【手続補正書】
【提出日】平成23年1月24日(2011.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Phanerochaete chrysosporium(ファネロケーテ・クリソスポリウム)由来であってＧＨＦ６に属するセロビオヒドロラーゼ又はその改変体と、
Phanerochaete chrysosporium以外の他起源のエンドグルカナーゼと、
を含有する、セルロース分解用酵素製剤。
【請求項２】
前記改変体は、配列番号２に記載のアミノ配列における２２位又はこれに相当する位置において、セリンがプロリンに置換されたアミノ酸変異を有する改変体である、請求項１に記載の酵素製剤。
【請求項３】
前記改変体は、配列番号２に記載のアミノ酸配列における以下の表に示すアミノ酸変異及びこれらに相当するアミノ酸変異からなる群から選択される１種又は２種以上を有する改変体である、請求項１又は２に記載の酵素製剤。
【表９】
2010041996.tif 000001
【請求項４】
前記他起源のエンドグルカナーゼは、ＧＨＦ５、ＧＨＦ７、ＧＨＦ１２及びＧＨＦ４５に属するエンドグルカナーゼから選択される１種又は２種以上である、請求項１〜３のいずれかに記載の酵素製剤。
【請求項５】
前記他起源のエンドグルカナーゼは、ＧＨＦ５に属し、かつ、Trichoderma reesei（トリコデルマ・リーゼイ）由来のエンドグルカナーゼ、Aspergillus niger（アスペルギルス・ニガー）由来のエンドグルカナーゼ及びAspergillus oryzae（アスペルギルス・オリザ)由来のエンドグルカナーゼからなる群から選択される１種又は２種以上である、請求項４に記載の酵素製剤。
【請求項６】
前記他起源のエンドグルカナーゼは、ＧＨＦ１２に属し、Trichoderma reesei由来のエンドグルカナーゼ、Aspergillus niger由来のエンドグルカナーゼ及びAspergillus oryzae由来のエンドグルカナーゼからなる群から選択される１種又は２種以上である、請求項４に記載の酵素製剤。
【請求項７】
前記他起源のエンドグルカナーゼは、ＧＨＦ７に属し、Trichoderma reesei由来のエンドグルカナーゼ及びAspergillus oryzae由来のエンドグルカナーゼから選択される、請求項４に記載の酵素製剤。
【請求項８】
前記他起源のエンドグルカナーゼは、Trichoderma reesei由来のエンドグルカナーゼである、請求項４に記載の酵素製剤。
【請求項９】
さらに、ＧＨＦ７に属するセロビオヒドロラーゼを含有する、請求項１〜８のいずれかに記載の酵素製剤。
【請求項１０】
Trichoderma reesei又はその形質転換体由来のセルラーゼ組成物を含有する、請求項１〜９のいずれかに記載の酵素製剤。
【請求項１１】
実質的にβ−グルコシダーゼを含有しない、請求項１〜１０のいずれかに記載の酵素製剤。
【請求項１２】
Phanerochaete chrysosporium由来であってＧＨＦ６に属するセロビオヒドロラーゼ又はその改変体を含有する、セルロースを分解するために他のセルラーゼと組み合わされて使用されるセルロース分解活性増強剤。
【請求項１３】
前記他のセルラーゼは、Phanerochaete chrysosporium以外の他起源のエンドグルカナーゼから選択される１種又は２種以上を含む、請求項１２に記載の増強剤。
【請求項１４】
前記他起源のエンドグルカナーゼは、ＧＨＦ５、ＧＨＦ７、ＧＨＦ１２及びＧＨＦ４５に属するエンドグルカナーゼから選択される１種又は２種以上である、請求項１３に記載の増強剤。
【請求項１５】
前記他起源のエンドグルカナーゼは、Trichoderma reesei、Aspergillus niger及びAspergillus oryzaeから選択される１種又は２種以上を起源とする、請求項１４に記載の増強剤。
【請求項１６】
配列番号２に記載のアミノ酸配列における２２位又はこれに相当する位置において、セリンがプロリンに置換されたアミノ酸変異を有し、ＧＨＦ６に属するセロビオヒドロラーゼ活性を有するタンパク質。
【請求項１７】
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１６に記載のタンパク質。
【請求項１８】
配列番号２に記載のアミノ酸配列における以下の表に示すアミノ酸変異及びこれらに相当するアミノ酸変異からなる群から選択される１種又は２種以上を有し、ＧＨＦ６に属するセロビオヒドロラーゼ活性を有するタンパク質。
【表１０】
2010041996.tif 000002
【請求項１９】
配列番号２に記載のアミノ酸配列において以下の表に示す各改変体が有する変異の種類に示すアミノ酸変異又はこれらのアミノ酸変異に相当する変異を有し、ＧＨＦ６に属するセロビオヒドロラーゼ活性を有するタンパク質。
【表１１】
2010041996.tif 000003
【請求項２０】
請求項１６又は１７に記載のタンパク質をコードするＤＮＡを含む、ＤＮＡ構築物。
【請求項２１】
請求項１８又は１９に記載のタンパク質をコードするＤＮＡを含む、ＤＮＡ構築物。
【請求項２２】
発現ベクターである、請求項２０又は２１に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項２３】
請求項２０又は２１に記載のＤＮＡ構築物によって形質転換された形質転換体。
【請求項２４】
Phanerochaete chrysosporium由来であってＧＨＦ６に属するセロビオヒドロラーゼ又はその改変体と、Phanerochaete chrysosporium以外の他起源のエンドグルカナーゼと、を発現する、形質転換体。
【請求項２５】
前記セロビオヒドロラーゼ又はその改変体と前記他起源のエンドグルカナーゼとを細胞表層に保持する又は細胞外に分泌する、請求項２４に記載の形質転換体。
【請求項２６】
β−グルコシダーゼの発現が抑制されている、請求項２４又は２５に記載の形質転換体。
【請求項２７】
前記セロビオヒドロラーゼ又はその改変体及び前記他起源のエンドグルカナーゼ以外のセルラーゼであって、内在性のセルラーゼの発現が抑制されている、請求項２４〜２６のいずれかに記載の形質転換体。
【請求項２８】
前記形質転換体は、非セルラーゼ生産菌である、請求項２４〜２６のいずれかに記載の形質転換体。
【請求項２９】
請求項２３〜２８のいずれかに記載の形質転換体を用いて、Phanerochaete chrysosporium由来であってＧＨＦ６に属するセロビオヒドロラーゼ又はその改変体と、Phanerochaete chrysosporium以外の他起源のエンドグルカナーゼと、を製造する、セルロース分解用の酵素製剤の生産方法。
【請求項３０】
セルロースの存在下、Phanerochaete chrysosporium由来であってＧＨＦ６に属するセロビオヒドロラーゼ又はその改変体と、Phanerochaete chrysosporium以外の他起源のエンドグルカナーゼと、を用いて、セルロースを低分子化する工程、を備える、セルロースの低分子化産物の生産方法。
【請求項３１】
前記低分子化工程は、β−グルコシダーゼの非存在下でセルロースを分解して、セルロースオリゴマーを得る工程である、請求項３０に記載の生産方法。
【請求項３２】
前記低分子化工程は、前記セルロースとともにリグニン及びヘミセルロースが共存している、請求項３０又は３１に記載の生産方法。
【請求項３３】
セルロースを原料として有用物質を生産する方法であって、
セルロースの存在下、β−グルコシダーゼの非存在下で、Phanerochaete chrysosporium由来であってＧＨＦ６に属するセロビオヒドロラーゼ又はその改変体と、Phanerochaete chrysosporium以外の他起源のエンドグルカナーゼと、を用いて、セルロースを分解してオリゴマーを生産する工程と、
前記セルロースオリゴマーをβ−グルコシダーゼで分解してグルコースを生産する工程と、
を備える、生産方法。
【請求項３４】
前記グルコース生産工程は、β−グルコシダーゼを発現するエタノール生産微生物を用いて前記セルロースオリゴマーを分解し、得られるグルコースを炭素源として用いるエタノール発酵工程である、請求項３３に記載の生産方法。
【請求項３５】
前記グルコース生産工程は、β−グルコシダーゼを発現する有機酸生産微生物を用いて前記セルロースオリゴマーを分解し、得られるグルコースを炭素源として用いる有機酸発酵工程である、請求項３３に記載の生産方法。
【請求項３６】
Phanerochaete chrysosporium(ファネロケーテ・クリソスポリウム)由来であってＧＨＦ６に属するセロビオヒドロラーゼ又はその改変体と、
ＧＨＦ５に属するエンドグルカナーゼと、
を細胞表層に保持し又は細胞外に分泌可能な、形質転換体。
【請求項３７】
前記ＧＨＦ５に属するエンドグルカナーゼは、Trichoderma reesei由来のエンドグルカナーゼである、請求項３６に記載の形質転換体。
【請求項３８】
さらに、ＧＨＦ７に属するセロビオヒドロラーゼを細胞表層に保持し又は細胞外に分泌可能な、請求項３６又は３７に記載の形質転換体。
【請求項３９】
前記ＧＨＦ７に属するセロビオヒドロラーゼは、Phanerochaete chrysosporium由来である、請求項３８に記載の形質転換体。