(57)【要約】  本発明は、（１）配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子と、（２）抗がん剤とを含む組合せ物、有効量の前記組合せ物を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんを処置する方法に関する。【選択図】なし
2020116536.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子と、（２）抗がん剤とを含む組合せ物。
【請求項２】
抗がん剤が、ＢｃＬ２ファミリー分子の阻害剤である、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項３】
ＢｃＬ２ファミリー分子の阻害剤が、ＢｃＬ２ファミリー分子の発現阻害剤、又は、ＢｃＬ２ファミリー分子の機能阻害剤である、請求項２に記載の組合せ物。
【請求項４】
ＢｃＬ２ファミリー分子が、ＢｃＬ−ＸＬである、請求項３に記載の組合せ物。
【請求項５】
（１）の分子が、配列番号１のヌクレオチド配列に相補性を有するヌクレオチド配列を含む遺伝子の発現を抑制する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項６】
（１）の分子が、ｍｉＲ−３４５の二本鎖成熟ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｐｒｅ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｐｒｉ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃ、及びこれらのうち1つ又は2つ以上を発現するベクターから選択されるｍｉＲ−３４５関連分子である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組合せ物と、薬学的に許容し得る添加物とを含む、医薬組成物。
【請求項８】
がんの処置のための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組合せ、又は、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
がんがＢｃＬ−ＸＬを発現している、請求項８に記載の組合せ物又は医薬組成物。
【請求項１０】
がんが、脳腫瘍、頭頚部がん、乳がん、肺がん、口腔がん、食道がん、胃がん、十二指腸がん、虫垂がん、大腸がん、直腸がん、肝がん、膵がん、胆嚢がん、胆管がん、肛門がん、腎がん、尿管がん、膀胱がん、前立腺がん、陰茎がん、精巣がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、外陰がん、膣がん、皮膚がん、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、リンパ管肉腫、滑膜肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、骨髄腫、リンパ腫、白血病からなる群から選択される、請求項８に記載の組合せ物又は医薬組成物。
【請求項１１】
有効量の請求項１〜６、８〜１０のいずれか一項に記載の組合せ物、又は、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんを処置する方法。
【請求項１２】
配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子を含む、抗がん剤と組み合わせてがんを処置するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、がんの処置に有用な組合せ、当該組合せを用いたがんの処置方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
がん化学療法は、アルキル化剤など、細胞非特異的に細胞毒性を示す薬剤の使用から始まったが、近年は、がん細胞以外の細胞に対してより影響の少ない、がん特有の分子を標的とした分子標的薬に関心が集まっている。こうした状況の中、ＢｃＬ−ＸＬがいくつかの種類のがんで上方調節されていることが報告されている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Sarosiek and Leta, FEBS J. 2016;283(19):3523-3533
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
がん細胞以外の細胞に対する影響が少ないがん治療薬が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示の一部の態様は以下に関する。
［１］  （１）配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子と、（２）抗がん剤とを含む組合せ物。
［２］  抗がん剤が、ＢｃＬ２ファミリー分子の阻害剤である、［１］に記載の組合せ物。
［３］  ＢｃＬ２ファミリー分子の阻害剤が、ＢｃＬ２ファミリー分子の発現阻害剤、又は、ＢｃＬ２ファミリー分子の機能阻害剤である、［２］に記載の組合せ物。
［４］  ＢｃＬ２ファミリー分子が、ＢｃＬ−ＸＬである、［３］に記載の組合せ物。
［５］  （１）の分子が、配列番号１のヌクレオチド配列に相補性を有するヌクレオチド配列を含む遺伝子の発現を抑制する、［１］〜［４］のいずれか一項に記載の組合せ物。
［６］  （１）の分子が、ｍｉＲ−３４５の二本鎖成熟ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｐｒｅ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｐｒｉ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃ、及びこれらのうち1つ又は2つ以上を発現するベクターから選択されるｍｉＲ−３４５関連分子である、［１］〜［５］のいずれか一項に記載の組合せ物。
［７］  ［１］〜［６］のいずれか一項に記載の組合せ物と、薬学的に許容し得る添加物とを含む、医薬組成物。
［８］  がんの処置のための、［１］〜［６］のいずれか一項に記載の組合せ、又は、［７］に記載の医薬組成物。
［９］  がんがＢｃＬ−ＸＬを発現している、［８］に記載の組合せ物又は医薬組成物。
［１０］  がんが、脳腫瘍、頭頚部がん、乳がん、肺がん、口腔がん、食道がん、胃がん、十二指腸がん、虫垂がん、大腸がん、直腸がん、肝がん、膵がん、胆嚢がん、胆管がん、肛門がん、腎がん、尿管がん、膀胱がん、前立腺がん、陰茎がん、精巣がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、外陰がん、膣がん、皮膚がん、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、リンパ管肉腫、滑膜肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、骨髄腫、リンパ腫、白血病からなる群から選択される、［８］に記載の組合せ物又は医薬組成物。
［１１］  有効量の［１］〜［６］、［８］〜［１０］のいずれか一項に記載の組合せ物、又は、［７］〜［１０］のいずれか一項に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんを処置する方法。
［１２］  配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子を含む、抗がん剤と組み合わせてがんを処置するための医薬組成物。
［１３］  抗がん剤と組み合わせてがんを処置するための、配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子。
［１４］  がんの処置のための医薬の製造における（１）配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子、及び、（２）抗がん剤の使用。
［１５］  抗がん剤と組み合わせてがんを処置するための医薬の製造における、配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子の使用。
【発明の効果】
【０００６】
本開示による組合せ物及び／又は当該組合せ物を用いたがんの処置方法は、その態様に応じて以下の１又は２以上の効果を奏し得る。
（１）がん細胞の増殖を抑制することができる。
（２）がん細胞にアポトーシスを誘導することができる。
（３）正常細胞への影響が少ない。
（４）ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤単独より抗がん活性が高い。
（５）ｍｉＲ−３４５単独より抗がん活性が高い。
（６）ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤に抵抗性のがんに対しても抗がん作用を有し得る。
（７）ｍｉＲ−３４５に抵抗性のがんに対しても抗がん作用を有し得る。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤（Cpd. A又はCompound A）とｍｉＲ−３４５関連分子（Cpd. B又はCompound B）の併用による細胞増殖抑制能の増強（A）、及び、アポトーシス誘導能（B）を示した図である。
【図２】図２は、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤（化合物D）によるＢｃＬ−ＸＬの発現抑制とｍｉＲ−３４５関連分子（Compound B）の組合せによる細胞増殖抑制能の増強を示した図である。
【図３】図３は、ｍｉＲ−３４５関連分子（Cpd. F又はCompound F）によるｍｉＲ−３４５の過剰発現とＢｃＬ−ＸＬ阻害剤（Cpd. A又はCompound A）の投与の組合せによる細胞増殖抑制能の増強を示した図である。
【図４】図４は、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤（Compound D）によるＢｃＬ−ＸＬの発現抑制と、CUGACUC配列を含む分子（Compound B）又はCUGACUC配列を含まない分子（Compound H）との組合せによる細胞増殖への影響を示した図である。
【図５】図５は、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤（Cpd. A）とｍｉＲ−３４５関連分子（Cpd. B）の組合せの正常細胞の細胞増殖への影響を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本明細書において別様に定義されない限り、本明細書で用いる全ての技術用語及び科学用語は、当業者が通常理解しているものと同じ意味を有する。本明細書中で参照する全ての特許、出願及び他の出版物（オンライン情報を含む）は、その全内容を参照により本明細書に援用する。
また、本明細書は、２０１８年１２月５日に出願された本願優先権主張の基礎となる日本国特許出願（特願２０１８−２２８２８３号）の明細書および図面に記載の内容を包含する。
【０００９】
本開示は、一態様において、（１）配列番号１（CUGACUC）のヌクレオチド配列を含む分子と、（２）抗がん剤とを含む組合せ物に関する（以下、「本開示の組合せ物」と称することがある）に関する。
配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子（以下、「CUGACUC配列含有分子」又は「CUGACUC含有分子」と称することがある）としては、限定されずに、例えば、配列番号XXのヌクレオチド配列を含む核酸分子が挙げられる（以下、「CUGACUC配列含有核酸分子」又は「CUGACUC含有核酸分子」と称することがある）。一態様において、CUGACUC含有核酸分子はＲＮＡ分子である。
【００１０】
CUGACUC含有分子は、好ましくは、配列番号１のヌクレオチド配列に相補性を有するヌクレオチド配列を含む遺伝子の発現を抑制することができる。かかる遺伝子としては、限定されずに、例えば、FLG2、AIMP2、TGM1、C12orf76、ZNF133、GPANK1、TMEM139、CTD-2330K9.3、PHF2、SAPCD1、CCL8、HABP4、C6orf164、ARL14、SAT1、RFC1、DNAH10OS、TJP2、KISS1、CNBP、TMEM204、RPS21、ANKRD18A、IL1F10、MBLAC1、GOLGA7B、BRMS1、RSAD2、NMRK1、CYP3A5、IAPP、UBE2L6、AC069547.2、MAP3K7CL、CCDC144NL、CTXN2、GYPE、ZBTB25、RGS1、NOP9、E2F6、HIAT1、PPP2R3A、MRS2、OTX2、TMED7-TICAM2、EPN3、SLC9A3R2、AP000867.1、BST1、RNF4、LIMS3、LIMS3L、C1orf115、NADK、TMEM78、C14orf144、SZRD1、SMAD1、GPR3、C8orf86、SLC2A5、ZNF259、ZNF839、C8orf37、FAM3D、BcL2L11、KLF10、CRTAM、C10orf11、EPB41L2、CDIP1、CXCR5、SLC25A48、HYPK、C20orf202、DUSP18、GJB7、RPA1、KCNA5、PIEZO2、GALR1、PPFIA2、MPEG1、IP6K2、CRISP3、CCDC78、VAPB、SNX12、AIDA、CEACAM8、HFE2、CDKN1A、USP50、FAM57B、OLFM3、CDC42EP3、LILRB1、KRTAP10-11、AC022498.1、MED1、ZNF879、SPARC、IL5、CTTNBP2NL、MCM9、HDGF、PCDH15、TMEM186、PLEKHJ1、RAVER2、PRPSAP1、DST、GAL、LINC00998、SMCP、RPGR、NCMAP、TMCO5A、PBRM1、KRTAP5-2、SLC22A16、FLJ27365、PRSS45、RNPS1、FAM222B、AC093677.1、MRPL36、DRD1、CCBL2、PAX8、FCHO2、RHD、SLC47A2、AKNAD1、C16orf54、CTD-2228K2.5、ZNF14、SLBP、CHCHD5、ARHGAP6、RP11-41O4.1、AACS、CREBL2、SLC35E2B、RTP3、FICD、RTN4、CILP2、LDLRAD3、BLNK、CHRNA1、CCDC136、IKZF1、SLC2A2、TMED4、ZNF598、HMGN1、FAM118A、SNAI3、CENPN、ZNF45、POLR1E、SGMS1、MLC1、IP6K3、RAB27B、AP000322.53、TBX19、C10orf40、RBBP9、SLC9A8、GMEB2、AK4、MTDH、RPP14、SCN10A、DHCR24、SORT1、RAB3B、CDADC1、GATAD1、HSPA12A、CCDC43、NDUFA11、C22orf26、LYRM9、HIST1H3A、S100B、GPR12、APH1A、CPXCR1、DNAJB4、AC007431.1、FSBP、LIG1、TNFSF13B、CASP5、RGL4、B4GALT1、IGFBP4、ALDH1A2、KLRC2、INO80、ZSWIM7、KLRC1、ARL2BP、AIFM1、SNAP23、VTI1A、ATP10B、CYB5D1、VSTM2L、KLK7、GPATCH11、WISP3、GPALPP1、PSMG3、TRIM39、ITPKC、CASS4、SULT1A3、RNF20、SULT1A4、DCP1A、CCDC152、YEATS2、CTC-360G5.8、CLDN18、RGS7、CDA、RTBDN、MTERF、FAM103A1、SELV、C10orf113、KCTD2、NRSN1、ALDOB、SYT4、UBAC2、CDRT1、SRPX2、C17orf96、TFAP2E、CHRDL1、KANK4、IDI2、CTD-2162K18.4、MAN2A2、THY1、IL7R、TBC1D13、NEK7、AL391421.1、C11orf52、GATS、MTF2、CPA4、HEY2、SARS2、FAP、SPOCK3、PAQR7、CDIPT、PDE4B、FAM216B、RHOA、WDR59、LYRM1、CBX7、EZR、ASAP3、TBATA、HERC6、PIP4K2C、PPP2R2A、ELAVL1、HPS5、FLJ00104、TNFRSF10B、CCR5、GJA4、APOC4、LFNG、NOV、C9orf84、ABHD15、ME1、GKN2、NFE2L3、UBL4A、AMIGO1、
【００１１】
TM4SF1、FAM26D、AKT2、SERPINE3、KIAA0895、FBXO31、GPR55、FAM214B、CCDC93、PPAPDC3、XKR4、FGF11、CERKL、FAM53C、DNAJC3、TMEM63B、C14orf177、PTPRN、MOCS2、NAA50、BVES、PRPF3、SMS、C11orf87、SULF2、CYB561、AL589765.1、CDCA8、ZNF396、OSCAR、TCTA、TOR1AIP1、ERLIN2、C12orf66、RUNX3、C22orf46、RP11-80A15.1、CD5、CHST2、GRAPL、CPLX4、RP11-351M8.1、ANAPC2、HLA-DPB1、ALCAM、MXRA5、CARD8、RNF138、TBC1D10C、KCNH1、ERGIC2、SGPP1、MLANA、ERGIC1、NPY4R、SMARCA1、FBXO16、FAM90A1、PRAMEF8、PLB1、PRAMEF7、LRRC20、KIAA1644、AMBP、PCNA、GPX8、OTOS、GBA、WDR31、ZNF689、TMSB15A、MAPK1、INHBE、GLP1R、ZFAND1、MGAT1、GPR157、BcL2、BET1L、SSBP2、TTC19、CD40LG、RAPGEF5、ZNF154、NKAP、FAF2、UBIAD1、WDR70、UAP1L1、PDYN、ZSWIM1、TRIM56、RAD51B、UQCRC2、MUS81、MOCOS、PDE6A、APOBR、OXCT1、METTL9、LYRM7、AQP2、BACE1、TOB1、RASA4B、PRSS8、C2orf50、TMEM86A、C1orf174、DHRS13、CCDC62、MRPL18、SNTN、TNFSF8、NID1、PLA2G12B、FNIP1、KLHL40、ZBTB26、TRIM44、LY6K、SLC39A1、FAM90A26、LINC00923、UHMK1、TMEM33、THAP11、ATF2、AC009365.3、TBCA、NKAIN3、BLMH、CD300E、OR13A1、SPAST、IRF1、FAM65A、GPRC5C、ZNF773、CTD-2368P22.1、FNDC9、ADAM8、DYNLT1、C21orf62、PXN、TXNRD3NB、TNFRSF1B、RPS6KB1、BRCA1、KLHL42、ABCA6、LBR、BMPER、PITRM1、CABLES1、GNPDA2、KRBOX4、TNFRSF13C、SMYD4、BEND4、FLVCR2、GAB2、ITM2A、PPP2R5E、MRPS27、SLC25A18、SYT11、FAM71C、HS3ST3B1、ZNF12、BRS3、SIGLEC9、PPP1R12B、VNN3、TLR5、C8orf47、F11R、METTL21A、CCDC36、SORBS1、GPR98、TINF2、SPRED2、SLC30A3、TMEM168、CLN6、TBX20、ZDHHC12、FP15737、FBLN7、HYAL3、EPS8、PRSS50、MCHR2、PRND、ADORA3、CAPN6、ALPPL2、ARHGAP31、P2RY8、SLC46A1、LAT2、HOXD3、SMIM5、EPHA6、GAN、LYPD1、EIF2B1、PGAM1、KIAA1024L、RP11-10A14.4、TBC1D16、IRAK4、KCNE1、KCTD21、LPAR2、TICRR、FBXO3、LCMT2、FBXL4、DNAH17-AS1、RNFT2、SMIM15、SCN3B、ACTRT3、QRSL1、SEPT2、MRGPRX4、RNF185、VWC2、STX2、GREM1、HTR6、IGFBP3、PLEKHA8、RNF115、AC023632.1、NUP160、TMEM44、TXN2、LDB1、NAA30、PA2G4、AC000003.2、TRAM2、BNIPL、ZMYND12、PRSS33、ZNF844、PEX19、EEF1A1、BUB3、TADA2A、AC132186.1、FANCC、ZNF587、SFTA3、ZSCAN9、MCU、C3orf67、C8orf31、FAM122C、LACC1、RP5-1052I5.2、SLC44A4、PGPEP1、USP25、MS4A1、TRIM24、SDPR、ZKSCAN8、STC2、CDC42SE2、THPO、EPDR1、VWC2L、UMODL1、NSUN7、NFIL3、CHMP4C、SOWAHD、SEPT9、ART4、NAA11、BPIFA2、TRAF1、RAB39B、HSF1、AL079342.1、TRIP12、SNAP29、CCNC、PRAMEF12、PTPN21、ALX4、TFIP11、UBXN10、STON1、RELA、ABCA12、ST8SIA3、PRDM1、CRISPLD2、GPATCH4、MAP2K7、BTNL3、CCDC125、ZNF286B、IL36RN、MORN3、SYTL4、RNF5、NDEL1、FAM83C、CCDC112、CAMK2B、THEGL、RNMTL1、SLC7A6、BTN2A1、AC135983.2、SNX33、GPR75、C19orf40、PLEKHH1、SYPL2、FKBP14、C1orf170、CYBB、RGMA、SECISBP2L、
【００１２】
KIAA1549、SRP19、SLC7A11、SIRPB2、PSMG4、APOA1BP、HSFY1、USP54、AUH、PELI3、NKX6-3、IFNAR1、INSM1、SLC43A3、WDR43、STX3、TFE3、KREMEN1、C1orf192、ABL1、HPCAL4、RAB37、RNF165、HSFY2、RPL27A、NUTM2E、LCN6、N4BP2L1、FAM167A、PRDM2、E2F3、HIF1AN、CCR4、ALDOC、SLCO1A2、NOL12、BBS4、PGAM4、DOK1、ZNF638、CYP1B1、IFIT2、PHYHIP、KCNE3、EHBP1、FAM120AOS、CLEC2D、KITLG、PMP2、PTPN12、NOSTRIN、MATN1、GUSB、CDC23、BBC3、PARP16、FSD2、BSG、ARMC7、ARL5A、WBP2NL、HS3ST5、POC1A、AQP7、SRL、TYSND1、ZMAT3、FCN2、GJB4、IRAK3、PLA2G15、MAP3K1、SLC16A12、GPR112、STARD6、ALS2CR11、RAB33B、PURB、SCRN3、UPK1B、PLCL2、SLC35E1、PTCH1、MMS22L、ADM2、C16orf70、C22orf34、STAMBP、ITIH6、RCN2、ZADH2、FAM210A、NDUFA5、PCDH10、RPL3L、NFKBIB、ZNF48、CELF3、SLC29A2、CLHC1、GPR107、CBL、C3orf70、MMP16、HFE、ACER2、NPEPPS、TEX261、C1orf106、OSM、C17orf72、CKAP4、EIF4E、GABRB3、C12orf4、PRKRIP1、ZEB2、PAH、GPR132、ERVV-1、LPAR1、CCDC28B、SSTR3、ZNF182、SOGA3、RPUSD3、FBLN5、NMUR2、DPH7、KCNN1、STK32B、RAB43、SLC25A19、FAM169A、CLOCK、LRRC38、GCNT4、SLC22A9、ZNF740、USP45、IKZF2、CD83、CACNA1D、MYOZ3、ATOX1、ARHGAP28、C1RL、CHP2、TMEM130、MPZL1、FPR3、CA1、SLCO4C1、TTL、TCP10、AWAT2、EBF2、CBLL1、ZCCHC24、TMPRSS5、C11orf65、CXADR、GRK4、RP9、SETD7、MICAL2、CSRP2BP、ZKSCAN1、SENP5、TSC1、ZNF440、SLC6A20、AIPL1、PPP1R13B、KIAA1279、TMC1、IKBKG、KIAA1737、API5、CHST15、ROPN1、BTNL8、CEACAM7、GM2A、RASL10B、TIGIT、ROPN1B、NT5DC1、C1orf109、TUB、EXO1、DBNDD1、DNA2、MPP2、SLC9C2、NAAA、FAM83F、CLSPN、SLC19A3、HNRNPA3、NUAK1、IL22RA2、RABGAP1L、IDI1、TRAPPC13、SLC25A36、LDLRAD4、CYB561D2、IRF8、OMP、COL1A1、SFRP2、ARG2、PCSK1、TECPR2、PLLP、NAA38、VIPAS39、MAT2B、MFAP3、CDH8、KCNJ1、NPHS2、POLD4、DAP、FAM221B、SHANK3、ROM1、HLA-DOA、TEAD3、APOL4、ELOVL4、BTLA、AKIRIN1、TMEM41A、ZNF135、NOTCH2NL、KMT2C、SLC25A13、ZNF841、GINS2、ZNF768、MRPL19、TSSK6、NLRP10、ITPRIPL2、DNAJC16、USO1、CDC25B、BLOC1S6、SCUBE1、ARSG、ZNF286A、XIRP1、KSR2、FAM175A、TMEM164、CRIM1、RANBP6、MCAM、FFAR2、ZNF525、C11orf21、GALNT10、DCTN5、TMEM201、PTPRF、YWHAE、RAB12、PRDM7、ST8SIA5、CAPN7、WWC3、LIMD2、ZFP3、HOXA3、STAR、UBE2K、DERL1、FMOD、RCSD1、GOLGA6A、FAM19A2、SLC1A2、MINPP1、C7orf63、KIAA1586、RBM28、FAM219A、AL360004.1、PALD1、H2BFM、SLC4A5、MEGF9、FAM47C、ALK、THRB、RNF24、TMEM199、SAMD9、PPP1R16B、SLC1A7、DEC1、TIMELESS、ASB7、PRRG1、SLC2A12、GABARAPL2、GPATCH2L、GNAI3、PIK3R3、OSGIN2、EMP1、SLC22A17、MBP、HEATR6、IRF4、CD48、HTATIP2、ANKH、NDOR1、POLL、PPM1E、SRRD、VDR、C6orf222、AC117395.1、CSRNP3、ATF7IP、ZBTB39、PIAS2、LANCL3、KCNG3、KIAA2018、FLJ20373、ARHGEF37、EPHA5、
【００１３】
ATP6V0E2、DDHD2、ZW10、ABHD2、GLRX3、PPP3R2、ZMYM4、NBPF14、PNN、AKAP12、NT5E、XPC、ETV6、FZD3、TMEM246、GPR161、DNAJC24、UBXN2A、HMX2、RNF222、HIST1H2BN、CCNJL、FAM168A、FRMD6、OPA1、USP46、ISG20、PGRMC2、SLAMF7、P4HA3、SLC23A3、PVALB、AK2、RAPGEF3、PAFAH2、TBC1D5、RS1、TBC1D30、POTEG、GALNTL6、POTEM、GABRA4、SLC16A7、DFFA、SLC30A10、EFNA5、SLC39A11、KIAA1244、MFHAS1、ACSS3、RP11-383H13.1、TRIM10、EXT2、CXorf40B、ZNF215、CDKAL1、MBLAC2、CRISPLD1、UPB1、PAK3、HTR2C、NIPAL1、SEPT11、KCNS1、RGS5、CEP44、CBFA2T2、SPIB、POLD3、TDRD9、CNR2、PHACTR1、VAV2、LMX1B、CDC14A、B3GALT5、NBPF3、AKR1E2、YAP1、DHX57、GSE1、ZNF620、GREM2、PABPC4L、CX3CR1、LRRTM3、LYPLA1、ETV3、EDC4、CPEB3、CCR9、OGFOD2、HPS4、ZCCHC14、NRIP3、IL17RD、ALG10、UVRAG、ZDHHC3、DUOXA1、MED9、AP000695.1、PRRC2C、LILRB4、FBXO25、AC002451.1、IFNAR2、NPR2、COPS5、RPL23、ADIPOQ、CERS3、F2RL3、CYP27B1、BNC1、TRIM62、SV2C、SLC35B4、CXorf56、PIGM、GPR20、KDM2B、STAG2、EPT1、TAB1、GPR42、GIPR、NBPF9、IMPDH1、NGFR、PMPCA、GABRA2、CENPF、CTGF、FSD1L、DPYSL5、BTF3L4、GPR160、BRWD1、LINC00346、SHOX2、HS2ST1、FAM136A、ARL6、PRAMEF18、RHBDD1、RP11-422N16.3、ZNF600、USP33、PRAMEF19、WISP1、TRAPPC11、ORAI2、HLA-E、HECTD2、TCF4、KCNJ15、RUFY4、WNT3、TNFAIP3、FFAR3、WDR64、RETSAT、INHBB、WAC、LACE1、MSANTD3、SERTAD2、DPH3、CD2BP2、ARHGAP26、RNF150、SPATA3、WNT2B、NWD1、GYG2、ZBTB18、RCVRN、EPB41、ZFP14、KCNJ6、CHRNA4、AL356356.1、TRERF1、SFMBT2、ALX3、PVRL1、HS6ST3、SLC25A51、DNAJB12、SLC45A4、CEP104、SPOCK2、ITPR2、KIF5B、RNF125、CYYR1、SOX1、DISC1、NEGR1、UBE2S、VKORC1L1、CCDC14、NCS1、PIRT、LCLAT1、TRPS1、C20orf196、POC1B、CYB561D1、FERMT2、MICALCL、TRIM25、ABCG8、CNTF、RNF144A、C2orf49、CA12、WNT7A、ANKRD13A、DDAH1、KIAA0040、KIAA1239、PLA2G4E、PYCR2、GABRG2、HEBP2、SLC16A10、PRDM6、KIF27、PGBD4、ATXN7L3B、SNX30、SHISA3、SYTL5、NBPF15、PCP4L1、NBPF16、PPP5C、NBPF10、USP32、ALDH1L2、SAMD4B、ZC3H6、TCTE1、DARS2、ARL4D、MAP1LC3A、SPSB4、DKK3、PINK1、RBM8A、GLUD1、AGR2、ARL14EP、FRRS1L、BNIP2、ZNF529、GRB10、PTCD2、ADAMTS4、CCND2、C21orf59、GTF2I、HTR1F、MKLN1、CSMD2、TMEM245、H1F0、MEGF6、SLC17A9、KHNYN、MTHFSD、HOGA1、JPH4、CEP97、TRPM6、RASA4、PRPF38A、GPN2、TARS、SCO1、DRD2、PLXDC1、PRAMEF3、CDR2、FOXO6、KCNS2、USP6、CCDC137、BSND、CERS6、PMEPA1、VEPH1、MTIF2、ITGB3、RAB3D、IRAK2、TMEM155、NUP153、SLC22A15、ZNF621、PDDC1、FOXP1、NDNF、C17orf82、FOXP4、NRG2、SERINC3、SLC25A46、FAM92B、EVI5L、PER2、APOL6、TEX9、SMPD3、LPP、PPP1R9B、RBM20、SPN、PRKCB、CDC42EP2、PATE3、SLC25A47、CATSPER2、POTEI、SYT1、KCNN3、SCD、ZBTB47、NCR3LG1、CHST3、CNPY3、ASAH2B、EXOSC10、SCN1A、
【００１４】
PRAMEF22、RABGAP1、DBNL、PLS3、SNRNP200、XPO4、SLC15A4、EXTL2、ITCH、LRP6、RAB40A、CREB1、OTUD3、JAKMIP2、UBE2J1、DNAJB7、SLC7A1、GPR158、ZFP69B、PTPN18、MYCBP、PANK3、DGKH、ARHGAP11A、OR2W3、RC3H1、C6orf89、SRGAP1、ATP8B4、ZC3H12D、TMTC2、LAMB4、GPR111、PQLC3、RNF144B、ZIC5、GLCE、DCUN1D1、RPL37、TMEM104、LAT、EIF3A、TXLNG、ACVRL1、GPRASP1、SLC8A1、AK7、ENTPD3、CHD2、ARHGEF40、TSPAN9、ODF2L、ZNF652、FADS1、CDC42BPA、CTBP2、BACH2、PRKAB1、ARNT2、PHACTR2、CADM3、FBXL2、ADCYAP1R1、ZNF710、DDX52、ZFYVE20、SP8、C6、PTPRJ、RCAN3、BTAF1、SLC24A4、KIAA0930、PARPBP、PBLD、IFITM5、RP11-17M16.1、TBC1D26、ANKRD22、SASH1、BCOR、VMP1、FAM117B、GOLGA8G、PLCXD1、CHURC1-FNTB、CSGALNACT2、ZRANB3、DYNLL2、MFSD1、RORA、STON2、C1GALT1、ANKRD33B、RND2、SLC9A1、BCL9L、FAM102B、NABP2、SYNGR1、KRIT1、MBTPS2、ZNF415、GPN1、CD58、C7orf61、ONECUT2、RCAN2、DAZAP2、FASTKD2、JPH2、GPSM2、SH2D1B、ST8SIA2、TSPAN6、FAM179B、NHEJ1、ZNF280B、ARHGAP10、RCC2、CHERP、TBC1D4、ARHGAP42、ZNF691、FAM76B、ZNF260、TTC3、TBC1D8B、M6PR、ZNF236、SCUBE3、GTF3C2、KIAA1324、HSPA6、ZNF704、TNR、KLC4、SETBP1、CNDP1、APOL1、FBXW11、LHFPL4、LIPH、RCOR1、TMEM2、PTPRB、ITGB8、FAM126B、ARHGAP22、TAF5、TNFSF14、P2RX1、KANSL3、NRP2、KBTBD6、C1orf158、PLEKHM1、CALN1、TPCN1、NBPF1、JMJD1C、FFAR4、TLL2、DIRAS2、SORD、FAM110C、FAM135B、GRIK3、NBPF20、GRIN2B、GPR37L1、NHS、PFKFB2、CCDC141、IPCEF1、TLCD2、CSGALNACT1、IKZF3、BSN、ADAMTS13、DDX11、SLC7A14、NFASC、NPTXR、NT5C1A、TGM2、LRRC15、AR、WDR65、RP11-770J1.4、XKR7、NPAP1、ZDHHC8、GABBR2、CHD5、ZDHHC15、MKL2、EDEM3、ABR、HOOK3、TTLL12、MLEC、HEG1、RABGEF1、CAMKK2、BHLHE41、H6PD、CLSTN2、AHCYL2、PHIP、OLA1、C20orf112、TAF5L、CLEC5A、RASAL2、SLC25A37、TMEM221、ECM2、NBEAL1、MAPK13、C5orf63、PTPN14、BTN2A2、KAT7、C6orf223、RIOK3、GOLGA3、CYP4F3、PEBP1、MTTP、LRIG2、NBPF11、SMUG1、AC005609.1、GRK1、CHP1、CNIH4、PIGN、RPL10A、ZNF280D、DIO2、THAP1、ZNF490、ZBTB5、COLGALT2、SH2B3、CYP7B1、EMR2、SCIN、TPH1、PRR18、AKR1C2、CD109、HS3ST3A1、PTCD3、MAP9、FAM71F2、NFAT5、EPOR、ZNF19、NICN1、FUT11、ANKRD20A3、TMEM233、USP18、ADCY6、NARG2、AMOTL1、PDE10A、GLIPR2、ZNF451、PDHA1、ERBB3、RDH13、ATG4C、DGKI、KLHDC10、KCNMB3、ANKRD20A4、ARHGEF11、B3GAT2、BLOC1S5、RALGAPB、THSD4、KLHL21、MCHR1、DENND2C、CHL1、ARL2、JAM2、CD59、BMF、PALM2、ME2、ARSB、PPP6R3、COL6A3、EMCN、FBXL3、TNFAIP2、ZNF629、BEND6、SLC45A2、GOLGA6D、GOLGA8J、FAM168B、RPS6、PKN2、HLF、CCDC90B、PCDHB16、NPR1、ACACA、C1QL3、MYO9B、TMEM127、TRIM66、GPR35、SRGAP2、DCAF16、PDK3、QKI、IGF2、PGAP1、ZNF592、C2orf15、MRPL30、ZNF573、PDXK、NUDT5、RAB30、FAM105A、
【００１５】
MED12L、BNIP3、TRPM1、C10orf2、TMEM169、SYN3、C1orf198、MGAT5、SATB1、ATG4B、NSD1、CEP78、RAB22A、CCDC50、GPT2、PPP1R3G、DNAJC18、TMEM242、HS3ST1、APEX2、TMEM231、CTSO、ELF1、IFRG15、CDH19、ANKRD63、UBE2V2、EML1、SCIMP、PRRG3、ZNF202、PTTG1IP、PCGF5、SLC39A9、SYNCRIP、MED8、ANXA11、NOVA2、RNF111、KIAA1147、ZFYVE26、MAN2B2、NCKIPSD、RAB21、MED21、PLXDC2、YIPF4、FLNB、PPP2R5C、SDK2、DGKB、FAIM2、MARVELD1、RASEF、KCNQ3、LRRC8A、ZNF672、GLP2R、MUC6、FAT3、ARHGAP19、RTN3、IL17REL、ARHGAP19-SLIT1、TENM1、ZNF324B、CXorf36、CPLX2、RIC8B、FIGN、DPF2、FKTN、PLXNA2、PAX7、AL627309.1、ZNF445、SLC30A2、TRIM71、SYT6、C10orf105、MED7、KRT74、NTSR1、PLCD3、ERN1、MAFK、PCDH19、NBPF12、SRRM2、INMT、ERC1、SLC24A2、C17orf103、GPR155、TNS1、IQSEC3、CDHR3、NOS1、COL11A2、SNED1、SIPA1L3、TAF8、PIANP、RGS6、CTCF、SHISA6、FIBCD1、PYGB、DAPK1、CMKLR1、ZNF436、KIF1B、SRRM4、PDGFRB、DCAKD、SNX29、KIAA0556、MAPK10、TSPAN33、CLMP、C10orf53、AL590483.1、DBH、PCDH12、IYD、DEPDC5、CENPM、SCN2B、SPEG、KIAA2022、HOXC12、MAPKBP1、FLJ14816、FOXO3、SPECC1L、IFNLR1、TMPRSS4、MYO3B、DAGLA、FBLIM1、PDE11A、CNGA3、FAM155B、AKAP10、TBC1D10B、PDXDC1、ADAM19、TTBK1、TRIM67、FAM222A、ZNF736、PTPN11、SCN4A、ABCC1、C1QTNF7、DNAJC6、PCBP4、CHRNB2、PLEKHN1、SLC9A5、TBX4、GPR56、ARMC5、APC2、STAC、PARD3B、SLC6A17、NDST1、APLN、SAMD12、NOX5、NSG2、EMID1、SPIRE1、CRY2、CD84、PIAS3、IGSF9B、PDE4C、ATP8A1、CRKL、HNF4A、ATP5E、MINOS1-NBL1、NRP1、SHC2、TAPBP、NBL1、FAM83G、HMGN2、P2RY6、TGFB2、MDGA1、PODXL、APOL2、ZBTB34、KMT2D、IQCE、EP400、TTC7A、KCTD15、EGFR、PPP1R10、GXYLT1、CXXC4、FAM196B、RNF11、TRAK1、CCL1、ATP6V1B2、INHBA、ZKSCAN2、IL13RA1、MECP2、EPB41L5、MFN1、KIF26B、USP20、PPP1R3C、QPCTL、NEK9、SNN、NUDCD1、RSPO2、HRH1、LCOR、PCGF2、POU2F1、RAPH1、TANC2、DSTYK、TEF、DENND5B、INSR、TMEM107、WARS、NAT8L、P2RY2、POLR2F、STK35、MYEF2、MYO5A、GDPD1、SP1、CCDC88C、SETX、MNT、SPAG9、ZZZ3、ELL、CC2D1B、PLBD2、CLINT1、ZNF850、NSF、SPTBN2、STK17B、LIMK2、TIAL1、TMOD3、CDK6、ZBTB37、BACE2、ITGA1、APH1B、DHX37、PIGL、SAMD4A、ZNF793、ZNF570、GRAMD1B、KLHL3、TBL1X、AAK1、MARCH6、MTMR3、FGF2、USP8、UCHL5、EIF4E3、TMOD2、TLK1、CACNB4、DNAH11、SCRG1、FAHD1、GIMAP6、NKPD1、PTPN4、EXOC2、PSD3、MRPS36、ZNF431、DYNC1LI2、EBF3、SURF6、FAM179A、LSAMP、AL117190.3、TMED8、TAS2R5、TIMP4、ZNF417、KLF9、ZNF20、ZNF749、TLN2、ZBTB8B、TMEM120B、CHRM3、TREM1、GOLGA6C、PDE8B、MGLL、CDAN1、E2F2、ANKRD12、RALGPS2、WSCD1、ACSF3、KIAA0368、SHE、TOLLIP、SLFN5、HIP1、TIGD6、EFCAB6、G3BP2、UMPS、UACA、AP1S3、TAF9B、GNA12、FSTL4、FAM120B、MTL5、USP40、KCNH5、SRI、NAPEPLD、
【００１６】
RFX7、CRCP、GOLGA8H、GBP4、SMAD3、LOH12CR1、ATP6V0A2、ATP8A2、YOD1、FOSL2、KATNAL1、C7orf60、ANKRD46、KLF3、HELZ、RNF216、PI4K2B、TCEANC2、HGSNAT、CLUAP1、TBX5、HDAC4、GPRC5B、MOB3B、MYO18A、STARD13、LL22NC03-63E9.3、PTCHD4、FAM199X、USP14、LOX、DLC1、FASTKD1、BMPR1A、AASS、TUBB、AQR、RFX3、TBC1D20、DNAJB5、TCHP、TMEM108、ARID3A、KIAA1033、NOL11、C11orf54、BAALC、NR2C2、TATDN3、C9orf69、FOXN4、ZNF667、USP9Y、GLRA2、TCF19、ZNF497、SLC19A1、ST13、KIF6、ID4、C17orf51、STX11、KIAA0141、AGO1、DYRK3、ABT1、TRPV3、DUSP7、UCK2、UBE2J2、AC007040.11、RNF19B、PPM1A、BMP8A、ZBTB21、ZNF696、COL13A1、CCNL1、DBT、TLX1、NOL6、TEX14、CDCP2、MPRIP、LRP8、STXBP5、MAVS、NSFL1C、USP15、ATP5F1、HHIPL1、AP5M1、NUDCD2、CENPA、TIAF1、DNAJB13、RPL37A、CSTF1、PSMF1、MYSM1、CEP350、ZBTB17、LPHN3、ST3GAL1、RBM12、PDIK1L、GOLGA8A、PLEKHM3、PHF7、SFMBT1、KLHL24、SGIP1、ZFYVE28、ACSL3、FAM81A、SRSF7、FAM46C、DTNA、CLMN、SLC20A2、PLXNA1、POT1、ARHGAP20、CBX6、FPGT、YES1、C17orf75、FGD4、TRPM7、SSH3、PHKA2、PCDH18、IL1RAPL1、DCPS、SBSPON、ARMCX3、CDKN2AIP、RAB3IP、TBL3、GOLGA8B、FCRL5、AC137932.1、KIAA0513、FER、ST6GAL2、ADAMTS15、PARP14、ULBP1、SLC26A9、GFI1B、SOCS5、SLC10A2、PPM1M、GSTM4、GPATCH2、NTRK2、TNS3、ZNF365、CYS1、MYO1D、XCR1、C17orf102、STARD7、ARHGEF9、XKR8、DRP2、KCNA1、ALS2、GOLGA6L10、THSD7A、CYTH1、KRT80、SIAH3、MARCH1、KRT77、RP11-247C2.2、MOB1B、LRRC10、CCPG1、POLR3B、ABCC12、ZNF37A、ANKRD34B、LAX1、EBF4、MARCH9、TEX22、SLC9A3R1、PDGFRA、PLEKHG4B、ERVFRD-1、SYT10、WBP1L、CA13、KIAA0895L、GOLGA8F、ZNF384、SMG5、NCAN、CD209、TAOK1、CATSPERG、ZNF28、ZNF654、NXPE3、GOLGA8N、KIAA1024、CELSR3、FAM98A、LRRC3DN、FZD8、CACNA1E、DNMT3A、ABCF2、WDR52、LZTS1、AMMECR1、FNTB、PAX5、ARHGAP17、FLYWCH1、SLC30A8、TRIM37、CDC42BPB、BAZ2A、FLT1、MDGA2、CDH5、ZNF681、KCNAB2、DNMBP、GPRIN2、DCHS2、TRIO、HLTF、GOLGA6L9、GOLGA8O、FCF1、KCNMB1、TNFSF15、ISY1-RAB43、EREG、GOLGA8M、CCNF、KCNC1、ABCA13、CCDC144A、DPP10、ZFR2、GNE、FOXI2、EPS15、PIK3IP1、SNX19、WNK2、RGS7BP、ANKS1A、KIAA1429、BMP3、MFSD6、CASP14、ZNF594、CNIH3、LCP2、PRLR、LPAR4、IRGQ、TRIM68、TCEANC、AGO4、ALDH1L1、ASAH2、GOLGA8I、GABRG1、CDR2L、PROSC、WNT9A、RGS12、CRMP1、PLEKHA2、PLCL1、OCLN、IFNGR2、UTS2、JARID2、PRX、FAM63B、KIAA0430、CADM2、ZBTB46、ZNF609、C22orf29、DSC1、ZNF546、GRIA1、EXOC6B、ZFP41、DRAXIN、SLFN11、TEX15、SPHKAP、RHOBTB3、C10orf90、EMC10、EFCAB13、LIPN、RASSF8、FAM65B、TMEM234、TRIM2、LZTS2、TUBB6、GFRA2、PREPL、FAM102A、N4BP2、ZNF660、PRKG1、BMP2K、MOGAT2、CAPZA2、VSTM5、RP13-996F3.5、PTGER3、CCL22、FBXL7、KIF3C、RIPK1、GBF1、GPR173、ARID4A、
【００１７】
CTNNA3、RBM22、NFIA、KCNJ3、SLC36A2、PRKACA、EIF5、ARHGAP32、TDRD6、KIF21A、SLC46A3、POU6F2、KIF14、ATRN、FOXP2、ICAM1、NUP98、ADAM28、SLC39A14、LHX6、GRM5、SCARF1、HCFC1、ZFYVE1、GOLGA8R、FA2H、ATE1、C3orf58、LUZP2、MGAT3、STX1A、KCNA6、ZNF75D、CD96、ABCG1、GOLGA8K、ANKRD62、SPATA13、KLF7、RAB31、PHF17、BHLHE40、ZXDA、CCNI、ETV5、FGFR1、STARD10、ARFGEF2、MAFF、CPD、FAM129A、GPR64、AFF4、ZRANB1、GPR126、TMEM123、SGK1、ALG10B、CYP20A1、TEX30、MAPK14、LHX4、PAICS、GPR50、GIGYF2、SLC7A2、FAM8A1、HNRNPA1、DOCK4、LRRC3、ZXDC、BTD、ABL2、DSC3、ZKSCAN3、CSTF2T、ELP5、PRKCI、TPM3、RAP2A、MTF1、STOX2、PDK1、CDK14、CCNY、RIMKLA、DENND5A、FAR1、KPNA4、IGFBP5、LRRC8B、DCBLD2、ACER3、TRIM14、TBC1D19、GMEB1、EOGT、EDEM1、SDC2、CMTM4、GID4、RNGTT、COMT、CD2AP、STEAP3、TRIM58、IDS、ETF1、CELF1、LGALS8、TFDP2、GMPS、SP3、ISPD、POLR3D、TMTC3、SPRTN、TRIM38、TGOLN2、ADD2、GJA9、KIAA1958、ADIPOR2、CLDN19、STX4、MAGI2、COL8A1、PTAR1、STXBP1、C21orf2、MCTP2、GNB4、ZNF516、TMTC1、FAM126A、ERAP2、MCFD2、MCC、RALGPS1、METTL8、C7orf73、BTBD7、CHDH、MAOA、ZNF321P、ARNTL2、CNR1、CDS2、KIF1A、FLRT2、TMEM98、NUDT16、RBBP4、GPLD1、VWDE、AHRR、MAP3K9、AP5B1、ACAP2、SMARCC1、AP3D1、ENTPD7、TUSC3、AGPAT5、CTBS、SH3BP2、GDI2、ZNF446、EXPH5、MAP2K6、SRA1、SMIM8、WDR41、ZNF562、PAGR1、ZNF10、TSPAN18、PPP4R1L、PARD6G、PPP1R11、KPNA6、ZNF224、FAM212B、CLCN4、SARM1、NFATC2IP、RAB11FIP4、WIPF2、LRRC27、RCL1、C16orf58、CDYL2、TTC9、NDUFAF3、NAB1、DAG1、PSMD11、TRIM72、ZMIZ2、RBBP5、NUP155、KIAA0319、PIFO、RAB3C、USP13、TYW5、SP110、TMEM19、GGA2、TMCC1、KIF11、PPARA、DCAF5、MTAP、TMX1、PRR3、C1orf95、ATXN3、GPD2、NHLRC2、LUZP1、SLC38A1、ZNF324、MPC2、PCYOX1、CORO2A、ENTPD1、PURA、REEP5、ATP6V1C1、INTU、DNAJC5、SLC48A1、HGFAC、UGGT1、PSME3、ILDR2、ALDH3A2、FAM3A、FASTKD5、TRAPPC9、ARIH1、SH3KBP1、RXRB、ATP6V1C2、AGPAT6、FNIP2、AFF2、SIT1、SLC5A12、RBMS2、ORC4、TMEM56、OSBPL3、TPST2、SLC23A2、TNFAIP8、SH2D4A、CAPN5、DNAL1、ZSCAN16、GPR39、MUC13、PHF20L1、GTDC1、SLC9A7、KCNJ5、TIFA、DCP2、PTEN、ISCA2、USP47、SNX2、NLGN2、PDE12、GGACT、NXPH3、PTPRD、CCDC153、SLC1A1、ZC3H8、VAMP4、OARD1、MLXIP、USP6NL、C11orf58、CFD、CLN8、TRPM3、NOA1、EIF2AK2、FNDC3B、C18orf21、AGO3、TLR4、TMEM106B、LNPEP、TENM4、TMC7、XRRA1、FZD5、MXRA7、ZNF514、RAB1A、DDHD1、BHMT2、HNRNPUL2、SCAND3、CLYBL、TMEM200C、DGCR6L、HIST1H2BD、TMEM55A、NRDE2、INSL4、TBC1D1、KCTD20、MAP1LC3B、RBBP8、PHEX、COPZ1、MAPRE2、ANKRD9、C20orf144、SEMA3A、SRCAP、ANKRD49、CECR2、PLAC8、ADARB2、CD55、DCLK1、AVPR1A、GMPPB、R3HDM1、ADARB1、SNX16、NSL1、CYLD、FXN、ACTN2、ABI2、
【００１８】
SPPL2A、CENPL、PTBP2、PPM1L、FBXL20、TLN1、P2RX7、MBD3、TFAP2B、PPIP5K2、PRSS21、NDUFS1、CD38、FRS2、RP11-47I22.3、PTCHD1、MRPL2、CISD1、USP37、MFSD9、SPATA33、ZKSCAN4、HAUS5、ZBTB40、KIAA1045、FAM120C、CTNND1、SF3A1、EFCAB11、UBA6、ICK、TMEM220、HSDL2、AFF1、CTH、FAM105B、NCOR1、GNL1、ZNF805、FRMD4A、SFT2D3、CTNNBIP1、ARRB1、NECAB3、GCNT1、RAB14、CCDC77、EIF4EBP3、TXNL1、UPP1、PDE4DIP、FRK、ZNF468、ESYT2、RPL13、MSH5、HEXA、MCMBP、HSPA4L、MLH3、PRMT3、SGPL1、GGCX、UQCC2、FAM104A、SLC33A1、UBE2T、ERBB2IP、FBXW2、QDPR、CCSER2、WDR33、ADAMTS5、CKAP2L、KIAA1377、ZNF701、PPP1R12A、IL20RA、FLT3、ZNF117、ERG、ENDOD1、ZCCHC9、FAM26E、MXD1、GPR180、FGFR1OP、CEP57L1、INSIG2、CCDC149、TNPO3、RNF170、SMC2、OTUD7B、SENP1、MBD2、ANTXR1、PDHX、MRGPRF、N4BP3、TMEM110、ARFGEF1、C11orf74、DCAF8、RYR2、AK1、STRIP1、TFCP2L1、C19orf70、TAF12、WDFY2、TMBIM4、NEDD4L、MFAP4、C3orf62、PKIA、ERCC6、GNB1L、C11orf48、NAGS、DEPTOR、GDF5OS、EMC3、LRRC47、MTO1、AP2B1、FUT10、LMOD1、RANBP17、HELLS、RBFA、C3orf14、SLC29A4、PHF21A、TBL1XR1、MRRF、TMEM241、PLEKHG3、MGAT4A、TUSC2、MYPN、VSTM4、SMAP1、RHPN1、RAP2B、WRN、TRIP4、PIK3C3、YTHDC1、FKBP9、WDR37、ACADSB、DOCK5、CBX5、ZNF670、FAM114A2、CXorf23、ACAD11、MCM3AP、ZBTB44、CNKSR3、CREBRF、OSTF1、MAGIX、BOD1、SMAD2、DDX19B、UROS、SFT2D2、MRPS10、DDX18、SOCS7、AKT3、ENSA、SMARCE1、CEP41、TRIM13、ZNF780B、MLPH、SERPINA4、TTC33、PPM1H、FXR1、ALG5、SEPHS1、TTF2、KCTD16、SLC11A2、HNRNPD、C1orf21、RBM12B、CCDC171、MTPAP、FAF1、SLC22A3、TCEB3、C7orf25、CHKA、ANKIB1、ZNF326、WDR3、MRPL3、FAM122A、SKP1、HTRA1、REST、RAB11B、SLC35C2、LRPAP1、INTS8、PON3、XRCC3、CYTH2、RBM23、ZFP62、NGDN、ARFRP1、UBE2R2、THBS2、ATP1B2、SMIM7、C2orf68、RPAP2、PON1、KCMF1、CTSB、TXNDC17、ORC1、PGBD1、MRPL17、METTL14、KDM5B、TRAF4、SUSD1、RPS6KA5、NPC2、FAM151B、PIK3CA、KNTC1、HLA-A、ZNF554、JDP2、ZNF526、HPX、C12orf5、CPE、FOCAD、ASPSCR1、SYT7、CASD1、MRPL51、BTBD9、FTO、LITAF、F10、LYRM4、MAPK6、TMBIM6、PSMB5、TRIM27、PLA2G12A、GLG1、TCF21、FAIM3、BCAS3、C19orf47、RWDD1、TMED7、TSPAN14、RBM4B、PTDSS1、SIK2、HARBI1、KIAA1551、SPICE1、SVIP、GTF2F2、CNGA4、PHKG2、MMAB、CRNKL1、FZD1、QSOX1、ZNF382、RSBN1L、GOSR1、ACSM2A、CNNM2、TMEM184C、BAMBI、GPBP1L1、NCAPH2、C9orf64、FUT4、WNK1、PLEKHO1、RAP1A、WBP11、USP38、CORO7、CRTAP、WBP4、ABRACL、GNG11、PGBD2、YWHAB、F7、LONP2、BNIP3L、SLC22A23、ALG14、ANG、ABCF3、SLCO1B3、ZNF607、GPR65、CDC6、DONSON、ZNF226、LPHN2、MCOLN3、L3HYPDH、ARHGEF5、MED31、CYP2A7、FAM175B、CHML、FHL5、SLC35E2、C14orf119、FUCA2、FARSB、TK2、CHID1、APOPT1、C11orf83、ZNF641、COPS8、KPNA3、MTHFR、ADK、
【００１９】
CCNI2、HLA-DRB5、G6PC2、ZNF860、FXYD5、CNGB1、TWISTNB、PSMB7、GPR34、MAP4K4、CDK13、ANKHD1-EIF4EBP3、CHST12、MSH3、MYL12B、AKR1C4、DYRK4、INPP4A、AKT1、LOXL3、EMILIN2、AKR7A2、ZNF107、RBM15B、PRR13、BPIFA3、ATP2B2、ANXA4、HTT、SGSM2、SND1、ACO1、CHD7、IMMT、PANK2、TACO1、OR2A4、G6PC3、TPBG、NAT10、SLC25A32、KIAA0391、ACSM2B、MAGEB10、SLC35D2、PYCR1、AVPI1、CDK12、CYB5R3、CDX2、C3、DYRK2、PPIL4、SLC25A16、CERCAM、ACAD10、PLRG1、LMBR1、METTL24、VLDLR、PCYT2、SMIM12、RWDD2B、CCDC158、HIF1A、HSBP1、OIP5、B3GAT3、RFFL、SRFBP1、LRRC6、AARD、ITGA11、PPP1CC、RNF126、BAG1、SHB、IGSF3、TRIP13、RYBP、TEPP、DOCK7、LMF1、CEP63、DAPP1、SELM、COLEC10、SOD2、MLIP、GDAP2、POLA2、GLUL、TMEM70、FOXRED2、TSC2、AGTRAP、DDX5、CAD、TPD52L1、DR1、PDCD6IP、GATA6、GNRHR、CAMSAP1、HUWE1、LIMD1、ZNRF2、TAF1B、CKAP5、NR2F6、PPIC、HDAC2、BRD9、NBN、CSTF2、RNPEPL1、GLYAT、DGCR14、RPS12、PRSS23、NKX2-1、GTF2B、ZNF579、TACR2、OR7A5、CABP4、NSUN3、GRK5、NUDCD3、TCP10L、C8A、ST3GAL6、HMGCR、SIGLEC14、TPT1、RNF213、TMEM37、ZNF17、NUP188、AC007952.5、DCAF15、NCF1、MS4A2、CYP2C19、NCKAP1、PFKM、CD300C、ANKRD20A1、RAD51L3-RFFL、ZNF626、RP11-210M15.2、TLR8、LRRC2、SLITRK3、ANKRD20A2、METTL22、TTLL2、UBE2QL1、UGT2B4、GABRR2、STRN、ZBTB20、MSH2、MRPL22、MYO1G、IMPA1、C10orf71、CTD-2545M3.6、FGF5、PAX1、GRIN2A、MGAT4C、C16orf72、TCEAL4、RP11-343C2.12、AC106017.1、PAM、AGAP2、KCNJ13、TLK2、NLRP9、RNF214、GINM1、POLDIP2、SHROOM4、BMP10、HLA-DRB1、CLEC18A、ZNF283、SH3TC2、DNAJC10、MALSU1、FNDC5、FAM127A、TCF23、PATE2、SLC25A11、SLC2A4RG、GABRB1、TMC2、ARL6IP4、HJURP、DIRC2、ANGPT4、PRH2、PIGP、SF3B3、MOBP、TM9SF3、ATG7、NUP37、CYR61、CRP、FSTL1、GTF2H5、CLPP、ALDH2、TM2D2、AGFG2、PPL、NBPF24、GPR25、FBXO47、RCAN1、SLA、CNOT7、GRWD1、PDF、B3GALT2、SELPLG、ELP2、SEC23IP、TMEM150C、PCDH8、PDCL、ATP1A3、PLGLB2、SLC10A6、PLGLB1、OTUB1、BID、KLF2、RGS18、PLA2G16、ERCC6L2、GDE1、KY、LRRFIP1、POPDC2、POTED、KNG1、CCT5、CNTNAP5、GSC2、RP13-996F3.4、CERS5、OS9、C14orf23、ZNF70、EXOSC1、C6orf25、CD226、APOB、ACOT2、ABCD2、BTN3A2、SYNPO2、PSMB9、LRRC40、ELF4、NFIB、METAP1、PTPRC、FPR1、DSE、APC、ZNF8、ENPP6、PIK3CG、TBL2、NKAPL、GOLGA6B、CCNO、RBM14、ELK1、WT1、SC5D、LRRC49、NAP1L4、PANK1、LIPG、CDC73、ANKFY1、SLMAP、NRXN3、CRHR2、AGT、KLHDC8A、CUL4A、IL10RA、CACNA1C、XPNPEP2、DNAJC15、AC002472.13、ATG13、PSMB2、PPDPF、PPP1R15B、RNF187、MRVI1、ATP6V1E1、SART1、DECR1、SLC28A1、DCC、CLU、VEGFB、GUCY1A3、BCKDK、PHF19、HSPA14、CACUL1、STARD3NL、SSTR2、CHIC2、FGF10、CLEC7A、ZBTB7C、SLC25A26、KIAA1715、PSTPIP1、COMMD9、CD180、FGL2、SPATS2L、MMP19、XRCC5、ZBTB16、SHC3、CCDC71、HIST1H2BG、MAG、MAP7、TFAM、NUP93、DCUN1D5、EHD3、PTPRA、DENND2D、GHITM、TYRP1、RUNDC1、FUS、CYP2C8、VASN、PRDM16、AREL1、ATP2B1、CTDP1、C1orf27及びSCARA3から選択される１以上の遺伝子が挙げられる。
【００２０】
より好ましい遺伝子としては、FLG2、AIMP2、TGM1、C12orf76、ZNF133、GPANK1、TMEM139、CTD-2330K9.3、PHF2、SAPCD1、CCL8、HABP4、C6orf164、ARL14、SAT1、RFC1、DNAH10OS、TJP2、KISS1、CNBP、TMEM204、RPS21、ANKRD18A、IL1F10、MBLAC1、GOLGA7B、BRMS1、RSAD2、NMRK1、CYP3A5、IAPP、UBE2L6、AC069547.2、MAP3K7CL、CCDC144NL、CTXN2、GYPE、ZBTB25、RGS1、NOP9、E2F6、HIAT1、PPP2R3A、MRS2、OTX2、TMED7-TICAM2、EPN3、SLC9A3R2、AP000867.1、BST1、RNF4、LIMS3、LIMS3L、C1orf115、NADK、TMEM78、C14orf144、SZRD1、SMAD1、GPR3、C8orf86、SLC2A5、ZNF259、ZNF839、C8orf37、FAM3D、BcL2L11、KLF10、CRTAM、C10orf11、EPB41L2、CDIP1、CXCR5、SLC25A48、HYPK、C20orf202、DUSP18、GJB7、RPA1、KCNA5、PIEZO2、GALR1、PPFIA2、MPEG1、IP6K2、CRISP3、CCDC78、VAPB、SNX12、AIDA、CEACAM8、HFE2、CDKN1A、USP50、FAM57B、OLFM3、CDC42EP3、LILRB1、KRTAP10-11、AC022498.1、MED1、ZNF879、SPARC、IL5、CTTNBP2NL、MCM9、HDGF、PCDH15、TMEM186、PLEKHJ1、RAVER2、PRPSAP1、DST、GAL、LINC00998、SMCP、RPGR、NCMAP、TMCO5A、PBRM1、KRTAP5-2、SLC22A16、FLJ27365、PRSS45、RNPS1、FAM222B、AC093677.1、MRPL36、DRD1、CCBL2、PAX8、FCHO2、RHD、SLC47A2、AKNAD1、C16orf54、CTD-2228K2.5、ZNF14、SLBP、CHCHD5、ARHGAP6、RP11-41O4.1、AACS、CREBL2、SLC35E2B、RTP3、FICD、RTN4、CILP2、LDLRAD3、BLNK、CHRNA1、CCDC136、IKZF1、SLC2A2、TMED4、ZNF598、HMGN1、FAM118A、SNAI3、CENPN、ZNF45、POLR1E、SGMS1、MLC1、IP6K3、RAB27B、AP000322.53、TBX19、C10orf40、RBBP9、SLC9A8、GMEB2、AK4、MTDH、RPP14、SCN10A、DHCR24、SORT1、RAB3B、CDADC1、GATAD1、HSPA12A、CCDC43、NDUFA11、C22orf26、LYRM9、HIST1H3A、S100B、GPR12、APH1A、CPXCR1、DNAJB4、AC007431.1、FSBP、LIG1、TNFSF13B、CASP5、RGL4、B4GALT1、IGFBP4、ALDH1A2、KLRC2、INO80、ZSWIM7、KLRC1、ARL2BP、AIFM1、SNAP23、VTI1A、ATP10B、CYB5D1、VSTM2L、KLK7、GPATCH11、WISP3、GPALPP1、PSMG3、TRIM39、ITPKC、CASS4、SULT1A3、RNF20、SULT1A4、DCP1A、CCDC152、YEATS2、CTC-360G5.8、CLDN18、RGS7、CDA、RTBDN、MTERF、FAM103A1、SELV、C10orf113、KCTD2、NRSN1、ALDOB、SYT4、UBAC2、CDRT1、SRPX2、C17orf96、TFAP2E、CHRDL1、KANK4、IDI2、CTD-2162K18.4、MAN2A2、THY1、IL7R、TBC1D13、NEK7、AL391421.1、C11orf52、GATS、MTF2、CPA4、HEY2、SARS2、FAP、SPOCK3、PAQR7、CDIPT、PDE4B、FAM216B、RHOA、WDR59、LYRM1、CBX7、EZR、ASAP3、TBATA、HERC6、PIP4K2C、PPP2R2A、ELAVL1、HPS5、FLJ00104、TNFRSF10B、CCR5、GJA4、APOC4、LFNG、NOV、C9orf84、ABHD15、ME1、GKN2、NFE2L3、UBL4A、AMIGO1、TM4SF1、FAM26D、AKT2、SERPINE3、KIAA0895、FBXO31、GPR55、FAM214B、CCDC93、PPAPDC3、XKR4、FGF11、CERKL、FAM53C、DNAJC3、TMEM63B、C14orf177、PTPRN、MOCS2、NAA50、BVES、PRPF3、SMS、C11orf87、SULF2、CYB561、AL589765.1、CDCA8、ZNF396、OSCAR、TCTA、TOR1AIP1、ERLIN2、C12orf66、RUNX3、C22orf46、RP11-80A15.1、CD5、CHST2、GRAPL、CPLX4、RP11-351M8.1、ANAPC2、HLA-DPB1、ALCAM、MXRA5、CARD8、RNF138、TBC1D10C、KCNH1、ERGIC2、SGPP1、MLANA、ERGIC1、NPY4R、SMARCA1、FBXO16、FAM90A1、PRAMEF8、PLB1、PRAMEF7、LRRC20、KIAA1644、AMBP、PCNA、GPX8、OTOS、GBA、WDR31、ZNF689、TMSB15A、MAPK1、INHBE、GLP1R、ZFAND1、MGAT1、GPR157及びBcL2から選択される１以上の遺伝子が挙げられる。
特に好ましい遺伝子としては、BcL2及びSmad1から選択される１以上の遺伝子が挙げられる。
【００２１】
遺伝子発現の抑制は、例えば、CUGACUC含有分子を作用させた細胞と作用させていない細胞における遺伝子の発現量を比較することにより評価することができる。遺伝子の発現量は、既知の任意の手法、例えば、当該遺伝子をコードする核酸分子若しくはそのユニークな断片に特異的にハイブリダイズする核酸を利用した、種々のハイブリダイゼーション法、ノーザンブロット法、サザンブロット法、種々のＰＣＲ法などにより前記核酸分子を検出することや、当該遺伝子がコードするタンパク質を、既知のタンパク質検出手法、例えば、限定されずに、抗体を利用した免疫沈降法、ＥＩＡ（enzyme immunoassay）（例えば、ＥＬＩＳＡ（emzyme-linked immunosorbent assay）など）、ＲＩＡ（radio immuno assay）（例えば、ＩＲＭＡ（immunoradiometric assay）、ＲＡＳＴ（radioallergosorbent test）、ＲＩＳＴ（radioimmunosorbent test）など）、ウエスタンブロッティング法、免疫組織化学法、免疫細胞化学法、フローサイトメトリー法などにより検出することなどにより決定することができる。
【００２２】
一態様において、CUGACUC含有核酸分子はｍｉＲＮＡ様作用を示すか、ｍｉＲＮＡ様作用を示す分子を生成する。ｍｉＲＮＡ様作用は、典型的には、ｍｉＲＮＡが誘導する配列特異的なＲＮＡの分解又は翻訳抑制を指し、成熟ｍｉＲＮＡによるシード配列（５’末端から２〜８位の配列）と相補的なｍＲＮＡからの翻訳の抑制、及び、同ｍＲＮＡの３’末端に存在するポリＡテールの分解によるｍＲＮＡの分解の促進を含む。
【００２３】
CUGACUC含有核酸分子の長さは特に限定されないが、例えば、１０〜５０００、１２〜３０００、１３〜２０００、１４〜１０００、１５〜８００、１６〜７００、１７〜６００ヌクレオチド長等であってよい。
CUGACUC含有核酸分子は、一本鎖又は二本鎖であってよく、また、CUGACUC配列の部分が二重鎖を形成していてもいなくてもよい。CUGACUC含有核酸分子は、一本鎖であり、かつ、CUGACUC配列の部分が二重鎖を形成していてもよく、その場合、CUGACUC配列の３’側又は５’側、好ましくは３’側にループを有していてもよい。CUGACUC含有核酸分子はまた、CUGACUCを５’末端から２〜８位の位置に有してもよい。
【００２４】
好ましい態様において、CUGACUC含有核酸分子は、一本鎖成熟ｍｉｃｒｏＲＮＡ、二本鎖成熟ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｐｒｅ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｐｒｉ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ ｍｉｍｉｃ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ模倣物）、及びこれらのうち1つ又は2つ以上を発現するベクターから選択されるｍｉＲＮＡ関連分子である。CUGACUC配列は、ｍｉｃｒｏＲＮＡの５’アーム（microRNA-5ｐ）に存在しても、３’アーム（microRNA-3ｐ）に存在しても、ループ部分（Loop-miR（Winter et al., Nucleic Acids Res. 2013;41(10):5503-12））に存在してもよい。好ましい態様において、CUGACUC配列は、ｍｉｃｒｏＲＮＡの５’アームに存在する。
【００２５】
ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃは、内因性ｍｉｃｒｏＲＮＡの機能を模倣する核酸分子であり、当該技術分野において周知である（例えば、van Rooij and Kauppinen, EMBO Mol Med. 2014;6(7):851-64、Chorn et al., RNA. 2012;18(10):1796-804）。ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃは化学修飾を含んでもよく、内因性ｍｉｃｒｏＲＮＡに対してヌクレオチド配列が変更されていてもよい。化学修飾は後述する種々のものを含んでもよい。化学修飾は、ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃのCUGACUC配列を含む部分（ガイド鎖）のＡＧＯへの取り込みに対する悪影響が少ないものが好ましい。好ましい化学修飾の非限定例としては、例えば、２’フルオロ修飾、２’−Ｏ−メチル修飾、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾、ＬＮＡ、ホスホロチオエート結合、モルホリノ、ＰＮＡ等が挙げられる。ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃは、内因性ｍｉｃｒｏＲＮＡ（例えば、pre-microRNA）と同一のヌクレオチド配列を有しても、内因性ｍｉｃｒｏＲＮＡのヌクレオチド配列に対して、１又は２以上のヌクレオチドの欠失、置換、付加を有するヌクレオチド配列を有してもよい。また、ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃは二本鎖であっても、一本鎖であってもよく、二本鎖の場合、１又は２以上の一本鎖の部分を有してもよい。
【００２６】
特定の好ましい態様において、CUGACUC含有核酸分子は、配列番号２（mature-mir-345-5p）、又は、配列番号３（pre-mir-345）のヌクレオチド配列を含んでもよい。
特に好ましい態様において、CUGACUC含有核酸分子は、hsa-miR-345の一本鎖成熟ｍｉｃｒｏＲＮＡ、二本鎖成熟ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｐｒｅ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｐｒｉ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃ、及びこれらのうち1つ又は２つ以上を発現するベクターから選択されるhsa-miR-345関連分子である。
【００２７】
本開示における核酸分子は、非修飾ヌクレオチド及び／又は修飾ヌクレオチドを含んでいてもよい。本明細書において、非修飾ヌクレオチド及び修飾ヌクレオチドを、単に「ヌクレオチド」と総称することがある。非修飾ヌクレオチドは、天然に存在するＤＮＡやＲＮＡを構成するヌクレオチド、すなわち、核酸塩基（アデニン、グアニン、ウラシル、チミン、シトシン）と、糖（リボース、デオキシリボース）と、リン酸基とから構成されるものを指す。非修飾ヌクレオチドで構成される非修飾核酸分子において、隣接する２個の非修飾ヌクレオチド同士は通常ホスホジエステル結合により一方の非修飾ヌクレオチドの３’位と他方の非修飾ヌクレオチドの５’位が連結されている。一態様において、非修飾ヌクレオチドは非修飾リボヌクレオチドであり、非修飾核酸分子は非修飾リボヌクレオチドで構成される。
【００２８】
修飾ヌクレオチドは、非修飾ヌクレオチドに対して化学的修飾を含むヌクレオチドを指す。修飾ヌクレオチドは、人工的に合成したものであっても、天然に存在するものであってもよい。修飾ヌクレオチドは、その核酸塩基、糖、バックボーン（ヌクレオチド間結合）、５’末端及び／又は３’末端が修飾されたものを包含する。修飾ヌクレオチドは、上記部位のいずれか１つが修飾されたもののほか、上記部位の２つ以上が修飾されたものも含む。
【００２９】
核酸塩基に対する修飾としては、限定されずに、例えば、２，４−ジフルオロトルイル、２，６−ジアミノ、５−ブロモ、５−ヨード、２−チオ、ジヒドロ、５−プロピニル、及び、５−メチル修飾、脱塩基などが挙げられる。また、修飾核酸塩基としては、限定されずに、例えば、キサンチン、ヒポキサンチン、イノシン、２−アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６−メチル誘導体及び他のアルキル誘導体、ユニバーサル塩基、アデニン及びグアニンの２−プロピル誘導体及び他のアルキル誘導体、５−ハロウラシル及び５−ハロシトシン、５−プロピニルウラシル及び５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン及び６−アゾチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、アミノ、チオール、チオアルキル、ヒドロキシル及び他の８−置換アデニン及びグアニン、５−トリフルオロメチル及び他の５−置換ウラシル及び５−置換シトシン、７−メチルグアニン、アシクロヌクレオチド、デアザプリン、プリン及びピリミジンの複素環置換アナログ、例えばアミノエチオキシフェノキサジン、プリン及びピリミジンの誘導体（例えば１−アルキル誘導体、１−アルケニル誘導体、複素芳香環誘導体及び１−アルキニル誘導体）及びその互変異性体、８−オキソ−Ｎ６−メチルアデニン、７−ジアザキサンチン、５−メチルシトシン、５−メチルウラシル、５−（１−プロピニル）ウラシル、５−（１−プロピニル）シトシン、４，４−エタノシトシン、非プリン塩基及び非ピリミジン塩基、例えば２−アミノピリジン及びトリアジン、無塩基ヌクレオチド、デオキシ無塩基ヌクレオチド、逆位無塩基ヌクレオチド、逆位デオキシ無塩基ヌクレオチドなどが挙げられる。
【００３０】
糖に対する修飾としては、限定されずに、２’位の修飾、例えば、２’−Ｏ−アルキル修飾（例えば、２’−Ｏ−メチル修飾、２’−Ｏ−エチル修飾等）、２’−メトキシエトキシ修飾、２’−メトキシエチル修飾、２’−デオキシ修飾、２’−ハロゲン修飾（２’−フルオロ修飾、２’−クロロ修飾、２’−ブロモ修飾等）、２’−Ｏ−アリル修飾、２’−アミノ修飾、２’−Ｓ−アルキル修飾、２’−Ｏ−［２（メチルアミノ）−２−オキソエチル］修飾、２’−アルコキシ修飾、２’−Ｏ−２−メトキシエチル、２’−アリルオキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、２’−プロパルギル、２’−プロピル、２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）修飾、２’−Ｏ−（２，４−ジニトロフェニル）修飾、２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｄ−アラビノ修飾など、４’位の修飾、例えば、４’チオ修飾、４’-Ｃ-ヒドロキシメチル修飾など、その他、エチニル、エテニル、プロペニル、ＣＦ、シアノ、イミダゾール、カルボキシレート、チオエート、Ｃ１〜Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル又はアラルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＮ、Ｏ−、Ｓ−又はＮ−アルキル、Ｏ−、Ｓ−又はＮ−アルケニル、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ又は置換シリルなどが挙げられる。上記以外の修飾糖としては、例えば、ロックド核酸（ＬＮＡ）、オキセタン−ＬＮＡ（ＯＸＥ）、アンロックド核酸（ＵＮＡ）、エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）、アルトリトール核酸（ＡＮＡ）、ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）などが挙げられる。
【００３１】
本開示において、アルキル基は、飽和脂肪族基を含み、これは直鎖アルキル基（例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなど）、分枝鎖アルキル基（イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチルなど）、シクロアルキル（脂環式）基（シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル）、アルキル置換シクロアルキル基を含む。一部の態様において、直鎖又は分枝鎖アルキルはその骨格に６個又はそれ未満の炭素原子を有し（例えば、直鎖についてはＣ１〜Ｃ６、分枝鎖についてはＣ３〜Ｃ６）、より好ましくは４個又はそれ未満の炭素原子を有する。同様に、好ましいシクロアルキルは、その環構造中に３〜８個の炭素原子を有してもよく、より好ましくは５個又は６個の炭素を環構造中に有してもよい。用語Ｃ１〜Ｃ６は、１〜６個の炭素原子を含有するアルキル基を含む。アルキル基は、置換アルキル基、例えば、炭化水素骨格の１個又は２個以上の炭素上で水素に置換する置換基を有するアルキル部分であってもよい。かかる置換基は、例えば、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホナト、ホスフィナト、シアノ、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ及びアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイル及びウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、硫酸塩、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリール又は、芳香族部分又は複素環式芳香族部分を含んでもよい。
【００３２】
本開示において、アルコキシ基は、酸素原子に共有結合的に連結した、置換及び非置換アルキル、アルケニル及びアルキニル基を含む。アルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシ、プロポキシ、ブトキシ及びペントキシ基を含む。置換アルコキシ基の例は、ハロゲン化アルコキシ基を含む。アルコキシ基は、例えば、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホナト、ホスフィナト、シアノ、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ及びアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイル及びウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、硫酸塩、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリール又は芳香族部分又は複素環式芳香族部分で置換されていてもよい。ハロゲン置換アルコキシ基の例は、限定されずに、フルオロメトキシに、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、クロロメトキシ、ジクロロメトキシ、トリクロロメトキシなどを含む。
本開示において、ハロゲンは、フッ素、臭素、塩素、ヨウ素を含む。
【００３３】
修飾バックボーンとしては、限定されずに、例えば、ホスホロチオエート、チオリン酸−Ｄ−リボース体、トリエステル、チオエート、２’−５’結合（５’−２’又は２’５’ヌクレオチド又は２’５’リボヌクレオチドとも称する）、ＰＡＣＥ、ＰＮＡ、３’−（又は−５’）デオキシ−３’−（又は−５’）チオ−ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレネート、３’−（又は−５’）デオキシホスフィネート、ボラノホスフェート、３’−（又は−５’）デオキシ−３’−（又は５’−）アミノホスホルアミデート、水素ホスホネート、ホスホネート、ボラノリン酸エステル、ホスホルアミデート、アルキル又はアリールホスホネート及びホスホトリエステル修飾、アルキルホスホトリエステル、ホスホトリエステルリン結合、５’−エトキシホスホジエステル、Ｐ−アルキルオキシホスホトリエステル、メチルホスホネート、モルホリノなど、及び非リン含有結合、例えば、炭酸塩、カルバメート、シリル、硫黄、スルホネート、スルホンアミド、ホルムアセタール、チオホルムアセチル、オキシム、メチレンイミノ、メチレンメチルイミノ、メチレンヒドラゾ、メチレンジメチルヒドラゾ及びメチレンオキシメチルイミノなどが挙げられる。
【００３４】
５’末端及び／又は３’末端修飾としては、例えば、５’末端及び／又は３’末端へのキャッピング部分の付加や、５’末端及び／又は３’末端のリン酸基の修飾、例えば、［３〜３’］−逆位デオキシリボース、デオキシリボヌクレオチド、［５’−３’］−３’−デオキシリボヌクレオチド、［５’−３’］−リボヌクレオチド、［５’−３’］−３’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、３’−グリセリル、［３’−５’］−３’−デオキシリボヌクレオチド、［３’−３’］−デオキシリボヌクレオチド、［５’−２’］−デオキシリボヌクレオチド及び［５−３’］−ジデオキシリボヌクレオチドなどが挙げられる。キャッピング部分の非限定例としては、例えば、無塩基ヌクレオチド、デオキシ無塩基ヌクレオチド、逆位（デオキシ）無塩基ヌクレオチド、炭化水素（アルキル）部分及びその誘導体、ミラーヌクレオチド（Ｌ−ＤＮＡ又はＬ−ＲＮＡ）、ＬＮＡ及びエチレン架橋核酸を含む架橋核酸、結合修飾ヌクレオチド（例えばＰＡＣＥ）及び塩基修飾ヌクレオチド、グリセリル、ジヌクレオチド、非環式ヌクレオチド、アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ＣＮ、ＣＦ、メトキシ、イミダゾール、カルボキシレート、チオエート、Ｃ１〜Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル又はアラルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＮ、Ｏ−、Ｓ−又はＮ−アルキル、Ｏ−、Ｓ−又はＮ−アルケニル、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ又は置換シリルなどが挙げられる。キャッピング部分は、非ヌクレオチド突出として機能することもできる。
【００３５】
本開示における修飾ヌクレオチドには、２’−デオキシリボヌクレオチド、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロリボヌクレオチド、ユニバーサル塩基ヌクレオチド、非環式ヌクレオチド、５−Ｃ−メチルヌクレオチド、ビオチン基、及び末端グリセリル及び/又は逆位デオキシ無塩基残基を含むヌクレオチド、立体障害分子、例えば、蛍光分子などを含むヌクレオチド、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）、２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）、２’，３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシチミジン（ｄ４Ｔ）、及び３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）又は２’，３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシチミジン（ｄ４Ｔ）を含むヌクレオチド、ノーザンコンフォメーションを有するヌクレオチド、２’−メチルチオエチル、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−クロロヌクレオチド、２’−アジドヌクレオチド、及び２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、６員環ヌクレオチドアナログ（例えば、WO 2006/047842等に記載のヘキシトール及びアルトリトールヌクレオチドモノマーを含むもの）、ミラーヌクレオチド（例えば、Ｌ−ＤＮＡ（Ｌ−デオキシリボアデノシン−３’−ホスフェート（ミラーｄＡ）、Ｌ−デオキシリボシチジン−３’−ホスフェート（ミラーｄＣ）、Ｌ−デオキシリボグアノシン−３’−ホスフェート（ミラーｄＧ）、Ｌ−デオキシリボチミジン−３’−ホスフェート（鏡像チミジン））及びＬ−ＲＮＡ（Ｌ−リボアデノシン−３’−ホスフェート（ミラーｒＡ）、Ｌ−リボシチジン−３’−ホスフェート（ミラーｒＣ）、Ｌ−リボグアノシン−３’−ホスフェート（ミラーｒＧ）、Ｌ−リボウラシル−３’−ホスフェート（ミラーｄＵ）等）が包含される。
【００３６】
修飾ヌクレオチドの非限定例は、例えば、Gaglione and Messere, Mini Rev Med Chem. 2010;10(7):578-95、Deleavey and Damha, Chem Biol. 2012;19(8):937-54、Bramsen and Kjems, J.Front Genet. 2012;3:154などにも記載されている。
【００３７】
本開示の組合せ物に含まれる抗がん剤は、がんの増殖、浸潤及び／又は転移等を抑制する薬剤を含む。抗がん剤には、アルキル化剤、抗腫瘍性抗生物質、代謝拮抗剤、白金製剤、トポイソメラーゼ阻害薬、微小管阻害薬、分子標的薬、内分泌療法薬などが含まれる。本開示の組合せ物に含まれる抗がん剤は、本開示の組合せ物に含まれるCUGACUC含有分子とは異なる。したがって、本開示の組合せ物に含まれる抗がん剤は、配列番号１のヌクレオチド配列を含まない。
【００３８】
一態様において、抗がん剤はＢｃＬ２ファミリー分子を標的とする分子標的薬、例えば、ＢｃＬ２ファミリー分子の阻害剤を含む。ＢｃＬ２ファミリー分子の阻害剤は、例えば、ＢｃＬ２ファミリー分子の発現阻害剤、ＢｃＬ２ファミリー分子の機能阻害剤などを含む。ＢｃＬ２ファミリー分子の発現阻害剤としては、限定されずに、ＢｃＬ２ファミリー分子を標的とするＲＮＡｉ分子、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃ、ゲノム編集用構築物、リボザイム、アンチセンス核酸などの阻害性核酸分子、これらを発現させる構築物又はベクターなどが挙げられる。ＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉）分子は、ＲＮＡｉ活性を有する任意の分子を意味し、例えば、限定されずに、ｓｉＲＮＡ（small interfering RNA）、ｓｈＲＮＡ（short hairpin RNA）、ｄｄＲＮＡ（DNA-directed RNA）、ｐｉＲＮＡ（Piwi-interacting RNA）、ｒａｓｉＲＮＡ（repeat associated siRNA）などのＲＮＡ及びこれらの改変体を包含する。ゲノム編集用構築物としては、限定されずに、例えば、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮなどに基づくものが挙げられる。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９に基づくゲノム編集用構築物は、ガイドＲＮＡとＣａｓ９をコードする核酸を同一の構築物中に含んでも、別々の構築物中に含んでもよい。
【００３９】
好ましい態様において、ＢｃＬ２ファミリー分子はアポトーシス抑制性ＢｃＬ２ファミリー分子である。アポトーシス抑制性ＢｃＬ２ファミリー分子には、ＢｃＬ−２、ＢｃＬ−ＸＬ、ＢＦＬ１、ＢｃＬ−Ｗなどが含まれる。特に好ましい態様において、ＢｃＬ２ファミリー分子は、ＢｃＬ−ＸＬである。アポトーシス抑制性ＢｃＬ２ファミリー分子は、アポトーシス促進性ＢｃＬ２ファミリー分子（例えば、ＢＡＸ、ＢＯＫ、ＢＡＫなどのマルチドメインタンパク質、ＢＩＭ、ＢＡＤ、ＢＩＤ、ＮＯＸＡ、ＰＵＭＡ（Ｂｂｃ３）、ＢＭＦ、ＨＲＫ、ＢＩＫなどのＢＨ３のみタンパク質（BH3-only protein））との相互作用を通じて、アポトーシスを抑制すると考えられている。
【００４０】
アポトーシス抑制性ＢｃＬ２ファミリー分子の発現阻害剤としては、限定されずに、アポトーシス抑制性ＢｃＬ２ファミリー分子、例えば、ＢｃＬ−２、ＢｃＬ−ＸＬ、ＢＦＬ１及びＢｃＬ−Ｗから選択される分子を標的とするＲＮＡｉ分子、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃ、ゲノム編集用構築物、リボザイム、アンチセンス核酸などの阻害性核酸分子、これらを発現させる構築物又はベクターなどが挙げられる。なお、ＢｃＬ−ＸＬ、ＢＦＬ１及びＢｃＬ−Ｗは、ＢＣＬ２Ｌ１、ＢＣＬ２Ａ１及びＢＣＬ２Ｌ２遺伝子によりそれぞれコードされているため、ＢｃＬ−ＸＬ、ＢＦＬ１又はＢｃＬ−Ｗの発現阻害剤は、ＢＣＬ２Ｌ１、ＢＣＬ２Ａ１又はＢＣＬ２Ｌ２遺伝子を標的とするものであってもよい。
【００４１】
アポトーシス抑制性ＢｃＬ２ファミリー分子の機能阻害剤としては、限定されずに、例えば、アポトーシス抑制性ＢｃＬ２ファミリー分子と、ＢＨ３のみタンパク質との結合を阻害する薬剤が挙げられる。かかる薬剤としては、例えば、ＢＨ３模倣物が挙げられる。ＢＨ３模倣物の非限定例は、ＡＢＴ−７３７、ＡＢＴ−２６３、ＡＢＴ−１９９、ＷＥＨＩ−５３９、ＢＸＩ−６１、ＢＸＩ−７２、ＧＸ１５−０７０、Ｓ１、ＪＹ−１−１０６、ＡｐｏＧ２、ＢＩ９７Ｃ１、ＴＷ−３７、ＭＩＭ１、ＭＳ１及びＵＭＩ−７７を含む。ＢｃＬ−ＸＬとＢＨ３のみタンパク質との結合を阻害する薬剤の非限定例は、ＡＢＴ−７３７、ＡＢＴ−２６３、ＷＥＨＩ−５３９、ＢＸＩ−６１、ＢＸＩ−７２、ＧＸ１５−０７０、ＪＹ−１−１０６、ＢＩ９７Ｃ１及びＴＷ−３７を含む。
【００４２】
本開示の組合せ物に含まれるCUGACUC含有分子及び抗がん剤は、１種であっても２種以上であってもよい。したがって、本開示の組合せ物は、１種以上のCUGACUC含有分子と、１種以上の抗がん剤を含み得る。また、本開示の組合せ物において、CUGACUC含有分子と抗がん剤とは別々な分子として存在しても、同一の分子内に存在してもよい。例えば、本開示の組合せ物は、CUGACUC含有分子と抗がん剤を別々の分子として含んでもよいし、CUGACUC含有分子が核酸分子である場合、CUGACUC含有分子をコードするヌクレオチド配列と、抗がん剤をコードするヌクレオチド配列とを同一分子内に含む核酸構築物又はベクターであってもよい。さらに、本開示の組合せ物が、CUGACUC含有分子と抗がん剤を別々の分子として含む場合、これらの分子は同一の製剤に含まれても、別々の製剤に含まれてもよい。前者の非限定例としては、例えば、CUGACUC含有分子と抗がん剤を同一の送達システムに含む場合などが挙げられる。
【００４３】
本開示の組合せ物が核酸分子を含む場合、当該核酸分子は作用部位への送達を補助、促進又は容易化する作用を有する既知の任意の送達担体とともに送達又は投与されてもよいし、これらの送達担体なしで直接送達又は投与されてもよい。送達担体としては、ウイルスベクター又は非ウイルスベクターを用いることができる。
【００４４】
ウイルスベクターとしては、限定されずに、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（AAV）、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルスなどをベースとするベクターが挙げられる。ウイルスベクターは、腫瘍溶解性であってもよい。腫瘍溶解性ウイルスベクターはがんの処置に特に有用である。
【００４５】
非ウイルスベクターとしては、限定されずに、例えば、ポリマー粒子、脂質粒子、無機粒子などの粒子状担体、細菌ベクター等が挙げられる。粒子状担体としては、大きさがナノレベルのナノ粒子を用いることができる。ポリマー粒子としては、限定されずに、例えば、カチオン性ポリマー、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）、キトサン、シクロデキストリン、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（乳酸−コ−カプロラクトン酸）（ＰＬＣＡ）、ポリ（βアミノエステル）、アテロコラーゲンなどのポリマーを含むものが挙げられる。脂質粒子にはリポソームや非リポソーム型脂質粒子などが含まれる。リポソームは脂質二重膜で包まれた内腔を有する小胞であり、非リポソーム型脂質粒子は、このような構造を有しない脂質粒子である。無機粒子としては、例えば、金ナノ粒子、量子ドット、シリカナノ粒子、酸化鉄ナノ粒子（例えば、超常磁性酸化鉄ナノ粒子（ＳＰＩＯＮ））、ナノチューブ（例えば、カーボンナノチューブ（ＣＮＴ））、ナノダイヤモンド、フラーレンなどが挙げられる。細菌ベクターとしては、限定されずに、例えば、リステリア菌、ビフィズス菌、サルモネラ菌などをベースにしたものが挙げられる。
【００４６】
本開示の組合せ物は皮膚適用、経皮適用又は注射（静脈注射、皮内注射、皮下注射、筋肉注射、動脈注射、点滴注射等）を介して、全身投与あるいは関係する組織にex vivo又はin vivoで、局所投与することができる。
【００４７】
本開示の組合せ物は、目的に適した送達システムにより送達することができる。送達システムは、例えば、水性及び非水性のゲル、クリーム、複エマルション、マイクロエマルション、リポソーム、軟膏、水性及び非水性の溶液、ローション、エアゾール、炭化水素基剤及びパウダーなどを含んでもよく、賦形剤、例えば可溶化剤、浸透促進剤（例えば脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪族アルコール及びアミノ酸など）及び親水性ポリマー（例えばポリカルボフィル及びポリビニルピロリドンなど）を含むことができる。一態様において、薬学的に許容し得る担体は、リポソーム又は経皮促進剤である。
【００４８】
送達システムは、パッチ、錠剤、坐薬、ペッサリー、ゲル及びクリームを含んでもよく、賦形剤、例えば可溶化剤及び促進剤（例えばプロピレングリコール、胆汁酸塩及びアミノ酸など）、及び他のビヒクル（例えば、ポリエチレングリコール、脂肪酸エステル及び誘導体、及び親水性ポリマー、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース及びヒアルロン酸など）を含むことができる。
本開示の組合せ物の送達に有用な手法やシステムは、例えば、Rettig and Behlke, Mol Ther. 2012;20(3):483-512、Kraft et al., J Pharm Sci. 2014;103(1):29-52、Hong and Nam, Theranostics. 2014;4(12):1211-32、Kaczmarek et al., Genome Med. 2017;9(1):60 などに記載されている。
【００４９】
本開示の一部の態様は、本開示の組合せ物を含む組成物に関する（以下、本開示の組成物と称することがある）。本開示の組成物は、本開示の組合せ物に加え、上述の任意の担体、希釈剤、送達ビヒクル、送達システムなどを含んでもよい。本開示の組成物は、がんなどの疾患の処置に使用できる。したがって、本開示の組成物は、がんなどの疾患の処置のための医薬組成物となり得る（以下、本開示の医薬組成物と称することがある）。本開示の医薬組成物は、１又は２以上の薬学的に許容し得る添加物（例えば、界面活性剤、担体、希釈剤、賦形剤など）を含んでもよい。薬学的に許容し得る添加物は医薬分野でよく知られており、例えば、その全体を本明細書に援用するRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990)などに記載されている。
【００５０】
一部の態様において、本開示の組合せ物及び医薬組成物は、がんの処置のために使用することができる。がんは、上皮性悪性腫瘍及び非上皮性悪性腫瘍を含む。処置の対象となるがんとしては、限定されずに、例えば、脳腫瘍、頭頚部がん、乳がん、肺がん、口腔がん、食道がん、胃がん、十二指腸がん、虫垂がん、大腸がん、直腸がん、肝がん、膵がん、胆嚢がん、胆管がん、肛門がん、腎がん、尿管がん、膀胱がん、前立腺がん、陰茎がん、精巣がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、外陰がん、膣がん、皮膚がん、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、リンパ管肉腫、滑膜肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、骨髄腫、リンパ腫、白血病などが挙げられる。がんは、任意の部位、例えば、脳、頭頚部、胸部、四肢、肺、心臓、胸腺、食道、胃、小腸（十二指腸、空腸、回腸）、大腸（結腸、盲腸、虫垂、直腸）、肝臓、膵臓、胆嚢、肛門、腎、尿管、膀胱、前立腺、陰茎、精巣、子宮、卵巣、外陰、膣、皮膚、横紋筋、平滑筋、滑膜、軟骨、骨、甲状腺、副腎、腹膜、腸間膜、骨髄、血液、血管系、リンパ節等のリンパ系、リンパ液などに存在し得る。
【００５１】
特定の態様において、本開示の組合せ物及び医薬組成物は、ＢｃＬ−ＸＬを発現しているがんの処置のために使用することができる。好ましい態様において、がんにおけるＢｃＬ−ＸＬは過剰発現されている。あるがんがＢｃＬ−ＸＬを発現しているか否か、又は、ＢｃＬ−ＸＬを過剰発現しているか否かは、文献などにより知られているか、そのがんを構成するがん細胞におけるＢｃＬ−ＸＬの発現を検出することなどにより決定することができる。ＢｃＬ−ＸＬの発現は、既知の任意の手法、例えば、ＢｃＬ−ＸＬをコードする核酸分子（Ｂｃｌ２Ｌ１）若しくはそのユニークな断片に特異的にハイブリダイズする核酸を利用した、種々のハイブリダイゼーション法、ノーザンブロット法、サザンブロット法、種々のＰＣＲ法などにより前記核酸分子を検出することや、ＢｃＬ−ＸＬを、既知のタンパク質検出手法、例えば、限定されずに、抗体を利用した免疫沈降法、ＥＩＡ（例えば、ＥＬＩＳＡなど）、ＲＩＡ（例えば、ＩＲＭＡ、ＲＡＳＴ、ＲＩＳＴなど）、ウエスタンブロッティング法、免疫組織化学法、免疫細胞化学法、フローサイトメトリー法などで検出することなどにより決定することができる。また、がん細胞におけるＢｃＬ−ＸＬの過剰発現は、Ｂｃｌ２Ｌ１遺伝子の増幅による場合があるため、Ｂｃｌ２Ｌ１遺伝子の増幅をＢｃＬ−ＸＬの過剰発現の１つの指標とすることができる。膀胱がん、乳がん、頭頚部がん、肺がん、胃がん、子宮がんなどでＢｃｌ２Ｌ１遺伝子の増幅がみられることが報告されている（Campbell and Tait, Open Biol. 2018;8(5):180002）。
【００５２】
ＢｃＬ−ＸＬを発現しているがんは、ＢｃＬ−ＸＬの抑制に対して抵抗性であってもよい。ＢｃＬ−ＸＬの抑制は、ＢｃＬ−ＸＬの発現抑制、ＢｃＬ−ＸＬの機能抑制などを含む。あるがんがＢｃＬ−ＸＬの抑制に対して抵抗性であることは、文献等により既知であるか、あるいは、そのがん組織又はがん細胞にＢｃＬ−ＸＬ抑制剤を作用させ、その効果を評価することなどにより決定することができる。例えば、評価対象のがん組織又はがん細胞に対するＢｃＬ−ＸＬ抑制剤の効果が、ＢｃＬ−ＸＬ抑制剤に感受性である組織又は細胞（陽性対照）より小さい場合、また、ＢｃＬ−ＸＬ抑制剤に抵抗性である組織又は細胞（陰性対照）と同等以上の場合、評価対象のがん組織又はがん細胞がＢｃＬ−ＸＬの抑制に対して抵抗性であると決定することができる。ＢｃＬ−ＸＬ抑制剤に感受性である細胞系としては、限定されずに、例えば、Ｈ３５８、Ｈ８３８、Ｈ１９７５、ＡｓＰＣ−１、ＢｘＰＣ−３等が、ＢｃＬ−ＸＬ抑制剤に抵抗性である細胞系としては、限定されずに、例えば、Ａ５４９、ＭＣＦ７、ＢＴ−２０、ＰＡＮＣ−１、ＭＩＡ  ＰａＣａ−２、ＫＰ−３、ＫＰ−４、ＨＣＴ１１６、ＳＵＩＴ−２、ＳＷ１９９０、ＳＡＯＳ−２、ＨｅＬａ、ＨｅｐＧ２、ＣＦＰＡＣ−１等が、それぞれ挙げられる。ＢｃＬ−ＸＬ抑制剤としては、例えば、ＢｃＬ−ＸＬを標的とするＲＮＡｉ分子、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｍｉｃ、ゲノム編集用構築物、リボザイム、アンチセンス核酸などの阻害性核酸分子、これらを発現させる構築物又はベクターなどのＢｃＬ−ＸＬ発現抑制剤、ＢＨ３模倣物などＢｃＬ−ＸＬ機能抑制剤などが挙げられる。ＢｃＬ−ＸＬ抑制剤の効果としては、例えば、細胞増殖抑制、アポトーシス誘導等が挙げられる。細胞増殖抑制やアポトーシス誘導の評価には既知の種々の手法を用いることができる。
【００５３】
特定の態様において、本開示の組合せ物及び医薬組成物は、CUGACUC含有分子により発現が抑制され得る遺伝子を発現しているがんの処置のために使用することができる。CUGACUC含有分子により発現が抑制され得る遺伝子は、本開示の組合せ物について上記した通りである。CUGACUC含有分子により発現が抑制され得る遺伝子を発現しているがんは、CUGACUC含有分子による処置に対して抵抗性であってもよい。あるがんがCUGACUC含有分子による処置に対して抵抗性であることは、文献等により既知であるか、あるいは、そのがん組織又はがん細胞にCUGACUC含有分子を作用させ、その効果を評価することなどにより決定することができる。例えば、評価対象のがん組織又はがん細胞に対するCUGACUC含有分子の効果が、CUGACUC含有分子に感受性であることが知られている組織又は細胞（陽性対照）より小さい場合、また、CUGACUC含有分子に抵抗性であることが知られている組織又は細胞（陰性対照）と同等以上の場合、評価対象のがん組織又はがん細胞がCUGACUC含有分子による処置に対して抵抗性であると決定することができる。CUGACUC含有分子による処置に感受性である細胞系としては、限定されずに、例えば、Ａ５４９、ＭＩＡ  ＰａＣａ−２等が、CUGACUC含有分子による処置に抵抗性である細胞系 としては、限定されずに、例えば、ＨＣＴ１１６、ＰＡＮＣ−１、ＣＦＰＡＣ−１、ＳＵＩＴ−２、ＳＷ１９９０等が、それぞれ挙げられる。CUGACUC含有分子の例は本開示の組合せ物について上記した通りである。CUGACUC含有分子の効果としては、例えば、細胞増殖抑制、アポトーシス誘導等が挙げられる。細胞増殖抑制やアポトーシス誘導の評価には既知の種々の手法を用いることができる。
【００５４】
特に好ましい態様において、本開示の組合せ物及び医薬組成物は、ＢｃＬ−ＸＬと、CUGACUC含有分子により発現が抑制され得る遺伝子の両方を発現しているがんの処置のために使用することができる。かかるがんは、ＢｃＬ−ＸＬの抑制に対して抵抗性であり、かつ、CUGACUC含有分子による処置に対して抵抗性であってもよい。ＢｃＬ−ＸＬの発現、CUGACUC含有分子により発現が抑制され得る遺伝子の発現、ＢｃＬ−ＸＬの抑制への抵抗性及びCUGACUC含有分子による処置への抵抗性については上記の通りである。ＢｃＬ−ＸＬの抑制に対して抵抗性であり、かつ、CUGACUC含有分子による処置に対して抵抗性である細胞系 としては、限定されずに、例えば、ＨＣＴ１１６、ＣＦＰＡＣ−１、ＳＵＩＴ−２、ＳＷ１９９０ 等が挙げられる。
【００５５】
本開示の組合せ物及び医薬組成物はまた、アポトーシスの異常に起因する疾患、例えば、細胞の異常増殖に起因する疾患などの処置のために使用することができる。細胞の異常増殖に起因する疾患としては、限定されずに、例えば、良性又は悪性腫瘍、過形成症、ケロイド、クッシング症候群、原発性アルドステロン症、紅板症、真性多血症、白板症、過形成瘢痕、扁平苔癬及び黒子症などを含む。
本開示の組合せ物及び医薬組成物はまた、ＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患、例えば、ＢｃＬ−ＸＬの発現に伴う細胞の異常増殖に起因する疾患などの処置のために使用することができる。細胞の異常増殖に起因する疾患としては、限定されずに、例えば、良性又は悪性腫瘍、リンパ増殖性疾患などを含む。
【００５６】
本開示において、「処置」は、疾患の治癒、一時的寛解又は予防などを目的とする医学的に許容される全ての種類の予防的及び／又は治療的介入を包含するものとする。例えば、「処置」は、疾患の進行の遅延又は停止、病変の退縮又は消失、当該疾患発症の予防又は再発の防止などを含む、種々の目的の医学的に許容される介入を包含する。したがって、前記組合せ物及び医薬組成物は、疾患の治療及び／又は予防に用いることができる。
【００５７】
本開示の組合せ物又は医薬組成物は、経口及び非経口の両方を包含する種々の経路、例えば、限定することなく、経口、頬側、口腔内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、局所、直腸、動脈内、門脈内、心室内、経粘膜、経皮、鼻腔内、腹腔内、気道内、肺内及び子宮内等の経路で投与してもよく、各投与経路に適した剤形に製剤してもよい。かかる剤形及び製剤方法は任意の公知のものを適宜採用することができる（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990)などを参照）。
【００５８】
例えば、経口投与に適した剤形としては、限定することなく、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤、ゲル剤、シロップ剤などが挙げられ、また非経口投与に適した剤形としては、溶液性注射剤、懸濁性注射剤、乳濁性注射剤、用時調製型注射剤などの注射剤が挙げられる。非経口投与用製剤は、水性又は非水性の等張性無菌溶液又は懸濁液の形態であることができる。
【００５９】
本開示に係る組成物は、いずれの形態で供給されてもよいが、保存安定性の観点から、用時調製可能な形態、例えば、医療の現場あるいはその近傍において、医師及び／又は薬剤師、看護士、若しくはその他のパラメディカルなどによって調製され得る形態で提供されてもよい。この場合、前記組成物は、これらに必須の構成要素の少なくとも１つを含む１個又は２個以上の容器として提供され、使用の前、例えば、２４時間前以内、好ましくは３時間前以内、そしてより好ましくは使用の直前に調製される。調製に際しては、調製する場所において通常入手可能な試薬、溶媒、調剤器具などを適宜使用することができる。
【００６０】
本開示のさらなる態様は、本開示に係る組合せ物若しくは組成物、又はその構成要素を含む、前記組合せ物若しくは組成物を調製するための、疾患を処置するためのキット又はパック、ならびに、そのようなキット又はパックの形で提供される前記組合せ物若しくは組成物、又はその必要構成要素にも関する。かかるキット又はパックに含まれる、組合せ物若しくは組成物の各構成要素は、前記組合せ物若しくは組成物について上記した通りである。本キットは、上記のほか、組合せ物若しくは組成物の調製方法や使用方法（例えば、投与方法等）などに関する指示、例えば、使用説明書や、使用方法に関する情報を記録した媒体、例えば、フレキシブルディスク、ＣＤ、ＤＶＤ、ブルーレイディスク、メモリーカード、ＵＳＢメモリーなどをさらに含んでいてもよい。また、かかるキット又はパックは、組合せ物若しくは組成物を完成するための構成要素の全てを含んでいてもよいが、必ずしも全ての構成要素を含んでいなくてもよい。したがって、前記キット又はパックは、医療現場や、実験施設などで通常入手可能な試薬や溶媒、例えば、無菌水や、生理食塩水、ブドウ糖溶液などを含んでいなくてもよい。
【００６１】
本開示の別の態様は、がん、アポトーシスの異常に起因する疾患又はＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患を処置する方法であって、該方法が、有効量の本開示に係る組合せ物又は医薬組成物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、前記方法に関する（以下、「本開示の処置方法」と称することがある）。ここで、有効量とは、例えば、当該疾患の発症及び再発を予防し、又は当該疾患を治癒する量である。
【００６２】
前記処置方法において対象に投与する組合せ物又は医薬組成物の具体的な用量は、投与を要する対象に関する種々の条件、例えば、標的の種類、方法の目的、治療内容、疾患の種類、症状の重篤度、対象の一般健康状態、年齢、体重、対象の性別、食事、投与の時期及び頻度、併用している医薬、治療への反応性、及び治療に対するコンプライアンスなどを考慮して決定され得る。前記組合せ物又は医薬組成物の１日総投与量は、限定されずに、例えば、組合せ物の量として約１μｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／体重ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／体重ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／体重ｋｇであってもよい。あるいは、投与量は患者の表面積に基づいて計算してもよい。
【００６３】
投与経路としては、経口及び非経口の両方を包含する種々の経路、例えば、経口、頬側、口腔内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、局所、直腸、動脈内、門脈内、心室内、経粘膜、経皮、鼻腔内、腹腔内、気道内、肺内及び子宮内等の経路が含まれる。
投与頻度は、用いる製剤又は組成物の性状や、上記のような対象の条件によって異なるが、例えば、１日多数回（すなわち１日２、３、４回又は５回以上）、１日１回、数日毎（すなわち２、３、４、５、６、７日毎など）、１週間に数回（例えば、１週間に２、３、４回など）、１週間毎、数週間毎（すなわち２、３、４週間毎など）であってもよい。
【００６４】
本開示において、用語「対象」は、任意の生物個体、好ましくは動物、さらに好ましくは哺乳動物、さらに好ましくはヒトの個体を意味する。対象は健常（例えば、特定の又は任意の疾患を有しない）であっても、何らかの疾患に罹患していてもよいものとするが、標的核酸分子に関連する疾患の処置等が企図される場合には、典型的には当該疾患に罹患しているか、罹患するリスクを有する対象を意味する。
【００６５】
本開示の別の側面は、抗がん剤と組み合わせて、がん、アポトーシスの異常に起因する疾患及び／又はＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患を処置するための、配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子（以下、「本開示のCUGACUC配列含有分子A」又は「本開示のCUGACUC含有分子A」と称することがある）に関する。
本開示のCUGACUC含有分子Aにおける「抗がん剤」、「がん」、「アポトーシスの異常に起因する疾患」、「ＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患」、「処置」、「配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子」の各用語は、本開示のCUGACUC含有分子について上記した通りである。本開示のCUGACUC含有分子Aは、抗がん剤と組み合わせてがん、アポトーシスの異常に起因する疾患及び／又はＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患を処置することに関する指示（例えば、添付文書など）とともに提供することができる。
【００６６】
本開示の別の側面は、配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子を含む、抗がん剤と組み合わせて、がん、アポトーシスの異常に起因する疾患及び／又はＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患を処置するための医薬組成物（以下、「本開示の医薬組成物A」と称することがある）に関する。
本開示の医薬組成物Aにおける「配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子」、「抗がん剤」、「がん」、「アポトーシスの異常に起因する疾患」、「ＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患」、「処置」の各用語は、本開示のCUGACUC含有分子又は医薬組成物について上記した通りである。本開示の医薬組成物Aは、抗がん剤を含む必要はない。また、本開示の医薬組成物Aは、抗がん剤と組み合わせてがん、アポトーシスの異常に起因する疾患及び／又はＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患を処置することに関する指示（例えば、添付文書など）とともに提供することができる。
【００６７】
本開示の別の側面は、がん、アポトーシスの異常に起因する疾患及び／又はＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患の処置のための医薬の製造における（１）配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子、及び、（２）抗がん剤の使用（以下、「本開示の使用」と称することがある）に関する。
本開示の使用における「がん」、「アポトーシスの異常に起因する疾患」、「ＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患」、「処置」、「配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子」、「抗がん剤」の各用語は、本開示のCUGACUC含有分子について上記した通りである。本開示の使用における医薬は、CUGACUC含有分子及び抗がん剤を同じ製剤に含んでも、別々の製剤に含んでもよい。
【００６８】
本開示の別の側面は、抗がん剤と組み合わせてがん、アポトーシスの異常に起因する疾患及び／又はＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患を処置するための医薬の製造における、配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子の使用（以下、「本開示の使用A」と称することがある）に関する。
本開示の使用Aにおける「がん」、「アポトーシスの異常に起因する疾患」、「ＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患」、「処置」、「配列番号１のヌクレオチド配列を含む分子」、「抗がん剤」の各用語は、本開示のCUGACUC含有分子又は使用について上記した通りである。本開示の使用Aにおける医薬は、抗がん剤を含む必要はない。また、当該医薬は、抗がん剤と組み合わせてがん、アポトーシスの異常に起因する疾患及び／又はＢｃＬ−ＸＬの発現に起因する疾患を処置することに関する指示（例えば、添付文書など）とともに提供することができる。
【実施例】
【００６９】
以下の例で本開示の一部の態様をより詳細に説明するが、これらの例は例証を目的とするものであり、前記態様の範囲を制限するものではない。【００７０】
例１  ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤とｍｉＲ−３４５関連分子の併用による抗がん活性の増強
がん細胞にＢｃＬ−ＸＬ阻害剤及び／又はｍｉＲ−３４５関連分子を作用させた際の、細胞増殖抑制能及びアポトーシス誘導能を指標として、併用効果の有無を検証した。
ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤としては、以下のヌクレオチド配列からなるｓｉＲＮＡ（化合物Ａ）を用いた。なお、配列中の大文字はＲＮＡ、小文字はＤＮＡを示す。
化合物Ａ
センス鎖：5’-ＧＧＵＡＵＵＧＧＵＧＡＧＵＣＧＧＡＵＣｔｔ-3’（配列番号４）
アンチセンス鎖：5’-ＧＡＵＣＣＧＡＣＵＣＡＣＣＡＡＵＡＣＣｔｔ-3’（配列番号５）
ｍｉＲ−３４５関連分子としては、hsa-miR-345-5p mirVanaTMmiRNA mimic（ID:MC12733、Ambion、化合物Ｂ）を用いた。
がん細胞としては、Ｋ−Ｒａｓ変異陽性大腸癌細胞株ＨＣＴ１１６を用いた。細胞は、１０％の非働化処理したウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１００Ｕ／ｍＬのpenicillin、１００μｇ／ｍＬのstreptomycinを含むＤＭＥＭ培地で、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養した。【００７１】
化合物Ａ及び／又は化合物Ｂのトランスフェクションは、次の通りに行った。トランスフェクションの前日、ＨＣＴ１１６細胞を、細胞数計測実験では０．１×１０５個／ウェル、ウエスタンブロットでは０．２×１０５個／ウェルとなるように６ウェル組織培養プラスチックディッシュに播種した。２５０μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Medium（Invitrogen）中に化合物Ａ及び／又は化合物Ｂを２５ｐｍｏｌ（併用の場合２５＋２５ｐｍｏｌ）加え、穏やかに混合した。次に、Lipofectamine RNAiMAX（Invitrogen）を２５０μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Medium中に５μＬ希釈し、穏やかに混合した。希釈した化合物Ａ及び／又は化合物Ｂと希釈したLipofectamine RNAiMAXを合わせ、穏やかに混合した後、室温で１５分間インキュベートした。この間、培地を２ｍＬのOpti-MEM I Reduced Serum Mediumに交換した。15分間のインキュベーション後、化合物Ａ及び/又は化合物Ｂとの複合体を細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２を含む大気下でインキュベートした。５時間のインキュベーション後、３ｍＬの１０％ＦＢＳ入りＤＭＥＭ培地に交換した。また、コントロール実験としてAllstars negative control siRNA（QIAGEN社、化合物Ｃ）を用いて同様の操作を行った。トランスフェクション後３日目に細胞抽出液を調製し、ＢｃＬ−ＸＬのノックダウンならびにｈｓａ−ｍｉＲ−３４５の標的分子であるＳｍａｄ１、Ｂｃｌ−２抑制により誘導されるアポトーシスシグナルである活性化ｃａｓｐａｓｅ−３ならびにＰＡＲＰの発現変化をウエスタンブロットにより解析し、５日目に細胞数を計測した。【００７２】
ウエスタンブロットは次のように行った。細胞は氷冷ＰＢＳで洗浄後、TNE lysis buffer（１％ＮＰ−４０、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、complete Mini EDTA-free（Roche社）、PhosSTOP（Roche社）、ｐＨ７．５）を加え、氷冷にて３０分間インキュベートすることで可溶化した。その後、１５０００ｒｐｍ、４℃の条件で１５分間遠心し、上清を細胞抽出液とした。得られた細胞抽出液は、Micro BCA Protein Assay Kit（Thermo Scientific社）を用いてタンパク質の定量を行い、１０μｇの細胞抽出液にRed Loading Buffer Pack（New England Biolabs社）を加えて熱処理（１００℃、５分間）することで変性させ、SuperSepTM Ace（Wako社）を用いたＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、タンパク質を分離した。分離後、セミドライ式ブロッティング装置（Bio-Rad社）を用いて、PVDF transfer membrane（Immobilon-P：Millipore）に転写した。メンブレンは５％スキムミルク／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０添加ＰＢＳ（以下ＰＢＳ−Ｔと略す）で室温、１時間でインキュベートしてブロッキングを行った。続いて、ＰＢＳ−Ｔで希釈した各種一次抗体（Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb #2764（CST社）、PARP Antibody #9542（CST社）、Smad1 (D59D7) XP(R)Rabbit mAb #6944（CST社）、Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb #9664（CST社）、Anti-GAPDH antibody [6C5]（abcam社））で１６時間、４℃でインキュベートした。ＰＢＳ−Ｔで洗浄後、対応するHRP結合抗マウス若しくはウサギＩｇＧ（CST社）と室温で６０分間インキュベートした。ＰＢＳ−Ｔで洗浄後、SuperSignalTMWest Femto Maximum Sensitivity Substrate（Thermo Scientific社）と反応させ、chemidoc（Bio-Rad社）を用いて化学発光を検出した。各操作間の洗浄には、ＰＢＳ−Ｔによる５分間の振盪を３回行った。結果を図１に示す。図１に示すように、化合物Ａ単独及び化合物Ｂ単独より、これらの併用でより強い増殖抑制が見られた。また、化合物Ａ単独及び化合物Ｂ単独より、これらの併用でCleaved Caspase-3及び、Cleaved PARPの発現がより強く見られたことから、併用では各化合物単独より強くアポトーシスが誘導されていると考えられる。【００７３】
例２  ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤によるＢｃＬ−ＸＬの発現抑制とｍｉＲ−３４５関連分子の投与の組合せによる抗がん活性の検証
ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤によりＢｃＬ−ＸＬの発現を抑制したがん細胞における、ｍｉＲ−３４５関連分子による抗がん活性を評価した。
ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤としては、ＢｃＬ−XＬ特異的ｇＲＮＡ配列（ｇｔｔｔｇａａｃｔｇｃｇｇｔａｃｃｇｇｃｇｇｇ、配列番号６）を挿入したpCG SapI vector（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムを用いたオールインワンベクター、Takei et al., Sci Rep. 2017;7(1):9389、化合物D）を用いた。
ｍｉＲ−３４５関連分子としては、例１で用いた化合物Ｂを用いた。
ＢｃＬ−ＸＬの発現が抑制された細胞株（ＢｃＬ−ＸＬノックアウト細胞株（KO））は、Lipofectamine 3000（Invitrogen）を用いて化合物DをＢｃＬ−ＸＬ野生型ＨＣＴ１１６細胞に導入し、薬剤選択によりシングルクローンをピックアップすることで樹立した。
実験には、ジェノタイピングＰＣＲ及びウエスタンブロッティングによってＢｃL−XＬ遺伝子座の欠損及びＢｃL−XＬタンパク発現の消失が確認されたクローンを用いた。コントロールとしてのＢｃＬ−ＸＬ野生型ＨＣＴ１１６細胞株（WT)は挿入配列のないpCG SapI vector（化合物Ｅ）をLipofectamine 3000（Invitrogen）を用いて導入し、薬剤選択によりシングルクローンをピックアップすることで樹立した。【００７４】
化合物Ｂのトランスフェクションは、次の通りに行った。トランスフェクションの前日、ＢｃL−XＬノックアウト及び野生型ＨＣＴ１１６細胞を０．１×１０５個／ウェルとなるように６ウェル組織培養プラスチックディッシュに播種した。２５０μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Medium（Invitrogen）中に２５ｐｍｏｌ加え、穏やかに混合した。次に、Lipofectamine RNAiMAX（Invitrogen）を２５０μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Medium中に５μＬを希釈し、穏やかに混合した。希釈した化合物Ｂと希釈したLipofectamine RNAiMAXを合わせ、穏やかに混合した後、室温で１５分間インキュベートした。この間、培地を２ｍＬのOpti-MEM I Reduced Serum Mediumに交換した。１５分間のインキュベーション後、化合物ＢとLipofectamine RNAiMAXとの複合体を細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２を含む大気下でインキュベートした。５時間のインキュベーション後、３ｍＬの１０％ＦＢＳ入りＤＭＥＭ培地に交換した。また、コントロール実験として（QIAGEN社、化合物Ｃ）を用いて同様の操作を行った。トランスフェクション後５日目に、細胞数を計測した。図２の結果が示すように、ＢｃL−XＬノックアウト細胞の方がＢｃＬ−ＸＬ野生型細胞よりも、化合物Ｂの持つ増殖抑制効果が強く現れた。この結果は、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤とｍｉＲ−３４５関連分子との併用により、ｍｉＲ−３４５関連分子単独より抗がん活性が増強することのさらなる証拠を示す。また、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤とｍｉＲ−３４５関連分子を異なる時期に作用させても、ＢｃＬ−ＸＬの発現が抑制されていれば、併用による効果が得られることが分かる。【００７５】
例３  ｍｉＲ−３４５関連分子によるｍｉＲ−３４５の過剰発現とＢｃＬ−ＸＬ阻害剤の投与の組合せによる抗がん活性の検証
ｍｉＲ−３４５関連分子によりｍｉＲ−３４５を過剰発現させたがん細胞における、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤による抗がん活性を評価した。
ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤としては、例１で用いた化合物Ａを用いた。
ｍｉＲ−３４５関連分子としては、Expression plasmid for human microRNA MIR345（MI0000825、ORIGENE社、化合物Ｆ）を用いた。
ｍｉＲ−３４５を過剰発現する細胞株は、Lipofectamine 3000（Invitrogen）を用いて化合物Ｅをｈｓａ−ｍｉＲ−３４５野生型ＨＣＴ１１６細胞に導入し、薬剤選択によりシングルクローンをピックアップすることで樹立した。実験には、ｑＰＣＲによって、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４５−５ｐの発現増加が確認されたクローンを用いた。コントロールとしてのｈｓａ−ｍｉＲ−３４５野生型ＨＣＴ１１６細胞株は、Expression plasmid pCMV-MIRVector（PCMVMIR、ORIGENE社、化合物Ｇ）をLipofectamine 3000（Invitrogen）を用いてｈｓａ−ｍｉＲ−３４５野生型ＨＣＴ１１６細胞に導入し、薬剤選択によりシングルクローンをピックアップすることで樹立した。【００７６】
化合物Ａのトランスフェクションは次の通りに行った。トランスフェクションの前日、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４５過剰発現ＨＣＴ１１６細胞及びコントロールＨＣＴ１１６細胞を０．１×１０５個／ウェルとなるように６ウェル組織培養プラスチックディッシュに播種した。２５０μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Medium（Invitrogen）中に化合物Aを２５ｐｍｏｌ加え、穏やかに混合した。次に、Lipofectamine RNAiMAX（Invitrogen）を２５０μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Medium中に５μＬを希釈し、穏やかに混合した。希釈した化合物Ａと希釈したLipofectamine RNAiMAXを合わせ、穏やかに混合した後、室温で１５分間インキュベートした。この間、培地を２ｍＬのOpti-MEM I Reduced Serum Mediumに交換した。１５分間のインキュベーション後、化合物ＡとLipofectamine RNAiMAXとの複合体を細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２を含む大気下でインキュベートした。５時間のインキュベーション後、３ｍＬの１０％ＦＢＳ入りＤＭＥＭ培地に交換した。また、コントロール実験としてAllstars negative control siRNA（QIAGEN社、化合物Ｃ）を用いて同様の操作を行った。トランスフェクション後、１及び４日目に、細胞数を計測した。図３の結果が示すように、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４５過剰発現株の方が、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４５野生型株よりも化合物Ａによる細胞増殖抑制効果が強く現れた。この結果は、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤とｍｉＲ−３４５関連分子との併用により、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤単独より抗がん活性が増強することのさらなる証拠を示す。また、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤とｍｉＲ−３４５関連分子を異なる時期に作用させても、ｍｉＲ−３４５の発現が増強されていれば、併用による効果が得られることが分かる。【００７７】
例４  ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤によるＢｃＬ−ＸＬの発現抑制とCUGACUC配列を含まない分子の投与の組合せによる抗がん活性の検証
ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤によりＢｃＬ−ＸＬの発現を抑制したがん細胞における、CUGACUC配列を含まないmicroRNA mimicの抗がん活性を評価した。
ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤としては、例２で用いた化合物Dを用いた。
CUGACUC配列を含まない分子としては、hsa-miR-1182 MISSION(R)miRNA mimic（ID:HMI0051、Sigma-Aldrich社、化合物Ｈ）を用いた。
また、陽性対照として化合物Ｂを、陰性対照としてmirVanaTMmiRNA mimic Negative Control #1 (Ambion、化合物Ｉ）をそれぞれ用いた。
ＢｃＬ−ＸＬの発現が抑制された細胞株（ＢｃＬ−ＸＬノックアウト細胞株（ＫＯ））及びコントロール用ＢｃＬ−ＸＬ野生型ＨＣＴ１１６細胞株（ＷＴ）は、例２と同様に作製した。【００７８】
化合物Ｂ、Ｈ、Ｉのトランスフェクションは、次の通りに行った。トランスフェクションの前日、ＢｃL−XＬノックアウト及び野生型ＨＣＴ１１６細胞を０．２５×１０５個／ウェルとなるように６ウェル組織培養プラスチックディッシュに播種した。２５０μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Medium（Invitrogen）中に化合物Ｂ、Ｈ又はＩを２５ｐｍｏｌ加え、穏やかに混合した。次に、Lipofectamine RNAiMAX（Invitrogen）を２５０μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Medium中に５μＬ希釈し、穏やかに混合した。希釈した化合物Ｂ、Ｈ又はＩと希釈したLipofectamine RNAiMAXを合わせ、穏やかに混合した後、室温で１５分間インキュベートした。この間、培地を２ｍＬのOpti-MEM I Reduced Serum Mediumに交換した。１５分間のインキュベーション後、化合物Ｂ、Ｈ又はＩとLipofectamine RNAiMAXとの複合体を細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２を含む大気下でインキュベートした。５時間のインキュベーション後、３ｍＬの１０％ＦＢＳ入りＤＭＥＭ培地に交換した。また、コントロール実験としてAllstars negative control siRNA（QIAGEN社、化合物Ｃ）を用いて同様の操作を行った。トランスフェクション後６日目に、細胞数を計測した。図４の結果が示すように、CUGACUC配列を含む化合物Ｂのみが、ＢｃＬ−ＸＬノックアウト細胞において、ＢｃＬ−ＸＬ野生型細胞よりも強い増殖抑制効果を示した。このことは、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤との併用による抗がん活性の増強には、CUGACUC配列が必要であることを示す。【００７９】
例５  ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤とｍｉＲ−３４５関連分子の組合せの正常細胞への影響
ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤とｍｉＲ−３４５関連分子の組合せの正常細胞の増殖への影響の有無を検証した。
ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤として、化合物Ａを、ｍｉＲ−３４５関連分子として、化合物Ｂをそれぞれ用いた。また、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤の陰性対照として化合物Cを、ｍｉＲ−３４５関連分子の陰性対照として化合物Ｉをそれぞれ用いた。
正常細胞としては、ヒト正常皮膚線維芽細胞NHDF-Ad-Der Fibroblasts (Lonza社、#CC-2511)を用い、FGMTM-2 SingleQuotsTM（Lonza社、#CC-4126）を含むFibroblast Basal Medium培地（FBMTM、Lonza社、#CC-3131）で、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養を行った。【００８０】
ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤及び／又はｍｉＲ−３４５関連分子のトランスフェクションは、次の通りに行った。トランスフェクションの前日、NHDFを０．１５×１０４個／ウェルとなるように９６ウェル組織培養プラスチックディッシュに播種した。５μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Medium（Invitrogen）中に化合物Ａ及び化合物Ｉ、又は化合物Ｂ及び化合物Ｃ、又は化合物Ａ及び化合物Ｂをそれぞれ１．１＋１．１ｐｍｏｌ加え、穏やかに混合した。次に、Lipofectamine RNAiMAX（Invitrogen）を４．８８μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Medium中に０．１２μＬ希釈し、穏やかに混合した。希釈した各化合物と希釈したLipofectamine RNAiMAXを合わせ、穏やかに混合した後、室温で１５分間インキュベートした。この間、培地を１００μＬのOpti-MEM I Reduced Serum Mediumに交換した。１５分間のインキュベーション後、各化合物とLipofectamine RNAiMAXとの複合体を細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２を含む大気下でインキュベートした。５時間のインキュベーション後、１００μＬの１０％ＦＢＳ入りＤＭＥＭ培地に交換した。また、コントロール実験として化合物Ｃ及び化合物Ｉを用いて同様の操作を行った。トランスフェクション後４日目に、Hoechst 33342（Thermo Fisher社、#H3570）とヨウ化プロピジウム（Wako社、#169-26281）をそれぞれ終濃度が、５μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬとなるように培地に添加し、Celigo(R) Image Cytometer（Nexcelom Bioscience社、#Celigo-106-0448）にて、Hoechst 33342で染色された細胞を生細胞数と死細胞数の合計として、ヨウ化プロピジウムで染色された細胞を死細胞数として、生細胞数、死細胞数を計測した。図５の結果が示すように、ＢｃＬ−ＸＬ阻害剤単独又はｍｉＲ−３４５関連分子単独でも、これらの併用でも、正常細胞の増殖がコントロールと比較して増殖が抑制されることはなかった。【００８１】
多数の様々な改変が、本発明の精神から逸脱せずになされ得ることを当業者は理解する。したがって、本明細書に記載された本発明の形態は例示にすぎず、本発明の範囲を制限する意図がないことを理解すべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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