(57)【要約】  本発明は、イミダゾピラジン置換ピペリジン誘導体および医薬としてのその使用に関する。
2012509910.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩：
【化１】
2012509910.tif 000011
（上記式中、Ａｒは、式：
【化２】
2012509910.tif 000012
からなる群から選択され、
Ｒ１は、（Ｃ１−４）アルキル、ハロ、ハロ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルキル−Ｏ−（Ｃ１−４）アルキル、ＣＮ、ＮＲ５Ｒ６であり、ここで、Ｒ５は、Ｈまたは（Ｃ１−４）アルキルであり、かつＲ６は、Ｈまたは（Ｃ１−４）アルキルであり、
Ｒ２は、（Ｃ１−４）アルキル、ハロ、ハロ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルキル−Ｏ−（Ｃ１−４）アルキル、ＣＮ、ＮＲ７Ｒ８であり、ここで、Ｒ７は、Ｈまたは（Ｃ１−４）−アルキルであり、かつＲ８はＨまたは（Ｃ１−４）−アルキルであり、
Ｒ３は、（Ｃ１−４）アルキル、ハロ、ハロ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルキル−  Ｏ  −（Ｃ１−４）アルキル、ＣＮ、ＮＲ９Ｒ１０であり、ここで、Ｒ９は、Ｈまたは（Ｃ１−４）−アルキルであり、かつＲ１０は、Ｈまたは（Ｃ１−４）−アルキルであり、
ｎは、０または１であり、
ｐは、０または１であり、かつ
ｑは、０または１であり、
但し、ｐおよびｑが両方とも０ではない）。
【請求項２】
Ａｒが式（ＩＩ）の基である、請求項１に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項３】
Ａｒが式（ＩＩＩ）の基である、請求項１に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項４】
Ａｒが式（ＩＩ）の基でありかつｎが０である、請求項１または２に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項５】
Ａｒが式（ＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが１であり、ｑが０であり、かつＲ２が（Ｃ１−４）アルキルである、請求項１、２または４に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項６】
Ａｒが式（ＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが１であり、ｑが０であり、かつＲ２がメチルである、請求項５に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項７】
Ａｒが式（ＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが０であり、ｑが１であり、かつＲ３が（Ｃ１−４）アルキルである、請求項１、２、または４に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項８】
Ａｒが式（ＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが０であり、ｑが１であり、かつＲ３がメチルである、請求項７に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項９】
Ａｒが式（ＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが１であり、ｑが１であり、Ｒ２が（Ｃ１−４）アルキルであり、かつＲ３が（Ｃ１−４）アルキルである、請求項１、２、または４に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１０】
Ａｒが式（ＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが１であり、ｑが１であり、Ｒ２がメチルであり、かつＲ３がメチルである、請求項９に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１１】
Ａｒが式（ＩＩＩ）の基であり、かつｎが０である、請求項１または３に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１２】
Ａｒが式（ＩＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが１であり、ｑが０であり、かつＲ２が（Ｃ１−４）アルキルである、請求項１、３、または１１に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１３】
Ａｒが式（ＩＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが１であり、ｑが０であり、かつＲ２がメチルである、請求項１２に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１４】
Ａｒが式（ＩＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが０であり、ｑが１であり、かつＲ３が（Ｃ１−４）アルキルである、請求項１、３、または１１に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１５】
Ａｒが式（ＩＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが０であり、ｑが１であり、かつＲ３がメチルである、請求項１４に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１６】
Ａｒが式（ＩＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが１であり、ｑが１であり、Ｒ２が（Ｃ１−４）アルキルであり、かつＲ３が（Ｃ１−４）アルキルである、請求項１、３、または１１に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１７】
Ａｒが式（ＩＩＩ）の基であり、ｎが０であり、ｐが１であり、ｑが１であり、Ｒ２がメチルであり、かつＲ３がメチルである、請求項１６に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１８】
６−８−ジメチル−２−（｛（２Ｓ）−１−［（２−メチル−５−フェニル−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］−２−ピペリジニル｝メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジンである化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１９】
治療において使用するための、請求項１〜１８のいずれか一項に定義された化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項２０】
ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる疾患または障害の治療のための、請求項１〜１８のいずれか一項に定義された化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項２１】
前記疾患または障害が、睡眠障害、うつ病もしくは気分障害、不安障害、物質関連障害、または摂食障害である、請求項２０に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項２２】
前記疾患または障害が睡眠障害である、請求項２１に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項２３】
前記睡眠障害が、原発性不眠症（３０７．４２）、原発性過眠症（３０７．４４）、ナルコレプシー（３４７）、呼吸関連睡眠障害（７８０．５９）、概日リズム睡眠障害（３０７．４５）、および他に規定されていない睡眠異常（３０７．４７）などの睡眠異常；悪夢障害などの睡眠時随伴症（３０７．４７）、夜驚障害（３０７．４６）、夢遊症障害（３０７．４６）、および他に規定されていない睡眠時随伴症（３０７．４７）などの原発性睡眠障害；別の精神障害と関連した不眠症（３０７．４２）および別の精神障害と関連した過眠症（３０７．４４）などの、別の精神障害と関連した睡眠障害；一般的な医学的容態による睡眠障害、特に神経学的障害、神経因性疼痛、むずむず脚症候群、心疾患および肺疾患などの疾患と関連した睡眠障害；ならびに、不眠症型、過眠症型、睡眠時随伴症型、および混合型のサブタイプを含む物質誘発性睡眠障害；睡眠時無呼吸および時差症候群からなる群から選択される、請求項２２に記載の化合物またはその医薬として許容し得る塩。
【請求項２４】
ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる疾患または障害の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜１８のいずれか一項に定義された化合物またはその医薬として許容される塩の使用。
【請求項２５】
前記疾患または障害が、睡眠障害、うつ病もしくは気分障害、不安障害、物質関連障害、または摂食障害である、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記疾患または障害が睡眠障害である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記睡眠障害が、原発性不眠症（３０７．４２）、原発性過眠症（３０７．４４）、ナルコレプシー（３４７）、呼吸関連睡眠障害（７８０．５９）、概日リズム睡眠障害（３０７．４５）、および他に規定されていない睡眠異常（３０７．４７）などの睡眠異常；悪夢障害などの睡眠時随伴症（３０７．４７）、夜驚障害（３０７．４６）、夢遊症障害（３０７．４６）、および他に規定されていない睡眠時随伴症（３０７．４７）などの原発性睡眠障害；別の精神障害と関連した不眠症（３０７．４２）および別の精神障害と関連した過眠症（３０７．４４）などの、別の精神障害と関連した睡眠障害；一般的な医学的容態による睡眠障害、特に神経学的障害、神経因性疼痛、むずむず脚症候群、心疾患および肺疾患などの疾患と関連した睡眠障害；ならびに、不眠症型、過眠症型、睡眠時随伴症型、および混合型のサブタイプを含む物質誘発性睡眠障害；睡眠時無呼吸および時差症候群からなる群から選択される、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる疾患または障害を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１〜１８のいずれか一項に定義された有効量の化合物またはその医薬として許容し得る塩を投与することを含む、方法。
【請求項２９】
前記疾患または障害が、睡眠障害、うつ病もしくは気分障害、不安障害、物質関連障害、または摂食障害である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記疾患または障害が睡眠障害である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記睡眠障害が、原発性不眠症（３０７．４２）、原発性過眠症（３０７．４４）、ナルコレプシー（３４７）、呼吸関連睡眠障害（７８０．５９）、概日リズム睡眠障害（３０７．４５）、および他に規定されていない睡眠異常（３０７．４７）などの睡眠異常；悪夢障害などの睡眠時随伴症（３０７．４７）、夜驚障害（３０７．４６）、夢遊症障害（３０７．４６）、および他に規定されていない睡眠時随伴症（３０７．４７）などの原発性睡眠障害；別の精神障害と関連した不眠症（３０７．４２）および別の精神障害と関連した過眠症（３０７．４４）などの、別の精神障害と関連した睡眠障害；一般的な医学的容態による睡眠障害、特に神経学的障害、神経因性疼痛、むずむず脚症候群、心疾患および肺疾患などの疾患と関連した睡眠障害；ならびに、不眠症型、過眠症型、睡眠時随伴症型、および混合型のサブタイプを含む物質誘発性睡眠障害；睡眠時無呼吸および時差症候群からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ａ）請求項１〜１８のいずれか一項に定義された化合物またはその医薬として許容し得る塩と、ｂ）医薬として許容し得る担体とを含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イミダゾピラジルメチル置換ピペリジン誘導体、および医薬としてのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くの医学的に有意な生物学的プロセスが、Ｇタンパク質および／または第二メッセンジャーを包含するシグナル伝達経路に関与するタンパク質によって仲介される。
【０００３】
ヒト７回膜貫通型Ｇタンパク質共役神経ペプチド受容体オレキシン−１（ＨＦＧＡＮ７２）をコードするポリペプチドおよびポリヌクレオチドが同定されており、ＥＰ８７５５６５、ＥＰ８７５５６６、およびＷＯ  ９６／３４８７７に開示されている。第二のヒトオレキシン受容体オレキシン−２（ＨＦＧＡＮＰ）をコードするポリペプチドおよびポリヌクレオチドが同定されており、ＥＰ８９３４９８に開示されている。
【０００４】
オレキシン−１受容体、例えばオレキシン−Ａ（Ｌｉｇ７２Ａ）についてのリガンドであるポリペプチドおよびポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＥＰ８４９３６１に開示されている。
【０００５】
オレキシンリガンドおよび受容体の系は、その発見以来十分に特徴づけられてきた（例えば、Ｓａｋｕｒａｉ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ  （１９９８）  Ｃｅｌｌ，  ９２  ｐ．５７３〜５８５；Ｓｍａｒｔ  ｅｔ  ａｌ  （１９９９）  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １２８  ｐ．１〜３；Ｗｉｌｌｉｅ  ｅｔ  ａｌ  （２００１）  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２４  ｐ．４２９〜４５８；Ｓａｋｕｒａｉ  （２００７）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ８  ｐ．１７１〜１８１；Ｏｈｎｏ  ａｎｄ  Ｓａｋｕｒａｉ  （２００８）  Ｆｒｏｎｔ．  Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ２９  ｐ．７０〜８７参照）。これらの研究から、オレキシンおよびオレキシン受容体が、哺乳類における多くの重要な生理学的役割を担っており、以下に記載される種々の疾患および障害についての新たな治療処置の発展の可能性を開いていることは明らかとなっている。
【０００６】
リガンドオレキシン−Ａの中枢投与が、自由摂餌ラットにおける食餌摂取を４時間刺激したことが実験によって示されている。この増加は、ビヒクルを受けている対照ラットのおよそ４倍であった。これらのデータは、オレキシン−Ａが、食欲の内在性調節因子であるかもしれないことを示唆している（Ｓａｋｕｒａｉ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ  （１９９８）  Ｃｅｌｌ，  ９２  ｐ．５７３〜５８５；Ｐｅｙｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ  （１９９８）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  １８  ｐ．９９９６〜１００１５；Ｗｉｌｌｉｅ  ｅｔ  ａｌ  （２００１）  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２４  ｐ．４２９〜４５８）。それゆえ、オレキシン−Ａ受容体のアンタゴニストは、肥満および糖尿病の治療に有用であるかもしれない。このことを立証するために、オレキシン受容体アンタゴニストＳＢ３３４８６７が、ラットにおける快楽摂食を強力に減少させ（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ  （２００５）  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ２６  ｐ．２２３１〜２２３８）、また、ラットにおける高脂肪ペレット自己投与も減弱させたことが示された（Ｎａｉｒ  ｅｔ  ａｌ  （２００８）  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  ２００８年１月２８日オンライン刊行）。肥満および他の摂食障害を治療するための新たな治療法の探索は、重要な努力目標である。ＷＨＯの定義によると、西洋化社会において、３９件の研究における平均３５％の対象が過体重であり、さらに２２％が臨床的に肥満であった。米国における健康管理の総額の５．７％が肥満の結果であると概算されている。２型糖尿病の約８５％が肥満である。食事および運動は、すべての肥満者において価値がある。西洋国において糖尿病と診断された発症率は典型的には５％であり、等数が診断されていないと概算される。両方の疾患の発症率は上昇中であり、心臓血管効果を含めて効果がないかまたは毒性の危険性を有するかのいずれかであるかもしれない現行の治療の不適切さを示している。スルホニル尿素またはインスリンを用いた糖尿病の治療は、低血糖を生じる可能性があるのに対し、メトホルミンはＧＩ副作用を生じる。２型糖尿病の長期の合併症を低下させることを示した該疾患に対する薬剤治療はない。インスリン増感剤は、多くの糖尿病患者にとって有用であろうが、抗肥満効果を有さない。
【０００７】
摂食における役割を有するのと同様に、オレキシン系はまた、睡眠および覚醒状態にも関与する。ラットの睡眠／脳波記録研究は、オレキシン受容体のアゴニストであるオレキシン−Ａの中枢投与が、正常な睡眠期の開始時に投与されると、覚醒における用量関連増大を生じ、逆説睡眠および徐波睡眠２における低下という犠牲を大きく払うことを示している（Ｈａｇａｎ  ｅｔ  ａｌ  （１９９９）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ９６  ｐ．１０９１１〜１０９１６）。睡眠および覚醒状態におけるオレキシン系の役割は、いまや十分に確立されている（Ｓａｋｕｒａｉ  （２００７）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ８  ｐ．１７１〜１８１；Ｏｈｎｏ  ａｎｄ  Ｓａｋｕｒａｉ  （２００８）  Ｆｒｏｎｔ．  Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ２９  ｐ．７０〜８７；Ｃｈｅｍｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ  （１９９９）  Ｃｅｌｌ  ９８  ｐ．４３７〜４５１；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ  （２００５）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２５  ｐ．６７１６〜６７２０；Ｐｉｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ  （２０００）  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １２  ｐ．７２６〜７３０、およびＳｍａｒｔ  ａｎｄ  Ｊｅｒｍａｎ  （２００２）  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ９４  ｐ．５１〜６１）。オレキシン受容体のアンタゴニストはそれゆえ、不眠症を含む睡眠障害の治療に有用であるかもしれない。オレキシン受容体アンタゴニストを用いた研究、例えば、ラット（例えばＳｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ  （２００３）  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３４１  ｐ．２５６〜２５８参照）ならびにより近年ではイヌおよびヒト（Ｂｒｉｓｂａｒｅ−Ｒｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ  （２００７）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １３（２）  ｐ．１５０〜１５５）におけるＳＢ３３４８６７はこのことをさらに支持している。
【０００８】
加えて、近年の研究は、報酬探索行動と関連した障害、例えば薬物嗜癖および薬物乱用など、意欲障害の治療におけるオレキシンアンタゴニストについての役割を示唆してきた（Ｂｏｒｇｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ  （２００６）  Ｎｅｕｒｏｎ  ４９（４）  ｐ．５８９〜６０１；Ｂｏｕｔｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ  （２００５）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  １０２（５２）  ｐ．１９１６８〜１９１７３；Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ  （２００５）  Ｎａｔｕｒｅ  ４３７  ｐ．５５６〜５５９）。
【０００９】
国際特許出願ＷＯ９９／０９０２４、ＷＯ９９／５８５３３、ＷＯ００／４７５７７、およびＷＯ００／４７５８０は、フェニル尿素誘導体を開示し、ＷＯ００／４７５７６は、オレキシン受容体アンタゴニストとしてのキノリニルシナミド（ｑｕｉｎｏｌｉｎｙｌ  ｃｉｎｎａｍｉｄｅ）誘導体を開示している。ＷＯ０５／１１８５４８は、オレキシンアンタゴニストとしての置換１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン誘導体を開示している。
【００１０】
ＷＯ０１／９６３０２、ＷＯ０２／４４１７２、ＷＯ０２／８９８００、ＷＯ０３／００２５５９、ＷＯ０３／００２５６１、ＷＯ０３／０３２９９１、ＷＯ０３／０３７８４７、ＷＯ０３／０４１７１１、およびＷＯ０８／０３８２５１はすべて、環状アミン誘導体を開示している。
【００１１】
ＷＯ０３／００２５６１は、オレキシンアンタゴニストとしてのＮ−アロイル環状アミン誘導体を開示している。ＷＯ０３／００２５６１に開示された化合物には、２位で二環式ヘテロアリールメチル基と置換されたピペリジン誘導体が挙げられる。本発明者らは、２位でイミダゾピラジニルメチル基と置換したいくつかのピペリジン誘導体が、例えば、従来の化合物と比較して高い経口の生物学的利用率および生理学的に関連のある媒体における有意に高い溶解度を含めた有益な特性を有することをいまや発見した。このような特性によって、これらのイミダゾピラジニルメチル置換ピペリジン誘導体は、２型（インスリン非依存性）糖尿病患者において観察される肥満を含めた肥満、睡眠障害、不安、うつ病、統合失調症、薬物依存、または強迫行動の予防または治療において有用であるかもしれない可能性のある医薬剤として非常に魅力的なものとなっている。加えて、これらの化合物は、脳卒中、特に虚血性もしくは出血性脳卒中の治療、および／または催吐性応答を遮断する治療おいて有用であるかもしれず、すなわち、吐き気および嘔吐の治療に有用であるかもしれない。
【発明の概要】
【００１２】
従って、本発明は、式（Ｉ）
【化１】
2012509910.tif 000003
（ここで、Ａｒは、式：
【化２】
2012509910.tif 000004
からなる群から選択され；
Ｒ１が、（Ｃ１−４）アルキル、ハロ、ハロ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルキル−Ｏ−（Ｃ１−４）アルキル、ＣＮ、ＮＲ５Ｒ６であり、式中、Ｒ５は、Ｈまたは（Ｃ１−４）アルキルであり、かつＲ６は、Ｈまたは（Ｃ１−４）アルキルであり；
Ｒ２が、（Ｃ１−４）アルキル、ハロ、ハロ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルキル−Ｏ−（Ｃ１−４）アルキル、ＣＮ、ＮＲ７Ｒ８であり、式中、Ｒ７は、Ｈまたは（Ｃ１−４）−アルキルであり、かつＲ８はＨまたは（Ｃ１−４）−アルキルであり；
Ｒ３が、（Ｃ１−４）アルキル、ハロ、ハロ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルキル−  Ｏ  −（Ｃ１−４）アルキル、ＣＮ、ＮＲ９Ｒ１０であり、式中、Ｒ９は、Ｈまたは（Ｃ１−４）−アルキルであり、かつＲ１０は、Ｈまたは（Ｃ１−４）−アルキルであり；
ｎが、０または１であり；
ｐが、０または１であり；かつ
ｑが、０または１であり；
但し、ｐおよびｑが両方とも０ではないという条件付きである。）
の化合物またはその医薬として許容し得る塩を提供する。
【００１３】
一実施態様において、Ａｒは式（ＩＩ）の基である。
【００１４】
別の実施態様において、Ａｒは式（ＩＩＩ）の基である。
【００１５】
一実施態様において、Ａｒは式（ＩＩ）の基であり、かつｎは０である。
【００１６】
一実施態様において、Ａｒは式（ＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは１であり、ｑは０であり、かつＲ２は（Ｃ１−４）アルキルである。
【００１７】
別の実施態様において、Ａｒは式（ＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは１であり、ｑは０であり、かつＲ２はメチルである。
【００１８】
一実施態様において、Ａｒは式（ＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは０であり、ｑは１であり、かつＲ３は（Ｃ１−４）アルキルである。
【００１９】
別の実施態様において、Ａｒは式（ＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは０であり、ｑは１であり、かつＲ３はメチルである。
【００２０】
一実施態様において、Ａｒは式（ＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは１であり、ｑは１であり、Ｒ２は（Ｃ１−４）アルキルであり、かつＲ３は（Ｃ１−４）アルキルである。
【００２１】
別の実施態様において、Ａｒは式（ＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは１であり、ｑは１であり、Ｒ２はメチルであり、かつＲ３はメチルである。
【００２２】
一実施態様において、ｎは０である。
【００２３】
一実施態様において、Ａｒは式（ＩＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは１であり、ｑは０であり、かつＲ２は（Ｃ１−４）アルキルである。
【００２４】
別の実施態様において、Ａｒは式（ＩＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは１であり、ｑは０であり、かつＲ２はメチルである。
【００２５】
一実施態様において、Ａｒは式（ＩＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは０であり、ｑは１であり、かつＲ３は（Ｃ１−４）アルキルである。
【００２６】
別の実施態様において、Ａｒは式（ＩＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは０であり、ｑは１であり、かつＲ３はメチルである。
【００２７】
一実施態様において、Ａｒは式（ＩＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは１であり、ｑは１であり、Ｒ２は（Ｃ１−４）アルキルであり、かつＲ３は（Ｃ１−４）アルキルである。
【００２８】
別の実施態様において、Ａｒは式（ＩＩＩ）の基であり、ｎは０であり、ｐは１であり、ｑは１であり、Ｒ２はメチルであり、かつＲ３はメチルである。
【００２９】
本発明の化合物の例には、６，８−ジメチル−２−（｛（２Ｓ）−１−［（２−メチル−５−フェニル−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］−２−ピペリジニル｝メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジンが挙げられる。
【００３０】
化合物が（Ｃ１−４）アルキル基を含む場合、単独であろうと、より大きな基、例えば（Ｃ１−４）アルコキシの部分を形成しようと、アルキル基は、直鎖、分岐鎖、もしくは環状、またはこれらの組み合わせであってもよい。（Ｃ１−４）アルキルの例は、メチルまたはエチルである。（Ｃ１−４）アルコキシの例は、メチルオキシである。
【００３１】
ハロ（Ｃ１−４）アルキルの例には、トリフルオロメチル（すなわち、−ＣＦ３）が挙げられる。
【００３２】
（Ｃ１−４）アルコキシの例には、メチルオキシおよびエチルオキシが挙げられる。
【００３３】
ハロ（Ｃ１−４）アルコキシの例には、トリフルオロメチルオキシ（すなわち、−ＯＣＦ３）が挙げられる。
【００３４】
ハロゲンまたは「ハロ」（例えば、ハロ（Ｃ１−４）アルキルにおいて使用する場合）は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを意味する。
【００３５】
本発明が、本明細書の上記の特別な基および置換基のすべての組み合わせに及ぶことは理解されるべきである。
【００３６】
医学において使用する場合、式（Ｉ）の化合物の塩が医薬的に許容され得るべきであることは認められるであろう。適切な医薬として許容し得る塩は、当業者に明白であろう。医薬として許容し得る塩には、Ｂｅｒｇｅ，  Ｂｉｇｈｌｅｙ  ａｎｄ  Ｍｏｎｋｈｏｕｓｅ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ  （１９７７）  ６６，  ｐ．１〜１９によって記載されたものが含まれる。このような医薬として許容し得る塩には、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、またはリン酸、および有機酸、例えば、コハク酸、マレイン酸、酢酸、フマル酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、またはナフタレンスルホン酸を用いて形成された酸付加塩が挙げられる。他の塩、例えば、シュウ酸塩またはギ酸塩は、例えば式（Ｉ）の化合物の単離において用いてもよく、本発明の範囲内に含まれる。
【００３７】
式（Ｉ）の特定の化合物は、１つ以上の等価の酸を用いて酸付加塩を形成してもよい。本発明には、その範囲内に、すべての考えられ得る化学量論的形態および非化学量論的形態が含まれる。
【００３８】
式（Ｉ）の化合物は、結晶形態または非晶質形態で調製されてもよく、結晶の場合、例えば水和物として、任意に溶媒和されてもよい。本発明には、その範囲内に、化学量論的溶媒和物（例えば、水和物）および可変量の溶媒（例えば、水）を含む化合物が含まれる。
【００３９】
本発明には、式（Ｉ）の化合物の医薬として許容し得る誘導体が含まれ、これらが本発明の範囲内に含まれることは理解されるであろう。
【００４０】
本明細書で使用する場合、「医薬として許容し得る誘導体」には、レシピエントへの投与の際に式（Ｉ）の化合物またはその活性代謝産物もしくは残基を（直接的にまたは間接的に）提供できる式（Ｉ）の化合物の任意の医薬として許容し得るエステルまたはこのようなエステルの塩が含まれる。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物は、Ｓ鏡像異性体である。追加的なキラル中心が式（Ｉ）の化合物に存在する場合、本発明には、その範囲内に、それらの混合物を含めてすべての考えられ得る鏡像異性体およびジアステレオ異性体が含まれる。異なる異性体形態は、従来の方法によって互いに分離または分割されてもよく、または任意の所与の異性体は、従来の合成方法によって、または立体特異的合成もしくは非対称性合成によって得られてもよい。本発明はまた、任意の互変異性体形態またはその混合物にも及ぶ。
【００４２】
本発明にはまた、式（Ｉ）で列挙されたものと同一である同位体標識された化合物も含まれるが、例外は、１つ以上の原子は、天然に最も普遍的に認められる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって、１つ以上の原子が置換されるという事実である。本発明の化合物に組み込むことのできる同位体の例には、３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１８Ｆ、１２３Ｉ、または１２５Ｉなどの水素、炭素、窒素、酸素、フッ素、ヨウ素、および塩素の同位体が挙げられる。
【００４３】
上記の同位体および／または他の原子の他の同位体を含む本発明の化合物ならびに該化合物の医薬として許容し得る塩は、本発明の範囲内である。本発明の同位体標識した化合物、例えば、３Ｈまたは１４Ｃなどの放射性同位体が組み込まれたものは、薬剤および／または基質の組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム標識した同位体、すなわち３Ｈ、および炭素−１４同位体、すなわち１４Ｃは、調製および検出性の簡便さのために特に好ましい。１１Ｃ同位体および１８Ｆ同位体は、ＰＥＴ（陽電子放出型断層撮影法）において特に有用である。
【００４４】
式（Ｉ）の化合物が、医薬組成物における使用に意図されているので、実質的に純粋な形態、例えば少なくとも６０％純粋、より適切には少なくとも７５％純粋、好ましくは少なくとも８５％、特に少なくとも９８％純粋な形態で各々好適に提供されることは容易に理解されるであろう（％は、重量を基にした重量に関している。）。化合物の不純な調製物は、医薬組成物において用いられるさらに純粋な形態を調製するために用いられてもよい。
【００４５】
本発明のさらなる態様によると、式（Ｉ）の化合物およびその誘導体の調製のためのプロセスが提供される。下記のスキームは、本発明の化合物に至るいくつかの合成経路を詳述する。下記のスキームにおいて、反応基は、保護基を用いて保護され、十分に確立された技術に従って脱保護されることが可能である。
【００４６】
スキーム
本発明のさらなる特徴によると、式（Ｉ）の化合物およびその誘導体の調製のためのプロセスが提供される。下記は、本発明の化合物を合成するために用いてもよい合成スキームの一例である。
【化３】
2012509910.tif 000005
【００４７】
本発明の特定の化合物が、標準的な化学方法に従って本発明の他の化合物に変換することができることは当業者によって理解されるであろう。
【００４８】
スキームにおいて使用するための出発材料は、市販されており、文献において公知であり、または公知の方法によって調製することができる。
【００４９】
本発明は、人間医学または獣医学における使用のための式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩を提供する。
【００５０】
式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩は、ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる、原発性不眠症（３０７．４２）、原発性過眠症（３０７．４４）、ナルコレプシー（３４７）、呼吸関連睡眠障害（７８０．５９）、概日リズム睡眠障害（３０７．４５）、および他に指定されていない睡眠異常（３０７．４７）などの睡眠異常；悪夢障害などの睡眠時随伴症（３０７．４７）、夜驚障害（３０７．４６）、夢遊症障害（３０７．４６）、および他に指定されていない睡眠時随伴症（３０７．４７）などの原発性睡眠障害；別の精神障害と関連した不眠症（３０７．４２）および別の精神障害と関連した過眠症（３０７．４４）などの、別の精神障害と関連した睡眠障害；一般的な医学的容態による睡眠障害、特に神経学的障害、神経因性疼痛、むずむず脚症候群、心疾患および肺疾患などの疾患と関連した睡眠障害；ならびに不眠症型、過眠症型、睡眠時随伴症型、および混合型のサブタイプを含む物質誘発性睡眠障害；睡眠時無呼吸および時差症候群からなる群から選択される睡眠障害などの疾患または障害の治療または予防のための使用に関するものであってもよい。
【００５１】
加えて、本発明の化合物またはその医薬として許容し得る塩は、ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる、大うつ病発作、躁病発作、混合型発作および軽躁病発作を含めたうつ病および気分障害；大うつ病、気分変調性障害（３００．４）、他に指定されていないうつ病性障害（３１１）を含めたうつ病性障害；双極Ｉ型障害、双極ＩＩ型障害（軽躁病発作を伴う再発性大うつ病発作）（２９６．８９）、循環気質障害（３０１．１３）；ならびに他に指定されていない双極性障害（２９６．８０）を含めた双極性障害；うつ病性特徴、大うつ病様発作、躁病性特徴、および混合型特徴を有するサブタイプを含めた、一般的な医学的容態による気分障害（２９８．８３）を含めた他の気分障害、薬物誘発性気分障害（うつ病性特徴、躁病性特徴、および混合型特徴を有するサブタイプを含む。）、ならびに他に指定されていない気分障害（２９６．９０）など疾患または障害の治療または予防のための使用に関するものであってもよい。
【００５２】
さらに、式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩は、ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる、パニック発作を含めた不安障害；広場恐怖症を伴わないパニック障害（３００．０１）および広場恐怖症を伴うパニック障害（３００．２１）を含めたパニック障害；広場恐怖症；パニック障害の既往歴のない広場恐怖症（３００．２２）、動物型、天然環境型、血液注射損傷型、情況型、および他の型のサブタイプを含めた特定の恐怖症（３００．２９、旧単一恐怖）、社会恐怖（社会不安障害、３００．２３）、強迫性障害（３００．３）、外傷後ストレス障害（３０９．８１）、急性ストレス障害（３０８．３）、全般性不安障害（３００．０２）、一般的な医学的容態による不安障害（２９３．８４）、薬物誘発性不安障害、分離不安障害（３０９．２１）、不安を伴う調整障害（３０９．２４）、および他に指定されていない不安障害（３００．００）などの疾患または障害の治療または予防のための使用に関するものであってもよい。
【００５３】
加えて、式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩は、ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる、薬物依存、薬物依存症、および薬物乱用などの薬物使用障害；薬物中毒、薬物断薬、薬物誘発性せん妄、薬物誘発性持続性認知症、薬物誘発性持続性健忘障害、薬物誘発性精神障害、薬物誘発性気分障害、薬物誘発性不安障害、薬物誘発性性機能障害、物質誘発性睡眠障害、および幻覚薬持続性知覚障害（フラッシュバック）などの薬物誘発性障害；アルコール依存（３０３．９０）、アルコール乱用（３０５．００）、アルコール中毒（３０３．００）、アルコール断薬（２９２．８１）、アルコール中毒せん妄、アルコール断薬せん妄、アルコール誘発性持続性認知症、アルコール誘発性持続性健忘障害、アルコール誘発性精神障害、アルコール誘発性気分障害、アルコール誘発性不安障害、アルコール誘発性性機能障害、アルコール誘発性睡眠障害、および他に指定されていないアルコール関連障害（２９１．９）などのアルコール関連障害；アンフェタミン依存（３０４．４０）、アンフェタミン乱用（３０５．７０）、アンフェタミン中毒（２９２．８９）、アンフェタミン断薬（２９２．０）、アンフェタミン中毒せん妄、アンフェタミン誘発性精神障害、アンフェタミン誘発性気分障害、アンフェタミン誘発性不安障害、アンフェタミン誘発性性機能障害、アンフェタミン誘発性睡眠障害、および他に指定されていないアンフェタミン関連障害（２９２．９）などのアンフェタミン（またはアンフェタミン様）関連障害；カフェイン中毒（３０５．９０）、カフェイン誘発性不安障害、カフェイン誘発性睡眠障害、および他に指定されていないカフェイン関連障害（２９２．９）などのカフェイン関連障害；大麻依存（３０４．３０）、大麻乱用（３０５．２０）
、大麻中毒（２９２．８９）、大麻中毒せん妄、大麻誘発性精神障害、大麻誘発性不安障害、および他に指定されていない大麻関連障害（２９２．９）などの大麻関連障害；コカイン依存（３０４．２０）、コカイン乱用（３０５．６０）、コカイン中毒（２９２．８９）、コカイン断薬（２９２．０）、コカイン中毒せん妄、コカイン誘発性精神障害、コカイン誘発性気分障害、コカイン誘発性不安障害、コカイン誘発性性機能障害、コカイン誘発性睡眠障害、および他に指定されていないコカイン関連障害（２９２．９）などのコカイン関連障害；幻覚薬依存（３０４．５０）、幻覚薬乱用（３０５．３０）、幻覚薬中毒（２９２．８９）、幻覚薬持続性知覚障害（フラッシュバック）（２９２．８９）、幻覚薬中毒せん妄、幻覚薬誘発性精神障害、幻覚薬誘発性気分障害、幻覚薬誘発性不安障害、および他に指定されていない幻覚薬関連障害（２９２．９）などの幻覚薬関連障害；吸入薬依存（３０４．６０）、吸入薬乱用（３０５．９０）、吸入薬中毒（２９２．８９）、吸入薬中毒せん妄、吸入薬誘発性持続性認知症、吸入薬誘発性精神障害、吸入薬誘発性気分障害、吸入薬誘発性不安障害、および他に指定されていない吸入薬関連障害（２９２．９）などの吸入薬関連障害；ニコチン依存（３０５．１）、ニコチン断薬（２９２．０）、他に指定されていないニコチン関連障害（２９２．９）などのニコチン関連障害；オピオイド依存（３０４．００）、オピオイド乱用（３０５．５０）、オピオイド中毒（２９２．８９）、オピオイド断薬（２９２．０）、オピオイド中毒せん妄、オピオイド誘発性精神障害、オピオイド誘発性気分障害、オピオイド誘発性性機能障害、オピオイド誘発性睡眠障害、および他に指定されていないオピオイド関連障害（２９２．９）などのオピオイド関連障害；フェンシクリジン依存（３０４．６０）、フェンシクリジン乱用（３０５．９０）、フェンシクリジン中毒（２９２．８９）、フェンシクリジン中毒せん妄、フェンシクリジン誘発性精神障害、フェンシクリジン誘発性気分障害、フェンシクリジン誘発性不安障害、および他に指定されていないフェンシクリジン関連障害（２９２．９）などのフェンシクリジン（またはフェンシクリジン様）関連障害；鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬依存（３０４．１０）、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬乱用（３０５．４０）、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬中毒（２９２．８９）、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬断薬（２９２．０）、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬中毒せん妄、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬断薬せん妄、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬持続性認知症、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬持続性健忘障害、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬誘発性精神障害、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬誘発性気分障害、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬誘発性不安障害、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬誘発性性機能障害、鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬誘発性睡眠障害、および他に指定されていない鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬関連障害（２９２．９）などの鎮静薬、催眠薬、または抗不安薬関連障害；多剤依存（３０４．８０）などの多剤関連障害；ならびにタンパク質同化ステロイド、硝酸吸入薬、および亜酸化窒素などの他の（または未知の）物質関連障害などの疾患または障害の治療または予防のための使用に関するものであってもよい。
【００５４】
加えて、式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩は、ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる。神経性大食症、気晴らし食いなどの摂食障害、２型（インスリン非依存性）糖尿病患者において観察される肥満を含めた肥満などの疾患または障害の治療または予防のための使用に関するものであってよい。さらに、式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩は、ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる脳卒中、特に虚血性もしくは出血性脳卒中などの疾患または障害の、および／または催吐性応答、すなわち、吐き気および嘔吐を遮断する上での治療または予防のための使用に関するものであってもよい。
【００５５】
列挙した疾患の後の括弧内の数字は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  によって刊行されたＤＳＭ−ＩＶ：  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，  第４版における分類コードを指す。本明細書で述べられる種々のサブタイプの障害は、本発明の一部として考慮される。
【００５６】
本発明はまた、ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる疾患または障害、例えば、上記の疾患および障害を治療または予防する方法であって、該疾患または障害を治療または予防することを必要とする対象に、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩を投与することを含む該方法も提供する。
【００５７】
本発明はまた、ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる疾患または障害、例えば、上記の疾患および障害の治療または予防における使用のための、式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩も提供する。
【００５８】
本発明はまた、ヒトオレキシン受容体のアンタゴニストが必要とされる疾患または障害、例えば、上記の疾患および障害の治療または予防のための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩の使用も提供する。
【００５９】
治療における使用のために、本発明の化合物は通常、医薬組成物として投与される。本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩と、医薬として許容し得る担体とを含む医薬組成物も提供する。
【００６０】
式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩は、任意の簡便な方法によって、例えば、経口投与、非経口投与、頬側投与、舌下投与、経鼻投与、直腸投与、または経皮投与によって、およびそれに応じて適した医薬組成物によって投与されてもよい。
【００６１】
活性のある式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩は、経口で与えられる場合、液体または固体として、例えば、シロップ剤、懸濁剤、エマルション、錠剤、カプセル剤、またはロゼンジ剤として製剤することができる。
【００６２】
液体製剤は一般的に、適切な液体担体、例えば、水、エタノール、もしくはグリセリンなどの水性溶媒、またはポリエチレングリコールもしくは油などの非水性溶媒における活性成分の懸濁液または溶液からなるであろう。製剤はまた、懸濁剤、保存料、調味料、および／または着色料を含んでもよい。
【００６３】
錠剤の形態の組成物は、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、ラクトース、スクロース、およびセルロースなど、固体製剤を調製するために慣例的に用いられる任意の適切な医薬担体を用いて調製することができる。
【００６４】
カプセル剤の形態の組成物は、慣例の封入手段を用いて調製することができ、例えば、活性成分を含むペレットは、標準的な担体を用いて調製した後、硬質ゼラチンカプセルへと充填することができ；あるいは、分散剤または懸濁剤は、任意の適切な医薬担体、例えば、水性ゴム、セルロース、ケイ酸塩、または油を用いて調製した後、該分散剤または懸濁剤を軟質ゼラチンカプセルへと充填することができる。
【００６５】
典型的な非経口組成物は、滅菌水性担体または非経口的に許容し得る油、例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、ラッカセイ油、またはゴマ油における活性成分の溶液または懸濁液からなる。あるいは、溶液は、凍結乾燥した後に、適切な溶媒を用いて再構成した直後に投与することができる。
【００６６】
経鼻投与のための組成物は、エアゾール剤、点鼻剤、ゲル剤、および散剤として簡便に製剤してもよい。エアゾール製剤は典型的には、医薬として許容し得る水性または非水性溶媒における活性成分の溶液または粒子の細かい懸濁液を含み、噴霧装置を用いて使用するためのカートリッジまたは詰め替え用品の形態を取ることのできる密封した容器における滅菌した形の単回用量または複数回用量で通常呈される。あるいは、密封した容器は、単回用量の経鼻吸入器または用量設定弁を取り付けたエアゾール分配器などの使い捨て可能な分配装置であってもよい。剤形がエアゾール分配器を含む場合、圧縮された気体、例えば空気またはフルオロクロロヒドロカーボンまたはヒドロフルオロカーボンなどの有機噴霧剤であり得る噴霧剤を含むであろう。エアゾール剤形はまた、ポンプ噴霧器の形態も取ることができる。
【００６７】
頬側投与または舌下投与に適した組成物には、活性成分が、糖およびアカシアなどの担体、トラガカントまたはゼラチン、およびグリセリンとともに製剤される錠剤、ロゼンジ剤、およびパステル剤が挙げられる。
【００６８】
直腸投与のための組成物は簡便に、ココアバターなどの従来の坐剤基剤を含む坐剤の形態である。
【００６９】
経皮投与に適した組成物には、軟膏、ゲル、およびパッチが挙げられる。
【００７０】
一実施態様において、組成物は、錠剤、カプセル剤、またはアンプル剤などの単位用量形態である。
【００７１】
上記の障害または疾患の治療または予防において用いられる式（Ｉ）の化合物またはその医薬として許容し得る塩の用量は、治療されている特定の障害または疾患、対象の体重、および他の類似の因子とともに通常の方法で変動するであろう。しかしながら、一般則として、適切な単位用量は、投与の方法に応じて、０．１重量％〜１００重量％、例えば１０重量％〜６０重量％の活性材料を含んでもよい。組成物は、投与の方法に応じて、０重量％〜９９重量％、例えば、４０重量％〜９０重量％の担体を含んでもよい。組成物は、投与の方法に応じて、０．０５ｍｇ〜１０００ｍｇ、例えば１．０ｍｇ〜５００ｍｇの活性材料を含んでもよい。組成物は、投与の方法に応じて、５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、例えば１００ｍｇ〜４００ｍｇの担体を含んでもよい。上記の障害の治療において用いられる化合物の用量は、障害の重度、罹患者の体重、および他の類似の因子とともに、通常の方法で変動するであろう。しかしながら、一般則として、適切な単位用量は、０．０５〜１０００ｍｇ、より適切には１．０〜５００ｍｇであってもよく、このような単位用量は、１日に２回以上、例えば１日に２回または３回投与されてもよい。このような治療は、数週間または数ヶ月間に及んでもよい。
【００７２】
本発明の化合物は、例えば活性アッセイおよび機能アッセイを含めたスクリーニング手順およびアッセイを用いて同定および特徴付けしてもよい。オレキシン−Ａ（Ｓａｋｕｒａｉ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ  （１９９８）  Ｃｅｌｌ，  ９２  ｐ．５７３〜５８５）は、オレキシン−１受容体またはオレキシン−２受容体のリガンドの活性化を阻害する化合物についてのスクリーニング手順において採用することができる。
【００７３】
一般に、このようなスクリーニング手順は、細胞表面にオレキシン−１受容体またはオレキシン−２受容体を発現する適切な細胞を提供することを包含する。このような細胞には、哺乳類、酵母、ショウジョウバエ、または大腸菌に由来する細胞が挙げられる。特に、オレキシン−１受容体またはオレキシン−２受容体をコードするポリヌクレオチドを用いて細胞に形質移入し、受容体を発現させる。発現した受容体は次に、試験化合物およびオレキシン−１受容体リガンドまたはオレキシン−２受容体リガンドと接触し、適宜、機能応答の阻害を観察する。このようなスクリーニング手順の１つは、ＷＯ  ９２／０１８１０に記載された、オレキシン−１受容体またはオレキシン−２受容体を発現させるよう形質移入したメラノフォアの使用を包含する。
【００７４】
別のスクリーニング手順は、オレキシン−１受容体またはオレキシン−２受容体をコードするＲＮＡをツメガエル卵母細胞に導入して、受容体を一過性に発現させることを包含する。受容体卵母細胞を次に、受容体リガンドおよび試験化合物と接触させた後、受容体の活性化をリガンドによって阻害すると考えられる化合物についてスクリーニングする場合のシグナルの阻害を検出する。
【００７５】
別の方法は、標識したオレキシン−１受容体リガンドまたはオレキシン−２受容体リガンドの、細胞表面にオレキシン−１受容体またはオレキシン−２受容体を（適宜）有する細胞に対する結合の阻害を決定することによって、受容体の活性化を阻害する化合物についてスクリーニングすることを包含する。本方法は、細胞がその表面上に受容体を発現するよう、真核細胞にオレキシン−１受容体またはオレキシン−２受容体を形質移入すること、およびオレキシン−１受容体リガンドまたはオレキシン−２受容体リガンドの標識した形態の存在下で、細胞または細胞膜調製物を化合物と接触させることを包含する。リガンドは、放射性標識を含んでもよい。受容体に結合した標識したリガンドの量は、例えば放射能を測定することによって測定する。
【００７６】
なおも別のスクリーニング技術は、オレキシン−１受容体リガンドまたはオレキシン−２受容体リガンドとオレキシン−１受容体またはオレキシン−２受容体との相互作用に適宜影響を及ぼすことによって細胞内カルシウムイオンまたは他のイオンの移動を阻害する試験化合物の高処理量スクリーニングのためのＦＬＩＰＲ機器の使用を包含する。
【００７７】
文脈が別段に必要としない限り、以下の明細書および特許請求の範囲を通じて、語「を含む」ならびに「を含む」および「を含んでいる」などの変形は、記載された整数もしくは級または整数の群を含むことを含意するが、その他の整数もしくは級または整数もしくは級の群を排除しないよう理解されるであろう。
【００７８】
本明細書において引用される特許および特許出願を含むがこれらに限定されないすべての刊行物は、各個々の刊行物が完全に示されているかのように引用により組み込まれるよう具体的かつ個々に示されているかのように、本明細書に引用により組み込まれる。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
下記の実施例は、本発明の薬理学的に活性のある化合物の調製を説明する。説明１および２は、本発明の化合物に至る中間体の調製を説明する。
【００８０】
実施例
下記の手順において、各出発材料の後、説明に対する引用が典型的に提供される。このことは単に、当業者に対する助力のために提供される。出発材料は、引用されるバッチから必ずしも調製される必要はなかったかもしれない。
【００８１】
以後に記載される実施例において記載される化合物はすべて、立体化学的に純粋な５−オキソ−Ｌ−プロリン酸メチルまたは５−オキソ−Ｄ−プロリン酸エチルからの第一の工程として調製されている。説明および実施例の化合物の立体化学は、５−オキソ−プロリナートの純粋な立体配置が維持されるという仮定の下に与えられている。
【００８２】
化合物は、ＡＣＤ／Ｎａｍｅ  ＰＲＯ  ６．０２化学名付与ソフトウェア（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｃ．，  Ｔｏｒｏｎｔｏ，  Ｏｎｔａｒｉｏ，  Ｍ５Ｈ２Ｌ３，  Ｃａｎａｄａ）を用いて命名されている。
【００８３】
プロトン磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを、３００、４００、もしくは５００ＭＨｚでＶａｒｉａｎ機器において、または３００および４００ＭＨｚでＢｒｕｋｅｒ機器においてのいずれかで記録した。化学シフトは、内部標準物質としての残留溶媒ラインを用いて、ｐｐｍ（δ）で報告している。分裂パターンは、ｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｑ、四重線；ｍ、多重線；ｂ、幅広として設計されている。
【００８４】
ＮＭＲスペクトルは、２５〜９０℃の範囲の温度で記録した。２つ以上の配座異性体が検出される場合、最も多量の配座異性体についての化学シフトを報告する。
【００８５】
Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：Ｘ分によって示されるＨＰＬＣ分析は、Ｌｕｎａ  ３ｕ  Ｃ１８（２）  １００Ａ（５０×２．０ｍｍ）カラムを用いてＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズの機器において実施した（移動相：１００％［水＋０．０５％ＴＦＡ］〜９５％［アセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡ］、８分、流量＝１ｍＬ／分、検出波長２２０ｎｍ）。
【００８６】
質量スペクトル（ＭＳ）は、ＥＳ（＋）イオン化モードおよびＥＳ（−）イオン化モードで作動する４ＩＩ三重四極子Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＵＫ）においてもしくはＡｇｉｌｅｎｔ  ＭＳＤ  １１００  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒにおいて、またはＨＰＬＣ機器Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓと連結されたＥＳ（＋）イオン化モードおよびＥＳ（−）イオン化モードで作動するＡｇｉｌｅｎｔ  ＬＣ／ＭＳＤ  １１００  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒにおいて得た。［ＬＣ／ＭＳ−ＥＳ（＋）：Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ  ＡＢＺ  ＋Ｐｌｕｓ（３３×４．６  ｍｍ，  ３μｍ）において実施した分析（移動相：１００％［水＋０．１％ＨＣＯ２Ｈ］で１分間、次いで、１００％［水＋０．１％ＨＣＯ２Ｈ］から５％［水＋０．１％ＨＣＯ２Ｈ］および９５％［ＣＨ３ＣＮ］で５分間、最後にこれらの条件下で２分間）；Ｔ＝４０℃；流量＝１  ｍＬ／分；ＬＣ／ＭＳ−ＥＳ（−）：Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ  ＡＢＺ＋Ｐｌｕｓ（３３×４．６  ｍｍ，  ３μｍ）で実施した分析（移動相：１００％［水＋０．０５％ＮＨ３］で１分間、次いで１００％［水＋０．０５％ＮＨ３］から５％［水＋０．０５％ＮＨ３］および９５％［ＣＨ３ＣＮ］で５分間、最後にこれらの条件下で２分間）；Ｔ＝４０℃；流量＝１  ｍＬ／分］。質量スペクトルにおいては、分子のイオンクラスターにおけるたった１つのピークを報告する。
【００８７】
マイクロ波照射を包含する反応については、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｅｍｒｙｓ（商標）Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを用いた。
【００８８】
フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーをシリカゲル２３０〜４００メッシュ（Ｍｅｒｃｋ  ＡＧ  Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，  Ｇｅｒｍａｎｙによって供給）上で、またはＶａｒｉａｎ  Ｍｅｇａ  Ｂｅ−Ｓｉ充填済みカートリッジもしくは充填済みＢｉｏｔａｇｅシリカカートリッジを通じて実施した。
【００８９】
ＳＰＥ−ＳＣＸカートリッジは、Ｖａｒｉａｎによって供給されるイオン交換固相抽出カラムである。ＳＰＥ−ＳＣＸカートリッジとともに用いた溶離剤は、メタノール、次いで、メタノールにおける２Ｎアンモニア溶液である。
【００９０】
いくつかの調製物において、Ｂｉｏｔａｇｅ手動フラッシュクロマトグラフィー（Ｆｌａｓｈ＋）または自動フラッシュクロマトグラフィー（Ｈｏｒｉｚｏｎ）システムのいずれかを用いて、精製を実施した。すべてのこれらの機器は、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｓｉｌｉｃａカートリッジを用いて作動する。
【００９１】
ＳＰＥ−Ｓｉカートリッジは、Ｖａｒｉａｎによって供給されるシリカ固相抽出カラムである。
【００９２】
下記の表は、本文中で用いた略語を列挙する：
【表１】
2012509910.tif 000006
【００９３】
説明
説明１：（２Ｓ）−２−［２−（メチルオキシ）−２−オキソエチル］−１−ピペリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（Ｄ１）
【化４】
2012509910.tif 000007
２５０ｍＬの丸底フラスコに、（（２Ｓ）−１−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−２−ピペリジニル）酢酸（１．００ｇ、４．１１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２５ｍＬ）、ＤＩＰＥＡ（２．１５ｍＬ、１２．３３ｍｍｏｌ）、およびＴＢＴＵ（１．９８ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２０分間撹拌し、褐色を形成した。この時点の後、ＭｅＯＨ（０．２５ｍＬ、６．１７ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液を室温で３０分間撹拌した。次に、これを、鹹水を含む分離漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出し、組み合わせた有機層を水／氷（５×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。得られた粗物をカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＰ１，  Ｃｙ−ＥｔＯＡｃ１００／０〜８５／１５）によって精製した。  回収した画分によって、表題化合物（１．０１ｇ、３．９２ｍｍｏｌ、９５％収率）が無色の油として与えられた。１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ（ｐｐｍ）：  ４．６７  −  ４．７５  （ｍ，  １  Ｈ），  ３．９６  −  ４．０５  （ｍ，  １  Ｈ），  ３．６７  （ｓ，  ３  Ｈ），  ２．７９  （ｔ，  １  Ｈ），  ２．６１  （ｄｄ，  １  Ｈ），  ２．５３  （ｄｄ，  １  Ｈ），  １．６０  −  １．７０  （ｍ，  ６  Ｈ），  １．４６  （ｓ，  ９  Ｈ）。
【００９４】
説明２：（２Ｓ）−２−（３−ブロモ−２−オキソプロピル）−１−ピペリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（Ｄ２）
【化５】
2012509910.tif 000008
室温における窒素下の５００ｍＬの丸底フラスコに、Ｄ１（１１．１ｇ、４３．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、淡黄色の溶液を与えた。この溶液を−７８℃に冷却し、テッベ試薬（トルエンにおける０．５Ｍ溶液１０４ｍＬ、５１．８ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。粘稠な混合物をさらなる無水トルエン７０ｍＬで希釈した。得られた褐色−橙色混合物をこの温度で３０分間撹拌した後、室温までゆっくりと加温し、撹拌下で２時間放置しておいた。反応混合物を滴下漏斗へと負荷した後、０℃に冷却したＮａＯＨの１Ｍ水溶液を最大で４００ｍＬ含む２Ｌの丸底フラスコに滴下して添加した。クエンチの終了時に、得られた灰色の懸濁液をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で希釈し、一晩撹拌しておいた（機械的撹拌）。次に、得られた黄色の懸濁液を、Ｇｏｏｃｈ漏斗（Ｓｔｅｒｉｍａｔを用いる）で濾過し：塩をＥｔＯＡｃ（最大５００ｍＬ）で洗浄した。次に、相を分離し、有機層を鹹水（２×５００ｍＬ）で洗浄した。組み合わせた有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、濃橙色の油を与えた。この材料を最大５００ｍＬのＥｔ２Ｏで希釈し：いくらかの塩が沈殿したので、得られた懸濁液をＧｏｏｃｈ漏斗（Ｓｔｅｒｉｍａｔを用いる）で濾過した。濾液を真空下で濃縮して１２．４ｇの粗物（２Ｓ）−２−［２−（メチルオキシ）−２−プロペン−１−イル］−１−ピペリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル１２．４ｇを橙色−褐色の油として与えた。（回収された全体量が、理論値より高かったので）材料はいくらかの残余塩を含んでいた。次の反応において材料をさらに精製せずに用い、８９重量％で純粋であると想定した。室温における窒素下の１Ｌ丸底フラスコにおいて、（２Ｓ）−２−［２−（メチルオキシ）−２−プロペン−１−イル］−１−ピペリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（１２．４ｇ、４３．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１２５ｍＬ）および水（３５ｍＬ）に溶解して、淡黄色の溶液を与えた。次に、ＮＢＳ（７．６７ｇ、４３．１ｍｍｏｌ）を添加して、最大１００ｍＬのＴＨＦに溶解した。得られた灰色の混合物を室温で１時間撹拌した。次に、５０ｍＬのＴＨＦに溶解した追加的なＮＢＳ（０．２等量、１．５ｇ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮して、ＴＨＦを除去した後、ＥｔＯＡｃ（最大５００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で希釈した。相を分離し、水性層をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で溶媒相抽出した。組み合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、１７．８ｇの褐色の油を与えた。この材料をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  ７５Ｌ、Ｃｙ−ＥｔＯＡｃ、１００−０〜９０−１０）によって精製して、表題化合物（６．０ｇ、１８．７ｍｍｏｌ、Ｄ１からの４３％収率、２工程）をわずかに黄色の油として与え、静置して凝固させた。ＵＰＬＣ：  ｒｔ  ＝  ０．７９，  観察されたピーク：  ３４４  ［Ｍ＋Ｎａ，  １００％］，  ３４２  ［Ｍ＋Ｎａ，  １００％］，  ２６６  ［Ｍ−ｔＢｕ，１００％］および２６４  ［Ｍ−ｔＢｕ，１００％］。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ（ｐｐｍ）：  ４．７２  −  ４．７９  （ｍ，  １  Ｈ），  ���．９１  −  ４．１０  （ｍ，  ３  Ｈ），  ２．７７  −  ２．９７  （ｍ，  ３  Ｈ），  １．４９  −  １．７５  （ｍ，  ６  Ｈ），  １．４６  （ｓ，  ９  Ｈ）。
【００９５】
実施例１：６，８−ジメチル−２−（｛（２Ｓ）−１−［（２−メチル−５−フェニル−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］−２−ピペリジニル｝メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン（ＨＣｌ塩）（Ｅ１）：
【化６】
2012509910.tif 000009
ＤＭＦ（２ｍＬ）における（２Ｓ）−２−（３−ブロモ−２−オキソプロピル）−１−ピペリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチルＤ２（０．１４０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、３，５−ジメチル−２−ピラジンアミン（０．０５４ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１５０℃で３０分間撹拌した。反応混合物をＳＣＸカラムに負荷し、メタノールおよびメタノールにおける２Ｍアンモニアで溶出した。回収した画分によって、所望の６，８−ジメチル−２−［（２Ｓ）−２−ピペリジニルメチル］イミダゾ［１，２−ａ］ピラジンを含む０．１１５ｇの粗物が与えられた。ＵＰＬＣ：  ｒｔ＝０．３４，  観察されたピーク：  ２４５  （Ｍ＋１）。Ｃ１４Ｈ２０Ｎ４は２４４を要する。７ｍＬのねじキャップつきバイアルへと、２−メチル−５−フェニル−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（０．１１４ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解し、塩化オキサリル（０．１００ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）、次いでＤＭＦ（０．０３６ｍＬ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、得られた黄色の固体をＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解し、粗物６，８−ジメチル−２−［（２Ｓ）−２−ピペリジニルメチル］イミダゾ［１，２−ａ］ピラジンおよびＤＣＭ（１ｍＬ）におけるＴＥＡ（０．１９７  ｍｌ、０．４７  ｍｍｏｌ）を含む０℃に冷却した溶液に滴下して添加した。氷槽を除去し、反応混合物を室温で撹拌下で１時間放置した。ＤＣＭ（１ｍＬ）を添加し、混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって（Ｂｉｏｔａｇｅ  ２５  Ｍ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９０／０１）、およびｆｒａｃｔｉｏｎ  ｌｙｎｘ（基本法）によって精製した。表題化合物の遊離塩基（０．０３９ｇ、０．０７９  ｍｍｏｌ、Ｄ２から２０％収率、３工程）を黄色の固体として得た。ＵＰＬＣ：  ｒｔ  ＝０．５８，  観察されたピーク：  ４４６  （Ｍ＋１）。Ｃ２５Ｈ２７Ｎ５ＯＳは４４５を要する。１Ｈ  ＮＭＲ  ［本生成物は、配座異性体の混合物（ｃ比約６０／４０）として存在する。］  （５００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）。遊離塩基（０．０３７ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（１ｍＬ）の入った７ｍＬのねじキャップつきバイアルに移し、溶液を０℃に冷却した。ＨＣｌ（Ｅｔ２Ｏにおける１Ｍ溶液０．１２５ｍＬ、０．１３ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、混合物を１５分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、得られた固体を無水Ｅｔ２Ｏで倍散した。表題化合物を白色の固体として得た（０．０４１ｇ、０．０８ｍｍｏｌ、９８％収率）。ＵＰＬＣ：  ｒｔ＝０．５８分、観察されたピーク：４４６（Ｍ＋１−ＨＣｌ）。Ｃ２５Ｈ２８ＣｌＮ５ＯＳは４８２を要する。
【００９６】
実施例２：ＦＬＩＰＲを用いたヒトオレキシン−１受容体および２受容体におけるアンタゴニスト親和性の決定
細胞培養
組換えヒトオレキシン−１受容体（ｈＯＸ１）またはヒトオレキシン−２受容体（ｈＯＸ２）を安定して発現する接着性のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を、補体を有さない１０％ウシ胎仔血清（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  カタログ番号１０１０６−０７８）および４００μｇ／ｍＬのジェネティシンＧ４１８（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，  カタログ番号３４５８１０）を補充したα最小必須培地（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  カタログ番号；  ２２５７１−０２０）における培養で維持した。細胞を３７℃で９５％：５％の空気：ＣＯ２の下で単層として増殖させ、３〜４日ごとに継代した。用いた最高の継代は２５回であった。
【００９７】
本実施例において用いたヒトオレキシン１受容体およびヒトオレキシン２受容体の配列は、Ｓａｋｕｒａｉ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ  （１９９８）  Ｃｅｌｌ，  ９２  ｐ．５７３〜５８５において刊行されているとおりであったが、例外は、用いたヒトオレキシン１受容体配列が、位置２８０でアミノ酸残基アラニンを有しており、Ｓａｋｕｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．において報告されたグリシンではないということであった。
【００９８】
ＦＬＩＰＲ（商標）を用いる［Ｃａ２＋］ｉの測定
ＣＨＯ−ｈＯＸ１細胞またはＣＨＯ−ｈＯＸ２細胞を上記の培地においてウェルあたり２０，０００個の密度で黒色の透明な底の３８４ウェルプレートに蒔種し、一晩維持した（３７℃における９５％：５％の空気：ＣＯ２）。
【００９９】
実験当日、培地を廃棄し、細胞を、２．５ｍＭのＰｒｏｂｅｎｅｃｉｄを添加した標準緩衝液（ＮａＣｌ，  １４５ｍＭ；  ＫＣｌ，  ５ｍＭ；  ＨＥＰＥＳ，  ２０ｍＭ；  グルコース，  ５．５ｍＭ；  ＭｇＣｌ２，  １ｍＭ；  ＣａＣｌ２，  ２ｍＭ）で３回洗浄した。
【０１００】
次に、プレートを暗所で室温で６０分間、１μＭ  ＦＬＵＯ−４ＡＭ色素とともにインキュベートして、ＦＬＵＯ−４ＡＭを細胞に取り込ませた後、細胞内エステラーゼによって細胞に残ることができないＦＬＵＯ−４へと変換した。
【０１０１】
インキュベーション後、細胞を標準緩衝液で３回洗浄して細胞外色素を除去し、洗浄後に３０μＬの緩衝液を各ウェルにおいて放置した。本発明の化合物を１．６６Ｅ−０５Ｍ〜１．５８Ｅ−１１Ｍの範囲の最終アッセイ濃度で試験した。
【０１０２】
本発明の化合物を１０ｍＭのストック濃度のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。これらの溶液を３８４化合物プレートにおけるＤＭＳＯで連続希釈し、１μＬの各希釈物を試験化合物プレートに移した。細胞に化合物を添加する直前に、緩衝液（５０μＬ／ウェル）を１μＬの化合物コピープレートに添加した。
【０１０３】
５０μＬ／ウェルのヒトオレキシンＡ（ｈＯｒｅｘｉｎＡ）を含むアゴニスト刺激３８４ウェルプレートを調製した直後に、緩衝液を用いてストックプレートを希釈することによって用い：終濃度は、ｈＯｒｅｘｉｎＡについて算出されたＥＣ８０と等価である。この値を、実験の同じ日に、濃度反応曲線（少なくとも１６個の複製物）におけるｈＯｒｅｘｉｎＡを試験することによって得た。
【０１０４】
次に、負荷した細胞を試験化合物とともに３７℃で１０分間インキュベートした。次に、プレートをＦＬＩＰＲ（商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，  ＵＫ）に置き、細胞蛍光（λｅｘ＝４８８ｎｍ，  λＥＭ＝５４０ｎｍ）をモニターした（Ｓｕｌｌｉｖａｎ  Ｅ，  Ｔｕｃｋｅｒ  ＥＭ，  Ｄａｌｅ  ＩＬ．    Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ［Ｃａ２＋］ｉ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｆｌｕｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｐｌａｔｅ  ｒｅａｄｅｒ  （ＦＬＩＰＲ）．  Ｌａｍｂｅｒｔ  ＤＧ  （編），  Ｃａｌｃｉｕｍ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ：  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９９，  １２５−１３６に収録）。基線蛍光読み取りを５〜１０秒間行った後、１０μＬのＥＣ８０  ｈＯｒｅｘｉｎＡ溶液を添加した。次に、蛍光を４〜５分間読み取った。
【０１０５】
データ分析
ＦＬＩＰＲを用いた機能的応答を、ピーク蛍光強度−基線蛍光として測定し、同じプレートにおける阻害されていないオレキシンＡによる誘導される応答の百分率として表した。反復性の曲線適合およびパラメータ概算を、４つのパラメータロジスティックモデルおよびＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌを用いて実施した（Ｂｏｗｅｎ  ＷＰ，  Ｊｅｒｍａｎ  ＪＣ．  Ｎｏｎｌｉｎｅａｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｓｐｒｅａｄｓｈｅｅｔｓ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｃｉ．  １９９５；  １６：  ４１３−４１７）。アンタゴニスト親和性値（ＩＣ５０）を、改変したＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ補正を用いて機能的ｐＫｉ値に変換した（Ｃｈｅｎｇ  ＹＣ，  Ｐｒｕｓｏｆｆ  ＷＨ．    Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃｏｎｓｔａｎｔ  （Ｋｉ）  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｈｉｃｈ  ｃａｕｓｅｓ  ５０  ｐｅｒｃｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  （ＩＣ５０）  ｏｆ  ａｎ  ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｒｅａｃｔｉｏｎ．    Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９７３，  ２２：  ３０９９−３１０８）。
【数１】
2012509910.tif 000010
【０１０６】
式中、［アゴニスト］は、アゴニスト濃度であり、ＥＣ５０は、アゴニスト用量反応曲線に由来する５０％活性を与えるアゴニストの濃度であり、ｎ＝用量反応曲線の傾斜である。ｎ＝１のとき、等式は、より見慣れたＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式に折りたたまれる。
【０１０７】
本方法に従って試験した実施例１の化合物のｆｐＫｉ値は、ヒトクローン化オレキシン−１受容体（位置２８０にアミノ酸残基アラニンを有し、グリシンではない。）で８．３、およびヒトクローン化オレキシン−２受容体で８．２であった。
【国際調査報告】
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2012509910.tif 000014