(57)【要約】  Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節する式Ｉの化合物、および動物における、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の調節と関連付けられる疾患の治療のためのその使用が本明細書に記載される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉを有する化合物
【化１】
2012528847.tif 000092
［式中、
Ｘは、
【化２】
2012528847.tif 000093
であり、
Ｙは、Ｏ、ＣＨ（Ｒ５）、またはＮＲ５であり、
Ｚは、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ６、またはＣ１〜Ｃ４アルキル、ＣＦ３、ハロゲン、シアノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、もしくはシクロアルキル部分の１個の炭素原子がメチルもしくはエチルで任意選択により置換されていてもよいＣ３〜Ｃ６シクロアルキルで置換されているピリミジンであり、
ｍは、１、２または３であり、
ｎは、０、１または２であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ２ａは、水素、フルオロ、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ２ｂは、水素またはフルオロであり、但し、Ｒ２ａがＣ１〜Ｃ４アルキルであるとき、Ｒ２ｂは水素であり、
各Ｒ３は、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、−ＳＯ２−Ｒ７、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）（ＯＲ９）、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＮＨ−ＣＯ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＯＨ、ならびに酸素、窒素、および硫黄からそれぞれ独立に選択される１、２、３または４個のヘテロ原子を含んでいる５〜６員ヘテロアリール基からなる群から個別に選択され、前記ヘテロアリール基上の炭素原子は、Ｒ４ａで置換されていてもよく、または前記ヘテロアリール基上の窒素原子は、Ｒ４ｂで置換されていてもよく、
Ｒ４ａは、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、またはハロゲンであり、前記アルキルは、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシで置換されていてもよく、
Ｒ４ｂは、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＣＨ２−Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、−Ｃ２〜Ｃ４アルキル−ＯＨ、または−ＣＨ２−Ｃ１〜Ｃ４アルコキシであり、
Ｒ５は水素であり、またはＲ１が水素であるとき、その場合Ｒ５は水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、前記シクロアルキル部分の１個の炭素原子は、メチルまたはエチルで任意選択により置換されていてもよく、
Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、ＮＨ２、または−（ＣＨ２）２−ＯＨを示し、
Ｒ８は、水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルを示し、
Ｒ９は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−（ＣＨ２）２−ＯＨ、−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３−ＯＨ、−（ＣＨ２）３−Ｏ−ＣＨ３、３−オキセタニル、または３−ヒドロキシシクロブチルを示し、
またはＲ３が−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９であるとき、Ｒ８およびＲ９は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環、またはモルホリン環を形成することができる］
または薬学的に許容できるその塩。
【請求項２】
Ｘが
【化３】
2012528847.tif 000094
であり、
ＹがＯであり、
ｍが１または２であり、
Ｚが−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ６であり、
Ｒ１が水素であり、
Ｒ２ａが水素であり、
Ｒ２ｂが水素であり、
各Ｒ３が、独立に、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ＳＯ２−Ｒ７、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）（ＯＲ９）、−ＣＯ−ＮＲ８Ｒ９、または酸素および窒素からそれぞれ独立に選択される１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を含んでいる５〜６員ヘテロアリール基であり、前記ヘテロアリール基上の炭素原子は、Ｒ４ａで置換されていてもよく、または前記ヘテロアリール基上の窒素原子は、Ｒ４ｂで置換されていてもよい、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘが
【化４】
2012528847.tif 000095
であり、
ＹがＯであり、
ｍが１または２であり、
Ｚが−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ６であり、
Ｒ１が水素であり、
Ｒ２ａがフルオロであり、
Ｒ２ｂが水素であり、
各Ｒ３が、独立に、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ＳＯ２−Ｒ７、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）（ＯＲ９）、−ＣＯ−ＮＲ８Ｒ９、または酸素および窒素からそれぞれ独立に選択される１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を含んでいる５〜６員ヘテロアリール基であり、前記ヘテロアリール基上の炭素原子は、Ｒ４ａで置換されていてもよく、または前記ヘテロアリール基上の窒素原子は、Ｒ４ｂで置換されていてもよい、
請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
各Ｒ３が、独立に、フルオロ、メチル、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−Ｒ７、テトラゾール、ピラゾール、イミダゾール、またはトリアゾールである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
各Ｒ３が、独立に、フルオロ、メチル、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−Ｒ７、
【化５】
2012528847.tif 000096
であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂが、それぞれ独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ２〜Ｃ４アルキル−ＯＨである、
請求項１、２または４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘが
【化６】
2012528847.tif 000097
であり、
ＹがＯまたはＮＨであり、
Ｚが−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ６であり、
ｎが０または１であり、
Ｒ１が水素であり、
Ｒ２ａが水素であり
Ｒ２ｂが水素であり、
Ｒ３が、存在する場合、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、または酸素および窒素からそれぞれ独立に選択される１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を含んでいる５〜６員ヘテロアリール基であり、前記ヘテロアリール基上の炭素原子は、Ｒ４ａで置換されていてもよく、または前記ヘテロアリール基上の窒素原子は、Ｒ４ｂで置換されていてもよい、
請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが
【化７】
2012528847.tif 000098
であり、
ＹがＯまたはＮＨであり、
Ｚが−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ６であり、
ｎが０または１であり、
Ｒ１が水素であり、
Ｒ２ａがフルオロであり、
Ｒ２ｂが水素であり、
Ｒ３が、存在する場合、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、または酸素および窒素からそれぞれ独立に選択される１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を含んでいる５〜６員ヘテロアリール基であり、前記ヘテロアリール基上の炭素原子は、Ｒ４ａで置換されていてもよく、または前記ヘテロアリール基上の窒素原子は、Ｒ４ｂで置換されていてもよい、
請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ６がイソプロピルまたは１−メチルシクロプロピルである、請求項１から８のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
以下の化合物
１−メチルシクロプロピル４−｛４−［（４−カルバモイル−３−フルオロフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛４−［（４−カルバモイル−２−フルオロフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２，３−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２，５−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛２−フルオロ−４−［１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル］フェノキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛２−フルオロ−４−［２−（２−ヒドロキシエチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］フェノキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛５−シアノ−４−［（４−シアノフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛４−［（４−カルバモイルフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−（５−シアノ−４−｛［４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２，４−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−（５−シアノ−４−｛［（２−メチルピリジン−３−イル）オキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛［２−メチル−６−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−３−イル］オキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛［２−メチル−６−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−３−イル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛［２−メチル−６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２−メチルフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［（２−メチルピリジン−３−イル）アミノ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛１−［（２−メチルピリジン−３−イル）オキシ］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛１−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノキシ］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛２−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］プロピル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛２−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−｛５−シアノ−４−［（４−シアノ−２−フルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［４−（ジメトキシホスホリル）−２−フルオロフェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［（２−メチルピリジン−３−イル）オキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛２−フルオロ−４−［（２−ヒドロキシエチル）スルホニル］フェノキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［４−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；または
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
または薬学的に許容できるその塩。
【請求項１０】
少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤と混和された、治療有効量で存在する請求項１から９のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１１】
抗肥満薬および抗糖尿病薬からなる群から選択される少なくとも１種の追加の薬剤をさらに含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗肥満薬が、ジルロタピド、ミトラタピド、イミプリタピド、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）、ＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６、ロルカセリン、セチリスタット、ＰＹＹ３−３６、ナルトレキソン、オレオイル−エストロン、オビネピチド、プラムリンチド、テソフェンシン、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エクセナチド、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）、およびシブトラミンからなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記抗糖尿病薬が、メトホルミン、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ジアビネース、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、トルブタミド、テンダミスタット、トレスタチン、アカルボース、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラジミシンＱ、サルボスタチン、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エキセンディン３、エキセンディン４、トロダスケミン、レセルバトロール、ヒルチオサール抽出物、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、およびサクサグリプチンからなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
有効量の請求項１から９のいずれかに記載の化合物の、その必要がある患者への投与を含む、糖尿病の治療方法。
【請求項１５】
治療有効量の請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物を患者に投与するステップを含む、代謝性または代謝関連の疾患、状態、または障害の治療方法。
【請求項１６】
高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早発性２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年性非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠糖尿病、冠動脈心疾患、虚血発作、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞（たとえば、壊死およびアポトーシス）、脂質異常症、食後高脂血症、耐糖能障害（ＩＧＴ）状態、空腹時血漿グルコース異常状態、代謝性アシドーシス、ケトーシス、関節炎、肥満、骨粗鬆症、高血圧、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性ニューロパシー、メタボリック症候群、シンドロームＸ、月経前症候群、冠動脈心疾患、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、一過性脳虚血発作、卒中、血管再狭窄、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝障害、耐糖能障害状態、空腹時血漿グルコース異常状態、肥満、勃起機能不全、皮膚および結合組織の障害、足の潰瘍化および潰瘍性大腸炎、内皮障害および血管コンプライアンスの障害、高アポＢリポタンパク質血症、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、ならびに過敏性腸症候群からなる群から選択される状態の治療方法であって、有効量の請求項１から９のいずれかに記載の化合物の投与を含む方法。
【請求項１７】
代謝性または代謝関連の疾患、状態、または障害の治療方法であって、そのような治療の必要がある患者に、
（ｉ）請求項１２に記載の第一の組成物、および
（ｉｉ）抗肥満薬および抗糖尿病薬からなる群から選択される少なくとも１種の追加の薬剤と少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤とを含む第二の組成物
を含む２種の別個の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１８】
前記第一の組成物と前記第二の組成物が同時に投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記第一の組成物と前記第二の組成物が逐次的に、任意の順序で投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節する疾患、状態、または障害を治療するための医薬の製造における、請求項１から９に記載の化合物の使用。
【請求項２１】
糖尿病または前記糖尿病に付随する病的状態を治療するための医薬の調製における、請求項１から９のいずれかに記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な部類のシアノピラゾール、それらの化合物を含有する医薬組成物、およびＧタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、異常なグルコース恒常性の結果として高濃度の血中グルコースが存在する障害である。最も一般的な形態の糖尿病は、Ｉ型糖尿病（インスリン依存型糖尿病とも呼ばれる）およびＩＩ型糖尿病（インスリン非依存型糖尿病とも呼ばれる）である。すべての糖尿病症例のおよそ９０％を占めるＩＩ型糖尿病は、微小血管合併症（網膜症、神経障害、および腎障害を含める）、ならびに大血管合併症（加速性のアテローム性動脈硬化症、冠動脈心疾患、および卒中を含める）をもたらす深刻な進行性疾患である。
【０００３】
現在、糖尿病の治療法は存在しない。この疾患の標準的な治療は限られており、血中グルコース濃度をコントロールして、合併症を最小限に抑える、または遅らせることに集中している。現行の治療は、インスリン抵抗性（メトホルミン、チアゾリジンジオン）、またはβ細胞からのインスリン放出（スルホニル尿素、エキサナチド（ｅｘａｎａｔｉｄｅ））のどちらかをターゲットとしている。β細胞の脱分極を介して働くスルホニル尿素および他の化合物は、循環グルコース濃度とは無関係にインスリン分泌を刺激するので、低血糖を促進する。認可されている薬物の１つであるエキサナチドは、高グルコースの存在下でのみインスリン分泌を刺激するが、経口による生物学的利用能を欠くので、注射しなければならない。ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤であるシタグリプチンは、インクレチンホルモンの血中濃度を上昇させる新しい薬物であり、そのインクレチンホルモンは、インスリン分泌を増加させ、グルカゴン分泌を減少させることができ、あまり特徴付けられていない他の効果ももち得る。しかし、シタグリプチンおよび他のジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤は、他のホルモンおよびペプチドの組織濃度にも影響を及ぼすことがあり、このより広範な影響による長期的な結果については、十分な調査がなされていない。
【０００４】
ＩＩ型糖尿病では、筋細胞、脂肪細胞、および肝細胞がインスリンに正常に反応しない。この状態（インスリン抵抗性）は、細胞のインスリン受容体の数の減少、細胞のシグナル伝達経路の破綻、またはこの両方に起因する可能性がある。最初のうち、β細胞は、インスリン産生量を増加させてインスリン抵抗性の埋め合わせをする。しかし結局、β細胞は、正常なグルコース濃度（正常血糖）を維持するのに十分なインスリンを産生できなくなり、ＩＩ型糖尿病への進行を示す。
【０００５】
ＩＩ型糖尿病では、β細胞の機能不全と相まったインスリン抵抗性により空腹時高血糖が生じる。β細胞異常機能不全には２つの態様がある。すなわち、１）（非刺激性の低グルコース濃度で起こる）基礎インスリン放出の増加（これは、ＩＩ型糖尿病だけでなく、肥満のインスリン抵抗性前糖尿病段階でも認められる）、および２）高血糖負荷に反応して、インスリン放出が、すでに上昇している基礎レベルを上回って増加しないこと（この現象は、前糖尿病段階では起こらず、正常血糖のインスリン抵抗性段階から明らかなＩＩ型糖尿病へと移行する前兆となる場合もある）。後者の態様を治療する現行の療法としては、内在性の貯蔵インスリンの放出を誘発するためのＡＴＰ感受性β細胞カリウムチャネルの阻害剤、および外因性インスリンの投与が挙げられる。どちらも血中グルコース濃度の的確な正常化を実現するものでなく、また低血糖を惹起するリスクを伴う。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、グルコース依存的に機能する薬剤の発見に大きな関心が寄せられている。このように機能する生理学的なシグナル伝達経路は、腸管ペプチドのＧＬＰ−１およびＧＩＰを含めて、よく知られている。これらのホルモンは、同種のＧタンパク質共役受容体を介して信号を送って、膵臓β細胞におけるｃＡＭＰの産生を刺激する。ｃＡＭＰが増加しても、空腹時または食事前の状態の間はインスリン放出が刺激されないようである。しかし、ＡＴＰ感受性カリウムチャネル、電位感受性カリウムチャネル、および開口分泌機構を含めた、ｃＡＭＰのいくつかの生化学的ターゲットは、食後のグルコース刺激によるインスリン分泌が顕著に強化されるように調節される。したがって、同様に機能する、ＧＰＲ１１９を含めた新規なβ細胞ＧＰＣＲのアゴニスト調節因子も、ＩＩ型糖尿病患者において、内在性インスリンの放出を刺激し、グルコース濃度の正常化を促進するということになる。たとえばＧＬＰ−１が刺激された結果としてｃＡＭＰが増加すると、β細胞増殖が促進され、β細胞死が抑制され、したがって膵島質量が向上することもわかっている。β細胞質量に対するこのプラスの効果は、インスリンが十分に産生されないＩＩ型糖尿病において有益となるはずである。
【０００７】
代謝性疾患が他の生理系に悪影響を及ぼすことはよく知られており、複合的な疾患状態（たとえば、「シンドロームＸ」におけるＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、不十分な耐糖能、インスリン抵抗性、高血糖、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、脂質異常症、肥満、または心血管疾患）、または腎疾患や末梢神経障害などの、糖尿病に引き続いて生じる続発性疾患がしばしば併発される。したがって、糖尿病状態の治療は、このような相互に関連した疾患状態にとって有益であるはずである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明によれば、新規な部類のＧＰＲ調節因子が発見された。これらの化合物は、以下に示す式Ｉ
【０００９】
【化１】
2012528847.tif 000002
［式中、
Ｘは、
【化２】
2012528847.tif 000003
であり、
Ｙは、Ｏ、ＣＨ（Ｒ５）、またはＮＲ５であり、
Ｚは、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ６、またはＣ１〜Ｃ４アルキル、ＣＦ３、ハロゲン、シアノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、もしくはシクロアルキル部分の１個の炭素原子がメチルもしくはエチルで任意選択により置換されていてもよいＣ３〜Ｃ６シクロアルキルで置換されているピリミジンであり、
ｍは、１、２または３であり、
ｎは、０、１または２であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ２ａは、水素、フルオロ、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ２ｂは、水素またはフルオロであり、但し、Ｒ２ａがＣ１〜Ｃ４アルキルであるとき、Ｒ２ｂは水素であり、
各Ｒ３は、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、−ＳＯ２−Ｒ７、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）（ＯＲ９）、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＮＨ−ＣＯ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＯＨ、ならびに酸素、窒素、および硫黄からそれぞれ独立に選択される１、２、３または４個のヘテロ原子を含んでいる５〜６員ヘテロアリール基からなる群から個別に選択され、前記ヘテロアリール基上の炭素原子は、Ｒ４ａで置換されていてもよく、または前記ヘテロアリール基上の窒素原子は、Ｒ４ｂで置換されていてもよく、
Ｒ４ａは、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、またはハロゲンであり、前記アルキルは、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシで置換されていてもよく、
Ｒ４ｂは、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＣＨ２−Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、−Ｃ２〜Ｃ４アルキル−ＯＨまたは−ＣＨ２−Ｃ１〜Ｃ４アルコキシであり、
Ｒ５は水素であり、またはＲ１が水素であるとき、その場合Ｒ５は水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、前記シクロアルキル部分の１個の炭素原子は、メチルまたはエチルで任意選択により置換されていてもよく、
Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、ＮＨ２、または−（ＣＨ２）２−ＯＨを示し、
Ｒ８は、水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルを示し、
Ｒ９は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−（ＣＨ２）２−ＯＨ、−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３−ＯＨ、−（ＣＨ２）３−Ｏ−ＣＨ３、３−オキセタニル、または３−ヒドロキシシクロブチルを示し、
またはＲ３が−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９であるとき、Ｒ８およびＲ９は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環、またはモルホリン環を形成することができる］
または薬学的に許容できるその塩
によって表すことができる。
【００１０】
さらに、本発明は、以下の化合物を対象とする。
１−メチルシクロプロピル４−｛４−［（４−カルバモイル−３−フルオロフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛４−［（４−カルバモイル−２−フルオロフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２，３−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２，５−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛２−フルオロ−４−［１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル］フェノキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛２−フルオロ−４−［２−（２−ヒドロキシエチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］フェノキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛５−シアノ−４−［（４−シアノフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−｛４−［（４−カルバモイルフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−（５−シアノ−４−｛［４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２，４−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
１−メチルシクロプロピル４−（５−シアノ−４−｛［（２−メチルピリジン−３−イル）オキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛［２−メチル−６−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−３−イル］オキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛［２−メチル−６−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−３−イル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛［２−メチル−６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−｛５−シアノ−４−［（２−メチルフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［（２−メチルピリジン−３−イル）アミノ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛１−［（２−メチルピリジン−３−イル）オキシ］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛１−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノキシ］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛２−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］プロピル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛２−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−｛５−シアノ−４−［（４−シアノ−２−フルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［４−（ジメトキシホスホリル）−２−フルオロフェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［（２−メチルピリジン−３−イル）オキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−［５−シアノ−４−（｛２−フルオロ−４−［（２−ヒドロキシエチル）スルホニル］フェノキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［４−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；
イソプロピル４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート；またはこれらの薬学的に許容できる塩。
【００１１】
式Ｉの化合物は、Ｇタンパク質共役受容体の活性を調節する。より詳細には、式Ｉの化合物は、ＧＰＲ１１９を調節する。そのため、前記化合物は、糖尿病などの、ＧＰＲ１１９の活性が疾患の病理または症状の一因となる疾患の治療に有用である。そのような状態の例として、高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早発性２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年性非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠糖尿病、冠動脈心疾患、虚血発作、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞（たとえば、壊死およびアポトーシス）、脂質異常症、食後高脂血症、耐糖能障害（ＩＧＴ）状態、空腹時血漿グルコース異常（ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｆａｓｔｉｎｇ  ｐｌａｓｍａ  ｇｌｕｃｏｓｅ）状態、代謝性アシドーシス、ケトーシス、関節炎、肥満、骨粗鬆症、高血圧、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性ニューロパシー、メタボリック症候群、シンドロームＸ、月経前症候群、冠動脈心疾患、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化症、一過性脳虚血発作、卒中、血管再狭窄、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝障害、耐糖能障害状態、空腹時血漿グルコース異常状態、肥満、勃起機能不全、皮膚および結合組織の障害、足の潰瘍化および潰瘍性大腸炎、内皮障害、ならびに血管コンプライアンスの障害が挙げられる。式Ｉの化合物は、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害などの神経障害の治療に使用することもできる。式Ｉの化合物は、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群などの胃腸疾患においても有益となる。上述のように、式Ｉの化合物は、肥満患者、特に糖尿病に罹患している肥満患者において体重減少を刺激するのにも使用することができる。
【００１２】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物を含有する医薬組成物を対象とする。そのような製剤は通常、少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤と混和された式Ｉの化合物を含有する。そうした製剤はまた、少なくとも１種の追加の薬剤を含有してもよい。そのような薬剤の例として、抗肥満薬および／または抗糖尿病薬が挙げられる。本発明の追加の態様は、糖尿病および本明細書に記載の関連状態を治療する医薬の調製における式Ｉの化合物の使用に関する。
【００１３】
前述の概要および以下の詳細な説明は、どちらも例示および説明のためのものにすぎず、特許請求の範囲に記載する本発明を限定するものでないと理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、野生型ｈＧＰＲ１１９のＤＮＡ配列を示した図である。
【図２】図２は、ｐＦＢ-ＶＳＶＳ-ＣＭＶ-ポリベクターを示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、本発明の例示的な実施形態についての以下の詳細な記述およびその中に含まれる実施例を参照することにより、より容易に理解することができる。
【００１６】
本発明は、特定の合成的製造方法に限定されず、当然様々に異なり得ることを理解されたい。本明細書で使用する専門用語は、特定の実施形態について述べるためのものにすぎず、限定するものではないことも理解されたい。複数形および単数形は、数を示す以外では、交換可能であるとして扱うべきである。
ａ．「ハロゲン」とは、塩素、フッ素、ヨウ素、または臭素原子を指す。
ｂ．「Ｃ１〜Ｃ５アルキル」とは、１〜５個の炭素原子を含んでいる分枝状または直鎖状アルキル基、たとえば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ペンチルなどを指す。
ｃ．「Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ」とは、１〜５個の炭素原子を含んでいる直鎖または分枝鎖アルコキシ基、たとえば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ペントキシなどを指す。
ｄ．「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル」とは、完全に水素化され、単環として存在する、非芳香族の環を指す。そのような炭素環の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。
ｅ．「５〜１０員ヘテロアリール」とは、合計５〜１０個の環原子を有し、酸素、窒素、および硫黄から独立に選択される１個、２個、３個、または４個のヘテロ原子を含んでおり、また１個、２個、または３個の環を有し、そうした環は縮合していてもよい、炭素環式芳香族系を意味する。用語「縮合」とは、第一の環と共通の（すなわち、共有される）２個の近接する原子を有することにより、第二の環が存在する（すなわち、結合されるまたは生成される）ことを意味する。用語「縮合した（ｆｕｓｅｄ）」は、用語「縮合した（ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ）」に等しい。用語「ヘテロアリール」は、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピリミジン、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、イミダゾ［１，５−ａ］ピリジン、［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン、［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリミジン、および［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジンなどの芳香族ラジカルを包含する。
ｆ．「治療有効量」とは、（ｉ）特定の疾患、状態、または障害を治療もしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態、または障害の１つまたは複数の症状を緩和し、寛解させ、もしくは除去する、または（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態、または障害の１つまたは複数の症状の発症を予防し、もしくは遅らせる、本発明の化合物の量を意味する。
ｇ．「患者」とは、温血動物、たとえば、モルモット、マウス、ラット、アレチネズミ、ネコ、ウサギ、イヌ、サル、チンパンジー、およびヒトを指す。
ｈ．「治療する」とは、予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）すなわち予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）治療、ならびに対症的治療、すなわち患者の疾患（もしくは状態）または疾患に関連する任意の組織損傷を軽減し、解消し、またはその進行を緩慢にする治療の両方を包含する。
ｉ．用語「調節された」、「調節すること」、または「調節する」とは、本明細書では、別段指摘しない限り、本発明の化合物を用いた、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性化を指す。
ｊ．「薬学的に許容できる」とは、物質または組成物が、製剤を構成する他の成分および／またはそれによる治療を受ける哺乳動物と化学的および／または毒物学的に適合性でなければならないことを示す。
ｋ．「塩」とは、薬学的に許容できる塩、および化合物の調製などの工業的プロセスでの使用に適する塩を指すものとする。
ｌ．「薬学的に許容できる塩」とは、化合物の実際の構造に応じて、薬学的に許容できる酸付加塩」または「薬学的に許容できる塩基付加塩」のどちらかを指すものとする。
ｍ．「薬学的に許容できる酸付加塩」とは、式Ｉまたはその中間体のいずれかによって表される塩基化合物の非毒性のいかなる有機酸または無機酸付加塩にも該当するものとする。適切な塩を形成する無機酸の実例として、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸、ならびにオルトリン酸一水素ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｏｒｔｈｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）や硫酸水素カリウムなどの酸金属塩が挙げられる。適切な塩を形成する有機酸の実例として、モノ、ジ、およびトリカルボン酸が挙げられる。そのような酸の実例は、たとえば、酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ−安息香酸、フェニル酢酸、ケイ皮酸、サリチル酸、２−フェノキシ安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ならびにメタンスルホン酸や２−ヒドロキシエタンスルホン酸などのスルホン酸である。このような塩は、水和した形態または実質的に無水の形態のどちらで存在してもよい。一般に、こうした化合物の酸付加塩は、水および種々の親水性有機溶媒に可溶性である。
ｎ．「薬学的に許容できる塩基付加塩」とは、式Ｉまたはその中間体のいずれかによって表される化合物の非毒性のいかなる有機または無機塩基付加塩にも該当するものとする。適切な塩を形成する塩基の実例として、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化バリウムなどの、アルカリ金属またはアルカリ土類金属水酸化物；アンモニア；ならびにメチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピコリンなどの、脂肪族、脂環式、または芳香族有機アミンが挙げられる。
ｏ．「式Ｉの化合物」、「本発明の化合物」、および「化合物」は、本出願全体にわたり区別なく使用しており、同義語として扱うべきである。
ｐ．「異性体」とは、以下で定義するような「立体異性体」および「幾何異性体」を意味する。「立体異性体」とは、１つまたは複数のキラル中心を有する化合物を指し、各中心は、ＲまたはＳ立体配置で存在し得る。立体異性体として、すべてのジアステレオ異性体、鏡像異性体、およびエピマーの形態、ならびにそのラセミ体および混合物が挙げられる。「幾何異性体」とは、シス、トランス、アンチ、シン、エントゲーゲン（Ｅ）、およびツザンメン（Ｚ）の形態、ならびにその混合物として存在し得る化合物を指す。
【００１７】
式（Ｉ）の化合物のいくつかは、幾何異性体として存在し得る。式（Ｉ）の化合物は、１つまたは複数の不斉中心を有し、したがって２種以上の立体異性体形態として存在することもある。本発明は、式（Ｉ）の化合物のすべての個々の立体異性体および幾何異性体ならびにその混合物を包含する。個々の鏡像異性体は、キラル分離によって、または合成の際に関連する鏡像異性体を使用して得ることができる。
【００１８】
加えて、本発明の化合物は、溶媒和していない形で存在しても、水、エタノールなどの薬学的に許容できる溶媒と溶媒和した形で存在してもよい。一般に、本発明の目的では、溶媒和した形態は、溶媒和していない形態と同等であるとみなす。化合物は、１種または複数の結晶状態、すなわち、共結晶、多形体で存在する場合もあり、または非晶質固体として存在する場合もある。そのようなすべての形態が本発明および特許請求の範囲に包含される。
【００１９】
本発明の化合物の一実施形態では、
Ｘは
【００２０】
【化３】
2012528847.tif 000004
であり、
ＹはＯであり、
ｍは１または２であり、
Ｚは−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ６であり、
Ｒ１は水素であり、
Ｒ２ａは水素であり、
Ｒ２ｂは水素であり、
各Ｒ３は、独立に、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ＳＯ２−Ｒ７、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）（ＯＲ９）、−ＣＯ−ＮＲ８Ｒ９、または酸素および窒素からそれぞれ独立に選択される１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を含んでいる５〜６員ヘテロアリール基であり、前記ヘテロアリール基上の炭素原子は、Ｒ４ａで置換されていてもよく、または前記ヘテロアリール基上の窒素原子は、Ｒ４ｂで置換されていてもよい。
【００２１】
本発明の化合物の別の実施形態では、
Ｘは
【００２２】
【化４】
2012528847.tif 000005
であり、
ＹはＯであり、
ｍは１または２であり、
Ｚは−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ６であり、
Ｒ１は水素であり、
Ｒ２ａはフルオロであり、
Ｒ２ｂは水素であり、
各Ｒ３は、独立に、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ＳＯ２−Ｒ７、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）（ＯＲ９）、−ＣＯ−ＮＲ８Ｒ９、または酸素および窒素からそれぞれ独立に選択される１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を含んでいる５〜６員ヘテロアリール基であり、前記ヘテロアリール基上の炭素原子は、Ｒ４ａで置換されていてもよく、または前記ヘテロアリール基上の窒素原子は、Ｒ４ｂで置換されていてもよい。
【００２３】
本発明の化合物の別の実施形態では、各Ｒ３は、独立に、フルオロ、メチル、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−Ｒ７、テトラゾール、ピラゾール、イミダゾールまたはトリアゾールである。
【００２４】
本発明の化合物の別の実施形態では、各Ｒ３は、独立に、フルオロ、メチル、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−Ｒ７、
【化５】
2012528847.tif 000006
であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、それぞれ独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ２〜Ｃ４アルキル−ＯＨである。
【００２５】
本発明の化合物の別の実施形態では、
Ｘは
【化６】
2012528847.tif 000007
であり、
ＹはＯまたはＮＨであり、
Ｚは−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ６であり、
ｎは０または１であり、
Ｒ１は水素であり、
Ｒ２ａは水素であり、
Ｒ２ｂは水素であり、
Ｒ３は、存在する場合、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、または酸素および窒素からそれぞれ独立に選択される１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を含んでいる５〜６員ヘテロアリール基であり、前記ヘテロアリール基上の炭素原子は、Ｒ４ａで置換されていてもよく、または前記ヘテロアリール基上の窒素原子は、Ｒ４ｂで置換されていてもよい。
【００２６】
本発明の化合物の別の実施形態では、
Ｘは、
【化７】
2012528847.tif 000008
であり、
ＹはＯまたはＮＨであり、
Ｚは−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ６であり、
ｎは０または１であり、
Ｒ１は水素であり、
Ｒ２ａはフルオロであり、
Ｒ２ｂは水素であり、
Ｒ３は、存在する場合、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、または酸素および窒素からそれぞれ独立に選択される１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を含んでいる５〜６員ヘテロアリール基であり、前記ヘテロアリール基上の炭素原子は、Ｒ４ａで置換されていてもよく、または前記ヘテロアリール基上の窒素原子は、Ｒ４ｂで置換されていてもよい。
【００２７】
本発明の化合物の別の実施形態では、Ｒ６は、イソプロピルまたは１−メチルシクロプロピルである。
【００２８】
本発明の組成物の別の実施形態では、組成物は、抗肥満薬および抗糖尿病薬からなる群から選択される少なくとも１種の追加の医薬をさらに包含する。抗肥満薬の例としては、ジルロタピド、ミトラタピド、インプリタピド、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ  Ｎｏ．４０３９８７）、ＣＡＳ  Ｎｏ．９１３５４１−４７−６、ロルカセリン、セチリスタット、ＰＹＹ３−３６、ナルトレキソン、オレオイル−エストロン、オビネピチド（ｏｂｉｎｅｐｉｔｉｄｅ）、プラムリンチド、テソフェンシン、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エクセナチド、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ  Ｎｏ．２２１２３１−１０−３）、およびシブトラミンが挙げられる。抗糖尿病薬の例としては、メトホルミン、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ジアビネース（ｄｉａｂｉｎｅｓｅ）、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、トルブタミド、テンダミスタット、トレスタチン、アカルボース、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラディマイシン−Ｑ、サルボスタチン（ｓａｌｂｏｓｔａｔｉｎ）、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エキセンディン−３、エキセンディン−４、トロダスケミン（ｔｒｏｄｕｓｑｕｅｍｉｎｅ）、レセルバトロール（ｒｅｓｅｒｖａｔｒｏｌ）、ヒルチオサール抽出物（ｈｙｒｔｉｏｓａｌ  ｅｘｔｒａｃｔ）、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチンが挙げられる。
【００２９】
本発明の方法の別の実施形態では、高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早発性２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年性非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠糖尿病、冠動脈心疾患、虚血発作、血管形成術後再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞（たとえば、壊死およびアポトーシス）、脂質異常症、食後脂血症、耐糖能障害（ＩＧＴ）状態、空腹時血漿グルコース異常状態、代謝性アシドーシス、ケトーシス、関節炎、肥満、骨粗鬆症、高血圧、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性ニューロパシー、メタボリック症候群、シンドロームＸ、月経前症候群、冠動脈心疾患、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、一過性脳虚血発作、卒中、血管再狭窄、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝障害、耐糖能障害状態、空腹時血漿グルコース異常状態、肥満、勃起機能不全、皮膚および結合組織の障害、足の潰瘍化および潰瘍性大腸炎、内皮障害および血管コンプライアンスの障害、高アポＢリポタンパク質血症、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、ならびに過敏性腸症候群からなる群から選択される状態を治療するために、本発明の化合物または組成物を有効量で投与することができる。
【００３０】
別の実施形態では、この方法は、抗肥満薬および抗糖尿病薬からなる群から選択される少なくとも１種の追加の薬剤と、薬学的に許容できる少なくとも１種の賦形剤とを含む第二の組成物を投与するステップをさらに包含する。この方法は、各組成物を同時または逐次投与で、また任意の順序で投与するのに使用することができる。
【００３１】
さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、疾患、状態、または障害を治療するための、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節する医薬の製造において有用である。さらに、化合物は、糖尿病または前記糖尿病に付随する病的状態を治療する医薬の調製においても有用である。
【００３２】
合成
例示する目的で、以下で図示する反応スキームにより、本発明の化合物ならびに重要中間体を合成する潜在的経路を示す。個々の反応ステップのより詳細な説明については、以下の実施例の部を参照されたい。当業者なら、本発明の化合物の合成に他の合成経路を使用してもよいことがわかるであろう。詳細な出発材料および試薬をスキームの中で示し、以下で論じるが、他の出発材料および試薬で容易に置き換えて、様々な誘導体および／または反応条件を準備することができる。加えて、以下で述べる方法によって調製される化合物の多くは、当業者によく知られている従来の化学を使用し、この開示に照らしてさらに改変することができる。
【００３３】
本発明の化合物は、化学分野でよく知られている方法と類似した方法を包含する合成経路によって、特に本明細書に収められている記述に照らして、合成することができる。出発材料は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ウィスコンシン州ミルウォーキー）などの市販品供給元から一般に入手可能であり、または当業者に知られている方法を使用して容易に調製される（たとえば、Ｌｏｕｉｓ  Ｆ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒ、Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１９巻、Ｗｉｌｅｙ、ニューヨーク（１９６７〜１９９９年版）、またはＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ、第４版、ベルリン、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ編（増刊を含める）（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースからも入手可能）に一般に記載されている方法によって調製される）。
【００３４】
式Ｉの化合物は、当技術分野で同様に知られているエーテル生成の方法を使用して調製することができる。１）Ｈｕｇｈｅｓ，Ｄ．Ｌ．、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  １９９２、４２、米国ニュージャージー州ホーボーケン、２）Ｔｉｋａｄ，Ａ．、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｓ．、Ａｋｓｓｉｒａ，Ｍ．、Ｌｅｇｅｒ，Ｊ．−Ｍ．ｌ、Ｊａｒｒｙ，Ｃ．、Ｇｕｉｌｌａｕｍｅｔ，Ｇ．、Ｓｙｎｌｅｔｔ  ２００６、１２、１９３８〜４２、および３）Ｌｏｋｓｈａ，Ｙ．Ｍ．、Ｇｌｏｂｉｓｃｈ，Ｄ．、Ｐｅｄｅｒｓｅｎ，Ｅ．Ｂ．、Ｌａ  Ｃｏｌｌａ，Ｐ．、Ｃｏｌｌｕ，Ｇ．、Ｌｏｄｄｏ，Ｒ．、Ｊ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．２００８、４５、１１６１〜６などの、そうした反応についてより詳細に記載している教本に目を向けられたい。
【００３５】
【化８】
2012528847.tif 000009
【００３６】
Ｒ２ｂがＨである式Ｉの化合物は、スキーム１に示すとおりに調製することができる。ステップ１では、式Ａの化合物と市販の化合物Ｂ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の縮合反応を、エタノール、トルエン、およびアセトニトリルが挙げられるがこの限りでない多様な数多くの溶媒中にて、利用する溶媒に応じて２２℃〜１３０℃の範囲の温度で１〜７２時間実施することにより、式Ｃの化合物を調製できる。式Ａの化合物が塩化水素塩またはトリフルオロ酢酸塩である場合には、酢酸ナトリウムや炭酸水素ナトリウムなどの塩基改質剤を１〜３当量加えて、塩を中和することができる。その反応は、メタノールやエタノールなどの極性プロトン性溶媒中にて２２℃〜８５℃の温度で実施することができる。この変換の典型的な条件として、８５℃で３時間加熱を行う、エタノール中での３当量の酢酸ナトリウムの使用が挙げられる。
【００３７】
式Ａの化合物は、置換または非置換４−ピペリジノン塩酸塩を出発材料とする４ステップ手順（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４、４７、２１８０）で調製することができる。まず、過剰の塩基の存在下、そうした塩を適切なクロロギ酸アルキルまたは二炭酸ビス（アルキル）で処理して、対応するカルバミン酸アルキルを生成する。次いでケトン基をｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルヒドラジドと縮合させて、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル（ＢＯＣ）で保護された、対応するヒドラゾン誘導体を生成する。引き続いて、シアノ水素化ホウ素ナトリウムやトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤を使用し、これをＢＯＣ保護された対応するヒドラジン誘導体に還元する。最後に、トリフルオロ酢酸や塩酸などの酸性条件下でＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル基を切断して、式Ａの化合物を得るが、通常はこれを単離し、対応する塩（たとえば、二塩酸塩）として使用する。
【００３８】
ステップ２では、式Ｃの化合物から、ザンドマイヤー反応によって、中間体ジアゾニウム塩の生成を経て、式Ｄの化合物を調製することができる（Ｃｏｍｐ．Ｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．、１９９１、６、２０３）。ジアゾニウム塩は、亜硝酸ナトリウム、および単独または組合せでの塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸などの酸水溶液を用いた、式Ｃの化合物のジアゾ化によって調製することができる。この反応は通常、水中にて０℃〜１００℃で実施する。別法として、アセトニトリルなどの溶媒を用い、亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチルなどの亜硝酸アルキルを使用する無水条件（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００６、４９、１５６２）を、０℃〜９５℃の範囲の温度で利用することもできる。次いで、こうしたジアゾニウム中間体を臭化銅（ＩＩ）や臭化銅（Ｉ）などの銅の塩、またはトリブロモメタンと反応させて、式Ｄの化合物を生成する。この変換の典型的な条件として、亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル、臭化銅（ＩＩ）をアセトニトリル中にて６５℃で３０分間使用するものが挙げられる。
【００３９】
ステップ３では、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタンなどの極性非プロトン性溶媒中にて、水素化アルミニウムリチウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、ボラン−ジメチルスルフィド、ボラン−テトラヒドロフランなどの還元剤を、０℃〜１１０℃の範囲の温度で１〜２４時間使用することにより、式Ｄの化合物から、式Ｅの化合物を調製することができる。典型的な条件として、テトラヒドロフラン中にてボラン−ジメチルスルフィドを７０℃で１４時間使用するものが挙げられる。
【００４０】
式Ｅの化合物から式Ｆの化合物を調製するには、シアノ基を導入しなければならない（ステップ４）。これは、一定範囲の条件によって実現することができる。シアノ基を導入する１つの方法は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）などの極性非プロトン性溶媒中にて、シアン化銅などの銅の塩を、２２℃〜２００℃の範囲の温度で１〜２４時間使用するものでよい。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中のシアン化銅を１６５℃で５時間加熱するものが、この変換の典型的なプロトコールである。
【００４１】
ステップ４では別法として、この鋳型にシアノ基を付加するために、アセトニトリルやジメチルスルホキシドなどの極性非プロトン性溶媒中にて、シアン化カリウムやシアン化ナトリウムなどのアルカリシアン化物塩を、１８−クラウン−６（ＵＳ２００５０２０５６４）およびまたは臭化テトラブチルアンモニウム（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３、４６、１１４４）などの触媒と共に２２℃〜１００℃の範囲の温度で使用することもできる。
【００４２】
最後に、ステップ４に示す変換には、金属触媒作用を使用するのが普通である。触媒手順で使用する一般的なシアン化物塩としては、シアン化亜鉛、シアン化銅、シアン化ナトリウム、およびヘキサシアノ酸鉄（ＩＩ）カリウムが挙げられる。金属触媒は、ヨウ化銅などの銅触媒およびまたはトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、パラジウムテトラキス−トリフェニルホスフィン（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）、ジクロロ（ジフェニル−ホスフィノフェロセン）−パラジウム（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）などのパラジウム触媒でよい。これらの触媒は、単独で使用してもよいし、または上記シアン化物塩のいずれかとの任意の組合せにして使用してもよい。こうした反応に、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン（ｄｐｐｆ）などの配位子または亜鉛や銅金属などの金属添加剤を加えてもよい。反応は、ＮＭＰ、ＤＭＦ、ＤＭＡなどの極性非プロトン性溶媒中で、添加剤として水を加え、または加えずに実施する。反応は、従来の加熱またはマイクロ波による加熱によって２２℃〜１５０℃の範囲の温度で１〜４８時間実施し、密封または非密封反応容器で実施することができる。ステップ４の典型的な条件として、マイクロ波装置において１２０℃に加熱したＤＭＡ中にてシアン化亜鉛、Ｐｄ２（ｄｂａ）３、ｄｐｐｆ、および亜鉛ダストを１時間使用するものが挙げられる（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００５、４８、１１３２）。
【００４３】
ステップ５では、式Ｆの化合物から、光延反応を経て式Ｇの化合物（Ｘ、ＺおよびＲ２ａは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）を合成することができる。光延反応は、合成の文献（たとえば、Ｃｈｅｍ．Ａｓｉａｎ．Ｊ．２００７、２、１３４０；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００４、２７６３；Ｓ．Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００４、１０、３１３０）で概説されており、これらの総説の中で挙げられている合成プロトコールの多くを使用することができる。アゾジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）、アゾジカルボン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（ＴＢＡＤ）、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ）などのアゾジカルボン酸エステル、およびトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３）、トリブチルホスフィン（ＰＢｕ３）、ポリマー担持トリフェニルホスフィン（ＰＳ−ＰＰｈ３）などのホスフィン試薬を利用する光延反応プロトコールの使用を、式Ｆの化合物および一般構造式Ｘ−ＯＨの化合物（Ｘは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）と組み合わせる。この反応で利用する溶媒として、利用する溶媒およびアゾジカルボン酸エステルに応じて、０℃〜１３０℃の範囲にある温度のトルエン、ベンゼン、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン、アセトニトリルなどの非プロトン性溶媒を挙げることができる。この変換の典型的な条件は、１，４−ジオキサン中にてＤＥＡＤをＰＳ−ＰＰｈ３と共に２２℃で１５時間使用するものである。
【００４４】
式Ｇの化合物（Ｘ、ＺおよびＲ２ａは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）を調製する光延反応に代わる選択肢は、トリエチルアミンやピリジンなどの塩基の存在下で、それぞれ塩化メタンスルホニルまたは塩化パラ−トルエンスルホニルを使用して、式Ｆの化合物を対応するメタンスルホネートまたはパラ−トルエンスルホネート誘導体に変換することである。次いで、中間体のスルホン酸エステルを、炭酸カリウム、水素化ナトリウム、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの塩基の存在下で、一般構造式Ｘ−ＯＨの化合物（Ｘは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）と合わせると、式Ｇの化合物（Ｘ、ＺおよびＲ２ａは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）が得られる。
【００４５】
式Ｋの化合物（Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、Ｘ、ＺおよびＲ２ａは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）は、式Ｆの化合物から、３ステップで調製することができる。すなわち、１）第一級アルコールを酸化して対応する式Ｈのアルデヒドにするステップ（ステップ６、スキーム１）、２）式Ｈのアルデヒド中間体を式Ｒ１Ｍの有機金属試薬［Ｍは、リチウム（Ｌｉ）またはハロゲン化マグネシウム（ＭｇＣｌ、ＭｇＢｒまたはＭｇＩ）である］と反応させて、式Ｊの第二級アルコール（Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである）を得るステップ（ステップ７）、および３）式Ｊの第二級アルコールと式Ｘ−ＯＨのフェノール（Ｘは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）を光延反応条件下で反応させるステップ（ステップ８）。
【００４６】
ステップ６（スキーム１）において、式Ｈの化合物は、単独または組合せのジクロロメタン、アセトニトリル、ヘキサン、またはアセトンが挙げられるがこの限りでない溶媒中にて、１〜２０当量の活性二酸化マンガンを２２℃〜８０℃で１〜７２時間使用するものなどの酸化手順によって生成することができる。別法として、この酸化は、ジクロロメタンまたはクロロホルム中にて、０．１〜１当量の２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル（ＴＥＭＰＯ）の存在下、１〜３当量のトリクロロイソシアヌル酸を用い、０℃〜２２℃の範囲の温度で０．１〜１２時間実施することもできる。この変換の典型的な条件は、ジクロロメタン中にて０．１当量のＴＥＭＰＯの存在下、トリクロロイソシアヌル酸を２２℃で１時間使用するものである。
【００４７】
ＹがＮＲ５である式Ｉの化合物の調製も、スキーム１に示す。式Ｌの化合物（Ｘ、Ｚ、Ｒ２ａおよびＲ５は、式Ｉの化合物について規定したとおりである）は、式Ｈの中間体化合物（スキーム１）から、還元的アミノ化条件下での式Ｘ−ＮＨ−Ｒ５のアミノ化合物（ＸおよびＲ５は、式Ｉの化合物について規定したとおりである）との反応によって調製することができる（ステップ９）（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９９６、６１、３８４９；Ｏｒｇ．Ｒｅａｃｔ．２００２、５９、１）。同様に、式Ｎの化合物（Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、Ｘ、Ｚ、Ｒ２ａおよびＲ５は、式Ｉの化合物について規定したとおりである）は、式Ｊの中間体（Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである）から、１）対応する式Ｍのケトンに酸化し（ステップ１０）、２）式Ｍのケトンと式Ｘ−ＮＨ−Ｒ５のアミノ化合物（ＸおよびＲ５は、式Ｉの化合物について規定したとおりである）を還元的アミノ化条件下で反応させる（ステップ１１）ことにより、２ステップで調製することができる。別法として、Ｒ５がＣ１〜Ｃ４アルキルである式Ｌおよび式Ｎの化合物を、Ｒ５がＨである対応する式Ｌの化合物、またはＲ５がＨである対応する式Ｎの化合物から、塩基の存在下、式（Ｃ１〜Ｃ４）−Ｃｌ、（Ｃ１〜Ｃ４）−Ｂｒ、または（Ｃ１〜Ｃ４）−Ｉのハロゲン化アルキルでアルキル化することにより調製してもよい。
【００４８】
ＹがＣＨＲ５であり、Ｒ２ｂが水素である式Ｉの化合物は、スキーム２および３に示すとおりに調製することができる。式Ｒの化合物（Ｘ、ＺおよびＲ２ａは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）は、スキーム２に示すとおりに調製することができる。
【００４９】
【化９】
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【００５０】
スキーム２のステップ１では、式Ｈのアルデヒド（スキーム１も参照されたい）から、メタノール、エタノール、またはテトラヒドロフランなどの溶媒中にて、ジメチル（ジアゾメチル）ホスホネートまたはジメチル−１−ジアゾ−２−オキソプロピルホスホネートのいずれか、および炭酸カリウムやカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの塩基を−７８℃〜２２℃の範囲の温度で０．１〜２４時間使用することにより、式Ｏの化合物を生成することができる。この変換の典型的な条件として、メタノール中にてジメチル−１−ジアゾ−２−オキソプロピルホスホネートおよび２当量の炭酸カリウムを２２℃で０．７５時間使用するものが挙げられる。
【００５１】
ステップ２では、式Ｏの化合物から、一般構造式Ｘ−Ｐの化合物［Ｘは、式Ｉの化合物について規定したとおりであり、Ｐは、ハロゲン化物またはトリフルオロメタンスルホネート（トリフラート）である］との、金属を触媒とする薗頭カップリング手順によって、式Ｑの化合物を生成することができる。薗頭反応は、広範囲にわたって総説されており（Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２００７、１０７、８７４；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００７、４６、８３４；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００８、４７、６９５４）、これらの総説の中で挙げられている合成プロトコールの多くを、式Ｑの化合物の合成に使用することができる。通常、この反応における金属触媒の使用は、ヨウ化銅などの銅触媒、およびまたはＰｄ２（ｄｂａ）３、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２などのパラジウム触媒でよい。これらの触媒は、単独で使用しても、任意の組合せにして使用してもよい。塩基添加剤は、この反応に決まって使用されるものであり、塩基添加剤としては、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピロリジンなどのアミン塩基、または炭酸カリウムやフッ化カリウムなどの無機塩基を挙げることができる。反応は、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、ＤＭＦ、トルエン、１，４−ジオキサンなどの溶媒中で、添加剤として水を加え、または加えずに実施する。反応は、溶媒に応じて０℃〜１５０℃の範囲の温度で、０．１〜４８時間の範囲の時間実施する。この変換の典型的な条件として、ＤＭＦ中にてＣｕＩおよびＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２を９０℃で２時間使用するものが挙げられる。
【００５２】
最後に、ステップ３では、式Ｑの化合物から、遷移金属触媒存在下での水素化によって、式Ｒの化合物（Ｘ、ＺおよびＲ２ａは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）を生成することができる。一般的な触媒として、５〜２０％パラジウム炭素または５〜２０％水酸化パラジウム炭素の使用が挙げられる。これらの反応は、Ｐａｒｒシェーカー装置またはＨ−Ｃｕｂｅ水素化流通反応器（ＴｈａｌｅｓＮａｎｏ、英国）において、１〜５０ｐｓｉの範囲の水素圧下で、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、メタノール、エタノールなどの極性溶媒中にて、２２℃〜５０℃の温度で０．１〜２４時間の範囲の時間実施することができる。ステップ３の典型的な条件として、「水素最大量」の設定にセットしたＨ−Ｃｕｂｅ流通装置において、酢酸エチル中の式Ｑの化合物を１ｍＬ／分の流量で１０％パラジウム炭素カートリッジに通して使用するものが挙げられる。
【００５３】
スキーム３に、式Ｗの化合物（Ｘ、Ｚ、Ｒ２ａおよびＲ５は、式Ｉの化合物について規定したとおりである）の調製方法を示す。
【００５４】
【化１０】
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【００５５】
スキーム３のステップ１では、式Ｆの化合物（スキーム２も参照されたい）を三臭化リンや四臭化炭素などの試薬およびトリフェニルホスフィンで処理して、式Ｓの化合物を得ることができる。ステップ２では、次いで、ジクロロメタン、クロロホルム、トルエン、ベンゼン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリルなどの溶媒中で、式Ｓの化合物をトリフェニルホスフィンと反応させて、式Ｔのトリフェニルホスホニウム塩を得る。次いで、ＴＨＦ、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサンなどの溶媒中にて、ｎ−ブチルリチウム、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド、リチウムジイソプロピルアミドなどの塩基の存在下、式Ｔの塩を式Ｕのカルボニル化合物（ＸおよびＲ５は、式Ｉの化合物について規定したとおりである）と合わせて、式Ｖのアルケン化合物を得るが、この化合物は通常、ＥおよびＺ幾何異性体の混合物として単離される（ステップ３）。ウィッティヒオレフィン化反応として一般に知られているこの反応は、文献で広範囲にわたって総説されている（Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９８９、８９、８６３；Ｍｏｄｅｒｎ  Ｃａｒｂｏｎｙｌ  Ｏｌｅｆｉｎａｔｉｏｎ  ２００４、１〜１７；Ｌｉｅｂｉｇｓ  Ａｎｎ．Ｃｈｅｍ．１９９７、１２８３）。
【００５６】
ステップ４では、式Ｖの化合物から、遷移金属触媒存在下での水素化によって、式Ｗの化合物（Ｘ、Ｚ、Ｒ２ａおよびＲ５は、式Ｉの化合物について規定したとおりである）を生成する。一般的な触媒として、５〜２０％パラジウム炭素または５〜２０％水酸化パラジウム炭素の使用が挙げられる。こうした反応は、スキーム２のステップ３について記載したのと同様にして実施することができる。
【００５７】
別法として、式Ｗの化合物（Ｘ、ＺおよびＲ２ａは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）は、式Ｈのアルデヒドから、式ＡＡのトリフェニルホスホニウム塩とのウィッティヒ反応によって調製することもできる（ステップ５、スキーム３）。ステップ３でのように、この反応によって、式Ｖのアルケン化合物が生じるが、この化合物はここでも、通常はＥおよびＺ幾何異性体の混合物として単離され、水素化によって式Ｗの化合物（Ｘ、Ｚ、Ｒ２ａおよびＲ５は、式Ｉの化合物について規定したとおりである）に変換することができる。式ＡＡの塩は、対応するアルコールを臭化物に変換し、引き続いてトリフェニルホスフィンと反応させることにより、式Ｔの塩の調製に使用したのと同様にして得る。
【００５８】
以下に示す式ＢＢの化合物（Ｘ、Ｚ、Ｒ１およびＲ２ａは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）は、式Ｊの第二級アルコール（スキーム１を参照されたい）または式Ｍのケトン（スキーム１を参照されたい）から、スキーム３に示したのと同様の反応シーケンスで調製することができる。式Ｊの化合物を対応する臭化物に変換した後、一般式Ｘ−ＣＨＯのアルデヒド（Ｘは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）とのウィッティヒオレフィン化にかけると、式ＣＣのアルケンが得られる。式ＣＣのアルケンは、式Ｍのケトンと一般構造Ｘ−ＣＨ２−ＰＰｈ３＋Ｂｒ−の塩のウィッティヒ反応によって得ることもできる。次いで式ＣＣのアルケンを水素化によって式ＢＢの化合物（Ｘ、Ｚ、Ｒ１およびＲ２ａは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）に変換する。
【００５９】
【化１１】
2012528847.tif 000012
【００６０】
ある特定の例では、スキーム１、２および３に示したステップの順序を変えることが可能である。たとえば、スキーム１において、ピラゾール環上にシアノ基を最後のステップとして導入する、すなわち、ステップ４および５を実施する順序を逆にすることが時には可能である。また、特定の場合では、基Ｘ上の置換基Ｒ３（Ｒ３およびＸは、式Ｉの化合物について規定したとおりである）を、合成の後半に、さらには最後のステップとして、導入または修飾することが好ましい。たとえば、Ｒ３がＳＯ２Ｒ７であるとき、一般式Ｓ−Ｒ７の置換基を有する対応する化合物を酸化することにより、ＳＯ２Ｒ７基を最後のステップで生成することができる。
【００６１】
Ｒ２ａおよびＲ２ｂがフルオロである式Ｉの化合物は、３，３−ジフルオロ−４，４−ジヒドロキシ１−ピペリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチルエステル（ＷＯ２００８１２１６８７）を出発材料として、スキーム１、２および３に示したのと類似したシーケンスに従って調製することができる。この材料は、スキーム１における式Ａの中間体の調製について記載したのと同様にして、式ＤＤのヒドラジン誘導体に変換することができ、次いでこれを、スキーム１の式Ａの中間体と同様に、Ｒ２ａおよびＲ２ｂがフルオロである式Ｉの化合物の調製に使用する。
【００６２】
【化１２】
2012528847.tif 000013
【００６３】
当業者には容易にわかるように、中間体の遠位官能基（たとえば、第一級または第二級アミン）を保護する必要がある場合もある。そのような保護の必要性は、その遠位官能基の性質および調製方法の条件に応じて異なってくる。適切なアミノ保護基（ＮＨ−Ｐｇ）として、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。同様に、「ヒドロキシ保護基」とは、ヒドロキシ官能基を封鎖または保護する、ヒドロキシ基の置換基を指す。適切なヒドロキシル保護基（Ｏ−Ｐｇ）として、たとえば、アリル、アセチル、シリル、ベンジル、ｐａｒａ−メトキシベンジル、トリチルなどが挙げられる。このような保護の必要性は、当業者によって容易に決定される。保護基およびその使用に関する総説については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ニューヨーク、１９９１を参照されたい。
【００６４】
上述のとおり、本発明の化合物の一部は、酸性であり、薬学的に許容できるカチオンと塩を形成する。本発明の化合物の一部は、塩基性であり、薬学的に許容できるアニオンと塩を形成する。そのような塩はすべて、本発明の範囲内にあり、従来の方法によって、たとえば、適宜、水性、非水性、または部分的に水性の媒質中にて、酸性実体と塩基性実体とを、通常は化学量論比で合わせるなどして調製することができる。塩は、適宜、濾過、非溶媒で沈殿させてからの濾過、溶媒の蒸発、または水溶液の場合では凍結乾燥によって回収する。化合物は、エタノール、ヘキサン、水／エタノール混合物などの適切な（１種または複数の）溶媒に溶解させるなどの、当技術分野で知られている手順に従って、結晶の形で得る。
【００６５】
上述のとおり、化合物の一部は、異性体として存在する。そうした異性体混合物は、その物理化学的差異に基づき、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶などの当業者によく知られている方法によって、その個々の異性体に分離することができる。鏡像異性体は、鏡像異性体混合物を、光学活性のある適切な化合物（たとえば、キラルアルコールやＭｏｓｈｅｒの酸塩化物などのキラル助剤）と反応させてジアステレオ異性体混合物に変換し、ジアステレオ異性体を分離し、個々のジアステレオ異性体を対応する純粋な鏡像異性体に変換する（たとえば、加水分解する）ことにより、分離することができる。鏡像異性体は、キラルなＨＰＬＣカラムを使用して分離することもできる。別法として、光学活性のある出発材料の使用、光学活性のある試薬、基質、触媒、もしくは溶媒を使用する不斉合成、または不斉転位による一方の立体異性体の他方への変換によって、特定の立体異性体を合成することもできる。
【００６６】
本発明は、原子質量または質量数が自然界で通常見られる原子質量または質量数と異なっている原子で１個または複数の原子が置き換えられていること以外は本明細書で列挙したものと同一である、同位体標識された本発明の化合物も包含する。本発明の化合物に組み込むことのできる同位体の例として、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、３６Ｃｌなどの、それぞれ、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素、および塩素の同位体が挙げられる。
【００６７】
特定の同位体標識された本発明の化合物（たとえば、３Ｈおよび１４Ｃで標識された化合物）は、化合物および／または基質の組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム、１４Ｃ、３５Ｓ、および１２５Ｉが組み込まれている特定の同位体標識されたリガンドは、放射リガンド結合アッセイにおいて有用となり得るはずである。トリチウム化（すなわち３Ｈ）およびカーボン１４（すなわち１４Ｃ）同位体は、調製しやすく、検出性がよいので、特に好ましい。さらに、ジュウテリウム（すなわち２Ｈ）などのより重い同位体での置換は、代謝安定性がより高いために生じる特定の治療上の優位性（たとえば、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の延長または投与必要量の減少）をもたらす場合もあり、したがって、状況によっては好ましいこともある。１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ、１８Ｆなどの陽電子放射同位体は、受容体占有率を調べるための陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）研究に有用である。本発明の同位体標識された化合物は、一般に、同位体標識されていない試薬の代わりに同位体標識された試薬を用いて、スキームおよび／または後述の実施例で開示する手順と類似した手順に従って調製することができる。
【００６８】
特定の本発明の化合物は、２種以上の結晶形で存在する場合もある（一般に「多形体」と呼ばれる）。多形体は、種々の条件下での結晶化によって、たとえば、結晶化の際に、異なる再結晶用溶媒もしくは溶媒混合物、異なる温度での結晶化、および／または超急速冷却から超緩速冷却の範囲の種々の冷却モードを使用して、調製することができる。多形体は、本発明の化合物を加熱または溶融した後、徐々にまたは急速に冷却して得ることもできる。多形体の存在は、固体プローブＮＭＲ分光法、ＩＲ分光法、示差走査熱量測定、粉末Ｘ線回折、または他のそのような技術によって判定することができる。
【００６９】
医学的使用
本発明の化合物は、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節する。そのため、前記化合物は、糖尿病などの、ＧＰＲ１１９の活性が疾患の病理または症状の一因となる疾患の予防および治療に有用である。したがって、本発明の別の態様は、個体において代謝性疾患および／または代謝関連障害を治療する方法であって、そのような治療が必要である個体に、治療有効量の本発明の化合物、前記化合物の塩、またはそのような化合物を含有する医薬組成物を投与することを含む方法を包含する。代謝性疾患および代謝関連障害は、限定はしないが、高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早発性２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年性非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠糖尿病、冠動脈心疾患、虚血発作、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞（たとえば、壊死およびアポトーシス）、脂質異常症、食後高脂血症、耐糖能障害（ＩＧＴ）状態、空腹時血漿グルコース異常状態、代謝性アシドーシス、ケトーシス、関節炎、肥満、骨粗鬆症、高血圧、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性ニューロパシー、メタボリック症候群、シンドロームＸ、月経前症候群、冠動脈心疾患、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、一過性脳虚血発作、卒中、血管再狭窄、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝障害、耐糖能障害状態、空腹時血漿グルコース異常状態、肥満、勃起機能不全、皮膚および結合組織の障害、足の潰瘍化、内皮障害、高アポＢリポタンパク質血症（ｈｙｐｅｒ  ａｐｏ  Ｂ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｅｍｉａ）、ならびに血管コンプライアンスの障害から選択される。さらに、本発明の化合物は、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害などの神経障害の治療に使用することもできる。本発明の化合物は、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群などの胃腸疾患においても有益となる。上述のように、本発明の化合物は、肥満患者、特に糖尿病に罹患している肥満患者において体重減少を刺激するのにも使用することができる。
【００７０】
前述の内容によれば、本発明はさらに、その必要がある対象において、上述の疾患または障害のいずれかの症状を予防し、または寛解させる方法であって、治療有効量の本発明の化合物を対象に投与することを含む方法を提供する。本発明の別の態様は、糖尿病およびその関連合併症を治療する医薬の調製を包含する。
【００７１】
上述の治療特性を示すためには、化合物は、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性化を調節するのに十分な量で投与する必要がある。この量は、治療する特定の疾患／状態、患者の疾患／状態の重症度、患者、投与する特定の化合物、投与経路、および患者内の他の基礎病態の存在などに応じて様々となり得る。全身に投与するとき、化合物は通常、上で挙げた疾患または状態のいずれに対しても、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の投与量範囲でその効果を示す。毎日の連続投与が望ましい場合もあり、上で概略を述べた状態に応じて異なってくる。
【００７２】
本発明の化合物は、様々な経路によって投与することができる。本発明の化合物は、経口投与することができる。本発明の化合物は、非経口（すなわち、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、またはくも膜下腔内）、直腸、または局所投与することもできる。
【００７３】
共投与
本発明の化合物は、本明細書に記載の疾患、状態、および／または障害を治療するための他の薬剤と共に使用することもできる。したがって、本発明の化合物を他の薬剤と組み合わせて投与することを含む治療方法も提供する。本発明の化合物と組み合わせて使用することのできる適切な薬剤として、抗肥満薬（食欲抑制薬を含める）、抗糖尿病薬、抗高血糖薬（ａｎｔｉ−ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃ  ａｇｅｎｔ）、高脂血症治療薬、および降圧薬が挙げられる。
【００７４】
適切な抗糖尿病薬として、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ２（ＡＣＣ−２）阻害剤、ジアシルグリセロールＯ−アシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ−１）阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）１０阻害剤、スルホニル尿素（たとえば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ジアビネース（ｄｉａｂｉｎｅｓｅ）、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド（ｇｌｉｐｅｎｔｉｄｅ）、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、およびトルブタミド）、メグリチニド、α−アミラーゼ阻害剤（たとえば、テンダミスタット（ｔｅｎｄａｍｉｓｔａｔ）、トレスタチン、およびＡＬ−３６８８）、α−グルコシドヒドロラーゼ阻害剤（たとえば、アカルボース）、α−グルコシダーゼ阻害剤（たとえば、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラジミシンＱ、およびサルボスタチン（ｓａｌｂｏｓｔａｔｉｎ））、ＰＰＡＲγ作動薬（たとえば、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン（ｉｓａｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、およびトログリタゾン）、ＰＰＡＲα／γ作動薬（たとえば、ＣＬＸ−０９４０、ＧＷ−１５３６、ＧＷ−１９２９、ＧＷ−２４３３、ＫＲＰ−２９７、Ｌ−７９６４４９、ＬＲ−９０、ＭＫ−０７６７、およびＳＢ−２１９９９４）、ビグアナイド（たとえば、メトホルミン）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）作動薬（たとえば、エキセンディン３およびエキセンディン４）、タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＰＴＰ−１Ｂ）阻害剤（たとえば、トロダスケミン（ｔｒｏｄｕｓｑｕｅｍｉｎｅ）、ヒルチオサール抽出物（ｈｙｒｔｉｏｓａｌ  ｅｘｔｒａｃｔ）、およびＺｈａｎｇ，Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、１２（９／１０）、３７３〜３８１（２００７）で開示されている化合物）、ＳＩＲＴ−１阻害剤（たとえば、レセルバトロール（ｒｅｓｅｒｖａｔｒｏｌ））、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤（たとえば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、およびサクサグリプチン）、インスリン分泌刺激物質、脂肪酸酸化阻害剤、Ａ２拮抗薬、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）阻害剤、インスリン、インスリン模倣物、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、ＶＰＡＣ２受容体作動薬、およびＳＧＬＴ２阻害剤（ナトリウム依存性グルコース輸送体阻害剤、たとえば、ダパグリフロジンなど）が挙げられる。好ましい抗糖尿病薬は、メトホルミンおよびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（たとえば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、およびサクサグリプチン）である。
【００７５】
適切な抗肥満薬として、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１（１１β−ＨＳＤ１型）阻害剤、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ１（ＳＣＤ−１）阻害剤、ＭＣＲ−４作動薬、コレシストキニンＡ（ＣＣＫ−Ａ）作動薬、モノアミン再取込み阻害剤（シブトラミンなど）、交感神経様作動薬、β３アドレナリン作動薬、ドーパミン作動薬（ブロモクリプチンなど）、メラノサイト刺激ホルモン類似体、５ＨＴ２ｃ作動薬、メラニン濃縮ホルモン拮抗薬、レプチン（ＯＢタンパク質）、レプチン類似体、レプチン作動薬、ガラニン拮抗薬、リパーゼ阻害剤（テトラヒドロリプスタチン、すなわちオルリスタットなど）、食欲抑制薬（ボンベシン作動薬など）、ニューロペプチドＹ拮抗薬（たとえば、ＮＰＹ  Ｙ５拮抗薬、ＰＹＹ３−３６（その類似体を含める）、甲状腺模倣薬（ｔｈｙｒｏｍｉｍｅｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）、デヒドロエピアンドロステロンまたはその類似体、糖質コルチコイド作動薬または拮抗薬、オレキシン拮抗薬、グルカゴン様ペプチド１作動薬、毛様体神経栄養因子（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク州タリータウン、およびＰｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ、オハイオ州シンシナティーから入手可能なＡｘｏｋｉｎｅ（商標）など）、ヒトアグーチ関連タンパク質（ＡＧＲＰ）阻害剤、グレリン拮抗薬、ヒスタミン３拮抗薬または逆作動薬、ニューロメジンＵ作動薬、ＭＴＰ／ＡｐｏＢ阻害剤（たとえば、ジルロタピド（ｄｉｒｌｏｔａｐｉｄｅ）などの消化管選択的ＭＴＰ阻害剤）、オピオイド拮抗薬、オレキシン拮抗薬などが挙げられる。
【００７６】
本発明の組合せ態様で使用するのに好ましい抗肥満薬として、消化管選択的ＭＴＰ阻害剤（たとえば、ジルロタピド（ｄｉｒｌｏｔａｐｉｄｅ）、ミトラタピド（ｍｉｔｒａｔａｐｉｄｅ）およびイミプリタピド（ｉｍｐｌｉｔａｐｉｄｅ）、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）、およびＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６）、ＣＣＫａ作動薬（たとえば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／１１６０３４号または米国公開第２００５−０２６７１００Ａ１号に記載のＮ−ベンジル−２−［４−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−オキソ−１−フェニル−４，５−ジヒドロ−２，３，６，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−イソプロピル−アセトアミド）、５ＨＴ２ｃ作動薬（たとえば、ロルカセリン）、ＭＣＲ４作動薬（たとえば、ＵＳ６，８１８，６５８に記載の化合物）、リパーゼ阻害剤（たとえば、セチリスタット）、ＰＹＹ３−３６（本明細書では、「ＰＹＹ３−３６」は、ベグ化ＰＹＹ３−３６（たとえば、米国公開２００６／０１７８５０１に記載のもの）などの類似体を包含する）、オピオイド拮抗薬（たとえば、ナルトレキソン）、オレオイル−エストロン（ＣＡＳ番号１８０００３−１７−２）、オビネピチド（ｏｂｉｎｅｐｉｔｉｄｅ）（ＴＭ３０３３８）、プラムリンチド（Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））、テソフェンシン（ＮＳ２３３０）、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エクセナチド（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）、およびシブトラミンが挙げられる。本発明の化合物および併用療法は、運動および賢明な食生活と合わせて投与することが好ましい。
【００７７】
上で引用した米国特許および公開はすべて、参照により本明細書に援用する。
【００７８】
医薬製剤
本発明は、少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤と混和された治療有効量の化合物または薬学的に許容できるその塩を含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、経口、局所、または非経口の使用に適合させた形態の組成物を包含し、上述のような糖尿病および関連状態の治療に使用することができる。
【００７９】
医薬組成物は、皮下、吸入、経口、局所、非経口などの、当技術分野で知られている任意の経路による投与用に製剤することができる。医薬組成物は、限定はしないが、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、ロゼンジ、または経口もしくは滅菌非経口溶液もしくは懸濁液などの液体製剤を含めて、当技術分野で知られているどんな形態でもよい。
【００８０】
経口投与用の錠剤およびカプセル剤は、単位用量体裁にすることができ、従来の賦形剤、たとえば、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；ラクトース、糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール、グリシンなどの充填剤；ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカなどの打錠滑沢剤；バレイショデンプンなどの崩壊剤；またはラウリル硫酸ナトリウムなどの許容される湿潤剤を含有してよい。錠剤は、標準の薬務でよく知られている方法に従ってコーティングしてもよい。
【００８１】
経口液体製剤は、たとえば、水性もしくは油性の懸濁液、溶液、乳濁液、シロップ、もしくはエリキシルの形にすることもでき、または使用前に水もしくは適切な他のビヒクルで再形成する乾燥製品としての体裁にすることもできる。このような液体製剤は、従来の添加剤、たとえば、ソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、水素添加食用脂などの懸濁化剤；レシチン、モノオレイン酸ソルビタン、アカシアなどの乳化剤；扁桃油、グリセリンのような油性エステル、プロピレングリコール、エチルアルコールなどの非水性ビヒクル（食用油を含めてもよい）；ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、ソルビン酸などの保存剤、および所望なら、従来の着香剤または着色剤を含有してよい。
【００８２】
非経口投与では、化合物および無菌ビヒクル（水が好ましい）を利用して、流動性の単位剤形を調製する。化合物は、使用するビヒクルおよび濃度に応じて、ビヒクルまたは適切な他の溶媒に懸濁または溶解させることができる。溶液の調製では、化合物を、注射用の水に溶解させ、濾過滅菌した後、適切なバイアルまたはアンプルに充填し、密封することができる。有利にするため、局所麻酔剤、保存剤、緩衝剤などの薬品をビヒクルに溶解させることができる。安定性を高めるために、組成物をバイアルに充填した後凍結させ、真空中で水を除去することができる。次いで、凍結乾燥した乾燥粉末をバイアルに密閉し、使用前に液体を再形成するための付属のバイアルの注射用水を支給することができる。非経口懸濁液は、化合物をビヒクルに溶解させる代わりに懸濁させること、および滅菌が濾過によって実現できないことを除き、実質上同じようにして調製する。無菌ビヒクルに懸濁させる前にエチレンオキシドにさらすことにより、化合物を滅菌することができる。組成物に界面活性剤または湿潤剤を組み込んで、化合物の均一な分布を促進すると有利である。
【００８３】
組成物は、投与方法に応じて、たとえば約０．１重量％〜約９９重量％の活性材料を含有してよい。組成物が投与量単位を構成する場合、各単位は、たとえば、約０．１〜９００ｍｇ、より典型的な場合では１ｍｇ〜２５０ｍｇの活性成分を含有することになる。
【００８４】
本発明の化合物は、他の抗糖尿病薬による類推によって、ヒト医学または獣医学で使用するための好都合な任意の方法における投与用に製剤することができる。そのような方法は、当技術分野で知られており、上で概略を述べている。そうした製剤の調製に関するより詳細な論述については、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２１版に目を向けられたい。
【００８５】
以下の実施例によって、本発明の実施形態を例示する。しかし、本発明の実施形態は、実施例の詳細な項目を限定せず、このためそれらの他の変形形態が、当業者には知るところとなり、またはこの開示に照らして明白となることを理解されたい。
【実施例】
【００８６】
別段指定しない限り、出発材料は一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏ．（ウィスコンシン州ミルウォーキー）、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．（ニューハンプシャー州Ｗｉｎｄｈａｍ）、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（ニュージャージー州フェアローン）、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．（英国コーンウォール）、Ｔｙｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ニュージャージー州プリンストン）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（英国ロンドン）、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ  Ｂａｋｅｒ（ニュージャージー州フィリップスバーグ）、ＥＭＤ（ニュージャージー州Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ）などの市販品供給元から入手可能である。
【００８７】
一般実験手順
プロトン分析について、ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ（商標）４００（ＤＧ４００−５プローブ）または５００（ＤＧ５００−５プローブ）（共にＶａｒｉａｎ  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州パロアルトから入手可能）を用い、室温にてそれぞれ４００ＭＨｚまたは５００ＭＨｚで記録した。化学シフトは、内部標準としての残存溶媒を基準とした百万分率（δ）で表示する。ピーク形状は、次のとおりに表記する。すなわち、ｓ：一重線、ｄ：二重線、ｄｄ：二重二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線、ｍ：多重線、ｂｓ：ブロード一重線、２ｓ：２本の一重線。
【００８８】
大気圧化学イオン化質量スペクトル（ＡＰＣＩ）は、Ｗａｔｅｒｓ（商標）分光計（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＭＤ、キャリヤーガス：窒素）（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．、米国マサチューセッツ州ミルフォードから入手可能）を用い、０．３ｍＬ／分の流量で、５０：５０の水／アセトニトリル溶離液系を利用して取得した。エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル（ＥＳ）は、Ｗａｔｅｒｓ（商標）（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱまたはＺＭＤ機器（キャリヤーガス：窒素）（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．、米国マサチューセッツ州ミルフォード）の液体クロマトグラフィー質量分析計を用い、各溶媒に０．０１％のギ酸を加えた９５：５〜０：１００の勾配の水アセトニトリル溶液を利用して取得した。これらの機器には、３．７５分間１ｍＬ／分または１．９５分間２ｍＬ／分の流量で、Ｖａｒｉａｎ  Ｐｏｌａｒｉｓ  ５  Ｃ１８−Ａ２０×２．０ｍｍカラム（Ｖａｒｉａｎ  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州パロアルト）を用いた。
【００８９】
カラムクロマトグラフィーは、Ｆｌａｓｈ  ４０  Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）カラム（ＩＳＣ，Ｉｎｃ．、コネティカット州シェルトン）またはＢｉｏｔａｇｅ（商標）ＳＮＡＰカートリッジＫＰｓｉｌまたはＲｅｄｉｓｅｐ  Ｒｆシリカ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ  Ｉｎｃより）のいずれかを用い、シリカゲルを使用して窒素圧下で実施した。分取ＨＰＬＣは、フォトダイオードアレイ（Ｗａｔｅｒｓ  ２９９６）および質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ／Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ）検出スキームを備えたＷａｔｅｒｓ  ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘシステムを使用して実施した。分析ＨＰＬＣ作業は、フォトダイオードアレイ、単収束四極子質量検出および蒸発光散乱検出スキームを備えたＷａｔｅｒｓ  ２７９５  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣまたはＷａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣを用いて行った。
【００９０】
真空中での濃縮とは、ロータリーエバポレーターを使用して、減圧下で溶媒を蒸発させることを指す。
【００９１】
別段言及しない限り、化学反応は室温（摂氏約２３度）で実施した。また、別段言及しない限り、化学反応は窒素雰囲気中で進めた。
【００９２】
薬理学的データ
Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の本発明の化合物によるアゴニスト活性化によって調節される疾患を治療する本発明の実施は、後述する機能アッセイの１つまたは複数における活性によって証明することができる。供給元は括弧内に示す。
【００９３】
ｉｎ−ｖｉｔｒｏ機能アッセイ
β−ラクタマーゼ：
ＧＰＲ１１９アゴニストについてのアッセイでは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニスト活性化を、環状ＡＭＰ反応要素（ＣＲＥ）によってβ−ラクタマーゼ産生と合体させた、細胞を主体とした（ｈＧＰＲ１１９  ＨＥＫ２９３−ＣＲＥ  β−ラクタマーゼ）レポーター構築物を利用する。そしてＧＰＲ１１９活性は、ＦＲＥＴを可能にするβ−ラクタマーゼ基質であるＣＣＦ４−ＡＭ（Ｌｉｖｅ  Ｂｌａｚｅｒ  ＦＲＥＴ−Ｂ／Ｇ  Ｌｏａｄｉｎｇキット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ｋ１０２７）を利用して測定する。詳細には、ｈＧＰＲ１１９−ＨＥＫ−ＣＲＥ−β−ラクタマーゼ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２．５×１０７／ｍＬ）を液体窒素貯蔵庫から取り出し、プレーティング培地（ダルベッコ変法イーグル培地高グルコース（ＤＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１９９５−０６５）、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＨＩＦＢＳ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｆ４１３５）、１×ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、２００ｎＭのクラブラン酸カリウム（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ３４９４）に希釈した。細胞プレーティング培地を使用して細胞濃度を調節し、この細胞懸濁液（１２．５×１０４生細胞）５０μＬを、ポリ−ｄ−リシンでコートされた黒色透明底３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅカタログ番号７８１９４６）の各ウェルに加え、５％の二酸化炭素を含有する加湿した環境において３７℃でインキュベートした。４時間後、プレーティング培地を除去し、４０μＬのアッセイ培地（アッセイ培地は、クラブラン酸カリウムおよびＨＩＦＢＳを含有しないプレーティング培地である）と入れ替えた。次いで、試験対象の様々な濃度の各化合物を１０ｕＬの体積（最終ＤＭＳＯ≦０．５％）で加え、５％の二酸化炭素を含有する加湿した環境において細胞を３７℃で１６時間インキュベートした。プレートをインキュベーターから取り出し、約１５分間かけて室温に平衡化させた。１０ｕＬの６×ＣＣＦ４／ＡＭ作用色素溶液（Ｌｉｖｅ  Ｂｌａｚｅｒ  ＦＲＥＴ−Ｂ／Ｇ  Ｌｏａｄｉｎｇキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ｋ１０２７）に入っている説明書に従って調製）をウェル毎に加え、暗所にて室温で２時間インキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ蛍光定量プレートリーダー（励起４０５ｎｍ、発光４６０ｎｍ／５３５ｎｍ）で蛍光を測定した。４パラメータロジスティック用量反応方程式を使用した曲線適合プログラムで分析を行ったアゴニスト反応曲線から、ＥＣ５０を決定した。
【００９４】
ｃＡＭＰ：
細胞中のｃＡＭＰレベルを測定するＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）ｃＡＭＰ検出キット（ｃＡＭＰ  ｄｙｎａｍｉｃ  ２アッセイキット  Ｃｉｓ  Ｂｉｏカタログ番号６２ＡＭ４ＰＥＣ）を利用する細胞アッセイでも、ＧＰＲ１１９アゴニスト活性を求めた。この方法は、細胞によって産生される自然なｃＡＭＰと、色素ｄ２で標識したｃＡＭＰの競合イムノアッセイである。トレーサー結合を、クリプテートで標識したＭａｂ抗ｃＡＭＰによって可視化する。特異的シグナル（すなわち、エネルギー移動）は、標準またはサンプル中のｃＡＭＰの濃度に反比例する。
【００９５】
詳細には、ｈＧＰＲ１１９  ＨＥＫ−ＣＲＥβ−ラクタマーゼ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２．５×１０７／ｍＬ、上述のβ−ラクタマーゼアッセイで使用した同じ細胞系）を凍結保存から取り出し、増殖培地（ダルベッコ変法イーグル培地高グルコース（ＤＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１９９５−０６５）、１％チャコールデキストラン処理ウシ胎児血清（ＣＤ血清、ＨｙＣｌｏｎｅカタログ番号ＳＨ３００６８．０３）、１×ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、および２５ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０））中に希釈する。細胞濃度を１．５×１０５細胞／ｍＬに調整し、この懸濁液３０ｍＬをＴ−１７５フラスコに加え、５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃でインキュベートした。１６時間（一晩経過）後、細胞をＴ−１７５フラスコから（フラスコの側面を叩いて）取り出し、８００×ｇで遠心分離し、次いでアッセイ培地（１×ＨＢＳＳ＋ＣａＣｌ２＋ＭｇＣｌ２（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１４０２５−０９２）および２５ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０））に再懸濁した。アッセイ培地を用いて細胞濃度を６．２５×１０５細胞／ｍＬに調整し、この細胞懸濁液８μｌ（５０００細胞）を、Ｇｒｅｉｎｅｒ３８４ウェル白色小体積アッセイプレート（ＶＷＲカタログ番号８２０５１−４５８）の各ウェルに加えた。
【００９６】
試験対象の様々な濃度の各化合物を３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｉ５８７９）を含有するアッセイ緩衝液に希釈し、２μＬの体積でアッセイプレートウェルに加えた（最終ＩＢＭＸ濃度は４００μＭとし、最終ＤＭＳＯ濃度は０．５８％とした）。室温で３０分間のインキュベートに続いて、５μＬの標識したｄ２ｃＡＭＰおよび５μＬの抗ｃＡＭＰ抗体（両方とも細胞溶解緩衝液に１：２０希釈したもの、製造者のアッセイプロトコールに記載のとおり）をアッセイプレートの各ウェルに加えた。次いでプレートを室温でインキュベートし、６０分後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０４マルチラベルプレートリーダーで、励起波長３３０ｎｍ、発光波長６１５ｎｍおよび６６５ｎｍを使用し、ＨＴＲＦシグナルの変化を読み取った。生データを、ｃＡＭＰ検量線からの内挿によってｎＭ  ｃＡＭＰに変換し（製造者のアッセイプロトコールに記載のとおり）、４パラメータロジスティック用量反応式を使用して曲線適合プログラムで分析したアゴニスト反応曲線から、ＥＣ５０を決定した。
【００９７】
ＧＰＲ１１９の活性化によるｃＡＭＰ反応は、ここで使用した特定の細胞系以外の細胞でも発生し得ることが認められている。
【００９８】
β−アレスチン：
ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ  ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒβ−アレスチン細胞アッセイ技術およびそのＵ２ＯＳ  ｈＧＰＲ１１９β−アレスチン細胞系（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸカタログ番号９３−０３５６Ｃ３）を利用する細胞アッセイでも、ＧＰＲ１１９アゴニスト活性を求めた。このアッセイでは、アゴニストによって誘発される、β−アレスチンと活性化型ＧＰＲ１１９の相互作用を測定することにより、アゴニスト活性化を判定する。ＰｒｏＬｉｎｋと呼ばれる、小さい４２アミノ酸の酵素断片を、ＧＰＲ１１９のＣ末端に付加した。アレスチンを、ＥＡ（酵素アクセプター）と呼ばれるより大きい酵素断片に融合した。ＧＰＲ１１９が活性化すると、アレスチンの結合が刺激され、２つの酵素断片の相補性が引き出される結果、基質を加水分解し、化学発光シグナルを発生させることのできる機能性β−ガラクトシダーゼ酵素が生成する。
【００９９】
詳細には、Ｕ２ＯＳ  ｈＧＰＲ１１９β−アレスチン細胞（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ  １×１０７／ｍＬ）を凍結保存から取り出し、増殖培地（最小必須培地（ＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１０９５−０８０）、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＨＩＦＢＳ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｆ４１３５−１００）、１００ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｓ８６３６）、５００μｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｇ８１６８）、および２５０μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１０６８７−０１０）中に希釈する。細胞濃度を１．６６×１０５細胞／ｍＬに調整し、この懸濁液３０ｍＬをＴ−１７５フラスコに加え、５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃でインキュベートした。４８時間後、酵素不使用の細胞解離緩衝液（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１３１５１−０１４）を用いて細胞をＴ−１７５フラスコから取り出し、８００×ｇで遠心分離し、次いでプレーティング培地（Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ  Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ＢＲＬカタログ番号３１９８５−０７０）および２％チャコールデキストラン処理ウシ胎児血清（ＣＤ血清、ＨｙＣｌｏｎｅカタログ番号ＳＨ３００６８．０３））に再懸濁した。プレーティング培地を用いて細胞濃度を２．５×１０５細胞／ｍＬに調整し、この細胞懸濁液１０マイクロリットル（２５００細胞）を、Ｇｒｅｉｎｅｒ  ３８４ウェル白色小体積アッセイプレート（ＶＷＲカタログ番号８２０５１−４５８）の各ウェルに加え、プレートを５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃でインキュベートした。
【０１００】
１６時間（一晩経過）後、インキュベーターからアッセイプレートを取り出し、試験対象の様々な濃度の各化合物（アッセイ緩衝液（１×ＨＢＳＳ＋ＣａＣｌ２＋ＭｇＣｌ２（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１４０２５−０９２）、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、および０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ９５７６）中に希釈したもの）を２．５マイクロリットルの体積でアッセイプレートウェルに加えた（最終ＤＭＳＯ濃度を０．５％とした）。５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃で９０分インキュベートした後、７．５マイクロリットルのＧａｌａｃｔｏｎ  Ｓｔａｒβ−ガラクトシダーゼ基質（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘカタログ番号９３−０００１）、製造者のアッセイプロトコールに記載のとおりに調製）をアッセイプレートの各ウェルに加えた。プレートを室温でインキュベートし、６０分後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０４マルチラベルプレートリーダーを用い、ウェルあたり０．１秒で発光の変化を読み取った。４−パラメータロジスティック用量反応式を使用して曲線適合プログラムで分析したアゴニスト反応曲線から、ＥＣ５０を決定した。
【０１０１】
ＢａｃＭａｍを使用したＧＰＲ１１９の発現およびＧＰＲ１１９結合アッセイ
鋳型としてのｐＩＲＥＳ−ｐｕｒｏ−ｈＧＰＲ１１９および以下のプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（Ｐｆｕ  Ｔｕｒｂｏ  Ｍａｔｅｒ  Ｍｉｘ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、カリフォルニア州ラホーヤ）によって、野生型ヒトＧＰＲ１１９（図１）を増幅した。
ｈＧＰＲ１１９  ＢａｍＨ１、上流
５’−ＴＡＡＡＴＴＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＡＴＣＡＴＣＴＴＴＣＴＣＡＴＴＴＧＧＡＧ−３’
（５’末端にＢａｍＨＩ部位を挿入する）
ｈＧＰＲ１１９  ＥｃｏＲＩ、下流
５’−ＴＡＡＡＴＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＴＣＡＧＣＣＡＴＣＡＡＡＣＴＣＴＧＡＧＣ−３’
（３’末端にＥｃｏＲＩ部位を挿入する）
【０１０２】
製造者のプロトコールに従い、増幅産物を精製し（Ｑｉａｑｕｉｃｋ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）、ＢａｍＨ１およびＥｃｏＲＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ、マサチューセッツ州イプスウィッチ）で消化した。ｐＦＢ−ＶＳＶＧ−ＣＭＶ−ポリベクター（図２）をＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ、マサチューセッツ州イプスウィッチ）で消化した。消化したＤＮＡを１％アガロースゲルでの電気泳動によって分離し、断片をゲルから切り出し、精製した（Ｑｉａｑｕｉｃｋ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）。ベクターと遺伝子断片を連結し（Ｒａｐｉｄ  Ｌｉｇａｓｅ  Ｋｉｔ、Ｒｏｃｈｅ、カリフォルニア州プレザントン）、ＯｎｅＳｈｏｔ  ＤＨ５αＴ１Ｒ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）に形質転換した。８つのアンピシリン耐性コロニー（「クローン１〜８」）をミニプレップ（Ｑｉａｇｅｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）用に成長させ、配列決定して、同一性および正しい挿入の方向を確認した。
【０１０３】
製造者のプロトコールに従い、ｐＦＢ−ＶＳＶＧ−ＣＭＶ−ポリ−ｈＧＰＲ１１９構築物（クローン＃１）をＯｎｅＳｈｏｔ  ＤＨ１０Ｂａｃ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）に形質転換した。８つの陽性（すなわち白色）のコロニーを画線し直して、「陽性」であると確認し、引き続いてバクミド単離に向けて成長させた。組み換え型ｈＧＰＲ１１９バクミドは、Ｑｉａｇｅｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）の緩衝液を使用する変法アルカリ溶解手順によって単離した。簡潔に述べると、ペレット化した細胞を緩衝液Ｐ１に溶解させ、緩衝液Ｐ２中で中和し、緩衝液Ｎ３で沈殿させた。沈殿を遠心分離（１７，９００×ｇで１０分間）によってペレット化し、上清をイソプロパノールと合わせてＤＮＡを沈殿させた。ＤＮＡを遠心分離（１７，９００×ｇで３０分間）によってペレット化し、７０％エタノールで１回洗浄し、５０μＬの緩衝液ＥＢ（Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ８．５）に再懸濁した。市販のプライマー（Ｍ１３Ｆ、Ｍ１３Ｒ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）を用いたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、バクミド中にｈＧＰＲ１１９挿入断片が存在することを確認した。
【０１０４】
ｈＧＰＲ１１９組み換え型バキュロウイルスの生成
Ｐ０ウイルスストックの作製
Ｓｆ９００ＩＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で増殖させた、懸濁液に適合させたＳｆ９細胞に、製造者のプロトコール（Ｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）に従って１０μＬのｈＧＰＲ１１９バクミドＤＮＡをトランスフェクトした。５日間インキュベートした後、条件培地（すなわち「Ｐ０」ウイルスストック）を遠心分離し、０．２２μｍフィルター（Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、マサチューセッツ州ビルリカ）で濾過した。
【０１０５】
凍結ウイルス（ＢＩＩＣ）ストックの作製
長期間のウイルス貯蔵および作業（すなわち「Ｐ１」）ウイルスストック生成に備えて、凍結ＢＩＩＣ（バキュロウイルスを感染させた昆虫細胞）ストックを以下のとおりに作製した。懸濁液に適合させたＳｆ９細胞をＳｆ９００ＩＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で増殖させ、ｈＧＰＲ１１９  Ｐ０ウイルスストックで感染させた。２４時間増殖させた後、感染した細胞を穏やかに遠心分離し（約１００×ｇ）、凍結用培地（１０％のＤＭＳＯ、１％のアルブミンを含有するＳｆ９００ＩＩ培地）に再懸濁して、最終密度を１×１０７細胞／ｍＬとし、標準の凍結用プロトコールに従って、１ｍＬずつの一定分量にして凍結させた。
【０１０６】
作業（「Ｐ１」）ウイルスストックの作製
Ｓｆ９００ＩＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で増殖させた、懸濁液に適合させたＳｆ９細胞を、解凍したｈＧＰＲ１１９  ＢＩＩＣストックの１：１００希釈物で感染させ、数日間インキュベートした（振盪しながら２７℃）。細胞の生存度が７０％に到達したとき、条件培地を遠心分離によって回収し、ＥＬＩＳＡ（ＢａｃｕｌｏＥｌｉｓａ  Ｋｉｔ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カリフォルニア州マウンテンヴュー）によってウイルス力価を決定した。
【０１０７】
懸濁液に適合させたＨＥＫ  ２９３ＦＴ細胞におけるｈＧＰＲ１１９の過剰発現
振盪フラスコにおいて、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）を、５０μｇ／ｍＬのネオマイシンおよび１０ｍＭのＨＥＰＥＳを補充した２９３Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させた（３７Ｃ、８％二酸化炭素、振盪）。細胞を穏やかに遠心分離し（約５００×ｇ、１０分）、ペレットを、１８％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充したダルベッコＰＢＳ（Ｍｇ＋＋／−Ｃａ＋＋なし）とＰ１ウイルスの混合物に再懸濁して、感染多重度（ＭＯＩ）が１０になり、最終細胞密度が１．３×１０６／ｍＬ（合計体積２．５リットル）になるようにした。細胞を５リットルのＷａｖｅ  Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ  Ｗａｖｅｂａｇ（Ｗａｖｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、マサチューセッツ州）に移し、２７℃で４時間インキュベートし（１７振動（ｒｏｃｋ）／分、乗せ台角度７°）、インキュベート期間の終わりに、３０ｍＭの酪酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充した等体積（２．５リットル）の２９３Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ培地を加え（最終濃度＝１５ｍＭ）、細胞を２０時間増殖させた（３７℃、８％ＣＯ２［０．２リットル／分｝、２５振動（ｒｏｃｋ）／分、乗せ台角度７°）。細胞を遠心分離（３，０００×ｇ、１０分）によって収集し、ＤＰＢＳ（Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋なし）で１回洗浄し、０．２５Ｍのスクロース、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４に再懸濁し、−８０℃で凍結させた。
【０１０８】
放射リガンド結合アッセイに向けた膜調製
凍結した細胞を氷上で解凍し、４℃で１０分間７００×ｇ（１４００ｒｐｍ）で遠心分離した。細胞ペレットを２０ｍＬのリン酸緩衝溶液に再懸濁し、１４００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。次いで細胞ペレットをホモジナイズ緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ  ＃１５６３０）、ｐＨ７．５、１ｍＭのＥＤＴＡ（ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ、＃ＢＩＯ２６０−１５）、１ｍＭのＥＧＴＡ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｅ−４３７８）、０．０１ｍｇ／ｍＬのベンズアミジン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｂ６５０６）、０．０１ｍｇ／ｍＬのバシトラシン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｂ０１２５）、０．００５ｍｇ／ｍＬのロイペプチン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｌ８５１１）、０．００５ｍｇ／ｍＬのアプロチニン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ａ１１５３））に再懸濁し、氷上で１０分間インキュベートした。次いで細胞を、タイトフィット型ガラス製Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーで１５回の穏やかなストロークで溶解させた。ホモジネートを４℃で１０分間１０００×ｇ（２２００ｒｐｍ）で遠心分離した。上清を氷上の新たな遠心管に移した。細胞ペレットをホモジナイズ緩衝液に再懸濁し、４℃で１０分間１０００×ｇ（２２００ｒｐｍ）で再び遠心分離し、その後上清を取り出し、ペレットをホモジナイズ緩衝液に再懸濁した。この過程を３回目も繰り返し、その後上清を合わせ、Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（Ｎｏｖａｇｅｎ  ＃７１２０６）およびＭｇＣｌ２（Ｆｌｕｋａ  ＃６３０２０）を加えて最終濃度をそれぞれ１Ｕ／ｍＬおよび６ｍＭとし、氷上で１時間インキュベートした。次いで溶液を４℃で２０分間２５，０００×ｇ（１５０００ｒｐｍ）で遠心分離し、上清を廃棄し、ペレットを新鮮なホモジナイズ緩衝液（ＢｅｎｚｏｎａｓｅおよびＭｇＣｌ２なし）に再懸濁した。２５，０００×ｇでの遠心分離ステップを繰り返した後、最終膜ペレットをホモジナイズ緩衝液に再懸濁し、−８０℃で凍結させた。Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ試薬Ａ  ＃２３２２３およびＢ  ＃２３２２４）を使用して、タンパク質濃度を決定した。
【０１０９】
［３Ｈ］−化合物Ａの合成および精製
【０１１０】
【化１３】
2012528847.tif 000014
化合物Ａ（４−（１−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３ａ，７ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル、上で示したとおり）（４ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）を０．５ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、得られる溶液を（１，５−シクロオクタジエン）（ピリジン）（トリシクロヘキシルホスフィン）−イリジウム（Ｉ）ヘキサフルオロホスフェート（Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌ．Ｃｈｅｍ．１９７９、１６８、１８３）（５ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）で処理した。反応容器を密封し、溶液をトリチウムガス雰囲気中で１７時間撹拌した。減圧下で反応溶媒を除去し、得られる残渣をエタノールに溶解させた。未精製の［３Ｈ］−化合物Ａの精製を、以下の条件を使用する分取ＨＰＬＣによって実施した。
カラム：Ａｔｌａｎｔｉｓ、４．６×１５０ｍｍ、５μｍ
移動相Ａ：水／アセトニトリル／ギ酸（９８／２／０．１）
移動相Ｂ：アセトニトリル
勾配：  時間            ％Ｂ
０．００        ３０．０
１．００        ３０．０
１３．００      ８０．０
分析時間：１６分
ポストタイム：５分
流量：１．５ｍＬ／分
注入体積：２０〜５０μＬ
注入溶媒：ＤＭＳＯ
検出：２１０ｎｍおよび２４５ｎｍでのＵＶ
【０１１１】
精製した［３Ｈ］−化合物Ａの比活性は、質量分析によって、７０Ｃｉ／ｍｍｏｌと決定した。
【０１１２】
別法として、結合アッセイは、［３Ｈ］−化合物Ｂで実施してもよい。
【０１１３】
［３Ｈ］−化合物Ｂの合成および精製
【０１１４】
【化１４】
2012528847.tif 000015
化合物Ｂ（４−（１−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル、上で示したとおり）（５ｍｇ、１０．６μｍｏｌ）を１．０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、得られる溶液をＣｒａｂｔｒｅｅ触媒（５ｍｇ、６．２μｍｏｌ）で処理した。反応容器を密封し、溶液をトリチウムガス雰囲気中で１７時間撹拌した。減圧下で反応溶媒を除去し、得られる残渣をエタノールに溶解させた。未精製の［３Ｈ］−化合物Ｂの精製を、７０％のヘキサン／３０％の酢酸エチルを溶離液とするシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーに続いて、６０％の石油エーテル／４０％の酢酸エチルを溶離液とするシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって実施した。
【０１１５】
精製した［３Ｈ］−化合物Ｂの比活性は、質量分析によって、５７．８Ｃｉ／ｍｍｏｌと決定した。
【０１１６】
ＧＰＲ１１９放射リガンド結合アッセイ
試験化合物を１００％ＤＭＳＯ（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ  ＃９２２４０１）に段階希釈した。各希釈液２μＬを９６ウェルプレートの適切なウェルに加えた（各濃度３通りにして）。未標識化合物Ａ（または化合物Ｂ）を最終濃度１０μＭで使用して、非特異的結合を測定した。
【０１１７】
［３Ｈ］−化合物Ａ（または［３Ｈ］−化合物Ｂ）を結合緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｔ７４４３）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２（Ｆｌｕｋａ  ６３０２０）、１ｍＭのＥＤＴＡ（ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ  ＃ＢＩＯ２６０−１５）、０．１５％のウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ａ７５１１）、０．０１ｍｇ／ｍＬのベンズアミジン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｂ６５０６）、０．０１ｍｇ／ｍＬのバシトラシン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｂ０１２５）、０．００５ｍｇ／ｍＬのロイペプチン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｌ８５１１）、０．００５ｍｇ／ｍＬのアプロチニン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ａ１１５３））中に希釈して濃度を６０ｎＭとし、９６ウェルプレート（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  ＃２６７２４５）のすべてのウェルに１００μＬを加えた。
【０１１８】
ＧＰＲ１１９を発現する膜を解凍し、結合緩衝液に希釈して最終濃度を２０μｇ／各ウェル１００μＬとし、希釈した膜１００μＬを９６ウェルプレートの各ウェルに加えた。
【０１１９】
プレートを振盪しながら室温（約２５℃）で６０分間インキュベートした。Ｐａｃｋａｒｄハーベスターを使用した、０．３％ポリエチレンアミンに予浸したＧＦ／Ｃフィルタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ  ＃６００５１７４）での真空濾過によって、アッセイを終結させた。次いで、洗浄緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、４℃に保ったもの）を使用してフィルターを６回洗浄した。次いでフィルタープレートを室温で終夜風乾した。３０μｌのシンチレーション液（Ｒｅａｄｙ  Ｓａｆｅ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＃１４１３４９）を各ウェルに加え、プレートを密封し、Ｗａｌｌａｃ  Ｔｒｉｌｕｘ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａプレートベースのシンチレーションカウンターを使用して、各フィルターに付随する放射能を測定した。
【０１２０】
［３Ｈ］−化合物Ａ（または［３Ｈ］−化合物Ｂ）のＫｄは、一部位双曲線（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ）に適合させる非線形回帰によるデータ解析を用いた飽和結合実験を実施して求めた。ＩＣ５０は、専有の曲線適合プログラム（ＳＩＧＨＴＳ）および４パラメータロジスティック用量反応式を用いて分析した競合曲線から求めた。Ｋｉ値は、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を使用してＩＣ５０値から算出した。
【０１２１】
β−ラクタマーゼおよびβ−アレスチンの機能アッセイについて、以下の結果が得られた。
【０１２２】
【表１−１】
2012528847.tif 000016
【０１２３】
【表１−２】
2012528847.tif 000017
【０１２４】
ｃＡＭＰおよび結合アッセイについて、以下の結果が得られた。
【０１２５】
【表２−１】
2012528847.tif 000018
【０１２６】
【表２−２】
2012528847.tif 000019
【０１２７】
【表２−３】
2012528847.tif 000020
【０１２８】
出発材料の調製
調製例１：４−ヒドラジノピペリジン−１−カルボキン酸イソプロピル二塩酸塩
【０１２９】
【化１５】
2012528847.tif 000021
４−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ヒドラジニル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（ＷＯ２００８１３７４３６に記載のとおりに得た）（２０．２ｇ、６７．０２ｍｍｏｌ）を無水エタノール（２５０ｍＬ）に溶解させ、溶液を窒素中にて室温で撹拌した。濃塩酸水溶液（２７．９ｍＬ、３３５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。溶液を窒素中にて室温で４時間撹拌した。反応液を濃縮して、多少の出発材料を含有する白色の固体とした。固体を４Ｍの塩化水素１，４−ジオキサン溶液（１００ｍＬ、４００ｍｍｏｌ）で処理し、得られる混合物を室温で１４時間撹拌した。次いで反応液を減圧下で濃縮して白色の固体を得、これをヘプタン（１００ｍＬ）で処理し、再び濃縮して、表題化合物を白色の固体（１５ｇ、８１％）として得た。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 4.9 (m, 1 H), 4.1 (m, 2
H), 3.2 (m, 1H), 2.9 (m, 2 H), 2.0 (m, 2H), 1.4 (m, 2H), 1.2, (d, 6 H); LCMS
(ES+): 202 (M+1).
【０１３０】
調製例２：４−［５−アミノ−４−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１３１】
【化１６】
2012528847.tif 000022
４−ヒドラジノピペリジン−１−カルボキン酸イソプロピル二塩酸塩（７．０８ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）、２−シアノ−３−エトキシアクリル酸エチル（４．８１ｇ、２８．４ｍｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（６．４９ｇ、７７．５ｍｍｏｌ）、およびエタノール（８０ｍＬ）からなる混合物を、８５℃で３時間撹拌した。混合物を最初の体積の約３分の１に濃縮した。水（５０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（５０ｍＬ）、およびブライン（５０ｍＬ）を加えた。得られる混合物を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して、未精製の表題化合物を淡黄色の固体（９．８ｇ）として得、これを精製せずに次のステップで使用した。分析サンプルは、３０％〜６０％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーで精製することにより調製した。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.26 (d, 6 H) 1.35 (t, 3 H) 1.86 - 1.95
(m, 2 H) 2.04 - 2.17 (m, 2 H) 2.84 - 2.96 (m, 2 H) 3.89 - 3.98 (m, 1 H) 4.28
(q, 2 H) 4.25 - 4.40 (m, 2 H) 4.89 - 4.97 (m, 1 H) 5.06 (s, 2 H) 7.64 (s, 1
H);  LCMS (ES+): 325.1 (M+1).
【０１３２】
調製例３：４−［５−ブロモ−４−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１３３】
【化１７】
2012528847.tif 000023
４−［５−アミノ−４−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例２）（８．５ｇ、２６．２ｍｍｏｌ）および臭化銅（ＩＩ）（３．７ｇ、１６ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に混ぜた撹拌した混合物に、未希釈の亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（４．８ｍＬ、３９．３ｍｍｏｌ）を室温でゆっくりと加えた。かなりの発熱効果が認められ、混合物は約５０℃に温まっていた。６５℃で３０分間発熱を続けさせた後、反応液を室温に冷却し、次いで真空中で濃縮した。過剰の１０％アンモニア水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を水およびブラインで洗浄し、真空中で濃縮した。残渣を、３０％〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を黄色の油状物として得たが、この油状物は、ＮＭＲおよびＬＣＭＳによる純度が約７０％であった。この材料をそれ以上精製せずに次のステップで使用した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.23 (d, 6 H) 1.34 (t, 3 H) 1.84 - 1.95
(m, 2 H) 2.01 - 2.15 (m, 2 H) 2.82 - 2.98 (m, 2 H) 4.25 - 4.36 (m, 2 H) 4.30
(q, 2 H) 4.45 - 4.56 (m, 1 H) 4.86 - 4.96 (m, 1 H) 7.95 (s, 1 H);  LCMS
(ES+): 387.9 (M+1).
【０１３４】
調製例４：４−［５−ブロモ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１３５】
【化１８】
2012528847.tif 000024
４−［５−ブロモ−４−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（３．５９ｇ、６．５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３２ｍＬ）に溶かした０℃に冷却した溶液に、２Ｍのボラン−メチルスルフィド錯体テトラヒドロフラン溶液（１４．６ｍＬ、２９．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２１時間還流加熱し、次いで室温で４時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、メタノールを加えた。得られる溶液を室温に温め、１０分間撹拌した。溶液を０℃に冷却し直し、２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を滴下添加した。得られる混合物を酢酸エチルで希釈し、３０分間激しく撹拌した。層を分離し、水相を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせて水およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、真空中で濾液を濃縮した。５５％〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルでのクロマトグラフィーにかけると、表題化合物が油状物（１．８９ｇ、８４％）として得られた。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.23 (d, 6 H), 1.87 - 1.95 (br m, 3 H),
2.06 (qd, 2 H), 2.89 (br t, 2 H), 4.29 (br s, 2 H), 4.39 (tt, 1 H), 4.50 (d, 2
H), 4.90 (m, 1 H), 7.58 (s, 1 H); LCMS (ES+) 348.0 (M+1).
【０１３６】
調製例５：４−［５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１３７】
【化１９】
2012528847.tif 000025
４−［５−ブロモ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（１．４２ｇ、４．１０ｍｍｏｌ）、トリス−（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（１５６ｍｇ、０．１７０ｍｍｏｌ）、１−１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（１９２ｍｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）、亜鉛ダスト（６８．８ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（４９７ｍｇ、４．２３ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（２０ｍＬ）を、マイクロ波対応バイアル中で合わせた。バイアルを窒素でフラッシュし、密封し、マイクロ波反応器（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ  ２．２）に入れて１２０℃で１時間加熱した。反応混合物をＦｌｏｒｉｓｉｌ（商標）パッドに通し、酢酸エチルで希釈し、次いで水を加えた。水相を酢酸エチルで３回抽出し、有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を真空中で蒸発させた。５５％〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルでのクロマトグラフィーにかけると、表題化合物が緑色の油状物として得られたが、油状物は静置すると凝固した（１．０６ｇ、８８％）。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.24 (d, 6 H), 1.99 (br d, 2 H), 2.06 -
2.17 (m, 3 H), 2.93 (br t, 2 H), 4.31 (br s, 2 H), 4.48 (tt, 1 H), 4.71 (d, 2
H), 4.92 (m, 1 H), 7.60 (s, 1 H); LCMS (ES+): 293.1 (M+H).
【０１３８】
調製例６：２−フルオロ−４−［（２−ヒドロキシエチル）チオ］フェノール
【０１３９】
【化２０】
2012528847.tif 000026
４−ブロモ−２−フルオロフェノール（０．７５ｍＬ、６．８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３．５ｍＬ、２０．０９ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（３５ｍＬ）に溶かした溶液に、９，９−ジメチル−４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）キサンテン（４１５ｍｇ、０．７１７ｍｍｏｌ）、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（３２２ｍｇ、０．３５１ｍｍｏｌ）、および２−メルカプトエタノール（０．４６ｍＬ、６．８６ｍｍｏｌ）を加え、濃褐色の反応溶液を１１０℃で１６時間加熱した。反応液を室温に冷まし、水で希釈し、酢酸エチルで４回抽出した。有機抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、栗色の油状物を得、これをケイ素ゲルでのクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（９８５ｍｇ、７６％）を栗色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 3.00 (t, 2H, J=5.95 Hz) 3.69 (d, 2 H,
J=3.71 Hz) 6.89-6.95 (m, 1 H) 7.11 (ddd, 1 H, J=8.39, 2.15, 1.17 Hz) 7.17 (dd,
1 H, J=10.54, 2.15 Hz).
【０１４０】
調製例７：４−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２−フルオロフェノール
【０１４１】
【化２１】
2012528847.tif 000027
２−フルオロ−４−［（２−ヒドロキシエチル）チオ］フェノール（９８５ｍｇ、５．２４ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（３７１ｍｇ、５．３０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶かした溶液に、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（８１４ｍｇ、５．２４ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、反応液を室温で４時間撹拌した。反応液を減圧下で濃縮し、残渣を水で希釈した後、酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、表題化合物を橙色の油状物（１．４３ｇ、９０％）として得、これをそれ以上精製せずに使用した。LCMS (ES+): 301.1 (M-1).
【０１４２】
調製例８：１−［４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル］−１Ｈ−テトラゾール
【０１４３】
【化２２】
2012528847.tif 000028
窒素雰囲気中にある４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロアニリン（１．０４ｇ、４．８ｍｍｏｌ）（ＷＯ２００５０３０１４０）の懸濁液に、酢酸（２．３ｍＬ、３８．３ｍｍｏｌ）、オルトギ酸トリエチル（２．４４ｍＬ、１４．４ｍｍｏｌ）、およびアジ化ナトリウム（０．３４ｇ、５．３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を９５℃で２．５時間加熱した。次いで溶液を室温に冷まし、水を加えた後、酢酸エチルで３回抽出した。抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、未精製材料をケイ素ゲルでのクロマトグラフィー（２０〜４０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、表題化合物を白色の固体（１．１２ｇ、８６％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化メタノール) δ 9.65 (s, 1H), 7.73 - 7.68 (dd, 1H, J=11,
2.5 Hz), 7.60 - 7.57 (m, 1H)  7.47 - 7.45 (m, 2H), 7.40 - 7.30 (m, 5H),
5.24 (s, 2H); LCMS (ES+): 271.1 (M+1).
【０１４４】
調製例９：２−フルオロ−４−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）フェノール
【０１４５】
【化２３】
2012528847.tif 000029
Ｐａｒｒシェーカーフラスコ中の１−［４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル］−１Ｈ−テトラゾール（１．１２ｇ、４．１４ｍｍｏｌ）にエタノール（４０ｍＬ）を加え、溶液を窒素ガスでパージした。１０％パラジウム炭素（０．３０ｇ）を加え、反応液をＰａｒｒシェーカー装置において４０ｐｓｉの水素で３０分間水素化した。次いで混合物を微小孔フィルターで濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、表題化合物を白色の固体（０．６７ｇ、９０％）として得、これを精製せずに使用した。1H NMR (400 MHz, 重水素化メタノール) δ 9.62 (s, 1H), 7.65 - 7.62 (dd, 1H, J=11,
2.5 Hz), 7.50 - 7.46 (m, 1H)  7.47 - 7.45 (dd, 1H, J=9.0, 9.0 Hz); LCMS (ES+):
181.1 (M+1).
【０１４６】
調製例１０：４−（５−シアノ−４−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１４７】
【化２４】
2012528847.tif 000030
４−（５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例５）（７５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を１ｍＬの無水ジクロロメタンに溶解させ、トリエチルアミン（０．１ｍＬ、０．７４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を氷浴で冷却し、次いでメタンスルホン酸無水物（６２ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を氷浴から取り出し、３０分間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を失活させ、層を分離した。水層をジクロロメタンでもう３回抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮して油状物（７５ｍｇ、収率１００％）を得た。未精製材料をそれ以上精製せずに後続のステップで使用した。
【０１４８】
調製例１１：４−ヒドラジノピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル塩酸塩
【０１４９】
【化２５】
2012528847.tif 000031
オートクレーブに入れた４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５０ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）のメタノール（５００ｍＬ）溶液に、ヒドラジン一塩酸塩（１７．２ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を含有する水（１００ｍＬ）を加えた。白色の混合物をアルゴン中で撹拌した後、５％白金炭素（７５０ｍｇ）を水とのスラリーとして加えた。オートクレーブを密閉し、水素を充填して６０気圧とし、反応液を１５時間撹拌した。完了後、反応液をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過し、パッドをメタノールで洗浄した。この段取りを６回行った。濾液を合わせて減圧下で濃縮し、得られる白色の沈殿副生物（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４，４’−ヒドラジン−１，２−ジイルジピペリジン−１−カルボキシレート）を濾過によって収集し、水で数回洗浄した。次いで水性の濾液を減圧下で濃縮して、所望の生成物（２２１ｇ、５９％）を無色の固体として得た。1H NMR (400MHz, 重水素化クロロホルム) δ 4.13 (br s, 2H), 3.32 (br t, 1H), 2.77
(br t, 2H), 2.16 (m, 2H), 1.66 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
【０１５０】
調製例１２：４−［５−アミノ−４−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１５１】
【化２６】
2012528847.tif 000032
４−ヒドラジノピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル塩酸塩（２２１ｇ、８８０ｍｍｏｌ）、２−シアノ−３−エトキシアクリル酸エチル（１５３ｇ、８８０ｍｍｏｌ）、酢酸ナトリウム三水和物（４７７ｇ、３５２ｍｍｏｌ）、およびエタノール（２０００ｍＬ）からなる混合物を８５℃で８時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチルと水に溶解させた。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。次いで有機抽出物を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。未精製材料を、４０％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルのショートプラグで濾過することにより精製して、生成物を淡黄色の固体（２１４ｇ、７２％）として生成した。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 7.60 (s, 1H), 5.27 (br s, 2H), 4.23 (br
q, 4H), 3.91 (m, 1H), 2.81 (br s, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.44 (s,
9H), 1.29 (t, 3H).
【０１５２】
調製例１３：４−［５−ブロモ−４−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１５３】
【化２７】
2012528847.tif 000033
臭化銅（ＩＩ）（１．６９ｇ、７７０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０００ｍＬ）溶液に、亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（１１２ｍＬ、９６０ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、溶液を６５℃に加熱した。これに、４−［５−アミノ−４−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２１５ｇ、６４０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（６５０ｍＬ）溶液を３０分かけて滴下添加した。４時間後、反応液を室温に冷まし、次いで、氷の中の２Ｍ塩酸（１５００ｍＬ）中に注いだ。混合物を酢酸エチルで３回抽出し、有機抽出物を合わせて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を、最初は１０％のヘプタンジクロロメタン溶液、続いてジクロロメタンを溶離液とするシリカゲルのショートプラグで濾過することにより精製して、表題化合物（１３７ｇ、５３％）を黄色の油状物として得たが、油状物は静置すると凝固した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 7.95 (s, 1H), 4.48 (m, 1H), 4.28 (br q,
4H), 2.86 (br s, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.90 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.34 (t, 3H).
【０１５４】
調製例１４：４−［５−ブロモ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１５５】
【化２８】
2012528847.tif 000034
４−［５−ブロモ−４−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１３７ｇ、０．３４ｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１３００ｍＬ）に溶かした０℃に冷却した溶液に、ボラン−メチルスルフィド（９７ｍＬ、１．０２ｍｏｌ）をゆっくりと加えた。溶液を室温に温め、次いで１５時間還流加熱した。次いで反応液を氷浴で冷却し、メタノール（４０ｍＬ）を滴下添加した。次いで溶液を室温で２０分間撹拌した。２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１２００ｍＬ）を加え、層を分離した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。得られた残渣を、３０％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルのショートプラグで濾過することにより精製すると、表題化合物が無色の固体（６１．４ｇ、５０％）として現れた。この精製からの不純な材料を上記クロマトグラフィー手順によってさらに精製して、２回目の分の表題化合物（２２ｇ、１８％）を無色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ  7.59 (s, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.37
(m, 1H), 4.25 (br s, 2H), 2.86 (br s, 2H), 2.06 (m br s, 2H), 1.89 (m, 2H),
1.45 (s, 9H).
【０１５６】
調製例１５：４−［５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１５７】
【化２９】
2012528847.tif 000035
４−［５−ブロモ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）を脱気済ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、シアン化銅（Ｉ）（２．９７ｇ、３３．３ｍｍｏｌ）を加えた。次いで反応液を１６５℃で４時間加熱し、室温に冷ました。それを氷浴でさらに冷却し、エチレンジアミン（５．５ｍＬ）の水（２０ｍＬ）溶液を加えた後、さらに水（７０ｍＬ）で希釈した。次いで混合物を酢酸エチルで抽出し、層を分離した。有機層を水およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。この手順を８回分で実施した。最終未精製残渣を合わせ、４０％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返して精製して、表題化合物（１１．６ｇ、１７％）を無色の固体として得た。1H NMR (400MHz, 重水素化クロロホルム) 7.59 (s, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.45 (m, 1H), 4.26 (br s, 2H), 2.88
(br t, 2H), 2.08 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.48 (s, 9H); LCMS (ES+): 207.1 (M-Boc+H).
【０１５８】
調製例１６：４−（５−シアノ−４−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１５９】
【化３０】
2012528847.tif 000036
４−（５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２０２ｍｇ、０．６５９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６．６ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、トリエチルアミン（０．１８ｍＬ、１．３２ｍｍｏｌ）に続いてメタンスルホン酸無水物（１８９ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を４．５時間撹拌した後、それをジクロロメタンおよび飽和炭酸水素塩水溶液で希釈した。層を分離し、水層をジクロロメタンで抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して、４−（５−シアノ−４−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを油状物として得、これをそれ以上精製せずに使用した。
【０１６０】
調製例１７：２−フルオロ−４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノールおよび２−フルオロ−４−（２−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール
【０１６１】
【化３１】
2012528847.tif 000037
Ａ）４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロベンゾニトリル
３−フルオロ−４−ヒドロキシベンゾニトリル（１．００ｇ、７．３０ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのアセトニトリルに溶かした撹拌した溶液に、炭酸カリウム（２．０２ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）を滴下添加した。得られる混合物を１０分間撹拌した後、臭化ベンジル（１．３３ｍＬ、１０．９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で７０時間撹拌した後、酢酸エチルと水で希釈した。有機相を分離し、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、５〜２０％の勾配の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロベンゾニトリルを白色の固体（１．３３ｇ）として得た。
【０１６２】
Ｂ）５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールおよび５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２Ｈ−テトラゾール
４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロベンゾニトリル（２５０ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（２１４ｍｇ、３．３０ｍｍｏｌ）、塩化アンモニウム（１７６ｍｇ、３．３０ｍｍｏｌ）、および３ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを投入したバイアルを１１０℃で１８時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水と酢酸エチルで希釈し、１Ｎ塩酸水溶液を使用してｐＨを３に調整した。有機相を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して、表題化合物を白色の固体（２７０ｍｇ）として得た。この材料を精製せずに後続のステップで使用した。
【０１６３】
Ｃ）５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−テトラゾールおよび５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−２Ｈ−テトラゾール
５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールおよび５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２Ｈ−テトラゾール（２７０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフランに溶解させた溶液に、水素化ナトリウム（４４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を４回で加え、得られる混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで（２−（クロロメトキシ）エチル）トリメチルシラン（０．１９ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。水を加えて反応を失活させ、酢酸エチルを加えた。有機相を分離し、水相を酢酸エチルで２回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。酢酸エチルとヘプタン（５〜２０％の酢酸エチル）の勾配で溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製すると、所望の生成物が白色の固体（２７０ｍｇ、収率６７％）として得られた。
【０１６４】
Ｄ）２−フルオロ−４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノールおよび２−フルオロ−４−（２−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール
５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−テトラゾールおよび５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−２Ｈ−テトラゾール（１４０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を２ｍＬのエタノールと２ｍＬのテトラヒドロフランの混合物に溶解させた溶液に、パラジウムブラック（５６ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）およびギ酸（０．１４ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）を加えた。得られる混合物を室温で４時間撹拌した後、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドで濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる未精製材料をそれ以上精製せずに後続のステップで使用した。
【０１６５】
調製例１８：５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−１Ｈ−テトラゾールおよび５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−２Ｈ−テトラゾール
【０１６６】
【化３２】
2012528847.tif 000038
５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールおよび５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２Ｈ−テトラゾール（調製例１７、ステップＢ）（５５０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）に溶解させた溶液に、水素化ナトリウム（１６３ｍｇ、４ｍｍｏｌ）を２回で加え、得られる混合物を室温で５分間撹拌した。次いで（２−ブロモエトキシ）トリメチルシラン（１．３ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を７０℃で１６時間撹拌した後、室温に冷却した。水を加えて反応を失活させ、酢酸エチルを加えた。有機相を分離し、水相を酢酸エチルで２回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、酢酸エチルとヘプタン（５〜３０％の酢酸エチル）の勾配で溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−１Ｈ−テトラゾール（１００ｍｇ、収率１２％）および５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−２Ｈ−テトラゾール（６００ｍｇ、収率６９％）を得た。
【０１６７】
調製例１９：２−フルオロ−４−（２−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール
【０１６８】
【化３３】
2012528847.tif 000039
５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−２Ｈ−テトラゾール（調製例１８）（２３０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を６ｍＬのエタノールと６ｍＬのテトラヒドロフランの混合物に溶解させた溶液に、パラジウムブラック（８６ｍｇ、０．８０６ｍｍｏｌ）およびギ酸（０．２１５ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）を加えた。得られる混合物を室温で４時間撹拌した後、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドで濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる未精製材料（１８０ｍｇ）をそれ以上精製せずに後続のステップで使用した。
【０１６９】
調製例２０：２−フルオロ−４−（１−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール
【０１７０】
【化３４】
2012528847.tif 000040
５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−１Ｈ−テトラゾール（調製例１８）（１３０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を２ｍＬのエタノールと２ｍＬのテトラヒドロフランの混合物に溶解させた溶液に、パラジウムブラック（４８ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）およびギ酸（０．１２ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を加えた。得られる混合物を室温で４時間撹拌した後、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドで濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる未精製材料（９４ｍｇ）をそれ以上精製せずに後続のステップで使用した。
【０１７１】
調製例２１：２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール
【０１７２】
【化３５】
2012528847.tif 000041
Ａ）５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−テトラゾールおよび５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２−メチル−２Ｈ−テトラゾール
５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールおよび５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２Ｈ−テトラゾール（調製例１７、ステップＢ）（１．５０ｇ、５．５５ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのテトラヒドロフランに溶かした撹拌した溶液に、室温において水素化ナトリウム（４４４ｍｇ、１１．１ｍｍｏｌ）を２回で加えた。５分後、ヨードメタン（１．０４ｍＬ、１６．６ｍｍｏｌ）を加え、反応液を窒素雰囲気中にて室温で１５時間撹拌した。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、１０〜４０％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、白色の固体（１．１ｇ）としての５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−２−メチル−２Ｈ−テトラゾールおよび白色の固体（４５０ｍｇ）としての５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−テトラゾールを得た。
５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−テトラゾール。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 4.15 (s, 3 H) 5.23 (s, 2 H) 7.15 (t,
J=8.39 Hz, 1 H) 7.31 - 7.48 (m, 6 H) 7.52 (dd, J=11.13, 2.15 Hz, 1 H). LCMS
(M+1) 285.1.
【０１７３】
Ｂ）２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール
５−（４−（ベンジルオキシ）−３−フルオロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−テトラゾール（５００ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）を６ｍＬのエタノールと６ｍＬのテトラヒドロフランに溶かした溶液に、ギ酸（０．７ｍＬ、１７．６ｍｍｏｌ）に続いてパラジウムブラック（２８１ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過し、濾液を真空中で濃縮して、２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノールを白色の固体（３３０ｍｇ）として得、これをそれ以上精製せずに後続の反応で使用した。
【０１７４】
調製例２２：４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール
【０１７５】
【化３６】
2012528847.tif 000042
Ａ）４−（ベンジルオキシ）−Ｎ−メチルベンズアミド
塩化チオニル（０．３５ｍＬ、４．８２ｍｍｏｌ）を投入したフラスコに、市販の４−ベンジルオキシ安息香酸（１．００ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのジクロロメタンと０．０１ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶かした溶液を、０℃で撹拌しながら加えた。氷浴を取り外し、溶液を室温で４時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮して白色の固体を得た。この固体を１０ｍＬのメチルアミン（２Ｍテトラヒドロフラン溶液）に溶かし、得られる溶液を室温で７０時間撹拌した。混合物を酢酸エチルと水で希釈し、有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して白色の固体を得た。この固体を酢酸エチルとヘプタンから再結晶させて、４−（ベンジルオキシ）−Ｎ−メチルベンズアミドを白色の針状結晶（ｎｅｅｄｌｅ）（８５０ｍｇ）として得た。
【０１７６】
Ｂ）５−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−テトラゾール
還流冷却器を頂部に備えたフラスコに入った、４−（ベンジルオキシ）−Ｎ−メチルベンズアミド（２００ｍｇ、０．８２９ｍｍｏｌ）を３ｍＬのアセトニトリルと１滴のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶かした撹拌した溶液に、窒素雰囲気中でトリエチルアミン（０．１２ｍＬ）を加えた。反応混合物を１０分間撹拌した後、塩化チオニル（０．０７８ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。黄色の反応混合物を窒素雰囲気中にて室温で１時間撹拌した。次いでトリエチルアミン（０．３６ｍＬ）に続いて、塩化テトラブチルアンモニウム（３７．４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（６１１ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。得られる黄色の懸濁液を窒素雰囲気中にて室温で７０時間激しく撹拌した。混合物を水と酢酸エチルで希釈した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、１０〜４０％の勾配の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、５−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−テトラゾールを白色の固体（１８０ｍｇ）として得た。
【０１７７】
Ｃ）４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール
５−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−テトラゾール（１８０ｍｇ、０．６７６ｍｍｏｌ）を３ｍＬのエタノールと３ｍＬのテトラヒドロフランに溶かした撹拌した溶液に、ギ酸（０．２７ｍＬ、６．７６ｍｍｏｌ）に続いてパラジウムブラック（１０８ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過し、濾液を濃縮して、４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノールを白色の固体（１１０ｍｇ）として得、これをそれ以上精製せずに後続の反応で使用した。
【０１７８】
調製例２３：３−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアミド
【０１７９】
【化３７】
2012528847.tif 000043
市販の３−フルオロ−４−ヒドロキシベンゾニトリル（５００ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム（１．０２ｇ、１８．２ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの８０％エタノールに混ぜた混合物を、１６時間還流加熱した。室温に冷却した後、混合物を真空中で濃縮し、残渣を水に溶かし、酢酸で酸性化し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、２０〜６０％の勾配の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、３−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアミドを白色の固体（２１０ｍｇ）として得た。
【０１８０】
別法として、３−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアミドは、以下のように調製することもできる。
尿素過酸化水素（４．２ｇ、４３．８ｍｍｏｌ）を１２ｍＬの水に溶かした撹拌した溶液に、固体水酸化ナトリウム（１．０４ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）を加えた。得られる溶液を氷浴で冷却した後、３−フルオロ−４−ヒドロキシベンゾニトリル（１．００ｇ、７．２９ｍｍｏｌ）を５ｍＬのエタノールに溶かした溶液を加えた。混合物を室温で２時間激しく撹拌した後、それを水（１００ｍＬ）と酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した。混合物を５分間撹拌した後、ｐＨ４になるまで１Ｍ塩酸を加えた。水層を分離し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮して白色の固体を得た。この固体をジエチルエーテルとヘプタン（２：１、９０ｍＬ）で１時間摩砕した後、濾過して、３−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアミドを白色の固体（１．０５ｇ）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化ジメチルスルホキシド) δ 6.93 (t, J=8.69 Hz, 1 H) 7.19 (br. s., 1
H) 7.53 (dd, J=8.39, 1.95 Hz, 1 H) 7.62 (dd, J=12.40, 2.05 Hz, 1 H) 7.77 (br.
s., 1 H) 10.39 (s, 1 H). LCMS (ES) 156.0 (M+1).
【０１８１】
調製例２４：２−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアミド
【０１８２】
【化３８】
2012528847.tif 000044
尿素過酸化水素（２．１ｇ、２１．９ｍｍｏｌ）を６ｍＬの水に溶かした撹拌した溶液に、固体水酸化ナトリウム（５２１ｍｇ、１２．８ｍｍｏｌ）を加えた。得られる溶液を氷浴で冷却した後、２−フルオロ−４−ヒドロキシベンゾニトリル（５００ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）を２ｍＬのエタノールに溶かした溶液を加えた。混合物を室温で２時間激しく撹拌した後、それを水（１００ｍＬ）と酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した。混合物を５分間撹拌した後、ｐＨ＝４になるまで１Ｍ塩酸を加えた。水層を分離し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮して、２−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアミドを白色の固体として得た。
【０１８３】
調製例２５：４−（５−シアノ−４−（１−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１８４】
【化３９】
2012528847.tif 000045
４−（５−シアノ−４−ホルミル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（実施例９、ステップＡ）（５１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を２ｍＬの無水テトラヒドロフランに溶解させ、窒素雰囲気中で−７８℃に冷却した。次いで臭化メチルマグネシウム（０．０７０ｍＬ、０．２１ｍｍｏｌ、３Ｍジエチルエーテル溶液）を滴下添加した。冷浴を取り外し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を１Ｍ硫酸水素カリウム水溶液で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、酢酸エチルヘプタン溶液（２０〜１００％の酢酸エチル）の勾配で溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−（５−シアノ−４−（１−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを白色の固体（３３ｍｇ）として得、これを精製せずに後続のステップで使用した。
【０１８５】
調製例２６：１−メチルシクロプロピル４−ニトロフェニルカルボナート
【０１８６】
【化４０】
2012528847.tif 000046
Ａ）１−メチルシクロプロパノール
１Ｌのフラスコにチタンメトキシド（１００ｇ）、シクロヘキサノール（２３２ｇ）、およびトルエン（４６１ｍＬ）を投入した。フラスコにＤｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップおよび冷却器を備え付けた。メタノールが除去されるまで混合物を１４０℃で加熱した。１８０℃でトルエンを除去した。さらにトルエンを加え、この過程を２回繰り返した。すべてのトルエンを除去した後、フラスコを高真空中で乾燥させた。フラスコにジエチルエーテル（５８０ｍＬ）を加えて、１Ｍのジエチルエーテル溶液を調製した。５Ｌの三口フラスコにオーバーヘッドスターラー、不活性ガス導入口、および側管付き滴下漏斗を備え付けた。フラスコを窒素ガスでフラッシュし、酢酸メチル（６０．１ｍＬ、７５６ｍｍｏｌ）、チタンシクロヘキシルオキシド（１Ｍエーテル溶液７５．６ｍＬ）、およびジエチルエーテル（１５００ｍＬ）を投入した。反応フラスコを室温の水浴に浸した状態で、溶液を撹拌した。滴下漏斗に３Ｍ臭化エチルマグネシウム溶液（５５４ｍＬ、１．６６ｍｏｌ）を投入した。グリニャール試薬を室温で３時間かけて滴下添加した。混合物が淡黄色の溶液になり、次いで徐々に沈殿が生成し、最終的に濃緑色／褐色／黒色の混合物に変わった。さらに１５分間撹拌した後、グリニャールを加えたのに続き、混合物を、１０％濃硫酸を１Ｌの水に混ぜた混合物中に慎重に注いだ。得られる混合物を、すべての固体が溶解するまで撹拌した。水層を分離し、ジエチルエーテル２×５００ｍＬで抽出した。有機抽出物を合わせて水、ブラインで順次洗浄し、炭酸カリウム（５００ｇ）で３０分間乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して油状物とした。炭酸水素ナトリウム（２００ｍｇ）を加え、未精製材料を蒸留し、１００℃付近で沸騰する画分を収集して、メチルエチルケトンおよび２−ブタノールを少量の不純物として伴う表題化合物（２３グラム）を得た。1H NMR (500 MHz, 重クロロホルム) δ 0.45 (見かけt,
J=6.59 Hz, 2 H), 0.77 (見かけt, J=5.61 Hz, 2 H), 1.46 (s,
3 H). 表題化合物の調製は、ＷＯ０９１０５７１７にも記載されている。
【０１８７】
Ｂ）１−メチルシクロプロピル４−ニトロフェニルカルボナート
１−メチルシクロプロパノール（１０ｇ、１３７ｍｍｏｌ）、クロロギ酸４−ニトロフェニル（３２ｇ、１５２ｍｍｏｌ）、および数個の４−ジメチルアミノピリジン結晶（１５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４６２ｍＬ）に溶かした溶液を、０℃に冷却した。トリエチルアミン（３６．５ｇ、３６１ｍｍｏｌ）を滴下添加した。１０分後、氷浴を取り外し、反応液を室温で１４時間撹拌した。反応混合物を飽和炭酸ナトリウム水溶液で２回洗浄した。水相をジクロロメタンで抽出した。有機抽出物を合わせて水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、酢酸エチルヘプタン溶液からなる勾配混合物（最初の１０分でヘプタンに対して０〜５％の酢酸エチル、次いで５％の酢酸エチルでの定組成）で溶離するフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、２０．８ｇの所望のカルボナートを透明な油状物として得た。この油状物は静置すると凝固した。
1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.77 (見かけt, J=6.59 Hz, 2 H), 1.09 (見かけt, J=7.07 Hz, 2 H), 1.67 (s, 3 H), 7.40 (見かけdt,
J=9.27, 3.17 Hz, 2 H), 8.29 (見かけdt, J=9.27, 3.17 Hz, 2
H).
別法として、１−メチルシクロプロパノールは、以下のように調製することもできる。
１−メチルシクロプロパノール
２０００ｍＬの四口フラスコに、メカニカルスターラー、不活性ガス導入口、温度計、および２つの側管付き滴下漏斗を備え付けた。フラスコを窒素でフラッシュし、４９０ｍＬのジエチルエーテルに続いて１８．２ｍＬ（３０ｍｍｏｌ）のチタンテトラ（２−エチルヘキシルオキシド）を投入した。一方の滴下漏斗には、２８．６ｍＬ（３６０ｍｍｏｌ）の酢酸メチルをエーテルで１２０ｍＬに希釈して調製した溶液を投入した。第二の滴下漏斗には、３Ｍの臭化エチルマグネシウムエーテル溶液２００ｍＬを投入した。反応フラスコを氷水浴で冷却して、内部温度を１０℃以下に保った。酢酸メチル溶液４０ミリリットルをフラスコに加えた。次いで滴下漏斗から、毎秒約２滴、かつ毎分２ｍＬより速くない速度でグリニャール試薬を滴下添加した。最初の４０ｍＬのグリニャール試薬を加えた後、別の２０ｍＬ分の酢酸メチルエーテル溶液を加えた。２番目の４０ｍＬのグリニャール試薬を加えた後、別の２０ｍＬ分の酢酸メチルジエチルエーテル溶液を加えた。３番目の４０ｍＬのグリニャール試薬を加えた後、別の２０ｍＬ分の酢酸メチルエーテル溶液を加えた。４番目の４０ｍＬのグリニャール試薬を加えた後、最後の２０ｍＬ分の酢酸メチルエーテル溶液を加えた。
【０１８８】
グリニャール試薬を加え終えたのに続いて、混合物をさらに１５分間撹拌した。次いで混合物を６６０ｇの氷と６０ｍＬの濃硫酸の混合物中にすばやく撹拌しながら注いで、すべての固体を溶解させた。相を分離し、水相を５０ｍＬのジエチルエーテルで再び抽出した。エーテル抽出物を合わせて１５ｍＬの１０％炭酸ナトリウム水溶液、１５ｍＬのブラインで洗浄し、撹拌しながら３０グラムの硫酸マグネシウムで１時間乾燥させた。次いでエーテル溶液を濾過した。トリ−ｎ−ブチルアミン（１４．３ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）およびメシチレン（１０ｍＬを加えた。２．５ｃｍ×３０ｃｍジャケット付きＶｉｇｒｅｕｘカラムを使用して大気圧で蒸留することにより、ジエチルエーテルの大部分を除去した。残存する液体を、円滑に移すために２回分の１０ｍＬのヘキサンを使用して、より小さい蒸留フラスコに移した。大気圧での蒸留を２ｃｍ×２０ｃｍジャケット付きＶｉｇｒｅｕｘカラムで続けた。９８〜１０５℃で蒸留される液体を収集して、１４ｇの表題化合物を無色の液体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.42 - 0.48 (m, 2 H), 0.74 - 0.80 (m, 2
H), 1.45 (s, 3 H), 1.86 (br. s., 1 H).
【０１８９】
調製例２７：２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）フェノール
【０１９０】
【化４１】
2012528847.tif 000047
Ａ）５−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈイミダゾール
２−フルオロ−４−ブロモアニソール（０．２１６ｍＬ、１．６３ｍｍｏｌ）、トリ（２−フリル）ホスフィン（２５．９ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（３００ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）をマイクロ波対応バイアルに入れ、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．８ｍＬ）に溶解させた。混合物を窒素ガス流で１０分間脱気し、１−メチルイミダゾール（０．０８７ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）および酢酸パラジウム（ＩＩ）（１２．４ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、混合物をもう１０分間脱気した。容器を１４０℃のマイクロ波反応器に２時間入れておいた。混合物を酢酸エチルで希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。未精製材料を、２５〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液、次いで０〜１０％のメタノールジクロロメタン溶液の勾配で溶離するクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を黄色の油状物（２１０ｍｇ）として得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 3.57 (s, 3 H), 3.85 (s, 3 H), 6.95 -
6.98 (m, 2 H), 7.00 - 7.07 (m, 2 H), 7.42 (s, 1 H). 7.42のプロトンシフトは文献（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．ｃｈｅｍ．、２００８、５４３６およびＥｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．、２００６、１３７９）と比較したとき、所望のイミダゾール異性体を示す。
【０１９１】
Ｂ）２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）フェノール
５−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈイミダゾール（１０１．８ｍｇ、０．４９４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍＬ）溶液に、臭化ホウ素（ＩＩＩ）の溶液（０．５０ｍＬ、１．０Ｍヘプタン溶液）を−３０℃で加えた。混合物を室温で２０時間撹拌した。次いで混合物を−３０℃に冷却し、混合物にメタノール（２ｍＬ）を加えた。混合物を真空中で濃縮し、残渣を水に溶解させ、１Ｍ水酸化ナトリウムで中和した。溶液を濃縮して、表題化合物を黄色の固体（９０ｍｇ）として得た。この化合物を精製せずにさらに使用した。
【０１９２】
調製例２８：２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）フェノール
【０１９３】
【化４２】
2012528847.tif 000048
Ａ）２−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈイミダゾール
２−フルオロ−４−ブロモアニソール（０．２５６ｍＬ、１．９３ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（Ｉ）（３７５ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）をマイクロ波対応バイアルに入れ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．８ｍＬ）に溶解させた。混合物を窒素ガス流で１０分間脱気し、１−メチルイミダゾール（０．０７８ｍＬ、０．９６ｍｍｏｌ）および酢酸パラジウム（ＩＩ）（１１ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）を加え、混合物をもう１０分間脱気した。容器を１４０℃のマイクロ波反応器に２時間入れておいた。混合物を酢酸エチル（３ｍＬ）で希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液中に注ぎ、屋外で３０分間撹拌し、酢酸エチルで２回抽出した。有機相を合わせて水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。未精製材料を、酢酸エチルからヘプタンへの勾配混合物（２５〜１００％の酢酸エチル／ヘプタン、次いで０〜１０％のメタノールジクロロメタン溶液）で溶離するクロマトグラフィーによって精製して、２−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈイミダゾールを黄色の油状物（３５．８ｍｇ）として得た。1H NMR (400 MHz, 重クロロホルム) δ 3.66 (s, 3 H), 3.88 (s, 3 H), 6.90 (s, 1
H), 6.96 (m 1 H), 7.10 (s, 1 H), 7.24 - 7.33 (m, 2 H). プロトンＮＭＲは、５−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈイミダゾール（調製例２７）のプロトンＮＭＲおよび文献（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．ｃｈｅｍ．、２００８、５４３６およびＥｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．、２００６、１３７９）と比較すると、所望のイミダゾール異性体の存在を示している。
【０１９４】
Ｂ）２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）フェノール
２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）フェノールは、２−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈイミダゾールから、調製例２７（Ｂ）の手順と類似した手順に従って調製して、表題化合物を褐色の固体（３３．４ｍｇ）として得た。未精製材料を精製せずにさらに使用した。
【０１９５】
調製例２９：２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）−１−（プロプ−１−エン−２−イル）ベンゼン
【０１９６】
【化４３】
2012528847.tif 000049
１−ブロモ−２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）ベンゼン（１９９ｍｇ、０．７９０ｍｍｏｌ）およびイソプロペニルトリフルオロホウ酸カリウム（３００ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ）を２−プロパノール（１０ｍＬ）に溶かした溶液に、触媒の１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）−フェロセンパラジウムジクロリド（６７ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．１７ｍＬ、１．２０ｍｍｏｌ）を順次加えた。反応液を９０℃で１５時間加熱し、次いで反応液を室温で４８時間撹拌した。次いで水および酢酸エチルを加え、層を分離した。水層を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（１０〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、表題化合物を白色の固体（１３０ｍｇ、８０％）として得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 2.17 (s, 3 H), 3.08 (s, 3 H), 5.29 -
5.43 (m, 2 H), 7.51 (t, J=7.56 Hz, 1 H), 7.64 (dd, J=9.88, 1.59 Hz, 1 H), 7.70
(dd, J=8.05, 1.71 Hz, 1 H).
【０１９７】
（実施例１）
４−［５−シアノ−４−（｛２−フルオロ−４−［（２−ヒドロキシエチル）スルホニル］−フェノキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１９８】
【化４４】
2012528847.tif 000050
Ａ）４−［４−（｛４−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２−フルオロフェノキシ｝−メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１９９】
【化４５】
2012528847.tif 000051
４−［５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（５４．４ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、４−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２−フルオロフェノール（６４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、およびポリマー結合型トリフェニルホスフィン（３ｍｍｏｌ／ｇ、３１０ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１．７ｍＬ）に溶かした溶液に、アゾジカルボン酸ジエチル（０．０３３ｍＬ、０．２０５ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を窒素雰囲気中で１６時間撹拌した。ポリマーを濾別し、次いで濾液を真空中で蒸発させた。残渣を、２０％〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を油状物（４４ｍｇ、４１％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.02 (s, 6 H), 0.86 (s, 9 H), 1.24 (d,
J=6.3 Hz, 6 H), 2.00 (br d, 2 H), 2.06 - 2.17 (m, 2 H), 2.86 - 3.01 (m, 4 H),
3.72 - 3.77 (m, 2 H), 4.10 - 4.22 (m, 2 H), 4.45 - 4.53 (m, 1 H), 4.90 (m, 1
H), 5.06 (s, 2 H) 6.90 - 6.96 (m, 1 H), 7.05 - 7.10 (m, 1 H), 7.12 - 7.16 (m, 1
H), 7.65 (s, 1 H).
【０２００】
Ｂ）４−［５−シアノ−４−（｛２−フルオロ−４−［（２−ヒドロキシエチル）スルホニル］フェノキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−［４−（｛４−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２−フルオロフェノキシ｝メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（４４ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶かした溶液に、４Ｍの塩化水素１，４−ジオキサン溶液（０．２ｍＬ、０．７６ｍｍｏｌ）を加えた。得られる混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させた。残渣をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶かし、３−クロロ過安息香酸（４８ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。得られる溶液を室温で１時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和炭酸ナトリウム水溶液、次いでブラインで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で蒸発させ、残渣をシリカゲルでのクロマトグラフィー（７０％〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、表題化合物を油状物（１５ｍｇ、４０％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.24 (d, J=6.3 Hz, 6 H), 2.02 (br d, 2
H), 2.07 - 2.19 (m, 2 H), 2.94 (br t, 2 H), 3.30 - 3.36 (m, 2 H), 3.97 - 4.03
(m, 2 H), 4.31 (br s, 2 H), 4.47 - 4.56 (m, 1 H), 4.93 (m, 1 H), 5.18 (s, 2 H),
7.14 - 7.22 (m, 1 H), 7.63 - 7.74 (m, 3 H); LCMS (ES+): 495.0 (M+H).
【０２０１】
（実施例２）
４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２０２】
【化４６】
2012528847.tif 000052
Ａ）４−（５−ブロモ−４−｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２０３】
【化４７】
2012528847.tif 000053
この化合物は、２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノール（ＷＯ２００７０５４６６８）と４−［５−ブロモ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例４）から、４−［４−（｛４−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２−フルオロフェノキシ｝−メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルの調製（実施例１、ステップＡ、光延反応）について記載したのと同様にして調製した。シリカゲルでのクロマトグラフィー（６０％の酢酸エチルヘキサン溶液）によって化合物を精製した。1H NMR (400 MHz, 重クロロホルム) δ 7.70 (ddd, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.65 (dd,
1H), 7.18 (t, 1H), 5.03 (s, 2H), 4.92 (m, 1H), 4.43 (m, 1H), 4.31 (br s, 2H),
3.03 (s, 3H), 2.91 (br t, 2H), 2.09 (m, 2H), 1.92 (br d, 2H), 1.25 (d, 6H).
【０２０４】
Ｂ）４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−（５−ブロモ−４−｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（２３７ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）およびシアン化銅（８２ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．０ｍＬ）に混ぜた混合物を、アルゴン雰囲気中にて１６５℃で２４時間加熱した。得られる濃褐色の混合物を室温に冷まし、次いで、塩化第二鉄六水和物（６１８ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ）、濃塩酸水溶液（２ｍＬ）、および水（１０ｍＬ）からなる撹拌した溶液中に慎重に注いだ。酢酸エチル（１０ｍＬ）を加え、得られる混合物を６５℃で３０分間撹拌した。混合物を室温に冷まし、次いで酢酸エチルで３回抽出した。抽出物を合わせて２Ｍ塩酸水溶液、２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液、水、およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して、粗生成物を褐色の油状物として得、これを、シリカゲルでのクロマトグラフィー（６０％の酢酸エチルヘキサン溶液）によって精製して、４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを淡黄色の油状物として得たが、油状物は静置すると凝固した（７７ｍｇ、３６％）。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 7.72 - 7.70 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.67
(dd, 1H), 7.18 (t, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.92 (m, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.31 (br s,
2H), 3.04 (s, 3H), 2.93 (br t, 2H), 2.12 (m, 2H), 2.01 (br d, 2H), 1.25 (d,
6H); LCMS (ES+): 465.06 (M+1).
【０２０５】
（実施例３）
４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）フェノキシ］−メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２０６】
【化４８】
2012528847.tif 000054
この化合物は、２−フルオロ−４−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）フェノール（調製例９）と４−［５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例５）からの、４−［４−（｛４−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２−フルオロフェノキシ｝−メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルの調製（実施例１、ステップＡ、光延反応）について記載したのと同様にして調製した。粗生成物をシリカゲルでのクロマトグラフィー（５０％〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.24 (d, J=6.3 Hz, 6 H), 2.01 (br d, 2
H), 2.07 - 2.18 (m, 2 H), 2.93 (br t, 2 H), 4.32 (br s, 2 H), 4.46 - 4.56 (m, 1
H), 4.91 (七重線, 1 H), 5.18 (s, 2 H), 7.16 - 7.26 (m, 1
H), 7.42 - 7.49 (m, 1 H), 7.49 - 7.58 (m, 1 H), 7.69 (s, 1 H), 8.93 (s, 1 H);
LCMS (ES+): 455.1 (M+H).
【０２０７】
（実施例４）
４−（５−シアノ−４−｛［４−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２０８】
【化４９】
2012528847.tif 000055
この化合物は、４−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）フェノールと４−［５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例５）からの、４−［４−（｛４−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２−フルオロフェノキシ｝−メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルの調製（実施例１、ステップＡ、光延反応）について記載したのと同様にして調製した。粗生成物を、５０％〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配を使用するシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.24 (d, J=6.3 Hz, 6 H), 2.02 (br d, 2
H), 2.07 - 2.20 (m, 2 H), 2.94 (br t, 2 H), 4.32 (br s, 2 H), 4.47 - 4.56 (m, 1
H), 4.88 - 4.97 (m, 1 H), 5.11 (s, 2 H), 7.11 - 7.16 (m, 2 H), 7.59 - 7.65 (m,
2 H), 7.68 (s, 1 H), 8.90 (s, 1 H); LCMS (ES+): 437.0 (M+H).
【０２０９】
（実施例５）
４−（５−シアノ−４−｛［（２−メチルピリジン−３−イル）オキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２１０】
【化５０】
2012528847.tif 000056
この化合物は、２−メチルピリジン−３−オールと４−［５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例５）から、４−［４−（｛４−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２−フルオロフェノキシ｝−メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルの調製（実施例１、ステップＡ、光延反応）について記載したのと同様にして調製した。未精製材料を、水メタノール溶液（改質剤として０．１％の水酸化アンモニウム）の勾配で溶離するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８  ２１．２×１５０ｍｍ、０．００５ｍｍカラムでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.25 (d, J=6.4 Hz, 6 H), 2.02 (br d, 2
H), 2.06 - 2.21 (m, 2 H), 2.52 (s, 3 H), 2.94 (br t, 2 H), 4.33 (br s, 2 H),
4.47-4.57 (m, 1 H), 4.91 (m, 1 H), 5.06 (s, 2 H), 7.11 - 7.22 (m, 2 H), 7.66
(s, 1 H), 8.11 - 8.19 (m, 1 H); LCMS (ES+): 384.1 (M+H).
【０２１１】
（実施例６）
４−（５−シアノ−４−｛［（２−メチルピリジン−３−イル）アミノ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２１２】
【化５１】
2012528847.tif 000057
４−（５−シアノ−４−ホルミル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（実施例９、ステップＡ）（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）および２−メチルピリジン−３−アミン（１９ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を投入したフラスコに、２ｍＬのジクロロエタンに続いてＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０３ｍＬ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。フラスコを窒素ガスでフラッシュし、チタンイソプロポキシド（９７．８ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物をこの温度で１９時間撹拌した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（７５．２ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素水溶液を加えた。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドで濾過した。濾液の層を分離し、水相をジクロロメタンで１回抽出した。有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、酢酸エチルヘプタン溶液からなる勾配混合物（６０〜８０％の酢酸エチル）を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。プロトンＮＭＲによって、材料がイミンであることが示された。次いでイミンを２ｍＬのメタノールと１ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させ、混合物を０℃に冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（１０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を加え、氷浴を取り外した。混合物を室温で４時間撹拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。混合物を真空中で部分的に濃縮し、水性混合物を酢酸エチルで１回抽出した。有機抽出物を真空中で濃縮し、残渣を、酢酸エチルヘプタン溶液からなる勾配混合物（８０〜１００％の酢酸エチル）を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（２４ｍｇ、収率６３％）を得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.15 - 1.33 (m, 6 H), 1.93 - 2.04 (m, 2
H), 2.11 (qd, J=12.2, 4.6 Hz, 2 H), 2.43 (s, 3 H), 2.84 - 2.99 (m, 2 H), 3.94
(t, J=5.2 Hz, 1 H), 4.31 (br. s., 2 H), 4.37 (d, J=5.5 Hz, 2 H), 4.41 - 4.54
(m, 1 H), 4.86 - 4.98 (m, 1 H), 6.78 - 6.87 (m, 1 H), 6.96 - 7.07 (m, 1 H),
7.52 - 7.62 (m, 1 H), 7.87 - 7.97 (m, 1 H). LCMS (ES+) 383.1 (M+1).
【０２１３】
（実施例７）
４−（５−シアノ−４−｛［４−（ジメトキシホスホリル）−２−フルオロフェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２１４】
【化５２】
2012528847.tif 000058
Ａ）４−｛４−［（４−ブロモ−２−フルオロフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル：
【０２１５】
【化５３】
2012528847.tif 000059
この化合物は、４−ブロモ−２−フルオロフェノールと４−［５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例５）からの、４−［４−（｛４−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２−フルオロフェノキシ｝−メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルの調製（実施例１、ステップＡ、光延反応）について記載したのと同様にして調製した。未精製化合物を、０％〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製した。1H NMR (重水素化クロロホルム): δ 1.35 (6H, d), 2.1 (2H, m), 2.2 (2H, m)
3.0 (2H, m), 4.3 (2H, m), 4.5 (1H, m), 4.95 (1H, m), 5.15 (2H, s), 6.95 (1H,
d,d), 7.2 (1H,d), 7.3 (1H, d), 7.7 (1H, s); LCMS (ES+): 464.8 (M-1).
【０２１６】
Ｂ）４−（５−シアノ−４−｛［４−（ジメトキシホスホリル）−２−フルオロフェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−｛４−［（４−ブロモ−２−フルオロ−フェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（２００ｍｇ、０．７１１ｍｍｏｌ）を脱気済テトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解させた。テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（１７０ｍｇ、０．１４４ｍｍｏｌ）および亜リン酸ジメチル（０．０８４ｍＬ、０．８７５ｍｍｏｌ）を加えた後、トリエチルアミン（０．１５２ｍＬ、１．０９ｍｍｏｌ）を加えた。容器にふたを被せ、反応混合物を７５℃で５時間加熱した。真空中で溶媒を蒸発させ、粗生成物を、８０％の水／２０％のアセトニトリルから１００％のアセトニトリル（０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤）で溶離するＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００ｍｍ、５μｍカラムでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。分析ＬＣＭＳ：保持時間１．０６分（Ａｃｑｕｉｔｙ  ＨＳＳ  Ｔ３  ２．１×５０ｍｍ、１．８μｍカラム；１．８分かけて９５％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの直線勾配、５％の水／アセトニトリルで２．０分間保持；０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤；流量１．３ｍＬ／分）。LCMS (ES+): 495.1 (M+H).
【０２１７】
（実施例８）
４−｛５−シアノ−４−［（４−シアノ−２−フルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２１８】
【化５４】
2012528847.tif 000060
この化合物は、４−シアノ−３−フルオロフェノールと４−［５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例５）からの、４−［４−（｛４−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２−フルオロフェノキシ｝−メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルの調製（実施例１、ステップＡ、光延反応）について記載したのと同様にして調製した。粗生成物を、水アセトニトリル溶液（０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤）の勾配で溶離するＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム１９×１００ｍｍ、５μｍカラムでの分取ＨＰＬＣによって精製した。分析ＬＣＭＳ：保持時間３．３９分（Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、５μｍカラム；４．０分間で８０％のＨ２Ｏ／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの直線勾配；０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤；流量２．０ｍＬ／分）。LCMS (ES+): 412 (M+H).
【０２１９】
（実施例９）
４−（５−シアノ−４−｛２−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２２０】
【化５５】
2012528847.tif 000061
ステップＡ：４−（５−シアノ−４−ホルミル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２２１】
【化５６】
2012528847.tif 000062
４−［５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例５）（４００ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、トリクロロイソシアヌル酸（３７９ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）および２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル（ＴＥＭＰＯ、２２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。黄色の混合物を氷浴から取り出し、室温で４５分間撹拌した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（商標）パッドで濾過し、パッドをジクロロメタンで洗浄した。濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と合わせ、層を分離した。水層をジクロロメタンで抽出した。両方の有機溶液を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して油性混合物を得、これをシリカゲルでのクロマトグラフィー（５〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、４−（５−シアノ−４−ホルミル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを透明な油状物として得たが、油状物は真空中で部分的に凝固した（３１１ｍｇ、７８％）。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 10.0 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 4.99 - 4.94
(m, 1H), 4.65 - 4.59 (m, 1H), 4.37 (m, 2H), 2.98 - 2.95 (m, 2H), 2.23 - 2.15
(m, 2H), 2.06 - 2.04 (m, 2H), 1.28 (d, 6H, J=6.3 Hz); LCMS (ES+): 290.1 (M+).
【０２２２】
ステップＢ：４−（５−シアノ−４−エチニル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２２３】
【化５７】
2012528847.tif 000063
４−（５−シアノ−４−ホルミル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の無水メタノール（１．５ｍＬ）溶液に、（１−ジアゾ−２−オキソ−プロピル）−ホスホン酸ジメチルエステル（４０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）および粉末炭酸カリウム（４８ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３．５時間撹拌し、次いで過剰の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて失活させた。層を分離し、水層を酢酸エチルで２回抽出した。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して油状物を得、これをシリカゲルでのクロマトグラフィー（１０％〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、４−（５−シアノ−４−エチニル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを淡黄色の固体（１８ｍｇ、３７％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 7.68 (s, 1H), 4.96 - 4.94 (m, 1H) 
4.52 - 4.48 (m, 1H), 4.34 (m, 2H), 3.34 (s, 1H), 2.95 - 2.93 (m, 2H), 2.16 -
2.10 (m, 2H), 2.03 - 2.01 (m, 2H), 1.28 (d, 6H, J=6.3 Hz); LCMS (ES+): 287.5
(M+1).
【０２２４】
ステップＣ：４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］エチニル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２２５】
【化５８】
2012528847.tif 000064
ヨウ化銅（１．５ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）、ジクロロ−ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（４．０ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）、１−ブロモ−２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）ベンゼン（２１ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．０２８ｍＬ、０．１９ｍｍｏｌ）を脱気済Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）に溶かした溶液を、４−（５−シアノ−４−エチニル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（１８ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）を含有する脱気済Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）を収容するフラスコに加えた。最初の溶液を収容していたフラスコを脱気済Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）で洗浄し、次いでそれを反応液に加えた。黄色の溶液を９０℃で１．５時間加熱し、次いで室温で１５時間撹拌した。反応液を水と酢酸エチルとに分配し、層を分離した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機抽出物を合わせ、水およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して琥珀色の油状物を得、これをシリカゲルでのクロマトグラフィー（１０〜９０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］エチニル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを淡黄色の固体（２０ｍｇ、６９％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 7.75 (s, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 3H), 4.94
- 4.91 (m, 1H)  4.52 - 4.48 (m, 1H), 4.33 (m, 2H), 3.07 (s, 3H), 2.97 -
2.91 (m, 2H), 2.16 - 2.09 (m, 2H), 2.09 - 2.01 (m, 2H), 1.25 (d, 6H, J=6.3 Hz);
LCMS (ES+): 459.0 (M+1).
【０２２６】
ステップＤ：４−（５−シアノ−４−｛２−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］エチニル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（１５ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（５．０ｍＬ）に溶解させ、Ｈ−Ｃｕｂｅ流通反応器（ＴｈａｌｅｓＮａｎｏ、英国）において、水素最大量の設定で、１０％Ｐｄ／Ｃカートリッジに１ｍＬ／分の流量で通して水素化した。収集した酢酸エチル中の生成物を減圧下で濃縮して、４−（５−シアノ−４−｛２−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを高純度の白色の固体（１４ｍｇ、９１％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ  7.69 - 7.63 (m, 2H), 7.39 - 7.34
(m, 1H),  4.98 - 4.93 (m, 1H)  4.48 - 4.41 (m, 1H), 4.33 (m, 2H),
3.08 (s, 3H), 3.06 - 3.03 (t, 2H, J=7.6 Hz), 2.96 - 2.93 (m, 4H), 2.16 - 2.10
(m, 2H), 2.08 - 1.98 (m, 2H), 1.28 (d, 6H, J=6.3 Hz); LCMS (ES+): 463.1 (M+1).
【０２２７】
（実施例１０）
４−［５−シアノ−４−（｛［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２２８】
【化５９】
2012528847.tif 000065
４−（５−シアノ−４−ホルミル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（実施例９、ステップＡ）（４３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を１．５ｍＬのジクロロエタンに溶かした撹拌した溶液に、２−フルオロ−４−（メチルチオ）アニリン（２４ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）に続いて０．０１ｍＬの酢酸を加えた。混合物を窒素雰囲気中にて室温で１．５時間撹拌した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（５２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。１１５時間後、反応混合物をジクロロメタンと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した。層を分離し、水層をジクロロメタンで２回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、酢酸エチルからヘプタンへの勾配混合物（０〜５０％の酢酸エチル）で溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４５ｍｇの中間体スルフィドを得た。この材料の一部（２３ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）を１ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、ｍｅｔａ−クロロ過安息香酸（３６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を１回で加えた。混合物を室温で２．５時間撹拌した後、それをジクロロメタンと飽和炭酸ナトリウム水溶液で希釈した。有機層を分離し、飽和炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。サンプルを逆相ＨＰＬＣによって精製した（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８．５分で９０％の水／１０％のアセトニトリルから０％の水／１００％のアセトニトリルへの直線勾配、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）。LCMS: (MS ES+: 464.2).
【０２２９】
（実施例１１）
４−｛５−シアノ−４−［（２，４−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２３０】
【化６０】
2012528847.tif 000066
４−（５−シアノ−４−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例１０）（１６６．５ｍｇ、０．４４９ｍｍｏｌ）、２，４−ジフルオロフェノール（０．０５２ｍＬ、０．５３９ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（２９３ｍｇ、０．８９８ｍｍｏｌ）をマイクロ波対応バイアルに入れ、アセトニトリル（３ｍＬ）に溶解させ、マイクロ波反応器において１１０℃で２０分間加熱した。混合物を室温に冷却し、真空中で濃縮し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で希釈し、ジクロロメタンで３回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。未精製材料を、水アセトニトリル溶液（０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤）の勾配で溶離するＷａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８カラム  ４．６×５０ｍｍ、０．００５ｍｍでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製して、４−｛５−シアノ−４−［（２，４−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを得た。分析ＬＣＭＳ：保持時間：３．６２分（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、０．００５ｍｍ；４．０分かけて９５％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの直線勾配；０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤；流量２．０ｍＬ／分）。LCMS (ES +): 405.18 (M + H).
【０２３１】
（実施例１２）
４−｛５−シアノ−４−［（２−メチルフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２３２】
【化６１】
2012528847.tif 000067
オルト−クレゾール（２１ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）および４−（５−シアノ−４−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例１０）（６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１．６ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、炭酸セシウム（１０６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１５時間還流加熱した。室温に冷却した後、未精製材料を真空中で濃縮乾燥し、残渣を水に溶かし、酢酸エチル（各抽出２０ｍＬ）で３回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮乾燥して黄褐色の残渣（０．０６５ｇ、１００％）を得た。未精製サンプルをジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、８．５分で８０％の水／アセトニトリルから０％の水／アセトニトリルへの直線勾配に続いて、０％の水／アセトニトリルで１．５分間（０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤）；流量：２５ｍＬ／分で溶離するＷａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  １９×１００ｍｍ、０．００５ｍｍカラムでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。分析ＬＣＭＳ：保持時間３．８２分（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、０．００５ｍｍカラム；４．０分かけて９５％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの直線勾配に続いて、５％の水／アセトニトリルで１分間；０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤；流量：２．０ｍＬ／分）。LCMS (ES+) 383.2 (M+1).
【０２３３】
（実施例１３）
４−｛５−シアノ−４−［（２，５−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０２３４】
【化６２】
2012528847.tif 000068
Ａ）４−（５−シアノ−４−（（２，５−ジフルオロフェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２，５−ジフルオロフェノール（５４ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）および４−（５−シアノ−４−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（調製例１６）（１２６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を３ｍＬのアセトニトリルに溶かした撹拌した溶液に、炭酸セシウム（２１４ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１５時間還流加熱した。混合物を室温に冷却し、酢酸エチルと水で希釈した。層を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して、４−（５−シアノ−４−（（２，５−ジフルオロフェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得、これを精製せずに次のステップで使用した。
【０２３５】
Ｂ）４−（（２，５−ジフルオロフェノキシ）メチル）−１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボニトリル
４−（５−シアノ−４−（（２，５−ジフルオロフェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１３７ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を５ｍＬのジクロロメタンに溶かした溶液に、０．８２ｍＬの塩酸（４Ｍ  １，４−ジオキサン溶液）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、混合物を真空中で濃縮して、４−（（２，５−ジフルオロフェノキシ）メチル）−１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボニトリルを得、これを精製せずに次のステップで使用した。
【０２３６】
Ｃ）４−｛５−シアノ−４−［（２，５−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
４−（（２，５−ジフルオロフェノキシ）メチル）−１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボニトリル（１０４ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を３．３ｍＬのジクロロメタンに溶かした撹拌した溶液に、トリエチルアミン（０．１８ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）に続いて４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピル（調製例２６およびＷＯ０９１０５７１７を参照されたい）（１７１ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られる鮮黄色の混合物を窒素雰囲気中で１５時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンと水で希釈した。層を分離し、水相をジクロロメタンで抽出した。有機相を合わせて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して、２２５ｍｇの未精製材料を得た。この材料の一部（４５ｍｇ）をジメチルスルホキシド（０．９ｍＬ）に溶解させ、水アセトニトリル溶液（０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤）の勾配で溶離するＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム  １９×１００ｍｍ、０．００５カラムでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。分析ＬＣＭＳ：保持時間３．６０分（Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、５マイクロメートルカラム；４分かけて９５％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの直線勾配；０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤；流量２．０ｍＬ／分）。LCMS (ES+): 417.1 (M+H).
【０２３７】
（実施例１４）
４−｛５−シアノ−４−［（２，３−ジフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０２３８】
【化６３】
2012528847.tif 000069
表題化合物は、市販の２，３−ジフルオロフェノールを使用し、実施例１３に類似した手順に従って調製した。未精製材料（４９ｍｇ）をジメチルスルホキシド（０．９ｍＬ）に溶解させ、水アセトニトリル溶液（０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤）の勾配で溶離するＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム  １９×１００ｍｍ、０．００５カラムでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。分析ＬＣＭＳ：保持時間３．６２分（Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、５マイクロメートルカラム；４分かけて９５％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの直線勾配；０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤；流量２．０ｍＬ／分）。LCMS (ES+): 417.2 (M+H).
【０２３９】
（実施例１５）
４−｛４−［（４−カルバモイル−２−フルオロフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０２４０】
【化６４】
2012528847.tif 000070
Ａ）４−（４−（（４−カルバモイル−２−フルオロフェノキシ）メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
４−（５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（調製例１５）（２００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、３−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアミド（調製例２３）（１００ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（１８８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を３ｍＬの１，４−ジオキサンに溶かした撹拌した溶液に、アゾジカルボン酸ジエチル（０．１１ｍＬ、０．６９ｍｍｏｌ）を滴下添加した。得られる混合物を室温で終夜撹拌した後、混合物を真空中で濃縮した。残渣を、３０〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配で溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−（４−（（４−カルバモイル−２−フルオロフェノキシ）メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを白色の固体（２１５ｍｇ）として得た。
【０２４１】
Ｂ）４−（（５−シアノ−１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メトキシ）−３−フルオロベンズアミド
４−（４−（（４−カルバモイル−２−フルオロフェノキシ）メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２１５ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を２ｍＬのジクロロメタンに溶かした撹拌した溶液に、１ｍＬのトリフルオロ酢酸を室温で加えた。１時間後、溶液を真空中で濃縮した。残渣を、２％のアンモニア水を含有する１〜１５％のメタノールジクロロメタン溶液からなる勾配混合物を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−（（５−シアノ−１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メトキシ）−３−フルオロベンズアミドを白色の固体（１５０ｍｇ）として得た。
【０２４２】
Ｃ）４−｛４−［（４−カルバモイル−２−フルオロフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
４−（（５−シアノ−１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メトキシ）−３−フルオロベンズアミド（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を１ｍＬのジクロロメタンに溶かした撹拌した溶液に、トリエチルアミン（０．０３６ｍＬ、０．２６ｍｍｏｌ）に続いて４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピル（調製例２６およびＷＯ０９１０５７１７）（６０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られる鮮黄色の混合物を窒素雰囲気中にて６５℃で２時間撹拌した。反応液を室温に冷却し、水で希釈し、ジクロロメタンで２回抽出した。有機抽出物を合わせて飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、４０〜９０％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配で溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−｛４−［（４−カルバモイル−２−フルオロフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルを白色の固体（３４ｍｇ）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.59 - 0.67 (m, 2 H), 0.83 - 0.92 (m, 2
H), 1.54 (s, 3 H), 2.02 (d, J=4.10 Hz, 2 H), 2.04 - 2.22 (m, 2 H), 2.91 (br.
s., 2 H), 4.11 - 4.43 (m, 2 H), 4.44 - 4.55 (m, 1 H), 5.15 (s, 2 H), 7.03 -
7.10 (m, 1 H), 7.52 - 7.62 (m, 2 H), 7.68 (s, 1 H). １Ｈ  ＮＭＲでは、（４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピルに混入する４−ニトロフェニル炭酸イソプロピルからの）対応するイソプロピルカルバメート誘導体であると考えられるものの存在は１０％未満しか示されなかった。LCMS (ES) 442.4 (M+1).
【０２４３】
（実施例１６）
４−｛４−［（４−カルバモイルフェノキシ）メチル］−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０２４４】
【化６５】
2012528847.tif 000071
表題化合物は、市販の４−ヒドロキシベンズアミドを使用し、実施例１５に類似した手順に従って調製した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.57 - 0.67 (m, 2 H), 0.84 - 0.91 (m, 2
H), 1.56 (s, 3 H), 1.93 - 2.05 (m, 2 H), 2.05 - 2.19 (m, 2 H), 2.91 (t, J=15.62
Hz, 2 H), 4.26 (br. s., 2 H), 4.44 - 4.55 (m, 1 H), 5.09 (s, 2 H), 6.96 - 7.04
(m, 2 H), 7.66 (s, 1 H), 7.75 - 7.82 (m, 2 H).１Ｈ  ＮＭＲでは、（４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピルに混入する４−ニトロフェニル炭酸イソプロピルからの）対応するイソプロピルカルバメート誘導体であると考えられるものの存在は１０％未満しか示されなかった。LCMS (ES) 424.4 (M+1).
【０２４５】
（実施例１７）
４−（５−シアノ−４−（（４−シアノフェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０２４６】
【化６６】
2012528847.tif 000072
表題化合物は、市販の４−ヒドロキシベンゾニトリルを使用し、実施例１５に類似した手順に従って調製した。未精製反応混合物の精製は、酢酸エチルヘプタン溶液からなる勾配混合物（０〜１００％の酢酸エチル）を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって行った。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.60 - 0.70
(m, 2 H), 0.84 - 0.94 (m, 2 H), 1.23 - 1.31 (m, 1 H), 1.56 (s, 3 H), 2.01 -
2.15 (m, 4 H), 2.93 (m, 2 H), 4.11 - 4.37 (m, 1 H), 4.49 - 4.55 (m, 1 H), 5.10
(s, 2 H), 7.03 (d, J=8.78 Hz, 2 H), 7.63 (d, J=8.78 Hz, 2 H), 7.67 (s, 1 H).
【０２４７】
（実施例１８）
４−（４−（（４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェノキシ）メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２４８】
【化６７】
2012528847.tif 000073
表題化合物は、４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェノール（ＷＯ２００３０７２５４７）を使用し、実施例１２に類似した手順に従って調製した。未精製反応混合物の精製は、酢酸エチルヘプタン溶液からなる勾配混合物（０〜１００％の酢酸エチル）を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって行った。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.28 (d,
J=6.34 Hz, 6 H), 2.01 - 2.09 (m, 2 H), 2.17 (m, 2 H), 2.91 - 2.99 (m, 2 H),
4.37 (m, 2 H), 4.50 - 4.58 (m, 1 H), 4.93-4.98 (m, 1 H), 5.11 (s, 2 H), 6.47
(t, J=2.07 Hz, 1 H), 7.07 (d, J=9.03 Hz, 2 H),  7.64 (d, J=9.03 Hz, 2 H),
7.70 (s, 1 H), 7.72 (d, J=1.71 Hz, 1 H), 7.86 (d, J=2.44 Hz, 1 H). LCMS (ES)
435.4(M+1).
【０２４９】
（実施例１９）
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルおよび４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２５０】
【化６８】
2012528847.tif 000074
Ａ）４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルおよび４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−（５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（９４ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ）、２−フルオロ−４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノールおよび２−フルオロ−４−（２−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール（調製例１７）（１００ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（１１０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を５ｍＬの１，４−ジオキサンに溶かした撹拌した溶液に、アゾジカルボン酸ジエチル（０．０６０ｍＬ、０．３９ｍｍｏｌ）を滴下添加した。得られる混合物を室温で終夜撹拌した後、混合物を真空中で濃縮した。残渣を、１０〜４０％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配で溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルおよび４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（１４０ｍｇ、収率７４％）を得た。
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ -0.05-0.01 (m, 9 H), 0.90 - 1.00 (m, 2
H), 1.18 - 1.27 (m, 6 H), 2.02 (br. s., 2 H), 2.13 (m, 2 H) 2.93 (br. s., 2 H),
3.65 - 3.78 (m, 2 H), 4.30 (d, J=7.22 Hz, 2 H), 4.46 - 4.58 (m, 1 H), 4.86 -
4.98 (m, 1 H),  5.16 (s, 2 H), 5.89 (s, 2 H), 7.09 - 7.18 (m, 1 H), 7.69
(s, 1 H), 7.88 - 7.96 (m, 2 H). LCMS (ES) 585.1 (M+1).
【０２５１】
Ｂ）４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルおよび４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルおよび４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（２２０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）をエタノール（３ｍＬ）に溶解させ、２Ｍ塩酸水溶液（３ｍＬ）を滴下添加した。得られる混合物を５０℃で４時間撹拌した後、室温に冷却し、濾過した。得られる白色の固体を酢酸エチルとヘプタン（１／１体積）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、表題化合物（８０ｍｇ、収率４７％）を得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化ジメチルスルホキシド) δ 1.16 (d, J=6.25 Hz, 6 H), 1.76 - 1.90
(m, 2 H), 1.98 (dd, J=14.45, 3.12 Hz, 2 H), 2.99 (br. s., 2 H), 4.04 (d,
J=15.81 Hz, 2 H), 4.59 - 4.71 (m, 1 H), 4.70 - 4.82 (m, 1 H), 5.27 (s, 2 H),
7.47 - 7.57 (m, 1 H), 7.80 - 7.83 (m, 1 H), 7.83 - 7.87 (m, 1 H), 7.90 (s, 1
H). LCMS (ES) 455.0 (M+1).
【０２５２】
（実施例２０）
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル、および
（実施例２１）
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２５３】
【化６９】
2012528847.tif 000075
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルおよび４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（７０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶かした室温の溶液に、水素化ナトリウム（１４ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を２回で加え、得られる混合物を５分間撹拌した。次いでヨードメタン（０．０３ｍＬ、０．４６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温でもう１６時間撹拌した。水を加えて反応を失活させ、混合物を酢酸エチルで希釈した。有機相を分離し、水相を酢酸エチルで２回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、酢酸エチルヘプタン溶液からなる勾配混合物（３０〜６０％の酢酸エチル）を溶離液とするフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（１０ｍｇ、収率１４％）および４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（３０ｍｇ、収率４２％）を得た。
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（実施例２０）。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.18 - 1.28 (m, 6 H), 1.95 - 2.06 (m, 2
H), 2.13 (m, 2 H), 2.85 - 3.02 (m, 2 H), 4.17 (s, 3 H), 4.36 (d, J=10.15 Hz, 2
H), 4.46 - 4.57 (m, 1 H) 4.92 (七重線, 1 H), 5.19 (s, 2
H), 7.17 - 7.24 (m, 1 H), 7.48 - 7.58 (m, 2 H), 7.70 (s, 1 H). LCMS (ES) 469.0
(M+1).
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（実施例２１）。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.24 (d, J=6.25 Hz, 6 H) 1.95 - 2.05 (m,
2 H) 2.13 (m, 2 H) 2.93 (t, J=12.59 Hz, 2 H) 4.31 (br. s., 2 H) 4.37 (s, 3 H)
4.51 (m, 1 H) 4.92 (m, 1 H) 5.16 (s, 2 H) 7.09 - 7.16 (m, 1 H) 7.69 (s, 1 H)
7.83 - 7.87 (m, 1 H) 7.87 - 7.90 (m, 1 H). LCMS (ES) 469.0 (M+1).
【０２５４】
（実施例２２）
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−（２−ヒドロキシエチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２５５】
【化７０】
2012528847.tif 000076
Ａ）４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−（５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例５）（７８ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）、２−フルオロ−４−（２−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール（調製例１９）（９０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（７７ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を５ｍＬの１，４−ジオキサンに溶かした撹拌した溶液に、アゾジカルボン酸ジエチル（０．０４６ｍＬ、０．２８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。得られる混合物を室温で１５時間撹拌した後、混合物を真空中で濃縮した。残渣を、５〜４０％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配で溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（１４０ｍｇ、収率８６％）を得た。
【０２５６】
Ｂ）４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−（２−ヒドロキシエチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（２−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（１４０ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）に溶解させ、４Ｍ塩酸１，４−ジオキサン溶液（１ｍＬ）を滴下添加した。得られる混合物を室温で２時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。残渣（１６０ｍｇ）を分け、約５０ｍｇの未精製物を逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物（３０ｍｇ、２６％）を得た（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８５％の水／１５％のアセトニトリルから８．５分で直線的に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分；検出：２１５ｎｍ）。LCMS (ES+): 499.5 (M+1).
【０２５７】
（実施例２３）
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２５８】
【化７１】
2012528847.tif 000077
Ａ）４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−（５−シアノ−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（４３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、２−フルオロ−４−（１−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール（調製例２０）（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（４３ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を３ｍＬの１，４−ジオキサンに溶かした撹拌した溶液に、アゾジカルボン酸ジエチル（０．０２５ｍＬ、０．１６ｍｍｏｌ）を滴下添加した。得られる混合物を室温で終夜撹拌した後、混合物を真空中で濃縮した。残渣を、３０〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配で溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（５０ｍｇ、収率５５％）を得た。
【０２５９】
Ｂ）４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−（５−シアノ−４−（（２−フルオロ−４−（１−（２−（トリメチルシリルオキシ）エチル）−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（５０ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）に溶解させ、４Ｍ塩酸１，４−ジオキサン溶液（１ｍＬ）を滴下添加した。得られる混合物を室温で２時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。残渣（６０ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物（２０ｍｇ、収率４９％）を得た（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８０％の水／２０％のアセトニトリルから８．５分で直線的に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分；検出：２１５ｎｍ）。
LCMS (ES+): 499.4
(M+1).
【０２６０】
（実施例２４）
４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０２６１】
【化７２】
2012528847.tif 000078
表題化合物は、２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール（調製例２１）を使用し、実施例１５に類似した手順に従って調製した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.58 - 0.67 (m, 2 H), 0.83 - 0.92 (m, 2
H), 1.57 (s, 3 H), 1.94 - 2.05 (m, 2 H), 2.05 - 2.21 (m, 2 H), 2.92 (t, J=12.98
Hz, 2 H), 4.17 (s, 3 H), 4.32 (br. s., 2 H), 4.43 - 4.56 (m, 1 H), 5.19 (s, 2
H), 7.17 - 7.24 (m, 1 H), 7.48 - 7.58 (m, 2 H), 7.70 (s, 1 H).１Ｈ  ＮＭＲでは、（４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピルに混入する４−ニトロフェニル炭酸イソプロピルからの）対応するイソプロピルカルバメート誘導体であると考えられるものの存在は１０％未満しか示されなかった。LCMS (ES) 481.6 (M+1).
【０２６２】
（実施例２５）
４−（５−シアノ−４−｛［４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０２６３】
【化７３】
2012528847.tif 000079
表題化合物は、４−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェノール（調製例２２）を使用し、実施例１５に類似した手順に従って調製した。
1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.60 - 0.67 (m, 2 H), 0.83 - 0.91 (m, 2 H), 1.58 (s, 3 H), 1.96 -
2.06 (m, 2 H), 2.06 - 2.21 (m, 2 H), 2.84 - 3.00 (m, 2 H), 4.16 (s, 3 H), 4.33
(br. s., 2 H), 4.45 - 4.57 (m, 1 H), 5.12 (s, 2 H), 7.10 - 7.15 (m, 2 H), 7.68
(s, 1 H), 7.69 - 7.74 (m, 2 H).１Ｈ  ＮＭＲでは、（４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピルに混入する４−ニトロフェニル炭酸イソプロピルからの）対応するイソプロピルカルバメート誘導体であると考えられるものの存在は１０％未満しか示されなかった。LCMS (ES) 463.5 (M+1).
【０２６４】
（実施例２６）
４−（４−（（４−カルバモイル−３−フルオロフェノキシ）メチル）−５−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０２６５】
【化７４】
2012528847.tif 000080
表題化合物は、２−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアミド（調製例２４）を使用し、実施例１３に類似した手順に従って調製した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.57 - 0.65 (m, 2 H), 0.82 - 0.89 (m, 2
H), 1.53 (s, 3 H), 1.92 - 2.04 (m, 2 H), 2.10 (qd, J=12.14, 4.20 Hz, 2 H), 2.90
(br. s., 2 H), 4.32 (br. s., 2 H), 4.49 (tt, J=11.25, 4.37 Hz, 1 H), 5.02 -
5.09 (m, 2 H), 6.00 (br. s., 1 H), 6.51 - 6.64 (m, 1 H), 6.69 (dd, J=13.66,
2.54 Hz, 1 H), 6.84 (dd, J=8.78, 2.54 Hz, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 8.07 (t, J=9.08
Hz, 1 H).１Ｈ  ＮＭＲでは、（４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピルに混入する４−ニトロフェニル炭酸イソプロピルからの）対応するイソプロピルカルバメート誘導体であると考えられるものの存在は１０％未満しか示されなかった。LCMS (ES) 442.4 (M+1).
【０２６６】
（実施例２７）
４−（５−シアノ−４−｛１−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノキシ］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２６７】
【化７５】
2012528847.tif 000081
表題化合物は、２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェノールと４−（５−シアノ−４−（１−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例２５）を使用し、実施例１５に類似した手順に従って調製した。サンプルを逆相ＨＰＬＣによって精製した（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８０％の水／２０％のアセトニトリルから８．５分で直線的に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分。LCMS ( ES+): 479.2 M+1）.
【０２６８】
（実施例２８）
４−（５−シアノ−４−｛１−［（２−メチルピリジン−３−イル）オキシ］エチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２６９】
【化７６】
2012528847.tif 000082
表題化合物は、２−メチルピリジン−３−オールと４−（５−シアノ−４−（１−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例２５）を使用し、実施例１５に類似した手順に従って調製した。サンプルを逆相ＨＰＬＣによって精製した（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８５％の水／１５％のアセトニトリルから８．５分で直線的に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分。LCMS (ES+): 398.2 M+1）.
【０２７０】
（実施例２９）
４−（５−シアノ−４−｛２−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］プロピル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２７１】
【化７７】
2012528847.tif 000083
Ａ）４−（５−シアノ−４−ビニル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
臭化（メチル）−トリフェニルホスホニウム（３２３ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に混ぜた−７８℃の撹拌した混合物に、ｎ−ブチルリチウム（０．３６０ｍＬ、０．８９ｍｍｏｌ、２．５Ｍヘキサン溶液）を滴下添加した。得られる黄色の混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、次いで４−（５−シアノ−４−ホルミル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（実施例９、ステップＡ）（１７１ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）溶液を加えた。冷浴を取り外し、反応混合物を室温で３．７５時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液で反応を失活させ、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。抽出物を合わせて水およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、酢酸エチルヘプタン溶液からなる勾配混合物（１０〜１００％）を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を透明な油状物（１１６ｍｇ、６８％）として得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ  0.88 (d, J=6.10 Hz, 6 H), 1.55 - 1.67
(m, 2 H), 1.68 - 1.84 (m, 2 H), 2.43 - 2.73 (m, 2 H), 3.95 (br. s., 2 H), 4.04
- 4.21 (m, 1 H) 4.44 - 4.67 (m, 1 H), 5.02 (d, J=11.22 Hz, 1 H), 5.43 (d,
J=17.81 Hz, 1 H), 6.20 (dd, J=17.81, 11.22 Hz, 1 H), 7.27 (s, 1 H).
【０２７２】
Ｂ）４−（５−シアノ−４−（２−（２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル）プロプ−１−エニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸（Ｅ，Ｚ）−イソプロピル
４−（５−シアノ−４−ビニル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（１１６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）および２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）−１−（プロプ−１−エン−２−イル）ベンゼン（調製例２９）（４３ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（２ｍＬ）に溶かした溶液に、第２世代Ｈｏｖｅｙｄａ−Ｇｒｕｂｂｓ触媒（Ａｌｄｒｉｃｈから市販されている）（１２．５ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を加えた。緑色の溶液を、ジクロロメタンを定期的に加えながら４０℃で７２時間加熱した。材料を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１０〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、生成物を不純な油状物（８ｍｇ、８％）として得た。この材料をそのまま使用した。LCMS (APCI): 473.2 (M - 1).
【０２７３】
Ｃ）４−（５−シアノ−４−｛２−［２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）フェニル］プロピル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−（５−シアノ−４−（２−（２−フルオロ−４−（メチルスルホニル）−フェニル）プロプ−１−エニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸（Ｅ，Ｚ）−イソプロピル（８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（３ｍＬ）溶液を、「水素最大量」の設定にしたＨ−Ｃｕｂｅ（商標）において、１０％パラジウム炭素カートリッジを使用し、１ｍＬ／分の流量で水素化した。材料を真空中で濃縮し、残渣（４ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８０％の水／２０％のアセトニトリルから８．５分で直線的に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）によって精製して、表題化合物（１．９ｍｇ、２３％）を得た。LCMS (ES+): 477.2 (M+1).
【０２７４】
（実施例３０）
４−（５−シアノ−４−｛［（２−メチルピリジン−３−イル）オキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０２７５】
【化７８】
2012528847.tif 000084
表題化合物は、２−メチルピリジン−３−オールを使用し、実施例１３に類似した手順に従って調製した。未精製材料を、酢酸エチルヘプタン溶液からなる勾配混合物（６０〜１００％の酢酸エチル）を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、７７ｍｇの表題化合物を白色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.60 - 0.66 (m, 2 H), 0.83 - 0.90 (m, 2
H), 1.55 (s, 3 H), 1.96 - 2.05 (m, 2 H), 2.05 - 2.20 (m, 2 H), 2.49 (s, 3 H),
2.84 - 2.98 (m, 2 H), 4.11 - 4.42 (m, 2 H), 4.46 - 4.55 (m, 1 H), 5.04 (s, 2
H), 7.06 - 7.16 (m, 2 H), 7.65 (s, 1 H), 8.12 (dd, J=4.49, 1.56 Hz, 1 H).
【０２７６】
（実施例３１）
４−｛５−シアノ−４−［（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０２７７】
【化７９】
2012528847.tif 000085
Ａ）４−（５−シアノ−４−（（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
４−（５−シアノ−４−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（調製例１６）（８７．８ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）、２，３，６−トリフルオロフェノール（５１．７ｍｇ、０．３４２ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（１４９ｍｇ、０．４５６ｍｍｏｌ）をマイクロ波対応バイアルに入れ、アセトニトリル（３ｍＬ）に溶解させた。バイアルをマイクロ波反応器において１１０℃で２０分間加熱した。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（５ｍＬ）に溶かし、ジクロロメタンで３回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。未精製材料を、０〜３０％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配で溶離するクロマトグラフィーによって精製して、３６．２ｍｇの４−（５−シアノ−４−（（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを透明な油状物として得た。
【０２７８】
Ｂ）４−｛５−シアノ−４−［（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
４−｛５−シアノ−４−［（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルは、市販の２，３，６−トリフルオロフェノールを使用し、実施例１３（ＢおよびＣ）に類似した手順に従って調製した。未精製材料（１７．１ｍｇ）を、エタノールヘプタン溶液の勾配で溶離するＳｅｐａｘ２−Ｅｔｈｙｌ  Ｐｙｒｉｄｉｎｅカラム２５０×２１．２ｍｍ、０．００５での分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。分析ＬＣＭＳ：保持時間１１．７６９分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ（２）Ｃ１８  １５０×３．０ｍｍ、５マイクロメートルカラム；１２．５分かけて９５％の水／メタノールから１００％のメタノールへの直線勾配；０．１％のギ酸改質剤；流量０．７５ｍＬ／分）。LCMS (ES+): 456.9 ( M + Na).1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.64 - 0.66 (m, 2 H), 0.88 - 0.91 (m, 2 H), 1.57 (s, 3 H), 2.00 (d,
J=10.49 Hz, 2 H), 2.07 - 2.18 (m, 2 H), 2.91 - 2.95 (m, 2 H), 4.18 (br. s., 1
H), 4.36 (br. s., 1 H), 4.50 (tt, J=11.34, 4.15 Hz, 1 H), 5.19 (s, 2 H), 6.83 -
6.90 (m, 2 H), 7.67 (s, 1 H).
【０２７９】
（実施例３２）
４−｛５−シアノ−４−［（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２８０】
【化８０】
2012528847.tif 000086
表題化合物は、市販の２，３，６−トリフルオロフェノールを使用し、実施例１１に類似した手順に従って調製した。未精製材料を、０〜２５％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配で溶離するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４−｛５−シアノ−４−［（２，３，６−トリフルオロフェノキシ）メチル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを透明な油状物として得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.26 (d, J=6.10 Hz, 6 H), 2.01 (d,
J=11.22 Hz, 2 H) 2.13 (qd, J=12.28, 4.64 Hz, 2 H), 2.88 - 3.01 (m, 2 H), 4.32
(br. s., 2 H) 4.51 (tt, J=11.34, 4.15 Hz, 1 H), 4.90 - 4.98 (m,1 H), 5.18 (s, 2
H), 6.82 - 6.92 (m, 2 H), 7.67 (s, 1 H); LCMS (ES+): 423.4 ( M + H).
【０２８１】
（実施例３３）
４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２８２】
【化８１】
2012528847.tif 000087
表題化合物は、２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）フェノール（調製例２８）と４−（５−シアノ−４−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例１０）から、実施例１１に類似した手順に従って調製した。未精製材料を、エタノールヘプタン溶液の勾配で溶離するＳｅｐａｘ  Ｓｉｌｉｃａ２５０×２１．２ｍｍ、０．００５ｍｍでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。分析ＬＣＭＳ：保持時間８．５９８分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ（２）Ｃ１８  １５０×３．０ｍｍ、５マイクロメートルカラム；１２．５分かけて９５％の水／メタノールから１００％のメタノールへの直線勾配；０．１％のギ酸改質剤；流量０．７５ｍＬ／分）。LCMS (ES +): 467.0 (M + H). 1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.27 (d, J=6.10 Hz, 6 H), 1.97 - 2.09
(m, 2 H), 2.16 (m, 2 H), 2.93 - 2.98 (m, 2 H), 3.76 (s, 3 H) 4.25 - 4.43 (m,
2H), 4.50 - 4.57 (m, 1 H), 4.91-4.99 (m, 1 H), 5.17 (s, 2 H), 6.97 (s, 1 H),
7.11 (s, 1 H), 7.12 - 7.15 (m, 1 H), 7.42 (dd, J=11.71, 1.95 Hz, 1 H), 7.38 -
7.44 (m, 1 H), 7.72 (s, 1 H).
【０２８３】
（実施例３４）
４−（５−シアノ−４−｛［２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）フェノキシ］メチル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２８４】
【化８２】
2012528847.tif 000088
表題化合物は、２−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）フェノール（調製例２７）と４−（５−シアノ−４−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例１０）から、実施例１１に類似した手順に従って調製した。未精製材料を、エタノールヘプタン溶液の勾配で溶離するＳｅｐａｘ  Ｓｉｌｉｃａ２５０×２１．２ｍｍ、０．００５での分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。分析ＬＣＭＳ：保持時間８．７９７分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ（２）Ｃ１８  １５０×３．０ｍｍ、５マイクロメートルカラム；１２．５分かけて９５％の水／メタノールから１００％のメタノールへの直線勾配；０．１％のギ酸改質剤；流量０．７５ｍＬ／分）。LCMS (ES +): 467.0 (M + H). 1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.27 (d, J=6.34 Hz, 6 H), 2.03 (d,
J=11.22 Hz, 2 H), 2.11 - 2.20 (m, 2 H), 2.95 (br. s., 2 H), 3.66 (s, 3 H), 4.34
(br. s., 2 H), 4.50 - 4.57 (m,1 H), 4.94 (dt, J=12.44, 6.22 Hz, 1 H), 5.15 (s,
2 H), 7.07 (s, 1 H), 7.10 - 7.17 (m, 3 H), 7.51 (s, 1 H), 7.71 (s, 1 H).
【０２８５】
（実施例３５）
４−［５−シアノ−４−（｛［２−メチル−６−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−３−イル］オキシ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２８６】
【化８３】
2012528847.tif 000089
表題化合物は、２−メチル−６−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−３−オールを使用し、実施例１２に類似した手順に従って調製した。サンプルを逆相ＨＰＬＣによって精製した（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８０％の水／２０％のアセトニトリルから８．０分で直線的に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで９．５分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）。LCMS (MS ES+:451.1).
【０２８７】
（実施例３６）
４−［５−シアノ−４−（｛［２−メチル−６−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−３−イル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２８８】
【化８４】
2012528847.tif 000090
４−（５−シアノ−４−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（調製例１０）（４４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を０．７５ｍＬのテトラヒドロフランに溶かした撹拌した溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０４２ｍＬ、０．２４ｍｍｏｌ）に続いて２−メチル−６−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−３−アミン（２１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６０℃で１６時間加熱した後、それを室温に冷却し、水とブラインで希釈した。次いで混合物を１５ｍＬの酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して、５２ｍｇの黄色の泡沫を得た。サンプルを逆相ＨＰＬＣによって精製した（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  １９×１００、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０５％のトリフルオロ酢酸水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０５％のトリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液（ｖ／ｖ））；勾配：９０％の水／１０％のアセトニトリルから８．５分で直線的に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分。LCMS (MS ES+: 450.1).
【０２８９】
（実施例３７）
４−［５−シアノ−４−（｛［２−メチル−６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０２９０】
【化８５】
2012528847.tif 000091
表題化合物は、２−メチル−６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−アミンを使用し、実施例３６に類似した手順に従って調製した。サンプルを逆相ＨＰＬＣによって精製した（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８５％の水／１５％のアセトニトリルから８．５分で直線的に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）。LCMS (ES+): 461.0 (M+1).
【０２９１】
本出願では終始、様々な刊行物を参照文献として引用している。それらの刊行物の開示は、その全体が、あらゆる目的で参照により本出願に援用される。
【０２９２】
本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本発明に様々な変更および変化を添えてよいことは、当業者に明白となろう。本発明の他の実施形態は、本明細書を検討し、本明細書で開示する本発明を実践する中で、当業者に明らかとなろう。本明細書および実施例は、例示的なものにすぎないとみなし、本発明の真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲によって示すものとする。
【図１】
2012528847.tif 000099
【図２】
2012528847.tif 000100
【国際調査報告】
2012528847.tif 000101
2012528847.tif 000102
2012528847.tif 000103