(57)【要約】慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症及び肝機能を含む関連する状態の改善された治療のための、標準治療（ＳＯＣ）、又は抗ウイルス療法とインターフェロン療法との併用療法と組み合わせた免疫治療組成物の使用を開示する。本発明の組成物、キット及び使用は、ＳＯＣ療法単独の使用と比べて：早期ウイルス学的マーカーにより測定される療法に対する初期反応率（例えば、ＲＶＲ及びＥＶＲ）を改善し、長期にわたって療法に対して反応が持続するであろう患者のプールを増大させ、ある患者については療法のコースを短縮し、ＳＯＣ療法に対して無反応者又は不耐性である患者の「救済」を可能にし、患者における肝機能の改善及び／又は肝障害の軽減をもたらし、患者においてＨＣＶ療法の個別化を可能にして、その結果、投与量を減らし、患者のコンプライアンスを改善し、副作用を軽減して、長期治療転帰を改善することができる。
2012503011.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物を投与し、前記被験者に対して少なくとも１つのインターフェロン及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物の一方又は両方をさらに投与することを含み、
前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発し；
前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物を、前記免疫治療組成物の初回投与の少なくとも４週間後に初めて投与する、方法。
【請求項２】
前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物を、前記免疫治療組成物の初回投与の４〜１２週間後に初めて投与する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物を、前記免疫治療組成物の初回投与の少なくとも１２週間後に初めて投与する、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記インターフェロンを前記被験者に対して毎週投与し、併行して前記抗ウイルス化合物を前記被験者に対して毎日、合計２４〜４８週間投与する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記インターフェロンを前記被験者に対して２、３又は４週間ごとに投与する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
追加用量の前記免疫治療組成物を、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物の投与と同じ期間中に投与する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記免疫治療組成物を前記インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物と同じ日に投与する、請求項６記載の方法。
【請求項８】
免疫治療組成物の投与を、前記インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の投与と交互に行い、前記免疫治療組成物の各用量を、前記インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の最終投与の少なくとも３〜４日後に投与する、請求項６記載の方法。
【請求項９】
前記免疫治療組成物を４〜１２週間、毎週投与し、続いて毎月投与する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記免疫治療組成物を５週間、毎週投与し、続いて毎月投与する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物を投与し、前記被験者に対してインターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方をさらに投与することを含み、
前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発し、
前記免疫治療組成物を、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも１〜４週間後に投与する、方法。
【請求項１２】
前記免疫治療組成物を、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の４〜１２週間後に投与する、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前記免疫治療組成物を、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも１２週間後に投与する、請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
前記免疫治療組成物の投与を、前記インターフェロン投与の開始と同じ時間にわたって開始する、請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物を投与し、前記被験者に対してインターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方をさらに投与することを含み、
前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発し、
前記免疫治療組成物を、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物の最終用量を投与した後に投与する、方法。
【請求項１６】
慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物及びインターフェロンを投与し、前記被験者に対して抗ウイルス化合物をさらに投与することを含み、
前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発し、
前記抗ウイルス化合物を、前記免疫治療組成物及びインターフェロンの初回投与の少なくとも４週間後に初めて投与する、方法。
【請求項１７】
慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物及び抗ウイルス化合物を投与し、前記被験者に対してインターフェロンをさらに投与することを含み、
前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発し、
前記インターフェロンを、前記免疫治療組成物及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも４週間後に初めて投与する、方法。
【請求項１８】
慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物、インターフェロン、及び抗ウイルス化合物を投与することを含み、
前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発し、
前記免疫治療組成物、前記インターフェロン及び前記抗ウイルス化合物を同じ期間にわたって投与する、方法。
【請求項１９】
慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）及び／又は早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ／ｃＥＶＲ）の頻度を、慢性的にＨＣＶに感染し、インターフェロン及び抗ウイルス療法の組み合わせのみで治療された被験者の集団におけるＲＶＲ及びＥＶＲ／ｃＥＶＲと比べて増加させる方法であって、前記被験者集団に、前記インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせで、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２０】
前記免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との前記組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与する、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との前記組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団において急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）及び／又は早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ／ｃＥＶＲ）の持続的ウイルス学的反応（ＳＶＲ）への変換率を、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療した同じ集団におけるＲＶＲ及び／又はＥＶＲ／ｃＥＶＲのＳＶＲへの変換率と比較して向上させる方法であって、前記被験者集団に、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせで、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２３】
前記免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との前記組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与する、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との前記組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における完全著効者数を、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された慢性的にＨＣＶに感染した被験者の集団における完全著効者数と比較して増大させる方法であって、前記被験者集団に、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせで、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２６】
前記免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との前記組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与する、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
前記免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との前記組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に投与する、請求項２５記載の方法。
【請求項２８】
慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者集団における治療中のブレイクスルー被験者数又は治療後の再発者数を、慢性的にＨＣＶに感染し、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された被験者集団における治療中のブレイクスルー者数又は治療後の再発数と比べて減少させる方法であって、前記被験者集団に、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせで、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２９】
前記免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との前記組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与する、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
記免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との前記組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する、請求項２８記載の方法。
【請求項３１】
薬剤耐性ＨＣＶ突然変異の発生を阻害する方法であって、前記被験者集団に、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせで、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３２】
前記免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との前記組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与する、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
前記免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との前記組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する、請求項３１記載の方法。
【請求項３４】
慢性的にＨＣＶに感染した被験者を治療する方法であって：
ａ）１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を前記被験者に少なくとも４〜１２週間投与し、続いて前記免疫治療組成物の投与を継続しながら、併行してインターフェロン及び抗ウイルス剤を投与し、
ｂ）インターフェロン及び抗ウイルス化合物の前記初回投与の約４週間後で、前記被験者の急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）を測定し、且つ
ｃ）インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法単独で治療された被験者の予想されるＲＶＲよりも統計的に高いか、又は高くなる強い傾向があるＲＶＲを有する被験者において、インターフェロン−抗ウイルス化合物療法の用量及び／又は回数を減少させることを含む、方法。
【請求項３５】
インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法が失敗することが予想される慢性的にＨＣＶに感染した被験者の治療を継続するための方法であって、前記被験者に１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３６】
前記免疫治療組成物が投与される期間中、前記被験者がインターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法を受け続ける、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
慢性的にＨＣＶに感染した被験者において肝障害の軽減及び／又は肝機能の改善をもたらす方法であって、前記被験者に、少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物、並びに場合によってインターフェロン及び抗ウイルス化合物を投与することを含む、方法。
【請求項３８】
インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法に対して不耐性である慢性的にＨＣＶに感染した被験者の治療を継続するための方法であって、前記併用療法を中断し、前記被験者に１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３９】
前記被験者が、いずれのＨＣＶの前治療に対してもナイーブである、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記被験者が、いずれのＨＣＶのインターフェロンベースの前治療に対してもナイーブである、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記被験者が、いずれのＨＣＶのインターフェロンベースの前治療に対してもナイーブであり、ベースラインで高いウイルス価（＞６００，０００ＩＵ／ｍｌのＨＣＶ  ＲＮＡレベル）を有する、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記被験者がＨＣＶの治療に対して従前の無反応者であるか、又は部分的反応者である、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記インターフェロンがペグ化インターフェロン−αである、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記抗ウイルス化合物がリバビリン又はその機能的類似体である、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記抗ウイルス化合物がＮＳ３プロテアーゼ阻害物質である、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記抗ウイルス化合物がＮＳ５ｂポリメラーゼ阻害物質である、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記抗ウイルス化合物が宿主酵素阻害物質である、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記被験者における肝機能の少なくとも１つのパラメータを改善する、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記被験者における肝障害を減少させる、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記免疫治療組成物がＣＤ８＋Ｔ細胞反応を誘発する、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記免疫治療組成物がＣＤ４＋Ｔ細胞反応を誘発する、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記免疫治療組成物が細胞によるインターフェロン−γの産生を誘発する、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記免疫治療組成物が次の特性：
ａ）抗原提示細胞を活性化するために有効な１つ以上のパターン認識受容体の刺激、
ｂ）抗原提示細胞上の接着分子、共刺激分子、及びＭＨＣクラスＩ及び／又はクラスＩＩ分子の上方制御、
ｃ）抗原提示細胞による炎症誘発性サイトカインの産生の誘発、
ｄ）Ｔ細胞によるＴｈ１型サイトカインの産生の誘発、及び
ｅ）ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩ、抗原特異的免疫応答の誘発
の１つ以上を有する、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記炎症誘発性サイトカインが、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）を含む、請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
前記Ｔｈ１型サイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−５、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）を含む、請求項５３記載の方法。
【請求項５６】
前記Ｔｈ１型サイトカインがインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）を含む、請求項５３記載の方法。
【請求項５７】
前記免疫治療組成物がアジュバントを含む、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記免疫治療組成物が酵母ビヒクルを含み、前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が、前記酵母ビヒクルによって発現されるか、前記酵母ビヒクルに結合するか、又は前記酵母ビヒクルと混合される、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が前記酵母ビヒクルによって発現される、請求項５８記載の方法。
【請求項６０】
前記酵母ビヒクルが、全酵母、酵母スフェロプラスト、酵母細胞質体、酵母ゴースト、及び亜細胞酵母膜抽出物又はそのフラクションからなる群から選択される、請求項５８記載の方法。
【請求項６１】
前記酵母ビヒクルが、全酵母及び酵母スフェロプラストからなる群から選択される、請求項５８記載の方法。
【請求項６２】
前記酵母ビヒクルが全酵母である、請求項５８記載の方法。
【請求項６３】
前記酵母ビヒクルが熱不活性化された酵母である、請求項６２記載の方法。
【請求項６４】
前記酵母ビヒクルがサッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）由来である、請求項６３記載の方法。
【請求項６５】
前記酵母ビヒクルがサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）由来である、請求項６４記載の方法。
【請求項６６】
前記酵母ビヒクルがサッカロミセス属由来である、請求項５８記載の方法。
【請求項６７】
前記酵母ビヒクルがサッカロミセス・セレビシエ由来である、請求項６６記載の方法。
【請求項６８】
前記免疫治療組成物がＨＣＶ配列を含むＨＣＶ融合タンパク質を含み、前記ＨＣＶ配列が１〜５個のＨＣＶタンパク質及び／又はその免疫原性領域からなり、前記ＨＣＶタンパク質が：ＨＣＶコア（配列番号２０の１〜１９１位）；ＨＣＶ  Ｅ１エンベロープ糖タンパク質（配列番号２０の１９２〜３８３位）；ＨＣＶ  Ｅ２エンベロープ糖タンパク質（配列番号２０の３８４〜７４６位）；ＨＣＶ  Ｐ７イオンチャンネル（配列番号２０の７４７〜８０９位）；ＨＣＶ  ＮＳ２メタロプロテアーゼ（配列番号２０の８１０〜１０２６位）；ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ／ヘリカーゼ（配列番号２０の１０２７〜１６５７位）；ＨＣＶ  ＮＳ４ａ  ＮＳ３プロテアーゼ補因子（配列番号２０の１６５８〜１７１１位）；ＨＣＶ  ＮＳ４ｂ（配列番号２０の１７１２〜１９７２位）；ＨＣＶ  ＮＳ５ａ（配列番号２０の１９７３〜２４２０位）；及びＨＣＶ  ＮＳ５ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（配列番号２０の２４２１〜３０１１位）からなる群から選択され、
前記組成物が、ＨＣＶ融合タンパク質においてＨＣＶタンパク質又はその免疫原性領域のそれぞれに対する免疫応答を誘発する、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記免疫治療組成物がＨＣＶ配列を含むＨＣＶ  ＮＳ３−コア融合タンパク質を含み、前記ＨＣＶ配列がＨＣＶコア配列又はその少なくとも１つの免疫原性領域と結合したＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ配列又はその少なくとも１つの免疫原性領域からなり、前記ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ配列が天然のＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼの触媒領域が欠失し、前記組成物がＨＣＶ  ＮＳ３特異的免疫応答及びＨＣＶコア特異的免疫応答を誘発する、請求項６８記載の方法。
【請求項７０】
前記ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼが、完全長ＮＳ３タンパク質の最初のＮ末端の８８個のアミノ酸（配列番号２０において１１１５〜１３７６位）に続くＨＣＶ  ＮＳ３の２６２個のアミノ酸からなる、請求項６９記載の方法。
【請求項７１】
前記ＨＣＶコア配列が完全長ＨＣＶコア配列のアミノ酸位置２〜１４０（配列番号２０において２〜１４０位）からなる、請求項６９記載の方法。
【請求項７２】
前記ＨＣＶコアの前記疎水性Ｃ末端配列がトランケートされている、請求項６９記載の方法。
【請求項７３】
前記融合タンパク質が配列番号２からなる、請求項６９記載の方法。
【請求項７４】
前記免疫治療組成物がＨＣＶ配列を含むＨＣＶ融合タンパク質を含み、前記ＨＣＶ配列が完全長不活性化ＨＣＶ  ＮＳ３タンパク質、又はその少なくとも１つの免疫原性領域からなり、前記組成物がＨＣＶ  ＮＳ３特異的免疫応答を誘発する、請求項６８記載の方法。
【請求項７５】
前記ＨＣＶ  ＮＳ３タンパク質が、配列番号２０においてＨＣＶポリタンパク質配列の残基１１６５で突然変異を含み、その結果、前記タンパク質のタンパク質分解活性が不活性化される、請求項７４記載の方法。
【請求項７６】
前記融合タンパク質が配列番号４からなる、請求項７４記載の方法。
【請求項７７】
前記免疫治療組成物が、ＨＣＶ配列を含むＨＣＶ融合タンパク質を含み、前記ＨＣＶ配列が、ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域と融合したＨＣＶ  Ｅ１タンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域からなり、前記組成物が、ＨＣＶ  Ｅ１特異的免疫応答及びＨＣＶ  Ｅ２特異的免疫応答を誘発する、請求項６８記載の方法。
【請求項７８】
前記ＨＣＶ  Ｅ１タンパク質が完全長タンパク質であり、前記ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質が完全長タンパク質である、請求項７７記載の方法。
【請求項７９】
前記融合タンパク質が配列番号１２からなる、請求項７７記載の方法。
【請求項８０】
前記ＨＣＶ  Ｅ１タンパク質が、ＨＣＶ  Ｅ１のアミノ酸１〜１５６（配列番号２０において、１９２〜３４７位）からなるトランケートされたＥ１タンパク質である、請求項７７記載の方法。
【請求項８１】
前記ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質が、ＨＣＶ  Ｅ２のアミノ酸１〜３３４（配列番号２０において３８４〜７１７位）からなるトランケートされたＥ２タンパク質である、請求項７７記載の方法。
【請求項８２】
前記融合タンパク質が配列番号６からなる、請求項７７記載の方法。
【請求項８３】
前記免疫治療組成物が、ＨＣＶ配列を含むＨＣＶ融合タンパク質を含み、前記ＨＣＶ配列が、膜貫通領域欠失ＨＣＶ  ＮＳ４ｂタンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域からなり、前記組成物がＨＣＶ  ＮＳ４ｂ特異的免疫応答を誘発する、請求項６８記載の方法。
【請求項８４】
前記膜貫通領域欠失ＨＣＶ  ＮＳ４ｂタンパク質が、ＨＣＶ  ＮＳ４ｂのアミノ酸１７７〜２６１（配列番号２０において１８８８〜１９７２位）に結合したＨＣＶ  ＮＳ４ｂのアミノ酸１〜６９（配列番号２０において１７１２〜１７８０位）からなる、請求項８３記載の方法。
【請求項８５】
前記融合タンパク質が配列番号８からなる、請求項８３記載の方法。
【請求項８６】
前記免疫治療組成物がＨＣＶ配列を含むＨＣＶ融合タンパク質を含み、前記ＨＣＶ配列が、膜貫通領域欠失ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域と融合した膜貫通領域欠失ＨＣＶ  Ｅ１タンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域と融合した、トランケートされたＨＣＶコアタンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域からなり、前記組成物がＨＣＶコア特異的免疫応答、ＨＣＶ  Ｅ１特異的免疫応答、及びＨＣＶ  Ｅ２特異的免疫応答を誘発する、請求項６８記載の方法。
【請求項８７】
前記トランケートされたＨＣＶコアタンパク質がＨＣＶコアタンパク質の２〜１４０位（配列番号２０において２〜１４０位）からなり、前記膜貫通領域欠失ＨＣＶ  Ｅ１タンパク質がＨＣＶ  Ｅ１タンパク質の１〜１５６位（配列番号２０において１９２〜３４７位）からなり、前記膜貫通領域欠失ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質がＨＣＶ  Ｅ２タンパク質の１〜３３４位（配列番号２０において３８４〜７１７位）からなる、請求項８６記載の方法。
【請求項８８】
前記融合タンパク質が配列番号１４からなる、請求項８６記載の方法。
【請求項８９】
前記免疫治療組成物がＨＣＶ配列を含むＨＣＶ融合タンパク質を含み、前記ＨＣＶ配列が、膜貫通領域欠失ＨＣＶ  ＮＳ４ｂ又はその少なくとも１つの免疫原性領域と融合したＨＣＶ  ＮＳ４ａ又はその少なくとも１つの免疫原性領域と融合した、不活性化ＨＣＶ  ＮＳ３又はその少なくとも１つの免疫原性領域からなり、前記組成物が、ＨＣＶ  ＮＳ３特異的免疫応答、ＨＣＶ  ＮＳ４ａ特異的免疫応答、及びＨＣＶ  ＮＳ４ｂ特異的免疫応答を誘発する、請求項６８記載の方法。
【請求項９０】
前記ＨＣＶ  ＮＳ３タンパク質がＨＣＶ  ＨＳ３の１〜６３１位（配列番号２０において１０２７〜１６５７位）からなり、配列番号２０において１１６５位の前記セリンがアラニンで置換されて、プロテアーゼを不活性化し；前記ＨＣＶ  ＮＳ４ａタンパク質がＨＣＶ  ＮＳ４ａタンパク質の１〜５４（配列番号２０において６３５〜６９１位）からなり；前記ＨＣＶ  ＮＳ４ｂタンパク質が、ＨＣＶ  ＮＳ４ｂの１７７〜２６１位（配列番号２０において１８８８〜１９７２位）と融合したＨＣＶ  ＮＳ４ｂの１〜６９位（配列番号２０において１７１２〜１７８０位）からなる、請求項８９記載の方法。
【請求項９１】
前記融合タンパク質が配列番号１６からなる、請求項８９記載の方法。
【請求項９２】
前記免疫治療組成物がＨＣＶ配列を含むＨＣＶ融合タンパク質を含み、前記ＨＣＶ配列が、ＮＳ５ｂ  Ｃ末端の不活性化欠失を含むＨＣＶ  ＮＳ５ｂタンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域と融合したＨＣＶ  ＮＳ５ａタンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域からなり、前記組成物がＨＣＶ  ＮＳ５ａ特異的免疫応答を誘発する、請求項６８記載の方法。
【請求項９３】
前記ＨＣＶ  ＮＳ５ａタンパク質がＨＣＶ  ＮＳ５ａの１〜４４８（配列番号２０において１９７３〜２４２０位）からなり；前記ＨＣＶ  ＮＳ５ｂタンパク質がＨＣＶ  ＮＳ５ｂの１〜５３９位（配列番号２０において２４２１〜２９５９位）からなる、請求項９２記載の方法。
【請求項９４】
前記融合タンパク質が配列番号１８からなる、請求項９２記載の方法。
【請求項９５】
前記免疫治療組成物が少なくとも１つの生物反応修飾物質をさらに含む、請求項１〜９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域、インターフェロン及び抗ウイルス化合物を含む免疫治療組成物であって、
１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する、免疫治療組成物。
【請求項９７】
慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療するためのキットであって：
ａ）少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物（前記免疫治療組成物は１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する）、
ｂ）インターフェロン、
ｃ）抗ウイルス化合物、並びに
ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）のそれぞれを投与するための説明書
を含む、キット。
【請求項９８】
前記免疫治療組成物が酵母系免疫治療組成物である、請求項９７記載のキット。
【請求項９９】
前記説明書が、前記免疫治療組成物の初回投与の少なくとも４週間後に、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物を初めて投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１００】
前記説明書が、前記免疫治療組成物の初回投与の４〜１２週間後に、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物を初めて投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１０１】
前記説明書が、前記免疫治療組成物の初回投与の少なくとも１２週間後に、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物を初めて投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１０２】
前記説明書が、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも１〜４週間後に前記免疫治療組成物を初めて投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１０３】
前記説明書が、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも４〜１２週間後に前記免疫治療組成物を初めて投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１０４】
前記説明書が、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも１２週間後に前記免疫治療組成物を初めて投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１０５】
前記説明書が、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の最終用量の投与後に前記免疫治療組成物を初めて投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１０６】
前記説明書が、前記免疫治療組成物及びインターフェロンの初回投与の少なくとも４週間後に、前記抗ウイルス化合物を初めて投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１０７】
前記説明書が、前記免疫治療組成物及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも４週間後に前記インターフェロンを初めて投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１０８】
前記説明書が、前記免疫治療組成物、前記インターフェロン及び前記抗ウイルス化合物を同じ期間にわたって投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１０９】
前記説明書が、インターフェロンを毎週投与し、併行して前記抗ウイルス化合物を毎日、合計２４〜４８週間投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１１０】
前記説明書が、インターフェロンを２、３又は４週間ごとに投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１１１】
前記説明書が、前記インターフェロン及び抗ウイルス化合物の投与と同じ期間中に、追加用量の前記免疫治療組成物を投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１１２】
前記説明書が、前記免疫治療組成物を、前記インターフェロン又は抗ウイルス化合物と同じ日に投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１１３】
前記説明書が、前記免疫治療組成物を前記インターフェロン又は抗ウイルス化合物の投与と交互に投与し、前記免疫治療組成物の各用量を、前記インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の最終投与の少なくとも３〜４日後に投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１１４】
前記説明書が、前記免疫治療組成物を毎週、４〜１２週間投与し、続いて毎月投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１１５】
前記説明書が、免疫治療組成物を毎週、５週間投与し、続いて毎月投与することを指定している、請求項９７記載のキット。
【請求項１１６】
慢性的にＨＣＶに感染した被験者において肝障害を軽減するか又は肝機能を改善するために、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む酵母系免疫治療組成物の使用であって、
前記酵母系免疫治療組成物が酵母ビヒクルを含み、前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が、前記酵母ビヒクルによって発現されるか、前記酵母ビヒクルに結合するか、又は前記酵母ビヒクルと混合され、前記免疫治療組成物が、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１１７】
前記改善された肝機能が、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）正常化によって示される、請求項１１６記載の使用。
【請求項１１８】
前記ＨＣＶ感染被験者が、ＨＣＶの治療に対して従前の無反応者であるか又は部分的反応者である、請求項１１６記載の使用。
【請求項１１９】
前記ＨＣＶ感染被験者が、いずれのインターフェロンベースのＨＣＶの前治療に対してもナイーブである、請求項１１６記載の使用。
【請求項１２０】
前記ＨＣＶ感染被験者が、いずれのＨＣＶのインターフェロンベースの前治療に対してもナイーブであり、ベースラインで高いウイルス価（＞６００，０００ＩＵ／ｍｌのＨＣＶ  ＲＮＡレベル）を有する、請求項１１６記載の使用。
【請求項１２１】
ＨＣＶのいずれの従前の治療に対してもナイーブである被験者において、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症の治療のためにインターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む酵母系免疫治療組成物の使用であって、
前記酵母系免疫治療組成物が酵母ビヒクルを含み、前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が、前記酵母ビヒクルによって発現されるか、前記酵母ビヒクルに結合するか、又は前記酵母ビヒクルと混合され、前記免疫治療組成物が、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１２２】
前記被験者が、いずれの従前のインターフェロンベースのＨＣＶの治療に対してもナイーブである、請求項１２１記載の使用。
【請求項１２３】
前記被験者が、いずれの従前のインターフェロンベースのＨＣＶの治療に対してもナイーブであり、ベースラインで高いウイルス価（＞６００，０００ＩＵ／ｍｌのＨＣＶ  ＲＮＡレベル）を有する、請求項１２１記載の使用。
【請求項１２４】
慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）及び／又は早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ／ｃＥＶＲ）の頻度を、インターフェロンと抗ウイルス剤の併用療法のみで治療された慢性的にＨＣＶに感染した被験者の集団におけるＲＶＲ及びＥＶＲ／ｃＥＶＲと比べて増大させるための、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む酵母系免疫治療組成物の使用であって、
前記酵母系免疫治療組成物が酵母ビヒクルを含み、前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が、前記酵母ビヒクルによって発現されるか、前記酵母ビヒクルに結合するか、又は前記酵母ビヒクルと混合され、前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１２５】
慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）及び／又は早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ／ｃＥＶＲ）の持続的ウイルス学的反応（ＳＶＲ）への変換率を、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された同じ集団におけるＲＶＲ及び／又はＥＶＲ／ｃＥＶＲのＳＶＲへの変換率と比べて向上させるための、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む酵母系免疫治療組成物の使用であって、
前記酵母系免疫治療組成物が酵母ビヒクルを含み、前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が、前記酵母ビヒクルによって発現されるか、前記酵母ビヒクルに結合するか、又は前記酵母ビヒクルと混合され、前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１２６】
慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における完全著効者の数を、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された慢性的にＨＣＶに感染した被験者の集団における完全著効者の数と比べて増大させるための、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における、少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む酵母系免疫治療組成物の使用であって、
前記酵母系免疫治療組成物が酵母ビヒクルを含み、前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が、前記酵母ビヒクルによって発現されるか、前記酵母ビヒクルに結合するか、又は前記酵母ビヒクルと混合され、前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１２７】
慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における治療中のブレイクスルー被験者数又は治療後の再発者数を、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された慢性的にＨＣＶに感染した被験者の集団における治療中ブレイクスルー数又は治療後再発数と比べて減少させるための、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む酵母系免疫治療組成物の使用であって、
前記酵母系免疫治療組成物が酵母ビヒクルを含み、前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が、前記酵母ビヒクルによって発現されるか、前記酵母ビヒクルに結合するか、又は前記酵母ビヒクルと混合され、前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１２８】
薬剤耐性ＨＣＶ突然変異の発生を阻害するためにインターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用するための医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む酵母系免疫治療組成物の使用であって、
前記酵母系免疫治療組成物が酵母ビヒクルを含み、前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が、前記酵母ビヒクルによって発現されるか、前記酵母ビヒクルに結合するか、又は前記酵母ビヒクルと混合され、前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１２９】
インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法が失敗すると予想される慢性的にＨＣＶ感染した被験者の治療を継続するためにインターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用するための医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む酵母系免疫治療組成物の使用であって、
前記酵母系免疫治療組成物が酵母ビヒクルを含み、前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が、前記酵母ビヒクルによって発現されるか、前記酵母ビヒクルに結合するか、又は前記酵母ビヒクルと混合され、前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１３０】
インターフェロン−抗ウイルス化合物併用療法に対して不耐性である、慢性的にＨＣＶ感染した被験者の治療を継続するための医薬品の調製における、少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む酵母系免疫治療組成物の使用であって、
前記酵母系免疫治療組成物が酵母ビヒクルを含み、前記ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域が、前記酵母ビヒクルによって発現されるか、前記酵母ビヒクルに結合するか、又は前記酵母ビヒクルと混合され、前記免疫治療組成物が１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１３１】
前記インターフェロンがペグ化インターフェロン−αである、請求項１１６〜１３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３２】
前記抗ウイルス化合物がリバビリン又はその機能的類似体である、請求項１１６〜１３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３３】
前記抗ウイルス化合物がＮＳ３プロテアーゼ阻害物質である、請求項１１６〜１３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３４】
前記抗ウイルス化合物がＮＳ５ｂポリメラーゼ阻害物質である、請求項１１６〜１３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３５】
前記抗ウイルス化合物が宿主酵素阻害物質である、請求項１１６〜１３０のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（優先権の主張）
本出願は、米国特許法（合衆国法典３５巻）第１１９条（ｅ）に基づき、以下の各々に対して優先権の恩典を主張する：２００８年９月１９日出願の米国特許仮出願第６１／０９８，３０６号；２００８年１０月３１日出願の米国特許仮出願第６１／１１０，００３号；２００９年４月２１日出願の米国特許仮出願第６１／１７１，３７３号、及び２００９年８月６日出願の米国特許仮出願第６１／２３１，９０１号。上記で特定された出願の各々は、米国では英語で出願されており、且つその全体が本明細書に援用される。
（技術分野）
本発明は概して、被験者における慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染を治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、世界的に、急性及び慢性の肝炎の主要な原因因子である。ＨＣＶ感染には、世界中で２億人を超える人々が罹患しており、且つ多くの国で重大な健康上の問題となっている（非特許文献１及び２）。ＨＣＶに感染した個体の約２０〜４０％が急性期の間にウイルスを排除するが、残りの６０〜８０％は慢性疾患を発症して、この患者は肝不全及び肝臓癌を生じる場合がある（非特許文献３〜５）。現在のところ、予防的組成物はなく、治療の選択肢は現在のところインターフェロン／リバビリン療法（以下を参照のこと）に限られており、この療法は耐容性が低い場合が多く、多くの被験者には禁忌であり、且つ高価である。さらに、インターフェロン及びリバビリンでの現在の標準治療の有効性は、特に米国及び多数の先進国において最も一般的な遺伝子型である遺伝子型１型では、限られたものである（非特許文献６）。従って、現在の標準的なレジメンを用いて成功裏に治療が行えるＨＣＶ感染者の割合はごく一部である。
【０００３】
ＨＣＶは、急性及び慢性の肝炎の両方を誘発する非細胞変性ウイルスであって、高度に複雑な形態で免疫系と相互作用する（非特許文献７）。同様に、免疫系は、ウイルスの感染の制御及び肝臓の修復の両方に寄与するが、また慢性の感染及び肝硬変の進行にも寄与するので、ＨＣＶ感染の病因に固有の役割を有する。
【０００４】
上述のように、慢性Ｃ型肝炎の治療のための現行の標準治療（Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｏｆ  Ｃａｒｅ（ＳＯＣ）は、ペグ化インターフェロンαとリバビリンとの併用療法であり、インターフェロンは典型的には２４週間にわたり（ＨＣＶ遺伝子型２及び３）、又は４８週間にわたり（ＨＣＶ遺伝子型１及び４）、毎週１回の皮下注射によって、リバビリンの１日用量とともに投与される。インターフェロン／リバビリン療法は、遺伝子型２又は３のＨＣＶ感染に罹患している患者で比較的有効である（患者の約８５％が持続的ウイルス学的反応（ＳＶＲ）に達する）が、遺伝子型１のＨＣＶに感染している患者のうち約５０％がＳＶＲに達しない。さらに現在のＳＯＣは耐容性が低い（インターフェロンは、インフルエンザ様症状及び鬱を含む副作用を生じることが公知である炎症誘発性のサイトカインであり、且つリバビリンは、患者の２０〜３０％で溶血性貧血を誘導する）。標準治療（ＳＯＣ）として併用される場合、報告される有害事象としては、インフルエンザ様症状（例えば、発熱、頭痛、悪寒）、胃腸の問題（例えば、悪心、食欲不振、下痢）、精神神経障害（例えば、鬱）、皮膚障害及び血液疾患が挙げられる。これらの副作用は患者のノンコンプライアンス又は治療中止をもたらし、且つ患者の１０〜２０％でエリスロポエチンの救急措置及び／又は用量の減少を要する。
【０００５】
慢性ＨＣＶにおける血清ＨＣＶのＲＮＡレベルの挙動は、ウイルス動態の３コンパートメントモデル（未感染の肝細胞、感染した肝細胞及び血清中の遊離のウイルスを含む）を用いて種々の状況で予測されている。インターフェロン（ＩＦＮ）療法のコースの初期の間、末梢血のウイルス濃度は、それらが容易に測定できるという事実に起因して、治療に対する反応の早期の予測因子として機能し、且つ長期ＩＦＮ療法の状況で他のさらに重要なエンドポイント、例えば、持続的ウイルス学的反応（ＩＦＮベースの治療の終了後少なくとも６カ月間の陰性の末梢ウイルス濃度として定義される、ＳＶＲ）と相関している。インターフェロン治療の状況におけるウイルスのクリアランスは二相性である；第１週目に初期の末梢ウイルス量の急速な低下が生じ（第１相）、続いて、数カ月間にわたり律速的に末梢ウイルス量が段階的に低下する（第２相）（非特許文献８及び９）。第１相の動態は、ウイルス複製の阻害（急速な末梢のウイルスクリアランスによってもたらされる）の有効性を反映するが、第２相の動態は感染した肝細胞の直接のクリアランスに相当する。感染した肝細胞のクリアランスは、肝感染の完全な根絶及びＳＶＲの達成における律速段階である。
【０００６】
治療の究極の目的はＳＶＲであるが、患者の治療の指針となるマーカーとして機能するいくつかの早期の予後のエンドポイントがある。これらのエンドポイントは下の表１にまとめられている。
【０００７】
【表１】
2012503011.tif 000003
表１のエンドポイントのうち、ＥＶＲは、最も重要な転帰の負の予測因子である。インターフェロン治療に対して１２週までにＥＶＲに達することができない患者（ウイルス量において２を超えるｌｏｇ１０の減少）は、ＳＶＲに最終的に達する確率が３％未満である。これらの患者は慣用的にはＳＯＣに関連する有意な副作用を逃れるために治療を離れる。その理由はこれらの患者における自然免疫応答では、４８週というウイルス抑制の状況でウイルス感染した細胞を除去できないと考えられるからである。ＲＶＲ及びｃＥＶＲは、正の予測エンドポイントであって、ここで約９０％の患者が最終的に、ペグ化インターフェロン−ベースの治療の４８週後にＳＶＲを達成する。
【０００８】
患者は、これらのウイルス学的エンドポイントにおける反応によって分類される。「無効反応者（Ｎｕｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒｓ）」とは、ＳＯＣでの１２週までにウイルス量で少なくとも１というｌｏｇ１０減少を達成できない患者である。これらの患者は免疫系に障害があると考えられる。「無反応者（Ｎｏｎ−Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒｓ）」とは、１２週間の治療コースを受け、且つＥＶＲに到達できない患者である。「部分反応者（Ｐａｒｔｉａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒｓ）」は、１２週までに２を超えるｌｏｇ１０ウイルス量減少があるが、ウイルスが陰性にならなかった患者と定義される。これらの患者は、さらに積極的なレジメンに対して２０〜３０％の確率で反応する。「再発者（Ｒｅｌａｐｓｅｒｓ）」とは、治療の終了時にウイルスの根絶（陰性）に達するが、ウイルス量が２４週間のフォローアップの間に検出可能なレベルに戻る患者である。
【０００９】
遺伝子型１の患者における４８週間の標準治療に対する平均的な患者の反応は十分特徴付けられている。例えば、ペグ化インターフェロンα２（ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標）（ペグインターフェロンα−２ａ、ロシュ・ファーマシューティカルズ社（Ｒｏｃｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）））に加えてリバビリンというＳＯＣ治療を受けている慢性Ｃ型肝炎感染（遺伝子型１）を有する患者のうち、表２は、これらの患者に典型的に予測される反応を示す。
【００１０】
【表２】
2012503011.tif 000004
多くの報告によれば、ウイルス複製、ウイルス血症の程度及びＣ型肝炎感染個体における慢性状態への進行は、ＣＤ４＋ヘルパー（Ｔｈ）及びＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）によって媒介されるＨＣＶ特異的細胞性免疫によって直接及び間接的に影響を受けることが示唆されている（非特許文献１０〜１４）。ヒト及びチンパンジーでの研究によれば、ＨＣＶはＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞反応の発生が肝臓及び血液において検出される前に数週間にわたって複製可能であることが明らかになっている。さらに、血液中でのそれらの増殖後でさえＣＤ８＋Ｔ細胞（及びおそらくＣＤ４＋）Ｔ細胞が機能を獲得するには遅延が生じる場合がある（Ｓｈｏｕｋｒｙ，同書）。機能的なＣＤ８＋Ｔ細胞の出現は、ウイルス血症の制御及び、少なくともいくつかの場合には、血清トランスアミナーゼの上昇と動態的に関連しており、これによって、急性のＣ型肝炎の間の肝臓の障害が免疫病理学的なものであることが示唆される。持続的なＨＣＶ感染のリスクが最も高いものは、血液、肝臓又はその両方において検出可能なウイルス特異的Ｔリンパ球反応を生じることができない個体である。おそらく最も重要なことに、細胞性免疫応答の発生は、感染が永続的に制御されていることを必ずしも保証するものではない。ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の反応は、持続感染の再発及び確立を防ぐためにウイルス複製の明確な制御の時点を超えて数週間又は数カ月間維持されなければならない。
【００１１】
ＳＯＣは、ＨＣＶに慢性的に感染した患者に現在最高の治療を与えるものであるが、治療に対して反応できず、あるいは反応を維持できないままである患者の割合に伴う、ノンコンプライアンス、用量減少及び治療中断をもたらし得るこのレジメンの重大な有害作用によって、ＨＣＶに対する新規な治療処置の余地が残る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｌａｕｅｒ及びＷａｌｋｅｒ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００１；３４５：４１〜５２
【非特許文献２】Ｓｈｅｐａｒｄら、Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ２００５；５：５５８〜５６７
【非特許文献３】Ｖｉｌｌａｎｏら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １９９９；２９：９０８〜９１４
【非特許文献４】Ｓｅｅｆｆ，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００２；３６：Ｓ３５−Ｓ４６
【非特許文献５】Ｃｏｘら、Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ２００５；４０：９５１〜９５８
【非特許文献６】Ｄｉｅｎｓｔａｇ及びＭｃＨｕｔｃｈｉｓｏｎ，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２００６；１３０：２３１〜２６４
【非特許文献７】Ｒｅｈｅｒｍａｎｎ及びＮａｓｃｉｍｂｅｎｉ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５；５：２１５〜２２９
【非特許文献８】Ｌａｙｄｅｎ−Ａｌｍｅｒら、Ｊ  Ｖｉｒａｌ  Ｈｅｐ  ２００６；１３：４９９〜５０４
【非特許文献９】Ｈｅｒｒｍａｎｎ及びＺｅｕｚｅｍ  Ｓ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２００６；１８：３３９〜３４２
【非特許文献１０】Ｃｏｏｐｅｒら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９９；１０：４３９〜４４９
【非特許文献１１】Ｇｅｒｌａｃら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９９９；１１７：９３３〜９４１
【非特許文献１２】Ｌｅｃｈｎｅｒら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０００；１９１：１４９９〜１５１２
【非特許文献１３】Ｔｈｉｍｍｅら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００１；１９４：１３９５〜１４０６
【非特許文献１４】Ｓｈｏｕｋｒｙら、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２００４；５８：３９１〜４２４
【発明の概要】
【００１３】
本発明の一実施形態は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法に関する。当該方法は、少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物を被験者に投与し、少なくとも１つのインターフェロン及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物の一方又は両方を該被験者にさらに投与することを含む。この実施形態においては、インターフェロン及び抗ウイルス化合物を、免疫治療組成物の初回投与の少なくとも４週間後に初めて投与する。一態様において、インターフェロン及び抗ウイルス化合物を、免疫治療組成物の初回投与の４〜１２週間後に初めて投与する。別の態様において、インターフェロン及び抗ウイルス化合物を、免疫治療組成物の初回投与の少なくとも１２週間後に初めて投与する。
【００１４】
該実施形態のいずれの態様においても、インターフェロンを被験者に対して毎週投与することができ、併行して抗ウイルス化合物を被験者に対して毎日、合計２４〜４８週間投与することができる。或いは、インターフェロンを被験者に対して２、３又は４週間おきに投与することができる。
【００１５】
該実施形態の一態様において、追加用量の免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の投与と同じ期間中に投与することができる。一態様においては、免疫治療組成物をインターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物と同じ日に投与する。一態様においては、免疫治療組成物の投与を、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の投与と交互に行い、この場合、免疫治療組成物の各用量を、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の最終投与の少なくとも３〜４日後に投与する。
【００１６】
該実施形態の一態様において、免疫治療組成物を４〜１２週間の間、毎週投与し、続いて毎月投与する。一態様において、免疫治療組成物を５週間の間、毎週投与し、続いて毎月投与する。
【００１７】
本発明の別の実施形態は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法に関する。当該方法は、被験者に少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物を投与し、該被験者にインターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方をさらに投与することを含む。この実施形態においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも１〜４週間後に投与する。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の４〜１２週間後に投与する。一態様において、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも１２週間後に投与する。一態様においては、免疫治療組成物の投与を、インターフェロン投与の開始と同じ期間にわたって開始する。
【００１８】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法に関する。当該方法は、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物を投与し、該被験者にインターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方をさらに投与することを含む。免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の最終用量を投与した後に投与する。
【００１９】
本発明の別の実施形態は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法に関する。当該方法は、被験者に少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物及びインターフェロンを投与し、該被験者に抗ウイルス化合物をさらに投与することを含む。この実施形態においては、当該抗ウイルス化合物を、免疫治療組成物及びインターフェロンの初回投与の少なくとも４週間後に初めて投与する。
【００２０】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法に関する。当該方法は、被験者に少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物及び抗ウイルス化合物を投与し、該被験者にインターフェロンをさらに投与することを含む。この実施形態においては、インターフェロンを、免疫治療組成物及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも４週間後に初めて投与する。
【００２１】
本発明の別の実施形態は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法に関する。この方法は、被験者に少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物、インターフェロン、及び抗ウイルス化合物を投与することを含む。この実施形態においては、免疫治療組成物、インターフェロン及び抗ウイルス化合物を同じ期間にわたって投与する。
【００２２】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）及び／又は早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ／ｃＥＶＲ）の頻度を、慢性的にＨＣＶに感染し、インターフェロンと抗ウイルス剤との併用療法のみで治療された被験者の集団におけるＲＶＲ及びＥＶＲ／ｃＥＶＲと比べて増加させる方法に関する。当該方法は、インターフェロン及び抗ウイルス化合物との組み合わせで１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を被験者の集団に投与することを含む。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与する。別の態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する。
【００２３】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）及び／又は早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ／ｃＥＶＲ）から持続的ウイルス学的反応（ＳＶＲ）への変換率を、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された同じ集団におけるＲＶＲ及び／又はＥＶＲ／ｃＥＶＲからＳＶＲへの変換率と比較して向上させる方法に関する。当該方法は、該被験者集団に１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物をインターフェロン及び抗ウイルス化合物と組み合わせて投与することを含む。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与する。別の態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する。
【００２４】
本発明の別の実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における完全著効者の数を、慢性的にＨＣＶに感染し、インターフェロン及び抗ウイルス剤療法のみで治療された被験者の集団における完全著効者の数と比べて増加させる方法に関する。当該方法は、被験者集団に、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物をインターフェロン及び抗ウイルス化合物と組み合わせて投与することを含む。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与する。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する。
【００２５】
本発明のさらに別の実施形態は、治療中のブレイクスルー被験者数又は慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における治療後の再発者数を、慢性的にＨＣＶに感染し、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された被験者の集団の治療中のブレイクスルー被験者数又は治療後の再発者数と比べて減少させる方法に関する。当該方法は、被験者集団に、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物をインターフェロン及び抗ウイルス化合物と組み合わせて投与することを含む。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与する。一態様においては、免疫治療組成物をインターフェロン及び抗ウイルス化合物の組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する。
【００２６】
本発明の別の実施形態は、薬剤耐性ＨＣＶ突然変異の発生を抑制する方法に関する。当該方法は、被験者集団に、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物をインターフェロン及び抗ウイルス化合物と組み合わせて投与することを含む。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与する。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する。
【００２７】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性的にＨＣＶに感染した被験者を治療する方法に関する。当該方法は：（ａ）１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を被験者に少なくとも４〜１２週間投与し、続いて免疫治療組成物の投与を継続しながら、併行してインターフェロン及び抗ウイルス剤を投与し；（ｂ）インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の約４週間後で被験者の急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）を測定し；そして（ｃ）インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法のみで治療された被験者の予想されるＲＶＲよりも統計的に有意に高いか、又は高い傾向が強いＲＶＲを有する被験者において、インターフェロン−抗ウイルス化合物療法の用量及び／又は回数を減少させることを含む。
【００２８】
本発明の別の実施形態は、インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法が失敗することが予想される、慢性的にＨＣＶ感染した被験者の治療を継続する方法に関する。当該方法は、被験者に１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む。一態様においては、被験者は免疫治療組成物が投与される期間中、インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法を継続して受ける。
【００２９】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性的にＨＣＶに感染した被験者における肝障害の軽減及び／又は肝機能の改善のための方法に関する。当該方法は、被験者に、少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物、並びに場合によってインターフェロン及び抗ウイルス化合物を投与することを含む。
【００３０】
本発明の別の実施形態は、インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法に対して不耐性である慢性的にＨＣＶに感染した被験者の治療を継続する方法に関する。当該方法は、併用療法を中断し、被験者に１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む。
【００３１】
上記実施形態のいずれにおいても、免疫治療組成物は１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。好適な実施形態において、免疫治療組成物は酵母系免疫治療組成物である。
【００３２】
本明細書に記載する本発明の実施形態のいずれかの一態様において、被験者はいずれのＨＣＶの前治療に対してもナイーブである。一態様において、被験者は、いずれのインターフェロンベースのＨＣＶ前治療に対してもナイーブである。一態様において、被験者はいずれのインターフェロンベースのＨＣＶ前治療に対してもナイーブであり、ベースラインで高いウイルス価（＞６００，０００ＩＵ／ｍｌのＨＣＶ  ＲＮＡレベル）を有する。一態様において、被験者はＨＣＶの治療に対して従前の無反応者又は部分反応者である。
【００３３】
本明細書に記載する本発明の実施形態のいずれかの一態様において、当該方法は、被験者における肝機能の少なくとも１つのパラメータを改善する。一態様において、当該方法は、被験者における肝障害を減少させる。
【００３４】
本発明の一実施形態は、慢性的にＨＣＶに感染した被験者における肝障害を軽減するか、又は肝機能を改善するためのインターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用する医薬品の調製における、少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物の使用に関する。免疫治療組成物は、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。この実施形態の一態様において、免疫治療組成物は、酵母系免疫治療組成物である。一態様においては、ＨＣＶに感染した被験者は、ＨＣＶの治療に対して従前の無反応者又は部分反応者である。一態様においては、ＨＣＶに感染した被験者は、いずれのインターフェロンベースのＨＣＶの前治療に対してもナイーブである。別の態様において、ＨＣＶに感染した被験者は、いずれのインターフェロンベースのＨＣＶの前治療に対してもナイーブであり、ベースラインで高いウイルス価（＞６００，０００ＩＵ／ｍｌのＨＣＶ  ＲＮＡレベル）を有する。
【００３５】
本発明のさらに別の実施形態は、被験者における慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の治療ためにインターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における、少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物の使用に関する。この実施形態の一態様において、被験者は、ＨＣＶのいずれの前治療に対してもナイーブである。この実施形態の一態様において、被験者は、いずれのインターフェロンベースのＨＣＶの前治療に対してもナイーブである。別の態様において、被験者は、ＨＣＶのいずれのインターフェロンベースの前治療に対してもナイーブであり、ベースラインで高いウイルス価（＞６００，０００ＩＵ／ｍｌのＨＣＶ  ＲＮＡレベル）を有する。免疫治療組成物は、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。この実施形態の一態様において、免疫治療組成物は酵母系の免疫治療組成物である。
【００３６】
本発明の別の実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）及び／又は早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ／ｃＥＶＲ）の頻度を、慢性的にＨＣＶに感染し、インターフェロンと抗ウイルス剤の併用療法のみで治療された被験者の集団におけるＲＶＲ及びＥＶＲ／ｃＥＶＲと比べて増加させるために、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物の使用に関する。免疫治療組成物は、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。この実施形態の一態様において、免疫治療組成物は、酵母系免疫治療組成物である。
【００３７】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）及び／又は早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ／ｃＥＶＲ）から持続的ウイルス学的反応（ＳＶＲ）への変換率を、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された同じ集団におけるＲＶＲ及び／又はＥＶＲ／ｃＥＶＲからＳＶＲへの変換率と比べて向上させるために、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物の使用に関する。免疫治療組成物は、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。この実施形態の一態様において、免疫治療組成物は、酵母系免疫治療組成物である。
【００３８】
本発明の別の実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における完全著効者の数を、慢性的にＨＣＶに感染し、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された被験者の集団における完全著効者数と比べて増加させるための、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物の使用に関する。免疫治療組成物は、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。この実施形態の一態様において、免疫治療組成物は、酵母系免疫治療組成物である。
【００３９】
本発明の別の実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団における治療中のブレイクスルー被験者数又は治療後の再発者数を、慢性的にＨＣＶに感染し、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された被験者の集団における治療中のブレイクスルー者数又は治療後の再発者数と比べて減少させるために、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物の使用に関する。免疫治療組成物は、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。この実施形態の一態様において、免疫治療組成物は、酵母系免疫治療組成物である。
【００４０】
本発明のさらに別の実施形態は、薬剤耐性ＨＣＶ突然変異の発生を抑制するために、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における、少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物の使用に関する。免疫治療組成物は、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。この実施形態の一態様において、免疫治療組成物は、酵母系免疫治療組成物である。
【００４１】
本発明の別の実施形態は、インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法が失敗することが予想される慢性的にＨＣＶに感染した被験者の治療を継続するための、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の一方又は両方とともに使用される医薬品の調製における、少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物の使用に関する。免疫治療組成物は、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。この実施形態の一態様において、免疫治療組成物は、酵母系免疫治療組成物である。
【００４２】
本発明のさらに別の実施形態は、インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法に対して不耐性である慢性的にＨＣＶに感染した被験者の治療を継続するための医薬品の調製における少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物の使用に関する。免疫治療組成物は、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。この実施形態の一態様において、免疫治療組成物は、酵母系免疫治療組成物である。
【００４３】
本発明の別の実施形態は、（ａ）少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域、（ｂ）インターフェロン及び（ｃ）抗ウイルス化合物を含む酵母系免疫治療組成物を含む医薬品組成物に関する。酵母系免疫治療組成物は、酵母ビヒクルを含み、この場合、ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域は、酵母ビヒクルによって発現されるか、又は酵母ビヒクルと結合するか、又は酵母ビヒクルと混合され、免疫治療組成物は１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する。
【００４４】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療するためのキットに関する。当該キットは：（ａ）少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む酵母系の免疫治療組成物（この酵母系免疫治療組成物は酵母ビヒクルを含み、ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域は、該酵母ビヒクルによって発現されるか、該酵母ビヒクルに結合するか、又は該酵母ビヒクルと混合され、免疫治療組成物は１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する）；（ｂ）少なくとも１つのインターフェロン；（ｃ）少なくとも１つの抗ウイルス化合物；並びに（ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）のそれぞれを投与するための説明書を含む。
【００４５】
一態様において、説明書は、免疫治療組成物の初回投与の少なくとも４週間後にインターフェロン及び抗ウイルス化合物を初めて投与することを指定している。一態様においては、説明書は、免疫治療組成物の初回投与の４〜１２週間後に、インターフェロン及び抗ウイルス化合物を初めて投与することを指定している。一態様においては、説明書は、免疫治療組成物の初回投与の少なくとも１２週間後に、インターフェロン及び抗ウイルス化合物を初めて投与することを指定している。
【００４６】
別の態様において、説明書は、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも１〜４週間後に免疫治療組成物を初めて投与することを指定している。一態様において、説明書は、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも４〜１２週間後に免疫治療組成物を投与することを指定している。一態様において、説明書は、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも１２週間後に免疫治療組成物を初めて投与することを指定している。
【００４７】
一態様において、説明書は、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の最終用量を投与した後に、免疫治療組成物を初めて投与することを指定している。
別の態様において、説明書は、免疫治療組成物及びインターフェロンの初回投与の少なくとも４週間後に抗ウイルス化合物を初めて投与することを指定している。
【００４８】
別の態様において、説明書は、免疫治療組成物及び抗ウイルス化合物の初回投与の少なくとも４週間後にインターフェロンを初めて投与することを指定している。
一態様において、説明書は、免疫治療組成物、インターフェロン及び抗ウイルス化合物を同じ期間にわたって投与することを指定している。
【００４９】
一態様において、説明書は、抗ウイルス化合物を毎日投与するのと併行してインターフェロンを毎週、合計で２４〜４８週間投与することを指定している。
一態様において、説明書は、インターフェロンを２、３又は４週間ごとに投与することを指定している。
【００５０】
一態様において、説明書は、インターフェロン及び抗ウイルス化合物の投与と同じ期間中に追加用量の免疫治療組成物を投与することを指定している。
一態様において、説明書は、インターフェロン又は抗ウイルス化合物と同じ日に免疫治療組成物を投与することを指定している。
【００５１】
別の態様において、説明書は、インターフェロン又は抗ウイルス化合物の投与と交互に免疫治療組成物を投与し、免疫治療組成物の各用量をインターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の最終投与の少なくとも３〜４日後に投与することを指定している。
【００５２】
一態様において、説明書は、免疫治療組成物を毎週４〜１２週間投与し、続いて毎月投与することを指定している。
さらに別の態様において、説明書は、免疫治療組成物を毎週５週間投与し、続いて毎月投与することを指定している。
【００５３】
前述のいずれかを包含する本明細書に記載する本発明の実施形態のいずれかの一態様において、抗ウイルス化合物は、リバビリン又はその機能的類似体、ＮＳ３プロテアーゼ阻害物質、ＮＳ５ｂポリメラーゼ阻害物質、又は宿主酵素阻害物質である。
【００５４】
前述のいずれかを包含する本明細書に記載する本発明の実施形態のいずれかの一態様において、免疫治療組成物は、ＣＤ８＋Ｔ細胞反応を誘発する。一態様において、免疫治療組成物は、ＣＤ４＋Ｔ細胞反応を誘発する。一態様において、免疫治療組成物は、細胞によるインターフェロン−γの産生を誘発する。一態様において、免疫治療組成物は以下の特性：（ａ）抗原提示細胞を活性化するために有効な１つ以上のパターン認識受容体の刺激、（ｂ）抗原提示細胞上の接着分子、共刺激分子、及びＭＨＣクラスＩ及び／又はクラスＩＩ分子の上方制御、（ｃ）抗原提示細胞による炎症誘発性サイトカインの産生の誘発、（ｄ）Ｔ細胞によるＴｈ１型サイトカインの産生の誘発、及び（ｅ）ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩ抗原特異的免疫応答の誘発、の１つ以上を有する。炎症誘発性サイトカインとしては、限定されるものではないが、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）が挙げられる。Ｔｈ１型サイトカインとしては、限定されるものではないが、ＩＬ−２、ＩＬ−５、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）が挙げられる。
【００５５】
前述のものを包含する本明細書に記載する本発明の実施形態のいずれか一態様において、免疫治療組成物はアジュバントを含む。別の態様において、免疫治療組成物は、少なくとも１つの生物反応修飾物質をさらに含む。
【００５６】
前述のものを包含する本明細書に記載する本発明の実施形態のいずれか一態様において、インターフェロンはペグ化インターフェロン−αである。
前述のものを包含する本明細書に記載する本発明の実施形態のいずれか一態様において、抗ウイルス化合物は、限定されるものではないが、リバビリン若しくはその機能的類似体、ＮＳ３プロテアーゼ阻害物質、ＮＳ５ｂポリメラーゼ阻害物質、又は宿主酵素阻害物質を包含し得る。
【００５７】
前述のものを包含する本明細書に記載する本発明の実施形態のいずれか一態様において、免疫治療組成物は酵母ビヒクルを含む。本明細書に記載する本発明の実施形態のいずれかにおいて、一態様では、酵母系免疫治療組成物は酵母ビヒクルを含み、この場合、ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域は、該酵母ビヒクルによって発現されるか、該酵母ビヒクルに結合するか、又は該酵母ビヒクルと混合される。好適な実施形態において、ＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域は、酵母ビヒクルによって発現される。酵母ビヒクルは、一態様においては：全酵母、酵母スフェロプラスト、酵母細胞質体、酵母ゴースト、又は亜細胞（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ）酵母膜抽出物若しくはそれらのフラクションであり得る。好適な一態様において、酵母ビヒクルは全酵母又は酵母スフェロプラストであり、全酵母が特に好適である。一態様において、酵母ビヒクルは熱不活性化酵母である。一態様において、酵母ビヒクルはサッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）由来であり、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が特に好適である。
【００５８】
前述のものを包含する本明細書に記載する本発明の実施形態のいずれか一態様において、免疫治療組成物は、ＨＣＶ配列を含むＨＣＶ融合タンパク質を含み得る。本発明のこの態様において、ＨＣＶ配列は１〜５個のＨＣＶタンパク質及び／又はその免疫原性領域から構成される。ＨＣＶタンパク質は、限定されるものではないが：ＨＣＶコア（配列番号２０の１〜１９１位）；ＨＣＶ  Ｅ１エンベロープ糖タンパク質（配列番号２０の１９２〜３８３位）；ＨＣＶ  Ｅ２エンベロープ糖タンパク質（配列番号２０の３８４〜７４６位）；ＨＣＶ  Ｐ７イオンチャンネル（配列番号２０の７４７〜８０９位）；ＨＣＶ  ＮＳ２メタロプロテアーゼ（配列番号２０の８１０〜１０２６位）；ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ／ヘリカーゼ（配列番号２０の１０２７〜１６５７位）；ＨＣＶ  ＮＳ４ａプロテアーゼ補因子（配列番号２０の１６５８〜１７１１位）；ＨＣＶ  ＮＳ４ｂ（配列番号２０の１７１２〜１９７２位）；ＨＣＶ  ＮＳ５ａ（配列番号２０の１９７３〜２４２０位）；又はＨＣＶ  ＮＳ５ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（配列番号２０の２４２１〜３０１１位）を含み得る。免疫治療組成物は、ＨＣＶ融合タンパク質におけるＨＣＶタンパク質又はその免疫原性領域のそれぞれに対する免疫応答を誘発する。
【００５９】
ＨＣＶ配列は、ＨＣＶコア配列又はその少なくとも１つの免疫原性領域に結合した、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ配列又はその少なくとも１つの免疫原性領域から構成されてもよく、この場合、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ配列は、天然のＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼの触媒領域が欠失しており、組成物はＨＣＶ  ＮＳ３特異的免疫応答及びＨＣＶコア特異的免疫応答を誘発する。一態様において、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼは、完全長ＮＳ３タンパク質のＮ末端の最初の８８個のアミノ酸に続くＨＣＶ  ＮＳ３の２６２個のアミノ酸（配列番号２０において１１１５〜１３７６位）から構成される。一態様において、ＨＣＶコア配列は、完全長ＨＣＶコア配列のアミノ酸位置２〜１４０（配列番号２０において２〜１４０位）から構成される。一態様において、ＨＣＶコアの疎水性Ｃ末端配列はトランケートされている。１つの好適な融合タンパク質は配列番号２からなる。
【００６０】
ＨＣＶ配列は、完全長の不活性化されたＨＣＶ  ＮＳ３タンパク質、又はその少なくとも１つの免疫原性領域から構成されてもよく、この場合、組成物はＨＣＶ  ＮＳ３特異的免疫応答を誘発する。一態様において、ＨＣＶ  ＮＳ３タンパク質は、配列番号２０において、ＨＣＶポリタンパク質配列の残基１１６５で突然変異を含み、その結果、タンパク質のタンパク質分解活性が不活性化する。１つの好適な融合タンパク質は配列番号４から構成される。
【００６１】
ＨＣＶ配列は、ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域と融合したＨＣＶ  Ｅ１タンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域から構成されてもよく、この場合、組成物はＨＣＶ  Ｅ１特異的免疫応答及びＨＣＶ  Ｅ２特異的免疫応答を誘発する。一態様において、ＨＣＶ  Ｅ１タンパク質は完全長タンパク質であり、この場合、ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質は完全長タンパク質である。一態様において、融合タンパク質は配列番号１２から構成される。一態様において、ＨＣＶ  Ｅ１タンパク質は、ＨＣＶ  Ｅ１のアミノ酸１〜１５６（配列番号２０において１９２〜３４７位）から構成されるトランケートされたＥ１タンパク質である。一態様において、ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質は、ＨＣＶ  Ｅ２のアミノ酸１〜３３４（配列番号２０において３８４〜７１７位）から構成されるトランケートされたＥ２タンパク質である。一態様において、融合タンパク質は配列番号６から構成される。
【００６２】
ＨＣＶ配列は、膜貫通領域欠失ＨＣＶ  ＮＳ４ｂタンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域から構成されてもよく、この場合、組成物はＨＣＶ  ＮＳ４ｂ特異的免疫応答を誘発する。一態様において、膜貫通領域欠失ＨＣＶ  ＮＳ４ｂタンパク質は、ＨＣＶ  ＮＳ４ｂのアミノ酸１７７〜２６１（配列番号２０において１８８８〜１９７２位）に結合したＨＣＶ  ＮＳ４ｂのアミノ酸１〜６９（配列番号２０において１７１２〜１７８０位）から構成される。一態様において、融合タンパク質は配列番号８から構成される。
【００６３】
ＨＣＶ配列は、膜貫通領域欠失ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域と融合した、膜貫通領域欠失ＨＣＶ  Ｅ１タンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域と融合した、トランケートされたＨＣＶコアタンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域から構成されてもよく、この場合、組成物は、ＨＣＶコア特異的免疫応答、ＨＣＶ  Ｅ１特異的免疫応答、及びＨＣＶ  Ｅ２特異的免疫応答を誘発する。一態様において、トランケートされたＨＣＶコアタンパク質は、ＨＣＶコアタンパク質の２〜１４０位（配列番号２０において２〜１４０位）から構成され、この場合、膜貫通領域欠失ＨＣＶ  Ｅ１タンパク質は、ＨＣＶ  Ｅ１タンパク質の１〜１５６位（配列番号２０において１９２〜３４７位）から構成され、膜貫通領域欠失ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質は、ＨＣＶ  Ｅ２タンパク質の１〜３３４位（配列番号２０において３８４〜７１７位）から構成される。一態様において、融合タンパク質は配列番号１４から構成される。
【００６４】
ＨＣＶ配列は、膜貫通領域欠失ＨＣＶ  ＮＳ４ｂ又はその少なくとも１つの免疫原性領域に融合したＨＣＶ  ＮＳ４ａ又はその少なくとも１つの免疫原性領域に融合した、不活性化ＨＣＶ  ＮＳ３又はその少なくとも１つの免疫原性領域から構成され、この場合、組成物は、ＨＣＶ  ＮＳ３特異的免疫応答、ＨＣＶ  ＮＳ４ａ特異的免疫応答、及びＨＣＶ  ＮＳ４ｂ特異的免疫応答を誘発する。一態様において、ＨＣＶ  ＮＳ３タンパク質は、ＨＣＶ  ＨＳ３の１〜６３１位（配列番号２０において１０２７〜１６５７位）から構成され、この場合、配列番号２０において１１６５位のセリンはアラニンで置換されてプロテアーゼを不活性化し；ＨＣＶ  ＮＳ４ａタンパク質はＨＣＶ  ＮＳ４ａタンパク質の１〜５４位（配列番号２０において６３５〜６９１位）から構成され；ＨＣＶ  ＮＳ４ｂタンパク質は、ＨＣＶ  ＮＳ４ｂの１７７〜２６１位（配列番号２０において１８８８〜１９７２位）に融合したＨＣＶ  ＮＳ４ｂの１〜６９位（配列番号２０において１７１２〜１７８０位）から構成される。一態様において、融合タンパク質は配列番号１６から構成される。
【００６５】
ＨＣＶ配列は、ＮＳ５ｂ  Ｃ末端の不活性化欠失を含むＨＣＶ  ＮＳ５ｂタンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域と融合した、ＨＣＶ  ＮＳ５ａタンパク質又はその少なくとも１つの免疫原性領域から構成されてもよく、この場合、組成物はＨＣＶ  ＮＳ５ａ特異的免疫応答を誘発する。一態様において、ＨＣＶ  ＮＳ５ａタンパク質はＨＣＶ  ＮＳ５ａの１〜４４８（配列番号２０において１９７３〜２４２０位）から構成され；ＨＣＶ  ＮＳ５ｂタンパク質はＨＣＶ  ＮＳ５ｂの１〜５３９位（配列番号２０において２４２１〜２９５９位）から構成される。一態様において、融合タンパク質は配列番号１８から構成される。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１】慢性ＨＣＶ感染の標準治療療法と免疫療法とを組み合わせた第ＩＩ相試験のデザインを示す模式図である。
【図２】標準治療（ＳＯＣ）単独、対、ＳＯＣに加えてＧＩ−５００５による免疫療法（５００５＋ＳＯＣ）を受けた、ＨＣＶに慢性感染した患者の急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）の割合を示す棒グラフである。割合は全ての患者（全体（ＩＴＴ））、インターフェロンでの治療に対して従前にナイーブであった患者（ＩＦＮナイーブ）及びベースラインで６００，０００ＩＵ／ｍｌを超えるウイルス量（高ウイルス量）で治療を開始した患者について示している。
【図３】免疫療法に加えてＳＯＣ（ＧＩ−５００５＋ＳＯＣ）で治療された標準治療（ＳＯＣ）に対する従前の無反応者が、ＳＯＣ単独で治療された従前の無反応者と比較して、増強された第２相ウイルス動態に向かう傾向を示すことが示されているグラフである。
【図４】最初の４週間の三剤併用療法（ＳＯＣに加えてＧＩ−５００５での免疫療法）を完了した臨床試験における全ての被験者、対、ＳＯＣ単独の４週間を終了した被験者についての急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）を示す棒グラフである。割合は試験における全ての患者（全体）、インターフェロンでの治療に対して従前にナイーブであった全ての患者（ＩＦＮナイーブ）、及びベースラインで６００，０００ＩＵ／ｍｌを超えるウイルス量で治療を開始したＩＦＮナイーブの患者（高ウイルス量（ナイーブ））について示されている。
【図５】一群として、ＳＯＣ＋ＧＩ−５００５（三剤併用）治療の最初の４週間を終了した全ての被験者（全ての治療）が、ＳＯＣ単独で治療された全ての被験者との比較において、末梢ウイルス減少について増大した（増強した）第２相の動態へ向かうという統計学的に有意な傾向を示したことを示すグラフである。
【図６】一群として、三剤併用療法の最初の４週を終了したインターフェロン治療に対する従前の無反応者（無反応者）であった被験者が、ＳＯＣ単独で治療された従前の無反応者との比較において、末梢ウイルス減少について増大した（増強した）第２相の動態へ向かうという統計学的に有意な傾向を示したことを示すグラフである。
【図７】一群として、三剤併用療法の最初の４週間を終了したインターフェロンナイーブな被験者（インターフェロンナイーブ）であった被験者が、ＳＯＣ単独で治療されたインターフェロンナイーブな被験者との比較において、末梢ウイルス減少について増大した（増強した）第２相の動態へ向かうという強い傾向を示したことを示すグラフである。
【図８】一群として、三剤併用療法の最初の４週間を終了した、ベースラインで高ウイルス量を有する全ての被験者（ベースラインでの高ウイルス量）が、ＳＯＣ単独で治療された、ベースラインでウイルス量の高い被験者との比較において、末梢ウイルス減少について増大した（増強した）第２相の動態へ向かうという統計学的に有意な傾向を示したことを示すグラフである。
【図９】一群として、三剤併用療法の最初の４週間を終了した、インターフェロンナイーブであって、且つ試験のベースラインで高ウイルス量であった被験者（インターフェロンナイーブ且つベースラインで高ウイルス量）が、インターフェロンナイーブであって、且つ試験のベースラインで高いウイルス量を有していたＳＯＣ単独で治療された被験者のと比較において、末梢ウイルス減少について増大した（増強した）第２相の動態へ向かうという強い傾向を示したことを示すグラフである。
【図１０Ａ】一群として、インターフェロンナイーブであった１２週の三剤併用療法を完了している被験者（ナイーブ）、及びインターフェロンナイーブであって、且つ試験のベースラインで高いウイルス量を有していた三剤併用療法の１２週間を終了している被験者のサブグループ（ナイーブＨＶＬ）が、ＳＯＣ単独を受けている患者の相当する群と比較して、改善されたＥＶＲ率に向かうという強い傾向を示したことを示すグラフである。
【図１０Ｂ】図１０Ａと同じ結果であるが、米国での臨床試験現場からの患者にのみ限定された結果を示しているグラフである。
【図１１Ａ】１２週でのＡＬＴ正常化において、ＳＯＣと比較して、三剤併用療法が治療ナイーブ群（ナイーブ及びナイーブＨＶＬ）で改善を示したことを示すグラフである。
【図１１Ｂ】２４週でのＡＬＴ正常化において、ＳＯＣと比較して、三剤併用療法が全ての治療ナイーブ群（ナイーブ及びナイーブＨＶＬ）で改善を示したことを示すグラフである。
【図１２Ａ】２４週でのアクチテスト（Ａｃｔｉｔｅｓｔ）スコアにおいて、ＳＯＣと比較して、三剤併用療法が全ての治療ナイーブ群（ナイーブ及びナイーブＨＶＬ）で改善を示したことを示すグラフである。
【図１２Ｂ】２４週でのフィブロテスト（Ｆｉｂｒｏｔｅｓｔ）スコアにおいて、ＳＯＣと比較して、三剤併用療法が全ての治療ナイーブ群（ナイーブ及びナイーブＨＶＬ）で改善を示したことを示すグラフである。
【図１３】三剤併用療法（ＥＴＲ）の開始後４８週で、治療反応の終了時の改善（４８週でのＰＣＲアッセイによって、ＨＣＶ  ＲＮＡ＜２５ＩＵ／ｍＬ）が、ＳＯＣ単独と比較して三剤併用療法群においてナイーブな遺伝子型１の患者で観察されたことを示すグラフである（全無作為化）；三剤併用−３７／５３（７０％）対ＳＯＣ−２７／４９（５５％）、片側フィッシャーの直接確立検定ｐ＝０．０９。
【図１４Ａ】三剤併用療法の開始後４８週で、治療反応の終了時の改善（４８週でのＰＣＲアッセイによるＨＣＶ  ＲＮＡ＜２５ＩＵ／ｍＬ）が、ＳＯＣ単独と比較して三剤併用療法群においてナイーブな遺伝子型１患者で観察されたことを示すｍＩＴＴ（改変Ｉｎｔｅｎｔ  ｔｏ  Ｔｒｅａｔ）解析を反映するグラフである（ｍＩＴＴ；三剤併用３７／５０（７４％）対ＳＯＣ  ２７／４６（５９％））。
【図１４Ｂ】三剤併用療法の開始後４８週で、治療反応の終了時の改善（４８週でのＰＣＲアッセイによるＨＣＶ  ＲＮＡ＜２５ＩＵ／ｍＬ）が、ＳＯＣ単独と比較して三剤併用療法群（ナイーブ及び無反応者）において全ての患者で観察されたことを示すｍＩＴＴ（改変Ｉｎｔｅｎｔ  ｔｏ  Ｔｒｅａｔ）解析を反映するグラフである（ｍＩＴＴ；三剤併用６３％対ＳＯＣ５１％）。
【図１５Ａ】三剤併用療法が、４８週で、ＳＯＣと比較して全ての被験者の群でＡＬＴ正常化の改善を示したことを表すグラフである。
【図１５Ｂ】三剤併用療法が、４８週で、ＳＯＣと比較してベースラインで高いウイルス量を有する全ての被験者の群でＡＬＴ正常化の改善を示したことを表すグラフである。
【図１５Ｃ】三剤併用療法が、４８週で、ＳＯＣと比較してインターフェロンナイーブな被験者の群でＡＬＴ正常化の改善を示したことを表すグラフである。
【図１５Ｄ】三剤併用療法が、４８週で、ＳＯＣと比較してベースラインで高いウイルス量を有していたインターフェロンナイーブな被験者の群でＡＬＴ正常化の改善を示したことを表すグラフである。
【図１５Ｅ】三剤併用療法が、４８週で、ＳＯＣと比較して従前の無反応者の群でＡＬＴ正常化の改善を示したことを表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
本発明は、概して、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療するための新規な方法であって、現行の標準治療（ＳＯＣ；抗ウイルス療法と組み合わせたインターフェロン療法）と免疫療法（例えば、免疫治療組成物の投与）とを組み合わせる方法であり、ＳＯＣ単独と比べて：早期ウイルス学的マーカー（例えば、ＲＶＲ及びＥＶＲ）によって測定される療法に対する初期反応率を改善し、長期にわたって療法に対する反応が持続する患者のプールを増大させ、ある患者については治療コースを短縮し、ＳＯＣ療法に対して無反応又は不耐性である患者の「救済」を可能にし、患者における肝機能の改善及び／又は肝障害の軽減をもたらし、そして患者についてＨＣＶ療法の個別化を可能にするような方法で組み合わせる方法に関する。その結果、用量を減らし、患者のコンプライアンスを改善し、副作用を軽減し、そして長期治療転帰を改善することができる。重要なことには、理論によって拘束されないが、本発明者等は、本明細書に記載する新規治療プロトコルによって、遺伝子型ＩのＨＣＶに感染し、ＳＯＣで治療された患者の現在の持続的ウイルス学的反応（ＳＶＲ）の割合が、遺伝子型２若しくは３のＨＣＶに感染した患者のそれにより近い割合に変換されると考える。実際、ＥＴＲ（４８週）で、本発明の治療プロトコルを受けている遺伝子型１ナイーブ患者は、ＳＯＣ単独を受けている同等の群よりも高い完全著効／維持著効を有していた（実施例を参照）。ＳＶＲに当てはめると、本発明者等は、本発明の治療プロトコルを受ける患者集団では、ＳＯＣのみを受ける患者と比べて、治療後の再発が少なく、ＳＶＲ率が改善されるであろうと予想する。
【００６８】
より詳細には、免疫療法＋ＳＯＣの組み合わせ（三剤併用療法）の第２相試験（臨床試験）において、本発明者等は、本明細書に記載する三剤併用療法が、ＳＯＣ単独と比較して、４８週間の治療中に様々な患者群でウイルス動態を改善し、完全著効率を改善し、また肝機能の改善及び／又は肝障害の軽減をもたらすことを見いだした。この試験において（図１）、ＧＩ−５００５（高レベルのＨＣＶ  ＮＳ３及びコア抗原を発現する全加熱死菌エス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）免疫療法産物）をペグ−ＩＦＮ／リバビリン（ＳＯＣ）と併用して、遺伝子型１慢性ＨＣＶ感染症の被験者を治療した。患者（１４０の総症例）を無作為に１：１に分け、この非盲検試験における従前の治療コース中のウイルス学的反応によって階層化した。治療群１の患者は、４０ＹＵ（１ＹＵ＝１０，０００，０００酵母）のＧＩ−５００５を１２週間にわたって毎週×５回、続いて毎月×２回皮下（ＳＣ）投与（１０ＹＵの用量として患者に４つの別の部位に投与）することからなるＧＩ５００５単独療法導入期間と、続いて毎月４０ＹＵのＧＩ−５００５＋ペグＩＦＮ／リバビリンからなる三剤併用療法（ナイーブ患者では４８週間、従前の無反応者には７２週間投与）を受けた。治療群２の患者は、ＳＯＣ単独での治療を受けた（従前のＧＩ−５００５単独療法なし）。
【００６９】
４週治療エンドポイント（ＲＶＲ）
本発明者らは、標準治療と組み合わせた免疫治療組成物の投与（本明細書では「三剤併用療法」とも呼ぶ）が、意外にも三剤併用療法を受けているインターフェロンナイーブ患者（本明細書では「ナイーブ」患者（すなわちインターフェロン又はＳＯＣで従前に治療されていない患者）とも呼ぶ）において、ＳＯＣ単独を受けている患者と比べて急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）率が統計的に改善される傾向をもたらすか又は急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）率が統計的に改善されることを見いだした。ほとんどのＳＯＣ被験者がＳＯＣの開始後４週間に達し、三剤併用療法被験者のほぼ半分がインターフェロン／リバビリン療法の開始後４週間に達した中間時点で（すなわち、免疫療法単独を１２週導入期間後、次いでインターフェロン／リバビリンを開始し、免疫療法を継続）、三剤併用療法で治療したインターフェロンナイーブ患者は、ＳＯＣ単独を受けた患者と比べて、ＲＶＲ率が統計的に改善された（４７％ＲＶＲ対２０％ＲＶＲ；ｐ＝０．０３）。この中間解析で、ＳＯＣに対して従前に無反応であった患者（すなわち、従前の無反応者とは、従前にＥＶＲ又は１２週間のＳＯＣ後、ウイルス量の減少が＞２ｌｏｇを達成しなかった患者である）において、免疫療法とＳＯＣの併用（すなわち、三剤併用療法）は、第２相ウイルス排除動態において統計的に有意な差（−１．１６ｌｏｇ１０／ｍｏ．対−０．８８ｌｏｇ１０／ｍｏ；ｐ＝０．０２）によって測定されるように、ＥＶＲ及び／又はｃＥＶＲ率が改善される傾向を示した。これらの差を、１２週を通してモデル化した場合（１２週での０．８０ｌｏｇ１０減少効果を得る）、三剤併用療法を受ける患者について良好なＥＶＲ及びｃＥＶＲ率が予想された。
【００７０】
両治療群（ＳＯＣ単独及び三剤併用療法）における全患者が４週間のインターフェロン／リバビリン療法を完了した際、標準治療（三剤併用療法）と併用した免疫治療組成物の投与の結果、ＳＯＣ単独を受けた患者と比べて、インターフェロンナイーブ及び従前の無反応患者において４週間動態が改善され、インターフェロンナイーブ患者において急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）率が改善された。
【００７１】
より具体的には、４週間のインターフェロン／リバビリン療法の完了時で、インターフェロンナイーブ患者（すなわち、ＳＯＣで従前に治療されていない患者）を含め、三剤併用療法を受けた全患者において、三剤併用療法は、ＳＯＣ単独を受けた患者（２６．０％ＲＶＲ対１９．６％ＲＶＲ；ｐ＝０．３１）と比べて、ＲＶＲ率が改善される傾向が強かった（１９．１％ＲＶＲ対１３．８％ＲＶＲ；ｐ＝０．２８）。加えて、三剤併用療法が２．６倍有利であることが、インターフェロンナイーブでありベースライン高ウイルス量で試験を開始した患者（高ウイルス量は、本明細書では＞６００，０００ＩＵ／ｍｌのＨＣＶ  ＲＮＡレベルとして定義される）の群において観察された（２０．０％ＲＶＲ対７．７％ＲＶＲ；ｐ＝０．１）。ナイーブ／低ウイルス量患者のほとんどは、両治療群（三剤併用療法及びＳＯＣ単独）においてＲＶＲを達成し、このことは全体としてのインターフェロンナイーブ群（ベースラインで高又は低ウイルス量を有するナイーブ患者を合わせたもの）において三剤併用療法について観察される優位性が小さいことの原因となる。さらに、いずれの治療群からの無反応患者においてもＲＶＲは観察されず、単一群として全ての患者の解析での絶対的ＲＶＲ率が低くなった。
【００７２】
さらに、両治療群において全ての患者が４週間のインターフェロン／リバビリン療法を完了した際、第２相ウイルス排除動態によって測定される、三剤併用療法から得られるＥＶＲ、ＥＴＲ及びＳＶＲ率に好都合な傾向が継続した。より具体的には、いくつかの患者のサブグループでは、第２相ウイルス排除速度が増大し、これは４週の時点で三剤併用療法に有利であった。特に、３つのサブグループ：（１）全患者、（２）従前の無反応者；及び（３）ベースラインで高ウイルス量を有する患者は、統計的有意性を達成した（それぞれｐ＝０．０２、ｐ＝０．００８、及びｐ＝０．０２）。２つのサブグループ：（１）インターフェロンナイーブ患者、及び（２）インターフェロンナイーブであり、且つベースラインで高ウイルス量を有する患者は、強い三剤併用療法優位の傾向を示した。総合すると、三剤併用療法は、インターフェロンベースの療法に対して従前の無反応者を含む全ての関連するサブグループにおいて、ＳＯＣ単独と比較して、ウイルス排除の線形速度において４週間にわたって約２倍の改善を示した（０．２４〜０．３２１ｏｇ１０／月）。３〜４ｌｏｇ２０を目的としたこのような排除速度の改善は、４８〜７２週の全レジメンで持続する場合はウイルスの減少を改善した。第２相ウイルス動的排除のこのような改善率は、免疫療法誘発性の改善された感染肝細胞除去の機構案についての役割を裏付ける。
【００７３】
１２週の治療エンドポイント（ＥＶＲ）並びに１２及び２４週肝機能データ
両治療群（ＳＯＣ単独及び三剤併用療法）の全患者が１２週のインターフェロン／リバビリン療法を完了した時点で（ＥＶＲエンドポイント）、三剤併用療法は、ナイーブ（インターフェロン−ナイーブ）患者サブグループでは、ＳＯＣ単独と比べてＥＶＲ率において８〜１２％の改善を示した。特に、三剤併用療法ＥＶＲ率は、全ナイーブ被験者を含むサブグループにおいて改善され（三剤併用療法については６７％が完全著効を達成するのに対して、ＳＯＣについては５６％が完全著効を達成する）、かつ高いベースラインウイルス量（＞６００，０００ＩＵ／ｍＬ）を有していたナイーブ被験者のサブグループにおいても改善された。
【００７４】
加えて、全患者が１２週の療法を完了した後及び全患者が２４週の療法を完了した後の肝機能又は肝障害のマーカーの評価によって、ＳＯＣ単独を受ける患者と比べて、三剤併用療法を受ける患者では肝機能改善及び／又は肝障害軽減に対する非常に強い傾向が示された。
【００７５】
より具体的には、三剤併用療法を受けるナイーブ患者サブグループ（全ナイーブ及びナイーブ／高ウイルス量）は、同じＳＯＣサブグループと比較して、１２週及び２４週療法の両方でＡＬＴ正常化において１０〜１５％の改善を示した（ＡＬＴ正常化は、第１日でＡＬＴ＞ＵＬＮである患者について継続した試験来院で少なくとも２ＡＬＴ値＜ＵＬＮと定義される）。ＡＬＴは十分に有効性が確認された肝傷害の尺度であり、肝炎の代わりになる。従前の大規模な肝炎試験で、ＡＬＴレベルの減少及び／又は正常化は、連続生検によって測定される肝機能の改善及び肝線維症の軽減と相関することが証明されている。
【００７６】
加えて、２４週の療法後、三剤併用療法では、ＳＯＣと比較して、血清フィブロテストスコアが明確に改善された患者の割合が増加し（２倍まで）、血清フィブロテストスコアが明確に悪化した患者の割合が減少した（５０％程度の減少）（フィブロテストスコアは、フィブロテストによって測定した場合、線維症が中等度から最小に又は線維症が重度から中等度又は最小に改善された患者の割合を示す）。これらの傾向は、図１１Ｂで示されるように全群で反映された（全治療、ナイーブ、ナイーブＨＶＬ、及び無反応者）。
【００７７】
２４週での三剤併用療法はまた、ＳＯＣと比較して、血清アクチテストスコアが明確に改善されたナイーブ患者サブグループ（全ナイーブ及びナイーブ／ＨＶＬ）で１４％までの優位性を示した（アクチテストスコアとは、アクチテストによって測定した場合、壊死が中等度から最小に又は重度から中等度又は最小に改善された患者の割合を反映する）。
【００７８】
１２及び２４週の療法のどちらもが完了した時点で、ＧＩ−５００５三剤併用療法は継続して良好な耐容性を示し、三剤併用療法はＳＯＣに相当する中断率を示した。
４８週の治療エンドポイント（ＥＴＲ）
両治療群（ＳＯＣ単独及び三剤併用療法）の全患者が４８週のインターフェロン／リバビリン療法を完了した時点（治療終了（ＥＴＲエンドポイント））で、ＳＯＣ単独を受けた患者と比較して三剤併用療法群ではより高い割合のナイーブ患者が完全著効を達成又は維持した。具体的には、ＳＯＣ単独と比較して、三剤併用療法群のナイーブ（インターフェロン−ナイーブ）遺伝子型１患者では、治療終了時の反応（ＥＴＲ）における改善（ＰＣＲアッセイによると、ＨＣＶ  ＲＮＡ＜２５ＩＵ／ｍＬ）が観察された（三剤併用では３７／５３（７０％）に対してＳＯＣでは２７／４９（５５％））（図１３）。同様の治療効果が、全患者（インターフェロンナイーブ及び無反応）で観察された（データは不掲載）。完全著効（ＨＣＶ  ＲＮＡ＜２５ＩＵ／ｍＬ）も４８週の群として無反応者において評価したところ（全て無作為化）；三剤併用では６／１９（３２％）に対してＳＯＣでは６／１９（３２％）であった。ｍＩＴＴ（改変Ｉｎｔｅｎｔ  Ｔｏ  Ｔｒｅａｔ）解析（実験で実際に少なくとも１つの治療用量を投与された、実験に登録した患者のみの解析）は、１５％の一貫した治療効果を示し；三剤併用３７／５０（７４％）に対してＳＯＣ２７／４６（５９％）（図１４Ａ）であり、４８週のウイルス学的完全著効率は、最近報告されたプロテアーゼ阻害物質三剤併用療法レジメンのそれに相当する。類似の治療効果が、ｍＩＴＴ解析を用いて全患者（ナイーブ及び無反応）で観察された（図１４Ｂ；三剤併用６３％に対してＳＯＣ５１％）。
【００７９】
これらの結果は、ＳＯＣ単独と比べて、ＧＩ−５００５三剤併用療法を受ける患者において４８週でウイルス学的完全著効において実質的な改善を示す。これは、ウイルス学的完全著効などの長期の臨床的に重要なウイルス学的エンドポイントで実質的な差を生じる治療ワクチンの最初の例である。さらに、ＧＩ−５００５の免疫介在性作用機序に基づいて、ＧＩ−５００５三剤併用療法を受ける患者は、治療期間後で継続して恩恵を受けることが期待され、良好にＥＴＲからＳＶＲに変換するはずである。
【００８０】
治療期間にわたる完全著効に関して４８週までの治療で興味深いことは、三剤併用療法を受ける患者が、一群として、ＳＯＣ単独群では著効者が減少し始める時点を過ぎても完全著効者が増え続けたという観察結果である（図１３を参照）。理論によって拘束されないが、本発明者等は、ＳＯＣとともに免疫療法を用いた付加的なプラスの効果が、ＨＣＶに対する免疫系の活性化により長期にわたってウイルス感染した細胞の制御を獲得及び／又は持続する能力であると考える。この結果、ＳＯＣ単独を受ける群と比較して、三剤併用療法群では治療後の再発が少なくなり、従って、ＳＶＲ率が改善されることが期待される。
【００８１】
従って、療法の４８週間後の第２相臨床試験結果は、遺伝子型１患者、及び特にインターフェロンナイーブ患者群において、ウイルス動態、ＲＶＲ、ＥＶＲ、及びＥＴＲの改善を示し、これは、ＳＶＲにより測定されるような、ＳＯＣと比較した三剤併用療法のウイルス学的反応における利点（完全著効）につながることが期待される。加えて、ＡＬＴ正常化、フィブロテスト、及びアクチテストスコアにおいて示された改善は、対応のある（ｐａｉｒｅｄ）生検評価により測定されるＳＯＣと比較した三剤併用療法の肝組織像の利点につながることが期待される。加えて、三剤併用療法は、他の方法ではＳＯＣ単独での療法に失敗する患者を救済するために有用であることが期待される。最後に、本明細書で記載される免疫療法とＳＯＣとの併用は、様々な抗ウイルス小分子薬剤の使用から起こることが知られているウイルス突然変異によるエスケープ（ｖｉｒａｌ  ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｅｓｃａｐｅ）を軽減又は排除することが期待される。
【００８２】
適応的細胞性免疫応答を刺激する薬剤の使用が、ＳＯＣ単独と比較して持続的ウイルス学的反応（ＳＶＲ）率を含む後期エンドポイントを改善することは予想されていたが、免疫療法をインターフェロン−抗ウイルス療法に追加することが、ＳＯＣ単独と比較して早期ウイルス学的エンドポイントで患者反応において有意な改善（すなわち、第１相ウイルス動態においては、（迅速な周辺ウイルス排除により促進される）ウイルス複製の阻害の有効性を反映する）を示すことは予想できなかったので、本明細書に記載する結果は意外である。予想されていたことは、ＨＣＶ特異的細胞性免疫応答の刺激が治療の後期で最も顕著な効果を有し、ウイルスに感染した肝細胞の排除の改善に有利であり（ウイルス動力学プロファイルの律速部分）、一方、インターフェロン／抗ウイルス療法は、ウイルス複製を直接阻害することにより早期ウイルス量減少に主に関与するため、免疫療法は、インターフェロン／抗ウイルス剤ベースの療法の直接的抗ウイルス効果を補足し、ＳＶＲを実質的に改善するであろうということである。インターフェロン／抗ウイルス療法（第１相ウイルス排除）による早期ウイルス排除（ｐｒｅ−ＲＶＲ）中の免疫系刺激の影響は、ＳＯＣ単独と比べて、統計的に有意であるか、又は免疫療法付加優位の強い傾向を示すことは予想されていなかった。
【００８３】
しかし、追加された免疫療法の効果は、顕著であり、意外である。その理由は、早期ウイルス学的マーカーに対する効果が、インターフェロン／抗ウイルス療法のごく初期に現れ、場合によっては、インターフェロン／抗ウイルス療法開始のちょうど８日後に検出されるからである。この結果は、免疫療法をＨＣＶ  ＳＯＣプロトコルに追加することが、インターフェロン／抗ウイルス療法と相乗効果を奏する場合があることを示し、改善された第２相ウイルス動態及び改善された持続的ウイルス排除をもたらすことに加え、早期ウイルス動態に対してＳＯＣ単独よりも大きな影響を与えることが期待できる。これらの結果は、少なくとも一部の患者についてＳＯＣ療法の用量を減らすレジメン（すなわち、ＳＯＣ成分の減少又は除去）をもたらす可能性があり、別の方法ではＳＯＣ療法が失敗する少なくとも一部の患者が、療法（おそらくは改変された療法）を続け、そしてプラスの結果を達成することが可能になることが期待される。
【００８４】
さらに、免疫療法とＳＯＣとの組み合わせによって、ＳＯＣ単独を用いて得られるよりも長期間にわたって完全著効者が増加することは予想外であり、免疫療法とＳＯＣとの組み合わせによって、治療の最後までＳＯＣ単独よりも高い程度まで完全著効を持続できることも予想外であった。
【００８５】
免疫療法をＳＯＣに追加して観察される完全著効率は、ＳＯＣ単独を用いた完全著効率と比較して、治療中の再発（ブレイクスルー）及び治療後の再発（再発）を抑制できることを示す。さらに、本発明の三剤併用療法プロトコルの免疫療法成分が、ＨＣＶに対する免疫応答、及び特に細胞性免疫応答の活性化により肝クリアランスを一部制御すると考えられることから、突然変異によるエスケープの発生は、他の小分子抗ウイルス療法を受ける患者と比較して、本明細書に記載のような三剤併用療法を受ける患者において低下するか又は存在しないことが予想される。小分子療法は、ウイルスの突然変異を「後押し」し、その結果、小分子療法が効かないウイルスのエスケープ変異体が発生させることが知られている。
【００８６】
加えて、三剤併用療法を受ける患者においては、ＳＣＯ療法と比較して、肝機能、ＡＬＴ正常化、フィブロテスト、及びアクチテストスコアの改善が、対応のある生検評価によって測定されるＳＯＣと比較した三剤併用療法の肝組織像の利点につながることが期待できる。前述のように、慢性ＨＣＶ感染症の続発症としては、肝硬変、肝不全及び肝臓癌を挙げることができる。したがって、ＨＣＶ感染症から起こる肝障害の軽減（又はＨＣＶ感染症の治療中又は治療後の肝機能の改善）は、慢性ＨＣＶ感染症に罹っている患者にとって重要な臨床的利点である。
【００８７】
最後に、本明細書に記載する免疫療法は、良好な耐容性を示し、ＨＣＶ感染症を治療するための小分子法から予想されるよりも中断率が低く、ノンコンプライアンスの問題が少ないことが予想される。例えば、一部の小分子抗ウイルス法は、貧血及び発疹による毒性を報告するか、又は現行のプロトコルのもとで使用する場合は頻回投薬する必要があるので、ノンコンプライアンスが現実の問題となる。本発明の免疫療法プロトコルは、簡便な一月あたりの用量で投与することができ、免疫療法製品に関連する安全性、用量制限毒性、又は中止の問題についての報告は少ない。加えて、本発明の免疫療法成分は、ＳＯＣ及び他の薬剤の用量を減らすレジメンの使用につながり、これによって患者の耐容性及びＨＣＶの治療のコンプライアンスが改善される。
【００８８】
理論によって拘束されないが、本発明者等は、本明細書で提示される初期及び後期ウイルス学的エンドポイントの両方における結果が、三剤併用療法の３成分の複合的及び相補的又は相乗効果によるものであると考え、これらは、本発明の一態様において、患者に対して３成分を投与するタイミングによって向上させることができる。特に、本発明者等は、単独療法としての免疫療法の初期と、それに続くインターフェロン及び／又は抗ウイルス療法（三剤併用療法）を用いた治療の追加は、この三剤併用療法の１つの有効なプロトコルであり、早期ウイルス学的エンドポイントにおいて改善をもたらすと考える。このプロトコルにおいて、免疫系をまず初回抗原刺激し、追加抗原刺激して、ＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物の投与によってＨＣＶ抗原に対して反応させる。本発明者らは従前に、免疫治療組成物を用いた単独療法が、長時間にわたって患者においてウイルス量を減少させ、肝機能を改善させることを示したが（第Ｉｂ相臨床試験データに基づく）、第１相ウイルス動態に対するこの種の免疫療法の影響が、追加の治療薬と併用して投与された場合に有意であることは従前には知られていないか又は予想されていなかった。
【００８９】
従って、本発明者等は、免疫療法と標準治療（ＳＯＣ）との組み合わせは、改善されたＳＶＲ率をもたらし、他の抗ウイルス剤を追加できない最適化された中枢療法としても機能することが期待される新規三剤併用療法であると考える。実際、免疫療法とウイルス複製の様々な阻害物質との組み合わせ、例えば小分子ポリメラーゼ及びプロテアーゼ阻害物質の組み合わせは、現行のＳＯＣの成分（インターフェロン又はリバビリン）を減らすか又は完全に排除することができ、また小分子の投与を無くし、その結果、ＨＣＶ感染症の療法の患者の良好な耐容性及び良好な患者のコンプライアンスをもたらすことが期待される。
【００９０】
本明細書で詳細に記載するような組成物を用いて免疫療法の初期に患者の治療を開始することによって、免疫系が活性化され、ＨＣＶウイルス抗原に対するＴ細胞反応（すなわち、ＣＤ４＋反応及び／又はＣＤ８＋反応）が、このような反応の拡大を阻害又は遅延させ得る追加の因子の非存在下で誘発される。ＨＣＶ抗原に対する免疫系を数ラウンド追加抗原刺激した後、インターフェロン／抗ウイルス療法を導入するが、一実施形態（後述）においては、インターフェロン療法を免疫療法と同時に開始し（免疫療法の効果を増強させるため）、後の時点で抗ウイルス療法を導入することが望ましい場合がある。
【００９１】
Ｉ型インターフェロンは、（例えば、ＨＣＶなどのＲＮＡウイルスによる細胞の感染の結果としての）細胞中の異常に多量のｄｓＲＮＡに反応して、宿主細胞によって分泌される。トール様受容体３（ＴＬＲ３）の活性化の結果として、自然免疫系の細胞においてインターフェロン産生が誘発され、これは次に細胞に遺伝子を活性化させ、ウイルス複製を防止し正常細胞リボソーム機能を阻害するタンパク質を産生させ、このようにしてウイルス及びおそらくは感染した宿主細胞も殺す。従って、Ｉ型インターフェロンの投与は、ＨＣＶ感染症に対して即時的抗ウイルス効果を有する。しかし、Ｉ型インターフェロンはまた、例えば抗原提示細胞及び標的Ｔ細胞における主要組織適合性遺伝子の上方制御、並びに樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、及びＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球の上方制御など、本発明者らが本発明の免疫治療組成物によって誘発される細胞性免疫と相乗的なものであると考える免疫効果とも関連する（Ｃａｒｕｎｔｕ  ａｎｄ  Ｂｅｎｅａ，Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ  ２００６；１５：２４９−２５６）。インターフェロンの投与はとりわけ、すでに初回抗原刺激され、追加抗原刺激された免疫系（前述の免疫療法の結果として）であって、現在はウイルスに感染した細胞を除去する態勢になっているものを、抗原提示細胞機能を増強することによってさらに援助する。
【００９２】
リバビリンは、ウイルス複製を妨げるヌクレオシド代謝拮抗剤である。従って、この抗ウイルス剤（又はウイルスのライフサイクルを妨げる他の薬剤）の投与は、ＨＣＶの現行のＳＯＣにおいてインターフェロンの抗ウイルス活性を補足する。他の抗ウイルス剤も公知であり、抗プロテアーゼ、抗ポリメラーゼ、又は他の抗ウイルス効果を有する。しかし、リバビリンは、宿主における免疫応答の種類をＴｈ２型反応からＴｈ１型反応へと切り替えることによって、ウイルス感染症に対する宿主Ｔ細胞性免疫を向上させることも知られている（Ｔａｍら、Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ  １９９９；３０：３７６−３８２；Ｈｕｌｔｇｒｅｎら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．１９９８；７９：２３８１−２３９１）。従って、リバビリンと類似した機能特性を有する抗ウイルス剤の投与も、Ｔ細胞性免疫及び改善されたウイルス排除に有利な抗ウイルスＴｈ１型反応を向上させることによって、初回抗原刺激を受け、追加抗原刺激を受けた免疫系を向上させることが期待される。本発明において有用な免疫治療組成物は、Ｔｈ１型反応によって特徴づけられるので、リバビリン療法の付加的作用は、付加的なものであるか、又はさらには相乗的なものであることが予想される。
【００９３】
本発明のさらなる実施形態においては、三剤併用療法を直ちに開始する（３成分全てを同じ期間にわたって投与する）。このプロトコルにおいては、免疫療法、インターフェロン療法、及び抗ウイルス療法の補完性効果が起こることが予想され、第２相ウイルス動態は、現行のＳＯＣ単独と比較して有意に改善されるか、又は改善される傾向が強いことが予想される。このプロトコルでは、後期ウイルス学的エンドポイントに対して、免疫療法の早期の向上された、そしておそらくは相乗的な効果が期待される。
【００９４】
別の実施形態において、免疫療法はインターフェロン療法との組み合わせで開始され、続いてその少なくとも４〜１２週間後に抗ウイルス療法を追加する。この実施形態においては、適応免疫応答を増大させ、本発明者らが細胞性免疫と相乗的なものであると考える免疫系効果を上方制御するためのインターフェロンの組み合わせを、Ｔ細胞性免疫応答を誘発する非常に有効な免疫療法と組み合わせる。免疫系の初回抗原刺激及び追加抗原刺激の最初の期間の後に、抗ウイルス治療の付加的作用が（リバビリン及び／又は別の抗ウイルス剤によって）追加される。
【００９５】
最後に、本発明者らは、本発明の方法の予想外に有効で早い効果は、現行のＳＯＣ単独よりもさらに優れたさらなる利点を有すると考える。現行のＳＯＣ療法では、療法の１２週でＥＶＲを達成できない患者は、インターフェロン／抗ウイルス治療継続の副作用に対してＳＶＲ達成の見込みが非常に低いので、典型的には療法から外される。このような患者は、本明細書ではインターフェロン／抗ウイルス併用療法が「失敗すると予想される」患者、又は「無反応者」と呼ぶ場合がある。本発明の方法は、結果としてウイルス動態を改善するので、療法から外される患者が少なくなるだけでなく、療法の中断に対して、継続又は改変療法について患者をスクリーニングする能力、又は他の方法では療法が失敗する患者を救済する能力が向上するであろうと予想される。言い換えると、本明細書で記載するような免疫療法を含む三剤併用療法プロトコルの間、本発明者等は、現行のＳＯＣガイドラインのもとで、他の方法では療法が失敗した一部の患者が、延長及び／又は改変された療法コースで、直ちに療法から外されるのではなく、反応する可能性が高いと見なされるであろうと考える。その理由は、このプロトコルに免疫療法を追加することによって、さらに多数の患者において検出できる改善されたウイルス動態が達成されるだけでなく、抗ＨＣＶ  Ｔ細胞反応及び肝機能の改善（及び／又は肝障害の軽減）を含むが、これらに限定されない患者の反応を評価できる追加のマーカーを提供するからである。さらに、本明細書に記載する完全著効データによって示されるように（例えば、図１３を参照）、三剤併用療法中の患者は「失敗すると予想される」ＳＯＣの打ち切り時点（例えば、１２週）を超えて療法を継続することができる可能性がある。その理由は、本明細書に記載する三剤併用療法によって、ＳＯＣ単独での完全著効者数が典型的には減少する時点を超えて完全著効者が増え続けるようであるからである。
【００９６】
実際、本発明の方法は、有効性を評価するための新規マーカーを提供し、初期反応を改善し、完全著効の発生率を高め（その結果、ＳＶＲの発生率が高くなり、再発が少なくなると予想される）、療法中のブレイクスルーを減らし、肝機能／減少した肝障害を改善し、そして重要なことには免疫療法産物に関連する安全性の問題、用量制限毒性、又は中止についての報告が少ない療法（免疫療法）の追加によってＨＣＶ療法の「個別化」を可能にする。より具体的には、患者は、本明細書で記載する三剤併用療法中の早期ウイルス学的エンドポイントで評価することができ、おそらくは免疫学的反応についてさらに評価して、免疫療法、インターフェロン療法、及び／又は抗ウイルス化合物療法のいずれかにおいて、用量、投与回数、及び／又は治療期間の縮小を指示できる患者を特定することができる。今まで良好な耐容性を示している免疫療法の有効性は、ある患者について現行のＳＯＣ成分又は他の抗ウイルス成分（例えば、プロテアーゼ阻害物質などの小分子）の投薬及び／又はコースを実質的に減少させて、これによりＳＯＣ及び他の小分子療法に付随する副作用を軽減することが可能になることが期待される。他の患者は、結果を得るためにはさらに長い治療コースを必要とする可能性があるが、インターフェロン及び／又は抗ウイルス治療群の療法の投与量が少ないか、又はさらには使用しないために、療法を許容できるであろう。
【００９７】
一部の患者、及び特にインターフェロン療法に対して不耐性であることが確認された患者においては、免疫療法のみの継続、又は免疫療法及び抗ウイルス療法の二剤併用療法プロトコルを含み得る、療法の改変されたスケジュールを処方することができる。インターフェロンに対する不耐性は、若干主観的ではあるが、本明細書においてはインターフェロン療法の副作用として定義され、これは極めて重度であるため、用量を減らすか、又は療法から外すことが妥当であると判定される。不耐性の症状は、重度のインフルエンザに似た症状、性欲減弱、抑鬱、自殺念慮から、重度の汎血球減少症にまで及び得る。従って、本発明の方法は、現在療法から完全に外された患者に新たな救助又は救済の機会を提供し、また患者の治療を調整して、最も許容できる療法コースを用いて最適のウイルス学的反応を達成する可能性を提供する。
【００９８】
本発明の一実施形態は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物を投与し、被験者に少なくとも１つ以上の追加の療法をさらに投与する工程を含む方法に関する。一態様において、１つ以上の追加の療法は、少なくとも１つのインターフェロン及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物の一方又は両方を投与することを含む。この実施形態において、インターフェロン及び抗ウイルス化合物などの追加の療法を、免疫治療組成物の初回投与の少なくとも４週間後に初めて投与する。この実施形態の他の態様においては、インターフェロン及び抗ウイルス化合物などの追加の療法を、免疫治療組成物の初回投与の少なくとも４〜１２週間後に初めて投与し、別の態様においては、免疫治療組成物の初回投与の少なくとも１２週間後に初めて投与する。好ましくは、インターフェロンを、被験者に、２４〜４８週間、又はそれ以上の間、毎週投与し、同じ期間にわたって、抗ウイルス化合物を毎日投与する。一態様において、抗ウイルス化合物はリバビリンである。別の態様において、インターフェロンを、被験者に、併用抗ウイルス療法中、２、３又は４週間ごとに少なくとも２４週間、４８週間、又はそれ以上投与する。一実施形態において、抗ウイルス化合物の投与は、毎日、２日おき、３日おき、３日おき、４日おき、６日おき、又は毎週であり、毎日が一つの好ましい実施形態である。
【００９９】
リバビリンは、本発明において有用な抗ウイルス化合物の一例であるが、本発明はこの抗ウイルス化合物に限定されない。リバビリンは合成ヌクレオシド類似体である。リバビリンは２００ｍｇの錠剤又はカプセルで市販されているが、任意の投与形態又は送達型が本発明に含まれる。用量は、医師の好み及びアドバイス、並びにリバビリンが複合インターフェロンであるかどうかによって様々であり、適切な用量の決定は当業者の能力の範囲内である。リバビリンの好適な用量は、インターフェロンと併用される場合、一日あたり約８００ｍｇから約１２００ｍｇの間で変えることができ、これらの用量の間で任意の増分を含む（例えば、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ等）。典型的には、用量は、体重に基づいて決定され、体重が重い人ほど高用量のリバビリンを摂取する。好適な実施形態において、リバビリンをｌ０００ｍｇ（被験者＜７５ｋｇ）〜１２００ｍｇ（被験者≧７５ｋｇ）で毎日投与し、２回の分割量で経口投与する。用量は、好ましくは、ベースライン体重及びレジメンの耐容性に応じて患者に対して個別化される（製品説明書に準拠）。
【０１００】
インターフェロンは、典型的には、筋肉内又は皮下注射によって投与され、３００万〜１０００万単位の用量で投与することができ、一実施形態においては３００万単位が好ましい。別の実施形態において、慢性Ｃ型肝炎のためにリバビリンと併用される場合、インターフェロンの推奨される用量は、１８０μｇ（１．０ｍＬバイアル又は０．５ｍＬのあらかじめ充填されたシリンジ）を週１回投与する（例えば、ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標）において）。
【０１０１】
インターフェロンの用量は、１週間に１、２、３、４、５、又は６回から、毎週、隔週、３週間ごと、又は毎月まで様々な通常のスケジュールで投与される。現在入手可能なインターフェロンの典型的な用量は、週１回で提供され、これは本発明に準拠したインターフェロンについて好適な投与スケジュールである。投与量及びタイミングは、医師の好み及びアドバイスによって、また使用される特定のインターフェロンについての勧告によって様々であり、適切な用量を決定することは当業者の能力の範囲内である。
【０１０２】
好ましくは、インターフェロン及び抗ウイルス化合物療法コースを開始する場合、追加用量の免疫治療組成物を同じ期間、又は少なくともその期間の一部にわたって投与し、インターフェロン及び抗ウイルス化合物が終了した時点で、投与を継続してもよい。しかし、期間全体にわたる免疫療法の投薬スケジュールは、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物のものと異なっていてもよく、好ましくは異なっている。例えば、免疫治療組成物をインターフェロンの最後の（直近の）投薬と同じ日又は少なくとも３〜４日後（又は最終投与から好適な日数後）に投与してもよく、毎週、隔週、毎月、隔月、又は３〜６ヶ月ごとに投与してもよい。免疫治療組成物の単独療法の最初の期間中、組成物を好ましくは４〜１２週間、毎週投与し、続いて毎月投与する（さらなるインターフェロン／抗ウイルス療法がいつプロトコルに追加されるかを問わない）。一態様において、免疫治療組成物を５週間、毎週投与し、その後、治療プロトコルが完了するまで毎月投与する。
【０１０３】
本発明の別の実施形態は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物を投与し、被験者に、少なくとも１つの追加療法をさらに投与することを含む方法に関し、追加療法は、少なくとも１つのインターフェロン及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物の一方又は両方を投与することを含んでもよい。この実施形態においては、免疫治療組成物を、追加療法（例えば、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物）の初回投与の少なくとも１〜４週間後に初めて投与し、一態様においては、追加療法（例えば、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物）の初回投与の４〜１２週間後に初めて投与し、別の態様においては、追加療法（例えば、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物）の初回投与の少なくとも１２週間後に初めて投与する。この実施形態において、患者は、インターフェロン及び抗ウイルス併用療法（ＳＯＣ）又は単独療法（例えば、インターフェロン療法単独）を開始し、次いでその後の時点で免疫療法を開始することができる。例えば、患者はＳＯＣ単独に対して不耐性であるか又は失敗する可能性が高いと判定され、単独療法としての免疫療法又はインターフェロン及び／又は抗ウイルス療法を用いた二剤併用若しくは三剤併用療法としての免疫療法に移行される場合がある。後者の場合、インターフェロン及び／又は抗ウイルス療法の継続投与を、所望により用量を減らす方法で処方することができ、これらの治療法に付随する副作用を軽減することができる。加えて、インターフェロンのみを用いた初期単独療法は、自然免疫応答を活性化し、さらに抗原提示細胞が適応免疫応答に対してより容易に反応するように活性化することによって、後の免疫療法の追加を向上させることができる。
【０１０４】
別の態様において、免疫治療組成物及びインターフェロンの投与は、最初に一緒に（併行して）投与することができ、続けて免疫治療組成物の単独療法を行うか、又は三剤併用療法のための抗ウイルス化合物の追加を続けて行うことができる。本明細書において用いられる場合、併行使用は、必ずしも全化合物の全用量を同じ日の同じ時間に投与することを意味しない。むしろ、併行使用は、療法成分のそれぞれ（例えば、免疫療法及びインターフェロン療法、並びに加えるならば抗ウイルス療法）をほぼ同じ期間（互いに数時間以内、又は１〜７日まで）で開始することを意味し、各成分が異なる投与スケジュールを有し得るということである（例えば、インターフェロンを毎週、免疫療法を毎月とリバビリンの毎日投薬を追加する等）。
【０１０５】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物を投与し、被験者に少なくとも１つ以上の追加の療法を投与すること、例えば少なくとも１つのインターフェロン及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物の一方又は両方を投与することを含む方法に関する。この実施形態において、免疫治療組成物を追加療法（例えば、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物）の最終投与後に投与する。この方法は、主に現行のＳＯＣ（例えば、インターフェロン及びリバビリン）に対して不耐性である患者において有用であることが予想される。ＳＯＣとそれに続く本発明の免疫治療組成物を用いた免疫療法から患者を外すことは、このような患者を全体的なＨＣＶ治療の失敗からサルベージ又は救済するために有用であることが期待される。
【０１０６】
さらに別の実施形態において、本発明は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域、及び少なくとも１つのインターフェロンを含む免疫治療組成物を投与し、そしてさらに被験者に少なくとも１つの抗ウイルス化合物をさらに投与することを含む方法を含む。この実施形態において、抗ウイルス化合物を、免疫治療組成物及びインターフェロンの初回投与の少なくとも４週間後に初めて投与する。
【０１０７】
本発明は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を治療する方法であって、被験者に対して少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物、少なくとも１つのインターフェロン、及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物を投与することを含み、免疫治療組成物、少なくとも１つのインターフェロン及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物を同じ期間にわたって（併行して）投与する方法も含む。
【０１０８】
本発明の一実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団において、急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）及び／又は早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ）の頻度を、慢性的にＨＣＶに感染しインターフェロンと抗ウイルス剤の併用療法のみで治療された被験者の集団におけるＲＶＲ及びＥＶＲと比べて増大させる方法に関する。当該方法は、被験者集団に、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を、少なくとも１つのインターフェロン及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物の投与と組み合わせて投与することを含む。好ましくは、免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与し、一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する。別の態様において、免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との該組み合わせの初回投与後に初めて投与し、一態様においては、インターフェロン及び／又は抗ウイルス療法の投与が終了した後又は中断された後に投与する。
【０１０９】
本発明の別の実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者の集団において、急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）及び／又は早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ）から持続的ウイルス学的反応（ＳＶＲ）への変換を、インターフェロン及び抗ウイルス療法でのみ治療された同じ集団におけるＲＶＲ及び／又はＥＶＲからＳＶＲへの変換と比べて向上させる方法に関し、この方法は、被験者集団に、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を、少なくとも１つのインターフェロン及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物と組み合わせて投与することを含む。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与し、一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する。本発明のこの態様において、当該方法は、慢性ＨＣＶ感染症の患者集団においてＳＶＲを達成する患者数を増大させることができる。別の態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の初回投与後に初めて投与し、一態様においては、インターフェロン及び／又は抗ウイルス療法が終了した後又は中断された後に投与する。
【０１１０】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者集団における完全著効者数を、慢性的にＨＣＶに感染し、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された被験者集団における完全著効者数と比べて増大させる方法に関する。当該方法は、被験者集団に、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を、少なくとも１つのインターフェロン及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物と組み合わせて投与することを含む。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与し、一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する。別の態様において、免疫治療組成物を、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の初回投与後に初めて投与し、一態様においては、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の投与が終了した後又は中断された後に投与する。
【０１１１】
本発明の別の実施形態は、慢性的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した被験者集団において、治療中のブレイクスルー被験者数又は治療後の再発者数を、慢性的にＨＣＶに感染し、インターフェロン及び抗ウイルス療法のみで治療された被験者集団における治療中のブレイクスルー者数又は治療後の再発数と比較して減少させる方法に関する。当該方法は、被験者集団に、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を、少なくとも１つのインターフェロン及び少なくとも１つの抗ウイルス化合物と組み合わせて投与することを含む。一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与し、一態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロンと抗ウイルス化合物との組み合わせの初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する。別の態様においては、免疫治療組成物を、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の初回投与後に初めて投与し、そして一態様においては、インターフェロン及び／又は抗ウイルス化合物の投与が終了した後又は中断された後に投与する。
【０１１２】
本発明の別の実施形態は、薬剤耐性ＨＣＶ突然変異の発生を阻害する方法に関し、この方法は、被験者集団に、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を少なくとも１つ以上の追加の療法と組み合わせて投与することを含む。一態様において、追加の療法はインターフェロン及び抗ウイルス化合物を含む。一態様において、免疫治療組成物を、追加の療法の組み合わせの初回投与の少なくとも４週間前に初めて投与し、一態様においては、免疫治療組成物を、追加の療法の初回投与の少なくとも１２週間前に初めて投与する。別の態様においては、免疫治療組成物を、追加療法の初回投与後に初めて投与し、一態様においては、追加の療法が終了した後又は中断された後に投与する。
【０１１３】
本発明のさらに別の実施形態は、慢性的にＨＣＶに感染した被験者を治療する方法に関し、その工程は：（ａ）１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を被験者に少なくとも４〜１２週間投与し、続いて免疫治療組成物の投与を継続しながら、併行してインターフェロン及び抗ウイルス剤を投与し；（ｂ）インターフェロン及び抗ウイルス化合物の初回投与の約４週間後に被験者の急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）を測定し；そして（ｃ）インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法単独で治療された被験者の予想されるＲＶＲよりも統計的に有意に高いＲＶＲを有する被験者においてインターフェロン／抗ウイルス化合物療法の用量及び／又は回数及び／長さを減少させることを含む。別の実施形態において、被験者が、インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法単独で治療された被験者の予想されるＲＶＲよりも統計的に有意に高くないＲＶＲを有するならば、工程（ｃ）は：（１）このような被験者における免疫療法及び／又はインターフェロン／抗ウイルス化合物療法の用量及び／又は回数及び／又は長さを維持するか；又は（２）このような被験者における免疫療法及び／又はインターフェロン／抗ウイルス化合物療法の用量及び／又は回数及び／又は長さを増大させるかのいずれかのプロセスを含む。一態様において、このような被験者に対して投与するための免疫療法の用量及び／又は回数及び／又は時間の長さを増大させる一方で、インターフェロン／抗ウイルス療法を中断させることが好ましい場合がある。
【０１１４】
本発明の別の実施形態は、インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法が失敗することが予想される慢性的にＨＣＶに感染した被験者の治療を継続する方法であって、被験者に、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む方法に関する。一態様において、被験者は、免疫治療組成物が投与される期間中、インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法を受け続ける。
【０１１５】
本発明のさらに別の実施形態は、インターフェロン−抗ウイルス化合物の併用療法に対して不耐性である慢性的にＨＣＶに感染した被験者の治療を継続する方法であって、併用療法を停止し、被験者に、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発する免疫治療組成物を投与することを含む方法に関する。一実施形態においては、療法を停止する代わりに、免疫療法を併行して投与しながら、併用療法の用量及び／又は投与回数を、被験者によって許容されるレベルまで減少させる。
【０１１６】
本発明の方法の全てにおいて有用な免疫治療組成物は、１つ以上のＨＣＶ抗原に対するＴ細胞性免疫応答を誘発するように組成物中に配合される、少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む。好ましくは、組成物は、以下の特性：（ａ）抗原提示細胞を活性化するために有効な１つ以上のパターン認識受容体の刺激；（ｂ）抗原提示細胞上の接着分子、共刺激分子、並びにＭＨＣクラスＩ及びクラスＩＩ分子の上方制御；（ｃ）抗原提示細胞による炎症誘発性サイトカインの産生の誘発；（ｄ）Ｔ細胞によるＴｈ１型サイトカインの産生の誘発；（ｅ）ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩ抗原特異的免疫応答の誘発、の１つ以上、さらに好ましくは、２つ、３つ、４つ、又は全てを有する。炎症誘発性サイトカインの例としては、限定されるものではないが、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１２、ＩＬ−Ｉ及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）が挙げられる。Ｔｈ１サイトカインとしては、好ましくは、限定されるものではないが、ＩＬ−２、ＩＬ−５、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）が挙げられ、最も好ましくはＩＦＮ−γである。
【０１１７】
マクロファージ及び樹状細胞を含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、損傷したタンパク質及び細胞並びに細菌、酵母及び体内に侵入する他の物質を選択的に貪食する。その理由は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識するパターン認識受容体（ＰＲＲ）と総称される受容体を発現しているためである。ＰＡＭＰは、グリコシル化パターン、リポタンパク質及び核酸組成物における生物特有の違いである。従って、ＡＰＣは、微生物マンノプロテイン、ペプチドグリカン、グルカン、リポタンパク質、二本鎖ＲＮＡ及びＣｐＧ島含有ＤＮＡの受容体を有する（Ｕｎｄｅｒｈｉｌｌ，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００３；３３：１７６７−１７７５；Ｏｚｉｎｓｋｙら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２０００；９７：１３７６６−１３７７１；Ａｋｉｒａら、Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１；２：６７５−６８０）。これらの受容体の結合の結果、樹状細胞成熟、活性化、食作用の増大、及び結合物質と関連した抗原の有効な提示に至る「危険」シグナルと呼ばれるものが生じる（Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ  ａｎｄ  Ｊａｎｅｗａｙ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００２；２９６：２９８−３００）。ＰＲＲの例には、トール様受容体（ＴＬＲ）が含まれる（Ｋａｗａｉ  ａｎｄ  Ａｋｉｒａ，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ  ２００６；１３：８１６−８２５）。
【０１１８】
本発明者らは、本発明の方法における酵母系の組成物の使用について記載したが、同様の特性を有する他の免疫治療組成物も使用することができる。特に、組成物として、ＨＣＶ特異的Ｔ細胞性免疫応答を誘発する、配合物中に１つ以上のＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む任意の組成物（例えば、ＨＣＶ特異的ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化及び発現をもたらす）は、本発明において有用であることが期待される。さらに好ましくは、組成物は上述の特性（ａ）〜（ｅ）、又はそれらの任意の組み合わせを有する。
【０１１９】
例えば、一態様において、組成物に、このような特性を有するアジュバントを配合する。一態様において、本発明は、動物においてＨＣＶに対する免疫応答を誘発するために選択される、酵母ビヒクル及びＨＣＶ抗原を含む酵母系の免疫治療組成物の使用を含む。このような組成物を、以下で、例えば下記の定義の節でより詳細に説明する。
【０１２０】
ＨＣＶポリタンパク質遺伝子の核酸及びアミノ酸配列並びにこれによってコードされるポリタンパク質は、当該技術分野で公知である。例えば、Ｃ型肝炎ウイルスＨ７７株のポリタンパク質遺伝子の核酸配列は、データベースアクセッション番号ＡＦ０１１７５３（ｇｉ：２３２７０７４）に記載され、本明細書では配列番号１９によって表される。配列番号１９は、ＨＣＶ  Ｈ７７株ポリタンパク質をコードし、これは本明細書では配列番号２０によって表されるアミノ酸配列を有する。配列番号２０内で、ＨＣＶタンパク質は次の位置を含む：ＨＣＶコア（配列番号２０の１〜１９１位）；ＨＣＶ  Ｅ１エンベロープ糖タンパク質（配列番号２０の１９２〜３８３位）；ＨＣＶ  Ｅ２エンベロープ糖タンパク質（配列番号２０の３８４〜７４６位）；ＨＣＶ  Ｐ７イオンチャンネル（配列番号２０の７４７〜８０９位）；ＨＣＶ  ＮＳ２メタロプロテアーゼ（配列番号２０の８１０〜１０２６位）；ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ／ヘリカーゼ（配列番号２０の１０２７〜１６５７位）；ＨＣＶ  ＮＳ４ａ  ＮＳ３プロテアーゼ補因子（配列番号２０の１６５８〜１７１１位）；ＨＣＶ  ＮＳ４ｂ（配列番号２０の１７１２〜１９７２位）；ＨＣＶ  ＮＳ５ａ（配列番号２０の１９７３〜２４２０位）；及びＨＣＶ  ＮＳ５ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（配列番号２０の２４２１〜３０１１位）。ＨＣＶ株は、高いアミノ酸同一性を示す。従って、本明細書で記載するガイダンスを使用し、ＨＣＶ株例を挙げることにより、当業者には、本発明の組成物において使用されるＨＣＶ株由来の様々なＨＣＶベースのタンパク質及びペプチドが可能であろう。
【０１２１】
本発明の一実施形態は：（ａ）酵母ビヒクル；及び（ｂ）酵母ビヒクルによって発現されるか、酵母ビヒクルと結合するか、又は酵母ビヒクルと混合される少なくとも１つのＨＣＶ抗原又はその免疫原性領域を含む免疫治療組成物に関する。いくつかの実施形態において、抗原は融合タンパク質である。本発明の一態様において、融合タンパク質は、２つ以上の抗原を含み得る。一態様において、融合タンパク質は、１つ以上の抗原（例えば、ＮＳ３及びコア）の２つ以上の免疫原性領域又は２つ以上のエピトープを含み得る。このような組成物は、広範囲の患者においてＨＣＶ特異的免疫化を提供し、他のＨＣＶエピトープに広がる免疫応答を生じる。一態様において、免疫治療組成物はＧＩ−５００５と呼ばれ、これは全加熱死菌エス・セレビシエ免疫療法産物であり、組換えによりＨＣＶ  ＮＳ３及びコア抗原の高レベルの免疫原性部分を発現する。
【０１２２】
一実施形態において、本発明の酵母系組成物の成分として用いられる融合タンパク質は、酵母における異種抗原の発現又はある実施形態においては酵母に対する結合に特に有用な構築物を用いて産生される。典型的には、所望の抗原タンパク質又はペプチドを、それらのアミノ末端で：（ａ）酵母ビヒクルにおける融合タンパク質の発現を安定化させるか、又は発現された融合タンパク質の翻訳後修飾を防止する特定の合成ペプチド（このようなペプチドは、例えば２００４年８月１２日付で公開され、その全体が参照により本明細書で援用される、米国特許出願公開第２００４−０１５６８５８号明細書に詳細に記載されている）；（ｂ）内因性酵母タンパク質の少なくとも一部（ここで、いずれかの融合パートナーは、酵母におけるタンパク質の発現の著しく向上した安定性の提供及び／又は酵母細胞によるタンパク質の翻訳後修飾の防止を行う（このようなタンパク質も、例えば、米国特許出願公開第２００４−０１５６８５８号明細書（上出）で詳細に記載されている）；及び／又は（ｃ）融合タンパク質を酵母の表面上で発現させる、酵母タンパク質の少なくとも一部（例えば、Ａｇａタンパク質）と融合させる。加えて、本発明は、特にタンパク質の選択及び同定に使用される、抗原コード構築物のＣ末端に融合したペプチドの使用を含む。このようなペプチドとしては、限定されるものではないが、任意の合成若しくは天然ペプチド、例えばペプチドタグ（例えば、６Ｘ  Ｈｉｓ）又は任意の他の短いペプチドタグが挙げられる。本発明の抗原のＣ末端に結合したペプチドは、前述のＮ末端ペプチドを追加して、又は追加せずに使用することができる。
【０１２３】
一実施形態において、融合タンパク質において有用な合成ペプチドは、抗原のＮ末端に結合し、このペプチドは、抗原に対して異種である少なくとも２つのアミノ酸残基からなり、この場合、ペプチドは、酵母ビヒクル中の融合タンパク質の発現を安定化させるか、又は発現された融合タンパク質の翻訳後修飾を防止する。合成ペプチド及び抗原のＮ末端部分は一緒になって、次の要件を有する融合タンパク質を形成する：（１）融合タンパク質の１位のアミノ酸残基がメチオニンである（すなわち、合成ペプチド中の第１アミノ酸がメチオニンである）；（２）融合タンパク質の２位のアミノ酸がグリシン又はプロリンでない（すなわち、合成ペプチド中の第２アミノ酸がグリシン又はプロリンでない）；（３）融合タンパク質の２〜６位のアミノ酸はいずれもメチオニンでない（すなわち、２〜６位のアミノ酸は、合成ペプチド又はタンパク質の一部であるかによらず、合成ペプチドが６アミノ酸よりも短い場合は、メチオニンを含まない）；並びに（４）融合タンパク質の２〜６位のアミノ酸はいずれもリジン又はアルギニンでない（すなわち、２〜６位のアミノ酸は、合成ペプチド又はタンパク質の一部であるかによらず、合成ペプチドが５アミノ酸よりも短い場合は、リジン又はアルギニンを含まない）。合成ペプチドは、２アミノ酸程度の短さであり得るが、より好ましくは少なくとも２〜６アミノ酸であり（３、４、５アミノ酸を含む）、６アミノ酸よりも長く、約２００アミノ酸まで、３００アミノ酸まで、４００アミノ酸まで、５００アミノ酸まで、又はそれ以上の全ての整数であり得る。
【０１２４】
一実施形態において、融合タンパク質は、Ｍ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６（式中、Ｍはメチオニンであり；Ｘ２はグリシン、プロリン、リジン又はアルギニン以外の任意のアミノ酸であり；Ｘ３は、メチオニン、リジン又はアルギニン以外の任意のアミノ酸であり；Ｘ４は、メチオニン、リジン又はアルギニン以外の任意のアミノ酸であり；Ｘ５は、メチオニン、リジン又はアルギニン以外の任意のアミノ酸であり；Ｘ６は、メチオニン、リジン又はアルギニン以外の任意のアミノ酸である）のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、Ｘ６残基はプロリンである。酵母細胞における抗原の発現の安定性の向上及び／又は酵母におけるタンパク質の翻訳後修飾の防止を行う合成配列の例には、配列Ｍ−Ａ−Ｄ−Ｅ−Ａ−Ｐ（配列番号１）が含まれる。発現産物の安定性の向上に加えて、この融合パートナーは、構築物における接種抗原に対する免疫応答にマイナスの影響を及ぼさないようである。加えて、合成融合ペプチドは、抗体などの選択物質によって認識され得るエピトープを提供するように設計することができる。
【０１２５】
本発明の別の実施形態において、本発明において使用される合成ペプチドの翻訳開始部位をコードする核酸は、Ｋｏｚａｋ翻訳配列則にしたがうとＡ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇであり、ここで、この配列中のＡＴＧは、初期翻訳開始部位であり、Ｍ−Ａ−Ｄ−Ｅ−Ａ−Ｐ（配列番号１）のメチオニンをコードする。本明細書に記載するような本発明の様々な実施形態は、組み合わせることもできると解釈されるべきである。例えば、本発明の一態様において、合成ペプチドがＭＡ−Ｄ−Ｅ−Ａ−Ｐ（配列番号１）である場合、このペプチドの開始部位をコードする核酸は、Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｇであり得る。本発明の実施形態の様々な他の組み合わせは当業者には明らかになるであろう。
【０１２６】
本発明の一態様において、酵母ビヒクルは、発現された抗原産物の酵母ビヒクルの表面上での部分的又は全体的送達又は転位によって抗原が発現又は提供されるように操作される（細胞外発現）。本発明のこの態様を達成するための一方法は、酵母ビヒクルの表面上に１つ以上の抗原を配置するためにスペーサーアームを使用することである。スペーサーアームを使用するための一方法は、対象の抗原と、この対象の抗原を酵母細胞壁に標的化させるタンパク質との融合タンパク質を調製することである。例えば、使用できる１つのタンパク質は、抗原を酵母細胞壁に標的化させて、抗原を酵母の表面上に配置することを可能にする酵母タンパク質（例えば、細胞壁タンパク質２（ｃｗｐ２）、Ａｇａ２、Ｐｉｒ４又はＦｌｏ１タンパク質）である。酵母タンパク質以外のタンパク質をスペーサーアームに使用することができるが；任意のスペーサーアームタンパク質について、免疫原性反応をスペーサーアームタンパク質ではなく標的タンパク質に向かわせることが最も望ましい。従って、他のタンパク質をスペーサーアームに使用する場合、使用されるスペーサーアームタンパク質は、スペーサーアームタンパク質自体に対して、標的抗原に対する免疫応答が圧倒されるほどの大きな免疫応答を生じてはならない。当業者は、標的抗原の免疫応答と比較して小さなスペーサーアームタンパク質に対する免疫応答を目標としなければならない。スペーサーアームは、所望により、抗原を酵母から容易に除去するか又は処理して除去することを可能にする開裂部位（例えば、プロテアーゼ開裂部位）を有するように構築することができる。免疫応答の大きさを決定する任意の公知方法を用いることができ（例えば、抗体産生、溶解解析など）、これらは当業者には周知である。
【０１２７】
標的抗原を酵母表面上に露出させるように配置する別の方法は、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）などのシグナル配列を使用して、標的を酵母細胞壁に固定することである。或いは、対象の抗原を小胞体（ＥＲ）中に転位させることにより分泌経路中に向かわせるシグナル配列を付加することによって配置を行うことができ、細胞壁と結合したタンパク質（ｃｗｐ）と抗原が結合する。
【０１２８】
一態様において、スペーサーアームタンパク質は酵母タンパク質である。酵母タンパク質は、酵母タンパク質の約２〜約８００個のアミノ酸から構成され得る。一実施形態において、酵母タンパク質は約１０〜７００個のアミノ酸である。別の実施形態において、酵母タンパク質は、約４０〜６００個のアミノ酸である。本発明の他の実施形態は、少なくとも２５０個のアミノ酸、少なくとも３００個のアミノ酸、少なくとも３５０個のアミノ酸、少なくとも４００個のアミノ酸、少なくとも４５０個のアミノ酸、少なくとも５００個のアミノ酸、少なくとも５５０個のアミノ酸、少なくとも６００個のアミノ酸、又は少なくとも６５０個のアミノ酸である酵母タンパク質を含む。一実施形態において、酵母タンパク質は少なくとも４５０アミノ酸の長さである。
【０１２９】
別の実施形態において、酵母タンパク質は、酵母ビヒクルにおける融合タンパク質の発現を安定化し、発現された融合タンパク質の翻訳後修飾を防止し、及び／又は融合タンパク質を酵母の特定の区画に標的化させる（例えば、酵母細胞表面上で発現させるため）。酵母分泌経路中へ送達するために、使用される酵母タンパク質の例としては、限定されるものではないが：Ａｇａ（Ａｇａ１及び／又はＡｇａ２を包含するが、これらに限定されるものではない）；ＳＵＣ２（酵母インベルターゼ）；アルファ因子シグナルリーダー配列；ＣＰＹ；細胞壁におけるその局在化及び保持のためのＣｗｐ２ｐ；娘細胞形成の初期相中の酵母細胞芽（ｂｕｄ）での局在化のためのＢＵＤ遺伝子；Ｆｌｏ１ｐ；Ｐｉｒ２ｐ；及びＰｉｒ４ｐが挙げられる。
【０１３０】
本発明の別の態様において、他の配列を用いて、細胞質又はミトコンドリア中の酵母ビヒクルの他の部分に対して、タンパク質を標的化、保持及び／又は安定化させることができる。該実施形態のいずれかに用いることができる好適な酵母タンパク質の例としては、限定されるものではないが、ＳＥＣ７；グルコース及び細胞質局在化におけるそれらの抑制可能な発現のためのホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼＰＣＫ１、ホスホグリセロキナーゼＰＧＫ及びトリオースリン酸イソメラーゼＴＰＩ遺伝子産物；熱ショックタンパク質ＳＳＡｌ、ＳＳＡ３、ＳＳＡ４、ＳＳＣ１（細胞が熱処理にさらされることによって、その発現が誘発され、そのタンパク質がより熱安定性になる）；ミトコンドリア中への移入のためのミトコンドリアタンパク質ＣＹＣ１；ＡＣＴ１が挙げられる。
【０１３１】
前述のように、本発明の組成物は、被験者を免疫化するための少なくとも１つのＨＣＶ抗原及び／又は少なくとも１つのＨＣＶ抗原の少なくとも１つの免疫原性領域を含む。組成物は、１つ、２つ、数個、複数、又は多数のＨＣＶ抗原（所望により、１つ以上のＨＣＶ抗原の１つ以上の免疫原性領域を含む）を含むことができる。例えば、本明細書に記載する任意の融合タンパク質を包含する任意のタンパク質は：ＨＣＶ  Ｅ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＣＶ  Ｅ２エンベロープ糖タンパク質、ＨＣＶ  Ｐ７イオンチャンネル、ＨＣＶ  ＮＳ２メタロプロテアーゼ、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ／ヘリカーゼ、ＨＣＶ  ＮＳ４ａ  ＮＳ３プロテアーゼ補因子、ＨＣＶ  ＮＳ４ｂ、ＨＣＶ  ＮＳ５ａ、ＨＣＶ  ＮＳ５ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、及びＨＣＶコア配列から選択される任意の１つ以上のＨＣＶタンパク質の少なくとも１つ以上の部分を含み得る。一態様において、融合タンパク質は、１つ以上のＨＣＶ抗原の少なくとも１つ以上の免疫原性領域を含む。
【０１３２】
本発明の１つの好適な態様において、ＨＣＶ抗原は、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ及びコア配列からなるＨＣＶタンパク質である。別の態様において、ＨＣＶ抗原は、ＨＣＶコア配列と結合した天然のＮＳ３タンパク質の触媒領域が欠失したＨＣＶ  ＮＳ３タンパク質からなる。別の態様において、ＨＣＶ抗原は、ＨＣＶコア配列と結合した天然のＮＳ３タンパク質の最初のＮ末端の８８アミノ酸に続くＨＣＶ  ＮＳ３の２６２個のアミノ酸（すなわち、ＨＣＶ  ＮＳ３；配列番号２０の８９〜３５０位）からなる。一態様において、ＨＣＶコア配列は疎水性Ｃ末端配列が欠失している。別の態様において、ＨＣＶコア配列はＣ末端の２個のアミノ酸、つまりグルタミン酸塩とアスパラギン酸塩が欠失している。好適な態様において、ＨＣＶコア配列は天然のＨＣＶコア配列のアミノ酸２〜１４０位からなる。
【０１３３】
この実施形態において、酵母（例えば、サッカロミセス・セレビシエ）を、銅誘発性プロモータであるＣＵＰ１の制御下でＨＣＶ  ＮＳ３−コア融合タンパク質を発現するように操作した。融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端までフレーム内で融合した次の配列因子を有する１本鎖ポリペプチドである（ＨＣＶポリタンパク質（配列番号２０）ナンバリングを括弧中に記載し、融合タンパク質のアミノ酸配列は本明細書では配列番号２により表す）：１）プロテアソーム分解に対する耐性を付与するための配列ＭＡＤＥＡＰ（配列番号９）（配列番号２の１〜６位）；２）ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼタンパク質（配列番号２の６〜２６８位）のアミノ酸８９〜３５０（配列番号２０の１１１５〜１３７６）；３）クローニング中に導入された１つのトレオニンアミノ酸残基（配列番号２の２６９位）；４）ＨＣＶコアタンパク質（配列番号２の２７０〜４０８位）のアミノ酸２〜１４０（配列番号２０の２〜１４０）；及び５）コア変異体の親水性を増大させるための配列Ｅ−Ｄ（配列番号２の４０９〜４１０位）。配列番号２の融合タンパク質をコードする核酸配列を、本明細書では配列番号１により表す。配列番号２は、本明細書でＧＩ−５００５と称する酵母系免疫療法産物によって発現される融合タンパク質である。
【０１３４】
本発明の別の好適な態様において、ＨＣＶ抗原は、本発明の融合タンパク質の一部である不活性化完全長ＨＣＶ  ＮＳ３である。この実施形態において、酵母（例えば、サッカロミセス・セレビシエ）を、銅誘発性プロモータであるＣＵＰ１の制御下で不活性化完全長ＨＣＶ  ＮＳ３融合タンパク質を発現するように操作した。完全長ＨＣＶ  ＮＳ３を含む融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端までフレーム内で融合した次の配列因子を有する１本鎖ポリペプチドである（ＨＣＶポリタンパク質ナンバリングを括弧中に記載し、融合タンパク質のアミノ酸配列を本明細書では配列番号４によって表す）：１）プロテアソーム分解に対する耐性を付与するための配列ＭＡＤＥＡＰ（配列番号９）（配列番号４の１〜６位）；及び２）ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼタンパク質（配列番号４の７〜６３７位）のアミノ酸１〜６３１（配列番号２０の１０２７〜１６５７）（タンパク質分解活性を不活性化するために、ＨＣＶポリペプチド残基１１６５のアミノ酸がセリンからアラニンに変わっていることに注意）。配列番号４の融合タンパク質をコードする核酸配列を本明細書では配列番号３により表す。
【０１３５】
本発明の別の好適な態様において、酵母組成物はトランケートされたＨＣＶ  Ｅ１−Ｅ２融合タンパク質を含む。この実施形態において、酵母（例えば、サッカロミセス・セレビシエ）は、Ｎ末端からＣ末端までフレーム内で融合した次の配列因子を有する１本鎖ポリペプチドとしてＥ１−Ｅ２融合タンパク質を発現するように操作される（ＨＣＶポリタンパク質ナンバリングを括弧中に記載し、融合タンパク質のアミノ酸配列を本明細書では配列番号６によって表す）：１）プロテアソーム分解に対する耐性を付与するための配列ＭＡＤＥＡＰ（配列番号９）（配列番号６の１〜６位）；２）ＨＣＶタンパク質Ｅ１（配列番号６の７〜１６２位）のアミノ酸１〜１５６（配列番号２０の１９２〜３４７）；及び３）ＨＣＶタンパク質Ｅ２（配列番号６の１６３〜４４６位）のアミノ酸１〜３３４（配列番号２０の３８４〜７１７）。なお、この特定の融合タンパク質において、Ｅ１の３６個のＣ末端の疎水性アミノ酸及びＥ２の２９個のＣ末端の疎水性アミノ酸を融合タンパク質から除外して、酵母における細胞質内蓄積を促進した。配列番号６の融合タンパク質をコードする核酸配列を本明細書では配列番号５によって表す。
【０１３６】
本発明のさらに別の好適な態様において、酵母組成物は、膜貫通（ＴＭ）領域欠失ＨＣＶ  ＮＳ４ｂ融合タンパク質を含む。融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端までフレーム内で直列に配列された次の配列を有する１本鎖ポリペプチドである（ポリタンパク質ナンバリングを括弧中に記載し、融合タンパク質のアミノ酸配列は本明細書においては配列番号８によって表す）：１）プロテアソーム分解に対する耐性を付与するための配列ＭＡＤＥＡＰ（配列番号９）（配列番号８の１〜６位）；２）ＨＣＶタンパク質ＮＳ４ｂ（配列番号８の７〜７５位）のアミノ酸１〜６９（配列番号２０の１７１２〜１７８０）；及び３）ＨＣＶタンパク質ＮＳ４ｂ（配列番号８の７６〜１６０位）のアミノ酸１７７〜２６１（配列番号２０の１８８８〜１９７２）。複数の膜貫通領域を含むＮＳ４ｂアミノ酸７０〜１７６（配列番号２０の１７８１〜１８８７）に対応する１０７アミノ酸領域を除外して、酵母における細胞質内蓄積を促進した。配列番号８の融合タンパク質をコードする配列を本明細書において配列番号７によって表す。
【０１３７】
本発明のさらに別の好適な態様において、酵母組成物はコア−Ｅ１−Ｅ２融合タンパク質を含む。融合タンパク質は、以下の配列因子を有する、Ｎ末端からＣ末端までフレーム内で直列に配列された１本鎖ポリペプチドである（ポリタンパク質のナンバリングを括弧中に記載し、融合タンパク質のアミノ酸配列は本明細書では配列番号１２によって表される）：１）プロテアソーム分解に対する耐性を付与するための配列ＭＡＤＥＡＰ（配列番号９）（配列番号１２の１〜６位）；及び２）完全長コア、Ｅ１、及びＥ２タンパク質をコードする未修飾ＨＣＶポリタンパク質（配列番号１２の７〜７５１位：コアは７〜１９６位；Ｅ１は１９７〜３８７位；及びＥ２は３８８〜７５１位）のアミノ酸１〜７４６（配列番号２０の２〜７４６）。配列番号１２の融合タンパク質をコードする核酸配列は、本明細書では配列番号１１によって表される。
【０１３８】
本発明の別の好適な態様において、酵母組成物は、膜貫通領域が欠失したコア−Ｅ１−Ｅ２融合タンパク質を含む。融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端までフレーム内で融合した以下の配列因子を有する１本鎖ポリペプチドである（ポリタンパク質ナンバリングを括弧中に記載し、融合タンパク質のアミノ酸配列は、本明細書では配列番号１４によって表される）：１）プロテアソーム分解に対する耐性を付与する配列ＭＡＤＥＡＰ（配列番号９）、２）ＨＣＶコアタンパク質（配列番号１４の７〜１４５位）のアミノ酸２〜１４０（配列番号２０の２〜１４０）、３）ＨＣＶタンパク質Ｅ１（配列番号１４の１４６〜３０１位）のアミノ酸１〜１５６（配列番号２０の１９２〜３４７）、及び４）ＨＣＶタンパク質Ｅ２（配列番号１４の３０２〜６３５位）のアミノ酸１〜３３４（配列番号２０の３８４〜７１７）。コアタンパク質の５１個のＣ末端の疎水性アミノ酸、Ｅ１の３６個のＣ末端の疎水性アミノ酸及びＥ２の２９個のＣ末端の疎水性アミノ酸を融合タンパク質から除外して、酵母における細胞質内蓄積を促進した。配列番号１４の融合タンパク質をコードする核酸配列は、本明細書においては配列番号１３によって表される。
【０１３９】
本発明のさらに別の好適な態様において、酵母組成物は、ＮＳ３プロテアーゼが不活性化され、ＮＳ４ｂが膜貫通領域を欠失している、ＮＳ３−ＮＳ４ａ−ＮＳ４ｂ融合タンパク質を含む。ＮＳ３−ＮＳ４ａ−ＮＳ４ｂ融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端までフレーム内で融合した以下の配列因子を有する１本鎖ポリペプチドである（ポリタンパク質ナンバリングを括弧中に記載し、融合タンパク質のアミノ酸配列は、本明細書においては配列番号１６により表される）：１）プロテアソーム分解に対する耐性を付与する配列ＭＡＤＥＡＰ（配列番号９）（配列番号１６の１〜６位）；２）完全長ＨＣＶ  ＮＳ３タンパク質（注：セリン１３９（配列番号２０において１１６５位）をアラニンに変えて、ＮＳ３のタンパク質分解能を不活性化する）（配列番号１６の７〜６３４位）に対応するアミノ酸１〜６３１（配列番号２０の１０２７〜１６５７）；３）ＮＳ４ａタンパク質（配列番号１６の６３５〜６９１位）のアミノ酸１〜５４（配列番号２０の１６５８〜１７１１）；４）ＨＣＶタンパク質ＮＳ４ｂ（配列番号１６の６９２〜７７６）のアミノ酸１〜６９（配列番号２０の１７１２〜１７８０）；及び５）ＨＣＶタンパク質ＮＳ４ｂ（配列番号１６の７７７〜８４５位）のアミノ酸１７７〜２６１（配列番号２０の１８８８〜１９７２）。複数の膜貫通領域を含むＮＳ４ｂアミノ酸７０〜１７６（配列番号２０の１７８１〜１８８７）に対応する１０７アミノ酸領域を除外して、酵母における細胞質内蓄積を促進した。配列番号１６の融合タンパク質をコードする核酸配列は、本明細書においては配列番号１５によって表される。
【０１４０】
本発明の別の好適な態様において、酵母組成物は、ＮＳ５ｂのＣ末端の不活性化欠失を有するＮＳ５ａ−ＮＳ５ｂ融合タンパク質を含む。このＮＳ５ａ−ＮＳ５ｂ融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端までフレーム内で融合した以下の配列因子を有する１本鎖ポリペプチドである（ポリタンパク質ナンバリングを括弧中に記載し、融合タンパク質のアミノ酸配列は本明細書においては配列番号１８によって表される）：１）プロテアソーム分解に対する耐性を付与する配列ＭＡＤＥＡＰ（配列番号９）（配列番号１８の１〜６位）；２）アミノ酸１〜４４８に対応するＮＳ５ａタンパク質全体（配列番号２０の１９７３〜２４２０）（配列番号１８の７〜４５４位）；及び３）ＮＳ５ｂ（配列番号１８の４５５〜９９３位）のアミノ酸１〜５３９（配列番号２０の２４２１〜２９５９）。ＨＣＶ複製におけるＮＳ５ｂの活性に必要な５２個のＣ末端残基を除去して、タンパク質を不活性化する。配列番号１８のタンパク質をコードする核酸配列は、本明細書においては配列番号１７によって表される。
【０１４１】
本発明の特定の態様において、該融合タンパク質は、２つのＨＣＶタンパク質間（例えば、ＨＣＶ  ＮＳ３配列とＨＣＶコア配列）に１つ以上の異種リンカー配列を含む。好適な実施形態において、異種リンカー配列は単一の異種アミノ酸残基からなる。さらに好適な実施形態において、異種リンカー配列は単一のトレオニン残基からなる。
【０１４２】
本発明の該組成物のいずれかにおいて、酵母ビヒクルに関連する以下の態様が本発明に含まれる。一実施形態において、酵母ビヒクルは、全酵母、酵母スフェロプラスト、酵母細胞質体、酵母ゴースト、亜細胞酵母膜抽出物若しくはそのフラクション、又は任意の他の酵母粒子（細胞壁又は細胞壁タンパク質の一部が除去された酵母を包含し、細胞質が除去された酵母を包含する）からなる群から選択される。一態様において、酵母ビヒクルを調製するために使用される酵母細胞又は酵母スフェロプラストを、抗原をコードする組換え核酸分子で形質転換して、抗原が酵母細胞又は酵母スフェロプラストにより組換え技術によって発現される。この態様において、組換え技術によって抗原を発現する酵母細胞又は酵母スフェロプラストを使用して、酵母細胞質体、酵母ゴースト、又は亜細胞酵母膜抽出物若しくはそのフラクションを含む酵母ビヒクルを産生する。一態様において、酵母ビヒクルは、非病原性酵母由来である。別の態様において、酵母ビヒクルは、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロミセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、クルベロミセス属（Ｋｌｕｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ハンセヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）及びピチア属（Ｐｉｃｈｉａ）からなる群から選択される酵母に由来する。一態様において、サッカロミセス属は、エス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である。
【０１４３】
一般的に、酵母ビヒクル及び抗原は、本明細書に記載する任意の技術によって結合させることができる。一態様において、酵母ビヒクルにＨＣＶ抗原を細胞内で負荷した。別の態様において、ＨＣＶ抗原を、酵母ビヒクルに共有結合又は非共有結合させた（すなわち、発現はこの実施形態では必要とされない）。さらに別の態様において、酵母ビヒクル及びＨＣＶ抗原を混合によって結合させた。別の態様において、抗原は、酵母ビヒクルによって、又は酵母ビヒクルが由来する酵母細胞若しくは酵母スフェロプラストにより組換え技術によって発現される。
【０１４４】
より具体的には、本発明によれば、酵母ビヒクルは、本発明の組成物又は治療組成物において抗原と併用できるか、又はアジュバントとして使用できる任意の酵母細胞（例えば、完全若しくは無傷な細胞）若しくはその誘導体（下記を参照）である。したがって、酵母ビヒクルとしては、限定されるものではないが、生の無傷な酵母菌（すなわち、細胞壁を含むその全ての成分を有する酵母細胞）、殺された（死んだ）若しくは不活性化された（例えば、熱、塩基への曝露、煮沸などによる）無傷な酵母菌、或いは、酵母スフェロプラスト（すなわち、細胞壁のない酵母細胞）、酵母細胞質体（すなわち、細胞壁及び核のない酵母細胞）、酵母ゴースト（すなわち、細胞壁、核及び細胞質のない酵母細胞）、又は亜細胞酵母膜抽出物若しくはそのフラクション（従来は亜細胞酵母粒子とも称する）を含むその誘導体を挙げることができる。
【０１４５】
酵母スフェロプラストは、典型的には酵母細胞壁の酵素消化によって産生される。このような方法は、例えば、その全体が参照により本明細書で援用される、Ｆｒａｎｚｕｓｏｆｆら、１９９１，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９４，６６２−６７４に記載されている。酵母細胞質体は、典型的には酵母細胞の除核によって産生される。このような方法は、例えば、その全体が参照により本明細書で援用される、Ｃｏｏｎ，１９７８，Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．Ｍｏｎｏｇｒ．４８，４５−５５に記載されている。酵母ゴーストは、典型的には透過処理した細胞又は溶解細胞を再密封することによって産生され、この細胞の細胞小器官の少なくとも一部を含む可能性があるが、含む必要はない。このような方法は、例えば、そのそれぞれ全体が参照により本明細書で援用される、Ｆｒａｎｚｕｓｏｆｆら、１９８３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５８，３６０８−３６１４及びＢｕｓｓｅｙら、１９７９，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ５５３，１８５−１９６に記載されている。亜細胞酵母膜抽出物又はそのフラクションとは、天然の核又は細胞質がない酵母膜を意味する。粒子は、天然の酵母膜のサイズから、超音波処理又は当業者に公知の膜破壊法とそれに続く再シールによって産生されるマイクロ粒子までのサイズを含む任意のサイズのものであり得る。亜細胞酵母膜抽出物の産生法は、例えば、Ｆｒａｎｚｕｓｏｆｆら、１９９１，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９４，６６２−６７４に記載されている。酵母膜部分を含む酵母膜抽出物のフラクション、及び酵母膜抽出物の調製前に酵母により組換え技術によって抗原が発現された場合には、対象の抗原も使用することができる。
【０１４６】
任意の酵母株を、本発明の酵母ビヒクルを産生するために使用できる。酵母は３つの種類：子嚢菌類（Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅ）、担子菌綱（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅ）及び不完全菌類（Ｆｕｎｇｉ  Ｉｍｐｅｒｆｅｃｔｉ）のうちの１つに属する単細胞微生物である。病原性酵母株、又はその非病原性突然変異体を本発明に従って使用することができるが、非病原性酵母株が好ましい。酵母株の好ましい属としては、サッカロミセス属、カンジダ属（病原性であり得る）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ハンセヌラ属、クルベロミセス属、ピチア属、ロドトルラ属（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）、シゾサッカロミセス属及びヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）が挙げられ、サッカロミセス属、カンジダ属、ハンセヌラ属、ピチア属及びシゾサッカロミセス属がより好ましく、サッカロミセス属が特に好ましい。酵母株の好適な種としては、サッカロミセス・セレビシエ、サッカロミセス・カールスベルゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・ケフィア（Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｅｆｙｒ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、クリプトコッカス・ラウレンチ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｕｒｅｎｔｉｉ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ハンセヌラ・アノマラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ａｎｏｍａｌａ）、ハンセヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クルベロミセス・フラジリス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）、クルベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、クルベロミセス・マルキシアヌスｖａｒ．ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｍａｒｘｉａｎｕｓ  ｖａｒ．ｌａｃｔｉｓ）、ピチア・パストリス（Ｐｉｔｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｒｕｂｒａ）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、及びヤロウイア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）が挙げられる。多くのこれらの種が、該種に含まれることを意味する様々な亜種、型、亜型などを含むと解釈されるべきである。さらに好適な酵母種としては、エス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、シー・アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）、エイチ・ポリモルファ（Ｈ．ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、ピー・パストリス（Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ）及びエス・ポンベ（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）が挙げられる。エス・セレビシエは、比較的操作が簡単で、食品添加物としての使用において「一般に安全と認められる（Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  Ａｓ  Ｓａｆｅ）」又は「ＧＲＡＳ」（ＧＲＡＳ，ＦＤＡ  ｐｒｏｐｏｓｅｄ  Ｒｕｌｅ  ６２ＦＲ１８９３８，Ａｐｒｉｌ  １７，１９９７）であるので、特に好ましい。本発明の一実施形態は、プラスミドを特に高コピー数まで複製できる酵母株、例えばエス・セレビシエｃｉｒ°株である。
【０１４７】
一実施形態において、好適な本発明の酵母ビヒクルは、酵母ビヒクル及び抗原が送達される細胞型、例えば樹状細胞又はマクロファージと融合することができ、これによって酵母ビヒクルの、また多くの実施形態においては抗原の、細胞型への特に有効な送達を実施することができる。本明細書において用いられる場合、酵母ビヒクルと、標的とされる細胞型との融合とは、酵母細胞膜、又はその粒子が標的とされる細胞型（例えば、樹状細胞又はマクロファージ）の膜と融合することができ、シンシチウム形成に至ることを意味する。本明細書において用いられる場合、シンシチウムは、細胞の融合により産生される原形質の多核体である。多くのウイルス表面タンパク質（免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ、インフルエンザウイルス、ポリオウイルス及びアデノウイルスの表面タンパク質を包含する）並びに他のフソゲン（ｆｕｓｏｇｅｎ）（例えば卵と精子間の融合に関与するもの）は、２つの膜（すなわち、ウイルス膜と哺乳動物細胞膜との間、又は哺乳動物細胞膜間）の融合を実施できることが証明されている。例えば、その表面上でＨＩＶ  ｇｐ１２０／ｇｐ４１異種抗原を産生する酵母ビヒクルは、ＣＤ４＋Ｔリンパ球と融合することができる。しかし、標的部分を酵母ビヒクル中に組み入れることは、ある状況下では望ましい場合があるが、必要ではない。本発明の酵母ビヒクルは、樹状細胞（並びに他の細胞、例えばマクロファージ）によって容易に吸収される。
【０１４８】
酵母ビヒクルは、当業者に公知の多くの技術を用いて、被験者に直接投与されるか、又は樹状細胞などの担体にまず負荷される製剤を含む、本発明の組成物に処方することができる。例えば、酵母ビヒクルを凍結乾燥によって乾燥させることができる。酵母ビヒクルを含む配合物は、製パン又は醸造操作において使用される酵母において行われるように、酵母をケーキ又は錠剤中に充填することによって調製することもできる。加えて、樹状細胞中に負荷する前に、又は抗原との他の種類の併用投与の前に、酵母ビヒクルを医薬的に許容される賦形剤、例えば宿主細胞によって許容される等張緩衝液と混合することもできる。このような賦形剤の例としては、水、塩溶液、リンガー液、デキストロース溶液、ハンクス液、及び他の生理学的平衡塩水溶液が挙げられる。非水性ビヒクル、例えば不揮発性油、ゴマ油、オレイン酸エチル、又はトリグリセリドも使用することができる。他の有用な配合物としては、粘度増強剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、グリセロール又はデキストランを含む懸濁液が挙げられる。賦形剤は、等張性及び化学的安定性を増大させる物質などの少量の添加剤を含むこともできる。緩衝液の例としては、リン酸塩緩衝液、重炭酸塩緩衝液及びトリス緩衝液が挙げられ、保存料の例としては、チメロサール、ｍ−又はｏ−クレゾール、ホルマリン及びベンジルアルコールが挙げられる。標準的配合物は、注射可能な液体又は好適な液体中に注射用懸濁液若しくは溶液として溶解させることができる固体のいずれかであり得る。従って、非液状配合物においては、賦形剤は、例えば、デキストロース、ヒト血清アルブミン、及び／又は保存料を含むことができ、投与前にこれらに滅菌水又は塩溶液を添加することができる。
【０１４９】
本発明によれば、「酵母ビヒクル−抗原複合体」又は「酵母−抗原複合体」という用語は、酵母ビヒクルと抗原との任意の結合について記載するために一般的に用いられる。このような結合としては、酵母（組換え酵母）による抗原の発現、酵母中への抗原の導入、抗原の酵母に対する物理的結合（共有又は非共有）、並びに、例えば緩衝液又は他の溶液若しくは配合物中の酵母及び抗原の混合が挙げられる。これらの種類の複合体を以下で詳細に説明する。
【０１５０】
一実施形態において、酵母ビヒクルを調製するために用いられる酵母細胞を、抗原をコードする異種核酸分子で形質転換し、抗原を酵母細胞によって発現させる。このような酵母を本明細書では組換え酵母又は組換え酵母ビヒクルとも呼ぶ。酵母細胞を次いで無傷な細胞として樹状細胞中に負荷することができるか、又は酵母細胞を殺す（不活性化する）か、又は酵母スフェロプラスト、細胞質体、ゴースト、若しくは細胞内粒子の形成などにより誘導体化することができ、そのいずれかに続いて、樹状細胞中へ誘導体を負荷する。酵母スフェロプラストは、抗原を発現する組換えスフェロプラストを産生するために、組換え核酸分子で直接トランスフェクトすることもできる（例えば、スフェロプラストを全酵母から産生し、次いでトランスフェクトする）。
【０１５１】
組換え酵母ビヒクルの産生及び酵母ビヒクルによる抗原の発現に有効な条件は、酵母株を培養できる有効な培地を含む。有効な培地は、典型的には、同化可能な炭水化物、窒素及びリン酸塩源、並びに適切な塩、ミネラル、金属及び他の栄養素、例えばビタミン及び成長因子を含む水性培地である。培地は、複合栄養素を含んでもよく、又は所定の最少培地であってもよい。本発明の酵母株は、バイオリアクター、三角フラスコ、試験管、マイクロタイターディッシュ、及びペトリ皿を含むがこれらに限定されない様々な容器中で培養することができる。培養は、酵母株に適切な温度、ｐＨ及び酸素含有量で実施される。このような培養条件は、十分に当業者の経験の範囲内である（例えば、Ｇｕｔｈｒｉｅら（編），１９９１，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１９４，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏを参照）。
【０１５２】
本発明の一実施形態において、抗原を組換え技術により酵母ビヒクル中で発現するための代替法として、酵母ビヒクルにタンパク質若しくはペプチド抗原、又は炭水化物若しくは抗原としての働きをする他の分子を細胞内的に負荷する。続いて、抗原を細胞内に含む酵母ビヒクルを患者に投与することができるか、又は樹状細胞等の担体に負荷することができる（後述）。本明細書において用いられる場合、ペプチドは約３０〜５０以下のアミノ酸のアミノ酸配列を含み、一方、タンパク質は約３０〜５０を超えるアミノ酸のアミノ酸配列を含み；タンパク質はマルチマーであり得る。抗原として有用なタンパク質又はペプチドは、Ｔ細胞エピトープ程度の小ささであり得（すなわち、５アミノ酸超の長さ）、複数のエピトープ、タンパク質フラグメント、完全長タンパク質、キメラタンパク質又は融合タンパク質を含むものよりも大きな任意の好適なサイズであり得る。ペプチド及びタンパク質は、自然に又は合成的に誘導体化させることができ、このような修飾としては、限定されるものではないが、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリスチル化、プレニル化、パルミトイル化、アミド化及び／又はグリセロホスファチジルイノシトールの付加を挙げることができる。ペプチド及びタンパク質を本発明の酵母ビヒクル中に、拡散、能動輸送、リポソーム融合、エレクトロポレーション、食作用、凍結融解サイクル及び浴超音波処理（ｂａｔｈ  ｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ）などの当業者に既知の技術によって直接挿入することができる。ペプチド、タンパク質、炭水化物、又は分子を直接負荷することができる酵母ビヒクルとしては、無傷な酵母、並びにスフェロプラスト、ゴースト又は細胞質体が挙げられ、これらに、産生後であるが樹状細胞中に負荷する前に、抗原を負荷することができる。或いは、無傷な酵母に抗原を負荷することができ、次いでスフェロプラスト、ゴースト、細胞質体、又は亜細胞粒子をこれから調製することができる。任意の数の抗原を酵母ビヒクル中に負荷することができ、この実施形態においては、例えば微生物の負荷によるか、哺乳動物腫瘍細胞、若しくはその一部の負荷によって得られるものなど、少なくとも１、２、３、４、又は任意の整数から、数百若しくは数千までの抗原を負荷することができる。
【０１５３】
本発明の別の実施形態において、抗原は酵母ビヒクルに物理的に結合している。酵母ビヒクルの物理的結合は、共有及び非共有結合法を含む当該技術分野で好適な任意の方法によって行うことができ、このような方法としては、これらに限定されるものではないが、抗原を酵母ビヒクルの外表面に化学的に架橋させること、又は抗体若しくは他の結合パートナーを用いることによるなど、酵母ビヒクルの外表面に抗原を生物学的に結合させることが挙げられる。化学的架橋は、例えば、グルタルアルデヒド結合、光親和性標識、カルボジイミドでの処理、ジスルフィド結合可能な化学物質での処理、及び当該技術分野で標準的な他の架橋剤での処理を含む方法によって得ることができる。或いは、化学物質を酵母ビヒクルと接触させることができ、これによって酵母膜の脂質二重層の電荷又は細胞壁の組成を変えて、酵母の外表面を、特定の電荷特性を有する抗原と融合又は結合し易くする。抗体、結合ペプチド、可溶性受容体、及び他のリガンドなどの標的剤を、抗原中に融合タンパク質として組み入れるか、又は他の方法では抗原を酵母ビヒクルと結合させるために抗原と結合させることもできる。
【０１５４】
抗原が酵母の表面上で発現されるか、又は酵母の表面に物理的に結合する場合、スペーサーアームを慎重に選択して、表面上の抗原発現又は含有量を最適化することができる。スペーサーアームのサイズは、酵母の表面上に結合のための抗原がどの位多く露出されるかに影響を及ぼし得る。従って、どの抗原が使用されるかによって、当業者は、酵母表面上の抗原の適切なスペーシングを実施するスペーサーアームを選択する。一実施形態において、スペーサーアームは、少なくとも４５０アミノ酸の酵母タンパク質である。スペーサーアームはすでに詳細に説明した。
【０１５５】
抗原表面発現を最適化するための別の検討事項は、抗原及びスペーサーアームの組み合わせが単量体として若しくは二量体として若しくは三量体として発現されるか、又はさらに多くの単位が互いに結合しているかどうかである。このような単量体、二量体、三量体などの使用は、抗原の適切なスペーシング又はフォールディングを可能にし、抗原の全てではなくても一部が、さらにその免疫原性を高める方法で酵母ビヒクルの表面上に提示されることを可能にする。
【０１５６】
当業者は、酵母ビヒクル（異種抗原発現の有無を問わない）の性能を、酵母ビヒクルの表面上及び細胞質中のどちらにおいても、５．５より高いｐＨレベル（すなわち、中性ｐＨ）で酵母細胞を成長させることによって最適化することができる。中性ｐＨの使用は、抗原アクセシビリティ及び表面提示の最適化を助け、酵母細胞壁をより柔軟性の高い状態にし、酵母を結合する免疫細胞に、有用なサイトカイン（例えば、ＩＮＦ−ガンマ）の分泌を含む最適化された免疫応答及び最適化された活性化反応を生じさせる。
【０１５７】
酵母ビヒクル上の抗原の配置及び／又は発現を最適化するために当業者が使用できる別の方法は、酵母グリコシル化の量を制御することである。糖部分が嵩高い傾向があるので、酵母グリコシル化の量は、表面上で発現される抗原の免疫原性及び抗原性に影響を及ぼす。従って、酵母の表面上での糖部分の存在及び標的抗原の周りの三次元空間に対するその影響を考慮すべきである。酵母のグリコシル化の量を減少させるために（又は所望により増加させるために）、任意の方法を使用できる。例えば、低グリコシル化を有するために選択された酵母突然変異株（例えばｍｎｎ１、ｏｃｈ１及びｍｎｎ９突然変異体）を使用することができるか、又は標的抗原上のグリコシル化アクセプター配列を突然変異によって排除することができる。或いは、短縮されたグリコシル化パターンを有する酵母、例えばピチア属を使用することができる。グリコシル化を減少又は改変する方法を用いて酵母を処理することもできる。
【０１５８】
酵母の表面上に抗原を提供することに関する別の検討事項は、酵母がどのように不活性化されるか、及び表面上で発現された抗原の抗原性にこれがどのように影響を及ぼすかに対するその潜在的な影響である。酵母の熱不活性化は、酵母を不活性化する標準的方法であり、当業者は、当該技術分野で既知の標準的方法により、標的抗原の構造的変化をモニタリングすることができる。或いは、酵母を不活性化する他の方法、例えば化学的方法、電気的方法、放射線法又はＵＶ法を用いることができる。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１９４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（１９９０）などの標準的な酵母培養テキストに開示されている方法を参照のこと。使用される最適化法はいずれも、標的抗原の二次、三次、又は四次構造を考慮し、このような構造を保存してその免疫原性を最適化しなければならない。
【０１５９】
さらに別の実施形態においては、酵母ビヒクル及び抗原を、より受動的な非特異的又は非共有結合機構により、例えば酵母ビヒクル及び抗原を一緒に緩衝液又は他の好適な配合物中で穏やかに混合することによって、互いに結合させる。本発明のさらに別の実施形態は、核酸ベースの組成物、例えばＤＮＡ組成物又はウイルスベクター組成物であって、本明細書に記載するＨＣＶ融合タンパク質（本明細書に記載する様々なＮ末端及びＣ末端修飾の有無を問わない）をコードする核酸構築物（例えば、ウイルスベクター又は他の組換え核酸分子）を含むものに関する。組成物は、任意の医薬的に許容される送達ビヒクル（医薬的に許容される賦形剤又はアジュバントを含み得る）をさらに含むことができ、組成物は全体として、ＨＣＶに対してＭＨＣクラスＩ細胞性免疫応答を誘発できる特徴を有していなければならない。
【０１６０】
本発明の別の実施形態は、様々な本発明のＨＣＶ融合タンパク質から構成される偽ウイルスに関する。
本発明の一実施形態において、組成物は、生物反応修飾化合物、又はこのような修飾物質を産生する能力（すなわち、このような修飾物質をコードする核酸分子でトランスフェクトすることによる）も含み得る。このような修飾物質は、本発明の免疫治療組成物の特性の１つ以上を提供する組成物の要素であり得る。好適な生物反応修飾物質としては、サイトカイン、ホルモン、脂質誘導体、小分子薬剤及び他の成長調節物質、例えば限定されるものではないが、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−アルファ）、インシュリン様成長因子Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ−β）、ステロイド、プロスタグランジン及びロイコトリエンが挙げられる。酵母ビヒクルがＩＬ−２、ＩＬ−１２及び／又はＩＦＮ−ガンマを発現（すなわち産生）し、おそらくは分泌する能力は、細胞性免疫を選択的に向上させ、一方、酵母ビヒクルがＩＬ−４、ＩＬ−５及び／又はＩＬ−１０を発現し、おそらくは分泌する能力は、液性免疫を選択的に向上させる。他の好適な生物反応修飾物質としては、これらに限定されるものではないが、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、アネルギーＴ細胞を放出する）；Ｔ細胞共刺激物質（例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＣＤ２８、抗ＣＤ４０）；アレムツズマブ（例えば、ＣａｍＰａｔｈ（登録商標））、デニロイキン・ディフティトックス（例えば、ＯＮＴＡＫ（登録商標））、抗ＣＤ４、抗ＣＤ２５、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２又はＦＯＸＰ３をブロックする薬剤（例えば、活性を無効にする／ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔ調節細胞を殺す）；Ｆｌｔ３リガンド、イミキモド（Ａｌｄａｒａ（商標））、ＧＭ−ＣＳＦ、サルグラモスチム（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標））、トール様受容体（ＴＬＲ）−７作用物質、又はＴＬＲ−９作用物質（例えば、樹状細胞、マクロファージ及び他のプロフェッショナル抗原提示細胞の数を増加させるか、又は活性状態を増大させる薬剤）が挙げられる。このような生物反応修飾物質は、当該技術分野で周知であり、公的に入手可能である。
【０１６１】
アジュバントも生物反応修飾物質と見なすことができる。本発明によれば、アジュバントは、典型的には特異的抗原に対する動物の免疫応答を一般的に向上させる物質である。好適なアジュバントとしては、限定されるものではないが、フロインドアジュバント；他の細菌細胞壁成分；アルミニウム系の塩；カルシウム系の塩；シリカ；ポリヌクレオチド；トキソイド；血清タンパク質；ウイルスコートタンパク質；他の細菌由来の調製物；ガンマインターフェロン；ブロックコポリマーアジュバント、例えばハンターのタイターマックスアジュバント（ＣｙｔＲｘＴＭ社（ジョージア州ノルクロス））；リビアジュバント（リビイムノケムリサーチ社（Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．）（モンタナ州ハミルトン）から入手可能）；並びにサポニン及びそれらの誘導体、例えばＱｕｉｌ  Ａ（スーパーフォス・バイオセクター社（Ｓｕｐｅｒｆｏｓ  Ｂｉｏｓｅｃｔｏｒ  Ａ／Ｓ）（デンマーク）から入手可能）が挙げられる。前述のように、好適なアジュバントは、Ｔｈ１型免疫応答、及び好ましくはＴ細胞性免疫応答（ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋）を誘発する。
【０１６２】
本発明の組成物及び治療組成物は、被験者をＨＣＶ感染症から保護するために有用であるか、又はこのような感染症の任意の症状を治療若しくは改善する任意の他の化合物をさらに含むことができる。
【０１６３】
本明細書において用いられる場合、医薬的に許容される担体とは、本発明の方法において有用なＨＣＶ融合タンパク質を好適なインビボ又はエクスビボ部位へと送達するのに適した任意の物質又はビヒクルを意味する。このような担体としては、これらに限定されるものではないが、アジュバント、賦形剤、又は任意の他の種類の送達ビヒクル若しくは担体を挙げることができる。
【０１６４】
担体は、典型的には、治療される動物において治療組成物の半減期を増加させる化合物である。好適な担体としては、これらに限定されるものではないが、ポリマー制御放出処方、生分解性インプラント、リポソーム、油、エステル、及びグリコールが挙げられる。
【０１６５】
本発明の治療組成物は、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤も含むことができる。本明細書において用いられる場合、医薬的に許容される賦形剤とは、本発明の方法において有用な治療組成物を、好適なインビボ又はエクスビボ部位へ送達するために適した任意の物質を意味する。好適な医薬的に許容される賦形剤は、組成物が体内の標的細胞、組織又は部位に到達した際に、組成物が標的部位（標的部位は全身的であり得る）で免疫応答を誘発できる形態で組成物（又は酵母ビヒクル又は酵母ビヒクルを含む樹状細胞）を維持できる。本発明の好適な賦形剤としては、組成物をある部位へ輸送するが、特異的に標的としない賦形剤又は処方（本明細書においては、非標的担体とも呼ぶ）が挙げられる。医薬的に許容される賦形剤の例としては、これらに限定されるものではないが、水、塩溶液、リン酸緩衝塩溶液、リンガー液、デキストロース溶液、血清含有溶液、ハンクス溶液、他の生理学的平衡水溶液、油、エステル及びグリコールが挙げられる。水性担体は、例えば化学的安定性及び等張性を向上させることによって受容者の生理的状態に近づけるために必要な好適な補助物質を含むことができる。好適な補助物質としては、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、並びにリン酸緩衝液、トリス緩衝液、及び重炭酸緩衝液を製造するために用いられる他の物質が挙げられる。補助物質には、チメロサール、ｍ−又はｏ−クレゾール、ホルマリン及びベンゾールアルコールなどの保存料も含まれ得る。
【０１６６】
免疫治療組成物は、好ましくは、被験者が組成物からの利点を得、好ましくは治療されるように、被験者において免疫応答を誘発する。本明細書において用いられる場合、ＨＣＶ感染症に関する「治療される」という表現は、当該疾患の１つ以上の症状の軽減；当該疾患の発症の減少、及び／又は当該疾患の重篤度の軽減を意味する。特に、免疫治療組成物は、ＨＣＶに感染した被験者に対して１つ以上の利点を提供することができ、利点としては、限定されるものではないが、ＨＣＶに対する細胞性免疫応答（ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩ反応、並びに好ましくは、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞反応を包含する）の誘発、ウイルス量の減少、急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）の達成、増強されたウイルス学的反応（ＥＶＲ）の達成、完全な増強されたウイルス学的反応（ｃＥＶＲ）の達成、持続的ウイルス学的反応（ＳＶＲ）の達成、肝機能の改善、肝炎の軽減、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルの正常化、及び／又は軽減された肝障害が挙げられる。「疾患」という用語は、動物の正常な健康状態からの逸脱を意味し、病徴が存在する場合の状態、並びに逸脱（例えば、感染症、遺伝子突然変異、遺伝子欠陥等）が起こっているが、まだ症状を呈していない状態が挙げられる。
【０１６７】
本発明は、本発明の組成物を動物に送達することを含む。投与プロセスは、エクスビボ又はインビボで実施できるが、典型的にはインビボで実施される。エクスビボ投与とは、患者の外部で調節段階の一部を実施すること、例えば本発明の組成物を、酵母ビヒクル及び抗原が細胞中に負荷される条件下で患者から取り出した細胞（樹状細胞）の集団に投与し、この細胞を患者に戻すことを意味する。本発明の治療組成物を、任意の好適な投与様式により、患者に戻すか、又は患者に投与することができる。
【０１６８】
本発明の組成物の投与は、全身性、粘膜及び／又は標的部位の場所付近であり得る。好適な投与経路は当業者には明らかであろう。好適な投与法としては、これらに限定されるものではないが、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、節内投与、冠動脈内投与、動脈内投与（例えば、頸動脈中）、皮下投与、経皮送達、気管内投与、皮下投与、関節内投与、脳室内投与、吸入（例えば、エアゾル）、頭蓋内、髄腔内、眼内、耳、鼻内、経口、肺投与、カテーテルの含浸、及び組織中への直接注射が挙げられる。特に好適な投与経路としては：静脈内、腹腔内、皮下、皮内、節内、筋肉内、経皮、吸入、鼻内、経口、眼内、関節内、頭蓋内、及び髄腔内が挙げられる。非経口送達には、皮内、筋肉内、腹腔内、胸膜内、肺内、静脈内、皮下、心房カテーテル及び静脈カテーテル経路が含まれる。耳送達には点耳剤が含まれ、鼻内送達には点鼻薬又は鼻内注射が含まれ、眼内送達には点眼薬が含まれ得る。エアゾル（吸入）送達は、当該技術分野で標準的な方法を用いて実施することもできる（例えば、その全体が参照により本明細書で援用される、Ｓｔｒｉｂｌｉｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １８９：１１２７７−１１２８１，１９９２を参照）。粘膜免疫を調節する他の投与経路は、ウイルス感染症の治療に有用である。このような経路としては、気管支、皮内、筋肉内、鼻内、他の吸入、直腸、皮下、局所、経皮、膣及び尿道経路が挙げられる。一態様において、本発明の免疫治療組成物を皮下投与する。
【０１６９】
本発明によれば、好適な単一投与サイズは、好適な期間にわたって１回以上投与した場合に、動物において抗原特異的免疫応答を誘発できる用量である。用量は、治療される疾患又は状態によって様々である。例えば、一実施形態において、本発明の酵母ビヒクルの単一用量は、組成物を投与される生物の体重１キログラムあたり約１×１０５〜約５×１０７酵母細胞相当量である。好適な実施形態において、用量あたりの酵母細胞は、生物の体重について調節されない。この実施形態において、本発明の酵母ビヒクルの単一用量は、用量あたり、約１×１０４〜約１×１０９酵母細胞である。さらに好ましくは、本発明の酵母ビヒクルの単一用量は、用量あたり（すなわち生物あたり）約０．１Ｙ．Ｕ．（１×１０６細胞）〜約１００Ｙ．Ｕ．（１×１０９細胞）（０．１×１０６細胞の増分での任意の中間用量（すなわち、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６．．．）を含む）である。この用量範囲は、マウス、サル、ヒトなどを含む任意のサイズの任意の生物において有効に使用することができる。
【０１７０】
治療組成物の「ブースター」又は「ブースト」を好ましくは、抗原に対する免疫応答が減衰した場合、或いは必要に応じて、免疫応答を提供するか、又は特定の抗原若しくは複数の抗原に対する記憶応答を誘発するために、投与する。ブースターを、最初の投与後約１又は２週から毎月から毎年から数年まで投与することができる。一実施形態において、投与スケジュールは、生物の体重１ｋｇあたり約１×１０５〜約５×１０７酵母細胞相当量の組成物を、約１ヶ月〜約６ヶ月にわたり約１回〜約４回投与するものである。
【０１７１】
本発明の方法において、組成物及び治療組成物は、任意の脊椎動物を含む動物、及び特に、霊長類、齧歯類、家畜及びペットを含むがこれらに限定されない脊椎動物種、哺乳綱のメンバーに投与することができる。家畜には、食用又は有用な産物を産生する（例えば羊毛生産用のヒツジ）哺乳動物が含まれる。保護される好適な哺乳動物としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ及びブタが挙げられ、ヒトが特に好ましい。本発明によれば、「患者」又は「被験者」という用語は、本明細書に記載する診断、予防、又は治療の被験者である、任意の動物について記載するために使用できる。
【０１７２】
定義
「標準治療（Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｏｆ  Ｃａｒｅ）（ＳＯＣ）」とは、Ｃ型肝炎ウイルスの治療のための現行の標準治療をいい、この治療は本質的に、インターフェロン（好ましくはインターフェロン−α２、さらに好ましくは、ペグ化インターフェロン−α）と抗ウイルス化合物リバビリンとの併用投与からなる。この併用は、典型的には、毎日の投与スケジュールで典型的には経口投与されるリバビリンと併行して、２４週間（ＨＣＶの遺伝子型２及び３）又は４８週間（ＨＣＶの遺伝子型１及び４）の間の毎週１回のインターフェロンの皮下注射によって投与される。
【０１７３】
「ウイルス陰性」又は「（完全）著効（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」という用語は、大文字で始まってもよく、本明細書において交換可能に用いられても良く、且つＨＣＶ  ＲＮＡが２５ＩＵ／ｍｌ未満である（これには検出不能なウイルスを含む）と定義される。「完全著効者」とは、完全著効を達成した被験者である。
【０１７４】
「急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）」とは、インターフェロン−ベースの４週間の治療後、ウイルス陰性であることと定義される。
「早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ）」は、インターフェロン−ベースの１２週までのウイルス量において２を超えるｌｏｇ１０減少と定義される。
【０１７５】
「完全ＥＶＲ（ｃＥＶＲ）」とは、インターフェロン−ベースの治療の１２週までにウイルス陰性であることと定義される。
「治療反応の終了（ＥＴＲ）」とは、インターフェロン−ベースの治療の４８週までにウイルス陰性であることと定義される（遺伝子型１の患者について）。
【０１７６】
「持続的ウイルス学的反応（ＳＶＲ又はＳＶＲ２４）」とは、ＥＴＲ後６カ月でウイルス陰性であることと定義される。
「ナイーブ」又は「インターフェロン−ナイーブ」被験者（患者）とは、インターフェロン又はＳＯＣ（インターフェロンに加えてリバビリン）で従前に治療されていない被験者である。
【０１７７】
「無効反応者」とは、ＳＯＣにおいて１２週までのウイルス量における少なくとも１のｌｏｇ１０減少を達成できないＨＣＶ感染被験者である。
「無反応者」とは、治療の１２週間のコースを受け、且つＥＶＲを達成できない被験者である。
【０１７８】
「部分的反応者」とは、１２週までのウイルス量において２を超えるｌｏｇ１０減少を有するが、ウイルス陰性に達しなかった被験者として定義される。
「ブレイクスルー」被験者とは、治療の間にウイルス陰性を達成するが、そのウイルス量が治療の終了（ＥＴＲエンドポイント）の前に検出可能なレベルまで戻る被験者である。
【０１７９】
「再発者」とは、治療の終了（ＥＴＲエンドポイント）までウイルス根絶（陰性）が達成されるが、そのウイルス量が２４週間のフォローアップの間に検出可能なレベルまで戻る被験者である。
【０１８０】
本明細書において用いる場合、「インターフェロン」という用語は、二本鎖ＲＮＡの存在に応答して免疫系の細胞によって、及び広汎な種々の細胞によって典型的に産生されるサイトカインを指す。インターフェロンは、宿主細胞内のウイルス複製を阻害すること、ナチュラルキラー細胞及びマクロファージを活性化すること、リンパ球に対する抗原提示を増大すること、並びにウイルス感染に対する宿主細胞の抵抗を誘導することによって免疫応答を補助する。Ｉ型インターフェロンとしてはインターフェロンαが挙げられる。本発明の方法で有用なインターフェロンとしては、任意のＩ型インターフェロン、及び好ましくはインターフェロンα、さらに好ましくはインターフェロンα２、及びさらに好ましくは、インターフェロンのより長時間作用型が挙げられ、このインターフェロンとしては限定されるものではないが、ペグ化インターフェロン、インターフェロン融合タンパク質（アルブミンに対して融合されたインターフェロン）、及びインターフェロンを含む徐放性処方物（例えば、マイクロスフェア中のインターフェロン、又はポリアミノ酸ナノ粒子を有するインターフェロン）が挙げられる。インターフェロンの１種であるＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標）、ペグインターフェロンα−２ａは、単一分岐ビス−モノメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖（およそＭＷ４０，０００ダルトン）を有する組換えα−２ａインターフェロン（およそ分子量［ＭＷ］２０，０００ダルトン）の共有結合コンジュゲートである。ＰＥＧ部分は、リジンに対する安定なアミド結合を介してインターフェロンα部分に対して単一部位で連結される。ペグインターフェロンα−２ａは、６０，０００ダルトンというおよその分子量を有する。インターフェロンα−２ａは組換えＤＮＡ技術を用いて産生され、ここにクローニングされたヒト白血球インターフェロン遺伝子が挿入されており、且つ大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）の中で発現される。
【０１８１】
本明細書において用いる場合、「抗ウイルス化合物」という用語は、直接の抗ウイルス治療効果でＨＣＶライフサイクルにおける１つ以上の種々の過程を標的とする任意の化合物、典型的には低分子阻害物質又は抗体を指す。ＨＣＶ治療のための抗ウイルス化合物は時に、「Ｃ型肝炎のための特異的に標的化された抗ウイルス治療（Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ）」又は「ＳＴＡＴ−Ｃ」と呼ばれる。抗ウイルス化合物の例としては限定されるものではないが、ウイルスプロテアーゼ阻害物質類（例えば、ＴＥＬＡＰＲＥＶＩＲ（商標）、ヴェルテックス社（Ｖｅｒｔｅｘ）／ジョンソン・アンド・ジョンソン社（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ）／三菱社（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）のＮＳ３プロテアーゼ阻害物質；ＢＯＣＥＰＲＥＶＩＲ（商標）、シェリング・プラウ社（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）のＮＳ３プロテアーゼ阻害物質）、ポリメラーゼ阻害物質（例えば、Ｒ−１７２８、ロシュ社（Ｒｏｃｈｅ）／ファーマセット社（Ｐｈａｒｍａｓｓｅｔ）のＮＳ５ｂポリメラーゼ阻害物質）、又は他のウイルス阻害物質類（例えば、バレアント社（Ｖａｌｅａｎｔ）のＴＡＲＩＢＡ  ＶＩＲＩＮ（商標）（ビラミジン（ｖｉｒａｍｉｄｉｎｅ））が挙げられる。リバビリンは好ましい抗ウイルス化合物である。本発明において用いる場合「抗ウイルス化合物」という用語はまた宿主酵素阻害物質も包含する。
【０１８２】
「宿主酵素阻害物質類」は、ウイルスも免疫系も標的としないため、間接的に作用する。これらの分子はウイルスによって悪用される宿主細胞機能を阻害することによって働く。このような阻害物質の例としては限定されるものではないが、シクロフィリンＢ阻害物質類、αグルコシダーゼ阻害物質類、ＰＦＯＲ阻害物質類、及びＩＲＥＳ阻害物質類が挙げられる。例示的な宿主酵素阻害物質類としては限定されるものではないが、ＤＥＢＩＯ−０２５（商標）（デビオファーマ社（Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍａ））、シクロフィリンＢ阻害物質；ＣＥＬＧＯＳＩＶＩＲ（商標）（ミジェニックス社（Ｍｉｇｅｎｉｘ））、経口αグルコシダーゼ阻害物質；ＮＩＭ８１１（商標）（ノバルティス社（Ｎｏｖａｒｔｉｓ））、シクロフィリンＢ阻害物質；ＡＬＩＮＩＡ（商標）（ロマーク社（Ｒｏｍａｒｋ）のニタゾキサニド（ｎｉｔａｚｏｘａｎｉｄｅ））、ＰＦＯＲ阻害物質；及びＶＧＸ−４１０Ｃ（商標）（ＶＧＸファーマ社（ＶＧＸ  Ｐｈａｒｍａ））、経口ＩＲＥＳ阻害物質が挙げられる。
【０１８３】
「リバビリン」は不完全なプリン６員環を有するリボシルプリン類似体である。リバビリンの化学名は１−（β）−Ｄ−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミドである。リバビリンの実験式はＣ８Ｈ１２Ｎ４Ｏ５であり、且つ分子量は２４４．２である。リバビリンは、白色から灰色がかった白色の粉末である。リバビリンは水に容易に溶解し、且つ無水アルコールには僅かに溶解する。リバビリンのカルボキサミド基は、その回転に依存して、アデノシン又はグアノシンに似ている天然のヌクレオシド薬物を作製し得る。リバビリンは、細胞キナーゼ（リバビリンを５’三リン酸ヌクレオチドに変化する）によって活性化されるプロドラッグである。この形態では、ウイルス複製に関連するＲＮＡ代謝の局面に干渉する。リバビリンの誘導体は、当該分野で周知であり、且つ（ＣＯＰＥＧＵＳ（商標）；ＲＥＢＥＴＯＬ（商標）；ＲＩＢＡＳＰＨＥＲＥ（商標）；ＶＩＬＯＮＡ（商標）、ＶＩＲＡＺＯＬＥ（商標）さらにサンド社（Ｓａｎｄｏｚ）、テバ社（Ｔｅｖａ）、ワリック社（Ｗａｒｒｉｃｋ）のジェネリック薬も）として市販される。
【０１８４】
「免疫療法組成物」とは、被験者における少なくとも１つの治療効果を達成するために十分な免疫応答を誘発する組成物である。
本明細書において用いる場合、「類似体」という用語は、別の化合物と構造的に類似であるが、組成が僅かに異なる（異なる元素の原子による若しくは特定の官能基の存在下における１つの原子の置換、又は別の官能基による１つの官能基の置換など）化合物をいう。従って、類似体とは、機能又は外観において類似であるか又は相当するが、参照の化合物に対して異なる構造又は由来を有する化合物である。
【０１８５】
「置換された」、「置換された誘導体」及び「誘導体」という用語は、化合物について記載するために用いられる場合、非置換化合物に対して結合された少なくとも１つの水素が異なる原子又は化学部分で置換されていることを意味する。
【０１８６】
誘導体は親化合物に対して類似の物理的構造を有するが、その誘導体は、その親の化合物とは異なる化学特性及び／又は生物学的特性を有する場合がある。このような特性としては、限定されるものではないが、親化合物の活性の増大又は減少、親化合物と比較して新規な活性、バイオアベイラビリティの増大又は減少、有効性の増強又は減少、インビトロ及び／又はインビボでの安定性の増大又は減少、並びに／或いは吸収特性の増強又は減少が挙げられる。
【０１８７】
一般には、「生物学的に活性な」という用語は、ある化合物が、インビボで（すなわち、天然の生理学的環境で）又はインビトロで（すなわち、実験条件下で）測定又は観察された場合、細胞又は生物体の代謝又は他の特性に対して影響を有する少なくとも１つの検出可能な活性を有することを示す。
【０１８８】
本発明によれば、「抗原」という用語は、本明細書において一般的には以下を意味して用いられる：自然発生的又は合成的に得られたタンパク質の任意の部分（ペプチド、部分タンパク質、全長タンパク質）、細胞組成物（細胞全体、細胞可溶解物、又は崩壊した細胞、生物体（完全な生物体、細胞可溶解物又は崩壊した細胞）、或いは炭水化物、又は他の分子、又はそれらの一部分。抗原は、免疫系の要素（例えば、Ｔ細胞、抗体）によって引き起こされる、同じ又は同様の抗原に対する抗原特異的な免疫応答（例えば、体液性及び／又は細胞媒介性免疫応答）を誘発し得る。
【０１８９】
抗原は、単一のエピトープ程度に小さくでき、又はそれより大きくでき、複数のエピトープを含むこともできる。このようなものとして、抗原のサイズは約５〜１２アミノ酸（例えばペプチド）程度の小ささであり得、そして、多量体及び融合タンパク質、キメラタンパク質、細胞全体、微生物全体、又はその一部（例えば、細胞全体の溶解液又は微生物の抽出物）を含む全長タンパク質と同等の大きさであり得る。さらに抗原としては、炭水化物を挙げることができ、この炭水化物は、酵母ビヒクル中に、又は本発明の組成物中に負荷することもできる。いくつかの実施形態では（すなわち、抗原が組換え核酸分子由来の酵母ビヒクルによって発現される場合）、抗原は、細胞の全体でも微生物でもなく、タンパク質、融合タンパク質、キメラタンパク質又はそのフラグメントであることが理解されるであろう。
【０１９０】
免疫応答の刺激について言及する場合、「免疫原」という用語は、「抗原」という用語の部分集合（小集団）であり、従って、いくつかの場合には、「抗原」という用語と交換可能に用いられ得る。免疫原とは、本明細書において用いる場合、ある個体に対する免疫原の投与がその個体の免疫系によって引き起こされる同じ又は類似の抗原に対する抗原特異的な免疫応答を高めるような体液性及び／又は細胞媒介性の免疫応答（すなわち免疫原性）を誘発する抗原をいう。
【０１９１】
所定の抗原の「免疫原性領域」は、動物に投与された場合、免疫原として機能する少なくとも１つのエピトープを含む抗原の任意の一部分、フラグメント又はエピトープ（例えば、ペプチドフラグメント又はサブユニット又は抗体エピトープ又は他の立体構造エピトープ）であり得る。例えば、単一のタンパク質は複数の異なる免疫原性領域を含み得る。免疫原性領域は、例えば、体液性免疫応答の場合において、タンパク質内で直線配列である必要はない。
【０１９２】
エピトープとは、免疫応答を誘発するのに十分な所定の抗原内の単独の抗原部位として本明細書では定義される。当業者は、Ｔ細胞エピトープがＢ細胞エピトープとは異なる大きさ且つ組成であること、及びクラスＩのＭＨＣ経路を通じて提示されるエピトープが、クラスＩＩＭＨＣ経路を通じて提示されるエピトープとは異なるということを認識する。エピトープは、直線配列でもあり得、又は立体構造エピトープ（保存結合領域）でもあり得る。
【０１９３】
交換可能に用いられ得る用語である「個体」又は「被験者」又は「患者」とは、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、さらに好ましくはヒトである。哺乳動物としては限定されるものではないが、家畜、競技用動物、ペット、霊長類、マウス及びラットが挙げられる。
【０１９４】
本発明によれば、「異種アミノ酸」とは、特定のアミノ酸配列に隣接する天然には見出されない（すなわち、インビボで天然には見出されない）、又は特定のアミノ酸配列の機能に関連しない、又は遺伝子中に存在するような特定のアミノ酸配列をコードする天然に存在する核酸配列に隣接するヌクレオチドによってコードされないアミノ酸の配列（天然に存在する配列中のこのようなヌクレオチドが、所定のアミノ酸配列が由来する生物体の標準的なコドン用法を用いて翻訳された場合）である。
【０１９５】
本発明によれば、本発明の酵母ビヒクルと組み合わせて、異種融合タンパク質を含む、「異種」タンパク質又は「異種」抗原という言及は、このタンパク質又は抗原が酵母によって天然に発現されるタンパク質でも抗原でもないということを意味するが、融合タンパク質とは、酵母によって天然に発現される酵母配列又はそのタンパク質若しくは部分を包含してもよい。
【０１９６】
本発明の一実施形態では、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列は、特定のアミノ酸配列のＣ末端及び／又はＮ末端の各々に隣接する少なくとも１つ、及び最大約２０個の追加の異種アミノ酸から産生され得る。得られたタンパク質又はポリペプチドは、特定のアミノ酸配列から「本質的に構成される」と言うことができる。上記で考察されるとおり、本発明によれば、異種アミノ酸とは、特定のアミノ酸配列に隣接する天然には見出されない（すなわち、インビボで天然には見出されない）、又は特定のアミノ酸配列の機能に関連しない、又は遺伝子中に生じるような特定のアミノ酸配列をコードする天然に存在する核酸配列に隣接するヌクレオチドによってコードされないアミノ酸の配列（天然に存在する配列中のこのようなヌクレオチドが、所定のアミノ酸配列が由来する生物体の標準的なコドン用法を用いて翻訳された場合）である。同様に、本明細書の核酸配列に対する言及で用いられる場合「本質的に〜からなる」という表現は、特定のアミノ酸配列をコードする核酸配列の５’及び／又は３’末端の各々で少なくとも１つ、及び最大約６０個の追加の異種ヌクレオチドに隣接され得る、特定のアミノ酸配列をコードする核酸配列を指す。異種ヌクレオチドとは、天然の遺伝子中に存在するような特定のアミノ酸配列をコードする核酸配列に隣接して天然には見出されることもなく（すなわち、インビボで天然には見出されない）、又はタンパク質に対して任意の追加の機能を付与するタンパク質をコードすることもなく、又は特定のアミノ酸配列を有するタンパク質の機能を変化させることもない。
【０１９７】
本発明によれば、「選択的に結合する」という表現は、本発明の、抗体、抗原結合性フラグメント又は結合パートナーが、特定のタンパク質に優先的に結合する能力を指す。より具体的には、「選択的に結合する」という表現は、あるタンパク質が他のもの（例えば、抗体、そのフラグメント、又は、抗原の結合パートナー）に対して特異的に結合することを意味しており、ここでその結合レベルは、任意の標準的なアッセイ（例えば、イムノアッセイ）によって測定した場合、そのアッセイについてのバックグラウンドの対照よりも統計学的に有意に大きい。例えば、イムノアッセイを行う場合、対照としては、典型的には、抗体又は抗原結合性フラグメントを単独で含有する（すなわち、抗原を含まない）反応ウェル／チューブが挙げられ、ここでは、抗原が存在しない状態における抗体又はその抗原結合性フラグメントによる反応性（例えば、ウェルへの非特異的な結合など）の量がバックグラウンドと見なされる。結合は、酵素免疫測定法（例えばＥＬＩＳＡ）、イムノブロットアッセイなど）を含む、当該分野において標準的な種々の方法を用いて測定され得る。
【０１９８】
本発明における単離されたタンパク質又はポリペプチドについての言及には、全長タンパク質、融合タンパク質又は任意のフラグメント、領域、立体構造エピトープ、又はこのようなタンパク質の相同体を包含する。より詳細には、本発明による単離されたタンパク質とは、その天然の環境から取り出された（すなわち、ヒトの操作に供されている）タンパク質（ポリペプチド又はペプチドを含む）であり、これには、精製されたタンパク質、部分的に精製されたタンパク質、組換え産生されたタンパク質及び合成的に産生されたタンパク質を例として挙げることができる。そのようなものとして、「単離された」とは、タンパク質が精製された程度を反映するものではない。好ましくは、本発明の単離されたタンパク質は組換え産生される。本発明によれば、「修飾」及び「変異」という用語は、特に、本明細書に記載されるタンパク質又はその一部のアミノ酸配列（又は核酸配列）に対する修飾／変異において、交換可能に用いられ得る。
【０１９９】
本明細書において用いる場合、「相同体」という用語は、天然に存在するタンパク質又はペプチド（すなわち、「プロトタイプ」又は「野性型」タンパク質）から、その天然に存在するタンパク質又はペプチドに対する僅かな修飾によって異なるが、天然に存在する形態の基本的なタンパク質及び側鎖の構造を維持しているタンパク質又はペプチドを指して用いられる。このような変化としては限定されるものではないが以下が挙げられる：１若しくは２〜３個のアミノ酸側鎖の変化；１若しくは２〜３個のアミノ酸変化であって、欠失（例えば、タンパク質又はペプチドの短縮型）挿入及び／若しくは置換を含む変化；１若しくは２〜３個の原子の立体化学における変化；並びに／又は軽微な誘導体化、例としては、限定されるものではないが：メチル化、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミタート化（ｐａｌｍｉｔａｔｉｏｎ）、アミド化、及び／若しくはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加が挙げられる。相同体は、天然に存在するタンパク質又はペプチドと比較して、増強、減少又は実質的に類似のいずれかの特性を有し得る。相同体としてはタンパク質のアゴニスト又はタンパク質のアンタゴニストを挙げることができる。相同体は、限定されるものではないが、単離された天然に存在するタンパク質に対する直接の修飾、直接タンパク質合成、又は例えばランダム変異導入法若しくは標的化変異導入法を達成するための古典的若しくは組換えＤＮＡ技術を用いたタンパク質をコードする核酸配列に対する修飾を含む、タンパク質の産生のための当該分野で公知の技術を用いて産生され得る。
【０２００】
所定のタンパク質の相同体は、参照タンパク質のアミノ酸配列に対して少なくとも約４５％、又は少なくとも約５０％、又は少なくとも約５５％、又は少なくとも約６０％、又は少なくとも約６５％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約７５％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約８５％、又は少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％同一、又は少なくとも約９５％同一、又は少なくとも約９６％同一、又は少なくとも約９７％同一、又は少なくとも約９８％同一、又は少なくとも約９９％同一（又は、４５％〜９９％の全整数の増分の任意の同一性割合）であるアミノ酸配列を含んでもよく、本質的にそれらからなってもよく、又はそれらからなってもよい。一実施形態では、相同体は、参照タンパク質の天然に存在するアミノ酸配列に対して１００％未満同一、約９９％未満同一、約９８％未満同一、約９７％未満同一、約９６％未満同一、約９５％未満同一など（１％の増分で）から、約７０％未満同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。
【０２０１】
本明細書において用いる場合、他に特定しない限り、同一性（％）という言及は、以下を用いて行われる相同性の評価を指す：（１）アミノ酸検索のためにはｂｌａｓｔｐ及び核酸検索のためにはｂｌａｓｔｎを用いる（標準デフォルトパラメータによる）ＢＬＡＳＴ  ２．０  Ｂａｓｉｃ  ＢＬＡＳＴ相同性検索、ここでクエリー配列は、デフォルトによって低い複雑性領域についてフィルタリングされる（その全体が参照により本明細書に援用される、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．，Ｓｃｈａａｆｆｅｒ，Ａ．Ａ．，Ｚｈａｎｇ，Ｊ．，Ｚｈａｎｇ，Ｚ．，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｗ．＆  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．（１９９７）“Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−  ＢＬＡＳＴ：ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ．”Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９〜３４０２）；（２）ＢＬＡＳＴ  ２アラインメント（下記のパラメータを用いる）；（３）及び／又は標準的なデフォルトパラメータによるＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ（Ｐｏｓｉｔｉｏｎ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｉｔｅｒａｔｅｄ  ＢＬＡＳＴ）。ＢＬＡＳＴ  ２．０  Ｂａｓｉｃ  ＢＬＡＳＴとＢＬＡＳＴ  ２との間の標準的パラメータにおけるいくつかの相違に起因して、２つの特異的な配列が、ＢＬＡＳＴ２プログラムを用いて有意な相同性を有すると認識される場合があるが、クエリー配列として配列の１つを用いてＢＬＡＳＴ  ２．０  Ｂａｓｉｃ  ＢＬＡＳＴで行われる検索は、第２の配列をトップマッチで特定し得ない。さらに、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴは、配列相同体を探す鋭敏な方法である「プロフィール」検索の自動化された簡便版を提供する。このプログラムは最初に、ギャップのあるＢＬＡＳＴデータベース検索を行う。このＰＳＩ−ＢＬＡＳＴプログラムは、位置特異的なスコアマトリックスを構築するように戻された任意の有意なアラインメントからの情報を用い、このマトリックスは次回のデータベース検索のためにクエリー配列を置き換える。従って、同一性割合はこれらのプログラムのいずれか１つを用いることによって決定され得ることが理解されるべきである。
【０２０２】
２つの特異的な配列は、Ｔａｔｕｓｏｖａ及びＭａｄｄｅｎ，（１９９９），“Ｂｌａｓｔ  ２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  −  ａ  ｎｅｗ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ”，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．１７４：２４７−２５０（その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されるようなＢＬＡＳＴ  ２配列を用いて別の配列に対して整列され得る。ＢＬＡＳＴ  ２配列アラインメントを、ＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムを用いてｂｌａｓｔｐ又はｂｌａｓｔｎで行い、２つの配列間のＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ検索（ＢＬＡＳＴ  ２．０）を行って、得られたアラインメントにおけるギャップ（欠失及び挿入）の導入を可能にする。本明細書における明確化の目的のために、以下のように標準デフォルトパラメータを用いてＢＬＡＳＴ  ２配列アラインメントを行う。
ｂｌａｓｔｎについては、０  ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスを用いる：
マッチに対するリウォード（報酬）＝１
ミスマッチに対するペナルティ＝−２
オープンギャップ（５）及びエクステンションギャップ（２）ペナルティ
ギャップｘ＿ドロップオフ（５０）期待値（１０）ワードサイズ（１１）フィルター（オン）
ｂｌａｓｔｐについては、０  ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスを用いる：
オープンギャップ（１１）及びエクステンションギャップ（１）ペナルティ
ギャップｘ＿ドロップオフ（５０）期待値（１０）ワードサイズ（３）フィルター（オン）。
【０２０３】
単離された核酸分子は、その天然の環境から取り出されている（すなわち、ヒトの操作に供されている）核酸分子であり、その天然の環境とは、核酸分子が天然に見出されるゲノム又は染色体である。そのようなものとして、「単離された」とは、核酸分子が精製された程度を反映する必要はないが、その分子が、ゲノム全体又は染色体全体（その核酸分子が天然に見出される）を含まないことを示す。単離された核酸分子は、１つの遺伝子を含むことができる。１つの遺伝子を含む単離された核酸分子とは、このような遺伝子を含む染色体のフラグメントのことではなく、この遺伝子に関連するコード領域及び調節性領域を含むが、同じ染色体上に天然に見出される追加の遺伝子は含まないものである。単離された核酸分子はまた、天然における特定の核酸配列（すなわち、異種配列）に正常には隣接しない追加の核酸に隣接する（すなわち、配列の５’及び／又は３’末端で）特定の核酸配列を含むことができる。単離された核酸分子としてはＤＮＡ、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）、又はＤＮＡ若しくはＲＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）のいずれかの誘導体を挙げることができる。「核酸分子」という表現は主に、物理的な核酸分子を指し、そして「核酸配列」という表現は主に、核酸分子上のヌクレオチドの配列を指すが、この２つの表現は、特にタンパク質又はタンパク質の領域をコードし得る核酸分子に対して、又は核酸配列に対して、交換可能に用いられ得る。
【０２０４】
組換え核酸分子とは、トランスフェクトされるべき細胞中の核酸分子（単数又は複数）の発現を効果的に調節できる任意の転写制御配列のうちの少なくとも１つに作動可能に連結された、本明細書に記載の任意の１つ以上のタンパク質をコードする任意の核酸配列のうちの少なくとも１つを包含し得る分子である。「核酸分子」という表現は主に、物理的な核酸分子を指すが、「核酸配列」という表現は主に核酸分子上のヌクレオチドの配列を指し、この２つの表現は、特にタンパク質をコードし得る核酸分子又は核酸配列に対して、交換可能に用いられ得る。さらに、「組換え分子」という表現は主に、転写制御配列に対して作動可能に連結された核酸分子を指すが、動物に投与される「核酸分子」という表現と交換可能に用いられ得る。
【０２０５】
組換え核酸分子は、組換えベクターを含み、このベクターとは任意の核酸配列、典型的には異種配列であり、この配列は、本発明の融合タンパク質をコードする単離された核酸分子に作動可能に連結されており、融合タンパク質の組換え産生を可能にし得、そして本発明による宿主細胞へ核酸分子を送達できる。このようなベクターは、ベクターに挿入されるべき単離された核酸分子に対して天然では隣接することが見出されていない核酸配列を含んでもよい。このベクターは、ＲＮＡ又はＤＮＡのいずれでもあり得、原核生物又は真核生物のベクターであり得、且つ好ましくは本発明では、ウイルス又はプラスミドである。組換えベクターは、核酸分子のクローニング、配列決定及び／又はそうでなければ操作で用いることができ、且つこのような分子の送達に（例えば、ＤＮＡ組成物中で又はウイルスベクターベースの組成物中などで）用いることができる。組換えベクターは好ましくは、核酸分子の発現で用いられ、且つ発現ベクターと呼ばれてもよい。好ましい組換えベクターは、トランスフェクトされた宿主細胞で発現可能である。
【０２０６】
本発明の組換え分子では、核酸分子は、調節性配列、例えば、転写制御配列、翻訳制御配列、複製起点、及び宿主細胞と適合し、且つ本発明の核酸分子の発現を制御する他の調節性配列を含む発現ベクターに作動可能に連結される。詳細には、本発明の組換え分子としては、１つ以上の発現制御配列に作動可能に連結されている核酸分子が挙げられる。「作動可能に連結された」という用語は、宿主細胞にトランスフェクト（すなわち、形質転換、形質導入、又はトランスフェクト）された場合、分子が発現されるような方式で、発現制御配列に対して核酸分子を連結することをいう。
【０２０７】
本発明によれば、「トランスフェクション」という用語は、外因性の核酸分子（すなわち、組換え核酸分子）が細胞に挿入され得る任意の方法を指すために用いられる。「形質転換」という用語は、このような用語が微生物細胞、例えば、藻類、細菌及び酵母へ核酸分子の導入を指すために用いられる場合「トランスフェクション」という用語と交換可能に用いられ得る。微生物の系では、「形質転換」という用語は、微生物による外因性核酸の獲得に起因した遺伝性の変化について記載するために用いられ、「トランスフェクション」という用語と本質的に同義である。従って、トランスフェクション技術としては限定されるものではないが、形質転換、細胞の化学処理、微粒子銃、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、吸着、感染及び原形質体融合が挙げられる。
【０２０８】
以下の実験結果は、例示の目的のために示すものであり、本発明の範囲を限定することを意図していない。
【実施例】
【０２０９】
（実施例１）
以下の実施例は、単独療法として免疫療法を用いて治療されたヒト被験者の第１ｂ相臨調試験の結果について記載する。
【０２１０】
ヒト被験者でのＧＩ−５００５単独療法の完了した第Ｉｂ相臨床試験では、ＧＩ−５００５の投与は用量依存性の生化学的（ＡＬＴ）正常化、ウイルス量の最大１．４ｌｏｇ１０の減少、及びＨＣＶ特異的Ｔ細胞応答（ＨＣＶ  ＮＳ３及びＨＣＶコア特異的Ｔ細胞応答の両方を含む）を誘導した。重要なことに、これらの結果はプラセボ対照では観察されなかった。第１ｂ相試験は無作為化、二重盲検、プラセボ対照、多施設、用量コホート漸増の治療的試験であって、これでヒト被験者におけるプラセボ投与と比較してＧＩ−５００５単独療法の７用量の皮下投与を評価する。参加した被験者は、高い循環ウイルスレベルを有する慢性ＨＣＶ感染を有し、且つインターフェロンベースのレジメン（リバビリンの併用が有る場合と無い場合のペグ化又は非ペグ化したインターフェロンα）に対して治療ナイーブであるか、又は部分的反応者か若しくは再発者であった。ＧＩ−５００５は５用量を毎週皮下送達され、続いてさらに２回、毎月投与された。ＧＩ−５００５の最初の用量は、４週連続して（５免疫日）１週に１回０．０５ＹＵ（Ｙｅａｓｔ  Ｕｎｉｔｓ：１ＹＵ＝１０７酵母細胞）を、続いてさらに２回毎月の投与量を皮下注射された。その後の用量群は、０．５ＹＵ、２．５ＹＵ、１０．０ＹＵ、２０ＹＵ及び４０ＹＵに漸増された（用量レベル及び計画された群のサイズについては表１を参照のこと）。
【０２１１】
【表３】
2012503011.tif 000005
免疫学的アッセイ（ＥＬＩＳｐｏｔ）を、ベースライン及び３６日（毎週の投与後）、９２日（毎月の投与後）、及び２２５日（最終投与５カ月後）で行った。ＥＬＩＳｐｏｔは、エキソビボでＨＣＶ抗原に対する応答で活性化された被験者Ｔ細胞の数を測定する。ウイルス量及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを被験者の来院ごとに測定した（ベースライン及び８日、１５日、２２日、２９日、３６日、４３日、５７日、６４日、７１日、８５日、９２日、９９日、１６９日、２２５日、３３６日）。ＡＬＴは肝損傷の十分確立された指標であり、肝炎症の代用として機能する。従前の大規模な肝炎の試験では、ＡＬＴレベルの減少及び／又は正常化は改善された肝機能及び連続生検によって判定される肝線維症の軽減と相関していることが示されている。
【０２１２】
ＥＬＩＳｐｏｔの結果
Ｃ型肝炎ウイルスに感染した人のうち、個体の約２０％が医学的介入なしにウイルスを排除する（急性感染）；個体のうち残りの８０％が慢性感染になる。より詳細には、急性感染した患者は広範なＨＣＶ特異的なＴ細胞応答を有するが、慢性感染した患者は弱い細胞免疫応答によって、並びにＨＣＶエピトープに対する減弱且つ狭い免疫応答によって特徴付けられる。本発明者らは、ＧＩ−５００５の投与が、慢性感染した個体におけるＨＣＶ特異的な免疫応答を、医学的介入なしのＨＣＶ感染のクリアランスと関連する免疫応答に似たものに変換すると考えた。
【０２１３】
ＥＬＩＳｐｏｔアッセイは、選択の試験来院で被験者由来の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）で行った。ＰＢＭＣはＨＣＶペプチドとエキソビボで混合して、抗原特異的Ｔ細胞活性の特徴であるインターフェロン−γ（ＩＦＮγ）産生について解析した。非最適化ＨＣＶペプチドのプール及び最適化ＨＣＶペプチドのプールを被験者ＰＢＭＣのエキソビボ刺激について用いた。次いでＰＢＭＣを、エキソビボのペプチド刺激の後に収集して、ＩＦＮγを生じる１００万個のＰＢＭＣあたりの細胞数（又は「スポット」）を、酵素連結免疫吸着（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイを用いて測定した。
【０２１４】
ＥＬＩＳｐｏｔの結果、ＧＩ−５００５治療した患者においては治療緊急ＨＣＶ特異的免疫応答が明らかになったが、プラセボの被験者ではそうではなかった。より詳細には、ＧＩ−５００５での治療によって、弱いＥｌｉｓｐｏｔ応答を有する被験者が、急性感染した患者において観察される応答のタイプと一致して広範且つ強力なＥＬＩＳｐｏｔ応答へと変換され得る（データ未掲載）。十分な血液サンプリングを有する３９例の治療された被験者のうち、９例の被験者（２３％）が非最適化ペプチド条件について及び／又は最適化ペプチド条件について応答者の定義を満たした（データ未掲載）。重要なことに、プラセボ被験者のうちＥＬＩＳｐｏｔアッセイによる陽性の免疫学的応答についてこれらの基準を満たすものはなかった。
【０２１５】
さらに、ＧＩ−５００５治療した被験者における反応者は、ＨＣＶ特異的Ｔ細胞由来であった。その理由は、反応者被験者由来のＴ細胞は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）由来のペプチドプール中のいずれのペプチドとも反応しなかったからである（データ未掲載）。
【０２１６】
ウイルス量の結果
全てのコホート由来の被験者におけるウイルス量の検査によって、６例の被験者（１３％）がウイルス量において−０．７５ｌｏｇ１０〜−１．４ｌｏｇ１０の範囲で減少があったことが明らかになった。プラセボ治療した被験者のうち近いｌｏｇ１０の減少があったものはなかった。
【０２１７】
ＡＬＴ正常化の結果
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）は肝細胞で発現される酵素であり、肝損傷の十分確立された指標である（すなわち、壊死又は損傷による肝細胞の破裂は血流へＡＬＴを放出する）。ＡＬＴ正常化のための用量反応は、ＧＩ−５００５を投与されている患者で観察され、４０ＹＵの用量コホートにおいて５０％に到達し、ここで正常化とは、少なくとも２回連続来院で、正常の上限よりも大きいベースラインＡＬＴを有する患者における正常限界内のＡＬＴと定義される。プラセボ治療した被験者のうちＡＬＴ値が正常化したものはなかった。これらの結果によって、慢性のＨＣＶ感染個体におけるＧＩ−５００５免疫は、治療した被験者について肝機能を改善した（肝障害の進行の軽減）ことが示された。治療に対する改善された転帰についてのこのパラメータは、慢性のＨＣＶ感染個体が通常は肝臓癌を発症するか又は肝移植を要するという点で重大である。
【０２１８】
要旨
まとめると、ＧＩ−５００５単独療法の第Ｉｂ相試験からの結果によって、ＧＩ−５００５単独療法の短期コースは、最大１．４ｌｏｇ１０というウイルス量減少に関連するＨＣＶ特異的な免疫応答及びＡＬＴ正常化を生じることができる（肝障害の進行の減少を示す）。プラセボ治療被験者はこれらの結果のいずれも経験しなかった。従って、この組成物は、進行中のウイルス複製にもかかわらず、ヒト被験者でインビボ単独療法として有意な有効性を示した。
【０２１９】
（実施例２）
以下の実施例は、ヒトでの第２相臨床試験の中間解析からの結果を示しており、これによってインターフェロン及びリバビリンでの併用療法の前のＨＣＶで慢性感染した患者に対する免疫療法組成物の投与が治療ナイーブな患者で急性期ウイルス学的反応（ＲＶＲ）を有意に改善し、且つ高力価ＨＣＶ  ＲＮＡを有する従前の無反応者及び患者に利点を示すということが示している。
【０２２０】
ＧＩ−５００５は、高レベルのＨＣＶ  ＮＳ３及びコア抗原を発現する加熱殺菌Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ丸ごとの免疫療法である。ＧＩ−５００５は、ＨＣＶの免疫クリアランスの速度を改善する目標で抗原特異的な宿主ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞応答を誘発するように設計された。ＧＩ−５００５−０２第２相試験では、遺伝子型１慢性ＨＣＶ感染を有する被験者でのＧＩ−５００５に加えたｐｅｇ−ＩＦＮ／リバビリン（ＳＯＣ）の有効性及び安定性を評価する。
【０２２１】
図１はＳＯＣと組み合わせたＧＩ−５００５の第２相試験の模式的デザインを示す。インターフェロン（ＩＦＮ）又はペグインターフェロン（ペグＩＦＮ）ベースの治療の前に治療ナイーブ又は無反応者であった慢性ＨＣＶ感染を有する遺伝子型１の被験者は適格であった（従前の無効反応者及び再発者は除外した）。患者（全部で１４０例が参加）を１：１に無作為化し、この非盲検試験における治療の従前のコースの間のウイルス学的反応によって層別化した；治療群１  −  ５回の毎週、続いて２回の毎月の４０ＹＵ（１ＹＵ＝１０，０００，０００個の酵母）のＧＩ−５００５の１２週にわたる皮下（ＳＣ）投与（患者に対して４つの別の部位に対する１０ＹＵ用量として投与される）からなる、ＧＩ５００５単独療法の実行、続いて毎月の４０ＹＵのＧＩ−５００５の投与に加えてｐｅｇＩＦＮ／リバビリンからなる三剤併用療法（治療期間はナイーブ患者では４８週であり、且つ従前の無反応者では７２週である）、治療群２  −  ＳＯＣ単独での治療（先行するＧＩ−５００５単独療法なし）。
【０２２２】
ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標）、ペグインターフェロンα−２ａは、組換えα−２ａインターフェロン（適切な分子量［ＭＷ］２０，０００ダルトン）と単一分岐ビス−モノメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖（約ＭＷ４０，０００ダルトン）との共有結合コンジュゲートである。ＰＥＧ部分は、リジンに対する安定なアミド結合を介してインターフェロンα部分に対して単一部位で連結される。ペグインターフェロンα−２ａはおよそ６０，０００ダルトンという分子量を有する。インターフェロンα−２ａは、組換えＤＮＡ技術を用いて産生され、これにはクローニングされたヒト白血球インターフェロン遺伝子が挿入されており、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ中で発現される。
【０２２３】
リバビリンの化学名は１−（β）−Ｄ−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミドである。リバビリンの実験式はＣ８Ｈ１２Ｎ４Ｏ５であり、分子量は２４４．２である。リバビリンは白色からオフ・ホワイトの粉末である。リバビリンは水に自由に溶解し、且つ無水アルコールには僅かに溶解する。リバビリンは合成ヌクレオシド類似体である。リバビリン及びインターフェロン産物の組み合わせがＣ型肝炎ウイルスに対してその効果を発揮する機序は、完全には確立されていない。
【０２２４】
リバビリン及びインターフェロンは、以下の推奨される投与情報に従って投与された。ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標）の推奨用量は、慢性Ｃ型肝炎にリバビリンと組み合わせて用いられる場合、毎週１回１８０μｇ（１．０ｍＬバイアル又は０．５ｍＬのプレフィルドシリンジ）である。リバビリンの毎日用量は、２つの分割用量で経口的に投与される１０００ｍｇ（被験者が７５ｋｇ未満の場合）〜１２００ｍｇ（被験者が７５ｋｇ以上の場合）である。この用量はベースラインの重量及び投与計画の耐容性に依存して患者に対して個別化されるべきである。
【０２２５】
試験は、米国、インド及び欧州で４０の施設で行われた。全ての参加した患者のうち７４％が従前のインターフェロンベースの治療に対してナイーブであり；２６％では従前の治療が失敗である。
【０２２６】
中間解析では、７２例の患者のうち２８例（図１：治療群１）が、三剤併用療法の最初の４週間を終了し、ここで三剤併用療法群では改善された急性期ウイルス学的反応（４週までにＨＣＶ  ＲＮＡが２５ＩＵ／ｍＬとして定義されるＲＶＲ）という傾向があった；全体的（８／２８｛２９％｝対９／６５｛１４％｝；ｐ＝０．０８、ナイーブ（８／１７｛４７％｝対９／４６｛２０％｝；ｐ＝０．０３）、及びベースラインＨＣＶ  ＲＮＡ＞６００，０００ＩＵ／ｍＬ（４／２２｛１８％｝対５／６０｛８％｝ｐ＝０．１９）。治療群２における６５／６８の患者は、ＳＯＣの最初の４週間を完了した。図２は、ＲＶＲの率を比較する。いずれの治療群でも従前の無反応者でＲＶＲ反応者はなかった。第２相ウイルス動態の勾配（８日目〜２９日目；図３を参照のこと）によって、従前のＩＦＮ無反応者（−１．１６  ｌｏｇ１０／ｍｏ．対−０．８８  ｌｏｇ１０／ｍｏ；ｐ＝０．０２）及びベースラインでＨＣＶ  ＲＮＡ＞６００，０００ＩＵ／ｍＬの患者（−１．９２  ｌｏｇ１０／ｍｏ．対−１．７６  ｌｏｇ１０／ｍｏ；ｐ＝０．３６）において、ＳＯＣと比較して三剤併用療法の利点が示された。三剤併用療法は、解析の時間まで耐容性は良好であり、ＧＩ５００５関連の重度の有害事象も、用量を制限する毒性も、有害事象に起因する中断もなかった。
【０２２７】
従って、この中間解析では、本発明者らは、治療ナイーブな患者においてＲＶＲ率で統計学的に有意な相違を観察しており（８／１７｛４７％｝対９／４６｛２０％｝；ｐ＝０．０３）三剤併用療法が好ましく、免疫クリアランスが重要な早期且つ予測的なウイルス学的エンドポイントに影響を有しているという考えが支持されている。ＲＶＲはＳＯＣの完了後、ＳＶＲの強力な正の予測値（９０〜１００％におよぶ）を有することが示されている（Ｐｏｏｒｄａｄら、Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆ  Ｄｉｓ  ２００８，Ｊｅｎｓｅｎら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００６，Ｙｕら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００８）。ＩＦＮベースの治療に対する従前の非応答がある患者は今までいずれの治療群でもＲＶＲに達したものはいなかったが、本発明者らはまた、三剤併用療法が好ましい無反応者について８日目〜２９日目のウイルスクリアランスの運動速度における統計学的に有意な相違も観察した（−１．１６  ｌｏｇ１０／ｍｏ．対−０．８８  ｌｏｇ１０／ｍｏ；ｐ＝０．０２）。これらの動態的相違が前へ１２週にわたってモデリングされる場合、これは−０．８０  ｌｏｇ１０という治療効果を予測させ、且つ三剤併用療法群では１２週まで、より良好なＥＶＲ（２  ｌｏｇ１０又はそれより良好な減少）及び可能性としてはそれより良好な完全ＥＶＲ率（ＨＣＶ  ＲＮＡについては陰性）を予測してもよい。
【０２２８】
ＧＩ５００５に加えてｐｅｇＩＦＮ／リバビリンでの三剤併用療法は、十分耐容され、且つ慢性の遺伝子型１のＨＣＶを有するナイーブな患者でＳＯＣと比較して改善されたＲＶＲ率を示す生成された予備的データを有する。第２相のウイルスクリアランスの動態はまた、従前のＩＦＮ無反応者においてこのストラテジーの早期の好ましい効果を示す。
【０２２９】
慢性感染した患者におけるＨＣＶの改善された免疫クリアランスは、ウイルス学的なエンドポイントによって測定した場合、臨床的な転帰を改善すると期待される。このアプローチの重要性は、免疫クリアランスの増強の機構が持続的な追加投与で持続可能であり、且つウイルス複製を阻害することによって主に作用する他の治療様式（ＩＦＮベースの治療及び低分子阻害物質類）と相補的又は相乗的なものであるということである。
【０２３０】
ＧＩ−５００５−０２中間データは早期ウイルス学的エンドポイントを評価するが、本発明者らは、全長ＳＯＣの状況でＨＣＶの改善された免疫クリアランスがＥＶＲ及びＳＶＲを含む後期のウイルス学的エンドポイントによって測定した場合、臨床転帰に対して重要な影響を有し得るという本発明者らの考えを支持する重要な早期の治療効果が、それらによって示されていると考える。
【０２３１】
（実施例３）
以下の実施例は、インターフェロン／リバビリン治療と組み合わせたＧＩ−５００５免疫療法で治療された被験者の第２相臨床試験の完全な４週ウイルス学的エンドポイント解析からの結果を示しており、ここではインターフェロン及びリバビリンでの併用療法の前のＨＣＶで慢性感染した患者に対する免疫療法組成物の投与が急性期のウイルス学的反応（ＲＶＲ）の改善に向かう傾向を生じること、及び全ての主要な患者サブグループにおける連続した改善された第２相ウイルスクリアランス動態が生じることが示されている。
【０２３２】
この実施例は、インターフェロン／リバビリンでの４週の治療の完了後の実施例２に記載された第２相臨床試験の両方の治療群の全ての患者の解析について記載する。結果は、完全なデータセットについての安全性、ウイルス動態及びＲＶＲである。
【０２３３】
４週の治療によるＰＣＲアッセイによるＨＣＶ  ＲＮＡ陰性（＜２５ＩＵ／ｍＬ）として定義される、急性期のウイルス学的反応（ＲＶＲ）は、ＳＯＣの完全にすべての期間継続している患者の将来の持続的ウイルス学的反応ＳＶＲとして極めて予測的なものである。４週のＲＶＲ率を三剤併用療法及びＳＯＣ群で現在の試験で評価した（図４）。２．６倍の利点がナイーブ＋高負荷の患者（インターフェロン治療に対してナイーブであって、且つ試験のベースラインで高いウイルス量を有した患者）で観察され、ここで三剤併用療法が好ましい傾向であった（２０．０％  対  ７．７％，ｐ＝０．１）（図４；「高ウイルス量（ナイーブ）」。ほとんどのナイーブ＋低負荷の患者（インターフェロン治療に対してナイーブであって、且つ試験のベースラインで低いウイルス量を有した患者）は両方の治療群でＲＶＲを達成し、このことが、「全てのナイーブな群」において三剤併用療法について観察される利点が小さいことに寄与する（高い負荷及び低い負荷の患者の両方を含む、試験の開始でのインターフェロン治療に対してナイーブであった患者の組み合わせ群；図４、「ＩＦＮ  ナイーブ」を参照のこと（２６．０％対１９．６％）。いずれの治療群由来の無反応者の患者でもＲＶＲは観察されず、それによって全ての患者の解析で低い絶対的ＲＶＲ率が単独群として生じる（１９．１％対１３．８％）（図４、「全体的」を参照のこと）。
【０２３４】
第２相ウイルス動態のクリアランスは、ＨＣＶ感染細胞の肝リザーバーでのクリアランスの速度を反映する。８日は第２相ウイルス動態の算出のためのベースラインとみなされ、１５日、２２日及び２９日に得たサンプルを用いて、クリアランスの勾配を、反復測定線形混合効果モデルを用いて確立して、８日〜２９日の変化を算出した。欠けている８日のＨＣＶのＲＮＡ値は、１５日又は２２日の値によって入力された。解析には、８日目（実際上又は入力）及び２９日の少なくともＨＣＶのＲＮＡ値を有する全ての患者を含む。図５〜９に示されるとおり、全ての主な患者のサブグループは、末梢ウイルス減少の第２相の動態の率の増大を示し、ここではＳＯＣよりも三剤併用療法が好ましい。より詳細には、３つのサブグループは、統計学的有意差を達成した：（１）全ての患者を単一群として評価（図５、全ての治療）；（２）インターフェロンベースの治療に対して従前の無反応者（図６、従前の無反応者）；及び試験のベースラインで高いウイルス量を有する患者（図８、ベースラインで高ウイルス量）、ここでそれぞれｐ＝０．０２、ｐ＝０．００８、及びｐ＝０．０２。２つのサブグループは、三剤併用療法が好ましいという強い傾向を示した：（１）インターフェロン−ナイーブな患者（図７、インターフェロン−ナイーブ）、及びインターフェロンナイーブであって、且つ試験のベースラインで高いウイルス量を有する患者（図９，インターフェロン−ナイーブ、且つ、ベースラインで高ウイルス量）、これがそれぞれｐ＝０．０８及びｐ＝０．０６。
【０２３５】
１２週のＧＩ−５００５単独療法期の間、有害事象に起因して治療を中断した患者はなかった。ＳＯＣとの三剤併用療法併用の間、現在までいずれの治療群でも死亡例はなく、免疫療法関連の重篤な有害事象も用量を制限する毒性事象もなかった。ＧＩ−５００５に関連していると試験責任者がみなす、最も一般的に報告される重大ではない有害事象（５％を超える発生率と定義される）としては注射部位紅斑（１２％）、疲労感（９％）及び頭痛（９％）が挙げられた。従って、ＧＩ−５００５は十分耐容され、且つ臨床試験では現在まで安全である。
【０２３６】
結論として、ＧＩ−５００５免疫療法に加えてＳＯＣ（インターフェロン及びリバビリン）の組み合わせは、高いベースラインのＨＣＶ  ＲＮＡレベルを有する治療ナイーブな患者においてＳＯＣ単独と比較して、ＲＶＲ率の２．６倍の改善を示した。これに加えて三剤併用療法では、インターフェロンベースの治療に対する従前の無反応者を含む全ての関連のサブグループにおいてＳＯＣ単独と比較したウイルスクリアランスの線形速度における４週にわたる約２倍の改善が実証された（０．２４〜０．３２ｌｏｇ１０／月）。クリアランスのこの改善率は、完全な４８〜７２週の投与計画について維持される場合ウイルスの３〜４というｌｏｇ１０の改善された減少を投影する。第２相ウイルスクリアランス動態の速度の改善は、感染された肝細胞のＧＩ−５００５−誘導性の改善された排除の提唱された機序と一致している。従って、ＳＯＣとの併用は、ＳＶＲ率の改善を生じ得、且つまた最適化された背景の治療としても機能し得る新規な三剤併用療法アプローチであると考えられ、ここには他の新規な抗ウイルス剤が追加され得る。さらに、低分子ポリメラーゼ及びプロテアーゼ阻害物質類などのウイルス複製の種々の阻害物質類との併用によって、現在の標準治療の構成要素（ペグ化ＩＦＮ又はリバビリン）を使わないか又は排除する将来の能力が生じる場合がある。
【０２３７】
（実施例４）
以下の実施例は、インターフェロン／リバビリン療法と組み合わせたＧＩ−５００５免疫療法で治療された被験者の第２相試験の早期ウイルス学的エンドポイント解析について記載する。
【０２３８】
本実施例は、インターフェロン／リバビリン療法（三剤併用療法）と組み合わせたＧＩ−５００５免疫療法で治療された被験者の第２相臨床試験の完全な１２週のウイルス学的エンドポイント解析（ＥＶＲ及びｃＥＶＲ）からの結果を示しており、且つインターフェロン及びリバビリンでの併用療法の前のＨＣＶに慢性感染した患者に対する免疫療法組成物の投与が、特定の患者サブグループにおける早期ウイルス学的反応（ＥＶＲ）の強い改善傾向を生じることを示す。より詳細には、この実施例は、インターフェロン／リバビリンでの治療の１２週間の完了後、実施例２に記載される第２相臨床試験の両方の治療群における全ての患者の解析について記載する。結果は、完全データセットの安全性及びＥＶＲを示す。
【０２３９】
中間解析の時間のＥＶＲについて評価可能であった三剤併用療法被験者の７２例のうちの５２例及びＳＯＣ被験者の６８例のうち６５例に対して報告する中間結果（１２週でのＨＣＶ  ＲＮＡにおける２以上のｌｏｇ１０減少、最終観察は前向きに実行）を評価した。詳細には、患者が一旦、インターフェロン／リバビリン療法の開始後１２週に達すれば、ウイルス力価を測定した。この中間解析では、完全患者コホートの約８４％を含んでおり、三剤併用療法は、一群として、全てのナイーブな被験者（３４／３６｛９４．４％｝対４０／４６｛８７％｝ｐ＝０．２３）及び高いベースラインのウイルス量を有するナイーブ被験者（＞６００，０００ＩＵ／ｍＬ）（２８／３０｛９３．３％｝対３５／４１｛８５．４％｝ｐ＝０．２６）において改善されたＥＶＲという傾向を示した。ＥＶＲは従前の無反応被験者の小さいサブセットで三剤併用療法及びＳＯＣについて相当した。従って、中間解析は、ＳＯＣ群における異常に高いＥＶＲ率にかかわらず（ＳＯＣを用いて他の報告された肝炎臨床試験と比較して）、インターフェロン−ナイーブな被験者（この試験の前にインターフェロンで治療されていない被験者）に改善されたＥＶＲ率を示した。これらのデータは、改善された４週でのＲＶＲ率と一致した。
【０２４０】
その後、一旦、患者の全体のコホートがインターフェロン／リバビリン療法の開始後１２週のポイントに達すれば、ウイルス力価を第２相臨床試験の両方の治療群で患者の完全なセットについて評価した。図１０Ａ及び１０Ｂに示される結果によって、ＳＯＣ治療群と比較において、一群として、インターフェロン−ナイーブ患者の試験の免疫療法治療群における改善されたＥＶＲに向かう強い傾向が継続して示された。結果は、この試験では全ての患者に対して（図１０Ａ）、及び米国で臨床試験施設での患者のみに対して（図１０Ｂ）評価して、治療の地理的な位置に基づく転帰のなんらかの潜在的な相違を探した。
【０２４１】
図１０Ａ及び１０Ｂは、ＳＯＣ単独を投与されたナイーブなサブグループ（８５〜８７％のナイーブ又は８２〜８５％のナイーブＨＶＬがＥＶＲに達する）と比較して、三剤併用療法を投与されたナイーブなサブグループにおいてＥＶＲ率の８〜１２％の改善があることが示されている（９４〜９５％のナイーブ又は９３〜９４％のナイーブ高ウイルス量（ＨＶＬ）がＥＶＲに達する）。早期時点で示される結果とまとめて、ウイルスの動態、ＲＶＲ及びＥＶＲにおける改善は、ＳＶＲによって測定された場合、ＳＯＣと比較して三剤併用療法についてのウイルス学的反応の利点をもたらすことが期待される。
【０２４２】
（実施例５）
以下の実施例は、インターフェロン／リバビリン療法と組み合わせたＧＩ−５００５免疫療法で治療された被験者の第２相試験の治療エンドポイント解析の終わりを記述する。
【０２４３】
この実施例では、インターフェロン／リバビリン療法と組み合わせたＧＩ−５００５免疫療法（三剤併用療法）で治療された被験者の第２相臨床試験の完全４８週ウイルス学的エンドポイント解析（治療反応の終了時、又はＥＴＲ）からの結果が示されており、インターフェロン及びリバビリンでの併用療法の前のＨＣＶに慢性感染した患者に対する免疫療法組成物の投与が全ての患者の群（インターフェロン−ナイーブ及び無反応者組み合わせ）で、及びまたインターフェロン−ナイーブ患者のサブグループで治療反応の終わり（ＥＴＲ）の改善を生じることが示している。より詳細には、本実施例は、インターフェロン／リバビリンでの治療の４８週の終了後、実施例２に記載される第２相臨床試験の両方の治療群の全ての患者の解析について記載する。
【０２４４】
より詳細には、４８週の三剤併用療法は、十分耐容され、ここでは重大な新規な毒性は観察されず、以下の各々の群における有害事象に起因するＳＯＣ中止の回数は等価であった：三剤併用−５／６８（７．３％）及びＳＯＣ−５／６５（７．７％）。図１３に示されるとおり、治療反応の終わりにおける改善（ＨＣＶ  ＲＮＡ＜２５  ＩＵ／ｍＬ  ４８週でのＰＣＲアッセイによる）が、ＳＯＣ単独（全て無作為化）と比較して三剤併用療法群でナイーブな遺伝子型１患者で観察された；三剤併用−３７／５３（７０％）対ＳＯＣ−２７／４９（５５％）、片側フィッシャー直接確率検定ｐ＝０．０９。同様の治療転帰が観察され、全ての患者を一群として示している（ナイーブ及び無反応者をまとめて；データ未掲載）。完全著効（ＨＣＶ  ＲＮＡ  ＜２５ＩＵ／ｍＬ）を、４８週で、無反応者で評価した（全て無作為化）；三剤併用−６／１９（３２％）対ＳＯＣ−６／１９（３２％）。人種、ベースラインウイルス量、ＳＯＣコンプライアンス、及び中断で、観察される治療効果に対する重大な影響は明らかにならなかった。
【０２４５】
ｍＩＴＴ（包括解析変法）解析（試験で少なくとも１回の治療用量を実際に投与された患者のみを解析）によって、１５％という一貫した治療効果が示され；三剤併用３７／５０（７４％）対ＳＯＣ  ２７／４６（５９％）（図１４Ａ）、ここでは現在報告されたプロテアーゼ阻害物質三剤併用療法投与計画に相当する４８週のウイルス学的完全著効率であった。同様の治療効果がｍＩＴＴ解析を用いて全ての患者（ナイーブ及び無反応者）で観察された（図１４Ｂ）。
【０２４６】
これらの結果、ＳＯＣ単独と比較してＧＩ−５００５三剤併用療法を与えられた患者での４８週のウイルス学的著効率の実質的な改善が示している。これは、長期の実質的な相違、臨床的に意味のあるウイルス学的エンドポイント、例えば、ウイルス学的著効（反応）をもたらす治療ワクチンの初めての例である。さらに、ＧＩ−５００５の免疫媒介性の作用機序に基づいて、ＧＩ−５００５三剤併用療法を与えられる患者は、治療期間後に継続的な利点を経験すると期待され、さらに良好なＥＴＲからＳＶＲへの変換を経験するはずである。全体として、これらのデータによって、ＧＩ−５００５三剤併用療法の使用、及びＧＩ−５００５について他のＨＣＶ阻害性剤との新規な併用ストラテジーが支持される。
【０２４７】
（実施例６）
以下の実施例は、インターフェロン／リバビリン療法と組み合わせたＧＩ−５００５免疫療法で治療された被験者の第２相試験の持続的ウイルス学的エンドポイント解析について記載する。
【０２４８】
治療の終わり後６ヶ月で、ウイルス力価を測定する。少なくともナイーブな患者を含む、ある傾向、強い傾向又は統計学的に有意な数のいずれかに相当する、さらに多数の患者がＳＯＣ治療群よりも試験の免疫療法治療群でＳＶＲを達成することが期待される。従って、試験（三剤併用療法）の免疫療法における患者のうち、再発者の率はＳＯＣのみの治療群よりも低い。改善された肝機能及び／又は肝障害の低減も、ＡＬＴ解析、Ｆｉｂｒｏｔｅｓｔスコア及び／又は組織生検によって測定した場合、ＳＯＣ群と比較して、三剤併用療法を受けている患者の群で期待される。
【０２４９】
（実施例７）
以下の実施例は、インターフェロン／リバビリン療法と組み合わせた免疫療法を用いて治療された被験者の免疫学的解析について記載する。
【０２５０】
要するに、血液サンプルをベースラインで及び引き続く時点で全ての患者から収集し、そして末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を収集して保管する。免疫学的アッセイ（ＥＬＩＳｐｏｔ）を各々の時点由来の各々のＰＢＭＣで行う。ＥＬＩＳｐｏｔは、エキソビボでＨＣＶ抗原に応答して活性化された被験者Ｔ細胞数を測定する。
【０２５１】
より詳細には、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイは、選択の試験来院で被験者由来の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）で行う。ＰＢＭＣを、エキソビボでＨＣＶ抗原配列由来の種々のＨＣＶペプチドと混合され、抗原特異的なＴ細胞活性化の特徴であるインターフェロン−γ（ＩＦＮγ）産生について解析する。非最適化ＨＣＶペプチドのプール及び最適化ＨＣＶペプチドのプールを、被験者ＰＢＭＣのエキソビボ刺激のために用いる。対照としては、ホルボールミリステート酢酸塩（ｐｈｏｒｂｏｌ  ｍｙｒｉｓｔａｔｅ  ａｃｅｔａｔｅ）（ＰＭＡ）及びイオノマイシンでの分裂促進因子の刺激、ＣＥＦペプチドプール、ＨＩＶｇａｇペプチドプール及び／又は培地単独が挙げられる。いくつかのアッセイでは、十分な数の細胞次第で、ＧＩ−５００５、ＧＩ−５００３及びＹＶＥＣと命名された免疫療法産物も、ＰＢＭＣのインビトロの再刺激に用いられてもよい。次いで、ＰＢＭＣを、エキソビボのペプチド刺激後に回収して、ＩＦＮγを産生する１００万個のＰＢＭＣあたりの細胞数（又は「スポット」）を、酵素連結免疫結合（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイを用いて測定する。いくつかのアッセイでは、ＰＢＭＣのＣＤ４及びＣＤ８のＴ細胞枯渇をアッセイの前に行う。
【０２５２】
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ由来の培養上清を、ＰＢＭＣの一晩の刺激後に収集して、将来解析するため−８０℃で保管する。上清を選択するために、ルミネックスコーポレーション（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）（テキサス州オースティン）由来のイムノアッセイを用いる解析を複数の選択サイトカイン及びＨＣＶに対する緊急のＴ細胞媒介性反応に関連した他のマーカーについて、上記のように誘導した培養上清を用いて行う。複数項目同時解析のプロファイリングビーズによって、パネル中で１反応あたり最大３０個の異なるサイトカイン及びケモカインの検出が可能になる。１例の患者あたり最大５時点から選択上清を行う。
【０２５３】
イムノアッセイの結果、免疫療法の結果として被験者中で誘発されるＨＣＶ特異的免疫応答が明らかになると期待される。
（実施例８）
以下の実施例は、インターフェロン／リバビリン療法と組み合わせたＧＩ−５００５免疫療法で治療した被験者での肝分析の結果について記載する。
【０２５４】
ウイルス量及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルは、毎回の被験者の来院の際に継続して測定した（ベースライン及び各々のその後の来院）。ＡＬＴは、肝損傷の十分確証された指標であって、肝炎症の代用として機能する。従前の大規模肝炎試験では、ＡＬＴレベルの低下及び/又は正常化は、連続生検によって判定されるとおり、改善された肝機能及び減少した肝線維症と相関することが示されている。ＡＬＴ正常化は、１日目にＡＬＴ＞ＵＬＮである患者について継続的な試験来院の際に少なくとも２のＡＬＴ値＜ＵＬＮ（正常の上限）と定義される。
【０２５５】
インターフェロン／リバビリン治療の開始後１２週（図１１Ａ）及びインターフェロン／リバビリン療法の開始後２４週（図１１Ｂ）でのＡＬＴ値の結果によって、インターフェロン／リバビリン療法と組み合わせたＧＩ−５００５免疫療法（三剤併用療法）が、治療ナイーブな患者のサブグループ（ナイーブ及びナイーブＨＶＬ）でＡＬＴ正常化に１０〜１５％の改善を示すことが示された。
【０２５６】
ＡＬＴレベルに加えて、臨床試験の被験者における肝機能及び肝障害をさらに評価するために、全ての患者をアクチテスト及びフィブロテストによって、インターフェロン／リバビリン治療の開始後２４週で評価した。アクチテストは、アクチテストによって測定した場合、肝壊死を中等度から最小限に、又は肝壊死を重度から中等度若しくは最小限に改善した患者の割合を決定する。フィブロテストは、フィブロテストによって測定した場合、線維症を中等度から最小限に、又は線維症を重度から中等度若しくは最小限に改善した患者の割合を決定する。
【０２５７】
図１２Ａに示されるとおり、三剤併用療法はナイーブな患者サブグループにおいて最大１４％の利点を示し、ここではＳＯＣと比較して血清アクチテストスコアは全面的に改善された。図１２Ｂは、三剤併用療法では、ＳＯＣと比較して、血清フィブロテストスコアが絶対的に改善された患者の割合が増大し（最大２倍）、血清フィブロテストスコアが絶対的に悪化する患者の割合は減少した（５０％程度の大きさの減少）ことが示している。
【０２５８】
ＡＬＴ正常化の値はまた、三剤併用療法及びＳＯＣ群においてインターフェロン／リバビリン治療の開始後４８週で評価した（図１５Ａ〜１５Ｅ）。４８週では（ＥＴＲ）、この結果、インターフェロン／リバビリン治療（三剤併用療法）と組み合わせたＧＩ−５００５免疫療法は、この療法を与えられた被験者では、ＳＯＣ単独を与えられた被験者と比較してＡＬＴ正常化の顕著な改善が生じたことが示された。この結果は、見られた全ての被験者で全体として観察されるだけでなく、従前の治療歴に基づいた種々のサブグループで観察された。
【０２５９】
図１５Ａは、４８週で、三剤併用療法がＳＯＣ単独を投与されている全ての被験者の群と比較において、全ての被験者の群でのＡＬＴ正常化において２１．１％の改善を示したことを表しているグラフである。
【０２６０】
図１５Ｂは、４８週で、三剤併用療法がＳＯＣ単独を投与されているベースラインでウイルス量が高い全ての被験者の群と比較において、ベースラインで高いウイルス量を有する全ての被験者の群でのＡＬＴ正常化において１９．５％の改善を示したことを表しているグラフである。
【０２６１】
図１５Ｃは、４８週で、三剤併用療法がＳＯＣ単独を投与されているインターフェロン−ナイーブな被験者の群と比較において、インターフェロンナイーブな被験者の群でのＡＬＴ正常化において２３．５％の改善を示したことを表しているグラフである。
【０２６２】
図１５Ｄは、４８週で、三剤併用療法がＳＯＣ単独を投与されているベースラインでウイルス量が高いインターフェロン−ナイーブの被験者の群と比較において、ベースラインで高いウイルス量を有したインターフェロン−ナイーブ被験者の群でのＡＬＴ正常化において２２．３％の改善を示したことを表しているグラフである。
【０２６３】
図１５Ｅは、４８週で、三剤併用療法がＳＯＣ単独を投与されている従前の無反応者の群と比較において、従前の無反応者の群でのＡＬＴ正常化において１３．３％の改善を示したことを表しているグラフである。
【０２６４】
全体として、肝機能及び／又は肝障害の分析によって、肝組織学における利点（対になった生検のアセスメントによって測定される）が、ＳＯＣ単独を投与されている患者と比較してインターフェロン／リバビリン療法と組み合わせたＧＩ−５００５免疫療法を受けている患者で示している。従って、免疫療法は、Ｃ型肝炎ウイルスに慢性的に感染している患者で肝機能を改善し、及び／又は肝障害を阻害すると考えられ、これは肝硬変及び／又は肝臓癌を含む長期の肝機能を改善し、且つ肝炎の長期影響を軽減すると予想される。この試験における患者の追加の肝アセスメントによってこれらの結果が確認されることが期待される。
【０２６５】
本発明の種々の実施形態が詳細に記載されているが、これらの実施形態の変更及び適合が当業者になされ得ることは明らかである。しかし、このような変更及び適合が、添付の特許請求の範囲に示される本発明の範囲内であることは、明らかに理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2012503011.tif 000030