【手続補正書】
【提出日】平成21年11月6日(2009.11.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アデノウイルス以外の標的ウイルスあるいは１又はそれ以上の標的タンパク質を調製する方法であって、
（ａ）前記ウイルス、前記ウイルスをコードする核酸配列を有するベクター、あるいは前記１又はそれ以上の標的タンパク質をコードする核酸配列を有するベクターを宿主細胞に感染させるか又はトランスフェクションすることによって得ることができる発現細胞であって、異種調節タンパク質としてのアデノウイルスＰＩＸ又はその機能的改変体をコードする遺伝子をそのゲノムに安定的に組み込まれて有し、かつ前記調節タンパク質又はその機能的改変体を安定的かつ構成的に発現する発現細胞を培養すること、及び
（ｂ）標的ウイルス又は標的タンパク質を単離すること
を含む、前記方法。
【請求項２】
（ｉ）前記異種調節タンパク質が転写及び／又は細胞増殖を調節し、前記調節タンパク質を含有しないウイルスの産生において、及び前記調節タンパク質又はその機能的改変体とは異なるタンパク質の産生において細胞の産生能を高める；及び／又は
（ｉｉ）前記異種調節タンパク質の前記機能的改変体が融合タンパク質であり、ただし、好ましくは、前記融合タンパク質は、本明細書中で定義されるアデノウイルスＰＩＸ調節タンパク質を含む少なくとも１つの第１のドメインと、アデノウイルスｐＩＸの活性又は細胞内分布を調節又は拡大する少なくとも１つの第２のドメインとを含む；及び／又は
（ｉｉｉ）上記（ｉｉ）における前記少なくとも１つの第２のドメインが、転写調節因子（好ましくは、前記転写調節因子は、レチノイン酸受容体αを含む転写因子である）として作用するタンパク質又はペプチドを含み、マーカータンパク質（好ましくは、前記マーカータンパク質は、ＧＦＰ、ＤｓＲｅｄ及びその改変体を含む蛍光マーカーである）であるか、又はＬａｃＺを含む酵素であるか、又はＮＬＳを含む輸送ペプチドである；及び／又は
（ｉｖ）上記（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）における前記第１及び第２のドメインが直接又はペプチドリンカーを介して互いに共有結合により結合する；及び／又は
（ｖ）前記異種調節タンパク質又はその機能的改変体が、少なくとも１ｐｇ／μｇ細胞タンパク質の量で、好ましくは、少なくとも１０ｐｇ／μｇ細胞タンパク質の量で前記宿主細胞及び前記発現細胞において発現する；及び／又は
（ｖｉ）前記異種調節タンパク質又はその機能的改変体が安定な同種プロモーター又は異種プロモーターの制御下にあり、ただし、好ましくは、前記プロモーターは構成的な細胞プロモーターであり、最も好ましくは、ヒトのトランスロケーション伸長因子２プロモーターである、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記異種調節タンパク質が、
（ｉ）アデノウイルスＰＩＸであり、好ましくは、配列番号２に示される配列を有するタンパク質である；又は
（ｉｉ）ＰＩＸとレチノイン酸受容体αとの融合タンパク質であり、好ましくは、配列番号４に示される配列を有する融合タンパク質である；又は
（ｉｉｉ）ＰＩＸとＧＦＰとの融合タンパク質であって、ＮＬＳ配列を含有する融合タンパク質であり、好ましくは、配列番号２３に示される配列を有する融合タンパク質である；又は
（ｉｖ）ＰＩＸとＧＦＰとの融合タンパク質、又はＰＩＸと単離されたＮＬＳ配列との融合タンパク質である、
請求項２に記載の方法。
【請求項４】
（ｉ）前記宿主細胞及び発現細胞が、哺乳動物細胞及びトリ細胞を含む脊椎動物細胞であり、ただし、前記哺乳動物細胞は、好ましくは、ヒト細胞、マウス、ラット、ハムスターの細胞を含む齧歯類細胞などであり、最も好ましくは、ヒト胎児脳細胞（例えば、胎児ニューロン細胞及び胎児グリア細胞など）を含むヒト脳由来細胞、マウスのＮＳＯ細胞又はＳｐ２／０細胞、ＢＨＫ細胞又はＣＨＯ細胞であり、前記トリ細胞は、好ましくは、アヒル、ニワトリ、ウズラ又はガチョウの細胞であり、最も好ましくはアヒル網膜由来細胞又はアヒル体節由来細胞である；及び／又は
（ｉｉ）前記宿主細胞及び発現細胞が初代細胞又は以前に不死化された細胞に由来する；及び／又は
（ｉｉｉ）前記宿主細胞及び発現細胞が、アデノウイルスのＥ１タンパク質、好ましくは、マストアデノウイルスＣ群５型のＥ１タンパク質を含むさらなる不死化（ウイルス）遺伝子を有し、最も好ましくは、前記細胞は、配列番号５に示されるアデノウイルスのＥ１Ａ遺伝子及び／又はＥ１Ｂ遺伝子を有する；及び／又は
（ｉｖ）前記細胞が、機能的な配列（例えば、選択マーカー配列、スプライスドナー／アクセプター部位、及び／又は、細胞において発現する標的核酸配列の組み込みを可能にするリコンビナーゼ認識配列など）をさらに有する、
請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
（ｉ）前記標的ウイルスが、野生型、変異ウイルス又は欠失ウイルス、低温適合ウイルス又は弱毒化ウイルス、ワクチン株、異種の遺伝子を有するウイルスベクター、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルス、ポックスウイルス（牛痘ウイルス（例えば、改変ワクシニアＡｎｋａｒａなど）、鶏痘ウイルス又はカナリア痘ウイルスを含む）、及びアデノ随伴ウイルス（ａａｖ）など）から選択される；
（ｉｉ）前記１又はそれ以上の標的タンパク質が、抗体、組換えタンパク質（例えば、エリスロポイエチン、α−１−アンチトリプシン、血液凝固因子ＶＩＩＩ、血液凝固因子ＩＸ及びインターフェロンなど）、ウイルス抗原（例えば、インフルエンザＨＡ、インフルエンザＮＡ、ＨＢＶ−Ｓ、ヘルペスＧタンパク質及び狂犬病Ｇタンパク質など）、及びペプチドホルモンから選択される、
請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記宿主細胞及び発現細胞がヒト脳に由来し、好ましくはヒト胎児脳に由来し、最も好ましくはＮＣ５Ｔ１１細胞であり、前記細胞が、アデノウイルスＰＩＸ又はその機能的改変体をコードする核酸配列を異種調節タンパク質として有し、好ましくは、前記異種調節タンパク質が、配列番号１、配列番号３又は配列番号２２に示される核酸によってコードされる、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記宿主細胞がＮＣ５Ｔ１１＃３４細胞であり、前記発現細胞がＮＣ５Ｔ１１＃３４細胞に由来し、ただし、前記ＮＣ５Ｔ１１＃３４細胞はＤＳＭＺにアクセション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４４で寄託される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記宿主細胞及び発現細胞がトリ細胞であり、好ましくはアヒルの網膜又はアヒルの体節に由来し、前記細胞が、アデノウイルスＰＩＸ又はその機能的改変体をコードする核酸配列を異種調節タンパク質として有し、好ましくは、前記異種調節タンパク質が、配列番号１、配列番号３又は配列番号２２に示される核酸によってコードされる、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記宿主細胞がＣＲ．ＰＩＸ（１７ａ１１ｂ）細胞であり、前記発現細胞がＣＲ．ＰＩＸ（１７ａ１１ｂ）細胞に由来し、ただし、前記ＣＲ．ＰＩＸ（１７ａ１１ｂ）細胞はＤＳＭＺにアクセション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４９で寄託される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載の標的ウイルスあるいは１又はそれ以上の標的タンパク質を生産するための発現細胞であって、アデノウイルスＰＩＸ又はその機能的改変体を異種調節タンパク質として安定的かつ構成的に発現する、前記細胞。
【請求項１１】
請求項６から９において定義される細胞である、請求項１０に記載の発現細胞。
【請求項１２】
請求項１から９又は請求項６から９のいずれか一項に記載の宿主細胞株に、ウイルス、前記ウイルスをコードする核酸配列を有するベクター、あるいは前記１又はそれ以上の標的タンパク質をコードする核酸配列を有するベクターをそれぞれ感染又はトランスフェクションすることを含む、請求項１０又は１１に記載の発現細胞を調製する方法。
【請求項１３】
請求項６から９に記載の宿主細胞であって、アデノウイルスＰＩＸ又はその機能的改変体を異種調節タンパク質として安定的かつ構成的に発現する、前記細胞。
【請求項１４】
適切な出発細胞に、前記調節タンパク質又はその機能的改変体を有するベクターをトランスフェクションすることを含む、請求項１３に記載の宿主細胞を調製する方法。
【請求項１５】
標的ウイルスあるいは１又はそれ以上の標的タンパク質を調製するための、請求項１０又は１１に記載の発現細胞の使用。
【請求項１６】
アデノウイルスＰＩＸ調節タンパク質を含む少なくとも１つの第１のドメインと、転写調節因子として、及び／又は請求項２若しくは３に記載の細胞内標的化のためのシグナルとして作用するタンパク質又はペプチドを含む少なくとも１つの第２のドメインとを含む、融合タンパク質。
【請求項１７】
請求項１６に記載の融合タンパク質をコードする、ヌクレオチド配列。
【請求項１８】
請求項１７に記載のヌクレオチド配列を含む、ベクター。