【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年7月31日(2009.7.31)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  核酸に非共有的に結合し得る少なくとも１つのカチオン性親水性領域と、
少なくとも１つの脂肪族脂肪鎖と、１つまたは複数の脂肪族鎖、１つまたは複数のステロイド誘導体、天然もしくは合成の脂質及び／またはこれらの任意の組合せとから成る少なくとも１つの親油性領域、
を含む核酸導入剤であって、
これらの領域が加水分解性官能基を含む酸基またはアミン基を介して互いに連結されており、前記核酸導入剤は少なくとも１つのジスルフィド結合を含んでおり、更に前記核酸導入剤の前記カチオン性親水性領域がポリアミンまたはポリアミノグアニジンであって、前記ジスルフィド結合が、還元によって両親媒性界面活性分子を発生させるように親油性領域に配置されているか、または前記核酸導入剤が対称形であるときは還元によって前記核酸導入剤を二等分するように配置されていることを特徴とする核酸導入剤。
【請求項２】  親油性領域が少なくとも２つの脂肪族脂肪鎖から成ることを特徴とする請求項１に記載の導入剤。
【請求項３】  親油性領域が脂肪族脂肪鎖と１つのステロイド誘導体とから成ることを特徴とする請求項１に記載の導入剤。
【請求項４】  １つまたは複数の脂肪族脂肪鎖が、任意に飽和及び／またはフッ素化した炭素原子数１０−２２の分枝状または直鎖状のアルキル鎖であることを特徴とする請求項１に記載の導入剤。
【請求項５】  ステロイド誘導体がコレステロール、コリン酸及びコレステリルアミンから選択されることを特徴とする請求項１に記載の導入剤。
【請求項６】  加水分解性官能基を含む酸基またはアミン基がアミド基、カーバメート基、エステル基、エーテル基及び／または芳香環から選択されることを特徴とする請求項１に記載の導入剤。
【請求項７】  １つまたは２個のジスルフィド結合を含むことを特徴とする請求項１に記載の導入剤。
【請求項８】  その還元が脂肪族脂肪鎖を破壊するように配置されたジスルフィド結合を含むことを特徴とする請求項１に記載の導入剤。
【請求項９】  その還元が親油性領域に存在するステロイド由来鎖を破壊するように配置されたジスルフィド結合を含むことを特徴とする請求項１に記載の導入剤。
【請求項１０】  ＮＨ２（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＣＯＣｙｓ〔Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）４ＣＨ３〕−Ｎ〔（ＣＨ２）１７ＣＨ３〕２（Ｉ）；
ＮＨ２（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＣＯＣｙｓ〔Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）１７ＣＨ３〕−ＮＨ（ＣＨ２）１７ＣＨ３（ＩＩ）；
ＮＨ２（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＣＯＣｙｓ〔Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）１１ＣＨ３〕−ＮＨ（ＣＨ２）１７ＣＨ３（ＩＩＩ）；
ＮＨ２（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＣＯＣｙｓ〔Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）１１ＣＨ３〕−Ｎ〔（ＣＨ２）１７ＣＨ３〕２（ＩＶ）；
ＮＨ２（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＣＯＣｙｓ〔Ｓ−Ｓ−コレステロール〕−ＮＨ（ＣＨ２）１７ＣＨ３（Ｖ）；
【化１】
2002501762.tif 000001
から選択されることを特徴とする請求項１に記載の導入剤。
【請求項１１】  請求項１から１０のいずれか一項に記載の導入剤と少なくとも１つの核酸とを含むことを特徴とする組成物。
【請求項１２】  核酸がデオキシリボ核酸またはリボ核酸であることを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】  核酸が化学的に修飾されていることを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】  核酸がアンチセンスであることを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】  核酸が治療有効遺伝子を含むことを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】  更に、生理的条件で両イオン性であるかまたはイオン的に無電荷の合成または天然の脂質から選択された１種または複数の中性脂質から成るアジュバントを含むことを特徴とする請求項１１から１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】  １種または複数の中性脂質が、コレステロールであるか、または、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、オレイルパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジ−ステアロイル、−パルミトイル、−コレステリル、−ミリストイル−ホスファチジルエタノールアミン型及び１−３回Ｎ−メチル化されたそれらの誘導体、ホスファチジルグリセロール、グリコシルジアシルグリセロール、セレブロシド、スフィンゴ脂質またはアシアロガングリオシドの２つの脂肪鎖をもつ脂質であることを特徴とする請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】  セレブロシドがガラクトセレブロシド、スフィンゴ脂質がスフィンゴミエリンそしてアシアロガングリオシドがアシアロＧＭ１及びＧＭ２であることを特徴とする請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】  組成物が更にアジュバントを含み、前記アジュバントは、ヒストン、ヌクレオリン及び／またはプロタミンから誘導された化合物であるか、またはモチーフ数２−１０個で変化させ得る連続的もしくは不連続的に反復されるペプチドモチーフ（ＫＴＰＫＫＡＫＫＰ）及び／または（ＡＴＰＡＫＫＡＡ）から構成されている化合物を含有していることを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項２０】  更に、ターゲッティング要素が導入剤に結合されていることを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項２１】  前記ターゲッティング要素が、細胞表面分子に対する抗体、インスリン、トランスフェリン、葉酸もしくは他の任意の成長因子、サイトカインまたはビタミンのような膜受容体のリガンド、修飾または非修飾のレクチン、ＲＧＤモチーフを含むタンパク質、タンデム構造のＲＧＤモチーフを含む環状または非環状のペプチド、ポリリシンペプチド、並びに、天然または合成のリガンドペプチド、から選択されることを特徴とする請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】  更に、ポロキサマー、ポリオキシエチレンアルコール、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテルまたは樹状ベンジルポリエーテルヘッドをもつポリエチレングリコールを含む型の非イオン性界面活性剤を少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項２３】  細胞に核酸を試験管内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で導入するための請求項１から１０のいずれか一項に記載の導入剤の使用。
【請求項２４】  （１）必要な場合にはトランスフェクション剤を１種または複数の公知の別の核酸トランスフェクション剤及び／または１種または複数のアジュバントに予め接触させた後、核酸を請求項１から１０のいずれか一項に記載の導入剤に接触させて核酸／導入剤複合体を形成させる段階と、
（２）前項（１）で形成された複合体を試験管内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で細胞に接触させる段階と、
から成る細胞への核酸導入方法。
【請求項２５】  必要な場合にはトランスフェクション剤を１種または複数の公知の別の核酸トランスフェクション剤及び／または１種または複数のアジュバントに予め接触させた後、核酸を請求項１から１０のいずれか一項に記載の導入剤に接触させて核酸／導入剤複合体を形成させることを特徴とする請求項１１から２２のいずれか一項に記載の組成物の製造方法。
【請求項２６】  請求項１１から２２のいずれか一項に記載の組成物の、タンパク性物質または核性物質の欠損または欠出を原因とする疾病治療のための医薬製造への使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
従って本発明は、核酸に非共有的に結合し得る少なくとも１つのカチオン性親水性領域と少なくとも１つの親油性領域とを含む核酸導入剤であって、これらの領域がいわゆる“スペーサー”アームを介して互いに連結されており、核酸導入剤が更に、還元によって親油性領域が部分分解されるように配置されているかまたは該核酸導入剤が対称形であるときには還元によって該核酸導入剤を二等分するように配置されている少なくとも１つのジスルフィド結合を含む新規な核酸導入剤に関する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
これらの導入剤は、カチオン性親水性部分の作用によって核酸との複合体を有効に形成し得る。この相互作用によって核酸が強力に圧縮される。親油性領域は脂質膜から形成された粒子を被覆することによってこのイオン性相互作用を外部媒体に不感受性にする。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
本文中で使用された“界面活性”なる用語は、生体膜に侵入し生体膜を不安定化する特性をもつ任意の両親媒性分子を意味する。両親媒性界面活性分子はリン脂質二重層に侵入し脂質及びタンパク質を溶解させることによって膜を破壊する能力を有している（Ｌａ  Ｃｅｌｌｕｌｅ，Ｅｄ．Ｖｉｇｏｔ  ｅｔ  Ｄｅｃａｒｉｅ，１９８８，ｐｐ．５８１−５８３）。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
最後に、出願人はまた、導入剤が十分な親油性を有しており且つ導入剤が適正量で使用されるときには導入特性が有意に改善されることを知見した。より詳細には、これらの導入剤の親油性の増加またはステロイド由来鎖の導入によって得られる主要な利点の１つは血清抵抗の改善であることを知見した。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
本発明の導入剤は２つの型の構造を有し得る。双方の構造の違いはその技術的効果に全く影響しない。第一の型の構造は以下のごとく示される：
カチオン性親水性領域−スペーサー−親油性領域
このような構造中では１つまたは複数のジスルフィド結合が、親油性領域に配置されており、還元されたときに両親媒性界面活性分子を生成する。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
【化１】
2002501762.tif 000002
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２５】
本発明の導入剤に存在する親油性領域は少なくとも１つの脂肪族脂肪鎖と、１つまたは複数の別の脂肪族鎖、１つまたは複数のステロイド誘導体、天然もしくは合成の脂質または任意にこれらの組合せとから成り、好ましくはラメラ相または六方相を形成し得る。これらの構造の特徴は、層間または管間の間隔が脂肪族脂肪鎖または脂質の極性部分の長さに依存していることである。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
本文中で使用された“脂肪族脂肪鎖”なる表現は、任意に飽和及び／またはフッ素化した炭素原子数１０−２２の分枝状または直鎖状のアルキル鎖を意味する。炭素原子数１２−２２の鎖が好ましい。より特定的にはＣ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１８、Ｃ１９などの脂肪族基、特に基（ＣＨ２）１１ＣＨ３、（ＣＨ２）１２ＣＨ３、（ＣＨ２）１３ＣＨ３及び（ＣＨ２）１７ＣＨ３が好ましい。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
親油性領域がステロイドの誘導体を含むとき、ステロイドの誘導体は好ましくはコレステロール、コリン酸及びコレステリルアミンから選択される。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
好ましい実施態様においては、親油性領域が少なくとも２つの脂肪族脂肪鎖から成る。より好ましくは、親油性領域が２つまたは３つの脂肪族脂肪鎖から成る。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
本発明の別の有利な変形によれば、親油性部分が１つの脂肪族脂肪鎖と１つのステロイド誘導体とから成る。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
本発明の導入剤が対称形構造を有するとき、分子の対称部分の各々が少なくとも１つの脂肪族脂肪鎖を含む。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
カチオン性親水性領域と親油性領域とはいわゆる“スペーサー”アームを介して互いに連結されている。スペーサーの非限定例は、当業者に公知の加水分解性官能基を含む任意の酸基またはアミン基である。好ましくはスペーサー領域が脂肪族鎖または芳香族鎖を含む。好ましくはスペーサー領域が例えばアミド基、カーバメート基、エステル基、エーテル基または芳香環から選択される。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
第一の実施態様において、ジスルフィド結合は、その還元が親油性領域を部分分解し、その結果として細胞内に両親媒性界面活性分子を生じさせるように配置されている。これらの部分分解は特に、親油性領域が複数の脂肪族鎖を有するときは１つの脂肪族鎖の破壊に対応し、親油性領域が１つのステロイド由来鎖を有するときは該ステロイド由来鎖の破壊に対応する。脂肪族脂肪鎖の破壊という表現は、鎖の完全な消滅を意味するか、または、鎖が部分的に消滅し残余部分が存在するが余りにも短いので脂肪質鎖（少なくとも１０炭素原子の長さ）を構成できないことを意味する。このような分解によって複合体の一体性が破壊され、複合体は徐々に崩壊して解離要素になり、その要素の少なくとも１つが両親媒性界面活性分子である。複合体の分解は顕微鏡観察または電気泳動によって容易に確認できる。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
本発明の好ましい導入剤は、
−カチオン性親水性領域としてポリアミンまたはポリアミノグアニジンを含んでおり、
−親油性領域として少なくとも２つの脂肪族脂肪鎖を含むかまたは少なくとも１つのステロイド由来鎖と１つの脂肪族脂肪鎖とを含んでおり、
−その還元が、１つの脂肪族脂肪鎖を破壊するか、または、導入剤がステロイド由来鎖を含むときは該ステロイド由来鎖を破壊するジスルフィド結合とを含んでいる。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
特に有利な形態の別の導入剤は、１つのポリアミン領域と１つの脂肪族脂肪鎖と１つのステロイド由来鎖と還元性媒体中でステロイド由来鎖を破壊する１つのジスルフィド結合とを含む。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３７】
更に血清タンパク質存在下のトランスフェクション実験では、第三のアルキル鎖の付加によってカチオン性脂質の親油性が向上したときに得られる重要な利点の１つが証明される。この実験で、血清タンパク質の存在に起因する有意な阻害は全く生じない。従ってこれらの化合物はｉｎ  ｖｉｖｏトランスフェクションに使用できる導入剤の有力な候補である。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４４】
図３から図９の表及びヒストグラムに示した結果から以下の結論が得られる：
−カチオン性脂質型の導入剤に挿入された（１つまたは複数の）ジスルフィド結合は、ＤＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏトランスフェクションに使用される導入剤の能力に不利な影響を与えないだけでなく、逆にトランスフェクション効率を向上させる；
−本発明の導入剤は使用された用量で毒性を示さない；
−最後に、本発明の導入剤の親油性の増大は、血清に起因するトランスフェクション阻害の少なくとも一部を解消し得る。