(57)【要約】  本発明は、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法であって、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査を受けた対象の血液中のＤ−セリン量を測定する工程、Ｄ−セリン量と、所定の閾値とを比較する工程、及び血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定する工程、を含む前記方法、並びに当該方法を実施する試料分析システム及びプログラムを提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法であって、
血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査を受けた対象の血液中のＤ−セリン量を測定する工程、
Ｄ−セリン量と、所定の閾値とを比較する工程、及び
血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定する工程
を含む、前記方法。
【請求項２】
腎機能検査結果の妥当性を検定する方法が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の偽陽性及び／又は偽陰性を判定する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記決定工程が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と決定する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記決定工程が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定する、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
同一サンプルにおいて、Ｄ−セリン量及び血液中のクレアチニン量が測定される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記対象が、筋肉量の多い対象である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
記憶部と、入力部、分析測定部と、データ処理部と、出力部とを含み、クレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する試料分析システムであって、
記憶部は、入力部から入力されたＤ−セリン量の閾値を記憶し、
記憶部は、入力部から入力された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶し、
分析測定部は、血液試料中のＤ−セリンを分離定量し、
データ処理部は、Ｄ−セリン量を、記憶部に記憶されたＤ−セリン量の閾値と比較し、記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部が血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力する
を含む、前記試料分析システム。
【請求項８】
腎機能検査結果の妥当性の判定が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の偽陽性及び／又は偽陰性を判定する、請求項７に記載の試料分析システム。
【請求項９】
前記判定が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と判定する、請求項８に記載の試料分析システム。
【請求項１０】
前記判定が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定する、請求項８に記載の試料分析システム。
【請求項１１】
同一サンプルにおいて、Ｄ−セリン量及び血液中のクレアチニン量が測定される、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の試料分析システム。
【請求項１２】
入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定させるプログラムであって、以下の：
入力部から入力されたＤ−セリン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のＤ−セリン量を記憶させ、
記憶部に記憶されたＤ−セリン量と、Ｄ−セリン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、閾値を上回るか下回るかについて比較の結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果と、比較の結果を読み出し、腎機能検査の結果の妥当性を判定して、記憶部に記憶させ、
記憶された妥当性を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む、前記プログラム。
【請求項１３】
入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定させるプログラムであって、以下の：
入力部から入力された血液中のクレアチニン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のクレアチニン量を記憶させ、
入力部から入力されたＤ−セリン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のＤ−セリン量を記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量と、血液中のクレアチニン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、クレアチニン量に基づく腎機能検査結果を記憶部に記憶させ
記憶部に記憶されたＤ−セリン量と、Ｄ−セリン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、比較の結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果と、比較の結果を読み出し、腎機能検査の結果の妥当性を判定して、記憶部に記憶させ、
記憶された妥当性を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む、前記プログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法、当該方法を実施する試料分析システム、及びプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
腎機能を表す指標として糸球体濾過量（ＧＦＲ）が用いられている。糸球体濾過量は、糸球体で血液から１分間に濾過される液量を表し、その国際標準測定法はイヌリンクリアランスである。しかしながら、イヌリンクリアランスは、２時間にわたるイヌリンの持続点滴、及び複数回にわたる採尿及び採血と、正確な測定が必要であり、被験者及び実施者の負担が大きい。このようなことから、国際標準測定法としては確立されているものの、各国における医療の諸事情から、実地診療が導入されず、代替マーカーによる糸球体濾過量の決定が行われていることもある。日本では、イヌリンクリアランスによるＧＦＲの測定は２００６年に検査として保険適用されたものの、限定された状況でのみ行われるにとどまっており、日常の臨床現場では、他の腎機能マーカーを用いた推算式が用いられている。このように、糸球体濾過量のゴールドスタンダードであるイヌリンクリアランスが使用されない弊害として、腎機能の正確な判定や、それにともなう腎臓病の早期発見が難しくなっているという問題がある。【０００３】
イヌリンクリアランスに代わる糸球体濾過量の決定方法として、イヌリン以外の物質のクリアランスに基づく方法、さらには血液中の腎機能マーカー値に基づく方法が開発されている。これらは、国際標準測定法であるイヌリンクリアランスに対する相関を調べることで、ＧＦＲの決定に用いられている。現在最も汎用されている腎機能マーカーであるクレアチニンは、体外からの物質の投与を必要としない点で優れており、年齢と性別情報を組み合わせた下記の式により、推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が決定されている：
【数１】
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【０００４】
このように決定されたｅＧＦＲは、健康診断や医療現場で広く使用されている。しかしながら、ｅＧＦＲは、腎機能の悪化についてのスクリーニングに用いることや、多数の対象者を比較するような疫学研究における簡便かつ客観的な評価を主眼として作成された指標であり、個別の患者の腎機能評価には、依然としてイヌリンを用いたイヌリンクリアランスを用いることが日本腎臓学会により推奨されている。【０００５】
その理由として、そもそもクレアチニンは、生体のクレアチンより産生される物質であり、腎機能よりも、被験者の筋肉量、日内変動、食事の種類等、他の要因により影響される点が挙げられる。例えば、アスリート等の筋肉量が多い対象において、ｅＧＦＲが低くなる傾向がある一方で、寝たきりや低栄養等で筋肉量が少ない対象においては、ｅＧＦＲが高くなる傾向があり、日本人とは異なる人種では本来のＧＦＲからの乖離が大きくなる。このように、ｅＧＦＲにより、腎機能についてスクリーニングを行うと、偽陽性と偽陰性の判定がされる恐れがある。【０００６】
従来、哺乳類の生体には存在しないと考えられていたＤ−アミノ酸が、様々な組織に存在し、生理機能を担うことが明らかにされてきている。また、血液中のＤ−アミノ酸のうち、Ｄ−セリン、Ｄ−アラニン、Ｄ−プロリン、Ｄ−グルタミン酸、Ｄ−アスパラギン酸の濃度が、腎不全患者で変動し、クレアチニンと相関することから、腎不全の診断マーカーになり得ることが示されている（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４）。さらに、Ｄ−セリン、Ｄ−スレオニン、Ｄ−アラニン、Ｄ−アスパラギン、Ｄ−アロスレオニン、Ｄ−グルタミン、Ｄ−プロリン及びＤ−フェニルアラニンからなるグループから選択されるアミノ酸が、腎臓病の病態指標値とすることについて開示されている（特許文献１）。これらの文献では、健常者と比較して、腎臓病を患う患者の血液中のＤ−アミノ酸が変動していることから、これらの変動を指標にして腎臓病の診断が可能になる旨が開示されている。
その一方で、血液中のＤ−アミノ酸量によって、イヌリンクリアランスを基準とした糸球体濾過能力が決定できることについては何ら記載も示唆もされていない。なお、近年、腎臓病のマーカーとして、尿中Ｌ−ＦＡＢＰ、血液中ＮＧＡＬ、尿中ＫＩＭ−１等が開発されてきているが、腎臓病のマーカーであったとしても、必ずしも糸球体濾過能力の決定・推定できるものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１３／１４０７８５号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，Ｔ．ら、Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  １８：  １１３０（１９９５）
【非特許文献２】Ｎａｇａｔａ．Ｙ  Ｖｉｖａ  Ｏｒｉｇｉｎｏ  Ｖｏｌ．１８（Ｎｏ．２）  （１９９０）第１５回学術講演会講演要旨集
【非特許文献３】Ｉｓｈｉｄａら、北里医学  ２３：５１〜６２  （１９９３）
【非特許文献４】Ｙｏｎｇ  Ｈｕａｎｇら、Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ２１：（２）１５６-１６２（１９９８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
健康診断において、腎機能検査を目的として血液中のクレアチニン量や、血液中のクレアチニン量に基づく推算糸球体濾過量が算出されるが、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査では、筋肉量や食事による影響を受けるため、結果の判定において偽陽性及び偽陰性が含まれうる。本発明ではこうした偽陽性及び偽陰性を検定することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、血液中のＤ−セリンに着目し、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）との相関を調べていたところ、驚くべきことに、現在汎用されている血液中のクレアチニン量よりも、血液中のＤ−セリン量が、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）に相関が高いことを見出し、本発明に至った。【００１１】
そこで、本発明は下記に関する：
［１］  血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法であって、
血液中クレアチニン量に基づく腎機能検査を受けた対象の血液中のＤ−セリン量を測定する工程、
Ｄ−セリン量と、所定の閾値とを比較する工程、
血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定する工程
を含む、前記方法。
［２］  腎機能検査結果の妥当性を検定する方法が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の偽陽性及び／又は偽陰性を判定する、項目１に記載の方法。
［３］  前記決定工程が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値を超えた場合に、偽陽性と決定する、項目２に記載の方法。
［４］  前記決定工程が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陰性と決定する、項目２に記載の方法。
［５］  同一サンプルにおいて、Ｄ−セリン量及び血液中クレアチニン量が測定される、項目１〜４のいずれか一項に記載の方法。
［６］  前記対象が、筋肉量の多い対象である、項目１〜５のいずれか一項に記載の方法。
［７］  偽陰性又は真陰性と判定された対象に対し、治療介入が行われる、項目１〜６のいずれか一項に記載の方法。
［８］  前記治療介入が、生活習慣改善、食事指導、血圧管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、血糖値管理、免疫管理及び脂質管理からなる群から選ばれる、項目７に記載の方法。
［９］  前記治療介入として、利尿薬、カルシウム拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシン受容体拮抗薬、交感神経遮断薬、ＳＧＬＴ２阻害薬、スルホニル尿素薬、チアゾリジン薬、ビグアナイド薬、α―グルコシダーゼ阻害薬、グリニド薬、インスリン製剤、ＮＲＦ２活性化剤、免疫抑制剤、スタチン系薬剤、フィブラート系薬剤、貧血治療薬、エリスロポエチン製剤、ＨＩＦ−１阻害剤、鉄剤、電解質調整薬、カルシウム受容体作動薬、リン吸着剤、尿毒素吸着剤、ＤＰＰ４阻害薬、ＥＰＡ製剤、ニコチン酸誘導体、コレステロールトランスポーター阻害剤、およびＰＣＳＫ９阻害剤からなる群から選ばれる少なくとも１の薬剤を前記対象に投与することを含む、項目７又は８に記載の方法。
［１０］  記憶部と、入力部、分析測定部と、データ処理部と、出力部とを含み、クレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する試料分析システムであって、
記憶部は、入力部から入力されたＤ−セリン量の閾値を記憶し、
記憶部は、入力部から入力された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶し、
分析測定部は、血液試料中のＤ−セリンを分離定量し、
データ処理部は、Ｄ−セリン量を、記憶部に記憶されたＤ−セリン量の閾値と比較し、記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部が血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力する
を含む、前記試料分析システム。
［１１］  記憶部と、入力部、分析測定部と、データ処理部と、出力部とを含み、クレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する試料分析システムであって、
記憶部は、入力部から入力されたＤ−セリン量の閾値を記憶し、
記憶部は、入力部から入力された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶し、
分析測定部は、血液試料中のＤ−セリンを分離定量し、
データ処理部は、Ｄ−セリン量を、記憶部に記憶されたＤ−セリン量の閾値と比較し、記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部が血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力する
を含む、前記試料分析システム。
［１２］  腎機能検査結果の妥当性の判定が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の偽陽性及び／又は偽陰性を判定する、項目１１に記載の試料分析システム。
［１３］  前記判定が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と判定する、項目１２に記載の試料分析システム。
［１４］  前記判定が、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、Ｄ-セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定する、項目１２に記載の試料分析システム。
［１５］  同一サンプルにおいて、Ｄ−セリン量及び血液中のクレアチニン量が測定される、項目１０〜１４のいずれか一項に記載の試料分析システム。
［１６］  入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定させるプログラムであって、以下の：
入力部から入力されたＤ-セリン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のＤ−セリン量を記憶させ、
記憶部に記憶されたＤ−セリン量と、Ｄ−セリン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、閾値を上回るか下回るかについて比較の結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果と、比較の結果を読み出し、腎機能検査の結果の妥当性を判定して、記憶部に記憶させ、
記憶された妥当性を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む、前記プログラム。
［１７］  入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定させるプログラムであって、以下の：
入力部から入力された血液中のクレアチニン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のクレアチニン量を記憶させ、
入力部から入力されたＤ-セリン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のＤ−セリン量を記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量と、血液中のクレアチニン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、クレアチニン量に基づく腎機能検査結果を記憶部に記憶させ
記憶部に記憶されたＤ−セリン量と、Ｄ−セリン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、比較の結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果と、比較の結果を読み出し、腎機能検査の結果の妥当性を判定して、記憶部に記憶させ、
記憶された妥当性を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む、前記プログラム。
【発明の効果】
【００１２】
本発明は、血液中のクレアチニン量による腎機能判定にあわせて、よりＧＦＲ（イヌリンクリアランス）に対し相関の高いＤ−セリン量を用いることにより、血液中のクレアチニン量による腎機能判定の妥当性を判定することが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、血液中のＤ−セリン量（Ａ）及びクレアチニン量（Ｂ）と、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）（体表面積補正済み）との散布図を示したグラフである。
【図２】図２は、血液中のＤ−セリン量（Ａ）及びクレアチニン量（Ｂ）と、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）（体表面積補正無し）との散布図を示したグラフである。
【図３】図３は、血液中のＤ−セリン量（Ａ）及びクレアチニン量（Ｂ）と、体表面積（ＢＳＡ）との散布図を示したグラフである。
【図４】図４は、本発明の試料分析システムの構成図を示す。
【図５】図５は本発明のプログラムによる腎機能検査結果の妥当性を検定するための動作の例を示すフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法に関する。より具体的に、本発明の検定方法は、以下の：
血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査を受けた対象の血液中のＤ−セリン量を測定する工程、
Ｄ−セリン量と、所定の閾値とを比較する工程、
血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定する工程
を含む。
【００１５】
一の態様では、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法とは、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の偽陰性又は偽陽性を決定する方法に関する。偽陰性又は偽陽性を決定する工程は、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と決定し、又は血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定することができる。
【００１６】
本発明の別の態様では、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法とは、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の真陰性又は真陽性を決定する方法であってもよい。真陰性又は真陽性を決定する工程は、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より高い場合に、真陽性と決定し、又は血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、真陰性と決定することができる。
【００１７】
本発明において、指標として用いられるＤ−セリンは、タンパク質を構成するアミノ酸であるＬ−セリンの光学異性体である。Ｄ−セリン量は、主にセリンラセマーゼやＤ−アミノ酸オキシダーゼ等の代謝酵素によって、各組織や血液中で厳密に制御されている一方で、腎障害が生じた場合には血液中のＤ−セリン量が変動する。
【００１８】
本発明において「血液中のＤ−セリン量」とは、特定の血液量中のＤ−セリン量のことを指してもよく、濃度で表されてもよい。血液中のＤ−セリン量は、採取された血液において、遠心分離、沈降分離、あるいは分析のための前処理が行われた試料における量として測定される。したがって、血液中のＤ−セリン量は、採取された全血、血清、血漿等の血液に由来する血液試料における量として測定されうる。一例として、ＨＰＬＣを用いた分析の場合、所定量の血液に含まれるＤ−セリン量は、クロマトグラムで表され、ピークの高さ・面積・形状について標準品との比較やキャリブレーションによる解析によって定量されうる。Ｄ−セリン濃度が既知のサンプルとの比較により、血液中のＤ−セリン量を測定することが可能であり、血液中のＤ−セリン量として、血液中のＤ−セリン濃度を用いることができる。また、酵素法では、標準品の検量線を用いた定量解析により、アミノ酸濃度を算出可能である。
【００１９】
補正のための式は、一例として、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）への相関から決定しうる。イヌリンクリアランスと、血液中のＤ−セリン量との相関から算出された式又はグラフに、被験者のＤ−セリン量を代入することで決定することができる。イヌリンクリアランスは、体表面積補正済みのイヌリンクリアランスであってもよいし、体表面積補正前のイヌリンクリアランスであってもよい。体表面積補正前と補正後の糸球体濾過能力のどちらが必要かに応じて、選択することができる。
【００２０】
Ｄ−セリン量は、任意の方法によって測定することができ、例えばキラルカラムクロマトグラフィーを用いた測定や、酵素法を用いた測定、さらにはアミノ酸の光学異性体を識別するモノクローナル抗体を用いる免疫学的手法によって定量することができる。本発明における試料中のＤ−セリン量の測定は、当業者に周知ないかなる方法を用いて実施しても構わない。例えば、クロマトグラフィー法や酵素法（Y. Nagata et al., Clinical Science, 73 (1987), 105. Analytical Biochemistry, 150 (1985), 238., A. D'Aniello et al., Comparative Biochemistry and Physiology Part B, 66 (1980), 319. Journal of Neurochemistry, 29 (1977), 1053., A. Berneman et al., Journal of Microbial & Biochemical Technology, 2 (2010), 139., W. G. Gutheil et al., Analytical Biochemistry, 287 (2000), 196., G. Molla et al., Methods in Molecular Biology, 794 (2012), 273., T. Ito et al., Analytical Biochemistry, 371 (2007), 167. 等）、抗体法（T. Ohgusu et al., Analytical Biochemistry, 357 (2006), 15.,等 ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）（H. Hasegawa et al., Journal of Mass Spectrometry, 46 (2011), 502., M. C. Waldhier et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 394 (2009), 695., A. Hashimoto, T. Nishikawa et al., FEBS Letters, 296 (1992), 33., H. Bruckner and A. Schieber, Biomedical Chromatography, 15 (2001), 166. , M. Junge et al., Chirality, 19 (2007), 228., M. C. Waldhier et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 4537. 等）、キャピラリー電気泳動法（ＣＥ）（H. Miao et al., Analytical Chemistry, 77 (2005), 7190., D. L. Kirschner et al., Analytical Chemistry, 79 (2007), 736., F. Kitagawa, K. Otsuka, Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3078., G. Thorsen and J. Bergquist, Journal of Chromatography B, 745 (2000), 389. 等）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（N. Nimura and T. Kinoshita, Journal of Chromatography, 352 (1986), 169., A. Hashimoto et al., Journal of Chromatography, 582 (1992), 41., H. Bruckner et al., Journal of Chromatography A, 666 (1994), 259., N. Nimura et al., Analytical Biochemistry, 315 (2003), 262., C. Muller et al., Journal of Chromatography A, 1324 (2014), 109., S. Einarsson et al., Analytical Chemistry, 59 (1987), 1191., E. Okuma and H. Abe, Journal of Chromatography B, 660 (1994), 243., Y. Gogami et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3259., Y. Nagata et al., Journal of Chromatography, 575 (1992), 147., S. A. Fuchs et al., Clinical Chemistry, 54 (2008), 1443., D. Gordes et al., Amino Acids, 40 (2011), 553., D. Jin et al., Analytical Biochemistry, 269 (1999), 124., J. Z. Min et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3220., T. Sakamoto et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 517., W. F. Visser et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 7130., Y. Xing et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 141., K. Imai et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 106., T. Fukushima et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 10., R. J. Reischl et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 8379., R. J. Reischl and W. Lindner, Journal of Chromatography A, 1269 (2012), 262., S. Karakawa et al., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 115 (2015), 123., 等）がある。
【００２１】
本発明における光学異性体の分離分析系は、複数の分離分析を組み合わせてもよい。より具体的に、光学異性体を有する成分を含む試料を、移動相としての第一の液体と共に、固定相としての第一のカラム充填剤に通じて、前記試料の前記成分を分離するステップ、前記試料の前記成分の各々をマルチループユニットにおいて個別に保持するステップ、前記マルチループユニットにおいて個別に保持された前記試料の前記成分の各々を、移動相としての第二の液体と共に、固定相としての光学活性中心を有する第二のカラム充填剤に流路を通じて供給し、前記試料の成分の各々に含まれる前記光学異性体を分割するステップ、及び前記試料の成分の各々に含まれる前記光学異性体を検出するステップを含むことを特徴とする光学異性体の分析方法を用いることにより、試料中のＤ-／Ｌ-アミノ酸量を測定することができる（特許第４２９１６２８号）。ＨＰＬＣ分析では、予めｏ−フタルアルデヒド（ＯＰＡ）や４−フルオロ−７−ニトロ−２，１，３−ベンゾキサジアゾール（ＮＢＤ−Ｆ）のような蛍光試薬でＤ−及びＬ−アミノ酸を誘導体化したり、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−システイン（Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙｓ）等を用いてジアステレオマー化する場合がある（浜瀬健司及び財津潔、分析化学、５３巻、６７７−６９０（２００４））。代替的には、アミノ酸の光学異性体を識別するモノクローナル抗体、例えばＤ−セリン、Ｌ−セリン等に特異的に結合するモノクローナル抗体を用いる免疫学的手法によってＤ−アミノ酸を測定することができる。また、Ｄ体及びＬ体の合計量を指標とする場合、Ｄ体及びＬ体を分離して分析する必要はなく、Ｄ体及びＬ体を区別せずにアミノ酸を分析することもできる。その場合も酵素法、抗体法、ＧＣ、ＣＥ、ＨＰＬＣで分離及び定量することができる。
【００２２】
本発明において検定対象であるクレアチニンは、主に筋肉による活動により、クレアチンリン酸から分解されて血液中に放出される。血液中のクレアチニンは小分子であることから、糸球体による濾過を受けて、原尿となり、そのまま再吸収されずに尿中に排出される。したがって、糸球体の濾過能力が低下することで、血液中におけるクレアチニン濃度が増加することから、腎機能の指標として、血液中のクレアチニン量、又は血液中のクレアチニン量から推算される糸球体濾過量が用いられる。推算糸球体濾過量の算出式として、体重、年齢、性別による補正を行う古典的な式として、Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ−Ｇａｕｌｔの式が知られ、さらに体表面積の補正を行ったＭＤＲＤ式、ＣＫＤ−ＥＰＩ式等が開発されている。日本では、イヌリンクリアランスを標準とした下記の推算式が開発されている：
【数２】
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しかしながら、筋肉量の影響や、肉の大量摂取により血液中クレアチニン量が増加することが知られている。また、血液中クレアチニン量は、腎機能の悪化がかなり進行して初めて異常値を示すようになることから、標準的な対象であっても、６０ｍＬ／分／１．７３ｍ2以上の値では、正しい評価ができないことも知られている。
【００２３】
上述のように、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査について問題が報告されているものの、これまで汎用されてきた実績から、健康診断において腎機能検査として血液中のクレアチニン量及び/又は血液中のクレアチニン量に基づく推算糸球体濾過量が多く採用されている。例えば血液中のクレアチニン量の場合、男性であれば１．００ｍｇ／ｄＬを閾値とし、女性であれば０．７ｍｇ／ｄＬを閾値とされ、それを上回ると、腎機能が低下していると判定され、下回っていれば正常であると判定される。また、推算糸球体濾過量を用いる場合、日本では、イヌリンクリアランスを標準とした推算式に基づいて推算糸球体濾過量が計算され、閾値として６０．０ｍＬ／分／１．７３ｍ2が用いられ、この閾値を下回ると腎機能が低下していると判定され、上回っていれば正常であると判定される。血液中のクレアチニン量及び推算糸球体濾過量において、腎機能の低下を示す閾値は、学会主導の調査等で変更されることがあり、上述の数値に捕らわれることを意図するものではない。筋肉量の影響を直接受ける血液中のクレアチニン量はもちろんのこと、年齢と性別で補正された推算糸球体濾過量の場合であっても、アスリートや痩せた高齢者等の筋肉量について特殊な被験者では、偽陽性の問題及び偽陰性の問題が生じることになる。健康診断等の一次スクリーニングの結果に、偽陰性の結果が含まれることにより、初期の腎臓病を見逃しているという実態がある。腎機能は基本的に一度失われると回復が見込めないことから、初期の腎臓病について、偽陰性を見逃さずに腎機能を判定することが好ましい。また、偽陽性が含まれていた場合、対象は通常２次検査を受診することになり、そこでほかの症候やマーカー等の値から総合的に腎臓病が判断されるが、個別の腎機能の確定にはイヌリンクリアランスの測定が推奨されており、対象のみならず、医療関係者への負担が大きい。上述の通りクレアチニンは、軽度の腎機能低下におけるイヌリンクリアランスへの相関が低いことから、軽度の腎機能低下を示す対象において、陰性と判定してしまう可能性が高い。その一方で、血液中のＤ−セリン量は、軽度の腎機能低下についても、イヌリンクリアランスに対しての相関が高く、軽度の腎機能低下を示す対象にいてクレアチニン検査の偽陰性を判定できる。また、クレアチニン量は、筋肉量による影響が大きいことも偽陰性・偽陽性を招く原因である一方で、血液中のＤ−セリンは、筋肉量への相関を示さず、どのような体格の対象においても偽陰性・偽陽性を招く可能性が低い。よって、筋肉量の多い対象、特に定期的な運動や筋力トレーニングを行ったり、日常的に高蛋白食を摂取している対象について、本発明の偽陽性・偽陰性を判定する方法を実施することが特に好ましい。筋肉量の多い対象は、生体インピーダンス法等により決定することができる。予めインピーダンス法等で筋肉量を定量するか、又はアンケートにより、日常的な運動量を調査しておくことで、筋肉量の多い対象を選択することができる。
【００２４】
本発明において、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査とは、血液中のクレアチニン量を用いた検査であってもよいし、血液中のクレアチニン量から導かれた数値を利用する検査であってもよい。血液中のクレアチニン量から導かれた数値としては、一例として推算糸球体濾過量であるが、これに限定されることを意図するものではない。血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査を受けた対象とは、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査を予め受けていてもよいし、同時に受けてもよい。腎機能検査を同時に受けるとは、同日に採取された同一血液試料又は異なる血液試料を用いて検査されてもよいし、異日に採取された血液試料を用いて検査されてもよい。
【００２５】
血液中のＤ−セリン量は、理論に限定されることを意図するものではないが、血液中クレアチニン量とは異なり筋肉量による影響は少ないことに加えて、血液中のクレアチニン量に比較して、イヌリンクリアランスへの相関が高いことが利点である。したがって、血液中のＤ−セリン量を、従来の健康診断等で測定された血液中のクレアチニン量や、血液の中クレアチニン量に基づく推算糸球体濾過量に付随する偽陽性又は偽陰性の問題を解決することができる。
【００２６】
本発明において、偽陽性とは、第一種過誤のことを指す。具体的に、血液中のクレアチニン量及び/又は血液中のクレアチニン量に基づく推算糸球体濾過量による検査では陽性（すなわち、腎機能低下）と判定された一方で、実際は腎機能低下を患っていないことをいう。偽陰性とは、第二種過誤のことを指す。具体的に血液中のクレアチニン量及び/又は血液中のクレアチニン量に基づく推算糸球体濾過量による検査では陰性（すなわち、腎機能正常）と判定された一方で、実際は腎機能低下を患っているこということをいう。理論に限定されることを意図するものではないが、アスリート等の筋肉量の多い対象では、血液中のクレアチニン量及び/又は血液中クレアチニン量に基づく推算糸球体濾過量による検査において、偽陽性の可能性が増加し、一方寝たきりや低栄養等で筋肉量が少ない対象では、偽陰性の可能性が増加する。偽陽性及び偽陰性、さらには真陽性及び真陰性については下記の表を参照することで容易に理解することができる。
【表１】
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【００２７】
偽陽性の決定は、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と決定することにより行われる。偽陰性の決定は、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定することにより行われる。これらの閾値は、対象の要素、例えば性別、年齢、体重等の区分によらず１の値を用いてもよいし、区分にしたがってそれぞれ決定されてもよい。
【００２８】
本発明において、偽陽性又は偽陰性を検定する方法は、真陽性又は真陰性を検定する方法と換言することもできる。具体的に、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値を超えた場合に、真陽性と決定することにより行われる。真陰性の決定は、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より高いい場合に、真陰性と決定することにより行われる。
【００２９】
本発明の検定方法は、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査を受けた対象の血液試料について行われるが、かかる血液試料は、血液中のクレアチニン量を測定するために用いた血液試料と同一試料であってもよいし、血液中のクレアチニン量を測定するために用いた血液試料とは、異なる時点で採取された試料であってもよい。
【００３０】
本発明の妥当性の検定方法は、閾値との比較により行われることから医師による判断を含まない。本発明の検定方法の結果に基づくことで、医師は腎臓病をより正確に診断することができる。したがって、本発明の検定方法は、診断の予備的方法又は診断の補助方法である。本発明の方法は、医師以外の者、例えば血液の分析業者、健康診断業者、データ処理会社、分析システム、及び分析プログラム等により実施されうる。本発明のさらに別の態様では、本発明の妥当性の検討方法を利用し、腎機能又は腎臓病を診断する方法に関してもよい。
【００３１】
本発明の、偽陽性及び偽陰性の検定により、腎機能の低下と判定された場合、腎機能のさらなる悪化を防ぐために早期治療又は保健指導が特に有効である。保健指導は、主に、生活習慣改善、食事指導、血圧管理、血糖値管理、及び脂質管理等が、独立に又は組み合わせて指導される。食事指導としては、減塩及びタンパク質制限が行われる。血圧管理としては、１３０／８０ｍｍＨｇ以下となるように、管理が行われうる。血糖値は、Ｈｂａ１ｃ６．９％未満に管理が行われる。脂質管理では、ＬＤＬ−Ｃ１２０ｍｇ／ｄＬ未満となるよう管理される。生活習慣改善としては、禁煙及びＢＭＩ値の２５未満への減量等が推奨される。
【００３２】
腎機能の低下が判定された場合、治療介入がされてもよい。治療介入としては、血圧管理、血糖値管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、免疫管理及び脂質管理等が、独立に又は組み合わせて行われる。この中でも特に、血圧管理、血糖値管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、免疫管理及び／又は脂質管理については、投薬による治療が行われうる。血圧管理としては、１３０／８０ｍｍＨｇ以下となるように、管理され、場合により高血圧治療薬が投与されうる。高血圧治療薬としては、利尿薬（サイアザイド系利尿薬、例えばトリクロルメチアジド、ベンチルヒドロクロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、サイアザイド系類似利尿薬、例えばメチクラン、インダバミド、トリバミド、メフルシド、ループ利尿薬、例えばフロセミド、カリウム保持性利尿薬・アルドステロン拮抗薬、例えばトリアムテレン、スピロノラクトン、エプレレノン）、カルシウム拮抗薬（ジヒドロピリジン系、例えばニフェジピン、アムロジピン、エホニジピン、シルニジピン、ニカルジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、ニルバジピン、バルニジピン、フェロジピン、ベニジピン、マニジピン、アゼルニジピン、アラニジピン、ベンゾチアゼピン系、ジルチアゼム）、アンジオテンシン変換酵素阻害薬（カプトプリル、エナラプリル、アセラプリル、デラプリル、シラザプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、イミダプリル、テモカプリル、キナプリル、トランドラプリル、ベリンドプリルエルブミン）、アンジオテンシン受容体拮抗薬（アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬、例えばロサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、オルメサルタン、イルベサルタン、アジルサルタン）、交感神経遮断薬（β遮断薬、例えばアテノロール、ビソプロロール、ベタキソロール、メトプロロール、アセプトロール、セリプロロール、プロプラノロール、ナドロール、カルテオロール、ピンドロール、ニプラジロール、アモスラロール、アロチノロール、カルベジロール、ラベタロール、ベバントロール、ウラピジル、テラゾシン、ブラゾシン、ドキサゾシン、ブナゾシン）等が用いられうる。貧血治療薬としてはエリスロポエチン製剤、鉄剤、ＨＩＦ−１阻害剤等が用いられる。電解質調整薬としてカルシウム受容体作動薬（シナカルセト、エテルカルセチド等）、リン吸着剤が用いられる。尿毒素吸着剤として活性炭等が用いられる。血糖値は、Ｈｂａ１ｃ６．９％未満になるように管理され、場合により血糖降下薬が投与される。血糖降下薬として、ＳＧＬＴ２阻害薬（イプラグリフロジン、ダパグリフロジン、ルセオグリフロジン、トホグリフロジン、カナグリフロジン、エンパグリフロジン等）、ＤＰＰ４阻害薬（シタグリプチンリン酸、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、アログリプチン、リナグリプチン、テネリグリプチン、トレラグリプチン、アナグリプチン、オマリグリプチン）、スルホニル尿素薬（トルブタミド、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、グリクロピラミド、グリベンクラミド、グリクラジド、グリメピリド等）、チアゾリジン薬（ピオグリタゾン等）、ビグアナイド薬（メトホルミン、ブホルミン等）、α―グルコシダーゼ阻害薬（アカルボース、ボグリボース、ミグリトール等）��グリニド薬（ナテグリニド、ミチグリニド、レパグリニド）インスリン製剤、ＮＲＦ２活性化剤（バルドキソロンメチル等）等が用いられる。免疫管理としては、免疫抑制剤（ステロイド類、タクロリムス、抗ＣＤ２０抗体、シクロヘキサミド、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）等）が用いられる。脂質管理では、ＬＤＬ−Ｃ１２０ｍｇ／ｄＬ未満となるよう管理され、場合により脂質異常症治療薬、例えばスタチン系薬剤（ロスバスタチン、ピタバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン等）、フィブラート系薬剤（クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート、クリノフィブラート）、ニコチン酸誘導体（ニコチン酸トコレロール、ニコモール、ニセリトロール）、コレステロールトランスポーター阻害剤（エゼチミブ）、ＰＣＳＫ９阻害剤（エボロクマブ等）、ＥＰＡ製剤等が用いられる。いずれの薬剤も剤形は単剤でも合剤でもよい。腎機能の低下が著しく生命予後に危険が及ぶ場合は、腹膜透析、血液透析、持続的血液濾過透析、血液アフェレーシス（血漿交換、血漿吸着等）や腎移植のような腎代替療法が施される。
【００３３】
本発明の別の態様では、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法を実行する試料分析システム又はプログラムに関していてもよい。図４は、本発明の試料分析システムの構成図である。図４に示す試料分析システム１０は、本発明の血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の偽陰性及び偽陽性を検定する方法を実施することができるように構成される。このような試料分析システム１０は、記憶部１１と、入力部１２、分析測定部１３と、データ処理部１４と、出力部１５とを含んでおり、血液試料を分析し、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果について、妥当性、すなわち真陰性、真陽性、偽陰性、又は偽陽性を出力することができる。
【００３４】
より具体的に、本発明の試料分析システム１０において、
記憶部１１は、入力部１２から入力されたＤ−セリン量の閾値を記憶し、
記憶部１１は、入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶し、
分析測定部１３は、血液試料中のＤ−セリンを分離定量し、
データ処理部１４は、Ｄ−セリン量を、記憶部に記憶されたＤ−セリン量の閾値と比較し、記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部１５が血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力することができる。
【００３５】
さらに好ましい態様では、本発明の試料分析システムは、記憶部１１が、入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶する工程に代えて、分析測定部１３が、血液試料中のクレアチニン量を決定する工程を含んでもよい。この場合、さらにデータ処理部１４が、血液試料中のクレアチニン量に基づいて、腎機能検査の結果を判定し、判定された結果を記憶部が記憶する工程を含んでもよい。この場合、記憶部１１が入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量についての閾値を予め記憶し、データ処理部１４が血液中のクレアチニン量と、記憶された血液中のクレアチニン量についての閾値とを比較することで腎機能検査の結果が判定される。
【００３６】
より具体的に、ある態様の本発明の試料分析システム１０において、
記憶部１１は、入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量の閾値を記憶し、
記憶部１１は、入力部１２から入力されたＤ−セリン量の閾値を記憶し、
分析測定部１３は、血液試料中のクレアチニン量を測定し、
データ処理部１４は、記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量の閾値と血液試料中のクレアチニン量とを比較し、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を判定し
分析測定部１３は、血液試料中のＤ−セリンを分離定量し、
データ処理部１４は、血液中のＤ−セリン量を、記憶部に記憶されたＤ−セリン量の閾値と比較し、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部１５が血液中クレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力することができる。
【００３７】
血液中のクレアチニン量として、血液中のクレアチニン量から導かれた数値（例えば推算糸球体濾過量）を使用することもできる。一例として、血液中のクレアチニン量から導かれた数値を用いる場合、記憶部１１は入力部１２から入力された対象の年齢及び性別等のその他の要素を記憶し、さらに血液中のクレアチニン量から導かれた数値を算出する式又はグラフを記憶し、データ処理部１４が、測定された血液中のクレアチニン量と、記憶部１１に記憶された対象の年齢及び性別等のその他の要素と、血液中のクレアチニン量から導かれた数値を算出する式又はグラフとから数値を算出する工程を含んでもよい。推算糸球体濾過量の閾値としては、一例として６０ｍＬ／分／１．７３ｍ2を用いることができる。
【００３８】
より具体的に、推算糸球体濾過量を用いる場合、本発明の試料分析システム１０において、
記憶部１１は、入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量に基づく推算糸球体濾過量の算出式を記憶し、
記憶部１１は、入力部１２から入力された被験者の年齢及び性別を記憶し、
記憶部１１は、入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量に基づく推糸球体濾過量の閾値を記憶し、
記憶部１１は、入力部１２から入力されたＤ−セリン量の閾値を記憶し、
分析測定部１３は、血液試料中のクレアチニン量を測定し、
データ処理部１４は、血液中のクレアチニン量と、記憶部に記憶された被験者の年齢、性別と、推算糸球体濾過量の算出式から、推算糸球体濾過量を算出し、
データ処理部１４は、記憶部に記憶された推算糸球体濾過量の閾値と算出された推算糸球体濾過量とを比較し、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を判定し
分析測定部１３は、血液試料中のＤ−セリンを分離定量し、
データ処理部１４は、血液中のＤ−セリン量を、記憶部に記憶されたＤ−セリン量の閾値と比較し、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部１５が血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力することができる。
【００３９】
データ処理部１４において腎機能検査の結果の妥当性は、Ｄ−セリン量とその閾値との比較により、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性が決定される。具体的には、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と決定し、Ｄ−セリン量が前記閾値より高い場合に、真陽性と決定することができる。一方で、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定し、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、真陰性と決定することができる。
【００４０】
記憶部１１は、ＲＡＭ、ＲＯＭ、フラッシュメモリ等のメモリ装置、ハードディスクドライブ等の固定ディスク装置、又はフレキシブルディスク、光ディスク等の可搬用の記憶装置等を有する。記憶部は、分析測定部で測定したデータ、入力部から入力されたデータ及び指示、データ処理部で行った演算処理結果等の他、情報処理装置の各種処理に用いられるコンピュータプログラム、データベース等を記憶する。コンピュータプログラムは、例えばＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ−ＲＯＭ等のコンピュータ読み取り可能な記録媒体や、インターネットを介してインストールされてもよい。コンピュータプログラムは、公知のセットアッププログラム等を用いて記憶部にインストールされる。記憶部は、予め入力部１２から入力されたＤ−セリン量の閾値、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶することができる。さらには、腎機能検査のための血液中のクレアチニン量の閾値を記憶することができる。また、血液中のクレアチニン量の代わりに推算糸球体濾過量を用いる場合には、推算糸球体濾過量の閾値を記憶してもよく、さらには血液中のクレアチニン量に基づく推算糸球体濾過量の算出式を記憶し、また被験者の年齢、性別を記憶することができる。また、分析測定部１３が測定した結果や、データ処理部１４が行った処理の結果も記憶する。
【００４１】
入力部１２は、インターフェイス等であり、キーボード、マウス等の操作部も含む。これにより、入力部は、分析測定部１３で測定したデータ、データ処理部１４で行う演算処理の指示等を入力することができる。また、入力部１２は、例えば分析測定部１３が外部にある場合は、操作部とは別に、測定したデータ等をネットワークや記憶媒体を介して入力することができるインターフェイス部を含んでもよい。
【００４２】
分析測定部１３は、血液試料におけるＤ−セリンの測定工程を行う。したがって、分析測定部１３は、アミノ酸のＤ体及びＬ体の分離及び測定を可能にする構成を有する。アミノ酸は、１つずつ分析されてもよいが、一部又は全ての種類のアミノ酸についてまとめて分析することができる。分析測定部１３は、以下のものに限定されることを意図するものではないが、例えば試料導入部、光学分割カラム、検出部を備えたキラルクロマトグラフィーシステム、好ましくは高速液体クロマトグラフィーシステムであってもよい。特定のアミノ酸量のみを検出する観点では、酵素法や免疫学的手法による実施してもよい。分析測定部１３は、試料分析システムとは別に構成されていてもよく、測定したデータ等をネットワークや記憶媒体を用いて入力部１２を介して入力してもよい。さらに、別の態様では、分析測定部１３は、血液中のクレアチニン量を測定することもできる。
【００４３】
データ処理部１４は、記憶部に記憶しているプログラムに従って、分析測定部１３で測定され記憶部１１に記憶されたデータに対して、各種の演算処理を実行する。演算処理は、データ処理部に含まれるプロセッサ又はＣＰＵによりおこなわれる。このプロセッサ又はＣＰＵは、分析測定部１３、入力部１２、記憶部１１、及び出力部１５を制御する機能モジュールを含み、各種の制御を行うことができる。これらの各部は、それぞれ独立した集積回路、マイクロプロセッサ、ファームウェア等で構成されてもよい。データ処理部１４は、Ｄ−セリン量を、記憶部に記憶されたＤ−セリン量の閾値と比較し、記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定する。別の態様では、データ処理部１４は、血液中のクレアチニン量と、記憶部に記憶された被験者の年齢、性別と、推算糸球体濾過量の算出式から、推算糸球体濾過量を算出することができる。この場合、データ処理部１４は、さらに、記憶部に記憶された推算糸球体濾過量の閾値と算出された推算糸球体濾過量とを比較し、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の判定も行うことができる。
【００４４】
出力部１５は、データ処理部で判定された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性、すなわち真陰性、真陽性、偽陰性、又は偽陽性を出力するように構成される。さらに出力部１５は、分析測定部１３で測定されたＤ−セリン量、血液中のクレアチニン量、又はデータ処理部１４で算出された推算糸球体濾過量を、上述の妥当性と併せて出力してもよい。出力部１５は、演算処理の結果を直接表示する液晶ディスプレイ等の表示装置、プリンタ等の出力手段であってもよいし、外部記憶装置への出力又はネットワークを介して出力するためのインターフェイス部であってもよい。
【００４５】
図５は、本発明のプログラムによる糸球体濾過量を決定するための動作の例を示すフローチャートである。具体的に、本発明のプログラムは、入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定させるプログラムである。本発明のプログラムは、以下の：
入力部から入力されたＤ−セリン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のＤ−セリン量を記憶させ、
記憶部に記憶されたＤ−セリン量と、Ｄ−セリン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、閾値を上回るか下回るかについて比較の結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果と、比較の結果を読み出し、腎機能検査の結果の妥当性を判定して、記憶部に記憶させ、
記憶された妥当性を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む。本発明のプログラムは、記憶媒体に格納されてもよいし、インターネット又はＬＡＮ等の電気通信回線を介して提供されてもよい。
【００４６】
腎機能検査の結果の妥当性は、腎機能検査の結果と、比較の結果に基づいて決定される。具体的には、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と決定し、Ｄ−セリン量が前記閾値より高い場合に、真陽性と決定することができる。一方で、血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、Ｄ−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定し、Ｄ−セリン量が前記閾値より低い場合に、真陰性と決定することができる。
【００４７】
本発明のプログラムは、入力部１２から血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を入力する代わりに、入力部１２から血液中のクレアチニン量を入力することで、データ処理部１４が、記憶部１１に記憶された血液中のクレアチニン量の閾値と比較して、腎機能検査の結果を判定させる指令を含んでもよい。
【００４８】
より具体的に、本発明のプログラムは、入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶部１１に記憶させる指令に代えて、以下の：
入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量の閾値を記憶部１１に記憶させ、
入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量を記憶部１１に記憶させ、
記憶部１１に記憶された血液中のクレアチニン量と、血液中クレアチニン量の閾値とを読み出し、データ処理部１４で比較して、閾値を上回るか下回るかにより、腎機能検査の結果を判定して、腎機能検査の結果を記憶部１１に記憶させる
指令を含むプログラムであってもよい。
【００４９】
情報処理装置が、分析測定部１３を備える場合に、入力部１２から血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を入力する代わりに、分析測定部１３に血液試料中のＤ−セリン量を分離定量させ、データ処理部１４が、記憶部１１に記憶された血液中のクレアチニン量の閾値と比較することで、腎機能検査の結果を判定する指令を含んでもよい。
【００５０】
より具体的に、本発明のプログラムは、入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査の結果を記憶部１１に記憶させる指令に代えて、以下の：
入力部１２から入力された血液中のクレアチニン量の閾値を記憶部１１に記憶させ、
分析測定部１３を作動させて血液中クレアチニン量を測定し、記憶部１１に記憶させ、
記憶部１１に記憶された血液中のクレアチニン量と、血液中のクレアチニン量の閾値とを読み出し、データ処理部１４で比較して、腎機能検査の結果を判定して、腎機能検査の結果を記憶部１１に記憶させる
指令を含むプログラムであってもよい。
【００５１】
血液中のクレアチニン量に代えて、血液中のクレアチニン量から算出した推算糸球体濾過量を用いるプログラムを用いてもよい。この場合、さらに入力部から入力された推算糸球体濾過量を記憶部に記憶させる指令に代えて、
入力部１２から入力された被験者の年齢、性別を記憶部１１に記憶させ、
入力部１２から入力された、血液中のクレアチニン量に基づく推算糸球体濾過量の算出式を記憶部１１に記憶させ、
分析測定部１３に血液試料中のクレアチニン量を測定させて、記憶部１１に記憶させ、
データ処理部に、記憶部に記憶された年齢、性別、及び血液中のクレアチニン量を算出式に代入させて、推算糸球体濾過量を算出して、記憶部１１に記憶させる
指令を含んでもよい。
【００５２】
本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
【００５３】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。
【実施例】
【００５４】
被験者集合
診断及び／又は治療目的のために大阪大学医学部付属病院腎臓内科（（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ｏｓａｋａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ））に、２０１６年〜２０１７年の間に入院した慢性腎臓病（ＣＫＤ）患者からなるコホートから、１１人の患者について、後ろ向き研究に用いた。それとは別に、国立医薬基盤・健康・栄養研究所で１５名の２０歳以上の健常ボランティアを採用した。試験プロトコルは、各施設における倫理委員会により承認され、かつすべての被験者から書類によるインフォームドコンセントを取得した。【００５５】
健常者及び慢性腎臓病患者の情報は下記の通りである：
【表２】
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【００５６】
イヌリン腎臓クリアランスの計測方法
被験者のイヌリンクリアランス（Ｃｉｎ）を、Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １３，５０−５４（２００９）に記載された標準方法に従い、血漿及び尿のイヌリン濃度、並びに尿体積から計算した。簡潔に記載すると、絶食、服薬延期、及び水負荷環境下で、１％のイヌリン（イヌリード注：株式会社富士薬品）を２時間の持続静脈内点滴の間に、血液及び尿サンプルを異なる３時点で採取した。被験者は、点滴の３０分前に、経口で５００ｍＬの水を飲水した。水負荷を維持するために、イヌリン点滴の開始後、６０ｍＬの水を４０、６０、９０分で飲水した。点滴の初期速度は、最初の３０分間について、３００ｍＬ／ｈであり、続いて９０分について１００ｍＬ／ｈとした。イヌリン点滴の開始後、４５、７５、及び１０５分において血液試料を採取した。被験者は、点滴開始後、３０分で完全に膀胱を空にするように排尿した。次に、尿サンプルを、３０分〜６０分の間、６０分〜９０分の間、及び９０〜１２０分の間で採取した。イヌリンは、酵素法を用いて計測した。３つのＣｉｎ値の平均を、標準方法によるＣｉｎ（Ｃｉｎ−ＳＴ）として用いた。【００５７】
血液中Ｄ−アミノ酸の測定
サンプル調整
ヒト血漿からのサンプル調整を、下記のとおり行った：
２０倍体積のメタノールを血漿に添加し、完全に混合した。遠心後、メタノールホモジェネートから得られた上清の１０μＬを褐色チューブに移し、減圧乾燥させた。残渣に対し、２０μＬの２００ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）及び５μＬの蛍光標識試薬（無水ＭｅＣＮ中に４０ｍＭの４−フルオロ―７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール（ＮＢＤ−Ｆ））を添加し、次いで６０℃で２分加熱した。７５μｌの０．１％ＴＦＡ水溶液（ｖ／ｖ）を加えて反応を止め、そして２μＬの反応混合液を２次元ＨＰＬＣに供した。【００５８】
２次元ＨＰＬＣによるアミノ酸光学異性体の定量
アミノ酸光学異性体を、以下の２次元ＨＰＬＣシステムを用いて定量した。アミノ酸のＮＢＤ誘導体を、逆相カラム（ＫＳＡＡ  ＲＰ、１．０ｍｍｉ．ｄ．  ×４００ｍｍ；株式会社資生堂）を用い移動相（５〜３５％ＭｅＣＮ、０〜２０％ＴＨＦ、及び０．０５％ＴＦＡ）で分離、溶出した。カラム温度は４５℃、移動相の流速は２５μＬ／分に設定した。分離したアミノ酸の画分を、マルチループバルブを用いて分取し、連続的にキラルカラム（ＫＳＡＡＣＳＰ−００１Ｓ，１．５ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ；資生堂）で光学分割した。移動相として、アミノ酸の保持に応じて、クエン酸（０〜１０ｍＭ）又はギ酸（０〜４％）含むＭｅＯＨ−  ＭｅＣＮの混合用液を用いた。ＮＢＤ−アミノ酸は、４７０ｎｍの励起光を用い、５３０ｎｍで蛍光検出した。ＮＢＤ−アミノ酸の保持時間は、アミノ酸光学異性体の標準品により同定し、検量線により定量した。【００５９】
ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）との相関解析
（１）体表面積補正有
２６名の被験者について、体表面積補正を行ったＧＦＲ（イヌリンクリアランス）と、血液中のＤ−セリン量（Ａ）、クレアチニン量（Ｂ）とを散布図にプロットし、相関係数ｒとｐ値を算出した。結果を図１に示す。血液中のＤ−セリン量がＧＦＲ（イヌリンクリアランス）に対して、血液中のクレアチニン量よりも相関が高いことが示された。【００６０】
（２）体表面積補正無
２６名の被験者について、体表面積補正を行っていないＧＦＲ（イヌリンクリアランス）と、血液中のＤ−セリン量（Ａ）、クレアチニン量（Ｂ）とを散布図にプロットし相関係数ｒとｐ値を算出した。結果を図２に示す。血液中のＤ−セリン量が体表面積補正無しＧＦＲ（イヌリンクリアランス）に対して、血液中のクレアチニン量よりも相関が高いことが示された。【００６１】
体表面積（ＢＳＡ）との相関
健常者（ＧＦＲ＞７０）のデータについて、体表面積（ＢＳＡ）と、測定した血液中のＤ−セリン量及びクレアチニン量とを散布図に表し、相関係数ｒ値及びｐ値を算出した。結果を図３に示す。クレアチニン量が、体表面積に相関するのに対し、血液中のＤ−セリン量は体表面積とは相関しなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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