(57)【要約】  抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩であって、  下記式（Ｉ）：Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）〔式中、  Ａは、抗体に対する親和性物質であり、  Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、  Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、  Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表されるものであり、かつ  抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、化合物またはその塩。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩であって、
前記化合物が、下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、化合物またはその塩。
【請求項２】
前記ポリペプチドが、グルタミン残基（Ｑ）−グルタミン酸（Ｅ）−スレオニン残基（Ｔ）からなるトリペプチド（ＱＥＴ）をＮ末端に含むポリペプチドである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
グルタミン残基がピログルタミル化されている、請求項１または２記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
前記ポリペプチドが、１６個以上１２３個以下のアミノ酸残基数を有するポリペプチドである、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
前記ポリペプチドが、２０個以上７０個以下のアミノ酸残基数を有するポリペプチドである、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、以下（１）〜（４）からなる群より選ばれる、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物またはその塩：
【化１】
2020090979.tif 000064
〔Ｑは、Ｎ末端のグルタミン残基であり、Ｅはグルタミン酸残基であり、Ｔはスレオニン残基であり、実線は結合手であり、スペーサー部分は１個以上５０個以下のアミノ酸残基からなる部分であり、抗体に対する親和性物質は１５個以上７０個以下のアミノ酸残基からなる部分である。〕。
【請求項７】
抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、プロテインＺ、および抗体に対する親和性を有するそれらの断片、ならびに抗体に対する親和性を有するそれらの変異体からなる群より選ばれる、請求項６記載の化合物またはその塩。
【請求項８】
抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＸＩＸＳＩＲＤＤＣ（配列番号５）のアミノ酸配列（２つのＸは、それぞれ独立して、アルギニン残基、グルタミン酸残基、およびグルタミン残基からなる群より選ばれる１つのアミノ酸残基である。）において、いずれかの１つのアミノ酸残基が、リジン残基により置換されており、かつ配列番号５のアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６または７記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号６）のアミノ酸配列において、いずれかの１つのアミノ酸残基が、リジン残基により置換されており、かつ配列番号６のアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６〜８のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
【請求項１０】
抗体に対する親和性物質が、下記からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項記載の化合物またはその塩：
（１）ＱＥＴＮＰＴＥＮＬＹＦＱＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号７）；
（２）ＱＴＡＤＮＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＱＱＬＮＤＡＱＡＰＱＡ（配列番号８）；
（３）ＱＥＴＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号９）；
（４）ＱＥＴＦＮＫＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１０）；
（５）ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号２２）；
（６）ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号２３）；
（７）ＱＥＴＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５１）；
（８）ＱＥＴＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５２）；
（９）ＱＥＴＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５３）；
（１０）ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号２４）；および
（１１）ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号２５）。
【請求項１１】
抗体の位置選択的修飾試薬であって、
下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩を含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、抗体の位置選択的修飾試薬。
【請求項１２】
抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩であって、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、抗体またはその塩。
【請求項１３】
抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩であって、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、複合体またはその塩。
【請求項１４】
生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（ＩＶ）：
Ｌ１−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＶ）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
【請求項１５】
機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（Ｖ１）：
Ｌ１−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ１）
〔式中、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基であり、
Ｂ’、Ｆ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩＩ）のものと同じである。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
【請求項１６】
機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
（Ａ）下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（ＩＶ）：
Ｌ１−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＶ）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること、ならびに
（Ｂ）前記生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を、１種または２種以上の機能性物質と反応させて、
下記式（Ｖ２）
Ｆ−Ｌ１’−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ２）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＶ）のものと同じであり、
Ｌ１’は、機能性物質と、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
Ｆは、機能性物質である。〕、または
下記式（Ｖ３）：
Ｆａ−Ｌ１’−Ｂ’（−Ｆｂ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ３）
〔式中、
Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＶ）のものと同じであり、
Ｌ１’は、前記式（Ｖ２）のものと同じであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
ＦａおよびＦｂは、それぞれ、同一または異なる機能性物質である。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩などに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、抗体薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ：ＡＤＣ）の研究開発が盛んに行われている。ＡＤＣはその名の通り、抗体に薬物（例、抗がん剤）をコンジュゲーションした薬剤であり、がん細胞などに対して直接的な殺細胞活性を有する。代表的なＡＤＣとしては、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅ社およびＲｏｃｈｅ社が共同開発したＴ−ＤＭ１（商品名：カドサイラ（登録商標））がある（非特許文献１〜３）。【０００３】
Ｔ−ＤＭ１を始めとするＡＤＣは、開発当初からその不均一性が問題となっている。すなわち、抗体中に７０〜８０程度あるＬｙｓ残基に対して、低分子薬物をランダムに反応させているため、薬物抗体比（Ｄｒｕｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｒａｔｉｏ：ＤＡＲ）やコンジュゲーション位置が一定ではない。通常このようなランダムコンジュゲーション法になるとＤＡＲが０〜８の範囲となり、薬物の結合数が異なる複数の薬剤が生じることが分かっている。近年ＡＤＣの薬物の結合数および結合位置を変化させると、体内動態や薬物の放出速度、効果が変化することが報告されている。これらのことから次世代型ＡＤＣではコンジュゲーションする薬物の個数と位置を制御することが求められている。個数および位置が一定であると、期待通りのｅｆｆｉｃａｃｙ、コンジュゲーション薬剤のバリエーション、ロット差いわゆるレギュレーションの問題が解決すると考えられている（非特許文献４）。【０００４】
抗体の位置選択的修飾法は世界中で研究されているが、そのほとんどが遺伝子工学的手法もしくは酵素を用いた修飾法である。遺伝子工学的修飾法に関しては、位置選択性、個数選択性は制御できるものの、抗体自体の発現効率が低下（ＡＤＣを調製する際の総収率が低下）するなどの問題が指摘されている。また、抗体発現系の構築などに長い年月を要することが問題となっている（非特許文献５〜７）。【０００５】
また、小分子プローブを利用して細胞内のような夾雑な環境下でタンパク質を化学修飾する方法が近年報告されている。本手法は、イメージングや低分子薬物のリポジショニングを行う上で受容体の同定などに利用されている。また、ケミカルバイオロジー分野において、合成小分子プローブを用いた有機化学的なタンパク質修飾法が注目されている（非特許文献８〜１０）。【０００６】
最近、Ｃ−ＣＡＰ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ）法が開発された。本方法は、親和性ペプチド（Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ）に対してＮＨＳ活性化エステルおよび薬物が連結されたペプチド試薬を抗体と反応させる方法（すなわち、ペプチド部分を含むリンカーを介したＡＤＣの作製方法）により、抗体の位置選択的な修飾に成功している。本方法は世界で初めて、化学合成的手法により、薬物で抗体Ｆｃ領域を位置選択的に修飾することに成功したものであり、しかも実用上も良好な結果〔反応時間３０分、収率７０％（ＤＡＲ  １の場合）、位置選択性１００％〕が確認されている。ペプチド試薬を５等量程度加えることで、ＤＡＲを２で制御できることが実証されており、修飾位置も制御できる点で画期的である（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１６／１８６２０６号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｒｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２００５；２３：１０７３−８
【非特許文献２】Ｋｕｂｏｔａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ  ２００９；１００：１５６６−７２
【非特許文献３】Ｗｕ  ＡＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２００５；２３：１１３７−４６
【非特許文献４】Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２００８；２６：９２５−３２
【非特許文献５】Ｓｈｅｎ  ＢＱ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０１２；３０：１８４−９
【非特許文献６】Ｈｏｆｅｒ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００９；４８：１２０４７−５７
【非特許文献７】Ｌｉｕ  Ｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２００７；４：２３９−４４
【非特許文献８】Ｓ．Ｔ．Ｌａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００８；３２０，６６４
【非特許文献９】Ａ．Ｅ．Ｓｐｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ  ２００４；５，４１
【非特許文献１０】Ｙ．Ｔａｋａｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．  ２０１３；５２，４０８８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、抗体の修飾、特に、抗体の位置選択的な修飾を可能にする技術を開発することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、鋭意検討した結果、（１）抗体に対する親和性物質、および（２）その抗体を構成するアミノ酸残基に対する反応性基、ならびに（３）当該親和性物質と当該反応性基との間に切断性部分を含み、（４）切断性部分での切断により生体直交性官能基を反応性基側に有する構造単位（すなわち、生体直交性官能基および反応性基を含む構造単位）を生成できるという構造的特徴を有する、新規かつ独創的な設計思想に基づき開発された化合物が、抗体の位置特異的な修飾に有用であることを見出した（例、図１−１、図１−２、図１−３、図２）。【００１１】
本発明者らはまた、このような化合物を用いることにより、ペプチド部分をリンカーとして含まない、機能性物質（例、薬物）を位置選択的に有する抗体（例、抗体薬物複合体（ＡＤＣ））を調製できることなどを見出した。潜在的な免疫原性を有し、また血中で加水分解され易いペプチド部分を含むリンカーの使用の回避は、ＡＤＣの臨床応用において望ましいものである。すなわち、本発明者らの開発した方法は世界で初めて、化学合成的手法により、しかもペプチド部分を含むリンカーを使用することなく、薬物で抗体Ｆｃ領域を位置選択的に修飾することに成功したということができる。このような方法によれば、上記（１）〜（４）のような構造的特徴を具備する種々の化合物の開発などが可能になる（例、図１−１、図１−２、図１−３、図２）。【００１２】
本発明者らはまた、抗体に対する親和性物質として、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドを用いることにより、Ｎ末端のグルタミン残基（Ｑ）中のアミノ基（−ＮＨ２）がその側鎖に存在するアミド基（例、ＱＥＴをＮ末端に含む場合は、グルタミン残基（Ｑ）中の−ＣＯＮＨ２）と反応（ピログルタミル化）することにより同アミノ基を保護することができるので、抗体に対する親和性物質の結合を媒介するリンカーを、親和性物質中の特定のアミノ酸残基（アミノ基を有するリジン残基）に特異的に付加できることから、抗体に対する親和性物質として、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドが有用であることを見出した。【００１３】
本発明者らはまた、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドを簡便かつ多量に調製するためには、コリネ型細菌を宿主として用いるポリペプチドの分泌生産方法（国際公開第２０１３／０６２０２９号）が有用であることを見出した。本方法によれば、Ｃｓｐ成熟タンパク質のＮ末端３残基Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ（ＱＥＴ）を目的ポリペプチドのＮ末端に付加することにより当該ポリペプチド分泌生産方法の利点を享受できるので、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチド（抗体に対する親和性物質）の調製に適している。【００１４】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。【００１５】
第１の実施形態では、本発明は、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩、ならびに当該化合物またはその塩を含む、抗体の位置選択的修飾試薬を提供する。
〔１〕抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩であって、
前記化合物が、下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、化合物またはその塩。
〔２〕前記ポリペプチドが、グルタミン残基（Ｑ）−グルタミン酸（Ｅ）−スレオニン残基（Ｔ）からなるトリペプチド（ＱＥＴ）をＮ末端に含むポリペプチドである、〔１〕の化合物またはその塩。
〔３〕グルタミン残基がピログルタミル化されている、〔１〕または〔２〕の化合物またはその塩。
〔４〕前記ポリペプチドが、１６個以上１２３個以下のアミノ酸残基数を有するポリペプチドである、〔１〕〜〔３〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔５〕前記ポリペプチドが、２０個以上７０個以下のアミノ酸残基数を有するポリペプチドである、〔１〕〜〔３〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔６〕前記ポリペプチドが、以下（１）〜（４）からなる群より選ばれる、〔１〕〜〔５〕のいずれかの化合物またはその塩：
【化１】
2020090979.tif 000002
〔Ｑは、Ｎ末端のグルタミン残基であり、Ｅはグルタミン酸残基であり、Ｔはスレオニン残基であり、実線は結合手であり、スペーサー部分は１個以上５０個以下のアミノ酸残基からなる部分であり、抗体に対する親和性物質は１５個以上７０個以下のアミノ酸残基からなる部分である。〕。
〔７〕抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、プロテインＺ、および抗体に対する親和性を有するそれらの断片、ならびに抗体に対する親和性を有するそれらの変異体からなる群より選ばれる、〔６〕の化合物またはその塩。
〔８〕抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＸＩＸＳＩＲＤＤＣ（配列番号５）のアミノ酸配列（２つのＸは、それぞれ独立して、アルギニン残基、グルタミン酸残基、およびグルタミン残基からなる群より選ばれる１つのアミノ酸残基である。）において、いずれかの１つのアミノ酸残基が、リジン残基により置換されており、かつ配列番号５のアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、〔６〕または〔７〕の化合物またはその塩。
〔９〕抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号６）のアミノ酸配列において、いずれかの１つのアミノ酸残基が、リジン残基により置換されており、かつ配列番号６のアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、〔６〕〜〔８〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１０〕抗体に対する親和性物質が、下記からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、〔１〕〜〔９〕のいずれかの化合物またはその塩：
（１）ＱＥＴＮＰＴＥＮＬＹＦＱＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号７）；
（２）ＱＴＡＤＮＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＱＱＬＮＤＡＱＡＰＱＡ（配列番号８）；
（３）ＱＥＴＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号９）；
（４）ＱＥＴＦＮＫＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１０）；
（５）ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号２２）；
（６）ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号２３）；
（７）ＱＥＴＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５１）；
（８）ＱＥＴＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５２）；
（９）ＱＥＴＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５３）；
（１０）ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号２４）；および
（１１）ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号２５）。
〔１１〕Ｌが、（ｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有する切断性部分を含む２価の基である切断性リンカー、または（ｉｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有しない切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーである、〔１〕〜〔１０〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１２〕Ｌが前記（ｉ）の切断性リンカーである、〔１１〕の化合物またはその塩。
〔１３〕Ｌが前記（ｉ）の切断性リンカーであり、かつ、Ｂが前記（ｂ）の２価の基である、〔１１〕または〔１２〕の化合物またはその塩。
〔１４〕Ｌが前記（ｉｉ）の切断性リンカーであり、かつ、Ｂが前記（ａ）の２価の基である、〔１１〕の化合物またはその塩。
〔１５〕前記ポリペプチドが、モノクローナル抗体のＦｃ領域に対する結合性ペプチドである、〔１〕〜〔１４〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１６〕前記ポリペプチドが、ＩｇＧのＦｃ領域に対する結合性ペプチドである、〔１５〕の化合物またはその塩。
〔１７〕前記親和性物質が、下記（Ａ）〜（Ｃ）からなる群より選ばれるいずれか一つのＦｃ領域タンパク質を含み、かつ抗原結合能を有する抗体に対する親和性物質である、〔１〕〜〔１６〕のいずれかの化合物またはその塩：
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質；
（Ｂ）配列番号１のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸残基が挿入、付加、欠失もしくは置換されたアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質；または
（Ｃ）配列番号１のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を示すアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質。
〔１８〕前記ポリペプチドが、ヒトＩｇＧと結合可能であることを特徴とする、〔１〕〜〔１７〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１９〕切断性部分が、（ａ）酸性物質、塩基性物質、還元剤、酸化剤、酵素からなる群より選ばれる１種以上の物質による処理、（ｂ）光からなる群より選ばれる物理化学的刺激による処理、または（ｃ）自己分解性の切断性部分を含む切断性リンカーを用いた場合の放置のいずれかにより切断可能な部分である、〔１〕〜〔１８〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔２０〕前記切断性部分が、ジスルフィド残基、アセタール残基、ケタール残基、エステル残基、カルバモイル残基、アルコキシアルキル残基、イミン残基、三級アルキルオキシカルバメート残基、シラン残基、ヒドラゾン含有残基、フォスフォルアミデート残基、アコニチル残基、トリチル残基、アゾ残基、ビシナルジオール残基、セレン残基、電子吸引基を有する芳香族環含有残基、クマリン含有残基、スルホン含有残基、不飽和結合含有鎖残基、グリコシル残基からなる群より選ばれる、〔１〕〜〔１９〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔２１〕前記（ｉ）の切断性部分が、ジスルフィド残基、エステル残基、アセタール残基、ケタール残基、イミン残基、ビシナルジオール残基からなる群より選ばれる、〔１１〕〜〔２０〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔２２〕前記（ｉｉ）の切断性部分が、エステル残基、カルバモイル残基、アルコキシアルキル残基、イミン残基、三級アルキルオキシカルバメート残基、シラン残基、ヒドラゾン含有残基、フォスフォルアミデート残基、アコニチル残基、トリチル残基、アゾ残基、ビシナルジオール残基、セレン残基、電子吸引基を有する芳香族環含有残基、クマリン含有残基、スルホン含有残基、不飽和結合含有鎖残基、グリコシル残基からなる群より選ばれる、〔１１〕〜〔２０〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔２３〕切断性部分が、下記：
【化２】
2020090979.tif 000003
〔ここで、結合に直交する波線は、切断部位を示し、
複数のＲ２ａ、複数のＲ２ｂ、および複数のＲ２ｃは、同一または異なって、
（ｉ）水素原子、またはハロゲン原子；
（ｉｉ）１価の炭化水素基；
（ｉｉｉ）アラルキル；
（ｉｖ）１価の複素環基；
（ｖ）Ｒｃ−Ｏ−、Ｒｃ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｒｃ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、もしくはＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｒｃは、水素原子、もしくは一価の炭化水素基を示す。）；
（ｖｉ）ＮＲｄＲｅ−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくはＲｄ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｅ−（ＲｄおよびＲｅは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは一価の炭化水素基を示す。）；または
（ｖｉｉ）ニトロ基、硫酸基、スルホン酸基、シアノ基、もしくはカルボキシル基
からなる群より選ばれ、
Ｊは、−ＣＨ２−、−Ｏ−、または−Ｓ−であり、
ｒは、１〜４の任意の整数であり、
○（白丸）はＡに対する結合を示し、●（黒丸）はＢに対する結合を示す。
化学構造が、切断部位を中心にして非対称である場合、●がＡに対する結合を示し、○がＢに対する結合を示していてもよい。〕からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応する、〔１〕〜〔２２〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔２４〕前記（ｉ）の切断性部分が、以下：
【化３】
2020090979.tif 000004
〔ここで、結合に直交する波線は、切断部位を示し、
Ｒ２ａは、〔２３〕と同じであり、
○（白丸）はＡに対する結合を示し、●（黒丸）はＢに対する結合を示す。
化学構造が、切断部位を中心にして非対称である場合、●がＡに対する結合を示し、○がＢに対する結合を示していてもよい。〕からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応する、〔１１〕〜〔１９〕、〔２１〕、〔２３〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔２５〕前記（ｉｉ）の切断性部分が、以下：
【化４】
2020090979.tif 000005
〔ここで、結合に直交する波線は、切断部位を示し、
Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、Ｊ、ｒは、〔２３〕と同じであり、
○（白丸）はＡに対する結合を示し、●（黒丸）はＢに対する結合を示す。
化学構造が、切断部位を中心にして非対称である場合、●がＡに対する結合を示し、○がＢに対する結合を示していてもよい。〕からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応する、〔１１〕〜〔１９〕、〔２２〕、〔２３〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔２６〕Ｌが、下記式（Ｌ１）〜（Ｌ３）：
Ｌａ−Ｃ−Ｌｂ      （Ｌ１）
Ｌａ−Ｃ            （Ｌ２）
Ｃ−Ｌｂ      （Ｌ３）
〔式中、
ＬａおよびＬｂは、それぞれ、２価の基であり、
Ｃは、切断性部分である。〕のいずれか一つで表される、〔１〕〜〔２５〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔２７〕前記ＬａおよびＬｂが、それぞれ、下記（Ｌａ’）および（Ｌｂ’）：
【化５】
2020090979.tif 000006
〔式中、
ｐおよびｐ’は、同一または異なって、０〜１０の任意の整数であり、
ｑおよびｑ’は、同一または異なって、０〜１０の任意の整数であり、
ＸおよびＸ’は、同一または異なって、炭素原子、窒素原子、または単結合（ここで、Ｘが窒素原子である場合、Ｒ１ｂは存在せず、Ｘ’が窒素原子である場合、Ｒ１ｂ’は存在しない。Ｘが単結合である場合、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは存在せず、Ｘ’が単結合である場合、Ｒ１ａ’およびＲ１ｂ’は存在しない。）であり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ａ’およびＲ１ｂ’は、同一または異なって、前記（ｉ）〜（ｖｉｉ）からなる群より選ばれる原子または基である。〕で表される、〔２６〕の化合物またはその塩。
〔２８〕生体直交性官能基を含む２価の基が、アジド残基、アルデヒド残基、チオール残基、アルキン残基、アルケン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、チオエステル残基、α―ハロカルボニル残基、イソニトリル残基、シドノン残基、セレン残基からなる群より選ばれる生体直交性官能基を主鎖に含む２価の基である、〔１〕〜〔２７〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔２９〕生体直交性官能基を含む２価の基が、アジド残基、アルデヒド残基、チオール残基、アルキン残基、アルケン残基、ハロゲン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、α―ハロカルボニル残基、イソニトリル残基、シドノン残基、セレン残基からなる群より選ばれる生体直交性官能基を側鎖に含む２価の基である、〔１〕〜〔２７〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔３０〕生体直交性官能基が、下記：
【化６】
2020090979.tif 000007
〔式中、
Ｒ１ｆ、単一もしくは複数のＲ１ｇおよび単一もしくは複数のＲ１ｈは、同一もしくは異なって、前記（ｉ）〜（ｖｉｉ）からなる群より選ばれる原子もしくは基、または電子吸引基であり、
・は、結合手である。〕で表されるいずれか一つである、〔１〕〜〔２９〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔３１〕前記（ｂ）の２価の基が、置換されていてもよいアルキレン、置換されていてもよいシクロアルキレン、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよい２価の複素環基、−ＮＲａ−（Ｒａは水素原子、または置換基を示す）、−Ｏ−、またはこれらの２以上の組み合わせからなる群より選ばれる、〔１〕〜〔３０〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔３２〕Ｂが、下記式（Ｂ−１）：
【化７】
2020090979.tif 000008
〔式中、
Ｙは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または下記式（Ｂ−２）：
【化８】
2020090979.tif 000009
（式中、
ＶおよびＶ’は、同一または異なって、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または単結合であり、
Ｖ１は、生体直交性官能基を含む２価の基であり、
ｓは、０〜１０の任意の整数であり、
式（Ｂ−２）における○および●は、それぞれ、式（Ｂ−１）における○および●と同じ配向である。）であり、
Ｚは、酸素原子、硫黄原子、または水素原子（Ｚが水素原子である場合、−Ｃ（＝Ｚ）−は、−ＣＨ２−を示す。）であり、
式（Ｂ−１）における○（白丸）は、Ｌ側の部分に対する結合を示し、●（黒丸）はＲ側の部分に対する結合を示す。〕で表される、〔１〕〜〔３１〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔３３〕反応性基が、リジン残基、チロシン残基、またはトリプトファン残基のいずれか一つの側鎖に対して特異的な反応性基である、〔１〕〜〔３２〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔３４〕反応性基が、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基である、〔３３〕の化合物またはその塩。
〔３５〕反応性基が、下記：
【化９】
2020090979.tif 000010
〔ここで、
Ｒ５ａおよびＲ５cは、前記（ｉ）〜（ｖｉｉ）からなる群より選ばれる原子または基であり、
Ｒ５ｂは、電子吸引基であり、
ｊは、１〜５の任意の整数であり、
ｋは、１〜４の任意の整数である。〕からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応する、〔１〕〜〔３４〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔３６〕ＡおよびＲを連結する主鎖の原子数が４〜２０個である、〔１〕〜〔３５〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔３７〕ＡおよびＲを連結する主鎖が環構造を含まない、〔１〕〜〔３６〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔３８〕Ｌ−Ｂで表される部分構造がペプチド部分を含まない、〔１〕〜〔３７〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔３９〕前記式（Ｉ）で表される化合物が、下記（Ｉ’）：
Ａ−Ｂ２−Ｌ’−Ｂ１−Ｒ      （Ｉ’）
〔式中、
ＡおよびＲは、前記式（Ｉ）のものと同じであり
Ｌ’は、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ１およびＢ２は、同一または異なって、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｂ１およびＢ２は、Ｌ’を中心にした対称構造を有していてもよい。〕で表される化合物である、〔１〕〜〔３８〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔４０〕前記式（Ｉ’）で表される化合物が、下記（Ｉ’’）：
【化１０】
2020090979.tif 000011
〔式中、
ＡおよびＲは、〔１〕記載の式（Ｉ）のものと同じであり、
Ｃは、切断性部分であり、
ｐ、ｐ’、ｑ、ｑ’、Ｘ、Ｘ’、Ｒ１ａ、Ｒ１ａ’、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｂ’は、〔１９〕記載の式（Ｌａ’）および（Ｌｂ’）のものと同じであり、
ＹおよびＹ’は、同一または異なって、〔３２〕記載の式（Ｂ−１）のＹと同じであり、
ＺおよびＺ’は、同一または異なって、前記式（Ｂ−１）のＺと同じである。〕で表される、〔３９〕の化合物またはその塩。
〔４１〕抗体の位置選択的修飾試薬であって、
前記化合物が、下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩を含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、抗体の位置選択的修飾試薬（好ましくは、上記〔２〕〜〔４０〕のいずれかである化合物またはその塩を含む、抗体の位置選択的修飾試薬）。
〔４２〕抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩であって、
下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、化合物またはその塩。
〔４３〕抗体の位置選択的修飾試薬であって、
下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩を含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、試薬。【００１６】
第２に、本発明は、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩、およびその製造方法を提供する。
（抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩）
〔１〕抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩であって、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、抗体またはその塩。
〔２〕抗体がモノクローナル抗体である、〔１〕の抗体またはその塩。
〔３〕抗体がＩｇＧ抗体である、〔１〕または〔２〕の抗体またはその塩。
〔４〕抗体がヒト由来である、〔１〕〜〔３〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔５〕抗体が、下記（Ａ）〜（Ｃ）からなる群より選ばれるいずれか一つのＦｃ領域タンパク質を含み、かつ抗原結合能を有する抗体である、〔１〕〜〔４〕のいずれかの抗体またはその塩：
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質；
（Ｂ）配列番号１のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸残基が挿入、付加、欠失もしくは置換されたアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質；または
（Ｃ）配列番号１のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を示すアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質。
〔６〕抗体が、連続する１〜５０個のアミノ酸残基からなる標的領域中において特定のアミノ酸残基を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において前記特定のアミノ酸残基を５個以上含み、
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’で表される構造単位が、前記標的領域中に含まれる１個以上の特定のアミノ酸残基に対して３０％以上の位置選択性で結合している、〔１〕〜〔５〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔７〕前記標的領域が、連続する１〜１０個のアミノ酸残基からなる領域である、〔６〕の抗体またはその塩。
〔８〕前記標的領域が、連続する１〜３個のアミノ酸残基からなる領域である、〔７〕の抗体またはその塩。
〔９〕前記標的領域が、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域における２４６〜２４８位のアミノ酸残基からなる領域である、〔８〕の抗体またはその塩。
〔１０〕前記位置選択性が５０％以上である、〔６〕〜〔９〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔１１〕前記位置選択性が７０％以上である、〔１０〕の抗体またはその塩。
〔１２〕前記位置選択性が９０％以上である、〔１０〕の抗体またはその塩。
〔１３〕前記特定のアミノ酸残基が、特定の位置に存在する特定のアミノ酸を中心としてそれぞれＮ末端側およびＣ末端側に対してａ個（ここで、ａは、１〜１０の任意の整数である）のアミノ酸残基の遠隔位置までの領域において、前記特定の位置に存在する特定のアミノ酸残基以外に、特定のアミノ酸残基と同種のアミノ酸残基を含まない、〔６〕〜〔１２〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔１４〕前記抗体が、複数個の重鎖を含む抗体であり、
Ｔが、複数個の重鎖中の対応する複数個の標的領域において、Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’で表される構造単位を有する結果、前記抗体がＡ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’で表される構造単位を複数個有する、〔１〕〜〔１３〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔１５〕重鎖の個数が２個である、〔１４〕の抗体またはその塩。
〔１６〕抗体と反応性基との間の反応により生成する部分が、リジン残基、チロシン残基、またはトリプトファン残基に対する、リジン残基、チロシン残基、またはトリプトファン残基のいずれか一つの側鎖に対して特異的な反応性基の反応により生成する部分である、〔１〕〜〔１５〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔１７〕抗体と反応性基との間の反応により生成する部分が、リジン残基と、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分である、〔１〕〜〔１６〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔１８〕前記反応により生成する部分が、下記：
【化１１】
2020090979.tif 000012
〔ここで、●（黒丸）は、Ｔ側の部分に対する結合を示し、○（白丸）は、Ｂ側の部分に対する結合を示す。結合に直交する直線は、反応により生成する結合を示す。〕からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応する、〔１〕〜〔１７〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔１９〕ＡおよびＲ’を連結する主鎖の原子数が４〜２０個である、〔１〕〜〔１８〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔２０〕ＡおよびＲを連結する主鎖が環構造を含まない、〔１〕〜〔１９〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔２１〕Ｌ−Ｂで表される部分構造がペプチド部分を含まない、〔１〕〜〔２０〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔２２〕前記式（ＩＩ）で表される化合物が、下記（ＩＩ’）：
Ａ−Ｂ２−Ｌ’−Ｂ１−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ’）
〔式中、
Ａ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり
Ｌ’は、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ１およびＢ２は、同一または異なって、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｂ１およびＢ２は、Ｌ’を中心にした対称構造を有していてもよい。〕で表される化合物である、〔１〕〜〔２１〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔２３〕前記式（ＩＩ’）で表される化合物が、下記（ＩＩ’’）：
【化１２】
2020090979.tif 000013
〔式中、
Ａ、Ｒ’およびＴは、上記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｃは、切断性部分であり、
ｐおよびｐ’は、同一または異なって、０〜１０の任意の整数であり、
ｑおよびｑ’は、同一または異なって、０〜１０の任意の整数であり、
ＸおよびＸ’は、同一または異なって、炭素原子、窒素原子、または単結合（ここで、Ｘが窒素原子である場合、Ｒ１ｂは存在せず、Ｘ’が窒素原子である場合、Ｒ１ｂ’は存在しない。Ｘが単結合である場合、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは存在せず、Ｘ’が単結合である場合、Ｒ１ａ’およびＲ１ｂ’は存在しない）であり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ａ’およびＲ１ｂ’は、同一または異なって、
（ｉ）水素原子、またはハロゲン原子；
（ｉｉ）１価の炭化水素基；
（ｉｉｉ）アラルキル；
（ｉｖ）１価の複素環基；
（ｖ）Ｒｃ−Ｏ−、Ｒｃ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｒｃ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、もしくはＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｒｃは、水素原子、もしくは一価の炭化水素基を示す。）；
（ｖｉ）ＮＲｄＲｅ−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくはＲｄ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｅ−（ＲｄおよびＲｅは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは一価の炭化水素基を示す。）；または
（ｖｉｉ）ニトロ基、硫酸基、スルホン酸基、シアノ基、もしくはカルボキシル基
からなる群より選ばれ、
ＹおよびＹ’は、同一または異なって、上記式（Ｂ−１）のＹと同じであり、
ＺおよびＺ’は、同一または異なって、前記式（Ｂ−１）のＺと同じである。〕で表される、〔２２〕の抗体またはその塩。
〔２４〕抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩であって、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、抗体またはその塩。【００１７】
（抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩の製造方法）
〔２５〕抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａ、Ｌ、およびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
〔２６〕反応性基が、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基である、〔２５〕の方法。【００１８】
第３に、本発明は、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩、およびその製造方法を提供する。
（抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩）
〔１〕抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩であって、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、複合体またはその塩。
〔２〕抗体がモノクローナル抗体である、〔１〕の複合体またはその塩。
〔３〕抗体がＩｇＧ抗体である、〔１〕または〔２〕の複合体またはその塩。
〔４〕抗体がヒト由来である、〔１〕〜〔３〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔５〕抗体が、下記（Ａ）〜（Ｃ）からなる群より選ばれるいずれか一つのＦｃ領域タンパク質を含み、かつ抗原結合能を有する抗体である、〔１〕〜〔４〕のいずれかの複合体またはその塩：
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質；
（Ｂ）配列番号１のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸残基が挿入、付加、欠失もしくは置換されたアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質；または
（Ｃ）配列番号１のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を示すアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質。
〔６〕抗体が、連続する１〜５０個のアミノ酸残基からなる標的領域中において特定のアミノ酸残基を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において前記特定のアミノ酸残基を５個以上含み、
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’で表される構造単位が、前記標的領域中に含まれる１個以上の特定のアミノ酸残基に対して３０％以上の位置選択性で結合している、〔１〕〜〔５〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔７〕前記特定のアミノ酸残基が、特定の位置に存在する特定のアミノ酸を中心としてそれぞれＮ末端側およびＣ末端側に対してａ個（ここで、ａは、１〜１０の任意の整数である）のアミノ酸残基の遠隔位置までの領域において、前記特定の位置に存在する特定のアミノ酸残基以外に、特定のアミノ酸残基と同種のアミノ酸残基を含まない、〔６〕の複合体またはその塩。
〔８〕前記抗体が、複数個の重鎖を含む抗体であり、
Ｔが、複数個の重鎖中の対応する複数個の標的領域において、Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’で表される構造単位を有する結果、前記抗体がＡ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’で表される構造単位を複数個有する、〔１〕〜〔７〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔９〕前記機能性物質が、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有する場合、または、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有するように誘導体化されている場合、前記生体直交性官能基と反応し易い官能基が、アジド残基、アルデヒド残基、チオール残基、アルキン残基、アルケン残基、ハロゲン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、チオエステル残基、α―ハロカルボニル残基、イソニトリル残基、シドノン残基、セレン残基からなる群より選ばれる基である、〔１〕〜〔８〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔１０〕前記機能性物質が、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有する場合、または、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有するように誘導体化されている場合、前記生体直交性官能基と反応し易い官能基が、下記：
【化１３】
2020090979.tif 000014
〔式中、
Ｒ１ｆ、単一もしくは複数のＲ１ｇおよび単一もしくは複数のＲ１ｈは、同一もしくは異なって、前記（ｉ）〜（ｖｉｉ）からなる群より選ばれる原子もしくは基、または電子吸引基であり、・は、機能性物質に対する結合手である。〕で表される基からなる群より選ばれる基である、〔１〕〜〔９〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔１１〕抗体と反応性基との間の反応により生成する部分が、リジン残基、チロシン残基、またはトリプトファン残基と、リジン残基、チロシン残基、またはトリプトファン残基のいずれか一つの側鎖に対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分である、〔１〕〜〔１０〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔１２〕抗体と反応性基との間の反応により生成する部分が、リジン残基と、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分である、〔１〕〜〔１１〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔１３〕前記反応により生成する部分が、下記：
【化１４】
2020090979.tif 000015
〔ここで、●（黒丸）は、Ｔ側の部分に対する結合を示し、○（白丸）は、Ｂ側の部分に対する結合を示す。〕からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応する、〔１〕〜〔１２〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔１４〕機能性物質が薬物または標識物質である、〔１〕〜〔１３〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔１５〕機能性物質が低分子化合物である、〔１〕〜〔１３〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔１６〕薬物が抗癌剤である、〔１４〕または〔１５〕の複合体またはその塩。
〔１７〕ＡおよびＲ’を連結する主鎖の原子数が４〜２０個である、〔１〕〜〔１６〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔１８〕ＡおよびＲを連結する主鎖が環構造を含まない、〔１〕〜〔１７〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔１９〕Ｌ−Ｂで表される部分構造がペプチド部分を含まない、〔１〕〜〔１８〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔２０〕前記式（ＩＩＩ）で表される化合物が、下記式（ＩＩＩ’）：
Ａ−Ｂ２’（−Ｆ２）−Ｌ’−Ｂ１’（−Ｆ１）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ’）
〔式中、
Ａ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｌ’は、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ１’およびＢ２’は、同一または異なって、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆ１およびＦ２は、同一または異なって、機能性物質であり、
Ｂ１’（−Ｆ１）およびＢ２’（−Ｆ２）は、Ｌ’を中心にした対称構造を有していてもよい。〕で表される、〔１〕〜〔１９〕のいずれかの複合体またはその塩。
〔２１〕前記式（ＩＩＩ’）で表される化合物が、下記（ＩＩＩ’’）：
【化１５】
2020090979.tif 000016
〔式中、
Ａ、Ｒ’およびＴは、上記式（ＩＩＩ）のものと同じであり、
Ｃは、切断性部分であり、
ｐおよびｐ’は、同一または異なって、０〜１０の任意の整数であり、
ｑおよびｑ’は、同一または異なって、０〜１０の任意の整数であり、
ＸおよびＸ’は、同一または異なって、炭素原子、窒素原子、または単結合（ここで、Ｘが窒素原子である場合、Ｒ１ｂは存在せず、Ｘ’が窒素原子である場合、Ｒ１ｂ’は存在しない。Ｘが単結合である場合、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは存在せず、Ｘ’が単結合である場合、Ｒ１ａ’およびＲ１ｂ’は存在しない。）であり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ａ’およびＲ１ｂ’は、同一または異なって、前記（ｉ）〜（ｖｉｉ）からなる群より選ばれ、
ＹおよびＹ’は、同一または異なって、上記式（Ｂ−１）のＹから水素原子を一つ除いた残基であり、
ＺおよびＺ’は、同一または異なって、前記式（Ｂ−１）のＺと同じであり、
ＦおよびＦ’は、同一または異なって、機能性物質である。〕で表される、〔２０〕の複合体またはその塩。
〔２２〕親和性物質、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩であって、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、複合体またはその塩。【００１９】
（抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の製造方法）
〔２３〕抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の製造方法であって、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩を、機能性物質と反応させて、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
Ａ、Ｌ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
〔２４〕反応性基が、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基である、〔２３〕の方法。
〔２５〕抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の製造方法であって、
（Ａ）下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表される化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａ、Ｌ、およびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩を生成すること、ならびに
（Ｂ）前記抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩を、機能性物質と反応させて、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
ＡおよびＬは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。【００２０】
第４に、本発明は、生体直交性官能基を有する抗体の製造方法を提供する。
〔１〕生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（ＩＶ）：
Ｌ１−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＶ）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
〔２〕Ｌが、（ｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有する切断性部分を含む２価の基である切断性リンカー、または（ｉｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有しない切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーである、〔１〕の方法。
〔３〕Ｌが前記（ｉ）の切断性リンカーであり、
Ｌ１が、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基であり、
Ｂが、前記（ａ）または（ｂ）の２価の基である、〔２〕の方法。
〔４〕Ｌが前記（ｉ）の切断性リンカーであり、
Ｌ１が（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基であり、
Ｂが前記（ｂ）の２価の基である、〔２〕または〔３〕の方法。
〔５〕Ｌが前記（ｉｉ）の切断性リンカーであり、
Ｌ１が（ｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基であり、
Ｂが前記（ａ）の２価の基である、〔２〕の方法。
〔６〕反応性基が、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基である、〔１〕〜〔５〕のいずれかの方法。
〔７〕生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
（Ａ）下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表される化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａ、Ｌ、およびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩を生成すること、ならびに
（Ｂ）前記抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（ＩＶ）：
Ｌ１−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＶ）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。【００２１】
第５に、本発明は、機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する。
〔１〕機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（Ｖ１）：
Ｌ１−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ１）
〔式中、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基であり、
Ｂ’、Ｆ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩＩ）のものと同じである。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
〔２〕反応性基が、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基である、〔１〕の方法。
〔３〕機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
（Ａ）下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩を、機能性物質と反応させて、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
Ａ、Ｌ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を生成すること、ならびに
（Ｂ）前記抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（Ｖ１）：
Ｌ１−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ１）
〔式中、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基であり、
Ｂ’、Ｆ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩＩ）のものと同じである。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
〔４〕機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
（Ａ）下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａ、Ｌ、およびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩を生成すること、
（Ｂ）前記抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩を、機能性物質と反応させて、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
ＡおよびＬは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を生成すること、ならびに
（Ｃ）前記抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（Ｖ１）：
Ｌ１−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ１）
〔式中、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基であり、
Ｂ’、Ｆ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩＩ）のものと同じである。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
〔５〕機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
（Ａ）下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（ＩＶ）：
Ｌ１−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＶ）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること、ならびに
（Ｂ）前記生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を、１種または２種以上の機能性物質と反応させて、
下記式（Ｖ２）
Ｆ−Ｌ１’−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ２）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＶ）のものと同じであり、
Ｌ１’は、機能性物質と、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
Ｆは、機能性物質である。〕、または
下記式（Ｖ３）：
Ｆａ−Ｌ１’−Ｂ’（−Ｆｂ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ３）
〔式中、
Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＶ）のものと同じであり、
Ｌ１’は、前記式（Ｖ２）のものと同じであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
ＦａおよびＦｂは、それぞれ、同一または異なる機能性物質である。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
〔６〕機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
（Ａ）下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表される化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａ、Ｌ、およびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩を生成すること、
（Ｂ）前記抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（ＩＶ）：
Ｌ１−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＶ）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること、ならびに
（Ｃ）前記生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を、１種または２種以上の機能性物質と反応させて、
下記式（Ｖ２）
Ｆ−Ｌ１’−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ２）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＶ）のものと同じであり、
Ｌ１’は、機能性物質と、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
Ｆは、機能性物質である。〕、または
下記式（Ｖ３）：
Ｆａ−Ｌ１’−Ｂ’（−Ｆｂ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ３）
〔式中、
Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＶ）のものと同じであり、
Ｌ１’は、前記式（Ｖ２）のものと同じであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
ＦａおよびＦｂは、それぞれ、同一または異なる機能性物質である。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
【発明の効果】
【００２２】
（Ｉ）抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する本発明の化合物またはその塩は、例えば、抗体の位置選択的な修飾に有用である。
（Ｉ）本発明の化合物またはその塩、（ＩＩ）抗体に対する親和性物質、および切断性部分を（位置選択的に）有する本発明の抗体またはその塩、（ＩＩＩ）抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を（位置選択的に）有する本発明の複合体またはその塩は、例えば、生体直交性官能基を（位置選択的に）有する抗体またはその塩、および機能性物質を（位置選択的に）有する抗体またはその塩の調製のための中間体として有用である。機能性物質を（位置選択的に）有する抗体またはその塩は、例えば、医薬、または試薬（例、診断薬、研究用試薬）として有用である。生体直交性官能基を（位置選択的に）有する抗体またはその塩は、機能性物質を（位置選択的に）有する抗体またはその塩の調製のための中間体として有用である。したがって、（Ｉ）本発明の化合物またはその塩、（ＩＩ）本発明の抗体またはその塩、および（ＩＩＩ）本発明の複合体またはその塩は、例えば、医薬、または試薬の合成中間体として有用である。
また、抗体に対する親和性物質として、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドを使用することにより、Ｎ末端のグルタミン残基（Ｑ）中のアミノ基（−ＮＨ２）がその側鎖に存在するアミド基（例、ＱＥＴをＮ末端に含む場合は、グルタミン残基（Ｑ）中の−ＣＯＮＨ２）と反応（ピログルタミル化）することにより同アミノ基を保護することができるので、抗体に対する親和性物質の結合を媒介するリンカーを、親和性物質中の特定のアミノ酸残基に対してより特異的に付加することができる。
さらに、コリネ型細菌を宿主として用いるポリペプチドの分泌生産方法（ＣｓｐＢ融合法）によれば、ＣｓｐＢ成熟タンパク質のＮ末端３残基Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ（ＱＥＴ）を目的ポリペプチドのＮ末端に付加することにより当該ポリペプチド分泌生産方法の利点を享受できるので、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチド（抗体に対する親和性物質）の調製に適している。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１−１】図１−１は、本発明の化合物〔抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物：Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ（Ｉ）〕による抗体の位置選択的修飾のコンセプトを示す模式図（その１）である。先ず、本発明の化合物は、抗体に対する親和性物質（Ａ）を介して、抗体（Ｔ）に会合する。次に、本発明の化合物は、反応性基（Ｒ）（図中では活性化エステル）を介して、親和性物質と抗体との会合部位の近傍に存在する標的領域中の特定のアミノ酸残基の側鎖（図中ではリジン残基の側鎖）と反応して、本発明の化合物と抗体とのコンジュゲート〔抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む構造単位を位置選択的に有する抗体：Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ（ＩＩ）〕を生成する。
【図１−２】図１−２は、本発明の化合物による抗体の位置選択的修飾のコンセプトを示す模式図（その２）である。リンカー（Ｌ）中の切断性部分の切断により、生体直交性官能基で位置特異的に修飾された抗体が生成する。
【図１−３】図１−３は、本発明の化合物による抗体の位置選択的修飾のコンセプトを示す模式図（その３）である。生体直交性官能基と機能性物質（例、薬物）との反応により、機能性物質で位置特異的に修飾された抗体が生成する。
【図２】図２は、本発明の各発明の関連性を示す図である（塩については表記を省略）。反応（１）では、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物を抗体と反応させて、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体を生成する。反応（２）では、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体を機能性物質と反応させて、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体を生成する。反応（３）では、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体の切断性部分を切断して、機能性物質を有する抗体を生成する（このとき、親和性物質の含有部分が副産物として生成する）。反応（４）では、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体の切断性部分を切断して、生体直交性官能基を有する抗体を生成する（このとき、親和性物質の含有部分が副産物として生成する）。反応（５）では、生体直交性官能基を有する抗体を機能性物質と反応させて、機能性物質を有する抗体を生成する。反応（２）および（５）は同様に行うことができる。反応（３）および（５）もまた、同様に行うことができる。
【図３】図３は、トラスツズマブの重鎖中のＦｃ領域、およびＩｇＧ１  Ｆｃ領域のコンセンサスアミノ酸配列（配列番号１）を示す図である。
【図４】図４は、（１）トラスツズマブの重鎖のアミノ酸配列（配列番号２）、（２）糖鎖をＰＮＧａｓｅで切断したＩｇＧ１  Ｆｃ領域のアミノ酸配列（配列番号３）、および（３）トラスツズマブの軽鎖のアミノ酸配列（配列番号４）を示す図である。
【図５】図５は、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍにおける各改変プロテインＡの分泌発現を示す図である。レーン１：分子量マーカー；レーン２：ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃと推定されるタンパク質バンド；レーン３：ＱＺ３４Ｃ−６０と推定されるタンパク質バンド；レーン４：ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１と推定されるタンパク質バンド；レーン５：ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２と推定されるタンパク質バンド。
【図６】図６は、トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ（Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（疎水性相互作用クロマトグラフィー））−ＵＰＬＣ解析の結果（検出波長：ＵＶ２８０ｎｍ）を示す図である（実施例３）。縦軸のＡＵは、吸光度を示す（以降の図面において同様）。
【図７】図７は、トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析の結果（検出波長：ＵＶ２８０ｎｍ）を示す図である（実施例４）。
【図８】図８は、トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析の結果（検出波長：ＵＶ２８０ｎｍ）を示す図である（実施例５）。
【図９】図９は、トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析の結果（検出波長：ＵＶ２８０ｎｍ）を示す図である（実施例６）。
【図１０】図１０は、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号２６）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ９５２．２３１９６、理論値：９５２．２２９００、４価）を示す図である（実施例７）。
【図１１−１】図１１−１は、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるヒトＩｇＧ重鎖の２４６／２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１２に相当するｍ／ｚ  ７６４．６８（理論値：７６４．４０）のプロダクトイオンのＣＩＤスペクトルを示す図である（実施例７）。
【図１１−２】図１１−２は、トラスツズマブのトリプシン消化物に対し、リジン残基への修飾（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ）を含むペプチドフラグメントをＰｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて検索した結果を示す図である（実施例７）。横軸は同定されたリジン残基を示し、縦軸はＰｅｐｔｉｄｅ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍａｔｃｈｅｓ（ＰＳＭｓ）を示す。なお、リジン残基の残基番号に関して、重鎖ＶＨドメインおよび軽鎖上については配列中の番号（すなわち、Ｎ末端のアミノ酸を１番目とする。以下同様）で、重鎖ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３ドメイン上についてはＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇを用いて表記した。
【図１２】図１２は、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号２６）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ９５２．２３２２７、理論値：９５２．２２９００、４価）を示す図である（実施例８）。
【図１３−１】図１３−１は、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるヒトＩｇＧ重鎖の２４６／２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１３に相当するｍ／ｚ  ８３８．２３（理論値：８３７．９４）のプロダクトイオンのＣＩＤスペクトルを示す図である（実施例８）。
【図１３−２】図１３−２は、トラスツズマブのトリプシン消化物に対し、リジン残基への修飾（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ）を含むペプチドフラグメントをＰｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて検索した結果を示す図である（実施例８）。横軸は同定されたリジン残基を示し、縦軸はＰｅｐｔｉｄｅ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍａｔｃｈｅｓ（ＰＳＭｓ）を示す。なお、リジン残基の残基番号に関して、重鎖ＶＨドメインおよび軽鎖上については配列中の番号で、重鎖ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３ドメイン上についてはＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇを用いて表記した。
【図１４】図１４は、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号２６）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ９５２．２３０３２、理論値：９５２．２２９００、４価）を示す図である（実施例９）。
【図１５−１】図１５−１は、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるヒトＩｇＧ重鎖の２４６／２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１３に相当するｍ／ｚ  ８３８．２９（理論値：８３７．９４）のプロダクトイオンのＣＩＤスペクトルを示す図である（実施例９）。
【図１５−２】図１５−２は、トラスツズマブのトリプシン消化物に対し、リジン残基への修飾（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ）を含むペプチドフラグメントをＰｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて検索した結果を示す図である（実施例９）。横軸は同定されたリジン残基を示し、縦軸はＰｅｐｔｉｄｅ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍａｔｃｈｅｓ（ＰＳＭｓ）を示す。なお、リジン残基の残基番号に関して、重鎖ＶＨドメインおよび軽鎖上については配列中の番号で、重鎖ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３ドメイン上についてはＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇを用いて表記した。
【図１６】図１６は、トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析の結果（検出波長：ＵＶ２８０ｎｍ）を示す図である。
【図１７】図１７は、参考例１のバインダーペプチドを用いて修飾したトラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含む、ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ（配列番号４７）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（ｍ／ｚ  ７９１．７４８７２、３価）を示す図である。
【図１８】図１８は、参考例１のバインダーペプチドを用いて修飾したトラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含む、ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ（配列番号４７）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。
【図１９】図１９は、参考例１のバインダーペプチドを用いて修飾したトラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含む、ＥＥＱＹＤＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ（配列番号４８）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（ｍ／ｚ  ８８６．９３４０８、４価）を示す図である。
【図２０】図２０は、参考例１のバインダーペプチドを用いて修飾したトラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含む、ＥＥＱＹＤＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ（配列番号４８）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。
【図２１】図２１は、トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析の結果（検出波長：ＵＶ２８０ｎｍ）を示す図である（参考例３）。
【図２２】図２２は、参考例３のバインダーペプチドを用いて修飾したトラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含む、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号５０）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（ｍ／ｚ  ７６９．０４６８８、３価）を示す図である。
【図２３】図２３は、参考例３のバインダーペプチドを用いて修飾したトラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含む、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号５０）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。
【図２４】図２４は、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍにおける各改変プロテインＡ（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３およびＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４）の分泌発現について、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す図である。
【図２５】図２５は、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍにおける各改変Ｆｃ−ＩＩＩ（ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＬＶおよびＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＩＩ）の分泌発現について、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す図である。
【図２６】図２６は、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸１８残基からなるペプチド、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号５０）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ７６９．０４３５３、理論値：７６９．０４４８２、３価）を示す図である。
【図２７−１】図２７−１は、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるヒトＩｇＧ重鎖の２８８／２９０位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１６に相当するｍ／ｚ  １０２２．７３（理論値：１０２２．５１）のプロダクトイオンのＣＩＤスペクトルを示す図である（実施例１２）。
【図２７−２】図２７−２は、トラスツズマブのトリプシン消化物に対し、リジン残基への修飾（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ）を含むペプチドフラグメントをＢｉｏＰｈａｒｍａ  Ｆｉｎｄｅｒを用いて検索した結果を示す図である（実施例１２）。横軸は同定されたリジン残基を示し、縦軸はＩｎｔｅｎｓｉｔｙを示す。なお、リジン残基の残基番号に関して、重鎖ＶＨドメインおよび軽鎖上については配列中の番号（すなわち、Ｎ末のアミノ酸を１番目とする。以下同様）で、重鎖ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３ドメイン上についてはＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇを用いて表記した。
【図２８】図２８は、トラスツズマブの特異的修飾体のＥＳＩ−ＴＯＦＭＳ解析による確認を示す図である（実施例１３）。
【図２９】図２９は、トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析の結果（検出波長：ＵＶ２８０ｎｍ）を示す図である（実施例１３）。
【図３０】図３０は、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号２６）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ９５２．２３４２５、理論値：９５２．２２９４２、４価）を示す図である（実施例１４）。
【図３１】図３１は、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号２６）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ９５２．２３４２５、理論値：９５２．２２９４２、４価）を示す図である（実施例１４）。
【図３２−１】図３２−１は、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるヒトＩｇＧ重鎖の２４６／２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ２０に相当するｍ／ｚ  １１６６．９９（理論値：１１６６．６１）のプロダクトイオンのＣＩＤスペクトルを示す図である（実施例１４）。
【図３２−２】図３２−２は、トラスツズマブのトリプシン消化物に対し、リジン残基への修飾（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ）を含むペプチドフラグメントをＢｉｏＰｈａｒｍａ  Ｆｉｎｄｅｒを用いて検索した結果を示す図である（実施例１４）。横軸は同定されたリジン残基を示し、縦軸はＩｎｔｅｎｓｉｔｙを示す。なお、リジン残基の残基番号に関して、重鎖ＶＨドメインおよび軽鎖上については配列中の番号（すなわち、Ｎ末のアミノ酸を１番目とする。以下同様）で、重鎖ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３ドメイン上についてはＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇを用いて表記した。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
１．抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物またはその塩
１−１．概要
本発明は、式（Ｉ）で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物またはその塩を提供する。
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕
【００２５】
本発明に関連して提示される式（Ｉ）および他の式において、−（ハイフン）は、その両側に存在する２つの単位が共有結合していることを示す。したがって、式（Ｉ）では、Ａは、Ｌと共有結合しており、Ｌは、ＡおよびＢと共有結合しており、Ｂは、ＬおよびＲと共有結合しており、Ｒは、Ｂと共有結合している。
【００２６】
１−２．抗体に対する親和性物質（Ａ）
式（Ｉ）において、Ａは、抗体に対する親和性物質である。親和性物質とは、抗体に対して非共有結合による結合能を有する物質である。
【００２７】
本発明で用いられる親和性物質は、抗体を標的とする。抗体は、生体分子（例、糖）で修飾されたタンパク質（例、糖タンパク質）であっても、生体分子で未修飾のタンパク質であってもよい。抗体としては、生物由来成分、ウイルス由来成分、および環境中に見出される成分等の任意の成分に対する任意の抗体を用いることができるが、生物由来成分またはウイルス由来成分に対する抗体が好ましい。生物由来成分としては、例えば、哺乳動物、鳥類（例、ニワトリ）等の動物、昆虫、微生物、植物、菌類、および魚類由来の成分（例、タンパク質）が挙げられる。好ましくは、生物由来成分は、哺乳動物由来の成分である。哺乳動物としては、例えば、霊長類（例、ヒト、サル、チンパンジー）、齧歯類（例、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ）、愛玩動物（例、イヌ、ネコ）、家畜（例、ウシ、ブタ、ヤギ）、使役動物（例、ウマ、ヒツジ）が挙げられる。生物由来成分は、より好ましくは、霊長類または齧歯類由来の成分（例、タンパク質）であり、さらにより好ましくは、本発明の臨床応用の観点から、ヒト由来の成分（例、タンパク質）である。ウイルス由来成分としては、例えば、インフルエンザウイルス（例、トリインフルエンザウイルス、ブタインフルエンザウイルス）、エイズウイルス、エボラウイルス、ファージウイルスに由来する成分（例、タンパク質）が挙げられる。
【００２８】
抗体はまた、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり、好ましくはモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体としては、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、所定の糖鎖が付加された抗体（例、Ｎ型糖鎖結合コンセンサス配列等の糖鎖結合コンセンサス配列を有するように改変された抗体）、二重特異性抗体、ｓｃＦｖ抗体、Ｆａｂ抗体、Ｆ（ａｂ‘）２抗体、ＶＨＨ抗体、Ｆｃ領域タンパク質、Ｆｃ融合タンパク質が挙げられる。抗体はまた、２価の抗体（例、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ）、または４価以上の抗体（例、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体）であってもよい。
【００２９】
親和性物質の標的である抗体はまた、任意のアミノ酸残基から構成されていてもよいが、好ましくは、タンパク質を通常構成する天然の２０種のＬ−α−アミノ酸残基から構成される。このようなアミノ酸残基としては、例えば、Ｌ−アラニン（Ａ）、Ｌ−アスパラギン（Ｎ）、Ｌ−システイン（Ｃ）、Ｌ−グルタミン（Ｑ）、Ｌ−イソロイシン（Ｉ）、Ｌ−ロイシン（Ｌ）、Ｌ−メチオニン（Ｍ）、Ｌ−フェニルアラニン（Ｆ）、Ｌ−プロリン（Ｐ）、Ｌ−セリン（Ｓ）、Ｌ−スレオニン（Ｔ）、Ｌ−トリプトファン（Ｗ）、Ｌ−チロシン（Ｙ）、Ｌ−バリン（Ｖ）、Ｌ−アスパラギン酸（Ｄ）、Ｌ−グルタミン酸（Ｅ）、Ｌ−アルギニン（Ｒ）、Ｌ−ヒスチジン（Ｈ）、またはＬ−リジン（Ｋ）、及びグリシン（Ｇ）が挙げられる（以下、Ｌの表記を省略）。抗体は、例えば１００個以上、好ましくは１２０個以上、より好ましくは１５０個以上、さらにより好ましくは１８０個以上、特に好ましくは２００個以上のアミノ酸残基から構成されていてもよい。抗体はまた、例えば１０００個以下、好ましくは９００個以下、より好ましくは８００個以下、さらにより好ましくは７００個以下、特に好ましくは６００個以下であってもよい。より具体的には、抗体は、例えば１００〜１０００個、好ましくは１２０〜９００個、より好ましくは１５０〜８００個、さらにより好ましくは１８０〜７００個以上、特に好ましくは２００〜６００個のアミノ酸残基から構成されていてもよい。抗体が抗体（例、上述したようなモノクローナル抗体）である場合、上記個数のアミノ酸残基は、抗体の重鎖のアミノ酸残基に相当するものであってもよい。
【００３０】
親和性物質の標的である抗体はさらに、後述するような反応性基が反応できる側鎖または末端（Ｎ末端および/またはＣ末端）、好ましくは側鎖を有する特定のアミノ酸残基を１つの位置または複数の位置（好ましくは複数の位置）で含むタンパク質である。このような特定のアミノ酸残基としては、例えば、後述するような１４種のアミノ酸残基が挙げられるが、好ましくは、リジン残基、チロシン残基、トリプトファン残基、およびシステイン残基からなる群より選ばれるアミノ酸残基である。より好ましくは、このような特定のアミノ酸残基は、リジン残基、チロシン残基、およびトリプトファン残基からなる群より選ばれるアミノ酸残基である。本発明の化合物が抗体を位置選択的に修飾できることに鑑みると、このような特定のアミノ酸残基を複数の位置で含む抗体が好ましい。複数の位置としては、２以上の位置である限り特に限定されないが、例えば３以上の位置、好ましくは５以上の位置、より好ましくは１０以上の位置、さらにより好ましくは２０以上の位置、特に好ましくは３０以上の位置であってもよい。複数の位置はまた、例えば２００以下の位置、好ましくは１８０以下の位置、より好ましくは１５０以下の位置、さらにより好ましくは１２０以下の位置、特に好ましくは１００以下の位置であってもよい。より具体的には、複数の位置は、例えば３〜２００の位置、好ましくは５〜１８０の位置、より好ましくは１０〜１５０の位置、さらにより好ましくは２０〜１２０の位置、特に好ましくは３０〜１００の位置であってもよい。このような特定のアミノ酸残基を複数の位置で含む抗体であっても、本発明の化合物は、特定の一の位置に存在する特定のアミノ酸残基を位置選択的に修飾することができる。例えば、ヒトＩｇＧ１のリジン残基数は、可変領域中のアミノ酸組成にもよるが、一般的には７０〜９０個程度と言われている。本発明では、このようなヒトＩｇＧ１の特定の位置に存在するリジン残基を位置選択的に修飾することに成功している。
【００３１】
より具体的には、本発明では、抗体の機能を維持しつつ（すなわち、抗体を変性させずにネイティブなフォールディングを維持しつつ）、抗体中の特定の位置に存在するアミノ酸残基を修飾する観点から、抗体の表面に露出しているアミノ酸残基の位置選択的な修飾が好ましい。例えば、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧでは、露出リジン残基および露出チロシン残基は、以下の位置に存在する（ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇによる；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ／Ｈｕ＿ＩＧＨＧｎｂｅｒ．ｈｔｍｌを参照）。なお、本願においては、説明上の便宜のため、重鎖ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３ドメイン上についてはＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇを用いて表記し、重鎖ＶＨドメインおよび軽鎖上については配列中の番号（すなわち、Ｎ末端のアミノ酸を１番目）を用いて表記することがある。
（１）露出リジン残基
ＣＨ２ドメイン（２４６位、２４８位、２７４位、２８８位、２９０位、３１７位、３２０位、３２２位、３３８位）
ＣＨ３ドメイン（３６０位、４１４位、４３９位）
（２）露出チロシン残基
ＣＨ２ドメイン（２７８位、２９６位、３００位）
ＣＨ３ドメイン（４３６位）
したがって、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧがリジン残基またはチロシン残基で修飾される場合、上記位置での修飾が好ましい。
【００３２】
好ましくは、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧがリジン残基またはチロシン残基で修飾される場合、上記（１）および（２）の位置のなかでも、表面への露出性が高い以下の位置に存在するリジン残基またはチロシン残基が修飾されてもよい。
（１’）露出リジン残基
ＣＨ２ドメイン（２４６位、２４８位、２７４位、２８８位、２９０位、３１７位、３２０位、３２２位）
ＣＨ３ドメイン（３６０位、４１４位、４３９位）
（２’）露出チロシン残基
ＣＨ２ドメイン（２７８位、２９６位、３００位）
ＣＨ３ドメイン（４３６位）
したがって、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧがリジン残基またはチロシン残基で修飾される場合、上記位置での修飾がより好ましい。
【００３３】
より好ましくは、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧがリジン残基で修飾される場合、上記（１）の位置のなかでも、本発明において効率的に修飾することができるＣＨ２ドメイン中の所定の位置（例、２４６位、２４８位、２８８位、２９０位、３１７位）に存在するリジン残基が修飾されてもよい。
【００３４】
特定の実施形態では、親和性物質の標的である抗体は、上述したように特定のアミノ酸残基を複数の位置で含む場合、連続する１〜５０個のアミノ酸残基からなる標的領域中において特定のアミノ酸残基を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において特定のアミノ酸残基を５個以上含むものであってもよい。標的領域は、好ましくは１〜３０個、より好ましくは１〜２０個、さらにより好ましくは１〜１０個、１〜５個、または１〜３個（すなわち、１個、２個、もしくは３個）のアミノ酸残基からなるものであってもよい。特に好ましくは、標的領域は、特定の位置に存在する特定のアミノ酸残基からなる領域であってもよい。このような特定の位置は、標的タンパク質および親和性物質の種類などによっても変動するが、例えば、抗体の定常領域中の特定領域（例、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）中の特定の位置であってもよく、好ましくは抗体のＣＨ２中の位置であってもよい。より具体的には、標的領域は、ヒトＩｇＧ  ＦｃにおけるＥｕ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇに従う下記残基であってもよい：
（１）Ｌｙｓ２４８残基（以下、本明細書では単に「Ｌｙｓ２４８」とも表記し、ヒトＩｇＧ  ＣＨ２領域（配列番号１）の１８番目の残基に相当する）またはＬｙｓ２４６残基（以下、本明細書では単に「Ｌｙｓ２４６」とも表記し、ヒトＩｇＧ  ＣＨ２領域（配列番号１）の１６番目の残基に相当する）
：
（２）Ｌｙｓ２８８残基（以下、本明細書では単に「Ｌｙｓ２８８」とも表記し、ヒトＩｇＧ  ＣＨ２領域（配列番号１）の５８番目の残基に相当する）またはＬｙｓ２９０残基（以下、本明細書では単に「Ｌｙｓ２９０」とも表記し、ヒトＩｇＧ  ＣＨ２領域（配列番号１）の６０番目の残基に相当する）；
（３）Ｌｙｓ３１７残基（以下、本明細書では単に「Ｌｙｓ３１７」とも表記し、ヒトＩｇＧ  ＣＨ２領域（配列番号１）の８７番目の残基に相当する）。
【００３５】
本発明によれば、上記標的領域における特定のアミノ酸残基を高度に位置選択的に修飾することができる。このような位置選択性は、例えば３０％以上、好ましくは４０％以上、より好ましくは５０％以上、さらにより好ましくは６０％以上、特に好ましくは７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％以上であってもよい。
【００３６】
標的領域はまた、特定の位置に存在する特定のアミノ酸残基が、当該特定の位置を中心としてそれぞれＮ末端側およびＣ末端側に対してａ個（ここで、ａは、１〜１０の任意の整数である）のアミノ酸残基の遠隔位置までの領域において、当該特定の位置に存在する特定のアミノ酸残基以外に、特定のアミノ酸残基と同種のアミノ酸残基を含まないものであってもよい。ａは、好ましくは１〜５の整数であり、より好ましくは１〜３の整数であり、さらにより好ましくは１または２であり、特に好ましくは１である。
【００３７】
好ましい実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体等の抗体のアイソタイプとしては、例えば、ＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、およびＩｇＹが挙げられる。モノクローナル抗体は、全長抗体、または抗体断片（例、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、単鎖抗体）であるが、全長抗体が好ましい。
【００３８】
抗体は、任意の抗原に対する抗体である。例えば、このような抗原は、上述したような生物またはウイルスにおいて見出される成分であってもよい。このような抗原としてはまた、例えば、タンパク質〔オリゴペプチド、ポリペプチドを含む。糖等の生体分子で修飾されたタンパク質（例、糖タンパク質）であってもよい〕、糖鎖、核酸、低分子化合物が挙げられる。
【００３９】
好ましくは、抗体は、タンパク質を抗原とする抗体であってもよい。タンパク質としては、例えば、細胞膜受容体、細胞膜受容体以外の細胞膜タンパク質（例、細胞外基質タンパク質）、リガンド、可溶性受容体が挙げられる。
【００４０】
より具体的には、抗体の抗原であるタンパク質は、疾患標的タンパク質であってもよい。疾患標的タンパク質としては、例えば、以下が挙げられる。
【００４１】
（１）がん領域
ＰＤ−Ｌ１、ＧＤ２、ＰＤＧＦＲα（血小板由来成長因子受容体）、ＣＤ２２、ＨＥＲ２、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＥｐＣＡＭ、フィブロネクチン、ＰＤ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３３、ＨＧＦ、ｇｐＮＭＢ、ＣＤ２７、ＤＥＣ−２０５、葉酸受容体、ＣＤ３７、ＣＤ１９、Ｔｒｏｐ２、ＣＥＡＣＡＭ５、Ｓ１Ｐ、ＨＥＲ３、ＩＧＦ−１Ｒ、ＤＬＬ４、ＴＮＴ−１／Ｂ、ＣＰＡＡｓ、ＰＳＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１０５（エンドグリン）、ＩＣＡＭ−１、ＣＤ３０、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ３８、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＫＩＲ２ＤＬ１，２，、ＮＫＧ２Ａ、ｔｅｎａｓｃｉｎ−Ｃ、ＩＧＦ（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）、ＣＴＬＡ−４、ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、ＣＤ１３８、ｃ−Ｍｅｔ、Ａｎｇ２、ＶＥＧＦ−Ａ、ＣＤ７９ｂ、ＥＮＰＤ３、葉酸受容体α、ＴＥＭ−１、ＧＭ２、グリピカン３、ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ、ＣＤ７４、Ｎｏｔｃｈ１、Ｎｏｔｃｈ２、Ｎｏｔｃｈ３、ＣＤ３７、ＴＬＲ−２、ＣＤ３、ＣＳＦ−１Ｒ、ＦＧＦＲ２ｂ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＥｐｈＡ３、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ１２３、ｇｐＡ３３、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ７受容体、ＤＬＬ４、ＶＥＧＦ、ＲＳＰＯ、ＬＩＶ−１、ＳＬＩＴＲＫ６、Ｎｅｃｔｉｎ−４、ＣＤ７０、ＣＤ４０、ＣＤ１９、ＳＥＭＡ４Ｄ（ＣＤ１００）、ＣＤ２５、ＭＥＴ、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｆａｃｔｏｒ、ＩＬ−８、ＥＧＦＲ、ｃＭｅｔ、ＫＩＲ３ＤＬ２、Ｂｓｔ１（ＣＤ１５７）、Ｐ−カドヘリン、ＣＥＡ、ＧＩＴＲ、ＴＡＭ（ｔｕｍｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）、ＣＥＡ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ２、ＣＤ７３、ＦＧＦＲ２、ＣＸＣＲ４、ＬＡＧ−３、ＧＩＴＲ、Ｆｕｃｏｓｙｌ  ＧＭ１、ＩＧＦ−１、Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ  ２、ＣＳＦ−１Ｒ、ＦＧＦＲ３、ＯＸ４０、ＢＣＭＡ、ＥｒｂＢ３、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＰＴＫ７、ＥＦＮＡ４、ＦＡＰ、ＤＲ５、ＣＥＡ、Ｌｙ６Ｅ、ＣＡ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＬＡＭＰ１、ｔｉｓｓｕｅ  ｆａｃｔｏｒ、ＥＰＨＡ２、ＤＲ５、Ｂ７−Ｈ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ２、α２−ＰＩ、Ａ３３、ＧＤＦ１５、ＣＡＩＸ、ＣＤ１６６、ＲＯＲ１、ＧＩＴＲ、ＢＣＭＡ、ＴＢＡ、ＬＡＧ−３、ＥｐｈＡ２、ＴＩＭ−３、ＣＤ−２００、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＰＩＧＦ、Ａｘｌ、ＭＩＣＡ／Ｂ、Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ、ＣＤ３９、ＣＤ３７、ＣＤ７３、ＣＬＥＣ１２Ａ、Ｌｇｒ３、トランスフェリン受容体、ＴＧＦβ、ＩＬ−１７、５Ｔ４、ＲＴＫ、Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ、ＮａＰｉ２ｂ、ルイス血液型Ｂ抗原、Ａ３４、Ｌｙｓｉｌ−Ｏｘｉｄａｓｅ、ＤＬＫ−１、ＴＲＯＰ−２、α９インテグリン、ＴＡＧ−７２（ＣＡ７２−４）、ＣＤ７０
【００４２】
（２）自己免疫疾患・炎症性疾患
ＩＬ−１７、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＮＦ−α、ＩＬ−５Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＩＬ−６、ＡｃｔＲＩＩＢ、β７−Ｉｎｔｅｇｒｉｎ、ＩＬ−４αＲ、ＨＡＳ、Ｅｏｔａｘｉｎ−１、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１５、ＣＤ３ε、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１７、ＴＳＬＰ（Ｔｈｙｍｉｃ  Ｓｔｒｏｍａｌ  Ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ）、ＬＡＭＰ（Ａｌｐｈａ４  Ｂｅｔａ  ７  Ｉｎｔｅｇｒｉｎ）、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦＲ、ＴＳＬＰ、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＴＬＲ−３、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＭＡｄＣＡＭ、ＩＬ−３１Ｒ、ＩＬ−３３、ＣＤ７４、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ７９Ｂ、ＩｇＥ（免疫グロブリンＥ）、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、Ｃ５、ＦｃＲｎ、ＣＤ２８、ＴＬＲ４、ＭＣＡＭ、Ｂ７ＲＰ１、ＣＸＣＲ１，２  Ｌｉｇａｎｄｓ、ＩＬ−２１、Ｃａｄｈｅｒｉｎ−１１、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＣＬ２０、ＩＬ−３６Ｒ、ＩＬ−１０Ｒ、ＣＤ８６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−７Ｒ、Ｋｖ１．３、α９インテグリン、ＬＩＦＨＴ
【００４３】
（３）脳神経疾患
ＣＧＲＰ、ＣＤ２０、βアミロイド、βアミロイドプロトフィブリン、Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ  Ｇｅｎｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＬＩＮＧＯ（Ｉｇ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１）、αシヌクレイン、細胞外ｔａｕ、ＣＤ５２、インスリン受容体、ｔａｕタンパク、ＴＤＰ−４３、ＳＯＤ１、ＴａｕＣ３、ＪＣウイルス
【００４４】
（４）感染症
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  Ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ  ｔｏｘｉｎ  Ｂ、サイトメガロウイルス、ＲＳウイルス、ＬＰＳ、Ｓ．Ａｕｒｅｕｓ  Ａｌｐｈａ−ｔｏｘｉｎ、Ｍ２ｅタンパク、Ｐｓｌ、ＰｃｒＶ、Ｓ．Ａｕｒｅｕｓ  ｔｏｘｉｎ、インフルエンザＡ、Ａｌｇｉｎａｔｅ、黄色ブドウ球菌、ＰＤ−Ｌ１、インフルエンザＢ、アシネトバクター、Ｆ−ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｅｎｖ、ＣＤ３、病原性大腸菌、クレブシエラ、肺炎球菌
【００４５】
（５）遺伝性・希少疾患
アミロイドＡＬ、ＳＥＭＡ４Ｄ（ＣＤ１００）、インスリン受容体、ＡＮＧＰＴＬ３、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＦＧＦ２３、副腎皮質刺激ホルモン、トランスサイレチン、ハンチンチン
【００４６】
（６）眼疾患
Ｆａｃｔｏｒ  Ｄ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＰＧＤＦＲ、Ａｎｇ２、ＶＥＧＦ−Ａ、ＣＤ−１０５（Ｅｎｄｏｇｌｉｎ）、ＩＧＦ−１Ｒ、βアミロイド
【００４７】
（７）骨・整形外科領域
Ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ、Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ−１、ＧＤＦ８、ＲＮＡＫＬ、ＨＡＳ、Ｓｉｇｌｅｃ−１５
【００４８】
（８）血液疾患
ｖＷＦ、Ｆａｃｔｏｒ  ＩＸａ、Ｆａｃｔｏｒ  Ｘ、ＩＦＮγ、Ｃ５、ＢＭＰ−６、Ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ、ＴＦＰＩ
【００４９】
（９）その他の疾患
ＢＡＦＦ（Ｂ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）、ＩＬ−１β、ＰＣＳＫ９、ＮＧＦ、ＣＤ４５、ＴＬＲ−２、ＧＬＰ−１、ＴＮＦＲ１、Ｃ５、ＣＤ４０、ＬＰＡ、プロラクチン受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＣＢ１、Ｅｎｄｏｇｌｉｎ、ＰＴＨ１Ｒ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ８、ＩＬ−１β、ＡＴ２−Ｒ、ＩＡＰＰ
【００５０】
より好ましい実施形態では、抗体に対する親和性物質は、モノクローナル抗体に対する親和性物質である。モノクローナル抗体のアイソタイプは、抗体について上述したものと同様であるが、ＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）が好ましい。好ましくは、モノクローナル抗体は、全長モノクローナル抗体である。
【００５１】
さらにより好ましい実施形態では、抗体に対する親和性物質は、全長モノクローナル抗体であるキメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４等のＩｇＧ）に対する親和性物質である。
【００５２】
特に好ましい実施形態では、抗体に対する親和性物質は、下記（Ａ）〜（Ｃ）からなる群より選ばれるいずれか一つのＦｃ領域タンパク質を含み、かつ抗原結合能を有する抗体に対する親和性物質である：
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質；
（Ｂ）配列番号１のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸残基が挿入、付加、欠失もしくは置換されたアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質；または
（Ｃ）配列番号１のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を示すアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質。
【００５３】
配列番号１のアミノ酸配列は、Ｆｃ領域タンパク質である。このようなＦｃ領域タンパク質は、分泌能を有することが知られている。したがって、上記（Ａ）〜（Ｃ）のＦｃ領域タンパク質は、分泌能を有することができる。また、このようなＦｃ領域タンパク質を含む抗体は、抗原結合能を有することができる。配列番号１における１８位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは中性アミノ酸残基であり、より好ましくは後述するような非極性側鎖を有するアミノ酸残基であり、さらにより好ましくはロイシン、イソロイシンまたはアラニンであり、特に好ましくはロイシンまたはアラニンである。配列番号１における１９位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは中性アミノ酸残基または酸性アミノ酸残基であり、より好ましくは非極性側鎖を有するアミノ酸残基または酸性アミノ酸残基であり、さらにより好ましくはロイシンまたはグルタミン酸である。配列番号１における２１位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは中性アミノ酸残基であり、より好ましくは非極性側鎖を有するアミノ酸残基であり、さらにより好ましくはグリシンまたはアラニンである。配列番号１における１４０位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは酸性アミノ酸残基であり、より好ましくはグルタミン酸またはアスパラギン酸である。配列番号１における１４２位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは中性アミノ酸残基であり、より好ましくは非極性側鎖を有するアミノ酸残基であり、さらにより好ましくはメチオニン、ロイシンまたはイソロイシンであり、特に好ましくはメチオニンまたはロイシンである。配列番号１における１７７位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは中性アミノ酸残基であり、より好ましくは後述するような非荷電性極性側鎖を有するアミノ酸残基または非極性側鎖を有するアミノ酸残基であり、さらにより好ましくはスレオニン、アラニンまたはグリシンであり、特に好ましくはスレオニンまたはアラニンである。
【００５４】
好ましい実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列は、配列番号２のアミノ酸配列における２２０〜４４９位のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列であってもよい。
【００５５】
別の好ましい実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列は、配列番号３のアミノ酸配列における７〜２３６位のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列であってもよい。
【００５６】
特定の実施形態では、上述したようなアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質を含む抗体は、上述したようなアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質、および抗体の定常領域を含む抗体であってもよい。このような抗体の定常領域としては、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４等のＩｇＧ）の定常領域であってもよい。
【００５７】
Ｆｃ領域タンパク質（Ｂ）では、アミノ酸残基の欠失、置換、付加および挿入からなる群より選ばれる１、２、３または４種の変異により、１個または数個のアミノ酸残基が改変され得る。アミノ酸残基の変異は、アミノ酸配列中の１つの領域に導入されてもよいが、複数の異なる領域に導入されてもよい。用語「１個または数個」は、タンパク質の活性を大きく損なわない個数を示す。用語「１個または数個」が示す数は、例えば、１〜１００個、好ましくは１〜８０個、より好ましくは１〜５０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１０個または１〜５個（例、１個、２個、３個、４個、または５個）である。
【００５８】
Ｆｃ領域タンパク質（Ｃ）では、配列番号１のアミノ酸配列との同一性％は、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上または９９％以上であってもよい。本発明では、ペプチドまたはポリペプチド（タンパク質）の同一性％の算出は、アルゴリズムｂｌａｓｔｐにより行うことができる。より具体的には、ポリペプチドの同一性％の算定は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）において提供されているアルゴリズムｂｌａｓｔｐにおいて、デフォルト設定のＳｃｏｒｉｎｇ  Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ（Ｍａｔｒｉｘ：ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｇａｐ  Ｃｏｓｔｓ：Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ＝１１  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ＝１；Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  Ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔｓ：Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）を用いて行うことができる。また、ポリヌクレオチド（遺伝子）の同一性％の算出は、アルゴリズムｂｌａｓｔｎにより行うことができる。より具体的には、ポリヌクレオチドの同一性％の算定は、ＮＣＢＩにおいて提供されているアルゴリズムｂｌａｓｔｎにおいて、デフォルト設定のＳｃｏｒｉｎｇ  Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ（Ｍａｔｃｈ／Ｍｉｓｍａｔｃｈ  Ｓｃｏｒｅｓ＝１，−２；Ｇａｐ  Ｃｏｓｔｓ＝Ｌｉｎｅａｒ）を用いて行うことができる。
【００５９】
分泌能における分泌は、分泌タンパク質の分泌（いわゆる可溶性）と同じ意味である。したがって、「分泌能を有する」とは、通常の抗体と同様に、抗体として機能することを意味する。
【００６０】
上記Ｆｃ領域タンパク質を含む抗体は、目的の特性（例、分泌能、抗原結合能）を保持する限り、特定の部位に、変異が導入されていてもよい。目的の特性を保持し得る、変異が導入されてもよいアミノ酸残基の位置は、当業者に明らかである。具体的には、当業者は、１）同種の特性を有する複数のタンパク質のアミノ酸配列を比較し、２）相対的に保存されている領域、および相対的に保存されていない領域を明らかにし、次いで、３）相対的に保存されている領域および相対的に保存されていない領域から、それぞれ、機能に重要な役割を果たし得る領域および機能に重要な役割を果たし得ない領域を予測できるので、構造・機能の相関性を認識することができる。したがって、当業者は、上記Ｆｃ領域タンパク質を含む抗体のアミノ酸配列において変異が導入されてもよいアミノ酸残基の位置を特定できる。
【００６１】
アミノ酸残基が置換により変異される場合、アミノ酸残基の置換は、保存的置換であってもよい。本明細書中で用いられる場合、用語「保存的置換」とは、所定のアミノ酸残基を、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換することをいう。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で周知である。例えば、このようなファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電性極性側鎖を有するアミノ酸（例、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β位分岐側鎖を有するアミノ酸（例、スレオニン、バリン、イソロイシン）、芳香族側鎖を有するアミノ酸（例、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）、ヒドロキシル基（例、アルコール性、フェノール性）含有側鎖を有するアミノ酸（例、セリン、スレオニン、チロシン）、および硫黄含有側鎖を有するアミノ酸（例、システイン、メチオニン）が挙げられる。好ましくは、アミノ酸の保存的置換は、アスパラギン酸とグルタミン酸との間での置換、アルギニンとリジンとヒスチジンとの間での置換、トリプトファンとフェニルアラニンとの間での置換、フェニルアラニンとバリンとの間での置換、ロイシンとイソロイシンとアラニンとの間での置換、およびグリシンとアラニンとの間での置換であってもよい。
【００６２】
上記（Ａ）〜（Ｃ）からなる群より選ばれるいずれか一つのＦｃ領域を含む抗体としては、例えば、キメラ抗体（例、リツキシマブ、バシリキシマブ、インフリキシマブ、セツキシマブ、シルツキシマブ、ディヌツキシマブ、オルタトキサシマブ）、ヒト化抗体（例、ダクリヅマブ、パリビズマブ、トラスツズマブ、アレンツズマブ、オマリヅマブ、エファリヅマブ、ベバシヅマブ、ナタリヅマブ（ＩｇＧ４）、トシリヅマブ、エクリヅマブ（ＩｇＧ２）、モガムリヅマブ、ペルツヅマブ、オビヌツヅマブ、ベドリヅマブ、ペンプロリヅマブ（ＩｇＧ４）、メポリヅマブ、エロツヅマブ、ダラツムマブ、イケセキヅマブ（ＩｇＧ４）、レスリヅマブ（ＩｇＧ４）、アテゾリヅマブ）、ヒト抗体（例、アダリムマブ（ＩｇＧ１）、パニツムマブ、ゴリムマブ、ウステキヌマブ、カナキヌマブ、オファツムマブ、デノスマブ（ＩｇＧ２）、イピリムマブ、ベリムマブ、ラキシバクマブ、ラムシルマブ、ニボルマブ、デュピルマブ（ＩｇＧ４）、セクキヌマブ、エボロクマブ（ＩｇＧ２）、アリロクマブ、ネシツムマブ、ブロダルマブ（ＩｇＧ２）、オララツマブ）が挙げられる（ＩｇＧサブタイプに言及していない場合、ＩｇＧ１であることを示す）。
【００６３】
本発明では、抗体に対する親和性物質は、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである。抗体に対する親和性物質として、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドを用いることにより、Ｎ末端のグルタミン残基（Ｑ）中のアミノ基（−ＮＨ２）がその側鎖に存在するアミド基と反応（ピログルタミル化）することにより同アミノ基を保護することができる。したがって、抗体に対する親和性物質の結合を媒介するリンカーを、親和性物質中の特定のアミノ酸残基（アミノ基を有するリジン残基）に特異的に付加することができる。
【００６４】
グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドとしては、例えば、抗体に対する親和性ポリペプチドのＮ末端に対して、グルタミン酸残基、またはＮ末端にグルタミン酸残基を含有するペプチドが付加されたポリペプチドが挙げられる。抗体に対する親和性ポリペプチドとしては、種々のものが報告されている（例、国際公開第２０１６／１８６２０６号；国際公開２０１３／０２７７９６号；国際公開第２００８／０５４０３０号；国際公開２００１／０４５７４６号；Ｆａｓｓｉｎａ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＯＵＲＮＡＬ  ＯＦ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＲＥＣＯＧＮＩＴＩＯＮ，１９９６，ＶＯＬ．６，５６４−５６９；Ｅｈｒｌｉｃｈ  Ｇ．Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，ＶＯＬ．４９，４４３−４５４；Ｒｕｖｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ，２００５，ＶＯＬ．６，１２４２−１２５３；Ｋｒｏｏｋ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９８，ＶＯＬ．２２１，１５１−１５７；Ｊａｃｏｂｓ  Ｊ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ．Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２００３，ＶＯＬ．３４，１３２−１４１；Ｃａｒｂｏｎｅｌｌ  Ｒ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ，２００９，ＶＯＬ．１２１６，９１０−９１８；Ｌｕｎｄ  Ｌ．Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ，２０１２，ＶＯＬ．１２２５，１５８−１６７；Ｗａｒｒｅｎ  Ｌ．Ｄｅｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，ＶＯＬ．２８７，１２７９−１２８３；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１３，ＶＯＬ．７９，３３−４０）。
【００６５】
グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドとしては、コリネ型細菌を宿主として用いるポリペプチドの分泌生産方法（国際公開第２０１３／０６２０２９号）により調製することができるポリペプチドを使用することが好ましい。この方法は、Ｃｓｐ成熟タンパク質のＮ末端３残基Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ（ＱＥＴ）を目的ポリペプチドのＮ末端に付加することができ、しかもグルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドを簡便かつ多量に調製することができるので、抗体に対する親和性物質の調製に適している。この方法において使用され得るコリネ型細菌としては、例えば、コリネバクテリウム属細菌（例、コリネバクテリウム・グルタミカム、コリネバクテリウム・スタティオニス）、およびブレビバクテリウム属細菌が挙げられる。
【００６６】
グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドのアミノ酸残基数は、特に限定されないが、コリネ型細菌を宿主として用いるポリペプチドの分泌生産方法における分泌生産効率の観点から、１６個以上１２３個以下であってもよい。好ましくは、このようなアミノ酸残基数は、２０個以上、２５個以上、３０個以上、３５個以上、３７個以上、または４０個以上であってもよい。このようなアミノ酸残基数はまた、７３個以下、６８個以下、６４個以下、６１個以下、５８個以下、または５３個以下であってもよい。
【００６７】
特定の実施形態では、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドは、以下（１）〜（４）からなる群より選ばれるものであってもよい：
【化１６】
2020090979.tif 000017
〔Ｑは、Ｎ末端のグルタミン残基であり、Ｅはグルタミン酸残基であり、Ｔはスレオニン残基であり、実線は結合手であり、スペーサー部分は１個以上５０個以下のアミノ酸残基からなる部分であり、抗体に対する親和性物質は１５個以上７０個以下のアミノ酸残基からなる部分である。〕。
【００６８】
上記（１）〜（４）のポリペプチドにおいて、スペーサー部分のアミノ酸残基数は、好ましくは１個以上４０個以下であり、より好ましくは１個以上３０個以下であり、さらにより好ましくは１個以上２０個以下であり、特に好ましくは１個以上１０個以下である。アミノ酸残基としては、任意のアミノ酸残基を利用することができるが、天然タンパク質を構成する２０種の標準的なＬ−α−アミノ酸が好ましい。
【００６９】
上記（１）〜（４）のポリペプチドにおいて、抗体に対する親和性ポリペプチド部分のアミノ酸残基数は、１５個以上７０個以下であり、好ましくは、１５個以上、１７個以上、２０個以上、２５個以上、３０個以上、３４個以上、３５個以上、または４０個以上であってもよく、好ましくは、６５個以下、６１個以下、６０個以下、５５個以下、または５０個以下であってもよい。上記（１）〜（４）のポリペプチドにおいて、抗体に対する親和性ポリペプチド部分としては、抗体に対する任意の親和性ポリペプチド（例、上記既報のポリペプチド）を利用することができるが、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、プロテインＺ、および抗体に対する親和性を有するそれらの断片、ならびに抗体に対する親和性を有するそれらの変異体からなる群より選ばれるものが好ましい。
【００７０】
プロテインＡは、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）の細胞壁に存在する非グリコシル化タンパク質（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ：ＳｐＡ）である。プロテインＡの複数のドメイン（ドメインＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥ）がそれぞれ抗体に対する親和性を有することが知られている（例、Ｍｏｋｓ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９８６  Ｍａｙ  ２；１５６（３）：６３７−４３）。したがって、このようなドメインに対応するポリペプチドを、プロテインＡの断片として使用することができる。より具体的には、このようなドメインに対応するポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する（アミノ酸残基数  ５８〜６１個）。
（１）ドメインＡ：ＡＤＮＮＦＮＫＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＮＭＰＮＬＮＥＥＱＲＮＧＦＩＱＳＬＫＤＤＰＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＫＫＬＮＥＳＱＡＰＫ（配列番号２７）
（２）ドメインＢ：ＡＤＮＫＦＮＫＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨＬＰＮＬＮＥＥＱＲＮＧＦＩＱＳＬＫＤＤＰＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＫＫＬＮＤＡＱＡＰＫ（配列番号２８）
（３）ドメインＣ：ＡＤＮＫＦＮＫＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨＬＰＮＬＴＥＥＱＲＮＧＦＩＱＳＬＫＤＤＰＳＶＳＫＥＩＬＡＥＡＫＫＬＮＤＡＱＡＰＫ（配列番号２９）
（４）ドメインＤ：ＡＤＡＱＱＮＫＦＮＫＤＱＱＳＡＦＹＥＩＬＮＭＰＮＬＮＥＥＱＲＮＧＦＩＱＳＬＫＤＤＰＳＱＳＴＮＶＬＧＥＡＫＫＬＮＥＳＱＡＰＫ（配列番号３０）
（５）ドメインＥ：ＡＡＮＡＡＱＨＤＥＡＱＱＮＡＦＹＱＶＬＮＭＰＮＬＮＡＤＱＲＮＧＦＩＱＳＬＫＤＤＰＳＱＳＡＮＶＬＧＥＡＱＫＬＮＤＳＱＡＰＫ（配列番号３１）
【００７１】
プロテインＧは、Ｇ群溶血性レンサ球菌（ｇｒｏｕｐ  Ｇ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）の細胞壁に存在するタンパク質である。プロテインＧの複数のドメイン（ドメインＣ２およびＣ３）がそれぞれ抗体に対する親和性を有することが知られている（例、Ｓｊｏｂｒｉｎｇ  ＵＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  １９９１  Ｊａｎ  ５；２６６（１）：３９９−４０５）。したがって、このようなドメインに対応するポリペプチドを、プロテインＧの断片として使用することができる。より具体的には、このようなドメインに対応するポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する（アミノ酸残基数  ６０個）。
（１）ドメインＣ２：ＴＰＡＶＴＴＹＫＬＶＩＮＧＫＴＬＫＧＥＴＴＴＥＡＶＤＡＡＴＡＥＫＶＦＫＱＹＡＮＤＮＧＶＤＧＥＷＴＹＤＤＡＴＫＴＦＴＶＴＥ（配列番号３２）
（２）ドメインＣ３：ＴＰＡＶＴＴＹＫＬＶＩＮＧＫＴＬＫＧＥＴＴＴＫＡＶＤＡＥＴＡＥＫＡＦＫＱＹＡＮＤＮＧＶＤＧＶＷＴＹＤＤＡＴＫＴＦＴＶＴＥ（配列番号３３）
【００７２】
プロテインＬは、ペプトストレプトコッカス・マグナス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍａｇｎｕｓ）に由来するタンパク質である。プロテインＬの複数のドメイン（ドメインＣ、Ｃ１〜Ｃ４、Ｂ１〜Ｂ５）が抗体に対する親和性を有することが知られている（例、Ｇｒａｉｌｌｅ  Ｍ  ｅｌ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．  ２００１  Ａｕｇ；９（８）：６７９−８７）。したがって、このようなドメインに対応するポリペプチドを、プロテインＬの断片として使用することができる。より具体的には、このようなドメインに対応するポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する（アミノ酸残基数  ６１個）。
（１）ドメインＣ：ＥＶＴＩＫＶＮＬＩＦＡＤＧＫＩＱＴＡＥＦＫＧＴＦＥＥＡＴＡＥＡＹＲＹＡＤＬＬＡＫＶＮＧＥＹＴＡＤＬＥＤＧＧＮＨＭＮＩＫＦＡ（配列番号３４）
（２）ドメインＣ１：ＥＶＴＩＫＡＮＬＩＦＡＤＧＳＴＱＮＡＥＦＫＧＴＦＡＫＡＶＳＤＡＹＡＹＡＤＡＬＫＫＤＮＧＥＹＴＶＤＶＡＤＫＧＬＴＬＮＩＫＦＡ（配列番号３５）
（３）ドメインＣ２：ＥＶＴＩＫＶＮＬＩＦＡＤＧＫＴＱＴＡＥＦＫＧＴＦＥＥＡＴＡＫＡＹＡＹＡＤＬＬＡＫＥＮＧＥＹＴＡＤＬＥＤＧＧＮＴＩＮＩＫＦＡ（配列番号３６）
（４）ドメインＣ３：ＥＶＴＩＫＶＮＬＩＦＡＤＧＫＩＱＴＡＥＦＫＧＴＦＥＥＡＴＡＫＡＹＡＹＡＮＬＬＡＫＥＮＧＥＹＴＡＤＬＥＤＧＧＮＴＩＮＩＫＦＡ（配列番号３７）
（５）ドメインＣ４：ＥＶＴＩＫＶＮＬＩＦＡＤＧＫＴＱＴＡＥＦＫＧＴＦＥＥＡＴＡＥＡＹＲＹＡＤＬＬＡＫＶＮＧＥＹＴＡＤＬＥＤＧＧＹＴＩＮＩＫＦＡ（配列番号３８）
（６）ドメインＢ１：ＥＶＴＩＫＡＮＬＩＦＡＮＧＳＴＱＴＡＥＦＫＧＴＦＥＫＡＴＳＥＡＹＡＹＡＤＴＬＫＫＤＮＧＥＹＴＶＤＶＡＤＫＧＹＴＬＮＩＫＦＡ（配列番号３９）
（７）ドメインＢ２：ＥＶＴＩＫＡＮＬＩＹＡＤＧＫＴＱＴＡＥＦＫＧＴＦＥＥＡＴＡＥＡＹＲＹＡＤＡＬＫＫＤＮＧＥＹＴＶＤＶＡＤＫＧＹＴＬＮＩＫＦＡ（配列番号４０）
（８）ドメインＢ３：ＥＶＴＩＫＡＮＬＩＹＡＤＧＫＴＱＴＡＥＦＫＧＴＦＥＥＡＴＡＥＡＹＲＹＡＤＬＬＡＫＥＮＧＫＹＴＶＤＶＡＤＫＧＹＴＬＮＩＫＦＡ（配列番号４１）
（９）ドメインＢ４：ＥＶＴＩＫＡＮＬＩＹＡＤＧＫＴＱＴＡＥＦＫＧＴＦＡＥＡＴＡＥＡＹＲＹＡＤＬＬＡＫＥＮＧＫＹＴＡＤＬＥＤＧＧＹＴＩＮＩＲＦＡ（配列番号４２）
（１０）ドメインＢ５：ＱＶＴＩＫＥＮＩＹＦＥＤＧＴＶＱＴＡＴＦＫＧＴＦＡＥＡＴＡＥＡＹＲＹＡＤＬＬＳＫＥＨＧＫＹＴＡＤＬＥＤＧＧＹＴＩＮＩＲＦＡ（配列番号４３）
【００７３】
プロテインＺは、上記プロテインＡに基づき設計された人工ＩｇＧ結合ポリペプチドである（例、Ｎｉｌｓｓｏｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  １９８７  Ｆｅｂ−Ｍａｒ；１（２）：１０７−１３．）。プロテインＺは、以下のアミノ酸配列を有する（アミノ酸残基数  ５８個）。Ｚ３４Ｃは、プロテインＺと同様に、上記プロテインＡに基づき設計された、全長３４個のアミノ酸残基からなる人工ＩｇＧ結合ポリペプチドである（例、Ｓｔａｒｏｖａｓｎｉｋ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  １９９７  Ｓｅｐ  １６；９４（１９）：１００８０−５）。Ｚ３４Ｃは、プロテインＺに対し、抗体への親和性を上げるため複数のアミノ酸残基の置換が導入されているものの、プロテインＺよりもアミノ酸全長が短いことから、プロテインＺの断片に相当するとも言える。したがって、プロテインＺの短縮型ポリペプチド（例、少なくとも３４個のアミノ酸残基からなるＮ末端および／またはＣ末端短縮型ポリペプチド）、およびＺ３４Ｃを、プロテインＺの断片として使用することができる。
（１）プロテインＺ：ＶＤＮＫＦＮＫＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨＬＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＦＩＱＳＬＫＤＤＰＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＫＫＬＮＤＡＱＡＰＫ（配列番号４４）
（２）Ｚ３４Ｃ：ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＫＩＫＳＩＲＤＤＣ（配列番号４５）
【００７４】
抗体に対する親和性を有する、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、もしくはプロテインＺの断片は、プロテインＡ、Ｇ、Ｌ、もしくはＺのＮ末端側および／またはＣ末端側アミノ酸残基を欠失させた短縮型ポリペプチドである。プロテインＡ、Ｇ、Ｌ、またはＺでは、それを構成する全てのアミノ酸残基が抗体に対する親和性に必要ではなく、Ｎ末端側および／またはＣ末端側アミノ酸残基を欠失させても、抗体に対する親和性を有することが知られている（例、上述のドメインを有するもの）。したがって、当業者であれば、プロテインＡ、Ｇ、Ｌ、またはＺの末端側および／またはＣ末端側アミノ酸残基を欠失させた短縮型ポリペプチドを作製し、次いで、作製された短縮型ポリペプチドが抗体に対する親和性を有するか否かを評価することにより、抗体に対する親和性を有する、プロテインＡ、Ｇ、Ｌ、またはＺの断片を適宜調製することができる。
【００７５】
抗体に対する親和性を有する、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、もしくはプロテインＺ、またはそれらの断片の変異体としては、例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、もしくはプロテインＺ、またはそれらの断片に対して６０％以上のアミノ酸配列同一性を有し、かつ抗体に対する親和性を有する相同ポリペプチドが挙げられる。このような程度のアミノ酸配列同一性を有する相同性ポリペプチドであっても、抗体に対する親和性を有することが知られている（例、Ｓｔａｒｏｖａｓｎｉｋ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  １９９７  Ｓｅｐ  １６；９４（１９）：１００８０−５）。アミノ酸配列同一性は、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらにより好ましくは９０％以上、特に好ましくは９５％以上（例、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上）であってもよい。アミノ酸配列同一性は、上述したポリペプチドの同一性％と同様にして算定することができる。
【００７６】
特定の実施形態では、抗体に対する親和性ポリペプチド部分は、抗体に対する親和性を有するプロテインＡの断片またはその変異体である。好ましくは、抗体に対する親和性を有するプロテインＡの断片またはその変異体は、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＸＩＸＳＩＲＤＤＣ（配列番号５）のアミノ酸配列（２つのＸは、それぞれ独立して、アルギニン残基、グルタミン酸残基、およびグルタミン残基からなる群より選ばれる１つのアミノ酸残基である。）において、いずれかの１つのアミノ酸残基が、リジン残基により置換されており、かつ配列番号５のアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むものであってもよい（配列番号５のアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列において、リジン残基による置換は維持されているものとする）。換言すれば、このようなポリペプチド部分は、（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列においていずれかの１つのアミノ酸残基がリジン残基により置換されているポリペプチド部分、または（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列においていずれかの１つのアミノ酸残基がリジン残基により置換されており、かつリジン残基以外の１〜３個のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されているか、または挿入もしくは付加されているポリペプチド部分であるということができる。好ましくは、配列番号５のアミノ酸配列は、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号６）のアミノ酸配列であってもよい。
【００７７】
好ましい実施形態では、抗体に対する親和性ポリペプチドは、グルタミン残基（Ｑ）またはＱＥＴがＮ末端に付加されている、抗体に対する親和性を有するプロテインＡの断片の変異体である。このような変異体としては、例えば、以下が挙げられる：
（１）ＱＥＴＮＰＴＥＮＬＹＦＱＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号７）；
（２）ＱＴＡＤＮＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＱＱＬＮＤＡＱＡＰＱＡ（配列番号８）；
（３）ＱＥＴＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号９）；
（４）ＱＥＴＦＮＫＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１０）；
（５）ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号２２）；  
（６）ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号２３）；
（７）ＱＥＴＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５１）；
（８）ＱＥＴＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５２）；および
（９）ＱＥＴＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５３）。
【００７８】
別の特定の実施形態では、抗体に対する親和性ポリペプチドは、ヒトＩｇＧへの結合能を有することが報告されている、ＤＣＡＷＨＬＧＥＬＶＷＣＴ（配列番号５４）のアミノ酸配列からなるペプチドＦｃ−ＩＩＩ（ＷＯ２００１／０４５７４６）の改変ペプチド（改変Ｆｃ−ＩＩＩ）であってもよい。このような改変Ｆｃ−ＩＩＩは、例えば、以下であってもよい。
（１０）ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号２４）；および
（１１）ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号２５）。
【００７９】
上記親和性ポリペプチドの各アミノ酸配列の中に離間した少なくとも２つのシステイン残基は、ジスルフィド結合により環状ペプチドを形成することができる。あるいは、上記ペプチドにおいて、２つのシステイン残基中のスルフィド基は、以下で表されるカルボニル基含有リンカーにより連結されていてもよい。
【００８０】
【化１７】
2020090979.tif 000018
【００８１】
上記で表されるカルボニル基含有リンカーの破線部分は、スルフィド基との結合部分を意味する。当該リンカーは、通常のジスルフィド結合よりも、還元反応等に対して安定である。このようなペプチドは、例えば、国際公開第２０１６／１８６２０６号に記載される方法により、調製することができる。
【００８２】
このような特定の構造を有する新規ペプチドは、ヒトＩｇＧ  ＦｃにおけるＥｕ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇに従うＬｙｓ２４８残基またはＬｙｓ２４６残基、あるいはＬｙｓ２４８残基またはＬｙｓ２４６残基以外の他のアミノ酸残基の位置選択的な修飾に有用である（実施例）。上記ペプチドを構成するアミノ酸はＬ体またはＤ体のいずれであってもよいが、Ｌ体が好ましい（実施例ではペプチドを構成するアミノ酸残基は全てＬ体である）。
【００８３】
上記ペプチドは、架橋剤により特定のアミノ酸残基が修飾されてもよい。このような特定のアミノ酸残基としては、例えば、リジン残基、アスパラギン酸残基、およびグルタミン酸残基が挙げられるが、好ましくは、リジン残基である。架橋剤としては、例えば、ＤＳＧ（ｄｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｇｌｕｔａｒａｔｅ、ジスクシンイミジルグルタレート）、ＤＳＳ（ｄｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｓｕｂｅｒａｔｅ、ジスクシンイミジルスベレート）等のスクシンイミジル基を好ましくは２以上含む架橋剤、ＤＭＡ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ・２ＨＣｌ、アジプイミド酸ジメチル二塩酸塩）、ＤＭＰ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｐｉｍｅｌｉｍｉｄａｔｅ・２  ＨＣｌ、ピメルイミド酸ジメチル二塩酸塩）、及びＤＭＳ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｂｅｒｉｍｉｄａｔｅ・２  ＨＣｌ、スベルイミド酸ジメチル二塩酸塩）等のイミド酸部分を好ましくは２以上含む架橋剤、並びにＤＴＢＰ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ３，３’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓｐｒｏｐｉｏｎｉｍｉｄａｔｅ・２ＨＣｌ、３，３’−ジチオビスプロピオンイミド酸ジメチル二塩酸塩）及びＤＳＰ（ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、ジチオビススクシンイミジルプロピオン酸）等のＳＳ結合を有する架橋剤が挙げられる（例、国際公開第２０１６／１８６２０６号）。
【００８４】
上記ペプチドは、末端にあるアミノ基およびカルボキシ基が保護されていてもよい。Ｎ−末端アミノ基の保護基としては、例えば、アルキルカルボニル基（アシル基）（例、アセチル基、プロポキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基等のブトキシカルボニル基）、アルキルオキシカルボニル基（例、フルオレニルメトキシカルボニル基）、アリールオキシカルボニル基、アリールアルキル（アラルキル）オキシカルボニル基（例、ベンジルオキシカルボニル基）が挙げられる。Ｎ−末端アミノ基の保護基としては、アセチル基が好ましい。Ｃ−末端カルボキシ基の保護基としては、例えば、エステルまたはアミドを形成可能な基が挙げられる。エステルまたはアミドを形成可能な基としては、例えば、アルキルオキシ基（例、メチルオキシ、エチルオキシ、プロピルオキシ、ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ）、アリールオキシ基（例、フェニルオキシ、ナフチルオキシ）、アラルキルオキシ基（例、ベンジルオキシ）、アミノ基が挙げられる。Ｃ−末端カルボキシ基の保護基としては、アミノ基が好ましい。
【００８５】
１−３．リンカー（Ｌ）
式（Ｉ）において、Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーである。
【００８６】
Ｌで表される切断性リンカーは、切断性部分を含む２価の基である。切断性部分は、タンパク質の変性・分解（例、アミド結合の切断）を引き起こし得ない条件（温和な条件）下での特定の処理により切断可能な部位である。したがって、切断性部分は、温和な条件下での特定の切断処理により切断可能な部位（アミド結合以外の結合）であるということができる。このような特定の処理としては、例えば、（ａ）酸性物質、塩基性物質、還元剤、酸化剤、酵素からなる群より選ばれる１種以上の物質による処理、（ｂ）光からなる群より選ばれる物理化学的刺激による処理、または（ｃ）自己分解性の切断性部分を含む切断性リンカーを用いた場合の放置が挙げられる。このような切断性リンカーおよびその切断条件は、当該分野における技術常識である（例、Ｇ．Ｌｅｒｉｃｈｅ，Ｌ．  Ｃｈｉｓｈｏｌｍ，Ａ．Ｗａｇｎｅｒ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２０，５７１（２０１２）；Ｆｅｎｇ  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．１３２，１５００（２０１０）．；Ｂｅｓｓｏｄｅｓ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ９９，４２３（２００４）．；ＤｅＳｉｍｏｎｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．１３２，１７９２８（２０１０）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，９１，１８７（２００３）；Ｓｃｈｏｅｎｍａｒｋｓ，Ｒ．Ｇ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，９５，２９１（２００４））。このような切断性部分としては、例えば、ジスルフィド残基、アセタール残基、ケタール残基、エステル残基、カルバモイル残基、アルコキシアルキル残基、イミン残基、三級アルキルオキシカルバメート残基（例、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルバメート残基）、シラン残基、ヒドラゾン含有残基（例、ヒドラゾン残基、アシルヒドラゾン残基、ビスアリールヒドラゾン残基）、フォスフォルアミデート残基、アコニチル残基、トリチル残基、アゾ残基、ビシナルジオール残基、セレン残基、電子吸引基を有する芳香族環含有残基、クマリン含有残基、スルホン含有残基、不飽和結合含有鎖残基、グリコシル残基が挙げられる。
【００８７】
電子吸引基を有する芳香族環基は、アリール、アラルキル、芳香族複素環基、芳香族複素環基を有するアルキルからなる群より選ばれる芳香族環基を有するものが好ましく、アラルキル、芳香族複素環基を有するアルキルがより好ましい。電子吸引基は、環の２位に結合していることが好ましい。さらにより好ましくは、電子吸引基を有する芳香族環含有残基は、例えば、２位に電子吸引基を有するアラルキル（例、ベンジル）である。電子吸引基としては、例えば、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されたアルキル（例、トリフルオロメチル）、ボロン酸残基、メシル、トシル、トリフレート、ニトロ、シアノ、フェニル基、ケト基（例、アシル）が挙げられる。
【００８８】
切断性部分としての残基の名称に関連して接頭語、接尾語等の用語として見出されるアルキル、アシル（すなわち、アルキルカルボニル）、アルコキシ（すなわち、アルキルオキシ）、アリール、アラルキル等の基の定義、例、および好ましい例は、後述するものと同様である。
【００８９】
エステル残基としては、例えば、炭素原子および酸素原子から構成される通常のエステル残基〔例、アルキルエステル（例、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル等の三級アルキルオキシカルボニル）、アリールエステル（例、フェナシルエステル、２−（ジフェニルホスフィノ）ベンゾエート）、グリコシルエステル残基、オルトエステル残基〕、硫黄原子および酸素原子を含むエステル残基（例、α−チオフェニルエステル残基、アルキルチオエステル残基等のチオエステル残基）、リン原子および酸素原子を含むエステル残基（例、ホスホジエステル残基、ホスホトリエステル残基）、活性化エステル残基（例、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド残基）が挙げられる。
【００９０】
スルホン含有残基としては、例えば、スルホン残基、キノリニルベンゼンスルフォナート残基が挙げられる。
【００９１】
シラン残基は、好ましくは、アルキル、アリール、アラルキル、およびアルコキシからなる群より選ばれる基を有するシラン残基である。このようなシラン残基としては、例えば、ジアルキルジアルコキシシラン残基（例、ジメチルジアルコキシシラン、ジエチルジアルコキシシラン）、またはジアリールジアルコキシシラン残基（例、ジフェニルジアルコキシシラン）が挙げられる。
【００９２】
アルコキシアルキル（すなわち、アルキルオキシアルキル）残基としては、後述するアルキルオキシおよびアルキルを組み合せた基であり（アルキルオキシおよびアルキルの定義、例および好ましい例は、後述するものと同様）、例えば、メトキシメチル残基、エトキシメチル残基、メトキシエチル残基、エトキシエチル残基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９３】
不飽和結合含有鎖残基は、炭素原子のみからなる不飽和結合部分を含む残基（例、炭素原子間二重結合を有する最小単位であるビニル（エテニル）、または炭素原子間三重結合を有する最小単位であるアセチレニル（エチニル））、または炭素原子およびヘテロ原子（例、窒素原子、硫黄原子、酸素原子）からなる不飽和結合部分（例、アルデヒド、シアノ）を含む残基である。不飽和結合含有鎖残基としては、例えば、ビニルエーテル残基、シアノエチル残基、エチレン残基、マロンジアルデヒド残基が挙げられる。
【００９４】
酸性物質（求電子試薬とも称される）としては、例えば、塩酸、硫酸、硝酸等の無機酸性物質、およびギ酸、酢酸、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸、３−モルホリノプロパンスルホン酸、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸、ドデシル硫酸、Ｎ−ドデカノイルサルコシン酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸性物質が挙げられる。酸性物質により切断可能な部位としては、例えば、アルキルオキシアリールアルキル残基、三級アルキルオキシカルバメート残基、アセタール残基、シラン残基、イミン残基、ビニルエーテル残基、β−チオプロピオネート残基、トリチル残基、ヒドラゾン残基、アコニチル残基、オルトエステル残基、カルバモイル残基、２−（ジフェニルホスフィノ）ベンゾエート残基が挙げられる。
【００９５】
塩基性物質（求核試薬とも称される）としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸アンモニウム等の無機塩基性物質、およびヒドロキシルアミン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ‘−ジイソプロピルアミン等の有機塩基性物質が挙げられる。塩基性物質により切断可能な部位としては、例えば、シラン残基、シアノエチル残基、スルホン残基、エチレン残基、グリコシルジスクシネート残基、α−チオフェニルエステル残基、不飽和ビニルスルフィド残基、マロンジアルデヒド残基、アシルヒドラゾン残基、アルキルチオエステル残基が挙げられる。
【００９６】
還元剤としては、例えば、システイン、ジチオトレイトール、還元型グルタチオン、β−メルカプトエタノールが挙げられる。還元剤により切断可能な部位としては、例えば、ジスルフィド残基、アルコキシアルキル残基、アゾ残基が挙げられる。
【００９７】
酸化剤としては、例えば、過ヨウ素酸ナトリウム、酸化型グルタチオンが挙げられる。酸化剤により切断可能な部位としては、例えば、ビシナルジオール残基、セレン残基が挙げられる。
【００９８】
酵素としては、例えば、トリプシン、パパイン、ＴＥＶ、トロンビン、カテプシンＢ、カテプシンＤ、カテプシンＫ、カスパーゼ、プロテアーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ、リパーゼ、エンドグリコシターゼ、ＰＮガーゼＦが挙げられる。酵素により切断可能な部位としては、例えば、エステル残基、ホスホジエステル残基、グリコシル残基が挙げられる。
【００９９】
光により切断可能な部位としては、例えば、２−ニトロベンジル残基、フェナシルエステル残基、８−キノリンベンゼンスルホナート残基、クマリン残基、ホスホトリエステル残基、ビスアリールヒドラゾン残基、ビマンジチオプロピオン酸残基が挙げられる。
【０１００】
自己分解性の切断性部分としては、例えば、活性化エステル残基（例、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド残基）が挙げられる。
【０１０１】
より具体的には、切断性部分は、下記からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
【化１８】
2020090979.tif 000019
〔ここで、結合に直交する波線は、切断部位を示し、
複数のＲ２ａ、複数のＲ２ｂ、および複数のＲ２ｃは、同一または異なって、水素原子、または後述する置換基からなる群より選ばれ、
Ｊは、−ＣＨ２−、−Ｏ−、または−Ｓ−であり、
ｒは、１〜４の任意の整数であり、
○（白丸）はＡ（または後述するＬａ）に対する結合を示し、●（黒丸）はＢ（または後述するＬｂ）に対する結合を示す。
化学構造が、切断部位を中心にして非対称である場合、●がＡ（または後述するＬａ）に対する結合を示し、○がＢ（または後述するＬｂ）に対する結合を示していてもよい。〕
【０１０２】
Ｊは、−ＣＨ２−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。ｊは、好ましくは−ＣＨ２−または−Ｏ−であり、より好ましくは−ＣＨ２−である。
【０１０３】
ｒは、１〜４の任意の整数であり、好ましくは１〜３の任意の整数であり、より好ましくは１または２である。
【０１０４】
一実施形態では、切断性リンカーは、（ｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有する切断性部分を含む２価の基である切断性リンカー、もしくは（ｉｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有しない切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであってもよい。
【０１０５】
（ｉ）の切断性部分としては、例えば、ジスルフィド残基、エステル残基、アセタール残基、ケタール残基、イミン残基、ビシナルジオール残基が挙げられる。
【０１０６】
より具体的には、（ｉ）の切断性部分は、例えば、以下：
【化１９】
2020090979.tif 000020
〔ここで、結合に直交する波線は、切断部位を示し、
複数のＲ２ａは、同一または異なって、水素原子、または後述する置換基からなる群より選ばれ、
○（白丸）はＡ（または後述するＬａ）に対する結合を示し、●（黒丸）はＢ（または後述するＬｂ）に対する結合を示す。
化学構造が、切断部位を中心にして非対称である場合、●がＡ（または後述するＬａ）に対する結合を示し、○がＢ（または後述するＬｂ）に対する結合を示していてもよい。〕からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
【０１０７】
（ｉｉ）の切断性部分としては、例えば、エステル残基、カルバモイル残基、アルコキシアルキル残基、イミン残基、三級アルキルオキシカルバメート残基、シラン残基、ヒドラゾン含有残基、フォスフォルアミデート残基、アコニチル残基、トリチル残基、アゾ残基、ビシナルジオール残基、セレン残基、電子吸引基を有する芳香族環含有残基、クマリン含有残基、スルホン含有残基、不飽和結合含有鎖残基、グリコシル残基が挙げられる。
【０１０８】
より具体的には、（ｉｉ）の切断性部分は、例えば、以下：
【化２０】
2020090979.tif 000021
〔ここで、結合に直交する波線は、切断部位を示し、
複数のＲ２ｂ、複数のＲ２ｃ、Ｊ、ｒは、水素原子、または後述する置換基からなる群より選ばれ、
○（白丸）はＡ（または後述するＬａ）に対する結合を示し、●（黒丸）はＢ（または後述するＬｂ）に対する結合を示す。
化学構造が、切断部位を中心にして非対称である場合、●がＡ（または後述するＬａ）に対する結合を示し、○がＢ（または後述するＬｂ）に対する結合を示していてもよい。〕からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
【０１０９】
特定の実施形態では、切断性リンカー（Ｌ）は、下記式（Ｌ１）〜（Ｌ３）のいずれか一つで表されてもよい：
Ｌａ−Ｃ−Ｌｂ      （Ｌ１）
Ｌａ−Ｃ            （Ｌ２）
Ｃ−Ｌｂ      （Ｌ３）
〔式中、
ＬａおよびＬｂは、それぞれ、２価の基であり、
Ｃは、切断性部分である。〕
【０１１０】
２価の基としては、例えば、置換基を有していてもよい２価の炭化水素基、置換基を有していてもよい２価の複素環基、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲａ−（Ｒａは水素原子、または置換基を示す）、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｓ）−、およびこれらの２以上（例えば２〜８、好ましくは２〜６、より好ましくは２〜４）の組み合わせからなる基が挙げられる。
【０１１１】
２価の炭化水素基としては、直鎖、分岐鎖、または環状の２価の炭化水素基であり、好ましくは直鎖または分岐鎖の２価の炭化水素基である。２価の炭化水素基としては、例えば、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリーレンが挙げられる。
【０１１２】
アルキレンとしては、炭素原子数１〜１２のアルキレンが好ましく、炭素原子数１〜６のアルキレンがより好ましく、炭素原子数１〜４のアルキレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アルキレンは、直鎖、分岐鎖、または環状のいずれであってもよいが、直鎖のアルキレンが好ましい。このようなアルキレンとしては、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、へキシレンが挙げられる。
【０１１３】
アルケニレンとしては、炭素原子数２〜１２のアルケニレンが好ましく、炭素原子数２〜６のアルケニレンがより好ましく、炭素原子数２〜４のアルケニレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アルケニレンは、直鎖、分岐鎖、または環状のいずれであってもよいが、直鎖のアルケニレンが好ましい。このようなアルケニレンとしては、例えば、エチレニレン、プロピニレン、ブテニレン、ペンテニレン、へキセニレンが挙げられる。
【０１１４】
アルキニレンとしては、炭素原子数２〜１２のアルキニレンが好ましく、炭素原子数２〜６のアルキニレンがより好ましく、炭素原子数２〜４のアルキニレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アルキニレンは、直鎖、分岐鎖、または環状のいずれであってもよいが、直鎖のアルキニレンが好ましい。このようなアルキニレンとしては、例えば、エチニレン、プロピニレン、ブチニレン、ペンチニレン、へキシニレンが挙げられる。
【０１１５】
アリーレンとしては、炭素原子数６〜２４のアリーレンが好ましく、炭素原子数６〜１８のアリーレンがより好ましく、炭素原子数６〜１４のアリーレンがさらに好ましく、炭素原子数６〜１０のアリーレンがさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アリーレンとしては、例えば、フェニレン、ナフチレン、アントラセニレンが挙げられる。
【０１１６】
２価の複素環基は、２価の芳香族複素環基、または２価の非芳香族複素環基である。複素環を構成するヘテロ原子として、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、リン原子、ホウ素原子およびケイ素原子からなる群から選択される１種以上を含むことが好ましく、酸素原子、硫黄原子および窒素原子からなる群から選択される１種以上を含むことがより好ましい。
【０１１７】
２価の芳香族複素環基としては、炭素原子数１〜２１の２価の芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数１〜１５の２価の芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数１〜９の２価の芳香族複素環基がさらに好ましく、炭素原子数１〜６の２価の芳香族複素環基がさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。より具体的には、２価の芳香族複素環基としては、例えば、ピロールジイル、フランジイル、チオフェンジイル、ピリジンジイル、ピリダジンジイル、ピリミジンジイル、ピラジンジイル、トリアジンジイル、ピラゾールジイル、イミダゾールジイル、チアゾールジイル、イソチアゾールジイル、オキサゾールジイル、イソオキサゾールジイル、トリアゾールジイル、テトラゾールジイル、インドールジイル、プリンジイル、アントラキノンジイル、カルバゾールジイル、フルオレンジイル、キノリンジイル、イソキノリンジイル、キナゾリンジイル、およびフタラジンジイルが挙げられる。
【０１１８】
２価の非芳香族複素環基としては、炭素原子数２〜２１の非芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数２〜１５の非芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数２〜９の非芳香族複素環基がさらに好ましく、炭素原子数２〜６の非芳香族複素環基がさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。より具体的には、２価の非芳香族複素環基としては、例えば、ピロールジオンジイル、ピロリンジオンジイル、オキシランジイル、アジリジンジイル、アゼチジンジイル、オキセタンジイル、チエタンジイル、ピロリジンジイル、ジヒドロフランジイル、テトラヒドロフランジイル、ジオキソランジイル、テトラヒドロチオフェンジイル、ピロリンジイル、イミダゾリジンジイル、オキサゾリジンジイル、ピペリジンジイル、ジヒドロピランジイル、テトラヒドロピランジイル、テトラヒドロチオピランジイル、モルホリンジイル、チオモルホリンジイル、ピペラジンジイル、ジヒドロオキサジンジイル、テトラヒドロオキサジンジイル、ジヒドロピリミジンジイル、およびテトラヒドロピリミジンジイルが挙げられる。
【０１１９】
ＬａおよびＬｂで表される２価の基は、例えば１〜５個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１もしくは２個の置換基を有していてもよい。このような置換基は、上記ＲａおよびＲｂで表される置換基と同様である。このような置換基としては、例えば、以下が挙げられる：
（ｉ）ハロゲン原子；
（ｉｉ）１価の炭化水素基；
（ｉｉｉ）アラルキル；
（ｉｖ）１価の複素環基；
（ｖ）Ｒｃ−Ｏ−、Ｒｃ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｒｃ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、もしくはＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｒｃは、水素原子、もしくは一価の炭化水素基を示す。）；または
（ｖｉ）ＮＲｄＲｅ−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくはＲｄ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｅ−（ＲｄおよびＲｅは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは一価の炭化水素基を示す。）；
（ｖｉｉ）ニトロ基、硫酸基、スルホン酸基、シアノ基、およびカルボキシル基。
【０１２０】
ハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。
【０１２１】
１価の炭化水素基としては、例えば、１価の鎖状炭化水素基、１価の脂環式炭化水素基、および１価の芳香族炭化水素基が挙げられる。
【０１２２】
１価の鎖状炭化水素基とは、鎖状構造のみで構成された炭化水素基を意味し、主鎖に環状構造を含まない。ただし、鎖状構造は直鎖状であっても分岐状であってもよい。１価の鎖状炭化水素基としては、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニルが挙げられる。アルキル、アルケニル、およびアルキニルは、直鎖状、または分岐状のいずれであってもよい。
【０１２３】
アルキルとしては、炭素原子数１〜１２のアルキルが好ましく、炭素原子数１〜６のアルキルがより好ましく、炭素原子数１〜４のアルキルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数１〜１２のアルキルとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシルが挙げられる。
【０１２４】
アルケニルとしては、炭素原子数２〜１２のアルケニルが好ましく、炭素原子数２〜６のアルケニルがより好ましく、炭素原子数２〜４のアルケニルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数２〜１２のアルケニルとしては、例えば、ビニル、プロペニル、ｎ−ブテニルが挙げられる。
【０１２５】
アルキニルとしては、炭素原子数２〜１２のアルキニルが好ましく、炭素原子数２〜６のアルキニルがより好ましく、炭素原子数２〜４のアルキニルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数２〜１２のアルキニルとしては、例えば、エチニル、プロピニル、ｎ−ブチニルが挙げられる。
【０１２６】
１価の鎖状炭化水素基としては、アルキルが好ましい。
【０１２７】
１価の脂環式炭化水素基とは、環構造として脂環式炭化水素のみを含み、芳香族環を含まない炭化水素基を意味し、脂環式炭化水素は単環、多環のいずれであってもよい。ただし、脂環式炭化水素のみで構成されている必要はなく、その一部に鎖状構造を含んでいてもよい。１価の脂環式炭化水素基としては、例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニルが挙げられ、これらは、単環、多環のいずれであってもよい。
【０１２８】
シクロアルキルとしては、炭素原子数３〜１２のシクロアルキルが好ましく、炭素原子数３〜６のシクロアルキルがより好ましく、炭素原子数５〜６のシクロアルキルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数３〜１２のシクロアルキルとしては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルが挙げられる。
【０１２９】
シクロアルケニルとしては、炭素原子数３〜１２のシクロアルケニルが好ましく、炭素原子数３〜６のシクロアルケニルがより好ましく、炭素原子数５〜６のシクロアルケニルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数３〜１２のシクロアルケニルとしては、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニルが挙げられる。
【０１３０】
シクロアルキニルとしては、炭素原子数３〜１２のシクロアルキニルが好ましく、炭素原子数３〜６のシクロアルキニルがより好ましく、炭素原子数５〜６のシクロアルキニルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数３〜１２のシクロアルキニルとしては、例えば、シクロプロピニル、シクロブチニル、シクロペンチニル、シクロヘキシニルが挙げられる。
【０１３１】
１価の脂環式炭化水素基としては、シクロアルキルが好ましい。
【０１３２】
１価の芳香族炭化水素基とは、芳香族環構造を含む炭化水素基を意味する。ただし、芳香族環のみで構成されている必要はなく、その一部に鎖状構造や脂環式炭化水素を含んでいてもよく、芳香族環は単環、多環のいずれであってもよい。１価の芳香族炭化水素基としては、炭素原子数６〜１２のアリールが好ましく、炭素原子数６〜１０のアリールがより好ましく、炭素原子数６のアリールがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数６〜１２のアリールとしては、例えば、フェニル、ナフチルが挙げられる。
【０１３３】
１価の芳香族炭化水素基としては、フェニルが好ましい。
【０１３４】
これらの中でも、１価の炭化水素基としては、アルキル、シクロアルキル、アリールが好ましく、アルキルがより好ましい。
【０１３５】
アラルキルとは、アリールアルキルをいう。アリールアルキルにおけるアリールおよびアルキルの定義、例および好ましい例は、上述したとおりである。アラルキルとしては、炭素原子数３〜１５のアラルキルが好ましい。このようなアラルキルとしては、例えば、ベンゾイル、フェネチル、ナフチルメチル、ナフチルエチルが挙げられる。
【０１３６】
１価の複素環基とは、複素環式化合物の複素環から水素原子１個を除いた基をいう。１価の複素環基は、１価の芳香族複素環基、または１価の非芳香族複素環基である。複素環基を構成するヘテロ原子として、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、リン原子、ホウ素原子及びケイ素原子からなる群から選択される１種以上を含むことが好ましく、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子からなる群から選択される１種以上を含むことがより好ましい。
【０１３７】
１価の芳香族複素環基としては、炭素原子数１〜１５の芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数１〜９の芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数１〜６の芳香族複素環基がさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。１価の芳香族複素環基としては、例えば、ピロリル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インドリル、プリニル、アントラキノリル、カルバゾニル、フルオレニル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、及びフタラジニルが挙げられる。
【０１３８】
１価の非芳香族複素環基としては、炭素原子数２〜１５の非芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数２〜９の非芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数２〜６の非芳香族複素環基がさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。１価の非芳香族複素環基としては、例えば、オキシラニル、アジリジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロフラニル、ジオキソラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、ジヒドロオキサジニル、テトラヒドロオキサジニル、ジヒドロピリミジニル、及びテトラヒドロピリミジニルが挙げられる。
【０１３９】
これらの中でも、１価の複素環基としては、５員または６員の複素環基が好ましい。
【０１４０】
好ましくは、置換基は、以下であってもよい：
（ｉ’）ハロゲン原子；
（ｉｉ’）炭素原子数１〜１２のアルキル、フェニル、もしくはナフチル；
（ｉｉｉ’）炭素原子数３〜１５のアラルキル；
（ｉｖ’）５員または６員の複素環；
（ｖ’）Ｒｃ−Ｏ−、Ｒｃ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｒｃ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、もしくはＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｒｃは、水素原子、もしくは炭素原子数１〜１２のアルキルを示す。）；または
（ｖｉ’）ＮＲｄＲｅ−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくはＲｄ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｅ−（ＲｄおよびＲｅは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは炭素原子数１〜１２のアルキルを示す。）；
（ｖｉｉ’）上記（ｖｉｉ）で列挙したものと同じ基。
【０１４１】
より好ましくは、置換基は、以下であってもよい：
（ｉ’’）ハロゲン原子；
（ｉｉ’’）炭素原子数１〜１２のアルキル；
（ｉｉｉ’’）Ｒｃ−Ｏ−、Ｒｃ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｒｃ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、もしくはＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｒｃは、水素原子、もしくは炭素原子数１〜１２のアルキルを示す。）；または
（ｉｖ’’）ＮＲｄＲｅ−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくはＲｄ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｅ−（ＲｄおよびＲｅは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは炭素原子数１〜１２のアルキルを示す。）；
（ｖ’’）上記（ｖｉｉ）で列挙したものと同じ基。
【０１４２】
さらにより好ましくは、置換基は、以下であってもよい：
（ｉ’’’）ハロゲン原子；
（ｉｉ’’’）炭素原子数１〜６のアルキル；
（ｉｉｉ’’’）Ｒｃ−Ｏ−、Ｒｃ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｒｃ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、もしくはＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｒｃは、水素原子、もしくは炭素原子数１〜６のアルキルを示す。）；または
（ｉｖ’’’）ＮＲｄＲｅ−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくはＲｄ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｅ−（ＲｄおよびＲｅは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは炭素原子数１〜６のアルキルを示す。）；
（ｖ’’’）上記（ｖｉｉ）で列挙したものと同じ基。
【０１４３】
特に好ましくは、置換基は、以下であってもよい：
（ｉ’’’’）ハロゲン原子；
（ｉｉ’’’’）炭素原子数１〜４のアルキル；
（ｉｉｉ’’’’）Ｒｃ−Ｏ−、Ｒｃ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｒｃ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、もしくはＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｒｃは、水素原子、もしくは炭素原子数１〜４のアルキルを示す。）；または
（ｉｖ’’’’）ＮＲｄＲｅ−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−、ＮＲｄＲｅ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくはＲｄ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｅ−（ＲｄおよびＲｅは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは炭素原子数１〜４のアルキルを示す。）；
（ｖ’’’’）上記（ｖｉｉ）で列挙したものと同じ基。
【０１４４】
特定の実施形態では、ＬａおよびＬｂは、それぞれ、下記（Ｌａ’）および（Ｌｂ’）：
【化２１】
2020090979.tif 000022
〔式中、
ｐおよびｐ’は、同一または異なって、０〜１０の任意の整数であり、
ｑおよびｑ’は、同一または異なって、０〜１０の任意の整数であり、
ＸおよびＸ’は、同一または異なって、炭素原子、窒素原子、または単結合（ここで、Ｘが窒素原子である場合、Ｒ１ｂは存在せず、Ｘ’が窒素原子である場合、Ｒ１ｂ’は存在しない。Ｘが単結合である場合、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは存在せず、Ｘ’が単結合である場合、Ｒ１ａ’およびＲ１ｂ’は存在しない）であり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ａ’およびＲ１ｂ’は、同一または異なって、水素原子、または上述する置換基からなる群より選ばれる。〕で表されてもよい。
【０１４５】
ｐおよびｐ’は、同一または異なって、０〜１０の任意の整数であり、好ましくは０〜８の整数であり、より好ましくは０〜６の整数であり、さらにより好ましくは０〜４の整数であり、特に好ましくは０、１または２である。好ましくは、ｐおよびｐ’は、同一である。
【０１４６】
ｑおよびｑ’は、同一または異なって、０〜１０の任意の整数であり、好ましくは０〜８の整数であり、より好ましくは０〜６の整数であり、さらにより好ましくは０〜４の整数であり、特に好ましくは０、１または２である。好ましくは、ｑおよびｑ’は、同一である。
【０１４７】
ＸおよびＸ’は、同一または異なって、炭素原子、窒素原子、または単結合であり、好ましくは炭素原子または単結合である。好ましくは、ＸおよびＸ’は、同一である。
【０１４８】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ａ’およびＲ１ｂ’は、同一または異なって、水素原子、または後述する置換基からなる群より選ばれる。置換基の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。好ましくは、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ａ’およびＲ１ｂ’は、水素原子である。
【０１４９】
１−４．（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基（Ｂ）
式（Ｉ）において、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基である。
【０１５０】
生体直交性官能基とは、生体構成成分（例、アミノ酸、核酸、脂質、糖、リン酸）とは反応しない、もしくは生体構成成分に対する反応の速度が遅いが、生体構成成分以外の成分に対して選択的に反応する基をいう。生体直交性官能基は、当該技術分野において周知である（例、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ  Ｋ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４０，２００４（２０１５）；Ｂｅｒｔｏｚｚｉ  Ｃ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９１，２３５７（２００１）；Ｂｅｒｔｏｚｚｉ  Ｃ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １，１３（２００５）を参照）。
【０１５１】
親和性物質の標的が抗体である場合、生体直交性官能基は、タンパク質に対する生体直交性官能基である。タンパク質に対する生体直交性官能基とは、タンパク質を構成する天然の２０種のアミノ酸残基の側鎖と反応せずに、所定の官能基と反応する基である。タンパク質を構成する天然の２０種のアミノ酸は、アラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、システイン（Ｃ）、グルタミン（Ｑ）、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）、バリン（Ｖ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびリジン（Ｌ）である。これらの天然の２０種のアミノ酸のうち、側鎖がない（すなわち、水素原子である）グリシン、ならびに側鎖が炭化水素基である（すなわち、硫黄原子、窒素原子、および酸素原子からなる群より選ばれるヘテロ原子を側鎖に含まない）アラニン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、およびバリンは、通常の反応に対して不活性である。したがって、タンパク質に対する生体直交性官能基は、通常の反応に対して不活性である側鎖を有するこれらのアミノ酸の側鎖に加えて、アスパラギン、グルタミン、メチオニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、およびリジンの側鎖に対しても反応できない官能基である。
【０１５２】
タンパク質に対して反応できないこのような生体直交性官能基としては、例えば、アジド残基、アルデヒド残基、チオール残基、アルケン残基（換言すれば、炭素原子間二重結合を有する最小単位であるビニレン（エテニレン）部分を有していればよい。以下同様）、アルキン残基（換言すれば、炭素原子間三重結合を有する最小単位であるエチニレン部分を有していればよい。以下同様）、ハロゲン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、チオエステル残基、α―ハロカルボニル残基（例、α位にフッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を有するカルボニル残基。以下同様）、イソニトリル残基、シドノン残基、セレン残基が挙げられる。タンパク質としては、遊離のチオール（システイン）を含み得るタンパク質（例、抗体以外のタンパク質）、および遊離のチオールを含み得ないタンパク質（例、抗体）が存在する。遊離のチオールを含み得ないタンパク質においては、チオールが生体直交性官能基として機能する。したがって、親和性物質の標的が、遊離のチオールを含み得ない抗体であることから、生体直交性官能基にはチオールが含まれる。１種または２種以上（例、２種、３種、４種）の生体直交性官能基が２価の基に含まれていてもよいが、好ましくは、１種の生体直交性官能基が２価の基に含まれていてもよい。
【０１５３】
一実施形態では、生体直交性官能基を含む２価の基は、アジド残基、アルデヒド基、チオール残基、アルキン残基、アルケン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、チオエステル残基、α―ハロカルボニル残基、イソニトリル残基、シドノン残基、セレン残基からなる群より選ばれる生体直交性官能基を主鎖に含む２価の基であってもよい。
【０１５４】
別の実施形態では、生体直交性官能基を含む２価の基は、アジド残基、アルデヒド残基、チオール残基、アルキン残基、アルケン残基、ハロゲン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、α―ハロカルボニル残基、イソニトリル残基、シドノン残基、セレン残基からなる群より選ばれる生体直交性官能基を側鎖に含む２価の基であってもよい。
【０１５５】
より具体的には、生体直交性官能基は、下記からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
【化２２】
2020090979.tif 000023
〔式中、
Ｒ１ｆ、単一もしくは複数のＲ１ｇおよび単一もしくは複数のＲ１ｈは、同一もしくは異なって、前記（ｉ）〜（ｖｉｉ）からなる群より選ばれる原子もしくは基、または電子吸引基であり、
・は、結合手である。〕
【０１５６】
電子吸引基としては、例えば、上述したものが挙げられるが、ハロゲン原子、ボロン酸残基、メシル、トシル、トリフレートが好ましい。
【０１５７】
一実施形態では、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基であってもよい。２価の基に含まれる生体直交性官能基の数は、単一または複数であり、例えば１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１または２、さらにより好ましくは１である。２価の基に含まれる生体直交性官能基の数が複数である場合、複数の生体直交性官能基は、同種であっても異種であってもよいが、単純な構造の採用等の観点では、同種であることが好ましい。
【０１５８】
特定の実施形態では、Ｂは、（ａ１）生体直交性官能基を主鎖に含む２価の基であってもよい。生体直交性官能基を主鎖に含む２価の基は、アジド残基、アルデヒド基、チオール残基、アルキン残基、アルケン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、チオエステル残基、α―ハロカルボニル残基、イソニトリル残基、シドノン残基、セレン残基からなる群より選ばれる生体直交性官能基自体を２価の基とするもの、またはこのような２価の生体直交性官能基のいずれか一方の末端または両端に上述した２価の基が連結されている基である。連結されるべき２価の基の定義、例および好ましい例は、上述した２価の基と同様である。
【０１５９】
別の特定の実施形態では、Ｂは、（ａ２）生体直交性官能基を側鎖に含む２価の基であってもよい。生体直交性官能基を側鎖に含む２価の基は、アジド残基、アルデヒド残基、チオール残基、アルキン残基、アルケン残基、ハロゲン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、α―ハロカルボニル残基、イソニトリル残基、シドノン残基、セレン残基からなる群より選ばれる生体直交性官能基またはそれを含む基で置換された２価の基である。置換されるべき２価の基の定義、例および好ましい例は、上述した２価の基と同様である。
【０１６０】
別の実施形態では、Ｂは、（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であってもよい。このような２価の基は、置換されていてもよいアルキレン、置換されていてもよいシクロアルキレン、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよい２価の複素環基、−ＮＲａ−（Ｒａは水素原子、または置換基を示す）、−Ｏ−、およびこれらの２以上の組み合わせ（例えば２〜８、好ましくは２〜６、より好ましくは２〜４）からなる基であってもよい。置換されていてもよい場合の置換基、およびＲａの置換基は、生体直交性官能基以外の置換基である。このような置換基としては、例えば、アルキル、シクロアルキル、アラルキル、１価の複素環基、ヒドロキシル、アミノ、アルキルオキシ（アルコキシ）、シクロアルキルオキシ、アラルキルオキシが挙げられる。このような置換基の数は、例えば１〜５個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１もしくは２個、さらにより好ましくは１個である。
【０１６１】
生体直交性官能基以外の置換基について、アルキル、シクロアルキル、アラルキル、１価の複素環基の定義、例および好ましい例は、上述したとおりである。
【０１６２】
生体直交性官能基以外の置換基について、アルキルオキシ（アルコキシ）におけるアルキル、シクロアルキルオキシにおけるシクロアルキル、およびアラルキルオキシにおけるアラルキルの定義、例および好ましい例は、上述したとおりである。より具体的には、アルキルオキシとしては、例えば、メチルオキシ、エチルオキシ、プロピルオキシ（例、ｎ−プロピルオキシ、ｉｓｏ−プロピルオキシ）、ブチルオキシ（例、ｎ−ブチルオキシ、ｉｓｏ−ブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）、ペンチルオキシ（例、ｎ−ペンチルオキシ）、ヘキシルオキシ（例、ｎ−ヘキシルオキシ）が挙げられる。シクロアルキルオキシとしては、例えば、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシが挙げられる。アラルキルオキシとしては、例えば、ベンゾイルオキシ、フェネチルオキシ、ナフチルメチルオキシ、ナフチルエチルオキシが挙げられる。
【０１６３】
生体直交性官能基を含まない２価の基はまた、反応に対して高度に不活性な基であってもよい。したがって、このような２価の基は、炭素原子および水素原子のみから構成される基であってもよい。このような２価の基は、アルキレン、シクロアルキレン、またはアリール、およびこれらの２以上の組み合わせ（例えば２または３）である。生体直交性官能基を含まない２価の基が反応に対して高度に不活性な基である場合、このような２価の基は、反応に対して高度に不活性な置換基として、アルキレン、シクロアルキレン、およびアリールからなる群より選ばれる置換基を有していてもよい。反応に対して高度に不活性な置換基の数は、例えば１〜５個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１もしくは２個である。
【０１６４】
特定の実施形態では、Ｂは、下記式（Ｂ−１）：
【化２３】
2020090979.tif 000024
〔式中、
Ｙは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または下記式（Ｂ−２）：
【化２４】
2020090979.tif 000025
（式中、
ＶおよびＶ’は、同一または異なって、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または単結合であり、
Ｖ１は、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
ｓは、０〜１０の任意の整数であり、
式（Ｂ−２）における○および●は、それぞれ、式（Ｂ−１）における○および●と同じ配向である。）であり、
Ｚは、酸素原子、硫黄原子、または水素原子（Ｚが水素原子である場合、−Ｃ（＝Ｚ）−は、−ＣＨ２−を示す。）であり、
式（Ｂ−１）における○（白丸）は、Ｌ側の部分に対する結合を示し、●（黒丸）はＲ側の部分に対する結合を示す。〕で表されてもよい。
【０１６５】
Ｙは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または上記式（Ｂ−２）で表される基である。構造の簡便化等の観点から、Ｙは、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−ＣＨ２−であってもよい。あるいは、炭素原子を基調とした構造の設計等の観点からは、Ｙは、−ＣＨ２−、または上記式（Ｂ−２）で表される基であってもよい。
【０１６６】
Ｚは、酸素原子、硫黄原子、または水素原子であるが、好ましくは酸素原子または硫黄原子である。
【０１６７】
ＶおよびＶ’は、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または単結合であり、好ましくは−ＣＨ２−、または単結合である。
【０１６８】
Ｖ１は、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基である。このような２価の基は、上述したものと同様である。
【０１６９】
好ましくは、Ｖ１における２価の基は、置換されていてもよい２価の炭化水素基、または置換されていてもよい２価の複素環基である。２価の炭化水素基の定義、例および好ましい例は、上述したものと同様であるが、Ｖ１の場合、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレン、シクロアルケニレン、シクロアルキニレン、アリーレンが好ましい。例えば、生体直交性官能基を含有する部分で置換されていない場合、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルケニレン、シクロアルキニレンが好ましい。一方、生体直交性官能基を含有する部分で置換されている場合、アルキレン、シクロアルキレン、アリーレンが好ましい。これらの基の例および好ましい例は、上述したとおりである。２価の複素環基の定義、例および好ましい例は、上述したものと同様であるが、Ｖ１の場合、５員または６員の複素環基が好ましい。５員または６員の複素環基の例および好ましい例は、上述したものと同様である。置換基の定義、例および好ましい例は、上述したとおりである。Ｖ１は、（ａ）生体直交性官能基を、例えば１〜５個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１個または２個、さらにより好ましくは１個有していてもよい。２価の基に含まれる生体直交性官能基の数が複数である場合、複数の生体直交性官能基は、同種であっても異種であってもよい。単純な構造の採用、および反応性の向上等の観点では、同種であることが好ましい。差別化された反応の確保等の観点では、異種であることが好ましい。Ｖ１はまた、（ｂ）置換基を１〜５個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１もしくは２個を有していてもよい。
【０１７０】
ｓは、０〜１０の任意の整数であり、好ましくは０〜８の整数であり、より好ましくは０〜６の整数であり、さらにより好ましくは０〜４の整数であり、特に好ましくは０、１または２である。
【０１７１】
さらに特定の実施形態では、Ｖ１は、下記式（Ｂ−３）：
【化２５】
2020090979.tif 000026
〔式中、
ＧおよびＧ’は、同一または異なって、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、単結合、または下記式（Ｂ−４）：
【化２６】
2020090979.tif 000027
（式中、
ＷおよびＷ’は、同一または異なって、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または単結合であり、
Ｗ１は、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
ｔは、０〜１０の任意の整数である。
式（Ｂ−４）における○（白丸）は、式（Ｂ−３）における結合手（・）の方向に対する結合を示し、●（黒丸）はｂ側の方向に対する結合を示す。）で表される基であり、
Ｈは、−ＣＨ２−、−Ｃ＝Ｏ−、−Ｃ＝Ｓ−、−ＮＨ−、または単結合であり、
Ｉは、２価の炭化水素基、２価の複素環、または単結合であり、
ｂは、下記：
【化２７】
2020090979.tif 000028
（式中、
Ｒ１ｆ、単一もしくは複数のＲ１ｇおよび単一もしくは複数のＲ１ｈは、同一もしくは異なって、前記（ｉ）〜（ｖｉｉ）からなる群より選ばれる原子もしくは基、または電子吸引基であり、
・は、結合手である。）で表されるいずれか一つの基である。〕で表される基を側鎖として有する２価の基であってもよい。このような２価の基は、２価の炭化水素基、または２価の複素環基であり、好ましくは、置換されていてもよい２価の炭化水素基であり、より好ましくは、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレン、シクロアルケニレン、シクロアルキニレン、またはアリーレンであり、さらより好ましくは、アルキレン、シクロアルキレン、またはアリーレンであり、特に好ましくはアルキレンである。これらの基の例および好ましい例は、上述したとおりである。これらの基は、上記側鎖以外の置換基で置換されていてもよい。このような置換基の数は、１〜５個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１もしくは２個である。置換基の例および好ましい例は、上述したとおりである。
【０１７２】
ＧおよびＧ’は、同一または異なって、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、単結合、または上記式（Ｂ−４）で表される基である。構造の簡便化等の観点から、ＧおよびＧ’は、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または単結合であってもよい。あるいは、炭素原子を基調とした構造の設計等の観点からは、ＧおよびＧ’は、−ＣＨ２−、単結合、または上記式（Ｂ−４）で表される基であってもよい。
【０１７３】
Ｈは、−ＣＨ２−、−Ｃ＝Ｏ−、−Ｃ＝Ｓ−、−ＮＨ−、または単結合である。好ましくは、Ｈは、−ＣＨ２−、または単結合である。
【０１７４】
Ｉは、２価の炭化水素基、２価の複素環、または単結合である。２価の炭化水素基、および２価の複素環は、置換基で置換されていても、置換されていなくてもよい。２価の炭化水素基、２価の複素環、および置換基の定義、例および好ましい例は、Ｖ１において上述したものと同様である。
【０１７５】
ＷおよびＷ’は、同一または異なって、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または単結合であり、好ましくは−ＣＨ２−、または単結合である。
【０１７６】
Ｗ１は、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基である。このような２価の基は、上述したものと同様である。
【０１７７】
ｔは、０〜１０の任意の整数であり、好ましくは０〜８の整数であり、より好ましくは０〜６の整数であり、さらにより好ましくは０〜４の整数であり、特に好ましくは０、１または２である。
【０１７８】
１−５．反応性基（Ｒ）
式（Ｉ）において、Ｒは、抗体に対する反応性基である。このような反応性基は、当該技術分野において技術常識である。
【０１７９】
反応性基は、生体直交性官能基と同種または異種の基である。
【０１８０】
例えば、Ｂが、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基である場合、反応性基は、その生体直交性官能基と異種の基であってもよい。反応性基が生体直交性官能基と同種の基であれば、抗体に対する反応性基の反応特異性が確保されないためである。また、そもそも生体直交性官能基は、抗体を構成する天然の２０種のアミノ酸残基の側鎖と反応し得ない基のためである。
【０１８１】
より具体的には、タンパク質を構成する上述したような天然の２０種のアミノ酸のうち、側鎖がないグリシン、ならびに側鎖が炭化水素基であるアラニン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、およびバリンは、通常の反応に対して不活性である。したがって、タンパク質に対する反応性基は、アスパラギン、グルタミン、メチオニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、およびリジンからなる１４種のアミノ酸のいずれか１種または２種以上（例、２種、３種、４種）の側鎖に対して反応できる基である。タンパク質のアミノ酸組成等の条件に応じて、１種または２種以上（例、２種、３種、４種）の反応性基が式（Ｉ）で表される化合物に含まれていてもよいが、好ましくは、１種の反応性基が式（Ｉ）で表される化合物に含まれていてもよい。
【０１８２】
好ましくは、反応性基は、タンパク質を構成する上述したような１４種のアミノ酸のうちのいずれか１種のアミノ酸の側鎖と反応できる基である。
【０１８３】
より好ましくは、反応性基は、リジン、チロシン、トリプトファン、またはシステインのいずれか１種のアミノ酸の側鎖に対して特異的な反応性基であってもよい。
【０１８４】
さらにより好ましくは、反応性基は、リジン、チロシン、またはトリプトファンのいずれか１種のアミノ酸の側鎖に対して特異的な反応性基であってもよい。
【０１８５】
また、タンパク質がヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧである場合、反応性基は、リジンまたはチロシンの側鎖に対して特異的な反応性基であることが好ましい。
【０１８６】
リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基は、リジン残基の側鎖中に存在するアミノ基（ＮＨ２）と特異的に反応できる基であり、例えば、活性化エステル残基（例、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド残基）、ビニルスルホン残基、スルホニルクロライド残基、イソシアネート残基、イソチオシアネート残基、アルデヒド残基、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸残基、２−イミノ−２−メトキシエチル残基、ジアゾニウムテレフタル酸残基が挙げられる。
【０１８７】
リジン残基の側鎖に対して特異的な上述の反応性基と、リジン残基の側鎖中に存在するアミノ基（ＮＨ２）との間の反応により生成する連結部分としては、例えば、アミド残基、ウレア残基、ピリジン残基、カルバメート残基、スルホンアミド残基が挙げられる。
【０１８８】
より具体的には、リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基は、下記からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
【化２８】
2020090979.tif 000029
〔ここで、
Ｒ５ａおよびＲ５cは、水素原子、または上述した置換基であり、
Ｒ５ｂは、電子吸引基であり、
ｊは、１〜５の任意の整数であり、
ｋは、１〜４の任意の整数である。〕
【０１８９】
Ｒ５ａおよびＲ５cは、水素原子、または上述した置換基である。置換基の定義、例、および好ましい例は、上述したものと同様である。
【０１９０】
Ｒ５ｂは、電子吸引基である。このような電子吸引基としては、例えば、上述したものが挙げられるが、ハロゲン原子、ボロン酸残基、メシル、トシル、トリフレートが好ましい。
【０１９１】
ｊは、１〜５の任意の整数であり、好ましくは１〜３の整数であり、より好ましくは１または２である。
【０１９２】
ｋは、１〜４の任意の整数であり、好ましくは１〜３の整数であり、より好ましくは１または２である。
【０１９３】
リジン残基の側鎖に対して特異的な反応性基である上記化学構造と、リジン残基の側鎖中に存在するアミノ基（ＮＨ２）との間の反応により生成する連結部分は、下記からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
【化２９】
2020090979.tif 000030
〔ここで、●（黒丸）は、Ｔ側の部分に対する結合を示し、○（白丸）は、Ｂ側の部分に対する結合を示す。結合に直交する直線は、反応により生成する結合を示す。〕
【０１９４】
チロシン残基の側鎖に対して特異的な反応性基は、チロシン残基の側鎖中に存在するフェノール性ヒドロキシル基（ＯＨ）のオルト位の原子と特異的に反応できる基であり、例えば、ジアゾニウム残基、ジアゾジカルボキレート残基、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−６−オン残基が挙げられる。
【０１９５】
より具体的には、チロシン残基の側鎖に対して特異的な反応性基は、下記からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
【化３０】
2020090979.tif 000031
〔ここで、Ｒ４ａは、水素原子、または上述した置換基であり、○は、Ｂに対する結合を示す。〕
【０１９６】
Ｒ４ａは、水素原子、または上述した置換基である。置換基の定義、例、および好ましい例は、上述したものと同様である。
【０１９７】
チロシン残基の側鎖に対して特異的な反応性基である上記化学構造と、チロシン残基の側鎖中に存在するフェノール性ヒドロキシル基（ＯＨ）のオルト位の原子との間の反応により生成する連結部分は、下記からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
【化３１】
2020090979.tif 000032
〔ここで、Ｒ４ａは、水素原子、または上述した置換基であり、●は、Ｔに対する結合を示し、○は、Ｂに対する結合を示す。〕
【０１９８】
Ｒ４ａは、水素原子、または上述した置換基である。置換基の定義、例、および好ましい例は、上述したものと同様である。
【０１９９】
トリプトファン残基の側鎖に対して特異的な反応性基は、トリプトファン残基の側鎖中に存在するインドール基の３位の環構成原子と特異的に反応できる基であり、例えば、９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−オン−Ｎ−オキシル残基が挙げられる。
【０２００】
より具体的には、トリプトファン残基の側鎖に対して特異的な反応性基は、下記からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
【化３２】
2020090979.tif 000033
〔ここで、○は、Ｂに対する結合を示す。〕
【０２０１】
トリプトファン残基の側鎖に対して特異的な反応性基である上記化学構造と、トリプトファン残基の側鎖中に存在するインドール基の３位の環構成原子との間の反応により生成する連結部分は、下記からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
【化３３】
2020090979.tif 000034
〔ここで、●は、Ｔに対する結合を示し、○は、Ｂに対する結合を示す。〕
【０２０２】
特に好ましくは、反応性基は、リジンの側鎖に対して特異的な反応性基であってもよい。
【０２０３】
１−６．部分構造「Ｌ−Ｂ」
１−６−１．ＡおよびＲを連結する部分構造「Ｌ−Ｂ」中の主鎖の長さ
式（Ｉ）において、Ａ（親和性物質）およびＲ（反応性基）を連結する主鎖（Ｌ−Ｂ中の直鎖部分）の長さは、抗体および親和性物質の種類、ならびに抗体における親和性物質の標的部位と、Ｒが反応して結合すべきである、上述したような標的領域（例、特定の位置）中の特定のアミノ酸残基の位置および数との関係などの種々の因子に応じて、適宜設計することができる。式（Ｉ）で表される化合物は、親和性物質が抗体に会合し、次いで、Ｌ−Ｂを介して親和性物質と共有結合している反応性基が、上記標的部位の近傍に存在する特定のアミノ酸残基の側鎖中の基（例、リジン残基の側鎖中のアミノ基）と反応することにより、抗体と共有結合することができる。このとき、Ｒが反応して結合すべきである特定のアミノ酸残基の近傍領域、上記標的部位の近傍領域、および当該特定のアミノ酸残基と上記標的部位との間の領域において当該特定のアミノ酸残基が他に存在しない場合、主鎖の長さを厳密に制御せずとも、反応性基は、当該特定のアミノ酸残基に対して位置選択的に結合することができる。勿論、このような領域において当該特定のアミノ酸残基が他に存在する場合であっても、主鎖の長さを制御することにより、反応性基は、当該特定のアミノ酸残基に対して位置選択的に結合することができる。
【０２０４】
ＡおよびＲを連結する主鎖の長さは、抗体およびそれに対する親和性物質の種類、ならびに抗体中の標的部位中の特定のアミノ酸残基の位置および数の関係などの因子に応じて変動し得るが、約５Å以上、好ましくは約７．５Å、より好ましくは約１０．５Å以上であってもよい。このような主鎖の長さはまた、例えば約３０Å以下、好ましくは約２３Å以下、より好ましくは約１６．５Å以下であってもよい。より具体的には、このような主鎖の長さは、例えば約５．０〜３０Å、好ましくは約７．５〜２３Å、より好ましくは約１０．５〜１６．５Åであってもよい。
【０２０５】
ところで、原子間の長さ（距離）の関係については、下表のとおりであることが、当該技術分野における技術常識である。したがって、当業者であれば、下表の原子間の長さを参考にして、上述したような主鎖の長さ（Å）に対応する個数の原子を有する主鎖を適宜設計することができる。
【０２０６】
【表１】
2020090979.tif 000035
【０２０７】
より具体的には、ＡおよびＲを連結する主鎖の長さは、主鎖（水素原子および置換基を除く）を構成する原子数として規定することもできる。主鎖を構成する原子数は、例えば４個（約５．０Å）以上、好ましくは６個（約７．５Å）、より好ましくは８個（約１０．５Å）以上であってもよい。主鎖の原子数はまた、例えば２０個（約３０Å）以下、好ましくは１６個（約２３Å）以下、より好ましくは１２個（約１６．５Å）以下であってもよい。より具体的には、主鎖の原子数は、例えば４〜２０個、好ましくは６〜１６個、より好ましくは８〜１２個であってもよい。
【０２０８】
主鎖が環構造を含まない構造である場合、主鎖の原子数は、鎖状構造中の原子数を数えることにより決定することができる。
【０２０９】
一方、主鎖が環構造を含む構造である場合、主鎖の原子数と上述した長さとは必ずしも対応せず、主鎖の原子数により規定され得る長さは、上述した長さよりも短くなる傾向がある。このような場合であっても、主鎖の長さを規定する観点から、主鎖の原子数を便宜的に数えることができる。具体的には、このような場合における主鎖の原子数は、主鎖において２価の環構造を含まない鎖状構造中の原子数に加えて、環構造中の２つの結合手を連絡する最短経路の原子数を数えることにより決定することができる（例えば、以下（ａ）〜（ｄ）の太字経路を参照）。
【化３４】
2020090979.tif 000036
・は、結合手である。
（ａ）の場合、最短経路は太字経路であるため、主鎖の原子数として数えられる２価の環構造中の原子数は、２である。
（ｂ）の場合、最短経路は太字経路であるため、主鎖の原子数として数えられる２価の環構造中の原子数は、３である。
（ｃ）の場合、いずれの経路も最短経路（等距離）であるため、主鎖の原子数として数えられる２価の環構造中の原子数は、４である。
（ｄ）の場合、縮合部位の経路が最短経路であるため、主鎖の原子数として数えられる２価の環構造中の原子数は、４である。
【０２１０】
好ましくは、Ｌ−Ｂで表されるＡとＲとの連結部分（側鎖を除く）は、２価の環構造を含まない鎖状構造であってもよい。この場合、Ｌ−Ｂで表されるＡとＲとの連結鎖部分において２価の環基が含まれないようにＬおよびＢを適宜設計することができる。
【０２１１】
１−６−２．部分構造「Ｌ−Ｂ」の具体的構造
上記式（Ｉ）において、ＬおよびＢは、互いに連関し得る構造である。したがって、上記式（Ｉ）において、ＬおよびＢは、「Ｌ−Ｂ」で表される部分構造として規定することができる。
【０２１２】
一実施形態では、切断性リンカーは、（ｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有する切断性部分を含む２価の基である切断性リンカー、もしくは（ｉｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有しない切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであってもよい。
【０２１３】
特定の実施形態では、Ｌが上記（ｉ）の切断性リンカーである場合、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基である。
【０２１４】
好ましくは、Ｌが上記（ｉ）の切断性リンカーである場合、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基である。この場合、（ｉ）において生成される生体直交性官能基は、（ａ）における生体直交性官能基と同種であっても異種であってもよい。より単純な構造の採用、および/または単一の機能性物質に対する反応性の向上等の観点では、（ｉ）において生成される生体直交性官能基は、（ａ）における生体直交性官能基と同種であってもよい。一方、２種以上の機能性物質に対する差別化された反応性の確保、および反応における一部の生体直交性官能基の不使用等の観点では、（ｉ）において生成される生体直交性官能基は、（ａ）における生体直交性官能基と異種であってもよい。
【０２１５】
あるいは、Ｌが上記（ｉ）の切断性リンカーである場合、Ｂは、（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であってもよい。この場合、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩は、より単純な構造を有することになるので、合成が容易である。
【０２１６】
別の特定の実施形態では、Ｌが上記（ｉｉ）の切断性リンカーである場合、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基である。
【０２１７】
特定の実施形態では、Ｌ−Ｂで表される部分構造は、好ましくは、ペプチド部分を含まない。この場合、本発明の化合物を用いて得られる本発明の機能性物質を有する抗体（例、抗体薬物複合体）は、免疫原性を有し得るペプチド部分をリンカーとして含み得ないという利点がある。
【０２１８】
特定の実施形態では、「Ｌ−Ｂ」で表される部分構造は、ＡおよびＲを連結する主鎖（Ｌ−Ｂ中の直鎖部分）の中心位置に存在する原子（例、主鎖を構成する原子数が奇数の場合）、または当該主鎖の中心位置に存在する結合部位（例、主鎖を構成する原子数が偶数の場合）を基準として、対称構造〔例、シス型（すなわち、Ｚ）、トランス型（すなわち、Ｅ）〕を有していてもよい。例えば、中心位置に存在する結合部位を、上述したような切断リンカー中の切断性部分として設計することもできる。「Ｌ−Ｂ」で表される部分構造が対称構造を有する場合、「Ｌ−Ｂ」で表される部分構造は、容易に合成することができる。例えば、反応して切断性部分を形成できる官能基を一方の末端に有する同じ２価の基（例、ＳＨ基を一方の末端に有する鎖状の２価の基）を互いに反応させることにより、主鎖の中心位置に切断性部分を含む対称構造（鎖状の２価の基−Ｓ−Ｓ−鎖状の２価の基）を実現することができる。
【０２１９】
したがって、「Ｌ−Ｂ」で表される部分構造は、「Ｂ２−Ｌ’−Ｂ１」で表される部分構造（すなわち、Ｌが、Ｂ２−Ｌ’で表される２価の基であり、ＢがＢ１である。）であってもよい。この場合、上記式（Ｉ）で表される化合物は、下記式（Ｉ’）で表される化合物として規定することができる。
Ａ−Ｂ２−Ｌ’−Ｂ１−Ｒ      （Ｉ’）
〔式中、
ＡおよびＲは、前記式（Ｉ）のものと同じであり
Ｌ’は、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ１およびＢ２は、同一または異なって、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｂ１およびＢ２は、Ｌ’を中心にした対称構造を有していてもよい。〕
【０２２０】
Ｂ１およびＢ２は、同一または異なって、Ｂの定義、例および好ましい例と同様である。
【０２２１】
特定の実施形態では、Ｌ’は、下記式（Ｌ１’）〜（Ｌ３’）のいずれか一つで表されてもよい：
Ｌａ’−Ｃ’−Ｌｂ’      （Ｌ１’）
Ｌａ’−Ｃ’              （Ｌ２’）
Ｃ’−Ｌｂ’      （Ｌ３’）
〔式中、
Ｌａ’およびＬｂ’は、それぞれ、２価の基であり、
Ｃ’は、切断性部分である。〕
【０２２２】
Ｌａ’およびＬｂ’で表される２価の基は、それぞれ、Ｌａ’およびＬｂ’で表される２価の基の定義、例および好ましい例と同様である。
【０２２３】
Ｃ’で表される切断性部分は、Ｃで表される切断性部分の定義、例および好ましい例と同様である。
【０２２４】
別の特定の実施形態では、Ｌ−Ｂで表される構造単位は、下記式（ＬＢ’）で表されてもよい。
【化３５】
2020090979.tif 000037
〔式中、
Ｃ、ｐ、ｐ’、ｑ、ｑ’、Ｘ、Ｘ’、Ｒ１ａ、Ｒ１ａ’、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｂ’、Ｙ、Ｙ’、ＺおよびＺ’の定義、例および好ましい例は、上述したものと同じであり、
○（白丸）は、Ａに対する結合を示し、●（黒丸）は、Ｒに対する結合を示す。〕
【０２２５】
したがって、上記式（Ｉ）は、下記式（Ｉ’’）として規定することができる。
【化３６】
2020090979.tif 000038
〔式中、
Ａ、Ｒ、Ｃ、ｐ、ｐ’、ｑ、ｑ’、Ｘ、Ｘ’、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ａ’、Ｒ１ｂ’、Ｙ、Ｙ’、ＺおよびＺ’の定義、例および好ましい例は、上述したものと同じである。〕
【０２２６】
上記式（ＬＢ’）および（Ｉ’’）において、Ｃ＝ＺにおけるＣ（炭素原子）からＣ＝Ｚ’におけるＣ（炭素原子）までの長さは、ＡおよびＲを連結する主鎖の長さと同様である。これらの式において、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ＝Ｚ’におけるＣまでの長さはまた、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ＝Ｚ’におけるＣを連結する部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）を構成する原子数として規定することもできる。このような原子数は、ＡおよびＲを連結する主鎖を構成する原子数と同様である。Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ＝Ｚ’におけるＣを連結する部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）は、環構造を含んでいなくても含んでいてもよいが、環構造を含んでいないことが好ましい。当該連結鎖（水素原子および置換基を除く）は、好ましくは、ペプチド部分を含まないものであってもよい。
【０２２７】
１−７．製造方法
抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物またはその塩は、適宜調製することができる。抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物は、式（Ｉ）、好ましくは式（Ｉ’）、より好ましくは式（Ｉ’’）で表される。
【０２２８】
親和性物質としては、任意の官能基を有するものを適宜選択することができる。したがって、当該官能基と反応することができる反応性基を利用することにより、親和性物質を、Ｌ−Ｂ−Ｒで表される構造単位、またはＲ−Ｌ−Ｂ−Ｒで表される構造単位（２つの反応性基は同一または異なる）と反応させて、Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒで表される構造単位を調製することができる。例えば、このような反応は、適切な反応系、例えば有機溶媒系または水溶液系において、適温（例、約１５〜２００℃）で行うことができる。反応系は、適切な触媒を含んでいてもよい。反応時間は、例えば１分〜２０時間、好ましくは１０分〜１５時間、より好ましくは２０分〜１０時間、さらにより好ましくは３０分〜８時間である。
【０２２９】
反応系において、親和性物質（Ｘ）に対する、Ｌ−Ｂ−Ｒで表される構造単位、またはＲ−Ｌ−Ｂ−Ｒで表される構造単位（Ｙ）のモル比率（Ｙ／Ｘ）は、当該構造単位および親和性物質の種類、当該構造単位によって修飾されるべき親和性物質中の部位の数等に応じて変動することから特に限定されないが、例えば０．１〜５０であり、好ましくは０．５〜４０であり、より好ましくは１〜３５であり、さらにより好ましくは２〜２５であり、特に好ましくは３〜１５である。
【０２３０】
抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩の生成の確認は、その具体的な原料および生成物の分子量にもよるが、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー（例、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩は、クロマトグラフィー（例、上述したクロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー）等の任意の方法により適宜精製することができる。
【０２３１】
１−８．その他
後述の発明〔例、式（ＩＩ）〜（ｖ）およびその下位概念の式、ならびに部分構造式（例、（Ｌ１）〜（Ｌ３）、（Ｌａ’）、（Ｌｂ’）、（Ｂ−１）〜（Ｂ−４））で表される発明〕では、任意の記号（例、Ａ、Ｌ、Ｂ、Ｒ）、当該記号で表される用語、およびそれらの詳細（例えば、定義、例および好ましい例）は、上記式（Ｉ）で表される化合物またはその塩の発明と共通する。また、後述の発明を規定することができる特定の部分（例、切断性部分、切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有する部分）、特定の基（例、生体直交性官能基、２価の基、アルキル基、置換基、電子吸引基）、および特定の数値、ならびに塩等の任意の技術要素（例、定義、例および好ましい例）についても、上記で説明したものと共通にすることができる。したがって、これらの事項は、特に言及することなく、後述の発明において適宜援用することができる。同様に、後述の発明で述べた特定の発明の技術要素は、本発明および他の発明の技術要素として、適宜援用することができる。
【０２３２】
２．抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩
２−１．概要
本発明は、式（ＩＩ）で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩を提供する。
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕
【０２３３】
２−２．抗体と反応性基との間の反応により生成する部分（Ｒ’）
抗体と反応性基との間の反応により生成する部分において、抗体および反応性基の定義、例および好ましい例は、上述したとおりである。抗体と反応性基との間の反応により生成する部分は、当該技術分野において技術常識であり、抗体および反応性基の種類に応じて適宜決定することができる。
【０２３４】
好ましくは、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分は、抗体に含まれ得る１４種のアミノ酸（アスパラギン、グルタミン、メチオニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、およびリジン）のうちのいずれか１種のアミノ酸の側鎖と、それに対する反応性基との間の反応により生成する部分である。
【０２３５】
より好ましくは、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分は、リジン、チロシン、トリプトファン、またはシステインのいずれか１種のアミノ酸の側鎖と、それに対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分であってもよい。
【０２３６】
さらにより好ましくは、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分は、リジン、チロシン、またはトリプトファンのいずれか１種のアミノ酸の側鎖と、それに対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分であってもよい。リジン、チロシン、またはトリプトファンのいずれか１種のアミノ酸の側鎖と、それに対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分としては、例えば、上記「１−５．反応性基（Ｒ）」で述べた連結部分および/または化学構造が挙げられる。
【０２３７】
さらに一層より好ましくは、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分は、リジンまたはチロシンの側鎖と、それに対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分であってもよい（特に、抗体がヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧである場合）。リジンまたはチロシンの側鎖と、それに対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分としては、例えば、上記「１−５．反応性基（Ｒ）」で述べた連結部分および／または化学構造が挙げられる。
【０２３８】
特に好ましくは、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分は、リジンの側鎖と、それに対して特異的な反応性基との間の反応により生成する部分であってもよい。
【０２３９】
２−３．部分構造「Ｌ−Ｂ」
部分構造「Ｌ−Ｂ」の詳細は、上記「１−６．部分構造「Ｌ−Ｂ」」で述べたとおりである。
【０２４０】
特定の実施形態では、「Ｌ−Ｂ」で表される部分構造は、「Ｂ２−Ｌ’−Ｂ１」で表される部分構造（すなわち、Ｌが、Ｂ２−Ｌ’で表される２価の基であり、ＢがＢ１である。）であってもよい。この場合、上記式（ＩＩ）で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩は、下記式（ＩＩ’）で表されることができる。
Ａ−Ｂ２−Ｌ’−Ｂ１−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ’）
〔式中、
Ａ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり
Ｌ’は、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ１およびＢ２は、同一または異なって、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｂ１およびＢ２は、Ｌ’を中心にした対称構造を有していてもよい。〕
【０２４１】
上記式（ＩＩ’）において、Ｌ’は、上述した式（Ｌ１’）〜（Ｌ３’）のいずれか一つで表されてもよい。
【０２４２】
別の特定の実施形態では、Ｌ−Ｂで表される構造単位は、下記式（ＬＢ’）で表されてもよい。
【化３７】
2020090979.tif 000039
〔式中、
Ｃ、ｐ、ｐ’、ｑ、ｑ’、Ｘ、Ｘ’、Ｒ１ａ、Ｒ１ａ’、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｂ’、Ｙ、Ｙ’、ＺおよびＺ’の定義、例および好ましい例は、上述したものと同じであり、
○（白丸）は、Ａに対する結合を示し、●（黒丸）は、Ｒ’に対する結合を示す。〕
【０２４３】
したがって、上記式（ＩＩ）は、下記式（ＩＩ’’）として規定することができる。
【化３８】
2020090979.tif 000040
〔式中、
Ａ、Ｒ’、Ｔ、Ｃ、ｐ、ｐ’、ｑ、ｑ’、Ｘ、Ｘ’、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ａ’、Ｒ１ｂ’、Ｙ、Ｙ’、ＺおよびＺ’の定義、例および好ましい例は、上述したものと同じである。〕
【０２４４】
上記式（ＬＢ’）および（ＩＩ’’）において、Ｃ＝ＺにおけるＣ（炭素原子）からＣ＝Ｚ’におけるＣ（炭素原子）までの長さは、上述したようなＡおよびＲを連結する主鎖の長さと同様である。これらの式において、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ＝Ｚ’におけるＣまでの長さはまた、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ＝Ｚ’におけるＣを連結する部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）を構成する原子数として規定することもできる。このような原子数は、ＡおよびＲを連結する主鎖を構成する原子数と同様である。Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ＝Ｚ’におけるＣを連結する部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）は、環構造を含んでいなくても含んでいてもよいが、環構造を含んでいないことが好ましい。当該連結鎖（水素原子および置換基を除く）は、好ましくは、ペプチド部分を含まないものであってもよい。
【０２４５】
２−４．抗体が有する、抗体以外の部分構造の結合部位（位置選択性）
抗体以外の部分構造（例、Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’）は、抗体（Ｔ）における上述したような標的領域に位置選択的に結合させることができる。
【０２４６】
本明細書において、「位置選択的」または「位置選択性」とは、抗体において特定のアミノ酸残基が特定の領域に偏在していないにもかかわらず、抗体中の特定のアミノ酸残基と結合できる所定の構造単位が、抗体中の特定の領域に偏在することをいう。したがって、「位置選択的に有する」、「位置選択的な結合」、「位置選択性での結合」等の位置選択性に関連する表現は、１個以上の特定のアミノ酸残基を含む標的領域における所定の構造単位の保有率または結合率が、標的領域における当該特定のアミノ酸残基と同種である複数個のアミノ酸残基を含む非標的領域における当該構造単位の保有率または結合率よりも有意なレベルで高いことを意味する。このような位置選択的な結合または保有は、抗体中の特定のアミノ酸残基に対して所定の構造単位をランダムに反応させるのではなく、抗体中の標的領域における特定のアミノ酸残基に対して所定の構造単位を優先的に反応させることができる本発明により達成することができる。
【０２４７】
具体的には、Ｔが、連続する１〜５０個のアミノ酸残基からなる標的領域中において特定のアミノ酸残基を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において前記特定のアミノ酸残基を５個以上含む場合、抗体以外の部分構造は、当該標的領域中に含まれる１個以上の特定のアミノ酸残基に対して３０％以上の位置選択性で結合させることができる。標的領域および位置選択性の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。
【０２４８】
２−５．抗体が有する、抗体以外の部分構造の個数
抗体（Ｔ）が保有する、抗体以外の部分構造（例、Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’）の個数は、変動することができる。例えば、Ｔが複数の単量体タンパク質を含む多量体タンパク質である場合、Ｔは、複数個の単量体タンパク質中の対応する複数個の標的領域において、Ｔ以外の部分構造を有することができる。その結果、Ｔは、Ｔ以外の部分構造を複数個有することができる。したがって、式（ＩＩ）、（ＩＩ’）、または（ＩＩ’’）で表される構造は、Ｔが、Ｔ以外の部分構造を１個または複数個有していてもよいことを示す。Ｔが有する、Ｔ以外の部分構造の個数は、抗体の種類、および抗体とそれに対して導入される構造単位との反応比率等の条件を適宜設定することで調節することができる。このような個数は、抗体の種類によっても異なるが、例えば１〜８、好ましくは１〜４、より好ましくは１または２であってもよい。
【０２４９】
特定の実施形態では、抗体が保有する、抗体以外の部分構造の個数は、抗体が、複数個の単量体タンパク質から構成される多量体タンパク質である場合、複数個であってもよい。本発明によれば、複数個の単量体タンパク質の同一標的領域に対して抗体以外の部分構造を複数個導入することができる。
【０２５０】
好ましい実施形態では、抗体は、複数個の重鎖を含む抗体であってもよい。抗体の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。重鎖の個数は、抗体の種類によって異なる。例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、およびＩｇＤは、２個の重鎖を有することができる。ＩｇＡは、２個または４個の重鎖を有することができる。ＩｇＭは、８個の重鎖を有することができる。抗体（抗体）が保有する、抗体以外の部分構造の個数は、ＤＡＲと同義のものとして考慮することができる。本発明では、抗体が保有する、抗体以外の部分構造の個数は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、およびＩｇＤについては１個または２個（好ましくは２個）であり、ＩｇＡについては１〜４個（好ましくは４個）であり、ＩｇＭについては１〜８個（好ましくは８個）であってもよい。
【０２５１】
２−６．製造方法
本発明は、以下を含む、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩の製造方法を提供する：
（Ａ１）抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物またはその塩を抗体と反応させて、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩を生成すること。
【０２５２】
抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物は、式（Ｉ）、好ましくは式（Ｉ’）、より好ましくは式（Ｉ’’）で表される。抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体は、式（ＩＩ）、好ましくは式（ＩＩ’）、より好ましくは式（ＩＩ’’）で表される。
【０２５３】
抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物またはその塩は、反応性基を有するため、抗体と反応することができる。このような反応は、タンパク質の変性・分解（例、アミド結合の切断）を引き起こし得ない条件（温和な条件）下で適宜行うことができる。例えば、このような反応は、適切な反応系、例えば緩衝液中において、室温（例、約１５〜３０℃）で行うことができる。緩衝液のｐＨは、例えば５〜９であり、好ましくは５．５〜８．５であり、より好ましくは６．０〜８．０である。緩衝液は、適切な触媒を含んでいてもよい。反応時間は、例えば１分〜２０時間、好ましくは１０分〜１５時間、より好ましくは２０分〜１０時間、さらにより好ましくは３０分〜８時間である。このような反応の詳細については、例えば、Ｇ．Ｊ．Ｌ．Ｂｅｒｎａｒｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１１５，２１７４（２０１５）；Ｇ．Ｊ．Ｌ．Ｂｅｒｎａｒｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ａｓｉａｎ．Ｊ．，４，６３０（２００９）；Ｂ．Ｇ．Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．，５，４７４０（２０１４）；Ａ．Ｗａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ．Ｃｈｅｍ．，２５，８２５（２０１４）を参照のこと。
【０２５４】
反応系において、抗体（Ｘ）に対する、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物またはその塩（Ｙ）のモル比率（Ｙ／Ｘ）は、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物および抗体の種類、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物によって修飾されるべき抗体中の部位の数（例、ＤＡＲ）等に応じて変動することから特に限定されないが、例えば０．１〜１００であり、好ましくは０．５〜８０であり、より好ましくは１〜７０であり、さらにより好ましくは２〜５０であり、特に好ましくは３〜３０である。
【０２５５】
抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩の生成の確認は、その具体的な原料および生成物の分子量にもよるが、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー（例、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。位置選択性の確認は、例えば、ペプチドマッピングにより行うことができる。ペプチドマッピングは、例えば、プロテアーゼ（例、トリプシン、キモトリプシン、）処理および質量分析により行うことができる。プロテアーゼとしては、エンドプロテアーゼが好ましい。このようなエンドプロテアーゼとしては、例えば、トリプシン、キモトリプシン、Ｇｌｕ−Ｃ、Ｌｙｓ−Ｎ、Ｌｙｓ−Ｃ、Ａｓｐ−Ｎが挙げられる。抗体が有する、抗体以外の部分構造の個数の確認は、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩は、クロマトグラフィー（例、上述したクロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー）等の任意の方法により適宜精製することができる。
【０２５６】
３．抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩
３−１．概要
本発明は、式（ＩＩＩ）で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を提供する。
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩。
【０２５７】
式（ＩＩＩ）または他の式において、Ｒ’は、Ｆではなく、Ｂ’に共有結合している。
【０２５８】
３−２．機能性物質（Ｆ）
機能性物質としては、抗体に任意の機能を付与する物質である限り特に限定されず、例えば、薬物、標識物質、安定化剤が挙げられるが、好ましくは薬物または標識物質である。機能性物質はまた、単一の機能性物質であってもよく、または２以上の機能性物質が連結された物質であってもよい。
【０２５９】
薬物としては、任意の疾患に対する薬物であってもよい。このような疾患としては、例えば、癌（例、肺癌、胃癌、大腸癌、膵臓癌、腎臓癌、肝臓癌、甲状腺癌、前立腺癌、膀胱癌、卵巣癌、子宮癌、骨癌、皮膚癌、脳腫瘍、黒色腫）、自己免疫疾患・炎症性疾患（例、アレルギー疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス）、脳神経疾患（例、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症）、感染症（例、細菌感染症、ウイルス感染症）、遺伝性・希少疾患（例、遺伝性球状赤血球症、非ジストロフィー筋緊張症）、眼疾患（例、加齢黄斑変性症、糖尿病網膜症、網膜色素変性症）、骨・整形外科領域の疾患（例、変形性関節症）、血液疾患（例、白血病、紫斑病）、その他の疾患（例、糖尿病、高脂血症等の代謝異常症、肝臓疾患、腎疾患、肺疾患、循環器系疾患、消化器官系疾患）が挙げられる。抗体が所定の疾患の標的タンパク質に対する抗体である場合、薬物は、当該所定の疾患に関連する薬物（例、当該所定の疾患を治療する薬物、当該所定の疾患の標的タンパク質に対する抗体の使用に伴う副作用を緩和する薬物）であってもよい。
【０２６０】
より具体的には、薬物は、抗癌剤である。抗癌剤としては、例えば、化学療法剤、毒素、放射性同位体またはそれを含む物質が挙げられる。化学療法剤としては、例えば、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗薬、酵素阻害剤、ＤＮＡインターカレート剤、ＤＮＡ切断剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡ結合阻害剤、チューブリン結合阻害剤、細胞傷害性ヌクレオシド、白金化合物が挙げられる。毒素としては、例えば、細菌毒素（例、ジフテリア毒素）、植物毒素（例、リシン）が挙げられる。放射性同位体としては、例えば、水素原子の放射性同位体（例、３Ｈ）、炭素原子の放射性同位体（例、１４Ｃ）、リン原子の放射性同位体（例、３２Ｐ）、硫黄原子の放射性同位体（例、３５Ｓ）、イットリウムの放射性同位体（例、９０Ｙ）、テクネチウムの放射性同位体（例、９９ｍＴｃ）、インジウムの放射性同位体（例、１１１Ｉｎ）、ヨウ素原子の放射性同位体（例、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ)、サマリウムの放射性同位体（例、１５３Ｓｍ）、レニウムの放射性同位体（例、１８６Ｒｅ）、アスタチンの放射性同位体（例、２１１Ａｔ）、ビスマスの放射性同位体（例、２１２Ｂｉ）が挙げられる。更に具体的には、薬物として、オーリスタチン（ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ）、メイタンシン（ＤＭ１、ＤＭ４）、ＰＢＤ（ピロロベンゾジアゼピン）、ＩＧＮ、カンプトテシン類縁体、カリケアミシン、デュオカルミシン、エリブリン、アントラサイクリン、ｄｍＤＮＡ３１、ツブリシンが挙げられる。
【０２６１】
標識物質としては、例えば、酵素（例、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、βガラクトシダーゼ）、親和性物質（例、ストレプトアビジン、ビオチン、ジゴキシゲニン、アプタマー）、蛍光物質（例、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質）、発光物質（例、ルシフェリン、エクオリン、アクリジニウムエステル、トリス（２，２’−ビピリジル）ルテニウム、ルミノール）、放射性同位体（例、上述したもの）またはそれを含む物質が挙げられる。
【０２６２】
機能性物質はまた、高分子化合物、中分子化合物、または低分子化合物であり、好ましくは、低分子化合物である。低分子化合物とは、分子量１５００以下の化合物をいう。低分子化合物は、天然化合物または合成化合物である。低分子化合物の分子量は、１２００以下、１０００以下、９００以下、８００以下、７００以下、６００以下、５００以下、４００以下、または３００以下であってもよい。低分子化合物の分子量はまた、３０以上、４０以上、または５０以上であってもよい。低分子化合物は、上述したような薬物または標識物質であってもよい。また、低分子化合物としては、例えば、アミノ酸、オリゴペプチド、ビタミン、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、単糖、オリゴ糖、脂質、脂肪酸、およびそれらの塩が挙げられる。
【０２６３】
３−３．機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基（Ｂ’）
Ｂ’は、（ａ）の生体直交性官能基が機能性物質と反応していることを除き、上述したＢにおける（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基と同様である。したがって、Ｂ’における３価の基および直交性官能基の定義、例および好ましい例は、（ａ）の生体直交性官能基が機能性物質と反応していることを除き、Ｂにおけるものと同様である。
【０２６４】
機能性物質は、その構造に応じた種々の官能基を有する。機能性物質が、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有する場合、機能性物質の当該官能基と生体直交性官能基とを適宜反応させることができる。生体直交性官能基と反応し易い官能基は、生体直交性官能基の具体的な種類によっても異なり得る。当業者であれば、適切な官能基を、生体直交性官能基と反応し易い官能基として適宜選択することができる（例、Ｂｏｕｔｕｒｅｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．，２０１５，１１５，２１７４−２１９５）。生体直交性官能基と反応し易い官能基としては、例えば、生体直交性官能基がチオール残基の場合はマレイミド残基およびジスルフィド残基が挙げられ、生体直交性官能基がアルキン残基の場合はアジド残基が挙げられ、生体直交性官能基がアルデヒド残基またはケトン残基の場合はヒドラジン残基が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、生体直交性官能基がチオール残基であり、かつ生体直交性官能基と反応し易い官能基がマレイミド残基またはジスルフィド残基である場合（またはその逆である場合）、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基は、チオスクシンイミド残基を含む３価の基、またはジスルフィド残基を含む３価の基であってもよい；生体直交性官能基がアルキン残基であり、かつ生体直交性官能基と反応し易い官能基がアジド残基である場合（またはその逆である場合）、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基は、トリアゾール残基（他の環と縮合していても縮合していなくてもよい）を含む３価の基であってもよい；生体直交性官能基がアルデヒド残基またはケトン残基であり、かつ生体直交性官能基と反応し易い官能基がヒドラジン残基である場合（またはその逆である場合）、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基は、ヒドラゾン残基を含む３価の基であってもよい（例、Ｂｏｕｔｕｒｅｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．，２０１５，１１５，２１７４−２１９５）。チオスクシンイミド残基を含む３価の基、ジスルフィド残基を含む３価の基、トリアゾール残基（他の環と縮合していても縮合していなくてもよい）を含む３価の基、またはヒドラゾン残基を含む３価の基は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基の好ましい例である。
【０２６５】
一方、機能性物質が、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有しない場合、機能性物質として、所望の官能基を有するように誘導体化されたものを使用することができる。例えば、機能性物質が抗体である場合、抗体が天然に有しない官能基を有するように誘導体化されたものを使用することができる。この場合、抗体の誘導体化は、本発明の方法により行われてもよい。この場合、所望の生体直交性官能基を位置選択的に有するように誘導体化された抗体を、機能性物質として使用することができる。
【０２６６】
誘導体化は、当該分野における技術常識である（例、国際公開第２００４／０１０９５７号、米国特許出願公開第２００６／００７４００８号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書）。例えば、誘導体化は、上述したような架橋剤を用いて行われてもよい。あるいは、誘導体化は、所望の官能基を有する特定のリンカーを用いて行われてもよい。例えば、このようなリンカーは、適切な環境（例、細胞内または細胞外）において機能性物質と抗体とをリンカーの切断により分離可能なものであってもよい。このようなリンカーとしては、例えば、特定のプロテアーゼ〔例、細胞内プロテアーゼ（例、リソソーム、またはエンドソーム中に存在するプロテアーゼ）、細胞外プロテアーゼ（例、分泌性プロテアーゼ）〕で分解されるペプチジルリンカー（例、米国特許第６，２１４，３４５号；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３（１９９９））、生体内に存在する局所酸性部位で切断され得るリンカー（例、米国特許第５，６２２，９２９号、同第５，１２２，３６８号；同第５，８２４，８０５号）が挙げられる。リンカーは、自壊的（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）であってもよい（例、国際公開第０２／０８３１８０号、国際公開第０４／０４３４９３号、国際公開第０５／１１２９１９号）。本発明では、誘導体化された機能性物質も、単に「機能性物質」と呼称することができる。
【０２６７】
機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基において、機能性物質および生体直交性官能基の定義、例および好ましい例は、上述したとおりである。機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分は、当該技術分野において技術常識であり、機能性物質（機能性物質が誘導体化されている場合、その誘導体化部分）および生体直交性官能基の種類に応じて適宜決定することができる。
【０２６８】
機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基は、（１）上述の好ましい例において言及した残基である、チオスクシンイミド残基、トリアゾール残基、またはヒドラゾン残基を含む３価の基であってもよく、あるいは、（２）特に限定されるわけではないが、例えば、ジスルフィド残基（この残基は、上述の好ましい例において言及した残基である）、アセタール残基、ケタール残基、エステル残基、カルバモイル残基、アルコキシアルキル残基、イミン残基、三級アルキルオキシカルバメート残基、シラン残基、ヒドラゾン含有残基、フォスフォルアミデート残基、アコニチル残基、トリチル残基、アゾ残基、ビシナルジオール残基、セレン残基、電子吸引基を有する芳香族環含有残基、クマリン含有残基、スルホン含有残基、不飽和結合含有鎖残基、グリコシル残基からなる群より選ばれる残基を含む３価の基であってもよい。
【０２６９】
機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基はまた、特に限定されるわけではないが、例えば、下記：
【化３９】
2020090979.tif 000041
〔ここで、
黒四角は機能性物質側の部分に対する結合を示し、
○（白丸）はＬ側の部分に対する結合を示し、●（黒丸）はＲ’側の部分に対する結合を示す。
化学構造が、切断性部分を中心にして非対称である場合、●がＬ側の部分に対する結合を示し、○がＲ’側の部分に対する結合を示していてもよい。〕からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応する残基を含む３価の基であってもよい。
【０２７０】
３−４．部分構造「Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）」
部分構造「Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）」の詳細は、ＢがＢ’（−Ｆ）に変更されていることを除き、上記「１−６．部分構造「Ｌ−Ｂ」」で述べたとおりである。
【０２７１】
一実施形態では、切断性リンカーは、（ｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有する切断性部分を含む２価の基である切断性リンカー、もしくは（ｉｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有しない切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであってもよい。
【０２７２】
特定の実施形態では、切断性リンカーは、上記（ｉｉ）の切断性リンカーであってもよい。既にＢ’は機能性物質（Ｆ）と結合しているため、生体直交性官能基を反応性基側に生成する必要がないためである。
【０２７３】
別の特定の実施形態では、Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）で表される部分構造は、Ｂ２’（−Ｆ２）−Ｌ’−Ｂ１’（−Ｆ１）で表される部分構造（すなわち、Ｌは、Ｂ２’（−Ｆ２）−Ｌ’であり、Ｂ’は、Ｂ１’である。）であってもよい。この場合、上記式（ＩＩＩ）で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩は、下記式（ＩＩＩ’）で表されることができる。
Ａ−Ｂ２’（−Ｆ２）−Ｌ’−Ｂ１’（−Ｆ１）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ’）
〔式中、
Ａ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩＩ）のものと同じであり、
Ｌ’は、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ１’およびＢ２’は、同一または異なって、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆ１およびＦ２は、同一または異なって、機能性物質であり、
Ｂ１’（−Ｆ１）およびＢ２’（−Ｆ２）は、Ｌ’を中心にした対称構造を有していてもよい。〕
【０２７４】
Ｂ１’およびＢ２’は、同一または異なって、Ｂ’の定義、例および好ましい例と同様である。
【０２７５】
上記式（ＩＩＩ’）において、Ｌ’は、上述した式（Ｌ１’）〜（Ｌ３’）のいずれか一つで表されてもよい。
【０２７６】
別の特定の実施形態では、Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）で表される構造単位は、下記式（ＬＢ’（Ｆ）’）で表されてもよい。
【化４０】
2020090979.tif 000042
〔式中、
Ｃ、Ｆ１、Ｆ２、ｐ、ｐ’、ｑ、ｑ’、Ｘ、Ｘ’、Ｒ１ａ、Ｒ１ａ’、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｂ’、ＺおよびＺ’の定義、例および好ましい例は、上述したものと同じであり、
ＹおよびＹ’は、同一または異なって、前記式（Ｂ−１）のＹから水素原子を一つ除いた残基であり、
○（白丸）は、Ａに対する結合を示し、●（黒丸）は、Ｒ’に対する結合を示す。〕
【０２７７】
より具体的には、ＹおよびＹ’における、前記式（Ｂ−１）のＹから水素原子を一つ除いた残基は、−Ｎ（−）−、−ＣＨ（−）−、または上記式（Ｂ−２）から水素原子を一つ除いた基である。構造の簡便化等の観点から、Ｙは、−Ｎ（−）−、または−ＣＨ（−）−であってもよい。あるいは、炭素原子を基調とした構造の設計等の観点からは、Ｙは、−ＣＨ（−）−、または上記式（Ｂ−２）から水素原子を一つ除いた基であってもよい。
【０２７８】
上記式（Ｂ−２）から水素原子を一つ除いた基は、下記式（Ｂ−２’）：
【化４１】
2020090979.tif 000043
（式中、
ＶおよびＶ’は、同一または異なって、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または単結合であり、
Ｖ１は、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
ｓは、０〜１０の任意の整数であり、
式（Ｂ−２’）における○および●は、それぞれ、式（Ｂ−１）における○および●と同じ配向である。）である。〕から水素原子を一つ除いた基である。式（Ｂ−２’）におけるｓの定義、例および好ましい例は、式（Ｂ−２）のものと同様である。したがって、式（Ｂ−２’）では、ＶおよびＶ’の一方が、−Ｎ（−）−、または−ＣＨ（−）−であってもよい。あるいは、式（Ｂ−２’）では、Ｖ１は、上記（ａ）または（ｂ）の２価の基から水素原子が一つ除かれた３価の基であってもよい。あるいは、式（Ｂ−２’）では、ｓ個の−ＣＨ２−のうちの一つが−ＣＨ（−）−であってもよい。
【０２７９】
この場合、上記式（ＩＩＩ）は、下記式（ＩＩＩ’’）として規定することができる。
【化４２】
2020090979.tif 000044
〔式中、
Ａ、Ｒ、Ｃ、Ｆ１、Ｆ２、ｐ、ｐ’、ｑ、ｑ’、Ｘ、Ｘ’、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ａ’、Ｒ１ｂ’、Ｙ、Ｙ’、ＺおよびＺ’の定義、例および好ましい例は、上述したものと同じである。〕
【０２８０】
上記式（ＬＢ’（Ｆ）’）および（ＩＩＩ’’）において、Ｃ＝ＺにおけるＣ（炭素原子）からＣ＝Ｚ’におけるＣ（炭素原子）までの長さは、上述したようなＡおよびＲを連結する主鎖の長さと同様である。これらの式において、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ＝Ｚ’におけるＣまでの長さはまた、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ＝Ｚ’におけるＣを連結する部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）を構成する原子数として規定することもできる。このような原子数は、ＡおよびＲを連結する主鎖を構成する原子数と同様である。Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ＝Ｚ’におけるＣを連結する部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）は、環構造を含んでいなくても含んでいてもよいが、環構造を含んでいないことが好ましい。当該連結鎖（水素原子および置換基を除く）は、好ましくは、ペプチド部分を含まないものであってもよい。
【０２８１】
３−５．抗体が有する、抗体以外の部分構造の結合部位（位置選択性）
抗体以外の部分構造（例、Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’）は、抗体（Ｔ）における上述したような標的領域に位置選択的に結合させることができる。具体的には、Ｔが、連続する１〜５０個のアミノ酸残基からなる標的領域中において特定のアミノ酸残基を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において前記特定のアミノ酸残基を５個以上含む場合、抗体以外の部分構造は、当該標的領域中に含まれる１個以上の特定のアミノ酸残基に対して３０％以上の位置選択性で結合させることができる。標的領域および位置選択性の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。
【０２８２】
３−６．抗体が有する、抗体以外の部分構造の個数
抗体（Ｔ）が保有する、抗体以外の部分構造（例、Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’）の個数は、変動することができる。例えば、Ｔが複数の単量体タンパク質を含む多量体タンパク質である場合、Ｔは、複数個の単量体タンパク質中の対応する複数個の標的領域において、Ｔ以外の部分構造を有することができる。その結果、Ｔは、Ｔ以外の部分構造を複数個有することができる。したがって、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、または（ＩＩＩ’’）で表される構造は、Ｔが、Ｔ以外の部分構造を１個または複数個有していてもよいことを示す。Ｔが有する、Ｔ以外の部分構造の個数は、抗体の種類、および抗体とそれに対して導入される構造単位との反応比率等の条件を適宜設定することで調節することができる。このような個数は、抗体の種類によっても異なるが、例えば１〜８、好ましくは１〜４、より好ましくは１または２であってもよい。
【０２８３】
特定の実施形態では、抗体が保有する、抗体以外の部分構造の個数は、抗体が、複数個の単量体タンパク質から構成される多量体タンパク質である場合、複数個であってもよい。本発明によれば、複数個の単量体タンパク質の同一標的領域に対して抗体以外の部分構造を複数個導入することができる。
【０２８４】
好ましい実施形態では、抗体は、複数個の重鎖を含む抗体であってもよい。抗体の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。本発明では、抗体が保有する、抗体以外の部分構造の個数は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、およびＩｇＤについては１個または２個（好ましくは２個）であり、ＩｇＡについては１〜４個（好ましくは４個）であり、ＩｇＭについては１〜８個（好ましくは８個）であってもよい。
【０２８５】
３−７．製造方法
本発明は、以下を含む、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の製造方法を提供する：
（Ｂ１）抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩を機能性物質と反応させて、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を生成すること。
【０２８６】
抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体は、式（ＩＩ）、好ましくは式（ＩＩ’）、より好ましくは式（ＩＩ’’）で表される。抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体は、式（ＩＩＩ）、好ましくは式（ＩＩＩ’）、より好ましくは式（ＩＩＩ’’）で表される。
【０２８７】
抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩は、機能性物質に対して反応することができる生体直交性官能基を有するため、機能性物質と反応することができる。このような反応は、上記「２−６．製造方法」で述べたような、タンパク質の変性・分解（例、アミド結合の切断）を引き起こし得ない条件（温和な条件）下で適宜行うことができる。
【０２８８】
反応系において、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩（Ｘ）に対する機能性物質（Ｙ）のモル比率（Ｙ／Ｘ）は、抗体および機能性物質の種類、機能性物質によって修飾されるべき抗体中の部位の数（例、ＤＡＲ）等に応じて変動することから特に限定されないが、例えば０．１〜１００であり、好ましくは０．５〜８０であり、より好ましくは１〜７０であり、さらにより好ましくは２〜５０であり、特に好ましくは３〜３０である。
【０２８９】
抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の生成の確認は、その具体的な原料および生成物の分子量にもよるが、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー（例、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。位置選択性の確認、抗体以外の部分構造の個数の確認、および精製は、上記「２−６．製造方法」で述べた方法により適宜行うことができる。
【０２９０】
本発明はまた、以下を含む、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の製造方法を提供する：
（Ｂ２）抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物またはその塩を抗体と反応させて、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩を生成すること；および
（Ｂ３）抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩を機能性物質と反応させて、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を生成すること。
【０２９１】
上記（Ｂ２）の工程は、上記「２−６．製造方法」で述べた上記（Ａ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｂ３）の工程は、上記（Ｂ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｂ２）および（Ｂ３）の工程は、別々に行うことができる。あるいは、上記（Ｂ２）および（Ｂ３）の工程は、抗体中の反応標的である特定のアミノ酸残基と反応性基との反応対、および機能性物質中の官能基と生体直交性官能基との反応対の組合せに応じて、同時に行うことができる。すなわち、上記（Ｂ２）および（Ｂ３）の工程が同時に行われる場合、上記（Ｂ２）の工程で得られる生成物を単離することなく、上記（Ｂ２）の工程で得られる生成物含有反応液が、上記（Ｂ３）の工程に付されてもよい。
【０２９２】
４．生体直交性官能基を有する抗体またはその塩
４−１．製造方法の概要
本発明は、式（ＩＶ）で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する。
Ｌ１−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＶ）
〔式中、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基であり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕
【０２９３】
４−２．（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基（Ｌ１）
式（ＩＶ）において、Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である。このような１価の基は、上述したような切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーの切断により生成し得る１価の基である。したがって、Ｌ１は、上述したような切断性部分の残基または化学構造の切断により生成し得る１価の基であってもよい。より具体的には、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基は、上述した（ｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有する切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーの切断により生成し得る１価の基であってもよく、（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基は、（ｉｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有しない切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーの切断により生成し得る１価の基であってもよい。
【０２９４】
特定の実施形態では、Ｌ１は、下記式（Ｌ１−１）または（Ｌ１−２）のいずれか一つで表されてもよい：
Ｃ１−Ｌｂ      （Ｌ１−１）
Ｃ１            （Ｌ１−２）
〔式中、
Ｌｂは、２価の基であり、
Ｃ１は、生体直交性官能基、または生体直交性官能基以外の基である。〕
【０２９５】
２価の基としては、例えば、置換基を有していてもよい２価の炭化水素基、置換基を有していてもよい２価の複素環基、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲａ−（Ｒａは水素原子、または置換基を示す）、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｓ）−、およびこれらの２以上（例えば２〜８、好ましくは２〜６、より好ましくは２〜４）の組み合わせからなる基が挙げられる。２価の炭化水素基、２価の複素環基、および置換基の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。
【０２９６】
生体直交性官能基の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。
【０２９７】
生体直交性官能基以外の基としては、例えば、上述した置換基のうち、生体直交性官能基以外のものが挙げられる。生体直交性官能基以外のこのような基としては、例えば、アルキル、シクロアルキル、アラルキル、１価の複素環基、ヒドロキシル、アミノ、アルキルオキシ（アルコキシ）、シクロアルキルオキシ、アラルキルオキシ）が挙げられる。これらの基およびこれらの基の構成要素（例、アルキルオキシ（アルコキシ）におけるアルキル、シクロアルキルオキシにおけるシクロアルキル、およびアラルキルオキシにおけるアラルキル）の定義、例および好ましい例については、上述したものと同様である。
【０２９８】
特定の実施形態では、Ｌｂは、下記（Ｌｂ’）：
【化４３】
2020090979.tif 000045
〔式中、
ｐは、０〜１０の任意の整数であり、
ｑは、０〜１０の任意の整数であり、
Ｘは、炭素原子、窒素原子、または単結合（ここで、Ｘが窒素原子である場合、Ｒ１ｂは存在しない。Ｘが単結合である場合、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは存在しない）であり、
Ｒ１ａ、およびＲ１ｂは、同一または異なって、水素原子、または上述する置換基からなる群より選ばれる。
○（白丸）は、Ｃ１に対する結合を示し、●（黒丸）はＢに対する結合を示す。〕で表されてもよい。
【０２９９】
ｐ、ｑ、およびＸ、ならびにＲ１ａ、およびＲ１ｂ（置換基）の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。
【０３００】
４−３．部分構造「Ｌ１−Ｂ」
４−３−１．Ｌ１末端部分およびＲ’を連結する部分構造「Ｌ１−Ｂ」の長さ
式（ＩＶ）において、切断により生成したＬ１末端部分（またはＣ１末端部分）およびＲ’を連結する部分構造（「Ｌ１−Ｂ」中の直鎖部分）の長さ（あるいは、式（ＩＶ）等の特定の式に限定されない、生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体またはその塩における、生体直交性官能基および特定のアミノ酸残基の側鎖を連結する主鎖の原子数。以下同様）は、上記「１−６−１．ＡおよびＲを連結する部分構造「Ｌ−Ｂ」中の主鎖の長さ」で述べたような種々の因子に応じて、適宜設計することができる。
【０３０１】
切断により生成したＬ１末端部分（またはＣ１末端部分）およびＲ’を連結する部分構造の長さは、例えば約２．５Å以上、好ましくは約４Å以上、より好ましくは約５Å以上であってもよい。部分構造の長さはまた、例えば約１５Å以下、好ましくは約１２Å以下、より好ましくは約８Å以下であってもよい。より具体的には、部分構造の長さは、例えば約２．５〜１５Å、好ましくは約４〜１２Å、より好ましくは約５〜８Åであってもよい。
【０３０２】
より具体的には、切断により生成したＬ１末端部分（またはＣ１末端部分）およびＲ’を連結する部分構造の長さは、部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）を構成する原子数として規定することもできる。連結鎖を構成する原子数は、例えば２個（約２．５Å）以上、好ましくは３個（約４Å）以上、より好ましくは４個（約５Å）以上であってもよい。連結鎖を構成する原子数はまた、例えば１０個（約１５Å）以下、好ましくは８個（約１２Å）以下、より好ましくは６個（約８Å）以下であってもよい。より具体的には、連結鎖を構成する原子数は、例えば２〜１０個、好ましくは３〜８個、より好ましくは４〜６個であってもよい。
【０３０３】
切断により生成したＬ１末端部分（またはＣ１末端部分）およびＲ’を連結する部分構造の連結鎖が２価の環構造を含まない鎖状構造である場合、連結鎖の原子数は、連結鎖中の原子数を数えることにより決定することができる。
【０３０４】
一方、切断により生成したＬ１末端部分（またはＣ１末端部分）およびＲ’を連結する部分構造の連結鎖が２価の環構造を含む構造である場合、連結鎖の原子数と上述した長さとは必ずしも対応せず、連結鎖の原子数により規定され得る長さは、上述した長さよりも短くなる傾向がある。このような場合であっても、原子数により連結鎖の長さを規定する観点から、連結鎖の原子数を便宜的に数えることができる。具体的には、このような場合における連結鎖の原子数は、上述したように、連結鎖において２価の環構造を含まない鎖状構造中の原子数に加えて、２価の環構造中の２つの結合手を連絡する最短経路の原子数を数えることにより決定してもよい。
【０３０５】
好ましくは、切断により生成したＬ１末端部分（またはＣ１末端部分）およびＲ’を連結する部分構造の連結鎖は、２価の環構造を含まない鎖状構造であってもよい。この場合、切断により生成した末端部分およびＲ’を連結する部分構造の連結鎖において２価の環基が含まれないようにＬ１−Ｂを適宜設計することができる。
【０３０６】
特定の実施形態では、Ｌ１−Ｂで表される部分構造は、好ましくは、ペプチド部分を含まない。この場合、本発明の生体直交性官能基を有する抗体を用いて得られる本発明の機能性物質を有する抗体（例、抗体薬物複合体）は、免疫原性を有し得るペプチド部分をリンカーとして含み得ないという利点がある。
【０３０７】
４−３−２．部分構造「Ｌ１−Ｂ」の具体的構造
上記式（ＩＶ）において、Ｌ１およびＢは、互いに連関し得る構造である。したがって、上記式（ＩＶ）において、Ｌ１およびＢは、「Ｌ１−Ｂ」で表される部分構造として規定することができる。
【０３０８】
特定の実施形態では、Ｌ１が（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基である場合、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基である。
【０３０９】
好ましくは、Ｌ１が（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基である場合、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基である。この場合、（ｉ’）における生体直交性官能基は、（ａ）における生体直交性官能基と同種であっても異種であってもよい。より単純な構造の採用、および/または単一の機能性物質に対する反応性の向上等の観点では、（ｉ’）における生体直交性官能基は、（ａ）における生体直交性官能基と同種であってもよい。一方、２種以上の機能性物質に対する差別化された反応性の確保等、および反応における一部の生体直交性官能基の不使用の観点では、（ｉ’）における生体直交性官能基は、（ａ）における生体直交性官能基と異種であってもよい。
【０３１０】
あるいは、Ｌ１が（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基である場合、Ｂは、（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であってもよい。この場合、式（ＩＶ）で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩は、より単純な構造を有することになるので、合成が容易である。
【０３１１】
別の特定の実施形態では、Ｌ１が（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である場合、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基である。
【０３１２】
特定の実施形態では、Ｌ１−Ｂで表される構造単位は、下記式（Ｌ１Ｂ’）で表されてもよい。
【化４４】
2020090979.tif 000046
〔式中、
Ｃ１、ｐ、ｑ、Ｘ、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｙ、およびＺの定義、例および好ましい例は、上述したものと同じであり、
●（黒丸）は、Ｒ’に対する結合を示す。〕
【０３１３】
したがって、上記式（ＩＶ）は、下記式（ＩＶ’）として規定することができる。
【化４５】
2020090979.tif 000047
〔式中、
Ｃ１、ｐ、ｑ、Ｘ、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｙ、Ｚ、Ｒ’、およびＴの定義、例および好ましい例は、上述したものと同じである。〕
【０３１４】
上記式（Ｌ１Ｂ’）および（ＩＶ’）において、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ１までの長さは、切断により生成したＬ１末端部分（またはＣ１末端部分）およびＲ’を連結する部分構造の長さと同様である。これらの式において、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ１までの長さはまた、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ１までの部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）を構成する原子数として規定することもできる。このような原子数は、切断により生成したＬ１末端部分（またはＣ１末端）およびＲ’を連結する部分構造（水素原子および置換基を除く）を構成する原子数と同様である。Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ１を連結する部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）は、環構造を含んでいなくても含んでいてもよいが、環構造を含んでいないことが好ましい。当該連結鎖（水素原子および置換基を除く）は、好ましくは、ペプチド部分を含まないものであってもよい。
【０３１５】
４−４．抗体が有する、抗体以外の部分構造の結合部位（位置選択性）
抗体以外の部分構造（例、Ｌ１−Ｂ−Ｒ’）は、抗体（Ｔ）における上述したような標的領域に位置選択的に結合させることができる。具体的には、Ｔが、連続する１〜５０個のアミノ酸残基からなる標的領域中において特定のアミノ酸残基を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において前記特定のアミノ酸残基を５個以上含む場合、抗体以外の部分構造は、当該標的領域中に含まれる１個以上の特定のアミノ酸残基に対して３０％以上の位置選択性で結合させることができる。標的領域および位置選択性の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。
【０３１６】
４−５．抗体が有する、抗体以外の部分構造の個数
抗体（Ｔ）が保有する、抗体以外の部分構造（例、Ｌ１−Ｂ−Ｒ’）の個数は、変動することができる。例えば、Ｔが複数の単量体タンパク質を含む多量体タンパク質である場合、Ｔは、複数個の単量体タンパク質中の対応する複数個の標的領域において、Ｔ以外の部分構造を有することができる。その結果、Ｔは、Ｔ以外の部分構造を複数個有することができる。したがって、式（ＩＶＩ）、（ＩＶ’）、またはＩＶ’’）で表される構造は、Ｔが、Ｔ以外の部分構造を１個または複数個有していてもよいことを示す。Ｔが有する、Ｔ以外の部分構造の個数は、抗体の種類、および抗体とそれに対して導入される構造単位との反応比率等の条件を適宜設定することで調節することができる。このような個数は、抗体の種類によっても異なるが、例えば１〜８、好ましくは１〜４、より好ましくは１または２であってもよい。
【０３１７】
特定の実施形態では、抗体が保有する、抗体以外の部分構造の個数は、抗体が、複数個の単量体タンパク質から構成される多量体タンパク質である場合、複数個であってもよい。本発明によれば、複数個の単量体タンパク質の同一標的領域に対して抗体以外の部分構造を複数個導入することができる。
【０３１８】
好ましい実施形態では、抗体は、複数個の重鎖を含む抗体であってもよい。抗体の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。本発明では、抗体が保有する、抗体以外の部分構造の個数は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、およびＩｇＤについては１個または２個（好ましくは２個）であり、ＩｇＡについては１〜４個（好ましくは４個）であり、ＩｇＭについては１〜８個（好ましくは８個）であってもよい。
【０３１９】
４−６．製造方法
本発明は、以下を含む、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する：
（Ｃ１）抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩の切断性部分を切断して、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること。
【０３２０】
抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体は、式（ＩＩ）、好ましくは式（ＩＩ’）、より好ましくは式（ＩＩ’’）で表される。生体直交性官能基を有する抗体は、式（ＩＶ）、好ましくは式（ＩＶ’）、より好ましくは式（ＩＶ’’）で表される。
【０３２１】
抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩は、上述したような切断処理により切断することができる切断性部分を有するため、切断することができる。このような切断反応は、上記「２−６．製造方法」で述べたような、タンパク質の変性・分解（例、アミド結合の切断）を引き起こし得ない条件（温和な条件）下で適宜行うことができる。
【０３２２】
切断処理としては、例えば、（ａ）酸性物質、塩基性物質、還元剤、酸化剤、酵素からなる群より選ばれる１種以上の物質による処理、（ｂ）光からなる群より選ばれる物理化学的刺激による処理、または（ｃ）自己分解性の切断性部分を含む切断性リンカーを用いた場合の放置が挙げられる。このような切断処理の条件は、当該分野における技術常識である（例、Ｇ．Ｌｅｒｉｃｈｅ，Ｌ．  Ｃｈｉｓｈｏｌｍ，Ａ．Ｗａｇｎｅｒ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２０，５７１（２０１２）；Ｆｅｎｇ  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．１３２，１５００（２０１０）．；Ｂｅｓｓｏｄｅｓ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ９９，４２３（２００４）．；ＤｅＳｉｍｏｎｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．１３２，１７９２８（２０１０）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，９１，１８７（２００３）；Ｓｃｈｏｅｎｍａｒｋｓ，Ｒ．Ｇ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，９５，２９１（２００４））。
【０３２３】
生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の生成の確認は、その具体的な原料および生成物の分子量にもよるが、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー（例、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。位置選択性の確認、抗体以外の部分構造の個数の確認、および精製は、上記「２−６．製造方法」で述べた方法により適宜行うことができる。
【０３２４】
本発明はまた、以下を含む、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する：
（Ｃ２）抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物またはその塩を抗体と反応させて、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩を生成すること；および
（Ｃ３）抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩の切断性部分を切断して、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること。
【０３２５】
上記（Ｃ２）の工程は、上記「２−６．製造方法」で述べた上記（Ａ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｃ３）の工程は、上記（Ｃ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｃ２）および（Ｃ３）の工程は、別々に行うことができる。あるいは、上記（Ｃ２）および（Ｃ３）の工程は、反応性基と、切断により生成され得る生体直交性官能基との組合せ（非反応性）等の因子に応じて、同時に行うことができる。すなわち、上記（Ｃ２）および（Ｃ３）の工程が同時に行われる場合、上記（Ｃ２）の工程で得られる生成物を単離することなく、上記（Ｃ２）の工程で得られる生成物含有反応液が、上記（Ｃ３）の工程に付されてもよい。
【０３２６】
５．機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法
５−１．概要
本発明は、式（Ｖ）で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する。
Ｆ−（Ｌ１−Ｂ）’−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ）
〔式中、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基であり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
（Ｌ１−Ｂ）’で表される構造単位は、機能性物質と、（ｉ’）および（ａ）における生体直交性官能基のいずれか一方または双方との間の反応により生成する部分を含む２価の構造単位であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕
【０３２７】
５−２．部分構造「Ｆ−（Ｌ１−Ｂ）’」
５−２−１．ＦおよびＲ’を連結する部分構造「Ｌ１−Ｂ」の長さ
式（Ｖ）において、ＦおよびＲ’を連結する部分構造「Ｌ１−Ｂ」（「Ｌ１−Ｂ」中の直鎖部分）の長さ（あるいは、式（Ｖ）等の特定の式に限定されない、機能性物質を位置選択的に有する抗体またはその塩における、機能性物質および特定のアミノ酸残基の側鎖を連結する主鎖の原子数、または機能性物質が生体直交性官能基を介して抗体に結合している場合には、生体直交性官能基および特定のアミノ酸残基の側鎖を連結する主鎖の原子数。以下同様）は、上記「１−６−１．ＡおよびＲを連結する部分構造「Ｌ−Ｂ」中の主鎖の長さ」で述べたような種々の因子に応じて、適宜設計することができる。
【０３２８】
ＦおよびＲ’を連結する部分構造の長さは、例えば約２．５Å以上、好ましくは約４Å以上、より好ましくは約５Å以上であってもよい。部分構造の長さはまた、例えば約１５Å以下、好ましくは約１２Å以下、より好ましくは約８Å以下であってもよい。より具体的には、部分構造の長さは、例えば約２．５〜１５Å、好ましくは約４〜１２Å、より好ましくは約５〜８Åであってもよい。
【０３２９】
より具体的には、ＦおよびＲ’を連結する部分構造の長さは、部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）を構成する原子数として規定することもできる。連結鎖を構成する原子数は、例えば２個（約２．５Å）以上、好ましくは３個（約４Å）以上、より好ましくは４個（約５Å）以上であってもよい。連結鎖を構成する原子数はまた、例えば１０個（約１５Å）以下、好ましくは８個（約１２Å）以下、より好ましくは６個（約８Å）以下であってもよい。より具体的には、連結鎖を構成する原子数は、例えば２〜１０個、好ましくは３〜８個、より好ましくは４〜６個であってもよい。
【０３３０】
ＦおよびＲ’を連結する部分構造の連結鎖が２価の環構造を含まない鎖状構造である場合、連結鎖の原子数は、連結鎖中の原子数を数えることにより決定することができる。
【０３３１】
一方、ＦおよびＲ’を連結する部分構造の連結鎖が２価の環構造を含む構造である場合、連結鎖の原子数と上述した長さとは必ずしも対応せず、連結鎖の原子数により規定され得る長さは、上述した長さよりも短くなる傾向がある。このような場合であっても、原子数により連結鎖の長さを規定する観点から、連結鎖の原子数を便宜的に数えることができる。具体的には、このような場合における連結鎖の原子数は、上述したように、連結鎖において２価の環構造を含まない鎖状構造中の原子数に加えて、２価の環構造中の２つの結合手を連絡する最短経路の原子数を数えることにより決定してもよい。
【０３３２】
好ましくは、ＦおよびＲ’を連結する部分構造の連結鎖は、２価の環構造を含まない鎖状構造であってもよい。ＦおよびＲ’を連結する部分構造の連結鎖において２価の環基が含まれないようにＬ１−Ｂを適宜設計することができる。
【０３３３】
特定の実施形態では、Ｌ１−Ｂで表される部分構造は、好ましくは、ペプチド部分を含まない。この場合、本発明の機能性物質を有する抗体（例、抗体薬物複合体）は、免疫原性を有し得るペプチド部分をリンカーとして含まないという利点がある。
【０３３４】
５−２−２．部分構造「Ｆ−（Ｌ１−Ｂ）’」の具体的構造
式（Ｖ）において、Ｆ−（Ｌ１−Ｂ）’におけるＬ１およびＢは、互いに連関し得る構造である。したがって、上記式（Ｖ）において、Ｌ１およびＢは、「Ｌ１−Ｂ」で表される部分構造として規定することができる。
【０３３５】
また、Ｆ−（Ｌ１−Ｂ）’で表される構造単位は、機能性物質と、（ｉ’）および（ａ）における生体直交性官能基のいずれか一方または双方との間の反応により生成する部分である。反応に供された生体直交性官能基は、式（Ｖ）において、存在しない。したがって、式（Ｖ）において、（ｉ’）および（ａ）における生体直交性官能基のいずれか一方または双方は、存在しない。機能性物質と、（ｉ’）および（ａ）における生体直交性官能基のいずれか一方または双方との間の反応により生成する部分は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分と同じである。したがって、本明細書において、機能性物質と、（ｉ’）および（ａ）における生体直交性官能基のいずれか一方または双方との間の反応により生成する部分の例（残基の名称）および具体例（化学構造式）は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分について上述したものと同じである。
【０３３６】
一実施形態では、Ｌ１が（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基である場合、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基である。
【０３３７】
好ましい実施形態では、Ｌ１が（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基である場合、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基である。この場合、（ｉ’）における生体直交性官能基は、（ａ）における生体直交性官能基と同種であっても異種であってもよい。より単純な構造の採用、および/または単一の機能性物質に対する反応性の向上等の観点では、（ｉ’）における生体直交性官能基は、（ａ）における生体直交性官能基と同種であってもよい。一方、２種以上の機能性物質に対する差別化された反応性の確保、および反応における一部の生体直交性官能基の不使用等の観点では、（ｉ’）における生体直交性官能基は、（ａ）における生体直交性官能基と異種であってもよい。
【０３３８】
別の好ましい実施形態では、Ｌ１が（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基である場合、Ｂは、（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であってもよい。この場合、式（Ｖ）で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩は、より単純な構造を有することになるので、合成が容易である。
【０３３９】
別の実施形態では、Ｌ１が（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である場合、Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基である。
【０３４０】
特定の実施形態では、（ｉ’）および（ａ）における生体直交性官能基が異種である場合、式（Ｖ）で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩は、式（Ｖ１）または（Ｖ２）で表されてもよい。
【０３４１】
Ｌ１−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ１）
〔式中、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基であり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕
【０３４２】
Ｆ−Ｌ１’−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ２）
〔式中、
Ｌ１’は、機能性物質と、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕
【０３４３】
Ｌ１’は、機能性物質と、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基との間の反応により生成する部分を含む２価の基である。機能性物質と、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基との間の反応により生成する部分は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分と同じである。したがって、本明細書において、機能性物質と、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基との間の反応により生成する部分の例（残基の名称）および具体例（化学構造式）は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分について上述したものと同じである。したがって、機能性物質が生体直交性官能基と反応するので、機能性物質と、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基との間の反応により生成する部分を含む２価の基（Ｌ１’）は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基と表現することもできる（以下同様）。より具体的には、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基は、（１）上述の好ましい例において言及した残基である、チオスクシンイミド残基、トリアゾール残基、またはヒドラゾン残基を含む２価の基であってもよく、あるいは、（２）特に限定されるわけではないが、例えば、ジスルフィド残基（この残基は、上述の好ましい例において言及した残基である）、アセタール残基、ケタール残基、エステル残基、カルバモイル残基、アルコキシアルキル残基、イミン残基、三級アルキルオキシカルバメート残基、シラン残基、ヒドラゾン含有残基、フォスフォルアミデート残基、アコニチル残基、トリチル残基、アゾ残基、ビシナルジオール残基、セレン残基、電子吸引基を有する芳香族環含有残基、クマリン含有残基、スルホン含有残基、不飽和結合含有鎖残基、グリコシル残基からなる群より選ばれる残基を含む２価の基であってもよいが、（１）チオスクシンイミド残基、トリアゾール残基、またはヒドラゾン残基を含む２価の基が好ましい。
【０３４４】
別の特定の実施形態では、（ｉ’）および（ａ）における生体直交性官能基が同種または異種である場合、式（Ｖ）で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩は、式（Ｖ３）で表されてもよい。
【０３４５】
Ｆａ−Ｌ１’−Ｂ’（−Ｆｂ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ３）
〔式中、
Ｌ１’は、機能性物質と、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
ＦａおよびＦｂは、それぞれ、同一または異なる機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕
【０３４６】
特定の実施形態では、上記式（Ｖ１）において、Ｌ１−Ｂ’（−Ｆ）で表される構造単位は、下記式（Ｌ１Ｂ’（Ｆ））で表されてもよい。
【化４６】
2020090979.tif 000048
〔式中、
Ｆ、Ｃ１、ｐ、ｑ、Ｘ、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＺの定義、例および好ましい例は、上述したものと同じであり、
Ｙ’は、前記式（Ｂ−１）のＹから水素原子を一つ除いた残基であり、
●（黒丸）は、Ｒ’に対する結合を示す。〕
【０３４７】
前記式（Ｂ−１）のＹから水素原子を一つ除いた残基の定義、例および好ましい例は、上述したものと同様である。
【０３４８】
したがって、上記式（Ｖ１）は、下記式（Ｖ１’）として規定することができる。
【化４７】
2020090979.tif 000049
〔式中、
Ｆ、Ｃ１、ｐ、ｑ、Ｘ、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｚ、Ｒ’、およびＴの定義、例および好ましい例は、上述したものと同じであり、
Ｙ’は、前記式（Ｂ−１）のＹから水素原子を一つ除いた残基である。〕
【０３４９】
特定の実施形態では、上記式（Ｖ２）において、Ｆ−Ｌ１’−Ｂで表される構造単位は、下記式（ＦＬ１’Ｂ）で表されてもよい。
【化４８】
2020090979.tif 000050
〔式中、
Ｆ、ｐ、ｑ、Ｘ、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｙ、およびＺの定義、例および好ましい例は、上述したものと同じであり、
Ｃ１’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分であり、
●（黒丸）は、Ｒ’に対する結合を示す。〕
【０３５０】
Ｃ１’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分である。Ｃ１’における、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分の定義、例および好ましい例は、上記「機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基」で述べたものと同様である（以下同様）。
【０３５１】
したがって、上記式（Ｖ２）は、下記式（Ｖ２’）として規定することができる。
【化４９】
2020090979.tif 000051
〔式中、
Ｆ、ｐ、ｑ、Ｘ、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｙ、Ｚ、Ｒ’、およびＴの定義、例および好ましい例は、上述したものと同じであり、
Ｃ１’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分である。〕
【０３５２】
特定の実施形態では、上記式（Ｖ３）において、Ｆａ−Ｌ１’−Ｂ’（−Ｆｂ）で表される構造単位は、下記式（ＦａＬ１’Ｂ’（Ｆｂ））で表されてもよい。
【化５０】
2020090979.tif 000052
〔式中、
Ｆａ、Ｆｂ、ｐ、ｑ、Ｘ、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＺの定義、例および好ましい例は、上述したものと同じであり、
Ｃ１’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分であり、
Ｙ’は、前記式（Ｂ−１）のＹから水素原子を一つ除いた残基であり、
●（黒丸）は、Ｒ’に対する結合を示す。〕
【０３５３】
したがって、上記式（Ｖ３）は、下記式（Ｖ３’）として規定することができる。
【化５１】
2020090979.tif 000053
〔式中、
Ｆａ、Ｆｂ、ｐ、ｑ、Ｘ、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｚ、Ｒ’、およびＴの定義、例および好ましい例は、上述したものと同じであり、
Ｃ１’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分であり、
Ｙ’は、前記式（Ｂ−１）のＹから水素原子を一つ除いた残基である。〕
【０３５４】
上記式（Ｌ１Ｂ’（Ｆ））、（ＦＬ１’Ｂ）、および（ＦａＬ１’Ｂ’（Ｆ２））、ならびに（Ｖ１’）、（Ｖ２’）および（Ｖ３’）において、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ１までの長さは、切断により生成したＬ１末端部分（またはＣ１末端部分）およびＲ’を連結する部分構造の長さと同様である。これらの式において、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ１までの長さはまた、Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ１までの部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）を構成する原子数として規定することもできる。このような原子数は、切断により生成したＬ１末端部分（またはＣ１末端）およびＲ’を連結する部分構造（水素原子および置換基を除く）を構成する原子数と同様である。Ｃ＝ＺにおけるＣからＣ１を連結する部分構造の連結鎖（水素原子および置換基を除く）は、環構造を含んでいなくても含んでいてもよいが、環構造を含んでいないことが好ましい。当該連結鎖（水素原子および置換基を除く）は、好ましくは、ペプチド部分を含まないものであってもよい。
【０３５５】
５−３．抗体が有する、抗体以外の部分構造の結合部位（位置選択性）
抗体以外の部分構造（例、Ｆ−（Ｌ１−Ｂ）’−Ｒ’）は、抗体（Ｔ）における上述したような標的領域に位置選択的に結合させることができる。具体的には、Ｔが、連続する１〜５０個のアミノ酸残基からなる標的領域中において特定のアミノ酸残基を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において前記特定のアミノ酸残基を５個以上含む場合、抗体以外の部分構造は、当該標的領域中に含まれる１個以上の特定のアミノ酸残基に対して３０％以上の位置選択性で結合させることができる。標的領域および位置選択性の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。
【０３５６】
５−４．抗体が有する、抗体以外の部分構造の個数
抗体（Ｔ）が保有する、抗体以外の部分構造（例、Ｆ−（Ｌ１−Ｂ）’−Ｒ’）の個数は、変動することができる。例えば、Ｔが複数の単量体タンパク質を含む多量体タンパク質である場合、Ｔは、複数個の単量体タンパク質中の対応する複数個の標的領域において、Ｔ以外の部分構造を有することができる。その結果、Ｔは、Ｔ以外の部分構造を複数個有することができる。したがって、式（Ｖ）、（Ｖ１）、（Ｖ２）、（Ｖ３）、（Ｖ１’）、（Ｖ２’）、または（Ｖ３’）で表される構造は、Ｔが、Ｔ以外の部分構造を１個または複数個有していてもよいことを示す。Ｔが有する、Ｔ以外の部分構造の個数は、抗体の種類、および抗体とそれに対して導入される構造単位との反応比率等の条件を適宜設定することで調節することができる。このような個数は、抗体の種類によっても異なるが、例えば１〜８、好ましくは１〜４、より好ましくは１または２であってもよい。
【０３５７】
特定の実施形態では、抗体が保有する、抗体以外の部分構造の個数は、抗体が、複数個の単量体タンパク質から構成される多量体タンパク質である場合、複数個であってもよい。本発明によれば、複数個の単量体タンパク質の同一標的領域に対して抗体以外の部分構造を複数個導入することができる。
【０３５８】
好ましい実施形態では、抗体は、複数個の重鎖を含む抗体であってもよい。抗体の定義、例、および好ましい例は、上述したとおりである。本発明では、抗体が保有する、抗体以外の部分構造の個数は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、およびＩｇＤについては１個または２個（好ましくは２個）であり、ＩｇＡについては１〜４個（好ましくは４個）であり、ＩｇＭについては１〜８個（好ましくは８個）であってもよい。
【０３５９】
５−５．製造方法
本発明は、機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する。本製造方法は、（Ｄ）抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を原料として使用する方法（図２の反応（３）を参照）、および（Ｅ）生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を原料として使用する方法（図２の反応（５）を参照）に分類することができる。
【０３６０】
（Ｄ）抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を原料として使用する方法は、以下を含む：
（Ｄ１）抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の切断性部分を切断して、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成すること。
【０３６１】
抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体は、式（ＩＩＩ）、好ましくは式（ＩＩＩ’）、より好ましくは式（ＩＩＩ’’）で表される。機能性物質を有する抗体は、式（Ｖ）、好ましくは式（Ｖ１）、（Ｖ２）、または（Ｖ３）、より好ましくは式（Ｖ１’）、（Ｖ２’）、または（Ｖ３’）で表される。
【０３６２】
抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩は、上述したような切断処理により切断することができる切断性部分を有するため、切断することができる。このような切断反応は、上記「４−６．製造方法」で述べたような様式において行うことができる。
【０３６３】
機能性物質を有する抗体またはその塩の生成の確認は、その具体的な原料および生成物の分子量にもよるが、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー（例、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。位置選択性の確認、抗体以外の部分構造の個数の確認、および精製は、上記「２−６．製造方法」で述べた方法により適宜行うことができる。
【０３６４】
本発明はまた、以下を含む、機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する：
（Ｄ２）抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩を機能性物質と反応させて、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を生成すること；および
（Ｄ３）抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の切断性部分を切断して、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成すること。
【０３６５】
上記（Ｄ２）の工程は、上記「３−７．製造方法」で述べた上記（Ｂ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｄ３）の工程は、上記（Ｄ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｄ２）および（Ｄ３）の工程は、別々に行うことができる。あるいは、上記（Ｄ２）および（Ｄ３）の工程は、切断性部分、機能性物質および生体直交性官能基との組合せ等の因子に応じて、同時に行うことができる。すなわち、上記（Ｄ２）および（Ｄ３）の工程が同時に行われる場合、上記（Ｄ２）の工程で得られる生成物を単離することなく、上記（Ｄ２）の工程で得られる生成物含有反応液が、上記（Ｄ３）の工程に付されてもよい。
【０３６６】
本発明はさらに、以下を含む、機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する：
（Ｄ４）抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物またはその塩を抗体と反応させて、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩を生成すること；
（Ｄ５）抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩を機能性物質と反応させて、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩を生成すること；および
（Ｄ６）抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の切断性部分を切断して、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成すること。
【０３６７】
上記（Ｄ４）の工程は、上記「２−６．製造方法」で述べた上記（Ａ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｄ５）および（Ｄ６）の工程は、上記（Ｄ２）および（Ｄ３）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｄ５）の工程は、上記「３−７．製造方法」で述べた上記（Ｂ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｄ６）の工程は、上記（Ｄ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｄ４）〜（Ｄ６）の工程は、別々に行うことができる。あるいは、上記（Ｄ４）〜（Ｄ６）の工程の少なくとも一部は、反応性基、切断性部分、機能性物質および生体直交性官能基との組合せ等の因子に応じて、同時に行うことができる。すなわち、上記（Ｄ４）〜（Ｄ６）の工程のうち２以上の工程が同時に行われる場合、先の工程で得られる生成物を単離することなく、先の工程で得られる生成物含有反応液が、次の工程に付されてもよい。
【０３６８】
（Ｅ）生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を原料として使用する方法は、以下を含む：
（Ｅ１）生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を機能性物質と反応させて、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成すること。
【０３６９】
生体直交性官能基を有する抗体は、式（ＩＶ）、好ましくは式（ＩＶ’）で表される。機能性物質を有する抗体は、式（Ｖ）、好ましくは式（Ｖ１）、（Ｖ２）、または（Ｖ３）、より好ましくは式（Ｖ１’）、（Ｖ２’）、または（Ｖ３’）で表される。
【０３７０】
生体直交性官能基を有する抗体はまたはその塩は、生体直交性官能基を有するため、機能性物質と反応することができる。このような反応は、上記「３−７．製造方法」で述べたような様式において行うことができる。
【０３７１】
機能性物質を有する抗体またはその塩の生成の確認は、上述したような方法により行うことができる。位置選択性の確認、抗体以外の部分構造の個数の確認、および精製は、上記「２−６．製造方法」で述べた方法により適宜行うことができる。
【０３７２】
本発明はまた、以下を含む、機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する：
（Ｅ２）抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩の切断性部分を切断して、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること；および
（Ｅ３）生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を機能性物質と反応させて、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成すること。
【０３７３】
上記（Ｅ２）の工程は、上記「４−６．製造方法」で述べた上記（Ｃ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｅ３）の工程は、上記（Ｅ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｅ２）および（Ｅ３）の工程は、別々に行うことができる。あるいは、上記（Ｅ２）および（Ｅ３）の工程は、切断性部分、機能性物質および生体直交性官能基との組合せ等の因子に応じて、同時に行うことができる。すなわち、上記（Ｅ２）および（Ｅ３）の工程が同時に行われる場合、上記（Ｅ２）の工程で得られる生成物を単離することなく、上記（Ｅ２）の工程で得られる生成物含有反応液が、上記（Ｅ３）の工程に付されてもよい。
【０３７４】
本発明はさらに、以下を含む、機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する：
（Ｅ４）抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を含む化合物またはその塩を抗体と反応させて、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩を生成すること；
（Ｅ５）抗体に対する親和性物質、および切断性部分を含む抗体またはその塩の切断性部分を切断して、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること；および
（Ｅ６）生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を機能性物質と反応させて、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成すること。
【０３７５】
上記（Ｅ４）の工程は、上記「２−６．製造方法」で述べた上記（Ａ１）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｅ５）および（Ｅ６）の工程は、上記（Ｅ２）および（Ｅ３）の工程と同様にして行うことができる。上記（Ｅ４）〜（Ｅ６）の工程は、別々に行うことができる。あるいは、上記（Ｅ４）〜（Ｅ６）の工程の少なくとも一部は、反応性基、切断性部分、機能性物質および生体直交性官能基との組合せ等の因子に応じて、同時に行うことができる。すなわち、上記（Ｅ４）〜（Ｅ６）の工程のうち２以上の工程が同時に行われる場合、先の工程で得られる生成物を単離することなく、先の工程で得られる生成物含有反応液が、次の工程に付されてもよい。
【０３７６】
６．塩
本発明において、塩としては、例えば、無機酸との塩、有機酸との塩、無機塩基との塩、有機塩基との塩、およびアミノ酸との塩が挙げられる。無機酸との塩としては、例えば、塩化水素、臭化水素、リン酸、硫酸、硝酸との塩が挙げられる。有機酸との塩としては、例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、酒石酸、フマル酸、シュウ酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸との塩が挙げられる。無機塩基との塩としては、例えば、アルカリ金属（例、ナトリウム、カリウム）、アルカリ土類金属（例、カルシウム、マグネシウム）、および亜鉛、アルミニウム等の他の金属、ならびにアンモニウムとの塩が挙げられる。有機塩基との塩としては、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、プロピレンジアミン、エチレンジアミン、ピリジン、エタノールアミン、モノアルキルエタノールアミン、ジアルキルエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミンとの塩が挙げられる。アミノ酸との塩としては、例えば、塩基性アミノ酸（例、アルギニン、ヒスチジン、リジン、オルニチン）、および酸性アミノ酸（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）との塩が挙げられる。塩は、好ましくは、無機酸（例、塩化水素）との塩、または有機酸（例、トリフルオロ酢酸）との塩である。
【０３７７】
７．用途
抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する本発明の化合物またはその塩は、例えば、抗体の位置選択的な修飾に有用である。したがって、本発明は、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩を含む、抗体の位置選択的修飾試薬を提供する。
【０３７８】
本発明の位置選択的修飾試薬は、他の成分をさらに含む組成物の形態で提供されてもよい。このような他の成分としては、例えば、溶液、安定化剤（例、酸化防止剤、保存剤）が挙げられる。溶液としては、水溶液が好ましい。水溶液としては、例えば、水（例、蒸留水、滅菌蒸留水、精製水、生理食塩水）、緩衝液（例、リン酸水溶液、Ｔｒｉｓ−塩酸緩衝液、炭酸−重炭酸緩衝液、ホウ酸水溶液、グリシン−水酸化ナトリウム緩衝液、クエン酸緩衝液）が挙げられるが、緩衝液が好ましい。溶液のｐＨは、例えば５．０〜９．０、好ましくは５．５〜８．５である。本発明の位置選択的修飾試薬は、液状または粉末状（例、凍結乾燥粉末）において提供することができる。
【０３７９】
抗体に対する親和性物質、および切断性部分を（位置選択的に）有する本発明の抗体またはその塩、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を（位置選択的に）有する本発明の複合体またはその塩、ならびに生体直交性官能基を（位置選択的に）有する本発明の抗体またはその塩は、例えば、機能性物質を（位置選択的に）有する抗体またはその塩の調製のための中間体として有用である。
【０３８０】
機能性物質を（位置選択的に）有する本発明の抗体またはその塩は、例えば、医薬、または試薬（例、診断薬、研究用試薬）として有用である。
【０３８１】
特に、機能性物質を（位置選択的に）有する本発明の抗体またはその塩は、医薬として有用である。抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の薬物の結合数および結合位置を変化させると、体内動態や薬物の放出速度、効果が変化することが上記のとおり報告されている。これらのことから次世代型ＡＤＣではコンジュゲーションする薬物の個数と位置を制御することが求められている。個数および位置が一定であると、期待通りのｅｆｆｉｃａｃｙ、コンジュゲーション薬剤のバリエーション、ロット差いわゆるレギュレーションの問題が解決すると考えられている。機能性物質を有する本発明の抗体またはその塩は、このようなレギュレーションの問題を解決することができる。したがって、機能性物質を有する本発明の抗体またはその塩は、医薬組成物の形態において提供されてもよい。このような医薬組成物は、機能性物質を有する抗体またはその塩に加えて、医薬上許容され得る担体を含んでいてもよい。医薬上許容され得る担体としては、例えば、ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸、メントール、グリシルリシン・アンモニウム塩、グリシン、オレンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩水、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワックスなどが挙げられるが、それらに限定されるものではない。機能性物質を有する本発明の抗体またはその塩はまた、安定性を実現する任意の修飾（例、ＰＥＧ化）を有していてもよい。
【０３８２】
経口投与に好適な製剤は、水、生理食塩水、オレンジジュースのような希釈液に有効量のリガンドを溶解させた液剤、有効量のリガンドを固体や顆粒として含んでいるカプセル剤、サッシェ剤または錠剤、適当な分散媒中に有効量の有効成分を懸濁させた懸濁液剤、有効量の有効成分を溶解させた溶液を適当な分散媒中に分散させ乳化させた乳剤等である。
【０３８３】
医薬組成物は、非経口的な投与（例、静脈内注射、皮下注射、筋肉注射、局所注入、腹腔内投与）に好適である。このような非経口的な投与に好適な医薬組成物としては、水性および非水性の等張な無菌の注射液剤があり、これには抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、等張化剤等が含まれていてもよい。また、水性および非水性の無菌の懸濁液剤が挙げられ、これには懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、防腐剤等が含まれていてもよい。
【０３８４】
医薬組成物の投与量は、有効成分の種類・活性、病気の重篤度、投与対象となる動物種、投与対象の薬物受容性、体重、年齢等によって異なるが、適宜設定することができる。
【実施例】
【０３８５】
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【０３８６】
（実施例１）改変プロテインＡの設計およびＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍにおけるその分泌発現
（１−１）改変プロテインＡの設計の概要
本発明では、タンパク質にリンカーを結合させる必要がある。すなわち、タンパク質中の特定のアミノ酸残基へのリンカーの特異的な結合を達成するためには、リンカーと反応しうるアミノ基がタンパク質中に一つのみ存在するように設計する必要がある。このことを念頭に以下の変異を施した。
Ａ）タンパク質中のＫ（リジン）を全てＲ（アルギニン）に変異
Ｂ）Ｎ末のアミノ酸をＱ（グルタミン）とすることで、ピログルタミル化させＮ末アミノ基をアミドに変換
上記、Ａ）およびＢ）のルールに従い以下のように実際の改変プロテインＡを設計した。【０３８７】
（１−２）改変プロテインＡの調製
以下の改変プロテインＡを調製した。
（ａ）ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ
ＱＥＴＮＰＴＥＮＬＹＦＱＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号７）
（ｂ）ＱＺ３４Ｃ−６０
ＱＴＡＤＮＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＱＱＬＮＤＡＱＡＰＱＡ（配列番号８）
（ｃ）ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１
ＱＥＴＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号９）
（ｄ）ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２
ＱＥＴＦＮＫＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１０）
（ｅ）ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３
ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号２２）
（ｆ）ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４
ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号２３）【０３８８】
（１−３）改変プロテインＡの発現
Ｃｏｒｙｎｅｘ（登録商標）を用いてこれらの改変プロテインＡの発現検討を行った。Ｃｏｒｙｎｅｘ（登録商標）による発現では、ＣｓｐＢ融合法（ＷＯ２０１３／０６２０２９）、即ち、シグナルペプチドをコードする塩基配列と目的タンパク質をコードする塩基配列との間に、ＣｓｐＢ成熟タンパク質のＮ末端３残基Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ（ＱＥＴ）を含むアミノ酸配列をコードする塩基配列を挿入することで、目的タンパク質の分泌生産量を向上できるという技術を活用した。またＣｓｐＢタグのＮ末端がＱであるため、シグナル配列切断後、１残基目のＱがピログルタミル化してＮ末端アミノ基を保護することができるという利点がある。特に、ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１、およびＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２についてはこれらの知見を活用し、付加配列を最小限に抑えながら改変プロテインＡの高分泌発現に成功した。即ち、上記Ａ）およびＢ）のルールに加え、下記Ｃ）のルールを考慮することが、Ｃｏｒｙｎｅｘ（登録商標）を用いた親和性タンパク質の発現において有効である。
Ｃ）Ｎ末端にＱＥＴの３残基を付加し、Ｃｏｒｙｎｅｘ（登録商標）での分泌効率向上
以下、Ｃｏｒｙｎｅｘ（登録商標）による発現検討の実施例を記載する。【０３８９】
（１−４）ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ、ＱＺ３４Ｃ−６０、ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１、およびＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２の各分泌発現プラスミドの構築
改変プロテインＡ（改変Ｚ３４Ｃ）として、上記ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ、ＱＺ３４Ｃ−６０、ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１、およびＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２の４種類のアミノ酸配列をそれぞれ設計し、これらタンパク質をコードする塩基配列をＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍのコドン使用頻度を考慮して設計した。さらに、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍによる分泌発現を可能とするよう、それぞれ以下の発現カセットを設計した。【０３９０】
ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃは、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ１３８６９株由来のＣｓｐＢのシグナルペプチド３０アミノ酸残基、同株由来のＣｓｐＢ成熟タンパク質のＮ末端６アミノ酸残基ＱＥＴＮＰＴ（配列番号１１）、ｐｒｏＴｅｖプロテアーゼの認識配列ＥＮＬＹＦＱ（配列番号１２）、およびＱＺ３４Ｃの融合タンパク質（以下、「ＣｓｐＢｓｓ−ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ」と表記する）である。設計したＣｓｐＢｓｓ−ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃをコードする塩基配列およびアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号１３、１４に示す。ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃは、分泌発現後にｐｒｏＴｅｖプロテアーゼで切断することでＣｓｐＢ６Ｔｅｖ配列ＱＥＴＮＰＴＥＮＬＹＦＱ（配列番号１５）が除去されるため、ＱＺ３４Ｃのタンパク質を得ることが可能である。【０３９１】
ＣｓｐＢｓｓ−ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃをコードする塩基配列
ａｔｇｔｔｔａａｃａａｃｃｇｔａｔｃｃｇｃａｃｔｇｃａｇｃｔｃｔｃｇｃｔｇｇｔｇｃａａｔｃｇｃａａｔｃｔｃｃａｃｃｇｃａｇｃｔｔｃｃｇｇｃｇｔａｇｃｔａｔｃｃｃａｇｃａｔｔｃｇｃｔｃａｇｇａｇａｃｃａａｃｃｃａａｃｃｇａｇａａｃｃｔｇｔａｃｔｔｃｃａｇｃａｇａａｇａａｃａｔｇｃａｇｔｇｔｃａｇｃｇｔｃｇｃｔｔｃｔａｃｇａｇｇｃｃｃｔｃｃａｃｇａｃｃｃｔａａｃｃｔｃａａｃｇａｇｇａａｃａｇｃｇｔａａｃｇｃｇｃｇｔａｔｔｃｇｃｔｃｃａｔｃｃｇｃｇａｔｇａｃｔｇｃｔａａ（配列番号１３）【０３９２】
ＣｓｐＢｓｓ−ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃのアミノ酸配列
ＭＦＮＮＲＩＲＴＡＡＬＡＧＡＩＡＩＳＴＡＡＳＧＶＡＩＰＡＦＡＱＥＴＮＰＴＥＮＬＹＦＱＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１４）【０３９３】
ＱＺ３４Ｃ−６０は、Ｃ．ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ  ＡＴＣＣ６８７２株由来のＣｓｐＡのシグナルペプチド２５アミノ酸残基とＱＺ３４Ｃ−６０の融合タンパク質（以下、「ＣｓｐＡｓｓ−ＱＺ３４Ｃ−６０」と表記する）である。設計したＣｓｐＡｓｓ−ＱＺ３４Ｃ−６０をコードする塩基配列およびアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号１６、１７に示す。【０３９４】
ＣｓｐＡｓｓ−ＱＺ３４Ｃ−６０をコードする塩基配列
ａｔｇａａａｃｇｃａｔｇａａａｔｃｇｃｔｇｇｃｔｇｃｇｇｃｇｃｔｃａｃｃｇｔｃｇｃｔｇｇｇｇｃｃａｔｇｃｔｇｇｃｃｇｃａｃｃｔｇｔｇｇｃａａｃｇｇｃａｃａｇａｃｃｇｃａｇａｃａａｃｃａｇａａｇａａｃａｔｇｃａｇｔｇｔｃａｇｃｇｔｃｇｃｔｔｃｔａｃｇａｇｇｃｃｃｔｃｃａｃｇａｃｃｃｔａａｃｃｔｃａａｃｇａｇｇａａｃａｇｃｇｔａａｃｇｃｇｃｇｔａｔｔｃｇｃｔｃｃａｔｃｃｇｃｇａｔｇａｃｔｇｃｔｃｃｃａｇｔｃｃｇｃａａａｃｃｔｃｃｔｃｇｃａｇａｇｇｃａｃａｇｃａｇｃｔｃａａｃｇａｃｇｃａｃａｇｇｃａｃｃａｃａｇｇｃａｔａａ（配列番号１６）【０３９５】
ＣｓｐＡｓｓ−ＱＺ３４Ｃ−６０のアミノ酸配列
ＭＫＲＭＫＳＬＡＡＡＬＴＶＡＧＡＭＬＡＡＰＶＡＴＡＱＴＡＤＮＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＱＱＬＮＤＡＱＡＰＱＡ（配列番号１７）【０３９６】
ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１は、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ１３８６９株由来のＣｓｐＢのシグナルペプチド３０アミノ酸残基、同株由来のＣｓｐＢ成熟タンパク質のＮ末端３アミノ酸残基ＱＥＴ、およびＺ３４Ｃ１の融合タンパク質（以下、「ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１」と表記する）である。設計したＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１をコードする塩基配列およびアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号１８、１９に示す。【０３９７】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１をコードする塩基配列
ａｔｇｔｔｔａａｃａａｃｃｇｔａｔｃｃｇｃａｃｔｇｃａｇｃｔｃｔｃｇｃｔｇｇｔｇｃａａｔｃｇｃａａｔｃｔｃｃａｃｃｇｃａｇｃｔｔｃｃｇｇｃｇｔａｇｃｔａｔｃｃｃａｇｃａｔｔｃｇｃｔｃａｇｇａｇａｃｃａａｇａａｃａｔｇｃａｇｔｇｔｃａｇｃｇｔｃｇｃｔｔｃｔａｃｇａｇｇｃｃｃｔｃｃａｃｇａｃｃｃｔａａｃｃｔｃａａｃｇａｇｇａａｃａｇｃｇｔａａｃｇｃｇｃｇｔａｔｔｃｇｃｔｃｃａｔｃｃｇｃｇａｔｇａｃｔｇｃｔａａ（配列番号１８）【０３９８】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１のアミノ酸配列
ＭＦＮＮＲＩＲＴＡＡＬＡＧＡＩＡＩＳＴＡＡＳＧＶＡＩＰＡＦＡＱＥＴＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１９）【０３９９】
ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２は、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ１３８６９株由来のＣｓｐＢのシグナルペプチド３０アミノ酸残基、同株由来のＣｓｐＢ成熟タンパク質のＮ末端３アミノ酸残基ＱＥＴ、およびＺ３４Ｃ２の融合タンパク質（以下、「ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２」と表記する）と、その融合タンパク質をコードする塩基配列を設計した。設計したＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２をコードする塩基配列およびアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号２０、２１に示す。【０４００】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２をコードする塩基配列
ａｔｇｔｔｔａａｃａａｃｃｇｔａｔｃｃｇｃａｃｔｇｃａｇｃｔｃｔｃｇｃｔｇｇｔｇｃａａｔｃｇｃａａｔｃｔｃｃａｃｃｇｃａｇｃｔｔｃｃｇｇｃｇｔａｇｃｔａｔｃｃｃａｇｃａｔｔｃｇｃｔｃａｇｇａｇａｃｃｔｔｃａａｃａａｇｃａｇｔｇｔｃａｇｃｇｔｃｇｃｔｔｃｔａｃｇａｇｇｃｃｃｔｃｃａｃｇａｃｃｃｔａａｃｃｔｃａａｃｇａｇｇａａｃａｇｃｇｔａａｃｇｃｇｃｇｔａｔｔｃｇｃｔｃｃａｔｃｃｇｃｇａｔｇａｃｔｇｃｔａａ（配列番号２０）【０４０１】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２のアミノ酸配列
ＭＦＮＮＲＩＲＴＡＡＬＡＧＡＩＡＩＳＴＡＡＳＧＶＡＩＰＡＦＡＱＥＴＦＮＫＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号２１）【０４０２】
ＣｓｐＢｓｓ−ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ、ＣｓｐＡｓｓ−ＱＺ３４Ｃ−６０、ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１、およびＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２に記載の塩基配列の上流にＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ１３８６９株由来のｃｓｐＢ遺伝子のプロモーターを繋げ、さらに５’−側にＫｐｎＩサイト、３’−側にＢａｍＨＩサイトを付加した、プロテインＡ改変体４種類の発現カセットを設計し、全合成した。全合成したＤＮＡ断片（改変プロテインＡの発現カセット）を、特開平９−３２２７７４に記載のｐＰＫ４のＫｐｎＩ−ＢａｍＨＩ部位に挿入することによって、改変プロテインＡの分泌発現プラスミドであるｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ、ｐＰＫ４＿ＣｓｐＡｓｓ−ＱＺ３４Ｃ−６０、ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１、およびｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２をそれぞれ構築した。挿入断片の塩基配列決定の結果、それぞれ設計通りの改変プロテインＡの発現カセットが構築されていることを確認した。塩基配列の決定はＢｉｇＤｙｅ（Ｒ）  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ  ｖ３．１  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と３１３０  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行った。【０４０３】
（１−５）Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍにおける各改変プロテインＡの分泌発現
上記で構築したｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ、ｐＰＫ４＿ＣｓｐＡｓｓ−ＱＺ３４Ｃ−６０、ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１、およびｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２を用いて、ＷＯ２０１６／１７１２２４に記載のＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）株を形質転換し、ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ株、ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＡｓｓ−ＱＺ３４Ｃ−６０株、ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１株、およびＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２株を得た。Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）株は、ＷＯ２００２／０８１６９４に記載のＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＹＤＫ０１０の野生型ｐｈｏＳ遺伝子を変異型ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）遺伝子に置換して得られた株である。変異型ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）遺伝子は、３０２位のトリプトファン残基がシステイン残基に置換されたＰｈｏＳタンパク質（Ｗ３０２Ｃ）をコードする。ＹＤＫ０１０株は、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＪ１２０３６株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７３４）の細胞表層タンパク質ＰＳ２（ＣｓｐＢ）の欠損株である。ＡＪ１２０３６株は、１９８４年３月２６日に工業技術院  微生物工業技術研究所（現、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許生物寄託センター、郵便番号：２９２−０８１８、住所：日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２０号室）に国際寄託として原寄託され、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７３４が付与されている。【０４０４】
得られた各形質転換体を、２５ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＭＭＴＧ液体培地（グルコース  １２０ｇ、硫酸マグネシウム七水和物  ３ｇ、硫酸アンモニウム  ３０ｇ、リン酸二水素カリウム  １．５ｇ、硫酸鉄七水和物  ０．０３ｇ、硫酸マンガン五水和物  ０．０３ｇ、チアミン塩酸塩  ０．４５ｍｇ、ビオチン  ０．４５ｍｇ、ＤＬ−メチオニン  ０．１５ｇ、大豆塩酸加水分解液（全窒素量  ０．２ｇ）、炭酸カルシウム  ５０ｇ、水で１ＬにしてｐＨ７．０に調整）でそれぞれ３０℃、７２時間培養した。【０４０５】
培養終了後、各培養液を遠心分離して得られた培養上清６．５μＬを還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥに供してからＱｕｉｃｋ−ＣＢＢ（Ｗａｋｏ）にて染色を行った。その結果、ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ株の培養上清中にＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃと推定されるタンパク質バンド（図５、Ｌａｎｅ  ２）、ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＡｓｓ−ＱＺ３４Ｃ−６０株の培養上清中にＱＺ３４Ｃ−６０と推定されるタンパク質バンド（図５、Ｌａｎｅ  ３）、ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１株の培養上清中にＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１と推定されるタンパク質バンド（図５、Ｌａｎｅ  ４）、およびＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２株の培養上清中にＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２と推定されるタンパク質バンドがそれぞれ検出された（図５、Ｌａｎｅ  ５）。【０４０６】
（１−６）ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３およびＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４の各分泌発現プラスミドの構築
改変プロテインＡ（改変Ｚ３４Ｃ）として、上記ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３およびＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４の２種類のアミノ酸配列をそれぞれ設計し、これらタンパク質をコードする塩基配列をＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍのコドン使用頻度を考慮して設計した。さらに、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍによる分泌発現を可能とするよう、それぞれ以下の発現カセットを設計した。【０４０７】
ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３は、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ１３８６９株由来のＣｓｐＢのシグナルペプチド３０アミノ酸残基、同株由来のＣｓｐＢ成熟タンパク質のＮ末端３アミノ酸残基ＱＥＴ、およびＺ３４Ｃ３の融合タンパク質（以下、「ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３」と表記する）である。設計したＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３をコードする塩基配列およびアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号５５、５６に示す。【０４０８】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３をコードする塩基配列
ａｔｇｔｔｔａａｃａａｃｃｇｔａｔｃｃｇｃａｃｔｇｃａｇｃｔｃｔｃｇｃｔｇｇｔｇｃａａｔｃｇｃａａｔｃｔｃｃａｃｃｇｃａｇｃｔｔｃｃｇｇｃｇｔａｇｃｔａｔｃｃｃａｇｃａｔｔｃｇｃｔｃａｇｇａｇａｃｃｔｔｃａａｃａｔｇｃａｇｔｇｔｃａｇｃｇｔｃｇｃｔｔｃｔａｃｇａｇｇｃｃｃｔｃｃａｃｇａｃｃｃｔａａｃｃｔｃａａｃａａｇｇａａｃａｇｃｇｔａａｃｇｃｇｃｇｔａｔｔｃｇｃｔｃｃａｔｃｃｇｃｇａｔｇａｃｔｇｃｔａａ（配列番号５５）【０４０９】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３のアミノ酸配列
ＭＦＮＮＲＩＲＴＡＡＬＡＧＡＩＡＩＳＴＡＡＳＧＶＡＩＰＡＦＡＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号５６）【０４１０】
ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４は、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ１３８６９株由来のＣｓｐＢのシグナルペプチド３０アミノ酸残基、同株由来のＣｓｐＢ成熟タンパク質のＮ末端３アミノ酸残基ＱＥＴ、およびＺ３４Ｃ４の融合タンパク質（以下、「ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４」と表記する）である。設計したＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４をコードする塩基配列およびアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号５７、５８に示す。【０４１１】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４をコードする塩基配列
ａｔｇｔｔｔａａｃａａｃｃｇｔａｔｃｃｇｃａｃｔｇｃａｇｃｔｃｔｃｇｃｔｇｇｔｇｃａａｔｃｇｃａａｔｃｔｃｃａｃｃｇｃａｇｃｔｔｃｃｇｇｃｇｔａｇｃｔａｔｃｃｃａｇｃａｔｔｃｇｃｔｃａｇｇａｇａｃｃｔｔｃａａｃａｔｇｃａｇｔｇｔｃａｇｃｇｔｃｇｃｔｔｃｔａｃｇａｇｇｃｃｃｔｃｃａｃｇａｃｃｃｔａａｃｃｔｃａａｃｇａｇｇａａｃａｇｃｇｔａａｃｇｃｇｃｇｔａｔｔｃｇｃｔｃｃａｔｃａａｇｇａｔｇａｃｔｇｃｔａａ（配列番号５７）【０４１２】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４のアミノ酸配列
ＭＦＮＮＲＩＲＴＡＡＬＡＧＡＩＡＩＳＴＡＡＳＧＶＡＩＰＡＦＡＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５８）【０４１３】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３およびＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４に記載の塩基配列の上流にＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ１３８６９株由来のｃｓｐＢ遺伝子のプロモーターを繋げ、さらに５’−側にＫｐｎＩサイト、３’−側にＢａｍＨＩサイトを付加した、プロテインＡ改変体の発現カセットを設計し、全合成した。全合成したＤＮＡ断片（改変プロテインＡの発現カセット）を、特開平９−３２２７７４に記載のｐＰＫ４のＫｐｎＩ−ＢａｍＨＩ部位に挿入することによって、改変プロテインＡの分泌発現プラスミドであるｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３およびｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４をそれぞれ構築した。挿入断片の塩基配列決定の結果、それぞれ設計通りの改変プロテインＡの発現カセットが構築されていることを確認した。塩基配列の決定はＢｉｇＤｙｅ（Ｒ）  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ  ｖ３．１  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と３１３０  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行った。【０４１４】
（１−７）Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍにおける各改変プロテインＡの分泌発現
上記で構築したｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３およびｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４を用いて、ＷＯ２０１６／１７１２２４に記載のＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）株を形質転換し、ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３株およびＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４株を得た。【０４１５】
得られた各形質転換体を、２５ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＭＭＴＧ液体培地でそれぞれ３０℃、７２時間培養した。【０４１６】
培養終了後、各培養液を遠心分離して得られた培養上清６．５μＬを還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥに供してからＱｕｉｃｋ−ＣＢＢ（Ｗａｋｏ）にて染色を行った。その結果、ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３株の培養上清中にＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ３と推定されるタンパク質バンド（図２４、Ｌａｎｅ  ２）、およびＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４株の培養上清中にＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４と推定されるタンパク質バンドがそれぞれ検出された（図２４、Ｌａｎｅ  ３）。【０４１７】
（実施例２）改変Ｆｃ−ＩＩＩの設計およびＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍにおけるその分泌発現
（２−１）改変Ｆｃ−ＩＩＩの設計の概要
ヒトＩｇＧへの結合能を有するペプチドとして、ＤＣＡＷＨＬＧＥＬＶＷＣＴ（配列番号５４）のアミノ酸配列からなるＦｃ−ＩＩＩが報告されている（ＷＯ２００１／０４５７４６）。実施例（１−１）に記載のルールＡ）およびＢ）、さらに実施例（１−３）に記載のルールＣ）に従いＦｃ−ＩＩＩを改変して、下記改変Ｆｃ−ＩＩＩを設計した。【０４１８】
（２−２）改変Ｆｃ−ＩＩＩの調製
以下の改変Ｆｃ−ＩＩＩを調製した。
（ｇ）ＱＥＴ−ＬＶ
ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号２４）
（ｈ）ＱＥＴ−ＩＩ
ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号２５）【０４１９】
（２−３）ＱＥＴ−ＬＶおよびＱＥＴ−ＩＩの各分泌発現プラスミドの構築
改変Ｆｃ−ＩＩＩとして、上記ＱＥＴ−ＬＶおよびＱＥＴ−ＩＩの２種類のアミノ酸配列をそれぞれ設計し、これらタンパク質をコードする塩基配列をＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍのコドン使用頻度を考慮して設計した。さらに、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍによる分泌発現を可能とするよう、それぞれ以下の発現カセットを設計した。【０４２０】
ＱＥＴ−ＬＶは、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ１３８６９株由来のＣｓｐＢのシグナルペプチド３０アミノ酸残基、同株由来のＣｓｐＢ成熟タンパク質のＮ末端３アミノ酸残基ＱＥＴ、およびＬＶの融合タンパク質（以下、「ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＬＶ」と表記する）である。設計したＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＬＶをコードする塩基配列およびアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号５９、６０に示す。【０４２１】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＬＶをコードする塩基配列
ａｔｇｔｔｔａａｃａａｃｃｇｔａｔｃｃｇｃａｃｔｇｃａｇｃｔｃｔｃｇｃｔｇｇｔｇｃａａｔｃｇｃａａｔｃｔｃｃａｃｃｇｃａｇｃｔｔｃｃｇｇｃｇｔａｇｃｔａｔｃｃｃａｇｃａｔｔｃｇｃｔｃａｇｇａｇａｃｃｃｇｃｇｇｃａａｃｔｇｃｇｃａｔａｃｃａｃａａｇｇｇｃｃａｇｃｔｇｇｔｇｔｇｇｔｇｃａｃｃｔａｃｃａｃｔａａ（配列番号５９）【０４２２】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＬＶのアミノ酸配列
ＭＦＮＮＲＩＲＴＡＡＬＡＧＡＩＡＩＳＴＡＡＳＧＶＡＩＰＡＦＡＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号６０）【０４２３】
ＱＥＴ−ＩＩは、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ１３８６９株由来のＣｓｐＢのシグナルペプチド３０アミノ酸残基、同株由来のＣｓｐＢ成熟タンパク質のＮ末端３アミノ酸残基ＱＥＴ、およびＩＩの融合タンパク質（以下、「ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＩＩ」と表記する）である。設計したＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＩＩをコードする塩基配列およびアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号６１、６２に示す。【０４２４】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＩＩをコードする塩基配列
ａｔｇｔｔｔａａｃａａｃｃｇｔａｔｃｃｇｃａｃｔｇｃａｇｃｔｃｔｃｇｃｔｇｇｔｇｃａａｔｃｇｃａａｔｃｔｃｃａｃｃｇｃａｇｃｔｔｃｃｇｇｃｇｔａｇｃｔａｔｃｃｃａｇｃａｔｔｃｇｃｔｃａｇｇａｇａｃｃｃｇｃｇｇｃａａｃｔｇｃｇｃａｔａｃｃａｃａａｇｇｇｃｃａｇａｔｃａｔｃｔｇｇｔｇｃａｃｃｔａｃｃａｃｔａａ（配列番号６１）【０４２５】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＩＩのアミノ酸配列
ＭＦＮＮＲＩＲＴＡＡＬＡＧＡＩＡＩＳＴＡＡＳＧＶＡＩＰＡＦＡＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号６２）【０４２６】
ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＬＶおよびＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＩＩに記載の塩基配列の上流にＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ１３８６９株由来のｃｓｐＢ遺伝子のプロモーターを繋げ、さらに５’−側にＫｐｎＩサイト、３’−側にＢａｍＨＩサイトを付加した、改変Ｆｃ−ＩＩＩの発現カセットを設計し、全合成した。全合成したＤＮＡ断片（改変Ｆｃ−ＩＩＩの発現カセット）を、特開平９−３２２７７４に記載のｐＰＫ４のＫｐｎＩ−ＢａｍＨＩ部位に挿入することによって、改変Ｆｃ−ＩＩＩの分泌発現プラスミドであるｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＬＶおよびｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＩＩをそれぞれ構築した。挿入断片の塩基配列決定の結果、それぞれ設計通りの改変Ｆｃ−ＩＩＩの発現カセットが構築されていることを確認した。塩基配列の決定はＢｉｇＤｙｅ（Ｒ）  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ  ｖ３．１  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と３１３０  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行った。【０４２７】
（２−４）Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍにおける各改変Ｆｃ−ＩＩＩの分泌発現
上記で構築したｐＰＫ４  ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＬＶおよびｐＰＫ４  ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＩＩを用いて、ＷＯ２０１６／１７１２２４に記載のＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）株を形質転換し、ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４  ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＬＶ株およびＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４  ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＩＩ株を得た。【０４２８】
得られた各形質転換体を、２５ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＭＭＴＧ液体培地でそれぞれ３０℃、７２時間培養した。【０４２９】
培養終了後、各培養液を遠心分離して得られた培養上清、あるいは遠心分離せずに菌体と培養上清を均一に含む培養液、それぞれ６．５μＬを還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥに供してからＱｕｉｃｋ−ＣＢＢ（Ｗａｋｏ）にて染色を行った。その結果、ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４  ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＬＶ株の培養上清中にＱＥＴ−ＬＶと推定されるペプチドのバンドが検出され（図２５、Ｌａｎｅｓ  ２−３）、また菌体を含む培養液サンプルにおいても同様にＱＥＴ−ＬＶと推定されるペプチドのバンドが検出された（図２５、Ｌａｎｅｓ  ７−８）。【０４３０】
ＹＤＫ０１０：：ｐｈｏＳ（Ｗ３０２Ｃ）／ｐＰＫ４＿ＣｓｐＢｓｓ−ＱＥＴ−ＩＩ株の培養上清中にはＱＥＴ−ＩＩと推定されるペプチドのバンドはほとんど検出されず（図２５、Ｌａｎｅｓ  ４−５）、一方で菌体を含む培養液サンプルにおいてはＱＥＴ−ＩＩと推定されるペプチドのバンドが検出された（図２５、Ｌａｎｅｓ  ９−１０）。【０４３１】
以上の結果から、ＱＥＴ−ＬＶは分泌後に主に培養上清中に溶解して存在しており、一方でＱＥＴ−ＩＩは分泌後、培養上清中に凝集して存在、あるいは培養菌体の細胞表層中に吸着して存在していると考えられた。【０４３２】
（実施例３）抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物の調製
培養液中の夾雑成分を取り除くため、発現したタンパク質は、一度逆相分取ＨＰＬＣにより精製した。精製したタンパク質に、ジスルフィドリンカーを結合させた。具体的には、以下のとおり行った。【０４３３】
（３−１）抗体に対する親和性物質（ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ）、切断性部分および反応性基を有する化合物の調製
抗体に対する親和性物質として、ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃを利用した。ＱＥＴＮＰＴＥＮＬＹＦＱＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号７）（１３．０ｍｇ，２．２４μｍｏｌ、ただし１８番目と４７番目の２つのシステインは、それぞれ分子内でジスルフィド結合を形成している）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４０ｍＬ）に溶解し、３，３’−ジチオジプロピオン酸ジ（Ｎ−スクシンイミジル）（１８．０ｍｇ，４４．８μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４０ｍＬ）に溶解した溶液を加え、室温で２４時間攪拌した。減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、これを０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸を０．０５％含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、上記発現タンパク質ジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体（０．５０ｍｇ，０．０８μｍｏｌ）を得た。【０４３４】
（３−２）抗体に対する親和性物質（ＱＺ３４Ｃ−６０）、切断性部分および反応性基を有する化合物の調製
抗体に対する親和性物質として、ＱＺ３４Ｃ−６０を利用した。ＱＴＡＤＮＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＱＱＬＮＤＡＱＡＰＱＡ（配列番号８）（１５．８ｍｇ，２．１６μｍｏｌ、ただし１１番目と４０番目の２つのシステインは、それぞれ分子内でジスルフィド結合を形成している）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４０ｍＬ）に溶解し、３，３’−ジチオジプロピオン酸ジ（Ｎ−スクシンイミジル）（１７．５ｍｇ，４３．２μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４０ｍＬ）に溶解した溶液を加え、室温で２４時間攪拌した。これを０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸を０．０５％含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、上記発現タンパク質ジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体（５．２０ｍｇ，０．７１μｍｏｌ）を得た。【０４３５】
（３−３）抗体に対する親和性物質（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１）、切断性部分および反応性基を有する化合物の調製
抗体に対する親和性物質として、ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１を利用した。ＱＥＴＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号９）（６．７０ｍｇ，１．４６μｍｏｌ、ただし８番目と３７番目の２つのシステインは、それぞれ分子内でジスルフィド結合を形成している）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４０ｍＬ）に溶解し、３，３’−ジチオジプロピオン酸ジ（Ｎ−スクシンイミジル）（１１．８ｍｇ，２９．２μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２０ｍＬ）に溶解した溶液を加え、室温で２４時間攪拌した。減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、これを０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸を０．０５％含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、上記発現タンパク質ジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体（１．００ｍｇ，０．２１μｍｏｌ）を得た。【０４３６】
（３−４）抗体に対する親和性物質（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２）、切断性部分および反応性基を有する化合物の調製
抗体に対する親和性物質として、ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２を利用した。ＱＥＴＦＮＫＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１０）（９．５０ｍｇ，２．０７μｍｏｌ、ただし８番目と３７番目の２つのシステインは、それぞれ分子内でジスルフィド結合を形成している）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２０ｍＬ）に溶解し、３，３’−ジチオジプロピオン酸ジ（Ｎ−スクシンイミジル）（３３．０ｍｇ，８２．８μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４０ｍＬ）に溶解した溶液を加え、室温で２４時間攪拌した。これを０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸を０．０５％含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、上記発現タンパク質ジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体（０．９０ｍｇ，０．１８μｍｏｌ）を得た。【０４３７】
（実施例４）抗体に対する親和性物質（ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ）、および切断性部分を有する抗体の調製
抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブを、上記（３−１）で調製した化合物とのコンジュゲーション反応により特異的に修飾して、抗体に対する親和性物質（ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ）、および切断性部分を有する抗体を調製した。次いで、調製された抗体を解析した。【０４３８】
（４−１）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾とＥＳＩ−ＴＯＦＭＳによる解析
上記（３−１）において合成したペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体を、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドに溶解し２１．６ｍＭとした。抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）５００μｇを５０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ  ５．５）１７１μＬに溶解させ、４ｍＭのペプチド試薬を８．５μＬ（抗体に対して１０等量）加えて、室温で１時間攪拌した。反応液を１００ｍＭクエン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ  ２．９）に置換して反応を停止させ、さらに２０ｍＭＰＢＳバッファーに置換した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは１４８０５９にピークが観測され、結合性ペプチドが一つ導入された生成物が１５４０３３にピークが観測され、結合性ペプチドが二つ導入された生成物が１６００００にピークが確認された。【０４３９】
（４−２）トラスツズマブの特異的修飾体の還元条件でのＥＳＩ−ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
上記（４−１）において生成した抗体・ペプチド複合体に７ｍＭトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液５μＬ（抗体に対して等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは５０５９４、５０７５６に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測され、生成物は重鎖にチオプロピオニル基が導入された５０６８３、５０８４５に重鎖ピークが観測され、原料と同じ２３４３９に軽鎖ピークが観測された。【０４４０】
（４−３）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析
上記（４−１）において生成した抗体・ペプチド複合体と原料の抗体をＨＩＣにより解析した。カラムはＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐａｋ  Ｈｉ  Ｒｅｓ  ＨＩＣ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｗａｔｅｒｓ）４．６ｘ１００ｍｍ  ２．５μｍを使用した。Ａ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，２．３Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ７．０、Ｂ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，ｐＨ７．０にて流速は０．６ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエントをＡ６０％  Ｂ４０％→Ａ０％  Ｂ１００％，１６ｍｉｎ（データ採取２０ｍｉｎ）、カラム温度は４０℃、サーモスタット温度は４０℃、検出器は２８０ｎｍの波長で検出した。【０４４１】
サンプルは、以下の条件で反応させた。
ａ：トラスツズマブ原料
ｂ：トラスツズマブ＋ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体１０等量【０４４２】
その結果、図６のクロマトグラムが得られた。Ｒｅｔｅｎｓｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ９．７３６５分はトラスツズマブ原料、９．４８１５分はペプチドが１個導入された化合物、９．１３４２分はペプチドが２個導入された化合物であると考えられる（図６）。【０４４３】
（実施例５）抗体に対する親和性物質（ＱＺ３４Ｃ−６０）、および切断性部分を有する抗体の調製
抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブを、上記（３−２）で調製した化合物とのコンジュゲーション反応により特異的に修飾して、抗体に対する親和性物質（ＱＺ３４Ｃ−６０）、および切断性部分を有する抗体を調製した。次いで、調製された抗体を解析した。【０４４４】
（５−１）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾とＥＳＩ−ＴＯＦＭＳによる解析
上記（３−２）において合成したペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体を、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドに溶解し１．８ｍＭとした。抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）５００μｇを５０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ  ５．５）１７１μＬに溶解させ、１．８ｍＭのペプチド試薬を９．４μＬ（抗体に対して１０等量）加えて、室温で１時間攪拌した。反応液を１００ｍＭクエン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ  ２．９）に置換して反応を停止させ、さらに２０ｍＭＰＢＳバッファーに置換した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは１４８２２８にピークが観測され、結合性ペプチドが一つ導入された生成物が１５５４１６にピークが観測され、結合性ペプチドが二つ導入された生成物が１６２５９５にピークが確認された。【０４４５】
（５−２）トラスツズマブの特異的修飾体の還元条件でのＥＳＩ−ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
上記（５−１）において生成した抗体・ペプチド複合体に７ｍＭトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液５μＬ（抗体に対して等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは５０５９６、５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測され、生成物は重鎖にチオプロピオニル基が導入された５０６７９、５０８４４に重鎖ピークが観測され、原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。【０４４６】
（５−３）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析
上記（５−１）において生成した抗体・ペプチド複合体と原料の抗体をＨＩＣにより解析した。カラムはＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐａｋ  Ｈｉ  Ｒｅｓ  ＨＩＣ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｗａｔｅｒｓ）４．６ｘ１００ｍｍ  ２．５μｍを使用した。Ａ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，２．３Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ７．０、Ｂ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，ｐＨ７．０にて流速は０．６ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエントをＡ６０％  Ｂ４０％→Ａ０％  Ｂ１００％，１６ｍｉｎ（データ採取２０ｍｉｎ）、カラム温度は４０℃、サーモスタット温度は４０℃、検出器は２８０ｎｍの波長で検出した。【０４４７】
サンプルは、以下の条件で反応させた。
ａ：トラスツズマブ原料
ｂ：トラスツズマブ＋ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体１０等量【０４４８】
その結果、図７のクロマトグラムが得られた。Ｒｅｔｅｎｓｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ９．９６３４分はトラスツズマブ原料、９．５８６８分はペプチドが１個導入された化合物、９．１２１２分はペプチドが２個導入された化合物であると考えられる（図７）。【０４４９】
（実施例６）抗体に対する親和性物質（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１）、および切断性部分を有する抗体の調製
抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブを、上記（３−３）で調製した化合物とのコンジュゲーション反応により特異的に修飾して、抗体に対する親和性物質（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ１）、および切断性部分を有する抗体を調製した。次いで、調製された抗体を解析した。【０４５０】
（６−１）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾とＥＳＩ−ＴＯＦＭＳによる解析
上記（３−３）において合成したペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体を、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドに溶解し３．６ｍＭとした。抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２５０μｇを５０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ  ５．５）８４．４μＬに溶解させ、３．６ｍＭのペプチド試薬を４．７μＬ（抗体に対して１０等量）加えて、室温で１時間攪拌した。反応液を１００ｍＭクエン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ  ２．９）に置換して反応を停止させ、さらに２０ｍＭＰＢＳバッファーに置換した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは１４８２２６にピークが観測され、結合性ペプチドが一つ導入された生成物が１５１０２７にピークが観測され、結合性ペプチドが二つ導入された生成物が１５３０２２にピークが確認された。【０４５１】
（６−２）トラスツズマブの特異的修飾体の還元条件でのＥＳＩ−ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
上記（６−１）において生成した抗体・ペプチド複合体に７ｍＭトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液５μＬ（抗体に対して等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは５０５９４、５０７５６に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測され、生成物は重鎖にチオプロピオニル基が導入された５０６８１、５０８４５に重鎖ピークが観測され、原料と同じ２３４３９に軽鎖ピークが観測された。【０４５２】
（６−３）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析
上記（６−１）において上で生成した抗体・ペプチド複合体と原料の抗体をＨＩＣにより解析した。カラムはＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐａｋ  Ｈｉ  Ｒｅｓ  ＨＩＣ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｗａｔｅｒｓ）４．６ｘ１００ｍｍ  ２．５μｍを使用した。Ａ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，２．３Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ７．０、Ｂ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，ｐＨ７．０にて流速は０．６ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエントをＡ６０％  Ｂ４０％→Ａ０％  Ｂ１００％，１６ｍｉｎ（データ採取２０ｍｉｎ）、カラム温度は４０℃、サーモスタット温度は４０℃、検出器は２８０ｎｍの波長で検出した。【０４５３】
サンプルは、以下の条件で反応させた。
ａ：トラスツズマブ原料
ｂ：トラスツズマブ＋ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体１０等量【０４５４】
その結果、図８のクロマトグラムが得られた。Ｒｅｔｅｎｓｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  １１．３７３０分はトラスツズマブ原料、１０．７７８３分はペプチドが１個導入された化合物、９．８７４７分はペプチドが２個導入された化合物であると考えられる（図８）。【０４５５】
（６−４）トラスツズマブ・ペプチド複合体のリンカー切断と再酸化
上記（６−１）において得られた抗体・ペプチド複合体のリンカー切断と再酸化を行えば、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６およびＬｙｓ２４８に位置選択的にチオプロピオニル基が導入された抗体（すなわち、生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体）を得ることが可能である。【０４５６】
（リンカー切断）
抗体・ペプチド複合体４００μｇを６０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ８．０）に溶解し、７２μＭとした後、２０ｍＭ  Ｄ，Ｌ−ジチオスレイトール  １０．０μＬ（トラスツズマブ・ペプチド複合体に対して６０等量）を添加し室温で１６時間攪拌して、リンカー中のジスルフィド結合を切断する。【０４５７】
（再酸化）
次に、リンカー中のジスルフィド結合とともに切断された抗体中のジスルフィド結合を再度結合させるため、再酸化の工程を行う（Ｊａｇａｔｈ  Ｒ  Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＡＴＵＲＥ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ，２６（８），９２５−９３２（２００８））。具体的には、反応液をＡｍｉｃｏｎ  １０Ｋにより９．５７ｍＭ  ＰＢＳバッファー（ｐＨ７．０）へと溶媒置換し、トラスツズマブ・ペプチド複合体の濃度を１８μＭとした後、１０ｍＭ  デヒドロアスコルビン酸  ６．４μＬ（トラスツズマブ・ペプチド複合体に対して２０等量）加えて３時間攪拌することにより、再酸化を行う。【０４５８】
（実施例７）抗体に対する親和性物質（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２）、および切断性部分を有する抗体の調製
抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブを、上記（３−４）で調製した化合物とのコンジュゲーション反応により特異的に修飾して、抗体に対する親和性物質（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２）、および切断性部分を有する抗体を調製した。次いで、調製された抗体を解析した。【０４５９】
（７−１）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾とＥＳＩ−ＴＯＦＭＳによる解析
上記（３−４）において合成したペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体を、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドに溶解し９．２ｍＭとした。抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）１０００μｇを２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ  ６．５）２００μＬに溶解させ、９．２ｍＭのペプチド試薬を２０μＬ（抗体に対して２７等量）加えて、室温で１時間攪拌した。反応液を１００ｍＭクエン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ  ２．９）に置換して反応を停止させ、さらに２０ｍＭＰＢＳバッファーに置換した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは１４８２３４にピークが観測され、結合性ペプチドが一つ導入された生成物が１５２９７８にピークが観測され、結合性ペプチドが二つ導入された生成物が１５７７２１にピークが確認された。【０４６０】
（７−２）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析
上記（７−１）において生成した抗体・ペプチド複合体と原料の抗体をＨＩＣにより解析した。カラムはＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐａｋ  Ｈｉ  Ｒｅｓ  ＨＩＣ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｗａｔｅｒｓ）４．６ｘ１００ｍｍ  ２．５μｍを使用した。Ａ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，２．３Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ７．０、Ｂ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，ｐＨ７．０にて流速は０．６ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエントをＡ６０％  Ｂ４０％→Ａ０％  Ｂ１００％，１６ｍｉｎ（データ採取２０ｍｉｎ）、カラム温度は４０℃、サーモスタット温度は４０℃、検出器は２８０ｎｍの波長で検出した。【０４６１】
サンプルは、以下の条件で反応させた。
ａ：トラスツズマブ原料
ｂ：トラスツズマブ＋ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体２７等量【０４６２】
その結果、図９のクロマトグラムが得られた。Ｒｅｔｅｎｓｉｏｎ  Ｔｉｍｅ１０．０３８４分はトラスツズマブ原料、９．４３２４分はペプチドが１個導入された化合物、８．５６４７分はペプチドが２個導入された化合物であると考えられる（図９）。【０４６３】
（実施例８）抗体に対する親和性物質（ＣｓｐＢ６Ｔｅｖ−ＱＺ３４Ｃ）を利用することにより調製されたトラスツズマブ・チオール導入体のトリプシン処理によるペプチドマッピング
（８−１）トラスツズマブ・チオール導入体のトリプシン処理
上記（４−１）で得られたトラスツズマブ・チオール導入体をＰＮＧａｓｅＦ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ社製）により糖鎖切断を行った後、ペプチドマッピングを行った。１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブにサンプル溶液を１０μＬ、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液、４０％トリフルオロエタノールに溶解した２０ｍＭのジチオスレイトール水溶液１０μＬを加えて６５℃で１時間加温後、５０ｍＭのヨードアセトアミド水溶液１０μＬを添加し、遮光下室温で３０分間反応させた。反応後、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液を４０μＬ加えて撹拌し、２０ｎｇ／μＬのトリプシン水溶液を１０μＬ添加して３７℃で１６時間酵素消化した。消化後、２０％トリフルオロ酢酸水溶液を２μＬ添加し反応を止め、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定を実施した。【０４６４】
（８−２）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定条件
（分析装置）
ナノＨＰＬＣ：ＥＡＳＹ−ｎＬＣ  １０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）
質量分析計：トライブリッド質量分析計Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｆｕｓｉｏｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）【０４６５】
（ＨＰＬＣ分析条件）
トラップカラム：Ａｃｃｌａｉｍ  ＰｅｐＭａｐ（登録商標）  １００，７５μｍｘ２ｃｍ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）
分析カラム：ＥＳＩ−ｃｏｌｕｍｎ（ＮＴＣＣ−３６０／７５−３−１２５，７５μｍ×１２．５ｃｍ，３μｍ（日京テクノス社））
移動相Ａ：０．１％ギ酸水溶液
移動相Ｂ：０．１％ギ酸、アセトニトリル溶液
ローディング溶液：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液
流速：３００ｎＬ／ｍｉｎ
サンプル注入量：１μＬ
グラジエント条件（Ｂ％）：２％（０．０−０．５分）、２％→３０％（０．５−２３．５分）、３０％→７５％（２３．５−２５．５分）、７５％（２５．５−３５.０分）【０４６６】
（質量分析計分析条件）
イオン化法：ＥＳＩ，  Ｐｏｓｉｔｉｖｅモード
スキャンタイプ：Ｄａｔａ  Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ａｑｕｉｓｉｔｉｏｎ
Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｔｙｐｅ：Ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＣＩＤ）
データの取得は付属ソフトであるＸｃａｌｉｂｕｒ  ３．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）およびＴｈｅｒｍｏ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｔｕｎｅ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ２．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて行った。【０４６７】
（８−３）トラスツズマブの修飾部位の解析条件
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定結果に対する修飾部位解析については、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．４（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて行った。【０４６８】
Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒでの解析は、Ｓｅｑｕｅｓｔ  ＨＴを検索エンジンとして使用し、プリカーサーイオンの範囲を３５０〜５０００Ｄａ、Ｔｏｔａｌ  Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ  Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄをピークトップの強度の０．０１％となるように設定した。また、トリプシンを消化酵素として設定し、Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｍｉｓｓｅｄ  Ｃｌｅａｖａｇｅ  Ｓｉｔｅｓは３とした。また、プリカーサーおよびフラグメントイオンのＭａｓｓ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅは、それぞれ５ｐｐｍおよび０．５Ｄａとした。Ｓｔａｔｉｃ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎにはヨードアセトアミドによるシステイン残基の修飾として、Ｃａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ（＋５７．０２１Ｄａ）を設定した。Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓについては、メチオニン残基の酸化（＋１５．９９５Ｄａ）およびリジン残基への修飾体（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を設定した。さらに、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＣｏｎｆｉｄｅｎｃｅがＨｉｇｈのもののみとなるようフィルターをかけた。【０４６９】
また、修飾部位の検索対象のアミノ酸配列のデータとして、図４に示される（１）、（３）を用いた。【０４７０】
（８−４）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号２６）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ９５２．２３１９６、理論値：９５２．２２９００、４価）が観測され（図１０）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１２に相当するｍ／ｚ  ７６４．６８（理論値：７６４．４０）のプロダクトイオンが確認された（図１１−１）。また、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒでの解析により、２４６位もしくは２４８位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図１１−２）。【０４７１】
この結果より、上記（４−１）では、抗体の重鎖上、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６およびＬｙｓ２４８に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。【０４７２】
（実施例９）抗体に対する親和性物質（ＱＺ３４Ｃ−６０）を利用することにより調製されたトラスツズマブ・チオール導入体のトリプシン処理によるペプチドマッピング
（９−１）トラスツズマブ・チオール導入体のトリプシン処理
上記（５−１）で得られたトラスツズマブ・チオール導入体を、上記（８−１）と同じ処理に付した後、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定を実施した。【０４７３】
（９−２）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定条件
ＨＰＬＣおよび質量分析の測定装置および測定条件は、上記（８−２）のものと同じである。  【０４７４】
（９−３）トラスツズマブの修飾部位の解析条件
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定結果に対する修飾部位解析の条件は、上記（８−３）と同じである。【０４７５】
（９−４）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号２６）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ９５２．２３２２７、理論値：９５２．２２９００、４価）が観測され（図１２）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１３に相当するｍ／ｚ  ８３８．２３（理論値：８３７．９４）のプロダクトイオンが確認された（図１３−１）。また、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒでの解析により、２４６位もしくは２４８位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図１３−２）。【０４７６】
この結果より、上記（５−１）では、抗体の重鎖上、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６およびＬｙｓ２４８に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。【０４７７】
（実施例１０）抗体に対する親和性物質（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ２）を利用することにより調製されたトラスツズマブ・チオール導入体のトリプシン処理によるペプチドマッピング
（１０−１）トラスツズマブ・チオール導入体のトリプシン処理
上記（７−１）で得られたトラスツズマブ・チオール導入体を、上記（８−１）と同じ処理に付した後、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定を実施した。【０４７８】
（１０−２）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定条件
ＨＰＬＣおよび質量分析の測定装置および測定条件は、上記（８−２）のものと同じである。【０４７９】
（１０−３）トラスツズマブの修飾部位の解析条件
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定結果に対する修飾部位解析の条件は、上記（８−３）と同じである。【０４８０】
（１０−４）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号２６）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ９５２．２３０３２、理論値：９５２．２２９００、４価）が観測され（図１４）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１３に相当するｍ／ｚ  ８３８．２９（理論値：８３７．９４）のプロダクトイオンが確認された（図１５−１）。また、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒでの解析により、２４６位もしくは２４８位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図１５−２）。【０４８１】
この結果より、上記（７−１）では、抗体の重鎖上、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６およびＬｙｓ２４８に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。【０４８２】
（実施例１１）抗体に対する親和性物質（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４）、および切断性部分を有する抗体の調製および解析
（１１−１）抗体に対する親和性物質（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４）、切断性部分および反応性基を有する化合物の調製
ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号２３）（４４．０ｍｇ，９．７０μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．６０ｍＬ）に溶解し、３，３’−ジチオジプロピオン酸ジ（Ｎ−スクシンイミジル）（７８．０ｍｇ，１９４ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４０ｍＬ）に溶解した溶液を加え、室温で２４時間攪拌した。減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、これを０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸を０．０５％含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、上記発現タンパク質ジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体（１５ｍｇ，３．１０μｍｏｌ）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝４  １２１０．１［Ｍ＋４Ｈ］４＋【０４８３】
（１１−２）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾とＥＳＩ−ＴＯＦＭＳによる解析
（１１−１）で合成したペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体はジメチルスルホキシドに溶解し１０ｍＭとした。抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）５００μｇを２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５．５）１８８μＬに溶解させ、１０ｍＭのペプチド試薬を３．８８μＬ（抗体に対して１０等量）加えて、室温で１時間攪拌した。反応液を９．５６ｍＭＰＢＳバッファーに置換した。ＰＢＳバッファーに置換したトラスツズマブの特異的修飾体２００μＬ（抗体２００μｇ）にＧｌｙｃｏＢｕｆｆｅｒ２０μＬ、ＰＮＧａｓｅＦ（５０，０００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）８μＬを加え、３７℃で２４時間攪拌した。反応液を２０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液に置換し、ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは１４５１７０にピークが観測され、結合性ペプチドが一つ導入された生成物が１４９９０１、結合性ペプチドが二つ導入された生成物が１５４６２８にピークが確認された。【０４８４】
（実施例１２）抗体に対する親和性物質（ＱＥＴ−Ｚ３４Ｃ４）を利用することにより調製されたトラスツズマブ・チオール導入体のトリプシン処理によるペプチドマッピング
（１２−１）トラスツズマブ・チオール導入体のトリプシン処理
上記（１１−２）で得られたトラスツズマブ・チオール導入体に対しペプチドマッピングを行った。１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブにサンプル溶液を１０μＬ、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液、４０％トリフルオロエタノールに溶解した２０ｍＭのジチオトレイトール水溶液１０μＬを加えて６５℃で１時間加温後、５０ｍＭのヨードアセトアミド水溶液１０μＬを添加し、遮光下室温で３０分間反応させた。反応後、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液を４０μＬ加えて撹拌し、２０ｎｇ／μＬのトリプシン水溶液を１０μＬ添加して３７℃で１６時間酵素消化した。消化後、２０％トリフルオロ酢酸水溶液を２μＬ添加し反応を止め、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定を実施した。【０４８５】
（１２−２）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定条件
（分析装置）
ナノＨＰＬＣ：ＥＡＳＹ−ｎＬＣ  １０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）
質量分析計：トライブリッド質量分析計Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｆｕｓｉｏｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）【０４８６】
（ＨＰＬＣ分析条件）
トラップカラム：Ａｃｃｌａｉｍ  ＰｅｐＭａｐ（登録商標）  １００，７５μｍｘ２ｃｍ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）
分析カラム：ＥＳＩ−ｃｏｌｕｍｎ（ＮＴＣＣ−３６０／７５−３−１２５，７５μｍ×１２．５ｃｍ，３μｍ（日京テクノス社））
移動相Ａ：０．１％ギ酸水溶液
移動相Ｂ：０．１％ギ酸、アセトニトリル溶液
ローディング溶液：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液
流速：３００ｎＬ／ｍｉｎ
サンプル注入量：１μＬ
グラジエント条件（Ｂ％）：２％（０．０−０．５分）、２％→３０％（０．５−２３．５分）、３０％→７５％（２３．５−２５．５分）、７５％（２５．５−３５．０分）【０４８７】
（質量分析計分析条件）
イオン化法：ＥＳＩ，  Ｐｏｓｉｔｉｖｅモード
スキャンタイプ：Ｄａｔａ  Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ａｑｕｉｓｉｔｉｏｎ
Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｔｙｐｅ：Ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＣＩＤ）
データの取得は付属ソフトであるＸｃａｌｉｂｕｒ  ３．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）およびＴｈｅｒｍｏ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｔｕｎｅ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ２．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて行った。【０４８８】
（１２−３）トラスツズマブの修飾部位の解析条件
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定結果に対する修飾部位解析については、ＢｉｏＰｈａｒｍａ  Ｆｉｎｄｅｒ  ３．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて行った。【０４８９】
ＢｉｏＰｈａｒｍａ  Ｆｉｎｄｅｒでの解析は、Ｓ／Ｎ  Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄを１、ＭＳ  Ｎｏｉｓｅ  Ｌｅｖｅｌをピークトップの強度の０．０１％となるように設定して実施した。また、消化酵素をＴｒｙｐｓｉｎに、ＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙをＨｉｇｈに設定した。さらに、ピーク検出時のＭａｓｓ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅは４ｐｐｍ、ペプチド同定時のＭａｓｓ  Ａｃｃｕｒａｃｙは５ｐｐｍとした。Ｓｔａｔｉｃ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎにはヨードアセトアミドによるシステイン残基の修飾として、Ｃａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ（＋５７．０２１Ｄａ）を設定した。Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓについては、メチオニン残基の酸化（＋１５．９９５Ｄａ）およびリジン残基への修飾体（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を設定した。また、Ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ  Ｓｃｏｒｅが８０以上、ＭＳ／ＭＳが観測できているもののみとなるようフィルターを設定した。【０４９０】
また、修飾部位の検索対象のアミノ酸配列のデータとして、図４に示される（１）、（３）を用いた。【０４９１】
（１２−４）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸１８残基からなるペプチド、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号５０）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ７６９．０４３５３、理論値：７６９．０４４８２、３価）が観測され（図２６）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２８８位もしくは２９０位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１６に相当するｍ／ｚ  １０２２．７３（理論値：１０２２．５１）のプロダクトイオンが確認された（図２７−１）。また、ＢｉｏＰｈａｒｍａ  Ｆｉｎｄｅｒでの解析により、２８８位もしくは２９０位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図２７−２）。【０４９２】
この結果より、上記（１１−２）では、抗体の重鎖上、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２８８およびＬｙｓ２９０に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。【０４９３】
（実施例１３）抗体に対する親和性物質（改変Ｆｃ−ＩＩＩ（ＱＥＴ−ＬＶ））、および切断性部分を有する抗体の調製および解析
（１３−１）抗体に対する親和性物質（改変Ｆｃ−ＩＩＩ（ＱＥＴ−ＬＶ））、切断性部分および反応性基を有する化合物の調製
ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号２４）（５０．０ｍｇ，２１．０μｍｏｌ、ただし７番目と１７番目の２つのシステインは、それぞれ分子内でジスルフィド結合を形成している）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．００ｍＬ）に溶解し、Ｄｉ−（Ｎ−Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）３，３‘−Ｄｉｔｈｉｏｄｉｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（２５５ｍｇ，６３０μｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳで反応を確認後、０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸を０．０５％含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、上記ペプチドジスルフィドリンカー連結物（１．２ｍｇ，０．４５μｍｏｌ）を得た。【０４９４】
（１３−２）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾とＥＳＩ−ＴＯＦＭＳによる解析
（１３−１）で合成したペプチドリンカー連結物はジメチルスルホキシドに溶解し２０ｍＭとした。抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）５００μｇを５０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ４．７，ｐＨ５．５）１００μＬ（５００μｇ／１００μＬ）に溶解させ、２０ｍＭのペプチド試薬を１．６９μＬ（抗体に対して１０等量）加えて、室温で１時間攪拌した。反応液を２０ｍＭ酢酸アンモニウムバッファーに置換した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは１４８２２２にピークが観測された。ｐＨ４．７は、結合性ペプチドが２個導入された１５３３２３にピークが確認された。ｐＨ５．５は、結合性ペプチドが２個導入された１５３５１１にピークが確認された（図２８）。【０４９５】
（１３−３）トラスツズマブの特異的修飾体の還元条件でのＥＳＩ−ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
（１３−２）で生成した抗体・ペプチド複合体に１００ｍＭトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２μＬ（抗体に対して等量）を加えて、室温で１５分攪拌した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは５０５９４、５０７５５に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測され、ｐＨ４．７は、重鎖にリンカーが導入された５０６８１、５０８４３、軽鎖に原料と同じ２３４３９、リンカーが導入された２３５２６が確認された。ｐＨ５．５は、重鎖にリンカーが導入された５０６８１、５０８４３、軽鎖に原料と同じ２３４３９、リンカーが導入された２３５２６が確認された。ｐＨ６．４は、重鎖にリンカーが導入された５０６８１、５０８４３、軽鎖に原料と同じ２３４３９、リンカーが導入された２３５２６が確認された。ｐＨ７．４は、重鎖にリンカーが導入された５０６８１、５０８４３、軽鎖に原料と同じ２３４３９、リンカーが導入された２３５２７が確認された。ｐＨ８．０は、重鎖にリンカーが導入された５０６８１、５０８４４、軽鎖に原料と同じ２３４３９、リンカーが導入された２３５２７が確認された（図２９）。【０４９６】
（１３−４）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析
（１３−２）で生成した抗体・ペプチド複合体と原料の抗体をＨＩＣにより解析した。カラムはＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐａｋ  Ｈｉ  Ｒｅｓ  ＨＩＣ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｗａｔｅｒｓ）４．６ｘ１００ｍｍ  ２．５μｍを使用した。Ａ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，２．３Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ７．０、Ｂ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，ｐＨ７．０にて流速は０．６ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエントをＡ６０％  Ｂ４０％→Ａ０％  Ｂ１００％，１６ｍｉｎ（データ採取２０ｍｉｎ）、カラム温度は４０℃、サーモスタット温度は４０℃、検出器は２８０ｎｍの波長で検出した。【０４９７】
サンプルについては以下の条件で反応させた。
ａ：トラスツズマブ原料
ｂ：トラスツズマブ＋ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体  １０等量【０４９８】
その結果、図３０のクロマトグラムが得られた。Ｒｅｔｅｎｓｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  １０．２５５分はトラスツズマブ原料、１１．２９４分はペプチドが２個導入された化合物であると考えられる（図３０）。【０４９９】
（実施例１４）抗体に対する親和性物質（改変Ｆｃ−ＩＩＩ（ＱＥＴ−ＬＶ））を利用することにより調製されたトラスツズマブ・チオール導入体のトリプシン処理によるペプチドマッピング
（１４−１）トラスツズマブ・チオール導入体のトリプシン処理
上記（１３−２）で得られたトラスツズマブ・チオール導入体に対しＰＮＧａｓｅＦ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ社製）により糖鎖切断を行った後、ペプチドマッピングを行った。１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブにサンプル溶液を１０μＬ、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液、４０％トリフルオロエタノールに溶解した２０ｍＭのジチオトレイトール水溶液１０μＬを加えて６５℃で１時間加温後、５０ｍＭのヨードアセトアミド水溶液１０μＬを添加し、遮光下室温で３０分間反応させた。反応後、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液を４０μＬ加えて撹拌し、２０ｎｇ／μＬのトリプシン水溶液を１０μＬ添加して３７℃で１６時間酵素消化した。消化後、２０％トリフルオロ酢酸水溶液を２μＬ添加し反応を止め、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定を実施した。【０５００】
（１４−２）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定条件
（分析装置）
ナノＨＰＬＣ：ＥＡＳＹ−ｎＬＣ  １０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）
質量分析計：トライブリッド質量分析計Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｆｕｓｉｏｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）【０５０１】
（ＨＰＬＣ分析条件）
トラップカラム：Ａｃｃｌａｉｍ  ＰｅｐＭａｐ（登録商標）  １００，７５μｍｘ２ｃｍ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）
分析カラム：ＥＳＩ−ｃｏｌｕｍｎ（ＮＴＣＣ−３６０／７５−３−１２５，７５μｍ×１２．５ｃｍ，３μｍ（日京テクノス社））
移動相Ａ：０．１％ギ酸水溶液
移動相Ｂ：０．１％ギ酸、アセトニトリル溶液
ローディング溶液：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液
流速：３００ｎＬ／ｍｉｎ
サンプル注入量：１μＬ
グラジエント条件（Ｂ％）：２％（０．０−０．５分）、２％→３０％（０．５−２３．５分）、３０％→７５％（２３．５−２５．５分）、７５％（２５．５−３５．０分）【０５０２】
（質量分析計分析条件）
イオン化法：ＥＳＩ，  Ｐｏｓｉｔｉｖｅモード
スキャンタイプ：Ｄａｔａ  Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ａｑｕｉｓｉｔｉｏｎ
Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｔｙｐｅ：Ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＣＩＤ）
データの取得は付属ソフトであるＸｃａｌｉｂｕｒ  ３．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）およびＴｈｅｒｍｏ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｔｕｎｅ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ２．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて行った。【０５０３】
（１４−３）トラスツズマブの修飾部位の解析条件
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定結果に対する修飾部位解析については、ＢｉｏＰｈａｒｍａ  Ｆｉｎｄｅｒ  ３．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて行った。【０５０４】
ＢｉｏＰｈａｒｍａ  Ｆｉｎｄｅｒでの解析は、Ｓ／Ｎ  Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄを１、ＭＳ  Ｎｏｉｓｅ  Ｌｅｖｅｌをピークトップの強度の０．０１％となるように設定して実施した。また、消化酵素をＴｒｙｐｓｉｎに、ＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙをＨｉｇｈに設定した。さらに、ピーク検出時のＭａｓｓ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅは４ｐｐｍ、ペプチド同定時のＭａｓｓ  Ａｃｃｕｒａｃｙは５ｐｐｍとした。Ｓｔａｔｉｃ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎにはヨードアセトアミドによるシステイン残基の修飾として、Ｃａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ（＋５７．０２１Ｄａ）を設定した。Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓについては、メチオニン残基の酸化（＋１５．９９５Ｄａ）およびリジン残基への修飾体（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を設定した。また、Ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ  Ｓｃｏｒｅが８０以上、ＭＳ／ＭＳが観測できているもののみとなるようフィルターを設定した。【０５０５】
また、修飾部位の検索対象のアミノ酸配列のデータとして、図４に示される（１）、（３）を用いた。【０５０６】
（１４−４）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号２６）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ９５２．２３４２５、理論値：９５２．２２９４２、４価）が観測され（図３１）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ２０に相当するｍ／ｚ  １１６６．９９（理論値：１１６６．６１）のプロダクトイオンが確認された（図３２−１）。また、ＢｉｏＰｈａｒｍａ  Ｆｉｎｄｅｒでの解析により、２４６位もしくは２４８位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図３２−２）。【０５０７】
この結果より、上記（１３−２）では、抗体の重鎖上、ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６およびＬｙｓ２４８に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。【０５０８】
（実施例１５）抗体に対する親和性物質（改変Ｆｃ−ＩＩＩ（ＱＥＴ−ＩＩ））、および切断性部分を有する抗体の調製および解析
（１５−１）抗体に対する親和性物質（改変Ｆｃ−ＩＩＩ（ＱＥＴ−ＩＩ））、切断性部分および反応性基を有する化合物の調製
ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号２５）（４６．０ｍｇ，２０．０μｍｏｌ、ただし７番目と１７番目の２つのシステインは、それぞれ分子内でジスルフィド結合を形成している）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．００ｍＬ）に溶解し、Ｄｉ−（Ｎ−Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）３，３‘−Ｄｉｔｈｉｏｄｉｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（２５５ｍｇ，６３０μｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳで反応を確認後、０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸を０．０５％含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、上記ペプチドジスルフィドリンカー連結物（２．５ｍｇ，１．１０μｍｏｌ）を得た。【０５０９】
（１５−２）抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾とＥＳＩ−ＴＯＦＭＳによる解析
（１５−１）で合成したペプチドリンカー連結物はジメチルスルホキシドに溶解し２０ｍＭとした。抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）５００μｇを５０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ４．７，ｐＨ５．５）１００μＬ（５００μｇ／１００μＬ）に溶解させ、２０ｍＭのペプチド試薬を１．６９μＬ（抗体に対して１０等量）加えて、室温で１時間攪拌した。反応液を２０ｍＭ酢酸アンモニウムバッファーに置換した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは１４８２２２にピークが観測された。結合性ペプチドが２個導入された１５３５２４にピークが確認された。【０５１０】
（まとめ）
以上の結果をまとめると、以下のとおりである。【０５１１】
【表２】
2020090979.tif 000054
【０５１２】
また、抗体について、２４６位及び／又は２４８位のリジン残基（例、実施例７、８、９）を始めとする特定のアミノ酸残基の位置選択的な修飾が可能であることが示された。【０５１３】
さらに、下記式（Ｉ）で表される、抗体に対する親和性物質（グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチド）、切断性部分および反応性基を有する下記の化合物について、実施例の一部を例に挙げて説明すると以下の表３のとおりである。
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ    （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質（グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチド）であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕
Ｌは、（ｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有する切断性部分を含む２価の基である切断性リンカー、または（ｉｉ）切断により生体直交性官能基を反応性基側に生成する能力を有しない切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーである。【０５１４】
【表３−１】
2020090979.tif 000055
【０５１５】
【表３−２】
2020090979.tif 000056
【０５１６】
抗体に対する親和性物質（グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチド）、切断性部分および反応性基を有する種々の化合物は、上述のように、抗体に対する親和性物質（Ａ）、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカー（Ｌ）、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基（Ｂ）、抗体に対する反応性基（Ｒ）の種類を適宜変更することにより、周知の有機合成方法にしたがって調製することができる。本発明において調製することができる、抗体に対する親和性物質（グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチド）、切断性部分および反応性基を有する化合物のさらなる例と、それにより製造することができる生体直交性官能基を有する抗体との関係は、以下のとおりである。【０５１７】
【表４】
2020090979.tif 000057
【０５１８】
【表５】
2020090979.tif 000058
【０５１９】
【表６】
2020090979.tif 000059
【０５２０】
以上より、抗体に対する親和性物質（グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチド）、切断性部分および反応性基を有する化合物において、親和性物質の種類、親和性物質と反応性基との間のリンカーの長さ、およびリンカーが導入される親和性物質中の位置等の因子を適宜調節することにより、抗体を位置選択的に修飾できることが示された。【０５２１】
［参考例１：可溶性タンパク質に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物（ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体）の合成、ならびに当該化合物を用いた抗ＨＥＲ２ＩｇＧ抗体トラスツズマブの修飾およびその解析］
（１−１）ＩｇＧ１  Ｆｃ結合性ペプチドの合成
Ａｃ−ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ−ＮＨ２（配列番号４６）の配列をＦｍｏｃ固相合成法により合成し、目的物を得た。【０５２２】
（Ｆｍｏｃ固相合成法）
ペプチド合成装置はＢｉｏｔａｇｅ社製Ｓｙｒｏ  ｗａｖｅを使用した。試薬は全て渡辺化学工業製のものを使用した。ＲｅｓｉｎはＦｍｏｃ−ＮＨ−ＳＡＬ−ＰＥＧ  Ｒｅｓｉｎ，ＨＬ、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）はダブルカップリングを行った。Ｒｅｓｉｎからの切り出しはトリフルオロ酢酸：水：トリイソプロピルシラン：エタンジチオール＝９４：２．５：１．０：２．５の溶液中３時間攪拌の条件で行った。切り出し後Ｒｅｓｉｎをフィルトレーションにより除去し、トリフルオロ酢酸を除去した。生成した結晶中にジエチルエーテルを加えエーテル沈殿を行い、生成した白色結晶をフィルトレーションにより回収した。これを０．１％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸を０．１％含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルのみ除去した後、凍結乾燥を行った。【０５２３】
（１−２）Ａｃ−ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ−ＮＨ２（配列番号４６）の５位と３４位のＣｙｓでの分子内ジスルフィド結合の形成
【化５２】
2020090979.tif 000060
【０５２４】
（１−１）で合成したペプチドをＤＭＳＯに溶解し、０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ  ８．０を加えた。この溶液にグルタチオン酸化型を加えて室温で２０時間攪拌した。反応溶液に２Ｍトリフルオロ酢酸水溶液を加え反応を停止し、これを０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸０．０５％を含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、目的物（２３．０ｍｇ，５．３８μｍｏｌ）を得た。【０５２５】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝４  １０７０．５５［Ｍ＋４Ｈ］４＋，ｚ＝５  ８５６．５５［Ｍ＋５Ｈ］５＋【０５２６】
（１−３）ジスルフィドリンカーとペプチドの連結
【化５３】
2020090979.tif 000061
【０５２７】
（１−２）で合成したＡｃ−ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ−ＮＨ２（配列番号４６）（２３．０ｍｇ，５．３８μｍｏｌ、ただし５番目と３４番目の２つのシステインはそれぞれ分子内でジスルフィド結合を形成している）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．００ｍＬ）に溶解し、３，３’−ジチオジプロピオン酸ジ（Ｎ−スクシンイミジル）（８７．０ｍｇ，２１５μｍｏｌ）をアセトニトリル（１．００ｍＬ）に溶解した溶液を加え、室温で２４時間攪拌した。減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、これを０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸を０．０５％含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、上記ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体（１６．０ｍｇ，３．５０μｍｏｌ）を得た。【０５２８】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝５  ９１４．４５［Ｍ＋５Ｈ］５＋，ｚ＝６  ７６２．１５［Ｍ＋６Ｈ］６＋
ＨＰＬＣ純度：８３％【０５２９】
（１−４）抗ＨＥＲ２ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾とＥＳＩ−ＴＯＦＭＳによる解析
（１−３）で合成したペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体はＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドに溶解し４ｍＭとした。抗ＨＥＲ２ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）５００μｇを５０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ  ５．５）１７１μＬに溶解させ、４ｍＭのペプチド試薬を４．２μＬ（抗体に対して５等量）加えて、室温で１時間攪拌した。反応液をＮＡＰ−５カラムに添加し、反応を停止させ２０ｍＭＰＢＳバッファーに置換した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは１４８０６５にピークが観測され、結合性ペプチドが一つ導入された生成物が１５２５２５にピークが観測され、結合性ペプチドが二つ導入された生成物が１５６９７８にピークが観測された。【０５３０】
（１−５）抗ＨＥＲ２ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析
（１−４）で生成した抗体・ペプチド複合体と原料の抗体をＨＩＣにより解析した。カラムはＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐａｋ  Ｈｉ  Ｒｅｓ  ＨＩＣ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｗａｔｅｒｓ）４．６ｘ１００ｍｍ  ２．５μｍを使用した。Ａ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，２．３Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ７．０、Ｂ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，ｐＨ７．０にて流速は０．６ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエントをＡ６０％  Ｂ４０％→Ａ０％  Ｂ１００％，１６ｍｉｎ（データ採取２０ｍｉｎ）、カラム温度は４０℃、サーモスタット温度は４０℃、検出器は２８０ｎｍの波長で検出した。【０５３１】
サンプルについては以下の条件で反応させた。
ａ：トラスツズマブ原料
ｂ：トラスツズマブ＋ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体  ５等量；【０５３２】
Ｒｅｔｅｎｓｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ９．２１２４分はペプチドが１個導入された化合物、８．６１５７分はペプチドが２個導入された化合物であると考えられる（図１６）。【０５３３】
［参考例２：トラスツズマブのチオール導入体のペプチドマッピング］
（２−１）トラスツズマブのチオール導入体のトリプシン処理
１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブにサンプル溶液（参考例１で調製された、トラスツズマブのチオール導入体を含む）を１０μＬ、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液、４０％トリフルオロエタノールに溶解した２０ｍＭのジチオスレイトール水溶液１０μＬを加えて６５℃で１時間加温後、５０ｍＭのヨードアセトアミド水溶液１０μＬを添加し、遮光下室温で３０分間３００ｒｐｍで振盪し反応させた。反応後、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液を４０μＬ加えて撹拌し、２０ｎｇ／μＬのトリプシン水溶液（Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  Ｇｒａｄｅ，  Ｃｏｄｅ  Ｎｏ．Ｔ６５６７−５ｘ２０μｇ（ＳＩＧＭＡ））を１０μＬ添加して３７℃で１８時間酵素消化した。消化後、２０％トリフルオロ酢酸水溶液を２μＬ添加し反応を止め、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定を実施した。【０５３４】
（２−２）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定条件
（分析装置）
ナノＨＰＬＣ：ＥＡＳＹ−ｎＬＣ  １０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）
質量分析計：トライブリッド質量分析計Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｆｕｓｉｏｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）【０５３５】
（ＨＰＬＣ分析条件）
トラップカラム：Ａｃｃｌａｉｍ  ＰｅｐＭａｐ（登録商標）  １００，７５μｍｘ２ｃｍ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）
分析カラム：ＥＳＩ−ｃｏｌｕｍｎ（ＮＴＣＣ−３６０／７５−３−１２５，７５μｍ×１２．５ｃｍ，３μｍ（日京テクノス株式会社））
移動相Ａ：０．１％ギ酸水溶液
移動相Ｂ：０．１％ギ酸、アセトニトリル溶液
ローディング溶液：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液
流速：３００ｎＬ／ｍｉｎ
サンプル注入量：１μＬ
グラジエント条件（Ｂ％）：２％（０．０−０．５分）、２％→３０％（０．５−２３．５分）、３０％→７５％（２３．５−２５．５分）、７５％（２５．５−３５.０分）【０５３６】
（質量分析計分析条件）
イオン化法：ＥＳＩ，  Ｐｏｓｉｔｉｖｅモード
スキャンタイプ：Ｄａｔａ  Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ａｑｕｉｓｉｔｉｏｎ
Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｔｙｐｅ：Ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＣＩＤ）
データの取得は付属ソフトであるＸｃａｌｉｂｕｒ  ３．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック）およびＴｈｅｒｍｏ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｔｕｎｅ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ２．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いて行った。【０５３７】
（２−３）トラスツズマブの修飾部位の解析条件
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定結果に対する修飾部位解析については、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．４（サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いて行った。【０５３８】
Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒでの解析は、Ｓｅｑｕｅｓｔ  ＨＴを検索エンジンとして使用し、プリカーサーイオンの範囲を３５０〜５０００Ｄａ、Ｔｏｔａｌ  Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ  Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄを５００００とした。また、トリプシンを消化酵素として設定し、Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｍｉｓｓｅｄ  Ｃｌｅａｖａｇｅ  Ｓｉｔｅｓは３とした。また、プリカーサーおよびフラグメントイオンのＭａｓｓ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅは、それぞれ５ｐｐｍおよび０．５Ｄａとした。Ｓｔａｔｉｃ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎにはヨードアセトアミドによるシステイン残基の修飾として、Ｃａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ（＋５７．０２１Ｄａ）を設定した。Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓについては、メチオニンの酸化（＋１５．９９５Ｄａ）およびリジン残基への修飾体（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を設定した。さらに、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＣｏｎｆｉｄｅｎｃｅがＨｉｇｈのもののみとなるようフィルターをかけた。【０５３９】
また、修飾部位の検索対象のアミノ酸配列のデータとして、図４に示される（１）、（３）を用いた。【０５４０】
（２−４）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、参考例１のバインダーペプチドを用いて修飾したトラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸１９残基からなるペプチド、ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ（配列番号４７）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ７９１．７４８７２、理論値７９１．７４７５３、３価）が観測され（図１７）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける３１７位のリジン残基の修飾を示す、２価のｂ１８に相当するｍ／ｚ  １１１４．３５（理論値：１１１４．０６）のプロダクトイオンが確認された（図１８）。また、トリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸２８残基からなるペプチド、ＥＥＱＹＤＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ（配列番号４８）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ８８６．９３４０８、理論値：８８６．９３２１５、４価）が観測され（図１９）、ＣＩＤスペクトルより同じく重鎖の３１７位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１４に相当するｍ／ｚ  ９３８．７０（理論値：９３８．４６）のプロダクトイオンが確認された（図２０）。【０５４１】
［参考例３：可溶性タンパク質に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物（ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体）の合成、ならびに当該化合物を用いた抗ＨＥＲ２ＩｇＧ抗体トラスツズマブの修飾およびその解析］
（３−１）ＩｇＧ１  Ｆｃ結合性ペプチドの合成
Ａｃ−ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ−ＮＨ２（配列番号４９）の配列を参考例１と同様にＦｍｏｃ固相合成法により合成した。目的物を得た。【０５４２】
（３−２）Ａｃ−ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ−ＮＨ２（配列番号４９）の５位と３４位のＣｙｓでの分子内ジスルフィド結合の形成
【化５４】
2020090979.tif 000062
【０５４３】
（３−１）で合成したペプチドをＤＭＳＯに溶解し、０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ  ８．０を加えた。この溶液にグルタチオン酸化型を加えて室温で２０時間攪拌した。反応溶液に２Ｍトリフルオロ酢酸水溶液を加え反応を停止し、これを０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸０．０５％を含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、目的物（２０．０ｍｇ，４．７０μｍｏｌ）を得た。【０５４４】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝４  １０６３．６５［Ｍ＋４Ｈ］４＋，ｚ＝５  ８５１．１５［Ｍ＋５Ｈ］５＋【０５４５】
（３−３）ジスルフィドリンカーとペプチドの連結
【化５５】
2020090979.tif 000063
【０５４６】
（３−２）で合成したＡｃ−ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ−ＮＨ２（配列番号４９）（２０．０ｍｇ，４．７０μｍｏｌ、ただし５番目と３４番目の２つのシステインはそれぞれ分子内でジスルフィド結合を形成している）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．００ｍＬ）に溶解し、３，３’−ジチオジプロピオン酸ジ（Ｎ−スクシンイミジル）（７６．０ｍｇ，１８８μｍｏｌ）をアセトニトリル（１．００ｍＬ）に溶解した溶液を加え、室温で２４時間攪拌した。減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、これを０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、オクタドデシル基化学結合型シリカゲルを充填剤とする逆相高速液体クロマトグラフィーに付し、トリフルオロ酢酸を０．０５％含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、各フラクションをＬＣ−ＭＳにより確認した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することによりアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥を行い、上記ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体（１２．０ｍｇ，２．６３μｍｏｌ）を得た。【０５４７】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝５  ９０８．９５［Ｍ＋５Ｈ］５＋，ｚ＝６  ７５７．７５［Ｍ＋６Ｈ］６＋
ＨＰＬＣ純度：８３％【０５４８】
（３−４）抗ＨＥＲ２ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾とＥＳＩ−ＴＯＦＭＳによる解析
（３−３）で合成したペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体はＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドに溶解し４ｍＭとした。抗ＨＥＲ２ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）５００μｇを５０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ  ５．５）１７１μＬに溶解させ、４ｍＭのペプチド試薬を８．５μＬ（抗体に対して１０等量）加えて、室温で１時間攪拌した。反応液をＮＡＰ−５カラムに添加し、反応を停止させ２０ｍＭＰＢＳバッファーに置換した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料のトラスツズマブは１４８２３４にピークが観測され、結合性ペプチドが一つ導入された生成物が１５２６４８にピークが観測され、結合性ペプチドが二つ導入された生成物が１５７０８３にピークが観測された。【０５４９】
（３−５）トラスツズマブの特異的修飾体の還元条件でのＥＳＩ−ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
（３−４）で生成した抗体・ペプチド複合体に７ｍＭトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液５μＬ（抗体に対して等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、生成物は重鎖にチオプロピオニル基が導入された５０６８６、５０８４７および、原料と同じ２３４３９に軽鎖ピークが観測された。【０５５０】
（３−６）抗ＨＥＲ２ＩｇＧ抗体トラスツズマブの特異的修飾のＨＩＣ−ＵＰＬＣ解析
（３−４）で生成した抗体・ペプチド複合体と原料の抗体をＨＩＣにより解析した。カラムはＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐａｋ  Ｈｉ  Ｒｅｓ  ＨＩＣ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｗａｔｅｒｓ）４．６ｘ１００ｍｍ  ２．５μｍを使用した。Ａ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，２．３Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ７．０、Ｂ＿Ｂｕｆｆｅｒ：０．１Ｍ  ＰｉＮａ，ｐＨ７．０にて流速は０．６ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエントをＡ６０％  Ｂ４０％→Ａ０％  Ｂ１００％，１６ｍｉｎ（データ採取２０ｍｉｎ）、カラム温度は４０℃、サーモスタット温度は４０℃、検出器は２８０ｎｍの波長で検出した。【０５５１】
サンプルについては以下の条件で反応させた。
ａ：トラスツズマブ原料
ｂ：トラスツズマブ＋ペプチドジスルフィドリンカー連結物−ＮＨＳ活性化体  １０等量；【０５５２】
Ｒｅｔｅｎｓｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ９．７２０２分はトラスツズマブ原料、９．２６８９分はペプチドが１個導入された化合物、８．７９９４分はペプチドが２個導入された化合物であると考えられる（図２１）。  【０５５３】
［参考例４：トラスツズマブのチオール導入体のペプチドマッピング］
（４−１）トラスツズマブのチオール導入体のトリプシン処理
参考例（２−１）と同じ処理を行った。【０５５４】
（４−２）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定条件
参考例（２−２）と同じ測定条件を用いた。【０５５５】
（４−３）トラスツズマブの修飾部位の解析条件
参考例（２−３）と同じ解析条件を用いた。【０５５６】
（４−４）トラスツズマブのＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、参考例３のバインダーペプチドを用いて修飾したトラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（ヨードアセトアミドによるＣａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ化を受けたチオール導入体（＋１４５．０１９Ｄａ））を含むアミノ酸１８残基からなるペプチド、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号５０）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ  ７６９．０４６８８、理論値：７６９．０４４５７、３価）が観測され（図２２）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２８８位もしくは２９０位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１２に相当するｍ／ｚ  ７４１．１５（理論値：７４０．８９）のプロダクトイオンが確認された（図２３）。
【産業上の利用可能性】
【０５５７】
本発明は、例えば、位置選択的に修飾された抗体の製造に有用である。
【図１−１】
2020090979.tif 000065
【図１−２】
2020090979.tif 000066
【図１−３】
2020090979.tif 000067
【図２】
2020090979.tif 000068
【図３】
2020090979.tif 000069
【図４】
2020090979.tif 000070
【図５】
2020090979.tif 000071
【図６】
2020090979.tif 000072
【図７】
2020090979.tif 000073
【図８】
2020090979.tif 000074
【図９】
2020090979.tif 000075
【図１０】
2020090979.tif 000076
【図１１−１】
2020090979.tif 000077
【図１１−２】
2020090979.tif 000078
【図１２】
2020090979.tif 000079
【図１３−１】
2020090979.tif 000080
【図１３−２】
2020090979.tif 000081
【図１４】
2020090979.tif 000082
【図１５−１】
2020090979.tif 000083
【図１５−２】
2020090979.tif 000084
【図１６】
2020090979.tif 000085
【図１７】
2020090979.tif 000086
【図１８】
2020090979.tif 000087
【図１９】
2020090979.tif 000088
【図２０】
2020090979.tif 000089
【図２１】
2020090979.tif 000090
【図２２】
2020090979.tif 000091
【図２３】
2020090979.tif 000092
【図２４】
2020090979.tif 000093
【図２５】
2020090979.tif 000094
【図２６】
2020090979.tif 000095
【図２７−１】
2020090979.tif 000096
【図２７−２】
2020090979.tif 000097
【図２８】
2020090979.tif 000098
【図２９】
2020090979.tif 000099
【図３０】
2020090979.tif 000100
【図３１】
2020090979.tif 000101
【図３２−１】
2020090979.tif 000102
【図３２−２】
2020090979.tif 000103
【配列表】
2020090979000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和3年4月7日(2021.4.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩であって、
前記化合物が、下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、化合物またはその塩。
【請求項２】
前記ポリペプチドが、グルタミン残基（Ｑ）−グルタミン酸（Ｅ）−スレオニン残基（Ｔ）からなるトリペプチド（ＱＥＴ）をＮ末端に含むポリペプチドである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
グルタミン残基がピログルタミル化されている、請求項１または２記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
前記ポリペプチドが、１６個以上１２３個以下のアミノ酸残基数を有するポリペプチドである、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
前記ポリペプチドが、２０個以上７０個以下のアミノ酸残基数を有するポリペプチドである、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、以下（１）〜（４）からなる群より選ばれる、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物またはその塩：
【化１】
2020090979.tif 000104
〔Ｑは、Ｎ末端のグルタミン残基であり、Ｅはグルタミン酸残基であり、Ｔはスレオニン残基であり、実線は結合手であり、スペーサー部分は１個以上５０個以下のアミノ酸残基からなる部分であり、抗体に対する親和性ポリペプチド部分は１５個以上７０個以下のアミノ酸残基からなる部分である。〕。
【請求項７】
抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、プロテインＺ、および抗体に対する親和性を有するそれらの断片、ならびに抗体に対する親和性を有するそれらの変異体からなる群より選ばれる、請求項６記載の化合物またはその塩。
【請求項８】
抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＸＩＸＳＩＲＤＤＣ（配列番号５）のアミノ酸配列（２つのＸは、それぞれ独立して、アルギニン残基、グルタミン酸残基、およびグルタミン残基からなる群より選ばれる１つのアミノ酸残基である。）において、いずれかの１つのアミノ酸残基が、リジン残基により置換されており、かつ配列番号５のアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６または７記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号６）のアミノ酸配列において、いずれかの１つのアミノ酸残基が、リジン残基により置換されており、かつ配列番号６のアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６〜８のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
【請求項１０】
抗体に対する親和性物質が、下記からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項記載の化合物またはその塩：
（１）ＱＥＴＮＰＴＥＮＬＹＦＱＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号７）；
（２）ＱＴＡＤＮＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＱＱＬＮＤＡＱＡＰＱＡ（配列番号８）；
（３）ＱＥＴＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号９）；
（４）ＱＥＴＦＮＫＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１０）；
（５）ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号２２）；
（６）ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号２３）；
（７）ＱＥＴＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５１）；
（８）ＱＥＴＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５２）；
（９）ＱＥＴＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５３）；
（１０）ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号２４）；および
（１１）ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号２５）。
【請求項１１】
抗体の位置選択的修飾試薬であって、
下記式（Ｉ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ      （Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩を含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、抗体の位置選択的修飾試薬。
【請求項１２】
抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩であって、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、抗体またはその塩。
【請求項１３】
式（ＩＩ）中の抗体が、Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’で表される構造単位を複数有する、請求項１２記載の抗体またはその塩。
【請求項１４】
抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩であって、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、複合体またはその塩。
【請求項１５】
式（ＩＩＩ）中の抗体が、Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’で表される構造単位を複数有する、請求項１４記載の複合体またはその塩。
【請求項１６】
生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（ＩＶ）：
Ｌ１−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＶ）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
【請求項１７】
機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
下記式（ＩＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
Ｆは、機能性物質であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、切断性部分、機能性物質および抗体を有する複合体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（Ｖ１）：
Ｌ１−Ｂ’（−Ｆ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ１）
〔式中、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基であり、
Ｂ’、Ｆ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩＩ）のものと同じである。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
【請求項１８】
機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
（Ａ）下記式（ＩＩ）：
Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＩ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒ’は、抗体と反応性基との間の反応により生成する部分であり、
Ｔは、抗体である。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および切断性部分を有する抗体またはその塩の切断性部分を切断して、
下記式（ＩＶ）：
Ｌ１−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （ＩＶ）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
Ｌ１は、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基、または（ｉｉ’）生体直交性官能基を含まない１価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること、ならびに
（Ｂ）前記生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を、１種または２種以上の機能性物質と反応させて、
下記式（Ｖ２）
Ｆ−Ｌ１’−Ｂ−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ２）
〔式中、
Ｂ、Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＶ）のものと同じであり、
Ｌ１’は、機能性物質と、（ｉ’）生体直交性官能基を含む１価の基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
Ｆは、機能性物質である。〕、または
下記式（Ｖ３）：
Ｆａ−Ｌ１’−Ｂ’（−Ｆｂ）−Ｒ’−Ｔ      （Ｖ３）
〔式中、
Ｒ’およびＴは、前記式（ＩＶ）のものと同じであり、
Ｌ１’は、前記式（Ｖ２）のものと同じであり、
Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む３価の基であり、
ＦａおよびＦｂは、それぞれ、同一または異なる機能性物質である。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含み、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、方法。
【国際調査報告】
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