(57)【要約】  腱損傷時の腱・腱鞘再生を促進、腱癒着による手指・足趾の可動機能の損失を軽減する乾燥羊膜を新たな再生材料として提供することを課題とする。  解決手段として、特定の乾燥処理により製造される乾燥羊膜、すなわち処理槽内に載置した生羊膜を処理槽内に設けた赤外線ヒーターによって連続して加温して、処理槽内を減圧状態とする減圧操作と、減圧状態の処理槽内を僅かに大気圧側に上昇させる復圧操作時に、この生羊膜に処理槽内に設けたマイクロ波発生装置からもマイクロ波を照射して羊膜中に存在する水分子にエネルギーを加えつつ乾燥を行う。これを複数回繰り返すことによって細胞・組織構造を保持しつつ乾燥させた羊膜は、腱縫合手術後の手指・足趾の可動機能の再生を促進し、再生材料として有用である。
2020045608.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腱・腱鞘の再生材料として用いられる、人を含む動物の胎児を包む生羊膜を乾燥処理して得た乾燥羊膜であって、前記乾燥羊膜が無菌状態の乾燥大気中で保存できるように脱水乾燥されており、かつ水又は緩衝液に浸漬して再水和した羊膜には、前記生羊膜を構成する上皮細胞、基底膜、及び結合組織が保持されている乾燥羊膜であることを特徴とする修復材。
【請求項２】
腱鞘の再生材料として用いられる請求項１記載の修復材。
【請求項３】
腱・腱鞘の再生材料として用いられる、人を含む動物の胎児を包む生羊膜を乾燥処理して得た乾燥羊膜であって、前記乾燥羊膜が無菌状態の乾燥大気中で保存できるように脱水乾燥されており、かつ水又は緩衝液に浸漬して再水和した羊膜には、前記生羊膜を構成する上皮細胞、基底膜、及び結合組織が保持されている乾燥羊膜であることを特徴とする修復材の使用。
【請求項４】
腱鞘の再生材料として用いられる請求項３記載の修復材の使用。
【請求項５】
人を含む動物の胎児を包む生羊膜を乾燥処理して得た乾燥羊膜であって、無菌状態の乾燥大気中で保存できるように脱水乾燥されており、かつ水又は緩衝液に浸漬して再水和した羊膜には、前記生羊膜を構成する上皮細胞、基底膜、及び結合組織が保持されている乾燥羊膜を、腱・腱鞘の再生材料として用いることを特徴とする腱・腱鞘の修復方法。
【請求項６】
腱鞘の再生材料である請求項５記載の腱・腱鞘の修復方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腱および腱鞘の再生・修復に関し、詳しくは腱および腱鞘の再生および修復に用いる医療材料としての特定の乾燥方法で製造される乾燥羊膜に関する。
【背景技術】
【０００２】
羊膜はコラーゲンと弾性線維で構成された強靱な生体膜であり、膀胱、尿道、尿管の補修材料としての利用（特許文献１）や、羊膜由来の２層のコラーゲン膜の間に、シート状の多孔中間剤からなる積層体を含む、脳硬膜、心膜など代用膜（特許文献２）が提案されている。【０００３】
羊膜は、移植の際に拒絶反応が起こりにくく、抗炎症作用や創修復促進作用を有し、皮膚熱傷後の被覆や臍ヘルニアの修復、人工膣、腹部手術の際の癒着防止等で用いられてきた。
近年、角膜・食道・気管・血管・皮膚・鼓膜などの再生にも羊膜が用いられているが、羊膜自体を用いる場合は、通常、凍結・解凍した羊膜が使用される。また、凍結保存ざれた羊膜を解凍し、これを含む免疫適合性のある羊膜組成物が腱修復に利用できることが報告されている（特許文献３）。一方、凍結羊膜は、保存性（‐80℃で3ケ月程度）や凍結・解凍が煩雑である点など課題があった。 この課題に対して、特定の乾燥処理により製造される乾燥羊膜が提案されている（特許文献４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開昭６３−２６０５４９
【特許文献２】特開平１０−１１３３８４
【特許文献３】ＷＯ２０１５／１７１４４
【特許文献４】特開２００７−５４０１５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
腱は高い滑走性により骨関節のスムースな運動を可能にしているが、外傷や手術により腱は容易に周囲組織と癒着し関節拘縮を生じる。腱癒着の予防に関して様々な試みがなされてきた。例えば、凍結保存された羊膜を解凍し、これを含む免疫適合性のある羊膜組成物が腱修復に利用するが報告されている（特許文献３）。
腱断裂に対する治療においては、手足の関節可動域の維持が後遺症の軽減のため求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
特定の乾燥処理により製造される乾燥羊膜は、凍結・解凍された羊膜と同様の抗炎症作用、感染抑制作用、上皮化促進作用を持っていると考えられ、創傷治癒を促進する性質を持つことから、腱鞘再生促進効果による腱損傷後に、通常、生じる腱癒着の防止が期待でき、さらに断裂した腱より離れた骨損傷部の治癒を促進することが期待できる。すなわち、手指・足趾の可動機能の再生が期待できる。【０００７】
本発明者らは、特定の乾燥処理により製造される乾燥羊膜それ自体を欠損・損傷した腱鞘治療に使用することで、癒着などの障害の抑制、可動機能の再生を促進を見いだし、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００８】
羊膜を保存、移植しやすいように特殊な方法で乾燥させたＨＤ羊膜を使用した腱・腱鞘の再生・修復では、腱・腱鞘の修復を促進するばかりでなく、腱縫合周囲部の癒着を軽減し、さらに、骨損傷部の治癒も促進する。その結果、骨折を伴った腱鞘再生では、ＨＤ羊膜を使用することで腱縫合周囲部の骨を巻き込む癒着を抑制しつつ、正常な骨形成がなされ、患者のQOLを向上させる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】関節可動領域（ROM）を測定結果の図である。
【図２】組織学的にHD羊膜とウサギ腱鞘組織の構造、免疫染色陽性細胞の分布を示す図である。
【図３】引っ張り試験による腱の引抜きテスト結果の図である。
【図４】癒着rating testの結果を示す図である。
【図５】骨折合併における骨形成のエックス線写真である。
【図６】ＨＤ羊膜を製造するための装置の構成図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
特定の乾燥処理により製造される乾燥羊膜とは、例えば、特許文献１に記載された乾燥羊膜（ハイパードライ羊膜、以下、ＨＤ羊膜）である。すなわち、処理槽内に載置した生羊膜を処理槽内に設けた赤外線ヒーターによって連続して加温して、処理槽内を減圧状態とする減圧操作と、減圧状態の処理槽内を僅かに大気圧側に上昇させる復圧操作時に、この生羊膜に処理槽内に設けたマイクロ波発生装置からもマイクロ波を照射して羊膜中に存在する水分子にエネルギーを加えつつ乾燥を行う。これを複数回繰り返すことによって製造される乾燥羊膜は、羊膜細胞自体は不活化されるが、その細胞・組織構造を保持できる。
【００１１】
腱は、筋と骨とを結びつけている繊維性の丈夫な組織であるが、特に手指と前腕に存在する屈筋とをつなぐ組織である屈筋腱は、指を屈曲させる指屈筋腱と手関節を屈曲させる橈側手根屈筋腱、尺側手根屈筋腱、長掌筋腱があり、腱鞘の中を滑走している。腱鞘には骨から離れないように靭帯性腱鞘と呼ばれる強靭な線維部と柔らかい膜性腱鞘がある。本発明における腱とは前記した腱および腱鞘を含む。
屈筋腱が、外傷、スポーツなどで部分断裂した場合、通常は、保存療法が可能であり、ギプス固定が行われるが、完全断裂の場合は、縫合手術が必要となる。腱縫合術後に癒着を生じる場合があるが、本発明における腱の癒着とは、腱縫合術後に生じる癒着を意味する。
【００１２】
本発明のＨＤ羊膜を腱の修復に用いるには、例えば、断裂した腱および／または腱鞘の周囲に、適宜の大きさのＨＤ羊膜のパッチを行えばよい。
【００１３】
＜モデル動物の治療効果＞
12週齢家兎の趾屈筋腱を基節骨レベルで断裂後に縫合し、4週間のギブス固定を行い、48趾をそれぞれ3群に分類した。腱縫合後にHD羊膜を縫合部の周囲に巻いた群（＋HD羊膜群）と腱縫合のみを行った群（腱縫合群）と無処置群（対照群）に分類した。Mechanical test、顕微鏡評価、組織学的評価を行った
なお、実験動物の取り扱いは、National Institutes of Health のガイドラインに従い、富山大学動物実験委員会の許可を得た。また、実験は富山大学動物実験委員会の指針に従って行った。
【００１４】
＜方法１＞関節可動域測定
全身麻酔下に安楽死させ、各群の足趾を採取する。採取した足趾の基節骨を計測台に固定し、趾先を屈曲方向・進展方向に動かして関節可動領域（ROM）を測定した。
腱を引っ張り、定量的に関節可動領域（ROM）を測定すると、ＨＤ羊膜を使用して治療した方（＋ＨＤ羊膜群）がポジティブコントロール（腱縫合群）に比べて有意に可動領域が大きかった（図1）
【００１５】
＜方法２＞組織学的（癒着の）評価
ＨＥ染色、免疫染色を行い、組織学的にＨＤ羊膜とウサギ腱鞘組織の構造、免疫染色陽性細胞の分布について分析した。この観察により腱鞘再生と同時に腱自体の変化および周囲との線維性癒着に関する形態学的評価が可能であった。
その結果、深指屈筋腱と浅指屈筋腱の間など腱周囲の癒着を形態学的に検証すると、ＨＤ羊膜を使用して治療すると癒着が見られなかった（図２）。
【００１６】
＜方法３＞引き抜き強度の測定（癒着の程度）
採取した足趾で屈筋腱を縫合部より近位（MTP部）で切断する。牽引強度測定試験機に趾肢の基節部を固定しておき、腱の遠位側が付着する末節骨を牽引クランプで把持して、一定速度で牽引する。これにより腱が引き抜ける時の強度が測定され、癒着の程度が引き抜き強度に反映される。すなわち、固定した趾肢から腱を一定速度で牽引し、癒着強度を力学的に評価した。
その結果、ＨＤ羊膜を使用して治療した方（＋HD羊膜群）が引き抜く際に必要な張力がポジティブコントロール（腱縫合群）に比べて少ない傾向であった（図３）
【００１７】
＜方法４＞骨と腱の間の癒着を評価（癒着rating test）
採取した足趾を実体顕微鏡下で癒着の程度を整形外科領域で一般的に用いられている下記の評価でスコアリングした。
０点：正常。つるつるした表面。
１点：容易に滑る。腱滑走を妨げない程度の介在物の存在。
２点：鈍的剥離。ピンセットを使用して剥離できる。
３点：鋭的剥離。メスで切開して剥離できる。
癒着rating testでは、羊膜を用いて治療した群（（＋HD羊膜群）の方がポジティブコントロール（腱縫合群）に比べて有意にコントロール（対照群）に近い値を示した（図４）。
【００１８】
＜方法５＞腱断裂としばしば同時に発生する骨折の治癒に対する安全性の評価
臨床的には、腱断裂を生じる指外傷にはしばしば骨折が合併する。腱鞘再生を促進するＨＤ羊膜が骨折部における骨形成に悪影響を及ぼさないことは、治療の安全性の面から確認しておく必要がある。そこで、趾骨の屈筋腱に接する面に骨欠損を生じさせた不全骨折モデルを作成し、この面と屈筋腱の間に乾燥羊膜を留置して閉創した群と、何も置かずに閉創した群を作成し、XPでみた骨形成に差が生じるかを検討した。
その結果、ＨＤ羊膜を用いて治療を行っても骨形成を阻害することはなかった。（図５）。
【００１９】
＜ＨＤ羊膜の製造＞
図６に示す乾燥装置を用いて下記の真空・遠赤外線・マイクロウエーブ各装置の条件において、生羊膜を乾燥した。
・乾燥槽加温：50℃、F.I.R：50℃、ストッフ゜弁：37％、最高到達圧力0.34kPa  空運転最高到達圧力0.33kPa
・乾燥処理の方法
（１）減圧  180sec 
（２）復圧  30sec（ストッフ゜弁開度37％）
マイクロ波投入  0.1kw−180sec（復圧は継続）
（３）減圧  180sec 
（４）以降、（２）・（３）の繰返し
（５）乾燥終了は、（３）の180sec減圧後到達圧力を確認し（0.30〜0.35 kPa）、手動にて行う。
大気圧まで復圧し終了
【産業上の利用可能性】
【００２０】
特定の乾燥処理により製造される乾燥羊膜、すなわち処理槽内に載置した生羊膜を処理槽内に設けた赤外線ヒーターによって連続して加温して、処理槽内を減圧状態とする減圧操作と、減圧状態の処理槽内を僅かに大気圧側に上昇させる復圧操作時に、この生羊膜に処理槽内に設けたマイクロ波発生装置からもマイクロ波を照射して羊膜中に存在する水分子にエネルギーを加えつつ乾燥を行う。これを複数回繰り返すことによって細胞・組織構造を保持しつつ乾燥させた羊膜は、保存性が向上すると共に、移植用材料としても取り扱いがしやすい。この乾燥羊膜は、手指・足趾の可動機能の再生を促進させ、医療材料として有用である。また、前記乾燥羊膜を使用した腱の再生・修復治療では、腱縫合周囲部の癒着を軽減するだけでなく、骨損傷部の治癒を促進し患者のＱＯＬを向上させる。
【図１】
2020045608.tif 000003
【図２】
2020045608.tif 000004
【図３】
2020045608.tif 000005
【図４】
2020045608.tif 000006
【図５】
2020045608.tif 000007
【図６】
2020045608.tif 000008
【国際調査報告】
2020045608.tif 000009
2020045608.tif 000010
2020045608.tif 000011
2020045608.tif 000012