【手続補正書】
【提出日】平成21年6月25日(2009.6.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゲノム中に少なくとも一種のアセトヒドロキシ酸シンターゼ大サブユニット（ＡＨＡＳＬ）ポリヌクレオチドを少なくとも一コピー有するヒマワリ植物であって、前記ＡＨＡＳＬポリヌクレオチドが、位置１０７又はそれに相当する位置にトレオニンを有する除草剤耐性ＡＨＡＳＬタンパク質をコードし、配列番号２で表されるアミノ酸配列を含み、前記植物が、少なくとも一種の除草剤に対する耐性が、野生型ヒマワリ植物と比較して増加していることを特徴とするヒマワリ植物。
【請求項２】
前記植物の、イミダゾリノン除草剤、スルホニル尿素除草剤、トリアゾロピリミジン除草剤、ピリミジニルオキシベンゾエート除草剤、及びスルホニルアミノ−カルボニルトリアゾリノン除草剤からなる群から選択される少なくとも一種の除草剤に対する耐性が増加している請求項１に記載のヒマワリ植物。
【請求項３】
前記ＡＨＡＳＬポリヌクレオチドが、ＡＨＡＳＬ１ポリヌクレオチド、ＡＨＡＳＬ２ポリヌクレオチド、及びＡＨＡＳＬ３ポリヌクレオチドからなる群から選択される請求項１又は２に記載のヒマワリ植物。
【請求項４】
前記除草剤耐性のＡＨＡＳＬタンパク質が除草剤耐性ＡＨＡＳＬ１タンパク質である
請求項１〜３のいずれか１項に記載のヒマワリ植物。
【請求項５】
前記除草剤耐性のＡＨＡＳＬポリヌクレオチドが配列番号１で表される核酸配列を含む請求項１〜４のいずれか１項に記載のヒマワリ植物。
【請求項６】
前記除草剤耐性のＡＨＡＳＬタンパク質が、
（ａ）アミノ酸位置１８２又はそれに相当する位置に、アラニン、トレオニン、ヒスチジン、ロイシン、アルギニン、イソロイシン、グルタミン、又はセリン；
（ｂ）アミノ酸位置１８８又はそれに相当する位置にイソロイシン；  
（ｃ）アミノ酸位置１９０又はそれに相当する位置に、アスパラギン酸又はバリン；
（ｄ）アミノ酸位置５５９又はそれに相当する位置にロイシン；及び
（ｅ）アミノ酸位置６３８又はそれに相当する位置にアスパラギン、トレオニン、フェニルアラニン、又はバリン；  
からなる群から選択される少なくとも一種のアミノ酸を含む請求項１〜４のいずれか１項に記載のヒマワリ植物。
【請求項７】
前記植物が遺伝子組換え体又は非遺伝子組換え体である請求項１〜６のいずれか１項に記載のヒマワリ植物。
【請求項８】
ヒマワリ植物が、
（ａ）ヒマワリ系統Ｓ４８9７、ヒマワリ系統ＧＭ４０、又はヒマワリ系統ＧＭ１606：又はＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−６７１６のヒマワリ植物、又はＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−７６０６のヒマワリ植物、
（ｂ）ＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−６７１６又はＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−７６０６を有するヒマワリ植物、
（ｃ）（ａ）〜（ｂ）のヒマワリ植物の少なくとも一種の子孫であるか、又は（ａ）〜（ｂ）のヒマワリ植物に由来するヒマワリ植物、
からなる群から選択されるヒマワリ植物である請求項１〜７のいずれか１項に記載のヒマワリ植物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載のヒマワリ植物の種子であって、前記種子が、ゲノム中に前記ＡＨＡＳＬポリヌクレオチドを少なくとも一コピー含むことを特徴とする種子。
【請求項１０】
前記種子が、ＡＨＡＳ阻害性の除草剤で処理されたことを特徴とする請求項９に記載の種子。
【請求項１１】
有効量のイミダゾリノン除草剤、スルホニル尿素除草剤、トリアゾロピリミジン除草剤、ピリミジニルオキシベンゾエート除草剤、スルホニルアミノ−カルボニルトリアゾリノン除草剤、あるいはこれらの混合物を、
雑草及び植物に施用することにより植物の近くの雑草を防除する方法であって、
前記植物が、少なくとも一種の除草剤に対する耐性が野生型植物と比較して増加している植物であり、且つ
前記植物が、
（ａ）ゲノム中に、位置１０７又はそれに相当する位置にトレオニンを有する除草剤耐性ＡＨＡＳＬタンパク質をコードし、配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む、少なくとも一種のＡＨＡＳＬポリヌクレオチドを少なくとも一コピー有するヒマワリ植物、
（ｂ）ヒマワリ系統Ｓ４８９７、ヒマワリ系統ＧＭ４０、ヒマワリ系統ＧＭ１６０６のヒマワリ植物、又はＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−６７１６の植物、又はＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−７６０６の植物；  
（ｃ）ＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−６７１６、又はＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−７６０６を有する植物、
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のヒマワリ植物の少なくとも一種の子孫であるか、又は（ａ）〜（ｂ）のヒマワリ植物に由来するヒマワリ植物であって、位置１０７又はそれに相当する位置にトレオニンを有する除草剤耐性ＡＨＡＳＬタンパク質をコードする少なくとも一種のＡＨＡＳＬポリヌクレオチドを含むヒマワリ植物、及び
（ｅ）植物細胞内で発現を引き起こすプロモーターに作動可能な状態で連結しているポリヌクレオチドをゲノム中に含む形質転換植物であって、前記ポリヌクレオチドが、
（ｉ）配列番号１で表される核酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列をコードする核酸配列；
（ｉｉｉ）配列番号１で表される核酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を持つ核酸配列（ただし、前記核酸配列は、位置１０７あるいは相当する位置にトレオニンを有すタンパク質をコードし、前記タンパク質は除草剤耐性ＡＨＡＳ活性を有している）；及び
（ｉｖ）配列番号２で表されるアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を持つタンパク質をコードする核酸配列（ただし、前記タンパク質は位置１０７又はそれに相当する位置にトレオニンを有し、除草剤耐性のＡＨＡＳ活性を有している）；
からなる群から選択される核酸配列を含む形質転換植物、
からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１２】
前記イミダゾリノン除草剤が、［２−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−］イミダゾリン−２−イル）−ニコチン酸、２−（４−イソプロピル）−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−３−キノリンカルボン酸、［５−エチル−２−（４−イソプロピル−４−メチル−］５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−ニコチン酸、２−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−５−（メトキシメチル）−ニコチン酸、２−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−５−メチルニコチン酸、メチル６−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−ｍ−トルエートとメチル［２−（４−］イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−ｐ−トルエートとの混合物、及びこれらの混合物からなる群から選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記スルホニル尿素除草剤が、クロルスルフロン、メトスルフロンメチル、スルホメツロンメチル、クロリムロンエチル、チフェンスルフロンメチル、トリベヌロンメチル、ベンスルフロンメチル、ニコスルフロン、エタメトスルフロンメチル、リムスルフロン、トリフルスルフロンメチル、トリアスルフロン、プリミスルフロンメチル、シノスルフロン、アミドスルフロン、フルザスルフロン、イマゾスルフロン、ピラゾスルフロンエチル、ハロスルフロン、及びこれらの混合物からなる群から選択されるからなる群から選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）配列番号１又は３で表される核酸配列；
（ｂ）配列番号２又は４で表されるアミノ酸配列をコードする核酸配列：
（ｃ）配列番号１で表される核酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を持つ核酸配列（ただし、前記核酸配列は、位置１０７あるいは相当する位置にトレオニンを有すタンパク質をコードし、前記タンパク質は除草剤耐性アセトヒドロキシ酸シンターゼ（ＡＨＡＳ）活性を有している）；  
（ｄ）配列番号２で表されるアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を持つタンパク質をコードする核酸配列（ただし、前記タンパク質は位置１０７又はそれに相当する位置にトレオニンを有し、除草剤耐性のＡＨＡＳ活性を有している）；及び
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）で表される核酸配列からなる群から選択される少なくとも一種の核酸配列に完全に相補的な核酸配列、
からなる群から選択される核酸配列を含むことを特徴とする単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１５】
核酸配列（ｃ）又は（ｄ）でコードされた前記タンパク質が、更に
（ａ）アミノ酸位置１８２又はそれに相当する位置に、アラニン、トレオニン、ヒスチジン、ロイシン、アルギニン、イソロイシン、グルタミン、又はセリン；  
（ｂ）アミノ酸位置１８８又はそれに相当する位置にイソロイシン；
（ｃ）アミノ酸位置１９０又はそれに相当する位置に、アスパラギン酸又はバリン；
（ｄ）アミノ酸位置５５９又はそれに相当する位置にロイシン；及び
（ｅ）アミノ酸位置６３８又はそれに相当する位置にアスパラギン、トレオニン、フェニルアラニン、又はバリン；
からなる群から選択される少なくともアミノ酸を含む請求項１４に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１６】
作動可能な状態でプロモーターに連結しているポリヌクレオチド分子であることを特徴とする請求項１４又は１５に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項１７】
前記プロモーターが、細菌、真菌細胞、動物細胞、又は植物細胞において遺伝子発現を引き起こすことが可能である請求項１６記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項１８】
請求項１４〜１７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド分子により形質転換されたことを特徴とする非ヒト宿主細胞。
【請求項１９】
前記宿主細胞が、細菌、真菌細胞、動物細胞、及び植物細胞からなる群から選択される請求項１８に記載の宿主細胞。
【請求項２０】
植物細胞内で発現を引き起こすプロモーターに作動可能な状態で連結している核酸配列を含むポリヌクレオチドコンストラクトを、ゲノム中に安定にとり込んだ形質転換植物であって、前記核酸配列が
（ａ）配列番号１又は３で表される核酸配列；
（ｂ）配列番号２又は４で表されるアミノ酸配列をコードする核酸配列：
（ｃ）配列番号１で表される核酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を持つ核酸配列（ただし、前記核酸配列は、位置１０７あるいは相当する位置にトレオニンを有すタンパク質をコードし、前記タンパク質は除草剤耐性ＡＨＡＳ活性を有している）；  
（ｄ）配列番号２で表されるアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を持つタンパク質をコードする核酸配列（ただし、前記タンパク質は位置１０７又はそれに相当する位置にトレオニンを有し、除草剤耐性のＡＨＡＳ活性を有している）；及び
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）で表される核酸配列からなる群から選択される少なくとも一種の核酸配列に完全に相補的な核酸配列、
からなる群から選択されることを特徴とする形質転換植物。
【請求項２１】
前記プロモーターが、構成的なプロモーターと組織選択性プロモーターからなる群から選択される請求項２０に記載の形質転換植物。
【請求項２２】
前記ポリヌクレオチドコンストラクトが、更に作動可能な状態で連結している葉緑体ターゲティング配列を有する請求項２０又は２１に記載の形質転換植物。
【請求項２３】
前記形質転換植物のＡＨＡＳ活性が形質転換されなかった植物と較べて増加している請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の形質転換植物。
【請求項２４】
前記形質転換植物の少なくとも一種の除草剤に対する耐性が、形質転換されなかった植物と較べて増加している請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の形質転換植物。
【請求項２５】
前記除草剤がイミダゾリノン除草剤である請求項２４に記載の形質転換植物。
【請求項２６】
前記イミダゾリノン除草剤が、［２−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−］イミダゾリン−２−イル）−ニコチン酸、２−（４−イソプロピル）−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−３−キノリンカルボン酸、［５−エチル−２−（４−イソプロピル−４−メチル−］５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−ニコチン酸、２−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−５−（メトキシメチル）−ニコチン酸、２−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−５−メチルニコチン酸、及びメチル６−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−ｍ−トルエートとメチル［２−（４−］イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−ｐ−トルエートとの混合物からなる群から選択される請求項２５に記載の形質転換植物。
【請求項２７】
前記除草剤がスルホニル尿素除草剤である請求項２４に記載の形質転換植物。
【請求項２８】
前記スルホニル尿素除草剤が、クロルスルフロン、メトスルフロンメチル、スルホメツロンメチル、クロリムロンエチル、チフェンスルフロンメチル、トリベヌロンメチル、ベンスルフロンメチル、ニコスルフロン、エタメトスルフロンメチル、リムスルフロン、トリフルスルフロンメチル、トリアスルフロン、プリミスルフロンメチル、シノスルフロン、アミドスルフロン、フルザスルフロン、イマゾスルフロン、ピラゾスルフロンエチル、ハロスルフロン、及びそれらの混合物からなる群から選択される請求項２７に記載の形質転換植物。
【請求項２９】
前記形質転換植物が双子葉植物または単子葉植物である請求項２０〜２８のいずれか１項に記載の形質転換植物。
【請求項３０】
前記双子葉植物が、ヒマワリ、ダイズ、ワタ、アブラナ科、シロイヌナズナ、タバコ、ジャガイモ、テンサイ、アルファルファ、ベニバナ、及びピーナッツからなる群から選択され、
前記単子葉植物が、コムギ、コメ、トウモロコシ、オオムギ、ライムギ、カラスムギ、ライコムギ、キビ、及びソルガムからなる群から選択される請求項２９に記載の形質転換植物。
【請求項３１】
請求項２０〜３０のいずれか１項に記載の形質転換植物の形質転換種子であって、前記種子が前記ポリヌクレオチドコンストラクトを含むことを特徴とする形質転換種子。
【請求項３２】
ＡＨＡＳ阻害性の除草剤で処理されたことを特徴とする請求項３１に記載の形質転換種子。
【請求項３３】
植物細胞を植物細胞内で発現を引き起こすプロモーターに作動可能な状態で連結している核酸配列を含むポリヌクレオチドコンストラクトで形質転換し、前記形質転換植物細胞から形質転換植物を再生することで増加された除草剤耐性を有する植物を産生する方法であって、
前記核酸配列が、
（ａ）配列番号１で表される核酸配列；  
（ｂ）配列番号２で表されるアミノ酸配列をコードする核酸配列；
（ｃ）配列番号１で表される核酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を持つ核酸配列（ただし、前記核酸配列は、位置１０７あるいは相当する位置にトレオニンを有すタンパク質をコードし、前記タンパク質は除草剤耐性ＡＨＡＳ活性を有している）；及び  
（ｄ）配列番号２で表されるアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を持つタンパク質をコードする核酸配列（ただし、前記タンパク質は位置１０７又はそれに相当する位置にトレオニンを有し、除草剤耐性のＡＨＡＳ活性を有している）；
からなる群から選択され、
前記形質転換植物の少なくとも一種の除草剤に対する耐性が、形質転換されなかった植物の前記除草剤への耐性と比較して増加していることを特徴とする方法。
【請求項３４】
前記プロモーターが、構成的なプロモーターと組織選択性プロモーターからなる群から選択される請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ポリヌクレオチドコンストラクトが、更に作動可能な状態で連結している葉緑体ターゲティング配列を有する請求項３３又は３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記形質転換植物のＡＨＡＳ活性が形質転換されなかった植物と較べて増加している請求項３３〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記除草剤がイミダゾリノン除草剤である請求項３３〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記イミダゾリノン除草剤が、［２−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−］イミダゾリン−２−イル）−ニコチン酸、２−（４イソプロピル）−４−メチルー５オキソ−２−イミダゾリン−２イル）−３−キノリンカルボン酸、［５−エチル−２−（４−イソプロピル−４−メチル−］５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−ニコチン酸、２−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−５−（メトキシメチル）−ニコチン酸、２−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−５−メチルニコチン酸、及びメチル６−（４−イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−ｍ−トルエートとメチル［２−（４−］イソプロピル−４−メチル−５−オキソ−２−イミダゾリン−２−イル）−ｐ−トルエートとの混合物からなる群から選択される請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記除草剤がスルホニル尿素除草剤である請求項３３〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記スルホニル尿素除草剤が、クロルスルフロン、メトスルフロンメチル、スルホメツロンメチル、クロリムロンエチル、チフェンスルフロンメチル、トリベヌロンメチル、ベンスルフロンメチル、ニコスルフロン、エタメトスルフロンメチル、リムスルフロン、トリフルスルフロンメチル、トリアスルフロン、プリミスルフロンメチル、シノスルフロン、アミドスルフロン、フルザスルフロン、イマゾスルフロン、ピラゾスルフロンエチル、ハロスルフロン、およびこれらの混合物からなる群から選択される請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記形質転換植物が双子葉植物または単子葉植物である請求項３３〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記双子葉植物が、ヒマワリ、ダイズ、ワタ、アブラナ科、シロイヌナズナ、タバコ、ジャガイモ、テンサイ、アルファルファ、ベニバナ、及びピーナッツからなる群から選択され、
前記単子葉植物が、コムギ、コメ、トウモロコシ、オオムギ、ライムギ、カラスムギ、ライコムギ、キビ、及びソルガムからなる群から選択される請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記植物細胞が、前記形質転換段階の前に、少なくとも一種の除草剤に対する耐性を有している請求項３３〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記植物細胞が、前記形質転換段階の前に、除草剤耐性のＡＨＡＳＬタンパク質を含んでいる請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記植物細胞が、遺伝子組換え体又は非遺伝子組換え体である請求項３３〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記植物が、前記形質転換工程の前に、イミダゾリノン耐性植物である請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
（ａ）配列番号２又は４で表されるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号１又は３で表される核酸配列によりコードされたアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号２で表されるアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を持つアミノ酸配列（ただし、前記ポリペプチドは、位置１０７又はそれに相当する位置にトレオニンを有し、除草剤耐性ＡＨＡＳ活性をもつ）；及び
（ｄ）配列番号１で表される核酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を持つ核酸配列によりコードされたアミノ酸配列（前記核酸配列は位置１０７又はそれに相当する位置にトレオニンを有するタンパク質をコードし、前記タンパク質は、除草剤耐性ＡＨＡＳ活性を有する）、
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする単離されたポリペプチド。
【請求項４８】
第一の植物と第二の植物を交配させて植物の除草剤耐性を増加させる方法であって、第一の植物が請求項１〜８及び、２０〜３０のいずれか１項に記載の植物であることを特徴とする方法。
【請求項４９】
更に前記第二の植物の除草剤耐性と較べると増加した除草剤耐性を持つ子孫植物を選択することを含む請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
請求項１〜８及び、２０〜３０のいずれか１項に記載の植物の種子を、播種前及び／又は前発芽の後に、ＡＨＡＳ阻害性の除草剤に接触させることを特徴とする好ましくない植生を防止する方法。
【請求項５１】
前記ＡＨＡＳ阻害性の除草剤が、イミダゾリノン除草剤、スルホニル尿素除草剤、トリアゾロピリミジン除草剤、ピリミジニルオキシベンゾエート除草剤、及びスルホニルアミノ−カルボニルトリアゾリノン除草剤、又はこれらの混合物からなる群から選択される請求項５０に記載の方法。