(57)【要約】  本発明は、デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させ、生じるデスモステロール誘導体を晶析により分別除去することを含む、デスモステロールを実質的な量で含まない高純度コレステロールの製造方法であって、これにより、除去することが困難なデスモステロールなどの不純物を除去することが可能であり、また、高純度コレステロールを製造することができる製造方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させ、生じるデスモステロール誘導体を晶析により分別除去することを含む、デスモステロールを実質的な量で含まない高純度コレステロールの製造方法。
【請求項２】
高純度コレステロールの製造方法であって、下記工程：
デスモステロールを含むコレステロールを、水および有機溶媒中でハロゲン化試薬と混合して、デスモステロールをハロゲン化試薬および水と反応させ、
必要に応じて、得られた反応液に、還元剤を加えて脱色する
２）必要に応じて、反応後に、水層を除去する；
３−１）反応後に有機層をそのまま次の工程に用いる、または、
３−２）有機層を、部分濃縮または完全に濃縮乾固して粗反応生成物を得る；
４）３−１）の有機層、または３−２）の粗反応生成物に、有機溶媒を加え、当該有機溶媒中で晶析させる；
ことを含む、該製造方法。
【請求項３】
デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応において用いられるハロゲン化試薬が、Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、臭素、ヨウ素、Ｎ−ブロモフタルイミド、Ｎ−ブロモサッカリン、Ｎ−ブロモアセトアミド、１,３−ジブロモ−５,５−ジメチルヒダントイン、ジブロモイソシアヌル酸、トリメチルフェニルアンモニウムトリブロミド、ベンジルトリメチルアンモニウムトリブロミド、ピリジニウムブロミドペルブロマイド、４−ジメチルアミノピリジニウムブロミドペルブロミド、１−ブチルー３−メチルイミダゾリウムトリブロミド、１，８−ジアザビシクロ[５，４，０]−７−ウンデセンヒドロゲントリブロミド、Ｎ−ヨードフタルイミド、Ｎ−ヨードサッカリン、１,３−ジヨード−５,５−ジメチルヒダントイン、ピリジン一塩化ヨウ素、ジクロロヨウ素酸テトラメチルアンモニウム、およびジクロロヨウ素酸ベンジルトリメチルアンモニウムからなる群から選ばれる１種以上の求電子的ハロゲン化試薬である、請求項１または２に記載の製造方法。
【請求項４】
デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応において用いられるハロゲン化試薬が、コレステロール中に含まれるデスモステロールの１モルに対して、１モル〜１０モル当量である、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
晶析において用いられる有機溶媒が、エーテル類、ケトン類、エステル類、ハロゲン化炭素類、炭化水素類、アミド類、ニトリル類、およびアルコール類からなる群から選ばれる１種以上の有機溶媒である、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
高純度コレステロールが、９８％以上の純度を有するコレステロールである、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
コレステロールは、ステロイドに分類される有機化合物の１種であり、タンパク質や炭水化物とともに、様々な生命現象に関わる重要な化合物である。また、コレステロールは、医薬品、化粧品、または液晶の原材料等にも使用されている。
【背景技術】
【０００２】
一般に流通している市販のコレステロールの純度は９０〜９５％（ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）の面積％に基づく）である。とりわけ、より高純度のコレステロールを得ることが困難な原因として、類縁体不純物の存在が挙げられる。
市販のコレステロール中には、コレステロールの構造と類似する数種類の不純物が含まれ、たとえば、デスモステロール、ジヒドロコレステロール、またはラトステロール等が知られる。【０００３】
従来知られている高純度のコレステロールを得るための製造方法としては、コレステロールの不純物をメタノールなどのアルコール類を用いたリスラリーによる方法もしくは再結晶法により取り除く方法（特許文献１および２）、高価な水素化触媒を用いた接触還元方法によるデスモステロールをコレステロールに変換する方法（特許文献３）、あるいは、特殊な装置を用いる精製方法（例えば、塔型晶析装置を用いる製造方法）（特許文献４）を挙げられる。よって、化学反応を利用した不純物を誘導体化することにより、高純度のコレステロールを得る製造方法は前記還元反応以外は知られていない。【０００４】
上述のコレステロール中に含まれる不純物、とりわけ主要な不純物であるデスモステロールは、コレステロールと構造が近似しており、溶解度等の物理的性質も近似しているため、再結晶法等の一般的に知られる精製方法では分離除去することは極めて困難であった。また、これら再結晶法によれば、再結晶の操作を繰り返すことが必要であるため、操作が煩雑であり、またコレステロールの収率が低下する。さらに、再結晶法では、高純度のコレステロールを得ること自体が極めて困難であった。【０００５】
また、高価な水素化触媒を用いた接触還元方法によるデスモステロールをコレステロールに変換する方法によれば、コレステロールに含有されている不純物を反応により低減することはできるが、還元処理によって一部のコレステロールが反応することで、ジヒドロコレステロールを生じ、収率の低下が起こる。【０００６】
また、２５ヒドロキシコレステロールの取得を目的として、デスモステロール（２４デヒドロコレステロール）を、ＴＨＦ／水混液中でＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）と反応させてオキシブロモ化物を得て、その後に、水素化アルミニウム試薬によって脱ブロモ化物である２５ヒドロキシコレステロールを得る方法が知られる（特許文献５）が、この製法は、コレステロールの精製を目的としたものではない。【０００７】
よって、従来の晶析による製法では除去することが困難な不純物（特に、デスモステロール）を取り除くことが可能であり、また、工業的に適用可能な操作方法で効率よく、且つ高純度のコレステロールを製造することができる製造方法が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１６−００３１９０号
【特許文献２】特開２０１３−１８４９２９号
【特許文献３】特開平０６−２３９８８３号
【特許文献４】特開２００２−０８０４９３号
【特許文献５】中国特許公開第１０３６２６８２２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、デスモステロールを実質的な量で含まない高純度コレステロール（例えば、約９８％純度を有するコレステロール）を高収率で製造する製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者が鋭意研究した結果、デスモステロール等の不純物を含むコレステロールに、ハロゲン化試薬を作用させることで、デスモステロールを選択的に高極性不純物へ変換させ、続く晶析工程により当該不純物を容易に除去することができ、且つ工業的に適用可能であることを見出した。本発明は、以下の態様を提供するが、これらに限定されるものではない。
（製造方法）
［１］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させ、生じるデスモステロール誘導体を晶析により分別除去することを含む、デスモステロールを実質的な量で含まない高純度コレステロールの製造方法。
［２］  高純度コレステロールの製造方法であって、下記工程：
１）デスモステロール（desmosterol）を含むコレステロールを、水および有機溶媒中でハロゲン化試薬と混合して、デスモステロールをハロゲン化試薬および水と反応させ（工程１）、
必要に応じて、得られた反応液に、還元剤を加えて脱色する；
２）必要に応じて、反応後に、水層を除去する（工程２）；
３−１）反応後に有機層をそのまま次の工程に用いる、または、
３−２）有機層を、部分濃縮または完全に濃縮乾固して粗反応生成物を得る（工程３）；
４）３−１）の有機層、または３−２）の粗反応生成物に、有機溶媒を加え、当該有機溶媒中で晶析させる（工程４）、
ことを含む、該製造方法（以下、「本発明の製造法」とも呼称する。）。
［２−２］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））を、約０℃〜約１００℃の温度で、約１０分間〜約１２時間行う、[１]または［２］記載の製造方法。
［２−３］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））を、約０℃〜約６０℃の温度で、約３０分間〜約３時間行う、[１]または［２］記載の製造方法。【００１１】
［２−４］  還元剤が、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、シュウ酸およびその塩、および、ギ酸およびその塩からなる群から選ばれる１種以上である、[１]または［２］記載の製造方法。
［２−５］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））において用いられるハロゲン化試薬が、Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）またはヨウ素である場合に、亜硫酸ナトリウムまたはギ酸ナトリウムを加えて脱色することを含む、[１]または［２］記載の製造方法。
［２−６］  更に、５）前記４）において晶析したコレステロールを含む析出物を更に有機溶媒で洗浄して、精製されたコレステロールを得る（工程５）、および／または、
６）前記４）または５）において得られたコレステロールを、コレステロールに対する溶解度が高い溶媒中に溶解し、その後に溶液中にコレステロールに対する溶解度が低い溶媒を加えることによって、コレステロールの結晶を析出させる（工程６）、
ことを含む、[１]または［２］記載の製造方法。【００１２】
［３］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））において用いられるハロゲン化試薬が、Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、臭素、ヨウ素、Ｎ−ブロモフタルイミド、Ｎ−ブロモサッカリン、Ｎ−ブロモアセトアミド、１,３−ジブロモ−５,５−ジメチルヒダントイン、ジブロモイソシアヌル酸、トリメチルフェニルアンモニウムトリブロミド、ベンジルトリメチルアンモニウムトリブロミド、ピリジニウムブロミドペルブロマイド、４−ジメチルアミノピリジニウムブロミドペルブロミド、１−ブチルー３−メチルイミダゾリウムトリブロミド、１，８−ジアザビシクロ[５，４，０]−７−ウンデセンヒドロゲントリブロミド、Ｎ−ヨードフタルイミド、Ｎ−ヨードサッカリン、１,３−ジヨード−５,５−ジメチルヒダントイン、ピリジン一塩化ヨウ素、ジクロロヨウ素酸テトラメチルアンモニウム、およびジクロロヨウ素酸ベンジルトリメチルアンモニウムからなる群から選ばれる１種以上の求電子的ハロゲン化試薬である、[１]または［２］に記載の製造方法。
［３−２］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））において用いられるハロゲン化試薬が、Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）である、[１]または［２］に記載の製造方法。【００１３】
［３−３］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））において用いられる有機溶媒が、エーテル類、アルコール類、炭化水素類、ハロゲン化炭化水素類、エステル類、アミド類、ニトリル類およびケトン類からなる群から選ばれる１種以上の有機溶媒である、[１]または［２］に記載の製造方法。
［３−４］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））において用いられる有機溶媒が、エーテル類である、[１]または［２］に記載の製造方法。
［３−５］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））において用いられる有機溶媒が、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）である、[１]または［２］に記載の製造方法。【００１４】
［４］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））において用いられるハロゲン化試薬が、コレステロール中に含まれるデスモステロールの１モルに対して、約１モル〜約１０モル当量である、［１］乃至［３］のいずれか１つに記載の製造方法。
［４−２］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））において用いられるハロゲン化試薬が、コレステロール中に含まれるデスモステロールの１モルに対して、約１モル〜約４モル当量である、［１］乃至［３］のいずれか１つに記載の製造方法。【００１５】
［５］  晶析（項［２］の工程４））において用いられる有機溶媒が、エーテル類、ケトン類、エステル類、炭化水素類、ハロゲン化炭化水素素類、アミド類、ニトリル類およびアルコール類からなる群から選ばれる１種以上の有機溶媒である、［１］乃至［４］のいずれか１つに記載の製造方法。
［５−２］  晶析（項［２］の工程４））において用いられる有機溶媒が、エーテル類、ケトン類、エステル類、およびアルコール類からなる群から選ばれる１種以上の有機溶媒である、［１］乃至［４］のいずれか１つに記載の製造方法。
［５−３］  晶析（項［２］の工程４））において用いられる有機溶媒が、ＴＨＦ／メタノール、メタノール、ブタノール、酢酸エチル、またはアセトンである、［１］乃至［４］のいずれか１つに記載の製造方法。
［５−４］  晶析（項［２］の工程４））において用いられる有機溶媒が、ＴＨＦ／メタノールである、［１］乃至［４］のいずれか１つに記載の製造方法。
［５−５］  晶析（項［２］の工程４））において用いられる有機溶媒が、ＴＨＦとメタノールの容量比が１：３であるＴＨＦ／メタノール混合液である、［１］乃至［４］のいずれか１つに記載の製造方法。【００１６】
［５−６］  デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させる反応（項［２］の工程１））において用いられるコレステロールが、ジヒドロコレステロールおよびラトステロールから選ばれる１種以上の不純物を含む、［１］乃至［４］のいずれか１つに記載の製造方法。【００１７】
［５−７］  晶析（項［２］の工程４））における晶析を、約−１５℃〜約６０℃以下の温度で行う、［１］乃至［５］のいずれか１つに記載の製造方法。
［５−８］  晶析（項［２］の工程４））における晶析を、約０℃〜約３０℃の温度で行う、［１］乃至［５］のいずれか１つに記載の製造方法。【００１８】
［６］  高純度コレステロールが、約９８％以上の純度を有するコレステロールである、［１］乃至［５］のいずれか１つに記載の製造方法。
［６−２］  高純度コレステロールが、約９９％以上の純度を有するコレステロールである、［１］乃至［５］のいずれか１つに記載の製造方法。【００１９】
（高純度のコレステロール）
［７］  ［１］乃至［６］のいずれか１つに記載の製造方法で得られる、約１％以下の含有量のデスモステロールを含む、高純度コレステロール。
［７−２］  ［１］乃至［６］のいずれか１つに記載の製造方法で得られる、約０．３％以下の含有量のデスモステロールを含む、高純度コレステロール。
［８］  微量のコレステロールのハロゲン化誘導体を含む、［７］に記載の高純度コレステロール。【００２０】
（分離方法）
［９］  コレステロールおよびデスモステロールを含む混合物を、ハロゲン化試薬および水と反応させ、続いてコレステロールを晶析することにより、コレステロールとデスモステロールとを分離する方法。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の製造方法により、従来の方法（例えば、晶析法）によっては除去することが困難であった不純物（主に、デスモステロール）を除去した、高純度コレステロールを効率よく得ることができる。【００２２】
以下に、本発明をさらに詳細に説明する。
（定義）
以下に、本明細書および特許請求の範囲中で使用する用語の定義を示す。【００２３】
本願明細書中の用語「コレステロール」とは、下記構造式で示される化合物（ＣＡＳ登録番号５７−８８−５）である。当該コレステロールとしては、市販品、または一般的に知られる有機化学的手法により合成される物が挙げられるが、例えば市販品が挙げられる。通常の市販品のコレステロールは、純度が９０％以上（例えば、約９５％程度）であって、また、不純物として、コレステロールの構造と類似する数種類の不純物を含む、コレステロールを意味する。当該不純物としては、デスモステロール(desmosterol)、ジヒドロコレステロール、ラノステロール、ジヒドロラノステロール、またはラトステロールが挙げられる。
【化１】
2020095888.tif 000002
【００２４】
本願明細書中の用語「デスモステロール」とは、上記構造式で示される化合物（ＣＡＳ登録番号３１３−０４−２）である。デスモステロールは、通常、市販のコレステロール中に、不純物として、ＧＣ測定時の面積百分率として特約１〜約５％（例えば、２〜４％、典型的には約３％）の割合で含まれる。あるいは、ＬＣ（例えば、ＨＰＬＣ）測定時の面積百分率として約５〜約１５％（例えば、約６〜１０％、典型的には約８％）の割合で含まれる。【００２５】
本願明細書中の用語「純度」および「含有量」は、特に断らない限り、一般的な機器分析法（例えば、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、および液体クロマトグラフィー（ＬＣ）（例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が挙げられる）による測定時の面積百分率を意味する。【００２６】
本願明細書中の用語「高純度コレステロール」とは、ＧＣ測定時の面積百分率として、純度が約９５％以上、好ましくは約９６％以上、より好ましくは約９７％以上、一層より好ましくは約９８％以上、特に好ましくは約９９％以上のコレステロールを意味する。【００２７】
本願明細書中の用語「デスモステロールを実質的な量で含まない」における「実質的な量で含まない」とは、通常の分析方法（例えば、ＨＰＬＣ法）によっては検出可能なレベル以下であることを意味し、例えば、コレステロールに対して、デスモステロールの含有量が、面積百分率で約１．０％以下、好ましくは約０．３％以下、より好ましくは約０．２％以下、より一層好ましくは約０．１％以下であることを意味する。あるいは、ＧＣ測定時の面積百分率で約０．３％以下、好ましくは約０．２％以下、より好ましくは約０．１％以下であることを意味する。【００２８】
本願発明の１態様によれば、本願発明の製造方法は、
デスモステロールを含むコレステロールをハロゲン化試薬および水と反応させ、生じるデスモステロール誘導体を晶析により分別除去することを含む、デスモステロールを実質的な量で含まない高純度コレステロールの製造方法である。
本願発明の製造方法によれば、１）デスモステロールを主不純物として含むコレステロールの混合物を、ハロゲン化試薬および水と反応させることにより、コレステロールは反応せず、デスモステロールのみを選択的に反応させて誘導体化させることができる；２）デスモステロールを、コレステロールとは物理学性質（例えば、溶解度）が大きく相違する誘導体に変換することができる；３）有機合成において通常使用される有機溶媒を用いて、コレステロールとデスモステロールの誘導体を晶析によって容易に分離して、デスモステロールの誘導体を除去することができる；４）従来の精製方法（例えば、再結晶法）と比べて、コレステロールとデスモステロールとを極めて容易に且つ高効率で分離することができ、デスモステロールの除去効率が極めて大きく改善される；５）デスモステロールの含量を極めて少ない量にまで低減することができ、実質的な量のデスモステロールを含まない、高純度のコレステロールを、高収率で且つ高効率で得ることができる、との利点を有する。【００２９】
本願発明の１態様によれば、本願発明の製造方法は、
高純度コレステロールの製造方法であって、下記工程：
工程１）デスモステロールを含むコレステロールを、水および有機溶媒中でハロゲン化試薬と混合して、デスモステロールをハロゲン化試薬および水と反応させ、
必要に応じて、得られた反応液に、還元剤を加えて脱色する；
工程２）必要に応じて、反応後に、水層を除去する；
工程３−１）有機層をそのまま次の工程に用いる、または、
工程３−２）有機層を、部分濃縮または完全に濃縮乾固して粗反応生成物を得る；
工程４）３−１）の有機層、または３−２）の粗反応生成物に有機溶媒を加えて、コレステロールを晶析する、
ことにより、精製されたコレステロールを得る。【００３０】
（工程１）
工程１において、反応容器中、デスモステロールを含むコレステロールを、水および有機溶媒中に懸濁させ、該懸濁液中にハロゲン化試薬を加え、デスモステロールを選択的にハロゲン化試薬および水と反応させて、上述の通り、デスモステロールを、その極性化合物誘導体（例えば、デスモステロール内のアルケン部分にハロゲン原子およびヒドロキシ基が付加した化合物）に変換する。【００３１】
用語「ハロゲン化試薬」とは、有機化学の分野において一般的に知られる、ハロゲン化試薬を意味する。好ましくは、臭素化試薬、またはヨウ素化試薬が挙げられる。臭素化試薬の具体的な例としては、臭素、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）Ｎ−ブロモフタルイミド、Ｎ−ブロモサッカリン、Ｎ−ブロモアセトアミド、１,３−ジブロモ−５,５−ジメチルヒダントイン、ジブロモイソシアヌル酸、トリメチルフェニルアンモニウムトリブロミド、ベンジルトリメチルアンモニウムトリブロミド、ピリジニウムブロミドペルブロマイド、４−ジメチルアミノピリジニウムブロミドペルブロミド、１−ブチルー３−メチルイミダゾリウムトリブロミド、および１，８−ジアザビシクロ[５，４，０]−７−ウンデセンヒドロゲントリブロミドからなる群から選ばれる１種以上の求電子的臭素化試薬が挙げられるが、これらに限定されるものではない。ヨウ素化試薬の具体的な例としては、ヨウ素、Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）Ｎ−ヨードフタルイミド、Ｎ−ヨードサッカリン、１,３−ジヨード−５,５−ジメチルヒダントイン、ピリジン一塩化ヨウ素、ジクロロヨウ素酸テトラメチルアンモニウム、およびジクロロヨウ素酸ベンジルトリメチルアンモニウムからなる群から選ばれる１種以上の求電子的ヨウ素化試薬が挙げられるが、これらに限定されるものではない。より好ましいハロゲン化試薬の例としては、Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、臭素、またはヨウ素が挙げられるが、これらに限定されるものではない。目的物のコレステロールの純度および操作の取扱いの点で、Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）が好ましい。【００３２】
工程１において用いられる有機溶媒とは、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されるものではないが、コレステロールを部分的にまたは完全に溶解する溶媒が好ましい。例えば、エーテル類（例えば、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、２−メチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ））、アルコール類（例えば、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、１−ブタノール、２−ブタノール、ｔ−ブタノール）、炭化水素類（例えば、トルエン、キシレン、ヘプタン）、ハロゲン化炭化水素類（例えば、塩化メチレン、クロロホルム、モノクロロベンゼン（ＭＣＢ））、エステル類（例えば、酢酸エチル、酢酸メチル、酢酸ブチル）、アミド類、ニトリル類、およびケトン類（例えば、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ））からなる群から選ばれる１種以上の有機溶媒が挙げられる。好ましくは、エーテル類が挙げられ、特にテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）誘導体（例えば、ＴＨＦおよび２−メチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ））が挙げられる。溶媒の量は、経済的な観点から少ない方が好ましいが、例えば、反応に使用する粗コレステロールに対して、約１重量倍〜約１０重量倍が挙げられ、好ましくは、約２重量倍〜約４重量倍が挙げられる。【００３３】
工程１において用いられるハロゲン化試薬の量は、コレステロール中に含まれるデスモステロールの含有量および使用するハロゲン化試薬の反応性および種類に応じて変わり得るが、デスモステロールと反応するのに十分な量でよく、例えば、コレステロール中に含まれるデスモステロールの１モルに対して、約１モル〜約５０モル当量、好ましくは約１モル〜約１０モル当量である。典型的には、ＮＩＳまたはＩ２を使用する場合には、コレステロールの１モルに対して、約０．１モル当量が挙げられ、また、ＮＢＳを使用する場合には、コレステロールの１モルに対して、約０．０５モル当量が挙げられる。【００３４】
工程１の反応は、大気雰囲気下（好ましくは、窒素雰囲気下）で行う。反応温度は、使用するハロゲン化試薬の種類に応じて変わり得るが、例えば約０℃〜約１００℃、好ましくは約２０℃〜約６０℃を挙げられる。典型的には、ＮＩＳまたはＩ２を使用する場合には、反応温度は約４０℃〜約６０℃であり、また、ＮＢＳを使用する場合には、反応温度は約２０℃〜約４０℃である。
反応時間は、使用するハロゲン化試薬の種類および反応温度によって変わり得るが、例えば、約１０分間〜約１２時間（例えば、約３０分間〜約３時間）で行う。【００３５】
工程１の反応の終了後に、必要に応じて、工程１の反応液に、還元剤を加えて反応液をクエンチすることにより遊離ハロゲンを除去してもよい。当該還元剤は、使用するハロゲン化試薬由来の着色を還元作用により除去する試薬であって、例えば、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、シュウ酸およびその塩（例えば、ナトリウム塩、およびカリウム塩）、ギ酸およびその塩（例えば、ナトリウム塩、およびカリウム塩）などを挙げられるが、これらに限定されるものではない。例えば、ハロゲン化試薬が、Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）またはヨウ素である場合に、還元剤（例えば、亜硫酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム）を使用することができる。還元剤は、粉末状であっても、水溶液であってもよい。還元剤の使用量は、着色がなくなる程度であればよく、例えば、使用するハロゲン化試薬の１モル量に対して１モル当量以上であればよい。また、典型的には、還元剤の使用量は、コレステロールの１モルに対して、０．１〜０．５モル当量が使用でき、望ましくは０．２〜０．４モル当量の使用がよい。
クエンチの操作は、工程１の反応温度と同様な温度で、例えば約０℃〜約１００℃（例えば、約２０℃〜約６０℃）で行うことができる。【００３６】
（工程２）
必要に応じて、工程１の反応後（または脱色操作後）の反応液から水層を除去する。該水層中には、例えば、過剰量のハロゲン化試薬とその分解物、および無機塩が含まれ得る。水層の除去は、分離操作（例えば、分液ろうと）により行うことができる。【００３７】
（工程３）
工程２において水層を除去して得られる有機層をそのまま工程４に用いるか（工程３−１））、または有機層を、部分濃縮または完全に濃縮乾固して粗反応生成物を得る（工程３−２）。
工程３−１の場合、工程２において得られた有機層は、次の工程４において用いる前に、一般的に有機合成において用いられる乾燥剤（例えば、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム）を用いて乾燥してもよい。
別法として、工程３−２の場合、工程２において得られた有機層を、部分濃縮または完全に濃縮乾固（例えば、エバポレーターを用いる減圧下での濃縮乾固）して、粗反応生成物を得る。【００３８】
（工程４）
前記工程３−１の有機層、または工程３−２の粗反応生成物に、有機溶媒を加えて当該有機溶媒中でコレステロールを晶析する。【００３９】
本願明細書中の用語「晶析」とは、コレステロールの結晶を析出させることを意味し、また、更に低温の環境下に晶析液を一定時間保って析出した結晶を成長させることをも含み得る。【００４０】
工程４においては、有機溶媒を加えてコレステロールを晶析させる。晶析の操作時の温度は、工程２の反応後の反応温度であってもよく、例えば約０℃〜約１００℃（例えば、約２０℃〜約６０℃）が挙げられる。
次いで、コレステロールの結晶化を促進させるために晶析液を冷却してもよい。
冷却の温度としては、コレステロールの結晶が成長する低い温度であればよく、例えば、−１５℃〜約１０℃が挙げられ、好ましくは約０℃〜約１０℃（典型的には、約０℃〜約５℃）が挙げられる。よって、冷却する場合には、晶析の操作時の温度は、例えば約−１５℃〜約６０℃、好ましくは約０℃〜約３０℃が挙げられる。
また、冷却時間は、コレステロールの結晶が十分に成長する期間であればよいが、例えば、約１０分間〜約数日間が挙げられ、好ましくは約３０分間〜約１２時間（典型的には、約１時間以上）が挙げられる。【００４１】
工程４において用いられる有機溶媒としては、極性有機溶媒が好ましいが、低極性有機溶媒の場合は極性溶媒と組み合わせることで使用してもよい。当該有機溶媒としては、例えば工程１において用いられる有機溶媒、例えば、エーテル類（例えば、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、２−メチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ））、ケトン類（例えば、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ））、エステル類（例えば、酢酸エチル、酢酸メチル、酢酸ブチル）、ハロゲン化炭化水素類（例えば、塩化メチレン、クロロホルム、モノクロロベンゼン（ＭＣＢ））、炭化水素類（例えば、トルエン、キシレン、ヘプタン）、アミド類、ニトリル類およびアルコール類（例えば、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、１−ブタノール、２−ブタノール、ｔ−ブタノール）からなる群から選ばれる１種以上の有機溶媒が挙げられる。
工程４において用いられる有機溶媒の量は、目的物としてのコレステロールに対して適量であれば特に問題とならないが、量が多すぎる場合には、収率が低下し、一方で、少なさすぎる場合には、晶析するコレステロールの流動性が悪く、操作性が悪化し、且つ不純物が残存する恐れがある。【００４２】
また、前記工程４において晶析したコレステロールを含む析出物を、更に有機溶媒で洗浄して、精製されたコレステロールを得る工程（工程５）、を含んでいてもよい。工程５においては、必要に応じて、通常の後処理の工程（溶媒の留去、ろ過、および乾燥）を含み得る。
典型的には、工程５において、まず工程４において得られた析出物を含む反応液について、析出物をろ過する。次いで、ろ取した物を有機溶媒で洗浄する。洗浄後の湿結晶を乾燥（約５０℃〜約６０℃）して、目的物としての精製されたコレステロール、すなわち、高純度コレステロールを得る。【００４３】
工程５において用いられる、洗浄用の有機溶媒としては、洗浄時のコレステロールの損失を抑制するために、コレステロールに対する溶解度が低い有機溶媒が好ましい。例えば、アルコール類（例えば、メタノール）、アセトン、アセトニトリルが挙げられる。【００４４】
更に、前記工程４において晶析したコレステロールを含む析出物、または工程５において洗浄後に得られたコレステロールを、更に通常行われる既知の精製方法（例えば、懸濁洗浄法、再晶析法、クロマトグラフィー法）を組み合わせて精製することも可能である。特に、本発明の製法においては、再晶析する工程（工程６）を含んでいてもよい。【００４５】
工程６においては、必要に応じて、上記工程４または工程５において得られたコレステロールを、コレステロールに対する溶解度が高い溶媒（つまり、良溶媒）中に溶解し、その後に溶液中にコレステロールに対する溶解度が低い溶媒（つまり、貧溶媒）を加えることによって、コレステロールの結晶を析出させる。生成したスラリーを冷却し（５℃以下）、析出物をろ過する。次いで、ろ取した物を貧溶媒で洗浄する。洗浄後の析出物を乾燥（約５０℃〜約６０℃）して、目的物としての精製されたコレステロール、すなわち、高純度コレステロールを得る。【００４６】
工程６において用いられる、良溶媒の例としては、トルエン／メタノールの混合液、へプタン／メタノールの混合液、ＴＨＦ等が挙げられるが、これらに限定されない。トルエン／メタノールの混合液、またはへプタン／メタノールの混合液を使用する場合、トルエンまたはへプタンとメタノールとの容量比が約５０：１〜約２：１である混合液が挙げられる。また、貧溶媒の例としては、メタノール（含水メタノールであってもよい）またはヘプタン等を挙げられるが、これらに限定されない。良溶媒および貧溶媒の使用量は、例えば、精製するコレステロール原料の１２．００ｇに対して、良溶媒を約１０ｍＬ〜約５０ｍＬ（例えば、約１０ｍＬ〜約３０ｍＬが好ましい）を用いることができる。更に、貧溶媒の使用量は、良溶媒に対して容量比で約３倍〜約２０倍（例えば、約４倍〜約１５倍が好ましい）を用いることができる。【００４７】
本発明の製造方法においては、上記工程４の晶析（更に、工程５の洗浄）によって、工程１で生じたデスモステロールの誘導体（例えば、極性化合物）が、結晶化したコレステロールと分離され、除去しやすくなり、精製されたコレステロールを容易に得ることができると考えられる。【００４８】
（精製コレステロール）
上記本発明の製造により製造される、精製（された）コレステロールとは、約１％以下の含有量のデスモステロールを含み、適宜、微量の製造時に使用したハロゲン化試薬との反応に由来する、コレステロールのハロゲン化誘導体を含む、高純度コレステロールである。また、該精製コレステロールとは、ＧＣ測定時の面積百分率として約０．３％以下、ＬＣ測定時の面積百分率として約１．０％以下のデスモステロールしか含まず、適宜、微量のコレステロールのハロゲン化誘導体を含んでもよい、約９８％以上の純度を有するコレステロールである、ことが好ましい。ここで、ハロゲン化誘導体の微量とは、検出可能な限度の量を意味し、例えば、ＧＣ測定時の面積百分率として約１％以下、約０．５％以下、約０．１％以下の量を意味する。【００４９】
本発明の１実施態様によれば、
工程１において用いられるハロゲン化試薬がＮＩＳまたはＩ２であって、工程１において用いられる有機溶媒がＴＨＦであって、工程３が工程３−１であり、工程４において用いられる有機溶媒がＴＨＦ／メタノールである、製造方法を提供する。【００５０】
工程１の反応の終了後に、工程１の反応液に、亜硫酸ナトリウムまたはギ酸ナトリウムを加えて脱色することを含む。【００５１】
本発明の１実施態様によれば、
工程１において用いられるハロゲン化試薬がＮＢＳであって、工程１において用いられる有機溶媒がＴＨＦであって、工程３が工程３−１であり、工程４において用いられる有機溶媒がＴＨＦ／メタノールである、製造方法を提供する。【００５２】
本発明の１実施態様によれば、工程５において用いられる有機溶媒がメタノールである、製造方法を提供する。【００５３】
本発明の１実施態様によれば、工程６において、工程４または５において得られた精製コレステロールを更に再晶析することを含む、より高純度のコレステロールを得る製造方法を提供する。
【実施例】
【００５４】
以下に、実施例を挙げて、本発明のさらに具体的に説明するが、本発明はこれら実施例によって具体的に限定されるものではない。
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL）（コレステロール純度が、ＨＰＬＣ測定時の面積百分率として約８９％、ＧＣ測定時の面積百分率として９６％であり、そして、デスモステロール含量が、ＨＰＬＣ測定時の面積百分率として約８％、ＧＣ測定時の面積百分率として約３％である））を、下記の実施例および比較例において用いた。【００５５】
まず、本発明の製造方法における、ハロゲン化試薬の使用の有無、および晶析溶媒の影響について調べた。【００５６】
実施例１
Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）を用いる製造方法
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL） １０ｇ（２５．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ ３４ｍＬに溶解後、水 ２０ｇ（１．１ｍｏｌ）およびＮＩＳ ０．６ｇ（２．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で１時間撹拌反応させた。
反応液に、亜硫酸ナトリウム ０．５ｇを加えて有機層を脱色後、水層を除去した。有機層に、５０〜６０℃でメタノール ７６ｍＬを加えた後に、混合物を５℃以下まで冷却し、その後に０〜５℃で１時間以上保ち、結晶を析出させた。析出物をろ過し、分離した析出物をメタノール １３ｍＬで洗浄した。析出物を減圧乾燥し、精製コレステロール ８．５ｇ（収率８５％）を得た。
得られた精製コレステロールの純度およびデスモステロールの含有量を、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析によって測定した。結果を表１に示す。【００５７】
実施例２
Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）を用いる製造方法
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL） １０ｇ（２５．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ ３４ｍＬに溶解後、水 ２０ｇ（１．１ｍｏｌ）およびＮＢＳ ０．２ｇ（１．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０℃で１時間撹拌反応させた。
反応後に、水層を除去した。有機層に、５０〜６０℃でメタノール７６ｍＬを加えた後に、混合物を５℃以下まで冷却し、その後に０〜５℃で１時間以上保ち、結晶を析出させた。析出物をろ過し、分離した析出物をメタノール １３ｍＬで洗浄した。析出物を減圧乾燥し、精製コレステロール ８．３ｇ（収率８３％）を得た。
得られた精製コレステロールの純度およびデスモステロールの含有量を、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析によって測定した。結果を表１に示す。【００５８】
実施例３
ヨウ素（Ｉ２）を用いる製造方法
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL） １０ｇ（２５．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ ３４ｍＬに溶解後、水 ２０ｇ（１．１ｍｏｌ）およびヨウ素 ０．７ｇ（２．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で２時間撹拌反応させた。
反応液に、亜硫酸ナトリウム ０．５ｇを加えて有機層を脱色後、水層を除去した。有機層に、５０〜６０℃でメタノール ７６ｍＬを加えた後に、混合物を５℃以下まで冷却し、その後に０〜５℃で１時間以上保ち、結晶を析出させた。析出物をろ過し、分離した析出物をメタノール １３ｍＬで洗浄した。析出物を減圧乾燥し、精製コレステロール ８．３ｇ（収率８３％）を得た。
得られた精製コレステロールの純度およびデスモステロールの含有量を、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析によって測定した。結果を表１に示す。【００５９】
実施例４
Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）を用いる製造方法
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL） １．５ｋｇ（２５．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ ４．５ｋｇに溶解後、水３．０ｋｇ（１．１ｍｏｌ）およびＮＩＳ ８７．３ｇ（２．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で２．５時間撹拌反応させた。
反応液に、１０％亜硫酸ナトリウム水溶液 ７５０ｇを加えて有機層を脱色後、水層を除去した。有機層を20％食塩水 １．５ｋｇで洗浄・分液したのち冷却し、室温で５％含水メタノール ９．０ｋｇを加え、混合物を５℃以下まで冷却した。その後、０〜５℃で１時間以上保ってから析出物をろ過し、分離した析出物をメタノール １．５ｋｇで洗浄した。析出物を減圧乾燥し、精製コレステロール １．２８ｋｇ（収率８５％）を得た。
得られた精製コレステロールをガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析によって測定した結果、純度：９９．３％、デスモステロール含有量：０．０４％であった。
また、この精製コレステロールを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によって測定した結果では、純度：９９．０％、デスモステロール含有量：０．２％であった。【００６０】
実施例５
Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）を用いる製造方法
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL） ５０ｇ（１２．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ１００ｇと水１５０ｇの混合溶媒に溶解させ、ＮＩＳ ２．９ｇ（１３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で４時間撹拌反応させた。
反応液に、20%ギ酸ナトリウム水溶液１７．５ｇを加えて有機層を脱色後、水層を分液除去した。有機層を少量の水で洗浄した後、５％含水メタノール３７０ｍＬを滴下して晶析した。得られたスラリーを５℃以下まで冷却し、その後に０〜５℃で１時間以上保った後、析出物をろ過した。得られた析出物をメタノール ６０ｍＬで洗浄した。析出物を減圧乾燥し、４５ｇの精製コレステロールを得た（収率：９０％）。
得られた精製コレステロールを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によって測定した結果、純度：９９．０％、デスモステロール含有量：０．２％であった。【００６１】
比較例１
晶析のみの製造方法（つまり、ハロゲン化試薬を用いない製造方法）
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL） ６ｇ（１５．５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ ２０ｍＬに溶解後、５０〜６０℃でメタノール ４６ｍＬを加え、混合物を５℃以下まで冷却した。その後、混合物を０〜５℃で１時間以上保ち、結晶を析出させた。析出物をろ過し、分離した析出物をメタノール８ｍＬで洗浄した。析出物を減圧乾燥し、精製コレステロール ４．５ｇ（収率７５％）を得た。
得られた精製コレステロールの純度およびデスモステロールの含有量を、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析によって測定した。結果を表１に示す。【００６２】
比較例２
晶析のみの製造方法
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL） ６ｇ（１５．５ｍｍｏｌ）を、メタノール９１ｍＬに投入し、混合物を６０℃で１時間保持した。その後、混合物を、３０℃以下まで冷却し、２０〜３０℃で１時間以上保ち結晶を析出させた。析出物をろ過し、分離した析出物をメタノール４ｍＬで洗浄した。析出物を減圧乾燥し、精製コレステロール５．７ｇ（収率９５％）を得た。
得られた精製コレステロールの純度およびデスモステロールの含有量を、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析によって測定した。結果を表１に示す。【００６３】
比較例３
晶析のみの製造方法
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL） ３ｇ（７．８ｍｍｏｌ）を、１−ブタノール１５ｍＬに加熱溶解させた後、２０〜２５℃まで冷却し、この温度を１時間以上保持し結晶を析出させた。析出物をろ過し、分離した析出物を１−ブタノール２ｍＬで洗浄後に、減圧乾燥し、精製コレステロール ２．１ｇ（収率７０％）を得た。【００６４】
比較例４
晶析のみの製造方法
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL） １２ｇ（３１ｍｍｏｌ）を、トルエン２８ｍＬとメタノール１０ｍＬの混合溶媒に溶解させた後、メタノール１８０ｍＬを加えて晶析したのち、０〜５℃まで冷却し、この温度を１時間以上保持した。析出物をろ過し、分離した析出物をメタノール約７ｍＬで洗浄した後に、減圧乾燥し、精製コレステロール ９．８ｇ（収率８２％）を得た。
この精製コレステロールを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によって測定した結果は、純度：９３．１％、デスモステロール含有量：６．０％であった。【００６５】
上記実施例１〜３および比較例１〜３の結果を、表１に示す。
【表１】
2020095888.tif 000003
【００６６】
ハロゲン化試薬を用いる本発明の製造方法によれば、実施例１〜５のいずれの場合も、精製前のコレステロールの純度と比べて、純度が約９８％以上、特に約９９％以上の高純度のコレステロールが得られた。また、得られた精製コレステロールは、精製前のコレステロールと比べて、デスモステロールの含量が極めて少量であるかまたは検出可能なレベルでは含まれていなかった。
一方で、比較例としてハロゲン化試薬を用いない場合には、得られたコレステロールの純度は約９８％以下であり、また、コレステロール中のデスモステロールの含有量は、有意な量であった。【００６７】
実施例６〜１７
次に、本発明の製造方法において、ハロゲン化試薬と反応させた反応混合物の晶析処理時の晶析溶媒の影響について調べた。具体的には、晶析溶媒として下記の表２に示す各種の溶媒を用いて、得られた精製コレステロールの純度、およびデスモステロールの含有量を調べた。【００６８】
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL） ７０ｇ（１８１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ２３６ｍＬ中に溶解後に、水 １４０ｇ（７．８ｍｏｌ）およびＮＩＳ ４．１ｇ（１８．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で１時間撹拌反応させた。
反応液に、亜硫酸ナトリウム ３．５ｇを加えて有機層を脱色後に、水層を除去した。有機層を、濃縮乾固し、粗コレステロール（純度９６．１９％、デスモステロール検出されず（ＮＤ））を得た。続いて、該粗コレステロールに対して、各種溶媒での晶析を行った。各溶媒を用いた場合の実施例を、実施例６〜実施例１７として示す。
粗コレステロール ５．５ｇ（１３．０ｍｍｏｌ）に、コレステロール純分に対して２倍量のＴＨＦおよび６倍量のメタノールを加え、加熱溶解させた。混合物を５℃以下まで冷却後、０〜５℃で１時間以上保ち結晶を析出させた。析出物をろ過し、分離した析出物を減圧乾燥し、精製コレステロールを得た（実施例１６）。
得られた精製コレステロールの純度およびデスモステロールの含有量を、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析によって測定した。
以下同様の方法にて、それぞれの晶析溶媒毎の純度を確認した。実験結果を、表２に示す。【００６９】
【表２】
2020095888.tif 000004
【００７０】
【表３】
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【００７１】
晶析溶媒として、ｔ−ブチルメチルエーテル（実施例８）、塩化メチレン（実施例９）、酢酸エチル（実施例１１）、アセトン（実施例１２）、ブタノール（実施例１４）、メタノール（実施例１５）、ＴＨＦ／メタノール（実施例１６）、およびへプタン／メタノール（実施例１７）をそれぞれ使用した場合には、高純度（例えば、ＧＣ面積百分率で約９８％純度）のコレステロールが得られた。【００７２】
実施例１８
Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）を用いる製造方法において、前記実施例１等で用いるＴＨＦ／水の溶媒を、各種有機溶媒に変えて、コレステロールの純度の向上、およびデスモステロールの含量の減少について、溶媒の影響を調べた。
市販コレステロール（日本精化（株）品：商品名CHOLESTEROL）５ｇ（１２．９ｍｍｏｌ）を、有機溶媒２０ｇと水１０ｇの混合溶媒に懸濁させ、ＮＩＳ ０．３ｇ（１．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で３時間撹拌反応させた。
反応液に、20%ギ酸ナトリウム水溶液１．７５ｇを加えて有機層を脱色後、水層が分離するものは水層を除去した。反応液（有機層）を、メタノールで５０ｍＬに希釈し、混合物を５℃以下まで冷却し、その後に０〜５℃で１時間以上保ち、結晶を析出させた。析出物をろ過し、分離した析出物をメタノール ７ｍＬで洗浄した。析出物を減圧乾燥し、精製コレステロールを得た。
得られた精製コレステロールの純度およびデスモステロールの含有量を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によって測定した。結果を表３に示す。【００７３】
【表４】
2020095888.tif 000006
前記実施例１等における工程１で用いる有機溶媒を、ＴＨＦ／水に代えて、各種有機溶媒を用いて、コレステロールの純度およびデスモステロールの含量について調べたところ、エーテル類、ケトン類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類、アルコール類のいずれの場合についても、原料のコレステロールの純度と比べて著しく向上し、また、デスモステロールの含量が著しく低下した。特に、エーテル類、エステル類、アルコール類が好ましく、エーテル類がより好ましく、テトラヒドロフラン誘導体（例えば、テトラヒドロフランおよび２−メチルテトラヒドロフラン）が特に好ましいことが分かった。【００７４】
実施例１９
さらに、高純度のコレステロールを得るため、実施例４で調整した精製コレステロールを用いて、追加精製操作を行った。
精製コレステロール（実施例４の精製コレステロール） １２ｇを、数種の良溶媒に溶解しておき、貧溶媒を加えて結晶を析出させた。精製したスラリーを５℃以下まで冷却し、その後に０〜５℃で１時間以上保った後、析出物をろ過した。得られた析出物を貧溶媒 １０ｍＬで洗浄した。析出物を減圧乾燥し、高純度の精製コレステロールを得た。
得られた精製コレステロールの純度およびデスモステロールの含有量を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によって測定した。結果を表４に示す。【００７５】
【表５】
2020095888.tif 000007
上記表中、エントリー１８〜２３は、ＮＩＳ等を用いてヨウ素化処理して得られたコレステロールを原料として用いて、再精製処理を行った。一方で、エントリー２４は、ヨウ素化処理なしで得られたコレステロール（比較例４で調製したもの）を原料として用いて、再精製処理を行った。
追加精製前の各コレステロール原料の、コレステロール純度およびデスモステロール含量は、以下のとおりであった（以下、純度と含量は、ＨＰＬＣ測定時の面積百分率の値を記載した）。
ヨウ素化処理して得られたコレステロール原料（エントリー１８〜２２で使用）：
純度99.04 ％、デスモステロール含量 0.19 ％
低純度品のコレステロール（コレステロール純度が78.5％であり、そして、デスモステロール含量が12.3％である）をヨウ素化処理して得られたコレステロール原料（エントリー２３で使用）：
純度98.0 ％、デスモステロール含量 0.6 ％
ヨウ素化処理なしで得られたコレステロール原料（エントリー２４で使用）：
純度93.1 ％、デスモステロール含量 6.0 ％
上記の結果、エントリー１８〜２２の場合、実施例４で得られたヨウ素化処理して得られたコレステロールを原料として用いて、追加精製を行った場合には、約９９．５％程度の高純度コレステロールを得ることができた。また、エントリー２３の場合、低純度のコレステロール原料を用いても、ヨウ素化処理することによって、有意な程度の高い純度および有意な程度の低いデスモステロール含量を有するコレステロールを得ることができるため、追加精製を行った場合には、約９９．０％近い純度のコレステロールを得ることができた。
一方で、エントリー２４として、ヨウ素化処理をせずに得られたコレステロールを原料に用いた場合には、追加精製を行っても９５％以上の高純度のコレステロールを得ることはできなかった。
この結果より、本発明の製法におけるハロゲン化（例えば、ヨウ素化）処理した場合には、出発原料のコレステロール中に含まれるデスモステロールの含量を有意に低下させることができるため、続く、本実施例に示す追加精製により更にコレステロールの純度を向上することができることが分かった。一方で、ヨウ素化処理をせずに得られたコレステロールを用いた場合には、出発原料のコレステロール中に含まれているデスモステロールの含量を低下することができないために、本実施例の追加精製を行ってもコレステロールの純度を更に向上することが難しく、９５％以上の純度を有するコレステロールを得ることはできなかった。
【産業上の利用可能性】
【００７６】
本発明の製造方法により、不純物の含有量が極めて少ない、高純度のコレステロールを、工業的に効率的な方法で製造することができる。
【国際調査報告】
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