【手続補正書】
【提出日】平成21年5月11日(2009.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
あわび多糖類の抽出方法であって、
あわび腹足及びあわびの臓器のいずれか又は両方を組織破砕機で破砕して、ホモジネートする、或いは殻が除かれたあわび本体またはあわび腹足とあわびの臓器を乾燥して100目以下の干し粉に粉砕する原料処理ステップと、
水漬抽出法、アルカリ液抽出法、超音波抽出法及び酵素抽出法のうちの一つまたは複数を利用して、前記原料処理ステップで処理された原料から成分抽出を行う抽出ステップと、
抽出した上清液を糖含有量が1.5〜3.0％となるように濃縮する濃縮ステップと、
得られた濃縮液に、体積で前記濃縮液の3〜4倍の95％アルコールを加え、0〜4℃で12〜16時間放置し、遠心分離により沈澱となるあわび多糖類を得るアルコール沈殿ステップと、
アルコール沈殿により得た前記あわび多糖類を乾燥して生成品を得る乾燥ステップと、
前記生成品をさらに精製して純化するステップと、
を含むあわび多糖類の抽出方法。
【請求項２】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に前記あわび原料量の10〜50倍の水を加えた後、
（ａ）  均一化するように液を攪拌して混合する工程、
（ｂ）  前記混合液を20〜60℃で1〜6時間漬けて成分抽出を行う工程、
（ｃ）  成分抽出を行った液から遠心分離により上清液と沈澱とを得る工程、及び
（ｄ）  得られた沈澱に10〜30倍の水を加える工程、
を含む前記（ａ）〜（ｄ）の工程を１回又は２回行い、
得られた上清液を混合することを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項３】
前記抽出ステップは、前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に前記あわび原料量の10〜50倍の水を加えた後、
（ａ）  均一化するように液を攪拌して混合させる工程、
（ｂ）  前記混合液を20〜30kHzの超音波で10〜60分間処理を行う工程、
（ｃ）  超音波処理を行った液から遠心分離により上清液と沈澱とを得る工程、
（ｄ）  得られた沈澱に10〜30倍の水を加える工程、
を含む前記（ａ）〜（ｄ）の工程を１回又は２回行い、
得られた上清液を混合することを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項４】
前記抽出ステップは、前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に前記あわび原料量の10〜50倍の水を加えた後、
（ａ）  均一化するように液を攪拌して混合する工程、
（ｂ）  NaOHまたはKOHを用いて、前記混合液のpH値が8〜9となるように調整し、20〜60℃で1〜6時間漬けて成分抽出を行う工程、
（ｃ）  前記工程で成分抽出を行った液から遠心分離により上清液と沈澱とを得る工程、
（ｄ）  得られた沈澱に10〜30倍の水を加える工程、
を含む前記（ａ）〜（ｄ）の工程を１回又は２回行い、
得られた上清液を混合し、
HClを用いて中和することを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項５】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に前記あわび原料量の10〜50倍の水を加え均一化するように攪拌して混合し、
HClを用いて混合液のpH値が2〜5となるように調整し、
溶液重量の0.05〜3.00％のペプシンを加えて均一化するように、20〜60℃で1〜6時間の攪拌し混合する処理を行い、
90〜98℃まで昇温し、
酵素を失活させたのち、
20〜30℃まで冷却し、
遠心分離により上清液と沈澱とを得て、
NaOHまたはKOHを用いて前記上清液のpH値が中性となるように調整することを特徴とする請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項６】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に前記あわび原料量の10〜50倍の水を加え均一化するように攪拌して混合し、
NaOHまたはKOHを用いて前記混合液のpH値が8〜9となるように調整し、
溶液重量の0.05〜3.00％のトリプシン、パパインまたは中性プロテアーゼを加え、均一化するように攪拌して混合し、20〜60℃で1〜6時間の処理を行い、
90〜98℃まで昇温し
酵素を失活させたのち、
20〜30℃まで冷却し、
遠心分離により上清液と沈澱とを得て、
酸を用いて上清液のpH値が中性となるように調整することを特徴とする請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項７】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に前記あわび原料量の10〜50倍の水を加え均一化するように攪拌して混合し、
NaOHまたはKOHを用いて、前記混合液のpH値を8〜9に調整し、
比率が1：0.01〜1.0で溶液重量の0.05〜3.00％のパパインとトリプシンとを加え、均一化するように攪拌して、20〜60℃で1〜6時間の処理を行い、
90〜100℃まで昇温し、
酵素を失活させたのち、
20〜30℃まで冷却し、
遠心分離により上清液と沈澱とを得て、
HClを用いて上清液のpH値が中性となるように中和することを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項８】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に前記あわび原料量の10〜50倍の水を加え、HClを用いてpH値が1〜5となるように調整し、
溶液重量の0.05〜3.00％のペプシンを加えたのち、
20〜60℃の水浴において、pH値を前記範囲内に保持しながら、1〜6時間攪拌して酵素分解を行い、
さらにNaOHまたはKOHを用いて前記酵素分解を行った液のpH値を7〜9に調整し、
溶液重量の0.05〜3.00％のトリプシンを加え、20〜60℃の水浴において、pH値を7〜9に保持しながら、1〜6時間攪拌して酵素分解を行ったのち、
中和し、
2〜5分間で90〜100℃まで昇温し、
酵素を失活させ、
5分間以内に室温まで冷却し、
遠心分離により沈澱と上清液とを得ることを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項９】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に前記あわび原料量の10〜50倍の水を加え、
NaOHまたはKOHを用いてpH値を7〜9に調整し、
パパインと中性プロテアーゼとトリプシンを加え、三種類酵素の総添加量は溶液重量の0.05〜3.00％とし、
前記パパイン：前記中性プロテアーゼ：前記トリプシンの比率を1：0.01〜1：0.01〜1とし、20〜60℃で1〜6時間維持して酵素を分解したのち、
中和し、
2〜5分間で90〜98℃まで昇温し
酵素を失活させ、
5分以内に室温まで冷却し、
遠心分離により沈澱と上清液とを得ることを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項１０】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび原料の漿液に紫外線を10〜30分間照射し、
濃度0.06〜0.08mol/LのNaClを用いて前記紫外線を照射した液のpH値を7〜7.5にし、
温度30〜50℃で前記漿液に含まれる酵素により自己融解を行い、
6mol/LのHClを用いて前記自己融解を行った液のpH値を1〜5に調整し、
溶液重量の0.05〜3.00％のペプシンを加え、20〜60℃で1〜6時間酵素分解を行ったのち、
中和し、
2〜5分間で90〜98℃まで昇温し
酵素を失活させ、
5分間以内に室温まで冷却し、
遠心分離することにより沈澱と上清液とを得ることを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項１１】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび臓器の漿液を無菌酵素分解缶に入れ、pH6〜7.5、常温で6〜8時間自己融解を行い、
HClを用いて前記自己融解を行った液のpH値を1〜5に調整し、
溶液重量の0.05〜3.00％のペプシンを加え、20〜60℃で1〜6時間酵素を分解し、
中和し、
2〜5分間で90〜98℃まで昇温し、
酵素を失活させたのち、
5分間以内に室温まで冷却し、
遠心分離することにより沈澱と上清液とを得ることを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項１２】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび臓器の漿液を無菌酵素分解缶に入れ、pH6〜7.5、0〜4℃で24〜48時間自己融解を行い、
HClを用いて前記自己融解を行った液のpH値を1〜5に調整し、
溶液重量の0.05〜3.00％のペプシンを加え、20〜60℃で1〜6時間酵素分解を行い、
中和し、
2〜5分間で90〜98℃まで昇温し
酵素を失活させたのち、
5分以内に室温まで冷却し、
遠心分離することにより沈澱と上清液とを得ることを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項１３】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に前記あわび原料量の10〜50倍の水を加え、20〜80℃で3〜6時間漬けて成分抽出を行い、
HClを用いて抽出液のpH値を1〜5に調整し、
溶液重量の0.05〜3.00％のペプシンを加え、20〜60℃で1〜6時間酵素分解を行い、pH値を1〜5に維持しつつ加水分解し、
さらにNaOHまたはKOH液を用いて加水分解した液のpH値が7〜9となるように調整し、
溶液重量の0.05〜3.00％のトリプシンを加え、
20〜60℃で1〜6時間酵素分解を行い、
pH値を７〜９に維持しつつ加水分解し、酵素分解を行ったのち、
酸を用いて中和し、
2〜5分間で90〜98℃まで昇温させ、
酵素を失活させたのち、
5分以内に室温まで冷却し、
遠心分離より沈澱と上清液とを得ることを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項１４】
前記抽出ステップは、
前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に前記あわび原料量の10〜50倍の水を加え、20〜80℃で3〜6時間漬けて成分抽出を行い、
NaOHまたはKOH液を用いて抽出液のpH値を7〜9に調整し、
溶液重量の0.05〜3.00％の、パパインと中性プロテアーゼとトリプシンのうちのいずれかの二種類を加え、
20〜60℃の水浴において1〜6時間攪拌して酵素分解を行い、pH値を7〜9に維持しつつ加水分解し、酵素分解を行ったのち、
酸を用いて中和し、
2〜5分間で90〜98℃まで昇温し、
酵素を失活させたのち、
5分以内に室温まで冷却し、
遠心分離により沈澱と上清液とを得ることを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項１５】
前記抽出ステップは、前記原料処理ステップにより得られたあわび原料に
前記あわび原料量の10〜50倍の水を加え、
（ａ）  前記水を加えた液に20〜30kHzの超音波で10〜60分間の処理を行い、
（ｂ）遠心分離により上清液と沈澱とを得て、
（ｃ）さらに前記沈澱に15〜25倍の水を加え、
（ｄ）NaOHまたはKOHを用いて前記工程で水を加えた液のpH値を7〜9に調整し、
（ｅ）パパインと中性プロテアーゼとトリプシン、またはそのうちのいずれかの二種類を加え、添加量は溶液重量の0.05〜3.00％とし、20〜60℃で1〜6時間酵素分解を行ったのち、
（ｆ）酸を用いて中和し、
（ｇ）2〜5分間で90〜98℃まで昇温し、
（ｈ）酵素を失活させたのち、
（ｉ）5分以内に室温まで冷却し、
（ｊ）遠心分離により沈澱と上清液とを得て、
（ｋ）得られた沈殿に水を加え
上記（ａ）〜（ｋ）までの工程を１回又は2回行い、
遠心分離により上清液を得ることを特徴とする
請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項１６】
前記抽出ステップにおいて、
遠心分離により得られる沈澱に10〜40倍の水を加える工程を1又は2回行って成分抽出を行い、遠心分離により得られるすべての上清液を混合することを特徴とする
請求項5〜14のいずれか一項に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項１７】
前記乾燥ステップは、
前記アルコール沈殿ステップにより得られるあわび多糖類を50〜60℃で真空乾燥することを特徴とする請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。
【請求項１８】
前記乾燥ステップは、
前記アルコール沈殿ステップにより得られるあわび多糖類を精製し、噴霧による乾燥を行うことを特徴とする請求項１に記載のあわび多糖類抽出方法。