(57)【要約】  本発明は、炎症の抑制（例、炎症性腸疾患の予防・治療）に有用な手段および方法を提供する。より具体的には、本発明は、以下の発明を提供する。〔Ｉ〕５−ヒドロキシインドール酢酸を含む抗炎症剤。〔ＩＩ〕以下を含む、抗炎症剤のスクリーニング方法：（１）被験物質が投与された哺乳動物から採取されたサンプル中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を測定すること；および（２）サンプル中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を増加させる被験物質を、抗炎症剤として選択すること。〔ＩＩＩ〕以下を含む、抗炎症剤のスクリーニング方法：（１）被験物質を含む培地中で、５−ヒドロキシインドール酢酸の産生能を有する哺乳動物由来細胞を培養すること；（２）培地中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を測定すること；（３）培地中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を増加させる被験物質を、抗炎症剤として選択すること。
2020111239.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
５−ヒドロキシインドール酢酸を含む抗炎症剤。
【請求項２】
抗炎症剤が腸内の炎症に対する抗炎症剤である、請求項１記載の抗炎症剤。
【請求項３】
腸内の炎症が炎症性腸疾患である、請求項２記載の抗炎症剤。
【請求項４】
経口用組成物または経直腸投与用組成物である、請求項１〜３のいずれか一項記載の抗炎症剤。
【請求項５】
医薬または食品である、請求項１〜４のいずれか一項記載の抗炎症剤。
【請求項６】
以下を含む、抗炎症剤のスクリーニング方法：
（１）被験物質が投与された哺乳動物から採取されたサンプル中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を測定すること；および
（２）サンプル中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を増加させる被験物質を、抗炎症剤として選択すること。
【請求項７】
サンプルが糞便である、請求項６記載の方法。
【請求項８】
以下を含む、抗炎症剤のスクリーニング方法：
（１）被験物質を含む培地中で、５−ヒドロキシインドール酢酸の産生能を有する哺乳動物由来細胞を培養すること；
（２）培地中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を測定すること；
（３）培地中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を増加させる被験物質を、抗炎症剤として選択すること。
【請求項９】
５−ヒドロキシインドール酢酸の産生能を有する哺乳動物由来細胞が腸内細菌である、請求項８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症剤などに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、栄養介入による生活習慣病〔例、メタボリックシンドローム、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）〕の予防が一般的であり、消費者は健康を維持するために栄養摂取を意識している。納豆、味噌、抹茶などの伝統的な日本食は、健康増進のために有名である。それらは腸内環境にプラスの影響を及ぼし、健全な宿主の状態を維持することによってプレバイオティクスおよび／またはプロバイオティクスとして作用する。【０００３】
例えば、玄米に含まれる米糠（ＲＢ）は、一般的に消費される日本食の一つであり、大腸炎を抑制できることが報告されている（非特許文献１〜４）。ＲＢは、食物繊維、ビタミン、遊離アミノ酸、および胃腸の健康および抗大腸炎の効果を促進する可能性のある抗酸化物質（γ−オリザノールおよびフェルラ酸）等の生物活性成分の豊富な供給源である（非特許文献２、３、５，６）。しかしながら、ＲＢの構成成分の複雑さのために、ＲＢによる大腸炎抑制の分子メカニズムは未だ解明されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ａｌ−Ｆａｙｅｚ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６；５８（６）：８１６−２５．
【非特許文献２】Ｉｓｌａｍ  ＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００８；１５４（４）：８１２−２４．
【非特許文献３】Ｋｏｍｉｙａｍａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１１；４６（１）：４０−５２．
【非特許文献４】Ｓｈａｆｉｅ  ＮＨ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｓｃｉ．２０１３；１４（１２）：２３５４５−５８．
【非特許文献５】Ｃｈｏｉ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｔｒ  Ｊ．２０１４；１３（１）：３５．
【非特許文献６】Ｉｓｌａｍ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ．２０１７；９（７）：７４７．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、炎症の抑制（例、炎症性腸疾患の予防・治療）に有用な手段および方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、鋭意検討した結果、ＲＢによる大腸炎の抑制が腸内細菌による５−ヒドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）の産生により引き起こされ得るものであり、５−ＨＩＡＡが抗炎症作用を有することを見出した。
本発明者らはまた、５−ＨＩＡＡが抗炎症作用を有することに照らすと、哺乳動物または哺乳動物由来細胞における５−ＨＩＡＡの量を増加させる被験物質をスクリーニングすることにより、抗炎症剤を開発できることを見出した。【０００７】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕５−ヒドロキシインドール酢酸を含む抗炎症剤。
〔２〕抗炎症剤が腸内の炎症に対する抗炎症剤である、〔１〕の抗炎症剤。
〔３〕腸内の炎症が炎症性腸疾患である、〔２〕の抗炎症剤。
〔４〕経口用組成物または経直腸投与用組成物である、〔１〕〜〔３〕のいずれかの抗炎症剤。
〔５〕医薬または食品である、〔１〕〜〔４〕のいずれかの抗炎症剤。
〔６〕以下を含む、抗炎症剤のスクリーニング方法：
（１）被験物質が投与された哺乳動物から採取されたサンプル中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を測定すること；および
（２）サンプル中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を増加させる被験物質を、抗炎症剤として選択すること。
〔７〕サンプルが糞便である、〔６〕の方法。
〔８〕以下を含む、抗炎症剤のスクリーニング方法：
（１）被験物質を含む培地中で哺乳動物由来細胞を培養すること；
（２）培地中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を測定すること；
（３）培地中の５−ヒドロキシインドール酢酸の量を増加させる被験物質を、抗炎症剤として選択すること。
〔９〕５−ヒドロキシインドール酢酸の産生能を有する哺乳動物由来細胞が腸内細菌である、〔８〕の方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、５−ＨＩＡＡにより、炎症の抑制（例、炎症性腸疾患の予防・治療）を実現することができる。
また、本発明によれば、５−ＨＩＡＡ量を指標にすることにより、抗炎症剤をスクリーニングすることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、動物実験の概要を示す図である。
【図２−１】図２−１は、体重減少に対する米糠（ＲＢ）食の影響を示す図である。図２−１〜図２−３において、コントロールと各グループの間の有意性が示される。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図２−２】図２−２は、疾患活性指数（ＤＡＩ）に対するＲＢ食の影響を示す図である。有意性については図２−１を参照。
【図２−３】図２−３は、大腸長に対するＲＢ食の影響を示す図である。有意性については図２−１を参照。
【図２−４】図２−４は、大腸形態に対するＲＢ食の影響を示す図である。
【図２−５】図２−５は、大腸組織学に対するＲＢ食の影響を示す図である。倍率２００ｘであり、棒は１００μｍを示す。
【図２−６】図２−６は、遺伝子発現量に対するＲＢ食の影響を示す図である。
【図３−１】図３−１は、体重減少に対するＲＢ食の分画成分の影響を示す図である。図３−１〜図３−３において、コントロールと各グループの間の有意性が示される。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図３−２】図３−２は、ＤＡＩに対するＲＢ食の分画成分の影響を示す図である。
【図３−３】図３−３は、大腸長に対するＲＢ食の分画成分の影響を示す図である。
【図３−４】図３−４は、大腸形態に対するＲＢ食の分画成分の影響を示す図である。
【図３−５】図３−５は、腸内細菌叢に対するＲＢ食の分画成分の影響を示す図である。
【図４−１】図４−１は、ＤＳＳ誘発性大腸炎マウスについて、ＲＢによる、糞便中細菌叢の組成の変化を示す図である。相対存在量が全配列の１％を超える上位２０個で検出された糞便細菌科の相対存在量が棒グラフにより表される。
【図４−２】図４−２は、Ｓｉｍｐｓｏｎの多様性の変化を示す図である。図４−２および図４−３において、コントロールと各グループの間の有意性が示される。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【図４−３】図４−３は、０日目に有意に変化した細菌科の一部のボックスプロットを示す図である。
【図５−１】図５−１は、糞便中代謝物データの主成分分析（ＰＣＡ）を示す図である。
【図５−２】図５−２は、糞便中代謝物データの主成分分析（ＰＣＡ）のＰＣ２の因子負荷量の上位１０個と下位１０個を示す図である。
【図５−３】図５−３は、糞便中のトリプトファン代謝関連の代謝物を示す図である。
【図５−４】図５−４は、糞便中５−ＨＩＡＡの濃度を示す図である。図５−５において、コントロールと各グループの間の有意性が示される。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【図６−１】図６−１は、ＡｈＲ強制発現ＲＡＷ２６４．７を５−ＨＩＡＡで処理したときのＣｙｐ１ａ１の相対発現量を示す図である。
【図６−２】図６−２は、各細菌群を定着させたＧＦマウスの糞便中の５−ＨＩＡＡ濃度を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
１．抗炎症剤
本発明は、５−ＨＩＡＡを含む抗炎症剤を提供する。
【００１１】
５−ＨＩＡＡは、セロトニンの代謝産物であり、所定の細胞（例、セロトニン産生能を有する哺乳動物細胞、腸内細菌等の常在微生物）内でセロトニンから生合成される。したがって、５−ＨＩＡＡは、セロトニン産生細胞（例、天然細胞、または上記のような生合成系を組込んだ形質転換細胞）を用いて調製することができる。５−ＨＩＡＡはまた、有機化学的方法により合成することもできる。あるいは、５−ＨＩＡＡとしては、市販されているものを利用してもよい。
【００１２】
本発明の抗炎症剤が適用され得る炎症としては、哺乳動物において発生し得る任意の炎症である限り特に限定されない。このような炎症が発生し得る部位としては、例えば、腸内（例、小腸内、大腸内）、鼻腔内、気管支内、皮膚、口腔内が挙げられる。部位としては、腸内が好ましく、大腸内がより好ましい。
【００１３】
好ましくは、炎症は、炎症性疾患における炎症である。このような炎症性疾患としては、例えば、炎症性腸疾患（例、潰瘍性大腸炎、クローン病、ベーチェット病）、口内炎、腎炎、自己免疫疾患（例、アレルギー性疾患）が挙げられる。炎症としては、炎症性腸疾患が好ましい。したがって、本発明の抗炎症剤は、このような炎症性疾患の予防または治療剤として使用することができる。
【００１４】
抗炎症剤として使用される５−ＨＩＡＡの量は、抗炎症作用を発揮できる限り、特に限定されないが目安として説明すると以下のとおりである。実施例において、炎症性腸疾患モデルの哺乳動物（マウス）から採取された糞便中の５−ＨＩＡＡの濃度は約１００ｎｍｏｌ／ｇ、ＲＢ摂食哺乳動物（マウス）から採取された糞便中の５−ＨＩＡＡの濃度は約８００ｎｍｏｌ／ｇであることが確認されている。すなわち、哺乳動物の対象部位の５−ＨＩＡＡの濃度は３００ｎｍｏｌ／ｇ以上（例、３００〜１５００ｎｍｏｌ／ｇ）の範囲にあることが望ましいと考えられる。例えば哺乳動物の腸内において当該範囲の濃度を達成するためには、哺乳動物における５−ＨＩＡＡの投与または摂取量は、例えば０．０１〜１００ｇ／ｋｇであり、好ましくは０．５〜５０ｇ／ｋｇであり、より好ましくは１〜１０ｇ／ｋｇである。したがって、本発明の抗炎症剤は、このような量の５−ＨＩＡＡを含んでいてもよい。あるいは、哺乳動物の腸内または腸内以外の部位に５−ＨＩＡＡが適用される場合、例えば０．０１〜１０００ｍｇ／ｍｌであり、好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｍｌであり、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲において５−ＨＩＡＡが適用されるように、本発明の抗炎症剤は、このような濃度範囲の５−ＨＩＡＡを含んでいてもよい。
【００１５】
特定の実施形態では、本発明の抗炎症剤は、組成物の形態で提供されてもよい。
【００１６】
例えば、本発明の抗炎症剤は、医薬組成物の形態で提供される場合、５−ＨＩＡＡに加えて、医薬上許容され得る担体を含んでいてもよい。医薬上許容され得る担体としては、例えば、ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸、メントール、グリシルリシン・アンモニウム塩、グリシン、オレンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩水、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワックスなどが挙げられるが、それらに限定されるものではない。医薬組成物は、固形物（例、カプセル剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤）、半固形物（例、ゲル剤）、液状物（例、経口用液剤、または経直腸用液剤、点眼剤、点耳剤、経鼻用剤等の非経口用液剤）が挙げられる。
【００１７】
特定の好ましい実施形態では、医薬組成物の形態である本発明の抗炎症剤は、５−ＨＩＡＡに加えて、抗炎症作用を有する他の物質、および／または抗炎症作用を有する微生物を含んでいてもよい。抗炎症作用を有する他の物質としては、例えば、ステロイド性抗炎症薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）等の薬物；動植物等の天然物からの抽出物；抗体医薬が挙げられる。抗炎症作用を有する微生物としては、例えば、クロストリジウム属細菌、バクテロイデス属細菌、ラクトバチルス属細菌、ビフィドバクテリウム属細菌等が挙げられる。
【００１８】
本発明の抗炎症剤が食品組成物の形態で提供される場合、５−ＨＩＡＡは、食品に添加された形態で提供されてもよく、あるいは、サプリメントのように主成分として用いられてもよい。食品としては、例えば、液状物（例、飲料、アルコール類）、半固形物（例、ヨーグルト、ゼリー）、固形物（例、スナック、チョコレート）が挙げられる。
【００１９】
特定の好ましい実施形態では、食品組成物の形態である本発明の抗炎症剤は、５−ＨＩＡＡに加えて、抗炎症作用を有する他の物質、および／または抗炎症作用を有する微生物を含んでいてもよい。このような他の物質および微生物は、上述したものと同様である。
【００２０】
好ましい実施形態では、本発明の抗炎症剤は、経口用組成物または経直腸投与用組成物であってもよい。このような本発明の抗炎症剤は、哺乳動物の腸内において、抗炎症作用を発揮することができる。経口用組成物および経直腸投与用組成物における５−ＨＩＡＡの含有量は、５−ＨＩＡＡの上記投与または摂取量と同様である。経口用組成物は、医薬組成物および食品組成物において上述したような固形物、半固形物、または液状物として使用することができる。経直腸投与用組成物は、半固形物、または液状物として使用することができる。
【００２１】
本発明の抗炎症剤は、任意の哺乳動物に適用することができる。このような哺乳動物としては、例えば、霊長類（例、ヒト、サル、チンパンジー）、齧歯類（例、マウス、ラット、ウサギ）、家畜および使役動物（例、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ）が挙げられる。哺乳動物としては、霊長類または齧歯類が好ましく、霊長類がより好ましく、臨床応用の観点からはヒトがさらにより好ましい。
【００２２】
２．抗炎症剤のスクリーニング方法
本発明は、哺乳動物から採取されたサンプル、または哺乳動物由来細胞を用いる、抗炎症剤のスクリーニング方法を提供する。哺乳動物、および抗炎症剤は、上述したものと同様である。
【００２３】
一実施形態では、本発明のスクリーニング方法は、以下を含む：
（１）被験物質が投与された哺乳動物から採取されたサンプル中の５−ＨＩＡＡの量を測定すること；および
（２）サンプル中の５−ＨＩＡＡの量を増加させる被験物質を、抗炎症剤として選択すること。
【００２４】
工程（１）では、被験物質は、公知物質および新規物質を含む任意の物質である。このような被験物質としては、例えば、有機低分子化合物、コンビナトリアルケミストリー技術を用いて作製された化合物ライブラリー、核酸（例、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド）、糖質（例、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖）、脂質（例、飽和または不飽和の直鎖、分岐鎖および／または環を含む脂肪酸）、アミノ酸、蛋白質（例、オリゴペプチド、ポリペプチド、抗体またはその断片）、固相合成やファージディスプレイ法により作製されたランダムペプチドライブラリー、あるいは微生物、動植物、海洋生物等由来の天然成分等が挙げられる。あるいは、被験物質としては、微生物（例、腸内細菌等の常在微生物）が利用されてもよい。
【００２５】
サンプルは、哺乳動物から非侵襲的に採取可能であるサンプル、または哺乳動物から侵襲的に採取可能なサンプルである。哺乳動物から非侵襲的に採取可能であるサンプルとしては、例えば、排泄物サンプル（例、糞便、尿）、液体サンプル（例、唾液、涙液、汗）、粘膜サンプル（例、鼻腔内粘膜、口腔内粘膜）が挙げられる。哺乳動物から侵襲的に採取可能であるサンプル（例、生検サンプル）としては、例えば、皮膚、気管支、血液、小腸、大腸、盲腸、腎臓から採取可能なサンプルが挙げられる。サンプルとしては、哺乳動物から非侵襲的に採取可能であるサンプルが好ましく、糞便がより好ましい。サンプルは、予備処理に付されてもよい。このような予備処理としては、例えば、液体への溶解、遠心分離、抽出、加熱、凍結、冷蔵が挙げられる。
【００２６】
５−ＨＩＡＡの量の測定は、任意の方法により行うことができる。このような方法としては、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、質量分析、イムノアッセイ、比色法が挙げられる。５−ＨＩＡＡの量は、サンプルの単位量あたりの５−ＨＩＡＡ濃度として測定されてもよい。
【００２７】
本実施形態では、工程（１）の前に、哺乳動物に被験物質を投与することをさらに含むことができる。投与されるべき被験物質の量は、適宜調整することができる。例えば、効力が強い抗炎症剤のスクリーニングが特に所望される場合、投与されるべき被験物質の量は、低量（例、０．０５〜１０ｇ／ｋｇ）に設定することができる。あるいは、効力が強い抗炎症剤のスクリーニングが特に所望されない場合には、投与されるべき被験物質の量は、より高量（例、１０〜１００ｇ／ｋｇ）に設定されてもよい。
【００２８】
別の実施形態では、本発明のスクリーニング方法は、以下を含む：
（１）被験物質を含む培地中で、５−ＨＩＡＡの産生能を有する哺乳動物由来細胞を培養すること；
（２）培地中の５−ＨＩＡＡの量を測定すること；
（３）培地中の５−ＨＩＡＡの量を増加させる被験物質を、抗炎症剤として選択すること。
【００２９】
工程（１）では、被験物質を含む培地中で哺乳動物由来細胞が培養される。被験物質は、上述したものと同様である。培地中の被験物質の濃度は、適宜調整することができる。例えば、効力が強い抗炎症剤のスクリーニングが特に所望される場合、培地中の被験物質の濃度は、低濃度（例、１ｎＭ〜１０μＭ）に設定することができる。あるいは、効力が強い抗炎症剤のスクリーニングが特に所望されない場合には、培地中の被験物質の濃度は、より高濃度（例、１００ｎＭ〜１０ｍＭ）に設定されてもよい。
【００３０】
工程（１）で用いられる哺乳動物由来細胞は、５−ＨＩＡＡの産生能を有する限り特に限定されない。このような哺乳動物由来細胞は、哺乳動物細胞、または哺乳動物に存在する微生物であり、好ましくは、哺乳動物に存在する微生物である。哺乳動物に存在する微生物は、哺乳動物において炎症が発生し得る部位（例、上述の部位）に存在する常在微生物であり、好ましくは、腸内細菌である。
【００３１】
腸内細菌等の常在微生物は、他の微生物との混合物の形態において、または他の微生物との非混合物の形態において、培養することができる。例えば、特定の腸内細菌が他の腸内細菌との混合物の形態において培養される場合、このような混合物は、哺乳動物の糞便から上述のとおり回収することにより入手することができる。
【００３２】
腸内細菌等の常在微生物の培養は、常在微生物の培養に用いられる一般的な培地と同様の培地を用いて、常在微生物の一般的な培養条件下で行うことができる。例えば、腸内細菌の一般的な培地および培養条件は、周知である（例、（１）Ｆｕｋｕｄａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｅｔ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．，２００２  Ｎｏｖ；６４（１１）：９８７−９２、（２）Ｆｕｋｕｄａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｇｅｎ  Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２００５  Ａｐｒ；５１（２）：１０５−１３、（ｉｉｉ）Ｆｕｋｕｄａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．，２０１８  Ｊａｎ  １１；８（１）：４３５）。
【００３３】
例えば、培地は、炭素源、窒素源、有機微量栄養源、ビタミン、無機イオン等の成分を含むことができる。炭素源としては、例えば、単糖類（例、グルコース）、二糖類、オリゴ糖類、多糖類等の炭水化物；ショ糖を加水分解した転化糖；グリセロール；メタノール、ホルムアルデヒド、ギ酸塩、一酸化炭素、二酸化炭素等の炭素数が１の化合物；コーン油、パーム油、大豆油等のオイル；酢酸、プロピオン酸、酪酸等の短鎖脂肪酸；コハク酸、乳酸などの有機酸；動物油脂；動物オイル；飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸等の脂肪酸；脂質；リン脂質；グリセロ脂質；モノグリセライド、ジグリセライド、トリグリセライド等のグリセリン脂肪酸エステル；微生物性タンパク質、植物性タンパク質等のポリペプチド；加水分解されたバイオマス炭素源等の再生可能な炭素源；酵母エキス；馬血清；糞便抽出物；肉エキス；野菜エキス；胃内容物抽出物；又はこれらを組み合わせたものが挙げられる。窒素源としては、例えば、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機アンモニウム塩、大豆加水分解物などの有機窒素、アンモニアガス、アンモニア水が挙げられる。有機微量栄養源としては、例えば、Ｌ−ホモセリンなどの要求物質または酵母エキス等を適量含有させることが望ましい。ビタミンとしては、例えば、ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ６、Ｂ１２、Ｃ、Ｋ１が挙げられる。無機イオンとしては、例えば、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、鉄イオン、マンガンイオンが挙げられる。
【００３４】
培養条件について説明すると、例えば、培地における腸内細菌密度は、例えば１×１０６〜１×１０１１細胞／ｍＬであり、好ましくは１×１０７〜１×１０１０細胞／ｍＬであり、より好ましくは１×１０８〜１×１０９細胞／ｍＬである。培養温度は、例えば３０〜４０℃である。培養期間は、例えば１〜７日である。嫌気的培養条件または好気的培養条件のいずれも利用することができるが、嫌気的培養条件が好ましい。嫌気的培養条件下の酸素濃度は、例えば０〜５％、好ましくは０〜３％、より好ましくは０〜２％、さらにより好ましくは０〜１％である。
【００３５】
本発明のスクリーニング方法は、例えば、抗炎症作用を有する新規医薬または食品の開発、ならびに既存の作用に加え、抗炎症作用をさらに有する複合的な作用を発揮できる医薬または食品の開発のために有用である。
【実施例】
【００３６】
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００３７】
（方法）
（１）マウスと飼料
５週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６ＪマウスをＣｌｅａ  Ｊａｐａｎ，  Ｉｎｃ．から購入した。制御された光条件下（１２時間明／１２時間暗サイクル）でマウスを飼育した。水道水または２．０％ＤＳＳ（分子量３６，０００〜５０，０００；ＭＰ  Ｂｉｏ  Ｊａｐａｎ）を与え、ＡＩＮ−９３Ｇ（オリエンタル酵母）または５％ＲＢ、１０％ＲＢ、２０％ＲＢ、γ−オリザノール、ＲＢオイルおよび脱脂ＲＢ（ＡＩＮ−９３Ｇ）を与えた。ＲＢサンプルはＲｉｃｅｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．によって提供され、γ−オリザノール、ＲＢオイルおよび脱脂ＲＢは、Ｏｒｙｚａ  Ｏｉｌ＆Ｆａｔ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｃ．によって提供された。【００３８】
（２）動物実験
この研究では、２回の動物実験を行った。第１の実験では、米糠（ＲＢ）の効果を検証し、ＲＢ濃度依存性を調べた。第２の実験では、ＲＢの成分を分画して、どの成分がＲＢの大腸炎抑制効果に寄与するかを調べた。両方の実験において、１週間の馴化期間の後、以下のようにマウスを無作為に４または６のグループ（各グループでｎ＝５〜７）に割り当てた：コントロール：ＡＩＮ−９３Ｇ食および２．０％（ｗ／ｖ）ＤＳＳ水を１０週間投与することにより大腸炎を誘発した。５％ＲＢ、１０％ＲＢ、２０％ＲＢ、ＲＢ、ＲＢＧ（ガンマオリザノール）、ＲＢＯ（ＲＢオイル）およびＲＢＤ（脱脂ＲＢ）：５％ＲＢ、１０％ＲＢ、２０％ＲＢ、２０％ＲＢ、γ−オリザノール、ＲＢ  オイルおよび脱脂ＲＢを添加したＡＩＮ−９３Ｇ食および水道水を１週間、次いで２．０％ＤＳＳ水をそれぞれ１０日間間投与した。実験期間中、全てのマウスからの糞便試料を、１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子分析のために毎日収集した。さらに、ＤＳＳ投与期間中、大腸炎の重篤度は、後述のＤＡＩ評価に記載されているように評価した。ＤＳＳ投与後１０日目に、全てのマウスを解剖した。大腸および大腸内容物を収集し、大腸長を測定した。すべてのサンプルを−８０℃で保存した。【００３９】
（３）糞便収集
糞便試料を、キャピラリー電気泳動エレクトロスプレーイオン化飛行時間型質量分析（ＣＥＴＯＦＭＳ）および１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子解析のために収集した。すべてのマウスを別々のケージに入れた。毎日マウス１匹につき５個の糞便ペレットを、オートクレーブされたピンセットでチューブに採取し、氷上に置いた。これらのサンプルは、その後分析するまで−８０℃で保存した。【００４０】
（４）ＤＡＩ評価
疾患活性指数（ＤＡＩ）を毎日測定し、大腸炎の重篤度を評価した。ＤＡＩは、体重変化（０：＜１％；１：１−５％；２：５−１０％；３：１０−１５％；４：＞１５％）、糞便（０：陰性、１：＋、２：＋＋、３：＋＋＋、４：＋＋＋＋）、および糞便の硬さ（０：正常、２：軟質、４：下痢）の３つのパラメータの平均を計算することによって決定した。【００４１】
（５）組織病理学
組織病理学的分析のために、大腸の中央部からの代表的なサンプルを１０％ホルマリン中に固定し、パラフィンに包埋し、切片にし、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、倍率×２００で調べた。【００４２】
（６）ＤＮＡ抽出
糞便ＤＮＡ抽出は、いくつかの改変を伴って以前に記載された方法に従って実施された（Ｆｕｒｕｓａｗａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２０１３；５０４（７４８０）：４４６−５０．）。ＶＤ−８００Ｒ凍結乾燥機（ＴＡＩＴＥＣ）を用いて糞便サンプルを２４時間凍結乾燥した。凍結乾燥した糞便を、Ｓｈａｋｅ  Ｍａｓｔｅｒ（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて３．０ｍｍジルコニアビーズ（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）で激しく振とう（１，５００ｒ．ｐ．ｍ．１０分間）して破壊した。糞便試料（１０ｍｇ）を、１．０％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ／ＴＥ（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）溶液４００μＬとフェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール（２５：２４：１）４００μＬで懸濁した。混合液中に０．１ｍｍジルコニア／シリカビーズを加えてシェイクマスターを用いて激しく振とう（１，５００ｒ．ｐ．ｍ．５分間）してさらに破壊した。１７，８００×ｇで５分間室温にて遠心分離した後、標準のフェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール法により糞便抽出物から細菌ゲノムＤＮＡを精製した。ＲＮＡをＲＮａｓｅ  Ａ処理によりサンプルから除去し、次いで標準的なフェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール法によりＤＮＡサンプルをもう１回精製した。【００４３】
（７）１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子シークエンシング
糞便ＤＮＡサンプル中の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子は、いくつかの改変を伴って以前に記載された方法に従ってＭｉＳｅｑシーケンサー（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を用いて分析した（Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．２０１５；２０１５：８２４３９５．）。要約すると、１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子のＶ１−Ｖ２領域は、バクテリアユニバーサルプライマーセット２７Ｆｍｏｄ（５’−ＡＧＲＧＴＴＴＧＡＴＹＭＴＧＧＣＴＣＡＧ−３’（配列番号１））（Ｋｉｍ  ＳＷ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＮＡ  Ｒｅｓ．２０１３；２０（３）：２４１−５３．）および３３８Ｒ（５’−ＴＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＧＴＡＧＧＡＧＴ−３’（配列番号２））を用いて糞便から単離されたＤＮＡから増幅された。Ｔｋｓ  Ｇｆｌｅｘ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｔａｋａｒａ  Ｂｉｏ社製）を用いてＰＣＲを行い、９８℃で１分間、９８℃で１０秒間、５５℃で１５秒間、および６８℃で３０秒間で３０サイクルの増幅を行った後、６８℃で３分間最後に伸張させた。増幅産物をアガロースゲル電気泳動で確認し、Ａｇｅｎｃｏｕｒｔ  ＡＭＰｕｒｅ  ＸＰ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて精製し、次に各サンプルに固有の８ｂｐのバーコード配列（Ｎで示される）であるＰ５配列を含むフォワードプライマー(５’−ＮＮＮＮＮＮＮＮＴＡＴＧＧＴＡＡＡＴＴＧＴＡＧＲＧＴＴＴＧＡＴＹＭＴＧＧＣＴＣＡＧＴ−３’（配列番号３））、Ｒｄ１  ＳＰ配列及び２７Ｆｍｏｄプライマー及びユニークな８ｂｐのバーコード配列（Ｎで示される）を含む、Ｐ７配列を含有するリバースプライマー（５’−ＣＡＡＧＣＡＧＡＡ−ＧＡＣＧＧＣＴＡＴＡＣＧＡＧＡＴＮＮＮＮＮＮＮ−ＡＧＴＣＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣ  ＣＣＧＡＧＧＡＧＴ−３’（配列番号４））、Ｒｄ２  ＳＰ配列、および３３８Ｒプライマー。Ａｇｅｎｃｏｕｒｔ  ＡＭＰｕｒｅ  ＸＰを用いて精製した増幅産物を、Ｑｕａｎｔ−ｉＴＰｉｃｏＧｒｅｅｎ  ＤＮＡアッセイ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して定量化し、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００バイオアナライザ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で品質を制御した各サンプルからほぼ等量のＰＣＲアンプリコンをプールすることにより混合サンプルを調製した。最後に、ＭｉＳｅｑ配列決定をプロトコル通りに行った。この研究では、２×３００ｂｐのペアエンド配列決定が用いられた。【００４４】
（８）キャピラリー電気泳動エレクトロスプレーイオン化飛行時間型質量分析計を用いたメタボローム解析
メタボローム解析は、以前に記載された方法に従って実施した〔（１）Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．２０１５；２０１５：８２４３９５．、および（２）Ｍｉｓｈｉｍａ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．２０１５；２６（８）：１７８７−９４．〕。簡潔には、糞便サンプルを凍結乾燥し、上記ＤＮＡ抽出で記載されているように３．０ｍｍジルコニアビーズで破壊した。糞便サンプルから代謝産物を抽出するために、内部標準（メチオニンスルホンおよびＤ−ショウノウ−１０−スルホン酸（ＣＳＡ）の各２０μＭ）を含有する５００μＬのメタノールを１０ｍｇの糞便サンプルに添加した。シェイクマスターを用いて激しく振とう（１，５００ｒ．ｐ．ｍ．５分間）して１００ｍｇの０．１ｍｍジルコニア／シリカビーズでさらに混合物を破壊した。次に、この混合物を２００μＬの超純水および５００μＬのクロロホルムと混合した後、激しく振盪させた（１５００ｒ．ｐ．ｍ．５分間）。４，６００ｘｇで４℃で１５分間遠心分離した後、上清を遠心フィルターチューブ（Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのメタボローム抽出用のＵｌｔｒａｆｒｅｅＭＣ−ＰＬＨＣＣ  ２５０／ｐｋ）に移してタンパク質および脂質分子を除去した。濾液を遠心分離し、ＣＥ−ＴＯＦＭＳ分析の直前に参照化合物（それぞれ３−アミノピロリジンおよびトリメシン酸２００μＭ）を含有する１００μＬの超純水に溶解した。【００４５】
イオン性代謝産物を、陽性および陰性の両方のモードでＣＥ−ＴＯＦＭＳを用いて分析した。すべてのＣＥ−ＴＯＦＭＳ実験は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＣＥキャピラリー電気泳動システム（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて行った。注釈表は、標準化合物の測定から作成し、同様のｍ／ｚ値および標準化された移動時間に従ってデータセットと整列させた。次いで、ピーク面積を、それぞれ、カチオン性およびアニオン性代謝産物についての内部標準メチオニンスルホンまたはＣＳＡのピーク面積に対して正規化した。標準化合物の相対ピーク面積および濃度に基づいて、各代謝産物の濃度を算出した。ピーク注釈と定量は、社内ソフトウェア（ＭａｓｔｅｒＨａｎｄｓ）によって確認された（Ｓｕｇｉｍｏｔｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ．２０１０；６（１）：７８−９５．）。代謝物セット濃縮分析（ＭＳＥＡ）は、ＤＳＳ投与０日目のコントロールおよび１０％ＲＢ  からの代謝物を用いて行った〔（１）Ｘｉａ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２０１０；３８（ＳＵＰＰＬ．  ２）．、および（２）Ｘｉａ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ：  Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２０１６．ｐ．１４．１０．１−１４．１０．９１．〕。【００４６】
（９）統計分析
２つ以上の群間の差異は、スチューデントｔ検定またはダネット検定によってそれぞれ評価した。体重変化、ＤＡＩは双方向反復測定ＡＮＯＶＡ、続いて、Ｈｏｌｍ−Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ手順（これは、ａｎｏｖａｋｕｎバージョン４．８．０を使用）によって分析した。主成分分析（ＰＣＡ）は、ＳＩＭＣＡＰ１３．０．３（Ｕｍｅｔｒｉｃｓ）によって実施された。ＭｅＶ  ＴＭ４ソフトウェア４．７．４を用いて、階層的クラスタリングおよびヒートマップを描画した。【００４７】
（１０）ＡｈＲ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験
マウス由来ＲＡＷ２６４．７細胞（ＲＡＷ／Ｎｅｏ）もしくはＡｈＲを強制発現させたＲＡＷ細胞（ＲＡＷ／ＡｈＲ）に５−ＨＩＡＡを溶媒のみ（ＤＭＳＯ）、２μＭ、２０μＭ、２００μＭ培地に添加して２４時間培養した時のＣｙｐ１ａ１の相対発現量を測定した。【００４８】
（１１）ノトバイオート試験
無菌マウスに溶媒のみもしくはエンテロコッカス属細菌群、ラクトバチルス属細菌群、バクテロイデス属細菌群、クロストリジウム属細菌群を経口投与した。投与１ヶ月後に糞便を採取し、ＣＥ−ＴＯＦＭＳを用いて５−ＨＩＡＡの濃度を測定した。【００４９】
（１２）ＦＩＳＨ解析
大腸を採取し、Ｍｅｔｈａｃａｒｎ固定法で処理し、パラフィン切片の作成を行った。作成したパラフィン切片をキシレンで脱パラフィンさせたのち、米ぬか摂取マウスで特異的に増加するクロストリジウムをＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  （ＦＩＳＨ）法を用いて、１６Ｓ  ｒＲＮＡ標的に染色を行った。ＦＩＳＨ染色にクロストリジウムクラスターＸＩＶを特異的に染色するＥｒｅｃ４８２（５’−ＧＣＴＴＣＴＴＡＧＴＣＡＲＧＴＡＣＣＧ−３’）蛍光標識ＦＩＳＨプローブを用いた。クロストリジウムをＦＩＳＨ染色後、ＤＡＰＩと蛍光標識のＷｈｅａｔ  Ｇｅｒｍ  Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ（ＷＧＡ）レクチンでそれぞれＤＮＡとムチンの染色を行う。【００５０】
（結果と考察）
（１）ＲＢ摂取によって大腸炎が抑制される（図２）
ＲＢ摂取マウスではコントロールと比較して体重減少、ＤＡＩ、大腸の短縮、大腸炎に対するＲＢ食の効果を評価するために、ＤＳＳ誘発性大腸炎マウスモデルを用いて動物実験を行った。コントロールにおいて体重は減少したが、ＲＢ摂取群では体重減少では抑制された（図２−１）。同様に、コントロール群とＲＢ摂取群との間でＤＡＩに有意差があった（図２−２）。コントロール群とＲＢＧ摂取群との間の大腸長に有意差が観察された（図２−３、２−４）。さらに大腸での血液の量に差があった（図２−３）。大腸の組織切片は、ＲＢを与えたマウス群において、陰窩上窩のゆがみおよび白血球および好中球の粘膜および浸潤の減少を示した（図２−５）。まとめると、これらの結果は、ＲＢ食がＤＳＳ誘発大腸炎を抑制できることを示唆している。【００５１】
（２）ＲＢ脱脂成分は大腸炎を抑制する（図３）
ＲＢの大腸炎抑制効果に寄与する有効成分を同定するために、ＲＢＧ、ＲＢＤおよびＲＢＯの３つの成分を使用した。脂肪を含まないＲＢからなるＲＢＤは、体重、ＤＡＩ、ならびに大腸の長さおよび形態に対して有意な大腸炎抑制効果を有する（図３−１〜３−４）。特に、観察された大腸炎抑制効果は、ＲＢ丸ごと（ＲＢ）と同様であった。対照的に、これまでに大腸炎抑制効果を有すると考えられていたＲＢＧおよびＲＢＯは、有意な大腸炎抑制効果を示さなかった。これらの結果は、ＲＢの大腸炎抑制効果が主にその脱脂成分に起因する可能性があることを示唆している。【００５２】
（３）ＲＢ摂取による糞便細菌叢の変化（図４）
ＲＢ食餌介入による糞便微生物の組成の動態を評価するために、実験中に毎日採取した便試料を用いて１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子解析を行った。５９，６６２個のＯＴＵ（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ  ｔａｘｏｎｏｍｉｃ  ｕｎｉｔ）が３０８個のサンプルから構築された（糞便収集中にいくつかの糞便サンプルが失われた）。糞便細菌叢の科レベルにおける分類学的プロファイリングが示されている（図４−１）。ＤＳＳ誘発大腸炎マウスの糞便細菌叢の組成は劇的に変化したことが観察された。ＲＢを与えたマウス群におけるα多様性はコントロールと比較して有意に高かったか、または遅れていた（図４−２）。糞便細菌叢の変化を調べるために、コントロール群と他の群との間で０日目の各細菌科の相対存在量を比較した。コントロールと比較してＲＢ摂取群では２０の科、特にＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅおよびＴｕｒｉｃｉｂａｃｔｅｒａｃｅａｅは有意に増加し、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ、ＥｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅおよびＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅは有意な減少を示した（図４−３）。【００５３】
（４）ＲＢ摂取による糞便中代謝物の変化（図５）
ＲＢ摂取による分子レベルの影響を評価するために、０日目、５日目および１０日目に収集した糞便サンプルを用いてメタボローム解析を行った。ＣＥ−ＴＯＦＭＳおよびガスクロマトグラフィー質量分析計（ＧＣ−ＭＳ）によるメタボローム分析は、少なくとも１時点あたり１グループ１匹のマウスの糞便を用い３６０代謝物を同定した。これらの代謝産物の濃度をコントロールと他の群で比較した（データ示さず）。ＰＣＡにおけるコントロールおよびＲＢマウスの糞便代謝物プロファイルの時間的変化は異なる方向であった（図５−１）。これは、糞便メタボロームプロファイルはＤＳＳの影響を受けたが、ＲＢ摂取がその影響を抑制したことを示している。コントロールと比較してＲＢ摂取マウスではａｃｅｔａｔｅ、ｂｕｔｙｒａｔｅのような短鎖脂肪酸を含む４１代謝物が有意に変化していた（図５−２）。腸内微生物叢による食物繊維の発酵によって産生されるＳＣＦＡは、好中球におけるアポトーシスの誘導（Ｍａｓｌｏｗｓｋｉ  ＫＭ  ｅｔ  ａｌ．，ＧＰＲ４３．Ｎａｔｕｒｅ．２００９；４６１（７２６８）：１２８２−６．）および結腸調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の分化（Ｆｕｒｕｓａｗａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２０１３；５０４（７４８０）：４４６−５０．）を介してマウスの大腸炎を抑制する。さらに、ＳＣＦＡｓの濃度の増加は、ｐＨの低下をもたらす。より低いｐＨの存在下では、病原性微生物の数および胆汁酸の溶解度が減少し、それによって二次胆汁酸の腫瘍プロモーター活性の低下をもたらす〔（１）Ｃｏｏｋ  ＳＩ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｉｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．１９９８；１２（６）：４９９−５０７．、（２）Ｇｒｕｂｂｅｎ  ＭＪＡＬ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｇ  Ｄｉｓ  Ｓｃｉ．２００１；４６（４）：７５０−６．、および（３）Ｗｏｎｇ  ＪＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２００６；４０（３）：２３５−４３．〕。したがって、ＲＢのような発酵性食物繊維の摂取量の増加は、大腸炎の抑制に有益であり得る〔（１）Ｄａｏｕ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  ２０１４；５１（１２）：３８７８−８５．、および（２）Ｐａｒｋ  ＨＹ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ．２０１６；８２（０７）：６０６−１１．〕。我々の研究では、ＳＣＦＡｓの濃度はＲＢ消費によって増加した。最も顕著なＳＣＦＡであるａｃｅｔａｔｅは、結腸のｐＨを低下させるために重要であり〔（１）Ｄｕｎｃａｎ  ＳＨ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ．２００４；９１（０６）：９１５−２３．、および（２）Ｙｅ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．２０１６；６：２０３２９．〕、それによって病原性微生物の数および胆汁酸の溶解度が抗炎症特性を有し、マウスの腸上皮の完全性を促進する〔（１）Ｆｕｋｕｄａ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２０１１；４６９（７３３１）：５４３−７．、および（２）Ｍａｃｉａ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１５；６（Ａｕｇｕｓｔ）：６７３４．〕。また、０日目にコントロールおよび１０％ＲＢのメタボロームデータを用いてＭＳＥＡを実施した（表１）。ビタミンＢ６代謝、トリプトファン代謝およびユビキノン生合成などはコントロールと１０％ＲＢの間で有意に変化した。トリプトファン代謝関連代謝物のうち５−ヒドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）がＲＢ摂取によって増加していた（図５−３、５−４）。【００５４】
【表１】
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【００５５】
（５）５−ＨＩＡＡによる大腸炎抑制（図６）
５−ＨＩＡＡがＡｈＲリガンドか調べるためにＡｈＲ強制発現ＲＡＷ２６４．７細胞を５−ＨＩＡＡ（培地中の濃度  ２、２０、および２００μＭ）で処理したところ、コントロールと比較してＣｙｐ１ａ１遺伝子発現量が増加した（図６−１）。また、クロストリジウム属細菌群をＧＦマウスに定着させたところ、無菌マウスや他の細菌を定着させたときよりも多くの５−ＨＩＡＡが産生された（図６−２）。大腸断面のＦＩＳＨ解析の結果、ＲＢの繊維質部位にＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属細菌群が局在していた。先行研究では、腸内微生物叢によるトリプトファン代謝が、腸ホメオスタシスによく知られた効果を有するサイトカインであるＩＬ−２２の産生を調節することにより、ＡｈＲを介した粘膜免疫応答において役割を果たすことが示唆されている〔（１）Ｌａｍａｓ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２０１６；２２（６）：５９８−６０５．、（２）Ｒｕｔｚ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２０１３；２５２（１）：１１６−３２．、および（３）Ｚｅｌａｎｔｅ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０１３；３９（２）：３７２−８５．〕。さらに、ＩＢＤ患者では、ＡｈＲリガンドの微生物産生の障害が観察される（Ｌａｍａｓ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２０１６；２２（６）：５９８−６０５．）。我々の研究では、トリプトファン代謝はＲＢ消費によって有意にアップレギュレートされていた。したがって、腸内細菌叢由来のトリプトファン代謝は、大腸炎患者のための新しい治療薬の開発の標的となりうる。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明の抗炎症剤は、炎症の抑制（例、炎症性腸疾患の予防・治療）に有用である。
本発明のスクリーニング方法は、抗炎症剤の開発に有用である。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図３−５】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図５−４】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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