【手続補正書】
【提出日】平成20年9月2日(2008.9.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リジン残基のイプシロンアミノ基またはＮ末端アミノ基に結合した少なくとも１つのＰＥＧ部分、およびヒドロキシル基に結合した少なくとも１つのＰＥＧ部分を有するＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチドの安定性および均一性を増加させる方法であって、該ポリペプチドを、ヒドロキシル基に結合したＰＥＧ部分を取り除くために十分な時間、８．０を越える高められたｐＨとし、そして、該ｐＨを低下させて８．０またはそれ以下とすることを含む方法。
【請求項２】
高められたｐＨが、８．５から１０．５の範囲にある、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
高められたｐＨが、９．０から１０．０の範囲にある、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
高められたｐＨが、９．２から９．８の範囲にある、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ポリペプチドを、２時間から１００時間の期間、高められたｐＨとする、請求項１−４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
ポリペプチドを、４時間から７２時間の期間、高められたｐＨとする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ポリペプチドを、８時間から４８時間の期間、高められたｐＨとする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ポリペプチドを、１２時間から３０時間の期間、高められたｐＨとする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
さらに、ポリペプチドを、低下させたｐＨで、少なくとも１つのクロマトグラフィー精製工程にかけることを含む、請求項１−８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
クロマトグラフィー精製工程が、イオン交換クロマトグラフィーである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ｐＨを、７．０より下に低下させ、そして、クロマトグラフィー精製工程が、カチオン交換クロマトグラフィーである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
クロマトグラフィー精製工程が、ゲルろ過クロマトグラフィーである、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
低下させたｐＨが、２．０から５．０の範囲である、請求項１−１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
低下させたｐＨが、２．５から４．５の範囲である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
Ｇ−ＣＳＦポリペプチドを、アミン特異的活性化ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とＰＥＧ化反応させ、ＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチド中間体を製造し、そして、その後、該ＰＥＧ化ポリペプチド中間体を、ヒドロキシル基に結合したＰＥＧ部分を取り除くために十分な時間、少なくとも９．０の高められたｐＨとし、ＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチドを製造することを含む、ＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチドの製造方法。
【請求項１６】
ＰＥＧ化反応が、７．０−９．０の範囲のｐＨで実施される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＰＥＧ化反応が、９．０を超えるｐＨで実施される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
ＰＥＧ化反応およびその後のヒドロキシル基に結合したＰＥＧ部分の除去が、単一ｐＨ値で、単一工程で実施される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
アミン特異的活性化ＰＥＧが、ｍＰＥＧ−スクシンイミジルプロピオネート（ｍＰＥＧ−ＳＰＡ）、ｍＰＥＧ−スクシンイミジルブタノエート（ｍＰＥＧ−ＳＢＡ）、またはｍＰＥＧ−スクシンイミジルα−メチルブタノエート（ｍＰＥＧ−ＳＭＢ）である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
アミン特異的活性化ＰＥＧが、約５ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧ−ＳＰＡである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
高められたｐＨが、９．２から１１．０の範囲である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
高められたｐＨが、９．２から１０．０の範囲である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
請求項１−２２のいずれかに記載の方法で製造される、ＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチド。
【請求項２４】
ポリペプチドが、野生型ヒトＧ−ＣＳＦに比較して、置換K16R、K34R、K40R、T105KおよびS159Kを含む、Ｇ−ＣＳＦ改変体である、請求項２３に記載のＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチド。
【請求項２５】
ポリペプチドが、野生型ヒトＧ−ＣＳＦに比較して、置換K16R、K34R、K40R、T105KおよびS159Kを含み、ポリペプチドのＰＥＧ位置異性体の少なくとも８０％が、３つの結合したＰＥＧ部分を有するリジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体である、ＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチドのＰＥＧ位置異性体の混合物を含む、組成物。
【請求項２６】
ポリペプチドのＰＥＧ位置異性体の少なくとも８５％が、３つの結合したＰＥＧ部分を有するリジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
ポリペプチドのＰＥＧ位置異性体の少なくとも９０％が、３つの結合したＰＥＧ部分を有するリジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
３つの結合したＰＥＧ部分を有するＰＥＧ位置異性体の少なくとも８０％が、２つのＰＥＧ位置異性体からなり、該異性体の一つが、Ｎ末端、Lys23およびLys159で結合しているＰＥＧ部分を有し、そして、他の異性体が、Ｎ末端、Lys105およびLys159で結合しているＰＥＧ部分を有する、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２９】
３つの結合したＰＥＧ部分を有するＰＥＧ位置異性体の少なくとも８５％が、２つのＰＥＧ位置異性体からなり、該異性体の一つが、Ｎ末端、Lys23およびLys159で結合しているＰＥＧ部分を有し、そして、他の異性体が、Ｎ末端、Lys105およびLys159で結合しているＰＥＧ部分を有する、請求項２６に記載の組成物。
【請求項３０】
３つの結合したＰＥＧ部分を有するＰＥＧ位置異性体の少なくとも９０％が、２つのＰＥＧ位置異性体からなり、該異性体の一つが、Ｎ末端、Lys23およびLys159で結合しているＰＥＧ部分を有し、そして、他の異性体が、Ｎ末端、Lys105およびLys159で結合しているＰＥＧ部分を有する、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３１】
ポリペプチドが、野生型ヒトＧ−ＣＳＦに比較して、置換K16R、K34R、K40R、T105KおよびS159Kを含み、そして、ポリペプチドのＰＥＧ位置異性体の少なくとも８０％が、５℃の温度で、３ヶ月間、水性参照組成物中の貯蔵後に、３つの結合されたＰＥＧ部分を有するリジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体である、ＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチドのＰＥＧ位置異性体の混合物を含む、組成物。
【請求項３２】
医薬的に許容される担体、および請求項２３または２４に記載のＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチドまたは請求項２５−３１のいずれかに記載の組成物を含む、組成物。
【請求項３３】
野生型ヒトＧ−ＣＳＦに比較して置換K16R、K34R、K40R、T105KおよびS159Kを含む、組換えＧ−ＣＳＦポリペプチドの、リジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体の混合物を製造する方法であって、
ａ）宿主細胞に組換えＧ−ＣＳＦポリペプチドを発現させ；
ｂ）組換えＧ−ＣＳＦポリペプチドを単離し；
ｃ）単離された組換えＧ−ＣＳＦポリペプチドとアミン特異的活性化ＰＥＧを反応させ、複数の組換えＧ−ＣＳＦポリペプチドのＰＥＧ位置異性体を製造し；そして、
ｄ）ｐＨ８．５から１０．５で複数のＰＥＧ位置異性体を反応させ、複数の部分的に脱ＰＥＧ化された組換えＧ−ＣＳＦポリペプチドのリジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体を製造する、
ことを含む方法。
【請求項３４】
アミン特異的活性化ＰＥＧが、ｍＰＥＧ−スクシンイミジルプロピオネート（ｍＰＥＧ−ＳＰＡ）、ｍＰＥＧ−スクシンイミジルブタノエート（ｍＰＥＧ−ＳＢＡ）、またはｍＰＥＧ−スクシンイミジルα−メチルブタノエート（ｍＰＥＧ−ＳＭＢ）からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
さらに、複数の組換えＧ−ＣＳＦポリペプチドのリジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体を、１以上のクロマトグラフィー精製工程にかけ、実質的に精製されたＧ−ＣＳＦポリペプチドのリジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体の混合物を製造することを含む、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
さらに、組換えＧ−ＣＳＦポリペプチドのリジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体の実質的に精製された混合物の有効用量を、少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤と混合し、医薬組成物を製造することを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
請求項３３に記載の方法により製造される、複数の部分的に脱ＰＥＧ化されたリジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体。
【請求項３８】
請求項３５に記載の方法により製造される、リジン／Ｎ末端ＰＥＧ位置異性体の実質的に精製された混合物。
【請求項３９】
請求項３６に記載の方法により製造される、医薬組成物。
【請求項４０】
有効量の請求項２３または２４に記載のＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチド、または請求項２５−３２または３６−３９のいずれかに記載の組成物を含む、不十分な好中球レベルに罹患している、またはその危険性のある、患者における、好中球のレベルを増加させるために有用な医薬組成物。
【請求項４１】
不十分な好中球レベルが、化学療法または放射線療法の結果である、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
不十分な好中球レベルに罹患している、またはその危険性のある患者における好中球のレベルを増加させる医薬の製造のための、請求項２３または２４に記載のＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチド、または請求項２５−３２または３６−３９のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項４３】
不十分な好中球レベルが、化学療法または放射線療法の結果である、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
混合物のＰＥＧ位置異性体の少なくとも８０％が、２つのＰＥＧ位置異性体からなり、それぞれが、リジンのイプシロンアミノ基に結合した２個のＰＥＧ部分およびＮ末端アミノ基に結合した１個のＰＥＧ部分からなるＰＥＧ部分を有する、ＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦポリペプチド改変体のＰＥＧ位置異性体の均一な混合物を含む、組成物。
【請求項４５】
均一な混合物のＰＥＧ位置異性体の少なくとも８５％が、２つのＰＥＧ位置異性体からなり、それぞれが、リジンのイプシロンアミノ基に結合した２個のＰＥＧ部分およびＮ末端アミノ基に結合した１個のＰＥＧ部分からなるＰＥＧ部分を有する、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
均一な混合物のＰＥＧ位置異性体の少なくとも９０％が、２つのＰＥＧ位置異性体からなり、それぞれが、リジンのイプシロンアミノ基に結合した２個のＰＥＧ部分およびＮ末端アミノ基に結合した１個のＰＥＧ部分からなるＰＥＧ部分を有する、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４７】
医薬的に許容される担体および請求項４４−４６のいずれかに記載の組成物を含む、組成物。
【請求項４８】
有効量の請求項４４−４６のいずれかに記載の組成物を含む、不十分な好中球レベルに罹患しているか、またはその危険性のある患者において、好中球のレベルを増加させるために有用な医薬組成物。
【請求項４９】
不十分な好中球レベルに罹患しているか、またはその危険性のある患者において、好中球のレベルを増加させる医薬の製造のための、請求項４４−４６のいずれかに記載の組成物の使用。