【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年6月16日(2009.6.16)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト・リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ  １）の生来の配列から少なくとも２つのアミノ酸変化を含む、ヒト・リボヌクレアーゼの遺伝子操作されたリボヌクレアーゼ変異株であって、前記変化が、静電反発を介したＲＮａｓｅ  １によるヒト・リボヌクレアーゼ阻害剤（ｈＲＩ）の回避を生じ、前記第１の変化が、ＲＮａｓｅ  １の８５〜９４のアミノ酸残基の領域におけるアミノ酸置換であり、前記第２の変化が、ＲＮａｓｅ  １のアミノ酸残基４、７、１１、３１、３２、３８、３９、４１、４２、６６、６７、７１、１１１及び１１８からなる群から選択された位置における変質、置換又はアミノ酸交換であり、前記変異型のＲＮａｓｅ  １が、生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、遺伝子操作されたリボヌクレアーゼ変異株。
【請求項２】
生来の配列である、配列番号２に関連して静電反発を介してＲＮａｓｅ  １によりヒト・リボヌクレアーゼ阻害剤（ｈＲＩ）の回避を生じる残基４、３８、３９、６７、８８、８９、９１及び１１８におけるアミノ酸変化を含むヒト・リボヌクレアーゼ変異株であって、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、その生来のリボ核酸分解活性を維持し、前記生来のＲＮａｓｅ  １よりもＲＩに対して低い結合親和性を有し、前記生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、ヒト・リボヌクレアーゼ変異株。
【請求項３】
変異株が、Ｒ４Ｃ／Ｇ３８Ｒ／Ｒ３９Ｇ／Ｎ６７Ｒ／Ｎ８８Ｌ／Ｇ８９Ｒ／Ｒ９１Ｇ／Ｖ１１８Ｃである、請求項２に記載の変異株。
【請求項４】
生来の配列である、配列番号２に関連して残基３９、６７、８８、８９及び９１におけるアミノ酸変化を含むヒト・リボヌクレアーゼ変異株であって、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、その生来のリボ核酸分解活性を維持し、前記生来のＲＮａｓｅ  １よりもＲＩに対して低い結合親和性を有し、前記生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、ヒト・リボヌクレアーゼ変異株。
【請求項５】
変異株が、Ｒ３９Ｄ／Ｎ６７Ｄ／Ｎ８８Ａ／Ｇ８９Ｄ／Ｒ９１Ｄである、請求項４に記載の変異株。
【請求項６】
変異株が、Ｒ３９Ｌ／Ｎ６７Ｌ／Ｎ８８Ａ／Ｇ８９Ｌ／Ｒ９１Ｌである、請求項４に記載の変異株。
【請求項７】
生来の配列である、配列番号２に関連して残基３９、６７、８９及び９１におけるアミノ酸変化を含むヒト・リボヌクレアーゼ変異株であって、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、その生来のリボ核酸分解活性を維持し、前記生来のＲＮａｓｅ  １よりもＲＩに対して低い結合親和性を有し、前記生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、ヒト・リボヌクレアーゼ変異株。
【請求項８】
変異株がＲ３９Ｄ／Ｎ６７Ａ／Ｇ８９Ｄ／Ｒ９１Ｄである、請求項７に記載の変異株。
【請求項９】
生来の配列である、配列番号２に関連して残基３９、６７、８８及び９１におけるアミノ酸変化を含むヒト・リボヌクレアーゼ変異株であって、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、その生来のリボ核酸分解活性を維持し、前記生来のＲＮａｓｅ  １よりもＲＩに対して低い結合親和性を有し、前記生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、ヒト・リボヌクレアーゼ変異株。
【請求項１０】
変異株が、Ｒ３９Ｄ／Ｎ６７Ｄ／Ｎ８８Ａ／Ｒ９１Ｄである、請求項９に記載の変異株。
【請求項１１】
生来の配列である、配列番号２に関連して残基３９、６７、８８及び８９におけるアミノ酸変化を含むヒト・リボヌクレアーゼ変異株であって、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、その生来のリボ核酸分解活性を維持し、前記生来のＲＮａｓｅ  １よりもＲＩに対して低い結合親和性を有し、前記生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、ヒト・リボヌクレアーゼ変異株。
【請求項１２】
変異株が、Ｒ３９Ｄ／Ｎ６７Ｄ／Ｎ８８Ａ／Ｇ８９Ｄである、請求項１１に記載の変異株。
【請求項１３】
生来の配列である、配列番号２に関連して残基３９、８８、８９及び９１におけるアミノ酸変化を含むヒト・リボヌクレアーゼ変異株であって、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、その生来のリボ核酸分解活性を維持し、前記生来のＲＮａｓｅ  １よりもＲＩに対して低い結合親和性を有し、前記生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、ヒト・リボヌクレアーゼ変異株。
【請求項１４】
変異株が、Ｒ３９Ｄ／Ｎ８８Ａ／Ｇ８９Ｄ／Ｒ９１Ｄである、請求項１３に記載の変異株。
【請求項１５】
生来の配列である、配列番号２に関連して残基３８、３９、６７及び８８におけるアミノ酸変化を含むヒト・リボヌクレアーゼ変異株であって、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、その生来のリボ核酸分解活性を維持し、前記生来のＲＮａｓｅ  １よりもＲＩに対して低い結合親和性を有し、前記生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、ヒト・リボヌクレアーゼ変異株。
【請求項１６】
変異株が、Ｇ３８Ｒ／Ｒ３９Ｇ／Ｎ６７Ｒ／Ｎ８８Ｒである、請求項１５に記載の変異株。
【請求項１７】
生来の配列である、配列番号２に関連して残基６７、８８、８９及び９１におけるアミノ酸変化を含むヒト・リボヌクレアーゼ変異株であって、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、その生来のリボ核酸分解活性を維持し、前記生来のＲＮａｓｅ  １よりもＲＩに対して低い結合親和性を有し、前記生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、ヒト・リボヌクレアーゼ変異株。
【請求項１８】
変異株が、Ｎ６７Ｄ／Ｎ８８Ａ／Ｇ８９Ｄ／Ｒ９１Ｄである、請求項１７に記載の変異株。
【請求項１９】
ヒト・リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ  １）の生来の配列から少なくとも２つのアミノ酸変化を含む、ヒト・リボヌクレアーゼの遺伝子操作されたリボヌクレアーゼ変異株であって、前記変化が、静電反発を介したＲＮａｓｅ  １によるヒト・リボヌクレアーゼ阻害剤（ｈＲＩ）の回避を生じ、前記第１の変化が、ＲＮａｓｅ  １のアミノ酸残基９１におけるアミノ酸置換であり、前記第２の変化が、ＲＮａｓｅ  １のアミノ酸残基４、７、１１、３１、３２、３８、３９、４１、４２、６６、６７、７１、１１１及び１１８からなる群から選択された位置における変質、置換又はアミノ酸交換であり、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、遺伝子操作されたリボヌクレアーゼ変異株。
【請求項２０】
ヒト・リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ  １）の生来の配列から少なくとも２つのアミノ酸変化を含む、ヒト・リボヌクレアーゼの遺伝子操作されたリボヌクレアーゼ変異株であって、前記変化が、静電反発を介したＲＮａｓｅ  １によるヒト・リボヌクレアーゼ阻害剤（ｈＲＩ）の回避を生じ、前記第１の変化が、ＲＮａｓｅ  １のアミノ酸残基８８におけるアミノ酸置換であり、前記第２の変化が、ＲＮａｓｅ  １のアミノ酸残基４、７、１１、３１、３２、３８、３９、４１、４２、６６、６７、７１、１１１及び１１８からなる群から選択された位置における変質、置換又はアミノ酸交換であり、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、遺伝子操作されたリボヌクレアーゼ変異株。
【請求項２１】
細胞傷害性ＲＮａｓｅ  １変異株を作るためにヒト・リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ  １）を修飾する方法であって、前記方法が
ｈＲＩ・ＲＮａｓｅ  １錯体の３次元構造において静電アンカー残基を識別する工程と、
静電反発を介してｈＲＩへの結合を抑制するためにＲＮａｓｅ  １において識別された前記アンカー残基を修飾する工程を含み、前記変異株が、生来のリボ核酸分解活性を維持し、前記生来のＲＮａｓｅ  １よりもｈＲＩに対して低い結合親和性を有し、前記生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、ヒト・リボヌクレアーゼを修飾する方法。
【請求項２２】
変異型ヒト・リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ  １）の有効量を細胞に供給することを含む、癌細胞の増殖を阻害する方法であって、前記変異型ＲＮａｓｅ  １が、生来のリボ核酸分解活性を維持し、前記生来のＲＮａｓｅ  １よりもｈＲＩに対して低い結合親和性を有し、前記生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す、癌細胞の増殖を阻害する方法。
【請求項２３】
プロテインデータバンク識別番号１Ｚ７Ｘにより規定された、ｈＲＩ・ＲＮａｓｅ  １錯体。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
この特徴においては、ヒト・ＲＮａｓｅ１変異株は、その生来の配列から少なくとも２つのアミノ酸変化を含み、この変化は静電反発を介したＲＮａｓｅ１によるヒトｈＲＩの回避を生じ、第１の変化はＲＮａｓｅ１の８５〜９４のアミノ酸残基の領域におけるアミノ酸置換であり、第２の変化はＲＮａｓｅ１のアミノ酸残基４、７、１１、３１、３２、３８、３９、４１、４２、６６、６７、７１、１１１及び１１８からなる群から選択された位置における変質、置換又はアミノ酸交換（an alteration, substitution or amino acid swap）であり、この変異型ＲＮａｓｅ１は生来のＲＮａｓｅ  １に比べて高い細胞傷害活性を示す。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７５】
装置：蛍光測定は、ニュージャージー州サウス・ブルンスウイック（Ｓｏｕｔｈ  Ｂｒｕｎｔｈｗｉｃｋ）のフォトン・テクノロジー・インターナショナル（Ｐｈｏｔｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）の試料撹拌付きクアンタマスター１（ＱｕａｎｔａＭａｓｔｅｒ１）光子計数蛍光計を用いて行った。熱変性データは、カリフォルニア州パロアルト（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ）のバリアン（Ｖａｒｉａｎ）のケアリー（Ｃａｒｙ）温度調節器を備えたケアリー３ダブルビーム分光光度計を用いて集めた。ゲノムＤＮＡ中への［メチル−３Ｈ］チミジンの組み込みは、マサチューセッツ州ウエルズリー（Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ）のパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）のミクロベータ・トリルックス（Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘ）液体シンチレーション及びルミネッセンス計数器を用いたシンチレーション計数により定量した。ＲＮａｓｅ  １及びその変異株の質量は、カリフォルニア州フォスターシティー（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ）のアプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）のボイジャー・デプロ・バイオスペクトロメトリ・ワークステーション（Ｖｏｙａｇｅｒ−ＤＥＰＲＯ  Ｂｉｏｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ  Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ）を用いて、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分光法により確認した。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８２】
リボ核酸分解活性：ＲＮａｓｅ  １及びその変異株のリボ核酸分解活性を、６−ＦＡＭ−ｄＡｒＵ（ｄＡ）2−６−ＴＡＭＲＡを用いて定量した。ウリジン・リボヌクレオチドにおけるこの基質の開裂により、蛍光が１８０倍に上がる。ＮａＣｌ（０．１０Ｍ）を含む、ｐＨ６．０の２ｍｌの０．１０ＭのＭＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液において、２３（±２）℃でアッセイを行った。蛍光データは、下記式
ｋcat／ＫM＝（ΔＩ／Δｔ）／（（Ｉf−Ｉo）［Ｅ］）
に合致し、式中ΔＩ／Δｔは初期反応速度を表し、Ｉoはリボヌクレアーゼを添加する前の蛍光強度であり、Ｉfは完全な基質加水分解後の最終蛍光に相当し、［Ｅ］は総リボヌクレアーゼ濃度である。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０７】
Ｒ４Ｃ／Ｇ３８Ｒ／Ｒ３９Ｇ／Ｎ６７Ｒ／Ｎ８８Ｌ／Ｇ８９Ｒ／Ｒ９１Ｇ／Ｖ１１８ＣＲＮａｓｅ  １については、類似のアッセイ条件下で（１．４±０．８）×１０6Ｍ-1ｓ-1のｋcat／ＫM値を有する野生型酵素の酵素活性のほとんどすべてを維持することが判明した。