【手続補正書】
【提出日】平成21年10月26日(2009.10.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における脈管の損傷を修復するための薬理組成物であって、
脈管の損傷が自然発生の急性心筋梗塞であり、該対象が脈管再生された患者であり、
該薬理組成物が、
(a) 治療上有効な量の、無菌の、単離された、化学走性造血幹細胞生成物、ここで該化学走性造血幹細胞生成物は、該対象から得た、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団を含む、および
(b) 安定化量の血清、ここで安定化量とは、少なくとも20%(v/v)を意味する、
を含み、
該組成物は、カテーテルを通して、腸管外経路で該対象に投与され、
カテーテルを通過し、インビトロ試験がなされる際に、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団の少なくとも70％の細胞が、CD34+細胞であり、
更に、カテーテルを通過し、インビトロ試験がなされる際に、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団が、CXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含む高密度CD34+細胞を対象から取得した後、少なくとも約24時間にわたって、
（１）CXCR-4仲介化学走性活性を維持し、
（２）少なくとも約70％が生存率を示し、かつ
（４）インビトロにおいて造血コロニーを形成することができることを特徴とする、上記薬理組成物。
【請求項２】
CXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含むCD34+細胞の高密度集団を含む化学走性造血幹細胞生成物が、自己骨髄吸引物の細胞性成分から精製されたものである、請求項１記載の薬理組成物。
【請求項３】
該治療上有効な量の該化学走性造血幹細胞生成物が、CXCR-4媒介化学走性活性を有しかつCXCR-4を発現する、少なくとも0.5×106個の能力CD34+細胞亜集団を含む、最少数の単離されたCD34+造血幹細胞を含有する、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
CXCR-4を発現する能力CD34+細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団を、対象から取得した後、少なくとも48時間にわたって、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団の化学走性活性の少なくとも２％が、CXCR-4を発現する能力細胞の亜集団により維持され、かつ、少なくとも48時間にわたって、CD34+細胞の高密度集団が、インビトロにおいて造血コロニーを形成する能力を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
CXCR-4を発現する能力CD34+細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団を、対象から取得した後、少なくとも72時間にわたって、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団の化学走性活性の少なくとも２％が、CXCR-4を発現する能力細胞の亜集団により維持され、かつ、少なくとも72時間にわたって、CD34+細胞の高密度集団が、インビトロにおいて造血コロニーを形成する能力を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項６】
CXCR-4を発現する能力CD34+細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団を、対象から取得した後、少なくとも24時間にわたって、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する該能力細胞亜集団の該化学走性活性の少なくとも2％が、CXCR-4を発現する能力細胞亜集団により維持される、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
該組成物が、該カテーテルを通して、梗塞関連動脈に、血管内投与されることを特徴とする、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
該カテーテルが、流量調節型カテーテルである、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
該カテーテルが、バルーン式カテーテルである、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
該カテーテルが、少なくとも約0.36mmなる内径を持つ、請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
該組成物が、該カテーテルを通して、心筋層に投与されることを特徴とする、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
該薬理組成物が、更に少なくとも1種の適合性活性薬剤をも含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
該化学走性の造血性細胞生成物の無菌性が、以下の諸工程を含む方法によって確認されるものであることを特徴とする、請求項１記載の組成物：
(a) 該細胞生成物を遠心分離処理して、(i)該単離されたCD34+細胞の高密度集団を含有するペレットを含む、分離された細胞生成物、および(ii)上澄を生成する工程；
(b) 該分離された細胞生成物の細胞ペレットを乱すことなしに、該分離された細胞生成物の上澄を取出す工程；
(c) 該分離された細胞生成物の上澄の、無菌性を分析し、それにより、化学走性造血細胞生成物を消耗することなく、該分離された細胞生成物の、該細胞ペレットの無菌性を決定する工程。
【請求項１４】
単離されたCD34+細胞の高密度集団を含む調製物が、対象から得た末梢血から精製される、請求項１記載の組成物。
【請求項１５】
脈管に損傷を持つ対象に対して、脈管内放出するための薬理組成物を製造する方法であって、脈管の損傷が基礎疾患の結果生じた急性心筋梗塞であり、該対象が脈管再生された患者であり、
該薬理組成物が、無菌の、非拡張性の、化学走性を呈する造血幹細胞生成物を含み、ここで該化学走性造血幹細胞生成物は、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含む、対象から得た、単離されたCD34+細胞の高密度集団を含み、該方法が以下の諸工程：
(a) 無菌条件下で、該対象から、能力CD34+細胞の高密度集団を含む化学走性細胞製剤を取得するプロセスを行う工程；
(b) 場合により、該製剤を処理設備に輸送する工程；
(c) 該製剤から、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含有する、CD34+細胞を無菌的に精製する工程；
ここで、工程(c)は工程（a）の完了後、約12〜24時間以内に開始する；
(d) CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含有する、該精製したCD34+細胞を、無菌的に処方して、化学走性を呈する該造血細胞生成物を生成する工程；
(e) 該滅菌された化学走性を呈する該造血幹細胞生成物を、無菌的に処方して、薬理組成物を製造する工程；
(f) 組成物中の化学走性造血幹細胞生成物を消耗することなく、該薬理組成物の無菌性を確認する工程；
(g) 該対象に注入するのに適したものとして、該無菌薬理組成物を放出する工程；
ここで、工程（a）の完了後、少なくとも約48時間以内に、対象に対して無菌薬理組成物の注入をすべき場合にのみ工程(g)を行う；
(h) 該薬理組成物の治療上有効な量を、脈管内放出装置に予め装填する工程；および
(i) 場合により、該治療上有効な量の該無菌薬理組成物を含む該放出装置を、該対象に脈管内投与するための、心臓カテーテル処置設備に輸送する工程、
を含み、
それにより、対象に、カテーテルを通して、第一と第二の時間で規定された特定の間隔で、無菌薬理組成物が腸管外投与され、該第一の時間が、梗塞領域における炎症サイトカインカスケードのピーク生成の後であり、該第二の時間が、梗塞領域における心筋の瘢痕形成の前である、
ことを特徴とする、上記製造方法。
【請求項１６】
場合によって、更に該工程(a)と(b)との間で、該取得した製剤を保存する段階をも含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
該工程(a)における該化学走性細胞の取得工程が、微細-骨髄収穫技術である、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
該微細-骨髄収穫技術による、該取得工程(a)が、更に以下の諸工程：
(i) 該対象から骨髄を収穫するのに先立って、収穫用シリンジに、予めヘパリンを装入する工程；
(ii) 該対象の左後部腸骨稜および右後部腸骨稜から、該収穫用シリンジおよび微細-骨髄収穫技術を利用して、該骨髄を吸入する工程；および
(iii) 該収穫した骨髄を、収集バッグに注入する工程；
を含む、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
該輸送工程(b)が、更に以下の諸工程：
(i) 該収穫した骨髄を、収集バッグに収容する工程；
(ii) 該収集バッグを、第二のバッグに収容する工程；
(iii) 該収集バッグを含む該第二のバッグを、開放式搬送容器内に収容する工程；
(iv) 該搬送容器を封止する工程；および
(v) 該搬送容器を上記処理設備に搬送する工程；
をも含む、請求項１５記載の方法。
【請求項２０】
(a)において、CXCR-4を発現する能力CD34+細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団を、対象から取得した後、少なくとも24時間にわたって、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団の化学走性活性の少なくとも２％が、CXCR-4を発現する能力細胞の亜集団により維持され、かつ、少なくとも24時間にわたって、CD34+細胞の高密度集団が、インビトロにおいて造血コロニーを形成する能力を有する、請求項１５記載の方法。
【請求項２１】
該工程(a)において、CXCR-4を発現する能力CD34+細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団を、対象から取得した後、少なくとも48時間にわたって、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団の化学走性活性の少なくとも２％が、CXCR-4を発現する能力細胞の亜集団により維持され、かつ、少なくとも48時間にわたって、CD34+細胞の高密度集団が、インビトロにおいて造血コロニーを形成する能力を有する、請求項１５記載の方法。
【請求項２２】
該工程(a)において、CXCR-4を発現する能力CD34+細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団を、対象から取得した後、少なくとも72時間にわたって、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団の化学走性活性の少なくとも２％が、CXCR-4を発現する能力細胞の亜集団により維持され、かつ、少なくとも72時間にわたって、CD34+細胞の高密度集団が、インビトロにおいて造血コロニーを形成する能力を有する、請求項１５記載の方法。
【請求項２３】
工程(h)の薬理組成物において、治療上有効な量の該化学走性造血幹細胞生成物が、CXCR-4媒介化学走性活性を有しかつCXCR-4を発現する、少なくとも0.5×106個のCD34+能力細胞亜集団を含む最少数のCD34+造血幹細胞を含有する、請求項１５記載の方法。
【請求項２４】
該無菌性を確認する工程(f)が、更に以下の諸工程：
(i) 該処方された細胞生成物を遠心分離処理に掛けて、該単離されたCD34+細胞の高密度集団を含む、細胞ペレットを含有する、分離された細胞生成物および上澄を製造する工程；
(ii) 該分離された細胞生成物の該上澄を、該分離された細胞生成物の該細胞ペレットを乱すことなしに、無菌的に取出す工程；
(iii) 該分離された細胞生成物の該上澄が、微生物により汚染されているか否かを分析し、それにより幹細胞生成物を消耗することなしに該分離された細胞生成物の該細胞ペレットの無菌性を決定する工程；
を含む、請求項１５記載の方法。
【請求項２５】
該工程(h)の該脈管内放出装置が、
(i) 無菌四方型ストップコックに取付けられた注入シリンジ、ここで該注入シリンジは、該薬理組成物を含み；
(ii) 該無菌四方型ストップコックに取付けられた、洗浄溶液を含有する洗浄シリンジ；および
(iii) 該薬理組成物を該対象に放出するための、該無菌四方型ストップコックによって、該放出装置に取付けられたカテーテル；
を含む、請求項１５記載の方法。
【請求項２６】
該カテーテルが、流量調節カテーテルである、請求項１５記載の方法。
【請求項２７】
該カテーテルが、バルーン膨張式カテーテルである、請求項１５記載の方法。
【請求項２８】
該カテーテルが、少なくとも約0.36mmなる内径を持つ、請求項１５記載の方法。
【請求項２９】
該カテーテルを通して、梗塞関連動脈に注入することによって、該薬理組成物を該対象に放出する、請求項１５記載の方法。
【請求項３０】
該薬理組成物を、該カテーテルを通して、心筋層内に投与する、請求項１５記載の方法。
【請求項３１】
脈管損傷の修復を必要とする対象における該脈管損傷を治療または修復するための薬理組成物の製造における、下記(a)及び(b)成分の使用であって、
(a) 治療上有効な量の、無菌の、単離された、化学走性造血幹細胞生成物、ここで該化学走性造血幹細胞生成物は、対象から得た、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団を含む、および
(b) 安定化量の血清、ここで該安定化量とは、少なくとも20%(v/v)を意味する、
該脈管の損傷が基礎疾患の結果生じた急性心筋梗塞であり、該対象が脈管再生された患者であり、
該薬理組成物は、該対象に、カテーテルを通して、第一と第二の時間で規定された特定の間隔で、無菌薬理組成物を腸管外投与され、該第一の時間が、梗塞領域における炎症サイトカインカスケードのピーク生成の後であり、該第二の時間が、梗塞領域における心筋の瘢痕形成の前であり、
該治療または修復において、
CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団の少なくとも70％の細胞が、カテーテルを通過し、インビトロ試験がなされる際に、CD34+細胞であり、
更に、カテーテルを通過し、インビトロ試験がなされる際に、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含む単離されたCD34+細胞の高密度集団が、CXCR-4を発現する能力細胞の亜集団を含む高密度CD34+細胞を対象から取得した後、少なくとも約24時間にわたって、
（１）CXCR-4仲介化学走性活性を維持し、
（２）少なくとも約70％が生存率を示し、かつ
（４）インビトロにおいて造血コロニーを形成することができることを特徴とする上記使用。