【手続補正書】
【提出日】平成20年12月15日(2008.12.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質性構築物であって、
（ａ）血漿フォンビルブラント因子（ＶＷＦ）、組換え型ＶＷＦ、ＶＷＦの生物活性誘導体、ならびにそれらのダイマーおよびマルチマーからなる群から選択されるＶＷＦ分子と、
（ｂ）ペプチド結合またはウレタン結合によって該ＶＷＦ分子の一級アミノ基に結合した少なくとも１つのＰＥＧ部分と、を含み、
該構築物が少なくとも１つの第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子またはＦＶＩＩＩの生物活性誘導体に対する結合能を有し、該構築物の生体内半減期が該ＶＷＦ分子の生体内半減期と比較して増大している、タンパク質性構築物。
【請求項２】
前記構築物に結合した前記ＦＶＩＩＩ分子の生体内半減期が、該構築物とは結合していない前記ＦＶＩＩＩ分子の生体内半減期と比較して増大している、請求項１に記載のタンパク質性構築物。
【請求項３】
前記構築物の生体内半減期が前記ＶＷＦ分子の生体内半減期と比較して、少なくとも１．５倍増大している、請求項１に記載のタンパク質性構築物。
【請求項４】
前記構築物の生体内半減期が前記ＶＷＦ分子の生体内半減期と比較して、少なくとも２倍増大している、請求項１に記載のタンパク質性構築物。
【請求項５】
前記少なくとも１つのＰＥＧ部分が前記ＶＷＦまたは前記ＶＷＦの生物活性誘導体のリジン残基に結合している、請求項１または請求項２に記載のタンパク質性構築物。
【請求項６】
前記構築物に含まれる前記ＶＷＦが、血小板上の受容体に対する結合およびコラーゲンに対する結合というＶＷＦの一次止血における生物学的活性を保持する、請求項１または請求項２に記載のタンパク質性構築物。
【請求項７】
前記構築物に結合した場合、前記ＦＶＩＩＩ分子の生体内半減期が、前記構築物とは結合していない該ＦＶＩＩＩ分子の生体内半減期と比較して、少なくとも１．５倍増大している、請求項２に記載のタンパク質性構築物。
【請求項８】
前記構築物に結合した場合、前記ＦＶＩＩＩ分子の生体内半減期が、前記構築物とは結合していない該ＦＶＩＩＩ分子の生体内半減期と比較して、少なくとも２倍増大している、請求項２に記載のタンパク質性構築物。
【請求項９】
前記ＶＷＦまたは前記その生物活性誘導体が組換え産物である、請求項１または２に記載のタンパク質性構築物。
【請求項１０】
請求項１または２に記載のタンパク質性構築物および少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体を含む、複合体。
【請求項１１】
前記ＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体が組換え産物である、請求項１０に記載の複合体。
【請求項１２】
ＦＶＩＩＩの機能的な欠陥または欠乏に関連した出血性障害を持つ哺乳動物血液中でのＦＶＩＩＩまたはその生物活性誘導体の生体内半減期を延長させるための医薬の製造における請求項１または２に記載の少なくとも１つのタンパク質性構築物の使用であって、ここで、該哺乳動物には、少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体の第１の用量が投与される、使用。
【請求項１３】
ＦＶＩＩＩおよびＶＷＦのうちの少なくとも１つの機能的な欠陥に関連した出血性障害を持つ哺乳動物血液中でのＦＶＩＩＩまたはその生物活性誘導体の生体内半減期およびＶＷＦまたはその生物活性誘導体の生体内半減期を延長させるための医薬の製造における請求項１または２に記載の少なくとも１つのタンパク質性構築物の使用であって、ここで、該哺乳動物には、少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体の第１の用量が投与される、使用。
【請求項１４】
ＦＶＩＩＩの機能的な欠陥または欠乏に関連した出血性障害を持つ哺乳動物血液中でのＦＶＩＩＩまたはその生物活性誘導体の生体内半減期を延長させるための医薬の製造における少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体の使用であって、ここで、該哺乳動物には、請求項１または２に記載の少なくとも１つのタンパク質性構築物の第１の用量が投与される、使用。
【請求項１５】
ＦＶＩＩＩおよびＶＷＦのうちの少なくとも１つの機能的な欠陥に関連した出血性障害を持つ哺乳動物血液中でのＦＶＩＩＩまたはその生物活性誘導体の生体内半減期およびＶＷＦまたはその生物活性誘導体の生体内半減期を延長させるための医薬の製造における少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体の使用であって、ここで、該哺乳動物には、請求項１または２に記載の少なくとも１つのタンパク質性構築物の第１の用量が投与される、使用。
【請求項１６】
ＦＶＩＩＩおよびＶＷＦのうちの少なくとも１つの機能的な欠陥または欠乏に関連した出血性障害を持つ哺乳動物血液中での第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）またはその生物活性誘導体およびＶＷＦまたはその生物活性誘導体の生体内半減期を延長させるための方法であって、
（ａ）請求項１または２の少なくとも１つのタンパク質性構築物を提供するステップと、
（ｂ）少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体を提供するステップと、
（ｃ）前記タンパク質性構築物と前記ＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体との間で複合体を形成するステップと、
を含む、方法。
【請求項１７】
ＦＶＩＩＩの機能的な欠陥もしくは欠乏に関連した出血性障害を持つ哺乳動物血液中での第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）またはその生物活性誘導体の生体内半減期を延長させるための方法であって、
（ａ）請求項１または２に記載の少なくとも１つのタンパク質性構築物を提供するステップと、
（ｂ）少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体を提供するステップと、
（ｃ）該タンパク質性構築物と該ＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体との間で複合体を形成するステップと、
を含む、方法。
【請求項１８】
（ａ）ＦＶＩＩＩおよびＶＷＦのうちの少なくとも１つの機能的な欠陥または欠乏に関連した出血性障害を持つ哺乳動物血液中での第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）またはその生物活性誘導体およびＶＷＦまたはその生物活性誘導体の生体内半減期を延長させるため；または
（ｂ）ＦＶＩＩＩの機能的な欠陥または欠乏に関連した出血性障害を持つ哺乳動物血液中での第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）またはその生物活性誘導体の生体内半減期を延長させるため、
の医薬の製造における請求項１６または１７のいずれかの方法のステップ（ｃ）で形成された複合体の使用。
【請求項１９】
前記少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体は、前記タンパク質性構築物と同時に投与されるかまたは同時に投与するためのものである、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
前記少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはその生物活性誘導体は、前記タンパク質性構築物の投与前または投与後に、逐次投与されるか、または逐次投与するためのものである、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２１】
医薬組成物であって、
請求項１〜８のいずれか１項に記載のタンパク質性構築物の有効量と、
薬学的に許容可能な担体、希釈剤、塩、緩衝液および賦形剤からなる群から選択される一つ以上の化合物と、
を含む、医薬品組成物。
【請求項２２】
複合体であって、
（ａ）請求項１に記載のタンパク質性構築物と、
（ｂ）該タンパク質性構築物に結合した少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはＦＶＩＩＩの生物活性誘導体と、
を含み、
前記複合体の生体内半減期が、ＶＷＦに結合したＦＶＩＩＩの生体内半減期と比較して、増大している、複合体。
【請求項２３】
前記複合体の生体内半減期が、ＶＷＦに結合した前記ＦＶＩＩＩの生体内半減期と比較して、少なくとも１．５倍増大している、請求項２２に記載の複合体。
【請求項２４】
前記複合体の生体内半減期が、ＶＷＦに結合した前記ＦＶＩＩＩの生体内半減期と比較して、少なくとも２倍増大している、請求項２２に記載の複合体。
【請求項２５】
ＶＷＦ分子と、該ＶＷＦ分子上の少なくとも１つの一級アミノ基に共有結合したＰＥＧ部分とを含むタンパク質性構築物を形成するための方法であって、
（ａ）血漿フォンビルブラント因子（ＶＷＦ）、組換え型ＶＷＦ、ＶＷＦの生物活性誘導体、ならびにそれらのダイマーおよびマルチマーからなる群から選択されるＶＷＦ分子を提供するステップと、
（ｂ）該ＶＷＦ分子上の該一級アミノ基をＰＥＧ試薬と接触させるステップと、
（ｃ）該ＰＥＧ試薬を該ＶＷＦ上の該一級アミノ基と共有結合させることにより、該構築物を形成させるステップとを含み、
該構築物の生体内半減期がＶＷＦ分子の生体内半減期と比較して増大しており、
該構築物が、少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子またはＦＶＩＩＩの生物活性誘導体に結合することが可能であり、該ＰＥＧ試薬は、カルボキシル基含有ＰＥＧ誘導体である、方法。
【請求項２６】
前記ＰＥＧ部分が、前記ＶＷＦ分子のＦＶＩＩＩ結合部位に対しては結合しておらず、前記方法はさらに、
（ｉ）ステップ（ｂ）の前に該ＶＷＦ分子上のＦＶＩＩＩ結合部位を第ＶＩＩＩ因子結合部位保護剤と接触させることにより、保護されたＦＶＩＩＩ結合部位を持つＶＷＦ分子を形成させるステップと、
（ｉｉ）ステップ（ｃ）の後に該ＶＷＦ分子から該ＦＶＩＩＩ結合部位保護剤を分離させるステップと、
を含み、
該構築物が、少なくとも１つの第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子またはＦＶＩＩＩの生物活性誘導体と結合することができる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
（ａ）血漿フォンビルブラント因子（ＶＷＦ）、組換え型ＶＷＦ、ＶＷＦの生物活性誘導体、ならびにそれらのダイマーおよびマルチマーからなる群から選択されるＶＷＦ分子を提供するステップと、
（ｂ）該ＶＷＦ分子をＰＥＧ試薬に接触させて溶液を形成するステップと、
（ｃ）該溶液を灌流チェンバーに入れ、蠕動ポンプの使用により前記ＶＷＦ分子上に剪断応力を発生させるステップと、
（ｄ）該ＰＥＧ試薬を該ＶＷＦに共有結合させることにより、該構築物を形成させるステップと、
を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記一級アミノ基が、前記ＶＷＦ分子のリジン残基上に含まれる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記一級アミノ基が、前記ＶＷＦ分子のＮ末端上に含まれる、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＰＥＧ試薬が、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド−エステル、ＰＥＧカーボネートおよびカルボキシル基含有ＰＥＧ誘導体からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
前記試薬が、ＰＥＧ−スクシンイミジルスクシネート、ＰＥＧ−スクシンイミジルグルタレート、ＰＥＧ−スクシンイミジルブタノエート、ＰＥＧ−スクシンイミジルヘキサノエート、分解性ＰＥＧ試薬、および加水分解性ＰＥＧ試薬からなる群から選択されるＮ−ヒドロキシスクシンイミド−エステルである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記試薬が、ｐ−ニトロフェニルカーボネートまたはスクシンイミジルカーボネートであるＰＥＧカーボネートである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記試薬が、水溶性カルボジイミドの使用によって一級アミノ基に連結することができるカルボキシル基を含むＰＥＧ誘導体の群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記第ＶＩＩＩ因子結合部位保護剤が親和性カラムに含まれる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３５】
前記第ＶＩＩＩ因子結合部位保護剤が、第ＶＩＩＩ因子、ＦＶＩＩＩの誘導体、ヘパリン、およびヘパリンの誘導体からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＰＥＧ試薬が、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド−エステル、ＰＥＧカーボネートおよびカルボキシル基含有ＰＥＧ誘導体からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＰＥＧ試薬がＰＥＧ−スクシンイミジルスクシネート、ＰＥＧ−スクシンイミジルグルタレート、ＰＥＧ−スクシンイミジルブタノエート、ＰＥＧ−スクシンイミジルヘキサノエート、加水分解感受性のエステルまたはアミド結合によって結合される加水分解性ＰＥＧ、ｍＰＥＧ−（カルボキシメチル）−３−ヒドロキシ−ブタン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ＰＥＧ−ｐ−ニトロフェニルカーボネート、および、ＰＥＧ−スクシンイミジルカーボネートからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３８】
請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の方法によって調製されたタンパク質性構築物。
【請求項３９】
前記構築物の生体内半減期が、ＶＷＦ分子の生体内半減期と比較して、少なくとも１．５倍増大している、請求項３８に記載の構築物。
【請求項４０】
前記構築物の生体内半減期が、ＶＷＦ分子の生体内半減期と比較して、少なくとも２倍増大している、請求項３８に記載の構築物。
【請求項４１】
前記構築物に結合した場合、ＦＶＩＩＩ分子またはＦＶＩＩＩの生物活性誘導体の生体内半減期が、該構築物に結合していない該ＦＶＩＩＩ分子または該ＦＶＩＩＩの生物活性誘導体の生体内半減期と比較して、少なくとも１．５倍増大している、請求項３８に記載の構築物。
【請求項４２】
前記構築物に結合した場合、ＦＶＩＩＩ分子またはＦＶＩＩＩの生物活性誘導体の生体内半減期が、該構築物に結合していない該ＦＶＩＩＩ分子または該ＦＶＩＩＩの生物活性誘導体の生体内半減期と比較して、少なくとも２倍増大している、請求項３８に記載の構築物。