(57)【要約】  細胞検査方法は、光源と観察部とを用いて、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査方法であって、スライド上にチャンバを形成する準備工程と、前記チャンバ内に細胞浮遊液を注入して細胞濃縮液を作製する濃縮液作製工程と、前記細胞濃縮液に染色液を注入して細胞を染色する染色工程と、前記スライド上に前記細胞を沈降させる細胞沈降工程と、前記光源で照明しながら前記細胞を前記観察部により観察する観察工程と、を備える。
2020008563.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
光源と観察部とを用いて、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査方法であって、
スライド上にチャンバを形成する準備工程と、
前記チャンバ内に前記細胞浮遊液を注入して細胞濃縮液を作製する濃縮液作製工程と、
前記細胞濃縮液に染色液を注入して前記細胞を染色する染色工程と、
前記スライド上に前記細胞を沈降させる細胞沈降工程と、
前記光源で照明しながら前記細胞を前記観察部により観察する観察工程と、
を備える細胞検査方法。
【請求項２】
前記準備工程において、
貫通孔が形成された外筒を前記スライド上に配置することによって前記チャンバを形成し、
前記濃縮液作製工程において、
底面にフィルタが設けられ内部空間を有する内筒を前記底面側から前記外筒の前記貫通孔に進入させ、前記内筒を前記スライドに近づけることによって、前記細胞濃縮液を作製する
請求項１に記載の細胞検査方法。
【請求項３】
前記内筒の前記内部空間内の染色液を吸引する吸引工程をさらに備える
請求項２に記載の細胞検査方法。
【請求項４】
前記観察工程において、
前記内筒の前記フィルタを前記スライドと間隔をあけて配置する
請求項２または請求項３に記載の細胞検査方法。
【請求項５】
前記観察工程において、
前記内筒の前記フィルタを前記スライドに接触させる
請求項２または請求項３に記載の細胞検査方法。
【請求項６】
前記濃縮液作製工程において、前記細胞浮遊液を前記チャンバの側壁から注入し、
前記染色工程において、前記染色液を前記チャンバの前記側壁から注入する
請求項１から請求項５のいずれか１項に記載の細胞検査方法。
【請求項７】
貫通孔が形成され、スライド上に配置される外筒と、
底面にフィルタが設けられ、内部空間を有し、前記外筒の前記貫通孔内に挿通可能である内筒と、
前記スライドに対して前記外筒と反対側に設けられた観察部と、
を備え、
前記スライドと前記外筒の前記貫通孔とにより細胞浮遊液を注入するためのチャンバが形成される
細胞検査装置。
【請求項８】
前記外筒の側壁には、前記外筒の前記貫通孔と外部とを連通する連通孔が設けられている
請求項７に記載の細胞検査装置。
【請求項９】
前記スライドが載置されるベースプレートをさらに備え、
前記ベースプレートには前記観察部が挿通可能な貫通穴が形成されている
請求項７または請求項８に記載の細胞検査装置。
【請求項１０】
前記内筒の前記内部空間に挿通可能な光源をさらに備える
請求項７から請求項９のいずれか１項に記載の細胞検査装置。
【請求項１１】
前記フィルタは、前記細胞浮遊液の屈折率より高い屈折率を有する材料からなる
請求項７から請求項１０のいずれか１項に記載の細胞検査装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞検査装置及び細胞検査方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
超音波内視鏡で観察しながら穿刺針等で採取した細胞を迅速に診断する方法として、迅速病理診断（Ｒａｐｉｄ ｏｎ - ｓｉｔｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，以下、ＲＯＳＥと称す）が知られている。一般的なＲＯＳＥでは、穿刺針により採取された細胞を細胞保存液で薄めて細胞浮遊液を作製する。細胞浮遊液をフィルタにより濾過して細胞を標本化した後、顕微鏡により細胞を観察する。ＲＯＳＥにより、細胞を採取した場所で、必要な細胞が採取されているか否かを判断することができる。
ＲＯＳＥを用いない場合、穿刺針等で採取した細胞は、細胞を採取した場所とは別の検査場所に搬送されて病理診断などの検査が行われる。その結果、必要な細胞が採取されていなかった場合は、再度、細胞の採取が必要である。ＲＯＳＥを用いた検査では、細胞を採取した現場で必要な細胞が採取されたか否かを判断できるため、容易に細胞の採取を追加できる。したがって、ＲＯＳＥは、再検査率を低減することができるため、各施設でのＲＯＳＥの実施が望まれている。【０００３】
細胞の標本の作製において、スライド上に細胞を沈降させる方法が知られている（例えば、特許文献１参照）。特許文献１では、内側に空間を有する中空管と、中空管が載置される顕微鏡スライドと、顕微鏡スライドが嵌る凹部が形成されたベースプレートとを備える。
ベースプレートの凹部に顕微鏡スライドを嵌め、顕微鏡スライド上に中空管を載置する。中空管の空間に所定のサンプル細胞懸濁液を入れ、細胞が重力により沈降するのを待つ。細胞が顕微鏡スライドに沈降したら、上澄み液を吸引によって取り出し、細胞を染色した後、顕微鏡スライド上の細胞を観察する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】日本国特開平６−２１３７８９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許文献１に開示されている方法では、細胞が顕微鏡スライド上に自然に沈降するのを待つ必要があるため、必要な量の細胞が沈降するのに長時間を要する。
また、一般にスライド上に沈降した細胞を染色する際は、スライドを染色液に浸すため、スライド上の細胞が染色液内に脱落するという問題がある。【０００６】
本発明は、このような問題点に鑑みてなされたものであって、細胞を確実に確保し、かつ、細胞をスムーズかつ迅速に検査することができる細胞検査装置及び細胞検査方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の第１の態様に係る細胞検査方法は、光源と観察部とを用いて、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査方法であって、スライド上にチャンバを形成する準備工程と、前記チャンバ内に前記細胞浮遊液を注入して細胞濃縮液を作製する濃縮液作製工程と、前記細胞濃縮液に染色液を注入して前記細胞を染色する染色工程と、前記スライド上に前記細胞を沈降させる細胞沈降工程と、前記光源で照明しながら前記細胞を前記観察部により観察する観察工程と、を備える。【０００８】
本発明の第２の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様において、前記準備工程において、貫通孔が形成された外筒を前記スライド上に配置することによって前記チャンバを形成し、前記濃縮液作製工程において、底面にフィルタが設けられ内部空間を有する内筒を前記底面側から前記外筒の前記貫通孔に進入させ、前記内筒を前記スライドに近づけることによって、前記細胞濃縮液を作製してもよい。【０００９】
本発明の第３の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様、または、上記第２の態様において、前記内筒の前記内部空間内の染色液を吸引する吸引工程をさらに備えていてもよい。【００１０】
本発明の第４の態様に係る細胞検査方法は、上記第２の態様、または、上記第３の態様において、前記観察工程において、前記内筒の前記フィルタを前記スライドと間隔をあけて配置してもよい。
本発明の第５の態様に係る細胞検査方法は、上記第２の態様、または、上記第３の態様において、前記観察工程において、前記内筒の前記フィルタを前記スライドに接触させてもよい。【００１１】
本発明の第６の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様から上記第５の態様のいずれか一態様において、前記濃縮液作製工程において、前記細胞浮遊液を前記チャンバの側壁から注入し、前記染色工程において、前記染色液を前記チャンバの前記側壁から注入してもよい。【００１２】
本発明の第７の態様に係る細胞検査装置は、貫通孔が形成され、スライド上に配置される外筒と、底面にフィルタが設けられ、内部空間を有し、前記外筒の前記貫通孔内に挿通可能である内筒と、前記スライドに対して前記外筒と反対側に設けられた観察部と、を備え、前記スライドと前記外筒の前記貫通孔とにより細胞浮遊液を注入するためのチャンバが形成される。【００１３】
本発明の第８の態様に係る細胞検査装置は、上記第７の態様において、前記外筒の側壁には、前記外筒の前記貫通孔と外部とを連通する連通孔が設けられていてもよい。
本発明の第９の態様に係る細胞検査装置は、上記第７の態様、または、上記第８の態様において、前記スライドが載置されるベースプレートをさらに備え、前記ベースプレートには前記観察部が挿通可能な貫通穴が形成されていてもよい。【００１４】
本発明の第１０の態様に係る細胞検査装置は、上記第７の態様から上記第９の態様のいずれか一態様において、前記内筒の前記内部空間に挿通可能な光源をさらに備えていてもよい。
本発明の第１１の態様に係る細胞検査装置は、上記第７の態様から上記第１０の態様のいずれか一態様において、前記フィルタは、前記細胞浮遊液の屈折率より高い屈折率を有する材料からなっていてもよい。
【発明の効果】
【００１５】
上記各態様の細胞検査装置及び細胞検査方法によれば、細胞を確実に確保し、かつ、細胞をスムーズかつ迅速に検査することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の一実施形態に係る細胞検査装置を示す全体図である。
【図２】図１の外筒を示す斜視図である。
【図３】図１の内筒を示す斜視図である。
【図４】図１のベースプレートを示す上面図である。
【図５】図１のベースプレートに外筒を取り付けた状態を示す要部断面図である。
【図６】本発明の細胞検査方法を示すフローチャートである。
【図７】本発明の細胞検査方法で使用される細胞浮遊液の作製手順を示す図である。
【図８】本発明の細胞検査方法で使用される細胞浮遊液の作製手順を示す図である。
【図９】本発明の細胞検査方法で使用される細胞浮遊液の作製手順を示す図である。
【図１０】本発明の細胞検査方法で使用される細胞浮遊液の作製手順を示す図である。
【図１１】本発明の細胞検査方法を示す図である。
【図１２】本発明の細胞検査方法を示す図である。
【図１３】本発明の細胞検査方法を示す図である。
【図１４】本発明の細胞検査方法を示す図である。
【図１５】本発明の細胞検査方法を示す図である。
【図１６】本発明の細胞検査方法を示す図である。
【図１７】本発明の一実施形態に係る細胞検査装置の変形例を示す全体図である。
【図１８】本発明の一実施形態に係る細胞検査装置の変形例を示す全体図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
［一実施形態］
本発明の一実施形態に係る細胞検査装置について、図１から図１６を参照して説明する。
細胞検査装置１は、細胞浮遊液に含まれる細胞を観察する装置である。なお、細胞は細菌を含んでいてもよい。細胞検査装置１は、図１に示すように、ベースプレート３０上に配置された外筒１０及び内筒２０と、観察部５０とを備えている。
【００１８】
外筒１０は、図２に示すように、外筒１０の長手方向に、上部１１と、底部１２と、上部１１と底部１２とを接続する円筒状の筒部１３とを備えている。外筒１０には、外筒１０の長手方向に沿って貫通孔１４が形成されている。筒部１３の外壁（側壁）１３ａには、外筒１０の貫通孔１４と外部とを連通する連通孔１６が形成されている。
上部１１は、外筒１０の長手方向に垂直な方向に拡径している。上部１１には、上部１１の上面１１ａに向かって開口する凹部１１ｂが形成されている。凹部１１ｂから細胞浮遊液が注入される。貫通孔１４の第１端１４ａは、凹部１１ｂの底面１１ｃに開口し、貫通孔１４の第２端１４ｂは底部１２の底面１２ａに開口している。これにより、貫通孔１４は、上部１１の凹部１１ｂから底部１２の底面１２ａまで貫通している。
底部１２は、外筒１０の長手方向に垂直な方向に拡径している。底部１２の底面１２ａには、円環状の溝１２ｂが設けられている。溝１２ｂには、ゴム等の弾性部材によって形成されたＯリング１５が配設されている。底部１２には、後述するネジ３３が挿通可能なネジ穴１２ｃが、底部１２の厚み方向に貫通して形成されている。ネジ穴１２ｃは、外筒１０の長手軸を挟んで対称に一対設けられている。
【００１９】
内筒２０は、図３に示すように、上部２１と、円筒状の筒部２２とを備えている。
上部２１は、外筒１０の長手方向に垂直な方向に拡径している。上部２１には、上部２１の上面２１ａに向かって開口する凹部２１ｂが形成されている。凹部２１ｂは、図１に示すように、筒部２２に向かって縮径する。
筒部２２には、図３に示すように、筒部２２の長手方向に沿って内部空間２３が形成されている。内部空間２３の第１端２３ａは凹部２１ｂに開口し、内部空間２３の第２端２３ｂは内筒２０の底面２０ａに開口している。これにより、内部空間２３は、上部２１から筒部２２の底面２０ａまで貫通している。
筒部２２の底面２０ａには、フィルタ２４が接着されている。フィルタ２４は、筒部２２の底面２０ａを覆っている。フィルタ２４は、細胞よりも小さな孔径を有している。フィルタ２４の濾材は、特に限定されないが、例えば、織布または不織布からなる。フィルタ２４は、光透過性を有する材料からなる。フィルタ２４は、細胞浮遊液の屈折率より高い屈折率を有する材料からなる。
【００２０】
筒部２２の外側面２０ｂには、円環状の溝２０ｃが設けられている。溝２０ｃには、ゴム等の弾性部材によって形成されたＯリング２５が配設されている。Ｏリング２５は、筒部２２よりも径方向外方に突出している。
筒部２２の長手軸方向に対して垂直方向における筒部２２の先端部２６（上部２１が配置されている側とは反対側）の外径寸法Ｌ１は、筒部２２の長手軸方向に対して垂直方向における筒部２２の外径寸法Ｌ２より小さい。これにより、筒部２２の先端部２６には、段部２７が形成されている。
【００２１】
外筒１０は、図１に示すように、一般に使用される顕微鏡のステージ（図示略）に嵌合されるベースプレート３０に取り付けられる。ベースプレート３０は、図４に示すように、窪み３１と、観察穴（貫通穴）３２とを備える。
ベースプレート３０には、厚み方向（上面３０ａから下面３０ｂ）まで貫通するネジ穴３０ｃが形成されている。窪み３１は、略長方形状であり、スライド４０が載置される。観察穴３２は、窪み３１に形成されており、図１に示すように、窪み３１から下面３０ｂまで貫通されている。観察部５０は、観察穴３２に進入可能である。
【００２２】
図５に示すように、外筒１０の底部１２の底面１２ａがスライド４０に接触するように、外筒１０をスライド４０上に配置する。これにより、外筒１０の貫通孔１４とスライド４０とによりチャンバＰが形成される。チャンバＰには、細胞浮遊液が注入される。外筒１０とベースプレート３０とは、ネジ穴１２ｃ及びネジ穴３０ｃにネジ３３を挿通させることによって固定される。外筒１０がベースプレート３０に固定された状態において、Ｏリング１５により、外筒１０の貫通孔１４とスライド４０との間に液密を確保することができる。すなわち、チャンバＰに注入された細胞浮遊液は外筒１０の底部１２の底面１２ａからチャンバＰの外に漏れない。
外筒１０の連通孔１６には、チューブ６１を介してシリンジ６０が接続されている。チューブ６１は外筒１０に対して着脱可能である。染色液は、シリンジ６０からチューブ６１を通ってチャンバＰに注入される。染色液の他に細胞をスライド４０上に固定する固定液が、シリンジ６０からチャンバＰに注入されてもよい。
【００２３】
図１に示すように、外筒１０の貫通孔１４に、内筒２０の筒部２２が挿通される。具体的には、図２に示す外筒１０の長手軸方向に対して垂直方向における貫通孔１４の内径寸法Ｌ３は、図３に示す筒部２２の外径寸法Ｌ２よりも大きい。内径寸法Ｌ３と外径寸法Ｌ２との差はわずかである。図１に示すように、内筒２０の筒部２２を外筒１０の貫通孔１４に挿通させた際、Ｏリング２５が押圧され、Ｏリング２５は貫通孔１４内では付勢された状態となる。すなわち、Ｏリング２５により、内筒２０と外筒１０の貫通孔１４によって囲われた空間Ｐ１は、液密が確保されている。
また、拡径している内筒２０の上部２１が、外筒１０の上部１１の凹部１１ｂに当接するまで、内筒２０の筒部２２が外筒１０の貫通孔１４内に進入可能である。この当接状態では、フィルタ２４とスライド４０とは間隔をあけて配置されている。フィルタ２４からスライド４０までの距離Ｄは、内筒２０で連通孔１６を塞がない程度であればよく、例えば、３ｍｍ以上５ｍｍ未満である。さらに、この当接状態では、段部２７に連通孔１６が位置するため、連通孔１６を通った液体は空間Ｐ１に注入される。
【００２４】
細胞検査装置１は、図１に示すように、観察部５０を備えている。ベースプレート３０を顕微鏡のステージ（図示略）に嵌合させた際、観察部５０は、観察穴３２に挿通可能である。観察部５０は、スライド４０に近接する方向、あるいは、離間する方向に移動可能である。観察部５０が、スライド４０に近接したり、離間することにより、細胞に焦点を合わせることが可能となる。
細胞検査装置１は、さらにモニタ（図示略）を備えている。モニタは、観察部５０に接続されている。観察部５０により取得された細胞の画像は、モニタに表示される。
【００２５】
次に、本実施形態に係る細胞検査方法について図６のフローチャートを用いて説明する。
まず、図５に示すように、ネジ３３により外筒１０をベースプレート３０に固定し、チャンバＰを形成する（準備工程：ステップＳ１）。外筒１０が固定されたベースプレート３０を顕微鏡のステージ（図示略）に嵌合させる。
次に、患者の体内を超音波内視鏡で観察しながら穿刺針等を組織に刺入し、細胞を採取する。図７に示すように、採取された細胞Ｔをシャーレ９０に吐出し、細胞保存液をシャーレ９０内に注入して、細胞Ｔをほぐす。細胞Ｔをほぐした後、図８に示すように、底部にフィルタ９１が設けられた容器９２をシャーレ９０内に挿入する。図９に示すように、シャーレ９０内に容器９２を押し進めていくと、図１０に示すように、容器９２内の細胞浮遊液Ｃと、シャーレ９０内の細胞Ｔａとに分離される。このようにして、細胞浮遊液Ｃが作製される。
【００２６】
作製された細胞浮遊液Ｃは、スポイト、または、シリンジ等に吸引され、外筒１０の凹部１１ｂから注入される。細胞浮遊液Ｃは、図１１に示すように、チャンバＰ内に細胞Ｔを含む細胞浮遊液Ｃが貯留する。
【００２７】
次に、図１２に示すように、内筒２０を底面２０ａから外筒１０の貫通孔１４に進入させる。内筒２０の筒部２２を押し進めていくと、内筒２０の底面２０ａにフィルタ２４が設けられているので、細胞Ｔ以外の液体Ｃ１がフィルタ２４を通って、筒部２２の内部空間２３に流入し、空間Ｐ１には細胞Ｔを含む細胞濃縮液Ｃ２が残る。このようにして、細胞濃縮液Ｃ２が作製される（濃縮液作製工程：ステップＳ２）。内筒２０の筒部２２を外筒１０の貫通孔１４に一度のみ押し込むだけでもよいが、内筒２０を外筒１０の長手軸方向に数回進退させてもよい。内筒２０を外筒１０に対して進退させることにより、細胞濃縮液Ｃがより早く作製される。
【００２８】
次に、空間Ｐ１内の細胞濃縮液Ｃ２に、染色液Ｓがシリンジ６０からチューブ６１及び連通孔１６を通って注入される。図１３に示すように、空間Ｐ１内に染色液Ｓが滞留し、細胞Ｔが染色される（染色工程：ステップＳ３）。内筒の筒部２２に段部２７が形成されていない場合や、連通孔１６が塞がれている場合は、内筒２０を一旦引き上げてから染色液を注入する。内筒２０を外筒１０の長手軸方向に数回進退させてもよい。内筒２０を外筒１０に対して進退させることにより、細胞Ｔがより早く染色される。空間Ｐ１に染色液が注入されると、内部空間２３内の液体Ｃ１と染色液Ｓとが混じり着色された液体Ｃ３が内部空間２３内に貯留する。
【００２９】
次に、図１４に示すように、液体Ｃ３を内部空間２３の外に排出する。液体Ｃ３の排出方法は特に限定されないが、例えば、吸引器７０により排出される。吸引器７０は、内部空間２３に挿通可能なチューブ７１を有する。すなわち、チューブ７１の外径寸法は、内部空間２３の内径寸法より小さい。チューブ７１を内部空間２３に挿通し、内部空間２３の液体Ｃ３を吸引することにより排出する（吸引工程：ステップＳ４）。
【００３０】
図１５に示すように、染色された細胞Ｔは、しばらくするとスライド４０上に沈降する（細胞沈降工程：ステップＳ５）。
次に、図１６に示すように、光ファイバ８１を有する光源８０を用いて細胞Ｔに光を照射する。光ファイバ８１は内部空間２３に挿通可能である。すなわち、光ファイバ８１の外径寸法は、内部空間２３の内径寸法より小さい。光ファイバ８１を内部空間２３に挿通し、光源８０により光を照明しながら、観察部５０によりスライド４０上の細胞Ｔをモニタ（図示略）で観察する（観察工程：ステップＳ６）。必要に応じて観察部５０を観察穴３２内に進入させ、スライド４０に近づける。必要な細胞が採取されていれば、図１０に示す細胞Ｔａを病理検査に搬送する。一方、必要な細胞が採取されていない場合は、内視鏡を用いて再度細胞を採取する。
【００３１】
本実施形態の細胞検査装置１によれば、内筒２０の筒部２２を外筒１０の貫通孔１４に挿通させることにより、細胞濃縮液Ｃ２を作製する。これにより、スライド４０上により多くの細胞Ｔを確保することができる。
また、染色液Ｓを注入する連通孔１６が筒部２２の外壁１３ａに設けられているため、観察部５０による観察の妨げにならない。
細胞検査装置１は、スライド４０が載置されるベースプレート３０を備えているため、外筒１０とスライド４０とを固定することができる。これにより、より安定して、細胞Ｔを観察することができる。
細胞検査装置１は、内筒２０の内部空間２３に挿通可能である光ファイバ８１（光源）を備えているため、細胞Ｔを鮮明に観察することができる。
フィルタ２４は、細胞浮遊液Ｃの屈折率より高い屈折率を有する材料からなるため、光源８０から照射された光を拡散することができる。これにより、光源８０から照射された光を効率良く利用することができる。
【００３２】
本実施形態の細胞検査方法によれば、準備工程（ステップＳ１）、濃縮液作製工程（ステップＳ２）、染色工程（ステップＳ３）、細胞沈降工程（ステップＳ５）、観察工程（ステップＳ６）が、顕微鏡のステージ上、すなわち、同じ場所で行われるため、細胞Ｔをスムーズかつ迅速に検査することができる。
内筒２０のフィルタ２４をスライド４０と間隔をあけて配置されているため、観察部５０で細胞Ｔを観察する際、フィルタ２４が映り込むのを防止することができる。
外筒１０の外壁１３ａに染色液Ｓを注入する連通孔１６が形成されているため、染色液Ｓを貯留するシリンジ６０が観察部５０による観察の妨げにならない。
ベースプレート３０は、一般に使用される顕微鏡のステージに嵌合されるだけであり、シリンジ６０のチューブ６１が外筒１０に対して着脱可能であるので、ベースプレート３０と、外筒１０と、内筒２０とを使用ごとに交換するディスポーザブルタイプとして構成することができる。なお、ネジ３３を取り外すことにより、ベースプレート３０は使いまわすことも可能である。
【００３３】
ここで、底面２０ａにフィルタ２４を設けていない内筒を用いたときのスライド４０上に確保される細胞の量（面積）と、本実施形態のフィルタ２４を有する内筒２０を用いたときのスライド４０上に確保される細胞の量（面積）とを比較した。チャンバＰに細胞浮遊液Ｃを注入したときを開始時刻とし、フィルタのない内筒を用いた場合、そのまま３分経ったときのスライド４０上の細胞の面積と、フィルタ２４を有する内筒２０を用いた場合、外筒１０の貫通孔１４に内筒２０の筒部２２を押し込む時間を含め３分経ったときのスライド４０上の細胞の面積とを比較した。その結果、即ちフィルタのない内筒を用いた場合に比べて、フィルタ２４を有する内筒２０を用いた場合の方が約４．７倍の面積であった。すなわち、本実施形態の細胞検査装置１及び細胞検査方法によれば、従来に比べて短時間で必要な細胞をスライド４０上に沈降できることが分かった。
【００３４】
また、ステップＳ２の濃縮液作製工程後に、ベースプレート３０から取り外し、スライド４０を染色液に浸した場合の細胞の量（面積）と、本実施形態の細胞検査装置１により染色された細胞の量（面積）を比較した。その結果、フィルタのない内筒を用いた場合に比べて、フィルタ２４を有する内筒２０を用いた場合の方が約３．５倍の面積であった。すなわち、本実施形態の細胞検査装置１及び細胞検査方法によれば、染色液内に細胞が脱落するのを防止できることが分かった。
【００３５】
なお、内筒２０のフィルタ２４をスライド４０と間隔をあけて配置したが、図１７の変形例に示すように、内筒２０の長手軸方向において、筒部２２が本実施形態の筒部２２よりも長く、内筒２０のフィルタ２４をスライド４０に接触させてもよい。これにより、細胞Ｔをスライド４０上に固定することができる。
また、連通孔１６を筒部１３に形成したが、外筒１０の底部１２に貫通孔１４と外部とを連通する連通孔が形成されていてもよい。また、外筒１０に連通孔１６を設けず、図１８に示すように、シリンジ６５に設けられたチューブ６６を内筒２０の内部空間２３に挿通し、内部空間２３からフィルタ２４を通って、空間Ｐ１に染色液Ｓを注入してもよい。
また、フィルタ２４は、細胞浮遊液の屈折率より高い材料からなるとしたが、必ずしも細胞浮遊液の屈折率より高い材料から構成されていなくてもよい。
【００３６】
外筒１０は、上部１１と、底部１２、筒部１３とを備える構成としたが、少なくとも貫通孔１４を有する筒部１３を備える構成であればよい。
外筒１０をベースプレート３０にネジ３３により固定したが、外筒１０とベースプレート３０との固定はこれに限らない。また、外筒１０がベースプレート３０上に載置されているだけでもよい。
また、細胞検査方法は、必ずしも液体Ｃ３を内部空間２３の外に排出する吸引工程（ステップＳ４）を備える必要はないが、液体Ｃ３は着色されているため、内部空間２３に液体Ｃ３がない方が、光ファイバ８１からの光を効率よく利用することができる。例えば、内筒２０を外筒１０から取り出し、内筒２０を上下逆さまにして、内部空間２３内の液体Ｃ３を排出してもよい。
また、観察部５０により取得された細胞Ｔの画像をモニタ(図示略)で観察したが、目視で細胞Ｔを観察してもよい。
【００３７】
以上、本発明の好ましい実施形態を説明したが、本発明はこれら実施形態に限定されることはない。本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、構成の付加、省略、置換、およびその他の変更が可能である。本発明は前述した説明によって限定されることはなく、添付のクレームの範囲によってのみ限定される。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
上記各実施形態の細胞検査装置及び細胞検査方法によれば、フィルタ上に細胞を貯留したまま、染色、顕微鏡観察を行なうため、細胞を確実に確保し、かつ、細胞をスムーズかつ迅速に検査することができる。また本発明は、フィルタの孔径を小さくすることで、細菌の検査に応用することも可能である。
【符号の説明】
【００３９】
Ｃ  細胞濃縮液
Ｓ  染色液
Ｐ  チャンバ
１  細胞検査装置
１０  外筒
１４  貫通孔
１６  連通孔
２０  内筒
２０ａ  底面
２０ｂ  外側面
２３  内部空間
２４  フィルタ
３０  ベースプレート
３２  観察穴（貫通穴）
４０  スライド
５０  観察部
６０  シリンジ
８０  光源
８１  光ファイバ
【図１】
2020008563.tif 000003
【図２】
2020008563.tif 000004
【図３】
2020008563.tif 000005
【図４】
2020008563.tif 000006
【図５】
2020008563.tif 000007
【図６】
2020008563.tif 000008
【図７】
2020008563.tif 000009
【図８】
2020008563.tif 000010
【図９】
2020008563.tif 000011
【図１０】
2020008563.tif 000012
【図１１】
2020008563.tif 000013
【図１２】
2020008563.tif 000014
【図１３】
2020008563.tif 000015
【図１４】
2020008563.tif 000016
【図１５】
2020008563.tif 000017
【図１６】
2020008563.tif 000018
【図１７】
2020008563.tif 000019
【図１８】
2020008563.tif 000020
【手続補正書】
【提出日】令和2年12月28日(2020.12.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
光源と観察部とを用いて、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査方法であって、
貫通孔を有する外筒とスライドとで形成されるチャンバ内に、前記細胞浮遊液を注入して細胞濃縮液を作製する濃縮液作製工程と、
前記スライド上で前記細胞を染色する染色工程と、
前記スライド上に前記細胞を沈降させる細胞沈降工程と、
前記光源で照明しながら前記観察部により前記スライド上の前記細胞を観察する観察工程と、
を備え、
前記濃縮液作製工程において、底面にフィルタが設けられ内部空間を有する内筒を前記底面側から前記外筒の前記貫通孔内に進入させ、前記内筒を前記スライドに近づけることによって、前記細胞濃縮液を作製し、
前記観察工程は、前記内筒を前記外筒に進入させた状態で観察を行う
細胞検査方法。
【請求項２】
前記染色工程は、前記内筒と前記外筒の前記貫通孔とによって囲われた空間に染色液を注入することによって、前記細胞濃縮液中の前記細胞を染色する
請求項１に記載の細胞検査方法。
【請求項３】
前記内筒の前記内部空間内の染色液を吸引する吸引工程をさらに備える
請求項２に記載の細胞検査方法。
【請求項４】
前記観察工程において、
前記内筒の前記フィルタを前記スライドと間隔をあけて配置する
請求項１に記載の細胞検査方法。
【請求項５】
前記観察工程において、
前記内筒の前記フィルタを前記スライドに接触させる
請求項１に記載の細胞検査方法。
【請求項６】
前記濃縮液作製工程および前記染色工程のうち少なくとも一方において、前記内筒を前記外筒の長手方向に進退させる
請求項４または請求項５に記載の細胞検査方法。  
【請求項７】
細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査装置であって、
貫通孔を有し、スライド上に配置され、前記貫通孔と前記スライドとによりチャンバが形成される外筒と、
底面にフィルタが設けられ、内部空間を有し、前記外筒の前記貫通孔内に挿通可能である内筒と、
前記細胞の濃縮が実行された状態の前記チャンバ内に染色液を注入する染色液注入部と、
前記スライドに対して前記外筒と反対側に設けられた観察部と、
を備え、
前記チャンバ内に前記細胞浮遊液を収容した状態であって、前記内筒が、前記底面側から前記外筒の前記貫通孔に進入されて前記スライドに接近した状態のとき、前記細胞の濃縮が実行され、
前記細胞が、前記染色液により染色され、かつ前記スライドに沈降した状態において、前記内筒が、前記外筒に進入したままの状態のとき、前記観察部による前記細胞の観察が実行可能な状態となる
細胞検査装置。
【請求項８】
細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査装置であって、
ベースプレートと、
貫通孔が形成され、スライド上に配置される外筒と、
底面にフィルタが設けられ、内部空間を有し、前記外筒の前記貫通孔内に挿通可能である内筒と、
光源と、
前記スライドに対して前記外筒と反対側に設けられた観察部と、
を備え、
前記スライドと前記外筒の前記貫通孔とにより細胞浮遊液を注入するためのチャンバが形成され、
前記ベースプレートは、観察穴が形成され、前記スライドを載置する窪みを有し、
前記内筒の前記フィルタは、光透過性の材料からなり、前記光源は、前記チャンバ内の細胞を、前記内筒を前記外筒に進入させた状態で照明する
細胞検査装置。
【請求項９】
前記外筒の側壁には、前記外筒の前記貫通孔と外部とを連通する連通孔が設けられている請求項７または請求項８に記載の細胞検査装置。
【請求項１０】
前記観察穴には、前記観察部が挿通可能である
請求項８に記載の細胞検査装置。
【請求項１１】
前記内筒の前記内部空間に挿通可能な光源をさらに備える
請求項７に記載の細胞検査装置。
【請求項１２】
前記フィルタは、前記細胞浮遊液の屈折率より高い屈折率を有する材料からなる
請求項７または請求項８に記載の細胞検査装置。
【請求項１３】
前記フィルタは、前記細胞よりも小さな孔径を有している
請求項７または請求項８に記載の細胞検査装置。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
本発明の第１の態様に係る細胞検査方法は、光源と観察部とを用いて、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査方法であって、貫通孔を有する外筒とスライドとで形成されるチャンバ内に、前記細胞浮遊液を注入して細胞濃縮液を作製する濃縮液作製工程と、
前記スライド上で前記細胞を染色する染色工程と、前記スライド上に前記細胞を沈降させる細胞沈降工程と、前記光源で照明しながら前記観察部により前記スライド上の前記細胞を観察する観察工程と、を備え、前記濃縮液作製工程において、底面にフィルタが設けられ内部空間を有する内筒を前記底面側から前記外筒の前記貫通孔内に進入させ、前記内筒を前記スライドに近づけることによって、前記細胞濃縮液を作製し、
前記観察工程は、前記内筒を前記外筒に進入させた状態で観察を行う。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明の第２の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様において、前記染色工程は、前記内筒と前記外筒の前記貫通孔とによって囲われた空間に染色液を注入することによって、前記細胞濃縮液中の前記細胞を染色してもよい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明の第４の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様において、前記観察工程において、前記内筒の前記フィルタを前記スライドと間隔をあけて配置してもよい。
本発明の第５の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様において、前記観察工程において、前記内筒の前記フィルタを前記スライドに接触させてもよい。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明の第６の態様に係る細胞検査方法は、上記第４の態様、または、上記第５の態様において、前記濃縮液作製工程および前記染色工程のうち少なくとも一方において、前記内筒を前記外筒の長手方向に進退させてもよい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本発明の第７の態様に係る細胞検査装置は、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査装置であって、貫通孔を有し、スライド上に配置され、前記貫通孔と前記スライドとによりチャンバが形成される外筒と、底面にフィルタが設けられ、内部空間を有し、前記外筒の前記貫通孔内に挿通可能である内筒と、前記細胞の濃縮が実行された状態の前記チャンバ内に染色液を注入する染色液注入部と、前記スライドに対して前記外筒と反対側に設けられた観察部と、
を備え、前記チャンバ内に前記細胞浮遊液を収容した状態であって、前記内筒が、前記底面側から前記外筒の前記貫通孔に進入されて前記スライドに接近した状態のとき、前記細胞の濃縮が実行され、前記細胞が、前記染色液により染色され、かつ前記スライドに沈降した状態において、前記内筒が、前記外筒に進入したままの状態のとき、前記観察部による前記細胞の観察が実行可能な状態となる。
本発明の第８の態様に係る細胞検査装置は、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査装置であって、ベースプレートと、貫通孔が形成され、スライド上に配置される外筒と、底面にフィルタが設けられ、内部空間を有し、前記外筒の前記貫通孔内に挿通可能である内筒と、光源と、前記スライドに対して前記外筒と反対側に設けられた観察部と、
を備え、前記スライドと前記外筒の前記貫通孔とにより細胞浮遊液を注入するためのチャンバが形成され、前記ベースプレートは、観察穴が形成され、前記スライドを載置する窪みを有し、前記内筒の前記フィルタは、光透過性の材料からなり、前記光源は、前記チャンバ内の細胞を、前記内筒を前記外筒に進入させた状態で照明する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明の第９の態様に係る細胞検査装置は、上記第７の態様、または、上記第８の態様において、前記外筒の側壁には、前記外筒の前記貫通孔と外部とを連通する連通孔が設けられていてもよい。
本発明の第１０の態様に係る細胞検査装置は、上記第８の態様において、前記観察穴には、前記観察部が挿通可能であってもよい。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本発明の第１１の態様に係る細胞検査装置は、上記第７の態様において、前記内筒の前記内部空間に挿通可能な光源をさらに備えていてもよい。
本発明の第１２の態様に係る細胞検査装置は、上記第７の態様、または、上記第８の態様において、前記フィルタは、前記細胞浮遊液の屈折率より高い屈折率を有する材料からなっていてもよい。
本発明の第１３の態様に係る細胞検査装置は、上記第７の態様、または、上記第８の態様において、前記フィルタは、前記細胞よりも小さな孔径を有していてもよい。
【国際調査報告】
2020008563.tif 000021
2020008563.tif 000022
2020008563.tif 000023
2020008563.tif 000024