(57)【要約】  高濃度かつ高純度なエイコサペンタエン酸含有組成物の提供。エイコサペンタエン酸アルキルエステル含有組成物の製造方法であって、（１）エイコサペンタエン酸アルキルエステルを含有する原料油を、銀塩を含む水溶液と接触させた後、水層を回収すること；（２）該水層に有機溶媒を添加した後、有機溶媒層を回収すること；及び、（３）該有機溶媒層を、温度１８０〜１８８℃、塔頂真空度０．７Ｐａ以下で真空蒸留して、該有機溶媒層からエイコサペンタエン酸アルキルエステルを回収すること、を含む方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
エイコサペンタエン酸アルキルエステル含有組成物の製造方法であって、
（１）エイコサペンタエン酸アルキルエステルを含有する原料油を、銀塩を含む水溶液と接触させた後、水層を回収すること；
（２）該水層に有機溶媒を添加した後、有機溶媒層を回収すること；及び
（３）該有機溶媒層を、温度１８０〜１８８℃、塔頂真空度０．７Ｐａ以下で真空蒸留して、該有機溶媒層からエイコサペンタエン酸アルキルエステルを回収すること、
を含む、方法。
【請求項２】
前記エイコサペンタエン酸アルキルエステル含有組成物が、エイコサペンタエン酸のアルキルエステルの含有量が９５面積％以上であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が、それぞれ０．１面積％以下である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記エイコサペンタエン酸アルキルエステル含有組成物が、前記(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．１面積％以下であり、前記(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０７面積％以下であり、前記(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が０．０９面積％以下である、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記真空蒸留の温度が１８５〜１８８℃である、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
前記原料油が、含有する全脂肪酸中にエイコサペンタエン酸を４０面積％以上含有する、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
エイコサペンタエン酸のアルキルエステルの含有量が９５面積％以上であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が、それぞれ０．１面積％以下である、エイコサペンタエン酸アルキルエステル含有組成物。
【請求項７】
前記(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．１面積％以下であり、前記(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０７面積％以下であり、前記(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が０．０９面積％以下である、請求項６記載の組成物。
【請求項８】
エイコサペンタエン酸アルキルエステル含有組成物の純度を測定する方法であって、該組成物における、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルからなる群より選択される少なくとも１種の物質の含有量を測定することを含む、方法。
【請求項９】
エイコサペンタエン酸アルキルエステルの含有量を測定することをさらに含む、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、又は(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステル。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エイコサペンタエン酸アルキルエステル含有組成物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）やドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの高度不飽和脂肪酸（ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ、ＰＵＦＡ）は、近年その薬理効果が明らかになり、医薬品や健康食品の原料として利用されている。ＰＵＦＡは二重結合を複数有するために、化学合成によって得ることは容易でない。工業利用されるＰＵＦＡのほとんどは、ＰＵＦＡを豊富に含む生物由来の油脂原料、例えば魚油などから抽出又は精製することによって製造されている。【０００３】
しかしながら、生物由来の油脂原料は、炭素数、二重結合の数や位置、さらには立体異性体の構成比が異なる多種の脂肪酸の混合物であり、ＰＵＦＡの含有量は必ずしも高くない。さらに、生物由来油脂原料から精製されたＰＵＦＡには、該油脂原料に由来する、又は精製過程での加熱処理などによって生じた種々の微量不純物が含まれている。そのような不純物のなかには、例えば、アラキドン酸、飽和脂肪酸、ＰＵＦＡトランス異性体等の心血管イベントに対して好ましくない脂肪酸や、環境ホルモン等の環境汚染物質などの生体に悪影響を及ぼす物質が含まれ得る。したがって、医薬品や健康食品の原料として、ＰＵＦＡを高濃度に含むだけでなく、生体に悪影響を及ぼす不純物の含有量が可能な限り低い高純度なＰＵＦＡ含有組成物が求められている。【０００４】
これまでに、高純度なＰＵＦＡ含有組成物の製造方法が開示されている。特許文献１には、ＰＵＦＡを構成脂肪酸として含有する原料油から、薄膜蒸留によって、ポリ塩化ジベンゾパラジオキシン（PCDD）、ポリ塩化ジベンゾフラン（PCDF）等の環境汚染物質を除去することを含む、環境汚染物質の含有量が低減されたＰＵＦＡエチルエステルを製造する方法が記載されている。特許文献２には、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物に対して、０．２Ｔｏｒｒ、１９０℃以下での精密蒸留の後、クロマトグラフィーを用いた濃縮処理を行うことを含む、アラキドン酸エステル及びＥＰＡアルキルエステルのモノトランス体の含有量が一定量以下である高濃度ＥＰＡアルキルエステル含有組成物を製造する方法が記載されている。特許文献３には、油組成物を水性流体処理した後、短工程蒸留等のストリッピング処理にかけることにより、油組成物中の好ましくない成分、例えばタンパク質性化合物等の親水性成分や、環境汚染物質、コレステロール等の親油性成分を除去する方法が記載されている。特許文献４には、魚油をアルカリ、次いで活性白土に接触させた後、減圧水蒸気蒸留等により１５０〜２３０℃の魚油に水蒸気を接触させて脱臭処理することを含む、精製魚油の製造方法が記載されている。特許文献５には、高度不飽和脂肪酸のアルキルエステル体を、銀塩を含む水性溶液と接触させた後に、１７０〜１９０℃、塔頂真空度１Ｐａ以下で真空蒸留することで、トランス異性体の含有量が極めて低いＰＵＦＡアルキルエステル含有組成物を製造したことが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開公報第２０１３／１７２３４６号
【特許文献２】国際公開公報第２０１６／０４３２５１号
【特許文献３】特表２０１６−５０２５７３号公報
【特許文献４】特開２０１５−１０５３５４号公報
【特許文献５】国際公開公報第２０１４／０５４４３５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者の研究により、従来の方法（例えば特許文献５に記載の方法）で製造されたＥＰＡ含有組成物が未知の不純物質を含有すること、及びこれらの不純物質が、これまで知られていない新規なＥＰＡの類縁物質であることが見出された。該不純物質は未知の物質であったため、該不純物質に着目してＥＰＡを精製することは従来行われていなかった。また該不純物質は、ＥＰＡと化学構造が類似しているため、ＥＰＡ含有組成物からの除去が極めて困難である。これらの理由により、該不純物質は、それらの存在を知られることなく従来のＥＰＡ含有組成物中に含まれていたのであろうと推定された。これらの不純物質を除去することで、ＥＰＡ含有組成物の純度をさらに向上させることができる。【０００７】
本発明は、上述した従来未知のＥＰＡの類縁物質が除去された、高濃度かつ高純度なＥＰＡ含有組成物、及びその製造方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、本発明は、エイコサペンタエン酸アルキルエステル含有組成物の製造方法であって、
（１）エイコサペンタエン酸アルキルエステルを含有する原料油を、銀塩を含む水溶液と接触させた後、水層を回収すること；
（２）該水層に有機溶媒を添加した後、有機溶媒層を回収すること；及び
（３）該有機溶媒層を、温度１８０〜１８８℃、塔頂真空度０．７Ｐａ以下で真空蒸留して、該有機溶媒層からエイコサペンタエン酸アルキルエステルを回収すること、
を含む方法、を提供する。
また本発明は、エイコサペンタエン酸のアルキルエステルの含有量が９５面積％以上であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が、それぞれ０．１面積％以下である、エイコサペンタエン酸アルキルエステル含有組成物を提供する。
また本発明は、エイコサペンタエン酸アルキルエステル含有組成物の純度を測定する方法であって、該組成物における、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルからなる群より選択される少なくとも１種の物質の含有量を測定することを含む方法、を提供する。
また本発明は、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、又は(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルを提供する。
【発明の効果】
【０００９】
生体に悪影響を及ぼす可能性のある脂肪酸の含有量ができるだけ少ない、高濃度かつ高純度なＥＰＡ含有組成物は、医薬品や健康食品の原料として有用である。本発明によれば、従来不純物として除去されていたアラキドン酸等に加えて、これまで不純物として認識されていなかったＥＰＡの類縁物質の濃度が低減された、より高濃度かつ高純度なＥＰＡ含有組成物が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、従来のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）アルキルエステル含有組成物に含まれていた未知の不純物質に関する。
【００１１】
生体に悪影響を及ぼす可能性のある脂肪酸やトランス異性体等の不純物の含有量ができるだけ少ない、高濃度かつ高純度なエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）含有組成物は、医薬品や健康食品の原料として有用である。本発明者は、より高純度なＥＰＡ含有組成物を探求すべく、従来のＥＰＡ含有組成物に含まれている不純物の検出及び同定を行った。その結果、本発明者は、従来の方法（例えば、特許文献５に記載の方法）で得られるＥＰＡアルキルエステル含有組成物に、以下に記載する従来未知の不純物質が含まれていることを見出した：
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、
(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステル。
これら３つの物質は、いずれもＥＰＡの類縁物質であり、かつ従来知られていない新規物質であった。以下の本明細書において、これら３つの物質をまとめて、本発明の不純物質とも称する。本発明の不純物質は、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物から分離されたものであり得る。本発明の不純物質は、ＥＰＡと構造が類似しているために従来のＥＰＡの精製方法ではＥＰＡと分離することが極めて困難であり、それが、これまでに本発明の不純物質が分離又は同定されていなかった理由であろうと推定された。
【００１２】
さらに本発明者は、より高純度のＥＰＡ含有組成物を製造するために、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物から本発明の不純物質を除去する方法について研究を重ね、改良されたＥＰＡアルキルエステル含有組成物の製造方法を開発した。
【００１３】
したがって、本発明の一態様は、本発明の不純物質の含有量が低減されたＥＰＡアルキルエステル含有組成物の製造方法に関する。また本発明の別の一態様は、当該製造方法によって製造された、本発明の不純物質の含有量が低減されたＥＰＡアルキルエステル含有組成物に関する。
【００１４】
本発明の製造方法において、ＥＰＡアルキルエステルを含有する組成物の原料油は、ＥＰＡを含有する生物由来の油脂から調製され得る。当該生物由来油脂の例としては、魚類等の海産動物やプランクトン由来の油脂、藻類等の微生物由来の油脂などが挙げられ、中でもイワシ、サバ、マグロ等の魚類由来の油脂、及び藻類由来の油脂が好ましい例として挙げられる。これらの生物由来油脂は、主に、１分子のグリセリンに３分子の脂肪酸が結合したトリグリセリドの形態で脂肪酸を含有する。また少量ではあるが、ジグリセリドやモノグリセリド、遊離脂肪酸を含有し得る。
【００１５】
当該生物由来油脂は、含有する全脂肪酸中に、ＥＰＡを２０面積％以上含有する油脂であることが好ましい。ＥＰＡは、該生物由来油脂中に遊離脂肪酸の形態で存在していてもよく、又はモノ、ジもしくはトリグリセリドの脂肪酸鎖の形態で存在していてもよい。油脂における全脂肪酸中の各構成脂肪酸の比率は、後述する条件でのガスクロマトグラフィーにより測定することができる。
【００１６】
当該生物由来油脂は、含まれるＥＰＡをアルキルエステル化し、必要に応じてＥＰＡを濃縮することで、本発明の製造方法における原料油として調製される。ＥＰＡアルキルエステルは、例えば、ＥＰＡを含有する油脂と所望のアルキル基を有する酸とを公知の方法によりエステル化反応させることにより製造することができる。あるいは、該生物由来油脂に含まれるグリセリド中のＥＰＡを、触媒又は酵素の存在下で低級アルコールと反応させてアルキルエステル化することにより、ＥＰＡアルキルエステルを得ることができる。アルキルエステル化の程度は高いほど好適であり、該原料油中に含まれる目的のＰＵＦＡ（遊離体を含む）の全量のうち、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上がアルキルエステル化されているとよい。該ＥＰＡのアルキルエステルを構成するアルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基が挙げられ、好ましくはメチル基又はエチル基であり、より好ましくはエチル基である。
【００１７】
当該原料油として用いられるＥＰＡアルキルエステルを含有する油脂としては、市販されている油脂を用いてもよい。ＥＰＡのアルキルエステルを高含量で得るという観点からは、含有するＥＰＡの量が規格化された市販の魚油由来の油脂を用いることが好ましい。本発明の製造方法で用いられる該原料油は、含有する全脂肪酸中に、ＥＰＡを４０面積％以上含有する油脂であることが好ましい。本発明の製造方法においては、全脂肪酸中のＥＰＡ含有量が４０面積％以上である原料油を用いることにより、最終的に、ＥＰＡを高濃度に含む組成物を効率よく得ることができる。
【００１８】
本発明のＥＰＡアルキルエステル含有組成物の製造方法の各工程において、上述した原料油は、液体の形態で適用されることが好ましい。当該原料油は、各工程での反応温度において液体の形態である場合は、そのまま本発明の各工程に適用され得る。各工程での反応温度において固体の形態である場合は、当該原料油は、適宜有機溶媒や他の油に溶解又は希釈して適用され得る。該有機溶媒としては、下記工程（１）を遂行するために、水と分離可能な有機溶媒が使用され、例えば、酢酸エチル、クロロホルム、四塩化炭素、ジエチルエーテル、ヘキサン等が挙げられる。
【００１９】
本発明のＥＰＡアルキルエステル含有組成物の製造方法は、以下を含む：
（１）ＥＰＡアルキルエステルを含有する原料油を、銀塩を含む水溶液と接触させた後、水層を回収すること；
（２）該水層に有機溶媒を添加した後、有機溶媒層を回収すること；及び
（３）該有機溶媒層を、温度１８０〜１８８℃、塔頂真空度０．７Ｐａ以下で真空蒸留して、該有機溶媒層からＥＰＡアルキルエステルを回収すること。
【００２０】
本発明の製造方法において、当該（１）及び（２）の工程は、高度不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）の炭素−炭素二重結合部に銀塩が錯体を形成することにより、ＥＰＡを含むＰＵＦＡアルキルエステルの抽出溶媒への溶解性が変わることを利用して、原料油からＥＰＡアルキルエステルを分離精製する工程である。より詳細には、該工程（１）は、ＥＰＡアルキルエステルを含む原料油を、銀塩を含む水性溶液と接触させた後、水層を回収する工程である。該工程は、例えば、特許第２７８６７４８号公報、特許第２８９５２５８号公報、特許第２９３５５５５号公報、特許第３００１９５４号公報等に記載されている方法に従って行うことができる。
【００２１】
より詳細には、上述したＥＰＡアルキルエステルを含む原料油に、銀塩を含む水性溶液を添加し、５分〜４時間、好ましくは１０分〜２時間程度攪拌する。このときの反応温度は、当該工程（１）の生成物が完全に液体となる温度を上限とし、例えば約８０℃以下であり、一方、下限として５℃以上とすることが好ましい。より好ましくは、反応温度は室温（２０〜３０℃）付近である。当該反応により、銀−ＥＰＡの錯体が生成される。当該錯体は、水性溶液の層に溶解するので、溶液から水層を回収することによってＥＰＡを選択的に回収することができる。
【００２２】
当該銀塩としては、ＰＵＦＡの不飽和結合と錯体を形成し得るものであれば特に制限されず、硝酸銀、過塩素酸銀、四フッ化ホウ素酸銀、酢酸銀等を用いることができる。このうち、硝酸銀が好ましい。水性溶液の溶媒としては、水、又は水とグリセリンやエチレングリコール等の水酸基を有する化合物との混合媒体が挙げられるが、好ましくは水が用いられる。水性溶液中の銀塩濃度は、０．１ｍｏｌ／Ｌ以上であればよいが、好ましくは１〜２０ｍｏｌ／Ｌ程度とする。ＰＵＦＡと銀塩とのモル比は、１：１００〜１００：１、好ましくは１：５〜１：１程度である。
【００２３】
本発明の製造方法の工程（２）は、上記工程（１）で回収した水層に有機溶媒を添加して、該水層中のＥＰＡアルキルエステルを有機溶媒層に抽出させた後、該ＥＰＡアルキルエステルを含む有機溶媒層を回収する工程である。該工程は、例えば、特許第２７８６７４８公報、特許第２８９５２５８公報、特許第２９３５５５５公報、特許第３００１９５４公報等に記載されている方法に従って行うことができる。
【００２４】
当該水層に添加する有機溶媒としては、ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、キシレン等の、ＰＵＦＡへの溶解性が高く、かつ水と分離可能な溶媒が挙げられる。好ましくは、有機溶媒を添加した溶液（反応液）を、上記工程（１）での反応温度、すなわち上記銀−ＥＰＡの錯体の生成温度よりも高い温度になるよう加温する。より好ましくは工程（１）での反応温度、すなわち該錯体の生成温度よりも２０℃以上高い温度にする。例えば、上記工程（１）にて錯体を室温で生成させた場合、工程（２）での反応液の温度は、好ましくは４０℃以上、より好ましくは５０〜８０℃程度にするとよい。ＥＰＡアルキルエステルの有機溶媒層への抽出反応の時間は、１０分〜６時間、好ましくは３０分〜２時間とするとよく、また反応中には溶液を攪拌するとよい。次いで、水層を除去し、ＥＰＡアルキルエステルを含有する有機溶媒層を回収する。または回収した有機溶媒層をさらにシリカゲル、活性炭、二酸化ケイ素などの吸着剤に通液することにより、残留する銀イオンをさらに除去してもよい。
【００２５】
一実施形態において、上記工程（１）及び（２）は、上述したように原料油と水性溶液、又は水性溶液と有機溶媒とをバッチで混合する代わりに、ＷＯ２０１７／１９１８２１に記載される方法に従って行われてもよい。すなわち、銀塩を含む水性溶液の液滴を、第一反応槽中のＥＰＡアルキルエステルを含有する原料油中に通過させることで、該水性溶液を原料油と接触させて銀−ＥＰＡの錯体を含む水性溶液を生成させ、これを回収する。続いで、回収した銀−ＥＰＡの錯体を含む水性溶液の液滴を、第二反応槽中の有機溶媒中に通過させることで、ＥＰＡアルキルエステルを該有機溶媒中に抽出させ、次いで該ＥＰＡアルキルエステルを含む有機溶媒層を回収する。好ましくは、該水性溶液の液滴の原料油中の通過と、銀−ＥＰＡの錯体を含む水性溶液の回収は、及び／又は該銀−ＥＰＡの錯体を含む水性溶液の液滴の有機溶媒中の通過と、ＥＰＡアルキルエステルを含む有機溶媒層の回収は、該第一及び／又は第二反応槽に随時、水性溶液及び必要に応じて原料油又は有機溶媒を添加しながら、並行して、かつ好ましくは連続的に実施される。該第一及び第二反応槽中での水性溶液の通過時間（原料油又は有機溶媒との接触時間）は、水性溶液と原料油又は有機溶媒との比重差、及び原料油又は有機溶媒の容積（反応槽のサイズ）に従って制御され得るが、反応槽における水性溶液、及び必要に応じて原料油又は有機溶媒の流速や流量をポンプ等で制御することによっても制御され得る。該第一及び第二反応槽中の液体の温度は、それぞれ上述した工程（１）及び（２）の反応液の温度と同様でよい。さらに本実施形態では、有機溶媒と接触させた後の銀塩を含む水性溶液を繰り返し再利用し、再び原料油との接触に用いることができる。したがって、本実施形態では、銀塩を含む水性溶液の使用量を、上述した原料油に銀塩を含む水性溶液をまとめて添加し攪拌する方法と比べて１／２〜１／２０程度に減量することが可能である。
【００２６】
本発明の製造方法の工程（３）は、工程（２）で得られた有機溶媒層を真空蒸留し、目的のＥＰＡアルキルエステルを回収する工程である。より詳細には、工程（２）で得られたＥＰＡアルキルエステルを含有する有機溶媒層から、沸点の差により、目的とするＥＰＡアルキルエステルを選択的に回収する。
【００２７】
工程（３）の真空蒸留のためには、充填式、スプリング式、棚段式等の公知の方式による真空蒸留装置を用いることができ、また連続蒸留方式を採用してもよい。一方、本発明の方法における真空蒸留の条件は、従来の真空蒸留法（例えば特許文献５に記載の方法）と比べて、より低い圧力かつより制限された範囲の温度に設定される。すなわち、本発明の方法において、工程（３）の真空蒸留の条件は、蒸留機の塔頂真空度が０．７Ｐａ以下であり、蒸留温度が１８０〜１８８℃、好ましくは１８５〜１８８℃である。塔頂真空度が０．７Ｐａを超えると、本発明の不純物質との分離が悪くなり、高純度ＥＰＡアルキルエステルの回収が困難になる。また、蒸留温度が１８０℃未満であるとＥＰＡの濃縮や本発明の不純物質の除去のために必要な蒸留時間が長くなり、他方１８８℃を超えると、エネルギーコストが上がる割に蒸留効率は上がらず、コスト高になる。本工程における蒸留温度とは、ＥＰＡアルキルエステルを含有する有機溶媒層の温度として表される。
【００２８】
上記真空蒸留工程で得られたＥＰＡアルキルエステルを含む留分は、還流されて、再度上記の条件での真空蒸留に供されてもよい。
【００２９】
本発明のＥＰＡアルキルエステル含有組成物の製造方法においては、上記各工程を（１）→（２）→（３）の順序で行う。この順序を変更すると、目的のＥＰＡを高含有し、かつ本発明の不純物質の比率が充分に低い組成物を得ることはできない。特に、工程（３）を工程（１）又は（２）よりも先に行うと、目的のＥＰＡを高含有する組成物を得ることが難しくなるか、又は、ＥＰＡの含量は高いが、本発明の不純物質の含有量も高い組成物となる。
【００３０】
本発明の製造方法により製造されたＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、含有する全脂肪酸中に、ＥＰＡアルキルエステルを、好ましくは９５面積％以上、より好ましくは９６面積％以上、さらに好ましくは９８面積％以上、さらに好ましくは９９面積％以上含有する。
【００３１】
本明細書において、油脂組成物中の所与の脂肪酸の含有量は、下記条件でのガスクロマトグラフィーにより測定された、組成物中の全脂肪酸の合計ピーク面積に対する該脂肪酸のピーク面積の割合（面積％）で表される。
＜試料＞
測定試料９μＬをｎ−ヘキサン１．５ｍＬに希釈
＜カラム条件＞
カラム    ：内径0.25mm、長さ60ｍの溶融シリカ管に、ポリエチレン
グリコールを膜厚0.25μmに被膜したキャピラリーカラム
（例えば、Ｊ＆Ｗ社製ＤＢ−ＷＡＸ）
カラム温度：210℃
Ｈｅ流量  ：1.3mL/min
＜検出条件＞
Ｈ2流量：30mL/min、 Air流量：400mL/min
DET温度：260℃
あるいは、カラム条件と検出条件は下記のとおりでもよい。
＜カラム条件＞
カラム    ：内径0.25mm、長さ100mの溶融シリカ管に、シアノプロピル
を膜厚0.20μmに被膜した非化学結合タイプのキャピラリー
カラム（例えば、ジーエルサイエンス社製ＴＣ−２５６０
0.25mm×100m×0.20μm）
カラム温度：170℃（150min hold）→昇温（10℃/min）
→240℃（15min hold）
Ｈｅ流量  ：1.0〜1.5mL/min
＜検出条件＞
Ｈ2流量：30mL/min、 Air流量：400mL/min
DET温度：270℃
【００３２】
当該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物における本発明の不純物質の含有量は、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルのいずれについても、０．１面積％以下である。好ましくは、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物中、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量は０．１面積％以下であり、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量は０．０７面積％以下であり、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量は０．０９面積％以下である。より好ましくは、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物中、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量は０．０５面積％以下であり、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量は０．０７面積％以下であり、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量は０．０８面積％以下である。
【００３３】
好ましい実施形態において、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、ＥＰＡアルキルエステルの含有量が９５面積％以上、好ましくは９６面積％以上、より好ましくは９８面積％以上、さらに好ましくは９９面積％以上であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が、それぞれ０．１面積％以下である。
【００３４】
より好ましい実施形態において、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、ＥＰＡアルキルエステルの含有量が９５面積％以上、好ましくは９６面積％以上、より好ましくは９８面積％以上、さらに好ましくは９９面積％以上であり、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．１面積％以下であり、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０７面積％以下であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が０．０９面積％以下である。
【００３５】
さらに好ましい実施形態において、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、ＥＰＡアルキルエステルの含有量が９８面積％以上、好ましくは９９面積％以上であり、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０５面積％以下であり、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０７面積％以下であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が０．０８面積％以下である。
【００３６】
さらに本発明者は、本発明の不純物質がＥＰＡとの分離が極めて困難なＥＰＡの類縁物質であることから、それらの含有量が、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物の純度の指標となり得ることを見出した。したがって、本発明のさらなる態様は、本発明の不純物質の含有量を測定することを含む、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物の純度を測定する方法に関する。
【００３７】
より詳細には、本発明によるＥＰＡアルキルエステル含有組成物の純度を測定する方法においては、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルからなる群より選択される少なくとも１種の物質の含有量を測定する。当該物質の含有量は、例えば上述した条件でのガスクロマトグラフィーにより測定した、全脂肪酸の合計ピーク面積に対する該物質のピーク面積の割合から算出することができる。測定した物質の該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物における含有量は、目的のＥＰＡに対する測定した物質の混入レベルを示し、これは、本発明の不純物質が極めてＥＰＡとの分離が困難である物質であることを考慮すると、該組成物における目的のＥＰＡの純度を反映する。
【００３８】
好ましい実施形態においては、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物中における(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルのいずれかの含有量が、０．５面積％以下、好ましくは０．３面積％以下、より好ましくは０．１面積％以下であれば、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は高純度であると評価される。より詳細には、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、医薬又は食品の原料として充分に高純度であると評価される。
より好ましい実施形態においては、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物中における(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が、いずれも０．５面積％以下、好ましくは０．３面積％以下、より好ましくは０．１面積％以下であれば、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は高純度であると評価される。より詳細には、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、医薬又は食品の原料として充分に高純度であると評価される。
さらに好ましい実施形態においては、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物中における(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．１面積％以下であり、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０７面積％以下であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が０．０９面積％以下であれば、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は高純度であると評価される。より詳細には、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、医薬又は食品の原料として充分に高純度であると評価される。
さらに好ましい実施形態においては、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物中における(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０５面積％以下であり、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０７面積％以下であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が０．０８面積％以下であれば、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は高純度であると評価される。より詳細には、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、医薬又は食品の原料として充分に高純度であると評価される。
【００３９】
本発明によるＥＰＡアルキルエステル含有組成物の純度測定方法においては、さらに、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物におけるＥＰＡアルキルエステルの含有量を測定してもよい。
【００４０】
したがって、さらに好ましい実施形態においては、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物中におけるＥＰＡアルキルエステルの含有量が９５面積％以上、好ましくは９６面積％以上、より好ましくは９８面積％以上、さらに好ましくは９９面積％以上であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステル、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステル、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量がいずれも０．５面積％以下、好ましくは０．３面積％以下、より好ましくは０．１面積％以下であれば、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は高純度であると評価される。より詳細には、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、医薬又は食品の原料として充分に高純度であると評価される。
さらに好ましい実施形態においては、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物中におけるＥＰＡアルキルエステルの含有量が９５面積％以上、好ましくは９６面積％以上、より好ましくは９８面積％以上、さらに好ましくは９９面積％以上であり、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．１面積％以下であり、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０７面積％以下であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が０．０９面積％以下であれば、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は高純度であると評価される。より詳細には、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、医薬又は食品の原料として充分に高純度であると評価される。
さらに好ましい実施形態においては、ＥＰＡアルキルエステル含有組成物中におけるＥＰＡアルキルエステルの含有量が９８面積％以上、さらに好ましくは９９面積％以上であり、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０５面積％以下であり、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸アルキルエステルの含有量が０．０７面積％以下であり、かつ(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸アルキルエステルの含有量が０．０８面積％以下であれば、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は高純度であると評価される。より詳細には、該ＥＰＡアルキルエステル含有組成物は、医薬又は食品の原料として充分に高純度であると評価される。
【実施例】
【００４１】
以下、実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例にのみ限定されるものではない。【００４２】
参考例１  脂肪酸組成分析
測定試料９μＬをｎ−ヘキサン１．５ｍＬに希釈し、ガスクロマトグラフィー分析装置（Type 6890 GC；Agilent Technologies製）を用いて、以下の条件にて脂肪酸を分析した。脂肪酸の含有量は、クロマトグラムにおける全脂肪酸の合計ピーク面積に対する各脂肪酸のピーク面積の割合（面積％）として算出した。
＜カラム条件＞
カラム：Ｊ＆Ｗ社製ＤＢ−ＷＡＸ  0.25mm×60m
（内径0.25mm、長さ60mの溶融シリカ管に、ポリエチレン
グリコールを膜厚0.25μmに被膜したキャピラリーカラム）
カラム温度：210℃
Ｈｅ流量：1.3mL/min
＜検出条件＞
Ｈ2流量：30mL/min、 Air流量：400mL/min
DET温度：260℃
あるいは、
＜カラム条件＞
カラム：ジーエルサイエンス社製TC-2560  0.25mm×100m×0.20μm
（内径0.25mm、長さ100mの溶融シリカ管にシアノプロピル
を膜厚0.20μmに被膜した、非化学結合タイプのキャピラリ
ーカラム）
カラム温度：170℃(150min hold)→昇温(10℃/min)
→240℃(15min hold)
Ｈｅ流量：1.0〜1.5mL/min
＜検出条件＞
Ｈ2流量：30mL/min、Air流量：400mL/min
DET温度：270℃
【００４３】
参考例２  原料油の調製
イワシ油２ｋｇに、水酸化ナトリウム１００ｇを溶解させた無水エタノール溶液２０００ｍＬを加えて７０〜８０℃にて１時間混合攪拌し、さらに水１０００ｍＬを加えてよく混合し、１時間静置した。分離した水層を除去し、油層を数回水洗して洗液を中性にし、エチルエステル化イワシ油を得た。参考例１に従って該イワシ油の脂肪酸組成を調べた。該イワシ油は、表１に示すとおり、全脂肪酸中にＥＰＡ２０．４面積％を含有し、また(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸を０．０４７面積％（対ＥＰＡ比０．００２３）、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸を０．０１８面積％（対ＥＰＡ比０．０００９）、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸を０．０２４面積％（対ＥＰＡ比０．００１２）含有していた。【００４４】
調製したエチルエステル化イワシ油１ｇを塔頂真空度１３．３Ｐａ、蒸留温度１２０℃〜１７０℃で真空蒸留を行い、粗精製物を得た。参考例１に従って該粗精製物の脂肪酸組成を調べた。該粗精製物は、表１に示すとおり、全脂肪酸中にＥＰＡ４４．０面積％を含有し、また(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸を０．０９７面積％（対ＥＰＡ比０．００２２）、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸を０．０４０面積％（対ＥＰＡ比０．０００９）、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸を０．０５３面積％（対ＥＰＡ比０．００１２）含有していた。この精製物を、以下の実施例で原料油として用いた。【００４５】
実施例１  ＥＰＡ含有組成物の製造
工程（１）：参考例２で得た原料油３００ｇにｎ−ヘキサン１６０ｍＬを加え、よく混合して溶解させた。ここに５０質量％硝酸銀水溶液５００ｍＬを加え、５〜３０℃の条件下で攪拌した。混合液を静置後、分離したｎ−ヘキサン層を除去し、水層を回収した。
工程（２）：回収した水層に新たにｎ−ヘキサン２０００ｍＬを加えて５２〜６８℃でよく混合し、水層中の脂肪酸エチルエステルをｎ−ヘキサン中に抽出させた。混合液を静置後、分離した水層を除去し、ｎ−ヘキサン層を濃縮した。
参考例１に従って工程（２）で得たｎ−ヘキサン層の脂肪酸組成を調べた。該ｎ−ヘキサン層に含まれていた脂肪酸エチルエステルは、表１に示すとおり、全脂肪酸中にＥＰＡ７４．５面積％を含有し、また(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸を０．１５６面積％（対ＥＰＡ比０．００２１）、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸を０．０６７面積％（対ＥＰＡ比０．０００９）、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸を０．０８９面積％（対ＥＰＡ比０．００１２）含有していた。【００４６】
工程（３）：工程（２）で得た脂肪酸エチルエステルを含むｎ−ヘキサン層を、充填塔式精密蒸留機を用いて、塔頂真空度０．７Ｐａ以下、蒸留温度１８０〜１８３℃の条件を維持しながら真空蒸留を行い、ＥＰＡエチルエステル含有組成物を得た。参考例１に従って得られた組成物の脂肪酸組成を調べた。該組成物は、表１に示すとおり、全脂肪酸中にＥＰＡ９８．４面積％を含有し、また(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸を０．０９８面積％（対ＥＰＡ比０．００１０）、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸を０．０６９面積％（対ＥＰＡ比０．０００７）、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸を０．０８９面積％（対ＥＰＡ比０．０００９）含有していた。【００４７】
実施例２
工程（３）において、塔頂真空度０．７Ｐａとし、蒸留温度を１８０℃〜１８８℃とした以外は、実施例１と同様の手順でＥＰＡエチルエステル含有組成物を得た。参考例１に従って得られた組成物の脂肪酸組成を調べた。該組成物は、表１に示すとおり、全脂肪酸中にＥＰＡ９８．２面積％を含有し、また(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸を０．０７９面積％（対ＥＰＡ比０．０００８）、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸を０．０６９面積％（対ＥＰＡ比０．０００７）、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸を０．０８８面積％（対ＥＰＡ比０．０００９）含有していた。【００４８】
実施例３
工程（３）において、塔頂真空度０．７Ｐａとし、蒸留温度を１８５℃〜１８８℃とした以外は、実施例１と同様の手順でＥＰＡエチルエステル含有組成物を得た。参考例１に従って得られた組成物の脂肪酸組成を調べた。該組成物は、表１に示すとおり、全脂肪酸中にＥＰＡ９９．０面積％を含有し、また(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸を０．０５０面積％（対ＥＰＡ比０．０００５）、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸を０．０６９面積％（対ＥＰＡ比０．０００７）、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸を０．０７９面積％（対ＥＰＡ比０．０００８）含有していた。【００４９】
比較例１
工程（３）において、塔頂真空度０．９〜１．０Ｐａとし、蒸留温度を１７２℃〜１８８℃とした以外は、実施例１と同様の手順でＥＰＡエチルエステル含有組成物を得た。参考例１に従って得られた組成物の脂肪酸組成を調べた。該組成物は、表１に示すとおり、全脂肪酸中のＥＰＡの含有量は９８．３％と高かったが、不純物質である(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸、(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-7,10,13,16,19-ペンタエン酸、及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸の含有量は、それぞれ０．１５７面積％（対ＥＰＡ比０．００１６）、０．０８８面積％（対ＥＰＡ比０．０００９）、０．１０８面積％（対ＥＰＡ比０．００１１）であり、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-イコサ-4,7,10,13,16-ペンタエン酸及び(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-イコサ-4,7,10,13,16,19-ヘキサエン酸が高値であった。【００５０】
【表１】
2020138282.tif 000002
【００５１】
表１に示すとおり、実施例１の工程（２）では、不純物質の対ＥＰＡ比率は原料油とほぼ同じであり、不純物質はＥＰＡと共に濃縮されていた。これに対して、実施例１の工程（３）では、ＥＰＡが濃縮される一方で不純物質は減少しており、このことから、該工程（３）によりＥＰＡから不純物質が分離されたことが示された。また、比較例１での不純物質の対ＥＰＡ比率が原料油及び工程（２）とほぼ同じであったことから、工程（３）における真空蒸留の条件が不純物質の分離にとって重要であることが示された。 
【国際調査報告】
2020138282.tif 000003
2020138282.tif 000004
2020138282.tif 000005
2020138282.tif 000006
2020138282.tif 000007