【手続補正書】
【提出日】平成21年5月21日(2009.5.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍性疾患を有する被験体が遺伝毒性の抗腫瘍剤に応答するかどうかを予測する方法であって、被験体由来の試料中のFANC D2含有フォーカスの大きさまたは数を決定することを含み、ここで、試料中の前記フォーカスの数または大きさが、対照被験体由来の試料中の前記フォーカスの数または大きさの約70％未満である場合に、被験体は遺伝毒性の抗腫瘍剤に応答すると予測される方法。
【請求項２】
前記フォーカスの数または大きさが、モノユビキチン化FANC D2に特異的な抗体を使用して決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
被験体から試料を採取する前に、被験体が遺伝毒性の抗腫瘍剤に曝露される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記曝露が、治療上有効な用量以下である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記曝露が、治療上有効な用量の約50％以下である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記フォーカスの数または大きさを決定する前に、試料が遺伝毒性の抗腫瘍剤に曝露される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
腫瘍性疾患を有する被験体が遺伝毒性の抗腫瘍剤に応答するかどうかを予測する方法であって、被験体由来の試料中のFANC D2ポリペプチドのユビキチン化の程度を決定することを含み、ここで、試料中の前記FANC D2ポリペプチドのユビキチン化の程度が、対照被験体由来の試料と比較した時に約70％未満である場合に、被験体は遺伝毒性の抗腫瘍剤に応答すると予測される方法。
【請求項８】
FANC D2ポリペプチドのユビキチン化の程度が、モノユビキチン化FANC D2に特異的な抗体を使用したイムノブロット解析、ELISAまたはFACSを含む方法によって決定される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
FANC D2-LのFANC D2-Sに対する割合を決定する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
被験体から試料を採取する前に、被験体が遺伝毒性の抗腫瘍剤に曝露される、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記曝露が、治療上有効な用量以下である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記曝露が、治療上有効な用量の約50％以下である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
ユビキチン化の程度を決定する前に、試料が遺伝毒性の抗腫瘍剤に曝露される、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
遺伝毒性の抗腫瘍剤が、1,3-ビス(2-クロロエチル)-1-ニトロソウレア、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、マイトマイシンC、ミトキサントロン、オキサリプラチン、テモゾロマイド、トポテカンおよび電離放射線からなる群より選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
ファンコニ貧血DNA修復経路の阻害剤を同定する方法であって、
（a）細胞を試験化合物と接触させる工程と；
（b）ステップ（a）の前に、後に、または同時に、細胞を遺伝毒性の抗腫瘍化合物と接触させる工程と；
（c）細胞内のFANC D2含有フォーカスを定量する工程（ここで、前記フォーカスの量が対照細胞においてより少ない場合に、試験化合物はファンコニ貧血DNA修復経路の阻害剤として同定され、ここで、対照細胞は前記の遺伝毒性の抗腫瘍剤と接触したが、前記試験化合物とは接触しなかったものである）と；
（d）ステップ（c）で阻害剤として同定された試験化合物について、前記細胞内のFANC D2ポリペプチドのモノユビキチン化の程度を調べる工程（ここで、FANC D2ポリペプチドのモノユビキチン化の程度が前記対照細胞においてより低い場合に、試験化合物はファンコニ貧血DNA修復経路の阻害剤としてさらに同定される）と；
（e）ステップ（d）で阻害剤としてさらに同定された試験化合物について、機能性ファンコニ貧血経路を有する試験細胞を、前記の試験化合物および前記の遺伝毒性の抗腫瘍剤と接触させる工程と；
（f）遺伝毒性の抗腫瘍剤に対する試験細胞の感受性を測定する工程と；
（g）試験細胞の薬剤に対する感受性を、第二の対照細胞のそれと比較する工程（ここで、第二の対照細胞は試験細胞と同系であるが、ファンコニ貧血経路を欠損しており；ここで、試験細胞の感受性が第二の対照細胞の感受性と同程度である場合に、試験化合物がファンコニ貧血DNA修復経路の阻害剤としてさらに同定される）
とを含む方法。
【請求項１６】
ステップ（c）において、FANC D2含有フォーカスの数を決定する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ステップ（c）において、FANC D2含有フォーカスの大きさを決定する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
ステップ（c）において、モノユビキチン化FNAC D2に特異的な抗体を使用して、FANC D2含有フォーカスを決定する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
ステップ（c）がハイスループット形式で実施される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
ステップ（d）におけるFANC D2ポリペプチドのモノユビキチン化の程度が、イムノブロット解析によって決定される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
試験細胞および第二の対照細胞の抗腫瘍剤に対する感受性が、1種以上の濃度の抗腫瘍剤を用いた場合の細胞生存を測定することによって決定される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
試験細胞が、FANC A、FANC B、FANC C、FANC D、FANC E、FANC F、FANC G、FANC LおよびATRプロテインキナーゼからなる群より選択されるタンパク質に障害を有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
第二の対照細胞が、ファンコニ貧血経路の障害を回復するcDNAを用いて試験細胞をトランスフェクションすることによって調製される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
試験細胞および第二の対照細胞がヒト細胞である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
試験細胞および第二の対照細胞が卵巣細胞である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２６】
試験細胞が、FANC Fを発現しない卵巣細胞であり、第二の対照細胞がFANC FをコードするcDNAによりトランスフェクションされた卵巣細胞である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
遺伝毒性の抗腫瘍剤が、1,3-ビス(2-クロロエチル)-1-ニトロソウレア、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、マイトマイシンC、ミトキサントロン、オキサリプラチン、テモゾロマイド、トポテカンおよび電離放射線からなる群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２８】
非ファンコニ貧血DNA修復経路の阻害剤を同定する方法であって、
（a）機能性ファンコニ貧血経路を有する試験細胞を、試験化合物および遺伝毒性の抗腫瘍剤に接触させる工程と；
（b）試験細胞の遺伝毒性の抗腫瘍剤に対する感受性を測定する工程と；
（c）試験細胞の薬剤に対する感受性を、対照細胞のそれと比較する工程
とを含み、
ここで、対照細胞は試験細胞と同系であるが、ファンコニ貧血経路を欠損しており；試験細胞の感受性が対照細胞の感受性より高い場合に、試験化合物が非ファンコニ貧血DNA修復経路の阻害剤として同定される；
前記方法。
【請求項２９】
試験細胞および対照細胞の抗腫瘍剤に対する感受性が、1種以上の濃度の抗腫瘍剤を用いた場合の細胞生存を測定することによって決定される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
試験細胞が、FANC A、FANC B、FANC C、FANC D、FANC E、FANC F、FANC G、FANC LおよびATRプロテインキナーゼからなる群より選択されるタンパク質に障害を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
対照細胞が、ファンコニ貧血経路の障害を回復するcDNAを用いて試験細胞をトランスフェクションすることによって調製される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
試験化合物が請求項１５に記載の方法を用いてファンコニ貧血経路を阻害しない、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
試験細胞および対照細胞がヒト細胞である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
試験細胞および対照細胞が卵巣細胞である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
試験細胞がFANC Fを発現しない卵巣細胞であり、対照細胞がFANC FをコードするcDNAによりトランスフェクションされた卵巣細胞である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
腫瘍性疾患を治療するための医薬組成物の製造における
（a）ファンコニ貧血経路の阻害剤；および
（b）遺伝毒性の抗腫瘍剤
の使用。
【請求項３７】
遺伝毒性の抗腫瘍剤が、1,3-ビス(2-クロロエチル)-1-ニトロソウレア、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、マイトマイシンC、ミトキサントロン、オキサリプラチン、テモゾロマイド、トポテカンおよび電離放射線からなる群より選択される、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
ファンコニ貧血経路の阻害剤が、アルスターパウロン、(+-)13-HODE、ニフェジピン、ペニトレムA、ゲルダナマイシン、Go6976、ロイコトリエンB3、トリコスタチン-A、AG-370、マイトマイシンC、アマニチン（αアマニチン）、HNMPA-(AM)3、ヨウ化プロピジウム、DRB、オクラトキシン、Ca-074-Me、K252c、ワートマニン、アクチノマイシンD、AG213、BAPTA-AM、クルクミン、ピューロマイシン、ブメタニド、メチルアデニン（3-メチルアデニン）、H9、TPENおよびスペルミンNONOateからなる群より選択される、請求項３６に記載の使用。
【請求項３９】
ファンコニ貧血経路の阻害剤が、アルスターパウロン、クルクミンおよびH9からなる群より選択される、請求項３６に記載の使用。
【請求項４０】
ファンコニ貧血経路の阻害剤がクルクミンであり、遺伝毒性の抗腫瘍剤がカルボプラチンである、請求項３６に記載の使用。
【請求項４１】
前記医薬組成物が、非経口投与、経口投与、または腫瘍組織への直接投与のために製剤化される、請求項３６に記載の使用。
【請求項４２】
腫瘍性疾患を治療するための医薬組成物の製造における
（a）ファンコニ貧血経路の阻害剤；および
（b）非ファンコニ貧血DNA損傷修復経路の阻害剤
の使用。
【請求項４３】
ファンコニ貧血経路の阻害剤が、アルスターパウロン、(+-)13-HODE、ニフェジピン、ペニトレムA、ゲルダナマイシン、Go6976、ロイコトリエンB3、トリコスタチン-A、AG-370、マイトマイシンC、アマニチン（αアマニチン）、HNMPA-(AM)3、ヨウ化プロピジウム、DRB、オクラトキシン、Ca-074-Me、K252c、ワートマニン、アクチノマイシンD、AG213、BAPTA-AM、クルクミン、ピューロマイシン、ブメタニド、メチルアデニン（3-メチルアデニン）、H9、TPENおよびスペルミンNONOateからなる群より選択される、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
ファンコニ貧血経路の阻害剤が、アルスターパウロン、クルクミンおよびH9からなる群より選択される、請求項４２に記載の使用。
【請求項４５】
非ファンコニ貧血DNA損傷修復経路の阻害剤が、PARP阻害剤、DNA-PK阻害剤、mTOR阻害剤、ERCC1阻害剤、ERCC3阻害剤、ERCC6阻害剤、ATM阻害剤、XRCC4阻害剤、Ku80阻害剤、Ku70阻害剤、XPA阻害剤、CHK1阻害剤およびCHK2阻害剤からなる群より選択される、請求項４２に記載の使用。
【請求項４６】
前記医薬組成物が、非経口投与、経口投与、または腫瘍組織への直接投与のために製剤化される、請求項４２に記載の使用。
【請求項４７】
腫瘍性疾患を治療するための医薬組成物の製造における
（a）ファンコニ貧血経路の阻害剤；
（b）非ファンコニ貧血DNA損傷修復経路の阻害剤；および
（c）遺伝毒性の抗腫瘍剤
の使用。
【請求項４８】
ファンコニ貧血経路の阻害剤が、アルスターパウロン、(+-)13-HODE、ニフェジピン、ペニトレムA、ゲルダナマイシン、Go6976、ロイコトリエンB3、トリコスタチン-A、AG-370、マイトマイシンC、アマニチン（αアマニチン）、HNMPA-(AM)3、ヨウ化プロピジウム、DRB、オクラトキシン、Ca-074-Me、K252c、ワートマニン、アクチノマイシンD、AG213、BAPTA-AM、クルクミン、ピューロマイシン、ブメタニド、メチルアデニン（3-メチルアデニン）、H9、TPENおよびスペルミンNONOateからなる群より選択される、請求項４７に記載の使用。
【請求項４９】
ファンコニ貧血経路の阻害剤が、アルスターパウロン、クルクミンおよびH9からなる群より選択される、請求項４７に記載の使用。
【請求項５０】
非ファンコニ貧血DNA損傷修復経路の阻害剤が、PARP阻害剤、DNA-PK阻害剤、mTOR阻害剤、ERCC1阻害剤、ERCC3阻害剤、ERCC6阻害剤、ATM阻害剤、XRCC4阻害剤、Ku80阻害剤、Ku70阻害剤、XPA阻害剤、CHK1阻害剤およびCHK2阻害剤からなる群より選択される、請求項４７に記載の使用。
【請求項５１】
遺伝毒性の抗腫瘍剤が、1,3-ビス(2-クロロエチル)-1-ニトロソウレア、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、マイトマイシンC、ミトキサントロン、オキサリプラチン、テモゾロマイド、トポテカンおよび電離放射線からなる群より選択される、請求項４７に記載の使用。
【請求項５２】
前記医薬組成物が、非経口投与、経口投与、または腫瘍組織への直接投与のために製剤化される、請求項４７に記載の使用。
【請求項５３】
遺伝毒性の抗腫瘍剤による治療に対して患者を増感させるための医薬組成物の製造における、ファンコニ貧血経路の阻害剤の使用。
【請求項５４】
ファンコニ貧血経路の阻害剤が、アルスターパウロン、(+-)13-HODE、ニフェジピン、ペニトレムA、ゲルダナマイシン、Go6976、ロイコトリエンB3、トリコスタチン-A、AG-370、マイトマイシンC、アマニチン（αアマニチン）、HNMPA-(AM)3、ヨウ化プロピジウム、DRB、オクラトキシン、Ca-074-Me、K252c、ワートマニン、アクチノマイシンD、AG213、BAPTA-AM、クルクミン、ピューロマイシン、ブメタニド、メチルアデニン（3-メチルアデニン）、H9、TPENおよびスペルミンNONOateからなる群より選択される、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
ファンコニ貧血経路の阻害剤が、アルスターパウロン、クルクミンおよびH9からなる群より選択される、請求項５３に記載の使用。
【請求項５６】
遺伝毒性の抗腫瘍剤が、1,3-ビス(2-クロロエチル)-1-ニトロソウレア、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、マイトマイシンC、ミトキサントロン、オキサリプラチン、テモゾロマイド、トポテカンおよび電離放射線からなる群より選択される、請求項５３に記載の使用。
【請求項５７】
遺伝毒性の抗腫瘍剤が、ファンコニ貧血経路の阻害剤と同時に投与される、請求項５３に記載の使用。
【請求項５８】
遺伝毒性の抗腫瘍剤による治療に対して患者を増感させるための医薬組成物の製造における、
（a）ファンコニ貧血経路の阻害剤；および
（b）非ファンコニ貧血DNA修復経路の阻害剤
の使用。
【請求項５９】
ファンコニ貧血経路の阻害剤が、アルスターパウロン、(+-)13-HODE、ニフェジピン、ペニトレムA、ゲルダナマイシン、Go6976、ロイコトリエンB3、トリコスタチン-A、AG-370、マイトマイシンC、アマニチン（αアマニチン）、HNMPA-(AM)3、ヨウ化プロピジウム、DRB、オクラトキシン、Ca-074-Me、K252c、ワートマニン、アクチノマイシンD、AG213、BAPTA-AM、クルクミン、ピューロマイシン、ブメタニド、メチルアデニン（3-メチルアデニン）、H9、TPENおよびスペルミンNONOateからなる群より選択される、請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
ファンコニ貧血経路の阻害剤が、アルスターパウロン、クルクミンおよびH9からなる群より選択される、請求項５８に記載の使用。
【請求項６１】
非ファンコニ貧血DNA損傷修復経路の阻害剤が、PARP阻害剤、DNA-PK阻害剤、mTOR阻害剤、ERCC1阻害剤、ERCC3阻害剤、ERCC6阻害剤、ATM阻害剤、XRCC4阻害剤、Ku80阻害剤、Ku70阻害剤、XPA阻害剤、CHK1阻害剤およびCHK2阻害剤からなる群より選択される、請求項５８に記載の使用。
【請求項６２】
遺伝毒性の抗腫瘍剤が、1,3-ビス(2-クロロエチル)-1-ニトロソウレア、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、マイトマイシンC、ミトキサントロン、オキサリプラチン、テモゾロマイド、トポテカンおよび電離放射線からなる群より選択される、請求項５８に記載の使用。
【請求項６３】
遺伝毒性の抗腫瘍剤が、ファンコニ貧血経路の阻害剤およびDNA修復経路の阻害剤と同時に投与される、請求項５８に記載の使用。
【請求項６４】
腫瘍性疾患を有する被験体が遺伝毒性の抗腫瘍剤に対して応答するかどうかを決定するためのキットであって、FANC D2-Lに特異的な抗体、それらのパッケージング材料、および請求項１に記載の方法を実施するための説明書を含むキット。
【請求項６５】
非ファンコニ貧血経路の阻害剤を同定するためのキットであって、請求項２８に記載の試験細胞および対照細胞、ならびにそれらのためのパッケージング材料を含むキット。
【請求項６６】
前記試験細胞および前記対照細胞が卵巣細胞である、請求項６５に記載のキット。