【手続補正書】
【提出日】平成23年7月14日(2011.7.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＶＥＧＦ−２ポリペプチドに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体は、
（ｉ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−４０９５として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって発現される抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列と少なくとも９９％同一な第一のアミノ酸配列であって、該第一のアミノ酸配列は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−４０９５として寄託された該ハイブリドーマによって発現される抗体のＶＨＣＤＲ１領域、ＶＨＣＤＲ２領域およびＶＨＣＤＲ３領域のアミノ酸配列を含む、第一のアミノ酸配列と、
（ｉｉ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−４０９５として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって発現される抗体のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む第二のアミノ酸配列と
を含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
ヒトＶＥＧＦ−２ポリペプチドに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体は、
（ｉ）配列番号７９で示される６９Ｄ０９  ＳｃＦｖのＶＨドメインのアミノ酸配列に少なくとも９９％同一な第一のアミノ酸配列であって、該第一のアミノ酸配列は、配列番号７９のアミノ酸残基２６〜３５のアミノ酸配列からなるＶＨＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸残基５０〜６６のアミノ酸配列からなるＶＨＣＤＲ２、および配列番号７９のアミノ酸残基９９〜１０７のアミノ酸配列からなるＶＨＣＤＲ３を含む、第一のアミノ酸配列と、
（ｉｉ）配列番号７９で示される６９Ｄ０９  ＳｃＦｖのＶＬドメインのアミノ酸配列を含む第二のアミノ酸配列と
を含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下：
（ａ）配列番号１８のアミノ酸１−４１９からなるＶＥＧＦ−２ポリペプチド；
（ｂ）配列番号１８のアミノ酸３２−４１９からなるＶＥＧＦ−２ポリペプチド；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸１０３−２２７からなるＶＥＧＦ−２ポリペプチド；
（ｄ）配列番号１８のアミノ酸１１２−２２７からなるＶＥＧＦ−２ポリペプチド；
（ｅ）各々が配列番号１８のアミノ酸１０３〜２２７からなる２つのポリペプチドからなる二量体ＶＥＧＦ−２ポリペプチド；
（ｆ）各々が配列番号１８のアミノ酸１１２〜２２７からなる２つのポリペプチドからなる二量体ＶＥＧＦ−２ポリペプチド；
（ｇ）ＡＴＣＣ受託番号９７１４９に含まれるｃＤＮＡによりコードされる分泌ＶＥＧＦ−２ポリペプチドのアミノ酸配列；
（ｈ）配列番号１８のＶＥＧＦ−２ポリペプチドの分泌形態のアミノ酸配列
からなる群より選択されるＶＥＧＦ−２ポリペプチドに特異的に結合する、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
以下；
（ａ）ＩｇＭ定常ドメイン；
（ｂ）ＩｇＧ定常ドメイン；および
（ｃ）ＩｇＡ定常ドメイン
からなる群より選択される重鎖定常ドメインをさらに含む、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
以下：
（ａ）κ定常ドメイン；
（ｂ）λ定常ドメイン
からなる群より選択される軽鎖定常ドメインをさらに含む、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記軽鎖定常ドメインはヒト軽鎖定常ドメインである、請求項５に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
前記単離された抗原結合フラグメントは、以下：
（ａ）Ｆａｂフラグメント；
（ｂ）Ｆａｂ’フラグメント；
（ｃ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；
（ｄ）Ｆｖ；
（ｅ）単鎖Ｆｖ；および
（ｆ）ジスルフィド結合Ｆｖ
からなる群より選択される、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
前記単離された抗体がヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：
（ｉ）１０−９Ｍ〜１０−１５Ｍ；
（ｉｉ）５×１０−１０Ｍ〜１０−１５Ｍ；
（ｉｉｉ）１０−１０Ｍ〜１０−１５Ｍ；
（ｉｖ）５×１０−１１Ｍ〜１０−１５Ｍ；
（ｖ）１０−１１Ｍ〜１０−１５Ｍ；および
（ｖｉ）５×１０−１５Ｍ〜１０−１５Ｍ
からなる群より選択される解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：
（ｉ）１０−３／ｓｅｃ〜１０−７／ｓｅｃのオフレート；
（ｉｉ）１０−４／ｓｅｃ〜１０−７／ｓｅｃのオフレート；
（ｉｉｉ）１０−５／ｓｅｃ〜１０−７／ｓｅｃのオフレート；および
（ｉｖ）１０−６／ｓｅｃ〜１０−７／ｓｅｃのオフレート
からなる群より選択されるオフレートを有する、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＥＧＦ−２ポリペプチドのアンタゴニストである、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：
（ａ）ＶＥＧＦ−２の中和；
（ｂ）ｆｌｋ−１へのＶＥＧＦ−２の結合の阻害；
（ｃ）ｆｌｔ−４へのＶＥＧＦ−２の結合の阻害；
（ｄ）Ｅｌｋ−１のＶＥＧＦ−２誘導性リン酸化の阻害；
（ｅ）血管内皮細胞のＶＥＧＦ−２誘導性リン酸化の阻害；
（ｆ）リンパ球内皮細胞のＶＥＧＦ−２誘導性増殖の阻害；および
（ｇ）新脈管形成の阻害；
からなる群より選択される活性を有する、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：
（ａ）腫瘍増殖の阻害；および
（ｂ）腫瘍転移の阻害
からなる群より選択される活性を有する、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１５】
カップリングまたは結合体化された請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは検出可能な標識にカップリングまたは結合体化されている、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１６】
カップリングまたは結合体化された請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは異種ポリペプチドにカップリングまたは結合体化されている、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１７】
カップリングまたは結合体化された請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗新脈管形成剤、抗有糸分裂薬、アントラシクリン、毒素、アポトーシス剤、または細胞毒性薬剤にカップリングまたは結合体化されている、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１８】
請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメントと、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
【請求項１９】
請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを発現するように操作された、細胞株。
【請求項２０】
遺伝子操作された細胞株から発現された、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２１】
前記細胞株がＮＳＯ細胞またはＣＨＯ細胞である、請求項２０に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２２】
前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメントが、ウェスタンブロットにおいてＶＥＧＦ−２に特異的に結合する、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２３】
前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＥＬＩＳＡにおいてＶＥＧＦ−２に特異的に結合する、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２４】
請求項１または２に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメントを含む、キット。
【請求項２５】
コントロール抗体をさらに含む、請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
前記重鎖定常領域はヒト重鎖定常領域である、請求項４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２７】
前記ヒト重鎖定常ドメインは、
（ａ）ＩｇＧ１定常ドメイン、
（ｂ）ＩｇＧ２定常ドメイン、
（ｃ）ＩｇＧ３定常ドメイン、および
（ｄ）ＩｇＧ４定常ドメイン
からなる群より選択される、請求項２６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２８】
前記第一のアミノ酸配列は保存的アミノ酸置換を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。