【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年8月10日(2009.8.10)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・ジョンソニおよび／またはその代謝産物を、ペットの胃内ヘリコバクター様細菌（ＧＨＬＯ）感染に関係する疾患の予防と治療用に意図した組成物の製造のための使用。
【請求項２】
ラクトバチルス・ジョンソニは該ラクトバチルス・ジョンソニによる発酵培地の形で使用するか、あるいはラクトバチルス・ジョンソニにより発酵させた培養培地のサブフラクションの形で使用する、請求項１記載の使用。
【請求項３】
該ラクトバチルス・ジョンソニはラクトバチルス・ジョンソニＮＣＣ５３３（ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）である、請求項１又は２記載の使用。
【請求項４】
ラクトバチルス・ジョンソニは、ペットに利用できる量が１０３から１０１４ｃｆｕ／日であるように使用する、請求項１〜３のいずれか１項記載の使用。
【請求項５】
ラクトバチルス・ジョンソニは犬では１０９から１０１２ｃｆｕ／日で、かつネコでは１０７から１０１１ｃｆｕ／日で使用する、請求項１〜４のいずれか１項記載の使用。
【請求項６】
ペットの胃内ヘリコバクター様細菌（ＧＨＬＯ）感染に関係する疾患の治療または予防方法であって、ラクトバチルス・ジョンソニおよび／またはその代謝産物あるいはラクトバチルス・ジョンソニにより発酵させた培地を含有する組成物をペットに投与することからなる、上記治療予防方法。
【請求項７】
ラクトバチルス・ジョンソニの１０３から１０１４ｃｆｕをペットに一日当たり投与する、請求項６記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
例２  犬のヘリコバクター種感染におよぼすラクトバチルスの発酵培地による補給効果を実験する。
材料と方法
動物
フランス、リヨンの獣医学校の倫理委員会はこの研究を認証した。ＧＨＬＯを自然に胃内感染させた９匹の雄のビーグル犬をこの研究に使った。動物は体重１０−１４ｋｇ、年齢３−４歳の範囲である。犬を各犬舎に収容し、衛生と飼育条件を同一にした（リヨンの獣医学校）。犬舎は毎日清掃し、消毒した。
犬は規則的に午前８時に給餌し、実験中飲料水にはコンスタントに接近させた。全実験中、特定の飼料（ＶＩＴＡＬＩＴＹ登録商標、フリスキー社、フランス）を与えた。
実験デザイン
処理前の、ＧＨＬＯの胃内感染は、ＧＨＬＯの同定（組織細菌学）、胃内ウレアーゼ活性（Ｊａｔｒｏｘ登録商標試験）および胃の基底部および／または洞部バイオプシの慢性胃炎（組織病理学）の存在を評価して９匹のビーグル犬で確認した。ＧＨＬＯ感染のすべての犬は１３日間処理に供した。これらの試験プラス１３Ｃ−尿素呼吸試験によるＧＨＬＯの胃内感染の検出は３度（処理前〔Ｄ０〕、処理終了時〔Ｄ１３〕および処理終了後３０日〔Ｄ４３〕）繰返した。
処理
処理は、１３日の期間中Ｌ．ジョンソニ  ＮＣＣ５３３により発酵させた酸性乳標品を毎日消費させるものである。この酸性乳標品は特定の飼料（２４０ｇ「ＶＩＴＡＬＩＴＹ／犬」）を与える前に完全に食べさせる必要があった。
評価試験
・臨床試験：全実験中、犬は該獣医学校の二人の獣医師により観察した。臨床知見は報告書の形で記録した。
・胃のバイオプシ：麻酔下（ケタミン、ＩＭＡＬＧＥＮＥ登録商標、５ｍｇ／ｋｇ−ＩＭ（静注））、胃の内視鏡検査を行った。犬は２４時間断食させた。内視鏡はビデオガストロスコープ、オリンパス登録商標ＧＩＦＫ／ＸＶ１０で行った。各評価の日に、１２個のバイオプシを胃の基底部と洞部から取った。ＧＨＬＯのウレアーゼ活性を測定するために、２つの基底部および洞部バイオプシを直ぐに使用した。４つの基底部と洞部バイオプシは組織細菌学および組織病理学のために使用する前に「ブーイン（ｂｏｕｉｎ）」溶液に保持させた。
・ＧＨＬＯの同定（組織細菌学）：ＧＨＬＯの同定は、バイオプシ部位の組織検査により行った。組織部位はギームサ型染色液で染色し、顕微鏡（×１０００）で評価した。ＧＨＬＯの半定量的評価は胃内の局在と細胞外のコンタミの深さを考慮して行う。部位当たりのＧＨＬＯの数が無菌の場合、評点「０」、５未満の場合、評点「１」、５〜２０の場合、評点「２」、および２０を越える場合、評点「３」である。各基底部および洞部バイオプシについては、２つの部位を試験し、評価し、結果は２つの評価の平均値であった（エム・ディー・ウィラード、１６頭のドイツシェパード犬の天然に増殖する小腸のバクテリア過剰繁殖の特徴、Ｊ．Ａ．ｍ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．，１９９４，２０４，１２０１−１２０６）。
・胃内ウレアーゼ活性（Ｊａｔｒｏｘ登録商標−Ｈ．Ｐ．テスト、Ｐｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ、ドイツ）：本試験の原理は、試験媒体の尿素をＧＨＬＯに存在するウレアーゼにより分解させる。尿素の分解に関係するｐＨ値の上昇は、指示薬（フェノールレッド）が黄色からピンク／赤に変色することにより分かる。バイオプシは試料採取後直ぐに試験した。指示薬にバイオプシを加えた後、Ｊａｔｒｏｘ登録商標試験はＵＶ検出器で比色計により１８０分間で読んだ。比色計は対照６５０ｎｍで５５０ｎｍにセットした。基底部および洞部バイオプシのウレアーゼ活性は２つの光学的測定の平均であった。
・１３Ｃ−尿素呼吸試験：ＵＢＴ試験は内視鏡検査のため麻酔した後、２時間で行った。したがって、麻酔はＵＢＴの結果に影響を及ぼさなかった。ＵＢＴは麻酔せずに断食犬に行った。最初に、犬には試験食を食べさせ、それは、毎日の摂取量の半分、即ち１２０ｇＶＩＴＡＬＩＴＹ登録商標／犬である。２回目で、犬に７．５ｍｇの１３Ｃ−尿素／犬（マス・トレース、ウォバーン、米国）を経口投与した。試験食の前（ＴＢ）ついで１３Ｃ−尿素の投与から４０分後（Ｔ４０）に、１３ＣＯ２尿素ブリ−ズアウト試料を得た。その後、犬に毎日の食事量の半分を与えた。１３ＣＯ２尿素ブリーズアウト試料をガスアイソトープ比質量分析計（フィニガンＭＡＴ、ドイツ、ブレーメン）で分析した。研究室間の結果を標準化するために、１３Ｃ‐対照の国際標準（ビエナ・ピー・ディー・ベルムナイト即ちＶＰＤＳ）のアナログを使用した。１３ＣＯ２の原子比過剰はベースラインの試料（試験食および１３Ｃ投与前〔ＴＢ〕の試料）と４０分後〔Ｔ４０〕に得た試料×１０００（４４，４５）間の原子率１３ＣＯ２の差（デルタ値、δ）として規定した。結果は過剰δ１３ＣＯ２（δ‰）として表した。
・組織病理学（細胞学）：ｃｙｔｒｏＢＴ試験により行った組織病理学はバイオプシ薄層部位を細胞検査して行った。インプレッション部位をヘマトキシリン−フォロキシン−サフロン（ＨＰＳ）で染色し、顕微鏡で観察した。胃バイオプシの組織的診断の基準は、４００倍で見た３つの領域の平均および２００倍の試料中の数であるリンパ球集合体の量である各細胞型の数に依存する。慢性胃炎の組織学的分類はつぎの通りである。
・評点０：表面繊維形成、０好中球、０−１０リンパ球とプラズマ細胞、集合体なし、正常上皮細胞
・温和な慢性胃炎−評点１：表面慢性胃炎、１０−１５表面間隙性組織を含むリンパ球またはプラズマ細胞、集合体＜２、正常上皮細胞
・中度な慢性胃炎−評点２：間隙性慢性胃炎、１０−５０リンパ球または粘膜の全厚さを含むプラズマ細胞、集合体＞３、正常上皮細胞
・重篤な慢性胃炎−評点３：萎縮性胃炎、１０−５０それ以上のリンパ球またはプラズマ細胞、集合体＞３、腺性上皮細胞変化（萎縮）
（Ｒｅｆ．（参照）：ピー・レコインダー、エム・シュバリエ、アール・ジラードおよびエフ・ダウリン、犬の小腸のバクテリアの異常発育および炎症性腸病。スピラマイシン−メトロニダゾール併用の医療効果の評価、Ｒｅｖｕｅ  Ｍｅｄ．Ｖｅｔ．１９９８，１４９，８４３−８５２）。
統計的分析
診断試験の各結果は、別々のバイオプシから２つの測定値の平均である。結果分布の正常性または異常性はウィルク−シャピロ法により試験した。
処理および処理後の効果は、ウィルコキソンのランク付け試験（ＷＳＲＴ）および／または対ｔ−試験を使って評価した。すべての統計的計算はソフトウェアプログラム（Ｓｔａｔｉｓｔｉｘ登録商標、エクセル  マイクロソフト登録商標）で行った。Ｐ‐値＜０．０５は有意とみなされた。
結果
胃内ＧＨＬＯロードの運動性：結果は表１および２に示す。
【表１】
2003520038.tif 000001
【表２】
2003520038.tif 000002
処理（〔Ｄ０〕から〔Ｄ１４〕）段階の終わりに、ＧＨＬＯの中央値細菌ロードは有意に基底部（Ｐ＝０．０１４３）で「３」から「１」の評点に、かつ洞部（Ｐ＝０．０３６０）では「２」から「１」に低下した。
処理開始と研究（〔Ｄ０〕から〔Ｄ４３〕）の終了の間で、ＧＨＬＯによる中央値細菌ロードは基底部バイオプシ（Ｐ＜０．０３６０）で「３」から「２」の評点に有意に減少した。洞部バイオプシでは、有意な差はなかった。
胃内ウレアーゼ活性（Ｊａｔｒｏｘ登録商標試験）：結果は表３および４に示す。
【表３】
2003520038.tif 000003
【表４】
2003520038.tif 000004
処理（〔Ｄ０〕から〔Ｄ１４〕）段階の終わりで、ウレアーゼ活性の平均は基底部（Ｐ＝０．０１５５）で３５％、および洞部（Ｐ＝０．０１９７）で９３％有意に減少した。
処理（〔Ｄ１４〕から〔Ｄ４３〕）の終了２９日後に、平均ウレアーゼ活性は基底部バイオプシ（Ｐ＝０．０３８１）で３５％有意に減少したが、処理の開始時より依然として低かった。洞部のウレアーゼ活性は修正されず、ゼロのままだった。
全般のウレアーゼ活性（１３Ｃ−尿素呼吸試験））：
結果は表５に示す。
【表５】
2003520038.tif 000005
処理（〔Ｄ０〕から〔Ｄ１４〕）の開始と終了の間で、３５％の１３ＣＯ２−ブリーズアウトの中央値１３Ｃ−エンリッチメントは有意に減少した（Ｐ＝０．０４９）。
処理終了後の２９日間（〔Ｄ１４〕から〔Ｄ４３〕）終了時に、１３ＣＯ２−ブリーズアウトの１３Ｃ−エンリッチメントは有意には変わらなかった。
慢性胃炎（１３Ｃ−尿素呼吸試験）：
結果は表６および７に示す。
【表６】
2003520038.tif 000006
【表７】
2003520038.tif 000007
処理（〔インクルージョン〕から〔Ｄ１４〕）の段階の終わりに、慢性胃炎の中央値は基底部（Ｐ＝０．０１４３）で「１」から「０」の評点に有意に低下した。この減少は、研究の終了まで維持された。中央値評点の有意な修正は洞部バイオプシに示されなかった。
結論
【表８】
2003520038.tif 000008
慢性胃炎の胃内ＧＨＬＯ感染の犬では、Ｌ．ジョンソニ  ＮＣＣ５３３により発酵させた酸性乳標品を消費することにより、つぎの結果を得ることができた。
即ち、
・基底部および洞部で、処理中、ＧＨＬＯロードおよびウレアーゼ活性の有意な減少ならびに慢性胃炎の後退、
・基底部では、処理終了後に維持された慢性胃炎の有意な後退、
・副作用なし。