(57)【要約】  デバイスおよび方法は、ポイント・オブ・ケア検査デバイスに、溶解剤を組み込む。サンプルは載せられ、その後、溶解剤と遭遇するまで移動する。溶解剤は、好ましくは、採取デバイスに事前に載せられる。好適な実施形態において、最初の溶解剤は、サンプル塗布領域と複合体領域との間に配される。溶解剤は、好ましくは、サンプル輸送液体中に可溶性または混和性を有し、溶解剤は、サンプル輸送液体に接触すると可溶化するとともに活性化する。サンプル輸送液体は、溶液または懸濁液中の溶解剤と、懸濁液中のサンプル成分とを両方とも含有する。サンプル中の任意の溶解しやすい成分は、その後、懸濁液中で溶解剤に晒され、インサイツでそれ自体が溶解する。使用している緩衝液は、その後、任意の溶解から解放された成分を含む検体を、検出領域へと運ぶ。【選択図】図５Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中の標的を検出するためのデバイスであって、
前記デバイスは、
（ａ）前記デバイスにサンプルを塗布するためのサンプル塗布領域と、
（ｂ）前記サンプル塗布領域の下流に配された検出領域と、
（ｃ）溶出培地とともに移動することが可能な少なくとも１つの標識結合パートナーを含む複合体領域とを備え、
前記複合体領域は、前記サンプルが前記デバイス上でのアッセイ実行中に、前記標識結合パートナーと遭遇するような位置で前記デバイス上に配され、
前記デバイスはさらに、
（ｄ）少なくとも１つの溶解剤を含む溶解領域を備え、
前記溶解領域が、
（ｉ）前記サンプル塗布領域と前記複合体領域との間、
（ｉｉ）前記溶解領域の少なくとも一部が前記サンプル塗布領域に重なる位置、
（ｉｉｉ）前記溶解領域の少なくとも一部が前記複合体領域に重なる位置、および、
（ｉｖ）前記溶解領域の少なくとも一部が前記サンプル塗布領域に重なるとともに、前記溶解領域の少なくとも一部が前記複合体領域に重なる位置、
からなる群から選択される前記デバイス上の位置に配されることを特徴とするデバイス。
【請求項２】
前記複合体領域が前記サンプル塗布領域と前記検出領域との間に配されることを特徴とする、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
前記標的が、病原体、アレルギー関連成分、および、核酸からなる群から選択され、
前記標的が体液からのものであることを特徴とする、請求項１に記載のデバイス。
【請求項４】
前記溶解剤が、前記デバイスの前記溶解領域上に事前に載せられていることを特徴とする、請求項１に記載のデバイス。
【請求項５】
前記デバイスが側方流動イムノアッセイデバイスであることを特徴とする、請求項１に記載のデバイス。
【請求項６】
前記デバイスが、クロマトグラフィー検査ストリップであることを特徴とする、請求項１に記載のデバイス。
【請求項７】
障壁を含む阻止領域をさらに備え、前記障壁が、前記障壁よりも空隙率の高い溶解材料を効率的に遅くしたりまたは止めたりすることを特徴とする、請求項１に記載のデバイス。
【請求項８】
前記障壁が、物理的障壁および生物学的障壁からなる群から選択されることを特徴とする、請求項７に記載のデバイス。
【請求項９】
前記阻止領域は、前記溶解領域の下流に配されるとともに、
（ａ）前記サンプル塗布領域と前記複合体領域との間、
（ｂ）前記複合体領域と前記検出領域との間、および、
（ｃ）前記サンプル塗布領域と前記検出領域との間、
からなる群から選択される前記デバイス上の位置に配されることを特徴とする、請求項７に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記溶解剤は、
（ａ）少なくとも１つの塩、
（ｂ）少なくとも１つの両性剤、
（ｃ）少なくとも１つのイオン性洗剤
（ｄ）少なくとも１つの非イオン性洗剤
（ｅ）少なくとも１つの酵素、
（ｆ）尿素、および、
（ｇ）（ａ）乃至（ｆ）の任意の組み合わせ
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１１】
サンプル中の少なくとも１つの標的を検出するための方法であって、
前記方法は、
（ａ）溶解していないサンプルをサンプル分析デバイスのサンプル塗布領域上に移動させる工程と、
（ｂ）前記サンプル塗布領域から検出領域まで前記サンプルを移動させるために、前記サンプル分析デバイスに溶出培地を塗布する工程とを備え、
前記サンプルが前記検出領域に到達する前に溶解されるように、前記サンプルは前記サンプル分析デバイス上または前記溶出培地中で少なくとも１つの溶解剤と遭遇し、
前記方法は、さらに、
（ｃ）前記サンプルを分析する工程を備え、
前記サンプル塗布領域、前記溶解剤、および、前記検出領域は、クロマトグラフィー検査ストリップ上にあり、
前記クロマトグラフィー検査ストリップはさらに複合体領域を備え、
前記複合体領域は、溶出培地とともに移動することが可能な少なくとも１つの標識結合パートナーを含み、および、
前記サンプルが前記サンプル塗布領域から前記検出領域へと移動する間に、前記標識結合パートナーは前記サンプルと遭遇することを特徴とする方法。
【請求項１２】
（ｄ）工程（ａ）で前記サンプルを移動させる２０分以内に、工程（ｃ）で行われる分析の少なくとも１つの結果を決定する工程をさらに備えることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記結果が、工程（ａ）で前記サンプルを移動させる１０分以内に決定されることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記結果が、工程（ｂ）で前記溶出培地を塗布する１乃至５分以内に決定されることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記標的が、病原体および／またはアレルギー関連成分からなる群から選択される標的であり、
前記サンプルが体液からのものであることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記複合体領域が、前記サンプル塗布領域と前記検出領域との間に配されることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
工程（ａ）の前に、前記デバイスの溶解領域上に前記溶解剤を事前に載せるともに乾燥させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
工程（ａ）の前に、前記デバイスの溶解領域上で前記溶解剤を吸収し、吸着し、埋め込み、および、捕捉することからなる群から選択される方法を用いて、前記デバイスの前記溶解領域上に前記溶解剤を事前に載せる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
工程（ａ）の前に、（ｉ）前記溶解剤のフリーズドライおよび凍結乾燥からなる群から選択される方法を用いて、前記溶解剤を事前に乾燥させる工程と、（ｉｉ）前記溶解剤を前記デバイス上に事前に載せる工程とを、さらに含むことを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
前記サンプル分析デバイスは、前記溶解剤を含む溶解領域をさらに備え、
前記溶解領域は、
（ｉ）前記サンプル塗布領域と前記複合体領域との間、
（ｉｉ）前記溶解領域の少なくとも一部が前記サンプル塗布領域に重なる位置、
（ｉｉｉ）前記溶解領域の少なくとも一部が前記複合体領域に重なる位置、および、
（ｉｖ）前記溶解領域の少なくとも一部が前記サンプル塗布領域に重なるとともに、前記溶解領域の少なくとも一部が前記複合体領域に重なる位置、
からなる群から選択される前記デバイス上の位置に配されることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
前記デバイスは、障壁を含む阻止領域をさらに備え、
前記障壁は、前記障壁よりも空隙率の高い溶解材料を効率的に遅くしたりまたは止めたりすることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項２２】
前記障壁が、物理的障壁または生物学的障壁からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２１に記載のデバイス。
【請求項２３】
前記阻止領域は、前記溶解剤の下流に配されるとともに、
（ａ）前記サンプル塗布領域と前記複合体領域との間、
（ｂ）前記複合体領域と前記検出領域との間、および、
（ｃ）前記サンプル塗布領域と前記検出領域との間、
からなる群から選択される前記デバイス上の位置に配されることを特徴とする、請求項２１に記載のデバイス。
【請求項２４】
前記溶解剤は、
（ａ）少なくとも１つの塩、
（ｂ）少なくとも１つの両性剤、
（ｃ）少なくとも１つのイオン性洗剤
（ｄ）少なくとも１つの非イオン性洗剤
（ｅ）少なくとも１つの酵素、
（ｆ）尿素、および、
（ｇ）（ａ）乃至（ｆ）の任意の組み合わせ
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項２５】
サンプル中の標的を検出するためのデバイスであって、
前記デバイスは、
（ａ）前記デバイスにサンプルを塗布するためのサンプル塗布領域と、
（ｂ）前記サンプル塗布領域の下流に配された検出領域と、
（ｃ）溶出培地とともに移動することが可能な少なくとも１つの標識結合パートナーを含む複合体領域とを備え、
前記複合体領域は、前記サンプルが前記デバイス上でのアッセイ実行中に、前記標識結合パートナーと遭遇するような位置で前記デバイス上に配され、
前記溶出培地は少なくとも１つの溶解剤を含むことを特徴とするデバイス。
【請求項２６】
前記複合体領域が前記サンプル塗布領域と前記検出領域との間に配されることを特徴とする、請求項２５に記載のデバイス。
【請求項２７】
サンプル中の標的を検出するための側方流動イムノアッセイデバイスであって、
前記デバイスは、前記側方流動イムノアッセイデバイスに事前に載せられた少なくとも１つの溶解剤を備えることを特徴とするデバイス。
【請求項２８】
側方流動イムノアッセイデバイスを用いて、サンプル中の少なくとも１つの標的を検出するための方法であって、
前記方法は、
（ａ）前記側方流動イムノアッセイデバイスのサンプル塗布領域に、溶解していないサンプルを移動させる工程と、
（ｂ）前記側方流動イムノアッセイデバイスでアッセイを実行中に、前記サンプルを溶解する工程とを含むことを特徴とする方法。
【請求項２９】
工程（ｂ）は、前記側方流動イムノアッセイデバイスに事前に載せられた少なくとも１つの溶解剤に、前記サンプルをさらすことによって、達成されることを特徴とする、請求項２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は１以上の発明を請求しており、当該発明は２００８年７月１５日に出願され、「側方流動核酸検出器」と題する米国仮特許出願第６１／０８０，８７９号と、２００８年９月２２日に出願され、「側方流動イムノアッセイにおけるインサイツでの細胞の溶解」と題する米国仮特許出願第６１／０９８，９３５号と、２００９年５月１８日に出願され、「ウイルス性および細菌性の感染の複合された検出のための方法およびデバイス」と題する米国仮特許出願第６１／１７９，０５９号とに開示された。当該米国仮特許出願の米国特許法第１１９条（ｅ）項の下での利益が、本明細書に請求され、前述の出願は本明細書に参考のために取り込まれる。
【０００２】
また、この出願は、１以上の発明を請求しており、当該発明は２００９年７月１４日に出願され、「側方流動核酸検出器」と題する米国特許出願第１２／５０２，６２６号と、２００９年７月１４日に出願され、「側方流動イムノアッセイにおけるインサイツでの細胞の溶解」と題する米国特許出願第１２／５０２，６６２号とに開示された。前述の出願は本明細書に参考のために取り込まれる。
【背景技術】
【０００３】
本発明は、側方流動イムノアッセイの分野に関する。さらに詳細には、本発明は、側方流動イムノアッセイにおけるサンプルのインサイツでの溶解に関する。
【０００４】
側方流動イムノアッセイは、試薬と、より普遍的なイムノアッセイを改良アッセイへとする処理工程とを組み合わせる。これは、単一工程の、ポイント・オブ・ケア検査（ＰＯＣＴ）を可能にするとともに、標的分子を検出するための鋭敏かつ迅速な手段を提供する。側方流動イムノアッセイは、様々な標的検体に利用可能であり、サンドイッチテスト、または競合テストのフォーマットのために設計可能である。一般的に、複数のエピトープを含む高分子量検体は、サンドイッチフォーマットで分析され、一方で、１つのエピトープだけを表す小分子は、 競合アッセイ手段で検出される。第１の側方流動アッセイは、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）に関して検査される。今日、商業的に利用可能な検査は、排卵をモニタし、感染症生物を検出し、薬物の乱用を分析し、さらに、人間生理学にとって重要な他の検体を測定する。様々な製品が、獣医学検査、環境検査、および、製品モニタにも導入されている。
【０００５】
特許文献１は、唾液サンプル中のＨＩＶ特異的な抗体のための側方流動イムノアッセイを開示する。唾液サンプルはサンプル緩衝液中で希釈され、側方流動イムノアッセイは希釈された唾液サンプルに浸漬され、再度、迅速な結果をもたらすポイント・オブ・ケア検査を可能にする。
【０００６】
特許文献２は、唾液および汗における違法な麻薬に関する、側方流動イムノアッセイを開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第５，７１４，３４１号
【特許文献２】ドイツ特許第ＤＥ１９６２２５０３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
時間的な制約および費用的な制約のある臨床設定に適切な、使いやすく、さらに迅速な側方流動イムノアッセイが依然として必要とされている。この必要性は、サンプルのタイプと標的検体がサンプル調製工程を必要とする状況下でもっとも深刻である。検体がサンプル内部に容易に存在せず、別の溶解工程が、効率的な表示のため、検体を取り除く必要があるとき、この必要性が生じることもある。そのようなアッセイは、ヒトの体液中の検体に関して直接検査する必要があることもあり、該検体は、複合体内部または細胞膜の裏側で保護されることもある。
【０００９】
例として、発熱は、幼児が家庭医療および小児科施設の双方の応急手当センター訪れる一般的な原因である。通常、これは、呼吸器感染または胃腸炎のいずれかに関連する。小児期の発熱と不必要な抗生物質の用心深い投与とが高い確率で起こることが、ウィルスを細菌感染と区別するバイオマーカーの迅速なスクリーニング検査を開発する理由である。
【００１０】
所定のイムノアッセイの成功の効率および可能性さえも、検出される任意の抗原の最初の発現に依存するであろう。抗原および他の標的は、アッセイの抗体にアクセス可能なものでなければならない。利用可能な抗原のほとんどまたはすべてが複合体で覆われているか、または、細胞膜の裏、例えば、細胞の細胞質内にアクセスできない場合、アクセスは影響を受けかねない。このような状況下で、実行可能かつ効率的なアッセイは、化合物を曝露するために複合体を分解すること、または、細胞壁、または、細胞もしくはオルガネラの膜、または、ウィルス外被などの障壁を除去することのいずれかによって、抗原を接近可能にするよう設計された溶解工程を含んでもよい。しかしながら、そのような追加された溶解工程は、アッセイを複雑にするとともに遅らせ、アッセイを複雑にしすぎるか、または、臨床設定下の実務作業に時間がかかってしまうことさえある。
【００１１】
複合体分子内部、または、膜もしくは他の障壁の裏側で保護される検体を検出するために、イムノアッセイ分野の１つの手法は、イムノアッセイを行う前に、複合体または障壁を溶解するとともに所望の検体を抽出する。障壁が細胞壁または細胞膜である場合、細胞は、赤血球、白血球、上皮、ウィルス、真菌、または、細菌であってもよく、および、細胞は、正常であっても、または、悪性であってもよい。伝統的には、必要とされる溶解工程は、サンプル調製工程として、所望のイムノアッセイの前に行われるとともに、物理的に別に行われる。
【００１２】
ポイント・オブ・ケア検査における実務作業とは、アッセイが、適時性、正確性、感度、特異性、および、使いやすさを含む（ただし、これらに限定されない）ポイント・オブ・ケア検査の要件を満たす結果を報告するようなやり方で作動することを意味する。したがって、側方流動イムノアッセイを行う前に、別の溶解工程の必要性を回避することができる方法およびデバイスが、当該技術分野で必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
サンプルをポイント・オブ・ケア検査デバイスへと移す前に細胞を溶解させる代わりに、本発明は、溶解が別の工程として行われる必要がないように、溶解剤をポイント・オブ・ケア検査デバイスに取り入れるデバイスおよび方法を含む。溶解工程は、サンプル分析デバイスの不可欠な部分として、検査ストリップそのものの上で行われる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の実施形態で用いられるサンプル分析デバイスを示す。
【図２】図１の検査ストリップを含むハウジングを示す。
【図３】サンプルを採取する採取デバイスを示す。
【図４】図１および図２のサンプル分析デバイスと、図３の採取デバイスとを含む、検査キットを示す。
【図５Ａ】本発明の実施形態において、サンプル塗布領域と複合体領域との間に配された溶解領域を含む、サンプル分析デバイスを示す。
【図５Ｂ】本発明の実施形態において、サンプル塗布領域に重なる溶解領域を含む、サンプル分析デバイスを示す。
【図５Ｃ】本発明の実施形態において、複合体領域に重なる溶解領域を含む、サンプル分析デバイスを示す。
【図５Ｄ】本発明の実施形態において、サンプル塗布領域と複合体領域とに重なる溶解領域を含む、サンプル分析デバイスを示す。
【図６Ａ】本発明の実施形態において、サンプル塗布領域と複合体領域との間に阻止領域を含む、サンプル分析デバイスを示す。
【図６Ｂ】本発明の別の実施形態において、サンプル塗布領域と検出領域との間に阻止領域を含む、サンプル分析デバイスを示す。
【図６Ｃ】本発明の別の実施形態において、サンプル塗布領域と複合体領域との間に阻止領域を含む、サンプル分析デバイスを示す。
【図６Ｄ】本発明の実施形態において、サンプル塗布領域と検出領域との間に阻止領域を含む、サンプル分析デバイスを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
ポイント・オブ・ケア検査デバイスの「外部」で細胞を溶解する代わりに、本発明は、「インサイツでの溶解」を利用する。本明細書で用いられるインサイツでの溶解という用語は、溶解操作が別の工程として行われないように、クロマトグラフィー検査ストリップまたは他の側方流動イムノアッセイデバイスなどのポイント・オブ・ケア検査デバイスに、溶解剤を取り入れるための技術について記載している。
【００１６】
インサイツでの溶解は、別の溶解工程に勝る明白な利点を提供する。このような利点のいくつかは、
１．高効率性。デバイスに移す前に溶解した細胞は、本質的に回復率を低下させる。したがって、さらなる移動工程を回避することで、効率性と感度を高める。
２．高安定性。多くの細胞内検体は不安定である。 インサイツでの溶解設定中に抗体および抗原との相互作用にかかる時間を著しく減少させることによって、この不安定さは克服することができる。
３．さらに迅速な検査と結果。インサイツでの溶解は、別の外部の溶解工程の必要性を取り除き、ポイント・オブ・ケア検査シナリオにおける検査結果の迅速さが増す。
４．干渉の減少。適切な「阻止領域」を用いて、細胞片または細胞に結合した材料が、アッセイ反応領域に到達するのを阻止することができる。所望の検体が細胞内にあり、かつ、阻止される必要のある細胞壁または細胞片を伴うタンパク質であり、アッセイの抗体が保護されている場合、溶解剤の下流およびアッセイの上流の阻止領域が干渉を減らすために用いられてもよい。
【００１７】
「インサイツでの溶解」は、複合体が免疫複合体であれ、何らかの結合材料であれ、「複合体の分解」にも適用することができる。このような複合体をインサイツで溶解することによって、複合体中の検体の量を測定することができる。
【００１８】
好適な実施形態において、サンプル分析デバイスは、クロマトグラフィー検査ストリップ、例えば、側方流動または流水式（ｆｌｏｗ ｔｈｒｏｕｇｈ）検査ストリップなどを含む。検査ストリップは、サンプル塗布領域、溶解領域、複合体領域、および、検出領域を含む。好ましくは、検査ストリップは、さらに、廃棄物領域、対照群領域、担体裏当て材（ｃａｒｒｉｅｒ ｂａｃｋｉｎｇ）、ハウジング、および、結果を読み出すためのハウジング内の開口部を任意で含む。このような構成要素のいくつかまたはすべての任意の組み合わせが、検査ストリップに含まれてもよい。検出領域におけるサンプル分析は、標準的な手段、例えば、免疫学的検出法、生化学的検出法、または、酵素検出法によって行われてもよい。好ましくは、検出方法は、検査される病原体などの標的と特異的に結合可能な抗体、核酸、リガンド／受容体、または、ナノ粒子の使用と、例えば、酵素検出による、または、直接的な標識群、例えば、当該技術分野で周知のような、目に見える粒子もしくは色のついた粒子、染料、磁性粒子、蛍光粒子またはリン光粒子、化学発光粒子、放射性同位元素リガンド（ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｉｃ ｌｉｇａｎｄｓ）、酵素、ペプチド、アミノ酸、コロイド粒子、または、ビーズなどの手段による、その後の結合部分の視覚化とを含む。
【００１９】
マーカーの検出は、検出領域で達成されてもよい。結合分子は、検出領域における免疫反応または他の反応によって、標識複合体または標識マーカーのアナログを固定化し、こうして、工程の間に検出領域に目に見える検査ラインを作る。好ましくは、標識は、光学的に検出可能な標識である。検査ラインに複合体を形成することにより、標識を集中させて固定化し、検査ラインは肉眼で目に見えるようになり、陽性の検査結果であることを示す。特に好ましいのは、直接標識であり、さらに具体的には、肉眼でもっともよく認識できる金標識である。さらに、電子読み出しデバイス（例えば、測光トランスデューサー、音響トランスデューサー、インピーダンス変換器（ｉｍｐｅｄｉｍｅｔｒｉｃａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ）、電位差変換器、および／または、電流測定変換器に基づく）は、さらに正確な結果と検体の半定量化を得るために使用することができる。他の標識は、ラテックス、フルオロフォア、または、ホスホロフォア（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｐｈｏｒｅ）であってもよい。
【００２０】
さらに、この発明は、記載された方法の性能を発揮するためのデバイスおよび検査キットを含む。
【００２１】
いくつかの好適な実施形態において、サンプル中の検体のための特異結合パートナーは、モノクローナル、ポリクローナル、単一ドメインもしくは組み換え抗体、または、病原体と結合可能な抗体フラグメントである。代替的に、特異結合パートナーは、病原体またはアレルゲンに対する抗体と結合可能な抗原であってもよい。結合パートナーの他のタイプは、アプタマーまたはリガンド／受容体、ナノ粒子、または、核酸などの生物有機高分子（ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）を含むが、これらに限定されない。
【００２２】
目で見える標識は、肉眼で目に見える任意の標識であってもよく、コロイド金、染色ラテックスビーズ、セレン、または、炭素などの色のついた粒子を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、目に見えるタグは、蛍光成分で被覆されてもよい。いくつかの実施形態において、蛍光成分は蛍光染料である。あるいは、好ましくは無色の蛍光ラテックスビーズ複合体の混合物は、コロイド金（可視スペクトル）複合体、または、目に見えて読み出される検査ラインを生成する複合体とともに、アッセイの感度を上げて、真の陽性および真の陰性を視覚的に読み出すのに役に立つための側方流動イムノアッセイで混合される。ナノ粒子が用いられる実施形態において、用いられるナノ粒子は、セレン、炭素、および、コロイド金を含むが、これらに限定されない。好適な標的は、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、核酸、および、リポタンパク質を含むが、これらに限定されない。他の好適な標的は、病原体、低分子量化合物、および／または、アレルギー関連化合物を含むが、これらに限定されない。病原体は、ウィルス、微生物、例えば、細菌、および、寄生虫、例えば、アメーバ、または、線形動物などから好適に選択される。アレルギー関連化合物は、アレルゲンおよび抗アレルギー化合物から好適に選択される。
【００２３】
いくつかの好適な実施形態において、サンプルは、体液サンプルである。このような実施形態において、体液サンプルは、粘膜液（口腔、鼻腔、膣腔、眼腔の中から好適に）、血液、尿、涙、脳脊髄液、腺からの分泌物、および、病変または疱疹、例えば、皮膚上の病変または疱疹からの分泌物から選択された体表面から好適に採取される。さらに好ましくは、サンプルは、口腔液、鼻腔液、眼腔液、生殖液、および、直腸液、皮膚の病変または疱疹からの分泌物、ＣＳＦ（脳脊髄液）、および、滲出液から選択される。いくつかの実施形態において、体液サンプルは、好適には、一度採取されると流れない流体である。
【００２４】
側方流動デバイスは知られており、例えば、米国公開特許出願第２００５／０１７５９９２号、および、第２００７／００５９６８２号に記載されている。両出願内容は、参照することにより本明細書に組み込まれる。当該技術分野で知られている他の側方流動デバイスは、本発明のシステムおよび方法によって代替的に用いられることができる。
【００２５】
米国公開特許出願第２００７／００５９６８２号は、１以上の干渉物質を含有することもできる検体とサンプルとを検出することについて開示している。この公開公報は、クロマトグラフィー担体上の干渉物質を獲得することによって検体と干渉物質とを分離することと、および、干渉物質から分離したその担体上で分析を検出することとを教示している。
【００２６】
米国公開特許出願第２００５／０１７５９９２号は、体液サンプルがスワブ部材などの採取デバイスによって採取されるヒトの体液中で、病原体および／またはアレルギー関連化合物などの標的を検出する方法を開示している。サンプルはスワブ部材からサンプル分析デバイスへと移され、サンプル分析デバイスにおいて、免疫化学的手段または酵素的手段によって標的の分析が行われる。検査結果は非常に短時間、表示することができ、ユーザが直接読み出すことができる。これによって、ポイント・オブ・ケア検査は、患者の診察中に、結果を入手することができるようになる。この同時係属出願において開示される発明は、結膜炎の診断に特に有効である。
【００２７】
図１乃至図４で示されるクロマトグラフィー検査ストリップは、複数の異なるストリップ材料を含む。デバイスは、好ましくは、吸収パッド（１）、塗布領域（２）、検出領域（３）、および、廃棄物領域（４）を含む。ストリップ材料は、接着性のプラスチック裏当て材（５）上に配される。吸収パッド（１）は、サンプルの検出領域（３）への移動を促進するために、溶出培地を追加するためのこの例において提供される。米国公開特許出願第２００７／００５９６８２号は、側方流動イムノアッセイの特異性を増加させる方法について記載している。このような方法は、本明細書に記載の実施形態と組み合わせて用いることもできる。
【００２８】
図２は、ハウジング（６）を示し、このハウジングは好ましくはプラスチックで、図１に示される検査ストリップを含有する。サンプル適用ウィンドウ（７）は、採取デバイスを検査ストリップと接触させる。検査結果は読み出しウィンドウ（８）に表示される。図３は、サンプルを採取する採取デバイスを示す。１つの例において、採取デバイスはスワブ部材である。採取デバイスは本体部（９）を備え、この本体部は、好ましくはプラスチックで、本体部上に固定されたサンプル採取材料（１１）と、採取デバイスが検査ストリップと動作可能なように接触する際に読み出しウィンドウに対応する開口部（１０）とを備える。図４は検査キットを示し、この検査キットは、図１および図２のサンプル分析デバイスと、図３の採取デバイスとを備える。
【００２９】
本発明の方法およびデバイスは、サンプル材料をインサイツで溶解するために、図１乃至図４に記載の側方流動イムノアッセイ検査ストリップの一部として、または、当該技術分野で知られている他の側方流動イムノアッセイデバイスの一部として、少なくとも１つの溶解剤を含む溶解領域を組み込んでいる。
【００３０】
本発明は、サンプルを載せるための様々な方法に適している。アッセイは、サンプルが体液などの十分な量の液体に移されると直接開始されるか、または、その工程は、サンプルが、サンプル輸送液体（ｓａｍｐｌｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｌｉｑｕｉｄ）（例えば、水道水または緩衝液）によって加えられるか、溶出されることを必要とするかのいずれかである。１つの好適な実施形態において、スワブなどによって採取されたサンプルは、検査ストリップのサンプル塗布領域上に直接移される。この実施形態において、サンプル輸送液体がその後、検査ストリップに加えられる。別の好適な実施形態において、液体サンプルを、検査ストリップのサンプル塗布領域上に直接、沈着させる。この実施形態において、液体サンプル自体は、十分な量があれば、輸送液体になる。液体サンプルの量が不十分な場合、サンプル輸送液体がさらに追加される。さらに別の好適な実施形態において、液体サンプルをサンプル輸送液体と事前に混合し、その後、両方を一緒に検査ストリップに塗布する。
【００３１】
サンプルを載せた後、輸送液体とともに移動するサンプルは、溶解剤と遭遇するであろう。溶解剤は、検査ストリップ上に事前に載せられており、輸送液体により溶出する。いくつかの好適な実施形態において、溶解剤は検査ストリップで乾燥された。あるいは、溶解剤をフリーズドライまたは凍結乾燥によって事前に乾燥されてもよく、その後、検査ストリップ上に事前に載せてもよい。他の実施形態において、溶解剤は、検査ストリップ上で吸収されたり、吸着されたり、埋め込められたり、または、捕捉されてもよい。好適な実施形態において、溶解剤は、サンプル塗布領域と複合体領域との間で局在化している。溶解剤は、好ましくは、サンプル輸送液体中に溶解または混和し、溶解剤は、サンプル輸送液体に接触すると、可溶化するとともに活性化する。サンプル輸送液体は、溶液または懸濁液中の溶解剤と、懸濁液中のサンプル成分とを両方とも含有する。サンプル中の任意の溶解しやすい成分は、その後、懸濁液中で溶解剤に晒され、インサイツでそれ自体が溶解する。使用している緩衝液は、その後、任意の溶解から解放された成分を含む検体を、複合体領域を通って検出領域へと運ぶ。
【００３２】
溶解剤が事前に載せられた位置は、必要に応じて変えることができる。サンプルが溶解剤と相互作用しなければならない時間を最大化するために、同様に、溶解剤が検出領域に到達する時間を最小化するために、乾燥した溶解剤、吸収された溶解剤、吸着された溶解剤、埋め込まれた溶解剤、または、捕捉された溶解剤は、サンプル塗布領域内またはサンプル塗布領域のちょうど下流に配されてもよい。あるいは、溶解した生成物が複合体領域に到達する前に移動しなければならない距離を最小化するために、溶解剤は複合体領域のさらに近傍に配されてもよい。
【００３３】
検査ストリップ上に事前に載せられた溶解剤の濃度は、好ましくは、０．００１％および５％重量／容量の間である。事前に載せられる容量は、溶解剤が事前に載せられる場所に依存する。適切な範囲は、サンプル採取器のフリース（ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ ｆｌｅｅｃｅ）（サンプル塗布領域）に事前に載せられるときは、１乃至１０マイクロリットルであり、吸収パッドまたは検査ストリップ内の他の位置に事前に載せられるときは、５乃至５０マイクロリットルである。理想的には、事前に載せられる量は、約３マイクロリットルが採取器のフリースに事前に載せられるか、または、約１０マイクロリットルが吸収パッドまたは検査ストリップ内の他の位置に事前に載せられなければならない。
【００３４】
特異的な溶解環境および溶解剤の選択は、検体とアッセイに依存するであろう。ｐＨとイオン強度は、溶解環境の鍵となる。溶解剤によって確立されるｐＨに関しては、４．０以下のｐＨは、材料、特にタンパク質を沈殿させる傾向がある。約１０．０以上の高ｐＨは、タンパク質および細胞壁などの材料を溶解させる傾向がある。したがって、約１０．０またはそれ以上のｐＨが、多くの応用例で好ましい。あるいは、低ｐＨは、核酸標的に好ましいこともある。
【００３５】
溶解剤によって確立されるイオン強度に関しては、高イオン強度および低イオン強度の双方が溶解のために用いられてもよい。例えば、低イオン強度（低浸透圧性）は、赤血球を破壊する傾向がある。水それ自体は、赤血球を溶解することができる。高イオン強度環境は、特定の細胞壁および膜を破裂させるために用いられてもよい。
【００３６】
特異的な溶解剤に関して、これらの溶解剤は、その性質に基づいて分類および選択される：塩、両性およびカチオン活性剤、イオン性および非イオン性洗剤。塩、塩化アンモニウム（ＮＨ４Ｃｌ）は、赤血球を溶解する。高濃度の塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）および塩化カリウム（ＫＣｌ）を含むが、これらに限定されない他の塩は、特定の細胞壁および膜を破裂させることもある。他の溶解剤は、ＬｙｓｏＰＣ、ＣＨＡＰＳ、および、両性洗浄剤（Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ）を含むがこれらに限定されない両性剤である。あるいは、Ｃ１６ＴＡＢおよび塩化ベンザルコニウムを含むがこれらに限定されないカチオン剤は、溶解剤として用いられてもよい。イオン性および非イオン性洗剤は両方とも、リポタンパク質および糖タンパク質などの細胞壁または細胞膜成分を破壊または溶解するために、しばしば用いられる。一般的なイオン性洗剤は、ＳＤＳ、コール酸、および、デオキシコール酸を含むが、これらに限定されない。イオン性洗剤は、優れた可溶化剤である。抗体は、０．１％ＳＤＳまたはそれ未満で活性を維持する。一般的な非イオン性洗剤は、オクチルグルコシド、ジギトニン、Ｃ１２Ｅ８、ルブロール、トリトンＸ１００、Ｎｏｎｉｏｄｅｔ Ｐ−４０、Ｔｗｅｅｎ ２０、および、Ｔｗｅｅｎ ８０を含むがこれらに限定されない。非イオン性洗剤および弱イオン性洗剤は、弱変性剤であり、ウィルス表面タンパク質などの膜たんぱく質を可溶化するためにしばしば用いられる。さらなる溶解剤は、尿素および酵素を含むが、これらに限定されない。異なる溶解剤の組み合わせが、溶解環境を最適化するために用いられてもよい。
【００３７】
界面活性剤は、一般的に、湿潤剤であり、液体の表面張力を低下させる。これによって、液体間の界面張力を低下させることで容易に拡散することが可能になる。こうして、界面活性剤は、抗原と抗体の自然結合、または、リガンドと受容体の自然結合に干渉することができる。その濃度は、したがって、溶解剤の各々のクラスから実験的に選択される。溶解が生じると、所望の結合反応が阻害されないことが重要である。一般的に、０．００１％の溶解剤濃度が、下限とみなされ、上限は約１％である。溶解剤の組み合わせが用いられると、追加的なまたは相乗的な効果がある。これは、濃度の動作範囲を拡大して、約０．００１％から１％まで行うようにする。最終的に、いくつかの望ましくない非特異的な結合は、５％濃度のＴｗｅｅｎ ２０で妨げられてもよい。すべての場合において、個々の検査ストリップ上のすべての位置に事前に載せられた溶解剤の総量は、免疫検出まで障壁を溶解するほどに十分なものであり、検査ストリップの実務作業を可能にするものでなければならない。
【００３８】
溶解剤それ自体は、任意の他のアッセイ検出器または指示薬に干渉してはならず、したがって、アッセイの実務作業を妨げてしまうほどには、任意の他のアッセイの相互作用および反応に干渉しない。溶解剤は、ポイント・オブ・ケア検査で検査ストリップを使用する前に、製造、分配、および、保存を可能にするほどの十分な有効期間を有していなければならない。
【００３９】
本発明の好適な実施形態において、本発明の側方流動イムノアッセイデバイスは、サンプルを輸送する液体を備え、この液体は、緩衝液と、および、サンプルが通る毛細血管特性を有する１または複数のフリース材料または膜を含有するクロマトグラフィー検査ストリップとであってもよい。本発明の方法およびデバイスにおいて、サンプルを検査ストリップに塗布する前に、サンプル中の細胞を溶解する必要はない。好適な実施形態において、図５Ａ乃至５Ｄに示されるように、サンプルは、クロマトグラフィー検査ストリップ（２００）上の塗布領域（２０１）に塗布される。サンプルは溶解領域（２５０）を通り、この領域には、溶解剤が、好ましくは検査ストリップ上に事前に載せられており、輸送液体によって溶出される。溶解剤は、サンプル中の任意の溶解しやすい成分を任意でインサイツで溶解する。
【００４０】
クロマトグラフィー検査ストリップは、サンプル塗布領域（２０１）、溶解剤を含む溶解領域（２５０）、および、少なくとも１つの標識結合パートナーを含む複合体領域（２６０）を備え、 該標識結合パートナーは、サンプル輸送液体（例えば、緩衝溶液）によって溶出され、その後、該サンプル輸送液体とともに移動することができる。標識結合パートナーは、複合体を形成するために、所望の検体と特異的に結合することができ、該複合体が今度は、検出領域で別の特異的な試薬または結合パートナーと特異的に結合することができる。これらの図には示されていないが、図１に示す吸収パッドと類似する吸収パッドは、他に知られている側方流動イムノアッセイの構成要素（廃棄物領域、担体裏当て材、ハウジング、および、結果読み出しのためのハウジング内の開口部を含むが、これらに限定されない）と同様に、この実施形態において、検査ストリップ（２００）の構成要素でもあってもよい。
【００４１】
好適な実施形態において、溶解剤は、サンプル塗布領域（２０１）と複合体領域（２６０）との間の溶解領域 （２５０）に局在化する。溶解剤は、好ましくは、サンプル輸送液体中に可溶性または混和性であり、溶解剤は、サンプル輸送液体と接触すると、可溶化するとともに活性化する。サンプル輸送液体は、その後、溶液または懸濁液中の溶解剤と、懸濁液中のサンプル成分とを両方とも含有する。サンプル中の任意の溶解しやすい成分は、その後、懸濁液中で溶解剤に晒され、インサイツでそれ自体が溶解する。使用している緩衝液は、その後、任意の溶解から解放された成分を含む検体を、複合体領域を通って検出領域（２０５）へと運ぶ。
【００４２】
溶解領域（２５０）は、図５Ａに記載されるように、好ましくは、サンプル塗布領域（２０１）と複合体領域（２６０）との間に配される。他の実施形態において、溶解領域（２５０）は、図５Ｂ、図５Ｃ、および、図５Ｄの各々で示すように、サンプル塗布領域（２０１）と、複合体領域（２６０）と、または、サンプル塗布領域（２０１）と複合体領域（２６０）の両方とに重なる。図は概略的ものであり、一定の縮尺では描かれていないことを留意されたい。異なる領域（図５Ｂ乃至図５Ｄに示すような）間の重なりの量は、非常にばらつきがあることもある。
【００４３】
検査ストリップ（２００）は、さらに、検出領域（２０５）も含み、該領域は、第１の検体の検出のための第１部分、例えば、検査ライン（２０２）を含有し、第１の検体は、複合体領域（２６０）で形成されるとともに該複合体領域から到達する複合体に相補的な固定化した特定の結合パートナーを含む。したがって、検査ライン（２０２）で、検出領域の結合パートナーは、結合した検体とともに、複合体領域（２６０）から標識結合パートナーを捕捉する。標識結合パートナーによる検体のこの局在性によって、検査ライン（２０２）で表示が形成される。検査ライン（２０２）で、検体の存在は、標識結合パートナーの蓄積に由来する検査ライン（２０２）の表示の、質的なおよび／または量的な読み出しによって決まる。任意で、検出領域（２０５）は、 制御ライン（２０４）と同様に、他の検体を検出するさらなる検査ラインをさらに含んでもよい。制御ライン（２０４）は、標識化した特異結合パートナーがどの検体も結合していないかもしれないにもかかわらず、 該特異結合パートナーがアッセイの長さにわたって移動したことを示しており、したがって、アッセイの適切な操作を確認するものである。図５Ａ乃至図５Ｄに示されるように、制御ライン（２０４）は好ましくは、検査領域（２０２）の下流である。しかしながら、他の実施形態において、制御ライン（２０４）は、検査領域（２０２）の上流に配されてもよい。
【００４４】
好適な実施形態において、制御ライン（２０４）は、溶出培地の成分または検査で用いられる他の成分と結合する抗体または組み換えタンパク質を含む。核酸が標的である実施形態において、制御ライン（２０４）は、好ましくは、標的核酸のための結合パートナーとして用いられる標識核酸に相補的な核酸を含む。
【００４５】
１つの検査ラインだけが図では示されているが、複数の検査ラインが本発明の精神の範囲内に含まれる。複数の標的がある本発明のいくつかの実施形態において、各々の標的の存在は、好ましくは、別の検査ライン（２０２）に対応する。複数の標的がある他の実施形態において、複数の標的の存在は、１以上の標的の存在が単一の標的の存在とは異なる特徴を有するように、同じ検査ライン上で表示されてもよい。例えば、同じ検査ライン上の複数の標的が存在することは、各々の標的のみの存在とは異なる色によって視覚的に表示されてもよい。
【００４６】
他の実施形態において、使用している緩衝液それ自体に、１以上の弱溶解剤を含ませることができる。このような実施形態において、下流にある複合体領域上には副作用はなく、サンプルは、複合体領域の上流または下流のいずれかであってもよい。使用している緩衝液中の溶解酵素は、その基質を標的とすることができ、細胞壁を開くために該基質を切断することができる。例として、ペニシリンは、感受性細菌中に、穴を切り取るかまたは「穴を開ける」ことができる。他の実施形態において、溶解剤サンプル採取材料（１１）（図３参照）に塗布されると、その後、複合体領域が、サンプル塗布領域の上流にあってもよい。
【００４７】
別の好適な実施形態において、障壁は、サンプル塗布領域と、複合体領域または検出領域のいずれかとの間、好ましくは、複合体領域の前方の、「阻止領域」内に配されてもよい。この場合、溶解剤は、サンプル塗布領域内に、または、サンプル塗布領域と障壁との間に事前に載せられてもよい。こうして、サンプルが障壁に到達する前に、溶解が生じ、障壁は、障壁よりも空隙率の高いそのような溶解材料を効率的に遅くしたりまたは止めたりするのに役立ち、その一方で、小型材料をもっと容易に効率的に通過させることができる。そのようにして、障壁は、ろ過効果を提供するとともに、複合体領域および検出領域における結合相互作用への干渉を減らす。特異的な障壁材料の選択は、検体とアッセイとに依存する。
【００４８】
阻止領域の障壁は、物理的または生物学的であってもよい。物理的障壁の例は、赤血球またはその細胞片を本質的に結合するかまたは捕捉する、ガラス繊維マトリックスを含む。他の物理的障壁は、ろ過システムにおける、篩タイプ（ｓｉｅｖｅ−ｔｙｐｅ）のマトリックスであってもよく、該マトリックスでは、小孔径によって細胞の通過を阻止するが、バイオマーカーを通過させる。
【００４９】
対照的に、生物学的障壁は、細胞表面上でリガンドまたは受容体を特異的に結合させて、細胞がさらに流れるのを防ぐ、固定化された生物学的材料である。例は、抗体、組み換えタンパク質、特異的レクチン、および、受容体／リガンドを含む。生物材料を、ガラス繊維膜などの物理的な障壁に混合させてもよい。
【００５０】
図６Ａ乃至図６Ｄは、検査ストリップ（１００）の、サンプル塗布領域（１０１）と、複合体領域（１６０）（図６Ａおよび図６Ｃ）または検出領域（１０５）（図６Ｂおよび図６Ｄ）のいずれかとの間の、阻止領域（１７０）内に配された障壁を示す。いずれかの場合、溶解領域（１５０）は、溶解剤がサンプル塗布領域（１０１）内に事前に載せられるように、サンプル塗布領域（１０１）と重なるか（図６Ｃおよび図６Ｄ）、または、溶解領域（１５０）は、溶解剤がサンプル塗布領域（１０１）と阻止領域（１７０）との間に配されるように、 サンプル塗布領域（１０１）と阻止領域（１７０）内の障壁との間に配されるか（図６Ａおよび図６Ｂ）のいずれかである。このようにして、サンプルが阻止領域（１７０）に到達する前に、溶解が生じ、阻止領域（１７０）内の障壁は、障壁よりも空隙率の高いそのような溶解材料を効率的に遅くしたりまたは止めたりするのに役立ち、その一方で、小型材料をもっと容易に効率的に通過させることができる。そのようにして、障壁は、ろ過効果を提供するとともに、複合体領域（１６０）と検出領域（１０５）とにおける結合相互作用への干渉を減らす。特異的な障壁材料の選択は、検体とアッセイとに依存する。図５Ａ乃至図５Ｄと同様に、検出領域（１０５）は、少なくとも１つの検査領域（１０２）と制御領域（１０４）とを含む。
【００５１】
本明細書で議論される分析検査は、好ましくは、患者が従事者の検査を受けている間に、結果を許可する。検査結果は、好ましくは、サンプルをデバイスに移して２０分以内に決定される。好適な実施形態において、検査結果は、サンプルをデバイスに塗布した後、１０分以内に得られ、好ましくは、約１０分間、読み出される。高陽性のサンプルにおいて、検査領域の（好ましくは、検査ライン）の読み出しは、約１−５分間、目に見える。いくつかの実施形態において、本発明のデバイスおよび方法は、標的核酸のための増幅工程を用いることなく、サンプル中の核酸を検出する。いくつかの実施形態において、検出された核酸は、同様に定量化される。側方流動検出器は、任意の標的ウィルス、細菌、真菌、または、他の病原体、任意の遺伝的欠損、または、サンプル中の任意の他の標的核酸に関連する、標的の核酸配列を検出するために用いられてもよい。標的核酸は、ＤＮＡ、オリゴヌクレオチド、メッセンジャーＲＮＡ、または、任意の他のタイプのＲＮＡを含むが、これらに限定されない任意の核酸であってもよい。アッセイは、好ましくは、サンプルが得られた後、数分から数時間以内に行われるが、アッセイは、サンプルが得られた後の少なくとも２４時間後などの、後の時間に行われてもよい。検出器中の輸送液体の流れは、重力に依存するか、または、毛細管現象もしくは表面張力の結果としてでもよい。輸送液体は、輸送液体中の検査ストリップを浸漬させることによって塗布されてもよく、または、輸送液体は、検査ストリップ用の検査ハウジング内に含まれてもよい。
【００５２】
このような実施形態の側方流動核酸は、検出領域用の検査ストリップ上の単一シートを含む一平面であってもよい。あるいは、検出器は、同一または異なるサンプルからの同一または異なる標的核酸のために、同時アッセイと流体連通する複数のシート上の複数の検出領域を含む複数面であってもよい。
【００５３】
このような実施形態において、検査用サンプルは、標的核酸を潜在的に含むと予想される任意のサンプルでよく、唾液、涙、脳脊髄液、皮膚病変、膣液、陰茎液、粘液、組織、血液、尿、環境水のサンプル、および、土壌サンプルを含むが、これらに限定されない。ほとんどの場合、第１および第２複合体と接近可能なサンプル中に核酸を作るために、変性剤か溶解剤をサンプルにインサイツで加えるのが好ましい。変性剤または溶解剤は、サンプルが変性剤または溶解剤を加える工程を含まずに検査ストリップに直接塗布されるように、検査ストリップの領域に事前に載せられるのが好ましい。変性剤または溶解剤は、サンプルが検査ストリップ上の第１複合体に到達する前に変性剤または溶解剤が核酸を解放するような位置で、検査ストリップ上に事前に載せられる。変性剤または溶解剤は、好ましくは、輸送液体中に可溶性または混和性であり、サンプル塗布領域内に配されるか、または、サンプル塗布領域と、第１複合体が事前に載せられた領域との間に配される。
【００５４】
いくつかの実施形態において、視覚的に読み出された側方流動イムノアッセイ検査の感度は、少量の蛍光染料または蛍光ラテックスビーズ複合体を、最初の複合体材料に加えることによって高められる。可視スペクトル検査ラインが目に見えるようになると、検査結果は観察され、記録される。しかしながら、明白に目に見える検査ラインを生じさせるものではない弱陽性の場合、ＵＶスペクトルなどの適切なスペクトル光線が、検査ラインに投げかけられることによって、検査ラインで視認できる色を鮮やかにするために、検査ラインで結合される蛍光ラテックスビーズを励起するとともに該蛍光ラテックスビーズの蛍光を発する。
【００５５】
いくつかの実施形態において、本発明は、ウィルス感染症と細菌感染症とを区別するのに役立つ溶解領域を用いる、側方流動アッセイを提供する。溶解剤がアッセイ効率を改善する１つの状況は、ウィルス感染に対する応答として細胞質に蓄積する、ヒトＭｘＡ、７８ｋＤａタンパク質の存在下でアッセイを行う際のことである。このタンパク質の存在が、熱病の子供たちの細菌感染とウィルス感染とを区別するのに役立つ。１％乃至６％重量／容量のＣＨＡＰＳと、０．５％乃至２％重量／容積のＮＰ４０の組み合わせを溶解剤として用いるインサイツでの溶解は、新鮮な全血または凍結全血中におけるＭｘＡの検出を改善する。
【００５６】
組み合わされたポイント・オブ・ケア診断デバイスは、ウィルス感染症と細菌感染症との両方のマーカーを検査するとともに、例えば、外来患者用診療室での、または、緊急外来中のウィルス感染症と細菌感染症とを迅速に区別するのに効果的に役立つ。この能力は、誤診とその後の抗生物質の過剰使用とを最小化することによって、医療費を劇的に削減することができる。上記を行うことで、抗生物質アレルギー、有害な事象、および、抗生物質耐性を制限することもある。検査によって迅速に得られる結果は、さらに、患者が従事者の検査をまだ受けている間に、結果を許可する。
【００５７】
１つの好適な実施形態において、ウィルス感染のマーカーはＭｘＡであり、細菌感染のマーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）である。高ＭｘＡタンパク質レベルは、全身性ウィルス感染と相関性があり、ＣＲＰの増加は細菌感染と関連している。本発明は、 サンプル中のＭｘＡとＣＲＰを同定するための、迅速な感染スクリーニング検査を含む。ＭｘＡは、白血球（白血球細胞）中に存在する。したがって、サンプルは、白血球が入手可能などんな場所、例えば、末梢血サンプル、鼻咽頭吸引液、涙、髄液、および、中耳吸引液などでも採取することができる。
【００５８】
他の実施形態において、ウィルス感染および／または細菌感染の他のマーカーが用いられてもよい。例えば、宿主遺伝子の約１２％は、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）感染の後、その発現を変化させ、このような遺伝子の一部は、病原性ＬＣＭＶ感染と非病原性ＬＣＭＶ感染の違いを区別することができる。主要な転写の変化は、定量ＰＣＲおよびタンパク質研究によって予備的に与えられており、アレナウイルス疾患のバイオマーカーとして潜在的に貴重な候補である。細菌感染の他のマーカーは、プロカルシトニン、尿トリプシンインヒビター（ｕＴｉ）、リポ多糖類、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＥＳＲ、および、ＷＢＣ数の増加（帯の増加）、乳酸、トロポニン、血管内皮増殖因子、血小板由来増殖因子、コルチゾール、プロアドレノメデュリン、マクロファージ移動抑制マーカー（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｍｉｇｒａｔｏｒｙ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｍａｒｋｅｒ）、活性タンパク質Ｃ、ＣＤ ４、８、１３、１４、または、６４、カスパーゼ、胎盤由来成長因子、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、高移動度群１、コペプチン（ｃｏｐｅｐｔｉｎ）、ナトリウム利尿ペプチド（ｎａｔｕｒｉｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、リポ多糖結合タンパク質、腫瘍壊死因子α、循環する血管内皮前駆細胞、補体３ａ、および、骨髄系細胞（ｔｒｅｍ−１）上に発現した誘発因子を含むが、これらに限定されない。
【００５９】
１つの実施形態において、顕著な感染症は、呼吸器感染症である。他の実施形態において、細菌またはウィルスであり得る他のタイプの感染症は、本発明のシステムを用いて区別される。いくつかの例は、脳炎、髄膜炎、胃腸炎、発熱性呼吸器疾患（気管支炎、咽頭炎、肺炎）、副鼻腔炎、中耳炎、尿路感染症、および、結膜炎を含むが、これらに限定されない。
【００６０】
実施例
１以上の溶解剤を側方流動ストリップのサンプル塗布領域上で乾燥させる。ストリップごとに、溶解剤は、５％のＣＨＡＰＳと、１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む２％のＮＰ−４０と、０．１％のＢＳＡと、および、０．１％のアジ化ナトリウム（すべての割合が重量／容量）とを含む、約２マイクロリットルの１００ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）で作られる。インサイツで溶解させるために、最大で１０マイクロリットルの白血球をその後、サンプル塗布領域に加える。ＭｘＡタンパク質は白血球の内部から放出されることで、目に見えるタグ（コロイド金または目に見えるラテックスビーズ）の付いたＭｘＡモノクローナル抗体と反応する。この複合体は、トリトンＸ１００を含有する使用中の緩衝液を横断し、ニトロセルロース膜の検査ラインで固定されたＭｘＡモノクローナル抗体によって捕捉される。検査ラインでのこの結合が、目に見える表示を生じさせる。
【００６１】
これに応じて、本明細書に記載の実施形態は、たんに本発明の原則の適用の原理を反映したものにすぎないことを理解されたい。例示の実施形態の詳細に対する本明細書における参照は、本発明に必要不可欠とみなされる特徴を列挙している特許請求の範囲を限定することを意図したものではない。
【図１】
2012503170.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【国際調査報告】
2012503170.tif 000015
2012503170.tif 000016