(57)【要約】  ４，５−二置換−オキシ−２−メチル−３，６−ジオキソ−シクロヘキサ−１，４−ジエニルアルキル酸のエステルを化学的及び／又は酵素的に製造した。エステルによっては、メラノサイトの細胞毒性が改善された。改善された細胞毒性特性は、エステル類似体がそれらの対応する酸よりも皮膚に生理的親和性があり且つ皮膚に対する刺激が少ないことと一致している。
2012503601.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式１：
【化１】
2012503601.tif 000011
（式中、Ｒ及びＲ1は、それぞれ独立して、Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり；Ｒ2はＣ6〜Ｃ22アルキル、Ｃ6〜Ｃ22アルケニル、Ｃ6〜Ｃ20ジエニル、Ｃ6〜Ｃ22トリエニル、Ｃ8〜Ｃ22テトラエニル又はそれらの混合物であり；ｎは２〜１８である）
で表されるエステル及び皮膚科学的に許容され得る担体を含んでなる組成物。
【請求項２】
前記エステルが少なくとも０．００１重量％の量で存在する請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記エステルが約０．００１〜約１０重量％の量で存在する請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記エステルが約０．０１〜約５．０重量％の量で存在する請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
Ｒ2のアルキル、アルケニル、ジエニル、トリエニル及びテトラエニル基が、炭素数約２２以下の脂肪族炭化水素である請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記脂肪族炭化水素が２２個以下の炭素原子を含み、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、シアノ、Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル、Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルオキシ、ヒドロキシ、アリール、ヘテロアリール、チオール、チオエーテル及びハロゲンからなる群から選ばれた１〜３個の基で置換されている請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物がローション、クリーム、ゲル、軟膏、石けん又はスティックである請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
ａ）式２：
【化２】
2012503601.tif 000012
（式中、Ｘは−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ又は−ＯＲ3であり；Ｒ及びＲ1は、それぞれ独立して、Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり；ｎは２〜１８であり；Ｒ3はＣ1〜Ｃ6−アルキル又は置換Ｃ1〜Ｃ6−アルキルである）
の酸、無水物又は酸誘導体を、式３：
【化３】
2012503601.tif 000013
（式中、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6は、それぞれ、炭素数約６〜約２２の脂肪族炭化水素である］
のアルコールと、有機溶媒の存在下で、反応させて、少なくとも１種のエステルを形成せしめ；そして
ｂ）前記の少なくとも１種のエステルを単離する
ことを含んでなるエステルの製造方法。
【請求項９】
前記溶媒がジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサンもしくはリモネン、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ジブロモエタン、テトラクロロエチレン、クロロベンゼン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド又はそれらの混合物である請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記反応を約−１００℃と溶媒の沸点との間の温度で行う請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記温度が約０℃と約６０℃との間である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記温度が約２０℃と約５０℃との間である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ａ）が酵素を更に含む請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記酵素がプロテアーゼ、リパーゼ又はエステラーゼである請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の組成物の有効量を皮膚に適用することを含んでなる、皮膚疾患の治療方法。
【請求項１６】
前記皮膚疾患が肌荒れ、皮膚の皺、光損傷を受けた皮膚、皮膚の色素過剰沈着、皮膚刺激及び皮膚炎症反応からなる群から選ばれる請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４，５−二置換−オキシ−２−メチル−３，６−ジオキソ−シクロヘキサ−１，４−ジエニルアルキル酸のエステル、このようなエステルの製造方法及びこのようなエステルを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
長鎖アルコールは化粧品及びパーソナルケアにおいて多く利用されている。その一例が、肌荒れ、小じわ（fineline）及びしわ（wrinkle）を低減することが知られている強力な抗酸化剤、イデベノン（idebenone）である。更に、イデベノンは光損傷を受けた皮膚を改善することができる（非特許文献１）。この物質は保護作用及び再生作用を誘導し（特許文献１）、皮膚の色素沈着過剰を低減し（特許文献２）、そしてヒトの皮膚の刺激及び／又は炎症反応を低減する（特許文献３）こともクレームされている。
【０００３】
イデベノン（２−（１０−ヒドロキシデシル）−５，６−ジメトキシ−３−メチルシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン）は、対応する酸（イデベノン酸；１０−（４，５−ジメトキシ−２−メチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエニル）デカン酸）に酸化されることができる。イデベノン酸のエステル誘導体は、このオレンジ色の固体の物理的性質を改善することができる。更に、イデベノン酸のエステルは、エステルの性質によって、皮膚において容易に加水分解して又は容易には加水分解しないで、対応するアルコールと共にイデベノン酸を生成し；アルコールによっては、加水分解生成物も有益である場合がある。
【０００４】
イデベノン酸エステルのようなエステルの古典的化学的製造は、アルコールと、イデベノン酸、イデベノン酸ハロゲン化物又はイデベノン酸無水物とのいずれかの反応を含む。エステルを製造する方法は、温和〜過酷な化学的手法を用いて、且つ／又は酵素によって、実施できる。短鎖イデベノン酸エステルの報告は少ない（即ちメチル、エチル及びベンジル；非特許文献２及び３）。しかし、より長鎖のアルコールに由来するイデベノン酸エステルは欠けている。長鎖エステル類似体は、イデベノン酸よりも皮膚に対して生理的親和性があり、皮膚に対する刺激が少ないと考えられる（非特許文献４及び５）。従って、４，５−二置換−オキシ−２−メチル−３，６−ジオキソ−シクロヘキサ−１，４−ジエニルアルキル酸のエステルをベースとする組成物は不所望な副作用（即ち皮膚刺激）を低減すると考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第６，７５６，０４５号
【特許文献２】米国特許出願公開公報第２００５／０１７５５５９号
【特許文献３】米国特許出願公開公報第２００５／０１９７４０７号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ＭｃＤａｎｉｅｌ，Ｄ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  ２００５，４（３），１６７−１７３
【非特許文献２】Ｏｋａｍｏｔｏ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９８２，８，２７９７−２８１９
【非特許文献３】Ｏｋａｍｏｔｏ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１９８２，６８２，１４５−１５１
【非特許文献４】Ｓｃｈｕｒｅｒ，２００２，Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  ４７：１９９−２０５
【非特許文献５】Ｋｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ａｌｔｅｒｎ．Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｓｔ．Ｅｘｐｅｒ．５：２０１−２１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的はそのような化合物及び組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の第１の態様は、一般式１：
【０００９】
【化１】
2012503601.tif 000003
【００１０】
（式中、Ｒ及びＲ1は、それぞれ独立して、Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり；Ｒ2はＣ6〜Ｃ22アルキル、Ｃ6〜Ｃ22アルケニル、Ｃ6〜Ｃ20ジエニル、Ｃ6〜Ｃ22トリエニル、Ｃ8〜Ｃ22テトラエニル又はそれらの混合物であり；ｎは２〜１８である）
で表されるエステル及び皮膚科学的に許容され得る担体を含んでなる組成物に関する。
【００１１】
別の態様は、
ａ）式２：
【００１２】
【化２】
2012503601.tif 000004
【００１３】
（式中、Ｘは−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ又は−ＯＲ3であり；Ｒ及びＲ1は、それぞれ独立して、Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり；ｎは２〜１８であり；Ｒ3はＣ1〜Ｃ6−アルキル又は置換Ｃ1〜Ｃ6−アルキルである）
の酸、無水物又は酸誘導体を、式３：
【００１４】
【化３】
2012503601.tif 000005
【００１５】
（式中、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6は、それぞれ、炭素数約６〜約２２の脂肪族炭化水素である）
のアルコールと、有機溶媒の存在下で、反応させて、少なくとも１種のエステルを形成せしめ；そして
ｂ）前記の少なくとも１種のエステルを単離する
ことを含んでなるエステルの製造方法に関する。
【００１６】
更に別の態様は有効量の請求項１に係る組成物を皮膚に適用することを含んでなる、皮膚疾患の治療方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図は種々のイデベノン酸エステルの細胞毒性を示すグラフ図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、一般式１：
【００１９】
【化４】
2012503601.tif 000006
【００２０】
（式中、Ｒ及びＲ1は分岐鎖及び直鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルから選ばれ；Ｒ2は置換及び非置換の分岐鎖及び直鎖飽和Ｃ6〜Ｃ22アルキル、置換及び非置換の分岐鎖及び直鎖飽和Ｃ6〜Ｃ22アルケニル、置換及び非置換の分岐鎖及び直鎖飽和Ｃ6〜Ｃ20ジエニル、置換及び非置換の分岐鎖及び直鎖飽和Ｃ6〜Ｃ22トリエニル並びに置換及び非置換の分岐鎖及び直鎖飽和Ｃ8〜Ｃ22テトラエニル又はそれらの混合物から選ばれ；ｎは２〜１８である）
で表される一連の新規エステル及び当該エステルを含む組成物に関する。
【００２１】
Ｒ2で表すことができるアルキル、アルケニル、ジエニル、トリエニル及びテトラエニル基は炭素数約２２以下の直鎖又は分岐鎖脂肪族炭化水素であることができ、例えばＣ1〜Ｃ6−アルコキシ、シアノ、Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル、Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルオキシ、ヒドロキシ、アリール、ヘトロアリール、チオール、チオエーテル及びハロゲンから選ばれた１〜３個の基で置換されることができる。用語「Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ」、「Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル」及び「Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルオキシ」はそれぞれ、構造−ＯＲ3、−ＣＯ2Ｒ3及び−ＯＣＯＲ3（式中、Ｒ3はＣ1〜Ｃ6−アルキル又は置換Ｃ1〜Ｃ6−アルキルである）に対応する有機官能基を示すのに用いる。
【００２２】
前記エステルは、式２：
【００２３】
【化５】
2012503601.tif 000007
【００２４】
（式中、Ｘは−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ又は−ＯＲ3であり；Ｒ及びＲ1は分岐鎖及び直鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり；ｎは２〜１８であり；Ｒ3はＣ1〜Ｃ6−アルキル又は置換Ｃ1〜Ｃ6−アルキルである）
の酸、無水物又は酸誘導体と式３：
【００２５】
【化６】
2012503601.tif 000008
【００２６】
（式中、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6は、それぞれ、炭素数約２２以下の、例えば炭素数約６〜約２２の直鎖又は分岐鎖脂肪族炭化水素であることができ、例えばＣ1〜Ｃ6−アルコキシ、シアノ、Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル、Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルオキシ、ヒドロキシ、アリール、ヘテロアリール、チオール、チオエーテル及びハロゲンから選ばれた１〜３個の基で置換されることができる）
のアルコールとの反応によって製造できる。用語「Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ」、「Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル」及び「Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルオキシ」は、それぞれ、構造−ＯＲ3、−ＣＯ2Ｒ3及び−ＯＣＯＲ3（式中、Ｒ3はＣ1〜Ｃ6−アルキル又は置換Ｃ1〜Ｃ6−アルキルである）に対応する有機官能基を示すのに用いる。
【００２７】
一態様において、この方法は、式２で表される化合物と、式３で表される化合物とを、有機溶媒の存在下で、反応させることを含み；反応時間の変化が必要な場合があり、その場合は当業者によって決定できる。この方法は、環状若しくは非環状エーテル溶媒（例えばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル若しくはテトラヒドロフラン）、芳香族炭化水素（例えばベンゼン、トルエン若しくはキシレン）、脂肪族若しくは脂環式飽和若しくは不飽和炭化水素（例えばヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン若しくはリモネン）、ハロゲン化炭化水素（例えばジクロロメタン、ジクロロエタン、ジブロモエタン、テトラクロロエチレン若しくはクロロベンゼン）、極性非プロトン性溶媒（例えばアセトニトリル、ジメチルホルムアミド若しくはジメチルスルホキシド）又はそれらの混合物から選ばれた不活性溶媒のような有機溶媒中で実施する。この方法は、約−１００℃と溶媒の沸点との間の、又は約０〜６０℃の間又は更には約２０〜５０℃の間の温度において、実施できる。或いは、酵素を、水除去方法と併用して又は併用せずに、使用することもできる。この方法に使用する酵素は、プロテアーゼ、リパーゼ又はエステラーゼから選ばれる。例えば複数種のリパーゼを使用することができ、それらは細胞全体、単離された天然酵素の形態であってもよいし、担体上に固定されていてもよい。これらのリパーゼの例としては、Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ  ”Ａｍａｎｏ”（シュードモナス種（Pseudomonas）に由来）、Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｃ  ”Ａｍａｎｏ”（ シュードモナス種に由来；セラミック上に固定）、Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｄ  ”Ａｍａｎｏ”（ シュードモナス種に由来；珪藻土上に固定）、ＬｉｐｏＰｒｉｍｅ（登録商標）５０Ｔ、Ｌｉｐｏｚｙｍｅ（登録商標）ＴＬ  ＩＭ又はＮｏｖｏｚｙｍ（登録商標）４３５（カンジダ・アンタークチカ（Candida Antarctica）；アクリル樹脂上に固定）が挙げられるが、これらに限定するものではない。
【００２８】
この方法は、任意的に、分子篩（モレキュラーシーブ）又はイオン交換樹脂から選ばれた種々の付加物の存在下で実施できる。例えば３Ａ、４Ａ又は５Ａ分子篩を使用できる。この方法の生成物（類）は、当業者に知られた方法、例えば抽出、濾過又は結晶化を用いて単離できる。生成物１は、必要ならば、当業者に知られた方法、例えば抽出、クロマトグラフィー、蒸留又は結晶化を用いて精製できる。
【００２９】
本発明に係るエステルは、化粧用組成物、スキンケア用組成物などのような組成物に使用できる。この組成物は、例えば肌荒れ、小じわ及びしわの低減に、光損傷を受けた皮膚の改善、皮膚の再生、皮膚の色素過剰沈着の低減並びに皮膚の刺激及び／又は炎症反応の低減に有用であることができる。
【００３０】
本発明の典型的な化粧及び／又はスキンケア用組成物は、本発明に係るエステルを少なくとも０．００１重量％含む。例えば本発明の組成物は、本発明に係るエステルを約０．００１〜約１０．０重量％又は約０．０１〜約５．０重量％含むことができる。それほど顕著でない疾患（condition）にはより低い濃度を用いることができ、より急性の疾患にはより高い濃度を用いることができる。推奨濃度範囲は、組成物中に使用する任意的な補助成分によっても異なる。
【００３１】
本発明の化粧及びスキンケア用組成物は、エステルに加えて他のスキンコンディショニング成分を含むこともできる。本発明の化粧及びスキンケア用組成物はテトロン酸、テトロン酸誘導体、ヒドロキノン、コウジ酸、４−ヒドロキシベンジルアルコール、没食子酸、アルブチン、α−ヒドロキシ酸及びアスコルビン酸の脂肪酸エステルのような他の皮膚成分を含むこともできる。このような他の成分は当業者に知られている。
【００３２】
典型的には、皮膚部位への局所適用は、担体を併用して行う。担体は、使用する場合には、活性成分又は補助成分（類）の不活性化又は酸化を引き起こさないという意味で且つ適用皮膚領域に副作用を引き起こさないという意味で、不活性である。例えば本発明に係る化合物は、局所適用を容易にするために、場合によっては、もたらされるかもしれない更なる有益な効果を提供する（例えば皮膚患部の保湿によって）ために、皮膚科学的に許容され得る担体又は賦形剤（例えばローション、クリーム、軟膏、石けん、スティックなど）と混合して適用する。当業界では多くの製剤が知られており、油及び／若しくはアルコール並びに皮膚軟化剤（例えばオリーブ油、炭化水素油及びワックス、シリコーン油、他の植物、動物若しくは水産油脂、グリセリド誘導体、脂肪酸若しくは脂肪酸エステル又はアルコール若しくはアルコールエーテル、レシチン、ラノリン及び誘導体、多価アルコール若しくはエステル、ワックスエステル、ステロール、リン脂質など）と、前記皮膚軟化剤の一部は本質的に乳化性を有するが、一般的には乳化剤（ノニオン性、カチオン性又はアニオン性）も含むローション剤が挙げられる。同一の一般成分を、異なる成分比を利用することによって且つ／又はガム若しくは他の形態の親水コロイドのような増粘剤を含ませることによって、ローション剤ではなくクリーム剤、ゲル剤又は固体スティック剤に製剤化できる。
【実施例】
【００３３】
本発明は、以下の実施例によって、更に説明することができるが、これらの実施例は説明のみを目的として記載するのであって、特に断らない限り、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３４】
イデベノン酸［１０−（４，５−ジメトキシ−２−メチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエニル）デカン酸］の製造：ジョーンズ試薬を以下のようにして新たに調製した：濃Ｈ2ＳＯ4（１２．５ｍＬ）で稀釈されたＣｒＯ3（１２．５ｇ）を混ぜ合わせ、氷冷水（３７．５ｍＬ）に慎重に加え；内容物を混ぜ合わせ、室温まで加温した。イデベノン（２．５０ｇ，７．３９ミリモル）を、撹拌棒を含む２５０ｍＬ丸底フラスコ中に秤取した。次に、アセトン（１００ｍＬ）を滴加し、混ぜ合わせて、鮮やかなオレンジ色の溶液を生成した。室温で攪拌しながら、ジョーンズ試薬を加え、反応をＳｉＯ2  ＴＬＣによって監視した。ＴＬＣが酸化の完了を示すまで（ｔRシフト：〜０．５０から〜０．６２；ＥｔＯＡｃ：ヘキサン１：１）、更なるジョーンズ試薬を加えた。粗製物質を減圧下で濃縮し、次いでＳｉＯ2クロマトグラフィーによって精製した。生成物のみの画分を合し、減圧下で濃縮し、真空ライン下で更に乾燥させて、オレンジ色の固体を２．１５ｇ生成した（収率８３％）。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．９５（ｂｓ，１Ｈ；Ｄ2Ｏの添加とともに消失），３．８７（ｓ，６Ｈ；−ＯＭｅ），２．４１−２．３６（ｍ，２Ｈ），２．３６−２．３０（ｔ，２Ｈ），１．９２（ｓ，３Ｈ），１．５２−１．４６（ｍ，２Ｈ），１．３１−１．１９（ｂｓ，１２Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）１８４．０，１８３．５，１７４．５，１４４．３，１４４．２，１４１．９，１３８．２，６０．７，３３．７，２９．２，２８．８，２８．７，２８．６，２８．１，２５．７，２４．５，１１．６。
【００３５】
【化７】
2012503601.tif 000009
【００３６】
基本手順：
イデベノン酸（６．６ミリモル）、アルキルアルコール（６．０ミリモル）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（１．２ミリモル）を室温でＣＨ2ＣＨ2（４０ｍＬ）中に溶解させ、次いでＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（６．６ミリモル）を少しずつ添加した。反応混合物は５分で濁った。これを一晩撹拌した。得られた混合物をＣｅｌｉｔｅパッドに通して濾過し、ヘキサン類で洗浄して、黄色の溶液を得た。これを真空下で濃縮した。残留物を、ヘキサン類中５〜１５％のＥｔＯＡｃを用いて短いシリカゲル濾過カラムに通すことによって精製して、オレンジ色の固体又は油を得た。
【００３７】
ゲラニルイデベノンカルボキシレート（２８６−００１）：オレンジ色の油，収率６５％。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：１．２−１．４（ｍ，１２Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），１．６−１．７（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｓ，３Ｈ），１．７０（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），２．１−２．２（ｍ，４Ｈ），２．３０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．４５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．９９（ｓ，６Ｈ），４．５９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．０４−５．１２（ｍ，１Ｈ），５．３０−５．３８（ｍ，１Ｈ）。13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：２５．２，２５．９，２６．５，２６．６，２８．９，２９．３，２９．４，２９．５，３０．０，３１．１，３４．５，３９．７，６１．３２，６１．３６，１１８．６，１２３．９，１３２．０，１３８．８，１４２．３，１４３．２，１４４．５，１７４．１，１８４．３，１８４．９。
【００３８】
セチルイデベノンカルボキシレート（２８６−００２）：オレンジ色の油，収率６５％。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：０．８−０．９（ｍ，３Ｈ），１．２−１．４（ｍ，３８Ｈ），１．５５−１．６５（ｍ，４Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），２．２９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．４５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），３．９８７（ｓ，３Ｈ），３．９９０（ｓ，３Ｈ），４．０５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）。13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：１２．０，２２．８，２５．２，２６．１，２６．６，２８．８，２８．９，２９．３，２９．４１，２９．４５，２９．５，２９．６，２９．７２，２９．７７，２９．８５，２９．８７，２９．８９，３０．０，３１．８，３４．５，６１．３，６４．６，１３８．８，１４３．２，１４４．５，１７４．１，１８４．３，１８４．８。
【００３９】
ステアリルイデベノンカルボキシレート（２８６−００３）：オレンジ色の固体，収率８９％。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．２−１．４（ｍ，４２Ｈ），１．５５−１．６５（ｍ，４Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．４５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），３．９８７（ｓ，３Ｈ），３．９９０（ｓ，３Ｈ），４．０５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）。13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：１２．０，２５．１，２６．１，２６．５，２８．８，２８．９，２９．２７，２９．３８，２９．４２，２９．４６，２９．５３，２９．７０，２９．７４，２９．８７，２９．９５，３４．５，６１．２，６４．５，１３８．８，１４３．２，１４４．４，１７４．０，１８４．２，１８４．８。
【００４０】
デシルイデベノンカルボキシレート（２８６−００４）：オレンジ色の固体，収率７８％。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．２−１．４（ｍ，２６Ｈ），１．５５−１．６５（ｍ，４Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），２．２９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．４５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），３．９９０（ｓ，３Ｈ），３．９９３（ｓ，３Ｈ），４．０７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）。13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：１１．８，２５．０，２６．０，２６．４，２８．６８，２８．７２，２９．１，２９．２４，２９．２７，２９．３２，２９．５４，２９．８，３１．６，３４．３，６１．０，６４．３，１３８．６，１４３．０，１４４．３，１７３．８，１８４．０，１８４．６。
【００４１】
ヘキシルイデベノンカルボキシレート（２８６−００５）：オレンジ色の油，収率７６％。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｍ，３Ｈ），１．２−１．４（ｍ，１８Ｈ），１．５５−１．６５（ｍ，４Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），２．２９（ｍ，２Ｈ），２．４４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．９９（ｓ，６Ｈ），４．０５（ｔｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９，１．２Ｈｚ）。13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：１２．１，１４．２，２５．２，２５．８，２６．６，２８．８，２８．９，２９．３，２９．４１，２９．４９，３０．０，３４．６，６１．３，６４．６，１３８．８，１４３．２，１４４．５，１７４．１，１８４．３，１８４．８。
【００４２】
ファルネシルイデベノンカルボキシレート（２８６−００６）：オレンジ色の油，収率８０％。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：１．２−１．４（ｍ，１２Ｈ），１．６０（ｓ，６Ｈ），１．６−１．８（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｓ，３Ｈ），１．７０（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），１．９−２．２（ｍ，８Ｈ），２．３０（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．９８７（ｓ，３Ｈ），３．９９０（ｓ，３Ｈ），４．５９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），５．０５−５．１５（ｍ，２Ｈ），５．３−５．４（ｍ，１Ｈ）。13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：１１．９，１６．０，１６．５，１７．７，２５．０，２５．７，２６．２，２６．４，２６．７，２８．７，２９．１，２９．２，２９．３，２９．８，３１．６，３４．４，３９．５，３９．７，６１．１３，６１．１８，１１８．５，１２４．３，１３１．３，１３５．６，１３５．８，１３８．７，１４２．１，１４２．５，１４３．０，１４４．３，１７３．９，１８４．１，１８４．７。
【００４３】
ブチルイデベノンカルボキシレート（２８６−００７）：オレンジ色の油，収率７３％。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｄｔ，３Ｈ，Ｊ＝１．８，７．５Ｈｚ），１．２−１．４（ｍ，１４Ｈ），１．５５−１．６５（ｍ，４Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），２．２３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．４４（ｍ，２Ｈ），３．９９（ｍ，６Ｈ），４．０５（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝１．８，６．９Ｈｚ）。13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：１２．４，１４．３，１９．７，２５．５，２６．９，２９．３，２９．６，２９．７６，２９．８５，３０．３，３１．３，３４．９，６１．７，６４．６，１３９．２，１４３．６，１４４．８，１７４．５，１８４．７，１８５．２。
【００４４】
混合脂肪族（Ｃ16−Ｃ19−Ｃ20）イデベノンカルボキシレート（２８６−００８）：オレンジ色の油，収率７４％。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：０．８６（ｍ，３Ｈ），１．２−１．４（ｍ，１４Ｈ），１．５５−１．６５（ｍ，４Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ），２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．４３（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｍ，２Ｈ），３．９７１（ｓ，３Ｈ），３．９７４（ｓ，３Ｈ）。13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ｐｐｍ）：１２．０，１４．２，２２．７６，２２．７８，２５．１，２６．５，２６．７７，２６．８０，２８．８，２９．２，２９．３７，２９．４２，２９．４６，２９．６６，２９．７０，２９．７５，２９．９，３０．１，３１．４，３１．９，３２．０，３４．５，３７．４，６１．２，６７．１，１３８．７，１４３．１，１４４．４，１７４．２，１８４．２，１８４．８。
【００４５】
【化８】
2012503601.tif 000010
【００４６】
イデベノン酸（１．０６ｇ，３．０ミリモル）、ファルネソール（６６９ｍｇ，３．０ミリモル）及びＮｏｖｏｚｙｍｅ（３５ｍｇ）をコニカルチューブ中で混合し、次いでＮ2を混合物中に通して泡立てながら加熱した（５０℃）。一晩泡立てながら加熱を行った後、混合物を、ヘキサン類中５〜１５％のＥｔＯＡｃを用いて短いシリカゲル濾過カラムに通すことによって精製して、オレンジ色の油を得た（１．４６ｇ，８７％）。1Ｈ及び13Ｃ  ＮＭＲは、化学的に製造した生成物の1Ｈ及び13Ｃ  ＮＭＲと一致する（前記参照）。
【００４７】
固有細胞毒性の探査：
メラニン形成細胞（Ｂ１６：Ｆ１０マウスメラノーマ細胞）をＡＴＣＣ（American Type Culture Colleciton;Manassas,Virginia）から購入した。細胞は、約３７℃においてフェノールレッド不含ＤＭＥＭ（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）中で１％の抗生物質／抗真菌剤（Ｇｉｂｃｏ  ＃１５２４０）を含む１０％ＦＣＳ（ウシ胎児血清）の存在下で増殖させた。コンフルエント（confluent）になったら（約９０％）、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで分離させ、細胞数を数えた。
【００４８】
ＭＴＴスクリーニング：細胞（細胞５×１０5個／ウェル）を、培地１００±１μＬ／ウェルの容量を用いて９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ／Ｃｏｓｔａｒ＃３５９５）中で平板培養した。最初の平板培養の２４時間後に、各試験化合物をＤＭＳＯ中で新たに調製した。基本手順は以下の通りとした：２．０、２０、４０、１００及び２００μＭの濃度が得られるように、原液を培地中で稀釈し；ＤＭＳＯ濃度を≦０．４％に保ち続けた。次いで、各稀釈溶液１００μＬを既にある１００μＬ／ウェル培地に添加して、最終濃度を１．０、１０、２０、５０及び１００μＭ／ウェル（ｎ＝８）とした。添加の７２時間後に、１０％ＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾル−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）溶液（２０μＬ；フェノールレッド不含ＤＭＥＭ中５．０ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに加えた。ＭＴＴを用いると、ミトコンドリア・デヒドロゲナーゼ活性の関数としての生細胞のバイアビリティー（viability）の測定（細胞増殖の測定）が可能になる（例えばDeMarco et al.,Biochem.Pharmacol.2002,64,1503-1512参照）。プレートは約３７℃において２時間インキュベートした。培地を慎重に取り出し、ＭＴＴ溶媒溶液（２００μＬ；無水イソプロパノール中０．１ＮＨＣｌ）を各ウェルに加えた。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｍａｘ  ３４０（Sunnyvale,CA）を用いて、９６ウェルプレートを振盪し（１０分）、その後に、吸光度波長（５７０ｎｍ）を用い、背景吸光度（６９０ｎｍ）を減算して読み取りを行った。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ、Ｃｈｅｍ−Ｄｒａｗ（バージョン９．０．７）及びＰｒｉｓｍ  ５．０１（登録商標）（GraphPad Software,Inc.;San Diego,CA）をそれぞれ、生データの編集、化学構造の描画、実験データの処理に用いた。
【００４９】
図１に要約するように、７２時間後のＭＴＴデータは、異なるイデベノン酸エステルが細胞毒性も本質的に異なることを示すのに役立つ。
【００５０】
本発明を、特にその好ましい態様に関して詳述したが、本発明の精神及び範囲内で変形及び変更が可能なことはわかるであろう。
【図１】
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【国際調査報告】
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2012503601.tif 000016