(57)【要約】  トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む試料を有機相及び水相からなる移動相を用いる高速液体クロマトグラフィーに供する工程を含む、トリフルリジン由来の類縁物質及びチピラシル由来の類縁物質の一方又は両方を検出するための方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む試料を有機相及び水相からなる移動相を用いる高速液体クロマトグラフィーに供する工程を含む、トリフルリジン由来の類縁物質及びチピラシル由来の類縁物質の一方又は両方を検出するための方法。
【請求項２】
前記類縁物質が下記類縁物質１〜５からなる群より選ばれる少なくとも１つである、請求項１に記載の方法：
類縁物質１：トリフルオロチミン、
類縁物質２：２−イミノピロリジン、
類縁物質３：５−クロロ−６−｛（２−オキソピロリジン−１−イル）メチル｝ピリミジン−２，４−（１Ｈ、３Ｈ）−ジオン、
類縁物質４：２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン、
類縁物質５：５−カルボキシウラシル。
【請求項３】
前記類縁物質が類縁物質３を含み、高速液体クロマトグラフィーにおける類縁物質３とトリフルリジンとの保持時間が１．０分以上異なっている、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
類縁物質１〜５、トリフルリジン及びチピラシルの保持時間における移動相全体に対する有機相の割合がいずれも７〜１５容量％である、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記有機相がメタノールを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
水相が、リン酸もしくはその塩またはこれらの混合物を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
類縁物質１、３、４及びトリフルリジンの保持時間における移動相全体に対する有機相の割合のうち、最も大きい値と最も小さい値との差が、移動相全体の５容量％以下である、請求項２〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
移動相のｐＨが２．０〜５．０である、請求項１〜７のいずか１項に記載の方法。
【請求項９】
トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の品質管理に用いられる２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）。
【請求項１０】
トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の不純物検出の際に標準品として用いるための２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）。
【請求項１１】
２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）の、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の品質管理の際の標準品としての使用。
【請求項１２】
２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）からなる、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の不純物検出の際の標準品。
【請求項１３】
トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤から単離することを特徴とする２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリフルリジン及びチピラシル含有製剤に含まれる、これらの物質の類縁物質の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般的に医薬品の類縁物質の測定は、液体クロマトグラフィーにより行われており、水及び有機溶媒の混液を移動相とした順相又は逆相カラムの系がよく用いられる。【０００３】
出願人の製品であるロンサーフ（登録商標）は、トリフルリジン及びチピラシルを含有する製剤である。【０００４】
当該トリフルリジン及びチピラシルを含む医薬品は、抗腫瘍剤として販売されており、その製剤について複数の報告がある（特許文献１、２、３、４）。そして、トリフルリジンの類縁物質として、５−トリフルオロメチルウラシル（トリフルオロチミン）、及び５−カルボキシウラシルが知られており、高速液体クロマトグラフィーでこれらを測定している報告がある（非特許文献１）。また、チピラシルの類縁物質として、５−クロロ−６−｛（２−オキソピロリジン−１−イル）メチル｝ピリミジン−２，４−（１Ｈ、３Ｈ）−ジオンがチピラシルの合成中間体として知られている（特許文献５）。【０００５】
トリフルリジンの類縁物質である５−トリフルオロメチルウラシルの測定のために、アセトニトリルを用いた様々な高速液体クロマトグラフィーの条件が報告されている（非特許文献２）。【０００６】
トリフルリジンの腫瘍細胞への取込みを測定するために、アセトニトリルを用いた高速液体クロマトグラフィーの条件が報告されている（非特許文献３）。【０００７】
トリフルリジンのＴＫ１の基質特異性の判断のために、アセトニトリルを用いた高速液体クロマトグラフィーの条件が報告されている（非特許文献４）。【０００８】
酵素合成におけるトリフルリジンを確認するために、酢酸トリメチルアンモニウムを添加し、グラジエントをかけた高速液体クロマトグラフィーの条件が報告されている（非特許文献５）。【０００９】
ロンサーフに含まれるトリフルリジンとチピラシルの定量的な測定のために、アセトニトリルを用いた高速液体クロマトグラフィーの条件が報告されている（非特許文献６、７、８）。【００１０】
点眼剤としてのトリフルリジンについて、メタノールを用いた高速液体クロマトグラフィーの条件が報告されている（非特許文献９、１０）。【００１１】
トリフルリジンについて、酢酸バッファー、トリフルオロ酢酸、もしくは酢酸を添加した移動相を用いた高速液体クロマトグラフィーの条件が報告されている（非特許文献１１、１２、特許文献６、１３）。【００１２】
また、トリフルリジンの純度を確認するために、高速液体クロマトグラフィーを用いているが、その条件は記載されていない（特許文献７）。【００１３】
血漿中のチピラシルを測定するために、酢酸アンモニウムを添加したメタノールを用いた高速液体クロマトグラフィーの条件（非特許文献１３）及びアセトニトリルを用いた条件（非特許文献１４）が報告されている。そして、チピラシルの合成中間体として、５−クロロ−６−（クロロメチル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）-ジオンが知られている（特許文献４）。【００１４】
当該医薬品の生産管理のために、主成分とそれらの類縁物質ピークを分離させ、且つ短時間で再現性よく分析する必要がある。しかし、これまで、トリフルリジン及びチピラシル由来の類縁物質を同一条件の高速液体クロマトグラフィーで検出する方法についての報告はない。また、２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジンが、当該トリフルリジン及びチピラシルを含む医薬品に含まれうる類縁物質であることは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】ＷＯ２０１３／１２２１３４
【特許文献２】ＷＯ２０１３／１２２１３５
【特許文献３】ＷＯ２００６／０８０３２７
【特許文献４】ＷＯ９６／３０３４６
【特許文献５】ＣＮ１０６７４９１９４Ａ
【特許文献６】ＣＮ１０５１９８９４７Ａ
【特許文献７】ＣＮ１０５４６１７７２Ａ
【特許文献８】日本特許４６０３２７４
【特許文献９】日本特許４４４１３１３
【特許文献１０】日本特許４４３７７８６
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｐ.Ｈｏｒｓｃｈら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ２２２（２００１）、ｐ．２０５−２１５
【非特許文献２】Ｄ．Ｖ．Ｍｏｉｓｅｅｖら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４１，１（２００７）、ｐ．２５−３３
【非特許文献３】Ｎ．ＴＡＮＡＫＡら、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ３２（２０１４）、ｐ．２３１９−２３２６
【非特許文献４】Ｋ．ＳＡＫＡＭＯＴＯら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ４６（２０１５）、ｐ．２３２７−２３３４
【非特許文献５】Ａ．Ｆｒｅｓｃｏ−Ｔａｂｏａｄａら、Ｃａｔａｌｙｓｉｓ  Ｔｏｄａｙ  ２５９（２０１５）、ｐ．１９７−２０４
【非特許文献６】Ｍ．Ｓ．Ｈ．Ｒｉｚｗａｎら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５（２０１７）、ｐ．３２−４２
【非特許文献７】Ｓ．ＧＯＤＡＹら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ，Ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｓｏｃｉａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ５（２０１７）、ｐ．９３−１０４
【非特許文献８】Ｋ．Ｊｏｇｉら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７（２０１７）、ｐ．６３−７０
【非特許文献９】Ｂ．Ｐａｗら、Ｐｈａｒｍａｒｉｚｅ  ７（１９９７）、ｐ．５５１−５５２
【非特許文献１０】Ｔ．Ｂｒｉｇｇｌｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ３８１（１９８６）、ｐ．３４３−３５５
【非特許文献１１】Ｍ．Ｒｉｅｇｅｌら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ５６８（１９９１）、ｐ．４６７−４７４
【非特許文献１２】Ｇ．Ｂａｌａｎｓａｒｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ３４８（１９８５）、ｐ．２９９−３０３
【非特許文献１３】Ｔ．Ｋａｗａｕｃｈｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ７５１（２００１）、ｐ．３２５−３３０
【非特許文献１４】Ｊ．Ｌｅｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ７７（２０１６）、ｐ．５１５−５２６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明が解決すべき課題は、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む試料に含まれるトリフルリジン由来の類縁物質、チピラシル由来の類縁物質を同一の手順で検出し得る方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明者らは鋭意検討した結果、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む試料を、有機相及び水相からなる移動相を用いる高速液体クロマトグラフィーに供することによって、トリフルリジン又はチピラシル由来の類縁物質を、別々の方法で検出するのではなく、同一の方法で検出可能な方法を見出した。【００１９】
したがって、本発明は、典型的には、次の［１］〜［１２］を提供するものである。【００２０】
［１］トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む試料を有機相及び水相からなる移動相を用いる高速液体クロマトグラフィーに供する工程を含む、トリフルリジン由来の類縁物質及びチピラシル由来の類縁物質の一方又は両方を検出するための方法。【００２１】
［２］前記類縁物質が下記類縁物質１〜５からなる群より選ばれる少なくとも１つである、［１］に記載の方法：
類縁物質１：トリフルオロチミン、
類縁物質２：２−イミノピロリジン、
類縁物質３：５−クロロ−６−｛（２−オキソピロリジン−１−イル）メチル｝ピリミジン−２，４−（１Ｈ、３Ｈ）−ジオン、
類縁物質４：２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン、
類縁物質５：５−カルボキシウラシル。【００２２】
［３］前記類縁物質が類縁物質３を含み、高速液体クロマトグラフィーにおける類縁物質３とトリフルリジンとの保持時間が１．０分以上異なっている、［２］に記載の方法。【００２３】
［４］類縁物質１〜５、トリフルリジン及びチピラシルの保持時間における移動相全体に対する有機相の割合がいずれも７〜１５容量％である、［２］又は［３］に記載の方法。【００２４】
［５］前記有機相がメタノールを含む、［１］〜［４］のいずれか１項に記載の方法。【００２５】
［６］水相が、リン酸もしくはその塩またはこれらの混合物を含む、［１］〜［５］のいずれか１項に記載の方法。【００２６】
［７］類縁物質１、３、４及びトリフルリジンの保持時間における移動相全体に対する有機相の割合のうち、最も大きい値と最も小さい値との差が、移動相全体の５容量％以下である、［２］〜［６］のいずれか１項に記載の方法。【００２７】
［８］移動相のｐＨが２．０〜５．０である、［１］〜［７］のいずか１項に記載の方法。【００２８】
［９］トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の品質管理に用いられる２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）。【００２９】
［１０］トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の不純物検出の際に標準品として用いるための２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）。【００３０】
［１１］２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）の、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の品質管理の際の標準品としての使用。【００３１】
［１２］２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）からなる、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の不純物検出の際の標準品。【００３２】
［１３］トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤から単離することを特徴とする２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）の製造方法。【００３３】
［１４］［１］〜［８］のいずれか１項に記載の方法を実施する工程を含む、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の製造方法。【００３４】
［１５］［１］〜［８］のいずれか１項に記載の方法を実施する工程を含む、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の品質管理方法。
【発明の効果】
【００３５】
本発明により、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む試料に含まれるトリフルリジン由来の類縁物質及びチピラシル由来の類縁物質を、同一の方法で検出することができる。従って、本発明の方法により、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む製剤の品質管理を、簡便かつ迅速に行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】実施例１におけるクロマトグラムを示す。
【図２】実施例１０におけるクロマトグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本発明におけるチピラシル（ＴＰＩ）とは、５−クロロ−６−（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル−２，４（１Ｈ、３Ｈ）−ピリミジンジオンであり、下記の構造を持つ化合物である。
【００３８】
【化１】
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【００３９】
本発明におけるトリフルリジン（ＦＴＤ）とは、α，α，α−トリフルオロチミジンであり、下記の構造を持つ化合物である。
【００４０】
【化２】
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【００４１】
本発明において、トリフルリジン及びチピラシルが光学異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体等の異性体を有する場合には、特に明記しない限り、いずれの異性体、及びそれらとチピラシル及び／又はトリフルリジンとの混合物を試料として用いる方法も本発明に包含される。
【００４２】
本発明において、特にそうでないことを明記しない限り、塩とは、薬学的に許容される塩を意味し、塩基付加塩又は酸付加塩を挙げることができる。
【００４３】
該塩基付加塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；例えばアンモニウム塩；例えばトリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、プロカイン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等の有機アミン塩等が挙げられる。
【００４４】
該酸付加塩としては、例えば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、過塩素酸塩等の無機酸塩；例えば酢酸塩、ギ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、トリフルオロ酢酸塩等の有機酸塩；例えばメタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩等のスルホン酸塩等が挙げられる。
【００４５】
本発明に用いられるトリフルリジン又はその塩として、好ましくは塩を形成していないトリフルリジンのフリー体である。また、本発明に用いられるチピラシル又はその塩として、好ましくはチピラシル塩酸塩である。本発明に用いられるトリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む試料として、好ましくはトリフルリジンのフリー体、及びチピラシル塩酸塩を含む試料である。
【００４６】
本発明の方法は、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む試料を、複数回測定することなく1回の高速液体クロマトグラフィーで、これらの類縁物質を検出可能な方法である。尚、試料中にトリフルリジンに由来する類縁物質及びチピラシルに由来する類縁物質の両方が含まれている場合にこれらの両方を一回の測定で検出できる方法であれば、試料中にトリフルリジンに由来する類縁物質及びチピラシルに由来する類縁物質の一方しか含まれていなかったか、または類縁物質が含まれていなかったため、結果的にこれらの類縁物質を両方検出されなかったとしても、本発明に包含される。
【００４７】
本発明における試料は、トリフルリジン又はチピラシル由来の類縁物質を含みうる。類縁物質としては類縁物質１〜６の化合物が挙げられる。
【００４８】
【表１】
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【００４９】
類縁物質１は、トリフルオロチミンであり、トリフルリジン由来の類縁物質である。５−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンと称されることもある。
【００５０】
類縁物質２は、２−イミノピロリジンであり、チピラシル由来の類縁物質である。
【００５１】
類縁物質３は、５−クロロ−６−｛（２−オキソピロリジン−１−イル）メチル｝ピリミジン−２，４−（１Ｈ、３Ｈ）−ジオンであり、チピラシル由来の類縁物質である。
【００５２】
類縁物質４は、２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジンであり、トリフルリジン由来の類縁物質である。１−（（２Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル）−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボン酸メチルと称されることもある。
【００５３】
類縁物質５は、５−カルボキシウラシルであり、トリフルリジン由来の類縁物質である。２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボン酸と称されることもある。
【００５４】
類縁物質６は、５−クロロ−６−（クロロメチル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）-ジオンであり、チピラシル由来の類縁物質である。
【００５５】
本発明に用いられる試料としては、製剤や原薬そのものから調製した試料だけでなく、安定性などを確認するための試験において調製された試料、各類縁物質の保持時間（クロマトグラムのピーク）等を確認するために各類縁物質を添加した試料、製剤や原薬の製造工程を確認するために調製された試料などにも用いることができる。
【００５６】
本発明で用いることができる製剤（配合剤、組成物等と記載することもある）には、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む。そして、必要に応じて薬学的に許容される担体を配合し、予防又は治療目的に応じて各種の投与形態を採用可能であり、該形態としては、例えば、経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤等のいずれでもよく、好ましくは、経口剤が採用される。これらの投与形態は、各々当業者に公知慣用の製剤方法により製造できる。
【００５７】
薬学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用の各種有機或いは無機担体物質が用いられ、固形製剤における賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等として配合される。また、必要に応じて防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、安定化剤等の製剤添加物を用いることもできる。
【００５８】
経口用固形製剤を調製する場合は、本発明化合物に賦形剤、必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。
【００５９】
また、上記投与形態を有する薬剤の１日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって適宜決定することができる。
【００６０】
本発明において用いられる高速液体クロマトグラフィーは、通常市販されているものを用いることができる。
【００６１】
高速液体クロマトグラフィーにおいて、有機相及び水相を混合して移動相とし、これをカラムに注入することにより、医薬品の分析に用いることができる。本発明では、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を試料に含むため、トリフルリジン、チピラシルのそれぞれを元にした測定条件が必要となる。１つの高速液体クロマトグラフィーの測定条件でトリフルリジン、トリフルリジン由来の類縁物質、チピラシル、チピラシル由来の類縁物質を測定できれば、品質管理に非常に有用である。
【００６２】
クロマトグラフィーで用いられるカラムには、有機相を移動相にして脂溶性のある化合物を分離する順相カラムと、水相を移動相にして化合物を分離する逆相カラムが知られているが、高速液体クロマトグラフィーでは、逆相カラムが使用されることが多く、本発明においても逆相クロマトグラフィーが好ましい。
【００６３】
本発明において使用できる高速液体クロマトグラフィーのカラムは、シリカゲルカラム、表面をオクタデシルシリル基で修飾されたシリカゲルカラム（ＯＤＳカラム又はＣ１８カラム）、表面をオクチル基で修飾されたシリカゲルカラム（Ｃ８カラム）、表面をシアノプロピル基で修飾されたシリカゲルカラム（ＣＮカラム）、表面をフェネチル基で修飾されたシリカゲルカラム（Ｐｈカラム）、表面をアミノプロピル基で修飾されたシリカゲルカラム（ＮＨカラム）、表面をジヒドロキシプロピル基で修飾されたシリカゲルカラム（Ｄｉｏｌカラム）、各種ポリマーで充填されたカラム（ポリマーカラム）、イオン交換樹脂で充填されたカラム（イオン交換カラム）、などから選択されるが、本発明においてはＯＤＳカラムが好ましい。
【００６４】
ＯＤＳカラムとしては、シリカゲルの粒径、細孔径、オクタデシルシリル基の結合方法、オクタデシルシリル基の置換度等が異なる種々のものを使用することができる。本発明においては、シリカゲルの平均粒径は、例えば、２〜１０μｍが好ましく、３〜５μｍがより好ましい。シリカゲルの平均粒径は、レーザー回折法等により測定することができる。シリカゲルの平均細孔径は、例えば、６〜２０ｎｍが好ましく、８〜１３ｎｍがより好ましい。シリカゲルの平均細孔径は、ガス吸着法等により測定することができる。シリカゲルにおけるオクタデシルシリル基の結合様式としては、例えば、モノメリック様式、ポリメリック様式等が好ましい。シリカゲルの炭素量は、例えば、３〜２５％が好ましく、８〜２５％がより好ましく、１０〜２０％がより好ましい。シリカゲルの炭素量は、種々の方法により測定することができる。本発明においては、塩基性化合物であるチピラシル及びその類縁物質のピーク形状の改善及び分離しやすさの観点から、オクタデシル化後に残存したシラノールを低分子のシリル化剤で処理したＯＤＳカラム（エンドキャッピングされたＯＤＳカラム）が好ましく、より好ましくは炭素量が１０％以上となるようにエンドキャッピングされたＯＤＳカラムである。特に好ましくは、Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ  ５Ｃ１８  ＲＳ（和光純薬製）、又はＩｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４（ＧＬサイエンス社製）である。
【００６５】
高速液体クロマトグラフィーの移動相に用いられる有機相としては、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、クロロホルム、塩化メチレンなどの非極性溶媒、アセトン、ジメチルスルホキシド、アセトニトリルなどの非プロトン性極性溶媒、酢酸、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリルなどを用いることができる。これらの溶媒は、１種単独で、又は２種以上を混合溶媒として用いることができる。本発明における有機相としては、メタノール、又はアセトニトリルが好ましく、メタノールがより好ましい。また、有機相には１０％以下の水が含まれていてもよい。
【００６６】
高速液体クロマトグラフィーの移動相に用いられる水相には、水のみだけでなく、１０％以下の上記有機溶媒が含まれていてもよいが、好ましくは、水のみである。
【００６７】
高速液体クロマトグラフィーの移動相では、再現性を確保する観点から様々な緩衝剤を添加することができる。例えば、酢酸又はその塩、クエン酸又はその塩、酒石酸又はその塩、リン酸又はその塩を添加することができる。酢酸又はその塩としては、酢酸、酢酸ナトリウムが挙げられる。クエン酸又はその塩としては、クエン酸、クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、クエン酸三ナトリウムが挙げられる。酒石酸又はその塩には、酒石酸、酒石酸ナトリウム、リン酸又はその塩としては、リン酸、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウムが挙げられる。本発明における水相の添加剤としては、測定物質の持つ性質、測定の際に得られるピークの形状、及び測定の再現性の観点から、リン酸又はその塩が好ましく、リン酸、リン酸二水素ナトリウムがより好ましい。これらの添加剤は、１種単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００６８】
本発明に用いることができる緩衝剤の濃度は、高速液体クロマトグラフィーの測定中に緩衝剤が析出しない濃度であれば適宜調整することができる。好ましくは、１〜５０ｍＭであり、より好ましくは５〜２０ｍＭであり、特に好ましくは９〜１１ｍＭである。
【００６９】
高速液体クロマトグラフィーの移動相では、有機相と水相の混液が用いられる。本発明においては、類縁物質１、３、４及びトリフルリジンのからなる群より選ばれる１つ又は２つ以上の物質の保持時間（好ましくは、類縁物質１、３、４及びトリフルリジンの保持時間）における、移動相全体に対する有機相の割合が、移動相全体の５〜２０容量％であることが好ましく、７〜１５容量％であることがより好ましい。また、本発明においては類縁物質１、２、３、４、トリフルリジン、及びチピラシルの保持時間における、移動相全体に対する有機相の割合が、いずれも７〜１５容量％であることが特に好ましい。
【００７０】
本発明において、より好ましくは、移動相がメタノール及び水相からなり、かつ類縁物質１、３、４及びトリフルリジンからなる群より選ばれる１つ又は２つ以上の物質の保持時間（好ましくは、類縁物質１、３、４及びトリフルリジンの保持時間）における、移動相全体に対するメタノールの割合が移動相全体の５〜２０容量％である。より好ましくは、移動相がメタノール及びリン酸又はリン酸二水素ナトリウムを含む水相からなり、かつ類縁物質１、３、４及びトリフルリジンからなる群より選ばれる１つ又は２つ以上の物質の保持時間（好ましくは、類縁物質１、３、４及びトリフルリジンの保持時間）における、移動相全体に対するメタノールの割合が移動相全体の５〜２０容量％である。特に好ましくは、移動相がメタノール及びリン酸又はリン酸二水素ナトリウムを含む水相からなり、かつ類縁物質１、３、４及びトリフルリジンからなる群より選ばれる１つ又は２つ以上の物質の保持時間（好ましくは、類縁物質１、３、４及びトリフルリジンの保持時間）における、移動相全体に対するメタノールの割合が移動相全体の７〜１５容量％である。
【００７１】
高速液体クロマトグラフィーの移動相では、有機相と水相の混液が用いられるが、それらの割合は測定中に変化させることが多く、グラジエントをかけると呼ばれる。通常、目的とされる化合物の保持時間及び目的とする化合物と類縁物質との分離を考慮して、グラジエントをかけることが多い。
【００７２】
本発明においては、類縁物質１、３、４及びトリフルリジンの保持時間における移動相全体に対する有機相の割合のうち、最大値と最小値との差が、移動相全体の５容量％以下であることが好ましく、１容量％以下であることが特に好ましく、アイソクラティック状態であることがより特に好ましい。また、本発明においては、測定時間中における、移動相全体に対する有機相の割合の変化（測定時間中における移動相全体に対する有機相の割合のうち、最大値と最小値との差）を移動相全体の５容量％以下にすることが好ましく、１容量％以下にすることが特に好ましく、アイソクラティック状態であることがより特に好ましい。
【００７３】
本発明においては、上記の添加剤の他に、イオン対試薬を添加することができ、類縁物質をカラムに保持させるために重要な役割を果たす。イオン対試薬には、プロピルスルホン酸ナトリウム、ブチルスルホン酸ナトリウム、ペンタンスルホン酸ナトリウム、ヘキサンスルホン酸ナトリウム、ヘプタンスルホン酸ナトリウム、オクタンスルホン酸ナトリウム、ドデカンスルホン酸ナトリウムなどのアルキルスルホン酸又はその塩（好ましくはアルキルスルホン酸ナトリウム、特に好ましくは炭素数７〜１２の直鎖又は分枝鎖状アルキルスルホン酸ナトリウム）、ドデシル硫酸ナトリウム、水酸化テトラエチルアンモニウム、水酸化テトラブチルアンモニウム、塩化テトラブチルアンモニウム、臭化テトラブチルアンモニウムなどの４級アンモニウム塩、トリヘキシルアミン、トリオクチルアミンなどの３級アミンを用いることができる。本発明におけるイオン対試薬として、好ましくは炭素数７〜１２の直鎖又は分枝鎖状アルキルスルホン酸又はその塩（特に、炭素数７〜１２の直鎖又は分枝鎖状アルキルスルホン酸ナトリウム）であり、より好ましくは１−ヘプタンスルホン酸又はその塩（特に、１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム）である。これらのイオン対試薬は、１種単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００７４】
本発明における移動相のｐＨは、上記の添加剤などにより適宜調整することができるが、好ましくは２．０〜５．０であり、より好ましくは２．６〜２．８である。
【００７５】
本発明における方法で用いることができる検出波長は、各類縁物質の性質を考慮して２０５〜２３０ｎｍとすることができ、好ましくは２０８〜２２０ｎｍであり、より好ましくは２０８〜２１２ｎｍである。
【００７６】
本発明における方法で用いることができるカラム内の移動相の温度は適宜設定することができる。外部環境の影響、再現性などを考慮し、好ましくは当該温度を一定に保つことであり、より好ましくは２５〜５０℃であり、さらに好ましくは３５〜４５℃であり、特に好ましくは３８〜４２℃である。なお、当該温度を一定に保つにあたり、カラム全体の温度を制御するだけでなく、プレヒートミキサーなどを用いることができる。
【００７７】
本発明における高速液体クロマトグラフィーでは、適宜、移動相の流速、注入量、などを変更することができる。本発明において、移動相の流速は、特に限定されないが、０．５〜２．０ｍＬ／ｍｉｎが好ましく、０．７〜１．３ｍＬ／ｍｉｎがより好ましい。
【００７８】
本発明の類縁物質は、公知の方法により合成できるか、又は市販品により入手することができる。このようにして得られた類縁物質の高速液体クロマトグラフィーの保持時間、マススペクトル、フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）からの結果と、本発明により検出された類縁物質のそれらとを比較することで、類縁物質を特定することができる。
【００７９】
さらに、これらの類縁物質は、外部標準を用いる方法、内部標準を用いる方法のいずれの方法によっても定量的に測定することができる。
【００８０】
これらの類縁物質が不純物として医薬品や製剤に含まれうる場合、これらの類縁物質は医薬品規制調和国際会議におけるガイドライン（ＩＣＨ−Ｑ３）に従って制御されるものである。本発明の方法は、当該ガイドラインの基準を満たすかどうか確認できるため、非常に有用である。
【００８１】
また、これらの類縁物質は、本発明の方法によりトリフルリジン又はその塩、チピラシル又はその塩から検出することができる。さらに、本発明は、類縁物質１〜５のうち１つ又は２以上を標準品として品質管理に用いることができ、好ましくは類縁物質４である。
【００８２】
このような標準品に用いられるトリフルリジン、チピラシル、及びこれら由来の類縁物質は、高純度のものになる。標準品としての純度は、好ましくは９９．０％以上であり、より好ましくは９９．９％以上である。従って、当該高速液体クロマトグラフィーの条件により分離された各類縁物質は、標準品として用いることができる。よって、本発明は、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤から単離することを特徴とする当該類縁物質の製造方法と言い換えることもできる。当該類縁物質は上記の類縁物質１〜５が挙げられ、好ましくは類縁物質４である。
【００８３】
本発明におけるトリフルリジン又はチピラシル由来の類縁物質の検出において、高速液体クロマトグラフィーによる方法が用いられる。
【００８４】
好ましくは、類縁物質１、３、４、トリフルリジンの保持時間における有機相が移動相全体の５〜２０容量％である高速液体クロマトグラフィーを用いる方法である。
【００８５】
より好ましくは、移動相がメタノール及び水相からなり、かつ類縁物質１、３、４、トリフルリジンの保持時間におけるメタノールが移動相全体の５〜２０容量％である高速液体クロマトグラフィーによる方法である。
【００８６】
より好ましくは、移動相がメタノール及びリン酸又はリン酸二水素ナトリウムを含む水相からなり、かつ類縁物質１、３、４、トリフルリジンの保持時間におけるメタノールが移動相全体の５〜２０％である高速液体クロマトグラフィーによる方法である。
【００８７】
より好ましくは、移動相がメタノール及びリン酸又はリン酸二水素ナトリウムを含む水相からなり、かつ類縁物質１、３、４、トリフルリジンの保持時間におけるメタノールが移動相全体の７〜１５％である高速液体クロマトグラフィーによる方法である。
【００８８】
より好ましくは、移動相がメタノール及びリン酸又はリン酸二水素ナトリウムを含む水相からなり、類縁物質１、３、４、トリフルリジンの保持時間におけるメタノールが移動相全体の７〜１５％であり、かつ測定時間中における有機相と水相の割合の変化を移動相全体の５％以下にする高速液体クロマトグラフィーによる方法である。
【００８９】
より好ましくは、移動相がメタノール及びリン酸又はリン酸二水素ナトリウムを含む水相からなり、類縁物質１、３、４、トリフルリジンの保持時間におけるメタノールが移動相全体の７〜１５％であり、測定時間中における有機相と水相の割合の変化を移動相全体の５％以下であり、かつイオン対試薬として１−ヘプタンスルホン酸ナトリウムを用いる高速液体クロマトグラフィーによる方法である。
【００９０】
本発明においては、トリフルリジン及びチピラシルの保持時間が短すぎると、類縁物質１〜５を分離することができない。また、トリフルリジン及びチピラシルの保持時間が長すぎると、測定時間に長時間を要してしまう。本発明において、トリフルリジンの保持時間は５〜３０分が挙げられ、５〜２０分が好ましい。また、本発明において、チピラシルの保持時間は５〜３０分が挙げられ、１０〜２５分が好ましい。
【００９１】
本発明において、類縁物質１と類縁物質４は高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間が非常に近くなる傾向にある。これを避けるため、類縁物質１と類縁物質４の保持時間の差は０．２分以上が挙げられ、好ましくは０．４分以上であり、より好ましくは０．５分以上である。
【００９２】
また、類縁物質３とトリフルリジンも高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間が非常に近くなる傾向にある。これを避けるため、類縁物質３とトリフルリジンの保持時間の差は０．２分以上が挙げられ、好ましくは０．５分以上であり、より好ましくは１．０分以上である。
【００９３】
さらに、本発明はトリフルリジン由来及びチピラシル由来の類縁物質の検出できるため、個別にトリフルリジン又はその塩からトリフルリジン由来の類縁物質のみを検出することもでき、同様に、チピラシル又はその塩からチピラシル由来の類縁物質のみを検出することもできる。
【００９４】
トリフルリジン又はその塩からトリフルリジン由来の類縁物質のみを検出する方法は、上記のトリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩からトリフルリジン由来の類縁物質又はチピラシル由来の類縁物質の一方又は両方を検出するための方法に準じるものであり、好適な実施形態は当該方法と同様である。
【００９５】
チピラシル又はその塩からチピラシル由来の類縁物質のみを検出する方法は、上記のトリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩からトリフルリジン由来の類縁物質又はチピラシル由来の類縁物質の一方又は両方を検出するための方法に準じる。そのため、以下に示す事項以外の実施形態は、上記の実施形態を採用することができる。
【００９６】
本発明をチピラシル又はその塩からチピラシル由来の類縁物質のみを検出する方法に用いる場合、高速液体クロマトグラフィーにおいて用いられるカラムとしては、上記と同様のカラムが用いられ、好ましくはＯＤＳカラムであり、より好ましくはＷａｋｏｓｉｌ−ＩＩ  ５Ｃ１８  ＲＳ（和光純薬製）、又はＩｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３（ＧＬサイエンス社製）である。
【００９７】
高速液体クロマトグラフィーの移動相に用いられる有機相としては、上記の有機溶媒を用いることができ、メタノール又はアセトニトリルが好ましく、アセトニトリルがより好ましい。
【００９８】
高速液体クロマトグラフィーの移動相に用いられる水相には、水のみだけでなく、１０％以下の有機溶媒が含まれていてもよいが、好ましくは、水のみである。
【００９９】
高速液体クロマトグラフィーの移動相では、再現性を確保する観点から様々な緩衝剤を添加することができる。添加できる緩衝剤としては上記の添加剤が挙げられ、リン酸又はその塩が好ましく、リン酸二水素カリウムがより好ましい。
【０１００】
緩衝剤の濃度は、上記の濃度で用いることができ、好ましくは、１〜５０ｍＭであり、より好ましくは２〜２０ｍＭであり、特に好ましくは３〜１０ｍＭである。
【０１０１】
高速液体クロマトグラフィーの移動相では、上記の有機相と水相の混液が用いられ、類縁物質３又はチピラシルの保持時間（好ましくは、類縁物質３及びチピラシルの保持時間）における、移動相全体に対する有機相の割合が、移動相全体の５〜２０容量％であることが好ましく、７〜１５容量％であることがより好ましい。
【０１０２】
高速液体クロマトグラフィーの移動相では、より好ましくは、移動相がアセトニトリル及び水相からなり、かつ類縁物質３又はチピラシルの保持時間（好ましくは、類縁物質３及びチピラシルの保持時間）における、移動相全体に対するアセトニトリルの割合が移動相全体の５〜２０容量％である。より好ましくは、移動相がアセトニトリル及びリン酸又はその塩を含む水相からなり、かつ類縁物質３及びチピラシルの保持時間における、移動相全体に対するアセトニトリルの割合が移動相全体の５〜２０容量％である。特に好ましくは、移動相がアセトニトリル及びリン酸又はリン酸二水素ナトリウムを含む水相からなり、かつ類縁物質３及びチピラシルの保持時間における、移動相全体に対するアセトニトリルの割合が移動相全体の７〜１５容量％である。
【０１０３】
高速液体クロマトグラフィーの移動相には、イオン対試薬を添加することができ、上記のイオン対試薬を用いることができる。好ましくは、アルキルスルホン酸ナトリウムであり、より好ましくは炭素数４〜１２のアルキルスルホン酸ナトリウムであり、特に好ましくは１−ヘプタンスルホン酸ナトリウムである。
【０１０４】
高速液体クロマトグラフィーの移動相の流速は、特に限定されないが、０．５〜２．０ｍＬ／ｍｉｎが好ましく、０．６〜１．５ｍＬ／ｍｉｎがより好ましく、０．７〜１．３ｍＬ／ｍｉｎが特に好ましい。
【０１０５】
高速液体クロマトグラフィーによるチピラシル由来の類縁物質の測定においては、類縁物質２、３、６、及びチピラシルがそれぞれ分離できればよい。それぞれの類縁物質の保持時間は条件によって異なるが、互いに保持時間の差が０．５分以上であればよい。
【０１０６】
チピラシル又はその塩からチピラシル由来の類縁物質の検出において、高速液体クロマトグラフィーによる方法が用いられる。
【０１０７】
好ましくは、類縁物質３及びチピラシルの保持時間における有機相が移動相全体の５〜２０容量％である高速液体クロマトグラフィーを用いる方法である。
より好ましくは、有機相がアセトニトリルからなり、かつ類縁物質３及びチピラシルの保持時間におけるアセトニトリルが移動相全体の５〜２０容量％である高速液体クロマトグラフィーによる方法である。
【０１０８】
より好ましくは、移動相がアセトニトリル及びリン酸又はリン酸二水素カリウムを含む水相からなり、かつ類縁物質３及びチピラシルの保持時間におけるアセトニトリルが移動相全体の５〜２０％である高速液体クロマトグラフィーによる方法である。
より好ましくは、移動相がアセトニトリル及びリン酸又はリン酸二水素カリウムを含む水相からなり、かつ類縁物質３及びチピラシルの保持時間におけるアセトニトリルが移動相全体の７〜１５％である高速液体クロマトグラフィーによる方法である。
【０１０９】
より好ましくは、移動相がアセトニトリル及びリン酸二水素カリウムを含む水相からなり、類縁物質３及びチピラシルの保持時間におけるアセトニトリルが移動相全体の７〜１５％であり、かつ測定時間中における有機相と水相の割合の変化を移動相全体の５％以下にする高速液体クロマトグラフィーによる方法である。
【０１１０】
より好ましくは、移動相がアセトニトリル及びリン酸二水素カリウムを含む水相からなり、類縁物質３及びチピラシルの保持時間におけるアセトニトリルが移動相全体の７〜１５％であり、測定時間中における有機相と水相の割合の変化を移動相全体の５％以下であり、かつイオン対試薬として１−ヘプタンスルホン酸ナトリウムを用いる高速液体クロマトグラフィーによる方法である。
【０１１１】
上記のように、本発明の方法によれば、トリフルリジン由来の類縁物質をトリフルリジン又はその塩から分離し、検出することができる。また、本発明の方法によれば、チピラシル由来の類縁物質をチピラシル又はその塩から分離し、検出することができる。また、本発明の方法によれば、トリフルリジン及びチピラシル由来の各類縁物質をそれぞれ分離し、検出することができる。従って、トリフルリジン又はその塩及びチピラシル又はその塩を含む組成物の生産管理において、本発明を用いることにより、これらの類縁物質の含有量を低減させた組成物を得ることができる。前述の通り、類縁物質１と類縁物質４とは高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間が非常に近い値となる傾向にある。また、類縁物質３とトリフルリジンとも高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間が非常に近い値となる傾向にある。従って、これらの類縁物質の分離に関する発明は特に有用である。
【０１１２】
例えば、本発明によれば、前記類縁物質（例えば、類縁物質４）を実質的に含まないことを特徴とするトリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤を得ることができる。また、本発明によれば、前記類縁物質（例えば、類縁物質４）を含む配合剤であって、当該類縁物質（例えば、類縁物質４）の含有量（質量）が所定の量以下、例えば、配合剤に含まれるトリフルリジン全体の０．０５質量％以下、であるトリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤を得ることができる。かかる実施形態において、当該配合剤中の当該類縁物質（例えば、類縁物質４）の含有量（質量）の下限は特に限定されない。
【０１１３】
従って、本発明においては、前記類縁物質（例えば、類縁物質４）を、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の品質管理（例えば、類縁物質の含有量の管理（調整））に用いることができる。さらに、本発明によれば、前記類縁物質（例えば、類縁物質４）を、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の不純物検出の際に標準品として用いることもできる。また、本発明によれば、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤から単離することを特徴とする前記類縁物質（例えば、類縁物質４）の製造方法を提供することもできる。これらの発明の効果は類縁物質４だけでなく、類縁物質１〜３及び５、６についても同様のことが言える。
【０１１４】
本発明が提供する品質管理方法は、トリフルリジン又はその塩、及び、チピラシル又はその塩を含む配合剤の品質管理方法であって、上記の本発明の方法を実施する工程を含む。本発明の品質管理方法は、例えば、上記類縁物質（例えば、類縁物質１〜６のいずれか１つ以上）の含有量（質量）が、所定の量以下である場合に、配合剤は品質管理に係る基準を満たすと評価することができる。
【０１１５】
本発明は、上記の本発明の方法を実施する工程を含む、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の製造方法をも提供する。本発明の製造方法は、例えば、トリフルリジン又はその塩を製造する工程、チピラシル又はその塩を製造する工程、得られたトリフルリジン又はその塩、及び、チピラシル又はその塩を混合する工程、並びに、上記方法を実施する（好ましくはトリフルリジン又はその塩、及び、チピラシル又はその塩を含む配合剤の品質管理を行う）工程を含むことができる。
【実施例】
【０１１６】
以下の試験条件により高速液体クロマトグラフィーの測定を行った。
・検出器：紫外吸光光度計（波長は２１０ｎｍ）
・カラム：内径４．６ｍｍ，長さ１５ｃｍのステンレス管に５μｍの液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル化シリカゲルカラム
・カラム温度：４０℃
・流量：０．６〜１．０ｍＬ／分
・移動相：各実施例に記載
・グラジエント：各実施例に記載
高速液体クロマトグラフィーで測定する試料は以下の通り調製した。【０１１７】
トリフルリジンの濃度が約１ｍｇ／ｍＬかつチピラシル塩酸塩の濃度が約０．５ｍｇ／ｍＬとなるよう各測定条件で用いられる移動相と同じ組成の溶液に溶解させ、適宜希釈した溶液を試料とした。【０１１８】
実施例１
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４、ＧＬサイエンス社製
移動相：リン酸二水素ナトリウム二水和物１．４ｇ及び１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム０．９ｇを水９００ｍＬに溶かし，リン酸を加えてｐＨ２．７に調整した。この液にメタノール１００ｍＬを加えて移動相とした。【０１１９】
測定結果を図１に示す。これより、トリフルリジンの保持時間が１２．０分に確認され、チピラシルの保持時間が１９．６分に確認された。また、類縁物質１の保持時間が６．８分、類縁物質４の保持時間が７．６分、類縁物質３の保持時間が１１．０分、類縁物質２の保持時間が１５．３分に確認された。また、類縁物質５の保持時間が３．１分に確認された。これにより類縁物質１と４が分離でき、かつ類縁物質３とトリフルリジンが分離できる測定条件であることを確認した。【０１２０】
また、検出された各類縁物質は、別途購入又は合成した各類縁物質と保持時間が一致したことから、類縁物質１〜６の構造を示した化合物であることを確認した。【０１２１】
実施例２
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４、ＧＬサイエンス社製
移動相：リン酸二水素ナトリウム二水和物１．５ｇ及び１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム０．９ｇを水９００ｍＬに溶かし，リン酸を加えてｐＨ２．７に調整した。この液にメタノール１００ｍＬを加えて移動相とした。【０１２２】
測定結果は、実施例１と同様であった。【０１２３】
実施例３
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４、ＧＬサイエンス社製
移動相：リン酸二水素ナトリウム二水和物１．４ｇ及び１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム１．０ｇを水９００ｍＬに溶かし，リン酸を加えてｐＨ２．８に調整した。この液にメタノール１００ｍＬを加えて移動相とした。【０１２４】
測定結果は、実施例１と同様であった。【０１２５】
実施例４
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４、ＧＬサイエンス社製
移動相：リン酸二水素ナトリウム二水和物１．４ｇ及び１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム０．９ｇを水９００ｍＬに溶かし，リン酸を加えてｐＨ２．７に調整した。この液にメタノール９５ｍＬを加えて移動相とした。【０１２６】
測定結果は、実施例１と同様であった。【０１２７】
実施例５
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ  ５Ｃ１８  ＲＳ、和光純薬製
移動相：リン酸二水素ナトリウム二水和物１．４ｇ及び１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム０．９ｇを水９００ｍＬに溶かし，リン酸を加えてｐＨ２．７に調整した。この液にメタノール１００ｍＬを加えて移動相とした。【０１２８】
測定結果は、実施例１と同様であった。【０１２９】
実施例６
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ  ５Ｃ１８  ＲＳ、和光純薬製
移動相：リン酸二水素ナトリウム二水和物３．１ｇ及び１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム２．０ｇを水２０００ｍＬに溶かし，リン酸を加えてｐＨ２．７に調整した。この液９５０ｍＬにメタノール５０ｍＬを加えて移動相とした。【０１３０】
測定結果は、トリフルリジンの保持時間が２１．０分〜２３．０分の間にあることが確認され、チピラシルの保持時間が４１．０分〜４３．０分の間にあることが確認された。また、類縁物質１の保持時間が９．０分〜１０．０分の間、類縁物質４の保持時間が８．０分〜９．０分の間、類縁物質３の保持時間が１５．０〜１７．０分の間、類縁物質２の保持時間が２８．０分〜３０．０分の間にあることが確認された。【０１３１】
実施例７
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ  ５Ｃ１８  ＲＳ、和光純薬製
移動相：リン酸二水素カリウム１．２５ｇ及び１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム１．０１ｇを水９２０ｍＬに溶かし，アセトニトリル８０ｍＬを加えて移動相とした。【０１３２】
測定結果は、トリフルリジンの保持時間が８．４分に確認され、チピラシルの保持時間が１２．２分に確認された。また、類縁物質１の保持時間が６．１分に確認された。【０１３３】
実施例８
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３、ＧＬサイエンス社製
移動相：１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム１．８８ｇを水１８６０ｍＬに溶かし，アセトニトリル１４０ｍＬを加え，リン酸を加えてｐＨ２．７に調整した。【０１３４】
測定結果は、トリフルリジンの保持時間が１３．１分に確認され、チピラシルの保持時間が２４．７分に確認された。また、類縁物質１の保持時間が８．６分、類縁物質３の保持時間が１０．３分、類縁物質２の保持時間が１７．１分に確認された。【０１３５】
実施例９
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ  ５Ｃ１８  ＲＳ、和光純薬製
移動相：１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム１．０１ｇをとり、水を加えて１０００ｍＬとした。この液８５０ｍＬにメタノール１５０ｍＬを加え、リン酸を加えてｐＨ２．７に調整した。【０１３６】
測定結果は、トリフルリジンの保持時間が８．０〜１０．０分の間にあることが確認され、チピラシルの保持時間が１４〜１７分の間にあることが確認された。また、類縁物質３の保持時間が６．３分に確認された。【０１３７】
実施例１０
チピラシル塩酸塩の濃度が約０．８ｍｇ／ｍＬとなるよう水／アセトニトリル混合溶液（２３：２）に溶解させ、適宜希釈した溶液をチピラシルのみ含む試料とした。【０１３８】
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ  ５Ｃ１８  ＲＳ、和光純薬製、又はＩｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３、ＧＬサイエンス社製
移動相：リン酸二水素カリウム１．２５ｇ及び１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム１．０１ｇを水９２０ｍＬに溶かし，アセトニトリル８０ｍＬを加えて移動相とした。【０１３９】
測定結果は、チピラシルの保持時間が９．１分に確認された。また、類縁物質３の保持時間が５．２分に、類縁物質２の保持時間が７．０分に、類縁物質６の保持時間が７．７分に確認された。これにより、これにより類縁物質２、３、６、及びチピラシルが分離できる測定条件であることを確認した。
【図１】
2019124544.tif 000006
【図２】
2019124544.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】令和2年4月9日(2020.4.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む試料を有機相及び水相からなる移動相を用いる高速液体クロマトグラフィーに供する工程を含む、トリフルリジン由来の類縁物質及びチピラシル由来の類縁物質の一方又は両方を検出するための方法。
【請求項２】
前記検出が試料中に含まれる類縁物質１〜５の検出を含み、
類縁物質１：トリフルオロチミン、
類縁物質２：２−イミノピロリジン、
類縁物質３：５−クロロ−６−｛（２−オキソピロリジン−１−イル）メチル｝ピリミジン−２，４−（１Ｈ、３Ｈ）−ジオン、
類縁物質４：２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン、
類縁物質５：５−カルボキシウラシル、
である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記類縁物質が類縁物質３を含み、高速液体クロマトグラフィーにおける類縁物質３とトリフルリジンとの保持時間が１．０分以上異なっている、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
類縁物質１〜５、トリフルリジン及びチピラシルの保持時間における移動相全体に対する有機相の割合がいずれも７〜１５容量％である、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記有機相がメタノールを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
水相が、リン酸もしくはその塩またはこれらの混合物を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
類縁物質１、３、４及びトリフルリジンの保持時間における移動相全体に対する有機相の割合のうち、最も大きい値と最も小さい値との差が、移動相全体の５容量％以下である、請求項２〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
移動相のｐＨが２．０〜５．０である、請求項１〜７のいずか１項に記載の方法。
【請求項９】
移動相のｐＨが２．６〜２．８である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の品質管理に用いられる２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）。
【請求項１１】
トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の不純物検出の際に標準品として用いるための２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）。
【請求項１２】
２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）の、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の品質管理の際の標準品としての使用。
【請求項１３】
２’−デオキシ−５−メトキシカルボニルウリジン（類縁物質４）からなる、トリフルリジン又はその塩、及びチピラシル又はその塩を含む配合剤の不純物検出の際の標準品。
【国際調査報告】
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