(57)【要約】【課題】  より低用量の鉄含有化合物の使用で、より高い光障害の低減効果を達成することが可能な、新規な光障害の低減剤を提供することを目的とする。【解決手段】  鉄含有化合物およびトランスフェリンを含む、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルの投与を受けた対象における光障害を低減するための医薬を提供する。【選択図】  図３
2020090570.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬であって、
鉄含有化合物およびトランスフェリンまたはその類縁体を含んでおり、
式（Ｉ）：
【化１】
2020090570.tif 000008
（式中、Ｒ１は、水素原子またはアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基またはアラルキル基を表す）
で示される化合物またはその塩もしくはエステルの投与を受けた対象における光障害を低減するために使用される
ことを特徴とする、
医薬。
【請求項２】
組合せ医薬であって、
鉄含有化合物を含む第１の医薬組成物と、トランスフェリンまたはその類縁体を含む第２の医薬組成物とを含み、
式（Ｉ）：
【化２】
2020090570.tif 000009
（式中、Ｒ１は、水素原子またはアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基またはアラルキル基を表す）
で示される化合物またはその塩もしくはエステルの投与を受けた対象における光障害を低減するために使用される、
ことを特徴とする
医薬。
【請求項３】
請求項１または２に記載の医薬であって、
前記対象は、０．００１８モル／日以上の式（Ｉ）に示される化合物またはその塩もしくはエステルの投与を受ける対象であり、かつ、
前記医薬は、５０ｍｇ／日以下の鉄が前記対象に投与されるように製剤化または投与される、
ことを特徴とする
医薬。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬であって、
投与された対象において、０．１〜１０μＭの血中鉄イオン濃度を与えるように製剤化または投与される、
ことを特徴とする
医薬。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬であって、
鉄含有化合物１．０モルに対し、０．０２５〜５．０モルのトランスフェリンを含有する、
医薬。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬であって、
前記類縁体は、フェリチンまたはラクトフェリンである、
医薬。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬であって、
前記光障害は、光線過敏症または皮膚炎である、
医薬。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬であって、
鉄含有化合物は、有機酸の鉄塩である、
医薬。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬であって、
鉄含有化合物は、有機酸と鉄を含むキレート錯体である、
医薬。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬であって、
鉄含有化合物は、クエン酸第一鉄ナトリウムである、
医薬。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬であって、
鉄含有化合物またはトランスフェリンもしくはその類縁体が、鉄飽和型タンパク質の形態で提供される、
医薬。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬であって、
トランスフェリンまたはその類縁体は、鉄不飽和型タンパク質の形態で提供される、
医薬。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬であって、
Ｒ１が、水素原子、炭素数１〜８のアルカノイル基、および、炭素数７〜１４のアロイル基からなる群から選択され、
Ｒ２が、水素原子、直鎖または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、および、炭素数７〜１５のアラルキル基からなる群から選択される
ことを特徴とする、
医薬。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬であって、
Ｒ１およびＲ２が、水素原子である、
医薬。
【請求項１５】
医薬組成物であって、
（１）鉄含有化合物、（２）トランスフェリンまたはその類縁体、および（３）前記式（Ｉ）：
【化３】
2020090570.tif 000010
（式中、Ｒ１は、水素原子またはアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基またはアラルキル基を表す）
で示される化合物またはその塩もしくはエステルを含み、
式（Ｉ）で示される化合物またはその塩もしくはエステルの投与による副作用が、前記（２）を含まない場合に比して低減されている、
ことを特徴とする
医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の医薬組成物であって、
０．００１８モル／日以上の式（Ｉ）に示される化合物またはその塩もしくはエステルを対象に投与し、かつ、５０ｍｇ／日以下の鉄を前記対象に投与するために製剤化または投与される、
ことを特徴とする
医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１５または１６に記載の医薬組成物であって、
対象において、０．１〜１０μＭの血中鉄イオン濃度を与えるように製剤化または投与される、
ことを特徴とする
医薬組成物。
【請求項１８】
対象における光障害を低減する方法であって、
前記対象は、式（Ｉ）：
【化４】
2020090570.tif 000011
（式中、Ｒ１は、水素原子またはアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基またはアラルキル基を表す）
で示される化合物またはその塩もしくはエステルの投与を受けた対象であり、
前記対象に鉄含有化合物およびトランスフェリンまたはその類縁体を投与することを含む、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、５−アミノレブリン酸またはその誘導体（以下、単に「ＡＬＡ類」とも称する）または塩もしくはエステルの投与に起因する光障害を低減するための医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘムの生産につながるヘムポルフィリン生合成経路の律速因子であるＡＬＡ類は、これまでに、種々の薬剤の有効成分として使用されている。【０００３】
外因性ＡＬＡの投与により、ヘム合成およびヘム含有酵素の活性、ならびにミトコンドリアエネルギー代謝が増強される。具体的に、マウスへのＡＬＡの投与により、ミトコンドリア好気性代謝酵素であるシトクロムｃオキシダーゼの活性化およびＡＴＰの産生が増強されることが知られる（非特許文献１）。しかしながら、第一鉄の不足条件下でのＡＬＡの投与は、動物および細胞に光毒性を示すプロトポルフィリンＩＸ（ＰｐＩＸ）の蓄積を引き起こし得る。したがって、生体内外でのＰｐＩＸの蓄積を防止するのに、十分な鉄含有化合物の添加が必要である（非特許文献２）。【０００４】
これまでに、ＡＬＡの投与に起因する光障害を軽減する薬剤として、鉄含有化合物を有効成分とする薬剤が報告されている（特許文献１）。【０００５】
トランスフェリンは、血漿中にある鉄結合性のタンパク質であり、生体内における鉄の運搬、細胞内摂取に関与することが知られている（非特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００９−２９８７３９号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｏｇｕｒａ  Ｓ−Ｉ，  ｅｔ  ａｌ．“Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ５−ａｍｉｎｏｌｅｖｕｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｏｎ  ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  ｃ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｌｉｖｅｒ．”  ＢＭＣ  Ｒｅｓ  Ｎｏｔｅｓ  ４：  ６６．，  ２０１１.
【非特許文献２】Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｒ  Ｊ．  ｅｔ．ａｌ., “ＰｒｏｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎＩＸ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  δ−ａｍｉｎｏｌｅｖｕｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｅｌｉｃｉｔｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｒｅｌａｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｇｕａｎｙｌａｔｅ  ｃｙｃｌａｓｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ”  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２９１，  Ｌ３３７−３４４，  ２００６
【非特許文献３】Ｋｏｎｓｔａｎｔｉｎｏｓ  Ｇｋｏｕｖａｔｓｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｒｏｎ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ”，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １８２０  （２０１２）１８８−２０２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
鉄を含む薬剤は、腸管吸収性が乏しいことから、その十分な効果を得るために、十分な量で投与する必要がある。例えば、ＡＬＡ類の投与に起因するＰｐＩＸの蓄積を低減し、光障害に対する十分な低減効果を与えるためには、ＡＬＡ投与量に対して、十分な量の鉄化合物の投与が必要であると考えられている。しかし、食事摂取基準における鉄分の１日摂取量の上限は、女性では１８歳以上で４０ｍｇ、男性では１８〜２９歳で５０ｍｇ、３０〜４９歳で５５ｍｇ、５０歳以上で４５ｍｇと定められており、当該上限を上回る鉄分の摂取は、健康障害を引き起こす可能性がある。したがって、安全性の観点から、ＡＬＡ類を有効成分とする医薬の１日あたりの投与量は、鉄分の１日摂取量の上限によって、実質的に制限されている。【０００９】
そこで本発明は、より低用量の鉄含有化合物の使用で、より高い光障害の低減効果を達成することが可能な、新規な光障害の低減剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本願発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねたところ、鉄含有化合物と共に鉄結合タンパク質を使用することで、鉄含有化合物の投与量を低減しながら十分に光障害を低減できることを見出した。【００１１】
本発明は、上記知見に基づくものであり、本願発明は以下の特徴を包含する：
［１］  医薬であって、
鉄含有化合物およびトランスフェリンまたはその類縁体を含んでおり、
式（Ｉ）：
【化１】
2020090570.tif 000003
（式中、Ｒ１は、水素原子またはアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基またはアラルキル基を表す）
で示される化合物またはその塩もしくはエステルの投与を受けた対象における光障害を低減するために使用される
ことを特徴とする、
医薬。【００１２】
［２］  組合せ医薬であって、
鉄含有化合物を含む第１の医薬組成物と、トランスフェリンまたはその類縁体を含む第２の医薬組成物とを含み、
式（Ｉ）：
【化２】
2020090570.tif 000004
（式中、Ｒ１は、水素原子またはアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基またはアラルキル基を表す）
で示される化合物またはその塩もしくはエステルの投与を受けた対象における光障害を低減するために使用される、
ことを特徴とする
医薬。【００１３】
［３］  ［１］または［２］に記載の医薬であって、
前記対象は、０．００１８モル／日以上の式（Ｉ）に示される化合物またはその塩もしくはエステルの投与を受ける対象であり、かつ、
前記医薬は、５０ｍｇ／日以下の鉄が前記対象に投与されるように製剤化または投与される、
ことを特徴とする
医薬。【００１４】
［４］  ［１］〜［３］のいずれかに記載の医薬であって、
投与された対象において、０．１〜１０μＭの血中鉄イオン濃度を与えるように製剤化または投与される、
ことを特徴とする
医薬。【００１５】
［５］  ［１］〜［４］のいずれかに記載の医薬であって、
鉄含有化合物１．０モルに対し、０．０２５〜５．０モルのトランスフェリンを含有する、
医薬。【００１６】
［６］  ［１］〜［５］のいずれかに記載の医薬であって、
前記類縁体は、フェリチンまたはラクトフェリンである、
医薬。【００１７】
［７］  ［１］〜［６］のいずれかに記載の医薬であって、
前記光障害は、光線過敏症または皮膚炎である、
医薬。【００１８】
［８］  ［１］〜［７］のいずれかに記載の医薬であって、
鉄含有化合物は、有機酸の鉄塩である、
医薬。【００１９】
［９］  ［１］〜［８］のいずれかに記載の医薬であって、
鉄含有化合物は、有機酸と鉄を含むキレート錯体である、
医薬。【００２０】
［１０］  ［１］〜［９］のいずれかに記載の医薬であって、
鉄含有化合物は、クエン酸第一鉄ナトリウムである、
医薬。【００２１】
［１１］  ［１］〜［１０］のいずれかに記載の医薬であって、
鉄含有化合物またはトランスフェリンもしくはその類縁体が、鉄飽和型タンパク質の形態で提供される、
医薬。【００２２】
［１２］  ［１］〜［１１］のいずれかに記載の医薬であって、
トランスフェリンは、鉄不飽和型タンパク質の形態で提供される、
医薬。【００２３】
［１３］  ［１］〜［１２］のいずれかに記載の医薬であって、
Ｒ１が、水素原子、炭素数１〜８のアルカノイル基、および、炭素数７〜１４のアロイル基からなる群から選択され、
Ｒ２が、水素原子、直鎖または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、および、炭素数７〜１５のアラルキル基からなる群から選択される
ことを特徴とする、
医薬。【００２４】
［１４］  ［１］〜［１３］のいずれかに記載の医薬であって、
Ｒ１およびＲ２が、水素原子である、
医薬。【００２５】
［１５］  医薬組成物であって、
（１）鉄含有化合物、（２）トランスフェリンまたはその類縁体、および（３）前記式（Ｉ）：
【化３】
2020090570.tif 000005
（式中、Ｒ１は、水素原子またはアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基またはアラルキル基を表す）
で示される化合物またはその塩もしくはエステルを含み、
式（Ｉ）で示される化合物またはその塩もしくはエステルの投与による副作用が、前記（２）を含まない場合に比して低減されている、
ことを特徴とする
医薬組成物。【００２６】
［１６］  ［１５］に記載の医薬組成物であって、
０．００１８モル／日以上の式（Ｉ）に示される化合物またはその塩もしくはエステルが対象に投与され、かつ、５０ｍｇ／日以下の鉄が対象に投与されるように製剤化または投与される、
ことを特徴とする
医薬組成物。【００２７】
［１７］  ［１５］または［１６］に記載の医薬組成物であって、
対象において、０．１〜１０μＭの血中鉄イオン濃度を与えるように製剤化または投与される、
ことを特徴とする
医薬組成物。【００２８】
［１８］  対象における光障害を低減する方法であって、
前記対象は、式（Ｉ）：
【化４】
2020090570.tif 000006
（式中、Ｒ１は、水素原子またはアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基またはアラルキル基を表す）
で示される化合物またはその塩もしくはエステルの投与を受けた対象であり、
前記対象に鉄含有化合物およびトランスフェリンまたはその類縁体を投与することを含む、
方法。【００２９】
なお、上記に述べた本発明の一または複数の特徴を任意に組み合わせた発明も、本発明の範囲に含まれる。
【発明の効果】
【００３０】
本発明によれば、より低用量の鉄含有化合物の使用で、より高い光障害の低減効果を達成することが可能な、新規な光障害の低減剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、ＡＬＡ、およびトランスフェリンまたはＳＦＣの存在下でＨＵＶＥＣを細胞培養した後の、ＰｐＩＸの細胞内蓄積を測定したグラフを示す。
【図２】図２は、ＡＬＡ、およびトランスフェリンまたはＳＦＣの存在下でＨＵＶＥＣを細胞培養した後の、ＰｐＩＸの細胞外蓄積を測定したグラフを示す。
【図３】図３は、ＡＬＡ、およびＨｏｌｏ、Ａｐｏ、Ａｐｏ＋ＳＦＣまたはＳＦＣの存在下でＨＵＶＥＣを細胞培養した後の、ＰｐＩＸの細胞内蓄積を測定したグラフを示す。
【図４】図４は、ＡＬＡ、およびＨｏｌｏ、Ａｐｏ、Ａｐｏ＋ＳＦＣまたはＳＦＣの存在下でＨＵＶＥＣを細胞培養した後の、ＰｐＩＸの細胞外蓄積を測定したグラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルの投与を受けた対象における光障害を低減するための医薬（以下、「本発明の医薬」とも称する。）に関する。
【００３３】
本発明において、光障害は、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステル投与後のＰｐＩＸの蓄積に起因する光障害、典型的には光線過敏症または皮膚炎であり、光障害の低減には、光線過敏症または皮膚炎の症状の低減の他、その原因となるＰｐＩＸのレベルを低減することを含む。
【００３４】
本明細書において、ＡＬＡは、５−アミノレブリン酸を意味する。ＡＬＡは、δ−アミノレブリン酸ともいい、アミノ酸の１種である。
【００３５】
本発明において、ＡＬＡの誘導体は、生体内で代謝されたＰｐＩＸを生じる化合物を差し、下記式（Ｉ）で表される化合物を例示することができる。式（Ｉ）において、Ｒ１は、水素原子またはアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基またはアラルキル基を表す。なお、式（Ｉ）において、ＡＬＡは、Ｒ１およびＲ２が水素原子の場合に相当する。
【化５】
2020090570.tif 000007
【００３６】
式（Ｉ）のＲ１におけるアシル基としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、オクタノイル、ベンジルカルボニル基等の直鎖または分岐状の炭素数１〜８のアルカノイル基や、ベンゾイル、１−ナフトイル、２−ナフトイル基等の炭素数７〜１４のアロイル基を挙げることができる。
【００３７】
式（Ｉ）のＲ２におけるアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル基等の直鎖または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基を挙げることができる。
【００３８】
式（Ｉ）のＲ２におけるシクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロドデシル、１−シクロヘキセニル基等の飽和、または一部不飽和結合が存在してもよい、炭素数３〜８のシクロアルキル基を挙げることができる。
【００３９】
式（Ｉ）のＲ２におけるアリール基としては、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル基等の炭素数６〜１４のアリール基を挙げることができる。
【００４０】
式（Ｉ）のＲ２におけるアラルキル基としては、アリール部分は上記アリール基と同じ例示ができ、アルキル部分は上記アルキル基と同じ例示ができ、具体的には、ベンジル、フェネチル、フェニルプロピル、フェニルブチル、ベンズヒドリル、トリチル、ナフチルメチル、ナフチルエチル基等の炭素数７〜１５のアラルキル基を挙げることができる。
【００４１】
ＡＬＡ類のうち、ＡＬＡまたはその誘導体の塩としては、薬理学的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩等を挙げることができる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩等の各無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩等の各有機酸付加塩を例示することができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等の各アルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム塩等の各アルカリ土類金属塩、アルミニウム、亜鉛等の各金属塩を例示することができる。アンモニウム塩としては、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等のアルキルアンモニウム塩等を例示することができる。有機アミン塩としては、トリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩、トルイジン塩等の各塩を例示することができる。
【００４２】
ＡＬＡ類のエステルとしては、これに限定されるものではないが、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステル、ペンチルエステル等を挙げることができる。
【００４３】
本発明において、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルの投与経路に制限はなく、任意の非経口または経口投与による場合を含む。
【００４４】
本発明の医薬は、鉄含有化合物および鉄結合タンパク質を含むことを特徴とする。
本発明の医薬に用いられる鉄含有化合物としては、鉄を分子内に有する化合物であれば特に制限されないが、光障害低減効果の点から、無機化合物よりも有機化合物であることが特に好ましい。より具体的には有機酸の鉄塩が特に好ましく、さらに有機酸と鉄を含むキレート錯体であるのが好ましい。
【００４５】
具体的な有機酸の鉄塩としては、例えば、クエン酸第一鉄、クエン酸鉄ナトリウム、クエン酸第一鉄ナトリウム（ＳＦＣ）、クエン酸鉄アンモニウム、酢酸鉄、シュウ酸鉄、コハク酸第一鉄、コハク酸クエン酸鉄ナトリウム、ヘム鉄、デキストラン鉄、乳酸鉄、グルコン酸第一鉄、ジエチレントリアミン五酢酸鉄ナトリウム、ジエチレントリアミン五酢酸鉄アンモニウム、エチレンジアミン四酢酸鉄ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸鉄アンモニウム、トリエチレンテトラアミン鉄、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄ナトリウム、ジカルボキシメチルグルタミン酸アンモニウム、クエン酸鉄コリン、蟻酸第一鉄、蟻酸第二鉄、シュウ酸カリウム第二鉄アンモニウム、炭酸第二鉄等を例示することができる。これらのうち、クエン酸、シュウ酸、コハク酸、ヘム、デキストラン、乳酸、グルコン酸、エチレンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸、トリエチレンテトラアミン、ジカルボキシメチルグルタミン酸等の有機酸と鉄を含むキレート錯体が好ましい。さらにこれらの中でもジエチレントリアミン五酢酸鉄ナトリウムやジエチレントリアミン五酢酸鉄アンモニウムが好ましい。これらの鉄化合物は、それぞれ単独でも、２種以上を混合して用いてもよい。
【００４６】
本発明の一実施形態において、本発明の医薬に用いられる鉄含有化合物は、クエン酸第一鉄ナトリウム（ＳＦＣ）である。
【００４７】
鉄結合タンパク質は、生体内に存在する鉄との結合性を有するタンパク質であり、本発明において、トランスフェリンまたはその類縁体を指す。トランスフェリンは、血漿中に存在する鉄結合性のタンパク質であり、１分子のトランスフェリンは、２原子の鉄と結合し、鉄の運搬機能を有する。本発明に使用されるトランスフェリンは、当業者に公知の方法、例えば、これに限定されるものではないが、組み換え生産、血液および血漿などの血液成分からの精製などの手段によって取得することができる。
【００４８】
本発明に使用されるトランスフェリンを組み換え生産により取得する場合には、具体的に、当該技術分野で慣用的な手法にしたがって、公知のトランスフェリンの核酸配列を適切な宿主細胞（例えば大腸菌、酵母など）にトランスフェクトし、発現させ、精製することによってトランスフェリンを製造すればよい。
【００４９】
また、トランスフェリンは市販されており、臨床診断において、肝機能低下および炎症状態の有無の検査に既に用いられている。したがって、本発明において、トランスフェリンとして市販のものを使用してよく、そのような市販のトランスフェリンとしては、これに限定されるものではないが、例えば、ヒト由来ホロトランスフェリン（ＧＭＰグレード；メビオファーム（株））、ＴＲＡＮＳＦＥＲＲＩＮ（ＫＡＭＡＤＡ）等を挙げることができる。
【００５０】
本発明の医薬において、トランスフェリンと組み合わせてまたはこれに代えて、トランスフェリンの類縁体を用いることができる。本発明において、トランスフェリン類縁体として、これに限定されるものではないが、フェリチン、ラクトフェリン等を挙げることができる。フェリチンは、貯蔵鉄量と相関があるため、臨床検査で貯蔵鉄量マーカーとして用いられている。当業者であれば、常法に従って、生体からフェリチンを精製、分離することが可能である。ラクトフェリンは、生体防御作用（発ガン予防、感染防御）、抗菌または抗ウイルス活性、ビフィズス菌増殖促進、抗炎症作用、脂質代謝改善作用を持つことが報告されている。ラクトフェリンは、乳製品などの食品に使用されており、工業的に精製する技術も確立されている。
【００５１】
本発明において、有効成分である鉄含有化合物および鉄結合タンパク質は、両者を含む配合剤として１剤で提供されてもよいし、鉄含有化合物を含む第１の医薬組成物と、鉄結合タンパク質を含む第２の医薬組成物を組み合わせてなる組合せ医薬の形態で提供されてもよい。なお、鉄結合タンパク質には、典型的には、鉄を飽和状態で結合している鉄飽和型タンパク質の形態と、鉄不飽和型のタンパク質の形態とが存在する。本発明においては、いずれのタイプのタンパク質を用いてもよい。鉄結合タンパク質として、鉄飽和型のタンパク質、または不飽和状態で鉄結合を有する鉄不飽和型のタンパク質を使用する場合には、それ自体鉄結合タンパク質と鉄含有化合物の組み合わせとして機能し得る。
【００５２】
本発明において、鉄含有化合物の投与量は、対象において投与されているＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルの投与量に応じて、光障害の低減効果が発揮される量として設定されるが、安全性の観点から、１日あたりの上限を５０ｍｇとすることが好ましい。
【００５３】
また本発明者らは、鉄含有化合物による光障害の低減効果に関し、意外にも、鉄結合タンパク質との良好な併用効果が認められる特定の鉄濃度範囲が存在することを見出した（下記実施例参照）。したがって、鉄含有化合物の投与量は、投与後の血中鉄イオン濃度が、０．０１〜１０μＭの範囲となるように設定することが好ましい。血中鉄イオン濃度が、０．０１μＭの血中濃度を下回る場合には、鉄結合タンパク質との併用下においても、十分な光障害の低減効果が得られない可能性がある。また、血中鉄イオン濃度が、１０μＭを超える場合には、鉄単独投与と鉄結合タンパク質併用投与とで効果に差が認められない可能性がある。
本発明の別の実施形態において、鉄含有化合物の投与量は、投与後の血中鉄イオン濃度が、０．５〜５．０μＭ、より好ましくは１．０〜３．０μＭの範囲となるように設定することが好ましい。前記血中鉄イオン濃度下においては、適切な量の鉄結合タンパク質を併用することで、光障害の低減効果またはＰｐＩＸレベルの低減効果が、鉄結合タンパク質を含まない場合に比して、最大で１００倍程度まで増強される。
【００５４】
本発明において、鉄結合タンパク質の投与量は、鉄含有化合物の投与量に応じて変化し、鉄含有化合物１．０モルに対し、０．０２５〜５．０モル、好ましくは０．２５〜２．５モル、より好ましくは０．５〜１．５モルの量となるように設定することができる。
【００５５】
上記のとおり、鉄結合タンパク質と併用することで、鉄含有化合物の投与量を低減しながら、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルの投与に起因する光障害を効果的に低減することができる。したがって、本発明によれば、これまでに光障害を低減するための鉄剤の投与を十分に受けられないと考えられていた対象においても、十分な光障害の低減効果を提供することができるという点で有益である。例えば、１．０モルのＡＬＡの投与を受けた対象が十分な光障害低減効果を得るためには、理論上、少なくとも約２７ｇの鉄が投与される必要があると考えられている。この理論値に基づけば、安全性を考慮した1日あたりの鉄投与量５０ｍｇによって十分な光障害低減効果が得られるＡＬＡ最大投与量の理論値は、わずかに０．００１８モルであり、これは例えばＡＬＡ塩酸塩ではおよそ３０１ｍｇに相当する。
本発明の医薬は、安全性の面から、これまでは投与することができないまたは投与しないことが好ましいと考えられていた投与量で、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルの投与を可能にするものである。したがって、一実施形態において、本発明の医薬は、０．００１８モル以上のＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルの投与を受ける対象に投与される。
【００５６】
また、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルは、現在までに、最大０．００３６モル／日の投与量まで安全性が確認されている。したがって、別の実施形態において、本発明の医薬は、０．００３６モル／日以上のＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルの投与を受ける対象に投与される。
【００５７】
本発明の医薬は、一実施形態において、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルをさらに含んでもよい。本発明の医薬が組合せ医薬である場合、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルは、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルを含む第３の医薬組成物として提供されてもよいし、鉄含有化合物を含む前記第１の医薬組成物またはトランスフェリンを含む前記第２の医薬組成物のいずれかに配合して提供されてもよい。このようなＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルを含む本発明の医薬または組合せ医薬は、従来のトランスフェリンを含まないＡＬＡ含有の医薬組成物に比して、鉄の投与量が低減されているか、またはＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルの投与に起因する光障害が低減されていることによって特徴付けられる。
【００５８】
本発明の医薬を投与するタイミングは、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステルの投与前、投与中または投与後のいずれのタイミングでもよいが、好ましくは、ＡＬＡ類またはその塩もしくはエステル投与による薬理学的作用が達成された後の任意の時点で投与される。
【００５９】
本発明の医薬の投与経路は限定されず、全身投与であっても、局所投与であってもよい。投与経路としては、例えば、舌下投与も含む経口投与、あるいは吸入投与、点滴を含む静脈内投与、貼付剤等による経皮投与、座薬、または、経鼻胃管、経鼻腸管、胃ろうチューブ若しくは腸ろうチューブを用いる強制的経腸栄養法による投与等の非経口投与などを挙げることができる。また、本発明の医薬が組合せ医薬である場合には、第１の医薬組成物と第２の医薬組成物（および任意の第３の医薬組成物）とが、それぞれ同一の経路から投与されてもよいし、別々の経路から投与されてもよい。
【００６０】
本発明の医薬の剤型は、前記投与経路に応じて適宜決定してよく、限定はされないが、注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ等に溶解した水剤、貼付剤、座薬剤等を挙げることができる。
【００６１】
本発明に係る医薬は、必要に応じて他の薬効成分、栄養剤、担体等の他の任意成分を加えることができる。任意成分として、例えば結晶性セルロース、ゼラチン、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物性および動物性脂肪、油脂、ガム、ポリアルキレングリコール等の、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、溶剤、分散媒、増量剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を添加することができる。
【００６２】
本明細書において用いられる用語は、特に定義されたものを除き、特定の実施態様を説明するために用いられるのであり、発明を限定する意図ではない。
【００６３】
また、本明細書において用いられる「含む」との用語は、文脈上明らかに異なる理解をすべき場合を除き、記述された事項（部材、ステップ、要素、数字など）が存在することを意図するものであり、それ以外の事項（部材、ステップ、要素、数字など）が存在することを排除しない。
【００６４】
異なる定義が無い限り、ここに用いられるすべての用語（技術用語および科学用語を含む。）は、本発明が属する技術の当業者によって広く理解されるのと同じ意味を有する。ここに用いられる用語は、異なる定義が明示されていない限り、本明細書および関連技術分野における意味と整合的な意味を有するものとして解釈されるべきであり、理想化され、または、過度に形式的な意味において解釈されるべきではない。
【００６５】
以下において、本発明を、実施例を参照してより詳細に説明する。しかしながら、本発明はいろいろな態様により具現化することができ、ここに記載される実施例に限定されるものとして解釈されてはならない。
【実施例】
【００６６】
[実施例１]
本実施例においては、下記の方法にしたがって、細胞内外に蓄積するＰｐＩＸに対する鉄剤またはトランスフェリンの影響を評価した。
試験細胞として、ヒト臍帯静脈内皮細胞（Ｈｕｍａｎ  Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ  Ｖｅｉｎ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ，ＨＵＶＥＣ）を用いた。培地は、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｋｉｔ（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ社製）を使用した。
トランスフェリンは、ヒト血液由来トランスフェリン（ホロ）Ｗａｋｏ社製を用いた。トランスフェリンタンパク質１００ｍｇに対して、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｗａｋｏ社製）を５ｍｌ加え、混合し、２０ｍｇ／ｍｌ（２５０μＭ）トランスフェリン溶液とした。２５０μＭ  トランスフェリンを９倍量の培地で希釈し、２５μＭ  トランスフェリン含有培地を作製し、等量の培地で段階希釈し、希釈系列を１１点作製した（トランスフェリン濃度０−２５μＭ）。なお、トランスフェリンは、１分子につき２分子の鉄イオンが結合しているため、トランスフェリン濃度０−２５μＭは、鉄濃度０−５０μＭに相当する。
クエン酸第一鉄ナトリウム（ＳＦＣ、小松屋）を培地に希釈し、等量の培地で段階希釈し、ＳＦＣ溶液の希釈系列を１１点作製した（ＳＦＣ濃度０−１０００μＭ）。
アミノレブリン酸塩酸塩（ＡＬＡ）を培地で希釈し、２ｍＭ  ＡＬＡ溶液を作製した。
ＨＵＶＥＣを９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、３７℃で一晩培養した。一晩培養したＨＵＶＥＣの９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅから培養上清を除去後、各ｗｅｌｌに上記の２ｍＭ  ＡＬＡ溶液を５０μｌ添加（最終濃度１ｍＭ）し、トランスフェリン（最終トランスフェリン濃度０−１２．５μＭ）もしくはＳＦＣ溶液（最終ＳＦＣ濃度０−５００μＭ）を５０μｌ添加し、３７℃で４時間培養した。続いて５０μｌの培養上清と５０μｌの新規培地を加えた新たな９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅを作製し、細胞外分画とした。残った細胞上清を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄後、１ｗｅｌｌあたり１００μｌの１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ、Ｗａｋｏ社製）水溶液を加えて可溶化し、細胞内分画とした。
プロトポルフィリンＩＸ標品（ＰｐＩＸ、フナコシ社製）をＤＭＳＯに溶解し、１ｍＭ  ＰｐＩＸストック溶液とした。１ｍＭ  ＰｐＩＸストック溶液を１％  ＳＤＳ溶液で最終濃度０−１０００ｎＭに希釈し、細胞内ＰｐＩＸ標準液とした。また、ストック溶液を培地で最終濃度０−１０００ｎＭに希釈し、細胞外ＰｐＩＸ標準液とした。これらのＰｐＩＸ標準液をそれぞれ、細胞内分画および細胞外分画のプレートの未使用ｗｅｌｌに１００μｌずつ添加した。マイクロプレートリーダー（テカン社製）を用いて、これらのプレートの各ｗｅｌｌの蛍光強度を、励起波長４０５ｎｍ、測定波長６３５ｎｍの条件で測定した。測定後、ＰｐＩＸ標準液の蛍光強度から検量線を作成し、各ｗｅｌｌのＰｐＩＸ量を検量線から算出した。結果を図１および図２に示す。
図１および図２に示すように、同じ鉄イオン濃度であっても、ＰｐＩＸ蓄積に影響する濃度は異なる。すなわち、トランスフェリン添加条件では、添加量依存的に細胞内外のＰｐＩＸ蓄積量は減少する。その減少量は、ＳＦＣ添加条件と比較すると、１０倍以上低い濃度で５０％のＰｐＩＸ蓄積抑制効果が観察された。
[実施例２]
本実施例では、トランスフェリンは、ヒト血液由来トランスフェリンＷａｋｏ社製を用い、鉄結合型トランスフェリンを飽和型（Ｈｏｌｏ）、鉄遊離型トランスフェリンを不飽和型（Ａｐｏ）として使用した。
実施例１と同様にトランスフェリン溶液の調製を行い、Ｈｏｌｏ溶液およびＡｐｏ溶液とし、Ｈｏｌｏ溶液、Ａｐｏ溶液およびＳＦＣ溶液に関して、実施例１と同様に１１点の段階希釈を行った。なお、Ａｐｏ溶液は鉄イオンを結合していないため、鉄濃度は０−０μＭとなる。
また、Ａｐｏ溶液と、２倍モル量のＳＦＣ含有培地とから、２５μＭ  Ａｐｏ＋５０μＭ  ＳＦＣ含有培地を作製し、同様に１１点の段階希釈を行った。
一晩培養したＨＵＶＥＣの９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに１ｍＭ  ＡＬＡ、およびＨｏｌｏ溶液、Ａｐｏ溶液、Ａｐｏ＋ＳＦＣ溶液、もしくはＳＦＣ溶液をそれぞれ添加した。
本実施例における濃度条件はそれぞれ以下のとおりであった：
Ｈｏｌｏ添加条件：最終Ｈｏｌｏ濃度０−１２．５μＭ、最終鉄イオン濃度０−２５μＭ；
Ａｐｏ添加条件：最終Ａｐｏ濃度０−１２．５μＭ、最終鉄イオン濃度０−０μＭ；
Ａｐｏ＋ＳＦＣ添加条件：最終Ａｐｏ濃度０−１２．５μＭ、最終鉄（ＳＦＣ）イオン濃度０−２５μＭ；およびＳＦＣ添加条件：最終鉄イオン濃度０−５００μＭ。
３７℃で４時間培養したのち、実施例１と同様にして、細胞内外のＰｐＩＸの測定を行った。その結果を図３および４に示す。
図３および４から、鉄イオンを持たない鉄遊離型ＡｐｏではＰｐＩＸ蓄積抑制が観察されなかった。しかし、ＳＦＣと混合することで、鉄結合型Ｈｏｌｏと同様のＰｐＩＸ蓄積抑制効果が観察された。ＳＦＣはトランスフェリンと同時に投与することで数十倍のＰｐＩＸ抑制効果が観察することができた。
【産業上の利用可能性】
【００６７】
本発明によれば、より低用量の鉄含有化合物の使用で、より高い光障害の低減効果を達成することが可能な、新規な光障害の低減剤が提供される。本発明に係る光障害の低減剤は、従来の薬剤に比して、より少ない鉄含有化合物の投与量で光障害の低減効果が得られるので、例えば、これまで十分な光障害の低減効果を受けられないと考えられていたＡＬＡ高用量投与の対象においても、光障害の低減が可能であるという点で有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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