【手続補正書】
【提出日】平成21年1月8日(2009.1.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
顆粒球コロニー刺激因子ペプチドであって、前記ペプチドのアミノ酸残基に結合したグリコシル連結基を含んで成り、前記グリコシル連結基が、式
【化１】
2009501127.tif 000001
［式中、
Ｒ２はＨ、ＣＨ２ＯＲ７、ＣＯＯＲ７、またはＯＲ７であり、
ここで
Ｒ７は、Ｈ、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換へテロアルキルであり、
Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、置換もしくは非置換アルキル、ＯＲ８、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ９から独立して選択されるメンバーであり、
ここで
Ｒ８およびＲ９は、Ｈ、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換へテロアルキル、またはシアル酸から独立して選択され、
Ｌａは、結合、置換もしくは非置換アルキル、および置換もしくは非置換へテロアルキルから選択されるリンカーであり、
Ｒ１６およびＲ１７は、ポリマー腕から独立して選択され、
Ｘ２およびＸ４は、ポリマー部分Ｒ１６およびＲ１７をＣに結合する独立して選択されるリンケージ断片であり、
Ｘ５は非反応基である］
を有する修飾シアリル残基を含んで成る、顆粒球コロニー刺激因子ペプチド。
【請求項２】
部分
【化２】
2009501127.tif 000002
が、
【化３】
2009501127.tif 000003
［式中、
Ｑは、Ｈ、および置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルから選択され、
ｅおよびｆは、１〜２５００から独立して選択される整数であり、かつ
ｑは、０〜２０の整数である］
から選択されるメンバーである式を有する請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
前記部分が、
【化４】
2009501127.tif 000004
［式中、
Ｑは、Ｈ、および置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルから選択され、
ｅ、ｆおよびｆ’は、１〜２５００から独立して選択される整数であり、かつ
ｑおよびｑ’は、１〜２０から独立して選択される整数である］
から選択されるメンバーである式を有する、請求項２に記載のペプチド。
【請求項４】
前記グリコシル連結基が、
【化５】
2009501127.tif 000005
［式中、ｔは０または１である］
から選択される式を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項５】
前記グリコシル連結基が、式
【化６】
2009501127.tif 000006
［式中、ｔは０または１である］
を有する、請求項４に記載のペプチド。
【請求項６】
前記アミノ酸に結合した前記グリコシル連結基が式
【化７】
2009501127.tif 000007
［式中、ＡＡは前記ペプチドの前記アミノ酸残基である］
を有する、請求項５に記載のペプチド。
【請求項７】
前記アミノ酸残基がセリンまたはトレオニンから選択されるメンバーである、請求項６に記載のＧ−ＣＳＦペプチド。
【請求項８】
前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のＧ−ＣＳＦペプチド。
【請求項９】
前記アミノ酸残基が、配列番号１の位置１３３でトレオニンである、請求項８に記載のＧ−ＣＳＦペプチド。
【請求項１０】
前記ペプチドが、式
【化８】
2009501127.tif 000008
［式中、
Ｒ１５は前記修飾シアリル残基であり、かつ
ｐは１〜１０の整数である］
を有する基礎構造を含んで成る少なくとも１つのグリコシル連結基を含んで成る、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１１】
前記ペプチドのアミノ酸に結合した前記少なくとも１つのグリコシル連結基が、
【化９】
2009501127.tif 000009
およびそれの組合せから選択される式
［式中、
ＡＡは前記ペプチドの前記アミノ酸残基であり、
ｔは０または１に等しい整数であり、
ｐは１〜１０の整数であり、
Ｒ１５’は、Ｈ、ＯＨ、シアル酸、前記修飾シアリル残基、およびＳｉａ−Ｓｉａｐから選択されるメンバーであり、
ここで、
Ｓｉａｐは前記修飾シアリル残基であり、
ここで少なくとも１つのＲ１５’が前記修飾シアリル残基およびＳｉａ−Ｓｉａｐから選択される］
を有する、請求項１０に記載のペプチド。
【請求項１２】
前記アミノ酸残基がアスパラギン残基である、請求項１１に記載のペプチド。
【請求項１３】
前記ペプチドが生物活性顆粒球コロニー刺激因子ペプチドである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１４】
（ａ）
【化１０】
2009501127.tif 000010
から選択されるグリコシル部分を含んで成る基質顆粒球コロニー刺激因子ペプチドを、式
【化１１】
2009501127.tif 000011
［式中、ａは０または１である］
を有するＰＥＧ−シアル酸ドナーと接触させるステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）からの生成物を、前記ドナーから前記グリコシル部分のＧａｌへＰＥＧ−シアル酸を移動させる酵素と、前記移動に適切な条件下に接触させるステップとを含んで成る、請求項１に記載のペプチドを調製する方法。
【請求項１５】
ステップ（ａ）の前に、
（ｂ）適切な宿主において前記基質顆粒球コロニー刺激因子ペプチドを発現させるステップ
をさらに含んで成る、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記宿主が昆虫細胞および哺乳類細胞から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記昆虫細胞がスポドプテラ・フルギペルタ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞系である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
哺乳類に投与して、前記哺乳類における炎症性白血球産生を刺激するための医薬製剤を製造するための、請求項１に記載のペプチドの使用。
【請求項１９】
対象に投与して、それを必要とする前記対象における感染を治療するための医薬製剤を製造するための、前記対象における状態を緩和するために有効な量の請求項１に記載のペプチドの使用。
【請求項２０】
請求項１に記載の顆粒球コロニー刺激因子ペプチド、および医薬的に許容される担体を含んで成る医薬製剤。
【請求項２１】
顆粒球コロニー刺激因子ペプチドであって、前記ペプチドのアミノ酸残基に結合したグリコシル連結基を含んで成り、前記グリコシル連結基が、式
【化１２】
2009501127.tif 000012
［式中、
Ｒ２はＨ、ＣＨ２ＯＲ７、ＣＯＯＲ７、ＣＯＯ−またはＯＲ７であり、
ここで
Ｒ７は、Ｈ、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換へテロアルキルであり、
Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、置換もしくは非置換アルキル、ＯＲ８、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ９から独立して選択されるメンバーであり、
ここで
Ｒ８およびＲ９は、Ｈ、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換へテロアルキル、またはシアル酸から独立して選択され、
ｓは１〜２０の整数であり、
ｆは１〜２５００の整数であり、かつ
ＱはＨおよび置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルから選択されるメンバーである］
を有する修飾シアリル残基を含んで成る、顆粒球コロニー刺激因子ペプチド。
【請求項２２】
前記修飾シアリル残基が式
【化１３】
2009501127.tif 000013
を有する、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２３】
ＱがＨおよびＣＨ３から選択される、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２４】
前記ペプチドが、式
【化１４】
2009501127.tif 000014
［式中、
Ｒ１５は前記修飾シアリル残基であり、かつ
ｐは１〜１０の整数である］
を有する基礎構造を含んで成る少なくとも１つのグリコシル連結基を含んで成る、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２５】
前記ペプチドのアミノ酸に結合した前記少なくとも１つのグリコシル連結基が、
【化１５】
2009501127.tif 000015
およびそれの組合せから選択される式
［式中、
ＡＡは前記ペプチドの前記アミノ酸残基であり、
ｔは０または１に等しい整数であり、
ｐは１〜１０の整数であり、
Ｒ１５’は、Ｈ、ＯＨ、シアル酸、前記修飾シアリル残基、およびＳｉａ−Ｓｉａｐから選択されるメンバーであり、
ここで、
Ｓｉａｐは前記修飾シアリル残基であり、
ここで少なくとも１つのＲ１５’が前記修飾シアリル残基およびＳｉａ−Ｓｉａｐから選択される］
を有する、請求項２４に記載のペプチド。
【請求項２６】
前記アミノ酸残基がアスパラギンである、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２７】
前記グリコシル連結基が式
【化１６】
2009501127.tif 000016
［式中、ｂは０または１である］
を含んで成る、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２８】
ｓが１であり、ｆが約２００〜約３００の整数である、請求項２７に記載のペプチド。
【請求項２９】
前記アミノ酸残基がセリンまたはトレオニンから選択されるメンバーである、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項３０】
前記ペプチドが配列番号１のアミノ酸配列を有する、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項３１】
前記アミノ酸残基が配列番号１の位置１３３におけるトレオニンである、請求項３０に記載のペプチド。
【請求項３２】
前記ペプチドが配列番号２のアミノ酸配列を有する、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項３３】
前記アミノ酸残基が配列番号２の位置１３４におけるトレオニンである、請求項３２に記載のペプチド。
【請求項３４】
（ａ）
【化１７】
2009501127.tif 000017
から選択されるグリコシル部分を含んで成る基質顆粒球コロニー刺激因子ペプチドを、式
【化１８】
2009501127.tif 000018
［式中、ａは０または１である］
を有するＰＥＧ−シアル酸ドナーと接触させるステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）からの生成物を、前記ドナーから前記グリコシル部分のＧａｌＮａｃ、Ｇａｌ、またはＳｉａへＰＥＧ−シアル酸を移動させる酵素と、前記移動に適切な条件下に接触させるステップと
を含んで成る、請求項２１に記載の顆粒球コロニー刺激因子ペプチドを調製する方法。
【請求項３５】
ステップ（ａ）の前に、
（ｂ）適切な宿主において前記基質顆粒球コロニー刺激因子ペプチドを発現させるステップ
をさらに含んで成る、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記宿主が昆虫細胞である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記昆虫細胞が、スポドプテラ・フルギペルタ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞系である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ペプチドをメチオニンと接触させるステップをさらに含んで成る、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
ステップ（ｂ）の後に、前記ペプチドを精製するステップをさらに含んで成り、遊離メチオニンが前記精製するステップ中に存在する、請求項３４に記載の方法。
【請求項４０】
哺乳類に投与して、前記哺乳類における炎症性白血球産生を刺激するための医薬製剤を製造するための、請求項２１に記載のペプチドの使用。
【請求項４１】
対象に投与して、それを必要とする前記対象における感染を治療するための医薬製剤を製造するための、前記対象における状態を緩和する有効な量の請求項２１に記載のペプチドの使用。
【請求項４２】
請求項２１に記載の顆粒球コロニー刺激因子ペプチド、および医薬的に許容される担体を含んで成る医薬製剤。