【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年3月16日(2009.3.16)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一対の標識したオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体（プローブ）または少なくとも１つの標識したプローブトリプレットが使用され、その際、上流プローブは、比例して５′末端がターゲットにハイブリダイズし、３′末端が比例して下流プローブの５′末端にハイブリダイズし、下流プローブの３′末端は、再度比例してターゲットにハイブリダイズし、したがって結果として、三重構造が標的核酸とプローブ対との間に形成される、標的核酸または核酸類似体（標的）を検出するかまたは遺伝的多形を検出するための方法において、
ａ）１つまたは２つのプローブは、５′末端および/または３′末端に標識を有し、
ｂ）測定信号は、プローブ対の部分的な加水分解後に１つの含まれる酵素によって発生され、
ｃ）標的へのプローブの十分なハイブリダイズは、プローブ対またはプローブトリプレットで行なわれるにすぎず、個別のプローブでは行なわれず、
ｄ）比例してターゲットのハイブリダイゼーションの能力を有する、上流プローブおよび下流プローブの配列区間は、ターゲットの隣接した配列にハイブリダイズし、同時に上流プローブの３′末端と下流プローブの５′末端との間で安定した「幹構造」を形成することを特徴とする、標的核酸または核酸類似体（標的）を検出するかまたは遺伝的多形を検出するための方法。
【請求項２】
標識として蛍光染料および／または消光剤染料を使用する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
酵素としてポリメラーゼを使用する、請求項１記載の方法。
【請求項４】
上流プローブは、それぞれリポーターおよび消光剤として機能するリガンドで標識され、３′−ＯＨ阻止を全く有さず、一方、下流プローブは、標識されず、３′−ＯＨで阻止される、請求項１または２記載の方法。
【請求項５】
プローブトリプレットは、配列中で少なくとも１個の塩基で区別される、異なるリガンドで標識した２つの上流プローブまたは下流プローブと１つの属する上流プローブまたは下流プローブとからなり、この１つの属する上流プローブまたは下流プローブは、プローブトリプレットに属する、幹構造範囲内で相補的な上流プローブまたは下流プローブを有する幹構造を形成する能力を有し、この場合には、常に、プローブおよびターゲットの少なくとも１つのターゲットハイブリダイズするプローブ区間の間に十分な相補性が存在する場合にのみ上流プローブと下流プローブとターゲットとの間に加水分解可能な三重構造が形成される、請求項１または２記載の方法。
【請求項６】
プローブトリプレットの場合に、２つの上流プローブは、異なる波長で発光する、リポーターとして機能する２つのリガンドならびに消光剤として機能する１つのリガンドで標識され、３′ＯＨ阻止を有さず、一方で、下流プローブは、標識されず、３′ＯＨで阻止される、請求項５記載の方法。
【請求項７】
上流プローブの５′末端が、ターゲットの部分配列に対して十分に相補的であり、当該プローブの３′末端が、下流プローブの５′末端に対して十分に相補的であり、下流プローブの３′末端が、再度上流プローブの５′末端に対して十分に相補的であり、当該プローブの３′末端が、再度ターゲットの他の部分配列に対して十分に相補的である、標的核酸（ターゲット）を検出するためのプローブ対において、１つまたは２つのプローブは、５′末端および/または３′末端に蛍光染料および／または消光剤染料を有することを特徴とする、標的核酸（ターゲット）を検出するためのプローブ対。
【請求項８】
１つかまたは２つのプローブが３′−ＯＨ阻止を有しない、請求項７記載のプローブ対。
【請求項９】
部分配列５′−ＡＧＴＣＧＧＡＡＣＣＴＴ−３′および５′−ＡＡＧＧＴＴＣＣＧＡＣＴ−３′または５′−ＡＧＴＣＧＧＡＡＣ−３′および５′−ＧＴＴＣＣＧＡＣＴ−３′、または他の適当な、幹構造を形成する部分配列を含む、請求項７または８記載のプローブ対。
【請求項１０】
請求項７から９までのいずれか１項に記載のプローブ対を製造する方法において、次の工程：
公知であるかまたは公知でない、特に１５〜４０個の塩基長の、ターゲットに適合しうるオリゴヌクレオチド−プローブ配列を２つの部分プローブ配列に分解する工程、
それぞれプローブ対のプローブ間に幹構造を有する部分プローブ配列を補充する工程、
測定可能で定量化可能な測定信号を蛍光の形で発生させるリガンドを個別のプローブに結合する工程（標識）を有することを特徴とする、請求項７から９までのいずれか１項に記載のプローブ対を製造する方法。
【請求項１１】
標的にハイブリダイズする部分プローブ配列は、互いに同じＴm値を有し、ならびにプローブ対の完全なプローブは、それぞれ同じＴm値を有する、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
配列中で少なくとも１つの塩基だけが区別される２つの上流プローブまたは下流プローブおよび所属する上流プローブまたは下流プローブを含む、遺伝的多形を検出するためのプローブトリプレットであって、この場合上流プローブの５′末端は、ターゲットの部分配列に対して十分に相補的であり、当該プローブの３′末端は、下流プローブの５′末端に対して十分に相補的であり、下流プローブの３′末端は、再度上流プローブの５′末端に対して十分に相補的であり、当該プローブの３′末端は、再度ターゲットの他の部分配列に対して十分に相補的である、遺伝的多形を検出するためのプローブトリプレットにおいて、前記プローブが５′末端および/または３′末端に蛍光染料および/または消光剤染料を有することを特徴とする、遺伝的多形を検出するためのプローブトリプレット。
【請求項１３】
２つの上流プローブが、異なる波長で発光する、リポーターとして機能する２つのリガンドならびに消光剤として機能する１つのリガンドで標識されており、３′ＯＨ阻止を有さず、一方で、下流プローブは、標識されず、３′ＯＨで阻止されているる、請求項１２記載のプローブトリプレット。
【請求項１４】
請求項７記載の少なくとも１つの標識したプローブ対または請求項１２記載のプローブトリプレット、少なくとも１つのプライマー対、少なくとも１つのヘテロポリマー標的配列、少なくとも１つの酵素ならびに所属する試薬セットを含む、請求項１から６までのいずれか１項に記載の方法を実施するための試験キット。
【請求項１５】
任意のヘテロポリマー標的核酸または核酸類似体を定性的および／または定量的に検出するため、または遺伝的多形を検出するための、請求項７から９までのいずれか１項に記載のプローブ対および／または請求項１から６までのいずれか１項に記載の方法および／または請求項１４記載の試験キットおよび／または請求項１２または１３記載のプローブトリプレットの使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
この課題は、標的核酸または核酸類似体（標的）を検出するための方法によって解決されたが、この場合には、少なくとも一対の、リガンドで標識したオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体（プローブ）または少なくとも１つのリガンドで標識したプローブトリプレット（Sondenterzett）が遺伝的多形の検出に使用され、その際、上流プローブは、比例して５′末端が標的にハイブリダイズし、３′末端が比例して下流プローブの５′末端にハイブリダイズし、下流プローブの３′末端は、再度比例して標的にハイブリダイズし、したがって結果として、三重構造が目的の核酸とプローブ対との間に形成される。この場合、標的へのプローブの最適なハイブリダイゼーションは、プローブ対でのみ行なわれるが、しかし、個別のプローブでは行なわれない。それというのも、個別に使用されるプローブのハイブリダイゼーション区域は、標的相補的プローブ含分と標的との間での安定したハイブリダイゼーションには、短すぎるからである。比例して標的のハイブリダイゼーションの能力を有する、上流プローブおよび下流プローブの配列区間は、特に標的の隣接した配列にハイブリダイズし、同時に上流プローブの３′末端と下流プローブの５′末端との間で安定した「幹構造」を形成する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
プローブ対またはプローブトリプレットとして、幹構造を形成する状態にある全てのオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体を使用することができる。例えば、幹構造は、部分配列５′−ＡＧＴＣＧＧＡＡＣＣＴＴ−３′および５′−ＡＡＧＧＴＴＣＣＧＡＣＴ−３′または５′−ＡＧＴＣＧＧＡＡＣ−３′および５′−ＧＴＴＣＣＧＡＣＴ−３′によって形成させることができる。プローブトリプレットのための幹構造は、プローブ対のための幹構造と同一であるが、例えば幹５′−ＡＧＴＣＧＧＡＡＣ−３′は、２つの上流プローブ中に含まれており、一方で幹５′−ＧＴＴＣＣＧＡＣＴ−３′は、唯一使用される下流プローブ中にのみ存在する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
プローブ対の本発明による製造法は、次の工程：
公知であるかまたは公知でない、特に１５〜４０個の塩基長の、標的に適合しうるオリゴヌクレオチド−プローブ配列を２つの部分プローブ配列に分解する工程、
部分プローブ配列を、それぞれプローブ対のプローブ間に幹構造を形成する、請求項８記載の部分配列で補充する工程、
測定可能で、特に定量化可能な信号を発生させることができる複合体のリガンド、分子または原子を化学結合する工程（標識）を含む。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
特に蛍光染料および/または消光剤染料での標識のために、プローブ対１個あたり、Ｍ１〜Ｍ４と呼称される、少なくとも４つの座が存在する。１つの好ましい種類の形式において、プローブ１またはプローブ２、またはプローブ１およびプローブ２は、それぞれ１つまたは２つのリポーター染料、例えばフルオレセイン染料またはローダミン染料ＦＡＭ、ＶＩＣ、ＪＯＢ、ＨＥＸ、ＮＥＤ、ヤキマイェロー（Yakima Yellow）、ＲＯＸ、Ｃｙ３、Ｃｙ５またはＤＹＸＬ、および１つまたは２つの消光剤染料、例えばＴＡＭＲＡ、ＤＡＢＣＹＬ、ＤＡＢＳＹＬ、エレクエンチャー（ElleQuencher）またはダークエンチャー（DarkQuencher）で標識されている。更に、好ましい種類の形式において、２つのプローブは、特に幹構造の領域（Ｍ２＋Ｍ３）内でそれぞれ供与体染料および受容体染料、例えばフルオレセイン、ＬＣＲｅｄ６４０またはＬＣＲｅｄ７０５で標識されている。第１表には、標識のための若干の組合せの可能性が示されている。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
プローブ対の開発は、それぞれ選択された増幅系に適合する公知のオリゴヌクレオチド−プローブ配列、例えばＴａｑＭａｎプローブを、特に同じＴm値を有する２つの部分プローブ配列に分解し、この部分プローブ配列を、後の幹構造を形成する、適当な相補的部分配列に補充することにより行なわれる。プローブ対の製造は、常用のオリゴヌクレオチド固定相合成の当業者に公知の方法および引続く有利に使用される発色団リガンドの化学結合により行なわれる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
プローブトリプレットは、常に、野生型の特異的プローブと、プローブ特異的に２つの区別可能なリポーター染料（Ｒ１およびＲ２）および消光剤染料（Ｑ）で標識されている突然変異特異的なプローブと、野生型の特異的プローブならびに突然変異特異的なプローブと一緒に幹構造を形成する、標識されていないプローブとからなる。Ｒ１プローブまたはＲ２プローブの純粋な信号は、常に、検出すべき対立遺伝子がホモ接合的に野生型または突然変異体としてプローブ中に存在する場合にのみ検出可能である。これとは異なり、Ｒ１信号およびＲ２信号が同時に測定可能である場合、この測定可能であることは、ヘテロ接合的に対立遺伝子の組合せ、即ちプローブ中の野生型対立遺伝子および突然変異対立遺伝子のそれぞれの存在に対して言えることである。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６８】
幹構造：
幹構造は、専らプローブ対のプローブ間で形成される三重構造内のハイブリダイズ構造のための特殊な呼称である。