(57)【要約】  ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂質複合体を開示する。本合成ではグリセロール骨格に、小ＰＥＧオリゴマーを、所望の鎖長に達するまで段階的付加している。この合成によるポリマーは高度に単分散している。本発明は合成の簡易化、高収率、及び出発原料の低価格といった複数の利点を提供する。本合成方法は複合体の幅広い範囲の調整に適している。他の態様では、本発明はグリセロール骨格を有するＰＥＧ−脂質複合体が１又は２の単分散ＰＥＧ鎖及び１又は２の脂質に共有結合をしている。これらの複合体は特に医薬品組成物に有効である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＥＧ−脂質コンジュゲートを含む化学組成物であって、当該ＰＥＧ−脂質コンジュゲートは：
グリセロール骨格と；
グリセロール骨格に共有結合している脂質基と；及び
グリセロール骨格に共有結合しているＰＥＧ鎖とを含み、当該ＰＥＧ鎖は、２００乃至１２００ダルトンの分子量を有し、前記組成物中の前記コンジュゲートの７５％を超えるＰＥＧ鎖が同じ分子量を有すること特徴とする化学組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物において、当該組成物中の、前記コンジュゲートの９０％を超える前記ＰＥＧ鎖が同じ分子量を有すことを特徴とする組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の組成物において、前記ＰＥＧ鎖は６００ダルトンを超える分子量を有することを特徴とする組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物において、前記脂質がアルキル基であることを特徴とする組成物。
【請求項５】
請求項４に記載の組成物において、前記アルキル基が表１及び表２に記載のアルキル基から選択されることを特徴とする組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の組成物が、更にグリセロール骨格に共有結合している第２の脂質を含むことを特徴とする組成物。
【請求項７】
請求項６に記載の組成物において、前記第２の脂質がアルキル基であることを特徴とする組成物。
【請求項８】
請求項７に記載の組成物において、前記アルキル基が表１及び表２に記載のアルキル基から選択されることを特徴とする組成物。
【請求項９】
請求項６に記載の組成物において、前記脂質が胆汁酸であることを特徴とする組成物。
【請求項１０】
請求項７に記載の組成物において、前記胆汁酸は表４から選択される胆汁酸であることを特徴とする組成物。
【請求項１１】
請求項６に記載の組成物において、前記脂質がコレステロールであることを特徴とする組成物。
【請求項１２】
請求項１に記載の組成物が、更に前記グリセロール骨格と前記ＰＥＧ鎖の間にリンカー基を含むことを特徴とする組成物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の組成物において、前記リンカーが−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｎ−、−ＯＣＯＯ−及び表３の当該リンカーから成る群から選択されることを特徴とする組成物。
【請求項１４】
請求項１に記載の組成物が、更に当該グリセロール骨格に結合している第２のＰＥＧ鎖を含むことを特徴とする組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の組成物において、前記グリセロール骨格と、前記ＰＥＧ鎖間の結合が  −Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−及び−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−から成る群から選択されることを特徴とする組成物。
【請求項１６】
請求項１に記載の組成物において  、前記グリセロール骨格と、前記ＰＥＧ鎖の間の結合が表３から選択されることを特徴とする組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂質コンジュゲートの合成に関連する。より具体的には、本発明は、実質的に単分散ＰＥＧ鎖を有するＰＥＧ−脂質コンジュゲートを調整する簡便且つ経済的な合成方法、及び組成物に関連する。
【０００２】
優先権の主張
本出願は、２００９年６月２日に「純粋ＰＥＧ−脂質コンジュゲート」と題して出願された米国仮特許出願第６１／２１７，６２７号、及び２００９年１２月１２日に「純粋ＰＥＧ−脂質コンジュゲート」と題して出願された米国仮特許出願第６１／２８４，０６５号の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００３】
送達媒体として使用した場合、ＰＥＧ−脂質コンジュゲートは、薬理プロファイルや親油性薬剤の溶解性を改善する能力を有している。これらは、また治療的処置に関連する副作用や毒性を最小限に抑えるなど、他の潜在的な利点を提供する。
【０００４】
分子量分布が狭い薬剤送達ポリマーは、生物医学的な適用、特に静脈内注射に使用する場合に極めて重要である。例えば、ＰＥＧ−８カプリル酸／カプリン酸グリセリドは、２００乃至４００の平均相対分子量を有する、モノエステル、ジエステル及びトリエステルのグリセロールと、モノエステル及びジエステルのポリエチレングリコールの混合物である。部分的なアレルギー反応が動物で認められたため、多くの非水溶性薬剤についてのＰＥＧ−８ＣＣＧの適用が制限され、ヒトの経口薬の処方については約６％の容量限度が公示された。
【０００５】
フリーラジカル重合によって生成されるＰＥＧ鎖は、約２００乃至１，２００ダルトン及びそれ以上の分子量の鎖については分子量分布を狭く制御することができない。一般的には、１バッチ内において、正確な標的分子量を有するポリマーは５０％よりもはるかに少ない。サイズ排除クロマトグラフィーによりＰＥＧポリマーの大部分を、ある標的分子量までにすることで狭い分子量を達成することができるものの、精製したＰＥＧを単一分布にすることは極めて困難である。
【０００６】
最大で約１２のサブユニットを有する高純度ＰＥＧ鎖が市販されているが、これらのＰＥＧは非常に高価であり、医薬品及び／又は化粧品製剤に組み込むには追加の合成手順を必要とする。
【発明の概要】
【０００７】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂質コンジュゲートの合成を開示する。本合成は所望の鎖長に達するまでグリセロール骨格に、小ＰＥＧオリゴマーを段階的に付加することを含んでいる。本合成により得られるポリマーは高度に単分散である。本発明は、合成の単純化、高い生成物収率、及び出発材料の低コスト化など、いくつかの利点を提供する。本合成方法は広範囲のコンジュゲートの調整に適している。
【０００８】
別の側面から、本発明は、１つ又は２つの単分散ＰＥＧ鎖に共有結合をしているグリセロール骨格と、１つ又は２つの脂質を有するＰＥＧ−脂質コンジュゲートを含んでいる。これらのコンジュゲートは特に医薬品組成物に有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は１，２−ジオレオイル−ｒａｃ−３−モノメトキシドデカエチレングリコール（ｍＰＥＧ−１２）−グリセロールのＬＣ−ＭＳクロマトグラムを示している。
【図２】図２はマウスにおけるイトラコナゾール溶液静脈内投与の薬剤動態プロファイルを示している。
【図３】図３はマウスにおけるイトラコナゾール溶液経口投与の薬剤動態プロファイルを示している。
【００１０】
略語リスト
本発明は、本明細書において、以下の化学命名法を使用して開示する。
【００１１】
ＤＡＧ−ＰＥＧｓ：ジアシルグリセロール−ポリエチレングリコール
ＤＭＡＰ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ｍＰＥＧ：モノメトキシポリエチレングリコールエーテル
ＰＥＧ１２：ポリエチレングリコール６００
ＰＥＧ２３：ポリエチレングリコール１０００
ＰＥＧ２７：ポリエチレングリコール１２００
ＧＤＭ−１２：１，２−ジミリストイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ドデカエチレングリコール
ＧＤＯ−１２：１，２−ジオレオイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ドデカエチレングリコール
ＧＤＣ−１２：１，２−ジコロイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ドデカエチレングリコール
ＧＤＭ−６００：ＧＤＯ−６００：１，３−ジオレオイル−２−ドデカエチレングリコール
ＧＤＣ−６００：１，３−ジコロイル−グリセロール−２−ドデカエチレングリコール
ＧＤＳ−１２：１，２−ジステアロイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ドデカエチレングリコール
ＧＯＢ−１２：１，２−ビス（ドデカエチレングリコール）グリセロール−３−オレイン酸塩
ＧＭＢ−１２：１，２−ビス（ドデカエチレングリコール）グリセロール−３−ミリスチン酸塩
ＤＳＢ−１２：１，２−ビス（ドデカエチレングリコール）グリセロール−３−ステアリン酸塩
ＧＯＢＨ：１，２−ビス（ヘキサエチレングリコール）グリセロール−３−オレイン酸塩
ＧＭＢＨ：１，２−ビス（ヘキサエチレングリコール）グリセロール−３−ミリスチン酸塩
ＧＣＢＨ：１，２−ビス（ヘキサエチレングリコール）グリセロール−３−コール酸塩
ＧＣＬＢＨ：１，２−ビス（ヘキサエチレングリコール）グリセロール−３−コレステロール
ＧＰＢＨ：１，２−ビス（ヘキサエチレングリコール）グリセロール−３−パルミチン酸塩
ＧＤＯ−２３：１，２−ジオレオイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ポリエチレン（１０００）グリコール，ｎ＝２３
ＧＤＯ−２７：１，２−ジオレオイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ポリエチレン（１２００）グリコール，ｎ＝２７
ＧＤＭ−２３：１，２−ジミリストイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ポリエチレン（１０００）グリコール，ｎ＝２３
ＧＤＭ−２７：１，２−ジミリストイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ポリエチレン（１２００）グリコール，ｎ＝２７
ＧＤＳ−２３：１，２−ジステアロイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ポリエチレン（１０００）グリコール，ｎ＝２３
ＴＰＧＳ−ＶＥ：ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール−１０００コハク酸塩
ＧＤＯ−Ｘ−ＰＥＧ１２：１，２−ジオレオイル−ｒａｃ−グリセロール−３−Ｘ−ドデカエチレングリコール（「Ｘ」は表３にあるリンカー／スペーサー、つまり、チオールを表わしている。）  
シクロスポリン：シクロ［［（Ｅ）−（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−２−（メチルアミノ）−６−オクテノイル］−Ｌ−２−アミノブチリル−Ｎ−メチルグリシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｄ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル］
ＰＯＰＣ：パルミトイル−オレオイルフォスファチジルコリン
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の実施態様は、分子量範囲が狭いＰＥＧ−脂質コンジュゲートを作る合成方法、中間体、及び化合物の生成に関して記載されている。当業者は、本発明の後述する詳細な説明は単なる例示であり、任意の方法に限定することを意図していないことを当業者は理解すべきである。本発明の別の実施態様で、本当業者は当該開示による利益を容易に理解するであろう。ここでは、本発明の実施が詳細に述べられている。
【００１３】
明瞭にするため、本明細書の記載では、本実施に関する決まりきった手順の全ては表示、記述していない。多数の実施上特有の決定は、適用関連、及びビジネス関連の制約に関する規定の順守など、開発者の具体的な実施上の目標を達成するために行う必要があり、このような具体的な目標は、実施ごと、開発者ごとに異なるが、どのような実際の実施上の開発でも本発明は当然に理解されるであろう。また、そのような開発努力は複雑で時間がかかるかもしれないが、それでも当該開示は常用技術に携わる当業者にとって有益になることが理解されるであろう。
【００１４】
ＰＥＧ脂質コンジュゲートを薬剤送達媒体として使用する場合、特性が明確であり、高純度のコンジュゲートを使用することの重要性が高くなる。例えば、米国特許第６，６１０，３２２号ではＰＥＧとアシル鎖の長さの変化がＰＥＧ−脂質コンジュゲートのパッキングパラメータに影響を与えており、ひいてはＰＥＧ−脂質コンジュゲートの組成物がリポソームを形成するか否かを決定することを教示している。この特許は、参照することによって、ここに組み込まれている。薬剤製剤の物理的構造への影響に加え、ＰＥＧ−脂質コンジュゲートとを特定の薬剤組成物を配合する場合、脂質とＰＥＧサイズの選択は、薬剤動態及び安定性に重大な影響を与えることがある。したがって、多くの場合、特定の長さの単分散ＰＥＧ鎖を有する均一なコンジュゲートのバッチは、ある範囲のＰＥＧ鎖のバッチより非常に好ましい。
【００１５】
本発明は、単分散ＰＥＧ鎖を有する高純度ＰＥＧ脂質コンジュゲート、及び約１１０乃至３００ダルトンの範囲の分子量のＰＥＧオリゴマーから開始するこれらＰＥＧ脂質コンジュゲートの化合物、及び合成方法を提供する。本発明は、飽和または不飽和脂肪酸若しくは胆汁酸など様々な脂質を含むＰＥＧ−脂質コンジュゲートを調製する方法を提供する。このようなＰＥＧ−脂質コンジュゲートは、特に難溶性薬剤の静脈内投与といった薬剤送達に使用することができる。
【００１６】
本発明は、一般的に、１つ又は２つの単分散ＰＥＧ鎖のいずれかを伴うグリセロール骨格と、当該グリセロール骨格に結合している１つまた２つの脂質基とを含むＰＥＧ−脂質コンジュゲート組成物及び合成方法を含む。スペーサー又はリンカー基が、当該骨格とＰＥＧ鎖及び／又は脂質基との間に含まれてもよい。
【００１７】
本発明の変形態様は、２つの脂質と１つの単分散ＰＥＧ鎖（共に異性体）とを伴うグリセロール骨格、１つの脂質と２つの単分散ＰＥＧ鎖（共に異性体）とを伴うグリセロール骨格、１つの脂質と１つの単分散ＰＥＧ鎖（全て異性体）を伴うグリセロール骨格を含み、当該骨格の３番目の位置は、様々な化合物又は成分であってよい。
【００１８】
さらに、本発明は、純粋な１，２又は１，３グリセロール異性体を作成する方法を提供する。市販の１，２グリセロール脂質ジエステルを用いて、このグリセロール骨格上の利用できる部分に新しい成分を結合させることにより、様々な化合物を配合することができる。しかし、これら１，２グリセロールジエステルは、保存中の位置変換により、より安定な１，３グリセロール異性体となり、これが画分に約３０％にも達する可能性がある。本発明は、１，２又は１，３−グリセロール異性体の純粋な光学異性体を生成し、保持する唯一の可能性である。１，２又は１，３異性体は、機能的には同等であるが、異性体の選択は、細胞内脂溶性分子の輸送だけでなく、医薬品用途における媒体としての使用など、様々な送達プロセスに関係する可能性がある。例えば、異性体は、可溶化中及び保存中の化合物の安定性に関する能力の違いがある。化学構造１は、このような２つの異性体の立体配座の違いを示している。
2012528857.tif 000002
化学構造１：（１）１，２−ジミリストイル−グリセロール−３−ドデカエチレングリコール及び（２）１，３−ジミリストイル−グリセロール−３−ドデカエチレングリコールの３次元描画である。
【００１９】
１２００ダルトンまでの単分散ＰＥＧ鎖を有するコンジュゲートは様々な薬剤送達用アプリケーションに有用である。約３００乃至６００ダルトンのＰＥＧ鎖のコンジュゲートは、静脈内注射用または経口溶液用などの液状剤形の配合に、特に有用である。約６００乃至１，２００ダルトンのＰＥＧ鎖のコンジュゲートはカプセルなどの固体剤形に、特に有用である。上記の組み合わせは難溶性物質の固体剤形に有効であり、一般的に３００乃至６００ダルトンのＰＥＧ鎖を有する液状の上記コンジュゲートを溶剤として使用し、一般的に６００乃至約１，２００ダルトンのＰＥＧ鎖を有する固体の上記コンジュゲートを固化剤として使用する。
【００２０】
本発明は、単分散ＰＥＧ−脂質コンジュゲートを製造する簡便かつ経済的な合成方法の提供を含み、ポリマーに脂質を結合させる様々な直列連鎖群を提供する。本発明は、単純化された合成、高い製品収率と出発材料の低コスト化など、いくつかの利点を提供する。このような市販のＰＥＧオリゴマーは非常に高価であるため、同様のＰＥＧ−脂質コンジュゲートを大規模生産するには莫大なコストを要する。さらに、本合成法は広範囲のＰＥＧ−スペーサー−脂質コンジュゲートの調整に好ましい。
【００２１】
単分散ＰＥＧ鎖の合成は、最初にＰＥＧの短鎖（１乃至６サブユニットを有する）を保護化グリセロール骨格に結合させることを要する。ＰＥＧ鎖はエーテル化を繰り返すことにより伸長する。例を、反応スキーム１に示す。
2012528857.tif 000003
【００２２】
反応スキーム１では、ＰＥＧオリゴマーの第１末端を保護し（例えば、ベンゼンにより）、反応性第２末端を作成することで（例えば、示されているトシル基で）第一反応性ＰＥＧオリゴマー（ｂ）を調整する。第１反応性オリゴマーは、次いで２つの保護された−ＯＨ基を持つグリセロール（ａ）と結合する。グリセロール上の保護基は、第１反応性オリゴマーの最初の末端で保護基を除去する条件の下で安定するように選択する。オリゴマーの反応性第２末端はグリセロールの遊離−ＯＨ基と結合し、グリセロール−オリゴマー中間体（ｃ）を形成する。次いで中間体のオリゴマー部分の第一末端の保護基を除去して、反応性−ＯＨ基（ｄ）を露出させる。第２反応性ＰＥＧオリゴマー（ｅ）を中間体に追加してグリセロール骨格に結合する伸展ＰＥＧ鎖を形成する（ｆ）。反応スキーム１では、１２のサブユニットのＰＥＧ鎖が必要であるため第２反応性ＰＥＧオリゴマーの第一の末端は末端メチル基により保護されている。より長い鎖が必要な場合は、例えば（ｂ）を第二オリゴマーとして再び使用することによってＰＥＧ鎖のさらなる延長用に容易に除去することができる第２反応性ＰＥＧオリゴマーの保護基を選択する。目的の鎖長が達成されると、グリセロール骨格の保護基は除去され、生成物（ｇ）が形成される。生成物（ｇ）は、単分散ＰＥＧ鎖を有し、その後さらに反応させてグリセロール骨格に所望の脂質を追加することができる。同様の合成は、短いＰＥＧ鎖で開始するか、又は２つのトリエチレングリコール間の、若しくはトリエチレングリコールとモノメトキシトリエチレングリコール間のエーテル化からへキサエチレングリコールの調整をすることができる。この経路では、さらに２つのステップが、合成に関与することになる。
【００２３】
反応スキーム１において、遊離ヒドロキシル基を露出させる保護化ベンジル基の除去は任意の適当な試薬により達成することができる。例えば、エーテル化処理を繰り返すことによってＰＥＧ鎖を延ばす前に、パラジウム触媒存在下で水素添加をすることによりベンジル基を除去することができる。
【００２４】
反応スキーム１に例示すように、グリセロール骨格のＰＥＧ鎖の合成に続き、グリセロールの保護基を除去する結果、２つの遊離ヒドロキシル基が生ずる。この遊離ヒドロキシル基は、反応スキーム２で示すように、不活性溶媒中でＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下で脂肪酸と反応させることができる。
2012528857.tif 000004
【００２５】
反応スキーム３は、反応スキーム２で使用する活性脂質の調整方法を示している。この方法では、脂肪酸のカルボキシル基を、適当な活性化剤で活性化する。例えば、塩化オキサリルを、下記のように使用することができる。
2012528857.tif 000005
【００２６】
前述の記載は単一の単分散ＰＥＧ鎖を有する特定のＰＥＧ−脂質コンジュゲートを合成する１つの方法を示しているが、本発明は、ＰＥＧ−脂質コンジュゲートを作る方法及び材料を広い範囲で教示している。
【００２７】
第１反応性ＰＥＧオリゴマーは、好ましくは３乃至７のＣＨ２ＣＨ２Ｏユニットから成り、より好ましくは４乃至７のＣＨ２ＣＨ２Ｏユニットを有すが、最大１２ユニットまでのいずれの長さであってよい。追加の反応性オリゴマーも、好ましくは３乃至７のＣＨ２ＣＨ２Ｏユニットから成り、より好ましくは４乃至７のＣＨ２ＣＨ２Ｏユニットを有すが、最大１２ユニットまでのいずれの長さであってもよい。
【００２８】
本発明のＰＥＧ−脂質コンジュゲートは、それぞれ１つ又は２つの単分散ＰＥＧ鎖を有する。特に断りのない限り、特定のコンジュゲートにおけるＰＥＧ鎖の５０％以上が同一の分子量を有する。より好ましくは７５％以上が同一の分子量を有し、最も好ましくは、９０％以上が同一の分子量を有する。また、特に断りのない限り、好ましくはＰＥＧ鎖は約６乃至２７ポリマーのサブユニットから成る。より好ましいＰＥＧ鎖は約７乃至２７ポリマーのサブユニットから成り、最も好ましくは、ＰＥＧ鎖は約７乃至２３ポリマーのサブユニットから成る。
【００２９】
１，２−ジミリストイル−ｒａｃ−３−ＰＥＧ１２−グリセロールを合成する場合には、ＰＥＧ鎖が３の位置に形成されるように当該グリセロールを保護する（反応スキーム１、化合物（ａ）を参照）。出発成分として代わりのグリセロール誘導体を用いることにより、異なる位置にＰＥＧ鎖を有するコンジュゲートが得られることは自明である。例えば、グリセロールの１と３の位置を保護することで、２の位置にＰＥＧ鎖ができる（Ｒ）。化学構造２にこのような合成に使用するグリセロール誘導体を示す。
2012528857.tif 000006
【００３０】
２つのＰＥＧ鎖を有するコンジュゲートが必要な場合、化学構造３または化学構造４に示すグリセロール誘導体を使用してもよい。これらの構造において、Ｒは、後に置換され得る保護基、又は最終的な構造を含むことがあるアシル脂質のいずれかを示している。これらのコンジュゲートにより、ＰＥＧ鎖は直列に伸長し、同一の長さになる。２つのＰＥＧ鎖を有するコンジュゲートは、分岐ＰＥＧコンジュゲートとして機能するため、所定の状況において特に有用である。
2012528857.tif 000007
【００３１】
グリセロール骨格とＰＥＧ鎖との間にオキシル以外のリンカー基を組み込むことが望ましい場合がある。例えば、不安定な結合が有用なアプリケーションではチオールリンカーが使用される。他の有用なリンカーは、表３及び本明細書の他の部分に記載されている。当該骨格とＰＥＧ鎖との間に代替リンカーを有するコンジュゲートの合成の場合、まず、保護されているグリセロール骨格（例えば、化学構造３）にリンカー基を結合させる。次に、第一反応性ＰＥＧオリゴマーをリンカーの未反応末端に結合させ、ＰＥＧが所望の通り伸展する。代替的に、当該骨格にリンカーを結合させる前に、第１反応性ＰＥＧオリゴマーにリンカーを結合させてもよい。リンカーを用いた実施態様において、好ましいＰＥＧ−試薬は、ヒドロキシル基、アミノ基、カルボキシル基、イソシアネート基、チオール基、炭酸官能基を有する試薬である。本発明の方法の実施態様に使用する特に好ましいＰＥＧ−試薬は、ＰＥＧ−トシル酸、ＰＥＧ−メシル酸とスクシニル−ＰＥＧを含む。
【００３２】
グリセロール骨格と脂質基との間に同一のリンカー基を組み込むことが望ましいことがある。このようなコンジュゲートを得る際は、リンカーを骨格に結合させる前に脂質に結合させるか、又は、脂質をリンカーに結合させる前に骨格に結合させてもよい。
【００３３】
上記の手法は、除去可能な保護基で保護されている骨格上に伸長するＰＥＧ鎖について述べている。ＰＥＧを配置した後に、脂質基を骨格に結合させる。しかし、ＰＥＧ鎖を伸長させる前に、骨格上に１又は複数の保護基として１又は２つの脂質を使用することも可能である。この代替的な手法は、ＰＥＧを結合させ伸張させる間、保護する必要がある反応基を持たないアルキル鎖を有する場合に特に有用である。胆汁酸は、ＰＥＧを結合させ伸張させる間に問題を生ずる多くの側基を持っている傾向があるため、ステロイド酸コンジュゲートが必要な場合、有用性がはるかに低くなる。
【００３４】
上記のような合成方法は、本発明を含む多くの化合物の作成に有用であるが、場合によっては他の方法が必須な場合や、他の方法を採用することにより更に簡便になる場合がある。例えば、胆汁酸と２つの２７サブユニットＰＥＧ鎖を有するコンジュゲートを所望する場合には、それらをグリセロール骨格に結合させる前に、単分散ＰＥＧ鎖を合成することによりそのようなコンジュゲートを作成することができる。同様に、本発明においてグリセロール骨格に結合させる前に合成したＰＥＧ鎖を使用することで、より小さなＰＥＧを含む新規の様々な化合物を合成することが可能である。
【００３５】
本発明の他の化合物の合成にも特別な配慮が必要な場合がある。好ましくは、骨格とアシル基、又はＰＥＧの間にリンカー有するコンジュゲートは、このリンカー中の結合の性質といった検討事項によっては、骨格に結合させる前に、単分散ＰＥＧ鎖を作成して作ることが好ましい。
【００３６】
本発明のコンジュゲートは、単一の脂質と単一の単分散ＰＥＧ鎖がグリセロール骨格に結合したものを含み、ここで骨格上の３番目の位置は、ヒドロキシル基から活性剤に至る別の成分によって占められている。上述のように、遊離ヒドロキシル基を有する１，２グリセロールジエステルの保存中に位置変換が生ずる一方で、ＰＥＧ鎖が６サブユニットよりも長い場合は、遊離ヒドロキシル基を有するグリセロール骨格に結合した単一の脂質と、単一の単分散ＰＥＧ鎖を伴う結合体にとっては再配列のチャンスがはるかに少なくなることはいうまでもない。これは、ＰＥＧ鎖が移動するためには、大きなエネルギーが必要なためである（立体構造、分子サイズや極性が脂質と異なるため）。同様に、１，３−異性体は一般的に１，２−異性体よりも安定である。
【００３７】
上記の原理に続き、１つ又は２つの単分散ＰＥＧ鎖を有する多種多様なＰＥＧ−脂質コンジュゲートの合成をすることができる。いくつかの更なる特定の実施態様を以下に記載する。
【００３８】
ＰＥＧ−脂質コンジュゲートの合成に適した脂質には、アルキル鎖と同様に胆汁酸（ステロイド酸）が挙げられる。従って、本発明は、現液相合成法により調製した多種のＰＥＧ−脂質コンジュゲートを含む。ステロイド酸−ＰＥＧコンジュゲートは、特定の細胞への脂質ベースの薬剤送達用の標的成分として、又は自己乳化薬剤送達システム（ＳＥＤＤＳ）としてリポソームに組み込むことができる。
【００３９】
胆汁酸（ステロイド酸）は、四環ステロイド構造、カルボン酸末端を持つ５又は８個の炭素側鎖と、有無と配向が異なるいくつかのヒドロキシル基から成る大ファミリー分子で構成されており、四環は、左から右へＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤと呼ばれ、Ｄ環は他の３つに比べ炭素が１つ少ないため小さい。例示的な胆汁酸を、化学構造５に示す。すべての胆汁酸は、側鎖を有している。タウリンやグリシンとアミド結合できるカルボキシル基を有している場合、核のヒドロキシル基は、胆汁アルコールから水溶性の胆汁酸塩の形成に不可欠なグルクロン酸抱合物または硫酸塩でエステル化することができる。
2012528857.tif 000008
【００４０】
現在、胆汁酸塩の物理化学的性質に関する構造修飾については、ほんのわずかな研究しかされていない。ある特許公開公報（ＷＯ０２０８３１４７）では、胆汁酸や胆汁酸塩が、適切なアミノ酸と位置２４（カルボキシル）で結合し、不飽和Ｃ＝Ｃ結合が１４乃至２２個の炭素原子を有する１又は２の脂肪酸基と結合している、胆汁酸塩脂肪酸コンジュゲートを開示している。そのコンジュゲートは、血液中のコレステロールの低減、脂肪肝、高血糖や糖尿病の治療用医薬組成物として使用することを意図している。別の特許（米国２００３２１２０５１号）ではアシクロビル胆汁酸のプロドラッグを開示しており、これはリンカー基が、胆汁酸とこの化合物との間に使用されている。
【００４１】
一の一般的な実施態様において、本発明は、一般化学式Ｉに示すＰＥＧ−脂質コンジュゲートを提供する。化学式Ｉに示す２つの変異体の違いはグリセロール骨格に沿ったポリマーと脂質の鎖の相対的な位置である。
2012528857.tif 000009
【００４２】
化学式Ｉには、いくつかの代替的な実施態様がある。化学式Ｉの一変形態様において、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なっていてもよく、表１又は表２に記載されている飽和及び／又は不飽和アルキル基から選択され、Ｘは、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、又は表３から選択されるリンカーであり、ＰはＰＥＧ鎖である。
【００４３】
化学式Ｉの別の変形態様では、Ｒ１とＲ２の一方はアルキル基であり、他方は水素である。化学式Ｉのこれらの実施態様では、Ｒ１又はＲ２の少なくとも一方は６乃至２２個の炭素原子を有する飽和又は不飽和のアルキル基である。好ましい実施態様において、Ｒ１及びＲ２は同一であり、６乃至２２個の炭素原子、より好ましくは１２乃至１８個の炭素原子を含んでいる。「アルキル」という用語は飽和または不飽和脂肪酸を包含している。
【００４４】
また、本発明は、一般化学式ＩＩによるＰＥＧ−脂質コンジュゲートも提供する。
2012528857.tif 000010
【００４５】
同様に、化学式ＩＩにはいくつかの代替的な実施態様がある。式ＩＩの一つの変形態様では、Ｒは表１、又は表２に記載されているアルキル基であり；Ｘは−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、又は表３から選択されるリンカーであり；そしてＰ１とＰ２は同一のＰＥＧ鎖である。化学式ＩＩによるコンジュゲートは、分岐した２つのＰＥＧ鎖を具えることにより、単一の長いＰＥＧ鎖を有するコンジュゲートを上回る利点を提供することがある。
【００４６】
2012528857.tif 000011
【００４７】
2012528857.tif 000012
【００４８】
2012528857.tif 000013
2012528857.tif 000014
2012528857.tif 000015
【００４９】
本発明のＰＥＧ−脂質コンジュゲートはまた、脂質部分が、１つ又は２つの胆汁酸を含む化合物である。これらのコンジュゲートは、アルキル基が、胆汁酸で置換されていることを除き、化学式Ｉ及び化学式ＩＩと同一の構造を有している。胆汁酸コンジュゲートの場合も、変形態様及び好ましい態様はＰＥＧ−アルキルコンジュゲートで記載したものと同様である。胆汁酸は、同様にアルキル基に対して親油性であるため、胆汁酸コンジュゲートは同様の物理的性質を共有し、一般的にＰＥＧ−アルキルコンジュゲートと同じ用途のうちのいくつかに適している。
【００５０】
化学構造６は、単一のＰＥＧ鎖と２つの胆汁酸がグリセロール骨格に結合した、本発明の二つの変形体を示している。
2012528857.tif 000016
【００５１】
化学構造６では、Ｙ１とＹ２は、同一又は異なっていてもよく、ＯＨ若しくは、Ｈ若しくはＣＨ３であってもよく、若しくは表４に示す胆汁酸に従って選択されたものでもよい。同様に、側鎖が異なる胆汁酸（表４に示すように）を、グリセロール骨格に結合させることができる。表４は本発明を実施する上で有用な胆汁酸とその誘導体の一覧である。
【００５２】
2012528857.tif 000017
2012528857.tif 000018
【００５３】
本発明のさらに別の変形態様は化学式Ｉと同様の化合物であり、これはＲ１又はＲ２の一方が胆汁酸で他方がアルキル基である。変形態様の一例である脂質ポリマーコンジュゲートを化学構造式７に示す。
2012528857.tif 000019
【００５４】
化学構造３では、Ｙ１とＹ２は、同一であるか又は異なっており、ＯＨ若しくは、Ｈ若しくは、ＣＨ３である、若しくは表４に示す胆汁酸に従って選択されたものである。また、胆汁酸の側鎖は、表４に示すように様々な構造をとりうる。Ｒは表１及び表２から選択される飽和及び／又は不飽和アルキル基である。
【００５５】
化学式ＩＩ化合物の他の好ましい実施態様は、化学構造８によるＰＥＧ−胆汁酸コンジュゲートである。
2012528857.tif 000020
【００５６】
化学構造８では、Ｙ１とＹ２は、ＯＨ又はＨ又はＣＨ３である、又は表４に示す胆汁酸に従って選択される。また、胆汁酸の側鎖は、表４に示すように様々な構造をとりうる。
【００５７】
化学式ＩＩの化合物の別の更に好ましい態様は、化学構造９に示すいずれかのＰＥＧ−コレステロールコンジュゲートの構造である。
2012528857.tif 000021
【００５８】
本発明の別の実施態様を、反応スキーム４に示す。この方法では、コール酸等の適切な胆汁酸をＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下でジクロロメタンを加え、３−ｍＰＥＧ−１２−グリセロールと反応させることにより最終産物である１，２−ジコロイル−ｒａｃ−３−ｍＰＥＧ１２−グリセロールを生成する。様々な長さの単分散ＰＥＧ鎖を使用できることが理解される。
2012528857.tif 000022
【００５９】
反応スキーム５に示す本発明の別の実施態様は、ＤＬ−１，２−イソプロピリデングリセロール中間体と脂肪酸を反応させてＩを生成すること、又は当該中間体とコレステロールを反応させてＩＩを生成することを含む。好ましい方法によってイソプロピル基を除去することで中間産物ＩＩＩとＩＶをそれぞれ提供する。
2012528857.tif 000023
【００６０】
ここに記載した方法は、様々な新規ＰＥＧ−脂質コンジュゲートの調整に使用することができる。例えば、これらの方法は任意の脂肪酸鎖を含む純粋な形の３−ＰＥＧ−１，２−アルキルグリセロールを調製することができる。好ましい脂肪酸は、約Ｃ６乃至Ｃ２２の炭素鎖長の範囲であり、好ましくは約１０乃至約Ｃ１８の間である。
【００６１】
ここに記載した方法は、新規ＰＥＧ−脂質コンジュゲートの様々な調整に使用することができる。例えば、任意の胆汁酸の鎖を含む純粋な形の３−ＰＥＧ−１，２−ジステロイド酸−グリセロールの調製に使用することができる。
【００６２】
ここに記載した方法は、様々な新規分枝鎖のＰＥＧ−脂質コンジュゲートの調整に使用することができる。例えば、これらの方法は任意の脂肪酸鎖を含む純粋な形の３−アルキルｇｌ−１，２−ビスＰＥＧ−グリセロールの調整に使用することができる。好ましい脂肪酸は、約Ｃ６乃至Ｃ２２の炭素鎖長の範囲であり、好ましくはＣ１０乃至約Ｃ１８の範囲である（反応スキーム６）。
2012528857.tif 000024
【００６３】
反応スキーム６によりグリセロール骨格、１の脂質基、及び２つの単分散ＰＥＧ鎖を有する化合物が生ずる。しかし、上記で説明したように、反応スキーム１に例示したＰＥＧ鎖をトリエチレングリコール又はトリエチレングリコールとモノエチレングリコールなど、他のオリゴマーで延長できることが注目に値する。
【００６４】
ここに記載した方法は、様々な新規分枝鎖のＰＥＧ−脂質コンジュゲートの調整に使用することができる。例えば、これらの方法は任意の胆汁酸の鎖を含む純粋な形のステロイド酸−グリセロール含む純粋な形の３−ステロイド酸−１，２−ビスＰＥＧ−グリセロールの調整に使用することができる（反応スキーム７）。
2012528857.tif 000025
【００６５】
本発明のＰＥＧ−脂質の一の好ましい使用は、リポソームや他の脂質含有製剤の調整である。本発明によれば、医薬組成物は、１又はそれ以上の、遺伝子ベクター、アンチセンス分子、タンパク質、ペプチド、生理活性脂質又は薬剤を含んでいてもよい。例えば、活性剤には、１又それ以上の薬剤（例えば１又はそれ以上の抗がん剤、又はその他の抗がん剤等）を含んでいてもよい。一般的に、親水性活性剤は製剤に直接追加され、疎水性の活性剤は、他の成分と混合する前にＰＥＧ−脂質により溶解される。
【００６６】
本発明の製剤に存在することができる適当な活性剤は、上記に記載したような１又はそれ以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、タンパク質、ペプチド、生理活性脂質又は薬剤を含んでいる。本発明のＰＥＧ−脂質は、静脈注射用ＰＥＧオリゴマーの存在により、より安全な活性剤の投与に使用することができる。
【００６７】
本発明との互換性がある好ましい活性剤は、末梢神経、アドレナリン作動性受容体、コリン作動性受容体、骨格筋、心臓血管系、平滑筋、血管系、シナプス部位、神経効果器接合部位、内分泌及びホルモン系、免疫系、生殖系、骨格系、消化及び排泄系、ヒスタミン系及び中枢神経系に作用する薬剤が含まれる。適切な薬剤は、例えば、タンパク質、酵素、ホルモン、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、核タンパク、多糖類、糖タンパク質、リポタンパク質、ポリペプチド、ステロイド、テルペノイド、レチノイド、抗潰瘍Ｈ２受容体拮抗薬、抗潰瘍薬、低カルシウム血症剤、保湿剤、化粧品、等から選択することができる。活性剤は、鎮痛薬、麻酔薬、不整脈治療剤、抗生物質、抗アレルギー剤、抗真菌剤、抗がん剤（例えば、ミトキサントロン、タキサン、パクリタキセル、カンプトテシン、及びカンプトテシン誘導体（例えば、ＳＮ−３８）、ゲムシタビン、アンスラサイクリン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗体、シトキシン（ｃｙｔｏｘｉｎｅｓ）、イムノトキシン、等）、降圧剤（例えば、ジヒドロピリジン、抗うつ薬、ＣＯＸ−２阻害薬）、抗凝固薬、抗うつ薬、抗糖尿病薬、抗てんかん剤、抗炎症コルチコステロイド、アルツハイマー病及びパーキンソン病治療薬、抗潰瘍剤、抗原虫剤、抗不安薬、甲状腺、抗甲状腺、抗ウイルス、食欲抑制薬、ビスホスホネート、強心薬、心臓血管薬、コルチコステロイド、利尿剤、ドーパミン作動薬、胃腸薬、止血剤、高コレステロール剤、降圧剤、免疫抑制剤、抗痛風剤、抗マラリア、抗片頭痛剤、抗ムスカリン剤、抗炎症剤や、リウマチ、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、クローン病などの治療薬、又は多発性硬化症を含む脱髄疾患治療薬、眼科用剤治療；ワクチン（例えばインフルエンザウイルス、肺炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、コレラ毒素Ｂサブユニット、腸チフス、熱帯熱マラリア原虫（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、ジフテリア、破傷風、単純ヘルペスウイルス、結核、ＨＩＶ、百日咳（ｂｏｒｄｅｔｅｌａ  ｐｅｒｔｕｓｉｓ）、はしか、おたふく風邪、風疹、細菌類毒素、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、ＳＡＲＳウイルス、カナリア痘ウイルス、ビーシージー、クレブシエラ肺炎ワクチン、等）、ヒスタミン受容体拮抗薬、催眠薬、腎臓保護剤、脂質調節剤、筋弛緩薬、神経遮断薬、神経向性剤、オピオイドアゴニスト及びアンタゴニスト、副交感神経刺激剤、プロテアーゼ阻害剤、プロスタグランジン、鎮静薬、性ホルモン（例えば、アンドロゲン、エストロゲン、等）、興奮薬、交感神経作用薬、血管拡張薬及びキサンチン及びこれらの種の合成類似体でありうる。治療薬は、腎毒性のシクロスポリン及びアムホテリシンＢ等、又は心臓毒性のアムホテリシンＢ及びパクリタキセル等及びエトポシド、サイトカイン類、リボザイム類、インターフェロン類、オリゴヌクレオチド類、ｓｉＲＮＡ類、ＲＮＡｉ類、及び前述の機能的誘導体であり得る。
【００６８】
本明細書に記載する発明の実施態様化学療法剤は、本発明の方法の使用に適している。化学療法剤を含有する本発明のＰＥＧ−脂質製剤は、癌細胞へ化学療法剤を直接送達するために、腫瘍組織に直接注入することができる。いくつかの事例では、リポソーム製剤は、特に腫瘍の切除後に生じた腔に直接的に注ぎ込むか、残りの組織に被覆物として適用することがでる。  
【００６９】
本発明のＰＥＧ−脂質は、水溶性又は水不溶性賦形剤に加えて、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、坐剤、液剤、懸濁液、及び乳濁液、ペースト、軟膏、ゲル、クリーム、ローション、点眼剤、散剤を含む様々な剤形を調製に使用することができる。
【００７０】
当該発明のＰＥＧ−脂質コンジュゲートは生体内の標的細胞への活性剤の送達に使用することができる。例えば、組成物は、経口的、注射（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、非経口的、腹腔内、治療を必要とする腫瘍部位への直接注射、等）、吸入、粘膜投与、局所、及び／又は直腸に、既知または開発される方法で送達することができる。ＰＥＧ化カルジオリピンを含む製剤は、例えばクリーム、皮膚の軟膏、乾燥肌の軟化剤、保湿剤、等により局所的に投与することができる。
【００７１】
本発明の生体内での使用は、疾患治療用薬剤を調整する１又はそれ以上の活性剤を含む本明細書に記載した組成物の使用を提供する。言い換えれば、本発明は、１又はそれ以上の活性剤を含む本明細書記載の組成物を疾患の治療に使用するステップを具える方法を提供している。一般的に、この疾患は、ヒト又は動物の患者に存在する。好ましい実施態様では、この疾患は癌であり、この事例では、本発明の組成物は、活性剤として１又はそれ以上の抗がん剤を含む。例えば、本発明によれば、本明細書に記載した組成物は、単独又は他の療法（例えば、化学療法又は放射線療法）と併用して、頭、首、脳、血液、乳房、肺、膵臓、骨、脾臓、膀胱、前立腺、精巣、大腸、腎臓、卵巣、及び皮膚等の癌治療に用いることができる。１又はそれ以上の抗がん剤を含む本発明の組成物は、急性白血病（例えば、急性リンパ性白血病又は急性骨髄性白血病）のような白血病の治療に特に好ましい。また、カポジ肉腫も本発明の組成物及び方法を用いて治療することができる。
【００７２】
次の構造体は本発明を更に説明している。
2012528857.tif 000026
【００７３】
化学構造１０の「Ｘ」はオキシ、チオール、アミノ、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯＯ−、スクシニル、ハロゲン、及び表３の一覧を含むリンカーである。「ｎ」は、繰り返し単位の数である。これらの構造は、グリセロール骨格上で単一の単分散ＰＥＧ鎖が伸長する際の中間体を表し、ｎは一般的に約６乃至約２１である。ＰＥＧ鎖はリンカーを介してグリセロールに直接結合しているメチレングリコールやテトラエチレングリコールのような小さな鎖から開始する連続エーテル化によって伸展する。ＰＥＧ鎖上の末端基はメチル基であってよいが、これらに限定されない。
2012528857.tif 000027
【００７４】
化学構造１１の「Ｘ」はオキシ、チオール、アミノ、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯＯ−、スクシニル、ハロゲン、及び表３の一覧を含むリンカーである。「ｎ」は、繰り返し単位の数である。これらの構造は、グリセロール骨格に２つの単分散ＰＥＧ鎖を伸長させる際の最終ステップを表している。「Ｒ」は、飽和（表１）、又は不飽和脂肪酸（表２）、又はコリル基又は、その類似体（表４）などのアルキル基である。メチル以外の末端基がＰＥＧ鎖に含まれることがある。
2012528857.tif 000028
【００７５】
化学構造１２の「Ｘ」はオキシ、チオール、アミノ、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯＯ−、スクシニル、ハロゲン、及び類似物、及び表３の一覧を含むリンカーである。「ｎ」は、繰り返し単位の数である。これらの構造は、グリセロール骨格に２つの単分散ＰＥＧ鎖を伸長させる際の最終ステップを表している。同様に、ＰＥＧ鎖は、リンカーを介してグリセロールに直接結合しているメチレングリコールやテトラエチレングリコールのような小さな鎖から開始しエーテル化を繰り返すことにより伸展する。「Ｒ」は、飽和（表１）又は不飽和脂肪酸（表２）又はコリル基又はその類似体（表４）などのアルキル基である。メチル基以外の末端基がＰＥＧ鎖に含まれることがある。
2012528857.tif 000029
【００７６】
化学構造１３の「Ｘ」と「Ｌ」は、オキシ、チオール、アミノ、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯＯ−、スクシニル、ハロゲン、及び表３に示すものを含む同一又は異なるリンカーである。「ｎ」は、繰り返し単位の数である。これらの構造は、グリセロール骨格に２つの単分散ＰＥＧ鎖を伸長させる際の最終ステップを表しており、ｎは約５乃至１２の間が一般的である。「Ｒ」は、飽和（表１）または不飽和脂肪酸（表２）またはコリル基及びその類似体（表４）などのアルキル基である。メチル基以外の末端基がＰＥＧ鎖に含まれることがる。
【００７７】
本明細書に記載する発明の実施態様は、溶解度を高め、活性剤の送達を促進する精製ＰＥＧ−脂質結合を含む医薬組成物の調製に関連する。通常、医薬品が異なれば最適な処方が異なるが、処方医薬品製品用としておおよそ望ましい組成は、ほぼここに記載されている。
【００７８】
静脈内溶液の場合、薬剤の好ましい濃度は０．１％乃至３０％である。より好ましくは、１乃至１０％である。最も好ましくは、１乃至５％である。薬剤に対するＰＥＧ−脂質の望ましい比率（ＰＥＧ−脂質／薬剤）は１乃至２０である。より好ましくは、１乃至１０であり、最も好ましくは、１乃至５である。
【００７９】
経口溶液の場合、薬剤の好ましい濃度は１％乃至４０％である。より好ましくは２．５乃至３０％であり、最も好ましくは５乃至３０％である。薬剤に対するＰＥＧ−脂質の望ましい比率（ＰＥＧ−脂質／薬剤）は０．５乃至２０である。より好ましくは、１乃至５であり、最も好ましくは、１乃至３である。
【００８０】
点眼薬の場合、薬剤の好ましい濃度は０．０１乃至５％である。より好ましくは０．０５乃至２％であり、最も好まくは０．１乃至２％である。薬剤に対するＰＥＧ−脂質の好ましい比率（ＰＥＧ−脂質／薬剤）は１乃至２０である。より好ましくは３乃至１５であり、最も好ましくは５乃至１０である。
【００８１】
局所用溶液の場合、薬剤の好ましい濃度は０．０５乃至５％である。より好ましくは０．１乃至５％である。最も好ましくは０．１乃至２％である。薬剤に対するＰＥＧ−脂質の好ましい比率（ＰＥＧ−脂質／薬剤）１乃至２０である。より好まし３乃至１５であり、最も好ましいは５乃至１０である。
【００８２】
経口カプセルの場合、薬剤の好ましいカプセル含有量は１０ｍｇ乃至２５０ｍｇである。より好ましくは２５ｍｇ乃至２００ｍｇであり、最も好ましくは２５ｍｇ乃至１００ｍｇである。薬剤に対するＰＥＧ−脂質の比率（ＰＥＧ−脂質／薬剤）は１乃至１０である。より好ましくは１乃至５であり、最も好ましくは、２乃至５である。
【００８３】
局所製剤の場合、薬剤の好ましい濃度は０．０５乃至５％である。より好ましくは０．１乃至５％であり、最も好ましいは０．５乃至２％である。薬剤へのＰＥＧ−脂質の好ましい比率（ＰＥＧ−脂質／薬剤）は１乃至５０である。より好ましくは３乃至２０であり、最も好ましくは５乃至１０である。
【００８４】
上記の考察では、グリセロール骨格を有するＰＥＧ鎖を含むポリマー−脂質コンジュゲートに焦点を当てているが、本発明はさらに、代替的な骨格とポリマーを含んでいる。３−アミノ−１，２−プロパンジオール、３−ブロモ−１，２−プロパンジオール、３−クロロ−１，２−プロパンジオール、３−フルオロ−１，２−プロパンジオール、ＤＬ−グリセリン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸及び１，２，４−ブタントリオールを代替的な骨格として使用することで同様のＰＥＧ−脂質コンジュゲートを合成することができる。化学構造１４は、アスパラギン酸を骨格として使用した、本発明のコンジュゲートを示している。アミノ酸に２つのカルボキシル基が既に存在するので、このコンジュゲートを調整する出発原料は、オレイン酸の代わりにオレオイルアルコールである。コハク酸リンカーは、骨格にＰＥＧを付加するのに使用する。このような代替的な実施態様では、ＰＥＧ鎖（または別のポリマー鎖）は常に単分散である。
2012528857.tif 000030
【００８５】
プロピレングリコール及びメチレングリコールのオリゴマーはエチレングリコールのオリゴマーの代替として使用することができる。また、これら基本構成要素の共重合体またはブロック共重合体を作成することも可能である。
【００８６】
本明細書に記載された合成方法は、任意の適切な方法で変更することができる。例えば、本発明の方法に使用するＰＥＧ−試薬は、中央グリセロールのヒドロキシル基又はアミノ基、又は３−アミノ−１，２−プロパンジオール群、又はそれに類似するもの、又は任意の機能的リンカーと反応することが可能な任意のＰＥＧ誘導体でありうる。
【００８７】
本発明の方法でＰＥＧ−脂質のコンジュゲートに関する反応の溶媒は、好ましくは極性非プロトン性溶媒であり、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ピリジン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、ジオキサン及びこれらの類似物等の溶媒を含む。
【００８８】
一態様において、本発明は、規定の長さのＰＥＧ鎖を製造する方法であり、当該方法は、（ａ）第１セットの条件下で安定であり、第２セットの条件下で遊離のヒドロキシル基に変換可能なグリセロール保護基を有するグリセロール誘導体を選択するステップと；（ｂ）１乃至１２サブユニットの初期ＰＥＧオリゴマーを選択するステップであって、この初期オリゴマーは当該第１セットの条件下で、ヒドロキシル基に変換される保護基を第１末端に有し、第２セットの条件下で遊離ヒドロキシル基を有する化合物と化学結合を形成する反応基を第２末端に有しており、初期ＰＥＧオリゴマーが第２末端に反応基を有し、この反応基が遊離ヒドロキシル基を有する化合物と結合するステップと；（ｃ）グリセロール誘導体と初期ＰＥＧオリゴマーを反応させてグリセロール−ＰＥＧコンジュゲートの形成をするステップと；（ｄ）このコンジュゲートを当該第一セット条件に露出させてオリゴマーの保護基を除去するステップと；（ｅ）後述するステップ（ｆ）、（ｇ）及び（ｈ）を０乃至６回追加して繰り返すステップと；（ｆ）２乃至１１のサブユニットを有する伸展ＰＥＧオリゴマーを選択するステップであって、当該伸展ＰＥＧオリゴマーが第一末端にオリゴマー保護基を有し、このオリゴマー保護基が第１セットの条件下で、ヒドロキシル基に変換し、伸展ＰＥＧオリゴマーが第二末端に反応基を有し、当該反応基が遊離ヒドロキシル基を有する化合物と結合するステップと；（ｇ）グリセロール−ＰＥＧコンジュゲートと伸展ＰＥＧオリゴマーとを反応させて伸展グリセロール−ＰＥＧコンジュゲートを形成するステップと；（ｈ）このコンジュゲートを第１セット条件に露出させて、オリゴマー保護基を除去するステップと；（ｉ）後述のステップ（ｊ）又はステップ（ｋ）のいずれかと、ステップ（ｌ）でＰＥＧ鎖を終結させるステップと；（ｊ）伸展グリセロール−ＰＥＧコンジュゲートの遊離ヒドロキシル基に、端末基を追加するステップと；又は、（ｋ）２乃至１１のサブユニットを有する末端ＰＥＧオリゴマーを選択するステップであって、当該末端ＰＥＧオリゴマーが第一末端に末端基を有し、第二末端に反応基を有し、当該反応基が遊離ヒドロキシル基を有する化合物と結合している、ステップと；（ｌ）グリセロール−ＰＥＧコンジュゲート、又は伸展グリセロール−ＰＥＧコンジュゲートとＰＥＧオリゴマーとを反応させるステップと；及び（ｍ）末端グリセロール−ＰＥＧコンジュゲートを第２セット条件に露出させるステップを具える。末端基は、メチル基であってよい。当該第１セット条件は、触媒による還元であってよい。第２セット条件は酸への曝露であってよい。グリセロール誘導体は、反応スキーム１（ａ）に示す化学式で表される化合物であってよい。グリセロール誘導体は、化学構造２に示す化学式で表される化合物であってよい。グリセロール誘導体は化学構造３に示す化学式で表される化合物であってよい。グリセロール誘導体は化学構造４に示す化学式で表される化合物であってよい。グリセロール保護基は、アルキル基であってよい。この方法は、さらに：（ｎ）グリセロールの保護基を除去するステップ；及び（ｏ）脂質基をグリセロール骨格へ結合させるステップを具えていてもよい。
【００８９】
別の態様において、本発明は、ＰＥＧ−脂質コンジュゲートを含む化学組成物であり、このＰＥＧ−脂質コンジュゲートは：グリセロール骨格と：グリセロール骨格に共有結合した脂質基と：グリセロール骨格に共有結合したＰＥＧ鎖を含み、このＰＥＧ鎖は約２００乃至１２００ダルトンの分子量を有し、当該組成物におけるコンジュゲート分子のそれぞれのＰＥＧ鎖の約７５％以上が同量の分子量を有する。この組成物におけるコンジュゲート分子のＰＥＧ鎖の約９０％以上が同量の分子量を有していてもよい。ＰＥＧ鎖の分子量は６００ダルトン以上であってよい。脂質はアルキル基であってもよく、このアルキル基は表１と表２のアルキル基から選択することができる。この組成物はさらに、グリセロール骨格に共有結合した第２の脂質を含んでよい。第２の脂質はアルキル基であってもよく、この第２アルキル基は、表１と表２のアルキル基から選択してよい。脂質は、胆汁酸あってもでよく、この胆汁酸は、表４の胆汁酸から選択してよい。胆汁酸はコレステロールでもよい。この組成物はさらに、グリセロール骨格とＰＥＧ鎖との間にリンカー基を含んでもよい。このリンカーは−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｎ−、−ＯＣＯＯ−、及び表３のリンカーからなる群から選択される。この組成物は更に、グリセロール骨格に共有結合した第２のＰＥＧ鎖を含んでいてもよい。グリセロール骨格と第２のＰＥＧ鎖の間の結合は、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−から成る群から選択されるものでもよい。グリセロール骨格と第２のＰＥＧ鎖間の結合は、表３から選択されることがある。
【００９０】
別の態様において、本発明は段落００８９の組成物を含み、グリセロール骨格が、３−アミノ−１，２−プロパンジオール、３−ブロモ−１，２−プロパンジオール、３−クロロ−１，２−プロパンジオール、３−フルオロ−１，２−プロパンジオール、ＤＬ−グリセリン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、及び１，２，４−ブタントリオールからなる群から選択される骨格に置換される。
【００９１】
別の態様において、本発明は段落００８９による組成物を含み、ＰＥＧ鎖は、ポリメチレングリコール、ポリプロピレングリコールと、メチレングリコール、プロピレングリコール及びエチレングリコールから成る群から選択されるモノマーの少なくとも二つを含む共重合体から成る群から選択されるポリマーに置換される。
【００９２】
別の態様において、本発明は以下の化合物が含まれる：反応スキーム（ａ）で示される化学式で表される化合物；化学構造２として示される化学式で表される化合物；化学構造３として示される化学式で表される化合物；化学構造４として示される化学式で表される化合物；１，２−イソプロピリデングリセロール−３−エチレングリコール、１，２−イソプロピリデン−グリセロール−３−ジエチレングリコール、１，２−イソプロピリデン−グリセロール−３−トリエチレングリコール、１，２−イソプロピリデン−グリセロール−３−テトラエチレングリコール、１，２−イソプロピリデン−グリセロール−３−ペンタエチレングリコール及び１，２−イソプロピリデン−グリセロール−３−ヘキサエチレングリコール、１，２−イソプロピリデン−グリセロール−３−ヘプタエチレングリコール及び１，２−イソプロピリデングリセロール−３−オクタエチレングリコールの分子；及び１，３−ジアシルグリセロール−２−エチレングリコール、１，３−ジアシルグリセロール−２−ジエチレングリコール、１，３−ジアシルグリセロール−２−トリエチレングリコール、１，３−ジアシルグリセロール−２−テトラエチレングリコール、１，３−ジアシルグリセロール−２−ペンタエチレングリコール、１，３−ジアシルグリセロール−２−ヘキサエチレングリコール、１，３−ジアシルグリセロール−２−ヘプタエチレングリコール及び１，３−ジアシルグリセロール−２−オクタエチレングリコールの分子。
【００９３】
別の態様において、本発明は、特定の活性剤の生物学的利用能及び／又は溶解度を高める方法を含み、当該方法は本発明の１又はそれ以上のＰＥＧ−脂質コンジュゲートに当該活性剤を調整するステップと、このＰＥＧ−脂質コンジュゲートに基づいた製剤をヒト又は動物に投与するステップとを具える。
【００９４】
別の態様において、本発明は、以下の化学式を有する化合物を含む。
2012528857.tif 000031
ここでｎは約７乃至１２であり；Ｘはリンカー基であり、約１６乃至２００の分子量を有することがある。Ｘは、オキシ、チオール、アミノ、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯＯ−、スクシニル、ハロゲン及び表３に示されるリンカーからなる群から選択してよい。ＰＥＧ鎖の末端は約１５乃至約２１０の分子量をする。ＰＥＧ鎖の末端はメチル基であってよい。ＰＥＧ鎖の末端は保護基であってよい。ＰＥＧ鎖の末端はヒドロキシル基であってよい。
【００９５】
別の態様において、本発明は、以下の化学式を有する化合物を含む。
2012528857.tif 000032
ここで、ｎは約３乃至２３であり、Ｒは脂質であり、Ｘはリンカー基である。Ｘは約１４乃至６２０の分子量を有し、オキシ、チオール、アミノ、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯＯ−、スクシニル、ハロゲン、及び表３に示されたリンカーからなる群から選択してよい。ｎは約４乃至１２であってよい。より好ましくは、ｎは約７乃至１２であってよい。ＰＥＧ鎖の末端は約１５乃至２１０の分子量を有する。ＰＥＧ鎖の末端がメチル基であってよい。Ｒは、表１または表２から選択されたアルキル基であってよい。Ｒは胆汁酸であってよい。Ｒは、表４から選択される胆汁酸であってもよい。Ｒは、コレステロールであってもよい。
【００９６】
別の態様において、本発明は、以下の化学式を有する化合物を含む。
2012528857.tif 000033
ここで、ｎは約３乃至２３の間であり、Ｒは脂質であり、Ｘは同一または異なるリンカー基である。Ｘは約１４乃至６２０の分子量を有し、オキシ、チオール、アミノ、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯＯ−、スクシニル、ハロゲン及び表３に示されるリンカーから成る群から選択してよい。ｎは、約４乃至２３の間であってもよい。ｎは、約７乃至２３であることが好ましい。ＰＥＧ鎖末端は約１５乃至２１０の分子量を有する。ＰＥＧ鎖の末端はメチル基であってよい。Ｒは、表３又は表４から選択されるアルキル基であってよい。Ｒは、胆汁酸であってよい。Ｒは、表４から選択してよい。Ｒは、コレステロールであってよい。
【００９７】
別の態様において、本発明は、以下の化学式を有する化合物を含む。
2012528857.tif 000034
ここでｎは約３乃至２３の間であり、Ｒは脂質であり、Ｌはリンカー基であり、Ｘは同一または異なるリンカー基である。Ｘは約１４乃至６２０の分子量を有し、オキシ、チオール、アミノ、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯＯ−、スクシニル、ハロゲン、及び表３に示されるリンカーからなる群から選択されることがある。ｎは、約４乃至２３であってよい。ｎは、約７乃至２３の間であってよい。ＰＥＧ鎖の末端には約１５乃至２１０の分子量を有する。ＰＥＧ鎖は末端がメチル基であってもよい。Ｒは、表１または表２から選択されるアルキル基であってもよい。Ｒは、胆汁酸であってよい。Ｒは、表４から選択することができる。Ｒは、コレステロールであってもよい。Ｘはオキシ、チオール、アミノ、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯＯ−、スクシニル、ハロゲン、及び表３に示されるリンカーからなる群から選択できる。
【実施例】
【００９８】
次の実施例は本発明をさらに、いずれもその範囲を限定するものとして構成するものではない。
【００９９】
実施例１：３−オレオイル−１，２−ビス（メトキシヘキサチエレングリコール）グリセロールの合成
【０１００】
第１Ａ：３−ベンジル−１，２−ビス（メトキシヘキエサチレングリコール）グリセロール
【０１０１】
三口フラスコに（±）−３−ベンジルオキシ−１，２−プロパンジオール（１．２ｇ、６ｍｍｏｌ）、水素化ナトリウム（０．９６ｇ、４０ｍｍｏｌ）及び乾燥ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）（１５０ｍＬ）を添加した。当該混合物に、モノメトキシヘキサエチレングリコールトシレート（５．４ｇ、１２ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液（５０ｍＬ）を室温にて液滴で添加した。この混合物を２４時間還流し、室温に冷まし、次いで反応混合物に氷冷メタノールの添加することで、過剰な水素化ナトリウムを除去した。この溶媒を蒸発させて粗生成物を５％の塩酸（ｗ／ｖ）とジクロロメタンで抽出した。この溶媒を蒸発させ、さらにゲルパーミエーションクロマトグラフィーで精製し収率８５％の無色の液体を得た。
【０１０２】
第１Ｂ：３−ヒドロキシル−１，２−ビス（メトキシヘキサエチレングリコール）グリセロール
【０１０３】
５ｇの３−ベンジル−１，２−ビス（メトキシヘキサエチレングリコール）グリセロールを２０ｍＬのｎ−ヘキサン、５滴の酢酸及び０．６ｇのパラジウムブラックに添加した。大気中で、この混合物を３０℃で約６０分間の間、純粋な水素でパージし３’−ヒドロキシのベンジル保護基を除去した。水素を窒素に置換した後、この溶液を４乃至６℃に冷却し、次いで触媒を濾過により除去し、溶剤の蒸発させ最終産物を収率９８％で得た。
【０１０４】
第１Ｃ：３−オレオイル−１，２−ビス（メトキシヘキサエチレングリコール）グリセロール
【０１０５】
窒素下で６．５ｇの１Ｂの産物（１０ｍｍｏｌ）、３．１ｇのオレイン酸（１１ｍｍｏｌ）、９．６ｇのＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（５０ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＡＰ（０．６ｇ、５ｍｍｏｌ）無水ジクロロメタン（４００ｍＬ）を２５℃で１２時間攪拌し、その後Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル尿素塩の析出して、これをろ過により除去した。減圧下で濾液を蒸発させ、化学構造１５に示す最終産物を収率８９％で得た。
2012528857.tif 000035
【０１０６】
実施例２：１，２−ジオレオイル−ｒａｃ−３−モノメトキシドデカエチレングリコール（ｍＰＥＧ−１２）−グリセロールの合成。
【０１０７】
この合成の一般的な手順を反応スキーム８に示す。
2012528857.tif 000036
【０１０８】
１ｍｏｌのヘキサエチレングリコールを０．１５ｍｏｌのピリジンと混合し、４５乃至５０℃に加熱し、０．１ｍｏｌのトリチルクロリドを添加した。一定速度の攪拌下で、一晩（約１６時間）反応させ、次いで室温に冷まし、トルエンで抽出した。この抽出液を水で洗浄した後ヘキサンで抽出し、これを硫酸マグネシウムで乾燥させた。次に溶媒を減圧除去し、淡黄色油状のＴｒ−ヘキサエチレングリコール（収率７０乃至８５％）を得た。
【０１０９】
０．１ｍｏｌのＴｒ−ヘキサエチレングリコールと０．１０１ｍｏｌのｐ−トルエンスルホニルクロリドとを、１００ｍＬのジクロロメタンと混合した。この均質混合物をドライアイス−アセトン浴で０℃に冷却し、反応温度を５℃以下に維持しながら激しい撹拌下で４５ｇの水酸化カリウムを少量ずつ加えた。この反応を一定の攪拌下で、０℃、３時間で完了させ、この粗生成物を１００ｍＬのジクロロメタンで希釈した後、１２０ｍＬの氷冷した水を添加した。次に、有機層を回収し、水相をジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で抽出した。次いで、これを有機層に混合し、水（１００ｍＬ）で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥させた。その後、溶媒を真空下で除去し、透明な油状物（８７乃至９９％）を得た。
【０１１０】
三口フラスコに、１,２−イソプロピリデン−ｒａｃ−グリセロール（０．１ｍｏｌ）と水素化ナトリウム（０．４ｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（２００ｍＬ）を添加した。室温で、Ｔｒ−ヘキサエチレングリコールトシルレート（０．１ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液（１２５ｍＬ）を液滴で、この混合物に添加した。次いで反応混合物に氷冷メタノールを添加することで過剰な水素化ナトリウムを除去した。この溶媒を蒸発させ、粗生成物を５％の塩酸（ｗ／ｖ）とジクロロメタンで抽出した。粗生成物は、更に精製せず合成の次の段階に直接供した。
【０１１１】
上記粗生成物を高耐圧ガラスフラスコに移し、２００ｍＬの乾燥ジクロロメタンに１０％パラジウム炭素（１．５ｇ）を加えた。大気中で３０℃、約６０分間の間、純粋な水素をパージしヘキサエチレングリコールの保護基を除去する水素分解を行なった。水素の窒素置換後、この溶液を４乃至６℃に冷却し、次いで触媒を濾過により除去した。溶剤を、蒸発させ収率９５乃至９８％の最終産物を得た。
【０１１２】
三口フラスコに、３−ヘキサエチレングリコール−１，２−イソプロピリデン−ｒａｃ−グリセロール（０．１ｍｏｌ）と水素化ナトリウム（０．４ｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（５００ｍＬ）を添加した。室温で、モノベンジルヘキサエチレングリコールトシレート（０．１１ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液（２００ｍＬ）を液滴で、当該混合物に添加した。この混合物を２４時間還流し、室温まで冷却し、次いでこの反応混合物に氷冷メタノールを添加することより過剰な水素化ナトリウムを除去した。この溶媒を蒸発させて粗生成物を５％の塩酸（ｗ／ｖ）とジクロロメタンで抽出した。次いで触媒を濾過により除去し、ゲルクロマトグラフィーで更なる精製を行い収率８２％の３−モノメトキシヘキサエチレングリコール−１，２−イソプロピリデングリセロールを得た。
【０１１３】
１０ｇの３−モノメトキシドデカエチレングリコール−１，２−イソプロピリデングリセロールを３時間の間、酸性メタノール溶液（１８０ｍＬメタノール：２０ｍＬ、１Ｍ塩酸）に撹拌することでイソプロピリデン保護基を除去した。この混合物を、炭酸水素ナトリウムで中和した後、クロロホルム（３×１５０ｍＬ）に抽出し、これを硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶剤を濾過し、蒸発させ３−モノメトキシヘキサエチレングリコール−１，２−ジヒドロキシル−グリセロールの産物（７５乃至８０％）を得た（化学構造１６）。
2012528857.tif 000037
【０１１４】
上記のＰＥＧ鎖延長反応における、開始のＰＥＧ試薬は、好ましくは１乃至６のＣＨ２ＣＨ２Ｏユニットから成り、より好ましくは３乃至６のＣＨ２ＣＨ２Ｏユニットを有し、さらにより好ましくは４乃至６のＣＨ２ＣＨ２Ｏユニットを有する。グリセロールとＰＥＧ−試薬との反応は、リンカー基の存在の有無に関わらず生じうる。ヒドロキシル基、アミノ基、カルボキシル基、イソシアネート基、チオール基、炭酸官能基を有しているＰＥＧ−試薬が好ましい。本発明の方法をこの実施態様で使用する際、特に好ましいＰＥＧ−試薬には、ＰＥＧ−トシル酸、ＰＥＧ−メシル酸及びスクシニル−ＰＥＧがある。グリセロールとＰＥＧ−試薬との反応に続き、保護基を除去する。
【０１１５】
窒素下で、０．１ｍｏｌの３−モノメトキシドデカエチレングリコール−１，２−ジヒドロキシル−グリセロールを２５０ｍＬのクロロホルム中で撹拌し続けた。０．２１ｍｏｌのオレオイルクロライドが２５０ｍＬのクロロホルムに溶解し、ジヒドロキシアセトンの不均質混合物に添加した後、１５ｍＬの無水ピリジンを加えた。室温で、絶えず攪拌しながら反応を３０分間進めた。混合物が均質になり、検出可能な塩化オレオイルが混合物中になくなった時点で反応を完了させ、真空下でバルク溶媒を除去した。次に、残渣をジクロロメタンで希釈し、等量のブライン溶液を添加した。有機層を回収し、水相をジクロロメタンで繰り返し抽出し、有機層と混合した。これを水（５０ｍＬ）で再度洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、さらに蒸発させることにより油状物を得た（７０乃至８０％）（化学構造１７）。この液体クロマトグラフ−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）のクロマトグラムを図１に示す：（ａ）試料を、４．６×５０ｍｍのＩｎｅｒｔｓｉｌ  Ｃ８カラム上に注入し、質量分析（ＭＳ）でモニタリングしながらテトラヒドロフランと水の混合物（４／６、ｖ／ｖ）で溶出し、（ｂ）１．４５分に溶出したピークのＭＳスペクトルである。ここで、［Ｍ−１］＋は親化合物のイオンである。
2012528857.tif 000038
【０１１６】
実施例３：１，３−ジオレオイル−ｒａｃ−２−モノメトキシドデカエチレングリコール（ｍＰＥＧ−１２）−グリセロールの合成
【０１１７】
この合成の一般的な手順を次のスキーム（反応スキーム９）に示す。
2012528857.tif 000039
【０１１８】
窒素下で、０．０３３ｍｏｌのジヒドロキシアセトンを１５０ｍＬのクロロホルムに加え撹拌し続けた。０．０６ｍｏｌの塩化オレオイルを１５０ｍＬのクロロホルムに溶解し、当該ジヒドロキシアセトンの不均質混合物に添加した後、１０ｍＬの無水ピリジンを加えた。反応は、室温で、絶えず攪拌しながら３０分間進めた。混合物が均質になり、検出可能な塩化オレオイルが混合物中になくなった時点で反応を完了させ、バルク溶媒を真空下で除去した。残渣を水で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。水相を、酢酸エチル抽出物と有機層の混合液で繰り返し抽出し、水で再び洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。得られた油状物を、メタノールで再結晶させ４３乃至４４℃の融解温度を持つ３−（オクタデク−１０−エノイロキシ）−２−オキソプロピルオクタデク−９−エノアート（収率７５乃至８０％）を得た。
【０１１９】
１，３−ジオレイン酸（０．０２ｍｏｌ）を１５０ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）及び１０ｍＬの水に溶解した。この不均一溶液を氷浴で５℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（ＴＨＦ中に０．０２６ｍｏｌ）の溶液を少量ずつ加えた。３０分後に約１ｍＬの氷酢酸のを加えることで過剰な水素化ホウ素ナトリウムを壊し、次いで、この溶液をクロロホルムで希釈し、水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥させた。２０乃至２２℃の融解温度を有し、部分的に針状結晶化した２−ヒドロキシ−３−（オクタデク−１０−エノイロキシ）プロピルオクタデク−９−エノアート（収量８０乃至９０％）の油を得た。
【０１２０】
上記の中間生成物から、１，３−ジオレオイル−ｒａｃ−グリセロール−ｒａｃ−２−モノメトキシドデカエチレングリコール（ｍＰＥＧ−１２）−グリセロール（化学構造１８）を実施例１と２で述べたような反応と操作によって調整した。
2012528857.tif 000040
【０１２１】
実施例４：１，２−ジミリストイル−ｒａｃ−３−ドデカプロピレングリコール（ＰＰＧ−１２）−グリセロール  
【０１２２】
この合成の一般的な手順を、次のスキーム（反応スキーム１０）に示す。
2012528857.tif 000041
【０１２３】
１．５ｍｏｌのテトラプロピレングリコールを０．２３ｍｏｌのピリジンと混合し４５乃至５０℃に加熱し、０．１５ｍｏｌのトリチルクロライドを添加した。次いで一定の撹拌下で、一晩（約１６時間）反応を進め、この反応物を室温に冷まし、トルエンで抽出した。この抽出液を水で洗浄した後、ヘキサンで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を真空下で除去し、淡黄色油状のＴｒ−テトラプロピレングリコール（収率７５乃至８５％）を得た。
【０１２４】
０．１ｍｏｌのＴｒ−テトラプロピレングリコールと０．１０１ｍｏｌのｐ−トルエンスルホニルクロリドを１００ｍＬのジクロロメタンに混合した。この均一混合物をドライアイス−アセトン浴で０℃に冷却し５℃以下の反応温度を維持し、激しく撹拌しながら少量ずつ４５ｇの水酸化カリウムを加えた。反応は０℃で４時間一定の攪拌下で終了した。粗生成物を１００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、その後、氷冷した１２０ｍＬの水を加えた。有機層を回収し、水相をジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を真空下で除去し透明な油を得た（８５乃至９５％）。
【０１２５】
三口フラスコに１，２−イソプロピリデン−ｒａｃ−グリセロール（０．１ｍｏｌ）と水素化ナトリウム（０．４ｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（２００ｍＬ）とを加えた。室温でＴｒ−テトラプロピレングリコールトシレート（０．１ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液（１２５ｍＬ）を液滴でこの混合物に添加した。この混合物を２４時間還流し、室温に冷まし、次いで反応混合物に氷冷メタノールの添加することで過剰な水素化ナトリウムを除去した。この溶媒を蒸発させ粗生成物を５％の塩酸（ｗ／ｖ）とジクロロメタンで抽出した。粗生成物は、更に精製せずに、合成の次の段階に直接供した。
【０１２６】
上記粗生成物を高耐圧ガラスフラスコに移し、２００ｍＬの乾燥ジクロロメタンに１０％のパラジウム炭素（１．５ｇ）を加えた。大気化で３０℃、約６０分間の間、水素をパージし、水素分解によりヘキサエチレングリコールの保護基を除去した。水素を窒素で置換した後、この溶液を４乃至６℃に冷却し、次いで触媒を濾過で除去した。溶剤を、蒸発させ収率９５乃至９８％の最終産物を得た。
【０１２７】
三口フラスコに、３−テトラ−プロピレングリコール−１，２−イソプロピリデン−ｒａｃ−グリセロール（０．１ｍｏｌ）及び水素化ナトリウムを（０．４ｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（５００ｍＬ）を添加した。この混合物にＴｒ−テトラプロピレングリコールトシレート（０．１１ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液（２００ｍＬ）を室温にて液滴で添加した。この混合物を２４時間還流し、室温に冷ました。反応混合物に氷冷メタノールを添加により過度の水素化ナトリウムを除去した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を５％の塩酸（ｗ／ｖ）とジクロロメタンで抽出した。
【０１２８】
上記のエーテル化の行程をもう一度繰り返した。この溶媒を蒸発させ、さらに、ゲルパーミエーションクロマトグラフィーにより精製し、約８０％の３−トリチル−ドデカプロピレングリコール−１，２−イソプロピリデングリコールを得た。
【０１２９】
１０ｇの、３−ドデカプロピレングリコール−１，２−イソプロピリデングリコールを酸性メタノール溶液（１８０ｍＬのメタノール：２０ｍＬの１Ｍ塩酸）で３時間撹拌することによりイソプロピリデン保護基を除去した。この混合物を、炭酸水素ナトリウムで中和し、クロロホルム（３×１５０ｍＬ）中に抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶剤を濾過し、蒸発させることで３−トリチル−ドデカプロピレングリコール−１，２−ジヒドロキシル−グリセロール（化学構造１９）の生成物（７５乃至８０％）を得た。
2012528857.tif 000042
【０１３０】
上記のＰＥＧ鎖の延長反応では、開始ＰＥＧ試薬は、好ましくは１乃至６のＣＨ２（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏユニットを含み、より好ましくは３乃至６のＣＨ２ＣＨ２Ｏユニットを、そしてより好ましくは４乃至６のＣＨ２ＣＨ２Ｏユニットを有している。グリセロールとＰＥＧ−試薬との反応は、リンカー基の存在の有無に関わらず生じうる。この実施態様では、好ましいＰＥＧ−試薬は、ヒドロキシル基、アミノ基、カルボキシル基、イソシアネート基、チオール基、炭酸官能基を有している。当該実施態様に使用する特に好ましいＰＥＧ−試薬は、ＰＥＧ−トシル酸、ＰＥＧ−メシル酸とスクシニル−ＰＥＧを含む。グリセロールとＰＥＧ−試薬との反応に続いて、保護基を除去する。
【０１３１】
０．１ｍｏｌの３−トリチルドデカプロピレングリコール−１，２−ジヒドロキシル−グリセロールを窒素下で２５０ｍＬのクロロホルムに撹拌し続けた。０．２１ｍｏｌのミリストイルクロリドを２５０ｍＬのクロロホルムに溶解し、当該ジヒドロキシアセトンの不均質混合物に添加した後、無水ピリジン１５ｍＬを添加した。室温で絶えず撹拌しながら反応を３０分間進めた。混合物が均質になり、検出可能な塩化オレオイルが混合物中になくなった時点で反応を完了させ、バルク溶媒を真空下で除去し、更なる精製をせずに次の工程に移行した。
【０１３２】
上記粗生成物を高耐圧ガラスフラスコに移し、２００ｍＬの乾燥ジクロロメタンに１０％パラジウム炭素（１．５ｇ）を加えた。大気中で３０℃、約６０分間、純粋な水素をパージし、水素分解によりヘキサエチレングリコールの保護基を除去した。水素を窒素に置換した後、この溶液を４乃至６℃に冷却し、濾過により触媒を除去した。溶剤を、蒸発させ収率９５乃至９８％の最終産物を得た。
【０１３３】
上記産物から残渣とジクロロメタンを希釈して等量のブライン溶液を追加した。有機層を回収し、水相を繰り返しジクロロメタンで抽出して、有機層を混ぜ合わせ、水（５０ｍＬ）で再度洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、さらに蒸発させてを油状生成物（７０乃至８５％）を得た（化学構造２０）。
2012528857.tif 000043
【０１３４】
当該高分子鎖の延長反応の出発試薬は、例えばメチレングリコールまたはエチレングリコールまたはプロピレングリコール又は前記３つの１乃至６の繰り返し単位の混合物、そしてより好ましくは３乃至６の繰り返し単位を有し、より好ましくは４乃至６の繰り返し単位を有している。グリセロールと当該試薬との反応は、リンカー基の有無に関わらず生じうる。この実施態様では、好ましい重合試薬は、ヒドロキシル基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基、イソシアネート基、炭酸官能基を有している。本発明の方法のこの実施態様で使用する特に好ましい試薬にはトシレート、メシル酸とスクシニル活性中間体がある。グリセロールと重合試薬との反応に続き、保護基を除去する。このような例の一つを、化学構造２１に示す。
2012528857.tif 000044
【０１３５】
実施例５：固形剤組成
【０１３６】
液体ＰＥＧ−脂質コンジュゲートを、プロペラ型混合ブレードを装備したステンレス製の容器に添加した。絶えず混合しながら原薬を添加し、５５℃乃至６５℃の温度で、目視によって当該薬剤が脂質中に分散されるまで混合を続けた。別の容器で、約３０℃以上の融解温度を有するＰＥＧ−脂質コンジュゲートを加熱溶融させる又は、エタノールに溶解させ、前記容器に混合しながら添加した。完全に均質な溶液が得られるまで混合し続け、必要に応じて、真空でエタノールを除去する。この溶液が温かいうちに、カプセルの殻やデザイン済みの包装構造体（金型）に充填し、充填済みカプセルや金型は、冷却によりクリーム状の混合物が固化されるまで冷蔵下（２乃至８℃）に置く。サンプルの組成を、表５に記載する。
【０１３７】
2012528857.tif 000045
【０１３８】
液体ＰＥＧ−脂質コンジュゲートは、ＧＤＭ−１２、ＧＤＯ−１２、ＧＤＣ−１２、ＧＤＭ−６００、ＧＤＯ−６００、ＧＤＣ−６００、ＧＯＢ−１２、ＧＭＢ−１２、ＧＯＢＨ、ＧＭＢＨ、ＧＣＢＨ、ＧＣＢＨ又はＧＰＢＨであってよい。固体脂質コンジュゲートは、ＧＤＳ−１２、ＤＳＢ−１２、ＧＤＯ−２３、ＧＤＯ−２７、ＧＤＭ−２３、ＧＤＭ−２７及びＧＤＳ−２３であってよい。薬剤はモダフィニル又はニフェジピン又はエソメプラゾール又はラパマイシン又は別の活性剤でよい。
【０１３９】
実施例：固形剤組成
【０１４０】
液体ＰＥＧ−脂質コンジュゲート（融点が１５℃以下のもの）を、プロペラ型混合ブレードを装備したステンレス製の容器に添加し、絶えず混合しながら原薬を追加した。この薬が目視によって脂質中に分散されるまで５５℃乃至６５℃の温度で混合を続けた。別の容器でＴＰＧＳ−ＶＥをエタノールに溶解し、これを前記容器で混合しながら加えた。完全に均質な溶液が得られるまで混合し続け、真空でエタノールを除去した。この溶液を温かいうちに、カプセルの殻やデザイン済みの包装構造体（金型）に充填し、充填済みカプセルや金型を冷蔵下（２乃至８℃）に置いた。冷却によりクリーム状の混合物は固化した。サンプルの組成を、表６に記載する。
【０１４１】
2012528857.tif 000046
【０１４２】
液体ＰＥＧ−脂質コンジュゲートはＧＤＭ−１２、ＧＤＯ−１２、ＧＤＣ−１２、ＧＤＭ−６００、ＧＤＯ−６００、ＧＤＣ−６００、ＧＯＢ−１２、ＧＭＢ−１２、ＧＯＢＨ、ＧＭＢＨ、ＧＣＢＨ、ＧＣＢＨ又はＧＰＢＨであってもよい。この薬はモダフィニル又はニフェジピン又はエソメプラゾール又はラパマイシン又は他の活性剤でよい。
【０１４３】
実施例７：経口液剤組成
【０１４４】
ＰＥＧ−脂質を、混合用プロペラを装備した容器に添加した。原薬を、絶えず混合しながら添加し、目視で当該薬が脂質中に分散されるまで混合を続けた。予め溶解させた賦形剤を、十分に混合している容器にゆっくりと添加し、完全に均質な溶液が得られるまで混合し続けた。サンプルの組成を、表７に記載する。
【０１４５】
2012528857.tif 000047
【０１４６】
脂質は、ＧＤＭ−１２、ＧＤＯ−１２、ＧＤＣ−１２、ＧＤＭ−６００、ＧＤＯ−６００、ＧＤＣ−６００、ＧＯＢ−１２、ＧＭＢ−１２、ＧＯＢＨ、ＧＭＢＨ、ＧＣＢＨ、ＧＣＢＨ又はＧＰＢＨ又はこれら任意の組み合わせであってもよい。精製水で水酸化ナトリウムの１０％（ｗ／ｗ）溶液を調製して使用する。対象となるｐＨは４．０から７．０の範囲である。水酸化ナトリウムは、必要に応じてｐＨの調整に使用する。薬はモダフィニル又はニフェジピンは又はエソメプラゾール又はラパマイシン又は別の活性剤でよい。
【０１４７】
実施例８：シクロスポリン眼科用組成
【０１４８】
ＰＥＧ−脂質を、混合用プロペラを装備した容器に添加した。混合し続けながらシクロスポリン原薬を添加し、目視において当該薬が脂質中に分散するまで混合し続けた。溶解済みの賦形剤と滅菌精製水とを、十分に混合する容器にゆっくりと添加し、完全に均質な溶液が得られるまで混合を続けた。サンプルの組成を表８に記載する。
【０１４９】
2012528857.tif 000048
【０１５０】
脂質はＧＤＭ−１２、ＧＤＯ−１２、ＧＤＣ−１２、ＧＤＭ−６００、ＧＤＯ−６００、ＧＤＣ−６００、ＧＯＢ−１２、ＧＭＢ−１２、ＧＯＢＨ、ＧＭＢＨ、ＧＣＢＨ、ＧＣＢＨまたはＧＰＢＨ又は、これら任意の組み合わせであってもよい。精製水で水酸化ナトリウムの１０％（ｗ／ｗ）溶液を調製して使用する。対象となるｐＨは６．０から７．４の範囲である。水酸化ナトリウムは、必要に応じてｐＨの調製に使用する。
【０１５１】
実施例９：注射液の組成
【０１５２】
注射液は、対象となるｐＨ範囲が６．０乃至８．０であることを除いて、実施例７のように調製した。サンプルの組成を、表９に記載する。
【０１５３】
2012528857.tif 000049
【０１５４】
脂質は、ＧＤＭ−１２、ＧＤＯ−１２、ＧＤＣ−１２、ＧＤＭ−６００、ＧＤＯ−６００、ＧＤＣ−６００、ＧＯＢ−１２、ＧＭＢ−１２、ＧＯＢＨ、ＧＭＢＨ、ＧＣＢＨ、ＧＣＢＨ又はＧＰＢＨ又はこれらの任意の組み合わせであってよい。精製水で水酸化ナトリウムの１０％（ｗ／ｗ）溶液を調製して使用する。目標ｐＨは６．５乃至７．４の範囲である。水酸化ナトリウムは必要に応じてｐＨの調製に使用する。この薬はポサコナゾール、ボリコナゾール及びイトラコナゾール又はラパマイシン又はシクロスポリン又はタクロリム又はニフェジピン、又はパクリタキセル、又はドセタキセル又はゲフィチニブ又はプロポフォール又はリファンピン又はジアゼパム又はネルフィナビル又は別の活性剤を含むトリアゾールであってよい。
【０１５５】
実施例１０：イトラコナゾール製剤の薬剤動態プロファイルと生物学的利用能
【０１５６】
３匹の雄マウス（Ｂ６Ｄ２Ｆ１）群を研究に使用した。薬剤動態（ＰＫ）は、イトラコナゾールを急速静脈注射後、典型的に０時間、０．０８時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、８時間、１６時間及び２４時間で、又は経口摂取後０時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、８時間、１６時間及び２４時間で採取したヘパリン化マウスの血漿サンプルについて実施した。次いで、サンプルはＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を用いて分析した。各薬剤のレベルを測定するため、まずサンプルの前処理において血漿から薬剤を単離した。アセトニトリルは、試料中のタンパク質の除去に使用した。次いでアイソクラティックＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を用いて任意の潜在的な干渉から薬剤を分離した。薬剤濃度は、マルチプルリアクションモニタリング（ＭＲＭ）モードのＭＳ検出で測定した。ＰＫのデータは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎのプログラム（バージョン５．２、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社）のコンパートメントモデルを用いて解析した。
【０１５７】
図２は、マウスにおける（１）１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中のＧＤＯ−１２（脂質比１：１０薬剤）と、（２）１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中の１０％クレモフォール−５％メタノールを添加したイトラコナゾール製剤の薬剤動態プロファイルを示している。この薬剤を投薬強度２０ｍｇ／ｋｇで静脈内に投与した。ＤＡＧ−ＰＥＧ製剤（１）と商用製品（２）のＡＵＣは、それぞれ５４４１μｇ・ｈｒ／ｍＬ及び９８６μｇ・ｈｒ／ｍＬであった。
【０１５８】
図３は、（１）１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中のＧＤＯ−１２（脂質比１：１０薬剤）と、（２）１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中の１０％クレモフォール−５％メタノールを添加したイトラコナゾール製剤のマウスの薬剤動態プロファイルを示している。この薬剤を投薬強度２０ｍｇ／ｋｇで経口的に投与した。相対的な生物学的利用能は、ＰＥＧ−ＤＡＧの処方（１）及び（２）でそれぞれ６３％及び４５％であった（０乃至２４時間のＡＵＣに基づく）。
【０１５９】
実施例１１：局所クリームの組成
【０１６０】
ＰＥＧ脂質を、プロペラ型混合ブレードを装備したステンレス製の容器に添加し、絶えず混合しながら原薬を追加した。この薬が目視で脂質中に分散されるまで６０℃乃至６５℃の温度で混合を続けた。有機酸、コレステロール、及びグリセリン、次にエタノール及びエチオキシジグリコール、最後にカーボポールＥＴＤ２０２０、精製水及びトリエチルアミンを混合しながら添加し、完全に均質なクリームが得られるまで混合を続けた。この組成を表１０に記載する。
【０１６１】
2012528857.tif 000050
【０１６２】
脂質は、ＧＤＭ−１２、ＧＤＯ−１２、ＧＤＣ−１２、ＧＤＭ−６００、ＧＤＯ−６００、ＧＤＣ−６００、ＧＯＢ−１２、ＧＭＢ−１２、ＧＯＢＨ、ＧＭＢＨ、ＧＣＢＨ、ＧＣＢＨ又はＧＰＢＨ又はＧＤＳ−１２、又はこれらの任意の組み合わせであってよい。有機酸は乳酸又はピルビン酸又はグリコール酸であってよい。必要に応じてｐＨの調整に水酸化ナトリウムを使用する。目標ｐＨ範囲は３．５乃至７．０であった。薬剤はイトラコナゾール、ポサコナゾール、ボリコナゾールまたはエクアコナゾール（ｅｑｕａｃｏｎａｚｏｌｅ）、テルビナフィン、アモロルフィン、ナフチフィン、ブテナフィン、安息香酸、シクロピロックス、トルナフテート、ウンデシレン酸、フルシトシン、グリセオフルビン、ハロプロジン、重炭酸ナトリウムまたはフルオシノロンアセトニドであってよい。
【０１６３】
実施例１２：局所用溶液の組成．
【０１６４】
局所用溶液は、実施例１１と同様に調製した、サンプルの組成を、表１１に記載する。
【０１６５】
2012528857.tif 000051
【０１６６】
脂質は、ＧＤＭ−１２、ＧＤＯ−１２、ＧＤＣ−１２、ＧＤＭ−６００、ＧＤＯ−６００、ＧＤＣ−６００、ＧＯＢ−１２、ＧＭＢ−１２、ＧＯＢＨ、ＧＭＢＨ、ＧＣＢＨ、ＧＣＢＨ又はＧＰＢＨ、又はそれらの任意の組み合わせであってよい。有機酸は乳酸又はピルビン酸、グリコール酸であってよい。必要に応じてｐＨを調整するために水酸化ナトリウムを使用した。目標ｐＨ範囲は３．５乃至７．０であった。薬はイトラコナゾール、ポサコナゾール、ボリコナゾールまたはエクアコナゾール（ｅｑｕａｃｏｎａｚｏｌｅ）、テルビナフィン、アモロルフィン、ナフチフィン（Ｎａｆｔｉｆｉｎｅ）、ブテナフィン、安息香酸、シクロピロックス、トルナフテート、ウンデシレン酸、フルシトシン、グリセオフルビン、ハロプロジン、重炭酸ナトリウムまたはフルオシノロンアセトニドであってよい。
【０１６７】
実施例１３：アジスロマイシンの眼科用組成物
【０１６８】
ＰＥＧ−脂質は、混合用プロペラを装備した容器に加えた。アジスロマイシン原薬を絶えず混合しながら添加した。薬が視覚的に脂質中に分散されるまで混合を続け、溶解済み賦形剤と滅菌精製水を十分に混合をしながらゆっくりと容器に添加した。完全に均質な溶液が得られるまで混合を続けた。サンプルの組成を、表１２に記載する。
【０１６９】
2012528857.tif 000052
【０１７０】
脂質は、ＧＤＭ−１２、ＧＤＯ−１２、ＧＤＣ−１２、ＧＤＭ−６００、ＧＤＯ−６００、ＧＤＣ−６００、ＧＯＢ−１２、ＧＭＢ−１２、ＧＯＢＨ、ＧＭＢＨ、ＧＣＢＨ、ＧＣＢＨ又はＧＰＢＨ、又はそれらの任意の組み合わせであってよい。精製水を用いて水酸化ナトリウムの１０％（ｗ／ｗ）溶液を調整する。目標ｐＨは７．０から７．８の範囲である。水酸化ナトリウムは必要に応じてｐＨを調整するのに使用する。
【０１７１】
好ましいアジスロマイシンの濃度は０．５乃至３％であり、より好ましくは０．５乃至２％であり、最も好ましくは１乃至２％である。薬剤へのＰＥＧ−脂質の好ましい比率（ＰＥＧ−脂質／シクロスポリン）は１乃至２０であり、より好ましくは３乃至１５であり、最も好ましくは５乃至１０である。
【図１】
2012528857.tif 000053
【図２】
2012528857.tif 000054
【図３】
2012528857.tif 000055
【国際調査報告】
2012528857.tif 000056
2012528857.tif 000057