(57)【要約】式（Ｉ）によるトコフェリルスクシナート誘導体が記載される。これらの化合物は、タンパク質ホスファターゼ２Ａの活性を増加させ、医薬品組成物中に含むことができ、前立腺癌などのアンドロゲン受容体依存性癌の治療のために用いることができる。本発明の別の様相は、活性成分としての式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と、該活性成分と組み合わされた薬学的に許容される液体または固体の単数または複数のキャリアとを含む医薬品組成物を提供する。2012523458.tif 000034
2012523458.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉによる化合物あるいはその薬学的に許容される塩であって、
【化２９】
2012523458.tif 000031
式中Ｒ１は、独立に、水素およびメチルから選ばれ、Ｒ２は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基、およびノナニル基からなる群から選ばれ、Ｘは、カルボキシル部分、ホスホン酸部分、またはスルホン酸部分であり、ｎは、１から６の整数である、
化合物。
【請求項２】
Ｒ２が、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が、４，８−ジメチル−ノニル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、ノナ−１−エニル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、ノナニル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘが、カルボキシル部分である、請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが、ホスホン酸部分である、請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘが、スルホン酸部分である、請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
式Ｉの化合物あるいはその薬学的に許容される塩を含む組成物の治療的に有効な量を投与することを含む、被験体におけるアンドロゲン受容体依存性癌を治療するまたは被験体におけるアンドロゲン受容体依存性癌の発生を予防する方法であって、
【化３０】
2012523458.tif 000032
式中Ｒ１は、独立に、水素およびメチルから選ばれ、Ｒ２は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基およびノナニル基からなる群から選ばれ、Ｘは、カルボキシル部分、ホスホン酸部分、またはスルホン酸部分であり、ｎは、１から６の整数である、
方法。
【請求項１０】
前記アンドロゲン受容体依存性癌は、前立腺癌である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ２が、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ２が、４，８−ジメチル−ノニル基である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ２が、ノナ−１−エニル基である、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
Ｒ２が、ノナニル基である、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
Ｘが、カルボキシル部分である、請求項９から１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
Ｘが、ホスホン酸部分である、請求項９から１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
Ｘが、スルホン酸部分である、請求項９から１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
式Ｉの化合物あるいはその薬学的に許容される塩を含む組成物の有効な量を投与することを含む、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）活性を増加させる方法であって、
【化３１】
2012523458.tif 000033
式中、Ｒ１は、独立に、水素およびメチルから選ばれ、Ｒ２は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基およびノナニル基からなる群から選ばれ、Ｘは、カルボキシル部分、ホスホン酸部分、またはスルホン酸部分であり、ｎは、１から６の整数である、
方法。
【請求項１９】
Ｒ２が、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ２が、４，８−ジメチル−ノニル基である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ２が、ノナ−１−エニル基である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ２が、ノナニル基である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
Ｘが、カルボキシル部分である、請求項１８から２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
Ｘが、ホスホン酸部分である、請求項１８から２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
Ｘが、スルホン酸部分である、請求項１８から２２のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
継続出願情報
本出願は、２００９年４月１３日に出願された米国仮特許出願第６１／１６８，７５９号の利益を主張し、この出願は本明細書において参照として援用される。
【０００２】
政府の財政的支援
本発明は、ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  （ＮＣＩ）により授与された助成金番号ＣＡ１２２５０およびｔｈｅ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｄｅｆｅｎｓｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｇｒａｍにより授与された助成金番号ＰＣ０７４１５１の下の政府の援助によりなされた。政府は本発明における一定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
癌治療におけるα−トコフェリルスクシナート（ビタミンＥスクシナートＶＥＳとしても知られている）の移行潜在力が多数の最近の検討の的となっている。正常細胞への毒性を生じないで腫瘍細胞増殖を抑制する際のその効き目が注目されたためである。例えば非特許文献１参照。ＶＥＳが発癌、腫瘍進行および転移と関連する複数の信号伝達経路をターゲットとする独特の能力を示すことは確かな証拠が示しており、これらの信号伝達経路は、ＮＦ−κＢ、ＰＫＣα、スフィンゴ脂質、Ｂｃｌ−２／Ｂｃｌ−ｘＬ、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）およびインスリン様増殖因子結合タンパク質−３によって媒介されるものを含む。これらの信号伝達のターゲットのあるものは癌の種類に特異的かもしれないが、この広い作用スペクトルが低い毒性とあいまってＶＥＳを癌治療または予防のための有用な薬剤に発展させることの治療的な価値の基盤となっている。
【０００４】
ＶＥＳの影響を受ける癌の一つが前立腺癌である。前立腺癌の患者の管理における重要な課題は、折り紙つきの不治かつ致命的な前立腺癌進行形であるホルモン抵抗性前立腺癌（ＨＲＰＣ）の治療である。今日まで、化学療法投薬法が緩和を通してかなりの利点を提供しているが、明確な生存率の向上は得られていない。前立腺癌の治療を改善し、最終的に前立腺癌患者の生存率を増加させる新規な方策が明らかに求められている。従って、ＨＲＰＣと関連した調節異常経路をターゲットとする小分子薬剤を特定するために著しい努力が費やされてきた。
【０００５】
Ｒａｓ信号伝達系は、前立腺癌に対して用いるために開発される小分子薬剤にとっての潜在的なターゲットを提供する。癌原遺伝子由来のＲａｓは、Ａｋｔ、ＥＲＫ、ＲａｌＡ  ＧＴＰアーゼおよび転写因子ｃ−Ｍｙｃによって媒介されるものを含む、細胞成長および分化を制御する信号伝達経路のための分子スイッチとして機能する。これらのＲａｓ発癌エフェクターはさまざまな細胞の状況で発癌のさまざまな側面を調節するので、Ｒａｓ信号伝達が前立腺癌のアンドロゲン非依存状態への進行のための主な推進力を表すことを証拠が示している。非特許文献２。さらに、内因性Ｒａｓ活性の優勢な負の阻害はホルモン抵抗性Ｃ４−２前立腺癌細胞に対するアンドロゲン感受性を回復させることが示された。非特許文献３。これらの知見を合わせると、Ｒａｓ信号伝達がＨＲＰＣ治療のための治療にとって適切なターゲットを代表することを示している。
【０００６】
ファルネシルトランスフェラーゼ（ＦＴアーゼ）インヒビターは、もともとは抗Ｒａｓ化合物および癌治療のための新規なターゲットを根拠とする薬物として開発された。しかし、強力なＦＴアーゼインヒビターであるＲ１１５７７７は、最小限の事前治療を施したアンドロゲン非依存性前立腺癌の患者においてほとんど抗腫瘍活性を示さなかった。この臨床効力の欠如が、ＲａｓがヒトにおけるＦＴアーゼインヒビターの適切なターゲットであるかについての曖昧さの根拠となっている。
【０００７】
ＰＰ２Ａは、Ｒａｓ信号伝達と拮抗する腫瘍抑制因子である。ＰＰ２Ａは、ヒト細胞中のホスファターゼ活性の大きな割合を占める普遍的に発現されるタンパク質セリン／スレオニンホスファターゼである。非特許文献４。ＰＰ２Ａは、６５ｋＤａの骨格Ａサブユニット（ＡαまたはＡβ）、３６ｋＤａの触媒Ｃサブユニット、および可変調節Ｂサブユニットを含む二量体コア酵素で構成されている。ＰＰ２ＡのＣサブユニットはそのＣ末端で可逆メチル化を行い、これがＢの調節サブユニットの結合およびＰＰ２Ａホスファターゼ活性を調節する。下流の基質を脱リン酸する際にさまざまなＢサブユニットがＰＰ２Ａのさまざまな特性を付与し、それによってＰＰ２Ａは別々の細胞機能を媒介する。ＰＰ２Ａが、Ａｋｔ、ＥＲＫおよびＲａｌＡを含む複数の発癌性タンパク質の脱リン酸および不活性化を媒介するその能力を通して腫瘍抑制因子として機能することを確かな証拠が示している。非特許文献５。これらの発癌性ＰＰ２Ａ基質のすべてがＲａｓの下流ターゲットであるという事実は、ＰＰ２Ａの主な腫瘍抑制活性がＲａｓ信号伝達と拮抗することであることを示唆している。従って、治療上の観点から、ＰＰ２Ａ活性の小分子活性化剤を開発することは、Ｒａｓ信号伝達に対抗し、それによって前立腺癌細胞をアンドロゲン除去に対して再び感作させる潜在的に有効な方策を表す。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｗａｎｇら，Ｍｏｌ．Ｎｕｔｒ．Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓ．，５０，６７５〜８５（２００６）
【非特許文献２】Ｗｅｂｅｒら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，９１，ｐ．１３〜２５（２００４）
【非特許文献３】Ｂａｋｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６３，ｐ．１９７５〜８０（２００３）
【非特許文献４】Ｊａｎｓｓｅｎｓら，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．，３５３，ｐ．４１７〜３９（２００１）
【非特許文献５】Ｍｕｍｂｙ  Ｍ．，Ｃｅｌｌ，１３０，ｐ．２１〜４（２００７）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の一様相は、式Ｉによる化合物あるいはそれらの薬学的に許容される塩であって、
【００１０】
【化１】
2012523458.tif 000003
式中、Ｒ１は、独立に、水素およびメチルから選ばれ、Ｒ２は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基、およびノナニル基からなる群から選ばれ、Ｘは、カルボキシル部分、ホスホン酸部分、またはスルホン酸部分であり、ｎは、１から６の整数である、
化合物あるいはそれらの薬学的に許容される塩を提供する。これらの化合物は、ホルモン抵抗性前立腺癌などのアンドロゲン受容体依存性癌におけるＲＡＳ信号伝達系などの異常調節経路に影響を及ぼす。
【００１１】
本発明の別の様相は、活性成分としての式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と、該活性成分と組み合わされた薬学的に許容される液体または固体の単数または複数のキャリアとを含む医薬品組成物を提供する。本発明のさらに別の様相は、被験体におけるアンドロゲン受容体依存性癌を治療する、または被験体におけるアンドロゲン受容体依存性癌の発生を予防する方法を提供し、この方法は、治療的に有効な量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を投与することを含む。本発明のこの様相の実施態様は、ホルモン抵抗性前立腺癌などの前立腺癌を治療するために用いることができる。本発明のまた別の様相は、有効な量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することによって、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）活性を増加させる方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１Ａの上の図は、ＶＥＳおよびＴＳ−１の構造を示し、下の図はＶＥＳおよびＴＳ−１が、ＰＰ２Ａホスファターゼ活性をその発現に影響を及ぼさずに増加させたことを示す棒グラフを提供する。図１Ｂは、ＡｋｔおよびＭＡＰキナーゼ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８）の脱リン酸を促進することに対するＶＥＳおよびＴＳ−１の効果を示す。ＰＣ−３におけるＥＲＫを除き、これらのキナーゼは、薬物で処理した細胞において際立った脱リン酸を行った。
【図２】図２Ａは、ＰＰ２Ａ活性化によるＶＥＳおよびＴＳ−１の抗腫瘍活性に関与する要因の概略モデルを提供する。図２Ｂは、ＬＮＣａＰ細胞の細胞生存率の抑制に対するＶＥＳおよびＴＳ−１の効果をＰｒＥＣと対比して示すグラフを提供する。
【図３】図３は、カップリングによるトコフェリルスクシナート誘導体のコンビナトリアル合成に関与するさまざまな構造を有する３つの成分を示す表を提供する。
【図４】図４は、トコフェリルスクシナート誘導体のための合成スキームを提供する。
【図５】図５は、ＬＮＣａＰ細胞におけるＡＲ発現の転写調節に対するＶＥＳおよびＴＳ−１の効果をＰｒＥＣと対比して示す。セクション（Ａ）は、ＶＥＳおよびＴＳ−１の構造を示す。セクション（Ｂ）は、２．５％ＦＢＳ添加培地中のＬＮＣａＰ細胞におけるＡＲおよびそのターゲット遺伝子産物ＰＳＡおよび／またはＥＧＦＲの発現に対するＶＥＳおよびＴＳ−１の用量依存的な効果（上）および時間依存的な効果（下）のウエスタンブロット分析の結果を示す。百分率値は、それぞれの内部基準β−アクチンに対して規格化した後に、薬物処理試料のタンパク質バンドの、それぞれのＤＭＳＯビヒクル処理対照物のものに対する相対強度を示す。値はそれぞれ２つの独立な実験の平均を表す。セクション（Ｃ）の左は、２．５％ＦＢＳ添加培地中の７２時間のインキュベーションの後のＬＮＣａＰ細胞中のＡＲのｍＲＮＡレベルに対する１０μＭのＶＥＳまたはＴＳ−１の時間依存的な抑制効果のＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。百分率値は、それぞれの内部基準β−アクチンに対して規格化した後に、薬物処理試料のｍＲＮＡバンドの、それぞれのＤＭＳＯビヒクル処理対照物のものに対する相対強度を示す。値はそれぞれ２つの独立な実験の平均を表している。右側は、２．５％ＦＢＳ添加培地中の７２時間のインキュベーションの後のｈＡＲ−Ｌｕｃ形質移入ＬＮＣａＰ細胞中のルシフェラーゼレポータ活性に対するＶＥＳおよびＴＳ−１の用量依存的な阻害効果を示す。カラム、平均；バール、ＳＤ（ｎ＝６）。セクション（Ｄ）、上は、ＬＮＣａＰ細胞と対比したＰｒＥＣ中のＡＲの差分発現を示し、下の部分は、２．５％ＦＢＳ添加培地中のＰｒＥＣ中のＡＲおよびＰＳＡの発現に対する１０μモル／ＬのＶＥＳまたはＴＳ−１の時間依存的な効果のウエスタンブロット分析を示す。細胞は、示された時間間隔の間１０μモル／ＬのＶＥＳまたはＴＳ−１に曝露され、ＡＲおよびＰＳＡの発現レベルはウエスタンブロット分析によって分析された。セクション（Ｅ）は、ＭＴＴアッセイによって定量された、２．５％ＦＢＳ添加前立腺上皮成長およびＲＰＭＩ  １６４０培地中の７２時間のインキュベーションの後のＴＳ−１によるＰｒＥＣ細胞の生存率の選択的用量依存的な抑制をＬＮＣａＰ細胞と対比してそれぞれ示す。各データポイントは、平均＋ＳＤ（ｎ＝６）を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明者らは、ＶＥＳおよび複数のトコフェリル誘導体が、図１に示されるようにＰＰ２Ａ活性の活性化を通してＬＮＣａＰおよびＰＣ−３細胞中のＡｋｔおよびＭＡＰキナーゼの脱リン酸を媒介することを示した。その結果、本発明者らは、α−トコフェリルスクシナートにもとづく新規な種類のタンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）活性化剤を開発した。これは、ＰＰ２Ａホスファターゼ活性が活性化するとＲａｓ媒介発癌信号伝達経路と拮抗することによって癌の進行を遅らせるかまたは阻止することができるという理解によるものである。
【００１４】
腫瘍抑制因子としてのＰＰ２Ａの主な機能は、Ｒａｓのターゲットのリン酸化／活性のダウンレギュレーションによってＲａｓ発癌信号伝達と拮抗することなので、小分子薬剤によるＰＰ２Ａ活性の活性化は、癌進行、特に前立腺癌進行を阻止する治療法として適切な方策を表す。
【００１５】
定義
本明細書において示される用語法は、実施態様の記載のためでしかなく、全体として本発明の限定と解釈するべきではない。特に断らない限り、「１つの（ａ、ａｎ）」、「前記（ｔｈｅ）」および「少なくとも１つ」は、区別なく用いられる。さらに、本発明の記載および添付の請求項において用いられる単数形「１つの（ａ、ａｎ）」および「前記（ｔｈｅ）」は、前後の状況によって異なる場合でない限り、それらの複数形を含む。
【００１６】
用語「含む」およびその変化形は、これらの用語が明細書および請求項において現れる場合に、限定的な意味を有しない。
【００１７】
本明細書において用いられる用語「有機基」は、本発明において、脂肪族基、環状基、または脂肪族基と環状基との組み合わせ（例えばアルカリールおよびアラルキル基）として分類される炭化水素基を意味するために用いられる。本発明の状況において、トコフェリルスクシナート誘導体にとって適当な有機基は、トコフェリルスクシナート誘導体の抗癌活性を妨げないものである。本発明の状況において、用語「脂肪族基」は、飽和または不飽和の直鎖または分岐炭化水素基を意味する。この用語は、例えばアルキル、アルケニルおよびアルキニル基を包含するために用いられる。
【００１８】
本明細書において用いられるカルボキシル部分（ＣＯＯＨ）は、カルボニル基と結合したヒドロキシル部分を含む。スルホン酸部分（ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ｍｏｉｅｔｙ）（ＳＯ３Ｈ）は、スルホン酸の定義部分であり、ホスホン酸部分（ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  ｍｏｉｅｔｙ）（ＰＯ３Ｈ２）は、ホスホン酸の定義部分である。
【００１９】
本明細書において用いられる用語「アルキル」、「アルケニル」および接頭辞「アルク−」は、直鎖基、分岐鎖基および環状基、例えばシクロアルキルおよびシクロアルケニルを含む。特に断らない限り、これらの基は、１から２０の炭素原子を含み、アルケニル基は、２から２０の炭素原子を含む。実施態様によっては、これらの基は、合計で多くても１０の炭素原子、多くても８の炭素原子、多くても６の炭素原子、または多くても４の炭素原子を有する。低級アルキル基は、多くても６の炭素原子を含むものである。アルキル基の例は、ハロアルキル基およびヒドロキシアルキル基を含む。環状基は、単環または多環であってよく、好ましくは３から１０の環炭素原子を有する。
【００２０】
本明細書において用いられる用語「短縮側鎖」は、１つ以上のイソプラニル単位の除去によって短くなった、トコフェリルスクシナート誘導体のフィチル側鎖を指す。そのような短縮側鎖は、１から１１の炭素原子を含むアルキル基である。短縮側鎖の例は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基、およびノナニル基を含む。
【００２１】
特に断らない限り、「アルキレン」および「アルケニレン」は、上記で定義された「アルキル」および「アルケニル」基の二価の形である。用語「アルキレニル」および「アルケニレニル」は、「アルキレン」および「アルケニレン」がそれぞれ置換されているとき用いられる。例えば、アリールアルキレニル基は、アリール基が結合しているアルキレン部分を含む。
【００２２】
用語「ハロアルキル」は、１つ以上のハロゲン原子によって置換されている基を含み、過フッ素化基を含む。これは、接頭辞「ハロ」を含む他の基についても成立する。適当なハロアルキル基の例は、クロロメチル、トリフルオロメチルおよび類似物である。ハロ部分は、塩素、臭素、フッ素またはヨウ素であってよい。
【００２３】
本明細書において用いられる用語「アリール」は、炭素環の芳香環または環系を含む。アリール基の例は、フェニル、ナフチル、ビフェニル、アントラセニル、フェナントラセニル、フルオレニルおよびインデニルを含む。アリール基は置換されていても置換されていなくてもよい。
【００２４】
特に断らない限り、用語「ヘテロ原子」は、Ｏ、ＳまたはＮ原子を指す。
【００２５】
用語「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの環ヘテロ原子（例えばＯ、Ｓ、Ｎ）を含む芳香環または環系を含む。実施態様によっては、用語「ヘテロアリール」は、２から１２の炭素原子、１から３の環、１から４のヘテロ原子、およびヘテロ原子としてＯ、Ｓおよび／またはＮを含む環または環系を含む。適当なヘテロアリール基は、フリル、チエニル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、イソインドリル、トリアゾリル、ピロリル、テトラゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、カルバゾリル、ベンゾオキサゾリル、ピリミジニル、ベンゾイミダゾリル、キノキサリニル、ベンゾチアゾリル、ナフチリジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、プリニル、キナゾリニル、ピラジニル、１−オキシドピリジル、ピリダジニル、トリアジニル、テトラジニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリルなどを含む。
【００２６】
用語「アリーレン」および「ヘテロアリーレン」は、上記で定義された「アリール」および「ヘテロアリール」基の二価の形である。用語「アリーレニル」および「ヘテロアリーレニル」は、「アリーレン」および「ヘテロアリーレン」がそれぞれ置換されているとき用いられる。例えば、アルキルアリーレニル基は、アルキル基が結合しているアリーレン部分を含む。
【００２７】
本明細書に記載されているいずれかの式またはスキームにおいて、ある基が２回以上存在するとき、それぞれの基（または置換基）は、明示的に宣言されているか否かにかかわらず、独立に選ばれる。例えば、式−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２の場合、それぞれのＲ基は、独立に選ばれる。
【００２８】
本出願全体を通じて、用いられる特定の用語法の考察および説明を簡明にする手段として、置換が可能であるかまたは置換されてよい化学種と、置換がそのように可能でないかまたはそのように置換されてはならない化学種との間を区別するために、用語「基」および「部分」が用いられる。従って、化学置換基を記載するために用語「基」が用いられるとき、記載される化学物質は、置換されていない基、および鎖中に例えば過酸化物でないＯ、Ｎ、Ｓ、ＳｉまたはＦ原子を有する基、ならびにカルボニル基または他の通常の置換基を含む。用語「部分」が化学化合物または置換基を記載するために用いられる場合、置換されていない化学物質だけが含まれるものとする。例えば、句「アルキル基」は、メチル、エチル、プロピル、ｔｅｒｔ−ブチルおよび類似物などの純粋な開放鎖飽和炭化水素アルキル置換基だけでなく、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルスルホニル、ハロゲン原子、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル等などの当分野において知られているさらに別の置換基を有するアルキル置換基も含むものとする。従って、「アルキル基」は、エーテル基、ハロアルキル、ニトロアルキル、カルボキシアルキル、ヒドロキシアルキル、スルホアルキル等を含む。他方、句「アルキル部分」は、メチル、エチル、プロピル、ｔｅｒｔ−ブチルおよび類似物などの純粋な開放鎖飽和炭化水素アルキル置換基だけの包含に限定される。
【００２９】
本発明は、本明細書に記載されている化合物（中間体を含む）を薬学的に許容されるいずれの形でも含む。これは、異性体（例えばジアステレオマおよびエナンチオマ）、互変異性体、塩、溶媒和物、多形、プロドラッグおよび類似物を含む。特に、化合物が光学活性なら、本発明は、詳しくは、化合物のエナンチオマのそれぞれならびにエナンチオマのラセミ混合物を含む。用語「化合物」は、明示的に宣言されているか否かにかかわらず（ときに「塩」が明示的に宣言されるが）、そのような形のいずれもまたはすべてを含むと理解するべきである。
【００３０】
本明細書において用いられる「治療する」、「治療すること」、および「治療」等は、疾患の危険があるかまたは疾患に罹病している患者に、少なくとも１つの症状の軽減または抑制による状態の改善、疾患の進行の遅延、疾患の発症の防止または遅延等を含む利点を提供するいずれの活動も指す。
【００３１】
アンドロゲン受容体依存性癌は、増殖する細胞の能力を維持する癌細胞上のアンドロゲン受容体の存在に依存する癌である。例えば、ホルモン抵抗性前立腺癌は、細胞をアンドロゲンに対して極めて敏感にし、それによってアンドロゲンレベルが減少した環境でも増殖することができるように、増加した数のアンドロゲン受容体が提供されるアンドロゲン受容体依存性癌である。ＣｈｅｎらＮａｔ．Ｍｅｄ．１０，３３〜３９（２００４）参照。これは、癌におけるアンドロゲン受容体の役割のさらなる記載を提供する。
【００３２】
本明細書において用いられる「薬学的に許容される」は、化合物または組成物が、疾患の重篤さおよび治療の必要性を考慮して過度に有害な副作用なく、本明細書に記載されている治療を達成する被験体への投与に適していることを意味する。
【００３３】
本明細書において用いられる「阻害する」は、潜在的な影響の部分的または完全な除去を指し、インヒビターは、阻害する能力を有する化合物である。
【００３４】
トコフェリルスクシナート誘導体
本発明の化合物は、さまざまな異なるトコフェリルスクシナート誘導体を含む。本明細書において用いられるトコフェリルスクシナート誘導体とは、構造的にトコフェリルスクシナートと関連している、本明細書において記載されている化合物である化合物を指す。しかし、これらの化合物は、合成法としてトコフェリルスクシナートから誘導されなくてもよく、スクシナート側鎖を必要としない。本発明のトコフェリルスクシナート誘導体は、式（Ｉ）
【００３５】
【化２】
2012523458.tif 000004
式中、Ｒ１は、独立に、水素およびメチルから選ばれ、Ｒ２は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基、およびノナニル基からなる群から選ばれ、Ｘは、カルボキシル部分、ホスホン酸部分、またはスルホン酸部分であり、ｎは、１から６の整数である
による化合物を含む。
【００３６】
本発明のトコフェリルスクシナート誘導体は、本明細書において立体化学への参照なしに示され、指定されてきた。しかし、ビタミンＥは［（２Ｒ）−２，５，７，８−テトラメチル−２−［（４Ｒ，８Ｒ）−４，８，１２−トリメチルトリデシル］クロマン−６−イル］アセタート、すなわち示されている化合物の２Ｒ異性体であり、この２Ｒ異性体の方が本発明の実施態様において好ましいことがあると理解される。従って、本発明のトコフェリルスクシナート誘導体は、式（ＩＩ）
【００３７】
【化３】
2012523458.tif 000005
式中、さまざまな置換基は、式（Ｉ）の場合と同じように定義される
による化合物も含む。
【００３８】
一実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基であり、Ｘがカルボキシル部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は、式（Ｉａ）によって表され、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−アシト酸（ａｃｉｔｉｃ  ａｃｉｄ）、３−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、４−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、および７−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ハプタン酸（ｈａｐｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００３９】
【化４】
2012523458.tif 000006
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基であり、Ｘがホスホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｂ）によって表され、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシメチル］−ホスホン酸、｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−エチル）−ホスホン酸、｛３−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピル｝−リン酸、｛４−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ブチル｝−ホスホン酸、｛５−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンチル｝−ホスホン酸、および｛６−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキシル｝−ホスホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００４０】
【化５】
2012523458.tif 000007
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基であり、Ｘがスルホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｃ）によって表され、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−メタンスルホン酸、２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−エタンスルホン酸、３−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロパン−１−スルホン酸、４−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ブタン−１−スルホン酸、５−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン−１−スルホン酸、および６−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン−１−スルホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００４１】
【化６】
2012523458.tif 000008
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノニル基であり、Ｘがカルボキシル部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｄ）によって表され、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−アシト酸（ａｃｉｔｉｃ  ａｃｉｄ）、３−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、４−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ハプタン酸（ｈａｐｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、および８−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００４２】
【化７】
2012523458.tif 000009
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノニル基であり、Ｘがホスホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｅ）によって表され、［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシメチル］−ホスホン酸、｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−エチル｝−ホスホン酸、｛３−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピル｝−ホスホン酸、｛４−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ブチル｝−ホスホン酸、｛５−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンチル｝−ホスホン酸、および｛６−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキシル｝−ホスホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００４３】
【化８】
2012523458.tif 000010
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノニル基であり、Ｘがスルホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｆ）によって表され、［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−メタンスルホン酸、２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−エタンスルホン酸、３−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロパン−１−スルホン酸、４−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ブタン−１−スルホン酸、５−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン−１−スルホン酸、および６−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２−メチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン−１−スルホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００４４】
【化９】
2012523458.tif 000011
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がノナ−１−エニル基であり、Ｘがカルボキシル部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｇ）によって表され、（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−酢酸、３−（２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピオン酸、４−（２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−（２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−（２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、および７−（２−メチル−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００４５】
【化１０】
2012523458.tif 000012
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がノナ−１−エニル基であり、Ｘがホスホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｈ）によって表され、（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシメチル）−ホスホン酸、［２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−エチル］−ホスホン酸、［２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピル］−ホスホン酸、［２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ブチル］−ホスホン酸、［２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ペンチル］−ホスホン酸、および［２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ヘキシル］−ホスホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００４６】
【化１１】
2012523458.tif 000013
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がノナ−１−エニル基であり、Ｘがスルホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｉ）によって表され、２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−メタンスルホン酸、２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−エタンスルホン酸、２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロパン−１−スルホン酸、２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ブタン−１−スルホン酸、２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ペンタン−１−スルホン酸、および２−（２−メチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ヘキサン−１−スルホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００４７】
【化１２】
2012523458.tif 000014
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がノナニル基であり、Ｘがカルボキシル部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｊ）によって表され、（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−酢酸、３−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピオン酸、４−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、５−（２メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、６−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、７−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−ハプタン酸（ｈａｐｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、および８−（２−メチル−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−クロマン−６−イルオキシ］−オクタン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００４８】
【化１３】
2012523458.tif 000015
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がノナニル基であり、Ｘがホスホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｋ）によって表され、（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシメチル）−ホスホン酸、［２−（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−エチル］−ホスホン酸、［２−（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピル］−ホスホン酸、［２−（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ブチル］−ホスホン酸、［２−（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ペンチル］−ホスホン酸、および［２−（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ヘキシル］−ホスホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００４９】
【化１４】
2012523458.tif 000016
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がノナニル基であり、Ｘがスルホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｌ）によって表され、（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−メタンスルホン酸、（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−エタンスルホン酸、（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロパン−１−スルホン酸、（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ブタン−１−スルホン酸、（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ペンタン−１−スルホン酸、および（２−メチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ヘキサン−１−スルホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００５０】
【化１５】
2012523458.tif 000017
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基であり、Ｘがカルボキシル部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｍ）によって表され、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸、３−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、および［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００５１】
【化１６】
2012523458.tif 000018
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基であり、Ｘがホスホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｎ）によって表され、［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシメチル］−ホスホン酸、｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−エチル｝−ホスホン酸、｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピル｝−ホスホン酸、｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ブチル｝−ホスホン酸、｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンチル｝−ホスホン酸、および｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキシル｝−ホスホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００５２】
【化１７】
2012523458.tif 000019
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基であり、Ｘがスルホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｏ）によって表され、２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−メタンスルホン酸、２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−エタンスルホン酸、２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロパン−１−スルホン酸、２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ブタンスルホン酸、２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン−１−スルホン酸、および２−［２−（４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン−１−スルホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００５３】
【化１８】
2012523458.tif 000020
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノニル基であり、Ｘがカルボキシル部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｐ）によって表され、［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酢酸、３−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピオン酸、［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−酪酸、［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン酸、［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン酸、および［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘプタン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００５４】
【化１９】
2012523458.tif 000021
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノニル基であり、Ｘがホスホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｑ）によって表され、［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシメチル］−ホスホン酸、｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−エチル｝−ホスホン酸、｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロピル｝−ホスホン酸、｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ブチル｝−ホスホン酸、｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンチル｝−ホスホン酸、および｛２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキシル｝−ホスホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００５５】
【化２０】
2012523458.tif 000022
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２が４，８−ジメチル−ノニル基であり、Ｘがスルホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｒ）によって表され、２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−メタンスルホン酸、２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−エタンスルホン酸、２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−プロパン−１−スルホン酸、２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ブタンスルホン酸、２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ペンタン−１−スルホン酸、および２−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イルオキシ］−ヘキサン−１−スルホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００５６】
【化２１】
2012523458.tif 000023
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がノナ−１−エニル基であり、Ｘがカルボキシル部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｓ）によって表され、（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−酢酸、３−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピオン酸、４−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−酪酸、６−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ペンタン酸、および７−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ヘプタン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００５７】
【化２２】
2012523458.tif 000024
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がノナ−１−エニル基であり、Ｘがホスホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｔ）によって表され、（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシメチル）−ホスホン酸、［２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−エチル］−ホスホン酸、［２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピル］−ホスホン酸、［２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ブチル］−ホスホン酸、［２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ペンチル］−ホスホン酸、および［２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ヘキシル］−ホスホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００５８】
【化２３】
2012523458.tif 000025
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がノナ−１−エニル基であり、Ｘがスルホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義され、これらの化合物は式（Ｉｕ）によって表され、（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−メタンスルホン酸、２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−エタンスルホン酸、３−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロパンスルホン酸、４−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ブタンスルホン酸、５−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ペンタンスルホン酸、および６−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノナ−１−エニル−クロマン−６−イルオキシ）−ヘキサンスルホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００５９】
【化２４】
2012523458.tif 000026
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がノニル基であり、Ｘがカルボキシル部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義され、これらの化合物は式（Ｉｖ）によって表され、（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−酢酸、３−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピオン酸、４−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−酪酸、６−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ペンタン酸、および７−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ヘプタン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００６０】
【化２５】
2012523458.tif 000027
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がノニル基であり、Ｘがホスホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｗ）によって表され、（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシメチル）−ホスホン酸、［２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−エチル］−ホスホン酸、［２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロピル］−ホスホン酸、［２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ブチル］−ホスホン酸、［２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ペンチル］−ホスホン酸、および［２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ヘキシル］−ホスホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００６１】
【化２６】
2012523458.tif 000028
別の実施態様において、式（Ｉ）のトコフェリルスクシナート誘導体は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がノニル基であり、Ｘがスルホン酸部分であり、ｎが１から６の整数であるように定義される。これらの化合物は式（Ｉｘ）によって表され、（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−メタンスルホン酸、２−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−エタンスルホン酸、３−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−プロパンスルホン酸、４−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ブタンスルホン酸、５−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ペンタンスルホン酸、および６−（２，５，７，８−テトラメチル−２−ノニル−クロマン−６−イルオキシ）−ヘキサンスルホン酸からなる群から選ばれる化合物を含む。
【００６２】
【化２７】
2012523458.tif 000029
候補薬剤は、動物モデルにおいて試験することができる。通常、動物モデルは癌の研究用のものである。動物モデル（例えばマウス）におけるさまざまな癌の研究は、ヒトの癌の研究のための普通に受け入れられている慣行である。例えば、ヌードマウスモデルは、ヒトの腫瘍細胞がこの動物に注射され、前立腺癌を含む広い範囲の癌の研究のための有用な一般モデルとして普通に受け入れられている（例えばＰｏｌｉｎら、Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ，１５：９９〜１０８（１９９７）参照）。通常は、候補薬剤による治療を受けた対照動物と治療を受けなかった対照同腹子との間で結果が比較される。遺伝子組み換え動物モデルも利用可能であり、ヒト疾患のためのモデルとして一般に受け入れられている（例えばＧｒｅｅｎｂｅｒｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：３４３９〜３４４３（１９９５）参照）。これらの動物モデルにおいて候補薬剤を用い、例えば、癌転移、癌細胞運動性、癌細胞侵襲性、またはそれらの組み合わせを含む、癌と関連した症状の１つ以上を候補薬剤が減少させるかどうかを判定することができる。
【００６３】
トコフェリルスクシナート誘導体を用いる癌の治療
本発明は、トコフェリルスクシナート誘導体を用いて被験体における癌を治療するまたは被験体における癌の発生を予防するための方法を提供する。癌は、異常かつ過度の細胞増殖の疾患である。一般に、癌は、ごく一部の細胞が増殖についての正常な制御を免れ、数を増加させることを可能にする環境からの攻撃または複製における誤りによって始まる。一般に、損傷または誤りは、細胞周期チェックポイント制御、または腫瘍抑制遺伝子などの関連する細胞成長制御の局面をコード化しているＤＮＡに影響を及ぼす。この一部の細胞が増殖すると、別の遺伝変異形が発生することがあり、それらが成長を有利にすれば進化論的に選択されることになる。成長は有利になったがまだ完全に癌性となっていない細胞は、前癌細胞と呼ばれる。癌になると患者における癌細胞の数の増加が起こる。これらの細胞は、腫瘍と呼ばれる細胞の異常なかたまりを形成することができ、この細胞は腫瘍細胞と呼ばれる。患者の体の中の腫瘍細胞の全体量は、腫瘍量と呼ばれる。腫瘍は、良性のこともあり悪性のこともある。良性の腫瘍は、増殖しつつあるが特定の部位に留まる細胞を含む。一方、悪性の腫瘍の細胞は、近くの組織に侵入し、破壊することができ、転移と呼ばれる過程を通して体の他の部品に広がることができる。
【００６４】
一般に、癌は、起源となった組織にもとづいて名づけられる。いくつかの主要な種類の癌がある。癌腫は、皮膚または組織において始まる癌であり、内部器官に貼り付くかまたは覆う。肉腫は、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管または他の結合組織もしくは支持組織において始まる癌である。白血病は、骨髄などの造血組織において始まる癌であり、多数の異常な血液細胞が産生され、血流に入る原因となる。リンパ腫および多発性骨髄腫は、免疫系の細胞において始まる癌である。前立腺癌は、初めは前立腺組織中で発生する癌であるが、他の組織に転移することができる。
【００６５】
本発明のトコフェリルスクシナート誘導体を用いてさまざまな種類の癌および前癌を治療することができる。例えば、トコフェリルスクシナート誘導体をアンドロゲン受容体依存性癌に用いることができる。トコフェリルスクシナート誘導体を用いて前立腺癌およびホルモン抵抗性前立腺癌を治療することもできる。
【００６６】
本明細書において用いられる治療とは、予防的治療と治療上の処置との両方を包含する。本発明のトコフェリルスクシナート誘導体は、例えば、癌の発生の前に予防的に被験体に投与することができる。予防的な投与は、被験体におけるその後の癌の発生の可能性を減少させるかまたはその後に発生する癌の重篤さを減少させるのに効果がある。あるいは、本発明のトコフェリルスクシナート誘導体は、例えば、既に癌に罹病している被験体に治療的に投与することができる（すなわち非予防的治療）。治療的投与の一実施態様において、トコフェリルスクシナート誘導体の投与は、癌を除くのに効果があり、別の実施態様において、トコフェリルスクシナート誘導体の投与は、癌の重篤さを減少させるかまたは癌に罹病している被験体の寿命を延ばすのに効果がある。被験体は、好ましくは、飼いならされた家畜（例えば雌ウシ、ウマ、ブタ）またはペット（例えばイヌ、ネコ）などの哺乳類である。より好ましくは、被験体はヒトである。
【００６７】
本発明は、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）活性を増加させる方法も提供し、この方法は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
【００６８】
【化２８】
2012523458.tif 000030
式中、Ｒ１は、独立に、水素およびメチルから選ばれ、Ｒ２は、４，８−ジメチル−ノナ−１−エニル基、４，８−ジメチル−ノニル基、ノナ−１−エニル基およびノナニル基からなる群から選ばれ、Ｘは、カルボキシル部分、ホスホン酸部分、またはスルホン酸部分であり、ｎは、１から６の整数である、
化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物の有効な量を投与することを含む。インビボであってもインビトロであってもよい細胞中のタンパク質ホスファターゼ２Ａ活性を増加させることができる。癌を有する被験体を含む被験体についてもタンパク質リン酸塩２Ａ活性を増加させることができる。ＰＰ２Ａを活性化する化合物の効果を評価する能力は、本明細書においてさらに記載されるように、ＰＰ２Ａ免疫沈降ホスファターゼアッセイキットなどの方法を用いて評価することができる。
【００６９】
図２Ａに示されているように、トコフェリルスクシナート誘導体によってＪＮＫを不活性化すると、Ｓｐ１のプロテアソーム分解が促進され、ＶＥＧＦ、Ｍｄｍ２、ＤＮＭＴ１、およびＡＲを含む前立腺発癌および腫瘍進行に関連する一連の信号伝達タンパク質の転写が抑制される。機構上の観点から、ＰＰ２Ａを活性化するトコフェリルスクシナート誘導体の能力は、多くの分子ターゲットに対する薬理活性の広いスペクトルを際立たせる。同様に重要なことは、図２Ｂに示されるように、正常な前立腺上皮細胞（ＰｒＥＣ）が悪性細胞と比べてＶＥＳおよびＴＳ−１の抗増殖効果に対して抵抗性であったことである。
【００７０】
トコフェリルスクシナート誘導体の投与および製剤
本発明は、活性成分としての式Ｉによるトコフェリルスクシナート誘導体、および活性成分と組み合わされた薬学的に許容される液体または固体の単数または複数のキャリアを含む医薬品組成物も提供する。癌の治療に適していると上記に記載されているトコフェリルスクシナート誘導体のいずれも本発明の医薬品組成物に含むことができる。
【００７１】
トコフェリルスクシナート誘導体は、変更することなく投与してもよく、または薬学的に許容される塩として投与してもよい。薬学的に許容される塩とは、トコフェリルスクシナート誘導体の比較的無毒な無機および有機の酸の付加塩を指す。これらの塩は、トコフェリルスクシナート誘導体の最終的な単離および精製時に、または精製されたトコフェリルスクシナート誘導体を適当な有機または無機の対イオンと別々に反応させ、このようにして形成させた塩を単離することによってインサイチュ調製することができる。トコフェリルスクシナート誘導体アニオンとともに用いるのに適している代表的な陽イオン対イオンは、アンモニウム、アルギニン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、ピペラジンおよび類似物を含む。（例えばＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ），Ｗｉｌｅｙ（２００８）参照）。
【００７２】
本医薬品組成物は、当業者に知られているさまざまな希釈剤または賦形剤を含む、患者への送達のためのさまざまな生理的に許容されるキャリアの１つ以上とともに１つ以上のトコフェリルスクシナート誘導体を含む。例えば、非経口投与には等張食塩水が好ましい。局所性投与には、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などのキャリア、または通常塗り薬に見いだされる、ペプチドの活性を阻止または阻害しない他の薬剤を含むクリームを用いることができる。他の適当なキャリアは、アルコール、リン酸塩緩衝食塩水、および他の均衡塩溶液を含むがこれに限定されるものではない。
【００７３】
製剤は、単位用量形で便利に提供されてよく、調剤の分野において良く知られている方法のいずれによっても調製されてよい。好ましくは、そのような方法は、活性薬剤を１つ以上の副成分を構成するキャリアと一体化させる段階を含む。一般に、製剤は、活性薬剤を液体キャリア、微粉化された固体キャリアまたは両方と均一かつ密接に一体化させ、必要なら次に生成物を所望の製剤の形にすることによって調製される。本発明の方法は、被験体、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒトに、所望の効果を生み出す効果のある量の本発明の組成物を投与することを含む。トコフェリルスクシナート誘導体は、単回投与量としてまたは複数回投与量で投与することができる。活性薬剤の有用な用量は、インビトロ活性および動物モデルにおけるインビボ活性を比較することによって決定することができる。マウス、および他の動物における有効用量のヒトへの外挿のための方法が当分野において知られている。例えば米国特許第４，９３８，９４９号参照。
【００７４】
本発明の薬剤は、好ましくは医薬品組成物中に調合され、次に、本発明の方法に従って選ばれた投与経路に適合するさまざまな形でヒト患者などの被験体に投与される。製剤は、経口、直腸、膣、局所、鼻腔、眼、または親（ｐａｒｅｎｔａｌ）（皮下、筋肉内、腹膜内、腫瘍内、静脈内を含む）投与に適するものを含むがこれに限定されるものではない。
【００７５】
経口投与に適している本発明の製剤は、錠剤、トローチ、カプセル、薬用キャンディ、ウエハまたはカシェ剤などの個別的な単位として提供され、それぞれは予め定められた量の活性薬剤を粉体または顆粒として、トコフェリルスクシナート誘導体を含むリポソームとして、あるいはシロップ、エリキシル、エマルジョンまたはドラフトなどの溶液または水溶液または非水液体中の懸濁液として含む。そのような組成物および調製物は、通常、少なくとも約０．１重量％の活性薬剤を含む。トコフェリルスクシナート誘導体（すなわち活性薬剤）の量は、用量レベルが被験体において所望の結果を生み出すのに効果があるようにされる。
【００７６】
鼻腔スプレー製剤は、防腐剤および等張剤を有する精製された活性薬剤水溶液を含む。そのような製剤は、好ましくは鼻粘膜と適合するｐＨおよび等張状態に調整される。直腸投与または膣投与のための製剤は、ココアバター、水素化脂肪または水素化脂肪族カルボン酸などの適当なキャリアを有する坐薬として提供されてよい。眼科用製剤は、ｐＨおよび等張因子が好ましくは眼のそれと適合するように調整される点を除けば、鼻腔スプレーと同様な方法によって調製される。局所製剤は、鉱油、石油、ポリヒドロキシアルコール、または局所性医薬製剤のために用いられる他の基材などの１つ以上の媒質中に溶解または懸濁された活性薬剤を含む。
【００７７】
錠剤、トローチ、ピル、カプセルおよび類似物は、以下、すなわちトラガカントゴム、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチンなどのバインダ、リン酸二カルシウムなどの賦形剤、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸および類似物などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、スクロース、フラクトース、ラクトースまたはアスパルテームなどの甘味料、および天然または人工の着香料の１つ以上も含んでよい。単位用量形がカプセルのときは植物油またはポリエチレングリコールなどの液体キャリアをさらに含んでよい。さまざまな他の材料が被覆物として、または他の方法で固体の単位用量形の物理的な形を変えるために存在してよい。例えば、錠剤、ピルまたはカプセルをゼラチン、ワックス、セラック、砂糖および類似物で被覆してよい。シロップまたはエリキシルは、甘味料、メチルまたはプロピルパラベンなどの防腐剤、砂糖の結晶化を遅らせる薬剤、多価アルコール、例えばグリセロールまたはソルビトールなどの、他のいずれかの成分の溶解性を増加させる薬剤、染料、および着香料の１つ以上を含んでよい。いずれの単位用量形を調製する際に用いられる材料も、使用される量では実質的に非毒性である。活性薬剤を徐放性調製物およびデバイスに組み込んでよい。
【００７８】
化合物の調製
本発明のトコフェリルスクシナート誘導体は、化学分野において周知のものと同様なプロセスを含む合成経路によって、特に、本明細書に含まれる記載に従って合成することができる。出発原料は、一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ）などの市販元から入手可能であるか、または当業者に周知の方法を用いて容易に調製される（例えばＬｏｕｉｓ  Ｆ．Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒ，Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｖ．１〜１９，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６７〜１９９９編）、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｋａｔｒｉｔｓｋｙ，Ｏｔｔｏ  Ｍｅｔｈ−Ｃｏｈｎ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｗ．Ｒｅｅｓ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ｖ１〜６，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，（１９９５）、Ｂａｒｒｙ  Ｍ．Ｔｒｏｓｔ  ａｎｄ  Ｉａｎ  Ｆｌｅｍｉｎｇ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｖ．１〜８，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，（１９９１）、または補遺を含むＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ，４，Ａｕｆｌ．Ｅｄ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ，（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースによっても利用可能）に一般的に記載されている方法によって調製される）。
【００７９】
コンビナトリアル合成を用いて最初のＴＳ−１構造にもとづく集中的な化合物ライブラリーを調製した。構造上、ＴＳ−１は３つの部分構造、すなわち酸部分の構造Ａ、複素環系の構造Ｂ、および脂肪族側鎖の構造Ｃに分割することができる。これらの３つの構成部分を個々に修飾し、次にコンジュゲートさせて新しいトコフェリルスクシナート誘導体を生み出すことができる。調製されたそれぞれの部分構造は図３に要約されている。
【００８０】
部分構造は、トコフェリルスクシナート誘導体において異なる機能のために働く。部分構造Ａの場合、ヘミスクシナート（エステル結合）はエーテル結合した酸、すなわちカルボン酸（−ＣＯ２Ｈ）、ホスホン酸（−Ｐ（Ｏ）２ＯＨ）またはスルホン酸（−ＳＯ３Ｈ）によって置換されて向上した経口バイオアベイラビリティーを提供する。エーテル結合した酸は、１〜６のメチレン基の長さなどのさまざまな長さを有するアルキル基の末端に結合させることができる。エーテル結合はトコフェリルスクシナート誘導体のバイオアベイラビリティーを向上させるが、それらの向上したバイオアベイラビリティー以外では化合物自体の活性にほとんど影響を及ぼさないことが示された。部分構造Ｂについては、異なる立体化学特性を有するＴＳ−１のクロマン環の構造変化形を用いることができる。例えば、クロマン環は「きれい」（すなわち水素原子以外に結合基がない）であってもよく、または１つ以上の結合したメチル基を有してもよい。部分構造Ｃについては、鎖長を変化させてよく、メチル分岐を除いてよく、α，β−二重結合を導入して側鎖の剛直性を増加させてもよい。これらの誘導体の合成は、図４に例示されているように実現することができる。この合成は、実験室の状況においてグラム規模の量にスケールアップ可能である。
【００８１】
当業者は、他の合成経路を用いて本発明の化合物を合成してもよいことを理解するであろう。下記において特定の出発原料および試薬が反応スキームに示され、考察されているが、他の出発原料および試薬をたやすく代りに用いてさまざまな誘導体および／または反応条件を提供することができる。さらに、下記に記載されている方法によって調製される化合物の多くは、本開示に従い、当業者に周知の従来の方法を用いてさらに修飾することができる。
【００８２】
本発明は、以下の実施例によって例示される。これらの特定の実施例、材料、量および手順は、本明細書において示されている本発明の範囲および技術思想に従って広く解釈されるべきであると理解するべきである。
【実施例】
【００８３】
実施例１：ビタミンＥスクシナート誘導体はＰＰ２Ａ−ＪＮＫ−Ｓｐ１信号伝達軸をターゲットとすることにより前立腺癌細胞中のアンドロゲン受容体の転写抑制を媒介する
材料および方法
試薬、抗体およびプラスミド。
【００８４】
ＶＥＳおよびプロテアソームインヒビターＭＧ１３２およびエポキソマイシンは、ＥＭＤ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）およびＡｌｄｒｉｃｈ−Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）からそれぞれ購入した。ＴＳ１｛コハク酸モノ−［２−（４，８−ジメチル−ノニル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−イル］エステル｝は、抗増殖力の向上したＶＥＳの短縮誘導体である。Ｓｈｉａｕら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２８１，１１８１９〜２５（２００６）。これらの薬剤のＤＭＳＯ中の貯蔵溶液を作り、０．１％の最終ＤＭＳＯ濃度で培地に加えた。さまざまなタンパク質に対する抗体を以下の供給元から得た。マウスモノクローナル抗体：ＡＲおよび前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ）。ウサギ抗体：Ｓｐ１、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ；ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、ｐ−Ｓｅｒ４７３−Ａｋｔ、ｐ−Ｔｈｒ３０８−Ａｋｔ、Ａｋｔ、ｐ−ＥＲＫ、ＥＲＫ、ｐ−ＪＮＫ、ＪＮＫ、ｐ−ｐ３８およびｐ３８、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）。ＡＲプロモータ−ルシフェラーゼレポータベクター（ｈＡＲ−Ｌｕｃ）は既に記載されているように構築された。Ｙａｎｇら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６７，３２２９〜３８（２００７）。ドミナントネガティブＪＮＫ１プラスミドｐＣＤＮＡ３−Ｆｌａｇ−ＪＮＫ１ａ１は、Ａｄｄｇｅｎｅ  Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）から得られた。ヘマグルチニン（ＨＡ）−ユビキチンプラスミドおよび構成ＪＮＫ活性を有するＭＫＫ７−ＪＮＫ１融合タンパク質をコード化している構成的に活性なＪＮＫプラスミドＦｌａｇ−ＭＫＫ７−ＪＮＫ１（Ｌｅｉら，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，２２，４９２９〜４２（２００２））は、Ｄｒ．Ｈｕｎｇ−Ｗｅｎ  Ｃｈｅｎ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉａ  Ｓｉｎｉｃａ，Ｔａｉｐｅｉ，Ｔａｉｗａｎ）およびＤｒ．Ｒｏｇｅｒ  Ｄａｖｉｓ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）からのそれぞれ好意による贈り物であった。ｐＣＭＶＳｐ１プラスミドは、ＯｒｉＧｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から購入した。
【００８５】
細胞培養。
【００８６】
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）からＬＮＣａＰアンドロゲン依存性（ｐ５３＋／＋）およびＰＣ−３アンドロゲン非応答性（ｐ５３−／−）前立腺癌細胞を購入し、１０％の熱不活性化ＦＢＳを含むＲＰＭＩ  １６４０培地中で培養した。Ｌｏｎｚａ，Ｉｎｃ．（Ａｌｌｅｎｄａｌｅ，ＮＪ）から正常前立腺上皮細胞（ＰｒＥＣ）を入手し、販売業者によって勧められている成長因子キットを添加したＰｒｏｓｔａｔｅ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｍｅｄｉａ中に維持した。５％ＣＯ２を含む加湿インキュベーター中３７℃ですべての細胞型を培養した。ＭＴＴ生存率アッセイに用いるために対数期成長している細胞をトリプシン処理によって集めた。表面への細胞接着を支援するために、ポリ−Ｄ−リジン被覆培養フラスコ中にＬＮＣａＰ細胞を塗布した。薬物処理の前に、それぞれの培養培地中に細胞を１２，０００細胞／ｃｍ２表面積の密度で２４〜４８時間塗布し、続いて２．５％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩ培地中の個々の試験薬剤を加えた。
【００８７】
免疫ブロッティング。
【００８８】
Ｔ２５フラスコ中で培養した細胞をこすり取って集め、細胞ペレットをＰＢＳで１回洗浄した。Ａｌｄｒｉｃｈ−Ｓｉｇｍａからの市販プロテアーゼインヒビターカクテル（２ｍＭ  ＡＥＢＳＦ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１３０μＭベスタチン、１４μＭ  Ｅ−６４、１μＭロイペプチンおよび０．３μＭアプロチニン）の存在下、１％ＳＤＳ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡおよび５０ｍＭトリス−ＨＣｌからなるｐＨ８．１の溶菌緩衝液中で細胞を溶菌させた。Ｖｉｒｓｏｎｉｃ  ３００超音波照射装置（Ｖｉｒｔｉｓ，Ｇａｒｄｉｎｅｒ  ＮＹ）中で２０％の出力を用いて１０秒の超音波処理を行って細胞オルガネラおよびゲノムＤＮＡを分離させた後、１５，２００×ｇで１５分間細胞溶菌物を遠心分離した。比色ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いるタンパク質定量のために１μＬの懸濁液を用い、残りの溶液に、等体積の２×ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動試料添加用緩衝液（６２．５ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ６．８、４％ＳＤＳ、５％β−メルカプトエタノール、２０％グリセロール、および０．１％ブロモフェノールブルー）を加え、５分間沸騰させた。８％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル中で等しい量のタンパク質を分割し、セミドライトランスファーセルを用いてニトロセルロース膜に移した。トランスブロットした膜を、０．１％トゥイーン２０（ＴＢＳＴ）を含むトリス緩衝食塩水で２回洗浄した。５％脱脂乳を含むＴＢＳＴで４０分間ブロックした後、膜をＴＢＳＴ−１％脱脂乳中の適切な一次抗体とともに４℃で一夜インキューベートした。すべての一次抗体を１％脱脂乳含有ＴＢＳＴ中で１：１０００に希釈した。一次抗体で処理した後、膜をＴＢＳＴで３回、合計１５分間洗浄し、続いてヤギ抗ウサギまたは抗マウス免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）−セイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲート（１：２０００希釈）とともに室温で１時間インキュベーションし、ＴＢＳＴで４回、合計１時間洗浄した。増強した化学ルミネセンスによって免疫ブロットを視覚化した。
【００８９】
ＲＮＡ単離および逆転写（ＲＴ）−ＰＣＲ。
【００９０】
Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＣＡ）を用いることによってＬＮＣａＰ細胞を全ＲＮＡ単離に付した。分光光度計中で２６０ｎｍの吸収を測定することによってＲＮＡ濃度を定量した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用い、製造業者の指示に従って、各試料からの２μｇの全ＲＮＡの試料をｃＤＮＡに逆転写した。ＰＣＲ生成物を１．２％アガロースゲル中で電気泳動によって分割し、臭化エチジウム染色によって視覚化した。
【００９１】
形質移入およびルシフェラーゼアッセイ。
【００９２】
Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ中で製造業者のプロトコル（Ａｍａｘａ  Ｉｎｃ．Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）に従い、細胞系統特異的ヌクレオフェクターキットを用いて５μｇのＡＲ結合ルシフェラーゼレポータ（ｈＡＲ−Ｌｕｃ）プラスミドを細胞に移入し、次にＴ２５フラスコ中にフラスコあたり３×１０５細胞で４８時間接種した。３μｇのｐｍａｘＧＦＰプラスミドを細胞に移入し、続いて蛍光顕微鏡法によって緑色蛍光タンパク質発現を検出することによって形質移入効率を定量した。各形質移入について、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼプロモータによって推進されるＲｅｎｉｌｌａ  ｒｅｎｉｆｏｒｍｉｓルシフェラーゼを正規化のための内部標準として用いた。ルシフェラーゼレポータ遺伝子アッセイについて、形質移入後、細胞を２４ウェルプレート中１０％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩ１６４０中で４８時間培養し、示された回数２．５％ＦＢＳ添加培地中でさまざまな処理に付し、集め、受動溶菌緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）で溶菌させた。溶菌液の試料（５０μＬ）を９６ウェルプレート中で７５μＬのルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ）と混合し、ＭｉｃｒｏＬｕｍａＰｌｕｓ  ＬＢ９６Ｖ照度計（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｏａｋ  Ｒｉｄｇｅ，ＴＮ）中でＷｉｎＧｌｏｗソフトウェアパッケージを用いてルシフェラーゼ活性をモニタした。すべての形質移入実験は、６回繰り返して行った。
【００９３】
免疫沈降。
【００９４】
Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ中でＬＮＣａＰ特異的ヌクレオフェクタキットを用いてそれぞれ５μｇのＦｌａｇ−Ｓｐ１およびＨＡ−ユビキチンプラスミドをＬＮＣａＰ細胞に共移入した。これらの一過性移入細胞をウェルあたり２×１０５で６ウェルプレートに接種した。４８時間インキュベーションした後、細胞を示された濃度のＶＥＳまたはＴＳ−１に４８時間曝露し、ホスファターゼおよびプロテアーゼインヒビターの調製したばかりのカクテル（２ｍｍｏｌ／Ｌ  ＡＥＢＳＦ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１３０μＭベスタチン、１４μＭ  Ｅ−６４、１μＭロイペプチン、および０．３μＭアプロチニン、２ｍＭイミダゾール、１ｍＭフッ化ナトリウム、１．１５ｍＭモリブデン酸ナトリウム、１ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウム、および４ｍｍｏｌ／Ｌ酒石酸ナトリウム二水和物）の存在下、放射免疫沈降アッセイ溶菌緩衝液（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）によって溶菌させた。１３，０００×ｇで１５分間遠心分離した後、上清を集め、タンパク質Ａ／Ｇアガロース（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で１５分間予備インキュベーションし、１，０００×ｇで５分間遠心分離した。上清（２０μＬ）を４℃で貯蔵して入力として用い、一方、残っている上清を４μｇの抗Ｓｐ１抗体に４℃で１２時間、続いて４℃でタンパク質Ａ／Ｇアガロースビーズとさらに２時間接触させた。短時間の遠心分離した後、免疫沈降物を集め、前述の溶菌緩衝液で４回浄し、２×ＳＤＳ試料緩衝液中に懸濁させ、ＨＡおよびＦｌａｇに対する抗体とともにウエスタンブロット分析に付した。
【００９５】
クロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）。
【００９６】
薬物で処理した後、５０ｍＬのＰＢＳ中のＬＮＣａＰ細胞（２×１０７）を１．３５ｍＬの３７％ホルムアルデヒド（最終濃度１％）により室温で１５分間架橋させた。グリシン溶液（１モル／Ｌ）を加えて１２５ｍｍｏｌ／Ｌの最終濃度にして架橋反応を止めた。細胞を集め、５ｍＬのＰＢＳで２回洗浄し、（ｐＨ７．５の５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．１％デオキシコール酸ナトリウム、２ｍＭ  ＡＥＢＳＦ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１３０μＭベスタチン、１４μＭ  Ｅ−６４、１μＭロイペプチン、および０．３μＭアプロチニン）を含むＣｈＩＰ溶菌緩衝液中で細胞ペレットを溶菌させた。Ｖｉｒｓｏｎｉｃ  ３００超音波照射装置中２０％の出力で６セットの１０秒パルス（０．８〜０．２ｋｂの平均フラグメントサイズが得られる）を用いて懸濁液に超音波照射し、４℃で１５，０００×ｇで１０分間遠心分離した。ＢＣＡアッセイによってタンパク質濃度を決定するために透明上清の１μＬ試料を採取した。上記に記載されているように免疫沈降を行った。４μｇの抗Ｓｐ１抗体とそれに続くタンパク質Ａ／Ｇアガロースビーズを用いる免疫沈降のために１ｍｇのタンパク質の試料を用いた。免疫沈降物を１ｍＬのＣＨＩＰ溶菌緩衝液で２回、１ｍＬの高塩ＣＨＩＰ溶菌緩衝液（ｐＨ７．５の５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、５００ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．１％デオキシコール酸ナトリウム、２ｍｍｏｌ／Ｌ  ＡＥＢＳＦ、１ｍｍｏｌ／Ｌ  ＥＤＴＡ  １３０μモル／Ｌベスタチン、１４μｍｏｌ／Ｌ  Ｅ−６４、１μｍｏｌ／Ｌ  ロイペプチン、および０．３μｍｏｌ／Ｌ  アプロチニン）で２回、１ｍＬのＣＨＩＰ洗浄緩衝液（１０ｍｍｏｌ／Ｌ  トリスｐＨ８．０、２５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＬｉＣｌ、０．５％  ＮＰ−４０、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１ｍｍｏｌ／Ｌ  ＥＤＴＡ）で２回、１ｍＬのＴＥ緩衝液（１０ｍｍｏｌ／Ｌトリス、ｐＨ７．５、１ｍｍｏｌ／Ｌ  ＥＤＴＡ）で２回続けて洗浄した。７５μＬの溶離緩衝液（５０ｍｍｏｌ／Ｌトリス、ｐＨ８．０、１％ＳＤＳ、１０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＥＤＴＡ）の添加によって免疫複合体を溶出させ、６５℃において１０分間インキュベーションした。短時間遠心分離した後、得られた上清を集め、別の７５μｌの溶離緩衝液でペレットを再び溶出させた。上清を合わせ、６５℃で一夜インキュベーションした。元の全タンパク質の１０μｇの試料（１％）を１５０μｌの溶離緩衝液に加え、入力対照として６５℃で一夜インキュベーションした。最後に、ＰＣＲ精製キット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ  ＣＡ）を用いてＤＮＡ精製のために試料を処理し、回収したＤＮＡを５０μＬの１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．５で溶出させた。ＡＲ遺伝子の５’−ＵＴＲの４２９〜４４２に位置する、ＡＲプロモータ上の２つの隣り合うＳｐ１結合部位の間にあるプライマによるＰＣＲのために１μｌの試料を用いた。Ｗａｎｇら，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，２７，２１２４〜３２（２００６）。ＰＣＲ生成物の増幅のためにＥ２ＴＡＫ  ｔａｑポリメラーゼ（Ｔａｋａｒａ  Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．）および対応する緩衝液系を用いた。
【００９７】
ＰＰ２Ａ活性アッセイ。
【００９８】
ＰＰ２Ａ  Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いることにより、薬物処理した細胞中のＰＰ２Ａ活性を製造業者の指示に従って定量した。ＬＮＣａＰ細胞を２．５％ＦＢＳ添加培地中で示された濃度のＤＭＳＯ、ＶＥＳ、またはＴＳ−１に１２時間曝露し、２０ｍｍｏｌ／Ｌイミダゾール−ＨＣｌ、ｐＨ７．０、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２ｍＭ  ＥＧＴＡ、２ｍＭ  ＡＥＢＳＦ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１３０μＭベスタチン、１４μＭ  Ｅ−６４、１μＭロイペプチン、および０．３μＭアプロチニンを含む、リン酸塩を含まない溶菌緩衝液中で溶菌に付した。懸濁液を、２０％出力で１０秒間超音波照射（Ｖｉｒｔｉｓ）し、続いて２０００×ｇで５分間遠心分離した。ＢＣＡアッセイによる蛋白定量のために上清の１μＬの試料を採取し、残りの上清をホスファターゼ活性アッセイのために用いた。４００μｇのタンパク質を含む細胞溶菌物の試料を４μｇの抗ＰＰ２Ａｃ抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）と組み合わせ、これにＰＰ２Ａアッセイ緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．０、１００ｍＭ  ＮａＣｌ）を加えて最終的な体積を５００μＬとし、続いて４０μＬのタンパク質Ａ−アガロースを加えた。混合物を４℃で２時間インキュベーションし、短時間遠心分離した。免疫複合体を洗浄し、ホスファターゼ活性アッセイのために用いた。免疫複合体中のＰＰ２Ａの量をウェスタンブロッティングによって半定量的に定めた。
【００９９】
結果
正常な前立腺上皮細胞（ＰｒＥＣ）と対比したＬＮＣａＰ細胞中のＡＲ発現の抑制に対するＶＥＳおよびＴＳ１の効果差。
【０１００】
Ｂｃｌ−ｘＬ／Ｂｃｌ−２機能に対するＶＥＳの阻害効果の検討において、構造的に最適化された誘導体ＴＳ−１（図５Ａ）が開発された。この化合物においては、フィチル側鎖がＶＥＳのものと比べてイソプラニル単位１つ分短縮された。Ｓｈｉａｕら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２８１、１１８１９〜２５（２００６）この研究において、ウエスタンブロット分析は、この側鎖短縮によってＬＮＣａＰ細胞におけるＡＲおよびそのターゲット遺伝子産物ＰＳＡの発現の抑制において高くなった効能も得られることを示している（図５Ｂ）。例えば、５μｍｏｌ／ＬのＴＳ−１は、７２時間のインキュベーション後にこれらのバイオマーカの発現を効果的に５０％低下させ、一方、ＶＥＳは同じ程度の抑制を達成するのに少なくとも１０μｍｏｌ／Ｌを要した（図５Ｂ）。ＡＲを抑制するＶＥＳおよびＴＳ−１の能力は、ＰＡＲＰ開裂の程度によって示されるように、アポトーシスの誘発におけるそれぞれの効能と相関していた。さらに、２つの系統の証拠により、ＡＲタンパク質発現のこの減少は、ＡＲ遺伝子発現の転写抑制によるものであることが明らかになった。第一に、ＬＮＣａＰ細胞中のＡＲ遺伝子のｍＲＮＡ転写物のＲＴ−ＰＣＲ分析により、１０μＭ  ＶＥＳまたはＴＳ−１に応答してＡＲタンパク質のものと同じような時間依存的な低下が示された（図５Ｃの左側のパネル）。第二に、ＡＲプロモータ−ルシフェラーゼレポータアッセイにより、これらの薬剤が７２時間の曝露後に用量に依存してＡＲ遺伝子転写を阻害することができることが確認された（図５Ｃの右側のパネル）。全体として、これらのデータにより、ＶＥＳおよびＴＳ−１がＡＲプロモータの転写調節をターゲットとすることによってＡＲ  ｍＲＮＡ発現の阻害を媒介したことが示される。
【０１０１】
ＬＮＣａＰ細胞と比較すると、低いＡＲの存在量を示した正常な前立腺上皮細胞（ＰｒＥＣ）は、ＡＲ発現に対する薬物の抑制効果に対して抵抗力があった（図５Ｄ）。この選択性は、悪性細胞と対比した正常細胞の細胞生存率を抑制するＴＳ−１の能力に対する感度差を部分的に説明する可能性があった（図５Ｅ）。
【０１０２】
ＶＥＳおよびＴＳ−１はＳｐ１をターゲットとしてＡＲ遺伝子転写をダウンレギュレーションする。
【０１０３】
ＬＮＣａＰ細胞におけるＡＲ発現の調節に対するチアゾリジンジオン類の効果についての以前の研究において、本発明者らは、薬物媒介ＡＲ除去とＳｐ−１発現のダウンレギュレーションとの間の機構的なつながりを示した。Ｙａｎｇら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６７，３２２９〜３８（２００７）。ＶＥＳおよびＴＳ−１誘発ＡＲ抑制におけるこの推定上の関連を検討するために、ＣｈＩＰアッセイを行ってさまざまな投与量のＶＥＳまたはＴＳ−１で７２時間処理したＬＮＣａＰ細胞におけるＡＲプロモータへのＳｐ１の結合を検出した。細胞をホルムアルデヒド処理した後、Ｓｐ１またはＩｇＧに対する抗体を用いてＳｐ１結合ゲノムＤＮＡフラグメントを免疫沈降させ、続いてＡＲプロモータをはさんでいる一対のプライマを用いてＰＣＲ分析を行った。結果は、ＶＥＳおよびＴＳ−１が投与量に応じてＡＲプロモータへのＳｐ１の結合を減らすことを示した。ウエスタンブロット分析によると、この減少した結合は、薬物処理した細胞中のＳｐ１発現の減少によるものであった。さらに、高投与量のＶＥＳおよびＴＳ−１によるＬＮＣａＰ細胞の処理の後でもＳｐ１  ｍＲＮＡ発現は変らないままであったので、この抑制は翻訳後レベルで起った。Ｓｐ１レベルを低下させるＶＥＳおよびＴＳ−１の能力は、すべて前立腺腫瘍形成および癌進行において重要な役割を演じる血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、負のｐ５３調節因子Ｍｄｍ２、およびＤＮＡメチルトランスフェラーゼ１（ＤＮＭＴ１）をコード化するものを含む、一連のＳｐ１下流ターゲット遺伝子の用量依存性転写抑制によって確認された。
【０１０４】
Ｓｐ１のプロテアソーム分解。
【０１０５】
Ｓｐ１タンパク質の安定性を調節するＶＥＳおよびＴＳ−１の能力は、ＤＭＳＯ対照と比較して短くなった、薬物で処理したＬＮＣａＰ細胞における半減期によって確認された。これは、ＴＳ−１処理後の方が明らかであった。さらに、エポキソマイシンおよびＭＧ−１３２によってプロテアソーム分解を薬理学的に阻害すると、Ｓｐ１はＴＳ−１促進除去から保護された。プロテアソーム促進タンパク質分解にはユビキチン化が先行するので、異所性のＨＡ−ユビキチンおよびＦｌａｇ−Ｓｐ１を発現しているＬＮＣａＰ細胞において、さまざまな投与量のＶＥＳおよびＴＳ−１に応えるユビキチン化Ｓｐ１の形成を調べた。２４時間薬物処理した後、細胞溶菌物をＳｐ１抗体とともに免疫ブロットするかまたは抗Ｆｌａｇ抗体−アガロースコンジュゲートによって免疫沈降した。等量の免疫沈降タンパク質をＦｌａｇまたはＨＡ抗体とともに免疫ブロッティングに付した。ユビキチン化したＳｐ１バンドの複雑なラダーによって示されるように、ＴＳ−１とＶＥＳとの両方がＳｐ１ユビキチン化の度合いを増加させた。
【０１０６】
異所性Ｓｐ１発現はＡＲ転写抑制へのＶＥＳおよびＴＳ−１の影響に対する抵抗力を付与する。
【０１０７】
薬物誘発ＡＲ抑制とＳｐ１ダウンレギュレーションとの間のつながりを検証するために、ＶＥＳ−およびＴＳ−１誘発抑制からＡＲを保護する異所性Ｓｐ１発現の能力を評価した。ｐＣＭＶＳｐ１プラスミドをＬＮＣａＰ細胞に一過性移入するとｐｃＤＮＡ移入細胞の場合より高いＳｐ１の発現レベルが得られた。ｐＣＭＶＳｐ１移入細胞を１０μＭのＴＳ−１またはＶＥＳで処理するとＳｐ１発現における低下の差が生じたが、それぞれのＳｐ１レベルは処理していないｐｃＤＮＡ移入細胞のものより依然として高かった。結果として、ＡＲの発現レベルは、薬物処理した後に事実上変らないままであり、異所性Ｓｐ１の保護効果を示した。
【０１０８】
ＶＥＳおよびＴＳ−１はＪＮＫ依存性経路を通してＳｐ１分解を媒介する。
【０１０９】
Ｓｐ１の生物学的機能の理解における最近の進歩にもかかわらず、この転写因子の代謝回転を支配する機構は不明のままである。本発明者らが得たデータは、ＶＥＳおよびＴＳ−１促進Ｓｐ１分解にはそのリン酸化レベルの同時低下が伴ったことを示している。Ｊｕｎ  ＮＨ２末端キナーゼ（ＪＮＫ）がＳｐ１の安定性の維持に関与しているという最近の報告（Ｃｈｕａｎｇら、Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ，１９，１１３９〜５１（２００８））を考慮すると、この知見は薬物誘発Ｓｐ１タンパク質分解の媒介におけるＪＮＫの推定上の役割を示唆している。この前提を裏付けるために、ＬＮＣａＰ細胞におけるＪＮＫならびにＡｋｔ、ＥＲＫおよびｐ３８を含む他のキナーゼのリン酸化状態に対するＶＥＳおよびＴＳ−１の効果を調べた。結果は、ＶＥＳおよびＴＳ−１でＬＮＣａＰ細胞を処理すると、ＴＳ−１の方が程度が高かったが、調べた４つのすべてのキナーゼのリン酸化レベルの投与量に依存する低下が得られることを示した。これは、ＰＣ−３細胞においても明らかであった。これらのキナーゼは公知のＰＰ２Ａ基質なので、それらの同時に起る脱リン酸は、薬物処理細胞中のＰＰ２Ａ活性化との可能なつながりを浮上させた。この因果関係は、ＰＰ２Ａホスファターゼ活性を増加させるＶＥＳおよびＴＳ−１の能力によって支持された。しかし、ＰＰ２Ａ活性のこの向上は、薬物処理後のＰＰ２Ａタンパク質レベルの増加によるものではなかった。
【０１１０】
さらに、ＪＮＫ不活性化とＳｐ１分解との間の機構上のつながりは、２つの系統の証拠によって確証された。第一に、ＪＮＫ１の優性ネガティブ変異体（ＤＮ−ＪＮＫ）によってＬＮＣａＰ細胞を安定移入するとＳｐ１発現の減少へのＶＥＳおよびＴＳ−１の効果を模倣した。第二に、ＰＣ−３細胞をモデルとして用いて構成的に活性な融合タンパク質ＭＫＫ７−ＪＮＫ１がＶＥＳおよびＴＳ−１誘発Ｓｐ１分解に対する保護を付与することを示した。ＬＮＣａＰ細胞にＭＫＫ７−ＪＮＫ１プラスミドを一過性移入するとほぼすべての移入細胞においてアポトーシス死が起ったので、ＬＮＣａＰ細胞はこのストレスキナーゼのアップレギュレーションに対してＰＣ−３細胞より脆かった。同じように重要なことは、ＰＰ２Ａのインヒビターのオカダ酸がＪＮＫ、Ｓｐ１およびＡＲのリン酸化または発現に対するＶＥＳおよびＴＳ−１の抑制効果から細胞を保護することができ、ＶＥＳおよびＴＳ−１がＰＰ２Ａ−ＪＮＫ−Ｓｐ１信号伝達軸をターゲットとすることによってＡＲの転写抑制を促進することを確認したことであった。
【０１１１】
考察
前立腺癌においてＡＲをターゲットとすることの治療法としての適切さを考慮し、ＶＥＳおよびその短縮された誘導体ＴＳ−１がＡＲ遺伝子転写を抑制する機構を検討した。データは、ＡＲ転写抑制の促進に対するＶＥＳ−およびＴＳ−１の効果がＳｐ１分解を促進する能力によるものとすることができることを示した。この能力は、今度は、ＰＰ２Ａ媒介ＪＮＫ不活性化を通して媒介された。同じように重要なことは、ＶＥＳおよびＴＳ−１の抗増殖効果に対してＰｒＥＣの方が悪性細胞より抵抗力があることであった。機構上の観点からは、ＰＰ２Ａ活性を活性化するＶＥＳおよびＴＳ−１の機能は、複数の信号伝達経路のターゲット化に対するそれらの多面的な効果を強調した。この検討は、これらの機構が、すべて前立腺発癌および腫瘍進行に対して臨床上関連しているＡｋｔ、ＥＲＫ、ＪＮＫ、ｐ３８、Ｓｐ１、ＡＲ、およびそれぞれの下流ターゲットによって媒介される機構を含んでいたが、これに限定されものではなかったことを示している。増加しつつあるリンタンパク質および信号伝達経路の一覧表の中に広く見られるＰＰ２Ａの作用にもとづいて、ＰＰ２Ａは、腫瘍抑制因子タンパク質として認識された。Ｍｕｍｂｙ，Ｍ．，Ｃｅｌｌ，１３０，２１〜４（２００７）。最近の検討は、ＰＰ２Ａ活性の抑制が他の発癌性変化と協同して複数の細胞型の悪性形質転換を引き起こすことを示した。Ｊｕｎｔｔｉｌａら、１３０，５１〜６２（２００７）。従って、ＰＰ２Ａホスファターゼ活性を活性化するＶＥＳおよびＴＳ−１の効果は、前立腺癌療法および予防のための新規なＰＰ２Ａ活性化剤を開発する上で移行価値がある。
【０１１２】
しかし、ＶＥＳ／ＴＳ−１で処理した前立腺癌細胞中のＭＡＰキナーゼのＰＰ２Ａ媒介ダウンレギュレーションは、ＶＥＳがＥＲＫおよびＪＮＫを活性化することによって乳癌および胃癌細胞において分化およびアポトーシスを誘発したという最近の報告と食い違う。この不一致は、異なる癌の型におけるそれぞれの信号伝達ネットワークの調節の差異によって引き起こされるのかもしれない。現時点では、ＰＰ２Ａホスファターゼ活性の活性化に対するＶＥＳおよびＴＳ−１の効果の根底にある機構は明らかでないままである。ＶＥＳがセラミド産生を刺激することが報告されているので、ＰＰ２Ａ活性化は、薬物処理細胞中の、知られているＰＰ２Ａ活性化剤である、セラミドの増加した細胞内レベルによるものであるとすることができる可能性はある。セラミド誘発ＰＰ２Ａ活性化を媒介するＶＥＳおよびＴＳ−１の能力は、現在調査中である。
【０１１３】
要約すると、ＶＥＳおよびＴＳ−１によって媒介されるＡＲ遺伝子転写の抑制の根底にある機構を調査する過程で、ＰＰ２Ａ−ＪＮＫ−Ｓｐ１信号伝達軸を調節するこれらの小分子薬剤の能力が示された。このことの意味は複数ある。第一に、この信号伝達軸は、複数の信号伝達ターゲットに対する広いスペクトルのＶＥＳの活性を説明する分子的な基礎を提供する。この多面効果は、低い毒性と結び付いて、癌治療／予防に臨床上適している。第二に、ＶＥＳと比較して高いＴＳ−１のＰＰ２Ａ−Ｓｐ１−ＡＲ信号伝達経路の調節における効能は、これらの薬剤を構造的に最適化してＰＰ２Ａをターゲットとする前立腺癌治療のための強力な薬剤を開発することができるであろうことを示している。
【０１１４】
すべての特許、特許出願および公開、ならびに本明細書において引用されている電子的に利用可能な資料の開示全体が参照によって組み込まれる。上記の詳細な説明および実施例は、理解を明らかにするためにだけ示された。それらから不必要な限定を理解するべきでない。請求項によって定義される本発明には、当業者に自明の変化形が包含されているので、本発明は示され記載されている厳密な詳細に限定されない。
【０１１５】
すべての見出しは読者の便宜を図るものであり、特に断らない限り、見出しの後に続く文の意味を限定するために用いられるべきでない。
【図４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図５】
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【国際調査報告】
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