【手続補正書】
【提出日】平成23年6月27日(2011.6.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたポリヌクレオチドを含むベクターであって、該ポリヌクレオチドは、以下：
ａ．二重の互いに異なって転写されるプロモーターを含む、伸長されたメチル化されていないＣｐＧアイランド；
ｂ．ポリアデニル化シグナルによって終結される発現可能な核酸；
ｃ．プロモーターに作動可能に連結された選択マーカー遺伝子
を含み、該ベクターは、該ＣｐＧアイランドおよび該選択マーカーの両方が該発現可能な核酸に作動可能に連結され、該ベクターの成分が、該発現可能な核酸のセンス鎖に関して５’〜３’の方向で、以下の順序：伸長されたメチル化されていないＣｐＧアイランド、発現可能な核酸、選択マーカー遺伝子、で位置付けられ、そして、該発現可能な核酸の３’末端の該ポリアデニル化シグナルが該選択マーカーの近位末端の２０００ｂｐ以内となるように、直鎖化されそして染色体に組み込まれ得ることを特徴とする、ベクター。
【請求項２】
前記発現可能な核酸の３’末端の前記ポリアデニル化シグナルは、前記選択マーカーの近位末端の１５００ｂｐ以内である、請求項１に記載のベクター。
【請求項３】
前記発現可能な核酸の３’末端の前記ポリアデニル化シグナルは、前記選択マーカーの近位末端の１０００ｂｐ以内である、請求項２に記載のベクター。
【請求項４】
前記発現可能な核酸の３’末端の前記ポリアデニル化シグナルは、前記選択マーカーの近位末端の５００ｂｐ以内である、請求項３に記載のベクター。
【請求項５】
前記選択マーカーが、抗生物質耐性遺伝子である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項６】
前記抗生物質耐性遺伝子が、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種から得られる、請求項５に記載のベクター。
【請求項７】
前記抗生物質耐性遺伝子が、プロマイシン耐性遺伝子；ネオマイシン耐性遺伝子；ハイグロマイシン耐性遺伝子；ブレオマイシン耐性遺伝子およびブラスチシジン耐性遺伝子からなる群より選択される、請求項５に記載のベクター。
【請求項８】
前記プロマイシン耐性遺伝子が、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｌｂｏｎｉｇｅｒ由来のプロマイシンＮ−アセチルトランスフェラーゼ遺伝子、必要に応じて改変されたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｌｂｏｎｉｇｅｒ由来のプロマイシンＮ−アセチルトランスフェラーゼ遺伝子である、請求項７に記載のベクター。
【請求項９】
前記ネオマイシン耐性遺伝子が、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｆｒａｄｉａｅ由来のアミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子である、請求項７に記載のベクター。
【請求項１０】
前記ハイグロマイシン耐性遺伝子が、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ由来のハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子である、請求項７に記載のベクター。
【請求項１１】
前記ブレオマイシン耐性遺伝子が、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｓ由来のブレオマイシン結合タンパク質、必要に応じてＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｓ由来のブレオマイシンＮ−アセチルトランスフェラーゼである、請求項７に記載のベクター。
【請求項１２】
前記ブラスチシジン耐性遺伝子が、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｍ由来のブラスチシジンＳ−アセチルトランスフェラーゼ遺伝子である、請求項７に記載のベクター。
【請求項１３】
前記選択マーカーが、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ由来の抗生物質耐性遺伝子アミノシクリトールホスホトランスフェラーゼである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１４】
前記選択マーカーが、トランスポゾンＴｎ５由来の抗生物質耐性遺伝子ネオマイシンホスホトランスフェラーゼである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１５】
前記伸長されたメチル化されていないＣｐＧアイランドが、ヒト異種核リボ核タンパク質Ａ２／Ｂ１遺伝子にわたる８ｋｂのＤＮＡフラグメントを含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１６】
前記伸長されたメチル化されていないＣｐＧアイランドが、マウス異種核リボ核タンパク質Ａ２／Ｂ１遺伝子にわたる８ｋｂのＤＮＡフラグメントを含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１７】
前記伸長されたメチル化されていないＣｐＧアイランドが、図１９の配列のヌクレオチド１〜７８９８を含む、請求項１６に記載のベクター。
【請求項１８】
前記伸長されたメチル化されていないＣｐＧアイランドが、ヒトβ−アクチンＣｐＧアイランド／プロモーター領域にわたる２．０ｋｂのＤＮＡフラグメント、およびヒトＰＤＣＤ２  ＣｐＧアイランド／プロモーター領域にわたる１．８ｋｂのＤＮＡフラグメントを含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１９】
前記発現可能な核酸が、治療的核酸である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項２０】
前記発現可能な核酸が、インビトロ細胞培養系での発現のための組換えタンパク質をコードする、請求項１〜１９のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項２１】
前記発現可能な核酸がマルチクローニングサイト内に含まれ、そして該マルチクローニングサイトが、プロモーターにさらに作動可能に連結される、請求項１〜２０のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項２２】
前記プロモーターが、サイトメガロウイルス最初期／初期（ＣＭＶ  ＩＥ）プロモーターである、請求項２１に記載のベクター。
【請求項２３】
図１０の配列のヌクレオチド１〜１０５５１を含む、請求項１に記載のベクター。
【請求項２４】
図１２の配列のヌクレオチド１〜１３５４５を含む、請求項１に記載のベクター。
【請求項２５】
前記プロマイシン耐性遺伝子が、図１５の配列を有するＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｆｒａｄｉａｅ由来のアミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子で置き換えられる、請求項２４に記載のベクター。
【請求項２６】
前記プロマイシン耐性遺伝子が、図１７の配列を有するＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ由来のアミノシクリトールホスホトランスフェラーゼ遺伝子で置き換えられる、請求項２４に記載のベクター。
【請求項２７】
前記プロマイシン耐性遺伝子が、図１４の配列を有するＳｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ  ａｌｂｏｎｉｇｅｒ由来のプロマイシンＮ−アセチルトランスフェラーゼ遺伝子の改変形で置き換えられる、請求項２４に記載のベクター。
【請求項２８】
前記ヒトＩＥ  ＣＭＶプロモーターが、マウスＩＥ  ＣＭＶプロモーターで置き換えられる、請求項２４に記載のベクター。
【請求項２９】
前記ヒト異種核リボ核タンパク質Ａ２／Ｂ１遺伝子にわたる８ｋｂのフラグメントを含む伸長されたメチル化されていないＣｐＧアイランドが、図１９の配列を有するマウス異種核リボ核タンパク質Ａ２／Ｂ１遺伝子にわたる８ｋｂのフラグメントを含む伸長されたメチル化されていないＣｐＧアイランドで置き換えられる、請求項２４に記載のベクター。
【請求項３０】
図２１の配列のヌクレオチド１〜１２０３９を含む、請求項１に記載のベクター。
【請求項３１】
図２３の配列のヌクレオチド１〜１１６４６を含む、請求項１に記載のベクター。
【請求項３２】
図２５の配列のヌクレオチド１〜９０２７を含む、請求項１に記載のベクター。
【請求項３３】
図２７の配列のヌクレオチド１〜１２２２１を含む、請求項１に記載のベクター。
【請求項３４】
図２９の配列のヌクレオチド１〜１１８２８を含む、請求項１に記載のベクター。
【請求項３５】
図３１の配列のヌクレオチド１〜９２０９を含む、請求項１に記載のベクター。
【請求項３６】
請求項１〜３５のいずれか１項に記載のベクターでトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項３７】
発現可能な核酸の発現を得るための、請求項１〜３５のいずれか１項に記載のベクター、または請求項３６に記載の宿主細胞の使用。
【請求項３８】
所望の遺伝子産物の発現を得るための、細胞培養系における、請求項１〜３５のいずれか１項に記載のベクター、または請求項３６に記載の宿主細胞の使用。
【請求項３９】
医薬としての使用のための、請求項１〜３５のいずれか１項に記載のベクター、または請求項３６に記載の宿主細胞。
【請求項４０】
遺伝子治療における使用のための、請求項１〜３５のいずれか１項に記載のベクター、または請求項３６に記載の宿主細胞。
【請求項４１】
遺伝子治療によって処置可能な疾患のための医薬の製造のための、請求項１〜３５のいずれか１項に記載のベクター、または請求項３６に記載の宿主細胞の使用。
【請求項４２】
薬学的に受容可能な賦形剤と組み合わせて、請求項１〜３５のいずれか１項に記載のベクター、または請求項３６に記載の宿主細胞を含む、薬学的組成物。