【手続補正書】
【提出日】平成23年9月27日(2011.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは有効成分の構造が明確なグルタチオン産生促進作用を有する物質を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、トリテルペン酸及びその誘導体にその様な作用を見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示すとおりである。
＜１＞トリテルペン酸、トリテルペン酸の誘導体及びこれらの塩から選択される成分を有効成分として含有することを特徴とする、グルタチオン産生促進用の組成物。
＜２＞前記トリテルペン酸は、ウルソール酸又はオレアノール酸であることを特徴とする、＜１＞に記載のグルタチオン産生促進用の組成物。
＜３＞前記誘導体は３位アシル化体であることを特徴とする、＜１＞又は＜２＞に記載のグルタチオン産生促進用の組成物。
＜４＞前記トリテルペン酸、トリテルペン酸の誘導体及びこれらの塩から選択される成分の起源が、バラ科アロニア属（Aronia sp.）、バラ科リンゴ属（Malus sp.）、バラ科ナシ属（Pyrus sp.）、ツツジ科クマコケモモ属（Arctostaphylos sp.）、ツツジ科スノキ属（Vaccinium sp.）、フトモモ科フトモモ属（Syzygium sp.）、リンドウ科センブリ属（Swertia sp.）の植物体の抽出物から選ばれることを特徴とする、＜１＞〜＜３＞何れかに記載のグルタチオン産生促進用の組成物。
＜５＞バラ科アロニア属（Aronia sp.）の植物がアロニア・メラノカルパ（Aronia melanocarpa）、バラ科リンゴ属（Malus sp.）の植物がリンゴ（Malus pumila var. domestica）、バラ科ナシ属（Pyrus sp.）の植物がセイヨウナシ（Pyrus communis）、ツツジ科クマコケモモ属（Arctostaphylos sp.）の植物がウワウルシ（Arctostaphylos uva-ursi）、ツツジ科スノキ属（Vaccinium sp.）の植物がツルコケモモ（Vaccinium oxycoccus）、フトモモ科フトモモ属（Syzygium sp.）の植物がチョウジ（Syzygium aromaticum）、リンドウ科センブリ属（Swertia sp.）の植物がセンブリ（Swertia japonica）であることを特徴とする、＜４＞に記載のグルタチオン産生促進用の組成物。
＜６＞前記グルタチオンの産生促進に於いて、γ-グルタミルシステイン合成酵素の発現の促進を機作に含むことを特徴とする、＜１＞〜＜５＞何れかに記載のグルタチオン産生促進用の組成物。
＜７＞経口投与組成物であることを特徴とする、＜１＞〜＜６＞何れかに記載のグルタチオン産生促進用の組成物。
＜８＞デトックスを目的とする組成物であることを特徴とする、＜１＞〜＜７＞何れかに記載のグルタチオン産生促進用の組成物。
＜９＞前記デットクスの目的は、次に示す疾患予防及び／又は改善効果であることを特徴
とする、＜８＞に記載のグルタチオン産生促進用の組成物。
（疾患）しみ、にきび、アトピー性皮膚炎、動脈硬化、糖尿病、薬物中毒、妊娠中毒、白内障、慢性肝疾患、腎疾患、肺疾患
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
＜１＞本発明のグルタチオン産生促進用の組成物の必須成分であるトリテルペン酸類
本発明のグルタチオン産生促進用の組成物は、トリテルペン酸、トリテルペン酸の誘導体及びこれらの塩から選択される成分を有効成分として含有することを特徴とする。前記トリテルペン酸としては、例えば、ウルソール酸、オレアノール酸、アジア酸、ベツリン酸などが好適に例示でき、中でも３位に水酸基を有する、ウルソール酸、オレアノール酸がより好ましい。これらは、トリテルペン酸のまま使用することもできるが、誘導体などに構造変換して使用することもできる。誘導体としては、水酸基をアセチル化、オクタノイル化、ラウロイル化、オレオイル化、ステアロイル化、イソステアロイル化などの等アシル化したアシル誘導体、メトキシ化、エトキシ化、ブチルオキシ化等のアルコキシ化したアルコキシ誘導体、カルボキシル基をアミド化したアミド誘導体、カルボキシル基をアルキル化、アルケニル化、アリル化、ホスホリル化したエステル類等が好適に例示でき、アシル化誘導体が特に好ましい。具体的には、例えば、３-アセチルウルソール酸、３-アセチルオレアノール酸、３-アセチルアジア酸などが好適に例示でき、中でも、３-アセチルウルソール酸、３-アセチルオレアノール酸が特に好適に例示できる。これらは、更にアルカリで処理して塩としても使用でき、塩としては、例えば、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、トリエチルアミン塩、トリエタノールアミン塩等の有機アミン塩、アルギニン塩、リシン塩等の塩基性アミノ酸塩等が好適に例示できる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
＜２＞本発明のグルタチオン産生促進用の経口投与組成物
本発明のグルタチオン産生促進用の組成物は、生体内に於いてグルタチオンの産生を高める目的で経口投与組成物として投与するもの、皮膚内のグルタチオン産生量を高める目的で経皮的に投与されるものが存する。この様な本発明の組成物に於いて、前記トリテルペン酸、トリテルペン酸の誘導体及びこれらの塩は、グルタチオン産生促進剤として作用する。
経口投与組成物としては、例えば、菓子やパン、麺等の一般食品、カプセル剤や、錠剤の形態を取る、健康増進の目的を有する食品群（例えば、特定保健用食品等）、顆粒剤、粉末剤、カプセル剤や、錠剤の形態を取る、経口投与医薬等が例示でき、それぞれの製剤で許容される任意成分を含有することができる。この様な任意成分としては、食品であれば、塩、砂糖、グルタミン酸ナトリウム、イノシン酸ナトリウム、酢等の調味成分、着色成分、フレーバー等の矯臭成分、増粘剤、乳化・分散剤、保存料、安定剤等が好適に例示でき、健康増進の目的を有する食品群や医薬であれば、結晶セルロース、乳糖等の賦形剤、アラビヤガムやヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤、クロスカルメロースナトリウム、デンプン等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、矯味、矯臭剤、着色剤等が好ましく例示できる。これらを常法に従って処理することにより、本発明の経口投与組成物は製造することができる。この時、前記トリテルペン酸、トリテルペン酸の誘導体及びこれらの塩は、総量で、組成物全量に対して、１〜５０質量、より好ましくは５〜３０質量％含有されることが好ましい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
（２）γ-グルタミルシステインシンセターゼ（ＧＣＳ）遺伝子の定量試験
上記（１）と同様の方法でＨｅｐＧ２を培養し、ジメチルスルホキシドにて懸濁した各抽出物を乾燥固形物量として培地中に２０μｇ／ｍｌの濃度で含む試料添加培地に交換し、さらに６時間培養した。その後細胞を回収し、ＲＮＡｓｐｉｎ Ｍｉｎｉ ＲＮＡ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。得られた全ＲＮＡを用いて、以下に示すようにリアルタイムＲＴ-ＰＣＲ法によりγ-グルタミルシステインシンセターゼ（ＧＣＳ）遺伝子の定量試験を実施した。即ち、１μｇのｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＧＣＳ合成プライマー（ＳＩＧＭＡ ＧＥＮＯＳＹＳ社製：配列番号１、配列番号２）及びＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ １ｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ（タカラバイオ社製）を用いて逆転写反応を行った。逆転写反応によって得られたＧＣＳのｃＤＮＡを滅菌水にて１００倍希釈し、鋳型ｃＤＮＡとした。Ｅｘ Ｔａｑ ｋｉｔ（タカラバイオ社製）を用いてＰＣＲ反応を行った後に電気泳動を行った。得られたバンドは画像ソフトを用いて画像として取り込み、ＩｍａｇｅＪ（アメリカ国立衛生研究所製）を用いてバンドの濃淡を数値化した。ＧＣＳ遺伝子の発現量は、β-アクチン遺伝子についても同様に検討した発現量（合成プライマーはＳＩＧＭＡ ＧＥＮＯＳＹＳ社製：配列番号３、配列番号４）の相対値として表した。設計した合成プライマーの塩基配列及びＰＣＲ反応条件は以下の通りである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
＜結果３＞
図４に製造例１〜７に記載の植物抽出物を添加したときのヒト肝ガン由来細胞株ＨｅｐＧ２のＧＣＳ遺伝子の発現量を示す。製造例１〜７の植物抽出物はいずれもコントロールに比べて高いＧＣＳ遺伝子発現促進作用を有した。以上の結果より、本発明の組成物はグルタチオン合成酵素の発現を促進することを機作の一つとしており、新規な作用機序に則ったグルタチオン産生促進作用を有することが判る。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2010105937000001.app