【手続補正書】
【提出日】平成21年7月22日(2009.7.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９９】
従って、別に実施形態において、本発明は、
（ａ）
（ｉ）配列番号１、配列番号２及び配列番号３からなるグループから選択されるＣＤＲ１のアミノ酸配列、及び／又は配列番号４、配列番号５、及び配列番号６からなるグループから選択されるＣＤＲ２のアミノ酸配列、及び／又は配列番号７、８、及び９からなるグループから選択されるＣＤＲ３のアミノ酸配列と、
（ｉｉ）配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２からなるグループから選択されるＣＤＲ１のアミノ酸配列、及び／又は配列番号１３、配列番号１４、及び配列番号１５からなるグループから選択されるＣＤＲ２のアミノ酸配列、及び／又は配列番号１６、配列番号１７、及び配列番号１８からなるグループから選択されるＣＤＲ３のアミノ酸配列と、を含む軽鎖可変領域の抗体配列を提供し、
（ｂ）重鎖可変領域抗体配列及び／又は軽鎖可変領域抗体配列の少なくとも１個のアミノ酸残基を少なくとも１個の変化した抗体配列を生成するために変えることと、
（ｃ）変化した抗体配列をタンパク質として発現させること、とを含む抗ＩＦＮα抗体の調製方法を提供する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４６】
＜安定性が向上した１３Ｈ５変異体の調製及び特徴付け＞
本実施例において、１３Ｈ５変異体をＡｓｎ−５５でアミノ酸置換を有するように調製し、実施例１０に記載されるようにｃＩＥＦ分析によって、変異体の安定性を脱アミド化条件下に２日置いて調べた。変異体を標準的な組み換えＤＮＡ変異手法によって調製し、野生型１３Ｈ５とＶＨのアミノ酸位置５５−５８での変異の配列は、以下の通りであった。
１３Ｈ５野生型：  Ｎ  Ｇ  Ｎ  Ｔ（配列番号１９の５５〜５８番目のアミノ酸残基）
変異体番号１：    Ｄ  Ｇ  Ｎ  Ｔ（配列番号３８）
変異体番号２：    Ｑ  Ｇ  Ｎ  Ｔ（配列番号３９）
変異体番号３：    Ｑ  Ｇ  Ｑ  Ｔ（配列番号４０）
変異体番号１、変異体番号２及び変異体番号３の全長のＶＨアミノ酸配列は、配列番号３４、配列番号３５及び配列番号３６に示される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５０】
【図１Ａ】１３Ｈ５ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２５）及びアミノ酸配列（配列番号１９）を示す。ＣＤＲ１（配列番号１）、ＣＤＲ２（配列番号４）及びＣＤＲ３（配列番号７）領域を線引きし、そしてＶ、Ｄ、及びＪ生殖系列の派生を表す。
【図１Ｂ】１３Ｈ５ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２８）及びアミノ酸配列（配列番号２２）を示す。ＣＤＲ１（配列番号１０）、ＣＤＲ２（配列番号１３）及びＣＤＲ３（配列番号１６）領域を線引きし、そしてＶ、Ｄ、及びＪ生殖系列の派生を表す。
【図２Ａ】１３Ｈ７ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２６）及びアミノ酸配列（配列番号２０）を示す。ＣＤＲ１（配列番号２）、ＣＤＲ２（配列番号５）及びＣＤＲ３（配列番号８）領域を線引きし、そしてＶ、Ｄ、及びＪ生殖系列の派生を表す。
【図２Ｂ】１３Ｈ７ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２９）及びアミノ酸配列（配列番号２３）を示す。ＣＤＲ１（配列番号１１）、ＣＤＲ２（配列番号１４）及びＣＤＲ３（配列番号１７）領域を線引きし、そしてＶ、Ｄ、及びＪ生殖系列の派生を表す。
【図３Ａ】７Ｈ９ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２７）及びアミノ酸配列（配列番号２１）を示す。ＣＤＲ１（配列番号３）ＣＤＲ２（配列番号６）及びＣＤＲ３（配列番号９）領域を線引きし、そしてＶ、Ｄ、及びＪ生殖系列の派生を表す。
【図３Ｂ】７Ｈ９ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号３０）及びアミノ酸配列（配列番号２４）を示す。ＣＤＲ１（配列番号１２）、ＣＤＲ２（配列番号１５）及びＣＤＲ３（配列番号１８）領域を線引きし、そしてＶ、Ｄ、及びＪ生殖系列の派生を表す。
【図４】１３Ｈ５（配列番号１９）及び７Ｈ９（配列番号２１）の重鎖可変領域及びヒト生殖系列ＶＨ  １−１８（配列番号３１）とのアミノ酸配列のアラインメントを示す。
【図５】１３Ｈ７（配列番号２０）の重鎖可変領域及びヒト生殖系列ＶＨ  ４−６１（配列番号３２）とのアミノ酸配列のアラインメントを示す。
【図６】１３Ｈ５（配列番号２２）、１３Ｈ７（配列番号２３）及び７Ｈ９（配列番号２４）の軽鎖可変領域及びヒト生殖系列ＶＫ  Ａ２７（配列番号３３）とのアミノ酸配列のアラインメントを示す。
【図７】ｍＡｂ  １３Ｈ５による１２５Ｉ−ＩＦＮα  ２ａ結合の増加（▼）と対比した、非ラベルＩＦＮα  ２ａによるＩＦＮＡＲを発現するＤａｕｄｉ細胞との結合（●）の競合物質の濃度を示したグラフである。アイソタイプコントロール抗体は、結合において効果がなかった（◆）。
【図８】ＩＦＮα  ２ａの存在下での１２５Ｉ−１３Ｈ５のＤａｕｄｉ細胞に結合（■）するが、ＩＦＮα  ２ａ非存在下では結合しない（▲）ことを示すグラフである。１３Ｈ５の特異的なＩＦＮα依存的な結合は丸（●）によって表される。
【図９】１３Ｈ５存在下（■）、１３Ｈ５＋ＩＦＮα存在下（▲）、アイソタイプコントロール抗体＋ＩＦＮα（▼）、又は陽性対照抗体（●）の新鮮なヒト単核細胞による、Ｒａｊｉ細胞溶解のＡＤＣＣ検定の結果を示すグラフである。溶解は、陽性対照を用いた場合のみ見られた。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2007513633000001.app
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１Ａ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１Ａ】
2007513633.tif 000001
【手続補正６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１Ｂ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１Ｂ】
2007513633.tif 000002
【手続補正７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２Ａ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２Ａ】
2007513633.tif 000003
【手続補正８】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２Ｂ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２Ｂ】
2007513633.tif 000004
【手続補正９】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３Ａ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３Ａ】
2007513633.tif 000005
【手続補正１０】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３Ｂ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３Ｂ】
2007513633.tif 000006
【手続補正１１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４】
2007513633.tif 000007
【手続補正１２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５】
2007513633.tif 000008
【手続補正１３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図６】
2007513633.tif 000009