(57)【要約】式(I):2012515787.tif 000181（式中、Qは、式:2012515787.tif 000182であり;R1は、アルキルまたはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および/またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;そして、R2、R3、R4、およびnは本明細書に記載のとおりである）の化合物または医薬的に許容されるその塩について記載する。また、そのような化合物をGタンパク質結合受容体S1P1に対する選択的アゴニストとして用いる方法、およびそのような化合物を含有する医薬組成物についても記載する。これらの化合物は、様々な治療領域の疾患もしくは障害（例えば自己免疫疾患および血管疾患）の処置、予防、もしくは進行の遅延において有用である。
2012515787.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I):
【化１】
2012515787.tif 000177
［式中:
Qは、式:
【化２】
2012515787.tif 000178
であり;
nは、0か、または1〜4から選択される整数であり;
R1は、アルキルまたはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R2は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され; 
R3は、水素、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5は、水素、アルキル、またはベンジルであり;そして、
RaおよびRbは、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、および／またはベンジルから選択される］
の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項２】
Qが式:
【化３】
2012515787.tif 000179
である、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項３】
Qが式:
【化４】
2012515787.tif 000180
である、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項４】
R1が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいアリールである、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項５】
R1が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいフェニルであり;
R3が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、C3〜C6シクロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、あるいはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいフェニルであり;
R5が、水素またはC1〜C6アルキルであり;そして、
RaおよびRbが、独立して、水素、C1〜C6アルキル、および／またはC1〜C4ハロアルキルから選択される、
請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項６】
nが、0または1であり;
R1が、フェニルであり;
R2が、ハロゲンであり;
R3が、C1〜C4アルキル、シクロプロピル、フェニル、-CF3、-CF2H、-(CH2)2CF3、-CF2CH3、-CF2CH2CH3、-C(O)NHRa、または-C(O)OR5であり;
R5が、水素またはメチルであり;そして、
Raが、メチルまたは2,2,2-トリフルオロエチルである、
請求項５に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項７】
R1がC1〜C6アルキルである、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項８】
nが、0であり; 
R1が、C1〜C6アルキルであり;そして、
R3が、C1〜C6アルキルである、
請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項９】
nが、0または1であり;
R1が、プロピル、ブチル、またはフェニルであり;
R2が、F、Cl、Br、-CH3、または-CF3であり;そして、
R3が、C2-C4アルキル、-C1-C3フルオロアルキル、シクロプロピル、-C(O)OH、-C(O)OCH3、-C(O)NHCH3、-C(O)NH(CH2CF3)、またはフェニルである、
請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項１０】
1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩;
1-(4-(5-(4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(3-フェニル-4-(2,2,2-トリフルオロエチルカルバモイル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
5-(3-(4-((3-カルボキシアゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸;
1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(2-メチル-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(3-クロロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;および、
1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩、
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩、および医薬的に許容される担体を含有する組成物。
【請求項１２】
自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の処置のための医薬の製造における、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩の使用。
【請求項１３】
自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の処置における療法での使用のための、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、S1P1アゴニストとして有用な置換イソオキサゾール化合物に関する。本願は、置換イソオキサゾール化合物、そのような化合物を含有する組成物、およびそれらの使用方法を提供する。本発明はさらに、S1P1アゴニズムに関連する症状（例えば自己免疫疾患および血管疾患）の処置に有用である、少なくとも１つの本発明の化合物を含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
スフィンゴシン-1-リン酸(S1P)は、血小板凝集、細胞増殖、細胞形態（cell morphology）、腫瘍細胞浸潤、内皮細胞および白血球走化性、内皮細胞 in vitro 血管新生、およびリンパ球トラフィッキングをもたらすものを含む、多くの細胞性効果を誘導することが示されている。従って、S1P受容体は、様々な治療的適用（例えば腫瘍増殖阻害、血管疾患、および自己免疫疾患）に対する良好な標的である。S1Pは、部分的に、S1P1もしくはS1P1、S1P2もしくはS1P2、S1P3もしくはS1P3、S1P4もしくはS1P4、およびS1P5もしくはS1P5(当初は各々、EDG-1、EDG-5、EDG-3、EDG-6、およびEDG-8と称された)と命名された一連のGタンパク質結合受容体を介して、細胞にシグナルを送る。
【０００３】
S1Pは、血管系および免疫系の主要な制御因子でもあるため、人体全体において重要である。血管系において、S1Pは、血管新生、血管安定性および血管透過性を制御する。免疫系において、S1Pは、T-およびB-細胞のトラフィッキングの主要な制御因子として認識されている。S1Pとその受容体S1P1との相互作用は、リンパ器官(例えば胸腺およびリンパ節)からリンパ管への免疫細胞の放出に必要である。従って、S1P受容体の調節が免疫調節に重要であることが示されており、S1P受容体調節因子は新規の免疫抑制剤である。
【０００４】
S1P1受容体は多くの組織で発現している。それはリンパ球で発現している主なファミリーメンバーであり、リンパ球トラフィッキングにおいて重要な役割を果たす。S1P1受容体の下方制御により、様々な組織へのリンパ球の遊走およびホーミングが乱される。このことによってリンパ器官におけるリンパ球の隔離（sequestration）がもたらされ、それにより患部組織へ遊走できる循環リンパ球の数が減少される。従って、自己免疫性および異常な炎症プロセスに関連する標的部位へのリンパ球の遊走を抑制するS1P1受容体薬（receptor agent）の開発が、多くの自己免疫性および炎症性の疾患状態に有効であり得る。
５つのS1P受容体のうち、S1P1は、広く分布しており、内皮細胞上に非常に豊富であり、そこでS1P3と協調して働いて、細胞の遊走、分化、およびバリア機能を制御する。非選択的S1P受容体調節によるリンパ球再循環の阻害によって、移植片拒絶を防止する臨床的な免疫抑制がもたらされるが、そのような調節により一過性徐脈も引き起こされる。研究により、S1P1活性が循環リンパ球の喪失と有意に相関していることが示されている。その対照的に、S1P3受容体アゴニズムは有効性に必要とされない。代わりに、S1P3活性は、非選択的S1P受容体アゴニストの観察される急性毒性（望ましくない心血管系への影響（例えば徐脈および高血圧）をもたらす）において重要な役割を果たす。(例えば、非特許文献１;非特許文献２;非特許文献３;非特許文献４を参照。)
【０００５】
S1P1アゴニストの例がFTY720である。この免疫抑制性化合物FTY720(JPI 1080026-A)は、動物およびヒトにおいて循環リンパ球を減少させ、臓器拒絶反応および免疫不全の動物モデルにおいて疾患調節活性を有することが示されている。ヒトにおけるFTY720の使用は、ヒト腎臓移植における臓器拒絶反応の比率を低下させ、再発寛解型多発性硬化症における寛解率を増大させるのに有効である(非特許文献５;非特許文献６;非特許文献７;非特許文献８;非特許文献９;非特許文献１０;非特許文献１１;非特許文献１２;および非特許文献１３を参照)。その発見後、FTY720はプロドラッグであり、それはin vivoでスフィンゴシンキナーゼによりリン酸化されて、S1P1、S1P3、S1P4、およびS1P5受容体でのアゴニスト活性を有する、さらに生物学的に活性な物質になることが確立されている。動物およびヒトにおけるFTY720の薬理効果に大きく関与するのは、S1P受容体ファミリー上でのこの作用である。
【０００６】
臨床研究によって、FTY720を用いた治療は、治療の最初の24時間において徐脈を引き起こすことが示されている(非特許文献１３)。観察される徐脈は、S1P3受容体でのアゴニズムに起因すると一般的に考えられている。この結論は、多くの細胞ベースの実験および動物実験に基づいている。これらには、野生型マウスと違ってFTY720投与後に徐脈を示さないS1P3ノックアウト動物の使用、およびS1P1選択的化合物の使用が挙げられる(非特許文献１;非特許文献２;および非特許文献１４)。
以下の出願には、S1P1アゴニストとしての化合物が記載されている:特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、特許文献１３、および特許文献１４。また、非特許文献１５も参照。
【０００７】
S1P1アゴニストとして有用であり、それにもかかわらずS1P3を上回る選択性を有する化合物が依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】WO 03/061567(米国特許出願第2005/0070506号)
【特許文献２】WO 03/062248(米国特許第7,351,725号)
【特許文献３】WO 03/062252(米国特許出願第2005/0033055号)
【特許文献４】WO 03/073986(米国特許第7,309,721号)
【特許文献５】WO 03/105771
【特許文献６】WO 05/058848
【特許文献７】WO 06/047195
【特許文献８】WO 06/100633
【特許文献９】WO 06/115188
【特許文献１０】WO 06/131336
【特許文献１１】WO 2007/024922
【特許文献１２】WO 07/116866
【特許文献１３】WO 08/023783(米国特許出願第2008/0200535号)
【特許文献１４】WO 08/074820
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Hale et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 14:3501 (2004)
【非特許文献２】Sanna et al., J. Biol. Chem., 279:13839 (2004)
【非特許文献３】Anliker et al., J. Biol. Chem., 279:20555 (2004)
【非特許文献４】Mandala et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 309:758 (2004)
【非特許文献５】Brinkman et al., J. Biol. Chem., 277:21453 (2002)
【非特許文献６】Mandala et al., Science, 296:346 (2002)
【非特許文献７】Fujino et al., J. Pharmacol. and Exp. Ther., 305:45658 (2003)
【非特許文献８】Brinkman et al., Am. J. Transplant., 4:1019 (2004)
【非特許文献９】Webb et al., J. Neuroimmunol., 153:108 (2004)
【非特許文献１０】Morris et al., Eur. J. Immunol., 35:3570 (2005)
【非特許文献１１】Chiba, Pharmacology & Therapeutics, 108:308 (2005)
【非特許文献１２】Kahan et al., Transplantation, 76:1079 (2003)
【非特許文献１３】Kappos et al., N. Engl. J. Med., 335:1124 (2006)
【非特許文献１４】Koyrakh et al., Am. J. Transplant., 5:529 (2005)
【非特許文献１５】Hale et al., J. Med. Chem., 47:6662 (2004)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本出願人らは、S1P1アゴニストとしての活性を有する有効な化合物を見出した。さらに、本出願人らは、S1P1アゴニストとして活性を有し、S1P3以上に選択的である化合物を見出した。これらの化合物は、それらの薬剤能に重要である望ましい安定性、生物学的利用能、治療指数、および毒性値を有する医薬品として有用であると、提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の概要）
本発明は、式(I):
【化１】
2012515787.tif 000003
［式中、
Qは、式:
【化２】
2012515787.tif 000004
であり;
nは、0か、または1〜4から選択される整数であり;
R1は、アルキルまたはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R2は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され;
R3は、水素、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5は、水素、アルキル、またはベンジルであり;そして、
RaおよびRbは、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、および／またはベンジルから選択される］
の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供することにより、前述のニーズを満たす。
【００１２】
また、式(I)の化合物、もしくは医薬的に許容されるその塩;および医薬的に許容される担体を含有する医薬組成物も記載する。
【００１３】
さらに、Gタンパク質結合受容体S1P1の活性に関連する疾患もしくは障害の処置方法であって、哺乳動物患者に式(I)の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩を投与することを含む方法も記載する。
【００１４】
式(I)の化合物、および該化合物を含有する組成物はS1P1アゴニストであり、それはS1P3活性以上にS1P1活性に対して選択的である。式(I)の化合物、および該化合物を含有する組成物は、S1P3活性による副作用を減少もしくは最小化するとともに、様々なS1P1受容体関連症状の処置、予防、もしくは治療において用いられうる。これらの化合物を含有する医薬組成物は、様々な治療領域の疾患もしくは障害（例えば自己免疫疾患および血管疾患）の処置、予防、もしくは進行の遅延において有用である。
【００１５】
（詳細な説明）
一実施態様は、式(I):
【化３】
2012515787.tif 000005
［式中、
Qは、式:
【化４】
2012515787.tif 000006
であり;
nは、0か、または1〜4から選択される整数であり;
R1は、アルキルまたはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R2は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され;
R3は、水素、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5は、水素、アルキル、またはベンジルであり;そして、
RaおよびRbは、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、および／またはベンジルから選択される］
の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
【００１６】
一実施態様は、
Qが、式:
【化５】
2012515787.tif 000007
であり;
nが、0または1であり;
R1が、プロピル、ブチル、またはフェニルであり;
R2が、F、Cl、Br、-CH3、または-CF3であり;そして、
R3が、C2-C4アルキル、-C1-C3フルオロアルキル、シクロプロピル、-C(O)OH、-C(O)OCH3、-C(O)NHCH3、-C(O)NH(CH2CF3)、またはフェニルである、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
【００１７】
一実施態様は、Qが式:
【化６】
2012515787.tif 000008
である、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
この実施態様の化合物は、式(Ia):
【化７】
2012515787.tif 000009
（式中、R1、R2、R3、およびnは上述の通りである）
により表される構造を有するか、または医薬的に許容されるその塩である。
【００１８】
一実施態様は、Qが式:
【化８】
2012515787.tif 000010
である、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
この実施態様の化合物は、式(Ib):
【化９】
2012515787.tif 000011
（式中、R1、R2、R3、およびnは上述の通りである）
により表される構造を有するか、または医薬的に許容されるその塩である。
【００１９】
一実施態様は、R3がアルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよい、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
好ましくは、R3はC1〜C6アルキル、C3〜C6シクロアルキル、C1〜C4ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよい。
【００２０】
一実施態様は、
R1が、C1〜C6アルキルまたはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
R3が、C1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C6ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4が、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5が、水素、C1〜C6アルキル、またはベンジルであり;
RaおよびRbが、独立して、水素、C1〜C6アルキル、C1〜C6ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;そして、
R2、Q、およびnが、上述の通りである、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
この実施態様の化合物には、式(Ia)の化合物が含まれる。この実施態様の他の化合物には、式(Ib)の化合物が含まれる。
【００２１】
一実施態様は、
R1が、C1〜C6アルキルまたはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
R3が、C1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C6ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4が、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5が、水素、C1〜C6アルキル、またはベンジルであり;
RaおよびRbが、独立して、水素、C1〜C6アルキル、C1〜C6ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;そして、
R2、Q、およびnが、上述の通りである、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する
この実施態様の化合物には、式(Ia)の化合物が含まれる。この実施態様の他の化合物には、式(Ib)の化合物が含まれる。
【００２２】
一実施態様は、
R1が、C1〜C4アルキルまたはフェニルであり、該フェニルはC1〜C4アルキル、C1〜C2ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から２個の置換基で適宜置換されていてよく;
R3が、C1〜C4アルキル、C3〜C6シクロアルキル、C1〜C3ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NHRb、またはフェニルであり、該フェニルはC1〜C4アルキル、C1〜C2ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から２個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4が、独立して、C1〜C4アルキル、C1〜C3ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;R5が、水素、C1〜C4アルキル、またはベンジルであり;
Rbが、水素、C1〜C4アルキル、C1〜C3ハロアルキル、またはベンジルから選択され;
nが、0または1であり;そして、
R2およびQが、上述の通りである、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
この実施態様の化合物には、式(Ia)の化合物が含まれる。この実施態様の他の化合物には、式(Ib)の化合物が含まれる。
【００２３】
一実施態様は、
Qが、式:
【化１０】
2012515787.tif 000012
であり;
R3が、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4が、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5が、水素、アルキル、またはベンジルであり;そして、
RaおよびRbが、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、および／またはベンジルから選択される、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
好ましくは、R3はC1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C4ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C4アルキル、C1〜C2ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から３個の置換基で適宜置換されていてよい。さらに好ましくは、R3はC1〜C4アルキル、C3〜C6シクロアルキル、C1〜C2ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NHRb、またはフェニルであり、該フェニルはC1〜C4アルキル、C1〜C2ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から２個の置換基で適宜置換されていてよい。
【００２４】
一実施態様は、
Qが、式:
【化１１】
2012515787.tif 000013
であり;
R3が、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4が、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5が、水素、アルキル、またはベンジルであり;そして、
RaおよびRbが、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、および／またはベンジルから選択される、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
好ましくは、R3はC1〜C6アルキル、C3〜C8シクロアルキル、C1〜C4ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C4アルキル、C1〜C2ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から３個の置換基で適宜置換されていてよい。さらに好ましくは、R3はC1〜C4アルキル、C3〜C6シクロアルキル、C1〜C2ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NHRb、またはフェニルであり、該フェニルはC1〜C4アルキル、C1〜C2ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から２個の置換基で適宜置換されていてよい。
【００２５】
一実施態様は、
Qが、式:
【化１２】
2012515787.tif 000014
であり;
R1が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいフェニルであり;
R3が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、C3〜C6シクロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、あるいはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいフェニルであり;
各R4が、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5が、水素またはC1〜C6アルキルであり;そして、
RaおよびRbが、独立して、水素、C1〜C6アルキル、および／またはC1〜C4ハロアルキルから選択される、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
好ましくは、R1は、C1〜C4アルキル、C1〜C3ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から２個の置換基で適宜置換されていてよいフェニルであり;R3は、C1〜C4アルキル、C1〜C3ハロアルキル、C3〜C6シクロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NHRb、あるいはC1〜C4アルキル、C1〜C3ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から２個の置換基で適宜置換されていてよいフェニルであり;各R4は、独立して、C1〜C4アルキル、C1〜C3ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;R5は、水素またはC1〜C4アルキルであり;そして、Rbは、水素、C1〜C6アルキル、またはC1〜C4ハロアルキルから選択される。
【００２６】
一実施態様は、R1が、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいアリールである、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。好ましくは、R1は、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよいフェニルである。好ましくは、nは0、1、または2であり;そして、さらに好ましくは、nは、0または1である。
【００２７】
一実施態様は、nが0または1である、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
【００２８】
一実施態様は、nが0である、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
【００２９】
一実施態様は、
Qが、式:
【化１３】
2012515787.tif 000015
であり;
nが、0または1であり; 
R1が、フェニルであり;R2が、ハロゲンであり;R3が、C1〜C4アルキル、シクロプロピル、フェニル、-CF3、-CF2H、-(CH2)2CF3、-CF2CH3、-CF2CH2CH3、-C(O)NHRa、または-C(O)OR5であり;
R5が、水素またはメチルであり;そして、
Raが、メチルまたは2,2,2-トリフルオロエチルである、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
【００３０】
一実施態様は、
Qが、式:
【化１４】
2012515787.tif 000016
であり;
nが、0であり;
R1が、フェニルであり;そして、
R3が、-CF3である、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
この実施態様の化合物はトリフルオロ酢酸塩として提供されうる。
【００３１】
一実施態様は、構造:
【化１５】
2012515787.tif 000017
を有する、1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸または医薬的に許容されるその塩を提供する。
この実施態様の化合物はトリフルオロ酢酸塩として提供されうる。
【００３２】
一実施態様は、構造:
【化１６】
2012515787.tif 000018
を有する、1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸または医薬的に許容されるその塩を提供する。
この実施態様の化合物はトリフルオロ酢酸塩として提供されうる。
【００３３】
一実施態様は、R1がアルキルである、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。好ましくは、R1はC1〜C6アルキルである。さらに好ましくは、R1はC1〜C4アルキルである。
【００３４】
一実施態様は、
Qが、式:
【化１７】
2012515787.tif 000019
であり;
nが、0であり;
R1が、C1〜C6アルキルであり;そして、
R3が、C1〜C6アルキルである、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
【００３５】
一実施態様は、
1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩;
1-(4-(5-(4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(3-フェニル-4-(2,2,2-トリフルオロエチルカルバモイル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
5-(3-(4-((3-カルボキシアゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸;
1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(2-メチル-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(3-クロロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;
1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸;および、
1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
からなる群から選択される、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する
【００３６】
一実施態様は、
Qが、式:
【化１８】
2012515787.tif 000020
であり;
nが、0か、または1〜4から選択される整数であり;
R1が、アルキルまたはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R2が、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され;
R3が、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4が、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5が、水素、アルキル、またはベンジルであり;そして、
RaおよびRbが、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、および／またはベンジルから選択される、
式(I)による化合物の2,2,2-トリフルオロ酢酸塩を提供する。
【００３７】
一実施態様は、
Qが、式:
【化１９】
2012515787.tif 000021
であり;
nが、0か、または1〜4から選択される整数であり;
R1が、アルキルまたはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R2が、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され; 
R3が、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4が、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5が、水素、アルキル、またはベンジルであり;そして、
RaおよびRbが、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、および／またはベンジルから選択される、
式(I)による化合物もしくは医薬的に許容されるその塩;および医薬的に許容される担体を含有する組成物を提供する。
【００３８】
一実施態様は、1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸もしくは医薬的に許容されるその塩;および医薬的に許容される担体を含有する組成物を提供する。この実施態様の化合物は、トリフルオロ酢酸塩として提供されうる。
【００３９】
一実施態様は、1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸もしくは医薬的に許容されるその塩;および医薬的に許容される担体を含有する組成物を提供する。この実施態様の化合物は、トリフルオロ酢酸塩として提供されうる。
【００４０】
一実施態様は、哺乳動物患者に式(I)の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩を投与することを含む、Gタンパク質結合受容体S1P1の活性に関連する疾患もしくは障害の処置方法を提供し、
式中、
Qは、式:
【化２０】
2012515787.tif 000022
であり;
nは、0か、または1〜4から選択される整数であり;
R1は、アルキルまたはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R2は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから選択され;
R3は、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、-C(O)OR5、-C(O)NRaRb、またはアリールであり、該アリールはC1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、-OR4、および／またはハロゲンから独立して選択される１から５個の置換基で適宜置換されていてよく;
各R4は、独立して、C1〜C6アルキル、C1〜C4ハロアルキル、および／またはベンジルから選択され;
R5は、水素、アルキル、またはベンジルであり;そして、
RaおよびRbは、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、および／またはベンジルから選択される。
【００４１】
一実施態様は、哺乳動物患者に式(I)の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩を投与することを含む、Gタンパク質結合受容体S1P1の活性に関連する疾患もしくは障害の処置方法を提供し、
式中、
Qは、式:
【化２１】
2012515787.tif 000023
であり;
nは、0であり;
R1は、フェニルであり;そして、
R3は-CF3である。
この実施態様の化合物は、トリフルオロ酢酸塩として提供されうる。
【００４２】
一実施態様は、哺乳動物患者に1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸もしくは医薬的に許容されるその塩を投与することを含む、Gタンパク質結合受容体S1P1の活性に関連する疾患もしくは障害の処置方法を提供する。
【００４３】
一実施態様は、哺乳動物患者に1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸もしくは医薬的に許容されるその塩を投与することを含む、Gタンパク質結合受容体S1P1の活性に関連する疾患もしくは障害の処置方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
（定義）
本発明の特徴および利点は、以下の詳細な説明を読むことで、当業者によってさらに容易に理解されうる。当然のことながら、上部および下部の別個の実施態様中に明確な根拠として記載された本発明のある特定の特徴を組み合わせて、単独の実施態様を形成してもよい。反対に、単独の実施態様中に簡潔な根拠として記載された本発明の様々な特徴を組み合わせて、それらのサブコンビネーションを形成してもよい。本明細書において、例として特定された実施態様かまたは好ましい実施態様は、例示目的であって限定するものではないことが意図される。
【００４５】
本明細書において他に特に記載のない限り、単数形の言及には複数の言及もまた含まれうる。例えば、「a」および「an」は、１かまたは１以上のいずれかを示しうる。
【００４６】
他に指示のない限り、原子価が満たされていないいずれかのヘテロ原子は、その原子価を満たすのに十分な水素原子を有すると考える。
【００４７】
本明細書に記載の定義は、引用により本明細書に援用されるいずれの特許、特許出願、および/または特許出願公開に記載された定義よりも優先される。
【００４８】
本発明を説明するために用いられる様々な用語の定義を以下に記載する。これらの定義は、本明細書の全体を通して(それらが他に特定の場合に限定されない限り)、個別にか、またはより大きな基の一部としてのいずれかで用いられる用語に適用される。
【００４９】
本明細書の全体を通して、基およびそれらの置換基は、安定な部分および化合物をもたらすように、当業者により選択されうる。
【００５０】
当分野で用いられる慣習に従って、
【化２２】
2012515787.tif 000024
は本明細書において、コアもしくは骨格構造への部分もしくは置換基の結合点である結合を表すために、構造式中で用いられる。
【００５１】
本明細書で用いる用語「ハロ」および「ハロゲン」は、F、Cl、Br、またはIを言う。
【００５２】
本明細書で用いる用語「アルキル」は、例えば、1〜12個の炭素原子、1〜6個の炭素原子、または1〜4個の炭素原子を含む、分枝鎖および直鎖両方の飽和脂肪族炭化水素基を言う。アルキル基の例としては、限定はされないが、メチル(Me)、エチル(Et)、プロピル(例えば、n-プロピルおよびi-プロピル)、ブチル(例えば、n-ブチル、i-ブチル、sec-ブチル、およびt-ブチル)、およびペンチル(例えば、n-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル)、n-ヘキシル、2-メチルペンチル、2-エチルブチル、3-メチルペンチル、ならびに4-メチルペンチルが挙げられる。シンボル「C」の後に下付き文字で数字が記載されている場合、該下付き文字は特定の基が有しうる炭素原子の数をより具体的に定義する。例えば、「C1-C6アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖アルキル基を意味する。
【００５３】
本明細書で用いる用語「ハロアルキル」は、１個以上（１から、最大で親アルキル基中に存在し得る水素原子の総数までの範囲であり得る）の水素原子がハロゲン原子により置換されている、アルキル基を言う。ハロアルキル基の代表的な例としては、限定はされないが、クロロメチル(-CH2Cl)、トリフルオロメチル(-CF3-、および2,2,2-トリフルオロエチル(-CH2CF3)が挙げられる。シンボル「C」の後に下付き文字で数字が記載されている場合、該下付き文字は特定のハロアルキル基が有しうる炭素原子の数をより具体的に定義する。例えば、「C1-C4ハロアルキル」は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖ハロアルキル基を意味する。
【００５４】
本明細書で用いる用語「シクロアルキル」は、飽和環炭素原子から１個の水素原子を除去することによって、非芳香族の単環式もしくは多環式の炭化水素分子から得られる基を言う。シクロアルキル基の代表的な例としては、限定はされないが、シクロプロピル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。シンボル「C」の後に下付き文字で数字が記載されている場合、該下付き文字は特定のシクロアルキル基が有しうる炭素原子の数をより具体的に定義する。例えば、「C3-C6シクロアルキル」は、３〜６個の炭素原子を有するシクロアルキル基を意味する。
【００５５】
本明細書で用いる用語「アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子部分に結合したアルキル基、例えば、メトキシ基(-OCH3)を言う。
【００５６】
本明細書で用いる用語「アリール」は、芳香環に結合している１個の水素を除去することによって該芳香環を含有する分子から得られる原子団を言う。アリール基の代表的な例としては、限定はされないが、フェニル、ナフチル、インダニル、インデニル、および1,2,3,4-テトラヒドロナフタ-5-イルが挙げられる。
【００５７】
本明細書で用いる用語「ベンジル」は、水素原子のうちの１個がフェニル基によって置換されているメチル基を言う。
【００５８】
該フレーズ「医薬的に許容される」は本明細書において、適切な医学的判断の範囲内で、妥当な利益/リスク比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずにヒトおよび動物の組織と接触して用いるのに適した、化合物、物質、組成物、および/または剤形を意味するように用いられる。
【００５９】
本明細書で用いる「医薬的に許容される塩」は、親化合物がその酸性塩もしくは塩基性塩を製造することにより修飾される、開示化合物の誘導体を意味する。医薬的に許容される塩の例としては、限定はされないが、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩もしくは有機酸塩;および、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩もしくは有機塩が挙げられる。医薬的に許容される塩には、例えば無毒の無機酸もしくは有機酸から形成された親化合物の通常の無毒の塩または四級アンモニウム塩が含まれる。本発明の医薬的に許容される塩は、通常の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、水中もしくは有機溶媒中またはその２つの混合液中において、遊離酸もしくは塩基の形態のこれらの化合物を、化学量論量の適当な塩基または酸と反応させることによって製造することができ;一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。適切な塩のリストは、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, p. 1418 (1985)に記載されており、該開示は引用により本明細書に援用される。
【００６０】
式(I)の化合物の塩は、例えば、媒質中で、式(I)の化合物と、例えば同等量の酸もしくは塩基とを反応させることによって形成することができ、新しく形成された塩を、例えば析出させるか、または凍結乾燥によって単離することができる。無機および/または有機酸を用いて式(I)の化合物が形成できる酸性塩の例としては、限定はされないが、例えば、酢酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酒石酸水素塩、酸性クエン酸塩（acid citrate）、クエン酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、ゲンチジン酸塩（gentisinate）、グルコン酸塩、グルカロン酸塩（glucaronate）、グルタミン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、イソニコチン酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩（acid phosphate）、サッカラート、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、およびパモ酸塩[すなわち、1,1'-メチレン-ビス-(2-ヒドロキシ-3-ナフトエート)]が挙げられる。そのような塩は、当業者に公知の方法に従って製造することができる。
【００６１】
無機および/または有機塩基を用いて式(I)の化合物が形成できる塩基性塩の例としては、限定はされないが、例えば、アンモニウム塩;例えばナトリウム、リチウムおよびカリウム塩のような、アルカリ金属塩:例えばカルシウムおよびマグネシウム塩のような、アルカリ土類金属塩;例えばベンザチン、ジシクロヘキシルアミン、2-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール(トリスアミンもしくはトリス)、ヒドラバミン(例えば、N,N-ビス(デヒドロアビエチル)エチレンジアミンなど)、N-メチル-D-グルカミン、N-メチル-D-グリカミド、およびt-ブチルアミンのような、有機塩基を用いて形成される塩;例えばアルギニンおよびリジンのような、アミノ酸を用いて形成される塩;ならびに、例えば低級アルキルハライド(例えば、メチル、エチル、プロピルおよびブチルの、塩化物、臭化物およびヨウ化物)、硫酸ジアルキル(例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、および硫酸ジアミル)、長鎖ハライド(例えば、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルの、塩化物、臭化物およびヨウ化物)、およびアラルキルハライド(例えば、臭化ベンジルおよび臭化フェネチル)のような、塩基性窒素-含有基を四級化する物質（agent）を用いることにより形成される塩が挙げられる。そのような塩は、当業者に公知の方法に従って製造することができる。
【００６２】
加えて、式(I)の化合物は、製造後に単離および精製して、重量で99％以上の式(I)の化合物(「実質的に純粋」)を含む組成物を得て、次いでそれを本明細書に記載のとおり用いるかまたは製剤化するのが好ましい。そのような「実質的に純粋」な式(I)の化合物もまた、本発明の一部として本明細書において意図される。
【００６３】
in vivoで変換されて生理活性剤(すなわち、式(I)の化合物)を供することができるいずれの化合物も、本発明の範囲および精神内におけるプロドラッグである。
【００６４】
本明細書で用いる用語「プロドラッグ」には、当業者に公知の方法を用いて、式(I)の化合物の１つ以上のヒドロキシルを、アルキル、アルコキシもしくはアリール置換アシル化剤と反応させて、アセテート、ピバレート、メチルカーボネート、ベンゾエートなどを生成させることによって形成される、エステルおよびカーボネートが含まれる。
【００６５】
様々な形態のプロドラッグが当分野において周知であり、以下:
a)Wermuth, C.G. et al., The Practice of Medicinal Chemistry, Chapter 31, Academic Press (1996);
b)Design of Prodrugs, Bundgaard, H. ed., Elsevier (1985); 
c)Bundgaard, H., Chapter 5, “Design and Application of Prodrugs,” A Textbook of Drug Design and Development, pp. 113-191, Krosgaard-Larsen, P. et al., eds., Harwood Academic Publishers (1991); および、
d)Testa, B. et al., Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH (2003) に記載されている。
【００６６】
加えて、式(I)の化合物は、製造後に単離および精製して、重量で99％以上の式(I)の化合物(「実質的に純粋」な化合物I)を含む組成物を得て、次いでそれを本明細書に記載のとおり用いるかまたは製剤化するのが好ましい。そのような「実質的に純粋」な式(I)の化合物もまた、本発明の一部として本明細書において意図される。
【００６７】
「安定な化合物」および「安定な構造」とは、反応混合物から有用な純度への単離、および有効な治療薬への製剤化に耐えるのに十分強い化合物を示すことを意図する。本発明は安定な化合物を具体化するものと意図される。
【００６８】
「治療上有効な量」は、S1P1に対するアゴニストとして作用するのに有効であるか、または血管疾患もしくは自己免疫疾患の処置もしくは予防に有効である、本発明の化合物単独の量か、特許請求された化合物の組み合わせの量か、または他の活性成分と組み合わされた本発明の化合物の量を包含することを意図する。
【００６９】
本明細書で用いる「処置すること」または「処置」には、哺乳動物、とりわけヒトにおける疾患状態の処置が含まれ、ならびに:(a)とりわけ、哺乳動物が疾患状態に罹りやすいが、まだ罹患していると診断されていない場合において、哺乳動物での疾患状態が生じるのを予防すること;(b)疾患状態の抑制、すなわち、その進行を抑止すること;および/または(c)疾患状態を軽減すること、すなわち、疾患状態の退行をもたらすこと、が含まれる。
【００７０】
本発明の化合物は１個以上のさらなる不斉炭素原子を有し得ることから、２つ以上の立体異性体が存在する。本発明は、可能な個々の立体異性体、それらの個々の互変異性体、並びにそれらの混合物の全てを含む。ジアステレオ異性体の分離は、従来の技術、例えば、本発明の化合物またはその適当な塩もしくは誘導体の立体異性体混合物の分別結晶、クロマトグラフィーまたはHPLCにより達成されうる。該化合物の個々のエナンチオマーはまた、必要に応じて、対応する光学的に純粋な中間体からか、または分割（例えば、適当なキラル担体を用いた対応するラセミ体のHPLC、または対応するラセミ体と適当な光学活性な酸または塩基との反応によって形成されたジアステレオ異性体塩の分別結晶）によって、製造されてもよい。本発明の化合物の全ての立体異性体は、混合形態か、または純粋もしくは実質的に純粋な形態のいずれかであることが意図される。
【００７１】
本発明の化合物は、本発明の化合物に出現する原子の全ての同位体を含むことを意図する。同位体には、原子番号が同一であるが質量数が異なる原子が含まれる。一般的な例として、限定されることなく、水素の同位体にはジュウテリウムおよびトリチウムが含まれる。炭素の同位体としては13Cおよび14Cが挙げられる。同位体で標識された本発明の化合物は一般に、当業者に公知の通常の技法によってか、または本明細書に記載されたものと類似した方法によって、他で用いられる非標識試薬の代わりに適切な同位体-標識試薬を用いて、製造することができる。
【００７２】
１つ以上の無毒の、医薬的に許容される担体および/または希釈剤および/またはアジュバント(本明細書中では「担体」物質と総称する)、および、必要であれば、他の有効成分と合わせて式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を含む医薬組成物のクラスもまた、本発明の範囲内に包含される。式(I)の化合物は、いずれかの適当な投与経路で、好ましくはそのような投与経路に適応した医薬組成物の形態で、および目的とする治療に有効な用量で投与されうる。本発明の化合物および組成物は、例えば、通常の医薬的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルを含む用量単位剤形の状態で、経口、粘膜、または非経口（parentally）（血管内、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、胸骨内および注入技法を含む）で投与してもよい。例えば、該医薬担体はマンニトールまたはラクトースおよび微結晶セルロースの混合物を含み得る。該混合物は、例えば滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウムなど）および崩壊剤（例えばクロスポビドンなど）などのさらなる成分を含み得る。該担体混合物はゼラチンカプセルに充填するか、または錠剤として圧縮してもよい。
【００７３】
本発明の医薬的に活性な化合物を薬学の従来の方法に従って加工処理して、ヒトおよび他の哺乳類を含む患者への投与用薬剤を製造することができる。
【００７４】
経口投与において、該医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル、懸濁剤または液剤の形態であってよい。該医薬組成物は、好ましくは特定の量の有効成分を含有する用量単位の形態で製造される。そのような用量単位の例は、錠剤またはカプセルである。例えば、これらは、約1から2000 mg、好ましくは約1から500 mg、より好ましくは約5から150 mgの量の活性成分を含みうる。ヒトまたは他の哺乳類に適した１日量は、患者の症状および他の因子に依存して幅広く変えてもよいが、再度、ルーチンな方法を用いて決定することができる。
【００７５】
投与する化合物の量、および本発明の化合物および/または組成物を用いた病状の治療のための投与レジメンは、対象の年齢、体重、性別および病状、疾患の種類、疾患の重篤性、投与経路および投与回数、および用いる特定の化合物などの様々な因子に依存する。従って、該投与レジメンは大きく変化させてもよいが、標準的な方法を用いて既定通りに決定することができる。１日量は、約0.01から1500 mg/kg体重、好ましくは約0.5から約50 mg/kg体重、最も好ましくは約0.1から20 mg/kg体重が適切であり得る。該１日量を、１日当たり１から４回で投与することができる。
【００７６】
治療目的で、本発明の活性化合物は、通常、指定された投与経路に適する１つ以上のアジュバントと組み合わされる。経口投与の場合、該化合物を、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、ゼラチン、アカシアガム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および/またはポリビニルアルコールと混合した後、投与しやすいように錠剤化するかまたはカプセルに包んでもよい。そのようなカプセルまたは錠剤には、ヒドロキシプロピルメチルセルロース中に活性化合物が分散した状態で提供することができるような、徐放剤形が含まれうる。
【００７７】
式(I)の化合物を含有するエマルジョンの油相は、既知の方法で既知の成分から構成されうる。該相は単に乳化剤のみを含んでよい一方、少なくとも1つの乳化剤と、脂肪もしくは油、または脂肪および油の両方との混合物を含んでもよい。好ましくは、親水性乳化剤は安定剤として作用する親油性乳化剤と共に含まれる。また、油および脂肪の両方が含まれることも望ましい。一緒になって、安定剤の有無にかかわらず乳化剤はいわゆる乳化ワックスを組成し、該ワックスは油および脂肪と一緒になって、クリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化軟膏基剤を組成する。本発明の製剤における使用に適した乳化剤およびエマルジョン安定剤には、Tween 60、Span 80、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ラウリル硫酸ナトリウム、ジステアリン酸グリセリルが、単独か、またはワックスもしくは当分野で周知の他の物質と共に含まれる。
【００７８】
医薬的なエマルジョン製剤に用いられることが多い大部分の油中における該活性化合物の溶解性は非常に低いので、該製剤に適した油または脂肪の選択は、所望する美容特性の達成に基づく。従って、該クリーム剤は望ましくは、チューブまたは他の容器からの漏出を回避する適当な稠度の非-油脂性、非-染色性および水洗性の生成物であるべきである。直鎖または分枝鎖のモノ-またはジ-塩基性アルキルエステル（例えば、ジイソアジピン酸エステル、ステアリン酸イソセチル、ヤシ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、ミスチリン酸イソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸2-エチルヘキシルなど）または分枝鎖エステルの混合物が用いられうる。これらは、単独または目的の特性に応じた組み合わせで用いられ得る。あるいは、高融点の脂質（例えば白色軟パラフィンおよび/または流動パラフィンなど）、または他の鉱油を用いることができる。
【００７９】
非経口投与用製剤は、水性または非-水性の等張無菌注射用液剤または懸濁剤の形態であってよい。これらの液剤および懸濁剤は、経口投与用製剤での使用について記載した１つ以上の担体または希釈剤を用いて、あるいは他の適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、無菌粉末または顆粒から製造されうる。該化合物は、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、コーンオイル、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム、トラガカントゴム、および/または様々なバッファー中に溶解させてよい。他のアジュバントおよび投与方法は、製薬の分野において十分にかつ広く知られている。該活性成分はまた、適切な担体（生理食塩水、ブドウ糖または水が含まれる）、またはシクロデキストリン(すなわちキャプティソル（登録商標）)、共溶媒可溶化剤(すなわちプロピレングリコール)もしくはミセル可溶化剤(すなわちTween80)を有する組成物として注入により投与してもよい。
【００８０】
該無菌の注射用製剤はまた、無毒の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌の注射用液剤または懸濁剤、例えば1,3-ブタンジオールの液剤、であってよい。許容されるビヒクルおよび溶媒のうちで用いてもよいものは、水、リンガー液、および生理食塩水である。加えて、無菌の固定油が、溶媒または懸濁化媒質として通常用いられる。この目的のため、いずれの刺激の少ない固定油（合成モノ-またはジグリセリドが含まれる）を用いてもよい。さらに、脂肪酸（例えばオレイン酸など）が注射剤の製造で用いられる。
【００８１】
該医薬組成物は、通常の製薬工程（例えば滅菌など）で処理してもよく、および/または通常のアジュバント（例えば保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、バッファー）を含んでもよい。錠剤および丸薬は、さらに腸溶コーティングで製造することができる。そのような組成物はまた、アジュバント（例えば湿潤剤、甘味剤、香料、および芳香剤）を含みうる。
【００８２】
本発明の医薬組成物は、式(I)の化合物、または医薬的に許容されるその塩、および適宜、いずれかの医薬的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルから選択されるさらなる物質（agent）を含んでよい。本発明の別の組成物は、本明細書に記載の式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩、および医薬的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを含む。
【００８３】
本発明の医薬組成物に用いてもよい医薬的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルには、限定はされないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、自己乳化型ドラッグデリバリーシステム(SEDDS)（例えばd-α-トコフェロールポリエチレングリコール 1000 コハク酸塩）、医薬剤形で用いる界面活性剤（例えばTweenまたは他の同様のポリマーデリバリーマトリックスなど）、血清タンパク質（例えばヒト血清アルブミン）、緩衝物質（例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム）、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩または電解質（例えばプロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレン-ブロック重合体、ポリエチレングリコール）および羊毛脂が含まれる。シクロデキストリン（例えば、α-、β-、およびγ-シクロデキストリン）または化学修飾誘導体（例えば、2-および3-ヒドロキシプロピル-シクロデキストリンを含むヒドロキシアルキルシクロデキストリン）、または他の可溶化誘導体もまた、本明細書に記載の式の化合物の送達を高めるために、有利に用いられうる。
【００８４】
（有用性）
ヒト免疫系は、感染症、疾患または死を引き起こし得る、微生物、ウイルス、および寄生生物から身体を防御するように発展してきた。複雑な制御メカニズムは、免疫系の様々な細胞成分が、個体に永久的もしくは著しいダメージをもたらすことなく、外来物質または器官を標的とすることを確実なものとする。現時点では起因事象はよく分かっていないが、自己免疫疾患状態において、該免疫系はその炎症反応を罹患個体の標的器官に向ける。種々の自己免疫疾患は、典型的には、影響を受ける主要なもしくは最初の標的器官もしくは組織により特徴づけられる;例えば、関節リウマチの場合は関節、橋本甲状腺炎の場合は甲状腺、多発性硬化症の場合は中枢神経系、１型糖尿病の場合は膵臓、そして、炎症性腸疾患の場合は腸。従って、免疫系においてまたは免疫系のある特定の細胞型(例えば、B-リンパ球、およびTリンパ球、T細胞)において作用する治療薬は１つ以上の自己免疫疾患において有用性を有しうることが認められている。
【００８５】
S1P受容体は自己免疫疾患を含む幅広い治療的適用のための良好な標的であることが、本明細書に引用された文献を含め、当分野において良く認識されている。S1P受容体は、個々の受容体が組織-特異的および反応-特異的の両方であるため、良好な薬物標的となる。１つの受容体に対して選択的なアゴニストもしくはアンタゴニストの開発によって、その受容体を含有し、望ましくない副作用を制限する組織に対する細胞応答が限局化されるので、S1P受容体の組織特異性は重要である。S1P受容体の反応特異性はまた、他のプロセスに影響を与えることなく、ある特定の細胞応答を惹起もしくは抑制するアゴニストもしくはアンタゴニストの開発を可能にするので、重要である。従って、あるいくつかのS1P受容体ファミリーメンバー上では作用するが、他のファミリーメンバーにおいては活性が低下しているかもしくは活性のない化合物が望ましく、改善された副作用プロファイル(すなわち、望ましくない副作用の縮小または排除)とともに、治療効果をもたらすことが予期される。
【００８６】
本明細書で用いる、S1P1に関する該用語「アゴニスト」は、薬理作用（例えば、T細胞の運動性の低下、T細胞のトラフィッキングの低下、またはリンパ組織からのT細胞の放出の低下）を発現する物質を言う。(Rosen et al., Trends in Immunology, 28:102(2007)).
【００８７】
アゴニストとしてのそれらのS1P1活性のおかげで、本発明の化合物は自己免疫疾患もしくは慢性炎症疾患の処置もしくは予防に有用な免疫調節剤である。本発明の化合物は、免疫抑制が整っている免疫系（例えば、骨髄）、器官もしくは移植片拒絶、自己免疫疾患および慢性炎症疾患（全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、１型糖尿病（diabete mellitus）、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ぶどう膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス眼症、および喘息を含む）を抑制するのに有用である。
【００８８】
より具体的には、本発明の化合物は:器官もしくは組織の移植、移植に関連してもたらされる移植片対宿主病、自己免疫症候群（関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、１型糖尿病、ぶどう膜炎、後部ぶどう膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎を含む）、感染後自己免疫疾患（リウマチ熱および感染後糸球体腎炎を含む）、炎症性および過剰増殖性皮膚疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症（cutaneous eosinophilia）、エリテマトーデス、ざ瘡、円形脱毛症、角結膜炎、春季カタル、ベーチェット病に関連するぶどう膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮ジストロフィー（dystrophia epithelialis corneae）、角膜白斑、眼類天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼症、フォークト・小柳・原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆性閉塞性気道疾患（reversible obstructive airway disease）、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、粉塵喘息、慢性もしくは難治性の喘息、遅発型喘息および気道過敏症、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患および血栓症により引き起こされる血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎、熱傷に関連する腸の病変、セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、片頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギラン・バレー症候群、メニエール病、多発性神経炎（polyneuritis）、反復性神経炎（multiple neuritis）、単発神経炎、神経根障害、甲状腺機能亢進症、バセドウ病、赤芽球癆、再生不良性貧血、低形成性貧血（hypoplastic anemia）、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、無顆粒球症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、赤血球形成不全、骨粗鬆症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑（leukoderma vulgaris）、尋常性魚鱗癬（ichthyosis vulgaris）、光アレルギー性過敏症、皮膚T細胞リンパ腫、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症候群、結節性多発動脈炎、心筋症、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、脂肪症、好酸球性筋膜炎、脱毛の予防もしくは発毛をもたらすことおよび/または発毛および毛髪の成長の促進による歯肉、歯周組織、歯槽骨、歯セメント質（substantia ossea dentis）、糸球体腎炎、男性型脱毛症または老人型脱毛症の病変、筋ジストロフィー、濃皮症（pyoderrna）およびセザリー症候群、アジソン病、保存か移植かもしくは虚血性疾患で生じる器官の虚血再灌流障害、エンドトキシンショック、偽膜性大腸炎、薬剤もしくは放射線照射により引き起こされる大腸炎、虚血性急性腎不全、慢性腎不全、肺-酸素もしくは薬剤により引き起こされる中毒症、肺癌、肺気腫、白内障、鉄沈着症、網膜色素変性症、老人性黄斑変性症、硝子体瘢痕（vitreal scarring）、角膜アルカリ熱傷（corneal alkali burn）、多形性紅斑皮膚炎（dermatitis erythema multiforme）、線状IgA水疱性皮膚炎（linear IgA ballous dermatitis）およびセメント皮膚炎（cement dermatitis）、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、環境汚染、加齢、��癌、カルシノーマの転移および高山病により引き起こされる疾患、ヒスタミンもしくはロイコトリエン-C4放出により引き起こされる疾患、ベーチェット病、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、肝部分切除、急性肝壊死、毒素、ウイルス性肝炎、ショック、もしくはアノキシアにより引き起こされる壊死、B型ウイルス性肝炎、非-A/非-B型肝炎、硬変症、アルコール性肝硬変、肝不全、劇症肝不全、遅発性肝不全、慢性肝不全の急性憎悪（“acute-on-chronic” liver failure）、化学治療効果の増強、サイトメガロウイルス感染症、HCMV感染症、AIDS、癌、老年認知症、トラウマ、ならびに慢性細菌感染症、からなる群から選択される疾患もしくは障害の処置もしくは予防に有用である。
【００８９】
移植に対する抵抗または器官もしくは組織の移植拒絶反応の予防または処置を必要とする哺乳動物患者において、それらを予防もしくは処置する方法もまた本発明内において具体化され、それには式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を投与することが含まれる。移植に対する抵抗または移植拒絶反応の予防または処置のために治療上有効な量が投与されうる。
【００９０】
さらなる別の実施態様は、免疫系の抑制を必要とする哺乳動物患者において免疫系を抑制する方法であって、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を患者に投与することを含む方法である。免疫系を抑制するために治療上有効な量が投与されうる。
【００９１】
何よりもとりわけ、本明細書に記載の方法は、骨髄または器官移植拒絶反応を処置または予防する方法であって、そのような処置または予防が必要な哺乳動物患者に式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を投与することを含む方法を包含する。骨髄または器官移植拒絶反応の処置または予防のために治療上有効な量が投与されうる。
【００９２】
一実施態様は、自己免疫疾患および/または炎症性疾患の処置方法であって、それを必要とする哺乳動物に少なくとも１つの式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を投与することを含む方法を提供する。別の実施態様は、免疫疾患および/または炎症性疾患の処置のための療法において用いるための、式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。別の実施態様において、自己免疫疾患および/または炎症性疾患の処置もしくは予防のための医薬の製造における式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩の使用を提供する。これらの実施態様において、治療上有効な量が用いられうる。好ましくは、これらの実施態様において、該自己免疫性および炎症性疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患(クローン病および潰瘍性大腸炎を含む)、乾癬、または薬剤として防ぐ移植器官の拒絶反応（as an agent to prevent the rejection of transplanted organs）から選択される。この実施態様の方法での使用において適切な化合物の例には、
Qが、式:
【化２３】
2012515787.tif 000025
であり;
nが、0であり;R1が、フェニルであり;そして、
R3が、-CF3である、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩が含まれ、それはトリフルオロ酢酸塩として提供されうる。
式(I)の適切な化合物の例は、1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸、1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸、または医薬的に許容されるその塩である。本実施態様の方法には、治療上有効な量の式(I)の化合物または医薬的に有効なその塩の投与が含まれる。
【００９３】
別の実施態様において、血管疾患を処置するための方法であって、それを必要とする哺乳動物に少なくとも１つの式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を投与することを含有する方法を提供する。別の実施態様は、血管疾患の処置のための療法における使用のための式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。別の実施態様において、血管疾患の処置のための医薬の製造における式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩の使用を提供する。これらの実施態様において、治療上有効な量が用いられうる。好ましくは、これらの実施態様において、該血管疾患はアテローム性動脈硬化症または虚血再灌流障害から選択される。
【００９４】
一実施態様は、Gタンパク質結合受容体S1P1の活性に関連する疾患もしくは障害を処置する方法であって、
Qが、式:
【化２４】
2012515787.tif 000026
であり;
nが、0であり;
R1が、フェニルであり;そして、
R3が、-CF3である、
式(I)の化合物または医薬的に許容されるその塩（それはトリフルオロ酢酸塩として提供されうる）を哺乳動物患者に投与することを含む方法を提供する。
式(I)の適切な化合物の例は、1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸、1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸、または医薬的に許容されるその塩である。本実施態様の方法には、治療上有効な量の式(I)の化合物または医薬的に有効なその塩の投与が含まれる。
【００９５】
S1P1-関連症状を処置する方法には、式(I)の化合物を単独か、あるいは、互いに組み合わせてかおよび/またはそのような症状の処置に有用な他の適切な治療薬と組み合わせて、投与することが含まれうる。従って、「治療上有効な量」は、S1P1受容体においてアゴニストとして作用するのに有効である請求の化合物の組み合わせの量を含むことも意図する。化合物の組み合わせは、好ましくは、相乗的な組み合わせである。相乗作用は、例えばChou et al., Adv. Enzyme Regul. 22:27-55 (1984)によって記載されるように、組み合わせて投与された場合の化合物の効果が、単剤として単独で投与された場合の化合物の相加効果よりも大きい場合に生じる。通常、相乗効果は、該化合物の最適以下（sub-optimal）の濃度にて最も明瞭に示される。相乗作用は、低い細胞毒性の観点から、組み合わせの有効性もしくは他の有益な効果を、個々の成分と比べて増大させることができる。
【００９６】
そのような他の治療薬の例としては、副腎皮質ステロイド薬もしくはグルココルチコイド、例えばデキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、およびプレドニゾン;PDE4阻害薬、例えばロリプラム、シロミラスト、ロフルミラスト、およびオグレミラスト;サイトカイン抑制性抗炎症薬(CSAID)およびp38キナーゼの阻害薬、米国特許第4,200,750号に開示の4-置換イミダゾ[1,2-A]キノキサリン;細胞表面分子、例えば、CD2、CD3、CD4、CD8、CD20（例えばリツキサン（登録商標））、CD25、CD30、CD40、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90、CTLA（例えば、アバタセプト(オレンシア（登録商標）)、またはそれらのリガンド（CD154(GP39、もしくはCD40L)を含む）を対象とする抗体もしくは融合タンパク質;ヒトサイトカインもしくは成長因子に対する抗体か、あるいはヒトサイトカインもしくは成長因子の融合タンパク質かまたは可溶性受容体（例えば、インフリキシマブ(レミケード（登録商標）)、エタネルセプト(エンブレル（登録商標）)、アダリムマブ(ヒュミラ（登録商標）)といったTNF、LT、Il-1（例えばアナキンラ(キネレット（登録商標）)(IL-1受容体アンタゴニスト)）、IL-2、IL-4、IL-5、Il-6（例えばCNTO 328(キメラ抗-IL-6抗体)）、Il-7、Il-8、Il-12、Il-15、Il-16、Il-17、Il-21、Il-23、例えばウステキヌマブ(ヒト抗-IL-12/23モノクローナル抗体)、ならびにインターフェロン（例えばインターフェロンβ 1a(アボネックス（登録商標）、REBIF（登録商標）)、インターフェロンβ 1b(BETASERON（登録商標）);インテグリン受容体アンタゴニスト、例えばタイサブリ（登録商標）;高分子剤、例えば酢酸グラチラマー(コパクソン（登録商標）);スルファサラジン、メサラミン、ヒドロキシクロロキン、非-ステロイド系抗炎症薬(NSAID)、例えばサリチル酸塩（アスピリン、サルサラート、およびサリチル酸マグネシウムを含む）および非-サリチル酸塩（例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、メロキシカム、セレコキシブおよびロフェコキシブ）;抗ウイルス薬、例えばアバカビル;抗増殖薬、例えばメトトレキサート、メルカプトプリン、レフルノミド、シクロスポリン、ミコフェノレート（mycophenololate）、FK506(タクロリムス、プログラフ（登録商標）);細胞傷害性薬剤、例えばアザチオプリンおよびシクロホスファミド;核移行阻害剤（nuclear translocation inhibitor）、例えばデオキシスパガリン(DSG);金含有製剤、例えばオーラノフィン（auronofin）;ペニシラミン（penicllamine）、およびラパマイシン(シロリムスもしくはラパミューン（登録商標）)、あるいはそれらの誘導体が挙げられる。
【００９７】
上記の他の治療薬は、本発明の化合物と組み合わせて用いる場合、例えば、Physicians' Desk Reference(PDR)に示される量か、または他に当業者により決定される量で用いられうる。本発明の方法において、そのような他の治療薬は、本発明の化合物より前、同時、または後に投与してもよい。
【００９８】
（製造方法）
本発明の化合物は、有機合成の分野の当業者に周知の多くの方法で製造することができる。本発明の化合物は、以下に記載される方法、ならびに有機合成化学の分野で公知の合成方法、あるいは当業者により認められているその改変方法を用いて合成することができる。好ましい方法としては、限定はされないが、以下に記載のものが挙げられる。本明細書中の全ての引用文献は、引用によりその全般が本明細書に援用される。
【００９９】
本発明の化合物は、この項に記載の反応および技法を用いて製造されうる。該反応は、用いる試薬および物質に適した溶媒中で実施され、もたらされる変換に適切である。また、以下に記載の合成方法の説明において、提示した反応条件（溶媒の選択、反応雰囲気、反応温度、実験時間およびワークアップ方法を含む）は全て、該反応の標準である条件となるように選択されていると理解され、それは当業者によって容易に認識されるであろう。分子の様々な部分に存在する官能性が、提示された試薬および反応に適合しなければならないことは、有機合成の分野の当業者により理解される。反応条件に適合する置換基がそのように制限されることは当業者にとっては容易に明白であり、代替方法が用いられなくてはならない。これにより、本発明の目的の化合物を得るために、合成工程の順序を改変する判断か、またはさらに別の１つのプロセススキームを選択する判断が、しばしば必要とされうる。また、この分野のいずれの合成経路の計画における別の主流の判断が、本願に記載の化合物に存在する反応性官能基の保護のために用いられる保護基の賢明な選択であることが認識されるであろう。Greeneら(Protective Groups In Organic Synthesis, Third Edition, Wiley and Sons (1999))により、熟練した施術者のための多くの別法についての信頼できる説明が記載されている。
【０１００】
式(I)の化合物は、以下のスキームにおいて説明される方法を参照することによって、製造されうる。そこに示されるように、最終生成物は、式(I)と同じ構造式を有する化合物である。スキームに従って、試薬を適切に選択して適切に置換することにより、いずれの式(I)の化合物も製造されうることが理解されるであろう。溶媒、温度、圧力、および他の反応条件は、当業者により容易に選択されうる。出発物質は市販されているか、あるいは当業者により容易に製造される。化合物の組成は、この項かまたは明細書の他の部分に記載される通りである。
【０１０１】
スキーム1に示すとおり、本発明のオキサジアゾール化合物(1.4)は、様々なカップリング試薬(例えば、EDC、HOBt、BOP、BOP-Cl)を用いてカルボン酸(1.1)とN'-ヒドロキシベンズイミドアミド(1.2)を反応させることによって製造されうる。別法として、該N'-ヒドロキシベンズイミドアミドを、酸フルオリド化合物(1.5)もしくは酸クロリド化合物(1.6)と反応させてもよい。各場合において、はじめに形成された該N'-アシルオキシベンズイミドアミド(1.3)は、該反応条件下において、オキサジアゾールに自然に変換しうる。該N'-アシルオキシベンズイミドアミド(1.3)が自然に環化しない場合は、それを単離し、反応条件で処理して、1.4への脱水環化を達成してもよい。そのような条件には、加熱(従来型かマイクロ波のいずれか)、またはフルオリド源(例えばテトラブチルアンモニウムフルオリド)を用いた処理が含まれる。
スキーム1
【化２５】
2012515787.tif 000027
【０１０２】
上記の手段によって酸(1.1)、酸フルオリド(1.5)もしくは酸クロリド(1.6)と(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(2.1)を反応させて構造2.2の化合物を製造することを介して、式(I)の化合物を製造してもよい。酸(例えば、トリフルオロ酢酸)を用いた処理によるtert-ブチルエステル誘導体(2.2)の脱保護により、式(I)の化合物を得る。
スキーム2
【化２６】
2012515787.tif 000028
【０１０３】
別法として、式(I)の化合物はまた、スキーム3に記載の通りに製造されうる。上記の手段によって酸(1.1)、酸フルオリド(1.5)もしくは酸クロリド(1.6)と(Z)-N'-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ベンズイミドアミド(3.2))を反応させて、構造3.3の化合物を製造することができ、それを、対応するアルデヒド(3.4)に酸化させた後、アゼチジン-3-カルボン酸(3.5)もしくはtert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート(3.6)を用いた還元的アミノ化を経て、各々、式(I)もしくは2.2の化合物を得ることができる。化合物2.2を、上記のとおり、式(I)の化合物に変換してもよい。
スキーム3
【化２７】
2012515787.tif 000029
【０１０４】
tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート(3.6)は、アゼチジン-3-カルボン酸(3.5)から、アミンを(例えば、CBZ基を用いて)保護した後、カップリング試薬(例えば、CDI)の存在下においてtert-ブチル アルコールを用いて該酸をエステル化し、次いでアミン保護基を除去することにより、製造されうる。(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(2.1)は、tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート(3.6)と4-ホルミルベンゾニトリル(4.2)を還元条件下において反応させて4.3を得た後、ヒドロキシルアミンと反応させることにより、得られる。別法として、還元条件下においてアゼチジン-3-カルボン酸(3.5)と4-ホルミルベンゾニトリル(4.2)を反応させることによって得られる4.5をエステル化することにより、化合物4.3を製造してもよい。
スキーム4
【化２８】
2012515787.tif 000030
【０１０５】
本発明のカルボン酸フラグメント(1.1)は、5-位にカルボン酸基を有するイソオキサゾールに関してスキーム5に記載されたものを含む様々な方法により製造されうる。塩基性条件下におけるクロロ-オキシム5.1と置換プロピオレート(5.2)との反応によりイソオキサゾールカルボキシレート(5.3 / 5.4)の混合物（通常は異性体5.3が優勢）が得られる。該異性体の分離(例えば、シリカゲルクロマトグラフィーまたは逆相プレパラティブHPLCにより)後、5.4を加水分解して、所要のイソオキサゾールカルボン酸(5.5)得てもよい。塩基性条件下においてクロロ-オキシム5.1と置換プロパルギルアルコール(5.6)を反応させることによって、イソオキサゾールカルボキシレート(5.7 / 5.8)の混合物（通常は異性体5.8が優勢）が得られる。該異性体の分離(例えば、シリカゲルクロマトグラフィーまたは逆相プレパラティブHPLCにより)後、5.8を酸化させて、酸5.5を得てもよい。また、5.1と置換2-ブロモ-アクリレート(5.9)との反応を介して位置選択的に、エステル5.4を得てもよい。クロロ-オキシム5.1を無置換プロピオレート(5.10)と反応させると、位置選択的にイソオキサゾール5.11が得られる。その後、該無置換のイソオキサゾール位をハロゲン化誘導体(5.12)に変換してもよく、次いでそれをさらなる変換（限定はされないが、遷移金属クロスカップリング反応もしくは挿入反応を含む）に用いてもよい。
スキーム5
【化２９】
2012515787.tif 000031
【０１０６】
スキーム6には、3-位にカルボン酸基を有するイソオキサゾールへのアプローチが記載されている。イソオキサゾール-3-カルボキシルエステル(6.3)は、熱分解条件(不活性溶媒もしくは無溶媒における加熱)下における内部アルキン(6.1)とジメチル 2-ニトロマロネート(6.2)との反応か、または塩基性条件下における内部アルキン(6.1)とクロロ-オキシム6.5との反応から、製造されうる。次いで、エステル(6.3)の加水分解により、酸(6.4)が得られる。末端アルキン(6.8)とクロロ-オキシム6.5との反応によって、4-位での置換がないイソオキサゾールエステルがもたらされる。その後、無置換のイソオキサゾール位をハロゲン化誘導体(6.7)に変換し、次いでそれをさらなる変換（限定はされないが、遷移金属クロスカップリング反応もしくは挿入反応を含む）に用いてもよい。
スキーム6
【化３０】
2012515787.tif 000032
（略語）
Ac            アセチル
AcOH          酢酸
aq.            水性（または水溶液）
CDI            カルボニルジイミダゾール
Bn            ベンジル
Bu            ブチル
Boc            tert-ブトキシカルボニル
BOP-Cl        ビス-(2-オキソ-3-オキサゾリジニル)ホスフィン酸クロリド
DMA            N,N-ジメチルアセトアミド
DMAP          ジメチルアミノピリジン
DMF           ジメチルホルムアミド
DMSO          ジメチルスルホキシド
EDC            1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩
EtOAc        酢酸エチル
Et             エチル
EtOH         エタノール
H            水素
h            時間
i            イソ
HMPA          ヘキサメチルリン酸トリアミド
HOBt          ヒドロキシベンゾトリアゾール
HPLC          高圧液体クロマトグラフィー
HOAc          酢酸
LC            液体クロマトグラフィー
Me            メチル
MeOH          メタノール
分            分
M+1            (M+H)+
MS            質量分析
n            規定濃度
PhCONCS        ベンジルイソチオシアネート（benzyolyisothiocyanate）
Pd/C          パラジウム炭素
Ph            フェニル
Pr             プロピル
PSI            ポンド/平方インチ
Ret Time      保持時間
rtまたはRT        室温
sat.          飽和
t            第三級
TFA            トリフルオロ酢酸
THF            テトラヒドロフラン
Phenomenex    Phenomenex, Macclesfield, Cheshire, UK
YMC            YMC, Inc, Wilmington, NC 20403
【実施例】
【０１０７】
以下の実施例は、本発明の特定の好ましい実施態様を例示するものであり、本発明の範囲を制限するものではない。化学的な略語および記号ならびに科学的な略語および記号は、他に特別の定めのない限り、それらの通常および慣習の意味を有する。本明細書の実施例および他の部分で用いられるさらなる略語は、上記されている。共通中間体は、通常、１つ以上の実施例の製造に有用であり、中間体1、中間体2などのように連続的に識別され、Int.1、Int.2などのように省略される。場合によって、共通中間体の製造には、製造するために複数の工程が必要とされうる。各工程は、共通中間体および工程により特定される(例えば、Int.1-A、Int.1-B、その他）。実施例の化合物は、それが製造される実施例および工程(例えば、「1-A」は実施例1，工程Aを示す)によってか、あるいは、該化合物が実施例の表題の化合物である場合は実施例のみ(例えば、「1」は実施例1の表題の化合物を示す)によって特定される。場合によっては、中間体もしくは実施例の別の製法が記載される。合成の分野に熟練した化学者によって、１つ以上の検討事項、例えば、より短い反応時間、より安価な出発物質、操作の容易さ、触媒作用の受けやすさ、有害な試薬の回避、特定の機器使用のアクセス性、および直線的な工程数の減少、などに基づく望ましい別の製法が、しばしば考案されうる。別の製法を記載する意図は、本発明の実施例の製造をさらに可能にすることである。
【０１０８】
マイクロ波オーブン（microwave oven）で実施することを明記している実験は、SmithSynthesizerオーブン（Personal Chemistry製）かまたはDiscoverマイクロ波オーブン（CEM社製）において実施した。該マイクロ波オーブンは、60〜250℃の間で選択することができる温度を発生させる。該マイクロ波オーブンは、0〜300 PSIの圧力を自動的にモニターする。反応ホールド時間および温度設定値がレポートされる。
【０１０９】
中間体1(Int.1)の製造
tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)-ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化３１】
2012515787.tif 000033
Int.1-A. 1-(ベンジルオキシカルボニル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化３２】
2012515787.tif 000034
水(1.75 L)中のアゼチジン-3-カルボン酸(88 g, 0.871 mol)および炭酸水素ナトリウム(161 g, 1.92 mol)の溶液に、室温にて、ベンジル 2,5-ジオキソピロリジン-1-イルカーボネート(239 g, 0.959 mol)／テトラヒドロフラン(3.5 L)溶液を加えた。該反応混合液を、終夜、室温にて撹拌した。溶媒を減圧下において除去し、水層を酢酸エチル(2 x 500 mL)で洗浄した。該水層を、1.0 N 塩酸水溶液を用いて酸性化した後、酢酸エチル(3 x 750 mL)で抽出した。有機層を、水、続いて食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、1-(ベンジルオキシカルボニル)アゼチジン-3-カルボン酸を、無色の油状物として得た(202 g, 99％収率)。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.27分であった − カラム: YMC COMBISCREEN（登録商標） ODS-A 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 236.15.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.39 - 3.49 (m, 1H), 4.22 (d, J=7.28 Hz, 4H), 5.11 (s, 2H), および 7.29 - 7.39 (m, 5H).
【０１１０】
Int.1-B. 1-ベンジル 3-tert-ブチル アゼチジン-1,3-ジカルボキシレート
【化３３】
2012515787.tif 000035
1-(ベンジルオキシカルボニル)アゼチジン-3-カルボン酸(200 g, 0.851 mol)／ジクロロメタン(6.0 L)溶液に、0℃にて、t-ブタノール(158 g, 2.13 mol)、DMAP(52.0 g, 0.425 mol)、およびEDCI(163 g, 0.853 mol)を加えた。該反応混合液を室温で終夜撹拌した。次に、該反応混合液を濃縮して、残渣を酢酸エチルに溶解させた。有機層を、10％クエン酸水溶液、10％炭酸水素ナトリウム水溶液、および食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下において濃縮して、1-ベンジル-3-tert ブチル-アゼチジン-1,3-ジカルボキシレート(200 g, 81％収率)を無色の油状物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.27分であった - カラム: YMC COMBISCREEN（登録商標） ODS-A 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 292.15.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.46 (s, 9H), 3.24 - 3.33 (m, 1H), 4.14 (d, J=7.53 Hz, 4H), 5.10 (s, 2H), および 7.30 - 7.39 (m, 5H).
【０１１１】
Int.1-C. tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート
【化３４】
2012515787.tif 000036
酢酸エチル(1.40 L)中の1-ベンジル-3-tert-ブチル-アゼチジン-1,3-ジカルボキシレート(140 g, 0.480 mol)および10％パラジウム炭素(28.0 g)の混合液を、終夜、3.0kg/cm2の水素圧下のオートクレーブの中に入れた。該反応混合液を、セライト（登録商標）を通して濾過し、該セライト（登録商標）ベッドを酢酸エチルで洗浄した。酢酸(28.9 g, 0.480 mol)を該濾液に加え、それを、温度を50℃以下に維持しながら減圧下において濃縮して、tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート酢酸塩(96 g, 92％収率)を無色の油状物として得た。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.47 (s, 9H), 2.02 (s, 3H), 3.52 - 3.63 (m, 1H), および 4.00 - 4.10 (m, 4H).
【０１１２】
Int.1-D. tert-ブチル 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化３５】
2012515787.tif 000037
tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート酢酸塩(92.0 g, 0.423 mol)／メタノール(1.0 L)溶液に、室温にて、4-ホルミルベンゾニトリル(50.8 g, 0.381 mol)を加えた。該反応混合液を0℃に冷却し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(28.8 g, 0.458 mol)を少しずつ加えた。該反応混合液を、室温に昇温させ、終夜、撹拌を続けた。該反応混合液を減圧下において濃縮した後、残渣を10％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集め、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、20％酢酸エチル／石油エーテルを用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、tert-ブチル 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(89％)を得た(クロマトグラフィー後、Int.1-Dは少量の4-ヒドロキシメチルベンゾニトリルを含んでいた。この物質を、さらなる精製は行わずに、次の工程に進めた。)。LC/MS M+1 = 273.18.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.46 (s, 9H), 3.22 - 3.31 (m, 3H), 3.48 - 3.56 (m, 2H), 3.66 (s, 2H), 7.39 (d, J=8.28 Hz, 2H), および 7.60 (d, J=8.28 Hz, 2H).
【０１１３】
Int.1. tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの製造
【化３６】
2012515787.tif 000038
tert-ブチル-1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(89.0 g, 0.326 mol)／tert-ブタノール(1.30 L)に、炭酸水素ナトリウム(109.8 g, 1.31 mol)およびヒドロキシルアミン塩酸塩(45.5 g, 0.654 mol)を加えた。該反応液を、7時間還流加熱した後、室温まで冷却し、終夜撹拌した。該反応混合液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集め、水で洗浄し、食塩水で洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、溶離液として0.2％トリエチルアミンを含有する2.5％メタノール／クロロホルムを用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得た(64 g, 0.210 mol, 2工程で55％収率)。該化合物は、HPLC 保持時間 = 7.03分であった - カラム: XBridge フェニル 150x4.6 mm 3.5u, SC/749. 1mL/分.  溶媒A = 5％MeCN, 95％H2O, 0.05％TFA; 溶媒B = 95％MeCN, 5％H2O, 0.05％TFA.  時間/％B: 0分/0％, 15分/50％, 18分/100％, 20分/100％。 LC/MS M+1 = 306.2.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.45 (s, 9H), 3.23 - 3.30 (m, 3H), 3.49 - 3.57 (m, 2H), 3.63 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 7.31 (d, J=8.28 Hz, 2H), および 7.57 (d, J=8.28 Hz, 2H).
【０１１４】
Int.1-D: tert-ブチル 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの別の製造
【化３７】
2012515787.tif 000039
Int.1-E. 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化３８】
2012515787.tif 000040
ジクロロメタン(20 mL)およびメタノール(80 mL)中の4-ホルミルベンゾニトリル(2.88 g, 22.0 mmol)、アゼチジン-3-カルボン酸(2.02 g, 20 mmol)、および酢酸(1.15 mL, 20.0 mmol)の混合液を、室温で1時間撹拌した。ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド(6.78 g, 32.0 mmol)を加え、室温で18時間撹拌を続けた。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を水(50 mL)とジエチルエーテル(50 mL)間に分配した。水層を集め、ジエチルエーテル(50 mL)で洗浄し、濃縮した。残渣を水(20 mL)に溶解させ、2.5 x 20 cm HP-20カラムにロードした。HP-20ゲルの調製:約400 mlの、乾燥した未使用のMCI CHP-20ゲル(75-150ミクロン)を、24時間、メタノールで膨潤させた。該ゲルを、濾過し、1リットルのメタノールですすいだ。次いでそれを、メタノール下にて保存用ボトルに移した。使用の直前に、目的の量のゲルを20容積の水で十分にすすいだ。カラムを、240 mLの水および400 mLのメタノールで溶出した。画分を含む生成物を濃縮し、エタノールおよび酢酸エチル/ヘプタンから共エバポレートして、1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(3.25 g, 15.0 mmol, 75％収率)を白色の固形物として得た。 MS:(M+H) = 217.18.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 3.39 (m, 1H), 4.08 (m, 4H), 4.32 (s, 2H), 7.63 (d, J= 8.3 Hz, 2H), および 7.82 (d, J= 8.3 Hz, 2H).
【０１１５】
Int.1-Alt.1-D. tert-ブチル 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化３９】
2012515787.tif 000041
ジクロロエタン(150 mL)中の1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(3.25 g, 15.0 mmol)、DMAP(1.84 g, 15.0 mmol)、およびtert-ブタノール(14.1 mL, 150 mmol)の混合液に、EDCI(4.32 g, 22.5 mmol)を加え、該反応混合液を週末にかけて撹拌した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を、酢酸エチル(250 mL)と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(250 mL)間に分配した。有機層を、水(250 mL)で洗浄し、食塩水(100 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、薄黄色の油状物を得て、それを、5 x 15 cm シリカゲルカラム（0-40％酢酸エチル/ヘキサングラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理し、tert-ブチル 1-(4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(3.5 g, 12.9 mmol, 86％収率)を無色の液状物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.38分 - カラム: YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム。 MS:(M+H) = 273.18.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.46 (s, 9H), 3.26 (m, 3H), 3.52 (m, 2H), 3.66 (s, 2H), 7.39 (d, J= 8.3 Hz, 2H), および 7.60 (d, J= 8.3 Hz, 2H).
【０１１６】
実施例1
1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化４０】
2012515787.tif 000042
1-A. 4,4,4-トリフルオロブタ-2-イン-1-オール
【化４１】
2012515787.tif 000043
ジイソプロピルアミン(24.7 mL, 176 mmol)／エーテル(100 mL)溶液に、-78℃にて、ブチルリチウム／エーテル(17.6 mL, 176 mmol)の10M溶液を5分かけて加えた。10分後、-78℃にて、2-ブロモ-3,3,3-トリフルオロプロパ-1-エン(14.0 g, 80 mmol)を、該淡黄色の溶液に加えた。さらに10分後、パラホルムアルデヒド(2.40 g, 80 mmol)を加え、ドライアイス浴を外し、該反応混合液を室温で終夜撹拌した。該反応混合液は室温に近づくにつれて濃い色になった。該反応液を、1N 塩酸水溶液(100 mL)でクエンチし、エーテル(500 mL)で希釈し、1N 塩酸水溶液(2 x 100 mL)で洗浄し、食塩水 100 mLで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、暗色の液状物を得て、それを低-減圧下(〜50 Torr, 〜50℃)において蒸留し、4,4,4-トリフルオロブタ-2-イン-1-オール(7.1 g, 57.2 mmol, 72％収率)を淡黄色の液状物として得た。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 2.31 (br. s., 1H) および 4.38 - 4.42 (m, 2H).
【０１１７】
1-A: 4,4,4-トリフルオロブタ-2-イン-1-オールの別の製造
【化４２】
2012515787.tif 000044
フェナントロリン(2.16 mg, 0.012 mmol)(指標)のエーテル(硫酸マグネシウムで予め乾燥させた)溶液に、-78℃にて、窒素下において、n-ブチルリチウム／ペンタンの2M 溶液を加えた。すぐに、オレンジ色を呈した。トリフルオロメチルアセチレンガスを、-78℃にて、該溶液にバブルした。ガス導入の〜4分後、該オレンジ色はほぼ完全に消え、該反応溶液は濁り(いくらかの沈殿に起因する)、淡い薄オレンジ色が存続した。パラホルムアルデヒドを加え、5分後にドライアイス/イソプロパノール浴を外し、0℃の氷浴に取り替えた。45分間撹拌を続け、該氷浴を外し、さらに1.25時間、撹拌を続けた。該反応フラスコを0℃の氷浴に入れ、飽和塩化アンモニウム水溶液(20.0 mL)を加えた。層を分離し、有機層を水(2x)で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。加熱せずに低-減圧(〜50 Torr)下において濃縮し、暗褐色の液状物を得て、それを減圧蒸留(〜50 Torr, 〜50℃)により精製して、4,4,4-トリフルオロブタ-2-イン-1-オール(7.1 g, 57.2 mmol, 72％収率)を無色の液状物として得た。
【０１１８】
1-B. N-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド
【化４３】
2012515787.tif 000045
Liu, K.C. et al., J. Org. Chem., 45:3916-1918 (1980)の方法に従って、この化合物を製造した。
【０１１９】
N,N-ジメチルホルムアミド(60 mL)中の(E)-ベンズアルデヒドオキシム(24.4 g, 201 mmol)の無色で均一な溶液に、室温にて、N-クロロスクシンイミド(26.9 g, 201 mmol)を、分割して30分かけて加えた。各々の添加の間に、該反応混合液は黄色に変化し、その後、徐々にほぼ無色に戻った。さらに、各添加によって発熱が見られ、それは、該反応がN-クロロスクシンイミドの添加後に開始されたことを確実なものとしている。該発熱を冷却するために、必要に応じて、氷浴を用いることができた。添加の完了後、該均一な反応混合液を室温で終夜撹拌した。該反応混合液を、250 mLの水で希釈し、エーテル(3 x 100 mL)で抽出した。有機層を合わせて、水(2 x 100 mL)で洗浄し、10％塩化リチウム水溶液(2 x 100 mL)で洗浄し、食塩水(100 mL)で洗浄した。水層を、エーテル(100 mL)で逆抽出し、有機層を合わせて(400 mL)、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、(Z)-N-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド(30.84 g, 198 mmol, 98％収率)を綿毛状の淡黄色の固形物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 1.57分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 155.8.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.30 - 7.64 (m, 3H), 7.73 - 7.87 (m, 2H), および 12.42 (s, 1H).
【０１２０】
1-C. 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)メタノール
【化４４】
2012515787.tif 000046
250 mLの丸底フラスコ中の、ジクロロエタン(85 mL)中のN-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド(5.50 g, 35.4 mmol)および4,4,4-トリフルオロブタ-2-イン-1-オール(5.46 g, 39.6 mmol)の淡黄色で均一な混合液に、70℃にて、22 mLのジクロロエタン中のトリエチルアミン(9.85 mL, 70.7 mmol)を、滴下漏斗を介して2.5時間かけて加えた(2時間かけて最初の〜50％、0.5時間かけて残りの50％)。添加の完了後、HPLCにより該反応混合物を完結させた(70℃での合計時間は3時間であった)。該反応混合液を室温で終夜撹拌した。
【０１２１】
該反応混合液を、ジクロロメタン(100 mL)で希釈し、水(100 mL)で洗浄し、有機層を集めた。水層をジクロロメタン(2 x 50 mL)で抽出し、有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下において除去した。分析によって、該生成混合物が、目的の位置異性体(1-C), (3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)メタノールと、目的でない位置異性体, (3-フェニル-5-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-4-イル)メタノールの、86:14の混合物から成ることが示された。該混合物を、酢酸エチルとヘキサンの混合液(充填剤に対し1％、および-5％ -9％ -12％をロードする)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)メタノール(5.34 g, 21.96 mmol, 62.1％収率)を淡黄色の油状物として得た。該化合物はHPLC 保持時間 = 1.91分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 244.2.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 2.21 (br. s., 1H), 4.97 (s, 2H), 7.47 - 7.56 (m, 3H), および 7.65 (d, J=6.60 Hz, 2H).
【０１２２】
1-D. 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸
【化４５】
2012515787.tif 000047
ジョーンズ試薬の調製
オレンジ色で均一な三酸化クロム(12.4 g, 0.123 mol)／水(88.4 mL)溶液に、0℃にて、硫酸(10.8 mL)を、撹拌しながら滴下漏斗を介して30分かけて滴下した。該滴下漏斗を水(1 mL)ですすぎ、ジョーンズ試薬の1.23 M溶液(100 mLの溶媒中に0.123 molの試薬)を得た。
【０１２３】
(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)メタノール(5.24 g, 21.6 mmol)／アセトン(75 mL)溶液に、室温にて(水浴に入れた)、ジョーンズ試薬(43.8 mL, 53.9 mmol)を、滴下漏斗を介して1.5時間かけてゆっくりと加えた。濃い色の反応混合液を、室温で終夜撹拌した。HPLCによると、該反応は93％完了であった。さらに0.5当量(9 mL)のジョーンズ試薬を加えた。1時間後、該反応は95％完了であった。さらに3時間後、該反応は96％完了であった。さらに0.5当量(9 mL)のジョーンズ試薬を加えた。該反応混合液をさらに2.5時間撹拌した。HPLCによると、該反応は97％完了であった。イソプロピルアルコール(6 mL)を加え、該混合液を90分間撹拌し、濃い緑色の沈殿物を得た。該混合液を、エーテル(600 mL)で希釈し、2％亜硫酸水素ナトリウム水溶液(5 x 100 mL)で洗浄し、有機層を集めた。水層をエーテル(2 x 100 mL)で逆抽出した。HPLCによると、水層中にさらなる生成物はなかった。有機層を合わせて、水(100 mL)で洗浄し、飽和食塩水(100 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。水層をエーテル(100 mL)で逆抽出し、該有機層を先の有機層に加えた。該溶液を減圧下において濃縮し、3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸を、オフホワイト色の固形物として得た。該固形物を、ジクロロメタン(200 mL)に希釈し、2％亜硫酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸(3.84 g, 14.93 mmol, 69.3％収率)を、淡黄色の固形物として得た。該生成物は、HPLCによると、保持時間 = 1.60分で、96％純粋であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 258.2.
【０１２４】
該亜硫酸水素ナトリウムの水層は依然としてかなりの量の生成物を含んでいた。該食塩水の層は、さらなる生成物を含んでおらず、廃棄された。該水層を塩化ナトリウムで飽和させ、該pHを〜3.5に調整し、該溶液をエーテル(3 x 100 mL)で抽出した。該有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、さらなる3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸(1.12 g, 4.36 mmol, 20.21％収率)を白色の固形物として得た。該生成物は、HPLCによると、保持時間 = 1.60分で、＞99％純粋であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 258.1.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.55 - 7.63 (m, 5H).
【０１２５】
該生成物を合わせて、4.96 g(90％収率)の3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸を得た。
【０１２６】
(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)メタノールで開始する、1-D: 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸の別の製造
【化４６】
2012515787.tif 000048
(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)メタノール(2.1 g, 8.64 mmol)、TEMPO(0.094 g, 0.604 mmol)、およびリン酸ナトリウムバッファー(0.67M)(32.2 mL, 21.59 mmol)の混合液を、35℃まで加熱した。アセトニトリル(30 mL)中において製造したNaH2PO4(20 mL, 0.67M)とNa2HPO4(20 mL, 0.67M)の1:1溶液から成るリン酸ナトリウムバッファー(40 mL, pH〜6.5)の溶液を、使用前に調製した。亜塩素酸ナトリウム(3.91 g, 34.5 mmol)／水(4.5 mL)溶液および漂白剤(4.3 mL, 6重量％)を同時に、40分かけて加えた。該反応をHPLCによりモニターし、2時間後、〜30％の出発物質が残存していた。6時間後、10％が残存していた。さらに漂白剤(100 μL)を加え、該反応混合液を、終夜、室温に置いた。
【０１２７】
さらに漂白剤(100 μL)を加えた。得られた混合液を、35℃でさらに2時間撹拌した。HPLCにより、完全な変換が示された。該反応液を、亜硫酸ナトリウム(2.07 mL, 43.2 mmol)／水(90 mL)溶液を、0℃にてゆっくりと加えることによりクエンチすると、茶色の反応液の着色が消失した。溶媒を減圧下において除去し、残った水性残渣を酢酸エチル(3 x 40 mL)で抽出した。有機層を合わせて、水(8 mL)で洗浄し、食塩水(8 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸(2.2 g, 8.55 mmol, 99％収率)を淡黄色の固形物として得た。
【０１２８】
4,4,4-トリフルオロブタ-2イノエートで開始する、3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸の別の製造方法(1-D)
【化４７】
2012515787.tif 000049
Alt.1-D-1. エチル 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート
【化４８】
2012515787.tif 000050
ジエチルエーテル(20 mL)中の(Z)-N-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド(1.04 g, 6.68 mmol)およびエチル 4,4,4-トリフルオロブタ-2-イノエート(1.238 g, 7.45 mmol)の淡黄色の混合液に、室温にて、トリエチルアミン(1.86 mL, 13.4 mmol)を15分かけて加えると、沈殿が生じた。添加が完了した後、該淡黄色のスラリーを、週末にかけて室温で撹拌した。該均一な反応混合液を減圧下において濾過してトリエチルアミン塩酸塩を除去し、該濾液を濃縮して、生成混合物を濃い黄色の粘稠性の油状物として得た(2.03 g)。HPLCによると、該反応混合物は、目的の位置異性体, エチル 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレートと、目的でない位置異性体, エチル 3-フェニル-5-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-4-カルボキシレートの、約15:85の比の混合物で構成されていた。該化合物の混合物をヘキサン中に溶解させ、5分間、超音波処理した。ヘキサンをデカンテーションして除き、HPLCによって該暗赤色の油状の残渣は微量の生成物しか有しないことを見出した。ヘキサンを減圧下において除去し、残渣(1.89 g)をプレパラティブHPLCにより精製した。エチル 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレートを含む目的の画分を濃縮し、残渣をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、エチル 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート(0.087 g, 0.305 mmol, 4.6％収率)を淡黄色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.88分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.46 (t, J=7.15 Hz, 3H), 4.53 (q, J=7.03 Hz, 2H), 7.48 - 7.55 (m, 3H), および 7.58 (d, J=7.53 Hz, 2H).
【０１２９】
エチル 4,4,4-トリフルオロブタ-2-エノエートで開始する、1-D-1: エチル 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸の別の製造
1-D-1. エチル 2,3-ジブロモ-4,4,4-トリフルオロブタノエート
【化４９】
2012515787.tif 000051
臭素(18.4 mL, 357 mmol)を、(E)-エチル 4,4,4-トリフルオロブタ-2-エノエート(50 g, 297 mmol)／四塩化炭素(50 mL)溶液に、室温で窒素下において、30分かけて滴下した。得られた暗赤色の溶液を4時間還流した。さらなる臭素(2ml)を加え、HPLC分析により出発物質の消費が示されるまで、加熱を続けた。該反応混合液を減圧下において濃縮して、薄茶色の油状物を得て、それをさらなる精製は行わずに次の工程に用いた。HPLC(XBridge 5μ C18 4.6x50 mm, 4 mL/分, 溶媒A: 0.2％H3PO4含有10％MeOH/水, 溶媒B: 0.2％H3PO4含有90％MeOH/水, 4分かけて0-100％Bのグラジエント): 2.96分および3.19分.
【０１３０】
1-D-2. (Z/E)-エチル 2-ブロモ-4,4,4-トリフルオロブタ-2-エノエート
【化５０】
2012515787.tif 000052
0℃に冷却したエチル 2,3-ジブロモ-4,4,4-トリフルオロブタノエート(1-B-1)／ヘキサン(200 mL)溶液に、トリエチルアミン(49.7 ml, 357mmol)を35分かけて滴下し、その間に白色の沈殿が生じた。該反応混合液を、LCによって完全な変換が示されるまで、さらに2時間撹拌した。該固形物を濾過し、ヘキサン(3 x 50mL)ですすぎ、該濾液を濃縮し、短いシリカゲルパッド（10％酢酸エチル/ヘキサンで溶出）を通して、(Z/E)-エチル 2-ブロモ-4,4,4-トリフルオロブタ-2-エノエート(65.5 g, 265mmol, ２工程で89％収率)を無色の油状物として得た。別法として、該粗生成物を蒸留により精製することができる(85℃ / 〜60 mmHg)。 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.41 (q, 1H, J = 7.28 Hz), 4.35 (q, 2H, J = 7.11 Hz), 1.38 (t, 3H, J = 7.15 Hz); HPLC (XBridge 5μ C18 4.6x50 mm, 4 mL/分, 溶媒A: 0.2％H3PO4含有10％MeOH/水, 溶媒B: 0.2％H3PO4含有90％MeOH/水, 4分かけて0-100％Bのグラジエント): 3.09分.
【０１３１】
1-D-1. エチル 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート
【化５１】
2012515787.tif 000053
(Z/E)-エチル 2-ブロモ-4,4,4-トリフルオロブタ-2-エノエート, 1-D-3, (39.7 g, 161 mmol)およびN-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド(30 g, 193mmol)を、酢酸エチル(150mL)に溶解させた。塩化インジウム(III)(8.89 g, 40.2mmol)を加え、得られた混合液を、室温でN2下において、60分間撹拌した。炭酸水素カリウム(32.2 g, 321mmol)を、該反応混合液に加え、それを終夜、室温で14時間撹拌した。溶媒を減圧除去した。残渣を300mLのヘキサンに再懸濁し、10分間撹拌した後、濾過した。該濾過ケーキをヘキサン(3X30mL)で洗浄し、濾液を合わせて減圧濃縮し、粗生成物を得て、それをフラッシュクロマトグラフィーでさらに精製して、33gの生成物(72％)を、薄黄色がかった油状物として、目的の異性体1-D-1と目的でない異性体1-D-1aの〜30/1の比の混合物として得た。 MS m/e 286.06 (M+H+);  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.56 (m, 5H), 4.53 (q, 2H, J = 7.3 Hz), 1.46 (t, 3H, J = 7.2 Hz); HPLC (XBridge 5μ C18 4.6x50 mm, 4 mL/分, 溶媒A: 0.2％H3PO4含有10％MeOH/水, 溶媒B: 0.2％H3PO4含有90％MeOH/水, 4分かけて0-100％Bのグラジエント): 3.57分.
【０１３２】
Alt.1-D. 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸, リチウム塩
【化５２】
2012515787.tif 000054
メタノール(2.0 mL)および水(1.0 mL)中のエチル 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボキシレート, 1-D-1, (0.085 g, 0.298 mmol)および水酸化リチウム水和物(0.013 g, 0.298 mmol)の混合液を室温にて終夜撹拌した。該反応混合液を乾固するまで濃縮して、3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸, リチウム塩(0.079 g, 0.299 mmol, 100％収率)を淡黄色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 1.72分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 258.0.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.49 - 7.57 (m, 3H) および 7.58 - 7.62 (m, 2H).
【０１３３】
1-E. 3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボニルフルオリド
【化５３】
2012515787.tif 000055
ジクロロメタン(100 mL)中の3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸(3.00 g, 11.7 mmol)およびピリジン(1.132 mL, 14.0 mmol)の混合液に、室温にて、2,4,6-トリフルオロ-1,3,5-トリアジン(フッ化シアヌル)(1.18 mL, 14.0 mmol)を加えた。該反応混合液を、室温にて終夜撹拌し、ジクロロメタン(300 mL)で希釈し、氷冷した0.5 N 塩酸水溶液(2 x 100 mL)で洗浄し、有機層を集めた。水層をジクロロメタン(200 mL)で逆抽出し、有機層を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボニルフルオリド(2.91 g, 11.2 mmol, 96％収率)を黄色の粘稠性の油状物として得た。該生成物はメタノールと容易に反応することが分かり、結局のところメチルエステルとして特徴づけられ、それは、HPLC 保持時間 = 2.56分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 272.3 (メチルエステル).
【０１３４】
1-F. tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化５４】
2012515787.tif 000056
アセトニトリル(20 mL)中の3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボニルフルオリド(2.91 g, 11.2 mmol)、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 3.43 g, 11.2 mmol)、およびヒューニッヒ塩基(2.55 mL, 14.6 mmol)の懸濁液を、室温で週末にかけて撹拌した。該反応混合液は完全に固化した(ピンクがかった黄褐色)が、ただしHPLCおよびLCMSにより完了と判断した。該反応混合物を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(150 mL)とジクロロメタン(150 mL)間に分配した。水層をジクロロメタン(2 x 100 mL)で抽出し、有機層を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、黄褐色の固形物を得て、それを酢酸エチル／ヘキサンの混合液(0-50％)を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(4.60 g; 78％)を、白色の結晶性固形物として得た。該物質をメタノール(〜75 mL)中に懸濁し、5分間、超音波処理した。MeOHを減圧下において除去し、残渣を、超音波処理してメタノール(〜50 mL)中に再懸濁させた。減圧濾過し、乾燥させ、tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(4.04 g, 7.67 mmol, 68％収率)を白色の結晶性固形物として得た。メタノール濾液を濃縮して、さらなるtert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(570 mg; 10％)をオフホワイト色がかった固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.12分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 527.1.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 1.47 (s, 9H) 3.28 - 3.37 (m, 3H), 3.60 (br. s., 2H), 3.74 (br. s., 2H), 7.49 (d, J=7.70 Hz, 2H), 7.53 - 7.62 (m, 3H), 7.69 (d, J=7.15 Hz, 2H), および 8.16 (d, J=7.70 Hz, 2H).
【０１３５】
1. 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸の製造
tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(6.12 g, 11.6 mmol)およびトリフルオロ酢酸(50.1 mL, 651 mmol)の混合液を、室温で1.5時間撹拌した。HPLCによると、1時間後に脱保護が完了したであった。TFAを減圧下において除去し、油状の残渣を水(100 mL)で希釈し、5分間、超音波処理した。得られた懸濁液を、一貫して白色の懸濁液が観察されるまで、さらに10分撹拌した。1N 水酸化ナトリウム水溶液を、該pHが〜4.5になるまで、少しずつ加えた(42 mLの1N NaOH)。時間とともに、該pHは3-4に戻り、さらなる1N 水酸化ナトリウム水溶液を加えた。該懸濁液を室温にて終夜撹拌した。1N 水酸化ナトリウム水溶液を数滴加えて、pHを4.5に再調整し、60分後に、該pHは安定したようであった。該固形物を減圧濾過により集め、水で数回洗浄し、減圧下において5時間乾燥させた。次いで、該固形物を、150 mLの丸底フラスコ中においてメタノール(110 mL)に懸濁させ、15分間、超音波処理した。超音波処理の間に、該溶液は非常に濃くなった。さらなる25 mLのメタノールを加え、該懸濁液を終夜撹拌した。
【０１３６】
生成物を減圧濾過により集め、メタノール(〜50 mL)で洗浄し、減圧下において乾燥させた。該固形物を、250 mLの丸底フラスコに移し、メタノール(115 mL)に再懸濁させ、5分間超音波処理し、60分間撹拌した。該固形物を減圧濾過により集め、メタノール(〜50 mL)で洗浄し、減圧下において十分に乾燥させて、1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(5.06 g, 10.7 mmol, 92％収率)を結晶性の白色の固形物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.79分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 471.3.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.20 - 3.46 (m, 5H), 3.66 (s, 2H), 7.53 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.60 - 7.70 (m, 5H), および 8.06 (d, J=7.70 Hz, 2H).
【０１３７】
HPLC 純度 100/99.8％, 保持時間 = 7.62分(SunFire C18 3.5u  4.6 x 150 mm カラム上において、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B(15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出220/254 nmに設定した。).
【０１３８】
HPLC 純度 100/99.9％, 保持時間 = 8.45分(XBridge Ph 3.5u 4.6 x 150 mmカラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B(15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０１３９】
実施例2
1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化５５】
2012515787.tif 000057
2-A. エチル 5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化５６】
2012515787.tif 000058
エーテル(80 mL)中の(Z)-エチル 2-クロロ-2-(ヒドロキシイミノ)アセテート(3.03 g, 20 mmol)およびエチニルベンゼン(4.39 mL, 40 mmol)の混合液に、室温にて、トリエチルアミン(5.58 mL, 40.0 mmol)／エーテル(20 mL)溶液を、60分かけて滴下した。該反応混合液を、室温で2時間撹拌した。該反応混合液を濾過し、該濾液を濃縮し、黄色の油状物を得て、それを酢酸エチル／ヘキサン混合液(0-12％)を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、エチル 5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(3.06 g, 14.09 mmol, 70％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 2.99分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODSカラム)。 MS:(M+H) = 218.12.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.45 (t, J=7.3Hz, 3H), 4.48 (q, J=7.3, 2H), 6.93 (s, 1H), 7.45 - 7.53 (m, 3H), および 7.77 - 7.85 (m, 2H).
【０１４０】
2-B. エチル 4-ヨード-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化５７】
2012515787.tif 000059
トリフルオロ酢酸(10 mL)中のエチル 5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(406 mg, 1.87 mmol)およびN-ヨードスクシンイミド(505 mg, 2.24 mmol)の混合液を室温にて1.5時間撹拌した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を酢酸エチル(50 mL)と水(50 mL)間に分配した。有機層を、1N 水酸化ナトリウム水溶液(50 mL)で洗浄し、2.5％亜硫酸水素ナトリウム水溶液(50 mL)で洗浄し、食塩水(50 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、エチル 4-ヨード-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(641 mg, 1.87 mmol, 100％収率)を薄黄色の油状物として得た。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.36分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 343.97.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.47 (t, J=7.1 Hz, 3H), 4.50 (q, J=7.0Hz, 2H), 7.52 - 7.56 (m, 3H), および 8.05 (m, 2H).
【０１４１】
大スケール:トリフルオロ酢酸(78 mL)中のエチル 5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(3.05 g, 14.0 mmol)およびN-ヨードスクシンイミド(3.79 g, 16.9 mmol)の混合液を、室温にて3.5時間撹拌した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を酢酸エチル(150 mL)と水(150 mL)間に分配した。有機層を、1N 水酸化ナトリウム水溶液(150 mL)で洗浄し、3％亜硫酸水素ナトリウム水溶液(2 x 150 mL)で洗浄し、食塩水(150 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、エチル 4-ヨード-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(4.69 g, 13.7 mmol, 97％収率)を薄黄色の油状物として得た。
【０１４２】
2-C. エチル 5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化５８】
2012515787.tif 000060
N,N-ジメチルホルムアミド(9 mL)およびHMPA(1.2 mL)中のエチル 4-ヨード-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(638 mg, 1.86 mmol)およびヨウ化銅(I)(70.8 mg, 0.372 mmol)の溶液に、室温にて、メチル 2,2-ジフルオロ-2-(フルオロスルホニル)アセテート(0.947 mL, 7.44 mmol)を一度に加えた。ただちに、該反応混合液を75-80℃の油浴に入れ、6時間撹拌した。次いで、該反応混合液を、室温に冷却し、終夜撹拌した。該反応混合液を、エチルエーテル(125 mL)と飽和塩化アンモニウム水溶液(125 mL)間に分配した。有機層を、飽和塩化アンモニウム水溶液(125 mL)で洗浄し、水(2 x 125 mL)で洗浄し、食塩水(50 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、酢酸エチル／ヘキサンの混合液(0-10％)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、エチル 5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(454 mg, 1.59 mmol, 86％収率)を無色の油状物として得た。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC保持時間 = 3.44分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODSカラム)。 MS:(M+H) = 286.01.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.45 (t, J=7.2 Hz, 3H), 4.51 (q, J=7.3 Hz, 2H), 7.52 - 7.62 (m, 3H), および 7.69 (d, J=7.5 Hz, 2H).
【０１４３】
大スケール:N,N-ジメチルホルムアミド(59.8 mL)およびHMPA(7.48 mL)中のエチル 4-ヨード-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(4.62 g, 13.5 mmol)およびヨウ化銅(I)(0.513 g, 2.69 mmol)の溶液に、室温にて、メチル 2,2-ジフルオロ-2-(フルオロスルホニル)アセテート(6.86 mL, 53.9 mmol)を一度に加えた。ただちに、該反応混合液を75-80℃の油浴に入れた。この温度で、3.5時間撹拌を続けた。室温に冷却した後、該反応混合液を氷浴中で冷却した。飽和塩化アンモニウム水溶液(〜50 mL)をゆっくりと加えて、該反応液をクエンチした。該混合液を、エチルエーテル(400 mL)と飽和塩化アンモニウム水溶液(400 mL)間に分配した。有機層を、飽和塩化アンモニウム水溶液(200 mL)で洗浄し、水(2 x 200 mL)で洗浄し、食塩水(50 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、酢酸エチル／ヘキサン混合液(0-10％)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、エチル 5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(3.6 g, 12.6 mmol, 94％収率)を無色の油状物として得た。
【０１４４】
2-D. 5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボン酸
【化５９】
2012515787.tif 000061
メタノール(100 mL)および水(20 mL)中のエチル 5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(3.6 g, 12.6 mmol)の溶液に、室温にて、水酸化リチウム, 一水和物(0.583 g, 13.9 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で30分間撹拌した。メタノールを減圧下において除去し、残渣を水(〜100 mL)で希釈した。エチルエーテル(200 mL)を加え、1N 塩酸水溶液を用いて水層のpHを＜1に調整した。該混合液を分液漏斗に移し、撹拌後、層を分離させた。有機層を食塩水(100 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して、5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボン酸(3.12 g, 12.13 mmol, 96％収率)を、白色の結晶性固形物として得た。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 2.58分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+Na) = 279.95.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.53 - 7.64 (m, 3H), および 7.70 (d, J=7.5 Hz, 2H).
【０１４５】
2-E. 5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボニルフルオリド
【化６０】
2012515787.tif 000062
ジクロロメタン(5 mL)中の5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボン酸(197 mg, 0.766 mmol)およびピリジン(0.074 mL, 0.919 mmol)の混合液に、室温にて、フッ化シアヌル(0.078 mL, 0.919 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で18時間撹拌した。該混合液をジクロロメタン(40 mL)で希釈し、氷-冷の0.5N 塩酸水溶液(20 mL)で洗浄した。水層をジクロロメタン(20 mL)で抽出し、有機層を合わせて、氷-冷水(20 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボニルフルオリド(199 mg, 0.768 mmol, 100％収率)を淡黄色の油状物として得た。該化合物は、HPLC保持時間 = 2.53分(メチルエステル)であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。
【０１４６】
2-F. tert-ブチル 1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-ベンジル)-アゼチジン-3-カルボキシレート
【化６１】
2012515787.tif 000063
アセトニトリル(2 mL)中の5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボニルフルオリド(100 mg, 0.386 mmol)および(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 118 mg, 0.386 mmol)の混合液に、室温にて、ヒューニッヒ塩基(0.081 mL, 0.463 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で3日間撹拌した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を、ジクロロメタン(30 mL)と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(30 mL)間に分配した。水層をジクロロメタン(2 x 20 mL)で抽出し、有機層を合わせて無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して、薄黄色の油状物を得た。該化合物を、酢酸エチル/ヘキサン混合液(0-70％)を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、tert-ブチル 1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(175 mg, 0.332 mmol, 86％収率)を、白色の結晶性固形物として得た。該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.34分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H) = 527.13.  1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.47 (s, 9H), 3.26 - 3.33 (m, 3H), 3.54 - 3.59 (m, 2H), 3.70 (s, 2H), 7.46 (d, J=8.28 Hz, 2H), 7.56 - 7.62 (m, 2H), 7.63 - 7.68 (m, 1H), 7.78 (d, J=7.28 Hz, 2H), および 8.16 (d, 2H).
【０１４７】
2. 1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸の製造
tert-ブチル 1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(293 mg, 0.556 mmol)／トリフルオロ酢酸(4 mL)溶液を、室温にて1.5時間静置した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を水(5 ml)中に懸濁させた。1N 水酸化ナトリウム水溶液を用いて、撹拌しながら、pHを〜4に調整した。得られた濃い懸濁液を室温で1時間撹拌した。沈殿物を減圧濾過により集め、減圧下において十分に乾燥させた。該化合物をメタノール中に懸濁させ、室温で18時間撹拌した。該生成物を、減圧濾過により集め、メタノールで洗浄し、減圧下において十分に乾燥させて、1-(4-(5-(5-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(194 mg, 0.412 mmol, 74.1％収率)を、白色の結晶性固形物として得た。
【０１４８】
該化合物は、4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.09分であった(YMC-Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 470.99.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.22 - 3.39 (m, 4H), 3.43 (br. s., 2H) 3.66 (br. s., 2H), 7.53 (d, J=7.70 Hz, 2H), 7.69 (d, J=7.15 Hz, 2H), 7.74 (d, J=7.15 Hz, 1H), 7.82 (d, J=7.15 Hz, 2H), 8.05 (d, J=8.25 Hz, 2H) ならびに 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 3.45 (m, 1H), 4.19-4.22 (m, 4H), 4.43 (s, 2H), 7.64 - 7.75 (m, 5H), 7.83 (d, J=7.5 Hz, 2H), および 8.28 (d, J=8.3 Hz, 2H).
【０１４９】
HPLC 純度 99.7/99.6％, 保持時間 = 8.95分 (SunFire C-18 3.5 ミクロン, 4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 15分, 100％B(18分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０１５０】
HPLC 純度 99.8/99.6％, 保持時間 = 9.78分(XBridge Ph 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 15分, 100％B(18分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０１５１】
実施例3
1-(4-(5-(4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸
【化６２】
2012515787.tif 000064
3-A. メチル 4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化６３】
2012515787.tif 000065
トルエン(6 mL)中のヘキサ-1-イニルベンゼン(0.274 mL, 1.56 mmol)、ジメチル 2-ニトロマロネート(0.421 mL, 3.12 mmol)、1-ブチル-3-メチルイミダゾリウムヘキサフルオロホスフェート(0.032 mL, 0.156 mmol)の溶液を、170℃で150分間、マイクロ波処理した。該反応混合液を、減圧下において濃縮し、該残渣を5％酢酸エチル／ヘキサンを用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、メチル 4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(0.142 g, 0.531 mmol, 34.1％収率)を澄明な無色の油状物として得た。該生成物は、HPLCによると、保持時間 = 3.11分で、97％純粋であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 260.2.
【０１５２】
3-B. 4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸
【化６４】
2012515787.tif 000066
メタノール(3.0 mL)および水(1.5 mL)中のメチル 4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(0.142 g, 0.548 mmol)および水酸化リチウム水和物(0.023 g, 0.548 mmol)の混合液を、室温で終夜撹拌した。該反応混合液を乾固するまで濃縮して、4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸, リチウム塩(0.134 g, 0.531 mmol, 97％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.82分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 246.15.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.84 (t, J=7.42 Hz, 3H), 1.23 - 1.32 (m, 2H), 1.44 - 1.53 (m, 2H), 2.66 - 2.72 (m, 2H), 7.44 - 7.49 (m, 1H), 7.53 (t, J=7.42 Hz, 2H), および 7.64 (d, J=7.15 Hz, 2H).
【０１５３】
3. 1-(4-(5-(4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
N,N-ジメチルホルムアミド(4 mL)中の4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸, リチウム塩(0.132 g, 0.523 mmol)、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 0.160 g, 0.523 mmol)、N1-((エチルイミノ)メチレン)-N3,N3-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン塩酸塩(0.100 g, 0.523 mmol)、およびHOBt(0.080 g, 0.523 mmol)の混合液を、室温にて60分間撹拌した後、60℃にて終夜加熱した。溶媒を減圧下において除去した。残渣を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（1％メタノール／ジクロロメタンで溶出）により精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.156 g)を淡黄色の固形物として得た。該エステル中間体は、HPLCによると、保持時間 = 3.40分で、＞99％純粋であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 515.0.
【０１５４】
該tert-ブチル 1-(4-(5-(4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボキシレート中間体(0.156 g)を、トリフルオロ酢酸(4.03 mL, 52.3 mmol)中において30分間撹拌し、減圧下において濃縮して、目的の生成物を、黄色の粘稠性の油状物として得た。該油状物を、ジクロロメタン中に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。該生成物を（おそらくナトリウム塩として）含む有機層を、減圧下において濃縮した。白色で固体の残渣を水中に溶解させ(pH〜9)、pHを、濃塩酸を用いて〜4.5に調整した。得られた白色の沈殿物を減圧濾過により集め、乾燥させた(HPLCによると、水層中にさらなる生成物はなかった)。該固形物をメタノールで希釈して、5分間、超音波処理した。メタノールを減圧下において除去した。得られた固形物をもう一度メタノールで希釈し、超音波処理して、減圧濾過により集め、メタノールで洗浄した。得られた固形物を十分に乾燥させ、1-(4-(5-(4-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(0.102 g, 0.222 mmol, 42.5％収率)を白色の結晶性固形物として得た(メタノール濾過物の中にいくらかの生成物が残っていた)。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.11分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 459.1.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.91 (t, J=7.42 Hz, 3H), 1.37 - 1.46 (m, 2H), 1.62 - 1.70 (m, 2H), 3.00 - 3.06 (m, 2H), 3.23 (br. s., 3H), 3.43 (br. s., 2H), 3.65 (s, 2H), 7.52 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.59 - 7.68 (m, 3H), 7.83 (d, J=7.15 Hz, 2H), 8.06 (d, J=8.25 Hz, 2H), および 12.27 (s, 1H).
【０１５５】
実施例4
1-(4-(5-(4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸
【化６５】
2012515787.tif 000067
4-A. メチル 4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化６６】
2012515787.tif 000068
トルエン(5 mL)中の(4-メチルペンタ-1-イニル)ベンゼン(0.247 g, 1.56 mmol)、ジメチル 2-ニトロマロネート(0.421 mL, 3.12 mmol)、1-ブチル-3-メチルイミダゾリウムヘキサフルオロホスフェート(0.032 mL, 0.156 mmol)の溶液を、170℃で150分間マイクロ波処理した。HPLCによると、該反応は〜40-50％完了しており、該マイクロ波条件で360分間(170℃)再度処理した。トルエンをデカントして除くと、暗色のガム状物質が残り、それを、酢酸エチルで数回トリチュレートした。有機層を合わせて、減圧下において濃縮した。残渣を、5％酢酸エチル／ヘキサンを用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(0.122 g, 0.470 mmol, 30.2％収率)を澄明な無色の油状物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.96分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 259.9.  1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.88 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 1.89 (dt, J=13.75, 6.87 Hz, 1H), 2.80 (d, J=7.15 Hz, 2 H), 4.00 (s, 3H), 7.45 - 7.53 (m, 3H), 7.73 (d, J=6.60 Hz, 2H).
【０１５６】
4-B. 4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸
【化６７】
2012515787.tif 000069
メタノール(2.5 mL)および水(1.25 mL)中のメチル 4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(0.122 g, 0.470 mmol)および水酸化リチウム水和物(0.020 g, 0.470 mmol)の混合液を、室温にて終夜撹拌した。該反応混合液を乾固するまで濃縮して、4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸, リチウム塩(0.119 g, 0.472 mmol, 100％収率)を、白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.68分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA.  LC/MS M+1 = 245.8.
【０１５７】
4. 1-(4-(5-(4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
N,N-ジメチルホルムアミド(3.6 mL)中の4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸, リチウム塩(0.119 g, 0.472 mmol)、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 0.144 g, 0.472 mmol)、N1-((エチルイミノ)メチレン)-N3,N3-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン塩酸塩(0.090 g, 0.472 mmol)、およびHOBt(0.072 g, 0.472 mmol)の混合液を、室温で15分間撹拌した後、60℃で終夜加熱した。該反応混合液を、酢酸エチルで希釈し、炭酸水素ナトリウム水溶液(2x)で洗浄し、10％塩化リチウム水溶液(2x)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。該生成混合液を減圧下において濃縮した。残渣を、1％メタノール／ジクロロメタン混合液を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.179 g)を、淡黄色の固形物として得た。該エステル中間体は、HPLCによると、保持時間 = 3.27分で、98％純粋であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 515.4.
【０１５８】
該tert-ブチル 1-(4-(5-(4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボキシレート中間体を、トリフルオロ酢酸(3.64 mL, 47.2 mmol)中において30分間撹拌し、減圧下において濃縮して、目的の生成物を淡黄色の固形物として得た。該固形物を、いくらかのメタノールとともに、超音波処理して、水中に分散させた。該pHを〜4に調整し、得られた固形物を減圧濾過により集め、水(3x)で洗浄し、乾燥させた。白色の固形物を、超音波処理とともに、メタノールでトリチュレートし、濾過して、1-(4-(5-(4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(0.074 g, 0.161 mmol, 34.2％収率)を、白色の結晶性固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.99分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4 分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 459.3.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.87 (d, J=6.60 Hz, 6H), 1.93 (ddd, J=13.61, 6.74, 6.60 Hz, 1H), 2.99 (d, J=7.15 Hz, 2H), 3.24 (br. s., 3H), 3.43 (s, 2 H), 3.66 (s, 2H), 7.53 (d, J=7.70 Hz, 2H), 7.58 - 7.67 (m, 3H), 7.87 (d, J=6.60 Hz, 2H), および 8.06 (d, 2H). 該メタノール濾液を、減圧下において濃縮し、さらなる1-(4-(5-(4-イソブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(0.034 g, 0.066 mmol, 13.99％収率)を、淡黄色の固形物として得た(HPLC 純度 = 89％)。
【０１５９】
実施例5
1-(2-ブロモ-4-(5-(4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化６８】
2012515787.tif 000070
5-A. メチル 4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化６９】
2012515787.tif 000071
メシチレン(5 mL)中のブタ-1-イニルベンゼン(404 mg, 3.11 mmol)およびジメチル ニトロマロネート(0.381 mL, 2.82 mmol)の溶液を、150℃まで24時間加熱した。該反応混合液を濃縮して、残渣をヘキサン/酢酸エチル(10/1)を用いてシリカゲルカラムにて精製し、メチル 4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(194 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.25分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 232+.
【０１６０】
5-B. 4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸
【化７０】
2012515787.tif 000072
メタノール(3 mL)中のメチル 4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(194 mg, 0.839 mmol)および1N 水酸化ナトリウム水溶液(1.26 mL, 1.258 mmol)の溶液を、マイクロ波下において100℃まで10分間加熱した。該反応混合液を、pHが約4になるまで酢酸を用いて酸性化した。該混合液を濃縮し、残渣を水(2 mL)に懸濁させ、20分間撹拌した。該固形物を減圧濾過により集め、乾燥させて、4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(148 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.93分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100.  LC-MS: M+1 = 218+。
【０１６１】
5-C. 3-ブロモ-4-(ブロモメチル)ベンゾニトリル
【化７１】
2012515787.tif 000073
3-ブロモ-4-メチルベンゾニトリル(1 g, 5.10 mmol)／クロロホルム(20 mL)溶液を、40-50℃まで加熱し、N-ブロモスクシンイミド(0.953 g, 5.36 mmol)を一度に加え、続いてAIBN(8.38 mg, 0.051 mmol)を加えた。1.5時間後、さらなるAIBN(20mg)を加え、該反応液を50℃で終夜撹拌した。さらなるAIBN(20mg)およびN-ブロモスクシンイミド(1.1g)を加え、還流コンデンサーを取り付け、該溶液を還流加熱した。数時間後、さらなるAIBN(20mg)を加え、該反応液を還流で終夜撹拌した。該反応液を、水および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の添加によりクエンチした。有機相を分離し、減圧濃縮して、フラッシュカラムクロマトグラフィー(120g シリカ, 0％-20％酢酸エチル／ヘキサンを用いて溶出)により精製して、3-ブロモ-4-(ブロモメチル)ベンゾニトリルを淡黄色の固形物として得た(800 mg, 2.88 mmol)。 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 4.70 (s, 2H), 7.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H).
【０１６２】
5-D. (Z)-tert-ブチル 1-(2-ブロモ-4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化７２】
2012515787.tif 000074
撹拌子を有する反応バイアルに、3-ブロモ-4-(ブロモメチル)ベンゾニトリル(100 mg, 0.364 mmol)、tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート酢酸塩, Int.1-C (95 mg, 0.436 mmol)、DMF(1 mL)、およびDIPEA(0.381 mL, 2.182 mmol)を入れた。該バイアルをアルゴンでフラッシュし、密封して、反応ブロック上に置き、それを65℃まで加熱した。5時間後、該反応液を室温まで冷却し、そのままプレパラティブHPLC(溶離液として0.1％TFAを添加したメタノール/水)により精製した。生成物画分に炭酸水素ナトリウム(200 mg)／水(4 mL)溶液を加え、次いで揮発性物質を減圧除去し、白色の固形物を得て、それをメタノール(10 mL)中においてスラリーにした。ヒドロキシルアミン塩酸塩(37.6 mg, 0.541 mmol)を加え、該反応液を、50℃に設定した油浴中で、終夜加熱した。さらなるヒドロキシルアミン塩酸塩(30 mg)ならびに炭酸水素ナトリウム(150 mg)を加え、50℃で8時間加熱を続けた。揮発性物質を減圧除去し、残渣をプレパラティブHPLC(溶離液として0.1％TFA含有メタノール/水)により精製した。画分を含む生成物のpHを、炭酸水素ナトリウムを用いて〜7に調整し、溶媒を濃縮し、得られた水溶液をDCMで抽出した。有機物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濃縮して、(Z)-tert-ブチル 1-(2-ブロモ-4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(12.6 mg, 0.032 mmol)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 0.72分であった - カラム: BEH C18 2.1 x 50 mm 1.7u (グラジエント:1分かけて、0.05％TFA含有2％MeCN/水〜0.05％TFA含有98％MeCN/水); LC/MS M+1 = 384/386。
【０１６３】
5. 1-(2-ブロモ-4-(5-(4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
DMF(2 mL)中の4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸, Int.5-D (7.83 mg, 0.036 mmol)、EDCI(6.91 mg, 0.036 mmol)、およびHOBt(5.52 mg, 0.036 mmol)の溶液を、室温で5分間撹拌した後、(Z)-tert-ブチル 1-(2-ブロモ-4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.5-B (12.60 mg, 0.033 mmol)を含有するフラスコに移した。該反応液を油浴に入れ、55℃で終夜加熱した後、3時間、該温度を90℃まで上昇させた。該溶液を冷却し、揮発性物質を減圧下において除去した。得られた残渣を、室温で3時間、TFA(2 mL)で処理した。TFAをエバポレートし、残渣をトリエチルアミン(3-4 mL)で処理した後、再度、乾固するまでエバポレートした。残渣を4 gのシリカゲルIscoカートリッジ(DCMで予め平衡化した)にロードし、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。溶離液:0-20％MeOH／DCM(5％NH4OH含有)。画分を含有する生成物をエバポレートし、高真空下に置いて、1-(2-ブロモ-4-(5-(4-エチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸を淡黄色の固形物として得た(13.1 mg, 0.024 mmol)。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.97分であった - カラム: PHENOMENEX（登録商標） Luna 3u C18 4.6 x 30 mm (5分のグラジエント; 4 mL/分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.05％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.05％TFA。 LC/MS M+1 = 509/511.  1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.39 (t, J=7.5 Hz, 3H), 3.11 (q, J=7.5 Hz, 2H), 3.36-3.44 (m, 1H), 3.92 (dd, J=8.5 Hz, 8.5 Hz 2H), 4.01 (dd, J=8.8 Hz, 9.0 Hz 2H), 4.26 (s, 2 H), 7.56-7.72 (m, 4H), 7.81-7.83 (m, 2H), 8.22 (dd, J= 6.3, 1.8 Hz, 1H), 8.42 (d, 1.8 Hz).
【０１６４】
実施例6
1-(4-(5-(4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化７３】
2012515787.tif 000075
6-A. (シクロプロピルエチニル)ベンゼン
【化７４】
2012515787.tif 000076
N,N-ジメチルホルムアミド(20 mL)中のヨードベンゼン(0.549 mL, 4.90 mmol)、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)-パラジウム(II)(0.206 g, 0.294 mmol)、ヨウ化銅(I)(0.047 g, 0.245 mmol)およびジイソプロピルアミン(3.49 mL, 24.5 mmol)の脱気した溶液に、シクロプロピルアセチレン(0.622 mL, 7.35 mmol)を加えた。該反応混合液を75℃まで45分間加熱した。次いで、該反応混合液を酢酸エチル(150 mL)で希釈し、10％塩化リチウム水溶液(2 x 100mL)で洗浄し、2M 水酸化アンモニウム水溶液(100 mL)で洗浄し、食塩水(100 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮して粗生成物を得て、それをヘキサン/ジクロロメタン(10/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、(シクロプロピルエチニル)ベンゼン(691 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.40分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。
【０１６５】
6-B. メチル 4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化７５】
2012515787.tif 000077
メシチレン(4 mL)中の(シクロプロピルエチニル)ベンゼン(300 mg, 2.110 mmol)およびジメチル ニトロマロネート(0.854 mL, 6.33 mmol)の溶液を、150℃まで16時間加熱した。該反応混合液を濃縮し、粗生成物を得て、それをヘキサン/酢酸エチル(10/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレートを得た。該化合物を、プレパラティブHPLC[カラム: PHENOMENEX（登録商標） S10 30X100 mm; グラジエント時間: 10分; 流速 = 40 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.1％TFA; 開始％B = 20; 最終％B = 100]により再度精製し、メチル 4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(170 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.77分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 244+.
【０１６６】
6-C. 4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸
【化７６】
2012515787.tif 000078
メタノール(6 mL)中のメチル 4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(170 mg, 0.699 mmol)および1N 水酸化ナトリウム水溶液(1 mL, 1.05 mmol)の溶液を、密閉チューブにおいて1時間、80℃まで加熱した。該反応混合液を、pHが〜4になるまで、酢酸を用いて酸性化した。該混合液を濃縮し、残渣をプレパラティブHPLCにより精製して、4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(124 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.81分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 230+.
【０１６７】
6. 1-(4-(5-(4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
アセトニトリル(1 mL)中の4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(22 mg, 0.096 mmol)、HOBt(26.5 mg, 0.173 mmol)、およびジイソプロピルエチルアミン(0.067 mL, 0.384 mmol)の溶液に、EDC(43.2 mg, 0.226 mmol)および(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 29.3 mg, 0.096 mmol)を加えた。該反応混合液を80℃で2時間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、残渣をプレパラティブHPLCにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得た。
【０１６８】
ジクロロメタン(0.5 mL)およびトリフルオロ酢酸(0.5 mL)中のtert-ブチル 1-(4-(5-(4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの溶液を室温で30分間撹拌した。減圧下において濃縮し、1-(4-(5-(4-シクロプロピル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩(26.2 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.06分であった。 カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 443+.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 0.41 - 0.47 (m, 2H), 1.09 - 1.16 (m, 2H), 2.12 (tt, J=8.31, 5.36 Hz, 1H), 3.66 - 3.77 (m, 1H), 4.35 - 4.41 (m, 4H), 4.53 (s, 2H), 7.56 - 7.64 (m, 3H), 7.70 (d, J=8.53 Hz, 2H), 7.95 - 8.00 (m, 2H), および 8.32 (d, J=8.28 Hz, 2H).
【０１６９】
実施例7
1-(4-(5-(4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2-2-2トリフルオロ酢酸塩
【化７７】
2012515787.tif 000079
7-A. (3,3-ジメチルブタ-1-イニル)ベンゼン
【化７８】
2012515787.tif 000080
N,N-ジメチルホルムアミド(20 mL)中のヨードベンゼン(0.549 mL, 4.90 mmol)、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)-パラジウム(II)(0.206 g, 0.294 mmol)、ヨウ化銅(I)(0.047 g, 0.245 mmol)、およびジイソプロピルアミン(3.49 mL, 24.5 mmol)の脱気した溶液に、3,3-ジメチルブタ-1-イン(0.896 mL, 7.35 mmol)を加えた。該反応混合液を75℃まで45分間加熱した。次いで、該反応混合液を酢酸エチル(150 mL)で希釈し、10％塩化リチウム水溶液(2 x 100mL)で洗浄し、2M 水酸化アンモニウム水溶液で洗浄し、食塩水(100 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮後、ヘキサン/ジクロロメタン(10/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、(3,3-ジメチルブタ-1-イニル)ベンゼン(740 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.78分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。
【０１７０】
7-B. メチル 4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化７９】
2012515787.tif 000081
メシチレン(5 mL)中の(3,3-ジメチルブタ-1-イニル)ベンゼン(400 mg, 2.53 mmol)およびジメチル ニトロマロネート(0.853 mL, 6.32 mmol)の溶液を、150℃で48時間加熱した。該反応混合液を濃縮し、残渣を、ヘキサン/酢酸エチル(10/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(101 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.39分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 260+.
【０１７１】
7-C. 4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸, ナトリウム塩
【化８０】
2012515787.tif 000082
メタノール(1 mL)中のメチル 4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(26 mg, 0.100 mmol)および1N 水酸化ナトリウム水溶液(150 μL, 0.150 mmol)の溶液を、マイクロ波によって、100℃で10分間加熱した。該反応混合液を濃縮して、4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸, ナトリウム塩(30 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.97分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 246+.
【０１７２】
7. 1-(4-(5-(4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
アセトニトリル(1 mL)中の4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(25 mg, 0.102 mmol)、HOBt(28.1 mg, 0.183 mmol)、およびジイソプロピルエチルアミン(0.071 mL, 0.408 mmol)の溶液に、EDC(45.9 mg, 0.240 mmol)および(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 31.1 mg, 0.102 mmol)を加えた。該反応混合液を80℃で5時間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、残渣を酢酸エチル(3 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、水(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、プレパラティブHPLCにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボキシレートを得た。
【０１７３】
ジクロロメタン(0.5 mL)およびトリフルオロ酢酸(0.5 mL)中のtert-ブチル 1-(4-(5-(4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの溶液を、室温で30分間撹拌した。減圧下において濃縮して、1-(4-(5-(4-tert-ブチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩(30.5 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.12分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 459+.  1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.27 (s, 9H), 3.68 - 3.76 (m, 1H), 4.39 (d, J=7.70 Hz, 4H), 4.54 (s, 2H), 7.53 - 7.57 (m, 4H), 7.57 - 7.63 (m, 1H), 7.70 (d, J=8.25 Hz, 2H), および 8.29 (d, J=8.25 Hz, 2H).
【０１７４】
実施例8
1-(4-(5-(5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化８１】
2012515787.tif 000083
8-A. (5,5,5-トリフルオロペンタ-1-イニル)ベンゼン
【化８２】
2012515787.tif 000084
N,N-ジメチルホルムアミド(2.5 mL)中の1,1,1-トリフルオロ-3-ヨードプロパン(0.052 mL, 0.438 mmol)、Pd2(dba)3(24.0 mg, 0.026 mmol)、トリ-2-フリルホスフィン(10.2 mg, 0.044 mmol)およびヨウ化銅(I)(8.33 mg, 0.044 mmol)の溶液に、窒素下において、トリブチル(フェニルエチニル)スタンナン(0.178 mL, 0.481 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で16時間撹拌した。該反応混合液を、酢酸エチル(50 mL)で希釈し、水(10 mL)で洗浄し、食塩水(10 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサンを用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、(5,5,5-トリフルオロペンタ-1-イニル)ベンゼン(50 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 4.08分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。
【０１７５】
8-B. メチル 5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化８３】
2012515787.tif 000085
トルエン(3 mL)中の(5,5,5-トリフルオロペンタ-1-イニル)ベンゼン(215 mg, 1.09 mmol)、ジエチル ニトロマロネート(0.758 mL, 4.34 mmol)、および1-ブチル-3-メチルイミダゾリウムヘキサフルオロホフフェート(0.023 mL, 0.108 mmol)の溶液を、170℃まで150分間加熱した。該反応混合液を、酢酸エチル(50 mL)で希釈し、水(10 mL)で洗浄し、食塩水(10 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサン/酢酸エチル(9/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(72 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.61分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。
【０１７６】
8-C. 5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-カルボン酸
【化８４】
2012515787.tif 000086
メタノール(1 mL)中のメチル 5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(25 mg, 0.084 mmol)および1N 水酸化ナトリウム水溶液(125 μL, 0.125 mmol)の溶液を、23℃で2時間加熱した。該反応混合液に、pHが〜5になるまで酢酸を加えた。該混合液を、プレパラティブHPLCにより精製して、5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-カルボン酸(5 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.16分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 286+.
【０１７７】
8. 1-(4-(5-(5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
アセトニトリル(0.5 mL)中の5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-カルボン酸(5 mg, 0.018 mmol)、HOBt(4.83 mg, 0.032 mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(12.3 μL, 0.070 mmol)の溶液に、EDC(7.90 mg, 0.041 mmol)および(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 5.35 mg, 0.018 mmol)を加えた。該反応混合液を23℃で2.5時間撹拌した。該混合液を濃縮し、残渣を、酢酸エチル(3 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、水(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。該混合液を濃縮し、アセトニトリル(0.5 mL)に溶解させた。1M フッ化テトラブチルアンモニウム／テトラヒドロフラン(35 μL, 0.035 mmol)溶液を加え、該反応混合液を、1時間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、残渣を酢酸エチル(3 mL)で希釈し、水(1 mL)で洗浄し、飽和炭酸ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサン/酢酸エチル(7/3)を用いてプレパラティブTLCプレートで精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得た。
【０１７８】
ジクロロメタン(0.5 mL)およびトリフルオロ酢酸(0.5 mL)中のtert-ブチル 1-(4-(5-(5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの溶液を、室温で2時間撹拌した。減圧下において濃縮し、1-(4-(5-(5-フェニル-4-(3,3,3-トリフルオロプロピル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩(5.75 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.23分であった - カラム: YMC COMBISCREEN（登録商標） ODS-A 4.6X50 mm S-5; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.1％TFA。  LC-MS: M+1 = 499+.
【０１７９】
実施例9
1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化８５】
2012515787.tif 000087
9-A. メチル 5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化８６】
2012515787.tif 000088
トルエン(15.0 mL)およびメタノール(3 mL)中の5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(0.86 g, 4.55 mmol)の溶液に、2MのTMS-ジアゾメタン／ヘキサン溶液(3.1 mL, 6.14 mmol)を、室温にて滴下した。該反応混合液を30分間撹拌し、濃縮した。残渣をメタノール(3 mL)中に分散させ、5分間撹拌し、濾過して、メチル 5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(897 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.67分であった : YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 204+.
【０１８０】
9-B. メチル 4-ブロモ-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化８７】
2012515787.tif 000089
5％発煙硝酸／酢酸(2 mL)中のメチル 5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(100 mg, 0.492 mmol)およびN-ブロモスクシンイミド(119 mg, 0.669 mmol)の溶液を、マイクロ波によって、150℃まで10分間加熱した。該反応混合液を濃縮し、ヘキサン/酢酸エチル(10/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 4-ブロモ-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(108 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.21分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 284+.
【０１８１】
9-C. メチル 4-アセチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化８８】
2012515787.tif 000090
ジオキサン(5 mL)中のメチル 4-ブロモ-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(358 mg, 1.269 mmol, 工程9-Bにおける記載と同様の方法で製造した)およびトリブチル(1-エトキシビニル)スズ(0.858 mL, 2.54 mmol)の溶液を、100℃で24時間加熱した。該反応混合液に、1N 塩酸水溶液(2.54 mL, 2.54 mmol)を加え、該混合液を室温で1時間撹拌した。該反応混合液を、酢酸エチル(100 mL)で希釈し、水(30 mL)で洗浄し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(30 mL)で洗浄し、食塩水(30 mL)で洗浄した。該混合液を〜5 mLまで濃縮し、フッ化カリウム(0.059 mL, 2.54 mmol)／水（2 mL）を加え、該混合液を10分間撹拌した。該固形物を濾過し、酢酸エチルで洗浄し、該濾液を、水(10 mL)で洗浄し、食塩水(10 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサン/酢酸エチル(10/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 4-アセチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(105 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.69分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 246+.
【０１８２】
9-D. メチル 4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化８９】
2012515787.tif 000091
メチル 4-アセチル-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(105 mg, 0.428 mmol)を、エタノール(5.00 μL)が入っている反応容器に加え、デオキソフルオル（deoxofluor）(513 μL, 2.78 mmol)を加え、該反応混合液を85℃まで6時間加熱した。該反応混合液を、温度を0-5℃以下に維持しながら、20 mLの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチした。該混合液を酢酸エチル(30 mL)で抽出し、有機相を水(15 mL)で洗浄し、食塩水(15 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサン/酢酸エチル(9/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(63 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.13分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 268+.
【０１８３】
9-E. 4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸, ナトリウム塩
【化９０】
2012515787.tif 000092
メタノール(1 mL)中のメチル 4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(62 mg, 0.232 mmol)および1N 水酸化ナトリウム水溶液(11.1 mg, 0.278 mmol)の溶液を23℃で1時間撹拌した。該反応混合液を、減圧下において濃縮して、4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸, ナトリウム塩(68 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.39分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 254+.
【０１８４】
9. 1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸
アセトニトリル(2 mL)中の4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(58.7 mg, 0.232 mmol)、HOBt(64.0 mg, 0.418 mmol)、およびジイソプロピルエチルアミン(0.162 mL, 0.928 mmol)の溶液に、EDC(105 mg, 0.545 mmol)および(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 70.8 mg, 0.232 mmol)を加えた。該反応混合液を80℃で2時間撹拌した後、濃縮した。残渣を、酢酸エチル(3 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、水(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、プレパラティブHPLCにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得た。
【０１８５】
ジクロロメタン(0.5 mL)およびトリフルオロ酢酸(0.5 mL)中のtert-ブチル 1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの溶液を、室温で30分間撹拌した。減圧下において濃縮して、1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロエチル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸(19 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.94分であった - カラム: YMC COMBISCREEN（登録商標） ODS-A  4.6X50 mm S-5; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.1％TFA。 LC-MS: M+1 = 467+.  1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 2.24 (t, J=18.56 Hz, 3H) 3.64 - 3.73 (m, 1H), 4.35 - 4.39 (m, 4H), 4.52 (s, 2H), 7.58 - 7.67 (m, 3H), 7.70 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.76 (d, J=7.15 Hz, 2H), および 8.29 (d, J=8.25 Hz, 2H).
【０１８６】
実施例10
1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, トリフルオロ酢酸塩
【化９１】
2012515787.tif 000093
10-A. 1-フェニルペンタ-1-イン-3-オール
【化９２】
2012515787.tif 000094
N,N-ジメチルホルムアミド(6 mL)中のヨードベンゼン(0.110 mL, 0.980 mmol)、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)クロリド(41.3 mg, 0.059 mmol)、ヨウ化銅(I)(9.34 mg, 0.049 mmol)、およびジイソプロピルアミン(0.559 mL, 3.92 mmol)の脱気した溶液に、ペンタ-1-イン-3-オール(124 mg, 1.47 mmol)を加えた。該反応混合液を85℃まで6時間加熱した。該反応混合液を、酢酸エチル(50 mL)で希釈し、10％塩化リチウム水溶液(10 mL)で洗浄し、2M 水酸化アンモニウム水溶液(10 mL)で洗浄し、食塩水(10 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサン/酢酸エチル(3/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、1-フェニルペンタ-1-イン-3-オール(180 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.74分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。
【０１８７】
10-B. 1-フェニルペンタ-1-イン-3-オン
【化９３】
2012515787.tif 000095
オキサリルクロリド(0.168 mL, 1.92 mmol)／ジクロロメタン(2.5 mL)溶液に、-78℃にて、ジメチルスルホキシド(0.231 mL, 3.26 mmol)を滴下し、続いて1-フェニルペンタ-1-イン-3-オール(61.4 mg, 0.383 mmol)／ジクロロメタン（0.5 mL）を滴下した。該反応混合液を-78℃で1時間撹拌し、次いでトリエチルアミン(0.534 mL, 3.83 mmol)を滴下した。該反応混合液を室温まで昇温させ、1時間撹拌した。該反応混合液を、ジクロロメタン(2.5 mL)で希釈し、水(1 mL)で洗浄し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサン/酢酸エチル(10/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、1-フェニルペンタ-1-イン-3-オン(37 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.88分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 159+.
【０１８８】
10-C. エチル 5-フェニル-4-プロピオニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化９４】
2012515787.tif 000096
トルエン(1 mL)中の1-フェニルペンタ-1-イン-3-オン(36.7 mg, 0.232 mmol)およびトリエチルアミン(0.113 mL, 0.812 mmol)の溶液に、120℃にて、(Z)-エチル 2-クロロ-2-(ヒドロキシイミノ)アセテート(105 mg, 0.696 mmol)／トルエン(1 mL)を滴下した。該反応混合液を120℃で16時間撹拌した。該反応混合液に、さらなる(Z)-エチル 2-クロロ-2-(ヒドロキシイミノ)アセテート(105 mg, 0.696 mmol)およびトリエチルアミン(0.113 mL, 0.812 mmol)を加え、該反応混合液を140℃にて3日間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、酢酸エチル(5 mL)で希釈し、水(1 mL)で洗浄し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサン/酢酸エチル(10/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、エチル 5-フェニル-4-プロピオニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(14.7 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.15分であった - カラム: YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: 274+.
【０１８９】
10-D. エチル 4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化９５】
2012515787.tif 000097
エチル 5-フェニル-4-プロピオニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(19.4 mg, 0.071 mmol)、ビス(2-メトキシエチル)アミノ-サルファートリフルオリド(131 μL, 0.710 mmol)、およびエタノール(0.829 μL, 0.014 mmol)の混合液を、85℃で16時間加熱した。該反応混合液を、該温度を0-5℃間に維持しながら、2 mLの飽和炭酸水素ナトリウムでクエンチした。該反応混合液を、酢酸エチル(2 x 2 mL)で抽出し、有機相を水(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、ヘキサン/酢酸エチル(9/1)を用いてプレパラティブTLCプレートで精製して、エチル 4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(8.9 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.47分であった - YMC S5 COMBISCREEN（登録商標） 4.6X50 mm; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.2％H3PO4; 開始％B = 0; 最終％B = 100。 LC-MS: M+1 = 296+.
【０１９０】
10-E. 4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸
【化９６】
2012515787.tif 000098
エタノール(1 mL)中のエチル 4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(8.9 mg, 0.030 mmol)および1N 水酸化ナトリウム水溶液(36μL, 0.036 mmol)の溶液を、室温で30分間撹拌し、次いで減圧下において濃縮した。残渣を、水(0.5 mL)中に懸濁し、1N 塩酸水溶液を用いてpH〜3まで酸性化した。該水溶液を、酢酸エチル(3 x 2 mL)で抽出し、有機層を合わせて、水(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(8.0 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.69分であった - カラム: YMC COMBISCREEN（登録商標） ODS-A 4.6X50 mm S-5; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.1％TFA。
【０１９１】
10-F. 4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボニルフルオリド
【化９７】
2012515787.tif 000099
ジクロロメタン(1 mL)中の4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(8.4 mg, 0.031 mmol)およびピリジン(3.05 μL, 0.038 mmol)の溶液に、フッ化シアヌル(3.18 μL, 0.038 mmol)を加え、該反応混合液を室温で2時間撹拌した。該反応混合液をジクロロメタン(2 mL)で希釈し、氷-水(2 x 1 mL)で洗浄した。水層をジクロロメタン(2 x 1 mL)で抽出し、有機層を合わせて、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボニルフルオリド(7.2 mg)を得た。
【０１９２】
10. 1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
アセトニトリル(1 mL)中の4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-カルボニルフルオリド(7.2 mg, 0.027 mmol)および(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 8.17 mg, 0.027 mmol)の溶液に、ヒューニッヒ塩基(9.34 μL, 0.053 mmol)を加え、該反応混合液を室温で3日間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、酢酸エチル(3 ml)で希釈し、水(1 mL)で洗浄し、飽和炭酸ナトリウム水溶液(1 mL)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。該混合液を濃縮し、アセトニトリル(1 mL)中に溶解させ、1M フッ化テトラブチルアンモニウム／テトラヒドロフラン溶液(53 μL, 0.053 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で5時間撹拌した。該反応混合液を濃縮し、酢酸エチル(3 ml)で希釈し、水(1 ml)で洗浄し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(1ml)で洗浄し、食塩水(1 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮した後、プレパラティブHPLCにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートを得た。
【０１９３】
ジクロロメタン(0.5 mL)およびトリフルオロ酢酸(0.5 mL)中のtert-ブチル 1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートの溶液を室温で30分間撹拌した。該反応混合液を減圧下において濃縮して、1-(4-(5-(4-(1,1-ジフルオロプロピル)-5-フェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩(1.8 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.15分であった - カラム: YMC COMBISCREEN（登録商標） ODS-A  4.6X50 mm S-5; グラジエント時間: 4分; 流速 = 4 ml/分; 溶媒A = 10％MeOH-90％水-0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH-10％水-0.1％TFA。 LC-MS: 481+.  1H NMR (500 MHz, MeOH) δ ppm 1.06 (t, J=7.56 Hz, 3H), 2.46 - 2.59 (m, 2H), 3.70 (５重線, J=8.25 Hz, 1H), 4.33 - 4.41 (m, 4H), 4.53 (s, 2H), 7.58 - 7.67 (m, 3H), 7.70 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.75 (d, J=7.15 Hz, 2H), および 8.28 (d, J=8.25 Hz, 2H).
【０１９４】
実施例11
1-(4-(5-(3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化９８】
2012515787.tif 000100
11-A. エチル 2-ブロモヘキサ-2-エノエート
【化９９】
2012515787.tif 000101
断熱冷却浴において冷却した、NaH, 60％(0.800 g, 20.00 mmol)／THF(40 mL)の懸濁液に、15分かけて少しずつ、ホスホノ酢酸トリエチル(4.00 mL, 20 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で45分間撹拌した。その後、臭素(1.030 mL, 20.00 mmol)を15分かけて滴下した。該オレンジ色は、該反応液への各滴下の直後、退色した。しかしながら、添加が完了したとき、薄いオレンジ色が残留しており、該反応混合液は薄いオレンジ色の懸濁液であった。この懸濁液を40℃まで10分間昇温させ、その後、室温で1時間撹拌した。該反応混合液を10℃まで冷却した。NaH, 60％(0.800 g, 20.00 mmol)を一度に加え、該反応混合液を室温まで昇温させ、45分間撹拌した。気体の発生が観察された。その後、ブチルアルデヒド(1.803 mL, 20.00 mmol)を2分かけて加え、該反応混合液を室温で18時間撹拌した。該反応混合液を、Et2O(200 ml)および水(100 ml)間に分配した。有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(150 ml)、水(100 ml)および食塩水(100 ml)で洗浄した。乾燥させ(MgSO4)て濾過した後、有機層を薄黄色の液状物まで濃縮して、それを5 x 20 cm シリカゲルカラム（0-5％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する画分を濃縮して、(Z)-エチル 2-ブロモヘキサ-2-エノエート(3.61 g, 16.33 mmol, 82％収率)を無色の液状物として得た。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.81分(PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 221/223.08. 注:該生成物はオレフィン異性体の〜3:1の混合物である。該混合物をそのまま次の工程に用いた。
【０１９５】
11-B. エチル 3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-カルボキシレート
【化１００】
2012515787.tif 000102
DCM(15 mL)中の(Z)-N-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド(770 mg, 4.95 mmol)およびエチル 2-ブロモヘキサ-2-エノエート(1.09 g, 4.95 mmol)の溶液に、トリエチルアミン(2.07 mL, 14.85 mmol)を5分かけて加えた。〜50％の添加が完了した後、沈殿が生じた。室温で24時間、撹拌を続けた。該反応混合液をEt2O(100 ml)および水(100 ml)間に分配した。有機層を、食塩水(100 ml)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濃縮して、黄色の油状物を得た。この油状物を、5 x 15 cm シリカゲルカラム（0-8％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。画分を含有する生成物を濃縮して、343 mgのロウ状の白色の固形物を得た。この物質をヘプタンでトリチュレートした。該固形物は生成物を含んでいなかった。該母液を濃縮して、ある程度精製された半固体の残渣を得た。〜3 mlのヘキサンに溶解させた残渣部分を、12 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-1％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する画分を濃縮して、エチル 3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-カルボキシレート(34 mg, 0.131 mmol, 2.65％収率)を無色の油状物として得た。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.91分(PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 260.23.  1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.90 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 1.45 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 1.53 (m, 2H), 2.80 (m, 2H), 4.46 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 7.45 (m, 1H), 7.50 (m, 2H), 7.59 (m, 2H).
【０１９６】
1H NMRによると、位置異性体生成物を示唆する、エチルエステルおよびプロピル基を含む〜15％の不純物が存在している。この物質をさらなる精製は行わずに次の工程に用いた。
【０１９７】
11-C. 3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-カルボン酸, リチウム塩
【化１０１】
2012515787.tif 000103
メタノール(0.8 mL)および水(0.2 mL)中の工程11-Bの生成物(27 mg, 0.104 mmol)の混合液に、LiOH, 水和物(4.37 mg, 0.104 mmol)を加え、室温で終夜、撹拌を続けた。揮発性物質を減圧除去し、3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-カルボン酸, リチウム塩およびその推定位置異性体(24 mg, 0.101 mmol, 97％収率)を無色の油状物として得て、それをさらなる精製は行わずに用いた。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.66分(PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 232.17.
【０１９８】
11-D. tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１０２】
2012515787.tif 000104
3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-カルボン酸, リチウム塩(23.12 mg, 0.1mmol)、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1 (30.5 mg, 0.1 mmol)、HOBT(16.85 mg, 0.110 mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(0.044 mL, 0.250 mmol)およびEDC(23.00 mg, 0.120 mmol)の混合物を、DMF(1 mL)中において、室温で18時間撹拌した。さらなるEDC(23.00 mg, 0.120 mmol)を加え、該反応混合液を60℃で5時間撹拌した。該反応混合液を、EtOAc(30 mL)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(30 mL)間に分配した。有機層を、水(2 x 25 mL)、食塩水(25 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)て、濃縮し、油状物を得て、それを4 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-50％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(22 mg, 0.044 mmol, 43.9％収率)を無色の油状物として得た。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.84分(PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 501.21. 
【０１９９】
11. 1-(4-(5-(3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(22 mg, 0.044 mmol)／TFA(0.5 mL)溶液を、室温で2.5時間静置した。揮発性物質を減圧除去し、残渣をEt2Oでトリチュレートし、乾燥させて、1-(4-(5-(3-フェニル-4-プロピルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩(16 mg, 0.028 mmol, 63.0％収率)をオフホワイト色の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.17分(YMC-Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 445.18.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 0.97 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 1.66 (m, 2H), 3.09 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 3.71 (m, 1H), 4.39 (m, 4H), 4.54 (s, 2H), 7.61 (m, 3H), 7.72 (m, 4H), 8.31 (d, J= 8.3 Hz, 2H).
【０２００】
実施例12
1-(4-(5-(4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化１０３】
2012515787.tif 000105
12-A. (E)-メチル 4,4-ジメトキシ-2-(フェニルスルフィニル)ブタ-2-エノエート
【化１０４】
2012515787.tif 000106
アセトニトリル(20 ml)中のメチル 2-(フェニルスルフィニル)アセテート(1 g, 5.04 mmol)、2,2-ジメトキシアセトアルデヒド(3.15 ml, 10.09 mmol)およびピペリジン(0.999 ml, 10.09 mmol)の混合液を、60℃まで18時間加熱した。室温まで冷却した後、揮発性物質を減圧除去し、残渣を、5 x 12 cm シリカゲルカラム（0-40％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。純粋な画分を濃縮して、(E)-メチル 4,4-ジメトキシ-2-(フェニルスルフィニル)ブタ-2-エノエート(1.42 g, 4.99 mmol, 99％収率)を薄黄色の油状物として得た。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.23分(PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+Na)= 307.06.  1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 3.40 (s, 3H), 3.41 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 5.71 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 7.48 (m, 3H), 7.66 (m, 2H).
【０２０１】
12-B. メチル 4-(ジメトキシメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート
【化１０５】
2012515787.tif 000107
12-Bは、以下に記載のとおり、Garcia Ruano, J.L. et al., Tetrahedron, 14491-14500 (1999)により報告されたような、t-ブチル エステルと同様の方法で、製造された。
【０２０２】
DCM(5 mL)中の(E)-メチル 4,4-ジメトキシ-2-(フェニルスルフィニル)ブタ-2-エノエート(0.284 g, 1 mmol)および(Z)-N-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド(0.370 g, 2.378 mmol)の溶液に、室温にて、Et3N(0.488 mL, 3.50 mmol)を5 mLのDCM中の溶液として、30分かけて滴下した。室温で18時間撹拌した後、該反応混合液を0℃まで冷却し、さらなる(Z)-N-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド(0.370 g, 2.378 mmol)を加えた。冷却浴を取り外し、該反応混合液を2時間撹拌し（その間に該反応液の温度は室温に達した）、Et3N(0.488 mL, 3.50 mmol)を2分かけて加えた。該反応混合液を、室温でさらに18時間撹拌した。該反応混合液を、〜100 mlのヘキサンに注ぎ入れた。得られた懸濁液を室温で30分間静置した。濾過後、該濾液を濃縮し、残渣を5 x 12 cm シリカゲルカラム（0-6％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。(注:カラムにロードするために、残渣を5％CH2Cl2/Hex中においてスラリーにした。溶解したのは全ての物質ではなかった。) 生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、メチル 4-(ジメトキシメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート(125 mg, 0.451 mmol, 45.1％収率)を無色の油状物として得た。(注:目的の生成物は溶出する第３の生成物であり、6％EtOAc/Hexで溶出を開始した。) 2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.63分 (PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 278.12.  1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 3.41 (s, 6H), 4.03 (s, 3H), 5.95 (s, 1H), 7.45 (m, 3H), 7.96 (dd, J= 7.8, 2.0 Hz, 2H).
【０２０３】
12-C. メチル 4-ホルミル-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート
【化１０６】
2012515787.tif 000108
CHCl3(5 mL)中のメチル 4-(ジメトキシメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート(88 mg, 0.317 mmol)およびAmberlyst 15 イオン交換樹脂, 乾燥(250 mg)の混合物を室温で18時間撹拌した。該樹脂を濾過して除き、該濾液を濃縮して、メチル 4-ホルミル-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート(73 mg, 0.316 mmol, 99％収率)を無色の油状物として得て、それをさらなる精製は行わずに次の工程に用いた。
【０２０４】
12-D. メチル 4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート
【化１０７】
2012515787.tif 000109
メチル 4-ホルミル-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート(70 mg, 0.303 mmol)／CH2Cl2(1.5 mL)溶液に、室温にて、[ビス(2-メトキシエチル)アミノ]サルファートリフルオリド(0.095 mL, 0.515 mmol)、続いてエタノール(3.54 μL, 0.061 mmol)を加えた。該反応混合液を、室温で4日間撹拌した。該反応混合液をEtOAc(30 mL)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(30 mL)間に分配した。乾燥させ(MgSO4)て濾過した後、有機層を油状物まで濃縮し、それを4 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-4％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。本質的に純粋な生成物を含有する画分を濃縮して、メチル 4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート(34 mg, 0.134 mmol, 44.4％収率)を無色の油状物として得た。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.69分(PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 254.10.
【０２０５】
12-E. 4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボン酸, リチウム塩
【化１０８】
2012515787.tif 000110
メタノール(1 mL)および水(0.2 mL)中のメチル 4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート(29 mg, 0.115 mmol)の溶液に、LiOH, 水和物(4.81 mg, 0.115 mmol)を加え、該混合液を室温で1時間撹拌した。揮発性物質を減圧除去して、4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボン酸, リチウム塩(28 mg, 0.114 mmol, 99％収率)を無色の油状物として得た。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.45分(PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 240.12.
【０２０６】
12-F. tert-ブチル 1-(4-(5-(4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１０９】
2012515787.tif 000111
DMF中の4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボン酸(28 mg, 0.117 mmol)、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1, (35.7 mg, 0.117 mmol)、HOBT(28.7 mg, 0.187 mmol)、EDC(52.7 mg, 0.275 mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(82 μL, 0.468 mmol)の混合液を、室温で3時間、および55℃で18時間、撹拌した。該反応混合液をEtOAc(30 ml)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(30 ml)間に分配した。有機層を水(2 x 30 ml)および食塩水(30 ml)で洗浄した。乾燥させ(MgSO4)て濾過した後、有機層を黄色の油状物まで濃縮して、それを4 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-50％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(23 mg, 0.045 mmol, 38.6％収率)を白色の固形物として得た。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.80分(PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 509.14.
【０２０７】
12. 1-(4-(5-(4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
tert-ブチル 1-(4-(5-(4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(23 mg, 0.045 mmol)／TFA(0.5 mL)溶液を、室温で1.5時間静置した。その後、揮発性物質を減圧除去し、残渣をエーテルでトリチュレートした。乾燥させて、1-(4-(5-(4-(ジフルオロメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩(14 mg, 0.025 mmol, 54.6％収率)をオフホワイト色の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.03分(YMC Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 453.11.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 3.74 (m, 1H), 4.40 (m, 4H), 4.56 (s, 2H), 7.56 (m's, 6H), 7.87 (m, 2H), 8.34 (d, J= 8.3 Hz, 2H).
【０２０８】
実施例13
1-(4-(5-(4-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化１１０】
2012515787.tif 000112
13-A. メチル 3-フェニルイソオキサゾール-4,5-ジカルボキシレート
【化１１１】
2012515787.tif 000113
Et2O(10 mL)中の(Z)-N-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド(467 mg, 3 mmol)およびジメチル ブタ-2-インジオエート（ynedioate）(0.374 mL, 3.00 mmol)の溶液に、室温にて、Et3N(0.460 mL, 3.30 mmol)を5分かけて滴下した。該反応混合液は濃い懸濁液になり、室温で2時間撹拌した。濾過後、該濾液を油状物まで濃縮し、それを、24 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-25％EtOAc/Hexグラジエントを用いて溶出）でクロマトグラフィー処理した。該純粋な画分を濃縮して、ジメチル 3-フェニルイソオキサゾール-4,5-ジカルボキシレート(780 mg, 2.99 mmol, 100％収率)を無色の油状物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 2.86分(YMC Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 262.15.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) d ppm 3.91 (s, 2 H) 4.02 (s, 2 H) 7.46 - 7.53 (m, 2 H) 7.69 (d, J=6.6 Hz, 1 H).
【０２０９】
13-B. 4-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボン酸
【化１１２】
2012515787.tif 000114
MeOH(15 mL)/水(5.00 mL)中のジメチル 3-フェニルイソオキサゾール-4,5-ジカルボキシレート(770 mg, 2.95 mmol)の溶液に、室温にて、LiOH, 水和物(124 mg, 2.95 mmol)を加え、該反応混合液を室温で1時間撹拌した。MeOHを減圧除去し、残った水溶液を水(5 mL)で希釈した。該pHを1N HClを用いて＜1に調整し、該混合液をEtOAc(40 mL)で抽出した。有機層を食塩水(25 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濃縮して、4-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボン酸(709 mg, 2.87 mmol, 97％収率)を無色の油状物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.99分(YMC Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 248.13.  1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d)δ ppm 3.89 (s, 3 H) 7.51 (m, 5 H).
【０２１０】
13-C. メチル 5-(フルオロカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボキシレート
【化１１３】
2012515787.tif 000115
DCM(4 mL)中の4-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボン酸(100 mg, 0.405 mmol)およびピリジン(0.039 mL, 0.485 mmol)の溶液に、室温にて、フッ化シアヌル(0.041 mL, 0.485 mmol)を加え、該反応混合液を室温で2時間撹拌した。該反応混合液を、ジクロロメタン(20 ml)で希釈し、氷-冷の0.5N HCl(20 mL)で洗浄した。水層をDCM(10 mL)で抽出し、有機層を合わせて乾燥させ(MgSO4)、濾過および濃縮して、メチル 5-(フルオロカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボキシレート(100 mg, 0.401 mmol, 99％収率)を無色の油状物として得た。該化合物はメタノールと容易に反応することが分かり、メチルエステルと特徴づけられた。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.59分(PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 262.15 (メチルエステル).
【０２１１】
13-D. メチル 5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボキシレート
【化１１４】
2012515787.tif 000116
アセトニトリル(2 mL)中のメチル 5-(フルオロカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボキシレート(99 mg, 0.397 mmol)および(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(121 mg, 0.397 mmol)の混合液に、室温にて、ジイソプロピルエチルアミン(0.083 mL, 0.477 mmol)を加え、該反応混合液を、週末にかけて室温で撹拌した。該反応混合液をEtOAc(30 mL)と水(30 mL)間に分配した。有機層を、食塩水(20 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濃縮して、白色の固形物を得て、それを、12 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-100％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、メチル 5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボキシレート(128 mg, 0.248 mmol, 62.4％収率)を白色の固形物として得た。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.78分 (YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 517.22.  1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) d ppm 1.45 (s, 9H) 3.23 - 3.32 (m, 3H) 3.51 - 3.58 (m, 2H) 3.68 (s, 2H) 3.95 (s, 3H) 7.44 (d, J=8.0 Hz, 2 H) 7.48 - 7.56 (m, 3 H) 7.75 (dd, J=7.91, 1.63 Hz, 2 H) 8.11 (d, J=8.3 Hz, 2 H).
【０２１２】
13. 1-(4-(5-(4-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
メチル 5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボキシレート(22 mg, 0.043 mmol)／TFA(0.5 mL)溶液を、室温で1.5時間静置した。揮発性物質を減圧除去し、残渣をEtOAc/ヘプタン(3 x 2 mL)から共エバポレートして、高真空下において乾燥させ、1-(4-(5-(4-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩(24 mg, 0.042 mmol, 98％収率)を白色の粉末として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 2.84分(YMC Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 461.18.  1H NMR (400 MHz, MeOD) d ppm 3.67 - 3.77 (m, 1 H) 3.93 (s, 3 H) 4.39 (m, 4 H) 4.53 (s, 2 H) 7.50 - 7.62 (m, 3 H) 7.66 - 7.77 (m, 4 H) 8.28 (d, J=8.0 Hz, 2 H).
【０２１３】
実施例14
1-(4-(5-(4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化１１５】
2012515787.tif 000117
14-A. 5-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸
【化１１６】
2012515787.tif 000118
メチル 4-(ジメトキシメチル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート, 12-B, (144 mg, 0.519 mmol)／アセトン(3 mL)溶液に、室温にて、ジョーンズ試薬(0.539 mL, 0.727 mmol)を加え、得られた混合液を室温で1時間撹拌した。さらに３アリコートのジョーンズ試薬(0.539 mL, 0.727 mmol)を、1時間かけて少しずつ加え、室温で2時間撹拌を続けた。その後、該反応混合液をEtOAc(30 mL)と2％NaHSO3溶液(30 mL)間に分配した。有機層を、食塩水(20 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濃縮して、5-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸(108 mg, 0.437 mmol, 84％収率)を薄黄色の固形物として得た。2分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.30分(PHENOMENEX（登録商標） Luna 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 248.13.  1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 4.16 (s, 3H), 7.50 (m, 3H), 7.66 (dd, J= 8.2, 1.4 Hz, 2H).
【０２１４】
14-B. メチル 4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート
【化１１７】
2012515787.tif 000119
DMF中の5-(メトキシカルボニル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸(50 mg, 0.202 mmol)、メチルアミン塩酸塩(19.12 mg, 0.283 mmol)、HOBT(37.2 mg, 0.243 mmol)、EDC(46.5 mg, 0.243 mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.141 mL, 0.809 mmol)の混合液を、室温で22時間撹拌した。該反応混合液をEtOAc(30 mL)および水(30 mL)間に分配した。有機層を、飽和硫酸水素カリウム溶液(30 ml)、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(30 mL)および食塩水(30 mL)で洗浄した。乾燥させ(MgSO4)て濾過した後、有機層を濃縮して、メチル 4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート(38 mg, 0.146 mmol, 72.2％収率)を黄褐色の固形物として得た。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.09分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 261.15.  1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) d ppm 2.97 (d, J=4.77 Hz, 3 H) 4.04 (s, 3 H) 7.19 (brs, 1H) 7.42 - 7.51 (m, 3 H) 7.66 - 7.73 (m, 2 H).
【０２１５】
14-C. 4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボン酸
【化１１８】
2012515787.tif 000120
MeOH(0.8 mL)および水(0.2 mL)中のメチル 4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボキシレート(35 mg, 0.134 mmol)の懸濁液に、LiOH, 水和物(6.77 mg, 0.161 mmol)を加え、該混合液を室温で1時間撹拌し、その間に該反応液は均一になった。揮発性物質を減圧除去し、残渣を、DCM(20 mL)と飽和硫酸水素カリウム溶液(10 mL)間に分配した。水層を、DCM(10 mL)で抽出し、有機層を合わせて乾燥させ(MgSO4)、濃縮して、4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボン酸(33 mg, 0.134 mmol, 100％収率)をかすかにオフホワイト色の泡状物質として得た。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 0.88分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 247.13.
【０２１６】
14-D. tert-ブチル 1-(4-(5-(4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１１９】
2012515787.tif 000121
DMF(1 mL)中の4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-カルボン酸(32 mg, 0.130 mmol)、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1, (39.7 mg, 0.130 mmol)、HOBT(31.8 mg, 0.208 mmol)、EDC(58.5 mg, 0.305 mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.091 mL, 0.520 mmol)の混合液を、室温で18時間撹拌した。60℃まで3時間加温した後、該反応混合液を、EtOAc(30 mL)と飽和炭酸水素ナトリウム溶液(30 mL)間に分配した。有機層を水(2 x 30 mL)および食塩水(30 mL)で洗浄した。乾燥させ(MgSO4)て濾過した後、有機層を濃縮して、黄色の油状物を得て、それを、4 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-90％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(29 mg, 0.056 mmol, 43.3％収率)を、無色のガラス状の固形物として得た。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.50分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 516.27.
【０２１７】
14. 1-(4-(5-(4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
tert-ブチル 1-(4-(5-(4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(28 mg, 0.054 mmol)／TFA(1 mL)溶液を、室温で1.5時間静置した。揮発性物質を減圧除去し、残渣をEtOAc/Hex(2 x 2 mL)から共エバポレートした。残渣を、エチルエーテルでトリチュレートして、乾燥させ、ある程度精製された物質を得た。残渣を、プレパラティブHPLC(島津 20 x 100 mm S-10 カラム;10分にわたる0-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出)で処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、1-(4-(5-(4-(メチルカルバモイル)-3-フェニルイソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩(24 mg, 0.042 mmol, 77％収率)を白色の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 2.22分(YMC Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 460.18.  1H NMR (400 MHz, MeOD) d ppm 2.99 (d, J=4.52 Hz, 3 H) 3.68 - 3.79 (m, 1 H) 4.33 - 4.44 (m, 4 H) 4.53 (s, 2 H) 7.50 - 7.60 (m, 3 H) 7.69 (d, J=8.0 Hz, 2 H) 7.82 (dd, J=7.7, 1.6 Hz, 2 H) 8.26 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 8.98 (d, J=4.52 Hz, 1 H). 
【０２１８】
実施例15
1-(4-(5-(3-フェニル-4-(2,2,2-トリフルオロエチルカルバモイル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化１２０】
2012515787.tif 000122
15-A. 5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸, リチウム塩
【化１２１】
2012515787.tif 000123
THF(8 mL)および水(2 mL)中のメチル 5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボキシレート, 13-D, (567 mg, 1.098 mmol)の混合液に、室温にて、LiOH, 水和物(46.1 mg, 1.098 mmol)を加え、該反応混合液を室温で18時間撹拌した。さらなる11 mgのLiOH, 水和物を加え、室温で24時間撹拌を続けた。揮発性物質を減圧除去して、残渣をEtOAc/ヘプタン(3 x 5 mL)から共エバポレートし、乾燥させて、5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸, リチウム塩(555 mg, 1.089 mmol, 99％収率)（泡状の黄色の固形物）として得た。該物質をその後の工程でそのまま用いた。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.69分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 503.06.
【０２１９】
15-B. tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(2,2,2-トリフルオロエチルカルバモイル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１２２】
2012515787.tif 000124
DMF(0.5 mL)中の5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸(30 mg, 0.060 mmol)、2,2,2-トリフルオロエチルアミン(7.15 μL, 0.090 mmol)、BOP-Cl(18.24 mg, 0.072 mmol)およびEt3N(0.025 mL, 0.179 mmol)の混合液を、室温で週末にかけて撹拌した。該反応混合液を、EtOAc(30 mL)と飽和炭酸水素ナトリウム溶液(30 mL)間に分配した。有機層を、水(2 x 30 mL)および食塩水(30 mL)で洗浄した。乾燥させ(MgSO4)て濾過した後、有機層を無色の固形物まで濃縮して、それを、4 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-70％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(2,2,2-トリフルオロエチルカルバモイル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(18 mg, 0.031 mmol, 51.7％収率)を、白色の固形物として得た。この物質は、さらなる精製を行うことなく、次の工程に用いるのに適切であると考えられた。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.71分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 584.10.
【０２２０】
15. 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(2,2,2-トリフルオロエチルカルバモイル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩の製造
tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(2,2,2-トリフルオロエチルカルバモイル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(17 mg, 0.029 mmol)／TFA溶液を、室温で1.5時間静置した。濃縮した後、残渣を、プレパラティブHPLC(島津 20 x 100 mm S-10 カラム;10分にわたる30-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出)で処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、1-(4-(5-(3-フェニル-4-(2,2,2-トリフルオロエチルカルバモイル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩(14 mg, 0.022 mmol, 74.9％収率)を無色のガラス状の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 2.56分(YMC Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 528.00.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 3.68 - 3.79 (m, 1 H) 4.18 (q, J=9.3 Hz, 2 H) 4.33 - 4.43 (m, 4 H) 4.52 (s, 2 H) 7.50 - 7.59 (m, 3 H) 7.68 (d, J=8.0 Hz, 2 H) 7.77 - 7.86 (m, 2 H) 8.27 (d, J=8.3 Hz, 2 H).
【０２２１】
実施例16
5-(3-(4-((3-カルボキシアゼチジン（Carboxyazetidin）-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸
【化１２３】
2012515787.tif 000125
5-(3-(4-((3-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸, リチウム塩, 15-A, (25 mg, 0.049 mmol)／TFA(0.5 mL)溶液を、室温で1時間静置した。揮発性物質を減圧除去し、残渣を水(1 ml)中に懸濁した。1N NaOHを用いてpHを〜10に調整し、均一な溶液を得た。次いで該pHを、1N HClを用いて〜4に調整した。得られた懸濁液を室温で1.5時間撹拌した。ゆっくりと濾過し、濾過ケーキを水で洗浄して、乾燥させ、17 mgの白色の固形物を得た。該固形物をMeOH(2 ml)中に懸濁し、室温で4時間、活発に（briskly）撹拌した。濾過し、乾燥させて、5-(3-(4-((3-カルボキシアゼチジン-1-イル)メチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル)-3-フェニルイソオキサゾール-4-カルボン酸(15 mg, 0.034 mmol, 68.5％収率)を白色の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 2.43分(YMC Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 447.15.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.83 (s, 2 H) 3.92 (s, 2 H) 4.15 (s, 2 H) 7.52 - 7.58 (m, 3 H) 7.61 (d, J=8.0 Hz, 2 H) 7.89 - 7.96 (m, 2 H) 8.04 (d, J=8.0 Hz, 2 H).
【０２２２】
実施例17
1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩の製造
【化１２４】
2012515787.tif 000126
17-A. メチル 4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化１２５】
2012515787.tif 000127
メシチレン(11 ml)中の1,2-ジフェニルエチン(1.53 g, 8.6 mmol)およびジメチル 2-ニトロマロネート(1.05 mL, 7.83 mmol)の混合液を、150℃まで18時間加熱した。揮発性物質を減圧除去し、残渣を、5 x 12 cm シリカゲルカラム（0-10％EtOAc/ヘキサンで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、メチル 4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(307 mg, 1.1 mmol, 14.04％収率)を薄黄色の固形物として得た。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.85分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 280.08.  1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 3.87 (s, 3 H) 7.29 - 7.40 (m, 5 H) 7.43 (m, 3H) 7.47 - 7.53 (m, 2 H).
【０２２３】
17-B. 4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸
【化１２６】
2012515787.tif 000128
MeOH(8 mL)、THF(2 mL)および水(2 mL)中のメチル 4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(306 mg, 1.09 mmol)の濃い懸濁液に、室温にて、LiOH, 水和物(46.0 mg, 1.09 mmol)を加え、該反応混合液を室温で1時間撹拌した。この間に、該反応液は均一になった。MeOHおよびTHFを減圧除去し、残った水性混合液を、1N HClを用いてpH〜1に酸性化した。次いで、該混合液をEtOAc(30 mL)で抽出した。有機層を、食塩水(20 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濃縮して、4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(290 mg, 1.09 mmol, 100％収率)を黄色の固形物として得た。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.72分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 266.08.
【０２２４】
17-C. tert-ブチル 1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１２７】
2012515787.tif 000129
DMF(1 mL)中の4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(26.5 mg, 0.1 mmol)、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート, Int.1, (30.5 mg, 0.100 mmol)、HOBT(16.85 mg, 0.110 mmol)およびEDC(21.09 mg, 0.110 mmol)の混合液を、室温で18時間撹拌した。該反応混合液を、60℃まで2時間加温し、70℃まで2時間加温した。終夜、室温まで冷却した後、該反応混合液をEtOAc(30 ml)と飽和炭酸水素ナトリウム溶液(30 ml)間に分配した。有機層を、水(2 x 30 ml)および食塩水(20 ml)で洗浄した。乾燥させ(MgSO4)て濾過した後、有機層を黄色の固形物まで濃縮して、それを、4 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-60％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。該純粋な画分を濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(37 mg, 0.069 mmol, 69.2％収率)を白色の固形物として得た。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.90分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 535.16.
【０２２５】
実施例17. 1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
tert-ブチル 1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(37 mg, 0.069 mmol)／TFA(1 mL)溶液を、室温で1時間静置した。その後、揮発性物質を減圧除去し、残渣をプレパラティブHPLC(島津 20 x 100 mm S-10 カラム;8分にわたる50-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAのグラジエントで溶出)で処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩(31 mg, 0.052 mmol, 76％収率)を白色の粉末として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.24分(YMC Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。MS:(M+H)= 479.10.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δppm 3.70 (m, 1 H) 4.31 - 4.38 (m, 4 H) 4.48 (s, 2 H) 7.37 - 7.43 (m, 2 H) 7.43 - 7.53 (m, 6 H) 7.56 - 7.65 (m, 4 H) 8.09 (d, J=8.3 Hz, 2 H).
【０２２６】
実施例18および19
1-(4-(5-(5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, (18)、および、
1-(4-(5-(4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, (19)
【化１２８】
2012515787.tif 000130
18-A. 2-メチルオクタ-4-イン
【化１２９】
2012515787.tif 000131
4-メチルペンタ-1-イン(0.588 mL, 5 mmol)／THF溶液に、-78℃にて、BuLi, 2.5 M／ヘキサン(2.200 mL, 5.50 mmol)を加えた。-78℃で15分撹拌した後、該反応混合液を室温に昇温させ、1-ヨードプロパン(0.488 mL, 5.00 mmol)を加え、該反応混合液を室温で3日間撹拌した。該反応混合液を水(50 mL)でクエンチし、得られた混合液を分液漏斗に移した。該混合液をエーテル(75 mL)で抽出した。有機層を、食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濃縮して、2-メチルオクタ-4-イン(555 mg, 4.47 mmol, 89％収率)を薄黄色の液状物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.91-0.99 (m, 9 H) 1.45-1.53 (m, 2 H) 1.70-1.81 (m, 1 H) 2.03 (dt, J=6.5, 2.4 Hz, 2 H) 2.12 (tt, J=7.0, 2.4 Hz, 2 H).
【０２２７】
18-B. メチル 5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-カルボキシレートおよびメチル 4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化１３０】
2012515787.tif 000132
トルエン(4 mL)中の6-メチルヘプタ-3-イン(220 mg, 2 mmol)、ジメチル 2-ニトロマロネート(567 mg, 3.20 mmol)および1-ブチル-3-メチルイミダゾリウムヘキサフルオロホフフェート(0.04 ml, 0.2 mmol)の混合液を、マイクロ波において170℃まで1時間加熱した。室温に冷却した後、該反応混合液をEtOAc(50 ml)と水(50 ml)間に分配した。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濃縮し、オレンジ色の油状物を得て、それを12 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-5％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含む画分を濃縮して、228 mg, 54. ％収率の、メチル 4-エチル-5-イソブチルイソオキサゾール-3-カルボキシレートおよびメチル 5-エチル-4-イソブチルイソオキサゾール-3-カルボキシレートの混合物を、薄黄色の油状物として得た。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.86分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 226.22. 1H NMRは〜1:1の位置異性体混合物を示す。これらの異性体は順相もしくは逆相クロマトグラフィーによって容易に分離可能ではなく、この物質はさらなる精製は行わずに次の工程に用いられた。
【０２２８】
18.C 5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-カルボン酸および4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-カルボン酸
【化１３１】
2012515787.tif 000133
MeOH(8 mL)および水(2 mL)中のメチル 5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-カルボキシレートおよびメチル 4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(164 mg, 0.728 mmol)の混合液に、LiOH, 水和物(15.28 mg, 0.364 mmol)を加え、該混合液を室温で終夜撹拌した。さらなる量のLiOH, 水和物(15.28 mg, 0.364 mmol)を加え、該反応混合液を室温で2時間撹拌した。MeOHを減圧除去し、残った水層を1N HClを用いてpH〜1に酸性化した。該混合液をEtOAc(20 mL)で抽出した。有機層を食塩水(20 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濃縮して(144 mg, 0.682 mmol, 94％収率)の生成物を薄黄色の油状物として得て、それは5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-カルボン酸および4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-カルボン酸の約1:1の混合物であった。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.72分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 212.20.
【０２２９】
上記で模式的に示されるとおり、1H NMRは位置異性体の〜1:1の混合物を示す。これらの異性体は順相もしくは逆相クロマトグラフィーによって容易に分離可能ではなく、この物質はさらなる精製は行わずに次の工程に用いられた。
【０２３０】
18-D. tert-ブチル 1-(4-(5-(5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレートおよびtert-ブチル 1-(4-(5-(4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１３２】
2012515787.tif 000134
DMF(1 mL)中の、5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-カルボン酸、および4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-カルボン酸(42.26 mg, 0.2 mmol)、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(61.1 mg, 0.200 mmol)、HOBt(38.3 mg, 0.250 mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(0.070 mL, 0.400 mmol)ならびにEDC(47.9 mg, 0.250 mmol)の混合液を、室温で18時間撹拌した。DMF(1 mL)を加え、該反応混合液を50℃まで8時間加温した。該反応混合液を、EtOAc(30 ml)と飽和炭酸水素ナトリウム溶液(30 ml)間に分配した。有機層を水(2 x 30 ml)および食塩水(30 ml)で洗浄した。乾燥させ(MgSO4)て濾過した後、有機層を濃縮し、油状物を得て、それを4 gmのIscoシリカゲルカートリッジ（0-100％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。純粋な画分を濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(5-(5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(32 mg, 0.067 mmol, 66.6％収率)およびtert-ブチル 1-(4-(5-(4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(32 mg, 0.067 mmol, 66.6％収率)の混合物を無色の油状物として得た。10-90％メタノール水溶液 + 0.1％TFAの2分のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 1.89分(YMC Combi 4.6 x 30 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 481.32.
【０２３１】
該混合物を、Berger Prep SFC MGIII UnitにおいてChiral AD-H 30 X 3 cm ID, 5μm カラムで、分離した（70/30 CO2/(MeOH, 0.1％ジエチルアミン)、流速 88 mL/分で溶出、220 nmで測定）。溶出第１ピークからの画分を濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(21 mg; 44％)を無色の油状物として得た。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.93 (d, J= 7.3 Hz, 6 H) 1.00 (t, J= 7.4 Hz, 3 H) 1.44 (s, 9 H) 1.79 (m, 2 H) 1.92 (m, 1 H) 2.62 (d, J= 6.7 Hz, 2 H) 2.77 (t, J= 7.4 Hz, 2 H) 3.27 (m, 3 H) 3.53 (m, 2 H) 3.66 (s, 2 H) 7.42 (d, J= 8.1 Hz, 2 H) 8.10 (d, J= 8.1 Hz, 2 H).
【０２３２】
溶出第２ピークからの画分を濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(5-(5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(24 mg; 50％)を無色の油状物として得た。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.95-1.01 (m, 9 H) 1.44 (s, 9 H) 1.57-1.65 (m, 2 H) 2.10-2.19 (m, 1 H) 2.67 (d, J=7.4 Hz, 2 H) 2.69-2.73 (m, 2 H) 3.22-3.30 (m, 3 H) 3.50-3.56 (m, 2 H) 3.67 (s, 2 H) 7.42 (d, J=8.1 Hz, 2 H) 8.10 (d, J=8.1 Hz, 2 H).
【０２３３】
実施例18: 1-(4-(5-(5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, TFA
【化１３３】
2012515787.tif 000135
tert-ブチル 1-(4-(5-(5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(23 mg, 0.048 mmol)／TFA(0.5 mL)溶液を室温で2.5時間静置した。揮発性物質を減圧除去し、残渣をEt2Oでトリチュレートして、乾燥させ、1-(4-(5-(5-イソブチル-4-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, TFA(24mg, 0.044 mmol, 92％収率)を薄黄色のガラス状の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.21分(YMC Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 425.20.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 1.01 (m, 9 H) 1.60-1.71 (m, 2 H) 2.14 (m, 1 H) 2.77 (m, 4 H) 3.62-3.73 (m, 1 H) 4.30-4.40 (m, 4 H) 4.51 (s, 2 H) 7.68 (d, J=7.8 Hz, 2 H) 8.24 (d, J=7.8 Hz, 2 H).
【０２３４】
実施例19: 1-(4-(5-(4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, TFA
【化１３４】
2012515787.tif 000136
tert-ブチル 1-(4-(5-(4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(21 mg, 0.044 mmol)／TFA(0.5 mL)溶液を、室温で2.5時間静置した。揮発性物質を減圧除去し、残渣をEt2Oでトリチュレートし、乾燥させて、1-(4-(5-(4-イソブチル-5-プロピルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, TFA(21 mg, 0.038 mmol, 88％収率)を薄黄色のガラス状の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.20分(YMC Combi 4.6 x 50 mm S-5 ODS カラム)。 MS:(M+H)= 425.20.  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 0.96 (d, J=6.5 Hz, 6 H) 1.03 (t, J=7.3 Hz, 3 H) 1.75-1.86 (m, 2 H) 1.94 (m, 1 H) 2.68 (d, J=7.3 Hz, 2 H) 2.85 (t, J=7.5 Hz, 2 H) 3.61-3.71 (m, 1 H) 4.29-4.40 (m, 4 H) 4.50 (s, 2 H) 7.68 (d, J=8.0 Hz, 2 H) 8.24 (d, J=8.3 Hz, 2 H).
【０２３５】
実施例20
1-(4-(5-(5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸
【化１３５】
2012515787.tif 000137
20-A. メチル 4-ヨード-5-イソブチルイソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化１３６】
2012515787.tif 000138
トリフルオロ酢酸(25 mL)中のメチル 5-イソブチルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(0.923 g, 5.04 mmol)およびN-ヨードスクシンイミド(1.25 g, 5.54 mmol)の混合液を室温で終夜撹拌した。HPLCによると、該反応は完了していた。トリフルオロ酢酸を減圧下において除去し、残渣をジクロロメタン(100 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(2 x 25 mL)で洗浄し、2.5％亜硫酸水素ナトリウム水溶液(25 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、5％酢酸エチル／ヘキサン混合液を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 4-ヨード-5-イソブチルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(1.21 g, 3.91 mmol, 78％収率)を淡黄色の油状物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.40分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 LC/MS M+1 = 310.1.
【０２３６】
20-B. メチル 5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート
【化１３７】
2012515787.tif 000139
N,N-ジメチルホルムアミド(19 mL)中のメチル 4-ヨード-5-イソブチルイソオキサゾール-3-カルボキシレート(1.21 g, 3.91 mmol)、ヨウ化銅(I)(0.149 g, 0.783 mmol)、およびHMPA(2.59 mL)の溶液に、メチル 2,2-ジフルオロ-2-(フルオロスルホニル)アセテート(1.99 mL, 15.7 mmol)を1分かけて加えた。ただちに、該反応混合液を75℃の油浴に入れ、終夜撹拌した。該澄明なオレンジ色の反応混合液を室温に冷却し、エーテル(100 mL)で希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液(2 x 100 mL)で洗浄し、10％塩化リチウム水溶液(2 x 50 mL)で洗浄し、食塩水(50 mL)で洗浄した。水層をエーテル(100 mL + 50 mL)で逆抽出し、有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、5％酢酸エチル／ヘキサン混合液を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル 5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(0.819 g, 3.26 mmol, 83％収率)を澄明な無色の油状物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.52分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.99 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 2.09-2.20 (m, 1H), 2.86 (dd, J=7.21, 1.11 Hz, 2H), および 4.01 (s, 3H).
【０２３７】
20-C. 5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボン酸
【化１３８】
2012515787.tif 000140
メタノール(18 mL)および水(9.00 mL)中のメチル 5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボキシレート(0.816 g, 3.25 mmol)および水酸化リチウム水和物(0.136 g, 3.25 mmol)の混合液を、室温で終夜撹拌した。HPLCおよびLCMS分析により、加水分解の完了が示された。該反応混合液を減圧下において濃縮し、残渣を1N 塩酸水溶液に溶解させ、エーテルで抽出した。有機層を集め、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボン酸(0.746 g, 3.15 mmol, 97％収率)をオフホワイト色の固形物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.00分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.91 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 1.97-2.09 (m, 1H), および 2.89 (d, J=7.28 Hz, 2H).
【０２３８】
20-D. 3-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボニルフルオリド
【化１３９】
2012515787.tif 000141
ジクロロメタン(8 mL)中の3-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸(0.200 g, 0.843 mmol)およびピリジン(0.082 mL, 1.01 mmol)の混合液に、室温にて、2,4,6-トリフルオロ-1,3,5-トリアジン(フッ化シアヌル)(0.085 mL, 1.01 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で終夜撹拌した。該均一な反応液をジクロロメタンで希釈し、氷-冷の0.5N 塩酸水溶液(2x)で洗浄し、有機層を集めた。水層をジクロロメタンで逆抽出し、有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、3-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボニルフルオリド(0.130 g, 0.544 mmol, 65％収率)を黄色の固形物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 2.51分(メチルエステルに相当)であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。
【０２３９】
20-E. tert-ブチル 1-(4-(5-(5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１４０】
2012515787.tif 000142
アセトニトリル(2 mL)中の5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-カルボニルフルオリド(0.130 g, 0.544 mmol)、tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 0.166 g, 0.544 mmol)、およびヒューニッヒ塩基(0.123 mL, 0.707 mmol)の混合液を、室温で2日間撹拌した。HPLCによると、環化していない中間体が〜7％残存していた。該反応混合液を、ヒートガンを用いて穏やかに〜15分加熱し、さらに環化させた。該均一な混合液をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。水層をジクロロメタンで抽出し、有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、1％メタノール／ジクロロメタン混合液を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.219 g, 0.432 mmol, 80％収率)を澄明な粘稠性の黄色の油状物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 3.03分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 507.4.
【０２４０】
20. 1-(4-(5-(5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸
tert-ブチル 1-(4-(5-(5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.219 g, 0.432 mmol)およびトリフルオロ酢酸(2.50 mL, 32.4 mmol)の混合液を、室温で45分間撹拌した。トリフルオロ酢酸を減圧下において除去し、残渣を、超音波処理によって〜6 mLの水に懸濁させた。該生成物はガム状になり（gummed up）、分散しなかった。該pHを1N 水酸化ナトリウム水溶液を用いて〜4.5に調整し、該生成物は依然として大部分は底に凝集したままであった。ジクロロメタン(〜8 mL)を加え、該混合液を終夜激しく撹拌した。有機層を集めて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。該油状の残渣をメタノール中に溶解させ、終夜静置した。メタノール溶液を、Whatman 0.45 um PTFE w/GMF シリンジフィルターに通し、濃縮して、生成物(0.195 g, 0.424 mmol, 98％収率)を淡い黄色の油状物として得た。
【０２４１】
該化合物の一部を、メタノール、ジクロロメタン、および水酸化アンモニウムの混合液(10:90:0-20:80:1)を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。目的の画分を濃縮し、ジクロロメタンおよび水で希釈し、1.0 N 塩酸水溶液を用いてpHを4.5に調整した。振盪させた後、得られたエマルションを30分間静置した。有機層を集め、水層/エマルションをジクロロメタン(2x)で逆抽出した。濁った有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、白色の固体残渣を得て、それをジクロロメタンに再溶解させ、Whatman 0.45 um PTFE w/GMF シリンジフィルターを通して濾過し、濃縮して、生成物を白色の固形物として得た(118 mg)。該固形物を、超音波処理によってメタノールに懸濁させ、濃縮した(2x)。３回目の再懸濁の後、該固形物を減圧濾過により集めて、1-(4-(5-(5-イソブチル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(0.011 g, 0.024 mmol, 5.6％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.68分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 451.1.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 1.02 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 2.15-2.25 (m, 1H), 2.93 (d, J=7.21 Hz, 2H), 3.39 (br. s., 1H), 3.93 (br. s., 2H), 4.15 (br. s., 4H), 7.55 (d, J=7.77 Hz, 2H), および 8.14 (d, J=7.77 Hz, 2H).
【０２４２】
HPLC 純度 99.2/99.2％, 保持時間 = 7.51分(SunFire C18 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B (15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０２４３】
HPLC 純度 99.4/99.4％, 保持時間 = 8.44分(XBridge Ph 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B (15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０２４４】
実施例21
1-(2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
【化１４１】
2012515787.tif 000143
21-A. 3-フルオロ-4-(ヒドロキシメチル)ベンゾニトリル
【化１４２】
2012515787.tif 000144
3-フルオロ-4-ホルミルベンゾニトリル(3.6 g, 24.1 mmol)／メタノール(40 mL)溶液に、水素化ホウ素ナトリウム(0.304 g, 8.04 mmol)を、室温でゆっくりと加えた。20分後、HPLCおよびLCMSによると、該反応は完了していた。該反応混合液を室温で終夜撹拌した。該反応液を水(〜5 mL;20分間撹拌した)でクエンチし、メタノールを減圧下において除去した。水性残渣を、ジクロロメタン(80 mL)で希釈し、水(50 mL)で洗浄し、集めた。水層をジクロロメタン(40 mL)で抽出し、有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、3-フルオロ-4-(ヒドロキシメチル)ベンゾニトリル(3.51 g, 23.2 mmol, 96％収率)を黄色の固形物として得た。該化合物はHPLC 保持時間 = 0.720分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 152.09.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 4.85 (s, 2H), 7.35 (dd, J=9.43, 1.66 Hz, 1H), 7.50 (dd, J=7.91, 1.25 Hz, 1H), および 7.65 (t, J=7.49 Hz, 1H).
【０２４５】
21-B. 3-フルオロ-N'-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ベンズイミドアミド
【化１４３】
2012515787.tif 000145
メタノール(100 mL)中の3-フルオロ-4-(ヒドロキシメチル)ベンゾニトリル(3.51 g, 23.2 mmol)およびヒドロキシルアミン塩酸塩(3.23 g, 46.4 mmol)の混合液に、窒素下において、炭酸水素ナトリウム(7.80 g, 93 mmol)を加えた。該反応混合液を室温で5分間撹拌した後、油浴に入れ、2時間、還流加熱した。HPLC分析により、出発物質が消費されたことが示された。該均一な混合液を濾過し、該固形物をメタノールで洗浄し、該濾液を減圧下において濃縮した。白色の固体残渣を酢酸エチル(400 mL)で希釈したが、不均一なままであった。該混合液を5分間超音波処理し、減圧下において濾過した。該濾過物を、水(60 mL)で洗浄し、10％塩化リチウム水溶液(60 mL)で洗浄し、食塩水(60 mL)で洗浄した。水層を合わせて、酢酸エチル(100 mL)で抽出し、有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、(Z)-3-フルオロ-N'-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ベンズイミドアミド(3.85 g, 20.9 mmol, 90％収率)を白色の固形物として得た。該化合物はHPLC 時間 = 0.263分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 184.9.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.54 (d, 2H), 5.28 (t, J=5.83 Hz, 1H), 5.86 (s, 2H), 7.40 (dd, J=11.65, 1.39 Hz, 1H), 7.44 (t, J=7.91 Hz, 1H), 7.51 (dd, J=8.05, 1.66 Hz, 1H), および 9.72 (s, 1H).
【０２４６】
21-C. (2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)フェニル)メタノール
【化１４４】
2012515787.tif 000146
アセトニトリル(7 mL)中の3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボニルフルオリド(1-E, 0.973 g, 3.75 mmol)、3-フルオロ-N'-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ベンズイミドアミド(0.691 g, 3.75 mmol)、およびヒューニッヒ塩基(0.852 mL, 4.88 mmol)の不均一な混合液を、週末にかけて室温で撹拌した。該反応混合液をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。ジクロロメタンを減圧下において除去して、オレンジ色の油状の残渣を得て、それを20％酢酸エチル／ヘキサン混合液を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、(2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)フェニル)メタノール(0.762 g, 1.88 mmol, 50％収率)を淡黄色の固形物として得た。該化合物はHPLC 保持時間 = 3.33分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 406.1.
【０２４７】
21-D. 3-(4-(ブロモメチル)-3-フルオロフェニル)-5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール
【化１４５】
2012515787.tif 000147
(2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)フェニル)メタノール(1.95 mL, 0.740 mmol)／ジクロロメタン(8 mL)溶液に、0℃にて、三臭化リン(1.0M／ジクロロメタン)(0.740 mL, 0.740 mmol)を加えた。5分後、氷浴を取り外し、該反応混合液を室温で終夜撹拌した。該反応混合液を、ジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。残渣を、超音波処理とともに、メタノールでトリチュレートし、濾過し、メタノールで洗浄した。HPLCおよびLCMSによる該白色の固形物の分析によって、目的の生成物がほとんど存在しないことが示された。該濾液を減圧下において濃縮し、該化合物を、最小量のジクロロメタンとともに、シリカゲルの層を乗せたセライト（登録商標）の層を有するフリット漏斗（fritted funnel）にロードした。該プラグカラムをジクロロメタンで溶出し、3-(4-(ブロモメチル)-3-フルオロフェニル)-5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール(0.173 g, 0.370 mmol, 50％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.72分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 468.0 および 470.0.
【０２４８】
21-E. tert-ブチル 1-(2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１４６】
2012515787.tif 000148
3-(4-(ブロモメチル)-3-フルオロフェニル)-5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール(0.080 g, 0.171 mmol)およびtert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート, HCl塩(0.050 g, 0.256 mmol)の混合液に、室温にて、トリエチルアミン(0.071 mL, 0.513 mmol)を滴下した。該反応混合液を終夜、室温で撹拌した。該反応混合液をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮した後、20％酢酸エチル／ヘキサン混合液を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、tert-ブチル 1-(2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.073 g, 0.134 mmol, 78％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.07分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 545.3.
【０２４９】
21. 1-(2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
tert-ブチル 1-(2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.072 g, 0.132 mmol)およびトリフルオロ酢酸(3.06 mL, 39.7 mmol)の混合液を室温で60分間撹拌した。トリフルオロ酢酸を減圧下において除去し、残渣を水で希釈し、該pHを4.5に調整し(超音波処理とともに)、該固形物を減圧濾過により集め、水で洗浄し、乾燥させて、61 mgの生成物を白色の固形物として得た。該固形物を、超音波処理を用いてメタノール中に懸濁させ、減圧下において濾過し、メタノールで洗浄し、十分に乾燥させて、1-(2-フルオロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(0.014 g, 0.028 mmol, 22％収率)を白色の固形物として得た。該化合物はHPLC 保持時間 = 2.72分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 489.4.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.21-3.31 (m, 3H), 3.46 (t, J=7.07 Hz, 2H), 3.68 (s, 2H), 7.61-7.70 (m, 6H), 7.83 (dd, J=10.13, 1.25 Hz, 1H), および 7.94 (dd, J=7.91, 1.53 Hz, 1H).
【０２５０】
HPLC 純度 99.6/99.4％, 保持時間 = 7.51分 (SunFire C18 3.5u  3.0 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B (15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０２５１】
HPLC 純度 99.8/99.5％, 保持時間 = 8.85分 (XBridge Ph 3.5u  3.0 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B (15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０２５２】
実施例22
1-(2-メチル-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸の製造
【化１４７】
2012515787.tif 000149
22-A. N'-ヒドロキシ-4-ヨード-3-メチルベンズイミドアミド
【化１４８】
2012515787.tif 000150
メタノール(75 mL)中の4-ヨード-3-メチルベンゾニトリル(3.59 g, 14.8 mmol)およびヒドロキシルアミン塩酸塩(2.05 g, 29.5 mmol)の混合液に、窒素下において、炭酸水素ナトリウム(4.96 g, 59.1 mmol)を加えた。該反応混合液を、室温で5分間撹拌した後、油浴に入れ、2時間還流加熱した。該不均一な混合液を濾過し、該固形物をメタノールで洗浄し、該濾液を減圧下において濃縮した。白色の固体残渣を酢酸エチル(300 mL)で希釈したが、不均一なままであった。該混合液を5分間超音波処理し、減圧下において濾過した。HPLCによると、該固形物は無機であると思われた。該濾過物を、 (50 mL)で洗浄し、10％塩化リチウム水溶液(50 mL)で洗浄し、食塩水(50 mL)で洗浄した。水層を合わせて、酢酸エチル(2 x 50 mL)で抽出し、有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、N'-ヒドロキシ-4-ヨード-3-メチルベンズイミドアミド(3.87 g, 14.0 mmol, 95％収率)を白色の固形物として得た。該化合物はHPLC 保持時間 = 0.993分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 276.8.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 2.46 (s, 3H), 4.85 (br. s., 2H), 7.13 (dd, J=8.32, 2.22 Hz, 1H), 7.51 (d, J=1.66 Hz, 1H), および 7.84 (d, J=8.32 Hz, 1H).
【０２５３】
22-B. 3-(4-ヨード-3-メチルフェニル)-5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール
【化１４９】
2012515787.tif 000151
アセトニトリル(7 mL)中の3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボニルフルオリド(1-E, 0.974 g, 3.76 mmol)、N'-ヒドロキシ-4-ヨード-3-メチルベンズイミドアミド(1.04 g, 3.76 mmol)、およびヒューニッヒ塩基(0.853 mL, 4.89 mmol)の不均一な混合液を、室温で週末にかけて撹拌した。該反応混合液をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。ジクロロメタンを減圧下において除去し、赤みを帯びた残渣を、超音波処理(15分)とともに、メタノールでトリチュレートし、濾過して、生成物をオフホワイト色の固形物として得た。該濾液を濃縮し、さらに２回、メタノールでトリチュレートした。該固形物を合わせて十分に乾燥させて、3-(4-ヨード-3-メチルフェニル)-5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール(1.45 g, 2.92 mmol, 78％収率)をオフホワイト色の白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 4.01分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 497.89.
【０２５４】
22-C. 3-(3-メチル-4-ビニルフェニル)-5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール
【化１５０】
2012515787.tif 000152
密閉チューブ中の3-(4-ヨード-3-メチルフェニル)-5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール(1.45 g, 2.92 mmol)／ジオキサン(5 mL)溶液に、トリブチル(ビニル)スタンナン(0.942 mL, 3.21 mmol)および塩化リチウム(0.371 g, 8.75 mmol)を連続して加えた。該混合液を減圧下において脱気し、窒素(2x)で充填した。該混合液に、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(0.337 g, 0.292 mmol)を加え、該混合液を、強い窒素気流下において5分間撹拌した。該反応混合液を密封し、100℃の油浴に入れ、終夜撹拌した。該反応混合液を酢酸エチルで希釈し、濾過した。該固形物を酢酸エチル(3x)ですすいだ。該濾液を濃縮し、エーテルで希釈し、減圧下において濾過した。HPLCによって生成物が濾液中にあることが示され、それを減圧下において濃縮し、酢酸エチル／ヘキサン混合液(1％-2.5％)を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、3-(3-メチル-4-ビニルフェニル)-5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール(0.514 g, 1.294 mmol, 44.4％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.85分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 398.0.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 2.47 (s, 3H), 5.43-5.46 (m, 1 H), 7.00 (dd, J=17.34, 10.96 Hz, 1H), 7.53-7.62 (m, 3H) 7.65 (d, J=8.32 Hz, 1H), 7.69 (d, J=6.94 Hz, 2H), および 7.99-8.04 (m, 2H).
【０２５５】
22-D. 2-メチル-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンズアルデヒド
【化１５１】
2012515787.tif 000153
3-(3-メチル-4-ビニルフェニル)-5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール(0.250 g, 0.629 mmol)／ジクロロメタン(10 mL)溶液に、-78℃にて、該溶液が青色に変化するまでオゾンを加えた。該反応混合液を、青色が退色するまで酸素でパージし、次いで窒素でパージした。該反応混合液に、トリエチルアミン(0.263 mL, 1.89 mmol)を加え、該混合液を室温で15分間撹拌した。HPLCによる分析によって、出発物質が消費されたことが示された。溶媒を減圧下において除去し、生成物を淡黄色の固形物として得た。該化合物を、超音波処理とともに、メタノールでトリチュレートし、濾過し、乾燥させて、2-メチル-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンズアルデヒド(0.150 g, 0.376 mmol, 60％収率)を白色の固形物として得た。該生成物は、HPLC 保持時間 = 3.48分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 2.81 (s, 3H), 7.54-7.63 (m, 3H), 7.70 (d, J=7.21 Hz, 2H), 8.00 (d, J=7.77 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.21 (d, J=8.32 Hz, 1H), および 10.39 (s, 1H).
【０２５６】
22. 1-(2-メチル-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
メタノール(0.5 mL)およびジクロロエタン(0.5 mL)中の2-メチル-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンズアルデヒド(0.050 g, 0.125 mmol)およびアゼチジン-3-カルボン酸(0.015 g, 0.150 mmol)の混合液に、室温にて、パスツールピペットを介して3滴の酢酸を加えた。該反応混合液を60℃で1時間加熱した。該反応液を室温まで冷却し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(9.59 mg, 0.150 mmol)を加え、該混合液を室温で終夜撹拌した。該反応混合液をジクロロメタンで希釈し、水で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、白色の固形物を得て、それを、超音波処理とともに、メタノールでトリチュレートし、濾過した。得られた白色の固形物を、メタノール、ジクロロメタン、および水酸化アンモニウムの混合液(10:90:0-20:80:1)を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、1-(2-メチル-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(0.032 g, 0.065 mmol, 52％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.82分であった-カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA.  MS M+1 = 485.2.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.38 (s, 3H), 3.17 (s, 2H), 3.22-3.24 (m, 1H), 3.46 (br. s., 2H), 3.63 (s, 2H), 7.51 (d, J=7.77 Hz, 1H), 7.57-7.73 (m, 5H), 7.86-7.94 (m, 2H), および 12.33 (br. s., 1H).
【０２５７】
HPLC 純度 99.3/99.1％, 保持時間 = 7.62分(SunFire C18 3.5u  3.0 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B (15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０２５８】
HPLC 純度 99.4/99.2％, 保持時間 = 8.90分(XBridge Ph 3.5u  3.0 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B (15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０２５９】
実施例23
1-(3-クロロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸の製造
【化１５２】
2012515787.tif 000154
23-A. 4-(ブロモメチル)-2-クロロベンゾニトリル
【化１５３】
2012515787.tif 000155
4-(ブロモメチル)-2-クロロベンゾニトリル(2.72 g, 17.4 mmol)／四塩化炭素(10 mL)溶液に、85℃にて、N-ブロモスクシンイミド(3.83 g, 21.5 mmol)および過酸化ベンゾイル(1.15 g, 7.00 mmol)の混合液を、5分割で、1時間かけて加えた。25分後、さらなる6.0 mLの四塩化炭素を加えてN-ブロモスクシンイミドの溶解を補助し、AIBN部分を加えた。45分後、10 mLの四塩化炭素および5.0 mLのクロロホルムを加えた。2.5時間、還流を続けた。室温まで冷却した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。層を分離し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下において濃縮して、4.02 gの黄色の油状物を得た。ヘキサンおよび酢酸エチルの混合液(500 mLの99:1; 250 mLの97:3; および1.0 Lの95:5)を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより、4-(ブロモメチル)-2-クロロベンゾニトリル(2.30 g, 9.66 mmol, 54％収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.67 (1H, d, J=8.03 Hz), 7.56 (1H, d, J=1.51 Hz), 7.40 (1H, dd, J=8.03, 1.51 Hz), および 4.44 (2H, s).
【０２６０】
23-B. tert-ブチル 1-(3-クロロ-4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１５４】
2012515787.tif 000156
ジメチルホルムアミド中の4-(ブロモメチル)-2-クロロベンゾニトリル(2.30 g, 9.66 mmol)、tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート, HCl(0.084 g, 0.434 mmol)、およびジイソプロピルエチルアミン(0.189 mL, 1.09 mmol)の溶液を、60℃で2.33時間撹拌した。HPLCにより、反応の83％の完了が示された。さらなるジイソプロピルエチルアミン(0.189 mL, 1.09 mmol)およびtert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート, HCl(64 mg)を加え、1.5時間、60℃で撹拌を続けた。該反応混合液を室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、10％塩化リチウム水溶液で希釈した。有機層を集め、10％炭酸水素ナトリウム水溶液(2x)で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、tert-ブチル 1-(3-クロロ-4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.138 g)を黄褐色の油状物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 1.18分であった - カラム: PHENOMENEX（登録商標） S5 4.6 x 30 mm (2分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 307.06.
【０２６１】
23-C. tert-ブチル 1-(3-クロロ-4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１５５】
2012515787.tif 000157
ヒドロキシルアミン塩酸塩(0.060 g, 0.868 mmol)および炭酸水素ナトリウム(0.146 g, 1.74 mmol)を含む、tert-ブチル 1-(3-クロロ-4-シアノベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.133 g, 0.434 mmol)／イソプロパノール(1.2 mL)溶液を、90℃で6.5時間撹拌した。HPLCおよびLCMSにより、20分後、該反応は33％しか完了していないことが示された。さらなるヒドロキシルアミン塩酸塩(0.060 g)および炭酸水素ナトリウム(0.146 g)を加え、5時間、加熱を続けた。イソプロパノールを減圧下において除去し、該反応混合液を酢酸エチルで希釈し、水(2x)で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、黄褐色で粘稠性のタフィー（taffy）のtert-ブチル 1-(3-クロロ-4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(142 mg)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 0.795分であった - カラム: PHENOMENEX（登録商標） S5 4.6 x 30 mm (2分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 340.11.
【０２６２】
23-D. tert-ブチル 1-(3-クロロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１５６】
2012515787.tif 000158
N,N-ジメチルホルムアミド(1 mL)中の3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸(1-D, 0.027 g, 0.105 mmol)、tert-ブチル 1-(3-クロロ-4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.036 g, 0.105 mmol)、BOP-Cl(0.035 g, 0.136 mmol)、およびトリエチルアミン(0.044 mL, 0.315 mmol)の混合液を、プラットフォームシェーカー（platform shaker）において、室温で終夜、振盪させた。該反応混合液を、ジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下において濃縮した。該粗生成物を、シリカゲルのパッドを乗せたセライト（登録商標）のパッドを有するフリット漏斗にロードし、5％酢酸エチル／ヘキサン混合液で溶出し、ジクロロメタンで溶出し、その後20％酢酸エチル／ヘキサン混合液で溶出して、tert-ブチル 1-(3-クロロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.013 g, 0.023 mmol, 22％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間であった = 2.13分 - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 561.2.
【０２６３】
23. 1-(3-クロロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
tert-ブチル 1-(3-クロロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.0125 g, 0.022 mmol)およびトリフルオロ酢酸(1.0 mL)の混合液を、室温で45分間撹拌した。トリフルオロ酢酸を減圧下において除去した。該化合物をトリエチルアミンに溶解させ、濃縮した。次いで、該化合物を、メタノール、ジクロロメタン、および水酸化アンモニウムの混合液(10:90:0-20:80:1)を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、生成物を、無色の粘稠性の油状物として得た(9.5 mg)。該サンプルを凍結乾燥させ(アセトニトリル/水)て、1-(3-クロロ-4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(0.0035 g, 6.52 μmol, 29％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 2.81分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 504.9/507.0.  1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 3.37-3.45 (m, 1H), 4.01-4.12 (m, 4H), 4.29 (s, 2H), 7.56-7.65 (m, 4H), 7.69 (d, J=6.94 Hz, 2H), 7.77 (s, 1H), および 8.13 (d, J=8.05 Hz, 1H).
【０２６４】
HPLC 純度 94.8/96.6％, 保持時間 = 7.71分(SunFire C18 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B (15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０２６５】
HPLC 純度 95.4/96.3％, 保持時間 = 9.01分(XBridge Ph 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B (15 分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０２６６】
実施例24
1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸の製造
【化１５７】
2012515787.tif 000159
24-A. 4-(ブロモメチル)-2-(トリフルオロメチル)ベンゾニトリル
【化１５８】
2012515787.tif 000160
四塩化炭素(20 mL)およびクロロホルム(2 mL)中の4-(ブロモメチル)-2-(トリフルオロメチル)ベンゾニトリルの溶液に、85℃にて、N-ブロモスクシンイミド(3.31 g, 18.6 mmol)およびAIBN(0.933 g, 6.05 mmol)の混合液を、5分割で、1時間かけて加えた。数分後、沈殿が生じた。該反応混合液を2.5時間還流した。1.6時間後、HPLCによると、生成物は見られなかった。さらなるクロロホルムを加え(2.0 mL)、該反応混合液を1.5時間還流した。該反応がゆっくりと進行したことが、HPLC分析によって示された。さらなるN-ブロモスクシンイミド(0.30当量, 0.83 g)、ならびにAIBN(0.25 g, 0.10当量)およびクロロホルム(4 mL)を加え、加熱を続けた。2.5時間後に該反応が完了したことが、分析によって示された。室温に冷却した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。層を分離し、有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下において濃縮して、6.65 gのオレンジ色の油状物を得た。シリカゲル（エチルヘキサンおよび酢酸エチル(1Lの99:1, 2Lの97:3, および2Lの95:5)で溶出）でのフラッシュクロマトグラフィーにより、1.2 gの4-(ブロモメチル)-2-(トリフルオロメチル)ベンゾニトリル(1.20 g, 4.54 mmol, 29％収率)を無色の油状物として得て、それを白色の固形物までゆっくりと固化させた。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.79-7.86 (2H, m), 7.71 (1H, dd, J=7.91, 1.38 Hz), 4.51 (2H, s).
【０２６７】
24-B. tert-ブチル 1-(4-シアノ-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１５９】
2012515787.tif 000161
ジメチルホルムアミド中の4-(ブロモメチル)-2-(トリフルオロメチル)ベンゾニトリル(0.223 g, 0.843 mmol)、tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート, HCl(0.201 g, 0.927 mmol)、およびジイソプロピルエチルアミン(0.74 mL, 4.21 mmol)の溶液を、60℃で1時間撹拌した。該反応溶液を室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、10％塩化リチウム水溶液で洗浄した、有機層を集め、10％塩化リチウム水溶液(2x)で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、tert-ブチル 1-(4-シアノ-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.268 g, 0.787 mmol, 93％)を粘稠性の黄褐色の油状物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 1.26分であった - カラム: PHENOMENEX（登録商標） S5 4.6 x 30 mm (2分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 341.14.
【０２６８】
24-C. tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１６０】
2012515787.tif 000162
イソプロパノール(2.2 mL)中のtert-ブチル 1-(4-シアノ-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.268 g, 0.787 mmol)、ヒドロキシルアミン塩酸塩(0.109 g, 1.57 mmol)、および炭酸水素ナトリウム(0.265 g, 3.15 mmol)の溶液を、90℃で6.0時間撹拌した。HPLCおよびLCMSによって、該反応が69％完了したことが示された。さらなる、ヒドロキシルアミン塩酸塩(0.109 g)、炭酸水素ナトリウム(0.265 g)、およびイソプロパノール(2.2 mL)を加え、16時間加熱を続けた。イソプロパノールを減圧下において除去し、該反応混合液を酢酸エチルで希釈し、水(2x)で洗浄し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下において濃縮して、無色で粘稠性の油状物のtert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.258 g, 0.690 mmol, 88％収率)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 0.880分であった - カラム: PHENOMENEX（登録商標） S5 4.6 x 30 mm (2分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 374.10.
【０２６９】
24-D. tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１６１】
2012515787.tif 000163
N,N-ジメチルホルムアミド(1 mL)中の3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-カルボン酸(0.030 g, 0.104 mmol), tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.039 g, 0.104 mmol), BOP-Cl(0.035 g, 0.136 mmol)、およびトリエチルアミン(0.044 mL, 0.313 mmol)の混合液を、室温で終夜、プラットフォームシェーカーにおいて振盪させた。該反応混合液を、ジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下において濃縮した。該粗生成物を、20％酢酸エチル／ヘキサン混合液を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.010 g, 0.017 mmol, 16％収率)を白色の固形物として得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.16分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 595.2。
【０２７０】
24. 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
tert-ブチル 1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(0.010 g, 0.017 mmol)およびトリフルオロ酢酸(1.0 mL)の混合液を室温で45分間撹拌した。トリフルオロ酢酸を減圧下において除去した。該化合物をトリエチルアミンに溶解させ、濃縮した。次いで該化合物を、メタノール、ジクロロメタン、および水酸化アンモニウムの混合液(10:90:0 - 20:80:1)を用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、生成物を無色で粘稠性の油状物として得た(6.8 mg)。該サンプルを凍結乾燥させ(アセトニトリル/水)て、1-(4-(5-(3-フェニル-4-(トリフルオロメチル)イソオキサゾール-5-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロ-メチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸(0.0065 g, 0.011 mmol, 68％収率)をオフホワイト色の固形物として得た。該生成物は、HPLCよると、保持時間 = 2.86分で、＞99％純粋であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.1％TFA; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.1％TFA。 MS M+1 = 539.0.  1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.16-3.23 (m, 1H), 3.25 (t, J=6.80 Hz, 2H), 3.42-3.47 (m, 2H), 3.75 (s, 2H), 7.60-7.69 (m, 5H), 7.82 (d, J=7.77 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), および 7.94 (d, J=7.77 Hz, 1H).
【０２７１】
HPLC 純度 96.9/98.9％, 保持時間 = 7.90分(SunFire C18 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B (15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した。).
【０２７２】
HPLC 純度 97.1/99.0％, 保持時間 = 9.09分(XBridge Ph 3.5u  4.6 x 150 mm カラムにおいて、5％アセトニトリル、95％水、および0.05％TFA(溶媒A)ならびに95％アセトニトリル、5％水、および0.05％TFA(溶媒B); t = 0分, 10％B, t = 12分, 100％B (15分)を用いた直線グラジエントを用いた。流速は2 ml/分であり、UV検出は220/254 nmに設定した).
【０２７３】
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.16-3.23 (m, 1H), 3.25 (t, J=6.80 Hz, 2H), 3.42-3.47 (m, 2H), 3.75 (s, 2H), 7.60-7.69 (m, 5H), 7.82 (d, J=7.77 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), および 7.94 (d, J=7.77 Hz, 1H).
【０２７４】
実施例25
1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
【化１６２】
2012515787.tif 000164
25-A. N'-ヒドロキシ-4-メチル-2-(トリフルオロメチル)ベンズイミドアミド
【化１６３】
2012515787.tif 000165
撹拌子を有するオーブン乾燥させた20 mL 反応バイアルを、乾燥窒素気流下において冷却した。該バイアルに、4-メチル-2-(トリフルオロメチル)ベンゾニトリル(1000 mg, 5.40 mmol)、ヒドロキシルアミン塩酸塩(469 mg, 6.75 mmol)、炭酸水素ナトリウム(681 mg, 8.10 mmol)、およびメタノール(6 mL)を入れた。該バイアルを、窒素でフラッシュし、密封し、室温で30分間撹拌した後、75℃に設定したサンドバスに入れ、終夜撹拌した。該粗反応物質を逆相プレパラティブHPLCにより精製した。生成物画分を集めて、減圧下においてエバポレートして、N'-ヒドロキシ-4-メチル-2-(トリフルオロメチル)ベンズイミドアミド(0.54 g, 2.45 mmol, 45％収率)を得た。 MS M+1 = 219.0.
【０２７５】
25-B. 5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-3-(4-メチル-2-(トリフルオロメチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール
【化１６４】
2012515787.tif 000166
撹拌子を有する2ドラムの反応バイアルに、4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-カルボン酸(17-B, 48.6 mg, 0.183 mmol)、EDC(43.9 mg, 0.229 mmol)、HOBT(35.1 mg, 0.229 mmol)、およびジメチルホルムアミド(1 mL)を入れた。該バイアルを乾燥窒素でフラッシュし、密封し、該反応液を室温で30分間撹拌した。N'-ヒドロキシ-4-メチル-2-(トリフルオロメチル)ベンズイミドアミド(40.0 mg, 0.183 mmol)を入れた。該バイアルを、乾燥窒素でフラッシュし、密封し、室温で30分間撹拌した後、60℃に設定したリアクターブロック（reactor block）上に、終夜、設置した。該溶液が濁ったままである程度まで水を滴下(〜0.5mL)した後、該反応液を室温まで冷却した。冷却後、さらなる水(5 mL)を加え、該反応液を、60分間、超音波処理槽（sonicator bath）に入れた。ガム状の固形物がフラスコおよび撹拌子の側面に形成された。該水溶液をデカントし、残渣を水で洗浄した後、気流下においてある程度乾燥させた。該ガム状の固形物を、メタノール(1-2 mL)中に溶解させ、移し、乾固するまでエバポレートして、淡黄色の固形物を得た。該淡黄色の固形物を、フラッシュクロマトグラフィー(12gのIscoシリカゲル)により精製した。ジクロロメタンで溶出して、主要な生成物を得た。画分を含有する生成物をエバポレートして、5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-3-(4-メチル-2-(トリフルオロメチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール(24 mg)を得た。 MS M+1 = 448.1.
【０２７６】
25. 1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸, 2,2,2-トリフルオロ酢酸塩
撹拌子を有する2ドラムのバイアルに、5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-3-(4-メチル-2-(トリフルオロメチル)フェニル)-1,2,4-オキサジアゾール(22 mg, 0.049 mmol)／クロロホルム(3 mL)を入れ、該バイアルを、65℃に設定したリアクターブロック上に設置した。N-ブロモスクシンイミド(17.5 mg, 0.098 mmol)、続いてAIBN(4.04 mg, 0.025 mmol)を加え、該バイアルを密封した。1.5時間後、さらなるN-ブロモスクシンイミド(20 mg)を加え、該反応液を、終夜、65℃で維持した。水(2 mL)およびクロロホルム(2 mL)を加え、該反応液をボルテックスして、十分に混合した。有機相を水(2 mL)および食塩水(2 mL)で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、乾固するまで濃縮して、淡黄色の膜状物を得た。
【０２７７】
残渣をジメチルホルムアミド(1 mL)に溶解させ、tert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート, 酢酸塩(21.4 mg, 0.098 mmol)を加えた。該反応液を室温で４日間撹拌した。さらなるtert-ブチル アゼチジン-3-カルボキシレート, 酢酸塩(20 mg)およびトリエチルアミン(0.030 mL)を加えた。該反応液を、室温で終夜撹拌した後、60℃でさらに１日撹拌した。該粗反応混合液を逆相プレパラティブHPLCにより精製した。画分を含有する生成物を乾固するまでエバポレートし、得られた残渣をTFA(0.5 mL)に溶解させ、室温で静置した。TFAをエバポレートし、残渣をメタノールから再エバポレートし、高真空下に置いて、1-(4-(5-(4,5-ジフェニルイソオキサゾール-3-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)-3-(トリフルオロメチル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸, TFA(1.9 mg, 2.76 μmol)を得た。該化合物は、HPLC 保持時間 = 3.52分であった - カラム: CHROMOLITH（登録商標） SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分); 溶媒A = 10％MeOH, 90％H2O, 0.2％H3PO4; 溶媒B = 90％MeOH, 10％H2O, 0.2％H3PO4。 LC/MS M+1 = 547.0  1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 3.73 (m, 1 H) 4.39-4.41 (m, 4 H) 4.60 (s, 2 H) 7.39-7.50 (m, 8 H) 7.57-7.59 (m, 2 H) 7.87-7.95 (m, 2 H) 8.06 (s, 1 H).
【０２７８】
比較化合物A(Comp. A)
1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボン酸
評価のために、比較化合物(Comp. A)を製造した。この化合物はWO 2003/062252からの実施例54であり、Hale et al., J. Med. Chem., 6662 (2004)に記載されてもいる。
【化１６５】
2012515787.tif 000167
【０２７９】
Comp. A-1. (Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-カルボニルオキシ)-カルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１６６】
2012515787.tif 000168
N,N-ジメチルホルムアミド(7.5 mL)中の4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-カルボン酸(408 mg, 1.50 mmol)、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-ヒドロキシカルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(Int.1, 458 mg, 1.50 mmol)、HOBt(345 mg, 2.250 mmol)、ヒューニッヒ塩基(1.05 mL, 6.00 mmol)、およびEDC(431 mg, 2.25 mmol)の混合液を、室温で18時間撹拌した。該反応混合液を、酢酸エチル(120 mL)および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(60 mL)間に分配した。有機層を、水(2 x 120 mL)で洗浄し、食塩水(120 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下において濃縮し、(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-カルボニルオキシ)カルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(744 mg, 1.33 mmol, 89％収率)を薄桃色の固形物として得て、それをさらなる精製は行わずに次の工程に用いた。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC: 保持時間 = 3.26分(YMC Combi S-5 4.6 x 50 mm ODS カラム)。 MS: (M+H) = 560.25.
【０２８０】
Comp. A-2. tert-ブチル 1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート
【化１６７】
2012515787.tif 000169
(Z)-tert-ブチル 1-(4-(N'-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-カルボニルオキシ)カルバムイミドイル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(744 mg, 1.33 mmol)／アセトニトリル(30 mL)溶液に、1M TBAF／テトラヒドロフラン溶液(3.99 mL, 3.99 mmol)を加え、該反応混合液を室温で3日間撹拌した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を5 x 12 cm シリカゲルカラム（0-50％EtOAc/Hexグラジエントで溶出）でクロマトグラフィー処理した。生成物を含有する本質的に純粋な画分を濃縮して、tert-ブチル 1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(521 mg, 0.962 mmol, 72.4％収率)を無色の固形物として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.63分(YMC Combi S-5 4.6 x 50 mm ODS カラム)。 MS: (M+H)= 542.22.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 1.46 (s, 9H), 3.25 - 3.31 (m, 3H), 3.52 - 3.58 (m, 2H), 3.69 (s, 2H), 7.43 (d, J=8.25 Hz, 2H), 7.47 (m, 5H), 7.91 (s, d, J=1.65 Hz, 1H), および 8.09 (d, J=8.25 Hz, 2 H).
【０２８１】
Comp. A. 1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸
tert-ブチル 1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)アゼチジン-3-カルボキシレート(518 mg, 0.956 mmol)／トリフルオロ酢酸(15 mL)溶液を、室温で1.5時間静置した。揮発性物質を減圧下において除去し、残渣を酢酸エチル/ヘキサンから共エバポレートした(2 x 10 mL)。残渣を水(10 mL)に懸濁させ、pHを1N 水酸化ナトリウム水溶液を用いて〜11に調整した。この溶液に、十分な1N 塩酸水溶液を加えて、pH〜4.5に調整した。得られた懸濁液を、室温で終夜撹拌した。該白色の懸濁液を、中空孔率焼結ガラスフィルター（medium porosity sintered glass filter）を通して濾過し、該濾過ケーキを水で十分に洗浄した。該固形物を乾燥させ、該白色の粉末をメタノール中に懸濁させ、該懸濁液を均一になるまで超音波処理した。メタノールを減圧下において除去し、該手順をさらに２回繰り返して、白色の固形物を得て、それをメタノール(〜30 mL)の懸濁液として終夜撹拌した。減圧濾過し、乾燥させて、1-(4-(5-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)チオフェン-2-イル)-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)ベンジル)-アゼチジン-3-カルボン酸(345 mg, 0.707 mmol, 74％収率)を白色の粉末として得た。4分にわたる10-90％メタノール水溶液 + 0.2％リン酸のグラジエントで溶出して、HPLC 保持時間 = 3.45分(YMC Combi S-5 4.6 x 50 mm ODS カラム)。 MS: (M+H) = 486.12.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.23 (s, 3H), 3.39 - 3.45 (m, 2H), 3.64 (s, 2H), 7.50 (d, J=8.28 Hz, 2H), 7.58 (m, 5H), 8.02 (d, J=8.28 Hz, 2H), および 8.26 (d, J=1.25 Hz, 1H).  元素分析: C24H18N3O3SF3・0.1H2Oとして計算;計算値: C 59.22, H 3.76, N 8.63, S 6.59, F 11.71; 実測値: C24H18N3O3SF3・0.1H2O: C 59.06, H 3.45, N 8.60, S 6.61, F 11.42; KF (実測値)= 0.25％水.
【０２８２】
（生物学的アッセイ）
S1P1結合アッセイ
ヒトS1P1を発現しているCHO細胞から、膜を調製した。細胞を、20 mM HEPES、pH 7.5、50 mM NaCl、2 mM EDTAおよびプロテアーゼインヒビターカクテル(Roche)を含むバッファー中で分離し、氷上でポリトロンホモジナイザーを用いて破壊した。該ホモジネートを20,000 rpm(48,000g)で遠心分離して、上清を捨てた。該膜ペレットを、50 mM HEPES、pH 7.5、100 mM NaCl、1 mM MgCl2、2 mM EDTAを含むバッファー中に再懸濁させ、タンパク質濃度を測定した後、アリコートで、-80℃にて保存した。
【０２８３】
膜(2 μg/ウェル)および0.03 nM 最終濃度の33P-S1Pリガンド(1 mCi/ml, American Radiolabeled Chemicals)を、化合物プレートに加えた。結合を室温で60分間行い、GF/Bフィルタープレート上に該膜を集めることによって終了させ、そして、TOPCOUNT（登録商標）によって放射活性を測定した。様々な濃度にわたる試験化合物の競合データを、放射性リガンド特異的結合のパーセント阻害としてプロットした。IC50は、特異的結合を50％まで低下させるのに必要な競合リガンドの濃度と定義される。
【０２８４】
本発明の化合物および比較化合物Aを上記のS1P1結合アッセイにおいて試験し、表Aに示される２桁に四捨五入した結果を得た。いくつかの場合において、値は複数の実験の平均であり、ここでNは良好な用量反応曲線が得られた実験の実施数である。１つの実施例のうちの１つ以上のバッチを試験した場合、提示される値は、メソッドAにおいてGTPγS S1P1とGTPγS S1P3との比較が可能であったバッチからのものである(データは表Bに示される)。データは、実施例化合物の異なるバッチにわたる平均化はしなかった。
表A
【表１】
2012515787.tif 000170
【０２８５】
メソッドA:受容体[35S] GTPγS結合アッセイ
化合物を、384 Falcon v-底プレート(3倍希釈において0.5 μl/ウェル)にロードした。S1P1/CHO細胞もしくはEDG3-Ga15-bla HEK293T細胞から調製した膜を、MULTIDROP（登録商標）とともに、該化合物プレートに加えた(40 μl/ウェル、最終的にタンパク質 3 μg/ウェル)。[35S]GTP(1250 Ci/mmol, Perkin Elmer)を、アッセイバッファー: 20 mM HEPES、pH7.5、10 mM MgCl2、150 mM NaCl、1 mM EGTA、1 mM DTT、10 μM GDP、0.1％脂肪酸フリーBSA、および10 μg/ml サポニンにおいて0.4 nMまで希釈した。40 μlの該[35S]GTP溶液を、化合物プレートに、最終濃度 0.2 nMで加えた。該反応液を室温で45分間維持した。インキュベーションの終わりに、化合物プレート中の全ての混合液を、GPCRロボットシステムによって384ウェルのFBフィルタープレートに移した。該フィルタープレートを、改良したマニフォールドEmblaプレートウォッシャーを用いて水で4回洗浄し、60℃で45分間乾燥させた。Packard TOPCOUNT（登録商標）で測定するために、30 μlのMicroScint 20 シンチレーション流体（scintillation fluid）を各ウェルに加えた。EC50は、試験した各個々の化合物について得られたYmax(最大反応)の50％に相当するアゴニスト濃度と定義される。
【０２８６】
メソッドB:受容体[35S]GTPγS SPA結合アッセイ
S1P1もしくはS1P3トラスフェクトCHO細胞(2 μg タンパク質)から調製した膜を、96-ウェル白色プレート(CORNING（登録商標）3693)中で、7.5 μl WGA-PVTビーズ(20 mg/ml)、ならびに5 μM GDP、20 mM HEPES pH 7.4、100 mM NaCl、1 mM EDTA、5 mM MgCl2、10 μg /ml サポニン、0.1％BSA、および1 μM ロイペプチンを含有する50μlの反応混合液中において、DMSOに希釈した試験化合物とともにインキュベートした。25 μlの0.2 nM [35S]-GTPγS(1250 Ci/mmol; NEN)／アッセイバッファーを加えることによって、該アッセイを開始した。室温で90分インキュベートした後、該プレートを1000rpmで5分間遠心処理した。結合した放射性核種をTOPCOUNT（登録商標）にて測定し、S1P(1 μM)活性化と比較した％反応で表した。データは、エクセルにおいて、４つのパラメーターのロジスティック方程式を用いて分析した。該方程式 Y=A+((B-A)/(1+((EC50/X)^D)))中の４つのパラメーターは以下のように説明される:Aは底面プラトー（bottom plateau）でのY値(アゴニスト活性)であり;Bは上面プラトー（top plateau）でのY値であり;EC50は反応が底面と上面の中間である時のX値(アゴニスト濃度)であり;DはHill係数である。Ymax値が50％以下である化合物については曲線が得られなかった。
【０２８７】
本発明の化合物および比較化合物Aを、上記の受容体[35S]GTPγS結合アッセイ(メソッドA)および受容体[35S]GTPγS SPA結合アッセイ(メソッドB)において試験し、表Bに示される、２桁に四捨五入した結果を得た。ある場合には、値は複数の実験の平均であり、ここでNは良好な用量反応曲線が得られた実験の実施数である。１つの実施例のうちの１つ以上のバッチを試験した場合、提示された値は、メソッドAにおいてGTPγS S1P1とGTPγS S1P3との比較が可能であったバッチ（その中でほとんどの数の実験が実施された）からのものである。好ましくは、メソッドAおよびメソッドBにおいて同一のバッチを試験した。データは、実施例化合物の異なるバッチにわたる平均化はしなかった。
表B
【表２】
2012515787.tif 000171
ND = 測定せず。
NC = 良好な用量反応曲線が得られなかった。
【０２８８】
GTPγS S1P1 EC50値に対するGTPγS S1P3 EC50値の比を、表B中のデータから算出し、表Cに示す。
表C
【表３】
2012515787.tif 000172
【０２８９】
表Cにおいて、GTPγS S1P1 EC50値に対するGTPγS S1P3 EC50値の比が大きな値であるほど、S1P3活性よりもS1P1活性の選択性が高いことを示す。
【０２９０】
本発明の化合物は、実施例1〜19により例示されるように、S1P1のアゴニストとして驚くべき利点を示し、S1P3以上に選択的である。例えば、比較化合物Aと比較した場合、メソッドAによる測定で、表Cに記載される本発明の例示化合物は18〜4,900の範囲の選択性比を有していたが、対照的に、比較化合物Aは1.2の選択性比を有していた。メソッドBによる測定で、表Cに記載される本発明の例示化合物は112〜11,000の範囲の選択性比を有していたが、対照的に、比較化合物Aは78の選択性比を有していた。
【０２９１】
本発明の化合物は、S1P1のアゴニストとしての活性を有し、S1P3以上の選択性であり、従って、S1P3活性に起因する副作用を減少もしくは最小化するとともに、様々なS1P1受容体関連症状の処置、予防、もしくは治療に用いられうる。本発明の化合物の驚くべき選択性は、それらを、あり得る心血管系の副作用（例えば徐脈および高血圧）を減少もしくは最小化するとともに、自己免疫性および炎症性疾患（例えば多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患、または乾癬）の処置、予防、もしくは治療において用いることができる可能性を示唆する。本発明のその他の利用可能性には、S1P3活性に起因する副作用を減少もしくは最小化するとともに、移植器官の拒絶反応を最小化もしくは減少させることが含まれる。
【０２９２】
げっ歯類における血中リンパ球減少アッセイ（Blood Lymphocyte Reduction Assay）(BLR)
LewisラットもしくはBALB/cマウスに、試験物質(ビヒクル中の溶液もしくは懸濁液として)またはビヒクルのみ(ポリエチレングリコール300、「PEG300」)を経口で投与した。4時間および24時間にて、後眼窩採血（retro-orbital bleeding）により血液を採取した。血中リンパ球数を、ADVIA（登録商標）120 血液学検査装置(Siemens Healthcare Diagnostics)で測定した。結果は、4時間および24時間での測定にて、ビヒクル処置群と比べた場合の循環リンパ球の割合の減少として評価した。結果は、各処置群内の全動物の平均結果を示す(n = 3-4)。
【０２９３】
実施例1および2を、上記の血中リンパ球減少アッセイ(BLR)において試験し、結果を、ラットについては表Dに、マウスについては表Eに示す。
表D
【表４】
2012515787.tif 000173
表E
【表５】
2012515787.tif 000174
【０２９４】
ラットアジュバント誘発関節炎アッセイ(AA)
オスLewisラット(150-175 g; Harlan, n=8 処置群)を、10 mg/mlの直前に粉末にしたマイコバクテリウムブチリカム(Difco Laboratories)／不完全フロイントアジュバント(sigma)を100 μl用いて、尾の付け根にて、免疫処置した。動物に、試験物質(ビヒクル中の溶液もしくは懸濁液として)またはビヒクルのみ(ポリエチレングリコール300、「PEG300」)を、免疫処置の日から開始して、１日１回投与した。それらの後足の容積を、水置換（water displacement）plethysmometer(Ugo Basile, Italy)で測定した。ベースラインの足測定値を疾患の発症前(7日目から10日目の間)に採取した。次いで、20日目の研究終了まで、１週間に３回、足測定値を採取した。動物を用いる全ての方法は、動物実験委員会により審査され、承認された。
【０２９５】
実施例1を、上記のラットアジュバント誘発関節炎アッセイにおいて試験し、結果を表Fに示す。
表F
【表６】
2012515787.tif 000175
【０２９６】
関節リウマチについての動物モデルであるラットアジュバント誘発関節炎モデルにおいて、実施例1は、予防的経口投与レジメン（regiment）を用いたLewisラットにおける足の腫脹による測定で、疾患の進行を抑制する。
【０２９７】
マウス実験的自己免疫性脳脊髄炎アッセイ(EAE)
マウス(C57BL/6メス, 6-8週齢, Charles River, n=10-12 処置群)を、150 μgの結核菌H37RA(Difco Laboratories)を添加した不完全フロイントアジュバント(sigma)を用いて1:1で乳化された150 μgのMOG35-55を用いて、皮下に免疫処置した。400 ngの百日咳毒素(CalBiochem)を、免疫処置の日および２日後に、腹腔内に注入した。動物に、試験物質(ビヒクル中の溶液もしくは懸濁液として)またはビヒクルのみ(ポリエチレングリコール300、「PEG300」)を、免疫処置の1日後から開始して、１日１回投与した。24日目の研究終了まで、１週間に3回、臨床的スコアリングを行い、体重を測定した。臨床的スコアリングシステム: 0.5:部分的な尾の脱力; 1:尾の脱力、または尾の緊張を伴う動揺性歩行; 1.5: 部分的な尾の脱力を伴う動揺性歩行; 2:尾の脱力を伴う動揺性歩行(運動失調); 2.5: 部分的な四肢麻痺を伴う運動失調; 3: １つの肢の完全な麻痺; 3.5: 第２の肢の部分的な麻痺を伴う１つの肢の完全な麻痺; 4: ２つの肢の完全な麻痺; 4.5: 瀕死; 5: 死亡.
【０２９８】
実施例1を、上記のマウス実験的自己免疫性脳脊髄炎アッセイにおいて試験し、結果を表Gに示す。
表G
【表７】
2012515787.tif 000176
【０２９９】
多発性硬化症についての動物モデルであるマウス実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)モデルにおいて、実施例1は、予防的経口投与レジメンを用いたC57Bl/6 マウスにおける臨床的スコアーによる測定で、疾患の進行を抑制する。
【国際調査報告】
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