(57)【要約】本発明は、軟骨修復用の組成物、並びに該組成物の調製法および使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
約２５重量％〜約４０重量％の脱灰骨基質と、約３．５重量％〜約２５重量％のヒアルロン酸塩と、約４０重量％〜約７２重量％の生体適合性液体とを含有する、成形可能な組成物。
【請求項２】
前記ヒアルロン酸塩は、ヒアルロン酸のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記生体適合性液体はＰＢＳ、水、食塩水、またはＬＲＳである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記生体適合性液体はＰＢＳである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
レオロジー改質剤をさらに含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記レオロジー改質剤はグリセロールまたはカルボキシメチルセルロースである、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
約２５重量％〜約３５重量％の脱灰骨基質を含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
約６重量％〜約１５重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
約６重量％〜約９重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ヒアルロン酸塩は少なくとも約５００，０００ダルトンの平均分子量を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
少なくとも２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩と、第２平均分子量のヒアルロン酸塩とを含む、２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩は、約０．０５〜１．０百万ダルトンである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
第２平均分子量のヒアルロン酸塩は、約１．０〜５．０百万ダルトンである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩の、第２平均分子量のヒアルロン酸塩に対する平均分子量比は１：５〜５：１に及ぶ、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１６】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩と第２平均分子量のヒアルロン酸塩との間の平均分子量の差は、少なくとも約０．５百万ダルトンである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１７】
インストロン注射器押出力（ＩＳＥＦ）試験を受ける場合、前記組成物は約１２．０ニュートン〜約３０．０ニュートンの押出力を示すことをさらに特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記押出力は約１８．０ニュートン〜約２６．０ニュートンである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記押出力は、８．６ｍｍの直径および１５ゲージの１・１／１針を備えた３ｍＬの注射器において測定される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
医薬活性成分をさらに含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記医薬活性成分は、骨形態形成タンパク質、組織成長因子、インスリン成長因子、抗酸化剤、抗生物質、または成長因子の組み合わせである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記医薬活性成分は、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＴＧＦ−Ｂ、ＩＧＦ−１、アスコルベート、ピルベート、ＢＨＴ、ゲンタマイシン、バンコマイシン、ＴＧＦ−βおよびＢＭＰ−２の組み合わせ、並びにＴＧＦ−βおよびＩＧＦ−１の組み合わせのうちから選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記医薬活性成分はヒアルロン酸塩とコンジュゲートされる、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
対象の軟骨を修復する方法であって、有効量の組成物を、対象に対して、軟骨組織の損傷の部位に投与することを含み、前記組成物は脱灰骨基質とヒアルロン酸塩とを含有する、方法。
【請求項２５】
前記ヒアルロン酸塩は、ヒアルロン酸のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記組成物は生体適合性液体をさらに含有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記生体適合性液体はＰＢＳ、水、食塩水、またはＬＲＳである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記生体適合性液体はＰＢＳである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記生体適合性液体は水である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記組成物はレオロジー改質剤をさらに含有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
前記レオロジー改質剤はグリセロールまたはカルボキシメチルセルロースである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記組成物は約２５重量％〜約４０重量％の脱灰骨基質を含有する成形可能な組成物である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
前記組成物は、少なくとも約３．５重量％〜約２５重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記組成物は、約６重量％〜約１５重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記組成物は、約６重量％〜約９重量％ヒアルロン酸塩を含有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記組成物は、約４０重量％〜約７２重量％の生体適合性液体を含有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記組成物は、約６０重量％〜約９２重量％脱灰骨基質を含有する乾式混合組成物である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３８】
前記組成物は、少なくとも約３．５重量％〜約３８重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記組成物は、約３重量％〜約１０重量％の生体適合性液体を含有する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記組成物は、約２５重量％〜約８８重量％の脱灰骨基質を含有するプラグである、請求項２４に記載の方法。
【請求項４１】
前記組成物は、少なくとも約３．５重量％〜約３８重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記組成物は約３重量％〜約２０重量％の生体適合性液体をさらに含有する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記組成物は約５重量％〜約１０重量％の生体適合性液体をさらに含有する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記組成物は、少なくとも２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項４５】
前記組成物は、第１平均分子量のヒアルロン酸塩と、第２平均分子量のヒアルロン酸塩とを含む、２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩は、約０．０５〜１．０百万ダルトンである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．０〜５．０百万ダルトンである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩の第２平均分子量のヒアルロン酸塩に対する平均分子量比は１：５〜５：１に及ぶ、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩と第２平均分子量のヒアルロン酸塩との間の平均分子量の差は、少なくとも約０．５百万ダルトンである、請求項４５に記載の方法。
【請求項５０】
前記組成物は医薬活性成分をさらに含有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項５１】
前記医薬活性成分は、骨形態形成タンパク質、組織成長因子、インスリン成長因子、抗酸化剤、抗生物質または成長因子の組み合わせである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記医薬活性成分は、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＴＧＦ−Ｂ、ＩＧＦ−１、アスコルベート、ピルベート、ＢＨＴ、ゲンタマイシン、バンコマイシン、ＴＧＦ−βおよびＢＭＰ−２の組み合わせ、並びにＴＧＦ−βおよびＩＧＦ−１の組み合わせのうちから選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記医薬活性成分はヒアルロン酸塩とコンジュゲートされる、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
約２５重量％〜約４０重量％の脱灰骨基質と、約３．５重量％〜約２５重量％のヒアルロン酸塩と、約４０重量％〜約７２重量％の生体適合性液体とを含有する成形可能な組成物を調製する方法であって、該方法は、固形成分を混合し、続いて液体成分を添加することを含む、方法。
【請求項５５】
前記固形成分は脱灰骨基質とヒアルロン酸塩とを含有する、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記ヒアルロン酸塩は、ヒアルロン酸のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記液体成分は生体適合性液体である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記生体適合性液体はＰＢＳ、水、食塩水、またはＬＲＳである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記生体適合性液体は水である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
前記液体成分は目的とする使用の前に添加される、請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
前記組成物はレオロジー改質剤をさらに含有する、請求項５４に記載の方法。
【請求項６２】
前記レオロジー改質剤はグリセロールまたはカルボキシメチルセルロースである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記ヒアルロン酸塩は少なくとも約２００，０００ダルトンの平均分子量を有する、請求項５４に記載の方法。
【請求項６４】
前記組成物は、少なくとも２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項５４に記載の方法。
【請求項６５】
前記組成物は、第１平均分子量のヒアルロン酸塩と、第２平均分子量のヒアルロン酸塩とを含む、２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩は、約０．０５〜１．０百万ダルトンである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．０〜５．０百万ダルトンである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩の第２平均分子量のヒアルロン酸塩に対する平均分子量比は１：５〜５：１に及ぶ、請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩と第２平均分子量のヒアルロン酸塩との間の平均分子量の差は、少なくとも約０．５百万ダルトンである、請求項６５に記載の方法。
【請求項７０】
前記組成物は医薬活性成分をさらに含有する、請求項５４に記載の方法。
【請求項７１】
前記医薬活性成分は、骨形態形成タンパク質、組織成長因子、インスリン成長因子、抗酸化剤、抗生物質、または成長因子の組み合わせである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記医薬活性成分は、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＴＧＦ−Ｂ、ＩＧＦ−１、アスコルベート、ピルベート、ＢＨＴ、ゲンタマイシン、バンコマイシン、ＴＧＦ−βおよびＢＭＰ−２の組み合わせ、並びにＴＧＦ−βおよびＩＧＦ−１の組み合わせのうちから選択される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記医薬活性成分はヒアルロン酸塩とコンジュゲートされる、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記医薬活性成分は、脱灰骨基質およびヒアルロン酸塩と混合される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
前記医薬活性成分は液体成分と混合される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
約６０重量％〜約９２重量％の脱灰骨基質と、約３．５重量％〜約３８重量％のヒアルロン酸塩と、約３重量％〜約１０重量％の生体適合性液体とを含有する、乾式混合組成物。
【請求項７７】
前記ヒアルロン酸塩は、ヒアルロン酸のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩である、請求項７６に記載の組成物。
【請求項７８】
前記ヒアルロン酸塩は少なくとも約２００，０００ダルトンの平均分子量を有する、請求項７６に記載の組成物。
【請求項７９】
少なくとも２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項７６に記載の組成物。
【請求項８０】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩と、第２平均分子量のヒアルロン酸塩とを含む、２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項７６に記載の組成物。
【請求項８１】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩は、約０．０５〜１．０百万ダルトンである、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．０〜５．０百万ダルトンである、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８３】
医薬活性成分をさらに含有する、請求項７６に記載の組成物。
【請求項８４】
前記医薬活性成分は、骨形態形成タンパク質、組織成長因子、インスリン成長因子、抗酸化剤、抗生物質、または成長因子の組み合わせである、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８５】
前記医薬活性成分は、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＴＧＦ−Ｂ、ＩＧＦ−１、アスコルベート、ピルベート、ＢＨＴ、ゲンタマイシン、バンコマイシン、ＴＧＦ−βおよびＢＭＰ−２の組み合わせ、並びにＴＧＦ−βおよびＩＧＦ−１の組み合わせのうちから選択される、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８６】
前記医薬活性成分はヒアルロン酸塩とコンジュゲートされる、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８７】
約２５重量％〜約８８重量％の脱灰骨基質と、約３．５重量％〜約３８重量％のヒアルロン酸塩と、約３重量％〜約２０重量％の生体適合性液体とを含有するプラグ。
【請求項８８】
前記生体適合性液体は約５〜１０重量％である、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項８９】
前記生体適合性液体は水である、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項９０】
粉末はさらに可塑剤を含有する、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項９１】
前記可塑剤はグリセロールまたはＰＥＧである、請求項９０に記載のプラグ。
【請求項９２】
前記ヒアルロン酸塩は、ヒアルロン酸塩のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩である、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項９３】
少なくとも約６重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項９４】
約６重量％〜約２４重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項９５】
約６重量％〜約１８重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項９６】
前記ヒアルロン酸塩は少なくとも約２００，０００ダルトンの平均分子量を有する、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項９７】
少なくとも２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項９８】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩と、第２平均分子量のヒアルロン酸塩とを含む、２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項９７に記載のプラグ。
【請求項９９】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩は約０．０５〜１．０百万ダルトンである、請求項９８に記載のプラグ。
【請求項１００】
第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．０〜５．０百万ダルトンである、請求項９８に記載のプラグ。
【請求項１０１】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩の第２平均分子量のヒアルロン酸塩に対する平均分子量比は１：５〜５：１に及ぶ、請求項９８に記載のプラグ。
【請求項１０２】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩と第２平均分子量のヒアルロン酸塩との間の平均分子量の差は、少なくとも約０．５百万ダルトンである、請求項９８に記載のプラグ。
【請求項１０３】
粉末は医薬活性成分をさらに含有する、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項１０４】
前記医薬活性成分は、骨形態形成タンパク質、組織成長因子、インスリン成長因子、抗酸化剤、抗生物質、または成長因子の組み合わせである、請求項１０３に記載のプラグ。
【請求項１０５】
前記医薬活性成分は、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＴＧＦ−Ｂ、ＩＧＦ−１、アスコルベート、ピルベート、ＢＨＴ、ゲンタマイシン、バンコマイシン、ＴＧＦ−βおよびＢＭＰ−２の組み合わせ、並びにＴＧＦ−βおよびＩＧＦ−１の組み合わせのうちから選択される、請求項１０３に記載のプラグ。
【請求項１０６】
前記医薬活性成分はヒアルロン酸塩とコンジュゲートされる、請求項１０３に記載のプラグ。
【請求項１０７】
前記プラグは少なくとも約１．５５ＭＰａの一軸圧縮強さを示す、請求項８７に記載のプラグ。
【請求項１０８】
ａ）脱灰骨基質およびヒアルロン酸塩の粉末を提供することと、
ｂ）前記粉末を混合することと、
ｃ）液体成分を添加して、パテ状材料を形成することと、
ｄ）そのパテを型内に配置することと、
ｅ）成形されたパテを乾燥させてプラグを形成することと、を含む、プラグを形成する方法。
【請求項１０９】
前記ヒアルロン酸塩は、ヒアルロン酸塩のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩である、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記プラグは約２０重量％未満の生体適合性液体を含有する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１１】
前記プラグは約１０重量％未満の生体適合性液体を含有する、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記生体適合性液体は水である、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
前記粉末は可塑剤をさらに含有する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１４】
前記可塑剤はグリセロールまたはＰＥＧである、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記プラグは、少なくとも約６重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１６】
前記プラグは、約６重量％〜約２４重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１７】
前記プラグは、約６重量％〜約１８重量％のヒアルロン酸塩を含有する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１８】
前記ヒアルロン酸塩は少なくとも約２００，０００ダルトンの平均分子量を有する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１９】
前記プラグは、少なくとも２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記組成物は、第１平均分子量のヒアルロン酸塩と、第２平均分子量のヒアルロン酸塩とを含む、２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有する、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩は約０．０５〜１．０百万ダルトンである、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．０〜５．０百万ダルトンである、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２３】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩の第２平均分子量のヒアルロン酸塩に対する平均分子量比は１：５〜５：１に及ぶ、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２４】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩と第２平均分子量のヒアルロン酸塩との間の平均分子量の差は、少なくとも約０．５百万ダルトンである、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２５】
前記粉末は医薬活性成分をさらに含有する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１２６】
前記医薬活性成分は、骨形態形成タンパク質、組織成長因子、インスリン成長因子、抗酸化剤、抗生物質、または成長因子の組み合わせである、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記医薬活性成分は、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＴＧＦ−Ｂ、ＩＧＦ−１、アスコルベート、ピルベート、ＢＨＴ、ゲンタマイシン、バンコマイシン、ＴＧＦ−βおよびＢＭＰ−２の組み合わせ、並びにＴＧＦ−βおよびＩＧＦ−１の組み合わせのうちから選択される、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２８】
前記医薬活性成分はヒアルロン酸塩とコンジュゲートされる、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２９】
前記乾燥は、凍結乾燥、風乾、またはオーブン乾燥もしくは真空乾燥である、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記プラグは、約３重量％〜２０重量％の含水率に達するようにさらに調整され得る、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１３１】
前記含水率は約５重量％〜約１０重量％である、請求項１３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、軟骨修復用の組成物、並びに該組成物の調製法および使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
軟骨損傷はヒトによく見られる。治療しないと、損傷は漸進的に悪化し、変形性関節症のような慢性症状をもたらし得る。損傷した軟骨を修復するために、現在、多くの様々な治療方法が用いられている。例示的な方法としては、軟骨細胞または間葉系幹細胞の直接的または細胞送達ビヒクル（ｃｅｌｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｖｅｈｉｃｌｅ）を介した骨軟骨欠損部への移植、または修復プロセスを促進する成長因子の使用が挙げられる（非特許文献１）。修復組織の耐久性、初期の最適な成長因子の投与量の確実性、または多数の生物学的要因間の相互作用についての知見は重要であり、時には問題となる（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】ガオ（Ｇａｏ）ら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４、Ｓ６２〜６６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者らは、軟骨を修復するための特定の組成物および方法を発見した。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一態様において、本発明は、約２５重量％〜約４０重量％の脱灰骨基質（ＤＢＭ）と、約３．５重量％〜約２５重量％のヒアルロン酸塩と、約４０重量％〜約７２重量％の生体適合性液体（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  ｌｉｑｕｉｄ）とを含有する成形可能な（ｆｏｒｍａｂｌｅ）組成物を特徴とする。
【０００６】
いくつかの実施形態において、同ヒアルロン酸塩は、ヒアルロン酸のナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩であり得る。
いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は生体適合性液体を含有することができ、同液体は、ＰＢＳ、水、食塩水（ｓａｌｉｎｅ）またはＬＲＳであり得、例えばＰＢＳであり得る。
【０００７】
同成形可能な組成物は、レオロジー改質剤、例えばグリセロール、またはカルボキシメチルセルロースをさらに含むことができる。
いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は、３５重量％未満の脱灰骨基質を含有することができ、例えば約２５重量％〜約３５重量％の脱灰骨基質を含有し得る。
【０００８】
いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は少なくとも約６重量％のヒアルロン酸塩を含有し得る。特定の実施形態において、同成形可能な組成物は、約６重量％〜約１５重量％のヒアルロン酸塩を含有し得る。他の実施形態では、同成形可能な組成物は、約６重量％〜約９重量％のヒアルロン酸塩を含有し得る。
【０００９】
いくつかの実施形態において、同ヒアルロン酸塩は少なくとも約５００，０００ダルトンの平均分子量を有し得る。
いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は、少なくとも２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有し得る。他の実施形態では、同成形可能な組成物は、２種のヒアルロン酸塩の混合物、例えば、約０．０５〜約１．０百万ダルトンの範囲にある第１平均分子量のヒアルロン酸塩と、約１．０〜５．０百万ダルトンの範囲にある第２平均分子量のヒアルロン酸塩とを含有し得る。第１平均分子量のヒアルロン酸塩の第２平均分子量のヒアルロン酸塩に対する平均分子量比は、１：５〜５：１に及び得る。
【００１０】
いくつかの実施形態において、第１平均分子量のヒアルロン酸塩と第２平均分子量のヒアルロン酸塩との間の平均分子量の差は、少なくとも約０．５百万ダルトンであり得る。
いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は、試験においてさらに特徴付けることができる。例えば、インストロンシリンジ押出力（ＩＳＥＦ）試験を受ける場合、同組成物は約１２．０ニュートン〜約３０．０ニュートンの押出力を示し得る。いくつかの実施形態において、同押出力は約１８．０ニュートン〜約２６．０ニュートンであり得る。実施形態において、同押出力は、８．６ｍｍの直径および１５ゲージの１・１／１針を備えた３ｍＬの注射器において測定される。
【００１１】
同成形可能な組成物はさらに医薬活性成分を含有することができる。同医薬活性成分は、骨形態形成タンパク質、組織成長因子、インスリン成長因子、抗酸化剤、抗生物質または成長因子の組み合わせであり得る。実施形態において、同医薬活性成分は、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＴＧＦ−Ｂ、ＩＧＦ−１、アスコルベート、ピルベート、ＢＨＴ、ゲンタマイシン、バンコマイシン、ＴＧＦ−βおよびＢＭＰ−２の組み合わせ、並びにＴＧＦ−βおよびＩＧＦ−１の組み合わせのうちから選択することができる。
【００１２】
いくつかの実施形態において、同医薬活性成分はヒアルロン酸塩と結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）され得る。
別の態様において、本発明は、約６０重量％〜約９２重量％の脱灰骨基質と、約３．５重量％〜約３８重量％のヒアルロン酸塩と、約３重量％〜約１０重量％の生体適合性液体とを含有する乾式混合（ｄｒｙ  ｂｌｅｎｄ）組成物を特徴とする。いくつかの実施形態において、同ヒアルロン酸塩は少なくとも約２００，０００ダルトンの平均分子量を有する。
【００１３】
さらに別の態様において、本発明は、約２５重量％〜約８８重量％の脱灰骨基質と、約３．５重量％〜約３８重量％のヒアルロン酸塩と、約３重量％〜約２０重量％の生体適合性液体とを含有するプラグを特徴とする。いくつかの実施形態において、同組成物は、約５重量％〜約１０重量％の生体適合性液体を含有する。いくつかの実施形態において、同ヒアルロン酸塩は少なくとも約２００，０００ダルトンの平均分子量を有する。いくつかの実施形態において、同プラグは約１０重量％未満の生体液体を含有する。特定の実施形態において、同プラグは、約５重量％以下の生体液体を含有する。いくつかの実施形態において、同生体適合性液体は水であり得る。例えば、生体適合性液体は、乾燥減量によって測定することができる残留水分である。いくつかの実施形態において、同プラグは、少なくとも約１．５５ＭＰａ（例えば少なくとも約１．６０ＭＰａ、少なくとも約１．６５ＭＰａ、または少なくとも約１．７０ＭＰａ）の一軸圧縮強度を示す。特定の実施形態において、同プラグは、約１．５５ＭＰａ〜約１．７０ＭＰａの一軸圧縮強度を示す。
【００１４】
一態様において、本発明は、有効量の組成物を対象に対して軟骨組織の損傷部位に投与することを含む対象の軟骨を修復する方法を特徴とし、同組成物は脱灰骨基質とヒアルロン酸塩とを含有する。同組成物は、成形可能な組成物、乾式混合組成物またはプラグであり得る。
【００１５】
他の態様において、本発明は、成形可能な組成物を調製する方法を特徴とする。同組成物は、約２５重量％〜約４０重量％の脱灰骨基質と、約３．５重量％〜約２５重量％のヒアルロン酸塩と、約４０重量％〜約７２重量％の生体適合性液体とを含有し、同方法は、固形成分を混合し、続いて液体成分を添加することを含む。同固形成分は脱灰骨基質およびヒアルロン酸塩を含有し得る。同ヒアルロン酸塩は少なくとも約２００，０００ダルトンの平均分子量を有し得る。いくつかの実施形態において、同液体成分は目的とする使用の前に添加され得る。いくつかの実施形態において、同液体成分は水である。同組成物が医薬活性成分を含有する場合、同医薬活性成分はヒアルロン酸塩とコンジュゲートされ得る。他の実施形態では、同医薬活性成分は、脱灰骨基質およびヒアルロン酸塩のような固形成分と混合され得る。特定の実施形態において、同医薬活性成分は、液体成分と混合され得る。
【００１６】
さらに別の態様において、本発明はプラグを形成する方法を特徴とし、該方法は、
ａ）脱灰骨基質およびヒアルロン酸塩の粉末を提供することと、
ｂ）同粉末を混合することと、
ｃ）液体成分を添加して、パテ状材料を形成することと、
ｄ）そのパテを型内に配置することと、
ｅ）成形されたパテを乾燥させてプラグを形成することと、を含む。
【００１７】
概して、「パテ」は堅固であるが柔軟である。同パテは崩壊しない。同パテは、手で成形したり、または指圧によって骨の空隙または多孔質組織の間隙に押し込んだりすることができる展性に富んだコンシステンシー（粘稠性）を有する。
【００１８】
いくつかの実施形態において、同粉末は、グリセロールまたはＰＥＧのような可塑剤をさらに含有することができる。
いくつかの実施形態において、同乾燥は、凍結乾燥、風乾、またはオーブン乾燥もしくは真空乾燥であり得る。
【００１９】
特定の実施形態において、同プラグは、約３重量％〜２０重量％（例えば少なくとも５重量％）の含水率に達するように、さらに調整され得る。いくつかの実施形態において、同含水率は約５重量％〜約１０重量％である。他の実施形態では、同含水率は約５重量％〜約１５重量％である。
【００２０】
本願では「成形可能な組成物」とは、外科医によって、実質的に手袋に付着することなく所望形状に操ることができ、良好な外科技術に合致するものである。例えば、同成形可能な組成物は、外科的損傷の輪郭に一致するように成形され得る。パテは成形可能な組成物の一種であり、患者に用いられ得る。より典型的には、本発明者らは、本願の他の箇所では、同用語を、プラグに乾燥させる中間材料を記述するために用いている。
【００２１】
本願では「平均分子量」とは、下記式によって計算され得る重量平均分子量（Ｍｖ）を指す。
Ｍｗ＝ΣＮｉ２  Ｍｉ２／ΣＮｉ  Ｍｉ
同式中、Ｎｉは、分子量Ｍｉの分子の数である。
【００２２】
本願において「生体適合性液体」とは、生理学的に許容可能であり、許容できない細胞の損傷をもたらさないものである。そのような液体の例は、水、緩衝液、食塩水、タンパク質溶液および糖液である。
【００２３】
本願において、区別なく用いられる「対象」または「患者」という用語は、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマまたは霊長類、最も好ましくはヒトを含む任意の動物を指す。
【００２４】
本願では「有効量」という語句は、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって組織、系、動物、個体またはヒトにおいて求められている生物学的応答または薬剤応答を誘発する活性化合物または医薬品の量を指す。
【００２５】
本願では「修復」という用語は、制限なく、組織の修復、再生、再建、再形成または増量を意味するように意図される。
本発明の１つ以上の実施形態の詳細について以下の記載において述べる。本発明の他の特徴、目的および効果は、同記載および特許請求の範囲から明白になるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明は、軟骨を修復するために特定の組成物を用いることができるという予期しない発見に少なくとも部分的に基づく。
組成物
軟骨を修復するために用いることができる組成物としては、成形可能な組成物、乾式混合組成物、およびプラグが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２７】
成形可能な組成物は、約２０重量％〜約４０重量％、好ましくは約２５重量％〜約４０重量％、または約２５重量％〜約３５重量％、より好ましくは約３０重量％〜約４０重量％、最も好ましくは約３０重量％〜約３５重量％の脱灰骨基質（ＤＢＭ）を含有し得る。ＤＢＭとヒアルロン酸塩との間の重量比は、約１：１〜約２５：１、または約２：１〜約２０：１、または約２：１〜約１５：１、または約２．５：１〜約７．５：１に及び得る。
【００２８】
成形可能な組成物はまた、水または食塩水のような生体適合性液体成分も含有する。いくつかの実施形態において、同液体成分は乳酸加リンゲル溶液（ＬＲＳ）であり得る。他の実施形態では、同液体成分として、リン酸緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）のような生理学的に許容可能な緩衝食塩水が挙げられる。
【００２９】
いくつかの実施形態において、本発明の成形可能な組成物は、約４０重量％〜約７２重量％（例えば、約４５重量％〜約６６重量％、または約５０重量％〜約６６重量％、または約６０重量％〜約６６重量％、または約６２重量％〜約６５重量％）の液体成分を含有し得る。いくつかの実施形態において、同液体成分は、実質的に有機溶媒を含まない。同有機溶媒の例としては、エタノール、イソプロパノール、Ｎ−メチルピロリドン、プロピレングリコール、グリセロール、低分子量ポリエチレングリコールおよびＤＭＳＯが挙げられる。
【００３０】
成形可能な組成物は、少なくとも約３．５重量％、例えば少なくとも約５重量％、少なくとも約６重量％、少なくとも約９重量％、少なくとも約１２重量％、少なくとも約１５重量％、少なくとも約２０重量％のヒアルロン酸塩を含むことができる。いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は少なくとも約６重量％のヒアルロン酸塩を含有し得る。
【００３１】
いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は、約３．５重量％〜約２５重量％（例えば、約５重量％〜約２５重量％、約６重量％〜約２５重量％、約９重量％〜約２５重量％）のヒアルロン酸塩を含有し得る。いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は、約３．５重量％〜約２０重量％（例えば、約５重量％〜約２０重量％、約６重量％〜約２０重量％、約９重量％〜約２０重量％）のヒアルロン酸塩を含有し得る。いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は、約３．５重量％〜約１５重量％（例えば、約５重量％〜約１５重量％、約６重量％〜約１５重量％、または約９重量％〜約１５重量％）のヒアルロン酸塩を含有する。いくつかの実施形態において、同組成物は、約３．５重量％〜約１０重量％（例えば、約５重量％〜約１０重量％、約６重量％〜約１０重量％、または約９重量％〜約１０重量％）のヒアルロン酸塩を含有する。特定の実施形態において、同成形可能な組成物は、約３．５重量％〜約９重量％（例えば、約５重量％〜約９重量％、または約６重量％〜約９重量％）のヒアルロン酸塩を含有する。
【００３２】
いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は、インストロン注射器押出力（ＩＳＥＦ）試験を受けると、約１２．０〜約３０．０ニュートンの押出力を示す。例えば、同成形可能な組成物は、約１４．０〜約２６．０ニュートン（例えば、約１４．０〜約２３．０ニュートン、または約１４．０〜約２１．０ニュートン、または約１４．０〜約１９．０ニュートン、または約１４．０〜約１６．０ニュートン）の押出力を示す。他の実施形態では、同成形可能な組成物は、約１６．０〜約２６．０ニュートン（例えば、約１８．０〜約２６．０ニュートン、または約２０．０〜約２６．０ニュートン、または約２２．０〜約２６．０ニュートン）の押出力を示し得る。
【００３３】
いくつかの実施形態において、同成形可能な組成物は、レオロジー改質剤、例えばグリセロール、カルボキシメチルセルロースをさらに含有することができる。
いくつかの実施形態において、同ヒアルロン酸塩は少なくとも約５００，０００ダルトン（Ｄａ）（例えば少なくとも約０．８ＭＤａ、少なくとも約１．０ＭＤａ、少なくとも約１．２ＭＤａ、少なくとも約１．５ＭＤａ、少なくとも約１．８ＭＤａ、または少なくとも約２．０ＭＤａ）の平均分子量を有する。
【００３４】
同組成物が乾式混合組成物である場合、乾式混合組成物は、約６０重量％〜約９２重量％（例えば、約７０重量％〜約９２重量％、約８０重量％〜約９２重量％、８５重量％〜約９２重量％、または約９０重量％〜約９２重量％）のＤＢＭを含有し得る。いくつかの実施形態において、乾式混合組成物は、約３．５重量％〜約３８重量％（例えば、約４重量％〜約３８重量％、約６重量％〜約３８％重量、約９重量％〜約３８重量％、約９重量％〜約３０重量％、約９重量％〜約２５重量％、約９重量％〜約２０重量％）のヒアルロン酸塩を含有することができる。実施形態において、同乾式混合組成物は、約３重量％〜約１０重量％（例えば、約３重量％〜約９重量％、約３重量％〜約７重量％、約３重量％〜約５重量％）のＤＭＢおよびヒアルロン酸塩の双方に由来する残留水分を含有し得る。
【００３５】
同組成物がプラグとして調製される場合、プラグ中のＤＢＭの量は、全組成物の２５重量％〜約８８重量％（例えば、約３５重量％〜約８８重量％、約５５重量％〜約８８重量％、約６０重量％〜約８８重量％、約６５重量％〜約８８重量％、約７５重量％〜約８８重量％、または約８５重量％〜約８８重量％）にわたり得る。
【００３６】
プラグ中のヒアルロン酸塩の量は、全組成物の約３．５％重量〜約３８重量％（例えば、約５重量％〜約３８重量％、または約６重量％〜約３８重量％、約６重量％〜約２８重量％、約６重量％〜約２４重量％、約６重量％〜約１８重量％、または約６重量％〜約１５重量％、または約７重量％〜約１５重量％）にわたり得る。いくつかの実施形態において、ヒアルロン酸塩の重量は、全組成物の少なくとも約６重量％（例えば少なくとも約７重量％、少なくとも約１５重量％、または少なくとも約２０重量％）である。いくつかの実施形態において、同プラグは、約３重量％〜約２０重量％、例えば１０重量％未満の生体適合性液体を含有する。いくつかの実施形態において、同生体適合性液体は水であり得る。例えば、同生体適合性液体は、約３重量％〜約２０重量％（例えば約５重量％〜約１０重量％、約５重量％〜約１５重量％）であり得る残留水分である。同残留水分または他の低揮発性溶媒は乾燥減量法によって測定され得る。特定の実施形態において、同乾燥減量は、約３％〜約２０％（例えば約３％〜約１７％、約５％〜約１２％、約５％〜約１０％）である。
【００３７】
成形可能な組成物、乾式混合組成物およびプラグ中におけるＤＢＭの適当な粒子サイズは、約７０ミクロン〜約８５０ミクロン、例えば、約１５０ミクロン〜約８００ミクロン、または２００ミクロン〜約８００ミクロンにわたり得る。ヒアルロン酸塩の適当な粒子サイズは、約６００ミクロン、約５００ミクロン、または約４００ミクロンである。
【００３８】
いくつかの実施形態において、成形可能な組成物中の同ヒアルロン酸塩は少なくとも約５００，０００ダルトン（例えば、少なくとも約０．８ＭＤａ少なくとも約１．０ＭＤａ、少なくとも約１．２ＭＤａ、少なくとも約１．５ＭＤａ、少なくとも約１．８ＭＤａ、または少なくとも約２．０ＭＤａ）の平均分子量を有する。いくつかの実施形態において、乾燥組成物またはプラグ中のヒアルロン酸塩は、少なくとも約２００，０００ダルトン（例えば少なくとも約０．４ＭＤａ、少なくとも約０．６ＭＤａ、少なくとも約０．８ＭＤａ、少なくとも約１．０ＭＤａ、または少なくとも約１．２ＭＤａ）の平均分子量を有し得る。
【００３９】
本発明の組成物は、成形可能な組成物、乾式混合組成物、またはプラグであり得る。
同組成物は、少なくとも２種のヒアルロン酸塩の混合物、例えば２種のヒアルロン酸塩の混合物、または３種以上（例えば３種または４種）のヒアルロン酸塩の混合物を含有し得る。いくつかの実施形態において、同組成物は、第１平均分子量のヒアルロン酸塩と、第２平均分子量のヒアルロン酸塩とを含む、２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有することができる。いくつかの実施形態において、第１平均分子量のヒアルロン酸塩は、約０．０５〜１．０百万ダルトン（ＭＤａ）（例えば約０．０５ＭＤａ、約０．１ＭＤａ、約０．３ＭＤａ、約０．６ＭＤａ、約０．８ＭＤａ、または約１．０ＭＤａ）である。
【００４０】
いくつかの実施形態において、第１平均分子量のヒアルロン酸塩は、約０．１〜１．０百万ダルトンである。いくつかの実施形態において、第１平均分子量のヒアルロン酸塩は、約０．３〜１．０百万ダルトンである。特定の実施形態において、第１平均分子量のヒアルロン酸塩は、約０．３〜０．８百万ダルトン、例えば約０．３〜０．６百万ダルトンである。
【００４１】
いくつかの実施形態において、第２平均分子量のヒアルロン酸塩は、約１．０〜５．０百万ダルトン（ＭＤａ）（例えば約１．０ＭＤａ、約１．４ＭＤａ、約２．０ＭＤａ、約２．５ＭＤａ、約３．０ＭＤａ、約４．０ＭＤａまたは約５．０ＭＤａ）である。
【００４２】
いくつかの実施形態において、第２平均分子量のヒアルロン酸塩は、約１．２〜４．０百万ダルトンである。特定の実施形態において、第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．０〜３．０百万ダルトンである。例えば、第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．０〜２．０百万ダルトンであり、例えば約１．０〜１．４百万ダルトンであり得る。
【００４３】
本発明の組成物は、第１平均分子量のヒアルロン酸塩と第２平均分子量のヒアルロン酸塩とを含む、２種のヒアルロン酸塩の混合物を含有することができる。本発明の一態様は、同組成物中の２種のヒアルロン酸塩が同組成物のレオロジー特性の操作を可能にするということである。
【００４４】
いくつかの実施形態において、第１平均分子量のヒアルロン酸塩は約０．０５〜１．０百万ダルトンであり、かつ第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．０〜５．０百万ダルトンであり得る。例えば、第１平均分子量のヒアルロン酸塩は約０．１〜１．０百万ダルトンであり、かつ第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．０〜３．０百万ダルトンであり得る。特定の実施形態において、第１平均分子量のヒアルロン酸塩は０．３〜０．８百万ダルトンであり、かつ第２平均分子量のヒアルロン酸塩は１．０〜２．０百万ダルトンであり得る。他の実施形態において、第１平均分子量のヒアルロン酸塩は０．３〜０．６百万ダルトンであり、かつ第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．０〜１．６百万ダルトンであり得る。例えば、第１平均分子量のヒアルロン酸塩は０．４〜０．６百万ダルトンであり、かつ第２平均分子量のヒアルロン酸塩は約１．１〜１．６百万ダルトンであり得る。
【００４５】
第１平均分子量のヒアルロン酸塩の第２平均分子量のヒアルロン酸塩に対する重量比は、約１：５〜約５：１（例えば、約１：５、約１：２、約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、または約５：１）であり得る。いくつかの実施形態では、第１平均分子量のヒアルロン酸塩の第２平均分子量のヒアルロン酸塩に対する重量比は、約１：４〜約４：１（例えば、約１：３〜約１：１、または約１：１〜約３：１）であり得る。特定の実施形態では、第１平均分子量のヒアルロン酸塩の第２平均分子量のヒアルロン酸塩に対する重量比は、約１：３〜約１：１であり得る。
【００４６】
いくつかの実施形態において、第１平均分子量のヒアルロン酸塩と第２平均分子量のヒアルロン酸塩との間の平均分子量の差は、少なくとも約０．５百万ダルトン（ＭＤａ）（例えば、少なくとも約０．５ＭＤａ、少なくとも約０．７ＭＤａ、少なくとも約０．９ＭＤａ、または少なくとも約１．２ＭＤａ）であり得る。
【００４７】
同組成物はさらに医薬活性成分を含有することができる。同医薬活性成分は、骨形態形成タンパク質、組織成長因子、インスリン成長因子、抗酸化剤、抗生物質、またはそれらの組み合わせであり得る。
【００４８】
同組成物は、骨および軟骨の形成を誘発し得るタンパク質を含有し得る。例えば、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−６およびＢＭＰ−７のような骨形態形成タンパク質である。
【００４９】
同組成物はまた、有効量（自然に存在するか、または故意に添加されたかのいずれか）の組織成長因子、例えばＴＧＦ−Ｂを含有し得る。いくつかの実施形態において、同組成物はインスリン成長因子、例えばＩＧＦ−１を有し得る。特定の実施形態において、同組成物は抗酸化剤を有し得る。例示的な抗酸化剤としては、アスコルベート、ピルベートおよびＢＨＴが挙げられる。他の実施形態では、同組成物は、ゲンタマイシンおよびバンコマイシンのような抗生物質を含有することができる。
【００５０】
同組成物は、２種以上の医薬活性成分の混合物を組織の成長の促進に有効な量で含有することができる。例えば、骨形態形成タンパク質および組織成長因子の混合物、例えばＴＧＦ−βおよびＢＭＰ−２の混合物、またはインスリン成長因子および組織成長因子の混合物、例えばＴＧＦ−βおよびＩＧＦ−１の混合物である。
【００５１】
同組成物はまた、本願に記載する疾患または他の疾患に対する他の治療剤、例えば鎮痛剤も含有することができる。
これらの例は例示を目的としているに過ぎず、文献に記載されたいかなる他の薬剤を用いてもよい。
【００５２】
同組成物中に医薬活性成分が用いられる場合、それらの医薬活性成分は、粉末形態でヒアルロン酸塩および脱灰骨基質（ＤＢＭ）と単純に混合することもできるし、または液体成分と混ぜ合わせることもできる。これに代わって、医薬活性成分はヒアルロン酸塩とコンジュゲートされ得る。
【００５３】
本願では、脱灰骨基質（ＤＢＭ）は、当業者に周知の方法を用いて調製され得る。一般的な合成法は文献に見られる。イー（Ｙｅｅ）ら、Ｓｐｉｎｅ（２００３年）、２８（２１）およびコルノット（Ｃｏｌｎｏｔ）ら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００５年）、（４３５）、６９〜７８頁を参照されたい。例えば、脱灰骨基質（ＤＢＭ）は、大部分の石灰化成分（ｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）の喪失を生じるが、成長因子を含むコラーゲンおよび非コラーゲンタンパク質は保持される移植用骨（ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｂｏｎｅ）の酸抽出によって調製することができる。ＤＢＭは、破砕粒、粉末またはチップとして加工され得る。ＤＢＭは、粒剤、ゲル、スポンジ材料またはパテとして使用するために調剤され得、保存のために凍結乾燥することができる。加えて、ＤＢＭは、カリフォルニア州サンラファエルのティシュー  バンクス  インターナショナル（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｂａｎｋｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（ＴＢＩ））、またはフロリダ州ゲインズヴィルのエグザクテック（Ｅｘａｃｔｅｃｈ）のような商業的供給源から入手することができる。
【００５４】
ヒアルロン酸は、Ｄ−グロクロン酸とＮ−アセチルグルコサミンとの二糖単位の繰り返しからなる直鎖長鎖多糖類である。ヒアルロン酸は、例えば、鶏冠および臍帯のような動物組織からの抽出（クライン、ジェイ．（Ｋｌｅｉｎ，Ｊ．）およびメイヤー、エフ．エイ．（Ｍｅｙｅｒ，Ｆ．Ａ．）、１９８３年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．＆Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、７５５（３）、４００〜４１１頁）、またはバクテリア種、例えば連鎖球菌からのヒアルロン酸莢膜物質の除去（ヴァン  ブラント、ジェイ．（Ｖａｎ  Ｂｒｕｎｔ，Ｊ）、１９８６年、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、４、７８０〜７８２頁）のいずれかによって得ることができる。
【００５５】
ヒアルロン酸は、所望の分子量の低減が生じるのを可能にするためにガンマ線照射にさらに供され得る（ミラー、アール．（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｒ．）およびシードリン、エイ．（Ｓｈｉｅｄｌｉｎ，Ａ．）、米国特許第６，３８３，３４４号）。いくつかの実施形態において、ヒアルロン酸は本質的に水溶性である。
【００５６】
ヒアルロン酸は修飾ヒアルロン酸であり得る。例えば、ヒアルロン酸のグルクロン酸部分におけるカルボキシル基は、置換アミド基に変えることができる。上記の置換アミド基の適当な置換基としては、アミノアルキル基（それらのアルキレン鎖は、１つ以上、すなわち、例えば１〜８個、好ましくは１〜３個のヒドロキシル基によって置換されていてもよい）；アミノ（ポリアルキレンオキシ）アルキル基；アミノ（ポリアルキレンアミノ）アルキル基；メルカプト（ポリアルキレンアミノ）アルキル基；アクリロイルオキシアルキル基；アクリロイルアミノアルキル基；およびアクリロイルアミノ（ポリアルキレンオキシ）アルキル基が挙げられ得る。
【００５７】
さらに、修飾ヒアルロン酸はまた、通常はより高い分子量を有する架橋ヒアルロン酸であることもできる。より高分子量のヒアルロン酸は、その高い粘弾性により、より効果的であり得る。
【００５８】
同ヒアルロン酸は、生理的ｐＨにおいて塩であってもよい。ヒアルロン酸塩がアルカリ金属（例えばリチウム、ナトリウムもしくはカリウム）またはアルカリ土類金属（マグネシウムもしくはカルシウム）のような無機塩基を有する塩である場合、そのような塩は、例えば、ヒアルロン酸をアルカリ金属またはアルカリ土類金属を含有する塩基と反応させることによって容易に得られる。ヒアルロン酸塩（例えば銀塩）はまた、米国特許第４，７８４，９９１号および同第５，４７２，９５０号に開示されるような方法によって調製することもできる。さらに、ヒアルロン酸塩はまた様々な商業的供給源から購入することもできる。
【００５９】
同組成物は、キトサン、キチン、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリンおよびヘパリン硫酸（ｈｅｐａｒｉｎ  ｓｕｌｆａｔｅ）のような修飾多糖類または天然多糖類をさらに含有することができる。
【００６０】
同組成物は、可溶性コラーゲンもしくは可溶性ゼラチンのような天然タンパク質、組み換えタンパク質、もしくは合成タンパク質、またはポリリシンのようなポリアミノ酸を含有してもよい。
【００６１】
いくつかの実施形態において、同組成物はいかなる脂質も含有しない。他の実施形態において、同組成物は１２重量％未満（例えば１０％未満、または８％未満、または５％未満、または３％未満）の脂質を含有する。
【００６２】
使用の方法
本発明の組成物は対象の軟骨を修復するために用いられ得る。同組成物は、対象に対して、軟骨組織の損傷または骨軟骨欠損におけるような骨および軟骨の損傷の組み合わせの部位に投与され得る。本発明の組成物はまた、骨または半月板、靭帯、腱および椎間板輪（ｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌ  ｄｉｓｃ  ａｎｎｕｌｕｓ）のような他の組織の損傷を修復するために用いることもできる。有効投与量は、治療中の病状に依存するだけでなく、疾患の重症度、患者の年齢、体重および全身状態などのような要因に応じた担当臨床医の判断にもよるであろう。
【００６３】
患者に投与される組成物は、本願に記載する医薬組成物（例えば、成形可能な組成物、乾式混合組成物、またはプラグ）の形態にあり得る。従って、同乾燥混合およびプラグは使用前に生体液で水和されてもよい。水和された組成物のｐＨは、好ましくは６．５〜７．８、または好ましくは６．８〜７．４である。同組成物は従来の殺菌技術によって殺菌することができ、またはろ過滅菌（  ｓｔｅｒｉｌｅ  ｆｉｌｔｅｒｅｄ）されてもよい。同組成物は、そのまま使用のために梱包することができ、または凍結乾燥させることができる。凍結乾燥させた組成物は投与前に滅菌液体成分と合わせられる。
【００６４】
本発明の組成物は、軟骨修復を必要とする組織および／または部位に直接適用されてもよい。いくつかの実施形態において、体内の治療の部位は、異常な組織を除去し、続いて本発明の組成物を損傷領域に配置するために、外科的に準備され得る。これに代わって、外科的準備は、細胞または骨髄に対してプラグまたはパテ内に移動するための通路を形成するために、隣接する組織領域または血管新生領域（ｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ｒｅｇｉｏｎｓ）に穿刺する、アブレートする、または穿孔することを含む。本発明の組成物は、骨軟骨欠損、または微小骨折を含む損傷、または軟骨欠損を充填するために用いることができる。
【００６５】
組成物の調製
同組成物を調製する際、ＤＢＭおよびヒアルロン酸塩の双方は、他の成分と組み合わせる前に、例えば６００ミクロン未満または８５０ミクロン未満の適当な粒子サイズを提供するように粉砕され得る。
【００６６】
ＤＢＭおよびヒアルロン酸塩は、パテまたはプラグおよび他の調合物のタイプに適当な粒子サイズを得るために、乾式粉砕または湿式粉砕のような既知の粉砕方法を用いて粉砕され得る。本発明の化合物の微粉調製物は当業において既知のプロセスによって調製することができ、例えば、国際特許公報第ＷＯ２００２／０００１９６号を参照されたい。
【００６７】
本発明の成形可能な組成物は、ヒアルロン酸塩および脱灰骨基質（ＤＢＭ）の乾式混合物を液体成分（例えばＰＢＳ）と混合することによって調製することができる。本発明の重要な態様は、ヒアルロン酸塩およびＤＢＭを含むすべての固体粉末成分を、例えばＰＢＳなどの液体成分に添加する前に予め混合することである。
【００６８】
ヒアルロン酸塩および脱灰骨基質（ＤＢＭ）は約１０〜２４時間（例えば約１０時間、約１２時間、約１８時間、約２０時間、または約２４時間）にわたって予め混合されて、ＤＢＭおよびヒアルロン酸塩の均質混合物を含有する固形組成物を形成し得る。同組成物を均質であると称する場合、その成分は典型的には同組成物の全体にわたって均一に分散されており、その結果、該組成物は容易に有効な単位剤形に等しく細分され得る。少なくとも２種のヒアルロン酸塩の混合物が組成物中に用いられる場合、すべてのヒアルロン酸塩はＤＢＭと予め混合されるであろうことが理解され得る。同混合は、均質な粉末混合物が形成するまで（例えばターブラ  Ｔ２Ｆ（Ｔｕｒｂｕｌａ  Ｔ２Ｆ）のような高速振盪器において）機械的に行われ得る。ＰＢＳのような液体成分を同均質な粉末混合物に添加することができる。結果として生じる混合物は、高速振盪器中などで、さらに約１２〜３６時間（例えば約１２時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間）にわたって混合され得る。いくつかの実施形態において、ＤＢＭとヒアルロン酸塩とを混合した直後に液体成分を添加することができる。他の実施形態では、液体成分は目的とする使用の直前に添加することができる。
【００６９】
本発明の別の重要な態様は、異なる分子量の２種のヒアルロン酸塩を用いて、向上され制御された流動特性および生物学的特性を備えたペースト／パテを形成することができることである。本発明の教示を用いることにより、混合過程中の組成物に、または最終組成に直接、物質を添加することによって、多数の医学的に有用な物質を調製することができる。ＤＢＭとヒアルロン酸塩との混合物をインサイチュー薬剤送達のビヒクルとして用いるためには、薬剤をＤＢＭおよびヒアルロン酸塩の粉末と混合し、次いで、その組成物を水和させることができる。これに代わって、薬剤をＰＢＳのような液体成分と混合し、次いで、予め混合した粉末組成物に添加することができる。更に、薬剤をヒアルロン酸塩とコンジュゲートさせ、次いで、組成物に添加することができる。
【００７０】
本発明の方法は、組成物中少なくとも約３．５％のヒアルロン酸塩の濃度を有する使用可能な骨パテまたはペーストの調製を可能にする。より高濃度のヒアルロン酸塩を用いる効果としては、ペーストの粘弾性特性の向上が挙げられる。さらに、本発明の方法によって調製されるパテまたはペーストは、良好な凝集性と、最小限の付着性とを示す。例えば、同パテは、取り扱い工程の全体にわたって、ゴム手袋には付着せず、凝集（ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）を維持し、崩壊したり、「玉」ができたりしない。さらに、良好な展性も観察された。例えば、同パテは様々な形状（例えば球体）に形成することができ、また目的とする形状を保持することができる。いくつかの実施形態において、同パテは、移植の前に、幹細胞または骨髄細胞と予め混合される。いくつかの実施形態において、同組成物は、パテのその部位への操作によって損傷部に埋め込まれる。他の実施形態において、同組成物は、注射器から針を介した注射によって損傷部に埋め込まれる。
【００７１】
本発明の組成物はまたプラグとして調製することもできる。同プラグは、骨または軟骨の修復および置換のために特殊設計された生体吸収性足場（ｂｉｏｒｅｓｏｒｂａｂｌｅ  ｓｃａｆｆｏｌｄ）である。本発明によるＨＡおよびＤＢＭの組み合わせを用いて、この材料は、骨／軟骨の結合および再建を支持する高度に多孔性の足場となるように設計されている。同材料は、流体および栄養を吸収することにより生物学的に親和性（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ｆｒｉｅｎｄｌｙ）であり、骨髄を足場内に浸透（ｗｉｃｋ）させるように特殊設計されている。
【００７２】
プラグは、湿式関節鏡視下膝手術（ｗｅｔ  ａｒｔｈｒｏｓｃｏｐｉｃ  ｋｎｅｅ  ｓｕｒｇｅｒｙ）中における足場の送達のより好都合な手段を提供することができる。脱灰骨基質（ＤＢＭ）およびヒアルロン酸塩を含有する多孔性の骨伝導性構造（ｏｓｔｅｏｃｏｎｄｕｃｔｉｖｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）を備えたプラグは、ＨＡをＤＢＭと混合し、続いてその粉末混合物を水和させることによって得ることができる。例えば、プラグは、ＤＢＭおよびヒアルロン酸塩の混合物から、プラグ性能を最適化し、かつ骨軟骨欠損に適合するように特注設計された型内における凍結乾燥または他の乾燥過程によって調製することができる。プラグはＤＢＭおよびヒアルロン酸塩の乾燥調合物であり、従って、室温において高い安定性を有するであろう。いくつかの実施形態において、プラグは可塑剤を含むことができる。好ましい可塑剤はグリセロールまたはＰＥＧであり得る。同可塑剤は、例えば脱灰骨基質およびヒアルロン酸塩などの粉末混合物と混合することができる。いくつかの実施形態において、プラグは、埋め込み前に幹細胞または骨髄細胞と予め混合される。
【００７３】
本願に開示する発明をより効率的に理解するために、下記に実施例を提供する。当然のことながら、これらの実施例は例示を目的としているに過ぎず、いかなる方法においても本発明を限定すると解釈されるものではない。
【実施例】
【００７４】
実施例１〜３：骨パテまたはペーストの調製
実施例１
材料
ヒアルロン酸塩（ＨＡ）粉末は、ジェンザイムコーポレイション（Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）におけるストレプトコッカス・ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）の発酵から精製した：ＭＷ＝１．２ＭＤａ。物理的形態（微粉末）の脱灰骨基質（ＤＢＭ）はカリフォルニア州サンラファエルのティシュー  バンクス  インターナショナル（ＴＢＩ）から受領した。
【００７５】
方法１：
２．４グラムのＨＡと、２１．４ｍＬの液体成分（ＰＢＳ）とを、高速振盪器（ターブラ  Ｔ２Ｆ（Ｔｕｒｂｕｌａ  Ｔ２Ｆ）、グレン  ミルズ  インコーポレテッド（Ｇｌｅｎ  Ｍｉｌｌｓ  Ｉｎｃ．）、ニュージャージー州クリフトン）中で２４時間にわたって予め混合した。２４時間の混合後、均質なヒドロゲルが調製された。この時点で、１２グラムのＤＢＭを添加した。プロセスの終了時において、組成物はパテ（ＨＡ／ＤＢＭドウ組成物）を形成せず、むしろＤＢＭのすべてを取り込んでいない不均一な混合物を示した。
【００７６】
方法２：
１２グラムのＤＢＭと、２．４グラムのＨＡとを高速振盪器（ターブラ  Ｔ２Ｆ）中で粉末として１２時間にわたって予め混合し、均質な粉末混合物を製造した。この時点で、２１．４ｍＬの液体成分（ＰＢＳ）を添加し、容器をさらに２４時間にわたって高速振盪器に戻した。プロセスの終了時において、良好な凝集性、およびゴム手袋への最小限の付着性を有する均質なパテ（ＨＡ／ＤＢＭドウ組成物）が得られた。
【００７７】
【表１】
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【００７８】
【表２】
2012521270.tif 000003
実施例１の方法１では、第１にＨＡをＰＢＳ中に溶解させ、次いで、ＤＢＭ中に混合してパテを形成することによってパテを調製した。結果は、不均質なパテが形成されたことを示した。ＤＢＭの一部は同パテに取り込むことができなかった。さらに、ＤＢＭの一部はＰＢＳによって濡らされなかった。これは恐らくＨＡとＤＢＭとの間に生じる水の競合的な吸収による。実施例１の方法２では、第１にＨＡおよびＤＢＭの粉末を一様に分散させ、次いでＰＢＳを添加することによって、パテを調製した。これは均一で凝集性の展性に富むパテを生じた。
【００７９】
実施例２
材料
ヒアルロン酸塩（ＨＡ）粉末は、ジェンザイムコーポレイションでのストレプトコッカス・ズーエピデミカスの発酵から精製した：ＭＷ＝１．２  ＭＤａ、物理的形態（微粉末）。ＨＡ粉末はジェンザイムコーポレイションでのストレプトコッカス・ズーエピデミカスの発酵から精製し、次いでガンマ線照射に送って、分子量を５００ｋＤａ（ミラー、アール．およびシールドリン、エイ．米国特許第６，３８３，３４４号）に低減した、物理的形態（微粉末）。脱灰骨基質はカリフォルニア州サンラファエルのティシュー  バンクス  インターナショナル（ＴＢＩ）から受領した。
【００８０】
方法：
１２グラムのＤＢＭと、２グラムの分子量１．２ＭＤａのＨＡと、１グラムの分子量５００ｋＤａのＨＡとを高速振盪器（ターブラ  Ｔ２Ｆ）において粉末として１２時間にわたって予め混合し、均質な粉末混合物を製造した。この時点で、２１．４ｍＬの液体成分ＰＢＳを添加し、容器をさらに２４時間にわたって高速振盪器に戻した。プロセスの終了時において、良好な凝集性、およびゴム手袋への最小限の付着性を有する均質なパテ（ＨＡ／ＤＢＭドウ組成物）が得られた。
【００８１】
【表３】
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【００８２】
【表４】
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実施例２では、良好な凝集性、およびゴム手袋への最小限の付着性を備えたパテは組成物中１４％のＨＡを用いて得られた。さらに、この組成物は、２つのＨＡ分子量、すなわち０．５ＭＤａおよび１．２ＭＤａを用いた。２つの分子量のＨＡ成分の混合は、レオロジー特性の操作を可能にする。
【００８３】
実施例３
材料
ヒアルロン酸塩（ＨＡ）粉末はジェンザイムコーポレイションでのストレプトコッカス・ズーエピデミカスの発酵から精製した：ＭＷ＝１．２ＭＤａ、物理的形態（微粉末）。ＨＡ粉末はジェンザイムコーポレイションでのストレプトコッカス・ズーエピデミカスの発酵から精製し、次いでガンマ線照射に送って、分子量を５００ｋＤａに低減した（ミラー、アール．および  シールドリン、エイ．米国特許第６，３８３，３４４号）、物理的形態（微粉末）。脱灰骨基質はカリフォルニア州サンラファエルのティシュー  バンクス  インターナショナル（ＴＢＩ）から受領した。
【００８４】
方法：
９グラムのＤＢＭと、１．９グラムの分子量１．２ＭＤａのＨＡと、０．８５グラムの分子量５００ｋＤａのＨＡとを高速振盪器（ターブラ  Ｔ２Ｆ）において粉末として１２時間にわたって予め混合し、均質な粉末混合物を製造した。０．９グラム（１．４ｍＬ）の混合粉末を秤量皿に入れて、１．５グラムのＰＢＳを添加した。この添加の後、同粉末とＰＢＳとを均質なパテが得られるまで（３０秒）スパチュラで混合した。
【００８５】
【表５】
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【００８６】
【表６】
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実施例３では、ＨＡ／ＢＭ混合物中２３％のＨＡを用いて、良好な凝集性、およびゴム手袋への最小限の付着性を備えたパテが得られた。粉末を混合した後、ＰＢＳを所望のレオロジー特性を有するペーストを形成するために必要に応じて添加した。さらに、この組成物は、２つのＨＡの分子量、すなわち０．５ＭＤａおよび１．２ＭＤａを用いた。２つの分子量のＨＡ成分の混合は、レオロジー特性の操作を可能にする。
【００８７】
実施例４：許容可能なパテの押出力および押出力の測定
ＨＡ／ＤＢＭの機械的性質を特徴付ける付加的な試験を開発した。インストロン注射器押出力はパテの特性を特徴付けるために用いられる試験である。この試験では、材料を８．６ｍｍの直径および１５ゲージの１・１／２針を備えた３ｍＬ注射器を介して一定速度で押し出すのに必要とされる力を測定する。押出力は、０．５ｍｍ／ｓｅｃの速度で圧縮しながら平坦域に達するまで測定した（図１参照）。５種のＨＡ／ＤＢＭの調合物について測定し、ＤＢＸ（商標）（ペンシルベニア州のシンセス（Ｓｙｎｔｈｅｓ）から市販されているＤＢＭ）と比較した。
【００８８】
【表７】
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【００８９】
【表８】
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実施例５：ＨＡ−ＤＢＭプラグ調合物の吸収
ＨＡ−ＤＢＭパテは、実施例２に記載したように、またはルアーロック注射器コネクターを備えた２つの注射器内においてＨＡ−ＤＢＭ粉末を液体成分ＰＢＳと手動で混合することによって、調製した。均質なパテを所望の寸法を有するテフロン（登録商標）型に充填した。成形したパテを型内において−８０℃で少なくとも４時間にわたって凍結させ、その後、一晩凍結乾燥させた。結果として生じたＨＡ−ＤＢＭ乾燥プラグをテフロン（登録商標）型から取り出した。
【００９０】
骨髄を足場中に浸透させるプラグの能力を最適化するために、異なるプラグ調合物の吸収について次の方法で試験した。
方法：１ｃｃの注射器の両端を切断し、１０５〜１４９μｍのポリプロピレンメッシュを同注射器の一端に貼り付けた。各注射器に１つのＨＡ−ＤＢＭプラグを入れて、プラグの初期の高さを記録した。同注射器を１５ｍＬの円錐管内に配置し、ＰＢＳに溶かした染料をちょうど注射器の底部（取り付けられたフィルタを備えた端部）を被覆するように同管内に配置した。試料を３７℃に置いた。各プラグ中への染料の移動を７日間にわたって記録した。１００％の染料がプラグ中に吸収される時間を用いて、様々な調合物の吸収速度を比較した。
【００９１】
【表９】
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このデータから、より遅い吸収速度は、より高分子量のＨＡおよび／またはより高いＨＡの濃度に起因するようである。
【００９２】
実施例６：ＨＡ−ＤＢＭプラグ調合物の膨潤
ＤＢＭの最高濃度をインビボで維持するためには、最小限の膨潤を有するプラグが望ましい。膨潤を測定するために、異なるプラグ調合物を下記方法で試験した。
【００９３】
方法：１ｃｃの注射器の両端を切断し、５μｍのポリプロピレンメッシュを注射器の一端に貼り付けた。各注射器に１つのＨＡ−ＤＢＭプラグを入れて、プラグの初期の高さを記録した。注射器を１５ｍＬの円錐管内に配置し、同管内および注射器の内部にＰＢＳを入れた。試料を３７℃に置いた。各プラグの高さを７２時間にわたって記録した。プラグの高さの差を用いて膨潤率（ｐｅｒｃｅｎｔ  ｓｗｅｌｌｉｎｇ）を計算した。
【００９４】
【表１０】
2012521270.tif 000011
このデータから、膨潤の増大はより高分子量のＨＡに起因するようである。ＨＡの濃度もＨＡ−ＤＢＭプラグの膨潤に影響を与え得る。
【００９５】
実施例７：ＨＡ／ＤＢＭプラグ調合物の関節鏡視下送達の評価
プラグが取り扱い中に完全性を保持する能力を以下の方法で試験した。
方法：人工関節の膝関節を用いて関節鏡視下送達条件をシミュレートした。標準的な関節鏡装置を用いて、膝にアクセスポートを形成するとともに、関節包内における処置を視覚化した。標準的な流体管理装置を用いて、関節包内における流量を制御し、必要に応じて関節包を拡張させた。骨軟骨欠損を内側顆および大腿顆上に形成した。ＨＡ／ＤＢＭプラグをチューブおよびプランジャー装置に充填した。同装置の先端を、カニューレを介して、関節窩に導入し、損傷部と整合させた。この時点において、一定の流体の流れを開始し、同プランジャーを進めることによってＨＡ／ＤＢＭプラグを骨軟骨欠損部に移植した。移植の間およびその後（５〜６０分）における、流動状態下における完全性および保持特性についてプラグを評価した。
【００９６】
試験結果（表１０）は、６％のＨＡ濃度および２００，０００ダルトンの分子量を有するプラグ調合物は、一定流体流動下において適用部位から移動してしまうことを示した。対照的に、６％以上のＨＡ濃度および少なくとも４５０，０００ダルトンの分子量を有するプラグは、一定流体流動下において適用部位に成功裡に保持された。
【００９７】
【表１１】
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【００９８】
【表１２】
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実施例８：ＨＡ／ＤＢＭプラグ調合物の一軸圧縮試験（Ｕｎｃｏｎｆｉｎｅｄ  Ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｓｔｉｎｇ）
方法：
インストロン機械的試験装置を用いて、乾燥ＨＡ／ＤＢＭプラグの一軸圧縮特性を測定した。各試験の開始時に、プラグに１ｍｍ／分の割合で１Ｎまで予め負荷を加えた。予め負荷を加えた後に、表１１に記載したプラグを１ｍｍ／分の割合で１３％の圧縮歪みが得られるまで圧縮した。応力−歪み曲線から圧縮応力（１０％歪みにおける）および圧縮率（５〜１０％歪み）に対する値を計算した。
【００９９】
【表１３】
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【０１００】
【表１４】
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試料１〜３は適当な圧縮応力を示している。これらの結果は、１２％ＨＡ（４５０ｋＤａ）＋８８％ＤＢＭを含有する３つの個々のプラグの試験に基づく。この調合物は、表１０の項目Ｃに示されるように関節鏡評価に合格した。
【０１０１】
この明細書中に開示した特徴のすべては、任意の組み合わせで組み合わせられ得る。この明細書中で開示した各特徴は、同一の、均等の、または類似した目的を果たす代わりの特徴と置き換えられてもよい。したがって、明示的に別段の定めをした場合を除き、開示した各特徴は、一般的な一連の均等または同様の特徴の例に過ぎない。
【０１０２】
本願に記載したものに加えて、本発明の様々な変更は、前述の記載からの当業者には明白になるであろう。そのような変更もまた、添付の特許請求項の範囲内に存することが意図される。
【国際調査報告】
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