【手続補正書】
【提出日】平成21年3月10日(2009.3.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ロード流体から精製産物を回収する方法であって、以下の工程：
媒体１ｍＬあたり少なくとも２．８ｍｇの産物を媒体に結合させる作動条件において、該ロード流体を該媒体に通過させ、ここで、該媒体が前記媒体が荷電したイオン交換媒体、疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂及び固定化金属アフィニティークロマトグラフィー樹脂からなる群より選択されるものである、工程；ならびに
カラム溶出物から該精製産物を回収する工程；
を包含する、前記方法。
【請求項２】
ロード流体から精製産物を回収する方法であって、以下の工程：
少なくとも０．１の分配係数により規定される作動条件において、該ロード流体を媒体に通過させる工程；ならびに
カラム溶出物から該精製産物を回収する工程；
を包含する、前記方法。
【請求項３】
ロード流体から精製産物を回収する方法であって、以下の工程：
媒体１ｍＬあたり２．８ｍｇ〜１３ｍｇの産物を媒体に結合させる作動条件において、該ロード流体を該媒体に通過させる工程；ならびに
カラム溶出物から該精製産物を回収する工程；
を包含する、前記方法。
【請求項４】
ロード流体から精製産物を回収する方法であって、以下の工程：
媒体１ｍＬあたり少なくとも１ｍｇの産物を媒体に結合させる作動条件において、該ロード流体を該媒体に通過させ、ここで、該媒体が疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂及び固定化金属アフィニティークロマトグラフィー樹脂からなる群より選択されるものである、工程；ならびに
カラム溶出物から該精製産物を回収する工程；
を包含する、前記方法。
【請求項５】
ロード流体から精製抗体を回収する方法であって、以下の工程：
媒体１ｍＬあたり少なくとも２．８ｍｇの抗体を媒体に結合させる作動条件において、該ロード流体を荷電した陰イオン交換媒体に通過させ、ここで、該作動条件がｐＨ７．５〜８．２であり且つ１２ｍＭ〜５５ｍＭの塩化物濃度であり、該ロード流体がプロテインＡカラムから溶出された産物含有流体である、工程；ならびに
カラム溶出物中の該精製抗体を回収する工程；
を包含する、前記方法。
【請求項６】
ロード流体から精製抗体を回収する方法であって、以下の工程：
少なくとも１．０の分配係数により規定される作動条件において、該ロード流体を荷電した陰イオン交換媒体に通過させ、ここで、該作動条件がｐＨ７．５〜８．２であり且つ１２ｍＭ〜５５ｍＭの塩化物濃度であり、該ロード流体がプロテインＡカラムから溶出された流体を含む産物である、工程；ならびに
ロードサイクルの間のカラム溶出物および本質的に無勾配の任意の洗浄物中のカラム溶出物中の該精製抗体を回収する工程；
を包含する、前記方法。
【請求項７】
ロード流体から精製産物を回収する方法であって、以下の工程：
媒体１ｍＬあたり少なくとも１ｍｇの産物を媒体に結合させる作動条件において、該ロード流体を該媒体に通過させる工程；ならびに
カラム溶出物から少なくとも９８％の該産物を回収する工程；
を包含する、前記方法。
【請求項８】
ロード流体から精製産物を回収する方法であって、以下の工程：
媒体１ｍＬあたり少なくとも３．０ｍｇの産物を媒体に結合させる作動条件において、該ロード流体を該媒体に通過させる工程；ならびに
カラム溶出物から少なくとも９８％の該産物を回収する工程；
を包含する、前記方法。
【請求項９】
前記作動条件が媒体１ｍＬあたり少なくとも１０ｍｇの産物を前記媒体に結合させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記分配係数の値が約０．２〜約１０．０の範囲にある、請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
さらに、本質的に無勾配の洗浄を用いて前記媒体から前記精製産物を回収する工程を含む、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記精製産物が、融合タンパク質、Ｆｃ含有タンパク質、免疫結合体、サイトカイン、インターロイキン、ホルモンおよび治療酵素からなる群より選択されるタンパク質である、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記作動条件が、ｐＨ７．５〜８．２であり且つ１２ｍＭ〜５５ｍＭの塩化物濃度である、請求項１、２、３、４、７および８のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記ロード流体が、さらに、リン酸、カルシウム、アルギニン、グリシン、ＨＥＰＥＳおよびカウンターリガンドのうちの少なくとも１つを含む、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記カウンターリガンドがイミダゾールである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記作動条件が媒体１ｍＬあたり少なくとも８ｍｇの産物を前記媒体に結合させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記作動条件が媒体１ｍＬあたり少なくとも１４ｍｇの産物を前記媒体に結合させる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記作動条件が媒体１ｍＬあたり２．８ｍｇ〜１２ｍｇの産物を前記媒体に結合させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記作動条件が媒体１ｍＬあたり２．８ｍｇ〜５ｍｇの産物を前記媒体に結合させる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記作動条件が媒体１ｍＬあたり８ｍｇ〜１２ｍｇの産物を前記媒体に結合させる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記分配係数の値が約０．５〜約１５の範囲にある、請求項２に記載の方法。
【請求項２２】
前記分配係数の値が約０．５〜約２．５の範囲にある、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｆｃ含有タンパク質が抗体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項２４】
前記媒体が荷電したイオン交換媒体を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２５】
前記荷電したイオン交換媒体が陰イオン交換樹脂を含む、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記荷電したイオン交換媒体が陽イオン交換樹脂を含む、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記媒体が疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２８】
前記媒体がヒドロキシアパタイト樹脂を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２９】
前記媒体が固定化金属アフィニティークロマトグラフィー樹脂を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項３０】
前記ロード流体が、宿主細胞タンパク質、核酸、産物変異体、内毒素およびプロテインＡからなる群より選択される１つ以上の不純物、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記ロード流体が、溶出緩衝液を使用してプロテインＡカラムから溶出される産物含有流体であり、該産物含有流体のｐＨおよび電導度が、該産物含有流体のイオン強度２０ｍＭ以下を生じる中和緩衝液を使用して調節される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記溶出緩衝液がｐＫａ２〜５の荷電した陰イオン基を有する分子を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記溶出緩衝液がｐＫａ６．５〜１０の荷電した陽イオン基を有する分子を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記溶出緩衝液がｐＨ４〜９で双生イオンである分子を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記双生イオンが、グリシン；１，４−ピペラジンビス−（エタンスルホン酸）；グリシルグリシン；シクロペンタンテトラ−１，２，３，４−カルボン酸；Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸；２−（Ｎ−モルホリノ）プロパン−スルホン酸；Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸；Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸；４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸；Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン；グリシンアミド；Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン；Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノプロパンスルホン酸；およびＮ−グリシル−グリシンからなる群より選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記双生イオンがグリシンである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記産物が媒体１ｍＬあたり少なくとも１００ｍｇの産物濃度で該媒体にロードされる、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記産物が媒体１ｍＬあたり少なくとも５００ｍｇの産物濃度で該媒体にロードされる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記産物が媒体１ｍＬあたり少なくとも１０００ｍｇの産物濃度で該媒体にロードされる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ロード流体中の産物濃度が、ロード流体１ｍＬあたり少なくとも１ｍｇの産物である、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
前記ロード流体中の産物濃度が、ロード流体１ｍＬあたり少なくとも１０ｍｇの産物である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ロード流体中の産物濃度が、ロード流体１ｍＬあたり少なくとも１００ｍｇの産物である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記産物の少なくとも８９％がカラム溶出物から回収される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記産物の少なくとも９５％がカラム溶出物から回収される、請求項４３に記載の方法。