(57)【要約】式(I):2012515788.tif 000088（式中、Qは、2012515788.tif 000089であり;R1は、シクロアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、各々、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;そして、R2、R3、R4、およびnは本明細書に記載のとおりである）の化合物または医薬的に許容されるその塩について記載する。また、そのような化合物をGタンパク質結合受容体S1P1に対する選択的アゴニストとして用いる方法、およびそのような化合物を含有する医薬組成物についても記載する。これらの化合物は、様々な治療領域の疾患もしくは障害（例えば血管疾患および自己免疫疾患）の処置、予防、もしくは進行の遅延において有用である。
2012515788.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I):
【化１】
2012515788.tif 000085
［式中、
Qは、式:
【化２】
2012515788.tif 000086
であり;
nは、０か、または1〜4から選択される整数であり;
R1は、シクロアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、各々、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R2は、独立して、水素、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され;
R3は、水素、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、または-C(O)NRaRbであり;
各R4は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5は、アルキルまたはベンジルであり;そして、
RaおよびRbは、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、および／またはベンジルから選択される］
の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項２】
R1が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいC3〜C8シクロアルキルである、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項３】
R1が、O、N、および／またはSから独立して選択される1〜4個のヘテロ原子を有し、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよい、1-から2-環のヘテロシクリルである、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項４】
R1が、O、N、および／またはSから独立して選択される1〜4個のヘテロ原子を有し、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよい、1-から2-環のヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項５】
該ヘテロアリールが、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよい、1-環のヘテロアリールである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
式(Id):
【化３】
2012515788.tif 000087
（式中、
mは、０か、または1〜4から選択される整数であり;
各R6は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、ハロゲン、および／または-OR4から選択され、
各R4は、独立して、C1〜C4アルキルであり;
R3は、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、または-C(O)OR5であり;そして、
R5は、C1〜C4アルキルである）
を有する、請求項５に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項７】
mが、0であり;そして、
R3が、水素、エチル、1-プロピル、2-プロピル、-CF3、またはC(O)OCH3である、
請求項６に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項８】
1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(メトキシカルボニル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;および、
1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル))-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項９】
該医薬的に許容される塩が2,2,2-トリフルオロ酢酸塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩、および医薬的に許容される担体を含有する組成物。
【請求項１１】
自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の処置のための医薬の製造における、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩の使用。
【請求項１２】
自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の処置における療法での使用のための、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、S1P1アゴニストとして有用なヘテロ環化合物に関する。本願は、ヘテロ環化合物、そのような化合物を含有する組成物、およびそれらの使用方法を提供する。本発明はさらに、S1P1アゴニズムに関連する症状（例えば自己免疫疾患および血管疾患）の処置に有用である、少なくとも１つの本発明の化合物を含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
スフィンゴシン-1-リン酸(S1P)は、血小板凝集、細胞増殖、細胞形態（cell morphology）、腫瘍細胞浸潤、内皮細胞および白血球走化性、内皮細胞 in vitro 血管新生、およびリンパ球トラフィッキングをもたらすものを含む、多くの細胞性効果を誘導することが示されている。従って、S1P受容体は、様々な治療的適用（例えば腫瘍増殖阻害、血管疾患、および自己免疫疾患）に対する良好な標的である。S1Pは、部分的に、S1P1もしくはS1P1、S1P2もしくはS1P2、S1P3もしくはS1P3、S1P4もしくはS1P4、およびS1P5もしくはS1P5(当初は各々、EDG-1、EDG-5、EDG-3、EDG-6、およびEDG-8と称された)と命名された一連のGタンパク質結合受容体を介して、細胞にシグナルを送る。
【０００３】
S1Pは、血管系および免疫系の主要な制御因子でもあるため、人体全体において重要である。血管系において、S1Pは、血管新生、血管安定性および血管透過性を制御する。免疫系において、S1Pは、T-およびB-細胞のトラフィッキングの主要な制御因子として認識されている。S1Pとその受容体S1P1との相互作用は、リンパ器官(例えば胸腺およびリンパ節)からリンパ管への免疫細胞の放出に必要である。従って、S1P受容体の調節が免疫調節に重要であることが示されており、S1P受容体調節因子は新規の免疫抑制剤である。
【０００４】
S1P1受容体は多くの組織で発現している。それはリンパ球で発現している主なファミリーメンバーであり、リンパ球トラフィッキングにおいて重要な役割を果たす。S1P1受容体の下方制御により、様々な組織へのリンパ球の遊走およびホーミングが乱される。このことによってリンパ器官におけるリンパ球の隔離（sequestration）がもたらされ、それにより患部組織へ遊走できる循環リンパ球の数が減少される。従って、自己免疫性および異常な炎症プロセスに関連する標的部位へのリンパ球の遊走を抑制するS1P1受容体薬（receptor agent）の開発が、多くの自己免疫性および炎症性の疾患状態に有効であり得る。
５つのS1P受容体のうち、S1P1は、広く分布しており、内皮細胞上に非常に豊富であり、そこでS1P3と協調して働いて、細胞の遊走、分化、およびバリア機能を制御する。非選択的S1P受容体調節によるリンパ球再循環の阻害によって、移植片拒絶を防止する臨床的な免疫抑制がもたらされるが、そのような調節により一過性徐脈も引き起こされる。研究により、S1P1活性が循環リンパ球の喪失と有意に相関していることが示されている。その対照的に、S1P3受容体アゴニズムは有効性に必要とされない。代わりに、S1P3活性は、非選択的S1P受容体アゴニストの観察される急性毒性（望ましくない心血管系への影響（例えば徐脈および高血圧）をもたらす）において重要な役割を果たす。(例えば、非特許文献１;非特許文献２;非特許文献３;非特許文献４を参照。)
【０００５】
S1P1アゴニストの例がFTY720である。この免疫抑制性化合物FTY720(JPI 1080026-A)は、動物およびヒトにおいて循環リンパ球を減少させ、臓器拒絶反応および免疫不全の動物モデルにおいて疾患調節活性を有することが示されている。ヒトにおけるFTY720の使用は、ヒト腎臓移植における臓器拒絶反応の比率を低下させ、再発寛解型多発性硬化症における寛解率を増大させるのに有効である(非特許文献５;非特許文献６;非特許文献７;非特許文献８;非特許文献９;非特許文献１０;非特許文献１１;非特許文献１２;および非特許文献１３を参照)。その発見後、FTY720はプロドラッグであり、それはin vivoでスフィンゴシンキナーゼによりリン酸化されて、S1P1、S1P3、S1P4、およびS1P5受容体でのアゴニスト活性を有する、さらに生物学的に活性な物質になることが確立されている。動物およびヒトにおけるFTY720の薬理効果に大きく関与するのは、S1P受容体ファミリー上でのこの作用である。
【０００６】
臨床研究によって、FTY720を用いた治療は、治療の最初の24時間において徐脈を引き起こすことが示されている(非特許文献１３)。観察される徐脈は、S1P3受容体でのアゴニズムに起因すると一般的に考えられている。この結論は、多くの細胞ベースの実験および動物実験に基づいている。これらには、野生型マウスと違ってFTY720投与後に徐脈を示さないS1P3ノックアウト動物の使用、およびS1P1選択的化合物の使用が挙げられる(非特許文献１;非特許文献２;および非特許文献１４)。
以下の出願には、S1P1アゴニストとしての化合物が記載されている:特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、特許文献１３、および特許文献１４。また、非特許文献１５も参照。
【０００７】
S1P1アゴニストとして有用であり、それにもかかわらずS1P3を上回る選択性を有する化合物が依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】WO 03/061567(米国特許出願第2005/0070506号)
【特許文献２】WO 03/062248(米国特許第7,351,725号)
【特許文献３】WO 03/062252(米国特許出願第2005/0033055号)
【特許文献４】WO 03/073986(米国特許第7,309,721号)
【特許文献５】WO 03/105771
【特許文献６】WO 05/058848
【特許文献７】WO 06/047195
【特許文献８】WO 06/100633
【特許文献９】WO 06/115188
【特許文献１０】WO 06/131336
【特許文献１１】WO 2007/024922
【特許文献１２】WO 07/116866
【特許文献１３】WO 08/023783(米国特許出願第2008/0200535号)
【特許文献１４】WO 08/074820
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Hale et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 14:3501 (2004)
【非特許文献２】Sanna et al., J. Biol. Chem., 279:13839 (2004)
【非特許文献３】Anliker et al., J. Biol. Chem., 279:20555 (2004)
【非特許文献４】Mandala et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 309:758 (2004)
【非特許文献５】Brinkman et al., J. Biol. Chem., 277:21453 (2002)
【非特許文献６】Mandala et al., Science, 296:346 (2002)
【非特許文献７】Fujino et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 305:45658 (2003)
【非特許文献８】Brinkman et al., Am. J. Transplant., 4:1019 (2004)
【非特許文献９】Webb et al., J. Neuroimmunol., 153:108 (2004)
【非特許文献１０】Morris et al., Eur. J. Immunol., 35:3570 (2005)
【非特許文献１１】Chiba, Pharmacology & Therapeutics, 108:308 (2005)
【非特許文献１２】Kahan et al., Transplantation, 76:1079 (2003)
【非特許文献１３】Kappos et al., N. Engl. J. Med., 335:1124 (2006)
【非特許文献１４】Koyrakh et al., Am. J. Transplant., 5:529 (2005)
【非特許文献１５】Hale et al., J. Med. Chem., 47:6662 (2004)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本出願人らは、S1P1アゴニストとしての活性を有する有効な化合物を見出した。さらに、本出願人らは、S1P1アゴニストとして活性を有し、S1P3以上に選択的である化合物を見出した。これらの化合物は、それらの薬剤能に重要である望ましい安定性、生物学的利用能、治療指数、および毒性値を有する医薬品として有用であると、提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の概要）
本発明は、式(I):
【化１】
2012515788.tif 000003
［式中、
Qは、式:
【化２】
2012515788.tif 000004
であり;
nは、０か、または1〜4から選択される整数であり;
R1は、シクロアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、各々、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R2は、独立して、水素、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され;
R3は、水素、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、または-C(O)NRaRbであり;
各R4は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5は、アルキルまたはベンジルであり;そして、
RaおよびRbは、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、および／またはベンジルから選択される］
の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供することにより、前述のニーズを満たす。
【００１２】
また、式(I)の化合物、もしくは医薬的に許容されるその塩;および医薬的に許容される担体を含有する医薬組成物も記載する。
【００１３】
さらに、Gタンパク質結合受容体S1P1の活性に関連する疾患もしくは障害の処置方法であって、哺乳動物患者に式(I)の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩を投与することを含む方法も記載する。
【００１４】
式(I)の化合物、および該化合物を含有する組成物は、S1P1アゴニストであり、それはS1P3活性以上にS1P1活性に対して選択的である。式(I)の化合物、および該化合物を含有する組成物は、S1P3活性による副作用を減少もしくは最小化するとともに、様々なS1P1受容体関連症状の処置、予防、もしくは治療において用いられうる。これらの化合物を含有する医薬組成物は、様々な治療領域の疾患もしくは障害（例えば自己免疫疾患および血管疾患）の処置、予防、もしくは進行の遅延において有用である。
【００１５】
（詳細な説明）
一実施態様は、式(I):
【化３】
2012515788.tif 000005
［式中、
Qは、式:
【化４】
2012515788.tif 000006
であり;
nは、０か、または1〜4から選択される整数であり;R1は、C3〜C8シクロアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、各々、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R2は、独立して、水素、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され;
R3は、水素、C1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C4ハロアルキル、または-C(O)OR5であり;
各R4は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および/またはベンジルから選択され;そして、
R5は、C1〜C6アルキルまたはベンジルである］
の化合物、または医薬的に許容されるその塩を提供する。
【００１６】
一実施態様は、
Qが式:
【化５】
2012515788.tif 000007
である、
式(I)の化合物、または医薬的に許容されるその塩を提供する。
この実施態様の化合物は、式(Ia):
【化６】
2012515788.tif 000008
（式中、R1、R2、R3、およびnは上述の通りである）
により示される構造、または医薬的に許容されるその塩を有する。
【００１７】
一実施態様は、
Qが、式:
【化７】
2012515788.tif 000009
である、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
この実施態様の化合物は、式(Ib):
【化８】
2012515788.tif 000010
（式中、R1、R2、R3、およびnは、上述の通りである）
により示される構造または医薬的に許容されるその塩を有する。
【００１８】
一実施態様は、nが０または1である、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
【００１９】
一実施態様は、nが０である、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
【００２０】
一実施態様は、式(I)による化合物の2,2,2-トリフルオロ酢酸塩を提供する。
【００２１】
一実施態様は、R1が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいC3〜C8シクロアルキルである、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。適切なシクロアルキル基としては、C3〜C6シクロアルキル基が挙げられる。例えば、この実施態様は、R1がC3〜C6シクロアルキルであり、nが０または1である式(I)の化合物を提供する。好ましくは、R3は、C1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C6ハロアルキル、または-C(O)OR5である。
【００２２】
一実施態様は、R1が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいヘテロシクリルである、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。適切なヘテロシクリルとしては、O、N、および／またはSから独立して選択される1〜4個のヘテロ原子を有する1-から2-環のヘテロシクリルが挙げられる。他の適切なヘテロシクリルとしては、O、N、またはSから独立して選択される1〜2個のヘテロ原子を有する1-環のヘテロシクリルが挙げられる。適切なヘテロシクリル基の例としては、飽和ヘテロシクリル基、例えば、オキセタニル、チアタニル（thiatanyl）、アゼチジニル、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニルが挙げられる。適切なヘテロシクリル基の他の例としては、部分不飽和ヘテロシクリル基が挙げられ、3,4-ジヒドロ-2H-ピラニル（pyrayl）、5,6-ジヒドロ-2H-ピラニル、2H-ピラニル、1,2,3,4-テトラヒドロピリジニル、および1,2,5,6-テトラヒドロピリジニルが含まれる。例えば、この実施態様は、nが０または1である式(I)の化合物を提供する。好ましくは、R3は、C1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C6ハロアルキル、または-C(O)OR5であり;そして、さらに好ましくは、R3は、C1〜C4アルキル、C1〜C2ハロアルキル、または-C(O)OR5（ここで、R5はメチルまたはエチルである）である。
【００２３】
一実施態様は、R1が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいヘテロアリールである、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。適切なヘテロアリールとしては、O、N、および／またはSから独立して選択される1〜4個のヘテロ原子を有する1-から2-環のヘテロアリールが挙げられる。他の適切なヘテロアリールとしては、O、N、および／またはSから独立して選択される1〜4個のヘテロ原子を有する1-環のヘテロアリールが挙げられる。適切なヘテロアリール基の例としては、1-環のヘテロアリール基、例えば、ピロリル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、およびピラジニルが挙げられる。適切なヘテロアリール基の他の例としては、2-環のヘテロアリール基、例えば、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ピロロピリジニル、イミダゾピリジニル、ピラゾロピリジニル（pyrazolopyrdinyl）、イソインドリル、インダゾリル、プリニル、インドリニニル（indolininyl）、イミダゾピリジニル、ピラゾロピリジニル、およびイミダゾリルピリミジニルが挙げられる。例えば、この実施態様は、nが０または1である式(I)の化合物を提供する。好ましくは、R3は、C1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C6ハロアルキル、または-C(O)OR5であり;そして、さらに好ましくは、R3は、C1〜C4アルキル、C1〜C2ハロアルキル、または-C(O)OR5（ここで、R5はメチルまたはエチルである）である。
【００２４】
一実施態様は、R3が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよい1-環のヘテロアリールである、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。例えば、この実施態様は、R3が１から３個の置換基で適宜置換されていてよい式(I)の化合物を提供する。この実施態様はまた、R3が０または１個の置換基で適宜置換されていてよい式(I)の化合物も提供する。
【００２５】
一実施態様は、R3が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいピリジニルである、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。この実施態様の化合物には、式(Ic):
【化９】
2012515788.tif 000011
（式中、
Qは、式:
【化１０】
2012515788.tif 000012
であり;
nは、０か、または1〜4から選択される整数であり;
各R2は、独立して、水素、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され;
R3は、水素、C1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C6ハロアルキル、または-C(O)OR5であり;
各R4は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5は、C1〜C6アルキルまたはベンジルであり;mは、０か、または1〜4から選択される整数であり;そして、
各R6は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、ハロゲン、および／または-OR4から選択される）
の化合物が含まれる。
好ましくは、R3は、C1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C6ハロアルキル、または-C(O)OR5である。例えば、この実施態様は、nが０または1である式(I)の化合物を提供する。好ましくは、R3は、C1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C6ハロアルキル、または-C(O)OR5であり;そして、さらに好ましくは、R3は、C1〜C4アルキル、C1〜C2ハロアルキル、または-C(O)OR5（ここで、R5はメチルまたはエチルである）である。
【００２６】
一実施態様は、nが０である式(Ic)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。この実施態様の化合物には、式(Id):
【化１１】
2012515788.tif 000013
（式中、
Qは、式:
【化１２】
2012515788.tif 000014
であり;
mは、０か、または1〜4から選択される整数であり;
各R6は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、ハロゲン、および／または-OR4から選択され;
各R4は、独立して、C1〜C4アルキルであり;R3は、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、または-C(O)OR5であり;そして、
R5は、C1〜C4アルキルである）
の化合物が含まれる。
この実施態様の１つの例において、mは0であり;そして、R3は、水素、エチル、1-プロピル、2-プロピル、-CF3、または-C(O)OCH3である。
【００２７】
一実施態様は、
1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(メトキシカルボニル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;および、
1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル))-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
からなる群から選択される、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。この実施態様の化合物は、2,2,2-トリフルオロ酢酸塩として提供されてもよい。
【００２８】
一実施態様は、式(I)による化合物もしくは医薬的に許容されるその塩;および医薬的に許容される担体を含有する組成物を提供する。
【００２９】
一実施態様は、Gタンパク質結合受容体S1P1の活性に関連する疾患もしくは障害を処置する方法であって、
Qが、式:
【化１３】
2012515788.tif 000015
であり;
nが、０か、または1〜4から選択される整数であり;
R1が、シクロアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、各々、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R2が、独立して、水素、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され;
R3が、水素、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、または-C(O)OR5であり;
各R4が、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;そして、
R5が、アルキルまたはベンジルである、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を哺乳動物患者に投与することを含む、方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
（定義）
本発明の特徴および利点は、以下の詳細な説明を読むことで、当業者によってさらに容易に理解されうる。当然のことながら、上部および下部の別個の実施態様中に明確な根拠として記載された本発明のある特定の特徴を組み合わせて、単独の実施態様を形成してもよい。反対に、単独の実施態様中に簡潔な根拠として記載された本発明の様々な特徴を組み合わせて、それらのサブコンビネーションを形成してもよい。本明細書において、例として特定された実施態様または好ましい実施態様は、例示目的であって限定するものではないことが意図される。
【００３１】
本明細書において他に特に記載のない限り、単数形の言及には複数の言及もまた含まれうる。例えば、「a」および「an」は、１かまたは１以上のいずれかを示しうる。
【００３２】
他に指示のない限り、原子価が満たされていないいずれかのヘテロ原子は、その原子価を満たすのに十分な水素原子を有すると考える。
【００３３】
本明細書に記載の定義は、引用により本明細書に援用されるいずれの特許、特許出願、および/または特許出願公開に記載された定義よりも優先される。
【００３４】
本発明を説明するために用いられる様々な用語の定義を以下に記載する。これらの定義は、本明細書の全体を通して(それらが他に特定の場合に限定されない限り)、個別にか、またはより大きな基の一部としてのいずれかで用いられる用語に適用される。
【００３５】
本明細書の全体を通して、基およびそれらの置換基は、安定な部分および化合物をもたらすように、当業者により選択されうる。
【００３６】
当分野で用いられる慣習に従って、
【化１４】
2012515788.tif 000016
は本明細書において、コアもしくは骨格構造への部分もしくは置換基の結合点である結合を表すために、構造式中で用いられる。
【００３７】
本明細書で用いる用語「ハロ」および「ハロゲン」は、F、Cl、Br、またはIを言う。
【００３８】
本明細書で用いる用語「アルキル」は、例えば、1〜12個の炭素原子、1〜6個の炭素原子、または1〜4個の炭素原子を含む、分枝鎖および直鎖両方の飽和脂肪族炭化水素基を言う。アルキル基の例としては、限定はされないが、メチル(Me)、エチル(Et)、プロピル(例えば、n-プロピルおよびi-プロピル)、ブチル(例えば、n-ブチル、i-ブチル、sec-ブチル、およびt-ブチル)、およびペンチル(例えば、n-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル)、n-ヘキシル、2-メチルペンチル、2-エチルブチル、3-メチルペンチル、ならびに4-メチルペンチルが挙げられる。シンボル「C」の後に下付き文字で数字が記載されている場合、該下付き文字は特定の基が有しうる炭素原子の数をより具体的に定義する。例えば、「C1-C6アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖アルキル基を意味する。
【００３９】
本明細書で用いる用語「ハロアルキル」は、１個以上（１から、最大で親アルキル基中に存在し得る水素原子の総数までの範囲であり得る）の水素原子がハロゲン原子により置換されている、アルキル基を言う。ハロアルキル基の代表的な例としては、限定はされないが、クロロメチル(-CH2Cl)、トリフルオロメチル(-CF3)、および2,2,2-トリフルオロエチル(-CH2CF3)が挙げられる。シンボル「C」の後に下付き文字で数字が記載されている場合、該下付き文字は特定のハロアルキル基が有しうる炭素原子の数をより具体的に定義する。例えば、「C1-C4ハロアルキル」は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖ハロアルキル基を意味する。
【００４０】
本明細書で用いる用語「シクロアルキル」は、飽和環炭素原子から１個の水素原子を除去することによって、非芳香族の単環式もしくは多環式の炭化水素分子から得られる基を言う。シクロアルキル基の代表的な例としては、限定はされないが、シクロプロピル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。シンボル「C」の後に下付き文字で数字が記載されている場合、該下付き文字は特定のシクロアルキル基が有しうる炭素原子の数をより具体的に定義する。例えば、「C3-C6シクロアルキル」は、３〜６個の炭素原子を有するシクロアルキル基を意味する。
【００４１】
本明細書で用いる用語「アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子部分に結合したアルキル基、例えば、メトキシ基(-OCH3)を言う。
【００４２】
本明細書で用いる用語「アリール」は、芳香環に結合している１個の水素を除去することによって該芳香環を含有する分子から得られる原子団を言う。アリール基の代表的な例としては、限定はされないが、フェニル、ナフチル、インダニル、インデニル、および1,2,3,4-テトラヒドロナフタ-5-イルが挙げられる。
【００４３】
本明細書で用いる用語「ベンジル」は、水素原子のうちの１個がフェニル基によって置換されているメチル基を言う。
【００４４】
本明細書で用いる用語「ヘテロ原子」は、酸素、硫黄、および窒素を言う。
【００４５】
本明細書で用いる用語「ヘテロシクリル」は、非芳香族の3-〜7-員単環式基、7-〜11-員二環式基、および10-〜15-員三環式基を言い、その中で、該環のうち少なくとも１つは、少なくとも１個のヘテロ原子(O、SまたはN)を有しており、該ヘテロ原子含有環は、好ましくは、O、S、および／またはNから独立して選択される、1、2、または3個のヘテロ原子を有している。ヘテロ原子を含むそのような基の各環は、１または２個の酸素原子または硫黄原子、および/または１〜４個の窒素原子を含むことができるが、但し、各環におけるヘテロ原子の総数は４個以下であり、さらに、該環は少なくとも１個の炭素原子を含む。該窒素原子および硫黄原子は適宜酸化されていてもよく、該窒素原子は適宜四級化されていてよい。該二環式基および三環式基を完成させる縮合環は、炭素原子のみを含みうるが、飽和、部分飽和、または不飽和であってもよい。ヘテロシクロ基は、いずれの可能な窒素原子または炭素原子に結合していてよい。
【００４６】
単環式ヘテロシクリル基の例としては、オキセタニル、アゼチジニル、ピロリジニル、イミダゾリニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、2-オキソピペラジニル、2-オキソピペリジル、2-オキソピロロジニル（oxopyrrolodinyl）、2-オキソアゼピニル、アゼピニル、4-ピペリドニル（piperidonyl）、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン、1,3-ジオキソランおよびテトラヒドロ-1,1-ジオキソチエニルが挙げられる。二環式ヘテロシクロ基の例としては、キヌクリジニルが挙げられる。
【００４７】
本明細書で用いる用語「ヘテロアリール」は、芳香族の5-または6-員単環式基、9-または10-員二環式基、および11-〜14-員三環式基を言い、該環のうちの少なくとも１つにおいて少なくとも１個のヘテロ原子(O、SまたはN)を有しており、該ヘテロ原子含有環は、好ましくは、O、S、および/またはNから独立して選択される、1、2、または3個のヘテロ原子を有している。ヘテロ原子を含む該ヘテロアリール基の各環は、１個または２個の酸素原子または硫黄原子、および/または１〜４個の窒素原子を含むことができるが、但し、各環におけるヘテロ原子の総数は４以下であり、各環は少なくとも１個の炭素原子を有する。二環式基および三環式基を完成させる縮合環は、飽和、部分飽和、または不飽和であってよい。該窒素原子および硫黄原子は適宜酸化されていてよく、該窒素原子は適宜四級化されていてよい。二環式または三環式であるヘテロアリール基には、少なくとも一つの完全な芳香環が含まれていなければならないが、他の縮合環は芳香族または非芳香族であってもよい。該ヘテロアリール基は、いずれの環のいずれの可能な窒素原子または炭素原子に結合していてよい。
【００４８】
単環式ヘテロアリール基の例としては、ピロリル、ピラゾリル、ピラゾリニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、フラニル、チオフェニル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、およびトリアジニルが挙げられる。
【００４９】
二環式ヘテロアリール基の例としては、インドリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチエニル、キノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾピラニル、インドリジニル、ベンゾフラニル、クロモニル、クマリニル、ベンゾピラニル、シンノリニル、キノキサリニル、インダゾリル、ピロロピリジル、フロピリジル、ジヒドロイソインドリル、およびテトラヒドロキノリニルが挙げられる。
【００５０】
三環式ヘテロアリール基の例としては、カルバゾリル、ベンゾイドリル（benzidolyl）、フェナントロリニル、アクリジニル、フェナントリジニル、およびキサンテニルが挙げられる。
【００５１】
該フレーズ「医薬的に許容される」は本明細書において、適切な医学的判断の範囲内で、妥当な利益/リスク比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずにヒトおよび動物の組織と接触して用いるのに適した、化合物、物質、組成物、および/または剤形を意味するように用いられる。
【００５２】
本明細書で用いる「医薬的に許容される塩」は、親化合物がその酸性塩もしくは塩基性塩を製造することにより修飾される、開示化合物の誘導体を意味する。医薬的に許容される塩の例としては、限定はされないが、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩もしくは有機酸塩;および、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩もしくは有機塩が挙げられる。医薬的に許容される塩には、例えば無毒の無機酸もしくは有機酸から形成された親化合物の通常の無毒の塩または四級アンモニウム塩が含まれる。本発明の医薬的に許容される塩は、通常の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、水中もしくは有機溶媒中またはその２つの混合液中において、遊離酸もしくは塩基の形態のこれらの化合物を、化学量論量の適当な塩基または酸と反応させることによって製造することができ;一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。適切な塩のリストは、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, p. 1418 (1985)に記載されており、該開示は引用により本明細書に援用される。
【００５３】
式(I)の化合物の塩は、例えば、媒質中で、式(I)の化合物と、例えば同等量の酸もしくは塩基とを反応させることによって形成することができ、新しく形成された塩を、例えば、析出させるかまたは凍結乾燥によって単離することができる。無機および/または有機酸を用いて式(I)の化合物が形成できる酸性塩の例としては、限定はされないが、例えば、酢酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酒石酸水素塩、酸性クエン酸塩（acid citrate）、クエン酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、ゲンチジン酸塩（gentisinate）、グルコン酸塩、グルカロン酸塩（glucaronate）、グルタミン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、イソニコチン酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩（acid phosphate）、サッカラート、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、およびパモ酸塩[すなわち、1,1'-メチレン-ビス-(2-ヒドロキシ-3-ナフトエート)]が挙げられる。そのような塩は、当業者に公知の方法に従って製造することができる。
【００５４】
無機および/または有機塩基を用いて式(I)の化合物が形成できる塩基性塩の例としては、限定はされないが、例えば、アンモニウム塩;例えばナトリウム、リチウムおよびカリウム塩のような、アルカリ金属塩:例えばカルシウムおよびマグネシウム塩のような、アルカリ土類金属塩;例えばベンザチン、ジシクロヘキシルアミン、2-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール(トリスアミンもしくはトリス)、ヒドラバミン(例えば、N,N-ビス(デヒドロアビエチル)エチレンジアミンなど)、N-メチル-D-グルカミン、N-メチル-D-グリカミド、およびt-ブチルアミンのような、有機塩基を用いて形成される塩;例えばアルギニンおよびリジンのような、アミノ酸を用いて形成される塩;ならびに、例えば低級アルキルハライド(例えば、メチル、エチル、プロピルおよびブチルの、塩化物、臭化物およびヨウ化物)、硫酸ジアルキル(例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、および硫酸ジアミル)、長鎖ハライド(例えば、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルの、塩化物、臭化物およびヨウ化物)、およびアラルキルハライド(例えば、臭化ベンジルおよび臭化フェネチル)のような、塩基性窒素-含有基を四級化する剤（agent）を用いることにより形成される塩が挙げられる。そのような塩は、当業者に公知の方法に従って製造することができる。
【００５５】
加えて、式(I)の化合物は、製造後に単離および精製して、重量で99％以上の式(I)の化合物(「実質的に純粋」)を含む組成物を得て、次いでそれを本明細書に記載のとおり用いるかまたは製剤化するのが好ましい。そのような「実質的に純粋」な式(I)の化合物もまた、本発明の一部として本明細書において意図される。
【００５６】
in vivoで変換されて生理活性剤(すなわち、式(I)の化合物)を供することができるいずれの化合物も、本発明の範囲および精神内におけるプロドラッグである。
【００５７】
本明細書で用いる用語「プロドラッグ」には、当業者に公知の方法を用いて、式(I)の化合物の１つ以上のヒドロキシルを、アルキル、アルコキシもしくはアリール置換アシル化剤と反応させて、アセテート、ピバレート、メチルカーボネート、ベンゾエートなどを生成させることによって形成される、エステルおよびカーボネートが含まれる。
【００５８】
様々な形態のプロドラッグが当分野において周知であり、以下:
a)Wermuth, C.G. et al., The Practice of Medicinal Chemistry, Chapter 31, Academic Press (1996);
b)Design of Prodrugs, Bundgaard, H. ed., Elsevier (1985); 
c)Bundgaard, H., Chapter 5, “Design and Application of Prodrugs,” A Textbook of Drug Design and Development, pp. 113-191, Krosgaard-Larsen, P. et al., eds., Harwood Academic Publishers (1991);および、
d)Testa, B. et al., Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH (2003)
に記載されている。
【００５９】
加えて、式(I)の化合物は、製造後に単離および精製して、重量で99％以上の式(I)の化合物(「実質的に純粋」な化合物I)を含む組成物を得て、次いでそれを本明細書に記載のとおり用いるかまたは製剤化するのが好ましい。そのような「実質的に純粋」な式(I)の化合物もまた、本発明の一部として本明細書において意図される。
【００６０】
「治療上有効な量」は、S1P1に対するアゴニストとして作用するのに有効であるか、または血管疾患もしくは自己免疫疾患の処置もしくは予防に有効である、本発明の化合物単独の量か、特許請求された化合物の組み合わせの量か、または他の活性成分と組み合わされた本発明の化合物の量を包含することを意図する。
【００６１】
本明細書で用いる「処置すること」または「処置」には、哺乳動物、とりわけヒトにおける疾患状態の処置が含まれ、ならびに:(a)とりわけ、哺乳動物が疾患状態に罹りやすいが、まだ罹患していると診断されていない場合において、哺乳動物での疾患状態が生じるのを予防すること;(b)疾患状態の抑制、すなわち、その進行を抑止すること;および/または(c)疾患状態を軽減すること、すなわち、疾患状態の退行をもたらすこと、が含まれる。
【００６２】
本明細書で用いる「処置すること」または「処置」には、哺乳動物、とりわけヒトにおける疾患状態の処置が含まれ、ならびに:(a)とりわけ、哺乳動物が疾患状態に罹りやすいが、まだ罹患していると診断されていない場合において、哺乳動物での疾患状態が生じるのを予防すること;(b)疾患状態の抑制、すなわち、その進行を抑止すること;および/または(c)疾患状態を軽減すること、すなわち、疾患状態の退行をもたらすこと、が含まれる。
【００６３】
本発明の化合物は１個以上のさらなる不斉炭素原子を有し得ることから、２つ以上の立体異性体が存在する。本発明は、可能な個々の立体異性体、それらの個々の互変異性体、並びにそれらの混合物の全てを含む。ジアステレオ異性体の分離は、従来の技術、例えば、本発明の化合物またはその適当な塩もしくは誘導体の立体異性体混合物の分別結晶、クロマトグラフィーまたはHPLCにより達成されうる。該化合物の個々のエナンチオマーはまた、必要に応じて、対応する光学的に純粋な中間体からか、または分割（例えば、適当なキラル担体を用いた対応するラセミ体のHPLC、または対応するラセミ体と適当な光学活性な酸または塩基との反応によって形成されたジアステレオ異性体塩の分別結晶）によって、製造されてもよい。本発明の化合物の全ての立体異性体は、混合形態か、または純粋もしくは実質的に純粋な形態のいずれかであることが意図される。
【００６４】
本発明の化合物は、本発明の化合物に出現する原子の全ての同位体を含むことを意図する。同位体には、原子番号が同一であるが質量数が異なる原子が含まれる。一般的な例として、限定されることなく、水素の同位体にはジュウテリウムおよびトリチウムが含まれる。炭素の同位体としては13Cおよび14Cが挙げられる。同位体で標識された本発明の化合物は一般に、当業者に公知の通常の技法によってか、または本明細書に記載されたものと類似した方法によって、他で用いられる非標識試薬の代わりに適切な同位体-標識試薬を用いて、製造することができる。
【００６５】
１つ以上の無毒の、医薬的に許容される担体および/または希釈剤および/またはアジュバント(本明細書中では「担体」物質と総称する)、および、必要であれば、他の有効成分と合わせて式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を含む医薬組成物のクラスもまた、本発明の範囲内に包含される。式(I)の化合物は、いずれかの適当な投与経路で、好ましくはそのような投与経路に適応した医薬組成物の形態で、および目的とする治療に有効な用量で投与されうる。本発明の化合物および組成物は、例えば、通常の医薬的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルを含む用量単位剤形の状態で、経口、粘膜、または非経口（parentally）（血管内、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、胸骨内および注入技法を含む）で投与してもよい。例えば、該医薬担体はマンニトールまたはラクトースおよび微結晶セルロースの混合物を含み得る。該混合物は、例えば滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウムなど）および崩壊剤（例えばクロスポビドンなど）などのさらなる成分を含み得る。該担体混合物はゼラチンカプセルに充填するか、または錠剤として圧縮してもよい。
【００６６】
本発明の医薬的に活性な化合物を薬学の従来の方法に従って加工処理して、ヒトおよび他の哺乳類を含む患者への投与用薬剤を製造することができる。
【００６７】
経口投与において、該医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル、懸濁剤または液剤の形態であってよい。該医薬組成物は、好ましくは特定の量の有効成分を含有する用量単位の形態で製造される。そのような用量単位の例は、錠剤またはカプセルである。例えば、これらは、約1から2000 mg、好ましくは約1から500 mg、より好ましくは約5から150 mgの量の活性成分を含みうる。ヒトまたは他の哺乳類に適した１日量は、患者の症状および他の因子に依存して幅広く変えてもよいが、再度、ルーチンな方法を用いて決定することができる。
【００６８】
投与する化合物の量、および本発明の化合物および/または組成物を用いた病状の治療のための投与レジメンは、対象の年齢、体重、性別および病状、疾患の種類、疾患の重篤性、投与経路および投与回数、および用いる特定の化合物などの様々な因子に依存する。従って、該投与レジメンは大きく変化させてもよいが、標準的な方法を用いて既定通りに決定することができる。１日量は、約0.01から1500 mg/kg体重、好ましくは約0.5から約50 mg/kg体重、最も好ましくは約0.1から20 mg/kg体重が適切であり得る。該１日量を、１日当たり１から４回で投与することができる。
【００６９】
治療目的で、本発明の活性化合物は、通常、指定された投与経路に適する１つ以上のアジュバントと組み合わされる。経口投与の場合、該化合物を、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、ゼラチン、アカシアガム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および/またはポリビニルアルコールと混合した後、投与しやすいように錠剤化するかまたはカプセルに包んでもよい。そのようなカプセルまたは錠剤には、ヒドロキシプロピルメチルセルロース中に活性化合物が分散した状態で提供することができるような、徐放剤形が含まれうる。
【００７０】
式(I)の化合物を含有するエマルジョンの油相は、既知の方法で既知の成分から構成されうる。該相は単に乳化剤のみを含んでよい一方、少なくとも1つの乳化剤と、脂肪もしくは油、または脂肪および油の両方との混合物を含んでもよい。好ましくは、親水性乳化剤は安定剤として作用する親油性乳化剤と共に含まれる。また、油および脂肪の両方が含まれることも望ましい。一緒になって、安定剤の有無にかかわらず乳化剤はいわゆる乳化ワックスを組成し、該ワックスは油および脂肪と一緒になって、クリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化軟膏基剤を組成する。本発明の製剤における使用に適した乳化剤およびエマルジョン安定剤には、Tween 60、Span 80、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ラウリル硫酸ナトリウム、ジステアリン酸グリセリルが、単独か、またはワックスもしくは当分野で周知の他の物質と共に含まれる。
【００７１】
医薬的なエマルジョン製剤に用いられることが多い大部分の油中における該活性化合物の溶解性は非常に低いので、該製剤に適した油または脂肪の選択は、所望する美容特性の達成に基づく。従って、該クリーム剤は望ましくは、チューブまたは他の容器からの漏出を回避する適当な稠度の非-油脂性、非-染色性および水洗性の生成物であるべきである。直鎖または分枝鎖のモノ-またはジ-塩基性アルキルエステル（例えば、ジイソアジピン酸エステル、ステアリン酸イソセチル、ヤシ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、ミスチリン酸イソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸2-エチルヘキシルなど）または分枝鎖エステルの混合物が用いられうる。これらは、単独または目的の特性に応じた組み合わせで用いられ得る。あるいは、高融点の脂質（例えば白色軟パラフィンおよび/または流動パラフィンなど）、または他の鉱油を用いることができる。
【００７２】
非経口投与用製剤は、水性または非-水性の等張無菌注射用液剤または懸濁剤の形態であってよい。これらの液剤および懸濁剤は、経口投与用製剤での使用について記載した１つ以上の担体または希釈剤を用いて、あるいは他の適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、無菌粉末または顆粒から製造されうる。該化合物は、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、コーンオイル、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム、トラガカントゴム、および/または様々なバッファー中に溶解させてよい。他のアジュバントおよび投与方法は、製薬の分野において十分にかつ広く知られている。該活性成分はまた、適切な担体（生理食塩水、ブドウ糖または水が含まれる）、またはシクロデキストリン(すなわちキャプティソル（登録商標）)、共溶媒可溶化剤(すなわちプロピレングリコール)もしくはミセル可溶化剤(すなわちTween80)を有する組成物として注入により投与してもよい。
【００７３】
該無菌の注射用製剤はまた、無毒の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌の注射用液剤または懸濁剤、例えば1,3-ブタンジオールの液剤、であってよい。許容されるビヒクルおよび溶媒のうちで用いてもよいものは、水、リンガー液、および生理食塩水である。加えて、無菌の固定油が、溶媒または懸濁化媒質として通常用いられる。この目的のため、いずれの刺激の少ない固定油（合成モノ-またはジグリセリドが含まれる）を用いてもよい。さらに、脂肪酸（例えばオレイン酸など）が注射剤の製造で用いられる。
【００７４】
該医薬組成物は、通常の製薬工程（例えば滅菌など）で処理してもよく、および/または通常のアジュバント（例えば保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、バッファーなど）を含んでもよい。錠剤および丸薬は、さらに腸溶コーティングで製造することができる。そのような組成物はまた、アジュバント（例えば湿潤剤、甘味剤、香料、および芳香剤）を含みうる。
【００７５】
本発明の医薬組成物は、式(I)の化合物、または医薬的に許容されるその塩、および適宜、いずれかの医薬的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルから選択されるさらなる物質（agent）を含んでよい。本発明の別の組成物は、本明細書に記載の式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩、および医薬的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを含む。
【００７６】
本発明の医薬組成物に用いてもよい医薬的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルには、限定はされないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、自己乳化型ドラッグデリバリーシステム(SEDDS)（例えばd-α-トコフェロールポリエチレングリコール 1000 コハク酸塩）、医薬剤形で用いる界面活性剤（例えばTweenまたは他の同様のポリマーデリバリーマトリックスなど）、血清タンパク質（例えばヒト血清アルブミン）、緩衝物質（例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム）、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩または電解質（例えばプロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレン-ブロック重合体、ポリエチレングリコール）および羊毛脂が含まれる。シクロデキストリン（例えば、α-、β-、およびγ-シクロデキストリン）または化学修飾誘導体（例えば、2-および3-ヒドロキシプロピル-シクロデキストリンを含むヒドロキシアルキルシクロデキストリン）、または他の可溶化誘導体もまた、本明細書に記載の式の化合物の送達を高めるために、有利に用いられうる。
【００７７】
（有用性）
ヒト免疫系は、感染症、疾患または死を引き起こし得る、微生物、ウイルス、および寄生生物から身体を防御するように発展してきた。複雑な制御メカニズムは、免疫系の様々な細胞成分が、個体に永久的もしくは著しいダメージをもたらすことなく、外来物質または器官を標的とすることを確実なものとする。現時点では起因事象はよく分かっていないが、自己免疫疾患状態において、該免疫系はその炎症反応を罹患個体の標的器官に向ける。種々の自己免疫疾患は、典型的には、影響を受ける主要なもしくは最初の標的器官もしくは組織により特徴づけられる;例えば、関節リウマチの場合は関節、橋本甲状腺炎の場合は甲状腺、多発性硬化症の場合は中枢神経系、１型糖尿病の場合は膵臓、そして、炎症性腸疾患の場合は腸。従って、免疫系においてまたは免疫系のある特定の細胞型(例えば、B-リンパ球、およびTリンパ球、T細胞)において作用する治療薬は１つ以上の自己免疫疾患において有用性を有しうることが認められている。
【００７８】
S1P受容体は自己免疫疾患を含む幅広い治療的適用のための良好な標的であることが、本明細書に引用された文献を含め、当分野において良く認識されている。S1P受容体は、個々の受容体が組織-特異的および反応-特異的の両方であるため、良好な薬物標的となる。１つの受容体に対して選択的なアゴニストもしくはアンタゴニストの開発によって、その受容体を含有し、望ましくない副作用を制限する組織に対する細胞応答が限局化されるので、S1P受容体の組織特異性は重要である。S1P受容体の反応特異性はまた、他のプロセスに影響を与えることなく、ある特定の細胞応答を惹起もしくは抑制するアゴニストもしくはアンタゴニストの開発を可能にするので、重要である。従って、あるいくつかのS1P受容体ファミリーメンバー上では作用するが、他のファミリーメンバーにおいては活性が低下しているかもしくは活性のない化合物が望ましく、改善された副作用プロファイル(すなわち、望ましくない副作用の縮小または排除)とともに、治療効果をもたらすことが予期される。
【００７９】
本明細書で用いる、S1P1に関する該用語「アゴニスト」は、薬理作用（例えば、T細胞の運動性の低下、T細胞のトラフィッキングの低下、またはリンパ組織からのT細胞の放出の低下）を発現する物質を言う。(Rosen et al., Trends in Immunology, 28:102(2007)).
【００８０】
アゴニストとしてのそれらのS1P1活性のおかげで、本発明の化合物は自己免疫疾患もしくは慢性炎症疾患の処置もしくは予防に有用な免疫調節剤である。本発明の化合物は、免疫抑制が整っている免疫系（例えば、骨髄）、器官もしくは移植片拒絶、自己免疫疾患および慢性炎症疾患（全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、１型糖尿病（diabete mellitus）、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ぶどう膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス眼症、および喘息を含む）を抑制するのに有用である。
【００８１】
より具体的には、本発明の化合物は:器官もしくは組織の移植、移植に関連してもたらされる移植片対宿主病、自己免疫症候群（関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、１型糖尿病、ぶどう膜炎、後部ぶどう膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎を含む）、感染後自己免疫疾患（リウマチ熱および感染後糸球体腎炎を含む）、炎症性および過剰増殖性皮膚疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症（cutaneous eosinophilia）、エリテマトーデス、ざ瘡、円形脱毛症、角結膜炎、春季カタル、ベーチェット病に関連するぶどう膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮ジストロフィー（dystrophia epithelialis corneae）、角膜白斑、眼類天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼症、フォークト・小柳・原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆性閉塞性気道疾患（reversible obstructive airway disease）、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、粉塵喘息、慢性もしくは難治性の喘息、遅発型喘息および気道過敏症、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患および血栓症により引き起こされる血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎、熱傷に関連する腸の病変、セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、片頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギラン・バレー症候群、メニエール病、多発性神経炎（polyneuritis）、反復性神経炎（multiple neuritis）、単発神経炎、神経根障害、甲状腺機能亢進症、バセドウ病、赤芽球癆、再生不良性貧血、低形成性貧血（hypoplastic anemia）、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、無顆粒球症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、赤血球形成不全、骨粗鬆症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑（leukoderma vulgaris）、尋常性魚鱗癬（ichthyosis vulgaris）、光アレルギー性過敏症、皮膚T細胞リンパ腫、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症候群、結節性多発動脈炎、心筋症、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、脂肪症、好酸球性筋膜炎、脱毛の予防もしくは発毛をもたらすことおよび/または発毛および毛髪の成長の促進による歯肉、歯周組織、歯槽骨、歯セメント質（substantia ossea dentis）、糸球体腎炎、男性型脱毛症または老人型脱毛症の病変、筋ジストロフィー、濃皮症（pyoderrna）およびセザリー症候群、アジソン病、保存か、移植かもしくは虚血性疾患で生じる器官の虚血再灌流障害、エンドトキシンショック、偽膜性大腸炎、薬剤もしくは放射線照射により引き起こされる大腸炎、虚血性急性腎不全、慢性腎不全、肺-酸素もしくは薬剤により引き起こされる中毒症、肺癌、肺気腫、白内障、鉄沈着症、網膜色素変性症、老人性黄斑変性症、硝子体瘢痕（vitreal scarring）、角膜アルカリ熱傷（corneal alkali burn）、多形性紅斑皮膚炎（dermatitis erythema multiforme）、線状IgA水疱性皮膚炎（linear IgA ballous dermatitis）およびセメント皮膚炎（cement dermatitis）、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、環境汚染、加齢��発癌、カルシノーマの転移および高山病により引き起こされる疾患、ヒスタミンもしくはロイコトリエン-C4放出により引き起こされる疾患、ベーチェット病、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、肝部分切除、急性肝壊死、毒素、ウイルス性肝炎、ショック、もしくはアノキシアにより引き起こされる壊死、B型ウイルス性肝炎、非-A/非-B型肝炎、硬変症、アルコール性肝硬変、肝不全、劇症肝不全、遅発性肝不全、慢性肝不全の急性憎悪（“acute-on-chronic” liver failure）、化学治療効果の増強、サイトメガロウイルス感染症、HCMV感染症、AIDS、癌、老年認知症、トラウマ、ならびに慢性細菌感染症、からなる群から選択される疾患もしくは障害の処置もしくは予防に有用である。
【００８２】
移植に対する抵抗または器官もしくは組織の移植拒絶反応の予防または処置を必要とする哺乳動物患者において、それらを予防もしくは処置する方法もまた本発明内において具体化され、それには式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を投与することが含まれる。移植に対する抵抗または移植拒絶反応の予防または処置のために治療上有効な量が投与されうる。
【００８３】
さらなる別の実施態様は、免疫系の抑制を必要とする哺乳動物患者において免疫系を抑制する方法であって、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を患者に投与することを含む方法である。免疫系を抑制するために治療上有効な量が投与されうる。
【００８４】
何よりもとりわけ、本明細書に記載の方法は、骨髄または器官移植拒絶反応を処置または予防する方法であって、そのような処置または予防が必要な哺乳動物患者に式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を投与することを含む方法を包含する。骨髄または器官移植拒絶反応の処置または予防のために治療上有効な量が投与されうる。
【００８５】
一実施態様は、自己免疫疾患および/または炎症性疾患の処置方法であって、それを必要とする哺乳動物に少なくとも１つの式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を投与することを含む方法を提供する。別の実施態様は、免疫疾患および/または炎症性疾患の処置のための療法において用いるための、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。別の実施態様において、自己免疫疾患および/または炎症性疾患の処置もしくは予防のための医薬の製造における式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩の使用を提供する。これらの実施態様において、治療上有効な量が用いられうる。好ましくは、これらの実施態様において、該自己免疫性および炎症性疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患(クローン病および潰瘍性大腸炎を含む)、乾癬、または薬剤として防ぐ移植器官の拒絶反応（as an agent to prevent the rejection of transplanted organs）から選択される。
【００８６】
別の実施態様において、血管疾患を処置するための方法であって、それを必要とする哺乳動物に少なくとも１つの式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を投与することを含有する方法を提供する。別の実施態様は、血管疾患の処置のための療法における使用のための式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。別の実施態様において、血管疾患の処置のための医薬の製造における式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩の使用を提供する。これらの実施態様において、治療上有効な量が用いられうる。好ましくは、これらの実施態様において、該血管疾患はアテローム性動脈硬化症または虚血再灌流障害から選択される。
【００８７】
S1P1-関連症状を処置する方法には、式(I)の化合物を単独か、あるいは、互いに組み合わせてかおよび/またはそのような症状の処置に有用な他の適切な治療薬と組み合わせて、投与することが含まれうる。従って、「治療上有効な量」は、S1P1受容体においてアゴニストとして作用するのに有効である請求の化合物の組み合わせの量を含むことも意図する。化合物の組み合わせは、好ましくは、相乗的な組み合わせである。相乗作用は、例えばChou et al., Adv. Enzyme Regul. 22:27-55 (1984)によって記載されるように、組み合わせて投与された場合の化合物の効果が、単剤として単独で投与された場合の化合物の相加効果よりも大きい場合に生じる。通常、相乗効果は、該化合物の最適以下（sub-optimal）の濃度にて最も明瞭に示される。相乗作用は、低い細胞毒性の観点から、個々の成分と比べた場合の組み合わせの有効性もしくは他の有益な効果を増大させることができる。
【００８８】
そのような他の治療薬の例としては、副腎皮質ステロイド薬もしくはグルココルチコイド、例えばデキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、およびプレドニゾン;PDE4阻害薬、例えばロリプラム、シロミラスト、ロフルミラスト、およびオグレミラスト;サイトカイン抑制性抗炎症薬(CSAID)およびp38キナーゼの阻害薬、米国特許第4,200,750号に開示の4-置換イミダゾ[1,2-A]キノキサリン;細胞表面分子、例えば、CD2、CD3、CD4、CD8、CD20（例えばリツキサン（登録商標））、CD25、CD30、CD40、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90、CTLA（例えば、アバタセプト(オレンシア（登録商標）)、またはそれらのリガンド（CD154(GP39、もしくはCD40L)を含む）を対象とする抗体もしくは融合タンパク質;ヒトサイトカインもしくは成長因子に対する抗体か、あるいはヒトサイトカインもしくは成長因子の融合タンパク質かまたは可溶性受容体（例えば、インフリキシマブ(レミケード（登録商標）)、エタネルセプト(エンブレル（登録商標）)、アダリムマブ(ヒュミラ（登録商標）)といったTNF、LT、Il-1（例えばアナキンラ(キネレット（登録商標）)(IL-1受容体アンタゴニスト)）、IL-2、IL-4、IL-5、Il-6（例えばCNTO 328(キメラ抗-IL-6抗体)）、Il-7、Il-8、Il-12、Il-15、Il-16、Il-17、Il-21、Il-23、例えばウステキヌマブ(ヒト抗-IL-12/23モノクローナル抗体)、ならびにインターフェロン（例えばインターフェロンβ 1a(アボネックス（登録商標）、REBIF（登録商標）)、インターフェロンβ 1b(BETASERON（登録商標）);インテグリン受容体アンタゴニスト、例えばタイサブリ（登録商標）;高分子剤、例えば酢酸グラチラマー(コパクソン（登録商標）);スルファサラジン、メサラミン、ヒドロキシクロロキン、非-ステロイド系抗炎症薬(NSAID)、例えばサリチル酸塩（アスピリン、サルサラート、およびサリチル酸マグネシウムを含む）および非-サリチル酸塩（例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、メロキシカム、セレコキシブおよびロフェコキシブ）;抗ウイルス薬、例えばアバカビル;抗増殖薬、例えばメトトレキサート、メルカプトプリン、レフルノミド、シクロスポリン、ミコフェノレート（mycophenololate）、FK506(タクロリムス、プログラフ（登録商標）);細胞傷害性薬剤、例えばアザチオプリンおよびシクロホスファミド;核移行阻害剤（nuclear translocation inhibitor）、例えばデオキシスパガリン(DSG);金含有製剤、例えばオーラノフィン（auronofin）;ペニシラミン（penicllamine）、およびラパマイシン(シロリムスもしくはラパミューン（登録商標）)、あるいはそれらの誘導体が挙げられる。
【００８９】
上記の他の治療薬は、本発明の化合物と組み合わせて用いる場合、例えば、Physicians' Desk Reference(PDR)に示される量か、または他に当業者により決定される量で用いられうる。本発明の方法において、そのような他の治療薬は、本発明の化合物より前、同時、または後に投与してもよい。
【００９０】
（製造方法）
本発明の化合物は、有機合成の分野の当業者に周知の多くの方法で製造することができる。本発明の化合物は、以下に記載される方法、ならびに有機合成化学の分野で公知の合成方法、あるいは当業者により認められているその改変方法を用いて合成することができる。好ましい方法としては、限定はされないが、以下に記載のものが挙げられる。本明細書中の全ての引用文献は、引用によりその全般が援用される。
【００９１】
本発明の化合物は、この項に記載の反応および技法を用いて製造されうる。該反応は、用いる試薬および物質に適した溶媒中で実施され、もたらされる変換に適切である。また、以下に記載の合成方法の説明において、提示した反応条件（溶媒の選択、反応雰囲気、反応温度、実験時間およびワークアップ方法を含む）は全て、該反応の標準である条件となるように選択されていると理解され、それは当業者によって容易に認識されるであろう。分子の様々な部分に存在する官能性が、提示された試薬および反応に適合しなければならないことは、有機合成の分野の当業者により理解される。反応条件に適合する置換基がそのように制限されることは当業者にとっては容易に明白であり、代替方法が用いられなくてはならない。これにより、本発明の目的の化合物を得るために、合成工程の順序を改変する判断か、またはさらに別の１つのプロセススキームを選択する判断が、しばしば必要とされうる。また、この分野のいずれの合成経路の計画における別の主流の判断が、本願に記載の化合物に存在する反応性官能基の保護のために用いられる保護基の賢明な選択であることが認識されるであろう。Greeneら(Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley and Sons (1999))により、熟練した施術者のための多くの別法についての信頼できる説明が記載されている。
【００９２】
式(I)の化合物は、以下のスキームにおいて説明される方法を参照することによって、製造されうる。そこに示されるように、最終生成物は、式(I)の化合物と同じ構造式を有する化合物である。スキームに従って、試薬を適切に選択して適切に置換することにより、いずれの式(I)の化合物も製造されうることが理解されるであろう。溶媒、温度、圧力、および他の反応条件は、当業者により容易に選択されうる。出発物質は市販されているか、あるいは当業者により容易に製造される。化合物の組成は、この項かまたは明細書の他の部分に記載される通りである。
【００９３】
スキーム1に示すとおり、本発明のオキサジアゾール化合物(1.4)は、様々なカップリング試薬(例えば、EDC、HOBt、BOP、BOP-Cl)を用いてカルボン酸(1.1)とN'-ヒドロキシベンズイミドアミド(1.2)を反応させることによって製造されうる。別法として、該N'-ヒドロキシベンズイミドアミドを、酸フルオリド化合物(1.5)もしくは酸クロリド化合物(1.6)と反応させてもよい。各場合において、はじめに形成された該N'-アシルオキシベンズイミドアミド(1.3)は、該反応条件下において、オキサジアゾールに自然に変換しうる。該N'-アシルオキシベンズイミドアミド(1.3)が自然に環化しない場合は、それを単離し、反応条件で処理して、1.4への脱水環化を達成してもよい。そのような条件には、加熱(従来型かマイクロ波のいずれか)、またはフルオリド源(例えばテトラブチルアンモニウムフルオリド)を用いた処理が含まれうる。
スキーム1
【化１５】
2012515788.tif 000017
【００９４】
上記の手段によって酸(1.1)、酸フルオリド(1.5)もしくは酸クロリド(1.6)と(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(2.1)を反応させて構造2.2の化合物を製造することを介して、式(I)の化合物を製造してもよい。酸(例えば、トリフルオロ酢酸)を用いた処理によるtert-ブチル エステル誘導体(2.2)の脱保護により、式(I)の化合物を得る。
スキーム2
【化１６】
2012515788.tif 000018
【００９５】
別法として、式(I)の化合物はまた、スキーム3に記載の通りに製造されうる。上記の手段によって、酸(1.1)、酸フルオリド(1.5)もしくは酸クロリド(1.6)と(Z)-N'-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ベンズイミドアミド(3.2)を反応させて、構造3.3の化合物を製造することができ、それを、対応するアルデヒド(3.4)に酸化させた後、アゼチジン-3-カルボン酸(3.5)もしくはtert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート(3.6)を用いた還元的アミノ化を経て、各々、式(I)もしくは2.2の化合物を得ることができる。化合物2.2を、上記のとおり、式(I)の化合物に変換してもよい。上記の方法を介した、酸(1.1)、酸フルオリド(1.5)、もしくは酸クロリド(1.6)と、(Z)-N'-ヒドロキシ-4-(メチル)ベンズイミドアミド(3.7)との反応によって構造3.8の化合物を得ることができ、それをベンジル位でハロゲン化(例えば、N-ブロモスクシンイミドを用いて)して、3.9を得ることができる。3.9とアゼチジン-3-カルボン酸(3.5)もしくはtert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート(3.6)との反応により、各々、式(I)もしくは2.2の化合物が得られる。
スキーム3
【化１７】
2012515788.tif 000019
【００９６】
tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート(3.6)は、アゼチジン-3-カルボン酸(3.5)から、アミンを(例えば、CBZ基を用いて)保護した後、カップリング試薬(例えば、CDI)の存在下においてtert-ブチル アルコールを用いて該酸をエステル化し、次いでアミン保護基を除去することにより、製造されうる。(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(2.1)は、tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート(3.6)と4-ホルミルベンゾニトリル(4.2)を還元条件下において反応させて4.3を得た後、ヒドロキシルアミンと反応させることにより、得ることができる。別法として、還元条件下においてアゼチジン-3-カルボン酸(3.5)と4-ホルミルベンゾニトリル(4.2)を反応させることによって得られる4.5をエステル化することにより、化合物4.3を製造してもよい。
スキーム4
【化１８】
2012515788.tif 000020
【００９７】
本発明のカルボン酸フラグメント(1.1)は、5-位にカルボン酸基を有するイソオキサゾールに関してスキーム5に記載されたものを含む様々な方法により製造されうる。塩基性条件下におけるクロロ-オキシム5.1と置換プロピオレート(5.2)との反応によりイソオキサゾールカルボキシレート(5.3 / 5.4)の混合物（通常は異性体5.3が優勢）が得られる。該異性体の分離(例えば、シリカゲルクロマトグラフィーまたは逆相プレパラティブHPLCにより)後、5.4を加水分解して、所要のイソオキサゾールカルボン酸(5.5)得てもよい。塩基性条件下においてクロロ-オキシム5.1と置換プロパルギルアルコール(5.6)を反応させることによって、イソオキサゾールカルボキシレート(5.7 / 5.8)の混合物（通常は異性体5.8が優勢）が得られる。該異性体の分離(例えば、シリカゲルクロマトグラフィーまたは逆相プレパラティブHPLCにより)後、5.8を酸化させて、酸5.5を得てもよい。また、5.1と置換2-ブロモ-アクリレート(5.9)との反応を介して位置選択的に、エステル5.4を得てもよい。クロロ-オキシム5.1を無置換プロピオレート(5.10)と反応させると、位置選択的にイソオキサゾール5.12が得られる。その後、該無置換のイソオキサゾール位をハロゲン化誘導体(5.13)に変換してもよく、次いでそれをさらなる変換（限定はされないが、遷移金属クロスカップリング反応もしくは挿入反応を含む）に用いてもよい。この方法において、4-トリフルオロメチル イソオキサゾール(5.14)は、4-ブロモイソオキサゾール 5.13と様々なトリフルオロメチル化試薬(例えば、メチル 2,2-ジフルオロ-2-(フルオロスルホニル)アセテート/ヨウ化銅(I)か、メチル 2-クロロ-2,2-ジフルオロアセテート/フッ化カリウム/ヨウ化銅(I)か、またはトリメチル(トリフルオロメチル)シラン/フッ化カリウム/ヨウ化銅(I))との反応を介して得られうる。
スキーム5
【化１９】
2012515788.tif 000021
【００９８】
スキーム6には、3-位にカルボン酸基を有するイソオキサゾールへのアプローチが記載されている。イソオキサゾール-3-カルボキシルエステル(6.3)は、熱分解条件(不活性溶媒における加熱)下における内部アルキン(6.1)とジメチル 2-ニトロマロネート(6.2)との反応か、または塩基性条件下における内部アルキン(6.1)とクロロ-オキシム6.5との反応から、製造されうる。次いで、エステル(6.3)の加水分解により、酸(6.4)が得られる。末端アルキン(6.8)とクロロ-オキシム6.5との反応によって、4-位での置換がないイソオキサゾールエステルがもたらされる。その後、無置換のイソオキサゾール位をハロゲン化誘導体(6.7)に変換し、次いでそれをさらなる変換（限定はされないが、遷移金属クロスカップリング反応もしくは挿入反応を含む）に用いて、化合物6.3への経路を得てもよい。
スキーム6
【化２０】
2012515788.tif 000022
（略語）
Ac            アセチル
AcOH          酢酸
aq.            水性（または水溶液）
CDI            カルボニルジイミダゾール
Bn            ベンジル
Bu            ブチル
Boc            tert-ブトキシカルボニル
DMAP          ジメチルアミノピリジン
DMA            N,N-ジメチルアセトアミド
DMF            ジメチルホルムアミド
DMSO          ジメチルスルホキシド
EDC            1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩
EtOAc        酢酸エチル
Et             エチル
EtOH         エタノール
H            水素
h            時間
i            イソ
HPLC          高圧液体クロマトグラフィー
HOAc          酢酸
LC            液体クロマトグラフィー
Me            メチル
MeOH          メタノール
分            分
M+1            (M+H)+
MS            質量分析
n            規定濃度
PhCONCS        ベンジルイソチオシアネート（benzyolyisothiocyanate）
Pd/C          パラジウム炭素
Ph            フェニル
Pr             プロピル
PSI            ポンド/平方インチ
Ret Time      保持時間
rtまたはRT        室温
sat.          飽和
t            第三級
TFA            トリフルオロ酢酸
THF            テトラヒドロフラン
Phenomenex    Phenomenex, Macclesfield, Cheshire, UK
YMC            YMC, Inc, Wilmington, NC 20403
【実施例】
【００９９】
以下の実施例は、本発明の特定の好ましい実施態様を例示するものであり、本発明の範囲を制限するものではない。化学的な略語および記号ならびに科学的な略語および記号は、他に特別の定めのない限り、それらの通常および慣習の意味を有する。本明細書の実施例および他の部分で用いられるさらなる略語は、上記されている。共通中間体は、通常、１つ以上の実施例の製造に有用であり、中間体1、中間体2などのように連続的に識別され、Int.1、Int.2などのように省略される。場合によって、共通中間体の製造には、製造するために複数の工程が必要とされうる。各工程は、共通中間体および工程により特定される(例えば、Int.1-A、Int.1-B、その他）。実施例の化合物は、それが製造される実施例および工程(例えば、「1-A」は実施例1，工程Aを示す)によってか、あるいは、該化合物が実施例の表題の化合物である場合は実施例のみ(例えば、「1」は実施例1の表題の化合物を示す)によって特定される。場合によっては、中間体もしくは実施例の別の製法が記載される。合成の分野に熟練した化学者によって、１つ以上の検討事項、例えば、より短い反応時間、より安価な出発物質、操作の容易さ、触媒作用の受けやすさ、有害な試薬の回避、特定の機器使用のアクセス性、および直線的な工程数の減少、などに基づく望ましい別の製法が、しばしば考案されうる。別の製法を記載する意図は、本発明の実施例の製造をさらに可能にすることである。
【０１００】
マイクロ波オーブン（microwave oven）で実施することを明記している実験は、SmithSynthesizerオーブン（Personal Chemistry製）かまたはDiscoverマイクロ波オーブン（CEM社製）において実施した。該マイクロ波オーブンは、60〜250℃の間で選択することができる温度を発生させる。該マイクロ波オーブンは、0〜300 PSIの圧力を自動的にモニターする。反応ホールド時間および温度設定値がレポートされる。
【０１０１】
中間体1(Int.1)の製造
tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)-ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化２１】
2012515788.tif 000023
Int.1-A. 1-(ベンジルオキシカルボニル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化２２】
2012515788.tif 000024
水(1.75 L)中のアゼチジン-3-カルボン酸(88 g, 0.871 mol)および炭酸水素ナトリウム(161 g, 1.92 mol)溶液に、室温にて、ベンジル 2,5-ジオキソピロリジン-1-イルカーボネート(239 g, 0.959 mol)／テトラヒドロフラン(3.5 L)溶液を加えた。該反応混合液を、終夜、室温にて撹拌した。溶媒を減圧下において除去し、水層を酢酸エチル(2 x 500 mL)で洗浄した。該水層を、1.0 N 塩酸水溶液を用いて酸性化し、酢酸エチル(3 x 750 mL)で抽出した。有機層を、水で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、1-(ベンジルオキシカルボニル)アゼチジン-3-カルボン酸を、無色の油状物として得た(202 g, 99％収率)。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.27分であった - カラム: YMC COMBISCREEN（登録商標） ODS-A 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 236.15.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.39 - 3.49 (m, 1H), 4.22 (d, J=7.28 Hz, 4H), 5.11 (s, 2H), および 7.29 - 7.39 (m, 5H).
【０１０２】
Int.1-B. 1-ベンジル 3-tert-ブチル アゼチジン-1,3-ジカルボキシレート
【化２３】
2012515788.tif 000025
1-(ベンジルオキシカルボニル)アゼチジン-3-カルボン酸(200 g, 0.851 mol)／ジクロロメタン(6.0 L)溶液に、0℃にて、t-ブタノール(158 g, 2.13 mol)、DMAP(52.0 g, 0.425 mol)、およびEDCI(163 g, 0.853 mol)を加えた。該反応液を室温で終夜撹拌した。該反応混合液を濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解させ、10％クエン酸水溶液で洗浄し、10％炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水炭酸水素ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、1-ベンジル-3-tert ブチル-アゼチジン-1,3-ジカルボキシレート(200 g, 81％収率)を、無色の油状物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.27分であった - カラム: YMC COMBISCREEN（登録商標） ODS-A 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 292.15.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.46 (s, 9H), 3.24 - 3.33 (m, 1H), 4.14 (d, J=7.53 Hz, 4H), 5.10 (s, 2H), および 7.30 - 7.39 (m, 5H).
【０１０３】
Int.1-C. tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート
【化２４】
2012515788.tif 000026
酢酸エチル(1.40 L)中の1-ベンジル-3-tert-ブチル-アゼチジン-1,3-ジカルボキシレート(140 g, 0.480 mol)および10％パラジウム炭素(28.0 g)の混合液を、終夜、3.0kg/cm2の水素圧下のオートクレーブの中に入れた。該反応混合液を、セライト（登録商標）を通して濾過し、該セライト（登録商標）ベッドを酢酸エチルで洗浄した。酢酸(28.9 g, 0.480 mol)を該濾液に加え、それを、温度を50℃以下に維持しながら減圧下において濃縮して、tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート酢酸塩(96 g, 92％収率)を無色の油状物として得た。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.47 (s, 9H), 2.02 (s, 3H), 3.52 - 3.63 (m, 1H), および 4.00 - 4.10 (m, 4H).
【０１０４】
Int.1-D. tert-ブチル 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化２５】
2012515788.tif 000027
tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート酢酸塩(92.0 g, 0.423 mol)／メタノール(1.0 L)溶液に、室温にて、4-ホルミルベンゾニトリル(50.8 g, 0.381 mol)を加えた。該反応混合液を0℃に冷却し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(28.8 g, 0.458 mol)を少しずつ加えた(注意:シアン化物が産生される可能性あり)。該反応混合液を、室温に昇温させ、終夜撹拌した。該反応混合液を減圧下において濃縮し、残渣を10％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集め、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、20％の酢酸エチル／石油エーテル混合液を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、tert-ブチル 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(89％)を得た(クロマトグラフィー後、Int.1-Dは少量の4-ヒドロキシメチルベンゾニトリルを含んでいたが、さらなる精製は行わずに次の工程に進めた)。 LC/MS M+1 = 273.18.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.46 (s, 9H), 3.22 - 3.31 (m, 3H), 3.48 - 3.56 (m, 2H), 3.66 (s, 2H), 7.39 (d, J=8.28 Hz, 2H), および 7.60 (d, J=8.28 Hz, 2H).
【０１０５】
Int.1. tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの製造
【化２６】
2012515788.tif 000028
tert-ブチル-1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(89.0 g, 0.326 mol)／tert-ブタノール(1.30 L)に、炭酸水素ナトリウム(109.8 g, 1.31 mol)およびヒドロキシルアミン塩酸塩(45.5 g, 0.654 mol)を加えた。該反応液を、7時間還流加熱した後、室温まで冷却し、終夜撹拌した。該反応混合液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集め、水で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、溶離液として0.2％トリエチルアミンを含有する2.5％メタノール／クロロホルムを用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得た(64 g, 0.210 mol, 2工程で55％収率)。該化合物は、HPLC 保持時間 = 7.03分であった - カラム: XBridge フェニル 150x4.6 mm 3.5u, SC/749. 1mL/分 溶媒A = 5％MeCN, 95％H2O, 0.05％TFA; 溶媒B = 95％MeCN, 5％H2O, 0.05％TFA.  時間/％B: 0分/0％, 15分/50％, 18分/100％, 20分/100％。 LC/MS M+1 = 306.2.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.45 (s, 9H), 3.23 - 3.30 (m, 3H), 3.49 - 3.57 (m, 2H), 3.63 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 7.31 (d, J=8.28 Hz, 2H), および 7.57 (d, J=8.28 Hz, 2H).
【０１０６】
Int.1-D. tert-ブチル 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの別の製造
【化２７】
2012515788.tif 000029
Int.1-E. 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化２８】
2012515788.tif 000030
ジクロロメタン(20 mL)およびメタノール(80 mL)中の4-ホルミルベンゾニトリル(2.88 g, 22.0 mmol)、アゼチジン-3-カルボン酸(2.02 g, 20 mmol)、および酢酸(1.15 mL, 20.0 mmol)の混合液を、室温で1時間撹拌した。ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド(6.78 g, 32.0 mmol)を加え、室温で18時間撹拌を続けた。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を水(50 mL)およびジエチルエーテル(50 mL)間に分配した。水層を集め、ジエチルエーテル(50 mL)で洗浄し、濃縮した。残渣を水(20 mL)に溶解させ、2.5 x 20 cm HP-20カラムにロードした[HP-20ゲルの調製:〜400 mlの乾燥した未使用のMCI CHP-20ゲル(75-150ミクロン)を、24時間、メタノールで膨潤させた。該ゲルを、濾過し、1リットルのメタノールですすいだ。次いでそれを、メタノール下にて保存用ボトルに移した。使用の直前に、目的の量のゲルを20容積の水で十分にすすいだ]。カラムを、240 mLの水および400 mLのメタノールで溶出した。画分を含む生成物を濃縮し、エタノールおよび酢酸エチル/ヘプタンから共エバポレートして、1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸 (3.25 g, 15.0 mmol, 75％収率)を白色の固形物として得た。 MS:(M+H) = 217.18.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 3.39 (m, 1H), 4.08 (m, 4H),  4.32 (s, 2H), 7.63 (d, J= 8.3 Hz, 2H), および 7.82 (d, J= 8.3 Hz, 2H).
【０１０７】
Int.1-Alt.D2. tert-ブチル 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化２９】
2012515788.tif 000031
ジクロロエタン(150 mL)中の1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(3.25 g, 15.0 mmol)、DMAP(1.84 g, 15.0 mmol)、およびtert-ブタノール(14.1 mL, 150 mmol)の混合液に、EDC(4.32 g, 22.5 mmol)を加え、該反応混合液を週末にかけて撹拌した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を、酢酸エチル(250 mL)および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(250 mL)間に分配した。有機層を、水(250 mL)で洗浄し、食塩水(100 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、薄黄色の油状物を得て、それを、5 x 15 cm シリカゲルカラム（0-40％酢酸エチル/ヘキサングラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理し、tert-ブチル 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(3.5 g, 12.9 mmol, 86％収率)を無色の液状物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.38分 - カラム: YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 273.18.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.46 (s, 9H), 3.26 (m, 3H), 3.52 (m, 2H),  3.66 (s, 2H), 7.39 (d, J= 8.3 Hz, 2H), および 7.60 (d, J= 8.3 Hz, 2H).
【０１０８】
実施例1
1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化３０】
2012515788.tif 000032
1-A. N-ヒドロキシピコリンイミドイルクロリド
【化３１】
2012515788.tif 000033
N,N-ジメチルホルムアミド(55 mL)中の(E)-ピコリンアルデヒドオキシム(6.75 g, 55.3 mmol)の無色で均一な溶液に、室温にて、N-クロロスクシンイミド(7.38 g, 55.3 mmol)を少しずつ加えた。該NCSの〜1/5を加えた後、該反応混合液を60℃の油浴に入れ、残りのNCSを1.5時間かけて少しずつ加えた。添加が完了した後、均一な反応混合液を60℃で60分間撹拌した後、室温まで冷却した。水(400 mL)を加え、該水性混合液をエーテル(3 x 200 mL)で抽出した。有機層を集め、水(2 x 200 mL)で洗浄し、食塩水の飽和水溶液(100 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、N-ヒドロキシピコリンイミドイルクロリド(6.45 g, 41.2 mmol, 75％収率)を黄褐色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 0.515分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 156.8.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.37 - 7.43 (m, 1H), 7.80 (td, J=7.78, 1.76 Hz, 1H), 7.91 - 7.97 (m, 1H), 8.72 (d, J=4.02 Hz, 1H), および 9.85 (br. s., 1H).
【０１０９】
1-B. エチル 3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート
【化３２】
2012515788.tif 000034
ジクロロメタン(90 mL)中のN-ヒドロキシピコリンイミドイルクロリド(4.67 g, 29.8 mmol)およびエチル 4,4,4-トリフルオロブタ-2-イノエート(4.50 g, 27.1 mmol)の黄色の均一な混合液に、室温にて、トリエチルアミン(7.93 mL, 56.9 mmol)を30分かけてゆっくりと加えた。添加の間に、該反応混合液はゆっくりと濃い色になった。該反応液を、室温で終夜撹拌した。該溶媒を減圧下において除去し、残渣をエーテル(100 mL)で希釈し、水(100 mL)で洗浄した。有機層を集め、水層をエーテル(2 x 100 mL)で抽出した。有機層を合わせて、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下において濃縮した。HPLCによると、該生成混合物には、目的の異性体とその位置異性体の〜15:85の混合物が含まれていた。該混合物をプレパラティブHPLCにより精製し、目的の画分を減圧下において濃縮した。残渣を酢酸エチル(100 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(100 mL)で洗浄し、食塩水(50 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、エチル 3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート(0.518 g, 1.81 mmol, 6.7％収率)を淡黄色で粘稠性の油状物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.18分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 286.9.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.46 (t, J=7.15 Hz, 3H), 4.54 (q, J=7.03 Hz, 2H), 7.46 (ddd, J=7.53, 4.77, 1.25 Hz, 1H), 7.76 - 7.81 (m, 1H), 7.83 - 7.89 (m, 1H), および 8.78 (d, J=4.77 Hz, 1H).
【０１１０】
エチル 3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート(1B)の別の製造
1-B-1. エチル 2,3-ジブロモ-4,4,4-トリフルオロブタノエート:
【化３３】
2012515788.tif 000035
(E)-エチル 4,4,4-トリフルオロブタ-2-エノエート(50 g, 297 mmol)／四塩化炭素(50 mL)溶液に、窒素下において室温で、臭素(18.4 mL, 357 mmol)を30分かけて滴下した。得られた暗赤色の溶液を4時間還流した。さらなる臭素(2ml)を加え、HPLC分析によって出発物質が消費されたことが示されるまで、加熱を続けた。該反応混合液を減圧下において濃縮して薄茶色の油状物を得て、それをさらなる精製は行わずに次の工程に用いた。HPLC(XBridge 5μ C18 4.6x50 mm, 4 mL/分, 溶媒A: 0.2％H3PO4含有10％MeOH/水、溶媒B: 0.2％H3PO4含有90％MeOH/水、ならびに、4分にわたる0-100％Bのグラジエント):2.96および3.19分.
【０１１１】
1-B-2. (Z/E)-エチル 2-ブロモ-4,4,4-トリフルオロブタ-2-エノエート
【化３４】
2012515788.tif 000036
0℃に冷却したエチル 2,3-ジブロモ-4,4,4-トリフルオロブタノエート(1-B-1)／ヘキサン(200 mL)溶液に、トリエチルアミン(49.7 ml, 357mmol)を35分かけて滴下し、その間に白色の沈殿が生じた。該反応混合液を、LCにより完全な変換が示されるまで、さらに2時間撹拌した。該固形物を濾過し、ヘキサン(3 x 50mL)ですすぎ、濾液を濃縮し、10％酢酸エチル/ヘキサンで溶出する短いシリカゲルパッドを通して、(Z/E)-エチル 2-ブロモ-4,4,4-トリフルオロブタ-2-エノエート(65.5 g, 265mmol, ２工程で89％収率)を無色の油状物として得た。別法として、該粗生成物を蒸留(85℃/〜60 mmHg)により精製することができる。 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.41 (q, 1H, J = 7.28 Hz), 4.35 (q, 2H, J = 7.11 Hz), 1.38 (t, 3H, J = 7.15 Hz); HPLC (XBridge 5μ C18 4.6x50 mm, 4 mL/分, 溶媒A: 0.2％H3PO4含有10％MeOH/水, 溶媒B: 0.2％H3PO4含有90％MeOH/水, 4分にわたる0-100％Bのグラジエント): 3.09分.
【０１１２】
1-B. エチル 3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレートの別の製造
【化３５】
2012515788.tif 000037
酢酸エチル(10 mL)中の(Z)-エチル 2-ブロモ-4,4,4-トリフルオロブタ-2-エノエート(1.58 g, 6.39 mmol)および(E,Z)-N-ヒドロキシピコリンイミドイルクロリド(2.0 g, 12.8 mmol)の溶液に、塩化インジウム(III)(0.283 g, 1.28 mmol)を加えた。得られた混合液を、窒素下において30分間撹拌した後、炭酸水素カリウム(0.959 g, 9.58 mmol)を加えた。該反応混合液を14時間撹拌した。該混合液を濾過し、該固形物を酢酸エチル(10 ml)ですすいだ。該濾液を、飽和塩化アンモニウム水溶液(10 mL)で洗浄し、食塩水(10 mL)で洗浄し、濃縮した。残渣を、溶媒としてEtOAc/ヘキサンを用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含む画分をプールし、濃縮して、目的の異性体, エチル 3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレートと目的でない異性体, エチル 3-(ピリジン-2-イル)-5-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-4-カルボキシレートの約30:1の比の混合物としての生成物(1.15g, 63％収率)を、油状物として得た。 MS m/e 287.02 (M+H+); 1H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 8.73 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.01(m, 1H), 7.87(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.65(m, 1H), 4.53 (q, J = 8.0 Hz, 2H,), 1.46 (t, J = 8.0 Hz, 3H); HPLC (XBridge 5μ C18 4.6x50 mm, 4 mL/分; 溶媒A: 0.2％H3PO4含有10％MeOH/水; 溶媒B: 0.2％H3PO4含有90％MeOH/水, 4分にわたる0-100％Bのグラジエント): 3.57分.
【０１１３】
1-C. 3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸
【化３６】
2012515788.tif 000038
メタノール(12 mL)および水(3 mL)中のエチル 3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート(511 mg, 1.79 mmol)の溶液に、室温にて、水酸化リチウム, 水和物(74.9 mg, 1.79 mmol)を加えた。該反応混合液を1時間撹拌した。1N 塩酸水溶液(1.8 mL)を加え、溶媒を減圧下において除去し、3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸 + 1LiCl(531 mg, 1.767 mmol, 99％収率)を白色の固形物として得た。該化合物はHPLC 保持時間 = 0.725分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 258.8.  1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.59 (dd, J=7.03, 5.02 Hz, 1H), 7.82 (d, J=7.78 Hz, 1H), 8.01 (td, J=7.78, 1.76 Hz, 1H), および 8.73 (d, 1H).
【０１１４】
1-D. tert-ブチル 1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化３７】
2012515788.tif 000039
N,N-ジメチルホルムアミド(0.5 mL)中の3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸, 1xLiCl(0.030 g, 0.100 mmol)、tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1(0.037 g, 0.120 mmol)、BOP-Cl(0.031 g, 0.120 mmol)、およびトリエチルアミン(0.042 mL, 0.300 mmol)の混合液を、週末にかけて室温で撹拌した。該反応混合液をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、1％メタノール／ジクロロメタン混合液を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.032 g, 0.061 mmol, 61％収率)を、白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.74分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 528.3.  1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 3.23 - 3.30 (m, 1H), 3.40 (t, J=7.56 Hz, 2H), 3.55 (t, J=8.25 Hz, 2H), 3.74 (s, 2H), 7.53 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.62 (ddd, J=7.56, 4.81, 1.10 Hz, 1H), 7.95 (d, J=7.70 Hz, 1H), 8.02 - 8.07 (m, 1H), 8.16 (d, J=8.25 Hz, 2H), および 8.78 (d, J=4.95 Hz, 1H).
【０１１５】
tert-ブチル 1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(1-D)の別の製造
1-E. エチル 3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート
【化３８】
2012515788.tif 000040
滴下漏斗および温度計を備えた３つ口の1000 mlフラスコ(水に入れてある)中の(Z)-N-ヒドロキシピコリンイミドイルクロリド(29.7 g, 190 mmol)／ジクロロメタン(311 mL)懸濁液に、エチル プロピオレート(19.3 mL, 190 mmol)を加えた。該滴下漏斗に、トリエチルアミン(31.7 mL, 228 mmol)／ジクロロメタン(20 mL)を入れ、温度を20℃から28℃の間に維持しながら(氷を水浴に加えることにより)、この溶液を該反応混合液にゆっくりと滴下した。トリエチルアミンを完全に添加した後、水浴を取り外し、該反応混合液を室温で30分間撹拌した。次いで、該混合液を酢酸エチル(350 mL)および水間に分配した。有機層を集め、食塩水で洗浄し、水層を合わせ、酢酸エチルで洗浄した。有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下においてある程度濃縮して、黄褐色の結晶を得て、それを減圧濾過により集め、ヘキサンで洗浄して、該生成物を得た(14.4 g)。濾液を減圧下において濃縮し、残渣を酢酸エチル／ヘキサン20％混合液を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。全部の生成物を２つのバッチに集め(１つは微量の遅い移動スポット（slower running spot）を有した)に集め、濃縮した。ヘキサンを残渣に加え、該生成物を無色のプリズムとして結晶化した(20.1g)。総生成物収量: 34.5 g, 158 mmol, 83％収率.  該化合物は、HPLC 保持時間 = 1.82分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 218.9  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.35 (t, J=7.15 Hz, 3H), 4.41 (q, J=7.15 Hz, 2H), 7.55 - 7.60 (m, 1H), 7.68 (s, 1H), 8.01 (t, J=7.70 Hz, 1H), 8.10 (d, J=8.25 Hz, 1H), および 8.75 (d, J=4.40 Hz, 1H).
【０１１６】
1-F. 5-(3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール
【化３９】
2012515788.tif 000041
氷浴で冷却した、N,N-ジメチルホルムアミド(210 mL)中のエチル 3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート(13.6 g, 62.5 mmol)および(Z)-N'-ヒドロキシ-4-メチルベンズイミドアミド(9.68 g, 62.5 mmol)の溶液に、60％水素化ナトリウム(6.25 g, 156 mmol)を少しずつ加えた。添加後、該反応混合液を室温に昇温させ、1時間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、水(500 mL)を加え、該混合液を室温で30分間撹拌した。該固形物を減圧濾過により集め、メタノールでトリチュレートし、再び集めて、5-(3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール(17.8 g, 93％収率)を固形物として得た。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.86分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 305+.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.46 (s, 3H), 7.35 (d, J=8.28 Hz, 2H), 7.41 - 7.47 (m, 1H), 7.83 - 7.91 (m, 2H), 8.09 (d, J=8.28 Hz, 2H), 8.20 (d, J=8.03 Hz, 1H), および 8.76 (d, J=5.02 Hz, 1H).
【０１１７】
1-G. 5-(4-ブロモ-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール
【化４０】
2012515788.tif 000042
アセトニトリル(12 mL)中の5-(3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール(655 mg, 2.15 mmol)、N-ブロモスクシンイミド(536 mg, 3.01 mmol)、およびPdOAc2(97 mg, 0.430 mmol)の溶液を、30分間、マイクロ波によって120℃まで加熱した。該反応を同様のスケールで３回さらに繰り返し、各反応チューブの内容物を合わせて、濾過した。該固形物を集め、メタノール(10 mL)でトリチュレートし、減圧濾過により集めて、5-(4-ブロモ-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール(3.24 g, 87％収率)を得た。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.96分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 385+.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.46 (s, 3H), 7.35 (d, J=8.03 Hz, 2H), 7.49 (ddd, J=7.65, 4.89, 1.00 Hz, 1H), 7.91 (td, J=7.78, 1.76 Hz, 1H), 8.03 (d, J=7.78 Hz, 1H), 8.12 (d, J=8.28 Hz, 2H), および 8.86 (d, J=4.77 Hz, 1H).
【０１１８】
1-H. 5-(4-ヨード-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール
【化４１】
2012515788.tif 000043
アセトニトリル(14 mL)中の5-(3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール(1.0 g, 3.29 mmol)、1-ヨードピロリジン-2,5-ジオン(1.11 g, 4.76 mmol)、およびPdOAc2(0.148 g, 0.657 mmol)の溶液を、40分間、マイクロ波によって120℃まで加熱した。該反応を同様のスケールで4回さらに繰り返し、各反応チューブの内容物を合わせ、濃縮し、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc - 4/1で溶出)により精製して、5-(4-ヨード-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール(5.35 g, 76％収率)を得た。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.81分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 431+.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.46 (s, 3H), 7.36 (d, J=8.03 Hz, 2H), 7.46 - 7.52 (m, 1H), 7.90 (td, J=7.72, 1.63 Hz, 1H), 8.01 (d, J=7.78 Hz, 1H), 8.12 (d, J=8.28 Hz, 2H), および 8.86 (d, J=4.27 Hz, 1H).
【０１１９】
1-I. 5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール
【化４２】
2012515788.tif 000044
メソッドA:N,N-ジメチルホルムアミド(12 mL)およびHMPA(1.33 mL)中の5-(4-ブロモ-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール(600 mg, 1.39 mmol)、ヨウ化銅(I)(80 mg, 0.418 mmol)、およびメチル 2,2-ジフルオロ-2-(フルオロスルホニル)アセテート(0.82 mL, 6.41 mmol)の溶液を、25分間、マイクロ波によって85℃まで加熱した。該反応を、基本的に同じスケールで3回さらに繰り返し、各反応チューブの内容物を合わせ、酢酸エチル(150 mL)で希釈し、10％塩化リチウム水溶液(50 mL)で洗浄し、飽和塩化アンモニウム水溶液(50 mL)で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮させた後、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc - 4/1で溶出)により精製して、5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール(992 mg, 48％)を得た。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.98分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 373+.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 2.46 (s, 3H), 7.36 (d, J=7.97 Hz, 2H), 7.50 (td, J=5.29, 2.89 Hz, 1H), 7.89 - 7.94 (m, 2H), 8.10 (d, J=8.25 Hz, 2H), および 8.83 (d, J=4.67 Hz, 1H).
【０１２０】
メソッドB:N,N-ジメチルホルムアミド(13 mL)およびHMPA(1.444 mL)中の5-(4-ヨード-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール(1.07 g, 2.49 mmol)、ヨウ化銅(I)(0.142 g, 0.746 mmol)、およびメチル 2,2-ジフルオロ-2-(フルオロスルホニル)アセテート(1.49 mL, 11.7 mmol)の溶液を、33分間、マイクロ波により75℃にて加熱した。該反応を、基本的に同じスケールで4回さらに繰り返し、各反応の内容物を合わせ、酢酸エチル(800 mL)で希釈し、10％塩化リチウム水溶液(2 x 200 mL)で洗浄し、飽和塩化アンモニウム水溶液(200 mL)で洗浄し、食塩水(200 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮させた後、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc - 4/1で溶出)により精製して、5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール(1.88g, 41％収率)を得た。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.98分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 373+.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 2.46 (s, 3H), 7.36 (d, J=7.97 Hz, 2H), 7.50 (td, J=5.29, 2.89 Hz, 1H), 7.89 - 7.94 (m, 2H), 8.10 (d, J=8.25 Hz, 2H), および 8.83 (d, J=4.67 Hz, 1H).
【０１２１】
1-J. 3-(4-(ブロモメチル)フェニル)-5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール
【化４３】
2012515788.tif 000045
5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-3-p-トリル-1,2,4-オキサジアゾール(2.69 g, 7.22 mmol)／アセトニトリル(50 mL)溶液に、75℃にて、N-ブロモスクシンイミド(2.70 g, 15.2 mmol)、続いてAIBN(0.320 g, 1.949 mmol)を加えた。該反応混合液を75℃で2.5時間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、該粗生成物を、酢酸エチル(200 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(50 mL)で洗浄し、水(50 mL)で洗浄し、食塩水(50 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノールでトリチュレートした。得られた固形物を、3-(4-(ブロモメチル)フェニル)-5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール(2.524 g, 77％収率)として集めた。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.86分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 453+.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 4.66 (s, 2H), 7.62 (dd, J=7.03, 5.27 Hz, 1H), 7.66 (d, J=8.03 Hz, 2H), 7.93 - 7.98 (m, 1H), 8.01 - 8.08 (m, 1H), 8.18 (d, J=8.03 Hz, 2H), および 8.79 (d, J=4.77 Hz, 1H).
【０１２２】
1-D. tert-ブチル 1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)-イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの別の製造
【化４４】
2012515788.tif 000046
氷-水浴で冷却した、N,N-ジメチルホルムアミド(40 mL)中の3-(4-(ブロモメチル)フェニル)-5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)-イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール(2.52 g, 5.59 mmol)およびtert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート, 酢酸(1.82 g, 8.39 mmol)の溶液に、トリエチルアミン(2.34 mL, 16.8 mmol)を滴下した。該反応混合液を30分間撹拌し、酢酸エチル(350 mL)で希釈し、10％塩化リチウム水溶液(2 x 100 mL)で洗浄し、水(100 mL)で洗浄し、食塩水(100 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮して粗生成物を得て、それをメタノールでトリチュレートした。得られた固形物を減圧濾過により集めた。該濾液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル - 4/1で溶出)により精製して、さらなる生成物を得た。該物質を合わせて、tert-ブチル 1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(2.46 g, 83％収率)を得た。
【０１２３】
1. 1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸の製造
tert-ブチル 1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.450 g, 0.853 mmol)およびトリフルオロ酢酸(10.19 mL, 132 mmol)の混合液を、室温で60分間撹拌した。トリフルオロ酢酸を減圧下において除去し、残渣を水(15 mL)中に懸濁させた。1N 水酸化ナトリウム水溶液を用いてpHを約4.5に調整し、得られた懸濁液を、2時間撹拌し、減圧下において濾過し、水で洗浄し、減圧下において終夜、十分に乾燥させて、1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(0.306 g, 0.641 mmol, 75％収率)を白色の固形物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.27分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 472.4.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.21 - 3.27 (m, 3H), 3.40 - 3.46 (m, 2H), 3.66 (s, 2H) 7.53 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.66 - 7.70 (m, 1H), 7.98 (d, J=7.70 Hz, 1H), 8.04 - 8.12 (m, 3H), および 8.83 (d, 1H).
【０１２４】
HPLC 純度 99.1/98.8％, 保持時間 = 6.80分(SunFire C18 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B(15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０１２５】
HPLC 純度 98.7/98.7％, 保持時間 = 7.55分(XBridge Ph 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B(15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０１２６】
実施例2
1-(4-(5-(5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化４５】
2012515788.tif 000047
2-A. 5-(トリブチルスタンニル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化４６】
2012515788.tif 000048
オーブン乾燥させた、撹拌子を備えた500 mLの丸底フラスコを、乾燥窒素気流下において冷却した。エチル クロロオキシイミドアセテート(4.95 g, 32.7 mmol)、ジエチルエーテル(100 mL)、およびトリブチル(エチニル)スズ(9.45 mL, 32.7 mmol)を加えて、澄明な淡黄色の溶液を得た。トリエチルアミン(6.83 mL, 49.0 mmol)を、シリンジを介して滴下した。〜500 μL添加後、該溶液は濁った。〜2 mL添加後、該溶液が沸騰し始めたので、冷水浴を導入し、添加速度を遅くした。トリエチルアミンを10分かけてゆっくりと加え、淡黄色の懸濁液を得て、それを室温で終夜撹拌した。該溶液を、ドライアイス浴を用いて冷却し、冷濾過し、冷ジエチルエーテルですすいだ。該濾過物をエバポレートし、高真空下に設置して、淡い琥珀色の油状物(15g)として得た。該油状物を、フラッシュクロマトグラフィー(ISCO, 330gシリカゲル, 5％〜20％酢酸エチル／ヘキサンで溶出)により精製した。生成物画分をエバポレートし、高真空下に設置して、エチル 5-(トリブチルスタンニル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(11 g, 25.3 mmol, 78％収率)を澄明な無色の油状物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 4.47分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 432.12.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.90 (t, J=7.28 Hz, 9H), 1.17 - 1.62 (m, 21H), 4.45 (q, J=7.03 Hz, 2 H), および 6.81 (s, 1H).
【０１２７】
2-B. エチル 5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化４７】
2012515788.tif 000049
20 mL BIOTAGE（登録商標）マイクロ波バイアルおよび撹拌子をオーブン乾燥させ、乾燥窒素気流下において冷却した。該バイアルを、アルゴンでフラッシュし、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)-パラジウム(II)(96 mg, 0.137 mmol)およびジオキサン(12 mL)を入れ、続いて、アルゴンで数分間スパージした。2-ブロモピリジン(0.217 mL, 2.28 mmol)、エチル 5-(トリブチルスタンニル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(980 mg, 2.28 mmol)、および1-ブチル-3-メチルイミダゾリウムヘキサフルオロホフフェート(0.047 mL, 0.228 mmol)を加え、数分間スパージを続けた。該バイアルを密封し、BIOTAGE（登録商標）マイクロ波において150℃で60分間処理した。該溶液を冷却し、エバポレートし、残渣を、ヘキサンで予め平衡化した120gのIscoシリカゲルカートリッジにロードし、その後、0-50％ EtOAc/ヘキサンで溶出した。該生成物画分をエバポレートして、淡黄色の油状物を得て、それを高真空下に設置した後に固化し、エチル 5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(212 mg, 0.972 mmol, 43％収率)を得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.48分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA.  LC/MS M+1 = 219.1.  1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.42 - 1.48 (m, 3H), 4.49 (q, J=7.28 Hz, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.39 (ddd, J=7.53, 4.89, 1.13 Hz, 1H), 7.87 (td, J=7.78, 1.76 Hz, 1H), 7.96 (d, J=7.78 Hz, 1H), および 8.73 (d, 1H).
【０１２８】
2-C. エチル 4-ブロモ-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化４８】
2012515788.tif 000050
トリフルオロ酢酸(6 mL)中のエチル 5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(212 mg, 0.972 mmol)およびN-ブロモスクシンイミド(432 mg, 2.43 mmol)の溶液を、30分間、マイクロ波によって150℃まで加熱した。減圧下において濃縮し、黄色の油状物を得て、それを酢酸エチル(80 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(20 mL)で洗浄し、食塩水(20 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、酢酸エチルとヘキサンの1:3の混合液を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、エチル 4-ブロモ-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(0.217 g, 0.672 mmol, 69％収率)を得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.65分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 299.02.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.48 (t, J=7.15 Hz, 3H), 4.52 (q, J=7.28 Hz, 2H), 7.43 - 7.48 (m, 1H), 7.90 (td, J=7.78, 1.76 Hz, 1H), 8.11 (d, J=8.03 Hz, 1H), および 8.84 (d, 1H).
【０１２９】
2-D. エチル 5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化４９】
2012515788.tif 000051
N,N'-ジメチルホルムアミド(4 mL)およびHMPA(0.444 mL)中のエチル 4-ブロモ-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(190 mg, 0.640 mmol)、ヨウ化銅(I)(36.5 mg, 0.192 mmol)、およびメチル 2,2-ジフルオロ-2-(フルオロスルホニル)アセテート(0.325 mL, 2.56 mmol)の溶液を、75℃で7時間撹拌した。該反応混合液を、先の小スケールの反応物(0.084 mmol)と合わせ、酢酸エチル(80 mL)で希釈し、10％塩化リチウム水溶液(2 x 20 mL)で洗浄し、飽和塩化アンモニウム水溶液(20 mL)で洗浄し、食塩水(20 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、酢酸エチルおよびヘキサンの1:4混合液を用いて、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、エチル 5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(0.138 g, 99％収率)を得た。該生成物はHPLC 保持時間 = 2.84分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 287.12.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 1.45 (t, J=7.15 Hz, 3H), 4.52 (q, J=7.15 Hz, 2H), 7.51 (ddd, J=7.63, 4.88, 1.24 Hz, 1H), 7.83 (d, J=7.70 Hz, 1H), 7.88 - 7.94 (m, 1H), および 8.83 (d, J=4.67 Hz, 1H).
【０１３０】
2-E. 5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボン酸
【化５０】
2012515788.tif 000052
エタノール(4.5 mL)中のエチル 5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(138 mg, 0.482 mmol)および1N 水酸化ナトリウム水溶液(579 μL, 0.579 mmol)の溶液を、室温で30分間撹拌した。該反応混合液を減圧下において濃縮し、残渣を水(0.5 mL)で希釈し、1N 塩酸水溶液を用いてpH〜3.0まで酸性化した。該溶液を酢酸エチル(3 x 2 mL)で抽出した。有機層を水(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボン酸(0.093, 0.361 mmol, 75％収率)を得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 1.57分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 259.0.  1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.60 - 7.65 (m, 2H), 7.92 (d, J=8.03 Hz, 2H), 8.02 - 8.09 (m, 2H), および 8.78 (d, 2H).
【０１３１】
2-F. 5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボニルフルオリド
【化５１】
2012515788.tif 000053
ジクロロメタン(2 mL)中の5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボン酸(54.3 mg, 0.210 mmol)およびピリジン(0.037 mL, 0.463 mmol)の溶液に、フッ化シアヌル(0.021 mL, 0.252 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で2時間撹拌し、ジクロロメタン(2 mL)で希釈し、氷水(1 mL)で洗浄した。水層をジクロロメタン(2 x 1 mL)で抽出し、有機層を合わせて食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボニルフルオリド(0.048 g, 0.185 mmol, 88％収率)を得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.50分であった(該生成物はメタノールと容易に反応し、ごく一部はメチルエステルと特徴づけられた) - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。
【０１３２】
2-G. tert-ブチル 1-(4-(5-(5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化５２】
2012515788.tif 000054
ジクロロメタン(2 mL)中の5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボニルフルオリド(48 mg, 0.185 mmol)およびtert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1 (56.3 mg, 0.185 mmol)の溶液に、ピリジン(37.3 μL, 0.461 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で16時間撹拌した。次いで、該反応混合液を減圧下において濃縮し、残渣を酢酸エチル(3 mL)で希釈し、水(1 mL)で洗浄し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、粗混合物を得て、それをアセトニトリル(2 mL)に溶解させた。1.0M フッ化テトラブチルアンモニウム／テトラヒドロフラン溶液(369 μL, 0.369 mmol)を加え、該溶液を室温で30分間撹拌した。該反応混合液を、酢酸エチル(30 mL)で希釈し、水(10 mL)で洗浄し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(10 mL)で洗浄し、食塩水(10 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、プレパラティブHPLCにより精製して、tert-ブチル-1-(4-(5-(5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得て、それをいずれのさらなる精製は行わずに次の工程に用いた。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.97分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 528.3.
【０１３３】
2. 1-(4-(5-(5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸の製造
tert-ブチル-1-(4-(5-(5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(先の反応物)／ジクロロメタン(0.5 mL)溶液に、トリフルオロ酢酸(0.5 mL)を加え、該混合液を室温で30分間撹拌した。該反応混合液を、減圧下において濃縮し、残渣をトリエチルアミンで処理して、再濃縮した。該生成混合物を、メタノール、ジクロロメタン、および水酸化アンモニウムの混合液(10:90:0 - 10:90:1 - 15:85:1 - 20:80:1)を用いて、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、1-(4-(5-(5-(ピリジン-2-イル)-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(0.007 g, 0.015 mmol)をオフホワイト色の固形物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.33分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 472.0.  1H NMR (500 MHz, メタノール-d3) δ ppm 3.50 (５重線, J=8.25 Hz, 1H), 4.21 - 4.29 (m, 4H), 4.46 (s, 2H), 7.66 - 7.71 (m, 3H), 8.02 - 8.05 (m, 1H), 8.08 - 8.13 (m, 1H), 8.28 (d, J=8.25 Hz, 2H), および 8.83 - 8.85 (m, 1H).
【０１３４】
HPLC 純度 99.5/99.6％, 保持時間 = 6.56分(SunFire C18 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B(15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０１３５】
HPLC 純度 99.5/99.7％, 保持時間 = 7.23分(XBridge Ph 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B(15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０１３６】
実施例3
1-(4-(5-(4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化５３】
2012515788.tif 000055
3-A. 2-(ペンタ-1-イニル)ピリジン
【化５４】
2012515788.tif 000056
N,N-ジメチルホルムアミド(20 mL)中の2-ヨードピリジン(0.519 mL, 4.88 mmol)、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)クロリド(0.205 g, 0.293 mmol)、ヨウ化銅(I)(0.046 g, 0.244 mmol)、およびジイソプロピルアミン(2.78 mL, 19.5 mmol)の脱気した溶液に、1-ペンチン(0.721 mL, 7.32 mmol)を加えた。該反応液を、85℃まで3時間加熱した。該反応混合液を、室温まで冷却し、酢酸エチル(150 mL)で希釈し、10％塩化リチウム水溶液(2 x 100mL)で洗浄し、2M 水酸化アンモニウム水溶液(100 mL)で洗浄し、食塩水(100 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサン/酢酸エチル(3/2)を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、2-(ペンタ-1-イニル)ピリジン(636 mg, 4.31 mmol)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 0.982分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 146.3.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.06 (t, 3H), 1.67 (dt, J=7.23 Hz, 2H), 2.43 (t, J=7.15 Hz, 2H), 7.18 (ddd, J=7.65, 4.89, 1.00 Hz, 1H), 7.38 (d, J=7.78 Hz, 1H), 7.62 (td, J=7.72, 1.88 Hz, 1H), および 8.55 (d, J=4.27 Hz, 1H).
【０１３７】
3-B. メチル 4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化５５】
2012515788.tif 000057
トルエン(3 mL)中の2-(ペンタ-1-イニル)ピリジン(150 mg, 1.03 mmol)、ジメチル ニトロマロネート(0.35 mL, 2.58 mmol)、および1-ブチル-3-メチルイミダゾリウム ヘキサフルオロホフフェート(0.021 mL, 0.103 mmol)の溶液を、マイクロ波下において、170℃まで120分間加熱した。該反応混合液を濃縮して粗生成物を得て、それをヘキサン/酢酸エチル(10/1)を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(14.3 mg, 0.052 mmol)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.05分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 247.1.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.97 (t, 3H), 1.66 (sxt, J=7.48 Hz, 2H), 3.15 - 3.20 (m, 2H), 4.01 (s, 3H), 7.33 (ddd, J=7.56, 4.81, 1.10 Hz, 1H), 7.83 (td, J=7.77, 1.79 Hz, 1H), 7.91 (d, J=7.97 Hz, 1H), および 8.72 (d, J=4.12 Hz, 1 H).
【０１３８】
3-C. 4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボン酸
【化５６】
2012515788.tif 000058
メタノール(1 mL)中のメチル 4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(14.3 mg, 0.058 mmol)および1N 水酸化ナトリウム水溶液(87 μL, 0.087 mmol)の溶液を、マイクロ波下において100℃で10分間加熱した。該反応混合液を濃縮して、4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボン酸, ナトリウム塩(16 mg)を得た。該物質をさらなる精製は行わずに用いた。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.60分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 233.1.
【０１３９】
3. 1-(4-(5-(4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩の製造
アセトニトリル(1 mL)中の4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボン酸, ナトリウム塩(13.5 mg, 約0.053 mmol)、HOBt(16.0 mg, 0.105 mmol)、およびジイソプロピルエチルアミン(0.041 mL, 0.233 mmol)の溶液に、EDC(26.1 mg, 0.136 mmol)およびtert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1 (17.8 mg, 0.058 mmol)を加えた。該反応混合液を80℃で2時間撹拌し、室温まで冷却し、濃縮して、粗生成物を得た。残渣を、酢酸エチル(3 mL)に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、水(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、プレパラティブHPLCにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得た。[プレパラティブHPLC: カラム: PHENOMENEX（登録商標） S10 30X100 mm; グラジエント時間: 10分; 流速 = 40 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.1％TFA; 開始％B = 20; 最終％B = 100.]
【０１４０】
ジクロロメタン(0.5 mL)およびトリフルオロ酢酸(0.5 mL)中のtert-ブチル 1-(4-(5-(4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの溶液を、室温で30分間撹拌した。該反応混合液を濃縮して、1-(4-(5-(4-プロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸トリフルオロ酢酸塩(17.4 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 7.75分であった - カラム: Xbridge Ph 3.5u 4.6X150 mm; グラジエント時間: 12分, 3分間ホールド; 流速 = 2 ml/分; 溶媒A = 5％MeCN-95％水-0.05％TFA; 溶媒B = 95％MeCN-5％水-0.05％TFA; 開始％B = 10; 最終％B = 100. LC-MS: M+1 = 446+.  1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.04 (t, 3H), 1.73 - 1.83 (m, 2H), 3.34 - 3.40 (m, 2H), 3.73 (t, J=8.25 Hz, 1H), 4.39 (d, J=7.42 Hz, 4H), 4.54 (s, 2H), 7.51 (ddd, J=6.74, 4.67, 2.06 Hz, 1H), 7.70 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.98 - 8.06 (m, 2H), 8.30 (d, J=8.25 Hz, 2H), および 8.78 (d, J=4.40 Hz, 1H).
【０１４１】
実施例4
1-(4-(5-(4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化５７】
2012515788.tif 000059
4-A. 2-(3-メチルブタ-1-イニル)ピリジン
【化５８】
2012515788.tif 000060
N,N-ジメチルホルムアミド(20 mL)中の2-ブロモピリジン(0.604 mL, 6.33 mmol)、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)クロリド(0.267 g, 0.380 mmol)、ヨウ化銅(I)(0.060 g, 0.316 mmol)、およびジイソプロピルジエチルアミン(3.61 mL, 25.3 mmol)の脱気した溶液に、3-メチルブタ-1-イン(0.647 g, 9.49 mmol)を加えた。該反応混合液を、85℃まで16時間加熱し、室温まで冷却し、酢酸エチル(150 mL)で希釈した。該混合液を、10％塩化リチウム水溶液(2 x 100 mL)で洗浄し、2M 水酸化アンモニウム水溶液(100 mL)で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサン/酢酸エチル(3/2)を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、(3-メチルブタ-1-イニル)ピリジン(696 mg, 4.65 mmol, 73％収率)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 1.02分であった - カラム: YMC COMBISCREEN（登録商標） ODS-A 4.6X50 mm S-5; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.1％TFA。 LC-MS: M+1 = 146.32.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.29 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 2.82 (dt, J=13.80, 6.90 Hz, 1H), 7.18 (dd, J=7.65, 4.89 Hz, 1H), 7.37 (d, J=7.78 Hz, 1H), 7.61 (td, J=7.72, 1.13 Hz, 1H), および 8.55 (d, J=4.77 Hz, 1H).
【０１４２】
4-B. メチル 4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化５９】
2012515788.tif 000061
トルエン(7 mL)中の(3-メチルブタ-1-イニル)ピリジン(170 mg, 1.17 mmol)、ジメチル ニトロマロネート(0.395 mL, 2.93 mmol)、および1-ブチル-3-メチルイミダゾリウムヘキサフルオロホフフェート(0.024 mL, 0.117 mmol)の溶液を、マイクロ波下において、170℃まで120分間加熱した。該反応混合液を濃縮し、ヘキサン/酢酸エチル(10/1)を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(11 mg, 0.033 mmol, 2.8％収率)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.96分であった - カラム:YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 247.15.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.36 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 4.02 (s, 3H), 4.03 - 4.10 (m, 1H), 7.33 - 7.38 (m, 1H), 7.80 - 7.90 (m, 2H), および 8.72 - 8.76 (m, 1H).
【０１４３】
4-C. 4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボン酸
【化６０】
2012515788.tif 000062
メタノール(1 mL)中のメチル 4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(11 mg, 0.045 mmol)および1N 水酸化ナトリウム水溶液(67 μL, 0.067 mmol)の溶液を、マイクロ波下において、80℃で30分間加熱した。該反応混合液を濃縮して、4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボン酸, ナトリウム塩(10.4 mg)を得た。該物質を、さらなる精製は行わずに用いた。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.96分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100. ％)。  LC-MS: M+1 = 233.1.
【０１４４】
4. 1-(4-(5-(4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩の製造
アセトニトリル(1 mL)中の4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボン酸塩(10.4 mg, 約0.045 mmol)、HOBt(12.34 mg, 0.081 mmol)、およびジイソプロピルエチルアミン(0.031 mL, 0.179 mmol)の溶液に、EDC(20.2 mg, 0.105 mmol)およびtert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1 (13.68 mg, 0.045 mmol)を加えた。該反応混合液を80℃で5時間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、残渣を酢酸エチル(3 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、水(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、酢酸エチルを用いたプレパラティブTLCプレートでの精製により、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得た。
【０１４５】
tert-ブチル 1-(4-(5-(4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート／ジクロロメタン(0.5 mL)溶液に、トリフルオロ酢酸(0.5 mL)を加え、該反応混合液を室温で30分間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、プレパラティブHPLC[プレパラティブHPLC: カラム: PHENOMENEX（登録商標） S10 30X100 mm; グラジエント時間: 10分; 流速 = 40 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.1％TFA; 開始％B = 20; 最終％B = 100.]により精製して、1-(4-(5-(4-イソプロピル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, トリフルオロ酢酸塩(2.03 mg, 3.47mmol, 7.8％)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 7.58分であった - カラム: Xbridge Ph 3.5u 4.6X150 mm; グラジエント時間: 12分, 3分間ホールド; 流速 = 2 ml/分; 溶媒A = 5％MeCN-95％水-0.05％TFA; 溶媒B = 95％MeCN-5％水-0.05％TFA; 開始％B = 10; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 446.3.  1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.44 (s, 3H), 1.46 (s, 3H), 3.68 - 3.76 (m, 1H), 4.19 (５重線, J=7.15 Hz, 1H), 4.37 - 4.42 (m, 4H), 4.54 (s, 2H), 7.53 (ddd, J=7.49, 4.74, 1.24 Hz, 1H), 7.70 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.96 - 8.00 (m, 1H), 8.00 - 8.05 (m, 1H), 8.30 (d, J=8.25 Hz, 2H), および 8.79 (d, J=4.67 Hz, 1H).
【０１４６】
実施例5
1-(4-(5-(4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化６１】
2012515788.tif 000063
5-A. エチル 5-(ピリジン-2-イル)-4-ビニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化６２】
2012515788.tif 000064
ジオキサン(3 mL)中のエチル 4-ブロモ-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(2-C)(170 mg, 0.572 mmol)、トリブチル(ビニル)スズ(0.504 mL, 1.72 mmol)、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)-パラジウム(II)(24.1 mg, 0.034 mmol)、および1-ブチル-3-メチルイミダゾリウムヘキサフルオロホフフェート(0.012 mL, 0.057 mmol)の溶液を、マイクロ波によって170℃まで120分間加熱した。該反応混合液を酢酸エチル(50 mL)で希釈し、水(10 mL)で洗浄し、食塩水(10 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮して粗生成物を得て、それをヘキサン/酢酸エチル(4/1)を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、エチル 5-(ピリジン-2-イル)-4-ビニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(60 mg, 2.37 mmol, 41％収率)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.80分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 245.2.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 1.42 (t, 3H), 4.47 (q, J=7.19 Hz, 2H), 5.49 (dd, J=11.80, 1.25 Hz, 1H), 5.85 (dd, J=18.07, 1.51 Hz, 1H), 7.26 (dd, J=18.07, 11.80 Hz, 1H), 7.51 (ddd, J=7.03, 5.02, 1.76 Hz, 1H), 7.93 - 8.02 (m, 2H), および 8.72 - 8.75 (m, 1H).
【０１４７】
5-B. エチル 4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化６３】
2012515788.tif 000065
エタノール(3 mL)中のエチル 5-(ピリジン-2-イル)-4-ビニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(40 mg, 0.164 mmol)およびPd/C(3.49 mg, 0.033 mmol)の溶液を、水素下(45 psi)において、5時間、パールシェイカー（Parr Shaker）上に設置した。濾過して触媒を除去した後、減圧下において濃縮して、エチル 4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(36.1 mg, 0.147 mmol, 90％収率)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.13分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 247+.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 1.23 (t, 3H), 1.43 (t, J=7.15 Hz, 3H), 3.17 (q, J=7.53 Hz, 2H), 4.46 (q, J=7.28 Hz, 2H), 7.46 (ddd, J=7.03, 5.14, 1.63 Hz, 1H), 7.90 - 8.01 (m, 2H), および 8.73 (dt, J=4.77, 1.38 Hz, 1H).
【０１４８】
5-C. 4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボン酸
【化６４】
2012515788.tif 000066
メタノール(1 mL)中のエチル 4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(24.6 mg, 0.100 mmol)および1N 水酸化ナトリウム水溶液(150 μL, 0.150 mmol)の溶液を、80℃で20分間加熱した。該反応混合液を濃縮して、4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボン酸, ナトリウム塩(26 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.13分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 219.25.
【０１４９】
5. 1-(4-(5-(4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩の製造
アセトニトリル(1 mL)中の4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-カルボン酸, ナトリウム塩(22 mg)、HOBt(27.8 mg, 0.181 mmol)、およびジイソプロピルエチルアミン(0.070 mL, 0.403 mmol)の溶液に、EDC(45.4 mg, 0.237 mmol)およびtert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1 (30.8 mg, 0.101 mmol)を加えた。該反応混合液を80℃で4時間撹拌した後、減圧下において濃縮した。残渣を、酢酸エチル(3 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、水(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、プレパラティブHPLC[プレパラティブHPLC: カラム: PHENOMENEX（登録商標） S10 30X100 mm; グラジエント時間: 10分; 流速 = 40 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.1％TFA; 開始％B = 20; 最終％B = 100.]により精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得た。
【０１５０】
ジクロロメタン(0.5 mL)およびトリフルオロ酢酸(0.5 mL)中のtert-ブチル 1-(4-(5-(4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの溶液を、室温で30分間撹拌した。該反応混合液を濃縮して、1-(4-(5-(4-エチル-5-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, トリフルオロ酢酸塩(22.9 mg, 0.042 mmol)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 7.33分であった - カラム: Xbridge Ph 3.5u 4.6X150 mm; グラジエント時間: 12分, 3分間ホールド; 流速 = 2 ml/分; 溶媒A = 5％MeCN-95％水-0.05％TFA; 溶媒B = 95％MeCN-5％水-0.05％TFA; 開始％B = 10; 最終％B = 100.  LC-MS: M+1 = 432.3.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 1.36 (t, 3H), 3.41 (q, J=7.53 Hz, 2H), 3.72 (５重線, J=8.34 Hz, 1H), 4.35 - 4.45 (m, 4 H), 4.54 (s, 2H), 7.51 (ddd, J=6.15, 4.77, 2.64 Hz, 1H), 7.70 (d, J=8.53 Hz, 2H), 7.99 - 8.06 (m, 2H), 8.31 (d, J=8.28 Hz, 2H), および 8.78 (ddd, J=4.64, 1.51, 1.38 Hz, 1H).
【０１５１】
実施例6
1-(4-(5-(4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化６５】
2012515788.tif 000067
6-A. (E,Z)-エチル 2-ブロモヘキサ-2-エノエート
【化６６】
2012515788.tif 000068
断熱冷却浴で冷却した、水素化ナトリウム, 60％(0.800 g, 20.0 mmol)／テトラヒドロフラン(40 mL)懸濁液に、ホスホノ酢酸トリエチル(4.00 mL, 20 mmol)を、15分かけて少しずつ加えた。該反応混合液を室温で45分間撹拌した。その後、臭素(1.03 mL, 20.0 mmol)を15分かけて滴下した。反応液への各滴下の直後に該オレンジ色は退色したが;しかしながら、添加が完了した時には薄いオレンジ色がまだ持続しており、該反応混合液は薄いオレンジ色の懸濁液であった。この懸濁液を、40℃まで10分間加熱した後、室温で1時間撹拌した。該反応混合液を10℃まで冷却した。水素化ナトリウム, 60％(0.800 g, 20.0 mmol)を一度に加え、該反応混合液を室温に昇温させて、45分間撹拌した。気体の発生が観察された。次いで、ブチルアルデヒド(1.80 mL, 20.0 mmol)を2分かけて加え、該反応混合液を室温で18時間撹拌した。該反応混合液をエーテル(200 mL)および水(100 mL)間に分配した。有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(150 mL)で洗浄し、水(100 mL)で洗浄し、食塩水(100 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮して、薄黄色の液状物を得て、それを5 x 20 cm シリカゲルカラム（0-5％ EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。純粋な画分を濃縮して、(E,Z)-エチル 2-ブロモヘキサ-2-エノエート(3.61 g, 16.3 mmol, 82％収率)を、無色の液状物として得た。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.81分 (PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODSカラム)。 MS:(M+H) = 221/223.08. [注:該生成物はE/Z異性体の約3:1の混合物であり、さらなる精製は行わずに次の工程に用いた。]
【０１５２】
6-B. エチル 4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート
【化６７】
2012515788.tif 000069
ジクロロメタン(17 mL)およびN,N-ジメチルホルムアミド(1 mL)中の(Z)-N-ヒドロキシピコリンイミドイルクロリド(0.637 g, 4.07 mmol)およびエチル 2-ブロモヘキサ-2-エノエート(0.900 g, 4.07 mmol)の薄オレンジ色の均一な混合液に、室温にて、トリエチルアミン(1.70 mL, 12.2 mmol)を5分かけてゆっくりと加えた。該均一な反応混合液を、室温で週末にかけて撹拌した。溶媒を減圧下において除去し、残渣をエーテル(100 mL)で希釈し、水(3 x 75 mL)で洗浄し、飽和塩化リチウム水溶液(1 x 75 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、超音波処理とともに、ヘキサンでトリチュレートして、赤みを帯びた固形物ならびに目的の生成物および残ったエチル 2-ブロモヘキサ-2-エノエートを含むヘキサン濾過物を得た。減圧下において濃縮した後、酢酸エチルおよびヘキサンの混合液(0:100 - 0.5:99.5 - 1:99)を用いたフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、エチル 4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート(0.015 g, 0.058 mmol, 1.5％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.61分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 261.0.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.92 (t, J=7.42 Hz, 3H), 1.45 (t, J=7.15 Hz, 3H), 1.55 - 1.64 (m, 2H), 3.11 - 3.17 (m, 2H), 4.47 (q, J=7.15 Hz, 2H), 7.37 (dd, J=7.70, 4.95 Hz, 1H), 7.81 (td, J=7.70, 2.20 Hz, 1H), 7.98 (d, J=7.70 Hz, 1H), および 8.72 (d, 1H).
【０１５３】
6-C. 4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボン酸
【化６８】
2012515788.tif 000070
メタノール(1.0 mL)および水(0.5 mL)中のエチル 4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート(0.015 g, 0.058 mmol)および水酸化リチウム, 一水和物(2.418 mg, 0.058 mmol)の混合液を、室温で終夜撹拌した。該反応混合液を乾固するまで濃縮して、4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボン酸, リチウム塩(0.014 g, 0.059 mmol, 102％収率)を淡黄色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 1.70分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 232.8.
【０１５４】
6. 1-(4-(5-(4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸の製造
アセトニトリル(1 mL)中の4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボン酸, リチウム塩(13.5 mg, 0.058 mmol)、tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1 (7.8 mg, 0.058 mmol)、HOBt(16.02 mg, 0.105 mmol)、N1-((エチルイミノ)メチレン)-N3,N3-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン塩酸塩(26.1 mg, 0.136 mmol)、およびジイソプロピルエチルアミン(0.041 mL, 0.233 mmol)の混合液を、80℃で2時間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、残渣を、酢酸エチル(3 mL)希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、水(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、プレパラティブHPLCにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得た。
【０１５５】
tert-ブチル 1-(4-(5-(4-プロピル-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート／ジクロロメタン(0.5 mL)溶液に、トリフルオロ酢酸(0.5 mL)を加えた。該反応混合液を室温で30分間撹拌した後、濃縮して、1-(4-(5-(4-プロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 7.35分であった - カラム: Xbridge Ph 3.5u 4.6X150 mm; グラジエント時間: 12分, 3分間ホールド; 流速 = 2 ml/分; 溶媒A = 5％MeCN-95％水-0.05％TFA; 溶媒B = 95％MeCN-5％水-0.05％TFA; 開始％B = 10; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 446+.  1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.04 (t, 3H), 1.73 - 1.83 (m, 2H), 3.34 - 3.40 (m, 2H), 3.73 (t, J=8.25 Hz, 1H), 4.39 (d, J=7.42 Hz, 4H), 4.54 (s, 2H), 7.51 (ddd, J=6.74, 4.67, 2.06 Hz, 1H), 7.70 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.98 - 8.05 (m, 2H), 8.30 (d, J=8.25 Hz, 2H), および 8.78 (d, J=4.40 Hz, 1H).
【０１５６】
実施例7
1-(4-(5-(4-(メトキシカルボニル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化６９】
2012515788.tif 000071
7-A. ジメチル 3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-4,5-ジカルボキシレート
【化７０】
2012515788.tif 000072
(E,Z)-N-ヒドロキシピコリンイミドイルクロリド(313 mg, 2 mmol)およびジメチル ブタ-2-インジオエート（ynedioate）(0.249 mL, 2.000 mmol)／エーテル(8 mL)溶液に、室温にて、トリエチルアミン(0.307 mL, 2.200 mmol)を5分かけて滴下した。該反応混合液を室温で2時間撹拌した。該反応混合液を油状物まで濃縮して、それを24 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-20％ EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。純粋な画分を濃縮して、ジメチル 3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-4,5-ジカルボキシレート(416 mg, 1.59 mmol, 79％収率)を無色の油状物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 2.35分(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 263.18.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.98 (s, 3H), 4.01 (s, 3H), 7.38 (ddd, J= 7.6, 4.8, 1.1 Hz, 1H),  7.83 (td, J= 7.8, 1.8 Hz, 1H), 8.08 (d, J= 7.8 Hz, 1H), および 8.65 (d, J= 4.8 Hz, 1H). [該生成物には、分析HPLC、LCMSおよびNMRデータによる推定で、約17％の不明な不純物が混入していた。この物質を、さらなる精製は行わずに次の工程に用いた。]
【０１５７】
7-B. 4-(メトキシカルボニル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボン酸
【化７１】
2012515788.tif 000073
メタノール(12 mL)および水(3 mL)中のジメチル 3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-4,5-ジカルボキシレート(410 mg, 1.56 mmol)の溶液に、室温にて、水酸化リチウム, 一水和物(49.2 mg, 1.17 mmol)を加え、該反応混合液を室温で1.5時間撹拌した。その後、メタノールを減圧下において除去し、残った水性残渣を水で〜10 mlまで希釈した。水層を酢酸エチル(20 mL)で洗浄した。次いで、1N 塩酸水溶液を用いて該水相のpHを〜3-4に調整し、該水層を酢酸エチル(2 x 30 ml)で抽出した。有機層を合わせて、乾燥させ(硫酸ナトリウム/硫酸マグネシウム)、濃縮して、60 mgの生成物を得た。水層を無水硫酸ナトリウムで飽和させた後、酢酸エチル(3 x 30 mL)で抽出した。乾燥(硫酸マグネシウム)させて濃縮した後、さらに20 mgの該生成物を得た。全ての物質を合わせて、4-(メトキシカルボニル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボン酸(80 mg, 0.322 mmol, 21％収率)を薄い黄褐色の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.17分 (YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 249.12.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.79 (s, 3H), 7.33 (brs, 1H),  7.75 (m, 1H), 7.81 (m, 1H), および 8.63 (brs, 1H).
【０１５８】
7-C. メチル 5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-4-カルボキシレート
【化７２】
2012515788.tif 000074
ジメチルホルムアミド(1.5 mL)中の4-(メトキシカルボニル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-カルボン酸(79 mg, 0.318 mmol)、tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1 (97 mg, 0.318 mmol)、およびBOP-Cl(97 mg, 0.382 mmol)の混合液に、室温にて、トリエチルアミン(0.133 mL, 0.955 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で終夜撹拌した。いくらかの環化されていない物質が残っていたので、さらに24時間撹拌を続けた。その後、該反応混合液を、酢酸エチル(30 mL)および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(30 mL)間に分配した。有機層を、水(2 x 30 mL)で洗浄し、食塩水(30 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濃縮して、茶色の油状物を得て、それを4 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-70％ EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、メチル 5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-4-カルボキシレート(80 mg, 0.155 mmol, 48.6％収率)を薄い紫色の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 2.91分 (YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 518.20.
【０１５９】
7. 1-(4-(5-(4-(メトキシカルボニル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸の製造
メチル 5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-4-カルボキシレート(79 mg, 0.153 mmol)／トリフルオロ酢酸(2 mL)溶液を、室温で1時間静置した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を水に懸濁させた。1N 水酸化ナトリウム水溶液を用いてpHを〜4に調整し、得られた懸濁液を終夜、活発に撹拌した。濾過し、乾燥させて、1-(4-(5-(4-(メトキシカルボニル)-3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(65 mg, 0.141 mmol, 92％収率)をかすかにオフホワイト色の粉末として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 2.51分(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 462.18.  1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 3.61-3.68 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 4.30-4.37 (m, 4H), 4.50 (s, 2H),  7.53-7.56 (m, 1H),  7.68 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.98-8.02 (m, 1H), 8.09 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 8.8 Hz, 2H), および 8.69 (d, J= 4.4 Hz, 1H).
【０１６０】
実施例8
1-(4-(5-(3-(ピリジン-2-イル)イソオキサゾール-5-イル))-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化７３】
2012515788.tif 000075
実施例8は、上述の一般的方法を用いて製造された。実施例8は、2-Bで出発して製造された。HPLC 保持時間 = 2.33分(YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6 x 50 mm カラム 4分のグラジエントによって); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA; MW 403.4; MS(M+1 = 404.1.
【０１６１】
比較化合物A(Comp. A)
1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
評価のために比較化合物(Comp. A)を製造した。この化合物はWO 2003/062252からの実施例54であり、Hale et al., J. Med. Chem., 6662 (2004)にも記載されている。
【化７４】
2012515788.tif 000076
【０１６２】
Comp. A-1. (Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-カルボニルオキシ)-カルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化７５】
2012515788.tif 000077
N,N-ジメチルホルムアミド(7.5 mL)中の4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-カルボン酸(408 mg, 1.50 mmol)、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1 (458 mg, 1.50 mmol)、HOBT(345 mg, 2.250 mmol)、ヒューニッヒ塩基(1.05 mL, 6.00 mmol)、およびEDC(431 mg, 2.25 mmol)の混合液を、室温で18時間撹拌した。該反応混合液を酢酸エチル(120 mL)および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(60 mL)間に分配した。有機層を、水(2 x 120 mL)で洗浄し、食塩水(120 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(N'-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-カルボニルオキシ)カルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(744 mg, 1.33 mmol, 89％収率)を薄い桃色の固形物として得て、それをさらなる精製は行わずに次の工程に用いた。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC: 保持時間 = 3.26分 (YMC Combi S-5 4.6 x 50 mm ODS カラム)。 MS: (M+H) = 560.25.
【０１６３】
Comp. A-2. tert-ブチル 1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化７６】
2012515788.tif 000078
tert-ブチル 1-(4-(N'-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-カルボニルオキシ)カルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(744 mg, 1.33 mmol)／アセトニトリル(30 mL)溶液に、1M TBAF／テトラヒドロフラン溶液(3.99 mL, 3.99 mmol)を加え、該反応混合液を室温で3日間撹拌した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を、5 x 12 cm シリカゲルカラム（0-50％ EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(521 mg, 0.962 mmol, 72.4％収率)を無色の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.63分(YMC Combi S-5 4.6 x 50 mm ODS カラム)。 MS: (M+H)= 542.22.  1H NMR (500 MHz, CDCL3) δ ppm 1.46 (s, 9H), 3.25 - 3.31 (m, 3H), 3.52 - 3.58 (m, 2H), 3.69 (s, 2H), 7.43 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.47 (m, 5H), 7.91 (s, d, J=1.65 Hz, 1H), および 8.09 (d, J=8.25 Hz, 2 H).
【０１６４】
Comp. A. 1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸の製造
tert-ブチル 1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(518 mg, 0.956 mmol)／トリフルオロ酢酸(15 mL)溶液を室温で1.5時間静置した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を、酢酸エチル/ヘキサン(2 x 10 mL)から共エバポレートした。残渣を水(10 mL)に懸濁させ、1N 水酸化ナトリウム水溶液を用いてpHを〜11に調整した。この溶液に、十分な1N 塩酸水溶液を加えて、pHを〜4.5に調整した。得られた懸濁液を室温で終夜撹拌した。該白色の懸濁液を、中空孔率焼結ガラスフィルター（medium porosity sintered glass filter）を通して濾過し、該濾過ケーキを水で十分に洗浄した。該固形物を乾燥させ、該白色の粉末をメタノール中に懸濁させ、該懸濁液を均一になるまで超音波処理した。メタノールを減圧下において除去し、該手順をさらに２回繰り返して、白色の固形物を得て、それをメタノール(〜30 mL)中の懸濁液として終夜撹拌した。減圧濾過し、乾燥させて、1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸(345 mg, 0.707 mmol, 74％収率)を白色の粉末として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.45分(YMC Combi S-5 4.6 x 50 mm ODS カラム)。 MS: (M+H) = 486.12.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.23 (s, 3H), 3.39 - 3.45 (m, 2H), 3.64 (s, 2H), 7.50 (d, J=8.28 Hz, 2H),  7.58 (m, 5H), 8.02 (d, J=8.28 Hz, 2H), および 8.26 (d, J=1.25 Hz, 1H).  元素分析: C24H18N3O3SF3・0.1H2Oとして計算;計算値: C 59.22,  H 3.76,  N 8.63, S 6.59, F 11.71; 実測値: C24H18N3O3SF3・0.1H2O: C 59.06, H 3.45,  N 8.60, S 6.61, F 11.42; KF (実測値)= 0.25％水.
【０１６５】
（生物学的アッセイ）
S1P1結合アッセイ
ヒトS1P1を発現しているCHO細胞から、膜を調製した。細胞を、20 mM HEPES、pH 7.5、50 mM NaCl、2 mM EDTAおよびプロテアーゼインヒビターカクテル(Roche)を含むバッファー中で分離し、氷上でポリトロンホモジナイザーを用いて破壊した。該ホモジネートを20,000 rpm(48,000g)で遠心分離して、上清を捨てた。該膜ペレットを、50 mM HEPES、pH 7.5、100 mM NaCl、1 mM MgCl2、2 mM EDTAを含むバッファー中に再懸濁させ、タンパク質濃度を測定した後、アリコートで、-80℃にて保存した。
【０１６６】
膜(2 μg/ウェル)および0.03 nM 最終濃度の33P-S1Pリガンド(1 mCi/ml, American Radiolabeled Chemicals)を、化合物プレートに加えた。結合を室温で60分間行い、GF/Bフィルタープレート上に該膜を集めることによって終了させ、そして、TOPCOUNT（登録商標）によって放射活性を測定した。様々な濃度にわたる試験化合物の競合データを、放射性リガンド特異的結合のパーセント阻害としてプロットした。IC50は、特異的結合を50％まで低下させるのに必要な競合リガンドの濃度と定義される。
【０１６７】
本発明の化合物および比較化合物Aを上記のS1P1結合アッセイにおいて試験し、表Aに示される２桁に四捨五入した結果を得た。いくつかの場合において、値は複数の実験の平均であり、ここでNは良好な用量反応曲線が得られた実験の実施数である。１つの実施例のうちの１つ以上のバッチを試験した場合、提示される値は、メソッドAにおいてGTPγS S1P1とGTPγS S1P3との比較が可能であったバッチからのものである(データは表Bに示される)。データは、実施例化合物の異なるバッチにわたる平均化はしなかった。
表A
【表１】
2012515788.tif 000079
【０１６８】
メソッドA:受容体[35S] GTPγS結合アッセイ
化合物を、384 Falcon v-底プレート(3倍希釈において0.5 μl/ウェル)にロードした。S1P1/CHO細胞もしくはEDG3-Ga15-bla HEK293T細胞から調製した膜を、MULTIDROP（登録商標）とともに、該化合物プレートに加えた(40 μl/ウェル、最終的にタンパク質 3 μg/ウェル)。[35S]GTP(1250 Ci/mmol, Perkin Elmer)を、アッセイバッファー: 20 mM HEPES、pH7.5、10 mM MgCl2、150 mM NaCl、1 mM EGTA、1 mM DTT、10 μM GDP、0.1％脂肪酸フリーBSA、および10 μg/ml サポニンにおいて0.4 nMまで希釈した。40 μlの該[35S]GTP溶液を、化合物プレートに、最終濃度 0.2 nMで加えた。該反応液を室温で45分間維持した。インキュベーションの終わりに、化合物プレート中の全ての混合液を、GPCRロボットシステムによって384ウェルのFBフィルタープレートに移した。該フィルタープレートを、改良したマニフォールドEmblaプレートウォッシャーを用いて水で4回洗浄し、60℃で45分間乾燥させた。Packard TOPCOUNT（登録商標）で測定するために、30 μlのMicroScint 20 シンチレーション流体（scintillation fluid）を各ウェルに加えた。EC50は、試験した各個々の化合物について得られたYmax(最大反応)の50％に相当するアゴニスト濃度と定義される。
【０１６９】
メソッドB:受容体[35S]GTPγS SPA結合アッセイ
S1P1もしくはS1P3トラスフェクトCHO細胞(2 μg タンパク質)から調製した膜を、96-ウェル白色プレート(CORNING（登録商標）3693)中で、7.5 μl WGA-PVTビーズ(20 mg/ml)、ならびに5 μM GDP、20 mM HEPES pH 7.4、100 mM NaCl、1 mM EDTA、5 mM MgCl2、10 μg /ml サポニン、0.1％BSA、および1 μM ロイペプチンを含有する50μlの反応混合液中において、DMSOに希釈した試験化合物とともにインキュベートした。25 μlの0.2 nM [35S]-GTPγS(1250 Ci/mmol; NEN)／アッセイバッファーを加えることによって、該アッセイを開始した。室温で90分インキュベートした後、該プレートを1000rpmで5分間遠心処理した。結合した放射性核種をTOPCOUNT（登録商標）にて測定し、S1P(1 μM)活性化と比較した％反応で表した。データは、エクセルにおいて、４つのパラメーターのロジスティック方程式を用いて分析した。該方程式 Y=A+((B-A)/(1+((EC50/X)^D)))中の４つのパラメーターは以下のように説明される:Aは底面プラトー（bottom plateau）でのY値(アゴニスト活性)であり;Bは上面プラトー（top plateau）でのY値であり;EC50は反応が底面と上面の中間である時のX値(アゴニスト濃度)であり;DはHill係数である。Ymax値が50％以下である化合物については曲線が得られなかった。
【０１７０】
本発明の化合物および比較化合物Aを、上記の受容体[35S]GTPγS結合アッセイ(メソッドA)および受容体[35S]GTPγS SPA結合アッセイ(メソッドB)において試験し、表Bに示される、２桁に四捨五入した結果を得た。ある場合には、値は複数の実験の平均であり、ここでNは良好な用量反応曲線が得られた実験の実施数である。１つの実施例のうちの１つ以上のバッチを試験した場合、提示された値は、メソッドAにおいてGTPγS S1P1とGTPγS S1P3との比較が可能であったバッチ（その中でほとんどの数の実験が実施された）からのものである。好ましくは、メソッドAおよびメソッドBにおいて同一のバッチを試験した。データは、実施例化合物の異なるバッチにわたる平均化はしなかった。
表B
【表２】
2012515788.tif 000080
ND = 測定せず。
NC = 良好な用量反応曲線が得られなかった。
【０１７１】
GTPγS S1P1 EC50値に対するGTPγS S1P3 EC50値の比を、表B中のデータから算出し、表Cに示す。
表C
【表３】
2012515788.tif 000081
【０１７２】
表Cにおいて、GTPγS S1P1 EC50値に対するGTPγS S1P3 EC50値の比が大きな値であるほど、S1P3活性よりもS1P1活性の選択性が高いことを示す。
【０１７３】
比較化合物Aと比較した場合、本発明の化合物は、実施例1〜8により例示されるように、S1P1のアゴニストとして驚くべき利点を示し、S1P3以上に選択的である。メソッドAによる測定で、表Cに記載される本発明の例示化合物は179〜5,800の範囲の選択性比を有していたが、対照的に、比較化合物Aは1.2の選択性比を有していた。メソッドBによる測定で、表Cに記載される本発明の例示化合物は430〜37,000の範囲の選択性比を有していたが、対照的に、比較化合物Aは78の選択性比を有していた。
【０１７４】
本発明の化合物は、S1P1のアゴニストとしての活性を有し、S1P3以上の選択性であり、従って、S1P3活性に起因する副作用を減少もしくは最小化するとともに、様々なS1P1受容体関連症状の処置、予防、もしくは治療に用いられうる。本発明の化合物の驚くべき選択性は、それらを、あり得る心血管系の副作用（例えば徐脈および高血圧）を減少もしくは最小化するとともに、自己免疫性および炎症性疾患（例えば多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患、または乾癬）の処置、予防、もしくは治療において用いることができる可能性を示唆する。本発明のその他の利用可能性には、S1P3活性に起因する副作用を減少もしくは最小化するとともに、移植器官の拒絶反応を最小化もしくは減少させることが含まれる。
【０１７５】
げっ歯類における血中リンパ球減少アッセイ（Blood Lymphocyte Reduction Assay）(BLR)
LewisラットもしくはBALB/cマウスに、試験物質(ビヒクル中の溶液もしくは懸濁液として)またはビヒクルのみ(ポリエチレングリコール300、「PEG300」)を経口で投与した。4時間および24時間にて、後眼窩採血（retro-orbital bleeding）により血液を採取した。血中リンパ球数を、ADVIA（登録商標）120 血液学検査装置(Siemens Healthcare Diagnostics)で測定した。結果は、4時間および24時間での測定にて、ビヒクル処置群と比べた場合の循環リンパ球の割合の減少として評価した。結果は、各処置群内の全動物の平均結果を示す(n = 3-4)。
【０１７６】
本発明の化合物を、上記の血中リンパ球減少アッセイ(BLR)において試験し、結果を、ラットについては表Dに、マウスについては表Eに示す。
表D
【表４】
2012515788.tif 000082
表E
【表５】
2012515788.tif 000083
【０１７７】
ラットアジュバント誘発関節炎アッセイ(AA)
オスLewisラット(150-175 g; Harlan, n=8 処置群)を、10 mg/mlの直前に粉末にしたマイコバクテリウムブチリカム(Difco Laboratories)／不完全フロイントアジュバント(sigma)を100 μl用いて、尾の付け根にて、免疫処置した。動物に、試験物質(ビヒクル中の溶液もしくは懸濁液として)またはビヒクルのみ(ポリエチレングリコール300、「PEG300」)を、免疫処置の日から開始して、１日１回投与した。それらの後足の容積を、水置換（water displacement）plethysmometer(Ugo Basile, Italy)で測定した。ベースラインの足測定値を疾患の発症前(7日目から10日目の間)に採取した。次いで、20日目の研究終了まで、１週間に３回、足測定値を採取した。動物を用いる全ての方法は、動物実験委員会により審査され、承認された。
【０１７８】
本発明の化合物を、上記のラットアジュバント誘発関節炎アッセイにおいて試験し、結果を表Fに示す。
表F
【表６】
2012515788.tif 000084
【０１７９】
関節リウマチについての動物モデルであるラットアジュバント誘発関節炎モデルにおいて、実施例1は、予防的経口投与レジメン（regiment）を用いたLewisラットにおける足の腫脹による測定で、疾患の進行を抑制する。
【国際調査報告】
2012515788.tif 000090
2012515788.tif 000091
2012515788.tif 000092