(57)【要約】  サーマルサイクラー１６０は、反応容器２を支持する支持ブロック３と、支持ブロック３に熱的に連結されており、支持ブロック３を加熱・冷却することにより反応容器２に保持された試液１の温度を調整するペルチェ素子５と、支持ブロック３の温度を計測する温度センサ４と、温度センサ４によって計測された支持ブロック３の温度に基づきペルチェ素子５へ供給する電流および電圧の制御を行う温度調整部２３０と、を備え、反応容器２として、上部２１が開口し、下部へ向かって先細りになる円錐形部を有している反応容器２が使用され、ペルチェ素子５は、反応容器２のうち、円錐形の母線２３の部分に平行になるように配置されている。
2020065917.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
反応容器を支持する支持ブロックと、
前記支持ブロックに熱的に連結されており、前記支持ブロックを加熱・冷却することにより前記反応容器に保持された試液の温度を調整するペルチェ素子と、
前記支持ブロックの温度を計測する温度センサと、
前記温度センサによって計測された前記支持ブロックの温度に基づき前記ペルチェ素子へ供給する電流および電圧の制御を行う入熱量調整部と、を備え、
前記反応容器として、上部が開口し、下部へ向かって先細りになる円錐形部を有している反応容器が使用され、
前記ペルチェ素子は、前記反応容器のうち、円錐形の母線部分に平行になるように配置されている
ことを特徴とするサーマルサイクラー。
【請求項２】
請求項１に記載のサーマルサイクラーにおいて、
前記支持ブロックは、前記ペルチェ素子の伝熱面の平面領域の中心線上に前記反応容器に保持された前記試液の重心が配置されるように前記反応容器を支持するとともに、前記伝熱面から前記支持ブロックの最も遠い部分までの距離が最小となるように反応容器を支持する
ことを特徴とするサーマルサイクラー。
【請求項３】
請求項１に記載のサーマルサイクラーにおいて、
前記支持ブロックは、
前記反応容器の外形と同一の形状のホルダ穴を形成するホルダ部と、
前記ホルダ部と熱的に連結され、前記ペルチェ素子の伝熱面との熱の授受を行う受熱板と、を有する
ことを特徴とするサーマルサイクラー。
【請求項４】
請求項３に記載のサーマルサイクラーにおいて、
前記受熱板の前記ペルチェ素子との受熱面は、前記ペルチェ素子と同形状、同面積である
ことを特徴とするサーマルサイクラー。
【請求項５】
請求項３に記載のサーマルサイクラーにおいて、
前記受熱板の前記ペルチェ素子との受熱面に垂直な方向の厚さは、前記ペルチェ素子との接触熱抵抗と前記支持ブロックを構成する材質の熱伝達率との比である厚さ寸法以上の厚さである
ことを特徴とするサーマルサイクラー。
【請求項６】
請求項３に記載のサーマルサイクラーにおいて、
前記受熱板の前記ペルチェ素子との受熱面に垂直な方向の厚さは、前記受熱面の面内での最大温度差が、前記ペルチェ素子の高温側の伝熱面と低温側の伝熱面との温度差よりも大きくなる最小限の肉厚以上の厚さである
ことを特徴とするサーマルサイクラー。
【請求項７】
請求項３に記載のサーマルサイクラーにおいて、
前記受熱板の前記ペルチェ素子との受熱面に垂直な方向の厚さは、前記受熱板の形状が維持できる最小の肉厚以上の厚さである
ことを特徴とするサーマルサイクラー。
【請求項８】
請求項３に記載のサーマルサイクラーにおいて、
前記ホルダ部は、前記ホルダ穴の周りに一定の肉厚を有している
ことを特徴とするサーマルサイクラー。
【請求項９】
請求項３に記載のサーマルサイクラーにおいて、
前記支持ブロックは、前記ホルダ部と前記受熱板とを接続するフィレットを更に有する
ことを特徴とするサーマルサイクラー。
【請求項１０】
請求項１に記載のサーマルサイクラーにおいて、
前記入熱量調整部は、前記温度センサによって計測された前記支持ブロックの温度から、前記支持ブロックの温度の時間変化を微分／積分し、前記ペルチェ素子への入力電流／電圧値から前記支持ブロックへの入熱量を計算する
ことを特徴とするサーマルサイクラー。
【請求項１１】
請求項１に記載のサーマルサイクラーと、
前記サーマルサイクラーにより温度が調整された試液の蛍光特性を測定する測定部と、を備えた
ことを特徴とするリアルタイムＰＣＲ装置。
【請求項１２】
請求項１１に記載のリアルタイムＰＣＲ装置において、
前記測定部は、前記試液を保持する前記反応容器の上方側に配置された
ことを特徴とするリアルタイムＰＣＲ装置。
【請求項１３】
請求項１１に記載のリアルタイムＰＣＲ装置において、
前記試液を作成する調液部を更に備えた
ことを特徴とするリアルタイムＰＣＲ装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液や尿等の生体由来の検体、いわゆる生体試料中に含まれる核酸を分析するリアルタイムＰＣＲ装置に好適なサーマルサイクラーとそれを備えたリアルタイムＰＣＲ装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
反応液の局所的な過剰加熱による分析性能の低下を防ぎながら、反応液の温度変化速度を向上させて分析時間を短縮させるため、分析項目や装置構成の特性に合わせた温度制御を、容易な操作により設定し実行するリアルタイムＰＣＲ装置の一例として、特許文献１には、オーバーシュート実施時に、第１処理として、オーバーシュート目標温度に到達するまで昇温を続け、第２処理として、当該温度に到達したら、オーバーシュートの維持時間に達するまでオーバーシュート目標温度で所定の時間保持し、第３処理として、反応液の目標温度に到達するまで降温を続ける、との各を実施することによって、温度測定値が台形の波形をとるように制御することが記載されている。【０００３】
装置を設置する場所の環境温度がある範囲で異なっても反応液の入った複数の反応容器に対し、それぞれ安定した温調性能を維持し温度のばらつきを最小限に抑えることを目的として、特許文献２には、反応液の入った反応容器とそれを直接的又は間接的に温度制御する箇所を断熱構造のカバーとフィンカバーで覆い、さらにそのカバーで覆った内側の庫内温度を制御するための熱源を有する構成により、庫内温度を一定にし、反応容器の温度制御に対する環境温度影響を最小化することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ２０１６−１３５７９８号
【特許文献２】ＷＯ２０１５−００５０７８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来、生体由来の検体中に含まれる核酸の検査を行う場合に用いられる核酸増幅技術としては、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ；以下、ＰＣＲと略称する）法を用いたものがある。ＰＣＲ法では、検体と試薬とを混合した反応液の温度を予め定められた条件に従って制御することにより、反応液中の所望の塩基配列を選択的に増幅させることができる。【０００６】
また、その他の核酸増幅法として、ＮＡＳＢＡ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−Ｂａｓｅｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）法やＬＡＭＰ（Ｌｏｏｐ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）法のように、反応液の温度を一定に制御し、核酸増幅を図る恒温増幅法が開発されている。【０００７】
このような核酸増幅法は、例えばウィルス性感染の診断等、臨床検査関連でも積極的に用いられており、自動化による検査の効率化・省力化・高精度化が求められている。【０００８】
特許文献１には、反応液の局所的な過剰加熱による分析性能の低下を防ぎながら、反応液の温度変化速度を向上させて分析時間を短縮させるため、分析項目や装置構成の特性に合わせた温度制御方法について記載されている。【０００９】
特許文献２には、装置を設置する場所の環境温度がある範囲で異なっても反応液の入った複数の反応容器に対し、それぞれ安定した温調性能を維持して、温度のばらつきを最小限に抑えることができる核酸増幅検出装置について記載されている。【００１０】
特許文献１，２に記載されたリアルタイムＰＣＲ装置では、回転軸廻りに回転可能なカローセルの円形状の外縁に沿って反応容器を支持した温調ブロックを設置し、カローセルと温調ブロックの間に温度調節装置としてペルチェ素子を温調ブロック毎に配置する構成になっている。【００１１】
このような構成では、蛍光分析装置や分注機構がカローセル周方向の一定の位置に固定されている場合に、個別の増幅対象のプロトコルに応じた調整温度・調整時間で独立に並行して温度調節できる。このため、多種類の検体に対して個別の核酸分析を同時に行う、複数のプロトコルに対応した処理が実現できる。【００１２】
特許文献１に記載されたリアルタイムＰＣＲ装置は、蛍光分析のため反応容器の下方より励起光を試液に照射し、カローセルの円形の半径方向外側に設けられた受光装置で蛍光を検出する構成になっている。【００１３】
特許文献１，２に記載されたリアルタイムＰＣＲ装置は、反応容器下部が温調ブロックから下方へ突き出した形態となっており、この突き出した反応容器底部を介して反応容器下方に位置する蛍光分析装置で蛍光分析を行う構成になっている。【００１４】
いずれにしても、カローセルに複数の温調ブロックが懸架される特許文献１，２の構成では、試液が入っている部分の反応容器の一部が蛍光分析装置の観測を行うために空気に大きく露出している部分が存在する。これは蛍光分析装置が固定されていて、蛍光の測光が反応容器の側方あるいは下方から行われるためである。【００１５】
また、特許文献１，２に記載の技術では、下方先端が細くなっているものの、ほとんどの部分が円形あるいは四角形の筒形をした反応容器を使用している。これは側方や下方からから反応容器を介して蛍光度を測定するために、光の複雑な散乱を防ぐ必要があるためである。【００１６】
更に、特許文献１，２に記載されたリアルタイムＰＣＲ装置は、限り個々の温調ブロックの体積を出来るだけ確保するように設計されている。このためにカローセルに個別の温調ブロックを周方向に配置する形態となっている。これは温調ブロックをインキュベーターとして考えているためである。このように温調ブロックの体積を大きくすることによって温調ブロックの熱容量が増し、試液を一定温度に保つ際に外部からの擾乱によって温度が変化しにくい、という特徴を持たせることができる。【００１７】
ここで、臨床検査では、検体の検査結果を迅速に得たいという要求がある。【００１８】
ＰＣＲ法では、一定温度に保つ時間はプロトコルにより決められているので、検査結果を迅速に得るためには一定温度と次の一定温度への変化をすばやく行うことが必要である。このためには温調ブロックの温度の変化速度であるランプレートを向上することが必要である。【００１９】
特許文献１，２に記載されたように、検体をカローセルに保持して計測系の上方まで回転移動する構成の替わりに、固定した温調ブロックを用いて蛍光度の計測系が移動する方式を採用すると、上方から蛍光度を測定することができるようになり、透明な反応容器を用いる必要がなくなる。これにより熱伝導性の良い材料を反応容器に使うことができるようになり、速い温度変化が可能になる。【００２０】
また、特許文献１，２に記載されたような筒形である反応容器では、着脱を容易とするために反応容器と温調ブロックの間に隙間を設けなければならない。しかしながら、この隙間は伝熱抵抗となるため、素早い温度変化を行うためには不利である。これに対し、上方から蛍光度を測定する方式とすると、反応容器を下方先細りの円錐形にすることができ、温調ブロックに密着させても着脱が容易となる、との利点が得られる。【００２１】
更に、試液の温度の時間変化を知ることが出来ればペルチェ素子の制御を最適化することができる、との効果が得られる。ここで、試液の温度を反応中に計測することは困難であるので、温度センサから得られる温調ブロックの温度から試液の温度を予測することになる。このためには、温度変化をしているときに温調ブロックの中に場所による温度差が大きくないことが望まれる。また、ペルチェ素子は伝熱面内に大きな温度差ができると熱応力の分布ができるため、大きな温度差を設けないことが望ましい。【００２２】
従って、本発明が解決しようとする課題は、反応容器を下方先細りの円錐形とした、上方から蛍光度を測定するリアルタイムＰＣＲ装置において、支持ブロックのランプレートを向上させるとともに、温度を時間的に変化しているときの支持ブロック内の温度差を小さくすることが可能なサーマルサイクラーおよびそれを備えたリアルタイムＰＣＲ装置を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明は、上記課題を解決する手段を複数含んでいるが、その一例を挙げるならば、反応容器を支持する支持ブロックと、前記支持ブロックに熱的に連結されており、前記支持ブロックを加熱・冷却することにより前記反応容器に保持された試液の温度を調整するペルチェ素子と、前記支持ブロックの温度を計測する温度センサと、前記温度センサによって計測された前記支持ブロックの温度に基づき前記ペルチェ素子へ供給する電流および電圧の制御を行う入熱量調整部と、を備え、前記反応容器として、上部が開口し、下部へ向かって先細りになる円錐形部を有している反応容器が使用され、前記ペルチェ素子は、前記反応容器のうち、円錐形の母線部分に平行になるように配置されていることを特徴とする。
【発明の効果】
【００２４】
本発明によれば、反応容器を下方先細りの円錐形とした、上方から蛍光度を測定する場合にも、支持ブロックのランプレートを向上させるとともに、温度を時間的に変化しているときの支持ブロック内の温度差を小さくすることができる。上記した以外の課題、構成および効果は、以下の実施例の説明により明らかにされる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本発明の実施例１のリアルタイムＰＣＲ装置の概略構成を示す図である。
【図２】本発明の実施例１のリアルタイムＰＣＲ装置のサーマルサイクラーの基本構造を説明する断面を示す図である。
【図３】本発明の実施例１のリアルタイムＰＣＲ装置のサーマルサイクラーで使用する反応容器の一例の外観を示す図である。
【図４】本発明の実施例１のリアルタイムＰＣＲ装置のサーマルサイクラーで使用する支持ブロックの一例を示す外観図。
【図５】本発明の実施例１のリアルタイムＰＣＲ装置のサーマルサイクラーの一例を示す組み上がり外観図である。
【図６】比較のための従来のリアルタイムＰＣＲ装置のサーマルサイクラーの支持ブロックの一例を示す断面図である。
【図７】比較のための従来のリアルタイムＰＣＲ装置のサーマルサイクラーの支持ブロックの一例を示す断面図である。
【図８】本発明の実施例１のリアルタイムＰＣＲ装置のサーマルサイクラーの支持ブロックの一例を示す断面図である。
【図９】本発明の実施例１のリアルタイムＰＣＲ装置のサーマルサイクラーと従来のサーマルサイクラーの支持ブロックの形状によるランプレートと最大温度差のシミュレーション結果を示す図である。
【図１０】本発明の実施例２のリアルタイムＰＣＲ装置のサーマルサイクラーの温度制御システムを説明するブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下に本発明のサーマルサイクラーおよびそれを備えたリアルタイムＰＣＲ装置の実施例について図面を用いて説明する。
【００２７】
＜実施例１＞  
本発明のサーマルサイクラーおよびそれを備えたリアルタイムＰＣＲ装置の実施例１について図１乃至図９を用いて説明する。
【００２８】
図１は、本発明の実施例１に係るリアルタイムＰＣＲ装置の概略構成を示した全体図である。
【００２９】
図１に示すリアルタイムＰＣＲ装置１０００は、ラック搭載部１１０、搬送機構１２０、液体分注機構１３０、蓋ユニット１４０、攪拌ユニット１５０、制御装置２００、サーマルサイクラー１６０、測定部１６５を備えている。
【００３０】
リアルタイムＰＣＲ装置１０００のうち、試液１（図２参照）を作成する調液部は、ラック搭載部１１０、搬送機構１２０、液体分注機構１３０、蓋ユニット１４０により構成される。
【００３１】
ラック搭載部１１０は、検査に用いられる検体，試薬，分注チップ，反応容器２が配備される領域である。ラック搭載部１１０は、リアルタイムＰＣＲ装置１０００の作業台１０２上の所定位置に設けられており、検体容器ラック１１２，試薬容器ラック１１４，反応容器ラック１１６，ノズルチップラック１１８がそれぞれ搭載される。
【００３２】
検体容器ラック１１２には、増幅処理の対象となる核酸を含む検体が収容された複数の検体容器１１３が配列収納されている。試薬容器ラック１１４には、検体に加えるための試薬が収容された複数の試薬容器１１５が配列収納されている。反応容器ラック１１６には、検体と試薬とを混合するために用いられる複数の未使用の空の反応容器２が配列収納されている。ノズルチップラック１１８には、検体および試薬の分注に用いられる複数の未使用のノズルチップ１１９が配列収納されている。
【００３３】
搬送機構１２０は、反応容器２等を保持しながらリアルタイムＰＣＲ装置１０００内の各箇所を移動させる機構であり、Ｘ軸方向ガイド１２１と、Ｘ軸方向可動子１２２と、Ｙ軸方向ガイド１２３と、Ｙ軸方向可動子１２４とを備えており、制御信号に基づいてＹ軸方向可動子１２４を作業台上で２次元移動させて、作業台上の所望の位置に配置できる構成になっている。
【００３４】
Ｘ軸方向ガイド１２１は、リアルタイムＰＣＲ装置１０００の作業台１０２上に図１中Ｘ軸方向に延在させて配置されたガイドである。Ｘ軸方向可動子１２２は、Ｘ軸方向ガイド１２１上を移動可能に設けられている可動子である。
【００３５】
Ｙ軸方向ガイド１２３は、Ｘ軸方向可動子１２２に一体的に取り付けられ、図１中Ｙ軸方向に延在させて配置されたガイドである。Ｙ軸方向可動子１２４は、Ｙ軸方向ガイド１２３上を移動可能に設けられている可動子である。
【００３６】
Ｙ軸方向可動子１２４には、バーコードリーダ１２５と、グリッパユニット１２６と、分注ユニット１２７とが設けられており、Ｙ軸方向可動子１２４と一体的に作業台上を移動し、作業台１０２上の所望位置に配置される。
【００３７】
バーコードリーダ１２５は、検体容器１１３，試薬容器１１５，反応容器２それぞれに付されている識別情報を読み取り、これらの識別情報を取得する。
【００３８】
グリッパユニット１２６は、制御信号に基づくグリッパの作動に応動して反応容器２を把持または解放し、作業台１０２上の装置各部間でのＹ軸方向可動子１２４の移動に伴って反応容器２を搬送する。
【００３９】
分注ユニット１２７は、ノズルチップ１１９を着脱可能な構成になっており、制御信号に基づいてノズルチップラック１１８からノズルチップ１１９を装着し、検体容器１１３内の検体または試薬容器１１５内の試薬にノズルチップ１１９を浸漬し、検体または試薬をノズルチップ１１９内に吸引して採取する。また、分注ユニット１２７は、制御信号に基づいてこのノズルチップ１１９内に貯留された検体や試薬を反応容器２に吐出して分注する。
【００４０】
この分注ユニット１２７は、選択された１つの反応容器２内に分注チップを用いて検体と試薬とを分注して試液を調製する機構である液体分注機構１３０の主部をなす。
【００４１】
また、リアルタイムＰＣＲ装置１０００では、ラック搭載部１１０とサーマルサイクラー１６０との間の作業台１０２上には、試液を調製するために反応容器ラック１１６から取り出した未使用の反応容器２が載置される試液調製ポジション１７０が形成されている。
【００４２】
試液調製ポジション１７０には、反応容器２を保持するための容器搭載部１７２が設けられている。リアルタイムＰＣＲ装置１０００では、反応容器ラック１１６からこの試液調製ポジション１７０にグリッパユニット１２６を用いて移した未使用の反応容器２に対し、分注ユニット１２７を用いて検体容器１１３および試薬容器１１５から検体および試薬の分注を行って、反応容器２内に検体および試薬を混合した試液を調製する。複数の容器搭載部１７２を備える。これにより、例えば、同じ検体または同じ試薬の分注を複数の反応容器２に対し一緒に行うこともでき、複数の試液の調製を纏めて行うバッチ処理ができるようになっている。
【００４３】
蓋ユニット１４０は、試液を収容した反応容器２に蓋をする機構であり、試液調製ポジション１７０からグリッパユニット１２６を用いて移された、試液が収容されている反応容器２の開口に蓋をして、試液の蒸発や外部からの異物の進入等を防ぐ。
【００４４】
攪拌ユニット１５０は、反応容器２に収容された試液の検体および試薬を均一に混合する機構であり、蓋ユニット１４０からグリッパユニット１２６を用いて移された、密閉された反応容器２に収容されている試液を攪拌し、検体および試薬の混合を行う。
【００４５】
さらに、図示のリアルタイムＰＣＲ装置１０００では、試液調製ポジション１７０とラック搭載部１１０との間の作業台１０２上には、分注ユニット１２７に装着されて検体または試薬の分注に使用された使用済みのノズルチップ１１９や、サーマルサイクラー１６０による核酸増幅処理が終わった検査済みの反応容器２を廃棄する廃棄ボックス１８０が設けられている。
【００４６】
サーマルサイクラー１６０は、攪拌が終わった反応容器２が搭載され、試液１の核酸を予め定められているプロトコルに従って増幅させる機構であり、その詳細は後述する。
【００４７】
測定部１６５は、試液１を保持する反応容器２の上方側に配置されており、サーマルサイクラー１６０によって予め定められているプロトコルに従って温度が調整された試液１の蛍光特性を測定することで核酸濃度測定を行う機構である。
【００４８】
測定部１６５は、対向した反応容器２の露出した底部側の容器部分に励起光を照射する励起光源と、この励起光の照射に基づいた試液からの蛍光を検出する検出素子とを含む。励起光源としては、例えば、発光ダイオード（ＬＥＤ），半導体レーザー，キセノンランプ，ハロゲンランプ等が用いられる。検出素子としては、フォトダイオード、フォトマルチプライヤー、ＣＣＤ等が用いられる。
【００４９】
これにより、測定部１６５は、励起光源からの励起光の照射によって試液１から生じる蛍光を検出素子により検出して測定することによって、試液１中の、試薬により蛍光標識された増幅対象の塩基配列の定量を経時的に並行して行うことができる。
【００５０】
このように構成されたリアルタイムＰＣＲ装置１０００のサーマルサイクラー１６０を含む装置各部は、図２に示すように、キーボード，マウス等の入力装置２１０や液晶モニタ等の表示装置２２０を備えた制御装置２００により、その作動が制御される。
【００５１】
制御装置２００は、リアルタイムＰＣＲ装置１０００のサーマルサイクラー１６０を含む上述した装置各部を制御し、入力装置２１０により設定されたプロトコルに基づいて、予め記憶部２０１に記憶された各種ソフトウェア等を用いて、試液調製処理および核酸増幅処理を含む核酸検査処理を実行する。また、制御装置２００は、この核酸検査処理の際の装置各部の可動状況等を記憶部２０１に記憶するとともに、サーマルサイクラー１６０によって得られた蛍光検出結果等の分析結果を記憶部２０１に記憶し、表示装置２２０に表示する。
【００５２】
本実施例の制御装置２００は、複数のサーマルサイクラー１６０を独立して並行して温度の制御が可能に構成されている。
【００５３】
次に、この制御装置２００が行う核酸検査処理に係り、上述した試液調製処理および核酸増幅処理について詳細に説明する。
【００５４】
ここで、試液調製処理とは、リアルタイムＰＣＲ装置１０００の制御装置２００によって行われる核酸検査処理の中、反応容器２内に検体および試薬を分注した試液１を調製する処理を指す。また、核酸増幅処理とは、この試液調製処理によって反応容器２内に調製された試液１を、サーマルサイクラー１６０によって増幅対象の塩基配列の種類に応じたプロトコルに従って温度調節し、塩基配列の核酸増幅を測定部１６５による試液１の蛍光測定によって確認しながら行う処理を指す。
【００５５】
制御装置２００は、試液調製処理を開始するに当たって、まず記憶部２０１に設けられている試液調製処理のための各種作業エリアをイニシャライズする。
【００５６】
制御装置２００は、試液１の調製処理に係るイニシャライズが済むと、入力装置２１０によって設定された、検体容器ラック情報および試薬容器ラック情報や、核酸検査の実行内容情報の読み込み処理を行う。
【００５７】
制御装置２００は、核酸検査の実行内容情報に含まれた１または複数の個別核酸検査処理の中から予め設定された手順に基づいて、今回、試液作製処理を行う１または複数の個別核酸処理を選択抽出する。
【００５８】
次に、制御装置２００は、試液調製ポジション１７０で、反応容器ラック１１６から事前に搬送し試液調製ポジション１７０の容器搭載部１７２に搭載した未処理の反応容器２に対して、選択抽出された個別核酸処理の試液調製処理情報に基づいて液体分注機構１３０を作動制御して、試液１の調製を行う。
【００５９】
次に、上述したように構成された本実施例に係るリアルタイムＰＣＲ装置１０００において、異なる分析項目を効率的に、短時間で処理するための主要部を構成するサーマルサイクラー１６０の構成および作用について図２乃至図９を用いて詳述する。
【００６０】
図２は本実施例のサーマルサイクラー１６０の基本構造を説明する断面図である。
【００６１】
本実施例のサーマルサイクラー１６０は、温度センサ４の温度を観察しながらペルチェ素子５への印加電流を温度調整部２３０により調整して、目的のプロトコルに従い試液１の温度を変化させる機構である。図２に示すサーマルサイクラー１６０は、支持ブロック３、温度センサ４、ペルチェ素子５、ヒートシンク６、断熱スペーサ７、ブロック固定部材８、締結ネジ９、温度調整部２３０を備えている。
【００６２】
図１を用いて説明した調液部によって、検体試料や希釈液や試薬などの液体を分注混合することで試液１が調製され、反応容器２に収納される。
【００６３】
支持ブロック３は、反応容器２の外形と同一の形状のホルダ穴３ａ（図４参照）があけられているホルダ部３２（図４参照）と、このホルダ部３２と熱的に連結されており、ペルチェ素子５の伝熱面５１と密着することで熱の授受を行う受熱面３１ｂを形成する受熱板３１と、フィレット３３（図４参照）と、から構成される。
【００６４】
反応容器２は、支持ブロック３のホルダ穴３ａで支持される。
【００６５】
受熱板３１は、一方の面（受熱面３１ｂ）がペルチェ素子５と接しており、もう一方の面３１ｄには、反応容器２を支持するホルダ部３２が形成されている。
【００６６】
支持ブロック３では、冷却と加熱が行えるペルチェ素子５により、反応容器２を支持するホルダ部３２や受熱板３１を介して、試液１の温度をそれぞれの反応のＰＣＲプロトコルに従って周期変化させる。
【００６７】
この間に試液１に光を照射して蛍光度の計測を行う。このうち試液調製や搬送や蛍光度計測に関する部分は、ランプレート向上には大きくは寄与しないので、特にその構成は限定されないが、図１で説明したように試液１の導入や蛍光度の測定は反応容器２の上方から行うことが望ましい。
【００６８】
またＰＣＲプロトコルも任意の場合があるので限定されないが、通常、リアルタイムＰＣＲ装置が設置される環境温度または室温よりも高い５０℃程度から１００℃程度の温度範囲で、２ないし３つの目標温度をそれぞれ一定の時間保持する温度変化パターンを指定された回数繰り返す。
【００６９】
支持ブロック３には温度センサ４が取り付けられており、支持ブロック３の温度を計測することによって間接的に試液１の温度を計測する。温度センサ４は、例えば熱電対や半導体温度計等で構成されるが、特にこれらに限定されるものではない。
【００７０】
温度調整部２３０は、温度センサ４により計測される支持ブロック３の温度があらかじめＰＣＲプロトコルで設定されている温度と一致するようにペルチェ素子５へ供給する電流と電圧を制御する。なお、制御装置２００と温度調整部２３０とが別体の場合について説明しているが、これらは一体であってもよい。
【００７１】
なお前述の特許文献では支持ブロック３とペルチェ素子５とを組み合わせたものを温調ブロックと呼んでいる。
【００７２】
図３は本実施例のサーマルサイクラー１６０で使用される反応容器２の説明図である。
【００７３】
サーマルサイクラー１６０で用いられる反応容器２は検査終了時に廃棄される使い捨てタイプであり、通常はプラスティック製である。図３に示すように、反応容器２の形状は、支持ブロック３と熱的に密着できて、着脱が容易にできるように、上部２１が開口し、支持ブロック３に収納される部分は下部へ向かって先細りになる円錐形部を有している。
【００７４】
反応容器２は、円錐形の中心軸２４がほぼ鉛直方向になるように支持ブロック３により支持される。円錐形の先細りの先端２２は熱的密着性と着脱の容易さの為にほぼ球形な形状に丸められている。この先端２２が鉛直下方になり、反対側の反応容器２の上部２１は開口し、試液１の導入や上方からの光の照射蛍光度の計測ができるようになっている。
【００７５】
本実施例では図示していないが、上述したように、反応容器２の上部２１にはＰＣＲ反応中に試液１が蒸発消失することを防ぐために透明な蓋を使用することができる。
【００７６】
また、支持ブロック３と接する部分以外はどのような形状をしていてもよく、例えば、追加の支持部材や上述した消失防止蓋の結露防止のヒータ等と位置合わせをするためのフランジを更に設けることができる。
【００７７】
上述した特許文献１，２では、光学系の構成が側方から蛍光を観測する構成となっているため、反応容器に光の散乱が複雑となる円錐面を使用することが出来ず、鉛直方向に直線状の円筒や角柱の形状をしている必要がある。
【００７８】
このため、反応容器の脱着を容易とするためには支持ブロックと反応容器との間に隙間を設けなければいけない、との制約があった。また、側方の光路を確保するために支持ブロックと反応容器とが密着しない領域を設ける必要がある、との制約があった。このため、熱的な密着性が得られない箇所が残っており、ランプレートの向上を図る余地が残されていることになる。
【００７９】
また、特許文献２では、試液が主に入っている反応容器の先端が支持ブロックから突き出している必要があるため、同様に、ランプレートの向上を図る余地があることになる。
【００８０】
図４は本実施例のサーマルサイクラー１６０で使用する支持ブロックの一例を示す外観図である。
【００８１】
図４に示し、また上述したように、支持ブロック３は、ホルダ部３２と受熱板３１とが受熱板３１のペルチェ素子５と接しているのとは反対側の面で一体に整形された部品である。
【００８２】
支持ブロック３は、恒久的な部品であり、反応容器２の脱着に耐える強度と熱伝導性がよいことが望まれるため、通常はその全体が熱伝導性の良い金属材料、例えばアルミニュウムなどの熱伝導性の良い金属で構成される。
【００８３】
支持ブロック３の製造方法は特に限定されず、ホルダ部３２と受熱板３１が一体となるよう、ホルダ部３２と受熱板３１とを別個に加工して、溶接や拡散接合で接合しても良いし、金型を使って加圧鋳造しても良い。あるいは一個の金属片から切削加工や放電加工で切り出しても良い。
【００８４】
支持ブロック３の体積を最小とするために、円錐形の反応容器２を一定の厚さ３２ａで覆うホルダ部３２を、平板のペルチェ素子５を一定の厚さ３１ａで覆う受熱板３１のペルチェ素子５と接触する受熱面３１ｂと反対側に、ホルダ部３２の母線部分と受熱板３１とが重なり合うように配置する。これにより、ペルチェ素子５の伝熱面５１や反応容器２に接している面の温度分布を均一にするには一定の厚みの熱伝導性の材料で覆うことができる。
【００８５】
なお、加工上、図４に示すようなフィレット３３などの付加体積がつく場合は、受熱板３１あるいはペルチェ素子５の伝熱面から等距離における支持ブロック３の断面積を距離が増すに従って減少させることが望ましい。
【００８６】
それぞれの部分を代表する寸法として、ホルダ穴３ａからホルダ部３２外形までの厚さ３２ａと、受熱板３１の厚さ３１ａと、を規定する。
【００８７】
反応容器２は、ホルダの中心軸２４に沿ってホルダ部３２上端からの挿入深さ３２ｂだけホルダ部３２に挿入される。
【００８８】
ホルダ部３２の内側の形状は反応容器２の形状とほぼ同一とするが、空気やこぼれた液滴が抜けるための小さな穴を設けることができる。
【００８９】
ここで、支持ブロック３内の温度分布を小さくすることで、受熱面３１ｂ側ではペルチェ素子５の性能を最大限に発揮させることができる。また、ホルダ部３２の温度分布を小さくすることで試液１の液温の偏りを小さくすることができ、試液１内での反応を均一にすることができる、との効果が得られる。
【００９０】
支持ブロック３の温度調整時の熱の収支を調べてみると、反応容器２を介して試液１に伝わる熱量は、通常、ペルチェ素子５からの入熱量または除熱量のうち１０分の１以下となっている。その他の熱量としては、支持ブロック３に接触している他の構成要素や周りの雰囲気に伝わる熱量が若干あるが、支持ブロック３自体の温度を変化させるために用いられるのがほとんどである。
【００９１】
したがって、ペルチェ素子５による加熱および吸熱する熱量が一定ならば、支持ブロック３の熱容量を小さくすることによりランプレートを向上することが出来ることが分かる。また、同じ材質の支持ブロック３自体の熱容量を小さくするためには、その体積を小さくすれば良いことが分かる。
【００９２】
試液１や反応容器２の熱伝導度は、その構成上、支持ブロック３の材質に比べると１００分の１程度である。
【００９３】
したがって、ホルダ部３２の厚さ３２ａは、反応容器２の肉厚の１００分の１程度で、またホルダ穴３ａの周りに一定の厚さであればよい、と思われる。
【００９４】
また、受熱板３１の受熱面３１ｂに垂直な方向の厚さ３１ａも、反応容器２の肉厚の１０分の１程度であれば十分である、と思われる。
【００９５】
ただし、実際には、ペルチェ素子５の耐久性の向上、および、加工できて強度上形状を保持して耐久性を向上させることを目的として、ペルチェ素子５との接触熱抵抗と支持ブロック３を構成する材質の熱伝達率との比である厚さ寸法以上の厚さ（接触熱抵抗（ｍ２Ｋ／Ｗ））×材質の熱伝導率（Ｗ／ｍＫ））＞厚さ）であるか、受熱面３１ｂの面内での最大温度差が、ペルチェ素子５の高温側の伝熱面５１，５２と低温側の伝熱面５１，５２との温度差よりも大きくなる最小限の肉厚以上の厚さであるか、受熱板３１の形状が維持できる最小の肉厚以上の厚さであることが望ましい。
【００９６】
ペルチェ素子５と受熱板３１とは密着することから、受熱板３１の受熱面３１ｂはペルチェ素子５の伝熱面５１と同形状、同面積とすることが望ましい。
【００９７】
このように、受熱板３１の面積をペルチェ素子５の伝熱面５１に比べて極端に小さくしないことで、ペルチェ素子５の伝熱面５１が空気に露出している面が大きくなることを抑制することができる。このため、ペルチェ素子５面内の温度分布が偏って熱応力が発生することを防止し、ペルチェ素子５の耐久性を確保することができる。また、受熱板３１の面積をペルチェ素子５の伝熱面５１に比べて極端に大きくしないことで、支持ブロック３以外の物体を加熱、冷却することを抑制することができる。
【００９８】
ペルチェ素子５は、支持ブロック３に熱的に連結されており、支持ブロック３を加熱・冷却することにより反応容器２に保持された試液１の温度を調整する部材であり、反応容器２のうち、円錐形の母線２３の部分に平行になるように配置されている。なお、厳密に円錐形の母線２３の部分に平行である必要はなく、±５度程度のずれは許容される。
【００９９】
ペルチェ素子５としては、伝熱方向の厚さが薄く、伝熱面５１，５２が長方形または正方形の形状であるものを用いる。なお、その他の特性、組成などは特に限定されず、求められるランプレートに応じた適切なものを用いることができ、例えばビスマステルル（Ｂｉ２Ｔｅ３）系化合物などが用いられる。
【０１００】
ペルチェ素子５の伝熱面５１は支持ブロック３と接しており、伝熱面５２はヒートシンク６と接している。これらの伝熱面５１，５２には、熱的結合を良好にすることを目的として、伝熱グリースや熱伝導グリースが塗布されていることが望ましい。伝熱グリースや熱伝導グリースの詳細も特に限定されず、用いるペルチェ素子５と支持ブロック３の特性に応じて適切なものを用いることが望ましい。
【０１０１】
ペルチェ素子５には伝熱面５１，５２の間の輸送熱量（単位ワット）の最大の出力が決まっており、本実施例のサーマルサイクラー１６０では、この最大出力の時の温度変化がランプレートとなる。
【０１０２】
図２に戻り、ヒートシンク６は、ペルチェ素子５の制御を容易にするために、ペルチェ素子５の動作にかかわらず伝熱面５２の温度をほぼ一定に保つ目的で置かれる。そのため、ペルチェ素子５からの熱量の授受により温度が変化しない程度に熱容量が大きいことが望ましく、熱伝導率、比熱、密度のそれぞれが大きな金属を用いるとともに、その体積をペルチェ素子５などに比べて大きくすることが望ましい。
【０１０３】
また、ヒートシンク６の温度を室温などの環境温度に近く保つために、ヒートシンク６のペルチェ素子５と接する以外の面に放熱フィンを設けることができる。また、ファンなどを設けて、室温の空気をあてるなどの方法を講じて、より室温に保つことができる。
【０１０４】
更に、本実施例のサーマルサイクラー１６０が複数ある装置においては、一つの大きなヒートシンク６を複数のサーマルサイクラー１６０で兼用することができる。
【０１０５】
断熱スペーサ７は、ペルチェ素子５の伝熱面５１，５２以外の面からの放熱・入熱を遮断するとともに、ペルチェ素子５および支持ブロック３の位置を決定するための固定枠の役割を持つ。このため、ペルチェ素子５と支持ブロック３の受熱板３１の厚さをあわせた厚さを有する板で、支持ブロック３の受熱板３１やペルチェ素子５が収まり、板の平面方向の位置を決定できるような穴が開いていることが望ましい。
【０１０６】
断熱スペーサ７は、図２に示す締結ネジ９によりヒートシンク６に対して固定される。更に、断熱スペーサ７は、支持ブロック３とペルチェ素子５をブロック固定部材８でヒートシンク６へ押し付けるために、ブロック固定部材８を固定する基盤となる。
【０１０７】
断熱スペーサ７は、例えば耐熱性プラスティックやセラミックスなどの、支持ブロック３やヒートシンク６等に比べて熱伝導率が低い材料を用いる。
【０１０８】
図２に示すように、ブロック固定部材８を固定ネジ８ａで締結する際には、断熱性を確保するために、ブロック固定部材８を固定する固定ネジ８ａと締結ネジ９とを別体とすることが望ましい。
【０１０９】
図５は本実施例のサーマルサイクラー１６０の一例を示す組み上がりの状態を示す外観図である。図５においてブロック固定部材８は３つとしているが、支持ブロック３とペルチェ素子５が脱落しないように必要な個数だけ設ければよい。
【０１１０】
さらに、従来技術の支持ブロックの一例（図６、および図７）を用いて、本発明の支持ブロックの一例（図８）を説明する。
【０１１１】
図６は、比較のために、従来技術のサーマルサイクラーの支持ブロックの一例を示す断面図である。
【０１１２】
図６に示す支持ブロック１００３の受熱板１０３１は、水平に設置されたペルチェ素子１００５と接するように、同じく水平な平板となっている。ホルダ部１３０２は円柱または多角形の柱であり、その中心軸１０１０は鉛直方向でペルチェ素子１００５の伝熱面の中央に位置している。反応容器１００２は挿入深さ１３０２ｂだけホルダ部１３０２に挿入されている。
【０１１３】
図６では省略されているが、この例でも図２に示した本発明と同様に断熱スペーサ、ブロック固定部材、締結ネジ、ヒートシンクは同様にあるものとする。この例で示す支持ブロック１００３は、上方からの光の照射蛍光度の計測を行うタイプの既存のＰＣＲ装置のサーマルサイクラーで用いられている。
【０１１４】
図７も、比較のために、従来技術のサーマルサイクラーの支持ブロックの一例を示す断面図である。
【０１１５】
図７に示す支持ブロック１００３Ａは、図６で説明した支持ブロック１００３と各要素の位置関係はほぼ同じである。異なる点は、ホルダ部１３０２Ａの外形が柱状ではなく、反応容器１００２を一定の肉厚１３０２ａで覆った円錐形である。このような形状にすると、支持ブロック１００３Ａの体積は最小に出来るので、ペルチェ素子１００５の熱輸送量が同じならランプレートは最大になるはずである。
【０１１６】
図８は本実施例のサーマルサイクラー１６０の支持ブロックの一例を示す断面図である。以下、図７で説明した従来技術の支持ブロック１００３Ａの形態と本発明の支持ブロック３の形態との違いを説明する。
【０１１７】
図８に示すように、本実施例の支持ブロック３のホルダ部３２は、反応容器２を一定の厚さ３２ａで覆った円錐形である。またこの円錐形は、ペルチェ素子５の中心線５ａと反応容器２の中心軸２４とが、試液１の重心１ｂで交わるように配置する。更に、支持ブロック３のうちホルダ部３２は、受熱板３１に対して、ペルチェ素子５の伝熱面５１の平面領域の中心線５ａ上に反応容器２に保持された試液１の重心１ｂが配置されるように反応容器２を支持する。
【０１１８】
上述のように、ホルダ部３２は、反応容器２の円錐形の母線２３に相当する部分で受熱板３１と接するが、試液１の量はいつも同じであるとは限らない。そこで、おおよその目安として、試液１の重心１ｂは、試液１の最大量と最小量との中間の液量に相当する液量の時の重心位置とすることが望ましい。すなわち、厳密に中心線５ａ上に試液１の重心１ｂが配置される必要はなく、多少の誤差は許容される。
【０１１９】
このようにして、ペルチェ素子５を鉛直方向に対して斜めに、かつ反応容器２の円錐形の母線２３に沿うように配置することで、ペルチェ素子５から支持ブロック３の最も遠い部分までの距離３１ｃが最小となるように反応容器２を支持することができる。
【０１２０】
従って、伝熱速度に依存した瞬時の支持ブロック３内の温度差が最小となり、支持ブロック３のいずれかの場所で計測した温度が反応容器２の支持ブロック３と接している部分の温度と最小の誤差で一致することができる。
【０１２１】
なお、ペルチェ素子５とそれをほぼ覆う受熱板３１は正方形あるいは長方形であるが、長方形であるなら短辺が水平となるように設置した方が、受熱板３１内の温度が均一になる傾向があり望ましい。ただしこれは大きな差とはならないので、どのように配置しても良い。
【０１２２】
上述した図８で説明した支持ブロック３のホルダ部３２とペルチェ素子５の位置関係は、反応容器２の円錐形の頂角が９０度よりも大きいときにはその効果を最大限に得ることが困難になる可能性がある。そのような場合には図７に示した形態とすることも可能であるが、上方から蛍光度を測定するために少ない試液でも深さが確保できるように、反応容器２の円錐形の頂角は２０度前後とすることが望ましい。
【０１２３】
図９は、同一の熱輸送量の条件での数値伝熱シミュレーションによる温度変化の様子からランプレートと支持ブロック内温度差を計算により求めた結果である。図９では、同一等量の試液、同一形状の反応容器、および同一仕様のペルチェ素子を用いる条件とした。また、同一の挿入深さ３２ｂとした図６乃至図８に示した形状の支持ブロックを用いる条件とした。
【０１２４】
この数値シミュレーションは、実測したブロック温度をプラス・マイナス０．２度の精度で予測できており、十分な予測精度があると考えられる。
【０１２５】
ランプレートは、支持ブロックに設置した温度センサが計測した温度が設定した温度差まで変化するのにかかった時間で温度差を除して求めるので、実験で得ることができるが、支持ブロック内温度差はランプレートの設定温度差に達した瞬間のブロック内の最高温度と最低温度の差であるので計測できない。したがってこのシミュレーションを用いて予測した。
【０１２６】
図９のグラフは、横軸に支持ブロックの体積、図９中左側の縦軸にランプレート、右側の縦軸にブロック内温度差を示している。
【０１２７】
図９中、プロット８１ａは図８に示す本発明の支持ブロック３のランプレート、プロット８２ａが同じく本発明の支持ブロック３でのブロック内温度差での計算結果を示している。
【０１２８】
図９中、プロット８１ｂ１，８１ｂ２，８１ｂ３は図６に示す従来技術の支持ブロック１００３でのランプレートの結果であり、プロット８２ｂ１，８２ｂ２，８２ｂ３は図６に示す従来技術の支持ブロック１００３でのブロック内温度差の結果である。図６に示す形態のブロックは３つ試作しており、それぞれ体積を異なるようにした。
【０１２９】
更に、図９中、プロット８１ｃとプロット８２ｃは、図７に示す従来技術の支持ブロック１００３Ａにおける受熱板１３０１Ａの板厚１３０１ａとホルダ部１３０２Ａの肉厚１３０２ａを、図８の形態のプロット８１ａとプロット８２ａの結果を与えた支持ブロック３と等しくしたブロックで得られた結果である。
【０１３０】
図９において、プロット８１ｃやプロット８２ｃがプロット８１ａやプロット８２ａに比べて体積が若干小さいのは、受熱板とホルダ部との接合部分のフィレットの分の体積の差である。
【０１３１】
図９に示すように、明らかにブロック体積が小さいほどランプレートが大きくなる。また、本発明の配置であるプロット８１ａのランプレートは、ほぼ体積が等しいプロット８１ｃのランプレートよりも大きくなっている。さらに、プロット８２ｂやプロット８２ｃに示すように、ブロック体積の減少、つまりランプレートの上昇とともにブロック内温度差が大きくなり、ブロックに設置した温度センサの温度測定値が誤差を持つことになる。
【０１３２】
また、図９に示すように、本発明の支持ブロック３の結果であるプロット８２ｂではほぼ同じ体積のプロット８２ｃに比べてブロック内温度差が明らかに小さく、ランプレートが大きいにも関わらず温度センサ４の温度測定値の誤差を小さくできることが分かる。
【０１３３】
次に、本実施例の効果について説明する。
【０１３４】
上述した本発明の実施例１のリアルタイムＰＣＲ装置１０００は、サーマルサイクラー１６０と、サーマルサイクラー１６０により温度が調整された試液１の蛍光特性を測定する測定部１６５と、を備えている。
【０１３５】
このうちサーマルサイクラー１６０は、反応容器２を支持する支持ブロック３と、支持ブロック３に熱的に連結されており、支持ブロック３を加熱・冷却することにより反応容器２に保持された試液１の温度を調整するペルチェ素子５と、支持ブロック３の温度を計測する温度センサ４と、温度センサ４によって計測された支持ブロック３の温度に基づきペルチェ素子５へ供給する電流および電圧の制御を行う温度調整部２３０と、を備え、反応容器２として、上部２１が開口し、下部へ向かって先細りになる円錐形部を有している反応容器２が使用され、ペルチェ素子５は、反応容器２のうち、円錐形の母線２３の部分に平行になるように配置されている。
【０１３６】
これによって、上方から蛍光度を測定する方式で反応容器２を下方先細りの円錐形としたときに、一定のペルチェ素子５の能力に対して支持ブロック３のランプレートを従来に比べて大きくすることができるとともに、温度を時間的に変化しているときの支持ブロック３内の温度差を従来に比べて小さくすることができる。支持ブロック３のランプレートを向上することにより、ＰＣＲ装置自体の温調にかかわる時間を短縮することができ、臨床検査時間を短縮することが出来、装置全体の利便性を向上できる。
【０１３７】
また、支持ブロック３は、ペルチェ素子５の伝熱面５１の平面領域の中心線５ａ上に反応容器２に保持された試液１の重心１ｂが配置されるように反応容器２を支持するとともに、伝熱面５１から支持ブロック３の最も遠い部分までの距離３１ｃが最小となるように反応容器２を支持するため、支持ブロック３の体積を最小にすることができる。よって支持ブロック３のランプレートをより大きく保つことができ、検査時間の短縮をより容易に図ることができる。
【０１３８】
更に、支持ブロック３は、反応容器２の外形と同一の形状のホルダ穴３ａを形成するホルダ部３２と、ホルダ部３２と熱的に連結され、ペルチェ素子５の伝熱面５１との熱の授受を行う受熱板３１と、を有することで、ペルチェ素子５から支持ブロック３への熱の伝導を効率的に行うことができ、ランプレートの更なる向上を図ることができる。
【０１３９】
また、受熱板３１のペルチェ素子５との受熱面３１ｂは、ペルチェ素子５と同形状、同面積であることにより、ペルチェ素子５の伝熱面５１が空気に露出している面が大きくなることを抑制することができ、ペルチェ素子５面内の温度分布が偏って熱応力が発生することを防止し、ペルチェ素子５の耐久性を確保することができる。
【０１４０】
更に、受熱板３１の受熱面３１ｂに垂直な方向の厚さ３１ａは、ペルチェ素子５との接触熱抵抗と支持ブロック３を構成する材質の熱伝達率との比である厚さ寸法以上の厚さであること、受熱板３１の受熱面に垂直な方向の厚さ３１ａは、受熱面３１ｂの面内での最大温度差が、ペルチェ素子５の高温側の伝熱面５１，５２と低温側の伝熱面５１，５２との温度差よりも大きくなる最小限の肉厚以上の厚さであること、受熱板３１の受熱面３１ｂに垂直な方向の厚さ３１ａは、受熱板３１の形状が維持できる最小の肉厚以上の厚さであることで、ペルチェ素子５および支持ブロック３の耐久性を向上させることができる。
【０１４１】
更に、支持ブロック３は、ホルダ部３２と受熱板３１とを接続するフィレット３３を更に有することで、支持ブロック３内の温度差をより小さくすることができる、との効果が得られる。
【０１４２】
また、リアルタイムＰＣＲ装置１０００の測定部１６５が、試液１を保持する反応容器２の上方側に配置されたことにより、反応容器２として、先端２２が先細りの円錐形状のものをより容易に用いることが可能となる。
【０１４３】
更に、リアルタイムＰＣＲ装置１０００が試液１を作成する調液部を更に備えたことで、検査員の負担を軽減することができ、検査結果の出力までの労力を軽減することができる。
【０１４４】
なお、本実施例ではサーマルサイクラー１６０がリアルタイムＰＣＲ装置１０００に搭載されている場合について説明したが、本実施例のサーマルサイクラー１６０はそれ自体で単独の装置とすることができる。この場合は、調液や測定を他の装置や検査員、研究員自身で行うことになる。
【０１４５】
また、リアルタイムＰＣＲ装置が調液部を備えている場合について説明したが、調液のみを検査員や研究員自身で行い、本実施例のサーマルサイクラー１６０と測定部１６５とを搭載したリアルタイムＰＣＲ装置により核酸分析を行うことができる。
【０１４６】
更に、本実施例のサーマルサイクラー１６０がリアルタイムＰＣＲ装置１０００に９個搭載される場合について説明したが、サーマルサイクラー１６０の搭載数位は特に限定されず、適宜必要な数を搭載することができる。
【０１４７】
また、サーマルサイクラー１６０と調液部や測定部１６５との位置関係についても図１に示す形態に限定されず、適宜変更可能である。
【０１４８】
＜実施例２＞  
本発明の実施例２のサーマルサイクラーおよびそれを備えたリアルタイムＰＣＲ装置について図１０を用いて説明する。実施例１と同じ構成には同一の符号を示し、説明は省略する。以下の実施例においても同様とする。
【０１４９】
図１０は本実施例のサーマルサイクラー１６０の温度制御システムを説明するブロック図である。
【０１５０】
図１０に示したサーマルサイクラー１６０Ａにおいては、実施例１と同様に、試液１、反応容器２、支持ブロック３、温度センサ４、ペルチェ素子５を備えている。
【０１５１】
また、図１０に示すように、温度調整部２３０は、温度センサ４によって計測された支持ブロック３の温度から、支持ブロック３の温度の時間変化を微分／積分し、ペルチェ素子５への入力電流／電圧値から支持ブロック３への入熱量を計算するために、リアルタイムＰＣＲ制御系２３１、リアルタイムのブロック温度の情報を取得する温度データ取得部２３２、ペルチェ入力電流電圧検出部２３３、時間積分部２３４、時間微分部２３５、輸送熱量算出部２３６、試液熱容量算出部２３７、試液温度算出部２３９、ＰＣＲサイクルコントローラ２４０、ドライバー電源２４１を有している。
【０１５２】
温度調整部２３０の各ユニットは、様々なプログラムに基づいて実行される。これらのプログラムは内部記録媒体や外部記録媒体等に格納されており、ＣＰＵによって読み出され、実行される。
【０１５３】
なお、動作の制御処理は、１つのプログラムにまとめられていても、それぞれが複数のプログラムに別れていてもよく、それらの組み合わせでもよい。また、プログラムの一部または全ては専用ハードウェアで実現してもよく、モジュール化されていても良い。
【０１５４】
試液１が反応容器２に分注されてＰＣＲサイクルが開始できるようになると、温度調整部２３０によって温度制御が実行される。
【０１５５】
最初に、リアルタイムＰＣＲ制御系２３１からの命令によりＰＣＲサイクルコントローラ２４０が温度制御を開始する。
【０１５６】
ＰＣＲサイクルコントローラ２４０は、現状の試液１の温度の値とＰＣＲサイクルのタイムチャート、試液１の設定温度とを比較することで現時点でのペルチェ素子５の動作状態を決定して、ペルチェ素子５のドライバー電源２４１を動作させる。
【０１５７】
試液１が分注された状態ではほぼ室温に近い温度であり、ＰＣＲサイクルで設定される温度はこれよりも高い。このため、最初は必ず温度上昇の動作が行われる。この時点で試液１の熱容量は分からない。そこで、ドライバー電源２４１はペルチェ素子５の最大能力で支持ブロック３へ熱輸送を行うように電流電圧をペルチェ素子５へ供給する。
【０１５８】
このときの支持ブロック３の温度変化の様子は温度センサ４で逐次計測され、リアルタイムのブロック温度情報となる。
【０１５９】
同時に、ドライバー電源２４１がペルチェ素子５に供給している電流電圧の情報はペルチェ入力電流電圧検出部２３３より検出され、輸送熱量算出部２３６で温度と同様にペルチェ素子の熱輸送量がリアルタイムデータ化される。
【０１６０】
温度データ取得部２３２で取得された支持ブロック３の温度データは、時間積分部２３４で逐次時間積分され、時間微分部２３５で逐次時間微分される。ペルチェ素子５が一定熱輸送量で動作しているときの温度の時間微分の逆数がランプレートである。
【０１６１】
試液熱容量算出部２３７では、輸送熱量算出部２３６で得られたペルチェ素子５の熱輸送量が一定である期間に取得したランプレートを２３６で得られたペルチェ素子５の熱輸送量で除して熱容量を求める。
【０１６２】
求める熱容量は、支持ブロック３、反応容器２、試液１の全熱容量を示している。このうち、支持ブロック３、反応容器２の熱容量は、それらの材質や体積が既知であるので、あらかじめ求めることができる。すなわち、これら支持ブロック３や反応容器２の熱容量を求められた熱容量から差し引くことで試液１の熱容量を求めることができる。この熱容量を試液熱容量一時記憶データ２３８として記録する。
【０１６３】
温度の時間積分部２３４の値は支持ブロック３、反応容器２、試液１の全体に加えられた熱量の総和を表しており、熱容量の比率で案分すると試液１に加えられた熱量となる。したがって、試液温度算出部２３９において、これらの熱量の計算を、試液熱容量一時記憶データ２３８を使用して行うことにより、リアルタイムの試液１の平均温度を算出することが出来る。
【０１６４】
以上により、ＰＣＲサイクルコントローラ２４０は試液１の正確な温度をもとに、温度制御を行うことが出来るようになる。以上で得られる試液１の温度の正確さは支持ブロック３内の瞬時の温度差と等しいので、上述した実施例１で述べたブロック内温度差の小さい支持ブロック３の使用が前提となる。
【０１６５】
その他の構成・動作は前述した実施例１のサーマルサイクラーおよびそれを備えたリアルタイムＰＣＲ装置と略同じ構成・動作であり、詳細は省略する。
【０１６６】
本発明の実施例２のサーマルサイクラーおよびそれを備えたリアルタイムＰＣＲ装置においても、前述した実施例１のサーマルサイクラーおよびそれを備えたリアルタイムＰＣＲ装置とほぼ同様な効果が得られる。
【０１６７】
＜その他＞  
なお、本発明は、上記の実施例に限定されるものではなく、様々な変形例が含まれる。上記の実施例は本発明を分かりやすく説明するために詳細に説明したものであり、必ずしも説明した全ての構成を備えるものに限定されるものではない。
【符号の説明】
【０１６８】
１…試液
１ｂ…重心
２…反応容器
３…支持ブロック
３ａ…ホルダ穴
４…温度センサ
５…ペルチェ素子
５ａ…中心線
６…ヒートシンク
７…断熱スペーサ
８…ブロック固定部材
８ａ…固定ネジ
９…締結ネジ
２１…上部
２２…先端
２３…母線
２４…中心軸
３１…受熱板
３１ａ…厚さ
３１ｂ…受熱面
３１ｃ…距離
３２…ホルダ部
３２ａ…厚さ
３２ｂ…挿入深さ
３３…フィレット
５１，５２…伝熱面
８１ａ…プロット
８２ａ…プロット
１６０，１６０Ａ…サーマルサイクラー
１６５…測定部
２００…制御装置
２３０…温度調整部（入熱量調整部）
２３１…リアルタイムＰＣＲ制御系
２３２…温度データ取得部
２３３…ペルチェ入力電流電圧検出部
２３４…時間積分部
２３５…時間微分部
２３６…輸送熱量算出部
２３７…試液熱容量算出部
２３８…試液熱容量一時記憶データ
２３９…試液温度算出部
２４０…サイクルコントローラ
２４１…ドライバー電源
１０００…リアルタイムＰＣＲ装置
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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