【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年9月8日(2009.9.8)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  式Ｉ
【化１】
2002517247.tif 000001
［式中、
（Ａ１〜Ａ５）はヒトインスリンのＡ鎖における位置Ａ１〜Ａ５のアミノ酸残基であり、
（Ａ15〜Ａ19）はヒトインスリンのＡ鎖における位置Ａ15〜Ａ19のアミノ酸残基であり、
（Ｂ８〜Ｂ18）はヒトインスリンのＢ鎖における位置Ｂ８〜Ｂ18のアミノ酸残基であり、
（Ｂ20〜Ｂ29）はヒトインスリンのＢ鎖における位置Ｂ20〜Ｂ29のアミノ酸残基であり、
Ｒ８はＴｈｒであり、
Ｒ９はＳｅｒであり、
Ｒ10はＩｌｅであり 、
Ｒ14はＴｙｒであり、
Ｒ21はＡｓｎであり、
Ｒ１はＰｈｅであり、
Ｒ２はＶａｌであり、
Ｒ３はＡｓｎ、ＨｉｓまたはＡｓｐであり、
Ｒ４はＧｌｎであり、
Ｒ30はＴｈｒ、または−ＯＨであり、
Ｚは水素原子、またはＨｉｓであり、
ただし、Ｚが水素原子である場合には、Ｒ３はＨｉｓまたはＡｓｐであり、Ｒ30はＴｈｒであり、ＺがＨｉｓである場合には、Ｒ３はＡｓｎであり、Ｒ30は−ＯＨである］
のインスリン同族体またはその生理学的に許容されうる塩。
【請求項２】  Ｂ鎖は配列：
His Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys（配列番号：３）
を有する、Ｈｉｓ（Ｂ０）−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリンである、請求項１記載のインスリン同族体またはその生理学的に許容されうる塩。
【請求項３】  Ｂ鎖は配列：  
Phe Val His Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr（配列番号：１０）
を有する、Ｈｉｓ（Ｂ３）−ヒトインスリンである、請求項１記載のインスリン同族体またはその生理学的に許容されうる塩。
【請求項４】  Ｂ鎖は配列：  
Phe Val Asp Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr（配列番号：１１）
を有する、Ａｓｐ（Ｂ３）−ヒトインスリンである、請求項１記載のインスリン同族体またはその生理学的に許容されうる塩。
【請求項５】  請求項１〜４のいずれかに記載のインスリン同族体またはその生理学的に許容されうる塩の製造方法において、アミノ酸配列II
Met-X2m-(Arg)p-Z-R1-R2-R3-R4-His-Leu-Cys-(B8-B18)-Cys-(B20-B29)-R30-X1n-Arg-(A1-A5)-Cys-Cys-R8-Ser-R10-Cys-Ser-Leu-R14-(A15-A19)-Cys-R21  （II)
［式中、
Ｘ1nはｎ個のアミノ酸残基（ｎは０〜３４の整数である）を有するペプチド鎖であり、
Ｘ2mはｍ個のアミノ酸残基（ｍは０〜２０の整数である）を有するペプチド鎖であり、
ｐは０、１または２であり、
他の記号は請求項１に述べた意味を有し、請求項１に述べたただし書きの条件はこの場合も適用される］
を有するインスリン同族体の前駆体をコードするＤＮＡ配列を含有する複製可能な発現ビヒクルの構築、宿主細胞における発現および化学的および／または酵素的方法を用いるその前駆体からのインスリン同族体の放出からなる方法。
【請求項６】  宿主細胞は細菌である請求項５記載の方法。
【請求項７】  細菌は大腸菌である請求項６記載の方法。
【請求項８】  宿主細胞は酵母である請求項５記載の方法。
【請求項９】  酵母はSaccharomyces cerevisiaeである請求項８記載の方法。
【請求項１０】  請求項５記載のインスリン同族体の前駆体。
【請求項１１】  請求項１０記載のインスリン同族体の前駆体をコードするＤＮＡ。
【請求項１２】  請求項１１記載のＤＮＡからなる発現ビヒクル。
【請求項１３】  請求項１２記載の発現ビヒクルを用いてトランスフォームされた宿主細胞。
【請求項１４】  請求項１〜４のいずれかに記載の少なくとも１種のインスリン同族体および／またはその少なくとも１種の生理学的に許容されうる塩からなる医薬製剤。
【請求項１５】  インスリン同族体および／またはその生理学的に許容されうる塩を溶解型、無定形型および／または結晶型で含有する請求項１４記載の医薬製剤。
【請求項１６】  さらにデポ補助剤を含有する請求項１４または１５記載の医薬製剤
。
【請求項１７】  デポ補助剤はプロタミン硫酸塩であり、インスリン同族体および／またはその生理学的に許容されうる塩はプロタミン硫酸塩との共晶として存在する請求項１６記載の医薬製剤。
【請求項１８】  付加的に修飾していないヒトインスリンを含有する請求項１４〜１７のいずれかに記載の医薬製剤。
【請求項１９】  付加的にインスリン同族体のGly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-ヒトインスリンを含有する請求項１４〜１８のいずれかに記載の医薬製剤。
【請求項２０】  請求項１４〜１９のいずれかに記載の医薬製剤の溶解型からなるインスリン活性を有する注射用溶液。
【請求項２１】  １mlあたり１μg〜２mgの亜鉛を含有する請求項２０記載の注射用溶液。
【請求項２２】  １mlあたり５μg〜２００μgの亜鉛を含有する請求項２１記載の注射用溶液。
【請求項２３】  請求項１〜４のいずれかに記載のインスリン同族体および／またはその生理学的に許容されうる塩の作用発現遅延型インスリン活性を有する医薬製剤の製造のための使用。
【請求項２４】  インスリンヘキサマーおよびインスリンヘキサマーあたり４〜７個の亜鉛イオンからなるインスリン-亜鉛錯体において、インスリンヘキサマーは式Ｉ
【化２】
2002517247.tif 000002
［式中、
（Ａ１〜Ａ５）はヒトインスリンのＡ鎖における位置Ａ１〜Ａ５のアミノ酸残基であり、
（Ａ15〜Ａ19）はヒトインスリンのＡ鎖における位置Ａ15〜Ａ19のアミノ酸残基であり、
（Ｂ８〜Ｂ18）はヒトインスリンのＢ鎖における位置Ｂ８〜Ｂ18のアミノ酸残基であり、
（Ｂ20〜Ｂ29）はヒトインスリンのＢ鎖における位置Ｂ20〜Ｂ29のアミノ酸残基であり、
Ｒ８はＴｈｒであり、
Ｒ９はＳｅｒであり、
Ｒ10はＩｌｅであり 、
Ｒ14はＴｙｒであり、
Ｒ21はＡｓｎであり、
Ｒ１はＰｈｅであり、
Ｒ２はＶａｌであり、
Ｒ３はＡｓｎ、ＨｉｓまたはＡｓｐであり、
Ｒ４はＧｌｎであり、
Ｒ30はＴｈｒ、または−ＯＨであり、
Ｚは水素原子、またはＨｉｓであり、
ただし、Ｚが水素原子である場合には、Ｒ３はＨｉｓまたはＡｓｐであり、Ｒ30はＴｈｒであり、ＺがＨｉｓである場合には、Ｒ３はＡｓｎであり、Ｒ30は−ＯＨである］
のインスリン同族体６分子から構成されるインスリン−亜鉛錯体。
【請求項２５】  インスリンヘキサマーは請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉのインスリン同族体６分子から構成される請求項２４記載のインスリン-亜鉛錯体。
【請求項２６】  式Ｉのインスリン同族体のＢ鎖は配列：
Phe Val His Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr（配列番号：１０）
を有する請求項２４記載のインスリン−亜鉛錯体。
【請求項２７】  式Ｉのインスリン同族体のＢ鎖は配列：
Phe Val Asp Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr（配列番号：１１）
を有する請求項２４記載のインスリン-亜鉛錯体。
【請求項２８】  請求項２４〜２７のいずれかに記載の少なくとも１種のインスリン-亜鉛錯体からなる医薬製剤。
【請求項２９】  請求項２４〜２７のいずれかに記載の少なくとも１種のインスリン同族体および／またはその生理学的に許容されうる塩ならびに適当量の亜鉛イオンの酸性溶液からなり請求項２４〜２７のいずれかに記載のインスリン−亜鉛錯体の形成を可能にする医薬製剤。
【請求項３０】  請求項１〜４のいずれかに記載のインスリン同族体および／またはその生理学的に許容されうる塩ならびに適当量の亜鉛イオンの酸性溶液からなり請求項２５記載のインスリン−亜鉛錯体の形成を可能にする請求項２９記載の医薬製剤。
【請求項３１】  請求項２６または２７記載の少なくとも１種のインスリン同族体および／またはその生理学的に許容されうる塩ならびに適当量の亜鉛イオンの酸性溶液からなり、請求項２６または２７記載のインスリン-亜鉛錯体の形成を可能にする請求項２９記載の医薬製剤。
【請求項３２】  インスリン−亜鉛錯体を溶解型、無定形型および／または結晶型で含有する請求項２８〜３１のいずれかに記載の医薬製剤。
【請求項３３】  請求項３２記載の医薬製剤の溶解型からなるインスリン活性を有する注射用溶液。
【請求項３４】  １mlあたり１μg〜２mgの亜鉛を含有する請求項３３記載の注射用溶液。
【請求項３５】  １mlあたり５μg〜２００μgの亜鉛を含有する請求項３４記載の注射用溶液。
【請求項３６】  請求項２４〜２７のいずれかに記載のインスリン−亜鉛錯体 の作用発現遅延型インスリン活性を有する医薬製剤の製造のための使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
21．式Ｉのインスリン同族体またはその生理学的に許容されうる塩は、Ｂ鎖が以下の配列である場合に傑出している。
His Ala Ala Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe   Tyr Thr Pro Lys Thr （配列番号：６）、たとえ
ば、His(Ｂ−２）、Ala(Ｂ−１）、Ala(Ｂ０)−ヒトインスリン。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
大腸菌における発現時には、上述の融合タンパク質（配列番号７〜９）は一般に不溶性の封入体を形成し、これは、細胞破壊後に遠心分離によって単離され、カロオトロピックな添加物（たとえば８Ｍ尿素または６Ｍグアニジニウムクロリド）を用いて再び溶解できる。溶解した融合タンパク質はサルファイト分解に付し、これによりＳＨ基をＳ−スルフォネート基に変換することができる（たとえば、R. C. Marshall & A. S. Iglis, "Practical Protein Chemistry - A Handbook", A. Darbre編、 1986, 49-53頁）。融合タンパク質の溶解度はこれによって改善され、たとえば陰イオン交換またはゲル浸透クロマトグラフィーによる精製が容易になる。誘導体化融合タンパク質をネイティブな空間的構造および正しく形成されたジスルフィド橋（フォールディング）を有するプレプロインスリンに変換するには、希釈された水溶液中限られた量のＳＨ試薬たとえばメルカプトエタノール、システインまたはグルタチオンの添加、およびついで空気酸化によって行われる。別法として、溶解された、非誘導体化融合タンパク質はまた、類似の条件下に直接フォールディングすることも可能である（EP-A-0 600 372号；EP-A-0 668 292号）。プレプロインスリンはついで限定されたタンパク質分解切断によって生物学的に活性なインスリンに変換される。この目的には、式IIにおいてＭｅｔ−Ｘ2m−(Ａｒｇ)pによって指示されるプレ配列を除去し、Ｘ1n−Ａｒｇによって指示されるペプチド鎖を切断し、したがってＢ鎖およびＡ鎖を分離するトリプシンの使用が可能である。一般に、配列Ｘ1はＡｒｇ、 Ａｒｇ2またはそれが存在しないで（ｎ＝０）で開始され、したがって切断後には、インスリン誘導体は、Ｂ鎖のＣ末端においてArgまたはArg2により延長されて存在する。これらのアミノ酸はカルボキシペプチダーゼＢを用いて除去することができる。トリプシン切断もリジン（Ｂ29）における切断がさらに起こるように、トリプシン濃度を上げるかまたは反応時間を延長することにより実施することができる。この場合、des(Ｂ30)インスリン誘導体が生じる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
本発明のインスリン−亜鉛錯体はまた、好ましくは式Ｉのインスリン同族体のＢ鎖が以下の配列、
Phe Val His Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr（配列番号：１０）、たとえばHis(Ｂ３)−ヒトインスリン、または
式Ｉのインスリン同族体のＢ鎖が以下の配列、
Phe Val Asp Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr（配列番号：１１）、たとえばAsp(Ｂ３)−ヒトインスリン
を有するものである。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４６】
実施例４：Ｈｉｓ(Ｂ−２）、Ａｌａ(Ｂ−１）、Ａｌａ(Ｂ０）−プレプロインスリン変異体をコードするプラスミドｐＩＮＴ ３４４ｄの構築
実施例ｂに記載された残基プラスミドフラグメントのＤＮＡを次の型：
His Ala Ala B1  B2  B3  B4  B5  B6  B7  B8  B9  B10 B11
5′-CG CGC CAC GCT GCT TTT GTT AAC CAG CAC CTG TGC GGC TCC CAC CTA -3′
3′-     G GTG CGA CGA AAA CAA TTG GTC GTG GAC ACG CCG AGG GTG     -5′
1/2 BssH2                Hpa1                           1/2 Dra3
の合成ＤＮＡフラグメントとＴ４−ＤＮＡリガーゼ反応で反応させる。プラスミドｐＩＮＴ ３４４ｄが生成し、これは出発のベクターと比較してさらにＨｐａ １切断部位を有する。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
実施例７：非経口投与のためのインスリン同族体の製剤化
このパレーションは１mlあたり４０または１００ ＩＵのインスリン（１Ｕは約６.２nmolに相当）、２０mgの８５％グリセロール、２.７mgのｍ−クレゾールおよび必要に応じてＺｎ++（塩化亜鉛として）をｐＨ４の滅菌水溶液中に含有する。