【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年3月10日(2009.3.10)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、生物学的材料を画像化する方法：
複数の個別領域およびそれらの上に光学的に検出可能な照合マークを有する基板を、倒立顕微鏡の対物レンズに対して位置させる工程；
該個別領域の少なくとも1つに関するある位置を該照合マークを基準として決定し、該少なくとも1つの個別領域に関する位置情報をコンピュータのメモリーに保存する工程；
該少なくとも1つの個別領域中の生物学的材料を画像化する工程；および
該少なくとも1つの個別領域に関する第一の画像情報を保存する工程。
【請求項２】
各個別領域がそれぞれマルチウェル・プレートの1つのウェルである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
照合マークに位置を合わせることによって該少なくとも1つの個別領域の該位置に戻る工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
照合マークに位置を合わせることによって、画像化された同じ生物学的材料の該位置に戻る工程をさらに含む、請求項3に記載の方法。
【請求項５】
該少なくとも1つの個別領域を画像化して第二の画像情報を生成し、この第二の画像情報と保存済みの第一の画像情報との位置を合わせる工程をさらに含む、請求項3に記載の方法。
【請求項６】
位置を合わせる工程は、第一の画像情報由来のピクセル値行列の少なくとも一部分と、第二の画像情報由来のピクセル値行列の少なくとも一部分との積の和が最大となるようにすることによって達成される、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
行列が、ある閾値レベルに満たないピクセル値に0の値が割り当てられて提供される、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
ある閾値レベルを超えるピクセル値には1の値が割り当てられる、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
第一および第二の画像情報が同じ生物学的材料の画像である、請求項5に記載の方法。
【請求項１０】
下記の工程をさらに含む、請求項5に記載の方法：
マルチウェル・プレートのウェル中の生物学的材料を候補物質と接触させる工程；
第一の画像情報および第二の画像情報を、候補物質と生物学的材料との間に相互作用が生じるのに十分な時間的間隔をおいて取得する工程；
第一の画像情報と第二の画像情報とを比較して、候補物質の生物学的材料に対する影響を評価する工程。
【請求項１１】
下記の工程を含む、得られた画像の位置を合わせる方法：
基板上の試料の第一の画像を取得する工程であって、基板が照合マークに相対的に位置する領域を有し、第一の画像が画像の値の第一の行列を提供する工程；
基板上の試料の第二の画像を取得する工程であって、第二の画像が画像の値の第二の行列を提供する工程；および
最初に照合マークを使用し、次に第一の行列の少なくとも一部分と第二の行列の少なくとも一部分の積の和が最大となるようにすることによって、第一の画像と第二の画像との位置を合わせる工程。
【請求項１２】
位置調整は位相差画像を使用して行われる、請求項11に記載の方法。
【請求項１３】
試料の蛍光画像結果の第一のセットを取得し、位置調整を行った後試料の蛍光画像結果の第二のセットを取得する、請求項11に記載の方法。
【請求項１４】
蛍光画像が互いに異なった色の画像である、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
蛍光画像を使用して位置調整を実施する、請求項11に記載の方法。
【請求項１６】
試料が生物学的材料を含み、下記の工程をさらに含む、請求項11に記載の方法：
生物学的材料を候補物質と接触させる工程；
第一の画像および第二の画像を、候補物質と生物学的材料との間に相互作用が生じるのに十分な時間的間隔をおいて取得する工程；および
位置を合わせた画像の画像情報を互いに比較し、候補物質の生物学的材料に対する効果を評価する工程。
【請求項１７】
下記の工程を含む、基板上の複数の個別領域中に位置する実質的に静止した生物学的材料を画像化する方法：
基板の第一の個別領域中の生物学的材料に焦点を合わせ、この焦点合わせにより焦点設定を得る工程；
少なくとも第一の個別領域中の生物学的材料を、再度焦点を合わせる事なく該焦点設定のまま画像化する工程。
【請求項１８】
複数の個別領域のそれぞれについて焦点合わせを行う、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
下記の工程をさらに含む、請求項17に記載の方法：
少なくとも3点に焦点を合わせることによって基板の傾斜を決定する工程；および
少なくとも第一の個別領域中の生物学的材料を画像化する際に、基板の傾斜が反映されるように焦点設定を調整する工程。
【請求項２０】
下記の工程を含む、基板に結合され実質的に静止した生物学的材料を画像化する方法：
少なくとも3点に焦点を合わせることによって基板の傾斜を決定する工程；
ある領域の一部に関して焦点設定を決定する工程；および
基板の傾斜が反映されるように調節された焦点設定で該領域を画像化する工程。
【請求項２１】
前記基板が複数のウェルを有し、前記領域が１つのウェルである、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】
画像化を行う前に、複数のウェルのそれぞれについて焦点合わせを1回行う、請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
傾斜の決定を１ウェル中の前記生物学的材料に焦点を合わせることによって行う、請求項21に記載の方法。
【請求項２４】
傾斜の決定を前記生物学的材料に焦点を合わせることによって行う、請求項20に記載の方法。
【請求項２５】
以下の工程を含む、基板上の生物学的材料を画像化する方法：
少なくとも2つのスペクトル範囲の検出に適合された自動化光学システムを用意する工程；
生物学的材料を画像化して、第一のスペクトル範囲を検出する工程；
第二のスペクトル範囲を検出すべく該システムを切り替える工程；および
予め決定した設定を使用する該システムの対物レンズの焦点を調節し、第二のスペクトル範囲の検出のために焦点の補正をする工程。
【請求項２６】
基板がマルチウェル・プレートを画定する、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
スペクトル範囲が、蛍光発光、ルミネセンス発光、化学発光、および反射光からなる群より選択される、請求項25に記載の方法。
【請求項２８】
下記の工程を含む、基板に結合された生物学的材料の画像データを分析する方法：
コンピュータで制御されたシステムにより生物学的材料を画像化して画像結果を得る工程であって、生物学的材料は少なくとも1種のフルオロフォアで標識されており、画像結果は複数のピクセル値によって表されている工程；
ピクセル値の平均閾値を計算する工程；
平均閾値の標準偏差を計算する工程；および
画像ピクセル値を傾斜とy切片とを有する一次方程式によって決定される閾値と比較する工程であって、
ここで平均閾値は傾斜であり、y切片は画像結果の最少ピクセル値を含み、かつ該閾値に満たないピクセル値を不適格とし、残りのピクセル値を適格とする工程。
【請求項２９】
幾何フィルターを使用して、隣接した適格のピクセル値のグループを対象物であるとして分類する、請求項28に記載の方法。
【請求項３０】
上記システムにより、分類された対象物について計数を行い記録する、請求項29に記載の方法。
【請求項３１】
下記の工程を含む、ある細胞集団中のある個々の細胞を、選択した時間にわたって観察する方法：
照合マークの付された基板を用意し、該細胞をこの基板に対して少なくとも実質的に静止させる工程；
第一の時点で該細胞の第一の画像を取得する工程；
第二の時点で該細胞に戻り、該細胞の第二の画像を取得する工程であって、
該戻る工程は照合マークを参照し、第一の画像および第二の画像の少なくとも一部分に対応する2つの行列の積の和が最大となるようにすることによって達成される工程。
【請求項３２】
上記戻る工程が、請求項12〜15記載の方法から選択される１の方法によって達成される、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
以下の工程をさらに含む、請求項31記載の方法：
細胞を候補物質と接触させる工程；および
第一の画像と第二の画像とを比較し、候補物質の細胞に対する効果を評価する工程。
【請求項３４】
接触を、第一の画像を得た後、第二の画像を得る前に行う、請求項33記載の方法。
【請求項３５】
下記の工程を含む、関心対象の生物学的活性を有する候補物質を同定する方法：
生物学的材料と候補物質とを、候補物質と生物学的材料との間に相互作用が生じるのに十分な時間にわたって接触させる工程であって、ここで生物学的材料は照合マークの付された基板のウェルに結合されている、工程；
第一の時点で前記生物学的材料の第一の画像を取得する工程；
第二の時点で前記生物学的材料に戻り、生物学的材料の第二の画像を取得する工程であって、該戻る工程は照合マークを使用し、第一の画像および第二の画像に対応する2つの行列の積の和が最大となるようにすることによって達成され、これにより前記生物学的材料の前記第一の画像と前記第二の画像との位置調整を提供する工程；ならびに
位置を合わせた前記第一の画像と前記第二の画像とを比較する工程であって、前記第一の画像と前記第二の画像との違いを候補物質の生物学的活性の指標とする工程。
【請求項３６】
前記第一の画像および前記第二の画像が同じ生物学的変数を示す検出可能なマーカーの画像であり、前記第一の画像と前記第二の画像との違いが同じ生物学的変数の変化を示唆する、請求項35記載の方法。
【請求項３７】
前記第一の画像が第一の生物学的変数の状態を示す検出可能なマーカーの画像であり、前記第二の画像が第二の生物学的変数の状態を示す検出可能なマーカーの画像である、請求項35記載の方法。
【請求項３８】
下記の工程を含む、関心対象の生物学的活性を有する候補物質を同定する方法：
生物学的材料と候補物質とを、候補物質と生物学的材料との間に相互作用が生じるのに十分な時間にわたって接触させる工程であって、ここで生物学的材料は照合マークを有する基板の個別領域に結合されている工程；
第一の時点で生物学的材料の第一の画像を得ることにより第一の生物学的変数を検出し、細胞の画像を得ることにより第二の生物学的変数を検出する工程；
第二の時点で生物学的材料に戻って両画像を取得することにより第一および第二生物学的変数を検出する工程であって、該戻る工程は、照合マークを使用する事により達成され、少なくとも第一生物学的変数と第二生物学的変数のうちの一方の第一の画像および第二の画像に対応する行列の積の和が最大となるようにすることにより生物学的材料の画像同士の位置を合わせる工程；
第一生物学的変数および第二生物学的変数のそれぞれについて位置を合わせた第一の画像と第二の画像とを比較する工程であって、前記第一の画像と前記第二の画像との違いを候補物質の生物学的活性の指標とする工程。
【請求項３９】
請求項1、11、17、20、25、28、31、35、および38記載の方法から選択された１の方法にしたがって作動するようプログラムされた自動化顕微鏡システム。
【請求項４０】
下記を備えた自動化顕微鏡システム：
顕微鏡；
顕微鏡動作の自動化に適合した複数の制御装置；
制御に指示を与える手段。
【請求項４１】
顕微鏡が倒立顕微鏡である、請求項40記載のシステム。
【請求項４２】
請求項1、11、17、20、25、28、31、35、および38記載の方法から選択された１の方法を用いて生成された画像結果を示すデータを含む、コンピュータで読み出し可能な媒体。
【請求項４３】
請求項1、10、11、16、17、20、25、28、31、35、38記載の方法から選択された１の方法を実施する、自動化された顕微鏡観察システムに指示を与えるためのプログラムの少なくとも一部を含む、コンピュータで読み出し可能な媒体。
【請求項４４】
プログラムの全てが提供される、請求項41記載のコンピュータで読み出し可能な媒体。
【請求項４５】
キットと共に使用する指示書が同梱された、請求項43記載のコンピュータで読み出し可能な媒体を含むキット。
【請求項４６】
生物学的材料が細胞を含む、請求項1、16、17、20、25、28、35、または38の何れかに記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
本発明の方法は、一つの態様において、複数の試料を含むアレイ(例えば、試料の入ったウェルを複数備えたマルチウェル・プレート)、およびそれらの上の１つの光学的に検出可能な照合マークを提供する工程、このアレイを顕微鏡の対物レンズに対して位置決めする工程、
を含む。対物レンズは、複数ウェル中の複数細胞の複数像が、複数の深度位置で焦点があったままとなるような被写界深度を有するものとすることができる。特に重要な態様において、このアレイは、複数のウェルが設けられたマルチウェル・プレートであり、この複数のウェルには、1以上の細胞が入っている。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
システムのハードウェアは、基板上での(例えば、ウェルによって画定される組織培養用プラスチックをはじめとする各種表面に生育させた生細胞の)画像化を、(例えば、日単位〜月単位の)ある期間にわたって行い、その間に、材料を必要に応じて定期的(例えば、1時間ごと、1日ごと、隔日、1週間ごとなど)または非定期的に観察できる構成とする。特に重要な一つの態様において、本発明は、単一細胞のレベル、特に生細胞の画像化を可能とするものであり、この細胞は、基板表面に単離された単一細胞として分散していてもよいし、他の細胞と(例えば、単層培養の場合のように)接触していてもよい。生物学的材料は、(例えば、細胞が基板に付着するのであれば、組織培養用プラスチック (例えば、ウェル)中に)固定化または実質的に固定化しておくことが好ましく、この場合には、画像化対象材料の位置が基板に対して相対的に固定されているので、その後、対象物(例えば複数細胞)の同一視野、場合によっては、ある視野内の同一対象物(例えば、個々の細胞）に正確に戻ることができる。本発明は、均質または混合された材料集団を画像化することができる(例えば、画像化された複数細胞は、均質な細胞培養物とすることも、異質な細胞培養(例えば、混合細胞培養物)とすることもできる)。本発明で画像化を行うのに適した生物学的材料の例としては、例えば、核酸(例えば、DNA、RNAなど)、タンパク質、などがある。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
本発明は、数多くの特徴と利点を選択的に提供するものであり、特に、下記の特徴や利点を選択的に提供する。すなわち：
細胞の集まり(または、他の生物学的材料)を画像化するにあたって、低開口数の対物レンズを使用して深い被写界深度を提供することにより、Z方向のより広い位置範囲で像(例えば、ウェル中の細胞の像)の焦点が合ったままとなるようにし、1領域(例えば、１つのウェル)あたりの焦点を合わせる回数が、1回もしくは低頻度ですむ(例えば、マルチウェル・プレートあたり20、15、10、5、3、もしくは2回未満の回数で焦点を合わせるか、あるいは別の方法の場合に要する時間もしくは回数の約2/3、1/2、1/4、1/8、もしくは1/16ですむ)ハイスループットな画像化が可能となるようにすること；
自動焦点合わせを使用して、特に、開口数が比較的高い対物レンズを使用した場合における、基板の傾きを考慮すること；
マルチウェル・プレート上の照合ポイントを使用し、以後の特定の時点でウェル中の同じ細胞の位置を突き止めて画像化できるようにマルチウェル・プレートのステージの移動をプログラミングすること；
関心対象の画像の視野、もしくはその視野中の対象物、例えば細胞の位置を再度突き止めるにあたって、行列を利用した位置合わせを、特に照合ポイントの利用と組み合わせて使用すること；
マルチウェル形式の基板上の各ウェルについて、予め設定したパターンで互いに重複することのない画像を自動的に取得するようなプログラミングを行うこと；
デュアル・フィルターホイールのコンピュータ制御された位置決めを介した、各種蛍光励起発光フィルターの組み合わせ間での自動スイッチングを使用することによって、複数の蛍光インジケータを使用した各種の構造もしくは機能プロセスの解像を行うこと；
各種フルオロフォアを観察する際に受け取る各種の波長の信号について、特に、高開口数の対物レンズ、および上記の自動蛍光検出を使用した場合に関して、焦点補償を使用すること；ならびに/または
所定の環境の組み合わせについて最低の明るさまたは閾値を決定することによって画像データの適不適を判断するルーチンを使用して、画像データをさらなる分析に関連するものとして計数すること。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
本発明のシステムおよび方法は、一般に、基板上に結合された細胞の画像化に関する。この文脈において、「基板」という用語は、その上に画像化対象細胞を載置する(例えば、生育させる）材料のことを意味する。基板は、複数の(すなわち、少なくとも2つの)ウェルを備えることができ、このウェルは、整列して配置することができる。「マルチウェル・プレート」は、こうしたウェルを含む基板の一例であり、複数の個別領域が設けられ、ウェルが整列して配置されているが、基板はこの例に限定されるものではない。個別領域を形成する別の方法は、例えば、上掲のNature vol. 411: 107-110 にも記載されており、ここでは、細胞の単層をDNAスポット上に生育させすことによって、個別の画像化/分析領域を設けている。さらに別の例としては、DNAアレイやタンパク質アレイがある。基板は、任意の適当な材料、例えば、プラスチック、ガラスなどから形成することができる。インビトロでの細胞の維持および/または生育にはプラスチックが通常使用され、本明細書では、基板の例としてプラスチックに言及するが、基板はプラスチックに限定されるものではない。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６５】
特に関心対象のものは、複数の神経細胞および複数の神経前駆細胞の画像化である。画像化を行う細胞は、遺伝的に改変した複数の細胞(例えば、組換え細胞)とすることもできる。特に関心対象のものは、複数の生細胞の画像化であるが、本発明は、態様によっては、細胞膜浸透化または固定された複数細胞の画像化も意図する。細胞は、通常細胞の維持および/または生育を目的とした培養液を含む試料中で画像化される。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
本発明の多くの態様、特に、同一の複数細胞の視野、および/または複数細胞の１つの視野中の同じ個別の細胞に戻る工程を含む態様において、細胞は基板表面に十分固定化され、例えば、基板または(例えば、細胞に対して付着性の物質でコーティングすることによって)処理した基板に付着させ、基板の操作を行っても複数細胞が基板に対して相対的に移動することのないようにしておく。例えば、細胞は、基板、例えば、(例えばウェル中の）組織培養用プラスチックに直接付着させ、細胞の位置が基板に対して相対的に固定されて基板に対する細胞の位置が移動することなく基板の操作を行えるようにしておく。こうすると、同一の複数細胞の視野に正確に戻ることも、複数細胞の視野中の同じ個別の細胞に正確に戻ることも可能となる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６７】
本発明は一般に単一細胞レベルの画像化を意図しており、特に生きた複数細胞の画像化を意図する。複数細胞は基板表面に孤立した単一細胞として分散していてもよく、(例えば、単層の場合のように)他の細胞と接触していてもよく、または(例えば、組織切片の場合のように)薄層を形成していてもよい。画像化される複数細胞は、均質な細胞集団であっても、異質な細胞集団(例えば、混合細胞培養物)であってもよい。このように、本発明は、複数の単一細胞の画像化、および複数の細胞集団の画像化を可能とするものであり、複数の細胞集団は、場合によっては2以上の異なったタイプの細胞を含んでいてもよい。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６８】
複数細胞は、検出可能なマーカー、例えば蛍光ラベルを利用して、またはそれらを利用せずに画像化されうる。こうした検出可能なマーカーや検出可能なマーカーを細胞と共に利用する方法は当技術分野で周知である。検出可能なマーカーとしては、フルオロフォア(または蛍光）(本明細書では、例としてあげるものであって、これらに限定されるものではない）、化学発光体、また他の適当な検出可能標識、例えば、FRET(蛍光共鳴エネルギー転移)およびBRET(生物発光共鳴エネルギー転移)検出系で使用する標識が挙げられる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
本発明のシステムおよび方法は、細胞集団および個々の複数細胞の画像化、特に、細胞の生存度(例えば、細胞の生存率や細胞の健康)、細胞の生理学的性質(シナプスの生理学的性質)、シグナル伝達、オルガネラの位置および機能、タンパク質の位置および機能(相互作用およびターンオーバーを含む)、酵素活性、レセプターの発現および位置、細胞表面の変化、細胞構造、分化、細胞分裂などを観察するための経時的な画像化を可能とする。例えば、一つの態様において、本発明のシステムおよび方法を、タンパク質の発現(例えば、ハンティントン舞踏病におけるハンティンギン(huntingin）の役割)および、タンパク質のレベル変化もしくは凝集が細胞死を引き起こしているのか、またはそれらは細胞死の症状(例えば、細胞による、細胞死を防止するための試みであって、細胞死自体の原因ではない)なのかを判断する際に使用する。特に関心対象のものは、培養中における神経細胞の神経変性についての研究である。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
本発明のシステムおよび方法は、複数の単一細胞または複数の細胞集団をリアルタイムで所望の時間例えば、比較的に短い時間をおいて画像化することを可能とする。例えば、24ウェルの基板で、各ウェルが、CCDによって撮影する互いに接する光学視野を13個含む場合、このウェルは、約10分で画像化することができる。別の事例においては、細胞の画像化に要する時間は、カバーする全面積、CCDの解像度、および焦点合わせのルーチンとして何を選ぶかに応じて決まる。いすれの場合でも、本発明でのデータ取得は、秒単位(例えば、本実施例では平均で1視野あたりわずか約1〜3秒)ですみ、焦点を合わせおよび次の位置までの移動にかかる時間を考慮すると、実際の画像化に要する時間はより少なくなる。焦点合わせの工程を完了するのに最大約10〜15秒を要するのに対し、視野の像を取り込むのに要する時間は、約50ms〜1秒であり、視野間の移動に要する時間は無視することができる。したがって、さらに別の視野の画像化を行っても、消費時間の観点からは、焦点を合わせ直さない限りは実質的に問題になることはない。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
細胞の画像化、例えば隣接したウェルに位置する細胞の画像化を迅速に行うことができ、さらに、比較的短い時間をおいて(同じ個別の細胞を含む同一の複数細胞についての視野に戻ることによって）再度画像化を行うことができるので、従来の方法では各画像の取得に要する時間の長さなどの事由ゆえに到底行いえなかったような観察を行うことが可能となった。本発明では、細胞現象、例えば、細胞の機能、細胞の生存、集団中の個々の細胞の運命を、上述したように比較的短い時間をおいて追跡することもできる。こうしたことは、特定の時点で撮影された画像しか得られず、進行する現象(例えば、変性)について得られる情報の量に制限があり、ひたすら時間が必要とされた従来の免疫細胞化学研究とは対照的である(例えば、神経変性についての研究で300,000個の細胞を分析するには通常約6週間を要していたが、本発明を用いるとこの同じ分析を半分にもはるかに満たない時間で完了させることができる)。本発明の諸側面を用いると、免疫細胞化学的な分析や顕微鏡を用いた分析を手動で行う場合に通常丸6日かかるような作業を、顕微鏡およびコンピュータの処理時間で1時間で終えることができる。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
また、本発明のシステムおよび方法では、基板をシステムから取り出し、その後再度システムに戻して、同じ複数の細胞集団、および複数の細胞集団中の個別の複数の細胞を正確に特定できるので、複数の単一細胞および選択された複数の細胞集団の長期(例えば、数時間〜数日から数週間またはそれ以上といった期間)にわたる分析も可能となっている。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
本発明のシステムおよび方法では、複数の生物学的変数(例えば、細胞機能のパラメータまたは変数)を、ほぼ、またはまったく同時に、(定性的または定量的に)測定することもできる。例えば、ある細胞を、位相差および蛍光の両方を用いて画像化することにより、細胞の形態や分子の諸現象の変化についての情報を得ることができる。別の態様において、該細胞は、複数の検出可能なマーカー(例えば複数の蛍光マーカー)を使用して画像化されうる。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７４】
本発明のシステムおよび方法は、同じ細胞または細胞集団の画像を順次得ることにより従来のシステムに付随していたユーザーごとの偏りや変異を防止する。また、本発明は光や激しい操作に対して感受性を有する複数細胞を画像化する際に使用することができ、具体的には画像を得るに際の光源への暴露が比較的少なくてすみ、複数細胞が結合した基板を比較的細かく動かすだけでよい。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
光毒性を防止または低減するための細胞の画像化
光毒性は、生きた試料の画像化を行う上で常に重要な制限要因となっており、光毒性は、入射光の強度、照射時間、波長と直接関連している。本発明のシステムおよび方法を使用して、利用可能な信号を検出するために必要な入射光の量を低減する。徐々に進行するプロセスを調べる場合、同一の複数細胞についての複数試料を繰り返し照射せねばならないので、光毒性は特に問題になる。本発明では、光毒性をいくつかの方法によって有意に低減する。低強度の白色光を極めて短時間照射することによって顕微鏡の焦点を合わせ、その後、より強度の光を照射することによって高解像度の蛍光画像を取得することができる。自動化を行わない場合、焦点は、通常高強度の蛍光を連続照射することによって合わせることになる。顕微鏡の焦点を合わせ、その後画像を取得するのに要する時間を考慮すると、細胞は、光毒性を有する高強度の光に、自動化を行った場合と比べると一桁程度も長時間にわたって照射されうることになる。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８１】
また、1度焦点を合わせた後、焦点を合わせなおすことなく複数の隣接した蛍光画像を取得する本発明の方法も光毒性を低減するうえで有利である。このアプローチは、複数細胞の視野の大半が画像の生成に必要な光のみを有意な光として受け取るので、蛍光画像を取得するうえで最適化された方法であるといえる。最後に、自動化によって高強度の光の照射時間が実質的に低減するので、光褪色も生じにくくなる。発せられる蛍光が明るいので、高解像度の画像を生成するのに必要な励起時間もさらに低減する。