(57)【要約】セイタカナミキソウから分離された、単離された化合物および単離された化合物の組み合わせは、癌細胞における活性酸素種の生成、ＤＮＡ損傷の誘導およびアポトーシスの誘導に有効である。その化合物および組み合わせは、固形癌、例えば上皮癌の処置のための哺乳類、例えばヒトへの投与のための医薬組成物として調製することができる。そのような上皮癌には乳癌および卵巣癌が含まれる。【選択図】図１
2012521424.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも約２０ｇのセイタカナミキソウ（Scutellaria barbata D. Don）から抽出された可溶性物質を含む投薬単位体。
【請求項２】
さらに少なくとも１種類の賦形剤を含む、請求項１に記載の投薬単位体。
【請求項３】
少なくとも１種類の矯味剤、少なくとも１種類の甘味料、または両方を含む、請求項２に記載の投薬単位体。
【請求項４】
経口投与に適した形である、請求項１に記載の投薬単位体。
【請求項５】
さらに水を含む、請求項４に記載の投薬単位体。
【請求項６】
約２０ｇ〜約２００ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を含む、請求項１に記載の投薬単位体。
【請求項７】
約２０ｇ〜約４０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を含む、請求項６に記載の投薬単位体。
【請求項８】
セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質が少なくとも約０．２７ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む、請求項１に記載の投薬単位体。
【請求項９】
セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質が約０．３５ｇ〜約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む、請求項１に記載の投薬単位体。
【請求項１０】
セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質が約０．３５ｇ〜約０．８ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む、請求項１に記載の投薬単位体。
【請求項１１】
癌患者に１日あたり少なくとも約２０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を投与することを含む、癌を処置する方法。
【請求項１２】
前記の癌が乳癌および１種類以上の婦人科の癌から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記の癌が乳癌である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記の乳癌が進行した乳癌、転移性乳癌、処置に抵抗性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、および／またはトリプルネガティブ乳癌である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
患者に１日あたり約２０ｇ〜１日あたり約２００ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を投与することを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
患者に１日あたり約２０ｇ〜１日あたり約４０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を投与することを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
患者が安定した疾患、部分的な寛解、または完全な寛解を達成する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質が少なくとも約０．２７ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質が約０．３５ｇ〜約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
そのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質が約０．３５ｇ〜約０．８ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
[0001]  この出願は、２００９年９月３日に出願された米国特許出願第１２／５５３，８７８号からの、ならびに２００９年３月２４日に出願された米国仮出願第６１／１６２，９８８号、および２００９年４月２４日に出願された米国仮出願第６１／１７２，６３９号からの優先権の利益を主張し、そのそれぞれを本明細書にそのまま援用する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]  乳癌に関する早期発見および合併療法における進歩は概して患者の生存に有望な影響を有していたが、進行した転移性乳癌を発現している患者は一般により有望ではない予後に直面するようである。一般に用いられるホルモン性および化学療法薬剤は腫瘍の一時的な退縮をもたらす可能性があり、癌に関連する症状を和らげる可能性もある。しかし、これらの処置はしばしば毒性および耐え難い副作用を伴い、最終的には進行期の乳癌およびその症状の制御において効果が無くなる。乳癌の生存の向上は、より新しい標的化された生物学的薬剤を用いてさえもあまり大きくない。さらに、大部分の転移癌において、最終的には利用可能な一般に行なわれる処置に対する耐性が発現し、または患者が過度の副作用を経験する。
【０００３】
[0003]  乳癌の処置において用いられる全ての化学療法剤の６０％より多くが天然の物質に由来する（Newman 2003）ことに気付くのは興味深い。かなり最近の例は、セイヨウイチイ（Ｐａｃｉｆｉｃ  ｙｅｗ）の樹木、タイヘイヨウイチイ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）からのタキサン類の開発である。世界中で、世界人口のおおよそ８０％が今でも療法の主な源として植物性の薬に頼っていると見積もられている。西洋では、植物性の薬は癌であると診断された患者の間で一般的な形の補足的な、および代替の薬であると考えられている。しかし、処置に関して植物性の薬のみに頼った女性における治癒および臨床的有効性の逸話的な症例報告にもかかわらず、乳癌の処置に関する植物性の薬剤の安全性および有効性をしっかりと評価するための臨床試験はほとんど行なわれてこなかった。以前に、半枝蓮（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ）の水性抽出物はインビトロで乳癌細胞株の増殖阻害をもたらすことができることが示されている（“中国の薬用草本の乳癌細胞に対するインビトロでの抗増殖活性”Anticancer Res., 22(6C):3843-52 (2002)）。半枝蓮の濃縮された水性抽出物であるＢＺＬ１０１が５種類の乳癌細胞株（ＳＫ−ＢＲ−３、ＭＣＦ７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＢＴ−４７４、およびＭＣＮｅｕＡ）に対する抗増殖活性に関して評価された。これらの細胞株は、ある範囲のエストロゲンおよびＨＥＲ２受容体を発現する乳癌の重要な予後徴候表現型（ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ）を代表している。１：１０希釈（１５μｇ／ｍｌ）で試験したＢＺＬ１０１は、その５種類の細胞株の内の４種類に対して５０％を超える増殖阻害を示した（Campbell, 2002）。ＢＺＬ１０１はあるグループの肺、前立腺および膵臓癌細胞株に対して５０％を超える増殖阻害を示した。同じ用量でのＢＺＬ１０１は、正常なヒトの乳房の細胞（ＨｕＭＥＣ）に対して２５％を超える増殖阻害を引き起こさず、これは癌細胞への選択性を示している（表１）。さらに、ＢＺＬ１０１は正常なヒトのリンパ球に対して穏やかな分裂促進作用を有していた。細胞周期の分析において、ＢＺＬ１０１はＳ期バーストおよびＧ１停止を引き起こした。また、ＢＺＬ１０１はミトコンドリア膜電位を弱め、カスパーゼ非依存性高分子グレード（ｈｉｇｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｇｒａｄｅ）（ＨＭＧ）アポトーシスを引き起こした。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Newman 2003
【非特許文献２】Anticancer Res., 22(6C):3843-52 (2002)
【非特許文献３】Campbell, 2002
【発明の概要】
【０００５】
[0004]  転移癌を有する患者の処置のための療法に関する必要性が存在する。転移癌を有する患者にとって低減された、より具体的には最小限の毒性を有する療法に関する必要性も存在する。特に、転移性の固形腫瘍、例えば上皮性腫瘍、より詳細には乳癌および卵巣癌の処置のための比較的低い毒性を有する新規の療法に関する必要性が存在する。
【０００６】
[0005]  本発明の態様により、これらの、および他の必要性が満たされる。
発明の概要
[0006]  発明者は、セイタカナミキソウ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ  Ｄ．  Ｄｏｎ）の抽出物は以前に報告されたよりもはるかに高い用量でも十分に許容されることを見出した。セイタカナミキソウの抽出物は、少なくとも約２０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の投与量において十分に許容される。さらに、発明者は、セイタカナミキソウの抽出物は患者への投与に適した投薬単位で都合よく提供することができることを見出した。従って、一部の態様において、少なくとも約２０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を含む投薬単位体が提供される。一部の態様において、その単位用量はさらに少なくとも１種類の賦形剤、特に少なくとも１種類の水以外の賦形剤、および特に少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方を含む。特定の態様において、その投薬単位体は経口投与に適した形、例えば水性（水に基づく）組成物または水での再構成に適した乾燥粉末の形である。発明者は、その投薬単位体は癌患者、特に乳癌または婦人科の癌、例えば子宮癌を患う癌患者への投与に適していることを見出した。
【０００７】
[0007]  発明者は、１日あたり少なくとも約２０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の用量は十分に許容され、癌、特に乳癌の処置に有効であることを決定した。従って、本発明は、癌患者に１日あたり少なくとも約２０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を投与することを含む、癌を処置する方法を提供する。一部の態様において、その癌は乳癌および１種類以上の婦人科の癌から選択される。一部の態様において、その方法はその患者に１日あたり約２０ｇ〜１日あたり約２００ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を投与することを含む。
【０００８】
[0008]  発明者は、高い用量のセイタカナミキソウの抽出物を含む医薬組成物への賦形剤、例えば矯味剤の添加はその抽出物の苦味を弱めることも決定した。発明者は、セイタカナミキソウの高い用量（例えば、投与あたり、または１日あたり少なくとも約２０ｇの可溶性物質）は十分に許容されるが比較的味が悪いことを見出したため、発明者は、その組成物を例えば癌の処置のためのセイタカナミキソウの抽出物の高い投与量の消費のために口に合うものにするために、矯味剤または他の薬剤の添加が望ましいことを見出した。従って、本明細書で記述される態様は、少なくとも１種類の水以外の賦形剤（例えば少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方）、ならびに発明者がセイタカナミキソウ抽出物の抗癌活性に必要であるものとして同定した抗癌有効物質であるルテオリン（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ）、アピゲニン（Ａｐｉｇｅｎｉｎ）、スクテラレイン（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｅｉｎ）、およびスクテラリン（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉｎ）からなるグループの１種類以上のメンバーを含む（例えば癌、特に乳癌または婦人科の癌の処置のための）医薬組成物を提供する。発明者は、高分子量化合物、例えば高分子量（例えば１，０００〜１０，０００グラム／モルより大きい分子量）を有する化合物は何らかの実質的価値のある活性を与えること無くその組成物のかさを増し、胃の不調、ガス、腹部膨満および／または下痢を引き起こす傾向があることも見出した。従って、一部の態様において、その医薬組成物は高分子量化合物が激減しており、一部の態様において、高分子量化合物を実質的に含まない。一部の態様において、その組成物は、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含む、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。（全ての“部”は重量により決定される。）一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む。一部の態様において、その組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶性物質を含み、その可溶性物質の約１％〜約９９％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約１．７％〜約３．２％はルテオリンであり、約２％〜約３．４％はアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％はスクテラレインであり、約４９％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。一部の態様において、その組成物は、進行した乳癌、転移性乳癌、処置に抵抗性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、および／またはトリプルネガティブ乳癌の１種類以上から選択される乳癌を処置するために用いられる。
【０００９】
[0009]  本明細書で記述される一部の態様は、癌、特に１種類以上の乳癌および／または婦人科の癌を処置する方法であって、その患者に有効量の少なくとも１種類の水以外の賦形剤（例えば少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方）ならびにルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの１種類以上のメンバーを含む組成物を投与することを含む方法を提供する。一部の態様において、その組成物は、進行した乳癌、転移性乳癌、処置に抵抗性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、および／またはトリプルネガティブ乳癌の１種類以上から選択される乳癌を処置するために用いられる。一部の態様において、その組成物の有効量は少なくとも０．２５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その組成物の有効量は少なくとも０．２７ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その組成物は少なくとも０．３５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その組成物の有効量は約０．３５ｇ〜２ｇ、約０．３５ｇ〜１．１ｇ、約０．３５ｇ〜１ｇ、約０．３５ｇ〜約０．８ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。
【００１０】
[0010]  発明者は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは癌、特に乳癌の処置として有効であることを見出した。従って、一部の態様において、本発明はルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む投薬単位体を提供する。一部の態様において、その投薬単位体は少なくとも約０．２５ｇ、少なくとも約０．２７ｇ、または少なくとも約０．３５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その投薬単位体はさらに少なくとも１種類の水以外の賦形剤、例えば矯味剤、甘味料または両方を含む。一部の態様において、その投薬単位体はセイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物を実質的に含まない。一部の態様において、その組成物は癌、例えば乳癌および／または１種類以上の婦人科の癌を処置する方法において用いられる。一部の態様において、その癌は乳癌、例えば進行した乳癌、転移性乳癌、処置に抵抗性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、および／またはトリプルネガティブ乳癌である。
【００１１】
[0011]  発明者はさらに、セイタカナミキソウの空気中に生長した（ａｅｒｉａｌ）部分を出発物質として用いて医薬組成物を作るためのプロセスを発見した。そのようなプロセスは、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンを含む組成物を作るために特に有用である。従って、一部の態様において、発明者は、以下のことを含む、医薬組成物を作るプロセスを記述した：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量化合物を分離して精製された抽出物を形成し；（ｄ）場合によりその精製された抽出物からその水の一部、実質的に全部、もしくは全部を蒸発させ、またはその精製された抽出物に追加の水を添加し；そして（ｅ）その精製された抽出物を少なくとも１種類の医薬的に許容できる水以外の賦形剤と組み合わせてその医薬組成物を形成する。一部の態様において、その精製された抽出物はアピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、およびスクテラリンを含む。一部の態様において、少なくとも１種類の医薬的に許容できる水以外の賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００１２】
[0012]  発明者は、セイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物の少なくとも一部を除去することはその医薬組成物の臨床的特徴を向上させることを見出した。セイタカナミキソウから抽出された大量の可溶性物質は不活性であるため、あらかじめ決められたカットオフ値より上の分子量を有する分子を除去することにより可溶性物質の量を低減させることは、セイタカナミキソウの抽出物に由来する医薬組成物のかさを大きく低減させるであろう。加えて、セイタカナミキソウから水の中に抽出された可溶性物質の大部分は可溶性の繊維であり、それは腸で吸収されず、胃腸の不調、腹部膨満、ガスおよび下痢を促進する傾向がある。従って、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の重荷を減らすことによりその可溶性の繊維の少なくとも一部を除去し、一方でルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの混合物をその組成物中に保持することは、結果として向上した抗癌薬をもたらす。従って、一部の態様において、本発明は１部のルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせならびに約５０部未満のあらかじめ決められたカットオフ値より大きい分子量を有する高分子量化合物を含む医薬組成物を提供し、ここでそのあらかじめ決められたカットオフ値は１，０００グラム／モルから約２０，０００グラム／モルまでである。
【００１３】
[0013]  発明者は、以下のことを含む医薬組成物を作るプロセスも発見した：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量化合物を分離して精製された抽出物を形成し；（ｄ）場合によりその精製された抽出物からその水の一部、実質的に全部、もしくは全部を蒸発させ、またはその精製された抽出物に追加の水を添加し；そして（ｅ）その精製された抽出物を医薬的に許容できる賦形剤と組み合わせてその医薬組成物を形成する。１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン。
【００１４】
[0014]  一部の態様は、以下のことを含む、セイタカナミキソウの精製された抽出物を作るプロセスも提供する：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；そして（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量化合物を分離してセイタカナミキソウの精製された抽出物を形成する。
【００１５】
[0015]  一部の態様はさらに、医薬組成物を作るプロセスであって、少なくとも１種類の医薬的に許容できる水以外の賦形剤をルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの１種類以上のメンバーと組み合わせてその医薬組成物を形成することを含むプロセスを提供する。一部の態様において、少なくとも１種類の水以外の医薬的賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００１６】
[0016]  一部の態様は、以下のことを含む、医薬的投薬単位体を作るプロセスを提供する：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；そして（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量化合物を分離して精製された抽出物を形成し；そして（ｄ）その精製された抽出物を少なくとも１種類の水以外の賦形剤と組み合わせてその医薬的投薬単位体を形成する。一部の態様において、少なくとも１種類の水以外の賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００１７】
[0017]  本発明の他の用途および利点は、本明細書の図面および特許請求の範囲を含む記述を考察した後に当業者に明らかになるであろう。
援用
[0018]  この明細書で言及される全ての刊行物および特許出願を、それぞれの個別の刊行物または特許出願を援用することを具体的に、かつ個別に示した場合と同程度まで本明細書に援用する。
【００１８】
[0019]  本発明の新規の特徴を、添付される特許請求の範囲において詳細に述べる。本発明の原則が利用されている説明的な態様を述べる下記の詳細な記述およびそれに付随する図面への参照により、本発明の特徴および利点のよりよい理解が得られるであろう：
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】[0020]  図１は、ＤＣＦＤＡ蛍光により測定された、セイタカナミキソウから抽出された様々な有効化合物の、活性酸素種（ＲＯＳ)の生成への作用を示す。
【図２】[0021]  図２は、ジヒドロエチジウム（ＨＥ）蛍光により測定された、セイタカナミキソウから抽出された様々な有効化合物の、活性酸素種（ＲＯＳ)の生成への作用を示す。
【図３】[0022]  図３は、ＭｉｔｏＳＯＸ蛍光により測定された、セイタカナミキソウから抽出された様々な有効化合物の、ミトコンドリアの活性酸素種（ＲＯＳ)の生成への作用を示す。
【図４】[0023]  図４は、セイタカナミキソウから抽出された様々な有効化合物の、処理された細胞におけるコメット（ｃｏｍｅｔｓ）の生成への作用を示す。
【図５】[0024]  図５は、セイタカナミキソウから抽出された様々な有効化合物の、処理された細胞におけるＡＴＰ生成への作用を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
[0025]  この発明は、半枝蓮の抽出物から分離された有効薬剤を含む医薬組成物および単位投薬（ｕｎｉｔ  ｄｏｓａｇｅｓ）に、ならびに癌の処置のためにそれらの抽出物を用いる方法に関する。特定の態様において、それからその有効化合物が分離される草本は、シソ科のセイタカナミキソウの種から選択される。
【００２１】
[0026]  加えて、この発明は、セイタカナミキソウの抽出物を用いる方法であって、それによりセイタカナミキソウの抽出物を今までに特性付けられていなかった投与量で患者に投与する方法に関する。
【００２２】
[0027]  本発明はさらに、セイタカナミキソウの抽出物、セイタカナミキソウの抽出物、特にセイタカナミキソウの水抽出物に由来する有効薬剤および有効薬剤の組み合わせの投与に関する。
【００２３】
[0028]  発明者は、セイタカナミキソウの抽出物は以前に報告されていた用量よりもはるかに高い用量でも十分に許容され、例えば少なくとも約２０ｇ／日のセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質をあらゆる用量制限毒性を誘導すること無く患者に投与することができることを見出した。発明者は、２０ｇ／日、３０ｇ／日、および４０ｇ／日のセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を最大耐容量に達すること無く乳癌患者に投与した。そのようにして、発明者は少なくとも約２０ｇ／日、特に約２０ｇ／日から約２００ｇ／日までの用量が本発明の範囲内であることを確認した。さらに、発明者は、セイタカナミキソウの抽出物は患者への投与に適した投薬単位体で都合よく提供することができることを見出した。従って、一部の態様において、少なくとも約２０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を含む投薬単位体が提供される。一部の態様において、その単位用量はさらに少なくとも１種類の賦形剤、特に少なくとも１種類の水以外の賦形剤、および特に少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方を含む。特定の態様において、その投薬単位体は経口投与に適した形、例えば水性（水に基づく）組成物または水での再構成に適した乾燥粉末の形である。発明者は、その投薬単位体は癌患者、特に乳癌または婦人科の癌、例えば子宮癌を患う癌患者への投与に適していることを見出した。特定の態様において、その投薬単位体は約２０ｇ〜約２００ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を含む。一部の態様において、その投薬単位体は約２０ｇ〜１００ｇ、約２０ｇ〜６０ｇ、約２０ｇ〜５０ｇ、約２０ｇ〜４０ｇ、約２０ｇ、約３０ｇ、約４０ｇ、約５０ｇ、約６０ｇ、または約４０ｇ〜１００ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を含む。発明者はセイタカナミキソウの抗癌有効化合物（すなわちルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリン）およびセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質中のそれらの濃度も同定しており、本発明は少なくとも約０．２５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせの投薬単位体も提供する。一部の態様は、少なくとも約０．２７ｇ、少なくとも約０．３５ｇ、約０．３５ｇ〜４ｇ、約０．３５ｇ〜２ｇ、約０．３５ｇ〜１．１ｇ、約０．３５ｇ〜約１ｇ、または約０．３５ｇ〜約０．８ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせの投薬単位体を提供する。
【００２４】
[0029]  発明者は、１日あたり少なくとも約２０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の用量は十分に許容され、かつ癌の処置に有効であることを決定しており、本発明はさらに、癌患者に１日あたり少なくとも約２０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を投与することを含む、癌を処置する方法を提供する。一部の態様において、その癌は乳癌および１種類以上の婦人科の癌から選択される。一部の態様において、前記の癌は乳癌である。一部の態様において、その乳癌は進行した乳癌、転移性乳癌、処置に抵抗性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、および／またはトリプルネガティブ乳癌である。一部の態様において、その方法はその患者に１日あたり約２０ｇ〜１日あたり約２００ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を投与することを含む。一部の態様において、その患者は１日あたり約２０ｇ〜１日あたり１００ｇ、１日あたり約２０ｇ〜１日あたり６０ｇ、１日あたり約２０ｇ〜１日あたり５０ｇ、１日あたり約２０ｇ〜１日あたり４０ｇ、または１日あたり約４０ｇ〜１日あたり１００ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を与えられる。一部の態様において、そのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は少なくとも約０．２５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、そのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は少なくとも約０．２７ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、そのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は少なくとも約０．３５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、そのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は約０．３５ｇ〜４ｇ、約０．３５ｇ〜２ｇ、約０．３５ｇ〜１．１ｇ、約０．３５ｇ〜１ｇ、約０．３５ｇ〜０．８ｇ、約０．３５ｇ〜０．７５ｇ、または約０．７ｇ〜２ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。
【００２５】
[0030]  発明者は、高い用量のセイタカナミキソウの抽出物を含む医薬組成物への賦形剤、例えば矯味剤の添加はその抽出物の苦味を弱めることも決定した。発明者は、セイタカナミキソウの高い用量（例えば、投与あたり、または１日あたり少なくとも約１ｇの可溶性物質）は十分に許容されるが比較的味が悪いことを見出したため、発明者は、その組成物を例えば癌の処置のためのセイタカナミキソウ抽出物の高い投与量の消費のために口に合うものにするために、矯味剤または他の薬剤の添加が望ましいことを見出した。従って、本明細書で記述される態様は、少なくとも１種類の水以外の賦形剤（例えば少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方）、ならびに発明者がセイタカナミキソウの抽出物の抗癌活性に必要であるものとして同定した抗癌有効物質であるルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの１種類以上のメンバーを含む（例えば癌、特に乳癌または婦人科の癌の処置のための）医薬組成物を提供する。発明者は、高分子量化合物、例えば１０００ｇ／ｍｏｌより大きい分子量を有する化合物（他のカットオフ値、例えば１，０００〜１０，０００ｇ／ｍｏｌを用いてもよいが）は、何らかの実質的価値のある活性を与えること無くその組成物のかさを増し、胃の不調、腹部膨満および／または下痢を引き起こす傾向があることも見出した。従って、一部の態様において、その医薬組成物は高分子量化合物が激減しており、一部の態様において、高分子量化合物を実質的に含まない。一部の態様において、その組成物は、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含む、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。（全ての“部”は重量により決定される。）一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリンを含む。一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリンを含む。一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む。一部の態様において、その組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶性物質を含み、その可溶性物質の約１％〜約９９％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約１．７％〜約３．２％はルテオリンであり、約２％〜約３．４％はアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％はスクテラレインであり、約４９％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。一部の態様において、その組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶性物質を含み、その可溶性物質の約１％〜約３％は有効可溶性物質であり、その有効可溶���物質の約１．７％〜約３．２％はルテオリンであり、約２％〜約３．４％はアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％はスクテラレインであり、約４９％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。一部の態様において、その組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶性物質を含み、その可溶性物質の約１．５％〜約２．１％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約１．７％〜約３．２％はルテオリンであり、約２％〜約３．４％はアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％はスクテラレインであり、約４９％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。一部の態様において、その組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶性物質を含み、その可溶性物質の約１％〜約９９％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約１．９％〜約３％はルテオリンであり、約２．２％〜約３．２％はアピゲニンであり、約９．２％〜約１４．５％はスクテラレインであり、約６０％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。一部の態様において、その組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶性物質を含み、その可溶性物質の約１％〜約３％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約１．９％〜約３％はルテオリンであり、約２．２％〜約３．２％はアピゲニンであり、約９．２％〜約１４．５％はスクテラレインであり、約６０％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。一部の態様において、その組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶性物質を含み、その可溶性物質の約１．５％〜約２．１％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約１．９％〜約３％はルテオリンであり、約２．２％〜約３．２％はアピゲニンであり、約９．２％〜約１４．５％はスクテラレインであり、約６０％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。一部の態様において、その組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶性物質を含み、その可溶性物質の約１％〜約５０％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約２．２％〜約２．７％はルテオリンであり、約２．４％〜約２．９％はアピゲニンであり、約１０．５％〜約１３．２％はスクテラレインであり、約７２％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。一部の態様において、その組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶性物質を含み、その可溶性物質の約１％〜約３％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約２．２％〜約２．７％はルテオリンであり、約２．４％〜約２．９％はアピゲニンであり、約１０．５％〜約１３．２％はスクテラレインであり、約７２％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。一部の態様において、その組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶性物質を含み、その可溶性物質の約１．５％〜約２．１％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約２．２％〜約２．７％はルテオリンであり、約２．４％〜約２．９％はアピゲニンであり、約１０．５％〜約１３．２％はスクテラレインであり、約７２％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。一部の態様において、その組成物は、進行した乳癌、転移性乳癌、処置に抵抗性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、および／またはトリプルネガティブ乳癌の１種類以上から選���される乳癌を処置するために用いられる。
【００２６】
[0031]  本明細書で記述されている一部の態様は、癌、特に１種類以上の乳癌および／または婦人科の癌を処置する方法であって、その患者に有効量の少なくとも１種類の水以外の賦形剤（例えば少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方）ならびにルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの１種類以上のメンバーを含む組成物を投与することを含む方法を提供する。一部の態様において、その組成物は、進行した乳癌、転移性乳癌、処置に抵抗性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、および／またはトリプルネガティブ乳癌の１種類以上から選択される乳癌を処置するために用いられる。一部の態様において、その組成物の有効量は少なくとも０．２５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その組成物の有効量は少なくとも０．２７ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その組成物は少なくとも０．３５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その組成物の有効量は約０．２７ｇ〜約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その組成物の有効量は約０．３５ｇ〜約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その組成物の有効量は約０．３５ｇ〜２ｇ、約０．３５ｇ〜１．１ｇ、約０．３５ｇ〜１ｇ、約０．３５ｇ〜約０．８ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは以下のものを含む：約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン；約６．７ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約５０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約３０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約２５ｍｇのルテオリン、または約８．９ｍｇ〜約２０ｍｇのルテオリン；約７．３ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約５０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約３０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約２５ｍｇのアピゲニン、または約９．７ｍｇ〜約２０ｍｇのアピゲニン；約３０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約２２０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１３０ｍｇのスクテ���レイン、約４０ｍｇ〜約１１０ｍｇのスクテラレイン、または約４０ｍｇ〜約９０ｍｇのスクテラレイン；約０．２５ｇ〜約３ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約３ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約１．５ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約０．９ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約０．８ｇのスクテラリン、または約０．３ｇ〜約０．６５ｇのスクテラリン。
【００２７】
[0032]  発明者は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは癌、特に乳癌の処置に有効であることを見出した。従って、一部の態様において、本発明はルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む投薬単位体を提供する。一部の態様において、その投薬単位体は少なくとも約０．２５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その投薬単位体は少なくとも約０．２７ｇ、または少なくとも約０．３５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その投薬単位体は約０．３５ｇ〜約４ｇ、約０．３５ｇ〜約２ｇ、約０．３５ｇ〜約１．１ｇ、約０．３５ｇ〜約１ｇ、約０．３５ｇ〜約０．８ｇ、または約０．７ｇ〜約２ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その投薬単位体はさらに少なくとも１種類の水以外の賦形剤、例えば矯味剤、甘味料または両方を含む。一部の態様において、その投薬単位体はセイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物を実質的に含まない。一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは以下のものを含む：約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン；約６．７ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約５０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約３０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約２５ｍｇのルテオリン、または約８．９ｍｇ〜約２０ｍｇのルテオリン；約７．３ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約５０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約３０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約２５ｍｇのアピゲニン、または約９．７ｍｇ〜約２０ｍｇのアピゲニン；約３０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約２２０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１３０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１１０ｍｇのスクテラレイン、または約４０ｍｇ〜約９０ｍｇのスクテラレイン；約０．２５ｇ〜約３ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約３ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約１．５ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約０．９ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約０．８ｇのスクテラリン、または約０．３ｇ〜約０．６５ｇのスクテラリン。一部の態様において、その組成物は癌、例えば乳癌および／または１種類以上の婦人科の癌の処置において用いられる。一部の���様において、その癌は乳癌、例えば進行した乳癌、転移性乳癌、処置に抵抗性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、および／またはトリプルネガティブ乳癌である。
【００２８】
[0033]  発明者はさらに、セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を出発物質として用いて医薬組成物を作るためのプロセスを発見した。そのようなプロセスは、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンを含む組成物を作るために特に有用である。従って、一部の態様において、発明者は、以下のことを含む、医薬組成物を作るプロセスを記述した：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量化合物を分離して精製された抽出物を形成し；（ｄ）場合によりその精製された抽出物からその水の一部、実質的に全部、もしくは全部を蒸発させ、またはその精製された抽出物に追加の水を添加し；そして（ｅ）その精製された抽出物を少なくとも１種類の医薬的に許容できる水以外の賦形剤と組み合わせてその医薬組成物を形成する。一部の態様において、その精製された抽出物はアピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、およびスクテラリンを含む。一部の態様において、少なくとも１種類の医薬的に許容できる水以外の賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００２９】
[0034]  発明者は、セイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物の少なくとも一部を除去することはその医薬組成物の臨床的特徴を向上させることを見出した。セイタカナミキソウから抽出された大量の可溶性物質は不活性であるため、あらかじめ決められたカットオフ値より上の分子量を有する分子を除去することにより可溶性物質の量を低減させることは、セイタカナミキソウの抽出物に由来する医薬組成物のかさを大きく低減させるであろう。加えて、セイタカナミキソウから水の中に抽出された可溶性物質の大部分は可溶性の繊維であり、それは腸で吸収されず、胃の不調、腹部膨満、ガスおよび下痢を促進する傾向がある。従って、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の重荷を減らすことによりその可溶性の繊維の少なくとも一部を除去し、一方でルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの混合物をその組成物中に保持することは、結果として向上した抗癌薬をもたらす。従って、一部の態様において、本発明は１部のルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせならびに約５０部未満のあらかじめ決められたカットオフ値より大きい分子量を有する高分子量化合物を含む医薬組成物を提供し、ここでそのあらかじめ決められたカットオフ値は１，０００グラム／モルから約２０，０００グラム／モルまでである。一部の態様において、その医薬組成物は約１部のルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせ、ならびに約４０部未満、約３０部未満、約２０部未満、約１０部未満、約５部未満、約２部未満、約１部未満、約０．５部未満、約０．０１〜約４０部、約０．０１〜約２０部または約０．０１〜約１０部の高分子量化合物を含む。一部の態様において、その高分子量化合物に関するカットオフ値は：１０，０００グラム／モル；５，０００グラム／モル；２，０００グラム／モル；１，０００グラム／モルであり；または約１，０００グラム／モル〜約１０，０００グラム／モル；約１，０００グラム／モル〜約５，０００グラム／モルもしくは約１，０００グラム／モル〜約２，０００グラム／モルの範囲内である。一部の態様において、その医薬組成物は少なくとも１種類の水以外の賦形剤を含む。一部の態様において、その少なくとも１種類の水以外の賦形剤は矯味剤、甘味料または両方である。発明者は、本明細書で記述した医薬組成物は本明細書で記述した医薬組成物を含む投薬単位体として都合よく調製されることを見出した。一部の態様において、その投薬単位体は少なくとも約１８ｍｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その投薬単位体は以下のものを含む：約０．２５ｇ〜約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせ；約０．２７ｇ〜約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせ；約０．３５ｇ〜約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせ；約０．３５ｇ〜約２ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせ；約０．３５ｇ〜約１．１ｇのルテオ���ン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせ；約０．３５ｇ〜約１ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせ；約０．３５ｇ〜約０．８ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせ；または約０．７ｇ〜約２ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせ。一部の態様において、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせに加えて、その組成物はさらに少なくとも１種類の水以外の賦形剤を含む。一部の態様において、少なくとも１種類の水以外の賦形剤は矯味剤、甘味料または両方から選択される。一部の態様において、本発明は、癌患者に有効量の本明細書で記述された医薬組成物または剤形を投与することを含む、癌を処置する方法を提供する。一部の態様において、その癌は１種類以上の乳癌および／または婦人科の癌、例えば乳癌または子宮癌である。一部の態様において、乳癌、例えば進行した乳癌、転移性乳癌、処置に抵抗性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、および／またはトリプルネガティブ乳癌である。
【００３０】
[0035]  発明者は、以下のことを含む医薬組成物を作るプロセスも発見した：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量化合物を分離して精製された抽出物を形成し；（ｄ）場合によりその精製された抽出物からその水の一部、実質的に全部、もしくは全部を蒸発させ、またはその精製された抽出物に追加の水を添加し；そして（ｅ）その精製された抽出物を医薬的に許容できる賦形剤と組み合わせてその医薬組成物を形成する。１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン。
【００３１】
[0036]  一部の態様は、以下のことを含む、セイタカナミキソウの精製された抽出物を作るプロセスも提供する：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；そして（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量化合物を分離してセイタカナミキソウの精製された抽出物を形成する。
【００３２】
[0037]  一部の態様はさらに、医薬組成物を作るプロセスであって、少なくとも１種類の医薬的に許容できる水以外の賦形剤をルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの１種類以上のメンバーと組み合わせてその医薬組成物を形成することを含むプロセスを提供する。一部の態様において、少なくとも１種類の水以外の医薬的賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００３３】
[0038]  一部の態様は、以下のことを含む、医薬的投薬単位体を作るプロセスを提供する：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；そして（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量化合物を分離して精製された抽出物を形成し；そして（ｄ）その精製された抽出物を少なくとも１種類の水以外の賦形剤と組み合わせてその医薬的投薬単位体を形成する。一部の態様において、少なくとも１種類の水以外の賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００３４】
[0039]  明記された値が後に続く用語“約”は、その明記された値の実験誤差の範囲内（一般に１標準偏差以内）の値を示すことを意図する。その実験誤差が明確に決定されていない限り、明記された値“ｘ”が後に続く用語“約”はＸ±０．１Ｘを意味するものと受け取られてよい。
【００３５】
半枝蓮の抽出物を含む医薬組成物および単位投薬物の製造のためのプロセス
[0040]  本明細書で記述される医薬組成物および単位投薬物は、半枝蓮、特にセイタカナミキソウの空気中に生長した部分から抽出された可溶性物質（すなわち水に溶ける物質）を含む。シソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ  ｆａｍｉｌｙ）の草本セイタカナミキソウ（シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ））−Ｂａｎ  Ｚｈｉ  Ｌｉａｎ（ＢＺＬ）は、排他的ではないが、主に四川、江蘇、江西、福建、広東、広西および陝西の省における黄河（Ｈｕａｎｇ  Ｐｏ）の南東地方に生えている。その植物は晩夏および初秋にその花が咲いた後（５月〜６月）に収穫される。その空気中に生長した部分を根から切り離す。その空気中に生長した部分（葉および茎）のみを本明細書で記述した組成物および投薬単位体の調製のために用いる。
【００３６】
[0041]  表１は、それからこの発明の抽出物が得られるこの発明の草木セイタカナミキソウの学名を示しており、科、属、種および伝統中国名によりリストされている。
表１
【００３７】
【表１】
2012521424.tif 000003
【００３８】
医薬組成物
[0042]  本明細書で記述されている一部の態様は、医薬組成物、特に癌の処置のための医薬組成物を提供する。特に、本発明は婦人科の癌および乳癌の処置のための医薬組成物（“組成物”）を提供する。一部の好ましい態様において、その組成物は乳癌、特に以下のものを含む、腫瘍学者に処置するのが特に難しいと考えられてきた乳癌（下記でより詳細に記述する）の処置のためのものである：進行した乳癌、転移性乳癌、１種類以上のホルモン受容体に関して陰性である乳癌（例えばＥＲ陰性、ＰＲ陰性、および／またはＨＥＲ２陰性乳癌）、ならびに以前に１種類以上の癌療法、例えば放射線療法、陽子療法、および／または化学療法での処置が不成功であった乳癌。発明者は、少なくとも約２０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を用いたこれらのタイプの癌の１種類以上を有する患者の処置は十分に許容され、これらの癌の処置において有効であることを見出した。
【００３９】
[0043]  一部の態様において、本発明は、少なくとも１種類の水以外の賦形剤、ならびにルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの１種類以上のメンバーを含む医薬組成物を提供する。ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンのそれぞれが分子レベルで抗癌活性を示す活性を有するが、これらの化合物の４種類全ての組み合わせは癌、特に乳癌、さらには先行する処置に対して抵抗性であることが判明している乳癌に対して特に効き目が強いことが分かっている。従って、一部の好ましい態様において、その組成物はルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンのそれぞれを含む。
【００４０】
[0044]  特に本明細書で記述される癌を処置する方法において用いられるより高い用量において、セイタカナミキソウの抽出物は味が悪く、それは患者のコンプライアンスを思いとどまらせる程である可能性さえあることも分かっている。従って、その組成物をより口に合うものにし、それによりその処置での患者の安心感を高め、潜在的に患者のコンプライアンスを高めるために、矯味剤、例えば香味料もしくは他の矯味剤、甘味料、または両方を用いるのが望ましい。従って、一部の態様において、少なくとも１種類の水以外の賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。本明細書で用いられる際、医薬組成物が“水以外の賦形剤”を含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）、またはそうでなければ含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）と述べることは、もしその医薬組成物がその中に存在する投薬単位体のその特定の形に関して水が適切な賦形剤であるならば、それは水も含んでいてよいが、その組成物は水とは別にいずれかの賦形剤を含んでいなければならないことを意味する。例えば、一部の態様は、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質、矯味剤、および水を含む。他の態様はその矯味剤に加えてさらに甘味料を含んでいてよく、または矯味剤の代わりに甘味料を用いてよい。
【００４１】
[0045]  発明者は、セイタカナミキソウ抽出物の高い用量（例えば少なくとも２０ｇのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質、またはより高い用量）は少なくとも一部の患者において胃の不調、腹部膨満、ガスおよび／または下痢を引き起こすことも発見した。発明者は、セイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物は乳癌および／または婦人科の癌に対して不活性であり、特に２０ｇ／日の、またはそれを超える用量において胃腸の苦痛（ｄｉｓｔｒｅｓｓ）を誘発する傾向があることを決定した。本明細書で記述されている用量において、そのような胃の不快感は、少なくとも一部の患者に関して、結果として患者の乏しいコンプライアンスまたはさらには療法の中止をもたらす可能性がある。セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質から高分子量化合物の少なくとも一部を（例えばナノ濾過により）除去することにより、患者に投与しなければならない可溶性物質のかさの量が低減し、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の高い濃度と関係する胃腸の不快感が低減するであろうと考えられる。従って、発明者は本明細書において、高分子量化合物が激減しており、一部の場合においてそれを実質的に含まない組成物の教示を提供する。
【００４２】
[0046]  ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは、別の状況では、本明細書において、“高分子量化合物”および高分子量化合物では無いが乳癌および／または婦人科の癌の処置において有効では無い化合物を含む“不活性な可溶性物質”に対するものとして“有効可溶性物質”と呼ばれてよい。従って、可溶性物質の質量は、有効可溶性物質（ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリン）と不活性な可溶性物質の質量の合計に等しい。不活性な可溶性物質の質量は、高分子量化合物と他の不活性な化合物の質量の合計である。
【００４３】
[0047]  本明細書で用いられる“高分子量化合物”は、セイタカナミキソウの水抽出の過程の間にルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンと共抽出され（ｃｏ−ｅｘｔｒａｃｔｅｄ）、あらかじめ決められたカットオフ値の、またはそれより大きい分子量を有する化合物を指す。一部の態様において、そのカットオフ値は１，０００ｇ／ｍｏｌから約１０，０００ｇ／ｍｏｌまでのどこかであってよい。一部の態様において、１，０００グラム／モルのカットオフ値はセイタカナミキソウの可溶性抽出物から高い百分率の可溶性繊維を除去するのに十分であろう；しかし、より低いカットオフ値が考えられ、より低いカットオフ値は医薬組成物および投薬単位体中のルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンのより大きい濃度の達成を可能にし、療法的効果を達成するために患者に投与しなければならない可溶性物質のかさを低減させると考えられるため、一部の場合においてはより低いカットオフ値が好ましい。一部の態様において、そのカットオフ値は７５０〜２０，０００ｇ／ｍｏｌの範囲内、好ましくは７５０〜１０，０００ｇ／ｍｏｌ、より詳細には７５０〜５，０００ｇ／ｍｏｌの範囲内である。個々のカットオフ値には以下のものが含まれる：７５０ｇ／ｍｏｌ；１，０００ｇ／ｍｏｌ；２，０００ｇ／ｍｏｌ；５，０００ｇ／ｍｏｌ；および１，００００ｇ／ｍｏｌ。
【００４４】
[0048]  従って、本明細書で提供される組成物および投薬単位体の一部の態様は、高分子量化合物を実質的に含まない。本明細書で用いられる用語“実質的に含まない”は、その組成物または投薬単位体が、不溶性物質（例えば茎、葉およびその不溶性部分）を除去するように処理された（例えば濾過またはデカントされた）がその他の点では高分子量化合物を除去するように処理されていないセイタカナミキソウの空気中に生長した部分の水抽出物である“粗製の抽出物”中に含まれていたよりも少ない、あるあらかじめ決められた割合よりも少ない高分子量化合物を含むことを意味する。一部の態様において、そのあらかじめ決められた割合は１／１０（０．１）、１／２０（０．０５）、１／５０（０．０２）、１／１００（０．０１）、１／２００（０．００５）、１／５００（０．００２）または１／１０００（０．００１）である。“高分子量化合物を実質的に含まない”に関する個々の値は、その医薬組成物中に含まれるセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の総質量と比較して表すこともできる。一部の態様において、高分子量化合物を実質的に含まない組成物は、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の総質量と比較して約１０重量％未満、約５重量％未満、約１重量％未満、約０．５重量％未満、または約０．１重量％未満の高分子量化合物を含む。さらに、“高分子量化合物を実質的に含まない”に関する個々の値は、その組成物中に含まれるルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの量に関する質量比率として表される。一部の態様において、その医薬組成物中のセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の約１％〜約９９％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約１．７％〜約３．２％はルテオリンであり、約２％〜約３．４％はアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％はスクテラレインであり、約４９％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。
【００４５】
[0049]  一部の場合において、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質から高分子量化合物の一部のみを除去すれば十分である可能性がある。従って、本明細書で提供される組成物および投薬単位体の一部の態様において、高分子量化合物が激減している。本明細書で用いられる用語“激減している”は、その組成物または投薬単位体が前の段落において記述した“粗製の抽出物”中に含まれていたよりも少ない、あるあらかじめ決められた割合よりも少ない高分子量化合物を含むことを意味する。一部の態様において、そのあらかじめ決められた割合は９／１０（０．９）、８／１０（０．８）、７／１０（０．７）、６／１０（０．６）、１／２（０．５）、１／３（０．３３３）または１／４（０．２５）である。“高分子量化合物が激減している”に関する個々の値は、その医薬組成物中に含まれるセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の総質量と比較して表すこともできる。一部の態様において、高分子量化合物が激減している組成物は、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の総質量と比較して約９０重量％未満、約８０重量％未満、約７０重量％未満、約６０重量％未満または約５０重量％未満の高分子量化合物を含む。さらに、“高分子量化合物が激減している”に関する個々の値は、その組成物中に含まれるアピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、およびスクテラリンの量に関する質量比率として表される。一部の態様において、その医薬組成物中のセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の約１％〜約９９％は有効可溶性物質であり、その有効可溶性物質の約１．７％〜約３．２％はルテオリンであり、約２％〜約３．４％はアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％はスクテラレインであり、約４９％〜有効可溶性物質の残りの部分はスクテラリンである。
【００４６】
[0050]  セイタカナミキソウから抽出された有効化合物（ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリン）は、セイタカナミキソウの空気中に生長した部分の水抽出物中で、それらの共同した活性に重要であると見られるある特有の比率で表される傾向があることが分かっている。一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む。一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリンを含む。一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリンを含む。一部の態様において、その組成物は、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含む、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。
【００４７】
医薬組成物を作るプロセス
[0051]  本明細書で提供される医薬組成物は、セイタカナミキソウの空気中に生長した部分（茎および／または葉）から例えば水を用いて有効化合物を抽出することを含む。抽出に関して本明細書で記述される際、“水”は純水（例えば注射のための水、蒸留水、二重脱イオン水（ｄｏｕｂｌｅ  ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ  ｗａｔｅｒ）、濾過した蒸留水等）ならびに、その抽出媒体の大部分が水であり溶質（単数または複数）が水の抽出特性に実質的に影響を及ぼさない限り、水および１種類以上の微量の固体または液体の溶質で構成される水溶液を含む。一部の好ましい態様において、そのプロセスは上記でより詳細に記述したようにセイタカナミキソウの抽出物から高分子量化合物の一部を除去することも含む。
【００４８】
[0052]  従って、一部の態様において、以下のことを含む、医薬組成物を作るプロセスを提供する：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量の化合物を分離して精製された抽出物を形成し；そして（ｅ）その精製された抽出物を少なくとも１種類の医薬的に許容できる水以外の賦形剤と組み合わせてその医薬組成物を形成する。一部の態様において、そのプロセスは以下のことも含む：（ｄ）場合によりその精製された抽出物からその水の一部、実質的に全部、もしくは全部を蒸発させ、またはその精製された抽出物に追加の水を添加する。一部の態様において、少なくとも１種類の医薬的に許容できる水以外の賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。一部の態様において、その医薬組成物をさらに適切な包装と組み合わせて適切な投薬単位体を形成する。
【００４９】
[0053]  セイタカナミキソウの空気中に生長した部分（葉および／または茎）を水と組み合わせて室温より上の適切な温度、特に約４０℃、より好ましくは約５０℃から約８０℃までに、場合により高圧において加熱する。その混合物を、その有効化合物がその混合物の水相中に抽出されるのに十分に長いが、不必要にエネルギーを浪費する、または有効化合物の分解を引き起こす程長くない時間調理する（ｃｏｏｋｅｄ）べきである。約１０分間より長いが約２日間より短いある期間が適切であるが、３０分間〜６時間の期間が一般に適切であると考えられる。より詳細な値は本明細書の実施例において述べられている。
【００５０】
[0054]  一度調理されると、セイタカナミキソウの空気中に生長した部分はいずれかの適切な方法により水相から分離される。その混合物をこし器を通してこすことにより、より大きな部分を除去することができ、一方でより小さい部分は濾過により除去することができる。その濾過は段階的に実施されてよく、それぞれの段階は連続的に孔の大きさが小さくなる１個以上のフィルターを通過させることを含む。
【００５１】
[0055]  高分子量化合物は、適切な方法、例えばナノ濾過またはサイズ排除クロマトグラフィーにより除去することができる。
[0056]  場合により、その溶液の体積を例えばその水の一部を蒸発させて除くことにより低減することができる。その溶液は凍結乾燥してもよく、別の状況では乾燥させて乾燥残留物を形成してもよく、それを微粉砕して粉末を形成してよい。いずれにせよ、結果として得られた精製された抽出物を、次いで少なくとも１種類の賦形剤、特に水以外の賦形剤と組み合わせて医薬組成物を形成することができる。一部の態様において、その水以外の賦形剤は矯味剤または甘味料である。一部の好ましい態様において、その水以外の賦形剤は矯味剤を含む。
【００５２】
[0057]  他の態様は、以下のことを含む、医薬組成物を作るプロセスを提供する：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量の化合物を分離して精製された抽出物を形成し；そして（ｅ）その精製された抽出物を医薬的に許容できる賦形剤と組み合わせてその医薬組成物を形成する。一部の態様は、以下のことも含む：（ｄ）場合によりその精製された抽出物からその水の一部、実質的に全部、もしくは全部を蒸発させ、またはその精製された抽出物に追加の水を添加する。一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む。一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリンを含む。一部の態様において、そのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせは約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリンを含む。一部の態様において、その組成物は、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含む、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。
【００５３】
[0058]  一部の態様において、以下のことを含む、組成物を作るプロセスを提供する：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；そして（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量の化合物を分離して精製された抽出物を形成する。その精製された抽出物をさらに処理して、本明細書で記述される投薬単位体を製造することができる。一部の態様において、その精製された抽出物は高分子量化合物が激減している。一部の態様において、その精製された抽出物は高分子量化合物を実質的に含まない。
【００５４】
[0059]  上記のように、特定の状況において、特にその投与量が少なくとも約２０ｇ／日である場合に、セイタカナミキソウの抽出物中に含まれる有効化合物の味を隠すことが望ましいと考えられる。従って、医薬組成物を作るプロセスの一部の態様は、少なくとも１種類の医薬的に許容できる水以外の賦形剤（例えば矯味剤および／または甘味料）をルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの１種類以上のメンバーと組み合わせてその医薬組成物を形成することを含む。
【００５５】
[0060]  一部のそのような態様において、少なくとも１種類の水以外の医薬的賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
投薬単位体（Dosage Units）
[0061]  本発明者は、本明細書で記述される医薬組成物は都合のよい配布、貯蔵および投与のための投薬単位体で都合よく調製されると考える。本明細書で記述される“用量”および“投薬単位体”の間には違いがある。本明細書で用いられる用語“用量”は、単一の出来事（ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ）で投与されるその医薬組成物の量を指す。日用量は１日に投与されるその医薬組成物の量である。用量は１日１回（Ｑ．Ｄ．）、１日２回（ｂ．ｉ．ｄ．）、１日３回（ｔ．ｉ．ｄ．）、１日４回（ｑ．ｉ．ｄ．）等で投与されてよい。
【００５６】
[0062]  本明細書で用いられる用語“投薬単位体”はその医薬組成物の単一のあらかじめ製造された形であり、それはその医薬組成物の１個以上の用量、または他の投薬単位体と組み合わせて１回の用量を形成することができるその医薬組成物の用量のある割合で構成されている。一部の態様において、その投薬単位体はその医薬組成物の単一の日の用量で構成されている。その投薬単位体は単一の日用量（Ｑ．Ｄ．）として投与するのに適合させることができ、またはその日の異なる時間に投与するために２個、３個、４個もしくはより多くの用量（それぞれｂ．ｉ．ｄ．、ｔ．ｉ．ｄ．、またはｑ．ｉ．ｄ．）に分割することができ、または１回の用量として投与することができる。（これは特に、投薬単位体あたり２個以上の用量に分割することができるエリキシルおよび１日の間の異なる時間における投与のために２個以上の投薬単位体に分割することができる錠剤に当てはまる。）一部の他の態様において、その投薬単位体は１回の用量のある割合（例えば半分、３分の１、４分の１、５分の１）を構成していてよい。投薬単位体は、点滴線（ｄｒｉｐ  ｌｉｎｅ）もしくは類似の静脈内投与法による、またはさらには鼻咽頭チューブによる投与のための、特定の体積、例えば２０ｍＬ〜１０００ｍＬの注入のための溶液であってもよい。
【００５７】
[0063]  その投薬単位体の一部の好ましい態様には錠剤、カプセル、粉末および溶液（エリキシル）が含まれる。
[0064]  錠剤には、飲み込むのを助ける液体、例えば水を用いる、または用いない、飲み込むための錠剤、噛んで飲み込むための錠剤、および舌の上で溶かして飲み込むのに適合した錠剤が含まれる。錠剤に関する適切な賦形剤には、結合剤、増量剤、崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔｓ）、分散剤、滑剤（ｇｌｉｄａｎｔｓ）、粘着防止（ａｎｔ−ｓｔｉｃｋｉｎｇ）および固化防止剤、ならびに矯味剤および甘味料が含まれる。
【００５８】
[0065]  カプセルには、丸ごと飲み込むためのカプセル、および液体の賦形剤、例えば水の中で溶解させるのに適合したカプセルが含まれる。カプセルには、開けてそれらの内容物を適切な賦形剤、例えば水の中で溶解させるためのカプセルも含まれる。カプセルに関する適切な賦形剤には、分散剤、増量剤、矯味剤および甘味料が含まれる。
【００５９】
[0066]  粉末には、輸送および貯蔵のための適切な容器、例えば箔の小袋、密封されたバイアル等の中に包装された粉末が含まれる。粉末に関する適切な賦形剤には、分散剤、増量剤、矯味剤および甘味料が含まれる。
【００６０】
[0067]  溶液には、水、水以外の賦形剤、およびセイタカナミキソウから抽出された有効可溶性物質（ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリン）を含む、水に基づく溶液が含まれる。好ましい態様において、溶液は適切な密封された容器中に包装されており、その溶液を患者に投与するための説明書と一緒に包装されている。静脈内投与に関して、その水に基づく溶液は水以外の賦形剤を含んでいてよく、または含んでいないくてよい。
【００６１】
[0068]  発明者は、本明細書で記述される組成物は今までに考えられなかったレベルで患者に投与されるべきであり、重要なことだが、患者はそれを許容することができることを見出した。驚いたことに、例えば、本明細書で記述されるその組成物は、患者に高い用量、すなわち１日あたり１０または１２グラムのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質より大きい用量で投与することができることが分かっている。驚いたことに、この投与は、高い用量、特に１日あたり２０グラムから１日あたり約４０グラムにおいて（特に１日あたり２０、３０および４０グラムにおいて）用量制限毒性を引き起こさない。これらの臨床データに基づいて、発明者は、許容できる最大用量は１日あたり４０グラムより大きく、それどころか１日あたり約２００グラムまでである可能性があり、おそらく１日あたり約１００グラムまでであると推測する。従って、本明細書で記述される一部の態様は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの少なくとも１種類のメンバーを含む、少なくとも約２０グラムの有効な医薬的成分を含む医薬的投薬単位体を提供する。一部の態様において、その有効な医薬的成分はルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンのそれぞれを含む。一部の好ましい態様において、その投薬単位体は経口投薬単位体である。一部の好ましい態様において、その投薬単位体はさらに少なくとも１種類の水以外の賦形剤を含む。一部の好ましい態様において、その投薬単位体は矯味剤および甘味料から選択される少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の態様において、その投薬単位体は少なくとも約２０グラムの有効な医薬的成分を含む。一部の態様において、単一の日における投与のためにその投薬単位体を２個以上の用量の間で分けることができる。
【００６２】
[0069]  一部の態様において、その医薬的投薬単位体は少なくとも約２０グラムのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を含む有効な医薬的成分を含む。そのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質はアピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの１種類以上を含み；好ましくはそれはアピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの４種類全てを含む。特に好ましい態様において、その可溶性物質はアピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンのそれぞれをおおよそ以下の比率で含む：約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン；約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン  約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン；約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリン；または約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリン。一部の態様において、そのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は高分子量化合物が激減しており、またはそれを実質的に含まない。一部の態様において、その投薬単位体は経口投薬単位体（例えば、丸ごと飲み込む、噛んで飲み込む、または舌の上で溶かして飲み込むための錠剤、丸ごと飲み込むためのカプセル、開けてその内容物を適切な液体賦形剤中で溶解させて飲み込むためのカプセル、適切な賦形剤中で丸ごと溶解させるためのカプセル、適切な賦形剤中で溶解させるための粉末、それは矯味剤、甘味料等および／または水を含んでいてよい）である。従って、一部の態様において、その投薬単位体はさらに水以外に（例えば水に加えて）少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の態様において、その投薬単位体は矯味剤および甘味料から選択される少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の態様において、その投薬単位体は少なくとも約２０グラムのその有効な医薬的成分を含む（例えば投薬単位体あたり２０〜２００グラム、投薬単位体あたり２０〜１００グラムまたは投薬単位体あたり２０〜６０グラム）。
【００６３】
[0070]  一部の態様において、その医薬的投薬単位体は少なくとも約０．２５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む有効な医薬的成分を含む。一部の態様において、その医薬的投薬単位体は少なくとも約０．２７ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンまたは少なくとも約０．３５ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンを含む。一部の態様において、その医薬的投薬単位体は約０．３５ｇ〜４ｇ、０．３５ｇ〜２ｇ、０．３５ｇ〜１．１ｇ、０．３５ｇ〜１ｇ、または０．３５ｇ〜０．８ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンを含む。一部の態様において、その医薬的投薬単位体は約０．２５ｇ、約０．２７ｇ、約０．３ｇ、約０．３５ｇ、約０．４ｇ、約０．４５ｇ、約０．５ｇ、約０．６ｇ、約０．７ｇ、約０．８ｇ、約０．９ｇ、約１ｇ、約１．１ｇ、約１．２ｇ、約１．３ｇ、約１．４ｇ、約１．５ｇ、約１．６ｇ、約１．７ｇ、約１．８ｇ、約１．９ｇ、約２ｇ、約２．１ｇ、約２．２ｇ、約２．３ｇ、約２．４ｇ、約２．５ｇ、約２．６ｇ、約２．７ｇ、約２．８ｇ、約２．９ｇ、約３ｇ、約３．１ｇ、約３．２ｇ、約３．３ｇ、約３．４ｇ、約３．５ｇ、約３．６ｇ、約３．７ｇ、約３．８ｇ、約３．９ｇ、約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンを含む。セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質はアピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの１種類以上を含み；好ましくはそれはアピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの４種類全てを含む。特に好ましい態様において、その可溶性物質はアピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンのそれぞれをおおよそ以下の比率で含む：約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン；約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン  約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン；約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリン；または約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリン。一部の態様において、そのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は高分子量化合物が激減しており、またはそれを実質的に含まない。一部の態様において、その投薬単位体は経口投薬単位体（例えば、丸ごと飲み込む、噛んで飲み込む、または舌の上で溶かして飲み込むための錠剤、丸ごと飲み込むためのカプセル、開けてその内容物を適切な液体賦形剤中で溶解させて飲み込むためのカプセル、適切な賦形剤中で丸ごと溶解させるためのカプセル、適切な賦形剤中で溶解させるための粉末、それは矯味剤、甘味料等および／または水を含んでいてよい）である。従って、一部の態様において、その投薬単位体はさらに水以外に（例えば水に加え��）少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の態様において、その投薬単位体は矯味剤および甘味料から選択される少なくとも１種類の賦形剤を含む。
【００６４】
[0071]  本明細書で記述されている投薬単位体は、本発明に従うプロセスにより製造されてよい。一部の態様において、以下のことを含む、医薬的投薬単位体を作るプロセスを提供する：（ａ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を４０℃より上まで加熱した水と少なくとも約１０分間の期間の間接触させて混合物を形成し；（ｂ）セイタカナミキソウの空気中に生長した部分をその混合物から分離して粗製の抽出物を生成し；（ｃ）その粗製の抽出物から高分子量の化合物を分離して精製された抽出物を形成し；そして（ｄ）その精製された抽出物を少なくとも１種類の水以外の賦形剤と組み合わせてその医薬的投薬単位体を形成する。一部の態様において、少なくとも１種類の水以外の賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。そのような投薬単位体は、癌、特に乳癌を処置するために適切な量の精製された抽出物を含む。一部の態様において、その投薬単位体は少なくとも０．２５ｇ、少なくとも０．２７ｇ、少なくとも０．３ｇ、少なくとも０．３５ｇ、または０．３５ｇ〜４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む。一部の態様において、その投薬単位体はさらに包装、例えば箔の小袋、瓶、小さい袋（ｓａｃｈｅｔ）、ブリスターパック、または他の密封された包装を含む。従って、一部の態様において、その投薬単位体を作るプロセスは、その投薬単位体を包装の中に包装する工程を含む。
【００６５】
[0072]  本発明に従うそれぞれの投薬単位体、またはそれぞれの用量中の有効可溶性物質（ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリン）の実例となる量を、下記の表２において示す。
【００６６】
【表２】
2012521424.tif 000004
【００６７】
使用の方法
[0073]  本明細書で記述された医薬組成物および投薬単位体は、癌、特に乳癌および婦人科の癌を処置するために用いることができる。発明者は本発明に従う組成物のヒトにおける臨床試験を実施し、１日あたり２０グラム、１日あたり３０グラムまたは１日あたり４０グラムのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の投与は十分に許容され、乳癌、特に以前に少なくとも１ラウンドの癌療法、少なくとも１ラウンドの化学療法を受けていた進行した乳癌を有する乳癌に対して有効性を示したことを見出した。処置に抵抗性の乳房の癌は特に処置するのが難しく、発明者はヒトにおいて癌を処置する方法を提供した。特に、発明者は、転移性乳癌を含む１種類以上の癌の亜型を処置する方法の提供に加えて、ヒトにおいて乳癌を処置する方法を提供した。処置することができる他の癌には、エストロゲン受容体を発現しない癌（ＥＲ陰性乳癌）、プロゲステロンを発現しない癌（ＰＲ陰性乳癌）、ヒト上皮成長ホルモン受容体２を発現しない癌（ＨＥＲ２陰性乳癌）が含まれる。この点に関して、これらの乳癌のカテゴリーは相互排他的では無いことを特筆する。例えば、乳癌はＥＲ陰性およびＰＲ陰性（いわゆるダブルネガティブ乳癌）であってよく、またはＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性（トリプルネガティブ乳癌）であってよい。トリプルネガティブ乳癌は進行したものおよび／または転移性のものであってよい。転移性乳癌は１種類以上の以前の療法的アプローチに抵抗性であることが判明しているものであってよく、しばしばそうであろう。従って、本明細書で用いられる場合、乳癌の１つの特徴（例えばＥＲ陰性）の列挙は、別途明確に述べられていない限り他の特徴（例えばＰＲ陰性）を排除することを意図しない。
【００６８】
[0074]  従って、本発明の一部の態様は、癌患者に有効量の少なくとも１種類の水以外の賦形剤ならびにルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの少なくとも１種類のメンバーを含む医薬組成物を投与することを含む、癌を処置する方法を提供する。一部の態様において、その組成物はアピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、およびスクテラリンのそれぞれを含み、ここで少なくとも１種類の水以外の賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。一部の態様において、その組成物は高分子量化合物を実質的に含まない。一部の態様において、その癌は乳癌または婦人科の癌である。一部の態様において、その癌は以下のものの少なくとも１種類である乳癌である：進行した乳癌、転移性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性乳癌、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌、または少なくとも１種類の以前の一連の癌処置に応答しなかった乳癌。
【００６９】
[0075]  本発明の一部の態様はさらに、癌、例えば乳癌または婦人科の癌を処置する方法であって、その癌を患う患者に少なくとも約０．２５ｇ、少なくとも約０．２７ｇ、少なくとも約０．３ｇ、少なくとも約０．３５ｇ、または約０．３５ｇ〜約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含む医薬組成物を投与することによる方法を提供する。一部の態様において、その方法は患者に約０．２５ｇ、約０．２７ｇ、約０．３ｇ、約０．３５ｇ、約０．４ｇ、約０．４５ｇ、約０．５ｇ、約０．６ｇ、約０．７ｇ、約０．８ｇ、約０．９ｇ、約１ｇ、約１．１ｇ、約１．２ｇ、約１．３ｇ、約１．４ｇ、約１．５ｇ、約１．６ｇ、約１．７ｇ、約１．８ｇ、約１．９ｇ、約２ｇ、約２．１ｇ、約２．２ｇ、約２．３ｇ、約２．４ｇ、約２．５ｇ、約２．６ｇ、約２．７ｇ、約２．８ｇ、約２．９ｇ、約３ｇ、約３．１ｇ、約３．２ｇ、約３．３ｇ、約３．４ｇ、約３．５ｇ、約３．６ｇ、約３．７ｇ、約３．８ｇ、約３．９ｇ、約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせの日用量を投与することを含む。一部の態様において、その癌は乳癌または婦人科の癌である。一部の態様において、その癌は以下のものの少なくとも１種類である乳癌である：進行した乳癌、転移性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性乳癌、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌、または以前の少なくとも１クールの癌処置に応答しなかった乳癌。
【００７０】
[0076]  上記のように、発明者は臨床試験を実施し、１日あたり２０グラムのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を超える投与量は十分に許容され、特に処置が難しいグループの癌患者において有効であることを見出した。加えて、発明者は、セイタカナミキソウの抽出物の可溶性物質中の有効化合物はアピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、およびスクテラリンの１種類以上（好ましくは４種類全て）であることを見出した。従って、一部の態様は、患者に少なくとも２０グラムのアピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの少なくとも１種類のメンバーを含む有効な医薬的成分を含む医薬的投薬単位体を投与することを含む、癌を処置する方法を提供する。一部の態様において、その有効な医薬的成分はアピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、およびスクテラリンのそれぞれを含む。一部の態様において、その投薬単位体は経口投薬単位体である。一部の態様において、その投薬単位体はさらに少なくとも１種類の水以外の賦形剤を含む。一部の態様において、その投薬単位体は矯味剤および甘味料から選択される少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の態様において、その方法は患者に少なくとも約０．２５ｇ、約０．２７ｇ、約０．３ｇ、約０．３５ｇ、約０．４ｇ、約０．４５ｇ、約０．５ｇ、約０．６ｇ、約０．７ｇ、約０．８ｇ、約０．９ｇ、約１ｇ、約１．１ｇ、約１．２ｇ、約１．３ｇ、約１．４ｇ、約１．５ｇ、約１．６ｇ、約１．７ｇ、約１．８ｇ、約１．９ｇ、約２ｇ、約２．１ｇ、約２．２ｇ、約２．３ｇ、約２．４ｇ、約２．５ｇ、約２．６ｇ、約２．７ｇ、約２．８ｇ、約２．９ｇ、約３ｇ、約３．１ｇ、約３．２ｇ、約３．３ｇ、約３．４ｇ、約３．５ｇ、約３．６ｇ、約３．７ｇ、約３．８ｇ、約３．９ｇ、約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含むセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の日用量を投与することを含む。一部の態様において、その癌は以下のものの少なくとも１種類である乳癌である：進行した乳癌、転移性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性乳癌、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌、または以前の少なくとも１クールの癌処置に応答しなかった乳癌。
【００７１】
[0077]  本明細書で記述される一部の態様は、患者に少なくとも１日あたり２０グラムのアピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの少なくとも１種類のメンバーを含む有効な医薬的成分を投与することを含む、癌を処置する方法を提供する。一部の態様において、その有効な医薬的成分は１日あたり１〜４個の用量で投与される。一部の態様において、その癌は乳癌または婦人科の癌である。一部の態様において、その癌は以下のものの少なくとも１種類である乳癌である：進行した乳癌、転移性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性乳癌、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌、または以前の少なくとも１クールの癌処置に応答しなかった乳癌。一部の態様において、その方法は患者に少なくとも約０．２５ｇ、約０．２７ｇ、約０．３ｇ、約０．３５ｇ、約０．４ｇ、約０．４５ｇ、約０．５ｇ、約０．６ｇ、約０．７ｇ、約０．８ｇ、約０．９ｇ、約１ｇ、約１．１ｇ、約１．２ｇ、約１．３ｇ、約１．４ｇ、約１．５ｇ、約１．６ｇ、約１．７ｇ、約１．８ｇ、約１．９ｇ、約２ｇ、約２．１ｇ、約２．２ｇ、約２．３ｇ、約２．４ｇ、約２．５ｇ、約２．６ｇ、約２．７ｇ、約２．８ｇ、約２．９ｇ、約３ｇ、約３．１ｇ、約３．２ｇ、約３．３ｇ、約３．４ｇ、約３．５ｇ、約３．６ｇ、約３．７ｇ、約３．８ｇ、約３．９ｇ、約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを含むセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の日用量を投与することを含む。
【００７２】
[0078]  本明細書で記述される一部の態様は、患者に少なくとも２０グラムのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を含む有効な医薬的成分を含む医薬的投薬単位体を投与することを含む、癌を処置する方法を提供する。一部の態様において、その投薬単位体は経口投薬単位体である。一部の態様において、その投薬単位体はさらに少なくとも１種類の水以外の賦形剤を含む。一部の態様において、その投薬単位体は矯味剤および甘味料から選択される少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の態様において、その投薬単位体は少なくとも約２０グラムのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を含む。
【００７３】
[0079]  一部の態様はさらに、毎日患者に少なくとも１５グラムのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を含む有効な医薬的成分を投与することを含む、癌を処置する方法を提供する。一部の態様において、その有効な医薬的成分は１日あたり１〜４個の用量で投与される。一部の態様において、その癌は乳癌または婦人科の癌である。一部の態様において、その癌は以下のものの少なくとも１種類である乳癌である：進行した乳癌、転移性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性乳癌、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌、または以前の少なくとも１クールの癌処置に応答しなかった乳癌。
【００７４】
[0080]  発明者は、一部の態様において、その患者を処置するために用いられる個々のの投与量は成功した臨床成果のために重要であることを見出した。従って、一部の態様において、その患者は少なくとも２０ｇ／日のセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を投与されなければならない。一部の態様において、その投薬単位体は少なくとも約２０グラムの有効な医薬的成分を含む。一部の態様において、その投薬単位体は約２０グラム〜約２００グラム、約２０グラム〜約１００グラム、約２０グラム〜約６０グラム、約２０グラム、約３０グラム、約４０グラム、約５０グラム、約６０グラム、約７０グラム、約８０グラム、約９０グラムまたは約１００グラムの有効な医薬的成分を含む。好ましい投与の方式は経口投与であり、好ましくはここでそのセイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は少なくとも１種類の水以外の賦形剤、例えば矯味剤、甘味料または両方と組み合わせられる。
【００７５】
セイタカナミキソウの抽出物のインビトロでの活性
[0081]  表３Ａは、この発明の抽出物によるいくつかのインビトロでの固形乳癌の腫瘍細胞株の活性の阻害の程度を示す。
【００７６】
【表３Ａ】
2012521424.tif 000005
【００７７】
[0082]  表３Ｂは、この発明の抽出物によるいくつかのインビトロでの固形癌の腫瘍細胞株の活性の阻害の程度を示す。
【００７８】
【表３Ｂ】
2012521424.tif 000006
【００７９】
[0083]  セイタカナミキソウ（“ＢＺＬ”）からの抽出物中の有効化合物を単離および特性付けすることは、本発明の１観点である。その抽出物は、乾燥後に再構成した場合、およびその抽出物を物理的および化学的手段により分離した場合、活性を失う。
【００８０】
[0084]  本明細書で用いられる用語“処置する（ｔｒｅａｔ）”“処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）”および“処置”は、疾患状態の１種類以上の症状を改善することを指す。成功した処置は、安定した疾患、部分的もしくは完全な寛解、または疾患の進行の部分的もしくは完全な遅延の達成により判断されてよい。成功した処置に関する１つの適切なエンドポイントは、余命の延長である。
【００８１】
[0085]  本明細書で用いられる“投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）”“投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）”または“投与”は、この発明の抽出物（単数または複数）の、またはこの発明の抽出物（単数または複数）を含む医薬組成物の、取り組んでいる個々の癌の処置に適した方法での患者への送達を指す。
【００８２】
[0086]  “患者”は、腫瘍を有する哺乳類、特にヒト、より詳細には１種類以上の婦人科の癌または乳癌を患う女性のヒトを指す。
[0087]  本明細書で用いられる用語“有効量”および“療法上有効量”は、患者集団において（１）腫瘍の大きさを低減する；（２）腫瘍の転移を抑制する（すなわち、ある程度遅くする、好ましくは止める）；（３）腫瘍成長をある程度抑制する（すなわちある程度遅くする、好ましくは止める）；および／または；（４）癌と関係する１種類以上の症状をある程度緩和する（または好ましくは除去する）；（５）腫瘍の成長を安定化する；（６）疾患の進行までの時間を延長する；（７）全生存を向上する効果を有する組成物または投薬単位の量を同義的に指す。
【００８３】
[0088]  本明細書で用いられる“医薬組成物”は、１種類以上の化合物の混合物または他の化学的構成要素、例えば生理的に許容できるキャリヤーおよび賦形剤との本明細書で記述される組み合わせを指す。その薬理学的組成物の目的は、この発明の抽出物（単数または複数）の患者への投与を促進することである。
【００８４】
[0089]  本明細書で用いられる用語“医薬的に許容できる”は、その薬剤または賦形剤が一般に医薬組成物中での使用に関して許容できるとみなされることを意味する。
[0090]  本明細書で用いられる“生理的に許容できるキャリヤー”は、生物に対して重大な刺激を引き起こさず、投与される組成物の生物学的活性および特性を抑止しないキャリヤーまたは希釈剤を指す。典型的な医薬的に許容できるキャリヤーには、固体および液体の希釈剤が含まれる。水、エタノール、プロピレングリコール、およびグリセロールは実例となる医薬的に許容できる液体希釈剤であり；これらの内で、一部の態様において水が好ましい。
【００８５】
[0091]  本明細書で用いられる“賦形剤”は、この発明の医薬組成物の投与をさらに促進するために医薬組成物に添加される医薬的に不活性な物質を指す。賦形剤の例には、限定では無いが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖類および様々なタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、野菜油ならびにポリエチレングリコール類が含まれる。賦形剤および有効な医薬的成分のグループは、医薬の技術において相互に排他的であると考えられている。一部の好ましい態様において、その賦形剤は矯味剤、甘味料、または両方である。
【００８６】
[0092]  用語“水以外の賦形剤”は、その賦形剤が水以外のいずれかの賦形剤、例えば矯味剤または甘味料である、またはそれを含むことを意味する。従って、用語“水以外の賦形剤”は、水および甘味料または水および矯味剤を含む賦形剤を含むであろうが、水のみを含む賦形剤を除外するであろう。水以外の賦形剤および有効な医薬的成分を含む医薬組成物は、例えば、その医薬的に有効な成分、水、およびいずれかの他の賦形剤、例えば矯味剤および／または甘味料を含んでいてよい。
【００８７】
[0093]  本明細書で用いられる用語“含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）”、“含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）”、“含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）”およびそれらの文法上の変形は包括的であり、または拡張可能（ｏｐｅｎ−ｅｎｄｅｄ）であり、追加の、列挙されていない要素または方法の工程を除外しない。用語“含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）”、“含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）”、“含む（ｃｏｎｔａｉｎ）”、“含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）”、“含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）”およびそれらの文法上の変形は同様に包括的である。
【００８８】
[0094]  本明細書で用いられる句“からなる”は、その文のそれに続く部分において明記されていないあらゆる要素、工程、または成分を除外する。
[0095]  本明細書で用いられる句“本質的に〜からなる”は、その文のそれに続く部分の範囲を明記された物質または工程ならびに特許請求される発明の基本的な、および新規の特徴（単数または複数）に実質的に影響を及ぼさない物質または工程に限定する。
【００８９】
[0096]  本明細書で用いられる“ＢＺＬ”は“セイタカナミキソウ”と同義である。用語“ＢＺＬ１０１”は、癌細胞に対して実証された活性を有するＢＺＬの特定の抽出物を指す。特に、セイタカナミキソウの空気中に生長した部分を意図している。
【実施例】
【００９０】
[0097]  それからこの発明の抽出物が得られる草本は、Ｓｈｅｎ  Ｎｏｎｇ  Ｈｅｒｂｓ、カリフォルニア州バークレーから購入した。それらの同一性は、伝統的な医薬文献への参照により確認された。
【００９１】
調製実施例１−半枝蓮（ＢＺＬ）からの有効化合物の単離
[0098]  乾燥させた半枝蓮を８：２  ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏで６時間および１２時間抽出した。抽出物を合わせて濾過し、真空中で濃縮し、ヘキサンおよび酢酸エチルで順次分配した（等体積、１回繰り返した）。酢酸エチル部分を合わせて真空中で濃縮し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ親油性ＬＨ−２０媒体（約１６０ｇ、１８００×２５ｍｍ内径カラム）上で、均一溶媒の９：０．５：０．５  ＭｅＯＨ−アセトン−Ｈ２Ｏまたは１００％ＭｅＯＨを用いた重力流れの下でクロマトグラフィー処理した。分析的ＨＰＬＣ（表３）および／またはＲＦ−ＴＬＣ（１：１  １０ｍＭ酢酸アンモニウム−ＭｅＣＮ）分析に基づいて、画分（４０ｍｌ）を集めて合わせた。
【００９２】
[0099]  スクテラレイン（１）、イソスクテラレイン（２）、ルテオリン（３）、およびアピゲニン（４）は部分的に重なった画分においてＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムから溶離された。分取ＨＰＬＣ方法Ａ（表３）を利用して個々の化合物を精製した。
【００９３】
[0100]  フラバノン類であるカルタミジン（Ｃａｒｔｈａｍｉｄｉｎ）（５）およびイソカルタミジン（Ｉｓｏｃａｒｔｈａｍｉｄｉｎ）（６）は、上記のフラボン類とは異なる画分においてＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムから一緒に溶離された。分取ＨＰＬＣ方法Ｂ（表３）を用いてカルタミジン（５）およびイソカルタミジン（６）を精製した。
【００９４】
[0101]  イソスクテラレインは、ＬＣ／ＭＳならびに１Ｄおよび２Ｄ  ＮＭＲ分析に基づいて同定された。全ての他の化合物（１、３〜６）は、市販の参照標準または本物であることを証明された合成による標準とのＬＣ／ＭＳおよびＮＭＲでの比較に基づいて同定された。ＮＭＲスペクトルをＶａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｐｌｕｓ  ４００  ＭＨｚを用いて記録した。そのＨＰＬＣおよびＵＶスペクトルを、ＤＡＤ検出器を装備したＡｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １２００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣシステムを用いて、およびＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（１５０×２．１ｍｍ，３μｍ）カラムを用いて記録した。その分子質量をＡｐｐｌｉｅｄ  Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ６２１０  ＴＯＦ  ＬＣ／ＭＳを用いてネガティブモードで決定した。用いた機器の特性の要約を表１−１に示す。
【００９５】
【表４】
2012521424.tif 000007
【００９６】
[0102]  表１−１：ＨＰＬＣ法。下記にリストしたカラムを化合物１〜６の単離において用いた。全てのＨＰＬＣの実行（ｒｕｎｓ）に関するクロマトグラフィーに関して同じ溶媒の勾配が用いられ、流速のみが明記したように異なっていた。勾配：溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ；１０％Ｂから６０％Ｂまでの３０分間での、アップフロントホールド（ｕｐｆｒｏｎｔ  ｈｏｌｄ）無しでの直線勾配。
【００９７】
[0103]  化合物１〜６を同定するために用いられたＮＭＲデータを下記で述べる。
[0104]  スクテラレイン（１）：CAS# 529-53-3; LC/MS [M-H]- m/z 285.0425。式１は、化合物（１）の重要なＨＭＢＣ相関を示す。化合物１に関するＮＭＲデータを表１−２に示す。
【００９８】
【化１】
2012521424.tif 000008
【００９９】
[0105]  イソスクテラレイン（２）: CAS# 41440-05-5; LC/MS [M-H]- m/z 285。式（２）は、化合物（２）の重要なＨＭＢＣ相関を示す。化合物２に関するＮＭＲデータを表１−３に示す。
【０１００】
【化２】
2012521424.tif 000009
【０１０１】
[0106]  ルテオリン（３）：CAS# 491-70-3; LC/MS [M-H]- m/z 285.0403。式３は、化合物（３）の重要なＨＭＢＣ相関を示す。化合物３に関するＮＭＲデータを表１−４に示す。
【０１０２】
【化３】
2012521424.tif 000010
【０１０３】
[0107]  アピゲニン（４）CAS# 520-36-5; LC/MS [M-H]- m/z 269.04479。式（４）は、アピゲニン（４）の構造を示す。
【０１０４】
【化４】
2012521424.tif 000011
【０１０５】
[0108]  カルタミジン（５）：CAS# 479-54-9; LC/MS [M-H]- m/z 287。式（５）は、化合物（５）の重要なＨＭＢＣ相関を示す。化合物５に関するＮＭＲデータを表１−５に示す。
【０１０６】
【化５】
2012521424.tif 000012
【０１０７】
[0109]  イソカルタミジン（６）：CAS# 2569-76-8; LC/MS [M-H]- m/z 287。式（６）は、化合物（６）の重要なＨＭＢＣ相関を示す。化合物６に関するＮＭＲデータを表１−６に示す。
【０１０８】
【化６】
2012521424.tif 000013
【０１０９】
調製実施例２−ヒトのインビボ実験のためのＢＺＬ１０１の調製
[0110]  ＢＺＬ１０１はシソ科のセイタカナミキソウの空気中に生長した部分の水性抽出物である。草本セイタカナミキソウ（中国語ピンイン字訳−Ｂａｎ  Ｚｈｉ  Ｌｉａｎ  （ＢＺＬ））は主に四川、江蘇、江西、福建、広東、広西および陝西の省における黄河（Ｈｕａｎｇ  Ｐｏ）の南東地方に生えている。その植物は晩夏および初秋にその花が咲いた後に収穫される。その空気中に生長した部分（葉および茎）を根から切り離し、出発物質（ＢＺＬ）として用いる。その草本の空気中に生長した部分を天日で乾燥させ、全草として包む。純度を確実にするために、その草本を植物学的、形態学的および化学的特性付けにより同定し、本物であることを確認する。
【０１１０】
[0111]  ＢＺＬ１０１の１回量は下記の手順により作られ、それをＢＺＬ１０１と呼ぶ（Ｂｉｏｎｏｖｏ，  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州エメリビル）。
・１８０グラムの原料のままの草本を挽いて微細な粉末にする（２５メッシュ）
・その粉末を１８００ｍｌの蒸留水と混合してスラリーを形成する
・そのスラリーを７０〜７２℃で６０分間煮る
・その抽出物をデカントし、２２μｍフィルターを通して濾過する
・抽出後のその上清の重量は１６８グラムである
・その溶液の体積は１７５０ｍｌである
・その抽出物を真空蒸発器で濃縮して水の体積を３５０ｍｌまで減らし、それは最初の溶液の５：１の濃度を構成する
・その抽出物中の可溶性物質の乾燥重量は１２グラムである
・それを無菌の真空密封された容器の中に包装する
・公認の試験所により、細菌、酵母および重金属に関する試験が実施される。
【０１１１】
[0112]  より高い用量（例えば１日あたり２０、３０および４０グラム）に関して、原料のままの草本（セイタカナミキソウの空気中に生長した部分および水の量を比例するように量り、結果として得られる可溶性物質の乾燥重量を比例させる。
【０１１２】
実施例１：セイタカナミキソウからの有効物質の特性付け
理論的根拠
[0113]  ＢＺＬ１０１は乳癌細胞において細胞死を誘導するが、癌化していない（ｎｏｎ−ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ）乳房の上皮細胞では細胞死を誘導しない。この選択的な細胞毒性は、ＢＺＬ１０１による腫瘍細胞における活性酸素種（ＲＯＳ）の強い誘導に基づいている。結果として、ＢＺＬ１０１で処理された癌細胞は広範囲にわたる酸化的ＤＮＡ損傷を発現し、壊死性の死で死ぬ。ＢＺＬ１０１で処理された細胞の発現プロファイリングからのデータは、酸化的ストレス、ＤＮＡ損傷および死を促進する遺伝子の活性化を含む死の経路を強く支持している。乳癌細胞において、ＢＺＬ１０１により誘導された酸化的損傷はポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の過剰活性化ならびにそれに続くＮＡＤのレベルの持続性の減少およびＡＴＰの枯渇をもたらし、そのいずれも癌化していない細胞では観察されない。ＰＡＲＰの阻害は結果として壊死の抑制およびアポトーシス性の死のプログラムの活性化をもたらすため、ＰＡＲＰの過剰活性化はＢＺＬ１０１により誘導される壊死性の死のプログラムの手段となっている。ＢＺＬ１０１処理は腫瘍細胞における解糖の選択的阻害をもたらし、それは解糖経路内の酵素活性の低下およびラクテート産生の阻害から明らかである。腫瘍細胞はしばしばエネルギー生産に関して解糖に頼っているため、観察された解糖の阻害は乳癌細胞において選択的に起こるエネルギー崩壊（ｅｎｅｒｇｅｔｉｃ  ｃｏｌｌａｐｓｅ）および壊死性の死における重要な要因でありそうである。ＢＺＬ１０１の癌細胞に対する期待できる選択性は、非常に解糖的な腫瘍細胞と正常な細胞の間の代謝的な違いに基づいている。
【０１１３】
[0114]  ＢＺＬ１０１から単離された個々の化合物を用いて、いくつかのタイプの実験を実施した。
[0115]  ＢＺＬ１０１からの合計７種類の精製された化合物を、水性ＢＺＬ１０１抽出物全体に存在するいくつかの生物学的活性：ＲＯＳの誘導、ＤＮＡ損傷および細胞死に関して試験した。下記のパラメーターを調べた：
１．ミトコンドリア膜電位差（ＭＴＰ）の喪失の誘導。試験した全ての化合物がＭＴＰの喪失を誘導した。
【０１１４】
２．活性酸素種（ＲＯＳ）の誘導。誘導されたＲＯＳの細胞透過性指示薬、例えばジヒドロエチジウム（スーパーオキシドに特異的）（図２）、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ（ほとんどのタイプのＲＯＳ）（図１）およびＭｉｔｏＳＯＸ（ミトコンドリアに由来するスーパーオキシド）（図３）からの蛍光を、蛍光プレートリーダーおよびＦＡＣＳを用いて調べた。
【０１１５】
３．ミトコンドリア由来のＲＯＳに関する特異的な指示薬、および／または既知の源、例えばミトコンドリア、ユビキノンオキシドレダクターゼＮＱＯ（ミトコンドリア複合体Ｉ）およびＮＡＤＰＨオキシダーゼ類によるＲＯＳ産生の特異的阻害剤のどちらかを用いて、誘導されたＲＯＳの可能性のある細胞の源に関しても化合物を試験した。
【０１１６】
４．ＤＮＡ損傷の誘導に関して、個々の細胞におけるＤＮＡ損傷の検出を可能にするコメットアッセイとして知られる試験を用いて化合物を試験した。（図４）
５．その化合物で処理された細胞における死の誘導を、細胞透過性に関するヨウ化プロピジウム試験およびそれに続くＦＡＣＳでの分析を用いて調べた。
【０１１７】
６．細胞死の方式（すなわちアポトーシス対壊死）を、いくつかの基準を用いて調べた：アネキシンＶとの結合に関して陽性になるような細胞の変換；ＤＮＡの断片化（アポトーシスでの死に特徴的）および細胞のＡＴＰレベルの低下（壊死性の死の間に一般的に観察される）（図５）。１．ミトコンドリア膜電位差（ＭＴＰ）の喪失の誘導。試験した全ての化合物がＭＴＰの喪失を誘導した。
【０１１８】
２．活性酸素種（ＲＯＳ）の誘導。誘導されたＲＯＳの細胞透過性指示薬、例えばジヒドロエチジウム（スーパーオキシドに特異的）（図２）、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ（ほとんどのタイプのＲＯＳ）（図１）およびＭｉｔｏＳＯＸ（ミトコンドリアに由来するスーパーオキシド）（図３）からの蛍光を、蛍光プレートリーダーおよびＦＡＣＳを用いて調べた。
【０１１９】
３．ミトコンドリア由来のＲＯＳに関する特異的な指示薬、および／または既知の源、例えばミトコンドリア、ユビキノンオキシドレダクターゼＮＱＯ（ミトコンドリア複合体Ｉ）およびＮＡＤＰＨオキシダーゼ類によるＲＯＳ産生の特異的阻害剤のどちらかを用いて、誘導されたＲＯＳの可能性のある細胞の源に関しても化合物を試験した。
【０１２０】
４．ＤＮＡ損傷の誘導に関して、個々の細胞におけるＤＮＡ損傷の検出を可能にするコメットアッセイとして知られる試験を用いて化合物を試験した。（図４）
５．その化合物で処理された細胞における死の誘導を、細胞透過性に関してヨウ化プロピジウム試験およびそれに続くＦＡＣＳでの分析を用いて調べた。
【０１２１】
６．細胞死の方式（すなわちアポトーシス対壊死）を、いくつかの基準を用いて調べた：アネキシンＶとの結合に関して陽性になるような細胞の変換；ＤＮＡの断片化（アポトーシスでの死に特徴的）および細胞のＡＴＰレベルの低下（壊死性の死の間に一般的に観察される）（図５）。
【０１２２】
[0116]  図１−５で示したデータを下記の表１−７で要約する。
【０１２３】
【表５】
2012521424.tif 000014
【０１２４】
[0117]  ２種類の乳癌細胞株ＭＤＡ  ＭＢ２３１およびＳＫＢｒ３が表１−７で要約した実験において用いられ、類似の結果が得られた。
結果
[0118]  試験した化合物の全てがミトコンドリア膜電位差の喪失を誘導し、模擬処理した（ｍｏｃｋ−ｔｒｅａｔｅｄ）細胞と比較して２５から９０％までのＭＴＰの喪失の範囲であった（示していない）。
【０１２５】
[0119]  その化合物のほとんどが細胞毒性活性を有する；しかし、それぞれの細胞毒性の程度は異なっている（表１−７）。その化合物は活性酸素種（ＲＯＳ）の誘導、ＤＮＡ損傷および細胞のエネルギー状態に対して違いのある作用を有する（図１−５）。従って、ＢＺＬ１０１抽出物は、細胞死の誘導の方式が異なる可能性のあるいくつかの化合物を含む。
【０１２６】
[0120]  異なる化合物による死の誘導の機構の分析は、少なくとも２種類の異なる細胞毒性の方式を明らかにする：
[0121]  試験した全ての化合物は処理後数分以内に細胞性ＲＯＳを誘導し、それは酸化剤感受性蛍光プローブ５−（および−６）−クロロメチル−２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセイン  ジアセテート  アセチルエステル（ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡまたはＤＣＦＤＡ）を用いながら細胞に負荷をかける（ｌｏａｄｉｎｇ）ことにより決定された。ＤＣＦＤＡは還元型では非蛍光性であり、容易に膜に浸透する。細胞のエステラーゼはそのアセテート基を切断する。次いでそのチオール反応性クロロメチル基が細胞のチオール類に結合し、その染料を細胞の内側に捕らえ、そこで酸化がそれを蛍光型に変換する。ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡは、細胞の過酸化水素、ヒドロキシルラジカル類、および過酸化水素から下流にある様々なフリーラジカル生成物により酸化される。それはスーパーオキシドによる酸化には比較的非感受性である。しかし、スーパーオキシドの不均化により過酸化水素が生成されるため、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡはスーパーオキシド生成の間接的な指示薬として利用できる。図１を見れば分かるように、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡは試験した全てのＢＺＬ１０１化合物により細胞内で酸化されるが、誘導される全ＲＯＳのレベルは異なっている。
【０１２７】
[0122]  試験した全ての化合物はスーパーオキシドも誘導し、それはスーパーオキシドにより選択的に酸化される細胞浸透性指示薬であるジヒドロエチジウムを用いた細胞の染色により決定された。細胞質ゾルのジヒドロエチジウムは青い蛍光を示す；しかし、一度このプローブがスーパーオキシドにより酸化されてエチジウムになると、それは細胞のＤＮＡの内部にインターカレートし、その核を鮮やかな蛍光赤色に染色し、それはフローサイトメトリーの方法により容易に検出される（図２）。
【０１２８】
[0123]  ２種類のフラボノイド類アピゲニンおよびルテオリンは、その由来がミトコンドリアであると同定されるスーパーオキシドの生成を誘導する。ミトコンドリア由来のスーパーオキシドの特異的な検出薬であるＭｉｔｏＳＯＸは、アピゲニンおよびルテオリンによりその蛍光形に変換されたが、他の化合物によっては変換されなかった。加えて、ミトコンドリア呼吸の阻害剤（アジ化ナトリウム、ＮａＮ３）およびミトコンドリア複合体Ｉの阻害剤（ジクマロール、示していない）はアピゲニンおよびルテオリンによるスーパーオキシドの生成を妨げた（図３）。
【０１２９】
[0124]  アピゲニンおよびルテオリンは、それらがＤＮＡ損傷を誘導しない点で他の化合物と異なっている（図４）。しかし、共に細胞毒性であり、アネキシンＶとの結合、ＤＮＡ断片化、および処置の最初の数時間の間に観察されるわずかだが一貫したＡＴＰレベルの増大に基づいてアポトーシス性であると特性付けられる重大な細胞死を誘導する（図５）。これら全ての特徴がアポトーシス性の死の特質である。
【０１３０】
[0125]  テトラヒドロキシフラボン類（スクテラレイン、イソスクテラレイン、カルタミジンおよびイソカルタミジン）またはペンタヒドロキシフラボン（名称無し）のどちらかであると同定された５種類の化合物は、異なる機構により細胞死を誘導する。それらはＲＯＳを誘導するが、ミトコンドリア外由来のものである（その源はまだ決定されていない）。これらの化合物はＤＮＡ損傷も誘導し、その程度はＲＯＳの誘導のレベルと相関しているようである。スクテラレインおよび同様の化合物により誘導されるタイプのＲＯＳ、例えば一重項酸素は、ＤＮＡ損傷の誘導において特に有効である可能性がある。スーパーオキシドは膜透過性では無く、直接的な酸化的ＤＮＡ損傷を誘導することができないため、これらの化合物により誘導されるほとんどのＲＯＳはスーパーオキシドでは無いと仮定するのは理にかなっている。しかし、スーパーオキシドは細胞中で迅速に過酸化物に変換されることができ、それはＤＮＡを直接損傷することができる。
【０１３１】
[0126]  全ＢＺＬ抽出物と同様に、上記で言及した５種類の化合物は細胞のＡＴＰのレベルの低下を誘導する。アネキシンＶに関する染色が無いことまたは低いことを伴うＡＴＰの喪失は、壊死方式の細胞死とより一致している。
【０１３２】
図の説明文：
[0127]  図１．ＣＭ−Ｈ２  ＤＣＦＤＡを用いた染色により決定された、ＳＫＢｒ３細胞におけるＲＯＳの誘導。示した化合物を細胞に、２０μｇ／ｍｌ増殖培地で添加し、続いて１０μＭ  ＣＭ−Ｈ２  ＤＣＦＤＡを添加した。ミトコンドリア呼吸の阻害剤であるＮａＮ３を１０ｍＭで添加した。３０分間の保温の後、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、蛍光に関してＦＡＣＳｃａｎで分析した。その化合物の名前を、この図および他の図において次のように略記する：Ａ−アピゲニン；Ｃ−カルタミジン；Ｌ−ルテオリン；Ｓ−スクテラレイン；ＩＣ−イソカルタミジン；ＩＳ−イソスクテラレイン；Ｐ−３２０の分子量を有する種（ペンタヒドロキシフラボンであると思われる）。
【０１３３】
[0128]  図２．ジヒドロエチジウムを用いた染色により決定された、ＳＫＢｒ３細胞におけるスーパーオキシドの誘導。示した化合物を細胞に添加し、続いて５μＭジヒドロエチジウムを添加した。２０分間の保温の後、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、蛍光に関してＦＡＣＳｃａｎで分析した。
【０１３４】
[0129]  図３．細胞をミトコンドリア由来のスーパーオキシドの指示薬であるＭｉｔｏＳＯＸで染色した。処理は図２に関する説明文において記述されているように行われた。
[0130]  図４．ＢＺＬ１０１から単離された化合物によるＳＫＢｒ３細胞におけるＤＮＡ損傷の誘導を、コメットアッセイを用いて分析した。細胞を示した化合物で２０μｇ／ｍｌで１５分間処理し、Ｔｒｅｖｉｇｅｎからのコメットアッセイキットを用いて、製造業者の説明書に従って分析した。簡潔には、細胞を集め、洗浄し、ＰＢＳで再懸濁した。その細胞を３７℃において融解した低融点アガロースと混ぜ合わせ、ピペットでコメットスライドの上に移した。アガロースを４℃で３０〜４０分間凝固させ、冷えた溶解溶液（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ，  Ｉｎｃ．）中に４℃で３０分間浸した。そのスライドを新しく調製したアルカリ性溶液（３００ｍＭ  ＮａＣｌおよび１ｍＭ  ＥＤＴＡ）中に２０分間浸し、同じアルカリ性緩衝液中で３００ｍＡにおいて３０〜４０分間電気泳動を行った。スライドを水中ですすぎ、次いで７０％エタノール中で５分間固定した。空気乾燥の後、核をＳｙｂｒ  ｇｒｅｅｎ（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ，  Ｉｎｃ．）で染色し、蛍光顕微鏡下で観察した。コメットを有する細胞の百分率を、スライドの正体を知らない観察者が定量した。
【０１３５】
[0131]  図５．ＳＫＢｒ３細胞を９６ウェルプレート上に蒔き、示した化合物で４時間処理した。細胞をインサイチュで溶解し、ＡＴＰ含有量をＲｏｃｈｅからのＡＴＰ  Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  ＨＳＩＩを用いて９６ウェルプレートに基づくルミノメーター上で分析した。
【０１３６】
結論：
[0132]  ＢＺＬ１０１抽出物は細胞毒性活性を有する化合物を含む。これらの化合物はミトコンドリアおよび細胞のＤＮＡに対して異なる作用を示すが、全てがヒトの癌細胞に対して細胞毒性活性を有する。その同定された化合物の内の２種類、アピゲニンおよびルテオリンはミトコンドリア性スーパーオキシドおよびアポトーシス性の死を誘導し、それはミトコンドリア性または内在性の経路により実行される。
【０１３７】
[0133]  他の５種類の化合物、特にスクテラレインおよびイソスクテラレインはＲＯＳを、続いてＤＮＡ損傷および細胞死を誘導し、それはプログラムされた壊死の特質を有する。
【０１３８】
実施例２−セイタカナミキソウから抽出された有効物質の分離および相乗的活性
[0134]  実施例２において実証されているように、セイタカナミキソウから抽出されたいくつかの化合物は、活性酸素種（ＲＯＳ）の生成、ＤＮＡ損傷および細胞死を誘導することが示された。その単離された種の組み合わせられた活性をよりよく理解するために、半枝蓮から単離されたいくつかのフラバノン類およびフラボン類を個別に、および組み合わせで試験した。試験したフラバノン類およびフラボン類を図８に示す。これらの化合物１〜８を、ＲＯＳ、ＤＮＡ損傷および細胞死の誘導に関して、実施例２において記述したように試験した。これらの試験の結果を下記の表１０および１１に示す。
【０１３９】
【表６】
2012521424.tif 000015
【０１４０】
[0135]  表１０および１１で分かるように、ルテオリンおよびイソスクテラレインの組み合わせは活性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において同じ濃度のルテオリン単独よりもはるかに有効である。同様に、ルテオリンおよびイソスクテラレインの組み合わせは活性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において同じ濃度のイソスクテラレイン単独よりもはるかに有効である。この意味で、イソスクテラレインおよびルテオリンの組み合わせはＲＯＳの生成および細胞死の誘導に対して相乗作用を有すると考えられる。
【０１４１】
[0136]  ルテオリンおよびアピゲニンの組み合わせは活性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において同じ濃度のルテオリン単独よりもはるかに有効である事実も表１０および１１から明らかである。同様に、ルテオリンおよびアピゲニンの組み合わせは活性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において同じ濃度のアピゲニン単独よりもはるかに有効である。この意味で、アピゲニンおよびルテオリンの組み合わせはＲＯＳの生成および細胞死の誘導に対して相乗作用を有すると考えられる。
【０１４２】
[0137]  表１０および１１で分かるように、アピゲニンおよびイソスクテラレインの組み合わせは活性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において同じ濃度のアピゲニン単独よりもはるかに有効である。同様に、アピゲニンおよびイソスクテラレインの組み合わせは活性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において同じ濃度のイソスクテラレイン単独よりもはるかに有効である。この意味で、イソスクテラレインおよびアピゲニンの組み合わせはＲＯＳの生成および細胞死の誘導に対して相乗作用を有すると考えられる。
【０１４３】
[0138]  表１０および１１で示した結果は、２種類の異なる乳癌細胞株において実験を実施することにより確認された。
実施例４−ＢＺＬ１０１に由来する有効物質のヒトにおけるインビボでの有効性
[0139]  経口でのＢＺＬ１０１の安全性および臨床での活性を実証するため、セイタカナミキソウから分離された有効化合物の組み合わせを進行した乳癌を有するヒトの患者において試験する。
【０１４４】
[0140]  適格な患者は組織学的に確証された転移性乳癌および測定可能な疾患を有する。患者はその試験の間は他の化学療法、ホルモン療法または生薬を一切与えられない。患者は１日あたり３５０ｍｌ（アピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、およびスクテラリンからなるグループの１種類、２種類、３種類、４種類、５種類または全てのメンバーのそれぞれ０．００００１〜１グラムに等しい）の薬物を、疾患の進行、毒性または個人的な好みがそれらを中止させるまで与えられる。主要エンドポイントは安全性、毒性および腫瘍の応答である。
【０１４５】
[0141]  患者は登録され、薬物を与えられる。平均年齢および前の処置の平均数を記録する。血液学的な、およびグレードＩＩＩまたはＩＶの非血液学的な有害事象（ＡＥ）がもしあれば追跡し、記録する。グレードＩおよびＩＩの有害事象、例えば吐き気、下痢、頭痛、鼓腸、嘔吐、便秘、および疲労がもしあれば注意深く観察し、記録する。応答に関して評価可能な患者は評価し、９０日間を超える疾患の安定（ＳＤ）を有する患者および１８０日間を超えるＳＤを有する患者は注意深く観察し、記録する。軽微な客観的な腫瘍の退縮を有する患者も注意深く観察し、記録する。
【０１４６】
[0142]  患者は１箇所以上の適切な研究センターにおいて登録され、地元の施設内審査委員会により認可されたインフォームドコンセントに署名する。以下のことにより、患者はその試験から除外される：３ヶ月を超える期間の療法により安定化されていない、大規模な肝臓での併発（ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）（肝実質の５０％を超える）、リンパ管性の肺での併発、中枢神経系での併発または脊髄圧迫、多数の、または重篤な食品または薬アレルギーの病歴、ならびに２．０ｇ／ｄｌを超えるクレアチニン、１．７ｇ／ｄｌを超える総ビリルビン、２，５００細胞／μＬ未満の白血球数および７５，０００ｍｍ３未満の血小板数により定義される、器官または骨髄の機能不全。（“ｄｌ”＝デシリットル（単数または複数）。）
[0143]  安全性の監視は継続的に実施され、患者はベースラインにおいて、およびＹ週間ごとに診察のために医師に会う。有害事象は共通毒性基準第２版を用いて等級分けされ、器官系によりカテゴリーを割り当てられ、試験薬物に関して関係が薄い（ｒｅｍｏｔｅ）、関係がある可能性あり（ｐｏｓｓｉｂｌｅ）、関係がある可能性が高い（ｐｒｏｂａｂｌｙ）または確実に関係あり（ｄｅｆｉｎｉｔｅｌｙ  ｒｅｌａｔｅｄ）と符号化される。ベースラインの腫瘍の評価は試験薬物の開始の１４日以内に、および３ヶ月ごとに行われる。応答はＲＥＣＩＳＴ基準を用いて評価される。試験薬物は来診ごとに与えられ、この来診においてコンプライアンスおよび摂取される投与量の再吟味が行われた。試験薬物は、１日２回の分割用量で投与される完全な日用量を含む、密封されてラベルが貼られたアルミニウムの包みの中の液体として提供される。試験薬物は、腫瘍の進行または用量制限毒性に直面したと決定されるまで、またはその対象が自発的に中止すると決心するまで毎日投与され、その場合は中断の理由を得る。
【０１４７】
結果
[0144]  上記の試験の結果を、試験のエンドポイントの達成（ｍｅｅｔｉｎｇ）に基づいて記録し、評価する。
【０１４８】
実施例４−セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質中の有効物質の濃度
[0145]  ＢＺＬ１０１を本明細書で記述したように調製する。有効化合物、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンを同定し、１ｍｇのＢＺＬ１０１に関して定量する。ＢＺＬ１０１中の可溶性物質１ｍｇ中のルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンのそれぞれの質量を表４−１に示す：
【０１４９】
【表７】
2012521424.tif 000016
【０１５０】
[0146]  表４−１で分かるように、この説明的であり限定的では無い実施例において、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質１ｍｇは約０．４４μｇ±０．０５μｇのルテオリン、０．４９μｇ±０．０４μｇのアピゲニン、２．１μｇ±０．２μｇのスクテラレインおよび１５μｇ±２μｇのスクテラリンを含む。従って、セイタカナミキソウから抽出された乾燥可溶性物質の各ｍｇは約１８μｇ±５μｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレイン、およびスクテラリンの組み合わせを約１：１．１：４．８：３４の比率で含む。
【０１５１】
実施例５−処置に屈折性の（ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ）転移性乳癌の処置におけるセイタカナミキソウ抽出物
[0147]  セイタカナミキソウの抽出物（“ＢＺＬ１０１”）を用いて転移性乳癌の患者の処置を実施した。抽出物ＢＺＬ１０１を本質的に上記で記述したように調製し、転移性乳癌に関する１クール以上の処置を受けた患者に与えた。ＢＺＬ１０１は下記のように１日１回（ｑ．ｄ．）または１日２回（ｂ．ｉ．ｄ．）のどちらかで与えられた。２０グラム、３０グラム、および４０グラムの用量は、それらは半枝蓮に関する文献においてかつて報告されたよりもはるかに高いにも関わらず、十分に許容されることが判明した。加えて、幾人かの患者は下記で論じるように有効性を示した。
【０１５２】
[0148]  ＢＺＬ１０１は半枝蓮の抽出物であり、それは新規の作用機構を示す。正常な細胞はエネルギー生産に関してクエン酸回路（＞８５％）および解糖（＜７％）に依存している。癌細胞はエネルギー生産に関して解糖（＞８５％）に依存している。ＢＺＬ１０１は解糖を阻害することによりエネルギー生産を阻害する。ＢＺＬ１０１はＤＮＡ損傷および癌細胞の死を引き起こす。ＢＺＬ１０１は正常な細胞において細胞死を引き起こさない。
【０１５３】
[0149]  癌細胞におけるＢＺＬ１０１の選択的細胞毒性活性に関して下記の原理が提案された：腫瘍細胞はエネルギー生産に関して解糖に頼っている。これは増大した内因性の活性酸素種（ＲＯＳ）のレベルと関係している。正常な細胞はそれらのエネルギー需要に関して酸化的リン酸化に頼っている。ＢＺＬ１０１処理は腫瘍細胞におけるＲＯＳのレベルをさらに増大させ、これはポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の過剰活性化および重度の酸化的ＤＮＡ損傷をもたらす。正常な細胞では、ＢＺＬ１０１処理は結果としてＲＯＳレベルの穏やかな増大およびＰＡＲＰの活性化無しでの中程度のＤＮＡ損傷のみをもたらす。
【０１５４】
[0150]  ＰＡＲＰの活性化はＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ（ポリＡＤＰリボースの合成のための基質）およびＡＴＰの貯蔵を激減させる。解糖は細胞質ゾルのＮＡＤ＋をＡＴＰを生成するための基質として用い、それはＮＡＤ＋の欠乏により阻害される。（酸化的リン酸化はＡＴＰを生成するためにミトコンドリアのＮＡＤ＋を用いており、通常はＰＡＲＰの活性化の影響を受けない）。ＢＺＬ１０１に誘導されるＰＡＲＰの活性化によるＮＡＤ＋およびＡＴＰの激減は解糖の阻害、さらにはＡＴＰレベルの低減および細胞死をもたらす。Breast Cancer Res Treat. 2007 Sep;105(1):17-28. Epub 2006 Nov 17. PMID: 17111207; Cancer Biol Ther. 2008 Jan 7;7(4) [印刷版に先んじての電子版] PMID: 18305410。
【０１５５】
[0151]  実施例３で概説した試験および最新の第１Ｂ相試験（実施例５）の主な特徴を、下記の表５−１において比較する。
【０１５６】
【表８】
2012521424.tif 000017
【０１５７】
ＢＺＬ１０１第１Ｂ相癌試験の主な特徴は下記のように要約される：
ＢＺＬ１０１第１Ｂ相の計画
[0152]  第１に：
・ＢＺＬ１０１の最大耐用量を決定する
・ＢＺＬ１０１の安全性および有効性についての予備的なデータを提供する
第２に：
・ＲＥＣＩＳＴ（固形腫瘍における応答評価基準）により定められる腫瘍応答
・全生存および無進行生存
・応答の持続期間
・参加者の報告するＱＯＬの変化（ＥＯＲＴＣ  ＱＬＱ−Ｃ３０）
[0153]  主な適格性基準
・組織学的に確証された乳癌を有していなければならない
・測定可能なステージＩＶの疾患を有していなければならない
・転移性疾患に関する３を超えない先行する化学療法（最初のものは数が限定されておらず、試験半ばで最大３と修正された）
[0154]  段階的に増大する容量の要約を下記の表５−２に示す：
【０１５８】
【表９】
2012521424.tif 000018
【０１５９】
[0155]  その試験に参加する患者に関するベースラインの特徴は、次の表５−３で示した通りである：
【０１６０】
【表１０】
2012521424.tif 000019
【０１６１】
[0156]  試験参加者の人口統計学的な内訳を次の表５−４において要約する：
【０１６２】
【表１１】
2012521424.tif 000020
【０１６３】
[0157]  試験参加者が経験した有害事象の数およびタイプを下記の表５−５に示す：
【０１６４】
【表１２】
2012521424.tif 000021
【０１６５】
[0158]  第１Ｂ相の用量制限毒性の定義：
（ａ）試験薬物投与に関係がある可能性がある、関係がある可能性が高い、または確実に関係がある、ＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ  Ｖ  ３．０に基づくグレード３、４、または５の毒性
（ｂ）試験薬物投与に関係がある可能性がある、関係がある可能性が高い、または確実に関係がある、３週間より長い期間継続するグレード２の胃腸毒性
（ｃ）試験薬物投与に関係がある可能性がある、関係がある可能性が高い、または確実に関係がある、グレード３以上に悪化するベースラインの実験室または医学的状態
[0159]  試験参加者が経験した用量制限毒性（ＤＬＴ）を次の表５−６で述べる：
【０１６６】
【表１３】
2012521424.tif 000022
【０１６７】
[0160]  第１Ｂ相の有害事象の要約：
ａ）ＢＺＬ１０１は十分に許容される。最も一般的な関係のある有害事象は以下のものである：下痢（４８％）、吐き気（４０％）、嘔吐（２６％）および疲労（２２％）。
【０１６８】
ｂ）その試験において１２の重篤な有害事象があり、１つのみが試験薬物投与に関係があると考えられた：４０ｇ／日の用量における、嘔吐によるグレード３の肋骨の痛みに関する入院。
【０１６９】
ｃ）ＤＬＴを有する患者が３人いた：
（ｉ）グレード４のＡＳＴの上昇、
（ｉｉ）同じ患者におけるグレード３の下痢およびグレード３の疲労、ならびに
（ｉｉｉ）嘔吐によるグレード３の肋骨の痛み。
【０１７０】
[0161]  試験薬物投与に関するコンプライアンスを下記の表５−７で述べる：
【０１７１】
【表１４】
2012521424.tif 000023
【０１７２】
[0162]  第１Ｂ相の予備的な有効性：
ａ）２７人の内２１人は２８日間以上試験を続けた
ｂ）８／２１（３８％）は９０日間を超えて安定であった
ｃ）４／２１（１９％）は１８０日間を超えて安定であった
ｄ）２７人の内１８人はＲＥＣＩＳＴにより評価可能であった（少なくとも１個の測定可能な病巣、追跡調査（ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ  ｓｃａｎ）が完了した、または未完である）
ｅ）６／１８（３３％）は９０日間を超えて安定であった
ｆ）３／１８（１７％）は１８０日間を超えて安定であった
[0163]  これらの結果を次の表５−８で要約する：
【０１７３】
【表１５】
2012521424.tif 000024
【０１７４】
第２相の評価項目
主要な成果
[0164]  ＲＥＣＩＳＴ基準を用いて腫瘍の応答の程度に基づく有効性の予備的な見積もりを得る
[0165]  それぞれの来診において、自己報告、身体検査および実験室での結果により評価される有害事象
[0166]  二次的な成果
ａ．腫瘍の応答：臨床的利益の程度、完全な応答、部分的な応答、疾患の進行
ｂ．応答の持続期間および生存時間：全体的な応答、完全な応答および部分的な応答の持続期間、全生存、ならびに進行の無い生存
ｃ．ＥＯＲＴＣ  ＱＬＱ−Ｃ３０を用いた生活の質の変化
要約
[0167]  到達したＭＦＤは４０ｇ／日であった。第２相は８０人の患者（４０人のＨＲ＋および４０人のＨＲ−）を登録して２０ｇ／日で進められるであろう。
【０１７５】
[0168]  半枝蓮の抽出物はインビトロで乳癌細胞の増殖を阻害する。
[0169]  ＢＺＬ１０１処理は解糖経路内の酵素活性の減少から明らかである解糖の阻害およびラクテート産生の阻害をもたらす。
【０１７６】
[0170]  ＢＺＬ１０１は癌細胞において選択的な細胞死を引き起こし、健康な細胞では引き起こさない。
[0171]  ＢＺＬ１０１の経口投与は十分に許容される。最も一般的な有害事象は以下のものである：下痢（４８％）、吐き気（４０％）、嘔吐（２６％）および疲労（２２％）。
【０１７７】
[0172]  ＤＬＴを有した３人の患者がいた：グレード４のＡＳＴの上昇、同じ患者におけるグレード３の下痢およびグレード３の疲労、ならびに嘔吐によるグレード３の肋骨の痛み。
【０１７８】
[0173]  １つのＳＡＥがＢＺＬ１０１に起因すると考えられた；４０ｇ／日における、嘔吐によるグレード３の肋骨の痛みに関する入院。
[0174]  平均で、試験薬物投与に関するコンプライアンスは定められた摂取される用量の９０％であった。
【０１７９】
[0175]  この重度に前処置された（ｐｒｅ−ｔｒｅａｔｅｄ）集団において、７／１８（３９％）は９０日間を超えて安定であり、４／１８（２２％）は１８０日間を超えて安定であった。
【０１８０】
[0176]  登録された２７人の女性の内で、１８人は進行により、３人は患者の選択により、２人はＡＥにより、２人はＳＡＥにより、および１人は試験手順に関するノンコンプライアンスにより中止した。
【０１８１】
[0177]  前記のことから、２０グラム、３０グラムまたは４０グラムの乾燥重量で投与されるセイタカナミキソウの抽出物は転移性乳癌、特に処置に抵抗性であることが判明している転移性乳癌の処置に有効であり、十分に許容されることを理解することができる。
【０１８２】
[0178]  前記のことから、セイタカナミキソウの抽出物の１５グラムの乾燥重量〜６０グラムの乾燥重量の日用量は、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ陰性乳癌および／またはトリプルネガティブ乳癌（他の組織に転移したそれらを含む）の処置に有効であると考えられる。これらの用量は他のＥＲ陰性、ＰＲ陰性、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ陰性およびトリプルネガティブ癌の処置にも有用であると考えられる。１日あたり２０、３０および４０グラムの乾燥重量の用量は前記の癌、特にＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ陰性乳癌および／またはトリプルネガティブ乳癌（他の組織に転移したそれらの乳癌を含む）の処置に特に有用であると考えられる。
【０１８３】
[0179]  実施例４で述べた方法論に従ってＢＺＬ１０１の追加の臨床試験を実施することができる。癌を有すると診断された患者を、実施例４で述べたように、処置する病気に応じて適切な修整を加えて、ＢＺＬ１０１の２０グラムの乾燥重量、３０グラムの乾燥重量または４０グラムの乾燥重量（または１５グラムの乾燥重量より大きいいずれかの他の量、例えば約１５〜６０グラムの乾燥重量）で処置し、評価する。処置される典型的な癌には、副腎皮質癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、成人ＣＮＳ脳腫瘍、小児ＣＮＳ脳腫瘍、乳癌、キャッスルマン病、子宮頚癌、小児非ホジキンリンパ腫、結腸および直腸（結腸直腸）癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリーの腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃腸カルチノイド腫瘍、胃腸間質腫瘍、胃腸絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭および下咽頭（ｈｙｐｏｐｈａｒｙａｇｅａｌ）癌、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、小児白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、肝臓癌、肺癌、肺カルチノイド腫瘍、非ホジキンリンパ腫、男性乳癌、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔および口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫（成人の軟組織の癌）、黒色腫皮膚癌、非黒色腫皮膚癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫（ｕｔｅｒｉｎｅ  ｓａｃｒｃｏｍａ）、膣癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウイルス由来の癌およびウイルスと関係する癌が含まれる。
【０１８４】
全般的な結論
[0180]  本明細書において本発明の好ましい態様を示し、記述したが、そのような態様は例としてのみ提供されていることは当業者には明らかであろう。当業者は、ここで、本発明から逸脱すること無く、数多くの変形、変更、および置換を思いつくであろう。本発明の実行において、本明細書で記述した本発明の態様に対して様々な代替案を用いてよいことは理解されるべきである。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定め、これらの特許請求の範囲内の方法および構成ならびにそれらの均等物はそれに含まれることを意図する。
【図１】
2012521424.tif 000025
【図２】
2012521424.tif 000026
【図３】
2012521424.tif 000027
【図４】
2012521424.tif 000028
【図５】
2012521424.tif 000029
【国際調査報告】
2012521424.tif 000030
2012521424.tif 000031
2012521424.tif 000032