【誤訳訂正書】
【提出日】平成18年10月27日(2006.10.27)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
（背景情報）
近年、アルツハイマー病、パーキンソン病、および他の衰弱性神経変性疾患を発症する危険が最も高い高齢者人口の増加により、神経変性疾患が重要な関心事となりつつある。脳卒中、または脳もしくは脊髄への外傷の結果としての神経の損傷は、死および身体障害の原因の第１位でもある。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
本明細書中で使用される場合は、用語「プロキネチシンレセプター」または「ＰＫＲ」は、５重螺旋の膜貫通ポリペプチドをいい、これは、プロキネチシンに結合して、プロキネチシンの結合に応答してＧタンパク質結合シグナル伝達経路を通じてシグナルを伝達する。プロキネチシンレセプターは、Ｇαｑとして知られているＧαサブタイプにだけ結合して、これによってアゴニストに応答して細胞内カルシウムの流動化を媒介すると考えられている。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
意図される用途に応じて、当業者は、ＰＫＲについての適切な形態、例えば、生存している動物、組織、組織抽出物、細胞、細胞抽出物中の、あるいは実質的に精製された形態を決定することができる。例えば、レセプター結合またはシグナル伝達アッセイについて、ＰＫＲは通常、細胞の表面で内生的に発現されるかまたは組み換えにより発現されるかのいずれかである。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
ＰＫＲアンタゴニストの例として、ヒトＰＫ１およびＰＫ２（米国公開出願番号２００２０１１５６１０Ａ１を参照）に関して、１つのＮ末端残基の付加、または１つのＮ末端残基の欠失のいずれかを有しているペプチドが挙げられる。他のプロキネチシンに関して同様の修飾を有しているか、またはヒトもしくは他のプロキネチシンの保存されたＮ末端の６残基に対する他の修飾（例えば、より広範な付加または欠失、および置換）を有しているペプチドもまた、ＰＫＲアンタゴニストであり得る。例示的なＰＫＲアンタゴニストはＭＶＩＴＧＡである。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５１】
必要に応じて、化合物を、それがＰＫＲに結合するかどうかを決定するために、最初に試験することができる。このような化合物は、ＰＫＲアゴニストまたはアンタゴニストとして作用する可能性がある。レセプターへのリガンドの結合を検出するための競合および非競合結合アッセイは、例えば、Ｍｅｌｌｅｎｔｉｎ−Ｍｉｃｅｌｏｔｔｉ等、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７２：１８２−１９０（１９９９）；Ｚｕｃｋ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：１１１２２−１１１２７（１９９９）；およびＺｈａｎｇ等、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６８；１３４−１４２（１９９９）に記載されている。ＰＫＲ結合アッセイの例は、Ｌｉｎ等、前出（２００２）およびＭａｓｕｄａ等、前出（２００２）に記載されている。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
本明細書中で使用される場合は、用語「神経前駆細胞」は、増殖できるが、神経幹細胞と比較してより系統が制限されている、中枢神経系の細胞をいう。神経前駆細胞には、ニューロンを生じるニューロン先祖細胞、星状膠細胞および／または乏突起膠細胞を生じる神経膠前駆細胞が含まれる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
神経発生は、嗅球（ＯＢ）、海馬の歯状回（ＤＧ）、および脳室下領域（ＳＶＺ）を含む、哺乳動物の中枢神経系のいくつかの神経領域において成体期を通じて生じることが示されている。アンモン角での低いレベルの神経発生もまた、報告されている。成体の哺乳動物のＯＢにおける新しいニューロン細胞は、ＳＶＺの前部において神経前駆細胞から生じる。ＳＶＺは、前脳の側脳室の壁にある組織の狭い領域である。ＳＶＺの神経前駆細胞は、吻側遊走流（ｒｏｓｔｒｏ−ｍｉｇｒａｔｏｒｙ  ｓｔｒｅａｍ）（ＲＭＳ）によってＯＢへと移動し、ここで、顆粒細胞および糸球周辺細胞として知られるＯＢの介在ニューロンへと分化する。成体のＤＧの神経前駆細胞は、ＤＧの顆粒細胞下帯（ＳＧＺ）で生じ、ＤＧの顆粒層でニューロン細胞およびグリア細胞へと分化する。新たに生じたニューロン細胞は、有糸分裂の４〜１０日後に直ちに、海馬のＣＡ３領域へと軸策を伸ばす（ＴａｕｐｉｎおよびＧａｇｅ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．６９：７４５−７４９（２００２）に概説されている）。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
神経幹細胞および／または前駆細胞は、脳室下領域（ＳＶＺ）、海馬、隔膜、線条体、大脳皮質、嗅球、ＳＶＺの吻側伸長（ｒｏｓｔｒａｌ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）、頸部、胸部、腰部、および仙椎のレベルを含む脊髄の種々のレベルを含む成体の中枢神経系の種々の領域から単離されている。脊髄では、神経幹細胞および／または前駆細胞は、室周囲の領域および柔組織から単離できる。神経幹細胞および／または前駆細胞はまた、成体の解剖した神経組織からも単離され、培養されており（ＴａｕｐｉｎおよびＧａｇｅ、前出（２００２）に概説されている）、成体の網膜内顆粒層にも存在している。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
神経幹細胞は、中間フィラメントタンパク質であるネスチン（Ｎｅｓｔｉｎ）（ＨｏｃｋｆｉｅｌｄおよびＭｃＫａｙ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５：３３１０−３３２８（１９８５））；ＲＮＡ結合タンパク質であるＭｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）（Ｓａｋａｋｉｂａｒａ等、Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１７６：２３０−２４２（１９９６））；および転写因子であるＳｏｘ１（Ｐｅｖｎｙ等、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２５：１９６７−１９７８（１９９８））を含む多数の免疫細胞化学的選択マーカーを発現する。これらのマーカーは、低いレベルではあるが、神経前駆細胞によっても発現される。神経幹細胞および前駆細胞は、それらが神経細胞接着分子のポリシアル化形態を発現することによって（ＰＳＡ−ＮＣＡＭ；Ｒｏｕｓｓｅｌｏｔ等、Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．３５１：５１−６１（１９９５））、そしてそれらが線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）および表皮成長因子（ＥＧＦ）レセプターを発現することによって（Ｇｒｉｔｔｉ等、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９：３２８７−３２９７（１９９９））も特徴付けられる。神経幹細胞および前駆細胞の他の特徴は当該分野で公知であり、例えば、Ｏｋａｎｏ等、前出（２００２）に概説されている。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８２】
他の例示的な増殖アッセイでは、細胞は、３Ｈチミジンまたは臭化デオキシウリジン（ＢｒｄＵ、チミジン類似体）を取り込むそれらの能力について評価されるか、あるいは、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）またはｃｄｃ２のような増殖マーカーの発現について評価される。このような増殖アッセイは当該分野で周知であり、例えば、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、「Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、第４版（２０００）に記載されている。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８３】
化合物が神経発生を調節するかどうかを決定するために適切な他の型の増殖アッセイは当該分野で公知であるか、または本明細書中の指針を使用して決定することができる。化合物の存在下および化合物が存在しない条件下で観察される、細胞の総数、または標識された細胞の数を比較して、神経発生が調節されているかどうかを決定することができる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９０】
脳卒中または神経損傷による外傷の実験動物モデルは当該分野で公知である。脳卒中の１つの実験モデルには、短期間でのラットの右中大脳動脈および両頸動脈の共通部分の閉塞、その後の再潅流が含まれる（Ｍｏｏｒｅ等、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．８０：１１１−１１８）。中枢神経損傷の１つの実験モデルは、液体衝撃外傷（ｆｌｕｉｄ  ｐｅｒｃｕｓｓｉｏｎ  ｉｎｊｕｒｙ）（ＦＰＩ）モデルであり、ここでは、適度な衝撃（１．５〜２．０ａｔｍ）が頭骨頭頂部の大脳皮質に加えられる（Ａｋａｓｕ等、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．３２９：３０５−３０８（２００２）。脊髄損傷の実験モデルもまた、当該分野で使用されている（Ｓｃｈｅｉｆｅｒ等、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．３２３：１１７−１２０（２００２））。酸化的ストレス、低酸素症、放射線、および毒素が原因である神経の損傷の適切なモデルもまた当該分野で公知である。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９５】
神経発生を調節する本発明の化合物は、神経発生を促進または阻害することが有益である種々の神経系の障害を予防または処置するための治療薬として、直接使用することができる。本発明の化合物はまた、エキソビボで神経発生を促進するために使用することもでき、その結果、神経幹細胞、神経前駆細胞、および／またはさらに分化した神経細胞を含む細胞組成物を、同じ兆候を予防または処置するために、続けて個体に投与することができる。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９６】
本発明の化合物で処置できる神経系の障害としては、神経系の損傷、および軸索の切断、ニューロンの縮小もしくは再生、または脱髄のいずれかを生じる疾患または障害が挙げられるがこれらに限定されない。このような疾患および障害として、例えば、以下の中枢神経系（脊髄および脳を含む）または末梢神経系の病変が挙げられる：
（１）虚血性の病変：ここでは、神経系の一部での酸素の欠乏により、脳梗塞もしくは虚血、または脊髄の梗塞もしくは虚血を含むニューロンの損傷または死が生じる；
（２）外傷性の病変：これには、物理的損傷によって、または外科手術に伴って生じる病変、例えば、神経系の一部を切断する病変または圧迫損傷が含まれる；
（３）悪性の病変：ここでは、神経系に関係している悪性腫瘍、または神経系以外の組織に由来する悪性腫瘍のいずれかである悪性組織によって、神経系の一部が破壊されるかまたは損傷する；
（４）感染性の病変：ここでは、神経系の一部が、例えば、膿瘍による感染、あるいはヒト免疫不全ウイルス、帯状疱疹ウイルス、もしくは単純ヘルペスウイルスによる感染、またはライム病、結核、もしくは梅毒への感染の結果として破壊されるかまたは損傷する；
（５）変性性の病変：ここでは、神経系の一部が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、および網膜変性に伴う変性を含むがこれらに限定されない変性プロセスの結果として破壊されるかまたは損傷する；
（６）栄養上の病気または栄養障害に関係する病変：ここでは、神経系の一部が、ビタミンＢ１２の欠乏、葉酸の欠乏、ウェルニッケ失語症、タバコ−アルコール性弱視、マルキャファーバ・ビニャミ（Ｍａｒｃｈｉａｆａｖａ−Ｂｉｇｎａｍｉ）症候群（脳梁の一次変性）、およびアルコール性小脳変性症を含むがこれらに限定されない、栄養障害または代謝障害によって破壊されるかまたは損傷する；
（７）糖尿病（糖尿病性神経障害、顔面神経麻痺）、全身性エリテマトーデス、ガン、またはサルコイドーシスを含むがこれらに限定されない全身性疾患に伴う、神経学的病変；
（８）アルコール、鉛、または特定の神経毒を含む毒性物質によって引き起こされる病変；ならびに
（９）脱髄性の病変：ここでは、神経系の一部が、多発性硬化症、ＨＩＶ関連ミエロパシー、横断性脊髄症、または種々の病因、進行性多病巣性白質脳障害、および橋中央ミエリン溶解を含むがこれらに限定されない、脱髄性疾患によって破壊されるかまたは損傷する。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０４】
全量の化合物を、１回の用量として、または比較的短い時間にわたる注入によって投与することができ、また、より長い時間にわたって投与される複数回の用量で投与することもできる。さらに、化合物は、標的組織の部位またはその付近での全身的な送達のために埋め込むことができる徐放マトリックスにおいて投与することもできる。治療用化合物を含む化合物の制御放出に有用な意図されるマトリックスは当該分野で公知であり、ＤｅｐｏＦｏａｍ（登録商標）、生体高分子、マイクロポンプなどの物質が挙げられる。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０５】
本発明の化合物は、例えば、大脳内、髄腔内、静脈内、筋肉内、皮下、眼窩内、関節内、腹腔内、後頭内、動脈内、経口、膣内、直腸内、局所、鼻腔内、または経皮を含む、当該分野で公知の種々の経路によって哺乳動物に投与することができる。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１８】
成体Ｃ５７Ｂ１６雄性マウスから脳を素早く取り出し、−２０℃で３０秒間、イソペンタン中で凍結させた。２０μｍの冠状断面または矢状断面を低温保持装置上で切り取り、連続する切片を回収した。組織切片を、Ｃｈｅｎｇ等、Ｎａｔｕｒｅ  ４１７：４０５−４１０（２００２）に記載されている方法にしたがってインサイチュハイブリダイゼーション用に処理した。簡単に言うと、組織切片をプロテイナーゼＫで前処理し、リボプローブと６０℃で１８時間ハイブリダイズさせ、その後、ＲＮＡｓｅ消化、高いストリンジェンシーでの洗浄、および脱水を行った。次いで、組織切片をＢｉｏＭａｘフィルム（Ｋｏｄａｋ）に３〜４日間露光させた。ｍＲＮＡの分布をオートラジオグラムおよび乳濁液に浸した切片について分析した。特異的なハイブリダイゼーションシグナルを、ビデオ型コンピューター画像解析システム（ＭＣＩＤ、Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｃａｔｈａｒｉｎｅ’ｓ  Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を使用して既知の放射活性の１４Ｃ標準物と比較することによって定量的に分析した。光学密度対放射活性（ｄｐｍ／ｍｇ組織の湿重量の検量線を、１４Ｃ標準物を使用して構築した。オートラジオグラフの画像をＭＣＩＤを使用して獲得し、そして乳濁液に浸した脳の画像を、透過型顕微鏡（ＢＸ５０、Ｏｌｙｍｐｕｓ）下でＳｐｏｔカメラソフトウェアバージョン２．２．２（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓｔｅｒｌｉｎｇ  Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＭＩ）を使用することによって撮影した。図をＡｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ（バージョン５．５）を使用することにより作成した。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２４】
網膜形成の間に、７つの重要な網膜細胞型が、眼杯の内層に存在している多能性網膜前駆細胞（ＲＰＣ）の共通の集団から誘導されることが知られている（Ｍａｒｑｕａｒｄｔ等、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５：３２−３８（２００２）。内顆粒層、すなわち、層６が、成体の網膜の中での多能性幹細胞の予想位置である。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２７】
神経幹細胞培養物を、ニューロスフェアと呼ばれるクローン状の球状細胞コロニーを形成する条件下で、成体マウスの側脳室の外側壁から確立させた（ＲｅｙｎｏｌｄｓおよびＷｅｉｓｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：１７０７−１７１０（２００２））。次いで、神経幹細胞を９種類の異なる条件下で培養した：ＥＧＦ、ＦＧＦ２、ＰＫ１、ＰＫ２、ＥＧＦ＋ＰＫ１、ＦＧＦ２＋ＰＫ１、ＥＧＦ＋ＰＫ２、ＦＧＦ＋ＰＫ２の存在下、または成長因子を含まない条件。インビトロで、６種類の異なる培養条件でのニューロスフェアの総数を、５日後にカウントし、５回の独立した実験によるニューロスフェアの平均の数を計算した。それぞれの独立した実験において、４匹の動物に由来する３００，０００個の側脳室壁細胞を９種類の異なる条件に分けた。以前の報告によれば、成長因子を加えなかった培養物においては、ニューロスフェアが検出されないか、またはいくつかのごく少ない数のスフェアが検出される。数に加えて、ニューロスフェアの形態をそれらの大きさおよび外観について記録する。ＰＫとＥＧＦおよび／またはＦＧＦ２の相乗効果の可能性についてもまた決定した。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２８】
その後、ニューロスフェアを形成している細胞を、それらが自己再生能力を有しているかどうか、および１つの条件下で増殖させた細胞が別の成長因子の存在下で増殖することができるかどうかを決定するために、異なる条件下で試験した。インビトロで、８日後にニューロスフェアを解離させ、単一の成長因子の中で増殖させたそれぞれの培養物を２等分した；片方の半分は、継代前と同じ成長因子の中で増殖させ続け、他方の半分を他の成長因子の中で増殖させた。両方の成長因子の中で増殖させたニューロスフェアは、両方の成長因子の中で増殖させ続け、成長因子を含めずに増殖させたニューロスフェアは成長因子を含めずに増殖させ続けた。継代後５日で、ニューロスフェアの総数を、５回の独立した実験からカウントした。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２９】
初代神経細胞を調製するために、４〜８ヶ月齢のＣＤ−１  アルビノマウスを、ペントバルビタールの腹腔内注射（１２０ｍｇ／ｋｇ）によって麻酔し、頚椎脱臼によって屠殺した。脳を取り出し、人工的な脳脊髄液（ａＣＳＦ）（１２４ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、１．３ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍＭのＣａＣｌ２、２６ｍＭのＮａＨＣＯ３、および１０ｍＭのＤ−グルコース、ｐＨ７．３）中に入れ、室温で９５％Ｏ２／５％ＣＯ２でエアレーションした。上衣下星細胞腫を冠状断面化の後に単離し、１ｍｍ３の小片になるように切断した。小片を、１．３ｍｇ／ｍｌのトリプシン（Ｔｙｐｅ  ＸＩＩ，９０００  ＢＡＳＦ単位／ｍｇ；Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、０．６７ｍｇ／ｍｌのヒアルロニダーゼ（２０００単位／ｍｇ；Ｓｉｇｍａ）、および０．２ｍｇ／ｍｌのキヌレン酸（Ｓｉｇｍａ）を含む３０ｍｌのａＣＳＦ中に移し、連続的な酸化および攪拌下で３２〜３４℃で９０分間インキュベートした。その後、組織切片をａＣＳＦ中で１０分間リンスし、０．７ｍｇ／ｍｌのオボムコイド（Ｓｉｇｍａ）を含むＤＭＥＭ／Ｆ１２培地（１：１ｖ／ｖ；Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）に移し、炎で研磨した（ｆｉｒｅ−ｐｏｌｉｓｈｅｄ）パスツールピペットで注意深く粉砕した。細胞を遠心分離によって回収し、２ｍＭのＬ−グルタミン、０．６％のグルコース、９．６ｇｍ／ｍｌのプトレッシン、６．３ｎｇ／ｍｌのプロゲステロン、５．２ｎｇ／ｍｌの亜セレン酸ナトリウム、０．０２５ｍｇ／ｍｌのインシュリン、０．１ｍｇ／ｍｌのトランスフェリン、および２μｇ／ｍｌのヘパリン（ナトリウム塩、等級ＩＩ；Ｓｉｇｍａ）を含む、成長因子を含まない化学的に定義されているＤＭＥＭ／Ｆ１２培地（コントロール培地）中に再懸濁した。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３０】
上記のように調製した細胞を、成長因子（ＧＦ；ＦＧＦ２（ヒト組換え体、２０ｎｇ／ｍｌ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，ＮＪ、もしくはＵｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌａｋｅ  Ｐｌａｃｉｄ，ＮＹ）、ＥＧＦ（ヒト組換え体、２０ｎｇ／ｍｌ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）のいずれか）、または組み換えのヒトＰＫ１もしくはＰＫ２（１０ｎＭ、もしくは１０ｎｇ／ｍｌ）を有するコントロール培地を含む３５ｍｍのペトリ皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）にプレートした。培地を３〜４日おきに交換した。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３１】
集団の分析のために、初代細胞を３５００細胞／ｃｍ２でプレートし、８〜１０日後に形成したスフェアを集め、遠心分離（８００×ｇで１０分間）によって回収し、単細胞懸濁物になるように機械的に解離させ、適切なＧＦ（単数または複数）を含む培地中に再度プレートした。この手順を、６ヶ月までインビトロで８〜１０日（ＤＩＶ）ごとに繰り返した。生存可能な細胞の総数を、トリパンブルー排除によってそれぞれの継代で評価し、カルセイン／ヨウ化プロピジウム技術によって確認した。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３２】
初代培養物中の幹様細胞の数を評価するために、ＥＧＦ、ＦＧＦ２、または組み換えヒトＰＫ２に応答する皿上にプレートされた幹様細胞の数の定量的決定ができる培養条件を確立した。この方法論は、成体の神経幹細胞について開発されており（Ｇｒｉｔｔｉ等、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６：１０９１−１１００（１９９６））、これは種々の造血組織から単離されたクローン形成性細胞の型および数を評価するための従来からのアッセイにからは変更が加えられている（Ｂｏｄｉｎｅ等、Ｂｌｏｏｄ  １５；７８：９１４−９２０（１９９１）；Ｂｏｄｉｎｅ等、Ｂｌｏｏｄ  ７９：９１３−９１９（１９９２））。脳室下の組織を単細胞の懸濁物となるように解離させ、これをメチルセルロースゲルマトリックス（１．５％の最終濃度；Ｄｏｗ  Ｍｅｔｈｏｃｅｌｌ  Ａ４  Ｍ、ｐｒｅｍｉｕｍ  ｇｒａｄｅ）中に包埋して凝集を防ぎ、＜１０の生存可能な細胞／ｃｍ２の最終密度でプレートし、適切なＧＦの存在下で球状のクローンが形成されるまで培養した（８〜１０日間インビトロで（ＤＩＶ））。ＦＧＦ２、ＥＧＦ、または組み換えＰＫ１もしくはＰＫ２の存在下で形成されたスフェアの数をカウントすることにより、試験した条件下で増殖することができるプレートされた幹細胞の数を得た。これらの培養物中の単細胞、ダブレット、およびトリプレットの数を評価するために、試料をガラスのカバースライド上に播種し、４’，６−ジアミノ−２−フェニルインドール二塩酸塩で対比染色した（ＤＡＰＩ；メタノール中で１ｍｇ／ｍｌ；３７℃で１５分間）細胞核をカウントした。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３５】
複数の免疫蛍光アッセイを以下のように行った。上衣下星細胞腫組織（１０００細胞／ｃｍ２）から新しく解離した細胞、および連続して継代したクローンのスフェアを、ポリオルニチンでコーティングしたガラスカバースライド上にプレートした。分化の実験のために、細胞を、ＧＦを含まない培養培地中に５日間、その後、ウシ胎児血清を加えてさらにインビトロで２〜５日間（ＤＩＶ）プレートした。初代培養物または分化した培養物を、ＰＢＳ中の４％のパラホルムアルデヒド（ｐＨ７．４）で固定し（２０分間）、ＰＢＳで３回リンスした。その後、カバースライドを、１０％の正常なヤギの血清（ＮＧＳ）、０．３％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、および適切な一次抗体または抗血清を含むＰＢＳ中で３７℃で９０分間インキュベートした。ＰＢＳおよび１０％のＮＧＳでの徹底的な洗浄の後、細胞を、二次フルオレセインイソチオシアネート結合ヤギ抗マウスもしくは抗ウサギＩｇＧ抗体、またはローダミンイソチオシアネート結合ヤギ抗マウスもしくは抗ウサギＩｇＧ抗体（１：１００；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）とともに、あるいは、７−アミノ−４−メチルクマリン−３−酢酸に結合させたロバ抗マウスＩｇＭ抗体（１：１００；Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）とともに４５分間（室温）反応させた。カバースライドをＰＢＳ中で３回、蒸留水中で１回リンスし、Ｆｌｕｏｒｓａｖｅ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）でガラススライド上に取り付けた。免疫染色後、カバースライドをＤＡＰＩで対比染色した。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３８】
組み換えプロキネチシンを脳室内（ＩＣＶ）注射によってラットの脳に投与し、神経発生を試験した。組み換えＰＫ１およびＰＫ２を注入するための手順は以下のとおりである。成体Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをケタミンで麻酔し、Ｃｈｅｎｇ等、Ｎａｔｕｒｅ  ４１７：４０５−４１０（２００２）に記載されているように、浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ  ２００２；Ａｌｚａ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を埋め込んだ。カニューレを右側脳室に、軟膜の表面に対して４．０ｍｍの深さ、ブレグマに対して＋０．０ｍｍの前後関係、および中線に対して１．８ｍｍ横に差し込んだ。それぞれのラットに、０．１ＭのＰＢＳ中に溶解させたヒト組み換えプロキネチシン１またはプロキネチシン２（１μｇ／ｍｌ）、あるいはＰＢＳのみのいずれかを、１０μｌ／日で１４日間注入した。プロキネチシンまたは媒体を注入した脳で新たに生じた細胞を標識するために、細胞増殖マーカーであるＢｒｄＵを、プロキネチシンまたはＰＢＳと同じ速さ（１２μｇ／日）で同じミニポンプによって注入した。プロキネチシンとＢｒｄＵ、またはＰＢＳとＢｒｄＵの注入の停止後、カニューレは側脳室に残し、動物をさらに１６日生存させておき、その後、潅流した。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３９】
組み換えプロキネチシンのＩＣＶ注入により神経発生が調節されるかどうかを決定するために、ヒトプロキネチシン１または２の投与（ｎ＝３）後に前脳に新たに生じた細胞の分布および数を試験し、単独で与えたコントロールの媒体である０．１ＭのＰＢＳの投与後の結果（ｎ＝３）と比較した。試験した領域には、側脳室の脳室下領域（ＳＶＺ）、嗅球、嗅ヘルニア、海馬の歯状回、大脳皮質領域、および神経の増殖、分化、または移動が生じるか、あるいはＰＫＲ１またはＰＫＲ２が発現されている脳の他の領域を含めた。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４２】
いくつかの切片を、ＢｒｄＵで標識された細胞のみが視覚化されるように処理し、一方他の切片は抗ＢｒｄＵと、新たに生じた細胞の表現形を決定するための細胞型特異的マーカーに対する抗体で二重標識した。ニューロンを同定するために、抗体ＴｕＪ１（１：４００）（Ｃｏｖａｎｃｅ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）（これは、通常は未熟なニューロンによって発現されるニューロン特異的βＩＩＩ−チューブリンを認識するマウスポリクローナルＩｇＧである（Ｌｅｅ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：７１９５−７１９９（１９９０）））、または微小管結合タンパク質−２（ＭＡＰ２）に対するモノクローナル抗体（１：２００；Ｒｏｃｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）（これは、より分化したニューロンを認識する（Ｂｅｒｎｈａｒｄｔ等、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５：９７７−９９１（１９８５）））を使用した。グリア細胞線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）に対するポリクローナル抗体（１：５００希釈；Ｄａｋｏ，Ｇｌｏｓｔｒｕｐ，Ｄｅｎｍａｒｋ；Ｂｉｇｎａｍｉ等、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．４３：４２９−４３５（１９７２））も、星状細胞を同定するために、そして１：２００希釈（Ｃｈｅｎｇ等、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８：５６７３−５６８１（１９９８））のマウスモノクローナル抗ミエリンプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）を乏突起膠細胞を同定するために使用した。未分化の細胞についてのマーカーとして、中間フィラメントタンパク質であるネスチンに対するマウスモノクローナル抗体（ＨｏｃｋｆｉｅｌｄおよびＭｃＫａｙ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５：３３１０−３３２８（１９８５））；ＦｒｅｄｅｒｉｋｓｅｎおよびＭｃＫａｙ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８：５６７３−５６８１（１９８８））は、希釈していない上清として使用した（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ｂａｎｋ，Ｉｏｗａ  Ｃｉｔｙ，ＩＡ）。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４８】
動物をペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、心臓を介して０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中の４％のパラホルムアルデヒドを注入した。脳を取り出し、４％のパラホルムアルデヒド中で一晩固定し（ｐｏｓｔ−ｆｉｘｅｄ）、０．３２Ｍのスクロースに移した。切片（４０μｍ）を低温保持装置を用いて切断し、凍結防止溶液（グリセロール、エチレングリコール、および０．１Ｍのリン酸緩衝液、ｐＨ７．４、３：３：４の容量）中で−２０℃で保存した。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５６】
【図１】図１は、ＰＫＲ２の３’非翻訳領域（ＵＴＲ）リボプローブを使用した成体マウスの脳の矢状断面のインサイチュハイブリダイゼーションの結果を示す。ＰＫＲ２  ｍＲＮＡの発現が、側脳室の脳室下領域（ＳＶＺ）、嗅球、嗅ヘルニア（ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ）、および海馬の歯状回において見られる。ＲＭＳ：ｒｏｓｔｒａｌ  ｍｉｇｒａｔｏｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ；ＯＢ：嗅球；ＣＰｕ：ｃａｕｄａｔｅ  ｐｕｔａｍｅｎ。図１Ａおよび１Ｂは明視野画像であり；図１Ｃおよび１Ｄは暗視野画像であり；図１Ｅおよび１Ｆはニッスル染色である。
【図２】図２は、ＰＫＲ２の３’ＵＴＲリボプローブを使用した、成体マウスの脳の冠状断面のインサイチュハイブリダイゼーションの結果を示す。ＰＫＲ２  ｍＲＮＡの発現は、側脳室のＳＶＺ、嗅球、嗅ヘルニアにおいて見られる。ＯＶ：嗅ヘルニア；Ｃｘ：大脳皮質。図１Ａ、１Ｄ、および１Ｆは明視野画像であり；図１Ｂおよび１Ｆは暗視野画像であり；図１Ｃおよび１Ｇはニッスル染色である。ＰＫＲ２  ｍＲＮＡは、種々の脳領域（例えば、皮質領域）の散在している細胞または細胞群においても発現されている（図１Ｆ）。
【図３】図３は、ＰＫＲ１の３’ＵＴＲリボプローブを使用した、成体マウスの脳の環状断面のインサイチュハイブリダイゼーションの結果を示す。ＰＫＲ１  ｍＲＮＡの発現は、側脳室のＳＶＺ、嗅球、および海馬の歯状回において見られる。全てのパネルは明視野画像を示す。
【図４】図４は、ＰＫ２リボプローブを使用した、成体マウスの脳の環状断面のインサイチュハイブリダイゼーションの結果を示す。ＰＫ２  ｍＲＮＡの発現は、嗅球で見られる。図１Ａは明視野画像であり；図１Ｂは暗視野画像であり；図１Ｃはニッスル染色である。
【図５】図５は、ＰＫＲ２の３’ＵＴＲリボプローブを用いた、成体マウスの網膜のインサイチュハイブリダイゼーションの結果を示す。上段左：眼の暗視野画像；上段右：眼のニッスル染色；下段左：網膜でのＰＫＲ２の発現；下段右：ニッスル染色。
【図６−１】図６は、配列番号１〜２１と名付けたアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を示す。ヒトＰＫ１プロモータ（配列番号１７）中の予想されるサイクリックＡＭＰ応答エレメントを、下線を伴って太字で示す。
【図６−２】図６−２は、図６−１の続きである。
【図６−３】図６−３は、図６−２の続きである。
【図６−４】図６−４は、図６−３の続きである。
【図６−５】図６−５は、図６−４の続きである。
【図６−６】図６−６は、図６−５の続きである。
【図６−７】図６−７は、図６−６の続きである。
【図６−８】図６−８は、図６−７の続きである。
【図６−９】図６−９は、図６−８の続きである。
【図６−１０】図６−１０は、図６−９の続きである。
【図６−１１】図６−１１は、図６−１０の続きである。
【図７Ａ】図７は、脳室下領域（ＳＶＺ）の神経芽細胞のＢｒｄＵの取り込みに対するＰＫ２の投与の短期間での効果を示す。図７Ａは、ＰＫ２で処置した動物およびコントロール動物に由来するニューロンのＢｒｄＵ免疫蛍光の代表的な画像を示し；図７Ｂは、ＰＫ２で処置した動物およびコントロール動物に由来するＢｒｄＵ陽性ニューロンの定量を示す。
【図７Ｂ】図７は、脳室下領域の神経芽細胞のＢｒｄＵの取り込みに対するＰＫ２の投与の短期間での効果を示す。図７Ａは、ＰＫ２で処置した動物およびコントロール動物に由来するニューロンのＢｒｄＵ免疫蛍光の代表的な画像を示し；図７Ｂは、ＰＫ２で処置した動物およびコントロール動物に由来するＢｒｄＵ陽性ニューロンの定量を示す。
【図８】図８は、ＰＫ２で長期間処置した動物および未処置の動物における嗅球（ＯＢ）ニューロンのＢｒｄＵ染色の代表的な画像を示す。
【図９】図９は、ＰＫ２で長期間処置した動物および未処置の動物におけるＢｒｄＵ陽性ＯＢニューロンの定量を示す。