【手続補正書】
【提出日】平成21年3月18日(2009.3.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第1および第2のサブユニットを有するIL12ヘテロダイマーを含むコンジュゲートであって、該第1および第2のサブユニットがそれぞれ、Fcドメインを欠いた抗体分子にコンジュゲートされている、前記コンジュゲート。
【請求項２】
前記ヘテロダイマータンパク質の第1および第2のサブユニットが、ジスルフィド結合を介して共有結合されている、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３】
前記抗体分子が一本鎖Fv(scFv)である、請求項１または２に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
前記抗体分子が単一ドメイン抗体分子(dAb)である、請求項１または２に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
第1のサブユニットが第1の融合タンパク質として前記抗体分子にコンジュゲートされ、第2のサブユニットが第2の融合タンパク質として前記抗体分子にコンジュゲートされている、請求項１〜４のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
前記コンジュゲートが250,000以下の分子量を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項７】
前記コンジュゲートが150,000以下の分子量を有する、請求項６に記載のコンジュゲート。
【請求項８】
前記コンジュゲートが120,000以下の分子量を有する、請求項７に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
前記2つの抗体分子が同一である、請求項１〜８のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
Fcドメインを欠いた2つの抗体分子とコンジュゲートされ、かつそれらの間にコンジュゲートされているヒトIL12ヘテロダイマーを含む請求項１〜９のいずれか１項に記載のコンジュゲートであって、
IL12ヘテロダイマーが第1および第2のサブユニットを有し、
第1のサブユニットが第1の融合タンパク質として、Fcドメインを欠いた抗体分子にコンジュゲートされ、そして
第2のサブユニットが第2の融合タンパク質として、Fcドメインを欠いた抗体分子にコンジュゲートされている、
前記コンジュゲート。
【請求項１１】
第1の融合タンパク質が配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１０に記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
第2の融合タンパク質が配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１０または１１に記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
一方または両方の抗体分子が、新生物増殖および／または血管新生に関連する細胞外マトリックス成分に特異的に結合する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
前記成分がフィブロネクチンED-Bである、請求項１３に記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
前記抗体分子が、配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７のアミノ酸配列を含むVHドメイン、ならびに配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０のアミノ酸配列を含むVLドメインを有するscFv(L19)である、請求項１４に記載のコンジュゲート。
【請求項１６】
前記抗体分子が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するscFv(L19)である、請求項１５に記載のコンジュゲート。
【請求項１７】
前記成分がテネイシンCのアイソフォームである、請求項１３に記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
前記抗体分子が、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を有するscFv(TN11)である、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
請求項５〜１８のいずれか１項に記載のコンジュゲートを製造する方法であって、
第1および第2の融合タンパク質を発現させること；ならびに
第1および第2のサブユニットをコンジュゲートさせて、IL12ヘテロダイマーを形成させること、
を含む前記方法。
【請求項２０】
両方の融合タンパク質をコードする核酸を含む細胞中で、第1および第2の融合タンパク質を発現させることを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記コンジュゲートを医薬組成物に製剤化することをさらに含む、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
Fcドメインを欠いた抗体分子およびIL12 p40サブユニットを含む融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む第1の核酸分子；ならびに
Fcドメインを欠いた抗体分子およびIL12 p35サブユニットを含む融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む第2の核酸分子、
を含む組成物。
【請求項２３】
前記抗体分子がscFvである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記抗体分子がdAbである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記抗体分子が請求項１３〜１８のいずれか１項において定義されるものである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２６】
前記第1および第2の核酸分子が第1および第2のベクターである、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、標的特異的結合メンバーとのコンジュゲーションにより所望のin vivo部位に薬剤を標的化することに関する。本発明は特に、癌および他の腫瘍、関節リウマチ、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性および血管腫の治療などの、病的な血管新生の阻害などの治療用途のためのIL12と抗体分子とのコンジュゲートに関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
これらの結果は、腫瘍ならびに、例えば関節リウマチ、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性および血管腫を治療するための、病的な血管新生の他の部位に対するIL12の改善された標的化のための有意な治療的示唆を有する。本発明の有用性は、scFv(L19)へのIL12の融合物だけでなく、他の特異的結合メンバーと他の薬剤および物質とのコンジュゲートにも拡張される。例えば、コンジュゲートを、腫瘍関連抗原（例えば、テネイシンCのアイソフォーム）に特異的な他の抗体フラグメントなどの、IL12サブユニットにコンジュゲートさせたscFv(L19)以外の特異的結合メンバーを用いて構築し、腫瘍標的化および癌治療に用いることができる。より広範な示唆はまた、診断方法ならびに疾患および他の病的状態の予防および治療などの、in vivoでの物質の標的化を伴う様々な他の用途も含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
前記コンジュゲートを用いて治療可能な状態としては、癌、他の腫瘍および新生物状態が挙げられる。前記コンジュゲートを用いて、血管新生を阻害し、それによって、関節リウマチ、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性、血管腫および癌などの腫瘍を治療することができる。治療は、予防的処置を含んでもよい。前記コンジュゲートを、診断方法、例えば、上記病的状態のいずれかに関連し得る血管新生の標的化および診断において投与することもできる。他の疾患および病的状態を、前記コンジュゲートに含まれるタンパク質治療剤または診断剤の性質、および特異的結合メンバーの特異性に従って、診断および治療することもできる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
本発明のコンジュゲートにおいては、前記タンパク質は通常、組換え生産された第1および第2のポリペプチドサブユニットを含む。このサブユニットはグリコシル化されていてもよく、そのようなグリコシル化の程度および性質を、該サブユニットを発現するような好適な宿主細胞の選択により制御することができる。このタンパク質は、生物活性物質、すなわち、それを投与する対象生物の構造またはその機能に影響する物質を含んでもよい。通常、このタンパク質は、診断剤または治療剤を含む。例えば、それは疾患または病的状態の診断、予防または治療に用いられる物質を含んでもよい。前記タンパク質は、例えば診断のための、マーカーまたは標識化剤を含んでもよい。本発明の内容においては、前記タンパク質は通常、例えば、癌および他の腫瘍、関節リウマチ、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性および血管腫の治療において、病的状態、特に、血管新生を治療または予防するための治療物質を含む。それは、例えば、毒素、酵素、またはサイトカインなどの免疫のメディエーターを含んでもよい。