(57)【要約】  この開示は、一般に、ヘッジホッグ経路阻害剤を投与することで、例えば血管密度および／または組織への血管開通性を改善するのに有用な方法に関する。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は剤と一緒に投与され、該剤の組織へのデリバリーを改善する。特定の実施態様において、組織は腫瘍組織を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
剤の組織へのデリバリーを増強させる方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤および該剤を該組織に投与することを含む、方法。
【請求項２】
ヘッジホッグ経路阻害剤および該剤を同時に投与する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ヘッジホッグ経路阻害剤および該剤を連続して投与する、請求項１記載の方法。
【請求項４】
該剤が治療剤または造影剤である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
該造影剤が磁気共鳴画像（ＭＲＩ）造影剤、コンピュータ断層撮影（ＣＡＴ）造影剤またはポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）造影剤である、請求項４記載の方法。
【請求項６】
該治療剤が化学治療剤である、請求項４記載の方法。
【請求項７】
該組織が自発性組織を含む、請求項１記載の方法。
【請求項８】
該組織が間質組織を含む、請求項１記載の方法。
【請求項９】
該組織が虚血組織を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
該組織が腫瘍組織を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
該腫瘍組織がヘッジホッグ経路活性化を示す、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
該ヘッジホッグ経路活性化がパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
哺乳動物における腫瘍を処置する方法であって、治療上有効量のヘッジホッグ経路阻害剤および治療上有効量の化学治療剤を該哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項１４】
該ヘッジホッグ経路阻害剤および該化学治療剤が同時に投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
該ヘッジホッグ経路阻害剤および該化学治療剤が連続して投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
該腫瘍が自発性腫瘍である、請求項１３記載の方法。
【請求項１７】
該自発性腫瘍が膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、乳房の腫瘍、繊維形成性小円形細胞腫瘍、結腸腫瘍、卵巣腫瘍、膀胱腫瘍または骨悪性腫瘍である、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
該化学治療剤の投与を開始する前に、該ヘッジホッグ経路阻害剤を投与することを含む、請求項１３記載の方法。
【請求項１９】
ヘッジホッグ経路阻害剤を約３日ないし約２１日間投与することを含む、請求項１３記載の方法。
【請求項２０】
該化学治療剤の投与を開始する前に、該ヘッジホッグ経路阻害剤を約３日ないし約２１日間投与することを含む、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
該化学治療剤の投与を開始する前に、該ヘッジホッグ経路阻害剤を約３日ないし約１４日間投与することを含む、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
該腫瘍がヘッジホッグ経路活性化を示す、請求項１３記載の方法。
【請求項２３】
該ヘッジホッグ経路活性化がパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
該化学治療剤が、ゲムシタビン、カペシタビン、５−フルオロウラシル、フロキシウリジン、ドキシフルリジン、ラルチトレキセド、メトトレキサート、トリメトレキサート、タプシガルジン、タキソール、パクリタクセル、ドセタキセル、アクチノマイシンＤ、ダクチノマイシン、メルカプトプリン、チオグアニン、ロバスタチン、シトシンアラビノシド、フルダラビン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シタラビン、テニポシド、トポテカン、９−アミノカンプトテシン、カンプトイリノテカン、クリスナトール、ブスルファン、マイトマイシンＣ、トレオスルファン、スタウロスポリン、１−メチル−４−フェニルピリジニウム、メルカプトプリン、チオグアニン、シクロホスファミド、イホスファミド、ＥＢ１０８９、ＣＢ１０９３、ＫＨ１０６０、カルムスチン、ロムスチン、ミコフェノール酸、チアゾフリン、リバビリン、ＥＩＣＡＲ、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ベバシズマブ、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルバジン、エトポシド、プレドニゾロン、トロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、エストラムスチン、デキサメタゾン、シタラビン、カムパテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン、ベラパミル、ミトキサントロン、テモゾロミド、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ペプロマイシン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、イマチニブ、サリドマイド、ロイコボリン、デフェロキサミン、レナリドミド、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ソラフェニブ、エルビタックスおよびスチニブからなる群より選択される、請求項６または１３−２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
組織の血管密度を増やす方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤を該組織に投与することからなる、方法。
【請求項２６】
該投与がインビボにて起こる、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
該組織が虚血組織を含む、請求項２５記載の方法。
【請求項２８】
該組織が心臓組織または脳組織を含む、請求項２５記載の方法。
【請求項２９】
該組織が間質組織を含む、請求項２５記載の方法。
【請求項３０】
該組織が腫瘍組織を含む、請求項２５記載の方法。
【請求項３１】
該腫瘍組織がヘッジホッグ経路活性化を示す、請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
該ヘッジホッグ経路活性化がパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
組織を画像化する方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤および造影剤を該組織に投与する工程、画像化技術を用いて該組織を画像化する工程を含む、方法。
【請求項３４】
該造影剤の投与を開始する前に、該ヘッジホッグ経路阻害剤を投与することを含む、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
該組織が心臓または脳組織である、請求項３３記載の方法。
【請求項３６】
該組織が腫瘍組織を含む、請求項３３記載の方法。
【請求項３７】
該腫瘍組織がヘッジホッグ経路活性化を示す、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
ヘッジホッグ経路活性化がパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
該投与がインビボにて起こる、請求項３３記載の方法。
【請求項４０】
該画像化技術が超音波、Ｘ−線、ＭＲＩ、ＣＡＴまたはＰＥＴである、請求項３３記載の方法。
【請求項４１】
該造影剤がＭＲＩ造影剤、ＣＡＴ造影剤またはＰＥＴ造影剤である、請求項３３記載の方法。
【請求項４２】
組織中の間質コンテンツを減少させる方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤を該組織に投与することを含む、方法。
【請求項４３】
該組織が虚血組織を含む、請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
該組織が自発性組織を含む、請求項４２記載の方法。
【請求項４５】
該組織が腫瘍組織を含む、請求項４２記載の方法。
【請求項４６】
該腫瘍組織がヘッジホッグ経路活性化を示す、請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
該ヘッジホッグ経路活性化がパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型によって特徴付けられる、請求項４６記載の方法。
【請求項４８】
組織中の血管開通性を増加させる方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤を該組織に投与することを含む、方法。
【請求項４９】
該投与がインビボにて起こる、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
該組織が虚血組織を含む、請求項４８記載の方法。
【請求項５１】
該組織が心臓組織または脳組織を含む、請求項４８記載の方法。
【請求項５２】
該組織が腫瘍組織を含む、請求項４８記載の方法。
【請求項５３】
該腫瘍組織がヘッジホッグ経路活性化を示す、請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
ヘッジホッグ経路活性化がパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる、請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
組織における血管形成を促進する方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤を該組織に投与することを含む、方法。
【請求項５６】
該投与がインビボにて起こる、請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
該組織が虚血組織を含む、請求項５５記載の方法。
【請求項５８】
該組織が心臓組織または脳組織を含む、請求項５５記載の方法。
【請求項５９】
該組織が腫瘍組織を含む、請求項５５記載の方法。
【請求項６０】
該腫瘍組織がヘッジホッグ経路活性化を示す、請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
該ヘッジホッグ経路活性化がパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる、請求項６０記載の方法。
【請求項６２】
組織を画像化する方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤を該組織に投与し、画像化技法を用いて該組織を画像化する工程を含む、方法。
【請求項６３】
該組織が腫瘍組織を含む、請求項６２記載の方法。
【請求項６４】
該腫瘍組織がヘッジホッグ経路活性化を示す、請求項６３記載の方法。
【請求項６５】
該ヘッジホッグ経路活性化がパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる、請求項６４記載の方法。
【請求項６６】
該投与が哺乳動物にて起こる、請求項６２記載の方法。
【請求項６７】
該画像化技術が超音波またはＸ−線である、請求項６２記載の方法。
【請求項６８】
該組織が心臓または脳組織である、請求項６２記載の方法。
【請求項６９】
腫瘍転移を処置または防止する方法であって、その必要とする哺乳動物に、ヘッジホッグ経路阻害剤および化学治療剤を投与することを含む、方法。
【請求項７０】
該ヘッジホッグ経路阻害剤および該化学治療剤が同時に投与される、請求項６９記載の方法。
【請求項７１】
該ヘッジホッグ経路阻害剤および該化学治療剤が連続して投与される、請求項６９記載の方法。
【請求項７２】
該腫瘍が膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、乳房の腫瘍、繊維形成性小円形細胞腫瘍、結腸腫瘍、卵巣腫瘍、膀胱腫瘍または骨悪性腫瘍である、請求項６９記載の方法。
【請求項７３】
該化学治療剤がゲムシタビン、カペシタビン、５−フルオロウラシル、フロキシウリジン、ドキシフルリジン、ラルチトレキセド、メトトレキサート、トリメトレキサート、タプシガルジン、タキソール、パクリタクセル、ドセタキセル、アクチノマイシンＤ、ダクチノマイシン、メルカプトプリン、チオグアニン、ロバスタチン、シトシンアラビノシド、フルダラビン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シタラビン、テニポシド、トポテカン、９−アミノカンプトテシン、カンプトイリノテカン、クリスナトール、ブスルファン、マイトマイシンＣ、トレオスルファン、スタウロスポリン、１−メチル−４−フェニルピリジニウム、メルカプトプリン、チオグアニン、シクロホスファミド、イホスファミド、ＥＢ１０８９、ＣＢ１０９３、ＫＨ１０６０、カルムスチン、ロムスチン、ミコフェノール酸、チアゾフリン、リバビリン、ＥＩＣＡＲ、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ベバシズマブ、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルバジン、エトポシド、プレドニゾロン、トロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、エストラムスチン、デキサメタゾン、シタラビン、カムパテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン、ベラパミル、ミトキサントロン、テモゾロミド、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ペプロマイシン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、イマチニブ、サリドマイド、ロイコボリン、デフェロキサミン、レナリドミド、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ソラフェニブ、エルビタックスおよびスチニブからなる群より選択される、請求項６９記載の方法。
【請求項７４】
該ヘッジホッグ経路阻害剤が式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩ：
【化１】
2012515792.tif 000036
Ｉ
【化２】
2012515792.tif 000037
ＩＩ
【化３】
2012515792.tif 000038
ＩＩＩ
［式中：
Ａが
【化４】
2012515792.tif 000039
であり；
ｎが０または１であり；
Ｘが結合手または−ＣＨ２−であり；
Ｒ１が−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）２、−Ｎ（Ｒ１０）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）２または糖より選択され；
Ｒ２が−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリルまたは置換されていてもよいヘテロシクロアルキルより選択されるか；あるいはＲ１とＲ２が一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ（ＯＲ）、＝Ｎ（Ｒ）−、＝Ｎ（ＮＲ２）、＝Ｃ（Ｒ）２を形成し；
Ｒ３およびＲ５が、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアルケニルまたは置換されていてもよいアルキニルより選択されるか；またはＲ３およびＲ５が一緒になって結合手を形成し；
Ｒ６およびＲ７が、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアルケニルまたは置換されていてもよいアルキニルより選択されるか；またはＲ６およびＲ７が一緒になって結合手を形成し；
Ｒ８およびＲ９が一緒になって結合手を形成し；
Ｒ４が−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキル、置換されていてもよいハロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＳＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）Ｏ］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−ＯＣ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−ＳＯ２］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ１０）ＳＯ２］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｏ］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ）］ｑＲ１０または−［（Ｗ）−Ｓ］ｑＲ１０より選択され；
各ｑが、独立して、各場合で、１、２、３、４、５または６であり；
各Ｒ１０が、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキルまたは−［Ｃ（Ｒ）２］ｐ−Ｒ１１（ここで、ｐは０−６である）から選択されるか；または同じ置換基にある２個のＲ１０が一緒になって、窒素、酸素、硫黄およびリンより選択される０−３個のヘテロ原子を含有する、４−８員の置換されていてもよい環を形成することができ；
各Ｒ１１が、独立して、ヒドロキシル、−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２（Ｒ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−ＣＯＯＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）（Ｒ）、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）、−ＮＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）または−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）から選択され；
各Ｒが、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいシクロアルキルまたは置換されていてもよいアラルキルから選択され；
Ｒ１２およびＲ１３が、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０または−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０から選択されるか；またはＲ１２およびＲ１３が一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ（ＯＲ）、＝Ｎ（Ｒ）−、＝Ｎ（ＮＲ２）、＝Ｃ（Ｒ）２を形成し；
各Ｗが、各場合で独立して、置換されていてもよいアルキルジラジカル、置換されていてもよいアルケニルジラジカル、置換されていてもよいアルキニルジラジカル、置換されていてもよいアリールジラジカル、置換されていてもよいシクロアルキルジラジカル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルジラジカル、置換されていてもよいアラルキルジラジカル、置換されていてもよいヘテロアリールジラジカルまたは置換されていてもよいヘテロアラルキルジラジカルより選択され；および
Ｔ１−Ｔ２−Ｔ３が、Ｙ−Ｂ−Ａ１、Ｂ−Ｙ−Ａ１またはＡ１−Ｂ−Ｙより選択され；ここでＡ１およびＢが、各々独立して、窒素、硫黄および−Ｃ（Ｒ１４）２−より選択され、Ｙが−Ｏ−、−Ｓ−または−Ｎ（Ｒ１５）−より選択され；
Ｒ１４が、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、ハロ、ニトロ、ニトリル、−ＳＲ１０、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｎ（Ｒ１０）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０または−［Ｃ（Ｒ１０）２］ｑ−Ｒ１１より選択されるか；または２つのＲ１４基が一緒になって＝Ｏを形成し；および
Ｒ１５が−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）または−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１１より選択される］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩からなる群より選択される、請求項１ないし７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
Ａが：
【化５】
2012515792.tif 000040
であり；
ｎが０または１であり；
Ｘが結合手または−ＣＨ２−であり；
Ｒ１が−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０または糖より選択され；
Ｒ２が−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリルまたは置換されていてもよいヘテロシクロアルキルより選択されるか；またはＲ１およびＲ２が一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ（ＯＲ）、＝Ｎ（Ｒ）−、＝Ｎ（ＮＲ２）、＝Ｃ（Ｒ）２を形成し；
Ｒ３およびＲ５が、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアルケニルまたは置換されていてもよいアルキニルより選択されるか；またはＲ３およびＲ５が一緒になって結合手を形成し；
Ｒ６およびＲ７が、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアルケニルまたは置換されていてもよいアルキニルより選択されるか；またはＲ６およびＲ７が一緒になって結合手を形成し；
Ｒ８およびＲ９が一緒になって結合手を形成し；
Ｒ４が−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキル、置換されていてもよいハロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＳＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）Ｏ］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−ＯＣ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−ＳＯ２］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ１０）ＳＯ２］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｏ］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ）］ｑＲ１０または−［（Ｗ）−Ｓ］ｑＲ１０から選択され；
各ｑが、各場合で独立して、１、２、３、４、５または６であり；
各Ｒ１０が、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキルまたは−［Ｃ（Ｒ）２］ｐ−Ｒ１１（ここで、ｐは０−６である）から選択されるか；または同じ置換基にある２個のＲ１０が一緒になって、窒素、酸素、硫黄およびリンより選択される０−３個のヘテロ原子を含有する、４−８員の置換されていてもよい環を形成することができ；
各Ｒ１１が、独立して、ヒドロキシル、−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２（Ｒ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−ＣＯＯＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）（Ｒ）、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）、−ＮＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）または−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）から選択され；
各Ｒが、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいシクロアルキルまたは置換されていてもよいアラルキルより選択され；
Ｒ１２およびＲ１３が、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０または−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０から選択されるか；またはＲ１２およびＲ１３が一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ（ＯＲ）、＝Ｎ（Ｒ）−、＝Ｎ（ＮＲ２）、＝Ｃ（Ｒ）２を形成し；
各Ｗが、各場合で独立して、置換されていてもよいアルキルジラジカル、置換されていてもよいアルケニルジラジカル、置換されていてもよいアルキニルジラジカル、置換されていてもよいアリールジラジカル、置換されていてもよいシクロアルキルジラジカル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルジラジカル、置換されていてもよいアラルキルジラジカル、置換されていてもよいヘテロアリールジラジカルまたは置換されていてもよいヘテロアラルキルジラジカルより選択され；および
Ｔ１−Ｔ２−Ｔ３がＹ−Ｂ−Ａ１、Ｂ−Ｙ−Ａ１またはＡ１−Ｂ−Ｙより選択され；ここでＡ１およびＢが、各々独立して、窒素、硫黄または−Ｃ（Ｒ１４）２−より選択され、Ｙが−Ｏ−、−Ｓ−または−Ｎ（Ｒ１５）−より選択され；
ここでＲ１４が、独立して、−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、ハロ、ニトロ、ニトリル、−ＳＲ１０、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｎ（Ｒ１０）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０または−［Ｃ（Ｒ１０）２］ｑ−Ｒ１１より選択され；Ｒ１５が−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）または−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１１より選択され；または２つのＲ１４基が一緒になって＝Ｏを形成し；
Ｒ１５が−Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）または−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１１より選択される、
請求項７４記載の方法。
【請求項７６】
化合物が式Ｉ−３２
【化６】
2012515792.tif 000041
Ｉ−３２
で示される化合物またはその医薬上許容される塩である、請求項７４記載の方法。
【請求項７７】
化合物が
【化７】
2012515792.tif 000042
である、請求項７６記載の方法。
【請求項７８】
該ヘッジホッグ経路阻害剤がＮＫ−４１０１、ＧＤＣ−０４４９、ＢＭＳ−８３３９２３、ＬＤＥ−２２５、ＰＦ−０４４４９９１３、ロボトニキニンまたはＣｕｒ−６１４１４より選択される、請求項１ないし７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
該ヘッジホッグ経路阻害剤がＮＫ−４１０１である、請求項１ないし７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
剤の組織へのデリバリーを向上させる方法であって、式Ｉ−３２
【化８】
2012515792.tif 000043
Ｉ−３２
で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項８１】
組織が腫瘍組織を含む、請求項８０記載の方法。
【請求項８２】
腫瘍組織が膵臓腫瘍組織である、請求項８１記載の方法。
【請求項８３】
式Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩および剤が同時に投与される、請求項８０記載の方法。
【請求項８４】
式Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩および剤が連続して投与される、請求項８０記載の方法。
【請求項８５】
剤が化学治療剤である、請求項８０記載の方法。
【請求項８６】
化学治療剤はゲムシタビンである、請求項８０記載の方法。
【請求項８７】
哺乳動物における腫瘍を処置する方法であって、該哺乳動物に、治療上有効量の式Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩および治療上有効量の化学治療剤を投与することを含む、方法。
【請求項８８】
Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩および化学治療剤が同時に投与される、請求項８７記載の方法。
【請求項８９】
Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩および化学治療剤が連続して投与される、請求項８７記載の方法。
【請求項９０】
腫瘍が自発性腫瘍である、請求項８７記載の方法。
【請求項９１】
自発性腫瘍が膵臓腫瘍である、請求項９０記載の方法。
【請求項９２】
化学治療剤がゲムシタビンである、請求項８７記載の方法。
【請求項９３】
組織中の血管密度を増大させる方法であって、式Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩を該組織に投与することを含む、方法。
【請求項９４】
組織が腫瘍組織を含む、請求項９３記載の方法。
【請求項９５】
腫瘍組織が膵臓腫瘍組織である、請求項９４記載の方法。
【請求項９６】
組織を画像化する方法であって、式Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩および造影剤を該組織に投与し、画像化技術を用いて該組織を画像化することを含む、方法。
【請求項９７】
Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩および造影剤を同時に投与することを含む、請求項９６記載の方法。
【請求項９８】
Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩および造影剤を連続して投与することを含む、請求項９６記載の方法。
【請求項９９】
組織が腫瘍組織を含む、請求項９６記載の方法。
【請求項１００】
腫瘍組織が膵臓腫瘍組織である、請求項９９記載の方法。
【請求項１０１】
組織中の間質コンテンツを減少させる方法であって、式Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩を該組織に投与することを含む、方法。
【請求項１０２】
組織が自発性組織を含む、請求項１０１記載の方法。
【請求項１０３】
自発性組織が膵臓腫瘍組織である、請求項１０２記載の方法。
【請求項１０４】
組織における血管形成を促進する方法であって、式Ｉ−３２の化合物またはその医薬上許容される塩を該組織に投与することを含む、方法。
【請求項１０５】
組織が腫瘍組織を含む、請求項１０４記載の方法。
【請求項１０６】
腫瘍組織が膵臓腫瘍組織である、請求項１０５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、一般に、剤、例えば治療剤または造影剤の組織へのデリバリーを改善する方法、より具体的には癌および非癌組織を治療する方法、組織を造影する方法、血管密度および開通性を増加させる方法、および組織、例えば透過性に乏しい組織へのドラッグデリバリーを改善する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
組織血管形成の乏しさは、血流ならびに内因性および外因性の両方の剤、例えば小分子および高分子化合物の特定の組織へのデリバリーの妨げとなり得る。プロ血管形成療法は一定の成功を持って組織血管形成を改善することが研究されてきた。血管形成に乏しい組織における血流およびドラッグデリバリーは、特定の例において、血管開通性および／または血管密度を増加させることで改善され得る。かかる活性を有する剤を用い、例えば、剤（例えば、診断剤または治療剤）の腫瘍へのデリバリーを改善することにより癌を診断および／または治療することができる。かかる活性を有する剤を用い、例えば、血液の虚血組織へのデリバリーを改善すること、および／または浸透性に乏しい組織への薬物デリバリーを改善することにより血管閉塞性疾患を治療することができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
したがって、組織血管形成の強化および／または治療剤および造影剤のデリバリーの改善に有用な組成物および方法に対する要求がある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本願発明において、血管密度、血管開通性、ドラッグデリバリーおよび／または組織への放射浸透性を改善するのに有用な方法が提供される。本願明細書に記載の方法は、ヘッジホッグ経路阻害剤を組織、例えば、虚血組織、腫瘍組織、非腫瘍組織、および／または浸透性に乏しい組織に投与することを含む。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤を組織に投与することは、組織における血管開通性および／または血管密度を増大させ、それにより組織への血流を増やし、および／または内因性および／または外因性剤の組織への透過性を改善する。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤に剤、例えば、治療剤および／または造影剤を投与し、該剤の組織へのデリバリーを改善する。
【０００５】
一の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および剤を組織に投与することを含む、剤の組織へのデリバリーを増加させる方法が提供される。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および剤が同時に投与される。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および剤が連続して投与される。
【０００６】
特定の実施態様において、剤は治療剤または造影剤である。特定の実施態様において、造営剤は磁気共鳴画像（ＭＲＩ）造影剤、コンピュータ断層撮影（ＣＡＴ）造影剤またはポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）造影剤である。特定の実施態様において、治療剤は化学治療剤である。
【０００７】
特定の実施態様において、組織は自発性組織（autochthonous tissue）、間質組織、虚血組織または腫瘍組織を含む。特定の実施態様において、腫瘍組織はヘッジホッグ経路活性化を示す。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路活性化は、パッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる。
【０００８】
もう一つ別の実施態様は、哺乳動物における腫瘍を治療する方法であって、該哺乳動物に治療上有効量のヘッジホッグ経路阻害剤および治療上活性量の化学治療剤を投与する方法に関する。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および化学療法は同時にまたは連続的に投与される。特定の実施態様において、腫瘍は自発性腫瘍である。特定の実施態様において、自発性腫瘍は、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、乳房の腫瘍、繊維形成性小円形細胞腫瘍、結腸腫瘍、卵巣腫瘍、膀胱腫瘍または骨悪性腫瘍である。
【０００９】
特定の実施態様において、該投与は化学治療剤の投与を始める前にヘッジホッグ経路阻害剤を投与することを含む。特定の実施態様において、該投与はヘッジホッグ経路阻害剤を約３日ないし約２１日間投与することを含む。特定の実施態様において、該投与は化学治療剤の投与を始める約３日ないし約２１日前にヘッジホッグ経路阻害剤を投与することを含む。特定の実施態様において、該投与は化学治療剤の投与を始める約３日ないし約１４日前にヘッジホッグ経路阻害剤を投与することを含む。特定の実施態様において、腫瘍はヘッジホッグ経路活性化を示す。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路活性化は、パッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる。
【００１０】
特定の実施態様は、化学治療剤が、ゲムシタビン、カペシタビン、５−フルオロウラシル、フロキシウリジン、ドキシフルリジン、ラルチトレキセド、メトトレキサート、トリメトレキサート、タプシガルジン、タキソール、パクリタクセル、ドセタキセル、アクチノマイシンＤ、ダクチノマイシン、メルカプトプリン、チオグアニン、ロバスタチン、シトシンアラビノシド、フルダラビン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シタラビン、テニポシド、トポテカン、９−アミノカンプトテシン、カンプトイリノテカン、クリスナトール、ブスルファン、マイトマイシンＣ、トレオスルファン、スタウロスポリン、１−メチル−４−フェニルピリジニウム、メルカプトプリン、チオグアニン、シクロホスファミド、イホスファミド、ＥＢ１０８９、ＣＢ１０９３、ＫＨ１０６０、カルムスチン、ロムスチン、ミコフェノール酸、チアゾフリン、リバビリン、ＥＩＣＡＲ、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ベバシズマブ、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルバジン、エトポシド、プレドニゾロン、トロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、エストラムスチン、デキサメタゾン、シタラビン、カムパテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン、ベラパミル、ミトキサントロン、テモゾロミド、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ペプロマイシン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、イマチニブ、サリドマイド、ロイコボリン（leucovirin）、デフェロキサミン、レナリドミド、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ソラフェニブ、エルビタックスおよびスチニブ（sutinib）からなる群より選択される、上記した方法のいずれか一つに関連する。
【００１１】
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤を組織に投与することを含む、組織中の血管密度を増加させる方法が提供される。特定の実施態様において、投与はインビボにて起こる。
【００１２】
特定の実施態様において、組織は虚血組織、心臓組織、脳組織を含み、間質組織を含むか、または腫瘍組織を含む。特定の実施態様において、腫瘍組織はヘッジホッグ経路活性化を示す。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路活性化は、パッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる。
【００１３】
もう一つ別の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および造影剤を組織に投与する工程、および画像化技術を用いて組織を造影する工程を含む、組織の増益方法が提供される。特定の実施態様において、該投与は、造影剤の投与を開始する前にヘッジホッグ経路阻害剤を投与することを含む。特定の実施態様において、組織は心臓、脳組織または腫瘍組織である。特定の実施態様において、腫瘍組織はヘッジホッグ経路活性化を示す。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路活性化は、パッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる。特定の実施態様において、投与はインビボにて起こる。
【００１４】
特定の実施態様において、画像化技術は超音波、Ｘ−線、ＭＲＩ、ＣＡＴまたはＰＥＴである。特定の実施態様において、造影剤は、ＭＲＩ造影剤、ＣＡＴ造影剤、またはＰＥＴ造影剤である。
【００１５】
もう一つ別の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤を組織に投与することを含む、組織中の間質コンテンツを減少させる方法が提供される。特定の実施態様において、組織は虚血組織、自発性組織または腫瘍組織を含む。特定の実施態様において、腫瘍組織はヘッジホッグ経路活性化を示す。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路活性化はパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる。
【００１６】
もう一つ別の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤を組織に投与することを含む、組織における血管能の増加方法が提供される。特定の実施態様において、該投与はインビボにて起こる。特定の実施態様において、組織は虚血組織、心臓組織、脳組織、腫瘍組織を含む。特定の実施態様において、腫瘍組織はヘッジホッグ経路活性化を示す。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路活性化はパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる。
【００１７】
もう一つ別の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤を組織に投与することを含む、組織での血管形成を促進する方法が提供される。特定の実施態様において、該投与はインビボにて起こる。特定の実施態様において、組織は虚血組織、心臓組織、脳組織または腫瘍組織を含む。特定の実施態様において、腫瘍組織はヘッジホッグ経路活性化を示す。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路活性化はパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる。
【００１８】
もう一つ別の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤を組織に投与し、画像化技術を用いて該組織を造影する工程を含む、組織の造影方法が提供される。特定の実施態様において、組織は腫瘍組織を含む。特定の実施態様において、腫瘍組織はヘッジホッグ経路活性化を示す。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路活性化はパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる。特定の実施態様において、投与は哺乳動物で起こる。特定の実施態様において、画像化技術は超音波またはＸ−線技法である。特定の実施態様において、組織は心臓または脳組織である。
【００１９】
もう一つ別の実施態様において、その必要とする哺乳動物にヘッジホッグ経路阻害剤および化学治療剤を投与することを含む腫瘍転移の治療または防止方法が提供される。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および化学治療剤は同時にまたは連続して投与される。
【００２０】
特定の実施態様において、腫瘍は膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、乳房の腫瘍、繊維形成性小円形細胞腫瘍、結腸腫瘍、卵巣腫瘍、膀胱腫瘍または骨悪性腫瘍である。
【００２１】
特定の実施態様において、化学治療剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、５−フルオロウラシル、フロキシウリジン、ドキシフルリジン、ラルチトレキセド、メトトレキサート、トリメトレキサート、タプシガルジン、タキソール、パクリタクセル、ドセタキセル、アクチノマイシンＤ、ダクチノマイシン、メルカプトプリン、チオグアニン、ロバスタチン、シトシンアラビノシド、フルダラビン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シタラビン、テニポシド、トポテカン、９−アミノカンプトテシン、カンプトイリノテカン、クリスナトール、ブスルファン、マイトマイシンＣ、トレオスルファン、スタウロスポリン、１−メチル−４−フェニルピリジニウム、メルカプトプリン、チオグアニン、シクロホスファミド、イホスファミド、ＥＢ１０８９、ＣＢ１０９３、ＫＨ１０６０、カルムスチン、ロムスチン、ミコフェノール酸、チアゾフリン、リバビリン、ＥＩＣＡＲ、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ベバシズマブ、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルバジン、エトポシド、プレドニゾロン、トロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、エストラムスチン、デキサメタゾン、シタラビン、カムパテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン、ベラパミル、ミトキサントロン、テモゾロミド、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ペプロマイシン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、イマチニブ、サリドマイド、ロイコボリン、デフェロキサミン、レナリドミド、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ソラフェニブ、エルビタックスおよびスチニブからなる群より選択される。
【００２２】
いくつかの実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は当該分野にて知られているいずれかのヘッジホッグ経路阻害剤である。
【００２３】
特定の実施態様は、ヘッジホッグ経路阻害剤がＭＫ−４１０１から選択されるか、あるいは式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩ：
【化１】
2012515792.tif 000002
Ｉ
【化２】
2012515792.tif 000003
ＩＩ
【化３】
2012515792.tif 000004
ＩＩＩ
［式中、
Ａは：
【化４】
2012515792.tif 000005
であり；
ｎは０または１であり；
Ｘは結合または−ＣＨ２−であり；
Ｒ１は、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０および糖から選択され；
Ｒ２は、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリルおよび所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキルから選択されるか；またはＲ１およびＲ２は一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ（ＯＲ）、＝Ｎ（Ｒ）−、＝Ｎ（ＮＲ２）、＝Ｃ（Ｒ）２を形成し；
Ｒ３およびＲ５は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアルケニルおよび所望により置換されていてもよいアルキニルより選択されるか；またはＲ３およびＲ５は一緒になって結合手を形成し；
Ｒ６およびＲ７は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアルケニルおよび所望により置換されていてもよいアルキニルから選択されるか；またはＲ６およびＲ７は一緒になって結合手を形成し；
Ｒ８およびＲ９は一緒になって結合手を形成し；
Ｒ４は、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキル、所望により置換されていてもよいハロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＳＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）Ｏ］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−ＯＣ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−ＳＯ２］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ１０）ＳＯ２］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｏ］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ）］ｑＲ１０および−［（Ｗ）−Ｓ］ｑＲ１０から選択され；
各ｑは、独立して、各場合で、１、２、３、４、５または６であり；
各Ｒ１０は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキルおよび−［Ｃ（Ｒ）２］ｐ−Ｒ１１（ここで、ｐは０−６である）から選択されるか；または同じ置換基にある２個のＲ１０が一緒になって、窒素、酸素、硫黄およびリンより選択される０−３個のヘテロ原子を含有する、４−８員の所望により置換されていてもよい環を形成することができ；
各Ｒ１１は、独立して、ヒドロキシル、−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２（Ｒ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−ＣＯＯＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）（Ｒ）、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）、−ＮＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）および−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）から選択され；
各Ｒは、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいシクロアルキルおよび所望により置換されていてもよいアラルキルから選択され；
Ｒ１２およびＲ１３は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０から選択されるか；またはＲ１２およびＲ１３は一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ（ＯＲ）、＝Ｎ（Ｒ）−、＝Ｎ（ＮＲ２）、＝Ｃ（Ｒ）２を形成し；
各Ｗは、各場合で独立して、所望により置換されていてもよいアルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいアルケニルジラジカル、所望により置換されていてもよいアルキニルジラジカル、所望により置換されていてもよいアリールジラジカル、所望により置換されていてもよいシクロアルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいアラルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいヘテロアリールジラジカルおよび所望により置換されていてもよいヘテロアラルキル ジラジカルより選択され；および
Ｔ１−Ｔ２−Ｔ３は、Ｙ−Ｂ−Ａ１、Ｂ−Ｙ−Ａ１およびＡ１−Ｂ−Ｙより選択され；ここでＡ１およびＢは、各々独立して、窒素、硫黄および−Ｃ（Ｒ１４）２−より選択され、Ｙは−Ｏ−、−Ｓ−および−Ｎ（Ｒ１５）−より選択され；
ここで、Ｒ１４は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、ハロ、ニトロ、ニトリル、＝Ｏ、−ＳＲ１０、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｎ（Ｒ１０）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０および−［Ｃ（Ｒ１０）２］ｑ−Ｒ１１より選択され；および
ここで、Ｒ１５は、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）および−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１１から選択される］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩からなる群より選択される、上記のいずれかの方法に関する。
【００２４】
本願明細書に記載の１または複数の実施態様の詳細は、添付図面および以下の記載に示される。詳細の他の特徴、目的および利点は、該記載および図面ならび特許請求の範囲から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
本願明細書には出願当初に少なくとも１枚のカラー図面が含まれている（米国仮出願第６１／２０５８３７号には図面が着色して提出されており、その内容を出典明示により本願明細書の一部とする）。庁に請求し、必要な料金を支払うことで、そのカラー図面の特許出願のコピーが提供されるでしょう。図１Ａ−１Ｄ、２Ｃ−２Ｈ、３Ｂ−３Ｄ、３Ｆ、３Ｉ、３Ｈ、４Ｃ−４Ｅ、４Ｇ、４Ｈおよび４Ｉは、その内容を出典明示により本願明細書の一部とする、Oliveら、“Inhibition of Hedgehog Signaling Enhances Delivery of Chemotherapy in a Mouse Model of Pancreatic Cancer”、Sciencexpress、２００９年５月２１日（www.sciencexpress.org / 21 May 2009 / Page 1 / 10.1126/science.1171362）でも見ることができる。
【００２６】
図１Ａ−１Ｆ  移植膵臓腫瘍を担持するマウスまたはインサイチュにて腫瘍を有するＫＰＣマウスを対照のセイラインまたはゲムシタビンでＱ３Ｄｘ４スケジュールの処理に付した。アステリスクはＰ＜０．０５、Mann-Whitney U検定を示す。図１Ａ：四角プロットは数種の移植実験からのセイライン（青色）処置またはゲムシタビン−（赤色、矢印）処置の腫瘍の１２日にわたる体積の％変化を示す。図１Ｂ：ホスホ−ヒストンＨ３についての免疫組織化学を数値化し、それはゲムシタビン処置した移植腫瘍にて顕著に低い増殖速度を示した。図１Ｃ：活性化されたカスパーゼ３についての免疫組織化学を数値化し、それはゲムシタビン処置した移植腫瘍にてアポトーシスの顕著な変化を示さなかった。正対照：小腸。図１Ｄ：０、５０または１００ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンで１２日間処置したＫＰＣ腫瘍の体積％変化。２つの応答腫瘍を黄色で強調する（矢印で示される円）。実線：体積変化の平均；点線：応答腫瘍なしの平均。図１Ｅ：１００ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンで処理されたＫＰＣ腫瘍において増殖（上記のように測定）が有意に低下した（Ｐ＝０.００３、Mann-Whitney U検定）。実線＝平均；点線：応答腫瘍なしの平均。図１Ｆ：アポトーシスが２つの応答ＫＰＣ腫瘍にて有意に上昇したが（矢印で示される、黄色の円）、ゲムシタビンで処理したＫＰＣ腫瘍のほとんどでは変化しなかった。実線＝平均；点線＝応答腫瘍なしの平均。
【００２７】
図２Ａ−２Ｈ  図２Ａおよび２Ｂ：トマトレクチン（赤色）の浸出は明確な血管を検出し、ＣＤ３１免疫蛍光（緑色）は血管全体のコンテンツを示す。スケールバー＝１００μｍ。レクチンおよびＣＤ３１の拡大した共同標識は移植した腫瘍での明確な（patent）血管系（矢印）を示す（図２Ａ、Ｎ＝５）のに対して、ＫＣＰ腫瘍においてはＣＤ３１＋血管（点線の矢印）の少数がレクチン（実線の矢印）で灌流されているに過ぎない（図２Ｂ、Ｎ＝３）。図２Ｃおよび２Ｄ：トマトレクチン（赤色）およびドキソルビシン（緑色）は死亡の前に浸出されており、直接免疫蛍光により可視化された。スケールバー＝２００μｍ。ドキソルビシンは、周辺組織に比べて、ＫＰＣ腫瘍（図２Ｄ、Ｎ＝４）よりも、移植された腫瘍（図２Ｃ、Ｎ＝５）により効率的にデリバリーされる。図２Ｅおよび２Ｆ：マイクロバブル（緑色）を用いるコントラスト超音波検査は、ＫＰＣ腫瘍にて観察されるわずかな灌流（図２Ｆ、Ｎ＝８）とは対照的に、移植された腫瘍の迅速な灌流（図２Ｅ、Ｎ＝６）を可視化した。腫瘍は黄色（点線）で示された。スケールバー＝１ｍｍ。図２Ｇおよび２Ｈ：ＤＣＥ−ＭＲＩは、ＫＰＣ腫瘍（図２Ｈ、Ｎ＝６）と比べて移植腫瘍（図２Ｇ、Ｎ＝６）にてＧｄ−ＤＴＰＡ（高デリバリー＝黄色／白色）の灌流および溢出の増加を示した。腫瘍は青（点線）で示された。スケールバー＝２ｍｍ。
【００２８】
図３Ａ−３Ｉ  ＣＤ３１免疫組織化学は、移植（図３Ａおよび３Ｂ）、ＫＰＣ（図３Ｃおよび３Ｄ）およびヒト（図３Ｅおよび３Ｆ）膵臓腫瘍に対してなされ、低倍率（図３Ａ、３Ｃ、３Ｅ；スケールバー＝５０μｍ）または高倍率（図３Ｂ、３Ｄ、３Ｆ；スケールバー＝２０μｍ）で撮影した。矢印は血管を示す。図３Ａ：移植腫瘍（Ｔ）の周辺領域は、周りの組織（Ｓ）およびより中心の領域（Ｃ）と比べて、密に血管形成された。図３Ｂ：血管が移植腫瘍において腫瘍細胞と直接並置されている。図３Ｃ：周辺の被膜組織（Ｓ）における広範囲に及ぶ血管形成にも拘わらず、ＫＰＣ腫瘍（Ｔ）の柔組織においては血管がほとんどないのが分かる。図３Ｄ：ＫＰＣ腫瘍の腫瘍性細胞は間質により血管と分離される。図３Ｅおよび３Ｆ：同様に、周辺組織（Ｓ）の十分な血管形成にも拘わらず、ヒト膵臓細胞（Ｔ）は血管形成に乏しい。図３Ｇ：血管平均密度（ＭＶＤ）は、ＫＰＣ腫瘍（ＫＰＣ）、同系自家移植片（Ｓｙｎ）、同所性異種移植片（Ｏｒｔｈｏ）、正常なネズミ膵臓（Ｎｏｒｍ）、ＫＰＣ腫瘍において隣接する周辺組織（Ａｄｊ）、ヒト正常膵臓組織およびヒト膵臓腫瘍組織にて測定された。ＫＰＣおよびヒト膵臓腫瘍は、移植腫瘍および正常な組織と比べて、血管平均密度は低かった（４種のすべての個々の比較において、Ｐ＜０．００４、Mann-Whitney U検定）。図３Ｈ：ＭＶＤは、正常なヒト膵臓または慢性膵炎のサンプルの周辺（Ｐ）および中心（Ｃ）領域と比べて、ヒトＰＤＡの中心領域にて有意に低下している（**  Ｐ＜０.００１５、***  Ｐ＜０.０００１、Mann-Whitney U検定）。図３Ｉ：血管と腫瘍細胞とを分離する距離は、ＫＰＣ腫瘍（ＫＰＣ）とヒトＰＤＡ（ヒト）において、同系自家移植片（Ｓｙｎ）または同所性異種移植片（Ｏｒｔｈｏ）におけるよりも著しく大きい。
【００２９】
図４Ａ−４Ｉ  マウスは次の５種のレジメの中の一つを受けた：処置せず（ＮＴ）、ビヒクル（Ｖ）、ゲムシタビン（Ｇ）、化合物Ａ（Ｉ）、および化合物Ａとゲムシタビン（ＩＧ）。図４Ａ：化合物Ａの腫瘍組織中での濃度が、単回用量（ＳＤ）、４日間毎日（初期）、または生存試験の最後（終点）で処置されたマウスに対して、ならびに終点で処置されたマウスからの腎臓中での濃度が示される。図４Ｂ：Ｇｌｉ１発現（ＲＴＰＣＲにより測定）は、化合物Ａおよび化合物Ａ／ｇｅｍ処置したＫＰＣ腫瘍では、対照の４日間処置したＫＰＣマウスよりも有意に低かった（Ｐ＜０.０５）。図４Ｃ：ＭＶＤは、８−１２日後、化合物Ａおよび化合物Ａ／ｇｅｍ処置のＫＰＣ腫瘍にて有意に高かった（Ｐ＜０.０５）。図４Ｄ：単位領域当たりのドキソルビシン蛍光は、８−１２日後、化合物Ａ／ｇｅｍ処置の腫瘍にて有意に高かった（Ｐ＝０.０３、Mann-Whitney U検定）。図４Ｅ：所定のレジメで処置した後で、すべてのマウスに、単回用量のゲムシタビンを投与し、１９Ｆ  ＮＭＲでサンプルを抽出することで、フッ素担持の代謝産物の濃度を測定した。ＫＰＣ腫瘍組織中のゲムシタビン代謝産物の濃度は、処置の１０日後には、化合物Ａ／ｇｅｍ処置の腫瘍にて有意に上昇した。プロットは、相対的単位にて、１９Ｆ  ＮＭＲにより検出されるフッ素担持ゲムシタビン代謝産物の全濃度を示す（Ｐ＜０.０４、Mann-Whitney U検定）。図４Ｆ：ＫＰＣ腫瘍の増殖（図１Ｅのように測定される）は、４日（初期）または８−１２日（中間）後に、ゲムシタビンおよび化合物Ａ／ｇｅｍ処置の腫瘍にて減少したが、化合物Ａ処置の腫瘍では変化しなかった。図４Ｇ：アポトーシスは、８−１２日後の化合物Ａ／ｇｅｍ処置のＫＰＣ腫瘍の部分集合にて上昇したが（Ｐ＝０.１７）、対照群では変化しなかった。図４Ｈ：５−１０ｍｍの膵臓腫瘍を検出した後のＫＰＣマウスの生存は、対照と比べて化合物Ａ／ｇｅｍ処置のマウスでは有意に拡張された（Ｐ＝０.００１ Log-Rank Test、Hazard Ratio＝６.３６）。図４Ｉ：化合物Ａ／ｇｅｍ処置のマウスはまた、対照処置群に比べて有意に少ない転移肝臓癌を有した（Ｐ＝０.０１５、Fisher’s Exact）。
【００３０】
図５Ａ−５Ｄ  図５Ａ：ＨＰＬＣは、正常なマウスの血液中のゲムシタビン（ｄＦｄＣ） の半減期が短いことを確認する（上方曲線が雌、下方曲線が雄）。図５Ｂ：図５ＡのＨＰＬＣの結果は、図５Ｂに示される不活性な代謝性ジフルオロデオキシウリジン（ｄＦｄＵ）のアキュムレーションと相関関係にある（上方曲線が雌、下方曲線が雄）。図５Ｃ：定量性ＲＴ−ＰＣＲをゲムシタビンに対する細胞応答に関与する遺伝子について腫瘍組織からのＲＮＡを用いて行った。Mann-Whitney U検定のＰ値は、各遺伝子について以下に示されており、ｄＣＫおよびＲＲＭ２においてのみ有意な違いを示した（各セットの最初のバーがＫＰＣであり、各セットの第２のバーが移植腫瘍である）。図５Ｄ：ゲムシタビン処置の腫瘍の群ではこれらの違いはほとんどなかった（各セットの最初のバーがＫＰＣであり、各セットの第２のバーが移植腫瘍である）。
【００３１】
図６Ａ−６Ｆ  図６Ａ：ＣＤ３１およびレクチンについての灌流および免疫蛍光を図２Ａに記載されるように行った。レクチンで標識されるＣＤ３１＋血管の割合を正常な膵臓（Ｎｏｒｍ）ならびにＫＰＣおよび移植腫瘍にて測定した。ＫＰＣ腫瘍は、移植腫瘍および正常組織よりも明確な血管が有意に少なかった（*  Ｐ＜０.０５、Mann-Whitney U検定）。図６Ｂ−６Ｆ：レクチンおよびドキソルビシンは図２Ｃにあるように灌流された。正常な組織（図６Ｂ）、皮下移植された腫瘍（図６Ｃ）および同所性移植腫瘍（図６Ｄ）は十分な血管標識化（赤色、矢印）およびドキソルビシンのコンテンツ（緑色）を示し、ＤＡＰＩ（青色）は核のコンテンツを示す。パネルＢにおいて、Ａ＝腺房状細胞、Ｉ＝膵島細胞、Ｄ＝導管腺細胞、および左側の差し込み図はドキソルビシンだけのチャネルを示し、正常な導管細胞におけるドキソルビシン吸収を示す。図６Ｅ：ＫＰＣマウスからの膵臓は、レクチン標識化（矢印）および隣接するＰａｎＩＮ組織にてドキソルビシンのコンテンツを示す。図６Ｆ：ＰＤＡ腫瘍（Ｔ）の侵襲的領域において、ドキソルビシン灌流はあまりレクチン標識されていない血管（矢印）に直接隣接しているようである。黄色の三角は、腫瘍と隣接する腺房膵臓組織との間の明確な境界を示す。スケールバー＝１００μＭ。
【００３２】
図７Ａ−７Ｆ  代表的な画像は、マッソンの三重染色した、皮下同種移植片（図７Ａ）および同所性異種移植片（図７Ｂ）からの腫瘍ならびにゲムシタビン耐性のＫＰＣ腫瘍（図７Ｃ）および第一ヒト膵臓腫瘍（図７Ｄ）で示される。黄色の矢印は、検出される際の、間質ファイバーを示す。移植モデルから腫瘍は、一般に、ほとんど間質を示さないが、ＫＰＣ腫瘍およびヒト腫瘍は主たる間質成分を有する。注目すべき２つのゲムシタビン−感受性腫瘍は、他のＫＰＣ腫瘍よりも、間質コンテンツが小さく（図７Ｅ）、血管密度が高かった（図７Ｆ）。黒色矢印は血管を示す。すべてのパネルのスケールバーは２０μｍである。
【００３３】
図８Ａ−８Ｆ  正常なヒト膵臓（図８Ａおよび８Ｂ）およびＰＤＡ（図８Ｃ−８Ｆ）の代表的な画像を示す。隣接するパラフィンの断面はヘマトキシリンおよびエオシン（図８Ａ、８Ｃおよび８Ｅ）および抗ＣＤ３１（図８Ｂ、８Ｄおよび８Ｆ）で染色された。図８Ｃおよび８Ｄの点線で囲まれた四角の部分は、各々、図８Ｅおよび図８Ｆにてより高い倍率で図示される領域を示す。マウスにおける観察と同様、ヒトの正常な膵臓組織は、腺房状細胞および導管腺細胞の周辺に細かい毛細血管の高密度のネットワークを有し（図８Ｂ、矢印）、それに対して浸潤癌の領域は明らかに血管が少なかった（図８Ｄおよび８Ｆ、矢印）。パネル（図８Ａ、８Ｂ、８Ｅおよび８Ｆ）中のスケールバーは５０μｍであり；パネル（図８Ｃおよび８Ｄ）のバーは２００μｍである。
【００３４】
図９Ａ−９Ｌ  ＫＰＣ腫瘍をビヒクル（図９Ａ、９Ｅおよび９Ｉ）、ゲムシタビン（図９Ｂ、９Ｆおよび９Ｊ）、化合物Ａ（図９Ｃ、９Ｇおよび９Ｊ）または化合物Ａ／ｇｅｍ（図９Ｄ、９Ｈおよび９Ｌ）を用いて８−１２日間処置した。図９Ａ−９Ｄ：Ｈ＆Ｅ染色された断面は、化合物Ａおよび化合物Ａ／ｇｅｍで処置した後の細胞および無細胞間質の喪失を示しており、その結果、腫瘍細胞が高い密度で存在する。化合物Ａ／ｇｅｍで処置された細胞は簡素な核および細胞異型の領域を含有した（矢印）。図９Ｅ−９Ｈ：ＣＤ３１の免疫組織化学は、化合物Ａおよび化合物Ａ／ｇｅｍ処置の後でＭＶＤの増加を示す。図９Ｉ−９Ｌ：ドキソルビシン免疫蛍光（緑色）は化合物Ａ処置の腫瘍のコンテンツの増加を示す。青色＝ＤＡＰＩ。ドキソルビシン染色と異種のパターンが化合物Ａおよび化合物Ａ／ｇｅｍ処置の腫瘍で観察された。スケールバーは１００μｍである。
【００３５】
図１０Ａ−１０Ｄ  セイライン（図１０Ａ）、ゲムシタビン（１００ｍｇ／ｋｇ、週に２回）（図１０Ｂ）、化合物Ａ（４０μｇ／ｋｇ／日）（図１０Ｃ）および化合物Ａ／ｇｅｍ（図１０Ｄ）で処置したマウスの腫瘍を３Ｄ高解像度超音波検査法によりモニター観察した。セイライン処置のマウスでは、客観的な応答は何ら観察されなかった。ゲムシタビン処置のマウスの２／１０は客観的応答を示した（一例として、第一のパネル）。化合物Ａ処置のマウスの２／１０は客観的応答を示した（一例として、第一のパネル）。化合物Ａ／ｇｅｍ処置の腫瘍の大部分（８／１０）は少なくとも一時的に処置に対して応答し、疾患が長期にわたって安定していることを示した（赤色トレース（下方曲線）、第二のパネル、第四のパネル）。
【００３６】
図１１  ｄＦｄＣＴＰおよびＡＴＰを実験中のマウスの脾臓、正常な膵臓および膵臓腫瘍組織にてＨＰＬＣにより検出した。該組織の適合は、サンプル中のＡＴＰのレベルにより決定された。
【００３７】
図１２  化合物Ａ／ｇｅｍ処置の膵臓腫瘍における血管開通性の部分的修復を示す。正常なマウス（Norm）、非処置のＫＰＣマウス（NT）またはゲムシタビン（G）、化合物Ａ（I）または化合物Ａ／ｇｅｍ（I／G）で１０日間処置したマウスをレクチンで１５分間灌流し、ついでＣＤ３１についての免疫組織化学を単離した膵臓または腫瘍組織で行った。レクチンで灌流されたＣＤ３１陽性血管の割合を記録し、それにより化合物Ａおよび化合物Ａ／ｇｅｍ処置のマウスは非処置またはゲムシタビン処置の腫瘍に比べて血管開通性が増加することがわかった。
【００３８】
図１３  ２種の異なるスムーセンド阻害剤、化合物ＡまたはＮＫ−４１０１は、ＫＰＣマウスの膵臓腫瘍における微小血管密度を増加させた。マウスをビヒクル対照、化合物ＡまたはＮＫ−４１０１で１０日間処置した。両方の化合物は微小血管密度を様々な程度まで増加させた。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
定義
具体的な官能基および化学用語の定義を以下により詳細に記載する。本発明の目的のためには、元素は、CAS version、Handbook of Chemistry and Physics、第７５版、裏表紙にある元素周期表に従って同定され、具体的な官能基は一般にその中で定義される。加えて、有機化学の一般的原理、ならびに具体的な官能基および反応性は、例えば、Organic Chemistry、Thomas Sorrell、University Science Books、Sausalito、1999；Smith and March March’s Advanced Organic Chemistry、5th Edition、John Wiley & Sons, Inc.、New York、2001；Larock、Comprehensive Organic Transformations、VCH Publishers, Inc.、New York、1989；およびCarruthers、Some Modern Methods of Organic Synthesis、3rd Edition、Cambridge University Press、Cambridge、1987に記載されている。
【００４０】
本発明の特定の化合物は、１または複数の不斉中心を含み得、かくして種々の異性体の形態、例えば立体異性体および／またはジアステレオマーの形態にて存在しうる。したがって、本発明の化合物およびその医薬組成物は個々のエナンチオマー、ジアステレオマーまたは幾何異性体の形態であってもよく、あるいは立体異性体の混合物の形態であってもよい。エナンチオマー、ジアステレオマーおよび立体異性体は、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ならびにキラル塩の形成および結晶化を含む、当業者に公知の方法によりラセミ混合物より単離されてもよく、あるいは不斉合成によって調製されてもよい；例えば、Jacquesら、Enantiomers, Racemates and Resolutions （Wiley Interscience、New York、1981）；Wilen, S.H.ら、Tetrahedron 33：2725 （1977）；Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds （McGraw-Hill、NY、1962）；Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 （E.L. Eliel, Ed.、Univ. of Notre Dame Press、Notre Dame、IN 1972）。
【００４１】
本願明細書に記載されるように、発明の化合物は、「所望により置換されていてもよい」基を含有してもよい。一般に、「置換されている」なる語は、「所望により」なる語が前にあってもなくても、所定の基の１つまたは複数の水素が適当な置換基で置き換えられていることを意味する。特記しない限り、「所望により置換されていてもよい」基は、該基の置換可能な位置の各々で一の置換基を有していてもよく、所定の構造にて１より多くの位置が特定の群より選択される１個より多くの置換基で置換されていてもよい場合、該置換基はいずれの位置で同じであっても、異なっていてもよい。本願発明により考えられる置換基の組み合わせは安定した化合物の形成をもたらす組み合わせである。本願明細書で用いられる「安定」なる語は、その合成、製造、精製および／または貯蔵を可能とする条件に付された場合に、実質的に変化されない化合物をいう。
【００４２】
「所望により置換されていてもよい」なる語は、１個または複数の水素が、ハロ、アジド、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、ニトリル、スルフヒドリル、イミド、アミド、ホスホナト、ホスフィナト、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨＯ、シリル、エーテル（例、アルコキシ、アリールオキシ）、チオエーテル（例、アルキルチオ、アリールチオ）、スルホニル、スルホンアミド、スルファミド、エステル、ケトン、＝Ｏ、＝Ｓ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、ハロアルキル（例、−ＣＦ３などのペルフルオロアルキル）等を含むが、これらに限定されない、別の置換基により置き換えられていてもよい、アルキル、シクロアルキル、アリール等などの基をいう。特定の実施態様において、任意の置換基は、ハロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、ニトロ、ニトリル、イミド、アミド、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨＯ、シリル、アルコキシ、アルキルチオ、スルホンアミド、スルファミド、エステル、＝Ｏ、＝Ｓ、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキルおよびペルフルオロアルキル（例、−ＣＦ３）より選択される。
【００４３】
一の範囲の値が挙げられている場合、それはその範囲内にある各値および部分的な範囲を含むことが意図される。例えば、１−６個の炭素原子を含有するアルキル基（Ｃ１−６アルキル）は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ１−６、Ｃ２−６、Ｃ３−６、Ｃ４−６、Ｃ５−６、Ｃ１−５、Ｃ２−５、Ｃ３−５、Ｃ４−５、Ｃ１−４、Ｃ２−４、Ｃ３−４、Ｃ１−３、Ｃ２−３およびＣ１−２アルキルを包含することが意図される。
【００４４】
本願明細書で使用される「アルキル」なる語は、１ないし３０個の炭素原子を含有する飽和の直鎖または分岐鎖の炭化水素基をいう。特定の実施態様において、アルキル基は１−２０個の炭素原子を含有する（「Ｃ１−２０アルキル」）。特定の実施態様において、アルキル基は１−１０個の炭素原子を含有する（「Ｃ１−１０アルキル」）。特定の実施態様において、アルキル基は１−９個の炭素原子を含有する（「Ｃ１−９アルキル」）。特定の実施態様において、アルキル基は１−８個の炭素原子を含有する（「Ｃ１−８アルキル」）。特定の実施態様において、アルキル基は１−７個の炭素原子を含有する（「Ｃ１−７アルキル」）。特定の実施態様において、アルキル基は１−６個の炭素原子を含有する（「Ｃ１−６アルキル」）。特定の実施態様において、アルキル基は１−５個の炭素原子を含有する（「Ｃ１−５アルキル」）。特定の実施態様において、アルキル基は１−４個の炭素原子を含有する（「Ｃ１−４アルキル」）。特定の実施態様において、アルキル基は１−３個の炭素原子を含有する（「Ｃ１−３アルキル」）。特定の実施態様において、アルキル基は１−２個の炭素原子を含有する（「Ｃ１−２アルキル」）。特定の実施態様において、アルキル基は１個の炭素原子を含有する（「Ｃ１アルキル」）。アルキル基の例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、sec−ブチル、sec−ペンチル、イソ−ペンチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、sec−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ドデシル等が挙げられるが、これらに限定されない。特記しない限り、「置換されていてもよい」アルキル基の例は、各々独立して、置換されていないか、または本願明細書に記載の１−５個の基で置換されている。
【００４５】
本願明細書で使用される「アルケニル」なる語は、１個の水素原子を除去することで少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する、２ないし３０個の炭素原子を含有する、直鎖または分岐鎖の炭化水素基をいう。特定の実施態様において、アルケニル基は２−２０個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−２０アルケニル」）。特定の実施態様において、アルケニル基は２−１０個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−１０アルケニル」）。特定の実施態様において、アルケニル基は２−９個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−９アルケニル」）。特定の実施態様において、アルケニル基は２−８個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−８アルケニル」）。特定の実施態様において、アルケニル基は２−７個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−７アルケニル」）。特定の実施態様において、アルケニル基は２−６個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−６アルケニル」）。特定の実施態様において、アルケニル基は２−５個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−５アルケニル」）。特定の実施態様において、アルケニル基は２−４個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−４アルケニル」）。特定の実施態様において、アルケニル基は２−３個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−３アルケニル」）。特定の実施態様において、アルケニル基は２個の炭素原子を含有する（「Ｃ２アルケニル」）。アルケニル基は、例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル等を包含する。特記しない限り、「所望により置換されていてもよい」アルケニル基の例は、各々独立して、置換されていないか、または本願明細書に記載の１−５個の基で置換されている。
【００４６】
本願明細書で使用される「アルキニル」なる語は、１個の水素原子を除去することで少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する、２ないし３０個の炭素原子を含有する、直鎖または分岐鎖の炭化水素基をいう。特定の実施態様において、アルキニル基は２−２０個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−２０アルキニル」）。特定の実施態様において、アルキニル基は２−１０個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−１０アルキニル」）。特定の実施態様において、アルキニル基は２−９個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−９アルキニル」）。特定の実施態様において、アルキニル基は２−８個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−８アルキニル」）。特定の実施態様において、アルキニル基は２−７個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−７アルキニル」）。特定の実施態様において、アルキニル基は２−６個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−６アルキニル」）。特定の実施態様において、アルキニル基は２−５個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−５アルキニル」）。特定の実施態様において、アルキニル基は２−４個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−４アルキニル」）。特定の実施態様において、アルキニル基は２−３個の炭素原子を含有する（「Ｃ２−３アルキニル」）。特定の実施態様において、アルキニル基は２個の炭素原子を含有する（「Ｃ２アルキニル」）。代表的なアルキニル基として、エチニル、２−プロピニル（プロパルギル）、１−プロピニル等が挙げられる。特記しない限り、「所望により置換されていてもよい」アルキニル基の例は、各々独立して、置換されていないか、または本願明細書に記載の１−５個の基で置換されている。
【００４７】
単独で、または大きな基の一部として用いられる「シクロアルキル」なる語は、３−１５個の炭素環員を有する、所望により置換されていてもよい飽和単環式または二環式炭化水素環系をいう（「Ｃ３−１５シクロアルキル」）。特定の実施態様において、シクロアルキル基は３−１０個の炭素環員を含有する（「Ｃ３−１０シクロアルキル」）。特定の実施態様において、シクロアルキル基は３−９個の炭素環員を含有する（「Ｃ３−９シクロアルキル」）。特定の実施態様において、シクロアルキル基は３−８個の炭素環員を含有する（「Ｃ３−８シクロアルキル」）。特定の実施態様において、シクロアルキル基は３−７個の炭素環員を含有する（「Ｃ３−７シクロアルキル」）。特定の実施態様において、シクロアルキル基は３−６個の炭素環員を含有する（「Ｃ３−６シクロアルキル」）。特定の実施態様において、シクロアルキル基は３−５個の炭素環員を含有する（「Ｃ３−５シクロアルキル」）。シクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを包含するが、これに限定されない。「シクロアルキル」なる語はまた、デカヒドロナフチルまたはテトラヒドロナフチルなどの、１個または複数のアリールまたはヘテロアリール環に縮合した飽和炭化水素環系であって、結合点が飽和炭化水素環上にある環系を包含する。特記しない限り、「所望により置換されていてもよい」シクロアルキル基の例は、各々独立して、置換されていないか、または本願明細書に記載の１−５個の基で置換されている。
【００４８】
単独で、または「アラルキル」にあるような、大きな基の一部として用いられる「アリール」なる語は、合計で６−１０個の環員を有する、所望により置換されていてもよい芳香族単環式および二環式炭化水素環系をいう（「Ｃ６−１０アリール」）。特定の実施態様において、アリール基は６個の炭素環員を含有する（「Ｃ６アリール」）。特定の実施態様において、アリール基は１０個の炭素環員を含有する（「Ｃ１０アリール」）。「アリール」なる語は「アリール環」なる語と互換的に使用されてもよい。本願発明の特定の実施態様において、「アリール」は芳香族環系をいい、それは１または複数の置換基を有していてもよい、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラシル等を包含するが、これらに限定されない。本願明細書に用いられる場合、インダニル、フタルイミジルまたはテトラヒドロナフタリル等などの、アリール環が１または複数の非芳香族環に縮合しており、結合点がアリール環上にある基もまた、「アリール」なる語の範囲内に含まれる。特記しない限り、「所望により置換されていてもよい」アリール基の例は、各々独立して、置換されていないか、または本願明細書に記載の１−５個の基で置換されている。
【００４９】
「アラルキル」なる語は、上記したアリール基により置換されている、上記したアルキル基をいい、結合点はアルキル基上にあり、そのアルキルおよびアリール基は独立して所望により置換されていてもよい。
【００５０】
「ヘテロ原子」なる語は、ボロン、リン、セレン、窒素、酸素または硫黄をいい、窒素または硫黄の酸化された形態および塩基性窒素の四級化された形態を包含する。
【００５１】
単独で、または大きな基、例えば「ヘテロアラルキル」の一部として用いられる「ヘテロアリール」なる語は、５−１０個の環原子を有する、所望により置換されていてもよい芳香族単環式または二環式炭化水素環系をいい、ここで環原子は炭素原子に加えて、１ないし５個のヘテロ原子を含む。ヘテロアリール基の環原子と関連して用いられる場合、「窒素」なる語は、置換された窒素を包含する。ヘテロアリール基は、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニルおよびプテリジニルを包含するが、これらに限定されない。本願明細書で用いられる、「ヘテロアリール」および「ヘテロアル−」なる語はまた、ヘテロアリール環が１または複数のアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環に縮合し、結合点がヘテロアリール環上にある、基を包含する。限定するものではない例として、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、４Ｈ−キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニルおよびテトラヒドロイソキノリニルが挙げられる。特記しない限り、「所望により置換されていてもよい」ヘテロアリール基の例は、各々独立して、置換されていないか、または本願明細書に記載の１−５個の基で置換されている。
【００５２】
「ヘテロアラルキル」なる語は、本願明細書に記載のあヘテロアリール基により置換されている、本願明細書に記載のアルキル基をいい、ここで、結合点はアルキル基上にあり、アルキルおよびヘテロアリール部は、独立して、所望により置換されていてもよい。
【００５３】
本願明細書で用いる場合、「ヘテロシクロアルキル」または「ヘテロシクリル」なる語は、安定した非芳香族の所望により置換されていてもよい５−７員の単環式炭化水素または安定した非芳香族の所望により置換されていてもよい７−１０員の二環式炭化水素であって、飽和または部分的に不飽和であり、炭素原子に加えて、１個または複数のヘテロ原子を有するものをいう。ヘテロシクロアルキル基の環原子との関連で用いられる場合、「窒素」なる語は置換されている窒素を包含する。ヘテロシクロアルキル基の結合点は、安定した構造をもたらすそのヘテロ原子または炭素環原子のいずれであってもよい。ヘテロシクロアルキル基の例として、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピロリジニル、ピロリドニル、ピペリジニル、ピロリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニルおよびキヌクリジニルが挙げられる。「ヘテロシクロアルキル」はまた、インドリニル、クロマニル、フェナントリジニルまたはテトラヒドロキノリニルなどの、そのヘテロシクロアルキル環が１または複数のアリール、ヘテロアリールまたはシクロアルキル環に縮合している基であって、結合ラジカルまたは点がヘテロシクロアルキル環上にあるものを包含する。特記しない限り、「所望により置換されていてもよい」ヘテロシクロアルケニルまたは「所望により置換されていてもよい」ヘテロシクリル基の例は、各々独立して、置換されていないか、または本願明細書に記載の１−５個の基で置換されている。
【００５４】
「ヘテロシクリルアルキル」なる語は、上記したヘテロシクリル基により置換されている、上記のアルキル基をいい、ここで結合点はアルキル基上にあり、アルキルおよびヘテロシクリルの部分は、独立して、所望により置換されていてもよい。
【００５５】
本願明細書にて用いられる「不飽和」なる語は、一の部分が１または複数の二重および／または三重結合を有することを意味する。
【００５６】
本願明細書で用いる場合、「部分不飽和」なる語は、少なくとも１個の二重または三重結合を含む環部分をいう。「部分不飽和」なる語は、複数の不飽和部位を有する環を包含することを意図とするが、本願明細書に記載のアリールまたはヘテロアリール基などの芳香族基を含むことを意図とするものではない。
【００５７】
本願明細書にて用いる「ジラジカル」なる語は、所望により置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアラルキル基をいい、ここで２個の水素原子が取り除かれ、二価の部分を形成するものをいう。ジラジカルは、典型的には、末尾に「−エン」の接尾辞を有する。例えば、アルキルジラジカルは、アルキレン（例えば、
【化５】
2012515792.tif 000006
および−（ＣＲ’２）ｘ−、ここでＲ’は水素または他の置換基であり、ｘは両端を含めて１−６である）と称され；アルケニルジラジカルは「アルケニレン」と称され；アルキニルジラジカルは「アルキニレン」と称され；アリールおよびアラルキルジラジカルは、各々、「アリーレン」および「アラルキレン」（例えば：
【化６】
2012515792.tif 000007
）と称され；ヘテロアリールおよびヘテロアラルキルジラジカルは、各々、「ヘテロアリーレン」および「ヘテロアラルキレン」（例えば：
【化７】
2012515792.tif 000008
）と称され；シクロアルキルジラジカルは「シクロアルキレン」と称され；ヘテロシクロアルキルジラジカルは「ヘテロシクロアルキレン」等と称される。
【００５８】
本願明細書にて用いられる「ハロ」および「ハロゲン」なる語は、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−Ｃｌ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）およびヨウ素（ヨード、−Ｉ）より選択される原子をいう。
【００５９】
本願明細書で用いる場合、「ハロアルキル」なる語は、本願明細書に記載のアルキル基であって、該アルキル基の１または複数の水素原子が１または複数のハロゲン原子と置き換えられている基をいう。特定の実施態様において、ハロアルキル基はペルハロアルキル基、すなわち、該アルキル基の水素原子のすべてがハロゲンと置き換えられている基（例えば、ペルフルオロアルキル基  −ＣＦ３などの基）である。
【００６０】
本願明細書で用いられる「糖」なる語は、天然または非天然の単糖、二糖または多糖をいう。糖は、酸素、窒素または硫黄結合を介して、あるいはアルキル結合を介して本願発明の化合物に共有結合されてもよい。特定の実施態様において、サッカリド部分はサッカリド環のアノマー中心で本願発明のステロイド性アルカロイドに共有結合してもよい。例示的な糖として、１,２および１,３ヒドロキシ糖（例、グリセロール、エリスリトール、スレイトール、リビトール、アラビニトール、キシリトール、アリトール、アルトリトール、ガラクチトール、ソルビトール、マンニトールおよびイジトール）、ヘキソース（例、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グルコース、イドース、ガラクトースおよびタロース）、ペントース（例、リボース、アラビナオース、キシロースおよびリキソース）、マルチトール、ラクチトールおよびイソマルト（isomalt）が挙げられる。
【００６１】
本願明細書で用いる場合、「ニトリル」なる語は基−ＣＮをいう。
本願明細書で用いる場合、「ニトロ」なる語は基−ＮＯ２をいう。
本願明細書で用いる場合、「アジド」なる語は基−Ｎ３をいう。
本願明細書で用いる場合、「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」なる語は基−ＯＨをいう。
本願明細書で用いる場合、「スルフヒドリル」なる語は基−ＳＨをいう。
【００６２】
本願明細書で用いる場合、「アミノ」なる語は基−ＮＲ’２であって、各Ｒ’が、独立して、水素または例えば、本願明細書に記載のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分であるか、または２つのＲ’基がその結合する窒素原子と一緒になって５−８員環を形成する基をいう。
【００６３】
本願明細書で用いる場合、「カルボニル」または「ケトン」なる語は基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’をいい、ここでＲ’は、独立して、例えば、本願明細書にて定義されるような、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分である。
【００６４】
本願明細書で用いる場合、「エステル」なる語は、基−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’または−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’をいい、ここで各Ｒ’は、独立して、例えば、本願明細書にて定義されるような、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分である。
【００６５】
本願明細書で用いる場合、「アミド」なる語は、基−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２または−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’をいい、ここで各Ｒ’は、独立して、水素または例えば、本願明細書に記載のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分であるか、または２つのＲ’基がその結合する窒素原子と一緒になって５−８員環を形成する基をいう。
【００６６】
本願明細書で用いる場合、「イミド」なる語は基−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２または−ＮＲ’Ｃ（＝ＮＲ’）Ｒ’をいい、ここで各Ｒ’は、独立して、水素、または例えば、本願明細書に記載のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分であるか、または２つのＲ’基がその結合する窒素原子と一緒になって５−８員環を形成する基をいう。
【００６７】
本願明細書で用いる場合、「エーテル」は基−ＯＲ’であって、ここでＲ’は、例えば、本願明細書に記載のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分である。特定の実施態様において、エーテル基は「アルコキシ」基、すなわち、ここでＲ’は本願明細書に記載される所望により置換されていてもよいアルキル基である。特定の実施態様において、エーテル基は「アリールオキシ」基、すなわち、ここでＲ’は本願明細書に記載される所望により置換されていてもよいアリール基である。
【００６８】
本願明細書で用いる場合 「チオエーテル」は基−ＳＲ’をいい、ここでＲ’は、例えば本願明細書に記載されるアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分である。特定の実施態様において、チオエーテル基は「アルキルチオ」基であり、すなわち、ここでＲ’は本願明細書に記載される所望により置換されていてもよいアルキル基である。特定の実施態様において、エーテル基は「アリールチオ」基、すなわち、ここでＲ’は本願明細書に記載される所望により置換されていてもよいアリール基である。
【００６９】
本願明細書で用いる場合、「シリル」は基−Ｓｉ（Ｒ’）３をいい、ここでＲ’は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分である。
【００７０】
本願明細書で用いる場合、「スルホニル」は基−ＳＯ２Ｒ’をいい、ここでＲ’は、例えば、本願明細書にて定義される、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分である。
【００７１】
本願明細書で用いる場合、「スルホンアミド」は、基−Ｎ（Ｒ’）ＳＯ２Ｒ’または−ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）２をいい、ここで各Ｒ’は、独立して、水素あるいは、例えば、本願明細書にて定義される、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分であるか、または２個のＲ’基がその結合する窒素原子と一緒になって５−８員環を形成する。
【００７２】
本願明細書で用いる場合、「スルホンアミド」は基−ＮＲ’ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）２をいい、ここで各Ｒ’は、独立して、水素あるいは、例えば、本願明細書にて定義される、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分であるか、または２個のＲ’基がその結合する窒素原子と一緒になって５−８員環を形成する。
【００７３】
本願明細書で用いる場合、「ホスホナト」は基−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２をいい、ここで各Ｒ’は、独立して、水素あるいは、例えば、本願明細書にて定義される、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分である。
【００７４】
本願明細書で用いる場合、「ホスフィナト」は基−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ’）２をいい、ここで各Ｒ’は、独立して、水素あるいは、例えば、本願明細書にて定義される、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基などの炭素部分である。
【００７５】
「医薬上許容される」なる語は、本願明細書において、安全な医薬の判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応あるいは他の問題または合併症を伴うことなく、合理的な利益／危険の割合に見合って、ヒトおよび動物の組織と接触して用いるのに適する、化合物、材料、組成物および／または剤形をいう。
【００７６】
本願明細書に記載の方法に有用な化合物、例えば、ヘッジホッグ経路阻害剤、治療剤および造影剤は、アミノまたはアルキルアミノなどの塩基性官能基を含有し、かくして医薬上許容される酸との医薬上許容される塩を形成することができる。この点において、「医薬上許容される塩」なる語は、本願発明の化合物の相対的に非毒性の無機および有機酸付加塩をいう。これらの塩は、投与ビヒクルまたは剤形を製造する工程で系内にて調製され得、あるいは遊離塩基の形態の化合物を適当な有機または無機酸で処理し、こうして形成された塩をその後の精製の間に単離することにより別々に調製され得る。代表的な塩は、適当な無機および有機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸より誘導される塩、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸などの有機酸を用いて得られる塩、あるいはイオン交換などの当該分野にて用いられる他の方法を使用することで誘導される塩を包含する。他の医薬上許容される酸付加塩は、アジピン酸塩、アルギニン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンフル酸塩、カンフルスルホン酸塩、クエン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パーモ酸塩、ペクチニン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等を包含する（例えば、Bergeら（1977）「Pharmaceutical Salts」、J. Pharm. Sci. 66：1-19を参照のこと）。
【００７７】
ある場合には、本願明細書に記載の方法に有用な化合物は１または複数の酸性官能基を含有してもよく、かくして、医薬上許容される塩基との医薬上許容される塩の形成能を有する。これらの場合の「医薬上許容される塩」なる語は、本願発明の化合物の相対的に非毒性の無機および有機塩基付加塩をいう。これらの塩は、同様に、投与ビヒクルまたは剤形を製造する工程で系内にて調製され得、あるいは遊離酸の形態の化合物を、医薬上許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩などの適当な塩基で、アンモニアで、あるいは医薬上許容される有機第一、第二または第三アミンで処理することにより別々に調製され得る。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩は、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアルミニウム塩等を包含する。塩基付加塩の形成に有用な代表的な有機アミンは、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン等を包含する（例えば、Bergeら、前掲を参照のこと）。
【００７８】
本願明細書で用いる場合、「互変異性体」なる語は、水素原子の少なくとも１回のホルマール移動および少なくとも１回の結合価の変化（例えば、単結合の二重結合への、三重結合の単結合への、あるいはその逆）によりもたらされる２種またはそれ以上の互変可能な化合物を包含する。互変異性体の正確な割合は、温度、溶媒およびｐＨを含む数種のファクターに依存する。互変異性化（すなわち、互変異性対をもたらす反応）は酸または塩基により触媒されてもよい。代表例としての互変異性化は、ケト−エノール；アミド−イミド；ラクタム−ラクチム；エナミン−イミン；およびエナミン−（異なる）エナミンの互変異性化を包含する。
【００７９】
「ヘッジホッグ経路活性化」は、ヘッジホッグリガンド（ａｋａヘッジホッグ蛋白）、パッチド（Ｐｔｃ）遺伝子またはスムーセンド（Ｓｍｏ）遺伝子の異常修飾または変異、あるいはＰｔｃ遺伝子またはＳｍｏ遺伝子の発現レベルの変化（例えば、個々の増加または減少）であって、細胞とヘッジホッグリガンドとの接触に似ている表現型、例えばヘッジホッグ経路の異常活性化をもたらすものをいう。
【００８０】
「パッチド（Ｐｔｃ）機能喪失」は、Ｐｔｃ遺伝子の異常修飾または変異、あるいはＰｔｃ遺伝子の発現レベルの減少（または喪失）であって、細胞とヘッジホッグリガンドとの接触に似ている表現型、例えばヘッジホッグ経路の異常活性化をもたらすものをいう。
【００８１】
「スムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得」は、Ｓｍｏ遺伝子の異常修飾または変異、あるいはＳｍｏ遺伝子の発現レベルの増加であって、細胞とヘッジホッグリガンドとの接触に似ている表現型、例えばヘッジホッグ経路の異常活性化をもたらすものをいう。
【００８２】
（特定の実施態様の詳細な記載）
本願の発明者らは、ヘッジホッグ経路阻害剤の組織への投与が、例えば血管開通性の増加、血管密度の増加および／または間質密度の減少によるなどの組織形態を変更しうることを見出した。ヘッジホッグ経路阻害剤を組織に投与すると、虚血組織にて血流も改善され得る。このように、特定の実施態様においては、ヘッジホッグ経路阻害剤は剤（治療剤または造影剤など）の組織へのデリバリーを増加させ、組織の造影（例えば、Ｘ−線および超音波を介するなどの造影）を改善するのに用いられ得る。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は、組織中の新たな血管形成（例えば、血管新生）を促進するのに利用され得る。
【００８３】
ヘッジホッグ経路阻害剤
ヘッジホッグ経路阻害剤は、該経路の１種または複数の構成要素、例えば、ヘッジホッグリガンド、スムーセンド、パッチドまたはＧｌｉとの相互作用を介して、該経路に対して阻害作用を発揮するいずれかの剤（例、小分子、抗体、小干渉ＲＮＡ等）であり得る。
【００８４】
適当なヘッジホッグ阻害剤は、例えば、米国特許第７,２３０,００４号、米国特許出願公開第２００８／０２９３７５４号、米国特許出願公開第２００８／０２８７４２０号および米国特許出願公開第２００８／０２９３７５５号に記載かつ開示されているものを包含し、その刊行物の内容はすべて出典明示により本願明細書の一部とする。
【００８５】
適当なヘッジホッグ阻害剤の他の例は、米国特許出願公開第２００２／０００６９３１号、第２００７／００２１４９３号および第２００７／００６０５４６号、ならびに国際出願公開番号ＷＯ２００１／１９８００、ＷＯ２００１／２６６４４、ＷＯ２００１／２７１３５、ＷＯ２００１／４９２７９、ＷＯ２００１／７４３４４、ＷＯ２００３／０１１２１９、ＷＯ２００３／０８８９７０、ＷＯ２００４／０２０５９９、ＷＯ２００５／０１３８００、ＷＯ２００５／０３３２８８、ＷＯ２００５／０３２３４３、ＷＯ２００５／０４２７００、ＷＯ２００６／０２８９５８、ＷＯ２００６／０５０３５１、ＷＯ２００６／０７８２８３、ＷＯ２００７／０５４６２３、ＷＯ２００７／０５９１５７、ＷＯ２００７／１２０８２７、ＷＯ２００７／１３１２０１、ＷＯ２００８／０７０３５７、ＷＯ２００８／１１０６１１、ＷＯ２００８／１１２９１３およびＷＯ２００８／１３１３５４に記載のものを包含する。
【００８６】
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤はＮＫ−４１０１（Merck）、ＧＤＣ−０４４９（Genentech）、ＸＬ−１３９（ＢＭＳ−８３３９２３）（Bristol Myers Squibb）、ＬＤＥ２２５（Novartis）、ＰＦ−０４４４９９１３（Pfizer）、ロボトニキニン（robotnikinin）およびＣｕｒ−６１４１４（Ｇ−０２４８５６）より選択される。
【００８７】
ある実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤はＮＫ−４１０１である。
ある実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤はＧＤＣ−０４４９である。
ある実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤はＢＭＳ−８３３９２３である。
ある実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤はＬＤＥ２２５である。
ある実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤はＰＦ−０４４４９９１３である。
ある実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤はロボトニキニンである。
ある実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤はＣｕｒ−６１４１４である。
【００８８】
【表１】
2012515792.tif 000009
【００８９】
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は、式Ｉ、式ＩＩおよび式ＩＩＩからなる群より選択される：
【化８】
2012515792.tif 000010
Ｉ
【化９】
2012515792.tif 000011
ＩＩ
【化１０】
2012515792.tif 000012
ＩＩＩ
［式中
Ａは：
【化１１】
2012515792.tif 000013
であり；
ｎは０または１であり；
Ｘは結合手または−ＣＨ２−であり；
Ｒ１は−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）２、−Ｎ（Ｒ１０）ＳＯ２Ｎ（Ｒ１０）２、および糖より選択され；
Ｒ２は−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、および所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキルより選択されるか；またはＲ１とＲ２は一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ（ＯＲ）、＝Ｎ（Ｒ）−、＝Ｎ（ＮＲ２）、＝Ｃ（Ｒ）２を形成し；
Ｒ３およびＲ５は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、および所望により置換されていてもよいアルキニルより選択されるか；またはＲ３およびＲ５は一緒になって結合を形成し；
Ｒ６およびＲ７は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、および所望により置換されていてもよいアルキニルより選択されるか；またはＲ６およびＲ７は一緒になって結合手を形成し；
Ｒ８およびＲ９は一緒になって結合手を形成し；
Ｒ４は−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキル、所望により置換されていてもよいハロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＳＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）Ｏ］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−ＯＣ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−ＳＯ２］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ１０）ＳＯ２］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｏ］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ）］ｑＲ１０、および−［（Ｗ）−Ｓ］ｑＲ１０より選択され；
ｑは、各々独立して、各場合で、１、２、３、４、５または６であり；
Ｒ１０は、各々独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキルおよび−［Ｃ（Ｒ）２］ｐ−Ｒ１１（ここで、ｐは０−６である）より選択されるか；または同じ置換基上のＲ１０のいずれか２つの場合が一緒になって、窒素、酸素、硫黄およびリンより選択される０−３個のヘテロ原子を含有する、４−８員の所望により置換されていてもよい環を形成し；
各Ｒ１１は、独立して、ヒドロキシル、−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２（Ｒ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−ＣＯＯＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）（Ｒ）、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）、−ＮＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）、および−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）より選択され；
各Ｒは、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいシクロアルキルおよび所望により置換されていてもよいアラルキルより選択され；
Ｒ１２およびＲ１３は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０より選択されるか；またはＲ１２とＲ１３は一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ（ＯＲ）、＝Ｎ（Ｒ）−、＝Ｎ（ＮＲ２）、＝Ｃ（Ｒ）２を形成し；
各Ｗは、各場合について独立して、所望により置換されていてもよいアルキル ジラジカル、所望により置換されていてもよいアルケニルジラジカル、所望により置換されていてもよいアルキニルジラジカル、所望により置換されていてもよいアリールジラジカル、所望により置換されていてもよいシクロアルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいアラルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいヘテロアリールジラジカルおよび所望により置換されていてもよいヘテロアラルキルジラジカルより選択され；
Ｔ１−Ｔ２−Ｔ３はＹ−Ｂ−Ａ１、Ｂ−Ｙ−Ａ１、およびＡ１−Ｂ−Ｙより選択され；ここでＡ１およびＢは、各々、独立して、窒素、硫黄および−Ｃ（Ｒ１４）２−より選択され、Ｙは−Ｏ−、−Ｓ−および−Ｎ（Ｒ１５）−より選択され；
Ｒ１４は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、ハロ、ニトロ、ニトリル,−ＳＲ１０、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｎ（Ｒ１０）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０および−［Ｃ（Ｒ１０）２］ｑ−Ｒ１１より選択されるか；または２個のＲ１４基が一緒になって＝Ｏを形成し；および
Ｒ１５は−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）および−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１１より選択される］
で示される化合物、またはその医薬上許容される塩である。
【００９０】
ある実施態様において：
Ａは：
【化１２】
2012515792.tif 000014
であり；
ｎは０または１であり；
Ｘは結合手または−ＣＨ２−であり；
Ｒ１は−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０および糖より選択され；
Ｒ２は−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、および所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキルより選択されるか；またはＲ１およびＲ２は一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ（ＯＲ）、＝Ｎ（Ｒ）−、＝Ｎ（ＮＲ２）、＝Ｃ（Ｒ）２を形成し；
Ｒ３およびＲ５は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、および所望により置換されていてもよいアルキニルから選択されるか；またはＲ３とＲ５は一緒になって結合手を形成し；
Ｒ６およびＲ７は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、および所望により置換されていてもよいアルキニルより選択されるか；またはＲ６およびＲ７は一緒になって結合手を形成し；
Ｒ８およびＲ９は一緒になって結合手を形成し；
Ｒ４は−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキル、所望により置換されていてもよいハロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＳＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）Ｏ］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−ＯＣ（Ｏ）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−ＳＯ２］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ１０）ＳＯ２］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｏ］ｑＲ１０、−［（Ｗ）−Ｎ（Ｒ）］ｑＲ１０、および−［（Ｗ）−Ｓ］ｑＲ１０より選択され；
ｑは、各々独立して、各場合で、１、２、３、４、５または６であり；
Ｒ１０は、各々独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキルおよび−［Ｃ（Ｒ）２］ｐ−Ｒ１１（ｐは０−６）から選択されるか；または同じ置換基上のＲ１０のいずれか２つの場合が一緒になって、窒素、酸素、硫黄およびリンより選択される０−３個のヘテロ原子を含有する、４−８員の所望により置換されていてもよい環を形成し；
Ｒ１１は、各々独立して、ヒドロキシル、−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２（Ｒ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）（Ｒ）、−ＣＯＯＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）（Ｒ）、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）、−ＮＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）および−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）より選択され；
Ｒは、各々独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいシクロアルキルおよび所望により置換されていてもよいアラルキルより選択され；
Ｒ１２およびＲ１３は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、ニトリル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０より選択されるか；またはＲ１２およびＲ１３が一緒になって＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ（ＯＲ）、＝Ｎ（Ｒ）−、＝Ｎ（ＮＲ２）、＝Ｃ（Ｒ）２を形成し；
Ｗが、各場合で各々独立して、所望により置換されていてもよいアルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいアルケニルジラジカル、所望により置換されていてもよいアルキニルジラジカル、所望により置換されていてもよいアリールジラジカル、所望により置換されていてもよいシクロアルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいアラルキルジラジカル、所望により置換されていてもよいヘテロアリールジラジカルおよび所望により置換されていてもよいヘテロアラルキルジラジカルより選択され；および
Ｔ１−Ｔ２−Ｔ３がＹ−Ｂ−Ａ１、Ｂ−Ｙ−Ａ１およびＡ１−Ｂ−Ｙより選択され；ここでＡ１およびＢは、各々独立して、窒素、硫黄および−Ｃ（Ｒ１４）２−より選択され、Ｙは−Ｏ−、−Ｓ−および−Ｎ（Ｒ１５）−より選択され；
Ｒ１４は、独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、ハロ、ニトロ、ニトリル、＝Ｏ、−ＳＲ１０、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｎ（Ｒ１０）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０および−［Ｃ（Ｒ１０）２］ｑ−Ｒ１１より選択され；および
Ｒ１５は、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキル、ペルハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）および−［Ｃ（Ｒ）２］ｑ−Ｒ１１より選択される。
【００９１】
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は、式Ｉの化合物である。
例えば、特定の実施態様において、Ａは、
【化１３】
2012515792.tif 000015
である。
特定の実施態様において、Ｘは−ＣＨ２−である。
【００９２】
特定の実施態様において、Ｒ１は、−ＯＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）、−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）ＣＯ２Ｒ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０または−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０である。特定の実施態様において、Ｒ１は−ＮＲ１０ＳＯ２Ｒ１０である。
特定の実施態様において、Ｒ２は−Ｈまたは所望により置換されていてもよいアルキルである。特定の実施態様において、Ｒ２は−Ｈである。
【００９３】
特定の実施態様において、Ｒ１およびＲ２は一緒になって＝Ｏを形成する。
特定の実施態様において、Ｒ３およびＲ５は−Ｈであるか、またはＲ３およびＲ５は結合手を形成する。
特定の実施態様において、Ｒ６およびＲ７は−Ｈであるか、またはＲ６およびＲ７は結合手を形成する。
特定の実施態様において、Ｒ１２およびＲ１３は−Ｈである。
【００９４】
特定の実施態様において、Ｒ４は−Ｈ、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール,−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＳＯ２Ｒ１０および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）より選択される。特定の実施態様において、Ｒ４は−Ｈ、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯ２Ｒ１０、−ＳＯ２Ｒ１０および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１０）より選択される。特定の実施態様において、Ｒ４は−Ｈである。
【００９５】
特定の実施態様において、Ｒ１０は、各場合で各々独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアルケニル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアルキニル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいシクロアルキル、所望により置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアラルキルおよび−［Ｃ（Ｒ）２］ｐ−Ｒ１１より選択される。特定の実施態様において、Ｒ１０は、各場合で各々独立して、−Ｈ、所望により置換されていてもよいアルキル、所望により置換されていてもよいアラルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアリールおよび所望により置換されていてもよいヘテロアラルキルより選択される。特定の実施態様において、各Ｒ１０は−Ｈである。特定の実施態様において、各Ｒ１１は−Ｈである。特定の実施態様において、ｎは１である。
【００９６】
特定の実施態様において、式Ｉの化合物は式Ｉ−Ａ：
【化１４】
2012515792.tif 000016
Ｉ−Ａ
で示される構造を有する。
【００９７】
特定の実施態様において、式Ｉの化合物は式Ｉ−Ｂ：
【化１５】
2012515792.tif 000017
Ｉ−Ｂ
で示される構造を有する。
【００９８】
特定の実施態様において、式Ｉの化合物は式Ｉ−Ｃ：
【化１６】
2012515792.tif 000018
Ｉ−Ｃ
で示される構造を有する。
【００９９】
特定の実施態様において、式Ｉの化合物は式Ｉ−Ｄ：
【化１７】
2012515792.tif 000019
Ｉ−Ｄ
で示される構造を有する。
【０１００】
式Ｉの代表的な化合物は、限定されるものではないが、表１で示される化合物またはその医薬上許容される塩を包含する：
【表２】
2012515792.tif 000020
【表３】
2012515792.tif 000021
【表４】
2012515792.tif 000022
【表５】
2012515792.tif 000023
【表６】
2012515792.tif 000024
【表７】
2012515792.tif 000025
【０１０１】
式Ｉの代表的な化合物は、限定されるものではないが、表２で示される化合物またはその医薬上許容される塩を包含する：
【表８】
2012515792.tif 000026
【０１０２】
式Ｉの代表的な化合物は、限定されるものではないが、表３で示される化合物またはその医薬上許容される塩を包含する：
【表９】
2012515792.tif 000027
【表１０】
2012515792.tif 000028
【０１０３】
式ＩＩの代表的な化合物は、限定されるものではないが、表４で示される化合物あるいはその互変異性体および／またはその医薬上許容される塩を包含する：
【表１１】
2012515792.tif 000029
【０１０４】
式ＩＩＩの代表的な化合物は、限定されるものではないが、表５で示される化合物あるいはその互変異性体および／またはその医薬上許容される塩を包含する：
【表１２】
2012515792.tif 000030
【表１３】
2012515792.tif 000031
【０１０５】
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は式Ｉの化合物である。
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は表１で提供される化合物またはその医薬上許容される塩である。
【０１０６】
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は化合物Ｉ−３２：
【化１８】
2012515792.tif 000032
Ｉ−３２
で示されるか、またはその医薬上許容される塩である。特定の実施態様において、化合物Ｉ−３２の医薬上許容される塩は塩酸塩である。
【０１０７】
使用および治療方法
一般に本願明細書にて上記されるように、ヘッジホッグ経路阻害剤を用いて、治療剤または造影剤などの剤の組織へのデリバリーを改善することができる。
【０１０８】
かくして、一の態様において、本願発明は、剤（例、治療剤または造影剤）の組織へのデリバリーを増加させる方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤および該剤の組織への投与を含む、方法を提供する。特定の実施態様において、該方法は、さらには、第２、第３、第４、第５等の剤などの１種または複数の付加的な剤を組織に投与することを含む。
【０１０９】
例えば、特定の実施態様において、本願発明は、ヘッジホッグ経路阻害剤および造影剤を組織に投与し、該造影剤を用いて該組織を造影することを含む、方法を提供する。他の実施態様に置いて、本願発明は、治療剤（例、化学治療剤）の組織（例、腫瘍または癌組織）へのデリバリーを増加させる方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤および治療剤を該組織に投与することを含む、方法を提供する。
【０１１０】
もう一つ別の態様において、組織での組織形態（例、間質密度の減少、血管密度の増加および／または開通性の増加）を改変する方法が提供される。かかる方法はヘッジホッグ経路阻害剤を組織に投与することからなる。特定の実施態様において、該方法はさらには剤（例、治療剤または造影剤）を組織に投与することを含む。
【０１１１】
例えば、特定の実施態様において、本願発明は、ヘッジホッグ経路阻害剤を組織に投与することを含む、該組織における間質密度を減少させる方法を提供する。特定の実施態様において、該方法はさらには、剤（例、治療剤または造影剤）を組織に投与することを含む。間質細胞は、線維芽細胞、免疫細胞、周皮細胞、内皮細胞および炎症細胞、ならびに始原新生細胞より誘導されるものではないが、腫瘍に存在する他の細胞を包含しうる。例えば、特定の実施態様において、間質密度を減少させる方法は、組織中の線維芽細胞（すなわち、線維芽細胞および／または線維細胞）コンテンツを減少させることを含む。特定の実施態様において、該線維芽細胞は腫瘍関連の線維芽細胞である。特定の実施態様において、該線維芽細胞は非腫瘍関連の線維芽細胞である。特定の実施態様において、該線維芽細胞は腫瘍関連の線維芽細胞であり、該剤は化学治療剤である。ある実施態様において、組織中の間質細胞を減少させる方法を用い、ヘッジホッグ経路阻害剤および化学治療剤を投与することで、癌（例えば、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、消化管癌、肺癌または扁平細胞癌）を治療することができる。
【０１１２】
特定の実施態様において、本願発明は、組織における血管密度を増加させる方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤を該組織に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、該方法はさらには、剤（例、治療剤または造影剤）を該組織に投与することを含む。ある実施態様において、組織中の血管密度を増加させる方法を用い、ヘッジホッグ経路阻害剤および化学治療剤を投与することにより、癌（例えば、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、消化管癌、肺癌、または扁平細胞癌）を治療することができる。
【０１１３】
特定の実施態様において、本願発明は、組織における血管開通性を増加させる方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤を該組織に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、該方法はさらには、剤（例、治療剤または造影剤）を該組織に投与することを含む。ある実施態様において、組織における血管開通性を増加させる方法を用い、ヘッジホッグ経路阻害剤および化学治療剤を投与することにより、癌（例えば、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、消化管癌、肺癌または扁平細胞癌）を治療することができる。
【０１１４】
特定の実施態様において、血管密度および／または血管開通性を増加させる方法を用い、例えば、肢、心臓、脳等における虚血（例、頻脈、アテローム性動脈硬化、低血圧、血栓塞栓、塞栓等の結果としての虚血）を治療することができる。血管は、例えば、動脈、細動脈、毛細血管、細静脈および静脈を含む、いずれの型の血管とすることもできる。特定の実施態様において、血管は微小血管である。
【０１１５】
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤を用い、既存の血管より新たな血管の増殖（すなわち、血管新生）を促進することができる。かくして、特定の実施態様において、本願発明は組織における血管新生を促進する方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤を該組織に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、該方法はさらには、剤（例、治療剤または造影剤）を該組織に投与することを含む。
【０１１６】
特定の実施態様において、本願発明は、腫瘍転移を治療（例、程度または頻度の減少）または防止する方法であって、その必要とする哺乳動物に、ヘッジホッグ経路阻害剤および化学治療剤を投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および化学治療剤は同時に投与される。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および化学治療剤は連続して投与される。特定の実施態様において、腫瘍は膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、乳房の腫瘍、繊維形成性小円形細胞腫瘍、結腸腫瘍、卵巣腫瘍、膀胱腫瘍または骨悪性腫瘍である。
【０１１７】
（ａ）投与
本願明細書で用いる場合、「投与」または「投与する」は、１種または複数の成分（すなわち、ヘッジホッグ経路阻害剤、および所望により、第一、第二、第三、第四、第五の剤等）の組織との接触をいう。投与はインビボでの投与（例、経口、非経口、局所、膣内、直腸内、舌下、眼内；経皮、経肺、経鼻的等の、１種または複数の医薬組成物にて提供される１種または複数の成分を哺乳動物に投与すること）、あるいはインビトロでの投与（例、１種または複数の成分を細胞培養体または組織培養体と接触させること）を含む。インビボ投与は、ヘッジホッグ経路阻害剤、および所望により、剤（例、治療剤または造影剤）の哺乳動物（例、ヒト、霊長類、イヌ、ネコまたは齧歯類）への投与を含み、ここで哺乳動物はかかる治療を必要としている。
【０１１８】
ヘッジホッグ阻害剤が剤と組み合わせて投与される特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および該剤は同時に投与されるか、連続して投与されるかのいずれかである。
【０１１９】
連続投与は、第一成分を一定期間にわたって投与し、第一成分の投与を止め、つづいて第二成分を投与することをいう。例えば、連続投与はヘッジホッグ経路阻害剤を投与し、ヘッジホッグ経路阻害剤の投与を止め、つづいて剤を投与することを包含する。連続投与はまた、剤を投与し、該剤の投与を止め、つづいてヘッジホッグ経路阻害剤を投与することを包含する。第一成分の投与を一旦停止し、その第一成分の投与を止めた直後に、第二成分を投与することができ、あるいは第一成分の投与を止めた後、有効期間の経過した後に第二成分を投与することができる。
【０１２０】
同時投与（例、時間的に同時に；「共同投与」）は第一成分および第二成分を同じ期間にわたって投与することをいう。例えば、同時投与は第一成分を一定期間にわたって投与し、ついで第二成分を第一成分と一緒に投与することを包含する。同時投与はまた、第一成分と第二成分を有効期間の間投与し、ついで第一または第二成分のいずれかの投与を止め、残りの成分の投与を持続することを包含する。同時投与はまた、第一成分と第二成分を有効期間の間投与し、ついで第一または第二の両方の成分の投与を停止することを包含する。
【０１２１】
有効期間は第一および／または第二成分の投与より由来の利益を得るための時間とすることができる。
【０１２２】
ヘッジホッグ経路阻害剤が剤と一緒に投与される特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は、哺乳動物に、一日に２回、一日に１回、一週間に１回、一週間に２回または一週間に３回、該剤の投与を開始する約１日前、約３日前、５日前までの間、約１週間、約３週間または約５週間前まで投与される。
【０１２３】
ヘッジホッグ経路阻害剤が剤と一緒に投与される特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は該剤の投与を開始する前に約３日ないし約１０日間、約７日ないし約１４日間、または約１０日ないし約２０日間哺乳動物に投与される。ヘッジホッグ経路阻害剤の投与は、該剤の投与が開始される際に終えることができ、あるいはヘッジホッグ経路阻害剤は該剤と一緒に一定期間同時に投与され得る。特定の場合には、ヘッジホッグ経路阻害剤は約７日間、約１４日間または約２１日間投与される。これらのいずれの時点で、ヘッジホッグ経路阻害剤の投与を止めてもよく、該剤の投与を開始することができる。
【０１２４】
（ｂ）組織
本願明細書で用いる場合、「組織」は、いずれかの型の組織：例えば、虚血組織、腫瘍組織、非腫瘍組織、および／または透過性に乏しい組織をいう。特定の実施態様において、腫瘍組織は低酸素性である。特定の実施態様において、組織はヘッジホッグ経路活性化を示すものとして特徴付けられる。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路活性化はパッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型またはスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる。代表的な組織は、限定されるものではないが、心臓組織、脳組織、結合組織、筋肉組織、神経組織および上皮組織を包含する。結合組織の例として、限定されるものではないが、疎性結合組織、脂肪組織、細網組織、レギュラー組織、イレギュラー組織、弾性組織、ヒアリン組織、線維軟骨組織、弾性組織、骨、血液およびリンパ組織が挙げられる。筋肉組織の例として、限定されるものではないが、骨格筋肉組織、平滑筋組織（例、胃、腸、気管支、子宮、尿道、膀胱、血管および皮膚の壁に見られる平滑筋）ならびに心臓筋肉組織が挙げられる。神経組織の例として、限定されるものではないが、単極ニューロン、双極ニューロン、および多極ニューロンが挙げられる。上皮組織の例として、限定されるものではないが、扁平上皮組織、立方上皮組織、円柱上皮組織および多列上皮組織が挙げられる。ヘッジホッグ経路阻害剤はインビトロまたはインビボにて組織と接触させることができる。 
【０１２５】
治療されるべき組織は腫瘍／癌組織または非癌組織とすることができる。本願明細書に記載の方法を用いて知慮うすることのできる腫瘍組織は、限定されるものではないが、
基底細胞癌、神経外胚葉腫瘍、髄芽細胞腫、膵臓癌、食道癌、胃癌（gastric cancer）、肺癌（例、非小細胞肺癌、小細胞肺癌）、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、精巣癌、前立腺癌、膵臓癌、肝細胞癌、皮膚癌、消化管（ＧＩＳＴ）癌、肺癌、扁平細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、胃癌（stomach cancer）、繊維形成性小円形細胞腫瘍、膀胱癌および骨悪性腫瘍を包含する。特定の実施態様において、癌は膵臓癌である。
【０１２６】
他の実施態様において、腫瘍組織は、異常量の線維形成間質によって特徴付けられるいずれかの癌組織／腫瘍、例、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、消化管癌、肺癌および扁平細胞癌とすることができる。特定の実施態様において、癌は膵臓癌である。
【０１２７】
組織はまた、自発性腫瘍組織を含むこともできる。例えば、特定の実施態様において、本願発明は哺乳動物において自発性腫瘍を治療する方法であって、ヘッジホッグ経路阻害剤および化学治療剤を該哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。
【０１２８】
自発性腫瘍は、自然発生的に、例えば生殖細胞の変異および／または体細胞変異により、生成される腫瘍、あるいは例えば、化学的操作および／または遺伝子操作により人工的に誘発される腫瘍を包含する。特定の場合には、自発性腫瘍は、そのように自然発生的に、または人工的に誘発される、転移癌（例、骨転移）を包含する。自発性腫瘍は異種移植片の腫瘍を包含しない。
【０１２９】
自発性腫瘍組織および／または血管系形態は、エコトロピックな（ecotopic）腫瘍、すなわち、異種移植片の腫瘍のそれとは全く異なり得る。特定の場合には、自発性腫瘍は隆起した無細胞および細胞間質成分により特徴付けられるのに対して、エコトロピックな腫瘍はあまり間質を含有しえない。自発性腫瘍の微小血管系を介する血液の輸送は、エコトロピックな腫瘍ではあり得ない、またはヒト腫瘍の典型的な生理学を反映しない構造にてあり得る、異常構造、間質高流体圧、および毛細血管出血により損傷を受け得る。かかる血管機能の損傷は、治療剤の腫瘍へのデリバリーを減少させうる。かくして、該剤、例、化学治療剤の自発性腫瘍へのデリバリーは、ヘッジホッグ経路阻害剤を共同投与することで改善され得る。特定の実施態様において、自発性腫瘍はヘッジホッグ経路の活性化を示す腫瘍である。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路活性化は、パッチド（Ｐｔｃ）機能喪失表現型およびスムーセンド（Ｓｍｏ）機能獲得表現型からなる群より選択される１または複数の表現型により特徴付けられる。
【０１３０】
（ｃ）治療剤
特定の実施態様において、該方法はヘッジホッグ経路阻害剤および治療剤を組織に投与することを含む。特定の実施態様において、該方法はさらに、第二、第三、第四、第五等の治療剤などの１または複数の付加的な治療剤を含む。ヘッジホッグ経路阻害剤を用いて、組織、例、高濃度組織、癌組織における治療剤の透過性を改善することができる。特定の実施態様において、該組織は上記したように腫瘍組織／癌組織である。特定の実施態様において、腫瘍組織は低酸素性である。特定の実施態様において、該治療剤は癌の治療に有用な剤である。
【０１３１】
例えば、特定の実施態様において、治療剤は放射線である。血管系の回復は腫瘍組織の低酸素状態が軽減される程度にまで灌流を増加させ、そのような場合には、腫瘍は放射線に対して敏感になりうる。本願明細書に記載の方法に有用な放射線は種々の方法で投与されうる。例えば、放射線は実際は電磁気または微粒子であってもよい。本願明細書に記載の方法にて有用な電磁気放射線は、限定されるものではないが、Ｘ−線およびガンマ線を包含する。本願明細書に記載の方法にて有用な微粒子放射線は、限定されるものではないが、電子ビーム、プロトンビーム、ニュートロンビーム、アルファ粒子および陰性パイ中間子を包含する。放射線は慣用的な放射線治療装置および方法を用い、手術中の定位照射方法により送達され得る。本願明細書に記載の方法に用いるのに適する放射線治療に関するさらなる議論が、Leibelら、Textbook of Radiation Oncology、W. B. Saundersら（1998）、およびそのテキストの第１３章および第１４章に見られる。放射線はまた、標的デリバリーなどの他の方法によって、例えば放射性シードにより、あるいは標的放射能コンジュゲートの全身性デリバリーにより、送達されてもよい。
【０１３２】
特定の実施態様において、治療剤は化学治療剤である。化学治療剤は、限定されるものではないが、小分子、抗体、小干渉ＲＮＡ等を包含する。例えば、化学治療剤は、限定されるものではないが、ゲムシタビン、メトトレキサート、タキソール、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソウレア、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルバジン、エトポシド、プレドニゾロン、デキサメタゾン、シタラビン、カムパテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、アスパラギナーゼ、ナイトロジェンマスタード（例、シクロホスファミド、イホスファミド、トロホスファミド、クロラムブシル、エストラムスチンおよびメルファラン）、ニトロソウレア（例、カルムスチン （ＢＣＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ））、アルキルスルホナート（例、ブスルファンおよびトレオスルファン）、トリアゼン（例、ダカルバジンおよびテモゾロミド）、白金含有化合物（例、シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチン）、ビンカ・アルカロイド（例、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、タキソイド（例、パクリタクセル、ドセタキソール、アルブミン結合パクリタクセル）、エピポドフィリン（例、エトポシド、テニポシド、トポテカン、９−アミノカンプトテシン、カンプトイリノテカン、クリスナトールおよびマイトマイシンＣ）、抗−代謝産物、ＤＨＦＲ阻害剤（例、メトトレキサートおよびトリメトレキサート）、ＩＭＰ脱水素酵素阻害剤（例、ミコフェノール酸、チアゾフリン、リバビリンおよびＥＩＣＡＲ）、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤（例、ヒドロキシウレアおよびデフェロキサミン）、ウラシルアナログ（例、フルオロウラシル、フロキシウリジン、ドキシフルリジン、ラルチトレキセドおよびカペシタビン）、シトシンアナログ（例、シタラビン（ａｒａＣ）、シトシンアラビノシドおよびフルダラビン）、プリンアナログ（例、メルカプトプリンおよびチオグアニン）、抗−エストロゲン（例、タモキシフェン、ラロキシフェンおよびメゲストロール）、ＬＨＲＨアゴニスト（例、ゴセレリンおよび酢酸ロイプロリド）および抗アンドロゲン（例、フルタミドおよびビカルタミド）、ビタミンＤ３アナログ（例、ＥＢ１０８９、ＣＢ１０９３およびＫＨ１０６０）、光動力学的治療（例、ベルトポルフィン（ＢＰＤ−ＭＡ）、フタロシアニン、光感作剤Ｐｃ４およびデメトキシ−ヒポクレルリンＡ（２ＢＡ−２−ＤＭＨＡ））、サイトキン（例、インターフェロンα、インターフェロンγおよび腫瘍壊死因子）、イソプレニル化阻害剤（例、ロバスタチン）、ドパミン作動性神経毒（例、１−メチル−４−フェニルピリジニウムイオン）、細胞周期阻害剤（例、スタウロスポリン）、アクチノマイシン（例、アクチノマイシンＤおよびダクチノマイシン）、ブレオマイシン（例、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２およびペプロマイシン）、アントラサイクリン（例、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン���よびミトキサントロン）、ＭＤＲ阻害剤（例、ベラパミル）、Ｃａ２＋ＡＴＰアーゼ阻害剤（例、タプシガルジン）、抗体（例、ＡＶＡＳＴＩＮ（ベバシズマブ）、ＥＲＢＩＴＵＸ（セツキシマブ）、ＲＩＴＵＸＡＮ（リツキシマブ）およびＢＥＸＸＡＲ（トシツモマブ））、コルチコステロイド（例、プレドニロンおよびプレジソン）、イマチニブ、サリドマイド、レナリドミド、ボルテゾミブ、ゲムシタビン、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ソラフェニブ、スチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、ダサチニブ、トラスツズマブ、カペシタビン、アリムタ（ペメトレキセド）、エピルビシン、ボルテゾミブ、フルオロピリミジンアナログ、ヌクレオシドサイチジンアナログ、トポイソメラーゼ阻害剤、抗微小管剤、プロテアソーム阻害剤、ビタミンＤアナログ、アラキドン酸経路阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例、ボリノスタット、バルプロン酸）およびファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（例、チピファルニブ、ロナファルニブ）を包含する。
【０１３３】
特定の実施態様において、化学治療剤はゲムシタビン、カペシタビン、５−フルオロウラシル、フロキシウリジン、ドキシフルリジン、ラルチトレキセド、マイトマイシンＣ、ロイコボリン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ＥＲＢＩＴＵＸ、エルロチニブ、ドセタキセル、ミトキサントロン、エストラムスチン、ドキソルビシン、エトポシド、ビンブラスチン、パクリタクセル、カルボプラチンおよびビノレルビンからなる群より選択される
【０１３４】
特定の実施態様において、化学治療剤はゲムシタビンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はカペシタビンである。
特定の実施態様において、化学治療剤は５−フルオロウラシルである。
特定の実施態様において、化学治療剤はフロキシウリジンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はドキシフルリジンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はラルチトレキセドである。
特定の実施態様において、化学治療剤はマイトマイシンＣである。
特定の実施態様において、化学治療剤はロイコボリンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はシスプラチンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はカルボプラチンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はオキサリプラチンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はＥＲＢＩＴＵＸである。
特定の実施態様において、化学治療剤はエルロチニブである。
特定の実施態様において、化学治療剤はドセタキセルである。
特定の実施態様において、化学治療剤はミトキサントロンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はエストラムスチンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はドキソルビシンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はエトポシドである。
特定の実施態様において、化学治療剤はビンブラスチンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はパクリタクセルである。
特定の実施態様において、化学治療剤はカルボプラチンである。
特定の実施態様において、化学治療剤はビノレルビンである。
【０１３５】
（ｄ）造影剤
特定の実施態様において、該方法はヘッジホッグ経路阻害剤および造影剤を組織に投与することを含む。本願明細書に記載の方法を用いて浸透性に乏しい組織を造影することができる。特定の実施態様において、該組織は本願明細書にて上記した癌組織である。かかる場合には、造影剤は癌組織の治療／分析に有用な剤でありうる。
【０１３６】
ヘッジホッグ経路阻害剤は造影剤の組織へのデリバリーを改変（例、改善）させうる。本願明細書に記載の方法にて有用な造影剤は、限定されるものではないが、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）造影剤、コンピュータ断層撮影（ＣＡＴ）造影剤および陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）造影剤を包含する。
【０１３７】
代表的なＭＲＩ造影剤は、限定されるものではないが、ガドリニウム（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、マンガン（ＩＩＩ）、クロム（ＩＩＩ）、銅（ＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、テルビウム（ＩＶ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）、プラセオジウム（ＩＩＩ）、ユウロピウム（ＩＩ）およびユウロピウム（ＩＩＩ）複合体および微結晶酸化鉄化合物などの常磁性複合体を包含する。
【０１３８】
代表的なＣＡＴ造影剤は、限定されるものではないが、ビスマスおよびバリウム塩、ならびに可溶性または不溶性ヨウ素化有機化合物を包含する。
【０１３９】
代表的なＰＥＴ造影剤は、限定されるものではないが、有機または無機陽電子放出放射性核種を包含する。かかる放射性核種は、Ｃ１１、Ｎ１３、Ｏ１５およびＦ１８を包含する。放射性核種がグルコースに取り込まれる場合（例、２−フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）には、組織中の核種トレーサーの濃度を用いて組織代謝活性をモニター観察することができる。
【０１４０】
診断映像、例えば、造影超音波、Ｘ−線（例、蛍光透視）および光音響映像も用いて、ヘッジホッグ経路阻害剤が組織に対して有する効果を評価してもよい。
【０１４１】
例えば、ヘッジホッグ阻害剤および造影剤（例、ドキソルビシンなどの小分子蛍光性プローブ）を哺乳動物（例、マウス）に一定期間投与した後、問題の組織を収穫し、共焦点顕微鏡法を用いて組織中のドキソルビシンの灌流を可視化しうる。該組織は、所望により、ＣＤ３１抗体で染色されてもよく、それで該組織の全体の血管コンテンツおよびそこにある蛍光性プローブの灌流量が測定されうる。
【０１４２】
第二の例において、造影超音波での映像を用いて組織の血管灌流を評価しうる。したがって、ヘッジホッグ経路阻害剤を哺乳動物に一定期間投与した後、マイクロバブルを該哺乳動物に投与し、造影超音波法を用いてマイクロバブルの組織灌流を測定しうる。
【０１４３】
第三の例において、ヘッジホッグ経路阻害剤および磁気共鳴造影剤（例、ガドリニウム（ＩＩＩ）ジエチレントリアミン五酢酸）を哺乳動物に一定期間共投与した後、動力学的造影磁気共鳴映像法を用いて哺乳動物における目的とする組織または領域を画像化し、組織灌流および溢出を測定することができる。
【０１４４】
第四の例において、ヘッジホッグ経路阻害剤の標的組織の血管密度に対する効果は蛍光により測定され得る。例えば、ヘッジホッグ阻害剤を哺乳動物に一定期間投与した後、リコスペルシコン・エスクレンタン（Lycospersicon esculentun）レクチンを静脈内に注射し、つづいて（組織の血管コンテンツを可視化するのに）哺乳動物より収穫した組織についてＣＤ３１抗体で染色され得る。染色組織は共焦点顕微鏡を用いて観察され、組織形態、例、血管灌流、血管開通性および血管密度の変化が測定され得る。
【０１４５】
第五の例において、組織中の間質密度に対するヘッジホッグ経路阻害剤の効果は、目的の組織を収穫し、染色することで測定され得る。したがって、ヘッジホッグ経路阻害剤を哺乳動物に一定期間投与した後、組織サンプルを収穫し、一または複数の染色剤で染色し、共焦点顕微鏡を用いて観察する。染色剤の例として、限定されるものではないが、ヘマトキシリン染色、エオシン染色、マッソン三重染色またはリリー三重染色が挙げられる。組織の染色断面は、共焦点顕微鏡の下で、約２０倍ないし約２００倍、または約２０倍ないし約１００倍、あるいは約２０倍ないし約６０倍の倍率で観察され得る。
【０１４６】
医薬組成物
ヘッジホッグ経路阻害剤が剤（例、治療剤または造影剤）と一緒に投与される特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および該剤は同じ医薬組成物にて送達されても、違う医薬組成物にて送達されてもよい。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および該剤は同じ医薬組成物にて投与される。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および該剤は違う医薬組成物にて投与される。
【０１４７】
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および該剤は異なる経路で投与される（例えば、一方は経口投与され、他方は静脈内投与される）。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤および該剤は同じ経路を介して投与される（例、共に経口的に、または共に静脈内的に投与される）。
【０１４８】
医薬組成物は、経口投与に適する形態（例えば、ドレンチ、水性または非水性溶液あるいは懸濁液、錠剤、例、頬側、舌下または全身吸収を標的とする錠剤、カプセル剤、ボーラス剤、散剤、顆粒剤、舌に適用するペースト剤）；非経口投与に適する形態（例えば、滅菌溶液または懸濁液、あるいは徐放性処方などの皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外注射による投与）に適する形態；局所塗布に適する形態（例えば、クリーム、軟膏あるいは皮膚に塗布される放出制御性パッチまたはスプレー）；膣内または直腸内投与に適する形態（例えば、ペッサリー、クリームまたはフォーム）；舌下的、経眼的、経皮的、経肺的または経鼻的投与に適する形態などの固体または液体形態にて投与するように処方されてもよい。
【０１４９】
医薬組成物は１種または複数の医薬上許容される担体（添加剤）および／または希釈体で処方されてもよい。医薬組成物に用いることのできる適当な水性または非水性担体の例として、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等など）およびその適当な混合物、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルが挙げられる。例えば、レシチンなどのコーティング剤を用いることで、分散剤の場合に必要な粒径を維持することで、および界面活性剤を用いることで、適度の流動性が維持され得る。
【０１５０】
医薬組成物は保存剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、滑沢剤および／または酸化防止剤などのアジュバントを含有してもよい。微生物の活動の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等を配合することで確保され得る。糖、塩化ナトリウム等の等張剤を組成物に配合することも望ましい。加えて、注射可能な医薬形態の長期にわたる吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる添加剤を配合することでもたらされうる。
【０１５１】
これら処方の製法は、医薬組成物の１種または複数の成分（すなわち、ヘッジホッグ経路阻害剤および／または剤）を、医薬上許容される担体（添加剤）、希釈剤および／またはアジュバントと組み合わせる工程を含む。一般に、処方は１種または複数の成分を液体担体と、または微細化固体担体と、あるいはその両方と、均一かつ密接に組み合わせ、ついで必要ならば、生成物を成形することで調製され得る。
【０１５２】
処方が哺乳動物に投与される場合、処方それ自体を服用することができ、あるいは、例えば、約０.１ないし９９％、約１０ないし５０％、約１０ないし４０％、約１０ないし３０％、約１０ないし２０％、または約１０ないし１５％の１種または複数の成分を医薬上許容される担体と組み合わせて含有する医薬組成物として投与され得る。
【０１５３】
医薬組成物中の１種または複数の成分の実際の用量レベルは、患者にとって毒性ではなく、個々の哺乳動物、組成物および投与経路について所望の治療的応答を達成するのに効果的である、一定量の成分を得るために変えられもよい。
【０１５４】
選択される用量レベルは、使用される個々の成分、投与経路、投与回数、使用されている個々の成分の排出または代謝の速度、吸収の速度および程度、治療期間、使用される個々の成分と組み合わせて用いられる他の薬物、他の化合物および／または材料、治療される哺乳動物の年齢、性別、体重、状態、総体的な健康、これまでの病歴ならびに医薬の分野にて周知の同様の因子に依存するであろう。
【０１５５】
一般に、一の成分の一日の適量は、治療的作用を得るのに効果的な最低の用量である。このような効果的な量は、一般に、本願明細書に記載の因子に依存するであろう。
【０１５６】
ヘッジホッグ阻害剤が剤（化学治療剤または放射線など）と組み合わせて投与される場合、各成分の日用量は単一剤療法での対応する用量よりも少ない量である。
【０１５７】
成分（例、ヘッジホッグ経路阻害剤および／または剤）の用量は、例えば、約０.０００１ｍｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／ｋｇ、約０.００１ｍｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／ｋｇ、約０.０１ ｍｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／ｋｇ、約０.１ｍｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇないし約５０ｍｇ／ｋｇ、約０.０００１ｍｇ／ｋｇないし約５００ｍｇ／ｋｇ、約０.００１ｍｇ／ｋｇないし約５００ｍｇ／ｋｇ、約０.０１ｍｇ／ｋｇないし約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０.１ｍｇ／ｋｇないし約５００ｍｇ／ｋｇの範囲とすることができる。
【０１５８】
投与経路および正確な投与量の決定は、十分に、顧問医の知識の範囲内にある。例えば、これらの用量は毎日、一日おき、周に三回、周に二回、毎週、または隔週毎に投与され得る。投与計画は「休薬期間」を含めることができ、すなわち、組成物を２週間投与して１週間休み、３週間投与して１週間休み、３週間投与して１週間休み、または４週間投与して１週間休む等、あるいは休薬期間を設けずに連続して投与しうる。組成物は経口的、静脈内、腹腔内、局所的、経皮的、筋肉内、皮下的、鼻内、舌下または他の公知経路により投与され得る。
【０１５９】
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は約１００ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は約７５ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤約５０ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は約４０ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は約４０ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。
【０１６０】
特定の実施態様において、剤（例、化学治療剤）は約５００ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。特定の実施態様において、剤は約４００ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。特定の実施態様において、剤は約３００ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。特定の実施態様において、剤は約２００ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。特定の実施態様において、剤は約１００ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。特定の実施態様において、剤は約１００ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される。 
【０１６１】
特定の実施態様において、ヘッジホッグ経路阻害剤は約１００ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与され、剤は約５００ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満の量で投与される。
【０１６２】
本願発明はこれまで包括的に記載されており、以下の実施例を参考にすることでより容易に理解されるであろう。該実施例は本願発明の特定の態様および実施形態を説明する目的で記載されているに過ぎず、何ら発明を限定することを意図とするものではない。
【０１６３】
実施例
膵管腺癌（ＰＤＡ）は広範な抗腫瘍剤に対して全く非感受的である。このＰＤＡの特徴の理解は適当な動物実験がなされていないため限定されてきた。伝統的な生着実験とは異なり、本願発明者らはＰＤＡを正確にマウス実験に付すことで、ＰＤＡが化学治療剤であるゲムシタビンに対して優勢的に難治性であることを見出した。本願発明者らは非効率的な薬物デリバリーをこの実験における化学耐性の機構と関連付け、このことを、ヒトＰＤＡと共有される、血管密度の減少および乏しい腫瘍内灌流、特徴と相関付けた。腫瘍内血管密度およびゲムシタビンのデリバリーは、ヘッジホッグ経路阻害剤、化合物Ａでの治療後に増加し、一時的な疾患の安定化および生存の有意な拡張と相関関係にあった。
【０１６４】
【化１９】
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化合物Ａ
【０１６５】
ヒト悪性腫瘍のうち最も難治性のものが膵管腺癌である。数十年に及ぶ努力が多くの化学治療方法の失敗を物語っており、近年の標準治療剤、ゲムシタビン（Gemzar、Eli Lilly）は２、３週間の生存期間の延長をもたらすにすぎない。最近、腫瘍薬の開発は、主に、新規な剤の効能試験について異種移植片などの腫瘍移植実験に依存している。しかしながら、存在する実験は、典型的には、ゲムシタビンを含む多くの化学治療剤に完全に応答するものである。
【０１６６】
癌の遺伝子操作されたマウス（ＧＥＭ）モデルは、臨床前の治療効果評価のための移植モデルに代わるものである。ＫＰＣマウスは、膵臓細胞にて、他の膵臓癌のＧＥＭモデルと比べて、ヒト疾患の病態生理学的および分子態様を最もよく真似る局所性腫瘍をもたらす、内因性変異体Krasおよびp53アレレを条件付きで発現するように設計されている。本願発明者らは、これら腫瘍の治療応答における行動を評価し、さらにこのモデルにおける化学耐性の作用機序を研究しようとした。
【０１６７】
臨床前の薬物開発におけるＰＤＡのＧＥＭモデルの有用性を評価するのに、自然発生の膵臓腫瘍を宿しているＫＰＣマウスをゲムシタビンで処置し、高解像度超音波検査によりモニター観察した。これら腫瘍の応答を移植モデルの３種の例と比較した（方法、図１Ａ−１Ｆおよび図１１を参照のこと）。ゲムシタビン治療は、ヒトまたはマウスの起源に関わりなく、移植されたすべての腫瘍にて実質的な腫瘍増殖の阻害をもたらした（図１Ａ）。それとは異なり、大部分のＫＰＣ膵臓腫瘍（Ｎ＝１５／１７）の増殖は、対照の処理マウスの増殖と同じようであった（図１Ｄおよび図１１）。ゲムシタビンは薬物投与のすぐ後に移植およびＫＰＣ腫瘍の両方にて増殖指標の減少を惹起したが、この効果はＫＰＣマウスでは移植モデルほども明らかではなく、２種のＫＰＣマウスを区別せず、目的とする超音波応答を示した（図１Ｂおよび１Ｅ）。むしろ、細胞アポトーシスはこれら２種の腫瘍にて実質的に増加しており、その一方で残りの他のＫＰＣまたは移植された腫瘍においては処置により影響されなかった（図１Ｃおよび１Ｆ）。したがって、移植された腫瘍モデルは、ゲムシタビンに対して常に感受的であり、同じ治療計画では、大部分のＫＰＣマウスにおける腫瘍増殖に影響を及ぼさない。この結果は、ほんの５−１０％の患者が一次腫瘍部位で目的とする放射線写真応答を示すに過ぎない、この剤で観察される臨床活性の結果と一致するものである（Temperoら、J. Clin. Oncol. （2003） 21：3402）。
【０１６８】
本発明者らは、ＫＰＣ腫瘍より由来の低継代の細胞の移植が、ゲムシタビン処置に対して感受的であるにも拘わらず、皮下腫瘍をもたらし、細胞の固有の違いがその異なる感受性を説明しないことを示唆することに注目した。したがって、本発明者らは、ＨＰＬＣにより、ゲムシタビン、（２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン、ｄＦｄＣ）およびその活性な細胞内代謝産物、ゲムシタビントリリン酸塩、（２’，２’−ジフルオロデオキシシチジントリリン酸塩、ｄＦｄＣＴＰ）への薬理学的照射を評価した。臨床実験と同様に、ゲムシタビンはその不活性な代謝産物、ジフルオロデオキシウレイド（ｄＦｄＵ）に迅速に脱アミノ化され、それにより循環血液中でのゲムシタビンの半減期は短くなる（図５Ａおよび５Ｂ）。白血病被検査物におけるゲムシタビン代謝産物を評価するのに開発された方法を用いた場合、ｄＦｄＣＴＰは移植された腫瘍組織および対照組織には存在したが、ＫＰＣ腫瘍にて不在であった（図１１）。したがって、膵臓腫瘍組織におけるｄＦｄＣＴＰアキュムレーションはＰＤＡの移植およびＫＰＣモデルを区別し、ゲムシタビンの応答性と相関した。
【０１６９】
ゲムシタビン感受性は、以前は、受動拡散ヌクレオシド１型（ｈＥＮＴ１）、デオキシシチジンキナーゼ（ｄＣＫ）およびリボヌクレオチドレダクターゼサブユニットＭ２（ＲＲＭ２）の発現の違いに寄与していたため、これらおよび関連する遺伝子のネズミ相同体の発現が移植およびＫＰＣ膵臓腫瘍にてリアルタイムＰＣＲにより研究された（図５Ｃおよび５Ｄ）。ＫＰＣ腫瘍と比べて移植腫瘍にて、ｄＦｄＣのモノリン酸化に関与する主要なキナーゼである、ｄＣＫについての発現の増加は注目に値した（Ｐ＝.０３、Mann-Whitney U検定）。しかしながら、ＲＲＭ２、ゲムシタビン耐性をプロモートする遺伝子もまた、移植腫瘍にて多くなった（Ｐ＝.０３、Mann-Whitney U検定）。これらの傾向はゲムシタビンで処置されたマウスより由来の腫瘍ではそれほど明らかではなく、このことはゲムシタビン耐性がこれら遺伝子の発現と相関しないことを示す（図５Ｄ）。
【０１７０】
薬物デリバリーにおける一般異常が移植およびＫＰＣ膵臓腫瘍におけるゲムシタビンの異なったアキュムレーションに寄与しうるかどうかを研究するために、各モデルにて、腫瘍組織の灌流が複数の方法により特徴付けられた。第一に、機能的血管系を麻酔処理した動物でのトマトレクチンの静脈内注入により各モデル系にて明瞭にし、つづいて収穫した組織中の血管をＣＤ３１抗体で共免疫蛍光検出に付した。この方法を用いた場合、皮下腫瘍は明確な血管系を示したのに対して、ＫＰＣ腫瘍は機能的血管系に乏しかった（図２Ａおよび２Ｂ）。実際に、移植された腫瘍では７８％がレクチンで標識化され、正常な膵臓組織では均一に標識化されたのに比べて、ＫＰＣ腫瘍のＣＤ３１＋血管ではわずか３２％に過ぎなかった（図６Ａ）。第二に、小分子の血管内デリバリーおよび薬物の組織への浸透が、一般に、ＫＰＣ腫瘍にて妨げられるかどうかを評価するために、蛍光化学治療性ドキソルビシンをレクチンと一緒に静脈内に共投与した（図２Ｃ−２Ｄおよび図６Ｂ−６Ｆ）。共焦点顕微鏡法は、ドキソルビシンの、対照組織および移植された腫瘍へのデリバリーと比較して、ＫＰＣ膵臓腫瘍には著しい減少を示し、これにより高分子蛋白および小型化合物の両方が短期間にわたって非効率的に輸送されていることを確認した。第三に、造影超音波での非侵襲性映像を用いて、ＫＰＣ腫瘍と比べて、移植された腫瘍のより効果的な灌流を明瞭に示す、５μｍの微小気泡の腫瘍への血管デリバリーを評価した（図２Ｅおよび２Ｆ）。最後に、ガドリニウム−ジエチルトリアミン五酢酸（Ｇｄ−ＤＴＰＡ）を動的造影強化磁気共鳴画像により評価した（ＤＣＥ−ＭＲＩ、図２Ｇおよび２Ｈ）。本発明者らは移植された腫瘍の末梢にて顕著な強化を観察したのに対して、コアにおいては組織構造により観察される広範囲に及ぶ壊死と一致する可変的な異種の強化パターンを示した。それに対して、Ｇｄ−ＤＴＰＡの迅速かつ効果的なデリバリーはＫＰＣ腫瘍を取り巻く組織に対して顕著であり、腫瘍内ではほとんどまたは全く強化されなかった。概して、これらの４つの方法は、移植された腫瘍と比べて、小および大分子のＫＰＣ膵臓腫瘍へのデリバリーは乏しく、ＫＰＣ腫瘍にてｄＦｄＣＴＰを選択的に蓄積することの低さを説明する。
【０１７１】
組織灌流が乏しい原因を研究するために、血管コンテンツおよび組織構造を移植された腫瘍およびＫＰＣ腫瘍にて特徴付けた。本願発明者らの前の機能的観察と一致して、移植された腫瘍は、その腫瘍周辺にて大きな血管の高密度帯、および腫瘍実質の生存可能な部分にて新生細胞と並置したレース状の細血管網を含む（図３Ａおよび３Ｂ）。反対に、ＫＰＣ腫瘍実質内では、血管密度は著しく減少している；これらの血管は、これらの腫瘍の、および主要なヒト膵管腺癌の特徴である、隆起した間質マトリックスに埋め込まれることが多い（図３Ｃ−３Ｄおよび図７Ａ−７Ｄ）。ＫＰＣ腫瘍の大部分は前浸潤膵臓癌域または小および大血管で密に血管形成されている炎症域で囲まれ、このことはＤＣＥ−ＭＲＩおよび造影超音波によるＫＰＣ腫瘍を取り囲む強化の観察と一致した（図２Ｆおよび２Ｈ）。興味深いことに、平均血管密度（ＭＶＤ）は、ＫＰＣ腫瘍の侵襲領域と比べて、皮下および同所移植された腫瘍の両方でずっと高いことが判明し（図３Ｇ）、このことは灌流および移植された腫瘍へのゲムシタビンのデリバリーの増加と相関した。この結果の臨床的関連性を測定するために、本願発明者らはヒト主要ＰＤＡ被検査物の集合体でのＭＶＤを評価し、再び、隣接する正常な膵臓組織と比べて、明白な癌腫の領域にて血管コンテンツが大きく減少することが判明した（図３Ｇ、図８Ａ−８Ｆ）。これらの結果は１８のヒトＰＤＡ被検査物のより大きな独立した群にまで広げられ、正常な膵臓組織および慢性膵炎（ＣＰ）サンプルと比較した。隣接する膵臓組織のびまん性浸潤により惹起される効果の混乱を回避するために、画像分析アルゴリズムを利用し、サンプルの末梢および中心領域の両方でＭＶＤを評価した（図３Ｈ）。この方法は、膵臓腫瘍のコア領域がＣＰおよび正常な膵臓組織と比較して極端に低血管性であることを確認した（Ｐ<０.０００１、Mann-Whitney U検定）。
【０１７２】
最後に、ＫＰＣおよびヒト膵臓腫瘍にて、腫瘍内血管を腫瘍細胞より隔てる距離を測定し、移植された腫瘍と比較した（図３Ｉ）。移植された腫瘍中の血管と腫瘍細胞の間の平均的な隔たりはごく僅かであったのに対して、ＫＰＣ（１１.９μｍ±４.６  ＳＥＭ）およびヒト（４１.８μｍ±４.６  ＳＥＭ）膵臓癌サンプルにてその隔たりが著しく増加した。これらの知見を拡張するために、本願発明者らは、細胞毒性および放射線写真応答を示すＫＰＣマウスからの２種の膵臓腫瘍を試験した。実際、これらの腫瘍は、ゲムシタビン耐性のＫＰＣ腫瘍の平均値と比べて、間質をほとんど含まず、ずっと高いＭＶＤ（５７および１７１）を含有し、血管と腫瘍細胞の間の距離（０.４および１.２μｍ）は短かった（図７Ｅおよび７Ｆ）。
【０１７３】
これらの観察に基づいて、本願発明者らは、膵臓腫瘍の間質を分離することで血管のネットワークが改変され、それにより化学治療剤のより効率的なデリバリーが可能となると推論した。最近では、Yauchらは、ヘッジホッグ（Ｈｈ）経路が腫瘍における傍分泌シグナル伝達ネットワークに関与し、この経路の、具体的には間質細胞における経路の、遺伝的および薬理的阻害が移植された癌腫細胞系の増殖を限定することを見出したと明らかにした（Yauchら、Nature （2008） 455：406）。さらには、Ｈｈ経路が直接的にソニックヘッジホッグ（Ｓｈｈ）リガンドの分泌を介して膵臓移植モデルにおける線維形成を刺激することが明らかにされた（Bailyら、Clin. Cancer Res. （2008） 14：5995）。ソニックヘッジホッグ（Ｓｈｈ）がヒトおよびＫＰＣ膵臓細胞の両方の腫瘍細胞にて過剰発現された場合、本発明者らはゲムシタビン処置と組み合わせたＫＰＣ腫瘍に対するＨｈ経路阻害の効果を評価した。
【０１７４】
ＫＰＣマウスのＨｈ経路を阻害するのに、本願発明者らはヘッジホッグ経路阻害剤の化合物Ａを利用した。化合物ＡのＫＰＣマウスへの経口投与は薬物のＰＤＡ組織における測定可能な蓄積（図４Ａ）およびＨｈ経路の転写標的である、Ｇｌｉ１の発現の顕著な減少（Ｐ＜０.０００１、Mann-Whitney U検定）（図４Ｂ）をもたらした。化合物Ａまたはゲムシタビンを単独で、または組み合わせて（化合物Ａ／ｇｅｍ）で処置した８−１２日後に、ＫＰＣマウスにて腫瘍構造および灌流についての効果を検討した。ビヒクルおよびゲムシタビン処置の腫瘍は大部分の腫瘍で高密度の間質マトリックスを宿し、優勢的に十分に分化されている導管上皮表現型を示した（図９Ａおよび９Ｂ）。反対に、化合物Ａ単独で処置された腫瘍および化合物Ａ／ｇｅｍで処置された腫瘍は劇的に改変された組織学的パターンを示した（図９Ｃおよび９Ｄ）。特に、化合物Ａ／ｇｅｍ処置の腫瘍は線維形成間質を枯渇させ、その結果として、管腫瘍細胞が高密度で充填されたようであった。極端な核および細胞異型の領域は一般に注目されており、より未分化の外観に、特に化合物Ａ／ｇｅｍで処置された外観に至る。最後に、実質的な治療応答の指標である、広域に及ぶキャビテーティング壊死が化合物Ａ／ｇｅｍ処置のマウスから由来の腫瘍にて頻繁に観察された。
【０１７５】
化合物Ａはまた腫瘍血管系にて大きな効果を有し、化合物Ａ処置のマウスから由来の腫瘍にてより高いＭＶＤが観察された（図４Ｃ）。この効果は化合物Ａ／ｇｅｍ処置のマウスにてより顕著でさえあり、そのＭＶＤは正常な膵臓組織のＭＶＤと近かった。さらには、化合物Ａおよび化合物Ａ／ｇｅｍ処置のマウスからの腫瘍内血管は、対照およびゲムシタビン処置の被検査物と比べて、腫瘍細胞に近接する位置にあった（図９Ｅ−９Ｈ）。最後に、本願発明者らは化合物Ａ処置のマウスで観察されるＭＶＤの増加がドキソルビシンの腫瘍組織へのより効果的なデリバリーと相関していると決定した。特に、ドキソルビシンの化合物Ａ／ｇｅｍ処置の腫瘍へのデリバリーはゲムシタビン単独で処置された腫瘍に比べて顕著に高く、この傾向は化合物Ａだけで処置されたマウスにてより一定していないが、明らかであった（図４Ｄおよび図９Ｉ−９Ｌ）。ＭＶＤの増加もまた、腫瘍がヘッジホッグ経路阻害剤、ＮＫ−４１０１で処置された場合に観察され（以下の実施例Ａおよび図１３を参照のこと）、該効果が他のヘッジホッグ経路阻害剤で再現され得ることを示す。
【０１７６】
本願発明者らは、化合物Ａで処置した後にドキソルビシンのデリバリーが改善されるならば、ゲムシタビンのデリバリーも同様に改善されるかどうかを追求した。本願発明者らは１９Ｆ  ＮＭＲ法を開発し、組織中のゲムシタビンより由来のフッ素化代謝産物をすべて測定し、ＫＰＣ腫瘍中のゲムシタビン代謝産物のコンテンツが他の正常な組織の約３分の一しかないことが判明した（図４Ｅ）。ＫＰＣマウスを化合物Ａ／ｇｅｍを用いて１０日間処置し、その結果、非処置の腫瘍と比べてゲムシタビンのデリバリーが６０％増加した（図４Ｅ、Ｐ＝０.０４、Mann-Whitney U検定）。化合物Ａだけで処置した腫瘍においては何ら違いは観察されず、それはおそらく、化合物Ａ単独の場合と比べて化合物Ａ／ｇｅｍ処置のマウスにおける血管系の増加が反映したものであろう。
【０１７７】
化合物ＡがゲムシタビンのＰＤＡへのデリバリーを促進することを確立し、本願発明者らは、処置の８−１２日後に、化合物Ａ／ｇｅｍの増殖およびアポトーシスについての効果を調べた。ゲムシタビン単独の場合と同様に、化合物Ａ／ｇｅｍの処置は増殖の顕著な減少をもたらした（図４Ｆ）。反対に、化合物Ａ単独では細胞増殖について感知できる効果はほとんどなく、ヒトＰＤＡ細胞が一次繊毛（Ｓｍｏ活性の部位）を欠き（Seeleyら、Cancer Res （2009） 69：422）、膵臓細胞における条件付きのＳｍｏ欠失が変異体Kras誘発の前侵襲および侵襲ＰＤＡの進行を改変しないとの最近の所見とも合致する（Nolan-Stevauxら、Genes Dev （2009） 23：24）。興味深いことに、化合物Ａ／ｇｅｍで処置された腫瘍の半分は高レベルのCleaved Caspase 3を有した。アポトーシスの平均量はその群の間で統計学的に有意ではないが（１４.２対４８.０、Ｐ＝０.１７）、該傾向は、低アポトーシスの腫瘍のいくつかが組織構造により壊死の実質的な指標を有するため、アポトーシスの開始のタイミングにおいてある程度の不均質性を反映しているかもしれない。
【０１７８】
最後に、本願発明者らは、腫瘍担持のＫＰＣマウスの群を処置し、生存をモニターした。ゲムシタビンまたは化合物Ａ処置のいずれもＫＰＣマウスの生存に対して効果を有しなかった。反対に、化合物Ａ／ｇｅｍでのコンビネーション処置は、ＫＰＣマウスの平均生存率を２倍以上有意に伸ばし（Ｐ＝０.００１、Log Rank Test）、６.３６の危険率がもたらされた（図４Ｈ）。その上、化合物Ａ／ｇｅｍ処置は肝臓への転移の有意な減少をもたらした（図４Ｉ、Ｐ＝.０１５、Fisher’s Exact）。個々の腫瘍の体積を分析し、化合物Ａ／ｇｅｍ−処置の腫瘍の大部分は、処置の１ないし２週間後に大きさの一時的な減少を示すことが分かった（図１０Ａ−１０Ｃ）。反対に、ゲムシタビン（２／１０）および化合物Ａ（２／１０）処置のマウスの少数のみが処置に対して目的とする超音波検査応答を示した。要約すれば、ＫＰＣマウスの化合物Ａ／ｇｅｍ処置はゲムシタビンのＰＤＡ腫瘍組織へのデリバリーを増加させ、寿命を有意に伸ばし、転移の心配を軽減させる。
【０１７９】
方法
多種の異なる型のマウスモデルが本願明細書に記載されている。そこで明確にするために、これらモデルの用語を以下に定義する。 
【０１８０】
遺伝子操作されたマウス（ＧＥＭ）−外部ＤＮＡ分子の遺伝子移植を介するか、または胚幹細胞の相同的組換えに従うかのいずれかでマウスゲノムを操作することに基づくモデルをいう；
移植モデル−腫瘍細胞または腫瘍フラグメントがマウスに移植されているすべてのマウスモデルをいう；
異種移植片−ヒト腫瘍細胞または腫瘍フラグメントが免疫不全マウスに移植されているモデルをいう；
同系自家移植片−ネズミ腫瘍細胞または腫瘍フラグメントが組織適合の免疫適応性マウスに移植されているモデルをいう；
異所性−移植材料が誘導される部位とは異なるものとして移植部位を記載する用語をいう；
皮下（ＳＣ）−異所移植片の位置が皮膚の下にあるものとして記載する；
同所性−移植材料が誘導される部位、この場合には膵臓と類似するものとして移植部位を記載する用語をいう。
【０１８１】
（ｉ）統計分析
統計分析をWindows（登録商標）使用のGraphPad Prism version 5.00、GraphPad Software、San Diego California USAを用いて行った。Cleaved Caspase 3によるレスポンダーの違いをExtreme Studentized Deviate異常値分析を用いて測定した。転移データの有意性をFischer’s Exact検定により測定した。他のすべての比較はMann-Whitney U検定を用いて行った。ボックスプロットは範囲、メディアンおよび四分位数を示す。
【０１８２】
（ｉｉ）細胞系
ヒト膵臓癌細胞系ＡｓＰｃ１を仕様書に従って培養した。マウス膵臓癌細胞系Ｋ８４８４、Ｋ８６７５およびＤＴ８０８２をSchreiberら、Gastroenterology（20004）127：250に記載のプロトコルの変形を用いてＫＰＣマウスに生じる腫瘍より単離した。簡単には、３ｍｍ３のＰＤＡのフラグメントを摘出し、１０ｍＬの冷ＰＢＳで洗浄し、ついで滅菌した刃で細かくダイスカットした。１０ｍＬのコラゲナーゼ溶液中、３７℃で３０−４５分間攪拌しながら細胞をインキュベートした（ＤＭＥＭ／Ｆ１２中１ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼＶ）。細胞を攪拌し（１００ｒｐｍ、５分間）、０.０５％トリプシン／ＥＤＴＡに５分間、３７℃で再び懸濁させ、ついで１０％ウシ胎児血清および９６μＭ  ＣａＣｌ２を捕捉したＤＭＥＭでクエンチさせた。細胞をＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で３回洗浄し、６−ウェルのBiocoat皿（Becton Dickenson）の導管細胞培地にてプレート培養した。３−４回継代した後、細胞を標準のプラスチック組織培養皿に移しＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ中で培養させた。
【０１８３】
（ｉｉｉ）皮下および同所性腫瘍モデル
１００μＬのＰＢＳに懸濁させた１ｘ１０６細胞をヌードマウス（異種移植片）の脇腹に、または免疫応答性マウス（同系移植片）に皮下注入した。同系移植モデル場合、被験体マウスはＫＰＣ  ＰＤＡ細胞系を生成するために用いられるマウスの子孫であった。MiaPaca2を含む同所性腫瘍を以前に記載されるように生成した（Niedergethmannら、Br J Cancer 97、1432 （Nov 19、2007））。 各腫瘍の長軸（Ｌ）および短軸（Ｌ）をキャリパー（皮下腫瘍用）または超音波（同所性腫瘍用）で測定した。腫瘍の体積（Ｖ）を計算した：Ｖ＝（ＬｘＳ２）／２。腫瘍の体積を皮下腫瘍のための薬物処置の開始の際の体積に関して正規化した。同所性腫瘍は細胞を注射した７日および２０日目に測定し、ゲムシタビン処置を８日目に開始した。腫瘍画像を小児用超音波装置を用いて得た。この装置は３Ｄ再構成手段を備えておらず、同じ式：Ｖ＝（ＬｘＳ２）／２を用いて腫瘍の体積および変化を測定した。マウスをＱ３Ｄｘ４投与計画で腹腔内注射することでゲムシタビンで処置した。必要ならば、薬理学的分析の剖検に付す最終日の４時間前に５倍用量を投与した。
【０１８４】
（ｉｖ）ＫＰＣマウス
ＫＰＣマウスはＫｒａｓおよびｐ５３の異型接合の条件付き変異体のアレレ、ならびに膵臓特異的Ｃｒｅリコンビナーゼ、Ｐｄｘ１−Ｃｒｅを宿す。Ｋｒａｓ、ｐ５３およびＣｒｅアレレを有するマウスは、残りの野生型Ｔｒｐ５３アレレの喪失を確率的に経験し、明確な侵襲および転移性ＤＮＡがもたらされ、生存期間が平均４．５ヶ月である、全領域の前癌性腫瘍を発達させる。本願発明において利用されるＫＰＣマウスは２種の条件付き点変異体ｐ５３アレレ：ｐ５３ＬＳＬ−Ｒ１７２Ｈまたはｐ５３ＬＳＬ−Ｒ２７０Ｈの一つを宿す。ＫｒａｓＬＳＬ−Ｇ１２Ｄ／＋、ｐ５３Ｒ１７２Ｈ／＋、Ｐｄｘ１−Ｃｒｅマウスは以前に報告されているが、後者のアレレ、ＫｒａｓＬＳＬ−Ｇ１２Ｄ／＋、Ｔｒｐ５３ＬＳＬ−Ｒ２７０Ｈ／＋、Ｐｄｘ１−Ｃｒｅを有する変異マウスは今までに報告されていない。これらのマウスは、Ｔｒｐ５３Ｒ１７２Ｈアレレを宿すマウスと明らかに類似する進行性膵臓導管腺癌を発達させる。
【０１８５】
（ｖ）薬物調製
ゲムシタビン（GemzarＴＭ、Eli Lilly）粉末（ジフルオロデオキシシタジン、ｄＦｄＣの約４８％製剤）を購入し（Hannas、Delaware）、滅菌生理食塩水に５ｍｇ／ｍｌのｄＦｄＣで再び懸濁させた。付加的なGemzar溶液をAddenbrooke’s Hospital Pharmacy（Cambridge、UK）より入手し、生理食塩水で５ｍｇ／ｍＬのｄＦｄＣに希釈した。指示用量の薬物を腹腔内注射により投与した。
【０１８６】
化合物Ａを５％ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストラン（ＨＰＢＣＤ）水溶液に超音波処置および攪拌しながら５ｍｇ／ｍＬの濃度（バッチ処置能を占める濃度）まで溶かし、ついで２２μＭのMillex GVシリンジフィルターを介して滅菌濾過した。標準溶液を１週間にわたって４℃で貯蔵した。
【０１８７】
（ｖｉ）薬物実験処置群
図１−３について、マウスをセイライン（２０μＬ／ｇの０.８５％  ＮａＣｌ）または５０もしくは１００ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを含有するセイラインのいずれかで処置した。図４について、次の４種の処置群を種々の時点で記載した：
ビヒクル：２０μＬ／ｇの０.８５％  ＮａＣｌ＋８μＬ／ｇの５％  ＨＰＢＣＤ；
ゲムシタビン：１００ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン＋８μＬ／ｇの５％  ＨＰＢＣＤ；
化合物Ａ：４０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋２０μＬ／ｇの０.８５％  ＮａＣｌ；
化合物Ａ／ｇｅｍ：４０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋１００ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン。
【０１８８】
生存実験について、超音波により５−１０ｍｍ径の腫瘍を検出したマウスを該実験に参加させた。腫瘍を終点まで週に２回３Ｄ超音波で定量した。
【０１８９】
（ｖｉｉ）ＫＰＣ膵臓腫瘍の画像化および定量化
正常および疾患のあるマウスの膵臓を35MHz RMVスキャンヘッドを備えたVevo 770（Visual Sonics, Inc.）を用いて高分解能超音波（ＵＳ）映像に付した。３Ｄモーターアームを用いて３Ｄ映像を作り、腫瘍の厚みを通して、０．２５ｍｍの間隔で連続映像を集めた。腫瘍を各２Ｄ画像のアウトラインを描き、再構成し、積分Vevo770ソフトウェアパッケージを用いてその３Ｄ体積を定量した。
【０１９０】
（ｖｉｉｉ）造影超音波処置
マウスを以前に記載されるように超音波で画像化に付した（Cookら、Methods Enzymol. （2008） 439：73）。ベースライン画像をContrast Modeで撮り、ついで８０μＬのボーラスのコンジュゲートされていないVivo Micromarker懸濁液（Visual Sonics, Inc.）を第２の画像ビデオを撮る間に尾静脈カテーテルを通して投与した。ベースライン画像をコントラスト画像より除去し、その違いをコントラストを８０にセットし、スレスホルドを０にセットして表示した。
【０１９１】
（ｉｘ）ＭＲＩ
磁気共鳴映像実験を、口径が２１０ｍｍで９．４Ｔの水平式ボアの極低温冷却型超電導磁石を備えた、Varian MRIシステム（Varian, Inc、Palo Alto、CA、USA）において、４０Ｇ／ｃｍの勾配度、１２０μｓｅｃの立ち上がり時間、および内径１２０ｍｍの条件にて行った。使用した造影プローブは内径が４０ｍｍのVarian Millipedeであった。マウスはHypnorm／Hypnovelで麻酔処理を施された。解剖学的画像が、化学シフト選択的脂肪抑制および呼吸ゲーティングと共に、コロナ加重高速スピンエコー（反復時間ＴＲ＝２０００ｍｓ、有効エコー時間ＴＥ＝２５ｍｓ、エコートレイン長  ８エコー、５１２ｘ５１２パイント、視野８０ｘ８０ｍｍ、スライス厚／ギャップ  １.５／０.５ｍｍ、１２−１５スライス）を用いて得られた。他のすべての画像は、該解剖学的画像のスライスの位置および視野に適合された。ベースラインＴ１マップは、ノンスライス選択的双曲線正割断熱反転パルスを用い、Ｔ１加重ＲＦ−スポイルの勾配エコー映像（ＴＥ＝１.５２ｍｓ、ＴＲ＝０.０５／０.１／０.２／０.５／１／２／５秒、１２８ｘ１２８パイント、α＝６０°）または反転回復ターボ−ＦＬＡＳＨ（ＴＥ＝１.５２ｍｓ、ＴＲ＝３ｍｓ、反転時間ＴＩ＝０.２／０.５／１／２／５／１０秒、１２８ｘ１２８パイント）のいずれかより得られた。Ｔ１加重ＲＦ−スポイルの勾配エコー（ＴＥ＝１.５２ｍｓ、ＴＲ＝５０ｍｓ、１２８ｘ１２８パイント、α＝４５°）を用いて動的造影強化（ＤＣＥ−ＭＲＩ）の時間的経過が得られた；０.１ミリモル／ｋｇのＧｄ−ＤＴＰＡ（Magnevist、Bayer Schering Pharma AG）を注入する前の５つの時点、およびその後の１００の時点の時間的経過を得、合計１０分間の画像時間を得た。加えて、高解像度（２５６ｘ２５６パイント）Ｔ１−加重画像が、造影剤投与の前に、およびＤＣＥ−ＭＲＩ時間的経過の後に得られ、フリップ角のマッピングデータを得、コイル高周波不均一を修正した。ＤＣＥ−ＭＲＩデータをTofts and Kermodeのモデルを用い、MATLAB 7.4（The Mathworks, Inc、Natick、MA、USA）の特注のソフトウェアにて解析し、薬物動態パラメータKtrans／veを評価し、加えて、腫瘍学における血管関連の実験の一連の専門家により推奨されている、注入後の最初の６０秒間にわたる［ガドリニウム］−時間曲線下の面積（IAUGC60）を計算した。
【０１９２】
（ｘ）１９フッ素核磁気共鳴
マウスを指示計画に従って１２日間処置した。最終日に、すべての群のマウスに１００ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内注射し、１時間後に殺した。直ちに組織を摘出し、液体窒素中でスナップ凍結させた。組織被検査物をヌクレオチド抽出に供されるまで−８０℃に維持した。サンプルを、Qiagen Tissue Lyser中、４倍容量の氷冷アセトニトリル（アセトニトリルのμＬ＝組織の４ｘμｇ）の存在下、２ｘ６分間、２５ＫＨｚで５ｍｍのボールベアリングを用いて均質化した。等容量の水を加え、ついでサンプルを１４,０００ｒｐｍで１０分間４℃でスピンさせた。上澄を凍結乾燥させ、６００μＬのＤ２Ｏに再び懸濁させ、ＱＮＰプローブを用いるBruker 600 MHz (14.1T) Avance NMR分光計で、１９Ｆ  ＮＭＲ分析に用いるための５ｍｍの標準ＮＭＲ管（Wilmad）に移した。獲得パラメータは、１９Ｆ観察の１Ｄパルスシーケンスおよびインバースゲートの１Ｈデカップリング、１７７ｐｐｍスペクトル掃引幅（１０００００Ｈｚ）、４０９６スキャンおよび１．６５秒の反復時間を包含した。各サンプルについての獲得時間の合計は約１時間５５分であった。トリクロロ−フルオロ−メタンが１９Ｆ  ＮＭＲ化学シフトの較正に用いられた。１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルのベースラインにて観察されたブロードなマウンドは、フーリエ変換および位相補正に付す前に、２０００（ＬＰの数）の係数および１２８の逆予測点を用いることにより、線形予測（ＬＰ）逆投影を時間領域データに適用することで除かれた。フッ素ピークのすべてをパーケージ処理するBruker Topspinソフトウェアを用いて積分し、サンプル中のゲムシタビン代謝産物濃度の合計値を得た。これらの積分値を組織の重量に対して正規化し、任意の単位で表した。パイロット実験において、本願発明者らは、ゲムシタビン投与の６時間後に、１９ＦシグナルのすべてがＰＤＡおよび対照組織に不在であることを見出した。
【０１９３】
（ｘｉ）薬理学
膵臓腫瘍を宿すＫＰＣマウスを、単発で、４日間毎日一回、あるいは生存実験の一環としての際に、強制経口投与により４０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで処置した。加えて、マウスに週に２回１００ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンまたは２０μＬ／ｇのセイラインのいずれかを指示されるように注射した。最後の投与から６時間後に、組織サンプルを収穫し、液体窒素でスナップ凍結に供し、−８０℃で貯蔵した。腹部腹水症のマウスは分析から除外した。サンプルを以下に記載するようにＬＣ／ＭＣで解析した。
【０１９４】
（ｘｉｉ）分析方法
較正基準のストック溶液を、化合物Ａを２.５ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＭＳＯに溶かすことで調製した。内部標準のストック溶液は重水素化化合物Ａ（化合物Ａ−ｄ３）をＤＭＳＯに２．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度で溶かすことで調製された。ストック溶液はさらに使用するまで−８０℃でアリコートにて貯蔵された。
【０１９５】
水（ＨＰＬＣ等級）をMallinckrodt Chemicals（Phillipsburg、NJ）より入手した。アセトニトリル（ＨＰＬＣ等級）をJT Baker（Phillipsburg、NJ）より購入し、ギ酸はFluka Chemie（Buchs、Switzerland）より供給された。ＤＭＳＯをSigma（St. Louis、MO）より購入した。リン酸緩衝セイライン粉末を水で０．１Ｍ濃度（ｐＨ７．２）に復元した。
【０１９６】
較正基準および内部標準のストックを室温で解凍した。内部標準溶液は重水素化化合物を１０％ＭｅＯＨ溶液で２５ｎｇ／ｍＬの最終濃度に希釈することで製造された。較正曲線をＡＣＮ：ＰＢＳの均質緩衝液で作成し、内部標準溶液で希釈した。アッセイは０.７８ｎｇ／ｍＬの最終ＬＬＯＱを有した。加えて、内部標準を含むまたは含まないＡＣＮ：ＰＢＳ（各々、ＱＣ０およびブランク）で分析操作を行った。
【０１９７】
腫瘍サンプルを４倍容量のＡＣＮ：ＰＢＳ緩衝液中に均質化させた。予め秤量した組織サンプルを単一のスチール製ミル粉砕ボール（SPEX CertiPrep、品番２１５６）を含有する５ｍＬのポリカーボネートチューブ（SPEX CertiPrep、品番２２４１−ＰＣ）に加え、Geno／Grinder（SPEX CertiPrep製）（Metuchen、NJ）を用いて２分間均質化した。ついで、均質物を０.４５μｍの低結合性親水性マルチスクリーンソルビナート（solvinert）プレート（Millipore、品番ＭＳＲＬＮ０４１０）を用いて濾過し、９６−ウェルの受入プレートにて集めた。ついで、組織の濾液を１：１（等容量）および１／１００に内部標準溶液で希釈した。すべての組織についての化合物Ａの濃度は、正確に定量するための高希釈度の１／１００を必要とする所定の組織の複製を除いて、優先的に１：１の希釈体を用いて測定された。
【０１９８】
サンプル中の化合物Ａの濃度を均質化緩衝液にて作成された較正曲線より決定した。均質化のために各組織に加えられる緩衝液の容量を明らかにするために、４の希釈係数を組織サンプルに適用した。希釈因子を調整する場合、アッセイＬＬＯＱは３.１ｎｇ／ｇである。抽出効率についての訂正は適用されなかった。
【０１９９】
多反応モニター観察（ＭＲＭ）により化合物Ａおよびジェルビン（Jervine）を検出するためにAPI-4000質量分析計（Applied Biosystems製（Foster City、CA））を接続したAgilent 1200（Agilent Technologies製（Santa Clara、CA））でサンプル分析を行った。
【０２００】
該サンプルの２０μＬを分析カラム（Symmetry IS、C18、2.1ｘ20 mm、3.5 μm、Waters、Milford、MA）に注入し、４分間の勾配で５−９５％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ、０.１％（ｖ／ｖ）ギ酸で溶出した。化合物Ａおよび化合物Ａ−ｄ３の質量分析検出を、各化合物について以下のトランジションのＭＲＭにより行った：
【表１４】
2012515792.tif 000034
【０２０１】
データを獲得し、ソフトウェアAnalyst 1.4.1（Applied Biosystems、Foster City、CA）を用いて処理を行った。標準曲線サンプルについて、化合物Ａの内部標準（ジェルビン）に対するピーク面積比を計算し、理論濃度に対してプロットした。１／ｘ２の荷重係数を該データに適用した。そのピーク面積比（分析値を内部標準で割った比）により測定された、サンプル濃度をその較正曲線より決定した。
【０２０２】
（ｘｉｉｉ）ＨＰＬＣによるｄＦｄＣＴＰ濃度の測定
マウスに５０または１００ｍｇ／ｋｇｎゲムシタビンを腹腔内注射し、４時間後に殺した。組織を迅速に取り出し、液体窒素でスナップ凍結に供した。被検査物をヌクレオチド抽出まで−８０℃で維持した。被検査物を液体窒素下、乳鉢および乳棒で粉砕した。その粉末状のコンテンツを０.４Ｎ過塩素酸に懸濁させ、氷浴にて超音波処置に付した。遠心分離により固体を取り出し、ペレットを過塩素酸で洗浄し、上澄を合わせた。ＫＯＨで中和した後、遠心分離によりＫＣｌＯ４を除去し、上澄の一部を高圧液体クロマトグラフィーにより分析した。ゲムシタビン三リン酸塩の量を同じサンプル分析にて測定したＡＴＰレベルに対して正規化した。不適当な濃度のＡＴＰのサンプルを分析より排除した。
【０２０３】
（ｘｉｖ）免疫組織化学
組織を１０％ホルマリン溶液に２４時間固定し、７０％エタノールに移した。組織をパラフィン包埋し、薄片にし、再水和に付した。ＣＤ３１  ＩＨＣでは、薄片を、圧力冷却器中、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８.０に曝露した。他のすべての抗体では、薄片を、圧力冷却器中、１０ｍＭクエン酸に曝露した。内因性ペルオキシダーゼを３％Ｈ２Ｏ２／ＰＢＳ中で２０分間クエンチした。残りの工程は、以下の修飾を行った、一次抗体（Vector Labs、Burlingame、CA）の種に適するVectastain ABCキットで実施された：ブロッキング血清がProtein Blocking Agent（Immunotech／BeckmanCoulter、Fullerton、CA）で１；５０に希釈して捕捉された。抗原をDAB Peroxidase Substrate（Vector Labs）で発達させた。以下の抗体希釈体を用いた：Phospho-Histone H3、１：１００（#９７０１、Cell Signaling Technology）；Cleaved Caspase 3、１：１００（#９６６１、Cell Signaling Technology）；ＣＤ３１、１：７５（ＳＣ−１５０６）。スライドをヘマトキシリンで対比染色した。
【０２０４】
（ｘｖ）平均血管密度および血管−腫瘍の距離
組織の薄片を抗ＣＤ３１抗体でプローブし、ヘマトキシリンで対比染色した。平均血管密度（ＭＤＶ）を腫瘍当たり３つのランダムなフィールドに対して４０ｘフィールド当たりのＣＤ３１陽性血管の数として決定した。腫瘍内血管と腫瘍細胞を隔てる距離を腫瘍当たりの２０のランダムに選択された血管について測定した。各腫瘍内血管を１０００倍で撮影し、４つの最も近い腫瘍細胞までの距離を測定し、結果を平均した。
【０２０５】
（ｘｖｉ）ヒト組織中の平均血管密度のコンピュータを使った映像解析
切除被検査物からの浸潤性結腸癌、浸潤性膵臓癌または慢性膵炎の組織学的に確認されたサンプルより凍結薄片（１０μｍ厚）を調製し、４％パラホルムアルデヒド中、４℃で１０分間固定した。ついで、薄片を１ｘＴＢＳで３回洗浄し、つづいてブロッキング血清（１ｘＴＢＳ／５％ＢＳＡ／０.０４％トリトンＸ１００）と一緒に４℃で３時間インキュベートした。スライドを１ｘＴＢＳで洗浄し、ついで４℃でブロッキング血清にて希釈された一次抗体（１：２００希釈のフィコエリトリン標識マウス抗−ＣＤ３１（#３４０２９７）、Becton Dickonson Systemsおよび１：１００希釈のラビット抗−ＴＥＭ８（Ｈ−１４０）、Santa Cruz Biotechnology）と一緒に一夜インキュベートした。１ｘＴＢＳで洗浄した後、薄片を４´,６−ジアミジノ−２−フェニルインドール・二塩酸塩（ＤＡＰＩ）
と一緒にインキュベートした。スライドにカバースリップを設け、Nikon E800顕微鏡を用いて標識を可視化した。
【０２０６】
免疫標識化されたスライドを２０ｘでスキャンし、膵臓の中心または周辺の両方にある５個までの１５００ｘ１５００ピクセルまたは７３５μｍ２フィールドを抽出し、カラーデコンボリューション（ImageJ software）により解析した。閾値化を用いて該画像をバイナリフォーマットに変換し、それでは明るい背景の染色が取り除かれ、残りの染色領域が粒子に変換され、その各々は該ソフトウェアにより解析され得る。背景の染色を排除し、スライド間の染色度の違いを明らかにすることは、染色全体の平均強度に基づくものであった。１５０以下のピクセル（７３．５μｍ２）を示すいずれの粒子も除外され、大血管のフラグメンテーションの度合いを小さくし、単一の免疫反応細胞の存在を少なくする。免疫反応性組織領域を測定するには、免疫反応性を示さないスライドの領域をフィールドの全体から差し引く。組織断面当たりの微小血管密度は組織断面当たりの５フィールドの組織全体に対する血管領域の平均割合を測定することにより算定された。
【０２０７】
（ｘｖｉｉ）血管の標識化および薬物拡散
機能性血管系を評価するのに、ビオチンのコンジュゲートしたLycopersicon esculentumレクチン（Ｂ１１７５−１ｍｇ、Vector Laboratories）を４２５μＬのＰＢＳに再懸濁させ、７５μＬの１ｍｇ／ｍＬのStreptavidin−AlexaFluor 633（Ｓ２１３７５、Molecular Probes）（滅菌ＰＢＳ中）と混合した。使用前に、レクチン−アビジンの混合物をマイクロ遠心分離器上１４０００ｋで１０分間遠心分離に付し、微粒子を取り除いた。安楽死させる１５分前に、１００μＬ（合計０.４ｍｇ）のコンジュゲートしたレクチンを５分間に及ぶ遅い速度の静脈内注入で投与し、血行動態を詳しくモニター観察し、それが許容されていることを確保した。ドキソルビシンを実験するのに、安楽死させる５分前に、マウスに２０ｍｇ／ｋｇのドキソルビシン溶液（Ｄ−１５１５.１０ｍｇ、滅菌セイライン中、Sigma）も１分間にわたって注入した。
【０２０８】
最終的に安楽死させるが、マウスをＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ｐＨ７．４）で灌流させた。灌流組織を収穫し、ＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ｐＨ７．４）中に一夜固定し、７０％エタノールに移した。組織をパラフィンに埋め込み、薄片にし、再水和し、ＤＡＰＩで対比染色した。レクチン標識化実験を別の実験室（ＳＲＨ、ＫＩ）で別個に再現した。
【０２０９】
ドキソルビシン分布におけるレクチン投与の影響を評価するために、２匹のＫＰＣマウスにドキソルビシンだけを注入し、上記のように処理した。ドキソルビシンの分布において違いは観察されなかった。反対に言えば、数匹のマウス（同種マウス、Ｎ＝２；ＫＰＣ、Ｎ＝１）はレクチンだけを受け、ドキソルビシンがLycopersicon esculentumレクチンによる内皮細胞の標識化を干渉する可能性を排除した。レクチン標識化における違いはこの実験にて観察されなかった。
【０２１０】
（ｘｖｉｉｉ）レーザー走査サイトメトリー
最終的に安楽死させるが、マウスをＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ｐＨ７．４）で灌流させた。灌流組織を収穫し、ＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ｐＨ７．４）中に一夜固定し、７０％エタノールに移した。組織をパラフィンに埋め込み、薄片にし、再水和し、ＤＡＰＩで対比染色した。iCys Research Imaging Cytometer（CompuCyte、Cambridge、MA）をiNovatorソフトウェア（CompuCyte）で用いて、ドキソルビシン蛍光を定量的映像サイトメトリーで測定した。
【０２１１】
定量化のためのスキャンイングプロトコルを２つのチャネルで構成した。核ＤＡＰＩ蛍光を４０５ｎｍのダイオードレーザーで励起させ、青色（４４５−４８５ｎＭ）チャネルにて検出し、ドキソルビシン蛍光をアルゴン４８８ｎＭレーザーで励起させ、橙色（５６５−５９５ｎＭ）チャネルで検出した。ＤＡＰＩチャネルの閾値を最適化し、個々の細胞の蛍光測定値が主要なおよび周辺の核の輪郭の範囲内にあるように選択的に合致させた。
【０２１２】
高解像度の組織スキャンが、６３ｘの対物および０．５ｍｍの刻み幅を用い、新たに調製した組織断面より獲得された。腫瘍および対照の面積が定義されており、細胞当たりのドキソルビシン蛍光および細胞面積はこれらの数値内から選出された。各領域についての平均蛍光値および標準偏差を細胞当たりの蛍光／細胞面積の値として決定した。
【０２１３】
（ｘｉｘ）免疫蛍光
Harvard Apparatus PhD 2000シリンジポンプを用いて、４２０ｍｌ／分の速度で、３０ｍｌの４％ＰＦＡ（ｐＨ７．４）をマウスに注入した。組織を４％ＰＦＡ（ｐＨ７．４）溶液に２４時間固定し、７０％エタノールに移した。組織をパラフィン包埋に付し、薄片にし、再水和に供した。断片を、１０ｍＭクエン酸中、マイクロ波にて１０分間脱マスキングに付した。この脱マスキング操作が組織のドキソルビシンの蛍光を効果的にクエンチし、共同免疫蛍光のための付加的なフルオロフォアの使用を可能とすることが判明した。断片をＴＢＳＴ中１０％Serum（D9663、Sigma）で遮断し、ＴＢＳＴ（トリス緩衝セイライン；Tween 20、１％）で洗浄した。以下に示す抗体希釈体を用いた：CD31、１：７５（sc−1506、Santa Cruz Biotechnology）、AlexaFluor 594、１：１０００（Ａ１１０５９、Invitrogen）。ドキソルビシン蛍光を４８８ｎｍレーザーで励起させ、発光を５２０−６２０ｎｍの範囲で検出した。図２ＢおよびＳ２Ｅ、ＦはNikon CC1Si共焦点顕微鏡を用いて画像化された。他のすべての映像はLeica SP5共焦点顕微鏡で得られた。
【０２１４】
（ｘｘ）ヒト組織
組織学的染色およびＣＤ３１の免疫組織化学評価を、個々の立場で、施設の方針および国策に従って、Addenbrooke’s Hospitalの保存されている患者のパラフィン断片およびJohns Hopkins Hospitalからの患者の被検査物で行った。
【０２１５】
（ｘｘｉ）ＲＮＡ単離および定量性経時的ＰＣＲ分析
RNeasyキット（Qiagen）を用いてＲＮＡを組織より単離した。１−２μｇのＲＮＡより、AffinityScript QPCR cDNA Synthesis Kit（Stratagene）を用いてｃＤＮＡを合成した。TaqMan遺伝子発現アッセイ（Applied Biosystems）での相対的定量（ΔΔｃｔ）を用いて7900HT Real-Time PCRシステムの定量性経時的ＰＣＲによりｃＤＮＡを分析した（表７）。実験は５つのＫＰＣ腫瘍およびＫ８４８４またはＫ８６７５細胞より由来の７種の同系腫瘍で行われた。
【０２１６】
【表１５】
2012515792.tif 000035
【０２１７】
実施例Ａ
KrasＬＳＬ．Ｇ１２Ｄ／＋、ｐ５３Ｒ１７２Ｈ／＋、PdxCreｔｇ／＋マウスをエージングさせ、Vevo 770超音波システムを用いて超音波により腫瘍形成の発生をモニター観察した。６−９ｍｍ径の膵臓腫瘍が検出されたならば、マウスが重度の疾患の徴候を示すまで、８０ｍｇ／ｋｇのヘッジホッグ阻害剤ＮＫ−４１０１で一日に２回処置した。剖検後に、パラフィン包埋された組織をＣＤ３１（Santa Cruz、SC1506、1:75希釈体、10mM EDTAにて脱マスキングに付される、pH8.0）について免疫組織化学に供し、免疫ペルオキシダーゼ標識（Vector Labs）を用いて発色させた。ＭＶＤの定量は、Olympus CX-51顕微鏡を用いて、４０ｘフィールド当たりのＣＤ３１＋血管の数を計数し、腫瘍当たりの５つのフィールドの平均値を平均化することで行われた。ＮＫ−４１０１処置の腫瘍からのデータを、同じ方法を用いて得られた化合物Ａ処置の組織からの保存データと比較した。化合物ＡおよびＮＫ−４１０１は共にＫＰＣマウスにて膵臓腫瘍の微小血管の密度を高めた（図１３）。
【０２１８】
本願は、その内容を出典明示により本願明細書の一部とする、２００９年１月２３日付け出願の、米国仮出願番号６１／２０５８３７の優先権の利益を主張する。
【０２１９】
均等
当業者は、本願発明の特定の実施態様に対する多くの均等の範囲を理解するか、または単に慣用的な実験を行うだけで解明することができる。かかる均等は以下の特許請求の範囲に含まれることを意図とする。
【図１】
2012515792.tif 000044
【図２Ａ−２Ｈ】
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【図４】
2012515792.tif 000046
【図５】
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【図７Ａ−７Ｆ】
2012515792.tif 000048
【図８Ａ−８Ｆ】
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【図９Ａ−９Ｌ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図３】
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【図６】
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【国際調査報告】
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