【手続補正書】
【提出日】平成20年12月5日(2008.12.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
野性型ＡＤＡＭプロテアーゼに比べて基質タンパク質を認識、結合かつ／またはタンパク質分解的に切断する能力が改変されている修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメント。
【請求項２】
前記基質タンパク質を認識、結合かつ／またはタンパク質分解的に切断し得ないか、前記野性型ＡＤＡＭプロテアーゼに比べて能力が低下している、請求項１に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメント。
【請求項３】
ＡＤＡＭプロテアーゼがＡＤＡＭ１０またはＡＤＡＭ１７である、請求項１に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメント。
【請求項４】
細胞外ドメインに１つ以上の非保存性アミノ酸置換を有する、請求項３に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメント。
【請求項５】
１つ以上のアミノ酸置換が、ＡＤＡＭプロテアーゼ細胞外ドメインのシステインリッチドメイン内に存在する、請求項４に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメント。
【請求項６】
システインリッチドメインがＡＤＡＭ１０の５５２−６４６残基を備える、請求項５に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメント。
【請求項７】
１つ以上のアミノ酸置換が、Ｇｌｕ５７３置換、Ｇｌｕ５７８置換およびＧｌｕ５７９置換からなる群から選択される、請求項６に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメント。
【請求項８】
システインリッチドメインがＡＤＡＭ１７の５６４−６４４残基を備える、請求項５に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメント。
【請求項９】
１つ以上のアミノ酸置換が、Ｇｌｕ５８３置換、Ｇｌｕ５８９置換およびＳｅｒ５９０置換からなる群から選択される、請求項８に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメント。
【請求項１０】
１つ以上の置換がアラニン置換である、請求項７または９に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメント。
【請求項１１】
ＡＤＡＭプロテアーゼフラグメントまたは請求項１に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼと、基質タンパク質と、基質タンパク質に結合するレセプターの可溶性細胞外ドメインとを備える単離タンパク質複合体。
【請求項１２】
ＡＤＡＭプロテアーゼフラグメントがＡＤＡＭプロテアーゼ細胞外ドメインのシステインリッチ領域である、請求項１１に記載の単離タンパク質複合体。
【請求項１３】
ＡＤＡＭプロテアーゼがＡＤＡＭ１０またはＡＤＡＭ１７である、請求項１２に記載の単離タンパク質複合体。
【請求項１４】
システインリッチドメインが、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼの５５２−６４６残基またはＡＤＡＭ１７プロテアーゼの５６４−６４４残基を備える、請求項１３に記載の単離タンパク質複合体。
【請求項１５】
基質タンパク質がエフリンＡ５またはエフリンＡ２であり、レセプターがＥｐｈＡ３である、請求項１１に記載の単離タンパク質複合体。
【請求項１６】
基質タンパク質がエフリンＢ２であり、レセプターがＥｐｈＢ２またはＥｐｈＢ４である、請求項１１に記載の単離タンパク質複合体。
【請求項１７】
基質タンパク質がプロＥＧＦであり、レセプターがｅｒｂＢ１である、請求項１１に記載の単離タンパク質複合体。
【請求項１８】
本質的にＡＤＡＭ１０プロテアーゼの５５２−６４６残基からなるシステインリッチドメインと、ＥｐｈＡ３の可溶性細胞外ドメインと、エフリンＡ５またはエフリンＡ２とからなる単離タンパク質複合体。
【請求項１９】
本質的にＡＤＡＭ１７プロテアーゼの５６４−６４４残基からなるシステインリッチドメインと、ＥｐｈＢ２またはＥｐｈＢ４の可溶性細胞外ドメインと、エフリンＢ２とを備える単離タンパク質複合体。
【請求項２０】
請求項１に記載の修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメントをコードする単離核酸。
【請求項２１】
ＡＤＡＭプロテアーゼがＡＤＡＭ１０またはＡＤＡＭ１７である、請求項２０に記載の単離核酸。
【請求項２２】
ＡＤＡＭプロテアーゼ細胞外ドメインのシステインリッチドメイン内の１つ以上のアミノ酸置換をコードする、請求項２１に記載の単離核酸。
【請求項２３】
システインリッチドメインが、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼの５５２−６４６残基またはＡＤＡＭ１７プロテアーゼの５６４−６４４残基を備える、請求項２２に記載の単離核酸。
【請求項２４】
ＡＤＡＭ１０プロテアーゼのＧｌｕ５７３置換、Ｇｌｕ５７８置換およびＧｌｕ５７９置換からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換をコードする、請求項２３に記載の単離核酸。
【請求項２５】
ＡＤＡＭ１７プロテアーゼのＧｌｕ５８３置換、Ｇｌｕ５８９置換およびＳｅｒ５９０置換からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換をコードする、請求項２３に記載の単離核酸。
【請求項２６】
請求項２５に記載の単離核酸を備える遺伝子構築物。
【請求項２７】
前記単離核酸が、発現ベクターの１つ以上の調節配列に作動可能に連結または結合されている、請求項２６に記載の遺伝子構築物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の遺伝子構築物を有する宿主細胞。
【請求項２９】
ＡＤＡＭプロテアーゼのシステインリッチドメイン内の基質認識部位に対して産生された抗体。
【請求項３０】
ＡＤＡＭプロテアーゼの基質認識部位に結合して、基質親和性を低下させ、基質切断を阻止し得る、請求項２９に記載の抗体。
【請求項３１】
ＡＤＡＭプロテアーゼがＡＤＡＭ１０またはＡＤＡＭ１７である、請求項３０に記載の抗体。
【請求項３２】
システインリッチドメインが、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼの５５２−６４６残基またはＡＤＡＭ１７プロテアーゼの５６４−６４４残基を備える、請求項３１に記載の抗体。
【請求項３３】
野性型ＡＤＡＭプロテアーゼに比べて基質タンパク質を認識、結合かつ／またはタンパク質分解的に切断する能力が改変されている修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメントを産生させる方法であって、
（ｉ）  ＡＤＡＭプロテアーゼもしくはそのフラグメント、またはそれをコードする核酸に、１つ以上のアミノ酸置換を導入して、修飾ＡＤＡＭプロテアーゼまたはそのフラグメントを産生させるステップと、
（ｉｉ）  前記修飾ＡＤＡＭプロテアーゼもしくはそのフラグメントが、基質タンパク質を認識、結合かつ／またはタンパク質分解的に切断するかどうか、または野性型ＡＤＡＭプロテアーゼに比べて能力が改変されているかどうかを測定するステップと
を備える方法。
【請求項３４】
修飾ＡＤＡＭプロテアーゼもしくはそのフラグメントが、前記基質タンパク質を認識、結合かつ／またはタンパク質分解的に切断し得ないか、または前記野性型ＡＤＡＭプロテアーゼに比べて能力が低下している、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ＡＤＡＭプロテアーゼがＡＤＡＭ１０またはＡＤＡＭ１７である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ＡＤＡＭ１０プロテアーゼの５５２−６４６残基を備えるシステインリッチドメインに１つ以上のアミノ酸置換を導入する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＡＤＡＭ１７プロテアーゼの５６４−６４４残基を備えるシステインリッチドメインに１つ以上のアミノ酸置換を導入する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
ＡＤＡＭプロテアーゼのシステインリッチドメインを備えるタンパク質構築物を用いてＡＤＡＭプロテアーゼを同定、設計、スクリーニングまたは生産するステップを備える、ＡＤＡＭプロテアーゼのモジュレーターを産生させる方法。
【請求項３９】
システインリッチドメインがＡＤＡＭ１０の５５２−６４６残基またはＡＤＡＭ１７の５６４−６４４残基である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
タンパク質構築物がさらに前記ＡＤＡＭプロテアーゼのディスインテグリンドメインを備える、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
モジュレーターが、前記ＡＤＡＭプロテアーゼによる１種以上の細胞表面タンパク質の基質認識、結合および／またはタンパク質分解的切断を低減、阻止またはブロックし得る阻害剤である、請求項３８から４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
蛍光エネルギー移動（ＦＲＥＴ）解析を用いて、候補阻害剤の存在下に、Ｅｐｈ、エフリンおよび前記構築物を備える単離タンパク質複合体の形成をモニターするステップをさらに備える、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記システインリッチドメインの分子モデリングにより阻害剤を生産する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
モジュレーターが、エフリンＢ２、プロＨｂ−ＥＧＦ、プロアンフィレグリンおよび／またはプロＴＧＦ−αのＡＤＡＭ１０認識、結合および／またはタンパク質分解的切断の阻害剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４５】
阻害剤が、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼのシステインリッチドメイン内のＧｌｕ５７３、Ｇｌｕ５７８およびＧｌｕ５７９からなる群から選択されるか、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼのシステインリッチドメイン内のＧｌｕ５８３、Ｇｌｕ５８９およびＳｅｒ５９０からなる群から選択されるアミノ酸残基が並ぶタンパク質表面に特異的に結合する、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
阻害剤が有機小分子または抗体である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ＡＤＡＭプロテアーゼのモジュレーターと、医薬上有効な担体、希釈剤または賦形剤とを備える医薬組成物。
【請求項４８】
前記モジュレーターが、１つ以上の表面タンパク質のＡＤＡＭ認識、結合および／またはタンパク質分解的切断の阻害剤である、請求項４７に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
モジュレーターが、エフリンＡ５、エフリンＡ２、プロＥＧＦおよび／またはプロベータセルリンのＡＤＡＭ１０認識、結合および／またはタンパク質分解的切断の阻害剤である、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
モジュレーターが、エフリンＢ２、プロＨｂ−ＥＧＦ、プロアンフィレグリンおよび／またはプロＴＧＦ−αのＡＤＡＭ１７認識、結合および／またはタンパク質分解的切断の阻害剤である、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
ＡＤＡＭ１０阻害剤が、本質的にＡＤＡＭ１０プロテアーゼ細胞外ドメインのシステインリッチ領域からなるＡＤＡＭ１０プロテアーゼフラグメントである、請求項４９に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
ＡＤＡＭ１７阻害剤が、本質的にＡＤＡＭ１７プロテアーゼ細胞外ドメインのシステインリッチ領域からなるＡＤＡＭ１７プロテアーゼフラグメントである、請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
システインリッチ領域が本質的にＡＤＡＭ１０の５５２−６４６残基からなる、請求項５１に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
システインリッチ領域が本質的にＡＤＡＭ１７の５６４−６４４残基からなる、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
阻害剤が有機小分子または抗体である、請求項４８に記載の医薬組成物。