(57)【要約】【課題】測定対象物質の分子濃度を直感的に表示することが可能であり、かつ、目視による判定が行い易い競合イムノクロマト分析法及び該分析法を用いたイムノクロマトセンサを提供すること。【解決手段】本発明に係る競合イムノクロマト分析法は、測定対象物質に対して特異的に反応する標識化抗体と特異的に反応する抗体から成るテキスト抗体を文字又は図形状に膜担体に固定すると共に、測定対象物質と同じ抗原から成るマスク抗原を前記文字又は図形状に固定したテキスト抗体を囲むように膜担体に固定して成る判定部に、測定対象物質を含む試液と前記標識化抗体とを混合した混合液とを供給し、前記判定部において、前記標識化抗体を、測定対象物質、マスク抗原及びテキスト抗体と競合的に結合させることにより、テキスト抗体及びマスク抗原に結合した標識化抗体によるシグナルに基づいて測定対象物質の濃度を判定することを特徴とする。【選択図】図２
2019221250.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
測定対象物質Ａに対して特異的に反応する標識化抗体Ｂと特異的に反応する抗体から成るテキスト抗体Ｃを文字又は図形状に膜担体に固定すると共に、測定対象物質Ａと同じ抗原から成るマスク抗原Ｄを前記文字又は図形状に固定したテキスト抗体Ｃを囲むように膜担体に固定して成る判定部に、
測定対象物質Ａを含む試液と前記標識化抗体Ｂとを混合した混合液とを供給し、
前記判定部において、
前記標識化抗体Ｂを、測定対象物質Ａ、マスク抗原Ｄ及びテキスト抗体Ｃと競合的に結合させることにより、
テキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄに結合した標識化抗体によるシグナルに基づいて測定対象物質Ａの濃度を判定する
ことを特徴とする競合イムノクロマト分析法。
【請求項２】
前記判定部を複数設け、
各判定部におけるテキスト抗体Ｃの配置量とマスク抗原Ｄの配置量との比率を変える
ことを特徴とする請求項１に記載の分析法。
【請求項３】
膜担体に、試液の流れ方向に沿って複数の判定部を設け、
下流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの配置量の比率を、上流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの配置量の比率より低くする
ことを特徴とする請求項２に記載の分析法。
【請求項４】
膜担体に、試液の流れ方向に沿って複数の判定部を設け、
下流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの配置量の比率を、上流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの配置量の比率より高くする
ことを特徴とする請求項２に記載の分析法。
【請求項５】
前記テキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄを膜担体にインクジェット印刷する
ことを特徴とする請求項１〜４の何れか一項に記載の分析法。
【請求項６】
測定対象物質Ａに対して特異的に反応する標識化抗体Ｂと特異的に反応する抗体から成るテキスト抗体Ｃを文字又は図形状に膜担体に固定すると共に、測定対象物質Ａと同じ抗原から成るマスク抗原Ｄを前記文字又は図形状に固定したテキスト抗体Ｃを囲むように膜担体に固定して成る判定部を有する
ことを特徴とする競合イムノクロマトセンサ。
【請求項７】
測定対象物質Ａを含む試液を導入する試液導入部１と、
前記試液導入部１の下流に配置され、測定対象物質Ａに対して特異的に反応する標識化抗体Ｂを含有させた標識化抗体含有部２と、
前記標識化抗体含有部２の下流に設けられた少なくとも一つの判定部３と、
判定部３の下流に配置された吸引部４と
を膜担体５の上に配置し、
試液導入部１に導入された試液が、標識化抗体含有部２及び判定部３を順に通過して吸引部４に流れるように構成された競合イムノクロマトセンサであって、
前記判定部３が、前記標識化抗体Ｂと特異的に反応する抗体から成るテキスト抗体Ｃを文字又は図形状に膜担体に固定すると共に、測定対象物質Ａと同じ抗原から成るマスク抗原Ｄを前記文字又は図形状に固定したテキスト抗体Ｃを囲むように膜担体に固定して成る
ことを特徴とする競合イムノクロマトセンサ。
【請求項８】
前記判定部３を複数備え、
各判定部３におけるテキスト抗体Ｃの配置量とマスク抗原Ｄの配置量との比率が異なる
ことを特徴とする請求項７に記載のセンサ。
【請求項９】
前記判定部が、試液の流れ方向に沿って複数設けられ、
下流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの量の比率が、上流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの量の比率より低い
ことを特徴とする請求項８に記載のセンサ。
【請求項１０】
前記判定部が、試液の流れ方向に沿って複数設けられ、
下流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの量の比率が、上流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの量の比率より高い
ことを特徴とする請求項８に記載のセンサ。
【請求項１１】
前記テキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄを判定部３にインクジェット印刷する
ことを特徴とする請求項７〜１０の何れか一項に記載のセンサ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、試液中の測定対象物質の分子濃度を、目視によって半定量可能な競合イムノクロマト分析法及び該分析法を用いたイムノクロマトセンサの改良に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、臨床検査が多様化する中で、臨床現場における即時検査、所謂、POCT（Point Of Care Testing)が注目されるようになってきている。
POCTを実現する簡易検査法の一つとして、競合イムノクロマト法を用いたセンサが既に提案されている（特許文献１）。
特許文献１で提案されているイムノクロマトセンサは、バイオピリンを測定するセンサであり、該センサは、
バイオピリンと高分子化合物との結合物を標識物質で標識した標識体を含浸した含浸部材と、
抗ビリルビン抗体を固定した捕捉部位を備えた膜担体と
を備え、
前記含浸部材において試液中に標識体を混合し、試液と標識体との混合液を、前記捕捉部位に向けて前記膜担体にてクロマト展開せしめることにより、前記捕捉部位にて、前記標識体及び前記試液中のバイオピリンを抗ビリルビン抗体と競合的に反応させ、前記標識体及び前記試液中のバイオピリンが捕捉部位にて競合的に捕捉されるように構成されている。
上記した構成により、試液中にバイオピリンが存在しなければ、標識体が、捕捉部位に固定された抗ビリルビン抗体と抗体抗原反応して捕捉されるため、捕捉部位は強く発色し、
試液中にバイオピリンが存在すれば、バイオピリンと標識体とが捕捉部位にて競合的に捕捉されることになるので、捕捉部位の発色は弱くなる。
これにより、試液中のバイオピリンの有無を捕捉部位の色に基づいて目視により判定することが可能になる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００７−２１８５９３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上記した従来の競合イムノクロマトセンサによれば、センサに試液を添加するだけで、目視によって結果を判定することができるので、即時検査用のセンサとして有用である。
しかし、上記した従来の競合イムノクロマトセンサは、試液中の測定対象物質の分子濃度に対して、テストライン（即ち、捕捉部位）のシグナル（即ち、色）が負の相関を示すため、その表示される結果が直感的でなく、使用者が結果の判定を誤って認識することがあるという問題がある。具体的には、特許文献１のセンサでは、試液中のバイオピリンの量が多い程、捕捉部位の色が薄くなり、バイオピリンの量が少ない程、捕捉部位の色が濃くなるため、使用者が捕捉部位の色が濃いからバイオピリンの量が多いと勘違いしてしまう可能性がある。
また、従来の競合イムノクロマト法によれば、測定対象物質の分子濃度は、テストラインの色の濃さによって判断しなければならないところ、人間が色の濃さに基づいて濃度を判定することは非常に困難であり、カットオフ値を決めることが難しく、かつ、狭い濃度範囲での定量は不可能であるという問題があった。
本発明は、上記した従来の問題点を解決し、測定対象物質の分子濃度を直感的に表示することが可能であり、かつ、目視による判定が行い易い競合イムノクロマト分析法及び該分析法を用いたイムノクロマトセンサを提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記した目的を達成するために、本発明に係る競合イムノクロマト分析法は、測定対象物質に対して特異的に反応する標識化抗体と特異的に反応する抗体から成るテキスト抗体を文字又は図形状に膜担体に固定すると共に、測定対象物質と同じ抗原から成るマスク抗原を前記文字又は図形状に固定したテキスト抗体を囲むように膜担体に固定して成る判定部に、測定対象物質を含む試液と前記標識化抗体とを混合した混合液とを供給し、前記判定部において、前記標識化抗体を、測定対象物質、マスク抗原及びテキスト抗体と競合的に結合させることにより、テキスト抗体及びマスク抗原に結合した標識化抗体によるシグナルに基づいて測定対象物質の濃度を判定することを特徴とする。
前記分析法においては、判定部を複数設け、各判定部におけるテキスト抗体の配置量とマスク抗原の配置量との比率を変えることもできる。
前記分析法においては、前記膜担体に、試液の流れ方向に沿って複数の判定部を設け、下流の判定部におけるテキスト抗体に対するマスク抗原の配置量の比率を、上流の判定部におけるテキスト抗体に対するマスク抗原の配置量の比率より低くすることもできる。また、逆に、下流の判定部におけるテキスト抗体に対するマスク抗原の配置量の比率を、上流の判定部におけるテキスト抗体に対するマスク抗原の配置量の比率より高くすることも可能である。
好ましくは、前記テキスト抗体及びマスク抗原は膜担体にインクジェット印刷され得る。
印刷をする場合、使用するテキスト抗体及びマスク抗原の種類に応じて、例えば、膜担体上に先にテキスト抗体を文字又は図形状に印刷した後に、前記テキスト抗体を覆うようにマスク抗原を印刷する方法と、膜担体上に先にマスク抗原を印刷し、次いで、マスク抗原の上にテキスト抗体を文字又は図形状に印刷する方法との何れかを選択することができる。何れの場合にも、テキスト抗体の周囲をマスク抗原が囲むようになる。
また、本発明に係る競合イムノクロマトセンサは、測定対象物質に対して特異的に反応する標識化抗体と特異的に反応する抗体から成るテキスト抗体を文字又は図形状に膜担体に固定すると共に、測定対象物質と同じ抗原から成るマスク抗原を前記文字又は図形状に固定したテキスト抗体を囲むように膜担体に固定して成る判定部を有することを特徴とする。
さらに、本発明に係る競合イムノクロマトセンサは、測定対象物質を含む試液を導入する試液導入部と、前記試液導入部の下流に配置され、測定対象物質に対して特異的に反応する標識化抗体を含有させた標識化抗体含有部と、前記標識化抗体含有部の下流に設けられた少なくとも一つの判定部と、判定部の下流に配置された吸引部とを膜担体の上に配置し、試液導入部に導入された試液が、標識化抗体含有部及び判定部を順に通過して吸引部に流れるように構成された競合イムノクロマトセンサであって、前記判定部が、前記標識化抗体と特異的に反応する抗体から成るテキスト抗体を文字又は図形状に膜担体に固定すると共に、測定対象物質と同じ抗原から成るマスク抗原を前記文字又は図形状に固定したテキスト抗体を囲むように膜担体に固定して成ることを特徴とする。
また、前記判定部を複数設け、各判定部におけるテキスト抗体の配置量とマスク抗原の配置量との比率を変えるように構成してもよい。
さらに、前記判定部を、試液の流れ方向に沿って複数設け、下流の判定部におけるテキスト抗体に対するマスク抗原の配置量の比率が、上流の判定部におけるテキスト抗体に対するマスク抗原の量の比率より低くなるように構成することもできる。さらにまた、下流の判定部におけるテキスト抗体に対するマスク抗原の配置量の比率が、上流の判定部におけるテキスト抗体に対するマスク抗原の量の比率より高くなるように構成することも可能である。
好ましくは、前記テキスト抗体及びマスク抗原は判定部にインクジェット印刷され得る。この場合、テキスト抗体及びマスク抗原の配置量は、印刷回数によって調整することができる。印刷をする場合、使用するテキスト抗体及びマスク抗原の種類に応じて、例えば、膜担体上に先にテキスト抗体を文字又は図形状に印刷した後に、前記テキスト抗体を覆うようにマスク抗原を印刷する方法と、膜担体上に先にマスク抗原を印刷し、次いで、マスク抗原の上にテキスト抗体を文字又は図形状に印刷する方法との何れかを選択することができる。何れの場合にも、テキスト抗体の周囲をマスク抗原が囲むようになる。
【発明の効果】
【０００６】
本発明に係る競合イムノクロマト分析法は、測定対象物質に対して特異的に反応する標識化抗体と特異的に反応する抗体から成るテキスト抗体を文字又は図形状に膜担体に固定すると共に、測定対象物質と同じ抗原から成るマスク抗原を前記文字又は図形状に固定したテキスト抗体を囲むように膜担体に固定して成る判定部に、測定対象物質を含む試液と前記標識化抗体とを混合した混合液とを供給し、前記判定部において、前記標識化抗体を、測定対象物質、マスク抗原及びテキスト抗体と競合的に結合させることにより、テキスト抗体及びマスク抗原に結合した標識化抗体によるシグナルに基づいて測定対象物質の濃度を判定する。
ここで、標識化抗体は、測定対象物質、マスク抗原及びテキスト抗体と夫々特異的に反応するが、測定対象物質とテキスト抗体とは特異的に反応しない。
そのため標識化抗体と試液とを混合した混合液を判定部に供給すると、標識化抗体は、試液中に含まれる測定対象物質、判定部に固定されたマスク抗原及びテキスト抗体と競合的に反応する。
ここで、測定対象物質に結合した標識化抗体は、マスク抗原とは結合できないが、テキスト抗体とは結合できる。また、測定対象物質に結合していない標識化抗体は、マスク抗原及びテキスト抗体の何れにも結合できる。
そして、判定部において、テキスト抗体は文字又は図形を表すようにレイアウトされ、マスク抗原は前記テキスト抗体を囲むようにレイアウトされている。
試液に含まれている測定対象物質が少ない場合、テキスト抗体に結合する標識化抗体の割合は変わらないが、測定対象物質と結合する標識化抗体の量が相対的に少なくなるため、マスク抗原に結合される標識化抗体の量が相対的に多くなる。測定対象物質に結合していない標識化抗体に加えて、測定対象物質と結合した標識化抗体がテキスト抗体に結合するが、測定対象物質と結合する標識化抗体の量が相対的に少なく、かつ、マスク抗原に結合する標識化抗体の量が相対的に多くなるため、判定部全体が発色して、テキスト抗体によって描かれた文字又は図形は見えなくなる。
試液に含まれている測定対象物質が多い場合、テキスト抗体に結合する標識化抗体の割合は変わらないが、測定対象物質と結合する標識化抗体の量は相対的に多くなるため、結果として、テキスト抗体に結合する標識化抗体の量は多くなる。また、測定対象物質と結合した標識化抗体はマスク抗原とは結合できないため、マスク抗原に結合する標識化抗体の量は相対的に少なくなる。測定対象物質に結合していない標識化抗体に加えて、測定対象物質と結合した標識化抗体がテキスト抗体と結合し、かつ、マスク抗原に結合する標識化抗体の量が相対的に少ないため、マスク抗原の部分の発色が弱くなり、テキスト抗体の部分の発色が強くなり、テキスト抗体によって模られた文字等が見えるようになる。
上記したように、本発明に係る競合イムノクロマト分析法によれば、判定部の色の濃淡ではなく、テキスト抗体の部分の色と、マスク抗原の部分の色とのコントラストによって現れる判定部における文字や図形等の見え方によって分析結果を判断することができるので、判定が容易になる。また、判定部に固定するテキスト抗体及びマスク抗原の配置量を調整することによりカットオフをコントロールすることも可能になる。
また、従来の分析法では、テストラインが呈色する場合が陰性、呈色しない場合が陽性と判定するが、陽性の時にテストラインが完全に呈色しないようにするためには、試液中の測定対象物質（検体）濃度がある程度高くなければならず、感度が悪いという欠点があるが、本発明に係る方法によれば、テキスト抗体の部分の色と、マスク抗原の部分の色とのコントラストによって判定ができるため、マスク抗原の部分（マスク部分）がある程度呈色していても、テキスト抗体の部分の呈色により文字が現れることにより陽性と判定することができる。このため、従来の分析法よりも目視によって判定できる測定対象物質の濃度の下限を下げることが可能になる。
また、上記したように、本発明に係る競合イムノクロマト分析法によれば、試液中の測定対象物質の量が多ければ多い程、文字又は図形が見やすくなり、試液中の測定対象物質の量が少なければ文字又は図形が見えにくくなり、試液中に測定対象物質が含有されていなければ文字又は図形は見えなくなるので、測定対象物質の濃度に対して判定結果が正の相関を示すようになり、使用者が判定結果を誤解することがなくなる。
また、前記判定部を複数設け、各判定部におけるテキスト抗体とマスク抗原の配置量の比率を変えることで、同じ試液に対して条件の異なる複数の判定部で分析を行うことが可能になるので、より正確な判定が可能になり、また、条件の異なる複数の判定部における判定結果を用いることでカットオフの設定も容易になる。
この場合、膜担体に、試液の流れ方向に沿って複数の判定部を設け、下流の判定部におけるテキスト抗体に対するマスク抗原の配置量の比率を、上流の判定部におけるテキスト抗体に対するマスク抗原の配置量の比率より低くすること、又は高くすることにより、上流の判定部における文字又は図形の見え方と、下流の判定部における文字又は図形の見え方とを比較して判定を行うことができるようになり、より正確な判定をより簡単に行うことができるようになる。
また、前記テキスト抗体及びマスク抗原を膜担体にインクジェット印刷することにより、製造が極めて容易になる。インクジェット印刷を使用することで、テキスト抗体により描く文字や図形を自由に簡単に選択することが可能になり、また、テキスト抗体及びマスク抗原の配置量も容易に調節することができるようになる。具体的には、例えば、重ね印刷の回数を増やすことで、固定されるテキスト抗体及びマスク抗原の配置量は増えるため、印刷回数によってテキスト抗体及びマスク抗原の密度を調整することができる。
本発明に係る競合マルチイムノクロマトセンサは、測定対象物質に対して特異的に反応する標識化抗体と特異的に反応する抗体から成るテキスト抗体を文字又は図形状に膜担体に固定すると共に、測定対象物質と同じ抗原から成るマスク抗原を前記文字又は図形状に固定したテキスト抗体を囲むように膜担体に固定して成る判定部を有しているので、前記判定部に試液を滴下するだけで、容易に測定対象物質の濃度を知ることができるようになる。
本発明に係る別の競合マルチイムノクロマトセンサは、測定対象物質を含む試液を導入する試液導入部と、前記試液導入部の下流に配置され、測定対象物質に対して特異的に反応する標識化抗体を含有させた標識化抗体含有部と、前記標識化抗体含有部の下流に設けられた少なくとも一つの判定部と、判定部の下流に配置された吸引部とを膜担体の上に配置し、試液導入部に導入された試液が、標識化抗体含有部及び判定部を順に通過して吸引部に流れるように構成された競合イムノクロマトセンサであって、前記判定部が、前記標識化抗体と特異的に反応する抗体から成るテキスト抗体を文字又は図形状に膜担体に固定すると共に、測定対象物質と同じ抗原から成るマスク抗原を前記文字又は図形状に固定したテキスト抗体を囲むように膜担体に固定して成るので、試液を試液導入部から導入するだけで、容易に測定対象物質の濃度を知ることが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】（ａ）は、本発明に係る競合イムノクロマト分析法で使用する測定対象物質、マスク抗原及びテキスト抗体の関係を示す概念図であり、図１（ｂ）はこの分析法を実行するイムノクロマトセンサの判定部の概念図である。
【図２】判定部における標識化抗体の挙動を模式的に表す図である。
【図３】本発明に係るイムノクロマトセンサの第二実施例の概略上面図である。
【図４】図３に示すイムノクロマトセンサの概略側面図である。
【図５】（ａ）はテキスト抗体を１回印刷し、マスク抗原を１回印刷した判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。  （ｂ）はテキスト抗体を１回印刷し、マスク抗原を５回印刷した判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。  （ｃ）はテキスト抗体を１回印刷し、マスク抗原を１０回印刷した判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。
【図６】（ａ）はテキスト抗体を３回印刷し、マスク抗原を１回印刷した判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。  （ｂ）はテキスト抗体を３回印刷し、マスク抗原を５回印刷した判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。  （ｃ）はテキスト抗体を３回印刷し、マスク抗原を１０回印刷した判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。
【図７】（ａ）はテキスト抗体を５回印刷し、マスク抗原を１回印刷した判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。  （ｂ）はテキスト抗体を５回印刷し、マスク抗原を５回印刷した判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。  （ｃ）はテキスト抗体を５回印刷し、マスク抗原を１０回印刷した判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。
【図８】本発明に係るイムノクロマトセンサの第三実施例の概略上面図である。
【図９】図８に示すイムノクロマトセンサの概略側面図である。
【図１０】テキスト抗体及びマスク抗原の量が異なる三つの判定部を用いて、実際に測定対象物質を測定した結果を示す写真である。
【図１１】テキスト抗体及びマスク抗原の配置量が異なる三つの判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて、濃度の異なるサンプルを測定した結果を示す写真である。
【図１２】テキスト抗体及びマスク抗原の配置量が異なる三つの判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて、濃度の異なるサンプルを測定した結果を示す写真である。
【図１３】テキスト抗体及びマスク抗原の配置量が異なる三つの判定部を有する５つのイムノクロマトセンサを用いて、濃度の異なるサンプルを測定した結果を示す写真である。
【図１４】本発明に係るイムノクロマトセンサの第四実施例の概略上面図である。
【図１５】図１４に示すイムノクロマトセンサの概略側面図である。
【図１６】各判定部におけるテキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄの配置量を印刷回数で表す図である。
【図１７】テキスト抗体及びマスク抗原の配置量が異なる三つの判定部及び一つの確認部を有するイムノクロマトセンサを用いて、濃度の異なるサンプルを測定した結果を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下、添付図面に示した一実施例を参照して、本発明に係る競合イムノクロマト分析法及びイムノクロマトセンサの実施の形態について説明していく。
【０００９】
始めに、本発明に係る競合イムノクロマト分析法について説明をしていく。
図１（ａ）は、本発明に係る競合イムノクロマト分析法で使用する測定対象物質、マスク抗原及びテキスト抗体の関係を示す概念図であり、図１（ｂ）はこの分析法を実行するイムノクロマトセンサの判定部の概念図である。
図面に示すように、競合イムノクロマト分析法は、試液中に含まれている測定対象物質Ａの濃度を半定量するために使用される。図１（ｂ）において符号Ｂは、測定対象物質Ａに対して特異的に反応する標識化抗体を示しており、符号Ｃは、前記標識化抗体Ｂに対して特異的に反応する抗体（以下、この明細書ではテキスト抗体と称する。）を示している。テキスト抗体Ｃは、測定対象物質Ａとは反応しないものが選択される。
図１（ｂ）に示すように、判定部には、前記テキスト抗体Ｃが文字又は図形の形態（この実施例では、数字の「１」）で固定されている。そして、判定部におけるテキスト抗体Ｃを囲むように測定対象物質Ａと同一の抗原Ｄが固定されている（以下、この明細書ではマスク抗原Ｄと称する。）。
好ましくは、これらテキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄは、インクジェット印刷され得る。具体的には、例えば、膜担体上に先にテキスト抗体Ｃを任意の形態（この実施例では数字「１」）で印刷した後に、前記テキスト抗体Ｃを覆うようにマスク抗原Ｄを印刷する方法と、膜担体上に先にマスク抗原Ｄを印刷し、次いで、マスク抗原Ｄの上にテキスト抗体Ｃを任意の形態（この実施例では数字「１」）で印刷する方法との何れかを選択することができる。どちらの方法を選択するかは使用するテキスト抗体及びマスク抗原の種類に応じて決めることができるが、何れの場合にも、テキスト抗体の周囲をマスク抗原が囲むようになる。
また、テキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄを固定するためにインクジェット印刷を使用することにより、テキスト抗体Ｃを任意の文字や図形等の形態で固定配置することが容易になる。また、重ね印刷の回数を増やすことで、固定されるテキスト抗体及びマスク抗原の配置量は増えるため、印刷回数によってテキスト抗体及びマスク抗原の密度を調整することができる。
上記した判定部を使用して測定対象物質Ａの濃度を判定する前に、予め、試液に前記標識化抗体Ｂを混合した混合液を作る。
この混合液を判定部に供給すると、標識化抗体Ｂは、試液中に含まれる測定対象物質Ａ、判定部に固定されたマスク抗原Ｄ及びテキスト抗体Ｃと競合的に反応して結合する。ここで測定対象物質Ａと結合していない標識化抗体Ｂはマスク抗原Ｄ及びテキスト抗体Ｃの両方に結合できるが、測定対象物質Ａと結合した標識化抗体Ｂはマスク抗原Ｄとは結合できず、テキスト抗体Ｃのみと結合可能になる。
前記した試液と標識化抗体との混合液を、判定部に滴下すると以下のような現象が生じる。
図２は、判定部における標識化抗体の挙動を模式的に表す図である。
１．試液に含まれている測定対象物質Ａが少ない場合
テキスト抗体Ｃに結合する標識化抗体Ｂの割合は変わらないが、測定対象物質Ａと結合する標識化抗体Ｂの量が相対的に少なくなるため、マスク抗原Ｄに結合される標識化抗体Ｂの量が相対的に多くなる。測定対象物質Ａに結合していない標識化抗体Ｂに加えて、測定対象物質Ａと結合した標識化抗体Ｂがテキスト抗体Ｃに結合するが、測定対象物質Ａと結合する標識化抗体Ｂの量が相対的に少なく、かつ、マスク抗原Ｄに結合する標識化抗体Ｂの量が相対的に多くなるため、判定部全体が発色して、テキスト抗体Ｃによって描かれた文字（本実施例では「１」）は見えない（図２（ａ）参照）。
２．試液に含まれている測定対象物質Ａが多い場合
テキスト抗体Ｃに結合する標識化抗体Ｂの割合は変わらないが、測定対象物質Ａと結合する標識化抗体Ｂの量は相対的に多くなるため、結果として、テキスト抗体Ｃに結合する標識化抗体Ｂの量は多くなる。また、測定対象物質Ａと結合した標識化抗体Ｂはマスク抗原Ｄとは結合できないため、マスク抗原Ｄに結合する標識化抗体Ｂの量は相対的に少なくなる。測定対象物質Ａに結合していない標識化抗体Ｂに加えて、測定対象物質Ａと結合した標識化抗体Ｂがテキスト抗体Ｃと結合し、かつ、マスク抗原Ｄに結合する標識化抗体Ｂの量が相対的に少ないため、マスク抗原Ｂの部分の発色が弱くなり、テキスト抗体Ｃの部分の発色が強くなり、テキスト抗体Ｃによって模られた文字等が見えるようになる（図２（ｂ）参照）。
上記したように、本実施例に係る競合イムノクロマト分析法によれば、判定部の色の呈色の有無ではなく、テキスト抗体Ｃの部分の色と、マスク抗原Ｄの部分の色とのコントラストによって現れる判定部における文字や図形等の見え方によって分析結果を判断することができるので、判定が容易になる。
また、試液中の測定対象物質Ａの量が多ければ多い程、文字又は図形が見やすくなり、試液中の測定対象物質Ａの量が少なければ文字又は図形が見えにくくなり、試液中に測定対象物質Ａが含有されていなければ文字又は図形は見えなくなるので、測定対象物質Ａの濃度に対して判定結果が正の相関を示すようになり、使用者が判定結果を誤解することがなくなる。
【００１０】
次に、上記したように構成された判定部をラテラルフロー構造のイムノクロマトセンサに適用した第二実施例について説明していく。
図３は、本発明に係るイムノクロマトセンサの第二実施例の概略上面図であり、図４は、図３に示すイムノクロマトセンサの概略側面図である。
このマルチイムノクロマトセンサは、一本のストリップ状の膜担体５を有し、この膜担体５の上流端に試液を導入するための試液導入部１が設けられ、該試液導入部１の下流に、具体的には、該試液導入部１と部分的に重なるように標識化抗体含有部２が設けられている。
そして、標識化抗体含有部２のさらに下流には、判定部３が配置され、判定部３の下流には試液吸引パッド４が設けられている。
膜担体５は、例えば、ろ紙（具体的には、ニトロセルロース）で作られたものであり、試液導入部１に試液を滴下すると、試液は毛細管現象によって標識化抗体含有部２に入り、次いで、判定部３を通って試液吸引パッド４に至る。尚、図示していないが、前記判定部３の下流に、標識化抗体Ｂを捕捉可能な抗体を固定した確認部を設けることができる。この確認部は、試液が正常に判定部３を通過しているかを確認するために用いられ得る。
【００１１】
前記標識化抗体含有部２には、測定対象物質Ａに特異的に反応する標識化抗体Ｂが含浸されており、この標識化抗体Ｂは、金コロイドやラテックス等の任意の標識化物質によって標識化されている。
判定部３は、上記した実施例で示した判定部と同じ構成であり、即ち、前記標識化抗体Ｂに対して特異的に反応するテキスト抗体Ｃが文字又は図形の形態で固定され、テキスト抗体Ｃを囲むように測定対象物質Ａと同一の抗原から成るマスク抗原Ｄが固定されている。
上記したように構成された競合イムノクロマトセンサによれば、
試液導入部１から試液を滴下すると、測定対象物質Ａを含む試液は、標識化抗体含有部２に入り、ここで、標識化抗体Ｂが試液に混合される。
標識化抗体Ｂと試液とを混合した混合液は、判定部３に入り、判定部３において、標識化抗体Ｂが、試液に含まれている測定対象物質Ａ、マスク抗原Ｄ及びテキスト抗体Ｃと競合反応する。
試液に含まれている測定対象物質Ａが少ない場合、テキスト抗体Ｃに結合する標識化抗体Ｂの割合は変わらないが、測定対象物質Ａと結合する標識化抗体Ｂの量が相対的に少なくなるため、マスク抗原Ｄに結合される標識化抗体Ｂの量が相対的に多くなる。測定対象物質Ａに結合していない標識化抗体Ｂに加えて、測定対象物質Ａと結合した標識化抗体Ｂがテキスト抗体Ｃに結合するが、測定対象物質Ａと結合する標識化抗体Ｂの量が相対的に少なく、かつ、マスク抗原Ｄに結合する標識化抗体Ｂの量が相対的に多くなるため、判定部３全体が発色して、テキスト抗体Ｃによって描かれた文字又は図形は見えなくなる。
試液に含まれている測定対象物質Ａが多い場合、テキスト抗体Ｃに結合する標識化抗体Ｂの割合は変わらないが、測定対象物質Ａと結合する標識化抗体Ｂの量は相対的に多くなるため、結果として、テキスト抗体Ｃに結合する標識化抗体Ｂの量は多くなる。また、測定対象物質Ａと結合した標識化抗体Ｂはマスク抗原Ｄとは結合できないため、マスク抗原Ｄに結合する標識化抗体Ｂの量は相対的に少なくなる。測定対象物質Ａに結合していない標識化抗体Ｂに加えて、測定対象物質Ａと結合した標識化抗体Ｂがテキスト抗体Ｃと結合し、かつ、マスク抗原Ｄに結合する標識化抗体Ｂの量が相対的に少ないため、マスク抗原Ｄの部分の発色が弱くなり、テキスト抗体Ｃの部分の発色が強くなり、テキスト抗体Ｃによって模られた文字等が見えるようになる。
尚、図示していないが、上記したように構成された競合イムノクロマトセンサは、適当なハウジングに収容される。該ハウジングには、好ましくは、前記判定部３に相当する位置に窓部が形成され、該窓部から判定部３における反応結果を見ることができるように構成され得る。
【００１２】
上記したように構成された本実施例に係る競合イムノクロマトセンサによれば、試液を試液供給部に滴下するだけで、試液中の測定対象物質を半定量することが可能になる。
【００１３】
次に、上記したように構成された競合イムノクロマトセンサを用いて、実際に測定対象物質の測定を行った結果を図５〜図７に示す。これらの測定結果は、判定部におけるテキスト抗体及びマスク抗原の配置量が異なる９種類のイムノクロマトセンサを、それぞれ５個ずつ作成し、５種類の濃度のサンプルを測定した結果である。
この実施例では、先にテキスト抗体Ｃを印刷した後に、テキスト抗体Ｃを覆うようにマスク抗原Ｄを印刷した。
ここでは、テキスト抗体Ｃとして抗ヤギIgGを使用し、マスク抗原としてヒトIgGを使用し、標識化抗体として金コロイドで標識された抗ヒトIgGを使用し、５種類の濃度（０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）のサンプル液中のヒトIgGの測定を行った。
また、各イムノクロマトセンサにおいて、標識化抗体含有部２は、以下の方法で作成したコンジュゲートパッドを使用した。
1.5 mL チューブに金ナノ粒子(753610, ALDRICH)1 mLを入れ、そこに100 μg/mL 抗ヒトIgG(I3382, SIGMA)を含むリン酸バッファPB(pH7.4、10 mM)を100 μL加え１５分間静置した。そこに10%(w/v) 牛血清アルブミンBSA(010-25783, Wako)を含むリン酸バッファPB(pH7.4、10 mM)100 μL及び1% ポリエチレングリコールPEG20000(168-11285, Wako)を含むリン酸バッファPB(pH7.4、10 mM)加え１５分間静置した。これを遠心分離機にかけて(15000 rpm、4 ℃、30 min)上澄み液を除去し、コンジュゲートパッド用バッファ(2%(w/v)牛血清アルブミンBSA及び10%(w/v)スクロースを含むリン酸バッファPB(pH7.4、10 mM))を50 μL加えた。これを、氷水を張った超音波洗浄機を用いて再溶解させ、1つのコンジュゲートパッド（５×８ｍｍ）につき5 μL添加し、その後、乾熱器を用いて３７℃で２時間乾燥させた。
図５（ａ）は、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を用いて「Ｄ」の文字の形態にテキスト抗体Ｃを１回印刷し、かつ、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を用いてマスク抗原を１回印刷して成る判定部３を有するイムノクロマトセンサを５個作成し、それぞれのイムノクロマトセンサで５種類の濃度（０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）のサンプル液を測定した時の判定部３の状態を示している。
図５（ｂ）は、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を用いて「Ｄ」の文字の形態にテキスト抗体Ｃを１回印刷し、かつ、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を用いてマスク抗原を５回印刷して成る判定部３を有するイムノクロマトセンサを５個作成し、それぞれのイムノクロマトセンサで５種類の濃度（０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）のサンプル液を測定した時の判定部３の状態を示している。
図５（ｃ）は、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を用いて「Ｄ」の文字の形態にテキスト抗体Ｃを１回印刷し、かつ、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を用いてマスク抗原を１０回印刷して成る判定部３を有するイムノクロマトセンサを５個作成し、それぞれのイムノクロマトセンサで５種類の濃度（０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）のサンプル液を測定した時の判定部３の状態を示している。
図６（ａ）は、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を用いて「Ｄ」の文字の形態にテキスト抗体Ｃを３回印刷し、かつ、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を用いてマスク抗原を１回印刷して成る判定部３を有するイムノクロマトセンサを５個作成し、それぞれのイムノクロマトセンサで５種類の濃度（０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）のサンプル液を測定した時の判定部３の状態を示している。
図６（ｂ）は、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を用いて「Ｄ」の文字の形態にテキスト抗体Ｃを３回印刷し、かつ、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を用いてマスク抗原を５回印刷して成る判定部３を有するイムノクロマトセンサを５個作成し、それぞれのイムノクロマトセンサで５種類の濃度（０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）のサンプル液を測定した時の判定部３の状態を示している。
図６（ｃ）は、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を用いて「Ｄ」の文字の形態にテキスト抗体Ｃを３回印刷し、かつ、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を用いてマスク抗原を１０回印刷して成る判定部３を有するイムノクロマトセンサを５個作成し、それぞれのイムノクロマトセンサで５種類の濃度（０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）のサンプル液を測定した時の判定部３の状態を示している。
図７（ａ）は、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を用いて「Ｄ」の文字の形態にテキスト抗体Ｃを５回印刷し、かつ、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を用いてマスク抗原を１回印刷して成る判定部３を有するイムノクロマトセンサを５個作成し、それぞれのイムノクロマトセンサで５種類の濃度（０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）のサンプル液を測定した時の判定部３の状態を示している。
図７（ｂ）は、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を用いて「Ｄ」の文字の形態にテキスト抗体Ｃを５回印刷し、かつ、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を用いてマスク抗原を５回印刷して成る判定部３を有するイムノクロマトセンサを５個作成し、それぞれのイムノクロマトセンサで５種類の濃度（０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）のサンプル液を測定した時の判定部３の状態を示している。
図７（ｃ）は、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を用いて「Ｄ」の文字の形態にテキスト抗体Ｃを５回印刷し、かつ、１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を用いてマスク抗原を１０回印刷して成る判定部３を有するイムノクロマトセンサを５個作成し、それぞれのイムノクロマトセンサで５種類の濃度（０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）のサンプル液を測定した時の判定部３の状態を示している。
図５〜図７に示す結果から、判定部に固定するテキスト抗体及びマスク抗原の配置量と、サンプルにおける測定対象物質の濃度との間に相関性があることが分かり、テキスト抗体及びマスク抗原の配置量によってカットオフを決められることが確認できた。
【００１４】
次に、上記したように構成された判定部をラテラルフロー構造の競合イムノクロマトセンサに適用した第三実施例について説明していく。
図８は、本発明に係るイムノクロマトセンサの第三実施例の概略上面図であり、図９は、図８に示すイムノクロマトセンサの概略側面図である。
この実施例では、判定部３ａ〜３ｃが直列に三つ設けられている点を除いて、第二実施例のイムノクロマトセンサと構成は同じであるので、重複する説明は省略する。
三つの判定部３ａ〜３ｃは、テキスト抗体Ｃのレイアウトが異なる。判定部３ａにおいては数字「３」、判定部３ｂにおいては数字「２」、そして判定部３ｃにおいては数字「１」の形態でテキスト抗体Ｃがレイアウトされている。
また、三つの判定部は、固定されているマスク抗原Ｄの配置量が変えてある。即ち、判定部３ａでは、マスク抗原Ｄは、例えば、１０回重ね印刷されており、判定部３ｂではマスク抗原Ｄは、例えば、５回重ね印刷されており、さらに、判定部３ｃではマスク抗原Ｄは、例えば、１回印刷されているだけである。テキスト抗体Ｃは、形態が異なるだけで、全て同じ回数印刷したものとする。これにより、下流に行くに従って、マスク抗原Ｄの配置量が少なくなり、結果として、試液中の測定対象物質Ａの含有量に対する数字の表れ方を三つの判定部３ａ〜３ｃで変えることが可能になる。
即ち、上記したように構成した場合、判定部３ａは測定対象物質Ａの含有量が一定量以上でなければ数字が表れないが、判定部３ｂでは、それより少ない含有量でも数字が表れ、判定部３ｃでは、さらに少ない含有量でも数字が表れる。各判定部３ａ〜３ｃにおいて数字が表れる測定対象物質の含有量を、テキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄの配置量で調整することによって、測定対象物質の含有量を半定量することが可能になる。
上記した実施例では、下流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの配置量の比率を、上流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの配置量の比率より低くしているが、これは、本実施例に限定されることなく、下流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの配置量の比率を、上流の判定部におけるテキスト抗体Ｃに対するマスク抗原Ｄの配置量の比率より高くしてもよい。
このように構成しても、試液中の測定対象物質Ａの含有量に対する数字の表れ方を三つの判定部３ａ〜３ｃで変えることが可能になり、テキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄの配置量で調整することによって、測定対象物質の含有量を半定量することが可能になる。
【００１５】
図１０〜図１３は、テキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄの配置量が異なる三つの判定部を有するイムノクロマトセンサを５つ作成し、濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。図１０、図１１、図１２及び図１３の実施例では、相互に、テキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄの配置量の比率が異なる。
ここでは、テキスト抗体Ｃとして抗ヤギIgGを使用し、マスク抗原としてヒトIgGを使用し、標識化抗体として金コロイドで標識された抗ヒトIgGを使用し、サンプル液中のヒトIgGの濃度を変えて実験を行った。
この実施例では、先にテキスト抗体Ｃを印刷した後に、テキスト抗体Ｃを覆うようにマスク抗原Ｄを印刷した。
標識化抗体含有部２を構成するコンジュゲートパッドは、図５〜図７に示した実施例のコンジュゲートパッドと同じものを使用した。
判定部３に固定するテキスト抗体Ｃの量及びマスク抗原Ｄの量は、インクジェット印刷の重ね印刷回数を変えることで調整した。
テキスト抗体Ｃは１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を使用して、「１」「２」及び「３」の形態で印刷を行った。
マスク抗原Ｄは１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を使用した。
測定対象物質としてのヒトIgGの濃度が０のサンプル、１μｇ／ｍＬのサンプル、５μｇ／ｍＬのサンプル、１０μｇ／ｍＬのサンプル及び５０μｇ／ｍＬのサンプルを使用した。
図１０は、全ての判定部３ａ〜３ｃに対してテキスト抗体を１回印刷し、最上流にある判定部３ａに対してはマスク抗原を１０回重ね印刷し、二番目の判定部３ｂに対してはマスク抗原を５回重ね印刷し、最下流にある判定部３ｃに対してはマスク抗原を１回印刷した判定部を有するイムノクロマトセンサを５つ作成し、これらのセンサを用いて、濃度０のサンプル、１μｇ／ｍＬのサンプル、５μｇ／ｍＬのサンプル、１０μｇ／ｍＬのサンプル及び５０μｇ／ｍＬのサンプルを測定した結果を示している。
図１１は、全ての判定部３ａ〜３ｃに対してテキスト抗体を３回印刷し、最上流にある判定部３ａに対してはマスク抗原を１０回重ね印刷し、二番目の判定部３ｂに対してはマスク抗原を５回重ね印刷し、最下流にある判定部３ｃに対してはマスク抗原を１回印刷した判定部を有するイムノクロマトセンサを５つ作成し、これらのセンサを用いて、濃度０のサンプル、１μｇ／ｍＬのサンプル、５μｇ／ｍＬのサンプル、１０μｇ／ｍＬのサンプル及び５０μｇ／ｍＬのサンプルを測定した結果を示している。
図１２は、全ての判定部３ａ〜３ｃに対してテキスト抗体を５回印刷し、最上流にある判定部３ａに対してはマスク抗原を１０回重ね印刷し、二番目の判定部３ｂに対してはマスク抗原を５回重ね印刷し、最下流にある判定部３ｃに対してはマスク抗原を１回印刷した判定部を有するイムノクロマトセンサを５つ作成し、これらのセンサを用いて、濃度０のサンプル、１μｇ／ｍＬのサンプル、５μｇ／ｍＬのサンプル、１０μｇ／ｍＬのサンプル及び５０μｇ／ｍＬのサンプルを流した結果を示している。
図１３は、判定部３ａに対してはテキスト抗体を１回印刷し、マスク抗原を１０回重ね印刷し、判定部３ｂに対してはテキスト抗体を３回重ね印刷し、マスク抗原を５回重ね印刷し、さらに、判定部３ｃに対してはテキスト抗体を５回重ね印刷し、マスク抗原を１回印刷した判定部を有するイムノクロマトセンサを５つ作成し、これらのセンサを用いて、濃度０のサンプル、１μｇ／ｍＬのサンプル、５μｇ／ｍＬのサンプル、１０μｇ／ｍＬのサンプル及び５０μｇ／ｍＬのサンプルを測定した結果を示している。
【００１６】
図１０〜図１３に示すように、テキスト抗体及びマスク抗原の配置量を調整することにより、測定対象物質Ａの濃度が異なる試液を識別して判別することが可能になることが確認できた。これにより、測定対象物質Ａの濃度の半定量が可能になることが確認できた。
【００１７】
尚、上記した説明では、ヒトIgGを測定対象物質として説明をしているが、測定対象物質は本実施例に限定されることなく、任意の対象物質でよく、例えば、8-OHdGを測定することができることは勿論である。尚、8-OHdGを測定する場合には、標識化抗体として抗8-OHdG（ラット由来）が使用され、テキスト抗体として、例えば、抗ラットIgGが使用され、マスク抗原として8-OHdG/BSA複合体が使用され得る。また、8-OHdGを測定するための判定部を作成する場合には、先にマスク抗原を印刷し、その上にテキスト抗体が印刷され得る。
【００１８】
以下に、8-OHdGを測定するように構成された判定部をラテラルフロー構造の競合イムノクロマトセンサに適用した第四実施例について説明していく。
図１４は本発明に係るイムノクロマトセンサの第四実施例の概略上面図であり、図１５は図１４に示すイムノクロマトセンサの概略側面図、図１６は各判定部におけるテキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄの配置量を印刷回数で表す図である。
この実施例では、直列に配置した判定部３ａ〜３ｃの下流に確認部６を設けている点を除いて、基本的な構造は第三実施例のイムノクロマトセンサと構成は同じであるので、重複する説明は省略する。
この実施例では、先にマスク抗原Ｄを印刷した後に、マスク抗原Ｄの上にテキスト抗体Cを印刷した。
ここでは、テキスト抗体Ｃとして抗ラットIgGを使用し、マスク抗原として8-OHdG / BSA conjugateを使用し、標識化抗体として金コロイドで標識された抗8-OHdGを使用し、4種類の濃度（0 ng/mL、5 ng/mL、 10 ng/mL及び25 ng/mL）のサンプル液中の8-OHdGの測定を行った。
また、標識化抗体含有部２は、以下の方法で作成したコンジュゲートパッドを使用した。
2 mL チューブに金ナノ粒子(753637, Sigma-Aldrich)1 mLを入れ、そこに40 μg/mL 抗8-OHdGを100 μL加え30分間震とうした。そこに10%(w/v) 牛血清アルブミンBSA(010-25783, Wako) 100 μL及び1(w/v)% ポリエチレングリコールPEG20000(168-11285, Wako) 50 μL加え１0分間震とうした。これにコンジュゲートパッド用保存バッファ（0.05%(w/v) ポリエチレングリコールPEG20000、1%(w/v)BSA、0.1%(w/v)アジ化ナトリウム及び150 mM 塩化ナトリウムを含むトリス-塩酸バッファ(pH8.2、20 mM)）を450 μL加えた。これを遠心分離機にかけて(2500 g、4 ℃、30 min)上澄み液を除去し、コンジュゲートパッド用塗布バッファ(0.05%(w/v) ポリエチレングリコールPEG20000、5%(w/v)スクロース及び150 mM 塩化ナトリウムを含むトリス-塩酸バッファ(pH8.2、20 mM))を75 μL及び超純水を33 μL加えた。これを、ボルテックスミキサを用いて再溶解させ、1つのコンジュゲートパッド（５×８ｍｍ）につき25 μL添加し、その後、乾熱器を用いて３７℃で２時間乾燥させた。
三つの判定部３ａ〜３ｃ及び一つの確認部６は、テキスト抗体Ｃのレイアウトが異なる。判定部３ａにおいては「Ｌｏ」、判定部３ｂにおいては「Ｍｄ」、判定部３ｃにおいては「Ｈｉ」、そして確認部６においては「Ｔｒ」の形態でテキスト抗体Ｃがレイアウトされている。
また、三つの判定部及び一つの確認部では、固定されているテキスト抗体Ｃ配置量が変えてある。即ち、判定部３ａでは、テキスト抗体Ｃは、例えば、１４回重ね印刷されており、判定部３ｂではテキスト抗体Ｃは、例えば、１０回重ね印刷されており、判定部３ｃでは、テキスト抗体Ｃは、例えば、６回印刷されており、さらに、確認部６では、テキスト抗体Ｃは、例えば、２０回印刷されている。
また、三つの判定部３ａ〜３ｃは、固定されているマスク抗原Ｄの配置量が変えてある。即ち、判定部３ａでは、マスク抗原Ｄは、例えば、１０回重ね印刷されており、判定部３ｂではマスク抗原Ｄは、例えば、１５回重ね印刷されており、さらに、判定部３ｃではマスク抗原Ｄは、例えば、２０回印刷されている。
これにより、下流に行くに従って、マスク抗原Ｄに対するテキスト抗体Ｃの配置量が少なく、結果として、試液中の測定対象物質Ａの含有量に対するテキストの表れ方を三つの判定部３ａ〜３ｃで変えることが可能になる。
即ち、上記したように構成した場合、判定部３cは測定対象物質Ａの含有量が一定量以上でなければテキストが表れないが、判定部３ｂでは、それより少ない含有量でもテキストが表れ、判定部３aでは、さらに少ない含有量でもテキストが表れる。一方で、確認部６では、測定対象物質Ａの含有量に関わらずテキストが表れる。各判定部３ａ〜３ｃにおいてテキストが表れる測定対象物質の含有量を、テキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄの配置量で調整することによって、測定対象物質の含有量を半定量することが可能になる。
【００１９】
図１７は、テキスト抗体Ｃ及びマスク抗原Ｄの配置量が異なる三つの判定部３ａ〜３ｃ及び一つの確認部６を有するイムノクロマトセンサを４つ作成し、濃度の異なるサンプルを測定した結果を示している。イムノクロマトセンサの基本的構成は図１４〜図１６で説明した構成と同一であるため、図１７では三つの判定部３ａ〜３ｃ及び一つの確認部６に対応する部分のみを示している。
ここでは、テキスト抗体Ｃとして抗ラットIgGを使用し、マスク抗原Dとして8-OHdG / BSA conjugateを使用し、標識化抗体として金コロイドで標識された抗8-OHdGを使用し、サンプル液中の8-OHdGの濃度を変えて実験を行った。
この実施例では、先にマスク抗原Ｄを印刷した後に、マスク抗原Ｄの上にテキスト抗体Cを印刷した。
標識化抗体含有部２を構成するコンジュゲートパッドは、図１４〜図１６に示した実施例のコンジュゲートパッドと同じものを使用した。
判定部３に固定するテキスト抗体Ｃの量及びマスク抗原Ｄの量は、インクジェット印刷の重ね印刷回数を変えることで調整した。
テキスト抗体Ｃは１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体が固定されるインクジェット印刷を使用して、「Tr」「Hi」「Md」及び「Lo」の形態で印刷を行った。
マスク抗原Ｄは１回の印刷で０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗原が固定されるインクジェット印刷を使用した。
測定対象物質としての8-OHdGの濃度が０のサンプル、５ nｇ／ｍＬのサンプル、１０ nｇ／ｍＬのサンプル及び２５ nｇ／ｍＬのサンプルを使用した。
判定部３ａに対してはテキスト抗体を１４回重ね印刷し、マスク抗原を１０回重ね印刷し、判定部３ｂに対してはテキスト抗体を１０回重ね印刷し、マスク抗原を１５回重ね印刷し、判定部３ｃに対してはテキスト抗体を６回重ね印刷し、マスク抗原を２０回重ね印刷し、さらに、確認部６に対してはテキスト抗体を２０回重ね印刷した判定部を有するイムノクロマトセンサを４つ作成し、これらのセンサを用いて、濃度が０のサンプル、５ nｇ／ｍＬのサンプル、１０ nｇ／ｍＬのサンプル及び２５ nｇ／ｍＬのサンプルを測定した結果を示している。
図１７に示すように、テキスト抗体及びマスク抗原の配置量を調整することにより、測定対象物質Ａとしての8-OHdGの濃度が異なる試液を識別して判別することが可能になることが確認できた。これにより、測定対象物質Ａとしての8-OHdGの濃度の半定量が可能になることが確認できた。
【符号の説明】
【００２０】
Ａ  測定対象物質
Ｂ  標識化抗体
Ｃ  テキスト抗体
Ｄ  マスク抗原
１  試液導入部
２  標識化抗体含有部
３  判定部
４  吸引部
５  膜担体
６  確認部
【図１】
2019221250.tif 000003
【図２】
2019221250.tif 000004
【図３】
2019221250.tif 000005
【図４】
2019221250.tif 000006
【図５】
2019221250.tif 000007
【図６】
2019221250.tif 000008
【図７】
2019221250.tif 000009
【図８】
2019221250.tif 000010
【図９】
2019221250.tif 000011
【図１０】
2019221250.tif 000012
【図１１】
2019221250.tif 000013
【図１２】
2019221250.tif 000014
【図１３】
2019221250.tif 000015
【図１４】
2019221250.tif 000016
【図１５】
2019221250.tif 000017
【図１６】
2019221250.tif 000018
【図１７】
2019221250.tif 000019
【国際調査報告】
2019221250.tif 000020
2019221250.tif 000021
2019221250.tif 000022
2019221250.tif 000023