【手続補正書】
【提出日】平成21年5月7日(2009.5.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内で活性な作用物質としてのＬ−核酸の使用。
【請求項２】
Ｌ−核酸がシュピーゲルマーであることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｌ−核酸が細胞内受容体と相互作用することを特徴とする請求項１ないし２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４】
細胞内受容体が転写因子およびＡＴフックを結合するＤＮＡ結合タンパク質を含んでなる群から選択され、ここで、細胞内受容体がＨＭＧタンパク質を含んでなる群、好ましくはＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ１ａ、ＨＭＧＡ１ｂおよびＨＭＧＡ２を含んでなる群から選択されること
を特徴とする請求項３に記載の使用。
【請求項５】
細胞内受容体を結合する方法であって：
−少なくとも１つの細胞内受容体を含有する細胞を準備し、
−Ｌ−核酸を準備し、ここでＬ−核酸がシュピーゲルマーであり、そして
−細胞をＬ−核酸とインキュベーションする、
ことを含んでなる上記結合方法。
【請求項６】
インキュベーションが、Ｌ−核酸が細胞内で細胞内受容体に結合するような条件下で起こることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
細胞内受容体が転写因子およびＡＴフックを結合するＤＮＡ結合タンパク質を含んでなる群から選択され、ここで細胞内受容体がＨＭＧタンパク質を含んでなる群、好ましくはＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ１ａ、ＨＭＧＡ１ｂおよびＨＭＧＡ２を含んでなる群から選択される
ことを特徴とする請求項５ないし６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
疾患の処置および／または防止の薬剤を製造するためのＬ−核酸の使用であって、薬剤の標的分子が細胞内標的分子であり、ここでＬ−核酸がシュピーゲルマーである、上記使用。
【請求項９】
標的分子が転写因子およびＡＴフックを結合するＤＮＡ結合タンパク質を含んでなる群から選択され、ここで標的分子がＨＭＧタンパク質を含んでなる群、そして好ましくはＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ１ａ、ＨＭＧＡ１ｂおよびＨＭＧＡ２を含んでなる群から選択される
ることを特徴とする請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
疾患が腫瘍疾患、ウイルス感染および動脈硬化症を含んでなる群から選択されることを特徴とする、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
腫瘍疾患が間葉腫瘍、上皮腫瘍、良性腫瘍、悪性腫瘍および転移している腫瘍を含んでなる群から選択されることを特徴とする請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
標的分子がＨＭＧＡであり、そして疾患が前立腺、膵臓、甲状腺、頚、胃、胸、結腸／直腸、卵巣の癌腫；神経芽腫；リンパ腫、子宮平滑筋腫；脂肪腫；子宮内膜ポリープ；肺の軟骨様過誤腫；唾液腺の多形腺腫；血管周囲細胞腫：軟骨種性の腫瘍；浸潤性血管粘液腫；拡散星状細胞腫；骨巨細胞腫；皮膚ガン；バーキットリンパ腫；ルイス肺癌；白血病；非−小細胞肺癌腫；ならびに各々の場合でその転移および／または転移している形態を含んでなる群から選択される、請求項９ないし１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
動脈硬化症がＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ１ａ、ＨＭＧＡ１ｂおよび／またはＨＭＧＡ２により媒介される動脈硬化性プラークの形成により誘発または引き起こされることを特徴とする、請求項１０に記載の使用。
【請求項１４】
細胞内標的分子が細胞内に存在することを特徴とする請求項８ないし１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
診断目的の診断薬の製造のためのＬ−核酸の使用であって、診断薬の標的分子が細胞内標的分子であり、ここでＬ−核酸がシュピーゲルマーである上記使用。
【請求項１６】
標的分子が転写因子およびＡＴフックを結合するＤＮＡ結合タンパク質を含んでなる群から選択され、ここで標的分子がＨＭＧタンパク質を含んでなる群、そして好ましくはＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ１ａ、ＨＭＧＡ１ｂおよびＨＭＧＡ２を含んでなる群から選択されること
を特徴とする請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
疾患が腫瘍疾患、ウイルス感染および動脈硬化症を含んでなる群から選択されることを特徴とする、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
標的分子がＨＭＧＡであり、そして疾患が前立腺、膵臓、甲状腺、頚、胃、胸、結腸／直腸、卵巣の癌腫；神経芽腫；リンパ腫、子宮平滑筋腫；脂肪腫；子宮内膜ポリープ；肺の軟骨様過誤腫；唾液腺の多形腺腫；血管周囲細胞腫；軟骨腫性の腫瘍；浸潤性血管粘液腫；拡散星状細胞腫；骨巨細胞腫；皮膚ガン；バーキットリンパ腫；ルイス肺癌；白血病；非−小細胞肺癌腫；ならびに各々の場合でその転移および／または転移している形態を含んでなる群から選択されることを特徴とする、請求項１６ないし１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
細胞内標的分子が細胞内に存在することを特徴とする請求項１５ないし１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
細胞内標的分子に結合するＬ−核酸および送達ベヒクルを含んでなり、ここでＬ−核酸がシュピーゲルマーである組成物。
【請求項２１】
送達ベヒクルが、Ｌ−核酸の細胞内送達に適する送達ベヒクルであることを特徴とする請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
送達ベヒクルがベヒクル、コンジュゲートおよび物理的手段を含んでなる群から選択されることを特徴とする、請求項２０または２１に記載の組成物。
【請求項２３】
送達ベヒクルがベヒクルであり、ここでベヒクルがリポソーム、ナノ粒子、ミクロ粒子、シクロデキストリンまたはデンドリマーを含んでなる群から選択されるか、あるいはポリペプチド、ポリエチレンイミンおよび／または両親媒性分子からなる小胞であることを特徴とする、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
送達ベヒクルがコンジュゲートであり、コンジュゲートが受容体−ベヒクル性のエンドサイトーシスのコンジュゲート、フューゾジェニックペプチドを含むコンジュゲート、シグナルペプチドを含むコンジュゲート、核酸を含むコンジュゲート、好ましくはシュピーゲルマーを含むコンジュゲートであるか、または親油性コンジュゲートであることを特徴とする、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
送達ベヒクルが物理的手段であり、手段が好ましくは電気穿孔法、イオン導入法、圧、超音波およびショック波を含んでなる群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２６】
送達ベヒクルがポリエチレンイミンを含んでなることを特徴とする請求項２３に記載の組成物。
【請求項２７】
ポリエチレンイミンが約２５ｋＤａの分子量を有する分枝ポリエチレンイミンであることを特徴とする請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
ポリエチレンイミンがミセルまたはミセル様構造を形成することを特徴とする請求項２６または２７に記載の組成物。
【請求項２９】
シュピーゲルマーが修飾を持ち、修飾がＰＥＧ残基を含んでなる群から選択されることを特徴とする請求項２０ないし２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３０】
ＰＥＧ残基が約１，０００〜１０，０００Ｄａの分子量、好ましくは約１，５００〜２，５００Ｄａの分子量、そして最も好ましくは約２，０００Ｄａの分子量を有することを特徴とする、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
修飾がＬ−核酸の５’末端または３’末端に結合していることを特徴とする請求項２９ないし３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
組成物中、組成物に含まれる核酸のリン酸基の総数に対するポリエチレンイミンの窒素基の総数の比が、約１〜２０、好ましくは約１．５〜１０、より好ましくは約２〜５、そして最も好ましくは約２〜３であることを特徴とする、請求項２０ないし３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
組成物がＬ−核酸を細胞内に提供することを特徴とする、請求項２０ないし３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
請求項２０ないし３３のいずれか１項に記載の組成物、および製薬学的に許容され得る担体を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項３５】
Ｌ−核酸が請求項２０ないし３４のいずれか１項に記載の組成物である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３６】
Ｌ−核酸が請求項２０ないし３４のいずれか１項に記載の組成物である、請求項５ないし７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
Ｌ−核酸が請求項２０ないし３４のいずれか１項に記載の組成物である、請求項８ないし１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３８】
Ｌ−核酸が請求項２０ないし３４のいずれか１項に記載の組成物である、請求項１５ないし１９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３９】
核酸が区分ボックス  Ａ１および区分ボックス  Ａ２を含んでなり、区分ボックス  Ａ１および区分ボックス  Ａ２は中間区分により互いに連結され、そしてボックス  Ａ１およびボックス  Ａ２は互いに個別に、そして独立してＧＧＧＣＧ、ＧＧＧＵＧおよびＧＧＧＡＧを含んでなる群から選択されることを特徴とするＨＭＧＡ結合核酸。
【請求項４０】
中間区分が、６もしくは７個のヌクレオチドを含んでなる中間区分Ｚ１、または１２〜２５個のヌクレオチドを含んでなる中間区分Ｚ２のいずれかからなることを特徴とする、請求項３９に記載のＨＭＧＡ結合核酸。
【請求項４１】
核酸が区分ボックス  Ａ１の５’末端で第１区分を含んでなり、そして区分ボックス  Ａ２の３’末端が第２区分を含んでなり、ここで好ましくは両区分が互いに独立して各々の場合で４〜８個のヌクレオチドを含んでなることを特徴とする、請求項３９または４０に記載のＨＭＧＡ結合核酸。
【請求項４２】
２つの区分が少なくとも一部、または完全に互いにハイブリダイズし、ハイブリダイゼーションが４〜８ヌクレオチド対に延びることを特徴とする請求項４１に記載のＨＭＧＡ結合核酸。
【請求項４３】
核酸が、区分ボックス  Ａ１の５’末端で区分ヘリックスＡ１を含んでなり、そして区分ボックス  Ａ２の３’末端で区分ヘリックスＡ２を含んでなり、ここで好ましくは区分ヘリックスＡ１が４〜８個のヌクレオチドを含んでなり、そして好ましくは区分ヘリックスＡ２が４〜８個のヌクレオチドを含んでなり、そしてここで好ましくは区分ヘリックスＡ１が区分ボックスＡ１の５’末端またはその一部に第１区分を形成し、そしてここで好ましくは区分ヘリックスＡ２が区分ボックスＡ２の３’末端またはその一部に第２区分を形成し、区分ヘリックスＡ１の長さが区分ヘリックスＡ２の長さから独立していることを特徴とする請求項４１または４２に記載のＨＭＧＡ結合核酸。
【請求項４４】
以下の構造
【化１】
2008540363.tif 000001
ここで
Ｎ1＝Ｕ、Ｃ、ＡまたはＧ；
Ｎ2＝ＧまたはＵ；
Ｎ3＝ＵまたはＣ；
Ｎ4＝ＵまたはＡ；
Ｎ5＝ＧまたはＡ；
Ｎ6＝Ｇ、ＡまたはＵ；
Ｎ7＝ＧまたはＵ；
Ｎ8＝Ｕまたはヌクレオチド無し
Ｎx＝０〜５個のヌクレオチド
Ｎy＝０または６個のヌクレオチド；そして
Ｎz＝０〜６個のヌクレオチド；
ここで区分ボックスＡ１および区分ボックスＡ２が各々の場合で個別に、そして互いに独立してＧＧＧＣＧ、ＧＧＧＵＧおよびＧＧＧＡＧを含んでなるヌクレオチド配列の群から選択され；
区分ヘリックスＡ１および区分ヘリックスＡ２が各々の場合で個別に、そして互いに独立して４〜８個のヌクレオチドを含んでなり、ここで好ましくは区分ヘリックスＡ１および区分ヘリックスＡ２は互いに完全に、または部分的にハイブリダイズし、そして
区分ヘリックスＢ１および区分ヘリックスＢ２が各々の場合で個別に、そして互いに独立して４〜８個のヌクレオチドを含んでなり、ここで好ましくは区分ヘリックスＢ１および区分ヘリックスＢ２は互いに完全に、または部分的にハイブリダイズし、そしてハイブリダイズする領域が４〜８個のヌクレオチドを含んでなり、そしてここで区分ヘリックスＡ１と区分ヘリックスＡ２との、および区分ヘリックスＢ１と区分ヘリックスＢ２とのハイブリダイゼーションからハイブリダイズしたヌクレオチドの和が１０〜１２ヌクレオチド対である、を含んでなる請求項３９ないし４３のいずれか１項に記載のＨＭＧＡ結合核酸。
【請求項４５】
以下の構造
【化２】
2008540363.tif 000002
ここで
Ｎ1＝Ｕ、Ｃ、ＡまたはＧ；
Ｎ2＝ＧまたはＵ；
Ｎ3＝ＵまたはＣ；
Ｎ4＝ＵまたはＡ；
Ｎ5＝ＧまたはＡ；
Ｎ6＝Ｇ、ＡまたはＵ；
Ｎ7＝ＧまたはＵ；
Ｎ8＝Ｕまたはヌクレオチド無し；
Ｎx＝０〜５個のヌクレオチド；そして
Ｎz＝０〜６個のヌクレオチド；
ここで区分ボックスＡ１および区分ボックスＡ２が各々の場合で個別に、そして互いに独立してＧＧＧＣＧ、ＧＧＧＵＧおよびＧＧＧＡＧを含んでなるヌクレオチド配列の群から選択され；
区分ヘリックスＡ１および区分ヘリックスＡ２が各々の場合で個別に、そして互いに独立して４〜８個のヌクレオチドを含んでなり、ここで好ましくは区分ヘリックスＡ１および区分ヘリックスＡ２は互いに完全に、または部分的にハイブリダイズし、そして
区分ヘリックスＢ１および区分ヘリックスＢ２が各々の場合で個別に、そして互いに独立して４〜８個のヌクレオチドを含んでなり、ここで好ましくは区分ヘリックスＢ１および区分ヘリックスＢ２は互いに完全に、または部分的にハイブリダイズし、そしてハイブリダイズする領域が４〜８個のヌクレオチドを含んでなり、そしてここで区分ヘリックスＡ１と区分ヘリックスＡ２との、および区分ヘリックスＢ１と区分ヘリックスＢ２とのハイブリダイゼーションからハイブリダイズしたヌクレオチドの和が１０〜１２ヌクレオチド対である、を含んでなる請求項３９ないし４３のいずれか１項に記載のＨＭＧＡ結合核酸。
【請求項４６】
以下の構造
【化３】
2008540363.tif 000003
を含んでなる請求項４４に記載のＨＭＧＡ結合核酸。
【請求項４７】
以下の構造
【化４】
2008540363.tif 000004
を含んでなる請求項４５に記載のＨＭＧＡ結合核酸。
【請求項４８】
以下の構造
【化５】
2008540363.tif 000005
ここで
Ｎa＝１〜５個のヌクレオチド；
Ｎb＝３個のヌクレオチド；
Ｎc＝３〜５個のヌクレオチド；
Ｎd＝２〜５個のヌクレオチド；そして
Ｎc＝１〜２個のヌクレオチド、好ましくはＡまたはＵＵ；
区分ボックスＡ１および区分ボックスＡ２が各々の場合で個別に、そして互いに独立してＧＧＧＣＧ、ＧＧＧＵＧおよびＧＧＧＡＧを含んでなる群から選択され；
区分ヘリックスＡ１および区分ヘリックスＡ２が各々の場合で個別に、そして互いに独立して５〜６個のヌクレオチドを含んでなり、そして
区分ヘリックスＣ１および区分リックスＣ２は各々の場合で５もしくは６個のヌクレオチドを含んでなり、これらは好ましくは互いに完全に、または部分的にハイブリダイズする、
を含んでなる請求項３９ないし４３のいずれか１項に記載のＨＭＧＡ結合核酸。
【請求項４９】
以下の構造
【化６】
2008540363.tif 000006
ここで
Ｎiは２個のヌクレオチドを含んでなり、そして好ましくはＣＡであり；
Ｎjは２個のヌクレオチドを含んでなり、そして好ましくはＡＧであり；
Ｎcは４個のヌクレオチドを含んでなり、そして好ましくはＧＡＵＧであり；
区分ボックスＡ１および区分ボックスＡ２が各々の場合で個別に、そして互いに独立して配列ＧＧＧＣＧ、ＧＧＧＵＧおよびＧＧＧＡＧを含んでなる群から選択され；
区分ヘリックスＡ１およびヘリックスＡ２が各々の場合で個別に、そして独立して６個のヌクレオチドを含んでなり、これらは好ましくは互いにハイブリダイズし；
区分ヘリックスＢ１および区分ヘリックスＢ２が各々の場合で個別に、そして独立して５個のヌクレオチドを含んでなり、ここで好ましくは区分ヘリックスＢ１および区分ヘリックスＢ２は互いにハイブリダイズし、そして
区分ヘリックスＣ１および区分ヘリックスＣ２が各々の場合で個別に、そして独立して３個のヌクレオチドを含んでなり、ここで好ましくは区分ヘリックスＣ１および区分ヘリックスＣ２が互いハイブリダイズする、
を含んでなる請求項３９ないし４３のいずれか１項に記載のＨＭＧＡ結合核酸。