【手続補正書】
【提出日】平成21年5月7日(2009.5.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一マンノース単位と第二マンノース単位とを含むオリゴ糖であって、第一マンノース単位は、Ｃ−１においてアルファ配置でスペーサー部分を含み、スペーサーは、タンパク質に複合することができ、第一マンノース単位は、第一単位のＣ−６を第二単位のＣ−１に連結する１，６−結合を介して第二マンノース単位に連結し、１，６−結合は、ホスホネートを含むオリゴ糖。
【請求項２】
１，６−結合が、アルファ配置においてである、請求項１に記載のオリゴ糖。
【請求項３】
第一マンノース単位は、２−デオキシ−２−アザ置換マンノース誘導体である、請求項１または２に記載のオリゴ糖。
【請求項４】
第二マンノース単位は、２−デオキシ−２−アザ置換マンノース誘導体である、請求項１〜３のいずれかに記載のオリゴ糖。
【請求項５】
存在する各２−アザ置換基は、ＮＨ２、ＮＨＡｃおよびＮ３から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載のオリゴ糖。
【請求項６】
第三マンノース単位が、リンを含む結合によって第二マンノース単位に連結され、結合は、第二マンノース単位のＣ−６を第三マンノース単位のＣ−１に連結する、請求項１〜５のいずれかに記載のオリゴ糖。
【請求項７】
オリゴ糖は、式：
【化１】
2008540398.tif 000001
（式中、各Ａｚは、ＮＨ２、ＮＨＡｃおよびＮ３から独立して選択され；
Ｚは、スペーサー部分であって、タンパク質に複合することができ、保護された形または保護されなくてもよく、あるいは、タンパク質に複合してよいスペーサー部分を示し；
各Ｒ１は、独立して、Ｈ、または場合によっては置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、あるいはＭ（ここでＭはカチオンを示す）であり；
Ｘは、ＯまたはＣＨ２であり；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ａｃ、Ｂｎおよび他の保護基からなる群から選択され；および
Ｒ６は、Ｈ、保護基、ホスフェート、または追加のサッカライド単位への結合を示す）である、請求項６記載のオリゴ糖。
【請求項８】
さらに、アルファ−配置において第一マンノース単位のＣ−１にあるスペーサー部分を介してオリゴ糖に複合するタンパク質を含み、タンパク質は、ジフテリアトキソイド、百日咳トキソイド、大腸菌ＬＴ、大腸菌ＳＴ、緑膿菌外毒素（ｒΕＰＡ）あるいは破傷風トキソイドから選択される不活性細菌毒素であり、またはタンパク質はＣＲＭ１９７である、請求項１〜７のいずれかに記載のオリゴ糖。
【請求項９】
Ｒ３は、アシル基であり、Ｒ４はＨである、請求項１〜８のいずれかに記載のオリゴ糖。
【請求項１０】
式：
【化２】
2008540398.tif 000002
（式中、各Ａｚは、アザ置換基を示し；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈまたは保護基を示し；
Ｒ６は、Ｈ、保護基、または他のサッカライド単位に結合するリンカーを示し；
ＷおよびＸの１つはＯであり、ＷおよびＸのもう１つはＣＨ２であり；
ｎは１または２であり；
Ｙｎは、ｎが１の場合、ＯＲであり、ｎが２の場合、１個のＹは＝Ｏであり、もう１つのＹはＯＲ
（ここで、ＲはＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ６−Ｃ１２アリールあるいはＣ６−Ｃ１２アリールアルキルであり、またはＲはＭであり、Ｍがカチオンである）であり；
Ｚは、ＯＲ’、ＳＲ’またはＮＲ’２（ここで、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、場合によっては置換されたアルキル、アシル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアシル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキル基である）であり；あるいは
Ｚは、他のサッカライド単位に、またはタンパク質に複合するスペーサー部分に結合するリンカーを示す）を含む、請求項１記載のオリゴ糖。
【請求項１１】
ＷはＣＨ２であり、ＸはＯであり、ＡｚはＮＨＡｃであり、ｎは２である、請求項１０に記載のオリゴ糖。
【請求項１２】
ＲはＭであり、Ｚは−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−（式中、ｎは２〜６である）を含む、請求項１０または１１に記載のオリゴ糖。
【請求項１３】
オリゴ糖を製造する方法であって、少なくとも１つのアザ置換マンノース単位を含む第一部分を、ホスホネートを含む１，６−結合を介して、少なくとも１つのアザ置換マンノース単位を含む第二部分に結合するステップを含み、第一部分は、スペーサー部分を含み、スペーサー部分を、アルファ−配置のマンノース単位のＣ−１に結合させる方法。
【請求項１４】
結合Ｎ−置換マンノース単位は、式（１）：
【化３】
2008540398.tif 000003
（式中、各Ａｚは、アザ置換基を示し；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈまたは保護基を示し；
Ｒ６は、Ｈ、保護基、または別のサッカライド単位に結合されたリンカーを示し；
ＷおよびＸの１つはＯであり、ＷおよびＸのもう１つはＣＨ２であり；
ｎは１または２であり；
Ｙｎは、ｎが１の場合、ＯＲであり、ｎが２の場合、１個のＹは＝Ｏであり、もう１つのＹはＯＲ
（ここで、ＲはＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ６−Ｃ１２アリールあるいはＣ６−Ｃ１２アリールアルキルであり、またはＲはＭであり、Ｍが１価のカチオンである）であり；
Ｚは、タンパク質に複合され得る部分を示し、これは保護体であってよい）を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
さらに、式（１）中のＯＲ６の酸素と追加のサッカライドとの間に結合を形成することにより、第二マンノース単位を追加のサッカライドに結合させることを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
追加のサッカライドは、１，６−アルファ−結合を介して、第二マンノース単位に結合されている、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
アルファ−結合されたマンノース単位のオリゴ糖の合成方法であって、式（２）：
【化４】
2008540398.tif 000004
（式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ６アシルまたはＨであり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、ＡｚおよびＺは請求項１０で規定するとおりである）を含むマンノース単位を、式（３）
【化５】
2008540398.tif 000005
（式中、Ｒｘは、Ｃ１−Ｃ６アシル基を示し、Ｍは、Ｈまたはカチオンを示す）の延長モノマーとミツノブ反応条件下で化合させ、１，６−アルファ結合によって連結される２−アザ置換マンノース単位を少なくとも２個含むオリゴ糖を得るステップを含む方法。
【請求項１８】
ミツノブ反応条件を長時間保ち、これによって、式（４）
【化６】
2008540398.tif 000006
（式中、ｐは１〜２０の整数である）のオリゴ糖を得る、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
さらに、オリゴ糖をタンパク質に複合するステップを含み、タンパク質は、ジフテリアトキソイド、百日咳トキソイド、大腸菌ＬＴ、大腸菌ＳＴ、緑膿菌外毒素（ｒΕＰＡ）または破傷風トキソイドから選択される不活性細菌毒素である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法によって製造される免疫原性化合物。
【請求項２１】
請求項１〜１２のいずれかに記載のオリゴ糖であって、有効量の髄膜炎Ａ型ワクチン成分を対象に投与することによって免疫原性応答を与えるステップを含む方法において使用するためのオリゴ糖。
【請求項２２】
請求項１〜１２のいずれかに記載の少なくとも１種のオリゴ糖と、少なくとも１種の医薬的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項２３】
請求項１〜１２のいずれかの化合物を少なくとも１種含む免疫原性組成物。
【請求項２４】
免疫原性オリゴ糖の製造に有用なマンノース誘導体を製造する方法であって、
式（２）：
【化７】
2008540398.tif 000007
の化合物を求電子物質で環化し、式（３）：
【化８】
2008540398.tif 000008
（ここで、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｅｌは、求電子物質から誘導される残基を示す）を形成するステップを含む方法。
【請求項２５】
さらに、Ｅｌをリン基で置き換えるステップを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
さらに、式（２）または式（３）中のＯＲ２をアジドで置き換えるステップを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
２−アジド−２−デオキシ−Ｄ−マンノピラノースを製造する改良方法であって、
１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アシルグルコピラノース誘導体の２位でトリフレートを形成するステップと、
トリフレートをアジド求核剤で置き換えるステップと
を含み、改良として、生成物の単離および精製の間、粗反応混合物の湿気への暴露を最小限にすることを含む方法。
【請求項２８】
髄膜炎Ａ型に対する保護抗体を誘発し得る免疫原性組成物であって、安定化されたリン含有結合を介して互いに共有結合する少なくとも２個のサッカライド単位を有するオリゴ糖を含む組成物。
【請求項２９】
安定化されたリン含有結合はホスホネートである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
ホスホネート結合は、ミツノブ反応によって形成された１，６−結合を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
少なくとも２種の髄膜炎菌性免疫型に特異的である少なくとも２種の異なるオリゴ糖を含む、請求項２９または３０記載の組成物。
【請求項３２】
さらに、肺炎球菌抗原を含む、請求項２８〜３１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
さらに、髄膜炎血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの少なくとも１種に由来する抗原（単数または複数）を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
抗原は、髄膜炎血清型Ｃ、Ｗ１３５またはＹから誘導される、請求項３３記載の組成物。
【請求項３５】
少なくとも１つのマンノース単位は、そのアノマー中心にアルファ−結合スペーサー部分を含む、請求項３３または３４に記載の組成物。