【手続補正書】
【提出日】平成21年4月30日(2009.4.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
閉鎖システム内で１の試料に対して２段階の核酸増幅を行うための容器であって、以下の：
前記試料の第１段階の増幅のために構成される第１段階の反応ブリスターを含む、第１段階の反応領域；
前記第１段階の反応ブリスターに流体接続されて、前記試料に追加の流体を供給するように構成される追加のリザーバ；
前記第１段階の反応領域に流体接続される第２段階の反応領域であって、前記第２段階の反応領域が複数の第２段階の反応チャンバを含み、第２段階の反応チャンバのそれぞれが、前記試料の部分の次の増幅用に構成される１対のプライマーを含み、前記第２段階の反応領域が複数の第２段階の反応チャンバを同時にサーマルサイクルさせるように構成される；
を含む容器。
【請求項２】
前記第１段階の増幅が、複数の標的に対する多重増幅であり、
前記第２段階の反応チャンバ中のプライマーの各対が、前記第１段階の１の標的の次の増幅用に構成される、
請求項１に記載の容器。
【請求項３】
前記第２段階の反応チャンバ中のプライマーの各対が、前記第１段階の標的の増幅に使用されるプライマー内にネスティングされるように構成された、請求項２に記載の容器。
【請求項４】
各第２段階の反応チャンバが、１の領域に乾燥形態の前記１対のプライマーを含み、第２の領域に乾燥形態の別のＰＣＲ成分を含む、請求項１に記載の容器。
【請求項５】
前記容器が、前記試料及び複数の試薬の導入後に密閉されるように構成され、第１段階及び第２段階の増幅中密閉されたままである、請求項１に記載の容器。
【請求項６】
前記試料を前記容器内に導入するための試料注入ポートと、
前記試料中にある細胞又は胞子を溶解するように構成され、前記試料注入ポートに流体接続され、複数の溶解粒子を含む細胞溶解領域と、
前記細胞溶解領域及び前記第１段階の反応領域に流体接続されて、核酸を精製するように構成される核酸生成領域
とをさらに含む、請求項５に記載の容器。
【請求項７】
前記ブリスターが可撓性材料を含み、前記ブリスターに加えられる圧力により前記ブリスターが壊れてその内容物が前記ブリスターから押し出されるようにする、請求項１に記載の容器。
【請求項８】
試料の生物学的分析を行うための容器であって、以下の：
可撓性部分であって
複数のチャネルを介して流体接続される複数のブリスター、及び
それぞれが反応成分を含有し、それぞれが前記複数のブリスターの少なくとも１つに流体接続される複数のリザーバ
を有する前記可撓性部分；と
前記試料を受け取るように構成され、前記複数のブリスターの１つと流体接続される密閉可能ポート；
とを含む容器。
【請求項９】
前記反応成分が乾燥形態であり、前記容器が、前記複数のリザーバのそれぞれに流体接続される第２の密閉可能ポートをさらに含み、前記ポートが、前記反応成分を再水和するための水を受け取るように構成される、請求項８に記載の容器。
【請求項１０】
前記反応成分が、ＰＣＲ増幅のための試薬及びプライマーを含む、請求項９に記載の容器。
【請求項１１】
前記反応成分が核酸精製のための試薬を含む、請求項９に記載の容器。
【請求項１２】
前記反応成分が細胞溶解のための試薬及び溶解剤を含む、請求項９に記載の容器。
【請求項１３】
前記可撓性部分に連結され前記可撓性部分中の適切なブリスターに流体を密閉可能に導入するように構成される付属部品をさらに含む、請求項８に記載の容器。
【請求項１４】
前記リザーバが前記付属部品中に配置される、請求項１３に記載の容器。
【請求項１５】
前記チャネルが密閉可能チャネルである、請求項８に記載の容器。
【請求項１６】
前記チャネルが、前記チャネルに印加される圧力により可逆的に密閉されるように構成され、それによりピンチ弁を形成する、請求項１５に記載の容器。
【請求項１７】
前記密閉可能チャネルが、前記チャネルを横断方向にねじること、熱融着、ローリング、その中に弁を有すること、及び凍結からなる群から選択される手段によって密閉されるように構成される、請求項１５に記載の容器。
【請求項１８】
試料を分析する装置であって、以下の：
第１の支持体；
第２の支持体；
前記第１及び第２の支持体の間で可撓性容器を受けるように構成される開口部であって、前記容器が、複数のチャネルによって流体接続される複数のブリスターであって、１の前記ブリスターはサーマルサイクルさせるように構成されており、及び前記サーマルサイクルさせるように構成されたブリスターに流体接続される、複数の第２段階のチャンバを含む第２段階の反応領域を含む；
前記第１又は第２の支持体上の少なくとも１つに設けられる複数のアクチュエータであって、前記複数のアクチュエータのそれぞれが、前記容器の種々のブリスター及びチャネルに対応して配置され、各アクチュエータが、対応するブリスター又はチャネルに圧力を印加するように構成され、前記複数のブリスターの１つに加えられる十分な圧力が、そのブリスターから前記試料を押し出し、前記複数のブリスターの１つに連結されるすべてのチャネルに加えられる十分な圧力が、そのブリスター内に前記試料を収容する；
前記第１又は第２の支持体上の１つに設けられ、サーマルサイクルさせるように構成された前記ブリスターの内容物をサーマルサイクルさせるように構成される第１の加熱／冷却装置；と
前記第１又は第２の支持体上の１つに設けられ、前記複数の第２段階のチャンバの内容物を同時にサーマルサイクルさせるように構成される第２の加熱／冷却装置；
とを含む装置。
【請求項１９】
試料を分析する装置であって、以下の：
第１の支持体；
第２の支持体；
前記第１及び第２の支持体の間で可撓性容器を受けるように構成される開口部であって、前記容器が、複数のチャネルによって流体接続される複数のブリスター及び前記ブリスターに流体接続される第２段階のチャンバを含む；
前記第１又は第２の支持体上の少なくとも１つに設けられる複数のアクチュエータであって、前記複数のアクチュエータのそれぞれが、前記容器の種々のブリスターに対応して配置され、各アクチュエータが、対応する前記ブリスターに圧力を印加するように構成され、前記複数のブリスターの１つに加えられる十分な圧力が、そのブリスターから前記試料を押し出す；
前記第１又は第２の支持体上の１つに設けられ、前記容器の前記１のブリスターの内容物をサーマルサイクルさせるように構成される第１の加熱／冷却装置；と、
前記第１又は第２の支持体の１つに設けられ、前記第２段階のチャンバの内容物をサーマルサイクルさせるように構成される第２の加熱／冷却装置；
とを含む装置。
【請求項２０】
種々のチャネルを密閉するように構成される複数のシールをさらに含む、請求項１９に記載の装置。
【請求項２１】
前記シールが、前記第１又は第２の支持体上の少なくとも１つに取り付けられて、それぞれの前記チャネルに圧力を印加するように構成される複数のアクチュエータを含む、請求項２０に記載の装置。
【請求項２２】
試料中で細胞を溶解する方法であって、以下の：
中に溶解粒子を含む細胞溶解ブリスターを含む可撓性容器を提供するステップ；
前記細胞溶解ブリスター内に細胞を導入するステップ；と
前記粒子及び試料を移動させて高速衝突を起こし溶解物を得るために、前記ブリスターに力を印加するステップ；
とを含む方法。
【請求項２３】
前記細胞溶解ブリスターが複数のローブを含み、
前記力を印加するステップが、前記ローブに交互に圧力を加えるステップを含む、
請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記力を印加するステップが、前記容器に複数のブレードを繰り返し衝突させるステップを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記溶解粒子がケイ酸ジルコニウム粒子を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
試料中の核酸を増幅する方法であって、以下の：
容器を提供するステップであって、前記容器が、
増幅ブリスターを含む流体接続される複数の反応ブリスター；
増幅ブリスターと流体接続された追加の第２段階増幅チェンバのセットであって、追加の第２段階増幅チェンバはそれぞれ、さらに試料中で特定の核酸を増幅するように構成される；及び
前記反応ブリスターに流体接続されて前記容器の外部から反応ブリスターへの進入のみを可能にする１又はそれ以上の密閉可能ポート；
を有する；
前記密閉可能ポートの第１の密閉可能ポートを介して前記容器に前記試料を注入し、さらに、前記試料の注入後に前記第１のポートを密閉するステップ；
前記試料から核酸を抽出し、さらに、前記抽出された核酸を前記増幅ブリスターに移動させるステップ；
前記核酸を前記増幅ブリスター中で増幅させるステップ；
増幅核酸の部分を追加の第２段階増幅チェンバそれぞれに移動させるステップ；と
他の第２段階増幅チェンバ中で第２段階増幅を行うステップ；
とを含む方法。
【請求項２７】
前記第２段階の増幅チャンバがそれぞれ１対のプライマーを含み、前記増幅ステップ及び第２段階増幅がＰＣＲ増幅のためのサーマルサイクルを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記増幅ステップが、ログ段階に到達する前に停止して、前記第２段階の増幅が、ログ段階に進行する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記抽出ステップが、以下の：
溶解物を生成するために前記試料内に含まれる細胞を溶解するステップ；
核酸が磁気ビーズと結合するのを可能にするために、核酸結合磁気ビーズと前記溶解物を混合してインキュベートするステップ；
前記複数のブリスターの１つの中に前記磁気ビーズを包含するために、そのブリスターに隣接する磁石を使用するステップ；
前記溶解物の残留物を前記複数のブリスターの別の１つに移動させるステップ；
とを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
溶解するステップが、容器の外面に繰り返し衝突させるステップを含む、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
前記増幅ステップが、前記試料中の核酸の増幅を検出するステップをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
試料中に存在する抗原を検出するために前記試料に対して免疫ＰＣＲを行う方法であって、以下の：
流体接続される複数の反応ブリスター及び１又はそれ以上の密閉可能ポートを有する容器を提供するステップであって、前記密閉可能ポートが、前記容器の外部から反応ブリスターへの進入のみを可能にする；
前記密閉可能ポートの第１の密閉可能ポートを介して前記容器に前記試料を注入し、さらに、前記試料の注入後に前記第１のポートを密閉するステップ；
前記複数のブリスターの第１のブリスターに前記試料を移動させるステップであって、前記第１のブリスターが、前記抗原に対して特異性を示す第１の１組の捕捉抗体を含む捕捉抗体試料を含み、前記第１の１組の捕捉抗体が、前記第１のブリスター内に拘束される、ステップにおいて、さらに、前記試料を前記捕捉抗体混合物でインキュベートして前記抗原を前記捕捉抗体に結合させる、ステップ；
レポーター抗体試料を提供するステップであって、前記レポーター抗体試料が、前記抗原に対して特異性を示す第１の１組のレポーター抗体を含み、前記第１の１組のレポーター抗体のそれぞれがオリゴヌクレオチドと結合し、さらに、前記レポーター抗体試料を前記捕捉された抗原でインキュベートして前記第１の１組のレポーター抗体のいくつかを結合させるステップ；
前記結合試料からすべての非結合レポーター抗体を洗浄し、さらに、前記洗浄された非結合レポーター抗体を前記容器内の第２のブリスターに移動させるステップであって、前記第２のブリスターが廃物用容器として構成される、ステップ；と
前記捕捉されたレポーター抗体に結合した前記オリゴヌクレオチドを増幅させ、さらに、前記増幅されたオリゴヌクレオチドを検出するステップ；
とを含む方法において、
前記試料を前記容器内に注入した後のすべてのステップが、前記容器内で行われる、
前記方法。
【請求項３３】
第２段階の反応領域が、１又はそれ以上の追加の第２段階の反応チェンバをさらに含み、追加の第２段階の反応チェンバそれぞれが増幅のコントロールとして構成される、請求項１記載の容器。