(57)【要約】  本発明は、新規な式Ｉの化合物、その調製方法、そのような化合物を含有する医薬製剤および治療におけるその使用に関する。このような化合物は特に、Ｗｎｔ経路におけるシグナル伝達の過剰活性化によって影響を受ける状態または疾患を治療および／または予防する際に使用される。例えば、これらは、腫瘍細胞、例えば結腸癌腫などの癌腫の増殖を予防および／または遅延させる際に使用することができる。2012528842.tif 000129【選択図】なし
2012528842.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉの化合物またはその立体異性体、薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ：
【化１】
2012528842.tif 000116
［式中、
破線は、場合による結合を示し；
Ｘ１およびＸ２は独立に、Ｎ、ＮＲｅ、Ｏ、Ｓ、ＣＲｆおよびＣＲｇＲｈから選択され；
ここで、Ｒｅ、Ｒｆ、ＲｇおよびＲｈ基はそれぞれ独立に、水素ならびにハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２およびＯＲ”（ここで、Ｒ”は水素またはＣ１〜４アルキルである）から選択される１個または複数（例えば１、２または３個）の置換基によって置換されていてもよいＣ１〜６アルキルから選択され；
Ｚ１は、不飽和の５員から１０員の単環式または二環式複素環を表し、この環は、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１個または複数の原子を含有する５員または６員の環と縮合していてもよく；
Ｚ２は、
（ａ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｂ）Ｃ２〜６アルケニル、
（ｃ）Ｃ２〜６アルキニル、
（ｄ）１個または複数（例えば１、２、３または４個の）基Ｒａによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基
（ここで、Ｒａはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）ＯＲまたは−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）；または
（ｅ）窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を、好ましくは窒素および酸素から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する５員または６員の飽和複素環
を表し；
Ｒ１は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）−ＯＣ１〜６アルキル、
（ｄ）ヒドロキシ、
（ｅ）−ＮＲ’２（ここで、Ｒ’はそれぞれ独立に、水素、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６ハロアルキル基である）、
（ｆ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｂによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基；
（ここで、Ｒｂはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、１個または複数の−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ−基によって（好ましくは、１個または２個の−Ｏ−原子によって）中断されていてもよいＣ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）ＯＲまたは−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得るか；または
隣接する環原子上に存在する２個のＲｂ基は、介在する環原子と一緒に、５員または６員の炭素環または複素環を形成している）；または
（ｇ）−ＣＯＮＲ””２（ここで、Ｒ””はそれぞれ独立に、ＨまたはＣ１〜６アルキル、例えばＣ１〜３アルキルである）
を表し、
Ｒ２は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）−ＯＣ１〜６アルキル、
（ｄ）Ｃ２〜６アルケニル、
（ｅ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｃによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基
（ここで、Ｒｃはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒまたは−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）；または
（ｆ）窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは、窒素および酸素から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する５員または６員の飽和複素環または
（ｇ）Ｃ３〜６シクロアルキレン基、好ましくはＣ５−またはＣ６−シクロアルキレン基
を表し；
Ｌ１は、１個または複数（例えば１または２個）の基Ｒｄによって置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン基を表し（ここで、１個または複数（好ましくは１から３個）のメチレン基はそれぞれ、基Ｙ１によって追加的に置き換えられていてよく）；
Ｙ１はそれぞれ独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ”’−、−ＮＲ”’−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ”’−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ２）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＣＲ”’＝Ｎ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、Ｃ３〜６シクロアルキレン基および３員から７員の飽和複素環（ここで、Ｒ”’はそれぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである）から選択され；
Ｒｄはそれぞれ同じか、または異なってよく、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）およびハロゲン（即ちＦ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩ、好ましくはＦ）から選択されることができ；
Ｌ２およびＬ３はそれぞれ独立に、結合または置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン基を表し；
ｍは０または１であり；
ｎは０または１である］。
【請求項２】
一般式ＩＩを有する請求項１に記載の化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ：
【化２】
2012528842.tif 000117
［式中、
破線は、場合による結合を示し；
Ｘ１およびＸ２は独立に、Ｎ、ＮＲｅ、Ｏ、Ｓ、ＣＲｆおよびＣＲｇＲｈから選択され；
ここで、Ｒｅ、Ｒｆ、ＲｇおよびＲｈ基はそれぞれ独立に、水素ならびにハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２およびＯＲ”（ここで、Ｒ”は水素またはＣ１〜４アルキルである）から選択される１個または複数（例えば１、２または３個）の置換基によって置換されていてもよいＣ１〜６アルキルから選択され；
Ｚ１は、不飽和の５員から７員の複素環を表し、この環は、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１個または複数の原子を含有する５員または６員の環と場合によって縮合していてもよく；
Ｚ２は、
（ａ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｂ）Ｃ２〜６アルケニル、
（ｃ）Ｃ２〜６アルキニル、または
（ｄ）１個または複数（例えば１、２、３または４個の）基Ｒａによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基
（ここで、Ｒａはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒまたは−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）
を表し、
Ｒ１は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）−ＯＣ１〜６アルキル、
（ｄ）ヒドロキシ、
（ｅ）−ＮＲ’２（ここで、Ｒ’はそれぞれ独立に、水素、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６ハロアルキル基である）、または
（ｆ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｂによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基
（ここで、Ｒｂはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、または−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）
を表し、
Ｒ２は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）−ＯＣ１〜６アルキル、
（ｄ）Ｃ２〜６アルケニル、または
（ｅ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｃによって置換されていてもよいアリール基
（ここで、Ｒｃはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒまたは−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）
を表し；
Ｌ１は、１個または複数（例えば１または２個）の基Ｒｄによって置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン基を表し（ここで、１または２個のメチレン基（好ましくは１個のメチレン基）はそれぞれ、基Ｙ１によって追加的に置き換えられていてよく）；
Ｙ１はそれぞれ独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ”’−、−ＮＲ”’−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ”’−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ２）−、−Ｓ（Ｏ）−、Ｃ３〜６シクロアルキレン基および３員から７員の飽和複素環（ここで、Ｒ”’はそれぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである）から選択され；
Ｒｄはそれぞれ同じか、または異なってよく、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、ヒドロキシ、およびＣ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る；
Ｌ２は、結合または置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン基を表し；
ｍは０または１であり；
ｎは０または１である］。
【請求項３】
式Ｉまたは式ＩＩにおいて、
Ｘ１およびＸ２は独立に、Ｎ、ＮＲｅ、ＣＲｆおよびＣＲｇＲｈから選択され；
ここで、Ｒｅ、Ｒｆ、ＲｇおよびＲｈ基はそれぞれ独立に、水素ならびにハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２およびＯＲ”（ここで、Ｒ”は水素またはＣ１〜４アルキルである）から選択される１個または複数（例えば１、２または３個）の置換基によって置換されていてもよいＣ１〜６アルキルから選択され；
Ｚ１は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される２または３個のヘテロ原子を含有する５員の複素環を表し；
Ｚ２は、１個または複数（例えば１、２、３または４個の）基Ｒａによって置換されていてもよいフェニルまたはピリジルを表し（ここで、Ｒａはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒまたは−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）；
Ｒ１は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｂによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基
（ここで、Ｒｂはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、または−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）
を表し、
Ｒ２は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）Ｃ２〜４アルケニル、または
（ｄ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｃによって置換されていてもよいアリール基
（ここで、Ｒｃはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒまたは−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）
を表し；
Ｌ１は、１個または複数（例えば１または２個）の基Ｒｄによって置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン基を表し（ここで、１または２個のメチレン基（例えば１個のメチレン基）はそれぞれ、基Ｙ１によって追加的に置き換えられていてよく）；
Ｙ１はそれぞれ独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ”’−、−ＮＲ”’−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ”’−、およびＣ３〜６シクロアルキレン基（ここで、Ｒ”’はそれぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである）から選択され；
Ｒｄはそれぞれ同じか、または異なってよく、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、ヒドロキシ、およびＣ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る；
Ｌ２は、結合または置換されていてもよいＣ１〜４アルキレン基を表し；
ｍは０または１、好ましくは１であり；
ｎは０または１、好ましくは１である、請求項１または２に記載の化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項４】
式Ｉまたは式ＩＩにおいて、
Ｘ１およびＸ２は独立に、ＮおよびＣＲｆから選択され；
ここで、Ｒｆは、水素またはＣ１〜６アルキルであり；
Ｚ１は、２個の窒素原子および１個の酸素原子を含有する５員の複素環を表し；
Ｚ２は、基Ｒａによって一置換されていてもよいフェニルまたはピリジルを表し
（ここで、Ｒａは、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシおよびＣ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る）；
Ｒ１は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、または
（ｃ）基Ｒｂによって一置換されていてもよいアリール基
（ここで、Ｒｂは、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）およびＣ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択される）
を表し、
Ｒ２は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）Ｃ２〜４アルケニル、または
（ｄ）基Ｒｃによって一置換もしくは二置換されていてもよいアリール基
（ここで、Ｒｃはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）およびＣ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る）
を表し；
Ｌ１は、１個または複数の基Ｒｄによって置換されていてもよいＣ１〜４アルキレン基を表し（ここで、１または２個のメチレン基はそれぞれ、基Ｙ１によって追加的に置き換えられていてよく）；
Ｙ１はそれぞれ独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ”’−、−ＮＲ”’−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ”’−、およびＣ３〜６シクロアルキレン基（ここで、Ｒ”’はそれぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである）から選択され；
Ｒｄはそれぞれ同じか、または異なってよく、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、ヒドロキシおよびＣ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る；
Ｌ２は、結合またはＣ１〜２アルキレン基を表し；
ｍは０または１、好ましくは１であり；
ｎは０または１、好ましくは１である、請求項１または２に記載の化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項５】
式Ｉまたは式ＩＩにおいて、Ｘ１およびＸ２が独立に、ＮおよびＣＲｆ（ここで、Ｒｆは水素またはＣ１〜４アルキルである）から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
式Ｉまたは式ＩＩにおいて、Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方がＮである、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
式ＩａまたはＩＩａの化合物：
【化３】
2012528842.tif 000118
［式中、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、ｍおよびｎは、請求項１から４のいずれか一項に記載の通りである］；その立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項８】
基Ｚ１が、下式から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【化４】
2012528842.tif 000119
【請求項９】
下式Ｉｂ、ＩＩｂ、ＩｃまたはＩＩｃを有する、請求項１に記載の化合物：
【化５】
2012528842.tif 000120
［式中、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびｍは、請求項１から４のいずれか一項に記載の通りである］；その立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１０】
式ＩＩｄまたはＩＩｅを有する、請求項１に記載の化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ：
【化６】
2012528842.tif 000121
［式中、
Ｚ２は、置換されていてもよいピリジル、フェニルまたはピリミジニル環、好ましくは２個のハロ原子（例えばＣｌまたはＦ）によって置換されているフェニル環またはハロ原子（例えばＣｌ）によって、もしくはアルコキシ基（例えばエトキシ）によって置換されていてもよいピリジル環であり；
Ｒ１は、置換フェニルまたはピリジル環、好ましくはＣ１〜６アルキル（例えばメチル）基によって置換されているフェニルまたはピリジル環であり；
Ｒ２は、置換されていてもよいフェニル環、好ましくは１個のハロ原子（例えばＣｌ）によって置換されているフェニル環であり；
Ｌ１は、−ＣＨ２−Ｓ−、−Ｓ−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｓ−または−Ｓ−ＣＨ（ＣＨ３）−であり；
Ｌ２は結合である］。
【請求項１１】
本明細書に定義されている化合物（１）から（１８０）のいずれか１種である請求項１に記載の化合物、その異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１２】
化合物番号（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（１１）、（１８）、（１９）、（４３）、（４５）、（４６）、（６０）、（６８）、（９９）、（１００）、（１０３）、（１０８）、（１０９）、（１１０）、（１１２）、（１１３）および（１３２）から選択される請求項１１に記載の化合物、それらの異性体、薬学的に許容されるその塩およびプロドラッグ。
【請求項１３】
化合物番号（４３）、（６０）、（１０８）、（１０９）、（１１０）および（１１２）から選択される請求項１１に記載の化合物、それらの異性体、薬学的に許容されるその塩およびプロドラッグ。
【請求項１４】
化合物（４３）および（６０）から選択される請求項１１に記載の化合物、それらの異性体、薬学的に許容されるその塩およびプロドラッグ。
【請求項１５】
請求項１または請求項２に記載の式ＩまたはＩＩの化合物を調製する方法であって：
（ａ）（Ｌ１が基−（ＣＨ２）ｐ−Ｘ−（ＣＨ２）ｑ−（ここで、ＸはＯ、ＳまたはＮＨであり；ｐは１から５の整数であり；ｑは０から４の整数であり；ｐおよびｑの合計は、１から５の整数である）を表す式ＩまたはＩＩの化合物を調製する場合）：
一般式ＩＩＩの化合物を
（Ｒ１）ｍ−（Ｚ１）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−Ｌ    （ＩＩＩ）
［式中、Ｒ１、Ｚ１、ｍおよびｎは、請求項１から６のいずれか一項に記載されている通りであり；ｐは、１から５の整数であり；Ｌは、ハロゲン原子、例えばＣｌまたはＢｒなどの脱離基を示す］
一般式ＩＶの化合物と
【化７】
2012528842.tif 000122
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｚ２、Ｒ２、Ｌ２およびＬ３は、請求項１から６のいずれか一項に記載されている通りであり；ＸはＯ、ＳまたはＮＨであり；ｑは０から４の整数である］反応させるステップ；
（ｂ）（Ｌ１が基−（ＣＨ２）ｐ−Ｘ−（ＣＨ２）ｑ−（ここで、ＸはＯ、ＳまたはＮＨであり；ｐは０から４の整数であり；ｑは１から５の整数であり；ｐおよびｑの合計は１から５の整数である）を表す式ＩまたはＩＩの化合物を調製する場合）
一般式Ｖの化合物を
（Ｒ１）ｍ−（Ｚ１）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＸＨ（Ｖ）
［式中、Ｒ１、Ｚ１、ｍおよびｎは、請求項１から６のいずれか一項に記載されている通りであり；ｐは０から４の整数であり；ＸはＯ、ＳまたはＮＨである］
一般式ＶＩの化合物と
【化８】
2012528842.tif 000123
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｚ２、Ｒ２、Ｌ２およびＬ３は、請求項１から６のいずれか一項に記載されている通りであり；ｑは１から５の整数であり；Ｌは、ハロゲン原子、例えばＣｌまたはＢｒなどの脱離基を示す］反応させるステップ；
（ｃ）（Ｘ１およびＸ２が両方ともＮであり、Ｚ１が存在しない式ＩまたはＩＩの化合物を調製する場合）：
一般式ＶＩＩの化合物を
【化９】
2012528842.tif 000124
［式中、Ｚ２、Ｒ２およびＬ３は、請求項１から６のいずれか一項に記載されている通りである］
一般式ＶＩＩＩの化合物と
【化１０】
2012528842.tif 000125
［式中、Ｒ１およびＬ１は、請求項１から６のいずれか一項に記載されている通りである］反応させるステップ；
（ｄ）（Ｌ１が基−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ２−（ＣＨ２）ｑ−（ここで、ｐは０から５の整数であり；ｑは０から５の整数であり；ｐおよびｑの合計は１から５の整数である）を表す式ＩまたはＩＩの化合物を調製する場合）：
一般式ＩＸの化合物を酸化させるステップ：
【化１１】
2012528842.tif 000126
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ２、Ｌ３、ｍおよびｎは、請求項１から６のいずれか一項に記載されている通りであり；ｐは０から５の整数であり；ｑは０から５の整数であり；ｐおよびｑの合計は１から５の整数である］；
（ｅ）（Ｚ２が基：
【化１２】
2012528842.tif 000127
を表す式ＩまたはＩＩの化合物を調製する場合）：
一般式Ｘの化合物を脱水するステップ：
【化１３】
2012528842.tif 000128
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびｍは、請求項１から６のいずれか一項に記載されている通りである］；
（ｆ）所望の場合には、こうして得られた一般式ＩまたはＩＩの化合物をその立体異性体に分割するステップ；および／または
（ｇ）こうして得られた一般式ＩまたはＩＩの化合物を、その塩、特に薬学的に許容されるその塩に変換するステップのうちの少なくとも１つを含む方法。
【請求項１６】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を、１種または複数の薬学的に許容される担体または添加剤と共に含む医薬製剤。
【請求項１７】
治療において使用するための、請求項１から１４のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１８】
Ｗｎｔ経路におけるシグナル伝達の過剰活性化によって影響を受ける任意の状態または疾患を治療および／または予防する際の、例えばβ−カテニンの活性化を伴うそのような状態または疾患を治療および／または予防する際に使用するための、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
腫瘍細胞、例えば腺癌などの癌腫の増殖を予防および／または遅延させる際に、例えば、次の癌：結腸癌（結腸直腸癌など）、膵臓癌、胃癌、肝臓癌（例えば肝細胞癌および肝芽腫癌）、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌（例えば黒色腫）、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌および前立腺癌のうちのいずれかを治療および／または予防する際に使用するための、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２０】
次の癌：結腸癌（結腸直腸癌など）、膵臓癌、胃癌、肝臓癌（例えば肝細胞癌および肝芽腫癌）、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌（例えば黒色腫）、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌および前立腺癌のうちのいずれかを治療または予防する方法において使用するための医薬品を製造する際の、請求項１から１４のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項２１】
次の癌：結腸癌（結腸直腸癌など）、膵臓癌、胃癌、肝臓癌（例えば肝細胞癌および肝芽腫癌）、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌（例えば黒色腫）、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌および前立腺癌のうちのいずれかを撲滅または予防するためにヒトまたは非ヒト動物身体を治療する方法であって、前記身体に、有効量の請求項１から１４のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な化合物、そのような化合物を含有する医薬製剤および詳細には腫瘍細胞の増殖を低減するためのＷｎｔ経路阻害薬としての治療におけるその使用に関する。本発明はさらに、そのような化合物を調製する方法およびこれらの方法の間に形成される中間体に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖タンパク質のＷｎｔファミリーは、細胞運命特定、増殖、極性および移動を包含する様々な発生プロセスを制御している。その結果、Ｗｎｔ経路は、胚では適正な組織発生を、かつ成体では組織維持を保証する手段になっている。シグナル変換プロセスに関与しているシグナル伝達経路は少なくとも３つ存在する。標準（またはβ−カテニン依存性）Ｗｎｔ経路が最初に発見され、最も研究されている。Ｗｎｔシグナルが存在しない場合、転写活性化因子β−カテニンは、細胞内において、タンパク質複合体の作用によって活発に分解される。この複合体の中で、アキシンと大腸腺腫性ポリポーシス（ＡＰＣ）タンパク質とが足場を形成していて、この足場が、カゼインキナーゼ１９α（ＣＫ１α）およびグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ−３β）によるβ−カテニンリン酸化を促進する。続いて、リン酸化されたβ−カテニンは認識されて、ユビキチン化され、そのプロテアソーム分解が生じる。その結果、遊離β−カテニンのレベルは低いままであり、このことによって、ＤＮＡ結合Ｔ細胞因子／リンパ系エンハンサー因子（Ｔｃｆ／Ｌｅｆ）タンパク質は、転写コリプレッサーと相互作用して、核中で標的遺伝子発現をブロックすることができる。膜で、ＷｎｔとＦｚｄ−ＬＲＰ（低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質）受容体複合体とが結合すると、Ｄｉｓｈｅｖｅｌｌｅｄ（Ｄｖｌ）−Ｆｚｄ複合体の形成と、破壊複合体から細胞膜へのアキシンの再配置とが生じる。このことによって、β−カテニンが蓄積し、核に入り、そこで、Ｔｃｆ／Ｌｅｆファミリーのメンバーと相互作用し、共活性化因子タンパク質を動員することによって、Ｔｃｆタンパク質を有効な転写活性化因子に変換して、Ｗｎｔ標的遺伝子の有効な活性化を保証する。
【０００３】
標準Ｗｎｔシグナル伝達は、様々な腫瘍において過剰活性化し、その際、細胞増殖および腫瘍進行において中心的な役割を果たす（Ｂａｒｋｅｒら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．５：９９７〜１０１４頁、２００６年；Ｇｒｉｇｏｒｙａｎら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．２２：２３０８〜２３４１頁、２００８年；およびＳｈｉｔａｓｈｉｇｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．９９：６３１〜６３７頁、２００８年）。約９０％の散発性結腸癌が、異常なＷｎｔシグナル伝達を示す一方で（Ｌｉｕら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２６：１４６〜１４７頁、２０００年；およびＭｏｒｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７５：１７８７〜１７９０頁、１９９７年）、全ての膵臓腺癌は、Ｗｎｔ／Ｎｏｔｃｈシグナル伝達において変化を示す（Ｊｏｎｅｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２１：１８０１〜１８０６頁、２００８年）。
【０００４】
Ｗｎｔ活性化突然変異は、胃癌、肝細胞癌、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣子宮内膜性癌、甲状腺未分化癌および前立腺癌を包含する様々な癌に存在する（Ｂａｒｋｅｒら、前出）。大腸腺腫性ポリポーシス遺伝子（ＡＰＣ）、β−カテニンまたはアキシン遺伝子における突然変異は、核β−カテニンの蓄積をもたらし、そのような突然変異は結腸癌と関連していることが多い（Ｍｏｒｉｎら、前出）。さらに、分泌ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質（ＳＦＲＰｓ）（Ｓｕｚｕｋｉら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ  ３６：４１７〜４２２頁、２００４年）、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ（Ｄｋｋ）（Ａｇｕｉｌｅｒａら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２５：４１１６〜４１２１頁、２００６年）およびＷｎｔ阻害因子（ＷＩＦ）ファミリーのメンバー（Ｍａｚｉｅｒｅｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：４７１７〜４７２０頁、２００４年）を包含するＷｎｔシグナル伝達を静める細胞外タンパク質における変化もまた、異常な経路活性をもたらし得る（Ｐｏｌａｋｉｓ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．１７：４５〜５１頁、２００７年）。
【０００５】
結腸直腸癌および他のＷｎｔ調節解除による癌において標準Ｗｎｔ活性をブロックすると、Ｇ１での細胞周期の停止を引き起こすことが判明しており、これは、腫瘍細胞の増殖を阻害する際の決定的なステップである（ｖａｎ  ｄｅ  ＷＭら、Ｃｅｌｌ  １１１：２４１〜２５０、２００２年；およびＳｕｋｈｄｅｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０４：７５１６〜７５２１頁、２００７年）。近年、複数の群の小分子が、Ｗｎｔ阻害薬として作用することが判明している。これらの薬物は、その阻害作用をＷｎｔシグナル伝達経路の様々なレベルで発揮する。核ＴＣＦ／β−カテニン結合を、かつ環状ＡＭＰ応答要素結合タンパク質（ＣＢＰ）を干渉する小分子が同定され、記載されている（Ｅｍａｍｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１：１２６８２〜１２６８７頁、２００４年；およびＬｅｐｏｕｒｃｅｌｅｔ  Ｍら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：９１〜１０２頁、２００４年）。Ｔｏｐｏ  ＩＩαおよびＰＡＲＰ−１（Ｓｈｉｔａｓｈｉｇｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．９９：６３１〜６３７頁、２００８年）またはＴＢＰ、ＢＲＧ１、ＢＣＬ９、ピゴパス（ｐｙｇｏｐｕｓ）およびＨｙｒａｘ（Ｂａｒｋｅｒら、前出）は、標準Ｗｎｔシグナル伝達を阻害するための標的であり得ると提案されている。核中での高レベルのβ−カテニンは、異常な標準Ｗｎｔシグナル伝達に共通する特徴であるので、β−カテニンの存在を低減することによる標準Ｗｎｔ活性のダウンレギュレーションは、有望な治療戦略である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂａｒｋｅｒら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．５：９９７〜１０１４頁、２００６
【非特許文献２】Ｇｒｉｇｏｒｙａｎら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．２２：２３０８〜２３４１頁、２００８
【非特許文献３】Ｓｈｉｔａｓｈｉｇｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．９９：６３１〜６３７頁、２００８
【非特許文献４】Ｌｉｕら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２６：１４６〜１４７頁、２０００
【非特許文献５】Ｍｏｒｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７５：１７８７〜１７９０頁、１９９７
【非特許文献６】Ｊｏｎｅｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２１：１８０１〜１８０６頁、２００８
【非特許文献７】Ｓｕｚｕｋｉら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ  ３６：４１７〜４２２頁、２００４
【非特許文献８】Ａｇｕｉｌｅｒａら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２５：４１１６〜４１２１頁、２００６
【非特許文献９】Ｍａｚｉｅｒｅｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：４７１７〜４７２０頁、２００４
【非特許文献１０】Ｐｏｌａｋｉｓ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．１７：４５〜５１頁、２００７
【非特許文献１１】ｖａｎ  ｄｅ  ＷＭら、Ｃｅｌｌ  １１１：２４１〜２５０、２００２年
【非特許文献１２】Ｓｕｋｈｄｅｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０４：７５１６〜７５２１頁、２００７
【非特許文献１３】Ｅｍａｍｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１：１２６８２〜１２６８７頁、２００４年
【非特許文献１４】Ｌｅｐｏｕｒｃｅｌｅｔ  Ｍら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：９１〜１０２頁、２００４
【非特許文献１５】Ｓｈｉｔａｓｈｉｇｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．９９：６３１〜６３７頁、２００８
【非特許文献１６】Ｖｅｅｍａｎ  ＭＴら、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１３：６８０〜６８５頁、２００３
【非特許文献１７】ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｅｔｅｒｉｎｇら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２００８）２８（８）、２７３２〜４４頁
【非特許文献１８】ｖａｎ  ｄｅ  ＷＭら  Ｃｅｌｌ  １１１：２４１〜２５０頁、２００２
【非特許文献１９】Ｐｈｉｅｌ  ＣＪら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．４１：７８９〜８１３、２００１
【非特許文献２０】Ｋｌｅｉｎ  ＰＳら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８４５５〜８４５９、１９９６
【非特許文献２１】Ｗｉｌｓｏｎ、Ｓ．Ｒ．ら、Ｊ．Ｓｅｐ．Ｓｃｉ．２８：１７５１〜１７５８頁、２００５
【非特許文献２２】Ｎｏｖａｒｔｉｓ；Ｈｕａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ（２００９）、４６１、６１４〜２０頁
【非特許文献２３】Ｃｈｅｎら、Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．（２００９）、５、１００〜７頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
今般、標準Ｗｎｔシグナル伝達のブロックにおいて活性を示し、詳細には、核β−カテニンのレベルを低減し得る新規な群の化合物を発見した。ＡＰＣおよびＧＳＫ−３βの下流で活性化β−カテニンの安定性に作用し得る限り、これらは、標準Ｗｎｔシグナル伝達経路のさらに上流で作用することが公知の他の化合物よりも幅広い可能性を提示すると考えられる。そのような化合物は、一般の腫瘍細胞、詳細には、乳癌、非小細胞肺癌、膵臓および結腸直腸癌に随伴する腫瘍細胞の増殖を阻害するのに適している。これらは特に、結腸癌細胞の増殖を阻害するのに適している。
【０００８】
一般式Ｉの化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグを提供する：
【０００９】
【化１】
2012528842.tif 000003
【００１０】
［式中、
破線は、場合による結合を示し；
Ｘ１およびＸ２は独立に、Ｎ、ＮＲｅ、Ｏ、Ｓ、ＣＲｆおよびＣＲｇＲｈから選択され；
ここで、Ｒｅ、Ｒｆ、ＲｇおよびＲｈ基はそれぞれ独立に、水素ならびにハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２およびＯＲ”（ここで、Ｒ”は水素またはＣ１〜４アルキルである）から選択される１個または複数（例えば１、２または３個）の置換基によって置換されていてもよいＣ１〜６アルキルから選択され；
Ｚ１は、不飽和の５員から１０員の単環式または二環式複素環を表し、この環は、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１個または複数の原子を含有する５員または６員の環と場合によって縮合していてもよく；
Ｚ２は、
（ａ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｂ）Ｃ２〜６アルケニル、
（ｃ）Ｃ２〜６アルキニル、
（ｄ）１個または複数（例えば１、２、３または４個の）基Ｒａによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基
（ここで、Ｒａはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）ＯＲまたは−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）；または
（ｅ）窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を、好ましくは窒素および酸素から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する５員または６員の飽和複素環
を表し；
Ｒ１は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）−ＯＣ１〜６アルキル、
（ｄ）ヒドロキシ、
（ｅ）−ＮＲ’２（ここで、Ｒ’はそれぞれ独立に、水素、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６ハロアルキル基である）、
（ｆ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｂによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基；
（ここで、Ｒｂはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、１個または複数の−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ−基によって（好ましくは、１個または２個の−Ｏ−原子によって）中断されていてもよいＣ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）ＯＲまたは−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得るか；または
隣接する環原子上に存在する２個のＲｂ基は、介在する環原子と一緒に、５員または６員の炭素環または複素環を形成している）；または
（ｇ）−ＣＯＮＲ””２（ここで、Ｒ””はそれぞれ独立に、ＨまたはＣ１〜６アルキル、例えばＣ１〜３アルキルである）
を表し、
Ｒ２は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）−ＯＣ１〜６アルキル、
（ｄ）Ｃ２〜６アルケニル、
（ｅ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｃによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基；
（ここで、Ｒｃはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒまたは−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）；または
（ｆ）窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは、窒素および酸素から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する５員または６員の飽和複素環または
（ｇ）Ｃ３〜６シクロアルキレン基、好ましくはＣ５−またはＣ６−シクロアルキレン基
を表し；
Ｌ１は、１個または複数（例えば１または２個）の基Ｒｄによって置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン基を表し（ここで、１個または複数（好ましくは１から３個）のメチレン基はそれぞれ、基Ｙ１によって追加的に置き換えられていてよく）；
Ｙ１はそれぞれ独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ”’−、−ＮＲ”’−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ”’−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ２）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＣＲ”’＝Ｎ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、Ｃ３〜６シクロアルキレン基および３員から７員の飽和複素環（ここで、Ｒ”’はそれぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである）から選択され；
Ｒｄはそれぞれ同じか、または異なってよく、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）およびハロゲン（即ちＦ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩ、好ましくはＦ）から選択されることができ；
Ｌ２およびＬ３はそれぞれ独立に、結合または置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン基を表し；
ｍは０または１であり；
ｎは０または１である］。
【００１１】
Ｚ２が５員または６員の飽和複素環である式Ｉでは、これは好ましくは、少なくとも１個の窒素原子を含有する。好ましい環は、場合によって、ただ１個の酸素原子と共に、ただ１個の窒素原子を含有するものである。そのような基の例には、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ピラゾリジニルおよびイミダゾリジニルが包含される。これらの基のうち、ピペリジニル、ピロリジニルおよびモルホリニルが特に好ましい。
【００１２】
Ｒ１の定義において、アリールまたはヘテロアリール環上の２個の隣接する基Ｒｂが一緒に５員または６員の環を形成している場合、好ましくはこれは、例えば、１，４−ジオキサン、１，３−ジオキソラン、ピリジン、ピロリジン、ピロリン、ピロール、フランおよびピペリジンから選択され得る複素環である。そのような環は、これらがオキソおよびチオ系を包含するように、１個または複数のカルボニルまたはチオカルボニル官能基をさらに含有してよい。そのような系の例には、ラクタム、ラクトン、環式イミドなどが包含される。基Ｒｂが結合して炭素環を形成している場合、これは、シクロペンチルまたはシクロヘキシル環であってよい。
【００１３】
Ｒ２が飽和複素環である場合、これは一般に、１個または複数の窒素または酸素原子を含有する。そのような基の例には、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニルおよびテトラヒドロフリルが包含される。これらのうち、テトラヒドロフリルが特に好ましい。
【００１４】
本明細書に記載の本発明の実施形態のいずれにおいても、リンカーＬ１の定義において、いずれのまたは全てのメチレン基も、基Ｙ１によって置き換えられていてよいことが企図されている。したがって、適切なリンカーＬ１には、メチレン部分を含有しない基が包含される（即ち、そのような基が全て、基Ｙ１によって置き換えられている）。しかし、少なくとも１個のメチレン基が、リンカーＬ１中に存在することが、一般には好ましい。
【００１５】
式Ｉにおいて、Ｌ３は好ましくは、直接結合または−ＣＨ２−基である。
【００１６】
本発明による好ましい化合物は、一般式ＩＩの化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグである：
【００１７】
【化２】
2012528842.tif 000004
【００１８】
［式中、
破線は、場合による結合を示し；
Ｘ１およびＸ２は独立に、Ｎ、ＮＲｅ、Ｏ、Ｓ、ＣＲｆおよびＣＲｇＲｈから選択され；
ここで、Ｒｅ、Ｒｆ、ＲｇおよびＲｈ基はそれぞれ独立に、水素ならびにハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２およびＯＲ”（ここで、Ｒ”は水素またはＣ１〜４アルキルである）から選択される１個または複数（例えば１、２または３個）の置換基によって置換されていてもよいＣ１〜６アルキルから選択され；
Ｚ１は、不飽和の５員から７員の複素環を表し、この環は、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１個または複数の原子を含有する５員または６員の環と場合によって縮合していてもよく；
Ｚ２は、
（ａ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｂ）Ｃ２〜６アルケニル、
（ｃ）Ｃ２〜６アルキニル、または
（ｄ）１個または複数（例えば１、２、３または４個の）基Ｒａによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基
（ここで、Ｒａはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒまたは−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）
を表し、
Ｒ１は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）−ＯＣ１〜６アルキル、
（ｄ）ヒドロキシ、
（ｅ）−ＮＲ’２（ここで、Ｒ’はそれぞれ独立に、水素、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６ハロアルキル基である）、または
（ｆ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｂによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基
（ここで、Ｒｂはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、または−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）
を表し、
Ｒ２は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）−ＯＣ１〜６アルキル、
（ｄ）Ｃ２〜６アルケニル、または
（ｅ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｃによって置換されていてもよいアリール基
（ここで、Ｒｃはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒまたは−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）
を表し；
Ｌ１は、１個または複数（例えば１または２個）の基Ｒｄによって置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン基を表し（ここで、１または２個のメチレン基（好ましくは１個のメチレン基）はそれぞれ、基Ｙ１によって追加的に置き換えられていてよく）；
Ｙ１はそれぞれ独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ”’−、−ＮＲ”’−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ”’−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ２）−、−Ｓ（Ｏ）−、Ｃ３〜６シクロアルキレン基および３員から７員の飽和複素環（ここで、Ｒ”’はそれぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである）から選択され；
Ｒｄはそれぞれ同じか、または異なってよく、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る；
Ｌ２は、結合または置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン基を表し；
ｍは０または１であり；
ｎは０または１である］。
【００１９】
本発明による特に好ましい化合物は、式ＩまたはＩＩの化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグである：
式中、
Ｘ１およびＸ２は独立に、Ｎ、ＮＲｅ、ＣＲｆおよびＣＲｇＲｈから選択され；
ここで、Ｒｅ、Ｒｆ、ＲｇおよびＲｈ基はそれぞれ独立に、水素ならびにハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２およびＯＲ”（ここで、Ｒ”は水素またはＣ１〜４アルキルである）から選択される１個または複数（例えば１、２または３個）の置換基によって置換されていてもよいＣ１〜６アルキルから選択され；
Ｚ１は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される２または３個のヘテロ原子を含有する５員の複素環を表し；
Ｚ２は、１個または複数（例えば１、２、３または４個の）基Ｒａによって置換されていてもよいフェニルまたはピリジルを表し（ここで、Ｒａはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒまたは−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）；
Ｒ１は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｂによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基
（ここで、Ｒｂはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、または−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）
を表し、
Ｒ２は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）Ｃ２〜４アルケニル、または
（ｄ）１個または複数（例えば１、２、３または４個）の基Ｒｃによって置換されていてもよいアリール基
（ここで、Ｒｃはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル（例えばＣＦ３）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒまたは−Ｓ（Ｏ）ＯＲ基（ここで、Ｒはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである）から選択され得る）
を表し；
Ｌ１は、１個または複数（例えば１または２個）の基Ｒｄによって置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン基を表し（ここで、１または２個のメチレン基（例えば１個のメチレン基）はそれぞれ、基Ｙ１によって追加的に置き換えられていてよく）；
Ｙ１はそれぞれ独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ”’−、−ＮＲ”’−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ”’−、およびＣ３〜６シクロアルキレン基（ここで、Ｒ”’はそれぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである）から選択され；
Ｒｄはそれぞれ同じか、または異なってよく、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る；
Ｌ２は、結合または置換されていてもよいＣ１〜４アルキレン基を表し；
ｍは０または１、好ましくは１であり；
ｎは０または１、好ましくは１である。
【００２０】
本発明によるさらに特に好ましい化合物は、式ＩまたはＩＩの化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグである：
式中、
Ｘ１およびＸ２は独立に、ＮおよびＣＲｆから選択され；
ここで、Ｒｆは、水素またはＣ１〜６アルキルであり；
Ｚ１は、２個の窒素原子および１個の酸素原子を含有する５員の複素環を表し；
Ｚ２は、基Ｒａによって一置換されていてもよいフェニルまたはピリジルを表し
（ここで、Ｒａは、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシおよびＣ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る）；
Ｒ１は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、または
（ｃ）基Ｒｂによって一置換されていてもよいアリール基
（ここで、Ｒｂは、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）およびＣ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る）
を表し、
Ｒ２は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、
（ｃ）Ｃ２〜４アルケニル、または
（ｄ）基Ｒｃによって一置換もしくは二置換されていてもよいアリール基
（ここで、Ｒｃはそれぞれ同じか、または異なってよく、ハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）およびＣ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る）
を表し；
Ｌ１は、１個または複数の基Ｒｄによって置換されていてもよいＣ１〜４アルキレン基を表し（ここで、１または２個のメチレン基はそれぞれ、基Ｙ１によって追加的に置き換えられている）；
Ｙ１はそれぞれ独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ”’−、−ＮＲ”’−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ”’−、およびＣ３〜６シクロアルキレン基（ここで、Ｒ”’はそれぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである）から選択され；
Ｒｄはそれぞれ同じか、または異なってよく、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル）、ヒドロキシおよびＣ１〜６アルコキシ（例えばＣ１〜３アルコキシ）から選択され得る；
Ｌ２は、結合またはＣ１〜２アルキレン基を表し；
ｍは０または１、好ましくは１であり；
ｎは０または１、好ましくは１である。
【００２１】
好ましい実施形態では、Ｘ１およびＸ２は独立に、ＮおよびＣＲｆから選択される（ここで、Ｒｆは、本明細書中の前記で定義された通りであり、好ましくは水素またはＣ１〜４アルキルである）。
【００２２】
好ましくは、Ｘ１およびＸ２のうちの少なくとも１個がＮである。例えば、Ｘ１は、Ｎであってよく、Ｘ２はＣＲｆであるか、またはＸ１はＣＲｆであってよく、Ｘ２は、Ｎであってよい（ここで、Ｒｆは、本明細書中の前記で定義された通りであり、好ましくは水素またはＣ１〜４アルキルである）。
【００２３】
最も好ましくは、Ｘ１およびＸ２は両方とも、Ｎである。したがって、本発明による特に好ましい化合物は、式ＩａおよびＩＩａの化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグである：
【００２４】
【化３】
2012528842.tif 000005
【００２５】
（式中、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、ｍおよびｎは、本明細書中の前記で定義された通りである）。
【００２６】
式Ｉ、ＩＩ、ＩａおよびＩＩａ中の基Ｚ１の例には、次の基が包含される：
【００２７】
【化４−１】
2012528842.tif 000006
【００２８】
【化４−２】
2012528842.tif 000007
【００２９】
これらの構造のうち、次の基が、Ｚ１には特に好ましい：
【００３０】
【化５】
2012528842.tif 000008
【００３１】
なおさらに好ましい態様では、したがって本発明は、次の式Ｉｂ、ＩＩｂ、ＩｃおよびＩＩｃの化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグを提供する：
【００３２】
【化６】
2012528842.tif 000009
【００３３】
（式中、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびｍは、本明細書中の前記で定義された通りである）。
【００３４】
好ましい実施形態では、Ｚ２は、置換されていてもよいアリールもしくはヘテロアリール基、好ましくは１個もしくは２個（好ましくは１個）の基Ｒａによって置換されていてもよいフェニルもしくはピリジル基を表すか（ここで、Ｒａはそれぞれ独立に、ハロゲン（好ましくはＣｌまたはＦ）、ヒドロキシまたはＣ１〜６アルコキシ（好ましくはＣ１〜３アルコキシ、例えばメトキシ）である）；またはＺ２は、飽和の５員もしくは６員の複素環を表す。特に好ましくは、Ｚ２は、置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基、例えば置換されていてもよいフェニルまたはピリジル基を表す。置換されている場合、フェニルまたはピリジル環上の置換基は独立に、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、クロロおよびフルオロからなる群から選択することができる。１個または複数のそのような基は、環上で任意の環位置に存在してよい。しかし、１個または２個のそのような基が、存在することが好ましい。２個の置換基が存在する場合、これらは一般に、同一である。
【００３５】
基Ｚ２の例には次の基が包含される：
【００３６】
【化７−１】
2012528842.tif 000010
【００３７】
【化７−２】
2012528842.tif 000011
【００３８】
好ましい実施形態では、Ｒ１は、水素、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、イソプロピル）または１個もしくは２個（好ましくは１個）の基Ｒｂによって置換されていてもよいフェニルもしくはピリジルを表し、ここで、Ｒｂはそれぞれ独立に、ハロゲン（例えばＦ、ＣｌまたはＢｒ）、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル（好ましくはＣ１〜３アルキル、例えばメチル）またはＣ１〜６アルコキシ（好ましくはＣ１〜３アルコキシ、例えばメトキシ）である。特に好ましくは、Ｒ１は、置換されていてもよいフェニル環を表す。フェニル環が置換されている場合、好ましい置換基には、非置換アルキル基（例えばメチル）が包含される。
【００３９】
基Ｒ１の例には、次の基が包含される：
【００４０】
【化８−１】
2012528842.tif 000012
【００４１】
【化８−２】
2012528842.tif 000013
【００４２】
好ましい実施形態では、Ｒ２は、水素、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル、エチル）もしくはＣ２〜３アルケニル（例えばプロペン−１−イル）；１個もしくは２個の基Ｒｃによって置換されていてもよいフェニルもしくはピリジル（ここで、Ｒｃはそれぞれ独立に、ハロゲン（例えばＦまたはＣｌ）、Ｃ１〜６アルコキシ（好ましくはＣ１〜３アルコキシ、例えばメトキシまたはエトキシ）である）；１個もしくは複数のアルキル基によって置換されていてもよいシクロヘキシル；またはテトラヒドロフリルを表す。特に好ましくは、Ｒ２は、置換されていてもよいフェニルである。置換されている場合、フェニル基上の環置換基は独立に、Ｃ１〜３アルキル（例えばメチルまたはエチル）、メトキシ、エトキシ、クロロおよびフルオロからなる群から選択されていてよい。１個または複数のそのような基は、環上で任意の環位置に存在してよい。しかし、１個または２個のそのような基が、存在することが好ましい。特に好ましくは、フェニル環は、ただ１個のクロロ基によって、オルト位またはパラ位で、例えばオルト位で置換されている。
【００４３】
基Ｒ２の例には、次の基が包含される：
【００４４】
【化９】
2012528842.tif 000014
【００４５】
好ましい実施形態では、Ｌ１は、１個または２個の基Ｒｄによって置換されていてもよいＣ１〜４アルキレンであり、ここで、Ｒｄはそれぞれ独立に、Ｃ１〜６アルキル（例えばメチル）であり、１個または２個のメチレン基（例えば１個のメチレン基）はそれぞれ、基Ｙ１によって置き換えられている（ここで、Ｙ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、Ｃ３、Ｃ４もしくはＣ５−シクロアルキレンまたはただ１個の酸素原子を含有する６員の複素環である）。
【００４６】
リンカー基Ｌ１としてさらにより好ましいのは、１個または２個の基Ｒｄによって置換されていてもよいＣ１〜４アルキレン基であり、ここで、Ｒｄはそれぞれ独立に、Ｃ１〜３アルキル（例えばメチル）であり、１個または２個のメチレン基（例えば１個のメチレン基）はそれぞれ、基Ｙ１によって置き換えられている（ここで、Ｙ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−である）。
【００４７】
特に好ましくは、Ｌ１は、１個または２個（好ましくは１個）のメチル基によって置換されていてもよく、１個のメチレン基が−Ｓ−によって置き換えられていてもよいＣ１〜３アルキレン（例えばＣ２アルキレン）である。リンカーが２個のメチル基によって置換されている場合、これらは、リンカー主鎖の異なる炭素原子上に存在することが好ましい。好ましいリンカーＬ１の例には、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｓ−、−Ｓ−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｓ−および−Ｓ−ＣＨ２−が包含される。
【００４８】
Ｌ１の例には、次の基が包含される：
【００４９】
【化１０−１】
2012528842.tif 000015
【００５０】
【化１０−２】
2012528842.tif 000016
【００５１】
【化１０−３】
2012528842.tif 000017
【００５２】
好ましい実施形態では、Ｌ２は結合であるか、またはＣ１〜２アルキレン基、好ましくはメチレンである。
【００５３】
好ましい実施形態では、Ｌ３は結合である。
【００５４】
本発明による特に好ましい化合物は、式ＩＩｄまたはＩＩｅの化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグである：
【００５５】
【化１１】
2012528842.tif 000018
【００５６】
［式中、
Ｚ２は、置換されていてもよいピリジル、フェニルまたはピリミジニル環、好ましくは２個のハロ原子（例えばＣｌまたはＦ）によって置換されているフェニル環またはハロ原子（例えばＣｌ）によって、もしくはアルコキシ基（例えばエトキシ）によって置換されていてもよいピリジル環であり；
Ｒ１は、置換フェニルまたはピリジル環、好ましくはＣ１〜６アルキル（例えばメチル）基によって置換されているフェニルまたはピリジル環であり；
Ｒ２は、置換されていてもよいフェニル環、好ましくは１個のハロ原子（例えばＣｌ）によって置換されているフェニル環であり；
Ｌ１は、−ＣＨ２−Ｓ−、−Ｓ−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｓ−または−Ｓ−ＣＨ（ＣＨ３）−であり；
Ｌ２は結合である］。
【００５７】
次の化合物は、本発明による特に好ましい化合物の例である：
【００５８】
【表１−１】
2012528842.tif 000019
【００５９】
【表１−２】
2012528842.tif 000020
【００６０】
【表１−３】
2012528842.tif 000021
【００６１】
【表１−４】
2012528842.tif 000022
【００６２】
【表１−５】
2012528842.tif 000023
【００６３】
【表１−６】
2012528842.tif 000024
【００６４】
【表１−７】
2012528842.tif 000025
【００６５】
【表１−８】
2012528842.tif 000026
【００６６】
【表１−９】
2012528842.tif 000027
【００６７】
【表１−１０】
2012528842.tif 000028
【００６８】
【表１−１１】
2012528842.tif 000029
【００６９】
【表１−１２】
2012528842.tif 000030
【００７０】
【表１−１３】
2012528842.tif 000031
【００７１】
【表１−１４】
2012528842.tif 000032
【００７２】
【表１−１５】
2012528842.tif 000033
【００７３】
【表１−１６】
2012528842.tif 000034
【００７４】
【表１−１７】
2012528842.tif 000035
【００７５】
【表１−１８】
2012528842.tif 000036
【００７６】
【表１−１９】
2012528842.tif 000037
【００７７】
【表１−２０】
2012528842.tif 000038
【００７８】
【表１−２１】
2012528842.tif 000039
【００７９】
【表１−２２】
2012528842.tif 000040
【００８０】
【表１−２３】
2012528842.tif 000041
【００８１】
【表１−２４】
2012528842.tif 000042
【００８２】
【表１−２５】
2012528842.tif 000043
【００８３】
本発明による特に好ましい化合物は、化合物番号（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（１１）、（１８）および（１９）、とりわけ化合物番号（１）、（７）、（１１）、（１９）およびその異性体、薬学的に許容されるその塩およびプロドラッグである。本発明によるさらに特に好ましい化合物は、化合物番号（１）および（７）、例えば化合物番号（１）である。
【００８４】
本発明による他の好ましい化合物は、化合物番号（４３）、（４５）、（４６）、（６０）、（６８）、（９９）、（１００）、（１０３）、（１０８）、（１０９）、（１１０）、（１１２）、（１１３）および（１３２）、それらの異性体、薬学的に許容されるその塩およびプロドラッグである。これらの化合物のうち、（４３）、（６０）、（１０８）、（１０９）、（１１０）および（１１２）が、とりわけ（４３）および（６０）、その異性体、薬学的に許容されるその塩およびプロドラッグが、特に好ましい。
【００８５】
別段に述べられていない限り、全ての置換基は、相互に独立している。
【００８６】
下付文字が整数０（即ちゼロ）である場合、その下付文字が付されている基が存在しない、即ち、その特定の基の両側の基の間に直接結合が存在するか、またはその下付文字が付されている基が、末端基（基Ｒ１の場合など）である場合には、それに結合している基が分子中の末端基となっていることが意図されている。
【００８７】
別段に述べられていない限り、本明細書中で「結合」に関する言及はいずれも、飽和結合を指すことが意図されている。
【００８８】
アステリスク（＊）が本明細書中で示されているいずれかの置換基のいずれかの構造式中に存在する場合、これは、その置換基が分子の残りの部分に結合するポイントを示していると理解されたい。これらの式のいずれかが、２個のアステリスク（２つの結合ポイントを示す）を包含する場合、これらのうちのいずれか１個は、分子の残りの部分にある所望の結合ポイントに結合していてよい。本明細書中で具体的に示されているそのような構造の配位は、これらが、示されている配位で結合すべきであることを暗示することを意図されていない。
【００８９】
別段に述べられていない限り、「ハロ」または「ハロゲン原子」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードであってよい。好ましくは、これは、フルオロまたはクロロである。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、飽和炭化水素基を指し、直鎖および分岐アルキル基の両方に及ぶことが意図されている。そのような基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシルなどが包含される。アルキル基は好ましくは、１〜６個の炭素原子、例えば１〜４個の炭素原子を含有する。別段に述べられていない限り、本明細書中で述べられているアルキル基はいずれも、同じか、または異なってよい１個または複数の基、例えばヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、アミノまたはハロゲン原子（例えばＦ、ＣｌまたはＢｒ）によって置換されていてもよい。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「アルケニル」という用語は、１つまたは複数の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基を指し、直鎖および分岐アルケニル基の両方を包含する。「Ｃ２〜６アルケニル」という用語は、２から６個の炭素原子および１つまたは複数（例えば１つまたは２つ）の二重結合を有するアルケニル基を指す。そのような基の例には、ビニル、アリル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、クロチル、ペンテニルおよびヘキセニルが包含される。別段に述べられていない限り、本明細書中に述べられているアルケニル基はいずれも、同じか、または異なってよい１個または複数の基、例えばヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、アミノまたはハロゲン原子（例えばＦ、ＣｌまたはＢｒ）によって置換されていてもよい。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「アルキニル」という用語は、１つまたは複数の炭素−炭素三重結合を有するアルキル基を指し、直鎖および分岐アルキニル基の両方を包含する。別段に述べられていない限り、本明細書中に述べられているアルキニル基はいずれも、同じか、または異なってよい１個または複数の基、例えばヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、アミノまたはハロゲン原子（例えばＦ、ＣｌまたはＢｒ）によって置換されていてもよい。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「ハロアルキル」という用語は、１個または複数のハロ置換基を有するアルキル基を指す。そのような基の例には、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＨＣｌ２、−ＣＨ２ＣＦ３などが包含される。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「アルキレン」という用語は、結合アルキル基を指し、任意の直鎖または分岐アルキレン基に及ぶことが意図されている。そのような基の例には、メチレン、エチレン、エタン−１，１−ジイル、プロピレン、プロパン−２，２−ジイル、１−メチルエチレン、ブチレン、１−メチルプロピレン、１，１−ジメチルエチレン、１，２−ジメチルエチレンなどが包含される。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、任意の環式アルキル基に及ぶことが意図されている。そのような基には、単環系または多環系（例えば２個の縮合環を有する）が包含され得る。これらは、３〜２０個の炭素原子、好ましくは３〜１４個の炭素、より好ましくは３〜１０個の炭素、例えば３〜７個の炭素を有してよい。そのような基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなどが包含される。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「不飽和複素環」という用語は、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する任意の５員、６員または７員の一、二または三不飽和複素環に及ぶことが意図されている。そのような環が二環式である場合、これらは、１０個までの環原子を含有してよく、その際、環はそれぞれ、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を包含する。複素環構造（単環式でも二環式でも）は、炭素原子を介して、または存在する場合には窒素原子を介して、分子の残りの部分に結合していてよい。例えば、２個の炭素原子を介して、２個の窒素原子を介して、または１個の炭素および１個の窒素原子を介して結合していてよい。好ましくは、２個の炭素原子を介して分子の残りの部分に結合している。別段に述べられていない限り、本明細書中で述べられている複素環はいずれも、同じか、または異なってよい１個または複数の基、例えばヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、アミノ、シアノ、ニトロまたはハロゲン原子（例えばＦ、ＣｌまたはＢｒ）によって場合によって置換されていてもよい。複素環は、これがオキソおよびチオ系を包含するように、１個または複数のカルボニルまたはチオカルボニル官能基をさらに含有してよい。
【００９７】
「不飽和複素環」の例示的な例は、複素環のピロール、２Ｈ−ピロール、フラン、ピロリン、チオフェン、ピラゾール、イミダゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピラゾリン、イミダゾリン、チアゾール、イソチアゾール、チアジアゾール、ピリジン、２Ｈ−ピラン、４Ｈ−ピラン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、１，３−ジオキシン、１，４−ジオキシンおよびトリアゾールである。これらのうち、チアゾール、チアジアゾール、ピリミジン、ピリダジン、ピラゾール、チオフェンおよびトリアゾールが特に好ましい。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「飽和複素環」という用語は、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する任意の３員、４員、５員、６員または７員の複素環に及ぶことが意図されている。環は、２個の炭素原子を介して、２個の窒素原子を介して、または１個の炭素および１個の窒素原子を介して分子の残りの部分に結合していてよい。好ましくは、環は、同じ環炭素原子から延びる２つの結合によって分子の残りの部分に結合している。
【００９９】
本明細書で使用される場合、「アリール」という用語は、芳香環系に及ぶことが意図されている。そのような環系は、単環式または多環式（例えば二環式）であってよく、少なくとも１個の不飽和芳香環を含有する。これらが多環を含有する場合、縮合していてもよい。好ましくはそのような系は、６〜２０個の炭素原子、例えば６個または１０個の炭素原子を含有する。そのような基の例には、フェニル、１−ナプチルおよび２−ナプチルが包含される。好ましいアリール基は、フェニルである。別段に述べられていない限り、「アリール」基はいずれも、同じか、または異なってよい１個または複数の置換基、例えばＣ１〜４アルキル基、ヒドロキシ、メトキシ、トリフルオロメトキシおよびハロ基によって置換されていてよい。
【０１００】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、複素環式芳香族基に及ぶことが意図されている。そのような基は、単環式または二環式であってよく、少なくとも１個の不飽和ヘテロ芳香環系を含有する。これらが単環式である場合、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有し、芳香族系を形成するのに十分な共役結合を含有する５員または６員の環を含む。これらが二環式である場合、９〜１１個の環原子を含有し得る。ヘテロアリール基の例には、チオフェン、チエニル、ピリジル、チアゾリル、フリル、ピロリル、トリアゾリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾロニル、オキサゾロニル、チアゾロニル、テトラゾリル、チアジアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、インドリル、イソインドリル、ピリドニル、ピリダジニル、ピリミジニル、イミダゾピリジル、オキサゾピリジル、チアゾロピリジル、イミダゾピリダジニル、オキサゾロピリダジニル、チアゾロピリダジニルおよびプリニルが包含される。別段に示されていない限り、「ヘテロアリール」はいずれも、同じか、または異なってよい１個または複数の置換基、例えばＣ１〜４アルキル基、ヒドロキシ、メトキシ、トリフルオロメトキシおよびハロ基によって置換されていてよい。
【０１０１】
「プロドラッグ」という用語は、生理学的条件下で本明細書に記載の化合物のいずれか、即ち式Ｉ、ＩＩ、Ｉａ、ＩＩａ、Ｉｂ、ＩＩｂ、Ｉｃ、ＩＩｃ、ＩＩｄまたはＩＩｅの化合物に変換される任意の化合物を包含することが意図されている。適切なプロドラッグには、生理学的条件下で加水分解されて所望の分子になる化合物が包含される。
【０１０２】
当分野で公知の合成方法を使用して、容易に利用可能な出発物質から、本発明による化合物を調製することができる。好ましくは、化合物を、本発明の一部を形成する次の方法に従って得る。
【０１０３】
（ａ）（Ｌ１が基−（ＣＨ２）ｐ−Ｘ−（ＣＨ２）ｑ−（ここで、ＸはＯ、ＳまたはＮＨであり；ｐは１から５の整数であり；ｑは０から４の整数であり；ｐおよびｑの合計は、１から５の整数である）を表す式ＩまたはＩＩの化合物を調製する場合）：
一般式ＩＩＩの化合物を
（Ｒ１）ｍ−（Ｚ１）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−Ｌ    （ＩＩＩ）
［式中、Ｒ１、Ｚ１、ｍ、ｎおよびｐは、本明細書中の前記で定義された通りであり；Ｌは、ハロゲン原子、例えばＣｌまたはＢｒなどの脱離基を示す］
一般式ＩＶの化合物と
【０１０４】
【化１２】
2012528842.tif 000044
【０１０５】
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｚ２、Ｒ２、Ｌ２、Ｌ３、Ｘおよびｑは、本明細書中の前記で定義された通りである］反応させるステップ。
【０１０６】
反応を簡便には、例えばアセトン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯまたはジオキサンなどの極性溶媒などの溶媒または溶媒の混合物中、場合によって無機または有機塩基の存在下、便宜的には１５０℃までの温度で、好ましくは−２０から８０℃の間の温度で実施する。
【０１０７】
（ｂ）（Ｌ１が基−（ＣＨ２）ｐ−Ｘ−（ＣＨ２）ｑ−（ここで、ＸはＯ、ＳまたはＮＨであり；ｐは０から４の整数であり；ｑは１から５の整数であり；ｐおよびｑの合計は１から５の整数である）を表す式ＩまたはＩＩの化合物を調製する場合）
一般式Ｖの化合物を
（Ｒ１）ｍ−（Ｚ１）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＸＨ（Ｖ）
［式中、Ｒ１、Ｚ１、ｍ、ｎ、ｐおよびＸは、本明細書中の前記で定義された通りである］
一般式ＶＩの化合物と
【０１０８】
【化１３】
2012528842.tif 000045
【０１０９】
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｚ２、Ｒ２、Ｌ２、Ｌ３およびｑは、本明細書中の前記で定義された通りであり；Ｌは、ハロゲン原子、例えばＣｌまたはＢｒなどの脱離基を示す］反応させるステップ。
【０１１０】
反応を簡便には、例えばアセトン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯまたはジオキサンなどの極性溶媒などの溶媒または溶媒の混合物中、場合によって無機または有機塩基の存在下、便宜的には１５０℃までの温度で、好ましくは−２０から８０℃の間の温度で実施する。
【０１１１】
（ｃ）（Ｘ１およびＸ２が両方ともＮであり、Ｚ１が存在しない式ＩまたはＩＩの化合物を調製する場合）：
一般式ＶＩＩの化合物を
【０１１２】
【化１４】
2012528842.tif 000046
【０１１３】
［式中、Ｚ２、Ｒ２およびＬ３は、本明細書中の前記で定義された通りである］
一般式ＶＩＩＩの化合物と
【０１１４】
【化１５】
2012528842.tif 000047
【０１１５】
［式中、Ｒ１およびＬ１は、本明細書中の前記で定義された通りである］反応させるステップ。
【０１１６】
反応を簡便には、例えばアセトン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯまたはジオキサンなどの極性溶媒などの溶媒または溶媒の混合物中、０から１００℃の間の温度で実施する。この反応の特定の例は、Ｌ１が基−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）２−であり、Ｒ１が水素である例である。
【０１１７】
（ｄ）（Ｌ１が基−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ２−（ＣＨ２）ｑ−（ここで、ｐは０から５の整数であり；ｑは０から５の整数であり；ｐおよびｑの合計は１から５の整数である）を表す式ＩまたはＩＩの化合物を調製する場合）：
一般式ＩＸの化合物を酸化させるステップ：
【０１１８】
【化１６】
2012528842.tif 000048
【０１１９】
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ２、Ｌ３、ｍ、ｎ、ｐおよびｑは、本明細書中の前記で定義された通りである］。
【０１２０】
硫化物を酸化させてスルホンにすることができる適切な酸化剤および条件には：塩化メチレン溶媒中、周囲温度で、シリカゲルに担持されているジクロロメタン中のモノペルオキシフタル酸マグネシウム（ＭＭＰＰ）；周囲温度で、ジクロロメタン中のＮａＩＯ４；周囲温度で、Ｈ２Ｏ２／ＭＴＯ（メチルトリオキソレニウム）／エタノール；０℃で、アセトニトリル中のオキソン；および周囲温度で、ジクロロメタン中で使用することができるメタ−クロロペルオキシ安息香酸が包含される。
【０１２１】
（ｅ）（Ｚ２が下式の基を表す式ＩまたはＩＩの化合物を調製する場合：
【０１２２】
【化１７】
2012528842.tif 000049
【０１２３】
一般式Ｘの化合物を脱水すること
【０１２４】
【化１８】
2012528842.tif 000050
【０１２５】
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびｍは、本明細書中の前記で定義された通りである）；
任意の慣用の薬剤を使用して、脱水を行うことができる。特定の例は、塩化ホスホリルである。
【０１２６】
（ｆ）所望の場合には、こうして得られた一般式ＩまたはＩＩの化合物を分割して、その立体異性体にすること；および／または
（ｇ）こうして得られた一般式ＩまたはＩＩの化合物を変換して、その塩、特に薬学的に許容されるその塩にすること。
【０１２７】
出発物質として使用される化合物は、文献から公知であるか、または市販されていることがある。別法では、文献から公知の方法によって、これらを得ることができる。
【０１２８】
本発明は、本明細書に開示されている化合物の全ての光学異性体および立体異性体を包含する。詳細には、本発明は、基Ｌ１、Ｚ１またはＲ１にキラル中心を有する任意の化合物の鏡像異性体に及ぶ。リンカー基Ｌ１にキラル中心を有する化合物の鏡像異性体は、本発明の特に好ましい態様を形成する。そのような化合物の実施例は、次の構造を有する化合物（９９）および（１００）の鏡像異性体である：
【０１２９】
【化１９】
2012528842.tif 000051
【０１３０】
一般式Ｉ、ＩＩ、Ｉａ、ＩＩａ、Ｉｂ、ＩＩｂ、Ｉｃ、ＩＩｃ、ＩＩｄおよびＩＩｅの化合物は、その鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体に分割することができる。例えば、これらがキラル中心を１つだけ含有する場合、これらは、ラセミ化合物の形態で得られるか、または純粋な鏡像異性体、即ちＲ体またはＳ体で得られる。ラセミ化合物として生じる化合物はいずれも、キラル相でのカラム分離などの当分野で公知の方法によって、または光学的に活性な溶媒からの再結晶化によって、その鏡像異性体に分離することができる。少なくとも２個の不斉炭素原子を有する化合物は、その物理化学的差違を元に、自体公知の方法を使用して、例えばクロマトグラフィーおよび／または分別結晶化によって、そのジアステレオ異性体に分割することができ、これらの化合物がラセミ体で得られる場合、それらを続いて、鏡像異性体に分割することができる。
【０１３１】
本発明による化合物は、無機または有機の酸または塩基を用いて、その塩に、特に薬学的に許容されるその塩に変換することができる。この目的のために使用することができる酸には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルホン酸、メタンスルホン酸、リン酸、フマル酸、コハク酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸およびアスコルビン酸が包含される。この目的に適し得る塩基には、アルカリおよびアルカリ土類金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは水酸化セシウム、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、シクロヘキシルアミンおよびジシクロヘキシルアミンなどのアンモニアおよび有機アミンが包含される。塩を形成するための手順は、当分野で慣用のものである。
【０１３２】
さらなる態様では、本明細書中に定義されている通りの式Ｉ、ＩＩ、Ｉａ、ＩＩａ、Ｉｂ、ＩＩｂ、Ｉｃ、ＩＩｃ、ＩＩｄもしくはＩＩｅの化合物または薬学的に許容されるその塩を、１種または複数の薬学的に許容される担体または添加剤と共に含む医薬製剤を提供する。
【０１３３】
本発明による化合物およびその薬学的に許容される塩は、価値のある薬理学的特性、特にβ−カテニンに対する阻害作用を有する。Ｗｎｔ経路においてシグナル伝達を阻害する、詳細には核β−カテニンのレベルを低減するその能力の観点から、本発明による化合物およびその薬学的に許容される塩は、Ｗｎｔ経路におけるシグナル伝達の過剰活性化によって影響を受け得る任意の状態または疾患、詳細には、β−カテニンの活性化を伴う状態または疾患を治療および／または予防するために適している。
【０１３４】
「Ｗｎｔシグナル伝達経路」という用語は、とりわけＷｎｔ、ＬＲＰ（ＬＤＬ−受容体関連タンパク質）、Ｆｒｉｚｚｌｅｄおよびβ−カテニンによって通常は媒介されて、遺伝子発現の変化およびＷｎｔ活性に特徴的な他の表現型変化をもたらす一連の事象を指すために使用されている。
【０１３５】
Ｗｎｔ経路は、様々な癌の病理において中心的な役割を果たしている。したがって本発明の化合物は特に、腫瘍細胞、詳細には腺癌などの癌腫の増殖を予防および／または遅延させるために適している。より具体的には、化合物は、次の癌を治療および／または予防する際に有効である：結腸癌（結腸直腸癌など）、膵臓癌（例えば膵臓腺癌）、胃癌、肝臓癌（例えば肝細胞および肝芽腫癌）、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌（例えば黒色腫）、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌（例えば卵巣子宮内膜癌）、膀胱癌、甲状腺癌（例えば甲状腺未分化癌）、頭頚部癌、乳癌および前立腺癌。特に好ましくは、本明細書に記載の化合物は、乳癌、非小細胞肺癌、卵巣、甲状腺、結腸直腸癌および膵臓癌を治療および／または予防する際に使用することができる。乳癌、非小細胞肺癌、膵臓癌および結腸直腸癌の治療または予防は、本発明の特に好ましい態様を表す。
【０１３６】
本明細書で使用される場合、「増殖」という用語は、有糸分裂を受けている細胞を指す。「増殖の遅延」という用語は、化合物が癌細胞の増殖を阻害することを示す。好ましい実施形態では、「増殖の遅延」は、ＤＮＡ複製が、未処置の細胞において観察されるよりも少なくとも１０％少ない、より好ましくは未処置の癌細胞において観察されるよりも少なくとも２５％少ない、さらにより好ましくは少なくとも５０％少ない、例えば７５％、９０％または９５％少ないことを示す。
【０１３７】
「癌腫」という用語は、上皮細胞から生じる任意の悪性増殖を指す。例示的な癌腫には、基底細胞癌腫、扁平上皮細胞癌腫および腺癌が包含される。腺癌は、腺上皮で発生する悪性腫瘍であり、結腸直腸、膵臓、乳房および前立腺の癌を包含する。
【０１３８】
よって、さらなる態様から考慮すると、本発明は、治療で使用するための式Ｉ、ＩＩ、Ｉａ、ＩＩａ、Ｉｂ、ＩＩｂ、Ｉｃ、ＩＩｃ、ＩＩｄもしくはＩＩｅの化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【０１３９】
別段に規定されていない限り、本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、治療および予防の両方を包含することが意図されている。
【０１４０】
さらなる態様では、本発明は、結腸癌（結腸直腸癌など）、膵臓癌、胃癌、肝臓癌（例えば肝細胞癌および肝芽腫癌）、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌（例えば黒色腫）、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌または前立腺癌の治療または予防で使用するための式Ｉ、ＩＩ、Ｉａ、ＩＩａ、Ｉｂ、ＩＩｂ、Ｉｃ、ＩＩｃ、ＩＩｄもしくはＩＩｅの化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【０１４１】
別の態様では、本発明は、結腸癌（結腸直腸癌など）、膵臓癌、胃癌、肝臓癌（例えば肝細胞癌および肝芽腫癌）、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌（例えば黒色腫）、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌または前立腺癌を治療または予防する方法において使用するための医薬品を製造する際の式Ｉ、ＩＩ、Ｉａ、ＩＩａ、Ｉｂ、ＩＩｂ、Ｉｃ、ＩＩｃ、ＩＩｄもしくはＩＩｅの化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【０１４２】
結腸癌（結腸直腸癌など）、膵臓癌、胃癌、肝臓癌（例えば肝細胞癌および肝芽腫癌）、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌（例えば黒色腫）、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌または前立腺癌を撲滅または予防するためにヒトまたは非ヒト動物身体を治療する方法であって、前記身体に、本明細書に規定されている有効量の式Ｉ、ＩＩ、Ｉａ、ＩＩａ、Ｉｂ、ＩＩｂ、Ｉｃ、ＩＩｃ、ＩＩｄもしくはＩＩｅの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む方法も提供される。
【０１４３】
所望の活性を達成するために必要な投薬量は、投与される予定の化合物、患者、状態の性質および重症度、投与方法および回数に左右されるはずであり、選択に従って変化または調節することができる。典型的には、投薬量は、１から１００ｍｇ、好ましくは１から３０ｍｇ（静脈内投与の場合）および１から１０００ｍｇ、好ましくは１から２００ｍｇ（経口投与の場合）の範囲であると予測され得る。
【０１４４】
本発明の化合物は、１種または複数の慣用の担体および／または添加剤を用いて、当分野で周知の技術に従って製剤化することができる。典型的には、組成物を、経口投与に、または例えば皮内、皮下、腹腔内もしくは静脈内注射による非経口投与に合わせる。したがって、適切な医薬形態には、活性成分を、場合によってコーンスターチ、ラクトース、スクロース、微結晶性セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、クエン酸、酒石酸、水、水／エタノール、水／グリセロール、水／ソルビトール、水／ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ステアリルアルコール、カルボキシメチルセルロースもしくは硬い脂肪などの脂肪族物質または上記のいずれかの適切な混合物などの１種または複数の慣用の不活性担体および／または賦形剤と共に含有するそのままか、またはコーティングされた錠剤、カプセル剤、懸濁剤および液剤が包含される。
【０１４５】
機能活性に関する標準なアッセイを使用して、本発明の化合物の薬理学的特性を分析することができる。本発明の化合物を試験するための詳細なプロトコルは、実施例において示す。
【０１４６】
本発明をここでは、次の非限定的な実施例において、添付の図面を参照しつつより詳細に記載する。
【図面の簡単な説明】
【０１４７】
【図１】ＳｕｐｅｒＴＯＰＦｌａｓｈプラスミドをトランスフェクションされ、０．１〜１０μＭの化合物番号１で処置されたＨＥＫ２９３細胞でルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）測定を使用する、レポーター系での化合物特異性アッセイの結果を示すグラフである。陽性対照（＋）３０％Ｗｎｔ３ａ−ＣＭおよび陰性対照（−）刺激なし。破線は、ＩＣ５０閾値を示す。Ｌｕｃアッセイにおける値は、３つの独立した実験の最小値の平均である。
【図２】Ａ）Ｓｈｈ  Ｌｉｇｈｔ２細胞（Ｇｌｉ１−Ｌｕｃ）（陽性対照（＋）はＳｈｈ−ＣＭ、陰性対照（−）は刺激なし、さらなる対照としてＳｈｈ阻害薬（シクロパミン））；Ｂ）ＮＦ−κＢレポータープラスミド（ＮＦ−κＢ−Ｌｕｃ）をトランスフェクションされたＨＥＫ２９３細胞（陽性対照（＋）は１０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦα、陰性対照（−）は刺激なし（Ｌｕｃアッセイの値は、３つの独立した実験の最小値の平均である））；およびＣ）ＳＷ４８０細胞（平行対照ＳＷ４８０細胞系におけるＳＴ−ｄ１ＥＧＦＰ値とＣＭＶ−ｄ１ＥＧＦＰ発現との比として示されるＳＴ−ｄ１ＥＧＦＰレポーターの用量依存性阻害）における化合物番号１の１または１０（または２５）μＭの作用を示すグラフである。
【図３】Ａ）化合物番号１によるＸｅｎｏｐｕｓ胚における二重軸形成の阻害の定量化（ｎは各群で試験された胚の数）；およびＢ）ＸＷｎｔ８によって誘発された重複軸を備えた胚および化合物番号１によるそのブロックを伴う胚の例を示す図である。
【図４】結腸癌細胞ＳＷ４８０およびＤＬＤ−１におけるアキシン２、Ｓｐ５およびＮｋｄ１遺伝子の相対的に低い発現を証明するリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。３つの独立した実験からの平均値が示されている。
【図５】対照細胞系ＨｅＬａ、ＴＨＬＥ−２およびＭｅＷｏと比較した場合のＳＷ４８０結腸直腸細胞の細胞増殖における濃度依存性相対的低下を示すＭＴＳアッセイの結果を示すグラフである。２つの独立した実験からプールされたデータが示されている。
【図６】化合物番号１で処置されたＳＷ４８０細胞のＢｒｄＵ／ＰＩ二重標識：Ａ）細胞周期のＧ１、ＳおよびＧ２／Ｍ期の細胞を表す図示コンパートメントを伴う散布図；およびＢ）処置された細胞およびＤＭＳＯ対照において、各細胞周期フェーズでゲート制御された細胞のパーセンテージを示す複数のアッセイからの代表データを示す図である。
【図７】ＧＳＫ−３βのレベルでのＬｉＣｌによる標準Ｗｎｔ経路の細胞内刺激は、０．１〜１０μＭ範囲の化合物番号１によって中和されることを示すグラフである。陽性対照（＋）は２５ｍＭのＬｉＣｌ、陰性対照（−）はＬｉＣｌなし。示されている結果は、３つの独立した実験の平均である。
【図８】化合物番号１で細胞を処置した後のβ−カテニンレベルの変化を示すグラフである：Ａ）β−カテニンに対する抗体を備えたＳＷ４８０細胞からの溶解産物のウェスタンブロット。正常β−カテニン（β−カテニン）の全量は、化合物を添加してから７２時間後に低下し、特に、活性β−カテニン（非リン酸化活性β−カテニン、ＡＢＣ）は、１μＭの化合物番号１でかろうじて検出可能である。分解性の形態（Ｎ−末端でリン酸化、ｐβ−カテニン）が、化合物番号１を添加してから２４時間後に一時的に上昇する（複数のアッセイからの代表的なデータが示されている）；およびＢ）ＳＷ４８０細胞におけるβ−カテニン（β−カテニン）に対する抗体での免疫組織化学および併合（β−カテニンＤＡＰＩ）写真。核（およびおそらく細胞質も）β−カテニンの量は、化合物１に７２時間曝露した後に大幅に減少する。細胞膜中にはβ−カテニンが存在する。
【図９】ＳＴ−Ｌｕｃレポーターと、全長β−カテニン、リン酸化部位に点突然変異を有するβ−カテニン（ｄａ−Ｃａｔ）、β−カテニンのＮ−末端欠失（ΔＮ−Ｃａｔ）またはＬＥＦ−１に融合しているβ−カテニントランス活性化ドメイン（ＣＬＥＦ）とを過渡的に同時トランスフェクションされているＨＥＫ２９３細胞のグラフである。４８ウェル当たり数ナノグラムの範囲にプラスミドコンストラクトを希釈することによって、１０〜２０倍誘発が達成された。「ｎ」は、複数の独立した実験からの個々のウェルの数を表す。比較的高い標準偏差は、非常に小さな用量のプラスミドでのトランスフェクション効率の弱い再現性による（１ウェル当たり数ナノグラム）。
【図１０】免疫不全マウスにおける結腸癌細胞の異種移植片の結果を示す図である：Ａ）化合物番号１での処置の２９日後の全腫瘍質量のドットプロット（線（−）は腫瘍質量の平均値を示す）；Ｂ）処置および対照動物コホートからの腫瘍でのｈＧＵＳＢ  ｍＲＮＡに対して正規化されたＳｐ５  ｍＲＮＡの検出を伴うリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ；およびＣ）移植されたＳＷ４８０細胞を標識するβ−カテニンに対する抗体および活性化ストローマに対する抗体（抗平滑筋アクチン）での免疫組織化学（ストローマでは変化が無かったのに対して、ＳＷ４８０細胞分布が観察され得た）。
【図１１】処置動物での化合物番号１のレベルを示す図である。注射の２９日後での腫瘍（Ａ）および血漿（Ｂ）での化合物番号１の蓄積が示されている。
【図１２】Ａ）化合物番号１で処置した後の小腸における全ての腫瘍の合計（ｍｍ２で）；およびＢ）化合物番号１またはＤＭＳＯを注射されたＡＰＣＭｉｎマウスの体重を示すグラフである。
【図１３】ＡＰＣ（＋／−）マウスでの腺腫ポリポーシスの発病率に対する化合物番号１の作用を示すグラフである。Ａ）は、室を起点として小腸（ｃｍ）に沿った腫瘍の分布および発生頻度を示すラインを伴うドットプロットである。Ｂ）は、ヒストグラムの右側に表で列挙されている通りの種々のサイズ群（ｍｍ２）での小腸における腫瘍の数のヒストグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【０１４８】
実施例１から８で調製される化合物は、実施例９から１７の最終生成物を調製する際に使用するための中間体である。実施例９から１７および３３から６５で調製される化合物は、式Ｉの最終生成物である。
【実施例１】
【０１４９】
中間体１．４の調製
【０１５０】
【化２０】
2012528842.tif 000052
【０１５１】
（ａ）化合物１．２の調製：
撹拌されているＮＨ２ＯＨ  ＨＣｌ（２．９ｇ、４３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ懸濁液に、Ｅｔ３Ｎ（５．３ｇ、５２ｍｍｏｌ）を加え、次いでこれを、周囲温度で３０分間撹拌した。化合物１．１（５ｇ、４３ｍｍｏｌ）を加え、５０℃に一晩加熱した。生じた溶液をそのまま真空濃縮して、ＥｔＯＨを除去し、残渣をＥｔ２Ｏに入れ、２ＮのＨＣｌ溶液によって抽出した。ＨＣｌ層を２Ｎの水酸化ナトリウム溶液でｐＨ７〜８に調節すると、白色の固体が形成した。これを濾過し、真空下、５０℃で一晩乾燥させて、淡色の固体（４．５ｇ）を得た。
【０１５２】
収率：６４％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 9.53 (1H, s, O-H), 7.56-7.54 (2H, dd, Ph-H), 7.18-7.16 (2H, dd, Ph-H), 5.74 (2H, s, -NH2).
（ｂ）化合物１．４の調製：
撹拌されている化合物１．２（５００ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ懸濁液に、ピリジン（４４３ｍｇ、３．９ｍｍｏｌ）および化合物１．３（４４３ｍｇ、３．９ｍｍｏｌ）を、氷浴を用いて加えた。次いで、混合物を周囲温度で３時間撹拌した。その後、４０℃に加温し、一晩撹拌した。生じた溶液をシリカゲルカラムによって精製して、白色の固体（３５０ｍｇ）を得た。収率：５１％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.92-7.90 (2H, dd, Ph-H), 7.40-7.38 (2H, dd, Ph-H), 5.18 (2H, s, -CH2-), 2.39 (3H, s, -CH3-).
【実施例２】
【０１５３】
中間体２．４の調製
【０１５４】
【化２１】
2012528842.tif 000053
【０１５５】
（ａ）化合物２．３の調製：
撹拌されている化合物２．１（１．３７ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ３０ｍｌ懸濁液に、化合物２．２（１．６５ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、これを１時間還流させ、白色の沈殿物（化合物２．３、２．２ｇ）を濾過によって回収した。収率：７３％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.84 (1H, s, -NH), 9.77-9.74 (2H, d, -NH), 8.77-8.75 (2H, dd, Py-H), 7.85-7.83 (2H, dd, Py-H), 7.26-7.24 (2H, dd, Ph-H), 6.91-6.88 (2H, dd, Ph-H), 3.74 (3H, s, -CH3O-).  ESI MS: 303 ([M+H]+)
（ｂ）化合物２．４の調製：
撹拌されている化合物２．３（２ｇ、６．６ｍｍｏｌ）の２ＮのＫＯＨ溶液中の懸濁液を８０℃に２時間加熱した。反応混合物を周囲温度に冷却した後に、３ＮのＨＣｌを加えて、溶液を酸性化した。白色の沈殿物（化合物２．４、１．７ｇ）を濾過によって回収した。収率：９０％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 14.31 (1H, s, -SH), 8.59-8.58 (2H, dd, Py-H), 7.34-7.31 (2H, dd, Py-H), 7.26-7.24 (2H, dd, Ph-H), 7.07-7.05 (2H, dd, Ph-H), 3.80 (3H, s, -CH3O-).
ESI MS:285 ([M+H]+)
【実施例３】
【０１５６】
中間体３．４の調製
【０１５７】
【化２２】
2012528842.tif 000054
【０１５８】
（ａ）化合物３．３の調製：
撹拌されている化合物３．１（１．３７ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ３０ｍｌ懸濁液に、化合物３．２（１．７ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、これを１時間還流させ、白色の沈殿物（化合物３．３、２ｇ）を濾過によって回収した。収率：６５％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm):10.84 (1H, s, -NH), 9.87 (2H, s, -NH), 8.78-8.77 (2H, dd, Py-H), 7.85-7.84 (2H, dd, Py-H), 7.50-7.47 (2H, dd, Ph-H), 7.40-7.38 (2H, dd, Ph-H).
ESI MS:307 ([M+H]+)
（ｂ）化合物３．４の調製：
撹拌されている化合物３．３（１．６ｇ、５．２ｍｍｏｌ）の２ＮのＫＯＨ溶液中の懸濁液を８０℃に２時間加熱した。反応混合物を周囲温度に冷却した後に、３ＮのＨＣｌを加えて、溶液を酸性化した。白色の沈殿物（化合物３．４、１．２ｇ）を濾過によって回収した。収率：８０％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 14.39 (1H, s, -SH), 8.61-8.60 (2H, dd, Py-H), 7.63-7.61 (2H, dd, Py-H), 7.49-7.47 (2H, dd, Ph-H), 7.27-7.26 (2H, dd, Ph-H).
ESI MS:289 ([M+H]+)
【実施例４】
【０１５９】
中間体４．５の調製
【０１６０】
【化２３】
2012528842.tif 000055
【０１６１】
（ａ）化合物４．２の調製：
撹拌されているＫ２ＣＯ３（０．９５ｇ、７ｍｍｏｌ）および化合物４．１（１ｇ、３．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ２０ｍｌ中の混合物に、ＭｅＩ（０．６ｇ、４．２ｍｍｏｌ）を５分間にわたって滴加した。混合物を周囲温度で２時間撹拌し、水に注いだ。白色の沈殿物（化合物４．２、７５０ｍｇ）を濾過によって回収した。収率：７１％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.58-8.57 (2H, dd, Py-H), 7.43-7.40 (2H, dd, Py-H), 7.32-7.31 (2H, dd, Ph-H), 7.12-7.10 (2H, dd, Ph-H), 3.83(3H, s, -CH3O-), 2.63 (3H, s, CH3-). ESI MS:299 ([M+H]+)
（ｂ）化合物４．３の調製：
撹拌されている化合物４．２（５００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍｌ）溶液に０℃で、ｍ−ＣＰＢＡ（１．１５ｇ、６．８ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。次いで、反応混合物を周囲温度に加温し、３時間撹拌した。生じた溶液をシリカゲルカラムによって精製して、白色の固体３２０ｍｇを得た。収率：５５％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.25-8.23 (2H, dd, Py-H), 7.57-7.55 (2H, dd, Py-H), 7.35-7.34 (2H, dd, Ph-H), 7.11-7.09 (2H, d, Ph-H), 3.83 (3H, s,- CH3O-), 3.42 (3H, s, CH3-). LCMS: 347 ([M+H]+)
（ｃ）化合物４．４の調製：
化合物４．３（３００ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（２２７ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）およびＦｅ（７３ｇ、１．３ｍｍｏｌ）をＨＯＡｃ６ｍｌ中で３０分間還流させた。次いで、混合物を周囲温度に冷却し、白色の沈殿物（化合物４．４、１８０ｍｇ）をクロマトグラフィーによって回収した。
【０１６２】
収率：６３％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.25-8.23 (2H, dd, Py-H), 7.57-7.55 (2H, dd, Py-H), 7.35-7.34 (2H, dd, Ph-H), 7.11-7.09 (2H, dd, Ph-H), 3.83 (3H, s, -CH3O-), 3.42 (3H, s, CH3).
LCMS:331 ([M+H]+) 
（ｄ）化合物４．５の調製：
撹拌されている化合物４．４（１６０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６ｍｌ）溶液に、ＮａＯＨ（７７ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を８０℃に２．５時間加熱した。反応混合物を周囲温度に冷却した後に、３ＮのＨＣｌを加えて、溶液を酸性化した。次いで、白色の沈殿物（化合物４．５、８５ｍｇ）をクロマトグラフィーによって回収した。収率：６５％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ(ppm):12.39 (1H, s, -OH) , 8.56 (2H, dd, Py-H), 7.28-7.25 (2H, dd, Py-H), 7.25-7.23 (2H, dd, Ph-H), 7.04-7.02 (2H, dd, Ph-H), 3.80 (3H, s, -CH3O).
LCMS: 269 ([M+H]+)
【実施例５】
【０１６３】
中間体５．３の調製
【０１６４】
【化２４】
2012528842.tif 000056
【０１６５】
化合物５．１（５５０ｍｇ、３．６６ｍｍｏｌ）をジオキサン（４０ｍｌ）に溶かし、化合物５．２（５００ｍｇ、３．６６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を８０℃に加熱し、１時間撹拌し、次いで、混合物を周囲温度に冷却し、ＢＦ３．Ｅｔ２Ｏ（１ｍｌ）を加えた。混合物を８０℃に加温し、一晩撹拌した。濃縮した後に、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝８０：１）によって、所望の生成物を白色の固体として９３ｍｇ得た。収率：１１．５％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.91-7.89 (2H, dd, Ph-H), 7.39-7.37 (2H, dd, Ph-H), 4.08 (2H, t, -CH2-), 3.53 (2H, t, -CH2-), 2.38 (3H, s, CH3-).
【実施例６】
【０１６６】
中間体６．４の調製
【０１６７】
【化２５】
2012528842.tif 000057
【０１６８】
（ａ）化合物６．２の調製：
化合物６．１（５ｇ、３７．９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（３０ｍＬ）溶液に、ＮＨ２ＯＨ  ＨＣｌ（２．６ｇ、３７．９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を周囲温度で０．５時間撹拌した。次いで、温度を５０℃まで一晩上昇させた。溶媒を除去した。残渣を水に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、白色の固体４．５ｇを得た。収率：６４．７％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 9 .74 (1H, s, O-H), 7.70-7.68 (2H, dd, Ph-H), 7.45-7.43 (2H, dd, Ph-H), 5.89 (2H, s, -NH2).
（ｂ）化合物６．４の調製：
化合物６．２（１ｇ、５．４５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、ピリジン（８６１ｍｇ、１０．９ｍｍｏｌ）を周囲温度で加え、化合物６．３（７３８ｍｇ、６．５４ｍｍｏｌ）を氷浴中で加えた。混合物を周囲温度で１時間撹拌した。次いで、温度を４０℃に一晩上昇させた。混合物を水に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、最後にカラムクロマトグラフィーによって精製して、白色の固体７００ｍｇを得た。収率：５７．４％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.04-8.02 (2H, dd, Ph-H), 7.68-7.65 (2H, dd, Ph-H), 5.198 (2H, s, -CH2-).
【実施例７】
【０１６９】
中間体７．３の調製
【０１７０】
【化２６】
2012528842.tif 000058
【０１７１】
撹拌されている化合物７．１（５００ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）のジオキサン（２０ｍｌ）懸濁液に、化合物７．２（５１７ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を３時間、還流下で撹拌した。その後、これを水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。濃縮およびクロマトグラフィーによって、所望の生成物３００ｍｇを無色のオイルとして得た。収率：３６％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.90-7.88 (2H, dd, Ph-H), 7.37-7.35 (2H, dd, Ph-H), 4.00 (2H, s,-CH2-), 2.38 (3H, s, CH3-), 1.52 (6H, s, CH3-).  LC-MS m/z: 251 ([M+H]+).
【実施例８】
【０１７２】
中間体８．２の調製
【０１７３】
【化２７】
2012528842.tif 000059
【０１７４】
化合物８．１（２２０ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）をジオキサン（３ｍｌ）に溶かし、次いで、ＢｒＣＮ（９６ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（９２ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）およびＨ２Ｏ（３ｍｌ）を加えた。混合物を周囲温度で２時間撹拌し、濾過した。残渣をカラムクロマトグラフィーによってシリカで精製して、黄色の固体（７０ｍｇ）を得た。収率：２８．８１％。
1HNMR (400 MHz, DMSO) δ (ppm): 8.46 (2H, d, Py-H), 7.32-7.30 (2H, d, Py-H), 7.18-7.17 (2H, d, Ph-H), 7.10-7.08 (2H, d, Ph-H), 5.90 (2H, s, -NH2), 3.82 (3H, s, -OCH3).  
ESI MS: 268 ([M+H]+).
【実施例９】
【０１７５】
化合物（３）の調製
【０１７６】
【化２８】
2012528842.tif 000060
【０１７７】
撹拌されている化合物１．４（１００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のアセトン（１２ｍｌ）懸濁液に、化合物３．４（１３８ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（８３ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、これを還流下で１時間撹拌した。生じた溶液をそのまま真空下で濃縮して、アセトンを除去し、残渣を酢酸エチルで抽出した。シリカゲルカラムによる精製によって、白色の固体８０ｍｇを得た。収率：３６％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.61-8.60 (2H, dd, Py-H), 7.88-7.86 (2H, dd, Ph-H), 7.69-7.67 (2H, dd, Py-H), 7.58-7.56 (2H, dd, Ph-H), 7.40-7.38 (2H, dd, Ph-H), 7.32-7.30 (2H, dd, Ph-H), 4.81 (2H, s, -CH2-), 2.39 (3H, s, CH3-).  ESI MS: 461 ([M+H]+).  HPLC: 98%.
【実施例１０】
【０１７８】
化合物（４）の調製
【０１７９】
【化２９】
2012528842.tif 000061
【０１８０】
撹拌されている化合物１．４（３８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のアセトン（５ｍｌ）懸濁液に、化合物４．５（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（３１ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、これを還流で一晩撹拌した。生じた溶液をそのまま真空濃縮して、アセトンを除去し、残渣を酢酸エチルで抽出した。シリカゲルカラムによって精製して、白色の固体３０ｍｇを得た。収率：３８％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.59-8.57 (2H, dd, Py-H), 7.92-7.90 (2H, dd, Ph-H), 7.40-7.38 (2H, dd, Py-H), 7.36-7.34 (2H, dd, Ph-H), 7.26-7.24 (2H, dd, Ph-H), 7.08-7.05 (2H, dd, Ph-H), 5.59 (2H, s, -CH2-), 3.81 (3H, s, -CH3O-), 2.39 (3H, s, CH3-).  
ESI MS: 441 ([M+H]+).  HPLC: 98%.
【実施例１１】
【０１８１】
化合物（２）の調製
【０１８２】
【化３０】
2012528842.tif 000062
【０１８３】
化合物２．４（７７ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）をアセトン（７ｍｌ）に溶かし、Ｋ２ＣＯ３（４７ｍｇ、０．３２８ｍｍｏｌ）および化合物５．３（６０ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃に加熱し、２時間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、酢酸エチルで抽出した。カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２：１）によって、所望の生成物を白色の固体として３０ｍｇ得た。
【０１８４】
収率：２３．６２％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.58-8.56 (2H, dd, Py-H), 7.90-7.88 (2H, dd, Ph-H), 7.38-7.36 (2H, dd, Py-H), 7.31-7.29 (2H, dd, Ph-H), 7.21-7.20 (2H, dd, Ph-H), 7.07-7.05 (2H, dd, Ph-H), 4.77-4.74 (2H, t, -CH2-), 3.81 (3H, s, CH3O-), 3.66-3.62 (2H, t, -CH2-), 2.38 (3H, s, CH3-).  ESI MS: 471 ([M+H]+).  HPLC: 99.8%.
【実施例１２】
【０１８５】
化合物（５）の調製
【０１８６】
【化３１】
2012528842.tif 000063
【０１８７】
化合物６．４（１００ｍｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍＬ）溶液に、化合物２．４（１２７ｍｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流下で１．５時間撹拌した。次いで、溶媒を除去し、水を混合物に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。濃縮および再結晶化の後に、白色の固体１００ｍｇを得た。収率：４７％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.58-8.56 (2H, dd, Py-H), 7.99-7.98 (2H, dd, Ph-H), 7.66-7.63 (2H, dd, Py-H), 7.43-7.41 (2H, dd, Ph-H), 7.31-7.30 (2H, dd, Ph-H), 7.11-7.09 (2H, dd, Ph-H), 4.81(2H, s, -CH2-), 3.81 (3H, s, -CH3O-).  ESI MS: 476 ([M+H]+).  HPLC: 98.9%.
【実施例１３】
【０１８８】
化合物（６）の調製
【０１８９】
【化３２】
2012528842.tif 000064
【０１９０】
（ａ）化合物１３．２の調製：
化合物１３．１（１ｇ、８．１ｍｍｏｌ）のＳＯＣｌ２（１０ｍＬ）溶液を２時間還流させた。次いで、ＳＯＣｌ２を真空下で除去して、白色の固体１．１６ｇを得た。収率：９９％。
【０１９１】
（ｂ）化合物１３．４の調製：
化合物１３．２（１．１６ｇ、８．２ｍｍｏｌ）および化合物１３．３（０．９１ｇ、７．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。反応の間に形成した黄色の固体を吸引濾過によって単離し、メタノール中で再結晶化させて、所望の生成物（黄色の固体）１．２７ｇを得た。収率：６８％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.79 (1H, s), 8.99 (2H, d, J=6.0Hz), 8.27 (2H, d, J=6.0Hz), 7.71 (2H, d, J=8.0Hz), 6.96 (2H, d, J=8.0Hz), 3.77 (3H, s).
（ｃ）化合物１３．５の調製：
化合物１３．４（１ｇ、４．４ｍｍｏｌ）およびＬａｗｅｓｓｏｎ試薬（１．７７ｇ、４．４ｍｍｏｌ）のトルエン（１００ｍＬ）中の混合物を３時間還流させた。反応の間に形成した黄色の固体を吸引濾過によって単離し、トルエン（２０ｍＬ）およびＥｔＯＥｔ（２０ｍＬ）中で洗浄して、所望の生成物１．０５ｇを得た。収率：９８％。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２４５．３（［Ｍ＋Ｈ］＋）
（ｄ）化合物１３．６の調製：
化合物１３．５（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）中の混合物に、Ｎ２Ｈ４・Ｈ２Ｏ（１０２ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で２０分間撹拌した。次いで、溶液を水（２０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で２回抽出し、水（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４によって乾燥させ、濃縮した後に、所望の生成物８５ｍｇを得た（黄色の固体）。収率：８６％。
【０１９２】
（ｅ）化合物（６）の調製：
化合物１３．７（１０８ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）のトルエン（５ｍＬ）中の混合物に、ＤＣＣ（７２４ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。トルエン（５ｍＬ）に溶かした化合物１３．６（１７０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を滴加し、次いで、一晩還流させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶かし、１ＮのＮａＯＨ（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。濃縮の後に、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１〜１０：１）およびＰ−ＨＰＬＣによって、所望の生成物２０ｍｇを黄色の粘着性の固体として得た。
【０１９３】
収率：９％。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm): 8.54 (2H, d, J=6.0Hz), 7.32 (2H, d, J=6.0Hz), 7.16 (2H, d, J=8.8Hz), 7.04 (2H, d, J=8.8Hz), 3.90 (3H, s), 2.87 (4H, t), 2.28 (6H, s).
【実施例１４】
【０１９４】
化合物（１８）の調製
【０１９５】
【化３３】
2012528842.tif 000065
【０１９６】
化合物２．４（１２５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２８６ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）に溶かし、次いで、化合物７．３（１１０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１００℃に上げ、一晩撹拌し、次いで、混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。カラムクロマトグラフィーによって、所望の生成物を白色の固体（２８ｍｇ）として得た。
【０１９７】
収率：１３％。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.49-8.47 (2H, dd, Py-H), 7.80-7.78 (2H, dd, Ph-H), 7.37-7.35 (2H, dd, Py-H), 7.30-7.28 (2H, dd, Ph-H), 7.10-7.09 (2H, dd, Ph-H), 7.09-7.07 (2H, dd, Ph-H), 3.81 (3H, s, CH3O-), 3.76 (2H, s,-CH2-), 2.34 (3H, s, CH3-), 1.52 (6H, s, CH3-). 
ESI-MS: 499 ([M+H]+).  HPLC: 99.2%
【実施例１５】
【０１９８】
化合物（１９）の調製
【０１９９】
【化３４】
2012528842.tif 000066
【０２００】
化合物８．２（６０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（７３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）に溶かした。化合物６．４（２３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７０℃に加熱し、２．５時間撹拌した。次いで、混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。カラムクロマトグラフィーによって、所望の生成物を黄色の固体（５ｍｇ）として得た。
【０２０１】
化合物８．２（８０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（９７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）に溶かした。化合物６．４（３１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７０℃に加熱し、２時間撹拌した。次いで、混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。生じた生成物をシリカゲルカラムによって精製して、黄色の固体（６ｍｇ）を得た。
1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm): 8.53-8.52 (2H, dd, Py-H), 7.92-7.90 (2H, dd, Ph-H), 7.32-7.28 (6H, dd, Py-H, Ph-H), 7.12-7.10 (2H, dd, Ph-H), 5.00-4.98 (2H, d, -CH2-), 4.59-4.56 (1H, t, -NH-), 3.92 (3H, s, CH3O-), 2.42 (3H, s, CH3-).  ESI MS: 440 ([M+H]+).  HPLC: 90%.
【実施例１６】
【０２０２】
化合物（１）の調製
【０２０３】
【化３５】
2012528842.tif 000067
【０２０４】
化合物１．４および２．４から出発して、実施例９の化合物（３）と同様に、化合物（１）を調製する。
【実施例１７】
【０２０５】
化合物（５８）の調製
次の反応スキームを使用して、化合物（５８）を調製することができる：
【０２０６】
【化３６】
2012528842.tif 000068
【０２０７】
実施例１８から２１は製剤の例であり、ここで、「作用物質」という言及は、その塩を包含する本発明による１種または複数の化合物を示す。
【実施例１８】
【０２０８】
作用物質１００ｍｇを含有する錠剤
各錠剤は：
作用物質      １００．０ｍｇ、
ラクトース      ８０．０ｍｇ、
コーンスターチ      ３４．０ｍｇ、
ポリビニルピロリドン      ４．０ｍｇ、
ステアリン酸マグネシウム      ２．０ｍｇ
を含有する。
【０２０９】
作用物質、ラクトースおよびコーンスターチを一緒に混合し、ポリビニルピロリドンの水溶液で均一に湿らせる。湿った組成物をふるいに掛け（メッシュサイズ２．０ｍｍ）、５０℃で乾燥させた。滑沢剤を加え、最終混合物を圧縮して、錠剤を形成する。各錠剤の最終質量は、２２０ｍｇである。
【実施例１９】
【０２１０】
作用物質１５０ｍｇを含有する錠剤
各錠剤は：
作用物質      １５０．０ｍｇ、
粉末化ラクトース      ８９．０ｍｇ、
コーンスターチ      ４０．０ｍｇ、
コロイドシリカ      １０．０ｍｇ、
ポリビニルピロリドン      １０．０ｍｇ、
ステアリン酸マグネシウム      １．０ｍｇ
を含有する。
【０２１１】
作用物質をラクトース、コーンスターチおよびシリカと混合し、ポリビニルピロリドン水溶液で湿らせる。湿った組成物を、メッシュサイズ１．５ｍｍのふるいに掛ける。生じた顆粒を４５℃で乾燥させ、次いで、ステアリン酸マグネシウムと混合する。混合物から錠剤を圧縮する。各錠剤の質量は３００ｍｇである。
【実施例２０】
【０２１２】
作用物質１０ｍｇを含有するアンプル
各アンプルは、
作用物質      １０．０ｍｇ、
０．０１Ｎの塩酸      適量、
再蒸留水      ２．０ｍｌまで添加
を含有する。
【０２１３】
作用物質を必要量の０．０１ＮのＨＣｌに溶かし、塩化ナトリウムで等張性にし、無菌濾過し、２ｍｌアンプルに移す。
【実施例２１】
【０２１４】
作用物質５０ｍｇを含有するアンプル
各アンプルは
作用物質      ５０．０ｍｇ、
０．０１Ｎの塩酸      適量、
再蒸留水      １０．０ｍｌまで添加
を含有する。
【０２１５】
作用物質を必要量の０．０１ＮのＨＣｌに溶かし、塩化ナトリウムで等張性にし、無菌濾過し、１０ｍｌアンプルに移す。
【実施例２２】
【０２１６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの標準Ｗｎｔシグナル伝達の阻害
化合物番号１によるＷｎｔシグナル伝達の阻害をｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＳｕｐｅｒＴＯＰフラッシュプラスミド（ＳＴ−Ｌｕｃ）を一過性トランスフェクションされたＨＥＫ２９３細胞（Ｖｅｅｍａｎ  ＭＴら、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１３：６８０〜６８５頁、２００３）で、０．１〜１０μＭの濃度でルシフェラーゼアッセイを使用して定量化した。ＨＥＫ２９３細胞は、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から購入し、供給者の推奨に従って保持した。
【０２１７】
実験
ポリ−Ｌリシンでコーティングされた４８ウェルプレートに播種されたＨＥＫ２９３細胞８００００個を使用して、トランスフェクションを行った。２４時間後に、全プラスミドＤＮＡ０．２５μｇ（ＳｕｐｅｒＴＯＰＦｌａｓｈ０．２３μｇ＋ｐＲＬ−ＴＫ（Ｒｅｎｉｌｌａ）０．０２μｇ、Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＦｕＧＥＮＥ６  ０．７５μｌ（Ｒｏｃｈｅ）を全体積で、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）２５μｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、製造者（Ｒｏｃｈｅ）が記載している通りに混合した。トランスフェクション混合物を平板培養されている細胞に加え、培地を２４時間後に変えた。
【０２１８】
トランスフェクションされた細胞を、３０％Ｗｎｔ３ａ−ＣＭ中の様々な濃度の化合物番号１と共に２４時間インキュベーションすることによって、ルシフェラーゼアッセイを行った（Ｗｎｔ３ａ含有調整培地をＬ  Ｗｎｔ３ａ細胞から、ＡＴＣＣが記載している通りに収集した）。処置されたレポーター細胞を全て最後に溶解させ、ホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケ活性を２０／２０ｎ  Ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ（Ｔｕｒｎｅｒ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ）でＤｕａｌ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ（Ｐｒｏｍｅｇａ）に記載されている通りに測定した。
【０２１９】
結果
図１は、細胞を０．１〜１０μＭの化合物番号１と共にインキュベーションした結果を示す。化合物番号１は、ＳＴ−Ｌｕｃアッセイによる標準Ｗｎｔシグナル伝達の著しい低減を示す（ＩＣ５０＝１μＭ）。
【実施例２３】
【０２２０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＷｎｔ経路阻害薬の特異性
化合物番号１の特異性を試験するために、３種の細胞系を使用した：
１）ソニックヘッジホッグ経路のための安定なレポーター系、Ｓｈｈ  Ｌｉｇｈｔ  ＩＩ細胞（Ｇｌｉ１−Ｌｕｃ、ＡＴＣＣから購入し、供給者の推奨に従って保持）；
２）ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターを一過性トランスフェクションされているＨＥＫ２９３細胞（ＮＦ−κＢ−Ｌｕｃ、Ｐｒｏｍｅｇａから購入）。結果は、図２Ａおよび２Ｂに示されている；および
３）ＡＰＣ遺伝子座での自発的な突然変異が原因の異常なＷｎｔ活性を有し、コンストラクトＳＴ−ｄ１ＥＧＦＰをトランスフェクションされているＳＷ４８０結腸直腸細胞系。この細胞系では、Ｗｎｔ−３ａＣＭを使用しなくても、ｄ１ＥＧＦＰレポーターは活性化される。即ち、この細胞系は、Ｗｎｔシグナル伝達経路を永続的に「スイッチオン」している。
【０２２１】
実験
１）Ｌｉｇｈｔ  ＩＩ細胞１０００００個を４８ウェルプレートに播種し、それを、５０％Ｓｈｈ−ＣＭ（Ｓｈｈ調整培地は、レンチウイルスを持つＰＡＮＣ−１細胞から収集した（ＶｉｒａＰｏｗｅｒ  Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して製造）中１０または１μＭの化合物番号１と、Ｓｈｈ  ｃＤＮＡ（マウスＳｈｈ  ｃＤＮＡをｐＬｅｎｔｉ６．２−ＧＷ／ＥｍＧＦＰ発現制御ベクター中でクローニングした））と共に４８時間インキュベーションすることによって、Ｓｈｈ  Ｌｉｇｈｔ  ＩＩアッセイを行った。
【０２２２】
２）実施例２２に記載されている通りにトランスフェクションを行ったが、但し、ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼ０．２３μｇおよびウミシイタケ０．０２μｇを使用した。トランスフェクションされた細胞を１または１０μＭの化合物番号１と共にｒＴＮＦ−α（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）１０ｎｇ／ｍｌ中で２４時間インキュベーションした。
【０２２３】
３）ＳＴ−ｄ１ＥＧＦＰ（ＳｕｐｅｒＴＯＰＦｌａｓｈフラッシュコンストラクトからのプロモーターをｄ１ＥＧＦＰ−Ｎ１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中でＣＭＶプロモーターの切除後にクローニングすることによって作成）をＳＷ４８０細胞（ＡＴＣＣから購入し、供給者の推奨に従って保持）にトランスフェクションした。ＳＴ−ｄ１ＥＧＦＰ  ＳＷ４８０およびＳＷ４８０  ＣＭＶ−ｄ１ＥＧＦＰ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）ＳＷ４８０細胞１０００００個を１２−ウェルプレートで平板培養し、翌日に１、１０または２５μＭの化合物番号１（または０．０１％、０．１％もしくは０．２５％ＤＭＳＯ対照）を細胞に加えた。７２時間のインキュベーションの後に、試料をトリプシン処理し、ｄ１ＥＧＦＰ発現についてＰＡＳ−ＰＰＣＳフローサイトメーターおよびセルソーター（Ｐａｒｔｅｃ）で分析した。
【０２２４】
結果
化合物番号１は、Ｈｈ（Ｓｈｈ）またはＴＮＦ−α経路（図２Ａおよび２Ｂ）に対して実質的な活性化または阻害作用を示さない。しかし、図２Ｃは、ＳＷ４８０細胞におけるＷｎｔシグナル伝達経路の用量依存性阻害を示す（ＳＴ−ｄ１ＥＧＦＰとＣＭＶ−ｄ１ＥＧＦＰの活性の比は、２５μＭの化合物番号１で６３．５％低減した）。
【０２２５】
したがって、化合物番号１はＷｎｔシグナル伝達経路の特異的阻害薬であると結論することができる。図２Ｃからの結果は、化合物がこの経路で、突然変異ＡＰＣ遺伝子産物にも関わらず、即ち、アキシン／ＡＰＣ／β−カテニン／ＧＳＫ−３β複合体（「破壊複合体」）で、またはその下流で作用することを示唆している。
【実施例２４】
【０２２６】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ効力およびＷｎｔ経路阻害薬の特異性
標準Ｗｎｔシグナル伝達を遮断する際の化合物番号１のｉｎ  ｖｉｖｏ効力および特異性を調査するために、アフリカツメガエル軸重複アッセイを行った。異所性ＸＷｎｔ８  ｍＲＮＡを予定腹側に注射することで、標準Ｗｎｔ経路シグナル伝達を活性化させるが、これは、第２の体軸を誘発する。このアッセイは、Ｗｎｔシグナル伝達に作用を有するかもしれない化合物の生物学的作用を試験するための確かな方法をもたらす。
【０２２７】
実験
キャップＸＷｎｔ８  ｍＲＮＡを線形化プラスミドテンプレートから、ｍＭＥＳＳＡＧＥ  ｍＭＡＣＨＩＮＥキット（Ａｍｂｉｏｎ）を使用して合成した。ＸＷｎｔ８  ４ｎｌ（１０ｐｇ）を化合物番号１またはビヒクルと共に、４細胞段階のアフリカツメガエル胚の２つの予定腹側分割球の赤道領域に注射した。胚を１９℃でインキュベーションし、軸重複を３６時間後にスコアリングした。
【０２２８】
結果
図３Ａおよび３Ｂに示されている通り、０．４ｐｍｏｌの化合物番号１の注射は、ＤＭＳＯ対照（ｎ＝２８３）と比較して、二重軸形成において８７％の低減（ｎ＝５３５）をもたらした。
【実施例２５】
【０２２９】
Ｗｎｔ標的遺伝子発現の特異的阻害
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析を使用して、発現Ｗｎｔ標的遺伝子の特異的阻害を確認した。
【０２３０】
実験
ＤＬＤ−１（ＡＴＣＣから購入し、供給者の推奨に従って保持）またはＳＷ４８０細胞１０００００個を１２ウェルプレートに播種した。２４時間後に、化合物番号１を含有する溶液を１０または２５μｍの最終濃度で加えた。試験化合物を含有する培地を毎日３日間変えた。
【０２３１】
ＧｅｎＥｌｕｔｅ（商標）Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ）を使用して、ｍＲＮＡを収集した。ｃＤＮＡを精製ｍＲＮＡから、ＡｆｆｉｎｉｔｙＳｃｒｉｐｔ（商標）ＱＰＣＲ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いて合成した。次のプライマーをＭｘ３０００Ｐ（登録商標）ＱＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍのリアルタイムサーマルサイクラー（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ（ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を行った：
アキシン２  フォワード：５’−ＣＣＣＡＡＧＣＣＣＣＡＴＡＧＴＧＣＣＣＡＡＡＧ−３’
アキシン２  リバース：５’−ＣＡＧＧＧＧＡＧＧＣＡＴＣＧＣＡＧＧＧＴＣ−３’
Ｓｐ５  フォワード：５’−ＧＣＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＣ−３’
Ｓｐ５  リバース：５’−ＣＧＣＣＧＡＧＧＣＡＴＧＧＡＣＡＣＣＣＧ−３’
Ｎｋｄ１  フォワード：５’−ＴＣＡＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＣＣＧＣＣ−３’
Ｎｋｄ１  リバース：５’−ＴＣＣＣＧＧＧＴＧＣＴＴＣＧＧＣＣＴＡＴＧ−３’
ＧＡＰＤＨ  フォワード：５’−ＧＣＣＣＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＴＧＣＣＣＣＣＡ−３’
ＧＡＰＤＨ  リバース：５’−ＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＣＡＴＧＧ−３’
ｈＧＵＳＢ  フォワード  ５’−ＴＧＧＴＴＧＧＡＧＡＧＣＴＣＡＴＴＴＧＧＡ−３’
ｈＧＵＳＢ  リバース  ５’−ＧＣＡＣＴＣＴＣＧＴＣＧＧＴＧＡＣＴＧＴＴ−３’
結果を、対照遺伝子（ＧＡＰＤＨ）に対する標的遺伝子の発現の比として算出した。
【０２３２】
結果
ＳＷ４８０およびＤＬＤ−１細胞の両方において、アキシン２、ＳＰ５およびＮＫＤ１  ｍＲＮＡレベルの用量依存性低減が、１０（または２５）μＭの化合物番号１と共に７２時間インキュベーションした後に観察された（図４）。全般に、標的遺伝子発現の低減は、１０μＭ濃度でのＤＬＤ−１細胞においてより顕著であった。
【実施例２６】
【０２３３】
Ｗｎｔ経路阻害後の遺伝子発現分析
Ｉｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）を使用するマイクロアレイ分析を三重に行って、Ｗｎｔ経路阻害薬で処置された細胞での種々の遺伝子発現を調査した。
【０２３４】
実験
１０μＭおよび２５μＭの化合物番号１で処置されたＳＷ４８０細胞からのｍＲＮＡを３つの独立した実験から得て（実施例２５に記載されている通りに収集）、ハイブリッド化のためにＩｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）ＢｅａｄＣｈｉｐｓ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）ＴｏｔａｌＰｒｅｐ  ＲＮＡ増幅キット（Ａｍｂｉｏｎ  Ｉｎｃ．）＃ＩＬ１７９１を使用）で、全ＲＮＡ４００ｎｇを使用して増幅した。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応を一晩（１４時間）インキュベーションした。
【０２３５】
ＢｅａｄＳｔａｔｉｏｎのためのＩｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）Ｗｈｏｌｅ−Ｇｅｎｏｍｅ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ（Ｄｏｃ．＃１１２２６０３０．ｒｅｖ．Ｃ、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  Ｉｎｃ．）に従って、５８℃で一晩、標識されたｃＲＮＡをＩｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）Ｈｕｍａｎ−６  ｖ３  ＢｅａｄＣｈｉｐｓ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）にハイブリッドさせた。ハイブリッドされたＢｅａｄＣｈｉｐをストレプトアビジン−Ｃｙ３（ＡｍｅｒｓｈａｍＴＭ、ＰＡ４３００１）で染色して可視化し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）ＢｅａｄＡｒｒａｙ  Ｒｅａｄｅｒで走査した。走査された画像をＢｅａｄＳｔｕｄｉｏ  ３．１．３．０（Ｉｌｌｕｍｉｎａ  Ｉｎｃ）にインポートして、抽出および品質管理した。発現における０．５倍変化の判定基準を分析に適用した。
【０２３６】
結果
次のｐ値切捨てによって、これらの最終ヒット数：１０μＭの化合物番号１（ｐ＝０．０２：３８４ヒット）および２５μＭの化合物番号１（ｐ＝０．０２：８８１ヒット）を得た。
【０２３７】
既知のＷｎｔ標的遺伝子の転写は、化合物番号１で処置された細胞では影響を受けることが判明した（標的遺伝子のリストについては、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｔａｎｆｏｒｄ．ｅｄｕ／〜ｒｎｕｓｓｅ／ｗｎｔｗｉｎｄｏｗ．ｈｔｍｌを参照されたい）。該当する異なって発現された遺伝子のリストを下記の表１および２に示す。表１は、１０μＭまたは２５μＭの化合物番号１の添加でダウンレギュレーションされた遺伝子の例を示しており；表２は、アップレギュレーションされた遺伝子の例を示す。多くの既知のＷｎｔ標的遺伝子（欄３）は、処置された細胞では影響を受けた。影響を受けた遺伝子のうちの一部は、ＴＣＦ−４の誘発性ドミナントネガティブ型を発現するＬｓ１７４Ｔ結腸直腸癌細胞でも作用を受ける（欄４）（ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｅｔｅｒｉｎｇら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２００８）２８（８）、２７３２〜４４頁）。細胞周期制御に重要である影響を受けた他の遺伝子および調節標準Ｗｎｔシグナル伝達に関連した他の遺伝子もまた示されている。モジュレーション度（欄５）は、非処置試料と化合物番号１で処置された試料との間の変化の度合いの表示である。表１および２は、最もダウン（またはアップ）レギュレーションされた遺伝子を初めに示すように分類されている。
【０２３８】
【表２−１】
2012528842.tif 000069
【０２３９】
【表２−２】
2012528842.tif 000070
【０２４０】
【表３−１】
2012528842.tif 000071
【０２４１】
【表３−２】
2012528842.tif 000072
【実施例２７】
【０２４２】
ＳＷ４８０結腸癌細胞系のＧ１／Ｓ停止の誘発
標準Ｗｎｔシグナル伝達を阻害すると、一部の癌細胞系は部分的に、細胞周期のＧ１基で停止し（ｖａｎ  ｄｅ  ＷＭら  Ｃｅｌｌ  １１１：２４１〜２５０頁、２００２）、このことは、腫瘍細胞成長におけるＷｎｔ経路の重要性を証明している。したがって、細胞成長に対する化合物番号１の作用をＳＷ４８０細胞系で、ＭＴＳ分析を使用して試験した（ＭＴＳは比色基質３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムである）。
【０２４３】
実験
細胞３０００個を９６ウェルプレートに、各試料で四重に播種した。翌日、細胞培地を、様々な濃度の化合物番号１または０．５％ＤＭＳＯビヒクル（対照）と混合し、ウェルに加えた。
【０２４４】
インキュベーション時間０（ｔ０）を規定し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓＮｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（ＭＴＳ）プロトコル（Ｐｒｏｍｅｇａ）に記載されている通りに、播種された対照細胞のウェル８つを基質２０μｌと共に、フェノール不含のＤ−ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）１００μｌ中で３時間インキュベーションした。Ａ４９０値を記録した。
【０２４５】
試料を７２時間後に測定した。次の式を使用して、単一ウェル相対Ａ４９０試料値を決定した：（（試料Ａ４９０−平均Ａ４９０ｔ０）×１００）／（平均Ａ４９００．５％ＤＭＳＯ対照−平均Ａ４９０ｔ０）。
【０２４６】
結果
結果（図５に示されている）は、化合物番号１で処置した後のＳＷ４８０細胞の増殖の濃度依存性の低減を証明しており、その際、約１１．５μＭのＩＣ５０値を伴う。対照的に、ＨｅＬａ（子宮頚部腺癌）、ＴＨＬＥ２（肝細胞）およびＭｅＷｏ（黒色腫）細胞などの、内生標準Ｗｎｔ活性を欠いた対照細胞系では、僅かのみの増殖低減が観察された。
【実施例２８】
【０２４７】
細胞周期進行の分析
ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で対比染色された培養細胞をＢｒｄＵ標識することによって、細胞周期進行を測定した。
【０２４８】
実験
ＳＷ４８０細胞を播種し、３日間化合物に曝露したが、その際、実施例２４に記載されている通り毎日、培地を変えた。１０μＭのＢｒｄＵと共に３０分インキュベーションした後に、細胞をトリプシン処理し、１：１００希釈されたマウス抗−ＢｒｄＵ抗体（Ｒｏｃｈｅ）およびＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗マウス抗体（Ａ１１００１、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した。対比染色を１０μｇ／ｍＬのＰＩで２００μｇ／ｍＬのＲＮａｓｅ  Ｉ中で行った（両方ともＳｉｇｍａ）。試料をＰＡＳ−ＰＰＣＳフローサイトメーターおよびセルソーター（Ｐａｒｔｅｃ）で分析した。
【０２４９】
結果
二重標識細胞のＦＡＣＳ分析は、処置された結腸直腸細胞が部分的に、細胞周期のＧ１期で停止したことを示した。
【０２５０】
２５または１０μＭの化合物番号１で７２時間処置した後、ＤＭＳＯ対照と比較して、Ｓ期の細胞のパーセンテージは低下し、Ｇ１コンパートメントは上昇した（図６）。２５μＭの化合物番号１と一緒のインキュベーションは、Ｓ期細胞の細胞数をほぼ半分にし（パーセンテージは２８．４％から１６．２％へ低下）、Ｇ１期細胞を増やした（３７．３％から４６．４％へ）。
【実施例２９】
【０２５１】
Ｗｎｔ経路の作用点
ＧＳＫ−３βタンパク質（セリン／トレオニンタンパク質キナーゼ）の機能は、β−カテニンの不十分なリン酸化によって標準Ｗｎｔシグナル伝達の活性化をもたらすＬｉＣｌによってブロックされ得る（Ｐｈｉｅｌ  ＣＪら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．４１：７８９〜８１３、２００１；およびＫｌｅｉｎ  ＰＳら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８４５５〜８４５９、１９９６）。したがって、ＨＥＫ２９３細胞に、ＳｕｐｅｒＴＯＰＦｌａｓｈレポーターを一過性トランスフェクションし、続いて、２５ｍＭのＬｉＣｌで誘発し、様々な用量の化合物番号１に曝露した。
【０２５２】
実験
ＨＥＫ２９３細胞のトランスフェクションを、実施例２２に記載されている通りに行ったが、但し、ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼ０．２３μｇおよびウミシイタケ０．０２μｇを使用した。トランスフェクションの後に、細胞を１μＭまたは１０μＭの化合物番号１と共に２５ｍＭのＬｉＣｌ中で２４時間インキュベーションした。全ての処置されたレポーター細胞を最後に溶解させ、Ｄｕａｌ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ（Ｐｒｏｍｅｇａ）に記載されている通りに、ホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケ活性を２０／２０ｎ  Ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ（Ｔｕｒｎｅｒ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ）で測定した。
【０２５３】
結果
図７に示されている通り、化合物番号１は４２０ｎＭのＩＣ５０で、標準Ｗｎｔシグナル伝達のＬｉＣｌ誘発活性化に拮抗した。これらの結果は、この化合物がその作用をＧＳＫ−３β／アキシン／ＡＰＣ−破壊複合体のレベルで発揮しているか、または破壊複合体の下流で作用していることを示す。
【実施例３０】
【０２５４】
β−カテニンに対する作用
結腸直腸癌ＳＷ４８０細胞の核または細胞質におけるβ−カテニンの存在に対する化合物番号１の作用を調査した。ＳＷ４８０細胞は、ＡＰＣ遺伝子に活性化突然変異を含有し、これは、高レベルの核β−カテニンおよび異常な標準Ｗｎｔシグナル伝達をもたらす。化合物処置されたＳＷ４８０細胞からの細胞溶解産物およびβ−カテニンの活性形（非リン酸化Ｎ−末端−ＡＢＣ）に対する抗体を使用して、ウェスタンブロット分析を実施した。平行して、β−カテニンの分解形態を検出する全β−カテニン（β−カテニン）またはＮ−末端でリン酸化されたβ−カテニン（−β−カテニン）に対する抗体を使用した。
【０２５５】
実験
ＳＷ４８０細胞を播種し、実施例２５に記載されている通りに化合物番号１で処置した。モノクローナル活性−β−カテニン（ＡＢＣ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、モノクローナルβ−カテニン（β−カテニン、ＢＤ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（商標））、ホスホ−β−カテニン（ｐβ−カテニン、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）およびアクチン（Ｓｉｇｍａ）を使用して、細胞溶解産物をイムノブロッティングした。一次抗体を二次ＨＲＰ結合抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）および強化化学発光基質（Ｐｉｅｒｃｅ（登録商標）ＥＣＬ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で可視化した。
【０２５６】
免疫細胞化学的実験のために、ＳＷ４８０細胞を播種し、実施例２４に記載されている通りに処置した。７２時間後に、細胞をＰＢＳ中４％のＰＦＡ中で１０分間固定した。標準プロトコルに記載されている通りに、免疫染色を行った。一次抗体（モノクローナルβ−カテニン、ＢＤ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（商標））および二次抗体（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を１：１０００希釈した。Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ  ２００Ｍ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ／Ｌｉｖｅ  ｃｅｌｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅを使用して倍率４０および同じ曝露時間を使用して、試料を画像化した。ＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール）を用いて、標準プロトコルに従って、細胞を染色した。
【０２５７】
結果
図８Ａ（左側）で分かる通り、全β−カテニンのレベル全体が、化合物番号１に７２時間曝露した後に低減した。顕著なことに、全ての濃度の化合物番号１が、ＡＢＣのより強い低減をもたらした。
【０２５８】
分解性ｐβ−カテニンのレベルは、化合物番号１を添加してから２４時間後に一時的に上昇した（図８Ａ、右側）。化合物と共に７２時間インキュベーションした後に、β−カテニン抗体を用いる免疫蛍光を使用すると、ＳＷ４８０細胞における核の全β−カテニンの低減もまた見られた（図８Ｂ）。核のβ−カテニンの変化とは対照的に、細胞膜関連β−カテニンはまだ観察することができた。
【実施例３１】
【０２５９】
β−カテニンに対する直接作用
β−カテニンに対して可能性のある化合物番号１の直接作用を調査するために、ＨＥＫ２９３細胞に、ＳＴ−ＬｕｃレポーターおよびＷｎｔ経路の様々な成分をコードする一連のコンストラクトを一過性トランスフェクションした。これらには、全長β−カテニン、Ｎ−末端リン酸化部位に点突然変異を有するβ−カテニン（ドミナントアクティブ、ｄａ−Ｃａｔ）、別のドミナントアクティブ型としてのＮ−末端欠失のβ−カテニン（ΔＮ−Ｃａｔ）およびドミナントアクティブＬＥＦ−１として機能するＬＥＦ−１（ＣＬＥＦ）に融合しているβ−カテニンＣ−末端トランス活性化ドメインが包含された。トランスフェクションのために使用されるプラスミド量を４８ウェルプレート当たり数ナノグラムまで減らして、１０〜２０倍の範囲の経路誘発を得た。
【０２６０】
実験
実施例２２に記載されている通りに、但し、次のプラスミド組合せを同時トランスフェクションされたβ−カテニン変異体を使用して、トランスフェクションを行った：
１）ＳｕｐｅｒＴＯＰＦｌａｓｈ０．２１５μｇ＋ウミシイタケ０．０２μｇ＋β−カテニン０．０１５μｇ；
２）ＳｕｐｅｒＴＯＰＦｌａｓｈ０．２３μｇ＋ウミシイタケ０．０２μｇ＋ｄａ−Ｃａｔ０．２ｎｇ（ドミナントアクティブβ−カテニン（Ｓ３３、３７、４１および４５Ａ突然変異）；
３）ＳｕｐｅｒＴＯＰＦｌａｓｈ０．２３μｇ＋ウミシイタケ０．０２μｇ＋ΔＮ−Ｃａｔ０．２ｎｇ（Ｎ−末端欠失β−カテニン；および
４）ＳｕｐｅｒＴＯＰＦｌａｓｈ０．２３μｇ＋ウミシイタケ０．０２μｇ＋ＣＬＥＦ０．２ｎｇ（ＬＥＦ−１に融合しているβ−カテニントランス活性化ドメイン）。
【０２６１】
β−カテニンプラスミドバージョンを同時トランスフェクションされたＨＥＫ２９３細胞を１０または２５μＭ濃度の化合物番号１に、トランスフェクションの時から２４時間曝露した。
【０２６２】
結果
図９は、正常全長β−カテニンの過剰発現による標準Ｗｎｔシグナル伝達の活性化は、化合物番号１によって低減されることを示す。興味深いことには、ドミナントアクティブコンストラクトｄａ−Ｃａｔ、ＣＬＥＦおよびΔＮ−Ｃａｔによる経路の活性化は、化合物番号１によって有意には拮抗されなかった。これらのトランスフェクション実験は、化合物番号１の機能は、β−カテニンのＮ−末端リン酸化のレベルに関していることを示す。例えばβ−カテニンでの標的突然変異によって、リン酸化が生じ得ない限り、化合物番号１は、異所性標準Ｗｎｔシグナル伝達を阻害することはできない。
【実施例３２】
【０２６３】
ＣＢ１７／ＳＣＩＤ異種移植片モデルにおける腫瘍増殖の低減
化合物番号１のｉｎ  ｖｉｖｏ検査を実施して、腫瘍増殖の低減における化合物の効力を決定し、何らかの可能性のある副作用を同定した。
【０２６４】
ＳＷ４８０結腸直腸細胞をＣＢ１７／ＳＣＩＤマウスに皮下注射すると、触診可能な腫瘍が、マウスの約５０％において７日以内に検出された。マウスの無作為群に毎日、化合物番号１を１５０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇの用量で注射（ｉ．ｐ．）し（５日間は毎日送達し、その後２日間休止）、終了時に、血漿を採取し、腫瘍を単離および秤量した。
【０２６５】
実験
４０匹の雌のＣ．Ｂ−Ｉｇｈ−１ｂ／ＩｃｒＴａｃ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ）に右側後側腹部で、ＰＢＳ１００μｌ中で希釈されたＳＷ４８０細胞１０７個を皮下（ｓ．ｃ．）注射した。腫瘍形成が５０％の動物で認識可能になったら（７日間）、注射を開始した。マウスを無作為化し、３つの処置群に分けた：化合物番号１  １５０ｍｇ／ｋｇ、化合物番号１  ３００ｍｇ／ｋｇおよびビヒクル対照の１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０（Ｓｉｇｍａ）。
【０２６６】
実験が終了するまで（２９日間）、毎日の注射（２００μｌ、ｉ．ｐ．）を続けた（５日間の注射日の後に毎回、２日間の注射休止期）。終了日に、最後の注射の２４時間後、心臓穿刺の後に、血液を採取し、腫瘍を切除し、秤量した。既に記載されている通りに（Ｗｉｌｓｏｎ、Ｓ．Ｒ．ら、Ｊ．Ｓｅｐ．Ｓｃｉ．２８：１７５１〜１７５８頁、２００５）、飛行時間型（ＴＯＦ）質量分析計に接続したオンラインおよびオフラインの固相抽出−毛細管液体クロマトグラフィー（ＳＰＥ−ＣａｐＬＣ）計装を使用して、血漿および腫瘍中の化合物濃度を決定した。Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ  Ｃ１８  ５μｍ  １５０×０．３ｍｍカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｓａｏ  Ｐａｕｌｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を分離のために使用し、Ｋｎａｕｅｒ  Ｋ−２６００  ＵＶ検出器を、相補的検出器として使用した。
【０２６７】
代表的な群の腫瘍（ｎ＝５）からＲＮＡを単離し、Ｓｐ５の発現に関して実施例２５に記載されている通りにリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって分析した。結果を、対照遺伝子（ｈＧＵＳＢ）に対するＳｐ５の発現の比として算出した。
【０２６８】
標準プロトコルに記載されている通り、両方とも１：１０００希釈されたウサギポリクローナル平滑筋アクチン（Ａｂｃａｍ）およびモノクローナルβ−カテニン（ＢＤ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（商標））で免疫染色を行った。使用された二次抗体は、１：５００希釈されたＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４ヤギ抗−ウサギ抗体およびＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗マウス抗体であった。Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ  ２００Ｍ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ／Ｌｉｖｅ  ｃｅｌｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅによって倍率４０および同じ曝露時間で、断面を画像化した。
【０２６９】
結果
平均して、１５０ｍｇ／ｋｇの化合物番号１では３３％および３００ｍｇ／ｋｇの化合物番号１では３５％の腫瘍サイズの低減が観察された（図１０Ａ）。これらの値は、統計的に有意である（２つの群、即ち１５０ｍｇ／ｋｇおよび３００ｍｇ／ｋｇの場合のＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ順位和検定をプールする：Ｐ＝０．０４５）。
【０２７０】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって、化合物番号１で処置された腫瘍において、１５０ｍｇ／ｋｇおよび３００ｍｇ／ｋｇ用量の両方で、ＳＰ５  ｍＲＮＡがダウンレギュレーションされたことが判明した（図１０Ｂ）。
【０２７１】
腫瘍をβ−カテニンおよび平滑筋アクチンに対する抗体で染色して、腫瘍内の活性化ストローマをいずれも同定した。腫瘍細胞またはストローマの分布において大きな変化は観察され得ず、治療群と対照群との間でヒト腫瘍細胞およびマウスストローマの割合は同一であった（図１０Ｃ）。
【０２７２】
ＬＣ−ＵＶ分析を使用すると、化合物番号１は、腫瘍および血漿中において容易に検出された（図１１ＡおよびＢ）。化合物番号１の濃度は：１５０ｍｇ／ｋｇのコホートでは１．９〜３２．９μｇ／ｇ（平均：１１．８μｇ／ｇ）およびコホート３００ｍｇ／ｋｇでは０．９〜４．９μｇ／ｇ（平均：２．４μｇ／ｇ）であると測定された。血漿中の濃度は：１５０ｍｇ／ｋｇ群では１．３μｇ／ｍｌおよび３００ｍｇ／ｋｇ群では１．３μｇ／ｍｌであると測定された。血漿中においてよりも、腫瘍においてのほうが濃度が高いことは、腫瘍中に化合物が蓄積していることを示す。
【０２７３】
体重減少などの明らかな副作用は治療の間に観察されなかった。
【実施例３３】
【０２７４】
化合物（１１３）の調整
【０２７５】
【化３７】
2012528842.tif 000073
【０２７６】
（ａ）４−（２−クロロフェニル）−５−（ピリジン−４−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール４の調製：
１−クロロ−２−イソチオシアナトベンゼン１（３ｇ、１７．６８ｍｍｏｌ）およびイソニコチノヒドラジド２（２．４３ｇ、１７．６８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）１００ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物４（４．３ｇ）を得た。収率：８６％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.68 (d, 2 H), 7.80-7.58 (m, 4 H), 7.28 (d, 2 H). 
（ｂ）２−（クロロメチル）−５−（４−クロロフェニル）−１，３，４−オキサジアゾール７の調製：
４−クロロベンゾヒドラジド５（１ｇ、５．８６ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（０．９７ｇ、７．０３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中の混合物に、２−クロロアセチルクロリド（０．６８ｇ、６．０８ｍｍｏｌ）を周囲温度で滴加した。生じた混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、４−クロロ−Ｎ’−（２−クロロアセチル）ベンゾヒドラジド６（１．２ｇ、８２％）を得、これをさらに精製することなく、次のステップで使用した。４−クロロ−Ｎ’−（２−クロロアセチル）ベンゾヒドラジド６（０．６ｇ、２．４３ｍｍｏｌ）およびオキシ塩化リン（０．３７ｇ、２．４３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）中の混合物を還流下で１６時間撹拌し、濃縮した。残渣を１０〜２５％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物７（０．４５ｇ）を得た。収率：８２％。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ (ppm): 8.02 (d, 2 H), 7.53 (d, 2 H), 4.78 (s, 2 H).  
（ｃ）４−（５−（（５−（４−クロロフェニル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン（化合物（１１３））の調製：
化合物７（０．１３ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、化合物４（０．１５ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を２５〜５０％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１１３）（０．２３ｇ）を得た。収率：９２％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 8.56 (d, 2 H), 7.93 (d, 2 H), 7.60-7.26 (m, 8H), 4.72 (q, 2 H).  MS (ESI): 481.70. HPLC (Waters 625 LCシステム): 98%.
【実施例３４】
【０２７７】
化合物（１１４）の調製
【０２７８】
【化３８】
2012528842.tif 000074
【０２７９】
（ａ）２−（クロロメチル）−５−（２，４−ジクロロフェニル）−１，３，４−オキサジアゾール１０の調製：
２，４−ジクロロベンゾヒドラジド８（４５１ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル２０ｍＬ懸濁液に、クロロアセチルクロリド（２６０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）を、続いて、ＮａＯＨ（１００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を周囲温度で４時間撹拌した。固体を濾過によって回収し、水で洗浄し、乾燥させて、化合物９  ５４５ｍｇ（８８％）を得、これをさらに精製することなく、次のステップで使用した。化合物９（２７０ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル３０ｍＬ懸濁液に、ＰＯＣｌ３３００ｍｇを加えた。混合物を還流で５時間加熱した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムによって精製して（１：１のヘキサン／酢酸エチル）、化合物１０  ２００ｍｇを得た。収率：７９％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.97 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.42 (dd, 1H), 4.56 (s, 2H).
（ｂ）４−（５−（（５−（２，４−ジクロロフェニル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン（化合物（１１４））の調製：
化合物１０（１８０ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）および４−（２−クロロフェニル）−５−（ピリジン−４−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール４（１９７ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル２０ｍＬ溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１８８ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を周囲温度で３時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をカラム（ＤＣＭ中０〜２％のＭｅＯＨ）によって精製して、化合物（１１４）３００ｍｇを得た。収率：８５％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 8.58 (m, 2H), 7.93 (d, 1H), 7.30-7.70 (m, 8H), 4.80 (q, 2H).  MS (ESI): 515.8.  HPLC (Waters 625 LCシステム): 98%.
【実施例３５】
【０２８０】
化合物（１３８）の調製
【０２８１】
【化３９】
2012528842.tif 000075
【０２８２】
（ａ）４−（２−クロロフェニル）−５−（２−クロロピリジン−４−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール１３の調製：
１−クロロ−２−イソチオシアナトベンゼン１（０．４ｇ、２．３３ｍｍｏｌ）および２−クロロピリジン−４−カルボヒドラジド１１（０．４ｇ、２．３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）２０ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物１３（４．３ｇ）を得た。収率：８６％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 8.30 (d, 1 H), 7.63-7.18 (m, 5 H), 7.16 (d, 1H).
（ｂ）２−（クロロメチル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６の調製：
４−メチルベンゾヒドラジド１４（１０ｇ、６６．５９ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１６．５７ｇ、１１９．８６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１００ｍＬ）中の混合物に、２−クロロアセチルクロリド（９．０２ｇ、７９．９ｍｍｏｌ）を周囲温度で滴加した。生じた混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、Ｎ’−（２−クロロアセチル）−４−メチルベンゾヒドラジド１５（１３ｇ、８２％）を得、これをさらに精製することなく、次のステップで使用した。Ｎ’−（２−クロロアセチル）−４−メチルベンゾヒドラジド１５（６．０ｇ、２６．４７ｍｍｏｌ）およびオキシ塩化リン（５．０ｇ、３２．８４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）中の混合物を還流下で１６時間撹拌し、濃縮した。残渣を１０〜２５％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物１６（４ｇ）を得た。収率：７２％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.96 (d, 2 H), 7.30 (d, 2 H), 4.77 (s, 2 H), 2.44 (s, 3 H). 
（ｃ）４−（５−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−２−クロロピリジン（化合物（１３８））の調製：
化合物１６（０．１６ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、化合物１３（０．２ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を２５〜５０％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１３８）（０．２８ｇ）を得た。収率：９３％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 8.30 (d, 1 H), 7.86 (d, 2 H), 7.63-7.18 (m, 7 H), 7.16 (d, 1 H), 4.76 (q, 2 H), 2.44 (s, 3 H).  
MS (ESI): 495.5. HPLC (Waters 625 LCシステム): 97%.
【実施例３６】
【０２８３】
化合物（１０９）の調製
【０２８４】
【化４０】
2012528842.tif 000076
【０２８５】
（ａ）４−（２−クロロフェニル）−５−（４−エトキシフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール１９の調製：
４−エトキシベンゾヒドラジド１７（０．５ｇ、２．７７ｍｍｏｌ）およびイソニコチノヒドラジド１（０．４７ｇ、２．７７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）２０ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物１９（０．７４ｇ）を得た。収率：８０％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.47-7.7.31 (m, 4 H), 7.18 (d, 2 H), 6.68 (d, 2 H), 3.90 (q, 2 H), 1.28 (t, 3 H). 
（ｂ）３−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−５−（４−エトキシフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール（化合物（１０９））の調製：
２−（クロロメチル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６（０．１３ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、化合物１９（０．１５ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を２５〜５０％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１０９）を得た。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.88 (d, 2 H), 7.55 (d, 1 H), 7.43 (t, 1 H), 7.40-7.21 (m, 6 H), 7.78 (d, 2 H), 4.71 (q, 2 H), 4.00 (q, 2 H), 2.41 (s, 3 H), 1.38 (t, 1 H). 
MS (ESI): 504.8. HPLC (Waters 625 LCシステム): 94%.
【実施例３７】
【０２８６】
化合物（１１２）の調製
【０２８７】
【化４１】
2012528842.tif 000077
【０２８８】
（ａ）５−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール２２の調製：１−クロロ−２−イソチオシアナトベンゼン１（３７３ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）および２，４−ジクロロベンゾヒドラジド２０（４５１ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル２０ｍＬ中で混合し、周囲温度で２４時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣を１０％Ｋ２ＣＯ３（水）溶液３０ｍＬと混合した。混合物を還流で１８時間加熱した。ｐＨ７に酸性化した後に、混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を分離し、濃縮し、カラム（１：１のヘキサン／酢酸エチル）によって精製して、化合物２２  ６６０ｍｇを得た。収率：８４％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.20-7.50 (m, 7H).
（ｃ）３−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−５−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール（化合物（１１２））の調製：
化合物２２（１８０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）および２−（クロロフェニル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６（１０５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル中の混合物に、Ｋ２ＣＯ３（１３８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を周囲温度で２時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムによって精製して（１：１のヘキサン／酢酸エチル）、化合物（１１２）２００ｍｇを得た。収率：７５％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.90 (d, 2H), 7.20-7.50 (m, 9H), 4.73 (q, 2H), 2.43 (s, 3H).  MS (ESI): 528.2.  HPLC (Waters 625 LCシステム): 98%.
【実施例３８】
【０２８９】
化合物（１１０）の調製
【０２９０】
【化４２】
2012528842.tif 000078
【０２９１】
（ａ）４−（２−クロロフェニル）−５−（２，４−ジフルオロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール２５の調製：
２，４−ジフルオロベンゾヒドラジド２３（０．５ｇ、２．９ｍｍｏｌ）およびイソニコチノヒドラジド１（０．４９ｇ、２．９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）２０ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物２５（０．７６ｇ）を得た。収率：８０％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.68 (d, J=4.8 Hz, 2 H), 7.80-7.58 (m, 4 H), 7.28 (d, J=15.7 Hz, 2 H). 
（ｂ）３−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−５−（２，４−ジクロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール（化合物（１１０））の調製：
２−（クロロメチル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６（０．１３ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、化合物２５（０．１７ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を２５％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１１０）（０．２５ｇ）を得た。収率：９６％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.88 (d., J=6.6 Hz, 2 H), 7.56 (dd, J=6.6 Hz, 1 H), 7.46-23 (m, 6 H), 6.95 (t, J=3.0 Hz, 1 H), 6.72 (t, J=8.7 Hz, 1 H), 4.74 (q, J=15.0 Hz, 2 H), 2.42 (s, 3 H).  MS (ESI): 496.5.  HPLC (Waters 625 LCシステム): 96%.
【実施例３９】
【０２９２】
化合物（１０６）の調製
【０２９３】
【化４３】
2012528842.tif 000079
【０２９４】
（ａ）５−（４−（２−クロロフェニル）−５−メルカプト−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ベンゼン−１，３−ジオール２８の調製：
１−クロロ−２−イソチオシアナトベンゼン１（１．０ｇ、５．９ｍｍｏｌ）および３，５−ジヒドロベンゾヒドラジド２６（１．０、６．０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル８０ｍＬおよびＤＭＦ２０ｍＬ中で混合した。混合物を周囲温度で５時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣を１０％Ｋ２ＣＯ３（水）溶液６０ｍＬと混合した。混合物を還流で１８時間加熱した。ｐＨ７に酸性化した後に、混合物を酢酸エチル（８０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を分離し、濃縮し、カラム（ＣＨ２Ｃｌ２中の５％ＣＨ３ＯＨ）によって精製して、化合物２８  １．７ｇを得た。収率：９０％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 9.50 (s, 2H), 7.40-7.70 (m, 4H), 6.23 (t, 1H), 6.17 (d, 2H).
（ｂ）（５−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ベンゼン−１，３−ジオール（化合物（１０６））の調製：
化合物２８（１６０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、２−（クロロメチル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６（１０５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１３８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル２０ｍＬ中で混合し、周囲温度で２時間撹拌した。固体を濾過によって回収し、カラム（ＣＨ２Ｃｌ２中の１０％ＣＨ３ＯＨ）によって精製して、化合物（１０６）２２０ｍｇを得た。収率：９０％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 9.47 (s, 2H), 7.30-7.90 (m, 8H), 6.20 (m, 3H), 4.66 (q, 2H), 2.39 (s, 3H).  MS (ESI): 492.4.  HPLC (Waters 625 LCシステム): 95%.
【実施例４０】
【０２９５】
化合物（１０５）の調製
【０２９６】
【化４４】
2012528842.tif 000080
【０２９７】
（ａ）４−（２−クロロフェニル）−５−（ピリミジン−４−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール３１の調製：
ピリミジン−４−カルボヒドラジド２９（０．５ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）およびイソニコチノヒドラジド１（０．６ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）２０ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物３１（０．７６ｇ）を得た。収率：８０％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.68 (d., J=4.8 Hz, 2 H), 7.80-7.58 (m, 4 H), 7.28 (d, J=15.7 Hz, 2 H). 
（ｂ）４−（５−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリミジン（化合物（１０５））の調製：
２−（クロロメチル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６（０．１７ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）、化合物３１（０．２ｇ、０．６９ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を２５〜５０％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１０５）（０．２６ｇ）を得た。収率：８０％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 8.82 (d., 2 H), 8.23 (d, 1 H), 7.89 (d, 2 H), 7.55 - 7.26 (m, 6 H), 4.82 (q, 2 H), 2.41 (s, 3 H).  
MS (ESI): 463.0. HPLC (Waters 625 LCシステム): 98%.
【実施例４１】
【０２９８】
化合物（１１１）の調製
【０２９９】
【化４５】
2012528842.tif 000081
【０３００】
（ａ）４−（２−クロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール３４の調製：
４−クロロベンゾヒドラジド３２（０．５ｇ、２．９３ｍｍｏｌ）およびイソニコチノヒドラジド１（０．５ｇ、２．９３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）２０ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物３４（０．７４ｇ）を得た。収率：８０％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.65-7.58 (m, 2 H), 7.56-7.50 (m, 2 H), 7.38-7.28 (m,  4 H). 
（ｂ）３−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール（化合物（１１１））の調製：
２−（クロロメチル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６（０．１５ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、化合物３４（０．２ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を３５％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１１１）（０．２７ｇ）を得た。収率：８８％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.88 (d., 2 H), 7.56 (d, 1 H), 7.47 (t, 1 H), 7.38 - 7.25 (m, 9 H), 4.72 (q, 2 H), 2.42 (s, 3 H).  
MS (ESI): 494.5. HPLC (Waters 625 LCシステム): 96%.
【実施例４２】
【０３０１】
化合物（１１７）の調製
【０３０２】
【化４６】
2012528842.tif 000082
【０３０３】
（ａ）４−（２−クロロフェニル）−５−（ピリジン−４−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール４の調製：
１−クロロ−２−イソチオシアナトベンゼン１（３ｇ、１７．６８ｍｍｏｌ）およびイソニコチノヒドラジド２（２．４３ｇ、１７．６８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）１００ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物４（４．３ｇ）を得た。収率：８６％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.68 (d, 2 H), 7.80-7.58 (m, 4 H), 7.28 (d, 2 H). 
（ｂ）２−（クロロメチル）−５−（３，５−ジクロロフェニル）−１，３，４−オキサジアゾール７の調製：
３，５−ジクロロベンゾヒドラジド５（０．５ｇ、２．４ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（０．６１ｇ、４．４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中の混合物に、２−クロロアセチルクロリド５（０．４１ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）を周囲温度で滴加した。生じた混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、３，５−ジクロロ−Ｎ’−（２−クロロアセチル）ベンゾヒドラジド６（０．６３ｇ、９２％）を得、これをさらに精製することなく、次のステップで使用した。３，５−ジクロロ−Ｎ’−（２−クロロアセチル）ベンゾヒドラジド６（０．６３ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）およびオキシ塩化リン（０．５１ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）中の混合物を還流下で１６時間撹拌し、濃縮した。残渣を１０〜２５％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物７（０．５２ｇ）を得た。収率：８８％。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ (ppm): 7.91 (s, 2 H), 7.53 (s, 1 H), 4.78 (s, 2 H).  
（ｃ）４−（５−（（５−（３，５−ジクロロフェニル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン（化合物（１１７））の調製：
化合物７（０．２２ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）、化合物４（０．２ｇ、０．６９ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を２５〜５０％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１１７）（０．２８ｇ）を得た。収率：８０％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 8.56 (d, 2 H), 7.88 (d, 2 H), 7.63 - 7.31 (m, 7H), 4.78 (q, 2 H).  
MS (ターボイオンスプレーTOF MS): 516.9998. HPLC (Waters 625 LCシステム): 96%.
【実施例４３】
【０３０４】
化合物（１３０）の調製
【０３０５】
【化４７】
2012528842.tif 000083
【０３０６】
（ａ）２−（クロロメチル）−５−（３，４−ジクロロフェニル）−１，３，４−オキサジアゾール１０の調製：
３，４−ジクロロベンゾヒドラジド８（０．５ｇ、２．４３ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（０．６１ｇ、４．４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中の混合物に、２−クロロアセチルクロリド（０．４１ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）を周囲温度で滴加した。生じた混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、３，４−ジクロロ−Ｎ’−（２−クロロアセチル）ベンゾヒドラジド９（０．５９ｇ、８５％）を得、これをさらに精製することなく、次のステップで使用した。化合物９（０．５９ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）およびオキシ塩化リン（０．５１ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）中の混合物を還流下で１６時間撹拌し、濃縮した。残渣を１０〜２５％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物１０（０．４３ｇ）を得た。収率：７８％。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ (ppm): 7.88 (s, 1 H), 7.12 (d, 2 H), 4.78 (s, 2 H).  
（ｂ）４−（５−（（５−（３，４−ジクロロフェニル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン（化合物（１３０））の調製：
化合物１０（０．２ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）および４−（２−クロロフェニル）−５−（ピリジン−４−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール４（０．１８ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル２０ｍＬ溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．１９ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を周囲温度で３時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣を２５〜５０％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１３０）を得た。収率：８５％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 8.58 (d, 2H), 8.08 (d, 1H), 7.86 (d, 1H),  7.63-7.26 (m, 7H), 4.76 (q, 2H). 
MS (ターボイオンスプレーTOF MS): 517.0004. HPLC (Waters 625 LCシステム): 96%.
【実施例４４】
【０３０７】
化合物（１１６）の調製
【０３０８】
【化４８】
2012528842.tif 000084
【０３０９】
（ａ）４−（４−（２−クロロフェニル）−５−メルカプト−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン−２−オール１３の調製：
１−クロロ−２−イソチオシアナトベンゼン１（０．７２ｇ、４．２５ｍｍｏｌ）および２−ヒドロキシピリジン−４−カルボヒドラジド１１（０．６５ｇ、４．２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）２０ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物１３（０．９８ｇ）を得た。収率：８０％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.72-7.53 (m, 4 H), 7.38 (d, 1 H), 6.28 (d, 1 H), 5.88 (S, 1H).
（ｂ）２−（クロロメチル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６の調製：
４−メチルベンゾヒドラジド１４（１０ｇ、６６．５９ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１６．５７ｇ、１１９．８６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１００ｍＬ）中の混合物に、２−クロロアセチルクロリド（９．０２ｇ、７９．９ｍｍｏｌ）を周囲温度で滴加した。生じた混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、Ｎ’−（２−クロロアセチル）−４−メチルベンゾヒドラジド１５（１３ｇ、８２％）を得、これをさらに精製することなく、次のステップで使用した。Ｎ’−（２−クロロアセチル）−４−メチルベンゾヒドラジド１５（６．０ｇ、２６．４７ｍｍｏｌ）およびオキシ塩化リン（５．０ｇ、３２．８４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）中の混合物を還流下で１６時間撹拌し、濃縮した。残渣を１０〜２５％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物１６（４ｇ）を得た。収率：７２％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.96 (d, 2 H), 7.30 (d, 2 H), 4.77 (s, 2 H), 2.44 (s, 3 H). 
（ｃ）４−（５−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン−２−オール（化合物（１１６））の調製：
化合物１６（０．１５ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、４−（４−（２−クロロフェニル）−５−メルカプト−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン−２−オール１３（０．２ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を５０〜６５％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１１６）（０．２５ｇ）を得た。収率：８０％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 8.30 (d, 1 H), 7.86 (d, 2 H), 7.63-7.18 (m, 7H), 7.16 (d, 1 H), 4.76 (q, 2 H), 2.44 (s, 3 H). 
MS (ターボイオンスプレーTOF MS): 477.0926. HPLC (Waters 625 LCシステム): 95%.
【実施例４５】
【０３１０】
化合物（１３１）の調製
【０３１１】
【化４９】
2012528842.tif 000085
【０３１２】
（ａ）４−（２−クロロフェニル）−５−（３，４−ジクロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール１８の調製：
３，４−ジクロロベンゾヒドラジド８（０．５ｇ、２．４４ｍｍｏｌ）およびイソニコチノヒドラジド１（０．４１ｇ、２．４４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）２０ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物１８（０．７ｇ）を得た。収率：８２％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.47-7.7.31 (m, 4 H), 7.18 (d., 2 H), 6.68 (d, 2 H), 3.90 (q, 2 H), 1.28 (t, 3 H). 
（ｂ）３−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−５−（３，４−ジクロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール（化合物（１３１））の調製：
２−（クロロメチル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６（０．１３ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、化合物１８（０．１５ｇ、０．４ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を２５〜５０％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１３１）（０．２ｇ）を得た。収率：８８％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.88 (d, 2 H), 7.55 (d, 1 H), 7.43 (t, 1 H), 7.40 - 7.21 (m, 6 H), 7.78 (d, 2 H), 4.71 (q, 2 H), 4.00 (q, 2 H), 2.41 (s, 3 H), 1.38 (t, 1 H). 
MS (ターボイオンスプレーTOF MS): 530.0209. HPLC (Waters 625 LCシステム): 98%.
【実施例４６】
【０３１３】
化合物（１３２）の調製
【０３１４】
【化５０】
2012528842.tif 000086
【０３１５】
（ａ）５−（２−アミノピリミジン−５−イル）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール２１の調製：
１−クロロ−２−イソチオシアナトベンゼン１（０．４２ｇ、２．２ｍｍｏｌ）および２−アミノピリミジン−５−カルボヒドラジド１９（４５１ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル２０ｍＬ中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）２０ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物２１（０．５９ｇ）を得た。収率：７８％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.20-7.50 (m, 7H).
（ｂ）５−（５−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリミジン−２−アミン（化合物（１３２））の調製：
化合物２１（０．２ｇ、０．６ｍｍｏｌ）および２−（クロロメチル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６（０．２ｇ、０．９６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル中の混合物にＫ２ＣＯ３（１３８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を周囲温度で２時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムによって精製して（５：９５のメタノール／ジクロロメタン）、化合物（１３２）（０．２ｇ）を得た。収率：６５％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.90 (d, 2H), 7.20-7.50 (m, 9H), 4.73 (q, 2H), 2.43 (s, 3H). 
MS (ターボイオンスプレーTOF MS): 477.1036. HPLC (Waters 625 LCシステム): 92%.
【実施例４７】
【０３１６】
化合物（１１５）の調製
【０３１７】
【化５１】
2012528842.tif 000087
【０３１８】
（ａ）４−（２−クロロフェニル）−５−（４−フルオロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール２４の調製：
４−フルオロベンゾヒドラジド２２（０．５ｇ、３．２４ｍｍｏｌ）およびイソニコチノヒドラジド１（０．５５ｇ、３．２４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、１０％Ｋ２ＣＯ３（水溶液）２０ｍＬを加えた。生じた混合物を還流下で６時間撹拌した。透明な溶液を周囲温度に冷却し、エーテルで洗浄し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、Ｈ２Ｏおよびエーテルで洗浄し、乾燥させて、化合物２４（０．９３ｇ）を得た。収率：９４％。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.68 (d., J=4.8 Hz, 2 H), 7.80-7.58 (m, 4 H), 7.28 (d, J=15.7 Hz, 2 H). 
（ｂ）３−（（５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチルチオ）−４−（２−クロロフェニル）−５−（４−フルオロフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール（化合物（１１５））の調製：
２−（クロロメチル）−５−ｐ−トリル−１，３，４−オキサジアゾール１６（０．１３ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、化合物２４（０．１５ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３のアセトニトリル中の混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を２５％アセトン／ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーに掛けて、化合物（１１５）（０．２３ｇ）を得た。収率：９８％。
1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ (ppm): 7.88 (d., J=6.6 Hz, 2 H), 7.56 (dd, J=6.6 Hz, 1 H), 7.46-23 (m, 6 H), 6.95 (t, J=3.0 Hz, 1 H), 6.72 (t, J=8.7 Hz, 1 H), 4.74 (q, J=15.0 Hz, 2 H), 2.42 (s, 3 H).  
MS (ターボイオンスプレーTOF MS): 478.0932.  HPLC (Waters 625 LCシステム): 98%.
【実施例４８】
【０３１９】
化合物（６６）の調製
【０３２０】
【化５２】
2012528842.tif 000088
【０３２１】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（２５ｇ、２１３ｍｍｏｌ）のエタノール１２０ｍｌ溶液に、ヒドロキシルアミン・ＨＣｌ（１９．９０ｇ、２８８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２９．３９ｇ、２１３ｍｍｏｌ）を同時に加えた。反応混合物を周囲温度で１時間撹拌し、６時間還流加熱した。次いで、混合物を周囲温度に冷却し、濾過し、濾液を蒸発させて、粗製の残渣を得、これをＥｔＯＡｃ／ＤＣＭの混合物と摩砕して、化合物２（互変異性体混合物）を固体（１４．４ｇ）として得た。収率：４５％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 9.50 (1H, s), 7.55-7.45 (2H, d), 7.20-7.10 (2H, d), 5.75 (2H, s), 2.30 (3H, s). 
（ｂ）化合物Ｂの調製：
化合物２（６ｇ、４０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２７５ｍｌ溶液に、ＤＩＰＥＡ（１０．３８ｍｌ、６０ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１０分間撹拌した。０℃で、この混合物をクロロアセチルクロリド（３．５ｍｌ、４４ｍｍｏｌ）に徐々に加え、反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した。溶媒を除去し、粗製物質をトルエン（５０ｍｌ）に加え、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ装置を使用して還流加熱した。反応が完了した後に（ＴＬＣによって監視）、溶媒を除去し、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（２０：８０）を溶離剤として使用するカラムクロマトグラフィーによって、粗製物質を精製して、化合物Ｂを固体（２ｇ）として得た。収率：２５％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.05-7.90 (2H, d), 7.35-7.25 (2H, d), 4.75 (2H, s), 2.45 (3H, s).  質量分析: 211.1 [M++2H], 209.2 [M++H].
（ｃ）化合物３の調製：
化合物Ｂ（０．５ｇ、２．３９８ｍｍｏｌ）、化合物Ａ（０．６９ｇ、２．３９８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（０．６６ｇ、４．７９ｍｍｏｌ）のアセトン（３０ｍＬ）中の混合物を３時間還流加熱した。反応混合物を周囲温度に冷却し、濾過した。濾液を蒸発させ、粗製の生成物をＥｔＯＡｃに溶かし、水で洗浄し、有機相を分離し、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を蒸発させて、粗製の残渣を得、これを、２％ＭｅＯＨ：ＤＣＭを溶離剤として使用するカラムクロマトグラフィーによって（ＴＥＡ溶離）精製して、化合物３（５５２ｍｇ）を得た。収率：５０％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.63-8.57 (2H, d), 7.9-7.82 (3H, m), 7.75-7.60 (3H, m), 7.42-7.35 (2H, m), 7.32-7.25 (2H, m), 5.0-4.70 (2H, dd), 2.40 (3H, s).
質量分析: 461.9 [M++H]および483.5 [M+Na]. 
（ｄ）化合物４の調製：
化合物３（３００ｍｇ、０．６５１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２中のｍＣＰＢＡ（２０ｍＬ）（１．１２３ｇ、６．５１４ｍｍｏｌ）を０℃で徐々に滴加した。反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した。溶媒を除去し、粗製の残渣を、２％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離剤として使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物４を固体（０．１４８ｇ）として得た。収率：４５％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.20-8.15 (2H, d), 7.85-7.80 (3H, m), 7.25-7.20 (3H, m), 7.40-7.30 (2H, m), 7.3-7.2 (2H, m), 4.9-4.7 (2H, dd), 2.40 (3H, s).  LC-質量分析: 509.6 [M++H]. 
（ｅ）化合物（６６）の調製：
化合物４（１４８ｍｇ、０．２９２ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（７６ｍｇ、０．２９２ｍｍｏｌ）およびＦｅ（１６ｍｇ、０．２９２ｍｍｏｌ）のＡｃＯＨ２０ｍｌ中の混合物を周囲温度で０．５時間撹拌し、５０℃に徐々に加熱し、４時間撹拌し続けた。反応の完了後に（ＴＬＣ分析によって）、生成物を濃縮して、粗製の残渣を得、これを、２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離剤として使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、部分的には純粋な物質を得た。これを、分取ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃを溶離剤として）によってさらに精製して、純粋な化合物（６６）をオフホワイト色の固体（２５ｍｇ）として得た。収率：１７％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.8-8.6 (2H, d), 7.9-7.8 (2H, d), 7.6-7.5 (2H, m), 7.40-7.30 (4H, m), 7.3 (1H, m), 7.2 (1H,m), 5.4-5.2 (2H, dd), 2.40 (3H, s).
質量分析 (-Veモード): 491.1 [M+-H] & 492.9. HPLC: 99.26%.
【実施例４９】
【０３２２】
化合物（６７）の調製
【０３２３】
【化５３】
2012528842.tif 000089
【０３２４】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（２９．１４ｇ、２３５ｍｍｏｌ）を含有するフラスコに、１０ＮのＨＣｌ（３０７ｍｌ）を滴加し、反応混合物を周囲温度で３時間撹拌した。溶媒を除去し、生成物を真空デシケーター中で２日間乾燥させて、酸中間体を淡黄色のゴム状物質（粗製５８ｇ）として得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。粗製酸誘導体（５８ｇ）のエタノール５８０ｍｌ溶液に、ＳＯＣｌ２（３６ｍｌ）を０℃で徐々に加え、４時間還流加熱した。揮発性物質を減圧下で除去し、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、エステル誘導体を黄色の液体（５０ｇ）として得た。撹拌されているＬＡＨ（２１．７ｇ、５７３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ２００ｍｌ懸濁液に、エステル誘導体溶液（ＴＨＦ３００ｍｌに溶かした５０ｇ）を０℃で徐々に滴加し、反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した。次いでこれを、イソプロピルエーテル（２００ｍｌ）で希釈し、１５％ＮａＯＨでクエンチし、セライトで濾過した。濾液を蒸発させると、ジアルコール化合物２が淡黄色の液体（８．３ｇ）として得られた。収率：２７％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 3.80-3.70 (t, 4H), 3.70-3.60 (t, 4H), 2.90-2.80 (m, 4H). MS: 135.1 [M++H] ピーク, 152.7 [M++H2O] ピーク 
（ｂ）化合物３の調製：
化合物２（１１ｇ、８２．０ｍｍｏｌ）を含有するフラスコに、ＰＢｒ３（５５ｍｌ）を徐々に滴加し、混合物を周囲温度で０．５時間撹拌し、続いて、９０℃に加熱した。この温度で３時間撹拌した後に、反応混合物を氷（５００ｇ）で徐々にクエンチし、１０分間続けて撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×７００ｍｌ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、化合物３を淡黄色の液体（７．２４ｇ）として得た。収率：３４％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 3.70-3.55 (t, 4H), 3.60-3.35 (t, 4H), 2.15-1.95 (m, 4H).
（ｃ）化合物５の調製：
撹拌されている化合物４（１ｇ、６．８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２．８ｇ、２０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ８ｍｌ中の混合物に、化合物３（２．４７ｇ、９．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍｌ）溶液を加え、混合物を８０℃に４時間加熱した。反応混合物を濾過し、濾液を蒸発させて粗製の残渣を得、これを再びＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で溶かし、有機層を水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗製の残渣を得、これを、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離剤として使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物５を無色の液体（６６０ｍｇ）として得た。収率：２１％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7.9-7.8 (m, 2H), 7.75-7.65 (m, 2H), 3.80-3.70 (m, 3H), 3.65-3.45 (m, 3H), 2.15-2.05 (m, 2H), 1.90-1.80 (m, 2H), 1.30-1.20 (m, 2H).
（ｄ）化合物７の調製：
化合物５（７００ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）、化合物６（２２２ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（７７２ｍｇ、５．５９ｍｍｏｌ、２当量）のＤＭＦ１０ｍｌ中の混合物を１００℃に３時間加熱した。反応混合物を周囲温度にし、濾過し、濾液を蒸発させて、粗製の残渣を得、これを、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（５０：５０）を溶離剤として使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物７を無色の液体（３４０ｍｇ）として得た。収率：５０％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7.9-7.8 (m, 2H), 7.75-7.65 (m, 2H), 7.4-7.3 (m, 1H), 7.25-6.90 (m, 3H), 4.10-4.0 (m, 2H), 3.95-3.85 (m, 2H), 3.83-3.75 (m, 1H), 3.60-3.40  (m, 2H), 2.30-2.15 (m, 2H), 2.05-1.90 (m, 2H), 1.3-1.2 (m, 1H).
（ｅ）化合物８の調製：
化合物７（４００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）のエタノール１０ｍｌ溶液に、ヒドロキシルアミン・ＨＣｌ（９８ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１５２ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を同時に加え、反応混合物を周囲温度で１時間撹拌し、４時間還流加熱した。混合物を周囲温度に冷却し、濾過し、濾液を蒸発させて、粗製の残渣を淡黄色のゴム状物質として得、これを、何らさらに精製することなく、次のステップで使用した（３３７ｍｇ）。収率：８４％。
【０３２５】
（ｅ）化合物９の調製：
化合物８（３７０ｍｇ、０．９３４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２５ｍｌ溶液に、ＤＩＰＥＡ（１８０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１０分間撹拌した。次いで、クロロアセチルクロリド（１１６ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を同じ温度で徐々に加え、混合物を周囲温度に加温し、一晩撹拌した。溶媒を除去して、粗製の化合物を得、これを、何らさらに精製することなく次のステップで使用した。粗製の化合物をトルエン（２５ｍｌ）中、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋを使用して１２時間還流加熱した。次いで、トルエンを蒸留し、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（４５：５５）を溶離剤として使用するカラムクロマトグラフィーにより、粗製の物質を精製して、化合物９を淡黄色のゴム状物質（２１２ｍｇ）として得た。収率：５０％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7.9-7.32 (m, 8H), 4.75 (s, 2H), 4.15-3.75 (m, 6H), 3.6-3.4 (m, 2H), 2.3-1.9 (m, 4H).  MS: 477.9 [M++Na] ピーク 
（ｆ）化合物１０の調製：
化合物９（１２０ｍｇ、０．２６３ｍｍｏｌ）、化合物Ａ（７６ｍｇ、０．２６３ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（７２．５８ｍｇ、０．５２６ｍｍｏｌ）の混合物をアセトン２５ｍｌ中で３時間、還流加熱した。反応混合物を周囲温度に冷却し、濾過し、濾液を蒸発させて、粗製の残渣を得、これを、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１５：８５）を溶離剤として使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物１０を黄色に着色したゴム状物質（７５ｍｇ）として得た。収率：４０％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.6-8.5 (d, 2H), 7.9-7.8 (m, 2H), 7.75-7.60 (m, 2H), 7.65-7.50 (m, 4H), 7.5-7.4 (t, 1H), 7.45-7.25 (m, 4H), 4.90-4.60 (dd, 2H), 4.10-4.0 (m, 2H), 4.0-3.90 (m, 1H), 3.85-3.75 (m, 2H), 3.60-3.40 (m, 3H), 2.05-1.9 (m, 3H).  
MS: 708.5 [M+] ピーク 
（ｇ）化合物（６７）の調製：
化合物１０（１００ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）およびエタノールアミン（１ｍＬ）の混合物を８０℃に１０〜１５分間加熱し、周囲温度に冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を濃縮して、粗製の残渣を得、これを、１０％ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２を溶離剤として使用する分取ＴＬＣによって精製して、化合物（６７）を半固体（３０ｍｇ）として得た。
【０３２６】
収率：３７％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.6-8.5 (d, 2H), 7.65-7.50 (m, 4H), 7.5-7.4 (t, 1H), 7.45-7.20 (m, 4H), 7.08-6.95 (m, 1H), 4.90-4.60 (dd, 2H), 4.20-4.05 (m, 2H), 3.65-3.45 (m, 4H), 2.90-2.75 (m, 1H), 2.10-2.0 (m, 2H), 1.35-1.20 (m, 2H), 1.0-0.8 (m, 1H).
質量分析: 578.2 [M+]ピーク; HPLCで純度74.42%.
【実施例５０】
【０３２７】
化合物（９９ａ）および（９９ｂ）の調製
【０３２８】
【化５４】
2012528842.tif 000090
【０３２９】
（ａ）化合物３の調製：
化合物１（１．３８４ｇ、９．２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（２．６３８ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（１．８６３ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５ｍｌ）に溶かし、化合物２（９９８ｍｇ、９．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を周囲温度で２時間撹拌した。混合物を濃縮し、クロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物３を白色の固体（７６０ｍｇ）として得た。収率：３４％。
【０３３０】
（ｂ）化合物４の調製：
化合物３（７６０ｍｇ、３．３５ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（６ｍｌ）に懸濁させ、反応混合物を１１０℃に２．５時間加熱した。混合物を周囲温度に冷却し、水を加えることによってクエンチし、次いで、これをＥＡで抽出し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で溶離するクロマトグラフィーによって精製して、化合物４を白色の固体（４１５ｍｇ）として得た。収率：５５％。
【０３３１】
（ｃ）化合物（９９ａ）および（９９ｂ）の調製：
化合物４（２５０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍＬ）溶液に、化合物５（３２４ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（３１０ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流で２時間撹拌した。次いで、水を混合物に注ぎ、ＥＡで抽出した。ＥＡ層を濃縮し、クロマトグラフィー（ＥＡ）によって精製して、化合物（９９ａ）を黄色の半固体（低い極性で、６０ｍｇ、収率：１１％）として、かつ化合物（９９ｂ）を黄色の半固体（４５ｍｇ、収率：８％）として得た。
化合物(99a)の1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.57-8.55 (2H, dd, Py-H), 7.87-7.14 (10H, m, Py-H, Ph-H), 5.34-5.31(1H, q, -CH-), 2.42(3H, s, -CH3), 1.93-1.91(3H, d, CH3-). 
ESI MS: 475([M+H] +.
HPLC (Waters SunFire C18 4.6*100mmカラム, 25℃; アセトニトリル30-95% (0.03% TFA)を水中で8分かけて1 ml/分): 96%.  化合物は4.55分で溶出する.  [a]20589= -13.25 (C=0.40, CH2Cl2).
化合物(99b)の1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.58-8.56(2H, dd, Py-H), 7.87-7.27 (10H, m, Py-H, Ph-H), 5.25-5.23 (1H, q, -CH-), 2.42 (3H, s, -CH3), 1.99-1.98(3H, d, CH3-). 
ESI MS: 475([M+H] +.
HPLC (Boston Symmetrix ODS-R 5μm 4.6*100mmカラム, 25℃; アセトニトリル30-95% (0.03% TFA)を水中で8分かけて1 ml/分): 95%.  化合物は5.137分で溶出する.  [a]20589= -2.5-4 (C=0.40, CH2Cl2).
【実施例５１】
【０３３２】
化合物（１００）の調製
【０３３３】
【化５５】
2012528842.tif 000091
【０３３４】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（１．０ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）、ＣＳ２（３．０ｇ、３９．４７ｍｍｏｌ）およびＮａＯＨ（２．６６ｇ、６６．５０ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ中で一晩還流させた。次いで、ＴＬＣによって、化合物１が消失したことが示された。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏに溶かした。ＨＣｌ（水溶液）をｐＨ＝２まで加え、ＥＡで抽出した。ＥＡ相をブラインで洗浄しＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、Ｅｔ２Ｏで結晶化させて、所望の生成物２を薄黄色の固体（８００ｍｇ）として得た。収率：６２．５％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 14.685 (1H, s,-SH), 7.771-7.752 (2H, d, Ph-H), 7.398-7.379 (2H, d, Ph-H), 2.378 (3H, s, -CH3).
（ｂ）化合物６の調製：
撹拌されている化合物４（９７０ｍｇ、３．８６ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１．９５ｇ、１９．３１ｍｍｏｌ）のトルエン溶液に、化合物５（８０４ｍｇ、７．７３ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物をＡｒ雰囲気下で約４０時間還流させた。次いで、ＴＬＣによって、化合物４がほとんど消失したことが示された。混合物を濃縮し、ＤＣＭに溶かした。ＤＣＭ相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ゲルカラムによって精製して、所望の生成物化合物６を白色の固体（５５０ｍｇ）として得た。収率：４７．４％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.581-8.571 (2H, d, Py-H), 7.934-7.586 (4H, m, Py-H, Ph-H), 7.301-7.280 (2H, m, Ph-H), 5.585-5.456 (1H, m, -OH), 4.756-4.484 (1H, m, -CH), 1.526-1.422 (3H, m, -CH3).
（ｃ）化合物７の調製：
化合物６（４０ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）をＳＯＣｌ２中、５５〜６０℃、Ａｒ雰囲気下で４．５時間撹拌した。ＴＬＣによって、化合物６が消失したことが示された。混合物を真空濃縮して、粗製の生成物化合物７を黄色の固体（４３ｍｇ）として得た。収率：１００％。
【０３３５】
（ｄ）化合物（１００）の調製：
化合物７（１５０ｍｇ、０．４７０ｍｍｏｌ）、化合物２（１１７ｍｇ、０．６０９ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（３０６ｍｇ、０．９３９ｍｍｏｌ）をアセトン中、Ａｒ雰囲気下で一晩還流させた。ＴＬＣによって、化合物７が消失したことが示された。混合物を濃縮し、ＤＣＭに溶かした。ＤＣＭ相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ゲルカラムによって精製した。粗製の生成物を再び分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：２０）によって精製して、２種の異性体を得た：化合物（１００ａ）：８５ｍｇ、薄黄色の固体（低い極性で）；および化合物（１００ｂ）：３２ｍｇ、薄灰色の固体（高い極性で）。
化合物(100a)の1HNMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.607-8.592 (2H, d, Py-H), 7.919-7.900 (1H, d, Py-H), 7.808-7.787 (3H, m, Py-H, Ph-H), 7.674-7.639 (1H, t, Ph-H), 7.606-7.587 (1H, t, Ph-H), 7.409-7.388 (2H, d, Ph-H), 7.291-7.279 (2H, d, Ph-H), 4.718-4.667 (1H, m, -CH), 2.395 (3H, s, -CH3), 1.878-1.861 (3H, d, -CH3).  ESI MS: 475.1 (M+H), HPLC (Waters SunFire C18 4.6*100mmカラム, 25℃; アセトニトリル20-95%(0.03% TFA)を水中で8分かけて1 ml/分): 95.5%.  化合物は5.436分で溶出する.  [a]20589= 0 (C=0.25, CH2Cl2).  化合物 (100b)のHPLC: (Waters SunFire C18 4.6*100mmカラム, 25℃; アセトニトリル20-95%(0.03% TFA)を水中で8分かけて1 ml/分): 化合物は5.317分で溶出する.  [a]20589= +10.8 (C=0.25, CH2Cl2).
【実施例５２】
【０３３６】
化合物（６８）の調製
【０３３７】
【化５６】
2012528842.tif 000092
【０３３８】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（３ｇ、１９．８５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５ｍｌ）に溶かし、ＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（５．４６ｇ、１０９．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を撹拌し、９０℃に２時間高めた。混合物を濃縮し、クロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物２を白色の固体（２．１ｇ）として得た。収率：６７％。
【０３３９】
（ｂ）化合物４の調製：
化合物２（２．１ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液に、化合物３（１．５７ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）および５０％水酸化ナトリウム（０．５６ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）を同時に加えたが、その際、内部温度を１０℃未満に維持した。３０分後に、混合物をＥＡで抽出し、次いで、ＥＡ層を濃縮して、化合物４を白色の固体（２．２ｇ）として得た。
【０３４０】
収率：６８％。
【０３４１】
（ｃ）化合物５の調製：
化合物４（９００ｍｇ、３．９５ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（６ｍｌ）に懸濁させ、反応混合物を１１０℃に２．５時間加熱した。混合物を周囲温度に冷却し、水を加えることによってクエンチし、次いで、これをＥＡで抽出し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で溶離するクロマトグラフィーによって精製して、化合物５を白色の固体（３００ｍｇ）として得た。収率：３７％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 9.05-7.51(3H, m, Py-H), 5.16(2H, s,-CH2-), 2.59 (3H, s, CH3-).
（ｄ）化合物（６８）の調製：
化合物５（２００ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍｌ）溶液に、化合物６（２７８ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２６５ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流で２時間撹拌した。次いで、混合物を水に注ぎ、ＥＡで抽出した。ＥＡ層を濃縮し、クロマトグラフィーによって精製して、化合物（６８）を白色の固体（１２２ｍｇ）として得た。
【０３４２】
収率：８５％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.96-7.29 (11H, m, Py-H, Ph-H), 4.85-4.74(2H, m, -CH2-).  ESI MS: 462 [M+H] +, HPLC: 99%.
【実施例５３】
【０３４３】
化合物（１０４）の調製
【０３４４】
【化５７】
2012528842.tif 000093
【０３４５】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（５．３ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を２７％硫酸水溶液に滴加した。反応混合物を７５℃に加熱した後に、固体状態のＮＨ４ＳＣＮ（４．２ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）をこれに徐々に加えた。添加が完了したら、反応混合物を９０℃で２０時間撹拌した。次いで、トルエンを加え、混合物全体を１時間還流させ、周囲温度に冷却し、次いで、アンモニア水を徐々に加えることによって、ｐＨ＝８に調節した。生じた白色の固体を濾過し、水で洗浄し、次いで、減圧下で乾燥させて、化合物２を白色の固体（６．５ｇ）として得た。収率：７８．２％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 9.591 (1H, s,-NH), 7.253-7.124 (6H, m, Ph-H, -NH2), 2.271 (3H, s, -CH3).
（ｂ）化合物３の調製：
化合物２（２．０ｇ、１２．０３ｍｍｏｌ）をＡｃＯＨ（２０ｍｌ）に加え、懸濁液を８０℃に加熱した。形成した溶液に、ＡｃＯＨ中３３％のＨＢｒ（５．９ｇ、２４．０６ｍｍｏｌ）を、続いて、ＤＭＳＯ（１．１３ｇ、１４．４４ｍｍｏｌ）を加えた。８０℃で１時間撹拌した後に、反応混合物を周囲温度に冷却し、ＥＡで希釈し、濾過して、白色の固体を得た。次いで、これを、Ｋ２ＣＯ３の溶液に加え、ＥＡで抽出した。ＥＡ層を濃縮して、化合物３を白色の固体（１．４ｇ）として得た。収率：７０％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 7.441 (1H, s, Ph-H), 7.337 (2H, s, -NH2), 7.229-7.207 (1H, d, Ph-H), 7.021-7.002 (1H, d, Ph-H), 2.310 (3H, s, -CH3).
（ｃ）化合物５の調製：
撹拌されている化合物３（７００ｍｇ、４．２６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液に、ＤＩＥＡ（８２６ｍｇ、６．３９ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、化合物４（５７７ｍｇ、５．１１ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。これを周囲温度で一晩撹拌した。生じた生成物を水でクエンチし、ＥＡで抽出した。ＥＡ層を濃縮し、シリカゲルカラムによって精製して、化合物５を白色の固体（７００ｍｇ）として得た。収率：６７％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 12.674 (1H, s, -NH), 7.782 (1H, s, Ph-H), 7.661-7.643 (1H, d, Ph-H), 7.279-7.259 (1H, d, Ph-H), 4.449 (2H, s, -CH2).
（ｄ）化合物７の調製：
撹拌されている化合物６（１．０ｇ、６．３６ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．９６ｇ、９．５０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液に、ＣｂｚＣｌ（１．３０ｇ、７．６４ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。混合物を周囲温度で一晩撹拌した。次いで、ＴＬＣによって、化合物６が消失したことが示された。混合物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗製の生成物７を無色のオイルとして得、これを、何ら精製することなく、次のステップで使用した。
【０３４６】
（ｅ）化合物８の調製：
撹拌されている化合物７（１．８５ｇ、６．３６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液に、ＮＨ２ＮＨ２  Ｈ２Ｏ（３．２ｇ、６４．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流下、Ａｒ雰囲気下で一晩撹拌した。ＴＬＣによって、化合物７が消失したことが示された。混合物を濃縮し、Ｅｔ２Ｏで洗浄して、所望の生成物８を白色の固体（１．２ｇ）として得た。収率：６８％。
【０３４７】
（ｆ）化合物１０の調製：
撹拌されている化合物８（５００ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍｌ）懸濁液に、化合物９（３７３ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を１時間還流させ、白色の沈殿化合物１０（６４４ｍｇ）を濾過によって回収した。収率：８０％。
【０３４８】
（ｇ）化合物１１の調製：
化合物１０（６００ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１５ｍｌ）懸濁液に、ＫＯＨ（１．５ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２時間還流加熱した。その後、反応混合物を周囲温度に冷却し、３ＮのＨＣｌを加えて溶液をｐＨ＝３に酸性化した。白色の沈殿化合物１１（３３３ｍｇ）を濾過によって回収した。収率：５８％。
【０３４９】
（ｈ）化合物１２の調製：
撹拌されている化合物１１（１８０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍｌ）懸濁液に、化合物５（１００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（６９ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃で２時間撹拌した。次いで、アセトンを除去し、水を混合物に加えた。混合物を濾過し、固体を乾燥させ、Ｅｔ２Ｏによって結晶化させて、化合物１２（１７０ｍｇ）を得た。収率：６５％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 12.588 (1H, s, -NH), 7.834-7.358 (12H, m, Ph-H), 5.061 (2H, s, -CH2), 4.224 (2H, s, -CH2), 3.951-3.919 (2H, d, -CH2), 2.855-2.833 (2H, m, -CH2), 2.611-2.574 (1H, m, -CH), 2.418 (3H, s, -CH3), 1.796-1.601 (4H, m, -CH2).
（ｉ）化合物（１０４）の調製：
化合物７（１００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）をＨＢｒ／ＡｃＯＨ溶液に氷浴下で加えた。溶液を０℃で２時間撹拌した。混合物をＮａＨＣＯ３水溶液に注ぎ、ＤＣＭによって抽出した。ＤＣＭ層を濃縮し、分取ＴＬＣによって精製して、化合物（１０４）を白色の固体（３５ｍｇ）として得た。収率：３８％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 7.799-7.573 (7H, m, Ph-H, -NH), 7.210 (1H, m, Ph-H), 4.144 (2H, s, -SCH2), 2.980-2.958 (2H, m, -CH2), 2.434-2.393 (5H, m, -CH2, -CH3), 1.693-1.615 (4H, m, -CH2).  ESI MS: 499 (M), HPLC: 94%.
1HNMR (400 MHz, CD3OD): δ (ppm): 7.627-7.607 (1H, d, Ph-H), 7.531-7.489 (4H, m, Ph-H), 7.416-7.376 (1H, t, Ph-H), 7.150-7.129 (1H, d, Ph-H), 2.978-2.948 (2H, d, -CH2), 2.508-2.390 (3H, m, -CH2, -CH), 2.336 (3H, s, -CH3), 1.756-1.673 (4H, m, -CH2).
【実施例５４】
【０３５０】
化合物（７０）の調製
【０３５１】
【化５８】
2012528842.tif 000094
【０３５２】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（３ｇ、２０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２０ｍｌ）に溶かし、ＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（５．２ｍｌ）を加えた。混合物を撹拌し、９０℃に一晩高めた。次いで、混合物を濃縮し、Ｅｔ２Ｏから結晶化させて、所望の生成物化合物２を白色の固体（５００ｍｇ）として得た。収率：１９％。
【０３５３】
（ｂ）化合物４の調製：
化合物２（５００ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液に、化合物３（４３４ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）および５０％水酸化ナトリウム（１５４ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）を同時に加えたが、その間、内部温度を１０℃未満に維持した。３０分後に、混合物をＥＡで抽出し、次いで、ＥＡ層を濃縮して、白色の固体化合物４（４００ｍｇ）を得た。
【０３５４】
収率：５０％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 10.21 (H, s,-NH), 9.93 (H, s,-NH), 4.10-4.07 (2H, s, -CH2-), 2.06-1.97(1H, m, CH), 1.49-1.32 (4H, m, -CH2-), 0.89-0.81 (6H, m, -CH3).
（ｃ）化合物（７０）の調製：
化合物５（０．８７ｍｍｏｌ）のアセトン（８ｍｌ）溶液に、化合物６（２５１ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２４０ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流で２時間撹拌した。次いで、アセトンを除去し、混合物に水を注ぎ、ＥＡで抽出した。ＥＡ相を濃縮し、クロマトグラフィーによって精製して、化合物（７０）を黄色の半固体（１２０ｍｇ）として得た。収率：３１％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.61-8.60 (2H, dd, Py-H), 7.83-7.29 (6H,m,Py-H, Ph-H), 4.74-4.62 (2H,m,-CH2-), 2.84-2.81 (1H,m,-CH-), 1.69-1.60 (4H,m,-CH2-), 0.86-0.78 (6H,m,-CH3).  ESI MS: 441[M+H] +, HPLC: 98%.
【実施例５５】
【０３５５】
化合物（１０１）の調製
【０３５６】
【化５９】
2012528842.tif 000095
【０３５７】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（５００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のジオキサン（１５ｍｌ）懸濁液に、ＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（３ｇ、６０．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２時間還流加熱した。次いで、反応混合物を水に注ぎ、ＥＡで抽出した。ＥＡ層を乾燥させ、濃縮して、化合物２を無色のオイル（４００ｍｇ）として得た。収率：８１％。
【０３５８】
（ｂ）化合物４の調製：
化合物２（４００ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍｌ）懸濁液に、化合物３（２６６ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）および５０％水酸化ナトリウム（６４．８ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を氷水浴下で加えた。３０分後に、混合物をＥＡで抽出し、次いで、ＥＡ層を濃縮して、化合物４を白色の固体（４８５ｍｇ）として得た。収率：８０％。
【０３５９】
（ｃ）化合物５の調製：
化合物４（３００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を２２％ＮａＯＨ溶液（３２０ｍｇ、８ｍｍｏｌ）に加え、懸濁液を一晩還流させた。１ＮのＨＣｌ溶液を使用して、生じた懸濁液をｐＨ＝５に調節した。混合物をそのまま濃縮して、化合物５を白色の固体（８００ｍｇ）として得た。
【０３６０】
（ｄ）化合物７の調製：
化合物５（３２８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍｌ）懸濁液に、化合物６（１５０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（２８８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２０２ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を周囲温度で２時間撹拌した。混合物を濃縮し、クロマトグラフィーによって精製して、化合物７を白色の固体（２３０ｍｇ）として得た。収率：５０％。
【０３６１】
（ｅ）化合物（１０１）の調製：
化合物７（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ３（１０ｍｌ）中の混合物を５時間還流させた。ＰＯＣｌ３を蒸発させ、残渣をＤＣＭによってＮａＨＣＯ３水溶液から抽出した。ＤＣＭ層を濃縮し、クロマトグラフィーによって精製して、化合物（１０１）を白色の固体（５０ｍｇ）として得た。収率：５０％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.585-8.574 (2H, d, Py-H), 7.894-7.773 (4H, m, Py-H, Ph-H), 7.707-7.631 (2H, m, Ph-H), 7.401-7.381 (2H, d, Ph-H), 7.285-7.273 (2H, d, Ph-H), 3.429-3.393 (2H, t, -CH2), 3.126-2.959 (2H, m, -CH2), 2.384 (3H, s, -CH3). 
ESI MS: 443 (M+H), HPLC: 97%.
【実施例５６】
【０３６２】
化合物（１０２）の調製
【０３６３】
【化６０】
2012528842.tif 000096
【０３６４】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（３ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５ｍｌ）に溶かし、ＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（５．１３ｇ、１０２．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を撹拌し、９０℃に２時間高めた。混合物を濃縮し、クロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物化合物２を白色の固体（２．３ｇ）として得た。収率：７６．７％。
【０３６５】
（ｂ）化合物４の調製：
化合物２（１ｇ、６．２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液に、化合物３（０．７ｇ、６．２ｍｍｏｌ）および５０％水酸化ナトリウム（０．２４８ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を同時に加えたが、その間、内部温度を１０℃未満に維持した。３０分後に、混合物をＥＡで抽出し、次いで、ＥＡ層を濃縮して、化合物４を白色の固体（１ｇ）として得た。収率：６７％。
【０３６６】
（ｃ）化合物５の調製：
化合物４（１ｇ、４．２ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（６ｍｌ）に懸濁させ、反応混合物を１１０℃に２．５時間加熱した。混合物を周囲温度に冷却し、水を加えることによってクエンチし、次いで、これをＥＡで抽出し、ＥＡ層を濃縮し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で溶離するクロマトグラフィーによって精製して、化合物５を白色の固体（７１９ｍｇ）として得た。収率：７８％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.19-8.18 (2H, dd, Ph-H), 8.10-8.08 (2H, dd, Ph-H), 5.17 (2H, s, -CH2-).
（ｄ）化合物（１０２）の調製：
化合物５（３５０ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍｌ）溶液に、化合物６（４５８ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（４３８ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流で２時間撹拌した。次いで、混合物を水に注ぎ、ＥＡで抽出した。ＥＡ層を濃縮し、クロマトグラフィーによって精製して、化合物（１０２）を黄色の固体（３２９ｍｇ）として得た。収率：４４％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.60-8.59 (2H, d, Py-H), 8.09-7.29 (10H, m, Py-H, Ph-H), 4.87-4.76 (2H, m, -CH2-).  ESI MS: 472 [M+H]+, HPLC: 99%.
【実施例５７】
【０３６７】
化合物（７１）の調製
【０３６８】
【化６１】
2012528842.tif 000097
【０３６９】
（ａ）化合物４の調製：
化合物２（２．３ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液に、化合物３（１．７３ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）および５０％水酸化ナトリウム（０．６１ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）を同時に加えたが、その間、内部温度を１０℃未満に維持した。３０分後に、混合物をＥＡで抽出し、次いで、ＥＡ層を濃縮して、化合物４を白色の固体（２．３ｇ）として得た。
【０３７０】
収率：６６％。
【０３７１】
（ｂ）化合物５の調製：
化合物４（２．３ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（１０ｍｌ）に懸濁させ、反応混合物を１１０℃に２．５時間加熱した。混合物を周囲温度に冷却し、水を加えることによってクエンチし、次いで、これをＥＡで抽出し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で溶離するクロマトグラフィーによって精製して、化合物５を白色の固体（１ｇ）として得た。収率：４５％。
【０３７２】
（ｃ）化合物（７１）の調製：
化合物５（２００ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍｌ）溶液に、化合物６（２７８ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２７０ｇ、１．９４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流で２時間撹拌した。次いで、アセトンを除去し、水を混合物に注ぎ、続いて、ＥＡで抽出した。ＥＡ層を濃縮し、クロマトグラフィーによって、化合物（７１）を白色の固体（２２０ｍｇ）として得た。収率：４９％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.60-8.59 (2H, dd, Py-H), 7.84-7.29 (10H, m, Py-H, Ph-H), 4.86-4.75(2H, m,-CH2-), 2.57 (3H, s, CH3-).  ESI MS: 461[M+H] +, HPLC: 98%.
【実施例５８】
【０３７３】
化合物（７２）の調製
【０３７４】
【化６２】
2012528842.tif 000098
【０３７５】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（２ｇ、８．７ｍｍｏｌ）およびＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（４．４ｇ、８７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍｌ）溶液を２４時間還流加熱した。次いで、混合物を濃縮し、残渣をＥＡ／ＰＥで洗浄して、化合物２を白色の固体（１．８ｇ）として得た。収率：９０％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 9.0 (1H, b,-NH), 7.49 (1H, d, Ar-H), 7.20-7.26 (2H, m, Ar-H), 2.34 (3H, s, CH3-).
（ｂ）化合物４の調製：
化合物２（１．５ｇ、６．６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍｌ）溶液に、化合物３（０．５７ｍＬ、７．２ｍｍｏｌ）およびＮａＯＨ溶液（水０．４ｍｌ中２８８ｍｇ、７．２ｍｍｍｏｌ）を同時に加え、内部温度を１０℃未満に維持した。１時間後に、混合物を水（５０ｍｌ）に加え、ＥＡによって抽出した。ＥＡ層を濃縮して、化合物４を白色の固体（１．８ｇ）として得た。収率：９０％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 10.50 (1H, b,-NH), 10.42 (1H, b, -NH), 7.55 (1H, s, Ar-H), 7.29-7.38 (2H, m, Ar-H), 4.19 (2H, s, -CH2-), 2.35 (3H, s, CH3-).
（ｃ）化合物５の調製：
化合物４（１．２ｇ、３．９ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（５ｍｌ）に懸濁させ、次いで、反応混合物を１１０℃に５時間加熱した。混合物を周囲温度に冷却し、水を加えることによってクエンチし、次いで、混合物をＥＡで抽出した。ＥＡ層を濃縮して、残渣を得、これを、再結晶化（ＤＣＭ：ＰＥ）によって精製して、化合物５を薄灰色の固体（８００ｍｇ）として得た。収率：７１％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7.83 (1H, d, Ar-H), 7.59 (1H, s, Ar-H), 7.27 (1H, m, Ar-H), 4.80 (2H, s, -CH2-), 2.41 (3H, s, CH3-).
（ｄ）化合物（７２）の調製：
化合物５（１００ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍｌ）溶液に、化合物６（１０１ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（６０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流で１．５時間撹拌した。次いで、溶媒を除去し、水（１５ｍｌ）を混合物に加え、ＥＡで抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。ＥＡ層を濃縮し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝５０／１）によって、化合物（７２）を白色の固体（１５８ｍｇ）として得た。
【０３７６】
収率：８４％。
【０３７７】
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.56-8.58 (2H, m, Py-H), 7.22-7.79 (9H, m, Ph-H, Py-H), 4.71-4.88 (2H, m, -CH2-), 2.40 (3H, s, CH3-).  ESI MS: ([M+H] +=539, HPLC: 97.6%.
【実施例５９】
【０３７８】
化合物（７３）の調製
【０３７９】
【化６３】
2012528842.tif 000099
【０３８０】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（２ｇ、８．７ｍｍｏｌ）およびＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（４．４ｇ、８７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍｌ）溶液を２４時間還流加熱した。次いで、混合物を約０℃に冷却した。次いで、沈殿した固体を濾過した。固体を乾燥させて、化合物２を白色の固体（１．７ｇ）として得た。
【０３８１】
収率：８５％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 9.83 (1H, b,-NH), 7.80 (1H, d, Ar-H), 7.71-7.73 (1H, dd, Ar-H), 7.42 (1H, d, Ar-H), 2.36 (3H, s, CH3-).
（ｂ）化合物４の調製：
化合物２（１．６ｇ、７．０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍｌ）溶液に、化合物３（０．６２ｍＬ、７．７ｍｍｏｌ）およびＮａＯＨ溶液（水１ｍｌ中の３０８ｍｇ、７．７ｍｍｍｏｌ）を同時に加え、内部温度を１０℃未満に維持した。１時間後に、混合物を水（５０ｍｌ）に加え、ＥＡによって抽出した。ＥＡ層を濃縮して、化合物４を薄黄色の固体（２．２ｇ）として得た。定量収率。
【０３８２】
（ｃ）化合物５の調製：
化合物４（２．１ｇ、６．８ｍｍｏｌ、粗製）をＰＯＣｌ３（６ｍｌ）に懸濁させ、次いで、反応混合物を１１０℃に５時間加熱した。混合物を周囲温度に冷却し、水を加えることによってクエンチし、次いで、混合物をＥＡで抽出した。ＥＡ層を濃縮して、残渣を得、これを、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１）で溶離するカラムクロマトグラフィーによって精製して、薄灰色の固体の化合物５（１．７ｇ）を得た。収率：８７％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.23 (1H, S, Ar-H), 7.91 (1H, d, Ar-H), 7.38 (1H, d, Ar-H), 4.78 (2H, s, -CH2-), 2.48 (3H, s, CH3-).
（ｄ）化合物（７３）の調製：
化合物５（１００ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のアセトン（８ｍＬ）溶液に、化合物６（１０１ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（６０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流で１．５時間撹拌した。次いで、溶媒を除去し、水（１５ｍＬ）を混合物に加え、ＥＡで抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。ＥＡ層を濃縮し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０／１）によって、化合物（７３）を白色の固体（１００ｍｇ）として得た。
【０３８３】
収率：５３％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.58 (2H, d, Py-H), 8.15 (1H, d, Ar-H), 7.83-7.86 (1H, m, Ar-H), 7.33-7.62 (7H, m, Ph-H, Py-H), 4.72-4.82 (2H, m, -CH2-), 2.47 (3H, s, CH3-). 
ESI MS: ([M+H] +=539, HPLC: 99.3%.
【実施例６０】
【０３８４】
化合物（１０２）の調製
【０３８５】
【化６４】
2012528842.tif 000100
【０３８６】
（ａ）化合物４の調製：
化合物１（２００ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）をトルエン（７０ｍｌ）に０℃で溶かし、化合物３（０．１６ｍＬ、２．０３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を還流で６時間撹拌し、反応物を０℃に冷却した。残渣をＫＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で洗浄した。混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ×４）で抽出し、有機層をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮して、粗製の生成物を得、これをシリカゲルでＥＡ：ＰＥ＝１０：１で溶離するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物４（９０ｍｇ）を得た（ＬＣ−ＭＳによっても確認）。収率：３４％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.62 (1H, s, Py-H), 8.45-8.47 (1H, d, Py-H), 7.11-7.12 (1H,d, Py-H) 
（ｂ）化合物６の調製：
化合物４（８３ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）および化合物５（６７ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（７ｍＬ）に溶かした。反応物を還流で４時間撹拌し、沈殿した黄色の化合物６を濾過によって回収した（１１０ｍｇ）（ＬＣ−ＭＳによっても確認）。収率：７３％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 11.07 (1H, b, -NH), 10.31 (1H, s, -NH), 9.80 (1H, s, -NH), 8.457-8.80 (4H, m, Py-H), 7.68-7.85 (3H, m, Py-H).
（ｃ）化合物７の調製：
化合物６（１．２５ｇ、４．０７ｍｍｏｌ）および１０ＭのＫＯＨ（４ｍＬ、４０．７ｍｍｏｌ）をエチレングリコール（４０ｍＬ）に溶かし、反応物を１３０℃で１４時間撹拌した（ＬＣ−Ｍｓによって、混合物中に４．１２％の化合物７が存在することが示された）。溶媒を減圧によって除去し、残渣を水性Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）およびＡｃＯＨ（４ｍＬ、１０Ｍ）中でクエンチした。混合物をＥＡ（８×３０ｍＬ）で抽出し、有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮して、粗製の生成物を得た。これを分取ＨＰＬＣで精製して、黄色の固体（１９ｍｇ）を得た。収率：１．５％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD): δ (ppm): 8.54-8.76 (4H, m, Py-H), 7.49 (1H, d, Py-H), 7.27 (2H, d, Py-H). 
（ｄ）化合物（１０２）の調製：
化合物７（１９ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）、化合物８（４４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１１．４ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）をアセトン（５ｍＬ）に溶かし、反応混合物を６５℃で５時間撹拌し、次いで、真空中で蒸発させた。混合物を水（１０ｍＬ）と共に摩砕し、ＥＡ（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮して、粗製の生成物を得、これを、分取ＨＰＬＣで精製して、黄色の固体（３ｍｇ）（ＬＣ−ＭＳによっても確認）を得た。収率：９．６％。
1HNMR (400 MHz, CD3OD): δ (ppm): 8.91 (2H, s), 8.75 (1H, s), 8.59 (1H, s), 8.48-8.49 (2H, d), 8.22-8.25 (2H, d), 7.97-7.99 (2H, d), 7.92-9.93 (1H, d).
【実施例６１】
【０３８７】
化合物（７４）の調製
【０３８８】
【化６５】
2012528842.tif 000101
【０３８９】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（５ｇ、３５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍｌ）に溶かした。混合物を０℃に冷却し、Ｈ２ＳＯ４（３ｍｌ）を滴加した。次いで、混合物を３０℃で４日間撹拌した。混合物をＮａ２ＣＯ３水溶液で処理し、ｐＨ＝８に調節し、続いて、ＥＡで抽出した。有機層を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）で精製して、化合物２を黄色のオイル（５．４ｇ）として得た。収率：９８％。
【０３９０】
（ｂ）化合物３の調製：
ＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（６．２ｍｌ、１２８ｍｍｏｌ）を化合物２（２ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍｌ）溶液に加えた。混合物を還流で一晩撹拌した。混合物を濃縮し、ＥＡおよびＰＥで洗浄して、化合物３を黄色の固体（１．８ｇ）として得た。収率：９０％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7.43 (1H, d, NH-), 7.35 (1H, d, Ar-H), 6.74 (1H, d, Ar-H), 3.50 (2H, b, NH2-), 2.51 (3H, s, CH3-).
（ｃ）化合物５の調製：
化合物３（１．７７ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）溶液に、化合物４（１．２８ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）および５０％水酸化ナトリウム（４５２ｍｇ、１１．３ｍｍｏｌ）を同時に加えたが、その間、内部温度を１０℃未満に維持した。１時間後に、混合物をＥＡで抽出し、次いで、濃縮して、黄色の固体（２．２２ｇ）を得た。収率：８２％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 10.42 (1H, s, NH-), 10.32 (1H, s, NH-), 7.65 (1H, d, Ar-H), 6.89 (1H, s, Ar-H), 4.18 (2H, d, -CH2-), 2.51 (3H, m, CH3-).
（ｄ）化合物６の調製：
化合物４（２ｇ、８．５ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（１３ｍＬ）に懸濁させ、反応混合物を１１０℃に一晩加熱した。混合物を周囲温度に冷却し、冷水を加えることによってクエンチし、次いで、これをＥＡで抽出し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で溶離するクロマトグラフィーによって精製して、黄色の固体（７００ｍｇ）を得た。収率：３８％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7.60 (1H, d, Ar-H), 6.85 (1H, d, Ar-H), 4.74 (2H, s, -CH2-), 2.57 (3H, s, CH3-).
（ｅ）化合物（７４）の調製：
化合物７（１５０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）のアセトン（１２ｍｌ）溶液に、化合物６（１１１ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（８９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃で２時間撹拌した。次いで、溶媒を除去し、水を混合物に注ぎ、ＥＡで抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮およびクロマトグラフィーによって、薄黄色の固体（１３０ｍｇ）を得た。収率：５４％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.57 (2H, d, Py-H), 7.32-7.60 (7H, m, Ph-H, Py-H), 6.81 (1H, dd, Ar-H), 4.65-4.80 (2H, m, -CH2-), 2.55 (3H, s, CH3-).  
ESI MS: ([M+H] +=467, HPLC: 99.8%.
【実施例６２】
【０３９１】
化合物（１０３）の調製
【０３９２】
【化６６】
2012528842.tif 000102
【０３９３】
（ａ）化合物３の調製：
ＰＰＡ（１０ｍＬ）を化合物１（４００ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ）および化合物２（５３９ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。混合物を１００℃に０．５時間加熱した。次いで、これを水に注ぎ、ＥＡで抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮およびクロマトグラフィーによって、茶色の固体（３５０ｍｇ）を得た。収率：４８％。
1HNMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.82 (1H, s), 7.52 (1H, s), 6.55 (1H, s), 4.52 (2H, s), 2.44 (3H, s), 2.37 (3H, s).
（ｂ）化合物（１０３）の調製：
化合物４（１９６ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）のアセトン（２０ｍＬ）溶液に、化合物３（１５０ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１１８ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃で２時間撹拌した。次いで、溶媒を除去し、水を混合物に注ぎ、ＤＣＭで抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。濃縮およびクロマトグラフィーによって、白色の固体（１４８ｍｇ）を得た。収率：４５．８％。
1HNMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.79 (1H, s), 8.58 (2H, b), 7.37-7.61 (7H, m), 6.53 (1H, s), 4.50-4.59 (2H, J1=21.6 Hz，J2=13.6 Hz, q), 2.41 (3H, s), 2.35 (3H, s).
【実施例６３】
【０３９４】
化合物（９８）の調製
【０３９５】
【化６７】
2012528842.tif 000103
【０３９６】
（ａ）化合物２の調製：
Ｈ２ＳＯ４／Ｈ２Ｏ（４．２ｍＬ／１４．５ｍＬ、７８．８ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物１（３ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）を懸濁させた。冷却後に、ＮａＮＯ２／Ｈ２Ｏ（１．４ｇ／５ｍＬ、２０．４ｍｍｏｌ）を加えることによって、ジアゾ化を達成した。次いで、冷たい溶液（−５℃）に、ＫＳＣＮ／Ｈ２Ｏ（２．４８ｇ／５ｍＬ、２５．６１ｍｍｏｌ）およびＣｕＳＣＮ（２．３ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）を加えた。一晩放置した後に、混合物を６０℃に５分間加熱し、冷却し、ＥＡで抽出した。混合物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、クロマトグラフィーによって精製して、オレンジ色の固体（２．５ｇ）を得た。収率：６５％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7.83 (1H, d, Ar-H), 7.53-7.65 (2H, m, Ar-H), 2.78 (3H, s, CH3-).
（ｂ）化合物３の調製：
スズ（１０ｇ）および化合物２（２．２２ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を、振盪しながら濃ＨＣｌ（４０ｍＬ）に加えた。ほぼ全てのスズが溶けるまで、これを６５℃に加熱した。溶液をデカンテーションして残りのスズを除去し、冷却し、濾過して、白色の塩を得た。この生成物をＮａ２ＣＯ３で分解し、アミノベンゾチアゾールをＥＡで抽出した。ＥＡを蒸発させて、灰色の固体（１．０ｇ）を得た。収率：５３％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ7.39 (1H, d, Ar-H), 7.21-7.25 (1H, m, Ar-H), 6.93-6.95 (1H, m, Ar-H), 5.46 (2H, s, NH2-), 2.44 (3H, s, CH3-).
（ｃ）化合物５の調製：
ＰＰＡ（１０ｍＬ）を、化合物３（１ｇ、６ｍｍｏｌ）および化合物４（１ｇ、６ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。混合物を１００℃に０．５時間加熱した。次いで、これを水に注ぎ、ＥＡで抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮およびクロマトグラフィーによって、黄色の固体（１３５ｍｇ）を得た。収率：８．５％。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.91 (1H, d, Ar-H), 7.32-7.47 (2H, m, Ar-H), 6.59 (1H, s, Ar-H), 4.47 (2H, s, -CH2-), 2.52 (3H, s, CH3-).
（ｄ）化合物（９８）の調製：
化合物６（１３０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍＬ）溶液に、化合物５（１２０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（７８ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃で２時間撹拌した。次いで、溶媒を除去した後に、水を混合物に注ぎ、ＤＣＭで抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮およびクロマトグラフィーによって、黄色の固体（１２０ｍｇ）を得た。収率：５２％。
1HNMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.88-8.90 (1H, J=8.0 Hz, d), 8.55-8.57 (2H, J1=8.4 Hz，J2=1.6 Hz, q), 7.30-7.62(8H, m), 6.59 (1H, s), 4.46-4.47 (2H, J=6.0 Hz, d), 2.51 (3H, s).
【実施例６４】
【０３９７】
化合物（４３）の調製
【０３９８】
【化６８】
2012528842.tif 000104
【０３９９】
（ａ）化合物２２の調製：
撹拌されている化合物１４（３２３ｍｇ、２．３６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ１５ｍｌ懸濁液に、化合物２１（４００ｍｇ、２．３６ｍｍｏｌ）を加え、次いで、これを１時間還流させ、沈殿した白色の化合物２２（７００ｍｇ）を濾過によって回収した。収率：９６％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 10.92 (1H,s,-NH), 9.95 (1H,s,-NH), 9.74 (1H,s, -NH), 8.78-8.76 (2H,dd,Py-H), 7.86 (2H,s,Py-H), 7.51-7.27 (4H,m,Ph-H).
（ｂ）化合物２３の調製：
撹拌されている化合物２２（７００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）の２ＮのＫＯＨ溶液中の懸濁液を８０℃に２時間加熱した。反応混合物を周囲温度に冷却した後に、３ＮのＨＣｌを加えて、溶液を酸性化した。沈殿した白色の化合物２３（３２４ｍｇ）を濾過によって回収した。収率：４９％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 14.50 (1H, s,-SH), 8.61-8.59 (2H, dd, Py-H), 7.78-7.25 (6H, m, Py-H, Ph-H).
（ｃ）化合物（４３）の調製：
撹拌されている化合物２７（８５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のアセトン（８ｍｌ）懸濁液に化合物２３（１００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（９７ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を加え、次いで、これを還流で２時間撹拌した。生じた生成物をそのまま真空濃縮して、アセトンを除去し、残渣をＥＡで抽出した。これをシリカゲルカラムによって精製して、白色の固体、８０ｍｇを得た。
【０４００】
収率：４７％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.60-8.59 (2H,dd,Py-H), 7.88-7.29 (10H,m, Py-H, Ph-H), 7.81-7.32 (8H,m,Ph-H), 4.86-4.85 (2H,d,-CH2-), 2.38 (3H,s,CH3-). 
ESI MS: 461.3([M+H] +), HPLC: 98.9%
【実施例６５】
【０４０１】
化合物（６０）の調製
【０４０２】
【化６９】
2012528842.tif 000105
【０４０３】
（ａ）化合物２の調製：
化合物１（０．９ｇ、５．９９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（８ｍｌ）溶液に、クロロアセチルクロリド（０．６７ｇ、５．９９ｍｍｏｌ）および５０％水酸化ナトリウム（水０．４８ｍｌ中の２４０ｍｇ）に同時に加えたが、その間、内部温度を１０℃未満に維持した。反応混合物をこの温度で３０分間撹拌した。反応物を水でクエンチし、化合物を酢酸エチルで抽出した。溶媒を除去して、化合物２（０．９ｇ）を白色の固体として得た。収率：６９％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 10.4 (1H,s,-NH), 10.3 (1H,s, -NH), 7.80-7.70 (2H, d, Ar-H), 7. 35-7.20 (2H, d, Ar-H), 4.2 (2H,s,-CH2-), 2.35 (3H, s,-CH3-).
MS: 229.4 [M++2H] ピーク.
（ｂ）化合物３の調製：
化合物２（０．９ｇ、４ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（６ｍｌ、６４．３ｍｍｏｌ）に懸濁させ、反応混合物を１１０℃に５時間加熱した。反応混合物を周囲温度に冷却し、水でクエンチした。化合物を酢酸エチルで抽出し、溶媒を除去した。粗製物質を（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝４０：６０）で溶離するクロマトグラフィーによって精製し、化合物３を固体（４００ｍｇ）として得た。収率：４７％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.93-7.88 (2H, d, Ar-H), 7.48-7.40 (2H, d, Ar-H), 5.15 (2H,s,-CH2-), 2.4 (3H, s,-CH3).  MS: 210.8 [M++2H] ピーク.
（ｃ）化合物（６０）の調製：
化合物３（８０ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ）、化合物Ａ（１１０ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１０６ｍｇ、０．７６８ｍｍｏｌ）の混合物をアセトン１０ｍｌ中で１．５時間還流させた。反応混合物を周囲温度に冷却し、濾過し、濾液を蒸発させて、粗製の残渣を得、これを、（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝２：９８）で溶離するカラムクロマトグラフィーによって精製し、化合物（６０）を固体（８０ｍｇ）として得た。収率：４５％。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm):  8.65-8.50 (2H,d,Py-2H), 7.84-7.78 (3H, m, Ar-H), 7.76-7.755 (3H, m, Ar-H), 7.44-7.38 (2H, m, Ar-H), 7.32-7.26 (2H, m, Ar-H) 4.54-4.52 (2H,dd,-CH2-), 2.4 (3H, s,-CH3-).  LC-MS: 461.9 [M+H]+.  HPLC: 99.19%.
【実施例６６】
【０４０４】
Ｗｎｔアッセイにおける化合物の活性
実施例２２に記載されている通り、ＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクションし、それを増殖させ、アッセイした。播種の２４時間後に、細胞を３０％Ｗｎｔ３ａ−ＣＭ中１０μＭ濃度の化合物と共にさらに２４時間インキュベーションした。
【０４０５】
表３に示されているパーセント活性は、対照としてのＤＭＳＯに対して算出している。示されている一部の値は、複数の測定の平均である。陽性対照として使用される化合物ＸＡＶ９３９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；Ｈｕａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ（２００９）、４６１、６１４〜２０頁）は、７％の活性を有する。
【０４０６】
【表４】
2012528842.tif 000106
【実施例６７】
【０４０７】
化合物のＩＣ５０およびＧＩ５０値
主に実施例２２に従って調製されたＳＴＦ／ＲＥＮ  ＨＥＫ２９３細胞を使用して、ＩＣ５０値を算出した。簡単には、ＨＥＫ２９３細胞（１ウェル当たり細胞８０，０００個）をポリ−Ｌリシンでコーティングされた４８ウェルプレートに播種した。播種の２４時間後に、細胞を５０％Ｗｎｔ３ａ−ＣＭ中の様々な化合物濃度と共に、さらに２４時間インキュベーションした。化合物に曝露した後に、細胞を溶解させ、Ｄｕａｌ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ（Ｐｒｏｍｅｇａ）に記載されている通りに、ホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケ活性を２０／２０ｎ  Ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ（Ｔｕｒｎｅｒ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ）で測定した。
【０４０８】
主に実施例２３に従って調製されたＳＷ４８０細胞を使用して、増殖阻害曲線を作成した。ＳＷ４８０細胞（１ウェル当たり細胞３０００個）を９６ウェルプレートに播種した（１処置あたり８回）。２４時間後およびその後は毎日、細胞培地（１０％ＦＢＳ含有）を様々な化合物濃度と、または０．１％のＤＭＳＯビヒクルと混合し、次いで、ウェルに加えた。インキュベーション時間ゼロと規定して（ｔ０＝細胞播種の２４時間後）、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓＮｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙプロトコル（ＭＴＳ、Ｐｒｏｍｅｇａ）に記載されている通りに、播種された対照細胞の１６ウェルを、フェノール不含Ｄ−ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）１００μｌ中の基質２０μｌと共に２時間インキュベーションした。Ａ４９０を記録した。処置試料を同様に７２時間後に測定した。次の式を使用して、個々のウェルの相対Ａ４９０試料値を決定した：
（（試料Ａ４９０−平均Ａ４９０ｔ０）×１００）／（平均Ａ４９０ｔ７２  ０．１％ＤＭＳＯ対照−平均Ａ４９０ｔ０）
ＸＬｆｉｔ（ｉｄｂｓ）を使用して、阻害実験におけるＩＣ５０およびＧＩ５０値を決定した。データを次の式にフィットさせた：
ＩＣ５０：Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合等温式：
ｆｉｔ＝（（Ａ＋（Ｂ×ｘ））＋（（（Ｃ−Ｂ）×（１−ｅｘｐ（（−１×Ｄ）×ｘ）））／Ｄ））
ｒｅｓ＝（ｙ−ｆｉｔ）
ＧＩ５０：Ｅａｄｉｅ−Ｈｏｆｓｔｅｅモデル：
ｆｉｔ＝（Ａ＋（（Ｂ×ｘ）／（（Ｃ×（Ｄ＋１））＋ｘ）））
ｉｎｖ＝（（（ｙ−Ａ）×（Ｃ×（Ｄ＋１）））／（（Ａ＋Ｂ）−ｙ））
ｒｅｓ＝（ｙ−ｆｉｔ）
表４は、ある種の化合物のＩＣ５０およびＧＩ５０値を示す。示されている一部の値は、複数の実験からの平均値である（ｎｔ＝試験せず）。陽性対照として使用されたＸＡＶ９３９は、１００ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。
【０４０９】
【表５】
2012528842.tif 000107
【実施例６８】
【０４１０】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞増殖アッセイ
対照および結腸癌細胞系を、既知のＷｎｔ経路モジュレーターで、かつ様々な化合物で処置した後に、細胞増殖の低減に関して評価した。
【０４１１】
実験
既知のＷｎｔ経路阻害薬である化合物ＩＷＲ−１（Ｃｈｅｎら、Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．（２００９）、５、１００〜７頁）をＳｉｇｍａから得た。試験化合物を先行する実施例に記載されている通りに合成した。
【０４１２】
使用された対照細胞系は、ＨｅＬａ細胞（細胞増殖が標準Ｗｎｔシグナル伝達によって制御されない）および結腸直腸癌細胞系ＬＳ１７４ＴおよびＨＣＴ１１６（突然変異β−カテニンＮ−末端リン酸化部位を有する）であった。使用された標的細胞系は、結腸直腸癌細胞系ＷｉＤｒ、ＬｏＶｏ、ＨＣＴ−８、ＨＣＴ−１５、ＣＯＬＯ２０５、ＤＬＤ−１、ＨＴ−２９、ＳＷ６２０、ＳＷ１４６３、ＳＷ４８０であり、これらは全て、突然変異ＡＰＣ遺伝子を持つ。標的細胞を、Ｌ  Ｗｎｔ３ａ発現細胞およびＨＥＫ２９３細胞と共に、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から購入し、供給者の推奨に従って維持した。ＡＴＣＣによって記載されている通りに、Ｌ  Ｗｎｔ３ａ発現細胞からＷｎｔ３ａ含有調整培地（Ｗｎｔ３ａ−ＣＭ）を収集した。
【０４１３】
表５に示されている結果をもたらした実験では、細胞（１ウェル当たり３０００個）を９６ウェルプレートに播種した（１処置当たり８回）。２４時間後およびその後は毎日、細胞培地（１０％ＦＢＳ含有）を１０μＭの化合物と、または０．１％のＤＭＳＯビヒクルと混合し、次いで、ウェルに加えた。インキュベーション時間ゼロと規定して（ｔ０＝細胞播種の２４時間後）、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓＮｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙプロトコル（ＭＴＳ、Ｐｒｏｍｅｇａ）に記載されている通りに、播種された対照細胞の１６ウェルを、フェノール不含Ｄ−ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）１００μｌ中の基質２０μｌと共に２時間インキュベーションした。Ａ４９０を記録した。処置試料を同様に７２時間後に測定した。
【０４１４】
表６に示されている結果をもたらした実験では、細胞を、播種の２４時間後に１０μＭの被験化合物を含有する細胞培地（１０％ＦＢＳ含有）に曝露した（９６ウェルプレートで細胞３０００個）。培地を毎日変えた。７２時間後に、ＭＴＳアッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓＮｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ−Ｐｒｏｍｅｇａ）を標準な手順に従って実施した。０．１％ＤＭＳＯを対照として使用した。
【０４１５】
低いＭＴＳ生成物の量（４９０ｎｍでの吸光度によって測定）はそのまま、培養中で生きている細胞の数に比例し、したがって、それぞれの場合において細胞増殖の直接的な比較が可能である。ＤＭＳＯを対照として使用した。次の式を使用して、個々のウェルの相対Ａ４９０試料値を決定した：
（（試料Ａ４９０−平均Ａ４９０ｔ０）×１００）／（平均Ａ４９０ｔ７２０．１％ＤＭＳＯ対照−平均Ａ４９０ｔ０）
結果
表５は、１０μＭの様々な化合物を使用して７２時間後のＳＷ４８０結腸癌細胞でのＭＴＳアッセイの結果を示す。ＳＷ４８０細胞の増殖（パーセントで）は、ＤＭＳＯ対照の増殖に対するＡ４９２値である。
【０４１６】
【表６】
2012528842.tif 000108
【０４１７】
表６は、上記の通りに実施されたＭＴＳアッセイの結果を示し、様々な突然変異ＡＰＣ結腸直腸細胞の細胞増殖を対照細胞系と比較して示す。示されているデータは、上記の通り算出されたＤＭＳＯ対照に対するＡ４９０パーセンテージ値であり、２から４つの独立した実験からの平均を表している（単一実験のみを報告しているＩＷＲ−１で処置されたＳＷ１４６３細胞を除く）。化合物ＩＷＲ−１およびＸＡＶ９３９は既知のＷｎｔ経路阻害薬である。
【０４１８】
【表７】
2012528842.tif 000109
【０４１９】
結論
複数の化合物で処置されたＳＷ４８０細胞の細胞増殖を調査することによって、これらの化合物は全て、癌細胞の増殖を、場合によっては７７％まで低減するように作用することが示された。
【０４２０】
化合物（４３）および（６０）の作用を、様々な細胞系で試験した。対照細胞（ＡＰＣ遺伝子に突然変異を有さない細胞）は、化合物（４３）または（６０）によって有意に影響を受けなかった。しかし、化合物（４３）および（６０）は両方とも、ＡＰＣ遺伝子に突然変異を持つ標的結腸直腸癌細胞系では細胞増殖の低減において類似のパターンを示す（それぞれ５２％および５５％の平均細胞増殖）。化合物（４３）および（６０）は、ＡＰＣ突然変異を持つ結腸直腸癌細胞に対して高い作用特異性を示す（それぞれ０．５６および０．５８の比）。
【０４２１】
対照的に、対照化合物（両方ともＷｎｔ経路の阻害薬であることが最近示された）は、ＡＰＣ突然変異癌細胞系の増殖を阻害する際に選択的ではなかった。化合物ＸＡＶ９３９は、試験された細胞系のいずれの細胞増殖にも重要な作用を示さなかった（ＳＷ１４６３を除く：６４％増殖）。対照化合物ＩＷＲ−１は、対照細胞系（平均７４％増殖）およびＡＰＣ突然変異細胞系（平均６２％増殖）の両方の増殖を低減させた。しかし、ＩＷＲ−１の作用の特異性は低い（０．８３の比）。
【０４２２】
したがって、化合物（４３）および（６０）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＷｎｔ経路の高度に選択的な阻害薬であり、突然変異ＡＰＣ遺伝子を持つ癌細胞においてのみ増殖を低減するように作用する。
【実施例６９】
【０４２３】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍増殖に対する化合物（１）の作用
ＡｐｃＭｉｎマウスでの腫瘍増殖に対する化合物（１）の作用を調査した。
【０４２４】
実験
雌のＣ５７ＢＬ／６  ３匹を含むケージを雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊ−ＡｐｃＭｉｎ１匹と交雑させた。マウスに、２０１８ＳＸ  Ｔｅｋｌａｄ  Ｇｌｏｂａｌ  １８％Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｔｒｕｄｅｄ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ（Ｈａｒｌａｎ（商標））を給餌した。５〜７日齢の子を無作為化し、２つの治療群に分けた；試験群を化合物（１）で処置し、対照群を対照ビヒクル（１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、Ｓｉｇｍａ）で処置した。試験溶液を毎日皮下注射によって、首の後ろに投与した（動物体重１グラム当たり溶液１０μｌ、化合物１５ｍｇ／ｍｌ溶液）。５日間の注射日の後に毎回、２日の注射の中断を続けた。２１日齢で、マウスの遺伝子型を同定し、ＡｐｃＭｉｎ動物を雌雄に分けた。同時に、溶液の皮下注射を、経口投与に変えた。経口適用では、化合物（１）をＤＭＳＯに溶かして１５０ｍｇ／ｋｇにした。ＤＭＳＯのみを、ビヒクル対照として使用した（動物体重１グラム当たり溶液５μｌ、３０ｍｇ／ｍｌ溶液）。投与を９週齢で終えて、動物を安楽死させた。各動物の小腸および結腸を切除し、１０％ＰＦＡ中に固定し、１％メチレンブルーで染色した。小腸を匿名でコードされた試料に分け、その後、顕微鏡法によって手動分析した。腫瘍の発生頻度、分布およびサイズを定量化した。実験を通して、マウスを週２回体重測定した。全ての動物実験は、Ｆｏｒｓｏｋｓｄｙｒｕｔｖａｌｇｅｔ、Ｏｓｌｏ、Ｎｏｒｗａｙの地域倫理委員会による承認を受け、認められた倫理規準に従って実施した。
【０４２５】
結果
全腫瘍負荷に対する化合物（１）の作用は図１２Ａに示されている。図１２Ｂは、２群のマウスの平均体重に対する化合物（１）の投与の作用を示す。処置の後に、雄または雌のマウスの体重において著しい差違は検出されなかった。
【０４２６】
小腸腫瘍を評価する実験からの統計分析および記述統計は、下記の表７および８に示されている。表７は、腫瘍の数に対する統計値を示す。各統計比較に関して、Ｓｈａｐｉｒｏ−Ｗｉｌｋ正規性検定を、該当する場合には（Ｐ＞０．０５）スチューデントｔ検定と共に行った。正規性がＳｈａｐｉｒｏ−Ｗｉｌｋ検定において達成され得なかった場合には、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ順位和検定を、スチューデントｔ検定の代わりに使用した。α−レベルを０．０５に設定し、Ｐ＜０．０５を有する差違を、統計的に有意とみなした。試料サイズ（ｎ）、中央値、幅、最大、最小、平均、標準偏差、標準誤差および信頼区間（平均のＣ．Ｉ．）を挙げる
【０４２７】
【表８】
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【０４２８】
【表９】
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【０４２９】
結腸腫瘍を評価する実験からの統計分析および記述統計は、下記の表９および１０に示されている。表７および８のデータと同じ方法で、データを分析した。
【０４３０】
【表１０】
2012528842.tif 000112
【０４３１】
【表１１】
2012528842.tif 000113
【０４３２】
図１３Ａは、室を出発点として小腸に沿った腫瘍の分布および発生頻度を示す（ｃｍ）。化合物（１）で処置された小腸の最後２／３は、対照群よりも少ない腫瘍を含有する。図１３Ｂに示されているヒストグラムは、種々のサイズ群（ｍｍ２）の小腸内の腫瘍の数を示す。化合物（１）での処置は特に、０．１０ｍｍ２から３．２０ｍｍ２の間の腫瘍の発生頻度を低減させる。各群の動物の数を使用して、図１３Ａおよび１３Ｂでの値を正規化した。
【０４３３】
結論
実験を行って、ＡｐｃＭｉｎ（多発性腸新形成、Ｍｉｎ）マウスの小腸および結腸での腫瘍形成および増殖の阻害に対する化合物（１）の作用を決定した。ＡｐｃＭｉｎマウスは、ＡＰＣ腫瘍サプレッサー遺伝子の１つの対立遺伝子に突然変異を有し、これらのマウスは、第２対立遺伝子における頻繁な自発突然変異によって、ポリポーシスおよび結腸腺癌を発症する。したがって、ＡｐｃＭｉｎマウス系は、ヒト結腸癌のための優れた動物モデルを提供する。
【０４３４】
皮下および経口適用後のこれらのマウスでの腫瘍形成に対する化合物（１）の作用を決定した。体重（図１２Ｂ）または他の考慮すべき不快に対する作用は、いずれの動物でも検出することができなかった。雄と雌との間で、小腸における腫瘍発生頻度において有意な差違は検出することができなかったので、２つの性別からのデータを合わせて、分析の間、１つの群とみなした。
【０４３５】
小腸における腫瘍数の有意な低減が、化合物（１）を注射した後に検出された（表７および８を参照されたい）。対照群における腸管腫瘍の平均数は、７４．８であったが、化合物（１）で処置された群では、平均値は３６．１（Ｐ＝０．０３６）であった。結腸での腫瘍数の統計的に有意な低減もまた、化合物（１）での処置の後に検出された。対照群における結腸腫瘍の平均数は１．７８であったが、化合物（１）で処置された群では、平均値は０．４２（Ｐ＝０．００３）であった。
【０４３６】
室からの距離に応じて、小腸を複数の切片に分けた（ｃｍで）。化合物（１）で処置されたマウスでは、小腸の最後２／３は、対照と比較した場合、著しく少ない腫瘍を有した（図１３Ａ）。さらに、腫瘍をサイズによって、ｍｍ２で複数のサイズ群に分けることができた。化合物（１）で処置した後、特に０．１０ｍｍ２から３．２０ｍｍ２の間では、腫瘍発生頻度が劇的に低減した（図１３Ｂ）。加えて、腫瘍発生頻度およびサイズを全腫瘍負荷として合わせると（全ての腫瘍の合計、ｍｍ２／ｎで）、小腸における腫瘍の形成および増殖の阻害を明らかに認識することができた（対照：３８．１ｍｍ２／対象および化合物（１）：１６．４ｍｍ２／対象）。
【０４３７】
ＡｐｃＭｉｎマウスでのｉｎ  ｖｉｖｏ実験からの結果は、本発明の化合物は、ｉｎ  ｖｉｖｏで異常なＷｎｔシグナル伝達を妨害する能力を有し、腸管癌の発症を低減させ得ることを示す。
【実施例７０】
【０４３８】
化合物（１）のキナーゼおよびホスファターゼプロファイル
実験
ホスファターゼおよびキナーゼの多様なパネルをｉｎ  ｖｉｔｒｏで１０μＭの化合物（１）または０．１％ＤＭＳＯに曝露した。ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（商標）Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ａｓｓａｙ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に従って、実験を行った。
【０４３９】
結果
表１１および１２（下記）は、それぞれホスファターゼおよびキナーゼスクリーンでの２つの独立した測定の平均パーセンテージ活性を示す。０．１％ＤＭＳＯ対照値を１００％に設定した。ヒト（ｈ）および酵母（ｙ）タンパク質の両方をこのアッセイでは使用した。
【０４４０】
【表１２】
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【０４４１】
【表１３】
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【０４４２】
結論
１０μＭの化合物（１）の存在下では、キナーゼまたはホスファターゼ活性の広範な阻害は検出されなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2012528842.tif 000136
【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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