(57)【要約】  本発明は、生理活性ポリペプチド、リポ多糖（ＬＰＳ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）またはポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ））で処理された、腫瘍壊死因子刺激因子１０（ＴＲＡＩＬ）を産生する間葉系組織由来の接着性細胞および医薬上許容される担体および／または賦形剤を含む、がんの治療のための医薬組成物を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生理活性ポリペプチド、リポ多糖（ＬＰＳ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）またはポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ））で処理された、腫瘍壊死因子刺激因子１０（ＴＲＡＩＬ）を産生する間葉系組織由来の接着性細胞および医薬上許容される担体および／または賦形剤を含む、がんの治療のための医薬組成物。
【請求項２】
生理活性ポリペプチドが、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦβ）、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）およびオンコスタチンＭからなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
生理活性ポリペプチドが、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）からなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
間葉系組織由来の接着性細胞が、間葉系組織由来幹細胞（ＭＳＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、Ｍｕｓｅ細胞、骨髄組織、胞衣組織、軟骨組織、骨膜組織、滑膜組織、骨格筋組織に由来する細胞、幹細胞および間質細胞、ならびに経血細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、請求項１〜３のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項５】
間葉系組織由来の接着性細胞が、ＡＤＳＣ、ＡＤＭＰＣ、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織に由来する細胞、および滑膜組織に由来する細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、請求項１〜３のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項６】
がんの治療のための医薬組成物の製造方法であって、下記工程：
（ａ）間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理し、次いで、
（ｂ）工程（ａ）にて処理された、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞を医薬上許容される担体および／または賦形剤と混合する
を含む方法。
【請求項７】
生理活性ポリペプチドが、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦβ）、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）およびオンコスタチンＭからなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、請求項６記載の方法。
【請求項８】
生理活性ポリペプチドが、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）からなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、請求項６記載の方法。
【請求項９】
間葉系組織由来の接着性細胞が、間葉系組織由来幹細胞（ＭＳＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、Ｍｕｓｅ細胞、骨髄組織、胞衣組織、軟骨組織、骨膜組織、滑膜組織、骨格筋組織に由来する細胞、幹細胞および間質細胞、ならびに経血細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、請求項６〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
間葉系組織由来の接着性細胞が、ＡＤＳＣ、ＡＤＭＰＣ、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織に由来する細胞、および滑膜組織に由来する細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、請求項６〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれか１項記載の医薬組成物の有効性を調べるための方法であって、がん細胞に請求項１〜５のいずれか１項記載の医薬組成物を添加し、がん細胞の生存率または死滅率を調べることを含む方法。
【請求項１２】
請求項１〜５のいずれか１項記載の医薬組成物を用いるがんの治療の有効性を予測する方法であって、がん細胞がデスレセプターを有しているかどうかを調べること、および／またはデスレセプターの量を調べることを含む方法。
【請求項１３】
生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）および医薬上許容される担体または賦形剤を含むがんの治療のための医薬組成物であって、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に投与される医薬組成物。
【請求項１４】
生理活性ポリペプチドが、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦβ）、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）およびオンコスタチンＭからなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、請求項１３記載の医薬組成物。
【請求項１５】
生理活性ポリペプチドが、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）からなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、請求項１３記載の医薬組成物。
【請求項１６】
間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理することを含む、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞の製造方法。
【請求項１７】
生理活性ポリペプチドが、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦβ）、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）およびオンコスタチンＭからなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
生理活性ポリペプチドが、ＩＦＮβ、ＩＦＮγおよびＴＮＦαからなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、請求項１６記載の方法。
【請求項１９】
間葉系組織由来の接着性細胞が、間葉系組織由来幹細胞（ＭＳＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、Ｍｕｓｅ細胞、骨髄組織、胞衣組織、軟骨組織、骨膜組織、滑膜組織、骨格筋組織に由来する細胞、幹細胞および間質細胞、ならびに経血細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、請求項１６〜１８のいずれか１項記載の方法。
【請求項２０】
間葉系組織由来の接着性細胞が、ＡＤＳＣ、ＡＤＭＰＣ、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織に由来する細胞、および滑膜組織に由来する細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、請求項１６〜１８のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんの治療のための医薬組成物等に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんの主な治療には外科治療、薬物療法および放射線治療がある。薬物治療のなかでもがん細胞に特異的な分子を標的とする分子標的治療が注目されている。最近になって、がん細胞に特異的に発現するデスレセプター（death receptor）を標的としたがん治療の研究が進んでいる。デスレセプターを刺激することにより、がん細胞のアポトーシスを誘導することができる。デスレセプターのリガンドとして腫瘍壊死因子刺激因子１０（ＴＮＦＳＦ１０）（ＴＲＡＩＬともいう）が知られている（非特許文献１等参照）。このサイトカインを癌治療に用いるための研究が行われている。しかしながら、ＴＲＡＩＬは血中での分解が早く、がん細胞を効果的に死滅させることができないという問題がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Pan G et al. Science 1997, 276, 111-113
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ＴＲＡＩＬが血中で早く分解されるという問題を解決し、ＴＲＡＩＬを用いてがん細胞を効果的に死滅させることが必要であった。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ね、生理活性ポリペプチド、リポ多糖（ＬＰＳ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）またはポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ））で処理された間葉系組織由来の接着性細胞がＴＲＡＩＬを産生することを見出し、本発明を完成させるに至った。【０００６】
すなわち本発明は以下のものを提供する。
（１）生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理された、腫瘍壊死因子刺激因子１０（ＴＲＡＩＬ）を産生する間葉系組織由来の接着性細胞および医薬上許容される担体および／または賦形剤を含む、がんの治療のための医薬組成物。
（２）生理活性ポリペプチドが、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦβ）、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）およびオンコスタチンＭからなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、（１）記載の医薬組成物。
（３）生理活性ポリペプチドが、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）からなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、（１）記載の医薬組成物。
（４）間葉系組織由来の接着性細胞が、間葉系組織由来幹細胞（ＭＳＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、Ｍｕｓｅ細胞、骨髄組織、胞衣組織、軟骨組織、骨膜組織、滑膜組織、骨格筋組織に由来する細胞、幹細胞および間質細胞、ならびに経血細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、（１）〜（３）のいずれか記載の医薬組成物。
（５）間葉系組織由来の接着性細胞が、ＡＤＳＣ、ＡＤＭＰＣ、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織に由来する細胞、および滑膜組織に由来する細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、（１）〜（３）のいずれか記載の医薬組成物。
（６）がんの治療のための医薬組成物の製造方法であって、下記工程：
（ａ）間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理し、次いで、
（ｂ）工程（ａ）にて処理された、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞を医薬上許容される担体および／または賦形剤と混合する
を含む方法。
（７）生理活性ポリペプチドが、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦβ）、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）およびオンコスタチンＭからなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、（６）記載の方法。
（８）生理活性ポリペプチドが、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）からなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、（６）記載の方法。
（９）間葉系組織由来の接着性細胞が、間葉系組織由来幹細胞（ＭＳＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、Ｍｕｓｅ細胞、骨髄組織、胞衣組織、軟骨組織、骨膜組織、滑膜組織、骨格筋組織に由来する細胞、幹細胞および間質細胞、ならびに経血細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、（６）〜（８）のいずれか記載の方法。
（１０）間葉系組織由来の接着性細胞が、ＡＤＳＣ、ＡＤＭＰＣ、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織に由来する細胞、および滑膜組織に由来する細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、（６）〜（８）のいずれか記載の方法。
（１１）（１）〜（５）のいずれか記載の医薬組成物の有効性を調べるための方法であって、がん細胞に（１）〜（５）のいずれか記載の医薬組成物を添加し、がん細胞の生存率または死滅率を調べることを含む方法。
（１２）（１）〜（５）のいずれか記載の医薬組成物を用いるがんの治療の有効性を予測する方法であって、がん細胞がデスレセプターを有しているかどうかを調べること、および／またはデスレセプターの量を調べることを含む方法。
（１３）生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）および医薬上許容される担体または賦形剤を含むがんの治療のための医薬組成物であって、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に投与される医薬組成物。
（１４）生理活性ポリペプチドが、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦβ）、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）およびオンコスタチンＭからなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、（１３）記載の医薬組成物。
（１５）生理活性ポリペプチドが、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）からなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、（１３）記載の医薬組成物。
（１６）間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理することを含む、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞の製造方法。
（１７）生理活性ポリペプチドが、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦβ）、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）およびオンコスタチンＭからなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、（１６）記載の方法。
（１８）生理活性ポリペプチドが、ＩＦＮβ、ＩＦＮγおよびＴＮＦαからなる群より選択される１種またはそれ以上のポリペプチドである、（１６）記載の方法。
（１９）間葉系組織由来の接着性細胞が、間葉系組織由来幹細胞（ＭＳＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、Ｍｕｓｅ細胞、骨髄組織、胞衣組織、軟骨組織、骨膜組織、滑膜組織、骨格筋組織に由来する細胞、幹細胞および間質細胞、ならびに経血細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、（１６）〜（１８）のいずれか記載の方法。
（２０）間葉系組織由来の接着性細胞が、ＡＤＳＣ、ＡＤＭＰＣ、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織に由来する細胞、および滑膜組織に由来する細胞からなる群より選択される１種またはそれ以上の細胞である、（１６）〜（１８）のいずれか記載の方法。
【発明の効果】
【０００７】
ＴＲＡＩＬは、がん細胞上のデスレセプターに結合し、がん細胞のアポトーシスを誘発する。しかし、ＴＲＡＩＬは血中での分解が早く、がん細胞を効果的に死滅させることができないという問題がある。そこで、本発明においては、生理活性ポリペプチドで処理された、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞を用いる。かかる細胞を用いると、ＴＲＡＩＬが患者体内で分解されても上記細胞から補充されるので、がん細胞を効果的に死滅させることができ、高い治療効果が得られる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）、胎盤由来細胞（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌｓ）および臍帯由来幹細胞（ＵＣ−ＭＳＣ）をＩＦＮβで処理した場合のＴＲＡＩＬの発現のｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙをプロットしたグラフである。
【図２】図２は、ＩＦＮ−βで処理された脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、胎盤由来細胞（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌｓ）および骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）からのＴＲＡＩＬ産生量を示すグラフである。縦軸はＴＲＡＩＬ産生量（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【図３】図３は、患者由来腫瘍移植片（ＰＤＸ）植え継ぎ後４週にて各マウスから摘出した腫瘍の写真である。Ａは、ＰＤＸ植え継ぎと同時にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを経血管的に投与したマウスから摘出した腫瘍である。Ｂは、ＰＤＸ植え継ぎ１週間後にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを経血管的に投与したマウスから摘出した腫瘍である。Ｃは、ＰＤＸ植え継ぎと同時にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを腹腔内投与したマウスから摘出した腫瘍である。Ｄは、ＰＤＸ植え継ぎ１週間後にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを腹腔内投与したマウスから摘出した腫瘍である。Ｅは、ＰＤＸ植え継ぎ１週間後にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを腫瘤に直接投与したマウスから摘出した腫瘍である。Ｆは、ＰＤＸ植え継ぎのみのコントロール群マウスから摘出した腫瘍である。
【図４】図４は、患者由来腫瘍移植片（ＰＤＸ）植え継ぎ後４週にて各マウスから摘出した腫瘍の容積を比較した図である。Ａ−Ｆの符号の意味は図３と同じである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、１の態様において、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理された、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞および医薬上許容される担体および／または賦形剤を含む、がんの治療のための医薬組成物を提供する。
【００１０】
生理活性ポリペプチドは、生体の特定の生理的調節機能に対して作用するポリペプチドである。ポリペプチドは、２つ以上のアミノ酸残基がペプチド結合を介して結合した物質をいう。
【００１１】
本発明で用いられる生理活性ポリペプチドは、間葉系組織由来の接着性細胞に作用して、そのＴＲＡＩＬの産生を増加させるもの、あるいはＴＲＡＩＬの産生が認められない間葉系組織由来の接着性細胞にＴＲＡＩＬを産生させるものであれば、いずれのポリペプチドであってもよい。本発明で用いられる好ましい生理活性ポリペプチドとしては、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、ホルモン等が例示されるが、これらに限定されない。本発明において好ましく用いられる生理活性ポリペプチドはサイトカインである。好ましいサイトカインとしてはインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン、オンコスタチンＭなどが例示される。より好ましいサイトカインとしてはインターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦβ）、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）およびオンコスタチンＭなどが例示される。さらに好ましいサイトカインとしてはＩＦＮβ、ＩＦＮγおよびＴＮＦαなどが例示される。
【００１２】
本発明で用いられる生理活性ポリペプチドは、その変異体も包含する。本発明において、変異体は、元の生理活性ポリペプチドと同様の生物学的活性を有するものである。変異体は、元のポリペプチドと比較して、ポリペプチドを構成するアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されているポリペプチドであってもよい。置換、欠失、挿入または付加されるアミノ酸残基の数は特に限定されない。例えば、置換、欠失、挿入または付加されるアミノ酸残基は１個〜数個であってもよい。また例えば、変異体ポリペプチドは、元のポリペプチドに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、例えば９５％以上９７％以上または９９％以上のものであってもよい。さらに変異体は、ポリペプチドを構成するアミノ酸残基が修飾されているもの、あるいはβ−アラニンやＤ−アミノ酸のような非天然アミノ酸を含むものであってもよい。修飾はあらゆる種類の標識であってよい。メチル化、ハロゲン化、配糖体化などの化学修飾であってもよく、蛍光標識や放射性標識などの標識付加であってもよい。また、変異体は、一部のアミノ酸残基がペプチド結合以外によって結合されているものであってもよい。
【００１３】
ＬＰＳは様々な種類のものが公知であり、いずれのＬＰＳを本発明に用いてもよい。
【００１４】
ｄｓＲＮＡは、二本の相補的な配列を持つＲＮＡ鎖が二重鎖を形成したものである。二本のＲＮＡ鎖の相補性は１００％でなくてもよい。ｄｓＲＮＡはアデニン、グアニン、シトシン、ウラシル以外の塩基を含んでいてもよく、修飾塩基、人工塩基を含んでいてもよい。本発明に使用可能なｄｓＲＮＡの配列、長さは特に限定されず、いずれのｄｓＲＮＡを用いてもよい。
【００１５】
ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、イノシン酸のポリマーとシチジル酸のポリマーから構成されるミスマッチ二本鎖ＲＮＡである。ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）中の一部のイノシン酸および／またはシチジル酸が他の塩基に置き換わっていてもよい。本発明に使用可能なｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の長さは特に限定されない。
【００１６】
本発明の医薬組成物の有効成分は、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理された、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞である。ここで、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞とは、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）での処理によりＴＲＡＩＬの産生を増加させた細胞、あるいは元々はＴＲＡＩＬの産生が認められなかった細胞であるが、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）での処理によりＴＲＡＩＬを産生するようになった細胞である。細胞からのＴＲＡＩＬの産生量は、がん細胞を死滅させるに十分な量であればよい。ＴＲＡＩＬの産生の増加は、処理前と比較して例えば１０倍以上、好ましくは３０倍以上、より好ましくは５０倍以上、さらに好ましくは１００倍以上である。
【００１７】
間葉系組織由来の接着性細胞であればいずれの細胞であっても本発明に用いることができる。細胞が由来する動物はいずれの動物であってもよく、好ましくは哺乳動物であり、例えばヒトが挙げられる。間葉系組織からの接着性細胞の取得手段・方法は公知である。間葉系組織由来の接着性細胞は市販されているものであってもよく、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）（米国）、ＮＩＴＥ（日本）などの機関から分譲されるものであってもよい。あるいは、間葉系組織由来の接着性細胞を間葉系組織から得てもよい。
【００１８】
好ましい間葉系組織由来の接着性細胞としては、間葉系組織由来幹細胞（ＭＳＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、Ｍｕｓｅ細胞、骨髄組織、胞衣組織（胎盤組織、臍帯組織、羊膜組織などを含む）、軟骨組織、骨膜組織、滑膜組織、骨格筋組織に由来する細胞、幹細胞および間質細胞、ならびに経血細胞などが例示されるが、これらに限定されない。さらに好ましい間葉系組織由来の接着性細胞としては、ＡＤＳＣ、ＡＤＭＰＣ、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織または滑膜組織に由来する細胞などが例示されるが、これらに限定されない。
【００１９】
細胞を間葉系組織から得る場合は、いずれの間葉系組織から単離してもよい。間葉系組織としては、脂肪組織、骨髄組織、胞衣組織、軟骨組織、骨膜組織、滑膜組織、骨格筋組織、経血などが例示されるが、これらに限定されない。好ましい間葉系組織としては脂肪組織、骨髄組織、滑膜組織、胞衣組織が挙げられる。特に脂肪組織は体内に含まれる量が多く、細胞を多く取り出せる点で好ましい。かかる点においてＡＤＳＣおよびＡＤＭＰＣは有利である。
【００２０】
体内から間葉系組織を取り出して、培養容器中に組織を入れて培養し、容器に付着する細胞を選択的に取得することにより、接着性細胞を得ることができる。間葉系組織は、切除や吸引といった公知の手段、方法を用いて取り出すことができる。取り出した間葉系組織をそのまま培養してもよく、必要に応じて、取り出した間葉系組織を刻んだり、解したりした後、赤血球を除去し、得られた細胞集団を培養してもよい。これらの処理方法および手段、ならびに細胞培養手段、方法は公知であり、適宜選択することができる。間葉系組織由来の接着性細胞は、例えば培養容器に付着した細胞をトリプシンなどの酵素で処理することによって得てもよい。
【００２１】
生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）での間葉系組織由来の接着性細胞の処理は、細胞と生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を公知の方法にて接触させることによって行うことができる。典型的には、適当濃度の生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を含む培地にて、間葉系組織由来の接着性細胞を一定時間培養することにより、この処理を行うことができる。通常は、数ピコグラム／ｍｌ〜数百ナノグラム／ｍｌの生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を添加した培地にて間葉系組織由来の接着性細胞を培養する。培養に使用する培地は公知のものでよい。培養時間、培養温度も適宜選択することができる。必要に応じて、間葉系組織由来の接着性細胞を培養して細胞数を増加させた後、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理してもよい。間葉系組織由来の接着性細胞の集団から所望の亜集団を得て、必要に応じて亜集団を培養して細胞数を増加させた後、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理してもよい。
【００２２】
間葉系組織由来の接着性細胞を処理するために用いられる生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は１種類であってもよく、２種類以上であってもよい。
【００２３】
生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理される間葉系組織由来の接着性細胞は１種類であってもよく、２種類以上であってもよい。
【００２４】
間葉系組織由来の接着性細胞をＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理する際に、リポソームに封入されたＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を用いてもよい。
【００２５】
がんの治療は、がんの症状を緩和、改善または消失させること包含する。また、がんの治療は、がん細胞の増殖を抑制すること、がん細胞数を減少させること、がん細胞を消失させることを包含する。
【００２６】
本発明の医薬組成物はあらゆる種類のがんの治療に用いることができる。本発明の医薬組成物を用いて、例えば、胃がん、陰茎がん、各骨軟部腫瘍、肝臓がん、甲状腺がん、後腹膜腫瘍、骨転移、子宮がん、食道がん、腎がん、腎盂尿管がん、膵臓がん、精巣がん、前立腺がん、大腸がん、胆道がん、頭頸部がん、乳がん、肺がん、皮膚がん、副腎がん、膀胱がん、卵巣がん、悪性リンパ腫、白血病などを治療することができるが、これらのがんに限定されない。
【００２７】
本発明の医薬組成物を、有効成分である生理活性ポリペプチドまたはＬＰＳで処理された間葉系組織由来の接着性細胞が由来する動物種と同種の対象に投与してもよく、異種の対象に投与してもよい。例えば、ヒト由来の細胞を含む本発明の医薬組成物をヒト対象に投与してもよい。本発明の医薬組成物中の細胞は、投与される対象と同一人に由来するものであってもよく、投与される対象とは異なる人に由来するものであってもよい。
【００２８】
本発明の医薬組成物は、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理された間葉系組織由来の接着性細胞を医薬上許容される担体および／または賦形剤と混合することにより製造することができる。医薬上許容される担体や賦形剤は様々なものが公知であり、適宜選択して使用できる。例えば、本発明の医薬組成物を注射剤として用いる場合は、精製水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの担体や賦形剤に細胞を懸濁してもよい。細胞と担体および／または賦形剤との混合方法、混合手段についても公知である。
【００２９】
本発明の医薬組成物の剤形は特に限定されず、液剤、半固形剤であってもよい。本発明の医薬組成物の投与方法も限定されず、局所注射、静脈注射、輸液などにより行ってもよく、患部に塗布や噴霧する等であってもよく、カテーテルにより患部に投与してもよく、外科的手法により組織に直接移植してもよい。本発明の医薬組成物を細胞シート、細胞塊、重層化細胞シート、スポンジ担持細胞などの形態として移植してもよい。
【００３０】
本発明の医薬組成物の投与経路および投与量は、治癒すべきがんの種類や部位、症状の重さ、対象の状態などを考慮して適宜決定することができる。
【００３１】
本発明の医薬組成物は、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理された間葉系組織由来の接着性細胞以外の成分を含んでいてもよい。このような成分としては公知の抗がん剤、鎮痛剤、解熱剤、栄養剤などが例示されるが、これに限定されない。また、本発明の医薬組成物を、他の医薬組成物および／または他の療法と併用してもよい。
【００３２】
本発明は、さらなる態様において、がんの治療のための医薬組成物の製造のための、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理された間葉系組織由来の接着性細胞の使用を提供する。
【００３３】
本発明は、さらなる態様において、がんの治療に使用される、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理された間葉系組織由来の接着性細胞を提供する。
【００３４】
本発明は、さらなる態様において、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理された間葉系組織由来の接着性細胞を対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療方法を提供する。
【００３５】
本発明は、さらにもう１つの態様において、
がんの治療のための医薬組成物の製造方法であって、下記工程：
（ａ）間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理し、次いで、
（ｂ）工程（ａ）にて処理された、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞を医薬上許容される担体および／または賦形剤と混合する
を含む方法、を提供する。
【００３６】
本発明は、さらなる態様において、本発明の医薬組成物の有効性を調べる方法を提供する。該方法は、がん細胞に請求項１〜３のいずれか１項記載の医薬組成物を添加し、がん細胞の生存率または死滅率を調べることを含む。該方法は、がん患者から得られたがん細胞を用いてもよく、公知のがん細胞株を用いてもよい。培養がん細胞に本発明の医薬組成物を添加し、一定時間後に、例えばトリパンブルー染色等の公知の方法を用いてがん細胞の生存率または死滅率を調べることにより、該方法を実施してもよい。
【００３７】
本発明は、さらなる態様において、本発明の医薬組成物の有効性を調べるためのキットを提供する。該キットは、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理された、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞を含んでいてもよい。該キットはがん細胞の生存率または死滅率を調べるための手段を含んでいてもよい。
【００３８】
本発明は、さらなる態様において、本発明の医薬組成物を用いるがんの治療の有効性を予測する方法を提供する。該方法は、がん細胞がデスレセプターを有しているかどうかを調べること、および／またはデスレセプターの量を調べることを含む。該方法において、デスレセプター４および／またはデスレセプター５の有無および／または量について調べることが好ましい。これらのレセプターの有無や量を調べる手段は公知であり、リアルタイムＰＣＲや免疫染色などが例示される。がん細胞は、がん患者から取得されたものであってもよく、公知のがん細胞株であってもよい。がん患者からのがん細胞の取得方法は公知であり、生検、採血等が例示される。がん細胞におけるデスレセプター、特にデスレセプター４および／またはデスレセプター５の量が多いほど、本発明の医薬組成物を用いるがんの治療の有効性は高いと予測することができる。
【００３９】
本発明は、さらなる態様において、本発明の医薬組成物を用いるがんの治療の有効性を予測するためのキットを提供する。該キットは、デスレセプター、特にデスレセプター４および／またはデスレセプター５の有無および／または量を調べるための手段を含む。例えば、該キットは、デスレセプター、特にデスレセプター４および／またはデスレセプター５遺伝子の発現を調べるためのＲＴ−ＰＣＲ用の試薬類および／または器具を含んでいてもよく、あるいはデスレセプター、特にデスレセプター４および／またはデスレセプター５に対する標識された抗体を含んでいてもよい。
【００４０】
本発明は、さらなる態様において、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）および医薬上許容される担体または賦形剤を含むがんの治療のための医薬組成物であって、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に投与される医薬組成物を提供する。ＣＡＦは間葉系組織由来の接着性細胞の１種であり、がん微小環境の構成成分の１つである。ＣＡＦは、生理活性ポリペプチド等の上記因子が投与されるとＴＲＡＩＬの産生を増加させ、あるいはＴＲＡＩＬを産生するようになる。ＣＡＦはがん細胞に隣接しているか、あるいはその近傍に存在しているので、ＣＡＦがＴＲＡＩＬを産生すればがん細胞は効果的に死滅する。
【００４１】
上記態様の医薬組成物をＣＡＦに直接送達することが好ましい。該医薬組成物をがん患部に直接注射してもよい。また、ＣＡＦが有している細胞表面マーカーに特異的な抗体と生理活性ポリペプチドとの複合体を用いてもよく、あるいはＬＰＳ、二本鎖ＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を含有するリポソームを該医薬組成物に用いてもよい。該複合体の例として、上記抗体と生理活性ポリペプチドとの融合タンパク質が挙げられる。
【００４２】
本発明は、さらなる態様において、ＣＡＦに投与されるがんの治療のための医薬組成物の製造のための、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の使用を提供する。
【００４３】
本発明は、さらなる態様において、がんの治療に使用され、使用に際してＣＡＦに投与される、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を提供する。
【００４４】
本発明は、さらなる態様において、生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を対象のＣＡＦに投与することを含む、がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療方法を提供する。
【００４５】
本発明は、さらなる態様において、ＴＲＡＩＬを産生する間葉系組織由来の接着性細胞の製造方法を提供する。該方法は、間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチド、ＬＰＳ、ｄｓＲＮＡまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）で処理することを含む。該方法で得られた細胞は、がんの治療に使用することができる。
【００４６】
本明細書中の用語は、特に断らない限り、医学、薬学、生物学、化学等の分野において通常に理解されている意味を有する。
【００４７】
以下に実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、実施例は本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００４８】
実施例１．生理活性ポリペプチドで処理された間葉系組織由来の接着性細胞のＴＲＡＩＬ発現増強効果
（１）実験方法
（ｉ）試供細胞
試供細胞として、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）、胎盤由来細胞（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌｓ）および臍帯由来幹細胞（ＵＣ−ＭＳＣ）を用いた。
（ｉｉ）ヒト対象からの脂肪組織の採取
インフォームドコンセントを受けた女性６人から脂肪吸引手術中に廃棄される余分な脂肪組織の分譲を受けた（米国ＣｕｒｅＬｉｎｅ社）。
（ｉｉｉ）脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）、胎盤由来細胞（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌｓ）および臍帯由来幹細胞（ＵＣ−ＭＳＣ）の入手
これらの細胞はＬｏｎｚａ社より購入した。【００４９】
（ｉｖ）  ＡＤＭＰＣの単離
脂肪組織を刻み、次に、０．００８％  リベレース（Ｒｏｃｈ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ）含有ハンクス緩衝塩類溶液（ＨＢＳＳ）中、３７℃のウォーターバスにて振盪しながら１時間消化した。消化産物をＣｅｌｌ  Ｓｔｒａｉｎｅｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で濾過し、８００ｘｇにて１０分間遠心した。リンパ球分離液（ｄ＝１．０７７）（Ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ）を用い、比重法により赤血球を除去し、得られたＡＤＭＰＣを含む細胞集団を、１０％  ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含むＤＭＥＭ中に細胞を播種して細胞を付着させた後、洗浄し、ＥＤＴＡで処理して、ＡＤＭＰＣを得た。
（ｖ）脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）、胎盤由来細胞（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌｓ）および臍帯由来幹細胞（ＵＣ−ＭＳＣ）の培養
これらの細胞を、培地（６０％  ＤＭＥＭ−低グルコース、４０％  ＭＣＤＢ２０１、１０μｇ／ｍＬ  ＥＧＦ、１ｎＭ  デキサメサゾン、１００μＭ  アスコルビン酸、および５％ＦＢＳ）にてヒトフィブロネクチンコートディッシュに播種し、３から８継代し、培養細胞を得た。【００５０】
（ｖｉ）ＩＦＮ−β処理およびＴＲＡＩＬ発現強度の測定
ＩＦＮ−βを、０ｎｇ／ｍｌ、２．５ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、２０ｎｇ／ｍｌ、４０ｎｇ／ｍｌとなるように、培地（６０％  ＤＭＥＭ−低グルコース、４０％  ＭＣＤＢ２０１、１０μｇ／ｍＬ  ＥＧＦ、１ｎＭ  デキサメサゾン、１００μＭ  アスコルビン酸、および５％ＦＢＳ）に添加した。上で得られた培養細胞を、上記ＩＦＮ−β含有培地にて７２時間培養した。培地交換７２時間後にＲＬＴ  Ｂｕｆｆｅｒ  ６００ｕＬを添加して回収、ＲＮＡ抽出した。
ＲＬＴ  Ｂｕｆｆｅｒサンプルは、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ  ／  ＱＩＡＧＥＮを用いて全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡを１００ｎｇ／ｕＬになるように調製後、１アレイ当たり全ＲＮＡ  １５０ｎｇからラベルされたｃＲＮＡを合成した。合成したラベルされたｃＲＮＡは濃度、収量およびＣｙ３取込率を算出し、合成サイズ（２００−２０００ｎｔを増幅）を測定した。ラベルされたｃＲＮＡ  ６００ｎｇを６０℃でフラグメンテーションを形成させ、６５℃、１７時間でハイブリダイゼーションを行い、アレイを洗浄してスキャンし、ＴＲＡＩＬのプローブであるＡ＿２３＿Ｐ１２１２５３）のｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙをプロットした結果を図１に示す。【００５１】
（２）実験結果
図１からわかるように、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）、胎盤由来細胞（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌｓ）および臍帯由来幹細胞（ＵＣ−ＭＳＣ）において、ＩＦＮβ処理によって濃度依存的にＴＲＡＩＬ発現が増加していた。ＩＦＮβ処理によるＴＲＡＩＬ発現増加は広く間葉系幹細胞および間葉系細胞に認められることが確認された。
【実施例２】
【００５２】
実施例２．生理活性ポリペプチド処理による間葉系組織由来の接着性細胞のＴＲＡＩＬ産生
（１）実験方法
（ｉ）試供細胞
試供細胞として、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）および胎盤由来細胞（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌｓ）を用いた。
（ｉｉ）ヒト対象からの脂肪組織の採取
インフォームドコンセントを受けた女性６人から脂肪吸引手術中に廃棄される余分な脂肪組織の分譲を受けた（米国ＣｕｒｅＬｉｎｅ社）。
（ｉｉｉ）脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）および胎盤由来細胞（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌｓ）の入手
これらの細胞はＬｏｎｚａ社より購入した。【００５３】
（ｉｖ）  ＡＤＭＰＣの単離
脂肪組織を刻み、次に、０．００８％  リベレース（Ｒｏｃｈｅ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ）含有ハンクス緩衝塩類溶液（ＨＢＳＳ）中、３７℃のウォーターバスにて振盪しながら１時間消化した。消化産物をＣｅｌｌ  Ｓｔｒａｉｎｅｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で濾過し、８００ｘｇにて１０分間遠心した。リンパ球分離液（ｄ＝１．０７７）（Ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ）を用い、比重法により赤血球を除去し、得られたＡＤＭＰＣを含む細胞集団を、１０％  ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含むＤＭＥＭ中に細胞を播種して細胞を付着させた後、洗浄し、ＥＤＴＡで処理して、ＡＤＭＰＣを得た。
（ｖ）脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）および胎盤由来細胞（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌｓ）の培養
これらの細胞を、培地（６０％  ＤＭＥＭ−低グルコース、４０％  ＭＣＤＢ２０１、１０μｇ／ｍＬ  ＥＧＦ、１ｎＭ  デキサメサゾン、１００μＭ  アスコルビン酸、および５％ＦＢＳ）にてヒトフィブロネクチンコートディッシュに播種し、３から８継代し、培養細胞を得た。【００５４】
（ｖｉ）ＩＦＮ−β処理およびＴＲＡＩＬ産生量の測定
ＩＦＮ−βを１０ｎｇ／ｍｌとなるように、培地（６０％  ＤＭＥＭ−低グルコース、４０％  ＭＣＤＢ２０１、１０μｇ／ｍＬ  ＥＧＦ、１ｎＭ  デキサメサゾン、１００μＭ  アスコルビン酸、および５％ＦＢＳ）に添加した。上の（ｖ）で得られた培養細胞を、上記ＩＦＮ−β含有培地にて７２時間培養した。無血清培地（６０％  ＤＭＥＭ−低グルコース、４０％  ＭＣＤＢ２０１、１０μｇ／ｍＬ  ＥＧＦ、１ｎＭ  デキサメサゾン、１００μＭ  アスコルビン酸、および２ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ）にて２４時間追加培養し、培地中に産生されたＴＲＡＩＬを測定した。コントロール系では、ＩＦＮ−βを添加しない上記無血清培地で上記培養細胞を培養し、培地中のＴＲＡＩＬを測定した。ＴＲＡＩＬの測定はＲ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ社のＥＬＩＳＡキット（ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦＳＦ１０  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ）を用いて行った。【００５５】
（２）実験結果
ＴＲＡＩＬ産生量の測定結果を図２に示す。ＩＦＮ−β処理された脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）、骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）および胎盤由来細胞（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌｓ）からＴＲＡＩＬが産生されることが確認された。臍帯由来幹細胞（ＵＣ−ＭＳＣ）についても同様の結果を得た。一方、コントロール系では、これらの細胞からのＴＲＡＩＬ産生は確認されなかった。
【実施例３】
【００５６】
実施例３．各種生理活性ポリペプチドによる間葉系組織由来の接着性細胞の処理効果
（１）実験方法
（ｉ）試供細胞
試供細胞として、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ＡＤＭＰＣ）を用いた。生理活性ポリペプチドとしては各種のサイトカインおよびケモカインを用いた。【００５７】
（ｉｉ）生理活性ペプチド
生理活性ポリペプチドとしてサイトカイン（ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ３〜ＩＬ３５、オンコスタチンＭ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、ＣＴ−１、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＢＡＦＦ、ＦａｓＬ、ＲＡＮＫＬ、ＴＲＡＩＬ、ＩＮＦ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ）およびケモカイン（ＣＣＬ１〜ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１〜ＣＸＣＬ１０）を用いた。【００５８】
（ｉｉｉ）生理活性ペプチドでの処理およびＴＲＡＩＬ発現強度の測定
試供細胞を、生理活性ペプチド添加培地（最終濃度１００ｎｇ／ｍＬ）および生理活性ペプチド非添加培地（コントロール）にて培地交換を行い、更に３日間（７２時間）継続培養を行った。培地交換７２時間後にＲＬＴ  Ｂｕｆｆｅｒ  ６００ｕＬを添加して回収、ＲＮＡ抽出した。
ＲＬＴ  Ｂｕｆｆｅｒサンプルは、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ  ／  ＱＩＡＧＥＮを用いて全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡを１００ｎｇ／ｕＬになるように調製後、１アレイ当たり全ＲＮＡ  １５０ｎｇからラベルされたｃＲＮＡを合成した。合成したラベルされたｃＲＮＡは濃度、収量およびＣｙ３取込率を算出し、合成サイズ（２００−２０００ｎｔを増幅）を測定した。ラベルされたｃＲＮＡ  ６００ｎｇを６０℃でフラグメンテーションを形成させ、６５℃、１７時間でハイブリダイゼーションを行い、アレイを洗浄してスキャンし、ＴＲＡＩＬのプローブであるＡ＿２３＿Ｐ１２１２５３）のｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙをプロットした。【００５９】
（２）実験結果
結果を表１に示す。
【表１−１】
2020045399.tif 000003
【表１−２】
2020045399.tif 000004
【００６０】
試験した大部分の生理活性ポリペプチドが細胞のＴＲＡＩＬ発現を増強することがわかった。ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１βおよびオンコスタチンＭのＴＲＡＩＬ発現増強効果が大きかった。なかでもＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＴＮＦαのＴＲＡＩＬ発現増強効果が大きく、ＩＦＮβのＴＲＡＩＬ発現増強効果が最も大きかった。
【実施例４】
【００６１】
実施例４．生理活性ポリペプチドで処理された間葉系組織由来の接着性細胞のインビボでの抗腫瘍効果
（１）実験方法
（ｉ）ＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣの調製
実施例２に記載した方法にて脂肪組織からＡＤＭＰＣを単離、培養し、ＩＦＮ−βにて処理して、ＴＲＡＩＬを産生するＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを得た。【００６２】
（ｉｉ）インビボ実験
肺がん患者から同意を得て入手した肺がん細胞をヌードマウス腰背部に移植し、患者由来腫瘍移植マウス（ＰＤＸマウス）を作出した。肺がん細胞移植後２４日目には肺がん細胞は腫瘤を形成した。形成した腫瘤を摘出し、３ｍｍ角にサイコロ状として、新たなヌードマウス腰背部に植え継ぎを行った。動物をＡ−Ｆの６群に分け、ＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを投与した。Ａ群のマウスには、患者由来腫瘍移植片（ＰＤＸ）植え継ぎと同時にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを経血管的に投与した。Ｂ群のマウスには、ＰＤＸ植え継ぎ１週間後にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを経血管的に投与した。Ｃ群のマウスには、ＰＤＸ植え継ぎと同時にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを腹腔内投与した。Ｄ群のマウスには、ＰＤＸ植え継ぎ１週間後にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを腹腔内投与した。Ｅ群のマウスには、ＰＤＸ植え継ぎ１週間後にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを腫瘤に直接投与した。Ｆ群のマウスは、ＰＤＸ植え継ぎのみのコントロール群マウスであった。Ａ群−Ｅ群における投与細胞数は、動物１匹あたり１ｘ１０６個であった。ＰＤＸ植え継ぎ後４週にて各マウスから腫瘤を摘出し、容量を測定し、写真を撮った。【００６３】
（２）実験結果
ＰＤＸ植え継ぎ後４週にて各マウスから摘出した腫瘤の写真を図３に示す。摘出した腫瘤の容量の平均値を図４に示す。コントロール群（Ｆ群）と比較し、ＩＦＮβ活性化ＡＤＭＰＣを投与した群では、経血管的投与・腹腔内投与あるいは腫瘤直接投与のいずれでも腫瘤の縮小を認めた。これは、ＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣが投与経路を選ばずに有効であることを示している。ＰＤＸ植え継ぎ後１週間後に当該細胞を投与することで腫瘤の縮小を認めたことは、腫瘤治療を目的として当該細胞の投与が有用であることを示している。また、ＰＤＸ植え継ぎと同時にＩＦＮ−β活性化ＡＤＭＰＣを投与しても縮小を認めたことは、周術期に当該細胞を投与することの有用性を示すものである。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明は、がんの治療薬の分野、がんの研究の分野等において利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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