【手続補正書】
【提出日】平成20年11月12日(2008.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチド上のあらかじめ規定される１個もしくはそれより多い部位において１個もしくはそれより多い生物適合性ポリマーに共有結合した機能性因子ＶＩＩＩポリペプチドを含んでなる因子ＶＩＩＩ前凝固剤活性を有する複合体であって、あらかじめ規定される部位がＮ−末端アミンではない複合体。
【請求項２】
生物適合性ポリマーがポリエチレングリコールを含む請求項１の複合体。
【請求項３】
ポリエチレングリコールがメトキシポリエチレングリコールを含む請求項２の複合体。
【請求項４】
メトキシポリエチレングリコールが５ｋＤ〜６４ｋＤのサイズ範囲を有する請求項３の複合体。
【請求項５】
生物適合性ポリマーが（ａ）因子ＶＩＩＩクリアランス受容体のための結合部位、（ｂ）因子ＶＩＩＩを分解することができるプロテアーゼのための結合部位及び／又は（ｃ）因子ＶＩＩＩ阻害性抗体のための結合部位内又はそれらの近辺におけるアミノ酸残基において機能性因子ＶＩＩＩポリペプチドに共有結合する請求項１の複合体。
【請求項６】
生物適合性ポリマーが機能性因子ＶＩＩＩポリペプチド上のあらかじめ規定される部位において共有結合して、低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質のポリペプチドへの結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合より少ない請求項１の複合体。
【請求項７】
低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質の複合体への結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合の２分の１より少ない請求項６の複合体。
【請求項８】
生物適合性ポリマーが機能性因子ＶＩＩＩポリペプチド上のあらかじめ規定される部位において共有結合して、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのポリペプチドへの結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合より少ない請求項１の複合体。
【請求項９】
ヘパリン硫酸プロテオグリカンの複合体への結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合の２分の１より少ない請求項８の複合体。
【請求項１０】
生物適合性ポリマーが機能性因子ＶＩＩＩポリペプチド上のあらかじめ規定される部位において共有結合して、因子ＶＩＩＩ阻害性抗体のポリペプチドへの結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合より少ない請求項１の複合体。
【請求項１１】
因子ＶＩＩＩ阻害性抗体の複合体への結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合の２分の１より少ない請求項１０の複合体。
【請求項１２】
生物適合性ポリマーが機能性因子ＶＩＩＩポリペプチド上のあらかじめ規定される部位において共有結合して、低密度リポタンパク質受容体のポリペプチドへの結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合より少ない請求項１の複合体。
【請求項１３】
低密度リポタンパク質受容体の複合体への結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合の２分の１より少ない請求項１２の複合体。
【請求項１４】
生物適合性ポリマーが機能性因子ＶＩＩＩポリペプチド上のあらかじめ規定される部位において共有結合して、血漿プロテアーゼがポリペプチドを分解する程度が、ポリペプチドが複合されない場合より低い請求項１の複合体。
【請求項１５】
血漿プロテアーゼによるポリペプチドの分解が、同じ条件下で同じ時間にわたり測定される場合に、ポリペプチドが複合されない場合のその分解の２分の１より少ない請求項１４の複合体。
【請求項１６】
生物適合性ポリマーが因子ＶＩＩＩアミノ酸位置８１、１２９、３７７、３７８、４６８、４８７、４９１、５０４、５５６、５７０、７１１、１６４８、１７９５、１７９６、１８０３、１８０４、１８０８、１８１０、１８６４、１９０３、１９１１、２０９１、２１１８及び２２８４の１個においてポリペプチドに共有結合する請求項１の複合体。
【請求項１７】
生物適合性ポリマーが因子ＶＩＩＩアミノ酸位置３７７、３７８、４６８、４９１、５０４、５５６、１７９５、１７９６、１８０３、１８０４、１８０８、１８１０、１８６４、１９０３、１９１１及び２２８４の１個もしくはそれより多くにおいてポリペプチドに共有結合し、且つさらに（１）低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質への複合体の結合が低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質への非複合ポリペプチドの結合より少ないか；（２）低−密度リポタンパク質受容体への複合体の結合が低−密度リポタンパク質受容体への非複合ポリペプチドの結合より少ないか；あるいは（３）低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質及び低−密度リポタンパク質受容体の両方への複合体の結合が低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質及び低−密度リポタンパク質受容体への非複合ポリペプチドの結合より少ない請求項１の複合体。
【請求項１８】
生物適合性ポリマーが因子ＶＩＩＩアミノ酸位置３７７、３７８、４６８、４９１、５０４、５５６及び７１１の１個もしくはそれより多くにおいてポリペプチドに共有結合し、且つさらにヘパリン硫酸プロテオグリカンへの複合体の結合がヘパリン硫酸プロテオグリカンへの非複合ポリペプチドの結合より少ない請求項１の複合体。
【請求項１９】
生物適合性ポリマーが因子ＶＩＩＩアミノ酸位置８１、１２９、３７７、３７８、４６８、４８７、４９１、５０４、５５６、５７０、７１１、１６４８、１７９５、１７９６、１８０３、１８０４、１８０８、１８１０、１８６４、１９０３、１９１１、２０９１、２１１８及び２２８４の１個もしくはそれより多くにおいてポリペプチドに共有結合し、且つ複合体が非複合ポリペプチドより少ない因子ＶＩＩＩ阻害性抗体への結合を有する請求項１の複合体。
【請求項２０】
生物適合性ポリマーが因子ＶＩＩＩアミノ酸位置８１、１２９、３７７、３７８、４６８、４８７、４９１、５０４、５５６、５７０、７１１、１６４８、１７９５、１７９６、１８０３、１８０４、１８０８、１８１０、１８６４、１９０３、１９１１、２０９１、２１１８及び２２８４の１個もしくはそれより多くにおいてポリペプチドに共有結合し、且つ複合体が、非複合ポリペプチドが有するより少ない因子ＶＩＩＩを分解できる血漿プロテアーゼからの分解を有する請求項１の複合体。
【請求項２１】
血漿プロテアーゼが活性化タンパク質Ｃである請求項２０の複合体。
【請求項２２】
機能性因子ＶＩＩＩポリペプチドがＢ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩである請求項１の複合体。
【請求項２３】
生物適合性ポリマーがアミノ酸位置１２９、４９１、１８０４及び／又は１８０８においてＢ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩに共有結合する請求項２２の複合体。
【請求項２４】
生物適合性ポリマーが因子ＶＩＩＩアミノ酸位置１８０４においてポリペプチドに結合し、且つポリエチレングリコールを含む請求項１の複合体。
【請求項２５】
生物適合性ポリマー結合のための１個もしくはそれより多いあらかじめ規定される部位が、部位特異的システイン突然変異により制御される請求項１の複合体。
【請求項２６】
機能性因子ＶＩＩＩポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を突然変異させて、あらかじめ規定される部位においてシステイン残基に関するコード配列に置換し；
突然変異したヌクレオチド配列を発現させてシステイン増強突然変異タンパク質を生産し；
突然変異タンパク質を精製し；
実質的に還元システイン残基のみにおいてポリペプチドと反応するように活性化された生物適合性ポリマーと突然変異タンパク質を反応させて複合体を形成し；
そして
複合体を精製する
ことを含んでなる請求項１の複合体の調製方法。
【請求項２７】
生物適合性ポリマーがポリエチレングリコールを含む請求項２６の方法。
【請求項２８】
ポリエチレングリコールがタンパク質中のシステインに特異的に反応することができるマレイミド基の付加により活性化される請求項２７の方法。
【請求項２９】
請求項１の複合体の治療的に有効な量及び製薬学的に許容され得る添加剤を含んでなる、非経口的投与のための製薬学的組成物。
【請求項３０】
必要のある患者に請求項２９の組成物の有効量を投与することを含んでなる、血友病の処置方法。
【請求項３１】
（ａ）特定部位の因子ＶＩＩＩ突然変異タンパク質を発現させ、ここで突然変異タンパク質は因子ＶＩＩＩ突然変異タンパク質の露出された表面上のアミノ酸残基に代わるシステイン置換を有し、且つそのシステインはキャッピングされており；
（ｂ）システイン突然変異タンパク質を穏やかに還元し且つキャップを放出する条件下でシステイン突然変異タンパク質を還元剤と接触させ；
（ｃ）システイン突然変異タンパク質からキャップ及び還元剤を除去し；そして
（ｄ）還元剤の除去から少なくとも約５分後に、ＰＥＧ化された因子ＶＩＩＩ突然変異タンパク質が生産されるような条件下で、スルフヒドリルカップリング部分を含んでなるＰＥＧでシステイン突然変異タンパク質を処理する
ことを含んでなる、因子ＶＩＩＩ突然変異タンパク質の特定部位のＰＥＧ化のための方法。
【請求項３２】
段階（ｃ）において、サイズ−排除又はイオン交換クロマトグラフィーによりシステイン突然変異タンパク質からキャップ及び還元剤を除去する請求項３１の方法。
【請求項３３】
因子ＶＩＩＩ突然変異タンパク質がＢ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩの突然変異タンパク質である請求項３１の方法。
【請求項３４】
ＰＥＧ−マレイミドが５ｋＤ〜６４ｋＤのサイズ範囲を有する請求項３１の方法。
【請求項３５】
ＰＥＧのスルフヒドリル部分がチオール、トリフレート、トレシレート、アジリジン、オキシラン、Ｓ−ピリジル及びマレイミド部分より成る群から選ばれる請求項３１の方法。
【請求項３６】
生物適合性ポリマーがヒドロキシエチル  デンプンである請求項１の複合体。
【請求項３７】
ヒドロキシエチル  デンプンが（ａ）因子ＶＩＩＩクリアランス受容体のための結合部位、（ｂ）因子ＶＩＩＩを分解することができるプロテアーゼのための結合部位及び／又は（ｃ）因子ＶＩＩＩ阻害性抗体のための結合部位内又はそれらの近辺におけるアミノ酸残基において機能性因子ＶＩＩＩポリペプチドに共有結合する請求項３６の複合体。
【請求項３８】
ヒドロキシエチル  デンプンが機能性因子ＶＩＩＩポリペプチド上のあらかじめ規定される部位において共有結合して、低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質のポリペプチドへの結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合より少ない請求項３６の複合体。
【請求項３９】
ヒドロキシエチル  デンプンが機能性因子ＶＩＩＩポリペプチド上のあらかじめ規定される部位において共有結合して、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのポリペプチドへの結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合より少ない請求項３６の複合体。
【請求項４０】
ヒドロキシエチル  デンプンが機能性因子ＶＩＩＩポリペプチド上のあらかじめ規定される部位において共有結合して、因子ＶＩＩＩ阻害性抗体のポリペプチドへの結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合より少ない請求項３６の複合体。
【請求項４１】
ヒドロキシエチル  デンプンが機能性因子ＶＩＩＩポリペプチド上のあらかじめ規定される部位において共有結合して、低密度リポタンパク質受容体のポリペプチドへの結合が、ポリペプチドが複合されない場合のそれへの結合より少ない請求項３６の複合体。
【請求項４２】
ヒドロキシエチル  デンプンが機能性因子ＶＩＩＩポリペプチド上のあらかじめ規定される部位において共有結合して、血漿プロテアーゼがポリペプチドを分解する程度が、ポリペプチドが複合されない場合より低い請求項３６の複合体。
【請求項４３】
ヒドロキシエチル  デンプンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の成熟全長ヒト因子ＶＩＩＩアミノ酸配列に関して、因子ＶＩＩＩアミノ酸位置８１、１２９、３７７、３７８、４６８、４８７、４９１、５０４、５５６、５７０、７１１、１６４８、１７９５、１７９６、１８０３、１８０４、１８０８、１８１０、１８６４、１９０３、１９１１、２０９１、２１１８及び２２８４の１つもしくはそれ以上においてポリペプチドに共有結合する請求項３６の複合体。
【請求項４４】
ヒドロキシエチル  デンプンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の成熟全長ヒト因子ＶＩＩＩアミノ酸配列に関して、因子ＶＩＩＩアミノ酸位置３７７、３７８、４６８、４９１、５０４、５５６、１７９５、１７９６、１８０３、１８０４、１８０８、１８１０、１８６４、１９０３、１９１１及び２２８４の１つもしくはそれ以上においてポリペプチドに共有結合し、且つさらに（１）低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質への複合体の結合が低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質への非複合ポリペプチドの結合より少ないか；（２）低−密度リポタンパク質受容体への複合体の結合が低−密度リポタンパク質受容体への非複合ポリペプチドの結合より少ないか；あるいは（３）低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質及び低−密度リポタンパク質受容体の両方への複合体の結合が低−密度リポタンパク質受容体関連タンパク質及び低−密度リポタンパク質受容体への非複合ポリペプチドの結合より少ない請求項３６の複合体。
【請求項４５】
ヒドロキシエチル  デンプンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の成熟全長ヒト因子ＶＩＩＩアミノ酸配列に関して、因子ＶＩＩＩアミノ酸位置８１、１２９、３７７、３７８、４６８、４８７、４９１、５０４、５５６、５７０、７１１、１６４８、１７９５、１７９６、１８０３、１８０４、１８０８、１８１０、１８６４、１９０３、１９１１、２０９１、２１１８及び２２８４の１つもしくはそれ以上においてポリペプチドに共有結合し、且つ複合体が非複合ポリペプチドより少ない因子ＶＩＩＩ阻害性抗体への結合を有する請求項３６の複合体。
【請求項４６】
ヒドロキシエチル  デンプンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の成熟全長ヒト因子ＶＩＩＩアミノ酸配列に関して、因子ＶＩＩＩアミノ酸位置８１、１２９、３７７、３７８、４６８、４８７、４９１、５０４、５５６、５７０、７１１、１６４８、１７９５、１７９６、１８０３、１８０４、１８０８、１８１０、１８６４、１９０３、１９１１、２０９１、２１１８及び２２８４の１つもしくはそれ以上においてポリペプチドに共有結合し、且つ複合体が、非複合ポリペプチドが有するより少ない因子ＶＩＩＩを分解できる血漿プロテアーゼからの分解を有する請求項３６の複合体。
【請求項４７】
血漿プロテアーゼが活性化タンパク質Ｃである請求項４６の複合体。
【請求項４８】
機能性因子ＶＩＩＩポリペプチドがＢ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩである請求項３６の複合体。
【請求項４９】
ヒドロキシエチル  デンプンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の成熟全長ヒト因子ＶＩＩＩアミノ酸配列に関して、アミノ酸位置１２９、４９１、１８０４及び／又は１８０８においてＢ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩに共有結合する請求項４８の複合体。
【請求項５０】
ヒドロキシエチル  デンプンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の成熟全長ヒト因子ＶＩＩＩアミノ酸配列に関して、因子ＶＩＩＩアミノ酸位置１８０４においてポリペプチドに結合する請求項３６の複合体。
【請求項５１】
ヒドロキシエチル  デンプン結合のための１つもしくはそれ以上のあらかじめ規定される部位がシステイン残基である請求項３６の複合体。
【請求項５２】
因子ＶＩＩＩプロコアグラント活性を有し且つヒト因子ＶＩＩＩ欠失を修正することができる因子ＶＩＩＩのシステイン置換変異体であって、因子ＶＩＩＩ配列においてアミノ酸がシステイン残基で置換されており、ここで該置換がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の成熟全長ヒト因子ＶＩＩＩアミノ酸配列に関してシステイン残基が因子ＶＩＩＩに存在しないアミノ酸位置においてシステイン残基を生じることを特徴とし、該システイン付加変異体がさらに該置換システイン残基に共有結合したヒドロキシエチル  デンプンを有することを特徴とする変異体。
【請求項５３】
ヒドロキシエチル  デンプン結合のあらかじめ規定される部位であるように、機能性因子ＶＩＩＩポリペプチドのアミノ酸配列におけるシステイン残基ではない特定のアミノ酸を選択し；
機能性因子ＶＩＩＩをコードするヌクレオチド配列を突然変異させて、非システインアミノ酸残基に関するコード配列をあらかじめ規定される部位においてシステイン残基に関するコード配列に置換し；
突然変異したヌクレオチド配列を発現させてシステイン増強突然変異タンパク質を生産し；
突然変異タンパク質を精製し；
突然変異タンパク質を、実質的に還元されたシステイン残基のみにおいてポリペプチドと反応するように活性化されたヒドロキシエチル  デンプンと反応させて、複合体を生成せしめ；そして
複合体を精製すること
を含んでなる請求項３６の複合体の製造方法。
【請求項５４】
ヒドロキシエチル  デンプンがタンパク質中のシステインと特異的に反応することができるマレイミド基の付加により活性化される請求項５３の方法。
【請求項５５】
治療的に有効な量の請求項３６の複合体及び製薬学的に許容しうる添加剤を含んでなる非経口投与のための製薬学的組成物。
【請求項５６】
処置を必要とする患者に有効量の請求項５５の組成物を投与することを含んでなる血友病の処置方法。