(57)【要約】  保存安定性と免疫賦活活性に優れた、ワクチンアジュバントとして有用な組成物の提供。具体的には、(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-アミノ-4-{[(3S)-1-ヒドロキシヘキサン-3-イル]アミノ}-6-メチルピリミジン-5-イル)メチル]ベンジル}(メチル)アミノ]エチル}-4,8,12,17,21,25-ヘキサメチルヘキサコサ-4,8,12,16,20,24-ヘキサエンアミド、スクワラン、親水性界面活性剤および親油性界面活性剤を含有する凍結乾燥製剤であって、アスコルビン酸類の抗酸化剤および賦形剤を含有することを特徴とする、保存安定性の高い凍結乾燥製剤が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｉ）(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-アミノ-4-{[(3S)-1-ヒドロキシヘキサン-3-イル]アミノ}-6-メチルピリミジン-5-イル)メチル]ベンジル}(メチル)アミノ]エチル}-4,8,12,17,21,25-ヘキサメチルヘキサコサ-4,8,12,16,20,24-ヘキサエンアミド（以下、「化合物Ａ」という）または製薬学的に許容されるその塩；
ii）スクワラン；
iii）アスコルビン酸エステル類（例えば、L-アスコルビン酸ステアリン酸エステル、パルミチン酸アスコルビン酸等）、アスコルビン酸の無機塩（例えば、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム等）、およびアスコルビン酸からなる群から選択される抗酸化剤Ａ；および
iv）非還元性の糖類および糖アルコール類（ただしマンニトールは除く）からなる群から選択される賦形剤Ａ、
を含有するエマルションの凍結乾燥製剤。
【請求項２】
更に、ｖ）親水性界面活性剤、およびvi）親油性界面活性剤を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
エマルションが、水中油型エマルションである、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
親水性界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ポリソルベート20、ポリソルベート40、ポリソルベート60、ポリソルベート65、ポリソルベート80等）；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類（例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油10、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油20、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油40、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油50、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60等）；またはポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール類（例えば、ポリオキシエチレン（42）ポリオキシプロピレン（67）グリコール、ポリオキシエチレン（54）ポリオキシプロピレン（39）グリコール、ポリオキシエチレン（105）ポリオキシプロピレン（5）グリコール、ポリオキシエチレン（124）ポリオキシプロピレン（39）グリコール、ポリオキシエチレン（160）ポリオキシプロピレン（30）グリコール、ポリオキシエチレン（196）ポリオキシプロピレン（67）グリコール、ポリオキシエチレン（200）ポリオキシプロピレン（70）グリコール等）である、請求項２または３に記載の製剤。
【請求項５】
親水性界面活性剤が、ポリソルベート20、ポリソルベート40、ポリソルベート80、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、またはポリオキシエチレン（160）ポリオキシプロピレン（30）グリコールである、請求項２または３に記載の製剤。
【請求項６】
親水性界面活性剤が、ポリソルベート20、ポリソルベート40、またはポリソルベート80である、請求項２または３に記載の製剤。
【請求項７】
親油性界面活性剤が、ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ソルビタン脂肪酸エステル、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、中鎖脂肪酸トリグリセリド等）；グリセリン脂肪酸エステル類（例えば、グリセリン脂肪酸エステル、モノステアリン酸グリセリン、モノミリスチン酸グリセリン、モノオレイン酸グリセリン、トリイソオクタン酸グリセリン等）；ショ糖脂肪酸エステル類（例えば、ショ糖脂肪酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステル等）；またはプロピレングリコール脂肪酸エステル類（例えば、プロピレングリコール脂肪酸エステル、モノステアリン酸プロピレングリコール等）である、請求項２〜６のいずれかに記載の製剤。
【請求項８】
親油性界面活性剤が、ソルビタン脂肪酸エステル、モノオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、またはトリオレイン酸ソルビタンである、請求項２〜６のいずれかに記載の製剤。
【請求項９】
親油性界面活性剤が、トリオレイン酸ソルビタンである、請求項２〜６のいずれかに記載の製剤。
【請求項１０】
更に、トコフェロール類（例えば、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール等）；トコフェロール酢酸エステル；およびブチルヒドロキシアニソールからなる群から選択される抗酸化剤Ｂを含む、請求項１〜９のいずれかに記載の製剤。
【請求項１１】
抗酸化剤Ｂが、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、およびδ-トコフェロールからなる群から選択されるトコフェロール類である、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
抗酸化剤Ｂが、α-トコフェロールである、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１３】
抗酸化剤Ａが、パルミチン酸アスコルビン酸、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸ナトリウム、またはアスコルビン酸である、請求項１〜１２のいずれかに記載の製剤。
【請求項１４】
抗酸化剤Ａが、アスコルビン酸ナトリウムまたは、アスコルビン酸カリウムである、請求項１〜１２のいずれかに記載の製剤。
【請求項１５】
賦形剤Ａが、非還元性の糖類（例えば、スクロース、またはトレハロース）；または糖アルコール類（例えば、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、またはラクチトール）である、請求項１〜１４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１６】
賦形剤Ａが、スクロース、トレハロース、ソルビトール、またはキシリトールである、請求項１〜１４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１７】
賦形剤Ａが、スクロース、またはトレハロースである、請求項１〜１４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１８】
スクワランの配合量が、化合物Ａの重量の50倍〜500倍である、請求項１〜１７のいずれかに記載の製剤。
【請求項１９】
スクワランの配合量が、化合物Ａの重量の100倍〜400倍である、請求項１〜１７のいずれかに記載の製剤。
【請求項２０】
スクワランの配合量が、化合物Ａの重量の200倍〜300倍である、請求項１〜１７のいずれかに記載の製剤。
【請求項２１】
親水性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の0.5倍〜250倍である、請求項２〜２０のいずれかに記載の製剤。
【請求項２２】
親水性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の5倍〜100倍である、請求項２〜２０のいずれかに記載の製剤。
【請求項２３】
親水性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の10倍〜50倍である、請求項２〜２０のいずれかに記載の製剤。
【請求項２４】
親油性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の0.5倍〜250倍である、請求項２〜２１のいずれかに記載の製剤。
【請求項２５】
親油性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の5倍〜100倍である、請求項２〜２２のいずれかに記載の製剤。
【請求項２６】
親油性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の10倍〜50倍である、請求項２〜２３のいずれかに記載の製剤。
【請求項２７】
抗酸化剤Ａの配合量が、アスコルビン酸ナトリウムの重量に換算した場合に、化合物Ａの重量の0.5倍〜500倍である、請求項１〜２６のいずれかに記載の製剤。
【請求項２８】
抗酸化剤Ａの配合量が、アスコルビン酸ナトリウムの重量に換算した場合に、化合物Ａの重量の2.5倍〜250倍である、請求項１〜２６のいずれかに記載の製剤。
【請求項２９】
抗酸化剤Ａの配合量が、アスコルビン酸ナトリウムの重量に換算した場合に、化合物Ａの重量の5倍〜100倍である、請求項１〜２６のいずれかに記載の製剤。
【請求項３０】
賦形剤Ａの配合量が、化合物Ａの重量の50倍〜1000倍である、請求項１〜２９のいずれかに記載の製剤。
【請求項３１】
賦形剤Ａの配合量が、化合物Ａの重量の100倍〜750倍である、請求項１〜２９のいずれかに記載の製剤。
【請求項３２】
賦形剤Ａの配合量が、化合物Ａの重量の200倍〜625倍である、請求項１〜２９のいずれかに記載の製剤。
【請求項３３】
抗酸化剤Ｂの配合量が、化合物Ａの重量の5倍〜250倍である、請求項１０〜３２のいずれかに記載の製剤。
【請求項３４】
抗酸化剤Ｂの配合量が、化合物Ａの重量の12.5倍〜125倍である、請求項１０〜３２のいずれかに記載の製剤。
【請求項３５】
抗酸化剤Ｂの配合量が、化合物Ａの重量の25倍〜50倍である、請求項１０〜３２のいずれかに記載の製剤。
【請求項３６】
化合物Ａの重量が、化合物Ａを含まない凍結乾燥物の重量の0.0001倍〜0.65倍である、請求項１〜３５のいずれかに記載の製剤。
【請求項３７】
化合物Ａの重量が、化合物Ａを含まない凍結乾燥物の重量の0.0002倍〜0.35倍である、請求項１〜３５のいずれかに記載の製剤。
【請求項３８】
化合物Ａの重量が、化合物Ａを含まない凍結乾燥物の重量の0.0005倍〜0.065倍である、請求項１〜３５のいずれかに記載の製剤。
【請求項３９】
エマルション調製直後の粒子径Ｄ９０値、および凍結乾燥製剤として25℃で6カ月保存後に復水したエマルションの粒子径Ｄ９０値が、いずれも1000 nm以下である、請求項１〜３８のいずれかに記載の製剤。
【請求項４０】
凍結乾燥製剤を5℃で6か月保存した時の、不純物UK-1.02の面積百分率値における増加量が、5.0%以下である、請求項１〜３９のいずれかに記載の製剤。
【請求項４１】
凍結乾燥製剤を5℃で6か月保存した時の、不純物UK-1.02の面積百分率値における増加量が、1.0%以下である、請求項１〜３９のいずれかに記載の製剤。
【請求項４２】
請求項１〜４１のいずれかに記載の製剤を含むワクチンアジュバント。
【請求項４３】
請求項１〜４１のいずれかに記載の製剤および抗原を含むワクチン。
【請求項４４】
抗原が病原体由来の物質である、請求項４３に記載のワクチン。
【請求項４５】
請求項１〜４１のいずれかに記載の製剤、および抗原を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ワクチンアジュバントとして有用な化合物のエマルション組成物、および当該組成物の凍結乾燥製剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
病原体そのものを用いるワクチンに比べ、病原体の一部の成分を抗原としたサブユニットワクチンは、化学合成や遺伝子組換え技術等により製造できることから、ワクチンの安全性および製造方法の面で優れている。しかし、一方で、サブユニットワクチンは、病原体そのものを用いる生ワクチンや不活化ワクチンに比べて免疫賦活の効能が低い傾向がある。このことから、エピトープの免疫原性を強化し、ワクチンの免疫賦活活性を向上させるために、ワクチン抗原にアジュバントを併用する予防もしくは治療方法が検討されている。【０００３】
最近、ＴＬＲ７アゴニスト活性を有するアジュバントとして、(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-アミノ-4-{[(3S)-1-ヒドロキシヘキサン-3-イル]アミノ}-6-メチルピリミジン-5-イル)メチル]ベンジル}(メチル)アミノ]エチル}-4,8,12,17,21,25-ヘキサメチルヘキサコサ-4,8,12,16,20,24-ヘキサエンアミド（以下、「化合物Ａ」という。）が報告されている（特許文献１）。
【化１】
2020138217.tif 000002
化合物Ａは、優れたワクチンアジュバント活性を有しているが、実際哺乳動物にワクチンアジュバントとして投与するためにはエマルション等の製剤処方にすることが求められている。一般的に、エマルション製剤において、製剤の保存安定性を向上するためにアスコルビン酸系の抗酸化剤を用いることが知られているが、アスコルビン酸類の抗酸化剤が粒度分布を安定化させることは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２０１７／０６１５３２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、保存安定性と免疫賦活活性に優れた、ワクチンアジュバントとして有用な製剤組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
化合物Ａは、分子中にスクワレン様構造に由来する６個の不飽和結合を有している。化合物Ａの製剤検討をする中で、化合物Ａは、油状組成物としてスクワレンを用いる一般的なエマルション製剤の凍結乾燥製剤とした場合に、化合物Ａの分子内の不飽和結合が酸化され、それにより化合物Ａの含量が低下してしまうことが判明した。そこで実用可能な保存安定性の高いワクチンアジュバントの製剤処方を見出すべく発明者らは鋭意検討を行った結果、化合物Ａのエマルション組成物を調製する際に油状組成物としてスクワランを用いることにより、化合物Ａの酸化に対する安定性が高まることを見出した。更にアスコルビン酸類の抗酸化剤を添加することにより、保存安定性、特に化合物Ａ自体の酸化に対する安定性だけでなく、粒度分布の安定性にも優れた製剤処方となることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００７】
すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
[項１]
ｉ）(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-アミノ-4-{[(3S)-1-ヒドロキシヘキサン-3-イル]アミノ}-6-メチルピリミジン-5-イル)メチル]ベンジル}(メチル)アミノ]エチル}-4,8,12,17,21,25-ヘキサメチルヘキサコサ-4,8,12,16,20,24-ヘキサエンアミド（以下、「化合物Ａ」という）または製薬学的に許容されるその塩；
ii）スクワラン；
iii）アスコルビン酸エステル類（例えば、L-アスコルビン酸ステアリン酸エステル、パルミチン酸アスコルビン酸等）、アスコルビン酸の無機塩（例えば、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム等）、およびアスコルビン酸からなる群から選択される抗酸化剤Ａ；および
iv）非還元性の糖類および糖アルコール類（ただしマンニトールは除く）からなる群から選択される賦形剤Ａ、
を含有するエマルションの凍結乾燥製剤。【０００８】
[項２]
更に、ｖ）親水性界面活性剤、およびvi）親油性界面活性剤を含む、項１に記載の製剤。【０００９】
[項３]
エマルションが、水中油型エマルションである、項１または２に記載の製剤。【００１０】
[項４]
親水性界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ポリソルベート20、ポリソルベート40、ポリソルベート60、ポリソルベート65、ポリソルベート80等）；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類（例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油10、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油20、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油40、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油50、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60等）；またはポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール類（例えば、ポリオキシエチレン（42）ポリオキシプロピレン（67）グリコール、ポリオキシエチレン（54）ポリオキシプロピレン（39）グリコール、ポリオキシエチレン（105）ポリオキシプロピレン（5）グリコール、ポリオキシエチレン（124）ポリオキシプロピレン（39）グリコール、ポリオキシエチレン（160）ポリオキシプロピレン（30）グリコール、ポリオキシエチレン（196）ポリオキシプロピレン（67）グリコール、ポリオキシエチレン（200）ポリオキシプロピレン（70）グリコール等）である、項２または３に記載の製剤。【００１１】
[項５]
親水性界面活性剤が、ポリソルベート20、ポリソルベート40、ポリソルベート80、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、またはポリオキシエチレン（160）ポリオキシプロピレン（30）グリコールである、項２または３に記載の製剤。【００１２】
[項６]
親水性界面活性剤が、ポリソルベート20、ポリソルベート40、またはポリソルベート80である、項２または３に記載の製剤。【００１３】
[項７]
親油性界面活性剤が、ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ソルビタン脂肪酸エステル、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、中鎖脂肪酸トリグリセリド等）；グリセリン脂肪酸エステル類（例えば、グリセリン脂肪酸エステル、モノステアリン酸グリセリン、モノミリスチン酸グリセリン、モノオレイン酸グリセリン、トリイソオクタン酸グリセリン等）；ショ糖脂肪酸エステル類（例えば、ショ糖脂肪酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステル等）；またはプロピレングリコール脂肪酸エステル類（例えば、プロピレングリコール脂肪酸エステル、モノステアリン酸プロピレングリコール等）である、項２〜６のいずれかに記載の製剤。【００１４】
[項８]
親油性界面活性剤が、ソルビタン脂肪酸エステル、モノオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、またはトリオレイン酸ソルビタンである、項２〜６のいずれかに記載の製剤。【００１５】
[項９]
親油性界面活性剤が、トリオレイン酸ソルビタンである、項２〜６のいずれかに記載の製剤。【００１６】
[項１０]
更に、トコフェロール類（例えば、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール等）；トコフェロール酢酸エステル；およびブチルヒドロキシアニソールからなる群から選択される抗酸化剤Ｂを含む、項１〜９のいずれかに記載の製剤。【００１７】
[項１１]
抗酸化剤Ｂが、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、およびδ-トコフェロールからなる群から選択されるトコフェロール類である、項１０に記載の製剤。【００１８】
[項１２]
抗酸化剤Ｂが、α-トコフェロールである、項１０に記載の製剤。【００１９】
[項１３]
抗酸化剤Ａが、パルミチン酸アスコルビン酸、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸ナトリウム、またはアスコルビン酸である、項１〜１２のいずれかに記載の製剤。【００２０】
[項１４]
抗酸化剤Ａが、アスコルビン酸ナトリウムまたは、アスコルビン酸カリウムである、項１〜１２のいずれかに記載の製剤。【００２１】
[項１５]
賦形剤Ａが、非還元性の糖類（例えば、スクロース、またはトレハロース）；または糖アルコール類（例えば、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、またはラクチトール）である、項１〜１４のいずれかに記載の製剤。【００２２】
[項１６]
賦形剤Ａが、スクロース、トレハロース、ソルビトール、またはキシリトールである、項１〜１４のいずれかに記載の製剤。【００２３】
[項１７]
賦形剤Ａが、スクロース、またはトレハロースである、項１〜１４のいずれかに記載の製剤。【００２４】
[項１８]
スクワランの配合量が、化合物Ａの重量の50倍〜500倍である、項１〜１７のいずれかに記載の製剤。【００２５】
[項１９]
スクワランの配合量が、化合物Ａの重量の100倍〜400倍である、項１〜１７のいずれかに記載の製剤。【００２６】
[項２０]
スクワランの配合量が、化合物Ａの重量の200倍〜300倍である、項１〜１７のいずれかに記載の製剤。【００２７】
[項２１]
親水性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の0.5倍〜250倍である、項２〜２０のいずれかに記載の製剤。【００２８】
[項２２]
親水性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の5倍〜100倍である、項２〜２０のいずれかに記載の製剤。【００２９】
[項２３]
親水性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の10倍〜50倍である、項２〜２０のいずれかに記載の製剤。【００３０】
[項２４]
親油性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の0.5倍〜250倍である、項２〜２１のいずれかに記載の製剤。【００３１】
[項２５]
親油性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の5倍〜100倍である、項２〜２２のいずれかに記載の製剤。【００３２】
[項２６]
親油性界面活性剤の配合量が、化合物Ａの重量の10倍〜50倍である、項２〜２３のいずれかに記載の製剤。【００３３】
[項２７]
抗酸化剤Ａの配合量が、アスコルビン酸ナトリウムの重量に換算した場合に、化合物Ａの重量の0.5倍〜500倍である、項１〜２６のいずれかに記載の製剤。【００３４】
[項２８]
抗酸化剤Ａの配合量が、アスコルビン酸ナトリウムの重量に換算した場合に、化合物Ａの重量の2.5倍〜250倍である、項１〜２６のいずれかに記載の製剤。【００３５】
[項２９]
抗酸化剤Ａの配合量が、アスコルビン酸ナトリウムの重量に換算した場合に、化合物Ａの重量の5倍〜100倍である、項１〜２６のいずれかに記載の製剤。【００３６】
[項３０]
賦形剤Ａの配合量が、化合物Ａの重量の50倍〜1000倍である、項１〜２９のいずれかに記載の製剤。【００３７】
[項３１]
賦形剤Ａの配合量が、化合物Ａの重量の100倍〜750倍である、項１〜２９のいずれかに記載の製剤。【００３８】
[項３２]
賦形剤Ａの配合量が、化合物Ａの重量の200倍〜625倍である、項１〜２９のいずれかに記載の製剤。【００３９】
[項３３]
抗酸化剤Ｂの配合量が、化合物Ａの重量の5倍〜250倍である、項１０〜３２のいずれかに記載の製剤。【００４０】
[項３４]
抗酸化剤Ｂの配合量が、化合物Ａの重量の12.5倍〜125倍である、項１０〜３２のいずれかに記載の製剤。【００４１】
[項３５]
抗酸化剤Ｂの配合量が、化合物Ａの重量の25倍〜50倍である、項１０〜３２のいずれかに記載の製剤。【００４２】
[項３６]
化合物Ａの重量が、化合物Ａを含まない凍結乾燥物の重量の0.0001倍〜0.65倍である、項１〜３５のいずれかに記載の製剤。【００４３】
[項３７]
化合物Ａの重量が、化合物Ａを含まない凍結乾燥物の重量の0.0002倍〜0.35倍である、項１〜３５のいずれかに記載の製剤。【００４４】
[項３８]
化合物Ａの重量が、化合物Ａを含まない凍結乾燥物の重量の0.0005倍〜0.065倍である、項１〜３５のいずれかに記載の製剤。【００４５】
[項３９]
エマルション調製直後の粒子径Ｄ９０値、および凍結乾燥製剤として25℃で6カ月保存後に復水したエマルションの粒子径Ｄ９０値が、いずれも1000 nm以下である、項１〜３８のいずれかに記載の製剤。【００４６】
[項４０]
凍結乾燥製剤を5℃で6か月保存した時の、不純物UK-1.02の面積百分率値における増加量が、5.0%以下である、項１〜３９のいずれかに記載の製剤。【００４７】
[項４１]
凍結乾燥製剤を5℃で6か月保存した時の、不純物UK-1.02の面積百分率値における増加量が、1.0%以下である、項１〜３９のいずれかに記載の製剤。【００４８】
[項４２]
項１〜４１のいずれかに記載の製剤を含むワクチンアジュバント。【００４９】
[項４３]
項１〜４１のいずれかに記載の製剤および抗原を含むワクチン。【００５０】
[項４４]
抗原が病原体由来の物質である、項４３に記載のワクチン。【００５１】
[項４５]
項１〜４１のいずれかに記載の製剤、および抗原を含むキット。【００５２】
[項４６]
ｉ）(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-アミノ-4-{[(3S)-1-ヒドロキシヘキサン-3-イル]アミノ}-6-メチルピリミジン-5-イル)メチル]ベンジル}(メチル)アミノ]エチル}-4,8,12,17,21,25-ヘキサメチルヘキサコサ-4,8,12,16,20,24-ヘキサエンアミドまたは製薬学的に許容されるその塩；
ii）スクワラン；
iii’）トコフェロール類（例えば、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール等）；および
iv）非還元性の糖類および糖アルコール類（ただしマンニトールは除く）からなる群から選択される賦形剤Ａ、
を含有するエマルションの凍結乾燥製剤。【００５３】
[項４７]
更に、ｖ）ポリソルベート20、ポリソルベート40、またはポリソルベート80から選択される親水性界面活性剤；および
vi）ソルビタン脂肪酸エステル、モノオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、またはトリオレイン酸ソルビタンから選択される親油性界面活性剤
を含有する、項４６に記載の製剤。【００５４】
[項４８]
ｉ）(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-アミノ-4-{[(3S)-1-ヒドロキシヘキサン-3-イル]アミノ}-6-メチルピリミジン-5-イル)メチル]ベンジル}(メチル)アミノ]エチル}-4,8,12,17,21,25-ヘキサメチルヘキサコサ-4,8,12,16,20,24-ヘキサエンアミドまたは製薬学的に許容されるその塩；
ii）スクワラン；
iii）アスコルビン酸エステル類（例えば、L-アスコルビン酸ステアリン酸エステル、パルミチン酸アスコルビン酸等）、アスコルビン酸の無機塩（例えば、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム等）、およびアスコルビン酸からなる群から選択される抗酸化剤Ａ；および
iv）非還元性の糖類および糖アルコール類（ただしマンニトールは除く）からなる群から選択される賦形剤Ａ、
を含有するエマルション。【００５５】
[項４９]
更に、ｖ）親水性界面活性剤、およびvi）親油性界面活性剤を含む、項４８に記載のエマルション。【００５６】
[項５０]
更に、トコフェロール類（例えば、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール等）；トコフェロール酢酸エステル；およびブチルヒドロキシアニソールからなる群から選択される抗酸化剤Ｂを含む、項４８または４９に記載のエマルション。【００５７】
[項５１]
ｉ）(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-アミノ-4-{[(3S)-1-ヒドロキシヘキサン-3-イル]アミノ}-6-メチルピリミジン-5-イル)メチル]ベンジル}(メチル)アミノ]エチル}-4,8,12,17,21,25-ヘキサメチルヘキサコサ-4,8,12,16,20,24-ヘキサエンアミドまたは製薬学的に許容されるその塩；
ii）スクワラン；
iii’）トコフェロール類（例えば、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール等）；および
iv）非還元性の糖類および糖アルコール類（ただしマンニトールは除く）からなる群から選択される賦形剤Ａ、
を含有するエマルション。
【発明の効果】
【００５８】
本発明により、抗原に対する特異的免疫反応をさらに増強することができ、かつ保存安定性の高いワクチンアジュバント製剤を提供することが可能となった。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
本発明の製剤は、化合物Ａ、スクワラン、アスコルビン酸類の抗酸化剤Ａおよび賦形剤Ａを含有するエマルションの凍結乾燥製剤である。凍結乾燥前のエマルション製剤および凍結乾燥製剤を復水したエマルション製剤も本発明に含まれる。
本発明の製剤において、活性成分として含有する化合物Ａは、フリー体であっても、その製薬学的に許容される酸付加塩又は塩基付加塩であってもよい。酸付加塩としては、例えば無機又は有機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸又はマレイン酸等）との酸付加塩等が挙げられる。塩基付加塩としては、例えばナトリウム塩もしくはカリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩等が挙げられる。また、本発明における化合物Ａまたはその製薬学的に許容される塩は、水和物および溶媒和物の形で存在することもあるので、それらの化合物も本発明における化合物Ａまたはその製薬学的に許容される塩に含まれる。それらの詳細および製造法については、特許文献１に記載されており、化合物Ａまたはその製薬学的に許容される塩は、例えば、特許文献１に記載の方法に従って製造することができる。
本発明の製剤において、化合物Ａの含量は、化合物Ａのフリー体の含量として記載している。よって、化合物Ａが、その製薬学的に許容される塩として用いられる場合の含量は、化合物Ａの重量に塩の重量を加えた重量に換算して算出される。
【００６０】
本発明のエマルションとは、水中油型のエマルション又は油中水型のエマルションを意味する。好ましくは水中油型エマルションである。油状組成物と水性溶液の割合（重量比）として好ましくは、１：９９〜１５：８５であり、より好ましくは、２：９８〜１０：９０であり、更に好ましくは３：９７〜９：９１であり、更により好ましくは４：９６〜７：９３である。本発明のエマルション製剤において、化合物Ａは、油状組成物の中に溶解して存在している。
本発明の凍結乾燥製剤とは、本発明のエマルション製剤における水を凍結乾燥条件下にて除去した製剤を意味する。凍結乾燥製剤の重量に対して２倍〜２０倍の重量の注射用水を用いて復水することによって、エマルション製剤とする事ができる。
【００６１】
本明細書における親水性界面活性剤とは、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ポリソルベート20、ポリソルベート40、ポリソルベート60、ポリソルベート65、ポリソルベート80等）；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類（例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油10、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油20、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油40、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油50、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60等）；ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール類（例えば、ポリオキシエチレン（42）ポリオキシプロピレン（67）グリコール、ポリオキシエチレン（54）ポリオキシプロピレン（39）グリコール、ポリオキシエチレン（105）ポリオキシプロピレン（5）グリコール、ポリオキシエチレン（124）ポリオキシプロピレン（39）グリコール、ポリオキシエチレン（160）ポリオキシプロピレン（30）グリコール、ポリオキシエチレン（196）ポリオキシプロピレン（67）グリコール、ポリオキシエチレン（200）ポリオキシプロピレン（70）グリコール等）が挙げられる。好ましくはポリソルベート20、ポリソルベート40、ポリソルベート80、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、ポリオキシエチレン（160）ポリオキシプロピレン（30）グリコールであり、更に好ましくはポリソルベート20、ポリソルベート40、ポリソルベート80であり、特に好ましくはポリソルベート80である。
本発明の製剤における親水性界面活性剤の含量としては、化合物Ａの重量の0.5倍〜250倍であり、好ましくは5倍〜100倍であり、更に好ましくは、10倍〜50倍である。
【００６２】
本明細書における親油性界面活性剤とは、ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ソルビタン脂肪酸エステル、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、中鎖脂肪酸トリグリセリド等）；グリセリン脂肪酸エステル類（例えば、グリセリン脂肪酸エステル、モノステアリン酸グリセリン、モノミリスチン酸グリセリン、モノオレイン酸グリセリン、トリイソオクタン酸グリセリン等）；ショ糖脂肪酸エステル類（例えば、ショ糖脂肪酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステル等）；プロピレングリコール脂肪酸エステル類（例えば、プロピレングリコール脂肪酸エステル、モノステアリン酸プロピレングリコール等）が挙げられる。好ましくはソルビタン脂肪酸エステル、モノオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、またはトリオレイン酸ソルビタンであり、更に好ましくはトリオレイン酸ソルビタンである。
本発明の製剤における親油性界面活性剤の配合量としては、化合物Ａの重量の0.5倍〜250倍であり、好ましくは5倍〜100倍であり、更に好ましくは、10倍〜50倍である。
【００６３】
本発明の製剤における油状組成物としては、スクワランが用いられる。本製剤処方の検討において、エマルション製剤における油状組成物として一般的なスクワレンを用いた場合と比べて、スクワランを用いた場合に化合物Ａの酸化に対する安定性が高まることから、本製剤処方においては油状組成物としてスクワランが好ましい。スクワランの配合量としては、化合物Ａの重量の50倍〜500倍であり、好ましくは100倍〜400倍であり、更に好ましくは、200倍〜300倍である。
【００６４】
本明細書における抗酸化剤Ａとは、アスコルビン酸エステル類（例えば、L-アスコルビン酸ステアリン酸エステル、パルミチン酸アスコルビン酸等）；アスコルビン酸の無機塩（例えば、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム等）；アスコルビン酸等が挙げられる。好ましくはパルミチン酸アスコルビン酸、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸であり、更に好ましくはアスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カリウムである。
本発明の製剤における抗酸化剤Ａの含量としては、アスコルビン酸ナトリウムに換算して、すなわち抗酸化剤Ａであるアスコルビン酸誘導体のアスコルビン酸について、アスコルビン酸ナトリウムに重量的に換算した含量が化合物Ａの重量の0.5倍〜500倍であり、好ましくは2.5倍〜250倍であり、更に好ましくは、5倍〜100倍である。
【００６５】
本明細書における賦形剤Ａとは、非還元性の糖類または糖アルコール類（ただし、マンニトールは除く）等が挙げられる。好ましくは非還元性の糖類（例えば、スクロース、トレハロース；または糖アルコール類（例えば、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、またはラクチトール）であり、更に好ましくはスクロース、トレハロース、ソルビトール、キシリトールであり、更により好ましくはスクロース、トレハロースであり、特に好ましくはスクロースである。
本発明の製剤における賦形剤Ａの含量としては、化合物Ａの重量の50倍〜1000倍であり、好ましくは100倍〜750倍であり、更に好ましくは、200倍〜625倍である。
【００６６】
本明細書における抗酸化剤Ｂとは、トコフェロール類（例えば、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール等）；トコフェロール酢酸エステル；ブチルヒドロキシアニソール等が挙げられる。好ましくはα-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロールであり、更に好ましくはα-トコフェロールである。
本発明の製剤における抗酸化剤Ｂの含量としては、化合物Ａの重量の5倍〜250倍であり、好ましくは12.5倍〜125倍であり、更に好ましくは20倍〜50倍であり、更により好ましくは25倍〜50倍である。
【００６７】
本発明の凍結乾燥製剤は、エマルションをバイアルに充填し、凍結乾燥機を用いて、通常の製造条件で凍結乾燥を行うことにより製造することができる。製造条件は特に規定はないが、具体的には、例えば、-40℃付近で凍結させた後、庫内を真空に減圧し、同時に、庫内の温度を-20℃に上昇させて10〜80時間程度乾燥させた上で、庫内の温度を25℃に上昇させて10〜30時間程度乾燥させる条件等が挙げられる。
【００６８】
本発明の製剤の一つの態様として、
ｉ）(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-アミノ-4-{[(3S)-1-ヒドロキシヘキサン-3-イル]アミノ}-6-メチルピリミジン-5-イル)メチル]ベンジル}(メチル)アミノ]エチル}-4,8,12,17,21,25-ヘキサメチルヘキサコサ-4,8,12,16,20,24-ヘキサエンアミド（以下、「化合物Ａ」という）または製薬学的に許容されるその塩；
ii）スクワラン；
iii）アスコルビン酸エステル類（例えば、L-アスコルビン酸ステアリン酸エステル、パルミチン酸アスコルビン酸等）、アスコルビン酸の無機塩（例えば、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム等）、およびアスコルビン酸からなる群から選択される抗酸化剤Ａ；
iv）非還元性の糖類および糖アルコール類（ただしマンニトールは除く）からなる群から選択される賦形剤Ａ；
ｖ）親水性界面活性剤；および
vi）親油性界面活性剤
を含有するエマルションの凍結乾燥製剤が挙げられる。
【００６９】
本発明の製剤の別の態様として、
ｉ）(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-アミノ-4-{[(3S)-1-ヒドロキシヘキサン-3-イル]アミノ}-6-メチルピリミジン-5-イル)メチル]ベンジル}(メチル)アミノ]エチル}-4,8,12,17,21,25-ヘキサメチルヘキサコサ-4,8,12,16,20,24-ヘキサエンアミド（以下、「化合物Ａ」という）または製薬学的に許容されるその塩；
ii）スクワラン；
iii）アスコルビン酸エステル類（例えば、L-アスコルビン酸ステアリン酸エステル、パルミチン酸アスコルビン酸等）、アスコルビン酸の無機塩（例えば、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム等）、およびアスコルビン酸からなる群から選択される抗酸化剤Ａ；
iv）非還元性の糖類および糖アルコール類（ただしマンニトールは除く）からなる群から選択される賦形剤Ａ；
ｖ）ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ポリソルベート20、ポリソルベート40、ポリソルベート60、ポリソルベート65、ポリソルベート80等）；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類（例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油10、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油20、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油40、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油50、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60等）；ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール類（例えば、ポリオキシエチレン（42）ポリオキシプロピレン（67）グリコール、ポリオキシエチレン（54）ポリオキシプロピレン（39）グリコール、ポリオキシエチレン（105）ポリオキシプロピレン（5）グリコール、ポリオキシエチレン（124）ポリオキシプロピレン（39）グリコール、ポリオキシエチレン（160）ポリオキシプロピレン（30）グリコール、ポリオキシエチレン（196）ポリオキシプロピレン（67）グリコール、ポリオキシエチレン（200）ポリオキシプロピレン（70）グリコール等）等の親水性界面活性剤； 
vi）ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ソルビタン脂肪酸エステル、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、中鎖脂肪酸トリグリセリド等）；グリセリン脂肪酸エステル類（例えば、グリセリン脂肪酸エステル、モノステアリン酸グリセリン、モノミリスチン酸グリセリン、モノオレイン酸グリセリン、トリイソオクタン酸グリセリン等）；ショ糖脂肪酸エステル類（例えば、ショ糖脂肪酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステル等）；プロピレングリコール脂肪酸エステル類（例えば、プロピレングリコール脂肪酸エステル、モノステアリン酸プロピレングリコール等）等の親油性界面活性剤；および
iii’）トコフェロール類（例えば、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール等）、トコフェロール酢酸エステル、およびブチルヒドロキシアニソールからなる群から選択される抗酸化剤Ｂ
を含有するエマルションの凍結乾燥製剤が挙げられる。
【００７０】
本発明の製剤の別の態様として、抗酸化剤としてiii）の抗酸化剤Ａは含有せず、iii’）トコフェロール類（例えば、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール等）を含有する凍結乾燥製剤が挙げられる。トコフェロール類として好ましくは、α-トコフェロールである。
当該製剤におけるトコフェロールの含量としては、化合物Ａの重量の5倍〜250倍であり、好ましくは12.5倍〜125倍であり、更に好ましくは20倍〜50倍であり、更により好ましくは25倍〜50倍である。
当該処方において、更なる抗酸化剤として、チオ硫酸ナトリウムまたはブチルヒドロキシアニソール等を含んでいてもよい。
【００７１】
本発明の製剤における化合物Ａの重量としては、化合物Ａを含まない凍結乾燥物の重量の0.0001倍〜0.65倍であり、好ましくは0.0002倍〜0.35倍であり、更に好ましくは、0.0005倍〜0.065倍である。
【００７２】
本発明の製剤における油滴の粒子径Ｄ９０値としては、製造工程中のエマルションの粒子径Ｄ９０値が1000 nm以下、好ましくは、300 nm以下である。また、凍結乾燥製剤として保存した後に復水したエマルションの油滴の粒子径Ｄ９０値として好ましくは、5℃または25℃で6カ月保存後に復水したエマルションの油滴の粒子径Ｄ９０値が、1000 nm以下である。
【００７３】
本発明の製剤において、油滴の粒子径Ｄ９０値は、エマルションに含有される油滴粒子の粒度分布を表す代表値の一つであり、散乱強度基準による90％粒子径を意味する。一般に、粒子径Ｄ９０値は、動的光散乱式粒度分布測定装置、レーザー回折式粒度測定装置、画像処理式粒度分布測定装置等を用いて測定し、算出される。本明細書における粒子径Ｄ９０値は、動的光散乱式粒度分布測定装置：Zetasizer Nano ZS（マルバーン社）を用いて測定した際の値を意味する。
【００７４】
本発明の製剤において、不純物UK-1.02は、高速液体クロマトグラフを用いた類縁物質の評価において検出される代表的な不純物の一つである。Phenyl-Hexylカラム（Waters製Xselect CSH Phenyl-Hexyl XP Column、4.6 mm×75 mm、2.5μm、型番：186006134）を用いて、純水、アセトニトリル、メタノール、トリフルオロ酢酸を用いた逆相系高速液体クロマトグラフィー法により、化合物Ａとして0.4〜2μg相当量を注入し、220 nmの波長で分光学的に測定した際に、化合物Ａの1.02倍の溶出時間に検出される不純物を意味する。測定条件の詳細は以下の通りである。
移動相A：0.1% トリフルオロ酢酸水溶液
移動相B: 0.06% トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル/メタノール混液（8:2）
送液条件： 
2020138217.tif 000003
流速： 毎分0.5 mL
カラム温度： 40℃付近の一定温度
【００７５】
本発明の製剤の保存安定性としては、本発明の凍結乾燥製剤を5℃で6か月保存した後の不純物UK-1.02の面積百分率値における増加量が、保存開始時の5.0%以下であり、好ましくは1.0%以下である。なお、面積百分率値は実測値で比較している。
【００７６】
本発明の製剤は、調製した水中油型エマルションを乳化後に無菌ろ過フィルターを用いて無菌ろ過を行い、凍結乾燥した状態で保存される。無菌ろ過をする際に、目詰まり等を避け効率よくろ過するために、粒子径Ｄ９０値が1000 nm以下である事が望ましい。
【００７７】
本発明の製剤は、復水した後のエマルションの粒子径等が変化しない範囲で、他の添加剤を含有することができる。また、投与時に、復水した後のエマルションの粒子径等が変化しない範囲で、ワクチン抗原を含む製剤と混合して投与する事ができる。本発明の製剤とワクチン抗原との混合方法や混合比は特に限定されないが、例えば、復水したエマルション製剤と、等容量のワクチン抗原を含む製剤を、バイアル中で転倒混和することによって混合することができる。
【００７８】
本発明の製剤と混合して投与されるワクチン抗原として、特に限定はないが、例えば、抗原タンパク質又は該抗原タンパク質に由来する抗原ペプチド（部分ペプチド）、さらにこれらと担体との複合体が挙げられる。ワクチン抗原の具体例として、１）癌免疫療法のための腫瘍抗原タンパク質又は腫瘍抗原ペプチド、２）感染症予防ワクチンの有効成分等が挙げられる。上記担体とは、抗原タンパク質もしくは抗原ペプチドを化学的及び／又は物理的に結合させる物質であり、例えば、タンパク質や脂質等が挙げられる。
【００７９】
本発明の製剤は、化合物Ａを含む凍結乾燥製剤およびワクチン抗原を含むキットとして提供する事ができる。
【００８０】
本発明の製剤は、投与時に凍結乾燥製剤の重量の２倍〜２０倍の注射用水で復水し、更にワクチン抗原を含む製剤と混合して投与する事ができる。本発明の製剤の一回当たりの投与量は、化合物Ａの重量として1 ng〜250 mg、好ましくは1 ng〜50 mgである。同時に投与するワクチン抗原の種類や投与される対象の年齢等によって異なるが、一回投与であってもよく、一回または複数回、追加投与されてもよい。
【００８１】
本発明によれば、以下の試験例で示すように、保存安定性を示した。
【実施例】
【００８２】
以下、本発明を実施例、参考例、比較例、試験例等により説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。【００８３】
スクワランとして「スクワラン（和光純薬製）」、「スクワラン（岸本特殊肝油工業所製）」又は「スクワラン（マルハニチロ製）」を用い、スクワレンとして「スクワレン（和光純薬製）」、「スクワレン（岸本特殊肝油工業所製）」又は「スクワレン（マルハニチロ製）」を用い、アスコルビン酸ナトリウムとしては「アスコルビン酸ナトリウム（和光純薬製）」又は「L-アスコルビン酸ナトリウム（協和ファーマケミカル製）」を用い、α-トコフェロールとして「α-トコフェロール（三菱ケミカルフーズ製）」又は「all-rac-α-Tocopherol EMPROVE(登録商標) ESSENTIAL Ph Eur,BP,USP,E 307（メルク製）」を用い、トリオレイン酸ソルビタンとして「Span85（シグマアルドリッチ製）」、「レオドール SP-O30V（花王製）」又は「Span85（CRODA製）」を用い、ポリソルベート80として「PS80（GS）（日油製）」、「Polysorbate 80（HX2）（日油製）」、「Tween 80（メルク製）」又は「Tween 80 HP-LQ-(HM)（CRODA製）」、スクロースとして「スクロース（ナカライテスク製）」又は「Sucrose low in endotoxins suitable for use as excipient EMPROVE(登録商標) exp Ph Eur,BP,JP,NF（メルク製）」を用い、注射用水として「大塚注射用蒸留水（大塚製薬工場製）」、パルミチン酸アスコルビン酸、ブチルヒドロキシアニソール及びチオ硫酸ナトリウムとして和光純薬製のものを使用した。【００８４】
〔凍結乾燥組成物の調製〕
〔実施例１〜１６、比較例１〜３〕
化合物Ａを表１〜４の組成となるように油性成分（実施例１〜９及び１５においてはスクワラン、トリオレイン酸ソルビタン及びα-トコフェロール、実施例１０〜１３においてはスクワラン及びトリオレイン酸ソルビタン、実施例１４においては、スクワラン、トリオレイン酸ソルビタン、α-トコフェロール及びパルミチン酸アスコルビン酸、実施例１６においてはスクワラン、トリオレイン酸ソルビタン、α-トコフェロール及びブチルヒドロキシアニソール、比較例１〜３においてはスクワレン、トリオレイン酸ソルビタン及びα-トコフェロール）に溶解させた。表１〜４の組成となるように注射用水に水性成分（実施例１〜３、１４及び１６においてはスクロース及びポリソルベート80、実施例４〜１３においてはスクロース、ポリソルベート80及びアスコルビン酸ナトリウム、実施例１５においてはスクロース、ポリソルベート80及びチオ硫酸ナトリウム）を溶解後、上記油性組成物を加えて予備混合を行い、超高圧乳化分散機を用いて乳化分散させた。0.2μmの滅菌フィルターを通してろ過した後、ガラス製バイアルに1 mLずつ充填し、凍結乾燥した。窒素ガスで復圧後、ゴム栓で密封し、凍結乾燥組成物である実施例１〜１６及び比較例１〜３を得た。
【表１】
2020138217.tif 000004
【表２】
2020138217.tif 000005
【表３】
2020138217.tif 000006
【表４】
2020138217.tif 000007
【００８５】
〔試験例１〕製造工程中の粒子径の評価
凍結乾燥組成物の製造工程において、乳化後で凍結乾燥前のエマルションに含有される油滴粒子の粒度分布を下記の方法により測定した。
注射用水を用いてエマルションを10倍に希釈し、動的光散乱式粒度分布測定装置（Zetasizer Nano ZS）を用いて、散乱強度基準の90%粒子径（D90）を測定した。実施例１〜１６および比較例１〜３のD90（nm）を表５に示す。
【表５】
2020138217.tif 000008
【００８６】
〔試験例２〕安定性評価（１）
調製した凍結乾燥組成物について、開始時及び5℃及び25℃の恒温庫内で6箇月間保存後の粒度分布を下記の方法により測定した。
実施例１〜１６および比較例１〜３で調整した凍結乾燥組成物1バイアルに1 mLの注射用水を加えて復水後、復水後の薬液100μLをマイクロピペットを用いて採取し、900μLの注射用水と混合後、動的光散乱式粒度分布測定装置（Zetasizer Nano ZS）を用いて、散乱強度基準の90%粒子径（D90）を測定した。保存前後の実施例１〜１６および比較例１〜３のD90（nm）を表６に示す。
【表６】
2020138217.tif 000009
試験結果より、アスコルビン酸類の抗酸化剤を含む実施例４〜１４の処方においては、5℃及び25℃の恒温庫内で6箇月間保存後の粒度分布が、保存開始時の値から変化が少なく、粒度分布の安定性が高い処方であると言える。【００８７】
〔試験例３〕安定性評価（２）
調製した凍結乾燥組成物について、開始時及び5℃の恒温庫内で6箇月間保存後の不純物量（Uk-1.02の面積百分率値）を下記の方法により測定した。
Phenyl-Hexylカラム（Waters製Xselect CSH Phenyl-Hexyl XP Column、4.6 mm×75 mm、2.5μm、型番：186006134）を用いて、純水、アセトニトリル、メタノール、トリフルオロ酢酸を用いた逆相系高速液体クロマトグラフィー法により、化合物Ａとして0.4〜2μg相当量を注入し、220 nmの波長で分光学的に検出した。測定条件の詳細を以下に示す。
移動相A：0.1% トリフルオロ酢酸水溶液
移動相B: 0.06% トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル/メタノール混液（8:2）
送液条件： 
2020138217.tif 000010
流速： 毎分0.5 mL
カラム温度： 40℃付近の一定温度
本法で測定したピーク面積及び溶出時間を用い、化合物Ａの1.02倍の溶出時間に検出される不純物ピーク（Uk-1.02）の面積百分率値を以下の式により算出した。
Uk-1.02の面積百分率値（%）＝Uk-1.02のピーク面積／類縁物質及び化合物Ａの総ピーク面積×100
保存前後の実施例１〜１６および比較例１〜３の不純物ピーク（Uk-1.02）の面積百分率値（%）を表７に示す。
【表７】
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試験結果より、アスコルビン酸類の抗酸化剤を含む実施例４〜１４の処方においては、5℃の恒温庫内で6箇月間保存後の不純物の値（Uk-1.02の面積百分率値）が低く、保存安定性が高い処方であると言える。また、油性成分としてスクワランを含有する実施例１〜３の処方と、油性成分としてスクワレンを含有する比較例１〜３の処方を比較すると、油性成分としてスクワランを含有する処方の方が不純物の値（Uk-1.02の面積百分率値）が低い事から、スクワランが化合物１の抗酸化安定性に寄与しており、スクワランを含有する処方は保存安定性が高い処方であると言える。
【産業上の利用可能性】
【００８８】
これらの実施例、参考例、比較例、試験例等により、本発明の製剤は保存安定性が高い事から、ワクチンアジュバント製剤として用いられる。
【国際調査報告】
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