【手続補正書】
【提出日】平成21年6月19日(2009.6.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロモーターに作動可能に連結した癌遺伝子を含む核酸がゲノムに安定に組み込まれている形質転換魚、および前記核酸であってエンハンサートラップ効果の特性を有する核酸がいくつかの細胞に取り込まれている形質転換魚からなる群から選択される形質転換魚。
【請求項２】
プロモーターが、器官特異的プロモーター、組織特異的プロモーター、最小プロモーターであるか、またはエンハンサートラッププロモーターの特性を有する、請求項１に記載の形質転換魚。
【請求項３】
組織特異的プロモーターがケラチン8(krt8)である、請求項２に記載の形質転換魚。
【請求項４】
癌遺伝子が、RAS、MYC、CYCLIN D1、FOS、JUN、MYB、BCL2、HOX11、HOX11L2、LYL1、TAL1/SCL、LMO1、LMO2、MYCN、MDM2、CDK4、GLI1、IGF2、活性化RAS、活性化EGFR、変異型FLT3-ITD、変異型および活性型のTP53、PAX3、PAX7、BCR/ABL、HER2/NEU、FLT3R、NPM-ALK、SRC、ABL、TAN1、PTC、B-RAF、PML-RARアルファおよびE2A-PBX1からなる群から選択される、請求項１に記載の形質転換魚。
【請求項５】
癌遺伝子がRas癌遺伝子である、請求項４に記載の形質転換魚。
【請求項６】
癌遺伝子が、該癌遺伝子の相同体である、請求項４に記載の形質転換魚。
【請求項７】
相同体が哺乳類の相同体である、請求項６に記載の形質転換魚。
【請求項８】
癌遺伝子が、(i) zK-rasB、(ii) zK-rasB相同体および(iii) zK-rasBと実質的に類似する癌遺伝子、からなる群から選択される、請求項１に記載の形質転換魚。
【請求項９】
癌遺伝子がレポーター遺伝子と融合している、請求項１に記載の形質転換魚。
【請求項１０】
レポーター遺伝子が、蛍光タンパク質遺伝子、ルシフェラーゼ、βガラクトシダーゼ、クロラムフェニコール、アシルトランスフェラーゼ、βグルクロニダーゼおよびアルカリフォスファタ−ゼからなる群から選択される、請求項９に記載の形質転換魚。
【請求項１１】
蛍光タンパク質遺伝子がEGFPである、請求項１０に記載の形質転換魚。
【請求項１２】
前記核酸がkrt8プロモーターと作動可能に連結したK-ras癌遺伝子を含み、該K-ras癌遺伝子は高感度緑色蛍光タンパク質遺伝子と融合している、請求項１に記載の形質転換魚。
【請求項１３】
K-ras癌遺伝子がzK-rasB(V12)であり、krt8プロモーターがゼブラフィッシュkrt8である、請求項１２に記載の形質転換魚。
【請求項１４】
癌遺伝子が癌遺伝子媒介性の癌の進行を誘導し、癌が非ホジキンリンパ腫、高悪性度星細胞腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、神経内分泌癌、膵癌、卵巣癌、精巣癌、胃癌、結腸癌、腎癌、黒色腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病およびT細胞急性リンパ性白血病からなる群から選択される、請求項１に記載の形質転換魚。
【請求項１５】
癌遺伝子が腫瘍を誘導する、請求項１に記載の形質転換魚。
【請求項１６】
不死の腫瘍細胞株を調製する方法であって、請求項１５に記載の形質転換魚の腫瘍から細胞を単離すること、および単離した腫瘍細胞を不死の腫瘍細胞株の産生に適した条件下で培養することを含む方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法により調製した不死の腫瘍細胞株を移植した魚を含む、腫瘍の進行および転移に関する動物モデル。
【請求項１８】
腫瘍の進行または転移を阻害する薬物をスクリーニングする方法であって、請求項１７の動物モデルを被験薬物または物質と接触させる、あるいは曝すこと、および該被験薬物または物質が腫瘍の進行または転移を阻害するかどうかを判定することを含む方法。
【請求項１９】
腫瘍細胞の成長を阻害する薬物をスクリーニングする方法であって、請求項１６に記載の方法により調製した不死の腫瘍細胞株を被験薬物または物質と接触させること、および該薬物または物質が腫瘍細胞の成長を阻害するかどうかを判定することを含む方法。
【請求項２０】
癌遺伝子媒介性の腫瘍性または過形成性形質転換を調節する薬物または物質をスクリーニングする方法であって、以下を含む方法：
形質転換魚を被験薬物または物質と接触させる、あるいは曝す；
該薬物または物質が癌遺伝子媒介性の腫瘍性または過形成性形質転換を調節するかどうかを判定する；および
該薬物または物質が癌遺伝子媒介性の腫瘍性または過形成性形質転換を調節する場合、該薬物または物質を癌遺伝子媒介性の腫瘍性または過形成性形質転換を調節する薬物または物質として分類する、
ここで該形質転換魚は、プロモーターに作動可能に連結した癌遺伝子を含む核酸がゲノムに安定に組み込まれている形質転換魚、および前記核酸であってエンハンサートラップ効果の特性を有する核酸がいくつかの細胞に取り込まれている形質転換魚からなる群から選択される。
【請求項２１】
プロモーターが、器官特異的プロモーター、組織特異的プロモーターまたは最小プロモーターである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
組織特異的プロモーターがケラチン8 (krt8)である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
癌遺伝子がRAS、MYC、CYCLIN D1、FOS、JUN、MYB、BCL2、HOX11、HOX11L2、LYL1、TAL1/SCL、LMO1、LMO2、MYCN、MDM2、CDK4、GLI1、IGF2、活性化RAS、活性化EGFR、変異型FLT3-ITD、変異型および活性型のTP53、PAX3、PAX7、BCR/ABL、HER2/NEU、FLT3R、NPM-ALK、SRC、ABL、TAN1、PTC、B-RAF、PML-RARアルファおよびE2A-PBX1からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
癌遺伝子がRas癌遺伝子である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
癌遺伝子が、該癌遺伝子の相同体である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
相同体が哺乳類の相同体である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
癌遺伝子が、(i) zK-rasB、(ii) zK-rasB相同体および(iii) zK-rasBと実質的に類似する癌遺伝子、からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２８】
癌遺伝子がレポーター遺伝子と融合している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２９】
レポーター遺伝子が、蛍光タンパク質遺伝子、ルシフェラーゼ、βガラクトシダーゼ、クロラムフェニコール、アシルトランスフェラーゼ、βグルクロニダーゼおよびアルカリフォスファタ−ゼからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
蛍光タンパク質遺伝子がEGFPである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記核酸がkrt8プロモーターと作動可能に連結したK-ras癌遺伝子を含み、該K-ras癌遺伝子は高感度緑色蛍光タンパク質遺伝子と融合している、請求項２０に記載の方法。
【請求項３２】
K-ras癌遺伝子がzK-rasB(V12)であり、krt8プロモーターがゼブラフィッシュkrt8である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
癌遺伝子が癌遺伝子媒介性の癌の進行を誘導し、癌が非ホジキンリンパ腫、高悪性度星細胞腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、神経内分泌癌、膵癌、卵巣癌、精巣癌、胃癌、結腸癌、腎癌、黒色腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病およびT細胞急性リンパ性白血病からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項３４】
癌遺伝子媒介性の腫瘍性または過形成性形質転換に起因する腫瘍形成の発症率を測定することをさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項３５】
癌遺伝子媒介性の腫瘍性または過形成性形質転換に起因する腫瘍の量または大きさを測定することをさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項３６】
被験薬物または物質がアンチセンスDNA、アンチセンスRNAまたは低分子干渉RNAである、請求項２０に記載の方法。
【請求項３７】
形質転換魚が形質転換魚の胚である、請求項２０に記載の方法。
【請求項３８】
形質転換魚が形質転換ゼブラフィッシュである、請求項２０に記載の方法。
【請求項３９】
形質転換魚の胚が形質転換ゼブラフィッシュの胚である、請求項３７に記載の方法。