(57)【要約】  皮膚潰瘍を治療可能な手法が提供される。  より具体的には、一酸化炭素を含有する皮膚創傷予防及び／又は治療組成物が提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
一酸化炭素を含有する皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
【請求項２】
一酸化炭素及び溶媒を含有する皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
【請求項３】
溶媒が水である請求項２記載の皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
【請求項４】
溶媒がミリスチン酸イソプロピルである請求項２記載の皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
【請求項５】
さらに増粘剤を含有する請求項２〜４のいずれかに記載の皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
【請求項６】
増粘剤が、カルボキシビニルポリマー及びヒドロキシアルキルセルロースからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項５に記載の皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
【請求項７】
一酸化炭素濃度が５００μＭ以上である、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
皮膚創傷予防及び／又は治療組成物が外用組成物である、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
皮膚創傷が皮膚潰瘍である、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚創傷予防及び／又は治療組成物等に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚組織等の損傷である傷や潰瘍は一般に「創傷」と呼ばれ、その具体例として、糜爛、切り傷、擦過傷、火傷、皮膚の潰瘍、褥瘡、などが挙げられる。【０００３】
特に皮膚潰瘍や褥瘡は、寝たきり、糖尿病、閉塞性動脈硬化、血管炎などにより発症し多くは長期化する為、超高齢者社会の到来とともに患者数の増加が確実で大きな社会問題となっている。【０００４】
しかしながら、皮膚潰瘍や褥瘡は、未だ難治性の疾患である。【０００５】
難治性皮膚潰瘍や褥瘡等については、白糖・ポビドンヨード配合剤等の創傷治療用外用剤（特許文献1）を用いた保存的治療では十分な治療効果を期待できない場合も多く存在するのが現状であり、重症化した場合は外科的治療（皮膚移植術等）が必要となることから、更に優れた治療効果を発揮する新たな皮膚外用剤の開発が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０００−３８３４２号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ（２００６）１２６、１１５９−１１６７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らは、高濃度ＣＯを水に溶解させたＣＯ水溶液が、炎症性消化器官疾患の予防及び／又は治療に効果を奏することを見出した。そこで、同様の高濃度ＣＯ含有水溶液を皮膚潰瘍に適用することで、皮膚潰瘍を予防及び／又は治療することを試みた。【０００９】
そこで、本発明は、新規な皮膚潰瘍を治療可能な手法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、ＣＯ含有組成物が皮膚潰瘍を治療できる可能性を見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。【００１１】
本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１  一酸化炭素を含有する皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
項２  一酸化炭素及び溶媒を含有する皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
項３  溶媒が水である項２記載の皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
項４  溶媒がミリスチン酸イソプロピルである項２記載の皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
項５  さらに増粘剤を含有する項２〜４のいずれかに記載の皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
項６  増粘剤が、カルボマー（カルボキシビニルポリマー）及びヒドロキシアルキルセルロースからなる群より選択される少なくとも１種である、項５に記載の皮膚創傷予防及び／又は治療組成物。
項７  一酸化炭素濃度が５００μＭ以上である、項１〜６のいずれかに記載の組成物。
項８  皮膚創傷予防及び／又は治療組成物が外用組成物である、項１〜７のいずれかに記載の組成物。
項９  皮膚創傷が皮膚潰瘍である、項１〜８のいずれかに記載の組成物。
項Ａ−１  一酸化炭素を含有する組成物を対象に適用することを含む、皮膚創傷予防及び／又は治療方法。
項Ａ−２  前記組成物が一酸化炭素及び溶媒を含有する組成物である、Ａ−１に記載の方法。
項Ａ−３  溶媒が水である項Ａ−２記載の方法。
項Ａ−４  溶媒がミリスチン酸イソプロピルである項Ａ−２記載の方法。
項Ａ−５  前記組成物がさらに増粘剤を含有する項Ａ−２〜Ａ−４のいずれかに記載の方法。
項Ａ−６  増粘剤が、カルボマー（カルボキシビニルポリマー）及びヒドロキシアルキルセルロースからなる群より選択される少なくとも１種である、項Ａ−５に記載の方法。
項Ａ−７  銭組成物に含有される一酸化炭素の濃度が５００μＭ以上である、項Ａ−１〜Ａ−６のいずれかに記載の方法。
項Ａ−８  一酸化炭素を含有する組成物を対象の患部に適用することを含む、項Ａ−１〜Ａ−７のいずれかに記載の方法。
項Ａ−９  皮膚創傷が皮膚潰瘍である、項Ａ−１〜Ａ−８のいずれかに記載の方法。
項Ｂ−１  皮膚創傷予防及び／又は治療における使用のための、一酸化炭素を含有する組成物。
項Ｂ−２  さらに溶媒を含有する項Ｂ−１に記載の組成物。
項Ｂ−３  溶媒が水である項Ｂ−２記載の組成物。
項Ｂ−４  溶媒がミリスチン酸イソプロピルである項Ｂ−２記載の組成物。
項Ｂ−５  さらに増粘剤を含有する項Ｂ−２〜Ｂ−４のいずれかに記載の組成物。
項Ｂ−６  増粘剤が、カルボマー（カルボキシビニルポリマー）及びヒドロキシアルキルセルロースからなる群より選択される少なくとも１種である、項Ｂ−５に記載の組成物。
項Ｂ−７  含有される一酸化炭素の濃度が５００μＭ以上である、項Ｂ−１〜Ｂ−６のいずれかに記載の組成物。
項Ｂ−８  皮膚創傷予防及び／又は治療における使用が、皮膚創傷予防及び／又は治療における外用である、項Ｂ−１〜Ｂ−７のいずれかに記載の組成物。
項Ｂ−９  皮膚創傷が皮膚潰瘍である、項Ｂ−１〜Ｂ−８のいずれかに記載の組成物。
項Ｃ−１  皮膚創傷予防及び／又は治療のための医薬の製造における、一酸化炭素を含有する組成物の使用。
項Ｃ−２  前記組成物が、一酸化炭素及び溶媒を含有する組成物である、項Ｃ−１に記載の使用。
項Ｃ−３  溶媒が水である項Ｃ−２記載の使用。
項Ｃ−４  溶媒がミリスチン酸イソプロピルである項Ｃ−２記載の使用。
項Ｃ−５  前記組成物が、さらに増粘剤を含有する組成物である、項Ｃ−２〜Ｃ−４のいずれかに記載の使用。
項Ｃ−６  増粘剤が、カルボマー（カルボキシビニルポリマー）及びヒドロキシアルキルセルロースからなる群より選択される少なくとも１種である、項Ｃ−５に記載の使用。
項Ｃ−７  前記組成物に含有される一酸化炭素の濃度が５００μＭ以上である、項Ｃ−１〜Ｃ−６のいずれかに記載の使用。
項Ｃ−８  前記医薬が外用医薬である、項Ｃ−１〜Ｃ−７のいずれかに記載の使用。
項Ｃ−９  皮膚創傷が皮膚潰瘍である、項Ｃ−１〜Ｃ−８のいずれかに記載の使用。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に包含される皮膚創傷予防及び／又は治療組成物によれば、優れた予防及び／又は治療効果が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ＣＯ含有組成物（溶媒：水）を皮膚潰瘍モデルマウスの潰瘍部に適用したときの、潰瘍が回復したヘマトキシリン・エオジン（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ  Ｅｏｓｉｎ：ＨＥ）染色結果を示す。
【図２】ＣＯ含有組成物（溶媒：カルボマー水溶液）を皮膚潰瘍モデルマウスの潰瘍部に適用したときの、潰瘍が回復した（ｗｏｕｎｄ  ｃｌｏｓｕｒｅ）面積の割合（％）を示す。横軸が日数を、縦軸が当初の潰瘍面積に対する潰瘍回復面積の割合（％）を示す。
【図３】ＣＯ含有組成物（溶媒：ヒドロキシエチルセルロース水溶液）を皮膚潰瘍モデルマウスの潰瘍部に適用したときの、潰瘍が回復した（ｗｏｕｎｄ  ｃｌｏｓｕｒｅ）面積の割合（％）を示す。横軸が日数を、縦軸が当初の潰瘍面積に対する潰瘍回復面積の割合（％）を示す。
【図４】ＣＯ含有組成物（溶媒：カルボマー水溶液、ヒドロキシエチルセルロース水溶液、又はミリスチン酸イソプロピル）を皮膚潰瘍モデルマウスの潰瘍部に適用したときの、潰瘍が回復した（ｗｏｕｎｄ  ｃｌｏｓｕｒｅ）面積の割合（％）を示す。横軸が日数を、縦軸が当初の潰瘍面積に対する潰瘍回復面積の割合（％）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の各実施形態について、さらに詳細に説明する。
【００１５】
本発明に包含される皮膚潰瘍予防及び／又は治療組成物は、一酸化炭素（ＣＯ）を含有し、好ましくは一酸化炭素（ＣＯ）及び溶媒を含有する。なお、当該組成物を本発明の組成物ということがある。
【００１６】
本発明の組成物における溶媒は、ＣＯを保持（好ましくは溶解）できるものであれば、特に制限はされず、水又は有機溶媒、あるいはこれらの混合液が挙げられる。混合液の場合、溶媒の組み合わせは特に制限されず、均一でも不均一でも良い。有機溶媒としては、脂肪族飽和炭化水素類、脂肪酸類、植物油類、カルボン酸エステル類、アルコール類、エーテル類、ケトン類、グリコール類、脂肪酸エステル類等が例示される。脂肪酸エステル類は、炭素数１２〜１８の脂肪酸と炭素数１〜２０のアルキルアルコールとのエステルが挙げられる。特に好ましいアルキルアルコールの炭素数は、経済性や安全性等の観点から１〜６が挙げられる。当該脂肪酸としては、飽和脂肪酸又は不飽和脂肪酸（好ましくは不飽和結合数が１、２、又は３）が挙げられ、より具体的には例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸等が挙げられる。また当該アルキルアルコールとしては、直鎖又は分岐鎖状アルキルアルコールが挙げられ、より具体的には例えばメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｎ−ペンタノール、イソペンタノール、ｎ−ヘキサノール、イソヘキサノール等が挙げられる。特に好ましい脂肪酸エステル類としては、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル等が挙げられる。脂肪酸エステル類以外の有機溶媒としては、具体的に、例えばアジピン酸ジイソプロピル、アセトン、安息香酸ベンジル、イソプロパノール、ウイキョウ油、アルモンド油、エタノール、エチレングリコール、２−エチル−１，３−ヘキサンジオール、ジエチルエーテル、オクチルドデカノール、オリーブ油、オレイン酸、グリセリン脂肪酸エステル、クロタミトン、ゲラニオール変性アルコール、合成スクワラン、ゴマ油、小麦胚芽油、酢酸エチル、酢酸ノルマルブチル、サフラワー油、サフラワー油脂肪酸、サリチル酸エチレングリコール、ジイソプロパノールアミン、ジエチレングリコール、ジエチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、シクロヘキサノン、シソ油、ジプロピレングリコール、ジメチルポリシロキサン、スクワレン、セバシン酸ジエチル、ソルビタン酸脂肪酸エステル、大豆油、大豆レシチン、炭酸プロピレン、中鎖脂肪酸トリグリセリド、ツバキ油、トウモロコシ油、ドデシルベンゼン、トリアセチン、トリオレイン酸ソルビタン、トリカプリル酸グリセリル、トリクロロエタン、濃グリセリン、ハッカ油、オクタアセチルショ糖変性アルコール、ヒマシ油、１，３−ブチレングリコール、プロピオン酸、プロピレングリコール、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ベンジルアルコール、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリソルベート、ポリエチレングリコール、エタノール、メタノール、メチルイソブチルケトン、メチルエチルケトン、綿実油、α−モノイソステアリルグリセリルエーテル、モノオレイン酸ポリエチレングリコール、モノラウリン酸ソルビダン、ヤシ油、ポリオキシエチレンラウリルアルコールエーテル、落花生油、流動パラフィン等が挙げられる。特に、ＣＯの保持能力および経済性の観���から、溶媒は水またはミリスチン酸イソプロピルであることが好ましい。
【００１７】
また、本発明の組成物は、増粘剤を含有してもよい。増粘剤としては、単糖類及びその誘導体、多糖類及びその誘導体、脂肪酸類、アミノ酸及びその誘導体、糖アルコール類、脂肪酸エステル類、脂肪族飽和炭化水素類、脂肪族アルコール類、無機化合物類等が例示される。具体的には、例えばキサンタンガム、アラビアガム、グアーガム、カラギーナン、ジェランガム、寒天、ローカストビーンガム、カルボマー（カルボキシビニルポリマー）、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、セラック、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体、ポリアクリル酸塩、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、α−シクロデキストリン、濃グリセリン、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、カロブービンガム、グルコノ−δ−ラクトン、形質無水ケイ酸、スクワラン、ステアリルアルコール、ステアリン酸アルミニウム、ラノリン、セチルアルコール、ゼラチン、デキストリン、尿素、ワセリン、パルミチン酸、バレイショデンプン、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒマシ油、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ポリソルベート、ポリエチレングリコール、メタリン酸ナトリウム、水飴、ミツロウ、メチルビニルエーテル・無水マレイン酸共重合体、ロジン、パルミチン酸デキストリン、ミリスチン酸デキストリン、ステアリン酸イヌリン、１２−ヒドロキシステアリン酸、１，３：２，４−ジベンジリデン−Ｄ−ソルビトール、Ｌ−ロイシン誘導体、Ｌ−イソロイシン誘導体、Ｌ−バリン誘導体、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸−α等が挙げられる。特に、経済性や安全性等の観点からカルボマー、ヒドロキシエチルセルロースが好ましい。増粘剤は、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００１８】
例えば、溶媒として水、増粘剤としてカルボマーを用いる場合には、カルボマーは組成物に対して０．０５〜３０質量％含まれることが好ましい。
【００１９】
また例えば、溶媒として水、増粘剤としてヒドロキシエチルセルロースを用いる場合には、ヒドロキシエチルセルロースは組成物に対して０．１〜１４質量％含まれることが好ましい。
【００２０】
本発明の組成物は、例えば、粘度が０．３〜１００００００センチポアズ（ｃｐ）程度であることが好ましく、０．５〜５０００００ｃｐ程度であることがより好ましく、０．８〜１０００００ｃｐ程度であることがさらに好ましい。当該粘度は、測定対象組成物を２５℃で３０分静置した後、ブルックフィールド型粘度計を用いて測定した値である。
【００２１】
なお、本発明の組成物のうち、溶媒が水であって、さらに増粘剤を含有するものは、特に制限はされないが、粘度が上記の範囲であることが好ましい。用いる増粘剤の種類及び量も、特に制限はされないが、当該粘度範囲の粘度となるよう適宜選択して用いることが好ましい。
【００２２】
本発明の組成物は、好ましくは外用組成物である。また、好ましくは液体組成物である。なお、ここでの液体組成物には粘性を有する組成物（粘性液体組成物）が包含される。
【００２３】
本発明の組成物は、好ましくはＣＯを５００μＭ以上含有する。また、ＣＯ濃度は、例えば５５０μＭ以上、６００μＭ以上、６５０μＭ以上、７００μＭ以上、７５０μＭ以上、８００μＭ以上、８５０μＭ以上、９００μＭ以上、９５０μＭ以上、１０００μＭ以上、１０５０μＭ以上、１１００μＭ以上、１１５０μＭ以上、１２００μＭ以上、１２５０μＭ以上、１３００μＭ以上、１３５０μＭ以上、１４００μＭ以上、１４５０μＭ以上、又は１５００μＭ以上、であってもよい。ＣＯ濃度は、効果の観点から特に１０００μＭ以上であることが好ましい。またＣＯ濃度の上限は特に制限されず、溶媒に飽和するまで含有させて用いることができ、例えば、１００００μＭ以下、９５００μＭ以下、又は９０００μＭ以下が挙げられる。
【００２４】
なお、上記のような高濃度ＣＯを含有する組成物を得るためには、常圧下で溶媒にＣＯを接触させる若しくは吹き込む等のみでは通常不十分であり、このような高濃度ＣＯ含有組成物を調製するためには、ＣＯを捕集した密閉容器において、ガスタイトシリンジ等を用いて例えば２気圧（又はそれ以上の気圧）になるようにＣＯを置換するなどすることが好ましい。
【００２５】
本発明の組成物は皮膚潰瘍の予防及び／又は治療のために好ましく用いられる。当該皮膚潰瘍としては、その原因は特に限定されない。このような原因としては、例えば外傷、火傷、糖尿病、放射線照射、動脈硬化症や静脈うっ滞といった末梢血管病変、膠原病（リウマチなど）等が挙げられる。なお、通常、「潰瘍」より軽度の被覆上皮損傷で、肉眼的には上皮が欠損しているが顕微鏡的に上皮粘膜内に留まり、その下層に至らないものは「びらん」と呼ばれるが、本明細書においては、特に断らない限り、潰瘍はびらんも包含する意味合いで用いられる。
【００２６】
また、本発明の組成物は、ヒトはもちろんのこと、非ヒト哺乳動物にも適用できる。当該非ヒト哺乳動物としては、例えばマウス、ラット、ネコ、イヌ、サル、ウシ、ウマ等が挙げられる。
【００２７】
本発明の組成物は、例えば、一日あたり１回又は複数回（例えば２又は３回）の投与を行うことができる。投与量は、適宜設定することができるが、例えば組成物量が０．１〜１０ｃｃ／回程度であることが好ましい。なお、上述の通り、本発明の組成物は好ましくは外用組成物であり、この場合には、投与は潰瘍部分に例えば塗布することによって行われる。また、本発明の組成物は、例えば、液剤であってもよく、また泡状製剤（フォーム製剤）であってもよい。注腸フォーム状製剤では、液体組成物と噴射ガスとが混合され、これがスプレーノズルから噴出されて皮膚へ適用され得る。特に、噴射直前に液体組成物と噴射ガスとがスプレー内で混合されて噴射されることが多い。上述した本発明の組成物における好ましいＣＯ濃度は、泡状製剤の場合には、液体組成物と噴射ガスとが混合された段階でのＣＯ濃度であってもよい。例えば、前記液体組成物と前記噴射ガスとが混合された際にＣＯ濃度が５００μＭ以上となることが好ましい。また、前記液体組成物と前記噴射ガスの、いずれにＣＯが含まれていてもよく、両方にＣＯが含まれていてもよい。
【００２８】
また、本発明の組成物は、本発明の効果を損なわない範囲で、さらに他の成分を含有してもよい。このような他成分としては、公知の成分を用いることができ、特に外用組成物に用いることが公知の成分を用いることができる。例えば、崩壊剤、滑沢剤（凝集防止剤）、流動化剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、吸収促進剤、着色剤、着香剤、酸化防止剤、抗菌剤、防腐剤等などが挙げられる。
【００２９】
崩壊剤としては、例えばカルメロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロース、クロスカルメロースナトリウム、部分α化でんぷん、乾燥でんぷん、カルボキシメチルスターチナトリウム、クロスポビドン、ポリソルベート８０（オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）等が挙げられる。
【００３０】
滑沢剤（凝集防止剤）としては、例えばタルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、コロイダルシリカ、ステアリン酸、含水二酸化珪素、合成ケイ酸マグネシウム、微粒子性酸化珪素、でんぷん、ラウリル硫酸ナトリウム、ホウ酸、酸化マグネシウム、ワックス類、硬化油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム等が挙げられる。
【００３１】
流動化剤としては、例えば無水ケイ酸等が挙げられる。
【００３２】
ｐＨ調整剤としては、例えば塩酸、水酸化ナトリウム、クエン酸、無水クエン酸、クエン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、無水リン酸一水素ナトリウム、無水リン酸二水素ナトリウム等が挙げられる。
【００３３】
等張化剤としては、例えば食塩、ブドウ糖、Ｄ−マンニトール、グリセリンなどが挙げられる。
【００３４】
吸収促進剤としては、例えば、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウムなどが挙げられる。これらその他成分の組成物における含有量は、その種類に応じて適宜決定することができる。
【００３５】
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。
【実施例】
【００３６】
以下、本発明をより具体的に説明する。【００３７】
ＣＯ含有組成物の調製１
［Ｈ２Ｏ＋ＣＯサンプル作製法］
バイアル瓶（マルエム（株）製３ｍＬ）に純水を２．５ｍＬ入れ、ゴム栓、アルミシールを行い密閉した。次いで、テドラーバッグ（アズワン（株）製１Ｌ）に任意のＣＯ濃度のガス（Ｎ２バランス）を捕集した。ガスタイトシリンジ（伊藤製作所（株）製ＭＳ−ＧＡＮ５００）によりバイアル瓶内の気相部をテドラーバッグ内のガスで約２気圧になるよう置換した。その後、気相部のＣＯが液相に溶解し、平衡状態に達するまで静置した。【００３８】
得られたＣＯ含有組成物（水が溶媒）中のＣＯ濃度を、表１に示す。なお、組成物中のＣＯ濃度は、ガスクロマトグラフィー（島津製作所(株)製ＧＣ−２０１４、ＦＩＤ）により分析した。【００３９】
【表１】
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【００４０】
［ＩＰＭ＋ＣＯサンプル作製法］
バイアル瓶（マルエム（株）製３ｍＬ）にミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ：和光純薬工業（株）製和光一級）を２．５ｍＬ入れ、ゴム栓、アルミシールを行い密閉した。次いで、テドラーバッグ（アズワン（株）製１Ｌ）に任意のＣＯ濃度のガス（Ｎ２バランス）を捕集した。ガスタイトシリンジ（伊藤製作所（株）製ＭＳ−ＧＡＮ５００）によりバイアル瓶内の気相部をテドラーバッグ内のガスで約２気圧になるよう置換した。その後、気相部のＣＯが液相に溶解し、平衡状態に達するまで静置した。【００４１】
得られた組成物中のＣＯ濃度は、ガスクロマトグラフィー（島津製作所(株)製ＧＣ−２０１４、ＦＩＤ）により分析した。テドラーバッグ内気相のＣＯ（％）を１８％とした場合には、ＩＰＭ中のＣＯ濃度は１５００μＭであり、テドラーバッグ内気相のＣＯ（％）を１００％とした場合には、ＩＰＭ中のＣＯ濃度は９０００μＭであった。【００４２】
皮膚潰瘍モデルマウスへの投与（実施例１）
公知（浅井ら  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ（２００６）１２６、１１５９−１１６７）の方法に従い、皮膚潰瘍モデルマウスを作製した。具体的には、糖尿病自然発症雄性マウス（ｄｂ／ｄｂマウス）を７週齢で搬入後、背部を除毛し、８週齢になるまで個別のゲージ内で予備飼育した。ケタミン・セラクタール混合溶液をマウスに腹腔内注射し、麻酔下でマウスの背部を再び除毛し、生検トレパンで８ｍｍ直径の皮膚全層欠損創を誘導し、皮膚潰瘍モデルマウスを作製した。以下、モデルマウスとして当該皮膚潰瘍モデルマウスを用いた。【００４３】
皮膚潰瘍モデルマウスの潰瘍部にＣＯ含有組成物（溶媒：水、１５００μＭＣＯ含有）を適用し、フィルム（親水性ポリウレタンドレッシング材；ＩＶ３０００ドレッシング トランスペアレントドレッシング）で潰瘍部を覆い（縫合はせず）、その後は１日おきに、生理食塩水で潰瘍部を洗浄して塗布する、という操作を繰り返した。なお、対照実験として、ＣＯ含有組成物の代わりに水を用いた以外は同様に操作する実験も行った。【００４４】
ＣＯ含有組成物適用から１４日目の潰瘍部のヘマトキシリン・エオジン（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ  Ｅｏｓｉｎ：ＨＥ）染色を実施した。結果を図１に示す。水のみを塗布した群と比較し、ＣＯ含有組成物を塗布した群で肉芽組織の形成促進を確認した。【００４５】
ＣＯ含有組成物の調製２
［カルボマー＋ＣＯサンプル作製法］
５００ｍＬポリビーカーに純水３００ｇを入れた。スリーワンモーター（新東科学（株）製ＢＬ−１２００）により４００ｒｐｍで攪拌させている所に、カルボマー（アクペック：住友精化（株）製５０１Ｅ）を２．７９ｇ添加し、２４０ｒｐｍで５時間攪拌し溶解させた。その後、６％水酸化ナトリウム水溶液を１５．８ｇ添加し３０分攪拌させ、カルボマー水溶液を作製した。２００ｍＬビーカーに当該カルボマー水溶液を１５０ｍＬ入れ、２５℃の恒温水槽で３０分静置した。【００４６】
バイアル瓶（マルエム（株）製３ｍＬ）にカルボマー水溶液を２．５ｍＬ入れ、ゴム栓、アルミシールを行い密閉した。次いで、テドラーバッグ（アズワン（株）製１Ｌ）に任意のＣＯ濃度のガス（Ｎ２バランス）を捕集した。ガスタイトシリンジ（伊藤製作所（株）製ＭＳ−ＧＡＮ５００）によりバイアル瓶内の気相部をテドラーバッグ内のガスで約２気圧になるよう置換した。その後、気相部のＣＯが液相に溶解し、平衡状態に達するまで静置した。【００４７】
得られたＣＯ含有組成物中のＣＯ濃度を、表２に示す。なお、組成物中のＣＯ濃度は、ガスクロマトグラフィー（島津製作所(株)製ＧＣ−２０１４、ＦＩＤ）により分析した。【００４８】
【表２】
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【００４９】
［ヒドロキシエチルセルロース＋ＣＯサンプル作製法］
５００ｍＬポリビーカーに純水２５０ｇを入れた。スリーワンモーター（新東科学（株）製ＢＬ−１２００）により４００ｒｐｍで攪拌させている所に、ヒドロキシエチルセルロース（住友精化（株）製ＣＦ−Ｗ）を５．１０ｇ添加し、２４０ｒｐｍで１０時間攪拌し溶解させ、ヒドロキシエチルセルロース水溶液を作製した。２００ｍＬビーカーに当該ヒドロキシエチルセルロース水溶液を１５０ｍＬ入れ、２５℃の恒温水槽で３０分静置した。【００５０】
バイアル瓶（マルエム（株）製３ｍＬ）にヒドロキシエチルセルロース水溶液を２．５ｍＬ入れ、ゴム栓、アルミシールを行い密閉した。次いで、テドラーバッグ（アズワン（株）製１Ｌ）に任意のＣＯ濃度のガス（Ｎ２バランス）を捕集した。ガスタイトシリンジ（伊藤製作所（株）製ＭＳ−ＧＡＮ５００）によりバイアル瓶内の気相部をテドラーバッグ内のガスで約２気圧になるよう置換した。その後、気相部のＣＯが液相に溶解し、平衡状態に達するまで静置した。【００５１】
得られたＣＯ含有組成物中のＣＯ濃度は、ガスクロマトグラフィー（島津製作所(株)製ＧＣ−２０１４、ＦＩＤ）により分析した。テドラーバッグ内気相のＣＯ（％）を１００％とした場合には、ヒドロキシエチルセルロース水溶液中のＣＯ濃度は１５００μＭであった。【００５２】
皮膚潰瘍モデルマウスへの投与（実施例２）
上記のようにして調製したカルボマーを含むＣＯ含有組成物を用い、実施例１と同様にして、皮膚潰瘍モデルマウスの潰瘍部に当該ＣＯ含有組成物を適用し、４日目、８日目及び１４日目の潰瘍部の面積（Ｗｏｕｎｄ  ｃｌｏｓｕｒｅ）を測定した。なお、対照実験として、ＣＯ含有組成物の代わりに水とカルボマーのみの組成物（上記カルボマー水溶液）を用いた以外は同様に操作する実験も行った。結果を図２に示す。水とカルボマーのみの組成物及びＣＯ濃度１００μＭのＣＯ含有組成物を用いた場合には、皮膚潰瘍治療効果はほとんど得られなかったが、ＣＯ濃度５００μＭのＣＯ含有組成物を用いた場合には、初期の傷の治りに差が確認され、さらに１５００μＭのＣＯ含有組成物を用いた場合には有意な皮膚潰瘍治療効果が得られた。なお、図２において、＊は水とカルボマーのみの組成物を塗布した群に対する有意差（Ｐ＜０．０５）を示す。【００５３】
皮膚潰瘍モデルマウスへの投与（実施例３）
また、上記のようにして調製したヒドロキシエチルセルロースを含むＣＯ含有組成物（ＣＯ濃度１５００μＭ）を用いた以外は、実施例２と同様にして皮膚潰瘍モデルマウスを用いた検討を行った。結果を図３に示す。ＣＯ濃度１５００μＭのＣＯ含有組成物を用いた場合には有意な皮膚潰瘍治療効果が得られた。なお、図３において、＊は水とヒドロキシエチルセルロースのみの組成物（上記ヒドロキシエチルセルロース水溶液）を塗布した群に対する有意差（Ｐ＜０．０５）を示す。【００５４】
皮膚潰瘍モデルマウスへの投与（実施例４）
上記のようにして調製した、カルボマーを含むＣＯ含有組成物（溶媒は水、ＣＯ濃度１５００μＭ）、ヒドロキシエチルセルロースを含むＣＯ含有組成物（溶媒は水、ＣＯ濃度１５００μＭ）、及び溶媒がミリスチン酸イソプロピルのＣＯ含有組成物（ＣＯ濃度９０００μＭ）、並びに水を用いた以外は、実施例２と同様にして皮膚潰瘍モデルマウスを用いた検討を行った。結果を図４に示す。いずれのＣＯ含有組成物を用いた場合にも水と比べて有意な皮膚潰瘍治療効果が得られた。なお、図４では、カルボマーを含むＣＯ含有組成物（溶媒は水、ＣＯ濃度１５００μＭ）、ヒドロキシエチルセルロースを含むＣＯ含有組成物（溶媒は水、ＣＯ濃度１５００μＭ）、及び溶媒がミリスチン酸イソプロピルのＣＯ含有組成物（ＣＯ濃度９０００μＭ）は、それぞれ、ＡＱ＋１５００μＭ、ＨＥＣ＋１５００μＭ、及びＩＰＭ＋９０００μＭ、と標記する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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