【手続補正書】
【提出日】平成20年11月17日(2008.11.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単鎖ポリペプチド融合タンパク質であって：
ａ）非細胞傷害性プロテアーゼまたはそのフラグメントであって、侵害受容感覚求心性神経細胞のエキソサイトーシス融合器官のタンパク質を切断し得る、プロテアーゼまたはプロテアーゼフラグメント；
ｂ）該侵害受容感覚求心性神経細胞上の結合部位に結合し得るターゲティング部分であって、該結合部位が、エンドサイトーシスを受けて該侵害受容感覚求心性神経細胞内のエンドソームに取り込まれ得る、ターゲティング部分；
ｃ）プロテアーゼ切断部位であって、該部位でプロテアーゼにより該融合タンパク質が切断され得、該プロテアーゼ切断部位が、該非細胞傷害性プロテアーゼまたはそのフラグメントと該ターゲティング部分との間に位置している、プロテアーゼ切断部位；および
ｄ）トランスロケーションドメインであって、エンドソームの内部から該エンドソームの膜を横断して該侵害受容感覚求心性神経細胞のサイトゾルへと、該プロテアーゼまたはプロテアーゼフラグメントをトランスロケートさせ得る、トランスロケーションドメイン
を含み、
該ターゲティング部分が、該プロテアーゼ切断部位と該トランスロケーションドメインとの間に位置しており、そして該ターゲティング部分および該プロテアーゼ切断部位が、多くとも０アミノ酸残基離れている、融合タンパク質。
【請求項２】
前記非細胞傷害性プロテアーゼが、クロストリジウム神経毒素Ｌ鎖またはＩｇＡプロテアーゼである、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
前記トランスロケーションドメインが、クロストリジウム神経毒素のＨＮドメインである、請求項１または２に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
前記ターゲティング部分が、多くとも５０アミノ酸残基、または多くとも４０アミノ酸残基、または多くとも３０アミノ酸残基、または多くとも２０アミノ酸残基を含む、請求項１から３のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項５】
前記ターゲティング部分が、オピオイドである、請求項１から４のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６】
前記ターゲティング部分が、侵害受容感覚求心性神経細胞上に存在するレセプターのアゴニストである、請求項１から４のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項７】
前記ターゲティング部分が、一次侵害受容感覚求心性神経細胞上に存在するレセプターのアゴニストである、請求項６に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
前記ターゲティング部分が、ＯＲＬ１レセプターに結合する、請求項１から４のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項９】
前記ターゲティング部分が、ＯＲＬ１レセプターに特異的に結合する、請求項８に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
前記ターゲティング部分が、ＯＲＬ１レセプターのアゴニストである、請求項８または９に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
前記ターゲティング部分が、配列番号３８またはそのフラグメントに対して少なくとも７０％の相同性を有する、請求項８から１０のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
前記ターゲティング部分が、配列番号３８またはそのフラグメントに対して少なくとも８０％の相同性を有する、請求項１１に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
前記ターゲティング部分が、配列番号３８またはそのフラグメントに対して少なくとも９０％の相同性を有する、請求項１２に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
前記ターゲティング部分が、配列番号３８またはそのフラグメントに対して少なくとも９５％の相同性を有する、請求項１３に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
前記ターゲティング部分が、配列番号３８またはそのフラグメントである、請求項８から１０のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
前記ターゲティング部分が、配列番号４０、４２、４４、４６、４８または５０のいずれかである、請求項８から１０のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
前記ターゲティング部分が、ノシセプチンである、請求項８から１０のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
前記ターゲティング部分が、ノシセプチン、β−エンドルフィン、エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、ダイノルフィン、ｍｅｔ−エンケファリン、ｌｅｕ−エンケファリン、ガラニン、およびＰＡＲ−２ペプチドからなる群から選択される、請求項１から４のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
前記融合タンパク質が精製タグを含む、請求項１から１８のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
前記融合タンパク質が精製タグを含み、該精製タグが該融合タンパク質のＮ末端および／またはＣ末端に存在する、請求項１９に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
前記精製タグが、ペプチドスペーサー分子によって前記融合タンパク質に結合されている、請求項１９または２０に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
前記トランスロケーションドメインが、ペプチドスペーサー分子によって前記ターゲティング部分から離されている、請求項１から２１のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
配列番号１４、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、５９、６１、６４、６７、６９、７１、７３、７６、７９、８２、８５または８８のいずれか１つを含む、ポリペプチド融合タンパク質。
【請求項２４】
請求項１から２３のいずれかに記載のポリペプチド融合タンパク質をコードする核酸配列。
【請求項２５】
前記核酸分子が、配列番号１から１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５８、６０、６３、６６、６８、７０、７２、７５、７８、８１、８４または８７のいずれか１つを含む、請求項２４に記載の核酸配列。
【請求項２６】
プロモーター、請求項２４または請求項２５に記載の核酸配列、およびターミネーターを含むＤＮＡベクターであって、該ＤＮＡ配列が、該プロモーターの下流に位置し、そして該ターミネーターが、該ＤＮＡ構築物の下流に位置している、ベクター。
【請求項２７】
請求項２４または請求項２５に記載のＤＮＡ配列の相補ＤＮＡ鎖。
【請求項２８】
請求項１から２３のいずれかに記載の単鎖ポリペプチド融合タンパク質を調製するための方法であって、請求項２４または請求項２５に記載の核酸配列、または請求項２６に記載のＤＮＡベクターを宿主細胞で発現させる工程を含む、方法。
【請求項２９】
非細胞傷害性薬剤を調製する方法であって、該方法が、
ａ）請求項１から２３のいずれかに記載の単鎖ポリペプチド融合タンパク質と、前記プロテアーゼ切断部位を切断し得るプロテアーゼとを接触させる工程；
ｂ）該プロテアーゼ切断部位を切断し、そしてそれにより二本鎖融合タンパク質を形成する工程
を含む、方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の方法により得られ得る非細胞傷害性ポリペプチドであって、該ポリペプチドが二本鎖ポリペプチドであり、そして
（ａ）第一鎖が非細胞傷害性プロテアーゼまたはそのフラグメントを含み、該プロテアーゼまたはプロテアーゼフラグメントが侵害受容感覚求心性神経細胞のエキソサイトーシス融合器官のタンパク質を切断し得；
（ｂ）第二鎖がＴＭおよびトランスロケーションドメインを含み、該トランスロケーションドメインが、エンドソームの内部から該エンドソームの膜を横断して該侵害受容感覚求心性神経細胞のサイトゾルへと、該プロテアーゼまたはプロテアーゼフラグメントをトランスロケートさせ得；そして
該第一鎖および第二鎖が一緒にジスルフィド結合で連結されている、
非細胞傷害性ポリペプチド。
【請求項３１】
疼痛の治療、予防、または緩和用の医薬品の製造のための、請求項１から２３のいずれかに記載の融合タンパク質または請求項３０に記載のポリペプチドの使用。
【請求項３２】
前記疼痛が慢性疼痛である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
患者の疼痛を治療、予防、または緩和する方法であって、該方法が、請求項１から２３のいずれかに記載の融合タンパク質または請求項３０に記載のポリペプチドの治療有効量を該患者に投与する工程を含む、方法。