(57)【要約】  本発明は、アルカリホスファターゼを含有する脱リン酸化試薬の品質を評価する方法、及び、該評価方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬を使用して標的核酸を検出する方法を提供することを目的とし、かかる目的を達成するために、本発明は、脱リン酸化試薬の品質を評価する方法であって、以下の工程：（１−１）アルカリホスファターゼと、前記アルカリホスファターゼに由来するペプチド断片とを含有する脱リン酸化試薬を準備する工程；及び（１−２）前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片の含有量の比率が所定の基準値以下である場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する工程を含む、前記方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
脱リン酸化試薬の品質を評価する方法であって、以下の工程：
（１−１）アルカリホスファターゼと、前記アルカリホスファターゼに由来するペプチド断片とを含有する脱リン酸化試薬を準備する工程；及び
（１−２）前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片の含有量の比率が所定の基準値以下である場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する工程
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなる２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ａ１）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ１）の含有量の比率が、下記式（Ａ１）：
（ＸＡ１／Ｙ）×１００≦５．００００      ・・・（Ａ１）
［式中、ＸＡ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ａ１）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ａ２）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ２）の含有量の比率が、以下の式（Ａ２）：
（ＸＡ２／Ｙ）×１００≦２．４０００      ・・・（Ａ２）
［式中、ＸＡ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ａ２）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する１３〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ａ３）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ３）の含有量の比率が、以下の式（Ａ３）：
（ＸＡ３／Ｙ）×１００≦４．５０００      ・・・（Ａ３）
［式中、ＸＡ３は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ａ３）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（２）：
（Ｘ２／Ｙ）×１００≦０．８０００      ・・・（２）
［式中、Ｘ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第２のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位から選択された連続する５〜２０個のアミノ酸残基からなる１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｂ１）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｂ１）の含有量の比率が、以下の式（Ｂ１）：
（ＸＢ１／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（Ｂ１）
［式中、ＸＢ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｂ１）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位から選択された連続する１１〜２０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位を含む１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｂ２）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｂ２）の含有量の比率が、以下の式（Ｂ２）：
（ＸＢ２／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（Ｂ２）
［式中、ＸＢ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｂ２）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる第４のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第４のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（４）：
（Ｘ４／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（４）
［式中、Ｘ４は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第４のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位から選択された連続する５〜２０個のアミノ酸残基からなる１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｃ１）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｃ１）の含有量の比率が、以下の式（Ｃ１）：
（ＸＣ１／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（Ｃ１）
［式中、ＸＣ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｃ１）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位から選択された連続する９〜２０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位を含む１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｃ２）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｃ２）の含有量の比率が、以下の式（Ｃ２）：
（ＸＣ２／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（Ｃ２）
［式中、ＸＣ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｃ２）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる第５のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第５のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（５）：
（Ｘ５／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（５）
［式中、Ｘ５は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第５のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなる２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｄ１）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が、以下の式（Ｄ１）：
（ＸＤ１／Ｙ）×１００≦４．４０００      ・・・（Ｄ１）
［式中、ＸＤ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｄ１）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する１３〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｄ２）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ２）の含有量の比率が、以下の式（Ｄ２）：
（ＸＤ２／Ｙ）×１００≦３．４０００      ・・・（Ｄ２）
［式中、ＸＤ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｄ２）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する１２〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｄ３）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ３）の含有量の比率が、以下の式（Ｄ３）：
（ＸＤ３／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（Ｄ３）
［式中、ＸＤ３は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｄ３）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第７のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（７）：
（Ｘ７／Ｙ）×１００≦１．６０００      ・・・（７）
［式中、Ｘ７は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第７のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第８のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（８）：
（Ｘ８／Ｙ）×１００≦０．２０００      ・・・（８）
［式中、Ｘ８は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第８のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記脱リン酸化試薬が、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第９のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（９）：
（Ｘ９／Ｙ）×１００≦０．３５００      ・・・（９）
［式中、Ｘ９は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第９のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記脱リン酸化試薬が、
配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片、
配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる第４のペプチド断片、
配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる第５のペプチド断片、
配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片、
配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片、及び
配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片
を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量が、それぞれ、下記式（２）、（４）、（５）、（７）、（８）及び（９）：
（Ｘ２／Ｙ）×１００≦０．８０００      ・・・（２）
（Ｘ４／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（４）
（Ｘ５／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（５）
（Ｘ７／Ｙ）×１００≦１．６０００      ・・・（７）
（Ｘ８／Ｙ）×１００≦０．２０００      ・・・（８）
（Ｘ９／Ｙ）×１００≦０．３５００      ・・・（９）
［式中、Ｘ２、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９は、それぞれ、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
標的核酸を検出する方法であって、
前記方法が、以下の工程：
（２−１）前記標的核酸を含むサンプルを準備する工程；
（２−２）アルカリホスファターゼと、前記アルカリホスファターゼに由来するペプチド断片群とを含有する脱リン酸化試薬を準備する工程；
（２−３）前記サンプルを前記脱リン酸化試薬で処理して前記標的核酸を脱リン酸化する工程；
（２−４）脱リン酸化された前記標的核酸を標識化する工程；
（２−５）標識化された前記標的核酸を検出する工程
を含み、
前記工程（２−２）で準備される前記脱リン酸化試薬が、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬である、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルカリホスファターゼを含有する脱リン酸化試薬の品質を評価する方法、及び、該評価方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬を使用して標的核酸を検出する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルカリホスファターゼは、リン酸モノエステルを加水分解する触媒機能を有し、タンパク質、核酸等の生体物質の量を測定する方法（例えば、免疫染色法、ＥＬＩＳＡ、核酸マイクロアレイ法等）において広く使用されている。例えば、遺伝子工学の研究分野においては、ＤＮＡ、ＲＮＡ等の核酸の標識化の前処理、ベクターの自己連結防止等を目的として、アルカリホスファターゼを使用した核酸の５’末端及び／又は３’末端の脱リン酸化が行われている。【０００３】
アルカリホスファターゼの工業的製法としては、その比活性が高いことから主としてウシの小腸又は大腸を原料とした製造方法が広く採用されている。アルカリホスファターゼの比活性の評価は、一般にｐ−ニトロフェニルリン酸が分解された際に生成するｐ−ニトロフェノール由来の４０５ｎｍの吸光度を測定することで行われる。【０００４】
アルカリホスファターゼの品質は、アルカリホスファターゼ比活性に基づいて評価されている。そして、ウシ腸由来のアルカリホスファターゼよりも比活性が高いアルカリホスファターゼを得るために、高比活性のアルカリホスファターゼを精製過程で単離したり、遺伝子工学的手法を用いて組換え大腸菌により高比活性のアルカリホスファターゼを生産したりしている。【０００５】
特許文献１には、バチルス・バディウス属由来の遺伝子を導入した組換え大腸菌を使用して高比活性を有するアルカリホスファターゼを製造する方法が開示されている。また、特許文献２には、シェワネラ属由来の遺伝子を導入した組換え大腸菌を使用して高比活性及び耐熱性を有するアルカリホスファターゼを製造する方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平１０−２６２６７４号
【特許文献２】国際公開第２０１２／１１５０２３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
アルカリホスファターゼを含有する脱リン酸化試薬（例えば、市販のアルカリホスファターゼ製品）は、アルカリホスファターゼとともに、その他の成分を含有する組成物である。アルカリホスファターゼを含有する脱リン酸化試薬の品質は、アルカリホスファターゼ比活性に基づいて評価される。【０００８】
しかしながら、ほぼ同じアルカリホスファターゼ比活性を有する脱リン酸化試薬であっても、当該脱リン酸化試薬を使用して調製された標識化核酸（当該脱リン酸化試薬により核酸の５’末端及び／又は３’末端を脱リン酸化し、脱リン酸化された核酸の５’末端及び／又は３’末端に標識物質を結合させることにより得られた標識化核酸）の、核酸検出法における検出感度に大きな差が生じることが判明した。すなわち、アルカリホスファターゼを含有する脱リン酸化試薬の品質は、アルカリホスファターゼ比活性を指標として正確に評価できないことが判明した。【０００９】
そこで、本発明は、アルカリホスファターゼを含有する脱リン酸化試薬の品質を評価する方法、及び、該評価方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬を使用して標的核酸を検出する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、アルカリホスファターゼを含有する脱リン酸化試薬（例えば、市販のアルカリホスファターゼ製品）には、以下の不純物のいずれか１種以上が混在し得ることを見出した。
・配列番号１０に記載のアミノ酸配列（ウシ由来のアルカリホスファターゼのアミノ酸配列）の７１〜１３０位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなる２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ａ１）
・配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ａ２）
・配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する１３〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ａ３）
・配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位から選択された連続する５〜２０個のアミノ酸残基からなる１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｂ１）
・配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位から選択された連続する１１〜２０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位を含む１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｂ２）
・配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位から選択された連続する５〜２０個のアミノ酸残基からなる１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｃ１）
・配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位から選択された連続する９〜２０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位を含む１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｃ２）
・配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなる２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｄ１）
・配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する１３〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｄ２）
・配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する１２〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｄ３）
・配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片
・配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片
・配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる第３のペプチド断片
・配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる第４のペプチド断片
・配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる第５のペプチド断片
・配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片
・配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片
・配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片
・配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片【００１１】
そして、本発明者らは、
・ペプチド断片群（Ａ１）の含有量、
・ペプチド断片群（Ａ２）の含有量、
・ペプチド断片群（Ａ３）の含有量、
・ペプチド断片群（Ｂ１）の含有量、
・ペプチド断片群（Ｂ２）の含有量、
・ペプチド断片群（Ｃ１）の含有量、
・ペプチド断片群（Ｃ２）の含有量、
・ペプチド断片群（Ｄ１）の含有量、
・ペプチド断片群（Ｄ２）の含有量、
・ペプチド断片群（Ｄ３）の含有量、
・第２のペプチド断片の含有量（好ましくは、第２のペプチド断片の含有量、並びに、第１及び第３のペプチド断片から選択された１種又は２種のペプチド断片の含有量）、
・第４のペプチド断片の含有量、
・第５のペプチド断片の含有量、
・第７のペプチド断片の含有量（好ましくは、第７のペプチド断片の含有量、並びに、第６、第８及び第９のペプチド断片から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片の含有量）、
・第８のペプチド断片の含有量（好ましくは、第８のペプチド断片の含有量、並びに、第６、第７及び第９のペプチド断片から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片の含有量）、
・第９のペプチド断片の含有量（好ましくは、第９のペプチド断片の含有量、並びに、第６、第７及び第８のペプチド断片から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片の含有量）、又は、
・第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量（好ましくは、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量、並びに、第１、第３及び第６のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片の含有量）
を低減させることにより、脱リン酸化試薬を使用して調製された標識化核酸（当該脱リン酸化試薬により核酸の５’末端及び／又は３’末端を脱リン酸化し、脱リン酸化された核酸の５’末端及び／又は３’末端に標識物質を結合させることにより得られた標識化核酸）の、核酸検出法における検出感度を向上させることができることを見出し、本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は、以下の発明を包含する。【００１２】
［１］脱リン酸化試薬の品質を評価する方法であって、以下の工程：
（１−１）アルカリホスファターゼと、前記アルカリホスファターゼに由来するペプチド断片とを含有する脱リン酸化試薬を準備する工程；及び
（１−２）前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片の含有量の比率が所定の基準値以下である場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する工程
を含む、前記方法。
［２］前記脱リン酸化試薬が、２０００Ｕ／ｍｇ以上のアルカリホスファターゼ比活性を有する、［１］に記載の方法。
［３］前記アルカリホスファターゼが、以下の（ａ）及び（ｂ）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される、［１］又は［２］に記載の方法。
［４］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなる２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ａ１）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ１）の含有量の比率が、下記式（Ａ１）：
（ＸＡ１／Ｙ）×１００≦５．００００      ・・・（Ａ１）
［式中、ＸＡ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ａ１）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［５］前記ペプチド断片群（Ａ１）が、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片、及び、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる第３のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片を含む、［４］に記載の方法。
［６］前記ペプチド断片群（Ａ１）が、前記第１のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ１）の含有量の比率が前記式（Ａ１）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第１のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（１）：
（Ｘ１／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（１）
［式中、Ｘ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第１のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［５］に記載の方法。
［７］前記ペプチド断片群（Ａ１）が、前記第２のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ１）の含有量の比率が前記式（Ａ１）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（２）：
（Ｘ２／Ｙ）×１００≦０．８０００      ・・・（２）
［式中、Ｘ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第２のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［５］又は［６］に記載の方法。
［８］前記ペプチド断片群（Ａ１）が、前記第３のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ１）の含有量の比率が前記式（Ａ１）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第３のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（３）：
（Ｘ３／Ｙ）×１００≦２．３０００      ・・・（３）
［式中、Ｘ３は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第３のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［５］〜［７］のいずれか一つに記載の方法。
［９］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ａ２）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ２）の含有量の比率が、以下の式（Ａ２）：
（ＸＡ２／Ｙ）×１００≦２．４０００      ・・・（Ａ２）
［式中、ＸＡ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ａ２）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［１０］前記ペプチド断片群（Ａ２）が、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片、及び、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む、［９］に記載の方法。
［１１］前記ペプチド断片群（Ａ２）が、前記第１のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ２）の含有量の比率が前記式（Ａ２）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第１のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（１）：
（Ｘ１／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（１）
［式中、Ｘ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第１のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１０］に記載の方法。
［１２］前記ペプチド断片群（Ａ２）が、前記第２のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ２）の含有量の比率が前記式（Ａ２）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（２）：
（Ｘ２／Ｙ）×１００≦０．８０００      ・・・（２）
［式中、Ｘ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第２のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１０］又は［１１］に記載の方法。
［１３］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する１３〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ａ３）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ３）の含有量の比率が、以下の式（Ａ３）：
（ＸＡ３／Ｙ）×１００≦４．５０００      ・・・（Ａ３）
［式中、ＸＡ３は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ａ３）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［１４］前記ペプチド断片群（Ａ３）が、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片、及び、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる第３のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む、［１３］に記載の方法。
［１５］前記ペプチド断片群（Ａ３）が、前記第１のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ３）の含有量の比率が前記式（Ａ３）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第１のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（１）：
（Ｘ１／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（１）
［式中、Ｘ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第１のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１４］に記載の方法。
［１６］前記ペプチド断片群（Ａ３）が、前記第３のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ａ３）の含有量の比率が前記式（Ａ３）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第３のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（３）：
（Ｘ３／Ｙ）×１００≦２．３０００      ・・・（３）
［式中、Ｘ３は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第３のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１４］又は［１５］に記載の方法。
［１７］前記脱リン酸化試薬が、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（２）：
（Ｘ２／Ｙ）×１００≦０．８０００      ・・・（２）
［式中、Ｘ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第２のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［１８］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２のペプチド断片の含有量の比率が前記式（２）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第１のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（１）：
（Ｘ１／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（１）
［式中、Ｘ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第１のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１７］に記載の方法。
［１９］前記脱リン酸化試薬が、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる第３のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２のペプチド断片の含有量の比率が前記式（２）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第３のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（３）：
（Ｘ３／Ｙ）×１００≦２．３０００      ・・・（３）
［式中、Ｘ３は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第３のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす、［１７］又は［１８］に記載の方法。
［２０］前記アルカリホスファターゼが、以下の（ａ）及び（ｂ１）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ１）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される、［４］〜［１９］のいずれか一つに記載の方法。
［２１］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位から選択された連続する５〜２０個のアミノ酸残基からなる１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｂ１）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｂ１）の含有量の比率が、以下の式（Ｂ１）：
（ＸＢ１／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（Ｂ１）
［式中、ＸＢ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｂ１）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［２２］前記ペプチド断片群（Ｂ１）が、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる第４のペプチド断片を含む、［２１］に記載の方法。
［２３］前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｂ１）の含有量の比率が前記式（Ｂ１）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第４のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（４）：
（Ｘ４／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（４）
［式中、Ｘ４は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第４のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［２２］に記載の方法。
［２４］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位から選択された連続する１１〜２０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位を含む１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｂ２）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｂ２）の含有量の比率が、以下の式（Ｂ２）：
（ＸＢ２／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（Ｂ２）
［式中、ＸＢ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｂ２）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［２５］前記ペプチド断片群（Ｂ２）が、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる第４のペプチド断片を含む、［２４］に記載の方法。
［２６］前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｂ２）の含有量の比率が前記式（Ｂ２）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第４のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（４）：
（Ｘ４／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（４）
［式中、Ｘ４は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第４のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［２５］に記載の方法。
［２７］前記脱リン酸化試薬が、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる第４のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第４のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（４）：
（Ｘ４／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（４）
［式中、Ｘ４は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第４のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［２８］前記アルカリホスファターゼが、以下の（ａ）及び（ｂ２）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ２）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含むアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される、［２１］〜［２７］のいずれか一つに記載の方法。
［２９］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位から選択された連続する５〜２０個のアミノ酸残基からなる１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｃ１）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｃ１）の含有量の比率が、以下の式（Ｃ１）：
（ＸＣ１／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（Ｃ１）
［式中、ＸＣ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｃ１）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［３０］前記ペプチド断片（Ｃ１）が、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる第５のペプチド断片を含む、［２９］に記載の方法。
［３１］前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｃ１）の含有量の比率が前記式（Ｃ１）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第５のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（５）：
（Ｘ５／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（５）
［式中、Ｘ５は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第５のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［３０］に記載の方法。
［３２］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位から選択された連続する９〜２０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位を含む１種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｃ２）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｃ２）の含有量の比率が、以下の式（Ｃ２）：
（ＸＣ２／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（Ｃ２）
［式中、ＸＣ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｃ２）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［３３］前記ペプチド断片（Ｃ２）が、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる第５のペプチド断片を含む、［３２］に記載の方法。
［３４］前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｃ２）の含有量の比率が前記式（Ｃ２）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第５のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（５）：
（Ｘ５／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（５）
［式中、Ｘ５は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第５のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［３３］に記載の方法。
［３５］前記脱リン酸化試薬が、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる第５のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第５のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（５）：
（Ｘ５／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（５）
［式中、Ｘ５は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第５のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［３６］前記アルカリホスファターゼが、以下の（ａ）及び（ｂ３）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ３）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含むアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される、［２９］〜［３５］のいずれか一つに記載の方法。
［３７］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなる２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｄ１）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が、以下の式（Ｄ１）：
（ＸＤ１／Ｙ）×１００≦４．４０００      ・・・（Ｄ１）
［式中、ＸＤ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｄ１）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［３８］前記ペプチド断片（Ｄ１）が、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片、及び、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種、３種又は４種のペプチド断片を含む、［３７］に記載の方法。
［３９］前記ペプチド断片群（Ｄ１）が、前記第６のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が前記式（Ｄ１）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第６のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（６）：
（Ｘ６／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（６）
［式中、Ｘ６は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第６のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［３８］に記載の方法。
［４０］前記ペプチド断片群（Ｄ１）が、前記第７のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が前記式（Ｄ１）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第７のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（７）：
（Ｘ７／Ｙ）×１００≦１．６０００      ・・・（７）
［式中、Ｘ７は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第７のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［３８］又は［３９］に記載の方法。
［４１］前記ペプチド断片（Ｄ１）が、前記第８のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が前記式（Ｄ１）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第８のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（８）：
（Ｘ８／Ｙ）×１００≦０．２０００      ・・・（８）
［式中、Ｘ８は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第８のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［３８］〜［４０］のいずれか一つに記載の方法。
［４２］前記ペプチド断片（Ｄ１）が、前記第９のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が前記式（Ｄ１）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第９のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（９）：
（Ｘ９／Ｙ）×１００≦０．３５００      ・・・（９）
［式中、Ｘ９は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第９のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［３８］〜［４１］のいずれか一つに記載の方法。
［４３］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する１３〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｄ２）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ２）の含有量の比率が、以下の式（Ｄ２）：
（ＸＤ２／Ｙ）×１００≦３．４０００      ・・・（Ｄ２）
［式中、ＸＤ２は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｄ２）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［４４］前記ペプチド断片群（Ｄ２）が、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片、及び、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む、［４３］に記載の方法。
［４５］前記ペプチド断片群（Ｄ２）が、前記第６のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ２）の含有量の比率が前記式（Ｄ２）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第６のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（６）：
（Ｘ６／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（６）
［式中、Ｘ６は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第６のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［４４］に記載の方法。
［４６］前記ペプチド断片群（Ｄ２）が、前記第７のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ２）の含有量の比率が前記式（Ｄ２）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第７のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（７）：
（Ｘ７／Ｙ）×１００≦１．６０００      ・・・（７）
［式中、Ｘ７は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第７のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［４４］又は［４５］に記載の方法。
［４７］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する１２〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位を含む２種以上のペプチド断片で構成されるペプチド断片群（Ｄ３）を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ３）の含有量の比率が、以下の式（Ｄ３）：
（ＸＤ３／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（Ｄ３）
［式中、ＸＤ３は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記ペプチド断片群（Ｄ３）のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［４８］前記ペプチド断片群（Ｄ３）が、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片、及び、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む、［４７］に記載の方法。
［４９］前記ペプチド断片群（Ｄ３）が、前記第８のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ３）の含有量の比率が前記式（Ｄ３）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第８のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（８）：
（Ｘ８／Ｙ）×１００≦０．２０００      ・・・（８）
［式中、Ｘ８は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第８のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［４８］に記載の方法。
［５０］前記ペプチド断片群（Ｄ３）が、前記第９のペプチド断片を含み、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記ペプチド断片群（Ｄ３）の含有量の比率が前記式（Ｄ３）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第９のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（９）：
（Ｘ９／Ｙ）×１００≦０．３５００      ・・・（９）
［式中、Ｘ９は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第９のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［４８］又は［４９］に記載の方法。
［５１］前記脱リン酸化試薬が、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第７のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（７）：
（Ｘ７／Ｙ）×１００≦１．６０００      ・・・（７）
［式中、Ｘ７は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第７のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［５２］前記脱リン酸化試薬が、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第７のペプチド断片の含有量の比率が前記式（７）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第６のペプチド断片の含有量が、下記式（６）：
（Ｘ６／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（６）
［式中、Ｘ６は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第６のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［５１］に記載の方法。
［５３］前記脱リン酸化試薬が、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第７のペプチド断片の含有量の比率が前記式（７）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第８のペプチド断片の含有量が、下記式（８）：
（Ｘ８／Ｙ）×１００≦０．２０００      ・・・（８）
［式中、Ｘ８は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第８のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［５１］又は［５２］に記載の方法。
［５４］前記脱リン酸化試薬が、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第７のペプチド断片の含有量の比率が前記式（７）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第９のペプチド断片の含有量が、下記式（９）：
（Ｘ９／Ｙ）×１００≦０．３５００      ・・・（９）
［式中、Ｘ９は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第９のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［５１］〜［５３］のいずれか一つに記載の方法。
［５５］前記脱リン酸化試薬が、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第８のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（８）：
（Ｘ８／Ｙ）×１００≦０．２０００      ・・・（８）
［式中、Ｘ８は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第８のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［５６］前記脱リン酸化試薬が、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第８のペプチド断片の含有量の比率が前記式（８）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第６のペプチド断片の含有量が、下記式（６）：
（Ｘ６／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（６）
［式中、Ｘ６は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第６のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［５５］に記載の方法。
［５７］前記脱リン酸化試薬が、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第８のペプチド断片の含有量の比率が前記式（８）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第９のペプチド断片の含有量が、下記式（９）：
（Ｘ９／Ｙ）×１００≦０．３５００      ・・・（９）
［式中、Ｘ９は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第９のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［５５］又は［５６］に記載の方法。
［５８］前記脱リン酸化試薬が、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第９のペプチド断片の含有量の比率が、下記式（９）：
（Ｘ９／Ｙ）×１００≦０．３５００      ・・・（９）
［式中、Ｘ９は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第９のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［５９］前記脱リン酸化試薬が、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第９のペプチド断片の含有量の比率が前記式（９）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第６のペプチド断片の含有量が、下記式（６）：
（Ｘ６／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（６）
［式中、Ｘ６は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第６のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［５８］に記載の方法。
［６０］前記アルカリホスファターゼが、以下の（ａ）及び（ｂ４）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ４）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される、［３７］〜［５９］のいずれか一つに記載の方法。
［６１］前記脱リン酸化試薬が、
配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片、
配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる第４のペプチド断片、
配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる第５のペプチド断片、
配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片、
配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片、及び
配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片
を含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量が、それぞれ、下記式（２）、（４）、（５）、（７）、（８）及び（９）：
（Ｘ２／Ｙ）×１００≦０．８０００      ・・・（２）
（Ｘ４／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（４）
（Ｘ５／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（５）
（Ｘ７／Ｙ）×１００≦１．６０００      ・・・（７）
（Ｘ８／Ｙ）×１００≦０．２０００      ・・・（８）
（Ｘ９／Ｙ）×１００≦０．３５００      ・・・（９）
［式中、Ｘ２、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９は、それぞれ、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［１］〜［３］のいずれか一つに記載の方法。
［６２］前記脱リン酸化試薬が、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量が、それぞれ、下記式（２）、（４）、（５）、（７）、（８）及び（９）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第１のペプチド断片の含有量が、下記式（１）：
（Ｘ１／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（１）
［式中、Ｘ１は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第１のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［６１］に記載の方法。
［６３］前記脱リン酸化試薬が、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる第３のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量が、それぞれ、下記式（２）、（４）、（５）、（７）、（８）及び（９）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第３のペプチド断片の含有量が、下記式（３）：
（Ｘ３／Ｙ）×１００≦２．３０００      ・・・（３）
［式中、Ｘ３は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第３のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［６１］又は［６２］に記載の方法。
［６４］前記脱リン酸化試薬が、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片をさらに含有し、
前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量が、それぞれ、下記式（２）、（４）、（５）、（７）、（８）及び（９）を満たすとともに、前記アルカリホスファターゼの含有量に対する前記第６のペプチド断片の含有量が、下記式（６）：
（Ｘ６／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（６）
［式中、Ｘ６は、前記脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、前記第６のペプチド断片のピーク面積値を表し、Ｙは、前記と同義である。］
を満たす場合に、前記脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する、［６１］〜［６３］のいずれか一つに記載の方法。
［６５］前記アルカリホスファターゼが、以下の（ａ）及び（ｂ５）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ５）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７８〜９０位、１７７〜１８７位、４６９〜４７７位、５１６〜５２８位及び５３４〜５５１位を含むアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される、［６１］〜［６４］のいずれか一つに記載の方法。
［６６］前記アルカリホスファターゼ（ｂ５）が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９１〜１０９位、９３〜１０５位及び５２９〜５３１位からなる群から選択された１種又は２種以上を含む、［６５］に記載の方法。
［６７］前記アルカリホスファターゼ（ｂ５）が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９１〜１０９位及び５２９〜５３１位を含む、［６５］に記載の方法。
［６８］標的核酸を検出する方法であって、
前記方法が、以下の工程：
（２−１）前記標的核酸を含むサンプルを準備する工程；
（２−２）アルカリホスファターゼと、前記アルカリホスファターゼに由来するペプチド断片群とを含有する脱リン酸化試薬を準備する工程；
（２−３）前記サンプルを前記脱リン酸化試薬で処理して前記標的核酸を脱リン酸化する工程；
（２−４）脱リン酸化された前記標的核酸を標識化する工程；
（２−５）標識化された前記標的核酸を検出する工程
を含み、
前記工程（２−２）で準備される前記脱リン酸化試薬が、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬である、前記方法。
［６９］前記標的核酸がＲＮＡである、［６８］に記載の方法。
［７０］前記工程（２−５）において、前記標的核酸と、前記標的核酸にハイブリダイズし得るプローブとを接触させ、前記プローブにハイブリダイズした前記標的核酸を検出する、［６８］又は［６９］に記載の方法。
［７１］前記プローブが支持体に固定されている、［７０］に記載の方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により、アルカリホスファターゼを含有する脱リン酸化試薬の品質を評価する方法、及び、該評価方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬を使用して標的核酸を検出する方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第１のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図２】図２は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第２のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図３】図３は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第３のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図４】図４は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第４のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図５】図５は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第５のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図６】図６は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第６のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図７】図７は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第７のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図８】図８は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第８のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図９】図９は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第９のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図１０】図１０は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第１のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図１１】図１１は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第２のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図１２】図１２は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第３のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図１３】図１３は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第４のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図１４】図１４は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第５のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図１５】図１５は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第６のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図１６】図１６は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第７のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図１７】図１７は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第８のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図１８】図１８は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第９のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
【図１９】図１９は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＵＶ分析により得られた、アルカリホスファターゼに関するクロマトグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。以下で説明する態様のうち２以上の態様を組み合わせること、及び、以下で説明する実施形態のうち２以上の実施形態を組み合わせることが可能であり、そのような組み合わせも本発明に包含される。なお、本明細書において使用される「数値Ｍ〜数値Ｎ」という表現は、数値Ｍ以上数値Ｎ以下の範囲を意味する。
【００１６】
≪用語の説明≫
以下、本明細書で使用される用語を説明する。
【００１７】
［アルカリホスファターゼ］
アルカリホスファターゼは、アルカリホスファターゼ活性を有する酵素である。アルカリホスファターゼは、アルカリホスファターゼ活性を有する限り特に限定されない。アルカリホスファターゼ活性は、アルカリ性（ｐＨ８〜１１、例えば、ｐＨ８〜１０又はｐＨ９〜１１）において、リン酸モノエステル結合を加水分解する活性であり、その反応形式は、ＥＣ３．１．３．１に分類される。アルカリホスファターゼは、１種のアルカリホスファターゼであってもよいし、２種以上のアルカリホスファターゼの混合物であってもよい。
【００１８】
アルカリホスファターゼの構造（例えば、一次構造、二次構造、三次構造、四次構造等）は特に限定されない。例えば、アルカリホスファターゼは、糖鎖を有してもよいし、糖鎖を有しなくてもよい。また、アルカリホスファターゼは、タンパク質分子の構造（例えば、タンパク質分子のアミノ酸配列）、糖鎖修飾等の相違に基づいて存在し得るいずれのアイソザイムであってもよい。また、アルカリホスファターゼは、１個のサブユニットから形成されるモノマー（単量体）であってもよいし、２個以上のサブユニットから形成されるオリゴマー（例えば、２量体、４量体等）であってもよい。オリゴマーは、ホモオリゴマーであってもよいし、ヘテロオリゴマーであってもよい。
【００１９】
アルカリホスファターゼが由来する動物は特に限定されない。アルカリホスファターゼが由来する動物としては、例えば、ウシ、エビ、アルカリホスファターゼをコードする遺伝子を導入した微生物等が挙げられる。ウシ由来のアルカリホスファターゼはアルカリホスファターゼ活性が高いことから、アルカリホスファターゼが由来する動物はウシが好ましい。アルカリホスファターゼがウシに由来する場合、アルカリホスファターゼが由来する臓器は小腸又は大腸であることが好ましい。
【００２０】
アルカリホスファターゼは、野生型であってもよいし、変異型であってもよい。変異型アルカリホスファターゼは、例えば、野生型アルカリホスファターゼが有するタンパク質分子のアミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有する。変異型アルカリホスファターゼが有するタンパク質分子のアミノ酸配列は、野生型アルカリホスファターゼが有するタンパク質分子のアミノ酸配列に対して、好ましくは７０％以上、さらに好ましくは７５％以上、さらに一層好ましくは８０％以上、さらに一層好ましくは８５％以上、さらに一層好ましくは９０％以上、さらに一層好ましくは９５％以上の配列同一性を有する。
【００２１】
一実施形態において、アルカリホスファターゼは、以下の（ａ）及び（ｂ）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００２２】
一実施形態において、アルカリホスファターゼは、以下の（ａ）及び（ｂ１）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ１）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００２３】
一実施形態において、アルカリホスファターゼは、以下の（ａ）及び（ｂ２）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ２）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含むアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００２４】
一実施形態において、アルカリホスファターゼは、以下の（ａ）及び（ｂ３）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ３）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含むアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００２５】
一実施形態において、アルカリホスファターゼは、以下の（ａ）及び（ｂ４）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ４）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００２６】
一実施形態において、アルカリホスファターゼは、以下の（ａ）及び（ｂ５）：
（ａ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ；及び
（ｂ５）配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７８〜９０位、１７７〜１８７位、４６９〜４７７位、５１６〜５２８位及び５３４〜５５１位を含むアミノ酸配列からなるタンパク質分子を有するアルカリホスファターゼ
から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ５）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００２７】
好ましい実施形態において、上記アルカリホスファターゼ（ｂ５）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９１〜１０９位、９３〜１０５位及び５２９〜５３１位からなる群から選択された１種又は２種以上をさらに含む。
【００２８】
さらに好ましい実施形態において、上記アルカリホスファターゼ（ｂ５）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９１〜１０９位及び５２９〜５３１位をさらに含む。
【００２９】
上記アルカリホスファターゼ（ａ）が有するタンパク質分子のアミノ酸配列（すなわち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列）は、ウシ由来のアルカリホスファターゼが有するタンパク質分子のアミノ酸配列に相当する。したがって、上記アルカリホスファターゼ（ａ）には、ウシ由来のアルカリホスファターゼが包含される。
【００３０】
上記アルカリホスファターゼ（ｂ）が有するタンパク質分子のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と７０％以上、好ましくは７５％以上、さらに一層好ましくは８０％以上、さらに一層好ましくは８５％以上、さらに一層好ましくは９０％以上、さらに一層好ましくは９５％以上の配列同一性を有する。上記アルカリホスファターゼ（ｂ１）〜（ｂ５）が有するタンパク質分子のアミノ酸配列も同様である。
【００３１】
上記アルカリホスファターゼ（ｂ）には、野生型アルカリホスファターゼ（例えば、ウシ以外の動物に由来するアルカリホスファターゼ、多型を有するウシ由来のアルカリホスファターゼ等）及び変異型アルカリホスファターゼのいずれも含まれる。上記アルカリホスファターゼ（ｂ１）〜（ｂ５）も同様である。
【００３２】
上記アルカリホスファターゼ（ｂ１）に関し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加される位置は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位以外の位置である。
【００３３】
上記アルカリホスファターゼ（ｂ２）に関し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加される位置は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位以外の位置である。
【００３４】
上記アルカリホスファターゼ（ｂ３）に関し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加される位置は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位以外の位置である。
【００３５】
上記アルカリホスファターゼ（ｂ４）に関し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加される位置は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位以外の位置である。
【００３６】
上記アルカリホスファターゼ（ｂ５）に関し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加される位置は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７８〜９０位、１７７〜１８７位、４６９〜４７７位、５１６〜５２８位及び５３４〜５５１位以外の位置である。
【００３７】
上記アルカリホスファターゼ（ｂ５）が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９１〜１０９位、９３〜１０５位及び５２９〜５３１位からなる群から選択された１種又は２種以上を含む実施形態において、配列番号１０に記載のアミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加される位置は、選択された１種又は２種以上の配列以外の位置である。
【００３８】
上記アルカリホスファターゼ（ｂ５）が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９１〜１０９位及び５２９〜５３１位を含む実施形態において、配列番号１０に記載のアミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加される位置は、９１〜１０９位及び５２９〜５３１位以外の位置である。
【００３９】
［第１のペプチド断片］
第１のペプチド断片は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。第１のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号１：EAEAEFLIPAEEENPAFWNRQAAQ）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜１０９位に相当する。
【００４０】
脱リン酸化試薬が第１のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片、及び、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる第３のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片をさらに含有することが好ましい。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、第１〜第３のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００４１】
第１のペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。第１のペプチド断片は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬が第１のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、通常、第１のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、第１のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００４２】
［第２のペプチド断片］
第２のペプチド断片は、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。第２のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号２：EGVSLEKREAEAE）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７８〜９０位に相当する。
【００４３】
脱リン酸化試薬が第２のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片、及び、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる第３のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片をさらに含有することが好ましい。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、第１〜第３のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００４４】
第２のペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。第２のペプチド断片は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬が第２のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、通常、第２のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、第２のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００４５】
［第３のペプチド断片］
第３のペプチド断片は、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる。第３のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号３：IPAEEENPAFWNR）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位に相当する。
【００４６】
脱リン酸化試薬が第３のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片、及び、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片をさらに含有することが好ましい。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、第１〜第３のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００４７】
第３のペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。第３のペプチド断片は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬が第３のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、通常、第３のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、第３のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００４８】
［第４のペプチド断片］
第４のペプチド断片は、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる。第４のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号４：DRQVPDSAGTA）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位に相当する。
【００４９】
脱リン酸化試薬が第４のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、第４のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００５０】
第４のペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。第４のペプチド断片は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬が第４のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、第４のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、第４のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００５１】
［第５のペプチド断片］
第５のペプチド断片は、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる。第５のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号５：APGKALDSK）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位に相当する。
【００５２】
脱リン酸化試薬が第５のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、第５のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００５３】
第５のペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。第５のペプチド断片は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬が第５のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、第５のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、第５のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００５４】
［第６のペプチド断片］
第６のペプチド断片は、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる。第６のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号６：VPLASETHGGEDVAVF）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５３１位に相当する。
【００５５】
脱リン酸化試薬が第６のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片、及び、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片をさらに含有することが好ましい。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、第６〜第９のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００５６】
第６のペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。第６のペプチド断片は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬が第６のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、第６のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、第６のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００５７】
［第７のペプチド断片］
第７のペプチド断片は、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる。第７のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号７：VPLASETHGGEDV）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位に相当する。
【００５８】
脱リン酸化試薬が第７のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片、及び、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片をさらに含有することが好ましい。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、第６〜第９のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００５９】
第７のペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。第７のペプチド断片は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬が第７のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、第７のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、第７のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００６０】
［第８のペプチド断片］
第８のペプチド断片は、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる。第８のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号８：GPQAHLVHGVQEETFVAH）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５５１位に相当する。
【００６１】
脱リン酸化試薬が第８のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片、及び、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片をさらに含有することが好ましい。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、第６〜第９のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００６２】
第８のペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。第８のペプチド断片は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬が第８のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、第８のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、第８のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００６３】
［第９のペプチド断片］
第９のペプチド断片は、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる。第９のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号９：GPQAHLVHGVQE）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位に相当する。
【００６４】
脱リン酸化試薬が第９のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片、及び、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片をさらに含有することが好ましい。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、第６〜第９のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００６５】
第９のペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。第９のペプチド断片は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬が第９のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、第９のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、第９のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００６６】
［ペプチド断片群（Ａ１）］
ペプチド断片群（Ａ１）は、２種以上のペプチド断片で構成され、ペプチド断片群（Ａ１）を構成する各ペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなる。ペプチド断片群（Ａ１）は、脱リン酸化試薬に含有されるペプチド断片のうち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなるペプチド断片に該当する全てのペプチド断片で構成される。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ１）は、３種以上のペプチド断片で構成される。
【００６７】
ペプチド断片群（Ａ１）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位の一部（連続する複数個のアミノ酸残基からなる部分）である。すなわち、ペプチド断片群（Ａ１）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位の分解により生じ得る。このことは、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含む必要があることを意味しない。脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含まなくてもよい。但し、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むことが好ましい。
【００６８】
ペプチド断片群（Ａ１）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位の一部である限り特に限定されないが、好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７５〜１３０位の一部、さらに好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７５〜１２５位の一部、さらに一層好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７５〜１２０位の一部である。
【００６９】
ペプチド断片群（Ａ１）を構成する各ペプチド断片を構成するアミノ酸残基の個数は５〜５０個である限り特に限定されないが、好ましくは５〜４５個、さらに好ましくは１０〜４０個、さらに一層好ましくは１０〜３０個である。
【００７０】
好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ１）は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片、及び、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる第３のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片を含む。この実施形態において、ペプチド断片群（Ａ１）は、第１〜第３のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００７１】
第１のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号１：EAEAEFLIPAEEENPAFWNRQAAQ）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜１０９位に相当する。第２のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号２：EGVSLEKREAEAE）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７８〜９０位に相当する。第３のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号３：IPAEEENPAFWNR）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位に相当する。
【００７２】
ペプチド断片群（Ａ１）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。ペプチド断片群（Ａ１）は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ａ１）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、通常、ペプチド断片群（Ａ１）を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ１）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００７３】
［ペプチド断片群（Ａ２）］
ペプチド断片群（Ａ２）は、２種以上のペプチド断片で構成され、ペプチド断片群（Ａ２）を構成する各ペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位（EAEAE）を含む。ペプチド断片群（Ａ２）は、脱リン酸化試薬に含有されるペプチド断片のうち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位を含むペプチド断片に該当する全てのペプチド断片で構成される。
【００７４】
ペプチド断片群（Ａ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列において、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位が含まれる位置は特に限定されない。配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位が含まれる位置は、ペプチド断片のＮ末端部分、ペプチド断片のＣ末端部分、並びに、ペプチド断片のＮ末端部分及びＣ末端部分以外の部分のいずれであってもよい。
【００７５】
ペプチド断片群（Ａ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位の一部（連続する複数個のアミノ酸残基からなる部分）である。すなわち、ペプチド断片群（Ａ２）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位の分解により生じ得る。このことは、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含む必要があることを意味しない。脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含まなくてもよい。但し、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むことが好ましい。
【００７６】
ペプチド断片群（Ａ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位の一部であり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位を含む限り特に限定されないが、好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１２５位の一部、さらに好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７５〜１２０位の一部、さらに一層好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７５〜１１５位の一部である。
【００７７】
ペプチド断片群（Ａ２）を構成する各ペプチド断片を構成するアミノ酸残基の個数は５〜５０個である限り特に限定されないが、好ましくは５〜４０個、さらに好ましくは１０〜４０個、さらに一層好ましくは１０〜３０個である。
【００７８】
好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ２）は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片、及び、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む。この実施形態において、ペプチド断片群（Ａ２）は、第１及び第２のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００７９】
第１のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号１：EAEAEFLIPAEEENPAFWNRQAAQ）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜１０９位に相当し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位を含む（下線部は配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位に相当する）。第２のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号２：EGVSLEKREAEAE）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７８〜９０位に相当し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位を含む（下線部は配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜９０位に相当する）。
【００８０】
ペプチド断片群（Ａ２）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。ペプチド断片群（Ａ２）は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ａ２）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、通常、ペプチド断片群（Ａ２）を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ２）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００８１】
［ペプチド断片群（Ａ３）］
ペプチド断片群（Ａ３）は、２種以上のペプチド断片で構成され、ペプチド断片群（Ａ３）を構成するそれぞれのペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する１３〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位（IPAEEENPAFWNR）を含む。ペプチド断片群（Ａ３）は、脱リン酸化試薬に含有されるペプチド断片のうち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位から選択された連続する１３〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位を含むペプチド断片に該当する全てのペプチド断片で構成される。
【００８２】
ペプチド断片群（Ａ３）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列において、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位が含まれる位置は、ペプチド断片のＮ末端部分、ペプチド断片のＣ末端部分、並びに、ペプチド断片のＮ末端部分及びＣ末端部分以外の部分のいずれであってもよい。
【００８３】
ペプチド断片群（Ａ３）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位の一部（連続する複数個のアミノ酸残基からなる部分）である。すなわち、ペプチド断片群（Ａ３）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位の分解により生じ得る。このことは、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含む必要があることを意味しない。脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含まなくてもよい。但し、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むことが好ましい。
【００８４】
ペプチド断片群（Ａ３）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位の一部であり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位を含む限り特に限定されないが、好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７５〜１３０位の一部、さらに好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８５〜１３０位の一部、さらに一層好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８５〜１２０位の一部である。
【００８５】
ペプチド断片群（Ａ３）を構成する各ペプチド断片を構成するアミノ酸残基の個数は１３〜５０個である限り特に限定されないが、好ましくは１３〜４５個、さらに好ましくは１３〜４０個、さらに一層好ましくは１３〜３０個である。
【００８６】
好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ３）は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１のペプチド断片、及び、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる第３のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む。この実施形態において、ペプチド断片群（Ａ３）は、第１及び第３のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００８７】
第１のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号１：EAEAEFLIPAEEENPAFWNRQAAQ）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の８６〜１０９位に相当し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位を含む（下線部は配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位に相当する）。第３のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号３：IPAEEENPAFWNR）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９３〜１０５位に相当する。
【００８８】
ペプチド断片群（Ａ３）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の７１〜１３０位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。ペプチド断片群（Ａ３）は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ａ３）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、通常、ペプチド断片群（Ａ３）を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ３）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００８９】
［ペプチド断片群（Ｂ１）］
ペプチド断片群（Ｂ１）は、１種以上のペプチド断片で構成され、ペプチド断片群（Ｂ１）を構成する各ペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位から選択された連続する５〜２０個のアミノ酸残基からなる。ペプチド断片群（Ｂ１）は、１種以上のペプチド断片で構成されてもよいし、２種以上のペプチド断片で構成されてもよい。ペプチド断片群（Ｂ１）は、脱リン酸化試薬に含有されるペプチド断片のうち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位から選択された連続する５〜２０個のアミノ酸残基からなるペプチド断片に該当する全てのペプチド断片で構成される。
【００９０】
ペプチド断片群（Ｂ１）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位の一部（連続する複数個のアミノ酸残基からなる部分）である。すなわち、ペプチド断片群（Ｂ１）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位の分解により生じ得る。このことは、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含む必要があることを意味しない。脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含まなくてもよい。但し、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含むことが好ましい。
【００９１】
ペプチド断片群（Ｂ１）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位の一部である限り特に限定されないが、好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜１９５位の一部、さらに好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６５〜１９５位の一部、さらに一層好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６５〜１９０位の一部である。
【００９２】
ペプチド断片群（Ｂ１）を構成する各ペプチド断片を構成するアミノ酸残基の個数は５〜２０個である限り特に限定されないが、好ましくは８〜２０個、さらに好ましくは１０〜２０個、さらに一層好ましくは１２〜２０個である。
【００９３】
好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｂ１）は、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる第４のペプチド断片を含む。この実施形態において、ペプチド断片群（Ｂ１）は、第４のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【００９４】
第４のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号４：DRQVPDSAGTA）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位に相当する。
【００９５】
ペプチド断片群（Ｂ１）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。ペプチド断片群（Ｂ１）は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｂ１）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、通常、ペプチド断片群（Ｂ１）を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｂ１）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【００９６】
［ペプチド断片群（Ｂ２）］
ペプチド断片群（Ｂ２）は、１種以上のペプチド断片で構成され、ペプチド断片群（Ｂ２）を構成する各ペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位から選択された連続する１１〜２０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位（DRQVPDSAGTA）を含む。ペプチド断片群（Ｂ２）は、１種以上のペプチド断片で構成されてもよいし、２種以上のペプチド断片で構成されてもよい。ペプチド断片群（Ｂ２）は、脱リン酸化試薬に含有されるペプチド断片のうち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位から選択された連続する１１〜２０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位を含むペプチド断片に該当する全てのペプチド断片で構成される。
【００９７】
ペプチド断片群（Ｂ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列において、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位が含まれる位置は特に限定されない。配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位が含まれる位置は、ペプチド断片のＮ末端部分、ペプチド断片のＣ末端部分、並びに、ペプチド断片のＮ末端部分及びＣ末端部分以外の部分のいずれであってもよい。
【００９８】
ペプチド断片群（Ｂ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位の一部（連続する複数個のアミノ酸残基からなる部分）である。すなわち、ペプチド断片群（Ｂ２）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位の分解により生じ得る。このことは、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含む必要があることを意味しない。脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含まなくてもよい。但し、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含むことが好ましい。
【００９９】
ペプチド断片群（Ｂ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位の一部であり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位を含む限り特に限定されないが、好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜１９５位の一部、さらに好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜１９０位の一部、さらに一層好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６５〜１９０位の一部である。
【０１００】
ペプチド断片群（Ｂ２）を構成する各ペプチド断片を構成するアミノ酸残基の個数は１１〜２０個である限り特に限定されないが、好ましくは８〜２０個、さらに好ましくは１０〜２０個、さらに一層好ましくは１２〜２０個である。
【０１０１】
好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｂ２）は、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる第４のペプチド断片を含む。この実施形態において、ペプチド断片群（Ｂ２）は、第４のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【０１０２】
第４のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号４：DRQVPDSAGTA）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１７７〜１８７位に相当する。
【０１０３】
ペプチド断片群（Ｂ２）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の１６１〜２００位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。ペプチド断片群（Ｂ２）は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｂ２）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、通常、ペプチド断片群（Ｂ２）を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｂ２）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０１０４】
［ペプチド断片群（Ｃ１）］
ペプチド断片群（Ｃ１）は、１種以上のペプチド断片で構成され、ペプチド断片群（Ｃ１）を構成する各ペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位から選択された連続する５〜２０個のアミノ酸残基からなる。ペプチド断片群（Ｃ１）は、１種以上のペプチド断片で構成されてもよいし、２種以上のペプチド断片で構成されてもよい。ペプチド断片群（Ｃ１）は、脱リン酸化試薬に含有されるペプチド断片のうち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位から選択された連続する５〜２０個のアミノ酸残基からなるペプチド断片に該当する全てのペプチド断片で構成される。
【０１０５】
ペプチド断片群（Ｃ１）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位の一部（連続する複数個のアミノ酸残基からなる部分）である。すなわち、ペプチド断片群（Ｃ１）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位の分解により生じ得る。このことは、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含む必要があることを意味しない。脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含まなくてもよい。但し、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含むことが好ましい。
【０１０６】
ペプチド断片群（Ｃ１）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位の一部である限り特に限定されないが、好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５５〜４９０位の一部、さらに好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６１〜４９０位の一部、さらに一層好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６５〜４９０位の一部である。
【０１０７】
ペプチド断片群（Ｃ１）を構成する各ペプチド断片を構成するアミノ酸残基の個数は５〜２０個である限り特に限定されないが、好ましくは６〜２０個、さらに好ましくは７〜２０個、さらに一層好ましくは８〜２０個である。
【０１０８】
好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｃ１）は、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる第５のペプチド断片を含む。この実施形態において、ペプチド断片群（Ｃ１）は、第５のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【０１０９】
第５のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号５：APGKALDSK）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位に相当する。
【０１１０】
ペプチド断片群（Ｃ１）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。ペプチド断片群（Ｃ１）は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｃ１）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、通常、ペプチド断片群（Ｃ１）を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｃ１）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０１１１】
［ペプチド断片群（Ｃ２）］
ペプチド断片群（Ｃ２）は、１種以上のペプチド断片で構成され、ペプチド断片群（Ｃ２）を構成する各ペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位から選択された連続する９〜２０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位（APGKALDSK）を含む。ペプチド断片群（Ｃ２）は、１種以上のペプチド断片で構成されてもよいし、２種以上のペプチド断片で構成されてもよい。ペプチド断片群（Ｃ２）は、脱リン酸化試薬に含有されるペプチド断片のうち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位から選択された連続する９〜２０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位を含むペプチド断片に該当する全てのペプチド断片で構成される。
【０１１２】
ペプチド断片群（Ｃ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列において、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位が含まれる位置は特に限定されない。配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位が含まれる位置は、ペプチド断片のＮ末端部分、ペプチド断片のＣ末端部分、並びに、ペプチド断片のＮ末端部分及びＣ末端部分以外の部分のいずれであってもよい。
【０１１３】
ペプチド断片群（Ｃ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位の一部（連続する複数個のアミノ酸残基からなる部分）である。すなわち、ペプチド断片群（Ｃ２）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位の分解により生じ得る。このことは、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含む必要があることを意味しない。脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含まなくてもよい。但し、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含むことが好ましい。
【０１１４】
ペプチド断片群（Ｃ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位の一部であり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位を含む限り特に限定されないが、好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５５〜４９０位の一部、さらに好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６１〜４９０位の一部、さらに一層好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６５〜４９０位の一部である。
【０１１５】
ペプチド断片群（Ｃ２）を構成する各ペプチド断片を構成するアミノ酸残基の個数は９〜２０個である限り特に限定されないが、好ましくは９〜１９個、さらに好ましくは９〜１８個、さらに一層好ましくは９〜１７個である。
【０１１６】
好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｃ２）は、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる第５のペプチド断片を含む。この実施形態において、ペプチド断片群（Ｃ２）は、第５のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【０１１７】
第５のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号５：APGKALDSK）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４６９〜４７７位に相当する。
【０１１８】
ペプチド断片群（Ｃ２）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の４５１〜４９０位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。ペプチド断片群（Ｃ２）は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｃ２）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、ペプチド断片群（Ｃ２）を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｃ２）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０１１９】
［ペプチド断片群（Ｄ１）］
ペプチド断片群（Ｄ１）は、２種以上のペプチド断片で構成され、ペプチド断片群（Ｄ１）を構成する各ペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなる。ペプチド断片群（Ｄ１）は、脱リン酸化試薬に含有されるペプチド断片のうち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する５〜５０個のアミノ酸残基からなるペプチド断片に該当する全てのペプチド断片で構成される。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ１）は、３種以上のペプチド断片で構成される。さらに好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ１）は、４種以上のペプチド断片で構成される。
【０１２０】
ペプチド断片群（Ｄ１）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位の一部（連続する複数個のアミノ酸残基からなる部分）である。すなわち、ペプチド断片群（Ｄ１）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位の分解により生じ得る。このことは、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含む必要があることを意味しない。脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含まなくてもよい。但し、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むことが好ましい。
【０１２１】
ペプチド断片群（Ｄ１）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位の一部である限り特に限定されないが、好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０５〜５７８位の一部、さらに好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１１〜５７８位の一部、さらに一層好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１１〜５７１位の一部である。
【０１２２】
ペプチド断片群（Ｄ１）を構成する各ペプチド断片を構成するアミノ酸残基の個数は５〜５０個である限り特に限定されないが、好ましくは５〜４５個、さらに好ましくは１０〜４０個、さらに一層好ましくは１０〜３０個である。
【０１２３】
好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ１）は、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片、及び、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種、３種又は４種のペプチド断片を含む。この実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ１）は、第６〜第９のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【０１２４】
第６のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号６：VPLASETHGGEDVAVF）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５３１位に相当する。第７のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号７：VPLASETHGGEDV）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位に相当する。第８のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号８：GPQAHLVHGVQEETFVAH）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５５１位に相当する。第９のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号９：GPQAHLVHGVQE）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位に相当する。
【０１２５】
ペプチド断片群（Ｄ１）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。ペプチド断片群（Ｄ１）は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｄ１）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、通常、ペプチド断片群（Ｄ１）を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ１）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０１２６】
［ペプチド断片群（Ｄ２）］
ペプチド断片群（Ｄ２）は、２種以上のペプチド断片で構成され、ペプチド断片群（Ｄ２）を構成する各ペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する１３〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位（VPLASETHGGEDV）を含む。ペプチド断片群（Ｄ２）は、脱リン酸化試薬に含有されるペプチド断片のうち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する１３〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位を含むペプチド断片に該当する全てのペプチド断片で構成される。
【０１２７】
ペプチド断片群（Ｄ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列において、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位が含まれる位置は特に限定されない。配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位が含まれる位置は、ペプチド断片のＮ末端部分、ペプチド断片のＣ末端部分、並びに、ペプチド断片のＮ末端部分及びＣ末端部分以外の部分のいずれであってもよい。
【０１２８】
ペプチド断片群（Ｄ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位の一部（連続する複数個のアミノ酸残基からなる部分）である。すなわち、ペプチド断片群（Ｄ２）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位の分解により生じ得る。このことは、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含む必要があることを意味しない。脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含まなくてもよい。但し、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むことが好ましい。
【０１２９】
ペプチド断片群（Ｄ２）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位の一部であり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位を含む限り特に限定されないが、好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７０位の一部、さらに好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５６０位の一部、さらに一層好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５５５位の一部である。
【０１３０】
ペプチド断片群（Ｄ２）を構成する各ペプチド断片を構成するアミノ酸残基の個数は１３〜５０個である限り特に限定されないが、好ましくは１３〜４５個、さらに好ましくは１３〜４０個、さらに一層好ましくは１３〜３５個である。
【０１３１】
好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ２）は、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなる第６のペプチド断片、及び、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる第７のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む。この実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ２）は、第６及び第７のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【０１３２】
第６のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号６：VPLASETHGGEDVAVF）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５３１位に相当し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位を含む（下線部は配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位に相当する）。第７のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号７：VPLASETHGGEDV）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１６〜５２８位に相当する。
【０１３３】
ペプチド断片群（Ｄ２）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。ペプチド断片群（Ｄ２）は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｄ２）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、ペプチド断片群（Ｄ２）を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ２）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０１３４】
［ペプチド断片群（Ｄ３）］
ペプチド断片群（Ｄ３）は、２種以上のペプチド断片で構成され、ペプチド断片群（Ｄ３）を構成する各ペプチド断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する１２〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位（GPQAHLVHGVQE）を含む。ペプチド断片群（Ｄ３）は、脱リン酸化試薬に含有されるペプチド断片のうち、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位から選択された連続する１２〜５０個のアミノ酸残基からなり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位を含むペプチド断片に該当する全てのペプチド断片で構成される。
【０１３５】
ペプチド断片群（Ｄ３）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列において、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位が含まれる位置は、ペプチド断片のＮ末端部分、ペプチド断片のＣ末端部分、並びに、ペプチド断片のＮ末端部分及びＣ末端部分以外の部分のいずれであってもよい。
【０１３６】
ペプチド断片群（Ｄ３）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位の一部（連続する複数個のアミノ酸残基からなる部分）である。すなわち、ペプチド断片群（Ｄ３）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位の分解により生じ得る。このことは、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含む必要があることを意味しない。脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含まなくてもよい。但し、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むことが好ましい。
【０１３７】
ペプチド断片群（Ｄ３）を構成する各ペプチド断片のアミノ酸配列は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位の一部であり、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位を含む限り特に限定されないが、好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０６〜５７８位の一部、さらに好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５１１〜５７８位の一部、さらに一層好ましくは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５２１〜５７８位の一部である。
【０１３８】
ペプチド断片群（Ｄ３）を構成する各ペプチド断片を構成するアミノ酸残基の個数は１２〜５０個である限り特に限定されないが、好ましくは１２〜４５個、さらに好ましくは１２〜４０個、さらに一層好ましくは１２〜３５個である。
【０１３９】
好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ３）は、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる第８のペプチド断片、及び、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる第９のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む。この実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ３）は、第８及び第９のペプチド断片以外のペプチド断片を含んでもよいし、含まなくてもよい。
【０１４０】
第８のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号８：GPQAHLVHGVQEETFVAH）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５５１位に相当し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位を含む（下線部は配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位に相当する）。第９のペプチド断片のアミノ酸配列（配列番号９：GPQAHLVHGVQE）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５３４〜５４５位に相当する。
【０１４１】
ペプチド断片群（Ｄ３）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の５０１〜５７８位を含むアルカリホスファターゼの分解により生じ得る。ペプチド断片群（Ｄ３）は、脱リン酸化試薬に含有されていないアルカリホスファターゼの分解により生じたものであってもよいが、通常は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼの分解により生じたものである。したがって、脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｄ３）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼは、ペプチド断片群（Ｄ３）を生じ得るアルカリホスファターゼである。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ３）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０１４２】
≪式の説明≫
以下、本明細書で使用される式を説明する。
本明細書で使用される式は、以下の通りである。
（ＸＡ１／Ｙ）×１００≦５．００００      ・・・（Ａ１）
（ＸＡ２／Ｙ）×１００≦２．４０００      ・・・（Ａ２）
（ＸＡ３／Ｙ）×１００≦４．５０００      ・・・（Ａ３）
（ＸＢ１／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（Ｂ１）
（ＸＢ２／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（Ｂ２）
（ＸＣ１／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（Ｃ１）
（ＸＣ２／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（Ｃ２）
（ＸＤ１／Ｙ）×１００≦４．４０００      ・・・（Ｄ１）
（ＸＤ２／Ｙ）×１００≦３．４０００      ・・・（Ｄ２）
（ＸＤ３／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（Ｄ３）
（Ｘ１／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（１）
（Ｘ２／Ｙ）×１００≦０．８０００      ・・・（２）
（Ｘ３／Ｙ）×１００≦２．３０００      ・・・（３）
（Ｘ４／Ｙ）×１００≦０．６０００      ・・・（４）
（Ｘ５／Ｙ）×１００≦０．１８００      ・・・（５）
（Ｘ６／Ｙ）×１００≦１．００００      ・・・（６）
（Ｘ７／Ｙ）×１００≦１．６０００      ・・・（７）
（Ｘ８／Ｙ）×１００≦０．２０００      ・・・（８）
（Ｘ９／Ｙ）×１００≦０．３５００      ・・・（９）
【０１４３】
上記式（Ａ１）中、ＸＡ１は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ａ１）のピーク面積値を表す。「ペプチド断片群（Ａ１）のピーク面積値」は、ペプチド断片群（Ａ１）を構成する全ての種類のペプチド断片の合計ピーク面積値を意味する。
【０１４４】
上記式（Ａ２）中、ＸＡ２は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ａ２）のピーク面積値を表す。「ペプチド断片群（Ａ２）のピーク面積値」は、ペプチド断片群（Ａ２）を構成する全ての種類のペプチド断片の合計ピーク面積値を意味する。
【０１４５】
上記式（Ａ３）中、ＸＡ３は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ａ３）のピーク面積値を表す。「ペプチド断片群（Ａ３）のピーク面積値」は、ペプチド断片群（Ａ３）を構成する全ての種類のペプチド断片の合計ピーク面積値を意味する。
【０１４６】
上記式（Ｂ１）中、ＸＢ１は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｂ１）のピーク面積値を表す。「ペプチド断片群（Ｂ１）のピーク面積値」は、ペプチド断片群（Ｂ１）が１種のペプチド断片で構成される場合、当該１種のペプチド断片のピーク面積値を意味し、ペプチド断片群（Ｂ１）が２種以上のペプチド断片で構成される場合、当該２種以上のペプチド断片の合計ピーク面積値（すなわち、ペプチド断片群（Ｂ１）を構成する全ての種類のペプチド断片の合計ピーク面積値）を意味する。
【０１４７】
上記式（Ｂ２）中、ＸＢ２は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｂ２）のピーク面積値を表す。「ペプチド断片群（Ｂ２）のピーク面積値」は、ペプチド断片群（Ｂ２）が１種のペプチド断片で構成される場合、当該１種のペプチド断片のピーク面積値を意味し、ペプチド断片群（Ｂ２）が２種以上のペプチド断片で構成される場合、当該２種以上のペプチド断片の合計ピーク面積値（すなわち、ペプチド断片群（Ｂ２）を構成する全ての種類のペプチド断片の合計ピーク面積値）を意味する。
【０１４８】
上記式（Ｃ１）中、ＸＣ１は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｃ１）のピーク面積値を表す。「ペプチド断片群（Ｃ１）のピーク面積値」は、ペプチド断片群（Ｃ１）が１種のペプチド断片で構成される場合、当該１種のペプチド断片のピーク面積値を意味し、ペプチド断片群（Ｃ１）が２種以上のペプチド断片で構成される場合、当該２種以上のペプチド断片の合計ピーク面積値（すなわち、ペプチド断片群（Ｃ１）を構成する全ての種類のペプチド断片の合計ピーク面積値）を意味する。
【０１４９】
上記式（Ｃ２）中、ＸＣ２は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｃ２）のピーク面積値を表す。「ペプチド断片群（Ｃ２）のピーク面積値」は、ペプチド断片群（Ｃ２）が１種のペプチド断片で構成される場合、当該１種のペプチド断片のピーク面積値を意味し、ペプチド断片群（Ｃ２）が２種以上のペプチド断片で構成される場合、当該２種以上のペプチド断片の合計ピーク面積値（すなわち、ペプチド断片群（Ｃ２）を構成する全ての種類のペプチド断片の合計ピーク面積値）を意味する。
【０１５０】
上記式（Ｄ１）中、ＸＤ１は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｄ１）のピーク面積値を表す。「ペプチド断片群（Ｄ１）のピーク面積値」は、ペプチド断片群（Ｄ１）を構成する全ての種類のペプチド断片の合計ピーク面積値を意味する。
【０１５１】
上記式（Ｄ２）中、ＸＤ２は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｄ２）のピーク面積値を表す。「ペプチド断片群（Ｄ２）のピーク面積値」は、ペプチド断片群（Ｄ２）を構成する全ての種類のペプチド断片の合計ピーク面積値を意味する。
【０１５２】
上記式（Ｄ３）中、ＸＤ３は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｄ３）のピーク面積値を表す。「ペプチド断片群（Ｄ３）のピーク面積値」は、ペプチド断片群（Ｄ３）を構成する全ての種類のペプチド断片の合計ピーク面積値を意味する。
【０１５３】
上記式（１）中、Ｘ１は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第１のペプチド断片のピーク面積値を表す。
【０１５４】
上記式（２）中、Ｘ２は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第２のペプチド断片のピーク面積値を表す。
【０１５５】
上記式（３）中、Ｘ３は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第３のペプチド断片のピーク面積値を表す。
【０１５６】
上記式（４）中、Ｘ４は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第４のペプチド断片のピーク面積値を表す。
【０１５７】
上記式（５）中、Ｘ５は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第５のペプチド断片のピーク面積値を表す。
【０１５８】
上記式（６）中、Ｘ６は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第６のペプチド断片のピーク面積値を表す。
【０１５９】
上記式（７）中、Ｘ７は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第７のペプチド断片のピーク面積値を表す。
【０１６０】
上記式（８）中、Ｘ８は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第８のペプチド断片のピーク面積値を表す。
【０１６１】
上記式（９）中、Ｘ９は、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第９のペプチド断片のピーク面積値を表す。
【０１６２】
上記式（Ａ１）〜（Ａ３）、（Ｂ１）、（Ｂ２）、（Ｃ１）、（Ｃ２）、（Ｄ１）〜（Ｄ３）及び（１）〜（９）中、Ｙは、脱リン酸化試薬のＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、アルカリホスファターゼのピーク面積値を表す。「アルカリホスファターゼのピーク面積値」は、脱リン酸化試薬が１種のアルカリホスファターゼを含有する場合、当該１種のアルカリホスファターゼのピーク面積値を意味し、脱リン酸化試薬が２種以上のアルカリホスファターゼを含有する場合、当該２種以上のアルカリホスファターゼの合計ピーク面積値（すなわち、脱リン酸化試薬に含まれる全ての種類のアルカリホスファターゼの合計ピーク面積値）を意味する。
【０１６３】
（ＸＡ１／Ｙ）×１００の値は、５．００００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（ＸＡ１／Ｙ）×１００の値は、好ましくは４．５０００以下、さらに好ましくは４．００００以下、さらに一層好ましくは３．５０００以下である。（ＸＡ１／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（ＸＡ１／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ａ１）の分離除去）に見合う効果を得る点から、（ＸＡ１／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０８００以上、さらに好ましくは０．１０００以上、さらに一層好ましくは０．１５００以上である。
【０１６４】
（ＸＡ２／Ｙ）×１００の値は、２．４０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（ＸＡ２／Ｙ）×１００の値は、好ましくは２．２０００以下、さらに好ましくは２．００００以下、さらに一層好ましくは１．５０００以下である。（ＸＡ２／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（ＸＡ２／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ａ２）の分離除去）に見合う効果を得る点から、（ＸＡ２／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０８００以上、さらに好ましくは０．１０００以上、さらに一層好ましくは０．１５００以上である。
【０１６５】
（ＸＡ３／Ｙ）×１００の値は、４．５０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（ＸＡ３／Ｙ）×１００の値は、好ましくは４．００００以下、さらに好ましくは３．００００以下、さらに一層好ましくは２．５０００以下である。（ＸＡ３／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（ＸＡ３／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ａ３）の分離除去）に見合う効果を得る点から、（ＸＡ３／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０８００以上、さらに好ましくは０．１０００以上、さらに一層好ましくは０．１５００以上である。
【０１６６】
（ＸＢ１／Ｙ）×１００の値は、０．６０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（ＸＢ１／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．５０００以下、さらに好ましくは０．３０００以下、さらに一層好ましくは０．２０００以下である。（ＸＢ１／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（ＸＢ１／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｂ１）の分離除去）に見合う効果を得る点から、（ＸＢ１／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０５００以上、さらに好ましくは０．０６００以上、さらに一層好ましくは０．０７００以上である。
【０１６７】
（ＸＢ２／Ｙ）×１００の値は、０．６０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（ＸＢ２／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．５０００以下、さらに好ましくは０．３０００以下、さらに一層好ましくは０．２０００以下である。（ＸＢ２／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（ＸＢ２／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｂ２）の分離除去）に見合う効果を得る点から、（ＸＢ２／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０５００以上、さらに好ましくは０．０６００以上、さらに一層好ましくは０．０７００以上である。
【０１６８】
（ＸＣ１／Ｙ）×１００の値は、０．１８００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（ＸＣ１／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．１５００以下、さらに好ましくは０．１２００以下、さらに一層好ましくは０．１０００以下である。（ＸＣ１／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（ＸＣ１／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｃ１）の分離除去）に見合う効果を得る点から、（ＸＣ１／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０５００以上、さらに好ましくは０．０６００以上、さらに一層好ましくは０．０７００以上である。
【０１６９】
（ＸＣ２／Ｙ）×１００の値は、０．１８００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（ＸＣ２／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．１５００以下、さらに好ましくは０．１２００以下、さらに一層好ましくは０．１０００以下である。（ＸＣ２／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（ＸＣ２／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｃ２）の分離除去）に見合う効果を得る点から、（ＸＣ２／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０５００以上、さらに好ましくは０．０６００以上、さらに一層好ましくは０．０７００以上である。
【０１７０】
（ＸＤ１／Ｙ）×１００の値は、４．４０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（ＸＤ１／Ｙ）×１００の値は、好ましくは４．００００以下、さらに好ましくは３．５０００以下、さらに一層好ましくは３．００００以下である。（ＸＤ１／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（ＸＤ１／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｄ１）の分離除去）に見合う効果を得る点から、（ＸＤ１／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０８００以上、さらに好ましくは０．１０００以上、さらに一層好ましくは０．１５００以上である。
【０１７１】
（ＸＤ２／Ｙ）×１００の値は、３．４０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（ＸＤ２／Ｙ）×１００の値は、好ましくは３．００００以下、さらに好ましくは２．８０００以下、さらに一層好ましくは２．５０００以下である。（ＸＤ２／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（ＸＤ２／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｄ２）の分離除去）に見合う効果を得る点から、（ＸＤ２／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０８００以上、さらに好ましくは０．１０００以上、さらに一層好ましくは０．１５００以上である。
【０１７２】
（ＸＤ３／Ｙ）×１００の値は、１．００００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（ＸＤ３／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．９０００以下、さらに好ましくは０．８０００以下、さらに一層好ましくは０．７０００以下である。（ＸＤ３／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（ＸＤ３／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｄ３）の分離除去）に見合う効果を得る点から、（ＸＤ３／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０８００以上、さらに好ましくは０．１０００以上、さらに一層好ましくは０．１５００以上である。
【０１７３】
（Ｘ１／Ｙ）×１００の値は、１．００００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（Ｘ１／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．９０００以下、さらに好ましくは０．８０００以下、さらに一層好ましくは０．７０００以下である。（Ｘ１／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（Ｘ１／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製による第１のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、（Ｘ１／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０８００以上、さらに好ましくは０．１０００以上、さらに一層好ましくは０．１５００以上である。
【０１７４】
（Ｘ２／Ｙ）×１００の値は、０．８０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（Ｘ２／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．７０００以下、さらに好ましくは０．６０００以下、さらに一層好ましくは０．５０００以下である。（Ｘ２／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（Ｘ２／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製による第２のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、（Ｘ２／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０８００以上、さらに好ましくは０．１０００以上、さらに一層好ましくは０．１５００以上である。
【０１７５】
（Ｘ３／Ｙ）×１００の値は、２．３０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（Ｘ３／Ｙ）×１００の値は、好ましくは２．００００以下、さらに好ましくは１．５０００以下、さらに一層好ましくは１．００００以下である。（Ｘ３／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（Ｘ３／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製による第３のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、（Ｘ３／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．１５００以上、さらに好ましくは０．１０００以上、さらに一層好ましくは０．０８００以上である。
【０１７６】
（Ｘ４／Ｙ）×１００の値は、０．６０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（Ｘ４／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．５０００以下、さらに好ましくは０．３０００以下、さらに一層好ましくは０．２０００以下である。（Ｘ４／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（Ｘ４／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製による第４のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、（Ｘ４／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０５００以上、さらに好ましくは０．０６００以上、さらに一層好ましくは０．０７００以上である。
【０１７７】
（Ｘ５／Ｙ）×１００の値は、０．１８００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（Ｘ５／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．１５００以下、さらに好ましくは０．１２００以下、さらに一層好ましくは０．１０００以下である。（Ｘ５／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（Ｘ５／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製による第５のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、（Ｘ５／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０５００以上、さらに好ましくは０．０６００以上、さらに一層好ましくは０．０７００以上である。
【０１７８】
（Ｘ６／Ｙ）×１００の値は、１．００００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（Ｘ６／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．９０００以下、さらに好ましくは０．８０００以下、さらに一層好ましくは０．７０００以下である。（Ｘ６／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（Ｘ６／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製による第６のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、（Ｘ６／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０５００以上、さらに好ましくは０．０６００以上、さらに一層好ましくは０．０７００以上である。
【０１７９】
（Ｘ７／Ｙ）×１００の値は、１．６０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（Ｘ７／Ｙ）×１００の値は、好ましくは１．５０００以下、さらに好ましくは１．２０００以下、さらに一層好ましくは１．００００以下である。（Ｘ７／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（Ｘ７／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製による第７のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、（Ｘ７／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０５００以上、さらに好ましくは０．０６００以上、さらに一層好ましくは０．０７００以上である。
【０１８０】
（Ｘ８／Ｙ）×１００の値は、０．２０００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（Ｘ８／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．１８００以下、さらに好ましくは０．１７００以下、さらに一層好ましくは０．１５００以下である。（Ｘ８／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（Ｘ８／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製による第８のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、（Ｘ８／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０５００以上、さらに好ましくは０．０６００以上、さらに一層好ましくは０．０７００以上である。
【０１８１】
（Ｘ９／Ｙ）×１００の値は、０．３５００以下である限り特に限定されないが、小さいほど好ましい。（Ｘ９／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．３２００以下、さらに好ましくは０．３０００以下、さらに一層好ましくは０．２８００以下である。（Ｘ９／Ｙ）×１００の下限値は、検出限界値である。但し、（Ｘ９／Ｙ）×１００の値を小さくするための労力（例えば、精製による第９のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、（Ｘ９／Ｙ）×１００の値は、好ましくは０．０８００以上、さらに好ましくは０．１０００以上、さらに一層好ましくは０．１５００以上である。
【０１８２】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ａ１）のピーク面積値は小さいほど好ましい。ペプチド断片群（Ａ１）のピーク面積値は、好ましくは１４０００以下、さらに好ましくは１２０００以下、さらに一層好ましくは１００００以下である。ペプチド断片群（Ａ１）のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、ペプチド断片群（Ａ１）のピーク面積値を小さくための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ａ１）の分離除去）に見合う効果を得る点から、ペプチド断片群（Ａ１）のピーク面積値は、好ましくは６００以上、さらに好ましくは８００以上、さらに一層好ましくは１０００以上である。
【０１８３】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ａ２）のピーク面積値は、小さいほど好ましい。ペプチド断片群（Ａ２）のピーク面積値は、好ましくは６０００以下、さらに好ましくは５０００以下、さらに一層好ましくは４０００以下である。ペプチド断片群（Ａ２）のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、ペプチド断片群（Ａ２）のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ａ２）の分離除去）に見合う効果を得る点から、ペプチド断片群（Ａ２）のピーク面積値は、好ましくは５００以上、さらに好ましくは８００以上、さらに一層好ましくは１０００以上である。
【０１８４】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ａ３）のピーク面積値は、小さいほど好ましい。ペプチド断片群（Ａ３）のピーク面積値は、好ましくは１２０００以下、さらに好ましくは１００００以下、さらに一層好ましくは８０００以下である。ペプチド断片群（Ａ３）のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、ペプチド断片群（Ａ３）のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ａ３）の分離除去）に見合う効果を得る点から、ペプチド断片群（Ａ３）のピーク面積値は、好ましくは５００以上、さらに好ましくは８００以上、さらに一層好ましくは１０００以上である。
【０１８５】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｂ１）のピーク面積値は小さいほど好ましい。ペプチド断片群（Ｂ１）のピーク面積値は、好ましくは１５００以下、さらに好ましくは１２００以下、さらに一層好ましくは１０００以下である。ペプチド断片群（Ｂ１）のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、ペプチド断片群（Ｂ１）のピーク面積値を小さくための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｂ１）の分離除去）に見合う効果を得る点から、ペプチド断片群（Ｂ１）のピーク面積値は、好ましくは１００以上、さらに好ましくは１５０以上、さらに一層好ましくは２００以上である。
【０１８６】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｂ２）のピーク面積値は小さいほど好ましい。ペプチド断片群（Ｂ２）のピーク面積値は、好ましくは１５００以下、さらに好ましくは１２００以下、さらに一層好ましくは１０００以下である。ペプチド断片群（Ｂ２）のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、ペプチド断片群（Ｂ２）のピーク面積値を小さくための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｂ２）の分離除去）に見合う効果を得る点から、ペプチド断片群（Ｂ２）のピーク面積値は、好ましくは１００以上、さらに好ましくは１５０以上、さらに一層好ましくは２００以上である。
【０１８７】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｃ１）のピーク面積値は小さいほど好ましい。ペプチド断片群（Ｃ１）のピーク面積値は、好ましくは４００以下、さらに好ましくは３８０以下、さらに一層好ましくは３５０以下である。ペプチド断片群（Ｃ１）のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、ペプチド断片群（Ｃ１）のピーク面積値を小さくための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｃ１）の分離除去）に見合う効果を得る点から、ペプチド断片群（Ｃ１）のピーク面積値は、好ましくは１００以上、さらに好ましくは１３０以上、さらに一層好ましくは１５０以上である。
【０１８８】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｃ２）のピーク面積値は小さいほど好ましい。ペプチド断片群（Ｃ２）のピーク面積値は、好ましくは４００以下、さらに好ましくは３８０以下、さらに一層好ましくは３５０以下である。ペプチド断片群（Ｃ２）のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、ペプチド断片群（Ｃ２）のピーク面積値を小さくための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｃ２）の分離除去）に見合う効果を得る点から、ペプチド断片群（Ｃ２）のピーク面積値は、好ましくは１００以上、さらに好ましくは１３０以上、さらに一層好ましくは１５０以上である。
【０１８９】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｄ１）のピーク面積値は小さいほど好ましい。ペプチド断片群（Ｄ１）のピーク面積値は、好ましくは１００００以下、さらに好ましくは８０００以下、さらに一層好ましくは７０００以下である。ペプチド断片群（Ｄ１）のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、ペプチド断片群（Ｄ１）のピーク面積値を小さくための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｄ１）の分離除去）に見合う効果を得る点から、ペプチド断片群（Ｄ１）のピーク面積値は好ましくは６００以上、さらに好ましくは８００以上、さらに一層好ましくは１０００以上である。
【０１９０】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｄ２）のピーク面積値は、小さいほど好ましい。ペプチド断片群（Ｄ２）のピーク面積値は、好ましくは７５００以下、さらに好ましくは７０００以下、さらに一層好ましくは６０００以下である。ペプチド断片群（Ｄ２）のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、ペプチド断片群（Ｄ２）のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｄ２）の分離除去）に見合う効果を得る点から、ペプチド断片群（Ｄ２）のピーク面積値は、好ましくは５００以上、さらに好ましくは６００以上、さらに一層好ましくは８００以上である。
【０１９１】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、ペプチド断片群（Ｄ３）のピーク面積値は、小さいほど好ましい。ペプチド断片群（Ｄ３）のピーク面積値は、好ましくは２４００以下、さらに好ましくは２０００以下、さらに一層好ましくは１５００以下である。ペプチド断片群（Ｄ３）のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、ペプチド断片群（Ｄ３）のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製によるペプチド断片群（Ｄ３）の分離除去）に見合う効果を得る点から、ペプチド断片群（Ｄ３）のピーク面積値は、好ましくは２００以上、さらに好ましくは３００以上、さらに一層好ましくは４００以上である。
【０１９２】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第１のペプチド断片のピーク面積値は、小さいほど好ましい。第１のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは３０００以下、さらに好ましくは２５００以下、さらに一層好ましくは２０００以下である。第１のペプチド断片のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、第１のペプチド断片のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製による第１のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、第１のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは５００以上、さらに好ましくは８００以上、さらに一層好ましくは１０００以上である。
【０１９３】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第２のペプチド断片のピーク面積値は、小さいほど好ましい。第２のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは２０００以下、さらに好ましくは１８００以下、さらに一層好ましくは１５００以下である。第２のペプチド断片のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、第２のペプチド断片のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製による第２のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、第２のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは５００以上、さらに好ましくは８００以上、さらに一層好ましくは１０００以上である。
【０１９４】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第３のペプチド断片のピーク面積値は、小さいほど好ましい。第３のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは６０００以下、さらに好ましくは３０００以下、さらに一層好ましくは１０００以下である。第３のペプチド断片のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、第３のペプチド断片のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製による第３のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、第３のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは５００以上、さらに好ましくは８００以上、さらに一層好ましくは１０００以上である。
【０１９５】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第４のペプチド断片のピーク面積値は、小さいほど好ましい。第４のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは１５００以下、さらに好ましくは１２００以下、さらに一層好ましくは１０００以下である。第４のペプチド断片のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、第４のペプチド断片のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製による第４のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、第４のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは１００以上、さらに好ましくは１５０以上、さらに一層好ましくは２００以上である。
【０１９６】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第５のペプチド断片のピーク面積値は、小さいほど好ましい。第５のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは４００以下、さらに好ましくは３８０以下、さらに一層好ましくは３５０以下である。第５のペプチド断片のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、第５のペプチド断片のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製による第５のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、第５のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは１００以上、さらに好ましくは１３０以上、さらに一層好ましくは１５０以上である。
【０１９７】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第６のペプチド断片のピーク面積値は、小さいほど好ましい。第６のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは３０００以下、さらに好ましくは２５００以下、さらに一層好ましくは２０００以下である。第６のペプチド断片のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、第６のペプチド断片のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製による第６のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、第６のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは１００以上、さらに好ましくは１５０以上、さらに一層好ましくは２００以上である。
【０１９８】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第７のペプチド断片のピーク面積値は、小さいほど好ましい。第７のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは４５００以下、さらに好ましくは３０００以下、さらに一層好ましくは２５００以下である。第７のペプチド断片のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、第７のペプチド断片のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製による第７のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、第７のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは１００以上、さらに好ましくは１５０以上、さらに一層好ましくは２００以上である。
【０１９９】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第８のペプチド断片のピーク面積値は、小さいほど好ましい。第８のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは５００以下、さらに好ましくは４５０以下、さらに一層好ましくは４００以下である。第８のペプチド断片のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、第８のペプチド断片のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製による第８のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、第８のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは１００以上、さらに好ましくは１５０以上、さらに一層好ましくは２００以上である。
【０２００】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから自動積分法により算出された、第９のペプチド断片のピーク面積値は、小さいほど好ましい。第９のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは１０００以下、さらに好ましくは９００以下、さらに一層好ましくは８００以下である。第９のペプチド断片のピーク面積値の下限値は、検出限界値である。但し、第９のペプチド断片のピーク面積値を小さくするための労力（例えば、精製による第９のペプチド断片の分離除去）に見合う効果を得る点から、第９のペプチド断片のピーク面積値は、好ましくは１００以上、さらに好ましくは１５０以上、さらに一層好ましくは２００以上である。
【０２０１】
脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用したＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから自動積分法により算出された、アルカリホスファターゼのピーク面積値は、好ましくは２０００００以上、さらに好ましくは２２００００以上、さらに一層好ましくは２４００００以上である。アルカリホスファターゼのピーク面積値の上限値は特に限定されない。アルカリホスファターゼのピーク面積値は、好ましくは５０００００以下、さらに好ましくは４０００００以下、さらに一層好ましくは３５００００以下である。
【０２０２】
≪ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析及びＬＣ−ＵＶ分析≫
以下、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析及びＬＣ−ＵＶ分析について説明する。
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析及びＬＣ−ＵＶ分析は、求めるべき比率が、脱リン酸化試薬と同一であるサンプルを使用して実施される。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析及びＬＣ−ＵＶ分析は、例えば、脱リン酸化試薬から調製された水溶液であって、アルカリホスファターゼ濃度が１０重量％である水溶液を使用して実施することができる。
【０２０３】
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析は、ハイフネーテッド法の一種である。ハイフネーテッド法は、ガスクロマトグラフ、液体クロマトグラフ等のクロマトグラフと質量分析装置とを接続して分析する手法である。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析は、液体クロマトグラフ（ＬＣ）とタンデム質量分析装置（ＭＳ／ＭＳ）とを接続して分析する手法である。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析では、液体クロマトグラフにより分離された分析対象成分がイオン化され、生成したイオンがタンデム質量分析装置で分離され、特定の質量イオンがフラグメント化されて検出される。
【０２０４】
抽出イオンクロマトグラムは、ハイフネーテッド法において、一定の時間間隔でマススペクトルを測定し、コンピュータに記憶させた後、特定の（１種類とは限らない）ｍ／ｚ値における相対強度を読み出し、時間の関数として表したクロマトグラムである。
【０２０５】
ペプチド断片群（Ａ１）を構成する各ペプチド断片のピークを検出するために使用されるペプチド断片群（Ａ１）を構成する各ペプチド断片のイオンのｍ／ｚ値は、好ましくは５０〜２２００、さらに好ましくは２００〜１５００、さらに一層好ましくは３００〜１２００である。ペプチド断片群（Ａ２）、ペプチド断片群（Ａ３）、ペプチド断片群（Ｂ１）、ペプチド断片群（Ｂ２）、ペプチド断片群（Ｃ１）、ペプチド断片群（Ｃ２）、ペプチド断片群（Ｄ１）、ペプチド断片群（Ｄ２）又はペプチド断片群（Ｄ３）を構成する各ペプチド断片のイオンのｍ／ｚ値についても同様である。
【０２０６】
第１のペプチド断片のイオンのｍ／ｚ値は９２０．７６８２であり、第２のペプチド断片のイオンのｍ／ｚ値は７２３．８５７２であり、第３のペプチド断片のイオンのｍ／ｚ値は７８６．８７５７であり、第４のペプチド断片のイオンのｍ／ｚ値は５５８．７６７６であり、第５のペプチド断片のイオンのｍ／ｚ値は４４３．７５３３であり、第６のペプチド断片のｍ／ｚ値は８１４．４０１８であり、第７のペプチド断片のｍ／ｚ値は６５５．８１４８であり、第８のペプチド断片のｍ／ｚ値は６５２．６６２３であり、第９のペプチド断片のｍ／ｚ値は６３６．３２８２である。
【０２０７】
ｍ／ｚ値が特定されているペプチド断片のイオンに関しては、ｍ／ｚ値に基づいてペプチド断片の抽出イオンクロマトグラムを作成することができる。ｍ／ｚ値が特定されていないペプチド断片に関しては、あるピークが所定のペプチド断片のピークに該当するか否かを、当該ピークを示すペプチド断片のアミノ酸配列分析により確認した後、当該ピークのｍ／ｚ値に基づいてペプチド断片の抽出イオンクロマトグラムを作成することができる。
【０２０８】
ＬＣ−ＵＶ分析は、液体クロマトグラフ（ＬＣ）と紫外線検出器（ＵＶ検出器）とを接続して分析する手法である。ＬＣ−ＵＶ分析において、アルカリホスファターゼは、２１４ｎｍに吸収を有する成分として検出される。
【０２０９】
≪ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析の具体的条件≫
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析の具体的条件は、以下の通りである。
＜装置構成＞
質量分析計：ｍａＸｉｓ  ｉｍｐａｃｔ（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．製）
＜質量分析条件＞
イオン化方式：ＥＳＩ
測定イオン：正イオン
キャピラリー電圧：４５００Ｖ
ネブライザー：２．０ｂａｒ
ドライガス：８．０Ｌ／分
検出器電圧：１８２３Ｖ
測定範囲（ＭＳ）：ｍ／ｚ  ５０〜２２００
＜ＭＳ／ＭＳ条件＞
測定範囲（ＭＳ）：ｍ／ｚ  ５０〜２２００
コリジョンガス：窒素
【０２１０】
≪ＬＣ−ＵＶ分析の条件≫
ＬＣ−ＵＶ分析の具体的条件は、以下の通りである。
＜装置構成＞
液体クロマトグラフ：ＬＣ−３０Ａシステム（島津製作所製）
検出器：ＵＶ−Ｖｉｓ（１９０〜９００ｎｍ、島津製作所製）
＜液体クロマトグラフィー条件＞
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）カラムサイズ：２．１ｍｍ×１００ｍｍ
カラム温度：５０℃
移動相流速：０．２ｍＬ／分
移動相Ａ：水／ギ酸混液（１０００：１）
移動相Ｂ：アセトニトリル／水／ギ酸混液（９００：１００：１）
注入量：２０μＬ
グラジエントプログラム：
【０２１１】
【表１】
2020067120.tif 000002
【０２１２】
≪第１態様≫
本発明は、第１態様として、脱リン酸化試薬の品質を評価する方法を提供する。
【０２１３】
第１の態様に係る方法は、以下の工程：
（１−１）アルカリホスファターゼと、該アルカリホスファターゼに由来するペプチド断片とを含有する脱リン酸化試薬を準備する工程；及び
（１−２）アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片の含有量の比率が所定の基準値以下である場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する工程
を含む。
【０２１４】
工程（１−１）及び工程（１−２）は、順次行われる。
【０２１５】
工程（１−１）は、アルカリホスファターゼと、該アルカリホスファターゼに由来するペプチド断片とを含有する脱リン酸化試薬を準備する工程である。
【０２１６】
第１態様に係る方法において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片が、品質評価のために使用される。ペプチド断片が、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来するか否かは、アルカリホスファターゼ及びペプチド断片のアミノ酸配列を分析することにより判断することができる。
【０２１７】
一実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種のペプチド断片が、品質評価のために使用される。別の実施形態において、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する２種以上のペプチド断片（ペプチド断片群）が、品質評価のために使用される。
【０２１８】
脱リン酸化試薬は、品質評価のために使用される１種以上のペプチド断片以外に、品質評価のために使用されない１種以上のペプチド断片（該ペプチド断片は、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来してもよいし、由来しなくてもよい）を含有してもよい。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片以外に、１種以上の成分を含有してもよい。その他の成分としては、例えば、水等の水性媒体、マグネシウム塩、ナトリウム塩等の金属塩、界面活性剤、有機酸、グリセリン等が挙げられる。
【０２１９】
脱リン酸化試薬は、好ましくは２０００Ｕ／ｍｇ以上、さらに好ましくは２５００Ｕ／ｍｇ以上、さらに一層好ましくは３０００Ｕ／ｍｇ以上のアルカリホスファターゼ比活性を有する。脱リン酸化試薬が有するアルカリホスファターゼ比活性は、次のようにして測定される。ｐ−ニトロフェニルリン酸水溶液にアルカリホスファターゼを添加することで生成するｐ−ニトロフェノール由来の４０５ｎｍの吸光度を測定することにより、アルカリホスファターゼの比活性を算出することができる。
【０２２０】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ａ１）を含有する。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ａ１）以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ１）は、第１〜第３のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片を含む。
【０２２１】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ａ１）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ａ１）を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ１）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２２２】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ａ２）を含有する。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ａ２）以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ２）は、第１及び第２のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む。
【０２２３】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ａ２）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ａ２）を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ２）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）のアルカリホスファターゼから選択される。
この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２２４】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ａ３）を含有する。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ａ３）以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ３）は、第１及び第３のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む。
【０２２５】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ａ３）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ａ３）を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ａ３）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）のアルカリホスファターゼから選択される。
この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２２６】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、第２のペプチド断片を含有する。脱リン酸化試薬は、第２のペプチド断片以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、脱リン酸化試薬は、第１及び第３のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片をさらに含有する。
【０２２７】
脱リン酸化試薬が第２のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、第２のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、第２のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ１）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２２８】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｂ１）を含有する。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｂ１）以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｂ１）は、第４のペプチド断片を含む。
【０２２９】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｂ１）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｂ１）を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｂ１）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）のアルカリホスファターゼから選択される。
この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２３０】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｂ２）を含有する。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｂ２）以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｂ２）は、第４のペプチド断片を含む。
【０２３１】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｂ２）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｂ２）を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｂ２）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）のアルカリホスファターゼから選択される。
この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２３２】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、第４のペプチド断片を含有する。脱リン酸化試薬は、第４のペプチド断片以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。
【０２３３】
脱リン酸化試薬が第４のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、第４のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、第４のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ２）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２３４】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｃ１）を含有する。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｃ１）以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｃ１）は、第５のペプチド断片を含む。
【０２３５】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｃ１）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｃ１）を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｃ１）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２３６】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｃ２）を含有する。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｃ２）以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｃ２）は、第５のペプチド断片を含む。
【０２３７】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｃ２）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｃ２）を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｃ２）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２３８】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、第５のペプチド断片を含有する。脱リン酸化試薬は、第５のペプチド断片以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。
【０２３９】
脱リン酸化試薬が第５のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、第５のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、第５のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ３）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２４０】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｄ１）を含有する。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｄ１）以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ１）は、第６〜第９のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種、３種又は４種のペプチド断片を含む。
【０２４１】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｄ１）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｄ１）を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ１）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２４２】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｄ２）を含有する。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｄ２）以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ２）は、第６及び第７のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む。
【０２４３】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｄ２）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｄ２）を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ２）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２４４】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｄ３）を含有する。脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｄ３）以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ３）は、第８及び第９のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片を含む。
【０２４５】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｄ３）を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、ペプチド断片群（Ｄ３）を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、ペプチド断片群（Ｄ３）を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２４６】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、第７のペプチド断片を含有する。脱リン酸化試薬は、第７のペプチド断片以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、脱リン酸化試薬は、第６、第８及び第９のペプチド断片から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片をさらに含有する。
【０２４７】
脱リン酸化試薬が第７のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、第７のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、第７のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２４８】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、第８のペプチド断片を含有する。脱リン酸化試薬は、第８のペプチド断片以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、脱リン酸化試薬は、第６、第７及び第９のペプチド断片から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片をさらに含有する。
【０２４９】
脱リン酸化試薬が第８のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、第８のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、第８のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２５０】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、第９のペプチド断片を含有する。脱リン酸化試薬は、第９のペプチド断片以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、脱リン酸化試薬は、第６、第７及び第８のペプチド断片から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片を含有する。
【０２５１】
脱リン酸化試薬が第９のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、第９のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、第９のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ４）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。
【０２５２】
一実施形態において、脱リン酸化試薬は、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片を含有する。脱リン酸化試薬は、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片以外に、脱リン酸化試薬に含有されるアルカリホスファターゼに由来する１種以上のペプチド断片を含有してもよい。好ましい実施形態において、脱リン酸化試薬は、第１、第３及び第６のペプチド断片から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片をさらに含有する。
【０２５３】
脱リン酸化試薬が第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片を含有する実施形態において、脱リン酸化試薬は、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片を生じ得るアルカリホスファターゼは、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ５）のアルカリホスファターゼから選択される。この実施形態において、脱リン酸化試薬は、上記アルカリホスファターゼ（ａ）及び（ｂ５）から選択された１種又は２種以上のアルカリホスファターゼを含有する。好ましい実施形態において、上記アルカリホスファターゼ（ｂ５）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９１〜１０９位、９３〜１０５位及び５２９〜５３１位からなる群から選択された１種又は２種以上を含む。上記アルカリホスファターゼ（ｂ５）が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９１〜１０９位、９３〜１０５位及び５２９〜５３１位からなる群から選択された１種又は２種以上を含む実施形態において、当該アルカリホスファターゼは、第１、第３及び第６のペプチド断片から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片を生じ得る。さらに好ましい実施形態において、上記アルカリホスファターゼ（ｂ５）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９１〜１０９位及び５２９〜５３１位を含む。上記アルカリホスファターゼ（ｂ５）は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の９１〜１０９位及び５２９〜５３１位を含む実施形態において、当該アルカリホスファターゼは、第１、第３及び第６のペプチド断片の３種のペプチド断片を生じ得る。
【０２５４】
工程（１−１）において準備される脱リン酸化試薬は、以下の不純物のいずれか１種以上の含有量を低減させる処理が予め施された脱リン酸化試薬であってもよい。
・ペプチド断片群（Ａ１）
・ペプチド断片群（Ａ２）
・ペプチド断片群（Ａ３）
・ペプチド断片群（Ｂ１）
・ペプチド断片群（Ｂ２）
・ペプチド断片群（Ｃ１）
・ペプチド断片群（Ｃ２）
・ペプチド断片群（Ｄ１）
・ペプチド断片群（Ｄ２）
・ペプチド断片群（Ｄ３）
・第２のペプチド断片（好ましくは、第２のペプチド断片、並びに、第１及び第３のペプチド断片からなる群から選択された１種又は２種のペプチド断片）
・第４のペプチド断片
・第５のペプチド断片
・第７のペプチド断片（好ましくは、第７のペプチド断片、並びに、第６、第８及び第９のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片）
・第８のペプチド断片（好ましくは、第８のペプチド断片、並びに、第６、第７及び第９のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片）
・第９のペプチド断片（好ましくは、第９のペプチド断片、並びに、第６、第７及び第８のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片）・第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片（好ましくは、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片、並びに、第１、第３及び第６のペプチド断片からなる群から選択された１種、２種又は３種のペプチド断片）
【０２５５】
例えば、ウシ、エビ等の臓器からのアルカリホスファターゼ抽出物、アルカリホスファターゼをコードする遺伝子を導入した微生物からのアルカリホスファターゼ抽出物、アルカリホスファターゼをコードする遺伝子を導入した微生物の菌体破砕物、市販のアルカリホスファターゼ製品等から、上記不純物のいずれか１種以上を分離することにより、上記不純物のいずれか１種以上の含有量を低減させることができる。分離方法としては、例えば、透析、塩析、ゲル濾過、限外濾過、膜分離、イオン交換、カラムクロマトグラフィー、電気泳動等が挙げられる。分離方法は、１種を単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて使用してもよい。例えば、市販のアルカリホスファターゼ製品をカラムクロマトグラフィー等により精製することにより、上記不純物のいずれか１種以上の含有量を所望の範囲まで低減させることができる。カラムクロマトグラフィーは、例えば、液体クロマトグラフィーである。液体クロマトグラフィーで使用されるカラム及び移動相は、上記不純物のいずれか１種以上を分離し得る限り特に限定されないが、Ｃ１８が担持された逆相カラムを使用することが好ましい。
【０２５６】
工程（１−２）は、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群の含有量の比率が所定の基準値以下である場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価する工程である。
【０２５７】
脱リン酸化試薬におけるアルカリホスファターゼの含有量は、公知の方法に従って測定することができる。脱リン酸化試薬におけるアルカリホスファターゼの含有量は、アルカリホスファターゼの含有量を反映する量として測定することができる。アルカリホスファターゼの含有量を反映する量としては、例えば、ＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムから算出されたアルカリホスファターゼのピーク面積値が挙げられる。アルカリホスファターゼの含有量とアルカリホスファターゼのピーク面積との関係を示す検量線を使用することにより、アルカリホスファターゼのピーク面積値から、脱リン酸化試薬におけるアルカリホスファターゼの含有量を求めることができる。
【０２５８】
脱リン酸化試薬におけるペプチド断片の含有量は、公知の方法に従って測定することができる。脱リン酸化試薬におけるペプチド断片の含有量は、ペプチド断片の含有量を反映する量として測定することができる。ペプチド断片の含有量を反映する量としては、例えば、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムから算出されたペプチド断片のピーク面積値が挙げられる。ペプチド断片の含有量とペプチド断片のピーク面積との関係を示す検量線を使用することにより、ペプチド断片のピーク面積値から、脱リン酸化試薬におけるペプチド断片の含有量を求めることができる。
【０２５９】
所定の基準値は、ペプチド断片の種類に応じて適宜決定することができる。
【０２６０】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ａ１）を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ１）の含有量の比率が、上記式（Ａ１）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２６１】
ペプチド断片群（Ａ１）が第１のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ１）の含有量の比率が上記式（Ａ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１のペプチド断片の含有量の比率が上記式（１）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２６２】
ペプチド断片群（Ａ１）が第２のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ１）の含有量の比率が上記式（Ａ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２のペプチド断片の含有量の比率が上記式（２）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２６３】
ペプチド断片群（Ａ１）が第３のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ１）の含有量の比率が上記式（Ａ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第３のペプチド断片の含有量の比率が上記式（３）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２６４】
ペプチド断片群（Ａ１）が第１、第２及び第３のペプチド断片からなる群から選択された２種以上のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ１）の含有量の比率が上記式（Ａ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する、選択された２種以上のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記所定の式を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２６５】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ａ２）を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ２）の含有量の比率が上記式（Ａ２）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２６６】
ペプチド断片群（Ａ２）が第１のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ２）の含有量の比率が上記式（Ａ２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１のペプチド断片の含有量の比率が上記式（１）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２６７】
ペプチド断片群（Ａ２）が第２のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ２）の含有量の比率が上記式（Ａ２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２のペプチド断片の含有量の比率が上記式（２）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２６８】
ペプチド断片群（Ａ２）が第１及び第２のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ２）の含有量の比率が上記式（Ａ２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１及び第２のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記式（１）及び（２）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２６９】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ａ３）を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ３）の含有量の比率が上記式（Ａ３）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２７０】
ペプチド断片群（Ａ３）が第１のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ３）の含有量の比率が上記式（Ａ３）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１のペプチド断片の含有量の比率が上記式（１）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２７１】
ペプチド断片群（Ａ３）が第３のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ３）の含有量の比率が上記式（Ａ３）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第３のペプチド断片の含有量の比率が上記式（３）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２７２】
ペプチド断片群（Ａ３）が第１及び第３のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ａ３）の含有量の比率が上記式（Ａ３）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１及び第３のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記式（１）及び（３）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２７３】
脱リン酸化試薬が第２のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２のペプチド断片の含有量の比率が上記式（２）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２７４】
脱リン酸化試薬が第１及び第２のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２のペプチド断片の含有量の比率が上記式（２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１のペプチド断片の含有量の比率が上記式（１）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２７５】
脱リン酸化試薬が第２及び第３のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２のペプチド断片の含有量の比率が上記式（２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第３のペプチド断片の含有量の比率が上記式（３）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２７６】
脱リン酸化試薬が第１、第２及び第３のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２のペプチド断片の含有量の比率が上記式（２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１及び第３のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記式（１）及び（３）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２７７】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｂ１）を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｂ１）の含有量の比率が上記式（Ｂ１）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２７８】
ペプチド断片群（Ｂ１）が第４のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｂ１）の含有量の比率が上記式（Ｂ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第４のペプチド断片の含有量の比率が上記式（４）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２７９】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｂ２）を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｂ２）の含有量の比率が上記式（Ｂ２）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２８０】
ペプチド断片群（Ｂ２）が第４のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｂ２）の含有量の比率が上記式（Ｂ２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第４のペプチド断片の含有量の比率が上記式（４）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２８１】
脱リン酸化試薬が第４のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第４のペプチド断片の含有量の比率が上記式（４）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２８２】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｃ１）を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｃ１）の含有量の比率が上記式（Ｃ１）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２８３】
ペプチド断片群（Ｃ１）が第５のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｃ１）の含有量の比率が上記式（Ｃ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第５のペプチド断片の含有量の比率が上記式（５）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２８４】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｃ２）を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｃ２）の含有量の比率が上記式（Ｃ２）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２８５】
ペプチド断片群（Ｃ２）が第５のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｃ２）の含有量の比率が上記式（Ｃ２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第５のペプチド断片の含有量の比率が上記式（５）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２８６】
脱リン酸化試薬が第５のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第５のペプチド断片の含有量の比率が上記式（５）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２８７】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｄ１）を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が上記式（Ｄ１）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２８８】
ペプチド断片群（Ｄ１）が第６のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が上記式（Ｄ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第６のペプチド断片の含有量の比率が上記式（６）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２８９】
ペプチド断片群（Ｄ１）が第７のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が上記式（Ｄ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第７のペプチド断片の含有量の比率が上記式（７）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２９０】
ペプチド断片群（Ｄ１）が第８のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が上記式（Ｄ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８のペプチド断片の含有量の比率が上記式（８）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２９１】
ペプチド断片群（Ｄ１）が第９のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が上記式（Ｄ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第９のペプチド断片の含有量の比率が上記式（９）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２９２】
ペプチド断片群（Ｄ１）が第６、第７、第８及び第９のペプチド断片からなる群から選択された２種以上のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ１）の含有量の比率が上記式（Ｄ１）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する、選択された２種以上のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記所定の式を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２９３】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｄ２）を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ２）の含有量の比率が上記式（Ｄ２）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２９４】
ペプチド断片群（Ｄ２）が第６のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ２）の含有量の比率が上記式（Ｄ２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第６のペプチド断片の含有量の比率が上記式（６）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２９５】
ペプチド断片群（Ｄ２）が第７のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ２）の含有量の比率が上記式（Ｄ２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第７のペプチド断片の含有量の比率が上記式（７）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２９６】
ペプチド断片群（Ｄ２）が第６及び第７のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ２）の含有量の比率が上記式（Ｄ２）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第６及び第７のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記式（６）及び（７）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２９７】
脱リン酸化試薬がペプチド断片群（Ｄ３）を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ３）の含有量の比率が上記式（Ｄ３）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２９８】
ペプチド断片群（Ｄ３）が第８のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ３）の含有量の比率が上記式（Ｄ３）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８のペプチド断片の含有量の比率が上記式（８）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０２９９】
ペプチド断片群（Ｄ３）が第９のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ３）の含有量の比率が上記式（Ｄ３）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第９のペプチド断片の含有量の比率が上記式（９）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３００】
ペプチド断片群（Ｄ３）が第８及び第９のペプチド断片を含む実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対するペプチド断片群（Ｄ３）の含有量の比率が上記式（Ｄ３）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８及び第９のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記式（８）及び（９）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３０１】
脱リン酸化試薬が第７のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第７のペプチド断片の含有量の比率が上記式（７）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３０２】
脱リン酸化試薬が第６及び第７のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第７のペプチド断片の含有量の比率が上記式（７）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第６のペプチド断片の含有量の比率が上記式（６）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３０３】
脱リン酸化試薬が第７及び第８のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第７のペプチド断片の含有量の比率が上記式（７）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８のペプチド断片の含有量の比率が上記式（８）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３０４】
脱リン酸化試薬が第７及び第９のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第７のペプチド断片の含有量の比率が上記式（７）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第９のペプチド断片の含有量の比率が上記式（９）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３０５】
脱リン酸化試薬が第７のペプチド断片と、第６、第８及び第９のペプチド断片からなる群から選択された２種以上のペプチド断片とを含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第７のペプチド断片の含有量の比率が上記式（７）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する、選択された２種以上のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記所定の式を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３０６】
脱リン酸化試薬が第８のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８のペプチド断片の含有量の比率が上記式（８）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３０７】
脱リン酸化試薬が第６及び第８のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８のペプチド断片の含有量の比率が上記式（８）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第６のペプチド断片の含有量の比率が上記式（６）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３０８】
脱リン酸化試薬が第７及び第８のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８のペプチド断片の含有量の比率が上記式（８）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第７のペプチド断片の含有量の比率が上記式（７）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３０９】
脱リン酸化試薬が第８及び第９のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８のペプチド断片の含有量の比率が上記式（８）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第９のペプチド断片の含有量の比率が上記式（９）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３１０】
脱リン酸化試薬が第８のペプチド断片と、第６、第７及び第９のペプチド断片からなる群から選択された２種以上のペプチド断片とを含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８のペプチド断片の含有量の比率が上記式（８）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する、選択された２種以上のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記所定の式を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３１１】
脱リン酸化試薬が第９のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第９のペプチド断片の含有量の比率が上記式（９）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３１２】
脱リン酸化試薬が第６及び第９のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第９のペプチド断片の含有量の比率が上記式（９）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第６のペプチド断片の含有量の比率が上記式（６）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３１３】
脱リン酸化試薬が第７及び第９のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第９のペプチド断片の含有量の比率が上記式（９）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第７のペプチド断片の含有量の比率が上記式（７）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３１４】
脱リン酸化試薬が第８及び第９のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第９のペプチド断片の含有量の比率が上記式（９）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８のペプチド断片の含有量の比率が上記式（８）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３１５】
脱リン酸化試薬が第９のペプチド断片と、第６、第７及び第８のペプチド断片からなる群から選択された２種以上のペプチド断片とを含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第９のペプチド断片の含有量の比率が上記式（９）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する、選択された２種以上のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記所定の式を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３１６】
脱リン酸化試薬が、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記式（２）、（４）、（５）、（７）、（８）及び（９）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３１７】
脱リン酸化試薬が、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片と、第１のペプチド断片とを含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記式（２）、（４）、（５）、（７）、（８）及び（９）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１のペプチド断片の含有量の比率が上記式（１）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３１８】
脱リン酸化試薬が、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片と、第３のペプチド断片とを含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記式（２）、（４）、（５）、（７）、（８）及び（９）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第３のペプチド断片の含有量の比率が上記式（３）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３１９】
脱リン酸化試薬が、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片と、第６のペプチド断片とを含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記式（２）、（４）、（５）、（７）、（８）及び（９）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する第６のペプチド断片の含有量の比率が上記式（６）を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３２０】
脱リン酸化試薬が、第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片と、第１、第３及び第６のペプチド断片からなる群から選択された２種以上のペプチド断片を含有する実施形態では、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２、第４、第５、第７、第８及び第９のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記式（２）、（４）、（５）、（７）、（８）及び（９）を満たすとともに、アルカリホスファターゼの含有量に対する、選択された２種以上のペプチド断片の含有量の比率がそれぞれ上記所定の式を満たす場合に、脱リン酸化試薬の品質が高いと評価することができる。
【０３２１】
工程（１−２）において、品質が高いと評価されなかった脱リン酸化試薬には、上記基準に従って品質が高いと評価されるように、上記不純物のいずれか１種以上の含有量を低減させる処理を施してもよい。これにより、上記基準に従って品質が高いと評価される脱リン酸化試薬を得ることができる。
【０３２２】
例えば、品質が高いと評価されなかった脱リン酸化試薬から、上記不純物のいずれか１種以上を分離することにより、上記不純物のいずれか１種以上の含有量を低減させることができる。分離方法としては、例えば、透析、塩析、ゲル濾過、限外濾過、膜分離、イオン交換、カラムクロマトグラフィー、電気泳動等が挙げられる。分離方法は、１種を単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて使用してもよい。例えば、市販のアルカリホスファターゼ製品をカラムクロマトグラフィー等により精製することにより、上記不純物のいずれか１種以上の含有量を所望の範囲まで低減させることができる。カラムクロマトグラフィーは、例えば、液体クロマトグラフィーである。液体クロマトグラフィーで使用されるカラム及び移動相は、上記不純物のいずれか１種以上を分離し得る限り特に限定されないが、Ｃ１８が担持された逆相カラムを使用することが好ましい。
【０３２３】
≪第２の態様≫
本発明の第２の態様に係る方法は、標的核酸を検出する方法に関する。なお、標的核酸の定量が実施されれば必然的に標的核酸の検出も実施されることになるので、本発明の第２の態様に係る方法には、標的核酸の定量に伴う標的核酸の検出も包含される。標的核酸の定量は、例えば、検出された標的核酸の強度（例えば、検出された標識物質の強度）に基づいて行うことができる。
【０３２４】
本発明の第２の態様に係る方法は、以下の工程：
（２−１）標的核酸を含むサンプルを準備する工程；
（２−２）アルカリホスファターゼと、該アルカリホスファターゼに由来するペプチド断片とを含有する脱リン酸化試薬を準備する工程；
（２−３）サンプルを脱リン酸化試薬で処理して標的核酸を脱リン酸化する工程；
（２−４）脱リン酸化された標的核酸を標識化する工程；及び
（２−５）標識化された標的核酸を検出する工程
を含む。
【０３２５】
工程（２−１）及び工程（２−２）の順序は特に限定されず、工程（２−１）は、工程（２−２）の前に行われてもよいし、工程（２−２）の後に行われてもよい。工程（２−３）、工程（２−４）及び工程（２−５）は、工程（２−１）及び工程（２−２）が行われた後、順次行われる。
【０３２６】
工程（２−１）は、標的核酸を含むサンプルを準備する工程である。
【０３２７】
標的核酸は、検出すべき核酸であり、標的核酸を検出する目的等に応じて適宜決定される。標的核酸を検出する目的としては、例えば、ウイルスの検出、細菌の検出、カビの検出、ＳＮＰ（一塩基多型）の検出、ｍＲＮＡの検出、ｍｉＲＮＡの検出、比較ゲノムハイブリダイゼーション（ＣＧＨ）、コピー数変動、ゲノムＤＮＡ配列の欠落・重複・融合の検出、転写産物の欠落・重複・融合の検出等が挙げられる。
【０３２８】
標的核酸としては、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ）等の核酸又は核酸誘導体が挙げられる。核酸誘導体としては、例えば、修飾ヌクレオチド（例えばハロゲン、メチル等のアルキル、メトキシ等のアルコキシ、チオ、カルボキシメチル等の基を含むヌクレオチド及び塩基の再構成、二重結合の飽和、脱アミノ化、酸素分子の硫黄分子への置換等を受けたヌクレオチド等）を含む核酸誘導体が挙げられる。標的核酸は、一本鎖であってもよいし、二本鎖であってもよい。ＤＮＡとしては、例えば、染色体ＤＮＡ，ウイルスのＤＮＡ，細菌、カビ等のＤＮＡ、ｃＤＮＡ、それらの断片等が挙げられる。ＲＮＡとしては、例えば、ｍＲＮＡ，ｒＲＮＡ，スモールＲＮＡ、それらの断片等が挙げられる。標的核酸は、化学的に合成したＤＮＡ、ＲＮＡ等であってもよい。標的核酸の具体例としては、病原菌、ウイルス等の遺伝子又はその一部、遺伝病の原因遺伝子又はその一部等が挙げられる。
【０３２９】
標的核酸を含むサンプルは、例えば、生体材料、ウイルス、細菌、カビ、飲食物等から常法により核酸を抽出することにより調製することができる。生体材料としては、例えば、血液、血清、血漿、尿、便、髄液、唾液、ぬぐい液、組織液等の体液、細胞、組織等が挙げられる。生体材料は、動物由来であってもよいし、植物由来であってもよい。
【０３３０】
サンプルは、標的核酸以外の成分を含有してもよい。サンプルは、標的核酸以外の核酸を含有してもよい。サンプルを調製する際、標的核酸以外の成分の少なくとも一部を除去してもよいし、除去しなくてもよい。
【０３３１】
サンプルにおける標的核酸の含有量は、標的核酸を検出し得る限り特に限定されない。例えば、標的核酸を鋳型として、ＰＣＲ等の核酸増幅法を実施することにより、標的核酸を増幅させることができる。すなわち、サンプルは、標的核酸の増幅産物を含有してもよい。これにより、標的核酸の検出感度を向上させることができる。
【０３３２】
サンプルに含有される標的核酸の長さ（塩基数）は特に限定されない。標的核酸の長さは、通常１０〜３００塩基、好ましくは１０〜１００塩基、さらに好ましくは１５〜１００塩基である。標的核酸の長さは、断片化処理により適宜調整することができる。標的核酸の長さは、例えば、プローブとハイブリダイズし得る長さである。標的核酸が長い場合（例えば１５００塩基以上、特に４０００塩基以上）には、標的核酸を断片化処理して、標的核酸の長さを適切な長さに調整することが好ましい。断片化処理を行う場合、生じた核酸断片から特定の核酸断片を選択する必要はなく、断片化処理物をそのまま使用することができる。
【０３３３】
断片化のために標的核酸を切断する方法としては、例えば、超音波を照射して切断する方法、酵素で切断する方法、制限酵素で切断する方法、ネブライザーを使用する方法、酸又はアルカリで切断する方法等が挙げられる。超音波で切断する方法の場合、標的核酸に照射する超音波の出力強度及び照射時間を制御することにより、標的核酸を所望の長さに切断することが可能である。
【０３３４】
工程（２−２）は、アルカリホスファターゼと、該アルカリホスファターゼに由来するペプチド断片群とを含有する脱リン酸化試薬を準備する工程である。
【０３３５】
工程（２−２）で準備される脱リン酸化試薬は、本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬である。
【０３３６】
本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価されなかった脱リン酸化試薬であっても、上記基準に従って品質が高いと評価されるように、上記不純物のいずれか１種以上の含有量を低減させる処理を施した後、工程（２−２）において準備される脱リン酸化試薬として使用することができる。
【０３３７】
例えば、品質が高いと評価されなかった脱リン酸化試薬から、上記不純物のいずれか１種以上を分離することにより、上記不純物のいずれか１種以上の含有量を低減させることができる。分離方法としては、例えば、透析、塩析、ゲル濾過、限外濾過、膜分離、イオン交換、カラムクロマトグラフィー、電気泳動等が挙げられる。分離方法は、１種を単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて使用してもよい。例えば、市販のアルカリホスファターゼ製品をカラムクロマトグラフィー等により精製することにより、上記不純物のいずれか１種以上の含有量を所望の範囲まで低減させることができる。カラムクロマトグラフィーは、例えば、液体クロマトグラフィーである。液体クロマトグラフィーで使用されるカラム及び移動相は、上記不純物のいずれか１種以上を分離し得る限り特に限定されないが、Ｃ１８が担持された逆相カラムを使用することが好ましい。
【０３３８】
工程（２−３）は、サンプルを脱リン酸化試薬で処理して標的核酸を脱リン酸化する工程である。
【０３３９】
サンプルを脱リン酸化試薬で処理することにより、標的核酸の５’末端及び／又は３’末端が脱リン酸化される。なお、サンプルに標的核酸以外の核酸が含まれる場合、標的核酸以外の核酸の５’末端及び／又は３’末端も脱リン酸化される。
【０３４０】
標的核酸を脱リン酸化する際の反応条件は適宜調節することができる。反応時間は、通常１０〜６０分、好ましくは２０〜５０分である。反応温度は、通常２０〜６０℃、好ましくは２５〜４５℃である。反応は、通常、水等の水性媒体中で行われる。
【０３４１】
アルカリホスファターゼに混在する上記不純物のいずれか１種以上は、アルカリホスファターゼにより核酸を脱リン酸化する際に悪影響を与える可能性がある。
【０３４２】
この点、本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬では、アルカリホスファターゼの含有量に対する上記不純物のいずれか１種以上の含有量の比率が上記所定の式を満たす。すなわち、本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬では、上記不純物のいずれか１種以上の相対的含有量が低減している。したがって、本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬を使用することにより、アルカリホスファターゼで核酸を脱リン酸化する際に生じ得る上記不純物のいずれか１種以上の悪影響を低減させることができ、核酸の脱リン酸化効率を向上させることができる。
【０３４３】
工程（２−４）は、脱リン酸化された標的核酸を標識化する工程である
【０３４４】
脱リン酸化された標的核酸は、アルカリホスファターゼで脱リン酸化された５’末端及び／又は３’末端を有し、脱リン酸化された５’末端及び／又は３’末端に標識物質を結合させることにより、標的核酸の標識化を行うことができる。なお、サンプルに標的核酸以外の核酸が含まれる場合、標識核酸以外の核酸も標識化される。
【０３４５】
標識物質としては、例えば、蛍光色素、蛍光タンパク、化学発光体、金属錯体、金属微粒子、ビオチン、ラジオアイソトープ等を使用することができる。標的核酸を標識化する際の反応条件は、標識物質の種類に応じて適宜調節することができる。標識物質が蛍光色素である場合、蛍光色素の検出は、蛍光顕微鏡、蛍光スキャナー等を使用して行うことができる。
【０３４６】
蛍光色素としては、例えば、フルオレセイン系色素、ローダミン系色素、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（インビトロジェン社製）系色素、ＢＯＤＩＰＹ（インビトロジェン社製）系色素、カスケード系色素、クマリン系色素、エオジン系色素、ＮＢＤ系色素、ピレン系色素、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ系色素、シアニン系色素等の有機蛍光色素が挙げられる。
【０３４７】
有機蛍光色素の具体例としては、５−カルボキシ−フルオレセイン、６−カルボキシ−フルオレセイン、５，６−ジカルボキシ−フルオレセイン、６−カルボキシ−２’，４，４’，５’，７，７’−ヘキサクロロフルオレセイン、６−カルボキシ−２’，４，７，７’−テトラクロロフルオレセイン、６−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン、ナフトフルオレセイン、５−カルボキシ−ローダミン、６−カルボキシ−ローダミン、５，６−ジカルボキシ−ローダミン、ローダミン ６Ｇ、テトラメチルローダミン、Ｘ−ローダミン、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４０５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５００、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５１４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６１０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ ４９３／５０３、ＢＯＤＩＰＹ ５３０／５５０、ＢＯＤＩＰＹ ５５８／５６８、ＢＯＤＩＰＹ ５６４／５７０、ＢＯＤＩＰＹ ５７６／５８９、ＢＯＤＩＰＹ ５８１／５９１、ＢＯＤＩＰＹ ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ ６５０／６６５（以上インビトロジェン社製）、メトキシクマリン、エオジン、ＮＢＤ、ピレン、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７等が挙げられる。
【０３４８】
アルカリホスファターゼに混在する上記不純物のいずれか１種以上は、脱リン酸化された核酸に標識物質を結合させる際に悪影響を与える可能性がある。
【０３４９】
この点、本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬では、アルカリホスファターゼの含有量に対する上記不純物のいずれか１種以上の含有量の比率が上記所定の式を満たす。すなわち、本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬では、上記不純物のいずれか１種以上の相対的含有量が低減している。したがって、本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬を使用することにより、脱リン酸化された核酸に標識物質を結合させる際に生じ得る上記不純物の悪影響を低減させることができ、脱リン酸化された核酸の標識化効率を向上させることができる。特に、標識物質として３２Ｐを使用する際、この効果は顕著である。
【０３５０】
工程（２−５）は、標識化された標的核酸を検出する工程である。
【０３５１】
標的核酸は、標的核酸に結合した標識物質を指標として検出される。すなわち、標的核酸は、標的核酸に結合した標識物質を検出することにより、検出される。標識物質の検出方法は特に限定されず、標識物質の種類に応じて、公知の方法の中から適宜選択することができる。検出されたシグナル（例えば、検出された標識物質の強度）に基づいて、標的核酸の定量を行うこともできる。
【０３５２】
標的核酸は、例えば、ハイブリダイゼーション法を使用して検出することができる。ハイブリダイゼーション法では、標的核酸とハイズリダイズし得るプローブを使用して標的核酸を検出することができる。プローブを使用する核酸検出法の一実施形態では、標識化された標的核酸と、標的核酸とハイズリダイズし得るプローブとを接触させ、プローブにハイブリダイズした標的核酸を、標的核酸に結合した標識物質を指標として検出することができる。サンプルに標的核酸以外の核酸が含まれる場合、標的核酸とプローブとを接触させた後、プローブとハイブリダイズしなかった核酸を洗浄等により除去することが好ましい。
【０３５３】
標的核酸とプローブとをハイブリダイゼーションさせる際の反応条件は、標的核酸の鎖長、プローブの鎖長等に応じて適宜調整することができる。反応時間は、通常３０〜１２００分、好ましくは６０〜３６０分である。反応温度は、通常２５〜６０℃、好ましくは３０〜４０℃である。反応は、通常、水等の水性媒体中で行われる。
【０３５４】
標的核酸及びプローブの使用量は、標的核酸とプローブとのハイブリダイゼーションが可能であり、標的核酸に結合した標識物質を検出が可能である限り特に限定されず、標的核酸の鎖長、プローブの鎖長、標識物質の種類等に応じて適宜調整することができる。
【０３５５】
プローブとしては、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ）等の核酸又は核酸誘導体を使用することができる。核酸誘導体としては、例えば、修飾ヌクレオチド（例えばハロゲン、メチル等のアルキル、メトキシ等のアルコキシ、チオ、カルボキシメチル等の基を含むヌクレオチド及び塩基の再構成、二重結合の飽和、脱アミノ化、酸素分子の硫黄分子への置換等を受けたヌクレオチド等）を含む核酸誘導体が挙げられる。
【０３５６】
プローブは、標的核酸の塩基配列の少なくとも一部と相補的な塩基配列を有し、標的核酸にハイブリダイズすることができる。標的核酸が二本鎖である場合、プローブはセンス鎖にハイブリダイズしてもよいし、アンチセンス鎖にハイブリダイズしてもよい。プローブの塩基配列は、標的核酸の塩基配列のうち、どの部分と相補的であってもよいが、標的核酸の塩基配列のうち、特異性が高い部分と相補的であることが好ましい。すなわち、プローブの塩基配列は、標的核酸の塩基配列のうち、サンプルに含有されるその他の核酸に含まれない塩基配列と相補的であることが好ましい。
【０３５７】
プローブの塩基配列のうち、標的核酸の塩基配列と相補的な部分の長さ（塩基数）は特に限定されないが、通常１０〜１５０塩基、好ましくは２０〜１００塩基、さらに好ましくは２０〜７０塩基である。プローブは、標的核酸の塩基配列と相補的な塩基配列で構成されていてもよいし、標的核酸の塩基配列と相補的でない塩基配列を含んでいてもよい。プローブの全長（総塩基数）は、通常１０〜３００塩基、好ましくは２０〜２００塩基、さらに好ましくは１５〜１００塩基である。
【０３５８】
プローブは、市販品、合成品、生体からの調製物等のいずれであってもよい。オリゴ核酸と呼ばれる長さが２００塩基までの核酸は、合成機で容易に人工的に合成が可能である。
【０３５９】
プローブは、支持体に固定化されていることが好ましい。すなわち、好ましい実施形態において、核酸検出法は、核酸マイクロアレイを使用する核酸検出法である。核酸マイクロアレイは、支持体と、支持体の表面に固定された複数のプローブとを有する。核酸マイクロアレイを使用する核酸検出法では、標識化された標的核酸と、標的核酸にハイブリダイズし得るプローブを備える核酸マイクロアレイとを接触させ、プローブにハイブリダイズした標的核酸を、標的核酸に結合した標識物質を指標として検出することができる。サンプルに標的核酸以外の核酸が含まれる場合、標的核酸と核酸マイクロアレイとを接触させた後、核酸マイクロアレイ上のプローブとハイブリダイズしなかった核酸を洗浄等により除去することが好ましい。複数のプローブを備える核酸マイクロアレイを使用することにより、２種以上の標的核酸を同時に検出することができる。
【０３６０】
支持体はプローブを固定化し得る限り特に限定されない。支持体としては、例えば、スライドガラス、メンブレン、ビーズ等が挙げられる。支持体の材質としては、例えば、ガラス、セラミック、シリコン等の無機材料、ポリエチレンテレフタレート、酢酸セルロース、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、シリコーンゴム等のポリマー等が挙げられる。
【０３６１】
支持体へのプローブの固定化は、常法に従って行うことができる。支持体にプローブを固定化する方法としては、支持体上面部でオリゴ核酸を合成する方法、あらかじめ合成しておいたオリゴ核酸を支持体上面部へ滴下し固定する方法等が公知である。前者の方法としては、例えば、Ｒｏｎａｌｄらの方法（米国特許第５７０５６１０号明細書）、Ｍｉｃｈｅｌらの方法（米国特許第６１４２２６６号明細書）、Ｆｒａｎｃｅｓｃｏらの方法（米国特許第７０３７６５９号明細書）等が挙げられる。これらの方法ではＤＮＡ合成反応時に有機溶媒を用いるため、支持体は有機溶媒に耐性のある材質であることが望ましい。例えば、特表平１０−５０３８４１号公報に記載の方法を用いて作製した凹凸構造を有したガラス製支持体を用いることができる。特にＦｒａｎｃｅｓｃｏらの方法においては、支持体の裏面から光を照射し、ＤＮＡ合成を制御するため、支持体は透光性を有する材質であることが好ましい。後者の方法としては、例えば、廣田らの方法（特許第３９２２４５４号）、ガラスキャピラリーを用いる方法等が挙げられる。ガラスキャピラリーの一例としては、自作したガラスキャピラリー、マイクロピペット（（株）マイクロサポート社製；ＭＰ−００５）等の市販製品を用いることができる。
【０３６２】
標的核酸の検出方法として、サンドイッチハイブリダイゼーション法を使用することができる。サンドイッチハイブリダイゼーション法では、支持体に固定された第１のプローブ（捕捉プローブ）と、支持体に固定されていない第２のプローブ（検出プローブ）とが使用される。捕捉プローブ及び検出プローブは、それぞれ、標的核酸の異なる部分に相補的な塩基配列を有し、標的核酸の異なる部分にハイブリダイゼーションすることができる。標的核酸と検出プローブ及び捕捉プローブとがハイブリダイズすることにより複合体が形成される。この複合体に含まれる標識物質を検出することにより、標的核酸を検出することができる。
【０３６３】
検出プローブの塩基配列と捕捉プローブの塩基配列との配列同一性は低いことが好ましい。配列同一性は、好ましくは２０％以下であり、さらに好ましくは１０％以下である。ここで、２つの塩基配列の同一性は、塩基ができるだけ多く一致するように２つの配列を整列させ（必要に応じギャップを入れる）、一致した塩基数を全塩基数（２つの塩基配列の塩基数が異なる場合には大きい方の塩基数）で除すことにより得られる数値であり、ＦＡＳＴＡやＢＬＡＳＴ等の市販のソフト（インターネットでも提供されている）により容易に算出可能である。
【０３６４】
標的核酸の検出方法において検出されたシグナル（例えば、検出された標識物質の強度）は、周辺ノイズと比較される。具体的には、プローブが固定されている支持体上の位置から得られたシグナル値と、プローブが固定されていない支持体上の位置から得られたシグナル値（ノイズ値）を比較し、前者の数値とノイズ値の比をＳ／Ｎ比とする。検出精度は、Ｓ／Ｎ比によって表すことができる。すなわち、Ｓ／Ｎ比が大きいほど、検出精度が高く、Ｓ／Ｎ比が小さいほど、検出精度が低い。
【０３６５】
アルカリホスファターゼに混在する上記不純物のいずれか１種以上は、標的核酸の検出感度に悪影響を与える可能性がある。この点、本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬では、アルカリホスファターゼの含有量に対する上記不純物のいずれか１種以上の含有量の比率が上記所定の式を満たす。すなわち、本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬では、上記不純物のいずれか１種以上の相対的含有量が低減している。したがって、本発明の第１の態様に係る方法により品質が高いと評価された脱リン酸化試薬を使用することにより、標的核酸の検出感度に対する上記不純物のいずれか１種以上の悪影響を低減させることができ、標的核酸の検出感度を向上させることができる。この効果は、微量（好ましくは５〜１０００μＬ、さらに好ましくは５〜５００μＬ）のサンプルが使用される核酸検出法、例えば、核酸マイクロアレイを使用する核酸検出法において顕著である。
【実施例】
【０３６６】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【０３６７】
≪ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析の条件≫
実施例及び比較例で使用されたＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析の条件は以下の通りである。
＜装置構成＞
質量分析計：ｍａＸｉｓ  ｉｍｐａｃｔ（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．製）
＜質量分析条件＞
イオン化方式：ＥＳＩ
測定イオン：正イオン
キャピラリー電圧：４５００Ｖ
ネブライザー：２．０ｂａｒ
ドライガス：８．０Ｌ／分
検出器電圧：１８２３Ｖ
測定範囲（ＭＳ）：ｍ／ｚ  ５０〜２２００
＜ＭＳ／ＭＳ条件＞
測定範囲（ＭＳ）：ｍ／ｚ  ５０〜２２００
コリジョンガス：窒素【０３６８】
≪ＬＣ−ＵＶ分析の条件≫
実施例及び比較例で使用されたＬＣ−ＵＶ分析の条件は以下の通りである。
＜装置構成＞
液体クロマトグラフ：ＬＣ−３０Ａシステム（島津製作所製）
検出器：ＵＶ−Ｖｉｓ（１９０〜９００ｎｍ，島津製作所製）
＜液体クロマトグラフィー条件＞
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）カラムサイズ：２．１ｍｍ×１００ｍｍ
カラム温度：５０℃
移動相流速：０．２ｍＬ／分
移動相Ａ：水／ギ酸混液（１０００：１）
移動相Ｂ：アセトニトリル／水／ギ酸混液（９００：１００：１）
注入量：２０μＬ
グラジエントプログラム：【０３６９】
【表２】
2020067120.tif 000003
【０３７０】
≪核酸検出法≫
実施例及び比較例で使用された核酸検出法は以下の通りである。
核酸の検出は、ＤＮＡチップ（ＤＮＡマイクロアレイ）を使用して行った。具体的には、東レ株式会社製の“３Ｄ−Ｇｅｎｅ”  ｈｕｍａｎ  ｍｉＲＮＡ  ｏｌｉｇｏ  ｃｈｉｐ（ｍｉＲＢａｓｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ２１対応）を使用して行った。【０３７１】
［比較例１〜８］
５社から購入した８種類のアルカリホスファターゼ製品（以下「組成物Ｃ１」〜「組成物Ｃ８」という。）を、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物として使用した。組成物Ｃ１〜Ｃ８のそれぞれに含まれるアルカリホスファターゼは、ウシの腸管由来のアルカリホスファターゼである。組成物Ｃ１〜Ｃ８のそれぞれのアルカリホスファターゼ比活性を測定したところ、組成物Ｃ１は２２３８Ｕ／ｍｇ、組成物Ｃ２は２４９２Ｕ／ｍｇ、組成物Ｃ３は２４３１Ｕ／ｍｇ、組成物Ｃ４は２５１９Ｕ／ｍｇ、組成物Ｃ５は２４１１Ｕ／ｍｇ、組成物Ｃ６は２５５２Ｕ／ｍｇ、組成物Ｃ７は２４４８Ｕ／ｍｇ、組成物Ｃ８は２４９０Ｕ／ｍｇであった。なお、アルカリホスファターゼ比活性は、ｐ−ニトロフェニルリン酸を使用する方法で測定した。具体的には、以下の通りである。【０３７２】
下記溶液Ａ及びＢを準備した。
溶液Ａ：１Ｍ  ジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．８）
溶液Ｂ：０．６７Ｍ  ｐ−ニトロフェノールリン酸水溶液
溶液Ａ  ２．９ｍＬと溶液Ｂ  ０．１ｍＬとをキュベット（光路長＝１ｃｍ）に調製し、３７℃で５分間加温した。次いで、アルカリホスファターゼ水溶液  ０．１ｍＬを添加し、分光光度計で４０５ｎｍ（３７℃）の吸光度変化を３〜５分間測定し、単位時間あたりの吸光度変化を求めた（ΔＯＤ）。対照としてアルカリホスファターゼ水溶液の代わりに水を添加したサンプルで吸光度変化を求めた（ΔＯＤブランク）。下記式によりアルカリホスファターゼ活性（Ｕ／ｍＬ）を算出した。
アルカリホスファターゼ活性（Ｕ／ｍＬ）＝（ΔＯＤ−ΔＯＤブランク）×３．１／（１８．２×０．１×１．０）【０３７３】
アルカリホスファターゼ水溶液中のアルカリホスファターゼの濃度は２１４ｎｍの吸光度を測定することにより算出した。２１４ｎｍにおける吸光度が０．１〜１．０となるようにアルカリホスファターゼ水溶液を蒸留水で希釈し、１Ａｂｓ＝１ｍｇ／ｍＬと近似して、希釈倍率を乗じた値をアルカリホスファターゼの濃度とした。本発明における比活性とはアルカリホスファターゼ１ｍｇあたりの活性（Ｕ／ｍｇ）であり、上記測定法により算出した。【０３７４】
組成物Ｃ１〜Ｃ８のそれぞれから、１０重量％アルカリホスファターゼ水溶液を調製し、この水溶液を使用してＬＣ−ＵＶ分析及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を行った。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムに基づいて、配列番号１に記載のアミノ酸配列（EAEAEFLIPAEEENPAFWNRQAAQ）からなる第１のペプチド断片、配列番号２に記載のアミノ酸配列（EGVSLEKREAEAE）からなる第２のペプチド断片、及び、配列番号３に記載のアミノ酸配列（IPAEEENPAFWNR）からなる第３のペプチド断片、配列番号４に記載のアミノ酸配列（DRQVPDSAGTA）からなる第４のペプチド断片、配列番号５に記載のアミノ酸配列（APGKALDSK）からなる第５のペプチド断片、配列番号６に記載のアミノ酸配列（V PLASETHGGEDVAVF）からなる第６のペプチド断片、配列番号７に記載のアミノ酸配列（VPLASETHGGEDV）からなる第７のペプチド断片、配列番号８に記載のアミノ酸配列（GPQAHLVHGVQEETFVAH）からなる第８のペプチド断片、及び、配列番号９に記載のアミノ酸配列（GPQAHLVHGVQE）からなる第９のペプチド断片のそれぞれのピーク面積値を自動積分法により算出した。また、ＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムに基づいて、アルカリホスファターゼのピーク面積値を自動積分法により算出した。ＬＣ−ＵＶ分析において、アルカリホスファターゼは、２１４ｎｍに吸収を有する成分として検出した。【０３７５】
図１は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第１のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図２は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第２のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図３は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第３のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図４は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第４のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図５は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第５のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図６は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第６のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図７は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第７のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図８は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第８のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図９は、比較例２において組成物Ｃ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第９のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。【０３７６】
比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物を使用して核酸を脱リン酸化し、得られた脱リン酸化核酸をシアニン系有機蛍光色素で標識化した。具体的には、以下の通り、脱リン酸化反応及び標識化反応を行った。【０３７７】
健常人から採血した全血を遠心分離して血清  １ｍＬ得た。血清中から“３Ｄ−Ｇｅｎｅ”  ＲＮＡ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｒｅａｇｅｎｔ  ｆｒｏｍ  ｌｉｑｕｉｄ  ｓａｍｐｌｅ  ｋｉｔ（東レ(株)製）を使用してマイクロＲＮＡを抽出した。得られた抽出マイクロＲＮＡを母液とし、“３Ｄ−Ｇｅｎｅ”  ｍｉＲＮＡ  ｌａｂｅｌｉｎｇ  ｋｉｔ（東レ(株)製）を使用して標識した。得られた抽出マイクロＲＮＡ  ５μＬを上記キットのＡＰ  ｂｕｆｆｅｒ  ０．４μＬ及びＳｐｉｋｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  １．０μＬの混合液に添加し、さらに組成物Ｃ１を０．４μＬ添加した溶液を調製した。次いで、３７℃で４０分間インキュベートした後、氷上で２分間静置した。次いで、ＬＥ  Ｂｕｆｆｅｒ  １．２μＬ、３Ｄ−Ｇｅｎｅ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｌａｂｅｌ  ３．０μＬ、Ｎｕｃｌｅａｓｅ  ｆｒｅｅ  ｗａｔｅｒ  ２．５μＬ、Ｌａｂｅｌｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  １．０μＬを添加し、１６℃で１時間インキュベートした後、６５℃で１５分間インキュベートして、標識化核酸を得た。組成物Ｃ２〜Ｃ８を使用した脱リン酸化反応及び標識化反応も同一の抽出マイクロＲＮＡ母液を使用し、上記と同様の方法で行った。【０３７８】
得られた標識化核酸を使用して核酸の検出を行った。標識した検体ＲＮＡについて、ＤＮＡチップ（“３Ｄ−Ｇｅｎｅ”  ｍｉＲＮＡ  ｃｈｉｐ，東レ(株)製）を使用し、その標準プロトコールに従い、ハイブリダイゼーションを行った。ハイブリダイゼーション後のＤＮＡチップをマイクロアレイスキャナー（東レ(株)製）に供して蛍光強度を測定した。スキャナーの設定は、レーザー出力１００％、フォトマルチプライヤーの電圧設定をＡＵＴＯ設定にした。核酸の検出は、上記の通りＤＮＡチップ（ＤＮＡマイクロアレイ）を使用して行った。ＤＮＡチップにおける有効スポット数を求め、検出率（％）を算出した。ＤＮＡチップ上の全２，５８８スポットのうち、検出シグナル値からノイズ（スポットの無い箇所のシグナル値）を引いた値が１００以上のものを有効スポットとし、有効スポット数を全スポット数で除して１００を乗じた値を検出率とした。結果を表４−２及び表５−２に示す。【０３７９】
［実施例１〜４］
比較例２〜４及び８のアルカリホスファターゼ組成物（組成物Ｃ２〜Ｃ４及びＣ８）を以下の方法で精製して、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物（以下「組成物Ｅ１」〜「組成物Ｅ４」という。）を得た。精製方法は、以下の通りである。【０３８０】
（透析工程）
組成物Ｃ２（３０μＬ）を、透析カップ（カットオフ分子量３．５Ｋ）を使用して、透析バッファ（１ｍＬ，５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，２ｍＭ  ＭｇＣｌ２，０．２ｍＭ  ＺｎＣｌ２）で３回透析処理し、濃縮液を回収した。【０３８１】
（ゲル濾過工程）
透析処理後の濃縮液をゲル濾過カラムを使用して、バッファ（２．５ｍＬ，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＭｇＣｌ２，０．１ｍＭ  ＺｎＣｌ２，５０ｍＭ  ＫＣｌ，５５重量％  グリセリン）で濾過回収した。【０３８２】
（疎水カラム工程）
ゲル濾過後の回収液から、疎水カラムを使用して、下記条件でアルカリホスファターゼ画分を回収した。【０３８３】
移動相流速：１．０ｍＬ／分
移動相Ａ：２０ｍＭ  リン酸水素二ナトリウム、３Ｍ  硫酸アンモニウム（５０／５０）
移動相Ｂ：２０ｍＭ  リン酸水素二ナトリウム
検出器：ＵＶ２１４ｎｍ
グラジエントプログラム：【０３８４】
【表３】
2020067120.tif 000004
【０３８５】
（透析工程）
回収したアルカリホスファターゼ画分を上記透析と同じ条件で３回透析処理し、濃縮液を回収した。【０３８６】
（限外濾過工程）
回収した濃縮液を、限外濾過カラム（カットオフ分子量１０Ｋ）を使用して、バッファ（２．５ｍＬ，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＭｇＣｌ２，０．１ｍＭ  ＺｎＣｌ２，５０ｍＭ  ＫＣｌ，５５重量％  グリセリン）で濾過回収し、組成物Ｅ１を得た。【０３８７】
組成物Ｅ２、組成物Ｅ３及び組成物Ｅ４も、上記と同様の方法を使用して、組成物Ｃ３、組成物Ｃ４及び組成物Ｃ８からそれぞれ得た。【０３８８】
実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物のアルカリホスファターゼ比活性を測定したところ、組成物Ｅ１は２４９０Ｕ／ｍｇ、組成物Ｅ２は２４２０Ｕ／ｍｇ、組成物Ｅ３は２５２２Ｕ／ｍｇ、組成物Ｅ４は２４７０Ｕ／ｍｇであった。なお、アルカリホスファターゼ比活性は、上記と同様にして測定した。【０３８９】
組成物Ｅ１〜Ｅ４のそれぞれから、１０重量％アルカリホスファターゼ水溶液を調製し、この水溶液を使用してＬＣ−ＵＶ分析及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を行った。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた抽出イオンクロマトグラムに基づいて、配列番号１に記載のアミノ酸配列（EAEAEFLIPAEEENPAFWNRQAAQ）からなる第１のペプチド断片、配列番号２に記載のアミノ酸配列（EGVSLEKREAEAE）からなる第２のペプチド断片、及び、配列番号３に記載のアミノ酸配列（IPAEEENPAFWNR）からなる第３のペプチド断片、配列番号４に記載のアミノ酸配列（DRQVPDSAGTA）からなる第４のペプチド断片、配列番号５に記載のアミノ酸配列（APGKALDSK）からなる第５のペプチド断片、配列番号６に記載のアミノ酸配列（VPLASETHGGEDVAVF）からなる第６のペプチド断片、配列番号７に記載のアミノ酸配列（VPLASETHGGEDV）からなる第７のペプチド断片、配列番号８に記載のアミノ酸配列（GPQAHLVHGVQEETFVAH）からなる第８のペプチド断片、及び、配列番号９に記載のアミノ酸配列（GPQAHLVHGVQE）からなる第９のペプチド断片のそれぞれのピーク面積値を自動積分法により算出した。また、ＬＣ−ＵＶ分析により得られたクロマトグラムに基づいて、アルカリホスファターゼのピーク面積値を自動積分法により算出した。ＬＣ−ＵＶ分析において、アルカリホスファターゼは、２１４ｎｍに吸収を有する成分として検出した。【０３９０】
図１０は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第１のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図１１は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第２のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図１２は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第３のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図１３は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第４のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図１４は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第５のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図１５は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第６のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図１６は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第７のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図１７は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第８のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図１８は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により得られた、第９のペプチド断片に関する抽出イオンクロマトグラムを示す。
図１９は、実施例１において組成物Ｅ１（組成物Ｃ２の精製品）のＬＣ−ＵＶ分析により得られた、アルカリホスファターゼに関するクロマトグラムを示す。なお、実施例２〜４及び比較例１〜８において各組成物のＬＣ−ＵＶ分析により得られた、アルカリホスファターゼに関するクロマトグラムは、図１９と同様であった。【０３９１】
実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物を使用して核酸を脱リン酸化し、得られた脱リン酸化核酸をシアニン系有機蛍光色素で標識化した。脱リン酸化反応及び標識化反応は、上記と同様にして行った。【０３９２】
得られた標識化核酸を使用して核酸の検出を行った。核酸の検出は、上記の通りＤＮＡチップ（ＤＮＡマイクロアレイ）を使用して行った。ＤＮＡチップにおける有効スポット数を求め、検出率（％）を算出した。結果を表４−１及び表５−１に示す。【０３９３】
【表４−１】
2020067120.tif 000005
【０３９４】
【表４−２】
2020067120.tif 000006
【０３９５】
【表５−１】
2020067120.tif 000007
【０３９６】
【表５−２】
2020067120.tif 000008
【０３９７】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物を使用して調製した核酸サンプルを核酸検出法で使用した場合、有効スポット数が１５００未満であったのに対して、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物を使用して調製した核酸サンプルを核酸検出法で使用した場合、有効スポット数が１５００以上であった。また、比較例１〜８における検出率は、アルカリホスファターゼ組成物が有するアルカリホスファターゼ比活性はほぼ同じであるにも関わらず、差が生じたのに対して、実施例１〜４における検出率はほぼ同じであり、しかも、比較例１〜８の検出率よりも高かった。【０３９８】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１〜第３のペプチド断片の合計含有量の比率の指標である（（Ｘ１＋Ｘ２＋Ｘ３）／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では５．００００を超えるのに対して（最小値は比較例１のアルカリホスファターゼ組成物における５．４９８９）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では５．００００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０３９９】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１及び第２のペプチド断片の合計含有量の比率の指標である（（Ｘ１＋Ｘ２）／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では２．４０００を超えるのに対して（最小値は比較例３のアルカリホスファターゼ組成物における２．４６１９）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では２．４０００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０４００】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１及び第３のペプチド断片の合計含有量の比率の指標である（（Ｘ１＋Ｘ３）／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では４．５０００を超えるのに対して（最小値は比較例１のアルカリホスファターゼ組成物における４．６４９２）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では４．５０００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０４０１】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第１のペプチド断片の含有量の比率の指標である（Ｘ１／Ｙ）×１００の値は、比較例１、２及び４〜８のアルカリホスファターゼ組成物では１．００００を超えるのに対して（但し、比較例３では１．００００以下である）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では１．００００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１、２及び４〜８との間で上記効果の差を生じさせた副因の一つであると考えられる。【０４０２】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第２のペプチド断片の含有量の比率の指標である（Ｘ２／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では０．８０００を超えるのに対して（最小値は比較例１のアルカリホスファターゼ組成物における０．８４９７）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では０．８０００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０４０３】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第３のペプチド断片の含有量の比率の指標である（Ｘ３／Ｙ）×１００の値は、比較例２〜４、７及び８のアルカリホスファターゼ組成物では２．３０００を超えるのに対して（但し、比較例１、５及び６では２．３０００以下である）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では２．３０００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例２〜４、７及び８との間で上記効果の差を生じさせた副因の一つであると考えられる。【０４０４】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第４のペプチド断片の含有量の比率の指標である（Ｘ４／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では０．６０００を超えるのに対して（最小値は比較例５のアルカリホスファターゼ組成物における０．６６４６）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では０．６０００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０４０５】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第５のペプチド断片の含有量の比率の指標である（Ｘ５／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では０．１８００を超えるのに対して（最小値は比較例４のアルカリホスファターゼ組成物における０．１８１０）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では０．１８００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０４０６】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第６〜第９のペプチド断片の合計含有量の比率の指標である（（Ｘ６＋Ｘ７＋Ｘ８＋Ｘ９）／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では４．４０００を超えるのに対して（最小値は比較例６のアルカリホスファターゼ組成物における４．４９１２）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では４．４０００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０４０７】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第６及び第７のペプチド断片の合計含有量の比率の指標である（（Ｘ６＋Ｘ７）／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では３．４０００を超えるのに対して（最小値は比較例６のアルカリホスファターゼ組成物における３．４１７１）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では３．４０００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０４０８】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８及び第９のペプチド断片の合計含有量の比率の指標である（（Ｘ８＋Ｘ９）／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では１．００００を超えるのに対して（最小値は比較例６のアルカリホスファターゼ組成物における１．０７４２）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では１．００００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０４０９】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第６のペプチド断片の含有量の比率の指標である（Ｘ６／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜３、５、７及び８のアルカリホスファターゼ組成物では１．００００を超えるのに対して（但し、比較例４及び６では１．００００以下である）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では１．００００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜３、５、７及び８との間で上記効果の差を生じさせた副因の一つであると考えられる。【０４１０】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第７のペプチド断片の含有量の比率の指標である（Ｘ７／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜７のアルカリホスファターゼ組成物では１．６０００を超えるのに対して（最小値は比較例１のアルカリホスファターゼ組成物における１．６９１３）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では１．６０００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０４１１】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第８のペプチド断片の含有量の比率の指標である（Ｘ８／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では０．２０００を超えるのに対して（最小値は比較例６のアルカリホスファターゼ組成物における０．２０７３）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では０．２０００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。【０４１２】
表４−１、表４−２、表５−１及び表５−２に示すように、アルカリホスファターゼの含有量に対する第９のペプチド断片の含有量の比率の指標である（Ｘ９／Ｙ）×１００の値は、比較例１〜８のアルカリホスファターゼ組成物では０．３５００を超えるのに対して（最小値は比較例１のアルカリホスファターゼ組成物における０．３９１５）、実施例１〜４のアルカリホスファターゼ組成物では０．３５００以下である。このことは、実施例１〜４と比較例１〜８との間で上記効果の差を生じさせた主因の一つであると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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