(57)【要約】本発明は、クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物を含む組成物を提供する。前期組成物の投与又は摂取により、糖尿病腎症における腎線維化が抑制される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物を含む、糖尿病腎症における腎線維化の治療又は予防用医薬組成物であって、該組成物が錠剤である医薬組成物。
【請求項２】
腎における炎症を抑制する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
腎におけるＴＧＦ−β、ＨＩＦ１及びＭＣＰ１からなる群から選択される少なくとも１つの蛋白質の発現を抑制する、請求項１又は２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４】
クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物が、無水クエン酸、クエン酸ナトリウム又はその水和物、及びクエン酸カリウム又はその水和物の混合物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物が、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物及びクエン酸ナトリウム二水和物である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
１型糖尿病に罹患している患者に投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖尿病腎症における腎線維化抑制等の為の、クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
慢性腎臓病（ＣＫＤ）は、腎臓の障害を示唆する所見やＧＦＲの低下が３ヶ月以上継続する病態であり、原疾患を問わない概念である。末期腎不全へと進展するＣＫＤの三大原因疾患としては、糖尿病腎症、慢性糸球体腎炎、高血圧性腎硬化症が知られている。これら疾患が末期腎不全へと進行する過程において、共通して腎線維化が認められ、そして、腎線維化の程度は腎機能予後と有意に相関することから（非特許文献１）、腎線維化を抑制する薬剤は、ＣＫＤの進行抑制剤として有望であると期待されている。
近年、腎線維化の機構が解明されてきており、サイトカインであるＴＧＦ−β１が腎線維化の誘導因子として中心的な役割を果たしていることが明らかになっている（非特許文献２）。実際、動物実験における腎線維化抑制効果を踏まえて、ＴＧＦ−β１作用の阻害効果を示すpirfenidoneについて糖尿病腎症患者を対象に臨床試験が行われ、その結果、１年間の投薬により腎機能（ｅＧＦＲ）が有意に改善することが示されている（非特許文献３）。
また、単球及び好塩基球の遊走を惹起するケモカインであるＭＣＰ１についても、ループス腎炎、IgA腎症等の、その発症・進展に炎症が関与する腎疾患において尿中濃度が上昇することが報告されており（非特許文献４）、ＭＣＰ１のレセプターであるＣＣＲ２のアンタゴニストを投与することにより、マウスモデルにおいて腎線維化が抑制され、マクロファージ浸潤が抑制されることも報告されている（非特許文献５）。
さらに、低酸素誘導因子であるＨＩＦ１αの阻害剤を投与することにより、マウスにおいて腎線維化が抑制されたことも報告されている（非特許文献６）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Nephrol Dial Transplant 16: 765-770, 2001
【非特許文献２】Clin Sci 124:243-254, 2013
【非特許文献３】J Am Soc Nephrol 24:1599-1616, 2013
【非特許文献４】Curr Med Chem Anti-Inflammatory & Anti-Allergy, 2: 175-190, 2003
【非特許文献５】J Am Soc Nephrol 15:940-948, 2004
【非特許文献６】Am J Physiol Renal Physiol 295:F1023-1029, 2008
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、糖尿病腎症における腎線維化抑制の為の薬剤を提供すること等を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物が糖尿病腎症における腎線維化抑制等に有用であることを見出し、本発明を完成した。【０００６】
一つの側面において、本発明は、クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物を含む、糖尿病腎症における腎線維化の治療用又は予防用組成物を提供する。【０００７】
一つの側面において、本発明は、クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物を含む、糖尿病性腎症の患者の腎におけるＴＧＦ−β、ＨＩＦ１及びＭＣＰ１からなる群から選択される少なくとも１つの蛋白質の産生阻害用組成物を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明が提供する組成物は、糖尿病腎症における腎線維化抑制等に有用である。また、本発明が提供する組成物は、副作用が少なく、安全である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明が提供する組成物は、有効成分として、クエン酸又はその水和物、クエン酸の医薬的に許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物を含むことができる。クエン酸の医薬的に許容可能な塩の例としては、クエン酸アルカリ金属塩が挙げられる。クエン酸アルカリ金属塩の例としては、クエン酸カリウム及びクエン酸ナトリウムが挙げられ、それぞれ安定なクエン酸カリウムの一水和物（C6H5K3O7・H2O）及びクエン酸ナトリウムの二水和物（C6H5Na3O7・2H2O）等の水和物であってもよい。
好ましい有効成分の例としては、無水クエン酸、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム若しくはその水和物又はそれらの混合物が挙げられ、例えば、クエン酸カリウムの一水和物（C6H5K3O7・H2O）及びクエン酸ナトリウムの二水和物（C6H5Na3O7・2H2O）の混合物；又はクエン酸カリウムの一水和物（C6H5K3O7・H2O）、クエン酸ナトリウムの二水和物（C6H5Na3O7・2H2O）及び無水クエン酸の混合物であってもよい。クエン酸カリウムの一水和物（C6H5K3O7・H2O）及びクエン酸ナトリウムの二水和物（C6H5Na3O7・2H2O）の混合比は、当業者が適宜設定でき、例えば、クエン酸カリウムの一水和物とクエン酸ナトリウムの二水和物のモル比を、クエン酸カリウムの一水和物1に対してクエン酸ナトリウムの二水和物を0.01〜100とすることができる。混合比をモル比で約1:1としてもよい。
クエン酸カリウムの一水和物（C6H5K3O7・H2O）、クエン酸ナトリウムの二水和物（C6H5Na3O7・2H2O）及び無水クエン酸の混合物における、クエン酸カリウムの一水和物（C6H5K3O7・H2O）、クエン酸ナトリウムの二水和物（C6H5Na3O7・2H2O）及び無水クエン酸の混合比は、当業者が適宜設定でき、例えば、クエン酸カリウムの一水和物、クエン酸ナトリウムの二水和物と無水クエン酸のモル比を、クエン酸カリウムの一水和物1に対してクエン酸ナトリウムの二水和物を0.01〜100、無水クエン酸を0.01〜100とすることができる。混合比をモル比で約2：2:1としてもよい。
また、好ましい有効成分の他の例には、クエン酸ナトリウム又はその水和物が挙げられ、例えば、クエン酸ナトリウムの二水和物（C6H5Na3O7・2H2O）であってもよい。
また、好ましい有効成分の他の例には、クエン酸カリウム又はその水和物が挙げられ、例えば、クエン酸カリウムの一水和物（C6H5K3O7・H2O）であってもよい。
また、有効成分として、クエン酸又はその水和物、クエン酸の医薬的に許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物に代えて、炭酸水素ナトリウム（重曹）を使用してもよい。
【００１０】
一つの実施態様において、本発明が提供する組成物の有効成分は、クエン酸又はその水和物、クエン酸の医薬的に許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物であって、前記クエン酸の医薬的に許容可能な塩は、クエン酸第二鉄以外の塩である。
一つの実施態様において、本発明が提供する組成物の有効成分は、クエン酸又はその水和物、クエン酸ナトリウム又はその水和物と、クエン酸カリウム又はその水和物との混合物を含んでもよく、クエン酸又はその水和物、クエン酸ナトリウム又はその水和物と、クエン酸カリウム又はその水和物との混合物のみから構成されてもよい。
一つの実施態様において、本発明が提供する組成物の有効成分は、クエン酸ナトリウム又はその水和物と、クエン酸カリウム又はその水和物との混合物を含んでもよく、クエン酸ナトリウム又はその水和物と、クエン酸カリウム又はその水和物との混合物のみから構成されてもよい。
本明細書において、クエン酸又はその水和物、クエン酸の医薬的に許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物（例えば、クエン酸カリウムの一水和物（C6H5K3O7・H2O）及び、クエン酸ナトリウムの二水和物（C6H5Na3O7・2H2O））の重量について言及する時は、その重量は乾燥重量であり得る。
【００１１】
本発明が提供する組成物は、医薬であり得、糖尿病腎症における腎線維化の抑制、糖尿病腎症の患者の腎における腎線維化に関連する炎症の抑制、又は糖尿病腎症の患者の腎におけるＴＧＦ−β、ＨＩＦ１及び／又はＭＣＰ１の産生阻害に有用である。
本明細書において、糖尿病の例には、限定はされないが、１型糖尿病及び２型糖尿病が挙げられる。
【００１２】
本発明が提供する医薬である組成物（医薬組成物）の投与対象は、医師により適宜選択され得る。
【００１３】
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物の投与対象は、糖尿病腎症に罹患しているヒト、糖尿病腎症の発症リスクのあるヒト（例えば、糖尿病腎症を発症していないが、糖尿病に罹患しているヒト）であり得る。
【００１４】
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物を、糖尿病腎症の患者に投与することにより、プラセボ投与に比較し、腎線維化の悪化を抑制できる。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物を、糖尿病腎症の患者に投与することにより、プラセボ投与に比較し、腎における腎線維化に関連する炎症の悪化を抑制できる。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物を、糖尿病腎症の患者に投与することにより、投与前に比較し、腎線維化の悪化を抑制できる。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物を、糖尿病腎症の患者に投与することにより、投与前に比較し、腎における腎線維化に関連する炎症の悪化を抑制できる。
【００１５】
本発明が提供する医薬組成物は、腎において、ＴＧＦ−β、ＨＩＦ１及びＭＣＰ１からなる群から選択される少なくとも１つの蛋白質の発現を抑制する。例えば、本発明が提供する医薬組成物は、腎において、ＴＧＦ−β、ＨＩＦ１又はＭＣＰ１の蛋白質の発現を抑制する。一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物を、糖尿病腎症の患者に投与することにより、プラセボ投与に比較し、腎において、ＴＧＦ−βの蛋白質の発現が抑制される。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物を、糖尿病腎症の患者に投与することにより、プラセボ投与に比較し、腎において、ＨＩＦ１の蛋白質の発現の発現が抑制される。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物を、糖尿病腎症の患者に投与することにより、プラセボ投与に比較し、腎において、ＭＣＰ１の蛋白質の発現の発現が抑制される。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物を、糖尿病腎症の患者に投与することにより、投与前に比較し、腎において、ＴＧＦ−βの蛋白質の発現が抑制される。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物を、糖尿病腎症の患者に投与することにより、投与前に比較し、腎において、ＨＩＦ１の蛋白質の発現の発現が抑制される。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物を、糖尿病腎症の患者に投与することにより、投与前に比較し、腎において、ＭＣＰ１の蛋白質の発現の発現が抑制される。
タンパク質の発現は、当業者に公知の方法で評価することができ、例えば、定量的ＰＣＲ（例えば、定量的ＲＴ−ＰＣＲ）、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた方法等で評価することができる。
腎臓における線維化は、例えば、腎生検により得られた腎組織を用いて病理学的に評価してもよい。
一つの実施態様において、腎組織におけるＴＧＦ−β、ＨＩＦ１、及びＭＣＰ１からなる群から選択される少なくとも１つの蛋白質の発現の抑制は、腎線維化進行の抑制と理解できる。
一つの実施態様において、腎組織におけるＴＧＦ−β及びＭＣＰ１からなる群から選択される少なくとも１つの蛋白質の発現の抑制は、腎線維化進行に関連する炎症の抑制と理解できる。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物は、慢性腎臓病患者の尿酸管理に使用されるものであり、副作用が少なく、安全である。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物は、ＴＧＦ−β、ＨＩＦ１、及びＭＣＰ１の作用を病態特異的に阻害する、又は部分的に阻害するので、副作用が少なく、安全である。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物は、本発明が提供する医薬組成物を投与した場合、プラセボ投与に比較して、ＴＧＦ−β、ＨＩＦ１、及びＭＣＰ１からなる群から選択される少なくとも１つの蛋白質の発現を５０％以上又は６０％以上阻害しない。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物は、本発明が提供する医薬組成物を投与した場合、プラセボ投与に比較して、ＴＧＦ−β、ＨＩＦ１、及びＭＣＰ１のそれぞれの蛋白質の発現を５０％以上又は６０％以上阻害しない。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物は、本発明が提供する医薬組成物を投与した場合、プラセボ投与に比較して、ＴＧＦ−β、ＨＩＦ１、及びＭＣＰ１からなる群から選択される少なくとも１つの蛋白質の発現を１０〜４０％阻害する。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物は、本発明が提供する医薬組成物を投与した場合、プラセボ投与に比較して、ＴＧＦ−β、ＨＩＦ１、及びＭＣＰ１のそれぞれの蛋白質の発現を１０〜４０％阻害する。
【００１６】
本発明が提供する医薬組成物は、ヒト又はその他の哺乳動物に経口又は非経口で投与され、非経口投与の例には、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、関節内投与、経粘膜投与、経皮投与、経鼻投与、直腸投与、髄腔内投与、腹腔内投与、局所投与が挙げられる。有効成分（例えば、クエン酸又はその水和物；クエン酸カリウム又はその水和物；クエン酸ナトリウム又はその水和物；クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；クエン酸、クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；又は炭酸水素ナトリウム）の投与量は、当業者が適宜設定できる。
本発明が提供する医薬組成物は、有効成分（例えば、クエン酸又はその水和物；クエン酸カリウム又はその水和物；クエン酸ナトリウム又はその水和物；クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；クエン酸、クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；又は炭酸水素ナトリウム）を、そのまま、又は薬学的に許容される担体、例えば、賦形剤（例えば、乳糖、Ｄ−マンニトール、結晶セルロース、ブドウ糖）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ））、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク）、崩壊剤（例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム（ＣＭＣ−Ｃａ））、希釈剤（例えば、注射用水、生理食塩水）、及び必要な場合はその他の添加剤（例えば、ｐＨ調整剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤）と混合して調製されてもよく、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、注射剤、坐薬等の製剤であり得る。例えば、錠剤とするには、有効成分（例えば、クエン酸又はその水和物；クエン酸カリウム又はその水和物；クエン酸ナトリウム又はその水和物；クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；クエン酸、クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；又は炭酸水素ナトリウム）を、賦形剤（例えば、乳糖、Ｄ−マンニトール、結晶セルロース、ブドウ糖）、崩壊剤（例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム（ＣＭＣ−Ｃａ））、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ））、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク）等と混合して製剤化してもよい。錠剤は素錠であってもフィルムコーティング錠であってもよい。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物は錠剤である。本発明が提供する錠剤は、有効成分（例えば、クエン酸又はその水和物；クエン酸カリウム又はその水和物；クエン酸ナトリウム又はその水和物；クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；クエン酸、クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；又は炭酸水素ナトリウム）の他、製薬分野において慣用の、薬学的に許容される添加剤を含んでもよい。このような添加剤の例としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、流動化剤、矯味剤、滑沢剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、安定化剤及び香料が挙げられる。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物（例えば、錠剤）の有効成分がクエン酸のアルカリ金属塩（例えば、クエン酸カリウム又はその水和物（例えば、クエン酸カリウムの一水和物）；クエン酸ナトリウム又はその水和物（例えば、クエン酸ナトリウムの二水和物）；クエン酸カリウム又はその水和物、及びクエン酸ナトリウム又はその水和物の混合物；又はクエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物）である場合、本発明が提供する医薬組成物（例えば、錠剤）は無水クエン酸を安定化剤として含んでもよい。
本発明が提供する錠剤における有効成分（例えば、クエン酸又はその水和物；クエン酸カリウム又はその水和物；クエン酸ナトリウム又はその水和物；クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；クエン酸、クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；又は炭酸水素ナトリウム）の含量は、錠剤に対し１０〜９５重量％、好ましくは３０〜９０重量％であってもよく、より好ましくは６０〜９０重量％であってもよい。
【００１７】
本発明が提供する医薬組成物は、製薬分野において公知の方法により製造することができる。例えば、錠剤とする場合、製造方法には、有効成分（例えば、クエン酸カリウム又はその水和物；クエン酸ナトリウム又はその水和物；クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；又は炭酸水素ナトリウム）と添加物を混合する混合工程、造粒工程、打錠工程及び／又はコーティング工程を含み得る。
混合工程は、有効成分と賦形剤、安定化剤、崩壊剤及び／又は結合剤等の添加物を混合する工程を含み得る。また、打錠工程の前に、有効成分と添加剤を含む混合物を、滑沢剤、矯味剤及び／又は香料と混合する工程を更に含み得る。混合は、Ｖ型混合機、Ｗ型混合機、コンテナミキサー、タンブラー混合機、撹拌混合機等を用いて行うことができる。
造粒工程は、製薬分野において公知の造粒方法により行うことができる。造粒方法の例には、乾式造粒法、湿式造粒法、流動層造粒法が挙げられる。
一つの実施態様として、混合工程で得られた混合物や造粒工程で得られた造粒物は、適宜粉砕及び／又は篩分けすることにより、所望の粒子径を有する混合物や造粒物とされ得る。粉砕は、例えば、ボールミル、ジェットミル、ハンマーミル等の製薬分野において公知の粉砕機で行うことができる。篩分けは、１６ｍｅｓｈ篩（目開き１０００μｍ）〜３２ｍｅｓｈ篩（目開き５００μｍ）等を用いて行うことができる、
打錠工程は、製薬分野において公知の打錠方法により行うことができる。打錠方法の例には、直接打錠法、乾式打錠法、湿式打錠法、外部滑沢打錠法が挙げられる。例えば、単発式打錠機やロータリー式打錠機等の製薬分野において公知の打錠機を用いて、上記の工程で得られた混合物や造粒物を打錠することができる。単発式打錠機、ロータリー式打錠機等を用いる場合は、１ｋＮ〜３０ｋＮの打錠圧を採用することができる。
コーティング工程は、製薬分野において公知の方法により行うことができる。例えば、コーティング基剤と、可塑剤、着色剤や光沢化剤等を適宜含めたコーティング液を素錠の外側にスプレーコーティングすることにより行うことができる。
【００１８】
一つの実施態様において、得られる錠剤の硬度は、１０〜２００Ｎ、好ましくは３０〜１５０Ｎであり得る。
【００１９】
本発明が提供する医薬組成物中の有効成分（例えば、クエン酸カリウム又はその水和物；クエン酸ナトリウム又はその水和物；クエン酸カリウムの一水和物及びクエン酸ナトリウムの二水和物の混合物；又は炭酸水素ナトリウム）の量は適宜設定され得る。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物は錠剤であり、１錠剤中に、有効成分しての無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物又はクエン酸ナトリウム二水和物を10mg〜1g、好ましくは、100mg〜600mg、より好ましくは、400mg〜550mgを含んでもよい。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物は錠剤であり、１錠剤中に、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物及びクエン酸ナトリウム二水和物を、それぞれ10mg〜300mgで、合計20mg〜600mg含んでもよく、好ましくは、それぞれ70〜250mgで、合計400〜600mg、より好ましくは、それぞれ70〜240mgで、合計450〜550mgを含んでもよい。
一つの実施態様において、本発明が提供する医薬組成物は錠剤であり、１錠剤中に、有効成分としての炭酸水素ナトリウムを10mg〜1g、好ましくは、100mg〜500mg含んでもよい。
一つの実施態様として、本発明が提供する医薬組成物は錠剤であり、クエン酸カリウム一水和物 231.5mg及びクエン酸ナトリウム二水和物 195.0mgを有効成分として、無水クエン酸、結晶セルロース、部分アルファー化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、ヒプロメロース、マクロゴール6000、酸化チタン及びカルナウバロウを添加剤として含んでもよい。
【００２０】
本発明が提供する組成物は、食品として使用され得る。食品は疾病の治療又は予防を目的としない範囲において、ヒト又はその他の哺乳動物（例えば、健常なヒト、健常な哺乳動物）に摂取され得る。
本発明が提供する食品を摂取することにより、腎臓の健康の維持等の効果を得ることができる。
本発明が提供する食品は、特定保健用食品、栄養機能食品、又は機能性表示食品であってもよい。
食品の形態としては、経口的に摂取可能な形態であれば特に限定されず、サプリメントであっても、一般の食品の形態であってもよい。一般の食品の例としては、飲料（例えば、ジュース等の果汁又は野菜エキスを含む飲料、紅茶飲料、スポーツ飲料、ニアウォーター、ダイエット飲料）、飴、ゼリー、グミ、及びガムが挙げられる。本発明が提供する食品は、食品の種類により当業者が適宜製造でき、例えば、食品素材にクエン酸又はその水和物、クエン酸の医薬的に許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物を配合することにより製造してもよい。食品に含まれるクエン酸又はその水和物、クエン酸の医薬的に許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物の含量についても、当業者が適宜設定でき、例えば、食品にクエン酸、クエン酸カリウム及び／又はクエン酸ナトリウム水和物を含ませる場合、無水クエン酸、クエン酸カリウム又はクエン酸ナトリウム水和物を合計で１日当たり１〜６ｇ、好ましくは１日当たり１〜３ｇ摂取するように食品中にクエン酸、クエン酸カリウム及び／又はクエン酸ナトリウム水和物を含ませてもよい。本発明が提供する食品が錠剤である場合、例えば、１錠当たり、300mg〜600mgの錠剤に、70〜90重量％のクエン酸又はその水和物、クエン酸の医薬的に許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物（例えば、クエン酸、クエン酸カリウム及びクエン酸ナトリウム水和物）を含むように、上記医薬における錠剤の製造方法に準じて製造してもよい。
【００２１】
一つの実施態様において、本発明は、本発明により提供される医薬組成物又は食品の製造のためのクエン酸又はその水和物、クエン酸の医薬的に許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物の使用を提供する。
一つの実施態様において、本発明は、糖尿病腎症における腎線維化抑制用医薬組成物の製造のためのクエン酸又はその水和物、クエン酸の医薬的に許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物の使用を提供する。
一つの実施態様において、本発明は、腎の健康を維持する食品の製造のためのクエン酸又はその水和物、クエン酸の医薬的に許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物の使用を提供する。
一つの実施態様において、本発明は、本発明により提供される医薬組成物又は食品の製造のための炭酸水素ナトリウムの使用を提供する。
一つの実施態様において、本発明は、糖尿病腎症における腎線維化抑制用医薬組成物の製造のための炭酸水素ナトリウムの使用を提供する。
一つの実施態様において、本発明は、腎の健康を維持する食品の製造のための炭酸水素ナトリウムの使用を提供する。
【００２２】
本発明が提供する実施態様の例としては、以下（１−１）〜（１−８）、（２−１）〜（２−８）、（３−１）〜（３−８）が挙げられる。
（１−１）
糖尿病腎症における腎線維化抑制に使用するための、有効成分として、クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物を含む、医薬組成物；
（１−２）
腎における炎症を抑制する、（１−１）に記載の医薬組成物；
（１−３）
腎におけるＴＧＦ−β、ＨＩＦ１及びＭＣＰ１からなる群から選択される少なくとも１つの蛋白質の発現を抑制する、（１−１）又は（１−２）に記載の医薬組成物；
；
（１−４）
錠剤である、（１−１）〜（１−３）のいずれかに記載の医薬組成物；
（１−５）
クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物が、無水クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩若しくはその水和物又はそれらの混合物である、（１−１）〜（１−４）のいずれかに記載の医薬組成物；
（１−６）
クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物が、クエン酸ナトリウム又はその水和物と、クエン酸カリウム又はその水和物との混合物である、（１−１）〜（１−５）のいずれかに記載の医薬組成物；
（１−７）
１型糖尿病に罹患している患者に投与される、（１−１）〜（１−６）のいずれかに記載の医薬組成物；
（１−８）
腎臓の健康維持に使用するための、クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物を含む食品組成物；
（２−１）
糖尿病腎症における腎線維化抑制用医薬組成物の製造における、有効成分としてのクエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物の使用；
（２−２）
医薬組成物が、腎における炎症を抑制する、（２−１）に記載の使用；
（２−３）
医薬組成物が、更に腎におけるＴＧＦ−β、ＨＩＦ１及びＭＣＰ１からなる群から選択される少なくとも１つの蛋白質の発現を抑制する、（２−１）又は（２−２）に記載の使用；
（２−４）
医薬組成物が錠剤である、（２−１）〜（２−３）のいずれかに記載の使用；
（２−５）
クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物が、無水クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物である、（２−１）〜（２−４）のいずれかに記載の使用；
（２−６）
クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物が、クエン酸ナトリウム又はその水和物と、クエン酸カリウム又はその水和物との混合物である、（２−１）〜（２−５）のいずれかに記載の使用；
（２−７）
医薬組成物が、１型糖尿病に罹患している患者に投与される、（２−１）〜（２−６）のいずれかに記載の使用；
（２−８）
ヒトの腎臓の健康維持用食品組成物の製造における、クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物の使用。
（３−１）
哺乳類対象（例えば、ヒト）における、糖尿病腎症における腎線維化抑制方法であって、糖尿病腎症における腎線維化を抑制することが必要な対象に有効量のクエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物を含む医薬組成物を投与することを含む方法；
（３−２）
更に、腎における炎症を抑制する、（３−１）に記載の方法；
（３−３）
更に、腎におけるＴＧＦ−β、ＨＩＦ１及びＭＣＰ１からなる群から選択される少なくとも１つの蛋白質の発現を抑制する、（３−１）又は（３−２）に記載の方法；
（３−４）
医薬組成物が錠剤である、（３−１）〜（３−３）のいずれかに記載の方法；
（３−５）
クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物が、無水クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはその水和物又はそれらの混合物である、（３−１）〜（３−４）のいずれかに記載の方法；
（３−６）
クエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物が、クエン酸ナトリウム又はその水和物と、クエン酸カリウム又はその水和物との混合物である、（３−１）〜（３−５）のいずれかに記載の方法；
（３−７）
医薬組成物が、１型糖尿病に罹患している患者に投与される、（３−１）〜（３−６）のいずれかに記載の方法；
（３−８）
哺乳類対象（例えば、ヒト）における、腎臓の健康維持方法であって、腎臓の健康維持を必要とする対象に有効量のクエン酸、クエン酸の製薬上許容可能な塩、若しくはそれらの水和物又はそれらの混合物を含む食品組成物を摂取させることを含む方法。
【００２３】
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００２４】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ雄マウスを無作為に一群３匹からなる３群（Control群、Citrate（−）群、Citrate（＋）群）に分けた。動物を24時間絶食させた後、Control群にはクエン酸バッファー（10mM、pH4.5）を、Citrate（−）群及びCitrate（＋）群にはクエン酸バッファー（10mM、pH4.5）に溶解したストレプトゾシン（STZ：streptozocin）（200mg/kg; Sigma-Aldrich、USA）を腹腔内に単回投与した。STZ投与後20日目に、血糖メーターを用いて、尾から得た血液試料における血糖値を測定し、糖尿病を発症していることを確認した。
クエン酸塩を含む水溶液（100mL中に463mgのクエン酸カリウム一水和物及び390mgのクエン酸ナトリウム二水和物を含む水溶液）を調製してCitrate（＋）群のマウスに一週間自由摂水させた。Control群及びCitrate（−）のマウスには、水道水を飲水投与した。
飲水投与一週間後に尿のｐＨを測定したところ、Citrate（−）群のマウスの尿のｐＨが5.296であったのに対し、Citrate（＋）群のマウスの尿のｐＨは5.568であり、アルカリ化されていることを確認した。
飲水投与一週間後にマウスより腎臓を摘出し、ｃＤＮＡを調製した。これを鋳型にＴＧＦ−β、ＨＩＦ１、ＭＣＰ１及びＳｉｒｔ１のそれぞれのプライマー（表２）を用いた定量的ＰＣＲを行い（増幅産物は、それぞれ、2191bp、4775bp、175bp、3793bp）、内部標準に対する相対量として、腎におけるＴＧＦ−β、ＨＩＦ１、ＭＣＰ１及びＳｉｒｔ１のそれぞれの発現量を求めた。【００２５】
【表１】
2020080451.tif 000002
【００２６】
【表２】
2020080451.tif 000003
【００２７】
その結果、クエン酸塩非投与群に比較し、クエン酸塩を含む水溶液を投与した糖尿病マウスにおいては、ＳＴＺが惹起するＴＧＦ−β及びＭＣＰ１の発現量増加が抑制され、そして、ＨＩＦ１の発現量が低下した（表１）。また、クエン酸塩を含む水溶液投与群のＨＩＦ１の発現量は、Control群に比較して低下した（表１）。
表１の結果から、クエン酸塩を含む水溶液の投与により、ＴＧＦ−β、ＨＩＦ１、及びＭＣＰ１の発現を病態特異的に阻害する、又は部分的に阻害することが示された。また、クエン酸塩を含む水溶液の投与により、糖尿病マウスにおける腎線維化、その進行過程における炎症が抑制されることが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００２８】
本発明の利用により、糖尿病腎症における腎線維化抑制用組成物等が提供される。
【配列表】
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【国際調査報告】
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