【手続補正書】
【提出日】平成21年9月10日(2009.9.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
本発明の他の好ましい塩としては第四級アンモニウム化合物があり、この場合、等価の陰イオン(Ｘ−)がＮ原子の正電荷と結合している。Ｘ−は、例えば塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、硫酸イオン、硝酸イオン、リン酸イオンなどの種々の無機酸の陰イオン、または例えば酢酸イオン、マレイン酸イオン、フマル酸イオン、クエン酸イオン、シュウ酸イオン、コハク酸イオン、酒石酸イオン、リンゴ酸イオン、マンデル酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、メタンスルホン酸イオンおよびｐ−トルエンスルホン酸イオンなどの有機酸の陰イオンであり得る。Ｘ−は好ましくは、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、硫酸イオン、硝酸イオン、酢酸イオン、マレイン酸イオン、シュウ酸イオン、コハク酸イオンまたはトリフルオロ酢酸イオンから選択される陰イオンである。より好ましくは、Ｘ−は塩化物イオン、臭化物イオン、トリフルオロ酢酸イオンまたはメタンスルホン酸イオンである。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
実験
薬理活性
アデノシン２Ｂ受容体サブタイプ競合放射性リガンド結合アッセイ
Euroscreenから購入した、ヒトＡ２Ｂ受容体を安定発現するＨＥＫ２９３細胞(ＥＳ−０１３−Ｃ)からＡ２Ｂ膜を調製した。試験化合物または非特異的結合に関しては１００μＭの５'ＮＥＣＡ(SIGMA E-2387)のいずれかの１％ＤＭＳＯ溶液を２μｌ、１００μｇのＡ２Ｂ膜(Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ５０ｍＭ  ｐＨ６.５、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、ＥＤＴＡ  １ｍＭ、ベンズアミジン０.１ｍＭ；バッファーＡ中に調製)および３５ｎＭ[３Ｈ]−ＤＰＣＰＸ(ＴＲＫ１０６４、１２８Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Amersham)を含有する、総量２００μｌバッファーＡ＋２ＵＩ／ｍｌアデノシンデアミナーゼ中、ポリプロピレン９６ウェルプレート(n° 267245、NUNC)にて、室温で６０分間インキュベートして競合アッセイを行った。インキュベーションが終わったところで、１５分間、２５０μｌのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ５０ｍＭ  ｐＨ６.５(バッファーＢ)で前処理したＧＦ／Ｃフィルタープレート(Milipore MAFCN0B50)にサンプルを移した。その後、サンプルを２５０μｌのバッファーＢで４回濾過した。３０μｌのHisafe II(Perkin Elmer)を用い、Triluxカウンターにてサンプルを計数した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
ステップｃ：
【化１４】
2009510152.tif 000001
３''−クロロ−３,２'：３',４''−ターピリジン−５',６'−ジアミン
３''−クロロ−５'−ニトロ−３,２'：３',４''−ターピリジン−６'−アミン(１２７ｍｇ、０.３９ｍｍｏｌ)をＥｔＯＨ(４.０ｍＬ)および濃ＨＣｌ(２４５μＬ)に溶解した。この懸濁液に鉄金属(１０９ｍｇ、１.０９ｍｍｏｌ)を加え、混合物を７０℃で１時間加熱した。次に、この懸濁液をセライト(登録商標)で濾過し、溶媒を真空除去した。この残渣にＮａＨＣＯ３(４重量％水溶液２０ｍＬ)を加え、水相をＡｃＯＥｔ(３×２０ｍＬ)で抽出した。有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて標題化合物(５２ｍｇ、４５％)を得、これをさらに精製することなく用いた。
ESI/MS m/e: 298 ([M+H]+, C15H12ClN5)
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１５】
ステップｂ：
５−トリブチルスタンニル−２−トリイソプロピルシラニル−オキサゾール
【化４６】
2009510152.tif 000002
−７８℃、アルゴン下で、テトラヒドロフラン(７５ｍＬ)中、２−トリイソプロピルシリルオキサゾール(３ｇ、１３ｍｍｏｌ)の攪拌溶液に、ｔｅｒｔ−ＢｕＬｉ(ｎ−ペンタン中１.７Ｍ、８.４ｍＬ、１４.３ｍｍｏｌ)を(およそ)３０分かけて滴下した。この溶液を−７８℃で２０分間攪拌した後、塩化トリブチルスズ(５.２ｍＬ、１９.５ｍｍｏｌ)を２０分かけて加えた。この反応混合物を室温まで温め、１６時間振盪して攪拌した。この反応物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄し、有機層を乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、減圧下で濃縮した。粗生成物をｎ−ペンタンに溶解し、セライト(登録商標)で濾過し、溶媒を蒸発させ、標題化合物を定量的収量で淡黄色油状残渣として得、これをさらに精製することなく次の工程で用いた。
δ1H-NMR (CDCl3): 1.12 (d, 18H), 1.38 (m, 3H), 1.42 (d, 9H), 1.52-1.95 (m, 18H) 7.22 (s, 1H)
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３０】
実施例６
ステップａ：
【化６１】
2009510152.tif 000003
Ｎ−(６'−アミノ−３''−フルオロ−３,２'：３',４''−ターピリジン−５'−イル)−４−メトキシベンズアミド
ピリジン(２ｍＬ)中、３''−フルオロ−３,２'：３',４''−ターピリジン−５',６'−ジアミン(中間体１、０.１ｇ、０.３６ｍｍｏｌ)の溶液に、４−メトキシベンゾイルクロリド(０.０６６ｇ、０.３９ｍｍｏｌ)を加えた。この混合物を室温で一晩攪拌し、溶媒を蒸発させた。ジクロロメタン(１.６ｍＬ)およびトリス−(２−アミノエチル)アミンポリスチレン(０.１８０ｇ、０.７２ｍｍｏｌ)を加え、この混合物を室温で１時間攪拌した。この樹脂を濾液し、ジクロロメタンで２回洗浄した。濾液を合わせ、溶媒を蒸発させて標題化合物(０.１７２ｇ)を得、これをさらに精製することなく次の工程で用いた。
ESI/MS m/e: 416 ([M+H]+, C23H18FN5O2)
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
実施例１４
ステップａ：
【化７０】
2009510152.tif 000004
Ｎ−(６'−アミノ−３''−フルオロ−３,２'：３',４''−ターピリジン−５'−イル)−３−フルオロ−４−メチルベンズアミド
ピリジン(２ｍＬ)中、３''−フルオロ−３,２'：３',４''−ターピリジン−５',６'−ジアミン(中間体１、０.２ｇ、０.７１ｍｍｏｌ)の溶液に、０.０７１ｍＬ(０.７８ｍｍｏｌ)の３−フルオロ−４−メチルベンゾイルクロリドを加えた。この混合物を４０℃で加熱し、溶媒を蒸発させた。この粗混合物を酢酸エチルと水とで抽出し、有機層を乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、蒸発させて標題化合物(０.２９５ｇ、収率８８％)を得、これをさらに精製することなく次の工程で用いた。
ESI/MS m/e: 418 ([M+H]+, C23H17F2N5O)
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５３】
実施例２７
ステップａ：
【化８４】
2009510152.tif 000005
Ｎ−(６'−アミノ−３''−クロロ−４,２'：３',４''−ターピリジン−５'−イル)−４−フルオロベンズアミド
実施例２ステップａに記載の手順に従い、３''−クロロ−４,２'：３',４''−ターピリジン−５',６'−ジアミン(中間体７、０.２５０ｇ、０.８４ｍｍｏｌ)および４−フルオロベンゾイルクロリド(０.１２０ｍＬ、１.０１ｍｍｏｌ)から得た(０.３３５ｇ、収率９５％)。この粗混合物をさらに精製することなく次の工程で用いた。
ESI/MS m/e: 420 ([M+H]+, C22H15ClFN5O)
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７３】
実施例４３
ステップａ：
【化１０４】
2009510152.tif 000006
Ｎ−(６'−アミノ−３''−フルオロ−３,２'：３',４''−ターピリジン−５'−イル)ピリミジン−５−カルボキサミド
ＤＭＦ(４ｍＬ)中、ピリミジン−５−カルボン酸(０.０８８ｇ、０.７０９ｍｍｏｌ)、Ｎ−[３−(ジメチルアミノ)プロピル]−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩(０.１３６ｇ、０.７０９ｍｍｏｌ)および１Ｈ−１,２,３−ベンゾトリアゾール−１−オール(０.０７２ｇ、０.５３４ｍｍｏｌ)の溶液を４０℃で１５分間加熱した。最後に、ＤＭＦ(４ｍＬ)中、３''−フルオロ−３,２'：３',４''−ターピリジン−５',６'−ジアミン(中間体１、０.１５ｇ、０.５３４ｍｍｏｌ)を加え、この混合物を室温で一晩攪拌した。この粗混合物を酢酸エチルと水とで抽出した。有機層を４％重炭酸ナトリウム水溶液および水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、蒸発させた。残渣(０.２ｇ)をさらに精製することなく次の工程で用いた。
ESI/MS m/e: 388 ([M+H]+, C20H14FN7O)
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７６】
実施例４５
ステップａ：
【化１０７】
2009510152.tif 000007
Ｎ−(６'−アミノ−３''−フルオロ−３,２'：３',４''−ターピリジン−５'−イル)−３−クロロイソニコチンアミド
ＤＭＦ(１ｍＬ)中、３−クロロイソニコチン酸(０.０７５ｇ、０.４８ｍｍｏｌ)、Ｎ−[(ジメチルアミノ)(３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｂ]ピリジン−３−イルオキシ)メチレン]−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェート(０.１７８ｇ、０.４７ｍｍｏｌ)およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン(０.１５ｍＬ、０.８６ｍｍｏｌ)の溶液を１５分間攪拌した。最後に、ＤＭＦ(２.９ｍＬ)中、３''−フルオロ−３,２'：３',４''−ターピリジン−５',６'−ジアミン(中間体１、０.１１ｇ、０.３９ｍｍｏｌ)の溶液を加え、この混合物を室温で３.５時間攪拌した。この粗混合物を酢酸エチルと水とで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、蒸発させた。残渣(０.１９５ｇ)をさらに精製することなく次の工程で用いた。
ESI/MS m/e: 421 ([M+H]+, C21H14ClFN6O)
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８６】
実施例５１
ステップａ：
【化１１７】
2009510152.tif 000008
６−(３−フルオロピリジン(luororyridin)−４−イル)−２−ヒドラジノ−５−ピリジン−３−イル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン
ヒドラジン(０.５ｍＬ)中、６−(３−フルオロピリジン−４−イル)−２−(メチルチオ)−５−ピリジン−３−イル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン(実施例４７、０.０５ｇ、０.１５ｍｍｏｌ)の溶液を密閉試験管にて１００℃で３０時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残渣(０.０５ｇ)をさらに精製することなく次の工程で用いた。
ESI/MS m/e: 322 ([M+H]+, C16H12FN7)