【手続補正書】
【提出日】平成21年1月13日(2009.1.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下で「ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体」と称する、６１７番アミノ酸に変異を含む、より特徴的には、Ｖ６１７Ｆ変異を含むことを特徴とする、単離されたＪＡＫ２（Ｊａｎｕｓキナーゼ２）タンパク質であり、該タンパク質の配列がＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ１で表されるか、または他の哺乳動物の６１７位が変異したこのタンパク質の等価物であるタンパク質。
【請求項２】
請求項１に記載のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体をコードするヌクレオチド配列であり、とりわけ、転写開始を示すＡＴＧから数えて１８４９位でｔ／ｇ変異を有する配列ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ２。
【請求項３】
ウイルスベクターもしくはプラスミドベクターであるか、または裸ＤＮＡ型の、クローニングベクターおよび／または発現ベクターであり、哺乳動物の細胞で有効なプロモーターの制御下で請求項２に記載の配列を含むことを特徴とするベクター。
【請求項４】
請求項１に記載の組換えＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体を発現する、ヒトの胚性幹細胞又は生殖幹細胞以外の哺乳動物の細胞。
【請求項５】
請求項１に記載の組換えＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆを発現する、ヒトではないトランスジェニック動物。
【請求項６】
相同組換えまたは部位特異的組換えにより、ゲノム中に少なくともＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆをコードする配列を組み込んだマウスまたはラットであることを特徴とする、請求項５に記載のヒトではないトランスジェニック動物。
【請求項７】
ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ／ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆホモ接合体またはＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ／ＪＡＫ２ヘテロ接合体であり、真性赤血球増加症および／またはＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆによって誘発される骨髄増殖症候群を再現することを特徴とする、請求項５または請求項６に記載のヒトではないトランスジェニック動物。
【請求項８】
配列ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ３または４の連続する１０〜３０個のヌクレオチドを含み、変異ヌクレオチドｔ１８４９を含むプローブまたはプライマー。
【請求項９】
配列ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ５〜１２から選択される、請求項８に記載のプローブまたはプライマー。
【請求項１０】
変異ヌクレオチドｔ１８４９を含む配列ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ４のＪＡＫ２のゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡとハイブリダイズする能力がある、少なくとも１０個のヌクレオチド、特に１５〜２５個のヌクレオチドのオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
ＰＶ患者またはＰＶもしくはその他のあらゆる骨髄増殖症候群、とりわけ赤血球増加症、白血球増加症、血小板増加症および骨髄線維症を発症する恐れのある患者のサンプルにおいて、ＪＡＫ２遺伝子のＧ１８４９Ｔ変異体の有無を判定するためのエクスビボまたはインビトロでの方法であり、
ａ）患者の核酸サンプルを得ること、
ｂ）患者から得た核酸サンプルにおいてＪＡＫ２遺伝子のＧ１８４９Ｔ変異体の有無を検出すること
を含み、
Ｇ１８４９Ｔ変異体の存在がＰＶまたは他のあらゆる骨髄増殖症候群の指標となることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項８〜１０のいずれか一つに記載の少なくとも一つのプローブとのハイブリダイゼーションの過程を含むことを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項８〜１０のいずれか一つに記載の少なくとも一つのプライマー対を用いたＰＣＲ反応による増幅の過程を含むことを特徴とする、請求項１１または請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
個体のｍＲＮＡについて実施され、ＲＴ−ＰＣＲ反応を含むことを特徴とする、請求項１１〜１３のいずれか一つに記載の方法。
【請求項１５】
前記プライマーを用いた増幅過程と、それに続く、ハイストリンジェンシーの条件の下でＧ１８４９Ｔ変異領域に対応する配列とハイブリダイズする少なくとも一つのプローブ、好ましくは二つのプローブとのハイブリダイゼーションの過程、そして前記プローブのマーカーが生成するシグナルの検出を含み、プローブとプライマーが請求項８〜１０のいずれか一つで定義されたものであることを特徴とする、請求項１１〜１３のいずれか一つに記載の方法。
【請求項１６】
ＰＶまたは他のあらゆる骨髄増殖症候群に冒された、あるいはこれらを発症する恐れのある患者のサンプルにおいてＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体の有無を検出するためのエクスビボまたはインビトロでの方法であり、
ｂ）患者から得たサンプルにおけるＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体の有無を検出すること
を含んでおり、
前記変異体の存在がＰＶまたは他のあらゆる骨髄増殖症候群の指標となることを特徴とする方法。
【請求項１７】
サンプルを、ＪＡＫ２タンパク質のＶ６１７Ｆ変異体に特異的な抗体、好ましくはＶ６１７Ｆ変異体と変異していないＪＡＫ２タンパク質を区別する能力を有する抗体と接触させることを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
抗体が、一本鎖または二本鎖の、モノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体、、キメラ抗体、ヒト化抗体、または抗原に結合するＦ（ａｂ’）２およびＦ（ｖ）断片であることを特徴とする、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＥＬＩＳＡ試験であることを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
５１％を超えるヘマトクリット値を有する患者の亜集団に対して実施されることを特徴とする、請求項１１〜１９のいずれか一つに記載の方法。
【請求項２１】
４５００００を超える血小板の割合を有する患者の亜集団に対して実施されることを特徴とする、請求項１１〜１９のいずれか一つに記載の方法。
【請求項２２】
ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体を特異的に認識するモノクローナル抗体。
【請求項２３】
請求項２２に記載の抗体を産生するハイブリドーマ。
【請求項２４】
ＪＡＫ２遺伝子のＧ１８４９Ｔ変異の有無を特異的に検出するための、請求項８〜１０のいずれか一つで定義した一つまたは複数のプライマーあるいはプローブを含む、ガンにおけるＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体を検出するためのキット。
【請求項２５】
患者が真性赤血球増加症またはＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体が関与する他のあらゆる骨髄増殖症候群、とりわけ赤血球増加症、白血球増加症、血小板増加症および骨髄線維症に冒されているかどうか判定するためのキットであり、ＪＡＫ２遺伝子におけるＧ１８４９Ｔ変異の有無を特異的に検出するための、請求項８〜１０のいずれか一つで定義した一つまたは複数のプローブまたはプライマーを含むキット。
【請求項２６】
さらに、ＰＣＲ増幅のための耐熱ポリメラーゼ、増幅および／またはハイブリダイゼーション過程のための一つまたは複数の溶液、ならびに、マーカーの検出を可能にするあらゆる試薬から選択される少なくとも一つの要素を含む、請求項２４または２５に記載のキット。
【請求項２７】
請求項２２に記載の抗体を含む、患者が真性赤血球増加症またはＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体が関与する他のあらゆる骨髄増殖症候群に冒されているかどうかを判定するためのキット。
【請求項２８】
ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体の発現を５０％以上あるいは９５％以上減少させる能力を有するｓｉＲＮＡであり、１９〜２５個のヌクレオチド、好ましくは１９個のヌクレオチド長を有し、第一の鎖の配列が、ｔ１８４９変異ヌクレオチドを含む配列ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ３、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ４またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ１１に同一であり、第二の鎖の配列がそれらの配列に相補的であることを特徴とするｓｉＲＮＡ。
【請求項２９】
一つまたは複数の化合物によるＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆに特異的な阻害を判定することを可能にするインビトロでの方法であり、
ａ）一つまたは複数の化合物を、結合および／または阻害に適した条件下で、請求項１に記載のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆタンパク質、ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆを含む膜画分、あるいは、請求項４に記載のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆを発現する細胞と接触させること、および
ｂ）ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆの特異的な結合および／または阻害を検出することから成る過程を含む方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の複数の分子に対する一連の試験と、ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆに対して１μＭ未満、好ましくは１００ｎＭ未満のＩＣ５０を有する分子を選択する過程とを含むインビトロでのスクリーニング方法。
【請求項３１】
さらに、ＪＡＫ２に対して５μＭ未満あるいは１μＭ未満のＩＣ５０を有する分子の負の選択を含む、請求項３０に記載のインビトロでの方法。
【請求項３２】
ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆのリン酸化の阻害を免疫沈降によって判定する、請求項２９〜３１のいずれか一つに記載のインビトロでのスクリーニング方法。
【請求項３３】
エリスロポエチン（Ｅｐｏ）の不在下で分化する能力を有する初代前駆細胞ＣＤ３４＋ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆに対する、あるいは、ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異体の導入によって独立因子となった細胞系に対する、請求項２９〜３２のいずれか一つに記載のインビトロでのスクリーニング方法。
【請求項３４】
請求項４に記載の細胞を用いた、請求項２９〜３３のいずれか一つに記載のインビトロでのスクリーニング方法。
【請求項３５】
医薬品の候補を識別するための方法であり、
ａ）真性赤血球増加症を再現している、および／または、ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆの存在に関連する骨髄増殖症候群に冒されている、請求項５〜７のいずれか一つで定義したＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆを発現するヒトではないトランスジェニック動物に、化合物を投与すること、
ｂ）化合物の効果を判定し、真性赤血球増加症の赤芽球の自然発生的な増殖および分化の減少もしくはブロック、またはＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆの存在に関連する細胞増殖の減少が観察される医薬品の候補を選択すること
からなる過程を含む方法。
【請求項３６】
医薬品製造のための、請求項２９に記載のｓｉＲＮＡの利用方法。
【請求項３７】
悪性血液疾患、特に、真性赤血球増加症、本態性血小板増加症、骨髄性脾腫あるいは原発性骨髄線維症を含む骨髄増殖症候群の治療を目的とする医薬品を調製するための、請求項３６に記載の利用方法。
【請求項３８】
ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異に関連する骨髄増殖症候群、その他の悪性血液疾患、およびＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆを発現する癌腫、黒色腫および神経芽腫のような充実性腫瘍の治療を目的とする医薬品を調製するための、請求項３６に記載の利用方法。
【請求項３９】
請求項２８のいずれか一つに記載のｓｉＲＮＡと薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物。