【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年10月28日(2009.10.28)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基質分子に作用する酵素のリン酸化活性を測定する方法であって、基質が酵素によりリン酸化されてリン酸化産物を生じ得る１以上の部分を含んでなり、かつ基質が蛍光色素で標識されているものであり、当該方法が、
ｉ）蛍光標識基質の蛍光強度と蛍光寿命を測定する工程；
ｉｉ）酵素と基質分子とをリン酸供与体の存在下に結合させる工程；及び
ｉｉｉ）工程ｉｉ）の結合に続いて、蛍光標識の蛍光強度と蛍光寿命における変化を測定する工程；
からなり、蛍光標識の蛍光強度と蛍光寿命における変化を酵素のリン酸化活性測定に使用する、方法。
【請求項２】
基質がアクリドン及びキナクリドン群の色素から選択される蛍光色素で標識したものである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
基質分子に作用する酵素のリン酸化活性を測定する方法であって、基質が酵素によりリン酸化されてリン酸化産物を生じ得る１以上の部分を含んでなり、かつ基質が以下の式：
【化１】
2005523024.tif 000001
（式中、
基Ｒ2及びＲ3はＺ1環構造に結合していて、基Ｒ4及びＲ5はＺ2環構造に結合しており、
Ｚ1及びＺ2は独立して１又は２つの縮合環芳香族又はへテロ芳香族系を完結するために必要な原子を表し、各環は複数の炭素原子から選択される５又は６個の原子と選択肢として酸素、窒素及びイオウから選択される２個を超えない原子を有しており、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は独立して
水素、ハロゲン、アミド、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ1〜Ｃ4アルキル置換アミノ、スルフィドリル、カルボニル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ20アルキル、アラルキル；基−Ｅ−Ｆ（ただし、Ｅは炭素、窒素、酸素、イオウ及びリン原子からなる基から選択される１〜６０個の原子鎖をもつスペーサーであり、Ｆは標的結合基である）；及び基−（ＣＨ2）nＹ（ただし、Ｙはスルホン酸、硫酸、ホスホン酸、リン酸、四級アンモニウム及びカルボキシルから選択され、ｎはゼロ又は１〜６の整数である）から選択される）
【化２】
2005523024.tif 000002
（式中、
基Ｒ3及びＲ4はＺ1環構造に結合していて、基Ｒ5及びＲ6はＺ2環構造に結合しており、
Ｚ1及びＺ2は独立して１又は２つの縮合環芳香族又はへテロ芳香族系を完結するために必要な原子を表し、各環は複数の炭素原子から選択される５又は６個の原子と選択肢として酸素、窒素及びイオウから選択される２個を超えない原子を有しており、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は独立して
水素、ハロゲン、アミド、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ1〜Ｃ4アルキル置換アミノ、スルフィドリル、カルボニル、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ20アルキル、アラルキル；基−Ｅ−Ｆ（ただし、Ｅは炭素、窒素、酸素、イオウ及びリン原子からなる基から選択される１〜６０個の原子鎖をもつスペーサーであり、Ｆは標的結合基である）；及び基−（ＣＨ2）nＹ（ただし、Ｙはスルホン酸、硫酸、ホスホン酸、リン酸、四級アンモニウム及びカルボキシルから選択され、ｎはゼロ又は１〜６の整数である）から選択される）
の蛍光色素で標識されているものであり、当該方法が、
ｉ）蛍光標識基質の蛍光強度を測定する工程；
ｉｉ）酵素と基質分子とをリン酸供与体の存在下に結合させる工程；及び
ｉｉｉ）工程ｉｉ）の結合に続いて、蛍光標識の蛍光強度の増加を測定する工程；
からなり、蛍光標識の蛍光強度の増加を酵素のリン酸化活性測定に使用する、方法。
【請求項４】
前記測定工程ｉ）及びｉｉｉ）が、さらに蛍光標識の蛍光寿命を測定することを含んでいて、蛍光標識基質がリン酸化されたときの蛍光強度及び蛍光寿命の増加を酵素のリン酸化活性測定に用いる、請求項３記載の方法。
【請求項５】
基質分子が天然のタンパク質（糖タンパク質及びリポタンパク質などの翻訳後修飾タンパク質を含む）及び合成ペプチドから選択される、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
基質分子がリン酸化を受け得る１以上のアミノ酸を含んでなる、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
リン酸化を受け得るアミノ酸がチロシン、セリン、スレオニン及びヒスチジンから選択される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
基質がチロシンキナーゼ、セリン／スレオニンキナーゼ及びヒスチジンキナーゼから選択される１種以上の酵素によりリン酸化を受け得るものである、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
リン酸化産物が１以上のホスホ−チロシン残基を含んでなる、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
基質のチロシン残基がチロシンキナーゼによりリン酸化されており、蛍光標識の蛍光寿命の増加を用いて非リン酸化基質濃度に対するリン酸化産物の濃度を測定する、請求項４乃至請求項９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
基質がリンカー基により固体支持体に結合している、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
基質が第二ペプチド又はタンパク質に接合している、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
試験作用物質が酵素のリン酸化活性に及ぼす作用を測定する試験作用物質のスクリーニング方法であって、
（ａ）作用物質の存在下及び不存在下に、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の方法を実施する工程；及び
（ｂ）作用物質の存在下及び不存在下に酵素のリン酸化活性を測定する工程；
からなり、作用物質の存在下及び不存在下での酵素のリン酸化活性の差が酵素のリン酸化活性に対する試験作用物質の作用の指標となる、スクリーニング方法。
【請求項１４】
試験作用物質が酵素のリン酸化活性に及ぼす作用を測定する試験作用物質のスクリーニング方法であって、
（ａ）試験作用物質の存在下に、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の方法を実施する工程；及び
（ｂ）酵素のリン酸化活性の値を、試験作用物質の不存在下での酵素活性の対照値であって電子的フォーマットに保存された対照値と比較する工程；
からなるスクリーニング方法。
【請求項１５】
酵素がチロシンキナーゼ、セリン／スレオニンキナーゼ及びヒスチジンキナーゼから選択される、請求項１３又は請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
基質分子に作用する酵素の脱リン酸化活性を測定する方法であって、基質が酵素により脱リン酸化されて産物を生じ得る１以上のリン酸化部分を含んでなり、かつ基質が蛍光色素で標識されているものであり、当該方法が、
ｉ）蛍光標識基質の蛍光強度と蛍光寿命を測定する工程；
ｉｉ）酵素と基質分子とを結合させて産物を生じさせる工程；及び
ｉｉｉ）工程ｉｉ）の結合に続いて、蛍光強度と蛍光寿命における変化を測定する工程；
からなり、蛍光標識の蛍光強度と蛍光寿命における変化を酵素の脱リン酸化活性測定に使用する、方法。
【請求項１７】
基質がアクリドン及びキナクリドン群の色素から選択される蛍光色素で標識したものである、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
基質分子に作用する酵素の脱リン酸化活性を測定する方法であって、基質が酵素により脱リン酸化されて産物を生じ得る１以上のリン酸化部分を含んでなり、かつ基質が以下の式：
【化３】
2005523024.tif 000003
（式中、
基Ｒ2及びＲ3はＺ1環構造に結合していて、基Ｒ4及びＲ5はＺ2環構造に結合しており、
Ｚ1及びＺ2は独立して１又は２つの縮合環芳香族又はへテロ芳香族系を完結するために必要な原子を表し、各環は複数の炭素原子から選択される５又は６個の原子と選択肢として酸素、窒素及びイオウから選択される２個を超えない原子を有しており、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は独立して
水素、ハロゲン、アミド、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ1〜Ｃ4アルキル置換アミノ、スルフィドリル、カルボニル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ20アルキル、アラルキル；基−Ｅ−Ｆ（ただし、Ｅは炭素、窒素、酸素、イオウ及びリン原子からなる基から選択される１〜６０個の原子鎖をもつスペーサーであり、Ｆは標的結合基である）；及び基−（ＣＨ2）nＹ（ただし、Ｙはスルホン酸、硫酸、ホスホン酸、リン酸、四級アンモニウム及びカルボキシルから選択され、ｎはゼロ又は１〜６の整数である）から選択される）
【化４】
2005523024.tif 000004
（式中、
基Ｒ3及びＲ4はＺ1環構造に結合していて、基Ｒ5及びＲ6はＺ2環構造に結合しており、
Ｚ1及びＺ2は独立して１又は２つの縮合環芳香族又はへテロ芳香族系を完結するために必要な原子を表し、各環は複数の炭素原子から選択される５又は６個の原子と選択肢として酸素、窒素及びイオウから選択される２個を超えない原子を有しており、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は独立して
水素、ハロゲン、アミド、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ1〜Ｃ4アルキル置換アミノ、スルフィドリル、カルボニル、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ20アルキル、アラルキル；基−Ｅ−Ｆ（ただし、Ｅは炭素、窒素、酸素、イオウ及びリン原子からなる基から選択される１〜６０個の原子鎖をもつスペーサーであり、Ｆは標的結合基である）；及び基−（ＣＨ2）nＹ（ただし、Ｙはスルホン酸、硫酸、ホスホン酸、リン酸、四級アンモニウム及びカルボキシルから選択され、ｎはゼロ又は１〜６の整数である）から選択される）
の蛍光色素で標識されているものであり、当該方法が、
ｉ）蛍光標識基質の蛍光強度を測定する工程；
ｉｉ）酵素と基質分子とを結合させて産物を生じさせる工程；及び
ｉｉｉ）工程ｉｉ）の結合に続いて、蛍光強度の低下を測定する工程；
からなり、蛍光標識の蛍光強度の低下を酵素の脱リン酸化活性測定に使用する、方法。
【請求項１９】
前記測定工程ｉ）及びｉｉｉ）が、さらに蛍光標識の蛍光寿命を測定することを含んでいて、蛍光標識基質がリン酸化されたときの蛍光強度及び蛍光寿命の減少を酵素の脱リン酸化活性測定に用いる、請求項３記載の方法。
【請求項２０】
基質分子が天然のタンパク質（糖タンパク質及びリポタンパク質などの翻訳後修飾タンパク質を含む）及び合成ペプチドから選択される、請求項１６乃至請求項１９のいずれか１項記載の方法。
【請求項２１】
基質分子が脱リン酸化を受け得る１以上のリン酸化アミノ酸を含んでなる、請求項１６乃至請求項２０いずれか１項記載の方法。
【請求項２２】
リン酸化アミノ酸がチロシン、セリン、スレオニン及びヒスチジンのリン酸化誘導体から選択されるものである、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
酵素が基質のホスホ−チロシン残基からリン酸基を除去し、蛍光標識の蛍光寿命の減少を用いて産物の濃度に対するリン酸化基質の濃度を測定する、請求項１９乃至請求項２２のいずれか１項記載の方法。
【請求項２４】
基質がリンカー基により固体支持体に結合している、請求項１６乃至請求項２３のいずれか１項記載の方法。
【請求項２５】
基質が第二のペプチド又はタンパク質に融合している、請求項１６乃至請求項２３のいずれか１項記載の方法。
【請求項２６】
試験作用物質が酵素の脱リン酸化活性に及ぼす作用を測定する試験作用物質のスクリーニング方法であって、
（ａ）作用物質の存在下及び不存在下に、請求項１６乃至請求項２５のいずれか１項記載の方法を実施する工程；及び
（ｂ）作用物質の存在下及び不存在下に酵素の脱リン酸化活性を測定する工程；
からなり、作用物質の存在下及び不存在下での酵素の脱リン酸化活性の差が酵素の脱リン酸化活性に対する試験作用物質の作用の指標となる、スクリーニング方法。
【請求項２７】
試験作用物質が酵素の脱リン酸化活性に及ぼす作用を測定する試験作用物質のスクリーニング方法であって、
（ａ）試験作用物質の存在下に、請求項１６乃至請求項２５のいずれか１項記載の方法を実施する工程；及び
（ｂ）酵素の脱リン酸化活性の値を、試験作用物質の不存在下での酵素活性の対照値であって電子的フォーマットに保存された対照値と比較する工程；
からなるスクリーニング方法。
【請求項２８】
酵素がホスファターゼである、請求項１６乃至請求項２７のいずれか１項記載の方法。
【請求項２９】
細胞環境における基質のリン酸化状態を測定する方法であって、基質が細胞性酵素によりリン酸化又は脱リン酸化されて産物を生じ得る１以上のの部分を含んでなり、かつ基質が蛍光色素で標識されているものであり、当該方法が、
ｉ）無細胞環境における蛍光標識基質の蛍光強度と蛍光寿命を測定する工程；
ｉｉ）液体培地中１個以上の細胞に基質を加える工程；及び
ｉｉｉ）工程ｉｉ）に続いて、蛍光標識の蛍光強度と蛍光寿命を測定する工程；
からなり、蛍光強度と蛍光寿命の変化を基質のリン酸化状態を示すために使用する、方法。
【請求項３０】
基質がキナーゼ基質又はホスファターゼ基質である、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
蛍光色素がアクリドン及びキナクリドン群の色素から選択されるものである、請求項２９又は請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
基質が第二のペプチド又はタンパク質に接合している、請求項２９乃至請求項３１のいずれか１項記載の方法。
【請求項３３】
基質が担体又は輸送ペプチドに接合している、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
各酵素が異なる基質に特異的であり、その２種以上の異なる酵素のキナーゼ活性を同時に測定する方法であって、各基質が酵素によりリン酸化されて産物を生じ得る１以上の部分を含んでなり、かつ各基質が蛍光色素セットの異なる１つにより標識されているものであり、当該方法が、
ｉ）蛍光標識基質それぞれの蛍光強度と蛍光寿命を測定する工程；
ｉｉ）リン酸源の存在下に酵素の混合物と各基質分子とを結合する工程；及び
ｉｉｉ）工程ｉｉ）の結合に続いて、各蛍光標識の蛍光強度と蛍光寿命の増加を測定する工程；
からなり、各蛍光標識の蛍光強度と蛍光寿命の増加を各酵素のリン酸化活性の定量に使用する、方法。
【請求項３５】
セット中の蛍光色素がアクリドン及びキナクリドン群の色素から選択される、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
酵素が単離酵素である、請求項３４又は請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
１種以上の酵素が細胞溶解液の成分である、請求項３４又は請求項３５記載の方法。
【請求項３８】
工程ｉｉ）の結合を細胞環境中で実施し、異なる基質のそれぞれが担体又は輸送ペプチドに接合している、請求項３４記載の方法。
【請求項３９】
測定するキナーゼ活性がチロシンキナーゼである、請求項３４乃至請求項３８のいずれか１項記載の方法。
【請求項４０】
以下の成分：
ｉ）キナーゼ酵素に対する基質であって、基質が酵素によりリン酸化されてリン酸化産物を生じ得る１以上の部分を含んでなり、かつ基質が以下の式：
【化５】
2005523024.tif 000005
（式中、
基Ｒ2及びＲ3はＺ1環構造に結合していて、基Ｒ4及びＲ5はＺ2環構造に結合しており、
Ｚ1及びＺ2は独立して１又は２つの縮合環芳香族又はへテロ芳香族系を完結するために必要な原子を表し、各環は複数の炭素原子から選択される５又は６個の原子と選択肢として酸素、窒素及びイオウから選択される２個を超えない原子を有しており、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は独立して
水素、ハロゲン、アミド、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ1〜Ｃ4アルキル置換アミノ、スルフィドリル、カルボニル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ20アルキル、アラルキル；基−Ｅ−Ｆ（ただし、Ｅは炭素、窒素、酸素、イオウ及びリン原子からなる基から選択される１〜６０個の原子鎖をもつスペーサーであり、Ｆは標的結合基である）；及び基−（ＣＨ2）nＹ（ただし、Ｙはスルホン酸、硫酸、ホスホン酸、リン酸、四級アンモニウム及びカルボキシルから選択され、ｎはゼロ又は１〜６の整数である）から選択される）
【化６】
2005523024.tif 000006
（式中、
基Ｒ3及びＲ4はＺ1環構造に結合していて、基Ｒ5及びＲ6はＺ2環構造に結合しており、
Ｚ1及びＺ2は独立して１又は２つの縮合環芳香族又はへテロ芳香族系を完結するために必要な原子を表し、各環は複数の炭素原子から選択される５又は６個の原子と選択肢として酸素、窒素及びイオウから選択される２個を超えない原子を有しており、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は独立して
水素、ハロゲン、アミド、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ1〜Ｃ4アルキル置換アミノ、スルフィドリル、カルボニル、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ20アルキル、アラルキル；基−Ｅ−Ｆ（ただし、Ｅは炭素、窒素、酸素、イオウ及びリン原子からなる基から選択される１〜６０個の原子鎖をもつスペーサーであり、Ｆは標的結合基である）；及び基−（ＣＨ2）nＹ（ただし、Ｙはスルホン酸、硫酸、ホスホン酸、リン酸、四級アンモニウム及びカルボキシルから選択され、ｎはゼロ又は１〜６の整数である）から選択される）
の蛍光色素で標識されている基質；及び
ｉｉ）リン酸供与体及びキナーゼから選択される成分；
を含んでなる組成物。
【請求項４１】
１種以上の酵素のキナーゼ活性を測定する試験キットであって、
ｉ）各基質がリン酸化されて産物を生じ得る部分を含んでなり、かつ各基質が以下の式：
【化７】
2005523024.tif 000007
（式中、
基Ｒ2及びＲ3はＺ1環構造に結合していて、基Ｒ4及びＲ5はＺ2環構造に結合しており、
Ｚ1及びＺ2は独立して１又は２つの縮合環芳香族又はへテロ芳香族系を完結するために必要な原子を表し、各環は複数の炭素原子から選択される５又は６個の原子と選択肢として酸素、窒素及びイオウから選択される２個を超えない原子を有しており、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は独立して
水素、ハロゲン、アミド、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ1〜Ｃ4アルキル置換アミノ、スルフィドリル、カルボニル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ20アルキル、アラルキル；基−Ｅ−Ｆ（ただし、Ｅは炭素、窒素、酸素、イオウ及びリン原子からなる基から選択される１〜６０個の原子鎖をもつスペーサーであり、Ｆは標的結合基である）；及び基−（ＣＨ2）nＹ（ただし、Ｙはスルホン酸、硫酸、ホスホン酸、リン酸、四級アンモニウム及びカルボキシルから選択され、ｎはゼロ又は１〜６の整数である）から選択される）
【化８】
2005523024.tif 000008
（式中、
基Ｒ3及びＲ4はＺ1環構造に結合していて、基Ｒ5及びＲ6はＺ2環構造に結合しており、
Ｚ1及びＺ2は独立して１又は２つの縮合環芳香族又はへテロ芳香族系を完結するために必要な原子を表し、各環は複数の炭素原子から選択される５又は６個の原子と選択肢として酸素、窒素及びイオウから選択される２個を超えない原子を有しており、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は独立して
水素、ハロゲン、アミド、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ1〜Ｃ4アルキル置換アミノ、スルフィドリル、カルボニル、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ20アルキル、アラルキル；基−Ｅ−Ｆ（ただし、Ｅは炭素、窒素、酸素、イオウ及びリン原子からなる基から選択される１〜６０個の原子鎖をもつスペーサーであり、Ｆは標的結合基である）；及び基−（ＣＨ2）nＹ（ただし、Ｙはスルホン酸、硫酸、ホスホン酸、リン酸、四級アンモニウム及びカルボキシルから選択され、ｎはゼロ又は１〜６の整数である）から選択される）
の色素から選択される蛍光色素セットの異なる１つにより標識されている基質；及び選択肢として、
ｉｉ）各酵素が異なる基質に特異的な１種以上の異なる酵素；
を含んでなる試験キット。
【請求項４２】
１種以上の酵素のホスファターゼ活性を測定する試験キットであって、
ｉ）各基質が脱リン酸化されて産物を生じ得るリン酸化部分を含んでなり、かつ各基質が以下の式：
【化９】
2005523024.tif 000009
（式中、
基Ｒ2及びＲ3はＺ1環構造に結合していて、基Ｒ4及びＲ5はＺ2環構造に結合しており、
Ｚ1及びＺ2は独立して１又は２つの縮合環芳香族又はへテロ芳香族系を完結するために必要な原子を表し、各環は複数の炭素原子から選択される５又は６個の原子と選択肢として酸素、窒素及びイオウから選択される２個を超えない原子を有しており、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は独立して
水素、ハロゲン、アミド、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ1〜Ｃ4アルキル置換アミノ、スルフィドリル、カルボニル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ20アルキル、アラルキル；基−Ｅ−Ｆ（ただし、Ｅは炭素、窒素、酸素、イオウ及びリン原子からなる基から選択される１〜６０個の原子鎖をもつスペーサーであり、Ｆは標的結合基である）；及び基−（ＣＨ2）nＹ（ただし、Ｙはスルホン酸、硫酸、ホスホン酸、リン酸、四級アンモニウム及びカルボキシルから選択され、ｎはゼロ又は１〜６の整数である）から選択される）
【化１０】
2005523024.tif 000010
（式中、
基Ｒ3及びＲ4はＺ1環構造に結合していて、基Ｒ5及びＲ6はＺ2環構造に結合しており、
Ｚ1及びＺ2は独立して１又は２つの縮合環芳香族又はへテロ芳香族系を完結するために必要な原子を表し、各環は複数の炭素原子から選択される５又は６個の原子と選択肢として酸素、窒素及びイオウから選択される２個を超えない原子を有しており、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は独立して
水素、ハロゲン、アミド、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ1〜Ｃ4アルキル置換アミノ、スルフィドリル、カルボニル、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ20アルキル、アラルキル；基−Ｅ−Ｆ（ただし、Ｅは炭素、窒素、酸素、イオウ及びリン原子からなる基から選択される１〜６０個の原子鎖をもつスペーサーであり、Ｆは標的結合基である）；及び基−（ＣＨ2）nＹ（ただし、Ｙはスルホン酸、硫酸、ホスホン酸、リン酸、四級アンモニウム及びカルボキシルから選択され、ｎはゼロ又は１〜６の整数である）から選択される）
の色素から選択される蛍光色素セットの異なる１つにより標識されている基質；及び選択肢として、
ｉｉ）各酵素が異なる基質に特異的な１種以上の異なる酵素；
を含んでなる試験キット。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
基質がチロシン残基でチロシンキナーゼによりリン酸化される場合の第二の態様による実施形態において、リン酸化産物は１以上のホスホ−チロシン残基を含んでなる。この実施形態において、測定工程ｉ）及びｉｉｉ）はさらに蛍光標識の蛍光寿命を測定することを含んでなり、蛍光寿命の増加を用いて、非リン酸化基質の濃度に対するリン酸化産物の濃度を測定する。従って、この方法は実時間での酵素反応の進行とともに変化する基質の量とそれによって生じた相当するリン酸化産物の量の増加についての連続的記録のために使用し得る。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
第一又は第二態様による好ましい実施形態においては、試験作用物質が酵素のリン酸化活性に及ぼす作用を測定する試験作用物質のスクリーニング方法が提供される。当該方法は、（ａ）作用物質の存在下及び不存在下に第一又は第二態様による方法を実施する工程；及び（ｂ）作用物質の存在下及び不存在下に酵素のリン酸化活性を測定する工程からなり、作用物質の存在下及び不存在下での酵素のリン酸化活性の差が酵素のリン酸化活性に対する試験作用物質の作用の指標となる、スクリーニング方法である。あるいは、試験作用物質の存在下に当該方法を実施し、次いで、酵素のリン酸化活性値を試験作用物質の不存在下での酵素活性の対照値と比較することによってスクリーニングを実施することができる。対照値は便宜的には電子的にデータベース又は他の電子的フォーマットに保存するとよい。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
第四の態様の特定の実施形態において、基質はリン酸化されたチロシン残基を含んでなり、酵素は基質中のホスホ−チロシン残基からリン酸基を除去する。この実施形態において、測定工程ｉ）及びｉｉｉ）はさらに蛍光標識の蛍光寿命を測定することを含んでなり、蛍光寿命の減少を用いて、生成物の濃度に対するリン酸化された基質の濃度を測定する。従って、この方法は実時間での酵素反応の進行とともに変化するリン酸化された基質の量とそれによって生じた相当する産物の量の増加についての連続的記録のために使用し得る。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
好ましい実施形態においては、試験作用物質が酵素の脱リン酸化活性に及ぼす作用を測定する試験作用物質のスクリーニング方法が提供される。当該方法は、（ａ）作用物質の存在下及び不存在下に第三又は第四の態様による方法を実施する工程；及び（ｂ）作用物質の存在下及び不存在下に酵素の脱リン酸化活性を測定する工程からなり、作用物質の存在下及び不存在下での酵素の脱リン酸化活性の差が酵素の脱リン酸化活性に対する試験作用物質の作用の指標となる。あるいは、スクリーニングは試験作用物質の存在下に当該方法を実施し、次いで、酵素の脱リン酸化活性値を試験作用物質の不存在下での酵素活性の対照値と比較することにより実施し得る。対照値は便宜的には電子的にデータベース又は他の電子的フォーマットに保存するとよい。