【手続補正書】
【提出日】平成23年9月7日(2011.9.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の性状を有する化合物、乃至は、前記化合物より誘導される誘導体であって、前記化合物と等価なアドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解作用を有する誘導体。
（１）λmaxを４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとに有する。
（２）図１に示す1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（３）図２に示す13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（４）以下の条件でのＨＰＬＣ分析において、リテンションタイム１５分前後にシングルピークを示す。
移動相：９０％アセトニトリル
カラム：ＯＤＳ４．６×２５０ｍｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
検知：紫外部２１０ｎｍ
（５）化学組成式はC34H40O9であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）
【請求項２】
請求項１に記載の化合物は、キク科ヨモギの植物体を抽出し、分画、精製して得られたものであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物乃至はその誘導体。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の化合物乃至はその誘導体からなるアドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解剤。
【請求項４】
キク科ヨモギ乃至はカワラヨモギの植物体を極性溶媒で抽出し、抽出物を、酢酸エチルと水で液液抽出し、酢酸エチル相を取り、これを濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて、クロロホルム・メタノール混液系で分画し、得られた分画のアドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解作用の有無を指標に、アドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解作用を有し、薄層クロマトグラフにおけるスポットが同一である分画を集め、以下の性状を有することを確認することを特徴とする、請求項３に記載のアドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解剤の製造方法。
（性状）
（１）λmaxを４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとに有する。
（２）図１に示す1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（３）図２に示す13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（４）以下の条件でのＨＰＬＣ分析において、リテンションタイム１５分前後にシングルピークを示す。
移動相：９０％アセトニトリル
カラム：ＯＤＳ４．６×２５０ｍｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
検知：紫外部２１０ｎｍ
（５）化学組成式はC34H40O9であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）
【請求項５】
請求項３に記載のアドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解剤を含有してなる化粧料。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
老化は人間が長生きすれば必ず出会う現象であり、その初期的な兆候は３０代或いは４０代に既に始まっていると言われる。老化により皮膚は弾性を喪失し、色白であった肌は黒ずんでその見た目は決して好ましいものとは言えない。人は誰しも美しくありたいと思うのが心情であり、この様な老化に抗う手段の開発が望まれていると言える。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、キク科ヨモギの植物体の抽出物において、ＡＧＥｓ分解作用を担う有効成分を求めて、鋭意努力を重ねた結果、次の性状を有する化合物が、ＡＧＥｓ分解作用の本体であることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示すとおりである。
＜１＞次の性状を有する化合物、乃至は、前記化合物より誘導される誘導体であって、前記化合物と等価なアドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解作用を有する誘導体。
（１）λmaxを４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとに有する。
（２）図１に示す1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（３）図２に示す13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（４）以下の条件でのＨＰＬＣ分析において、リテンションタイム１５分前後にシングルピークを示す。
移動相：９０％アセトニトリル
カラム：ＯＤＳ４．６×２５０ｍｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
検知：紫外部２１０ｎｍ
（５）化学組成式はC34H40O9であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）
＜２＞＜１＞に記載の化合物は、キク科ヨモギの植物体を抽出し、分画、精製して得られたものであることを特徴とする、＜１＞に記載の化合物乃至はその誘導体。
＜３＞＜１＞又は＜２＞に記載の化合物乃至はその誘導体からなるアドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解剤。
＜４＞キク科ヨモギ乃至はカワラヨモギの植物体を極性溶媒で抽出し、抽出物を、酢酸エチルと水で液液抽出し、酢酸エチル相を取り、これを濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて、クロロホルム・メタノール混液系で分画し、得られた分画のアドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解作用の有無を指標に、アドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解作用を有し、薄層クロマトグラフにおけるスポットが同一である分画を集め、以下の性状を有することを確認することを特徴とする、＜３＞に記載のアドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解剤の製造方法。
（性状）
（１）λmaxを４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとに有する。
（２）図１に示す1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（３）図２に示す13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（４）以下の条件でのＨＰＬＣ分析において、リテンションタイム１５分前後にシングルピークを示す。
移動相：９０％アセトニトリル
カラム：ＯＤＳ４．６×２５０ｍｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
検知：紫外部２１０ｎｍ
（５）化学組成式はC34H40O9であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）
＜５＞＜３＞に記載のアドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ分解剤を含有してなる化粧料。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
＜１＞本発明の化合物
本発明の化合物は次に示す性状を有することを特徴とする。
（性状）
（１）λmaxを４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとに有する。
（２）図１に示す1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（３）図２に示す13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（４）以下の条件でのＨＰＬＣ分析において、リテンションタイム１５分前後にシングルピークを示す。
本発明の化合物の紫外・可視吸収スペクトルは図４に示す。この図より、４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとにλmaxが存する特徴が明確に判別できる。本発明の化合物を特定する場合、かかる紫外・可視部吸収特性は非常に有利である。即ち、多波長の検出器を備えたＨＰＬＣを用いて、２１０ｎｍの吸収で分析し、ピークについて４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとの吸収を確認し、同様に強い吸収が認められた場合には、本願発明の化合物である蓋然性が非常に高い。この意味で有力な確認手段となる。本願発明の化合物は、極性溶媒抽出物の非極性部分に存在する。この為、溶媒で抽出し、抽出溶媒を減圧濃縮などで除去した後に酢酸エチルと水で分液し、酢酸エチル相を採取することにより、濃縮することが出来る。このものをシリカゲルカラムクロマトグラフィーなどを用いて、クロロホルム／メタノール混液系で分画精製することにより単離することが出来る。単離したかどうかについては、以下の条件のＨＰＬＣ分析でシングルピーク（リテンションタイム１５分前後）であるか否かを判別することにより特定することが出来る。図３に分析例を示す。この場合のリテンションタイムは１４．７分である。
（ＨＰＬＣ条件）
移動相：９０％アセトニトリル
カラム：ＯＤＳ４．６×２５０ｍｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
検知：紫外部２１０ｎｍ
（５）化学組成式はC34H40O9であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
＜製造例１＞
キク科ヨモギ属ヨモギの全草の乾燥物１００ｇを、細切した後、５００ｍｌのメタノールを加えて３時間、加熱還流し、冷却後濾過にて不溶物を取り除いた後、減圧濃縮し、ついで凍結乾燥し、抽出物１を得た。しかる後に、抽出物１に２００ｍｌの水と２００ｍｌの酢酸エチルを加え、液液抽出を行い、酢酸エチル相をとり、減圧濃縮し、分画１を得た。分画１を減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて分画精製した。即ち、シリカゲルをクロロホルムで濡らし、カラムに充填し、クロロホルムに溶解させた分画１の濃縮物をチャージし、クロロホルム、１％メタノール含有クロロホルム、５％メタノール含有クロロホルム、１０％メタノール含有クロロホルム次いで１５％メタノール含有クロロホルムを５０ｍｌ流し、流出分を減圧濃縮した。これらの分画を順に分画２、分画３、分画４、分画５、分画６とした。分画１〜６についてα−ジケトンの切断活性を調べたところ、分画３が最も高く４８％であった。分画３を更にクロロホルム・メタノール混液系を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーで４回精製し（１回目 クロロホルム：メタノール＝１００：０→１：１、２回目 クロロホルム：メタノール＝１００：２→９：１、３回目 クロロホルム：メタノール＝１００：５→８：２、４回目 クロロホルム：メタノール＝１００：０→１００：５）、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（展開溶媒クロロホルム：メタノール＝９５：５）で、５０％硫酸水溶液焼付での呈色でシングルスポットであるアモルファスの分画７を得た。このもののＮＭＲを図１、図２に示す。ＨＰＬＣ（条件は下記の通り）でのチャートを図３に示す。又、紫外・可視部吸収スペクトルは図４に、質量分析スペクトルを図５に示す。これらの結果より、構造そのものは不明であるものの、分画７は単一物質であることが推測される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
＜ＡＧＥｓ分解作用＞
００１２に記載のグルコース−アルブミンＡＧＥｓ分解スクリーニングの手技に則って、実施例１の分画７の種々の濃度のＡＧＥｓ分解作用を測定した。結果をグラフとして図６に示す。これより、分画７の本発明の化合物が１０-5質量％存在すれば、その有効性を発現することが判る。