【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年6月24日(2009.6.24)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の正電荷担体と、該正電荷担体と異なる少なくとも１種の負電荷担体とを含む両性リポソームであって、該リポソームが４〜８の間に等電点を有し、該リポソームが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、テトラエーテル脂質、セラミド、スフィンゴ脂質及び／又はジアクリルグリセロールからなる群より選ばれた中性脂質を含むことを特徴とする、両性リポソーム。
【請求項２】
前記リポソームが、５〜７の間に等電点を有する、請求項１記載の両性リポソーム。
【請求項３】
少なくとも１種の両性電荷担体を含む両性リポソームであって、該両性電荷担体が４〜８のｐH範囲内で可逆的に再荷電可能であり、該リポソームが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、テトラエーテル脂質、セラミド、スフィンゴ脂質及び／又はジアクリルグリセロールからなる群より選ばれた中性脂質を含むことを特徴とする、両性リポソーム。
【請求項４】
前記両性荷電担体が、５〜７の間に等電点を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の両性リポソーム。
【請求項５】
少なくとも１種の両性電荷担体と、少なくとも１種の陰イオン及び／又は陽イオン電荷担体とを含む両性リポソームであって、前記両性荷電担体が４〜８のｐH範囲内で可逆的に再充填可能であり、前記リポソームが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、テトラエーテル脂質、セラミド、スフィンゴ脂質及び／又はジアクリルグリセロールからなる群より選ばれた中性脂質を含むことを特徴とする、両性リポソーム。
【請求項６】
前記リポソームが、５〜７の間に等電点を有する、請求項５記載の両性リポソーム。
【請求項７】
前記リポソームが、50〜1000ｎｍの平均サイズを有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の両性リポソーム。
【請求項８】
有効成分を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の両性リポソーム。
【請求項９】
前記有効成分がタンパク質、ぺプチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンスヌクレオチド及び／又はデコイヌクレオチドである、請求項８に記載の両性リポソーム。
【請求項１０】
有効成分の少なくとも80％が前記リポソームの内部にある、請求項８又は９に記載の両性リポソーム。
【請求項１１】
請求項８〜１０のいずれか１項に記載の有効成分をリポソームに充填する方法であって、封入するために決められたpＨが用いられ、結合していない物質を分離するために第二pＨが用いられることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項８〜１０のいずれか１項に記載の有効成分をリポソームに充填する方法であって、該リポソームが決められたpＨで透過化処理され閉鎖されることを特徴とする方法。
【請求項１３】
ナノカプセルを製造するための請求項１〜１０のいずれか１項に記載のリポソームの使用。
【請求項１４】
診断における放出システムを製造するための請求項１〜１０のいずれか１項に記載のリポソームの使用。
【請求項１５】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のリポソームを含む、有効成分を運搬及び／又は放出するための医薬製剤。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のリポソームを含む、徐放性製剤。
【請求項１７】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のリポソームを含む、循環デポ。
【請求項１８】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のリポソームを含む、ベクター。
【請求項１９】
ヒトに使用することを除く、有効成分を運搬及び／又は放出するための請求項１〜１０のいずれか１項に記載のリポソームの使用。
【請求項２０】
ヒトに使用することを除く、徐放性製剤及び／又は循環デポとしての請求項１〜１０のいずれか1項に記載のリポソームの使用。
【請求項２１】
ヒトに使用することを除く、ベクターとしての請求項１〜１０のいずれか1項に記載のリポソームの使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
本発明の目的は、等電点が４〜８の間にある、少なくとも１種の正電荷担体と少なくとも１種の負電荷担体とを含む両性リポソームによって達成される。本目的は、リポソームがpＨ依存性の変化する電荷により調製される事実に基づいて達成される。
所望の性質をもつリポソーム構造は、例えば、膜形成型又は膜固定型陽イオン電荷担体の量が低pＨの陰イオン電荷担体の量を超えるとともに割合が高いpＨにおいては逆転する場合に形成される。このことは、イオン性成分のpＫa値が４〜９の間にある場合に常にあてはまる。媒体のpＨが下がるにつれて、カチオン電荷担体はすべて更に荷電され、陰イオン電荷担体はすべてその電荷を消失する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
等電点におけるリポソームの実効電荷は、０である。等電点がおおむね選択可能な構造は、陰イオン部分と陽イオン部分を混合することにより作製し得る。
その構造は、特に、pＨが下がるにつれて、分子の電荷が全体として実際には負から正に変化するように作ることができる。そのような電荷の逆反応は、その構造により製造されたリポソームが生理的相互関係で用いられる場合に特に有利である。全体が負電荷のリポソームのみが血液成分や血清成分と適合できる。正電荷により凝集を生じる。しかしながら、正電荷をもつリポソームは、融合誘導的に非常に良好であり、有効成分を細胞へ運搬することができる。それ故、電荷のpＨ依存性逆反応は、化合物が負電荷をもつことから血清と適合できる化合物を作ることを可能にする。しかしながら、エンドサイトーシス吸収後、それらの電荷は逆転し、細胞内でのみ融合誘導する。
本発明の実施態様の好適実施態様においては、両性リポソームの等電点は５〜７の間にある。
本発明は、また、等電点が４〜８の間にある少なくとも１種の両性電荷担体を含む両性リポソームに関する。
好適態様においては、リポソームの両性電荷担体の等電点は５〜７の間にある。
本発明は、また、少なくとも１種の両性電荷担体と陰イオン及び/又は陽イオン電荷担体とを含む、両性リポソームに関する。
好適態様においては、両性リポソームの等電点は５〜７の間にある。
本発明の特別の態様においては、本発明のリポソームは、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ジアシルグリセロール、コレステロール、テトラエーテル脂質、セラミド、スフィンゴ脂質、及び/又はジアシルグリセロールを含んでいる。しかしながら、リポソームの調製は、本発明の教示の多くの脂質を組合わせて行うことができることは当然のことである。例えば、リポソームは多量のCHEMS（約40％）と少量のDOTAP（約30％）を用いて合成することができる。CHEMSのカルボキシル基のpＫにおけるこの成分の負電荷はこれまですでに抑えられ、正電荷担体が全体を支配している。代替的製剤は、CHEMSとHis-Cholとの混合であり、正電荷担体HistCholの強い荷電が負のCHEMSの放電と相乗作用的に進む。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
本発明の教示の好適態様は、生体内条件下で治療適用又は診断適用のためのリポソームの使用に関する。好ましくは、そのようなリポソームは、非特異的結合がわずかであり、それにより、生理的条件下で融合する傾向がわずかであるが、変化した条件下で強くかつ高融合コンピテンスで結合するものである。そのようなリポソームは、生理的条件下で全体の粒子が陰イオン電荷であり、pＨ6.5で著しく陽イオン電荷である、両性リポソームである。そのようなpＨ値は、リポソームの細胞へのエンドサイトーシス中に起こる。そのようなpＨ値は、また、腫瘍内部や皮膚の外層で起こる。低pＨ値は、また、生体外器官をある時間潅流することにより得ることができる。それ故、高結合強度と融合コンピテンスは、細胞又は特殊な組織によってすでに吸収されたリポソームに限定される。結合強度と増加する融合コンピテンスは、リポソーム膜と細胞膜との融合を支持する。この事象により、エンドソームの溶解の成分を放出させずに、それにより、カーゴ又は細胞成分を危うくすることなく、カーゴが細胞の内部へ直接放出させることになる。
更に、徐放性製剤及び/又は循環デポとしてのリポソームの使用も適する。リポソームは、また、静脈内適用又は腹腔適用に有利に使用し得る。本発明の特に好ましい態様においては、リポソームは細胞の生体内、試験管内、生体外トランスフェクションのベクターとして用いられる。
本発明のリポソームは、いくつかの利点がある。40％のHisCholとPCの陽イオン的に再荷電可能なリポソームは、中性pＨの条件下でさえもＤＮＡのような核酸を膜に結合する。
驚くべきことに、上記リポソームが５％のPGを更に用いて製造され、その後、両性の性質をもつ場合には、この結合は完全に抑えられる。しかしながら、膜への核酸の結合は、pＨを下げることにより再び回復し得る。それ故、本発明のリポソームは、核酸のpＨ依存性結合に特に良く適している。