【手続補正書】
【提出日】平成21年1月9日(2009.1.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｐタンパク質をコードする変異体ポリヌクレオチドおよびＶタンパク質をコードするモノシストロン性ポリヌクレオチドを含む、部分または完全ポリ六量体ゲノムまたはアンチゲノムを有する、さらに、主要なヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質、ヌクレオカプシドリンタンパク質（Ｐ）、および大型のポリメラーゼタンパク質（Ｌ）を含む、パラミクソウイルス亜科の感染性自己増殖性組換えパラミクソウイルス。
【請求項２】
パラミクソウイルスが、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＰＩＶ）である、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項３】
ＨＰＩＶがＨＰＩＶ２である、請求項２に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項４】
Ｐタンパク質をコードする変異体ポリヌクレオチドおよびＶタンパク質をコードするモノシストロン性ポリヌクレオチドが、遺伝子転写終止シグナル、遺伝子間転写シグナル、および遺伝子転写開始シグナルを含む非翻訳ポリヌクレオチドスペーサー配列によって分離されている、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項５】
前記スペーサー配列がＶ  ＯＲＦの上流にある、請求項４に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項６】
前記遺伝子転写開始シグナルがシス作動性である、請求項４に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項７】
前記遺伝子転写開始シグナルが、位置６ｎ＋１に第１のアデノシンを含む、請求項６に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項８】
Ｖタンパク質をコードするモノシストロン性ポリヌクレオチドが、変異体Ｖタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項９】
前記ヌクレオチド配列が、感染宿主でインターフェロンの産生を妨害し、またはその受容体によってシグナル伝達を妨害する、Ｖタンパク質の能力を阻害する変異を含む、請求項８に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項１０】
Ｖタンパク質が、配列番号３の位置６７、６８、６９、７０、７１、７２、１０５、１０６、１０７、１０８、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２に相当するアミノ酸残基または残基間に、あるいは１７４〜２２５のアミノ酸のいずれか一つに、一個または複数のアミノ酸置換を含む、請求項８に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項１１】
ゲノムの３’末端にＶ遺伝子をコードするモノシストロン性ポリヌクレオチドを置く、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項１２】
Ｖタンパク質が、配列番号３に少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項１３】
アンチゲノムが、配列番号１に少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項１４】
アンチゲノムが、配列番号１のヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項１５】
Ｐタンパク質をコードする変異体ポリヌクレオチドが、ヘプタグアノシン配列を有するｍＲＮＡ編集部位を含む、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項１６】
ｍＲＮＡ編集部位が、配列番号８のヌクレオチド配列を含む、請求項１５に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項１７】
ヘプタグアノシン配列が、配列番号８のＧ９Ａ、Ｇ１２Ａ、およびＧ１５Ｔから選択される置換変異を含む、請求項１５に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項１８】
Ｐタンパク質のカルボキシ末端部分をコードするヌクレオチド配列がインフレームになるように、ｍＲＮＡ編集部位に一個または複数のヌクレオチドを挿入する、請求項１５に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項１９】
２個のヌクレオチドが、配列番号１のヌクレオチド位置２４８７の後に挿入されている、請求項１８に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項２０】
Ｐタンパク質をコードする変異体ポリヌクレオチドが、一個または複数のヌクレオチド置換を有するＰ  ＯＲＦを含み、該置換が、重複するＶ  ＯＲＦ読み枠に一個または複数の終止コドンを導入するが、Ｐタンパク質をコードする変異体ポリヌクレオチドによってコードされているＰタンパク質のアミノ酸配列は変化させない、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項２１】
Ｐ  ＯＲＦが、配列番号２のヌクレオチド配列を含む、請求項２０に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項２２】
Ｐタンパク質が、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項２３】
Ｖタンパク質をコードするモノシストロン性ポリヌクレオチドが、ヘプタグアノシン配列を有するｍＲＮＡ編集部位を含む、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項２４】
ｍＲＮＡ編集部位が、配列番号８のヌクレオチド配列を含む、請求項２３に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項２５】
ヘプタグアノシン配列が、配列番号８のＧ９ＡまたはＧ１２Ｃである置換を含む、請求項２３に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項２６】
Ｎタンパク質が、配列番号１６に少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項２７】
Ｐタンパク質が、配列番号１５に少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項２８】
Ｌタンパク質が、配列番号１７に少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項２９】
ゲノムまたはアンチゲノムが、少なくとも一つのさらなる減弱化変異を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項３０】
さらなる減弱化変異が、変異したアミノ酸をコードするコドンの二つのヌクレオチドの変異によって安定化された点変異である、請求項２９に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項３１】
減弱化変異が、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬタンパク質の位置４６０、９４８、１５６６、１７２４、または１７２５に相当する一個または複数のアミノ酸残基にアミノ酸置換または欠失を含む、請求項２９に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項３２】
前記変異が、Ｆ４６０Ｌ、Ｆ４６０Ａ、Ｆ４６０Ｐ、Ｙ９４８Ａ、Ｙ９４８Ｌ、Ｙ９４８Ｇ、Ｌ１５６６Ｉ、Ｓ１７２４Ｉの少なくとも一つを含み、または位置１７２４および１７２５が欠失している、請求項３０に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項３３】
減弱化変異が、配列番号１８の核酸配列を有する３’リーダー配列の位置１５に相当する位置に核酸置換を含む、請求項２９に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項３４】
前記置換がＴ１５Ｃを含む、請求項３３に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項３５】
ゲノムまたはアンチゲノムが、異種病原体の一個または複数の抗原決定基をコードする、一個または複数の過剰な異種ポリヌクレオチドまたはゲノムセグメントを含む、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項３６】
異種病原体が、ＨＰＩＶ１、ＨＰＩＶ３、麻疹ウイルス、下位群Ａまたは下位群Ｂ呼吸器合胞体ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス１型または２型、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、エプスタインバーウイルス、フィロウイルス、ブニアウイルス、フラビウイルス、アルファウイルス属、ヒトメタニューモウイルス、またはインフルエンザウイルスを含む、請求項３５に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項３７】
前記抗原決定基が麻疹ＨＡを含み、または前記抗原決定基がＨＰＩＶ１  ＨＮもしくはＦを含む、請求項３６に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項３８】
感染性自己増殖性組換えパラミクソウイルスを生成する方法であって、
（ａ）細胞中で
（ｉ）請求項１〜３５のいずれか一項に記載の組換えパラミクソウイルスの部分または完全ポリ六量体パラミクソウイルスゲノムまたはアンチゲノムを含む発現ベクターと、
（ｉｉ）Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬポリメラーゼをコードする、一個または複数のポリヌクレオチドを含む一個または複数のベクターと
を同時発現させるステップ、および
（ｂ）ウイルスが複製できる条件下で該細胞をインキュベートするステップ
を含む方法。
【請求項３９】
Ｌタンパク質（配列番号１７）の位置４６０または９４８に相当する一個または複数のアミノ酸残基に一個のアミノ酸置換を含む、組換え感染性変異体ヒトパラインフルエンザウイルス２型（ＨＰＩＶ２）であって、
（ａ）位置４６０がＡまたはＰで置換され、
（ｂ）位置９４８がＡ、Ｌ、またはＧで置換され、または
（ｃ）位置１７２４がＩで置換されている
組換え感染性変異体ヒトパラインフルエンザウイルス２型（ＨＰＩＶ２）。
【請求項４０】
変異体ＨＰＩＶ２が温度感受性表現型を有する、請求項３９に記載の組換えＨＰＩＶ２。
【請求項４１】
３’リーダー（配列番号１８）の位置１５に相当する位置に核酸置換を含む減弱化変異を含む、感染性組換え変異体ヒトパラインフルエンザウイルス２型（ＨＰＩＶ２）。
【請求項４２】
前記置換がＴ１５Ｃを含む、請求項４１に記載の組換えＨＰＩＶ２。
【請求項４３】
感染性自己増殖性組換えパラミクソウイルスを生成する方法であって、
（ａ）細胞中で
（ｉ）請求項３９または４１に記載のＨＰＩＶ２をコードする部分または完全ポリ六量体ゲノムまたはアンチゲノムを含む発現ベクターと、
（ｉｉ）Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬポリメラーゼをコードする、一個または複数のポリヌクレオチドと
を同時発現させるステップ、および
（ｂ）ウイルスが複製できる条件下で該細胞をインキュベートするステップ
を含む方法。
【請求項４４】
免疫原有効量の請求項１〜３７および３９〜４２のいずれか一項に記載のパラミクソウイルスと生理学的に受容可能な担体とを含む組成物。
【請求項４５】
２種以上の血清型から得たパラミクソウイルスを含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記血清型の少なくとも一つが、ＨＰＩＶ１、ＨＰＩＶ２、ＨＰＩＶ３、またはＨＰＩＶ４である、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
２属以上から得たパラミクソウイルスを含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４８】
少なくとも１つの属がルブラウイルス属である、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
少なくとも一つの温度感受性変異と少なくとも一つの非温度感受性変異とを含み、少なくとも一つの非温度感受性変異が、３’リーダー（配列番号１８）の位置１５に相当する位置に核酸置換を含む、パラミクソウイルス亜科の感染性自己増殖性組換えパラミクソウイルス。
【請求項５０】
温度感受性変異が、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬタンパク質の位置４６０、９４８、１５６６、１７２４、または１７２５に相当する一個または複数のアミノ酸残基に、一個のアミノ酸置換または欠失を含む、請求項４９に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項５１】
前記置換が、Ｆ４６０Ｌ、Ｆ４６０Ａ、またはＦ４６０Ｐ、Ｙ９４８Ｈ、Ｙ９４８Ａ、Ｙ９４８Ｌ、またはＹ９４８Ｇ、Ｌ１５６６Ｉ、Ｓ１７２４Ｉならびに位置１７２４および１７２５のアミノ酸残基の欠失の少なくとも一つを含む、請求項５０に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項５２】
Ｖタンパク質が、配列番号３の位置６７、６８、６９、７０、７１、７２、１０５、１０６、１０７、１０８、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２に相当するアミノ酸残基に、または１７４〜２２５のアミノ酸のいずれか一つに、一個または複数のアミノ酸置換を含む、請求項４９に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項５３】
Ｖタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、配列番号３に少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項４９〜５２のいずれか一項に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項５４】
前記アンチゲノムが、配列番号１に少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項４９〜５３のいずれか一項に記載の組換えパラミクソウイルス。
【請求項５５】
Ｐタンパク質をコードする変異体ポリヌクレオチドを含む、部分的ポリ六量体パラミクソウイルスゲノムまたはアンチゲノムを有するベクター。
【請求項５６】
Ｖタンパク質をコードするモノシストロン性ポリヌクレオチドを含む、部分的ポリ六量体パラミクソウイルスゲノムまたはアンチゲノムを有するベクター。
【請求項５７】
配列番号１の配列を有するポリヌクレオチドを含む単離した核酸。
【請求項５８】
配列番号２の配列を有するポリヌクレオチドを含む単離した核酸。
【請求項５９】
配列番号３の配列を有するポリヌクレオチドを含む単離した核酸。
【請求項６０】
配列番号４５の配列を有するＶポリペプチドに対して、少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む単離した核酸。
【請求項６１】
配列番号１７の配列を有するＬポリペプチドに対して、少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む単離した核酸。
【請求項６２】
請求項５７〜６１のいずれか一項に記載の単離した核酸を含むベクター。
【請求項６３】
ポリヌクレオチドの発現に適切な条件下で、請求項５７〜６２のいずれか一項に記載の核酸を含む宿主細胞を培養するステップを含む、パラミクソウイルスポリペプチドを生成する方法。
【請求項６４】
配列番号４５の配列を有するＶポリペプチドに対して、少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸を含むベクター。
【請求項６５】
配列番号１７の配列を有するＬポリペプチドに対して、少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸を含むベクター。
【請求項６６】
Ｎポリペプチド、配列番号１７の配列を有するＬポリペプチドに対して少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチド、またはＰポリペプチド、あるいはそれらの混合物をコードするポリヌクレオチドを含む、一個または複数の核酸を含むベクター。
【請求項６７】
さらに、Ｍタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む核酸を含む、請求項６６に記載のベクター。
【請求項６８】
さらに、ＨＮタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む核酸を含む、請求項６７に記載のベクター。
【請求項６９】
さらに、Ｆタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む核酸を含む、請求項６８に記載のベクター。