【手続補正書】
【提出日】平成21年7月23日(2009.7.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イムノグロブリンである目的のタンパク質を精製する方法であって、次の工程：
（ａ）融合タンパク質を含むリコンビナントウイルス粒子またはリコンビナントウイルス様粒子のアフィニティーマトリックスであって、次の融合タンパク質ドメイン：
（ｉ）植物ウイルスコートタンパク質および
（ii）少なくとも５０アミノ酸残基を含むリコンビナントタンパク質であって、精製される該目的のタンパク質へのアフィニティーを有し、そしてイムノグロブリンのＦｃ領域を通してイムノグロブリンに結合できる該融合タンパク質の該リコンビナントタンパク質
を含む融合タンパク質を含むアフィニティーマトリックスを与え、
（ｂ）該アフィニティーマトリックスと、該目的のタンパク質を含有する液体組成物とを、該アフィニティーマトリックスの該リコンビナントタンパク質への該目的のタンパク質の結合を可能にする条件下で接触させ、それによって、該アフィニティーマトリックスが、該条件下で不溶性であり、
（ｃ）該リコンビナントタンパク質に結合しなかった該液体組成物の成分を、工程（ｂ）の混合物から、該アフィニティーマトリックスの該リコンビナントタンパク質への該目的のタンパク質の結合を保存する条件下で除去し、そして
（ｄ）該目的のタンパク質を該アフィニティーマトリックスから分離すること
を含む方法。
【請求項２】
前記リコンビナントタンパク質が、免疫グロブリンまたはそれらの誘導体へのアフィニティーを有する、好ましくは、該リコンビナントタンパク質が、ブドウ球菌プロテインＡまたはその誘導体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記融合タンパク質が、
（iii）前記植物ウイルスコートタンパク質および前記リコンビナントタンパク質を連結する少なくとも一つのペプチドリンカー
を更に含む、請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも一つのペプチドリンカーが、少なくとも１０アミノ酸残基を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記アフィニティーマトリックスが、該アフィニティーマトリックス中に存在するフリーのウイルスコートタンパク質および前記融合タンパク質の合計に相対して多くとも２０ｍｏｌ％のフリーのウイルスコートタンパク質を含有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
複数の融合タンパク質分子を含むリコンビナントウイルス粒子またはリコンビナントウイルス様粒子であって、該融合タンパク質が、次の融合タンパク質ドメイン：
（ｉ）植物ウイルスコートタンパク質、
（ii）少なくとも５０アミノ酸残基を含むリコンビナントタンパク質、および
（iii）場合により、該植物ウイルスコートタンパク質および該リコンビナントタンパク質を連結するペプチドリンカー
を含み、ここにおいて、該リコンビナントタンパク質が、免疫グロブリンを、好ましくは、免疫グロブリンのＦｃ領域によって結合可能である、リコンビナントウイルス粒子またはリコンビナントウイルス様粒子。
【請求項７】
融合タンパク質分子を含むリコンビナントウイルス粒子またはリコンビナントウイルス様粒子であって、該融合タンパク質が、次の融合タンパク質セグメント：
（ｉ）植物ウイルスコートタンパク質、
（ii）少なくとも５０アミノ酸残基を含むリコンビナントタンパク質、および
（iii）該植物ウイルスコートタンパク質および該リコンビナントタンパク質を連結するペプチドリンカーであって、少なくとも１０アミノ酸残基を含む該ペプチドリンカー
を含み、ここにおいて、該ウイルス粒子が、多くとも２０ｍｏｌ％のフリーのウイルスコートタンパク質を含み、そしてリコンビナントタンパク質がイムノグロブリンのＦｃ領域を通してイムノグロブリンに結合できる、リコンビナントウイルス粒子またはリコンビナントウイルス様粒子。
【請求項８】
前記ウイルス粒子が、桿状形である、請求項６〜７のいずれか１項に記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項９】
前記ウイルスコートタンパク質が、ターニップベインクリアリングウイルス（turnip vein clearing virus）のコートタンパク質、またはターニップベインクリアリングウイルスのコートタンパク質に少なくとも４０％の同一性を有するタンパク質である、請求項６または請求項７のいずれかに記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項１０】
前記植物ウイルスコートタンパク質が、ターニップベインクリアリングウイルスのコートタンパク質に少なくとも６０％の同一性を有する、請求項６〜８のいずれかに記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項１１】
前記植物ウイルスコートタンパク質が、タバコモザイクウイルスコートタンパク質、またはタバコモザイクウイルスのコートタンパク質に少なくとも８０％の同一性を有するタンパク質である、請求項６〜８のいずれか１項に記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項１２】
前記リコンビナントタンパク質が、前記植物ウイルスコートタンパク質のＮ末端に、前記ペプチドリンカーによって連結している、請求項６〜１１のいずれかに記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項１３】
前記リコンビナントタンパク質が、前記植物ウイルスコートタンパク質のＣ末端に、前記ペプチドリンカーによって連結している、請求項６〜１１のいずれかに記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項１４】
前記リコンビナントタンパク質が、前記植物ウイルスコートタンパク質に関して内部融合であり且つ該植物ウイルスコートタンパク質に、二つのペプチドリンカーによって連結している、請求項６〜１１のいずれかに記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項１５】
前記ペプチドリンカーが、一定の二次構造を有していない、またはヘリックスを形成する、請求項６〜１４のいずれかに記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項１６】
前記ウイルス粒子が、それらの表面上の二つまたはそれを超える異なったリコンビナントタンパク質を提示する、請求項６〜１５のいずれかに記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項１７】
前記リコンビナントタンパク質が、免疫グロブリンを結合可能なブドウ球菌プロテインＡまたはその誘導体である、請求項６または７に記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項１８】
前記リコンビナントタンパク質が、免疫グロブリンを結合可能な連鎖球菌プロテインＧまたはその誘導体である、請求項６または７に記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項１９】
前記リコンビナントタンパク質が、ストレプトアビジンまたはその誘導体である、請求項６〜１６のいずれか１項に記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項２０】
ウイルス粒子が、多くとも２０ｍｏｌ％、好ましくは、多くとも１０ｍｏｌ％のフリーのウイルスコートタンパク質を含む、請求項６〜１９のいずれかに記載のウイルス粒子またはウイルス様粒子。
【請求項２１】
融合タンパク質分子を含むリコンビナントウイルス粒子またはリコンビナントウイルス様粒子であって、該融合タンパク質が、次の融合タンパク質ドメイン：
（ｉ）ターニップベインクリアリングウイルスの植物ウイルスコートタンパク質、またはターニップベインクリアリングウイルスのコートタンパク質に少なくとも４０％の同一性を有するタンパク質、
（ii）少なくとも５０アミノ酸残基を含むリコンビナントタンパク質、および
（iii）場合により、該植物ウイルスコートタンパク質および該リコンビナントタンパク質を連結するペプチドリンカーであって、少なくとも１０アミノ酸残基を含む該ペプチドリンカー
を含む、リコンビナントウイルス粒子またはリコンビナントウイルス様粒子。
【請求項２２】
請求項６〜２１のいずれかに記載のリコンビナントウイルス粒子またはリコンビナントウイルス様粒子を製造する方法であって、前記融合タンパク質を、細菌中、植物中、植物組織中または植物細胞中で発現することを含み、当該融合タンパク質は植物ウイルスコートタンパク質およびリコンビナントタンパク質を連結する少なくとも１０アミノ酸残基のペプチドリンカーを含む、方法。
【請求項２３】
前記融合タンパク質をコードしている植物ウイルスベクターを、アグロバクテリウムに媒介されるデリバリーによって植物細胞中に導入後、該ウイルス粒子を該植物細胞から単離することを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ウイルス粒子を、化学的失活を用いて感染不十分（infection-deficient）にすることを更に含む、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
リコンビナントウイルス粒子またはリコンビナントウイルス様粒子を製造する方法であって、請求項６〜２１のいずれかに記載の融合タンパク質と、コートタンパク質であるまたはそれを含む第二タンパク質とを含む混合物中において、該融合タンパク質および該第二タンパク質を含むウイルス粒子の集合を可能にする条件下でリコンビナントウイルス粒子を集合させることを含む方法。
【請求項２６】
融合タンパク質であって、次の融合タンパク質セグメント：植物ウイルスコートタンパク質；リンカーペプチド；および免疫グロブリンを結合可能なリコンビナントタンパク質を含み、好ましくは、該リコンビナントタンパク質は、免疫グロブリンの定常領域を結合可能であり、それによって、該融合タンパク質が、好ましくは、リコンビナントウイルス粒子またはウイルス様粒子を形成可能である、融合タンパク質。
【請求項２７】
融合タンパク質であって、次の融合タンパク質セグメント：
（ｉ）植物ウイルスコートタンパク質、
（ii）免疫グロブリンのＦｃ領域に結合可能なプロテインＡまたはプロテインＧ、またはプロテインＡまたはプロテインＧの変異体、および
（iii）項目（ｉ）および項目（ii）のセグメントを連結する少なくとも１０アミノ酸残基を含むリンカーペプチド
を含む融合タンパク質。
【請求項２８】
請求項６〜２１、２６または２７のいずれかに記載の融合タンパク質をコードしているポリヌクレオチド。
【請求項２９】
請求項２８に記載のポリヌクレオチドを含む植物、植物組織または植物細胞。
【請求項３０】
請求項２９に記載の植物、植物組織または植物細胞より得られるまたは入手可能なウイルス材料。
【請求項３１】
部品キットであって、植物、植物組織または植物細胞と、請求項２８に記載のポリヌクレオチドを含む部品キット。
【請求項３２】
目的のタンパク質のアフィニティー精製のためのタンパク質マトリックスであって、請求項６〜２１のいずれかに記載の融合タンパク質分子を含むリコンビナントウイルス粒子またはリコンビナントウイルス様粒子を含み、ここにおいて、該ウイルス粒子は、該アフィニティーマトリックス中に存在するフリーのウイルスコートタンパク質および該融合タンパク質の合計に相対して多くとも２０ｍｏｌ％のフリーのウイルスコートタンパク質を含む、タンパク質マトリックス。
【請求項３３】
請求項３２に記載のタンパク質マトリックスであって、化学的に架橋している前記ウイルス粒子またはウイルス様粒子を含むタンパク質マトリックス。
【請求項３４】
前記融合タンパク質が、請求項５〜２１のいずれか１項に定義の通りである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
目的のタンパク質を精製するための、
請求項１〜２１、２６または２７のいずれかに記載の融合タンパク質；または
請求項６〜２１のいずれかに記載のリコンビナントウイルス粒子またはウイルス様粒子；または
請求項３２または３３のいずれかに記載のマトリックス
の使用。