(57)【要約】【課題】  外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着の治療または防止のための乾燥粉末組成物、及びその使用方法を提供する。【解決手段】  乾燥粉末組成物は、トレハロースを含有することができる。乾燥粉末組成物は、フィブリノーゲンおよび／またはトロンビンを含むフィブリンシーラント組成物であり得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の被験動物（人間を除く）における組織癒着形成を減少または防止する方法であって、トレハロース、又はその異性体、塩、誘導体を含む所定量の乾燥粉末組成物を該外科手術または創傷療法の間に露出または分離された組織に局所的に投与することを含む方法。
【請求項２】
トレハロース、又はその異性体、塩、誘導体を含み、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着の治療または防止のための医薬として使用される乾燥粉末組成物。
【請求項３】
フィブリノーゲンまたはトロンビンの少なくとも一方をさらに含む請求項２に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項４】
０．５〜２０％ｗ／ｗフィブリノーゲンまたは２５〜１０００ＩＵ／ｇトロンビンの少なくとも一方を含む請求項３に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項５】
フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、及びトロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物をさらに含む請求項２に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項６】
前記第１マイクロ粒子は、０．５〜２０％ｗ／ｗフィブリノーゲンを含む請求項５に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項７】
水和結晶トレハロース、無水結晶トレハロース、無水非晶質トレハロース、α，α−トレハロース、α，β−トレハロース（ネオ−トレハロース）、β，β−トレハロース（イソ−トレハロース）、またはその混合物を含む請求項２〜６のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項８】
フィブリンシーラントである請求項２〜７のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項９】
フィブリンシーラントであり、前記第１マイクロ粒子は０．５〜２０％ｗ／ｗフィブリノーゲンを含有する請求項５に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項１０】
フィブリンシーラントであり、前記第２マイクロ粒子は２５〜１０００ＩＵ／ｇトロンビンを含む請求項５に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項１１】
０．００１〜９５％ｗ／ｗの添加材料を含む請求項８〜１０のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項１２】
前記添加材料は、生体適合性があり吸水性の材料を含む請求項１１に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項１３】
前記添加材料は、生体適合性があり水膨潤性の材料を含む請求項１１に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項１４】
前記添加材料は、生体適合性があり非水溶性の材料を含む請求項１１に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項１５】
前記添加材料は、ポリサッカライドを含む請求項１１に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項１６】
前記添加材料は、１０ｎｍ〜１０００μｍの平均粒子サイズを有する請求項８〜１５のいずれか一項に記載の方法または乾燥粉末組成物。
【請求項１７】
前記平均粒子サイズは、１０〜５００μｍである請求項１６に記載の乾燥粉末組成物。
【請求項１８】
外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の被験動物（人間を除く）における組織癒着形成を減少または防止する方法であって、フィブリノーゲンおよび／またはトロンビンを含む所定量の乾燥粉末組成物を、該外科手術または創傷療法の間の露出した組織または分離された組織に局所的に投与することを含む方法。
【請求項１９】
前記乾燥粉末組成物は、０．５〜２０％ｗ／ｗフィブリノーゲンまたは２５〜１０００ＩＵ／ｇトロンビンの少なくとも一方を含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記乾燥粉末組成物は、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、及びトロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物を含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
組織癒着の防止または緩和のための医薬品の製造における、トレハロース、異性体、塩またはその誘導体を含む乾燥粉末組成物の使用方法。
【請求項２２】
組織癒着の防止または緩和のための医薬品の製造における、フィブリノーゲンまたはトロンビンの少なくとも一方を含む乾燥粉末組成物の使用方法。
【請求項２３】
組織癒着の防止、治療または緩和のための医薬品の製造における、請求項２〜１７のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物、またはその構成要素の使用方法。
【請求項２４】
外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着の治療または防止に使用されるフィブリノーゲンまたはトロンビンの少なくとも一方を含む乾燥粉末組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、組織癒着（例えば手術後の癒着）を防止または軽減する乾燥粉末組成物、及びその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
例えば慢性骨盤痛の症例のうちの約４０％および不妊の症例のうちの約２０％が手術後の癒着により引き起こされるので、手術後の癒着は臨床的および医薬経済的に重要な関連性がある。実際、補助療法を用いることなしに癒着は防止することができず、あらゆる微細な外傷は癒着の形成をもたらし得る。
【０００３】
ヒアルロン酸ナトリウム／カルボキシメチルセルロースフィルム、コラーゲンの膜およびゲル、加えてフィブリン接着剤等の、外科手術上の癒着の軽減に陽性効果を有する多くの材料が見出されている。
【０００４】
ＥＰ１９０５４４３（特許文献１）は、外科手術の間または外科手術後の癒着の軽減および／または防止のためのトレハロースを含有する溶液の投与を記載する。
【０００５】
Ｌｅｅ他  （Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ  ＆  Ｓｕｒｇｅｒｙ，  Ｖｏｌ．  ４０，  ｐｐ．１９−２６  （２００９））は、内臓の表面上にトレハロース溶液と併用してナトリウムカルボキシメチルセルロースの溶液を噴霧することによる、ウサギモデルにおける卵巣子宮摘出術後の内部臓器の実験的に誘導された手術後の癒着の軽減を開示する。
【０００６】
液体フィブリン接着剤の抗癒着に対する効果は論争の的になっている。多くの報告により、かかる液体フィブリン接着剤を使用する手術後の癒着の防止の可能性が示唆された（例えばＢｒａｎｄｓ他  Ｃｈｉｒｕｒｇ  ６１  （１９９０）：  ２２−２６；  Ｌｉｎｄｅｎｂｅｒｇ他  Ａｎｎ．  Ｃｈｉｒ．  Ｇｙｎｅｃｏｌ．  ７３  （１９８４）：  １  １  −１３；  Ｄｅ  ｌａｃｏ他  Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ  ６２  （２）  （９４）：  ４００−４０４；  Ｔａｋｅｕｃｈｉ他  Ｊ．  Ａｍ．  Ａｓｓｏｃ．  Ｇｙｎｅｃｏｌ．  Ｌａｐａｒｏｓｃ．  ３  （４）  （１９９６）：  ５７５−５７９；  Ｍａｒｔｉ  ｎ−Ｃａｒｔｅｚ他  Ｓｕｒｇ  Ｔｏｄａｙ，  ２００８，  ３８（２）：  １３５−４０）。しかしながら、他の研究では、癒着形成の防止に対する有意な効果、または外科手術後癒着合併症を生じた後の生殖に対する効果は見出されなかった（例えばＭａｒａｎａ他  Ｇｙｎｅｃｏｌ．  Ｏｂｓｔｅｔ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ４１  （１９９６）：  １９９−２０２  ａｎｄ  Ｇａｕｗｅｒｋｙ他  Ａｒｃｈ．  Ｇｙｎｅｃｏｌ．  Ｏｂｓｔｅｔ．  ２４７  （１９９０）：  １６１−１６６を参照）。
【０００７】
最近の比較試験は、コラーゲンゲル、コラーゲン膜およびヒアルロン酸ナトリウム／カルボキシメチルセルロースフィルムが効果的に癒着形成を減少させるが、癒着形成に対する液体フィブリン接着剤の効果は類似実験と同様であることを示した。
【０００８】
それゆえ、組織癒着を効率的に減少または防止する方法および組成物を提供することが本発明の目的である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】欧州特許出願公開ＥＰ１９０５４４３号明細書
【発明の概要】
【００１０】
本発明の第１の態様において、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着を減少または防止する方法であって、効果的な量のトレハロース含有乾燥粉末を、上記外科手術または創傷療法の間に露出または分離された組織に局所的に投与することを含む方法が提供される。
関連する態様において、本発明は、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着の治療または防止のための医薬として使用される、トレハロース含有乾燥粉末形態組成物を提供する。
意外にも、かかるトレハロース含有乾燥粉末組成物が手術において補助剤として用いられた場合、外科手術後の癒着は減少または防止されることが見出された。
【００１１】
本発明の第２の態様において、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着を減少または防止する方法であって、効果的な量の乾燥粉末フィブリンシーラント組成物を、上記外科手術または創傷療法の間に露出または分離された組織に局所的に投与することを含む方法が提供される。
関連する態様において、本発明は、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着の治療または防止のための医薬として使用される、乾燥粉末フィブリンシーラント形態の組成物を提供する。
【００１２】
本発明の第３の態様において、外科手術の間もしくはその手術後または創傷療法の間の組織癒着を減少または防止する方法であって、効果的な量の乾燥粉末フィブリンシーラント組成物を、上記外科手術または創傷療法の間に露出した組織または分離された組織に局所的に投与することを含み、上記乾燥粉末フィブリンシーラント組成物がフィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子およびトロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物を含む方法が提供される。
関連する態様において、本発明は、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着の治療または防止のための医薬として使用される、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子およびトロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物を含む、乾燥粉末フィブリンシーラント形態の組成物を提供する。
【００１３】
本発明の第４の態様において、外科手術の間もしくはその手術後または創傷療法の間の組織癒着を減少または予防する方法であって、効果的な量の乾燥粉末フィブリンシーラント組成物を、上記外科手術または創傷療法の間に露出または分離された組織に局所的に投与することを含み、上記乾燥粉末フィブリンシーラント組成物がフィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、トロンビンを含む第２マイクロ粒子、およびさらに含まれる添加材料の混合物を含む方法が提供される。
関連する態様において、本発明は、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着の治療または防止のための医薬として使用される、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子およびトロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、ならびに添加材料を含む、乾燥粉末フィブリンシーラント形態の組成物を提供する。
【００１４】
本発明の第５の態様において、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着を減少または予防する方法であって、効果的な量の乾燥粉末フィブリンシーラント組成物を、上記外科手術または創傷療法の間に露出した組織または分離された組織に局所的に投与することを含み、上記乾燥粉末フィブリンシーラント組成物がフィブリノーゲンおよびトレハロースを含む第１マイクロ粒子ならびにトロンビンおよびトレハロースを含む第２マイクロ粒子の混合物を含む方法が提供される。
関連する態様において、本発明は、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着の治療または防止のための医薬として使用される、フィブリノーゲンおよびトレハロースを含む第１マイクロ粒子ならびにトロンビンおよびトレハロースを含む第２マイクロ粒子を含む、乾燥粉末フィブリンシーラント形態の組成物を提供する。
【００１５】
本発明の第６の態様において、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着を減少または予防する方法であって、効果的な量の乾燥粉末フィブリンシーラント組成物を、上記外科手術または創傷療法の間に露出した組織または分離された組織に局所的に投与することを含み、上記乾燥粉末フィブリンシーラント組成物がフィブリノーゲンおよびトレハロースを含む第１マイクロ粒子とトロンビンおよびトレハロースを含む第２マイクロ粒子の混合物、ならびに添加材料を含む方法が提供される。
関連する態様において、本発明は、外科手術の間もしくはその手術後または創傷療法の間の組織癒着の治療または防止のための医薬として使用される、フィブリノーゲンおよびトレハロースを含む第１マイクロ粒子とトロンビンおよびトレハロースを含む第２マイクロ粒子の混合物、ならびに添加材料を含む、乾燥粉末フィブリンシーラント形態の組成物を提供する。
【００１６】
本発明の第７の態様において、外科手術の間または外科手術後の組織癒着を減少または予防する方法であって、効果的な量の乾燥粉末フィブリンシーラント組成物を 上記外科手術または創傷療法の間に露出した組織または分離された組織に局所的に投与することを含み、上記乾燥粉末フィブリンシーラント組成物が、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子とトロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、ならびに添加材料を含み、添加材料がポリサッカライドまたは化学的に改良したポリサッカライドを含む方法が提供される。
関連する態様において、本発明は、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子とトロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、および添加材料を含む、乾燥粉末フィブリンシーラント形態の医薬組成物であって、外科手術の間もしくは外科手術後または創傷療法の間の組織癒着の治療または防止のための医薬として使用され、添加材料がポリサッカライドまたは化学的に改良したポリサッカライドを含む組成物を提供する。
【００１７】
第８の態様において、本発明は、任意で分注装置と共に、本発明に記載の組成物を含むキットを提供する。
【００１８】
第９の態様において、本発明は、組織癒着の防止、治療または緩和のための医薬品の製造における、本発明の組成物またはその構成要素の使用方法を提供する。
【００１９】
ＷＯ９７／４４０１５は、フィブリノーゲンおよびトロンビンのマイクロ粒子に基づく乾燥粉末フィブリンシーラントを記載する。これらのマイクロ粒子組成物のさらに最適化された処方は同時係属出願ＵＳ１２／６３６，７１８中に記載され、これは参照として本明細書に援用される。この米国出願の例において、構成要素はトレハロースとフィブリノーゲンおよびトレハロースとトロンビンを個別に噴霧乾燥することによって調製されている。各々の製品は、最大５０μｍ直径が優勢な粒子サイズである。これらの構成要素の混合物であるフィブリンシーラントは、使いやすく安定し効果的な局所止血剤であることが実証されている。製品は再構成なしに直ちに使用することができる。血液等の液体との接触に際して、露出された活性トロンビンは、露出されたフィブリノーゲンを不溶性フィブリンポリマーに転換する。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明の第１の態様は、トレハロースが粉末組成物中に存在するときの新規用途の発見に基づく。本発明に記載の方法は、トレハロース含有乾燥粉末組成物の手術部位または創傷への投与による、組織癒着の減少または防止に効果的である。本発明に記載の方法により患者において減少または防止される癒着は、器官、器官の部分もしくは他の組織に対する癒着、またはそれらの間の癒着であり得る。癒着は器官および／または他の組織の間の異常な癒着としても定義できる。
【００２１】
本発明の他の実施形態において、効果的な量の乾燥粉末フィブリンシーラントを外科手術または創傷療法の間の露出または分離された組織に局所的に投与することは、癒着を減少または防止する。
【００２２】
本発明の他の実施形態において、効果的な量の乾燥粉末フィブリンシーラントを外科手術または創傷療法の間の露出または分離された組織に局所的に投与することは、癒着を減少または防止する。ここで 上記乾燥粉末フィブリンシーラント組成物はフィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子および／またはトロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物を含む。
【００２３】
フィブリンは癒着の軽減または防止において役割を果たすことが公知である。理論により束縛されるものではないが、粉末形態でのトロンビンおよびフィブリノーゲンの反応は、それによって乾燥粉末が少量の血液または血漿などの中に溶解されるので、液体フィブリンシーラントまたはフィブリン接着剤を使用する場合に見出されるよりも濃厚なフィブリン層の形成をもたらすと考えられる。フィブリンのこの濃厚なバリアは抗癒着効果を促進する。
【００２４】
癒着は多くの場合、器官を含む組織の正常な動きを阻害する、それゆえ、外科手術後の深刻な合併症と判断される。例えば、腱の手術後の癒着は運動障害をもたらし得る。さらに、腹腔内の外科手術後の器官癒着は、腸閉塞、疼痛および不妊等の合併症を引き起こし得る。
【００２５】
乾燥粉末トロンビン調製物および／または乾燥粉末フィブリノーゲン調製物が使用される場合、それらは好適な投与装置と共にセットとして提供することが好ましい。
【００２６】
減少または防止される癒着は、産婦人科系外科手術、腹部外科手術、脊椎外科手術および腹腔鏡外科手術から生じ得ることが好ましいが、本組成物は、開胸術または腹壁切開術だけでなく、肝臓外科手術、脳外科手術処置、腱または靭帯に関する整形外科手術処置など、さらには、創傷療法においても広範囲で使用することができる。
【００２７】
本発明に記載の調製物の「効果的な量」は、かかる投与のない対照群と比較して、癒着形成を有意に減少または阻止できる、任意の量である。
【００２８】
さらなる態様によれば、本発明は、外科手術の間または外科手術後の癒着形成の軽減または防止のための調製物の生産に効果的な量のトレハロース、またはその異性体、塩、誘導体を含む、乾燥粉末フィブリンシーラント／組成物の使用に関する。
【００２９】
組成物は、潤滑特性を有する少なくとも１つ以上のポリサッカライド、ムコポリサッカライド、ポリサッカライドの塩、およびムコポリサッカライドの塩も含むことができる。ベンジル化ヒアルロン酸および同種のもの等の化学的に改良したムコポリサッカライドの誘導体も組成物中に存在することができる。
【００３０】
本明細書において、「組織」は、皮膚、器官、筋肉、神経、軟骨、骨等の体組織を指す。本発明の組織癒着防止のための乾燥粉末組成物組成物は、様々な動物（哺乳類種）に適用することができる。
【００３１】
トレハロースは、動物、野菜および微生物を含む天然において広範囲で存在する。トレハロースはパン酵母および醸造酵母等の酵母中に含有され、それは多くの場合、食品中に見出されるサッカライドである。
【００３２】
本発明中に用いることができるトレハロースの好適な形態またはアイソフォームは、水和結晶トレハロース、無水結晶トレハロース、無水非晶質トレハロース、α，α−トレハロース、α，β−トレハロース（ネオ−トレハロース）、β，β−トレハロース（イソ−トレハロース）、またはその混合物を含む。
【００３３】
カルボキシル基を含有するポリサッカライド、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルキチン、カルボキシメチルキトサン、カルボキシメチルスターチ、アルギン酸、ペクチン、カルボキシメチルデキストランなども存在してもよい。存在してもよいムコポリサッカライドはヒアルロン酸（ＨＡ）、ヘパリン、ヘパリン硫酸、およびコンドロイチン硫酸も含む。水溶性塩として、ナトリウム塩、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩を使用できる。カルボキシメチルセルロースおよび化学的に改良したヒアルロン酸等の組み合わせも含まれてもよい。
【００３４】
トレハロースを含む、それぞれのフィブリノーゲン含有可溶性マイクロ粒子およびトロンビン含有可溶性マイクロ粒子は、安定した乾燥形態で、処方し、混合することができる。本処方は、続いて創傷療法および外科的修復において役立つフィブリンシーラントとして用いることができる。
【００３５】
フィブリノーゲンおよびトロンビンはヒトドナーからの血液から単離されるか、または培養細胞または遺伝子導入の動物もしくは植物において組換えＤＮＡ技術によって作製することができる。フィブリノーゲンまたはトロンビンは全体またはその任意の活性フラグメントであり得る。
【００３６】
フィブリノーゲンを含有するマイクロ粒子中のフィブリノーゲンの含有量は約０．１〜５０％ｗ／ｗであり、約０．５〜２０％ｗ／ｗおよび５〜１０％ｗ／ｗ、または約６．５％ｗ／ｗであることが好ましい。トロンビンを含有するマイクロ粒子中のトロンビンの含有量は約１０〜２００００ＩＵ／ｇであり、約２５〜１０００ＩＵ／ｇ、または１００〜５００ＩＵ／ｇであることが好ましい。
【００３７】
活性含有マイクロ粒子および／または添加材料は、マイクロカプセルの事例等において、固体または中空あってもよい。例えば、ＷＯ９２／１８１６４、ＷＯ９６／０９８１４、ＷＯ９６／１８３８８またはＷＯ９７／４４０１５中に記載されているように、フィブリノーゲンまたはトロンビンを含むマイクロ粒子は、当該技術分野において公知の方法によって調製することができる。これらの噴霧乾燥プロセスおよび関連する粒子操作プロセスにより、定義されたサイズ分布（例えば直径最大５０μｍ）を持つ可溶性タンパク質マイクロカプセルの生産が可能になる。例えば、それらの文献中に記載されているように、マイクロ粒子は再現性良く生産することができ、例えば（体積で）９０％以上がサイズで最大３０μｍ、例えば１０〜２０μｍとなる。これらの粒子の易流動性凝集体は、当業者によって認識されるように、対抗流に対する噴霧乾燥器中の気流構成の調節によって、または「強制的一次凝集」の設定に複数の噴霧機を設置することによって、その場で（ｉｎ  ｓｉｔｕ）作製できる。かかる凝集体は、直径で、５０〜１０００μｍまたは１００〜５００μｍまたは１２５〜２５０μｍであり得る。ＷＯ０３／０３７３０３中に記載されているように、それぞれのフィブリノーゲン含有可溶性マイクロ粒子およびトロンビン含有可溶性マイクロ粒子は、マルチノズル噴霧機の使用によって、噴霧乾燥装置内で、処方してともに混合することができる。
【００３８】
乾燥粉末処方の調製の好ましい方法は噴霧乾燥を含むが、乾燥粉末処方の調製に他の乾燥技法を使用できる。好適な方法は当該技術分野において公知であり、流動層乾燥および凍結乾燥、そして続いて行なわれるマイクロ化、または噴霧凍結乾燥を含む。必要であるかまたは所望されるならば、マイクロ粒子は当該技術分野において公知の技法を使用して滅菌できる。
【００３９】
本発明のマイクロ粒子は、好ましくは噴霧乾燥によって調製される。一般的に、微粒化プロセスの間に圧縮空気を利用する２つの液体ノズルが使用され、これは中空性マイクロ粒子の生産をもたらす。Ｎｉｒｏ  Ｍｏｂｉｌｅ  Ｍｉｎｏｒ噴霧乾燥器上でこの微粒化システムを使用して製造することができるマイクロ粒子の最大の粒子サイズ（Ｘ５０、Ｓｙｍｐａｔｅｃによって測定されるものとして）は、〜３０μｍである。本発明のマイクロ粒子のＸ５０値は５〜５０μｍが好ましく、１０〜２０μｍが最も好ましい。マイクロ粒子は中空性または固体であり得る。
【００４０】
本発明の第１または第２マイクロ粒子は、サッカライド等の担体物質と共に、活性成分（例えばフィブリノーゲンまたはトロンビン）の溶液を噴霧乾燥することによって調製できる。代替手法は、活性成分が粒子へと組み込まれるマイクロ粒子を生ずるために活性成分および別の壁形成材料が処方され噴霧乾燥される、共噴霧乾燥を含む。
【００４１】
本発明の１つの実施形態において、乾燥粉末組成物は、外科手術の間また外科手術後の癒着の防止または軽減での使用に好適なフィブリノーゲンと共にトレハロースを含む。フィブリノーゲンおよびトレハロースは、本明細書において記載されるような噴霧乾燥または当業者に公知の他の技法によって、複合マイクロ粒子においてともに組み合わせることができる。
【００４２】
本発明の１つの実施形態において、フィブリノーゲンを含む個別のマイクロ粒子およびトロンビンを含む個別のマイクロ粒子をトレハロースと混合して、外科手術の間または外科手術後の癒着の防止または軽減での使用に好適な乾燥粉末組成物を生産する。
【００４３】
本発明の１つの実施形態において、固体または中空性のフィブリノーゲン含有マイクロ粒子は、均質混合物を生産する任意の順序で、固体または中空性のトロンビン含有マイクロ粒子および本明細書において記載されるような添加材料と混合される。かかる混合は、低剪断性もしくは高剪断性の混合、または当業者に公知の他の技法を使用して行なうことができる。
【００４４】
フィブリノーゲンまたはトロンビンは全体またはその任意の活性フラグメントであり得る。フラグメントは公知であり、Ｃｏｌｌｅｒ他，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８９：５４６−５５５  （１９９２）を参照されたい。フィブリノーゲン原材料は凍結溶液であってもよいが、噴霧乾燥の前に再構成を必要とする冷凍乾燥粉末が使用されてもよい。
【００４５】
好適な他のタンパク質は、天然に存在するものであるか、または培養細胞または遺伝子導入の動物もしくは植物において組換えＤＮＡ技術によって作製することができる。フィブリノーゲンまたはトロンビンは全体またはその任意の活性フラグメントであり得る。様々な実施例が示されるＷＯ９２／１８１６４中に記載されているように、それらは「壁形成材料」とし機能することができる。好ましい材料はＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）である。例えば、フィブリノーゲンは、単独でまたはＨＳＡ等の賦形剤の様々な量（例えば１：１、１：３、３：１のフィブリノーゲン：ＨＳＡ比））およびトレハロースの存在下において噴霧乾燥される。ＨＳＡの代わりの好適な他の代替物は、ツイーン２０、ツイーン８０、ポロキサマー４０７またはポロキサマー１８８等の界面活性剤を含む。カルシウムイオンは、例えば塩化カルシウムとして、トロンビンフィードストック中に組み込むことができる。あるいは、塩化カルシウムは処理後のマイクロ粒子に添加されてもよい。
【００４６】
本発明の特定の実施形態において、本発明において使用される添加材料は、一般的に１０〜１０００μｍ、または１００〜５００μｍ、または１２５〜２５０μｍ、または場合によっては、例えば１０〜４０μｍの平均粒子サイズを有する。添加物は１つの材料を含んでもよいし、または材料の混合物であってもよい。かかる添加材料は、活性材料のための担体および／または希釈剤として機能することができる。
【００４７】
上の段落において設定されたオーダーの粒子サイズを有する粒子の形態で存在できる添加材料は、生体適合性があり吸水性および／または水膨潤性の材料、ポリサッカライド、多孔質および／または中空性の材料のような添加物である。
【００４８】
かかる事例において、添加材料を、組成物の重量で約１％、約２％、約３％、約４％約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはその間の任意の範囲もしくは値で含んでもよい。
【００４９】
一般的に、かかる事例において、組成物は、少なくとも１％、または少なくとも５％または少なくとも１０％ｗ／ｗの添加材料、および最大６０％、最大７０％または最大８０％の添加材料を含む。したがって、添加物は、組成物の１％（または５％または１０％）〜８０％、または１％（または５％または１０％）〜７０％、または１％（または５％または１０％）〜６０％ｗ／ｗのレベルで存在することができる。
【００５０】
本発明の他の実施形態において、添加材料は一般的に約１０ｎｍ〜１０μｍの平均粒子サイズを有し、１つの材料を含んでもよいし、または材料の混合物であってもよい。
【００５１】
本発明の他の実施形態において、添加材料は固体の可溶性材料ではない。
【００５２】
様々な材料は、流動性および湿潤性などの促進のための添加粒子として存在してもよい。かかる材料は、デキストランポリマー（例えば、異なる粒子サイズで入手可能なセファデックス）、ヘタスターチを含むスターチ、プルラン誘導体、ヒアルロン酸およびそのエステルを含み得る。微結晶性セルロース等のセルロース製品（アビセルレンジ）、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、マイクロファインセルロースまたはヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよび架橋されたポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の他の材料は、単独でまたは混和物で使用できる。さらに、担体として機能する好適な添加材料は、好ましくは分子量約１０００を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；好ましくは平均分子量約５００００を有するポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）；ポリ（アクリル酸）、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）、ポリ（酸化エチレン）、および一般的に平均分子量約４００００を有するデキストランを含む。
【００５３】
他の好適な添加材料は可溶性であり、モノサッカライドおよびジサッカライドを含むサッカライド等であり、それらはラクトース、ラクトース一水和物、無水ラクトース、スクロース、マルトース、無水マルトース、フルクトース、マルチトール、ソルビトール、キシリトール、マンニトールまたはトレハロースそれ自体（フィブリノーゲンおよび／またはトロンビン含有マイクロ粒子中の担体物質がトレハロースを含まない場合に）を含む。好適なオリゴサッカライドは、デキストリン、硫酸デキストラン、プルラン、ヒアルロン酸およびその塩を単独または組み合わせで含む。
【００５４】
本発明の他の実施形態において、添加物は、例えばソルビトールおよび／またはマンニトールの、高度に多孔質でかつ高度に可溶性である、織り込まれた繊維状の結晶である。かかる材料は、名称ＰＡＲＴＥＣＫ  ＳＩおよびＰＡＲＴＥＣＫ  Ｍ（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ、ダルムシュタット、ドイツ）で販売される。これらのグレードは高い吸着容量を有し、したがって、適用する粉末層を介して血液を浸透させること、ひいては粉末界面のみでの凝固を回避することによって、ダスティングを減少させて、乾燥粉末フィブリンシーラントの湿潤性、可溶性およびパフォーマンスを促進する新規の粉末を生産する、本発明の乾燥粉末フィブリンシーラント粉末組成物との混合に好適である。
【００５５】
本発明のマイクロ粒子は、必要であるかまたは所望されるならば滅菌することができる。滅菌処理、電子線照射、γ−照射およびエチレンオキシドは、好適な技法の一例である。
【００５６】
添加材料は単一の構成要素としてまたは組み合わせで本発明の組成物中に存在することができ、そして添加材料は、フィードストック中に存在するか、もしくはともに混合する前に噴霧乾燥したトロンビンまたはフィブリノーゲンのいずれかに添加するか、または最終混合物に添加してさらなる混合を行うことができる。かかる混合は、低剪断性または高剪断性の混合、メカノケミカルボンディング、ハイブリダイゼーションまたは当業者に公知の他の技法を使用して行なうことができる。
【００５７】
本発明のフィブリンシーラント中のマイクロ粒子の構成要素は好ましくは水溶性であり、マイクロ粒子は好ましくは好適な溶液の噴霧乾燥によって得られるが、得ることができるマイクロ粒子は、自由流動性で離散的で実質的に乾燥および無水であり、残留水分含量は約８％ｗ／ｗまたは約５％ｗ／ｗ未満が好ましく、３％ｗ／ｗ未満が最も好ましい。これは、例えば、創傷部位で液体と接触することによって湿潤するまで、本発明によるフィブリンシーラントの化合物が活性化されないことを意味する。それゆえ、異なるマイクロ粒子の個別の適用が意図されるが、活性成分は乾燥混合物として送達することができる。活性含有マイクロ粒子は、トラップしたタンパク質を安定させるように、好ましくは室温（例えば２５℃）で非晶性またはガラスの形態であり、加えてこのような急速な可溶性状態において活性を示す。好ましくは、示差走査熱量測定法または改良した示差走査熱量測定法によって測定されるように、活性含有マイクロ粒子組成物は、約２５℃、または約３０℃、または約４０℃、または約５０℃以上のガラス転移温度を示す。添加材料も、急速に可溶性状態となるように室温（例えば２５℃）で非晶性またはガラスの形態である。好ましくは、示差走査熱量測定法または改良した示差走査熱量測定法によって測定されるように、添加材料は約２５℃、または約３０℃、または約４０℃、または約５０℃以上のガラス転移温度を示す。組成物は、活性の有意な損失なしに、例えば３か月または６か月を超える延長期間、周囲温度または室温（例えば２５℃）で、かかるガラス質の組成物により保存することができる。
【００５８】
添加材料も、結晶状態または非晶性状態でありえるが、自由流動性で離散的で実質的に無水でありえ、残留水分含量は５％ｗ／ｗ未満が好ましく、３％ｗ／ｗ未満が最も好ましい。
【００５９】
粉末組成物は、同時係属出願ＰＣＴ／ＧＢ２００９／０５１７１４（特願２０１１−５４０２２０、参照として本明細書に援用される）の粉末送達装置を使用して適用することができる。
【００６０】
本発明は、ここで、以下の実施例を単なる例として参照し説明する。
【実施例１】
【００６１】
本研究は、ブタの肝臓創傷モデルにおける本発明にかかわる粉末の効果を調査した。トレハロースを含むフィブリンシーラントの適用に対する組織反応も検査し、上記フィブリンシーラントを使用する組織反応および止血もＴｉｓｓｅｅｌ（商業的に入手可能で液体適用フィブリンシーラント）と比較した。
【００６２】
（研究材料）
同時係属出願ＵＳ１２／６３６，７１８中に記載されるように、乾燥粉末フィブリンシーラントを調製した。手短に言うと、フィブリノーゲン（ＺＬＢ、マールブルク、ドイツ）およびトレハロース（Ｐｆａｎｓｔｉｅｈｌ、ウォーキーガン、イリノイ、アメリカ）の中空の球形粒子を調製した。粒子中のフィブリノーゲンの濃度は１２％（ｗ／ｗ）である。
【００６３】
トロンビン（ＳＮＢＴＳ、グラスゴー、スコットランド）およびトレハロースを噴霧乾燥して、中空粒子を得た。トロンビンは１グラムの粒子あたり１０００ＩＵの濃度で存在した。粒子を１：１比で混合し、生じた粉末は６％ｗ／ｗ濃度のフィブリノーゲンを有し、５００ＩＵ／グラムの粉末である。この混合物は本発明の粉末と称される。
【００６４】
本発明の粉末を調製し、適用のために準備した。一方、Ｔｉｓｓｅｅｌを購入し、供給業者の指示に従って調製した。
【００６５】
（動物）
体重４５ｋｇのメスのラージホワイト／ランドレースの雑種のブタを１匹使用した。
【００６６】
（実験プロトコル）
本発明の粉末およびＴｉｓｓｅｅｌを肝生検創傷部位に適用した。
【００６７】
（外科手術のプロトコル）
ジアテルミーを使用して腹壁正中切開術を行い、肝臓の腹側表面を露出する。肝臓と横隔膜との間の背側の肝靭帯を離断して肝臓の遠位移動を可能にする。肝臓の左側葉を持ち上げ、体外に出して湿ったスワブ上に置いた。１０ｍｍのパンチ生検ツールを深さ４ｍｍで切断するように調節した。６つのパンチ生検を肝臓の左葉の実質表面上でひとつずつ行って、各々の生検部位の縁部の間に少なくとも３ｃｍの正常組織があるようにする。パンチ生検組織を除去して肝臓葉の表面に１０ｍｍ×４ｍｍのクレーター欠損を残す。組織を除去するのと同時に、あらかじめ計量したスワブを使用して毎分１個の率で部位から血液を回収した。スワブを計量して３分間の部位出血率を確立した。次いで実験プロトコルに従って部位を治療し、スワブ回収を５分間または止血するまで継続した。いったん６つの部位を左葉上で作成し治療したならば、これを腹膜腔内のもとの位置へと置き換え、中心葉を持ち上げ、体外に出して湿ったスワブ上に置いた。肝臓中心葉上の５つの部位について同一の処置を実行した。いったん外科的処置がすべて完了し、すべての生検部位について十分な止血が達成されたならば、腹膜腔の中へ５００ｍｌの滅菌塩類溶液を肝臓表面の上にフラッシングした。腹壁切開した腹膜および内部の筋肉層は半円型無傷針を用いて２／０バイクリル縫合糸により閉じた。腹壁切開した外部筋肉および皮膚切開は半円型角針を用いて２／０プロレン縫合糸により閉じた。閉じた腹壁切開部をＣｉｃａｔｒｉｎ粉末により治療し、Ｏｐｓｉｔｅをスプレーした。被験体を麻酔薬から回復させ、抜管し、動物飼育設備に戻した。被験体の有害な臨床的徴候について１４日間モニタリングされた。
【００６８】
（終結）
被験体に前投薬し麻酔した。腹壁正中切開術による切開を腸骨窩のレベルで開始し、近位に延長して肝臓表面および手術部位を露にした。肉眼観察を記録し、肝臓の左側葉および中心葉を完全に除去した。
【００６９】
（結果）
（臨床的観察）
有害な臨床的徴候は術後モニタリング期間中、示されず、すべての生理的機能はこの間は正常に思われた。
【００７０】
（肉眼的観察）
最終的な腹壁切開で、腹膜縫合線の内面と下にある腸、腹膜網または脾臓との間に存在する癒着はなかった。しかしながら、肝葉の先端から同側の腹膜への癒着があり、その癒着は手術処置の間、操作された肝臓表面の全体にわたって延長していた。中心葉が左側葉に重なっていた継目に沿って、中心葉と左側葉とが癒着していた。これらの大部分の癒着は、中心葉先端の領域から、緩やかな指圧力によって容易に外すことができた。治療された生検部位と一致し、分離がより難しい２つの領域があり、これらの領域の１つは非常に強く癒着しているので分離の間に肝臓が裂けた。治療した生検部位と一致するもうひとつの領域は、周囲の肝臓実質領域よりも主観的に分離が容易であった。癒着分離の間にその癒着から外された治療材料であるように見える１片もあった。創傷部位はすべて良好に閉じられたようであり、肝葉の実質表面における小窩によって特徴づけられていた。生検による欠損縁で有意な炎症はないようであり、肝臓表面に存在する治療材料の肉眼的証拠はなかった。線維状であり生検による欠損に癒着しているように見える３つの部位を覆う不透明な薄膜の材料の領域があった。横隔膜の内面上に、横隔膜に癒着し薄膜で不透明な線維組織により囲まれた治療材料に見える２つの領域があった。
【００７１】
癒着に関して、Ｔｉｓｓｅｅｌと本発明の粉末との間に差があることが意外にも見出された。すべてのＴｉｓｓｅｅｌ治療部位において、充填材料と上層にある横隔膜または肝葉との間で頑強な癒着があった。これらの癒着は１つ部位では非常に頑強だったので、分離により創傷部位で充填材料が失われ、再出血が起こった。対照的に、本発明の粉末により治療された１つ以外のすべての部位において、（炎症性反応の増加を示した１つの事例においてでさえ、）治療部位それ自体と上層にある横隔膜との間に癒着はなかった。しかしながら、治療部位に隣接する操作していない肝臓表面と上層にある横隔膜との間には癒着があった。
【実施例２】
【００７２】
（材料および方法）
出版されたデータおよびインハウスの経験に基づき、本研究にはウサギを使用した。実施例１の本発明の粉末および商業的に入手可能な抗癒着製品であるＳｅｐｒａｆｉｌｍ（例えば、Ｇｅｎｚｙｍｅ）を、対照として使用する非治療の組織と比較した。検査した材料はすべて製造者の使用説明書に従って保存および適用した。
【００７３】
（外科的処置）
外科手術は、外科医が着用する帽子、マスクおよび滅菌手袋により無菌技術を使用して行った。器具は、まず、オートクレーブによって滅菌したが、その後に動物間ではアルコール中のクロルヘキシジンで洗浄した。
・腹部の全層正中切開を行い、創傷縁部を組織鉗子により引き込んだ。
・片側の子宮角は接近を容易にするために腔から持ち上げて置いた。
・２６ｍｍ×３ｍｍの測定値の矩形の鋳型を子宮角に配置し、表面を専用の鋸状の金属スクレーパーにより１０回掻いて（各々の方向で５回）、擦過傷を生成した。
・次いで２４ｍｍ×３ｍｍの測定値の鋳型を同側の腹膜壁に配置し、上記のように擦過傷を生成した。
・非治療の対照部位の事例において、２つの創傷を接近させ、２つの５／０プロレン縫合糸により固定した（擦過領域の各々の端部で１つ）。治療部位の事例において、接近および固定の前に擦過部位の間に試験品を適用した。
・次いで類似した手順を反対の子宮角上で行った。
・完了したときに、腹筋を結節２／０バイクリル縫合糸により閉じ、皮膚を最初に連続表皮下３／０絹縫合糸を使用して閉じたが、続いて結節２／０絹製縫合糸を使用して閉じた。
【００７４】
（終結）
手術後１４日で、すべての被験体をバルビツレートの過剰用量を使用して安楽死させた。各々の被験体からの両方の手術部位を、隣接する関連組織と共に切り取り、これらのサンプルを１０％の中性に中和されたホルマール生理食塩水の中に置いた。
【００７５】
（結果）
本発明の粉末により治療された動物において、２つの擦過表面が互いから独立して治癒するように、これらの表面は別個に分離されていた。これはＳｅｐｒａｆｉｌｍにより治療したサンプルについても同様であった。組織学的結果（図示せず）から、発明の粉末が手術後の癒着を減少または防止できることが見出された。
【国際調査報告】
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