(57)【要約】  この蛍光免疫測定用カップは、蛍光標識となるビーズを用い、抗原抗体反応を利用する免疫系の分析において使用される蛍光免疫測定用カップであって、底面部と、前記底面部と接続している側面部とを有し、前記底面部は、前記ビーズが１個ずつ収納される複数の孔形状部を有し、前記孔形状部間の領域の上面は、平面形状である。
2020085104.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛍光標識となるビーズを用い、抗原抗体反応を利用する免疫系の分析において使用される蛍光免疫測定用カップであって、
底面部と、
前記底面部と接続している側面部とを有し、
前記底面部は、前記ビーズが１個ずつ収納される複数の孔形状部を有し、
前記孔形状部間の領域の上面は、平面形状である蛍光免疫測定用カップ。
【請求項２】
前記底面部と前記側面部とが一体に形成されている、請求項１に記載の蛍光免疫測定用カップ。
【請求項３】
前記側面部の内面は、前記蛍光免疫測定用カップを前記底面部に対して垂直に切断したときの断面において曲線状の部分を含み、
前記側面部の内径は、前記底面部へ近づくほど小さくなり、
前記側面部の前記内面は、前記底面部の上面と、前記断面においてスプライン曲線で連結している、請求項１又は２に記載の蛍光免疫測定用カップ。
【請求項４】
前記側面部の内面は疎水性である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
【請求項５】
前記底面部の上面と前記孔形状部の側面部は、前記蛍光免疫測定用カップを前記底面部に対して垂直に切断したときの断面においてスプライン曲線で連結している、請求項１〜４のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
【請求項６】
前記孔形状部の内面が親水性処理されている、請求項１〜５のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
【請求項７】
さらに、前記側面部の内面から突出している補強リブを有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
【請求項８】
さらに、前記側面部の外面を覆っている第１の遮光部を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
【請求項９】
さらに、第２の遮光部を有し、
前記第２の遮光部は、前記底面部の前記孔形状部が形成されている面とは反対の面上であり、前記側面部と重複し、且つ前記孔形状部と重複しない領域に位置している、請求項１〜８のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップの製造方法であって、
第１の金型に前記孔形状部を形成するためのモールドを取り付けることと、
前記第１の金型と第２の金型を合体させ、前記第１の金型と前記第２の金型に囲まれる空間に樹脂を射出して成形すること、
を含む蛍光免疫測定用カップの製造方法。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップを用いた蛍光免疫測定方法であって、
複数の前記孔形状部に前記ビーズを１個ずつ収納することと、
複数の前記孔形状部に検出対象物質である検体を含む液体と、試薬と、を流入することと、
前記蛍光免疫測定用カップに封止材を流入し、複数の前記孔形状部の上部を封止することと、
前記孔形状部から出射する蛍光を測定することと、を含む、蛍光免疫測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体の抗原抗体反応を利用して各種生体分子やガン細胞などの検査を行う免疫系の分析において使用される免疫測定用カップ及びその製造方法、並びに免疫測定方法に関する。
本願は、２０１８年１０月２４日に、日本に出願された特願２０１８−１９９９８５号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【０００２】
抗原は、病原性のウイルスや細菌、花粉、卵及び小麦などの生体に免疫応答を引き起こす物質である。抗体は、体内に入った抗原を体外へ排除するために作られる免疫グロブリンというタンパク質の総称である。例えば、ワクチンは、無毒化した病原性細菌やウイルスを投与することで、体内で病原体に対する抗体の産生を促し、感染症に対する免疫を獲得する。【０００３】
病原菌やガン細胞の検出、ＤＮＡの遺伝子解析又は環境有害物質等の測定などの、いわゆる生体計測の分野において、免疫反応を用いて測定すべき生体物質（例えば抗原）と、これと選択的に結合する検査用物質（例えば抗体）との結合を測定することで、前記抗原等の種類と量との計測がなされている。【０００４】
公知の免疫系の検査法としては、下記の非特許文献１に記載されるように、測定すべき検体が含む抗原を捕捉する抗体を直接又は間接的に蛍光色素、アイソトープその他の標識化物質（以下、マーカーと記す）で標識化し、捕捉後（抗原抗体反応後）のマーカーからの蛍光量や放射線量を計測し、診断に供する方法が一般的に採用されている。【０００５】
抗原等の測定に用いるマーカーとしては、厳密な管理を要求されるラジオアイソトープよりも、使い勝手の良い蛍光マーカー等が一般的に使用されている。蛍光マーカー等を用いる光学的手法では、蛍光マーカーが付加された抗体を抗原に結合させて、そのマーカーからの発光を測定することで抗原の測定及び分析を行なう。その代表的な方法として、エンザイムイムノアッセイ（例えば、Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＡ）法では、抗原と結合した抗体に付加した蛍光マーカーが試薬中の酵素と反応することで生じる蛍光を利用する。【０００６】
生体分子の観察を容易にし、測定対象の生体分子を識別するために、個々の生体分子には蛍光マーカーとともに、金コロイド又は微小粒子等が付加される。微小粒子としては、例えばポリスチレンビーズが使用される。生体分子に蛍光マーカーや微粒子を付加することで、光学顕微鏡の分解能では見ることが難しい大きさの分子を可視化することができる。以下、蛍光マーカーと微粒子を合わせて蛍光ビーズ又は単にビーズと記す。【０００７】
上記のような、免疫測定に抗原抗体反応を利用する分析では、測定すべき検体を含む血液などの液体（以下、血液で代表する）、蛍光標識となる蛍光ビーズ、発光（発色）反応を促進する試薬などを入れるために、試験管タイプの容器が用いられている（例えば、特許文献１、２参照）。【０００８】
図１０Ａは、従来の免疫測定用カップ５０の上面図、及び正面からの断面図である。図１０Ｂは、前記免疫測定用カップ５０に複数の蛍光ビーズ６２を滴下する様態を示す模式断面図である。【０００９】
従来の免疫測定用カップ５０を用いても、ガン細胞など細胞のレベルでの検出や大型のタンパク質など分子量の大きいもの（例えば分子量が６０ｋＤａ以上）は検出できる。一方で、図１０Ｂから推測できるように、滴下用治具先端部６１から従来の免疫測定用カップ５０に複数の蛍光ビーズ６２を滴下すると、蛍光ビーズ６２の配列が不均一となる。そのため、蛍光ビーズ６２が血液と試薬の混ざった液体中で分散するため蛍光が散乱して減光してしまう。よって、小さい分子量のタンパク質、例えば５〜６０ｋＤａ程度であるサイトカインなどを正確に測定し分析することは難しい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特許第４０９５１７６号公報
【特許文献２】特許第４５２２４３４号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】シンプル免疫学、１９５〜２０１ページ、株式会社南江堂（２００１年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本開示は、上記の課題を解決するためになされたもので、その目的とするところは、サイトカインなど小さな分子量のタンパク質などをばらつきがなく高い精度で測定し分析することができる免疫測定用カップ及びその製造方法、並びに免疫測定方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、以下の態様を包含する。
［１］蛍光標識となるビーズを用い、抗原抗体反応を利用する免疫系の分析において使用される蛍光免疫測定用カップであって、
底面部と
前記底面部と接続している側面部とを有し、
前記底面部は、前記ビーズが１個ずつ収納される複数の孔形状部を有し、
前記孔形状部間の領域の上面は、平面形状である蛍光免疫測定用カップ。
［２］前記底面部と前記側面部とが一体に形成されている、［１］に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［３］  前記側面部の内面は、前記蛍光免疫測定用カップを前記底面部に対して垂直に切断したときの断面において曲線状の部分を含み、
前記側面部の内径は、前記底面部へ近づくほど小さくなり、
前記側面部の前記内面は、前記底面部の上面と、前記断面においてスプライン曲線で連結している、［１］又は［２］に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［４］前記側面部の内面は疎水性である、［１］〜［３］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［５］前記底面部の上面と前記孔形状部の側面部は、前記蛍光免疫測定用カップを前記底面部に対して垂直に切断したときの断面においてスプライン曲線で連結している、［１］〜［４］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［６］前記孔形状部の内面が親水性処理されている、［１］〜［５］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［７］さらに、前記側面部の内面から突出している補強リブを有する、［１］〜［６］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［８］さらに、前記側面部の外面を覆っている第１の遮光部を有する、［１］〜［７］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［９］さらに、第２の遮光部を有し、
前記第２の遮光部は、前記底面部の前記孔形状部が形成されている面とは反対の面上であり、前記側面部と重複し、且つ前記孔形状部と重複しない領域に位置している、［１］〜［８］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［１０］［１］〜［９］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップの製造方法であって、
第１の金型に前記孔形状部を形成するためのモールドを取り付けることと、
前記第１の金型と第２の金型を合体させ、前記第１の金型と前記第２の金型に囲まれる空間に樹脂を射出して成形すること、
を含む蛍光免疫測定用カップの製造方法。
［１１］［１］〜［９］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップを用いた蛍光免疫測定方法であって、
複数の前記孔形状部に前記ビーズを１個ずつ収納することと、
複数の前記孔形状部に検出対象物質である検体を含む液体と、試薬と、を流入することと、
前記蛍光免疫測定用カップに封止材を流入し、複数の前記孔形状部の上部を封止することと、
前記孔形状部から出射する蛍光を測定することと、を含む、蛍光免疫測定方法。【００１４】
別の側面として、本発明は以下の態様を包含する。
［１２］蛍光標識となるビーズ（蛍光ビーズ）を用いた、抗原抗体反応を利用する免疫系の分析において使用される蛍光免疫測定用カップであって、
底面部と側面部を含む全体が一体で形成され、
前記底面部の上面は断面視で直線状の平面形状であり、
前記平面形状部分に前記蛍光ビーズが１個ずつ収納される複数の孔形状部が配列して形成されている、蛍光免疫測定用カップ。【００１５】
［１３］前記側面部の内面は断面視で曲線状の部分を含み、前記側面部の内径は前記底面部へ近づくほど小さくなり、
かつ前記底面部の上面と、断面視で、スプライン曲線で連結している、［１２］に記載の蛍光免疫測定用カップ。【００１６】
［１４］前記側面部の内面は疎水性である、［１２］又は［１３］に記載の蛍光免疫測定用カップ。【００１７】
［１５］前記底面部の上面と前記孔形状部の側面部はスプライン曲線で連結している、［１２］〜［１４］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ【００１８】
［１６］前記孔形状部の内面が親水性処理されている、［１２］〜［１５］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。【００１９】
［１７］［１２］〜［１６］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップの製造方法であって、
第１の金型に前記孔形状部を形成するためのモールドを取り付け、
前記第１の金型と第２の金型を合体させ、それらの空間に樹脂を射出して成形する、蛍光免疫測定用カップの製造方法。【００２０】
［１８］［１２］〜［１６］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップを用いた蛍光免疫測定方法であって、
複数の前記孔形状部に前記蛍光ビーズを１個ずつ収納する過程と、
複数の前記孔形状部に検出対象物質である検体を含む液体と、試薬と、を流入する過程と、
前記蛍光免疫測定用カップに封止材を流入し、複数の前記孔形状部の上部を封止する過程と、
前記孔形状部から出射する蛍光を測定する過程と、を含む、蛍光免疫測定方法。
【発明の効果】
【００２１】
本開示によれば、サイトカインなどの小さな分子量のタンパク質などをばらつきがなく高い精度で測定し分析することができる免疫測定用カップ及びその製造方法、並びに免疫測定方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１Ａ】本発明の一態様における免疫測定用カップの上面図、及び免疫測定用カップのＡ−Ａ断面における断面図である。
【図１Ｂ】本発明の一態様における免疫測定用カップの底面部の断面を斜めから撮影した拡大顕微鏡写真である。
【図１Ｃ】本発明の一態様における免疫測定用カップの孔形状部の図１ＡのＡ−Ａ断面に沿った概略断面図である。
【図１Ｄ】本発明の他の態様における免疫測定用カップの概略断面図である。
【図２】本発明の一態様における免疫測定用カップに複数の蛍光ビーズを滴下する様態を示す模式断面図である。
【図３】本発明の一態様における免疫測定用カップの図１ＡのＡ−Ａ断面における詳細な形状と、底面部の孔形状部にビーズが入り込む様態を示す模式断面図である。
【図４】図３に示す模式断面図における免疫測定用カップの内面の形状（孔形状部を除く）を説明するための模式図である。
【図５】本発明の一態様における免疫測定用カップの底面部の詳細な形状と、底面部の孔形状部にビーズ、血液及び試薬を閉じ込め封止した様態、及び蛍光を測定する様態を例示する図１ＡにおけるＡ−Ａ断面に沿った模式断面図である。
【図６Ａ】本発明の一態様における免疫測定用カップの製造方法の一工程を例示する模式断面図である。
【図６Ｂ】本発明の一態様における免疫測定用カップの製造方法の一工程を例示する模式断面図である。
【図６Ｃ】本発明の一態様における免疫測定用カップの製造方法の一工程を例示する模式断面図である。
【図６Ｄ】本発明の一態様における免疫測定用カップの製造方法の一工程を例示する模式断面図である。
【図７Ａ】本発明のさらに他の態様における免疫測定用カップの概略断面図である。
【図７Ｂ】本発明のさらに他の態様における免疫測定用カップの概略断面図である。
【図７Ｃ】本発明のさらに他の態様における免疫測定用カップの底面図である。
【図８Ａ】本発明のさらに他の態様における免疫測定用カップの遮光部について説明するための顕微鏡写真である。
【図８Ｂ】本発明のさらに他の態様における免疫測定用カップの遮光部について説明するための顕微鏡写真である。
【図９Ａ】本発明のさらに他の態様における試料台の上面図である。
【図９Ｂ】本発明のさらに他の態様におけるアダプタの概略断面図である。
【図１０Ａ】従来の免疫測定用カップの上面図、及び免疫測定用カップのＡ−Ａ断面における断面図である。
【図１０Ｂ】従来の免疫測定用カップに複数の蛍光ビーズを滴下する様態を示す模式断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明の実施形態に係る免疫測定用カップ及びその製造方法、並びに免疫測定方法について図面を用いて説明する。同一の構成要素については便宜上の理由がない限り同一の符号を付ける。各図面において、見易さのため構成要素の厚さや比率は誇張されていることがあり、構成要素の数も減らして図示していることがある。また、本発明は以下の実施形態そのままに限定されるものではなく、主旨を逸脱しない限りにおいて、適宜の組み合わせ、変形によって具体化できる。
【００２４】
［第一実施形態］
本発明の一態様における免疫測定用カップについて説明する。図１Ａは本発明の一態様における免疫測定用カップの上面図、及び免疫測定用カップのＡ−Ａ断面における断面図である。図１Ｂは、本発明の一態様における免疫測定用カップの底面部の断面を斜めから撮影した拡大顕微鏡写真である。本実施形態における免疫測定用カップは、蛍光標識となるビーズを用い、抗原抗体反応を利用する免疫系の分析において使用される蛍光免疫測定用カップであって、底面部と、前記底面部と接続している側面部とを有し、前記底面部は、前記蛍光ビーズが１個ずつ収納される複数の孔形状部を有し、前記孔形状部間の領域の上面は、平面形状である。
【００２５】
本実施形態における免疫測定用カップ１０は、底面部１１と側面部１４とを有する。前記側面部１４は、前記底面部１１と一体に形成されていてもよい。底面部１１には、前記平面形状部分に蛍光ビーズが１個ずつ収納される孔形状部１２が複数配列して形成されている。孔形状部１２間の領域の上面１５は、平面形状である。免疫測定用カップ１０は、側面部１４の上端に把持部１６を有していてもよい。なお蛍光ビーズは、以降、単にビーズと記載される場合がある。
【００２６】
免疫測定用カップ１０は、概略円形の底面部１１と、概略円筒形状の側面部１４とを含む。底面部１１の形状は特に限定されず、真円、楕円形、矩形、正方形及び多角形等であってもよい。側面部１４の形状は特に限定されず、底面部１１の形状に接続する筒状であればよい。例えば、側面部１４は、円筒状及び角筒状であってもよい。
【００２７】
把持部１６は、側面部１４の上端部から底面部１１と略平行となるよう突出している。免疫測定用カップ１０が把持部１６を有することで、ロボット等の自動ハンドリング装置を用いた場合においても免疫測定用カップ１０の取り扱い性が向上する。また、免疫測定時に免疫測定用カップ１０を測定システムにおけるアダプタに収容する際、把持部１６がストッパーとなる。そのため、測定箇所である孔形状部１２と測定システムにおける測定装置との距離を最適化することができる。
【００２８】
底面部１１の面積は特に限定されないが、例えば１０〜３０ｍｍ２である。免疫測定用カップ１０の底面部１１から側面部１４の上端までの距離（免疫測定用カップ１０の高さ）は特に限定されないが、例えば１０〜１５ｍｍである。
【００２９】
底面部１１の最も厚い部分の厚さは、０．２ｍｍ〜０．６ｍｍであることが好ましく、０．２ｍｍ〜０．３ｍｍであることがより好ましい。底面部１１の最も厚い部分が０．６ｍｍ以下であると、免疫測定用カップ１０の材料の自家蛍光による蛍光感度の低下が生じ難い。底面部１１の最も厚い部分が０．２ｍｍ以上であると、免疫測定用カップ１０の機械的強度が保たれる。
【００３０】
側面部１４の厚さは、底面部１１と同程度の厚さであることが好ましく、例えば、０．２ｍｍ〜０．６ｍｍであることが好ましく、０．２ｍｍ〜０．３ｍｍであることがより好ましい。また、図１Ｃに示すように側面部１４の内面が一部厚い部分、即ち補強リブ２５を有していてもよい。補強リブ２５は、側面部１４の内面から突出した形状である。補強リブ２５は、側面部１４の内周に沿って環状に形成されていてもよい。補強リブ２５の数は、特に限定されず、例えば１〜４個設けられていてもよく、２〜３個設けられることが好ましい。補強リブ２５の厚さ、即ち補強リブ２５における側面部外面から側面部内面までの寸法は、側面部１４の補強リブ２５以外の部分より厚ければよく、例えば０．１ｍｍ〜０．２ｍｍである。
【００３１】
免疫測定用カップ１０が補強リブ２５を有していると、側面部１４が上述のように薄い場合であっても、機械的強度を高めることができる。例えば、ロボット等の自動ハンドリング装置を用いて免疫測定を行う場合であっても、免疫測定用カップ１０が潰れにくい。
【００３２】
底面部１１を上面から見たときの孔形状部１２の平面形状は、円形でも多角形でもよいが、その最短の径の長さはビーズの最大径の１．１倍〜１．９倍であることが好ましく、１．２〜１．８倍であることがより好ましく、１．３〜１．７倍であることがさらに好ましい。孔形状部１２の最短の径がビーズの最大径の１．１倍〜１．９倍であると、１つの孔形状部１２にビーズが２個入らず、必ず１個収納できる。
【００３３】
免疫測定において、本実施形態における免疫測定用カップ１０と組み合わせて用いられるビーズの形状は、球形であってもよい。ビーズの最大径は、一般的に２μｍ〜５μｍである。
【００３４】
ビーズの最大径に鑑みて、孔形状部１２の最短の径は、２．２μｍ〜９．５μｍであってもよく、２．４μｍ〜９．０μｍであることが好ましく、２．６μｍ〜８．５μｍであることがより好ましい。例えば、ビーズが３μｍである場合、孔形状部１２の最短の径は、３．３μｍ〜５．７μｍであることが好ましく、３．６μｍ〜５．４μｍであることがより好ましく、３．９μｍ〜５．１μｍであることが更に好ましい。
【００３５】
孔形状部１２は、開口部の径より底面の径の方が小さいテーパー形状であることが好ましい。図１Ｄは、本発明の一態様における免疫測定用カップの孔形状部の図１ＡのＡ−Ａ断面に沿った概略断面図である。孔形状部１２の底面１７の径をＲ１で示す。孔形状部１２の開口部の径をＲ２で示す。孔形状部１２の開口部の径Ｒ２は、孔形状部１２の間の上面１５と同一平面上における孔形状部１２の開口部周縁の最小径と規定する。孔形状部１２は、Ｒ１＜Ｒ２であるテーパー形状を有していることが好ましい。孔形状部１２がこのようなテーパー形状を有していると、ビーズが孔形状部１２に収まりやすい。
【００３６】
孔形状部１２がテーパー形状を有している場合、Ｒ１はビーズの最大径の１．１倍〜１．５倍であることが好ましく、１．２〜１．４倍であることがより好ましい。Ｒ２は、ビーズの最大径の１．６倍〜１．９倍であることが好ましく、１．７〜１．８倍であることがより好ましい。Ｒ１がビーズの最大径の１．１倍〜１．５倍であると、孔形状部１２に入ったビーズが孔形状部１２から飛び出しにくい。Ｒ２がビーズの最大径の１．６倍〜１．９倍であると、１つのビーズが１つの孔形状部１２に収まりやすい。
【００３７】
孔形状部１２がテーパー形状を有している場合、Ｒ１は、２．２μｍ〜７．５μｍであることが好ましく、２．４μｍ〜７．０μｍであることがより好ましい。Ｒ２は、３．２μｍ〜９．５μｍであることが好ましく、６．８μｍ〜９．０μｍであることがより好ましい。Ｒ１がビーズの最大径の２．２μｍ〜７．５μｍであると、孔形状部１２に入ったビーズが孔形状部１２から飛び出しにくい。Ｒ２がビーズの最大径の３．２μｍ〜９．５μｍであると、１つのビーズが１つの孔形状部１２に収まりやすい。
【００３８】
一例として、ビーズの径が３μｍであるとき、Ｒ１は、３．３μｍ〜４．５μｍであることが好ましく、３．６μｍ〜４．２μｍであることがより好ましい。Ｒ２は、４．８μｍ〜５．７μｍであることが好ましく、５．１μｍ〜５．４μｍであることがより好ましい。
【００３９】
孔形状部１２の深さ、即ち孔形状部１２の間の上面１５から底面１７までの寸法は、ビーズの最大径の１．１倍〜１．５倍であることが好ましく、１．１〜１．３倍であることがより好ましい。孔形状部１２の深さがビーズの最大径の１．１倍〜１．５倍であると、１つの孔形状部１２に１つのビーズが収まりやすい。
【００４０】
孔形状部１２の深さは、２．２μｍ〜７．５μｍであることが好ましく、２．２μｍ〜６．５μｍであることがより好ましい。孔形状部１２の深さが２．２μｍ〜７．５μｍであると、１つの孔形状部１２に１つのビーズが収まりやすい。一例として、ビーズの最大径が３μｍであるとき、孔形状部１２の深さは、３．３μｍ〜４．５μｍであることが好ましく、３．３μｍ〜３．９μｍであることがより好ましい。
【００４１】
底面部１１が有する孔形状部１２の数は、例えば１８万個〜２７万個であり、２０万個〜２５万個であることがより好ましい。孔形状部１２の数が１８万個以上であると、免疫測定用カップ１０から蛍光が十分に得られ、測定精度を向上することができる。孔形状部１２の数が２７万個以下であると、隣り合う孔形状部１２間の距離が近くなりすぎず、免疫測定用カップ１０の生産性が向上する。
【００４２】
孔形状部１２は、底面部１１に規則性を持って配置している。孔形状部１２の配置は、隣り合う孔形状部１２の中心同士を結ぶ三角形が正三角形となる最密充填配置であることが好ましい。このとき、隣り合う孔形状部１２の中心間距離は、６μｍ〜１２μｍであることが好ましく、７μｍ〜１１μｍであることがより好ましい。隣り合う孔形状部１２の距離が３μｍ〜７μｍであると、免疫測定に十分な数のビーズを免疫測定用カップ１０の底面部１１に収容することができ、且つ免疫測定用カップ１０の製造時の歩留まり低下を防ぐことができる。
【００４３】
図２は、本発明の一態様における免疫測定用カップに複数の蛍光ビーズを滴下する様態を示す模式断面図である。滴下用冶具先端部２１からビーズ２２を１個ずつ配列して孔形状部１２に入れ込み、後述のように免疫測定を行うる場合、従来の免疫測定用カップを用いる場合のように、ビーズが血液と試薬の混ざった液体中で分散し、ビーズから発せられる蛍光が散乱し、減光してしまうことがない。
【００４４】
直線状等、規則的に配列した孔形状部１２に１個ずつ配列して入れ込まれたビーズからの蛍光は、後述のように、例えば集光レンズを通して測定システムにより測定される。従って、本実施形態における免疫測定用カップを用いれば、サイトカインなどの小さな分子量のタンパク質などをばらつきがなく高い精度で測定し分析することができる。
【００４５】
図３は、本発明の一態様における免疫測定用カップ１０の図１ＡのＡ−Ａ断面における詳細な形状と、底面部１１の孔形状部１２にビーズ２２が入り込む様態を示す模式断面図である。免疫測定用カップ１０は、底面部１１と側面部１４とが貼り合わせられることなく、全体が一体で形成されていることが好ましい。ここで、「底面部と側面部が一体に形成されている」とは、射出成形等により底面部と側面部とが継ぎ目なく連続的に形成されていることを意味し、底面部と側面部とがそれぞれ独立に形成され、接着剤等によりこれらを貼り合わせる場合とは区別される。底面部と側面部とがそれぞれ独立に形成され、接着剤等によりこれらを貼り合わせる場合、底面部と側面部との貼り合わせの精度を高めることが要求されるのに対し、底面部１１と側面部１４が一体に形成されている場合、貼り合わせの工程を有しておらず、免疫測定用カップ１０の歩留まりが向上する。また、底面部と側面部とがそれぞれ独立に形成され、接着剤等によりこれらを貼り合わせる場合、接着剤には免疫測定に用いられる試薬及び試料等に影響を及ぼさない材料であることが要求されるのに対し、底面部１１と側面部１４が一体に形成されている場合、接着剤について考慮する必要がない。なお、本発明の一態様における免疫測定用カップ１０は、本発明の趣旨を逸脱しない限り、底面部と側面部とが独立して形成され、これらが接着剤等で貼り合わされていてもよい。
【００４６】
免疫測定用カップ１０の材料としては、後述の製造工程のように射出成形が可能な高分子化合物及び樹脂が好ましい。免疫測定用カップ１０の材料が疎水性であると、試薬や血液などがカップの側壁などに残らず孔形状部まで入り易い。また、免疫測定の際には、蛍光を検出することから、光透過率が高く、自家蛍光の少ない材料が好ましい。さらに、免疫測定用カップ１０は、医療機器のため使い捨てとなる等の理由から、安価な材料であることが好ましい。上述の高分子化合物及び樹脂としては、脂肪族環状ポリオレフィン（ＣＯＰ）、ポリメタクリル酸メチル樹脂（ＰＭＭＡ）、ポリスチレン（ＰＳ）が挙げられる。光透過率が高く、自家蛍光が低く、疎水性であり、安価であることから、免疫測定用カップ１０の材料は、ＣＯＰ（脂肪族環状ポリオレフィン）が好ましい。
【００４７】
免疫測定用カップ１０は、その内径、即ち、側面部１４の内径が底面部１１へ近づくほど小さくなる（すなわち定点２と定点７との距離＞定点３と定点６との距離）すり鉢状（テーパー形状）となっている。
【００４８】
図４は、図３に示す模式断面図における免疫測定用カップ１０の内面の形状（孔形状部を除く）を説明するための模式図である。図４において、便宜上、底面部１１は孔形状部１２の間の領域の上面１５が連続していると仮定して記載されている。前記免疫測定用カップ１０の側面部１４の内面Ｓ（定点１〜４、及び定点５〜８）は蛍光免疫測定用カップ１０を底面部１１に対して垂直に切断したときの断面において曲線状の部分を含み、かつ底面部の上面（定点４〜５）の直線部と、前記断面においてスプライン曲線で連結していることが好ましい。より具体的に言えば、図３の楕円Ａ部、Ｂ部で示す定点８〜７間の部分、定点６〜５間の部分、（及び定点１〜２間の部分、定点３〜４間の部分）は略円弧状であり、定点７〜６間の部分（及び定点２〜３間の部分）は略直線状となるようなスプライン曲線で底面部１１の上面（定点４〜５間の部分）の直線部と連結していることが好ましい。
【００４９】
楕円Ａ部の略円弧状の曲線は、ビーズ、血液及び試薬を入れ易くする。また、側面部１４の楕円Ａ部が湾曲して折れ曲がることによりツバ（把持部１６）を形成し、免疫測定用カップ１０を持ち易くさせる効果がある。また、楕円Ｂ部の略円弧状の曲線は、後述のように、ビーズ、血液及び試薬を流れ易くする。楕円Ｂ部が円弧状でなく角部を有している場合、角部にビーズが集まることがある。これにより、孔形状部１２にビーズが入らなかったり、角部における蛍光強度が強くなり、蛍光強度のばらつきが生じることで測定対象物の検出感度が低下したりする。一方で、楕円部Ｂが略円弧状の曲線であることで、ビーズが孔形状部１２に入りやすくなり、蛍光強度のばらつきを抑えることができる。
【００５０】
免疫測定用カップ１０の裏面側から蛍光を見るためには底面部をなるべく薄くすることが好ましい。言い換えれば、ビーズから発せられる蛍光を、底面部１１の孔形状部１２が形成されている面とは反対の面側から観察するため、底面部１１はなるべく薄いことが好ましい。しかしながら、免疫測定用カップ１０を射出成形により製造する場合においては、免疫測定用カップ１０を射出成形後、免疫測定用カップ１０を構成する高分子化合物又は樹脂の冷却を全体として均一に行うことが好ましい。よって、底面部１１と側面部１４の厚さは、ほぼ同一であることが好ましい。従って、側面部１４の強度を維持するためにも、底面部１１に形成する孔形状部１２は、底面部が直線状である部分（即ち、底面部１１の上面が平面である部分）に限ることは好ましい。言い換えれば、孔形状部１２は、底面部１１における側面部１４と接続する曲面以外の部分に形成されることが好ましい。
【００５１】
図５は、本発明の一態様における免疫測定用カップの底面部の詳細な形状と、底面部の孔形状部にビーズ、血液及び試薬を閉じ込め封止した様態、及び蛍光を測定する様態を例示する模式断面図である。図５に示す模式断面図において、底面部１１の上面１５と孔形状部１２の側面部は、スプライン曲線で連結していることが好ましい。具体的には、孔形状部１２の側面部は、図５の楕円Ｃ部で示すように、定点９〜１０間の部分は略円弧状であり、定点１０〜１１間の部分は略直線状となるようにスプライン曲線で連結していることが好ましい。これにより、通常球状であるビーズは、孔形状部１２の中へ１個ずつ入り込まれ易くなる。なお上述の通り、測定すべき検体を含む血液などの液体は、単に血液と記載することがある。
【００５２】
図４及び図５で示したように、本発明の一態様における免疫測定用カップ１０はすり鉢状（テーパー形状）であるとともに、ビーズ、血液及び試薬の投入部（図４の楕円Ａ部）、底面部１１への移動部（図４の楕円Ｂ部）、及び孔形状部１２への入口部（図５の楕円Ｃ部、孔形状部１２の開口部ともいう）が略円弧状で、その他部分は略直線状であり、それらはスプライン曲線で連結していることが好ましい。さらに免疫測定用カップ１０の材料が疎水性であると、側面部１４の内面が疎水性となり、液体である血液及び試薬は、注入時の跳ねなどによりカップの側壁などに残ることなく滑らかに流れ、孔形状部１２の中へ流れ込む。従って、高価な試薬や血液を無駄にせず有効に利用することができる。
【００５３】
図５の楕円Ｄ部で示すように、孔形状部１２の側面部と、孔形状部１２の底面部とがつくる角は直線状であることが好ましい。言い換えれば、孔形状部１２の底面部に垂直な面で切断したときの断面において、孔形状部１２の側面部と、孔形状部１２の底面部とがつくる角は、丸みを帯びず、角部を有していることが好ましい。これにより孔形状部１２の中へ入り込んだビーズが、その勢いのまま孔形状部１２から飛び出てしまうことを防止することができる。
【００５４】
また、図５の符号１３で示すように、孔形状部１２の側面部の少なくとも直線部分と、孔形状部１２の底面部、即ち孔形状部１２の内面は、親水性となるよう処理されていることが好ましい。孔形状部１２の内面は、親水性の材料でコーティングされていることが好ましい。これにより、血液と試薬などの液体が、孔形状部１２に収まり易い構造となる。親水性の材料でコーティングする方法としては、ステンシルマスク等のマスクにより孔形状部１２以外の部分を覆い、マスクを通して、親水性スプレー等を孔形状部１２の内面に塗布することが好ましい。
【００５５】
以下に、本実施形態の一態様における免疫測定用カップを用いた免疫測定方法について簡単に説明する。図５には、本発明の一態様における免疫測定用カップの底面部の孔形状部１２にビーズ２２、血液及び試薬２３を閉じ込め、蛍光３１を集光レンズ３２を通して測定システム３３により測定する様態も例示している。
【００５６】
ビーズ２２とは、測定すべき検体を付着させるための微粒子である。具体的なビーズ２２として、金コロイド及びポリスチレンビーズ等が挙げられる。ビーズ２２はその表面に、測定すべき検体に含まれる測定対象物質（つまり検出対象物質）を補足するための抗体（補足抗体）を吸着することができる。
【００５７】
測定すべき検体として、がん細胞などの細胞又は血液等が挙げられる。測定すべき検体に含まれる測定対象物質として、分子量が６０ｋＤａ以上の分子量の大きいタンパク質及び分子量が５〜６０ｋＤａ程度の分子量の小さいタンパク質（つまりサイトカイン）等が挙げられる。本発明の一態様における免疫測定用カップ１０を用いると、特に５〜６０ｋＤａ程度の分子量の小さいタンパク質であっても高感度に検出が可能である。なお以降の説明では、測定すべき検体を、一例として血液と称する。
【００５８】
試薬とは、一般的に免疫測定法で用いられる試薬であり、例えばＥＬＩＳＡの場合、測定対象物質と特異的に結合する抗体（一次抗体）、一次抗体と特異的に反応する酵素標識済み抗体（二次抗体）及び前記酵素の基質等が挙げられる。一次抗体に酵素が標識されている場合は、二次抗体を必要としない場合がある。本実施形態では、酵素の基質は、蛍光試薬であることが好ましい。
【００５９】
測定を行うためには、まず、ビーズ２２を免疫測定用カップ１０に投入してビーズ２２を孔形状部１２に配置する。ビーズ２２は、予め補足抗体を吸着させておいてもよいし、ビーズ２２を孔形状部１２に配置した後、補足抗体を吸着させてもよい。その後血液及び試薬２３を免疫測定用カップ１０に注入する。
【００６０】
孔形状部１２に入らず、余分となったビーズ２２を、血液及び試薬２３の流入後に、余分の血液及び試薬とともに除去する。余分のビーズ、血液及び試薬を除去する方法として、封止剤である封止用オイルを流し込み、免疫測定用カップ１０を傾けて行うことが好ましい。すなわち、免疫測定用カップ１０に封止用オイルを流入し傾けると、親水性にコーティングされた孔形状部１２内のビーズ２２は固着して孔形状部１２から脱出しないが、それ以外のビーズ、余分の血液及び試薬は免疫測定用カップ１０を傾けることによって除去される。
【００６１】
前記のようにして、図５の符号２４で示すように、孔形状部１２に閉じ込めたビーズ２２、血液及び試薬２３を封止部２４（封止用オイル）で封止し保持する。これにより、封止部２４が複数の孔形状部１２を個別に封止し、孔形状部１２は独立した反応空間となる。封止部２４の材料としては、フッ素系オイルとシリコン系オイルとのいずれか一方、又はその混合物等が好ましい。
【００６２】
本実施形態の一態様における免疫測定用カップ１０よれば、孔形状部１２と封止部２４とで囲まれる独立した反応空間を複数形成することができる。そのため、血液と試薬が反応することにより生じる蛍光３１は、免疫測定用カップ１０に含まれる他のビーズ２２に干渉されることがない。
【００６３】
また、本実施形態の一態様における免疫測定用カップ１０によれば、血液及び試薬２３の量は、全ての孔形状部１２と封止部２４で囲まれる反応空間を十分に満たすことのできる程度であればよい。孔形状部１２は、上述の通り微小な空間であることから、従来の免疫測定用カップを用いる場合と比較して、血液及び試薬２３の量が少なくて済む。つまり、本実施形態の一態様における免疫測定用カップ１０を用いると、血液及び試料２３の量は少ないにもかかわらず、血液と試薬が反応することにより生じる蛍光３１の強度が強い。
【００６４】
孔形状部１２から出射する蛍光３１を、免疫測定用カップの裏面側（つまり、底面部１１の孔形状部１２が形成されている面とは反対の面側）から、測定システム３３を用いて測定することができる。測定システム３３としては、例えば倒立型の光学顕微鏡や蛍光顕微鏡を用いることができる。
【００６５】
本発明の一態様における免疫測定用カップ１０を用いると、血液と試薬が反応することにより生じる蛍光３１の強度に基づいて、観察の目的となる生体分子の数を特定することもできる。また通常、光学顕微鏡の分解能は数百ｎｍという可視光の波長程度である。本発明の一態様における免疫測定方法においては、測定対象物である生体分子は蛍光色素を使って標識されており、本発明の一態様における免疫測定用カップ１０を用いることで、蛍光検出感度を向上することが可能である。そのため、測定対象物がサイトカインのように低分子の物質であっても観察可能となる。
【００６６】
あるいは、測定システム３３としてデジタル顕微鏡やデジタルカメラと演算装置とを備えた通信機器を用いて蛍光３１を測定及び分析することも可能である。蛍光３１の光路には必要に応じて、波長選択用のフィルタを挿入してもよい。このようにして、生体分子の機能や活性状態に係る情報を得ることができる。
【００６７】
以下に本実施形態の一態様における免疫測定用カップの製造方法について簡単に説明する。図６Ａ〜６Ｄは、それぞれ本発明の一態様における免疫測定用カップの製造工程を例示する模式断面図である。まず、図６Ａに示すように、免疫測定用カップの底面部の孔形状部を形成するためのモールド４５を作製する。作製方法は、公知の熱インプリント用モールドを作製する方法でよい。一例として、図６Ａはニッケル電鋳によりニッケルモールドを作製する例を示している。まず、シリコンウェハー４１に、レジストコート４２を塗布する。レジストコート４２を露光及び現像してレジストコート４２のパターニングを行う。次に、レジストコート表面及びレジストコート４２が除去されて露出した部分のシリコンウェハー４１上に導電層４３を形成する。これを母型としてニッケル電位を行い、モールド４５を得る。モールド４５は、免疫測定用カップの孔形状部に対応する凸部を複数有している。
【００６８】
次に、図６Ｂに示すように、前記モールド４５を、第１の金型４６に組み合わせる。モールド４５と第１の金型４６とを組み合わせる方法は、特に限定されないが、射出成形装置内でモールド４５と第１の金型４６とを固定してもよいし、接着剤等で取り付けてもよい。その後、図６Ｃに示すように前記第１の金型４６と第２の金型４７を合体させる。これにより生じる金型４６と第２の金型４７とで囲まれる空間に、公知の射出成形法に従い、樹脂注入口４８から樹脂４９を注入して成形する。そして冷却工程を経て、最後に第１の金型４６と第２の金型４７を離型して図６Ｄに示すように本発明の一態様における免疫測定用カップ１０が作製される。
【００６９】
以上の免疫測定用カップの製造方法によれば、底面部１１と側面部１４とが一体に形成されている免疫測定用カップ１０を作製することができる。
【００７０】
［第二実施形態］
本発明の他の態様における免疫測定用カップについて図７Ａ〜図７Ｃを用いて説明する。図７Ａは、本発明のさらに他の態様における免疫測定用カップの概略断面図である。免疫測定用カップ１００は、底面部１１と、側面部１４と、遮光部１８とを含む。底面部１１は、側面部１４と接続している。遮光部１８は、側面部１４の外面を覆っている。具体的には、遮光部１８は、側面部１４の外面に接して、側面部１４全体を覆うように設けられている。
【００７１】
免疫測定用カップ１００の底面部１１及び側面部１４は、第一実施形態にて説明されている底面部１１及び側面部１４と同じであるため、その詳細な説明は省略する。免疫測定用カップ１００は、把持部１６を有していてもよい。把持部１６は、第一実施形態にて説明されている把持部１６と同じであるため、その詳細な説明は省略する。
【００７２】
免疫測定用カップを用いて免疫測定を行う際、上述の通り免疫測定用カップの底面の裏面側で蛍光が検出される。免疫測定用カップの側面部が透光性の材料であるため、側面部から外部の光が入り、測定対象物に由来する蛍光と共に検出されてしまう場合がある。測定対象物に由来する蛍光に加えて外光が検出されることにより、検出感度が低下することがある。
【００７３】
免疫測定用カップ１００の遮光部１８は、側面部１４の外面を覆っている。これにより、外部からの光が免疫測定用カップ１００に進入するのを防ぐことができる。つまり、免疫測定用カップ１００の孔形状部１２から発する蛍光の検出感度が向上する。遮光部１８は、側面部１４の外面全体を覆っていることが好ましいが、必ずしも全体を覆っている必要は無く、例えば、側面部１４の全体に対し、側面部１４の５０％程度を覆っていればよい。遮光部１８が側面部１４の全体を覆っていない場合は、遮光部１８は底面部１１に近い領域に設けられていることが好ましい。
【００７４】
遮光部１８は、遮光性テープであってもよく、遮光性インクを塗布して得られる遮光層であってもよい。遮光性テープとしては、黒色の遮光テープであることが好ましく、例えばリンテック社製  簡易遮光用片面粘着テープ  ＰＴシリーズ等が挙げられる。側面部１４の全体を覆うように遮光性テープを貼付することで、遮光部１８を形成することができる。遮光性インクとしては、例えば熱硬化性樹脂とカーボンブラックを含むインクが挙げられる。側面部１４の全体に遮光性インクを塗布し、その後加熱等により硬化させることで遮光部１８を形成することができる。
【００７５】
遮光部１８の光透過率は、５０％以下であることが好ましく、４０％以下であることが更に好ましい。遮光部１８の光透過率の下限は特に限定されず、０％であってもよい。
【００７６】
遮光部１８の光透過率は、例えば顕微分光光度計（例えば、日本分光社製、製品名：ＭＳＶ−５００）を使用して、免疫測定用カップの遮光部１８を設けている部分の可視光域内（波長：３６０〜８３０ｎｍ）における光透過率を測定することで得られる。
【００７７】
図７Ｂ及び図７Ｃは、それぞれ本発明のさらに他の態様における免疫測定用カップの概略断面図及び底面図である。免疫測定用カップ１０１は、底面部１１と、側面部１４と、遮光部１９とを含む。底面部１１は、側面部１４と接続している。遮光部１９は、底面部１１の孔形状部１２が形成されている面とは逆の面の一部に接して設けられている。遮光部１９は、底面部１１の孔形状部１２が形成されている面とは反対の面上であり、側面部１４と重複し、且つ孔形状部１２と重複しない領域に位置している。例えば図７Ｃに示すように、遮光部１９は、免疫測定用カップ１０１の裏面から見たとき、側面部１４及び底面部１１における側面部１４と接続する曲面部分と重複し、且つ孔形状部１２と重複しないように設けられている。遮光部１９は、底面部１１の外周縁と孔形状部１２が形成される領域の外周縁とに囲まれた領域に設けられている。
【００７８】
例えば、図７Ｃに示すように免疫測定用カップ１０１の底面が円形であり、孔形状部１２が形成されている領域も円形であれば、遮光部１９は環状である。
【００７９】
免疫測定用カップを用いて免疫測定を行う際、上述の通り免疫測定用カップの底面の裏面側で蛍光が検出される。免疫測定用カップの側面部が透光性の材料であるため、側面部に外光が入射し、外光の一部が側面部で導波して底面部に到達し、測定対象物質に由来する蛍光と共に検出されてしまう場合がある。測定対象物に由来する蛍光に加えて外光が検出されることにより、検出感度が低下することがある。
【００８０】
免疫測定用カップ１０１は、遮光部１９を有しているため、側面部１４で導波して底面部１１に到達する外光を遮断することができる。よって、免疫測定用カップ１０１の孔形状部１２から発する蛍光の検出感度が向上する。
【００８１】
図８Ａ及び図８Ｂは、それぞれ本発明のさらに他の態様における免疫測定用カップの遮光部について説明するための顕微鏡写真である。図８Ａは、免疫測定用カップの底面部に遮光部１９を部分的に設けたときの明視野における顕微鏡写真である。図８Ｂは、免疫測定用カップの底面部に遮光部１９を部分的に設けたときの蛍光観測条件における顕微鏡写真である。ここでは、孔形状部の最短の径が４．５μｍであり、便宜的にポリスチレンビーズ（最大径３μｍ）に蛍光色素であるＧＦＰを結合させた試料を使用した。撮影条件は、以下の通りである。
＜明視野における撮影条件＞
装置：蛍光顕微鏡、対物レンズ１０倍
撮影箇所：免疫測定用カップの孔形状部を含めた底面部
＜蛍光観測における撮影条件＞
装置：蛍光顕微鏡、対物レンズ１０倍
励起光源：蛍光励起用４７０ｎｍＬＥＤ
測定波長及び露光時間：ＧＦＰ（励起波長４７０ｎｍ、蛍光波長５２７ｎｍ）露光時間２秒
撮影箇所：免疫測定用カップの孔形状部を含めた底面部
【００８２】
図８Ａに示す免疫測定用カップは、遮光部１９が設けられた部分と、遮光部１９が設けられておらず、側面部１４が露出している部分とを含んでいることがわかる。図８Ｂの画像から、遮光部１９が設けられておらず、側面部１４が露出している部分では、外部からの光が側面部１４を導波して底面部まで達しているため、側面部１４が白く光ってしまっていることがわかる。一方で、蛍光測定条件において遮光部１９が設けられた部分では、側面部１４で導波して底面部１１に到達する外光が遮断されていることがわかる。また、外光が遮断されることにより、バックグラウンド値が低減され、シグナルノイズ比を高めることが出来ていることがわかる。これにより、底面部１１に白い略円形の部分が観察されており、蛍光色素１分子の蛍光を捉えられていることが見て取れる。そのため、少ない試料の反応でも、高い精度で測定し分析できることがわかる。
【００８３】
遮光部１９の材料として、遮光部１８と同じ材料が挙げられる。また、遮光部１９の形成方法は、遮光部１８と同じ形成方法が挙げられる。よってその詳細な説明は省略する。
【００８４】
遮光部１９の光透過率は、５０％以下であることが好ましく、４０％以下であることが更に好ましい。遮光部１９の光透過率の下限は特に限定されず、０％であってもよい。遮光部１９の光透過率は、遮光部１８の光透過率と同じ方法で測定することができる。
【００８５】
なお、免疫測定用カップ１０１の底面部１１及び側面部１４は、第一実施形態にて説明されている底面部１１及び側面部１４と同じであるため、その詳細な説明は省略する。免疫測定用カップ１０１は、把持部１６を有していてもよい。把持部１６は、第一実施形態にて説明されている把持部１６と同じであるため、その詳細な説明は省略する。
【００８６】
本発明の更に他の態様における免疫測定用カップは、遮光部１８及び１９の双方を有していてもよい。
【００８７】
［第三実施形態］
本実施形態では、本発明のさらに他の態様における免疫測定用カップとともに用いる遮光部材について図９Ａ及び図９Ｂを参照して説明する。図９Ａは、本実施形態の更に他の態様における試料台の上面図である。図９Ｂは、本発明のさらに他の態様におけるアダプタの概略断面図である。
【００８８】
第二実施形態にて説明したように、免疫測定用カップの側面部が透光性の材料であると、側面部から外部の光が入り、測定対象物質に由来する蛍光と共に検出されてしまう場合がある。測定対象物質に由来する蛍光に加えて外光が検出されることにより、検出感度が低下することがある。このように検出感度が低下するのを防止するため、本発明の一態様における免疫測定用カップ１０と組み合わせて本実施形態の試料台２０を用いることができる。
【００８９】
免疫測定の際には、試料台２０に本実施形態の一態様における免疫測定用カップ１０を載置する。このとき、免疫測定用カップ１０の孔形状部１２が形成されている領域と、遮光部６１とが重複せず、且つ孔形状部１２が形成されている領域以外が遮光部６１と重複するように、免疫測定用カップ１０を試料台２０上に載置する。そして、試料台２０の免疫測定用カップ１０が載置された面とは反対の面から測定システムを用いて蛍光を検出する。
【００９０】
試料台２０は、基材６０と、基材６０上に設けられた遮光部６１とを含む。遮光部６１は、免疫測定用カップ１０の孔形状部１２が形成されている領域と重複せず、且つ孔形状部１２が形成されている領域以外が重複する形状であれば特に限定されない。例えば、免疫測定用カップ１０のように、底面が円形であり、孔形状部１２が形成されている領域も円形であれば、図９Ａに示すように、遮光部６１は環状であってもよい。
【００９１】
基材６０は、光透過性を有する材質であれば特に限定されないが、例えばガラス、石英等が挙げられる。遮光部６１の材料として、遮光部１８と同じ材料が挙げられる。また、遮光部６１の形成方法は、遮光部１８と同じ形成方法が挙げられる。よってその詳細な説明は省略する。
【００９２】
本実施形態の試料台２０を免疫測定用カップ１０と組み合わせて免疫測定を行うと、側面部１４で導波して底面部１１に到達する外光を遮光部６１により遮断することができる。よって、免疫測定用カップ１０の孔形状部１２から発する蛍光の検出感度が向上する。
【００９３】
免疫測定用カップ１０に入る外光を遮断するもう一つの方法として、図９Ｂに示すアダプタを用いることもできる。免疫測定時、本実施形態のアダプタ７０によって免疫測定用カップ１０を保持し、底面部１１の孔形状部１２が形成されている面と反対の面から測定システムで蛍光を検出する。
【００９４】
アダプタ７０は、免疫測定用カップ１０の側面部１４及び底面部１１の一部を覆うように構成されている。アダプタ７０は、底面１１部のうち側面部１４と接続する曲面部分と重複し、孔形状部１２が形成される領域とは重複しないよう構成されている。
【００９５】
アダプタ７０は、遮光性を有し、免疫測定用カップ１０を保持できる材質で形成されていればよく、その材質は特に限定されないが、例えば外光反射を抑えることができるアルマイト処理したアルミニウムが好適である。
【００９６】
このようなアダプタ７０を用いることで、外部からの光が免疫測定用カップ１０に進入するのを防ぐことができる。また、側面部１４で導波して底面部１１に到達する外光を遮断することができる。よって、測定対象物質に由来する蛍光の検出感度が向上する。
【００９７】
本発明の別の側面として、以下の態様が挙げられる。
［１９］蛍光標識となるビーズを用い、抗原抗体反応を利用する免疫系の分析において使用される蛍光免疫測定用カップであって、底面部と、前記底面部と接続している側面部とを有し、前記底面部は、前記ビーズが１個ずつ収納される複数の孔形状部を有し、前記孔形状部は、開口部の径より底面の径の方が小さいテーパー形状である、蛍光免疫測定用カップ。
［２０］前記孔形状部の前記底面の径は、２．２μｍ〜７．５μｍであり、前記孔形状部の前記開口部の径は、３．２μｍ〜９．５μｍである、［１９］に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［２１］前記孔形状部の前記底面の径は、３．３μｍ〜４．５μｍμｍであり、前記孔形状部の前記開口部の径は、４．８μｍ〜５．７μｍである、［１９］に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［２２］前記孔形状部の深さは、２．２μｍ〜７．５μｍである、［１９］〜［２１］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［２３］前記孔形状部の深さは、３．３μｍ〜４．５μｍである、［１９］〜［２１］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［２４］隣り合う前記孔形状部の中心間距離は、６μｍ〜１２μｍである、［１９］〜［２３］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［２５］前記底面部と前記側面部とが一体に形成されている、［１９］〜［２４］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［２６］前記側面部の内面は、断面視で曲線状の部分を含み、前記側面部の内径は、前記底面部へ近づくほど小さくなり、前記側面部は、前記底面部の上面と、断面視で、スプライン曲線で連結している、［１９］〜［２５］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［２７］前記側面部の内面は疎水性である、［１９］〜［２６］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［２８］前記底面部の上面と前記孔形状部の側面部は、前記蛍光免疫測定用カップを前記底面部に対して垂直に切断したときのスプライン曲線で連結している、［１９］〜［２７］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［２９］前記孔形状部の内面が親水性処理されている、［１９］〜［２８］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［３０］さらに、前記側面部の内面から突出している補強リブを有する、［１９］〜［２９］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［３１］さらに、前記側面部の外面を覆う第１の遮光部を有する、［１９］〜［３０］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
［３２］さらに、第２の遮光部を有し、
前記第二の遮光部は、前記底面部の前記孔形状部が形成されている面とは反対の面上であり、前記側面部と重複し、且つ前記孔形状部と重複しない領域に位置している、［１９］〜［３１］のいずれか一項に記載の蛍光免疫測定用カップ。
【産業上の利用可能性】
【００９８】
本発明の一態様における免疫測定用カップを用いて、サイトカインなどの低分子量の物質などの状態を分析することにより、関節リウマチや過剰な免疫反応状態、核酸医薬の効き目なども把握でき、医療診断の分野で飛躍的な応用展開が期待できる。
【符号の説明】
【００９９】
１０、１００、１０１・・・本開示の免疫測定用カップ
５０・・・・・・従来の免疫測定用カップ
１１、５１・・・底面部
１２・・・・・・孔形状部
１３・・・・・・親水性処理部
１４・・・・・・側面部
１５・・・・・・底面部の上面
１６・・・・・・把持部
１７・・・・・・底面
１８、１９、６１・・・遮光部
２０・・・・・・試料台
２１、６１・・・滴下用冶具先端部
２２、６２・・・蛍光ビーズ
２３・・・・・・血液及び試薬
２４・・・・・・封止部
２５・・・・・・補強リブ
３１・・・・・・蛍光
３２・・・・・・集光レンズ
３３・・・・・・測定システム
４１・・・・・・シリコンウェハー
４２・・・・・・レジストパターン
４３・・・・・・導電層
４４・・・・・・ニッケル電鋳部
４５・・・・・・モールド
４６・・・・・・第１の金型
４７・・・・・・第２の金型
４８・・・・・・樹脂注入口
４９・・・・・・樹脂
６０・・・・・・基材
７０・・・・・・アダプタ
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【国際調査報告】
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