(57)【要約】  所定量の培地を供給するための培地シリンジ包装品（１０）であって、炭酸水素ナトリウム及びｐＨの影響を受ける重金属塩を含有する所定量の培地が充填されたプレフィルドシリンジ（７）と、プレフィルドシリンジ（７）を密封包装したガスバリア性包装袋（８）と、包装袋（８）内に、プレフィルドシリンジ（７）と共に収容された炭酸ガス発生型脱酸素剤（９）と、からなることを特徴としている。
2020036136.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定量の培地を供給するための培地容器包装品であって、
炭酸水素ナトリウム及びｐＨの影響を受ける重金属塩を含有する所定量の培地が充填された充填済容器と、
前記充填済容器を密封包装したガスバリア性包装袋と、
前記包装袋内に、前記充填済容器と共に収容された炭酸ガス発生型脱酸素剤と、
からなることを特徴とする培地容器包装品。
【請求項２】
前記充填済容器に用いられる容器がシリンジであり、前記充填済容器がプレフィルドシリンジである、
請求項１記載の培地容器包装品。
【請求項３】
前記包装袋内の二酸化炭素濃度が４〜２５％に維持されている、
請求項２記載の培地容器包装品。
【請求項４】
前記培地のｐＨが７．０〜７．６に維持されている、
請求項２又は３に記載の培地容器包装品。
【請求項５】
前記炭酸ガス発生型脱酸素剤が、アスコルビン酸、エリソルビン酸、没食子酸、及びカテコールから選択される、
請求項２〜４のいずれか一つに記載の培地容器包装品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、所定量の培地を供給するための培地容器包装品に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞医薬品の開発や製造においては、採取した細胞を培養するために、採取した細胞や血清に対して、無菌的に培地を添加する必要がある。また、採取した細胞等である培養対象の生体試料は、生体試料自体が貴重であったり、使用される添加物等が高価であったりするため、安定した培地を使う必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２０１７−５０４４３８号公報
【特許文献２】特許第３２４３３８７号公報
【特許文献３】特許第３７３３５８３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ところで、炭酸水素ナトリウムを含有する培地は、炭酸水素ナトリウムが分解して二酸化炭素を放出することにより、ｐＨが上昇しやすい。ｐＨが上昇した培地は、細胞培養に悪影響を及ぼす。加えて、炭酸水素ナトリウム以外の様々な成分は、ｐＨの上昇により影響を受けてしまうため、ｐＨが上昇した培地は、所望の分化の方向やレベル、必要とされる増殖率にも、悪影響を及ぼす。よって、添加する際の培地は、ｐＨの上昇が抑制されてｐＨが安定していることが、望まれる。ｐＨの上昇を抑制するために、例えば、保存容器の空間を二酸化炭素置換することなどが行なわれているが、この方法では、培地のｐＨを一定に保持してすぐに使用できる状態にすることは、困難である。特に培地に含まれる重金属塩等は、一度ｐＨが上昇してしまうと析出してしまい、細胞培養に悪影響を与えてしまう。【０００５】
また、大量の培地から必要量だけの培地を取り出す場合は、面倒であり、しかも、残りの培地にコンタミネーションなどの不具合が生じる恐れがある。よって、培地は、必要量だけを準備しておくことが望まれる。【０００６】
本発明は、ｐＨが安定した培地を、必要量だけ、簡便に供給することができる、培地容器包装品を、提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の第１態様は、所定量の培地を供給するための培地容器包装品であって、
炭酸水素ナトリウム及びｐＨの影響を受ける重金属塩を含有する所定量の培地が充填された充填済容器と、
前記充填済容器を密封包装したガスバリア性包装袋と、
前記包装袋内に、前記充填済容器と共に収容された炭酸ガス発生型脱酸素剤と、
からなることを特徴としている。【０００８】
本発明の第２態様は、前記充填済容器に用いられる容器がシリンジであり、前記充填済容器がプレフィルドシリンジである、前記第１態様に記載の培地容器包装品である。【０００９】
本発明の第３態様は、前記包装袋内の二酸化炭素濃度が４〜２５％に維持されている、前記第２態様に記載の培地容器包装品である。【００１０】
本発明の第４態様は、前記培地のｐＨが７．０〜７．６に維持されている、前記第２又は第３態様に記載の培地容器包装品である。【００１１】
本発明の第５態様は、前記炭酸ガス発生型脱酸素剤が、アスコルビン酸、エリソルビン酸、没食子酸、及びカテコールから選択される、前記第２〜第４態様のいずれか一つに記載の培地容器包装品である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の第１態様の培地容器包装品によれば、培地が充填済容器に充填されているので、必要量の培地を、コンタミネーション等の不具合を抑えて、簡便に使用することができる。また、炭酸ガス発生型脱酸素剤を使用しているので、包装袋に炭酸ガスを充填した場合に比べて安定したｐＨを維持することが可能となり、ｐＨの影響を受ける重金属塩などの成分の析出を押さえることができ、分化の方向やレベル、必要とされる増殖率を維持することができる。【００１３】
本発明の第２態様の培地容器包装品によれば、充填済容器がプレフィルドシリンジであるので、操作が簡単であり、それ故、培地を、所定量だけ、必要な箇所に、簡便に供給できる。【００１４】
本発明の第３態様の培地容器包装品によれば、包装袋内の二酸化炭素と培地内の二酸化炭素の気−液平衡を保つことができ、ｐＨの影響を受けるアミノ酸の性質が変化するのを抑え、ｐＨを安定して維持することができる。【００１５】
本発明の第４態様の培地容器包装品によれば、培地のｐＨが細胞培養に好適なｐＨであるので、ｐＨの再調整などを行うことなく、簡便に使用することができる。【００１６】
本発明の第５態様の培地容器包装品によれば、脱酸素剤が非金属の有機系の炭酸ガス発生型脱酸素剤であるので、金属探知機等を使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の一実施形態の培地シリンジ包装品を示す図である。
【図２】培地シリンジ包装品の作用を示す図である。
【図３】二酸化炭素濃度とＤＭＥＭ培地の理論ｐＨとの関係を示す図である。
【図４】培地シリンジ包装品が炭酸ガス発生型脱酸素剤を含んでいない場合における包装袋内の二酸化炭素濃度及び培地のｐＨの経時変化を示す図である。
【図５】本発明の培地シリンジ包装品における培地のｐＨの経時変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、所定量の培地を供給するための培地容器包装品であって、炭酸水素ナトリウム及びｐＨの影響を受ける重金属塩を含有する所定量の培地が充填された充填済容器と、充填済容器を密封包装したガスバリア性包装袋と、包装袋内に、充填済容器と共に収容された炭酸ガス発生型脱酸素剤と、からなることを特徴としている。
【００１９】
ところで、充填済容器に用いられる容器としては、培地を充填できる液密の容器であれば、種々の容器を使用できる。例えば、バッグ、ボトル、シリンジ等を、使用できる。特に、シリンジは、操作性が良いので、コンタミネーション等の不具合を抑えて、必要量の培地を、簡単に供給することができる。容器としてシリンジを用いた場合、培地容器包装品は培地シリンジ包装品であり、充填済容器はプレフィルドシリンジである。
【００２０】
そこで、以下では、本発明の培地容器包装品の一実施形態である培地シリンジ包装品について、説明する。
【００２１】
［培地シリンジ包装品］
図１は、本発明の一実施形態の培地シリンジ包装品を示す図である。培地シリンジ包装品１０は、プレフィルドシリンジ７と、プレフィルドシリンジ７を密封包装したガスバリア性包装袋８と、包装袋８内に、プレフィルドシリンジ７と共に収容された炭酸ガス発生型脱酸素剤９と、からなっている。プレフィルドシリンジ７は、炭酸水素ナトリウムを含有する所定量の培地７３が充填されたシリンジバレル７１と、シリンジバレル７１内の培地７３を押し出すためのプランジャー７２とに、分けられて、包装袋８内に収容されている。シリンジバレル７１内において、培地７３は、ガスケット７４によって封止されている。シリンジバレル７１の先端の吐出口は、ゴムやプラスチック等からなる栓７４２によって封止されている。
【００２２】
シリンジバレル７１及びプランジャー７２を構成する材料としては、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレンなどのポリオレフィン系樹脂；及び、ポリ塩化ビニル系樹脂；を含む、一般的な熱可塑性樹脂を、採用できる。なお、そのような樹脂としては、医療用安全性が高く、高圧蒸気滅菌を行う場合には少なくとも１０５℃の温度に耐えるものが、好ましい。
【００２３】
ガスバリア性包装袋８としては、例えば、エチレンビニルアルコール共重合体（ＥＶＯＨ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリ塩化ビニリデン（ＰＶＤＣ）、又はナイロンなどで構成された包装袋；又は、これらの素材にシリカやアルミナなどのガスバリア性物質を蒸着処理して構成された包装袋；又は、これらの素材を組み合わせた多層フィルムで構成された包装袋；を採用できる。なお、ガスバリア性とは、通常、酸素透過率が１０ｍｌ／ｍ２／２４時間／１気圧以下、好ましくは１ｍｌ／ｍ２／２４時間／１気圧以下であることを言う。包装袋８は、被包装物すなわちプレフィルドシリンジ７及び炭酸ガス発生型脱酸素剤９を視認できる程度の透明性を有していることが、好ましい。また、細胞培養施設等で使用する場合には、包装袋８は、別の包装袋で更に包装した多重包装の形態としても良い。
【００２４】
ガスケット７４は、ブチル系合成ゴム又はエラストマーなどでできている。ガスケット７４の、培地７３とは反対側の面７４１には、プランジャー７２の先端７２１をねじ込む穴（図示せず）が形成されている。
【００２５】
炭酸ガス発生型脱酸素剤９としては、大江化学工業株式会社製の商品名「タモツ（登録商標）Ｄ」及び商品名「タモツ（登録商標）ＶＸ」、三菱ガス化学株式会社製の商品名「エージレス（登録商標）ＧＴ」及び商品名「エージレス（登録商標）ＧＥ」、アイリス・ファインプロダクツ株式会社製の商品名「サンソカット（登録商標）ＧＡ」、ドレンシー株式会社製の商品名「キーピット（登録商標）ＹＣ」などが挙げられる。
【００２６】
培地７３は、培養する細胞の種類などに応じて適宜選択される。例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、神経前駆細胞標準培地（ＮＰＢＭ：Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社）、αＭＥＭ培地などを、採用できる。ＤＭＥＭの組成の一例を次に示す。
【００２７】
・ＤＭＥＭの組成：〈濃度（ｍｇ／Ｌ）〉
ＣａＣｌ２（無水物）〈１６０〜２４０〉、ＫＣＬ〈３２０〜４８０〉、Ｆｅ（ＮＯ３）３・９Ｈ２Ｏ〈０．０８〜１．２〉、ＭｇＳＯ４（無水物）〈８０〜１２０〉、ＮａＣｌ〈５１２０〜７６８０〉、ＮａＨＣＯ３〈２９６０〜４４４０〉、ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ〈１００〜１５０〉、Ｄ−グルコース〈３６００〜５４００〉、フェノールレッド〈１２〜１８〉、ピルビン酸ナトリウム〈８８〜１３２〉、Ｌ−アルギニン・ＨＣｌ〈６７〜１０１〉、Ｌ−システイン・２ＨＣｌ〈５０〜７６〉、Ｌ−ヒスチジン・ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ〈３４〜５０〉、Ｌ−イソロイシン〈８４〜１２６〉、Ｌ−ロイシン〈８４〜１２６〉、Ｌ−リジン・ＨＣｌ〈１１７〜１７５〉、Ｌ−メチオニン〈２４〜３６〉、Ｌ−フェニルアラニン〈５３〜７９〉、Ｌ−セリン〈３４〜５０〉、Ｌ−スレオニン〈７６〜１１４〉、Ｌ−トリプトファン〈１３〜１９〉、Ｌ−チロシン（２ナトリウム塩）〈８３〜１２５〉、Ｌ−バリン〈７５〜１１３〉、塩化コリン〈３．２〜４．８〉、Ｄ−Ｃａ−パントテン酸〈３．２〜４．８〉、葉酸〈３．２〜４．８〉、ｉ−イノシトール〈５．８〜８．６〉、ナイアシンアミド〈３．２〜４．８〉、ピリドキサール・ＨＣｌ〈３．２〜４．８〉、リボフラビン〈０．３〜０．５〉、チアミン・ＨＣｌ〈３．２〜４．８〉。
【００２８】
特に、このような培地に含まれるＣａＣｌ２（無水物）〈１６０〜２４０〉、Ｆｅ（ＮＯ３）３・９Ｈ２Ｏ〈０．０８〜１．２〉、ＭｇＳＯ４（無水物）等の重金属塩は、細胞培養に重要な成分であるが、ｐＨの影響を受けると析出してしまう。特にｐＨ８より高くなったり急激なｐＨ変化が生じたりすると析出しやすくなる。また、葉酸等は、ｐＨ５より低くなると析出してしまう。
【００２９】
培地７３には、必要に応じて、血清、栄養因子、増殖因子、成長因子、分化誘導因子、抗生物質、又はアミノ酸などを添加してもよい。これらの物質を添加する場合の濃度は、骨髄細胞の所望の分化の方向やレベル、必要とされる増殖率など、に応じて適宜設定できる。
【００３０】
栄養因子、増殖因子、成長因子、又は分化誘導因子としては、具体的には、例えば、アスコルビン酸、ニコチンアミドなどのビタミン類；ＮＧＦ、ＢＤＮＦなどの神経栄養因子；ＢＭＰなどの骨形成因子；上皮細胞成長因子、塩基性線維芽細胞成長因子、インスリン様成長因子、ＩＬ−２などのサイトカイン；を挙げることができる。
【００３１】
抗生物質としては、例えば、ペニシリン、ストレプトマイシンなどを、挙げることができ、これらを、単独で添加してもよく、併用して添加してもよい。抗生物質を添加する場合の濃度に関しては、例えば、ペニシリンとストレプトマイシンとを併用して添加する場合には、それぞれが培地総量の０．５〜２％（ｖ／ｖ）、好ましくは０．８〜１．２％（ｖ／ｖ）となるように、添加できる。
【００３２】
アミノ酸としては、例えば、Ｌ-アラニン、Ｌ−アスパラギンサン、Ｌ−システイン、Ｌ-グルタミン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−セリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−バリン、Ｌ−アスコルビン酸、又はＬ−グルタミン酸などを、挙げることができる。アミノ酸を添加する場合の濃度に関しては、間葉系幹細胞を迅速に増殖させる場合には、例えば、Ｌ-グルタミンを培地総量の０．１〜２％（ｗ／ｖ）となるように、添加できる。これらは、細胞の分化の方向やレベル、必要とされる増殖率の、制御に重要であるが、ｐＨの影響を受けやすいという問題がある。特にＬ−グルタミンなどは、ｐＨが７．３より高い又は低いと、一部が分解する性質を有している。
【００３３】
図２に示されるように、前記構成の培地シリンジ包装品１０においては、培地７３は、炭酸水素ナトリウムを含有しているので、炭酸水素ナトリウムの分解により生じた二酸化炭素を放出する。それにより、培地７３のｐＨが上昇する。放出された二酸化炭素は、包装袋８内の空間に存在することとなる。一方、炭酸ガス発生型脱酸素剤９からは、二酸化炭素が放出される。それ故、包装袋８内の二酸化炭素濃度が上昇し、二酸化炭素の一部が培地７３に吸収されていく。その結果、培地７３においては、二酸化炭素の放出と吸収との間に平衡関係が成立することとなる。これによって、培地７３のｐＨの上昇が抑制されて、ｐＨが長期間安定する。
【００３４】
すなわち、前記構成の培地シリンジ包装品１０によれば、プレフィルドシリンジ７に充填されている培地７３のｐＨを安定して維持できる。しかも、前記構成の培地シリンジ包装品１０によれば、プレフィルドシリンジ７が所定量の培地７３を吐出できる。したがって、作業者は、所定量の培地を必要とする作業において、培地シリンジ包装品１０の包装袋８を破いてシリンジバレル７１及びプランジャー７２を取り出し、プレフィルドシリンジ７を組立て、プランジャー７２を押し、それによって、ｐＨが安定した培地７３を、所定量だけ、必要な箇所に、簡便に供給できる。
【００３５】
なお、培地７３の所定量は、多種類の供給先の必要量に応じて、種々設定されている。
【００３６】
（実施例）
図３は、二酸化炭素濃度とＤＭＥＭ培地の理論ｐＨとの関係を示している。ＤＭＥＭ培地は、ｐＨ７．０〜７．６の範囲に維持されることが望まれている。図３によれば、ＤＭＥＭ培地をｐＨ７．０〜７．６の範囲に維持できる二酸化炭素濃度は、４〜２５％である。したがって、炭酸ガス発生型脱酸素剤９としては、培地７３が放出する二酸化炭素量との兼ね合いにおいて包装袋８内の二酸化炭素濃度を４〜２５％に維持できる程度の量の二酸化炭素を放出するものを、用いる。
【００３７】
図４は、培地シリンジ包装品１０が炭酸ガス発生型脱酸素剤９を含んでいない場合における包装袋８内の二酸化炭素濃度及び培地７３のｐＨの経時変化を示している。図４から明らかなように、この場合には、両者とも、次第に上昇している。一方、図５は、炭酸ガス発生型脱酸素剤９を含んでいる本発明の培地シリンジ包装品１０における培地７３のｐＨの経時変化を示している。炭酸ガス発生型脱酸素剤９としては、三菱ガス化学株式会社製の商品名「エージレス」を用いている。なお、図５のデータは、３ロット分を示している。本発明の培地シリンジ包装品１０によれば、ｐＨは少し上昇した後、下降していき、安定している。以上からも明らかなように、本発明の培地シリンジ包装品１０によれば、プレフィルドシリンジ７に充填されている培地７３のｐＨを安定して維持できる。
【００３８】
（変形例）
シリンジに代えて、バッグ、ボトル等の容器を、用いてもよい。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明の培地容器包装品は、ｐＨが安定した培地を、必要量だけ、簡便に供給することができるので、産業上の利用価値が大である。
【符号の説明】
【００４０】
７  プレフィルドシリンジ
８  包装袋
９  炭酸ガス発生型脱酸素剤
１０  培地シリンジ包装品
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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2020036136.tif 000009
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