(57)【要約】  ５’位修飾ヌクレオシドおよびそれを用いたヌクレオチドを開示する。本発明のヌクレオシドは、以下の式（Ｉ）：    【化１】2020166551.tif 000084で表される。本発明の５’位修飾ヌクレオシドは、特定の臓器への集積などが懸念されるホスホロチオエート修飾核酸の代替とすることができ、かつその製造においてジアステレオマーの分離工程を必要としないため、工業的生産性にも優れている。
2020166551.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）で表される化合物またはその塩：
【化１】
2020166551.tif 000068
（式中、
Ｂａｓｅ１およびＢａｓｅ２はそれぞれ独立して、α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、ここで、該α群は、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数１から６の直鎖アルキル基、炭素数１から６の直鎖アルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数１から６の直鎖アルキルチオ基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖アルキルアミノ基、核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、およびハロゲン原子からなり、
Ｇはシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、核酸合成の水酸基の保護基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から７のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から７のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいアシル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいシリル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいリン酸基、核酸合成の保護基で保護されたリン酸基、−Ｐ（Ｒ４）Ｒ５［式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６のアルコキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６のアルキル基を有するジアルキルアミノ基を表す］を表し、
Ｒ６は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ８は水素原子でありかつＲ９は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２［式中、Ｒ１２は水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ８およびＲ９は一緒になって以下の式：
【化２】
2020166551.tif 000069
［式中、
Ｒ２１は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２およびＲ２３は一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ１−［式中、ｑ１は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４およびＲ２５は、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４およびＲ２５は一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６）Ｒ３７［式中、Ｒ３６およびＲ３７は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６およびＲ２７は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９は、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１、Ｒ３２、およびＲ３３は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４およびＲ３５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍは０から２の整数であり；
ｎは０から１の整数であり；
ｐは０から１の整数であり；
Ｘ１は、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２は酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｒ１０は水素原子でありかつＲ１１は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｂ［式中、Ｒ１２ｂは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１０およびＲ１１は一緒になって以下の式：
【化３】
2020166551.tif 000070
［式中、
Ｒ２１ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ２−［式中、ｑ２は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｂ）Ｒ３７ｂ［式中、Ｒ３６ｂおよびＲ３７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｂおよびＲ２７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｂは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｂ、Ｒ３２ｂ、およびＲ３３ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｂおよびＲ３５ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ’は０から２の整数であり；
ｎ’は０から１の整数であり；
ｐ’は０から１の整数であり；
Ｘ１ｂは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｂは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｍ１は単結合であるか、または以下の式：
【化４】
2020166551.tif 000071
［式中、
Ｂａｓｅ３は、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、
Ｇ２はシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ１３は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ１４は水素原子でありかつＲ１５は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｃ［式中、Ｒ１２ｃは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１４およびＲ１５は一緒になって以下の式：
【化５】
2020166551.tif 000072
［式中、
Ｒ２１ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ３−［式中、ｑ３は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｃ）Ｒ３７ｃ［式中、Ｒ３６ｃおよびＲ３７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｃおよびＲ２７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｃは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｃ、Ｒ３２ｃ、およびＲ３３ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｃおよびＲ３５ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ”は０から２の整数であり；
ｎ”は０から１の整数であり；
ｐ”は０から１の整数であり；
Ｘ１ｃは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｃは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表す）。
【請求項２】
前記式（Ｉ）において、Ｍ１が単結合である、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
前記式（Ｉ）において、前記Ｂａｓｅ１および前記Ｂａｓｅ２が、それぞれ独立して、６−アミノプリン−９−イル基、２，６−ジアミノプリン−９−イル基、２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル基、２−アミノ−６−フルオロプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ブロモプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル基、６−アミノ−２−メトキシプリン−９−イル基、６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル基、６−アミノ−２−フルオロプリン−９−イル基、２，６−ジメトキシプリン−９−イル基、２，６−ジクロロプリン−９−イル基、６−メルカプトプリン−９−イル基、２−オキソ−４−アミノ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、４−アミノ−２−オキソ−５−フルオロ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、４−アミノ−２−オキソ−５−クロロ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−メトキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−メルカプト−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、または４−アミノ−５−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基である、請求項２に記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
前記式（Ｉ）において、前記Ｂａｓｅ１および前記Ｂａｓｅ２が、それぞれ独立して以下の式：
【化６】
2020166551.tif 000073
からなる群から選択される基である、請求項２に記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
前記式（Ｉ）において、Ｒ６がメチル基またはエチル基である、請求項２から４のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
前記式（Ｉ）において、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１がすべて水素原子である、請求項２から５のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項７】
以下の式（ＩＩ）で表されるヌクレオシド構造を少なくとも１つ含有するオリゴヌクレオチドまたはその薬理学上許容される塩：
【化７】
2020166551.tif 000074
（式中、
Ｂａｓｅ１およびＢａｓｅ２はそれぞれ独立して、α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、ここで、該α群は、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数１から６の直鎖アルキル基、炭素数１から６の直鎖アルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数１から６の直鎖アルキルチオ基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖アルキルアミノ基、核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、およびハロゲン原子からなり、
Ｇはシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ６は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ８は水素原子でありかつＲ９は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２［式中、Ｒ１２は水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ８およびＲ９は一緒になって以下の式：
【化８】
2020166551.tif 000075
［式中、
Ｒ２１は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２およびＲ２３は一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ１−［式中、ｑ１は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４およびＲ２５は、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４およびＲ２５は一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６）Ｒ３７［式中、Ｒ３６およびＲ３７は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６およびＲ２７は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９は、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１、Ｒ３２、およびＲ３３は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４およびＲ３５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍは０から２の整数であり；
ｎは０から１の整数であり；
ｐは０から１の整数であり；
Ｘ１は、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２は酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｒ１０は水素原子でありかつＲ１１は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｂ［式中、Ｒ１２ｂは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１０およびＲ１１は一緒になって以下の式：
【化９】
2020166551.tif 000076
［式中、
Ｒ２１ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ２−［式中、ｑ２は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｂ）Ｒ３７ｂ［式中、Ｒ３６ｂおよびＲ３７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｂおよびＲ２７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｂは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｂ、Ｒ３２ｂ、およびＲ３３ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｂおよびＲ３５ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ’は０から２の整数であり；
ｎ’は０から１の整数であり；
ｐ’は０から１の整数であり；
Ｘ１ｂは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｂは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｍ１は単結合であるか、または以下の式：
【化１０】
2020166551.tif 000077
［式中、
Ｂａｓｅ３は、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、
Ｇ２はシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ１３は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ１４は水素原子でありかつＲ１５は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｃ［式中、Ｒ１２ｃは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１４およびＲ１５は一緒になって以下の式：
【化１１】
2020166551.tif 000078
［式中、
Ｒ２１ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ３−［式中、ｑ３は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｃ）Ｒ３７ｃ［式中、Ｒ３６ｃおよびＲ３７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｃおよびＲ２７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｃは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｃ、Ｒ３２ｃ、およびＲ３３ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｃおよびＲ３５ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ”は０から２の整数であり；
ｎ”は０から１の整数であり；
ｐ”は０から１の整数であり；
Ｘ１ｃは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｃは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表す）。
【請求項８】
前記式（ＩＩ）において、Ｍ１が単結合である、請求項７に記載のオリゴヌクレオチドまたはその薬理学上許容される塩。
【請求項９】
前記式（ＩＩ）において、Ｒ６がメチル基またはエチル基である、請求項８に記載のオリゴヌクレオチドまたはその薬理学上許容される塩。
【請求項１０】
前記式（ＩＩ）において、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１がすべて水素原子である、請求項８または９に記載のオリゴヌクレオチドまたはその薬理学上許容される塩。
【請求項１１】
請求項７に記載のオリゴヌクレオチドまたはその薬理学上許容される塩の製造方法であって、
以下の式（Ｉ）で表される化合物またはその薬理学上許容される塩：
【化１２】
2020166551.tif 000079
（式中、
Ｂａｓｅ１およびＢａｓｅ２はそれぞれ独立して、α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、ここで、該α群は、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数１から６の直鎖アルキル基、炭素数１から６の直鎖アルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数１から６の直鎖アルキルチオ基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖アルキルアミノ基、核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、およびハロゲン原子からなり、
Ｇはシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、核酸合成の水酸基の保護基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から７のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から７のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいアシル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいシリル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいリン酸基、核酸合成の保護基で保護されたリン酸基、−Ｐ（Ｒ４）Ｒ５［式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６のアルコキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６のアルキル基を有するジアルキルアミノ基を表す］を表し、
Ｒ６は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ８は水素原子でありかつＲ９は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２［式中、Ｒ１２は水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ８およびＲ９は一緒になって以下の式：
【化１３】
2020166551.tif 000080
［式中、
Ｒ２１は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２およびＲ２３は一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ１−［式中、ｑ１は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４およびＲ２５は、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４およびＲ２５は一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６）Ｒ３７［式中、Ｒ３６およびＲ３７は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６およびＲ２７は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９は、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１、Ｒ３２、およびＲ３３は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４およびＲ３５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍは０から２の整数であり；
ｎは０から１の整数であり；
ｐは０から１の整数であり；
Ｘ１は、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２は酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｒ１０は水素原子でありかつＲ１１は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｂ［式中、Ｒ１２ｂは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１０およびＲ１１は一緒になって以下の式：
【化１４】
2020166551.tif 000081
［式中、
Ｒ２１ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ２−［式中、ｑ２は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｂ）Ｒ３７ｂ［式中、Ｒ３６ｂおよびＲ３７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｂおよびＲ２７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｂは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｂ、Ｒ３２ｂ、およびＲ３３ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｂおよびＲ３５ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ’は０から２の整数であり；
ｎ’は０から１の整数であり；
ｐ’は０から１の整数であり；
Ｘ１ｂは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｂは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｍ１は単結合であるか、または以下の式：
【化１５】
2020166551.tif 000082
［式中、
Ｂａｓｅ３は、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、
Ｇ２はシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ１３は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ１４は水素原子でありかつＲ１５は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｃ［式中、Ｒ１２ｃは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１４およびＲ１５は一緒になって以下の式：
【化１６】
2020166551.tif 000083
［式中、
Ｒ２１ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ３−［式中、ｑ３は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｃ）Ｒ３７ｃ［式中、Ｒ３６ｃおよびＲ３７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｃおよびＲ２７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｃは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｃ、Ｒ３２ｃ、およびＲ３３ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｃおよびＲ３５ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ”は０から２の整数であり；
ｎ”は０から１の整数であり；
ｐ”は０から１の整数であり；
Ｘ１ｃは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｃは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表す）
を用いてオリゴヌクレオチドを合成する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、５’位修飾ヌクレオシドおよびそれを用いたヌクレオチドに関する。より詳細には、良好なヌクレアーゼ耐性能を有しかつ効率よく製造することのできる５’位修飾ヌクレオシドおよびそれを用いたヌクレオチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
核酸医薬による疾病の治療法として、アンチセンス法、アンチジーン法、アプタマー、ｓｉＲＮＡなどがある。このうち、アンチセンス法は、疾病に関わるｍＲＮＡと相補的なオリゴヌクレオチド（アンチセンス鎖）を外部から導入し、二重鎖を形成させることにより、病原ＲＮＡの翻訳過程を阻害し、疾病の治療や予防を行う手法である。ｓｉＲＮＡもこれに類似しており、生体に投与した二重鎖ＲＮＡによりｍＲＮＡからタンパク質への翻訳を阻害する。一方、アンチジーン法は、病原ＲＮＡを転写するＤＮＡ部位に対応する三重鎖形成オリゴヌクレオチドを外部から導入することによりＤＮＡからＲＮＡへの転写を抑制する。また、アプタマーは、短い核酸分子（オリゴヌクレオチド）であるため、疾病の原因となるタンパク質などの生体成分と結合することにより機能を発揮する。【０００３】
こうした核酸医薬の素材として、種々の人工核酸が開発されている。中でも核酸の糖部コンホメーションを架橋によって固定化した２’，４’−ＢＮＡ（ｂｒｉｄｇｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ、別名ＬＮＡ）は一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）に対して優れた結合親和性を有することが報告されており（非特許文献１および２）アンチセンス法などの様々な核酸医薬への適応が期待されている。【０００４】
一方、核酸の５’位にメチル基を導入した人工核酸は、ヌクレアーゼ耐性能の面で優れた特性を有することが報告されている（特許文献１〜３）。このため、５’位に置換基を導入した人工核酸についても診断や医薬への応用が期待されている。【０００５】
しかし、このような５’位に置換基を導入した人工核酸は、その合成においてジアステレオマーの分離を必要とするため（非特許文献３および４）、製造工程が全体として煩雑となり、工業的生産に向けたさらなる開発が所望されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２０１０／０４８５４９号
【特許文献２】国際公開第２０１０／０４８５８５号
【特許文献３】国際公開第２０１０／０７７５７８号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】S.Obikaら, T. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 8735-8738
【非特許文献２】S.Singhら, J. Chem. Commun. 1998, 455-456.
【非特許文献３】Yawmanら, J. Org. Chem. 1995, 60, 788-789
【非特許文献４】Manoharanら, J. Org. Chem. 2016, 81, 2261-2279
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記課題を解決するものであり、その目的とするところは、良好なヌクレアーゼ耐性能を有し、かつその合成経路においてジアステレオマー分離操作を必要とすることなく効率的に製造することのできる５’位が修飾されたヌクレオシドおよびそれを用いたヌクレオチドを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、以下の式（Ｉ）で表される化合物またはその塩：【００１０】
【化１】
2020166551.tif 000003
【００１１】
（式中、
Ｂａｓｅ１およびＢａｓｅ２はそれぞれ独立して、α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、ここで、該α群は、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数１から６の直鎖アルキル基、炭素数１から６の直鎖アルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数１から６の直鎖アルキルチオ基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖アルキルアミノ基、核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、およびハロゲン原子からなり、
Ｇはシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、核酸合成の水酸基の保護基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から７のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から７のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいアシル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいシリル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいリン酸基、核酸合成の保護基で保護されたリン酸基、−Ｐ（Ｒ４）Ｒ５［式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６のアルコキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６のアルキル基を有するジアルキルアミノ基を表す］を表し、
Ｒ６は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ８は水素原子でありかつＲ９は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２［式中、Ｒ１２は水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ８およびＲ９は一緒になって以下の式：【００１２】
【化２】
2020166551.tif 000004
【００１３】
［式中、
Ｒ２１は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２およびＲ２３は一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ１−［式中、ｑ１は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４およびＲ２５は、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４およびＲ２５は一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６）Ｒ３７［式中、Ｒ３６およびＲ３７は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６およびＲ２７は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９は、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１、Ｒ３２、およびＲ３３は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４およびＲ３５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍは０から２の整数であり；
ｎは０から１の整数であり；
ｐは０から１の整数であり；
Ｘ１は、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２は酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｒ１０は水素原子でありかつＲ１１は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｂ［式中、Ｒ１２ｂは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１０およびＲ１１は一緒になって以下の式：【００１４】
【化３】
2020166551.tif 000005
【００１５】
［式中、
Ｒ２１ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ２−［式中、ｑ２は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｂ）Ｒ３７ｂ［式中、Ｒ３６ｂおよびＲ３７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｂおよびＲ２７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｂは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｂ、Ｒ３２ｂ、およびＲ３３ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｂおよびＲ３５ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ’は０から２の整数であり；
ｎ’は０から１の整数であり；
ｐ’は０から１の整数であり；
Ｘ１ｂは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｂは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｍ１は単結合であるか、または以下の式：【００１６】
【化４】
2020166551.tif 000006
【００１７】
［式中、
Ｂａｓｅ３は、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、
Ｇ２はシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ１３は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ１４は水素原子でありかつＲ１５は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｃ［式中、Ｒ１２ｃは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１４およびＲ１５は一緒になって以下の式：【００１８】
【化５】
2020166551.tif 000007
【００１９】
［式中、
Ｒ２１ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ３−［式中、ｑ３は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｃ）Ｒ３７ｃ［式中、Ｒ３６ｃおよびＲ３７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｃおよびＲ２７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｃは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｃ、Ｒ３２ｃ、およびＲ３３ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｃおよびＲ３５ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ”は０から２の整数であり；
ｎ”は０から１の整数であり；
ｐ”は０から１の整数であり；
Ｘ１ｃは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｃは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表す）である。【００２０】
１つの実施形態では、上記式（Ｉ）において、Ｍ１は単結合である。【００２１】
さらなる実施形態では、上記式（Ｉ）において、上記Ｂａｓｅ１および上記Ｂａｓｅ２は、それぞれ独立して、６−アミノプリン−９−イル基、２，６−ジアミノプリン−９−イル基、２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル基、２−アミノ−６−フルオロプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ブロモプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル基、６−アミノ−２−メトキシプリン−９−イル基、６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル基、６−アミノ−２−フルオロプリン−９−イル基、２，６−ジメトキシプリン−９−イル基、２，６−ジクロロプリン−９−イル基、６−メルカプトプリン−９−イル基、２−オキソ−４−アミノ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、４−アミノ−２−オキソ−５−フルオロ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、４−アミノ−２−オキソ−５−クロロ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−メトキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−メルカプト−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、または４−アミノ−５−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基である。【００２２】
さらなる実施形態では、上記式（Ｉ）において、上記Ｂａｓｅ１および上記Ｂａｓｅ２は、それぞれ独立して以下の式：【００２３】
【化６】
2020166551.tif 000008
【００２４】
からなる群から選択される基である。【００２５】
さらなる実施形態では、上記式（Ｉ）において、Ｒ６はメチル基またはエチル基である。【００２６】
さらなる実施形態では、上記式（Ｉ）において、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はすべて水素原子である。【００２７】
本発明はまた、以下の式（ＩＩ）で表されるヌクレオシド構造を少なくとも１つ含有するオリゴヌクレオチドまたはその薬理学上許容される塩：【００２８】
【化７】
2020166551.tif 000009
【００２９】
（式中、
Ｂａｓｅ１およびＢａｓｅ２はそれぞれ独立して、α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、ここで、該α群は、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数１から６の直鎖アルキル基、炭素数１から６の直鎖アルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数１から６の直鎖アルキルチオ基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖アルキルアミノ基、核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、およびハロゲン原子からなり、
Ｇはシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ６は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ８は水素原子でありかつＲ９は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２［式中、Ｒ１２は水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ８およびＲ９は一緒になって以下の式：【００３０】
【化８】
2020166551.tif 000010
【００３１】
［式中、
Ｒ２１は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２およびＲ２３は一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ１−［式中、ｑ１は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４およびＲ２５は、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４およびＲ２５は一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６）Ｒ３７［式中、Ｒ３６およびＲ３７は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６およびＲ２７は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９は、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１、Ｒ３２、およびＲ３３は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４およびＲ３５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍは０から２の整数であり；
ｎは０から１の整数であり；
ｐは０から１の整数であり；
Ｘ１は、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２は酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｒ１０は水素原子でありかつＲ１１は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｂ［式中、Ｒ１２ｂは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１０およびＲ１１は一緒になって以下の式：【００３２】
【化９】
2020166551.tif 000011
【００３３】
［式中、
Ｒ２１ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ２−［式中、ｑ２は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｂ）Ｒ３７ｂ［式中、Ｒ３６ｂおよびＲ３７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｂおよびＲ２７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｂは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｂ、Ｒ３２ｂ、およびＲ３３ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｂおよびＲ３５ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ’は０から２の整数であり；
ｎ’は０から１の整数であり；
ｐ’は０から１の整数であり；
Ｘ１ｂは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｂは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｍ１は単結合であるか、または以下の式：【００３４】
【化１０】
2020166551.tif 000012
【００３５】
［式中、
Ｂａｓｅ３は、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、
Ｇ２はシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ１３は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ１４は水素原子でありかつＲ１５は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｃ［式中、Ｒ１２ｃは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１４およびＲ１５は一緒になって以下の式：【００３６】
【化１１】
2020166551.tif 000013
【００３７】
［式中、
Ｒ２１ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ３−［式中、ｑ３は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｃ）Ｒ３７ｃ［式中、Ｒ３６ｃおよびＲ３７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｃおよびＲ２７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｃは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｃ、Ｒ３２ｃ、およびＲ３３ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｃおよびＲ３５ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ”は０から２の整数であり；
ｎ”は０から１の整数であり；
ｐ”は０から１の整数であり；
Ｘ１ｃは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｃは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表す）である。【００３８】
１つの実施形態では、上記式（ＩＩ）において、Ｍ１は単結合である。【００３９】
さらなる実施形態では、上記式（ＩＩ）において、Ｒ６はメチル基またはエチル基である。【００４０】
さらなる実施形態では、上記式（ＩＩ）において、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はすべて水素原子である。【００４１】
本発明はまた、上記オリゴヌクレオチドまたはその薬理学上許容される塩の製造方法であって、
以下の式（Ｉ）で表される化合物またはその薬理学上許容される塩：【００４２】
【化１２】
2020166551.tif 000014
【００４３】
（式中、
Ｂａｓｅ１およびＢａｓｅ２はそれぞれ独立して、α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、ここで、該α群は、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数１から６の直鎖アルキル基、炭素数１から６の直鎖アルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数１から６の直鎖アルキルチオ基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖アルキルアミノ基、核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、およびハロゲン原子からなり、
Ｇはシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、核酸合成の水酸基の保護基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から７のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から７のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいアシル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいシリル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいリン酸基、核酸合成の保護基で保護されたリン酸基、−Ｐ（Ｒ４）Ｒ５［式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６のアルコキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６のアルキル基を有するジアルキルアミノ基を表す］を表し、
Ｒ６は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ８は水素原子でありかつＲ９は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２［式中、Ｒ１２は水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ８およびＲ９は一緒になって以下の式：【００４４】
【化１３】
2020166551.tif 000015
【００４５】
［式中、
Ｒ２１は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２およびＲ２３は一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ１−［式中、ｑ１は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４およびＲ２５は、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４およびＲ２５は一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６）Ｒ３７［式中、Ｒ３６およびＲ３７は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６およびＲ２７は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９は、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１、Ｒ３２、およびＲ３３は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４およびＲ３５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍは０から２の整数であり；
ｎは０から１の整数であり；
ｐは０から１の整数であり；
Ｘ１は、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２は酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｒ１０は水素原子でありかつＲ１１は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｂ［式中、Ｒ１２ｂは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１０およびＲ１１は一緒になって以下の式：【００４６】
【化１４】
2020166551.tif 000016
【００４７】
［式中、
Ｒ２１ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ２−［式中、ｑ２は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｂ）Ｒ３７ｂ［式中、Ｒ３６ｂおよびＲ３７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｂおよびＲ２７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｂは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｂ、Ｒ３２ｂ、およびＲ３３ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｂおよびＲ３５ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ’は０から２の整数であり；
ｎ’は０から１の整数であり；
ｐ’は０から１の整数であり；
Ｘ１ｂは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｂは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｍ１は単結合であるか、または以下の式：【００４８】
【化１５】
2020166551.tif 000017
【００４９】
［式中、
Ｂａｓｅ３は、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、
Ｇ２はシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ１３は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ１４は水素原子でありかつＲ１５は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｃ［式中、Ｒ１２ｃは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１４およびＲ１５は一緒になって以下の式：【００５０】
【化１６】
2020166551.tif 000018
【００５１】
［式中、
Ｒ２１ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ３−［式中、ｑ３は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｃ）Ｒ３７ｃ［式中、Ｒ３６ｃおよびＲ３７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｃおよびＲ２７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｃは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｃ、Ｒ３２ｃ、およびＲ３３ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｃおよびＲ３５ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ”は０から２の整数であり；
ｎ”は０から１の整数であり；
ｐ”は０から１の整数であり；
Ｘ１ｃは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｃは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表す）
を用いてオリゴヌクレオチドを合成する工程を包含する、方法である。
【発明の効果】
【００５２】
本発明によれば、新規な５’位修飾ヌクレオシドおよびそれを用いたヌクレオチドが提供される。本発明の５’位修飾ヌクレオシドは、特定の臓器への集積などが懸念されるホスホロチオエート修飾核酸の代替とすることも可能である。本発明の５’位修飾ヌクレオシドはまた、その製造においてジアステレオマーの分離工程を必要としないため、工業的生産性にも優れている。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】５’−ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＸ−３’の配列の各種オリゴヌクレオチドを３’−エキソヌクレアーゼで処理した場合の、未切断オリゴヌクレオチドの割合の経時変化を示すグラフである。
【図２】ＡＳＯ１およびＡＳＯ２の各被験オリゴヌクレオチドを投与した場合ならびに生理食塩水投与の場合のマウス肝臓中の標的遺伝子ＮＲ３Ｃ１のｍＲＮＡ量を示すグラフであり、生理食塩水を投与した場合のｍＲＮＡ量を１００とした場合の相対値にて表す各種オリゴヌクレオチドによるアンチセンス効果を示すグラフである。
【図３】ＡＳＯ３およびＡＳＯ４の各被験オリゴヌクレオチドを投与した場合ならびに生理食塩水投与の場合のマウス肝臓中の標的遺伝子ＮＲ３Ｃ１のｍＲＮＡ量を示すグラフであり、生理食塩水を投与した場合のｍＲＮＡ量を１００とした場合の相対値にて表す各種オリゴヌクレオチドによるアンチセンス効果を示すグラフである。
【図４】ＡＳＯ１およびＡＳＯ２の各被験オリゴヌクレオチドを投与した場合ならびに生理食塩水投与の場合の血液中のアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の活性を示すグラフであり、ＡＳＯ１投与の場合のＡＬＴ値およびＡＳＴ値のそれぞれを１００とした場合の相対値にて表す。
【図５】ＡＳＯ３およびＡＳＯ４の各被験オリゴヌクレオチドを投与した場合ならびに生理食塩水投与の場合の血液中のアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の活性を示すグラフであり、ＡＳＯ３投与の場合のＡＬＴ値およびＡＳＴ値のそれぞれを１００とした場合の相対値にて表す。
【図６】５’−ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＸ−３’の配列の各種オリゴヌクレオチドを３’−エキソヌクレアーゼで処理した場合の、未切断オリゴヌクレオチドの割合の経時変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
まず、本明細書中で用いられる用語を定義する。
【００５５】
本明細書において、用語「炭素数１から６の直鎖アルキル基」は、炭素数１〜６の任意の直鎖アルキル基をいい、具体的にはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、またはｎ−ヘキシル基をいう。一方、用語「炭素数１から６のアルキル基」という場合は、炭素数１〜６の任意の直鎖、分岐鎖または環状のアルキル基をいう。
【００５６】
本明細書において、用語「炭素数１から６の直鎖アルコキシ基」は、炭素数１〜６の任意の直鎖アルキル基を有するアルコキシ基を包含する。例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基などが挙げられる。一方、用語「炭素数１から６のアルコキシ基」という場合は、炭素数１〜６の任意の直鎖、分岐鎖または環状のアルコキシ基をいう。また、用語「炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基」という場合は、上記「炭素数１から６の直鎖アルコキシ基」、ならびに「炭素数１から６の直鎖アルコキシ基」を構成する１つまたはそれ以上の水素原子が、同一または異なっていてもよい他の「炭素数１から６の直鎖アルコキシ基」で置換されたアルキル基をいう。このような「炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基」としては、例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、メトキシメトキシ基、エトキシメトキシ基、ｎ−プロポキシメトキシ基、メトキシエトキシ基（例えば２−メトキシエトキシ基）、エトキシエトキシ基（例えば２−エトキシエトキシ基）、およびｎ−プロポキシエトキシ基が挙げられる。
【００５７】
本明細書において、用語「炭素数１から６のシアノアルコキシ基」は、炭素数１〜６の任意の直鎖、分岐鎖または環状のアルコキシ基における少なくとも１つの水素原子がシアノ基で置換された基をいう。
【００５８】
本明細書において、用語「炭素数１から６の直鎖アルキルチオ基」は、炭素数１〜６の任意の直鎖アルキル基を有するアルキルチオ基を包含する。例えば、メチルチオ基、エチルチオ基、ｎ−プロピルチオ基などが挙げられる。一方、用語「炭素数１から６のアルキルチオ基」という場合は、炭素数１〜６の任意の直鎖、分岐鎖または環状のアルキルチオ基をいう。
【００５９】
本明細書において、用語「炭素数１から６の直鎖アルキルアミノ基」は、炭素数１〜６の任意の直鎖アルキル基を有するアルキルアミノ基を１つまたは２つ有するアルキルアミノ基を包含する。例えば、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、エチルアミノ基、メチルエチルアミノ基、ジエチルアミノ基などが挙げられる。
【００６０】
本明細書において、用語「分岐または環を形成していてもよい炭素数１から７のアルキル基」は、炭素数１〜７の任意の直鎖アルキル基、炭素数３〜７の任意の分岐鎖アルキル基、および炭素数３〜７の任意の環状アルキル基を包含する。単に、「低級アルキル基」という場合もある。例えば、炭素数１〜７の任意の直鎖アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、およびｎ−ヘプチル基が挙げられ、炭素数３〜７の任意の分岐鎖アルキル基としては、イソプロピル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、イソペンチル基などが挙げられ、そして炭素数３〜７の任意の環状アルキル基としては、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基などが挙げられる。
【００６１】
本明細書において、用語「分岐または環を形成していてもよい炭素数２から７のアルケニル基」は、炭素数２〜７の任意の直鎖アルケニル基、炭素数３〜７の任意の分岐鎖アルケニル基、および炭素数３〜７の任意の環状アルケニル基を包含する。単に、「低級アルケニル基」という場合もある。例えば、炭素数２〜７の任意の直鎖アルケニル基としては、エテニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、１−ペンテニル基、２−ペンテニル基、３−ペンテニル基、４−ペンテニル基、１−ヘキセニル基などが挙げられ、炭素数３〜７の任意の分岐鎖アルケニル基としては、イソプロペニル基、１−メチル−１−プロペニル基、１−メチル−２−プロペニル基、２−メチル−１−プロペニル基、２−メチル−２−プロペニル基、１−メチル−２−ブテニル基などが挙げられ、そして炭素数３〜７の任意の環状アルケニル基としては、シクロブテニル基、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基などが挙げられる。
【００６２】
本明細書において、用語「ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基」は、炭化水素のみで構成された、炭素数６〜１０の任意のアリール基と、当アリール基の環構造を構成する少なくとも１つの炭素原子がヘテロ原子（例えば、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子、ならびにこれらの組合せ）で置換された、炭素数３〜１２の任意のヘテロアリール基とを包含する。当該炭素数６〜１０のアリール基としては、フェニル基、ナフチル基、インデニル基、アズレニル基などが挙げられ、そして当該炭素数３〜１２の任意のヘテロアリール基としては、ピリジル基、ピロリル基、キノリル基、インドリル基、イミダゾリル基、フリル基、チエニル基などが挙げられる。
【００６３】
本明細書において、用語「ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基」の例としては、ベンジル基、フェネチル基、ナフチルメチル基、３−フェニルプロピル基、２−フェニルプロピル基、４−フェニルブチル基、２−フェニルブチル基、ピリジルメチル基、インドリルメチル基、フリルメチル基、チエニルメチル基、ピロリルメチル基、２−ピリジルエチル基、１−ピリジルエチル基、３−チエニルプロピル基などが挙げられる。
【００６４】
本明細書において、用語「アシル基」の例としては、脂肪族アシル基および芳香族アシル基が挙げられる。具体的には、脂肪族アシル基の例としては、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、ペンタノイル基、ピバロイル基、バレリル基、イソバレリル基、オクタノイル基、ノナノイル基、デカノイル基、３−メチルノナノイル基、８−メチルノナノイル基、３−エチルオクタノイル基、３，７−ジメチルオクタノイル基、ウンデカノイル基、ドデカノイル基、トリデカノイル基、テトラデカノイル基、ペンタデカノイル基、ヘキサデカノイル基、１−メチルペンタデカノイル基、１４−メチルペンタデカノイル基、１３，１３−ジメチルテトラデカノイル基、ヘプタデカノイル基、１５−メチルヘキサデカノイル基、オクタデカノイル基、１−メチルヘプタデカノイル基、ノナデカノイル基、アイコサノイル基およびヘナイコサノイル基のようなアルキルカルボニル基；スクシノイル基、グルタロイル基、アジポイル基のようなカルボキシ化アルキルカルボニル基；クロロアセチル基、ジクロロアセチル基、トリクロロアセチル基、トリフルオロアセチル基のようなハロゲノ低級アルキルカルボニル基；メトキシアセチル基のような低級アルコキシ低級アルキルカルボニル基；（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノイル基のような不飽和アルキルカルボニル基が挙げられる。また、芳香族アシル基の例としては、ベンゾイル基、α−ナフトイル基、β−ナフトイル基のようなアリールカルボニル基；２−ブロモベンゾイル基、４−クロロベンゾイル基のようなハロゲノアリールカルボニル基；２，４，６−トリメチルベンゾイル基、４−トルオイル基のような低級アルキル化アリールカルボニル基；４−アニソイル基のような低級アルコキシ化アリールカルボニル基；２−カルボキシベンゾイル基、３−カルボキシベンゾイル基、４−カルボキシベンゾイル基のようなカルボキシ化アリールカルボニル基；４−ニトロベンゾイル基、２−ニトロベンゾイル基のようなニトロ化アリールカルボニル基；２−（メトキシカルボニル）ベンゾイル基のような低級アルコキシカルボニル化アリールカルボニル基；４−フェニルベンゾイル基のようなアリール化アリールカルボニル基などが挙げられる。好適には、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、ペンタノイル基、ピバロイル基、ベンゾイル基である。
【００６５】
本明細書において、用語「シリル基」の例としては、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、イソプロピルジメチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、メチルジイソプロピルシリル基、メチルジ−ｔ−ブチルシリル基、トリイソプロピルシリル基のようなトリ低級アルキルシリル基；ジフェニルメチルシリル基、ブチルジフェニルブチルシリル基、ジフェニルイソプロピルシリル基、フェニルジイソプロピルシリル基のような１〜２個のアリール基で置換されたトリ低級アルキルシリル基などが挙げられる。好適には、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基であり、さらに好適にはトリメチルシリル基である。
【００６６】
本明細書において、用語「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子が挙げられる。好適には、フッ素原子または塩素原子である。
【００６７】
本明細書において、用語「核酸合成のアミノ基の保護基」、「核酸合成の水酸基の保護基」、「核酸合成の保護基で保護された水酸基」、「核酸合成の保護基で保護されたリン酸基」、「核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基」の「保護基」とは、核酸合成の際に安定してアミノ基、水酸基、リン酸基またはメルカプト基を保護し得るものであれば、特に制限されない。具体的には、酸性または中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解、および光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基のことをいう。このような保護基としては、例えば、低級アルキル基、低級アルケニル基、アシル基、テトラヒドロピラニルまたはテトラヒドロチオピラニル基、テトラヒドロフラニルまたはテトラヒドロチオフラニル基、シリル基、低級アルコキシメチル基、低級アルコキシ化低級アルコキシメチル基、ハロゲノ低級アルコキシメチル基、低級アルコキシ化エチル基、ハロゲン化エチル基、１〜３個のアリール基で置換されたメチル基、「低級アルキル基、低級アルコキシ基、ハロゲン原子またはシアノ基でアリール環が置換された１〜３個のアリール基で置換されたメチル基」、低級アルコキシカルボニル基、「ハロゲン原子、低級アルコキシ基またはニトロ基で置換されたアリール基」、「ハロゲン原子またはトリ低級アルキルシリル基で置換された低級アルコキシカルボニル基」、アルケニルオキシカルボニル基、「低級アルコキシまたはニトロ基でアリール環が置換されていてもよいアラルキルオキシカルボニル基」などが挙げられる。
【００６８】
より具体的には、テトラヒドロピラニル基またはテトラヒドロチオピラニル基としては、テトラヒドロピラン−２−イル基、３−ブロモテトラヒドロピラン−２−イル基、４−メトキシテトラヒドロピラン−４−イル基、テトラヒドロチオピラン−４−イル基、４−メトキシテトラヒドロチオピラン−４−イル基などが挙げられる。テトラヒドロフラニル基またはテトラヒドロチオフラニル基としては、テトラヒドロフラン−２−イル基、テトラヒドロチオフラン−２−イル基が挙げられる。低級アルコキシメチル基としては、メトキシメチル基、１，１−ジメチル−１−メトキシメチル基、エトキシメチル基、プロポキシメチル基、イソプロポキシメチル基、ブトキシメチル基、ｔ−ブトキシメチル基などが挙げられる。低級アルコキシ化低級アルコキシメチル基としては、２−メトキシエトキシメチル基などが挙げられる。ハロゲノ低級アルコキシメチル基としては、２，２，２−トリクロロエトキシメチル基、ビス（２−クロロエトキシ）メチル基などが挙げられる。低級アルコキシ化エチル基としては、１−エトキシエチル基、１−（イソプロポキシ）エチル基などが挙げられる。ハロゲン化エチル基としては、２，２，２−トリクロロエチル基などが挙げられる。１〜３個のアリール基で置換されたメチル基としては、ベンジル基、α−ナフチルメチル基、β−ナフチルメチル基、ジフェニルメチル基、トリフェニルメチル基、α−ナフチルジフェニルメチル基、９−アンスリルメチル基などが挙げられる。「低級アルキル基、低級アルコキシ基、ハロゲン原子またはシアノ基でアリール環が置換された１〜３個のアリール基で置換されたメチル基」としては、４−メチルベンジル基、２，４，６−トリメチルベンジル基、３，４，５−トリメチルベンジル基、４−メトキシベンジル基、４−メトキシフェニルジフェニルメチル基、４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル基、２−ニトロベンジル基、４−ニトロベンジル基、４−クロロベンジル基、４−ブロモベンジル基、４−シアノベンジル基などが挙げられる。低級アルコキシカルボニル基としては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基などが挙げられる。「ハロゲン原子、低級アルコキシ基またはニトロ基で置換されたアリール基」としては、４−クロロフェニル基、２−フロロフェニル基、４−メトキシフェニル基、４−ニトロフェニル基、２，４−ジニトロフェニル基などが挙げられる。「ハロゲン原子またはトリ低級アルキルシリル基で置換された低級アルコキシカルボニル基」としては、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基、２−トリメチルシリルエトキシカルボニル基などが挙げられる。アルケニルオキシカルボニル基としては、ビニルオキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基などが挙げられる。「低級アルコキシまたはニトロ基でアリール環が置換されていてもよいアラルキルオキシカルボニル基」としては、ベンジルオキシカルボニル基、４−メトキシベンジルオキシカルボニル基、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、２−ニトロベンジルオキシカルボニル基、４−ニトロベンジルオキシカルボニル基などが挙げられる。
【００６９】
１つの実施形態では、「核酸合成の水酸基の保護基」としては、例えば脂肪族アシル基、芳香族アシル基、１〜３個のアリール基で置換されたメチル基、「低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、シアノ基でアリール環が置換された１〜３個のアリール基で置換されたメチル基」、およびシリル基が挙げられる。あるいは、１つの実施形態では、「核酸合成の水酸基の保護基」としては、例えばアセチル基、ベンゾイル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベンゾイル基、ジメトキシトリチル基、モノメトキシトリチル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）基、［（トリイソプロピルシリル）オキシ］メチル（ＴＯＭ）基、［（２−ニトロベンジル）オキシ］メチル（ＮＢＯＭ）基、ビス（アセトキシエトキシ）メチルエーテル（ＡＣＥ）基、テトラヒドロ−４−メトキシ−２Ｈ−ピラン−２−イル（Ｍｔｈｐ）基、１−（２−シアノエトキシ）エチル（ＣＥＥ）基、２−シアノエトキシメチル（ＣＥＭ）基、ｔｅｒｔ−ブチルジチオメチル（ＤＴＭ）基、２−（４−トリルスルホニル）エトキシメチル（ＴＥＭ）基、および４−（Ｎ−ジクロロアセチル−Ｎ−メチルアミノ）ベンジルオキシメチル（４−ＭＡＢＯＭ）基が挙げられる。
【００７０】
１つの実施形態では、「核酸合成の保護基で保護された水酸基」の保護基としては、例えば脂肪族アシル基、芳香族アシル基、「１〜３個のアリール基で置換されたメチル基」、「ハロゲン原子、低級アルコキシ基またはニトロ基で置換されたアリール基」、低級アルキル基、および低級アルケニル基が挙げられる。あるいは、１つの実施形態では、「核酸合成の保護基で保護された水酸基」の保護基としては、例えばベンゾイル基、ベンジル基、２−クロロフェニル基、４−クロロフェニル基、および２−プロペニル基が挙げられる。
【００７１】
１つの実施形態では、「核酸合成のアミノ基の保護基」としては、例えばアシル基、好適には、ベンゾイル基が挙げられる。
【００７２】
１つの実施形態では、「核酸合成の保護基で保護されたリン酸基」の「保護基」としては、例えば低級アルキル基、シアノ基で置換された低級アルキル基、アラルキル基、「ニトロ基またはハロゲン原子でアリール環が置換されたアラルキル基」、および「低級アルキル基、ハロゲン原子、またはニトロ基で置換されたアリール基」が挙げられる。あるいは、１つの実施形態では、「核酸合成の保護基で保護されたリン酸基」の「保護基」としては、例えば２−シアノエチル基、２，２，２−トリクロロエチル基、ベンジル基、２−クロロフェニル基、および４−クロロフェニル基が挙げられる。
【００７３】
１つの実施形態では、「核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基」の「保護基」としては、例えば脂肪族アシル基および芳香族アシル基、好適には、ベンゾイル基が挙げられる。
【００７４】
本明細書において、−Ｐ（Ｒ４）Ｒ５［式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６のアルコキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６のアルキル基を有するジアルキルアミノ基を表す］で表される基のうち、Ｒ４がＯＲ４ａでありそしてＲ５がＮＲ５ａである基は、「ホスホロアミダイト基」という（ここで、Ｒ４ａは例えば炭素数１から６のシアノアルコキシ基であり、そしてＲ５ａは例えば炭素数１から６のアルキル基である）。ホスホロアミダイト基としては、好適には、式−Ｐ（ＯＣ２Ｈ４ＣＮ）（Ｎ（ｉＰｒ）２）で表される基、または式−Ｐ（ＯＣＨ３）（Ｎ（ｉＰｒ）２）で表される基が挙げられる。ここで、ｉＰｒはイソプロピル基を表す。
【００７５】
本明細書において、用語「ヌクレオシド」および「ヌクレオシド類縁体」とは、プリンまたはピリミジン塩基と糖とが結合した「ヌクレオシド」のうち非天然型のもの、ならびに、プリンおよびピリミジン以外の芳香族複素環および芳香族炭化水素環でプリンまたはピリミジン塩基との代用が可能なものと糖が結合したものをいう。
【００７６】
本明細書において、用語「人工オリゴヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド類縁体」とは、同一または異なる「ヌクレオシド」または「ヌクレオシド類縁体」がリン酸ジエステル結合で例えば２〜５０個結合した「オリゴヌクレオチド」の非天然型誘導体をいう。そのような類縁体としては、好適には、糖部分が修飾された糖誘導体；リン酸ジエステル部分がチオエート化されたチオエート誘導体；末端のリン酸部分がエステル化されたエステル体；プリン塩基上のアミノ基がアミド化されたアミド体が挙げられ、さらに好適には、糖部分が修飾された糖誘導体が挙げられる。
【００７７】
本明細書において、用語「その塩」とは、本発明の式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物の塩をいう。そのような塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩などの金属塩；アンモニウム塩のような無機塩、ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩；フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩のようなハロゲン原子化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなアリールスルホン酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩；および、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩が挙げられる。
【００７８】
本明細書において、用語「その薬理学上許容される塩」としては、本発明の式（ＩＩ）で表されるヌクレオシド構造を少なくとも１つ含有するオリゴヌクレオチド類縁体の塩をいう。そのような塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩などの金属塩；アンモニウム塩のような無機塩、ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩；フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩のようなハロゲン原子化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなアリールスルホン酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩；および、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩が挙げられる。
【００７９】
以下、本発明について詳述する。
【００８０】
本発明の５’位修飾ヌクレオシドは、以下の式（Ｉ）：
【００８１】
【化１７】
2020166551.tif 000019
【００８２】
（式中、
Ｂａｓｅ１およびＢａｓｅ２はそれぞれ独立して、α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、ここで、該α群は、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数１から６の直鎖アルキル基、炭素数１から６の直鎖アルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数１から６の直鎖アルキルチオ基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖アルキルアミノ基、核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、およびハロゲン原子からなり、
Ｇはシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、核酸合成の水酸基の保護基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から７のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から７のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいアシル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいシリル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいリン酸基、核酸合成の保護基で保護されたリン酸基、−Ｐ（Ｒ４）Ｒ５［式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６のアルコキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６のアルキル基を有するジアルキルアミノ基を表す］を表し、
Ｒ６は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ８は水素原子でありかつＲ９は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２［式中、Ｒ１２は水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ８およびＲ９は一緒になって以下の式：
【００８３】
【化１８】
2020166551.tif 000020
【００８４】
［式中、
Ｒ２１は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２およびＲ２３は一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ１−［式中、ｑ１は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４およびＲ２５は、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４およびＲ２５は一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６）Ｒ３７［式中、Ｒ３６およびＲ３７は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６およびＲ２７は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９は、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１、Ｒ３２、およびＲ３３は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４およびＲ３５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍは０から２の整数であり；
ｎは０から１の整数であり；
ｐは０から１の整数であり；
Ｘ１は、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２は酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｒ１０は水素原子でありかつＲ１１は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｂ［式中、Ｒ１２ｂは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１０およびＲ１１は一緒になって以下の式：
【００８５】
【化１９】
2020166551.tif 000021
【００８６】
［式中、
Ｒ２１ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ２−［式中、ｑ２は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｂ）Ｒ３７ｂ［式中、Ｒ３６ｂおよびＲ３７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｂおよびＲ２７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｂは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｂ、Ｒ３２ｂ、およびＲ３３ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｂおよびＲ３５ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ’は０から２の整数であり；
ｎ’は０から１の整数であり；
ｐ’は０から１の整数であり；
Ｘ１ｂは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｂは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｍ１は単結合であるか、または以下の式：
【００８７】
【化２０】
2020166551.tif 000022
【００８８】
［式中、
Ｂａｓｅ３は、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、
Ｇ２はシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ１３は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ１４は水素原子でありかつＲ１５は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｃ［式中、Ｒ１２ｃは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１４およびＲ１５は一緒になって以下の式：
【００８９】
【化２１】
2020166551.tif 000023
【００９０】
［式中、
Ｒ２１ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ３−［式中、ｑ３は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｃ）Ｒ３７ｃ［式中、Ｒ３６ｃおよびＲ３７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｃおよびＲ２７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｃは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｃ、Ｒ３２ｃ、およびＲ３３ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｃおよびＲ３５ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ”は０から２の整数であり；
ｎ”は０から１の整数であり；
ｐ”は０から１の整数であり；
Ｘ１ｃは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｃは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表す）で表される化合物またはその塩である。
【００９１】
上記式（Ｉ）において、Ｂａｓｅ１、Ｂａｓｅ２およびＢａｓｅ３は互いに同一または異なっていてもよい。Ｂａｓｅ１、Ｂａｓｅ２およびＢａｓｅ３は、それぞれ独立して、例えばプリン塩基（すなわち、プリン−９−イル基）またはピリミジン塩基（すなわち、２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基）である。これらの塩基は、水酸基、炭素数１から６の直鎖アルキル基、炭素数１から６の直鎖アルコキシ基、メルカプト基、炭素数１から６の直鎖アルキルチオ基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖アルキルアミノ基、およびハロゲン原子からなるα群より選択される任意の置換基を１以上有していてもよい。
【００９２】
上記Ｂａｓｅ１、Ｂａｓｅ２およびＢａｓｅ３の具体例としては、アデニニル基、グアニニル基、シトシニル基、ウラシニル基、およびチミニル基、ならびに６−アミノプリン−９−イル基、２，６−ジアミノプリン−９−イル基、２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル基、２−アミノ−６−フルオロプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ブロモプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル基、６−アミノ−２−メトキシプリン−９−イル基、６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル基、６−アミノ−２−フルオロプリン−９−イル基、２，６−ジメトキシプリン−９−イル基、２，６−ジクロロプリン−９−イル基、６−メルカプトプリン−９−イル基、２−オキソ−４−アミノ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、４−アミノ−２−オキソ−５−フルオロ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、４−アミノ−２−オキソ−５−クロロ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−メトキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−メルカプト−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、および４−アミノ−５−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基が挙げられる。
【００９３】
あるいは、Ｂａｓｅ１、Ｂａｓｅ２およびＢａｓｅ３は、本発明の５’位修飾ヌクレオシドを核酸医薬に導入することを目的とした場合、以下の構造式：
【００９４】
【化２２】
2020166551.tif 000024
【００９５】
でそれぞれ表される基、ならびに、２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−アミノ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、６−アミノプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル基、４−アミノ−５−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、および２−オキソ−４−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基が好ましい。Ｂａｓｅ１、Ｂａｓｅ２およびＢａｓｅ３はまた、オリゴヌクレオチドの合成の際には、上記基を構成する水酸基およびアミノ基が保護基により保護されているものであることが好ましい。
【００９６】
本発明の５’位修飾ヌクレオシドは、上記のように式（Ｉ）で表されるような構造、すなわち、所定のフラノース環を組み合わせて構成される、以下の式（Ｉ’）または（Ｉ”）：
【００９７】
【化２３】
2020166551.tif 000025
【００９８】
（式（Ｉ’）中、Ｂａｓｅ１、Ｂａｓｅ２、Ｇ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、上記式（Ｉ）で定義されるものと同様であり、そして式（Ｉ”）中、Ｂａｓｅ１、Ｂａｓｅ２、Ｂａｓｅ３、Ｇ、Ｇ２、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、上記式（Ｉ）で定義されるものと同様である）で表されるダイマーまたはトリマーの構造を有する。ここで、式（Ｉ’）のダイマーを構成する各フラノース環の５’位には、それぞれ２つのＲ６および２つの水素原子が結合している。式（Ｉ”）のトリマーを構成する各フラノース環の５’位には、それぞれ２つのＲ６、２つの水素原子、および２つのＲ１３が結合している。このような構造を有していることにより、本発明の５’位修飾ヌクレオシドは、同一分子内に含まれる各ピラノース環の５’位においてジアステレオマーの構造を有することはなく、従来の５’位に置換基を導入した人工核酸と比較して、その合成の際にジアステレオマーの分離を行う必要性から解放される。
【００９９】
１つの実施形態では、上記式（Ｉ’）のダイマーにおけるＲ６はメチル基である。１つの実施形態では、上記式（Ｉ”）のトリマーにおけるＲ６およびＲ１３はともにメチル基である。
【０１００】
１つの実施形態では、上記式（Ｉ’）のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のすべては水素原子である。１つの実施形態では、上記式（Ｉ”）のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１４およびＲ１５のすべては水素原子である。
【０１０１】
上記式（Ｉ’）で表される本発明の５’位修飾ヌクレオシドは、式（Ｉ’）を構成する各フラノース環の５’位に、それぞれ２つのＲ６および２つの水素原子が導入されていることにより、後述するオリゴヌクレオチドにおけるヌクレアーゼ耐性能が向上する。さらに、上記式（Ｉ”）で表される本発明の５’位修飾ヌクレオシドは、式（Ｉ”）を構成する各フラノース環の５’位に、それぞれ２つのＲ６、２つの水素原子、および２つのＲ１３が導入されていることにより、後述するオリゴヌクレオチドにおけるヌクレアーゼ耐性能が向上する。
【０１０２】
本発明において、オリゴヌクレオチドは、このような式（Ｉ）、あるいは式（Ｉ’）または（Ｉ”）で表される５’位修飾ヌクレオシドを用い、例えば、当該分野において周知のアミダイト法、またはM. Kuwaharaら、Nucleic Acids Res.，2008年，36巻，13号，4257-4265頁に記載されるような三リン酸化を経て容易に製造することができる。
【０１０３】
本発明のオリゴヌクレオチドまたはその薬理学上許容される塩（以下、これらをまとめて「本発明のオリゴヌクレオチド」を言うことがある）は、以下の式（ＩＩ）：
【０１０４】
【化２４】
2020166551.tif 000026
【０１０５】
（式中、
Ｂａｓｅ１およびＢａｓｅ２はそれぞれ独立して、α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、ここで、該α群は、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数１から６の直鎖アルキル基、炭素数１から６の直鎖アルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数１から６の直鎖アルキルチオ基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖アルキルアミノ基、核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、およびハロゲン原子からなり、
Ｇはシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ６は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ８は水素原子でありかつＲ９は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２［式中、Ｒ１２は水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ８およびＲ９は一緒になって以下の式（ＣＲ０１ａ）〜（ＣＲ１１ａ）：
【０１０６】
【化２５】
2020166551.tif 000027
【０１０７】
［式中、
Ｒ２１は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２およびＲ２３は一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ１−［式中、ｑ１は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４およびＲ２５は、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４およびＲ２５は一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６）Ｒ３７［式中、Ｒ３６およびＲ３７は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６およびＲ２７は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８は、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９は、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１、Ｒ３２、およびＲ３３は、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４およびＲ３５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍは０から２の整数であり；
ｎは０から１の整数であり；
ｐは０から１の整数であり；
Ｘ１は、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２は酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｒ１０は水素原子でありかつＲ１１は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｂ［式中、Ｒ１２ｂは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１０およびＲ１１は一緒になって以下の式（ＣＲ０１ｂ）〜（ＣＲ１１ｂ）：
【０１０８】
【化２６】
2020166551.tif 000028
【０１０９】
［式中、
Ｒ２１ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｂおよびＲ２３ｂは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ２−［式中、ｑ２は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｂおよびＲ２５ｂは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｂ）Ｒ３７ｂ［式中、Ｒ３６ｂおよびＲ３７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｂおよびＲ２７ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｂは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｂは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｂ、Ｒ３２ｂ、およびＲ３３ｂは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｂおよびＲ３５ｂは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ’は０から２の整数であり；
ｎ’は０から１の整数であり；
ｐ’は０から１の整数であり；
Ｘ１ｂは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｂは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表し、
Ｍ１は単結合であるか、または以下の式：
【０１１０】
【化２７】
2020166551.tif 000029
【０１１１】
［式中、
Ｂａｓｅ３は、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよいプリン−９−イル基または２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基を表し、
Ｇ２はシアノ基またはニトロ基であり、
Ｒ１３は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１または２のアルキル基であり、
Ｒ１４は水素原子でありかつＲ１５は水素原子、ハロゲン原子；炭素数１から６の直鎖アルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から６の直鎖アルコキシ基；または−ＯＲ１２ｃ［式中、Ｒ１２ｃは水素原子、または核酸合成の水酸基の保護基である］であるか、あるいは
Ｒ１４およびＲ１５は一緒になって以下の式（ＣＲ０１ｃ）〜（ＣＲ１１ｃ）：
【０１１２】
【化２８】
2020166551.tif 000030
【０１１３】
［式中、
Ｒ２１ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数２から６のアルケニル基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１０のアリール基、該α群から選択される任意の置換基を１以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは、それぞれ独立して、水素原子；ヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール基で置換されていてもよく、かつ分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；またはヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数３から１２のアリール部分を有するアラルキル基；であるか、あるいは
Ｒ２２ｃおよびＲ２３ｃは一緒になって、−（ＣＨ２）ｑ３−［式中、ｑ３は２から５の整数である］を表し；
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは、それぞれ独立して、水素原子；水酸基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基；分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基；アミノ基；および核酸合成の保護基で保護されたアミノ基；からなる群から選択される基であるか、あるいは、
Ｒ２４ｃおよびＲ２５ｃは一緒になって、＝Ｃ（Ｒ３６ｃ）Ｒ３７ｃ［式中、Ｒ３６ｃおよびＲ３７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基、炭素数１から６のシアノアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルアミノ基を表す］を表し；
Ｒ２６ｃおよびＲ２７ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２８ｃは、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、または炭素数１から６の直鎖または分岐鎖アルキルチオ基であり；
Ｒ２９ｃは、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、あるいは核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
Ｒ３１ｃ、Ｒ３２ｃ、およびＲ３３ｃは、それぞれ独立して、水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、あるいは核酸合成のアミノ基の保護基であり；
Ｒ３４ｃおよびＲ３５ｃは、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、アミノ基、または核酸合成の保護基で保護されたアミノ基であり；
ｍ”は０から２の整数であり；
ｎ”は０から１の整数であり；
ｐ”は０から１の整数であり；
Ｘ１ｃは、酸素原子、硫黄原子、またはアミノ基であり；そして
Ｘ２ｃは酸素原子または硫黄原子である]
で表される二価の基を表す）で表されるヌクレオシド構造を少なくとも１つ含む。
【０１１４】
なお、本発明において、上記式（ＣＲ０１ａ）〜（ＣＲ１１ａ）、（ＣＲ０１ｂ）〜（ＣＲ１１ｂ）、および（ＣＲ０１ｃ）〜（ＣＲ１１ｃ）で表される架橋構造のうち、式（ＣＲ０７ａ）、（ＣＲ０９ａ）、（ＣＲ０７ｂ）、（ＣＲ０９ｂ）、（ＣＲ０７ｃ）、および（ＣＲ０９ｃ）で表される構造は、当該架橋構造の周辺に存在する任意のアニオン（例えば、水酸化物イオン、リン酸イオン、塩化物イオン）により電気的に中性に保持されている。
【０１１５】
すなわち、本発明の上記式（ＩＩ）のオリゴヌクレオチドは、以下の式（ＩＩ’）または（ＩＩ”）：
【０１１６】
【化２９】
2020166551.tif 000031
【０１１７】
（式（ＩＩ’）中、Ｂａｓｅ１、Ｂａｓｅ２、Ｇ、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、上記式（ＩＩ）で定義されるものと同様であり、そして式（ＩＩ”）中、Ｂａｓｅ１、Ｂａｓｅ２、Ｂａｓｅ３、Ｇ、Ｇ２、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、上記式（ＩＩ）で定義されるものと同様である）で表されるヌクレオシド構造を含む。
【０１１８】
１つの実施形態では、上記式（ＩＩ’）のヌクレオシド構造を含むオリゴヌクレオチドにおけるＲ６はメチル基またはエチル基である。１つの実施形態では、上記式（ＩＩ”）のヌクレオシド構造を含むオリゴヌクレオチドにおけるＲ６およびＲ１３はともにメチル基またはエチル基である。
【０１１９】
１つの実施形態では、上記式（ＩＩ’）のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のすべては水素原子である。１つの実施形態では、上記式（ＩＩ”）のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１４およびＲ１５のすべては水素原子である。
【０１２０】
本発明のオリゴヌクレオチドは、上記式（ＩＩ）、あるいは式（ＩＩ’）または（ＩＩ”）で表されるヌクレオシド構造を、任意の位置に少なくとも１つ有する。その位置および数は、特に限定されず、目的に応じて適宜設計され得る。
【０１２１】
このようなヌクレオシド構造を含むオリゴヌクレオチド（アンチセンス分子）は、従来の２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡを用いる場合と比較して、ヌクレアーゼ耐性能が飛躍的に向上する。また、公知の２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡに匹敵するｓｓＲＮＡ結合親和性を有する。
【０１２２】
これらのことから、本発明の５’位修飾ヌクレオシドを用いて合成された本発明のオリゴヌクレオチドは、抗腫瘍剤、抗ウイルス剤をはじめとした、特定の遺伝子の働きを阻害して疾病を治療する医薬品（アンチセンス分子）としての有用性が期待される。
【０１２３】
特に、アンチセンス法では、相補センス鎖ＲＮＡに対する結合親和性および生体内ＤＮＡ分解酵素への耐性の両方が必要とされる。一般的に、核酸は、一本鎖状態では、糖部の構造が絶えずＤＮＡ二重鎖に近い形と、ＤＮＡ−ＲＮＡ二重鎖やＲＮＡ二重鎖に近い形との間で揺らいでいることが知られている。一本鎖核酸が相補的なＲＮＡ鎖と二重鎖を形成する場合、その糖部構造は固定される。そこで、本発明の５’位修飾ヌクレオシドでは、糖部を予め二重鎖を形成する場合の状態に固定されているため、目的のＲＮＡ鎖と二重鎖を形成しやすく、安定に存在させることができる。また、核酸二重鎖は、水分子のネットワークと呼ばれる鎖のようにつながった水和水により安定化されていることも知られている。
【０１２４】
本発明のオリゴヌクレオチドは、例えば、賦形剤、結合剤、防腐剤、酸化安定剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤などの医薬の製剤技術分野において通常用いられる補助剤を配合して、非経口投与製剤またはリポソーム製剤とすることができる。また、例えば、当該技術分野で通常用いられる医薬用担体を配合して、液剤、クリーム剤、軟膏剤などの局所用の製剤を調製することができる。
【実施例】
【０１２５】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。【０１２６】
（実施例１：５’位修飾ヌクレオシドの合成（１））【０１２７】
【化３０】
2020166551.tif 000032
【０１２８】
（１−１）化合物２の合成【０１２９】
【化３１】
2020166551.tif 000033
【０１３０】
Caruthersら、Tetrahedron Lett., 1996年,37巻,35号,6239-6242頁に記載の方法により作製した化合物１（４．２６ｇ，１１．９５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６０ｍＬ）に溶解させた後、ヨードベンゼンジアセテート（ＰｈＩ（Ａ）２；８．４７ｇ，２６．３０ｍｍｏｌ）を添加した。その後２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシルフリーラジカル（ＴＥＭＰＯ；４３０．４ｍｇ，２．７５ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、室温で５時間撹拌した。反応終了後に水／アセトニトリル（＝１：１（容量比），０．６６ｍＬ）を添加し、室温で４時間撹拌した。反応終了後にメタノール（２０ｍＬ）を添加した後、溶媒を減圧留去して、化合物２（粗生成物）を得た。この化合物２を精製することなく次の反応に用いた。【０１３１】
（１−２）化合物３の合成【０１３２】
【化３２】
2020166551.tif 000034
【０１３３】
上記で得られた化合物２（粗生成物）のジクロロメタン溶液（１２０ｍＬ）に、メタノール（４．８ｍＬ，０．１２ｍｏｌ）と１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ；２．７６ｇ，１４．３９ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で４．５時間撹拌した。反応終了後に水を添加し、酢酸エチルで抽出した。水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝１：１（容量比））により精製し、化合物３（３．８４ｇ，収率８４％，２工程）を白色固体として得た。【０１３４】
得られた化合物３の物性データを表１に示す。【０１３５】
【表１】
2020166551.tif 000035
【０１３６】
（１−３）化合物４の合成【０１３７】
【化３３】
2020166551.tif 000036
【０１３８】
上記で得られた化合物３（３．００ｇ，７．８０ｍｍｏｌ）を無水トルエンで共沸した後、無水テトラヒドロフラン（８０ｍＬ）に溶解させ、窒素気流下にてメチルマグネシウムブロミド（ＣＨ３ＭｇＢｒ；３１ｍＬ，３１．０ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中で１Ｍ）を−２０℃にてゆっくり滴下し、４．５時間撹拌した。反応が完結しなかったため、さらにメチルマグネシウムブロミド（ＣＨ３ＭｇＢｒ；７．８ｍＬ，７．８ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中で１Ｍ）を−２０℃にてゆっくり滴下し、３．５時間撹拌した。反応終了後に塩化アンモニウム水溶液を添加し、酢酸エチルで抽出した。飽和重曹水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝３：２（容量比））により精製し、化合物４（２．５２ｇ，収率８４％）を白色固体として得た。【０１３９】
得られた化合物４の物性データを表２に示す。【０１４０】
【表２】
2020166551.tif 000037
【０１４１】
（１−４）化合物５の合成【０１４２】
【化３４】
2020166551.tif 000038
【０１４３】
上記で得られた化合物４（１．２６ｇ，３．２８ｍｍｏｌ）を無水トルエンで共沸した後、無水アセトニトリル（３５ｍＬ）に溶解させ、５’−（４，４’−ジメトキシトリチル）−チミジン−３’−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホロアミダイト（ＤＭＴ−ｄＴホスホロアミダイト；３．６９ｇ，４．９５ｍｍｏｌ）および５−（ベンジルチオ）−１Ｈ−テトラゾール（ＢＴＴ；０．９８ｇ，５．１０ｍｍｏｌ）を窒素気流下にて順次添加し、室温で３時間撹拌した。反応終了後に水を添加し、酢酸エチルで抽出した。水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝１：１→５：２（容量比））により簡易に精製し、粗生成物として化合物５（３．４８ｇ）を得た。【０１４４】
（１−５）化合物６の合成【０１４５】
【化３５】
2020166551.tif 000039
【０１４６】
上記で得られた化合物５（３．４８ｇ）を、アセトニトリル（３０ｍＬ）に溶解させ、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ；４．６ｍＬ，７０％水溶液，３３．５９ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１時間撹拌した。反応終了後に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を０℃にて添加し、酢酸エチルで抽出した。水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，メタノール：クロロホルム＝１：２０（容量比））により精製し、化合物６（３．２４ｇ，収率７６％，２工程）を白色固体として得た。【０１４７】
得られた化合物６の物性データを表３に示す。【０１４８】
【表３】
2020166551.tif 000040
【０１４９】
（１−６）化合物７の合成【０１５０】
【化３６】
2020166551.tif 000041
【０１５１】
上記で得られた化合物６（０．６４ｇ，０．６１ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（６ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン三フッ化水素酸塩（ＴＥＡ・３ＨＦ；１．０ｍＬ，  ６．１３ｍｍｏｌ）を０℃にて添加して１５分間撹拌した後、室温で４１．５時間撹拌した。反応終了後に酢酸エチル（３０ｍＬ）を添加して溶液を希釈し、２％の重曹水で２回、水で１回洗浄した。水層を酢酸エチルで再抽出し、有機層を合わせて飽和食塩水で１回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，メタノール：クロロホルム＝１：１０（容量比））により精製し、化合物７（５３９ｍｇ，収率９５％）を白色固体として得た。【０１５２】
得られた化合物７の物性データを表４に示す。【０１５３】
【表４】
2020166551.tif 000042
【０１５４】
（１−７）化合物８の合成【０１５５】
【化３７】
2020166551.tif 000043
【０１５６】
上記で得られた化合物７（３．９８ｇ，４．２８ｍｍｏｌ）を無水トルエンで共沸した後、無水アセトニトリル（４３ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ；２．２ｍＬ，１２．９４ｍｍｏｌ）と２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホロクロリダート（iＰｒ２ＮＰ（Ｃｌ）ＯＣ２Ｈ４ＣＮ；１．８ｍＬ，６．４６ｍｍｏｌ）を窒素気流下にて順次添加し、室温で４時間撹拌した。反応終了後に酢酸エチルで希釈し、水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｄｉｏｌ−ＳｉＯ２，酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝１：１→１：２（容量比））により精製した後、再沈殿（ヘキサン：クロロホルム＝２０：１（容量比））により、化合物８（３．２５ｇ，収率６７％）を白色固体として得た。【０１５７】
得られた化合物８の物性データを表５に示す。【０１５８】
【表５】
2020166551.tif 000044
【０１５９】
（実施例２：５’位修飾ヌクレオシドの合成（２））【０１６０】
【化３８】
2020166551.tif 000045
【０１６１】
（２−１）化合物９の合成【０１６２】
【化３９】
2020166551.tif 000046
【０１６３】
実施例１の（１−３）で得られた化合物４（４９４．７ｍｇ，１．２９ｍｍｏｌ）を無水トルエンで共沸した後、無水アセトニトリル（１３ｍＬ）に溶解させ、５’−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン−３’−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホロアミダイト（ＤＭＴ−ｄＧ（ｉｂ）ホスホロアミダイト；１．６６ｇ，１．９８ｍｍｏｌ）、５−（ベンジルチオ）−１Ｈ−テトラゾール（ＢＴＴ；３７２．６ｍｇ，１．９４ｍｍｏｌ）を窒素気流下で順次添加し、室温で２時間撹拌した。反応終了後に水を添加し、酢酸エチルで抽出した。水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた化合物９（２．５１ｇ；粗生成物）を、精製することなく次の反応に用いた。【０１６４】
（２−２）化合物１０の合成【０１６５】
【化４０】
2020166551.tif 000047
【０１６６】
上記で得られた化合物９（２．５１ｇ）をアセトニトリル（１１ｍＬ）に溶解させ、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ；１．８ｍＬ，７０％水溶液，１３．１４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で２時間撹拌した。反応終了後に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を０℃にて添加し、酢酸エチルで抽出した。水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，メタノール：クロロホルム＝１：１８→１：１６）により精製し、化合物１０（１．３７ｇ，収率９４％，２工程）を白色固体として得た。【０１６７】
得られた化合物１０の物性データを表６に示す。【０１６８】
【表６】
2020166551.tif 000048
【０１６９】
（２−３）および（２−４）化合物１１および化合物１１’の合成【０１７０】
上記で得られた化合物１０を用い、以下の合成スキームにしたがって上記実施例１の（１−６）〜（１−７）に記載した方法に基づいて化合物１１’を得ることができる。【０１７１】
【化４１】
2020166551.tif 000049
【０１７２】
（実施例３：５’位修飾ヌクレオシドの合成（３））【０１７３】
【化４２】
2020166551.tif 000050
【０１７４】
（３−１）化合物１２の合成【０１７５】
【化４３】
2020166551.tif 000051
【０１７６】
上記実施例１の（１−７）で得られた化合物８（８０．５ｍｇ，０．０７１ｍｍｏｌ）を無水トルエンで共沸した後、無水アセトニトリル（０．５ｍＬ）に溶解させ、上記実施例１の（１−３）で得られた化合物４（２１．９ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）、５−（ベンジルチオ）−１Ｈ−テトラゾール（ＢＴＴ；１７．１ｍｇ，０．０８９ｍｍｏｌ）を窒素気流下で順次添加し、室温で５．５時間撹拌した。反応終了後に水を添加し、酢酸エチルで抽出した。水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた化合物１２（１０５．９ｍｇ；粗生成物）を、精製することなく次の反応に用いた。【０１７７】
（３−２）化合物１３の合成【０１７８】
【化４４】
2020166551.tif 000052
【０１７９】
上記で得られた化合物１２（１０５．９ｍｇ）をアセトニトリル（０．４５ｍＬ）に溶解させ、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ；７１．３μＬ，７０％水溶液，０．０５２ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１．５時間撹拌した。反応終了後に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を０℃にて添加し、酢酸エチルで抽出した。水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，メタノール：クロロホルム＝１：１２）により精製し、化合物１３（３３．１ｍｇ，収率４２％，２工程）を白色固体として得た。【０１８０】
得られた化合物１３の物性データを表７に示す。【０１８１】
【表７】
2020166551.tif 000053
【０１８２】
（３−３）および（３−４）化合物１４および化合物１５の合成【０１８３】
上記で得られた化合物１３を用い、以下の合成スキームにしたがって上記実施例１の（１−６）〜（１−７）に記載した方法に基づいて化合物１５を得ることができる。【０１８４】
【化４５】
2020166551.tif 000054
【０１８５】
（実施例４：５’位修飾ヌクレオシドの合成（４））【０１８６】
【化４６】
2020166551.tif 000055
【０１８７】
（４−１）化合物１６の合成【０１８８】
【化４７】
2020166551.tif 000056
【０１８９】
化合物３（４４６ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）を無水トルエンで共沸した後、無水テトラヒドロフラン（１２ｍＬ）に溶解させ、窒素気流下にてエチルマグネシウムブロミド（Ｃ2Ｈ5ＭｇＢｒ；４．６ｍＬ，４．６ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中で１Ｍ）を−２０℃にてゆっくり滴下し、同温度にて３．５時間撹拌した。反応終了後に塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。飽和重曹水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝１：１）により精製し、化合物１６（３６４ｍｇ，７６％）を白色固体として得た。【０１９０】
得られた化合物１６の物性データを表８に示す。【０１９１】
【表８】
2020166551.tif 000057
【０１９２】
（４−２）化合物１７の合成【０１９３】
【化４８】
2020166551.tif 000058
【０１９４】
上記で得られた化合物１６（２８３ｍｇ，０．６９ｍｍｏｌ）を無水トルエンで共沸した後、無水アセトニトリル（７ｍＬ）に溶解させ、５’−（４，４’−ジメトキシトリチル）−チミジン−３’−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホロアミダイト（ＤＭＴ−ｄＴホスホロアミダイト；８４０．３ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）および５−（ベンジルチオ）−１Ｈ−テトラゾール（ＢＴＴ；１９８．９ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）を窒素気流下で順次加え、室温にて４時間撹拌した。反応終了後に水を加え、酢酸エチルで抽出した。水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去し、粗生成物として化合物１７（１．２２ｇ）を得た。この化合物１７を精製することなく次の反応に用いた。【０１９５】
（４−３）化合物１８の合成【０１９６】
【化４９】
2020166551.tif 000059
【０１９７】
上記で得られた化合物１７（１．２２ｇ）をアセトニトリル（６．２ｍＬ）に溶解させ、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ；０．７ｍＬ，７０％水溶液，５．１１ｍｍｏｌ）を加え、室温で３．５時間撹拌した。反応終了後に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を０℃で加え、酢酸エチルで抽出した。水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，メタノール：クロロホルム＝０：１→１：３０）により簡易に精製し、粗生成物として化合物１８（９７９ｍｇ）を得た。【０１９８】
得られた化合物１８の物性データを表９に示す。【０１９９】
【表９】
2020166551.tif 000060
【０２００】
（４−４）化合物１９の合成【０２０１】
【化５０】
2020166551.tif 000061
【０２０２】
上記で得られた化合物１８（９７９ｍｇ）を無水テトラヒドロフラン（６．９ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン三フッ化水素酸塩（ＴＥＡ・３ＨＦ；１．１ｍＬ，６．６１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた後、室温で１６．５時間撹拌した。反応が完結しなかったため、さらにトリエチルアミン三フッ化水素酸塩（ＴＥＡ・３ＨＦ；０．６ｍＬ，３．６１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた後、室温で６．５時間撹拌した。反応終了後、酢酸エチル（３０ｍＬ）を加えて溶液を希釈し、２％重曹水で２回、水で１回洗浄した。水層を酢酸エチルで再抽出し、有機層を合わせて飽和食塩水で１回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，メタノール：クロロホルム＝０：１→１：３０）により精製し、化合物１９（４２５ｍｇ，６５％（３工程以上））を白色固体として得た。【０２０３】
得られた化合物１９の物性データを表１０に示す。【０２０４】
【表１０】
2020166551.tif 000062
【０２０５】
（４−５）化合物２０の合成【０２０６】
【化５１】
2020166551.tif 000063
【０２０７】
上記で得られた化合物１９（３９３ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）を無水トルエンで共沸脱水した後、無水アセトニトリル（４．２ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ；０．２５ｍＬ，１．４７ｍｍｏｌ）と２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホロクロリダート（iＰｒ２ＮＰ（Ｃｌ）ＯＣ２Ｈ４ＣＮ；０．１７ｍＬ，０．６１ｍｍｏｌ）を窒素気流下で順次加え、室温にて２．５時間撹拌した。溶媒を一部減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，メタノール：クロロホルム＝０：１→１：３５）により精製後、再沈殿（ペンタン：クロロホルム＝２０：１）により、化合物２０（２１５ｍｇ，４５％）を白色固体として得た。【０２０８】
得られた化合物２０の物性データを表１１に示す。【０２０９】
【表１１】
2020166551.tif 000064
【０２１０】
（実施例５：オリゴヌクレオチドの合成および精製）
実施例１で作製された化合物８をアミダイトブロックとして用い、以下のようにしてオリゴヌクレオチドを合成した。オリゴヌクレオチドを構成する化合物８以外の化合物については、特に表記がない限り、Proligo社から購入した。【０２１１】
実施例１で作製された化合物８と、市販のｄＧ（ｉＢｕ）、ｄＣ（Ｂｚ）およびＴのホスホロアミダイトを、アンチセンスオリゴヌクレオチドを構成する化合物として用いた。これらのアミダイトブロックを含む０．１Ｍの無水アセトニトリル溶液を調製し、ＧｅｎｅＤｅｓｉｇｎ社製ｎＳ−８  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒに仕込み、０．２μｍｏｌのスケールでオリゴ合成をトリチルオン条件で行った。活性化剤には５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＥＴＴ）アクチベーター（０．２５Ｍアセトニトリル溶液）を用い、通常のホスホロアミダイト法に従って合成を行った。【０２１２】
合成完了後、生成物を、２８％アンモニア水溶液を用いて室温下で１．５時間処理してカラム担体からの切り出しを行い、次いで５５℃で２４時間静置することにより塩基部の脱保護およびリン酸ジエステル部の脱保護を行った。その後、簡易逆相カラム（Ｗａｔｅｒｓ社製Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標）Ｐｌｕｓ  Ｃ１８  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ）により精製し、さらに逆相ＨＰＬＣにて精製を行った。【０２１３】
精製したオリゴヌクレオチドの組成をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ測定により決定した。当該測定にあたり、まず、３−ヒドロキシピコリン酸水溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）とクエン酸二アンモニウム水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）とを１：１の容量比で混合したマトリックス（１μＬ）を乾燥させたアンカーチップ上に、オリゴヌクレオチド水溶液（約５０μＭ，１μＬ）を載せて再度乾燥させ、その後ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ測定を行った。分子量の測定をネガティブモードで行い、オリゴチミジル酸（７ｍｅｒ、９ｍｅｒ、１１ｍｅｒおよび１３ｍｅｒ）を外部標準として用いた。また、合成したオリゴヌクレオチドの定量を、吸光度測定装置（株式会社島津製作所製ＳＨＩＭＡＤＺＵ  ＵＶ−１８００）を用いて２６０ｎｍにおける紫外部吸収を測定することで行った。【０２１４】
（実施例６：二重鎖形成能の評価）
実施例５に記載のようにして、以下の配列のオリゴヌクレオチドを合成および精製した：
５’−ｄ（ＧＣＧＴＴＸＴＴＴＧＣＴ）−３’（配列番号１〜２）
（１）Ｘ＝チミジン（Ｔ）（配列番号１）
（２）Ｘ＝５’−ジメチルチミジン（５’−ｄｉＭｅ−Ｔ）（配列番号２）【０２１５】
上記（２）の配列のオリゴヌクレオチドの合成の際、化合物８を用いて、オリゴヌクレオチドの配列の５’側から数えて５番目にチミジン（Ｔ）かつ６番目（「Ｘ」）に５’−ジメチルチミジン（５’−ｄｉＭｅ−Ｔ）を並べた。【０２１６】
標的鎖として一本鎖オリゴＲＮＡ５’−ｒ（ＡＧＣＡＡＡＡＡＡＣＧＣ）−３’（配列番号３）および一本鎖オリゴＤＮＡ５’−ｄ（ＡＧＣＡＡＡＡＡＡＣＧＣ）−３’（配列番号４）を用いて、各オリゴヌクレオチドの二重鎖形成能（結合親和性）を調べた。【０２１７】
オリゴヌクレオチドの二重鎖形成能を、各種オリゴヌクレオチドと標的鎖とをアニーリング処理して二重鎖を形成させた後、Ｔｍ値を測定することにより調べた。より詳細には、各オリゴヌクレオチド（終濃度４μＭ）と塩化ナトリウム（終濃度１００ｍＭ）のリン酸緩衝液（１０ｍＭ，ｐＨ７．２，１３０μＬ）の混合液を沸騰水中に浴し、室温までゆっくり冷却した。その後、窒素気流下で５℃まで冷却し、測定を開始した。０．５℃／分で９０℃まで昇温し、０．５℃間隔で２６０ｎｍにおける吸光度をプロットした。Ｔｍ値を中線法により算出し、独立した３回の測定における平均値とした。結果を以下の表１２に示す。表１２中、一本鎖オリゴＲＮＡに対する結果を「ｓｓＲＮＡ」、一本鎖オリゴＤＮＡに対する結果を「ｓｓＤＮＡ」に示し、そして各オリゴヌクレオチドのＴｍと、人工修飾核酸１塩基当たりのＴｍ変動温度（「ΔＴｍ／ｍｏｄ．」）とを示す。【０２１８】
【表１２】
2020166551.tif 000065
【０２１９】
化合物８を用いて合成した５’−ジメチルチミジン含有オリゴヌクレオチドの場合（上記（２））、一本鎖オリゴＤＮＡおよび一本鎖オリゴＲＮＡの両方とも、天然のオリゴヌクレオチド（上記（１））と比べてＴｍ値はわずかに低下したのみであり、結合親和性を損なわなかった。【０２２０】
（実施例７：ヌクレアーゼ耐性能の評価）
実施例５に記載のようにして、以下の１０ｍｅｒの配列のオリゴヌクレオチドを合成および精製し、被験オリゴヌクレオチドとして用いた：
５’−ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＸ−３’
（３）Ｘ＝ホスホロチオエートチミジン（ｐｓ−Ｔ）（ホスホロチオエート結合（ヌクレオチド間の結合部位のリン酸基を硫黄化（Ｓ化）した）
（４）Ｘ＝５’−ジメチルチミジン（５’−ｄｉＭｅ−Ｔ）【０２２１】
上記（４）の配列のオリゴヌクレオチドの合成の際、化合物８を用いて、オリゴヌクレオチドの配列の５’側から数えて９番目にチミジン（Ｔ）かつ１０番目（「Ｘ」）に５’−ジメチルチミジン（５’−ｄｉＭｅ−Ｔ）を並べた。【０２２２】
７．５μＭ被験オリゴヌクレオチドと１０ｍＭ塩化マグネシウムを含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に、２．５μｇ／ｍＬの３’−エキソヌクレアーゼ（Crotalus adamanteus venom phosphodiesterase，ＣＡＶＰ）を加え、３７℃でインキュベートした。インキュベーションの開始時（０分）、２．５分後、５分後、１０分後、２０分後、４０分後にそれぞれ１０μＬずつ試料を取り出し、逆相ＨＰＬＣで解析し、未切断のオリゴヌクレオチドの割合を算出した。また、評価は独立した３回の測定により導き出した。【０２２３】
結果を図１に示す。図１中、黒菱形は上記（３）の結果、そして黒四角は上記（４）の結果を表す。図１から明らかなように、本実施例では、ホスホロチオエート化（ＰＳ）オリゴ（上記（３））において、ヌクレアーゼ処理４０分後の未切断オリゴヌクレオチドの残存率は約２０％以下に低下したのに対し、化合物８を用いて合成した５’−ジメチルチミジン含有オリゴヌクレオチド（上記（４））は、ヌクレアーゼ処理の４０分後でも約８０％が未切断で残存しており、分解されにくかった。このことから、５’−ジメチル修飾によって、ホスホロチオエート修飾と比べて高いヌクレアーゼ耐性が獲得できることが確認された。【０２２４】
（実施例８：ＲＮａｓｅ  Ｈ活性の評価）
実施例５に記載のようにして、以下の配列のオリゴヌクレオチドを合成および精製し、被験オリゴヌクレオチドとして用いた：
（５）５’−ＧｍＣｍＧｍｔｔｔｔｔｔｔｔＧｍＣｍＵｍ−３’（配列番号５）
（６）５’−ＧｍＣｍＧｍｔｔｔＸｔｔｔＸＧｍＣｍＵｍ−３’（配列番号６）
（７）５’−ＧｍＣｍＧｍｔＸｔｔＸｔｔＸＧｍＣｍＵｍ−３’（配列番号７）
（８）５’−ＧｍＣｍＧｍＵｍＵｍＵｍＵｍＵｍＵｍＵｍＵｍＧｍＣｍＵｍ−３’（配列番号８）
Ｇｍ、Ｃｍ、Ｕｍ：２’−Ｏ−メチル修飾
ｔ＝チミジン
Ｘ＝５’−ジメチルチミジン（５’−ｄｉＭｅ−Ｔ）【０２２５】
上記（６）および（７）の配列のオリゴヌクレオチドの合成の際、化合物８を用いて、各配列中の「ｔＸ」の位置（５’側から数えて配列（６）の６番目−７番目および１０番目−１１番目、ならびに配列（７）の４番目−５番目、７番目−８番目および１０番目−１１番目）にチミジン（ｔ）と５’−ジメチルチミジン（５’−ｄｉＭｅ−Ｔ）とを並べた。【０２２６】
５０ｍＭ  トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）と３ｍＭ塩化マグネシウム、１０ｍＭジチオトレイトールを含む混合溶液に、被験オリゴヌクレオチド（６０ｐｍｏｌ）とフルオレセインで標識された相補鎖ＲＮＡ（５’−ＦＡＭ−ｒ（ＡＧＣＡＡＡＡＡＡＡＡＣＧＣ）−３’（配列番号９））（３００ｐｍｏｌ）とを溶解させた。各試料を６５℃まで加熱した後、室温までゆっくり冷却した。３．０ユニットの大腸菌由来ＲＮａｓｅ  Ｈを各試料に加え、３７℃にてインキュベートした。４０分後、ホルムアミド／０．１Ｍエチレンジアミン四酢酸混合溶液（ホルムアミド：０．１Ｍエチレンジアミン四酢酸＝１４：１（容量比））を試料容積の３倍量加え、反応を停止させた。切断産物は２０％変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって解析した。なお、各配列の切断率をバンドの蛍光強度比によって、配列（８）の残存率を１００％として算出した。結果を以下の表１３に示す。【０２２７】
【表１３】
2020166551.tif 000066
【０２２８】
５’−ジメチルチミジンを３個置きに導入したオリゴヌクレオチド（配列（６））は、５’−ジメチルチミジンを含まないオリゴヌクレオチド（配列（５））と同程度の切断率を示した。一方、５’−ジメチルチミジンを２個置きに導入したオリゴヌクレオチド（配列（７））は、５’−ジメチルチミジンを含まないオリゴヌクレオチド（配列（５））と比べるとやや低い切断率を示したが、切断は見られた。これらのことから、５’−ジメチル修飾は、ＲＮａｓｅ  Ｈ誘導型アンチセンスオリゴヌクレオチドへの利用も可能であることを確認した。【０２２９】
（実施例９：アンチセンス活性ならびに肝毒性の評価）
実施例５に記載のようにして、以下の配列のオリゴヌクレオチドを合成および精製し、被験オリゴヌクレオチドとして用いた。被験オリゴヌクレオチドの配列は、ＮＲ３Ｃ１のアンチセンスとして２種設計した：
ＡＳＯ１：５’−Ｇ＾Ｔ＾ｍＣ＾ｔ＾ｃ＾ｔ＾ｔ＾ｔ＾ａ＾ｃ＾ｃ＾Ｔ＾Ｇ＾Ｇ−３’（配列番号１０）
ＡＳＯ２：５’−Ｇ＾Ｔ＾ｍＣ＾ｔ＾ｃ＾ｔＸ＾ｔ＾ａ＾ｃ＾ｃ＾Ｔ＾Ｇ＾Ｇ−３’（配列番号１１）
ＡＳＯ３：５’−Ａ＾Ｇ＾Ｇ＾ｔ＾ｇ＾ｃ＾ｔ＾ｔ＾ｔ＾ｇ＾ｇ＾Ｔ＾ｍＣ＾Ｔ−３’（配列番号１２）
ＡＳＯ４：５’−Ａ＾Ｇ＾Ｇ＾ｔ＾ｇ＾ｃ＾ｔ＾ｔＸ＾ｇ＾ｇ＾Ｔ＾ｍＣ＾Ｔ−３’（配列番号１３）
ａ、ｇ、ｃおよびｔ＝ＤＮＡ
Ａ＝ＬＮＡ−Ａ、Ｇ＝ＬＮＡ−Ｇ、ｍＣ＝ＬＮＡ−５−メチルシトシン、Ｔ＝ＬＮＡ−Ｔ
Ｘ＝５’−ジメチルチミジン（５’−ｄｉＭｅ−Ｔ）
＾＝ホスホロチオエート結合（ヌクレオチド間の結合部位のリン酸基を硫黄化（Ｓ化）した）【０２３０】
６週齢のマウス（Ｃ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌ、雄）の尾静脈に、上記被験オリゴヌクレオチド（２０ｍｇ／ｋｇ）を投与した。コントロールとして生理食塩水を投与した。９６時間後、吸入麻酔下（イソフルラン）で採血を行い、放血安楽死させた。その後、肝臓を採取し、肝臓重量の測定ならびにＲＮＡ抽出（ＴＲＩｚｏｌでホモジナイズ後、フェノール・クロロホルム抽出）を行った。血液中のアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の活性を自動分析装置（日本電子株式会社製ＪＣＡ−ＢＭ６０７０）により測定した。また、標的遺伝子ＮＲ３Ｃ１ならびにハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現量をリアルタイムＰＣＲ（使用キット：Ｏｎｅ  Ｓｔｅｐ  ＳＹＢＲ  ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社製）、プライマー配列：ＮＲ３Ｃ１  ｆｏｒｗａｒｄ（ａｃｔｇｔｃｃａｇｃａｔｇｃｃｇｃｔａｔ）（配列番号１４）、ＮＲ３Ｃ１  ｒｅｖｅｒｓｅ（ｇｃａｇｔｇｇｃｔｔｇｃｔｇａａｔｔｃｃ）（配列番号１５）、ＧＡＰＤＨ  ｆｏｒｗａｒｄ（ｇｔｇｔｇａａｃｇｇａｔｔｔｇｇｃｃｇｔ）（配列番号１６）、ＧＡＰＤＨ  ｒｅｖｅｒｓｅ（ｇａｃａａｇｃｔｔｃｃｃａｔｔｃｔｃｇｇ）（配列番号１７））により測定した。【０２３１】
得られた結果を図２〜図５に示す。図２および図３は、各被験オリゴヌクレオチドを投与した場合ならびに生理食塩水投与の場合のマウス肝臓中の標的遺伝子ＮＲ３Ｃ１のｍＲＮＡ量を示すグラフであり、生理食塩水を投与した場合のｍＲＮＡ量を１００とした場合の相対値にて表す（図２：ＡＳＯ１およびＡＳＯ２、ならびに図３：ＡＳＯ３およびＡＳＯ４）。図４および図５は、各被験オリゴヌクレオチドを投与した場合ならびに生理食塩水投与の場合の血液中のアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の活性を示すグラフであり、５’−ジメチルチミジンを含まないオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ１またはＡＳＯ３）投与の場合のＡＬＴ値およびＡＳＴ値のそれぞれを１００とした場合の相対値にて表す（図４：ＡＳＯ１およびＡＳＯ２、ならびに図５：ＡＳＯ３およびＡＳＯ４）。【０２３２】
図２および図３に示すように、ＡＳＯ１とＡＳＯ２の間、ならびにＡＳＯ３とＡＳＯ４との間で、ＲＮＡ発現量はコントロールの生理食塩水投与の場合と比べて同程度に抑制された。よって、５’−ジメチルチミジンを含むオリゴヌクレオチドは、５’−ジメチルチミジンを含まないオリゴヌクレオチドと比べてアンチセンス活性はほぼ同程度であった。図４および図５に示すように、５’−ジメチルチミジンを用いたＡＳＯ２およびＡＳＯ４では、それぞれ５’−ジメチルチミジンを用いないＡＳＯ１およびＡＳＯ３と比較して、肝毒性の指標となるＡＳＴおよびＡＬＴの値を有意に減少させた。このことから、５’−ジメチル修飾によって、アンチセンスオリゴヌクレオチドのアンチセンス活性を損なうことなく肝毒性を減少させることができることが確認された。【０２３３】
（実施例１０：５’−ジエチル修飾核酸のヌクレアーゼ耐性能の評価）
Ｘの化合物として化合物２０のジエチルチミジン（５’−ｄｉＥｔ−Ｔ）を用いたこと以外は実施例５に記載のようにして、以下の１０ｍｅｒの配列のオリゴヌクレオチドを合成および精製し、被験オリゴヌクレオチドとして用いた：
５’−ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＸ−３’
（９）Ｘ＝ホスホロチオエートチミジン（ｐｓ−Ｔ）（ホスホロチオエート結合（ヌクレオチド間の結合部位のリン酸基を硫黄化（Ｓ化）した）
（１０）Ｘ＝５’−ジメチルチミジン（５’−ｄｉＭｅ−Ｔ）
（１１）Ｘ＝５’−ジエチルチミジン（５’−ｄｉＥｔ−Ｔ）【０２３４】
上記（１０）または（１１）の配列のオリゴヌクレオチドの合成の際、化合物８または２０を用いて、オリゴヌクレオチドの配列の５’側から数えて９番目にチミジン（Ｔ）かつ１０番目（「Ｘ」）に５’−ジメチルチミジン（５’−ｄｉＭｅ−Ｔ）または５’−ジエチルチミジン（５’−ｄｉＥｔ−Ｔ）を並べた。【０２３５】
７．５μＭ被験オリゴヌクレオチドと１０ｍＭ塩化マグネシウムを含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に、３．０μg／ｍＬの３’−エキソヌクレアーゼ（Crotalus adamanteus venom phosphodiesterase，ＣＡＶＰ）を加え、３７℃でインキュベートした。インキュベーションの開始時（０分）、２．５分後、５分後、１０分後、２０分後、４０分後にそれぞれ１０μＭずつ試料を取り出し、逆相ＨＰＬＣで解析し、未切断のオリゴヌクレオチドの割合を算出した。また、評価は独立した３回の測定により導き出した。【０２３６】
結果を図６に示す。図６中、黒丸は上記（９）の結果（ＰＳ）、黒三角は上記（１０）の結果（５’ｄｉＭｅＴ）、そして白菱形は上記（１１）の結果（５’ｄｉＥｔＴ）を表す。図６から明らかなように、本実施例では、ホスホロチオエート化（ＰＳ）オリゴ（上記（９））において、ヌクレアーゼ処理２０分以降で未切断オリゴヌクレオチドの残存率が約２０％以下に低下したのに対し、化合物２０を用いて合成した５’−ジエチルチミジン含有オリゴヌクレオチド（上記（１１））は、化合物８を用いて合成した５’−ジメチルチミジン含有オリゴヌクレオチド（上記（１０））と同様に、ヌクレアーゼ処理の４０分後でも約６０％が未切断で残存しており、分解されにくかった。このことから、５’−ジメチル修飾だけでなく、５’−ジエチル修飾によっても、ホスホロチオエート修飾と比べて高いヌクレアーゼ耐性が獲得できることが確認された。【０２３７】
（実施例１１：５’−ジエチル修飾核酸の二重鎖形成能の評価）
Ｘの化合物として化合物２０のジエチルチミジン（５’−ｄｉＥｔ−Ｔ）を用いたこと以外は実施例５に記載のようにして、以下の配列のオリゴヌクレオチドを合成および精製し、被験オリゴヌクレオチドとして用いた：
（１２）５’−ｄ（ＧＣＧＴＴＴＴＴＴＧＣＴ）−３’（配列番号１）
（１３）５’−ｄ（ＧＣＧＴＴＸＴＴＴＧＣＴ）−３’（配列番号１８）
（１４）５’−ｄ（ＧＣＧＴＴＸＴＸＴＧＣＴ）−３’（配列番号１９）
配列（１３）および（１４）中のＸは、５’−ジエチルチミジン（５’−ｄｉＥｔ−Ｔ）である。【０２３８】
上記（１３）の配列のオリゴヌクレオチドの合成の際、化合物２０を用いて、オリゴヌクレオチドの配列の５’側から数えて５番目にチミジン（Ｔ）かつ６番目（「Ｘ」）に５’−ジエチルチミジン（５’−ｄｉＥｔ−Ｔ）を並べた。上記（１４）の配列のオリゴヌクレオチドについては、５’側から数えて５番目と７番目にチミジン（Ｔ）かつ６番目と８番目（「Ｘ」）に５’−ジエチルチミジン（５’−ｄｉＥｔ−Ｔ）を並べた。【０２３９】
標的鎖として一本鎖オリゴＲＮＡ５’−ｒ（ＡＧＣＡＡＡＡＡＡＣＧＣ）−３’（配列番号３）および一本鎖オリゴＤＮＡ５’−ｄ（ＡＧＣＡＡＡＡＡＡＣＧＣ）−３’（配列番号４）を用いて、各オリゴヌクレオチドの二重鎖形成能（結合親和性）を調べた。【０２４０】
オリゴヌクレオチドの二重鎖形成能を、上記の実施例６と同様に評価した。結果を以下の表１４に示す。表１４中、一本鎖オリゴＲＮＡに対する結果を「ｓｓＲＮＡ」、一本鎖オリゴＤＮＡに対する結果を「ｓｓＤＮＡ」に示し、そして各オリゴヌクレオチドのＴｍと、人工修飾核酸１塩基当たりのＴｍ変動温度（「ΔＴｍ／ｍｏｄ．」）とを示す。【０２４１】
【表１４】
2020166551.tif 000067
【０２４２】
化合物２０を用いて合成した５’−ジエチルチミジン含有オリゴヌクレオチドの場合（上記（１３）および（１４））、一本鎖オリゴＤＮＡおよび一本鎖オリゴＲＮＡとも、天然のオリゴヌクレオチド（上記（１２））と比べてＴｍ値はわずかに低下したのみであり、結合親和性を損なわなかった。５’−ジエチルチミジンの量を増やした場合、特にＲＮＡに対する二重鎖形成能が損なわれなかった。
【産業上の利用可能性】
【０２４３】
本発明によれば、ホスホロチオエート修飾核酸の代替とすることが可能な新規な５’位修飾ヌクレオシドおよびそれを用いたヌクレオチドが提供される。本発明の５’位修飾ヌクレオシドはまた、その製造においてジアステレオマーの分離工程を必要としないため、工業的生産性にも優れている。本発明の５’位修飾ヌクレオシドを用いて得られるオリゴヌクレオチドは、例えば、核酸医薬への素材として有用である。
【図１】
2020166551.tif 000085
【図２】
2020166551.tif 000086
【図３】
2020166551.tif 000087
【図４】
2020166551.tif 000088
【図５】
2020166551.tif 000089
【図６】
2020166551.tif 000090
【配列表】
2020166551000001.app
【国際調査報告】
2020166551.tif 000091
2020166551.tif 000092
2020166551.tif 000093
2020166551.tif 000094