【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年10月20日(2009.10.20)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
目的とする形質を発現し、前記形質は子孫への前記形質の分配が制御されている、トランスジェニック多細胞植物又はその部分の生成方法であって、前記方法は、
（ｉ）核染色体の第１座位中に前記目的とする形質をコードするヌクレオチド配列の第１断片を含む第１異種ヌクレオチド配列を有する第１植物を生成するステップ、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）の前記核染色体に相同する核染色体の第２座位中に前記目的とする形質をコードするヌクレオチド配列の第２断片を含む第２異種ヌクレオチド配列を有する第２植物を生成するステップ、及び
（ｉｉｉ）前記第１植物及び前記第２植物をハイブリッド形成して、前記第１異種ヌクレオチド配列によってコードされている蛋白質又はポリペプチドと、前記第２異種ヌクレオチド配列によってコードされている蛋白質又はポリペプチドとをインテイン媒介トランススプライシングにより結合することにより前記当該機能形質を示す子孫を発生させるステップ、
を含む、方法。
【請求項２】
前記多細胞植物体又は前記部分が、２つの目的とする形質、形質（１）及び形質（２）を発現し、両形質は子孫への分配が制御されている、請求項１記載の方法。
【請求項３】
（ｉ’）ステップ（ｉ）の前記第１異種ヌクレオチド配列は、
形質（１）をコードするヌクレオチド配列の第１断片、及び
形質（２）をコードするヌクレオチド配列の第１断片を含み、且つ
（ｉｉ’）ステップ（ｉｉ）の前記第２異種ヌクレオチド配列は、
形質（１）をコードするヌクレオチド配列の第２断片、及び
形質（２）をコードするヌクレオチド配列の第２断片を含み、且つ
（ｉｉｉ’）ステップ（ｉｉｉ）は、前記第１植物及び前記第２植物をハイブリッド形成して、形質（１）及び形質（２）を示す子孫を発生させるステップを含み、前記第１異種ヌクレオチド配列によってコードされている蛋白質又はポリペプチドと、前記第２異種ヌクレオチド配列によってコードされている蛋白質又はポリペプチドとを結合させることによって形質（１）が示される、
請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記第１異種ヌクレオチド配列によってコードされている蛋白質又はポリペプチドと、前記第２異種ヌクレオチド配列によってコードされている蛋白質又はポリペプチドとを結合させることによって、ステップ（ｉｉｉ’）で発生する子孫が形質（２）を示す、請求項３記載の方法。
【請求項５】
インテイン媒介トランススプライシングによって前記子孫が、形質（１）及び／又は形質（２）を示す、請求項２〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記第１異種ヌクレオチド配列によってコードされているＲＮＡ発現産物と、前記第２異種ヌクレオチド配列によってコードされているＲＮＡ発現産物とのＲＮＡトランススプライシングによって形質（１）又は形質（２）が示される、請求項２記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ｉｉｉ）が、前記形質（１）及び前記形質（２）を示す子孫を選択することを伴う、請求項２〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
形質（１）が、除草剤耐性である、請求項２〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ステップ（ｉｉｉ）が、前記子孫に除草剤を適用することによって前記形質（２）を示す子孫を選択することを伴い、前記形質（１）が前記除草剤に対する耐性を付与する、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
形質（２）が、雄性又は雌性不稔である、請求項２〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｉｉｉ）が、前記子孫に除草剤を適用することによって、前記形質（２）として雄性不稔を示す子孫を選択することを伴い、前記形質（１）が前記除草剤に対する耐性を付与する、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
ステップ（ｉ）が、予め設計した組込み部位中への部位標的組込み又は相同組換えによって、植物又は植物細胞の核染色体の前記第１座位中に前記第１異種ヌクレオチド配列を導入するステップを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（ｉｉ）が、予め設計した組込み部位中への部位標的組込み又は相同組換えによって、植物又は植物細胞の核染色体の前記第２座位中に前記第２異種ヌクレオチド配列を導入するステップを含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）が、
（ａ）前記第１及び前記第２異種ヌクレオチド配列を含む親異種ヌクレオチド配列を、親植物又はその細胞の核染色体中に導入するステップであって、ここで前記親異種ヌクレオチド配列中の前記第１及び／又は前記第２異種ヌクレオチド配列が、非自律的トランスポゾン中に含まれる上記ステップ、
（ｂ）続いて、前記親植物に前記トランスポゾン用のトランスポザーゼを提供することにより、前記親異種ヌクレオチド配列から前記第１又は前記第２異種ヌクレオチド配列を切り出すステップ、及び
（ｃ）前記切り出した第１若しくは第２異種ヌクレオチド配列を含まない植物若しくはその細胞、又は、前記切り出した第１若しくは第２異種ヌクレオチド配列を、切り出されなかった異種ヌクレオチド配列を有する染色体と相同な染色体上の所望の部位に含む植物若しくはその細胞を選択するステップ
によって実施される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
（Ａ）前記親異種ヌクレオチド配列中の前記第１異種ヌクレオチド配列が、第１非自律的トランスポゾン中に含まれ、且つ前記第２異種ヌクレオチド配列が、第２非自律的トランスポゾン中に含まれ、且つ
（Ｂ）前記第１非自律的トランスポゾンの許で機能する第１トランスポザーゼを得ることによって前記第１異種ヌクレオチド配列を切取り、且つ前記第２非自律的トランスポゾンの許で機能する第２トランポザーゼを得ることによって前記第２異種ヌクレオチド配列を切取る、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記第１又は前記第２異種ヌクレオチド配列の切取りによって、それぞれ前記第２又は前記第１非自律的トランスポゾンの破壊がもたらされる結果となるように、前記親異種ヌクレオチド配列中の前記第１及び前記第２トランスポゾンが重複する、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）が、
（ａ）前記第１及び前記第２異種ヌクレオチド配列を含む親異種ヌクレオチド配列を、親植物又はその細胞の核染色体中に導入するステップであって、ここで前記親異種ヌクレオチド配列中の前記第１異種ヌクレオチド配列が両側に第１部位特異的リコンビナーゼの組換え部位を置き、且つ前記親異種ヌクレオチド配列中の前記第２異種ヌクレオチド配列が両側に第２部位特異的リコンビナーゼの組換え部位を置く上記ステップ、
（ｂ）続いて、前記親植物又はその細胞に前記第１又は前記第２部位特異的リコンビナーゼを提供することにより、前記親異種ヌクレオチド配列から前記第１又は前記第２異種ヌクレオチド配列を切り出すステップ
によって実施される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１部位特異的リコンビナーゼが、前記第２部位特異的リコンビナーゼと異なる、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記親異種ヌクレオチド配列のセグメント１及びセグメント２が重複し、それによってセグメント１は、前記第１部位特異的リコンビナーゼで機能する組換え部位を両側に置く前記第１異種ヌクレオチド配列を含み、且つセグメント２は、前記第２部位特異的リコンビナーゼで機能する組換え部位を両側に置く前記第２異種ヌクレオチド配列を含む、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）が、
（ａ）前記第１及び前記第２異種ヌクレオチド配列を含む親異種ヌクレオチド配列を、親植物又はその細胞の核染色体中に導入するステップであって、ここで前記親異種ヌクレオチド配列中の前記第１異種ヌクレオチド配列が両側に部位特異的インテグラーゼの異なる組換え部位を置き、前記親異種ヌクレオチド配列中の前記第２異種ヌクレオチド配列が両側に同じ部位特異的インテグラーゼの異なる組換え部位を置く上記ステップ、
（ｂ）続いて、
前記親生物又はその細胞に前記部位特異的インテグラーゼを提供することにより、前記親異種ヌクレオチド配列から前記第１及び前記第２異種ヌクレオチド配列を切り出すステップ
前記第１異種ヌクレオチド配列を含むが前記第２異種ヌクレオチド配列を含まない前記親生物又はその細胞の子孫を選択するステップ、及び
前記第２異種ヌクレオチド配列を含むが前記第１異種ヌクレオチド配列を含まない前記親生物又はその細胞の子孫を選択するステップ
によって実施される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ステップ（ａ）が、前記親異種ヌクレオチド配列を核染色体の所定の座位中へ相同組換え又は部位標的組込みすることによって実施される、請求項１４〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ステップ（ａ）の後に、前記親異種ヌクレオチド配列を所望する染色体又は染色体座位中に組込ませた生物又はその細胞を選択するステップが続く、請求項１４〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ステップ（ａ）の後に、前記親ヌクレオチド配列に関してホモ接合である生物又はその細胞を生成するステップが続く、請求項１４〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ステップ（ａ）で得られた前記生物体が、前記親ヌクレオチド配列に関してヘテロ接合である、請求項１４〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ステップ（ｂ）が、前記親異種ヌクレオチド配列から前記第２異種ヌクレオチド配列を切取るステップを含む、請求項１４〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ステップ（ｂ）が、前記親異種ヌクレオチド配列から前記第１異種ヌクレオチド配列を切取るステップを含む、請求項１４〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
請求項２５又は２６において得られた植物又はその細胞或いはその子孫を、前記切取った異種ヌクレオチド配列の再組込みについて分析し、且つ前記切取った異種ヌクレオチド配列を含まない植物又はその細胞、或いは切取られていない異種ヌクレオチド配列を収容する染色体に相同な染色体の所望の座位に前記異種ヌクレオチド配列を含む植物又はその細胞を選択する、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記トランスポザーゼ、前記部位特異的リコンビナーゼ、及び前記部位特異的インテグラーゼが、前記トランスポザーゼ又は前記リコンビナーゼをコードする遺伝子を含む植物又は植物細胞とハイブリッド形成又は交配することによって、或いは前記トランスポザーゼ又は前記リコンビナーゼをコードする遺伝子を用いるアグロバクテリウム媒介形質転換、ウイルス形質移入、パーティクルボンバードメント、電気穿孔法又はＰＥＧ媒介形質転換によって提供される、請求項１４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記第１及び前記第２座位が、前記相同染色体上で相応する座位である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記第１植物及び前記第２植物或いはその細胞が、前記第１及び前記第２異種ヌクレオチド配列に関してホモ接合になされている、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記トランスジェニック多細胞植物体と前記第１及び前記第２異種配列を欠く生物体との交配によって、子孫生物での前記形質の出現頻度が１％未満であり、０．１％未満が好ましく、０．０１％未満がより好ましく、０．００１未満％が最も好ましいことを前記制御された分配が意味する、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記トランスジェニック多細胞植物体が、前記第１又は前記第２異種ヌクレオチド配列の不在下では前記目的とする形質を発現できない、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
前記第１及び／又は前記第２異種ヌクレオチド配列が、前記第１又は前記第２異種ヌクレオチド配列転写産生物のＲＮＡシススプライシング用イントロンを含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記目的とする形質が、雄性又は雌性不稔に関与する、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記形質が、除草剤耐性、殺虫剤耐性、選択マーカー、逆選択マーカー、転写因子、ＤＮＡ又はＲＮＡ改変酵素、当該蛋白質の産生の群から選択される、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記多細胞植物体が、子孫を産生することができる、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記結合及び／又は前記ペプチド結合の形成が、シグナルポリペプチド、標的ポリペプチド、膜形質導入ポリペプチド、結合領域、認識又は可視化タグ、精製タグ、蛋白質切断配列の群から選択されるポリペプチドを含む蛋白質を生成する、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記目的とする形質をコードする前記遺伝子の前記第２及び／又は前記第１断片が、調節したプロモーターに動作可能に結合されている、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記目的とする形質をコードする前記遺伝子の前記第１又は前記第２断片が、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）をコードし、前記第１又は第２断片転写物の翻訳を可能にする、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
目的とする形質を発現する植物、種子又は植物細胞であって、該植物、種子又は植物細胞が、
（ｉ）核染色体の第１座位中に、前記目的とする形質をコードするヌクレオチド配列の第１断片を含む第１異種ヌクレオチド配列、及び
（ｉｉ）段階（ｉ）に記載の前記核染色体と相同な核染色体の第２座位中に、前記目的とする形質をコードするヌクレオチド配列の第２断片を含む第２異種ヌクレオチド配列
を含み、
前記第１異種ヌクレオチド配列によってコードされている蛋白質又はポリペプチドと、前記第２異種ヌクレオチド配列によってコードされている蛋白質又はポリペプチド間のインテイン媒介トランススプライシングにより当該機能形質を示す、上記植物、種子又は植物細胞。
【請求項４１】
請求項２〜３９のいずれか一項にしたがってトランスジェニック多細胞植物を生成するステップを含む、ハイブリッド種子の生成方法。
【請求項４２】
さらに、前記トランスジェニック多細胞植物体を雄性稔性である別の植物と交配するステップを含む、請求項４１記載のハイブリッド種子の生成方法。
【請求項４３】
形質（１）が除草剤耐性であり、且つ形質（２）が雄性不稔である、請求項４１又は４２に記載のハイブリッド種子の生成方法。
【請求項４４】
前記ハイブリッド種子から生育した植物の子孫種子が子葉期に到達しない、請求項４１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ハイブリッド種子から生育した植物の子孫種子が発芽しない、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
それによって、前記トランスジェニック多細胞植物体及び／又は前記他の植物が、前記ハイブリッド種子から生長した植物中で発現できるようになった発現不能種子発芽制御遺伝子を含む、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
請求項３に記載の方法によって作成したトランスジェニック多細胞植物体を、他の植物と交配することによって得られる、ハイブリッド種子。
【請求項４８】
前記植物の子孫が、生存不能である請求項４７記載のハイブリッド種子から生長した植物。
【請求項４９】
前記植物の子孫種子が発芽しない、請求項４８記載の植物。
【請求項５０】
活性化蛋白質の発現によって活性化し得る不活性種子の発芽制御遺伝子を含む、請求項４８又は４９に記載の植物。
【請求項５１】
当該蛋白質、特に薬剤蛋白質を発現させるための、請求項４７〜５０のいずれか一項によるハイブリッド種子又は植物の使用。
【請求項５２】
請求項１の段階（ｉ）又は段階（ｉｉ）について、それぞれ請求項３の段階（ｉ’）又は段階（ｉｉ’）をさらに定義することによって得られる、植物又は種子又はその細胞。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
前記切取りは、たとえば、部位特異的リコンビナーゼを使用して行うことができる（図２Ｅ参照）。トランスポゾン、特に非自律的トランスポゾン（すなわち、それぞれのトランスポザーゼをコードしないトランスポゾン）を使用し前記切取りを行うことが非常に好都合である。後者の実施形態のために前記親異種ヌクレオチド配列中の前記第１及び／又は前記第２異種ヌクレオチド配列は、そのようなトランスポゾン中に包埋される。前記切取りは、前記トランスポゾン用のトランスポザーゼを提供することを含む。特に、
（ａ）前記親異種ヌクレオチド配列中の前記第１異種ヌクレオチド配列が第１トランスポゾン中に含まれ、前記第２異種ヌクレオチド配列が第２トランスポゾン中に含まれ、及び
（ｂ）前記第１トランスポゾンの許で機能する第１トランスポザーゼを得ることによって前記第１異種ヌクレオチド配列を切取り、前記第２トランスポゾンの許で機能する第２トランポザーゼ（ｔｒａｎｐｏｓａｓｅ）を得ることによって前記第２異種ヌクレオチド配列を切取る。
前記第１又は前記第２異種ヌクレオチド配列の切取りによって、それぞれ前記第２又は前記第１非自律的トランスポゾンの遺伝子破壊がもたらされる結果となるように、前記親異種ヌクレオチド配列中の前記第１及び前記第２トランスポゾンが重複することが好ましい。図７及び８に示すように重複領域中の選択マーカー及び逆選択マーカーを用いて重複するトランスポゾンを好都合に使用することができる。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
プロ座位配列を含む系統Ａ（図１３）は雄性不稔でよい。これは、所望の表現型（たとえば、雄性不稔、除草剤耐性など）を備えた系統Ａの一次形質転換体の生成に有利であるが、系統Ａの維持は困難なものになりかねない。したがって、系統Ａを稔性となるように設計することもできるが、依然として系統Ａ１及びＡ２は雄性不稔植物Ａ１／Ａ２を交配によって提供することができる。これは、系統Ａの前記親異種ヌクレオチド配列（プロ座位）中の雄性不稔形質をコードするヌクレオチド配列断片の１個をそのプロモーターから分離することによって実現することができる。その後、雄性不稔をコードする断片の１個は発現されないので、前記プロ座位が雄性不稔を準備するはずがない。イソ座位の作出（系統Ａ１及びＡ２）によって前記断片が発現できるようにプロモーター及び断片を接合することができ、それによって雄性不稔Ａ１／Ａ２植物を得ることが可能になる。一例として、前記第１異種ヌクレオチド配列は、プロ座位中の前記第２異種ヌクレオチド配列を破壊することができる。系統Ａ１及びＡ２の作出と同時に、前記第１異種ヌクレオチド配列を切取ることによって前記第２異種ヌクレオチド配列の機能性を回復することができる。