【手続補正書】
【提出日】平成21年4月6日(2009.4.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
幹細胞集団の分化をひき起こす複数の成長因子と一緒に幹細胞集団を培養することを含み、該幹細胞集団は、CD34+であって、自己再生でき、外胚葉、中胚葉および内胚葉細胞に分化することができ、組織培養グレードプラスチックに付着することができることを特徴とする、標的とする内胚葉、外胚葉、間葉および／または血管内皮細胞集団を産生する方法。
【請求項２】
前記標的とする細胞が膵臓，肝臓，神経，上皮，腺上皮，骨格筋，心筋，腎臓，肺，骨，皮膚および内分泌細胞からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記標的とする細胞が肝細胞，神経細胞または乏突起膠細胞である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記標的とする内胚葉、外胚葉、間葉または血管内皮細胞がCD133，PECAM，VWF，CXCR4，アンジオポイエチン-1，ネブリン，トロポニン1，VEGF，アンジオポイエチン-2，ICAM 2，アルファ-１-アンチトリプシン，サイトケラチン18，LDLR，アルブミン，HGF，HNF-3β，トランスフェリン，αフェトプロテイン，Pax-6，Pdx-1，インスリン，IGF-1，NeuroD-1 およびNGN3をコードする遺伝子を発現する、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記標的とする内胚葉細胞がインスリン生産に関係する遺伝子を発現する、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記幹細胞が、単離後3時間は組織培養グレードプラスチックに付着することができ、さらに少なくとも72時間は付着を持続できる能力を特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記幹細胞がCD33-、CD38-、HLA-DR-、CD3-およびCD19-である、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記幹細胞集団がThy-1+でもある細胞について富化されている、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記幹細胞集団がAC133+および/またはc-met+でもある細胞について富化されている、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記幹細胞集団がRex-1，Oct 4，Nanog，CD34，CD133，PECAM，VWF，Tal-1，CXCR4，アンジオポイエチン1，Tie 2，TNNT1，デスミン，ネブリン，コネクシン-43，GATA-4，VEGF，KDR，アンジオポイエチン2，ICAM-2，VEカドヘリン，アルファ-１-アンチトリプシン，サイトケラチン 18，ネスチン，ビメンチンおよびc-metをコードする遺伝子を発現する、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記幹細胞が成人幹細胞であることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記幹細胞集団が臍帯血サンプルという非胎児性サンプルから得られる胎児細胞を含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記幹細胞が受託番号04092401号でECACCに寄託された細胞の特徴を有する、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記幹細胞集団が哺乳類起源である、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記幹細胞集団がヒト起源である、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記幹細胞集団がげっ歯類、ウマまたはウシ起源であるか、あるいはペット動物から採取されたサンプルより単離され、または由来する、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記幹細胞集団が培養中に支持細胞層を必要としない、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記単離された幹細胞集団が以下の工程：
(i)   造血組織を密度勾配分離にかけること;
(ii)  低密度細胞をCD34用の親和性リガンドにさらす;
(iii) 該CD34リガンドに付着した細胞を取り戻す;
(iv)  CD34+亜集団を、組織培養グレードプラスチックにさらす；
(v)   そのプラスチックに付着したCD34+細胞を取り戻す。
によって得ることができることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
以下の工程：
(i)   造血組織を密度勾配分離にかけること;
(ii)  低密度細胞をCD34用の親和性リガンドにさらす;
(iii) 該CD34リガンドに付着した細胞を取り戻す;
(iv)  CD34+亜集団を固体支持体にさらす；
(v)   そのプラスチックに付着したCD34+細胞を取り戻す；
(vi)  そのCD34+付着細胞を請求項１に記載された細胞の分化を引き起こす複数の成長因子と一緒に培養する
を含むことを特徴とする、請求項１〜１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記固体支持体が組織培養グレードのプラスチックまたはガラスから選択されることを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれかに記載の方法によって生産された、内胚葉、外胚葉、間葉および／または血管内皮細胞集団。
【請求項２２】
膵臓，肝臓，神経，上皮，腺上皮，骨格筋，心筋，腎臓，肺，骨，皮膚および内分泌細胞からなる群より選択される、請求項２１に記載の細胞集団。
【請求項２３】
CD133，PECAM，VWF，CXCR4，アンジオポイエチン-1，ネブリン，トロポニン1，VEGF，アンジオポイエチン-2，ICAM 2，アルファ-１-アンチトリプシン，サイトケラチン18，LDLR，アルブミン，HGF，HNF-3β，トランスフェリン，αフェトプロテイン，Pax-6，Pdx-1，インスリン，IGF-1，NeuroD-1およびNGN3をコードする遺伝子を発現する、請求項２１または２２に記載の細胞集団。
【請求項２４】
凍結保存を生きぬくことが可能である、請求項２１〜２３のいずれかに記載の細胞集団。
【請求項２５】
前記細胞のゲノムが核酸の一領域を挿入することにより変更されたことを特徴とする、請求項２１〜２４のいずれかに記載の細胞集団。
【請求項２６】
前記幹細胞のゲノムが核酸の一領域を挿入することにより変更されたことを特徴とする、請求項１で規定された幹細胞集団。
【請求項２７】
前記ゲノムがDNAウィルス，RNAウィルスまたはレトロベクターを用いるDNAの挿入により変更されることを特徴とする請求項２５または２６に記載の細胞集団。
【請求項２８】
前記ゲノムの一部が、アンチセンス核酸分子、リボザイム配列または阻害的ＲＮＡ配列の存在によって不活性化されることを特徴とする、請求項２１〜２７のいずれかに記載の細胞集団または請求項１で規定された幹細胞集団。
【請求項２９】
治療に使用される、請求項２１〜２８のいずれかに記載の細胞集団または請求項１で規定された単離された幹細胞集団。
【請求項３０】
器官の再生または損傷された器官の修復に使用される、請求項２１〜２８のいずれかに記載の細胞集団または請求項１で規定された単離された幹細胞集団。
【請求項３１】
前記器官が免疫系，肝臓，肺，膵臓，骨，軟骨，筋肉，皮膚，脳または神経系および心臓または循環器系からなる群より選択されることを特徴とする、請求項３０に記載の細胞集団。
【請求項３２】
前記細胞が追跡可能なマーカー、好ましくは酸化鉄または常磁性ビーズで標識されることを特徴とする、請求項２９〜３１のいずれかに記載の細胞集団。
【請求項３３】
患者への細胞移植用としての、請求項２１〜２８のいずれかに記載の細胞集団または請求項１で規定された単離された幹細胞集団の使用。
【請求項３４】
請求項２１〜２５のいずれかに記載の細胞を薬剤に曝すことにより器官特異的作用について薬剤をスクリーニングする方法。
【請求項３５】
前記薬剤が器官特異的な毒性を疑われる毒素であることを特徴とする、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記薬剤が器官特異的な毒性を疑われる薬剤もしくは治療剤、または器官特異的な利得作用を問題とされる薬剤もしくは治療剤であることを特徴とする、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
請求項２１〜２８のいずれかの細胞集団または請求項１で規定された幹細胞集団を培養すること、ならびに該細胞により発現される１以上のタンパク質を回収することを含む、タンパク質生産のインビトロ方法。
【請求項３８】
前記タンパク質がインスリンまたはアルブミンである、請求項３７に記載のタンパク質生産のインビトロ方法。