【手続補正書】
【提出日】平成21年3月5日(2009.3.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ターゲットタンパク質および宿主細胞タンパク質を含む1つまたは複数の混入物質を含む混合物からターゲットタンパク質を精製するための方法であって、
（a）いずれかの順序で、陽イオン交換クロマトグラフィー工程および疎水性電荷誘導クロマトグラフィー工程に混合物を供し、インプロセス（in-process）接線流ろ過工程がなく、かつ疎水性電荷誘導クロマトグラフィー工程がターゲットタンパク質について差次的に宿主細胞タンパク質を溶出する溶出緩衝液を用いる工程；ならびに
（b）約100百万分率（ppm）またはそれ未満の宿主細胞タンパク質の純度まで、ターゲットタンパク質を単離する工程を含む、
2工程非アフィニティークロマトグラフィー方法。
【請求項２】
陽イオン交換クロマトグラフィー工程が、ターゲットタンパク質について差次的に宿主細胞タンパク質を溶出する溶出緩衝液を用いる、請求項1記載の方法。
【請求項３】
混入物質が核酸を含み、かつターゲットタンパク質が約10pg/mgまたはそれ未満の核酸の純度まで単離される、請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
ウイルス不活性化工程をさらに含む、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
ウイルス不活性化工程がインプロセス工程である、請求項4記載の方法。
【請求項６】
混合物が細胞培養上清から調製される、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
陽イオン交換クロマトグラフィーが、3〜10のpH範囲または4.0〜8.0のpH範囲で行われる、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
ターゲットタンパク質が、
（i）pH3〜9で、かつ0.1〜40mS/cmの伝導度範囲で；または
（ii）pH4.0〜8.0で、かつ0.5〜10mS/cmの伝導度で、
陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに結合する、
前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
ターゲットタンパク質が、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに結合し、かつカラムが、
（i）3〜9のpH範囲および0.1〜40mS/cmの伝導度範囲；または
（ii）4.0〜8.0のpH範囲および0.5〜10mS/cmの伝導度範囲
を有する洗浄緩衝液を用いて洗浄される、
前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
ターゲットタンパク質が、
（i）3〜10のpH範囲および0.1〜40mS/cmの伝導度範囲で；または
（ii）4.0〜8.0のpH範囲および5〜15mS/cmの伝導度範囲で、
陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから溶出する、
前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
陽イオン交換クロマトグラフィー工程が、スルホネート、カルボン酸、カルボキシメチルスルホン酸、スルホイソブチル、スルホエチル、カルボキシル、スルホプロピル、スルホニル、スルホキシエチルおよびオルトホスフェートから選択される陽イオン交換リガンドを使用する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
陽イオン交換クロマトグラフィー工程が、膜、Poros HS、Poros S、カルボキシ-メチル-セルロース、BAKERBOND ABX（商標）、アガロース上に固定されたスルホプロピルおよびアガロース上に固定されたスルホニル、MonoS、MiniS、Source 15S、30S、SP Sepharose、CM Sepharose、 BAKERBOND Carboxy-Sulfon、WP CBX、WPスルホニック（WP Sulfonic）、 Hydrocell CM、Hydrocel SP、UNOsphere S、Macro-Prep High S、Macro-Prep CM、Ceramic HyperD S、Ceramic HyperD CM、Ceramic HyperD Z、Trisacryl M CM、Trisacryl LS CM、Trisacryl M SP、Trisacryl LS SP、Spherodex LS SP、DOWEX 微細メッシュ強酸陽イオン樹脂、DOWEX MAC-3、Matrex Cellufine C500、Matrex Cellufine C200、Fractogel EMD SO3-、Fractogel EMD SE、Fractogel EMD COO-、Amberlite 弱および強陽イオン交換体、Diaion弱および強陽イオン交換体、TSK Gel SP-5PW-HR、TSK Gel SP-5PW、Toyopearl CM (650S、650M、650C)、Toyopearl SP (650S、650M、650C)、CM (23、32、52)、SE(52、53)、P11、エクスプレス-イオン（Express-Ion） Cならびにエクスプレス-イオンSから選択される陽イオン交換樹脂上で行われる、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
疎水性電荷誘導クロマトグラフィーが、
（i）3〜10のpH範囲；または
（ii）4.0〜9.0のpH範囲
で行われる、
前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
ターゲットタンパク質が、
（i）pH5〜10で、かつ0〜90mS/cmの伝導度範囲で；または
（ii）pH6〜9で、かつ2〜9mS/cmの伝導度範囲で、
疎水性電荷誘導クロマトグラフィーカラムに結合する、
前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
疎水性電荷誘導クロマトグラフィーカラム工程において用いられる洗浄緩衝液が、6〜9のpH範囲および0.1〜9mS/cmの伝導度範囲を有する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
疎水性電荷誘導クロマトグラフィー工程において用いられる洗浄緩衝液がリン酸ナトリウムである、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
疎水性電荷誘導交換クロマトグラフィー工程において用いられる溶出緩衝液が、4.0〜6.0のpH範囲および0.1〜2.0mS/cmの伝導度範囲を有する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１８】
疎水性電荷誘導交換クロマトグラフィーカラムからのターゲットタンパク質の収集が上昇するA280から下降するA280のピークの形成に基づき、かつターゲットタンパク質をピークの最大の高さの25%より前に収集する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１９】
リンカーアームおよび／またはリガンド構造上に脂肪族鎖および少なくとも1つのイオウ原子を有する、イオン化可能芳香族または複素環構造を含む、疎水性電荷誘導クロマトグラフィーリガンドを、疎水性電荷誘導クロマトグラフィーが使用する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
疎水性電荷誘導クロマトグラフィーリガンドが、2-アミノメチルピリジン、3-アミノメチルピリジンおよび4-アミノメチルピリジン、2-メルカプトピリジン、4-メルカプトピリジンまたは4-メルカプトエチルピリジン、メルカプト酸、メルカプトアルコール、イミダゾリルに基づくもの、メルカプトメチルイミダゾール、2-メルカプトベンズイミダゾール、アミノメチルベンズイミダゾール、ヒスタミン、メルカプトベンズイミダゾール、ジエチルアミノプロピルアミン、アミノプロピルモルホリン、アミノプロピルイミダゾール、アミノカプロン酸、ニトロヒドロキシ安息香酸、ニトロチロシン／エタノールアミン、ジクロロサリチル酸、ジブロモチラミン、クロロヒドロキシフェニル酢酸、ヒドロキシフェニル酢酸、チラミン、チオフェノール、グルタチオン、ビサルフェート、および色素、またはその誘導体から選択される群を含む、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
疎水性電荷誘導クロマトグラフィーが、疎水性電荷誘導樹脂としてMEP HyperCelを用いて行われる、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
ターゲットタンパク質が抗体または抗体断片である、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
抗体が完全ヒト抗体である、請求項22記載の方法。
【請求項２５】
抗体が、抗CTLA4抗体および抗CD30抗体から選択される、請求項22〜24のいずれか一項記載の方法。
【請求項２６】
抗体が、一本鎖抗体分子、ダイアボディ、直鎖抗体、二重特異性抗体および多重特異性抗体から選択される、請求項22〜25のいずれか一項記載の方法。
【請求項２７】
抗体断片がFab、Fab1'、F(ab')2およびFvから選択される、請求項22〜25のいずれか一項記載の方法。
【請求項２８】
ターゲットタンパク質がイムノアドヘシンである、請求項1〜21のいずれか一項記載の方法。
【請求項２９】
単離タンパク質を配合して薬学的組成物にする工程をさらに含む、前記請求項のいずれか一項記載の方法。