【手続補正書】
【提出日】平成21年10月22日(2009.10.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の改変リン酸化部位を含む、配列番号１のヒト色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）のアミノ酸配列の変異体又はその断片を含むＰＥＤＦの抗血管新生変異体或いはその類似体又は融合タンパク質であって、但し、前記変異体が、改変リン酸化部位がセリン２４及びセリン１１４の２つのみからなるＰＥＤＦ変異体、その類似体、断片又は融合タンパク質以外である、ＰＥＤＦの抗血管新生変異体或いはその類似体又は融合タンパク質。
【請求項２】
セリン２４、セリン１１４及びセリン２２７に３つの改変リン酸化部位を含む、請求項１に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片。
【請求項３】
神経栄養活性を有する、請求項２に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片。
【請求項４】
３つの改変リン酸化部位が負に帯電したアミノ酸残基によって置換された、請求項３に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片。
【請求項５】
配列番号２に記載のアミノ酸配列又はその断片を含む、請求項４に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質。
【請求項６】
セリン２４及びセリン１１４が非極性アミノ酸残基によって置換され、セリン２２７が負に帯電したアミノ酸残基及び非極性アミノ酸残基からなる群より選択されるアミノ酸残基によって置換された、請求項３に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片。
【請求項７】
配列番号３及び配列番号４又はそれらの断片からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体又は融合タンパク質。
【請求項８】
本質的に神経栄養活性を欠いている、請求項２に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片。
【請求項９】
セリン２４及びセリン１１４が負に帯電したアミノ酸残基によって置換され、セリン２２７が非極性アミノ酸残基によって置換された、請求項８に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片。
【請求項１０】
配列番号５に記載のアミノ酸配列又はその断片を含む、請求項９に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体又は融合タンパク質。  
【請求項１１】
セリン２４及びセリン２２７と、セリン１１４及びセリン２２７とからなる群より選択される２つの改変リン酸化部位を含む、請求項１に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片。
【請求項１２】
リン酸化部位の改変が化学修飾によって実施される、請求項１に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片。
【請求項１３】
前記化学修飾が、グリコシル化、酸化、永久リン酸化、還元、ミリスチル化、硫酸化、アシル化、アセチル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化及び遮断基による誘導体化からなる群より選択される、請求項１２に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片。
【請求項１４】
複数の改変リン酸化部位を含む色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）変異体、その類似体、断片又は融合タンパク質をコードする、配列番号６のヒトＰＥＤＦのヌクレオチド配列の変異体又はその断片を含むＰＥＤＦの抗血管新生変異体或いはその類似体又は融合タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、但し、前記ＰＥＤＦ変異体は、改変リン酸化部位がセリン２４及びセリン１１４の２つのみからなる変異体以外である、単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項１５】
前記ＰＥＤＦ変異体、その類似体、断片又は融合タンパク質が、セリン２４及びセリン２２７と、セリン１１４及びセリン２２７とからなる群より選択される２つのリン酸化部位を含む、請求項１４に記載の単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項１６】
前記ＰＥＤＦ変異体、その類似体、断片又は融合タンパク質が、セリン２４、セリン１１４及びセリン２２７に３つの改変リン酸化部位を含む、請求項１４に記載の単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項１７】
前記ＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、断片又は融合タンパク質が神経栄養活性を有する、請求項１６に記載の単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項１８】
前記３つの改変リン酸化部位が、負に帯電したアミノ酸残基によって置換された、請求項１７に記載の単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項１９】
配列番号７又はその断片を含む、請求項１８に記載の単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項２０】
セリン２４及びセリン１１４が非極性アミノ酸残基によって置換され、セリン２２７は負に帯電したアミノ酸残基及び非極性アミノ酸残基からなる群より選択されるアミノ酸残基によって置換された、請求項１７に記載の単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項２１】
配列番号８及び配列番号９又はその断片からなる群より選択される、請求項２０に記載の単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項２２】
前記ＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、断片又は融合タンパク質が本質的に神経栄養活性を欠いている、請求項１６に記載の単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項２３】
セリン２４及びセリン１１４が負に帯電したアミノ酸残基によって置換され、セリン２２７が非極性アミノ酸残基によって置換された、請求項２２に記載の単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項２４】
配列番号１０又はその断片を含む、請求項２３に記載の単離ポリヌクレオチド配列。
【請求項２５】
請求項１４から２４までのいずれか一項に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体或いはその類似体、断片又は融合タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチド配列を含む発現ベクター。
【請求項２６】
請求項２５に記載の、ＰＥＤＦの抗血管新生変異体或いはその類似体、断片又は融合タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２７】
活性成分としての請求項１から１３までのいずれか一項に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片と、医薬として許容しうる担体とを含む医薬組成物。
【請求項２８】
活性成分としての請求項１４から２４までのいずれか一項に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体或いはその類似体、融合タンパク質又は断片をコードする単離ポリヌクレオチド配列と、医薬として許容しうる担体とを含む医薬組成物。
【請求項２９】
活性成分としての請求項２５に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片をコードする単離ポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターと、医薬として許容しうる担体とを含む医薬組成物。
【請求項３０】
活性成分としての請求項２６に記載のＰＥＤＦの抗血管新生変異体、その類似体、融合タンパク質又は断片をコードする単離ポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを含む宿主細胞と、医薬として許容しうる担体とを含む医薬組成物。
【請求項３１】
新血管形成を随伴する疾患及び障害を治療するための、請求項２７から３０までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
前記新血管形成を随伴する疾患又は障害が、癌、眼疾患及び抗血管新生因子を用いて治療される障害からなる群より選択される、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記疾患又は障害が、非上皮性悪性腫瘍、上皮性悪性腫瘍、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌胆管癌、絨毛腫、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起膠腫、髄膜腫、黒色腫及び神経芽細胞腫からなる群より選択される癌である、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記眼疾患が、血管新生緑内障、糖尿病性網膜症、網膜芽腫、水晶体後部線維増殖症、ブドウ膜炎、未熟児網膜症、黄斑変性症、角膜移植片新血管形成、網膜腫瘍及び脈絡膜腫瘍からなる群より選択される、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記抗血管新生因子により治療される障害が、血管腫、関節炎、乾癬、血管線維腫、動脈硬化性プラーク、血友病関節及び肥厚性瘢痕からなる群より選択される、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
神経変性症状を治療するための、請求項２７から３０までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記神経変性症状が、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、重症筋無力症、運動神経障害、ギランバレー症候群、自己免疫性神経障害、ランバートイートン筋無力症候群、腫瘍随伴性神経疾患、腫瘍随伴性小脳委縮症、非腫瘍随伴性スティフマン症候群、進行性小脳委縮症、ラスムッセン脳炎、筋委縮性側索硬化症、シデナム舞踏病、トゥレット症候群、自己免疫性腺性内分泌障害、免疫不全性神経障害、後天性神経性筋硬直症、先天性多発性関節拘縮症、視神経炎及びスティフマン症候群からなる群より選択される、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
（ａ）少なくとも１つの負に帯電した改変リン酸化部位を含む、配列番号１のヒトＰＥＤＦのアミノ酸配列の変異体；
（ｂ）（ａ）のＰＥＤＦ変異体の類似体；
（ｃ）（ａ）のＰＥＤＦ変異体の断片又は（ｂ）の類似体
からなる群より選択される、ポリペプチドに特異的に結合する単離抗体又はその断片であり、非リン酸化セリン又は負に帯電していない改変リン酸化部位を有する、配列番号１のヒトＰＥＤＦの対応する配列に結合しない単離抗体。
【請求項３９】
少なくとも１つの改変リン酸化部位がセリン２４に位置し、前記ＰＥＤＦ変異体が配列番号２、配列番号５、配列番号１１及び配列番号１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の単離抗体又はその断片。
【請求項４０】
少なくとも１つの改変リン酸化部位がセリン２２７に位置し、前記ＰＥＤＦ変異体が配列番号２、配列番号３及び配列番号１３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の単離抗体又はその断片。
【請求項４１】
前記ＰＥＤＦ変異体が、２つの改変リン酸化部位をセリン２４及びセリン１１４に含み、配列番号２、配列番号５及び配列番号１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の単離抗体又はその断片。
【請求項４２】
前記ＰＥＤＦ変異体が、３つの改変リン酸化部位をセリン２４、セリン１１４及びセリン２２７に含み、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の単離抗体又はその断片。
【請求項４３】
ポリクロナール抗体である、請求項３８から４２までのいずれか一項に記載の単離抗体又はその断片。
【請求項４４】
モノクロナール抗体である、請求項３８から４２までのいずれか一項に記載の単離抗体又はその断片。
【請求項４５】
（ａ）Ｆａｂ、
（ｂ）Ｆ（ａｂ）２、
（ｃ）キメラ抗体、及び
（ｄ）一本鎖抗体
からなる群より選択される、請求項３８から４２までのいずれか一項に記載の単離抗体又はその断片。
【請求項４６】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載の、ＰＥＤＦの抗血管新生変異体或いはその断片又は類似体をコードする単離ポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、前記変異体、断片又は類似体の発現を促進する条件下で培養すること及び前記変異体、断片又は類似体を回収することを含む、ＰＥＤＦの抗血管新生変異体の作製方法。
【請求項４７】
前記宿主細胞が真核細胞である、請求項４６に記載の方法。