【手続補正書】
【提出日】平成21年2月10日(2009.2.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬物と化学的に共役した細胞結合剤を含む複合体を調製する方法であって、以下を含む方法：
（ａ）細胞結合剤を二官能性架橋試薬と接触させて、細胞結合剤にリンカーを共有結合させ、それによって、リンカーが安定に結合した細胞結合剤及び不安定に結合した細胞結合剤を含む第一混合物を調製すること、
（ｂ）第一混合物を非吸着性クロマトグラフィに供し、リンカーが結合した細胞結合剤を第一混合物の他の成分から精製し、それによって精製された第一混合物を調製すること、
（ｃ）ｐＨが約４．５から約８の溶液中で、リンカーが結合した細胞結合剤を薬物と反応させることによって、薬物をリンカーが結合した細胞結合剤と複合体化させ、（ｉ）リンカーを通じて薬物と化学的に共役した細胞結合剤、（ｉｉ）遊離薬物、並びに（ｉｉｉ）溶媒及び反応副産物、を含む第二混合物を調製すること、
（ｄ）第二混合物を非吸着性クロマトグラフィに供し、リンカーを通じて薬物と化学的に共役した細胞結合剤を第二混合物の他の成分から精製し、それによって精製された第二混合物を調製すること、
（ｅ）精製された第二混合物を、接線流ろ過（ＴＦＦ）に任意で供し、薬物と化学的に共役した細胞結合剤を含む複合体を単離すること、並びに
（ｆ）混合物を、工程ａ−ｂ、工程ｂ−ｃ、及び工程ｄ−ｅの少なくとも１つの間で少なくとも約５時間保持し、不安定に結合したリンカーを細胞結合剤から放出させること。
【請求項２】
細胞結合剤が、インターフェロン、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インスリン、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、トランスフェリン、及び抗体からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
細胞結合剤が抗体である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
抗体がヒト化モノクローナル抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
抗体が、ｈｕＮ９０１、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＣ２４２、トラスツズマブ、ビバツズマブ、シブロツズマブ、ＣＮＴＯ９５及びｈｕＤＳ６及びリツキシマブからなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
薬物が細胞毒性剤である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
細胞毒性剤が、メイタンシノイド、タキサン、ＣＣ１０６５、及び前述のアナログからなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
薬物がメイタンシノイドである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
メイタンシノイドがチオール基を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
メイタンシノイドがＤＭ１又はＤＭ４である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
細胞結合剤が、ジスルフィド結合、酸解離性結合、光解離性結合、ペプチダーゼ解離性結合、チオエーテル結合、及びエステラーゼ解離性結合からなる群より選択される化学結合を介して薬物と化学的に共役している、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
工程（ｃ）及び／又は（ｄ）における溶液がさらにショ糖を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
工程（ｃ）及び／又は（ｄ）における溶液がさらに、クエン酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、コハク酸塩緩衝液、及びリン酸塩緩衝液からなる群より選択される緩衝剤を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
不安定に結合したリンカーが、工程（ｆ）の混合物のｐＨを調整することによって細胞結合剤から放出される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
保持工程が、混合物を約２℃〜約８℃で、約６〜７．５のｐＨにて、約１２時間から約４週間までの間インキュベートすることを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
保持工程が、混合物を２０℃〜３０℃で、約６〜７．５のｐＨにて、約１２時間から約１週間までの間インキュベートすることを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
保持工程が、混合物を約２℃〜約８℃で、約４．５〜５．９のｐＨにて、約５時間から約５日までの間インキュベートすることを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
保持工程が、混合物を２０℃〜３０℃で、約４．５〜５．９のｐＨにて、約５時間から約１日までの間インキュベートすることを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
保持工程がさらに、混合物へ求核試薬を添加することを含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
求核試薬が、一級求核アミン、二級求核アミン、又はそれらの組合せである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
求核試薬が、グリシルグリシン、タウリン、ジエタノールアミン、リジン、ヒドロキシルアミン、イミダゾール、エチルアミン、４−アミノ−１−ブタノール、ポリリジン、リジン含有ペプチド、ポリ（エチレンイミン）、ヒドラジン、グリシン、エタノールアミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパン−ジオール及びそれらの組合せからなる群より選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
非吸着性クロマトグラフィが、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）樹脂、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（商標）樹脂、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）樹脂、及びＢＩＯ−ＧＥＬ（登録商標）樹脂からなる群より選択される、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
薬物と化学的に共役した細胞結合剤を含む複合体を調製する方法であって、以下を含む方法：
（ａ）細胞結合剤を、活性エステルを持つ薬物と接触させ、それによって、薬物が安定に結合した細胞結合剤及び不安定に結合した細胞結合剤を含む混合物を調製すること、
（ｂ）混合物を非吸着性クロマトグラフィに供し、薬物が結合した細胞結合剤を混合物の他の成分から精製し、それによって精製された混合物を調製すること、
（ｃ）精製された混合物を、接線流ろ過（ＴＦＦ）に任意で供し、薬物と化学的に共役した細胞結合剤を含む複合体を単離すること、並びに
（ｄ）混合物を、工程ａ−ｂ及びｂ−ｃの少なくとも１つの間で保持し、不安定に結合した薬物を細胞結合剤から放出させること。
【請求項２５】
細胞結合剤が、インターフェロン、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インスリン、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、トランスフェリン、及び抗体からなる群より選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
細胞結合剤が抗体である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
抗体がヒト化モノクローナル抗体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
抗体が、ｈｕＮ９０１、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＣ２４２、ＣＮＴＯ９５、ｈｕＤＳ６、トラスツズマブ、ビバツズマブ、シブロツズマブ、及びリツキシマブからなる群より選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
薬物が細胞毒性剤である、請求項２４〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
細胞毒性剤が、メイタンシノイド、タキサン、ＣＣ１０６５、及び前記のアナログからなる群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
薬物がメイタンシノイドである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
メイタンシノイドがチオール基を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
メイタンシノイドがＤＭ１又はＤＭ４である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
細胞結合剤が、ジスルフィド結合、酸解離性結合、光解離性結合、ペプチダーゼ解離性結合、チオエーテル結合、及びエステラーゼ解離性結合からなる群より選択される化学結合を介して薬物と化学的に共役している、請求項２４〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
工程（ａ）及び／又は（ｂ）における溶液がさらにショ糖を含む、請求項２４〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
工程（ａ）及び／又は（ｂ）における溶液がさらに、クエン酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、コハク酸塩緩衝液、及びリン酸塩緩衝液からなる群より選択される緩衝剤を含む、請求項２４〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
不安定に結合したリンカーが、工程（ｄ）の混合物のｐＨを調整することによって細胞結合剤から放出される、請求項２４〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
保持工程が、混合物を約２℃〜約８℃で、約６〜７．５のｐＨにて、約１２時間から約４週間までインキュベートすることを含む、請求項２４〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
保持工程が、混合物を２０℃〜３０℃で、約６〜７．５のｐＨにて、約１２時間から約１週間までインキュベートすることを含む、請求項２４〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
保持工程がさらに、混合物への求核試薬の添加を含む、請求項２４〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
求核試薬が、一級求核アミン、二級求核アミン、又はそれらの組合せである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
求核試薬が、グリシルグリシン、タウリン、ジエタノールアミン、リジン、ヒドロキシルアミン、イミダゾール、エチルアミン、４−アミノ−１−ブタノール、ポリリジン、リジン含有ペプチド、ポリ（エチレンイミン）、ヒドラジン、グリシン、エタノールアミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパン−ジオール及びそれらの組合せからなる群より選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
非吸着性クロマトグラフィが、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）樹脂、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（商標）樹脂、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）樹脂、及びＢＩＯ−ＧＥＬ（登録商標）樹脂からなる群より選択される、請求項２４〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
式中、Ｙ’は、（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ９＝ＣＲ１０）ｐ（Ｃ≡Ｃ）ｑＡｏ（ＣＲ５Ｒ６）ｍＤｕ（ＣＲ１１＝ＣＲ１２）ｒ（Ｃ≡Ｃ)ｓＢｔ（ＣＲ３Ｒ４）ｎ−ＣＲ１Ｒ２ＳＺを表し、
ここで、Ｒ１及びＲ２は各々独立してＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、フェニル、置換フェニル又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、Ｒ２はまたＨであり得、
ここで、Ａ、Ｂ、Ｄは、３〜１０の炭素原子を有するシクロアルキル若しくはシクロアルケニル、単純若しくは置換アリール、又は複素環芳香族、又はヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、及びＲ１２は各々独立してＨ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、フェニル、置換フェニル又は複素環芳香族、又はヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ここで、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、及びｔは、各々独立して０又は１から５の整数であり（ただし、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、及びｔの少なくとも２つは、同時に０ではない）、かつ
ここで、ＺはＨ、ＳＲ若しくはＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、又は単純若しくは置換アリール又は複素環芳香族、又はヘテロシクロアルキルラジカルである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
式中、Ｙは、（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺを表し、
ここで、Ｒ１及びＲ２は、各々独立してＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル、若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、ここでＲ２はまたＨであり得、
ここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は、各々独立してＨ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ここで、ｌ、ｍ、及びｎは、各々独立して１から５の整数であり、さらにｎは０であり得、
ここで、Ｚは、Ｈ、ＳＲ、又はＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖若しくは分枝アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する環状アルキル若しくはアルケニル、又は単純若しくは置換アリール又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、かつ
ここで、Ｍａｙは、Ｃ−３、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシ、若しくはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドである。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
式中、Ｙは（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺを表し、
ここで、Ｒ１及びＲ２は、各々独立してＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル、若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、フェニル、置換フェニル又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、かつここで、Ｒ２はまた、Ｈであり得、
ここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々独立してＨ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ここで、ｌ、ｍ、及びｎは、各々独立して１から５の整数であり、さらにｎは０であり得、かつ
ここで、ＺはＨ、ＳＲ若しくはＣＯＲであり、ここで、Ｒは、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、又は単純若しくは置換アリール又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
式中、Ｙ２は（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺ２を表し、
ここで、Ｒ１及びＲ２は、各々独立してＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、フェニル、置換フェニル又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、かつここでＲ２はまたＨであり得、
ここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々独立してＨ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖環状アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、フェニル、置換フェニル又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ここで、ｌ、ｍ、及びｎは、各々独立して、１から５の整数であり、さらにｎは０であり得、
ここで、Ｚ２はＳＲ若しくはＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル又はアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、又は単純若しくは置換アリール又は複素環芳香族又はヘテロシクロアルキルラジカルであり、かつ
ここでＭａｙはメイタンシノイドである。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
式中、Ｙ２’は（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ９＝ＣＲ１０）ｐ（Ｃ≡Ｃ）ｑＡｏ（ＣＲ５Ｒ６）ｍＤｕ（ＣＲ１１＝ＣＲ１２）ｒ（Ｃ≡Ｃ）ｓＢｔ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺ２を表し、
ここで、Ｒ１及びＲ２は、各々独立してＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖分枝又はアルキル又はアルケニル、３から１０の炭素原子を有する環状アルキル若しくはアルケニル、フェニル、置換フェニル又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、さらにＲ２はＨであり得、
ここで、Ａ、Ｂ、及びＤは、各々独立して３から１０の炭素原子を有するシクロアルキル若しくはシクロアルケニル、単純若しくは置換アリール、又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、及びＲ１２は、各々独立してＨ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル又はアルケニル、フェニル、置換フェニル又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ここで、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、及びｔは、各々独立して０又は１から５の整数であり（ただし、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、及びｔの少なくとも２つは、同時に０ではない）、かつ
ここで、Ｚ２はＳＲ又は−ＣＯＲであり、ここで、Ｒは、１から１０の炭素原子を有する直鎖アルキル若しくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝若しくは環状アルキル若しくはアルケニル、又は単純若しくは置換アリール又は複素環芳香族若しくはヘテロシクロアルキルラジカルである。