【手続補正書】
【提出日】平成21年9月18日(2009.9.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2009510144.tif 000001
［式中、
Ｒ１は、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−（Ｃ3−Ｃ6）シクロアルキル、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−Ｏ−（Ｃ3−Ｃ6）シクロアルキル、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−（Ｃ5−Ｃ15）ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルキレン、アリール及びシクロアルキルは無置換、又はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＣＮ、ＣＯ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＣＯＯ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＣＯＮ（（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−Ｈ）（（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−Ｈ）、Ｓ（Ｏ）m（Ｃ1−Ｃ6）アルキルにより一、二若しくは三置換され；
Ｒ２、Ｒ３は、独立に、Ｈ、ハロゲン、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｏ−（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｈ、ＳＣＨ3、ＣＮであり、ここで、アルキル及びアルキレンは無置換、又はＦにより一、二若しくは三置換され；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７は、独立に、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ3−Ｃ6）シクロアルキル、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−（Ｃ5−Ｃ15）ヘテロアリール、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−
（Ｃ3−Ｃ15）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−（Ｃ3−Ｃ15）ヘテロシクロアルケニルであり、ここで、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニル及びヘテロアリールは無置換、又はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ3、（Ｃ1−Ｃ4）アルキル及び（Ｃ0−Ｃ4）−アルキレン−Ｏ−（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｈにより一、二若しくは三置換され；
ｍは、０、１であり；
Ａは、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ5−Ｃ15）ヘテロアリールであり；
Ｂは、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ3−Ｃ12）シクロアルキル、（Ｃ5−Ｃ15）ヘテロ
アリールであり；
Ｚは、結合、Ｏであり；又は
環Ａ、環Ｂは一緒になって、  縮合（Ｃ5−Ｃ15）ヘテロ環又は（Ｃ8−Ｃ14）芳香族環系を形成し；そして
Ｚは、存在せず；
Ｒ８、Ｒ９は、独立に、Ｈ、ハロゲン、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｏ−（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｈ、ＳＣＦ3、ＳＦ5、Ｓ（Ｏ）2ＣＦ3、Ｏ−（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、ＮＯ2であり、ここで、アルキル及びアルキレンは無置換、又はＦにより一、二若しくは三置換され、そして、アリールは無置換、又はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ3、（Ｃ1−Ｃ4）アルキル及び（Ｃ0−Ｃ4）−アルキレン−Ｏ−（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｈにより一、二若しくは三置換され；
ｐは、０、１、２、３であり；
ｑは、０、１、２である］
の化合物、全てのその立体異性体、エナンチオマー体及び任意の割合での混合物、並びにその生理学的に許容される塩及び互変異性体。
【請求項２】
Ｒ１は、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ6）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ14）アリールであり、ここで、アルキル、アルキレン及びアリールは無置換、又はＦにより一若しくは二置換され；
Ｒ２、Ｒ３は、独立に、Ｈ、ハロゲン、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｏ−（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｈであり、ここで、アルキル及びアルキレンは無置換、又はＦにより、一、二若しくは三置換され；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７の置換基の１つは、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ2）アルキレン−（Ｃ3−Ｃ6）シクロアルキル、（Ｃ0−Ｃ2）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）アリール、（Ｃ0−Ｃ2）アルキレン−（Ｃ5−Ｃ10）ヘテロアリール、（Ｃ0−Ｃ2）アルキレン−（Ｃ3−Ｃ10）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ0−Ｃ2）アルキレン−（Ｃ3−Ｃ10）ヘテロシクロアルケニルであり、ここで、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニル及びヘテロアリールは無置換、又はＦ、Ｃｌ、ＣＦ3、（Ｃ1−Ｃ4）アルキル及び（Ｃ0−Ｃ4）−アルキレン−Ｏ−（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｈにより一、二若しくは三置換され；そして、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７の他の３つの置換基は、Ｈであり；
ｍは、０、１であり；
Ａは、（Ｃ6−Ｃ10）アリール、（Ｃ5−Ｃ10）ヘテロアリールであり；
Ｂは、（Ｃ6−Ｃ10）アリール、（Ｃ6−Ｃ8）シクロアルキル、（Ｃ5−Ｃ10）ヘテロアリールであり；
Ｚは、結合又はＯであり；
Ａ及びＢは、一緒になって縮合（Ｃ8−Ｃ10）ヘテロ環を形成し；
Ｚは、存在せず；
Ｒ８は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり；
Ｒ９は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｏ−（Ｃ0−Ｃ4）アルキレン−Ｈ、Ｏ−（Ｃ6−Ｃ10）アリールであり、ここで、アルキル及びアルキレンは無置換、又はＦにより、一、二若しくは三置換され；
ｐは、０、１、２であり；
ｑは、０、１である；
請求項１に記載の式Ｉの化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、フェニル、（Ｃ3−Ｃ6）シクロアルキルである；
請求項１又は２に記載の式Ｉの化合物。
【請求項４】
Ｒ１が、イソプロピルである；
請求項１又は２に記載の式Ｉの化合物。
【請求項５】
Ｒ２、Ｒ３が、Ｈである；
請求項１〜４のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項６】
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７が、Ｈである；
請求項１〜５のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項７】
ｍが、０である；
請求項１〜６のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項８】
Ａが、オキサゾール、チアゾール、フェニル、１，２，４−オキサジアゾールである；請求項１〜７のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項９】
Ｂが、フェニル、シクロヘキシルである；
請求項１〜８のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項１０】
Ｚが、結合である；
請求項１〜９のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項１１】
Ａ及びＢが、一緒になってベンゾフラン環を形成し；そして
Ｚが、存在しない；
請求項１〜９のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項１２】
Ｒ８が、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ4）アルキルであり；そして
ｐが、０又は１である；
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項１３】
Ｒ９が、Ｈ、ＣＦ3、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、フェノキシであり；そして
ｑが、１である；
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の１つ又はそれ以上の式Ｉの化合物を含む医薬品。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物を含む、脂肪酸代謝の障害及びグルコース利用障害の治療又は予防のための医薬。
【請求項１６】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物を含む、インスリン抵抗性が関与する障害の治療又は予防のための医薬。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物を含む、糖尿病に伴う続発症の予防を含む糖尿病の治療又は予防のための医薬。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物を含む、異脂肪血症及びその続発症の治療又は予防のための医薬。
【請求項１９】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物を含む、メタボリックシンドロームに関連する可能性のある状態の治療又は予防のための医薬。
【請求項２０】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物を含む、中枢及び末梢神経系の脱髄障害及び他の神経変性障害の治療又は予防のための医薬。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６３】
アッセイ手順
ＰＰＡＲガンマ作動薬活性は、以下に記述される４日アッセイにおいて測定された。トランスフェクションの前に、ＨＥＫ細胞は、以下の添加物：１０％ＦＣＳ（＃１６０００−０４４、Invitrogen）、１％ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（＃１５１４０−１２２、Invitrogen）及び２ｍＭのＬ−グルタミン（＃２５０３０−０２４、Invitrogen）、と混合されたＤＭＥＭ（４１９６５−０３９、Invitrogen）で培養された。
１日目
先ず、溶液Ａ、即ちＤＭＥＭに加えて、先に記述された全ての４つのプラスミドを含有するトランスフェクション混合物が調製された。アッセイ用の各９６穴のマイクロタイタープレートに対して、下記の量が３ｍｌの溶液Ａを作成するために使われた：２６２２μｌの抗生物質及び無血清ＤＭＥＭ（＃４１９６５−０３９、Invitrogen）、１００μｌの参照プラスミドｐＲＬＣＭＶ（１ｎｇ／μｌ）、１００μｌのルシフェラーゼレポータープラスミドｐＧＬ３塩基性−５ｘＧＡＬ４−ＴＫ（１０ｎｇ／μｌ）、１００μｌのＰＰＡＲガンマ発現プラスミドｐｃＤＮＡ３−ＧＡＬ４−ヒトＰＰＡＲガンマＬＢＤ（１００ｎｇ／μｌ）、及び７８μｌのプラスミドｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）（５００ｎｇ／μｌ）。次いで、２ｍｌの溶液Ｂを、１．９ｍｌのＤＭＥＭ（＃４１９６５−０３９、Invitrogen）を、各９６穴のウエルマイクロタイタープレートに対して１００μｌのＰｏｌｙＦｅｃｔトランスフェクション試薬（Qiagenから）と混合することによって調製した。次いで、３ｍｌの溶液Ａを２ｍｌの溶液Ｂと混ぜて、５ｍｌの溶液Ｃとし、それを複数のピペッティングによって十分に混合し、１０分の間室温でインキュベートした。
１７５ｃｍ3の容量の細胞培養瓶からの８０％−コンフルエントのＨＥＫ細胞を、１５ｍｌのＰＢＳ（＃１４１９０−０９４（Invitrogen）で１回洗浄し、３ｍｌのトリプシン溶液（＃２５３００−０５４、Invitrogen）で３７°Ｃで２分間処理した。次に、細胞を１０％ＦＣＳ（＃１６０００−０４４、Invitrogen）、１％ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（＃１５１４０−１２２、Invitrogen）及び２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（＃２５０３０−０２４、Invitrogen）を混合した１５ｍｌのＤＭＥＭ（＃４１９６５−０３９、Invitrogen）に溶解した。細胞懸濁液を細胞カウンターで計数した後、懸濁液を２５万個の細胞／ｍｌに希釈した。１５ｍｌのこの細胞懸濁液を、１つのマイクロタイタープレートに対して５ｍｌの溶液Ｃと混合した。２００μｌの懸濁液は、透明なプラスチックベース（３６１０、Corning Costar）を有する９６穴のマイクロタイタープレートの各ウェルにシードされた。プレートは、細胞培養インキュベーターの中で、３７℃及び５％ＣＯ2で２４時間インキュベートした。
２日目
テストするＰＰＡＲ作動薬を１０ｍｍの濃度でＤＭＳＯに溶解した。このストック溶液を、２％のUltroser（＃１２０３９−０１２、Biosepra）、１％のペニシリン・ストレプトマイシン溶液（＃１５１４０−１２２、Invitrogen）及び２ｍＭのＬ−グルタミン（＃２５０３０−０２４、Invitrogen）を混合したＤＭＥＭ（＃４１９６５−０３９、Invitrogen）で希釈した。テスト物質は、１０μＭから１００ｐＭの合計１１の異なった濃度範囲でテストされた。より効能のある化合物は、１μＭから１０ｐＭの濃度範囲でテストされた。
１日目にトランスフェクトされシードされたＨＥＫ細胞の培地は、吸引によって完全に除去され、培地の中で希釈されたテスト物質は、細胞へ直ちに加えられた。物質の希釈及び追加は、ロボット(Beckman FX)によって行われた。培地で薄められたテスト物質の最終容積は、９６穴のマイクロタイタープレートの１穴当たり１００μｌであった。各プレートは、個々のプレート中のアッセイの機能を実証するために、１１の異なる濃度で同様に薄められた標準ＰＰＡＲガンマ作動薬を充填された。アッセイプレートは、インキュベーターの中で、３７℃及び５％ＣＯ2でインキュベートされた。
４日目
吸引による培地の除去後、細胞を溶解し、細胞中に形成された蛍ルシフェラーゼ（Photinus pyralis）の基質を提供するために、製造会社の説明書に従って、５０μｌのDual-GloTM試薬（Dual-GloTM Luciferase Assay System; promega）をそれぞれの穴に加えた。室温で１０分間の暗所でのインキュベーション後、蛍ルシフェラーゼ媒介化学発光を測定器（測定時間／穴：１秒；WallacからのTrilux）で測定した。その後、蛍ルシフェラーゼの活性を止め、かつ参照プラスミドｐＲＬ−ＣＭＶによって発現されたRenillaルシフェラーゼの基質を提供するために、５０μｌのDual-GloTM STOP & Glo試薬（Dual-GloTMのルシフェラーゼアッセイシステム; Promega）を各穴に添加した。室温で更に１０分間の暗所でのインキュベーション後、Renillaシフェラーゼによって媒介された化学発光を、再度測定器中で穴当たり１秒間測定した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９４】
Ｎ−（５−イソプロピル−［１，３，４］チアジアゾール−２−イル）−４−［４−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−チアゾール−５−イルメトキシ］−Ｎ−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−ベンゼンスルホンアミド  
【化２４】
2009510144.tif 000002
４−ヒドロキシ−Ｎ−（５−イソプロピル−［１，３，４］チアジアゾール−２−イル）−Ｎ−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−ベンゼンスルホンアミド（３６０ｍｇ）を、ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）に溶解した。炭酸セシウム（５２７ｍｇ）及び４−メチル−２−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５−クロロメチルチアゾール（２３６ｍｇ）のジメチルホルムアミド（２ｍｌ）溶液を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、溶媒を減圧下で除去し、残留物をシリカゲル上（溶離液：ｎ−ヘプタン／酢酸エチル＝４／１→１／１）でのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、Ｎ−（５−イソプロピル−［１，３，４］チアジアゾール−２−イル）−４−［４−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−チアゾール−５−イルメトキシ］−Ｎ−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−ベンゼンスルホンアミド（１８０ｍｇ）を得た。
Ｃ２９Ｈ３５Ｆ３Ｎ４Ｏ４Ｓ３Ｓｉ（６８４．９０），ＭＳ（ＥＳＩ）：６８５．２（Ｍ＋Ｈ＋），Ｒｆ（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル＝１／１）＝０．４８。