(57)【要約】本発明は、ヒトがん細胞を標的とする新規の化合物、そのような化合物の合成のための方法、および、がんを処置する際のそのような化合物の使用に関する。例えば、免疫グロブリンの構造に関連する、合成非免疫グロブリン抗腫瘍化合物であって、（ａ）それぞれ腫瘍細胞マーカーに結合することが可能な配列を含む、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチド；（ｂ）エフェクターとしての少なくとも１つのペプチドであって、配列：ｆＭＬ；ｆＭＬＰ；ｆＭＬＦのうちの１つを含むペプチド；および（ｃ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、またはそれらの組み合わせから構成される、２つまたはそれより多くのリンカー分子を含み、リンカー分子が２つまたはそれより多くのバインダーを少なくとも１つのエフェクターへと共有結合的に連結し、免疫グロブリン分子の構造に関連させる化合物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫グロブリンの構造に関連した、合成非免疫グロブリン抗腫瘍化合物であって、該化合物は、
（ａ）それぞれ腫瘍細胞マーカーに結合することが可能な配列を含む、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチドであって、該腫瘍細胞マーカーは、ヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）；ヒト血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）；ＥｒｂＢ−２受容体（Ｈｅｒ−２）；繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）；インテグリン（α３β１インテグリンおよびα４β１インテグリンが挙げられる）；レクチン（ヒトβ−ガラクトシド結合レクチン３（ガレクチン−３、すなわちＧａｌ−３）が挙げられる）またはｃ−Ｍｅｔ（肝細胞増殖因子受容体ＨＧＦＲまたは細胞分散因子ＳＦ）を含む、ペプチド；
（ｂ）エフェクターとしての少なくとも１つのペプチドであって、以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含むペプチド；および
（ｃ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、またはそれらの組み合わせから構成される、２つまたはそれより多くのリンカー分子を含み、
該リンカー分子が該２つまたはそれより多くのバインダーを該少なくとも１つのエフェクターへと共有結合的に連結することにより、免疫グロブリン分子の構造に関連させる合成非免疫グロブリン抗腫瘍化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の合成非免疫グロブリン抗腫瘍化合物であって、該化合物は、
（ａ）それぞれ以下の配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ；ＣＳＤＳＷＨＹＷＣ；ＣＳＤＨＷＨＹＷＣ、ＣＳＤＹＮＨＨＷＣ、ＣＳＤＷＱＨＰＷＣ；ＫＣＣＹＳＬ；ＭＱＬＰＬＡＴ；ＣＤＧＬＧＤＤＣ；ＣＤＧＷＧＰＮＣ；ＣＬＤＷＤＬＩＣ；ＳＷＫＬＰＰＳ；ＣＰＬＤＩＤＦＹＣ；ＡＮＴＰＣＧＰＹＴＨＤＣＰＶＫＲ；ＹＬＦＳＶＨＷＰＰＬＫＡ；またはそれらの誘導体もしくはバリエーション（部分配列、付加、欠失および置換が挙げられる）のうちの１つを含み、該誘導体もしくはバリエーションは、ヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）;ヒト血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）;ＥｒｂＢ−２受容体（Ｈｅｒ−２）;繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）;インテグリン（α３β１インテグリンおよびα４β１インテグリンが挙げられる）;レクチン（ヒトβ−ガラクトシド結合レクチン３（ガレクチン−３、すなわちＧａｌ−３）が挙げられる）;ｃ−Ｍｅｔ（肝細胞増殖因子受容体ＨＧＦＲまたは細胞分散因子ＳＦ）に結合することが可能である、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチド；
（ｂ）以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含む、エフェクターとしての少なくとも１つのペプチド；および
（ｃ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、またはそれらの組み合わせから構成される、２つまたはそれより多くのリンカー分子を含み、
該リンカー分子が該２つまたはそれより多くのバインダーを該少なくとも１つのエフェクターへと共有結合的に連結する合成非免疫グロブリン抗腫瘍化合物。
【請求項３】
式：（バインダー−リンカー）２−エフェクターを有する、請求項１または２に記載の抗腫瘍化合物であって、ここで、
（ａ）該バインダーペプチドは、配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ）またはＥＧＦＲに結合することが可能な、そのバリエーションもしくは誘導体を含み；
（ｂ）該エフェクターペプチドは、Ｎ末端における以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つおよび２つのリジン残基を含み；
（ｃ）前記リンカー分子は、ポリエチレングリコールオリゴマーであり；
（ｄ）前記エフェクターは、該２つのリジン残基のεアミノ基を介して、前記２つのリンカー分子の末端のカルボキシ基へのアミド結合によって共有結合的に連結され；
（ｅ）該バインダー分子は、カルボキシ末端を介して、該ポリエチレングリコールリンカー分子の末端のカルボキシ基へのアミド結合によって共有結合的に連結される、
抗腫瘍化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の抗腫瘍化合物であって、ここで、
（ａ）前記バインダーペプチドは、配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ）を有し；
（ｂ）前記エフェクターペプチドは、以下の配列：ｆＭＬＫＫ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ）；ｆＭＬＰＫＫ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ）；ｆＭＬＦＫＫ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ）のうちの１つを有し；
（ｃ）前記２つのリンカー分子は、２個と１００個との間のエチレングリコール単位の長さを有するポリエチレングリコールオリゴマーである、
抗腫瘍化合物。
【請求項５】
図２に記載の構造を有する抗腫瘍化合物。
【請求項６】
図３に記載の構造を有する抗腫瘍化合物。
【請求項７】
図４の化合物から選択される構造を有する抗腫瘍化合物。
【請求項８】
前述の請求項のいずれか１項に記載の抗腫瘍化合物であって、該化合物は、前記バインダーの前記ペプチド配列のアミノ末端側の末端が、安定性を増大するためにアセチル化される抗腫瘍化合物。
【請求項９】
前述の請求項のいずれか１項に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１０】
結腸がん、頭部および頸部のがん、卵巣がん、膵がん、非小細胞肺がん、乳がん、もしくはグリア芽細胞腫、またはＥＧＦＲマーカーを持つ他の病原性細胞の処置における、請求項９に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項１１】
乳がん、膵がん、卵巣がん、ＮＳＣＬＣ、もしくはリンパ腫、またはＥｒｂＢ−２受容体（Ｈｅｒ−２）を持つ他の病原性細胞の処置における、請求項９に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項１２】
卵巣がんまたは繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦ受容体）を持つ他の病原性細胞の処置における、請求項９に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項１３】
胃がんの複数の腹膜腫瘍またはインテグリン（α３β１インテグリンおよびα４β１インテグリンが挙げられる）を持つ他の病原性細胞の処置における、請求項９に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項１４】
乳がんまたはヒトβ−ガラクトシド結合レクチン  ガレクチン−３（Ｇａｌ−３）を持つ他の病原性細胞の処置における、請求項９に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項１５】
ＶＥＧＦＲを有するヒトのがんの処置における、請求項９に記載の薬学的組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍マーカーを標的とする新規の化合物；そのような化合物の合成のための方法；および、がんを処置する際のそのような化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
新しい抗がん療法の開発についての、特に、がん細胞を特異的に標的とする化学療法剤についての強い必要性が存在する。
【０００３】
いくつかのそのような療法は、イムノトキシン、すなわち、ヒトがん細胞上の受容体に対する抗体分子またはタンパク質リガンドへの毒性薬物の結合体である化合物に依存する。例えば、非病原性細胞への毒素のあらゆる送達を最小限にする試みにおいて、がん細胞に結合する抗体が毒素との結合体として使用される。イムノトキシンは、例えば、リシン、シュードモナス外毒素、ジフテリア（Ｄｉｐｔｈｅｒｉａ）外毒素、および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）へと腫瘍特異的抗体を連結することにより開発された。
【０００４】
記載されたアプローチは（例えば、非特異的な毒性、低い効力、および高い製造コストの点から）顕著に不都合なことがある。その結果、腫瘍細胞に対して特異的であって、かつより低コストで製造され得る抗腫瘍化合物を提供する必要性が存在する。特に、標準化学構築ブロックからの化学合成により完全に製造され得る、抗腫瘍効力および特異性を有する化合物を提供する必要性が存在する。
【０００５】
抗腫瘍効力および特異性を有するそのような合成化合物は、一般的な形式で特許文献１において記載されており、特許文献１は、ここで参考として含まれる。そのような化合物をさらに改善する必要性が存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００８／０００５１７号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
腫瘍細胞の効果的な処置を可能にする新規の合成化合物を提供することが本発明の目的である。この目的は、構造および機能が免疫グロブリンの構造および機能に基づく化学的に合成された単純な化合物を提供するというアイディアによって達成される。本発明は、特許請求の範囲において明記されるような化合物および方法を特に提供する。
【０００８】
特に、本発明は、抗腫瘍効力を有する化合物を提供し、この化合物は、骨格構造および１つまたはそれより多くの合成バインダーから構成される結合体である。ここで、その骨格構造は、１つまたはそれより多くの、エフェクター機能、可撓性リンカー構造、およびそのバインダーに対する１つまたはそれより多くのカップリング部位を含む合成化学構造である。好ましくは、その骨格構造内のエフェクター機能は、病原体パターン認識受容体（ＰＲＲ）に対するリガンド（特に病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）を含む）として働き、そして／または、ＰＲＲを活性化する。
【０００９】
本発明の好ましい実施形態において、上記骨格構造は、免疫グロブリンのＹ構造に似ており、上記化合物の基部でのエフェクター機能と、上記バインダーが位置する２つの可撓性の腕とを伴う（図１を参照のこと）。従って、上記化合物は、免疫グロブリンにおいてのように可撓性リンカー構造（上記腕）間に１つの分岐点を含むが、またはさらなる実施形態においては追加の分岐点を含む。上記バインダーに対する上記カップリング部位は、そのような可撓性リンカー構造の端に位置する。
【００１０】
さらなる実施形態において、本発明は、腫瘍細胞マーカーを特異的に標的とする化合物を提供する。好ましくは、そのような腫瘍細胞マーカーとしては、ヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）；ヒト血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）；ＥｒｂＢ−２受容体（Ｈｅｒ−２）；繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）；インテグリン（α３β１インテグリンおよびα４β１インテグリンが挙げられる）；レクチン（ヒトβ−ガラクトシド結合レクチン３（ガレクチン−３、すなわちＧａｌ−３）が挙げられる）；ｃ−Ｍｅｔ（肝細胞増殖因子受容体ＨＧＦＲまたは細胞分散因子（ｓｃａｔｔｅｒ  ｆａｃｔｏｒ）ＳＦ）が挙げられる。
【００１１】
特に本発明は、化合物を提供し、この化合物は、
（ａ）２つまたはそれより多くのバインダー（免疫グロブリン構造の頭部部分に似ている）：
（ｂ）そのバインダーに対する少なくとも１つのカップリング部位、少なくとも１つのリンカー構造、および少なくとも１つのエフェクター（免疫グロブリン構造の基部に似ている）を含む骨格構造
を含み、
ここで、そのエフェクターは以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含み、そのリンカー構造は、ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、またはそれらの組み合わせから構成される。
【００１２】
（定義）
本発明中で用いられる場合、用語「バインダー」は、好ましくは、第二の分子構造（特に標的腫瘍細胞上の腫瘍マーカー）と相互作用／結合する任意の分子構造を指す。本発明のバインダーは、天然または合成由来のバインダーであり得、改変されていてもよく、または改変されていなくてもよい。本発明のバインダーとしては、低分子、ペプチド、ペプチド模倣体、改変されたアミノ酸または改変されていないアミノ酸、オリゴヌクレオチド、および前述されたもののフラグメント、誘導体、類似体、キメラ、またはポリマーが挙げられる。バインダーの他の例としては、合成により生成された低分子が挙げられる。好ましくは、用語、低分子は、好ましくは５００Ｄａ未満の分子量を有する生物活性分子を指す。低分子は、ペプチド、タンパク質、ＤＮＡまたはＲＮＡ以外の分子である。
【００１３】
本発明中で用いられる場合、用語「腫瘍マーカー」は、がん細胞に対して十分に特異的であって、それをもって宿主の他の構造からそのがん細胞の区別を可能にする任意の構造を指す。量的にか、または質的にかのいずれかでがん細胞から宿主の構造を見分けることが可能である任意の構造は、腫瘍マーカーとして（例えば、宿主の他の細胞上にもまた、より低い量だが存在する、過剰発現された細胞表面タンパク質の場合のように）働き得る。バインダーと腫瘍マーカーとの間の相互作用は、任意の種類の化学的または物理的相互作用（例えば、水素結合、ファンデルワールス力または疎水性相互作用）を含み得る。そのマーカーの特異性は、がん細胞中、またはがん細胞上、またはがん細胞の近傍での、その選択的発現か、またはその増強した発現のいずれかに起因し得る。腫瘍マーカーの例としては、受容体、イオンチャネルおよび他の細胞表面タンパク質が挙げられる。
【００１４】
好ましくは、用語「エフェクター」は、ＰＲＲを介してシグナル伝達を調節する任意の分子構造を指す。本発明のエフェクターとしては、低分子、サッカリド、ペプチド、ペプチド模倣体、天然または他のアミノ酸、オリゴヌクレオチド、およびこれらのフラグメント、誘導体、類似体、キメラ、またはポリマーが挙げられる。エフェクターとしては、リポ多糖類、テイコ酸、メチル化していないＣｐＧモチーフを有するヌクレオチド、二本鎖ＲＮＡ、マンナン、およびホルミルペプチドが挙げられる。エフェクターの１つの重要な機能は、免疫細胞の活性化であり得る。好ましくは、エフェクターは、ＰＲＲのアゴニストである。すなわち、受容体のシグナル伝達活性を誘導するか、またはそうでなければ増強する。エフェクターは、直接または間接の、刺激性、改変性または活性化の影響を先天性免疫系に及ぼす分子構造を特に含む。先天性免疫系の細胞は、病原体および罹病した組織または細胞を破壊および除去することにおいて有効である。エフェクターによって活性化される先天性免疫系の細胞としては、マクロファージ、好中球（多形核好中球、リンパ球、およびナチュラルキラー細胞が挙げられる）が挙げられる。
【００１５】
好ましくは、用語「リンカー構造」は、２つの分子的実体を物理的に連結することが可能であって、これによりこれらの実体が、その意図される機能を示し得る任意の構造を指す。リンカーは、多様な化学構造（例えば、ポリエチレングリコール、ペプチド、エーテル、エステル）から構成され得る。
【００１６】
細胞または受容体（およびその定量測定または定性評価）と組み合わせて使用される場合、用語「活性化」は、好ましくは、任意の直接または間接の免疫応答を指す。この免疫応答としては、例えば、浸潤、脱顆粒、ローリング、走化性、食作用、エンドサイトーシス、さまざまな異化酵素または分解酵素（例えば、エラスターゼ）の増加した発現または活性、酸化的バースト、過酸化水素および他の反応性の高い酸素種の産生または放出、細胞内のカルシウムの流れ、細胞極性化（ｃｅｌｌ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）、ならびにイノシトール代謝およびイノシトールシグナリングにおける変化が挙げられる。活性化の他の決定要素としては、ロイコトリエン、補体、ケモカイン、サイトカイン、化学誘引物質因子、インターロイキン、またはインターフェロンの増加した発現および産生が挙げられる。これらの活性を測定するための方法は、当業者に周知である。（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｅ．Ｐａｕｌ、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｇ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ．１９９９；Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、１９９９を参照のこと）。
【００１７】
アミノ酸配列と組み合わせて使用される場合、用語「実質的に相同な」は、好ましくは、配列が実質的に同一または類似する配列であって、コンフォメーションにおける相同性を生じ、従って、類似の生物学的活性を生じる配列を指す。この用語は、共通の配列進化を意味することを意図しない。代表的に「実質的に相同な」配列は、少なくとも所望する活性に関係することが知られる任意の領域にわたって、配列が、少なくとも５０％同一、より好ましくは、少なくとも８０％同一である。最も好ましくは、末端以外では５以下の残基が異なる。好ましくは、配列の不一致は、少なくとも前述の領域において、「保存的改変」の形式である。一般的に、２つの配列の相同性百分率を決定するためには、それらの配列は、最適の比較を目的として整列させられる（例えば、最適な整列のために第一の配列および第二の配列のうちの一方または両方においてギャップが導入され得、非相同配列は、比較目的のために無視され得る）。好ましい実施形態において、比較目的のために整列される参照配列の長さは、その参照配列の長さの、少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、そしてさらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、または、９０％である（例えば、第二の配列を、例えば、１００残基を有する第一の配列へ整列させる場合、少なくとも３０、好ましくは少なくとも４０、より好ましくは少なくとも５０、さらにより好ましくは少なくとも６０、そしてさらにより好ましくは少なくとも７０、８０または９０残基が整列される）。
【００１８】
用語「非免疫グロブリン」は、天然の免疫グロブリンではない合成分子、または合成部分を有する天然の免疫グロブリンを指す。しかしながら、本発明によると、その分子は、多かれ少なかれ免疫グロブリンの一般構造に似ている。
【００１９】
用語「好ましくは」は、本発明に対する選択物を示唆することを意図し、本発明をどんな様式でも限定または制限することを意図しない。
【００２０】
アミノ酸略語：Ａ：Ａｌａ、アラニン；Ｃ：Ｃｙｓ、システイン；Ｄ：Ａｓｐ、アスパラギン酸；Ｅ：Ｇｌｕ、グルタミン酸；Ｆ：Ｐｈｅ、フェニルアラニン；Ｇ：Ｇｌｙ、グリシン；Ｈ：Ｈｉｓ、ヒスチジン；Ｉ：Ｉｌｅ、イソロイシン；Ｋ：Ｌｙｓ、リジン；Ｌ：Ｌｅｕ、ロイシン；Ｍ：Ｍｅｔ、メチオニン；Ｎ：Ａｓｎ、アスパラギン；Ｐ：Ｐｒｏ、プロリン；Ｑ：Ｇｌｎ、グルタミン；Ｒ：Ａｒｇ、アルギニン；Ｓ：Ｓｅｒ、セリン；Ｔ：Ｔｈｒ、トレオニン；Ｖ：Ｖａｌ、バリン；Ｗ：Ｔｒｐ、トリプトファン；Ｙ：Ｔｙｒ、チロシン；Ｘ：任意のアミノ酸。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１。免疫グロブリンの構造を有する本発明の化合物についての機能性、大きさおよび分子内の距離の比較。
【図２】図２。ペプチド配列ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩを含む２つのバインダーペプチド、ペプチド配列ｆＭＬＰを含む１つのエフェクター、およびリンカーとしてＰＥＧを有する、本発明の好ましい実施形態に従う構造１。
【図３】図３。ペプチド配列ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩを含む２つのバインダーペプチド、ペプチド配列ｆＭＬＦを含む１つのエフェクター、およびリンカーとしてＰＥＧを有する、本発明の好ましい実施形態に従う構造２。
【図４】図４。バインダーを可撓性リンカー構造にカップリングするための異なる化学構造を有する構造２のバリエーション。バインダーのペプチド配列ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩは、（切断された、または１アミノ酸残基が置き換えられた（ｒｅｐｌａｃｅｄ））そのバリエーションによって、および腫瘍マーカーに対する結合能力を提供する他のペプチド配列によって置き換えられ得る。そのバインダーは、そのＣ末端を介して（構造ＢおよびＥにおけるように）、またはそのＮ末端を介して（構造Ａ、ＣおよびＤにおけるように）結合され得る。
【図５】図５。ＥＧＦＲ、および構造１に従う化合物を用いた結合試験。
【図６】図６。構造２に従う化合物を用いた走化性アッセイ。「ＳＡＢ」は、構造２を指し、「ｆＭＬＦ」は、コントロールとして用いられるｆＭＬＦペプチドのみを指す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
（発明の詳細な説明）
上記で概説されるように、本発明は、腫瘍細胞の有効な処置を可能にする新規の化合物を提供する。
【００２３】
この目的は、骨格構造、および１つまたはそれより多くの合成バインダーから構成される結合体である抗腫瘍化合物を提供することにより達成され、ここで、その骨格構造は１つまたはそれより多くのエフェクター、１つまたはそれより多くの可撓性リンカー構造、およびバインダーに対する１つまたはそれより多くのカップリング部位を含む合成化学構造である。
【００２４】
本発明の化合物の骨格構造は、この化合物の基本的な機能を提供する。すなわち、（ｉ）エフェクター機能、（ｉｉ）バインダーがカップリングし得る部位、および（ｉｉｉ）先天性免疫系の細胞および腫瘍マーカーを持つ標的細胞の両方とこの化合物との相互作用を可能にする可撓性フレームワークである。これらの機能の他に上記骨格構造は、好ましくは、他の副次的な活性を有さないように選択される。
【００２５】
好ましくは、上記骨格構造は、大きさおよび機能が免疫グロブリンＧの構造に似ている。すなわち、（ｉ）そのエフェクター機能は、免疫グロブリンＧのＦｃ部分のように、Ｙの形をした構造の基部に位置し；（ｉｉ）２つ（またはそれより多く）の可撓性リンカー構造は、免疫グロブリンＧにおけるＦａｂフラグメントのように、分岐点を介して基部に結合され；（ｉｉｉ）上記バインダーは、免疫グロブリンＧにおけるＦａｂフラグメントの先端に位置するＣＤＲのように、その可撓性リンカー構造の末端に結合される。完全に伸ばされる場合のその可撓性リンカーの長さは、約８ｎｍであり得る。これは、Ｆａｂフラグメントの長さと同じ範囲内にあり、その結果、免疫グロブリンと同じ距離内に位置する２つの結合部位（例えば、細胞の表面上の受容体）に結合する能力を提供する（図１を参照のこと）。
【００２６】
上記骨格構造内の少なくとも１つのエフェクターは、病原体パターン認識受容体（ＰＲＲ）に対するリガンドとして働き得る任意の物質、特に病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）を含む物質であって、かつ／またはＰＲＲを活性化し、先天性免疫系における、それらの生物学的機能のうちの少なくとも１つを示す物質である。その先天性免疫系は、多くの異なる病原体に存在する少数の高度に保存された構造を認識する防衛機構を表す。そのような病原体関連分子パターンとしては、グラム陰性細菌の細胞壁由来のＬＰＳ、ペプチドグリカン、グラム陽性細菌の細胞壁由来のリポテイコ酸（ｌｉｐｏｔｅｃｈｏｉｃ  ａｃｉｄ）、多くの微生物の糖脂質および糖タンパク質に共通する糖マンノース、フコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、細菌性ＤＮＡ、細菌性タンパク質に見出されるＮ−ホルミルメチオニン、ウイルス由来の２本鎖ＲＮＡ、および真菌細胞壁由来のグルカンが挙げられる。
【００２７】
本発明の標的化されたＰＲＲとしては、特にマンノース受容体（ＭＲ）、ホルミルペプチド受容体（ＦＰＲ）、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＣＤ１４、およびヌクレオチド結合オリゴマー化ドメインタンパク質（ＮＯＤ）が挙げられる。これらの受容体へのリガンドの結合はまた、先天性免疫および適応免疫を開始する上で欠くことのできないサイトカインのような、細胞内制御分子（免疫調節シグナル）の合成および分泌を促進する。本発明のエフェクターの例は、ペプチド、ホルミル化ペプチド、特にＮ−ホルミルメチオニンペプチド、ペプチドグリカン、アシル化リポペプチド（例えば、ジアシル化マイコプラズマリポペプチドまたはトリアシル化細菌リポペプチドおよびトリアシル化リポペプチド（ｔｒｙａｃｙｌ  ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ）（Ｐａｍ３ＣＳＳＮＡ））、ジアミノピメリン酸含有デスムラミルペプチド（γ−Ｄ−グルタミル−メソ−ＤＡＰ；ｉＥ−ＤＡＰ）、およびムラミルジペプチド（ＭＤＰ）、ＣｐＧ含有ヌクレオチド、ｄｓＲＮＡ、マンノース、フコース、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩＩＩ（ＬＮＦＰＩＩＩ）を含むオリゴ−またはポリカーボハイドレート、イミダゾキノリン、ホスホコリンである。
【００２８】
本発明の１つの実施形態において、少なくとも１つのエフェクターは、ホルミルペプチド受容体（ＦＰＲ）を活性化する。ＦＰＲの活性化は、数段階の好中球の応答および活性化につながる。その段階としては、化学誘引、免疫シグナリング分子（例えば、インターロイキン、サイトカインなど）の産生および放出への刺激、ならびに外来性の物質または病原体の破壊を媒介することが可能な化学物質（例えば、過酸化水素水および他の反応性酸素ラジカル種）および酵素物質（例えば、エラスターゼおよび他の消化酵素）の両方の産生および放出を含む細胞プロセスである脱顆粒が挙げられる。ヒトにおいて、３つの関係するＦＰＲファミリーメンバーが同定されている：同名のホルミルペプチド受容体（ＦＰＲ）、ならびに２つの他の受容体、ＦＰＲＬ１およびＦＰＲＬ２である。ＦＰＲＬ１およびＦＰＲＬ２は、配列相同性によりＦＰＲに関係するが、機能的に異なるようである。ホルミルペプチド受容体（ＦＰＲ）によって媒介される細胞応答としては、細胞極性化（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）、および遊出、呼吸バーストオキシダーゼを介するスーパーオキシドＯ２ラジカルの生成、脱顆粒、および多様な種々の分解酵素の放出、および食作用が挙げられる。本発明によると、そのエフェクターは、ＦＰＲと相互作用し、ＦＰＲとともに上で言及した細胞応答のうち少なくとも１つを誘導する。
【００２９】
この実施形態の好ましい局面において、そのエフェクターは、Ｎ−ホルミルメチオニン残基を含む。より好ましくは、そのエフェクターは、以下のＮ末端アミノ酸配列のうちの１つを含む：Ｎ−ホルミル−メチオニン−ロイシン（ｆＭＬ）；Ｎ−ホルミル−メチオニン−ロイシン−フェニルアラニン（ｆＭＬＦ）；Ｎ−ホルミル−メチオニン−ロイシン−プロリン（ｆＭＬＰ）。特に好ましいエフェクターは、ペプチドの、ホルミル−メチオニルロイシン（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ；ｆＭＬ）、ホルミル−メチオニルロイシルフェニルアラニン（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ；ｆＭＬＦ）、およびホルミル−メチオニルロイシルプロリン（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ；ｆＭＬＰ）。ホルミルメチオニルペプチドは、多くの白血球機能を刺激することが可能な炎症促進性ペプチドである。これらは、好中球の走化性、リソソームの酵素の放出、酸素のフリーラジカル産生、Ｃａ＋＋の流れ、好中球によるロイコトリエンの放出、および平滑筋収縮を刺激する。好中球のホルミルメチオニン刺激は、接着受容体の発現における、すばやい変更を誘導する。さらに、ホルミルメチオニルペプチドは、スーパーオキシドの産生および細胞内のＣａ＋＋レベルの増加を誘導することが示されている。ホルミルメチオニルペプチドは、多くの細胞において走化性を誘導することが示されている。その細胞としては、肺胞マクロファージ、好中球、樹状細胞（ＤＣ）および単球が挙げられる。実際、ホルミルメチオニルペプチドの走化性活性または化学誘導物質活性は、ｆＭＬＦが走化性アッセイにおけるポジティブコントロールとしてしばしば用いられるほど十分よく確立されている。ホルミル化ペプチドアンタゴニストのホルミルペプチド受容体（ＦＰＲ）への結合を介した細胞応答としては、細胞極性化、および遊出、呼吸バーストオキシダーゼを介するスーパーオキシドＯ２ラジカルの生成、脱顆粒、および多様な種々の分解酵素の放出、および食作用が挙げられる。
【００３０】
本発明の化合物の骨格構造内の可撓性リンカーは、好ましくは、その化合物が異なる細胞表面タンパク質と相互作用できるように選択される。さらに、その骨格構造の化学的性質は、好ましくは、ヒトの身体において、免疫原性を有さないか、または非常に低い免疫原性しか有さないように選択される。さらに、その骨格構造の大きさは、好ましくは、そのリンカーの長さによって調整される。好ましくは、本発明の化合物の大きさは、その化合物の組織浸透を容易にするための範囲、および／または、その治療上の効力に対してヒトの身体からのその化合物のクリアランスを調整するための範囲において選択される。
【００３１】
そのようなリンカーの例としては、エチレングリコール（ＰＥＧ）のオリゴマーおよびポリマー、ペプチド、デンドリマー（例えば、ポリリジン）、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ｄｅｓｏｘｙｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）（ＤＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）から構成されるオリゴヌクレオチド、多糖類（例えば、ヒドロキシエチルセルロース（ｈｙｄｒｏｙｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）またはヒドロキシエチルデンプン）、デキストラン、アミノデキストラン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリウレタンが挙げられる。
【００３２】
本発明の好ましい実施形態において、骨格構造内の１つまたはそれより多くの可撓性リンカーは、エチレングリコールのオリゴマーおよびポリマーから構成される。ポリエチレングリコールは、ヒトの身体において、免疫原性を有さないか、または非常に低い免疫原性しか有さないことが知られている。その骨格構造の大きさは、ポリエチレングリコールのリンカーを合成するために使用されるエチレン単位の数を選択することにより調整される。好ましくは、その骨格構造内のエチレングリコール単位の数は、１個と２５０個との間、より好ましくは１個と１００個との間の範囲にある。この実施形態の特に好ましい局面において、エチレングリコール単位の数は、２０個と８０個との間の範囲にある。
【００３３】
本発明の別の好ましい実施形態において、骨格構造内の１つまたはそれより多くの可撓性リンカーは、ペプチド配列、すなわちアミノ酸のオリゴマーから構成される。そのようなオリゴマーは、ホモオリゴマー（例えば、ポリリジン、ポリグリシンなど）であってもよいし、または標準および非標準アミノ酸を含む異なるアミノ酸から構成されてもよい。好ましくは、可撓性リンカー単位を形成する骨格構造内のアミノ酸残基の数は、１個と１００個との間、より好ましくは、１個と５０個との間の範囲にある。特に好ましい実施形態において、アミノ酸残基の数は、１０個と２５個との間の範囲にある。さらなる特に好ましい実施形態において、そのペプチドオリゴマーは、配列（ＧＧＧＧＳ）２−４を有する。すなわち、配列ＧＧＧＧＳが、２回〜４回繰り返される。そのようなリンカーは、代表的に、水溶液中において可撓性構造を形成する。別の特に好ましい実施形態において、そのペプチドオリゴマーは、配列（ＥＡＡＡＫ）２−５を有する。すなわち、配列ＥＡＡＡＫが、２回〜５回繰り返される。そのようなリンカーは、代表的に、水溶液中においてαへリックス構造を形成する。
【００３４】
さらに、本発明の化合物の骨格構造は、バインダー部分をその骨格構造へと共有結合するために用いられ得るカップリング部位を含む。その骨格構造への、バインダー部分の部位特異的共有結合的な連結を可能にする任意の化学残基が、カップリング部位として使用され得る。そのような化学残基の例としては、カルボン酸基、活性化されたカルボキシル基（例えば、活性エステル）、アミノ基、アルデヒド、イソシアネート、チオール基、マレイミド、スクシンイミジルエステルが挙げられる。
【００３５】
本発明の好ましい実施形態において、そのカップリング部位はアミノ基であり、１つまたはそれより多くのバインダー部分は、活性化されたカルボキシル基を介して骨格構造へと共有結合的にカップリングされる。特に好ましい実施形態において、そのカップリング部位はアミノ基であり、１つまたはそれより多くのバインダー部分は、Ｃ末端のαカルボキシル基を用いて、カップリング部位のアミノ基に対して共有結合的にカップリングされるペプチドであり、それによりフリーのＮ末端を伴う１つまたはそれより多くのペプチドバインダーを含む化合物を提供する。
【００３６】
その骨格構造は、好ましくは、１つより多くのエフェクターか、もしくは１つより多くのカップリング部位のいずれか、またはその両方の導入を可能にする分岐点をさらに含む。本発明の好ましい実施形態において、その骨格構造は少なくとも１つの分岐点および少なくとも２つのカップリング部位を含み、可撓性リンカーは、その少なくとも１つの分岐点とその少なくとも２つのカップリング部位との間に含まれる。
【００３７】
分岐点の例としては、三官能性のモノマー（例えば、アミノ酸の、リジン、オルニチンおよびシトルリン（１つのカルボキシル基および２つのアミノ基）、アスパラギン酸およびグルタミン酸（２つのカルボキシル基および１つのアミノ基）、システイン（１つのカルボキシル基、１つのアミノ基および１つのチオール基）、またはトリカルボン酸（例えば、クエン酸、イソクエン酸、またはアコニット酸）（３つのカルボキシル基））、ならびに四官能性のモノマー（例えば、ランチオニン（２つのカルボキシル基および２つのアミノ基））が挙げられる。
【００３８】
本発明の特に好ましい実施形態において、その骨格構造は、分岐点として、さらなるアミノ側基を有する２つまたはそれより多くのアミノ酸（例えば、リジン、オルニチンまたはシトルリン）を含む。ここで、これらのアミノ酸は、ペプチド結合により互いに連結され、かつ結果として生じる３つまたはそれより多くのアミノ基（１つのαアミノ基および２つまたはそれより多くの他のアミノ基）のうちの１つは、エフェクターに対するカップリング部位として働き、残りの２つまたはそれより多くのアミノ基は、バインダーに対するカップリング部位として働く。この実施形態のさらなる特に好ましい局面において、結果として生じる１つのαアミノ基は、エフェクターに対するカップリング部位として働き、その２つまたはそれより多くのアミノ基は、バインダーに対するカップリング部位として働く。好ましくは、１つまたはそれより多くの、エフェクター、分岐点および／またはバインダーの間で可撓性リンカーが合成される。
【００３９】
従って、本発明の特に好ましい実施形態において、その骨格構造は、以下の組成物のうちの１つを有する：
【００４０】
【化１】
2012515144.tif 000002
ここで、「エフェクター」はエフェクター部分であり、「ＣＯ−ＮＨ」または「ＮＨ−ＣＯ」はペプチド結合を表し、「ＬＭ」はリンカーモノマー（例えば、エチレングリコール、またはアミノ酸）であり、「ＢＰ」は分岐点（例えば、リジン残基）であり、「ＮＨ２」はアミノ基であり、「ＯＨ」はヒドロキシル基であり、ならびに「ｎ」および「ｍ」は整数である。アステリスク「＊」は、バインダーが骨格構造へと共有結合的にカップリングするカップリング部位の印である。
【００４１】
この実施形態の好ましい局面において、ｎは１と１００との間、より好ましくは１０と５０との間、そして、さらにより好ましくは１５と３５との間である。特に好ましい実施形態において、ｎは２７である。好ましくは、ｍは１０より低いか、または１０と等しく、より好ましくは５より低いか、または５と等しく、そして、さらにより好ましくは、ｍは２または３である。特に好ましい実施形態において、ｍは２である。
【００４２】
その骨格構造は、化学合成により完全に製造され得る。本発明の１つの実施形態において、その骨格構造は、固相合成により完全に合成される。ペプチドの固相合成のための標準プロトコルは、本発明の化合物の骨格構造を合成するために使用され得る。本発明の好ましい実施形態において、その骨格構造は、２つのアミノ酸基（分岐点、例えば、リジン）を有するアミノ酸から開始して合成され、そのアミノ酸はカルボキシル基を用いて固相支持体（例えば、ポリスチレン）へとカップリングされる。それにより、リンカー構造およびエフェクターは、活性化されたカルボキシル基を介してその分子にカップリングされ得る。この実施形態のさらなる好ましい局面において、１つもしくはそれより多くのエフェクターおよび／または１つもしくはそれより多くのリンカー構造は、ペプチドであり、活性化されたカルボキシルエステルを介してそれぞれのアミノ酸残基をその分子へとカップリングすることによって合成される。
【００４３】
バインダーは、カップリング部位を介して合成骨格構造へと共有結合的に連結される。１つの実施形態において、本発明の化合物は固相合成を介して骨格構造を合成後、その骨格構造へとバインダー部分をカップリングすることにより製造される。本発明の別の好ましい実施形態において、１つまたはそれより多くのバインダーはペプチドであり、本発明の化合物は固相合成により完全に合成される。
【００４４】
本発明に従うバインダーの例は、ペプチド（直線状、環状、または分枝状）、ペプチド模倣体、ペプチドリピート（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｐｅａｔ）、オリゴヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）、オリゴヌクレオチド類似体（例えば、ＰＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラなど）または低分子である。
【００４５】
本発明の特定の実施形態において、そのバインダーはペプチドである。好ましくは、そのペプチドの長さは、１アミノ酸残基と７５アミノ酸残基との間、より好ましくは３アミノ酸残基と２５アミノ酸残基との間である。本発明の好ましい実施形態において、そのバインダーは、特定のアミノ酸配列を含むペプチドである。そのような配列は、２０個の標準アミノ酸、非標準アミノ酸、および化学的に改変されたアミノ酸を含み得る。非標準アミノ酸の例としては、カルニチン、シトルリン、ホモアルギニン、ホモシトルリン、ホモシステイン、ホモフェニルアラニン、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、アロイソロイシン、イソセリン、オルニチン、フェニルグリシン、フェニルイソセリン、アロトレオニン、セレノシステイン、ピロリジン（ｐｙｒｒｏｌｙｓｉｎｅ）、ランチオニン、２−アミノイソ酪酸、γ−アミノ酪酸、デヒドロアラニン（２−アミノアクリル酸）、βアラニン（３−アミノプロパン酸）、またはこの立体異性体が挙げられる。そのペプチド配列はＬ−アミノ酸およびＤ−アミノ酸の両方を含み得る。
【００４６】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、１つまたはそれより多くのバインダーは、環状構造である。特に好ましい実施形態において、そのバインダーは、環状ペプチドである。３０アミノ酸残基またはそれより少ないアミノ酸残基のペプチドは、しばしば水溶液中で無構造である。これらのペプチドは、受容体のようなパートナー分子との複合体形成の際のみに規定のコンフォメーションを取る。無構造ペプチド（ｕｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ）は、哺乳動物の身体からのより速いクリアランスに起因して代謝的に不安定であり得る。安定性、バイオアベイラビリティ、および受容体との相互作用についての選択性は、そのようなペプチドの環化により増大され得る。
【００４７】
１つの実施形態において、環状ペプチドは分子内ジスルフィド架橋により生成される。分子内ジスルフィド架橋を有するペプチドは、コンフォメーション的に安定であり、それにより、例えば、受容体に対して、高度に選択的なバインダーであり得ることが示されている。そのようなペプチドの例は、ディフェンシン（脊椎動物および無脊椎動物における病原体制御）である。
【００４８】
別の実施形態において、環状ペプチドは、アミノ末端とカルボシキル末端との間でアミド結合を形成することによってペプチドのＮ末端とＣ末端とを安定して連結することにより生成される（頭−尾環化）。この結合形成により、ホモデティック環状ペプチドになる。従って、使用されるカップリングの化学的結合は、固相ペプチド合成の間に適用される化学的結合と同様に活性化されたエステルに基づく。
【００４９】
本発明のさらなる実施形態において、環状ペプチドは、側鎖−側鎖環化により生成される。これは、適切な官能基間で反応すると、チオエーテル、ラクタム、ラクトンまたは炭素−炭素連結を伴う大環状構造になる。この実施形態の特に好ましい局面において、（例えば、システイン残基の）チオール側鎖は、（例えば、２−アミノアクリル酸残基の）Ｃ−Ｃ二重結合と反応し、チオエーテル結合を形成する。この実施形態の別の特に好ましい局面において、（例えば、２−アミノアクリル酸残基の）２つのＣ−Ｃ二重結合は、反応して、２つのアミノ酸残基間で炭素−炭素二重結合連結を形成する。そのようなホモデティックペプチド大環状分子およびヘテロデティックペプチド大環状分子は、骨格構造におけるカップリング部位への共有結合的な連結のためのハンドルとして、アルデヒド、ケトンおよびアミノオキシ基のようなさらなる官能基を備え得る。
【００５０】
別の好ましい実施形態において、バインダーペプチドおよび／もしくはエフェクターペプチドの安定性は増大され、ならびに／またはそのペプチドは、アミノ末端および／もしくはカルボキシ末端をブロッキングすることによってタンパク分解性分解から保護される。用語ブロッキングは、共有結合的な改変を介してそのペプチドの末端へとブロッキング基を導入することを指す。適切なブロッキング基は、そのペプチドの生物学的活性を妨げない。そのペプチドのアミノ末端のアセチル化は、タンパク分解性分解からそのペプチドを保護する好ましい方法である。好ましいブロッキング部分としては、以下のアシル部分が挙げられる（疎水性が上がる順に）：ホルミル、アセチル、プロパノイル、ヘキサノイル。そのペプチドのカルボキシ末端のアミド化は、タンパク分解性分解からペプチドを保護するさらなる好ましい方法である。
【００５１】
本発明の好ましい実施形態において、１つまたはそれより多くのバインダーを含む化合物が提供され、ここでそのバインダーは以下の腫瘍マーカーのうちの１つに結合する：ヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）；ヒト血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）；ＥｒｂＢ−２受容体（Ｈｅｒ−２）；繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦ受容体）；インテグリン（α３β１インテグリンおよびα４β１インテグリンが挙げられる）；ヒトβ−ガラクトシド結合レクチン  ガレクチン−３（Ｇａｌ−３）；ｃ−Ｍｅｔ（ヒト肝細胞増殖因子ＨＧＦまたは細胞分散因子ＳＦに対する受容体）。
【００５２】
そのようなバインダーは、好ましくは、以下の配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ；ＣＳＤＳＷＨＹＷＣ；ＣＳＤＨＷＨＹＷＣ；ＣＳＤＹＮＨＨＷＣ；ＣＳＤＷＱＨＰＷＣ；ＫＣＣＹＳＬ；ＭＱＬＰＬＡＴ；ＣＤＧＬＧＤＤＣ；ＣＤＧＷＧＰＮＣ；ＣＬＤＷＤＬＩＣ；ＳＷＫＬＰＰＳ；ＣＰＬＤＩＤＦＹＣ；ＡＮＴＰＣＧＰＹＴＨＤＣＰＶＫＲ；ＹＬＦＳＶＨＷＰＰＬＫＡ；または、少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するこれらのフラグメントのうちの１つを含む。好ましくは、そのペプチドバインダーは、フリーのＮ末端を有するバインダーを伴う化合物を提供するために、Ｃ末端を介して骨格構造へと共有結合的に連結される。
【００５３】
本発明のこの実施形態の別の好ましい局面において、そのバインダーは、チオエーテルまたはＣ−Ｃ二重結合を介して形成されるホモデティックペプチド大環状分子またはヘテロデティックペプチド大環状分子において、以下の配列：ＤＳＷＨＹＷ；ＳＤＨＷＨＹＷ；ＳＤＹＮＨＨＷ；ＳＤＷＱＨＰＷ；ＤＧＬＧＤＤ；ＤＧＷＧＰＮ；ＬＤＷＤＬＩ；ＰＬＤＩＤＦＹ；ＧＰＹＴＨＤのうちの１つを含む。
【００５４】
この実施形態の特定の局面において、本発明は、構造タイプ：（バインダー−リンカー１）ｎ−リンカー２−エフェクターの化合物を提供し、ここで、
（ａ）そのバインダーはペプチドであり、以下の配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ；ＣＳＤＳＷＨＹＷＣ；ＣＳＤＨＷＨＹＷＣ；ＣＳＤＹＮＨＨＷＣ；ＣＳＤＷＱＨＰＷＣ；ＫＣＣＹＳＬ；ＭＱＬＰＬＡＴ；ＣＤＧＬＧＤＤＣ；ＣＤＧＷＧＰＮＣ；ＣＬＤＷＤＬＩＣ；ＳＷＫＬＰＰＳ；ＣＰＬＤＩＤＦＹＣ；ＡＮＴＰＣＧＰＹＴＨＤＣＰＶＫＲ；ＹＬＦＳＶＨＷＰＰＬＫＡ；または少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するこれらのフラグメントのうちの１つを含み；
（ｂ）そのエフェクターはペプチドであり、以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含み；
（ｃ）リンカー１およびリンカー２は、ポリペプチド、ポリエチレングリコール構造、もしくはそれらの組み合わせ、または１つの共有結合であり；
（ｄ）ｎは少なくとも２である。
【００５５】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、少なくとも１つのエフェクターへと作動可能に連結する１つまたはそれより多くのバインダーを含む化合物が提供され、そのバインダーは、ヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに結合し、その少なくとも１つのエフェクターは、病原体パターン認識受容体（ＰＲＲ）に対するリガンドとして働き得る任意の物質、特に病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）を含む物質であって、かつ／またはＰＲＲを活性化し得る物質である。そのような化合物は、好ましくは、固形腫瘍の処置、特に結腸がん、乳がん、前立腺がん、頭部および頸部のがん、ＮＳＣＬＣ、卵巣がん、膀胱がん、ならびに／または食道がん（ｅｓｏｐｈｅａｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ）の処置において使用され得る。
【００５６】
特に本発明は、以下
（ａ）それぞれが以下の配列：ＹＨＷＹ；ＨＷＹＧ；ＷＹＧＹ；ＹＧＹＴ；ＧＹＴＰ；ＹＴＰＱ；ＴＰＱＮ；ＰＱＮＶ；ＱＮＶＩのうちの１つを含む、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチド；
（ｂ）以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含む、エフェクターとしての少なくとも１つのペプチド；および
（ｃ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、もしくはそれらの組み合わせから構成されるか、または１つの共有結合から構成される、リンカー分子、
を含む化合物であって、
ここでそのリンカー分子は、上記２つまたはそれより多くのバインダーを上記少なくとも１つのエフェクターへと共有結合的に連結する化合物を提供する。
【００５７】
好ましい実施形態において、本発明は、以下
（ａ）配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ）または、少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントを含む、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチド；
（ｂ）以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含む、エフェクターとしての少なくとも１つのペプチド；
（ｃ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、もしくはそれらの組み合わせから構成されるか、または１つの共有結合から構成される、オリゴマーリンカー
を含む化合物を提供する。
【００５８】
あるいは、そのバインダーペプチド配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩは、（切断された、または１アミノ酸残基が置き換えられた）そのバリエーションによって、およびＥＧＦＲに対する結合能力を提供する他のペプチド配列によって置き換えられ得る。
【００５９】
そのバインダーペプチド配列は、二者択一的にそのＮ末端またはそのＣ末端を介して連結され得る。
【００６０】
さらに本発明は、構造タイプ：（バインダー−リンカー１）ｎ−リンカー２−エフェクターの化合物を提供し、ここで、
（ａ）そのバインダーはペプチドであり、配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ）または少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントを含み；
（ｂ）そのエフェクターはペプチドであり、以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含み；
（ｃ）リンカー１およびリンカー２は、ポリペプチド、ポリエチレングリコール構造、もしくはそれらの組み合わせ、または１つの共有結合であり；
（ｄ）ｎは、少なくとも２であり、そのエフェクターに結合されるバインダー分子の数を示す。
【００６１】
好ましくは、そのような化合物は、３アミノ酸残基と７５アミノ酸残基との間、より好ましくは、４アミノ酸残基と２５アミノ酸残基との間の長さを有するペプチドであるバインダーであって、配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ）または少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメント、好ましくは、ＹＧＹＴＰＱ；ＷＹＧＹＴＰＱＮ；もしくはＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶ、または配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩもしくはそのフラグメントと実質的に相同であるペプチドを含むバインダーを含む。従って、そのような化合物におけるバインダーは、少なくとも以下の配列：ＹＨＷＹ；ＨＷＹＧ；ＷＹＧＹ；ＹＧＹＴ；ＧＹＴＰ；ＹＴＰＱ；ＴＰＱＮ；ＰＱＮＶ；ＱＮＶＩまたはこれらの配列のうちの１つと実質的に相同である配列のうちの１つを含むペプチドである。
【００６２】
この実施形態の特定の局面において、そのペプチドは、ヒトＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）および／またはその改変体、誘導体もしくは相同体に対する結合親和性を有する。例えば、オリゴペプチドは、全長ＥＧＦＲもしくは切断された受容体ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体改変体ＩＩＩ）またはその両方に対する結合親和性を有する。ＥＧＦＲは、結腸がん、頭部および頸部のがん、卵巣がん、膵がん、非小細胞肺がん、乳がん、およびグリア芽細胞腫においてのような多くの病原性細胞集団において過剰発現される。
【００６３】
本発明の好ましい実施形態において、式：（バインダー−リンカー）ｎ−エフェクターを有する化合物が提供され、ここで
（ａ）そのバインダーは、配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ）または少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントを含むペプチドであり；
（ｂ）そのエフェクターは、そのＮ末端における以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つおよびｎリジン残基を含むペプチドであり；
（ｃ）そのｎリンカー分子は、ポリエチレングリコールオリゴマーであり；
（ｄ）上記エフェクターは、ｎリジン残基のεアミノ基を介して、上記ｎリンカー分子の末端のカルボキシ基へのアミド結合によって共有結合的に連結され；
（ｅ）上記バインダー分子は、カルボキシ末端を介して、ポリエチレングリコールリンカーの末端のカルボキシ基へのアミド結合によって共有結合的に連結され；
（ｆ）ｎは、２と１０との間の整数である。
【００６４】
本発明の別の好ましい実施形態において、式：（バインダー−リンカー）２−エフェクターを有する化合物が提供され、ここで
（ａ）そのバインダーは、配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ）を有するペプチドであり；
（ｂ）そのエフェクターは、そのＮ末端における以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つおよび２つのリジン残基を含むペプチドであり；
（ｃ）その２つのリンカー分子は、ポリエチレングリコールオリゴマーであり；
（ｄ）上記エフェクターは、上記２つのリジン残基のεアミノ基を介して、上記２つのリンカー分子の末端のカルボキシ基へのアミド結合によって共有結合的に連結され；
（ｅ）上記バインダー分子は、カルボキシ末端を介して、ポリエチレングリコールリンカー分子の末端のカルボキシ基へのアミド結合によって共有結合的に連結される。
【００６５】
本発明の別の好ましい実施形態において、式：（バインダー−リンカー）２−エフェクターを有する化合物が提供され、ここで
（ａ）そのバインダーは、配列：ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ）を有するペプチドであり；
（ｂ）そのエフェクターは、配列：ｆＭＬＰＫＫ（Ｎ−ｆｏｒｍｙｌ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ）を含むペプチドであり；
（ｃ）その２つのリンカー分子は、２個と１００個との間のエチレングリコール単位の長さを有するポリエチレングリコールオリゴマーであり；
（ｄ）上記エフェクターは、２つのリジン残基のεアミノ基を介して、上記２つのリンカー分子の末端のカルボキシ基へのアミド結合によって共有結合的に連結され；
（ｅ）上記バインダー分子は、カルボキシ末端を介して、ポリエチレングリコールリンカー分子の末端のカルボキシ基へのアミド結合によって共有結合的に連結される。
【００６６】
本発明の別の実施形態において、図２（図２：本発明の好ましい実施形態に従う構造１）に示されるような構造１を有する化合物が提供される。
【００６７】
本発明の別の実施形態において、図３（図３：本発明の好ましい実施形態に従う構造２）に示されるような構造２を有する化合物が提供される。
【００６８】
本発明の別の実施形態において、図４（図４Ａ〜Ｅ）に示される構造のうちの１つを有する化合物が提供される。
【００６９】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、ヒト血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに対するバインダーを含む化合物が提供される。そのような化合物は、ＶＥＧＦＲまたは関連するマーカーを有する、多様な、ヒトのがんの処置に使用され得る。
【００７０】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、そのバインダーは、ヒト血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに結合し、以下の配列ＣＳＤＳＷＨＹＷＣ；ＣＳＤＨＷＨＹＷＣ；ＣＳＤＹＮＨＨＷＣ；ＣＳＤＷＱＨＰＷＣ；または少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するこれらのフラグメントのうちの１つを含む。
【００７１】
好ましい実施形態において、本発明は、以下
（ｄ）配列：ＣＳＤＳＷＨＹＷＣ；ＣＳＤＨＷＨＹＷＣ；ＣＳＤＹＮＨＨＷＣ；ＣＳＤＷＱＨＰＷＣ；または少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するこれらのフラグメントを含む、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチド；
（ｅ）以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含む、エフェクターとしての少なくとも１つのペプチド；
（ｆ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、もしくはそれらの組み合わせから構成されるか、または１つの共有結合から構成される、オリゴマーリンカー
を含む化合物を提供する。
【００７２】
さらなる好ましい実施形態において、そのバインダーは、配列：ＳＤＳＷＨＹＷ  ＳＤＨＷＨＹＷ；ＳＤＹＮＨＨＷ；またはＳＤＷＱＨＰＷを含み、側鎖−側鎖環化は、適切な官能基間で反応の際に、チオエーテル、ラクタム、ラクトンまたは炭素−炭素連結を介して実施される。特に好ましい連結は、チオエーテル結合の形成および炭素−炭素二重結合の形成を含む。そのようなペプチド大環状分子は、リンカー分子への共有結合的な連結のためのハンドルとして、アルデヒド、ケトンおよびアミノオキシ基のようなさらなる官能基を備え得る。
【００７３】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、ヒトＥｒｂＢ−２受容体（Ｈｅｒ−２）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに対するバインダーを含む化合物が提供される。そのような化合物は、好ましくは、乳がん、膵がん、卵巣がん、ＮＳＣＬＣ、および／またはリンパ腫の処置において使用され得る。
【００７４】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、そのバインダーは、ヒトＥｒｂＢ−２受容体（Ｈｅｒ−２）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに結合し、以下の配列：ＫＣＣＹＳＬまたは少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントのうちの１つを含む。
【００７５】
好ましい実施形態において、本発明は、以下
（ｇ）配列：ＫＣＣＹＳＬまたは少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントを含む、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチド；
（ｈ）以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含む、エフェクターとしての少なくとも１つのペプチド；
（ｉ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、もしくはそれらの組み合わせから構成されるか、または１つの共有結合から構成される、オリゴマーリンカー
を含む化合物を提供する。
【００７６】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、ヒト繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦ受容体）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに対するバインダーを含む化合物が提供される。そのような化合物は、好ましくは、卵巣がんの処置において使用され得る。
【００７７】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、そのバインダーは、ヒト繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦ受容体）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに結合し、以下の配列：ＭＱＬＰＬＡＴまたは少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントのうちの１つを含む。
【００７８】
好ましい実施形態において、本発明は、
（ｊ）配列：ＭＱＬＰＬＡＴまたは少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントを含む、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチド；
（ｋ）以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含む、エフェクターとしての少なくとも１つのペプチド；
（ｌ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、もしくはそれらの組み合わせから構成されるか、または１つの共有結合から構成される、オリゴマーリンカー
を含む化合物を提供する。
【００７９】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、ヒトインテグリン（α３β１インテグリンおよびα４β１インテグリンが挙げられる）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに対するバインダーを含む化合物が提供される。そのような化合物は、好ましくは、胃がんの複数の腹膜腫瘍の処置において使用され得る。
【００８０】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、そのバインダーは、ヒトインテグリン（α３β１インテグリンおよびα４β１インテグリンが挙げられる）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに結合し、以下の配列：ＣＤＧＬＧＤＤＣ；ＣＤＧＷＧＰＮＣ；ＣＬＤＷＤＬＩＣ；ＳＷＫＬＰＰＳ；ＣＰＬＤＩＤＦＹＣまたは少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそれらのフラグメントのうちの１つを含む。
【００８１】
好ましい実施形態において、本発明は、以下
（ｍ）配列：ＣＤＧＬＧＤＤＣ；ＣＤＧＷＧＰＮＣ；ＣＬＤＷＤＬＩＣ；ＳＷＫＬＰＰＳ；ＣＰＬＤＩＤＦＹＣ；または少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそれらのフラグメントを含む、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチド；
（ｎ）以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含む、エフェクターとしての少なくとも１つのペプチド；
（ｏ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、もしくはそれらの組み合わせから構成されるか、または１つの共有結合から構成される、オリゴマーリンカー
を含む化合物を提供する。
【００８２】
さらなる好ましい実施形態において、そのバインダーは、配列：ＤＧＬＧＤＤ、ＤＧＷＧＰＮ；ＬＤＷＤＬＩ；ＳＷＫＬＰＰＳ；またはＰＬＤＩＤＦＹを含み、側鎖−側鎖環化は、適切な官能基間で反応の際に、チオエーテル、ラクタム、ラクトンまたは炭素−炭素連結を介して実施される。特に好ましい連結は、チオエーテル結合の形成および炭素−炭素二重結合の形成を含む。そのようなペプチド大環状分子は、リンカー分子への共有結合的な連結のためのハンドルとして、アルデヒド、ケトンおよびアミノオキシ基のようなさらなる官能基を備え得る。
【００８３】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、ヒトβ−ガラクトシド結合レクチン  ガレクチン−３（Ｇａｌ−３）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに対するバインダーを含む化合物が提供される。そのような化合物は、好ましくは、乳がんの処置において使用され得る。
【００８４】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、そのバインダーは、ヒトインテグリン（α３β１インテグリンおよびα４β１インテグリンが挙げられる）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに結合し、以下の配列：ＡＮＴＰＣＧＰＹＴＨＤＣＰＶＫＲまたは少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントのうちの１つを含む。
【００８５】
好ましい実施形態において、本発明は、以下
（ｐ）配列：ＡＮＴＰＣＧＰＹＴＨＤＣＰＶＫＲ；または少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントを含む、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチド；
（ｑ）以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含む、エフェクターとしての少なくとも１つのペプチド；
（ｒ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、もしくはそれらの組み合わせから構成されるか、または１つの共有結合から構成される、オリゴマーリンカー
を含む化合物を提供する。
【００８６】
さらなる好ましい実施形態において、そのバインダーは、配列：ＧＰＹＴＨＤを含み、側鎖−側鎖環化は、適切な官能基間で反応の際に、チオエーテル、ラクタム、ラクトンまたは炭素−炭素連結を介して実施される。特に好ましい連結は、チオエーテル結合の形成および炭素−炭素二重結合の形成を含む。そのようなペプチド大環状分子は、リンカー分子への共有結合的な連結のためのハンドルとして、アルデヒド、ケトンおよびアミノオキシ基のようなさらなる官能基を備え得る。
【００８７】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、ｃ−Ｍｅｔ（ヒト肝細胞増殖因子ＨＧＦまたは細胞分散因子ＳＦに対する受容体）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに対するバインダーを含む化合物が提供される。そのような化合物は、好ましくは、多様なヒトの腫瘍の処置において使用され得る。
【００８８】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、そのバインダーは、ｃ−Ｍｅｔ（ヒト肝細胞増殖因子ＨＧＦまたは細胞分散因子ＳＦに対する受容体）および／または腫瘍細胞上の関連するマーカーに結合し、以下の配列：ＹＬＦＳＶＨＷＰＰＬＫＡまたは少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントのうちの１つを含む。
【００８９】
好ましい実施形態において、本発明は、以下
（ｓ）配列：ＹＬＦＳＶＨＷＰＰＬＫＡ；または少なくとも４アミノ酸残基の長さを有するそのフラグメントを含む、バインダーとしての２つまたはそれより多くのペプチド；
（ｔ）以下の配列：ｆＭＬ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ）；ｆＭＬＰ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）；ｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）のうちの１つを含む、エフェクターとしての少なくとも１つのペプチド；
（ｕ）ポリペプチドから構成されるか、ポリエチレングリコールから構成されるか、もしくはそれらの組み合わせから構成されるか、または１つの共有結合から構成される、オリゴマーリンカー
を含む化合物を提供する。
【実施例】
【００９０】
（実施例１：ＥＧＦＲおよびＥＧＦＲ発現細胞への構造１の結合試験）
腫瘍マーカーＥｒｂ−Ｂ１／ＥＧＦＲへの特異的な結合活性を示すペプチドＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩをバインダーとして、およびマクロファージ活性化ペプチドであるホルミル−ＭＬＰをエフェクターとして選び、構造１を合成した。その構造を、当該分野において公知の標準方法により化学的に合成し、イオン交換クロマトグラフィーにより精製した。質量分析法によって化学的アイデンティティ（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を確認した。免疫グロブリンおよび他の公知の抗腫瘍化合物と違って、構造１はｐＨ７で高い可溶性（１０ｍｇ／ｍｌまで）を示した。サイズ排除クロマトグラフィーおよび動的光散乱分析によって、オリゴマーも大きな凝集体も示されず、約６ｋＤａの分子について予想されるよりわずかに大きい流体力学的半径が示された。
【００９１】
ヒトＥＧＦＲ／Ｅｒｂ−Ｂ１への構造１の結合親和性を、蛍光標識された改変体ＥＧＦＲ調製物および蛍光標識された市販されているＥＧＦＲ調製物を用い、蛍光分光法を用いて試験した。これらの実験において、複合体を形成するために、蛍光標識されたＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ  １２マー（図５ａ）をＥＧＦＲとともにインキュベートした。前もって形成された複合体へ構造１を添加すると、ＥＧＦＲとの複合体から蛍光ペプチドを取り外すこと（ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）に起因した蛍光強度の減少が観察された（図５ｂ）。構造１とＥＧＦＲとの相互作用について低いｎＭ範囲でのＫＤ値が見積られた。この知見によって、多価であることによりそれぞれの受容体へのバインダーの親和性が増すという考えが確かめられた。この効果は、細胞表面上の受容体を標的にする場合に適切であると予想される。
【００９２】
結果を図５に示す。図５ａは、取り外し（ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）実験において蛍光トレーサーとして使用された１２マーＥＧＦＲ結合ペプチドのＮＢＤ標識された改変体についてのＨＰＬＣおよびＭＳデータを示す。１７０３．４Ｄａの観察されたモル質量は、計算された質量によく合致している。図５ｂは、ＮＢＤ標識されたトレーサーペプチドのＥＧＦＲへの結合を示す。５０ｎＭのトレーサー（灰色の線）を５０ｎＭのＥＧＦＲと混合した。混合により、蛍光強度の増加という結果となった（黒色の線）。図５ｃは、標識されていないペプチドの添加後に、ＥＧＦＲ複合体から蛍光トレーサーペプチドが取り外されることを示す。ＥＧＦＲトレーサー複合体を、ｐＨ７．５のＰＢＳ緩衝液中で、５０ｎＭで前もって形成した（黒色の線、４６０ｎｍで励起）。１０倍過剰の標識されていないペプチドを添加し、観察される蛍光強度の減少（灰色の線）は、トレーサー分子の放出を反映する。図５ｄは、漸増する濃度の構造１による取り外しを示す。ＥＧＦＲおよびＮＢＤ−１２マーペプチド複合体の１μＭ溶液のタイターを、蛍光トレーサーの取り外しにつながる漸増する濃度の構造１で決定した。
【００９３】
（実施例２：走化性アッセイにおけるマクロファージの活性化）
走化性アッセイ（マクロファージを移動させること（ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）についてのトランスウェルアッセイ）において、構造１および構造２ならびにＮ−ホルミルペプチド配列を含むこれらの前駆体についてのマクロファージ活性化プロフィールが示された。
【００９４】
構造２での走化性アッセイの結果を図６に示す。Ｎ−ホルミルペプチド結合体の濃度依存的顆粒球活性化をそのペプチドのみの活性化と比較した。各２００，０００個の顆粒球を用いて各シリーズの実験を３回繰り返した。構造２の化合物は、（刺激に応答して遊走した細胞を数えることにより測定し）同じ濃度の参照Ｎ−ホルミルペプチドと同様の（わずかに高い）走化性挙動を誘導した。
【００９５】
別個の実験において、どちらの選択肢でも顆粒球の走化性が刺激され得、ｆＭＬＦの走化性応答がｆＭＬＰと比較してわずかに高いこともまた、示されている。従って、ホルミルペプチドアミノ酸組成のバリエーション（例えば、構造１および構造２におけるような３位での異なるアミノ酸残基（フェニルアラニン、プロリン））は、免疫応答を調整するさらなる手段を提供する。
【図２】
2012515144.tif 000003
【図３】
2012515144.tif 000004
【図４Ａ】
2012515144.tif 000005
【図４Ｂ】
2012515144.tif 000006
【図４Ｃ】
2012515144.tif 000007
【図４Ｄ】
2012515144.tif 000008
【図４Ｅ】
2012515144.tif 000009
【図６】
2012515144.tif 000010
【図１】
2012515144.tif 000011
【図５】
2012515144.tif 000012
【配列表】
2012515144000001.app
【国際調査報告】
2012515144.tif 000013
2012515144.tif 000014
2012515144.tif 000015