【手続補正書】
【提出日】平成21年5月19日(2009.5.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチドが１μMより少ないか等しい所定のクラスＩ pMHCに対するKDを有し、及び/又は２ S-1かそれより遅い該所定のクラスＩ pMHC分子に対する解離速度(koff)を有すること、配列番号７に対し少なくとも45％の同一性及び/又は55％の類似性を有すること、該所定のpMHCに対するCD8の結合を配列番号３のポリペプチドより大きな程度で阻害することを特徴とする所定のクラスＩ pMHCへの結合性を有するポリペプチド。
【請求項２】
変異ヒトILT分子であるか、KD及び/又はkoffが表面プラズモン共鳴により測定されるか、又は配列番号３のアミノ酸10W、19Q、20G、21S、42K、47W、50R、66I、77Y、78Y、79G、80S、81D、82T、83A、84G、85R、87E、99A、101I、102K、141E、146L、147N、159I、168S、172W、174R及び188Lに相当するアミノ酸の１つ又はそれより多くが変異している請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
配列番号３の番号付けを使用して、以下の変異10W→L、19Q→M、19Q→L、19Q→V、20G→D、20G→M、20G→Q、20G→F、20G→S、20G→E、20G→R、21S→Q、21S→R、21S→A、21S→S、42K→R、47W→Q、50R→L、66L→V、77Y→V、77Y→M、77Y→I、77Y→Q、78Y→Q、78Y→I、78Y→G、79G→Q、79G→Y、79G→W、79G→R、79G→V、80S→R、80S→T、80S→G、81D→G、81D→Q、81D→L、81D→V、82T→G、82T→E、83A→S、83A→G、83A→R、84G→L、84G→Q、84G→A、85R→W、87E→A、99A→I、99A→Y、101I→L、101I→K、101I→Q、101→V、102K→Q、102K→A、102K→R、141E→G、141E→D、146L→D、147N→S、159I→E、168S→G、172W→R、174R→W又は188L→Dの１つ又はそれより多くを含んでなる請求項１又は２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
ａ)配列番号３の番号付けを使用して、19Q→M及び21→Qに相当するか、又は
ｂ)配列番号３の番号付けを使用して、19Q→M、20G→D、21S→Q、99A→V及び168S→Gに相当するか、又は
ｃ)配列番号３の番号付けを使用して、19Q→L、20G→M、及び21S→Qに相当するか、又は
ｄ)配列番号３の番号付けを使用して、19Q→M、20G→Q、21S→R、42K→R、及び146L→Sに相当するか、又は
ｅ)配列番号３の番号付けを使用して、19Q→M、20G→D、21S→Q、83A→S、84G→Q、85R→W、87E→A及び99A→Vに相当する
変異を含んでなる請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項５】
配列番号３の番号付けを使用して、135C又は145Cの一方又は両方に相当するアミノ酸がＳに変異している請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
配列番号３の少なくともアミノ酸１〜195に相当するアミノ酸を含んでなる請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
配列番号６〜９又は21〜61のいずれかからなるか又はいずれかを含む請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記変異を欠く対応ポリペプチドに対して溶解性を増大させる１つ又はそれより多い変異を含んでなる、特に少なくとも１つの溶媒曝露疎水性アミノ酸が荷電アミノ酸で置換されており、任意に変異がＣ末端６アミノ酸内にある請求項１〜７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
配列番号３の196L及び/又は198Lに相当するアミノ酸がそれぞれ196D及び198Dに変異しているか、又は配列番号63〜80のいずれかからなるか又はいずれかを含み、特に配列番号３の番号付けを使用して、19Q→M、20G→D、21S→Q、83A→S、84G→Q、85R→W、87E→A、99A→V、196L→D及び198L→Dに相当する変異を含んでなるか、又は配列番号17若しくは62からなるか又は配列番号17若しくは62を含む請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
Ｃ末端に「タグ」を含んでなり、特に該タグがシステイン残基である請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
少なくとも１つのポリアルキレングリコール鎖と組み合わされ、特に該ポリアルキレングリコール鎖が共有結合しており、任意に該ポリアルキレングリコール鎖が少なくとも２つのポリエチレングリコール反復単位を含んでなる請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
治療剤と組み合わされ、特に該治療剤に共有結合しており、更に特には該治療剤がＣ末端に共有結合している請求項１〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
前記治療剤が免疫エフェクター分子であり、特に該免疫エフェクター分子がサイトカインであり、更に特には該免疫エフェクター分子がIL-4、IL-10又はIL-13である請求項１２に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかに記載の少なくとも２つのポリペプチドを含んでなり、１μMより少ないか等しい所定のクラスＩ pMHCに対するKD及び/又は２ S-1かそれより遅い該所定のクラスＩ pMHCに対する解離速度(koff)を有する多価複合体。
【請求項１５】
前記ポリペプチドが非ペプチド性ポリマー鎖又はペプチド性リンカー配列により連結しているか、又は前記ポリマー鎖又はペプチド性リンカー配列が、各ポリペプチドのクラスＩ pMHC結合性ドメインに位置しないアミノ酸残基同士間に伸びている請求項１４に記載の多価複合体。
【請求項１６】
前記ポリペプチドが、ポリアルキレングリコール鎖又はヒト多量体化ドメイン由来のペプチド性リンカーにより連結しており、特に二価アルキレンスペーサ基が、前記ポリアルキレングリコール鎖と前記複合体のポリペプチドへのその結合点との間に位置し、任意に前記ポリアルキレングリコール鎖が、少なくとも２つのポリエチレングリコール反復単位を含んでなる請求項１５に記載の多価複合体。
【請求項１７】
二量体又は四量体である請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の多価複合体。
【請求項１８】
（ｉ）前記ポリペプチドの少なくとも１つが請求項８又は９に記載のように治療剤と組み合わされている、請求項１４〜１７のいずれかに記載の少なくとも２つのポリペプチドを含んでなる多価複合体。
【請求項１９】
可溶性である請求項１〜１８のいずれか１項に記載のポリペプチド又は多価複合体。
【請求項２０】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードし、特に宿主細胞における高レベル発現に適合されている単離された核酸。
【請求項２１】
請求項１〜９のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチドを提示する単離された細胞又は粒子。
【請求項２２】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載のポリペプチド、又は請求項１４〜１８のいずれかに記載の多価複合体、又は複数の請求項２１に記載の細胞又は粒子を、薬学的に許容され得るキャリアと共に含んでなる医薬組成物。
【請求項２３】
自己免疫疾患の治療用である請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
経口投与に適合されている請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
１μMより少ないか等しい所定のクラスＩ pMHCに対するKDを有し、及び/又は２ S-1かそれより遅い該所定のクラスＩ pMHC分子に対する解離速度(koff)を有すること、配列番号７に対し少なくとも45％の同一性及び/又は55％の類似性を有すること、該所定のpMHCに対するCD8の結合を配列番号３のポリペプチドより大きな程度で阻害することを特徴とする所定のクラスＩ pMHCへの結合性を有する所定のILT分子の高親和性変形体を同定する方法であり、
(ｉ)対応する野生型ILT分子と比較してアミノ酸配列中に１つ又はそれ以上の変異を含んでなるILT分子のライブラリを作製し；
(ii)該変異ILT分子を標的クラスＩ pMHCと、該変異ILT分子の該標的クラスＩ pMHCへの結合を可能にするに適切な条件下で接触させ；
(iii)相互作用のKD及び/又はkoffを測定し；
(iv)所望の結合特性を有するポリペプチドを選択する
ことを含んでなる方法。
【請求項２６】
(ｉ)請求項２０に記載のベクターで宿主細胞を形質転換し；
(ii)該形質転換細胞を、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリペプチドの発現に適切な条件下で培養し；
(iii)該発現ポリペプチドを回収する
ことを含んでなる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリペプチドの製造方法。