(57)【要約】本発明は、認知障害の治療のために、特異的５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物を使用すること、特にこれらの化合物を、アルツハイマー病および他の認知障害の治療のために他の薬剤、具体的にはアセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせて使用することに関連する。一実施形態では、上記化合物は１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドであり、上記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル塩酸塩である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者においてアルツハイマー病または認知障害を治療する方法であって、該方法は該患者に５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物を投与する工程を含み、ここで該化合物は、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される、方法。
【請求項２】
前記方法は、前記患者にアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記５−ＨＴ４アゴニストおよび前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、単独で投与した場合にはアルツハイマー病または認知障害の治療に有効量未満である用量でそれぞれ存在する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル塩酸塩である、請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項５】
記憶欠損を経験している患者において、記憶を増強する方法であって、該方法は、該患者に５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物を投与する工程を含み、ここで該化合物は、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される、方法。
【請求項６】
患者においてｓＡＰＰαのレベルを増加させる方法であって、該方法は、
（ａ）ｓＡＰＰαの産生の増加の必要がある患者を同定する工程、および
（ｂ）ｓＡＰＰαの産生の増加に有効な量で、該患者に、５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物を投与する工程
を含み、
ここで該化合物は、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される、方法。
【請求項７】
１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物であって、患者におけるアルツハイマー病または認知障害の治療において使用するための、５−ＨＴ４アゴニスト化合物。
【請求項８】
アルツハイマー病または認知障害の治療のために、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせて使用するための、請求項７に記載の５−ＨＴ４アゴニスト化合物。
【請求項９】
前記治療において、前記５−ＨＴ４アゴニストおよび前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、単独で投与した場合にはアルツハイマー病または認知障害の治療に対して有効量未満である用量でそれぞれ存在する、請求項８に記載の５−ＨＴ４アゴニスト化合物。
【請求項１０】
前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル塩酸塩である、請求項８または請求項９に記載の５−ＨＴ４アゴニスト化合物。
【請求項１１】
１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される５−ＨＴ４アゴニスト化合物であって、アルツハイマー病または認知障害の治療のために、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の有効性を増強するのに使用するための、５−ＨＴ４アゴニスト化合物。
【請求項１２】
１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される５−ＨＴ４アゴニスト化合物であって、記憶欠損を経験している患者において、記憶を増強するのに使用するための、５−ＨＴ４アゴニスト化合物。
【請求項１３】
記憶欠損を経験している患者において、記憶を増強するために、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせて使用するための、請求項１２に記載の５−ＨＴ４アゴニスト化合物。
【請求項１４】
前記治療において、前記５−ＨＴ４アゴニストおよび前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、単独で投与した場合には、記憶欠損を経験している患者において、記憶を増強するのに有効量未満である用量でそれぞれ存在する、請求項１３に記載の５−ＨＴ４アゴニスト化合物。
【請求項１５】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物であって、該化合物は１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される、薬学的組成物。
【請求項１６】
前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル塩酸塩である、請求項１５に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物は、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドまたはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１５または請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
患者におけるアルツハイマー病または認知障害の治療に使用するための医薬の製造における、５−ＨＴ４アゴニスト化合物の使用であって、該５−ＨＴ４アゴニスト化合物は、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される、使用。
【請求項１９】
前記医薬は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の投与と組み合わせて使用するためのものである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記医薬は、単独で投与した場合にはアルツハイマー病または認知障害の治療に対して有効量未満である、前記５−ＨＴ４アゴニストおよび前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の用量で、使用するためのものである、請求項１９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（本発明の背景）
（本発明の分野）
本発明は、認知障害の治療のための、特異的５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物の使用、特に、アルツハイマー病および他の認知障害の治療のための、他の薬剤、具体的にはアセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせたこれらの化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
（技術水準）
認知症を発症するリスクのある高齢者の数は、世界中で平均余命が増加するにつれて急速に増えている。アルツハイマー病は、高齢者の認知症の最もよくある原因であり、ある専門家によれば、全ての症例の５０−６０％を占める。２００８年において、米国単独で、推定５２０万人の人々が、アルツハイマー病を有して生活しており、６５歳以上の米国人口の１３％を占める。
【０００３】
アルツハイマー病は、進行性の認知機能低下および通常の加齢とは一致しない機能障害の状態として定義される。コリン作動性システムにおける欠損が、アルツハイマー病に伴う認知機能の症状の主な原因であると考えられる。よって、アルツハイマー病の支配的な医薬品治療は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の使用によって、中程度の症状の軽減を提供する。これらの薬剤は、アセチルコリン分解の速度を低下させ、従って脳内のアセチルコリン濃度の増加を引き起こすことによって作用すると考えられる。
【０００４】
セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン、５−ＨＴ）は、中枢および末梢神経系の両方において、体中に広く分布する神経伝達物質である。セロトニン受容体の少なくとも７つのサブタイプが同定され、そしてセロトニンのこれらの異なる受容体との相互作用は、広く様々な生理学的機能と関連している。脳内のセロトニン作動性システムは、認知過程に関与していることが示された。特に、５−ＨＴ４受容体は、動物モデルにおいて記憶増強および認知過程の神経細胞メカニズムにおいて役割を果たしていることが示された。５−ＨＴ４受容体の活性化は、コリン作動性ニューロンからのアセチルコリンの放出を増強し、従って脳内のシナプスにおけるアセチルコリン濃度を有利に増加させる薬理学的介入に対する別の可能性のあるアプローチを提供する（非特許文献１）。さらに、いくつかの５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物を、認知障害、行動障害、うつおよび不安のような気分障害、および自律神経機能のコントロールの障害を含む、中枢神経系の障害の治療において使用し得ることが示唆された。
【０００５】
５−ＨＴ４受容体の活性化はまた、α−セクレターゼ活性を刺激し、神経栄養性および神経保護的性質を有し、そしてまた前臨床で認知機能の増強と関連する、可溶性アミロイド前駆体タンパク質アルファ（ｓＡＰＰα）のレベルの増加を引き起こす。ベータアミロイド（Ａβ）は、アルツハイマー病患者の脳におけるアミロイド斑の主な構成成分であると思われる、３９−４３アミノ酸のペプチドである。Ａβは、βおよびγセクレターゼによるアミロイド前駆体タンパク質の切断後に形成される。前臨床試験において、５−ＨＴ４受容体アゴニストによるαセクレターゼの活性化、およびｓＡＰＰαの産生は、Ａβのレベルを抑制する。Ａβレベルにおけるそのような抑制は、有用であると予期される。従って、５−ＨＴ４受容体アゴニストは、症候性、および疾患を変化させる利点の両方を提供する可能性を提示する（非特許文献２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｍａｉｌｌｅｔら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４年、第１巻、ｐ．７９−８５
【非特許文献２】Ｌｅｚｏｕａｌｃ’ｈ、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、２００７年、第２０５巻、ｐ．３２５−３２９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
現在までに、認知障害の治療のために５−ＨＴ４メカニズムの潜在的な有用性を利用する治療は認可されていない。よって、５−ＨＴ４受容体アゴニスト薬剤の使用から予期される、アセチルコリン濃度の増加および他の潜在的な利点を利用する、アルツハイマー病に苦しむ人々における記憶機能不全の治療の必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の概要）
本発明は、アルツハイマー病または認知障害の治療のための、特異的５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物の使用、およびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせた特異的５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物の使用に関連する。特に、本発明は、５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物およびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤の使用に関連し、ここでそれぞれの薬剤を、単独で使用した場合に有意な効果を観察し得る濃度より低い濃度で使用する。
【０００９】
５−ＨＴ４受容体アゴニスト、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミド（１）およびその薬学的に許容可能な塩
【００１０】
【化１】
2012523437.tif 000002
が、米国特許第７，３７５，１１４Ｂ２号において開示される。化合物１は、あるいは１，２−ジヒドロ−Ｎ−［（３−エンド）−８−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−［メチル（メチルスルホニル）アミノ］プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル］−１−（１−メチルエチル）−２−オキソ−３−キノリンカルボキサミドとして表示される。
【００１１】
５−ＨＴ４受容体アゴニスト、４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル（２）およびその薬学的に許容可能な塩
【００１２】
【化２】
2012523437.tif 000003
が、米国特許第７，２５６，２９４Ｂ２号および米国特許出願公開第２００６／０２７０６５２Ａ１号において開示される。化合物２は、あるいは４−［［４−［［［［２−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−７−イル］カルボニル］アミノ］メチル］−１−ピペリジニル］メチル］−１−ピペリジンカルボン酸メチルエステルとして表示される。
【００１３】
化合物１および２は、インビトロアッセイにおいて中程度から高い内因性活性を示す、強力および選択的な５−ＨＴ４受容体アゴニストである。化合物１および２はそれぞれ、ラットのモーリス水迷路前臨床認知モデルにおいて、ムスカリン性アンタゴニストによる記憶欠損を軽減することが示された。化合物１とアセチルコリンエステラーゼ阻害剤ドネペジルの間、および化合物２とドネペジルの間で、それ自体ではほとんどまたはまったく効果がない用量において、相加または相乗的効果と一致する結果が観察された。化合物１および２はまた、インビトロアッセイにおいてｓＡＰＰαの濃度依存的な増加を誘起することが示された。従って化合物１および２は、記憶機能不全の治療において有用であることが予期される。
【００１４】
１つの局面において、本発明は、患者においてアルツハイマー病または認知障害を治療する方法において有用性を見出し、その方法は患者に５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物を投与することを含み、ここでその化合物は、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される。従って、１つの局面において、本発明は、アルツハイマー病または認知障害の治療において使用するための、上記で記載したような５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物を提供する。
【００１５】
本発明の５−ＨＴ４アゴニスト化合物を、体内でアセチルコリンエステラーゼの作用を阻害するよう作用する薬剤と組み合わせて有利に使用する。有用な阻害剤は、ドネペジル塩酸塩（Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）として市販で入手可能）、臭化水素酸ガランタミン（ｇａｌａｎｔａｍｉｎｅ）（あるいは臭化水素酸ガランタミン（ｇａｌａｎｔｈａｍｉｎｅ）と書かれる）（Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）、Ｒｅｍｉｎｙｌ（登録商標））、酒石酸リバスチグミン（Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標））および塩酸タクリン（Ｃｏｇｎｅｘ（登録商標））を含むがこれに限らない。
【００１６】
本発明は、患者においてアルツハイマー病または認知障害を治療する方法において有用性を見出し、その方法は患者に５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物およびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を投与することを含み、ここでその化合物は、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される。
【００１７】
従って別の局面において、本発明は、アルツハイマー病または認知障害の治療目的で、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせて使用するための本発明の５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物を提供する。本発明はさらに、アルツハイマー病または認知障害の治療のために、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の有効性を増強するための、本発明の５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物を提供する。
【００１８】
本発明の１つの局面において、上記の方法において、５−ＨＴ４アゴニスト化合物およびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を、単独で投与する場合には、アルツハイマー病または認知障害の治療するのに有効量未満の用量でそれぞれ投与する。
【００１９】
特定の局面において、５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物は、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミド塩酸塩であり、そしてアセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジルである。
【００２０】
別の特定の局面において、５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物は、４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステルであり、そしてアセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジルである。
【００２１】
本発明はさらに、記憶欠損を経験している患者において、記憶を増強する方法に有用性を見出し、その方法は、患者に５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物およびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を投与することを含み、ここでその化合物は、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される。
【００２２】
１つの局面において、５−ＨＴ４アゴニスト化合物およびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を、単独で投与する場合には記憶欠損を経験している患者において記憶を増強するのに有効量未満の用量でそれぞれ投与する。
【００２３】
ｓＡＰＰαレベルの増加は、認知機能の増強と関連するので、さらに別の局面において、本発明は、患者においてｓＡＰＰαのレベルを増加させる方法に有用性を見出し、その方法は、（ａ）ｓＡＰＰαの産生の増加を必要とする患者、すなわち認知障害に苦しむ患者を同定すること、および（ｂ）その患者に治療的に有効な量の５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物を投与することを含み、ここで化合物は１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにその薬学的に許容可能な塩から選択される。
【００２４】
本発明はさらに、薬学的に許容可能な担体、５−ＨＴ４受容体アゴニスト化合物、およびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含む薬学的組成物を提供し、ここで上記化合物は１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミドおよび４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
本発明の様々な局面を、添付する図面を参照することによって例示する。
【００２６】
図１から６は、認知機能のラットモーリス水迷路モデルにおいて試験した動物の、試験３日目における平均避難遅延時間（ｅｓｃａｐｅ  ｌａｔｅｎｃｙ）を秒で示す。
【図１】図１は、媒体、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）（０．５ｍｇ／ｋｇ）、ドネペジル（０．３ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、ドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、およびドネペジル（３ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果を示す。＊媒体に関して統計学的に有意（ボンフェローニ補正有りのスチューデントｔ検定ｐ＜０．０２５）＃スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）に関して統計学的に有意（スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）および全ての用量のドネペジル＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）に関して一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）、事後の（ｐｏｓｔ−ｈｏｃ）Ｄｕｎｎｅｔｔ検定  ｐ＜０．０５）。
【図２】図２は、媒体、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）（０．５ｍｇ／ｋｇ）、ドネペジル（３ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、化合物１（０．０１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、化合物１（０．０３ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、化合物１（０．１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）および化合物１（０．１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果を示す。＊＊＊媒体に関して統計学的に有意（ボンフェローニ補正有りのスチューデントｔ検定ｐ＜０．０００５）＃スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）に関して統計学的に有意（スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）および全ての用量の化合物１＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）に関して一元配置分散分析、事後のＤｕｎｎｅｔｔ検定ｐ＜０．０５）。
【図３】図３は、媒体、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）（０．５ｍｇ／ｋｇ）、ＧＲ１２５４８７（１ｍｇ／ｋｇ）、化合物１（０．１ｍｇ／ｋｇ）＋ＧＲ１２５４８７（１ｍｇ／ｋｇ）およびスコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、および化合物１（０．１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果を示す。＊媒体に関して統計学的に有意（ボンフェローニ補正有りのスチューデントｔ検定ｐ＜０．０２５）††化合物１（０．１ｍｇ／ｋｇ）＋ＧＲ１２５４８７（１ｍｇ／ｋｇ）およびスコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）に関して統計学的に有意（ボンフェローニ補正有りのスチューデントｔ検定ｐ＜０．００５）＃スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）に関して統計学的に有意（ボンフェローニ補正有りのスチューデントｔ検定ｐ＜０．０２５）。
【図４】図４は、媒体、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）（０．５ｍｇ／ｋｇ）、ドネペジル（０．１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、化合物１（０．０１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、および化合物１（０．０１ｍｇ／ｋｇ）＋ドネペジル（０．１ｍｇ／ｋｇ）およびスコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果を示す。＊媒体に関して統計学的に有意（スチューデントｔ検定ｐ＜０．０５）
【図５】図５は、媒体、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）（０．５ｍｇ／ｋｇ）、ドネペジル（３ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、化合物２（０．０１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、化合物２（０．０３ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、化合物２（０．１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）および化合物２（１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果を示す。＊＊＊媒体に関して統計学的に有意（ボンフェローニ補正有りのスチューデントｔ検定ｐ＜０．０００５）＃スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）に関して統計学的に有意（スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）および全ての用量の化合物２＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）に関して一元配置ＡＮＯＶＡ、ｐ＝０．００９６  事後のＤｕｎｎｅｔｔ検定ｐ＜０．０５）。
【図６】図６は、媒体、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）（０．５ｍｇ／ｋｇ）、ドネペジル（０．１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、化合物２（０．０１ｍｇ／ｋｇ）＋スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、および化合物２（０．０１ｍｇ／ｋｇ）＋ドネペジル（０．１ｍｇ／ｋｇ）とスコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）の用の結果を示す。＊＊媒体に関して統計学的に有意（ボンフェローニ補正有りのスチューデントｔ検定ｐ＜０．００５）＃スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）に関して統計学的に有意（ボンフェローニ補正有りのスチューデントｔ検定ｐ＜０．０２５）。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
（発明の詳細な説明）
定義
本発明の組成物および方法を説明する場合に、以下の用語は、他に示さなければ、以下の意味を有する。
【００２８】
「治療的に有効な量」という用語は、治療の必要がある患者に投与した場合に治療を達成するのに十分な量を意味する。
【００２９】
「有効量未満の（ｓｕｂｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓ）量」または、同等に、「有効量未満の用量」という用語は、治療的に有効な量または用量より低い量または用量を意味する。
【００３０】
本明細書中で使用される「治療」という用語は、哺乳類（特にヒト）のような患者における疾患、障害、または医学的状態の治療を意味し、それは１つまたはそれ以上の以下のものを含む：
（ａ）疾患、障害、または医学的状態が起こることを予防する、すなわち患者の予防的治療；
（ｂ）他の治療薬の効果を相殺することを含む、疾患、障害、または医学的状態の寛解、すなわち患者において疾患、障害、または医学的状態の排除または退縮を引き起こすこと；
（ｃ）疾患、障害、または医学的状態を抑制すること、すなわち患者において疾患、障害、または医学的状態の進展を緩徐化または停止すること；または
（ｄ）患者において疾患、障害、または医学的状態の症状を軽減すること。
【００３１】
本明細書中で使用される「併用療法」という用語は、治療薬の組み合わせた作用から有用な効果を提供することを意図した治療プロトコールの一部として、２つまたはそれ以上の治療薬を投与することを意味する。
【００３２】
本明細書中で使用される「アセチルコリンエステラーゼ阻害剤」という用語は、アセチルコリンエステラーゼの作用を阻害する効果を有するあらゆる薬剤を意味する。その用語は、コリンエステラーゼ阻害剤と呼ばれる薬剤を含み、それはさらに他の活性、例えばブチリルコリンエステラーゼ阻害剤としての活性を有し得る。
【００３３】
「ドネペジル」という用語は、本明細書中でドネペジル塩酸塩と等価なものとして使用される。
【００３４】
インビボにおける認知機能増強の証明
以下の実施例においてさらに記載されるように、ラットのムスカリン性アンタゴニストによる記憶障害の逆転における、５−ＨＴ４アゴニスト、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミド（１）および４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル（２）の効果を、モーリス水迷路モデルにおいて評価した。
【００３５】
０．０３、０．１、および１ｍｇ／ｋｇの用量の化合物１、および０．０３および０．１ｍｇ／ｋｇの用量の化合物２は、スコポラミンの注射によってラットにおいて誘発された記憶障害を軽減した。両方の化合物に関して、０．１ｍｇ／ｋｇにおいて統計学的に有意な反応が観察された。両方の５−ＨＴ４アゴニスト化合物の効力および／または有効性は、アルツハイマー病の症状の治療のために上市されたアセチルコリンエステラーゼ阻害剤であるドネペジルのものと同様であるようであった。化合物１および化合物２の認知機能増強効果は、それぞれの化合物を選択的５−ＨＴ４アンタゴニストと共投与することによって阻害され、観察された反応における５−ＨＴ４受容体の関与を確認した。
【００３６】
重要なことに、化合物１およびドネペジルの間にそれぞれ０．０１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇの用量において、ならびに、化合物２およびドネペジルの間にそれぞれ０．０１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇの用量において、相加または相乗効果が認められ、その用量は、単独で投与された場合には、スコポラミンによる認知機能低下を逆転させることにおいて有効ではない。
【００３７】
インビトロにおけるｓＡＰＰαの放出の証明
ｓＡＰＰαの細胞外放出に対する化合物１および２の効果を、ヒト５−ＨＴ４（ｄ）受容体およびヒトＡＰＰ６９５（アミロイド前駆体タンパク質）を安定にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞において研究した。両方の化合物は、ｓＡＰＰαの放出において、濃度依存的な増加を誘発した。その放出は、５−ＨＴ４受容体選択的アンタゴニストＧＲ１１３８０８によって阻害され、観察された効果は、５−ＨＴ４受容体のアゴニズムと関連することを示した。
【００３８】
治療の方法
本発明の５−ＨＴ４アゴニスト、化合物１および２は、軽度認知機能障害の治療、およびアルツハイマー病に関連する記憶機能不全およびアルツハイマー型認知症の治療を含む、アルツハイマー病または認知障害の治療のために有用であることが予期される。上記化合物はさらに、行動障害、うつおよび不安のような気分障害、および自律機能のコントロールの障害を含む、さらなる中枢神経系の障害の治療において有用性を見出し得る。さらに、アセチルコリン濃度を増強する化合物はまた、パーキンソン病に関連する認知症、血管性メカニズムによる認知症、およびレビー小体型認知症のような、他の形式の認知症の治療のために有用であり得ることが示唆された。
【００３９】
本発明の５−ＨＴ４化合物を、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤と、それぞれの化合物を単独で投与した場合には無効である用量で共投与した場合、ラット水迷路実験において相加または相乗効果が認められた。よって、本化合物は、ドネペジル塩酸塩（Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標））、臭化水素酸ガランタミン（Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）、Ｒｅｍｉｎｙｌ（登録商標））、酒石酸リバスチグミン（Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標））、または塩酸タクリン（Ｃｏｇｎｅｘ（登録商標））のようなアセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせて投与した場合に、アルツハイマー病または認知障害の治療に有用であることが予期される。異なる、相補的な作用メカニズムによって作用する薬剤の利点を提供することに加えて、併用療法は、より低い投与量の各薬剤を使用することを可能にし、従ってあらゆる有害な副作用への曝露を制限する、さらなる潜在的な利点を提供する。
【００４０】
さらに、化合物１および２は、さらに他の作用メカニズムによって、アルツハイマー病患者の症状の治療を提供するようデザインされた薬剤と共投与した場合に有用であり得る。例えば、本化合物は、メマンチン（Ｎａｍｅｎｄａ（登録商標））、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストと組み合わせて有用であり得る。アルツハイマー病の治療のために組み合わせて使用し得るさらなる薬剤は、ＤＭＸＢ−アナバシン、ＧＳＫ−７４２４５７、ＳＵＶＮ−５０２、ＰＲＸ−０７０３４、およびＳＡＭ−５３１（ＷＡＹ−２６２５３１）のような５−ＨＴ６アンタゴニスト；ＡＢＴ−０８９、ＳＳＲ−１８０７１１、ＡＺＤ−０３２８、およびＥＶＰ−６１２４のようなニコチン性受容体アゴニスト；ＮＧＸ−２６７、ＡＦ−１０２Ｂ（セビメリン）、およびＷＡＬ２０１４ＦＵ（タルサクリジン）のようなムスカリン性Ｍ１アゴニスト；ＧＳＫ−１８９２５４およびＰＦ−３６５４７４のようなヒスタミンＨ３アンタゴニスト；およびジメボンを含む。また、５−ＨＴ４アゴニストは、アミロイドベータおよびタウ凝集阻害剤、およびＢＭＳ−７０８１６３のような、ベータセクレターゼ阻害剤またはガンマセクレターゼ阻害剤のような、他の提案された疾患変更治療（ｄｉｓｅａｓｅ  ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｙ）と組み合わせて有用であり得る。
【００４１】
併用療法において使用する場合、本発明の５−ＨＴ４化合物を、物理的に他の治療薬と混合して両方の薬剤を含む組成物を形成するか；または各薬剤は別のおよび区別できる組成物中に存在し、それを同時に、または任意の順番で連続的に患者に投与するかいずれかである。併用療法は、２つの薬剤を別々に調合した場合には、２つの薬剤を実質的に同時に投与すること、および各薬剤を別の時間に投与することを含む。
【００４２】
例えば、本発明の５−ＨＴ４化合物を、従来の手順および装置を使用して、第２の治療薬と組み合わせて、化合物１または化合物２および第２の治療薬を含む組成物を形成し得る。さらに、治療薬を、薬学的に許容可能な担体と組み合わせて、化合物１または化合物２、第２の治療薬、および薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物を形成し得る。この実施態様において、組成物の構成要素を、典型的には混和または混合して、物理的な混合物を作成する。その物理的な混合物を次いで、下記で記載する経路のいずれかを用いて、治療的に有効な量で投与する。
【００４３】
あるいは、治療薬は、患者への投与前には別々および異なったままであり得る。この実施態様において、薬剤を、投与前に物理的に１つに混合しないが、別々の組成物として同時にまたは別の時間に投与する。そのような組成物を、別々に包装し得る、またはキットとして一緒に包装し得る。キット中の２つの治療薬を、同じ投与経路によって、または異なる投与経路によって投与し得る。
【００４４】
アルツハイマー病または認知障害を治療するために使用する場合、化合物１または化合物２を、典型的には経口で、１日１回量で、または１日あたり複数回量で投与するが、他の剤形も使用し得る。ある状況において、本発明の５−ＨＴ４化合物を、経皮または非経口的に投与することが有用であり得る。用量あたりに投与される活性薬剤の量、または１日あたり投与される全量は、典型的には、治療する状態の重症度、選択した投与経路、投与される特定の化合物およびその相対的な活性、個々の患者の年齢、体重、および反応等を含む、関連する状況を考慮して医師によって決定される。
【００４５】
アルツハイマー病または認知障害を治療するのに適当な用量は、平均７０ｋｇのヒトに関して、例えば１日あたり約１から約５０ｍｇの化合物１、および１日あたり約０．５から約２０ｍｇの化合物２を含む、１日あたり約０．１から約９０ｍｇの５−ＨＴ４アゴニスト薬剤の範囲である。
【００４６】
本発明の５−ＨＴ４化合物をアセチルコリンエステラーゼ阻害剤との併用療法において使用する場合、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を治療的に有効な量で、すなわち化合物１または化合物２と共投与した場合に治療的に有用な効果をもたらす任意の量で投与する。本発明の化合物と組み合わせて投与するアセチルコリンエステラーゼ阻害剤の適当な用量は、典型的には約１ｍｇ／日から約３０ｍｇ／日の範囲である。前に記載したように、併用療法の一部として使用する場合、個々の薬剤それぞれの有効な用量は、その薬剤を独立して使用する場合の有効な用量よりも低くあり得る。
【００４７】
薬学的組成物
本発明の５−ＨＴ４アゴニストおよびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤のような他の治療薬を、典型的には薬学的組成物または処方物の形式で患者に投与する。そのような薬学的組成物を、経口、直腸内、膣内、鼻腔内、吸入、局所（経皮を含む）および非経口様式の投与を含むがこれに限らない、任意の許容可能な投与経路によって患者に投与し得る。
【００４８】
薬学的組成物は、典型的には治療的に有効な量の活性薬剤を含む。しかし、当業者は、薬学的組成物は治療的に有効な量を超える量、すなわちバルク組成物、または治療的に有効な量未満、すなわち治療的に有効な量を達成する複数回投与のためにデザインされた個々の単位用量を含み得ることを認識する。
【００４９】
典型的には、そのような薬学的組成物は、重量の約０．１から約９５％の活性薬剤；好ましくは重量の約５から約７０％の活性薬剤を含む。
【００５０】
あらゆる従来の担体または賦形剤を、本発明の薬学的組成物において使用し得る。特定の担体もしくは賦形剤、または担体もしくは賦形剤の組み合わせの選択は、特定の患者を治療するために使用される投与の方式、または医学的状況または疾患状態の型に依存する。この点について、特定の投与方式のために適当な薬学的組成物の調製は、医薬分野の当業者の十分範囲内である。さらに、本発明の薬学的組成物において使用する担体または賦形剤は、市販で入手可能である。さらなる説明のために、従来の処方技術が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｈｉｔｅ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；およびＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、第７版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｈｉｔｅ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）において記載されている。
【００５１】
薬学的に許容可能な担体として役立ち得る材料の代表的な例は、以下のものを含むがこれに限らない：ラクトース、グルコース、およびショ糖のような糖；コーンスターチおよびジャガイモデンプンのようなデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースのような結晶セルロースおよびその誘導体のようなセルロース；粉末トラガカントゴム；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバターおよび坐剤ワックスのような賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、および大豆油のような油；プロピレングリコールのようなグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールのようなポリオール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルのようなエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのような緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張生理食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；および薬学的組成物において使用される他の無毒性の適合性物質。
【００５２】
薬学的組成物を、典型的には活性薬剤を、薬学的に許容可能な担体、および１つまたはそれ以上の任意の成分と、完全におよび深く混和または混合することによって調製する。得られる均一に混合された混合物を、次いで従来の手順および装置を用いて、錠剤、カプセル、丸剤等へ成形または充填し得る。
【００５３】
薬学的組成物を、好ましくは単位剤形で包装する。「単位剤形」という用語は、患者に投与するのに適した、物理的に別々の単位、すなわち、単独でまたは１つまたはそれ以上のさらなる単位と組み合わせて望ましい治療的効果を生じるように計算された、前もって決定した量の活性薬剤を含む各単位を指す。例えば、そのような単位剤形は、カプセル、錠剤、丸剤等、または非経口投与に適した単位包装であり得る。
【００５４】
１つの実施態様において、本発明の薬学的組成物は、経口投与に適当である。経口投与に対して適切な薬学的組成物は、カプセル、錠剤、丸剤、ロゼンジ、カシェ剤、糖衣丸、粉末、顆粒の形式であり得るか；あるいは、水性もしくは非水性液体中に溶液もしくは懸濁液として；または水中油型もしくは油中水型液体エマルションとして；またはエリキシルもしくはシロップ等として存在し得る；それぞれ活性成分として前もって決定した量の治療化合物を含む。
【００５５】
固体剤形（すなわちカプセル、錠剤、丸剤等として）における経口投与を意図する場合、薬学的組成物は、典型的には活性薬剤、およびクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムのような、１つまたはそれ以上の薬学的に許容可能な担体を含む。任意で、または代替で、そのような固体剤形はまた、デンプン、結晶セルロース、ラクトース、ショ糖、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸のような充填剤または増量剤；カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖および／またはアラビアゴムのような結合剤；グリセロールのような加湿剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）；寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、あるケイ酸塩、および／または炭酸ナトリウムのような崩壊剤；パラフィンのような溶液遅延剤；四級アンモニウム化合物のような吸収促進剤；セチルアルコールおよび／またはグリセロールモノステアラートのような湿潤剤；カオリンおよび／またはベントナイト粘土のような吸収剤；タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、および／またはそれらの混合物のような潤滑剤；着色料；ならびに緩衝剤を含み得る。
【００５６】
離散剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味料、香料および芳香剤、保存剤および抗酸化剤も、本発明の薬学的組成物中に存在し得る。薬学的に許容可能な抗酸化剤の例としては、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸（ｍｅｔａｂｉｓｕｌｆａｔｅ）ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等のような水溶性抗酸化剤；パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、アルファトコフェロール等のような油溶性抗酸化剤；およびクエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビトール、酒石酸、リン酸等のような金属キレート化剤が挙げられる。錠剤、カプセル、丸剤等のためのコーティング剤は、酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸−メタクリル酸エステルコポリマー、セルロースアセテートトリメリテート、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート等のような、腸溶性コーティングのために使用されるものを含む。コーティング剤はまた、タルク、ポリエチレングリコール、ヒプロメロース（ｈｙｐｏｍｅｌｌｏｓｅ）、および二酸化チタンを含む。
【００５７】
薬学的組成物をまた、例として、様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース；または他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／もしくはマイクロスフィアを用いて、活性薬剤の遅延性放出または徐放を提供するために調合し得る。さらに、薬学的組成物は任意で、不透明剤を含み得、そして胃腸管のある部分のみで、または優先的にそこで、任意に遅延した方式で、活性成分を放出するように調合され得る。使用し得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質およびワックスを含む。活性薬剤はまた、もし適当なら、１つまたはそれ以上の上記で記載した賦形剤を含む、マイクロカプセル封入形式であり得る。
【００５８】
経口投与に対して適当な液体剤形は、例示として、薬学的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルを含む。液体剤形は、典型的には活性薬剤および、例えば水または他の溶媒のような不活性の希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に綿実油、ピーナッツ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物のような可溶化剤および乳化剤を含む。懸濁液は、活性成分に加えて、例えばエトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカントゴム、ならびにそれらの混合物のような、懸濁剤を含み得る。
【００５９】
本発明の活性薬剤をまた、非経口で（例えば静脈内、皮下、筋肉内、または腹腔内注射によって）投与し得る。非経口投与のために、活性薬剤を、典型的には、例として滅菌水溶液、生理食塩水、プロピレングリコールのような低分子量アルコール、ポリエチレングリコール、植物油、ゼラチン、オレイン酸エチルのような脂肪酸エステル等を含む、非経口投与に対し適切な媒体と混合する。非経口処方物はまた、１つまたはそれ以上の抗酸化剤、可溶化剤、安定剤、保存剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤、または分散剤を含み得る。滅菌注射用媒体、滅菌剤、ろ過、照射、または熱の使用によって、これらの処方物を滅菌状態にし得る。
【００６０】
あるいは、薬剤を吸入による投与のために調合する。吸入による投与に適した薬学的組成物は、典型的にはエアロゾルまたは粉末の形式である。そのような組成物を一般的に、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、噴霧器または同様の伝達装置のような、周知の伝達装置を用いて投与する。
【００６１】
加圧容器を用いて吸入によって投与する場合、本発明の薬学的組成物は、典型的には活性成分およびジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適当な気体のような、適当な噴射剤を含む。さらに、薬学的組成物は、本発明の化合物および粉末吸入器での使用に適した粉末を含むカプセルまたはカートリッジ（例えばゼラチンでできている）の形式であり得る。適当な粉末基剤は、例として、ラクトースまたはデンプンを含む。
【００６２】
最後に、活性成分をまた、公知の経皮伝達システムおよび賦形剤を用いて、経皮的に投与し得る。例えば、活性薬剤を、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールモノラウレート、アザシクロアルカン−２−オン等のような、透過性増強剤と混合し、そしてパッチまたは同様の伝達システムに組み込み得る。ゲル化剤、乳化剤および緩衝液を含むさらなる賦形剤を、もし望ましいなら、そのような経皮組成物において使用し得る。
【００６３】
アルツハイマー病または認知障害の治療のために有用な、代表的な薬学的組成物は、以下の例を含むがこれに限らず、ここで「本発明の化合物」は、化合物１または化合物２を示す。化合物１は、典型的には塩酸塩として供給され、そして化合物２は典型的には遊離塩基として供給されるが、特定の投与方式に適する、化合物の任意の形式（すなわち遊離塩基または薬学的塩）を、以下の薬学的組成物において使用し得ることが理解される。
【００６４】
処方例Ａ：経口投与のためのハードゼラチンカプセル
本発明の化合物（２０ｍｇ）、デンプン（８９ｍｇ）、結晶セルロース（８９ｍｇ）、およびステアリン酸マグネシウム（２ｍｇ）を、完全に混合し、次いでＮｏ．４５メッシュＵ．Ｓ．ふるいを通す。得られた組成物を、ハードゼラチンカプセルに充填する（カプセルあたり２００ｍｇの組成物）。
【００６５】
処方例Ｂ：経口投与のためのゼラチンカプセル
本発明の化合物（１０ｍｇ）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（５０ｍｇ）、およびデンプン粉末（２５０ｍｇ）を、完全に混合し、次いでゼラチンカプセルに充填する（カプセルあたり３１０ｍｇの組成物）。
【００６６】
処方例Ｃ：経口投与のための錠剤
本発明の化合物（５ｍｇ）、結晶セルロース（４００ｍｇ）、ヒュームド二酸化ケイ素（１０ｍｇ）、およびステアリン酸（５ｍｇ）を完全に混合し、次いで圧縮して錠剤を形成する（錠剤あたり４２０ｍｇの組成物）。
【００６７】
処方例Ｄ：経口投与のための錠剤
本発明の化合物（２ｍｇ）、結晶セルロース（４００ｍｇ）、ヒュームド二酸化ケイ素（１０ｍｇ）、およびステアリン酸（５ｍｇ）を完全に混合し、次いで圧縮して錠剤を形成する（錠剤あたり４１７ｍｇの組成物）。
【００６８】
処方例Ｅ：経口投与のための錠剤
本発明の化合物（２０ｍｇ）、結晶セルロース（４００ｍｇ）、ヒュームド二酸化ケイ素（１０ｍｇ）、およびステアリン酸（５ｍｇ）を完全に混合し、次いで圧縮して錠剤を形成する（錠剤あたり４３５ｍｇの組成物）。
【００６９】
処方例Ｆ：経口投与のための１本切り目の入った割線（ｓｉｎｇｌｅ−ｓｃｏｒｅｄ）錠剤
本発明の化合物（１５ｍｇ）、コーンスターチ（５０ｍｇ）、クロスカルメロースナトリウム（２５ｍｇ）、ラクトース（１２０ｍｇ）、およびステアリン酸マグネシウム（５ｍｇ）を完全に混合し、次いで圧縮して切り目の入った錠剤を形成する（錠剤あたり２１５ｍｇの組成物）。
【００７０】
処方例Ｇ：経口投与のための懸濁物
以下の成分を完全に混合して、懸濁物１０ｍＬあたり２０ｍｇの活性成分を含む、経口投与のための懸濁物を形成する：本発明の化合物（２００ｍｇ）、安息香酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、精製水（１００ｍＬまで適量）。
【００７１】
処方例Ｈ：注射用処方
本発明の化合物（２０ｍｇ）を、０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液（１５ｍＬ）と混合する。得られた溶液のｐＨを、１Ｎの塩化水素酸水溶液または１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ６に調整する。次いでクエン酸緩衝液中の滅菌生理食塩水を加えて、全体の体積を２０ｍＬにする。
【００７２】
処方例Ｉ：経口投与のための切り目の入った錠剤
本発明の化合物（５ｍｇ）、ドネペジル塩酸塩（５ｍｇ）、コーンスターチ（５０ｍｇ）、結晶セルロース（１５ｍｇ）、ヒドロキシプロピルセルロース（１０ｍｇ）、ラクトース（１２０ｍｇ）、およびステアリン酸マグネシウム（５ｍｇ）を完全に混合し、次いで圧縮して切り目の入った錠剤を形成する（錠剤あたり２１０ｍｇの組成物）。
【００７３】
処方例Ｊ：経口投与のための懸濁液
以下の成分を完全に混合して、懸濁物１０ｍＬあたり５ｍｇの各薬剤を含む、経口投与のための懸濁物を形成する：本発明の化合物（５０ｍｇ）、酒石酸リバスチグミン（５０ｍｇ）、安息香酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、精製水（１００ｍＬまで適量）。
【実施例】
【００７４】
単独で、またはアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ドネペジルと組み合わせて使用した、５−ＨＴ４アゴニスト、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル｝アミド（１）および４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル（２）の、ムスカリン性受容体アンタゴニスト、スコポラミンによって誘発される空間記憶障害を予防する能力を、ラットモーリス水迷路動物モデルにおいて評価した（Ｍｏｒｒｉｓ（１９８４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １１：４７−６０）。全ての実験において、化合物１の塩酸塩を使用した。
【００７５】
モーリス水迷路モデル法
成体雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重範囲２７５−４００ｇ）を、各研究の１日前に約５分間研究者が扱った。最初の研究日に、各ラットに、まずテスト化合物または媒体を、その後すぐに、このモデルにおいてほとんど最大の認知機能低下を提供すると以前に同定された用量である、ムスカリン性受容体アンタゴニスト、スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）または媒体を腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与した。投与の３０分後、ラットを個々に、水（２３℃±１℃を維持する）を満たした円形、濃青色のポリエチレンタンク（直径６フィート）に入れた。透明のＰｅｒｓｐｅｘ（登録商標）プラットフォームが、水の表面の１ｃｍ下で、かつタンクの壁から３４ｃｍの固定した位置に置いた。４つの視覚的な手掛かり（異なる黒および白のシンボルのＡ４サイズの図）を、水表面のすぐ上に、タンクの壁に等しい間隔で置いた。黒いカーテンをタンクの周りに置き、そしてテストの間、白色雑音を産生した。各ラットをタンクの壁に向けて、指定の開始点から（すなわちタンクの北側で）水に放し、そして各配置の後、水中に沈んだプラットフォームの位置を突き止めるために６０秒を与えた。ラットの水への放出およびプラットフォームの位置探知の間の避難遅延時間（秒）を、ビデオカメラ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、ＣＡ）および追跡ソフトウェア（ＳＭＡＲＴソフトウェア、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、ＣＡ）によって自動的に記録した。ラットが６０秒以内にプラットフォームを見つけられなかった場合、ラットをプラットフォームへ導き、次いでプラットフォームに置いた（特定の視覚的手掛かりに向けて）。ラットをプラットフォームに３０秒留まらせて外部の視覚的手掛かりを観察させ、ラットをプラットフォームの相対的位置と対にさせた。次いでラットをプラットフォームから取り、そしてペーパータオルでやさしく乾燥してから、さらに３回テストを繰り返した（南、次いで東、そして最終的に西の開始位置から）。４回目のテストの後、各ラットを５分間加熱灯の下に置いてから、ホームケージに戻した。その手順全体を、２日目および３日目に繰り返した。３日間のテストを通して、ラットは水中に沈んだプラットフォーム（および水から避難するその唯一の手段）の位置を、視覚的手掛かりと関連付けることを学んだ。
【００７６】
テスト薬剤の、スコポラミン誘発認知障害を阻害する能力を評価した。４日目に、各ラットに、前のように投与して、プラットフォームをタンクから除去しておいて２分間の「探査試行」を行った。以前のプラットフォームの位置を横切った回数および各四分円でラットが費やした時間を記録した。プラットフォームの位置を学習した動物は、適切な四分円でより多くの時間を費やし、そして繰り返しその四分円を横切った。探査テストを行うことによって、分析から偽陽性を除外し得る（すなわち、足がプラットフォームにぶつかるまで無作為に泳ぐような、視覚的手掛かりとは独立した戦略によって前にプラットフォームの位置を突き止めたラット）。三日間のテストおよび探査テストの間の対立するデータに基づいて動物を除外しなかった。
【００７７】
データ分析
同じテスト日における４回の試行のそれぞれからの平均避難遅延時間を、各ラットに関して計算し、次いでこれらのデータを組み合わせて、１、２、および３日目の各治療グループに関する平均避難遅延時間を決定した。以下の統計学的試験を、データに対して行った：
媒体／媒体および媒体／スコポラミングループの避難遅延時間を比較するスチューデントｔ検定。媒体／スコポラミングループは、スチューデントｔ検定および一元配置ＡＮＯＶＡ検定の両方を受けたので、α値を０．０２５にボンフェローニ補正した。
【００７８】
一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてＤｕｎｎｅｔｔの事後検定を、媒体／スコポラミンおよびテスト化合物／スコポラミングループの避難遅延時間を比較するために使用し、ｐ＜０．０５は統計学的に有意な差を示す。
【００７９】
二元配置反復−測定ＡＮＯＶＡ、続いてボンフェローニの事後検定を、三日連続のテスト日のそれぞれに関して平均避難遅延時間を比較するために使用し、ｐ＜０．０５は統計学的に有意な差を示す。
【００８０】
材料
５−ＨＴ４アゴニスト化合物１および２を、米国特許第７，３７５，１１４Ｂ２号および米国特許第７，２５６，２９４Ｂ２号にそれぞれ記載されている手順によって調製し、これらの米国特許の開示は本明細書中で参考文献に組み込まれる。ドネペジル塩酸塩を、Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ  Ｄａｈｕａ  Ｉｍｐ．ａｎｄ  Ｅｘｐ．Ｃｏｒｐ．Ｌｔｄ．（Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ、Ｊｉａｎｇｓｕ、Ｃｈｉｎａ）から購入し、一方塩酸スコポラミンを、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはＳｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｆｇ．Ｃｏｒｐ．（Ｇａｒｄｅｎａ、ＣＡ）から購入した。ＧＲ１２５４８７スルファミン酸塩を、Ｔｏｃｒｉｓ（Ｅｌｌｉｓｖｉｌｌｅ、ＭＯ）から購入した。化合物１および化合物２およびドネペジルを、５％ジメチルスルホキシドおよび９５％滅菌生理食塩水中で調合し、一方スコポラミンおよびＧＲ１２５４８７を、１００％滅菌生理食塩水中で調製した。用量を、各化合物の遊離塩基重量に関して表した。
【００８１】
モデルの検証
各研究において、テスト３０分前の媒体のラットへの投与（ｉ．ｐ．）は、避難遅延時間の進行性の抑制を引き起こした。１日目、媒体処置ラットは、典型的には４０−５０秒の範囲の、４回の試行からの平均遅延時間で、隠れたプラットフォームの位置を突き止め、一方、３日目には、これは１０−２５秒に短縮した。スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）は、媒体処置動物と比較して、学習の統計学的に有意な減弱を生じた（ｐ＜０．０２５、ボンフェローニ補正有りのスチューデントｔ検定）。アセチルコリンエステラーゼ阻害剤ドネペジル（３ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）および５−ＨＴ４受容体アゴニスト、化合物１（１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）および化合物２（１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）は、単独で投与した場合、すなわちスコポラミンに曝露されていない動物に投与した場合に、正または負のいずれにしても、水中に沈んだプラットフォームの位置を学習するラットの能力に対して影響がなかった。ドネペジル（０．３−３ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）は、試験３日目の平均避難遅延時間を示す図１に示すように、スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）誘発認知欠損を、用量依存的な方式で逆転させた。３ｍｇ／ｋｇのドネペジル用量は、統計学的に有意な逆転を生じた。
【００８２】
実施例１：スコポラミン誘発認知障害に対する化合物１の効果
化合物１を、ラットモーリス水迷路モデルにおいて、０．０１、０．０３、０．１、および１ｍｇ／ｋｇの用量で試験した。テスト３日目の平均避難遅延時間を示した図２に示すように、化合物１は、０．５ｍｇ／ｋｇのスコポラミンによって生じた記憶障害の逆転と関連していた。０．１ｍｇ／ｋｇの用量における化合物１の効果は、スコポラミン（０．５ｍｇ／ｋｇ）に関して統計学的有意性を達成した。「Ｕ型」の用量反応曲線が明らかであった；最も高い用量である１ｍｇ／ｋｇの化合物１は、０．１ｍｇ／ｋｇの用量と異なり、スコポラミン誘発反応に対して効果がなかった。化合物１（０．１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）は、３日目にドネペジル（３ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）のものと同様の逆転を生じた（すなわち、５０−６０％の範囲、図１を参照のこと）。
【００８３】
実施例２：スコポラミン誘発認知障害に対する、５−ＨＴ４受容体アンタゴニストと一緒に使用した化合物１の効果
化合物１の観察された効果が、５−ＨＴ４受容体におけるアゴニズムに起因し得るのかどうかを証明するために、化合物１を、選択的５−ＨＴ４受容体アンタゴニスト化合物であるＧＲ１２５４８７と一緒に試験した。図３に示すように、ＧＲ１２５４８７（１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）は、単独で投与した場合には効果がなかった。しかし、アンタゴニストＧＲ１２５４８７（１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）の共投与は、化合物１（０．１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）のスコポラミン誘発認知障害を逆転させる能力を無効にした。従って、化合物１の観察された効果は、５−ＨＴ４受容体アゴニズムによると結論を下すことが妥当である。
【００８４】
実施例３：スコポラミン誘発認知障害に対する、化合物１とアセチルコリンエステラーゼ阻害剤ドネペジルの共投与の効果
化合物１およびドネペジルの共投与の効果を、図４に示す。０．０１ｍｇ／ｋｇの用量の化合物１も０．１ｍｇ／ｋｇの用量のドネペジルも、単独で投与した場合には有意な効果を有することが見出されなかった。しかし、同じ用量の化合物１およびドネペジルは、５％ＤＭＳＯおよび９５％滅菌生理食塩水中で一緒に調合された場合、スコポラミン誘発認知機能低下の顕著な減弱をもたらした。
【００８５】
実施例４：スコポラミン誘発認知障害に対する化合物２の効果
化合物２を、実施例１に記載したように試験した。図５で示すように、０．１ｍｇ／ｋｇの用量における化合物２の効果は、スコポラミンに関して統計学的有意性を達成した。「Ｕ型」の用量反応曲線が明らかであった；最も高い用量である１ｍｇ／ｋｇの化合物２は、０．０３および０．１ｍｇ／ｋｇの用量と異なり、スコポラミン誘発反応に対して効果がなかった。化合物２（０．１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）は、３日目にドネペジル（３ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）のものと同様の逆転を引き起こした（すなわち、５０−６０％の範囲、図１を参照のこと）。
【００８６】
実施例５：スコポラミン誘発認知障害に対する、５−ＨＴ４受容体アンタゴニストと一緒に使用した化合物２の効果
化合物２と５−ＨＴ４受容体アンタゴニストＧＲ１２５４８７の共投与の効果を、実施例２で記載したように証明した。ＧＲ１２５４８７（１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）を加えることは、化合物２（０．１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）のスコポラミン誘発認知障害を逆転させる能力を無効にし、それは化合物２の観察された効果は、５−ＨＴ４受容体アゴニズムによることを示す。
【００８７】
実施例６：スコポラミン誘発認知障害に対する、化合物２とアセチルコリンエステラーゼ阻害剤ドネペジルの共投与の効果
化合物２およびドネペジルの共投与の効果を、図６に示す。０．０１ｍｇ／ｋｇの用量の化合物２も０．１ｍｇ／ｋｇの用量のドネペジルも、単独で投与した場合には有意な効果を有することが見出されなかった。しかし、同じ用量の化合物２およびドネペジルは、５％ＤＭＳＯおよび９５％滅菌生理食塩水中で一緒に調合された場合、スコポラミン誘発認知機能低下の統計学的に有意な逆転をもたらした（ボンフェローニ補正有りのスチューデントｔ検定  ｐ＜０．０２５）。
【００８８】
実施例７：ＨＥＫ２９３−５−ＨＴ４（ｄ）−ＡＰＰ６９５細胞における、ｓＡＰＰαの細胞外放出に対する化合物１および化合物２の効果のインビトロ研究
細胞培養
ヒト５−ＨＴ４（ｄ）受容体ｃＤＮＡおよびヒトＡＰＰ６９５ｃＤＮＡを安定にトランスフェクトしたＨＥＫ−２９３（ヒト胎児由来腎臓）細胞（ＨＥＫ２９３−５−ＨＴ４（ｄ）−ＡＰＰ６９５）を、１０％胎仔ウシ血清、２ｍＭのＧｌｕｔａＭａｘ−１、および１００単位のペニシリン（１００μｇ）、および１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加した、Ｄ−グルコースを含むダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で、５％ＣＯ２、加湿インキュベーターにおいて３７℃で増殖させた。Ｇ４１８（５００μｇ／ｍＬ）抗生物質の添加によって、細胞を持続的な選択圧の下で増殖させた。
【００８９】
ｓＡＰＰαの放出
ＨＥＫ２９３−５−ＨＴ４（ｄ）−ＡＰＰ６９５細胞（３×１０５細胞／ウェル）を、３７℃で（他に述べなければ）３０分間のアゴニストとのインキュベーション前に、４時間血清不足にした。培地を吸引し、遠心して細胞の破片を除去し、そしてｓＡＰＰαのレベルをウェスタンブロットによって決定した。ｓＡＰＰαを、抗体６Ｅ１０（Ｓｉｇｎｅｔ／Ｃｏｖａｎｃｅ）およびヤギ抗マウスＨＲＰ結合２°抗体を用いて検出した。ｓＡＰＰαに対応する免疫反応性のバンドを、ＥＣＬ基質（Ｐｉｅｒｃｅ）およびＦｌｕｏｒＣｈｅｍＨＤ２イメージシステム（Ａｌｐｈａ  Ｉｎｎｏｔｅｃｈ）によって可視化および定量した。サンプルのウェスタンブロット分析を２組行った。
【００９０】
結果
効力のデータを、ＥＣ５０値の負の１０が底の対数である、ｐＥＣ５０値として報告し、ここでＥＣ５０は、５０％最大反応のために有効な濃度である。このアッセイにおいてより高いｐＥＣ５０値を示すテスト化合物は、ｓＡＰＰαの放出の刺激に関してより高い効力を有する。ＥＣ５０値を決定するために、独立した実験由来のデータを、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（無理に一致させた傾き（ｓｌｏｐｅ  ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ  ｔｏ  ｕｎｉｔｙ））を用いて、同時にＳ字型濃度反応曲線にフィットさせた。化合物１および化合物２の効力データを、１μＭの濃度における内因性リガンド５−ＨＴの効果に対する％応答と共に、下記に示す：
【００９１】
【表１】
2012523437.tif 000004
５−ＨＴ４受容体選択的アンタゴニストＧＲ１１３８０８の効果を、化合物が最大付近または最大の反応を誘起する濃度である、１００ｎＭの濃度で化合物１または化合物２とインキュベートする前に、細胞を１μＭのＧＲ１１３８０８と１０分間インキュベートすることによって証明した。そのアンタゴニストは、化合物１および化合物２の効果を完全に阻害し、観察されたｓＡＰＰαの放出は、５−ＨＴ４受容体のアゴニズムに関連することを示した。
【００９２】
本発明は、その特定の実施態様に関して記載されたが、本発明の真の趣旨および範囲から離れることなく、様々な変化をし得ること、および同等物を置換し得ることが、当業者によって理解されるべきである。それに加えて、本発明の目的、趣旨および範囲に特定の状況、材料、組成物、プロセス、プロセス工程（単数または複数）を適合させるために、多くの改変をし得る。全てのそのような修飾は、明細書に添付する請求の範囲内であると意図される。さらに、本明細書中で引用される全ての出版物、特許、および特許文献は、個々に参考として組み込まれているかのように、全てが本明細書中で参考として組み込まれる。
【図１】
2012523437.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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