(57)【要約】環境汚染および／または紫外線により対象体の皮膚に引き起こされる損傷を予防または回復させるための化粧用の方法および組成物であって、例えば、皮膚細胞に対する損傷を低減することにより、および／またはヒト皮膚の美的概観を向上させることにより、環境汚染および紫外線の皮膚に対する有害効果を予防または回復させるのに有効な量で、局所塗布用の単離されたポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体を含む方法および組成物。【選択図】図１Ｂ
2012502020.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト皮膚の美的外観を向上させるのに有効な量のポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体と、化粧用に許容される担体とを含む局所用化粧品組成物。
【請求項２】
紫外線に曝露された後のヒト皮膚の美的外観を向上させるための方法であって、前記皮膚に、化粧的有効量のポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体を化粧用に許容される担体中に含む組成物を適用することを含む方法。
【請求項３】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体が、Ｃ１３〜Ｃ２５炭素の骨格を含む、請求項１または２のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項４】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体が、少なくとも１つの不飽和炭素結合を含む、請求項３に記載の組成物または方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つの不飽和炭素結合が、前記骨格の最後の２つの炭素間に存在する、請求項４に記載の組成物または方法。
【請求項６】
前記骨格が、Ｃｌ、Ｃ２、またはＣ４の１つまたは複数に存在するヒドロキシル基をさらに含む、請求項３〜５のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項７】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールが、単離された天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項８】
前記単離された天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールが、果実または植物供給源から単離される、請求項７に記載の組成物または方法。
【請求項９】
前記果実または植物供給源が、アボカド果実およびアボカド種子からなる群から選択される、請求項８に記載の組成物または方法。
【請求項１０】
前記天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの誘導体が、アセチル化誘導体を実質的に含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項１１】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体が、実質的に純粋な形態で単離されている、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項１２】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体が、合成的に調製される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項１３】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体が、前記単離された物質の約８０％〜約９５％重量／重量の純度で存在する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項１４】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールが、前記全組成物の約０．００１％〜約２０％重量／重量の濃度で存在する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項１５】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールが、前記全組成物の約０．０１％〜約５％重量／重量の濃度で存在する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項１６】
前記組成物が、フラン脂質を実質的に含んでいない、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項１７】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体またはそれらの組合せが、１−アセトキシ−２，４−ジヒドロキシ−１６−ヘプタデセン、またはｌ，２−ジヒドロキシ−４−アセトキシ−１６ヘプタデセン、１−アセトキシ−２，４−ジヒドロキシ−１６−ヘプタデシン、またはｌ，２−ジヒドロキシ−４−アセトキシ−１６−ヘプタデシンからなる群から選択される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項１８】
前記組成物が、油溶性ビタミン、ポリフェノールの酸化防止剤および酸化防止剤抽出物、天然植物抽出物、ならびに天然種子油からなる群から選択される追加的な化合物をさらに含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項１９】
前記追加的な化合物が、緑茶に基づくポリフェノール、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピカテキン３−ガレート（ＥＣＧ）、エピカテキンガレート（ＥＧ）、オオアザミ、ブドウ抽出物、リスベラトロールイチョウ抽出物、ポリフェノール、コエンザイムＱ１０（ＣｏＱ１０）、グルタチオン、ビタミンＣ、ビタミンＡ、リコピン、カロチノイド、フラボノイド／ポリフェノールビタミンＥ、アロベラ抽出物、およびザクロ種子油からなる群から選択される、請求項１８に記載の組成物または方法。
【請求項２０】
前記組成物が、麻酔剤；抗アレルギー剤；抗菌剤；抗真菌剤；防腐剤；キレート剤；着色剤；脱色剤；皮膚軟化剤；剥脱剤；芳香剤；乳化剤；湿潤剤；虫よけ剤；潤滑剤；保湿剤；保存剤；皮膚浸透促進剤；安定化剤；日焼け止め；界面活性剤；増粘剤；粘性調整剤；およびビタミンからなる群から選択される追加的な化合物を含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項２１】
前記組成物が、エアロゾル、固塊、クリーム、軟膏、乳剤、精油、フォーム、ゲル、ローション、ムース、ペースト、パッチ、筆、美容液、液剤、濡れナプキン、マスク、ボディラップ、スプレー、およびスティックからなる群から選択される形態である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項２２】
前記乳剤が水中油型乳剤である、請求項２１に記載の組成物または方法。
【請求項２３】
前記水中油型乳剤が、約３０％〜約８０％重量／重量の油相を含む、請求項２２に記載の組成物または方法。
【請求項２４】
前記油相が、天然植物油、多価不飽和脂肪酸、ビタミンＡ、Ｅ、およびＦ、アスコルビン酸パルミテート、酸化防止剤、ならびに他の好適な成分、またはそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２３に記載の組成物または方法。
【請求項２５】
前記天然植物油が、ホホバ油、麦芽油、アボカド油、大豆油、胡麻油、米油、またはそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２４に記載の組成物または方法。
【請求項２６】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールが、全組成物の約０．０１％〜約５％（重量／重量）の濃度で存在する、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の組成物または方法。
【請求項２７】
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールが、全組成物の約０．０５％〜約１％（重量／重量）の濃度で存在する、請求項２６に記載の組成物または方法。
【請求項２８】
ヒト皮膚に対するＵＶ損傷の外部徴候を低減するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項２９】
ヒト皮膚に対するＵＶ損傷を予防するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項３０】
ヒト皮膚に対するＵＶ誘導性老化の外部徴候を低減するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項３１】
ヒト皮膚におけるＵＶ誘導性老化の外部徴候を予防するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項３２】
前記老化の外部徴候が色素斑の外観を含む、請求項３０または３１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３３】
前記色素斑が、そばかす、黒皮症、および日光黒子からなる群から選択される、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記ＵＶ誘導性老化の外部徴候が、損傷を受けやすい皮膚、皮膚のたるみ、微細線、しわ、皮膚の菲薄化、皮膚光沢の欠如、皮膚の疲労、および皮膚の乾燥からなる群から選択される、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３５】
前記皮膚の発赤または炎症を低減するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項３６】
おむつかぶれを予防または低減するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項３７】
ヒト皮膚に対する環境損傷の外部徴候を低減するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項３８】
ヒト皮膚に対する１つまたは複数の目に見える老化の影響を低減するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項３９】
ヒト皮膚に対する１つまたは複数の老化の影響を寛解するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項４０】
ヒト皮膚に対する１つまたは複数の老化の影響を予防するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項４１】
ヒト皮膚に対する環境損傷の外部徴候を予防するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または方法の使用。
【請求項４２】
天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびそれらの誘導体を、果実または植物供給源から単離する方法であって、
前記果実または植物供給源を破砕および凍結乾燥して凍結乾燥粉末を取得することと、
前記凍結乾燥粉末を無極性有機溶媒または極性溶媒で抽出して粗脂質抽出物を取得することと、
無極性溶媒または極性溶媒を使用して前記粗脂質抽出物を濃縮し、濃縮粗脂質抽出物を取得することと、
前記ポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびそれらの誘導体を、室温より低い温度で結晶化することにより前記濃縮粗脂質抽出物から分離して結晶を取得することと、
前記結晶化されたポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびそれらの誘導体をろ過することと、
前記ろ過液にエタノールを添加することと、
前記エタノールに残る不溶性物質をろ過することと、
蒸発させることと、
無極性溶媒で再結晶させることを含む方法。
【請求項４３】
前記果実または植物供給源が、アボカド果実およびアボカド種子からなる群から選択される、請求項４２に記載の組成物または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に化粧品の分野であり、具体的には、皮膚に対する環境損傷およびＵＶ誘導性損傷を予防または治療するための化粧品組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト皮膚細胞、特にケラチノサイト、線維芽細胞、および脂腺細胞（ｓｅｂｏｃｙｔｅ）の外観および物理的特性は、年齢と共に変化する。老化は、肉眼での臨床変化として現れる分子的修飾の蓄積の結果として生じる。紫外線（ＵＶ）、大気汚染、創傷、感染、外傷性傷害、酸素欠乏症、たばこの煙、およびホルモン状態を含む要因は、分子的修飾の蓄積速度を増加させ、したがって老化プロセスの加速に重要な役割を有する。  
【０００３】
皮膚老化の主要な細胞内原因は酸化であり、それは、細胞を損傷し皮膚の区域を破壊するフリーラジカルの産生をその結果としてもたらす。皮膚は、紫外線（ＵＶ）誘導性酸化ストレスに対処するための精巧な抗酸化防御系を有する。しかしながら、紫外線への曝露が甚だしいと、皮膚の抗酸化能力を圧倒し、酸化的損傷および最終的には早発性皮膚老化に結びつく。  
【０００４】
紫外線（ＵＶ）照射への曝露は、インターフェロン（ＩＦＮ）ガンマおよび腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アルファなどの幾つかのメディエーターを誘導することが見出されており、それらは、急性皮膚炎および亜急性慢性炎症の両方に関与すると考えられており、それらの累積的な変性効果は、内因性および外因性の老化に結びつく。したがって、しわ、浅さ（ｓｈａｌｌｏｗｎｅｓｓ）、ならびに皮膚の機械的特性および全体的な美的外観の低下が、時間の経過と共に生じる。  
【０００５】
ＴＮＦ−アルファは、慢性および急性の太陽放射に応答する表皮損傷に関与する最も重要な組織因子のうちの１つであると考えられている。ＴＮＦ−アルファは、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｔリンパ球、およびケラチノサイトを含む種々様々な細胞により産生される。様々な刺激が、様々な細胞および調節機構を介してＴＮＦ−アルファ産生を誘導することが実証された。皮膚が紫外線で照射されると、ＴＮＦ−アルファは、残留表皮Ｔリンパ球（Ｈａｓｓａｎ−Ｚａｈｒａｅｅ，Ｍ、Ｗｕ，Ｊ、Ｇｏｒｄｏｎ，Ｊ：“Ｒａｐｉｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ＩＦＮ−ｇａｍｍａ  ｂｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｓｋｉｎ  ｍａｙ  ｐｌａｙ  ａ  ｐｉｖｏｔａｌ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ”、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２年、１０巻：１５９９〜１６１２頁）およびケラチノサイトにより産生される。  
【０００６】
ｍＲＮＡレベルでは、紫外線により、培養ケラチノサイト中の腫瘍壊死因子アルファｍＲＮＡのレベルが、４時間以内に２０〜４０倍上方制御されることが示されている。  
【０００７】
最近の研究により、ＴＮＦ−アルファは、ＵＶＢ照射に曝露された後の細胞動態およびＤＮＡ修復に重大な影響を及ぼすことも示されている。ＵＶは、シクロブタンピリミジンダイマー（ＣＰＤ、Ｃｙｃｌｏｂｕｔａｎｅ  Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  Ｄｉｍｍｅｒ）および６−４−光産物の形成などのＤＮＡ損傷を直接的に引き起こす場合があり、それらは両方とも、ヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ）系により修復することができる（Ｍｏｒｉｗａｋｉ  Ｓ、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｙ：“Ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ＤＮＡ  ｒｅｐａｉｒ”、Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｃｉ．２００８年、６月；５０巻（３号）：１６９〜７６頁；Ｂｙｋｏｖ  ＶＪ、Ｓｈｅｅｈａｎ  ＪＭ、Ｈｅｍｍｉｎｋｉ  Ｋ、Ｙｏｕｎｇ  ＡＲ．：“Ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｒｅｐａｉｒ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｂｕｔａｎｅ  ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ｄｉｍｅｒｓ  ａｎｄ  ６−４  ｐｈｏｔｏｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ  ｅｘｐｏｓｅｄ  ｔｏ  ｓｏｌａｒ  ｓｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ”、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９９年  ３月；１１２巻（３号）：３２６〜３１頁）。ＴＮＦ−アルファは、細胞周期中の細胞の割合を増加させ、アポトーシスの速度を増大させ、未修理のシクロブタンピリミジンダイマー（ＣＰＤ）を含有する細胞が細胞周期に入ることを可能にすることが実証された。このように、ＴＮＦ−アルファは、皮膚光老化の促進に重要な役割を果たす。  
【０００８】
インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）は、ＵＶ関連皮膚リモデリングの発生に関与すると考えられている別の重要な細胞因子である。ＩＦＮ−γは、種々の刺激に応答して、Ｔリンパ球、樹状細胞、およびナチュラルキラー細胞により分泌される。紫外線に曝露された表皮皮膚における少量だが重要で持続的なＩＦＮ−γの産生は、以前にＳｈｅｎらにより報告されている（Ｓｈｅｎ  Ｊ、Ｂａｏ  Ｓ、Ｒｅｅｖｅ  ＶＥ：“Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１０，  ＩＬ−１２，ａｎｄ  ＩＦＮ−ｇａｍｍａ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ  ｏｆ  ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｉｃｅ  ｂｙ  ＵＶＡ（３２０−４００ｎｍ）  ａｎｄ  ＵＶＢ（２８０−３２０ｎｍ）  ｒａｄｉａｔｉｏｎ．”Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １１３巻：１０５９〜１０６４、１９９９年）。色素斑の発生は、皮膚光老化の最も代表的な症状のうちの１つである。ヒト皮膚で形成される多くの種類の色素斑の中で、そばかす、黒皮症、および日光黒子が、最も一般的に観察される。色素斑の形成におけるＩＦＮ−γの極めて重要な役割は、Ａｏｋｉ  ＨおよびＭｏｒｏ  Ｏ．“Ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＩＦＮ−ｇａｍｍａ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｓｐｏｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｄｏｒｓａｌ  ｓｋｉｎ  ｏｆ  Ｆ１  ｍｉｃｅ  ｏｆ  ＨＲ−１  ｘ  ＨＲ／Ｄｅ”Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００５年  ５月；１２４巻（５号）：１０５３〜６１頁により、最近になって実証された。マウス背側皮膚のモデルを使用して、Ａｏｋｉ  ＨおよびＭｏｒｏ  Ｏは、ＵＶ曝露による色素性病変において、分泌されたＩＦＮ−γの濃度が、非照射対照と比較して４倍を超えて非常に著しく増加することを実証している。  
【０００９】
ＩＦＮ−γの初期供給源は、ＵＶ曝露により活性化された残留表皮Ｔリンパ球である可能性が仮定されている。分泌されたＩＦＮ−γは、ケラチノサイトを刺激し、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）−２、インターフェロン誘導タンパク質（ＩＰ）−１０、およびインターフェロン−γにより誘導されるモノカイン（ＭＩＧ）の転写を上方制御し、損傷部位により多くのＴリンパ球を動員する。浸潤したＴリンパ球は、追加的なＩＦＮ−γを含むケモカインおよびサイトカインをさらに産生する。Ｔリンパ球活性に加えて、それらの細胞によりおよび活性化ケラチノサイトにより分泌される炎症性ケモカインおよびサイトカインは、マスト細胞、単球、およびマクロファージの浸潤および活性化も引き起こす。これらの細胞は全て、相互作用的ネットワークの形成に関与しており、メラノサイト活性化のために好適な局所的環境を提供する。さらに、ＩＦＮ−γは、核因子（ＮＦ）−カッパＢのＴＮＦ−アルファ誘導活性を相乗効果的に増強し、皮膚老化を引き起こす。  
【００１０】
紫外線が、炎症プロセスの重要なステップであるＴ細胞増殖および炎症誘導細胞の損傷皮膚への浸潤を引き起こすという事実に基づき、このプロセスを遅延させ皮膚傷害を防止するためにＴ細胞阻害剤が開発された。現在のところ、多くのＴリンパ球阻害剤、ならびにＴＮＦ−アルファおよびＩＦＮ−γ発現阻害剤が知られており、タンパク質に基づくＴＮＦアルファ阻害剤は効能が実証されており、種々の炎症性疾患での臨床使用が認可されている。しかしながら、これら化合物は全て強力な薬物であり、潜在的に重篤な全身性副作用を引き起こし、化粧品製剤で使用することはできない（Ｐａｌｌａｄｉｎｏ  ＭＡ、Ｂａｈｊａｔ  ＦＲ、Ｔｈｅｏｄｏｒａｋｉｓ  ＥＡ、Ｍｏｌｄａｗｅｒ  ＬＬ：“Ａｎｔｉ−ＴＮＦ−ａｌｐｈａ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ：ｔｈｅ  ｎｅｘｔ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ”、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２００３年  ９月；２巻（９号）：７３６−４６頁）。インターフェロン関連炎症性疾患を治療するためのインターフェロンアンタゴニストの使用の一例は、米国特許第７，２８５，５２６号明細書に記述されている。Ｔ細胞活性化の増加を特徴とする特定の皮膚状態、例えばＵＶ損傷を治療するためのインターフェロンアンタゴニストの使用の一例は、米国特許第７，３２３，１７１号明細書に開示されている。  
【００１１】
Ｔ細胞増殖ならびにＴＮＦアルファおよびＩＦＮ発現に対して阻害効果を示す限られた数の天然化合物が記述されている（Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ．２００６年  ８月；ｌｌ巻（１５〜１６頁）：７２５〜３２頁）。  
【００１２】
アボカド果実は、食物として世界中で一般的に消費されており、種々の医薬目的および化粧品目的にも使用されている。アボカドの健康上の利益は、それが２０種を超える必須栄養素および種々の潜在的な生物学的活性化合物を含有しているという事実による可能性がある。  
【００１３】
ポリヒドロキシル化脂肪アルコール（ＰＦＡ）のアセチル誘導体は、アボカド果実の果肉および種子の両方に存在する。非アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールも、アボカド果実中に少量検出された。ポリヒドロキシル化脂肪アルコールのアセチル誘導体は、比較的類似した構造を有する一群の脂質である。これら物質は、癌細胞系統に対して活性を持つことが以前に見出されおり（Ｏｂｅｒｌｉｅｓ  ＮＨ、Ｒｏｇｅｒｓ  ＬＬ、Ｍａｒｔｉｎ  ＪＭ、およびＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ＪＬ：“Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｎｄ  ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｎｒｉｐｅ  ｆｒｕｉｔ  ｏｆ  Ｐｅｒｓｅａ  Ａｍｅｒｉｃａｎａ．”Ｊ  Ｎａｔ  Ｐｒｏｄ  １９９８年；６１巻：７８１〜５頁）、肝保護活性および抗毒活性が実証されており（Ｋａｗａｇｉｓｈｉ  Ｈ、Ｆｕｋｕｍｏｔｏ  Ｙ、Ｈａｔａｋｅｙａｍａ  Ｍ、Ｈｅ  Ｐ、Ａｒｉｍｏｔｏ  Ｈ、Ｍａｔｓｕｚａｗａ  Ｔら、“Ｌｉｖｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｖｏｃａｄｏ．”Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ２００１年；４９巻：２２１５〜２１頁）、エピマスチゴートおよびトリポマスチゴートに対する中程度の活性が実証されている（Ａｂｅ  Ｆ、Ｎａｇａｆｕｊｉ  Ｓ、Ｏｋａｗａ  Ｍ、Ｋｉｎｊｏ  Ｊ、Ａｋａｈａｎｅ  Ｈ、Ｏｇｕｒａ  Ｔら：“Ｔｒｙｐａｎｏｃｉｄａｌ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｉｎ  ｐｌａｎｔｓ  ５．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｍｅ  Ｍｅｘｉｃａｎ  ｐｌａｎｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｉｒ  ｔｒｙｐａｎｏｃｉｄａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖｅ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｅｅｄｓ  ｏｆ  Ｐｅｒｓｅａ  Ａｍｅｒｉｃａｎａ”．Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ  ２００５年；２８巻：１３１４〜７頁）。加えて、これら化合物の幾つかは、抗真菌特性、及び（Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ  Ｆ、Ｈｅｌｍｓ  ＧＬ、Ｐｒｕｓｋｙ  Ｄ、Ｂｒｏｗｓｅ  Ｊ：“Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｆｒｏｍ  ｉｄｉｏｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｖｏｃａｄｏ  ｆｒｕｉｔｓ”．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０００年；５４巻：１８３〜９頁）、抗菌特性を示し（Ｎｅｅｍａｎ  Ｉ．、Ｌｉｓｈｉｔｚ，Ａ、およびＫａｓｈｍａｎ，Ｙ．１９７０年：“Ｎｅｗ  ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｇｅｎｔ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｖｏｃａｄｏ  ｐｅａｒ．”Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１９巻：４７０〜４７３頁）、アセチルＣｏＡ（ａｃｅｔｙ  ＣｏＡ）カルボキシラーゼ活性を阻害する重要な能力を有することも実証されている（Ｈａｓｈｉｍｕｒａ  Ｈ、Ｕｅｄａ  Ｃ、Ｋａｗａｂａｔａ  Ｊ、Ｋａｓａｉ  Ｔ．：“Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｆｒｏｍ  ａｖｏｃａｄｏ（Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  Ｍｉｌｌ．）  ｆｒｕｉｔｓ”．Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００１年；６５巻：１６５６〜８頁）。  
【００１４】
アボカド油の不鹸化画分は、アルカリ性溶液で長期間加水分解した後で依然として水に不溶性である脂肪性物質の画分であり、有機溶媒を使用して抽出することができる。アボカド種子油の不鹸化画分は、幾つかの化粧応用および治療応用に有用である。例えば、国際公開第９９／４３２９８号パンフレットは、皮膚線条および角化症を寛解するための、アボカド種子由来の不鹸化脂質抽出物を含有する皮膚科学的製剤の使用を記述している。無機アルカリ性溶液中でアボカド油を鹸化することによりトリグリセリドを単離するプロセス中に、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールのアセチル誘導体が、非アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールへと加水分解され、不鹸化画分中にその状態で残ることが見出された。  
【００１５】
非アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールも、アボカド種子の鹸化（加水分解）抽出物で検出される場合があり、それらの濃度は、不鹸化画分の１０％までを占める場合がある。アボカド種子の不鹸化物中に存在する別の主要な群の化合物はフランであり（図４）、それは、不鹸化画分の３０％までの濃度で存在する場合がある。これらフラン化合物は、生物学的活性特性が以前に実証されている。  
【００１６】
米国特許第６，５８２，６８８号明細書は、非アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールとの混合物中（２５％まで）のフラン脂質で構成される画分の分離を可能にする、アボカドの不鹸化物質の画分を単離するための方法、および皮膚の化粧的治療および炎症性障害の治療のための、フランに基づく化合物の使用を記述している。脱アセチル化形態のポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびフラン脂質が両方とも、これら化粧品応用に存在することは、この製剤の主要な欠点である。  
【００１７】
フラン脂質は、リシルオキシダーゼの既知の強力な阻害剤であり（Ｍ．Ｊ．Ｗｅｒｍａｎ、Ｓ．Ｍｏｋａｄｙ、およびＩ．Ｎｅｅｍａｎ：“Ｐａｒｔｉａｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｎｅｗ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  Ｌｙｓｙｌ  Ｏｘｉｄａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ａｖｏｃａｄｏ  Ｓｅｅｄ  Ｏｉｌ”、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．１９９０年、３８巻、２１６４〜２１６８頁；Ｒｏｓｅｎｂｌａｔ  Ｇ、Ｋａｇａｎ  Ｈ、Ｓｈａｈ  Ｍ、Ｓｐｉｔｅｌｌｅｒ  Ｇ、Ｎｅｅｍａｎ  Ｉ：“Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｙｓｙｌ  Ｏｘｉｄａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｒｏｍ  Ａｖｏｃａｄｏ  Ｓｅｅｄ  Ｏｉｌ”、ＪＡＯＣＳ  ７２巻、２２５〜２２９頁（１９９５年））、リシルオキシダーゼは正常な皮膚の張りおよび弾力性に重要な酵素である。  
【００１８】
リシルオキシダーゼ活性に対するフランの阻害効果のため、フラン含有脂質は、過剰コラーゲンおよびエラスチン沈着を伴う疾患の治療において、強皮症関連状態において、分子内および分子間架橋を阻害するための、および恐らくは新しく形成された架橋の切断を増強するための抗繊維症薬物として機能する場合がある。対照的に、他の状態では、リシルオキシダーゼ活性の低減は、皮膚弛緩症および関節過剰伸長性のリスク増加に関連している（Ｓｏｎｇ  ＹＬ、Ｆｏｒｄ  ＪＷ、Ｇｏｒｄｏｎ  Ｄ：“Ｓｈａｎｌｅｙ  ＣＪ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ  ｉｎ  ｒａｔ  ａｏｒｔｉｃ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ．”Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．２０巻（２０００）、９８２〜９８８頁）。実験動物モデルを使用して、体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）でのリシルオキシダーゼ活性の低減が、大動脈瘤の発生リスクと関連していることが実証された（Ｍａｋｉ  ＪＭ、Ｒａｓａｎｅｎ  Ｊ、Ｔｉｋｋａｎｅｎ  Ｈ、Ｓｏｒｍｕｎｅｎ  Ｒ、Ｍａｋｉｋａｌｌｉｏ  Ｋ、Ｋｉｖｉｒｉｋｋｏ  ＫＩ、Ｓｏｉｎｉｎｅｎ  Ｒ．：“Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｇｅｎｅ  Ｌｏｘ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ａｏｒｔｉｃ  ａｎｅｕｒｙｓｍｓ，  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｐｒｅｎａｔａｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．”Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．  ２００２年  １１月５日；１０６巻（１９号）：２５０３〜９頁）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】米国特許第７，２８５，５２６号
【特許文献２】米国特許第７，３２３，１７１号
【特許文献３】国際公開第９９／４３２９８号
【特許文献４】米国特許第６，５８２，６８８号
【特許文献５】国際公開第９９／４３２９８号
【特許文献６】米国特許第６，５８２，６８８号
【特許文献７】米国特許第６，５８２，６８８号
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｈａｓｓａｎ−Ｚａｈｒａｅｅ，Ｍ、Ｗｕ，Ｊ、Ｇｏｒｄｏｎ，Ｊ：“Ｒａｐｉｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ＩＦＮ−ｇａｍｍａ  ｂｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｓｋｉｎ  ｍａｙ  ｐｌａｙ  ａ  ｐｉｖｏｔａｌ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ”、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２年、１０巻：１５９９〜１６１２頁
【非特許文献２】Ｍｏｒｉｗａｋｉ  Ｓ、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｙ：“Ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ＤＮＡ  ｒｅｐａｉｒ”、Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｃｉ．２００８年、６月；５０巻（３号）：１６９〜７６頁
【非特許文献３】Ｂｙｋｏｖ  ＶＪ、Ｓｈｅｅｈａｎ  ＪＭ、Ｈｅｍｍｉｎｋｉ  Ｋ、Ｙｏｕｎｇ  ＡＲ．：“Ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｒｅｐａｉｒ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｂｕｔａｎｅ  ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ｄｉｍｅｒｓ  ａｎｄ  ６−４  ｐｈｏｔｏｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ  ｅｘｐｏｓｅｄ  ｔｏ  ｓｏｌａｒ  ｓｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ”、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９９年  ３月；１１２巻（３号）：３２６〜３１頁
【非特許文献４】Ｓｈｅｎ  Ｊ、Ｂａｏ  Ｓ、Ｒｅｅｖｅ  ＶＥ：“Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１０，  ＩＬ−１２，ａｎｄ  ＩＦＮ−ｇａｍｍａ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ  ｏｆ  ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｉｃｅ  ｂｙ  ＵＶＡ（３２０−４００ｎｍ）  ａｎｄ  ＵＶＢ（２８０−３２０ｎｍ）  ｒａｄｉａｔｉｏｎ．”Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １１３巻：１０５９〜１０６４、１９９９年
【非特許文献５】Ａｏｋｉ  ＨおよびＭｏｒｏ  Ｏ．“Ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＩＦＮ−ｇａｍｍａ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｓｐｏｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｄｏｒｓａｌ  ｓｋｉｎ  ｏｆ  Ｆ１  ｍｉｃｅ  ｏｆ  ＨＲ−１  ｘ  ＨＲ／Ｄｅ”Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００５年  ５月；１２４巻（５号）：１０５３〜６１頁
【非特許文献６】Ｐａｌｌａｄｉｎｏ  ＭＡ、Ｂａｈｊａｔ  ＦＲ、Ｔｈｅｏｄｏｒａｋｉｓ  ＥＡ、Ｍｏｌｄａｗｅｒ  ＬＬ：“Ａｎｔｉ−ＴＮＦ−ａｌｐｈａ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ：ｔｈｅ  ｎｅｘｔ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ”、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２００３年  ９月；２巻（９号）：７３６−４６頁
【非特許文献７】Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ．２００６年  ８月；ｌｌ巻（１５〜１６頁）：７２５〜３２頁
【非特許文献８】Ｏｂｅｒｌｉｅｓ  ＮＨ、Ｒｏｇｅｒｓ  ＬＬ、Ｍａｒｔｉｎ  ＪＭ、およびＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ＪＬ：“Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｎｄ  ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｎｒｉｐｅ  ｆｒｕｉｔ  ｏｆ  Ｐｅｒｓｅａ  Ａｍｅｒｉｃａｎａ．”Ｊ  Ｎａｔ  Ｐｒｏｄ  １９９８年；６１巻：７８１〜５頁
【非特許文献９】Ｋａｗａｇｉｓｈｉ  Ｈ、Ｆｕｋｕｍｏｔｏ  Ｙ、Ｈａｔａｋｅｙａｍａ  Ｍ、Ｈｅ  Ｐ、Ａｒｉｍｏｔｏ  Ｈ、Ｍａｔｓｕｚａｗａ  Ｔら、“Ｌｉｖｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｖｏｃａｄｏ．”Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ２００１年；４９巻：２２１５〜２１頁
【非特許文献１０】Ａｂｅ  Ｆ、Ｎａｇａｆｕｊｉ  Ｓ、Ｏｋａｗａ  Ｍ、Ｋｉｎｊｏ  Ｊ、Ａｋａｈａｎｅ  Ｈ、Ｏｇｕｒａ  Ｔら：“Ｔｒｙｐａｎｏｃｉｄａｌ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｉｎ  ｐｌａｎｔｓ  ５．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｍｅ  Ｍｅｘｉｃａｎ  ｐｌａｎｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｉｒ  ｔｒｙｐａｎｏｃｉｄａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖｅ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｅｅｄｓ  ｏｆ  Ｐｅｒｓｅａ  Ａｍｅｒｉｃａｎａ”．Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ  ２００５年；２８巻：１３１４〜７頁
【非特許文献１１】Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ  Ｆ、Ｈｅｌｍｓ  ＧＬ、Ｐｒｕｓｋｙ  Ｄ、Ｂｒｏｗｓｅ  Ｊ：“Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｆｒｏｍ  ｉｄｉｏｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｖｏｃａｄｏ  ｆｒｕｉｔｓ”．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０００年；５４巻：１８３〜９頁
【非特許文献１２】Ｎｅｅｍａｎ  Ｌ、Ｌｉｓｈｉｔｚ，Ａ、およびＫａｓｈｍａｎ，Ｙ．１９７０年：“Ｎｅｗ  ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｇｅｎｔ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｖｏｃａｄｏ  ｐｅａｒ．”Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１９巻：４７０〜４７３頁
【非特許文献１３】Ｈａｓｈｉｍｕｒａ  Ｈ、Ｕｅｄａ  Ｃ、Ｋａｗａｂａｔａ  Ｊ、Ｋａｓａｉ  Ｔ．：“Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｆｒｏｍ  ａｖｏｃａｄｏ（Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  Ｍｉｌｌ．）  ｆｒｕｉｔｓ”．Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００１年；６５巻：１６５６〜８頁
【非特許文献１４】Ｍ．Ｊ．Ｗｅｒｍａｎ、Ｓ．Ｍｏｋａｄｙ、およびＩ．Ｎｅｅｍａｎ：“Ｐａｒｔｉａｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｎｅｗ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  Ｌｙｓｙｌ  Ｏｘｉｄａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ａｖｏｃａｄｏ  Ｓｅｅｄ  Ｏｉｌ”、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．１９９０年、３８巻、２１６４〜２１６８頁
【非特許文献１５】Ｒｏｓｅｎｂｌａｔ  Ｇ、Ｋａｇａｎ  Ｈ、Ｓｈａｈ  Ｍ、Ｓｐｉｔｅｌｌｅｒ  Ｇ、Ｎｅｅｍａｎ  Ｉ：“Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｙｓｙｌ  Ｏｘｉｄａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｒｏｍ  Ａｖｏｃａｄｏ  Ｓｅｅｄ  Ｏｉｌ”、ＪＡＯＣＳ  ７２巻、２２５〜２２９頁（１９９５年）
【非特許文献１６】Ｓｏｎｇ  ＹＬ、Ｆｏｒｄ  ＪＷ、Ｇｏｒｄｏｎ  Ｄ：“Ｓｈａｎｌｅｙ  ＣＪ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ  ｉｎ  ｒａｔ  ａｏｒｔｉｃ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ．”Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｅ  Ｂｉｏｌ．２０巻（２０００）、９８２〜９８８頁
【非特許文献１７】Ｍａｋｉ  ＪＭ、Ｒａｓａｎｅｎ  Ｊ、Ｔｉｋｋａｎｅｎ  Ｈ、Ｓｏｒｍｕｎｅｎ  Ｒ、Ｍａｋｉｋａｌｌｉｏ  Ｋ、Ｋｉｖｉｒｉｋｋｏ  ＫＩ、Ｓｏｉｎｉｎｅｎ  Ｒ．：“Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｇｅｎｅ  Ｌｏｘ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ａｏｒｔｉｃ  ａｎｅｕｒｙｓｍｓ，  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｐｒｅｎａｔａｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．”Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．  ２００２年  １１月５日；１０６巻（１９号）：２５０３〜９頁
【非特許文献１８】Ｈａｓｓｏｎ，Ｅ．、Ｓｌｏｖａｔｉｚｋｙ，Ｙ．、Ｓｈｉｍｏｎｉ，Ｙ．、Ｆａｌｋ，Ｈ．、Ｐａｎｅｔ，Ａ．、およびＭｉｔｒａｎｉ，Ｅ．“Ｓｏｌｉｄ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ｃａｎ  ｂｅ  ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｕｓｅｄ  ａｓ  ｖｅｈｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ”．Ｊ  Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ．７巻：９２６〜９３５頁、２００５年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
したがって、環境汚染および紫外線への曝露の結果として対象体の皮膚に引き起こされる損傷を予防および／または回復させるための方法および化粧品組成物に対する必要性が存在し、そのような方法および化粧品組成物を有することは有用であろう。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
したがって、本発明は、環境汚染および紫外線により対象体の皮膚に引き起こされる損傷を予防および／または回復させるための化粧用の方法および組成物を提供し、これらの方法および組成物は、例えば、皮膚細胞に対する損傷を低減することにより、および／またはヒト皮膚の美的概観を向上させることにより、環境汚染および紫外線の皮膚に対する有害効果を予防または回復させるのに有効な量で、局所塗布用の単離されたポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体を含む。  
【００２３】
「化粧品」とは、これらに限定されないが、柔軟性、柔らかさ、および弾力性の増強；しわの低減；および／もしくは老化プロセスの明らかな低減；またはそれらの組合せを含む、皮膚の視覚的外観を向上させる任意の組成物または方法を意味する。「皮膚の美的外観」という用語は、皮膚の視覚的な外観を指す。
【００２４】
皮膚老化の寛解、予防、治療、または回復のいずれかとは、これらに限定されないが、角質肥厚化、きめの粗さ、しわ、たるみ、弾力性の喪失、色素斑（これらに限定されないが、そばかす、黒皮症、および日光黒子を含む）、損傷を受けやすい皮膚、皮膚のたるみ、微細線、皮膚の菲薄化、皮膚光沢の欠如、皮膚の疲労、および皮膚の乾燥、もしくは斑状色素沈着、またはそれらの組合せを含む、皮膚に対する老化の１つまたは複数の目に見える影響の寛解、予防、治療、または回復のいずれかを意味する。  
【００２５】
ＵＶ誘導性損傷の場合、そのような損傷は、これらに限定されないが、角質肥厚化、きめの粗さ、しわ、たるみ、弾力性の喪失、もしくは斑状色素沈着、またはそれらの組合せを含む、皮膚に対する紫外線の任意の目に見える影響に関する。したがって、ＵＶ誘導性損傷の寛解、予防、治療、または回復は、ＵＶ誘導性損傷の上記効果またはそれらの組合せのいずれかを寛解、予防、治療、または回復させることに関する。
【００２６】
別様に定義されない限り、本明細書で使用されている技術用語および科学用語は全て、本発明が属する分野の当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有する。本明細書に記述されているものに類似したまたは等価である方法および物質を、本発明の実施または試験に使用することができるが、好適な方法および物質が下記に記述されており、矛盾が生じた場合は、定義を含む本特許明細書が優先することになる。加えて、物質、方法、および例は、単なる例示に過ぎず、限定を意図していない。  
【００２７】
本明細書で使用される場合、「約」は、表示されている値のプラスまたはマイナスおよそ１０パーセントを意味する。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
本明細書では、単なる例として添付の図面を参照して本発明を記述する。これから図面を詳細に具体的に参照するが、示されている詳細は、本発明の好ましい実施形態の例としておよび例示的な考察のためのものであり、本発明の原理および概念的態様のうち最も有用であると考えられるものならびに説明が容易に理解されると考えられるものを提供するために提示されていることを強調しておく。この点で、本発明の構造的詳細を示そうとする試みは、本発明の基本的理解に必要以上に詳細にはなされていない。当業者であれば、本発明の幾つかの形態を実際にどのように実施できるかについては、図面に記載されている記述を参照すれば明白である。本図面には以下の図が含まれている：
【図１Ａ】アボカド種子（Ａ）および果肉（Ｂ）に由来するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの天然誘導体のガスクロマトグラフィー溶出プロファイルを示す図である。
【図１Ｂ】アボカド種子（Ａ）および果肉（Ｂ）に由来するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの天然誘導体のガスクロマトグラフィー溶出プロファイルを示す図である。
【図２】ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの主要な天然誘導体の構造を示す図である。
【図３】アボカドに由来する天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの主要な脱アセチル化誘導体の化学構造を例示する図である。
【図４】アボカドに由来する代表的なフラン脂質の化学構造を例示する図である。
【図５】初代ヒトＴ細胞およびジャーカット細胞の増殖に対する、天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの阻害効果を実証する棒グラフである。
【図６】初代ヒトＴ細胞の生存率に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの天然誘導体および脱アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果を実証する棒グラフである。
【図７】ヒト活性化ＣＤ３＋Ｔリンパ球によるＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γ分泌に対する、アボカド由来のポリヒドロキシル化脂肪アルコールの天然誘導体の阻害効果を実証する棒グラフである。
【図８Ａ】ＵＶＢ照射に曝露された後のＨａＣａＴ細胞（Ａ）および初代ヒトケラチノサイト（Ｂ）の生存率に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの保護効果を実証する棒グラフである。
【図８Ｂ】ＵＶＢ照射に曝露された後のＨａＣａＴ細胞（Ａ）および初代ヒトケラチノサイト（Ｂ）の生存率に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの保護効果を実証する棒グラフである。
【図９】１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）（ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート、ＰＭＡとしても知られている）誘導性のミトコンドリア電位喪失に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果を実証する棒グラフである。
【図１０】初代ヒトケラチノサイトによるＴＰＡ誘導性ＩＬ−６分泌に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果を実証する棒グラフである。
【図１１】初代ヒトケラチノサイトによるＵＶ誘導性ＩＬ−６分泌に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果を示す棒グラフである。
【図１２】初代ヒトケラチノサイトによるＵＶＢ誘導性ＰＧＥ２分泌に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果を示す棒グラフである。
【図１３】ＵＶ照射された初代ヒトケラチノサイトによるプロスタグランジン（ＰＧＥ２）分泌に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコール、ならびにウルソール酸およびアセチルサリチル酸とのポリヒドロキシル化脂肪アルコール混合物の阻害効果を実証する表である。
【図１４Ａ】ＰＦＡ（「ポリオール」として示されている）有りまたは無しでＵＶＢ照射された皮膚外植片における日焼け細胞の写真を示す図である。
【図１４Ｂ】ＵＶＢ照射された皮膚外植片における日焼け細胞の形成に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの保護効果を示す棒グラフである。
【図１５】初代ヒトケラチノサイトにおけるＵＶＢ誘導性シクロピリミジンダイマー（ＣＰＤ）の除去を促進するＰＦＡの効果を示す棒グラフである。
【図１６】ケラチノサイト（ＨａＣａＴ細胞）（Ａ）および線維芽細胞（Ｂ）の生存率に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
ポリヒドロキシル化脂肪アルコール（ＰＦＡ）は、ヒト皮膚細胞に対して著しい生物学的効果を示し、皮膚の特性に影響を及ぼすことができ、皮膚の美的外観を向上させ、皮膚老化の影響を予防または寛解するための有用性を裏付けている。本発明の種々の実施形態は、これら化合物を含むかまたは使用する。「ポリヒドロキシル化脂肪アルコール」とは、任意のタイプの果実または植物に含まれる物質、好ましくはアボカド種子またはアボカド果実の果肉に見出されてもよく、またはそれらに由来してもよい任意のポリヒドロキシル化脂肪アルコールを意味する。「由来する」とは、任意のタイプの果実または植物、好ましくは本明細書で記述されているようなアボカド種子またはアボカド果実の果肉に見出すことができる任意のポリヒドロキシル化脂肪アルコールの任意のタイプの誘導体化を意味する。  
【００３０】
さらに、これらポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、好ましくは、環境上の原因により引き起こされる皮膚細胞損傷を低減または予防することもでき、例えば、それらは、紫外線に曝露されることにより引き起こされる皮膚損傷を低減または修復することができ、様々な化粧品応用に使用することができる。  
【００３１】
加えて、少なくとも幾つかの実施形態では、これらポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、皮膚の視覚的な外観を向上させるための種々の化粧品応用のために、皮膚細胞（ケラチノサイト）に対する直接損傷により、ならびにＵＶまたは他の環境汚染による皮膚損傷後の炎症細胞の活性化および炎症促進性メディエーターの産生により引き起こされる皮膚への有害効果を予防または低減することができる。皮膚の深部組織に対するＵＶ損傷および老化の影響に関する上記の背景技術における説明は、弾力性、関門特性、および透過性などを含む角質層における生物学的効果にも関係する。  
【００３２】
本発明者らは、驚くべきことに、ポリヒドロキシル化脂肪アルコール、例えばアボカドおよびアボカド種子から単離されたものが、ヒト皮膚に対して著しい化粧的効果および皮膚細胞に対する生物学的効果を示すことを発見し、それにより皮膚老化の影響の寛解およびその美的外観の向上にそれらが有用であることを確認した。さらに、これらポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、好ましくは、例えば毒性化合物または紫外線への曝露により引き起こされる皮膚細胞損傷を低減することもできる。  
【００３３】
加えて、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、紫外線への曝露および／または環境損傷後の炎症細胞の増殖および活性に影響を及ぼすことができ、炎症促進性メディエーターの産生を低減することができ、化粧品応用のために皮膚局所的炎症反応を低減するために使用することができる。  
【００３４】
加えて、少なくとも幾つかの実施形態では、これらポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、臨床研究において陰性の皮膚反応を示さず、それにより様々な化粧品応用に使用することが可能になった。  
【００３５】
単一の仮説に制限されることは望まないが、皮膚の視覚的な外観におけるそのような向上は、随意に、より好ましくは皮膚の角質層およびより深部の組織の両方を含む、皮膚細胞に対するＰＦＡの生物学的効果により、および／またはスフィンゴ脂質様化合物としてのポリヒドロキシル化脂肪アルコールの機能により生じてもよく、したがって適合性がより自然に近い溶液を提供する。  
【００３６】
本発明者らは、例えば、ガスクロマトグラフィーおよびＨＰＬＣ法を使用して、アボカド種子およびアボカド果実に存在する活性成分を単離および定量化した。  
【００３７】
本発明の幾つかの実施形態によると、ヒト皮膚の美的外観を向上させるのに有効な量で、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体を含む局所用化粧品組成物が提供される。本発明の好ましい実施形態のさらなる特徴によると、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの誘導体は、アセチル化誘導体を実質的に含む。  
【００３８】
幾つかの実施形態によると、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体は、天然供給源から単離される。  
【００３９】
随意におよび好ましくは、単離された天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、例えばアボカド果実またはアボカド種子などの果実または植物供給源から単離される。  
【００４０】
記述されている好ましい実施形態のなおさらなる特徴によると、天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、実質的に純粋な形態で単離される。  
【００４１】
本明細書で使用される場合、「天然」は、非アセチル化されている少量成分と共にアセチル化形態を含む、抽出物由来の物質を全て含む。加水分解後、脂肪アルコールは脱アセチル化されており、本明細書では天然とは呼ばない。
【００４２】
幾つかの実施形態によると、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体は、合成産物である。  
【００４３】
幾つかの実施形態によると、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体は、合成産物である。  
【００４４】
記述されている好ましい実施形態のなおさらなる特徴によると、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、単離物質の約８０％〜約９５％重量／重量の濃度で存在する。  
【００４５】
記述されている好ましい実施形態のなおさらなる特徴によると、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、全組成物の約０．００１％〜約２０％重量／重量の濃度で存在する。  
【００４６】
記述されている好ましい実施形態のなおさらなる特徴によると、組成物には、フラン脂質が含まれていないかまたは全く含まれていない。「フラン脂質が全く含まれていない」とは、約５％までのフラン脂質が組成物中に存在してもよいことを意味する。「フラン脂質が含まれていない」とは、約２０％まで、好ましくは約１５％まで、より好ましくは約１０％まで、および最も好ましくは約７．５％までのフラン脂質が、組成物中に存在してもよいことを意味する。  
【００４７】
記述されている好ましい実施形態のなおさらなる特徴によると、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体は、ｌ−アセトキシ−２，４−ジヒドロキシ−１６−ヘプタデセン、ｌ−アセトキシ−２、４−ジヒドロキシ−１６−ヘプタデシンからなる群から実質的に選択される。  
【００４８】
本発明は、ヒト皮膚および皮膚細胞におけるＵＶ誘導性老化の外部徴候の低減に使用するための、前述組成物のいずれかの使用をさらに提供する。  
【００４９】
本発明は、皮膚の視覚的な外観を向上させるための、ヒト皮膚および皮膚細胞に対するＵＶ損傷の予防的治療用の前述組成物のいずれかの使用をさらに提供する。  
【００５０】
したがって、少なくとも幾つかの実施形態では、本発明のポリヒドロキシル化脂肪アルコール混合物は、紫外線への曝露前におよび／または曝露後に、予防用化合物として投与することができる。  
【００５１】
本発明は、例えば色素斑（これらに限定されないが、そばかす、黒皮症、および日光黒子を含む）の外観、損傷を受けやすい皮膚、皮膚のたるみ、微細線、しわ、皮膚の菲薄化、皮膚光沢の欠如、皮膚の疲労、および皮膚の乾燥などのヒト皮膚のＵＶ誘導性老化を含む、しかしこれに限定されない、老化の外部徴候の予防に使用するための、上述組成物のいずれかの使用をさらに提供する。  
【００５２】
幾つかの実施形態によると、老化の外部徴候はＵＶ誘導性早期老化による。本発明は、皮膚の発赤または刺激の低減に使用するための、上述組成物のいずれかの使用をさらに提供する。  
【００５３】
幾つかの実施形態によると、本発明の組成物は、例えば、酒さまたは酒さに伴う毛細血管拡張症により引き起こされる、ならびに／またはＵＶ誘導性損傷および／もしくは環境損傷による皮膚の発赤または刺激を低減するために使用される。環境損傷の一例はおむつかぶれであり、そのため本組成物は、随意に、おむつかぶれを予防および／または軽減するために使用される。  
【００５４】
本発明の幾つかの実施形態によると、天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびそれらの誘導体を、果実または植物供給源から単離するための方法であって、果実または植物供給源を破砕して凍結乾燥粉末を取得することと、凍結乾燥粉末を無極性有機溶媒または極性溶媒で抽出して粗脂質抽出物を取得することと、無極性有機溶媒または極性溶媒を使用して粗脂質抽出物を濃縮し、濃縮粗脂質抽出物を取得することと、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびそれらの誘導体を、室温より低い温度で結晶化することにより濃縮粗脂質抽出物から分離して結晶を取得することと、結晶化されたポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびそれらの誘導体をろ過することと、ろ過液にエタノールを添加することと、エタノールに残る不溶性物質をろ過することと、蒸発させることと、無極性溶媒で再結晶させることとを含む方法を提供する。  
【００５５】
紫外線は、広い範囲の生物系に有害である。損傷の程度は、曝露のレベルおよび曝露期間、ならびに曝露した生物の感受性および抵抗性に依存する。紫外線への曝露に由来する重要なヒトの健康への影響には、皮膚癌、白内障、および免疫抑制が含まれる。加えて、他の皮膚科学的な影響には、重篤な光アレルギーおよび皮膚の老化促進が含まれる。紫外線による皮膚への損傷は、皮膚の免疫学的防御を低下させ、感染症ならびに皮膚腫瘍に対する抵抗性を妨げ、ワクチンの有効性を低下させる。本発明の組成物は、好ましくは、皮膚に対する紫外線の悪影響を予防および／または寛解することができる。  
【００５６】
本発明の天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコール混合物は、炎症性メディエーターの発現および活性化Ｔ細胞の増殖を特徴とする炎症反応を著しく阻害することを実証した。紫外線により損傷を受けた細胞に対する活性化合物の活性を体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で試験することにより、本化合物がＵＶ誘導性ＩＬ−６発現およびＰＧＥ２発現を阻害することができることを示した。  
【００５７】
加えて、本発明のポリヒドロキシル化脂肪アルコールに関する体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）生物学的研究により、本活性化合物が、照射された皮膚細胞の生存率を著しく保護し、ＵＶ誘導性ケラチノサイト死滅を阻害し、皮膚外植片における日焼け細胞の形成を阻害し、ヒトケラチノサイトにおいてＵＶＢ誘導性シクロピリミジンダイマー（ＣＰＤ）の除去を著しく促進することができることが実証された。ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの保護機序は、まだ研究中である。  
【００５８】
さらに、アボカド種子由来のポリヒドロキシル化脂肪アルコールのアセチル化誘導体は、驚くべきことに、同じ供給源から単離され、鹸化プロセスで形成される非アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールと比較して、毒性が極めて低いことを実証した。  
【００５９】
体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）毒物学的研究により、高い生物活性を示した濃度（１μｇ／ｍｌまで）のポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、ケラチノサイト、線維芽細胞、またはＴ細胞に対して毒性でないことを示した。これらの結果ならびに追加的な知見により、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、アボカド果実の種子だけでなく食用部分にも見出されることを実証し、本活性化合物のヒト安全性分析を可能にした。  
【００６０】
本発明の化合物が、皮膚と接触する際に、任意の望ましくない反応を引き起こすかどうかを特定するためにポリヒドロキシル化脂肪アルコールの安全性試験を実施した。反復傷害パッチ試験（Ｒｅｐｅａｔ  Ｉｎｓｕｌｔ  Ｐａｔｃｈ  Ｔｅｓｔ）は、ある成分または産物がヒト対象体に接触過敏症をもたらす可能性を予測するための最も信頼できる研究であると考えられている。このプロトコールでは、５０人の志願者に１０回の連続パッチを使用し、有害皮膚反応を示した者はいなかった。  
【００６１】
したがって、化粧品応用のためには、本化合物の考え得る悪影響を回避するために、そのようなフラン化合物が含まれていないか、または実質的に含まれていないアボカド種子由来の活性成分を提供することが非常に有益であることは明らかだろう。同様に、それらの脱アセチル化誘導体の代りに天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールを使用することは、本化合物の細胞毒性増加に関連する前記効果を回避するために、より好ましい。  
【００６２】
ポリヒドロキシル化脂肪アルコールのアルカリ性加水分解は、主に１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−エンおよび１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インの形成に結びつく。加水分解されたポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、本化合物の毒性を著しく増加させる（図６）。したがって、国際公開第９９／４３２９８号パンフレットおよび米国特許第６，５８２，６８８号明細書に記述されているような、不鹸化物から分離された、または他のアボカド不鹸化物と混合されている脱アセチル化化合物の代りに、自然に存在するアセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールを使用することには大きな利点がある。さらに、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの誘導体の構造に少なくとも１つのアセチル基が存在することにより、産物の安定性が増加され、活性分子が酸化から保護される。  
【００６３】
化粧品製剤
本発明の少なくとも幾つかの実施形態によると、局所投与用の化粧品製剤が提供される。  
【００６４】
幾つかの実施形態によると、本組成物は、これらに限定されないが、ローション、乳液、クリーム、およびパックなどの顔用化粧品；プレメイクアップ（ｐｒｅ−ｍａｋｅｕｐ）、ファンデーション、頬紅、口紅、リップクリーム、アイシャドー、アイライナー、マスカラ、および日焼け止めなどのメイクアップ化粧品；ボディ化粧品；芳香化粧品；化粧落とし、洗顔剤、およびボディシャンプーなどの皮膚洗浄剤；エアロゾル、固塊、クリーム、軟膏、乳剤、精油、フォーム、ゲル、ローション、ムース、ペースト、パッチ、筆、美容液、液剤、濡れナプキン、マスク、ボディラップ（ｂｏｄｙ  ｗｒａｐ）、スプレー、またはスティックを含む従来の皮膚外用剤の任意の形態である。  
【００６５】
本化粧品組成物は、例えば、アンモニウムアクリロイルジメチルタウレート／ＶＰ−コポリマーに基づくものなどの油／水乳剤；グリセリルポリメタクリレート／プロピレングリコールに基づくものなどのゲル製剤；またはエトキシ化脂肪アルコールおよびソルビトール脂肪酸エステルに基づくものなどの非イオン性乳剤を含んでいてもよい。  
【００６６】
局所投与用の好ましい組成物は、非イオン水中油型乳剤である。乳剤組成物は、好ましくは、約３０％〜約８０％（重量／重量）の、最も好ましくは約３５％〜約４０％（重量／重量）の油相を含む。水相は、好ましくは、約１９％〜約７０％（重量／重量）、最も好ましくは約５９％〜約６５％（重量／重量）の範囲である。ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの濃度は、好ましくは約０．０１％〜約５％（重量／重量）であり、最も好ましくは約０．１％〜約１％である。  
【００６７】
油相は、好ましくは、天然植物油、多価不飽和脂肪酸、ビタミンＡ、Ｅ、およびＦ、アスコルビン酸パルミテート、酸化防止剤、ならびに他の好適な成分の少なくとも１つ、またはそれらの混合物を含む。天然植物油は、好ましくは、ホホバ油、麦芽油、アボカド油、大豆油、胡麻油、米油、または他の好適な自然な植物油に限定される。クリーム組成物の水相は、好ましくは、水、天然植物抽出物、湿潤剤、非イオン性乳化剤、および他の好適な成分の混合物を含む。  
【００６８】
クリーム製剤は、好ましくは、顔面皮膚および身体皮膚が、毒素、病原体、紫外線、悪影響をもたらす環境要因、および環境汚染という敵対的環境にさらされる前に、顔面皮膚、頚部、頭皮、目のまわり、および身体皮膚に局所的に塗布することにより、随意に投与することができる。  
【００６９】
親油性天然油組成物は、好ましくは、ポリヒドロキシル化脂肪アルコール、天然植物油、ポリヒドロキシル化脂肪酸、ビタミンＡ、Ｅ、およびＦ、酸化防止剤、浸透促進剤、ならびに他の好適な成分の少なくとも１つを含む。ポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、好ましくは、約０．０１％〜約５％（重量／重量）の、より好ましくは約０．１％〜約１％（重量／重量）の範囲の濃度で存在する。天然植物油の濃度は、好ましくは約２０％〜約８０％（重量／重量）であり、最も好ましくは約６５％〜約７５％（重量／重量）である。  
【００７０】
天然植物油は、麦芽油、胡麻油、大豆油、アボカド油、オリーブ油、および米油の１つまたは複数を含むことが好ましい。脂肪酸は、好ましくは、リノール酸、リノレン酸、オメガ３、ガンマリノレン酸、およびアラキドン酸−オメガ６の１つもしくは複数、またはそれらの混合物である。浸透促進剤は、好ましくは、約０．５％〜約２．０％（重量／重量）の濃度、最も好ましくは２％（重量／重量）の濃度で存在する。  
【００７１】
好ましい浸透促進剤には、これらに限定されないが、プロピレングリコールジペラルゴネートおよびエトキシジアグリコール（ｅｔｈｏｘｙｄｉａｇｌｙｃｏｌ）が含まれる。プロピレングリコールジペラルゴネートは、好ましくは、約１．６０％（重量／重量）の濃度で存在し、エトキシジアグリコールは、好ましくは、約０．４％（重量／重量）の濃度で存在する。追加的な好適な成分は、随意に、約１９％〜約８０％（重量／重量）の範囲で存在する。  
【００７２】
親油性天然油製剤は、顔面皮膚、頚部、唇、頭皮、目のまわり、および身体皮膚に、好ましくは１日２回、局所的に塗布することにより随意に投与することができる。塗布は、顔面皮膚および身体皮膚が、毒素、病原体、紫外線、悪影響をもたらす環境要因、および環境汚染という敵対的環境にさらされる前が特に好ましい。  
【００７３】
随意に、本組成物は、化粧品用に許容される担体をさらに含む。好適な担体の例には、水；ホホバ油、アボカド油、またはトウモロコシ油などの植物油；鉱油；オクチルパルミテート、したがってイソプロピルミリステートおよびイソプロピルパルミテートなどのエステル；ジカプリリルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、およびジメチルイソソルビドなどのエーテル；エタノールおよびイソプロパノールなどのアルコール；セチルアルコール、セテアリルアルコール、ステアリルアルコール、およびビフェニルアルコールなどの脂肪アルコール；イソオクタン、イソドデカン、およびイソヘキサデカンなどのイソパラフィン；シクロメチコン、ジメチコン、ジメチコンクロスポリマー、ポリシロキサン、およびそれらの誘導体、好ましくは有機修飾誘導体などのシリコン油；鉱油、ワセリン、イソエイコサン、およびポリイソブテンなどの炭化水素油；プロピレングリコール、グリセリン、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、およびヘキシレングリコールなどのポリオール；蜜ろうおよび植物ろうなどのろう；またはそれらの任意の組合せもしくは混合物が含まれる。  
【００７４】
担体は、随意に、例えば緑茶抽出物、生姜抽出物、およびブドウ種子抽出物、またはそれらの混合物などの酸化防止剤をさらに含む。  
【００７５】
本組成物は、随意に、水溶性着色剤（ＦＤ＆Ｃ青色＃１など）；油溶性着色剤（Ｄ＆Ｃ緑色＃６など）；キレート剤（ＥＤＴＡ二ナトリウムなど）；乳剤安定化剤（カルボマーなど）；保存剤（メチルパラベンなど）；芳香剤（ピネンなど）；香味料（ソルビトールなど）；湿潤剤（ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、１、３−ブチレングリコール、ヘキシレングリコール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ムコイチン硫酸、カロン酸（ｃａｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、アテロコラーゲン、コレステリル１２−ヒドロキシステアレート、乳酸ナトリウム、胆汁酸塩、ｄｌ−ピロリドンカルボン酸（ｄｌ−ｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）塩、短鎖可溶性コラーゲン、ジグリセロール（エチレンオキシド）プロピレンオキシド付加物、チェストナットローズ（ｃｈｅｓｔｎｕｔ  ｒｏｓｅ）の抽出物、マリホイル（ｍａｌｉｆｏｉｌ）（セイヨウノコギリソウ（Ａｃｈｉｌｌｅａ  ｍｉｌｌｅｆｏｌｉｕｍ）の抽出物、およびメリロートの抽出物）；白色剤（胎盤の抽出物、グルタチオン、ユキノシタ（ｃｒｅｅｐｉｎｇ  ｓａｘｉｆｒａｇｅ）（ユキノシタ（Ｓａｘｉｆｒａｇｅ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）の抽出物、防水剤（ＰＶＰ／エイコサエンコポリマーなど）；水溶性薄膜形成剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）；油溶性薄膜形成剤（水素化Ｃ−９樹脂など）；陽イオン性ポリマー（ポリクオテミウム（Ｐｏｌｙｑｕａｔｅｍｉｕｍ）１０など）；陰イオンポリマー（キサンタンガムなど）；ジメチコン、ポリシリコン、およびシクロメチコンなどの皮膚軟化剤；潤滑剤；保湿剤；皮膚浸透促進剤；界面活性剤；増粘剤；および粘性調整剤などを含むがそれらに限定されない１つまたは複数の化粧品用に許容される賦形剤をさらに含む。  
【００７６】
単離された天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体の有効量、および本組成物の適用期間は、低減または予防されようとしている特定の老化徴候、個人の年齢および健康状態、老化徴候の程度、使用される特定の担体、ならびに当業者の知識および専門における要因などに応じて変化する。適用期間は、例えば、少なくとも１週間または２週間または２週間以上の間、１日に１回または２回であってもよい。  
【００７７】
記述されている好ましい実施形態のなおさらなる特徴によると、本発明の組成物は、例えば、緑茶に基づくポリフェノールの１つまたは複数、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピカテキン３−ガレート（ＥＣＧ、ｅｐｉｃａｔｈｅｃｈｉｎ  ３−ｇａｌｌａｔｅ）、エピカテキンガレート（ＥＧ）、オオアザミ（ｓｉｌｙｍａｒｉｎｅ）、ブドウ抽出物、リスベラトロールイチョウ抽出物（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  Ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ  ｅｘｔｒａｃｔ）、ポリフェノール、ロスマリン酸、ウルソール酸、コエンザイムＱ１０（ｃｏＱ１０）、グルタチオン、ビタミンＣ、ビタミンＡ、リコピン、カロチノイド、フラボノイド／ポリフェノールビタミンＥ、アロベラ（Ａｌｏｖｅｒａ）抽出物、およびザクロ種子油などの、油溶性ビタミン、ポリフェノールの酸化防止剤および酸化防止剤抽出物、天然植物抽出物、および天然種子油からなる群から選択される追加的な化合物をさらに含む。  
【００７８】
追加的化合物は、例えば、麻酔剤；抗アレルギー剤；抗菌剤；抗真菌剤；アセチルサリチル酸またはウルソール酸などの天然または合成ＣＯＸ（シクロオキシゲナーゼ）阻害剤；防腐剤；キレート剤；着色剤；脱色剤；ジメチコン、ポリシリコン、およびシクロメチコンなどの皮膚軟化剤；レチナール、レチナール、およびレチノイン酸などの剥脱剤（ｅｘｆｏｌｌｉｅｎｔ）；芳香剤；乳化剤；湿潤剤；虫よけ剤；潤滑剤；保湿剤；保存剤；皮膚浸透促進剤；安定化剤；日焼け止め；界面活性剤；増粘剤；粘性調整剤；防腐剤；酸化防止剤およびビタミンの１つまたは複数を含んでいてもよい。しかしながら、それに皮膚の視覚的な外観に対する化粧的効果（複数可）があれば、あらゆるそのような１つまたは複数の追加的な化合物が含まれることに留意すべきである。  
【００７９】
幾つかの実施形態によると、本発明の組成物は、随意に、油溶性ビタミン群、緑茶に基づくポリフェノール、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピカテキン３−ガレート（ＥＣＧ）、およびエピカテキンガレート（ＥＧ）などのポリフェノールを含有する酸化防止剤または酸化防止剤抽出物、オオアザミ、ブドウ抽出物、リスベラトロール、イチョウ抽出物、アロエベラ抽出物などの天然植物抽出物、およびザクロ種子油などの天然種子油を含むがそれらに限定されない群から選択される合成または天然化合物をさらに含む。  
【００８０】
好適なビタミンの例には、ビタミンＡ、Ｂ群のビタミン、ビタミンＣ、ビタミンＥ、およびそれらの誘導体が含まれる。有用な誘導体には、レチナール、レチナール、レチノイン酸、およびレチノイドまたはレチノイドのような活性を有する他の関連化合物、リン酸アスコルビルマグネシウム、リン酸アスコルビルナトリウム、リン酸アスコルビルトコフェリル、およびマレイン酸アスコルビルトコフェリルが含まれる。  
【００８１】
酸化プロセスを遅延または防止可能な酸化防止剤の例には、緑茶に基づくポリフェノール、コエンザイムＱ１０（ＣｏＱ１０）、グルタチオン、ビタミンＣ、ビタミンＡ、リコピン、カロチノイド、フラボノイド／ポリフェノール、およびビタミンＥなどの化合物、ならびにカタラーゼおよびペルオキシダーゼなどの酵素が含まれる。  
【００８２】
他の特に有用な追加的な成分は、日焼け止めである。好ましい日焼け止めは、オクトクリレン、アボベンゾン（パーソル  １  ７８  ９）、オクチルメトキシシンナメート、ホモシレート（ｈｏｍｏｓｙｌａｔｅ）、ベンゾフェノン、カンファー誘導体、酸化亜鉛、および二酸化チタンなどの広範囲なＵＶＢおよびＵＶＡ保護を示すものである。
【００８３】
他の特に有用な追加的な成分は、アルファヒドロキシ酸、ベータヒドロキシ酸、オキサ酸、オキサ二酸、ならびにそれらのエステル、無水物、および塩などの誘導体などの剥離剤（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）である。  
【００８４】
ポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよび誘導体
したがって、本発明は、ヒト皮膚の美的外観を向上させるのに有効な量の、単離された天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体またはそれらの合成型を含む局所用化粧品組成物を提供する。  
【００８５】
好ましい実施形態によると、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれら誘導体は、好ましくは、随意に少なくとも１つの不飽和炭素結合を有するＣ１３〜Ｃ２５炭素の骨格を含む。好ましくは、少なくとも１つの不飽和炭素結合が存在する場合、不飽和炭素結合は、骨格の最後の２つの炭素間に、二重結合または三重結合のいずれかとして存在する。随意におよびより好ましくは、ヒドロキシル基が、Ｃｌ、Ｃ２、またはＣ４に存在する。  
【００８６】
他の好ましい実施形態によると、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの誘導体は、好ましくは、アシル化（エステル化）されているか、または酸化されているか、または例えば不飽和炭素結合を水素添加するために、不飽和炭素結合を１つまたは複数の他の分子と反応させたポリヒドロキシル化脂肪アルコールを含む。  
【００８７】
「ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの天然誘導体」という用語は、本明細書で使用される場合、果実または植物抽出物に存在し、加水分解を受けていない全てのタイプのポリヒドロキシル化脂肪アルコールの誘導体を指す。上記で言及されているように、主成分はアセチル化されているが、少量成分は脱アセチル化されている。  
【００８８】
「アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコール」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒドロキシル基のひとつの水素原子の代りに少なくとも１つのアセチル基を含有する全てのタイプのポリヒドロキシル化脂肪アルコールの誘導体を指す。アセチル基は、随意に、Ｃｌ、Ｃ２、またはＣ４にあってもよいが、好ましくはＣ１またはＣ４にある。  
【００８９】
幾つかの実施形態によると、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、例えば純度９５％、純度９０％、純度８５％、または純度８０％などの、実質的に純粋な形態で単離されている天然ポリヒドロキシル化アルコールである。  
【００９０】
本発明の幾つかの実施形態によると、単離された天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの誘導体または合成等価物には、これらに限定されないが、１−アセトキシ−２，４−ジヒドロキシ−１６−ヘプタデセン、もしくは１，２−ジヒドロキシ−４−アセトキシ−１６ヘプタデセン、１−アセトキシ−２，４−ジヒドロキシ−１６ヘプタデシン、もしくは１，２−ジヒドロキシ−４−アセトキシ−１６−ヘプタデシン、またはそれらの組合せが含まれる。  
【００９１】
アボカド種子および果実から分離された天然アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの溶出プロファイルは、図１Ａおよび１Ｂに示されている。アボカドの種子および果肉から分離された天然アセチル化脂肪酸の主要な誘導体の構造は、図２に示されている。  
【００９２】
化合物の特定は、ＧＣ／ＭＳおよびＬＣ／ＭＳ分析を使用することにより実施した。化合物の化学構造の解明は、質量スペクトルの特徴ピーク（ｍ／ｅ）および化合物のナトリウム付加体［Ｍ＋Ｎａ］＋の分子ピークと、対応するポリヒドロキシル化脂肪ポリヒドロキシル化脂肪アルコールについて以前に記述されているピークとの類似性に基づいていた。  
【００９３】
図３は、アルカリ性溶液中でアセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールを鹸化することにより得られた脱アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの代表的な構造を示す。  
【００９４】
図４は、アボカド種子に由来する代表的なフラン脂質の構造を示しており、それにより本発明のポリヒドロキシル化脂肪アルコールの好ましい実施形態の構造との違いが示される。  
【００９５】
幾つかの実施形態によると、アボカド種子の粗抽出物からポリヒドロキシル化脂肪アルコールの天然誘導体の画分を特異的に単離するための方法が提供される。そのプロセスは、随意に、そして好ましくはアボカド種子をアボカド果実から単離する段階、アボカド種子を破砕する段階、およびアボカド種子を凍結乾燥する段階を含む。  
【００９６】
凍結乾燥された粉末を、無極性（有機）溶媒（例えば、ヘキサン、石油エーテル）または極性溶媒（エタノール、メタノール）を使用して抽出し、粗脂質抽出物を得る。  
【００９７】
粗脂質抽出物を、無極性溶媒（ヘキサン、石油エーテル）または極性溶媒（エタノール、メタノール）を使用することにより濃縮する。  
【００９８】
所望の成分を、好ましくは、低温結晶化法により、つまり室温より低い温度で結晶化させ、その後ろ過することにより濃縮粗抽出物から分離する。  
【００９９】
ろ過した化合物をエタノールに溶解し、不溶性の高度に無極性な化合物をろ過により分離する。  
【０１００】
エタノールを蒸発させ、得られた化合物を、例えばヘキサンまたは石油エーテルなどの無極性溶媒で再結晶させる。  
【０１０１】
驚くべきことに、無極性溶媒中で冷却アボカド抽出液から再結晶される化合物は、アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールを多く含み、フラン含有脂質を含んでいないかまたはそれら化合物をごく微量にしか含んでいないことを見出した。  
【０１０２】
ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの天然誘導体を単離するためのこの方法は、フラン含有脂質を有する混合物中２５％までのポリヒドロキシル化脂肪アルコールの濃度をその結果としてもたらす、米国特許第６，５８２，６８８号明細書に記述されているような分子蒸留を使用する背景技術の方法と比較して、これら活性化合物の濃度を著しく、少なくとも約４倍増加させる。  
【０１０３】
この方法により分離されるポリヒドロキシル化脂肪アルコールの天然誘導体は、乾燥粉末の重量で９５％までを占めることができる。  
【０１０４】
本発明の組成物は、随意に、約０．０１％〜約９０重量％の天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールまたはそれらの合成等価物を含むことができる。  
【０１０５】
本発明は、環境損傷、ＵＶＢ光損傷、およびＴＰＡ誘導性のミトコンドリア電位喪失に対する保護をもたらし、Ｔリンパ球増殖、ＴＮＦアルファ発現、およびＩＦＮ−γ発現の阻害剤である天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびそれらの誘導体を、アボカド果実および／またはアボカド種子を含む果実または植物供給源から単離するための方法をさらに提供する。  
【０１０６】
図５および７に示されているように、Ｔリンパ球増殖、ＴＮＦアルファ発現、およびＩＦＮガンマ発現を阻害するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの能力を、体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で実証した。  
【０１０７】
無機アルカリ性溶液中でアボカド油を鹸化することによりトリグリセリドを単離するプロセス中に、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールのアセチル誘導体は、非アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールへと加水分解され、不鹸化画分中にその状態で残ることが見出された。脱アセチル化脂肪アルコールの存在下でＴ細胞生存率を調査することにより、本発明者らは、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの脱アセチル化が、単離された化合物の毒性を著しく増加させることを実証した（図６）。  
【０１０８】
幾つかの実施形態では、本発明は、随意に、例えば加水分解により調製された脱アセチル化脂肪アルコールも含むため天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールに関する、本明細書に記述されている用途は、そのような脱アセチル化アルコールのものともみなすこともできる。  
【０１０９】
本発明のポリヒドロキシル化脂肪アルコールの組成物は、汚染物質に曝露されることより引き起こされる損傷から皮膚および皮膚細胞を保護するために、および皮膚老化を予防するために使用することができる。汚染物質の例には、これらに限定されないが、大気的要因、化学汚染物質、および生物学的汚染物質が含まれる。皮膚に影響を及ぼす大気的要因の例には、これらに限定されないが、太陽からの紫外線などの放射線、オゾン、酸性雨、および極端な温度が含まれる。化学的および生物学的汚染物質には、自動車、産業、フリーラジカル、洗剤、化粧品に由来する汚染物質が含まれる。  
【０１１０】
対象体が汚染物質に曝露されることにより、皮膚老化、皮膚刺激、および膚湿度の低下などの異常な皮膚状態の発生が、その結果としてもたらされる場合がある。本発明のポリヒドロキシル化脂肪アルコール混合物は、先述の汚染物質のいずれかに曝露される前または後に、予防用化合物として投与することができる。  
【０１１１】
用量は、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールに対する対象体の応答性に依存する。ポリヒドロキシル化脂肪アルコール組成物は、約０．０１μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌの量で有効である。ポリヒドロキシル化脂肪アルコールを含有する製剤は、好ましくは、約０．０１％〜約５％、より好ましくは０．１％〜約１％のポリヒドロキシル化脂肪アルコールを含む。しかしながら、より高いかまたはより低い用量も可能である。用量の投薬頻度は、対象体の応答性に依存するだろう。当業者であれば、最適用量、投薬方法、および反復率を容易に決定することができる。  実施例
【０１１２】
これから以下の例を参照する。これらは、上記の説明と共に非限定的な様式で本発明を例示するものである。  
【０１１３】
Ｉ：ポリヒドロキシル化アルコールの単離
実施例１
アボカド種子由来の天然ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの単離、およびそれらのアルカリ加水分解
アボカド種子をアボカドの果肉から分離し、その後凍結および凍結乾燥した。１０ｋｇの凍結乾燥された粉末の種子を、ヘキサンを使用してソックスレー装置で１４時間抽出した。  
【０１１４】
有機溶媒を、約３０ミリバールの圧力、４０〜６０℃の温度間隔でローター蒸発器中で蒸発させた。抽出された化合物を、２容積のヘキサンまたは石油エーテル（無極性溶媒の非限定的な例として）に再溶解し、その後低温結晶化のプロセスのために、温度が２〜８℃の範囲にある低温室に約１２時間入れておいた。  
【０１１５】
結晶化した化合物を、Ｗｏｒｔｈｍａｎ社製ろ紙でろ過することにより溶媒から分離した。  
【０１１６】
このプロセスにより、３０ｇの晶質化合物を得た。ＧＣ／ＭＳおよびＨＰＬＣ／ＭＳ−ＥＣＩ分析による溶出プロファイルおよび化学構造は、図１Ａおよび２に示されている。フラン脂質は検出されなかった。  
【０１１７】
室温で２４時間、メタノール中２％の水酸化ナトリウムで天然ＰＦＡをアルカリ加水分解することにより、脱アセチル化ＰＦＡを得た。反応終了時に、溶液を５％塩酸で中和し、脱アセチル化ポリヒドロキシル化脂肪アルコールをジエチルエーテルで抽出した。溶媒を減圧下で除去した。  
【０１１８】
所望のポリヒドロキシル化脂肪アルコールを定量化するために、ガスクロマトグラフ法を開発した。分析は、水素炎イオン化検出器を備えるＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社製ガスクロマトグラフを使用して実施した。低温結晶化によりアボカド種子から分離されたポリヒドロキシル化脂肪アルコールの混合物を、標準物質として使用した。  
【０１１９】
実施例２
アボカドの果肉に由来するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの単離
アボカド果実の食用部分からポリヒドロキシル化脂肪アルコールを単離するために、２００ｇのすりつぶしたアボカドの果肉（ハガリル（Ｈａｇａｌｉｌ）またはエッチンガー（Ｅｔｔｉｎｇｅｒ））を、６０℃で１時間、４００ｍｌの温エタノールで２回抽出し、その後４℃で終夜アセトン抽出した。抽出物を全て収集し、溶媒を蒸発させた。乾燥抽出物を、３５ｍｌのヘキサンに再溶解した。アボカド果肉のヘキサン抽出物を終夜冷却し（４℃）、析出したポリヒドロキシル化脂肪アルコールをろ過により分離し、試料をＧＣカラムで分析した。このプロセスにより、１００〜１４０ｍｇの晶質化合物を得た。ＧＣによる溶出プロファイル、およびＧＣ／ＭＳ分析による化学構造は、図１Ｂおよび図２に示されている。  
【０１２０】
実施例３
Ｔ細胞およびジャーカット細胞の増殖ならびにＴ細胞生存率に対するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果
ヒトＴ細胞を、健常ヒト供与体の末梢血から精製した。全血を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）ヒトＴ細胞濃縮カクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、バンクーバー、ブリティッシュコロンビア、カナダ）と共にインキュベートした（２０分間、２２℃）。その後、残りの非沈降細胞を、リンパ球分離培地（ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社、ベルギー）に投入し、密度遠心分離により単離し、ＰＢＳで洗浄した。得られた精製細胞（９５％を超えるＣＤ３＋Ｔ細胞）を、抗生物質および１０％加熱不活化ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ中で培養した。Ｔ細胞の増殖を、ＰＦＡ存在下において、細胞分裂促進性抗ＣＤ３細胞活性化後に、２，３−ビス−［２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホフェニル］−２Ｈ−テトラゾリウム−５−カルボキサニリド（ＸＴＴ）アッセイにより評価した。Ｔ細胞生存率に対するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果を調査するため、ＣＤ３  Ｔ細胞を、試薬と共に７２時間インキュベートし、その後ＸＴＴアッセイによりＴ細胞生存率を測定した。  
【０１２１】
抗ＣＤ３の添加によるＣＤ３＋Ｔ細胞の活性化は、Ｔ細胞増殖を促進させる。しかしながら、この増殖は、細胞をＰＦＡで前処理することにより阻害された。約４０％増殖阻害が、１０μｇ／ｍｌの濃度のＰＦＡで処理された抗ＣＤ３活性化Ｔ細胞で観察された。ジャーカット細胞はＰＦＡの影響をより受けやすく、同様の条件で８０％を超える細胞増殖の阻害を達成した。結果は、図５に示されている。  
【０１２２】
生存率アッセイは、Ｔ細胞の数が、ＰＦＡを投与した７２時間後に、未処理細胞と比較してわずかに減少したことを明らかにした（図６）。１０μｇ／ｍｌのＰＦＡ濃度で、生細胞の数は約１０％減少したが、これは４０％のＴ細胞阻害増殖の説明にはならなかった。  
【０１２３】
１０μｇ／ｍｌの濃度の脱アセチル化ＰＦＡは、Ｔ細胞増殖を著しく減少させた（約２０％阻害）（図６）。  
【０１２４】
実施例４
Ｔリンパ球によるＴＮＦアルファおよびＩＮＦガンマ産生に対する、アボカド種子由来のポリヒドロキシル化脂肪アルコールの天然誘導体の阻害効果
以下の実験は、活性化Ｔリンパ球によるＴＮＦアルファおよびＩＮＦガンマ産生に対する、アボカド種子由来のポリヒドロキシル化脂肪アルコールの天然誘導体の阻害効果を確認するために実施した。  
【０１２５】
Ｔ細胞（１ｍｌ当たり２×１０６個の細胞）を、１０％の加熱不活化ＦＣＳを含有するＲＰＭＩに基づく培地の２４ウエルプレート中で指示濃度の試薬を用いて活性化した（１時間、３７℃）。細胞を洗浄し、アボカド種子由来のポリヒドロキシル化脂肪アルコールと共におよびそれら無しで、抗ＣＤ３ｍＡｂを事前にコーティングした２４ウエルプレートに、同じ濃度で２４時間４℃で再播種した（２μｇ／ｍｌ；非組織培養等級プレート）。上清を収集し、サイトカイン含有量（ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ）を、製造業者の説明書に従って市販のＥＬＩＳＡキット（ＯｐｔｉＥＩＡキット；ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社）を使用することにより測定した。  
【０１２６】
ＰＦＡによる細胞の前処理は、Ｔ細胞によるＴＮＦアルファおよびＩＦＮガンマ分泌の著しい用量依存的抑制を引き起こした。濃度１μｇ／ｍｌのＰＦＡで前処理されたＴ細胞によるＴＮＦアルファおよびＩＦＮガンマ分泌は、対照細胞の分泌より２５％および３０％低かった。濃度１０μｇ／ｍｌのＰＦＡの存在下におけるサイトカイン発現抑制は、それぞれ約５０％および７０％はるかに高く達成された。結果は図７に示されている。  
【０１２７】
実施例５
ＵＶＢ照射に曝露された後のケラチノサイト細胞の生存率に対するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果
ヒト不死化ケラチノサイト細胞系であるＨａＣａＴを、１０％ウシ胎仔血清、Ｌ−グルタミン２ｍＭ、および抗生物質（１ｍｌ当たり１００Ｕのペニシリンおよび１ｍｌ当たり１００ｍｇのストレプトマイシン）で補完されたＤＭＥＭ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社、ベイトヘメク（Ｂｅｉｔ  Ｈａｅｍｅｋ）、イスラエル）中で、５％ＣＯ２、３７℃で増殖させた。この細胞系は、Ｎ．Ｆｕｓｅｎｉｇ氏、ハイデルベルグ、ドイツの研究室が由来である。初期の継代のみ（＜５０）を実験に使用した。  
【０１２８】
初代正常ヒト表皮ケラチノサイトは、Ｍ．Ｃｈａｏｕａｔ理学修士（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｓｕｒｇｅｒｙ、ハダーサ病院、エルサレム、イスラエル）により提供された。細胞は、美容形成外科手術中に除去された皮膚から単離された。手短に言えば、分割した薄い厚さの皮膚生検を、無菌的に（ａｓｃｅｐｔｉｃａｌｌｙ）採取し、４〜８℃で終夜トリプシン処理する。表皮層を皮層から分離し、単一の細胞を単離し、専用のケラチノサイト培地中で培養する。その後ケラチノサイトを、致死的に照射された３Ｔ３を含有するフラスコに再分布させる。フラスコを、３７℃、８〜１０％ＣＯ２でインキュベートする。サブコンフルエントに達した際に、細胞を、３Ｔ３支持細胞層を有していない新しいフラスコに再分布する。  
【０１２９】
ＨａＣａＴ細胞生存率を、ＭＴＴアッセイにより測定した。細胞を、１×１０５細胞／ウエルの濃度で９６ウエルマイクロタイタープレートに播種した。ＵＶＢ照射の前に、細胞を、６０分間ＰＦＡで前処理した。培地を除去した後、培養物をＰＢＳでよく洗浄し、ＰＢＳで満たし、ＵＶＢを３０ｍＪ／ｃｍ２で照射した。細胞を照射した後、ＰＢＳ生理食塩水を、対応するＰＦＡ濃度を含有する増殖培地に変更し、細胞をさらに２４時間インキュベートした。  
【０１３０】
インキュベーション時間の終了時に、１００μｌのＭＴＴ（５ｍｇ／ｍｌ）を各ウエルに添加した。３７℃で４時間インキュベーションした後、プレートを１０００ｒｐｍで５０分間遠心分離した。上清を除去し、沈殿物を１００μｌのイソプロパノールに溶解した。その結果生じた溶液の５４０ｎｍにおけるＯ．Ｄを、分光測光法で測定した。  
【０１３１】
初代ヒトケラチノサイトの生存率を、蛍光染料を含有するＤｅａｄ／Ｌｉｖｅキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社、ユージーン、オレゴン州、アメリカ合衆国）を使用して測定した。ケラチノサイトを、８ウエルのμ−スライド（組織培養で処理、ＩＢＩＤＩ社）上で、サブコンフルエント状態になるまで増殖させた。ＵＶＢ照射の前に、細胞を、６０分間ＰＦＡで前処理した。培地を除去した後、培養物をＰＢＳでよく洗浄し、ＰＢＳで満たし、ＵＶＢを２０ｍＪ／ｃｍ２で照射した。細胞を照射した後、ＰＢＳ生理食塩水を、対応するＰＦＡ濃度を含有する増殖培地に変更し、細胞をさらに２４時間インキュベートした。細胞数を、共焦点顕微鏡法を使用することにより算出した。  
【０１３２】
細胞生存率は、図８に示されている。細胞数は、計数された初期細胞と比較した、各試料中の生細胞の割合として表されている。ＵＶ処理をしていない対照細胞の生存率を、任意に１００％として示してある。  
【０１３３】
図８（Ａ）に示されているように、ＵＶＢ照射に曝露されたＨａＣａＴ細胞は、対照と比較して、２３％の細胞生存率を示した。しかしながら、細胞をＰＦＡで前処理すると、細胞生存率は著しく増加した。これらの条件では、細胞生存は、０．２μｇ／ｍｌおよび１μｇ／ｍｌのＰＦＡで前処理した後、それぞれ２３％から３４％、および２３％から４３％に増加した。  
【０１３４】
ＨａＣａＴ細胞の挙動と同様に、ＰＦＡによる前処理は、図８（Ｂ）に示されているように、ＵＶＢに曝露された初代ヒトケラチノサイトの生存率を著しく増加させる。これらの条件では、ＰＦＡで前処理されたＵＶ照射初代ヒトケラチノサイトの生存率は、５０％（未処理細胞）から９０％に増加した。ＰＦＡは、２８０〜３２０ｎｍの波長では、ＵＶＢを遮蔽するいかなる特性も示さない（データ非表示）。  
【０１３５】
実施例６
ＴＰＡ誘導性のミトコンドリア電位（ΔΨｍ）喪失に対するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果
ＵＶＢ誘導性またはＰＭＡ誘導性のミトコンドリア膜内外電位差喪失に対するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果を調査した。ＨａＣａＴ細胞を、μ−スライド８ウエル（組織培養で処理、ＩＢＩＤＩ社、ミュンヒェン、ドイツ）上で４８時間増殖させ、その後ポリヒドロキシル化脂肪アルコールで４０分間前処理した。ＰＦＡ処理細胞を、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）（ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）としても知られている）を、２５ｎｇ／ｍｌの濃度で９０分間追加投与することにより処理した。細胞をＰＢＳで洗浄し、電位感受性色素ＴＭＲＭで染色した。  
【０１３６】
内部ミトコンドリアＴＭＲＭ蛍光を、共焦点顕微鏡法により測定し、膜内外電位差（ΔΨｍ）を任意の蛍光単位で表した。ＴＰＡ誘導性のミトコンドリア電位（ΔΨｍ）喪失に対するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果は、図９に示されている。０．２μｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌの濃度範囲のポリヒドロキシル化脂肪アルコールによる細胞の前処理は、ミトコンドリア電位喪失からＨａＣａＴ細胞を有意に保護した。  
【０１３７】
実施例７
初代ヒトケラチノサイトにおけるＵＶ誘導性およびＴＰＡ誘導性のＩＬ−６分泌に対するアボカド種子由来のポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果
ＴＰＡ誘導性ＩＬ−６分泌に対する効果を研究するために、２４ウエルプレート中でサブコンフルエント状態にある初代ケラチノサイトを、増殖培地中で６０分間、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールで処理した。終了時に、１ｎｇ／ｍｌのＴＰＡで増殖培地をさらに補完し、細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で８時間インキュベートした。市販のキット（ヒトＩＬ−６  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＨＳ  ＥＬＩＳＡキット、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ社、ミネソタ州、アメリカ合衆国）を製造業者の説明書に従って使用して、ＥＬＩＳＡ法により、ＩＬ−６を増殖培地中で定量化した。  
【０１３８】
紫外線の影響を調査するために、２４ウエルプレート中でサブコンフルエント状態にある初代ヒトケラチノサイトを、増殖培地中で６０分間、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールで処理した。培地を除去した後、培養物をＰＢＳでよく洗浄し、１ｃｍ層のＰＢＳで満たし、ＵＶＢ（３０ｍＪ／ｃｍ２）で照射した。細胞を照射した後、ＰＢＳ生理食塩水を、対応する濃度のポリヒドロキシル化脂肪アルコールを含有する増殖培地に変更し、細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で８時間インキュベートした。同じキットを製造業者の説明書に従って使用することにより、ＥＬＩＳＡ法でＩＬ−６を増殖培地中で定量化した。  
【０１３９】
結果は、図１０および１１に示されている。図に見ることができるように、ＴＰＡおよびＵＶＢ放射は両方とも、初代ヒトケラチノサイトにおいてＩＬ−６の分泌増加を誘導する。ＰＦＡによる細胞の前処理は、ＩＬ−６の追加的な分泌を４０〜５０％著明に阻害した。ＰＭＡ処理細胞とＵＶＢ曝露細胞との間の違いは、ＩＬ−６に対するＰＦＡの阻害効果が、ＵＶＢ照射細胞においては、濃度１ｕｇ／ｍｌ以上でまだ明白ではなかったということだった。  
【０１４０】
実施例８
初代ヒトケラチノサイトにおけるＵＶＢ誘導性ＰＧＥ２分泌に対するアボカド種子由来のポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果
２４ウエルプレート中でサブコンフルエント状態にある初代ヒトケラチノサイトを、増殖培地中で６０分間、ＰＦＡで処理した。培地を除去した後、培養物をＰＢＳでよく洗浄し、１ｃｍ層のＰＢＳで満たし、ＵＶＢ（３０ｍＪ／ｃｍ２）で照射した。細胞を照射した後、ＰＢＳ生理食塩水を、対応する濃度のポリヒドロキシル化脂肪アルコールを含有する増殖培地に変更し、細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で８時間インキュベートした。市販のキット（プロスタグランジンＥ２パラメーターアッセイキット、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ社、ミネソタ州、アメリカ合衆国）を製造業者の説明書に従って使用することにより、ＥＬＩＳＡ法で、ＰＧＥ２を培地中で定量化した。  
【０１４１】
図１２は、初代ヒトケラチノサイトにおけるＵＶＢ照射誘発性のＰＧＥ２分泌を実証する。ポリヒドロキシル化脂肪アルコールによる細胞の前処理は、ＰＧＥ２の追加的分泌を阻害する。図１２に示されている結果は、ＵＶＢ曝露ケラチノサイトにおけるプロスタグランジンＥ２合成に対するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの阻害効果を実証する。  
【０１４２】
実施例９
ＵＶ照射された初代ヒトケラチノサイトでのＰＧＥ２分泌に対する、ポリヒドロキシル化脂肪アルコール、およびウルソール酸またはアセチルサリチル酸とのポリヒドロキシル化脂肪アルコール混合物の阻害効果
２４ウエルプレート中でサブコンフルエント状態にある初代ヒトケラチノサイトを、ＤＭＥＭに基づく増殖培地中で６０分間、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールもしくはウルソール酸もしくはアセチルサリチル酸のエタノール溶液で、またはポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびウルソール酸またはアセチルサリチル酸の混合物で処理した。培地を除去した後、培養物をＰＢＳでよく洗浄し、１ｃｍ層のＰＢＳで満たし、ＵＶＢ（３０ｍＪ／ｃｍ２）で照射した。細胞を照射した後、ＰＢＳ生理食塩水を、試験化合物またはそれらの混合物を含有する増殖培地に変更し、細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で８時間インキュベートした。  
【０１４３】
同じキットを製造業者の説明書に従って使用することにより、ＥＬＩＳＡ法でＰＧＥ２を培地中で定量化した。結果は、図１３に示されている。  
【０１４４】
図１３が実証しているように、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの生物活性と、アセチルサリチル酸またはウルソール酸などのＣＯＸ阻害剤の生物活性との間には、相乗効果が存在する。ＣＯＸ阻害剤とポリヒドロキシル化脂肪アルコールの混合物は、いずれかの成分が単独でＰＧＥ２分泌を阻害する能力と比較して、初代ヒトケラチノサイトによるＰＧＥ２分泌をより高いレベルで減少させることを見出した。  
【０１４５】
実施例１０
器官培養モデルにおいてＵＶ損傷から皮膚組織を保護するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの能力
ヒトの皮膚組織試料を、外科手術の２時間以内に取得した（エルサレム、イスラエル、ハダーサ病院の施設内治験審査委員会の第０２７３−０８−ＨＭＯ号の承認に基づく）。器官培養物を、基本的にＨａｓｓｏｎおよび同僚らにより記述されているように調製した（Ｈａｓｓｏｎ，Ｅ．，Ｓｌｏｖａｔｉｚｋｙ，Ｙ．，Ｓｈｉｍｏｎｉ，Ｙ．，ＦａＩｋ，Ｈ．，Ｐａｎｅｔ，Ａ．およびＭｉｔｒａｎｉ，Ｅ．“Ｓｏｌｉｄ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ｃａｎ  ｂｅ  ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｕｓｅｄ  ａｓ  ｖｅｈｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ”．Ｊ  Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ．７巻：９２６〜９３５頁、２００５年）。手短に言えば、皮膚組織試料をＤＭＥＭで洗浄し、ミクロトーム（組織切片器、Ｓｏｒｖａｌｌ社製ＴＣ−２型；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ウォルサム、マサチューセッツ州）で薄切片（３００μｍ）に切断し、１０％ＦＣＳ、ゲンタミシン（１５．２μｇ／ｍｌ）、およびシプロキシン（シプロフロキサシン、１９μｇ／ｍｌ）を含有するＤＭＥＭ中で、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。  
【０１４６】
ＵＶ照射の前に、各試料をポリヒドロキシル化脂肪アルコールで６０分間処理した。それが終了した後、培地を除去し、培養物をＰＢＳでよく洗浄し、１ｃｍ層のＰＢＳで満たし、ＵＶＢ（９０ｍＪ／ｃｍ２）で照射した。細胞を照射した後、ＰＢＳ生理食塩水を、対応する濃度の試験化合物を含有するＤＭＥＭ培地に変更した。２４時間後に、皮膚試料を、４％パラホルムアルデヒドを含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で３０分間固定し、すすいで、ＴｉｓｓｕｅＴｅｋ（Ｓａｋｕｒａ社、日本）に包埋した。組織学的検査は、Ｙｏｕｎｇ  ＣＭ−３０００低温槽を使用して８μｍの厚さの凍結切片を調製することにより実施した。染色は、日常的な組織学的方法によりヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）を用いて行った。日焼け細胞は、ケラチノサイトに由来していた。ヘマトキシリン‐エオシン染色は、収縮クロマチン、好酸球性細胞質、および核濃縮性の核を示した。  
【０１４７】
結果は、図１４Ａおよび１４Ｂに示されている。１μｇ／ｍｌのポリオールによる前処理皮膚外植片は、処理された皮膚培養およびＵＶ曝露された皮膚培養内の日焼け細胞およびアポトーシス細胞の量を劇的に減少させた。  
【０１４８】
実施例１１
ヒトケラチノサイトにおいてＵＶＢ誘導性のＣＰＤ除去を促進するＰＦＡの効果
９ｃｍ培養皿中でサブコンフルエント状態にある初代ヒトケラチノサイトを、増殖培地中で６０分間、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールで処理した。培地を除去した後、培養物をＰＢＳでよく洗浄し、１ｃｍ層のＰＢＳで満たし、ＵＶＢ（２０ｍＪ／ｃｍ２）で照射した。細胞を照射した後、ＰＢＳ生理食塩水を、対応するポリヒドロキシル化脂肪アルコール濃度を含有するＤＭＥＭに基づく増殖培地に変更し、細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートし、その後ＷｉｚａｒｄゲノムＤＮＡ精製キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社、マディソン、ウィスコンシン州、アメリカ合衆国）を使用してＤＮＡを抽出した。［１２］。  
【０１４９】
対照試料では、照射直後にＤＮＡを抽出した。手短に言えば、５μｇ／ウエルの変性ＤＮＡを、ポリ−Ｌ−リジン（Ｓｉｇｍａ社）を事前にコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに三重反復でアプライし、ＰＢＳで５回洗浄し、ＰＢＳ中２％のＦＣＳでブロッキングした。第１の抗体として、ＰＢＳ中２％のＦＣＳで１：１，０００に希釈された抗チミジンダイマーＨ３クローン４Ｆ６（Ａｆｆｉｔｅｃｋ社、オスロ、ノルウェー）を使用した。第２の抗体として、１：５０，０００に希釈されたビオチンＳＰ結合ヤギ抗マウスＩｇを使用し、その後１：１０，０００に希釈されたペルオキシダーゼ−結合ストレバビジン（ｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎ）（Ｊａｃｋｓｏｎ社）を使用した。０．０２％のＨ２Ｏ２の存在下で０．４ｍｇ／ｍｌのＯＰＤ（ｏ−フェニルアミン）（Ｓｉｇｍａ社）を使用して、ペルオキソダーゼ反応を実施し、分光光度法により４９２ｎｍの色強度を測定した。  
【０１５０】
データは、図１５に示されている。濃度１μｇ／ｍｌのポリヒドロキシル化脂肪アルコール処理は、その結果として照射の２４時間後に、細胞のＣＰＤ濃度の著しい低減をもたらした。  
【０１５１】
実施例１２
ケラチノサイトおよび線維芽細胞の生存率に対するポリヒドロキシル化脂肪アルコールの効果
実施例５に記述されているように、ＨａＣａＴ細胞を増殖させた。ＨａＣａＴ細胞生存率を、ＭＴＴアッセイにより測定した。細胞を、１×１０５細胞／ウエルの濃度で９６ウエルマイクロタイタープレートに播種した。  
【０１５２】
終夜培養した後、１００μｌのポリヒドロキシル化脂肪アルコールで補完された培地を、細胞に添加し、４時間または２４時間インキュベートした。１００μｌのＭＴＴ（５ｍｇ／ｍｌ）を各ウエルに添加した。３７℃で４時間インキュベーションした後、プレートを１０００ｒｐｍで５０分間遠心分離した。上清を除去し、沈殿物を１００μｌのイソプロパノールに溶解した。その結果生じた溶液の５４０ｎｍにおけるＯ．Ｄを、分光光度法で測定した。  
【０１５３】
正常なヒト皮膚線維芽細胞は、Ｍ．Ｃｈａｏｕａｔ理学修士（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｓｕｒｇｅｒｙ、ハダーサ病院、エルサレム、イスラエル）により提供された。線維芽細胞は、胸部形成外科手術を受けた健常供与体から取得された。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２、９ｃｍ培養皿で、１０％ウシ胎仔血清、Ｌ−グルタミン２ｍＭ、および抗生物質（１ｍｌ当たり１００Ｕペニシリンおよび１ｍｌ当たり１００ｍｇのストレプトマイシン）で補完されたＤＭＥＭ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社、ベイトヘメク、イスラエル）中で培養した。実験は、継代４と８との間で実施した。  
【０１５４】
線維芽細胞生存率を、２４ウエルプレート上でＭＴＴアッセイにより測定した。１０μｇ／ｍｌまでの濃度のＰＦＡによる短期間のＨａＣａＴ細胞処理（４時間）では、細胞増殖に対するＰＦＡの効果は明らかではなかった。対照的に、１μｇ／ｍｌより高濃度のＰＦＡによる長期間細胞処理（２４時間）では、細胞生存率の用量依存的減少が実証された。さらに、より低いＰＦＡ濃度は、ＨａＣａＴ細胞に毒性ではなかった（図１６Ａ）。  
【０１５５】
線維芽細胞生存率に対するＰＦＡの効果は、２０μｇ／ｍｌまでの濃度では検出されなかった（図１６Ｂ）。  
【０１５６】
実施例１３
アボカド種子由来のポリヒドロキシル化脂肪アルコールを含有する非イオン性水中油型乳剤に基づく化粧用途のクリーム組成物の調製
非イオン性水中油型乳剤は、２０％〜４０％（重量／重量）の本組成物の油相を含んでいた。油相は、麦芽油、多価不飽和脂肪酸、ビタミンＡ、Ｅ、およびＦ、アスコルビン酸パルミテート、ならびに酸化防止剤を含有していた。水相は、６０％〜８０％（重量／重量）であり、水、植物抽出物、湿潤剤、および非イオン性乳化剤の混合物を含有していた。  
【０１５７】
アボカド由来のポリヒドロキシル化脂肪アルコールの濃度は、０．０１％〜ｌ％（重量／重量）だった。クリームは、水相を油相に添加することによる逆乳化プロセスにより調製した。ポリヒドロキシル化脂肪アルコールを事前に油相に溶解し、非イオン性乳化剤を事前に水相に分散した。両相を、７５℃に予熱した。乳化は、高速ホモジナイザーで２０〜４０分間、低速軌道ミキサーでさらに６０〜１２０分間継続することによってもたらさせた。  
【０１５８】
実施例１４
アボカド種子由来のポリヒドロキシル化脂肪アルコールを含有する化粧用途の親油性天然油組成物の調製
親油性天然油組成物は、ポリヒドロキシル化脂肪アルコール、ホホバ油、ガンマリノレン酸、プロミグラナート（ｐｒｏｍｉｇｒａｎａｔｅ）油、アボカド油、ビタミンＡ、Ｅ、およびＦ、酸化防止剤、ならびにプロピレングリコールおよびジペラルゴネートエトキシジアグリコールを含んでいた。  
【０１５９】
ポリヒドロキシル化脂肪アルコールは、０．０５％〜０．１％（重量／重量）の濃度で存在していた。天然植物油の濃度は、７０％（４０％〜８０％）（重量／重量）だった。プロピレングリコールジペラルゴネートは、約１．６０％（２％〜７％）（重量／重量）の濃度で存在し、エトキシジアグリコールは、約０．４％（０．０５％〜１％）（重量／重量）の濃度で存在していた。追加的成分は、２７．９５％（１０％〜５０％）（重量／重量）の濃度で存在していた。  
【０１６０】
実施例１５
毒物学的臨床研究−反復傷害パッチ試験（ＲＩＰＴ）
ポリヒドロキシル化脂肪アルコールの毒性試験を、ＲＩＰＴ（反復傷害パッチ試験）法を使用して実施した。ＲＩＰＴでは、少量の活性化合物を各々の個々対象体の皮膚に塗布し、その効果をモニターする。一定時間間隔にわたって、皮膚を観察、類別、および再試験した。  
【０１６１】
この臨床研究は、ＨＥＬＡ皮膚研究センター（ＨＥＬＡ  Ｓｋｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ）により実施された。このセンターは、化粧品、医薬品、栄養補助食品、原材料、医療器具、および繊維工業の製品評価を専門とする国際的に認められている独立系の検査会社である。  
【０１６２】
この研究の目的は、ヒト対象体の皮膚への反復投与条件下でポリヒドロキシル化脂肪アルコールにより処理された皮膚の刺激および／または敏感化能力を決定することである。対象体には、拒絶反応の可能性を含む検査の性質を通知した。全ての参加者は、誘導の前に同意書に署名した。指示を読み、理解し、従うことができた対象体だけに参加を依頼した。試験の開始前に、各対象体は問診票に記入した。対象体は、試験物質（複数可）の塗布を妨げるであろう、身体的または皮膚科学的ないかなる状態も示していなかった。  
【０１６３】
反復傷害（ＲＩＰＴ）は、２つの段階で５０人のヒト対象体で実施した。第１段階は、誘導段階である。１試験パッチ当たりの塗布された試験物質の量は、５％重量／重量の各物質のおよそ０．２ｍＬまたは０．２ｇだった。試験物質（複数可）を、２ｃｍ四方のＰａｒｋｅ−Ｄａｖｉｄ  Ｒｅａｄｉ包帯（閉鎖性）、またはＳｃａｎｐｏｒテープに貼り付けた２ｃｍ四方のＷｅｂｒｉｌ不織布（半閉鎖性）、または同様の被覆物に配置した。パッチを、対象体の肩胛骨と腰との間の背部に適用した。各適用の２４時間後に、パッチを対象体から剥がした。剥がした後は毎回、２４時間の休息期間をおいた。各再適用に先立って、経験を積んだ有資格のＨＥＬＡ職員が、部位（複数可）を評価した。  
【０１６４】
この手順を、試験物質（複数可）が９回塗布されるまで繰り返した。皮膚応答は、以下のスコアリングにより評価した：
０）可視反応がない。
？）疑わしい反応：微かで最小限の紅斑、無浸潤。
１）弱い陽性反応：紅斑、浸潤、「離散性の丘疹」
２）強い陽性反応：紅斑、浸潤、丘疹、離散性の小水疱
３）より大きな陽性反応：激しい紅斑、浸潤、融合した小水疱、球状反応。
ＩＲ）刺激反応：浸潤のない離散性の紅斑／斑状のろ胞状紅斑／出血性およびろ胞状膿疱。
ＮＴ）未試験。  
【０１６５】
対象体が、誘導段階中にレベル２またはそれ以上の陽性反応を発症した場合、次回の適用では、未適用の隣接部位にパッチを適用した。レベル２またはそれ以上の反応が第２の部位または塗布で生じた場合、誘導段階の残り間、それ以上の反応試験物質の塗布を行わなかった。  
【０１６６】
第２段階は、負荷段階である。最後の誘導パッチを適用した１０〜２１日後に、負荷パッチ（複数可）を、元の誘導パッチ部位に隣接した以前にパッチされていない（未適用）部位に適用した。負荷部位を、適用の２４〜４８時間後にスコアリングした。対象体には、最後の負荷パッチ読み取り後に生じる可能性のあるあらゆる遅延反応について報告するように依頼した。  
【０１６７】
結果
５０人の志願者：男性７名および女性４３名に対して試験を実施した。対象体の年齢は、１５〜６５歳の間で比較的均等に分布していた。  
【０１６８】
皮膚応答は、試験物質のいずれかの塗布中または塗布後、５０人の志願者のうちの誰にも見出されなかった。したがって、この物質は、皮膚に対して非刺激性であり、非毒性であるとみなすことができる。  
【０１６９】
本発明のある特徴は、分かりやすくために別々の実施形態の状況で記述されているが、単一の実施形態の組合せで提供することもできることが認識される。逆に、本発明の種々の特徴は、簡略化のために単一の実施形態の状況で記述されているが、別々にもしくは任意の好適なサブコンビネーションで、または本発明の任意の他の記述されている実施形態において好適なように提供することもできる。種々の実施形態の状況で記述されているある特徴は、それらの要素がなければ実施形態が機能しない限り、それら実施形態の本質的な特徴とみなすべきではない。  
【０１７０】
本発明は、その特定の実施形態と共に記述されているが、当業者には、多くの代替、改変、および変異が明白であることは明らかである。したがって、添付の特許請求の範囲の趣旨および幅広い範囲内にある代替、改変、および変異を全て包含することが意図されている。  
【０１７１】
本出願中にある任意の参考文献の引用または特定は、そのような参考文献が本発明に対する従来技術として利用可能であるという承認として解釈されるべきではない。  
【０１７２】
項目の見出しが使用される程度に、必ずしも限定として解釈されるべきでない。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図４】
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【図３】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【国際調査報告】
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