【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年8月20日(2009.8.20)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項４】
前記血管外細胞は、骨格筋細胞、筋繊維、筋細胞、関節細胞、滑膜細胞、軟骨細胞、結合組織細胞、線維芽細胞、線維細胞、軟骨細胞、間葉細胞、マスト細胞、大食細胞、組織球、腱細胞、被膜細胞、骨の細胞、骨細胞(osteocyte)、破骨細胞、骨芽細胞、骨髄細胞、造血細胞、皮膚細胞、リンパ節細胞およびストロマ細胞からなる群から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項７】
前記ウィルスは、アデノ随伴ウィルス及びアデノウィルスから構成される群から選択されることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項８】
前記ポリヌクレオチドは、トランスフェクション剤に付随することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項１１】
前記ポリペプチドは、前記細胞の遺伝子の発現を変化させることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項１２】
前記ポリヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスポリヌクレオチド、リボザイム、ＲＮＡｉを誘発するポリヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡ又はアンチセンスポリヌクレオチドをコードする遺伝子からなる群から選択されることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項１７】
前記疾病は、代謝性疾患、筋疾患、筋肉損傷、筋委縮症、癌、感染症、血管病、循環障害、内分泌の障害、免疫疾患からなるリストから選択されることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
骨格筋は、疾患（例えば筋ジストロフィーまたは末梢性肢虚血）を治療することを意図する遺伝子治療介入のための魅力的な目標組織である。また、代謝および遺伝子の筋肉状況の他の先天的な過失、筋肉疾患、筋委縮症、筋肉損傷（スポーツ損傷を含む）および筋ジストロフィーの二次症状は、遺伝子治療を使用する処置における候補である。筋肉に関連した疾患に加えて、他の非筋肉状況は、また、骨格筋に対する遺伝子送達によって治療されることができる。遺伝物質を骨格筋細胞に届けることによって、筋組織は、改変された内分泌組織になることができ得る。届けられた遺伝子が筋細胞から分泌されるタンパク質をコード化する場合、血友病、糖尿病、高コレステロール血症、腎臓間質性線維症、高血圧、異リポ蛋白血症、慢性腎臓線維症、肝硬変、高血糖およびアテローム性動脈硬化症のような疾患は治療されることができる。筋細胞に対する遺伝子送達は、また、免疫反応を調節するかまたは誘発して、骨疾患を治療するかまたは骨の治癒を促進するか、または、成長プレート損傷を治療するために用いてもよい。治療的な見込みが高い候補遺伝子が識別される一方、現行の送達方法は関連した問題を有する。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
細胞は、骨格筋細胞（筋繊維、筋細胞）骨の細胞（骨細胞(osteocyte)、破骨細胞、骨芽細胞）、骨髄細胞、ストロマ細胞、関節の細胞（滑膜および軟骨細胞）、結合組織細胞（線維芽細胞、線維細胞、軟骨細胞、間葉細胞、マスト細胞、大食細胞、組織球）、皮膚の腱細胞の細胞およびリンパ節の細胞で構成される群から選択されてよい。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２５】
図１１は、毎分３ｍｌの率で、０．８ｍｌ食塩水のアデノ随伴ウイルスの０．１９のｘ  １０９の変換ユニットの一回の静注後のβガラクトシダーゼにおいて染色されたマウス後肢腓腹筋の筋肉の顕微鏡写真である。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
記載されている方法は、ポリヌクレオチドをマウス、ラット、ウサギ、イヌおよび人間以外の霊長類の肢筋細胞に届けるために効果的なことを示す。また、関節の細胞（滑膜細胞、軟骨細胞および被膜細胞を含む）並びに骨の細胞および骨髄（造血および造血幹細胞、並びに骨髄間質細胞を含む）を含む肢の他の細胞への送達が可能である。注射されるポリヌクレオチドの量および注射量を増やすことによって、ラットのような小さい哺乳類の肢の細胞に対するポリヌクレオチドの静脈内送達のために記載された方法は、より大型動物で使用するために容易に適する。また、注射率は、より大型の哺乳類に対する送達のために高めてもよい。逆にいえば、より小さい動物に対する注射量および／または注射率は減じられる。例えば、ラットの後肢（総量１５０ｇの動物）に対する送達において、伏在静脈に対する２５ｍｌ／分の率で０．２乃至３ｍｌの注射溶液の注射は、結果として、肢の全体にわたって多数の筋細胞へのポリヌクレオチドの送達になる。ビーグル犬（総量９．５ｋｇまで）前肢に対する送達において、肢静脈に対する２ｍｌ／秒の送達率の４０ｍｌの注射溶液は、結果として、肢の全体にわたって多数の筋細胞にポリヌクレオチドの送達になる。アカゲザルの肢に対する送達において、肢静脈に対する１．７乃至２ｍｌ／秒の送達率の４０乃至１００ｍｌの注射溶液は、結果として、肢の全体にわたって多数の筋細胞にポリヌクレオチドの送達になる。この量は、アカゲザルの取って代わった目標の肢の１ｍｌにつき、約０．２乃至０．６ｍｌの注射量に対応する。目標の肢の量は、肢の量であるか、静脈閉塞に対して末端の肢の部分であるか、あるいは血管閉塞によって分離される肢の部分である。静注方法は、単一の注射にしたがって、閉塞に対して末端の肢のほとんど全ての筋肉群において、結果として、非常に効果的な遺伝子送達となる。この手法がより大型の哺乳類に拡大されるにつれて、この手法を用いて達成できるトランス遺伝子発現のレベルが減少しないことは、特に注目に値する。対照的に、プラスミドＤＮＡの直接の筋内注射は、げっ歯動物の筋肉の１グラムにつき高い発現レベルとなるが、しかし、霊長類の筋肉の１グラムにつき非常に低い発現レベルとなる（Ｊｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．  １９９２）。この方法がラット、犬、及びヒト以外の霊長類に対して容易に適用されるので、ヒトを含む他の哺乳類での使用においても容易に適用されることが予測される。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４５】
好ましい実施態様において、ポリヌクレオチドは、分泌されたタンパク質の発現のために提供する肢の骨格筋細胞および他の血管外か実質細胞に届けられてよい。一般に、筋肉は分泌組織と考えられないが、筋細胞に届けられる遺伝子からの産物は体循環に入ることができる。したがって、エンドクリンおよびパラクリン要因および他の治療的なタンパク質のレベルを変えるためにこの方法を使用することで可能性が存在する。このような方法で、筋肉がトランス遺伝子生成のためのバイオリアクタとして使用され、全身効果のために分泌されるタンパク質を生成する。治療手法として、この方法はペプチド／タンパク質の投与において有利であり、それは比較的短い半減期を有して、反復注射を必要とする。（Ｇｏｌｄｓｐｉｎｋ  ２００３）。成長ホルモン欠乏、貧血症その他のような内分泌物、糖尿病性神経障害および末梢性神経障害を含む神経組織栄養障害、循環障害および代謝性障害は筋肉への遺伝子移動を使用して治療されることができる疾患の実施例である。潜在的に治療的なタンパク質をコード化する遺伝子は、関節炎の治療のためのＩＬ−１０、可溶なｐ７５腫瘍壊死要因レセプタ−Ｆｃ融合タンパク質、インターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−ＲＡ）およびＴＮＦα拮抗剤；  糖尿病の治療のための修正されたインスリン、プレプロインシュリンおよび修正されたプレプロインシュリン遺伝子；  コレステロール関連の疾患（例えば高コレステロール血症およびアテローム硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｈｌｅｒｏｓｉｓ）の治療または予防のためのアポリポタンパク質Ｅおよびアデポネクチン（ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）；  高血糖症の治療のためのグルコキナーゼまたはブドウ糖輸送体；間質性腎臓病、腎臓間質性線維症および慢性腎臓線維症のための肝細胞増殖因子およびアンギオテンシンＩＩブロッカー；  肝硬変、筋肉疾患および筋肉損傷、神経障害などのためのＩＧＦ１；血友病のための第ＩＸ因子を含む凝固因子；  癌または肝炎を治療するインターフェロンα、サイトカインＩＬ−２、ＩＬ１２；  骨疾患を治療して、破断治癒を改善される骨形態形成タンパク質−２のような骨帰納的な因子および成長因子；  自己免疫疾患を治療するかまたは免疫反応を修正するサイトカインおよびサイトカイン抑制剤；  貧血症の治療のための造血因子およびエリトロポイエチン（Ｅｐｏ）；  筋肉成長／肥大を誘発して、筋肉質量を増やす成長ホルモンおよびメカノ（ｍｅｃｈａｎｏ）成長因子；  ファブリー病の治療のためのα−ガラクトシダーゼ；  成長プレート損傷の処置のためのＩＧＦ１および骨形態形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）；  気腫を治療するかまたは肺疾患を予防するα−反トリプシン；  癌の処置のための顆粒白血球大食細胞コロニー刺激因子および他の神経成長因子、オートクリン因子、成長因子および分泌促進物質からなるリストから選ばれることができる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
また、送達方法は、例えば、筋芽細胞および造血幹細胞などの細胞を届けるために用いることができる。細胞は、治療的なタンパク質を生産するために遺伝子組換えできる。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１５】
【表１３】
2007501282.tif 000001
実施例２０．関節および骨に対するポリヌクレオチド送達、ならびに静脈内注射を経た骨髄細胞。ＩＣＲマウスは、各手順を通して、１乃至２％のイソフルランによって麻酔された。小さいラテックス止血バンドは、後肢（上記の四頭筋）上にしっかりと巻かれて、止血鉗子で保持された。小さい切り傷（１ｃｍまでの）は、遠位の大伏在静脈の部分を露出させるために、皮膚においてなされた。３０のゲージ針カテーテルは、遠位の大伏在静脈に嵌入されて、約０．５ｃｍを血管内に前進させて、注射の間、保持された。次いで、カテーテルは、ハーバードＰＨＤ  ２０００のシリンジポンプに接続されて、ＤＮＡ（１００μｇ、１４７μｇ  ＭＣＫ、２８０μｇ  Ｄｅｓｍｉｎ）の食塩液（１．０ｍｌ）が、８ｍｌ／分の率で注射された（順行）。プラスミドＤＮＡは、ルシフェラーゼ遺伝子またはβ−ガラクトシダーゼ遺伝子でコード化される。注射の２分後に止血バンドは取り外されて、皮膚が５乃至０の縫合によって閉じた。注射の一日後、組織は、０．５ｍｌの溶解緩衝液において均質にされて収集され、ルシフェラーゼ発現のために検定された。骨髄細胞は、大腿骨を開いて、鉗子で骨髄を掘り出すことによって収集された。残りの大腿骨は、骨の発現のために検定された。関節の組織は、関節包から滑液ライニング、腱、軟骨および結合組織を含んだ。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１６】
表１３．静脈内注射を経た大腿骨の細胞に対するポリヌクレオチド送達
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１９】
【表１６】
2007501282.tif 000002
図１２は、ＬａｃＺ染色によって示されたようにβ−ガラクトシダーゼのトランス遺伝子でトランスフェクションされた骨の細胞の存在を示す。左のパネルは、骨と関節の断面図を示す。顕微鏡写真の中間部の近くの暗から明への移行は、骨および軟骨からの移行を示す。右側パネルは、ＬａｃＺによって染色される同じ部分を示して、トランスフェクションした骨の細胞（暗い点）の存在を示す。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２８】
【表２０】
2007501282.tif 000003
実施例２３．さらなる圧力静脈内注射を経た肢筋細胞に対するアデノ随伴ウィルス（ＡＡＶ）の送達。マウスは、各手順の全体にわたって１乃至２％のイソフルランによって麻酔された。小さいラテックス止血バンドは、上部の後肢（上記の四頭筋）のまわりにしっかりと巻かれて、止血鉗子で保持された。小さい切開（１ｃｍまで）は、遠位の大伏在静脈の部分を露出させるために、皮膚においてなされた。３０のゲージ針カテーテルは、遠位の大伏在静脈に嵌入されて、約０．５ｃｍを静脈内に前進させて、注射の間、保持された。カテーテルは、ハーバードＰＨＤ  ２０００シリンジポンプに接続されて、ＡＡＶ（０．１９ｘ  １０９導入ユニット、（ＣＭＶ−ＬａｃＺ）の食塩液（０．８ｍｌ）が３ｍｌ／分の率で注射された（順行）。注射の２分後に、止血バンドは取り外されて、皮膚が５−０の縫合によって閉じられた。注射の２週後に、肢の筋肉は収集されて、冷却したイソペンタンにおいて−８０℃で保存された。１０μｍ厚の低温部分が製作されて、１．２５％のグルタルアルデヒド（ｇｌｕｔｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ）に固定された。次いで、その部分は、３７°Ｃで１時間のＸ−ｇａｌ染色溶液（Ｍｉｒｕｓ社）においてインキュベーションされた。図１１は、β−ガラクトシダーゼにおいて染色されるマウス後肢腓腹筋の筋肉の顕微鏡写真を示し、ＡＡＶが筋細胞に対して効率的に分配されたことを示す。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３６】
【図１Ａ】哺乳類の肢への核酸のカテーテルによって媒介される静注の概略図であり、ラットの末梢後肢に対する静脈内送達を示し、右パネルは、肢の主要静脈を例示する。
【図１Ｂ】哺乳類の肢への核酸のカテーテルによって媒介される静注の概略図であり、イヌの末梢後肢に対する静脈内送達を示し、右パネルは、肢の主要静脈を例示する。
【図１Ｃ】哺乳類の肢への核酸のカテーテルによって媒介される静注の概略図であり、霊長類の末梢後肢に対する静脈内送達を示し、右パネルは、肢の主要静脈を例示する。
【図１Ｄ】哺乳類の肢への核酸のカテーテルによって媒介される静注の概略図であり、ヒトの末梢後肢に対する静脈内送達を示し、右パネルは、肢の主要静脈を例示する。
【図２Ａ】雌のスピローグ-ドーリー・ラット（１２０−１５０ｇ）の後肢に対するpDNA（pCI−Luc-K）の静脈内送達の注射量の効果を示すグラフである。
【図２Ｂ】雌のスピローグ-ドーリー・ラット（１２０−１５０ｇ）の後肢に対するpDNA（pCI−Luc-K）の静脈内送達による、ルシフェラーゼ発現の注射率を示すグラフである。
【図３】５００μｇのpDNA（pCI-LacZ）の単一の静注後のβガラクトシダーゼにおいて染色されたラット肢腓腹筋の筋肉の顕微鏡写真である。
【図４】５００μｇのpDNA（pCI-LacZ）の反復した（複数の）静注後のβガラクトシダーゼにおいて染色されたラット肢腓腹筋（Ａ）及び肢むこうずね（Ｂ）の筋肉の顕微鏡写真である。
【図５】治療遺伝子の哺乳類の四肢への血管内注射後のエリトロポイエチン発現の時間の経過を示すグラフである。
【図６】治療遺伝子の哺乳類の四肢への血管内注射後の免疫組織化学染色図である。
【図７Ａ】40mgのpDNA（pCI-LacZ）の大伏在静脈の末端部位への一回の静注後のβガラクトシダーゼにおいて染色された腓腹筋筋肉の顕微鏡写真を示す。
【図７Ｂ】40mgのpDNA（pCI-LacZ）の大伏在静脈の末端部位への一回の静注後のβガラクトシダーゼにおいて染色された腓腹筋筋肉の顕微鏡写真を示す。
【図７Ｃ】40mgのpDNA（pCI-LacZ）の大伏在静脈の末端部位への一回の静注後のβガラクトシダーゼにおいて染色されたヒラメ筋の顕微鏡写真を示す。
【図７Ｄ】40mgのpDNA（pCI-LacZ）の大伏在静脈の末端部位への一回の静注後のβガラクトシダーゼにおいて染色されたヒラメ筋の顕微鏡写真を示す。
【図７Ｅ】40mgのpDNA（pCI-LacZ）の大伏在静脈の末端部位への一回の静注後のβガラクトシダーゼにおいて染色された短母指伸筋の顕微鏡写真を示す。
【図７Ｆ】40mgのpDNA（pCI-LacZ）の大伏在静脈の末端部位への一回の静注後のβガラクトシダーゼにおいて染色された短母指伸筋の顕微鏡写真を示す。
【図８】siRNAsおよびpDNA発現ベクターの静脈内共同送達後のラットおよび霊長類の肢の筋肉のRNA干渉を示すグラフであり、Ａはラット、Ｂはモンキーを示す。
【図９】ビーグル犬(A)およびアカゲザル・マカーク（B）の2つの静注後のクレアチンホスホキナーゼ（CPK）値の時間の経過を示すグラフである。
【図１０】静脈内遺伝子の免疫化において、Aはマウス、Bはウサギの抗ルシフェラーゼ抗体発現の時間の経過を示すグラフである。
【図１１】毎分3mlの率で、0.8ml食塩水のアデノ随伴ウィルスの0.19のx 109の変換ユニットの一回の静注後のβガラクトシダーゼにおいて染色されたマウス後肢腓腹筋の筋肉の顕微鏡写真である。
【図１２】β-ガラクトシダーゼ・トランス遺伝子の静脈内送達後の骨のLacZ染色の顕微鏡写真であり、左パネルは、骨および関節の断面図を示し、右側パネルは、LacZによって染色された同じ断面を示す。
【図１３】止血バンドから末端の伏在静脈へローダミン標識の70kDaのデキストランの静脈内注射の後、マウスの肢の骨格筋の顕微鏡写真であり、左上のパネルは、ローダミン標識のデキストランを示し、右上のパネルは、筋細胞の位置を示し、左下のパネルは、核の位置を示し、右下のパネルは、合成画像を示す。