【手続補正書】
【提出日】平成23年6月6日(2011.6.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を脊椎動物宿主において誘発するための免疫原組成物であって、
（ａ）ＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）第２のＤＮＡプラスミドであって、以下：
（ｉ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット、
（ｉｉ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニットを含み、
ここで、該第１および第２のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、かつ、該第１および第２のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向と同じ方向であり、該第１および第２の転写ユニットが少なくとも１キロ塩基対のスペーサー領域によって隔てられる、第２のＤＮＡプラスミド；ならびに
（ｃ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物。
【請求項２】
前記トランスフェクション促進因子がブピバカインである、請求項１に記載の免疫原組成物。
【請求項３】
前記プロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーター、サルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーター、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）潜伏期関連プロモーター−１（ＬＡＰ１）、シミアンウイルス４０プロモーター、ヒト伸長因子１αプロモーターおよびヒト筋細胞特異的デスミンプロモーターからなる群から選択される、請求項１に記載の免疫原組成物。
【請求項４】
前記ポリアデニル化シグナルが、ウサギβ−グロビンポリ（Ａ）シグナル、合成ポリＡ、ＨＳＶチミジンキナーゼポリＡ、ヒトαグロビンポリＡ、ＳＶ４０ポリＡ、ヒトβグロビンポリＡ、ポリオーマウイルスポリＡおよびウシ成長ホルモンポリＡからなる群より選択される、請求項１に記載の免疫原組成物。
【請求項５】
前記第１のプラスミドにおける前記プロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターである、請求項３に記載の免疫原組成物。
【請求項６】
前記第１のプラスミドにおける前記ポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモンポリＡのポリアデニル化シグナルである、請求項４に記載の免疫原組成物。
【請求項７】
前記第１のＤＮＡプラスミドがＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードし、ＨＩＶのｇａｇ遺伝子およびｐｏｌ遺伝子の前記融合体、または、ｇａｇ−ｐｏｌ遺伝子がＨＩＶの単離体ＨＸＢ２に由来する、請求項１に記載の免疫原組成物。
【請求項８】
前記第２のプラスミドにおける前記第１のプロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターである、請求項３に記載の免疫原組成物。
【請求項９】
前記第２のプラスミドにおける前記第１のポリアデニル化シグナルがＳＶ４０ポリＡのポリアデニル化シグナルである、請求項４に記載の免疫原組成物。
【請求項１０】
前記ＨＩＶ  ｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドが、ＨＩＶのｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の融合体（ｎｔｖ）から発現される、ｎｅｆ、ｔａｔおよびｖｉｆの融合タンパク質（ＮＴＶ）である、請求項１に記載の免疫原組成物。
【請求項１１】
ＨＩＶのｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の前記融合体、または、ｎｔｖ遺伝子がＨＩＶの単離体ＮＬ４−３に由来する、請求項１０に記載の免疫原組成物。
【請求項１２】
前記第２のプラスミドにおける前記第２のプロモーターがサルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーターである、請求項３に記載の免疫原組成物。
【請求項１３】
前記第２のプラスミドにおける前記第２のポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）のポリアデニル化シグナルである、請求項４に記載の免疫原組成物。
【請求項１４】
前記ＨＩＶエンベロープポリペプチドがＨＩＶの初代単離体６１０１に由来する、請求項１に記載の免疫原組成物。
【請求項１５】
前記免疫原組成物が、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与されることを特徴とする、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
前記エレクトロポレーションが、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激する工程を包含する、請求項１５に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
前記第１のプラスミドにおける前記プロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターである、請求項１５に記載の免疫原組成物。
【請求項１８】
前記第１のプラスミドにおける前記ポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモンポリＡのポリアデニル化シグナルである、請求項１７に記載の免疫原組成物。
【請求項１９】
ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を脊椎動物宿主において誘発するための免疫原組成物であって、該免疫原組成物が、以下：
（ａ）ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）ＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；
（ｃ）ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第３のＤＮＡプラスミド；
（ｄ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；ならびに
（ｅ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物。
【請求項２０】
前記免疫原組成物が、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与されることを特徴とする、請求項１９に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
前記エレクトロポレーションが、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激する工程を包含する、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
ＨＩＶに対する免疫応答を脊椎動物宿主において誘発するための免疫原組成物であって、該免疫原組成物が、以下：
（ａ）ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）ＨＩＶのｇａｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；
（ｃ）ＨＩＶのｐｏｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第３のＤＮＡプラスミド；
（ｄ）ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；
（ｅ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第５のＤＮＡプラスミド；ならびに
（ｆ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物。
【請求項２３】
前記免疫原組成物が、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与されることを特徴とする、請求項２２に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
前記エレクトロポレーションが、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激する工程を包含する、請求項２３に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を脊椎動物宿主において誘発するための免疫原組成物であって、該免疫原組成物が、以下：
（ａ）ＨＩＶのｇａｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）ＨＩＶのｐｏｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；
（ｃ）第３のＤＮＡプラスミドであって、以下：
（ｉ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット、
（ｉｉ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニットを含み、
ここで、該第１および第２のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、かつ、該第１および第２のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向と同じ方向であり、該第１および第２の転写ユニットが少なくとも１キロ塩基対のスペーサー領域によって隔てられる、第３のプラスミド；ならびに
（ｄ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；ならびに
（ｅ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物。
【請求項２６】
前記プロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーター、サルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーター、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）潜伏期関連プロモーター−１（ＬＡＰ１）、シミアンウイルス４０プロモーター、ヒト伸長因子１αプロモーターおよびヒト筋細胞特異的デスミンプロモーターからなる群より選択される、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ポリアデニル化シグナルが、ウサギβ−グロビンポリ（Ａ）シグナル、合成ポリＡ、ＨＳＶチミジンキナーゼポリＡ、ヒトαグロビンポリＡ、ＳＶ４０ポリＡ、ヒトβグロビンポリＡ、ポリオーマウイルスポリＡおよびウシ成長ホルモンポリＡからなる群より選択される、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
前記免疫原組成物が、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与されることを特徴とする、請求項２５に記載の免疫原性組成物。
【請求項２９】
前記エレクトロポレーションが、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激する工程を包含する、請求項２８に記載の免疫原性組成物。
【請求項３０】
前記トランスフェクション促進因子がブピバカインである、請求項２９に記載の免疫原性組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
（発明の要旨）
１つの実施形態において、本発明は、（ａ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニットと、（ｂ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニットと、（ｃ）第３のプロモーターおよび第３のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第３のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第３の転写ユニットとを含み、該第１のプロモーター、該第２のプロモーターおよび該第３のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、かつ、該第１のポリアデニル化シグナル、該第２のポリアデニル化シグナルおよび該第３のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来するＤＮＡプラスミドを提供する。本発明の別の実施形態において、第１、第２および第３のポリペプチドが真核生物細胞において発現される。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
ＤＮＡプラスミドであって、以下：
（ａ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット；
（ｂ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニット；
（ｃ）第３のプロモーターおよび第３のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第３のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第３の転写ユニット；
を含み、
該第１のプロモーター、該第２のプロモーターおよび該第３のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１のポリアデニル化シグナル、該第２のポリアデニル化シグナルおよび該第３のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第３の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であり、かつ、該第３の転写ユニットの転写方向とは反対方向である、
ＤＮＡプラスミド。
（項目２）
前記第１、第２および第３のポリペプチドが真核生物細胞において発現される、項目１に記載のプラスミド。
（項目３）
前記第１、第２および第３のプロモーターが真核生物細胞において活性である、項目１に記載のプラスミド。
（項目４）
前記第１、第２および第３のプロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーター、サルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーター、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）潜伏期関連プロモーター−１（ＬＡＰ１）、シミアンウイルス４０プロモーター、ヒト伸長因子１αプロモーターおよびヒト筋細胞特異的デスミンプロモーターからなる群より選択される、項目１に記載のプラスミド。
（項目５）
前記第１、第２および第３のポリアデニル化シグナルが、ウサギβ−グロビンポリ（Ａ）シグナル、合成ポリＡ、ＨＳＶチミジンキナーゼポリＡ、ヒトαグロビンポリＡ、ＳＶ４０ポリＡ、ヒトβグロビンポリＡ、ポリオーマウイルスポリＡおよびウシ成長ホルモンポリＡからなる群より選択される、項目１に記載のプラスミド。
（項目６）
前記第１のプロモーターがサルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーターである、項目４に記載のプラスミド。
（項目７）
前記第１のポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）のポリアデニル化シグナルである、項目５に記載のプラスミド。
（項目８）
前記第２のプロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターである、項目４に記載のプラスミド。
（項目９）
前記第２のポリアデニル化シグナルがシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）のポリアデニル化シグナルである、項目５に記載のプラスミド。
（項目１０）
前記第３のプロモーターが単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）潜伏期関連プロモーター−１である、項目４に記載のプラスミド。
（項目１１）
前記第３のポリアデニル化シグナルがウサギβ−グロビンのポリアデニル化シグナルである、項目５に記載のプラスミド。
（項目１２）
前記第１の転写ユニットがＨＩＶのｇａｇ遺伝子およびｐｏｌ遺伝子の融合体からｇａｇ−ｐｏｌ融合タンパク質を発現する、項目１に記載のプラスミド。
（項目１３）
ＨＩＶのｇａｇ遺伝子およびｐｏｌ遺伝子の前記融合体、または、ｇａｇ−ｐｏｌ遺伝子がＨＩＶの単離体ＨＸＢ２に由来する、項目１２に記載のプラスミド。
（項目１４）
前記第２の転写ユニットがＨＩＶのエンベロープ遺伝子からエンベロープタンパク質を発現する、項目１に記載のプラスミド。
（項目１５）
前記エンベロープ遺伝子がＨＩＶの初代単離体６１０１に由来する、項目１４に記載のプラスミド。
（項目１６）
前記第３の転写ユニットが、ＨＩＶのｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の融合体（ｎｔｖ）から、ｎｅｆ、ｔａｔおよびｖｉｆの融合タンパク質（ＮＴＶ）を発現する、項目１に記載のプラスミド。
（項目１７）
ＨＩＶのｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の前記融合体、または、ｎｔｖ遺伝子がＨＩＶの単離体ＮＬ４−３に由来する、項目１６に記載のプラスミド。
（項目１８）
プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、選択マーカーをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、項目１に記載のプラスミド。
（項目１９）
前記選択マーカーが、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ヒグロマイシン耐性遺伝子およびクロラムフェニコール耐性遺伝子からなる群より選択される、項目１８に記載のプラスミド。
（項目２０）
前記選択マーカーの存在位置が、スペーサー領域１、スペーサー領域２およびスペーサー領域３からなる群より選択される、項目１９に記載のプラスミド。
（項目２１）
前記選択マーカーの存在位置がスペーサー領域２である、項目２０に記載のプラスミド。（項目２２）
細菌の複製起点をさらに含む、項目１に記載のプラスミド。
（項目２３）
前記複製起点の存在位置が、スペーサー領域１、スペーサー領域２およびスペーサー領域３からなる群より選択される、項目２２に記載のプラスミド。
（項目２４）
前記選択マーカーの存在位置がスペーサー領域３である、項目２３に記載のプラスミド。（項目２５）
前記複製起点がｐＵＣの複製起点である、項目２２に記載のプラスミド。
（項目２６）
前記プラスミドの全体的なサイズが約１５キロ塩基対未満である、項目１に記載のプラスミド。
（項目２７）
スペーサー領域１が約４００塩基対未満である、項目１に記載のプラスミド。
（項目２８）
スペーサー領域２が約１１００塩基対未満である、項目１に記載のプラスミド。
（項目２９）
スペーサー領域３が約１１００塩基対未満である、項目１に記載のプラスミド。
（項目３０）
選択された抗原に対する免疫応答を脊椎動物宿主において誘発するための免疫原組成物であって、該免疫原組成物は、以下：
（ａ）ＤＮＡプラスミドであって、以下：
（ｉ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット、
（ｉｉ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニット、
（ｉｉｉ）第３のプロモーターおよび第３のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第３のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第３の転写ユニット、
を含み、
ここで、該第１、第２および第３のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１、第２および第３のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第３の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であり、かつ、該第３の転写ユニットの転写方向とは反対方向である、ＤＮＡプラスミド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な希釈剤、アジュバント、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物。
（項目３１）
前記トランスフェクション促進因子がブピバカインである、項目３０に記載の免疫原組成物。
（項目３２）
前記第１、第２および第３のプロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーター、サルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーター、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）潜伏期関連プロモーター−１（ＬＡＰ１）、シミアンウイルス４０プロモーター、ヒト伸長因子１αプロモーターおよびヒト筋細胞特異的デスミンプロモーターからなる群より選択される、項目３０に記載の免疫原組成物。
（項目３３）
前記第１、第２および第３のポリアデニル化シグナルが、ウサギβ−グロビンポリ（Ａ）シグナル、合成ポリＡ、ＨＳＶチミジンキナーゼポリＡ、ヒトαグロビンポリＡ、ＳＶ４０ポリＡ、ヒトβグロビンポリＡ、ポリオーマウイルスポリＡおよびウシ成長ホルモンポリＡからなる群より選択される、項目３０に記載の免疫原組成物。
（項目３４）
前記第１のポリペプチドが、ＨＩＶのｇａｇ遺伝子およびｐｏｌ遺伝子の融合体から発現されたｇａｇ−ｐｏｌ融合タンパク質である、項目３０に記載の免疫原組成物。
（項目３５）
前記第２のポリペプチドが、ＨＩＶのエンベロープ遺伝子から発現されたエンベロープタンパク質である、項目３０に記載の免疫原組成物。
（項目３６）
前記第３のポリペプチドが、ＨＩＶのｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の融合体（ｎｔｖ）から発現された、ｎｅｆ、ｔａｔおよびｖｉｆの融合タンパク質（ＮＴＶ）である、項目３０に記載の免疫原組成物。
（項目３７）
選択された抗原に対して脊椎動物宿主を免疫化する方法であって、
（ａ）ＤＮＡプラスミドであって、以下：
（ｉ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット、
（ｉｉ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニット、
（ｉｉｉ）第３のプロモーターおよび第３のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、第３のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第３の転写ユニット、
を含み、
ここで、該第１、第２および第３のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１、第２および第３のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第３の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であり、かつ、該第３の転写ユニットの転写方向とは反対方向である、ＤＮＡプラスミド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な希釈剤、アジュバント、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物を該脊椎動物宿主に投与する工程を包含する、方法。
（項目３８）
前記免疫原組成物が、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与される、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記エレクトロポレーションが、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激する工程を包含する、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記トランスフェクション促進因子がブピバカインである、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
前記第１、第２および第３のプロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーター、サルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーター、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）潜伏期関連プロモーター−１（ＬＡＰ１）、シミアンウイルス４０プロモーター、ヒト伸長因子１αプロモーターおよびヒト筋細胞特異的デスミンプロモーターからなる群より選択される、項目３７に記載の方法。
（項目４２）
前記第１、第２および第３のポリアデニル化シグナルが、ウサギβ−グロビンポリ（Ａ）シグナル、合成ポリＡ、ＨＳＶチミジンキナーゼポリＡ、ヒトαグロビンポリＡ、ＳＶ４０ポリＡ、ヒトβグロビンポリＡ、ポリオーマウイルスポリＡおよびウシ成長ホルモンポリＡからなる群より選択される、項目３７に記載の方法。
（項目４３）
ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を脊椎動物宿主において誘発するための免疫原組成物であって、
（ａ）ＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）第２のＤＮＡプラスミドであって、以下：
（ｉ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット、
（ｉｉ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニットを含み、
ここで、該第１および第２のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、かつ、該第１および第２のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向と同じ方向であり、該第１および第２の転写ユニットが少なくとも１キロ塩基対のスペーサー領域によって隔てられる、第２のＤＮＡプラスミド；および
（ｃ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物。
（項目４４）
前記トランスフェクション促進因子がブピバカインである、項目４３に記載の免疫原組成物。
（項目４５）
前記プロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーター、サルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーター、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）潜伏期関連プロモーター−１（ＬＡＰ１）、シミアンウイルス４０プロモーター、ヒト伸長因子１αプロモーターおよびヒト筋細胞特異的デスミンプロモーターからなる群から選択される、項目４３に記載の免疫原組成物。
（項目４６）
前記ポリアデニル化シグナルが、ウサギβ−グロビンポリ（Ａ）シグナル、合成ポリＡ、ＨＳＶチミジンキナーゼポリＡ、ヒトαグロビンポリＡ、ＳＶ４０ポリＡ、ヒトβグロビンポリＡ、ポリオーマウイルスポリＡおよびウシ成長ホルモンポリＡからなる群より選択される、項目４３に記載の免疫原組成物。
（項目４７）
前記第１のプラスミドにおける前記プロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターである、項目４５に記載の免疫原組成物。
（項目４８）
前記第１のプラスミドにおける前記ポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモンポリＡのポリアデニル化シグナルである、項目４６に記載の免疫原組成物。
（項目４９）
前記第１のＤＮＡプラスミドがＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードし、ＨＩＶのｇａｇ遺伝子およびｐｏｌ遺伝子の前記融合体、または、ｇａｇ−ｐｏｌ遺伝子がＨＩＶの単離体ＨＸＢ２に由来する、項目４３に記載の免疫原組成物。
（項目５０）
前記第２のプラスミドにおける前記第１のプロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターである、項目４５に記載の免疫原組成物。
（項目５１）
前記第２のプラスミドにおける前記第１のポリアデニル化シグナルがＳＶ４０ポリＡのポリアデニル化シグナルである、項目４６に記載の免疫原組成物。
（項目５２）
前記ＨＩＶ  ｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドが、ＨＩＶのｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の融合体（ｎｔｖ）から発現される、ｎｅｆ、ｔａｔおよびｖｉｆの融合タンパク質（ＮＴＶ）である、項目４３に記載の免疫原組成物。
（項目５３）
ＨＩＶのｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の前記融合体、または、ｎｔｖ遺伝子がＨＩＶの単離体ＮＬ４−３に由来する、項目５２に記載の免疫原組成物。
（項目５４）
前記第２のプラスミドにおける前記第２のプロモーターがサルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーターである、項目４５に記載の免疫原組成物。
（項目５５）
前記第２のプラスミドにおける前記第２のポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）のポリアデニル化シグナルである、項目４６に記載の免疫原組成物。
（項目５６）
前記ＨＩＶエンベロープポリペプチドがＨＩＶの初代単離体６１０１に由来する、項目４３に記載の免疫原組成物。
（項目５７）
選択された抗原に対して脊椎動物宿主を免疫化する方法であって、該方法が、以下：
（ａ）ＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）第２のＤＮＡプラスミドであって、以下：
（ｉ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット、
（ｉｉ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニット、を含み、
ここで、該第１および第２のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、かつ、該第１および第２のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向と同じ方向であり、該第１および第２の転写ユニットが少なくとも１キロ塩基対のスペーサー領域によって隔てられる、第２のＤＮＡプラスミド；および
（ｃ）薬学的に受容可能な希釈剤、アジュバント、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む免疫原組成物を該脊椎動物宿主に投与する工程を包含する、方法。
（項目５８）
前記免疫原組成物が、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与される、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記エレクトロポレーションが、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激する工程を包含する、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記トランスフェクション促進因子がブピバカインである、項目５７に記載の方法。
（項目６１）
前記プロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーター、サルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーター、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）潜伏期関連プロモーター−１（ＬＡＰ１）、シミアンウイルス４０プロモーター、ヒト伸長因子１αプロモーターおよびヒト筋細胞特異的デスミンプロモーターからなる群より選択される、項目５７に記載の方法。
（項目６２）
前記ポリアデニル化シグナルが、ウサギβ−グロビンポリ（Ａ）シグナル、合成ポリＡ、ＨＳＶチミジンキナーゼポリＡ、ヒトαグロビンポリＡ、ＳＶ４０ポリＡ、ヒトβグロビンポリＡ、ポリオーマウイルスポリＡおよびウシ成長ホルモンポリＡからなる群より選択される、項目５７に記載の方法。
（項目６３）
前記第１のプラスミドにおける前記プロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターである、項目６１に記載の免疫原組成物。
（項目６４）
前記第１のプラスミドにおける前記ポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモンポリＡのポリアデニル化シグナルである、項目６２に記載の免疫原組成物。
（項目６５）
前記第１のＤＮＡプラスミドがＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードし、ＨＩＶのｇａｇ遺伝子およびｐｏｌ遺伝子の前記融合体、または、ｇａｇ−ｐｏｌ遺伝子がＨＩＶの単離体ＨＸＢ２に由来する、項目５７に記載の方法。
（項目６６）
前記第２のプラスミドにおける前記第１のプロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターである、項目６１に記載の方法。
（項目６７）
前記第２のプラスミドにおける前記第１のポリアデニル化シグナルがＳＶ４０ポリＡのポリアデニル化シグナルである、項目６２に記載の方法。
（項目６８）
前記ＨＩＶ  ｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドが、ＨＩＶのｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の融合体（ｎｔｖ）から発現される、ｎｅｆ、ｔａｔおよびｖｉｆの融合タンパク質（ＮＴＶ）である、項目５７に記載の方法。
（項目６９）
ＨＩＶのｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の前記融合体、または、ｎｔｖ遺伝子がＨＩＶの単離体ＮＬ４−３に由来する、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記第２のプラスミドにおける前記第２のプロモーターがサルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーターである、項目６１に記載の方法。
（項目７１）
前記第２のポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）のポリアデニル化シグナルである、項目６２に記載の方法。
（項目７２）
前記ＨＩＶエンベロープポリペプチドがＨＩＶの初代単離体６１０１に由来する、項目５７に記載の方法。
（項目７３）
ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を脊椎動物宿主において誘発するための免疫原組成物であって、該免疫原組成物が、以下：
（ａ）ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）ＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；
（ｃ）ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第３のＤＮＡプラスミド；
（ｄ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；および
（ｅ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物。
（項目７４）
選択された抗原に対して脊椎動物宿主を免疫化する方法であって、該方法が、以下：
（ａ）ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）ＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；
（ｃ）ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第３のＤＮＡプラスミド；
（ｄ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；および
（ｅ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物を該脊椎動物宿主に投与する工程を包含する、方法。
（項目７５）
前記免疫原組成物が、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与される、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
前記エレクトロポレーションが、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激する工程を包含する、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
ＨＩＶに対する免疫応答を脊椎動物宿主において誘発するための免疫原組成物であって、該免疫原組成物が、以下：
（ａ）ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）ＨＩＶのｇａｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；
（ｃ）ＨＩＶのｐｏｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第３のＤＮＡプラスミド；
（ｄ）ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；
（ｅ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第５のＤＮＡプラスミド；および
（ｆ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物。
（項目７８）
選択された抗原に対して脊椎動物宿主を免疫化する方法であって、該方法が、以下：
（ａ）ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）ＨＩＶのｇａｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；
（ｃ）ＨＩＶのｐｏｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第３のＤＮＡプラスミド；
（ｄ）ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；
（ｅ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第５のＤＮＡプラスミド；および
（ｆ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物を該脊椎動物宿主に投与する工程を包含する、方法。
（項目７９）
前記免疫原組成物が、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与される、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
前記エレクトロポレーションが、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激する工程を包含する、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を脊椎動物宿主において誘発するための免疫原組成物であって、該免疫原組成物が、以下：
（ａ）ＨＩＶのｇａｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）ＨＩＶのｐｏｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；
（ｃ）第３のＤＮＡプラスミドであって、以下：
（ｉ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット、
（ｉｉ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニットを含み、
ここで、該第１および第２のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、かつ、該第１および第２のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向と同じ方向であり、該第１および第２の転写ユニットが少なくとも１キロ塩基対のスペーサー領域によって隔てられる、第３のプラスミド；および
（ｄ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；および
（ｅ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、免疫原組成物。
（項目８２）
前記プロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーター、サルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーター、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）潜伏期関連プロモーター−１（ＬＡＰ１）、シミアンウイルス４０プロモーター、ヒト伸長因子１αプロモーターおよびヒト筋細胞特異的デスミンプロモーターからなる群より選択される、項目８１に記載の組成物。
（項目８３）
前記ポリアデニル化シグナルが、ウサギβ−グロビンポリ（Ａ）シグナル、合成ポリＡ、ＨＳＶチミジンキナーゼポリＡ、ヒトαグロビンポリＡ、ＳＶ４０ポリＡ、ヒトβグロビンポリＡ、ポリオーマウイルスポリＡおよびウシ成長ホルモンポリＡからなる群より選択される、項目８１に記載の組成物。
（項目８４）
選択された抗原に対して脊椎動物宿主を免疫化する方法であって、該方法が、以下：
（ａ）ＨＩＶのｇａｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）ＨＩＶのｐｏｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；
（ｃ）第３のＤＮＡプラスミドであって、以下：
（ｉ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット、
（ｉｉ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニットを含み、
ここで、該第１および第２のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、かつ、該第１および第２のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向と同じ方向であり、該第１および第２の転写ユニットが少なくとも１キロ塩基対のスペーサー領域によって隔てられる、第３のプラスミド；および
（ｄ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；および
（ｅ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む免疫原組成物を該脊椎動物宿主に投与する工程を包含する、方法。
（項目８５）
前記免疫原組成物が、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与される、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記エレクトロポレーションが、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激する工程を包含する、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
前記トランスフェクション促進因子がブピバカインである、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
選択された抗原に対して脊椎動物宿主を免疫化するための医薬品の製造における、項目３７〜４２、５７〜６２、６５〜７２、７４〜７６、７８〜８０または８４〜８７のいずれか１項に記載される免疫原組成物の使用。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明の特定の実施形態において、免疫原組成物は、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与される。１つの具体的な実施形態において、エレクトロポレーションは、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激することを伴う。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
さらにさらなる実施形態において、本発明は、選択された抗原に対して脊椎動物宿主を免疫化する方法であって、（ａ）ＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；（ｂ）（ｉ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニットと、（ｉｉ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニットとを含み、該第１および第２のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、かつ、該第１および第２のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、また、該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向と同じ方向であり、該第１および第２の転写ユニットが少なくとも１キロ塩基対のスペーサー領域によって隔てられる第２のＤＮＡプラスミド；および（ｃ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つを含む免疫原組成物を該脊椎動物宿主に投与する工程を包含する方法を提供する。具体的な実施形態において、トランスフェクション促進因子はブピバカインである。具体的な実施形態において、第１のプラスミドにおけるプロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターであり、第１のプラスミドにおけるポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモンポリＡのポリアデニル化シグナルであり、第１のＤＮＡプラスミドがＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードし、この場合、ＨＩＶのｇａｇ遺伝子およびｐｏｌ遺伝子の融合体、または、ｇａｇ−ｐｏｌ遺伝子はＨＩＶの単離体ＨＸＢ２に由来する。特定の実施形態において、第２のプラスミドにおける第１のプロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターであり、第２のプラスミドにおける第１のポリアデニル化シグナルがＳＶ４０ポリＡのポリアデニル化シグナルであり、ポリペプチドが、ＨＩＶの単離体ＮＬ４−３に由来するｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の融合体（ｎｔｖ）から発現される、ｎｅｆ、ｔａｔおよびｖｉｆの融合タンパク質（ＮＴＶ）である。具体的な実施形態において、第２のプラスミドにおける第２のプロモーターがサルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーターであり、第２のプラスミドにおける第２のポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）のポリアデニル化シグナルであり、コードされるエンベロープポリペプチドがＨＩＶの初代単離体６１０１に由来する。１つの実施形態において、免疫原組成物が、生体内エレクトロポレーションを使用して哺乳動物に投与される。具体的な実施形態において、エレクトロポレーションは、約２５Ｖ／ｃｍ〜約８００Ｖ／ｃｍの範囲での電場強度を有する電流により筋肉を電気的に刺激することを伴う。１つの実施形態において、トランスフェクション促進因子がブピバカインである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
１つの実施形態において、本発明は、免疫原組成物を脊椎動物宿主に投与する工程を包含する、選択された抗原に対して脊椎動物宿主を免疫化する方法を提供し、この場合、免疫原組成物は、（ａ）ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；（ｂ）ＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；（ｃ）ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第３のＤＮＡプラスミド；（ｄ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；および（ｅ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つを含む。具体的な実施形態において、トランスフェクション促進因子がブピバカインである。別の実施形態において、ブピバカインを含有する免疫原組成物がエレクトロポレーションとの併用で投与される。具体的な実施形態において、ＨＩＶのエンベロープポリペプチド、ｇａｇ−ｐｏｌポリペプチド、ｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆポリペプチドおよびアジュバントポリペプチドが真核生物細胞において発現される。１つの実施形態において、第１、第２、第３および第４のプラスミドは、真核生物細胞において活性であるプロモーターを含有する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶに対する免疫応答を脊椎動物宿主において誘発するための免疫原組成物であって、（ａ）ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；（ｂ）ＨＩＶのｇａｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；（ｃ）ＨＩＶのｐｏｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第３のＤＮＡプラスミド；（ｄ）ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；（ｅ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第５のＤＮＡプラスミド；および（ｆ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つを含む免疫原組成物を提供する。具体的な実施形態において、トランスフェクション促進因子がブピバカインである。別の実施形態において、ブピバカインを含有する免疫原組成物がエレクトロポレーションとの併用で投与される。１つの実施形態において、ＨＩＶのエンベロープポリペプチド、ｇａｇポリペプチド、ｐｏｌポリペプチド、ｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆポリペプチドおよびアジュバントポリペプチドが真核生物細胞において発現される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
別の実施形態において、本発明は、選択された抗原に対して脊椎動物宿主を免疫化する方法であって、（ａ）ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；（ｂ）ＨＩＶのｇａｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第２のＤＮＡプラスミド；（ｃ）ＨＩＶのｐｏｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第３のＤＮＡプラスミド；（ｄ）ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第４のＤＮＡプラスミド；（ｅ）アジュバントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列が、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第５のＤＮＡプラスミド；および（ｆ）薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つを含む免疫原組成物を該脊椎動物宿主に投与する工程を包含する方法を提供する。具体的な実施形態において、トランスフェクション促進因子がブピバカインである。別の実施形態において、ブピバカインを含有する免疫原組成物がエレクトロポレーションとの併用で投与される。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５３】
表１９に示されるように、２つ以上の転写ユニットを有する少なくとも１つのプラスミドを含有するプラスミドの組合せに基づく免疫原組成物により免疫化された群３ｃの動物は第１６週で最大の非エレクトロポレーション力価を達成した。しかしながら、群２ｄおよび群３ａについての結果はある程度類似していたが、群３ａの動物は第８週および第１０週で最大の力価を示した。表１９を参照し、３ａを２ｄおよび３ｃと比較のこと。２つ以上の転写ユニットを有する少なくとも１つのプラスミドを含有するプラスミドの組合せに基づく免疫原組成物により免疫化され、かつ、エレクトロポレーション−電気刺激を免疫化とともに受けた動物は、ＨＩＶエンベロープタンパク質に対するこれまでにない最大の力価を発達させた。表１９を参照し、３ｃを３ｃＥと比較のこと。