(57)【要約】式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体が記述される。これらの化合物は、薬学的組成物に含めることができ、転移性癌などの癌の治療に、さらに抗接着剤として、使用することができる。本発明の別の一態様は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、治療有効量の組成物を投与することを含む、被験体における癌を治療又は癌の発生を予防する方法を提供する。本発明のこの態様の実施形態は、接着依存性癌及び転移性癌の治療に使用することができる。2012524070.tif 000034
2012524070.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩であって、
【化２９】
2012524070.tif 000031
式中、Ｒは、水素及びメチルから独立に選択され、Ｒ１は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基、ノナニル基、ノナ−８−エニルニトリル基及びノナニルニトリル基からなる群から選択され、ｎは１から７の整数である、化合物。
【請求項２】
Ｒ１が、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル、ノナ−１−エニル及びノナ−８−エニルニトリルからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｎが１又は２である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が４，８−ジメチル−ノニル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がノナ−１−エニル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１がノナニル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１がノナ−８−エニルニトリル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１がノナニルニトリル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
ｎが１であり、Ｒ１が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル又は４，８−ジメチル−ノニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
被験体における癌を治療又は癌の発生を予防する方法であって、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、治療有効量の薬学的組成物を投与することを含み、
【化３０】
2012524070.tif 000032
式中、Ｒは、水素及びメチルから独立に選択され、Ｒ１は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基、ノナニル基、ノナ−８−エニルニトリル基及びノナニルニトリル基からなる群から選択され、ｎは１から７の整数である、方法。
【請求項１２】
前記癌が接着依存性癌である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記癌が転移性癌である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
式（Ｉ）の前記化合物が請求項２から１０のいずれか一項によって定義される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、治療有効量の薬学的組成物を投与することによって細胞接着を阻害することを必要とする被験体における細胞接着を阻害する方法であって、
【化３１】
2012524070.tif 000033
式中、Ｒは、水素及びメチルから独立に選択され、Ｒ１は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基、ノナニル基、ノナ−８−エニルニトリル基及びノナニルニトリル基からなる群から選択され、ｎは１から７の整数である、方法。
【請求項１６】
式（Ｉ）の前記化合物が請求項２から１０のいずれか一項によって定義される、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
継続出願
本出願は、２００９年４月１７日に出願された米国仮特許出願第６１／１７０，３１６号の利益を主張し、この出願は本明細書において参照として援用される。
【０００２】
政府の財政的支援
本発明は、ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  （ＮＣＩ）により授与された助成金番号ＣＡ１２２５０の下の政府の援助によりなされた。政府は本発明における一定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
背景
癌の治療及び予防における（ビタミンＥコハク酸エステルＶＥＳとしても知られる）コハク酸αトコフェロールの治療学的可能性は、多数の最近の研究の焦点になっている。非特許文献１及び非特許文献２を参照されたい。注目すべきことに、ＶＥＳは、正常細胞に重大な毒性を招くことなく、腫よう細胞増殖をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで抑制する。ますます増加する多数の証拠によれば、ＶＥＳは、癌細胞増殖、アポトーシス、分化、血管新生及び転移を支配する複数のシグナル伝達経路を混乱させることによってその抗腫よう効果を実現している。この広範な作用は、低毒性と併せて、癌の治療又は予防におけるＶＥＳの技術移転的（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ）可能性の基礎をなす。文献で報告された種々の標的機序のうち、癌細胞接着に対するＶＥＳの阻害効果は特に注目される。非特許文献３。これは、代謝安定性の高いＶＥＳ誘導体であるαトコフェリルオキシ酢酸が動物モデルにおいて乳腺腫増殖を抑制し、肺転移を抑制する能力によって明らかである。非特許文献４。
【０００４】
かなりの証拠によれば、細胞接着は、生存、浸潤、転移及び薬剤耐性を含めて、癌細胞の様々な態様の悪性形質の発達に極めて重要である。その結果、接着又はその関連経路のターゲティングは、多数の固形及び血液学的悪性腫ようの臨床成績を改善する治療関連戦略である。異なる接着分子に対する多数のヒト化抗体がヒトにおける試験に入っているが、小分子の細胞接着を標的とした薬剤はほとんど存在しない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｎｅｕｚｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ７１，１１８５−９９（２００７）
【非特許文献２】Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｎｕｔｒ  Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓ５０，６７５−８５（２００６）
【非特許文献３】Ｃｒｉｓｐｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｓｔａｔｅ６７，５８２−９０（２００７）
【非特許文献４】Ｈａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６６，９３７４−８（２００６）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の一態様は、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００７】
【化１】
2012524070.tif 000003
式中、Ｒは、水素及びメチルから独立に選択され、Ｒ１は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基、ノナニル基、ノナ−８−エニルニトリル基及びノナニルニトリル基からなる群から選択され、ｎは１から７の整数である。
【０００８】
本発明の別の一態様は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、治療有効量の組成物を投与することを含む、被験体における癌を治療又は癌の発生を予防する方法を提供する。式（Ｉ）の置換基は上述のように定義される。本発明のこの態様の実施形態は、接着依存性癌（ａｄｈｅｓｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃａｎｃｅｒ）及び転移性癌の治療に使用することができる。
【０００９】
本発明の別の一態様は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、治療有効量の薬学的組成物を投与することによって、細胞接着を阻害することを必要とする被験体における細胞接着を阻害する方法を提供する。式（Ｉ）の置換基は上述のように定義される。
【００１０】
本発明の組成物又は方法の実施形態は、上記化合物の種々のサブセットを含むことができる。例えば、一実施形態においては、Ｒ１は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル、ノナ−１−エニル及びノナ−８−エニルニトリルからなる群から選択される。別の一実施形態においては、ｎは１又は２である。更なる実施形態においては、ｎは１であり、Ｒ１は４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル又は４，８−ジメチル−ノニルである。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１（Ａ）は、抗接着剤を開発するためのＶＥＳの構造最適化過程の略図であり、図１（Ｂ）は、ＶＥＳ誘導体の一般的合成手順の略図である。
【図２】図２は、ＶＥＳ誘導体による４Ｔ１細胞接着の抑制を示す。セクション（Ａ）は、Ｍａｔｒｉｇｅｌ被覆表面への４Ｔ１細胞の接着に対する、各々５μＭのＶＥＳ及び種々のＶＥＳ誘導体の効果を示す。柱、平均；棒、ＳＤ（ｎ＝３）。セクション（Ｂ）は、４Ｔ１細胞接着の抑制に対するＶＥＳ、ＴＳ１及び化合物１〜３の用量依存的効果を示す。点、平均；棒、ＳＤ（ｎ＝３）。セクション（Ｃ）は、４Ｔ１細胞の生存度に対するＴＳ−１及び化合物１〜３の用量依存的阻害効果を示す。４Ｔ１細胞は、２％ＦＢＳ補充ＲＰＭＩ１６４０培地中で個々の薬剤で２４時間処理され、薬物処理後の細胞生存率はＭＴＴアッセイによって決定された。点、平均；棒、ＳＤ（ｎ＝６）。
【図３】図３は、ＶＥＳ誘導体が、４Ｔ１細胞の遊走及びアクチン細胞骨格構造を破壊することを示す。セクション（Ａ）は、４Ｔ１細胞遊走に対する５０μＭのＶＥＳと各々５μＭのＴＳ−１及び化合物１〜３の効果を示す。細胞運動性は、実験の項に記載のＴｒａｎｓｗｅｌｌ遊走アッセイによって分析された。柱、平均；棒、ＳＤ（ｎ＝３）。セクション（Ｂ）は、４時間処理後の４Ｔ１細胞における膜状仮足形成及びアクチン張線維に対する化合物２及び３の効果の免疫細胞化学的分析を示す。矢印は膜状仮足形成を示す。セクション（Ｃ）は、５μＭ化合物２によるアクチン細胞骨格構造の破壊の積層３Ｄ分析を示す。画像は、張線維を失った細胞が丸くなり、表面から分離した（右パネル）のに対して、対照細胞のアクチンフィラメント（左パネル）はそのままであり、細胞体の縁まで延びており、細胞が表面に接着したことを示す。
【図４】図４は、細胞接着の中心成分である局所接着キナーゼ（ＦＡＫ）の発現に対するＶＥＳとＴＳ−１及び化合物１〜３の効果を示す。セクション（Ａ）は、指定濃度の個々の薬剤で１時間処理した４Ｔ１細胞を示す。細胞溶解物は、抗ＦＡＫモノクローナル抗体を用いて免疫ブロットされた。セクション（Ｂ）は、２．５μＭ化合物２又はＤＭＳＯで１時間処理され、固定され、抗ＦＡＫ抗体で免疫染色された、４Ｔ１細胞を示す。細胞周辺における接着接触を表すＦＡＫの明確な点状染色パターンが、ビヒクルで処理された４Ｔ１細胞では明らかであるが、化合物２で処理後はもはや検出不可能であった。
【図５】図５は、ノナ−１−エニル基及びノナニル基を含むビタミンＥコハク酸エステル誘導体の合成の反応スキームである。
【図６】図６は、ノナ−８−エニルニトリル基及びノナニルニトリル基を含むビタミンＥコハク酸エステル誘導体の合成の反応スキームである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、足場としての（ビタミンＥコハク酸エステルとしても知られる）コハク酸αトコフェロールの使用に基づいて発生する強力な小分子抗接着剤を提供する。これらの抗接着剤の一つ（化合物２）は、４Ｔ１転移性乳癌細胞の接着の阻止においてＶＥＳよりも一桁高い効力を示す（ＩＣ５０、０．６ｕＭ対１０ｕＭ）。証拠によれば、細胞接着及び遊走を阻止するビタミンＥコハク酸エステル誘導体の能力は、局所接着キナーゼの破壊に対するその効果に起因し得る。治療学的観点からは、細胞接着の阻害におけるビタミンＥコハク酸エステル誘導体の高い効力及び独特の機序は、癌、特に転移性癌の治療に対して技術移転的価値を有し得る。
【００１３】
定義
本明細書に記載の用語は、単に実施形態を記述するためのものにすぎず、本発明を全体として限定するものと解釈すべきではない。別段の記載がない限り、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」及び「少なくとも１」は、区別なく使用される。さらに、本発明及び添付の特許請求の範囲の記述で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、その前後の文脈によって否定されない限り、その複数形を含む。
【００１４】
「含む」という用語及びその変形は、この用語が本文及び特許請求の範囲に出現する場合、限定的意味を持たない。
【００１５】
本明細書では「有機基」という用語は、脂肪族基、環式基、又は脂肪族基と環式基の組合せ（例えば、アルカリール及びアラルキル基）として分類される炭化水素基を意味するのに本発明では使用される。本発明の状況において、ビタミンＥコハク酸エステル誘導体に適切な有機基は、ビタミンＥコハク酸エステル誘導体の抗接着活性を妨げないものである。本発明の状況において「脂肪族基」という用語は、飽和又は不飽和の線状又は分枝炭化水素基を意味する。この用語は、例えば、アルキル、アルケニル及びアルキニル基を包含するのに使用される。
【００１６】
本明細書では「アルキル」、「アルケニル」及び接頭辞「アルク（ａｌｋ−）」という用語は、直鎖基及び分枝鎖基及び環式基、例えば、シクロアルキル及びシクロアルケニルを含む。別段の記載がない限り、これらの基は、１から２０個の炭素原子を含み、アルケニル基は２から２０個の炭素原子を含む。一部の実施形態においては、これらの基は、合計で最高１０個の炭素原子、最高８個の炭素原子、最高６個の炭素原子、又は最高４個の炭素原子を有する。低級アルキル基は、最高６個の炭素原子を含むものである。アルキル基の例としては、ハロアルキル基及びヒドロキシアルキル基が挙げられる。環式基は、単環式でも多環式でもよく、好ましくは３から１０個の環炭素原子を有する。
【００１７】
本明細書では「切断型側鎖」という用語は、１個以上のイソプラニル（ｉｓｏｐｒａｎｙｌ）単位の除去によって短縮されたコハク酸トコフェロール誘導体のフィチル側鎖を指す。かかる切断型側鎖は、１から１１個の炭素原子を含むアルキル基である。切断型側鎖の例としては、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基及びノナニル基が挙げられる。
【００１８】
別段の記載がない限り、「アルキレン」及び「アルケニレン」は、上で定義された「アルキル」及び「アルケニル」基の二価の形である。「アルキレニル」及び「アルケニレニル」という用語は、それぞれ「アルキレン」及び「アルケニレン」が置換されたときに使用される。例えば、アリールアルキレニル基は、アリール基が付加したアルキレン部分を含む。
【００１９】
「ハロアルキル」という用語は、全フッ素置換基を含めて、１個以上のハロゲン原子で置換された基を含む。これは、接頭辞「ハロ−」を含む別の基にも当てはまる。適切なハロアルキル基の例は、クロロメチル、トリフルオロメチルなどである。ハロ部分は、塩素、臭素、フッ素又はヨウ素とすることができる。
【００２０】
本明細書では「アリール」という用語は、炭素環式芳香環又は環系を含む。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、ビフェニル、アントラセニル、フェナントラセニル、フルオレニル及びインデニルが挙げられる。アリール基は、置換されていても、いなくてもよい。
【００２１】
別段の記載がない限り「ヘテロ原子」という用語は、原子Ｏ、Ｓ又はＮを指す。
【００２２】
本明細書に記載の任意の式又はスキームにおいて基が１回を超えて存在するときには、各基（又は置換基）は、明示してもしなくても、独立に選択される。例えば、式−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２の場合、各Ｒ基は独立に選択される。
【００２３】
本願を通して使用されるある用語の考察及び列挙を単純化する手段として、「基」と「部分」という用語を使用して、置換可能な、又は置換され得る化学種と、そのような置換が不可能な、又はそのように置換することができない化学種とを区別する。すなわち、「基」という用語を使用して化学置換基を記述するときには、記述された化学材料は、非置換基、及び例えば鎖中に、非過酸化物のＯ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＦ原子を有する基、並びにカルボニル基又は別の従来の置換基を含む。「部分」という用語を使用して化学物質又は置換基を記述する場合、非置換化学材料のみが含まれるものとする。例えば、「アルキル基」という句は、メチル、エチル、プロピル、ｔｅｒｔ−ブチルなどの純粋な開鎖飽和炭化水素アルキル置換基だけでなく、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルスルホニル、ハロゲン原子、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシルなどの当分野で公知の更なる置換基を有するアルキル置換基も含むものとする。したがって、「アルキル基」は、エーテル基、ハロアルキル、ニトロアルキル、カルボキシアルキル、ヒドロキシアルキル、スルホアルキルなどを含む。一方、「アルキル部分」という句は、メチル、エチル、プロピル、ｔｅｒｔ−ブチルなどの純粋な開鎖飽和炭化水素アルキル置換基のみを含むことに限定される。
【００２４】
本発明は、異性体（例えば、ジアステレオマー及び鏡像異性体）、互変異性体、塩、溶媒和化合物、多形体、プロドラッグなどを含めて、その薬学的に許容される形態のいずれかの（中間体を含めた）本明細書に記載の化合物を含む。特に、化合物が光学活性である場合、本発明は、とりわけ、化合物の鏡像異性体の各々、及び鏡像異性体のラセミ混合物を含む。「化合物」という用語は、（時々「塩」は明示されるが）明示してもしなくても、任意又はすべてのかかる形態を含むことを理解すべきである。
【００２５】
本明細書では転移性癌は、一器官又は部分から別の非隣接器官又は部分に転移する能力を有する癌である。腫よう細胞が転移するときには、新しい腫ようは二次性腫よう又は転移性腫ようと呼ばれ、その細胞は最初の腫ようの細胞に似ている。これは、例えば、乳癌が肺に転移する場合、二次性腫ようが、異常肺細胞ではなく、異常乳腺細胞でできており、肺癌ではなく転移性乳癌と呼ばれることを意味する。原発腫ようは、検出される必要はないが、「ごく微量」であり得る。
【００２６】
本明細書では「薬学的に許容される」とは、化合物又は組成物が、疾患の重症度と治療の必要性の観点から過度に有害な副作用なしに、被験体に投与されて本明細書に記載の治療を果たすのに適切であることを意味する。
【００２７】
本明細書では「阻害する」とは、潜在的効果の部分的又は完全な除去を指し、阻害剤は、阻害能力を有する化合物である。
【００２８】
ビタミンＥコハク酸エステル誘導体
本発明のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、式（Ｉ）の化合物を含む。
【００２９】
【化２】
2012524070.tif 000004
式中、Ｒは、水素及びメチルから独立に選択され、Ｒ１は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基、ノナニル基、ノナ−８−エニルニトリル基及びノナニルニトリル基からなる群から選択され、ｎは１から７の整数である。追加の実施形態においては、ｎは１、１若しくは２、又は１〜３、１〜４、１〜５若しくは１〜６の範囲の整数とすることができる。
【００３０】
本発明のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、立体化学に関係なく本明細書に示され、命名されている。しかし、本明細書に記載の化合物は、不斉中心を有する。別段の記載がない限り、すべての鏡像異性、ジアステレオマー及びラセミ体が本発明に含まれる。非対称的に置換された炭素原子を含む本発明の化合物は、光学活性又はラセミ体として単離できることが理解されるであろう。ラセミ体の分割によって、合成によってなど、光学活性な出発材料から光学活性体を調製する方法は当分野で周知である。特定の立体化学又は異性体を明示しない限り、ある構造のすべての鏡像異性、ジアステレオマー、ラセミ体及びすべての幾何異性体が意図される。
【００３１】
ビタミンＥは［（２Ｒ）−２，５，７，８−テトラメチル−２−［（４Ｒ，８Ｒ）−４，８，１２−トリメチルトリデシル］クロマン−６−イル］アセタート、すなわち、示した化合物の２Ｒ異性体であり、２Ｒ異性体は本発明の一部の実施形態において好ましい場合があることが理解される。したがって、本発明のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、式（ＩＩ）の化合物も含む。
【００３２】
【化３】
2012524070.tif 000005
式中、種々の置換基は、式（Ｉ）と同様に定義される。
【００３３】
一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒが水素であり、Ｒ１が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニルであるように定義される。これらの化合物は、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸、３−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、４−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒが水素であり、Ｒ１が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニルである化合物を以下に示す。
【００３４】
【化４】
2012524070.tif 000006
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒが水素であり、Ｒ１が４，８−ジメチル−ノニルであるように定義される。これらの化合物は、［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸、３−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、４−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒが水素であり、Ｒ１が４，８−ジメチル−ノニルである化合物を以下に示す。
【００３５】
【化５】
2012524070.tif 000007
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒが水素であり、Ｒ１がノナ−１−エニルであるように定義される。これらの化合物は、（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−酢酸、３−（２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピオン酸、４−（２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−（２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−（２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−（２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−［２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒが水素であり、Ｒ１がノナ−１−エニルである化合物を以下に示す。
【００３６】
【化６】
2012524070.tif 000008
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒが水素であり、Ｒ１がノナニルであるように定義される。これらの化合物は、（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−酢酸、３−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピオン酸、４−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒが水素であり、Ｒ１がノナニルである化合物を以下に示す。
【００３７】
【化７】
2012524070.tif 000009
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒが水素であり、Ｒ１がノナ−８−エニルニトリルであるように定義される。これらの化合物は、［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸、３−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、４−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒが水素であり、Ｒ１がノナ−８−エニルニトリルである化合物を以下に示す。
【００３８】
【化８】
2012524070.tif 000010
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒが水素であり、Ｒ１がノニルニトリルであるように定義される。これらの化合物は、［２−（８−シノ−オクチル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸、３−［２−（８−シノ−オクチル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、４−［２−（８−シノ−オクチル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−［２−（８−シノ−オクチル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−［２−（８−シノ−オクタ−イル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−［２−（８−シノ−オクチル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−［２−（８−シノ−オクチル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒが水素であり、Ｒ１がノニルニトリルである化合物を以下に示す。
【００３９】
【化９】
2012524070.tif 000011
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒがメチルであり、Ｒ１が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニルであるように定義される。これらの化合物は、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸、３−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、４−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒがメチルであり、Ｒ１が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニルである化合物を以下に示す。
【００４０】
【化１０】
2012524070.tif 000012
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒがメチルであり、Ｒ１が４，８−ジメチル−ノニルであるように定義される。これらの化合物は、［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸、３−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、４−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒがメチルであり、Ｒ１が４，８−ジメチル−ノニルである化合物を以下に示す。
【００４１】
【化１１】
2012524070.tif 000013
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒがメチルであり、Ｒ１がノナ−１−エニルであるように定義される。これらの化合物は、（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−酢酸、３−（２，５，７，８−テトラメチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピオン酸、４−（２，５，７，８−テトラメチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−（２，５，７，８−テトラメチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−（２，５，７，８−テトラメチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−（２，５，７，８−テトラメチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−（２，５，７，８−テトラメチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒがメチルであり、Ｒ１がノナ−１−エニルである化合物を以下に示す。
【００４２】
【化１２】
2012524070.tif 000014
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒがメチルであり、Ｒ１がノナニルであるように定義される。これらの化合物は、（２，５，７，８−テラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−酢酸、３−（２，５，７，８−テトラメチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピオン酸、４−（２，５，７，８−テトラメチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−（２，５，７，８−テトラメチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−（２，５，７，８−テトラメチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−（２，５，７，８−テトラメチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−（２，５，７，８−テトラメチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒがメチルであり、Ｒ１がノナニルである化合物を以下に示す。
【００４３】
【化１３】
2012524070.tif 000015
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒがメチルであり、Ｒ１がノナ−８−エニルニトリルであるように定義される。これらの化合物は、［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸、３−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、４−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−［２−（８−シノ−オクタ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒがメチルであり、Ｒ１がノナ−８−エニルニトリルである化合物を以下に示す。
【００４４】
【化１４】
2012524070.tif 000016
別の一実施形態においては、式（Ｉ）のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、Ｒがメチルであり、Ｒ１がノニルニトリルであるように定義される。これらの化合物は、［２−（８−シノ−オクチル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸、３−［２−（８−シノ−オクチル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、４−［２−（８−シノ−オクチル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−［２−（８−シノ−オクチル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−［２−（８−シノ−オクタ−イル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−［２−（８−シノ−オクチル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸及び８−［２−（８−シノ−オクチル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選択される化合物を含む。Ｒがメチルであり、Ｒ１がノニルニトリルである化合物を以下に示す。
【００４５】
【化１５】
2012524070.tif 000017
候補薬剤は、動物モデルで試験することができる。典型的には、動物モデルは、癌研究用のものである。動物モデル（例えば、マウス）における種々の癌の研究は、ヒト癌の研究で一般に容認された手法である。例えば、ヒト腫よう細胞が動物に注射されたヌードマウスモデルは、多種多様な癌の研究に有用である一般的モデルとして一般に容認されている（例えば、Ｐｏｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ，１５，ｐ．９９−１０８（１９９７）参照）。結果は、典型的には、候補薬剤で処置された対照動物と処置されていない対照同腹仔で比較される。トランスジェニック動物モデルも利用可能であり、ヒト疾患用モデルとして一般に容認されている（例えば、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２，ｐ．３４３９−３４４３（１９９５）参照）。候補薬剤をこれらの動物モデルに使用して、候補薬剤が、例えば、癌転移、癌細胞運動性、癌細胞侵襲性又はその組合せを含めて、癌に関連する症候の１つ以上を軽減するかどうかを判定することができる。
【００４６】
ビタミンＥコハク酸エステル誘導体を使用した治療
本発明は、ビタミンＥコハク酸エステル誘導体を使用して被験体における癌を治療又は癌の発生を予防する方法を提供する。癌は、異常で過剰な細胞増殖の疾患である。癌は、一般に、ごく一部の細胞が正常な増殖制御を逸脱して、その数を増加させる、複製の環境的傷害又は誤りによって惹起される。損傷又は誤りは、一般に、細胞周期チェックポイント制御をコードするＤＮＡ、又は癌抑制遺伝子などの細胞増殖制御の関連態様に影響を及ぼす。この一部の細胞が増殖するにつれ、追加の遺伝的変異体が生成され得る。それが増殖に有利であれば、進化の様式で選択されるであろう。増殖に有利であるが、まだ十分に癌性になっていない細胞は、前癌細胞と称される。癌は、被験体に多数の癌細胞をもたらす。これらの細胞は、腫ようと呼ばれる異常な細胞塊を形成し得る。その細胞は、腫よう細胞と称される。被験体の体内の腫よう細胞の全量は、腫よう量と称される。腫ようは、良性又は悪性であり得る。良性腫ようは、増殖性であるが特定の部位に留まる細胞を含む。一方、悪性腫ようの細胞は、近くの組織に侵入し、それを破壊し、転移と称されるプロセスによって体の別の部位に広がる。
【００４７】
癌は、一般に、その原発組織に基づいて命名される。幾つかの主要な癌タイプがある。癌腫は、皮膚、又は内臓の内側若しくは外側を覆う組織で生じる癌である。肉腫は、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、又は他の結合組織若しくは支持組織で生じる癌である。白血病は、骨髄などの造血組織で生じ、多数の異常血球を生成させて血流に進入させる癌である。リンパ腫及び多発性骨髄腫は、免疫系細胞で生じる癌である。
【００４８】
本発明のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、種々のタイプの癌及び前癌の治療に使用することができる。例えば、ビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、接着依存性癌の治療に使用することができる。ビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、転移性癌の治療に使用することもできる。
【００４９】
正常な細胞接着の損失は、発癌の重要な特徴である。接着の破壊は、細胞外基質（ＥＣＭ）を介した細胞運動性及び細胞の潜在的侵襲性を増大させる。転移は、癌細胞が原発部位に侵入し、そこを出て、続いて別の部位に接着する、正常な接着の改変を特徴とする。しかし、細胞接着は、腫よう細胞生存、組織浸潤、薬剤耐性などの癌の別の態様にも関与する。Ｓｃｈｍｉｄｍａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ１５，９７８−９０（２００８）を参照されたい。接着依存性癌は、接着が癌病理において重要な役割を果たす癌の形態である。
【００５０】
本発明のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、抗接着剤として使用することもできる。本明細書では抗接着剤とは、組織接着全体ではなく、細胞接着を阻害する薬剤を指す。理論に拘泥するものではないが、本発明のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、局所接着キナーゼ（ＦＡＫ）の分解を誘発することによって細胞接着を阻害すると考えられる。
【００５１】
抗接着剤は、癌の治療に使用することができるが、多種多様な他の疾患及び障害、特に細胞接着及び／又は細胞遊走を含む疾患及び障害の治療に使用することもできる。例えば、細胞接着は、炎症部位において血管新生の媒介物質を産生する白血球の浸潤において重要な役割を果たす。抗接着剤を使用して治療することができる疾患及び障害としては、血栓塞栓性障害、炎症、炎症性腸疾患及び他の自己免疫疾患、リウマチ様関節炎、ぜん息、アレルギー、成人呼吸促迫症候群、移植片対宿主病、臓器移植、敗血症ショック、乾せん、湿疹、接触性皮膚炎、骨粗しょう症、骨関節炎、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症、眼球脈管障害、骨分解、糖尿病性網膜症、黄斑変性症、並びに創傷治癒が挙げられる。
【００５２】
本明細書では治療は、癌に罹患した被験体へのビタミンＥコハク酸エステル誘導体の投与（すなわち、非予防的治療）を包含する。治療投与の一実施形態においては、ビタミンＥコハク酸エステル誘導体の投与は、癌の除去に有効である。別の一実施形態においては、ビタミンＥコハク酸エステル誘導体の投与は、癌の重症度を低下させ、患者を延命させるのに有効である。治療は、少なくとも１つの症候の軽減若しくは抑制及び／又は疾患進行の遅延による、症状の改善を含む。被験体は、好ましくは、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ）、ペット（例えば、イヌ、ネコ）などのほ乳動物である。より好ましくは、被験体はヒトである。
【００５３】
本明細書では癌発生の予防は、癌の予防的（すなわち、防止的）処置を包含する。本発明のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、例えば、発癌前に被験体に予防的に投与することができる。予防的投与は、被験体におけるその後の発癌の可能性を低下させ、又はその後に生じる癌の重症度を低下させるのに有効である。
【００５４】
ビタミンＥコハク酸エステル誘導体の投与及び処方
本発明は、式ＩのビタミンＥコハク酸エステル誘導体を活性成分として含み、活性成分と組み合わせて、薬学的に許容される液体又は固体の担体（単数又は複数）を含む、薬学的組成物も提供する。癌治療に適切である上記ビタミンＥコハク酸エステル誘導体のいずれかを本発明の薬学的組成物に含めることができる。
【００５５】
ビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、改変せずに投与することができ、又は薬学的に許容される塩として投与することができる。薬学的に許容される塩とは、ビタミンＥコハク酸エステル誘導体の比較的無毒の無機及び有機酸付加塩を指す。これらの塩は、ビタミンＥコハク酸エステル誘導体の最終単離及び精製中にｉｎ  ｓｉｔｕで調製することができ、又は精製ビタミンＥコハク酸エステル誘導体を適切な有機若しくは無機対イオンと別々に反応させ、そうして形成された塩を単離することによって調製することができる。ビタミンＥコハク酸エステル誘導体陰イオンと一緒に使用するのに適切な代表的陽イオン性対イオンとしては、アンモニウム、アルギニン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、ピペラジンなどが挙げられる。（例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ），Ｗｉｌｅｙ（２００８）を参照されたい。）
薬学的組成物は、当業者に公知の種々の希釈剤又は賦形剤を含めて、患者への送達用の種々の生理学的に許容される担体の１種類以上と一緒に１種類以上のビタミンＥコハク酸エステル誘導体を含む。例えば、非経口投与の場合、等張食塩水が好ましい。局所投与の場合、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの担体を含めたクリーム、又はペプチドの活性を阻止、阻害しない局所クリームで典型的に見られる他の薬剤を使用することができる。他の適切な担体としては、アルコール、リン酸緩衝食塩水、及び他の平衡塩類溶液が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００５６】
これらの製剤は、好都合には単位剤形として提供することができ、薬学分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。好ましくは、かかる方法は、１種類以上の副成分を構成する担体と活性薬剤を会合させる段階を含む。一般に、製剤は、液状担体、微粉担体又はその両方と活性薬剤を均一かつ十分に会合させ、次いで、必要に応じて、生成物を所望の製剤に成形することによって調製される。本発明の方法は、所望の効果を生じるのに有効な量の本発明の組成物を被験体、好ましくはほ乳動物、より好ましくはヒトに投与することを含む。ビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、単回又は複数回で投与することができる。活性薬剤の有用な投与量は、そのｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性と動物モデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ活性を比較することによって決定することができる。マウス及び他の動物における有効投与量をヒトに外挿する方法は、当分野で公知である。例えば、米国特許第４，９３８，９４９号を参照されたい。
【００５７】
本発明の薬剤は、好ましくは、薬学的組成物中に処方され、次いで、本発明の方法に従って、選択された投与経路に適合した種々の形態でヒト患者などの被験体に投与される。製剤としては、経口、直腸、膣、局所、経鼻、眼又は（皮下、筋肉内、腹腔内、腫よう内及び静脈内を含めた）親の投与に適切な製剤が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００５８】
経口投与に適切な本発明の製剤は、各々所定量の活性薬剤を粉末若しくは顆粒として含む錠剤、トローチ剤、カプセル剤、ロゼンジ剤、ウェーハ剤又はカシェ剤などの分離した単位として、ビタミンＥコハク酸エステル誘導体を含むリポソームとして、又はシロップ剤、エリキシル剤、乳剤、ひと飲み（ｄｒａｕｇｈｔ）などの水系液体若しくは非水系液体の溶液剤若しくは懸濁液剤として、提供することができる。かかる組成物及び調製物は、典型的には、少なくとも約０．１重量％の活性薬剤を含む。ビタミンＥコハク酸エステル誘導体（すなわち、活性薬剤）の量は、投与レベルが被験体に所望の結果を生じるのに有効であるようなものである。
【００５９】
経鼻噴霧製剤は、防腐剤及び等張化剤と一緒に活性薬剤の精製水溶液を含む。かかる製剤は、好ましくは、鼻粘膜に適合したｐＨ及び等張状態に調節される。直腸又は膣内投与製剤は、カカオ脂、水素化脂肪、水素化脂肪カルボン酸などの適切な担体を含む坐剤として提供することができる。眼科用製剤は、経鼻噴霧剤と類似の方法によって調製される。ただし、ｐＨ及び等張性因子は、好ましくは、目のそれに適合するように調節される。局所製剤は、鉱油、石油、ポリヒドロキシアルコール、局所医薬製剤用の別の基剤などの１種類以上の媒体中に溶解又は懸濁された活性薬剤を含む。
【００６０】
錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などは以下の１つ以上を含むこともできる：トラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチ、ゼラチンなどの結合剤、リン酸二カルシウムなどの賦形剤、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、及びスクロース、フルクトース、ラクトース、アスパルテームなどの甘味剤、及び天然又は人工香味剤。単位剤形がカプセル剤であるとき、それはさらに植物油、ポリエチレングリコールなどの液状担体を含むことができる。種々の他の材料が、剤皮として、又は固体単位剤形の物理的形態を改変するために、存在することができる。例えば、錠剤、丸剤又はカプセル剤は、ゼラチン、ワックス、シェラック、糖などで被覆することができる。シロップ剤又はエリキシル剤は、甘味剤、メチル又はプロピルパラベンなどの防腐剤、糖の結晶化を遅延させる薬剤、多価アルコール、例えばグリセロール、ソルビトールなどの任意の他の成分の溶解性を増加させる薬剤、色素、及び香味剤の１種類以上を含むことができる。任意の単位剤形の調製に使用される材料は、使用量では実質的に無毒である。活性薬剤は、徐放性調製物及び装置に組み込むことができる。
【００６１】
化合物の調製
本発明のビタミンＥコハク酸エステル誘導体は、特に本明細書に含まれる記述に照らして、化学分野で周知のものに類似したプロセスを含む合成経路によって合成することができる。出発材料は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、ＵＳＡ）などの商業供給源から一般に入手可能であり、当業者に周知の方法を使用して容易に調製される（例えば、Ｌｏｕｉｓ  Ｆ．Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒ，Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｖ．１−１９，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９６７−１９９９  ｅｄ．）；Ａｌａｎ  Ｒ．Ｋａｔｒｉｔｓｋｙ，Ｏｔｔｏ  Ｍｅｔｈ−Ｃｏｈｎ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｗ．Ｒｅｅｓ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ｖ１−６，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，（１９９５）；Ｂａｒｒｙ  Ｍ．Ｔｒｏｓｔ  ａｎｄ  Ｉａｎ  Ｆｌｅｍｉｎｇ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｖ．１−８，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，（１９９１）；又は（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースによっても利用可能な）補遺を含めたＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ，４，Ａｕｆｌ．Ｅｄ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙに一般に記載された方法によって調製される）。
【００６２】
当業者は、別の合成経路を使用して本発明の化合物を合成できることを理解するであろう。特定の出発材料及び試薬を反応スキームに示し、以下で考察するが、別の出発材料及び試薬で容易に置換して、種々の誘導体及び／又は反応条件を提供することができる。さらに、下記方法によって調製される化合物の多くは、当業者に周知の従来法を使用して、本開示に照らして、さらに改変することができる。
【００６３】
本発明を以下の実施例によって説明する。特定の実施例、材料、量及び手順は、本明細書に記載の本発明の範囲及び精神に従って広義に解釈されるべきであることを理解されたい。
【実施例】
【００６４】
（実施例１）
強力な乳癌細胞接着阻害剤を開発する足場としてのコハク酸αトコフェロール
本発明者らは、ビタミンＥコハク酸エステル（ＶＥＳ）の抗接着活性を媒介するのに脂肪族側鎖及びセミコハク酸エステルが極めて重要な役割を果たし得ると考えた。フィチル側鎖の関与を評価するために、図１に示すように、疎水性末端からイソプラニル単位を徐々に除去することによって鎖長を短縮して、ＴＳ−１及びＴＳ−２を得た。
【００６５】
これらの切断型誘導体は、Ｍａｔｒｉｇｅｌ被覆表面への４Ｔ１転移性乳癌細胞の接着を阻害するのにＶＥＳよりもかなり改善された効力を示し、相対効力はＴＳ−１＞ＴＳ−２＞ＶＥＳであった。さらに、ＴＳ−１に二重結合を導入して化合物１を生成することによって側鎖の剛性を高めると、抗接着効力が数倍改善した。これらの知見は、抗接着活性の媒介におけるフィチル側鎖の役割を強調するものである。
【００６６】
ＴＳ−１及び化合物１の更なる改変は、エーテルで連結されたＣ２−Ｃ４カルボン酸でヘミスクシナートを置換して、２系列の化合物（それぞれ４〜６及び７〜９）を生成することによって実施された。その理論的根拠は二つある。一つは、フィチル側鎖のように、カルボキシル基も、標的タンパク質によるリガンド認識に決定的に関与する。第２に、ヘミスクシナートは酵素消化されやすいので、エーテル結合を介したカルボキシル基の付加は、生成した誘導体のｉｎ  ｖｉｖｏ代謝安定性を増大させる。すべてのこれらの誘導体のうち、ＶＥＳは、（Ｒ，Ｒ，Ｒ）−αトコフェロールから誘導され、他方は、図１Ｂに示す一般的手順によって、鏡像異性前駆体（Ｓ）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−２−カルボン酸メチルエステルから合成された。しかし、別段の記載がない限り、使用されたすべての側鎖はラセミであった。
【００６７】
結果
強力な小分子細胞接着阻害剤を開発するためのＶＥＳの薬理学的利用。ステージＩＶヒト乳腺腫細胞によって共有される特性である、４Ｔ１細胞の肺、肝臓、骨及び他の部位に転移する高い傾向のために（Ｔａｏ，ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ８，２２８（２００８）、この研究では、４Ｔ１マウス乳房腫よう細胞系を使用して、ＶＥＳ及びその誘導体の抗接着活性を検討した。示したように、ＶＥＳは、図２Ｂに示すように、Ｍａｔｒｉｇｅｌ被覆表面への４Ｔ１細胞接着に対して比較的小さい阻害効果を示した。ＶＥＳは、１０μＭにおいて５０％の細胞接着を阻害したが、その活性は１０から５０μＭで頭打ちになった。この弱い効力は、代謝的不安定性と併せて、癌治療におけるＶＥＳの臨床使用を妨げたと考えられる。
【００６８】
ＶＥＳが細胞接着を阻害する分子標的は不明確なままであるが、本発明者らは、フィチル側鎖及びコハク酸エステル部分がＶＥＳの抗接着効力を改善する改変を受けやすいと仮定した。この前提は、図２Ａに示すように、アルキル側鎖がそれぞれ１個及び２個のイソプラニル単位だけ短縮されたＴＳ−１及びより少ない程度ではあるがＴＳ−２のかなり改善された効力によって裏付けられた。
【００６９】
ＴＳ−１の次の主要な最適化は、１）二重結合αｔｏクロマン環を挿入して側鎖の剛性を高めること、及び２）鎖長の異なるアルコキシカルボキシル基でヘミスクシナート部分を置換して代謝安定性を高めることの２つの戦略によって実施された。これらの改変は、２系列の誘導体、すなわち、系列Ｉ（化合物１、２及び４〜６）と系列ＩＩ（化合物３及び７〜９）をもたらした。これらの誘導体の多くが、図２Ａに示すように、Ｔ４１細胞接着の阻害においてＶＥＳよりも有意に改善された活性を示した（Ｐ＜０．０５）。そのうち、図２Ｂに示すように、化合物２は最高の効力を示し、続いて化合物１であった。それぞれのＩＣ５０値は、ＴＳ−１の２．５μＭに対して、０．６μＭ及び１．３μＭであった。化合物２は、α，β不飽和、切断型側鎖、及びエーテルで連結された酢酸によって識別され、その飽和対応物である化合物３（ＩＣ５０、２μＭ）の３倍強力であり、標的タンパク質（単数又は複数）との相互作用におけるアルキル鎖の剛性の重要性が強調された。さらに、２のアルコキシリンカー長の増加は、抗接着効力を低下させた。まとめると、この知見は、腫よう細胞接着に対するこれらのＶＥＳ誘導体の効果における難解な構造−活性関係（ＳＡＲ）を示している。
【００７０】
さらに、ＶＥＳ誘導体の接着阻止能力を薬剤誘発性細胞死に帰することができない証拠が得られた。細胞接着を阻害する高い効力にも関わらず、これらの最適なＶＥＳ誘導体は、図２Ｃに示すように、２％ＦＢＳ中の４Ｔ１細胞生存率の抑制に比較的小さい活性を示し、ＩＣ５０値は１０μＭを超えた。
【００７１】
ＶＥＳ誘導体による４Ｔ１転移性乳腺腫細胞の遊走及び膜状仮足形成の阻害。上記知見に従って、血清によって誘発される４Ｔ１細胞遊走を阻害する最適ＶＥＳ誘導体（化合物１〜３及びＴＳ−１）の能力をＶＥＳと比べてＢｏｙｄｅｎチャンバーアッセイによって調べた。図３Ａに示すように、５μＭの化合物１〜３は、２＞１＞３の順で細胞遊走の阻害に有効であり、抗接着のそれと一致した。対照的に、５μＭのＴＳ−１及び５０μＭものＶＥＳはほとんど効果を示さなかった。
【００７２】
ＶＥＳ誘導体によって媒介される腫よう細胞遊走の阻害に対する細胞上の基本原理を解明するために、４Ｔ１細胞のアクチン細胞骨格に対する化合物２（５μＭ）及び３（１０μＭ）の効果を免疫細胞化学によって調べた。曝露４時間後、これらの薬剤は、張線維の急速な溶解、及び４Ｔ１細胞の前縁における膜状仮足形成の障害を引き起こした（図３Ｂ）。定量分析によれば、４Ｔ１細胞を化合物２（５μＭ）及び３（１０μＭ）で処理すると、Ｆ−アクチンの蛍光強度がＤＭＳＯ対照に対してそれぞれ８４％及び７０％低下した（Ｐ＜０．００１）。さらに、薬物処理細胞の３Ｄ画像化は、図３Ｃに示すように、張線維損失の結果として、隣接細胞又は培養皿表面からの脱離を示した。さらに、４Ｔ１細胞を化合物２又は３で処理すると、小胞体が典型的には位置する核周囲の領域における小胞の蓄積に増加が認められた。小胞体膜の分解は、薬物によって媒介されるアクチン張線維の損失に関連するかもしれない。
【００７３】
ＶＥＳ誘導体は局所接着キナーゼ（ＦＡＫ）分解を標的にする。局所接着及びアクチン張線維の形成の調節におけるＦＡＫの重要な役割を考慮して（ＭｃＬｅａｎ  ｅｔ  ａｌ．，．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ５，５０５−１５（２００５））、４Ｔ１細胞中の局所接着部位に対する化合物２の効果を抗ＦＡＫ抗体による免疫染色によって評価した。その結果を図４Ａに示す。ＦＡＫ染色は、図３Ｂに示すように、ＤＭＳＯで処理された対照細胞において局所接着部位を表す典型的な点状パターンを示したが、化合物２処理は、局所接着部位の損失をもたらし、上記張線維溶解のそれと一致した。注目すべきことに、化合物２によるアクチン張線維及び局所接着の破壊は、神経芽細胞腫細胞においてマンニトールによって誘発されるものを連想させる。Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２７７，２７３９３−４００（２００２）。マンニトールによって誘発される細胞骨格の変化はＦＡＫの分解が先行するので、４Ｔ１細胞におけるＦＡＫタンパク質安定性に対する各々５μＭのＶＥＳ、ＴＳ−１並びに化合物１及び３と比較した化合物２の効果をウエスタンブロット法によって調べた。図４Ｂに示すように、化合物２並びにそれより少ないが１及び３による処理は、ＦＡＫ分解を誘発し、分子量約９０及び８０ｋＤａの２個の主要な切断断片を生成した。しかし、この分解は、ＴＳ−１及びＶＥＳで処理された細胞ではそれほど明白ではなく、又は測定できず、４Ｔ１細胞接着を阻止するそれぞれの活性と一致した。
【００７４】
考察
細胞接着は、癌細胞の浸潤性表現型の促進におけるその極めて重要な役割を考慮して、有望な治療標的として現れた。Ｓｃｈｍｉｄｍａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ１５，９７８−９０（２００８）。したがって、この研究は、強力な抗接着剤を開発するためのＶＥＳの薬理学的利用に焦点をおいた。ＳＡＲ分析によれば、その抗接着活性を決定する際にＶＥＳのフィチル側鎖とアルコキシカルボキシル末端との高度な構造上の協同性が存在する。試験した種々のＶＥＳ誘導体のうち、化合物２は、４Ｔ１細胞接着（ＩＣ５０、０．６μＭ対１０μＭ）及び遊走の阻止においてＶＥＳよりも一桁高い効力を示した。さらに、この高い抗接着効力は、４Ｔ１細胞における化合物２の細胞傷害性と無関係であった。これら二つの薬理活性の解離は、細胞接着の阻害における化合物２の強力な活性の根底にある独特な様式の機序を示唆している。細胞接着及び遊走を阻止する化合物２の能力は、局所接着の形成並びに膜状仮足及び張線維を含めたアクチン細胞骨格構造をＦＡＫ分解の刺激を介して破壊することに対するその効果に起因し得るという証拠が得られた。この作用様式は、マンニトールによって誘発される細胞骨格構造の破壊の、しかしアポトーシスの同時誘導のない、それを連想させる。したがって、腫ようの血管新生及び転移の媒介におけるＦＡＫシグナル伝達の重要性を考慮すると、化合物２がＦＡＫ分解を誘発する機序は更なる検討が当然必要である。Ｍｉｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ１８，５１６−２３（２００６）。機構的な観点からは、化合物２は、ＦＡＫタンパク質分解又はＦＡＫキナーゼ活性を標的にする他の薬剤とは異なる。Ｏｃｈｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  Ｍｅｔａｂ６６，２４−３０（１９９９）及びＲｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ６８，１９３５−４４（２００８）。したがって、それは、ＦＡＫシグナル伝達の細胞制御、及び腫よう進行の促進におけるその役割を解明する有用な薬理学的プローブを提供するかも知れない。
【００７５】
結論
細胞接着は、腫よう学だけでなく、炎症性腸疾患、自己免疫炎症などの急性及び慢性炎症性疾患においても重要な治療標的である。現在まで、細胞接着のターゲティングにおける治療学的開発の大部分は、モノクローナル抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は低分子干渉（ｓｉ）ＲＮＡを使用したインテグリン−リガンド相互作用の遮断に焦点をおき、小分子薬剤はほとんど開発されていない。その結果、ＦＡＫ分解を介した細胞接着の阻害における化合物２などのビタミンＥコハク酸エステル誘導体の高い効力及び独特の機序は、癌、特に転移性癌の治療と治療上の関連性があるかも知れない。４Ｔ１細胞転移を抑制する化合物２の根本的機序及びｉｎ  ｖｉｖｏ試験は、現在進行中である。
【００７６】
実験の部
別段の記載がない限り、化学試薬及び有機溶媒をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ  ＮＭＲ）をＢｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ３００モデル分光計で測定した。化学シフト（δ）をＴＭＳピークに対する百万分率（ｐｐｍ）で報告した。エレクトロスプレーイオン化質量分析法をＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑ−Ｔ  ｏｆ  ＩＩ高分解能エレクトロスプレー質量分析計で実施した。すべての試験化合物の純度は、Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｍｉｃｒｏｌａｂ，Ｉｎｃ．（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ、ＧＡ）によって実施された元素分析によれば９５％より高く、計算値の０．４％以内であることが報告された。フラッシュカラムクロマトグラフィーをシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）を使用して実施した。ＶＥＳ、ＴＳ−１及びＴＳ−２の合成を既報（Ｓｈｉａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２８１，１１８１９−２５（２００６）のとおりに実施し、２系列の化合物１、２、４〜６及び３、７〜９を図１Ｂに記載の一般スキームに従って合成した。図１Ｂは、化合物１の合成を例として示す。
【００７７】
コハク酸モノ−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イル］エステル（１）。ステップａ．６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−２−カルボン酸メチルエステル（ｉ、４１．９ｍｍｏｌ）、ｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシクロリド（６２．８ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（１７２．２ｍｍｏｌ）の１００ｍＬ  ＤＭＦ溶液を８５〜９５℃で１６時間撹拌し、室温に冷却した。溶液を酢酸エチル２００ｍＬで希釈し、直列にＨ２Ｏ、１％ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３及びかん水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、生成物６−（ｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシ）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−２−カルボン酸メチルエステル（ｉｉ）を白色固体として９９％収率で得た。
【００７８】
【化１６】
2012524070.tif 000018
ステップｂ．−６０℃の化合物ｉｉ（１５ｇ、３９．７ｍｍｏｌ）の１５０ｍＬ無水ヘキサン撹拌溶液に１Ｍ水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ−Ｈ）のヘキサン溶液４０ｍＬを９０分間滴下した。溶液を氷浴中で１時間撹拌し、メタノール１００ｍＬ、続いてＨ２Ｏ７５ｍＬを溶液に添加して、反応をクエンチした。混合物を酢酸エチル／ヘキサン（１：２）９０ｍＬで３回抽出し、貯留した有機相を脱水し、濃縮した。残留物をクロマトグラフィーによって精製して、６−（ｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシ）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−２−カルボアルデヒド（ｉｉｉ）を白色固体として８８％収率で得た。
【００７９】
【化１７】
2012524070.tif 000019
ステップｃ．０℃の１−ブロモ−３．７−ジメチルオクタニルホスホニウム（１．０５ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ無水ＴＨＦ懸濁液に１Ｍリチウムビス（トリメチシリル）アミドのＴＨＦ溶液１．０５ｍＬを添加した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、化合物ｉｉｉ（１ｍｍｏｌ）の１０ｍＬ  ＴＨＦ溶液を１時間徐々に添加した。室温で１時間撹拌した後、溶液を濃縮し、酢酸エチル２０ｍＬで希釈し、直列にＨ２Ｏ及びかん水で洗浄した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、ｔ−ブチル−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ジメチルシラン（ｉｖ）を無色オイルとして８０％収率で得た。
【００８０】
【化１８】
2012524070.tif 000020
ステップｄ．化合物ｉｖ（０．６７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、それに１Ｍ  ＴＢＡＦ（フッ化テトラブチルアンモニウム）のＴＨＦ溶液０．３ｍＬを添加した。０℃で１時間撹拌後、溶液を濃縮し、酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、水及びかん水で洗浄し、乾燥させた。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−オール（ｖ）を無色シロップとして９６％収率で得た。
【００８１】
【化１９】
2012524070.tif 000021
ステップｅ．化合物ｖ（０．５８ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（ｓｕｃｃｉｎｉｃ  ａｎｈｙｄｒａｔｅ）（１．１６ｍｍｏｌ）及びピリジン（９３μＬ）の混合物の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）溶液を還流温度で１６時間撹拌した。溶液を室温に冷却し、濃縮し、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、化合物１を白色固体として８８％収率で得た。
【００８２】
【化２０】
2012524070.tif 000022
Ｃ２８Ｈ４２Ｏ５（Ｍ＋Ｎａ）＋の正確なＨＲＭＳ質量、４８１．２９３０ａｍｕ；（Ｍ＋Ｎａ）＋の実測質量、４８１．２９４７ａｍｕ。計算分析値（Ｃ７３．３３、Ｈ９．２３、Ｏ１７．４４）実測、Ｃ７３．４９、Ｈ９．４６、Ｏ１７．５６。
【００８３】
化合物ｖのエーテル連結アルカンカルボン酸誘導体を調製する一般的手順（ステップｆ）。化合物ｖ（０．５８ｍｍｏｌ）とＮａＨ（０．６４ｍｍｏｌ）の混合物の無水ＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を０℃で３０分間撹拌し、それにブロモアルカンカルボン酸メチルエステル（１．１６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を添加した。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水及びかん水で洗浄し、脱水し、濃縮した。粗製残留物を１Ｎ  ＮａＯＨメタノール溶液で３時間処理した。溶液を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で中和し、濃縮し、酢酸エチルで希釈し、水及びかん水で洗浄し、脱水し、濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物２及び４〜６を白色固体として７０％〜７８％収率で得た。
【００８４】
［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸（２）。
【００８５】
【化２１】
2012524070.tif 000023
Ｃ２６Ｈ４０Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の正確なＨＲＭＳ質量、４３９．２８２４ａｍｕ；（Ｍ＋Ｎａ）＋の実測質量、４３９．２８４０ａｍｕ。計算分析値（Ｃ７４．９６、Ｈ９．６８、Ｏ１５．３６）；実測、Ｃ７５．１３、Ｈ９．７７、Ｏ１５．４７。
【００８６】
３−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸（４）。
【００８７】
【化２２】
2012524070.tif 000024
Ｃ２７Ｈ４２Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の正確なＨＲＭＳ質量、４５３．２９８１ａｍｕ；（Ｍ＋Ｎａ）＋の実測質量、４５３．３０１３ａｍｕ。計算分析値（Ｃ７５．３１、Ｈ９．８３、Ｏ１４．８６）；実測、Ｃ７５．２３、Ｈ９．８７、Ｏ１４．６７。
【００８８】
４−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸（５）。
【００８９】
【化２３】
2012524070.tif 000025
Ｃ２８Ｈ４４Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の正確なＨＲＭＳ質量、４６７．３１３８ａｍｕ；（Ｍ＋Ｎａ）＋の実測質量、４６７．３１６１ａｍｕ。計算分析値（Ｃ７５．６３、Ｈ９．９７、Ｏ１４．３９）；実測、Ｃ７５．５８、Ｈ９．８９、Ｏ１４．３３。
【００９０】
５−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸（６）。
【００９１】
【化２４】
2012524070.tif 000026
Ｃ２９Ｈ４６Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の正確なＨＲＭＳ質量、４８１．３２９４ａｍｕ；（Ｍ＋Ｎａ）＋の実測質量、４８１．３３１４ａｍｕ。計算分析値（Ｃ７５．９４、Ｈ１０．１１、Ｏ１３．９５）；実測、Ｃ７５．８３、Ｈ１０．０６、Ｏ１３．９２。
【００９２】
水素化分解の一般的手順（ステップｇ）。酢酸エチル中のα，β不飽和酸（化合物２及び４〜６；０．３７ｍｍｏｌ）、１０％Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ）の混合物をＨ２下で５６ｐｓｉで１６時間振とうし、ろ過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルカラムによって精製して、化合物３及び７〜９を白色固体として定量収率で得た。
【００９３】
［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸（３）。
【００９４】
【化２５】
2012524070.tif 000027
Ｃ２６Ｈ４２Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の正確なＨＲＭＳ質量、４４１．２９８１ａｍｕ；Ｃ２６Ｈ４２Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の実測質量、４４１．３０００ａｍｕ。計算分析値（Ｃ７４．６０、Ｈ１０．１１、Ｏ１５．２９）；実測、Ｃ７４．４６、Ｈ１０．３１、Ｏ１５．４０。
【００９５】
３−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸（７）。
【００９６】
【化２６】
2012524070.tif 000028
Ｃ２７Ｈ４４Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の正確なＨＲＭＳ質量、４５５．３１３８ａｍｕ；Ｃ２７Ｈ４４Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の実測質量、４５５．３１５２ａｍｕ。計算分析値（Ｃ７４．９６、Ｈ１０．２５、Ｏ１４．７９）；実測、Ｃ７４．８３、Ｈ１０．１９、Ｏ１４．６７。
【００９７】
４−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸（８）。
【００９８】
【化２７】
2012524070.tif 000029
Ｃ２８Ｈ４６Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の正確なＨＲＭＳ質量、４６９．３２９４ａｍｕ；Ｃ２８Ｈ４６Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の実測質量、４６９．３３２１ａｍｕ。計算分析値（Ｃ７５．２９、Ｈ１０．３８、Ｏ１４．３３）；実測、Ｃ７５．３５、Ｈ１０．３０、Ｏ１４．４６。
【００９９】
５−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸（９）。
【０１００】
【化２８】
2012524070.tif 000030
Ｃ２９Ｈ４８Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の正確なＨＲＭＳ質量、４８３．３４５１ａｍｕ；Ｃ２９Ｈ４８Ｏ４（Ｍ＋Ｎａ）＋の実測質量、４８３．３４７２ａｍｕ。計算分析値（Ｃ７５．６１、Ｈ１０．５０、Ｏ１３．８９）；実測、Ｃ７５．７５、Ｈ１０．６６、Ｏ１３．９１。
【０１０１】
細胞及び細胞培養。４Ｔ１転移性乳癌細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から購入した。ペニシリン−ストレプトマイシン及び１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中で細胞を３７℃で５％ＣＯ２中で培養した。
【０１０２】
接着アッセイ。９６ウェルプレートを１２％（ｖ／ｖ）Ｍａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で３７℃で１時間被覆し、洗浄緩衝剤（０．１％ＢＳＡ含有ＲＰＭＩ培地）で２回洗浄し、続いて０．５％ＢＳＡ含有ＲＰＭＩ培地で３７℃で６０分間ブロックした。４Ｔ１細胞をＣＯ２恒温器中で指定濃度の個々の誘導体で３７℃で６０分間処理し、１００μｌ中２×１０４個の細胞を各ウェルに蒔いた。細胞をＭａｔｒｉｇｅｌ被覆表面に３７℃で３０分間接着させ、上記洗浄緩衝剤で軽く洗浄して非接着細胞を除去した。接着細胞を１０％ホルマリンで固定し、０．５％クリスタルバイオレットで染色し、２％ＳＤＳに溶解させた。５７０ｎｍにおける吸光度をＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｅｖｉｃｅ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）で測定した。
【０１０３】
遊走アッセイ。４Ｔ１細胞を５分間トリプシン処理し、洗浄し、０．２％ＦＢＳ補充ＲＰＭＩ１６４０培地中に懸濁させた。個々の試験薬剤を指定濃度で含む０．２％ＦＢＳ補充ＲＰＭＩ培地０．５ｍｌ中の５×１０４個の細胞を、２４ウェルプレート中の各Ｔｒａｎｓｗｅｌｌシステム（１２ｍｍ、ポリカルボナート、１２μｍ細孔、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の上部チャンバーに添加し（すなわち、挿入物）、ＣＯ２恒温器中で３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、挿入物を１０％ＦＢＳ補充ＲＰＭＩ１６４０培地を含む新しいウェルに２４時間変えた。各ウェルのすべての細胞を１０％ホルマリンで固定し、続いて０．５％クリスタルバイオレットで染色した。遊走細胞を定量化するために、上部チャンバーの底部側に付着した細胞及びウェル底部の細胞を湿った綿棒で拭き、次いでＤＤＷ８０μｌでリンスした。次いで、１００％メタノール３２０μｌを添加して、細胞を溶解させた。チャンバーを８０％メタノール４００μｌに入れ、オービタルシェーカー中で３０分間インキュベートすることによって、非遊走細胞を数えた。５７０ｎｍにおける吸光度をＥＬＩＳＡプレートリーダーで測定した。各ウェルの細胞遊走割合を以下の式によって計算した。遊走％＝１００×［（遊走細胞のＯ．Ｄ．）−（バックグラウンドのＯ．Ｄ．）］／｛［（遊走細胞のＯ．Ｄ．）−（バックグラウンドのＯ．Ｄ．）］＋［（非遊走細胞のＯ．Ｄ．）−（バックグラウンドのＯ．Ｄ．）］｝。各処理群の遊走活性は、ビヒクル対照のそれを１００％とみなして、その百分率として表される。
【０１０４】
Ｆ−アクチン免疫染色  アクチン細胞骨格構造に対する試験化合物の効果を評価するために、細胞を６ウェルプレート中のカバーガラス上に蒔き、終夜インキュベートし、続いて２％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中で指定濃度の個々の薬剤に４時間曝露した。次いで、細胞を３．７％ホルムアルデヒドで固定し、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００及び０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで１時間透過処理し、次いでＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８ファロトキシン染色溶液（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）と一緒に３０分間インキュベートした。４，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）含有封入剤を使用して、核を対比染色した。免疫細胞化学的に標識された細胞を可視化し、アルゴン及びＨｅＮｅレーザーと、適切なフィルター（励起波長は４８８ｎｍ及び５４３ｎｍであった）と、６３×１．４開口数の水浸レンズとを備えたＺｅｉｓｓ顕微鏡（ＬＳＭ５１０）を使用して画像を取り込んだ。ＭａｃＢｉｏｐｈｏｔｏｎｉｃ  ＩｍａｇｅＪソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）を使用して対照試料を同じしきい値下の処理試料の各々と比較して蛍光強度差を計算し、未処理対照の蛍光強度の百分率として表した。統計的有意性をスチューデントのｔ検定によって評価し、Ｐ＜０．０５で有意と見なした。
【０１０５】
細胞生存率アッセイ。９６ウェルプレート中で３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイを６回使用して、細胞生存率を評価した。４Ｔ１細胞を１０％ＦＢＳ補充ＲＰＭＩ１６４０中に６０００細胞／ウェルで２４時間蒔き、続いて２％ＦＢＳ補充ＲＰＭＩ１６４０中の指定濃度の種々の化合物で処理した。対照は、薬物処理細胞におけるそれと同じ濃度のＤＭＳＯを受けた。インキュベーション終了後、１０％ＦＢＳ補充ＲＰＭＩ１６４０中のＭＴＴ（０．５ｍｇ／ｍｌ）を各ウェルに添加し、細胞を３７℃で２時間インキュベートした。培地を除去し、還元ＭＴＴ染料をＤＭＳＯに可溶化した（２００μｌ／ウェル）。吸光度を９６ウェルプレートリーダーによって５７０ｎｍで測定した。
【０１０６】
（実施例２）
追加のビタミンＥコハク酸エステル誘導体の合成
実施例Ｉは、式（Ｉ）のＲ１位置に４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基及び４，８−ジメチル−ノニル基を含むビタミンＥコハク酸エステル誘導体の調製を示す。式（Ｉ）のＲ１位置にノナ−１−エニル基、ノナニル基、ノナ−８−エニルニトリル基及びノナニルニトリル基を含むビタミンＥコハク酸エステル誘導体を調製することもできる。ノナ−１−エニル基、ノナニル基、ノナ−８−エニルニトリル基及びノナニルニトリル基を含むビタミンＥコハク酸エステル誘導体を調製するのに使用される出発化合物は異なるが、使用される試薬及び諸条件は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基及び４，８−ジメチル−ノニル基を含むビタミンＥコハク酸エステル誘導体の場合に記述したものと本質的に同じである。ノナ−１−エニル基及びノナニル基を含むビタミンＥコハク酸エステル誘導体の反応スキームを図５に示す。一方、ノナ−８−エニルニトリル基及びノナニルニトリル基を含むビタミンＥコハク酸エステル誘導体の反応スキームを図６に示す。
【０１０７】
本明細書で引用したすべての特許、特許出願及び刊行物並びに電子的に利用可能な資料の完全な開示を参照により本明細書に援用する。上記詳細な説明及び実施例は、単に理解しやすいように提供したものに過ぎない。それらから無用な限定を解釈すべきではない。本発明は、示し、記述した正確な詳細に限定されず、当業者に明白な変更は、特許請求の範囲によって定義される本発明に含まれる。
【０１０８】
すべての見出しは、読者の便宜を図ったものであり、特に明示しない限り、見出しに続く文章の意味を限定するのに使用されるべきではない。
【図１】
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【図２】
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【図５】
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【図６】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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