(57)【要約】  新たなｓＭＨＣII分子産生誘導剤、ｓＭＨＣII分子の産生細胞、ｓＭＨＣII分子の産生細胞の製造方法およびｓＭＨＣII分子の製造方法を提供する。  本発明のｓＭＣＨＩＩ分子産生誘導剤は、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む。
2020116602.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導組成物。
【請求項２】
ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む、請求項１記載の産生誘導組成物。
【請求項３】
前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォーム、およびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームからなる群から選択された少なくとも１つを含む、請求項１または２記載の産生誘導組成物。
【請求項４】
ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含まない、請求項３記載の産生誘導組成物。
【請求項５】
ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の産生誘導組成物。
【請求項６】
ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含み、前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームおよびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームの少なくとも一方を含む、請求項１または２記載の産生誘導組成物。
【請求項７】
ＭＨＣクラスII分子と複合体化させるペプチドを含むタンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の産生誘導組成物。
【請求項８】
前記ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターである、請求項１から７のいずれか一項に記載の産生誘導組成物。
【請求項９】
ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導キット。
【請求項１０】
外来性のＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞。
【請求項１１】
細胞に、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを導入する導入工程を含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞の製造方法。
【請求項１２】
請求項１０記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞において、可溶型ＭＨＣクラスII分子を発現させる発現工程を含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の製造方法。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導組成物、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導キット、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞の製造方法および可溶型ＭＨＣクラスII分子の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】  血清中には、可溶型主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスII分子（以下、「ｓＭＨＣII分子」ともいう）が存在することが知られている（非特許文献１）。ｓＭＨＣII分子は、生体内において免疫寛容等の誘導に働いていると考えられている（非特許文献２）。【０００３】  ＭＨＣクラスII分子とペプチドの複合体とを認識するＴ細胞の検出を行なうために、ｓＭＣＨII分子の各構成要素およびそれにローディングされるペプチドから、ＭＨＣクラスII分子とペプチドとの複合体の二量体（ダイマー）や、四量体（テトラマー）等が製造されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】S. Marios-Frankiskos et.al., “Serum-derived MHC class II molecules: potent regulators of the cellular and humoral immune response”, Immunobiology, vol. 215, 2010, pages 194-205
【非特許文献２】K. Bakela et.al., “Soluble MHC-II proteins promote suppressive activity in CD4+ T cells”, Immunology, vol. 144, 2015, pages 158-169
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  しかしながら、ｓＭＨＣII分子は、大腸菌を用いてＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖のモノマーを合成および精製後、両者をフォールディングおよび複合体化することにより製造される。このため、ｓＭＨＣII分子の製造には、手間がかかるという問題があった。【０００６】  そこで、本発明は、新たなｓＭＨＣII分子の産生誘導組成物、ｓＭＨＣII分子の産生細胞、ｓＭＨＣII分子の産生細胞の製造方法およびｓＭＨＣII分子の製造方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】  前記目的を達成するために、本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導組成物（以下、「組成物」ともいう）は、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む。【０００８】  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導キット（以下、「キット」ともいう）は、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む。【０００９】  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞（以下、「産生細胞」ともいう）は、外来性のＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む。【００１０】  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞の製造方法（以下、「細胞の製造方法」ともいう）は、細胞に、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを導入する導入工程を含む。【００１１】  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の製造方法は、前記本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞において、可溶型ＭＨＣクラスII分子を発現させる発現工程を含む。
【発明の効果】
【００１２】  本発明によれば、新たなｓＭＨＣII分子の産生誘導組成物、ｓＭＨＣII分子の産生細胞、ｓＭＨＣII分子の産生細胞の製造方法およびｓＭＨＣII分子の製造方法を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、実施例１における野生型マウスにおけるＣＤ７４のアリルと、ＣＤ７４ノックアウトマウスの作製に使用したＣＤ７４のアリルを示す模式図である。
【図２】図２は、実施例１のフローサイトメーターの結果を示すヒストグラムである。
【図３】図３は、実施例１における血清中のｓＭＨＣII分子の発現量を示すグラフである。
【図４】図４は、実施例２のフローサイトメーターの結果を示すヒストグラムである。
【図５】図５は、実施例２における培養上清におけるｓＭＨＣII分子の発現量を示すグラフである。
【図６】図６は、実施例３におけるゲル濾過による分画で得られた各画分の結果を示すグラフである。
【図７】図７は、実施例４における培養上清におけるｓＭＨＣII分子の発現量を示すグラフである。
【図８】図８は、実施例５におけるＭＨＣクラスII分子とI-Eaの５２〜６８番目のポリペプチドとの複合体の発現量およびＭＨＣクラスII分子の発現量を示すグラフである。
【図９】図９は、実施例６における培養上清中のｓＭＨＣII分子の発現量を示すグラフである。
【図１０】図１０は、実施例７における培養上清中のｓＭＨＣII分子の発現量を示すグラフである。
【図１１】図１１は、実施例８における培養上清中のｓＭＨＣII分子の相対的な発現量を示すグラフである。
【図１２】図１２は、実施例９における培養上清中のｓＭＨＣII分子の相対的な発現量を示すグラフである。
【図１３】図１３は、実施例１０における培養上清中のｓＭＨＣII分子の相対的な発現量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】＜可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導組成物＞  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導組成物は、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む。本発明の組成物は、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の組成物によれば、例えば、本発明の組成物を細胞（宿主）に取り込まれるように接触させることで、すなわち、細胞内に導入することで、前記細胞において、ｓＭＨＣII分子の産生を誘導できる。
【００１５】  本発明者らは鋭意研究の結果、細胞におけるｓＭＨＣII分子の産生経路にＣＤ７４タンパク質が関与していることを見出した。そして、ＭＨＣクラスII分子を発現する細胞において、ＣＤ７４タンパク質を発現させることにより、前記細胞がｓＭＨＣII分子を産生することを確認し、本発明を確立するに至った。本発明の組成物は、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含むため、例えば、前述のように、本発明の組成物を細胞内に導入することで、前記細胞においてｓＭＨＣII分子の産生を誘導できる。このため、本発明の組成物によれば、ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖を合成および精製後、両者をフォールディングおよび複合体化する製造方法（フォールディング法）と比較して、ｓＭＨＣII分子を簡便に製造できる。また、本発明の組成物を導入された細胞内で製造されるＭＨＣクラスII分子は、例えば、前記細胞内での通常のＭＨＣクラスII分子の生成プロセスで製造されるため、正しくフォールディングされた後に、ｓＭＨＣII分子として放出される。このため、本発明の組成物によれば、例えば、フォールディング法と比較して、効率よく正しくフォールディングされたｓＭＨＣII分子を製造することができる。
【００１６】  本発明において、「ｓＭＨＣII分子の産生誘導」は、ｓＭＨＣII分子を産生しない、または検出限界以下のｓＭＨＣII分子を産生する細胞（宿主）を、ｓＭＨＣII分子を産生する、または検出限界以上のｓＭＨＣII分子を産生する細胞（宿主）とすることを意味してもよいし、ｓＭＨＣII分子を産生する、または検出限界以上のｓＭＨＣII分子を産生する細胞（宿主）において、本発明の組成物を導入していない対照群と比較して、ｓＭＨＣII分子の産生量を有意に増加させることを意味してもよい。後者の場合、本発明の組成物は、例えば、ｓＭＨＣII分子の産生増強組成物ということもできる。前記ｓＭＨＣII分子の産生量は、例えば、後述の実施例１に準じてＩＰ−ＦＣＭ（immunoprecipitation detected by flow cytometry）により測定できる。
【００１７】  本発明において、「可溶型ＭＨＣクラスII分子」は、細胞膜に固定されていないＭＨＣクラスII分子、すなわち、非膜型のＭＨＣクラスII分子を意味する。本発明において、前記可溶型ＭＨＣクラスII分子は、例えば、ＭＨＣクラスII分子の単量体であり、α鎖およびβ鎖から構成される。ｓＭＨＣII分子は、例えば、そのペプチド結合溝（peptide binding groove）にペプチドがローディングされていてもよいし、タンパク質またはその断片の一部がローディングされてもよい。ｓＭＨＣII分子は、例えば、細胞膜、すなわち、脂質二重膜を含まない。また、ｓＭＨＣII分子は、２量体、３量体、４量体等の多量体を形成してもよい。
【００１８】  ＣＤ７４タンパク質は、例えば、ＭＨＣクラスII分子と複合体を形成するタンパク質であり、HLA class II histocompatibility antigen gamma chain、HLA-DR antigens-associated invariant chain、またはインバリアント鎖（invariant chain）としても知られている。
【００１９】  ＣＤ７４タンパク質の由来は、特に制限されず、例えば、ヒトおよびヒトを除く非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物は、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ、モルモット、ネコ等があげられる。ＣＤ７４タンパク質の由来は、例えば、本発明の組成物の使用対象である細胞と同種でもよいし、異種でもよい。
【００２０】  ＣＤ７４タンパク質としては、例えば、以下のタンパク質が例示できる。ヒト由来ＣＤ７４タンパク質は、例えば、ｐ３３アイソフォーム、ｐ３５アイソフォーム、ｐ４１アイソフォーム、またはｐ４３アイソフォームがあげられる。ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォームは、例えば、GenBankアクセッションNo. CAA25193.1で登録されているアミノ酸配列（配列番号１）からなるタンパク質等があげられる。ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォームは、例えば、GenBankアクセッションNo. NP_004346.1で登録されているアミノ酸配列（配列番号２）からなるタンパク質等があげられる。ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームは、例えば、配列番号３のアミノ酸配列からなるタンパク質等があげられる。ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームは、例えば、GenBankアクセッションNo. NP_001020330.1で登録されているアミノ酸配列（配列番号４）からなるタンパク質等があげられる。マウス由来ＣＤ７４タンパク質は、例えば、ｐ３１アイソフォームまたはｐ４１アイソフォームがあげられる。マウスＣＤ７４タンパク質ｐ３１アイソフォームは、例えば、GenBankアクセッションNo. NP_034675.1で登録されているアミノ酸配列（配列番号５）からなるタンパク質等があげられる。マウスＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームは、例えば、GenBankアクセッションNo. NP_001036070.1で登録されているアミノ酸配列（配列番号６）からなるタンパク質等があげられる。ＣＤ７４タンパク質がヒトＣＤ７４タンパク質の場合、前記ヒトＣＤ７４タンパク質は、例えば、より高いヒトｓＭＨＣII分子の産生誘導能を示すことから、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォーム、またはヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームが好ましい。各ＣＤ７４タンパク質のアイソフォームは、例えば、単独で、高いヒトｓＭＨＣII分子の産生誘導能を示すことから、後述のＨＬＡ−ＤＭα鎖および／またはＨＬＡ−ＤＭβ鎖、またはこれらのポリヌクレオチドと共存させなくてもよい。また、ＣＤ７４タンパク質は、例えば、より高いｓＭＨＣII分子、特に、マウスｓＭＨＣII分子の産生誘導能を示すことから、後述の産生増強配列を含むＣＤ７４タンパク質のアイソフォームが好ましく、具体例として、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォーム、またはマウスＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームがより好ましい。これらのＣＤ７４タンパク質のアイソフォームは、後述するように、ｓＭＨＣII分子の産生を増強するｓＭＨＣII分子の産生増強配列を有する。
【００２１】ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォーム（配列番号１）MDDQRDLISNNEQLPMLGRRPGAPESKCSRGALYTGFSILVTLLLAGQATTAYFLYQQQGRLDKLTVTSQNLQLENLRMK[LPKPPKPVSKMRMATPLLMQALPM]GALPQGPMQNATKYGNMTEDHVMHLLQNADPLKVYPPLKGSFPENLRHLKNTMETIDWKVFESWMHHWLLFEMSRHSLEQKPTDAPPKESLELEDPSSGLGVTKQDLGPVPM
【００２２】ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォーム（配列番号２）MHRRRSRSCREDQKPVMDDQRDLISNNEQLPMLGRRPGAPESKCSRGALYTGFSILVTLLLAGQATTAYFLYQQQGRLDKLTVTSQNLQLENLRMK[LPKPPKPVSKMRMATPLLMQALPM]GALPQGPMQNATKYGNMTEDHVMHLLQNADPLKVYPPLKGSFPENLRHLKNTMETIDWKVFESWMHHWLLFEMSRHSLEQKPTDAPPKESLELEDPSSGLGVTKQDLGPVPM
【００２３】ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォーム（配列番号３）MDDQRDLISNNEQLPMLGRRPGAPESKCSRGALYTGFSILVTLLLAGQATTAYFLYQQQGRLDKLTVTSQNLQLENLRMK[LPKPPKPVSKMRMATPLLMQALPM]GALPQGPMQNATKYGNMTEDHVMHLLQNADPLKVYPPLKGSFPENLRHLKNTMETIDWKVFESWMHHWLLFEMSRHSLEQKPTDAPPK[VLTKCQEEVSHIPAVHPGSFRPKCDENGNYLPLQCYGSIGYCWCVFPNGTEVPNTRSRGHHNCS]ESLELEDPSSGLGVTKQDLGPVPM
【００２４】ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォーム（配列番号４）MHRRRSRSCREDQKPVMDDQRDLISNNEQLPMLGRRPGAPESKCSRGALYTGFSILVTLLLAGQATTAYFLYQQQGRLDKLTVTSQNLQLENLRMK[LPKPPKPVSKMRMATPLLMQALPM]GALPQGPMQNATKYGNMTEDHVMHLLQNADPLKVYPPLKGSFPENLRHLKNTMETIDWKVFESWMHHWLLFEMSRHSLEQKPTDAPPK[VLTKCQEEVSHIPAVHPGSFRPKCDENGNYLPLQCYGSIGYCWCVFPNGTEVPNTRSRGHHNCS]ESLELEDPSSGLGVTKQDLGPVPM
【００２５】マウスＣＤ７４タンパク質ｐ３１アイソフォーム（配列番号５）MDDQRDLISNHEQLPILGNRPREPERCSRGALYTGVSVLVALLLAGQATTAYFLYQQQGRLDKLTITSQNLQLESLRMK[LPKSAKPVSQMRMATPLLMRPMSM]DNMLLGPVKNVTKYGNMTQDHVMHLLTRSGPLEYPQLKGTFPENLKHLKNSMDGVNWKIFESWMKQWLLFEMSKNSLEEKKPTEAPPKEPLDMEDLSSGLGVTRQELGQVTL
【００２６】マウスＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォーム（配列番号６）MDDQRDLISNHEQLPILGNRPREPERCSRGALYTGVSVLVALLLAGQATTAYFLYQQQGRLDKLTITSQNLQLESLRMK[LPKSAKPVSQMRMATPLLMRPMSM]DNMLLGPVKNVTKYGNMTQDHVMHLLTRSGPLEYPQLKGTFPENLKHLKNSMDGVNWKIFESWMKQWLLFEMSKNSLEEKKPTEAPPK[VLTKCQEEVSHIPAVYPGAFRPKCDENGNYLPLQCHGSTGYCWCVFPNGTEVPHTKSRGRHNCS]EPLDMEDLSSGLGVTRQELGQVTL
【００２７】  ＣＤ７４タンパク質は、例えば、下記（Ｐ１）、（Ｐ２）または（Ｐ３）のアミノ酸配列からなるタンパク質（ポリペプチド）でもよい。（Ｐ１）各種動物由来のＣＤ７４タンパク質のアミノ酸配列からなるタンパク質（Ｐ２）前記（Ｐ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質（Ｐ３）前記（Ｐ１）のアミノ酸配列に対して、５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質
【００２８】  前記（Ｐ１）において、各種動物由来のＣＤ７４タンパク質のアミノ酸配列は、例えば、配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列があげられる。前記ヒトおよびマウス以外の動物由来のＣＤ７４タンパク質は、例えば、前記ヒトＣＤ７４タンパク質および前記マウスＣＤ７４タンパク質の少なくとも一方のアミノ酸配列に基づき、アミノ酸配列の相同性を用いて同定してもよい。前記ヒトおよびマウス以外の動物由来のＣＤ７４タンパク質は、例えば、前記ヒトＣＤ７４タンパク質および前記マウスＣＤ７４タンパク質の少なくとも一方のアミノ酸配列を参照配列とし、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の解析ソフトウェアを用いて同定できる。
【００２９】  前記（Ｐ２）において、「１もしくは数個」は、例えば、前記（Ｐ２）が、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有する範囲、すなわち、使用対象の細胞内に導入することで、前記細胞においてｓＭＨＣII分子の産生を誘導できる範囲であればよい。前記（Ｐ２）の「１もしくは数個」は、前記（Ｐ１）のアミノ酸配列において、例えば、１〜１５０個、１〜１３５個、１〜１２０個、１〜１０５個、１〜９０個、１〜７５個、１〜６０個、１〜４５個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１０個、１〜９個、１〜５個、１〜３個、１または２個である。
【００３０】  前記（Ｐ３）において、「同一性」は、例えば、前記（Ｐ３）が、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有する範囲、すなわち、使用対象の細胞内に導入することで、前記細胞においてｓＭＨＣII分子の産生を誘導できる範囲であればよい。前記（Ｐ３）の「同一性」は、前記（Ｐ１）のアミノ酸配列に対して、例えば、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。前記同一性は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の解析ソフトウェアを用いて、デフォルトのパラメータにより算出できる（以下、同様）。
【００３１】  前記（Ｐ２）および（Ｐ３）のタンパク質は、各種動物由来のアミノ酸配列において、ＣＬＩＰペプチドをコードするアミノ酸配列（ＣＬＩＰ配列）が保存されることが好ましい。前記ＣＬＩＰ配列は、前記配列番号１〜６のアミノ酸配列において、括弧で囲った下線無しのアミノ酸配列である。具体例として、ヒト由来のＣＬＩＰ配列は、例えば、下記配列番号７のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。また、マウス由来のＣＬＩＰ配列は、例えば、下記配列番号８のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。前記ＣＬＩＰ配列が保存される場合、保存されるアミノ酸は、前記ＣＬＩＰ配列における全アミノ酸でもよいし、一部のアミノ酸でもよい。後者の場合、前記保存されるアミノ酸は、配列番号７または８のアミノ酸配列において下線で示すアミノ酸であることが好ましい。また、後者の場合、保存されないアミノ酸は、特に制限されないが、後述の保存的アミノ酸置換に該当するアミノ酸が好ましい。
【００３２】ヒト由来のＣＬＩＰ配列（配列番号７）LPKPPKPVSKMRMATPLLMQALPM
【００３３】マウス由来のＣＬＩＰ配列（配列番号８）LPKSAKPVSQMRMATPLLMRPMSM
【００３４】  前記（Ｐ２）および（Ｐ３）のタンパク質において、各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（Ｐ２）および（Ｐ３）のタンパク質は、ｓＭＨＣII分子の産生増強配列が保存されることが好ましい。前記産生増強配列が保存されることにより、前記（Ｐ２）および（Ｐ３）のタンパク質は、例えば、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームおよびマウスＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームにおける高いｓＭＨＣII分子、特に、マウスｓＭＨＣII分子の産生誘導能を維持できる。前記産生増強配列は、前記配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列において、括弧で囲った下線で示すアミノ酸配列である。具体例として、ヒト由来の産生増強配列は、例えば、下記配列番号９のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。また、マウス由来の産生増強配列は、例えば、下記配列番号１０のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。前記産生増強配列が保存される場合、保存されるアミノ酸は、前記産生増強配列における全アミノ酸でもよいし、一部のアミノ酸でもよい。後者の場合、前記保存されるアミノ酸は、配列番号９または１０のアミノ酸配列において下線で示すアミノ酸であることが好ましい。また、後者の場合、保存されないアミノ酸は、特に制限されないが、後述の保存的アミノ酸置換に該当するアミノ酸が好ましい。
【００３５】ヒト由来の産生増強配列（配列番号９）VLTKCQEEVSHIPAVHPGSFRPKCDENGNYLPLQCYGSIGYCWCVFPNGTEVPNTRSRGHHNCS
【００３６】マウス由来の産生増強配列（配列番号１０）VLTKCQEEVSHIPAVYPGAFRPKCDENGNYLPLQCHGSTGYCWCVFPNGTEVPHTKSRGRHNCS
【００３７】  前記（Ｐ２）および（Ｐ３）のタンパク質において、前記（Ｐ２）および（Ｐ３）のタンパク質は、ｓＭＨＣII分子のエンドソームへのターゲティング配列（シグナル配列）が欠失されてもよい。前記ターゲティング配列は、前記配列番号１〜６のアミノ酸配列において、括弧無しの下線で示すアミノ酸配列である。具体例として、ヒト由来のターゲティング配列は、例えば、下記配列番号１１のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。また、マウス由来のターゲティング配列は、例えば、下記配列番号１２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。
【００３８】ヒト由来のターゲティング配列（配列番号１１）MDDQRDLISNNEQLPMLGRR
【００３９】マウス由来のターゲティング配列（配列番号１２）MDDQRDLISNHEQLPILGNR
【００４０】  前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（Ｐ２）は、配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列におけるＣＬＩＰ配列が保存され、および／またはターゲティング配列が欠失され、前記（Ｐ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質であることが好ましい。また、前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（Ｐ３）は、配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列におけるＣＬＩＰ配列が保存され、および／またはターゲティング配列が欠失され、前記（Ｐ１）のアミノ酸配列に対して、５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質であることが好ましい。前記（Ｐ２）における「１もしくは数個」および前記（Ｐ３）における同一性の説明は、前述の「１もしくは数個」および「同一性」の説明を援用できる。
【００４１】  前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（Ｐ２）は、配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列における産生増強配列が保存され、前記（Ｐ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質であることが好ましい。また、前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（Ｐ３）は、配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列における産生増強配列が保存され、前記（Ｐ１）のアミノ酸配列に対して、５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質であることが好ましい。前記（Ｐ２）における「１もしくは数個」および前記（Ｐ３）における「同一性」の説明は、前述の「１もしくは数個」および「同一性」の説明を援用できる。
【００４２】  前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（Ｐ２）は、配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列における産生増強配列が保存され、かつ配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列におけるＣＬＩＰ配列が保存され、および／またはターゲティング配列が欠失され、前記（Ｐ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質であることが好ましい。また、前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（Ｐ３）は、配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列における産生増強配列が保存され、かつ配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列におけるＣＬＩＰ配列が保存され、および／またはターゲティング配列が欠失され、前記（Ｐ１）のアミノ酸配列に対して、５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質であることが好ましい。前記（Ｐ２）における「１もしくは数個」および前記（Ｐ３）における「同一性」の説明は、前述の「１もしくは数個」および「同一性」の説明を援用できる。
【００４３】  ＣＤ７４タンパク質は、例えば、保存的アミノ酸置換が導入されてもよい。前記保存的アミノ酸置換は、例えば、置換対象のアミノ酸と類似する特性の側鎖を有するアミノ酸残基による置換を意味する。前記保存的アミノ酸置換は、例えば、前記ＣＤ７４タンパク質のＣＬＩＰ配列および産生増強配列に導入されてもよい。また、ＣＤ７４タンパク質は、例えば、１以上の産生増強配列が挿入および／または付加されてもよい。
【００４４】  ＣＤ７４タンパク質は、例えば、ＣＤ７４タンパク質の部分配列からなるポリペプチドでもよい。この場合、前記部分配列からなるポリペプチドは、ｓＭＨＣII分子の産生誘導能を有する。前記部分配列からなるポリペプチドは、例えば、前記ＣＬＩＰ配列および前記産生増強配列を有する。この場合、前記部分配列からなるポリペプチドは、例えば、Ｎ末端からＣ末端に向かって、前記ＣＬＩＰ配列および前記産生増強配列をこの順序で有する。前記部分配列からなるポリペプチドは、さらに、膜貫通領域を構成するアミノ酸配列を含むことが好ましい。前記膜貫通領域を構成するアミノ酸配列は、例えば、膜タンパク質の膜貫通領域のアミノ酸配列があげられ、具体例として、αヘリックスを形成する疎水性アミノ酸から構成されるアミノ酸配列があげられる。前記膜貫通領域を構成するアミノ酸配列は、好ましくは、ＣＤ７４タンパク質の膜貫通領域を構成するアミノ酸配列である。前記部分配列からなるポリペプチドが前記膜貫通領域を構成するアミノ酸配列を含む場合、前記部分配列からなるポリペプチドは、例えば、Ｎ末端からＣ末端に向かって、前記膜貫通領域を構成するアミノ酸配列および前記産生増強配列、または前記膜貫通領域を構成するアミノ酸配列、前記ＣＬＩＰ配列および前記産生増強配列をこの順序で有する。各配列は、例えば、直接または間接的に連結される。後者の場合、前記各配列は、例えば、リンカー配列で連結されている。前記リンカー配列のアミノ酸配列は、特に制限されず、例えば、ＧＳリンカー（（ＧＧＧＧＳ（配列番号４８））３）等があげられる。前記リンカー配列の長さは、特に制限されず、例えば、１〜１００アミノ酸、５〜１５アミノ酸等があげられる。
【００４５】  本発明において、ＣＤ７４タンパク質は、例えば、天然型アミノ酸、非天然型アミノ酸および／または修飾された天然型アミノ酸から構成されるが、天然型アミノ酸および／または修飾された天然型アミノ酸から構成されることが好ましい。ＣＤ７４タンパク質を構成するアミノ酸は、例えば、Ｌ体でもよいし、Ｄ体でもよいし、両者でもよいが、Ｌ体が好ましい。
【００４６】  ＣＤ７４タンパク質は、未修飾のタンパク質でもよいし、修飾されたタンパク質でもよい。前記修飾は、例えば、アシル化、アセチル化、アルキル化、アミド化、ビオチニル化、ホルミル化、γカルボキシル化、グルタミン化、グリコシル化、グリシル化、イソプレニル化、リン酸化、ＰＥＧ化、ラセミ化等の官能基の付加；ジスルフィド結合の形成等のタンパク質内架橋；等があげられる。
【００４７】  ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチド（以下、「ＣＤ７４ポリヌクレオチド」ともいう）は、例えば、各種動物のｍＲＮＡの塩基配列に基づいて設計可能なＣＤ７４ポリヌクレオチドでもよいし、ＣＤ７４タンパク質のアミノ酸配列に基づいて、対応するコドンに置き換えることで設計可能なポリヌクレオチドでもよい。前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドは、例えば、コドン最適化されてもよい。
【００４８】  前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドとしては、例えば、以下のポリヌクレオチドが例示できる。ヒト由来ＣＤ７４ポリヌクレオチドは、例えば、ｐ３３アイソフォーム、ｐ３５アイソフォーム、ｐ４１アイソフォーム、またはｐ４３アイソフォームをコードするポリヌクレオチドがあげられる。ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（終止コドン含）は、例えば、GenBankアクセッションNo. X00497.1で登録されている塩基配列（配列番号１３）からなるポリヌクレオチド等があげられる。ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（終止コドン含）は、例えば、GenBankアクセッションNo. NM_004355.3で登録されている塩基配列（配列番号１４）からなるポリヌクレオチド等があげられる。ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（終止コドン含）は、例えば、下記配列番号１５の塩基配列からなるポリヌクレオチド等があげられる。ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（終止コドン含）は、例えば、GenBankアクセッションNo. NM_001025159.2で登録されている塩基配列（配列番号１６）からなるポリヌクレオチド等があげられる。マウス由来ＣＤ７４ポリヌクレオチドは、例えば、ｐ３１アイソフォームまたはｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチドがあげられる。マウスＣＤ７４タンパク質ｐ３１アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（終止コドン含）は、例えば、GenBankアクセッションNo. NM_010545.3で登録されている塩基配列（配列番号１７）からなるポリヌクレオチド等があげられる。マウスＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（終止コドン含）は、例えば、GenBankアクセッションNo. NM_001042605.1で登録されている塩基配列（配列番号１８）からなるポリヌクレオチド等があげられる。ＣＤ７４ポリヌクレオチドがヒトＣＤ７４ポリヌクレオチドの場合、前記ヒトＣＤ７４ポリヌクレオチドは、例えば、より高いヒトｓＭＨＣII分子の産生誘導能を示すことから、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォームをコードするポリヌクレオチド、またはヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチドが好ましい。各ＣＤ７４タンパク質のアイソフォームは、例えば、単独で、高いヒトｓＭＨＣII分子の産生誘導能を示すことから、後述のＨＬＡ−ＤＭα鎖をコードするポリヌクレオチドおよび／またはＨＬＡ−ＤＭβ鎖をコードするポリヌクレオチド、またはこれらのタンパク質と共存させなくてもよい。また、ＣＤ７４ポリヌクレオチドは、例えば、より高いｓＭＨＣII分子、特に、マウスｓＭＨＣII分子の産生誘導能を示すことから、後述の産生増強配列を含むＣＤ７４タンパク質のアイソフォームをコードするポリヌクレオチドが好ましく、具体例として、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチド、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームをコードするポリヌクレオチド、またはマウスＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチドがより好ましい。
【００４９】ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１３）5'-atggatgaccagcgcgaccttatctccaacaatgagcaactgcccatgctgggccggcgccctggggccccggagagcaagtgcagccgcggagccctgtacacaggcttttccatcctggtgactctgctcctcgctggccaggccaccaccgcctacttcctgtaccagcagcagggccggctggacaaactgacagtcacctcccagaacctgcagctggagaacctgcgcatgaag[cttcccaagcctcccaagcctgtgagcaagatgcgcatggccaccccgctgctgatgcaggcgctgcccatg]ggagccctgccccaggggcccatgcagaatgccaccaagtatggcaacatgacagaggaccatgtgatgcacctgctccagaatgctgaccccctgaaggtgtacccgccactgaaggggagcttcccggagaacctgagacaccttaagaacaccatggagaccatagactggaaggtctttgagagctggatgcaccattggctcctgtttgaaatgagcaggcactccttggagcaaaagcccactgacgctccaccgaaagagtcactggaactggaggacccgtcttctgggctgggtgtgaccaagcaggatctgggcccagtccccatgtga-3'
【００５０】ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４）5'-atgcacaggaggagaagcaggagctgtcgggaagatcagaagccagtcatggatgaccagcgcgaccttatctccaacaatgagcaactgcccatgctgggccggcgccctggggccccggagagcaagtgcagccgcggagccctgtacacaggcttttccatcctggtgactctgctcctcgctggccaggccaccaccgcctacttcctgtaccagcagcagggccggctggacaaactgacagtcacctcccagaacctgcagctggagaacctgcgcatgaag[cttcccaagcctcccaagcctgtgagcaagatgcgcatggccaccccgctgctgatgcaggcgctgcccatg]ggagccctgccccaggggcccatgcagaatgccaccaagtatggcaacatgacagaggaccatgtgatgcacctgctccagaatgctgaccccctgaaggtgtacccgccactgaaggggagcttcccggagaacctgagacaccttaagaacaccatggagaccatagactggaaggtctttgagagctggatgcaccattggctcctgtttgaaatgagcaggcactccttggagcaaaagcccactgacgctccaccgaaagagtcactggaactggaggacccgtcttctgggctgggtgtgaccaagcaggatctgggcccagtccccatgtga-3'
【００５１】ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５）5'-atggatgaccagcgcgaccttatctccaacaatgagcaactgcccatgctgggccggcgccctggggccccggagagcaagtgcagccgcggagccctgtacacaggcttttccatcctggtgactctgctcctcgctggccaggccaccaccgcctacttcctgtaccagcagcagggccggctggacaaactgacagtcacctcccagaacctgcagctggagaacctgcgcatgaag[cttcccaagcctcccaagcctgtgagcaagatgcgcatggccaccccgctgctgatgcaggcgctgcccatg]ggagccctgccccaggggcccatgcagaatgccaccaagtatggcaacatgacagaggaccatgtgatgcacctgctccagaatgctgaccccctgaaggtgtacccgccactgaaggggagcttcccggagaacctgagacaccttaagaacaccatggagaccatagactggaaggtctttgagagctggatgcaccattggctcctgtttgaaatgagcaggcactccttggagcaaaagcccactgacgctccaccgaaa[gtactgaccaagtgccaggaagaggtcagccacatccctgctgtccacccgggttcattcaggcccaagtgcgacgagaacggcaactatctgccactccagtgctatgggagcatcggctactgctggtgtgtcttccccaacggcacggaggtccccaacaccagaagccgcgggcaccataactgcagt]gagtcactggaactggaggacccgtcttctgggctgggtgtgaccaagcaggatctgggcccagtccccatgtga-3'
【００５２】ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１６）5'-atgcacaggaggagaagcaggagctgtcgggaagatcagaagccagtcatggatgaccagcgcgaccttatctccaacaatgagcaactgcccatgctgggccggcgccctggggccccggagagcaagtgcagccgcggagccctgtacacaggcttttccatcctggtgactctgctcctcgctggccaggccaccaccgcctacttcctgtaccagcagcagggccggctggacaaactgacagtcacctcccagaacctgcagctggagaacctgcgcatgaag[cttcccaagcctcccaagcctgtgagcaagatgcgcatggccaccccgctgctgatgcaggcgctgcccatg]ggagccctgccccaggggcccatgcagaatgccaccaagtatggcaacatgacagaggaccatgtgatgcacctgctccagaatgctgaccccctgaaggtgtacccgccactgaaggggagcttcccggagaacctgagacaccttaagaacaccatggagaccatagactggaaggtctttgagagctggatgcaccattggctcctgtttgaaatgagcaggcactccttggagcaaaagcccactgacgctccaccgaaa[gtactgaccaagtgccaggaagaggtcagccacatccctgctgtccacccgggttcattcaggcccaagtgcgacgagaacggcaactatctgccactccagtgctatgggagcatcggctactgctggtgtgtcttccccaacggcacggaggtccccaacaccagaagccgcgggcaccataactgcagt]gagtcactggaactggaggacccgtcttctgggctgggtgtgaccaagcaggatctgggcccagtccccatgtga-3'
【００５３】マウスＣＤ７４タンパク質ｐ３１アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１７）5'-atggatgaccaacgcgacctcatctctaaccatgaacagttgcccatactgggcaaccgccctagagagccagaaaggtgcagccgtggagctctgtacaccggtgtctctgtcctggtggctctgctcttggctgggcaggccaccactgcttacttcctgtaccagcaacagggccgcctagacaagctgaccatcacctcccagaacctgcaactggagagccttcgcatgaag[cttccgaaatctgccaaacctgtgagccagatgcggatggctactcccttgctgatgcgtccaatgtccatg]gataacatgctccttgggcctgtgaagaacgttaccaagtacggcaacatgacccaggaccatgtgatgcatctgctcacgaggtctggacccctggagtacccgcagctgaaggggaccttcccagagaatctgaagcatcttaagaactccatggatggcgtgaactggaagatcttcgagagctggatgaagcagtggctcttgtttgagatgagcaagaactccctggaggagaagaagcccaccgaggctccacctaaagagccactggacatggaagacctatcttctggcctgggagtgaccaggcaggaactgggtcaagtcaccctgtga-3'
【００５４】マウスＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１８）5'-atggatgaccaacgcgacctcatctctaaccatgaacagttgcccatactgggcaaccgccctagagagccagaaaggtgcagccgtggagctctgtacaccggtgtctctgtcctggtggctctgctcttggctgggcaggccaccactgcttacttcctgtaccagcaacagggccgcctagacaagctgaccatcacctcccagaacctgcaactggagagccttcgcatgaag[cttccgaaatctgccaaacctgtgagccagatgcggatggctactcccttgctgatgcgtccaatgtccatg]gataacatgctccttgggcctgtgaagaacgttaccaagtacggcaacatgacccaggaccatgtgatgcatctgctcacgaggtctggacccctggagtacccgcagctgaaggggaccttcccagagaatctgaagcatcttaagaactccatggatggcgtgaactggaagatcttcgagagctggatgaagcagtggctcttgtttgagatgagcaagaactccctggaggagaagaagcccaccgaggctccacctaaa[gtactgaccaagtgccaggaagaagtcagccacatccctgccgtctacccgggtgcgttccgtcccaagtgcgacgagaacggtaactatttgccactccagtgccacgggagcactggctactgctggtgtgtgttccccaacggcactgaggttcctcacaccaagagccgcgggcgccataactgcagt]gagccactggacatggaagacctatcttctggcctgggagtgaccaggcaggaactgggtcaagtcaccctgtga-3'
【００５５】  ＣＤ７４ポリヌクレオチドは、例えば、下記（ｐ１）〜（ｐ６）または（ｐ７）の塩基配列（核酸配列）からなるポリヌクレオチドでもよい。（ｐ１）各種動物由来のＣＤ７４タンパク質のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド（ｐ２）前記（ｐ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド（ｐ３）前記（ｐ１）のアミノ酸配列に対して、５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド（ｐ４）配列番号１３〜１８のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチド（ｐ５）前記（ｐ４）の塩基配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド（ｐ６）前記（ｐ４）の塩基配列に対して、５０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド（ｐ７）前記（ｐ４）の塩基配列からなるポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに、相補的な塩基配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
【００５６】  前記（ｐ１）における各種動物由来のＣＤ７４タンパク質のアミノ酸配列の説明は、前記（Ｐ１）における各種動物由来のＣＤ７４タンパク質のアミノ酸配列の説明を援用でき、具体例として、配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列があげられる。
【００５７】  前記（ｐ２）において、「１もしくは数個」は、例えば、前記（ｐ２）によりコードされるタンパク質が、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有する範囲、すなわち、使用対象の細胞内に導入することで、前記細胞においてｓＭＨＣII分子の産生を誘導できる範囲であればよい。前記（ｐ２）の「１もしくは数個」は、前記（ｐ１）のアミノ酸配列において、例えば、１〜１５０個、１〜１３５個、１〜１２０個、１〜１０５個、１〜９０個、１〜７５個、１〜６０個、１〜４５個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１０個、１〜９個、１〜５個、１〜３個、１または２個である。
【００５８】  前記（ｐ３）において、「同一性」は、例えば、前記（ｐ３）によりコードされるタンパク質が、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有する範囲、すなわち、使用対象の細胞内に導入することで、前記細胞においてｓＭＨＣII分子の産生を誘導できる範囲であればよい。前記（ｐ３）の「同一性」は、前記（ｐ１）のアミノ酸配列に対して、例えば、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００５９】  前記（ｐ４）において、配列番号１３〜１８のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドの説明は、前述の説明を援用できる。
【００６０】  前記（ｐ５）において、「１もしくは数個」は、例えば、前記（ｐ４）のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質が、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有する範囲であればよい。前記（ｐ５）の「１もしくは数個」は、前記（ｐ４）の塩基配列において、例えば、１〜４５０個、１〜４０５個、１〜３６０個、１〜３１５個、１〜２７０個、１〜２２５個、１〜１８０個、１〜１３５個、１〜９０個、１〜４５個、１〜２０個、１〜１０個、１〜９個、１〜５個、１〜３個、１または２個である。
【００６１】  前記（ｐ６）において、「同一性」は、例えば、前記（ｐ６）のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質が、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有する範囲であればよい。前記（ｐ６）の同一性は、前記（ｐ４）の塩基配列に対して、例えば、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である
【００６２】  前記（ｐ７）において、「ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド」は、例えば、前記（ｐ４）のポリヌクレオチドに対して、完全または部分的に相補的なポリヌクレオチドである。前記ハイブリダイズは、例えば、各種ハイブリダイゼーションアッセイにより検出できる。前記ハイブリダイゼーションアッセイは、特に制限されず、例えば、ザンブルーク（Sambrook）ら編「モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリーマニュアル第２版（Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd Ed.）」〔Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)〕等に記載されている方法を採用することもできる。
【００６３】  前記（ｐ７）において、「ストリンジェントな条件」は、例えば、低ストリンジェントな条件、中ストリンジェントな条件、高ストリンジェントな条件のいずれでもよい。「低ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、３２℃の条件である。「中ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、４２℃の条件である。「高ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、５０℃の条件である。ストリンジェンシーの程度は、当業者であれば、例えば、温度、塩濃度、プローブの濃度および長さ、イオン強度、時間等の条件を適宜選択することで、設定可能である。「ストリンジェントな条件」は、例えば、前述したザンブルーク（Sambrook）ら編「モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリーマニュアル第２版（Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd Ed.）」〔Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)〕等に記載の条件を採用することもできる。
【００６４】  前記（ｐ２）および（ｐ３）のタンパク質は、各種動物由来のアミノ酸配列において、ＣＬＩＰペプチドをコードするアミノ酸配列（ＣＬＩＰ配列）が保存されることが好ましい。前記ＣＬＩＰ配列は、前述の説明を援用できる。前記ＣＬＩＰ配列が保存される場合、保存されるアミノ酸は、前記ＣＬＩＰ配列における全アミノ酸でもよいし、一部のアミノ酸でもよい。後者の場合、前記保存されるアミノ酸は、配列番号７または８のアミノ酸配列において下線で示すアミノ酸であることが好ましい。また、後者の場合、保存されないアミノ酸は、特に制限されないが、前記保存的アミノ酸置換に該当するアミノ酸が好ましい。
【００６５】  前記（ｐ２）および（ｐ３）のタンパク質において、各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（ｐ２）および（ｐ３）のタンパク質は、ｓＭＨＣII分子の産生増強配列が保存されることが好ましい。前記産生増強配列は、前述の説明を援用できる。前記産生増強配列が保存される場合、保存されるアミノ酸は、前記産生増強配列における全アミノ酸でもよいし、一部のアミノ酸でもよい。後者の場合、前記保存されるアミノ酸は、配列番号９または１０のアミノ酸配列において下線で示すアミノ酸であることが好ましい。また、後者の場合、保存されないアミノ酸は、特に制限されないが、前記保存的アミノ酸置換に該当するアミノ酸が好ましい。
【００６６】  前記（ｐ２）および（ｐ３）のタンパク質において、前記（ｐ２）および（ｐ３）のタンパク質は、ｓＭＨＣII分子のエンドソームへのターゲティング配列が欠失されてもよい。前記ターゲティング配列は、前述の説明を援用できる。
【００６７】  前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（ｐ２）は、配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列におけるＣＬＩＰ配列が保存され、および／または、ターゲティング配列が欠失され、前記（ｐ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。また、前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（ｐ３）は、配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列におけるＣＬＩＰ配列が保存され、および／または、ターゲティング配列が欠失され、前記（ｐ１）のアミノ酸配列に対して、５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。前記（ｐ２）における「１もしくは数個」および前記（ｐ３）における同一性の説明は、前述の「１もしくは数個」および「同一性」の説明を援用できる。
【００６８】  前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（ｐ２）は、配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列における産生増強配列が保存され、前記（ｐ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。また、前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（ｐ３）は、配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列における産生増強配列が保存され、前記（ｐ１）のアミノ酸配列に対して、５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。前記（ｐ２）における「１もしくは数個」および前記（ｐ３）における「同一性」の説明は、前述の「１もしくは数個」および「同一性」の説明を援用できる。
【００６９】  前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（ｐ２）は、配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列における産生増強配列が保存され、かつ配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列におけるＣＬＩＰ配列が保存され、および／または、ターゲティング配列が欠失され、前記（ｐ１）のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。また、前記各種動物由来のアミノ酸配列が配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列である場合、前記（ｐ３）は、配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列における産生増強配列が保存され、かつ配列番号３、４および６のいずれかのアミノ酸配列におけるＣＬＩＰ配列が保存され、および／または、ターゲティング配列が欠失され、前記（ｐ１）のアミノ酸配列に対して、５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。前記（ｐ２）における「１もしくは数個」および前記（ｐ３）における「同一性」の説明は、前述の「１もしくは数個」および「同一性」の説明を援用できる。
【００７０】  前記（ｐ５）および（ｐ６）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質のアミノ酸配列において、前記ＣＬＩＰ配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存されることが好ましい。前記ＣＬＩＰ配列をコードする塩基配列は、前記配列番号１３〜１８のいずれかの塩基配列において、括弧で囲った下線無しの塩基配列からなるポリヌクレオチドである。具体例として、ヒト由来のＣＬＩＰ配列をコードするポリヌクレオチドは、例えば、下記配列番号１９の塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。また、マウス由来のＣＬＩＰ配列をコードするポリヌクレオチドは、例えば、下記配列番号２０の塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。前記ＣＬＩＰ配列をコードする塩基配列が保存される場合、保存される塩基は、前記ＣＬＩＰ配列をコードする塩基配列における全塩基でもよいし、一部の塩基でもよい。後者の場合、前記保存される塩基は、配列番号７または８のアミノ酸配列において下線で示すアミノ酸をコードする塩基であることが好ましい。また、後者の場合、保存されない塩基は、特に制限されないが、同じアミノ酸をコードする塩基が好ましい。
【００７１】ヒト由来のＣＬＩＰ配列をコードするポリヌクレオチド（配列番号１９）5'-cttcccaagcctcccaagcctgtgagcaagatgcgcatggccaccccgctgctgatgcaggcgctgcccatg-3'
【００７２】マウス由来のＣＬＩＰ配列をコードするポリヌクレオチド（配列番号２０）5'-cttccgaaatctgccaaacctgtgagccagatgcggatggctactcccttgctgatgcgtccaatgtccatg-3'
【００７３】  前記（ｐ５）および（ｐ６）のポリヌクレオチドの塩基配列が配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列である場合、前記（ｐ５）および（ｐ６）のポリヌクレオチドは、ｓＭＨＣII分子の産生増強配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存されることが好ましい。前記産生増強配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存されることにより、前記（ｐ５）および（ｐ６）のポリヌクレオチドがコードするタンパク質は、例えば、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームおよびマウスＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームにおける高いｓＭＨＣII分子の産生誘導能を維持できる。前記産生増強配列をコードするポリヌクレオチドは、前記配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列において、括弧で囲った下線で示す塩基配列からなるポリヌクレオチドである。具体例として、ヒト由来の産生増強配列をコードするポリヌクレオチドは、例えば、下記配列番号２１の塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。また、マウス由来の産生増強配列をコードするポリヌクレオチドは、例えば、下記配列番号２２の塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。前記産生増強配列をコードする塩基配列が保存される場合、保存される塩基は、前記産生増強配列をコードする塩基配列における全塩基でもよいし、一部の塩基でもよい。後者の場合、前記保存される塩基は、配列番号９または１０のアミノ酸配列において下線で示すアミノ酸をコードする塩基であることが好ましい。また、後者の場合、保存されない塩基は、特に制限されないが、同じアミノ酸をコードする塩基が好ましい。
【００７４】ヒト由来の産生増強配列をコードするポリヌクレオチド（配列番号２１）5'-gtactgaccaagtgccaggaagaggtcagccacatccctgctgtccacccgggttcattcaggcccaagtgcgacgagaacggcaactatctgccactccagtgctatgggagcatcggctactgctggtgtgtcttccccaacggcacggaggtccccaacaccagaagccgcgggcaccataactgcagt-3'
【００７５】マウス由来の産生増強配列をコードするポリヌクレオチド（配列番号２２）5'-gtactgaccaagtgccaggaagaagtcagccacatccctgccgtctacccgggtgcgttccgtcccaagtgcgacgagaacggtaactatttgccactccagtgccacgggagcactggctactgctggtgtgtgttccccaacggcactgaggttcctcacaccaagagccgcgggcgccataactgcagt-3'
【００７６】  前記（ｐ５）および（ｐ６）のポリヌクレオチドにおいて、前記（ｐ５）および（ｐ６）のポリヌクレオチドは、ｓＭＨＣII分子のエンドソームへのターゲティング配列をコードするポリヌクレオチドが欠失されてもよい。前記ターゲティング配列をコードするポリヌクレオチドは、前記配列番号１３〜１８のいずれかの塩基配列において、括弧無しの下線で示す塩基配列からなるポリヌクレオチドである。具体例として、ヒト由来のターゲティング配列をコードするポリヌクレオチドは、例えば、下記配列番号２３の塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。また、マウス由来のターゲティング配列は、例えば、下記配列番号２４の塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。
【００７７】ヒト由来のターゲティング配列をコードするポリヌクレオチド（配列番号２３）5'-atggatgaccagcgcgaccttatctccaacaatgagcaactgcccatgctgggccggcgc-3'
【００７８】マウス由来のターゲティング配列をコードするポリヌクレオチド（配列番号２４）5'-atggatgaccaacgcgacctcatctctaaccatgaacagttgcccatactgggcaaccgc-3'
【００７９】  前記（ｐ４）の塩基配列が配列番号１３〜１８のいずれかの塩基配列である場合、前記（ｐ５）は、配列番号１３〜１８のいずれかの塩基配列におけるＣＬＩＰ配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存され、および／またはターゲティング配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が欠失され、前記（ｐ４）の塩基配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。また、前記（ｐ４）の塩基配列が配列番号１３〜１８のいずれかの塩基配列である場合、前記（ｐ６）は、配列番号１３〜１８のいずれかの塩基配列におけるＣＬＩＰ配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存され、および／またはターゲティング配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が欠失され、前記（ｐ４）の塩基配列に対して、５０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。前記（ｐ５）における「１もしくは数個」および前記（ｐ６）における同一性の説明は、前述の「１もしくは数個」および「同一性」の説明を援用できる。
【００８０】  前記（ｐ４）の塩基配列が配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列である場合、前記（ｐ５）は、配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列における産生増強配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存され、前記（ｐ４）の塩基配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。また、前記（ｐ４）の塩基配列が配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列である場合、前記（ｐ６）は、配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列における産生増強配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存され、前記（ｐ４）の塩基配列に対して、５０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。前記（ｐ５）における「１もしくは数個」および前記（ｐ６）における「同一性」の説明は、前述の「１もしくは数個」および「同一性」の説明を援用できる。
【００８１】  前記（ｐ４）の塩基配列が配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列である場合、前記（ｐ５）は、配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列における産生増強配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存され、かつ配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列におけるＣＬＩＰ配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存され、および／またはターゲティング配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が欠失され、前記（ｐ４）の塩基配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。また、前記（ｐ４）の塩基配列が配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列である場合、前記（ｐ６）は、配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列における産生増強配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存され、かつ配列番号１５、１６および１８のいずれかの塩基配列におけるＣＬＩＰ配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が保存され、および／またはターゲティング配列をコードするポリヌクレオチドの塩基配列が欠失され、前記（ｐ４）の塩基配列に対して、５０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ｓＭＨＣII分子の産生誘導活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドであることが好ましい。前記（ｐ５）における「１もしくは数個」および前記（ｐ６）における「同一性」の説明は、前述の「１もしくは数個」および「同一性」の説明を援用できる。
【００８２】  前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドは、例えば、核酸から構成され、具体例として、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）から構成されてもよいし、デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）から構成されてもよいし、両者から構成されてもよい。前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドがＲＮＡから構成される場合、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドは、例えば、細胞に導入された際に、前記細胞内の翻訳系によりタンパク質が翻訳可能なように構成されることが好ましい。また、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドがＤＮＡから構成される場合、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドは、前記細胞内の転写系により、ｍＲＮＡが転写可能なように構成されることが好ましい。
【００８３】  前記核酸は、天然の核酸でもよいし、非天然の核酸でもよい。前記非天然の核酸は、例えば、修飾された塩基、糖骨格またはヌクレオシド間の連結を含む核酸があげられる。前記修飾された塩基、糖骨格およびヌクレオシド間の連結は、特に制限されず、任意の修飾形態を使用できる。前記非天然の核酸は、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、モルホリノ環を有する核酸、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）、Ｌｏｃｋｅｄ核酸（ＬＮＡ）等でもよい。
【００８４】  前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドがＤＮＡから構成される場合、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドは、ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクター（以下、「ＣＤ７４発現ベクター」ともいう）でもよい。前記ＣＤ７４発現ベクターは、例えば、骨格となるベクター（以下、「基本ベクター」ともいう）に、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドを挿入することで作製できる。前記ベクターの種類は、特に制限されず、例えば、後述する細胞（宿主）の種類に応じて、適宜決定できる。前記ベクターは、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター等のウイルスベクター；プラスミドベクター等の非ウイルスベクター；等があげられる。前記ベクターは、エピソーマルベクターでもよい。前記宿主が真核細胞の場合、前記ベクターは、例えば、pXT1、pSG5（Stratagene社製）、pSVK3、pBPV、pMSG、pSVLSV40（Pharmacia社製）、pMX、pME18S等があげられる。前記ベクターは、例えば、前記ベクターの導入方法に応じて決定してもよい。具体例として、前記導入方法としてヒートショック法により宿主の形質転換を行う場合、前記ベクターは、例えば、バイナリーベクター等があげられる。この場合、前記ベクターは、例えば、pETDuet-1、pQE-80L、pUCP26Km等があげられる。大腸菌等の細菌に形質転換を行う場合、前記ベクターは、例えば、pETDuet-1（ノバジェン社製）、pQE-80L（ＱＩＡＧＥＮ社社製）等があげられる。
【００８５】  前記ＣＤ７４発現ベクターは、例えば、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドの発現および前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドがコードする前記ＣＤ７４タンパク質の少なくとも一方の発現を調節する、調節配列を有することが好ましい。前記調節配列は、例えば、プロモーター、ターミネーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル配列、複製起点配列（ｏｒｉ）等があげられる。前記プロモーターは、例えば、恒常的に活性を有するプロモーターでもよいし、誘導性のプロモーターでもよい。前記恒常的に活性を有するプロモーターは、例えば、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ−ＴＫプロモーター、ＳＶ４０プロモーター等があげられる。前記誘導性プロモーターは、例えば、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、Ｔ３ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）調節性プロモーター、ラクトース誘導性プロモーター、熱ショックプロモーター、テトラサイクリン調節性プロモーター、ステロイド調節性プロモーター、金属調節性プロモーター、エストロゲン受容体調節性プロモーター等があげられる。また、前記プロモーターは、例えば、特定の細胞、組織等で特異的に発現を誘導するプロモーターであってもよい。前記ＣＤ７４発現ベクターにおいて、前記調節配列の配置は、特に制限されないが、例えば、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドの発現を可能にするように、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドと作動可能に連結されていることが好ましい。具体的には、前記ＣＤ７４発現ベクターにおいて、前記調節配列は、例えば、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドの発現およびこれがコードする前記ＣＤ７４タンパク質の少なくとも一方の発現を、機能的に調節できるように配置されていればよく、公知の方法に基づいて配置できる。前記調節配列は、例えば、前記基本ベクターが予め備える配列を利用してもよいし、前記基本ベクターに、さらに、前記調節配列を挿入してもよいし、前記基本ベクターが備える調節配列を、他の調節配列に置き換えてもよい。
【００８６】  前記ＣＤ７４発現ベクターは、例えば、さらに、選択マーカーのコード配列を有してもよい。前記選択マーカーは、例えば、タグ配列（例えば、６×Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグ、ＨＡタグ、ＧＳＴ（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ）、ＭＢＰ（マルトース結合タンパク質））、薬剤耐性マーカー、蛍光タンパク質マーカー、酵素マーカー、細胞表面レセプターマーカー等があげられる。前記タグは、例えば、前記ＣＤ７４タンパク質のＮ末端および／またはＣ末端に付加されるように配置されている。
【００８７】  本発明の組成物は、例えば、ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含んでもよいし、ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含んでもよいし、両者を含んでもよい。本発明の組成物は、ＭＨＣクラスII分子のα鎖および／またはβ鎖、ならびにこれらをコードするポリヌクレオチドを含むことにより、例えば、ＭＨＣクラスII分子の発現が低い細胞、またはＭＨＣクラスII分子を発現しない細胞（例えば、発現量が検出限界未満の細胞）においても、効率よくｓＭＨＣII分子を製造できる。また、本発明の組成物は、ＭＨＣクラスII分子のα鎖および／またはβ鎖ならびにこれらをコードするポリヌクレオチドを含むことにより、例えば、ＭＨＣクラスII分子の由来と異種の細胞においても効率よくｓＭＨＣII分子を製造できる。
【００８８】  前記ＭＨＣクラスII分子は、例えば、α鎖およびβ鎖の複合体であり、それぞれの種類は特に制限されず、これらをコードする遺伝子のハプロタイプは、特に制限されない。また、前記ＭＨＣクラスII分子の由来は、特に制限されず、例えば、前記ＣＤ７４タンパク質の由来の説明を援用できる。前記ＭＨＣクラスII分子の由来は、前記ＣＤ７４タンパク質の由来と同種でもよいし、異種でもよいが、同種であることが好ましい。
【００８９】  前記ＭＨＣクラスII分子がヒト由来である場合、前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖は、例えば、ＨＬＡ−ＤＰＡ遺伝子座、ＨＬＡ−ＤＱＡ遺伝子座またはＨＬＡ−ＤＲＡ遺伝子座にコードされているＭＨＣクラスII分子のα鎖があげられ、前記ＭＨＣクラスII分子のβ鎖は、例えば、ＨＬＡ−ＤＰＢ遺伝子座、ＨＬＡ−ＤＱＢ遺伝子座またはＨＬＡ−ＤＲＢ遺伝子座にコードされているＭＨＣクラスII分子のβ鎖があげられる。前記各遺伝子座におけるＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖のハプロタイプは、特に制限されない。前記ＭＨＣクラスII分子は、例えば、α鎖およびβ鎖のいずれか一方を含む分子であり、α鎖およびβ鎖の両方を含む分子であることが好ましい。
【００９０】  前記ＭＨＣクラスII分子は、例えば、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰおよびＨＬＡ−ＤＱ等が好ましい。
【００９１】  前記ＨＬＡ−ＤＲは、例えば、ＨＬＡ−ＤＲ１、ＨＬＡ−ＤＲ２、ＨＬＡ−ＤＲ３、ＨＬＡ−ＤＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ５、ＨＬＡ−ＤＲ６、ＨＬＡ−ＤＲ７、ＨＬＡ−ＤＲ８、ＨＬＡ−ＤＲ９、ＨＬＡ−ＤＲ１０、ＨＬＡ−ＤＲ１１、ＨＬＡ−ＤＲ１２、ＨＬＡ−ＤＲ１３、ＨＬＡ−ＤＲ１４、ＨＬＡ−ＤＲ１５、ＨＬＡ−ＤＲ５２、ＨＬＡ−ＤＲ５３等があげられる。前記ＨＬＡ−ＤＲは、例えば、α鎖としてＨＬＡ−ＤＲＡ１等のＨＬＡ−ＤＲＡと、β鎖としてＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４またはＨＬＡ−ＤＲＢ５等のＨＬＡ−ＤＲＢとを含む分子があげられ、具体的には、α鎖として、例えば、ＨＬＡ−ＤＲＡ１＊０１等のアリル、β鎖として、例えば、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊０１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊０３、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊０４、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊０７、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊０８、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊０９、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１０、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１２、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１３、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１４、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１５、ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１６、ＨＬＡ−ＤＲＢ３＊０１、ＨＬＡ−ＤＲＢ４＊０１、ＨＬＡ−ＤＲＢ５＊０１等のアリルがあげられる。
【００９２】  前記ＨＬＡ−ＤＱは、例えば、ＨＬＡ−ＤＱ１、ＨＬＡ−ＤＱ２、ＨＬＡ−ＤＱ３、ＨＬＡ−ＤＱ４、ＨＬＡ−ＤＱ５、ＨＬＡ−ＤＱ６、ＨＬＡ−ＤＱ７、ＨＬＡ−ＤＱ８等があげられる。前記ＨＬＡ−ＤＱは、例えば、α鎖としてＨＬＡ−ＤＱＡ１等のＨＬＡ−ＤＱＡと、β鎖としてＨＬＡ−ＤＱＢ１等のＨＬＡ−ＤＱＢとを含む分子があげられ、具体的には、α鎖として、例えば、ＨＬＡ−ＤＱＡ１＊０１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１＊０２、ＨＬＡ−ＤＱＡ１＊０３、ＨＬＡ−ＤＱＡ１＊０４、ＨＬＡ−ＤＱＡ１＊０５、ＨＬＡ−ＤＱＡ１＊０６、β鎖として、例えば、ＨＬＡ−ＤＱＢ１＊０２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１＊０３、ＨＬＡ−ＤＱＢ１＊０４、ＨＬＡ−ＤＱＢ１＊０５、ＨＬＡ−ＤＱＢ１＊０６等のアリルがあげられる。
【００９３】  前記ＨＬＡ−ＤＰは、例えば、ＨＬＡ−ＤＰ１、ＨＬＡ−ＤＰ２、ＨＬＡ−ＤＰ３、ＨＬＡ−ＤＰ４、ＨＬＡ−ＤＰ５等があげられる。前記ＨＬＡ−ＤＰは、例えば、α鎖としてＨＬＡ−ＤＰＡ１等のＨＬＡ−ＤＰＡと、β鎖としてＨＬＡ−ＤＰＢ１等のＨＬＡ−ＤＰＢとを含む分子があげられ、具体的には、α鎖として、例えば、ＨＬＡ−ＤＰＡ１＊０１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１＊０２、ＨＬＡ−ＤＰＡ１＊０３、ＨＬＡ−ＤＰＡ１＊０４等、β鎖として、例えば、ＨＬＡ−ＤＰＢ１＊０２、ＨＬＡ−ＤＰＢ１＊０４、ＨＬＡ−ＤＰＢ１＊０５、ＨＬＡ−ＤＰＢ１＊０９等のアリルがあげられる。
【００９４】  前記ＭＨＣクラスII分子は、例えば、Ｉ−Ａ（Ｈ−２Ａ）、およびＩ−Ｅ（Ｈ−２Ｅ）等でもよい。前記Ｉ−Ａは、例えば、Ｉ−Ａｂ、Ｉ−Ａｄ、Ｉ−Ａｆ、Ｉ−Ａｇ７、Ｉ−Ａｊ、Ｉ−Ａｋ、Ｉ−Ａｐ、Ｉ−Ａｑ、Ｉ−Ａｒ、Ｉ−Ａｕ、Ｉ−Ａｖ等があげられる。前記Ｉ−Ｅは、例えば、Ｉ−Ｅｂ、Ｉ−Ｅｄ、Ｉ−Ｅｆ、Ｉ−Ｅｊ、Ｉ−Ｅｋ、Ｉ−Ｅｐ、Ｉ−Ｅｑ、Ｉ−Ｅｒ、Ｉ−Ｅｕ、Ｉ−Ｅｖ等があげられる。
【００９５】  前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質のアミノ酸配列は、例えば、IPD-IMGT/HLA（https://www.ebi.ac.uk/ipd/imgt/hla/index.html）に登録されているアミノ酸配列を参照できる。
【００９６】  前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質および／またはβ鎖タンパク質は、例えば、タグ配列が付加されてもよい。前記タグ配列が付加される場合、前記タグ配列は、例えば、前記α鎖タンパク質のＮ末端およびＣ末端、ならびに前記β鎖のＮ末端およびＣ末端のいずれか１つ以上に付加される。また、前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質および／またはβ鎖タンパク質は、後述のターゲティングタンパク質またはその部分配列が付加されてもよい。これにより、本発明の組成物は、例えば、後述の本発明のターゲティングタンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む場合と同様の効果を得ることができる。前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質およびβ鎖タンパク質は、例えば、α鎖タンパク質および／またはβ鎖タンパク質の部分配列からなるポリペプチドから構成されてもよい。前記部分配列からなるポリペプチドは、例えば、α鎖タンパク質および／またはβ鎖タンパク質の細胞内領域を構成するアミノ酸配列の一部または全部が欠失されたポリペプチドがあげられる。
【００９７】  ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、各種動物のＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質をコードするｍＲＮＡの塩基配列に基づいて設計可能なポリヌクレオチドでもよいし、ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質のアミノ酸配列に基づいて、対応するコドンに置き換えることで設計可能なポリヌクレオチドでもよい。前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、それぞれ、コドン最適化されてもよい。
【００９８】  前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドの塩基配列は、例えば、IPD-IMGT/HLA（https://www.ebi.ac.uk/ipd/imgt/hla/index.html）に登録されている塩基配列を参照できる。
【００９９】  前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドおよびＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、核酸から構成される。前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドの説明は、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドの説明において、「ＣＤ７４ポリヌクレオチド」を「ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチド」に、「ＣＤ７４発現ベクター」を「ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクター」に、「ＣＤ７４タンパク質」を「ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質」に読み替えて、その説明を援用できる。また、前記ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドの説明は、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドの説明において、「ＣＤ７４ポリヌクレオチド」を「ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチド」に、「ＣＤ７４発現ベクター」を「ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクター」に、「ＣＤ７４タンパク質」を「ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質」に読み替えて、その説明を援用できる。
【０１００】  前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質は、例えば、前記ＭＨＣクラスII分子へのペプチドの提示機能を喪失しない範囲で、そのアミノ酸配列が改変されてもよい。前記アミノ酸配列の改変は、例えば、１もしくは数個のアミノ酸の欠失、置換、挿入および／または付加、小型化、前記保存的アミノ酸置換、他のタンパク質との融合等があげられる。
【０１０１】  本発明の組成物は、例えば、ＨＬＡ−ＤＭ（分子）のα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含んでもよいし、前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含んでもよいし、両者を含んでもよい。本発明の組成物は、前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖および／またはβ鎖、ならびにこれらをコードするポリヌクレオチドを含むことにより、例えば、ｓＭＨＣII分子に効率よくペプチドをローディングできる。このため、例えば、ｓＭＨＣII分子と複合化させたいペプチドを含むタンパク質と組合せて細胞に導入することにより、前記タンパク質由来のペプチドがローディングされたｓＭＨＣII分子を効率よく製造できる。
【０１０２】  本発明の組成物が、ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む場合、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームおよびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームの少なくとも一方またはこれらをコードするポリヌクレオチドを含むことが好ましい。これにより、本発明の組成物は、例えば、さらに高いヒトｓＭＨＣII分子の産生誘導能を示すことができる。
【０１０３】  前記ＨＬＡ−ＤＭ分子は、例えば、α鎖およびβ鎖の複合体である。また、前記ＨＬＡ−ＤＭ分子の由来は、特に制限されず、例えば、前記ＣＤ７４タンパク質の由来の説明を援用できる。前記ＨＬＡ−ＤＭ分子がヒト以外に由来する場合、前記ＨＬＡ−ＤＭ分子は、ヒトＨＬＡ−ＤＭ分子のホモログまたはオーソログであってもよい。マウスにおけるヒトＨＬＡ−ＤＭ分子のオーソログは、例えば、Ｈ−２Ｍ（Ｈ２−Ｍ）分子があげられる。前記ＨＬＡ−ＤＭ分子の由来は、前記ＣＤ７４タンパク質の由来と同種でもよいし、異種でもよいが、同種であることが好ましい。
【０１０４】  前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖およびβ鎖タンパク質としては、例えば、以下のタンパク質が例示できる。ヒトＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質は、例えば、GenBankアクセッションNo. NP_006111.2で登録されているアミノ酸配列（配列番号２５）からなるタンパク質等があげられる。ヒトＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質は、例えば、GenBankアクセッションNo. NP_002109.2で登録されているアミノ酸配列（配列番号２６）からなるタンパク質等があげられる。マウスＨ−２Ｍのα鎖タンパク質は、例えば、GenBankアクセッションNo. NP_001347459.1で登録されているアミノ酸配列（配列番号２７）からなるタンパク質等があげられる。マウスＨ−２Ｍのβ鎖タンパク質は、例えば、GenBankアクセッションNo. NP_034517.2で登録されているアミノ酸配列（配列番号２８）からなるタンパク質等があげられる。
【０１０５】ヒトＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質（配列番号２５）MGHEQNQGAALLQMLPLLWLLPHSWAVPEAPTPMWPDDLQNHTFLHTVYCQDGSPSVGLSEAYDEDQLFFFDFSQNTRVPRLPEFADWAQEQGDAPAILFDKEFCEWMIQQIGPKLDGKIPVSRGFPIAEVFTLKPLEFGKPNTLVCFVSNLFPPMLTVNWQHHSVPVEGFGPTFVSAVDGLSFQAFSYLNFTPEPSDIFSCIVTHEIDRYTAIAYWVPRNALPSDLLENVLCGVAFGLGVLGIIVGIVLIIYFRKPCSGD
【０１０６】ヒトＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質（配列番号２６）MITFLPLLLGLSLGCTGAGGFVAHVESTCLLDDAGTPKDFTYCISFNKDLLTCWDPEENKMAPCEFGVLNSLANVLSQHLNQKDTLMQRLRNGLQNCATHTQPFWGSLTNRTRPPSVQVAKTTPFNTREPVMLACYVWGFYPAEVTITWRKNGKLVMPHSSAHKTAQPNGDWTYQTLSHLALTPSYGDTYTCVVEHTGAPEPILRDWTPGLSPMQTLKVSVSAVTLGLGLIIFSLGVISWRRAGHSSYTPLPGSNYSEGWHIS
【０１０７】マウスＨ−２Ｍのα鎖タンパク質（配列番号２７）MEHEQKSGAVLLRLLRLLWLLPHSWAVLEASTPVFWDDPQNHTFRHTLFCQDGIPNIGLSETYDEDELFSFDFSQNTRVPRLPDFAEWAQGQGDASAIAFDKSFCEMLMREVSPKLEGQIPVSRGLPVAEVFTLKPLEFGKPNTLVCFISNLFPPTLTVNWQLHSAPVEGASPTSISAVDGLTFQAFSYLNFTPEPFDLYSCTVTHEIDRYTAIAYWVPQNALPSDLLENALCGVAFGLGVLGTIMGIVFFLCSQRPCSGD
【０１０８】マウスＨ−２Ｍのβ鎖タンパク質（配列番号２８）MAALWLLLLVLSLDCMGAGGFVAHVESTCVLDDAGTPQDFTYCVSFNKDLLACWDPDVGKIVPCEFGVLYPWAENFSRILNKEESLLQRLQNGLLDCASHTQPFWNALTHRTRAPSVRVAQTTPFNTREPVMLACYVWGFYPADVTITWMKNGQLVPSHSNKEKTAQPNGDWTYQTVSYLALTPSYGDVYTCVVQHSGTSEPIRGDWTPGLSPIQTVKVSVSAATLGLGFIIFCVGFFRWRKSHSSSYTPLSGSTYPEGQH
【０１０９】  前記ＨＬＡ−ＤＲ分子のα鎖およびβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、各種動物のＨＬＡ−ＤＲ分子のα鎖およびβ鎖タンパク質をコードするｍＲＮＡの塩基配列に基づいて設計可能なポリヌクレオチドでもよいし、ＨＬＡ−ＤＲ分子のα鎖およびβ鎖タンパク質のアミノ酸配列に基づいて、対応するコドンに置き換えることで設計可能なポリヌクレオチドでもよい。前記ＨＬＡ−ＤＲ分子のα鎖およびβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、それぞれ、コドン最適化されてもよい。
【０１１０】  前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖およびβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドとしては、例えば、以下のポリヌクレオチドが例示できる。ヒトＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、GenBankアクセッションNo. NM_006120.3で登録されている塩基配列（配列番号２９）からなるポリヌクレオチド等があげられる。ヒトＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、GenBankアクセッションNo. NM_002118.4登録されている塩基配列（配列番号３０）からなるポリヌクレオチド等があげられる。マウスＨ−２Ｍのα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、GenBankアクセッションNo. NM_001360530.1で登録されている塩基配列（配列番号３１）からなるポリヌクレオチド等があげられる。マウスＨ−２Ｍのβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、GenBankアクセッションNo. NM_010387.3で登録されている塩基配列（配列番号３２）からなるポリヌクレオチド等があげられる。
【０１１１】ヒトＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチド（配列番号２９）5'-atgggtcatgaacagaaccaaggagctgcgctgctacagatgttaccacttctgtggctgctaccccactcctgggccgtccctgaagctcctactccaatgtggccagatgacctgcaaaaccacacattcctgcacacagtgtactgccaggatgggagtcccagtgtgggactctctgaggcctacgacgaggaccagcttttcttcttcgacttttcccagaacactcgggtgcctcgcctgcccgaatttgctgactgggctcaggaacagggagatgctcctgccattttatttgacaaagagttctgcgagtggatgatccagcaaatagggccaaaacttgatgggaaaatcccggtgtccagagggtttcctatcgctgaagtgttcacgctgaagcccctggagtttggcaagcccaacactttggtctgttttgtcagtaatctcttcccacccatgctgacagtgaactggcagcatcattccgtccctgtggaaggatttgggcctacttttgtctcagctgtcgatggactcagcttccaggccttttcttacttaaacttcacaccagaaccttctgacattttctcctgcattgtgactcacgaaattgaccgctacacagcaattgcctattgggtaccccggaacgcactgccctcagatctgctggagaatgtgctgtgtggcgtggcctttggcctgggtgtgctgggcatcatcgtgggcattgttctcatcatctacttccggaagccttgctcaggtgactga-3'
【０１１２】ヒトＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチド（配列番号３０）5'-atgatcacattcctgccgctgctgctggggctcagcctgggctgcacaggagcaggtggcttcgtggcccatgtggaaagcacctgtctgttggatgatgctgggactccaaaggatttcacatactgcatctccttcaacaaggatctgctgacctgctgggatccagaggagaataagatggccccttgcgaatttggggtgctgaatagcttggcgaatgtcctctcacagcacctcaaccaaaaagacaccctgatgcagcgcttgcgcaatgggcttcagaattgtgccacacacacccagcccttctggggatcactgaccaacaggacacggccaccatctgtgcaagtagccaaaaccactccttttaacacgagggagcctgtgatgctggcctgctatgtgtggggcttctatccagcagaagtgactatcacgtggaggaagaacgggaagcttgtcatgcctcacagcagtgcgcacaagactgcccagcccaatggagactggacataccagaccctctcccatttagccttaaccccctcttacggggacacttacacctgtgtggtagagcacactggggctcctgagcccatccttcgggactggacacctgggctgtcccccatgcagaccctgaaggtttctgtgtctgcagtgactctgggcctgggcctcatcatcttctctcttggtgtgatcagctggcggagagctggccactctagttacactcctcttcctgggtccaattattcagaaggatggcacatttcctag-3'
【０１１３】マウスＨ−２Ｍのα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチド（配列番号３１）5'-atggagcatgagcagaagtcaggagctgtgctgctgaggctgctgcgccttctgtggctgctgccccactcctgggcggtgctcgaagcatctacaccagtgttctgggatgacccacagaaccacacattccggcacactctattctgccaggacgggattcccaacatagggctctcggagacctatgacgaggacgaactcttctccttcgacttctcccagaacaccagagtgccccgactgcctgactttgcagagtgggctcagggacagggggatgcctctgccattgcatttgacaaaagcttctgcgagatgttgatgcgggaagtgagcccgaagcttgaaggtcaaatcccagtgtccagaggtttgcctgtggcagaggtattcacactgaagcccctggagtttggcaagcccaacacgttggtctgtttcatcagcaacctctttccaccgaccctgaccgtgaactggcagcttcactcggcccctgtggagggagccagccccacatccatctcagctgtcgatgggctgaccttccaggctttctcttatttaaacttcacaccggaaccctttgacctttactcctgcactgtgacacacgagattgaccgctacacggcaattgcctattgggtaccccagaacgccctgccttcggatctcctagagaatgccctgtgtggtgtggcctttggcctcggtgtgctaggcaccatcatgggcattgtcttcttcctctgctcccagagaccgtgctcaggtgactga-3'
【０１１４】マウスＨ−２Ｍのβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチド（配列番号３２）5'-atggctgcactctggctgctgctgctggtcctcagtctggactgtatgggggcaggtggctttgtggctcatgtggaaagcacgtgcgtgctggatgatgctgggaccccacaggacttcacatactgtgtttccttcaacaaagatctgctggcctgctgggatccagatgtgggaaaaatagtcccctgtgaatttggggtgctgtatccatgggccgaaaatttttcaaggatcctcaacaaagaagagagccttctccagcgtttgcaaaacgggcttctggactgtgcctcccacacccagcccttctggaatgcgctgacccacagaacgagagcgccatctgtccgagtagcccaaaccacaccttttaacacaagggagccggtgatgctggcctgctacgtctggggcttctatccagcggatgtgaccatcacatggatgaagaatgggcagcttgtcccttcccacagcaacaaggagaagacggctcagcccaatggagactggacataccagacagtctcctacctagccctaaccccttcctacggggacgtctacacctgcgtggttcagcacagcgggacctctgagcccatccgaggggactggacacctgggctgtcccccatccagacagtgaaggtctctgtgtctgcagccaccctgggcctgggcttcatcatcttctgtgttggcttcttcagatggcgcaagtctcattcctccagctacactcctctctctggatccacctacccggaaggacagcattag-3'
【０１１５】  前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドおよびＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、核酸から構成される。前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドの説明は、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドの説明において、「ＣＤ７４ポリヌクレオチド」を「ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチド」に、「ＣＤ７４発現ベクター」を「ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクター」に、「ＣＤ７４タンパク質」を「ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖タンパク質」に読み替えて、その説明を援用できる。また、前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドの説明は、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドの説明において、「ＣＤ７４ポリヌクレオチド」を「ＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチド」に、「ＣＤ７４発現ベクター」を「ＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクター」に、「ＣＤ７４タンパク質」を「ＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質」に読み替えて、その説明を援用できる。
【０１１６】  前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖およびβ鎖タンパク質は、例えば、ＭＨＣクラスII分子へのペプチドのローディング機能を喪失しない範囲で、そのアミノ酸配列が改変されてもよい。前記アミノ酸配列の改変は、例えば、１もしくは数個のアミノ酸の欠失、置換、挿入および／または付加、小型化、前記保存的アミノ酸置換、他のタンパク質との融合等があげられる。
【０１１７】  本発明の組成物は、前記ＭＨＣクラスII分子と複合体化させるペプチド（前記ＭＨＣクラスII分子にローディングされるペプチド）を含むタンパク質（ターゲットタンパク質）またはそれをコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。本発明の組成物は、前記ターゲットタンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含むことにより、ｓＭＨＣII分子と複合化させたいペプチドを含むタンパク質と組合せて細胞に導入することで、前記ターゲットタンパク質由来のペプチドがローディングされたｓＭＨＣII分子を効率よく製造できる。前記ターゲットタンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドは、前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖および／またはβ鎖、ならびにこれらをコードするポリヌクレオチドと組合せることが好ましい。これにより、本発明の組成物は、前記ターゲットタンパク質由来のペプチドがローディングされたｓＭＨＣII分子をさらに効率よく製造できる。
【０１１８】  前記複合体化させるペプチドは、前記ＭＨＣクラスII分子と複合体化することが知られているペプチドでもよいし、前記ＭＨＣクラスII分子と複合体化するかが不明のペプチドでもよい。前記ターゲットタンパク質は、例えば、前記複合体化させるペプチドのみから構成されてもよいし、前記複合体化させるペプチドに１以上のアミノ酸が付加されたペプチドでもよい。すなわち、本発明の組成物に含まれるターゲティングタンパク質は、例えば、任意のタンパク質の全長のアミノ酸配列から構成されるタンパク質でもよいし、そのペプチド断片でもよいし、これらに改変を加えたタンパク質またはペプチド断片でもよい。前記ターゲットタンパク質は、特に制限されず、所望のタンパク質を使用でき、例えば、自己免疫疾患、アレルギー疾患等の自己免疫疾患に関与するタンパク質等があげられる。前記ターゲットタンパク質は、例えば、１種類でもよいし、２種類以上でもよい。
【０１１９】  前記ターゲットタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、前記ターゲットタンパク質をコードするｍＲＮＡの塩基配列に基づいて設計可能なポリヌクレオチドでもよいし、前記ターゲットタンパク質のアミノ酸配列に基づいて、対応するコドンに置き換えることで設計可能なポリヌクレオチドでもよい。前記ターゲットタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、それぞれ、コドン最適化されてもよい。
【０１２０】  前記ターゲットタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、核酸から構成される。前記ターゲットタンパク質をコードするポリヌクレオチドの説明は、前記ＣＤ７４ポリヌクレオチドの説明において、「ＣＤ７４ポリヌクレオチド」を「ターゲットタンパク質をコードするポリヌクレオチド」に、「ＣＤ７４発現ベクター」を「ターゲットタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクター」に、「ＣＤ７４タンパク質」を「ターゲットタンパク質」に読み替えて、その説明を援用できる。
【０１２１】  本発明の組成物は、例えば、前記本発明の組成物が細胞に導入されたかを確認する導入マーカーまたはそれをコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。前記導入マーカーは、例えば、タグ配列（例えば、６×Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグ、ＨＡタグ、ＧＳＴ（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ）、ＭＢＰ（マルトース結合タンパク質））、薬剤耐性マーカー、蛍光タンパク質マーカー、酵素マーカー、細胞表面レセプターマーカー等があげられる。
【０１２２】  本発明の組成物が、ＣＤ７４タンパク質以外のタンパク質を含む場合、すなわち、前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質、前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖およびβ鎖タンパク質、ならびにターゲットタンパク質からなる群から選択された少なくとも１つを含む場合、各タンパク質は混合された状態でもよいし、１つ以上のタンパク質が分離された状態であり、他のタンパク質が混合された状態でもよいし、各タンパク質が分離された状態でもよい。
【０１２３】  本発明の組成物が、ＣＤ７４ポリヌクレオチド以外のポリヌクレオチドを含む場合、すなわち、前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質、前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖およびβ鎖タンパク質、ならびにターゲットタンパク質からなる群から選択された少なくとも１つをコードするポリヌクレオチドを含む場合、各ポリヌクレオチドは混合された状態でもよいし、１つ以上のポリヌクレオチドが分離された状態であり、他のポリヌクレオチドが混合された状態でもよいし、各ポリヌクレオチドが分離された状態でもよい。また、各ポリヌクレオチドがベクターに含まれている場合、各ポリヌクレオチドは、例えば、全ポリヌクレオチドが同一のベクターに含まれても、１つ以上のポリヌクレオチドが別個のベクターに含まれ、その他のポリヌクレオチドが１つのベクターに含まれてもよいし、各ポリヌクレオチドが別個のベクターに含まれてもよい。
【０１２４】  本発明の組成物は、例えば、タンパク質とポリヌクレオチドとを含んでもよい。このため、本発明の組成物は、例えば、ＣＤ７４タンパク質およびそのポリヌクレオチドを含んでもよいし、ＣＤ７４タンパク質またはそのポリヌクレオチドに加えて、前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質、前記ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖およびβ鎖タンパク質、ならびにターゲットタンパク質からなる群から選択された少なくとも１つのタンパク質またはそのポリヌクレオチドを含んでもよい。
【０１２５】  本発明の組成物は、他の成分を含んでもよい。前記他の成分は、例えば、緩衝液等があげられる。本発明の組成物は、例えば、組成物を収容する容器、組成物の取扱説明書、使用説明書等を含んでもよい。
【０１２６】  前記各タンパク質の製造方法は、特に制限されず、例えば、化学的合成、組換えＤＮＡ技術を使用した合成等があげられる。前記化学的合成方法の場合、前記各タンパク質は、例えば、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ）、tert-ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）等の保護基を用いた有機合成方法により製造できる。前記組換えＤＮＡ技術を使用する場合、前記各タンパク質は、例えば、前記各タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを作成する。そして、前記各タンパク質の発現系を作製し、発現した前記各タンパク質を作製することにより製造できる。前記発現系は、例えば、前記発現ベクターを細胞（宿主）に導入することで作製できる。前記宿主は、例えば、後述のように、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、細菌細胞等があげられる。また、前記組換えＤＮＡ技術を使用する場合、前記各タンパク質は、例えば、前記各タンパク質をコードするポリヌクレオチドと、無細胞翻訳系とを使用し、作製してもよい。そして、前記無細胞翻訳系により、前記ポリヌクレオチドから翻訳された前記各タンパク質を単離することにより製造できる。
【０１２７】  また、前記各ポリヌクレオチドの製造方法は、特に制限されず、例えば、化学的合成、鋳型を用いたＰＣＲによる増幅等があげられる。
【０１２８】  本発明の組成物は、前記ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドに加えてまたは代えて、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの発現を誘導する発現誘導物質（以下、「発現誘導物質」ともいう）を含んでもよい。前記発現誘導物質は、例えば、ＣＤ７４を発現可能な発現系（例えば、宿主（細胞））と共存させた際に、前記発現系におけるＣＤ７４の発現を誘導または増強する物質である。具体例として、前記発現誘導物質は、例えば、Pam3CSK4、Histoneタンパク質、MALP-2、Poly（I）/Poly（C）、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）、Flagellin、Imiquimod/R-837、Imidazoquinoline Resiquimod/R-848、CpG ODN 2006等のトル様受容体のリガンド；ＩＬ−４等のインターロイキン、ＩＦＮ−γ等のインターフェロン等のサイトカイン；ＣＩＩＴＡ（class II, major histocompatibility complex, transactivator）等の転写活性化因子または転写因子；等があげられる。前記発現誘導物質が、サイトカイン、転写活性化因子または転写因子等のタンパク質またはポリペプチドである場合、前記発現誘導物質は、前記タンパク質またはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドでもよい。
【０１２９】  本発明の組成物が、単一の成分のみを含む場合、本発明の組成物は、例えば、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導剤ということもできる。
【０１３０】  本発明の組成物は、例えば、後述する本発明の産生細胞、産生細胞の製造方法およびｓＭＨＣII分子の製造方法に使用できる。
【０１３１】＜可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導ベクター＞  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導ベクター（以下、「誘導ベクター」ともいう）は、ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。本発明の誘導ベクターは、前記ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の誘導ベクターによれば、ｓＭＨＣII分子の産生細胞を簡便に製造でき、これによりｓＭＨＣII分子を簡便に製造できる。本発明の誘導ベクターの説明は、例えば、前記本発明の組成物の説明を援用できる。
【０１３２】  本発明の誘導ベクターが、複数のタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む場合、全ポリヌクレオチドが同じベクターに含まれてもよいし、全ポリヌクレオチドが別個のベクターに含まれてもよいし、１つ以上のポリヌクレオチドが別個のベクターに含まれ、その他のポリヌクレオチドが１つのベクターに含まれてもよい。
【０１３３】  本発明の誘導ベクターは、例えば、ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドに加えてまたは代えて、前記発現誘導物質をコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。
【０１３４】＜可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導キット＞  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導キットは、前述のように、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む。本発明のキットは、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明のキットによれば、ｓＭＨＣII分子の産生細胞を簡便に製造でき、これによりｓＭＨＣII分子を簡便に製造できる。本発明のキットの説明は、例えば、前記本発明の組成物の説明を援用できる。
【０１３５】  本発明のキットが、複数の構成成分を含む場合、すなわち、複数のタンパク質、複数のポリヌクレオチドまたは１以上のタンパク質と１以上のポリヌクレオチドとを含む場合、各構成成分は、１つの容器に各成分が収容されてもよいし、複数の容器に各成分が別個に収容されてもよいし、一部の成分が１つの容器に収容され、他の成分が１以上の容器に別個に収容されてもよい。
【０１３６】  本発明のキットは、例えば、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドに加えてまたは代えて、前記発現誘導物質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。
【０１３７】＜可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞＞  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞は、前述のように、外来性のＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む。本発明の産生細胞は、外来性のＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の産生細胞によれば、ｓＭＨＣII分子を簡便に製造できる。本発明の産生細胞の説明は、例えば、前記本発明の組成物の説明を援用できる。
【０１３８】  本発明の産生細胞において、「外来性」は、前記産生細胞外から前記産生細胞内に導入されたことを意味する。
【０１３９】  前記外来性のＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドは、例えば、前記ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを、細胞に導入することにより生じる。前記細胞内への導入方法は、例えば、パーティクルガン等の遺伝子銃による導入法、リン酸カルシウム法、ポリエチレングリコール法、ポリエチレンイミン法、リポソームを用いるリポフェクション法、エレクトロポレーション法、超音波核酸導入法、ＤＥＡＥ−デキストラン法、微小ガラス管等を用いた直接注入法、ハイドロダイナミック法、カチオニックリポソーム法、導入補助剤を用いる方法等の一時的な導入方法；レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター等のゲノムへの組み込みを伴うウイルスベクターを用いて、ゲノム中に挿入することによる恒常的（安定的）な導入方法；プラスミドベクター等を一時的な導入方法により導入し、染色体に組込まれた細胞を選抜する方法；エピソーマルベクターを導入する方法等があげられる。各導入方法は、市販の試薬を用いてもよい。具体例として、前記リポフェクション法は、例えば、TransIT（登録商標）-293 Reagent、TransIT（登録商標）-2020（Mirus社製）、Lipofectamine（登録商標）2000 Reagent、Lipofectamine（登録商標）2000CD Reagent、Lipofectamine（登録商標）3000 Reagent（Thermo Fisher Scientific社製）、FuGene（登録商標）Transfection Reagent（Promega社製）等を使用してもよい。前記ポリエチレンイミン法は、例えば、PEI: Polyethylenimine "Max" （Polysciences社製）等を使用してもよい。前記細胞内への導入方法の説明は、例えば、ＣＤ７４以外のタンパク質、すなわち、ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質、ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質、および／またはターゲットタンパク質、またはそれをコードするポリヌクレオチドの導入方法の説明として援用できる。
【０１４０】  前記細胞内に導入する対象がポリヌクレオチドの場合、前記ポリヌクレオチドが導入された産生細胞は、例えば、遺伝子改変された産生細胞、遺伝子導入された産生細胞、形質転換された産生細胞、または形質移入された産生細胞ということもできる。
【０１４１】  前記産生細胞における外来性のタンパク質は、例えば、抗体等を用いて検出できる。また、前記産生細胞における外来性のポリヌクレオチドは、例えば、プライマーを用いたＰＣＲ、プローブ等を用いて検出してもよいし、前記ポリヌクレオチドから翻訳されるタンパク質に対して、前述の検出方法により検出してもよい。また、前記外来のタンパク質がタグ等を有する場合、前記産生細胞における外来性のタンパク質は、前記タグを検出することより検出してもよい。前記外来性のポリヌクレオチドが前記選択マーカーを有する場合、前記産生細胞における外来性のポリヌクレオチドは、前記選択マーカーを検出することにより検出してもよい。
【０１４２】  前記ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドが導入される細胞（宿主）は、特に制限されず、例えば、ＭＨＣクラスII分子を発現している細胞でもよいし、発現していない細胞でもよいが、前者が好ましい。前記細胞は、例えば、古細菌細胞、細菌細胞等の原核細胞または真核細胞があげられる。前記真核細胞は、例えば、植物細胞または動物細胞があげられる。前記動物細胞は、例えば、ヒト細胞またはヒトを除く非ヒト動物細胞があげられる。前記非ヒト動物細胞は、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ、モルモット、ネコ等哺乳類動物、鳥類、魚類等の細胞があげられる。
【０１４３】  本発明の産生細胞は、後述の本発明の産生細胞の製造方法により製造できる。
【０１４４】＜可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞の製造方法＞  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞の製造方法は、前述のように、細胞に、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを導入する導入工程を含む。本発明の産生細胞の製造方法は、前記細胞に、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを導入する導入工程を含むことが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の産生細胞の製造方法によれば、ｓＭＨＣII分子を簡便に製造できる、前記本発明の産生細胞を製造できる。本発明の産生細胞の製造方法は、前記本発明の組成物および産生細胞の説明を援用できる。
【０１４５】  前記導入工程において、前記ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの導入方法および導入対象の細胞は、例えば、前述の細胞内への導入方法および細胞の説明を援用できる。
【０１４６】  前記導入工程において、前記細胞に導入するＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの量は、導入後の細胞において、ｓＭＨＣII分子が製造可能な範囲であればよい。具体例として、前記導入工程において、前記細胞に導入するＣＤ７４タンパク質の量は、例えば、１〜１００ｐｇ／細胞、５〜４０ｐｇ／細胞、１０〜３０ｐｇ／細胞である。また、前記細胞に導入するＣＤ７４ポリヌクレオチドの量は、例えば、１〜１００ｐｇ／細胞、５〜４０ｐｇ／細胞、１０〜３０ｐｇ／細胞である。前記細胞あたりのタンパク質またはポリヌクレオチドの導入量の説明は、例えば、ＣＤ７４以外のタンパク質、すなわち、ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質、ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質、および／またはターゲットタンパク質、またはこれらのポリヌクレオチドの導入量の説明として援用できる。
【０１４７】  前記導入工程では、ＣＤ７４以外のタンパク質、すなわち、ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質、ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質、および／またはターゲットタンパク質、またはこれらのポリヌクレオチドを導入してもよい。前記導入工程では、ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質およびＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質、またはこれらのポリヌクレオチドを導入することが好ましい。前記導入工程において、２種類以上のタンパク質、２種類以上のポリヌクレオチドまたは１種類以上のタンパク質と１種類以上のポリヌクレオチドとを導入する場合、各成分は、同時に前記細胞に導入されてもよいし、別個に導入されてもよいし、一部の成分が同時に前記細胞に導入され、他の成分が別個に導入されてもよい。
【０１４８】  本発明の産生細胞の製造方法は、例えば、前記導入工程で得られた細胞から、前記ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む細胞を選抜する選抜工程を含んでもよい。前記選抜は、例えば、前述の産生細胞における外来性のタンパク質またはポリヌクレオチドの検出方法により、前記ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを検出し、検出された細胞を選抜することにより実施できる。また、前記選抜は、例えば、前記ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを導入していないコントロールの細胞と比較して、ＣＤ７４タンパク質の発現量が増加している細胞を選抜することにより実施してもよい。
【０１４９】  前記導入工程において、前記ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質、ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質、および／またはターゲットタンパク質、またはこれらのポリヌクレオチドが導入されている場合、前記選抜工程において、対応するタンパク質またはポリヌクレオチドを含み、かつＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む細胞を選抜してもよい。前記選抜は、例えば、前記ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む細胞の選抜と同様にして実施できる。
【０１５０】  本発明の産生細胞の製造方法は、例えば、前記導入工程に加えてまたは代えて、細胞を、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの発現を誘導する発現誘導物質と共存させる共存工程を含んでもよい。前記発現誘導物質がポリヌクレオチドである場合、前記細胞と接触したポリヌクレオチドは、前記細胞内に導入されるように構成されることが好ましい。この場合、前記ポリヌクレオチドは、例えば、リポソーム等のベシクル内に封入されていることが好ましい。
【０１５１】＜可溶型ＭＨＣクラスII分子の製造方法＞  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の製造方法は、前述のように、前記本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞において、可溶型ＭＨＣクラスII分子を発現させる発現工程を含む。本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法は、前記本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞において、可溶型ＭＨＣクラスII分子を発現させる発現工程を含むことが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法によれば、ｓＭＨＣII分子を簡便に製造できる。また、本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法によれば、例えば、前記細胞内での通常のＭＨＣクラスII分子の生成プロセスで製造されるため、正しくフォールディングされた後に、ｓＭＨＣII分子として放出される。このため、本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法によれば、例えば、フォールディング法と比較して、効率よく正しくフォールディングされたｓＭＨＣII分子を製造することができる。本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法は、前記本発明の組成物、産生細胞および産生細胞の製造方法の説明を援用できる。
【０１５２】  本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法は、前記発現工程に先立ち、細胞に、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを導入してもよい（導入工程）。前記導入工程は、前記本発明の産生細胞の製造方法における導入工程と同様にして実施できる。前記導入工程では、ＣＤ７４以外のタンパク質、すなわち、ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質、ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭ分子のα鎖タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭ分子のβ鎖タンパク質、および／またはターゲットタンパク質、またはこれらのポリヌクレオチドを導入してもよい。
【０１５３】  つぎに、前記発現工程では、本発明の産生細胞において、ｓＭＨＣII分子を発現させる。具体的には、前記発現工程では、例えば、前記ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む産生細胞を培養することにより、ｓＭＨＣII分子を発現させる。前記産生細胞の培養方法および培養条件は、特に制限されず、前記産生細胞の種類に応じて適宜決定できる。また、前記産生細胞の培地は、特に制限されず、前記産生細胞の種類に応じて適宜決定できる。本発明の産生細胞が、ＭＨＣクラスII分子を発現していない細胞の場合、前記発現工程では、例えば、前記ＭＨＣクラスII分子の発現を誘導することが好ましい。前記ＭＨＣクラスII分子の発現誘導は、例えば、前記トル様受容体のリガンド、ＩＦＮ−γ等のインターフェロン、またはＴＮＦ−α等のサイトカインとの接触により誘導してもよいし、ＭＨＣクラスII分子のα鎖およびβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドを前記細胞に導入することにより誘導してもよい。
【０１５４】  本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法は、前記発現工程後において、前記可溶型ＭＨＣクラスII分子を回収する回収工程を含んでもよい。前記産生細胞を培養すると、ｓＭＨＣII分子は、例えば、培養上清中に放出される。このため、前記回収工程は、前記培養上清を回収することにより実施してもよいし、前記産生細胞を回収することにより実施してもよいし、両者を回収することにより実施してもよい。
【０１５５】  本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法は、回収された可溶型ＭＨＣクラスII分子から、可溶型ＭＨＣクラスII分子を精製する精製工程を含んでもよい。前記免疫用ペプチドの精製方法は、特に制限されず、例えば、ゲル濾過、ＨＰＬＣ等の公知の精製方法；後述する実施例の超遠心を利用する方法；ＭＨＣクラスII分子特異的な抗体を用いる方法；等があげられる。
【０１５６】  本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法は、例えば、前記発現工程に加えてまたは代えて、細胞を、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの発現を誘導する発現誘導物質と共存させる共存工程を含んでもよい。前記発現誘導物質がポリヌクレオチドである場合、前記細胞と接触したポリヌクレオチドは、前記細胞内に導入されるように構成されることが好ましい。この場合、前記ポリヌクレオチドは、例えば、リポソーム等のベシクル内に封入されていることが好ましい。
【０１５７】＜可溶型ＭＨＣクラスII分子の発現誘導物質のスクリーニング方法＞  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子の発現誘導物質のスクリーニング方法（以下、「スクリーニング方法」ともいう）は、可溶型ＭＨＣクラスII分子の発現誘導物質のスクリーニング方法であって、被検物質から、ＣＤ７４の発現量を増加させる被検物質を、前記発現誘導物質の候補物質として選択する。本発明のスクリーニング方法は、ＣＤ７４の発現量を指標とすることで、効率よくｓＭＨＣII分子の発現誘導物質の候補物質を選択できる。本発明のスクリーニング方法は、前記本発明の組成物、産生細胞および産生細胞の製造方法の説明を援用できる。
【０１５８】  本発明において、前記被検物質は、特に制限されず、例えば、低分子化合物、特殊環ペプチド等のペプチド、抗体、サイトカイン等のタンパク質、核酸等があげられる。
【０１５９】  本発明のスクリーニング方法は、例えば、ＣＤ７４の発現系に前記被検物質を共存させて、前記ＣＤ７４を発現させる発現工程と、前記発現系における前記ＣＤ７４の発現を検出する検出工程と、前記被検物質を共存させていないコントロールの発現系よりもＣＤ７４の発現量が高い、前記被検物質を、前記発現誘導物質の候補物質として選択する選択工程とを含む。
【０１６０】  前記検出工程において、検出対象の前記発現は、例えば、前記ＣＤ７４タンパク質の発現でもよいし、前記ＣＤ７４遺伝子のｍＲＮＡの転写でもよい。前記タンパク質の発現およびｍＲＮＡの発現の検出方法は、特に制限されず、公知の方法が適用できる。また、検出工程において、検出するＣＤ７４は、特に制限されないが、好ましくは、前記産生増強配列を含むＣＤ７４である。
【０１６１】＜可溶型ＭＨＣクラスII分子＞  本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子は、前記本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法により得られたことを特徴とする。本発明の可溶型ＭＨＣクラスII分子は、前記本発明のｓＭＨＣII分子の製造方法により得られたことが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明のｓＭＨＣII分子は、例えば、フォールディング法で製造されたｓＭＨＣII分子と比較して、正しくフォールディングされたｓＭＨＣII分子をより多く含有する。本発明のｓＭＨＣII分子は、例えば、フォールディング法で製造されたｓＭＨＣII分子と比較して、ＣＤ７４タンパク質が結合したｓＭＨＣII分子をより多く含有する。本発明のｓＭＨＣII分子は、例えば、疾患に関連するペプチドをローディングすることにより、医薬として用いることもできる。本発明のｓＭＨＣII分子は、前記本発明の組成物、産生細胞、産生細胞の製造方法、およびｓＭＨＣII分子の製造方法の説明を援用できる。
【０１６２】  以下に実施例等により本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【０１６３】［実施例１］  ＣＤ７４ノックアウトマウスを作製し、血清におけるｓＭＨＣII分子の発現量が減少していることを確認した。【０１６４】（１）ノックアウトマウスの作製  まず、図１に示すように、マウスＣＤ７４のエキソン２の上流（エキソン１側）およびエキソン３の下流（エキソン４側）に、それぞれｌｏｘＰ配列を有するターゲティングベクターを調製した。なお、図示していないが、ターゲティングベクターは、下流側のｌｏｘＰ配列とエキソン４との間にネオマイシンカセットを含む。つぎに、ＥＳ細胞（C57BL/6N由来のEGR-101株）に前記ターゲティングベクターを導入後、ネオマイシンを用いた選抜により、相同組換えが生じた結果、図１に示すＣＤ７４ＫＯアリルを有するＥＳ細胞を得た。得られたＥＳ細胞を偽妊娠マウスの子宮に移植し、図１の中段に示すＣＤ７４ＫＯアリルを有するマウスを作製した。さらに、得られたマウスを交雑し、両アリルについて、図１の中段に示すＣＤ７４ＫＯアリルを有するマウスを作成した（floxマウス）。【０１６５】  つぎに、Ｃａｇプロモーター（cytomegalovirus enhancerとchicken β-actin promoterとを連結したプロモーター）の制御下でＣｒｅタンパク質を発現するマウス（Ｃａｇ−Ｃｒｅマウス）と、前記ＣＤ７４ＫＯアリルを有するマウスを交配させることにより、図１の下段に示すＣＤ７４のエキソン２および３が欠失したアリルを有するＦ１マウスを作製した。Ｆ１マウス同士を交配させることにより、常染色体の両遺伝子座において、ＣＤ７４のエキソン２および３が欠失したアリルを有するＣＤ７４ＫＯマウスを得た。【０１６６】（２）ＣＤ７４分子の発現  前記ＣＤ７４ＫＯマウスの脾臓から脾臓細胞を調製後、得られた脾臓細胞を、PE標識抗マウスＭＨＣクラスII抗体（クローン名：M5、Biolegend社製）、PerCp5.5標識抗マウスCD45R/B220抗体（クローン名：RA3-6B2、Biolegend社製）、APC標識抗マウスCD11c抗体（クローン名：N418、Biolegend社製）、およびFITC標識抗マウスＣＤ７４抗体（クローン名：In-1、BD Bioscience社製）で染色した。前記染色後、脾臓細胞をフローサイトメーター（FACSVerse、Becton Dickinson社製）で測定した。得られたデータについて、ソフトウェア（FlowJo、BD Biosciences社製）を用いて、CD45R/B220陽性画分（Ｂ細胞）およびCD45R/B220陽性CD11clow画分（形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ））におけるＣＤ７４の発現を確認した。また、コントロールは、前記抗マウスＣＤ７４抗体に代えて、コントロール抗体（Rat IgG G2b, kappa）を用いた以外は、同様にして実施した。ポジティブコントロールは、前記floxマウスを用いた以外は同様にして実施した。この結果を図２に示す。【０１６７】  図２は、フローサイトメーターによる解析の結果を示すヒストグラムであり、（Ａ）は、ＣＤ７４の発現量を示すヒストグラムであり、（Ｂ）は、ＭＨＣクラスII分子の発現量を示すヒストグラムである。図２（Ａ）に示すように、前記floxマウス（ＣＤ７４f/f）のＢ細胞およびｐＤＣでは、ＣＤ７４が発現しているのに対し、ＣＤ７４ＫＯマウス（ＣＤ７４-/-）のＢ細胞およびｐＤＣでは、ＣＤ７４の発現量がコントロールと同程度であり、発現していないことが確認された。また、図２（Ｂ）に示すように、ＣＤ７４ＫＯマウスのＢ細胞およびｐＤＣでは、それぞれ、前記floxマウスのＢ細胞およびｐＤＣと比較して、細胞表面のＭＨＣクラスII分子の発現量が有意に低下していた。【０１６８】（３）血清中のｓＭＨＣII分子  ｓＭＨＣII分子は、血清中に存在することが知られている。そこで、ＣＤ７４ノックアウトマウスおよび野生型マウスの血清中のｓＭＨＣII分子の量を検討した。まず、各マウスから末梢血を取得後、前記末梢血から血清を回収した。つぎに、前記血清について、２１５００×ｇ、４℃の条件で、３０分間遠心し、ゴミ等の夾雑物を沈降させ、除去した。上清を回収後、前記上清について、１０００００×ｇ、４℃の条件で７０分間遠心した。前記遠心後、再度上清画分を回収した。【０１６９】  前記上清画分中のｓＭＨＣII分子は、ＩＰ−ＦＣＭ（immunoprecipitation detected by flow cytometry）により検出した。具体的には、まず、抗マウスＭＨＣクラスII抗体（クローン名：M5）と、Aldehyde/Sulfateラテックスビーズ（Thermo Fisher Scientific社製）を混合し、室温（約２５℃、以下同様）で終夜振盪することにより、抗マウスＭＨＣクラスII抗体を前記ラテックスビーズに連結した。前記抗体結合ビーズについて、０．１％（w/v）グリシンおよび０．１％（w/v）ＮａＮ３を含むリン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いて、３度洗浄後、前記上清画分と混合し、１時間室温でインキュベートした。つぎに、前記抗体結合ビーズを、ＰＥ標識抗マウスＭＨＣクラスII抗体（クローン名：AF6-120.1）で染色した。前記染色後の抗体結合ビーズについて、前記フローサイトメーターを用いて、ｓＭＨＣII分子の発現量を測定した。コントロールは、抗マウスＭＨＣクラスII抗体を結合させていない結合ビーズとした以外は同様にして実施した。この結果を図３に示す。【０１７０】  図３は、血清中のｓＭＨＣII分子の発現量を示すグラフである。図３において、（Ａ）は、野生型マウスの血清の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ７４ＫＯマウスの血清の結果を示す。図３（Ａ）および（Ｂ）に示すように、ＣＤ７４ＫＯマウスの血清におけるｓＭＨＣII分子の発現量は、野生型マウスの血清におけるｓＭＨＣII分子の発現量と比較して、顕著に低下しており、コントロールと同程度であった。すなわち、ＣＤ７４ＫＯマウスにおいては、血清中にｓＭＨＣII分子が確認できなかった。【０１７１】  これらの結果から、ＣＤ７４ノックアウトマウスを作製し、血清におけるｓＭＨＣII分子の発現量が減少していること、すなわち、ＣＤ７４がｓＭＨＣII分子の産生に必須であることを確認した。【０１７２】［実施例２］  ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することにより、ｓＭＨＣII分子が産生されることを確認した。【０１７３】（１）ベクターの作製  まず、下記のマウスＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質（I-Aｂα）をコードするポリヌクレオチド（終止コドン含、NM_010378.3）を含むベクター（I-Aｂα発現ベクター）、下記のマウスＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質（I-Aｂβ）をコードするポリヌクレオチド（終止コドン含、NM_207105.3）を含むベクター（I-Aｂβ発現ベクター）、前述のマウスＣＤ７４タンパク質ｐ３１アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１７（終止コドン含）、NM_010545.3）を含むベクター（ＣＤ７４ｐ３１発現ベクター）、および前述のマウスＣＤ７４タンパク��ｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１８（終止コドン含）、NM_001042605.1）を含むベクター（ＣＤ７４ｐ４１発現ベクター）を調製した。具体的には、C57BL/6マウスの脾臓からTotal RNAを回収後、前記Total RNAからｃＤＮＡを常法により合成した。各ポリヌクレオチドを増幅可能なプライマーセットと、前記ｃＤＮＡおよびＰＣＲ試薬とを用いて、ＰＣＲにより各ポリヌクレオチドを含む増幅断片を取得した。そして、得られた増幅断片を、ｐＭＥ１８Ｓにクローニングし、各発現ベクターを取得した。また、ＧＦＰ発現ベクターは、ｐＭＸ−ＧＦＰ（東京大学医科学研究所先端医療研究センター細胞療法分野から入手）を使用した。【０１７４】I-Abαをコードするポリヌクレオチド（配列番号３３）5'-atgccgcgcagcagagctctgattctgggggtcctcgccctgaccaccatgctcagcctctgtggaggtgaagacgacattgaggccgaccacgtaggcacctatggtataagtgtatatcagtctcctggagacattggccagtacacatttgaatttgatggtgatgagttgttctatgtggacttggataagaaggagactgtctggatgcttcctgagtttggccaattggcaagctttgacccccaaggtggactgcaaaacatagctgtagtaaaacacaacttgggagtcttgactaagaggtcaaattccaccccagctaccaatgaggctcctcaagcgactgtgttccccaagtcccctgtgctgctgggtcagcccaacaccctcatctgctttgtggacaacatcttccctcctgtgatcaacatcacatggctcagaaatagcaagtcagtcgcagacggtgtttatgagaccagcttcttcgtcaaccgtgactattccttccacaagctgtcttatctcaccttcatcccttctgacgatgacatttatgactgcaaggtggaacactggggcctggaggagccggttctgaaacactgggaacctgagattccagcccccatgtcagagctgacagagactgtggtctgtgccctggggttgtctgtgggccttgtgggcatcgtggtgggcaccatcttcatcattcaaggcctgcgatcaggtggcacctccagacacccagggcctttatga-3'【０１７５】I-Abβをコードするポリヌクレオチド（配列番号３４）5'-atggctctgcagatccccagcctcctcctcttggctgctgttgtggtgctgacggtgctgagcagcccagggactgagggcggaaactccgaaaggcatttcgtgcaccagttccagcccttctgctacttcaccaacgggacgcagcgcatacggcttgtgatcagatacatctacaaccgggaggagtacgtgcgcttcgacagcgacgtgggcgagtaccgcgcggtgaccgagctggggcggccagacgccgagtactggaataagcagtacctggagcgaacgcgggccgagctggacacggtgtgcagacacaactacgagaagacggagacccccacctccctgcggcggcttgaacagcccagtgtcgtcatctccctgtccaggacagaggccctcaaccaccacaacacgctggtctgctcagtgacagatttctacccagccaagatcaaagtgcgctggttccggaatggccaggaggagacggtgggggtctcgtccacacagcttattaggaatggggactggaccttccaggtcctggtcatgctggagatgacccctcggcggggagaggtctacacctgccatgtggagcatcccagcctgaagagtcccatcaccgtggagtggcgggcacagtccgagtctgcccggagcaagatgttgagcggcatcggtggctgcgtgcttggggtgatcttcctcgggcttggccttttcatccgtcacaggagtcagaaaggacctcgaggccctcctccagcagggctcctgcagtga-3'【０１７６】ＧＦＰ（配列番号３５）5'-atggtgagcaagggcgaggagctgttcaccggggtggtgcccatcctggtcgagctggacggcgacgtaaacggccacaagttcagcgtgtccggcgagggcgagggcgatgccacctacggcaagctgaccctgaagttcatctgcaccaccggcaagctgcccgtgccctggcccaccctcgtgaccaccctgacctacggcgtgcagtgcttcagccgctaccccgaccacatgaagcagcacgacttcttcaagtccgccatgcccgaaggctacgtccaggagcgcaccatcttcttcaaggacgacggcaactacaagacccgcgccgaggtgaagttcgagggcgacaccctggtgaaccgcatcgagctgaagggcatcgacttcaaggaggacggcaacatcctggggcacaagctggagtacaactacaacagccacaacgtctatatcatggccgacaagcagaagaacggcatcaaggtgaacttcaagatccgccacaacatcgaggacggcagcgtgcagctcgccgaccactaccagcagaacacccccatcggcgacggccccgtgctgctgcccgacaaccactacctgagcacccagtccgccctgagcaaagaccccaacgagaagcgcgatcacatggtcctgctggagttcgtgaccgccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtaa-3'【０１７７】（２）産生細胞の調製およびｓＭＨＣII分子の産生  前記発現ベクターを導入する宿主細胞として、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（理化学研究所  バイオリソースセンターから入手）を使用した。まず、２４ウェルプレートに、前記ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、２×１０５細胞／５００μＬ／ｗｅｌｌとなるように播種した。つぎに、前記ＨＥＫ２９３Ｔ細胞への前記発現ベクターの導入は、トランスフェクション試薬（PEI  max、コスモバイオ社）を２ｍｇ／ｍｌとなるように精製水で溶かしたPEI  max溶液を使用した。具体的には、２μＬ  PEI  max溶液と５０μＬ  無血清培地（OPTI-MEM（登録商標）、GIBCO社製）との混合液を、０．２６μｇ  I-Aｂα発現ベクター、０．２６μｇ  I-Aｂβ発現ベクター、０．２６μｇ  ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターおよび０．２６μg  ＧＦＰ発現ベクターを含む５０μＬ  無血清培地に添加後、混和し、トランスフェクション試薬を調製した。そして、前記トランスフェクション試薬を各ウェルに添加し、前記発現ベクターを前記ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に導入した。前記導入後、前記ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、ＤＭＥＭ培地を使用し、３７℃、５％ＣＯ２の湿潤条件下（培養条件は、以下同様）で３日間培養した。そして、培養後に、細胞および培養上清を回収した。また、前記ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターに代えて、ＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを用いた以外は、同様にして、細胞および培養上清を回収した。さらに、コントロールは、前記ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターをトランスフェクションしなかった以外は同様にして、細胞および培養上清を回収した。【０１７８】（３）細胞におけるＭＨＣクラスII分子の発現  各細胞について、前記PE標識抗ＭＨＣクラスII抗体（M5）およびＰＥ標識抗マウスＣＤ７４抗体で染色した。前記染色後、各細胞を前記フローサイトメーターで測定し、ＧＦＰ陽性画分におけるＭＨＣクラスII分子およびＣＤ７４の発現を解析した。この結果を図４に示す。【０１７９】  図４は、フローサイトメーターによる解析の結果を示すヒストグラムであり、（Ａ）は、コントロールの細胞（MHCII）の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターを導入した細胞（MHCII＋CD74p31）の結果を示し、（Ｃ）は、ＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した細胞（MHCII＋CD74p41）の結果を示す。また、図４（Ａ）〜（Ｃ）において、上段は、細胞表面のＭＨＣクラスII分子の発現を示し、下段は、ＣＤ７４の発現を示す。図４（Ａ）〜（Ｃ）に示すように、各細胞は、導入された発現ベクターが含むＭＨＣクラスII分子およびＣＤ７４を発現していることが確認された。【０１８０】（４）培養上清中のｓＭＨＣII分子  つぎに、各培養上清について、１５０００ｒｐｍ、４℃の条件で、３０分間遠心し、ゴミ等の夾雑物を沈降させ、除去した。上清を回収後、前記上清について、１０００００×ｇ、４℃の条件で７０分間遠心した。前記遠心後、再度上清画分を回収した。そして、前記上清画分について、前記実施例１（３）と同様にして、ｓＭＨＣII分子の発現量を測定した。また、前記上清画分に代えて、既知量のｓＭＨＣII分子を含む標準試料を用い、検量線を作製した。そして、各上清画分におけるｓＭＨＣII分子の発現量と、前記検量線とに基づき、各上清画分におけるｓＭＨＣII分子の濃度を算出した。そして、コントロールにおけるｓＭＨＣII分子の濃度を１とし、各上清画分のｓＭＨＣII分子の相対濃度を算出することで、培養上清中のｓＭＨＣII分子の相対濃度を算出した。これらの結果を図５に示す。【０１８１】  図５は、培養上清におけるｓＭＨＣII分子の発現量（産生量）を示すグラフであり、（Ａ）は、コントロールの細胞（MHCII）の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターを導入した細胞（MHCII＋CD74p31）の結果を示し、（Ｃ）は、ＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した��胞（MHCII＋CD74p41）の結果を示し、（Ｄ）は、各培養上清のｓＭＨＣII分子の相対濃度を示すグラフである。図５（Ａ）〜（Ｃ）に示すように、ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターまたはＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した細胞は、コントロールと比較して、ｓＭＨＣII分子の産生量が有意に増加していた。また、図５（Ｂ）および（Ｃ）に示すように、ＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した細胞は、ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターを導入した細胞と比較して、ｓＭＨＣII分子の産生量が有意に増加していた。さらに、図５（Ｄ）に示すように、ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターを導入した細胞は、コントロールと比較して、約２．５倍のｓＭＨＣII分子の産生しており、ＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した細胞は、コントロールと比較して、約１４倍のｓＭＨＣII分子の産生していた。【０１８２】  これらの結果から、本発明の組成物により、ｓＭＨＣII分子の産生を誘導できることがわかった。また、ＣＤ７４タンパク質ｐ３１アイソフォームとＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームとの違いは、前述の産生増強配列の有無である。このため、前記ＣＤ７４タンパク質は、前記産生増強配列を含むことで、ｓＭＨＣII分子の産生を増強できることがわかった。【０１８３】［実施例３］  ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することで産生される、ｓＭＨＣII分子が、血清中のｓＭＨＣII分子と同様に単量体であることを確認した。【０１８４】  前記実施例１（３）で調製した野生型マウスの血清由来の上清画分および前記実施例２（４）で調製したＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した細胞（産生細胞）由来の上清画分に対して、ゲル濾過による分画を行なった。具体的には、ゲル濾過カラム（superdex（登録商標）200 10/300 GL column 、GE Healthcare Life Science社製）に対して、ＰＢＳの流速が０．５ｍＬ／分となるようにＰＢＳを導入した。この状態で、０．５ｍＬの前記血清または上清画分を前記ゲル濾過カラムに導入し、２８０ｎｍにおける吸光度に基づき、溶出液をモニターし、２５０μＬ／画分として連続的に溶出液を回収した。各画分の溶出液について、前記実施例１（３）と同様にして、ｓＭＨＣII分子の発現量を測定した。また、ＭＨＣクラスII分子の分子量は、分子量マーカー（ヒトＩｇＧ：１５０ｋＤａ、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）：６６ｋＤａ、ニワトリ卵白リゾチーム：１５ｋＤａ）の測定値に基づき算出した。これらの結果を図６に示す。【０１８５】  図６は、各分画の結果を示すグラフであり、（Ａ）は、分子量マーカーの２８０ｎｍにおける吸光度を示し、（Ｂ）は、野生型マウスの血清由来の上清画分の２８０ｎｍにおける吸光度を示し、（Ｃ）は、野生型マウスの血清由来の上清画分のｓＭＨＣII分子の発現量を示し、（Ｄ）は、分子量マーカーの２８０ｎｍにおける吸光度を示し、（Ｅ）は、前記産生細胞由来の上清画分の２８０ｎｍにおける吸光度を示し、（Ｆ）は、前記産生細胞由来の上清画分のｓＭＨＣII分子の発現量を示す。図６（Ａ）〜（Ｃ）に示すように、野生型マウスの血清由来の上清画分では、約６０ｋＤａ付近に２８０ｎｍの吸光度のピークおよびｓＭＨＣII分子の発現量のピークが見られた。ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質の分子量は、３３���Ｄａであり、ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質の分子量は、２８ｋＤａであることから、野生型マウスの血清中に存在するｓＭＨＣII分子は、ＭＨＣクラスII分子の単量体であることがわかった。また、図６（Ｄ）〜（Ｆ）に示すように、前記産生細胞由来の上清画分においても、約６０ｋＤａ付近に２８０ｎｍの吸光度のピークおよびｓＭＨＣII分子の発現量のピークが見られた。前述のように、ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質の分子量は、３３ｋＤａであり、ＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質の分子量は、２８ｋＤａであることから、前記産生細胞の培養上清中に存在するｓＭＨＣII分子は、ＭＨＣクラスII分子の単量体であることがわかった。【０１８６】  これらの結果から、本発明の組成物により製造された産生細胞において産生されるｓＭＨＣII分子は、血清中のｓＭＨＣII分子と同様に単量体であることがわかった。すなわち、本発明の産生細胞によれば、生体におけるｓＭＨＣII分子と同じｓＭＨＣII分子を製造できることがわかった。【０１８７】［実施例４］  マウスＣＤ７４ｐ４１アイソフォーム等における産生増強配列がｓＭＨＣII分子の産生増強に重要であることを確認した。【０１８８】  まず、マウス由来ＣＤ７４タンパク質について、図７（Ａ）に示す、ＣＤ７４ｐ４１アイソフォームにおける１〜２０番目のアミノ酸が欠失した変異体（ＣＤ７４ｐ４１Δ１−２０）、６３〜２７９番目のアミノ酸が欠失した変異体（ＣＤ７４ｐ４１Δ６３−２７９）、１１７〜２７９番目のアミノ酸が欠失した変異体（ＣＤ７４ｐ４１Δ１１７−２７９）、および１８１〜２７９番目のアミノ酸が欠失した変異体（ＣＤ７４ｐ４１Δ１８１−２７９）を発現する産生細胞を作製した。具体的には、ＣＤ７４ｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび下記プライマーセットを用いて、各変異体をコードするポリヌクレオチドをＰＣＲにより増幅し、ｐＭＥ１８Ｓにクローニングし、各変異体の発現ベクターを作製した。【０１８９】ＣＤ７４ｐ４１Δ１−２０用プライマーセット  フォワードプライマー：5'-aatgaattcaccatgcctagagagccagaaaggtgc-3'（配列番号３６）  リバースプライマー：5'-aataatgcggccgctcacagggtgacttgaccc-3'（配列番号３７）ＣＤ７４ｐ４１Δ６３−２７９用プライマーセット  フォワードプライマー：5'-gggccgcctagactagctgaccatcac-3'（配列番号３８）  リバースプライマー：5'-gtgatggtcagctagtctaggcggccc-3'（配列番号３９）ＣＤ７４ｐ４１Δ１１７−２７９用プライマーセット  フォワードプライマー：5'-tgtgaagaacgttaccaagtagggcaacatgaccc-3'（配列番号４０）  リバースプライマー：5'-gggtcatgttgccctacttggtaacgttcttcaca-3'（配列番号４１）ＣＤ７４ｐ４１Δ１８１−２７９用プライマーセット  フォワードプライマー：5'-gagcaagaactccctgtaggagaagaagcccac-3'（配列番号４２）  リバースプライマー：5'-gtgggcttcttctcctacagggagttcttgctc-3'（配列番号４３）【０１９０】  前記ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターに加えて、前記ＣＤ７４ｐ４１発現ベクターおよび前記各変異体の発現ベクターを用いた以外は、前記実施例２（２）と同様にして、ＣＤ７４ｐ３１アイソフォーム、ＣＤ７４ｐ４１アイソフォームおよび各変異体を発現する産生細胞を取得した。そして、各産生細胞の培養上清について、前記実施例２（４）と同様にして、培養上清中のｓＭＨＣII分子の相対濃度を算出した。これらの結果を図７（Ｂ）に示す。【０１９１】  図７（Ｂ）は、培養上清におけるｓＭＨＣII分子の発現量を示すグラフである。図７（Ｂ）において、横軸は、産生細胞が発現するＣＤ７４タンパク質のアイソフォームまたは変異体の種類を示し、縦軸は、ｓＭＨＣII分子の相対濃度を示す。図７（Ｂ）に示すように、前記ターゲティング配列を欠失した変異体（ＣＤ７４ｐ４１Δ１−２０）は、ＣＤ７４ｐ４１アイソフォームを発現する産生細胞と同等のｓＭＨＣII分子を産生した。他方、ＣＤ７４ｐ４１Δ６３−２７９、ＣＤ７４ｐ４１Δ１１７−２７９、ＣＤ７４ｐ４１Δ１８１−２７９を発現する産生細胞では、ｓＭＨＣII分子の産生は見られるものの、ＣＤ７４ｐ４１アイソフォームを発現する産生細胞と比較して、ｓＭＨＣII分子の発現が低下した。これらの結果から、マウスＣＤ７４ｐ４１アイソフォーム等における産生増強配列がｓＭＨＣII分子の産生増強に重要であることがわかった。【０１９２】［実施例５］  ターゲティングタンパク質由来のペプチドがｓＭＨＣII分子にローディングされることを確認した。【０１９３】  前記I-Abβをコードするポリヌクレオチドに代えて、I-Abβをコードするポリヌクレオチドに、下線で示す、I-Eaの５２〜６８番目のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを挿入した下記配列番号４４の塩基配列からなるポリヌクレオチドを含むI-Ea-I-Abβ発現ベクターを作製した。【０１９４】I-Ea-I-Abβをコードするポリヌクレオチド（配列番号４４）5'-atgagggcctggatcttctttctcctttgcctggccgggagggctctggcagccagctttgaggctcagggtgcactggctaatatagctgtggacaaagctggcagcggcagcggcagcggagactccgaaaggcatttcgtgtaccagttcatgggcgagtgctacttcaccaacgggacgcagcgcatacgatatgtgaccagatacatctacaaccgggaggagtacgtgcgctacgacagcgacgtgggcgagcaccgcgcggtgaccgagctggggcggccagacgccgagtactggaacagccagccggagatcctggagcgaacgcgggccgagctggacacggtgtgcagacacaactacgaggggccggagacccacacctccctgcggcggcttgaacagcccaatgtcgtcatctccctgtccaggacagaggccctcaaccaccacaacactctggtctgctcagtgacagatttctacccagccaagatcaaagtgcgctggttccggaatggccaggaggagacggtgggggtctcatccacacagcttattaggaatggggactggaccttccaggtcctggtcatgctggagatgacccctcggcggggagaggtctacacctgtcacgtggagcatcccagcctgaagagccccatcactgtggagtggagggcacagtctgagtctgcctggagcaagatgttgagcggcatcgggggctgcgtgcttggggtgatcttcctcgggcttggccttttcatccgtcacaggagtcagaaaggacctcgaggccctcctccagcagggctcctgcagtga-3'【０１９５】  前記ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターに代えて、前記ＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを用い、I-Aｂβ発現ベクターに加えて、I-Ea-I-Abβ発現ベクターを用いた以外は、前記実施例２（２）と同様にして、産生細胞を取得した。そして、得られた産生細胞について、ＭＨＣクラスII分子とI-Eaの５２〜６８番目のポリペプチドとの複合体を認識する抗体（クローン名：eBioY-Ae(YAe,Y-Ae)、Thermo Fisher Scientific社製）または前記PE標識抗ＭＨＣクラスII抗体（M5）を用いて、ＭＨＣクラスII分子にI-Eaの５２〜６８番目のポリペプチドが提示されているかと、ＭＨＣクラスII分子の発現とを確認した。【０１９６】  つぎに、抗マウスＭＨＣクラスII抗体に代えて、eBioY-Ae(YAe,Y-Ae)を用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、抗体結合ビーズを調製した。そして、前記実施例１（３）で調製した抗体結合ビーズに加えて、eBioY-Ae(YAe,Y-Ae)抗体を連結した結合ビーズについて、０．１％（w/v）グリシンおよび０．１％（w/v）ＮａＮ３を含むリン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いて、３度洗���後、前記産生細胞の培養上清と混合し、１時間室温でインキュベートした。つぎに、前記抗体結合ビーズを、ＰＥ標識抗マウスＭＨＣクラスII抗体（クローン名：AF6-120.1）で染色した。前記染色後の抗体結合ビーズについて、前記フローサイトメーターを用いて、ＭＨＣクラスII分子とI-Eaの５２〜６８番目のポリペプチドとの複合体の発現量と、ｓＭＨＣII分子の発現量とを測定した。コントロールは前記抗体を結合させていない結合ビーズとした以外は同様にして実施した。これらの結果を図８に示す。【０１９７】  図８は、ＭＨＣクラスII分子とI-Eaの５２〜６８番目のポリペプチドとの複合体の発現量およびＭＨＣクラスII分子の発現量を示すグラフである。図８において、（Ａ）は、前記産生細胞におけるＭＨＣクラスII分子とI-Eaの５２〜６８番目のポリペプチドとの複合体の発現量およびＭＨＣクラスII分子の発現量の結果を示し、（Ｂ）は、ｓＭＨＣII分子とI-Eaの５２〜６８番目のポリペプチドとの複合体の発現量およびｓＭＨＣII分子の発現量の結果を示す。また、図８において、左列は、I-Aｂβ発現ベクターを導入した産生細胞の結果を示し、右列は、I-Ea-I-Abβ発現ベクターを導入した産生細胞の結果を示す。図８（Ａ）および（Ｂ）に示すように、いずれの産生細胞においてもＭＨＣクラスII分子が発現し、かつｓＭＨＣII分子が産生されていた。また、図８（Ａ）および（Ｂ）に示すように、I-Ea-I-Abβ発現ベクターを導入した産生細胞では、ＭＨＣクラスII分子とI-Eaの５２〜６８番目のポリペプチドとの複合体が発現しており、かつ、ｓＭＨＣII分子とI-Eaの５２〜６８番目のポリペプチドとの複合体を産生していた。これらの結果から、ｓＭＨＣII分子の発現系にターゲティングタンパク質を発現させることで、ターゲティングタンパク質由来のペプチドをｓＭＨＣII分子にローディングできることがわかった。【０１９８】［実施例６］  ヒトＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することにより、ｓＭＨＣII分子が産生されることを確認した。【０１９９】  前記実施例２（１）と同様にして、前述のヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１３（終止コドン含）、No. X00497.1）を含むベクター（ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクター）および前述のヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５（終止コドン含））を含むベクター（ｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクター）を調製した。つぎに、前記ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターに加えて、前記ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクターまたはｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを用いた以外は、前記実施例２（２）と同様にして、ヒトＣＤ７４ｐ４１アイソフォームを発現する産生細胞を取得した。そして、各産生細胞の培養上清について、前記実施例１（３）と同様にして、培養上清中のｓＭＨＣII分子の発現量を測定し、ＭＦＩ（mean fluorescence intensity）を算出した。コントロールは、前記ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクターおよびｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターをトランスフェクションしなかった以外は同様にして、ＭＦＩを算出した。これらの結果を図９に示す。【０２００】  図９は、培養上清中のｓＭＨＣII分子の発現量を示すグラフである。図９において、横軸は、��ンプルの種類を示し、縦軸は、ｓＭＨＣII分子の発現量（産生量）を示す。図９に示すように、前記ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクターまたはｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した産生細胞は、コントロールと比較し、ｓＭＨＣII分子の発現量が増加した。なお、コントロールのＭＦＩは、バックグラウンドと同程度であり、ｓＭＨＣII分子は発現していない。また、ｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した産生細胞は、ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクターを導入した産生細胞と比較して、ｓＭＨＣII分子の発現量が顕著に増加した。これらの結果から、本発明の組成物により、ｓＭＨＣII分子の産生を誘導できることがわかった。また、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォームとヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームとの違いは、前述の産生増強配列の有無である。このため、ヒトＣＤ７４タンパク質は、前記産生増強配列を含むことで、ｓＭＨＣII分子の産生を増強できることがわかった。【０２０１】［実施例７］  ＣＤ７４タンパク質の発現誘導物質と共存させることにより、ｓＭＨＣII分子が産生されることを確認した。【０２０２】  マウス（C57BL/6Jマウス、日本SLCから購入）から脾臓を採取し、ホモジナイザーを用いて脾臓細胞を単離した。単離した細胞を２×１０６ cells/mLに調整後、１２ウェルプレート（Nunc cell-culture treated multidishes、Thermo Fisher Scientific社製）に、1 ml／ウェルで播種した。前記播種後、１０ｎｇ／ｍＬとなるように、マウスＩＬ−４（Cat No.:130-097-757、Miltenyi Biotec社製）を添加し、４８時間培養した。前記培養後、培養上清を回収し、前記培養上清について、前記実施例１（３）と同様にして、培養上清中のｓＭＨＣII分子の発現量を測定し、ＭＦＩを算出した。コントロールは、ＩＬ−４を添加しなかった以外は同様にして実施した。これらの結果を図１０に示す。【０２０３】  図１０は、培養上清中のｓＭＨＣII分子の発現量を示すグラフである。図１０において、横軸は、サンプルの種類を示し、縦軸は、ｓＭＨＣII分子の発現量（産生量）を示す。図１０に示すように、ＩＬ−４存在下で培養した細胞では、コントロールと比較し、ｓＭＨＣII分子の発現量が増加した。これは、ＩＬ−４が、脾臓細胞においてＣＤ７４の発現を誘導したからと推定される。これらの結果から、ＣＤ７４タンパク質の発現誘導物質と共存させることにより、ｓＭＨＣII分子が産生されることがわかった。【０２０４】［実施例８］  ヒトＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することにより、ｓＭＨＣII分子が産生されることを確認した。【０２０５】（１）ベクターの作製  まず、下記のヒトＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質（HLA-DRA*01:01）をコードするポリヌクレオチド（配列番号４５（終止コドン含）、NM_019111.5）を含むベクター（HLA-DRA*01:01発現ベクター）、および下記のヒトＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質（HLA-DRB1*09:01）をコードするポリヌクレオチド（配列番号４６（終止コドン含）、HLA-DRB1*09:01：HM067851.1）を含むベクター（HLA-DRB1*09:01発現ベクター）を調製した。具体的には、ヒト721.221細胞（RIKEN BRCから入手）から調製したｃＤＮＡ（HLA-DRA*01:01用）およびヒトRBRC-HEV0186細胞（RIKEN BRCから入手）から調製したｃＤＮＡ（HLA-DRB1*09:01用）とＰＣＲ試薬とを用いて、Ｐ��Ｒにより各ポリヌクレオチドを含む増幅断片を取得した。そして、得られた増幅断片を、ｐＭＥ１８Ｓにクローニングし、各発現ベクターを取得した。また、前記実施例６と同様にして、前述のヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４（終止コドン含）、NM_004355.3）を含むベクター（ｈＣＤ７４ｐ３５発現ベクター）および前述のヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームをコードするポリヌクレオチド（配列番号１６（終止コドン含）、NM_001025159.2）を含むベクター（ｈＣＤ７４ｐ４３発現ベクター）を調製した。【０２０６】HLA-DRA*01:01をコードするポリヌクレオチド（配列番号４５）5'-ATGGCCATAAGTGGAGTCCCTGTGCTAGGATTTTTCATCATAGCTGTGCTGATGAGCGCTCAGGAATCATGGGCTATCAAAGAAGAACATGTGATCATCCAGGCCGAGTTCTATCTGAATCCTGACCAATCAGGCGAGTTTATGTTTGACTTTGATGGTGATGAGATTTTCCATGTGGATATGGCAAAGAAGGAGACGGTCTGGCGGCTTGAAGAATTTGGACGATTTGCCAGCTTTGAGGCTCAAGGTGCATTGGCCAACATAGCTGTGGACAAAGCCAACCTGGAAATCATGACAAAGCGCTCCAACTATACTCCGATCACCAATGTACCTCCAGAGGTAACTGTGCTCACAAACAGCCCTGTGGAACTGAGAGAGCCCAACGTCCTCATCTGTTTCATAGACAAGTTCACCCCACCAGTGGTCAATGTCACGTGGCTTCGAAATGGAAAACCTGTCACCACAGGAGTGTCAGAGACAGTCTTCCTGCCCAGGGAAGACCACCTTTTCCGCAAGTTCCACTATCTCCCCTTCCTGCCCTCAACTGAGGACGTTTACGACTGCAGGGTGGAGCACTGGGGCTTGGATGAGCCTCTTCTCAAGCACTGGGAGTTTGATGCTCCAAGCCCTCTCCCAGAGACTACAGAGAACGTGGTGTGTGCCCTGGGCCTGACTGTGGGTCTGGTGGGCATCATTATTGGGACCATCTTCATCATCAAGGGATTGCGCAAAAGCAATGCAGCAGAACGCAGGGGGCCTCTGTAA-3'【０２０７】HLA-DRB1*09:01をコードするポリヌクレオチド（配列番号４６）5'-ATGGTGTGTCTGAAGCTCCCTGGAGGCTCCTGCATGGCAGCTCTGACAGTGACACTGATGGTGCTGAGCTCCCCACTGGCTTTGGCTGGGGACACCCAACCACGTTTCTTGAAGCAGGATAAGTTTGAGTGTCATTTCTTCAACGGGACGGAGCGGGTGCGGTATCTGCACAGAGGCATCTATAACCAAGAGGAGAACGTGCGCTTCGACAGCGACGTGGGGGAGTACCGGGCGGTGACGGAGCTGGGGCGGCCTGTCGCCGAGTCCTGGAACAGCCAGAAGGACTTCCTGGAGCGGAGGCGGGCCGAGGTGGACACCGTGTGCAGACACAACTACGGGGTTGGTGAGAGCTTCACAGTGCAGAGGCGAGTCCATCCTGAGGTGACTGTGTATCCTGCCAAGACTCAGCCCCTGCAGCACCACAACCTCCTGGTCTGCTCTGTGAGTGGTTTCTATCCAGGCAGCATTGAAGTCAGGTGGTTCCGGAACGGCCAGGAAGAGAAGGCTGGGGTGGTGTCCACAGGCCTGATCCAGAATGGAGACTGGACCTTCCAGACCCTGGTGATGCTGGAAACAGTTCCTCGGAGTGGAGAAGTTTACACCTGCCAAGTGGAGCACCCAAGTGTGATGAGCCCTCTCACAGTGGAATGGAGAGCACGGTCTGAATCTGCACAGAGCAAGATGCTGAGTGGAGTCGGGGGCTTTGTGCTGGGCCTGCTCTTCCTTGGGGCCGGGCTGTTCATCTACTTCAGGAATCAGAAAGGACACTCTGGACTTCAGCCAACAGGATTCCTGAGCTGA-3'【０２０８】（２）産生細胞の調製およびｓＭＨＣII分子の産生  I-Aｂα発現ベクターに代えて、HLA-DRA*01:01発現ベクターを用い、I-Aｂβ発現ベクターに代えて、HLA-DRB1*09:01発現ベクターを用い、ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターに代えて、ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクター、ｈＣＤ７４ｐ３５発現ベクター、ｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクター、またはｈＣＤ７４ｐ４３発現ベクターを用いた以外は、前記実施例２（２）と同様にして、発現ベクターを導入し、培養上清を回収した。【０２０９】（３）培養上清中のｓＭＨＣII分子  前記上清画分中のｓＭＨＣII分子は、ＩＰ−ＦＣＭ（immunoprecipitation detected by flow cytometry）により検出した。具体的には、まず、抗HLA-DR抗体（クローン名：WR18、Bio-rad社製）と、Aldehyde/Sulfateラテックスビーズ（Thermo Fisher Scientific社製）を混合し、室温（約２５℃、以下同様）で終夜振盪することにより、抗HLA-DR抗体を前記ラテックスビーズに連結した。前記抗体結合ビーズについて、０．１％（w/v）グリシンおよび０．１％（w/v）ＮａＮ３を含むリン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いて、３度洗浄後、前記上清画分と混合し、１時間室温でインキュベートした。つぎに、前記抗体結合ビーズを、ビオチン標識抗HLA-DR抗体（クローン名：L243、BioLegend社製）と反応させた後に、ＡＰＣ標識ストレプトアビジン（Jackson laboratory社製）で染色した。前記染色後の抗体結合ビーズについて、前記フローサイトメーターを用いて、ＨＬＡ−ＤＲの発現量を測定し、ＭＦＩを算出した。コントロールは、前記ｈＣＤ７４ｐ３５発現ベクター、ｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクター、およびｈＣＤ７４ｐ４３発現ベクターをトランスフェクションしなかった以外は同様にして、ＭＦＩを算出した。そして、コントロールのＭＦＩを１として、相対的な発現量を算出した。この結果を図１１に示す。【０２１０】  図１１は、培養上清中のｓＭＨＣII分子の相対的な発現量を示すグラフである。図１１において、横軸は、サンプルの種類を示し、縦軸は、ｓＭＨＣII分子の相対的な発現量（産生量）を示す。図１１に示すように、いずれのＣＤ７４発現ベクターを導入した産生細胞においても、コントロールと比較し、ｓＭＨＣII分子の発現量が増加した。また、ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクター、ｈＣＤ７４ｐ３５発現ベクターまたはｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した産生細胞は、ｈＣＤ７４ｐ４３発現ベクターを導入した産生細胞と比較して、ｓＭＨＣII分子の発現量が増加した。これらの結果から、本発明の組成物により、ヒトのｓＭＨＣII分子の産生を誘導できること、およびヒトＣＤ７４アイソフォームのうち、ＣＤ７４ｐ３１アイソフォーム、ＣＤ７４ｐ３５アイソフォームおよびＣＤ７４ｐ４１アイソフォームが、特にｓＭＨＣII分子の産生増強能が高いことがわかった。【０２１１】［実施例９］  ヒトＣＤ７４タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭα鎖およびＨＬＡ−ＤＭβ鎖をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することにより、ｓＭＨＣII分子の産生が促進されることを確認した。【０２１２】（１）ベクターの作製  まず、前述のヒトＨＬＡ−ＤＭα鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチド（配列番号２９（終止コドン含）、NM_006120.3）を含むベクター（HLA-DMα発現ベクター）、および前述のヒトＨＬＡ−ＤＭβ鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチド（配列番号３０（終止コドン含）、NM_002118.4）を含むベクター（HLA-DMβ発現ベクター）を調製した。具体的には、ヒトRBRC-HEV0023（RIKEN BRCから入手）から調製したｃＤＮＡおよびＰＣＲ試薬とを用いて、ＰＣＲにより各ポリヌクレオチドを含む増幅断片を取得した。そして、得られた増幅断片を、ｐＭＥ１８Ｓにクローニングし、各発現ベクターを取得した。【０２１３】（２）産生細胞の調製およびｓＭＨＣII分子の産生  I-Aｂα発現ベクターに代えて、HLA-DRA*01:01発現ベクターを用い、I-Aｂβ発現ベクターに代えて、HLA-DRB1*09:01発現ベクターを用い、ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターに代えて、ｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターまたはｈＣＤ７４ｐ４３発現ベクターを用い、さらに、０．２６μｇ  HLA-DMα発現ベクターおよび０．２６μｇ  HLA-DMβ発現ベクターを添加した以外は、前記実施例２（２）と同様にして、発現ベクターを導入し、培養上清を回収した。【０２１４】（３）培養上清中のｓＭＨＣII分子  前記上清画分中のｓＭＨＣII分子の相対的な発現量は、前記実施例８（３）と同様にして算出した。コントロールは、前記ｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターおよびｈＣＤ７４ｐ４３発現ベクターをトランスフェクションしなかっ���以外は同様にして、ＭＦＩを算出した。そして、コントロールのＭＦＩを１として、相対的な発現量を算出した。この結果を図１２に示す。【０２１５】  図１２は、培養上清中のｓＭＨＣII分子の相対的な発現量を示すグラフである。図１２において、横軸は、サンプルの種類を示し、縦軸は、ｓＭＨＣII分子の相対的な発現量（産生量）を示す。図１２に示すように、前記ｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターまたはｈＣＤ７４ｐ４３発現ベクターと、HLA-DMα発現ベクターおよびHLA-DMβ発現ベクターとを導入した産生細胞は、コントロールと比較し、ｓＭＨＣII分子の発現量が増加した。また、ｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した産生細胞は、ｈＣＤ７４ｐ４３発現ベクターを導入した産生細胞と比較して、ｓＭＨＣII分子の発現量が増加した。さらに、前記実施例８の結果と比較した場合、本実施例の産生細胞は、いずれも、HLA-DMα発現ベクターおよびHLA-DMβ発現ベクターを導入していない産生細胞と比較して、ｓＭＨＣII分子の発現量が増加した。これらの結果から、本発明の組成物により、ヒトのｓＭＨＣII分子の産生を誘導できること、ＨＬＡ−ＤＭと共発現させることにより、さらにｓＭＨＣII分子の産生を増強できることがわかった。【０２１６】［実施例１０］  ヒトＣＤ７４タンパク質、ＨＬＡ−ＤＭα鎖およびＨＬＡ−ＤＭβ鎖をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することにより、ｓＭＨＣII分子が産生されることを確認した。【０２１７】（１）ベクターの作製  まず、下記のヒトＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質（HLA-DRB1*04:05）をコードするポリヌクレオチド（配列番号４７（終止コドン含）、HM067846）を含むベクター（HLA-DRB1*04:05発現ベクター）を調製した。具体的には、ヒトRBRC-HEV0023（RIKEN BRCから入手）から調製したｃＤＮＡおよびＰＣＲ試薬とを用いて、ＰＣＲにより各ポリヌクレオチドを含む増幅断片を取得した。そして、得られた増幅断片を、ｐＭＥ１８Ｓにクローニングし、各発現ベクターを取得した。【０２１８】HLA-DRB1*04:05をコードするポリヌクレオチド（配列番号４７）5'-ATGGTGTGTCTGAAGTTCCCTGGAGGCTCCTGCATGGCAGCTCTGACAGTGACACTGATGGTGCTGAGCTCCCCACTGGCTTTGGCTGGGGACACCCGACCACGTTTCTTGGAGCAGGTTAAACATGAGTGTCATTTCTTCAACGGGACGGAGCGGGTGCGGTTCCTGGACAGATACTTCTATCACCAAGAGGAGTACGTGCGCTTCGACAGCGACGTGGGGGAGTACCGGGCGGTGACGGAGCTGGGGCGGCCTAGCGCCGAGTACTGGAACAGCCAGAAGGACCTCCTGGAGCAGAGGCGGGCCGCGGTGGACACCTACTGCAGACACAACTACGGGGTTGGTGAGAGCTTCACAGTGCAGCGGCGAGTCTATCCTGAGGTGACTGTGTATCCTGCAAAGACCCAGCCCCTGCAGCACCACAACCTCCTGGTCTGCTCTGTGAATGGTTTCTATCCAGGCAGCATTGAAGTCAGGTGGTTCCGGAACGGCCAGGAAGAGAAGACTGGGGTGGTGTCCACAGGCCTGATCCAGAATGGAGACTGGACCTTCCAGACCCTGGTGATGCTGGAAACAGTTCCTCGGAGTGGAGAGGTTTACACCTGCCAAGTGGAGCACCCAAGCCTGACGAGCCCTCTCACAGTGGAATGGAGAGCACGGTCTGAATCTGCACAGAGCAAGATGCTGAGTGGAGTCGGGGGCTTCGTGCTGGGCCTGCTCTTCCTTGGGGCCGGGCTGTTCATCTACTTCAGGAATCAGAAAGGACACTCTGGACTTCAGCCAACAGGATTCCTGAGCTGA-3'【０２１９】（２）産生細胞の調製およびｓＭＨＣII分子の産生  I-Aｂα発現ベクターに代えて、HLA-DRA発現ベクターを用い、I-Aｂβ発現ベクターに代えて、HLA-DRB1*04:05発現ベクターを用い、ＣＤ７４ｐ３１発現ベクターに代えて、ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクターまたはｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを用い、さらに、０．２６μｇ  HLA-DMα発現ベクターおよび０．２６μｇ  HLA-DMβ発現ベクターを添加した以外は、前記実施例２（２）と同様にして、発現ベクターを導入し、培養上清を回収した。【０２２０】（３）培養上清中���ｓＭＨＣII分子  前記上清画分中のｓＭＨＣII分子の相対的な発現量は、前記実施例８（３）と同様にして算出した。コントロールは、前記ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクターおよびｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターをトランスフェクションしなかった以外は同様にして、ＭＦＩを算出した。そして、コントロールのＭＦＩを１として、相対的な発現量を算出した。この結果を図１３に示す。【０２２１】  図１３は、培養上清中のｓＭＨＣII分子の相対的な発現量を示すグラフである。図１３において、横軸は、サンプルの種類を示し、縦軸は、ｓＭＨＣII分子の相対的な発現量（産生量）を示す。図１３に示すように、前記ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクターまたはｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した産生細胞は、コントロールと比較し、ｓＭＨＣII分子の発現量が増加した。また、ｈＣＤ７４ｐ３３発現ベクターを導入した産生細胞は、ｈＣＤ７４ｐ４１発現ベクターを導入した産生細胞と比較して、ｓＭＨＣII分子の発現量が増加した。これらの結果から、本発明の組成物により、ヒトのｓＭＨＣII分子の産生を誘導できることがわかった。【０２２２】  以上、実施形態および実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解し得る様々な変更をすることができる。【０２２３】  この出願は、２０１８年１２月６日に出願された日本出願特願２０１８−２２８９８６を基礎とする優先権を主張し、その開示のすべてをここに取り込む。【０２２４】＜付記＞  上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。（付記１）ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導組成物。（付記２）ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む、付記１記載の産生誘導組成物。（付記３）前記ＣＤ７４タンパク質は、ＣＤ７４タンパク質のｐ４１アイソフォームである、付記１または２記載の産生誘導組成物。（付記４）前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォーム、およびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームからなる群から選択された少なくとも１つを含む、付記１または２記載の産生誘導組成物。（付記５）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含まない、付記４記載の産生誘導組成物。（付記６）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む、付記１から４のいずれかに記載の産生誘導組成物。（付記７）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれ��コードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含み、前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームおよびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームの少なくとも一方を含む、付記１または２記載の産生誘導組成物。（付記８）ＭＨＣクラスII分子と複合体化させるペプチドを含むタンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、付記１から７のいずれかに記載の産生誘導組成物。（付記９）前記ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターである、付記１から８のいずれかに記載の産生誘導組成物。（付記１０）ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導ベクター。（付記１１）ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む、付記１０記載の産生誘導ベクター。（付記１２）前記ＣＤ７４タンパク質は、ＣＤ７４タンパク質のｐ４１アイソフォームである、付記１０または１１記載の産生誘導ベクター。（付記１３）前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォーム、およびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームからなる群から選択された少なくとも１つを含む、付記１０または１１記載の産生誘導ベクター。（付記１４）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含まない、付記１３記載の産生誘導ベクター。（付記１５）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む、付記１０から１３のいずれかに記載の産生誘導ベクター。（付記１６）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含み、前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームおよびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームの少なくとも一方を含む、付記１０または１１記載の産生誘導ベクター。（付記１７）ＭＨＣクラスII分子と複合体化させるペプチドを含むタンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、付記１０から１６のいずれかに記載の産生誘導ベクター。（付記１８）前記ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターである、付記１０から１７のいずれかに記載の産生誘導ベクター。（付記１９）ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導キット。（付記２０���ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む、付記１９記載の産生誘導キット。（付記２１）前記ＣＤ７４タンパク質は、ＣＤ７４タンパク質のｐ４１アイソフォームである、付記１９または２０記載の産生誘導キット。（付記２２）前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォーム、およびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームからなる群から選択された少なくとも１つを含む、付記１９または２０記載の産生誘導キット。（付記２３）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含まない、付記２２記載の産生誘導キット。（付記２４）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む、付記１９から２２のいずれかに記載の産生誘導キット。（付記２５）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含み、前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームおよびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームの少なくとも一方を含む、付記１９または２０記載の産生誘導キット。（付記２６）ＭＨＣクラスII分子と複合体化させるペプチドを含むタンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、付記１９から２５のいずれかに記載の産生誘導キット。（付記２７）前記ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターである、付記１９から２６のいずれかに記載の産生誘導キット。（付記２８）外来性のＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞。（付記２９）外来性のＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、および外来性のＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む、付記２８記載の産生細胞。（付記３０）前記ＣＤ７４タンパク質は、ＣＤ７４タンパク質のｐ４１アイソフォームである、付記２８または２９記載の産生細胞。（付記３１）前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォーム、およびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームからなる群から選択された少なくとも１つを含む、付記２８または２９記載の産生細胞。（付記３２）外来性のＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、および外来性のＨＬＡ−ＤＭのβ鎖���ンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含まない、付記３１記載の産生細胞。（付記３３）外来性のＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、および外来性のＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含む、付記２８から３１のいずれかに記載の産生細胞。（付記３４）外来性のＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、および外来性のＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を含み、前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームおよびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォームの少なくとも一方を含む、付記２８または２９記載の産生細胞。（付記３５）外来性のＭＨＣクラスII分子と複合体化させるペプチドを含むタンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを含む、付記２８から３４のいずれかに記載の産生細胞。（付記３６）前記ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターである、付記２８から３５のいずれかに記載の産生細胞。（付記３７）細胞に、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを導入する導入工程を含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞の製造方法。（付記３８）ＭＨＣクラスII分子のα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＭＨＣクラスII分子のβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を導入する、付記３７記載の産生細胞の製造方法。（付記３９）前記ＣＤ７４タンパク質は、ＣＤ７４タンパク質のｐ４１アイソフォームである、付記３７または３８記載の産生細胞の製造方法。（付記４０）前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３３アイソフォーム、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ３５アイソフォーム、およびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームからなる群から選択された少なくとも１つを含む、付記３７または３８記載の産生細胞の製造方法。（付記４１）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、および外来性のＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を導入しない、付記４０記載の産生細胞の製造方法。（付記４２）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、およびＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を導入する、付記３７から４０のいずれかに記載の産生細胞の製造方法。（付記４３）ＨＬＡ−ＤＭのα鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチド、および外来性のＨＬＡ−ＤＭのβ鎖タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの少なくとも一方を導入し、前記ＭＨＣクラスII分子は、ヒトＭＨＣクラスII分子であり、前記ＣＤ７４タンパク質は、ヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４１アイソフォームおよびヒトＣＤ７４タンパク質ｐ４３アイソフォーム��少なくとも一方を含む、付記３７または３８記載の産生細胞の製造方法。（付記４４）ＭＨＣクラスII分子と複合体化させるペプチドを含むタンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを導入する、付記３７から４３のいずれかに記載の産生細胞の製造方法。（付記４５）前記ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＣＤ７４タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターである、付記３７から４４のいずれかに記載の産生細胞の製造方法。（付記４６）付記２８から３６のいずれかに記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生細胞において、可溶型ＭＨＣクラスII分子を発現させる発現工程を含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の製造方法。（付記４７）前記発現工程に先立ち、細胞に、ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドを導入する導入工程を含む、付記４６記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の製造方法。（付記４８）前記発現工程後において、前記可溶型ＭＨＣクラスII分子を回収する回収工程を含む、付記４６または４７記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の製造方法。（付記４９）回収された可溶型ＭＨＣクラスII分子から、可溶型ＭＨＣクラスII分子を精製する精製工程を含む、付記４８記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の製造方法。（付記５０）付記４６から４９のいずれかに記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の製造方法により得られる、可溶型ＭＨＣクラスII分子。（付記５１）ＣＤ７４タンパク質またはそれをコードするポリヌクレオチドの発現を誘導する発現誘導物質を含む、可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導組成物。（付記５２）前記発現誘導物質は、トル様受容体のリガンドを含む、付記５１記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導組成物。（付記５３）前記発現誘導物質は、サイトカインを含む、付記５１または５２記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導組成物。（付記５４）前記サイトカインは、ＩＬ−４またはＩＮＦ−γである、付記５３記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の産生誘導組成物。（付記５５）被検物質から、ＣＤ７４の発現量を増加させる被検物質を、可溶型ＭＨＣクラスII分子の発現誘導物質の候補物質として選択する、可溶型ＭＨＣクラスII分子の発現誘導物質のスクリーニング方法。（付記５６）ＣＤ７４の発現系に前記被検物質を共存させて、前記ＣＤ７４を発現させる発現工程と、前記発現系における前記ＣＤ７４の発現を検出する検出工程と、前記被検物質を共存させていないコントロールの発現系よりもＣＤ７４の発現量が高い、前記被検物質を、前記発現誘導物質の候補物質として選択する選択工程とを含む、付記５５記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の発現誘導物質のスクリーニング方法。（付記５７）前記被検物質は、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、または核酸である、付記５５または５６記載の可溶型ＭＨＣクラスII分子の発現誘導物質のスクリーニング方法。
【産業上の利用可能性】
【０２２５】  本発明によれば、新たなｓＭＨＣII分子の産生誘導組成物、ｓＭＨＣII分子の産生細胞、ｓＭＨＣII分子の産生細胞の製造方法およびｓＭＨＣII分子の製造方法を提供できる。前記ｓＭＨＣII分子は、例えば、研究分野および医薬分野において利用できる。このため、本発明は、例えば、研究分野および医薬分野等において極めて有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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