【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年3月24日(2009.3.24)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａｓｎ残基またはＡｓｐ残基を含むポリペプチドをグリコシル化する方法であって、該方法は、該ポリペプチドと、ＧｌｃＮＡＣ残基を有するグリコシルドナー分子および変異体ＰＮＧａｓｅ−Ｆアミダーゼとを、該グリコシルドナー分子上のＧｌｃＮＡｃ残基が、該ポリペプチド上のＡｓｎ残基またはＡｓｐ残基に結合するのに適切な条件下で接触させる工程を包含する、方法であって、
ここで、該ＰＮＧａｓｅ−Ｆアミダーゼが、野生型ＰＮＧａｓｅ−Ｆアミダーゼ配列に対応する、６０位のＡＳＰ、２０６位のＧｌｕおよび１１８位のＧｌｕからなる群から選択される活性部位の酸性アミノ酸残基についてのアミノ酸残基の置換を含む、方法。
【請求項２】
前記グリコシルドナー分子が、該分子の還元末端において、脱離基で修飾されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記脱離基が、ハロゲンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ハロゲンが、フッ素である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記脱離基が、ＡｓｎまたはＡｓｎ−ペプチド部分である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記グリコシルドナー分子上のＧｌｃＮＡＣ残基が、修飾されている、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＧｌｃＮＡｃ残基が、１，２−オキサゾリン部分を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記グリコシルドナー分子が、バイアンテナ構造、トリアンテナ構造またはテトラアンテナ構造を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記グリコシルドナーが、ＧｌｃＮＡＣとマンノースとの間に結合を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記グリコシルドナーが、高マンノースＮ結合構造を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記グリコシルドナーが、マンノース−６−ホスフェートを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記アミダーゼが、固体支持体に結合されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記糖タンパク質が、固体支持体に可逆的に結合されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
原核生物細胞において前記ポリペプチドを組換え発現する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記原核生物細胞が、細菌細胞である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
真核生物細胞において前記ポリペプチドを組み替え発現する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記真核生物細胞が、酵母細胞または昆虫細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ポリペプチドと変異体アミダーゼとを接触させる工程の前に、前記ポリペプチドを野生型アミダーゼと接触させて、該ポリペプチドから炭水化物構造を切断する工程をさらに包含する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の方法であって、前記ポリペプチドが、グリコシルトランスフェラーゼについてのアクセプター部分を含み、該方法が、該ポリペプチドと、グリコシルドナー部分およびグリコシルトランスフェラーゼを含有する反応混合物とを、グリコシル残基を、該グリコシルドナー部分から該グリコシルトランスフェラーゼアクセプター部分へ転移させるのに適切な条件下で接触させる工程をさらに包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の方法に従ってグリコシル化された糖ペプチドを含む、組成物。
【請求項２１】
前記糖ペプチド上のアクセプター部分の少なくとも８０％が、グリコシル化されている、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
糖ペプチドが、固体支持体に結合されている、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記糖ペプチドが、全長アミノ酸配列を有する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
前記糖ペプチドが、細胞上にある、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
変異体アミダーゼについてのアクセプター部分を含むポリペプチドのグリコシル化パターンを改変するための大規模方法であって、該方法は、
少なくとも約５００ｍｇのポリペプチドと、該変異体アミダーゼについてのグリコシルドナー部分および該変異体アミダーゼを含む反応混合物とを、グリコシル残基を、該グリコシルドナー部分から該アクセプター部分へと転移させるのに適切な条件下で接触させて、それにより改変されたグリコシル化パターンを有する糖タンパク質を生成する工程を包含する、
方法。
【請求項２６】
前記改変されたグリコシル化パターンが、均一なグリコシル化パターンである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ポリペプチドが、組換えポリペプチドである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
請求項２５に記載の方法であって、前記ポリペプチドが、グリコシルトランスフェラーゼについてのアクセプター部分を含み、該方法は、該ポリペプチドと、グリコシルドナー部分およびグリコシルトランスフェラーゼを含む反応混合物とを、グリコシル残基を該グリコシルドナー部分からグリコシルトランスフェラーゼアクセプター部分へと転移させるのに適切な条件下で接触させる工程をさらに包含する、方法。
【請求項２９】
請求項２５に記載の方法によって調製されたペプチド。
【請求項３０】
既知のグリコシル化パターンを有する糖ペプチドに同一であるグリコシル化パターンを有する糖ペプチドを精製する大規模方法であって、該方法は、以下：
（ａ）少なくとも約５００ｍｇのポリペプチドと、グリコシルドナー部分および変異体ＰＮＧａｓｅ−Ｆアミダーゼを含む反応混合物とを、グリコシル残基を該グリコシルドナー部分から該ポリペプチド上のグリコシルアクセプター部分へと転移させるのに適切な条件下で接触させる工程；ならびに
（ｂ）該既知のグリコシル化パターンと同一のグリコシル化パターンが得られた場合、該グリコシルアクセプターへの該グリコシル残基の転移を終結させる工程、であって、ここで、該ＰＮＧａｓｅ−Ｆアミダーゼが、野生型ＰＮＧａｓｅ−Ｆアミダーゼ配列に対応する、６０位のＡＳＰ、２０６位のＧｌｕおよび１１８位のＧｌｕからなる群から選択される活性部位の酸性アミノ酸残基についてのアミノ酸残基の置換を含む、工程、
を包含する、方法。
【請求項３１】
請求項３０に記載の方法であって、以下：
（ｃ）前記糖ペプチドのグリコシル化パターンをアッセイし、それにより、該グリコシル化パターンが、前記既知のグリコシル化パターンと同一であるか否かを決定する工程、をさらに包含する、方法。
【請求項３２】
請求項３０に記載の方法であって、前記終結する工程が、前記反応混合物における、前記変異体アミダーゼ、前記グリコシルドナー、前記グリコシルアクセプターから選択されるメンバーの消費、キレーターでのクエンチ、およびそれらの組合せに起因する、方法。
【請求項３３】
前記ポリペプチドが、組換えポリペプチドである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
請求項３０に記載の方法により調製されたペプチド。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
本発明の方法において使用される特定のグリコシルドナー分子は、本発明の重要な局面ではない。任意の所望の糖質構造が、本発明の方法を使用して糖ペプチドに付加され得、そして利用されるグリコシダーゼの基質特異性に依存して、ある程度制御され得る。代表的に、この構造は、ヒト糖ペプチドにて共通して見出される、バイアンテナ構造、トリアンテナ構造、またはテトラアンテナ構造を含む。