(57)【要約】  本発明は、美容上の目的および皮膚疾患の予防のために、老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚を再生するための毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞の使用に関する。本発明はさらに、老化した皮膚の再生のための美容的方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚を再生するための毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞の使用。
【請求項２】
ヒトおよび哺乳動物の皮膚の美容的処置のための、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
ヒトおよび哺乳動物における皮膚疾患の予防、好ましくは、皮膚の結着性、皮膚のホメオスタシス、皮膚の分化および/または皮膚のバリア機能の遺伝性または後天性の機能不全に基づく皮膚疾患、好ましくは、表皮水疱症、色素性乾皮症、早老症、魚鱗癬、外科的処置後およびエックス線照射後の状態、ならびに外因的に誘発された萎縮症または肥大症、特に肥厚性瘢痕およびケロイド、好ましくは局所的または全身的な副腎皮質ステロイド剤により誘発された萎縮症からなる群から選択される皮膚疾患の予防のための、請求項1に記載の使用。
【請求項４】
薬剤調製のための、請求項1に記載の使用。
【請求項５】
老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚に毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞を適用するステップを含む、老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚を再生するための美容的方法。
【請求項６】
毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞が自己細胞である、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
表皮が、細胞の適用前に、好ましくは表面的皮膚切除術、レーザー適用および/または表面的針穿刺によって、物理的および/または機械的に除去される、請求項5または6に記載の方法。
【請求項８】
表皮が、細胞の適用前に、フラクセルモダリティのレーザーおよび/またはダーマローラーによって、種々の透過深度の部分的/断片的脱表皮化の形態で除去される、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
細胞が、抽出物、懸濁液、溶液として、または生体適合性の生物学的または合成の担体中に含まれて濃縮または単離された細胞の形態である、請求項5から8のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞が、インビトロで培養されることによって増殖され、かつ/または選択される、請求項5から8のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
細胞適用の前、間および/または後で、(自己)免疫反応を阻害する少なくとも1つの活性成分、好ましくは局所的または全身的副腎皮質ステロイド剤および/または局所的カルシニューリン阻害剤が投与される、請求項5から10のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
追加的にメラノサイト前駆細胞が皮膚に適用される、請求項5から11のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞および任意選択のメラノサイト前駆細胞の他に、細胞が、毛根鞘に含まれる追加的な細胞、好ましくは他の前駆細胞を含む、請求項5から12のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美容上の目的および皮膚疾患の予防のために、老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚を再生するための毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞の使用に関する。また、本発明は老化した皮膚の再生のための美容的方法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
今日、若く美しい皮膚は心理面および社会面での関連性を益々高めており、したがって皮膚の老化に対抗するまたは逆行させるとされている数多くの局所用製剤が市販されている。しかし、持続的効果についての妥当な医学的科学的証拠は、大部分において欠落している。
【０００３】
一方で、皮膚の老化は、大きな個人差はあるが年齢に依存し(内因性老化または経時的老化)、他方では、外的な損傷要因、特に累積的な日光(UV)曝露、栄養不良、薬物乱用、機械的磨耗およびさらにニコチン乱用に依存する(外因性老化)。
【０００４】
老化した皮膚は、表皮ならびに真皮の菲薄化(萎縮症)、しわ形成の増加および弾力性喪失(真皮の弾力線維症)、乾燥皮膚および膨圧喪失ならびに場合によっては皮膚の色素沈着の不規則性(例えば、日光黒子)によって顕在化する。生涯にわたる皮膚の再生(ホメオスタシス)は、一方で、最下層(表皮基底層)におけるケラチノサイトの幹細胞分裂による表皮の連続的置換とそれに続いて外層である角層(角質層(stratum corneum))に進む際のホーンディスク(horn discs)への分化に基づいている。
【０００５】
老化した皮膚においては、このプロセスが障害され、それにより萎縮症に致る。ケラチノサイトの分化が強度の機能不全に陥っている場合、変性、すなわちいわゆる白色皮膚癌(有棘細胞癌、基底細胞癌)または癌前駆症(日光角化症)の発症の可能性が生じることがある。これは主として、慢性的に日光に曝露した皮膚部位の場合であり、UV放射の引き金としての関連性を明確に示している。したがって、老化した皮膚の再生への持続可能な治療的アプローチは、美容上の理由からばかりではなく、望ましい。十分に機能的な表皮はまた、その下層の真皮の構造および機能の維持にとってもまた重要である。それは、これら2つの皮膚区画の細胞系(表皮のケラチノサイトおよび線維芽細胞または真皮の血管内皮)は、可溶性因子(例えば、サイトカイン、成長因子)を介して互いに情報交換しているからである。したがって、十分に機能的な表皮はまた、年齢に関連する真皮の変化、すなわち弾力線維症および血管拡張(毛細血管拡張症)を伴う真皮の萎縮症の再生にも貢献することができる。
【０００６】
重要なケラチノサイト前駆細胞または幹細胞は、表皮のホメオスタシスにとって決定的なものであり、上皮毛根鞘(外毛根鞘:ORS)、すなわち真皮深層に位置し、したがって、有害なUV放射(特に有害なUV-Bは、かろうじて表皮を透過する程度でしかない)からは防御されている。これらORS細胞は、成長期に引き抜いた頭毛から単離することができ、また研究室において増殖させることもできる。
【０００７】
皮膚の再色素沈着は、自己毛根鞘由来のORS幹細胞またはそれに由来するメラノサイト前駆細胞の応用として知られている(VanscheidtおよびHunziker、Dermatology、904、2009年、国際公開第2009/049734号)。
【０００８】
さらに、慢性創傷は、自己毛根鞘由来の表皮ケラチノサイト前駆細胞によって治療される(EpiDex(登録商標)、Euroderm;Taushce他、Wound Repair and Regeneration、11(4)、248〜252頁、2003年、欧州特許第1 198 557 B1号、欧州特許第1 326 654 B1号)。
【０００９】
慢性創傷の治療の他に、ケラチノサイト前駆細胞による他の皮膚の欠陥の治療、例えば、皮膚腫瘍もしくは刺青の外科的除去または傷害による外科的除去後の治療などが開示されている(欧州特許第1 198 557 B1号、欧州特許第1 702 979 A1号)。
【００１０】
表皮神経堤幹細胞(EPI-NCSC)は、胚性神経堤に由来し、毛根鞘に位置する多能性幹細胞である。これらの幹細胞は、永続的に自己再生し、かつ、ニューロン、神経支持細胞、平滑筋細胞、骨/軟骨細胞およびメラノサイトを含む、神経堤の全ての重要な細胞派生物に分化する能力がある。これらの幹細胞は、さらに中胚葉に典型的な細胞型を生成することさえできる。背骨傷害のマウスモデルにおいて、これらの幹細胞は成体骨格筋線維と融合すること、導入された核は機能性であること、また成体骨格筋は、幹細胞核の長期生存に適した環境であることが示された(Sieber-BlumおよびHu、Stem Cell Rev.、4(4)、256〜60頁、2008年)。著者らは、マウスの骨格筋についての彼らの研究から、このような複能性の幹細胞は、将来の細胞置換治療および/または生物医学的開発にとって魅力的な特性を提供することができるであろうと結論付けている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第2009/049734号
【特許文献２】欧州特許第1 198 557 B1号
【特許文献３】欧州特許第1 326 654 B1号
【特許文献４】欧州特許第1 702 979 A1号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】VanscheidtおよびHunziker、Dermatology、904、2009年
【非特許文献２】Euroderm;Taushce他、Wound Repair and Regeneration、11(4)、248〜252頁、2003年
【非特許文献３】Sieber-BlumおよびHu、Stem Cell Rev.、4(4)、256〜60頁、2008年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚を再生することが本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
この目的は、老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚を再生するために毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞を使用することによって解決される。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
用語「健康であって傷害のない皮膚」は、欠陥のない皮膚、特に創傷がなく、ならびに炎症、感染性皮膚疾患または変性皮膚疾患、良性または悪性皮膚腫瘍またはその前駆症(例えば、日光角化症、悪性黒子)、皮膚移植後などの手術後皮膚の変化もない皮膚を表している。
【００１６】
本発明の文脈において、「老化した皮膚」という用語は、好ましくは下記の老化兆候:菲薄化(萎縮症)、小じわの形成、弾力性喪失(弾力線維症)、低レベルの外傷後の出血傾向を伴う脆弱性の増大、ならびに場合によっては色素沈着の不規則性、そればかりではなく乾燥した、場合によっては落屑性/角化性の皮膚表面を伴って深いしわまたはひだを有すること、皮脂腺の活性低下、皮膚膨圧の低下、皮膚脂肪含有量の減少、ひび割れおよび偽瘢痕の傾向、小血管の拡張(毛細血管拡張症)、再生能力の喪失およびそれに関連する創傷治癒機能不全のうち少なくとも1つを有する、内因的および/または外因的に老化した皮膚に関する。これらの出現は、皮膚細胞(特にケラチノサイトおよび線維芽細胞)の増殖および分化を制御し、それによって皮膚のホメオスタシスを制御する、転写因子または腫瘍抑制遺伝子(例えば、NF-kappa B、c-Myc、p53)の活性が障害されていることに基づくものである。例えば、加齢したマウスにおけるNF-kappa Bに関して、NF-kappa Bの遮断が、2週間以内に生物学的により若い皮膚状態を、限られた期間、誘発したことを示すことが可能であった。
【００１７】
本発明によれば、老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚の再生はまた、美容的側面に加え、医学的利点をも有している。皮膚に導入されたケラチノサイト前駆細胞は、十分に分化したケラチノサイトとして表皮を肥厚化するばかりではなく、規則的に分裂し、それによって、よりゆっくりと分裂する「古い」細胞ならびに変性した細胞と、時間経過とともに、置き換わる。さらに、これらケラチノサイト前駆細胞は、直接的環境にある細胞(線維芽細胞、血管内皮細胞、メラノサイト)に、サイトカインおよび成長因子の分泌により、良い影響を与える。このことは、全体として、健康および老化状態を長期的に改善して、しわ形成を減少(コラーゲン線維の再生)させ、弾力性を増加(弾力線維の再生)させ、場合によっては現時点での色素沈着の不規則性を低減(メラニン産生および分布の制御)する。皮膚の微小循環に影響を与えることによって、皮膚の栄養状態が改善され、そのことが、例えば、皮脂腺の栄養状態および活性も増大させ、それによって皮膚の油分状態を正常化する。したがって、本発明によれば、用語「老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚の再生」は、皮膚の美容上の再生のみならず、皮膚の医学的な予防的再生も包含する。
【００１８】
好ましい一実施形態において、本発明は、老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のないヒトおよび哺乳動物の皮膚を再生するための、毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞の専ら美容的使用に関する。
【００１９】
別の好ましい一実施形態において、本発明は、ヒトおよび哺乳動物における皮膚疾患の予防、好ましくは、皮膚の結着性、皮膚のホメオスタシス、皮膚の分化および/または皮膚のバリア機能の遺伝性または後天性の機能不全に基づく皮膚疾患、好ましくは、表皮水疱症、色素性乾皮症、早老症、魚鱗癬、外科的処置後およびエックス線照射後の状態、ならびに外因的に誘発された萎縮症または肥大症、特に肥厚性瘢痕およびケロイド、好ましくは局所的または全身的な副腎皮質ステロイド剤により誘発された萎縮症からなる群から選択される皮膚疾患の予防のための、毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞の使用を対象とする。したがって、本発明はまた、皮膚疾患の予防のための薬剤を調製するための前記細胞の使用にも関する。
【００２０】
自己細胞ならびに同種細胞および異種細胞も使用することができるが、免疫反応を回避するためには自己細胞が好ましい。
【００２１】
別の態様において、本発明は、老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚に毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞を適用するステップを含む、老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚を再生するための美容的方法を対象とする。
【００２２】
老化した皮膚の処置のために、好ましくは患者自身の毛根鞘由来幹細胞または好ましくはそれに由来するケラチノサイト前駆細胞、いわゆる自己ケラチノサイト前駆細胞を使用する。毛根鞘由来のケラチノサイト前駆細胞は、一生を通じて上皮皮膚構造を再生する複能性幹細胞を含む。したがって、これら細胞は、高齢のドナーに関してさえも高い増殖可能性を有する。これらの幹細胞または前駆細胞は、非侵襲的に調製することができるばかりではなく、ほとんど毛髪のないドナーから反復的に調製することや皮膚生検を伴わずに調製することもできる。したがって、これら細胞の適用は、老化した皮膚、特に表皮を、ほとんど非侵襲的に持続的に再生することができるようにする。
【００２３】
毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞ならびにこれらの調製、単離、増殖および貯蔵については、皮膚科学分野の当業者には十分に知られている。好ましくは、本発明を実践するための幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞は、毛根鞘、特に成長期(アナゲン期)の外上皮毛根鞘由来幹細胞から調製される。
【００２４】
これら細胞の調製は、非常に簡便で、痛みを伴わず、かつ、いかなる健康上のリスクをも負うことがない。例えば、細胞を調製するために使用する毛髪は、終毛、特に細毛体のアナゲン期毛髪を引き抜くことによって得ることができる。このことは、ヒトまたは哺乳動物由来の毛幹を処置する場合に有利である。
【００２５】
好ましくは、用語「調製」はまた、少なくとも1つの部分的単離および/または培養中の細胞の濃縮ならびに増殖または選択を含む。好ましい一実施形態において、細胞は、酵素的に、例えば、0.01から10%、好ましくは0.025から0.1%、より好ましくは約0.05%のトリプシン濃度のトリプシン溶液によって、任意選択でEDTAと一緒に、好ましくはPBS中で、好ましくは5から60分間、より好ましくは10から15分間にわたり、好ましくは約20℃、より好ましくは37℃で、引き抜いた毛髪の毛根鞘から遊離される。この種の酵素的除去は特に、調製される細胞に対して穏やかなものである。また、他の酵素系、例えばディスパーゼもまた使用することができる。調製のための別の可能なステップには、血清およびCa/Mgの添加による酵素的遊離の終結、懸濁液の遠心分離、ならびに皮膚への適用に適した溶液または生分解性または非生分解性担体マトリックス中への細胞含有沈殿の懸濁/導入が含まれる。好ましい適用は、細胞含有沈殿のトロンビン含有溶液への懸濁であり、この適用法によってフィブリノゲンで前処置した皮膚の薄層における適用細胞の即時的な固定が可能となり、したがっていかなる身体部位においても皮膚への均一な非閉塞適用を可能とする。好ましくは、本発明の方法では、毛根鞘由来自己幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞を使用する。
【００２６】
任意選択で、細胞を懸濁液または沈殿として、あるいは細胞抽出物として使用することができる。このような場合には、細胞を生体適合性の溶液または生体適合性の担体中に導入することができる。
【００２７】
適用ステップは、好ましくは、例えばシリンジを用いて、またはスプレーとしてまたは生体適合性の担体中または不織布によって、処理する毛髪領域１ｃｍ２当たり１０２から１０９、より好ましくは１０３から１０５個の細胞を有する懸濁液によって実施する。これは、生体適合性溶液(例えば、PBS、細胞培養培地、トロンビン)によって、または生体適合性の生物学的(例えば、フィブリン、ヒアルロナン、コラーゲン)担体または合成(例えば、ポリウレタン、カルボキシメチルセルロース、ポリリシン、ナノ粒子)担体を用いて行うことができる。細胞は、重要な増殖能力がある細胞または成長停止細胞として(例えば、マイトマイシンCによる処置またはエックス線照射によって)またはさらに細胞抽出物(例えば、凍結乾燥物、超音波処理物、促進処理物(stimulates)など)としても使用することができる。さらに、種々のインビトロインキュベーション条件下で(例えば、細胞に直接接触する系または2チャンバー培養系に分かれて、液内培養または器官型培養で、可変性のpO2濃度および/またはpCO2濃度、可変性の培地、可変性のマトリックス基質、可変性のフィーダー細胞で)これら細胞に由来する細胞も使用することができる。
【００２８】
用語「適用」は、本発明の文脈において、皮膚への細胞の単なる適用を包含する。好ましくは、細胞を、この目的で、例えばフィブリン接着剤によって、皮膚に固定し、通常の閉塞包帯で保護する。しかし、他のいかなる適切な形態の適用、例えば細胞を生物学的または合成のマトリックス中に溶け込ませ、次いでそれを適用すること、も可能である。さらに、好ましくは、細胞を直接皮膚中に導入することができる。この目的で、適用に先立ち、処置する皮膚を物理的および/または機械的に脱表皮化するが、これは好ましくは、皮膚切除術、表面的なレーザー適用(例えば、Fraxel re:pair(登録商標)CO2-レーザー、Soltamedical、アメリカ)、または表面的針穿刺(例えば、Dermaroller(登録商標)、Skintes、スイス)によって行い、これによって平面的または好ましくは穿孔状の、すなわち、格子タイプの断片的欠陥を表皮に形成し、それによって適用した細胞が経表皮適用と同様に、皮膚中に透過するのを可能にする、この除去プロセスにおいて、上部真皮層を含めることにより、真皮刺激、および真皮の再生もまた起こる。
【００２９】
本発明の方法の好ましい一実施形態において、表皮は、細胞の適用前に、表面的皮膚切除術、レーザー適用および/または表面的針穿刺によって、物理的および/または機械的に除去される。
【００３０】
より好ましい一実施形態において、表皮は、細胞の適用前に、フラクセルモダリティのレーザーおよび/またはダーマローラーによって、種々の透過深度の部分的/断片的脱表皮化の形態で除去される。
【００３１】
毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞は、好ましくは、適用または導入される間、抽出物、懸濁液、溶液として、または生体適合性の生物学的または合成の担体中に含まれて濃縮または単離された細胞として存在する。
【００３２】
別の好ましい一実施形態において、例えば、幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞の含有量、幹細胞の潜在力(単能性対多能性/複能性)、増殖能力、分化能力、生存能力などの有利な基準によれば、毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞は、インビトロで培養することによって増殖させることができ、かつ/または特定化された培養条件によって(例えば、細胞に直接接触する系または2チャンバー培養系に分かれて、液内培養または器官型培養で、可変性のpO2濃度および/またはpCO2濃度、可変性の培地、可変性のマトリックス基質、可変性のフィーダー細胞で)選択することができる。本発明の文脈において、選択は、特定の幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞、あるいは有利な特性を有する随伴細胞(フィーダー細胞との関連において、幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞の増殖または分化を相互作用的に促進する機能を有する幹細胞でもケラチノサイト前駆細胞でもない細胞)の意図的な選択を意味する。
【００３３】
細胞で処置した皮膚は、好ましくは適用後に、特に皮膚が機械的に前処置をされ、依然として部分的に「開放」状態である場合、皮膚を保護するためばかりでなく、適用された細胞を乾燥、感染および機械的歪から保護し、かつ、細胞の成長にとって最適な環境を作るために、閉塞的に覆われる。
【００３４】
自己細胞による、特に同種細胞または異種細胞による免疫反応を予防するために、好ましくは(自己)免疫反応を阻害する少なくとも1つの活性成分、好ましくは局所的または全身的な副腎皮質ステロイド剤および/または局所的カルシニューリン阻害剤が投与される。
【００３５】
メラノサイト前駆細胞の追加的適用が、老化した皮膚の構造および生理機能に有利な影響を与えることがさらに見出されている。したがって、好ましい一実施形態において、本発明の方法は、特に幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞の適用前、後または好ましくは適用と同時にメラノサイト前駆細胞を皮膚に追加的に適用することに関する。毛根鞘由来幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞を調製する間に、メラノサイト前駆細胞を分離しないことが最も好ましい。
【００３６】
本発明により使用される細胞は、好ましくは、毛根鞘中に含まれる追加的細胞、好ましくは幹細胞および/またはケラチノサイト前駆細胞および任意選択のメラノサイト前駆細胞の他に、別の前駆細胞を含むことができる。
【００３７】
さらに、本発明は、老化してはいるがそれ以外では健康であって傷害のない皮膚を有する哺乳動物およびヒトにおける皮膚疾患の予防、特に皮膚の結着性、皮膚のホメオスタシス、皮膚の分化および/または皮膚のバリア機能の遺伝性または後天性の機能不全に基づく皮膚疾患、好ましくは、表皮水疱症、色素性乾皮症、早老症、魚鱗癬、外科的処置後およびエックス線照射後の状態、ならびに外因的に誘発された萎縮症または肥大症、特に肥厚性瘢痕およびケロイド、好ましくは局所的または全身的な副腎皮質ステロイド剤により誘発された萎縮症からなる群から選択される皮膚疾患の予防のための上記方法を対象とする。この方法の好ましい実施形態は、上述の美容的方法に類似するものにおいて知ることができる。
【００３８】
本発明は、下記の代表的な応用例によって例証される。
【実施例】
【００３９】
不規則性の表皮萎縮症、小じわ形成、頬の毛細血管拡張症、乾燥および皮膚膨圧の減少を特徴とする強度にUV老化した顔面皮膚を有する50歳の女性から、50本のアナゲン期(成長期)毛髪を頭皮より引き抜き、毛根を分離し、それらをトリプシン溶液(Ca/Mg不含のPBS中0.05%トリプシン/0.02%EDTA)中、37℃で10分間インキュベートした。Ca/Mg含有PBSおよび20%ヒトAB血清の添加によりトリプシンを不活性化した後の顕微鏡的制御によって毛幹由来の上皮毛根鞘の全ての細胞の遊離を確認した。細胞篩への通過およびそれに続いての遠心分離(1200rpm、10分間、室温)の後、単離された細胞をCa/Mg含有PBSおよび5%グルコース中に取り込み、フラクセルモダリティのCO2レーザーによって前処置(処置した表皮区域の約20%を上部真皮まで格子状に除去、透過深度約100μm)した額および頬の区域に滴下適用(5cm2当たり0.1ml、約5×103個の細胞/cm2に相当)した。処置区域を続いて最新の創傷包帯で閉塞的に、計1週間にわたり覆った。最初の包帯交換は、3日後に行った。その後、処置皮膚区域を、朝には、ファクター>50のサンスクリーンで、かつ、夕方にはケアローションで処置した。3カ月以内に、皮膚の乾燥の減少、膨圧の増加および表皮構造の均一化を伴って皮膚表面の印象的な平滑化が認められ、また頬の毛細血管拡張症も若干軽減し、全体として、患者にとっては非常に満足のいく美容的結果であると考えられた。
【国際調査報告】
2012528809.tif 000002
2012528809.tif 000003
2012528809.tif 000004
2012528809.tif 000005
2012528809.tif 000006
2012528809.tif 000007