【手続補正書】
【提出日】平成21年8月20日(2009.8.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
低分子量生理活性物質の安定化方法であって、血液蛋白質上のヒドロキシル基（-ＯＨ）、チオール基（-ＳＨ）、アミノ基（-ＮＨ2）及びカルボキシル基（-ＣＯ2Ｈ）からなる群より選択される官能基をこれと安定な共有結合を形成することができる反応基と反応させて前記血液蛋白質を活性化させる段階;及び
生体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）で前記活性化した血液蛋白質と、天然または合成ペプチド分子、天然または合成ホルモン及び医薬原料物質からなる群より選択される分子量１００，０００以下の低分子量生理活性物質とを反応させて、その間に安定な共有結合を形成させ、前記反応基が共有結合の形成後に脱離する段階を含むことを特徴とする、前記方法。
【請求項２】
前記低分子量生理活性物質がインシュリン刺激ペプチド、グルカゴン系ペプチドホルモン及びＬＨＲＨ（Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ-Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ：黄体形成ホルモン放出ホルモン）からなる群より選択されるものであり、前記血液蛋白質がアルブミン、トランスフェリン、フェリチン及び免疫グロブリンからなる群より選択されるものであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記低分子量生理活性物質がグルカゴン様ペプチド-１（ＧＬＰ-１）、エキセンディン-３、エキセンディン-４及びＬＨＲＨからなる群より選択されるものであり、前記血液蛋白質がアルブミンであることを特徴とする、請求項２に記載の低分子量生理活性物質の安定化方法。
【請求項４】
前記血液蛋白質上の官能基がチオール基（-ＳＨ）であり、前記反応基が前記チオール基と安定なジスルファイド結合形成が可能なジスルファニル基であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記反応基が、２-ピリジルジスルファニル基、Ｎ-アルキルピリジニウムジスルファニル基、５-ニトロ-２-ピリジルジスルファニル基、３-ニトロ-チオフェニルジスルファニル、１-ピペリドジスルファニル基、３-シアノ-プロピルジスルファニル基、２-チオウレジルジスルファニル基、４-カルボキシルベンジルジスルファニル基、１-フェニル-１Ｈ-テトラゾリルジスルファニル基、１-アミノ-２-ナフチルジスルファニル基、３-カルボキシル-６-ピリジルジスルファニル基、２-ベンゾチアゾリルジスルファニル基及び４-ニトロ-チオフェニルジスルファニル基からなる群より選択されるものであることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記低分子量生理活性物質が、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基及びカルボキシル基からなる群より選択される官能基と結合され、前記官能基が前記反応基によって活性化した血液蛋白質上の官能基と安定な共有結合を形成することを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記血液蛋白質上の官能基と低分子量生理活性物質上の官能基が両方ともチオール基で、前記共有結合が安定なジスルファイド共有結合であることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記低分子量生理活性物質上の官能基が連結基を通じて前記低分子量生理活性物質に連結されていることを特徴とする、請求項６に記載の低分子量生理活性物質の安定化方法。
【請求項９】
前記連結基がＣ１乃至Ｃ６のアルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、多環基、アリール基、ポリアリール基、置換されたアリール基、ヘテロ環基、置換されたヘテロ環基及びＡＥ（Ｅ）nＡ（[２-（２-アミノ）-エトキシ]（エトキシ）n酢酸）（ｎは０から２の間の整数）からなる群より選択されることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
生理活性物質が天然または合成ペプチド、天然または合成ホルモン及び医薬原料物質からなる群より選択される分子量１００，０００以下の低分子量生理活性物質であり、
血液蛋白質が、血液蛋白質上の官能基と安定な共有結合を形成することができる反応基によって活性化するものであり、
血液蛋白質上の官能基がヒドロキシル基、チオール基、アミノ基及びカルボキシル基からなる群より選択される官能基であり、
安定な共有結合が生理活性物質と血液蛋白質上の官能基との間で生体外で形成され、これにより生理活性物質の安定性が改善される、
生理活性物質-血液蛋白質複合体。
【請求項１１】
前記低分子量生理活性物質がインシュリン刺激ペプチド、グルカゴン系ペプチドホルモン及びＬＨＲＨからなる群より選択されるものであり、前記血液蛋白質がアルブミン、トランスフェリン、フェリチン及び免疫グロブリンからなる群より選択されるものであることを特徴とする、請求項１０に記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体。
【請求項１２】
前記低分子量生理活性物質がグルカゴン様ペプチド-１（ＧＬＰ-１）、エキセンディン-３、エキセンディン-４及びＬＨＲＨからなる群より選択されるものであり、前記血液蛋白質がアルブミンであることを特徴とする、請求項１１に記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体。
【請求項１３】
前記血液蛋白質上の官能基がチオール基であり、前記反応基が前記官能基と安定なジスルファイド共有結合を形成することが可能なジスルファニル基であり、前記血液蛋白質上の官能基と生理活性物質との間に安定なジスルファイド共有結合が形成されることを特徴とする、請求項１０に記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体。
【請求項１４】
前記反応基が、２-ピリジルジスルファニル基、Ｎ-アルキルピリジニウムジスルファニル基、５-ニトロ-２-ピリジルジスルファニル基、３-ニトロ-チオフェニルジスルファニル、１-ピペリドジスルファニル基、３-シアノ-プロピルジスルファニル基、２-チオウレジルジスルファニル基、４-カルボキシルベンジルジスルファニル基、１-フェニル-１Ｈ-テトラゾリルジスルファニル基、１-アミノ-２-ナフチルジスルファニル基、３-カルボキシル-６-ピリジルジスルファニル基、２-ベンゾチアゾリルジスルファニル基及び４-ニトロ-チオフェニルジスルファニル基からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１３に記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体。
【請求項１５】
前記低分子量生理活性物質が、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基及びカルボキシル基からなる群より選択される官能基と結合され、前記官能基が前記反応基によって活性化した前記血液蛋白質上の官能基と安定な共有結合を形成することを特徴とする、請求項１０に記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体。
【請求項１６】
前記血液蛋白質上の官能基と低分子量生理活性物質上の官能基が両方ともチオール基であり、前記共有結合が安定なジスルファイド共有結合であることを特徴とする、請求項１５に記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体。
【請求項１７】
前記低分子量生理活性物質上の官能基が連結基を通じて前記低分子量生理活性物質に連結されていることを特徴とする、請求項１６に記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体。
【請求項１８】
前記連結基がＣ１乃至Ｃ６のアルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、多環基、アリール基、ポリアリール基、置換されたアリール基、ヘテロ環基、置換されたヘテロ環基及びＡＥ（Ｅ）nＡ（[２-（２-アミノ）-エトキシ]（エトキシ）n酢酸）（ｎは０から２の間の整数）からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体。
【請求項１９】
前記血液蛋白質上の官能基と低分子量生理活性物質上の官能基が両方ともチオール基であり、前記共有結合が安定なジスルファイド共有結合であり、前記連結基はＡＥＥＥＡであることを特徴とする、請求項１８に記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体。
【請求項２０】
請求項１０乃至１９のいずれかに記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体を含有する生理活性物質の生体内半減期及び安定性が改善されることを特徴とする生理活性物質の生体内送達用組成物。
【請求項２１】
請求項１０乃至１９のいずれかに記載の生理活性物質-血液蛋白質複合体の有効量を含有する、前記生理活性物質が治療的効果を有する疾病に対する予防または治療用組成物。
【請求項２２】
前記疾病が糖尿病、前立腺癌、子宮内膜症または子宮筋腫であることを特徴とする、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
アルブミンの３４番目のアミノ酸であるシステインに２-ピリジルジスルファニル基、Ｎ-アルキルピリジニウムジスルファニル基、５-ニトロ-２-ピリジルジスルファニル基、３-ニトロ-チオフェニルジスルファニル、１-ピペリドジスルファニル基、３-シアノ-プロピルジスルファニル基、２-チオウレジルジスルファニル基、４-カルボキシルベンジルジスルファニル基、１-フェニル-１Ｈ-テトラゾリルジスルファニル基、１-アミノ-２-ナフチルジスルファニル基、３-カルボキシル-６-ピリジルジスルファニル基、２-ベンゾチアゾリルジスルファニル基及び４-ニトロ-チオフェニルジスルファニル基からなる群より選択される反応基が結合してアルブミンのＣｙｓ34フリーチオール基を活性化することを特徴とする変形アルブミン。