【手続補正書】
【提出日】平成20年11月18日(2008.11.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａｓｎ１２１に対するＡｓｎ又はＧｌｎ以外の任意のアミノ酸置換を含むヒト線維芽細胞成長因子２１（以下、ヒトＦＧＦ−２１という）からなり、アミノ酸の番号付けが配列番号１に基づく、ヒトＦＧＦ−２１の突然変異タンパク質。
【請求項２】
前記突然変異タンパク質が、Ａｓｎ１２１Ａｌａ、Ａｓｎ１２１Ｓｅｒ、及びＡｓｎ１２１Ａｓｐからなる群から選択される、請求項１に記載の突然変異タンパク質。
【請求項３】
設計されたジスルフィド結合を含むヒトＦＧＦ−２１からなり、
ａ）システインが、ロイシン１１８及びアラニン１３４に対して置換され、
ｂ）Ａｓｎ又はＧｌｎを除く任意のアミノ酸が、Ａｓｎ１２１に対して置換され、
アミノ酸の番号付けが配列番号１に基づく、ヒトＦＧＦ−２１の突然変異タンパク質。
【請求項４】
前記突然変異タンパク質が、Ｌｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ａｓｐ、Ｌｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ａｌａ、及びＬｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ｓｅｒからなる群から選択される、請求項３に記載の突然変異タンパク質。
【請求項５】
設計されたジスルフィド結合を含むヒトＦＧＦ−２１からなり、
ａ）システインが、ロイシン１１８及びアラニン１３４に対して置換され、
ｂ）Ａｓｎ又はＧｌｎを除く任意のアミノ酸が、Ａｓｎ１２１に対して置換され、アミノ酸の番号付けが配列番号１に基づき、および
ｃ）１、２、３、又は４個のアミノ酸が、Ｎ末端から切断される、
ヒトＦＧＦ−２１の突然変異タンパク質の生物活性ペプチド。
【請求項６】
Δ（Ｈｉｓ１Ｐｒｏ２Ｉｌｅ３Ｐｒｏ４）−Ｌｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ａｓｐ、Δ（Ｈｉｓ１Ｐｒｏ２Ｉｌｅ３Ｐｒｏ４）−Ｌｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ａｌａ、及びΔ（Ｈｉｓ１Ｐｒｏ２Ｉｌｅ３Ｐｒｏ４）−Ｌｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ｓｅｒからなる群から選択される、請求項５に記載の生物活性ペプチド。
【請求項７】
設計されたジスルフィド結合を含むヒトＦＧＦ−２１からなり、
ａ）システインが、ロイシン１１８及びアラニン１３４に対して置換され、
ｂ）Ａｓｎ又はＧｌｎを除く任意のアミノ酸が、Ａｓｎ１２１に対して置換され、
ｃ）Ｓｅｒ又はＴｈｒを除く任意のアミノ酸が、Ｓｅｒ１６７に対して置換され、アミノ酸の番号付けが配列番号１に基づく、ヒトＦＧＦ−２１の突然変異タンパク質。
【請求項８】
前記突然変異タンパク質が、Ｌｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ａｌａ−Ｓｅｒ１６７Ａｌａ及びＬｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ａｓｐ−Ｓｅｒ１６７Ａｌａからなる群から選択され、アミノ酸の番号付けが配列番号１に基づく、請求項７に記載の突然変異タンパク質。
【請求項９】
設計されたジスルフィド結合を含むヒトＦＧＦ−２１からなり、
ａ）システインが、ロイシン１１８及びアラニン１３４に対して置換され、
ｂ）Ａｓｎ又はＧｌｎを除く任意のアミノ酸が、Ａｓｎ１２１に対して置換され、
ｃ）Ｓｅｒ又はＴｈｒを除く任意のアミノ酸が、Ｓｅｒ１６７に対して置換され、アミノ酸の番号付けが配列番号１に基づき、および
ｄ）１、２、３、又は４個のアミノ酸が、Ｎ末端から切断される、
ヒトＦＧＦ−２１の突然変異タンパク質の生物活性ペプチド。
【請求項１０】
Δ（Ｈｉｓ１Ｐｒｏ２Ｉｌｅ３Ｐｒｏ４）−Ｌｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ａｌａ−Ｓｅｒ１６７Ａｌａ及びΔ（Ｈｉｓ１Ｐｒｏ２Ｉｌｅ３Ｐｒｏ４）−Ｌｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ａｓｐ−Ｓｅｒ１６７Ａｌａからなる群から選択され、アミノ酸の番号付けが配列番号１に基づく、請求項９に記載の生物活性ペプチド。
【請求項１１】
治療上有効量の請求項１〜１０のいずれか１つに記載の突然変異タンパク質と、薬理学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項１２】
肥満症、２型糖尿病、又はメタボリック症候群に罹患した患者の治療用医薬を製造するための、有効量の請求項１〜１０のいずれか１つに記載のヒトＦＧＦ−２１の突然変異タンパク質の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
「ヒトＦＧＦ−２１突然変異タンパク質」は、野生型の成熟タンパク質の少なくとも１個のアミノ酸が、別の１個のアミノ酸で置換されているヒトＦＧＦ−２１を含むものと定義する。ＦＧＦ−２１突然変異タンパク質の例は、米国特許出願公開第６０／５２８，５８２号、米国特許出願公開第６０／６０６，８０５号、及び米国特許出願公開第６０／６０６，８３０号に記載されており、これらは参照することにより本願明細書に援用される。一般的に、突然変異タンパク質は、野生型タンパク質のいくつかの修飾特性（構造的又は機能的）を有する。例えば、突然変異タンパク質は、有利な生理活性プロフィールを維持しながら、濃縮溶液中での物理安定度を強化又は改善することができる（例えば、より低い疎水性の媒介された凝集）。突然変異タンパク質は、薬理学的な防腐剤（例えば、ｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール）と高い親和性を有することから、貯蔵の間にタンパク質の物理化学的特質及び生物活性を維持する保存製剤の調製が可能である。酵母において発現する場合、突然変異タンパク質は、Ｏ型グリコシル化の程度を減少させることができる。突然変異タンパク質は、野生型ＦＧＦ−２１と比較して、脱アミド化を減少させることができる。脱アミド化の処理は、タンパク質の安定性／活性に影響を与える可能性があり、Ａｓｎ又はＧｌｎの残基において発生しうることが十分に認識された現象である。Ａｓｎの脱アミド化は発生する場合が多く、該脱アミド化率は、タンパク質の１次、２次、及び３次構造に極めて依存する。このような脱アミド化によって、ペプチド又はタンパク質構造が構造的又は生物学的に重要な改変が生じる可能性がある。従って、野生型と比較して脱アミド化が減少した突然変異タンパク質は、生物学的な力価を維持しながら、構造的な改変を減少させる。本願明細書に使用されるこれらの用語は、限定することを意味するものではなく、所定の突然変異タンパク質が野生型タンパク質の１又は複数の修飾された特質を有することは全く可能である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
一定の線維芽細胞成長因子のペプチドフラグメントが生物学的に活性であることは、当技術分野において確立されている。例えば、Ｂａｉｒｄら、  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  （ＵＳＡ）  ８５：２３２４−２３２８  （１９８８）、及びＪ．  Ｃｅｌｌ．  Ｐｈｙｓ．  Ｓｕｐｐｌ．  ５：１０１−１０６  （１９８７）を参照されたい。従って、突然変異タンパク質の断片又はペプチドの選択は、従来技術において周知の基準に基づく。例えば、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）は、神経ペプチド、内分泌ペプチド、及びサイトカインの不活性化に関与するセリン型プロテアーゼであることが公知である（Ｄａｍｍｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７２：４２−５６，  （１９９９））。ＦＧＦ−２１のＮ末端（ＨｉｓＰｒｏＩｌｅＰｒｏ）は、ＤＰＰ−ＩＶに対する潜在的な基質となる２つのジペプチドを含み、４個以下のアミノ酸によってＮ末端で切断されているＦＧＦ−２１のフラグメントを生じる。予想外に、この野生型ＦＧＦ−２１のフラグメントは、生物活性を保持することが証明されており（表１）、従って、本発明の実施形態は、本発明のいずれの態様のアミノ酸置換と共に、４個以下のアミノ酸によってＮ末端において切断されている（ｄｅｓ−ＨＰＩＰ）本発明の突然変異タンパク質である。更に、出願人らは、Ｎ末端から５個以上のアミノ酸を切断すると、生物活性に否定的な影響を与えることを発見した。４個以下のアミノ酸によってＮ末端で切断される本発明の好ましい突然変異タンパク質は、ｄｅｓ−ＨＰＩＰ−Ｌｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ａｓｐ及びｄｅｓ−ＨＰＩＰ−Ｌｅｕ１１８Ｃｙｓ−Ａｌａ１３４Ｃｙｓ−Ａｓｎ１２１Ａｓｐ−Ｓｅｒ１６７Ａｌａである。