(57)【要約】本発明は、多形神経膠芽腫、結腸の腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、シスプラチン耐性の小細胞肺癌、卵嚢癌、白血病、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、ホジキンリンパ腫、リンパ脈管筋腫症、非ホジキンリンパ腫または肉腫の治療において使用するための化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤を含む併用療法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療において同時に、別々に、または連続的に使用するための、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤を複合製剤として含む生成物。
【請求項２】
多形神経膠芽腫、結腸の腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、シスプラチン耐性の小細胞肺癌、卵嚢癌、白血病、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、ホジキンリンパ腫、リンパ脈管筋腫症、非ホジキンリンパ腫または肉腫の治療において同時に、別々に、または連続的に使用するための、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤を複合製剤として含む生成物。
【請求項３】
前記複合製剤は非小細胞肺癌の治療において同時に、別々に、または連続的に使用するためのものである請求項２記載の生成物。
【請求項４】
前記ＥＧＦＲ阻害剤はエルロチニブ塩酸塩である請求項１〜３いずれか１項記載の生成物。
【請求項５】
前記化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩は、４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジントシラートである請求項１〜４いずれか１項記載の生成物。
【請求項６】
前記化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、および前記ＥＧＦＲ阻害剤は経口投与されるためのものである請求項１〜５いずれか１項記載の生成物。
【請求項７】
多形神経膠芽腫、結腸の腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、シスプラチン耐性の小細胞肺癌、卵嚢癌、白血病、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、ホジキンリンパ腫、リンパ脈管筋腫症、非ホジキンリンパ腫または肉腫の治療において、ＥＧＦＲ阻害剤と併用して同時に、別々に、または連続的に使用するための化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩。
【請求項８】
前記使用は非小細胞肺癌の治療におけるものである、ＥＧＦＲ阻害剤と併用して同時に、別々に、または連続的に使用するための請求項７記載の化合物、またはその薬理学的に許容できる塩。
【請求項９】
前記ＥＧＦＲ阻害剤はエルロチニブ塩酸塩である、ＥＧＦＲ阻害剤と併用して同時に、別々に、または連続的に使用するための請求項７または請求項８に記載の化合物、またはその薬理学的に許容できる塩。
【請求項１０】
前記化合物は４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジントシラートである請求項７〜９いずれか１項記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物および前記ＥＧＦＲ阻害剤は経口投与されるためのものである、ＥＧＦＲ阻害剤と併用して同時に、別々に、または連続的に使用するための請求項７〜１０いずれか１項記載の化合物、またはその薬理学的に許容できる塩。
【請求項１２】
多形神経膠芽腫、結腸の腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、シスプラチン耐性の小細胞肺癌、卵嚢癌、白血病、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、ホジキンリンパ腫、リンパ脈管筋腫症、非ホジキンリンパ腫および肉腫からなる群から選択される癌の治療方法であって、
治療を必要とする患者に、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩およびＥＧＦＲ阻害剤を、併用における有効量で投与する工程を含む治療方法。
【請求項１３】
前記癌は非小細胞肺癌である請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記ＥＧＦＲ阻害剤はエルロチニブ塩酸塩である請求項１２または請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩は、４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジントシラートである請求項１２〜１４いずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、および前記ＥＧＦＲ阻害剤は経口投与される請求項１２〜１５いずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＰ７０  Ｓ６キナーゼ阻害剤およびＥＧＦＲ阻害剤の併用療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホスホチジルイノシトール−３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ＡＫＴ／ラパマイシンの哺乳類における標的（ｍＴＯＲ）経路は、細胞増殖および生存の制御において非常に重要な、いくつかの情報伝達のポイントを包含する。Ｐ７０  Ｓ６キナーゼは、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ情報伝達経路の下流のエフェクターであるセリン−スレオニンタンパク質キナーゼである。Ｐ７０  Ｓ６キナーゼは、細胞中のリボソームタンパク質Ｓ６をリン酸化し、リボソーム生合成、細胞増殖および分裂促進的刺激に応答する細胞周期の進行を制御する。Ｐ７０  Ｓ６キナーゼは、通常、多くの固形腫瘍において活性化される。ｐ７０  Ｓ６キナーゼの阻害剤は、このような腫瘍の治療において有用であり、特許文献１および特許文献２に開示されている。
【０００３】
上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、構造的に関連した受容体型チロシンキナーゼのファミリーに属する膜貫通型糖タンパク質である。ＥＧＦＲは、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路に、細胞表面レベルで流れる。ＥＧＦＲは、複数のシグナル伝達経路において重要であると考えられ、腫瘍形成および腫瘍増殖の両方において非常に重要な役割を果たすと思われる。ＥＧＦＲおよびそのリガンドは、いくつかの腫瘍のタイプにおいて、過剰発現するか、または自己分泌増殖ループを伴う。特許文献３は、ＥＧＦＲ阻害活性を有し、癌の治療において有用な、一連の４−（置換フェニルアミノ）キナゾリン誘導体を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００６／０４６０２４号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００８／０７５１０９号パンフレット
【特許文献３】欧州特許第０８１７７７５号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
癌の治療において、改善された治療に対するニーズが存在する。さらに、現存する治療よりも、より大きな有効性を有する治療に対するニーズがある。本発明の好ましい併用治療は、いずれかの治療薬単独による治療よりも、より大きな有効性を示す。本発明のより好ましい併用治療は、治療薬のそれぞれの最適以下の投与量が投与された場合に、より大きな有効性を示す。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、治療において同時に、別々に、または連続的に使用するための、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤を複合製剤として含む生成物を提供する。
【０００７】
本発明は、多形神経膠芽腫、結腸の腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、シスプラチン耐性の小細胞肺癌、卵嚢癌、白血病、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、ホジキンリンパ腫、リンパ脈管筋腫症、非ホジキンリンパ腫または肉腫の治療において同時に、別々に、または連続的に使用するための、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤を複合製剤として含む生成物をさらに提供する。
【０００８】
本発明は、多形神経膠芽腫、結腸の腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、シスプラチン耐性の小細胞肺癌、卵嚢癌、白血病、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、ホジキンリンパ腫、リンパ脈管筋腫症、非ホジキンリンパ腫または肉腫の治療において、ＥＧＦＲ阻害剤と併用して同時に、別々に、または連続的に使用するための、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩をさらに提供する。
【０００９】
本発明は、多形神経膠芽腫、結腸の腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、シスプラチン耐性の小細胞肺癌、卵嚢癌、白血病、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、ホジキンリンパ腫、リンパ脈管筋腫症、非ホジキンリンパ腫および肉腫からなる群から選択される癌の治療方法であって、治療を必要とする患者に、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤を、併用における有効量で投与する工程を含む治療方法をさらに提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン：
【化１】
2012508240.tif 000002
は、ｐ７０  Ｓ６キナーゼ阻害剤である。
【００１１】
化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンは塩基であり、従って、いくつかの有機酸および無機酸のいずれかと反応し、薬理学的に許容できる塩を形成する。本願明細書で使用される用語「薬理学的に許容できる塩」は、生命体に対して実質的に無毒である化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンの塩を指す。このような塩としては、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６、２−１９（１９７７）に記載される薬理学的に許容できる塩が挙げられ、これらは当業者に公知である。トシラート（ｐ−トルエンスルホネートとしても知られる）および塩酸塩が好ましい。トシラート塩が特に好ましい。
【００１２】
「ＥＧＦＲ阻害剤」は、ＥＧＦＲの阻害剤である全ての化合物、ペプチドまたは抗体を意味する。好ましいＥＧＦＲ阻害剤としては、エルロチニブ、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）；欧州特許第０３５９２８２号明細書中に開示されている）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）；欧州特許第０３５９２８２号明細書中に開示されている）およびゲフィニチブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）；欧州特許第０５６６２２６号明細書中に開示されている）が挙げられる。特に好ましいＥＧＦＲ阻害剤は、エルロチニブ、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス−（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、および、特にエルロチニブ塩酸塩（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））である。ＥＧＦＲ阻害剤エルロチニブおよびその調製のための方法は、欧州特許第０８１７７７５号明細書中に開示されている。
【００１３】
用語「併用療法」は、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤（「治療薬」）を併用して投与する工程を含む治療を指す。当該治療薬は、同時に、別々に、または連続的に投与されてもよい。
【００１４】
用語「治療する」または「治療」は、症状、障害、状態もしくは疾病の進行または重症度を、緩慢化、妨害、抑止、制御、停止、減少、または逆転することを含む。
【００１５】
用語「併用における有効量」は、併用して投与された場合に、本願明細書に記載された障害の治療において有効な、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩の量、およびＥＧＦＲ阻害剤の量を意味する。併用して有効である各治療薬の量は、当該治療薬がそのまま投与される場合に有効である量と等しくてもよく、または当該治療薬の量は、当該治療薬がそのまま投与される場合に有効である量よりも少なくてもよい（すなわち、これは最適な用量以下でもよい）。
【００１６】
本願明細書に記載された併用療法は、癌等の増殖性障害の治療、および哺乳類における血管新生の阻害において使用されてもよい。本発明の全ての実施態様では、治療される癌が、多形神経膠芽腫、結腸の腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、シスプラチン耐性の小細胞肺癌、卵嚢癌、白血病、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、ホジキンリンパ腫、リンパ脈管筋腫症、非ホジキンリンパ腫および肉腫から選択されることが好ましい。治療される癌が、非小細胞肺癌であることが特に好ましい。治療される哺乳類はヒトが好ましい。
【００１７】
本発明の別の実施態様では、ＥＧＦＲ阻害剤は、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩と併用して、癌、特に上記の癌の治療において、同時に、別々に、または連続的に使用できる。
【００１８】
化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩は、癌、特に上記の癌の治療のための併用療法において使用するための薬物の製造において使用でき、当該薬物は、ＥＧＦＲ阻害剤と併用して投与されるためのものである。
【００１９】
本発明のさらに別の実施態様では、ＥＧＦＲ阻害剤は、癌、特に上記の癌の治療のための併用療法における使用のための薬物の製造において使用でき、当該薬物は、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩と併用して投与されるためのものである。
【００２０】
さらに別の実施態様では、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤を、薬理学的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と併用して含む医薬製剤が提供される。
【００２１】
化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤は、様々な経路によって投与できる。これらは、同一の経路によって、または異なる経路によって投与されてもよい。好ましくは、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、もしくはその薬理学的に許容できる塩、またはＥＧＦＲ阻害剤は、経口投与される。より好ましくは、両方とも経口投与される。
【００２２】
本発明の併用療法において使用される治療薬のそれぞれについての最適な投与計画は、例えば、投与経路、治療される疾病および使用されるＥＧＦＲ阻害剤に応じて変化し得る。例えば、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩の用量は、１日あたり１００ｍｇ〜２０００ｍｇの範囲であってもよい。好ましい用量は、１日あたり６００ｍｇ〜１６００ｍｇの範囲である。好ましい実施態様では、当該化合物は、１日２回投与され、各用量は、３００ｍｇ〜８００ｍｇの範囲である。ＥＧＦＲ阻害剤エルロチニブ塩酸塩の用量は、１日あたり１０ｍｇ〜４５０ｍｇの範囲であってもよい。エルロチニブ塩酸塩の好ましい用量は、１日あたり１５０ｍｇまたは１００ｍｇである。
【００２３】
併用療法は、単一の一定期間、例えば、６ヶ月間投与されてもよい。当該併用療法は、周期的な計画に従って投与されてもよく、この場合は治療期間および非治療期間が交互にある。あるいは、当該併用療法は、連続的に投与されてもよい。当該併用療法は（疾病の進行または容認できない毒性まで）、連続的に投与されることが好ましい。
【００２４】
１つの実施態様では、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤は、別々に投与される。別々に投与される場合、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤は、異なる投与計画に従って投与されてもよく、異なる投与経路によって投与されてもよい。
【００２５】
別の実施態様では、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤は、連続的に投与される。この実施態様では、いずれの治療薬が最初に投与されてもよい。好ましくは、ＥＧＦＲ阻害剤が最初に投与され、次いで、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩が投与される。１つの治療薬の投与と、他方の投与との間の時間は、８時間未満が好ましい。より好ましくは、４時間未満、さらにより好ましくは、１時間未満である。
【００２６】
さらに別の実施態様では、化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬理学的に許容できる塩、およびＥＧＦＲ阻害剤は、同時に投与される。この実施態様では、当該薬剤は、同じ処方中で、または、異なる投与経路を介して同時に投与されてもよい。
【００２７】
治療薬４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジントシラートは、好ましくは経口投与される。４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジントシラートは、治療の経過にわたって１日あたり２回の服用で投与されること、および、各用量は３００ｍｇ〜８００ｍｇの範囲であることがさらに好ましい。
【００２８】
１つの実施態様では、併用療法において使用される治療薬は、４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジントシラートおよびエルロチニブ塩酸塩である。４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジントシラートが、上記の好ましい投薬スケジュールに従って経口投与されることが好ましい。この実施態様では、エルロチニブ塩酸塩もまた経口投与されることが好ましい。エルロチニブは１日あたり１回の服用で投与されること、および各用量は１００ｍｇまたは１５０ｍｇであることがさらに好ましい。この実施態様では、併用療法が連続的に投与されることが好ましい。
【００２９】
化合物４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、およびその薬理学的に許容できる塩は、下記の方法に従って調製してもよい。
【実施例】
【００３０】
（中間体４−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンの調製）
トルエン（２０５．７１ｍＬ）中のアロプリノール（２０ｇ；１４６．９４ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化ホスホリル（６８．２７ｍＬ；７３４．６８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（５６．３８ｍＬ；３２３．２６ｍｍｏｌ）を加え、当該混合物を８０℃で２時間加熱した。溶媒を真空中で半分になるまで除去し、当該混合物を、水中の２Ｍ  二塩基性リン酸カリウム（７３４．６８ｍＬ；１．４７ｍｏｌ）に、４℃で注いだ。当該混合物を一晩、室温（ＲＴ）で撹拌した。沈殿物を、セライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、引き続いて、これをＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を分離し、水層をより多くのＥｔＯＡｃで洗浄し、有機層を合わせ、これをＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮し、標記の化合物（１６ｇ；７０．４５％の収率）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝１５５．１［Ｍ＋Ｈ］。
【００３１】
（４−｛４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン塩酸塩の調製）
メテナミン（１．１０当量；２３１．５５ｍｍｏｌ；３２．４６ｇ）を、酢酸エチル（４５０ｍＬ；４．６０ｍｏｌ）中の、臭化４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェナシル（６０．００ｇ；１．００当量；２１０．５０ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。当該混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空中で除去し、固形物を、メチル  ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）中で粉末にした。濾過し、減圧下で乾燥した。エタノール（４５０ｍＬ；７．７３ｍｏｌ）、次いで塩化水素（１５０ｍＬ；８．３０当量；１．７５ｍｏｌ）を加え、当該混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空中で除去し、固形物を真空中で、５０℃で１週間乾燥させ、２−アミノ−１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−エタノン塩酸塩（５４．２３ｇ；１００％の収率）を白色固体として得た。
【００３２】
Ｎ−メチルモルホリン（３当量；６３１．５２ｍｍｏｌ；６９．６６ｍＬ）を、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（４００ｍＬ）中のピペリジン−１，４−ジカルボン酸モノ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．２０当量；２５２．６１ｍｍｏｌ；５７．９２ｇ）の溶液に加えた。当該混合物を、−１０℃まで、ドライアイス−アセトン浴で冷却した。イソブチルクロロホルメート（１．１当量；２３１．５６ｍｍｏｌ；３０．２６ｍＬ）を、温度を−５℃未満に維持しながら滴下した。３０分後、−５°〜１０℃で、ＴＨＦ（３００ｍＬ）中に懸濁された２−アミノ−１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−エタノン塩酸塩（５４．２３ｇ；１．００当量；２１０．５１ｍｍｏｌ）を加え、当該混合物を浴中で、−５℃で２０分間撹拌した。１時間、室温で撹拌した。水およびＥｔＯＡｃを加え、次いで、有機層を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗製物をＭＴＢＥ中で懸濁し、２時間撹拌した。固形物を濾過し、真空中で乾燥させ、１−［２−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−ピペリジン−４−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６４．４４ｇ；７０．７９％の収率）を得た。
【００３３】
酢酸アンモニウム（１５当量；１．０２ｍｏｌ；７８．６１ｇ）を、１−ブタノール（１５０ｍＬ；１．６４ｍｏｌ）中の１−［２−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−ピペリジン−４−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２９．４ｇ；１．００当量；６７．９９ｍｍｏｌ）の溶液に加え、次いで、トリエチルアミン（１当量；６７．９９ｍｍｏｌ；９．４８ｍＬ）を加えた。当該混合物を、１６０℃で、封管中で３時間撹拌した。ＥｔＯＡｃおよび水を加え、次いで、有機層を、より多くの水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、真空中で濃縮した。粗製物をＭＴＢＥ中で粉末にし、濾過し、減圧下で乾燥し、４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１８．２３ｇ；４４．１０ｍｍｏｌ、６４．８６％の収率）を白色固体として得た。
【００３４】
４０ｍＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１６．０３ｇ；１．００当量；３８．７７ｍｍｏｌ）を、２００ｍＬのＤＭＳＯ中の水酸化カリウム（１．５当量；５８．１６ｍｍｏｌ；３．２６ｇ）の溶液に加えた。５分後、室温でヨウ化メチル（１．１当量；４２．６５ｍｍｏｌ；２．６６ｍＬ）を一度に加えた。室温で２時間撹拌し、次いで、当該混合物を氷水に注いだ。固形物を濾過し、水で洗浄し、減圧下で乾燥した。固形物を熱したヘプタン中で粉末にし、濾過し、減圧下で乾燥し、４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８．７ｇ；５２．４９％の収率）を白色固体として得た。
【００３５】
塩化水素（４．００当量；８１．４１ｍｍｏｌ；２０．３５ｍＬ）を、ジクロロメタン（１０１．７７ｍＬ）中の４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８．７ｇ；１．００当量；２０．３５ｍｍｏｌ）の溶液に、室温で加えた。当該溶液を、室温で、１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗製物をイソプロピルアルコール（１０１．７７ｍＬ）中で溶解した。４−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（１．６５当量；３３．５８ｍｍｏｌ；５．１９ｇ）およびトリエチルアミン（１０当量；２０３．５４ｍｍｏｌ；２８．３７ｍＬ）を加えた。当該混合物を還流で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗製物を水中で一晩粉末にした。固形物を濾過し、熱したアセトニトリル中で粉末にし、濾過し、真空中で乾燥させた。４−｛４−［５−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−３−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（８．４２ｇ；１８．８６ｍｍｏｌ；９２．６６％の収率）を、淡い黄色固体として得た。
【００３６】
塩化水素（１．１当量；１８．５２ｍｍｏｌ；４．６３ｍＬ）を、ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の４−｛４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（７．５ｇ；１．００当量；１６．８４ｍｍｏｌ）の懸濁液に加え、当該混合物を１時間、室温で撹拌した。溶媒を真空中で除去し、粗製物をＭＴＢＥ中で１時間粉末にした。固形物を濾過し、真空中で一晩乾燥させ、４−｛４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−３−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン塩酸塩（７．９９ｇ；１６．５８ｍｍｏｌ；９８．４７％の収率）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１４．０１−１３．９９（ｍ、１Ｈ）、８．５７−８．５４（ｍ、２Ｈ）、８．２６−８．１９（ｍ、３Ｈ）、７．７２−７．６３（ｍ、１Ｈ）、５．２３−５．２０（ｍ、２Ｈ）、３．８９（ｓ、３Ｈ）、３．４１（ｍ、２Ｈ）、２．１５−２．０７（ｍ、３Ｈ）、１．１０（ｓ、２Ｈ）。
【００３７】
（４−｛４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン  ｐ−トルエンスルホネートの調製）
臭化４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェナシル（９３％の純度、ＨＰＬＣによる、１０００ｇ；３．５１ｍｏｌ）およびＴＨＦ（５Ｌ）の溶液を＜５℃まで、氷浴中で冷却した。水（８００ｍＬ）中のアジ化ナトリウム（２３９ｇ；３．６８ｍｏｌ、１．０５当量）の溶液を、１時間かけて、＜５℃で滴下した。＜５℃で、１時間撹拌後、分離し、水層を捨てた。冷たいままで、有機層をゆっくりと３時間かけて、トリフェニルホスフィン（９２０．２ｇ、３．５１ｍｏｌ、１．０当量）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１３３５ｇ、７．０２ｍｏｌ、２．０当量）、およびＴＨＦ（５Ｌ）の溶液に加えた。この添加の間中、温度を＜１５℃に維持し、添加の間に、固形物が沈殿した。
【００３８】
当該反応混合物を、＜２０℃で、２時間撹拌し、次いで固形物を濾過し、ＴＨＦ（３×２Ｌ）で洗浄し、５０℃で、真空下で乾燥させ、１１６７．４ｇ（８５％、出発物質の純度に対して補正すると９２％）の２−アミノ−１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−エタノン  ｐ−トルエンスルホネートを白色の結晶性の固形物として得た。
【００３９】
２−アミノ−１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−エタノン  ｐ−トルエンスルホネート（１１３３ｇ；２．８８ｍｏｌ）、１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸（７９５ｇ；３．４７ｍｏｌ；１．２０当量）、ＴＨＦ（３４５０ｍＬ）、および酢酸エチル（７５００ｍＬ）を混合し、薄い、白色のスラリーを形成した。当該スラリーを、＜５℃まで、氷浴中で冷却し、２−プロパンホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）（５０％  ＥｔＯＡｃ中の溶液）（２３８５ｇ；３．７５ｍｏｌ、１．３当量）を加えた。次いで、Ｎ−メチルモルホリン（７９５ｍＬ；７．２１ｍｏｌ；２．５当量）を、１時間かけて、温度を＜１０℃に維持しながら加えた。得られたスラリーを常温まで温め、２時間撹拌した。
【００４０】
反応物を水の添加によってクエンチした。有機層を分離し、次いで、ＮａＨＣＯ３水溶液、ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機層を、５０℃まで、ロータリーエバポレーター上で温め、ｎ−ヘプタンを加えた。溶媒を、真空下で、最終的なスラリー量がおよそ５Ｌとなるまで蒸留した。当該スラリーを室温まで冷却し、固形物を濾過し、ｎ−ヘプタン（２×１Ｌ）で洗浄し、次いで、真空オーブン中で、５０℃で、一晩乾燥させ、１−［２−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−ピペリジン−４−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１１２４．８ｇ、９０％）を白色固体として得た。
【００４１】
１−［２−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−ピペリジン−４−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１００ｇ、２３１ｍｍｏｌ）、酢酸アンモニウム（１７８．３ｇ；２．３１ｍｏｌ；１０当量）、およびメタノール（１０００ｍＬ）を混合した。この変換のために使用された反応器は、コイル状の１／１６”（約１．５８８ｍｍ）Ｉ．Ｄ．ステンレス鋼チューブ（オーブン中のチューブの総内部容積は５４１ｍｏｌである）である。オーブン中で反応器を１４０℃まで加熱した。このチューブ中の背圧を、２５０ｐｓｉｇ（約１７１８ｋＰａ）に、レギュレーターによって制御し、当該溶液を、その通常の沸点を超えて過熱させた。上記の調製された溶液を、加熱されたチューブを通じて、圧力下で、６．０１ｍＬ／分で、連続的にポンプで送り込んだ（当該加熱されたチューブ中での総滞留時間は９０分間である）。溶液がオーブンから出るにつれて、ｔｕｂｅ−ｉｎ−ｔｕｂｅ式の熱交換器中で当該溶液を２０℃まで冷却した。一旦、全溶液が当該反応器を通り抜けたら（総処理時間は８時間である）、得られたオレンジ色の溶液を、真空下で、３０℃で、６００ｍＬの総体積まで濃縮した。アセトニトリル（２００ｍＬ）を加え、当該溶液を５０℃まで加熱した。種晶を入れて、水（７００ｍＬ）を２時間かけて滴下し、生成物を結晶化させた。得られたスラリーを２０℃まで冷却し、固形物を濾過し、次いで、水中の２０％  ＭｅＯＨ（２×２００ｍＬ）で洗浄した。得られた固形物を、真空下で、５０℃で乾燥させた。当該固形物をアセトニトリル（２００ｍＬ）中で、５０℃で再度スラリーにした。当該スラリーを常温まで冷却し、固形物を濾過し、アセトニトリル（１００ｍＬ）で洗浄し、４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５４．４３ｇ；１３２ｍｍｏｌ；５７％）を、オフホワイトの固体として得た。
【００４２】
４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８０．０２ｇ；１８３．６９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（１０６０ｍＬ）中に溶解させた。ＫＯＨ（１８．４７ｇ；２７９．８２ｍｍｏｌ；１．５当量）を一度に加えた。ヨウ化メチル（２７．７４ｇ；１９３．４８ｍｍｏｌ；１．０５当量）を、３０分間かけて、２５℃で加えた。当該溶液を、２５℃で１時間撹拌した。４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの種晶（０．１７ｇ）および水（８０ｍＬ）の混合物を５分間かけて当該溶液に加えた。得られた薄いスラリーを、２５℃で３０分間撹拌した。さらなる水（２４０．７３ｍＬ）を、３０分間かけて２５℃で加えた。固形物を濾過し、水中の２０％  ＤＭＳＯ（２×１２０ｍＬ）、次いで水（１２０ｍＬ）で洗浄した。固形物を、真空下で、６０℃で乾燥させた。得られた乾燥固形物を、エタノール（４８０ｍＬ）中で、５０℃で溶解させた。水（２４０ｍＬ）を５分間かけて加えた。次いで、４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル種（０．０３８ｇ）およびより多くの水（２４０ｍＬ）を３０分間かけて加えた。得られたスラリーを２５℃まで２時間かけて冷却した。固形物を濾過し、ケーキを水中の２０％  ＥｔＯＨで洗浄した。当該固形物を真空下で、６０℃で乾燥させ、４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７２．３６ｇ、９２％）を、白色固体として得た。
【００４３】
無水ＨＣｌ溶液を、塩化アセチル（１９３．１４ｍＬ；２．７１ｍｏｌ；４．００当量）をメタノール（１１６０ｍＬ）に、４５分間かけて＜５℃でゆっくり添加することによって調製した。得られた溶液を、メタノール（２３２０ｍＬ）中の４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２９０ｇ；６７８．４６ｍｍｏｌ）の溶液を含む分離フラスコに、９０分間かけて２０℃で加えた。当該反応混合物を、２０℃で一晩撹拌した。当該反応混合物を、真空下で、３０℃で濃縮した。ＤＭＳＯ（１０８０ｍＬ；１５．２０ｍｏｌ；１．０８Ｌ；１．１９ｋｇ）を加え、蒸留を、２０ｍｍＨｇの圧力で、内部温度が５０℃に達するまで続けた。ＤＭＳＯを総体積が２０３０ｍＬとなるまで加えた。次いで、トリエチルアミン（４７３ｍＬ；３．３９ｍｏｌ；５当量）を、滴下ロートを介して、３０分間かけて加えた。固形物４−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（１１０．２９ｇ；７１３．５８ｍｍｏｌ；１．０５当量）を、等分して、等間隔で、３０分間かけて入れた。得られたスラリーを２０℃で一晩撹拌した。当該スラリーを８０℃まで加熱した。水（２２９ｍＬ）を加え、透明な溶液を得た。反応物に種晶を入れ、より多くの水（１２７３ｍＬ）を４時間かけてゆっくりと加え、生成物を完全に結晶化させた。当該スラリーを５０℃まで冷却し、固形物を濾過した。ケーキを、ＤＭＳＯ中の３０％  水（２×２９０ｍＬ）、次いで水（２９０ｍＬ）で洗浄した。固形物を真空下で、６０℃で乾燥させ、４−｛４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（３０１ｇ、９９％）を、オフホワイトの固体として得た。
【００４４】
４−｛４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（２０ｇ、４４．９ｍｍｏｌ）を、２０：１  Ｈ２Ｏ：アセトン混合物（３６０ｍＬ）中で溶解させた。２０：１  Ｈ２Ｏ：アセトン混合物（４０ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１０．２５ｇ；５３．９ｍｍｏｌ；１．２当量）の溶液を、反応物に、２０分間かけて２０℃で加えた。当該反応混合物を５５℃まで加熱し、１時間維持し、次いで、２５℃まで、１時間かけて冷却した。固形物を濾過し、ケーキを水（４０ｍＬ）で洗浄した。真空下で、５０℃で乾燥させ、４−｛４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン  ｐ−トルエンスルホネート（２３．９ｇ；８６％）を、白色固体として得た。
【００４５】
（結晶性４−｛４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン  ｐ−トルエンスルホネートの調製）
オーバーヘッド撹拌機を有する１Ｌの丸底フラスコに、６０．１２ｇの４−｛４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（最終的な塩形成工程を経ることなく、上記の調製のいずれかに従って調製した）、次いで、２５０ｍＬの５％  ＭｅＯＨ水溶液を入れた。得られたスラリーを撹拌し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２６．８８ｇ）を加え、次いで、残りの５０ｍＬの５％  ＭｅＯＨ水溶液を用いてリンスした。得られたスラリーを撹拌し、結晶を５℃まで冷却した。５℃で１時間後、撹拌を止め、スラリーをブフナー漏斗上で濾過した。フラスコを、７５ｍＬの冷やした５％  ＭｅＯＨ水溶液でリンスし、このリンス液を、濾過ケーキを洗浄するために使用した。固形物を秤量皿に移し、５０℃で、真空中で、一日中、ゆっくりと空気を流しながら乾燥させた。最終的な重量は７１．４４ｇだった。
【００４６】
粉末Ｘ線回折による分析を、ＣｕＫａ線源（λ＝１．５４０５６Å）を備えるＤ４  Ｅｎｄｅａｖｅｒ回折計（４０ｋＶおよび５０ｍＡで操作した）によって行った。試料を、４°〜４０°（２θ）でスキャンした（ステップサイズ（２θ）は０．００９であり、スキャンレートはステップあたり≧１．５秒である）。
【００４７】
【表１】
2012508240.tif 000003
【００４８】
（Ｉｎ  Ｖｉｖｏでの有効性の特定）
０．２ｍＬのマトリゲル中のＡ５４９ヒト非小細胞肺癌細胞（５×１０６）を、メスのＣ．Ｂ−１７（Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  ＳＣＩＤ）モデル  ＃ＣＢ１７ＳＣ−Ｍ  マウスの側腹部に、皮下移植した。移植からおよそ１週間後、腫瘍サイズがおよそ１００ｍｇになったときに、マウスを１０群にランダム化し、２．５ｍｇ／ｋｇの４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（ｐ７０  Ｓ６キナーゼ阻害剤；Ｈ２Ｏ中の３５％ＰＥＧ３００／１０％ＨＰＢＣＤ／１０％ＰＳ８０中に処方した；阻害剤の濃度は０．３１ｍｇ／ｍＬである）、または２０ｍｇ／ｋｇのエルロチニブ塩酸塩（ＮａＣＭＣ  Ｔｗｅｅｎ  ８０中に処方した；エルロチニブ塩酸塩の濃度は２．５ｍｇ／ｍＬである）、または併用して（２．５ｍｇ／ｋｇのｐ７０  Ｓ６キナーゼ阻害剤および２０ｍｇ／ｋｇのエルロチニブ塩酸塩）１日１回経口投与した。媒体群は、２つの媒体（ＮａＣＭＣ  Ｔｗｅｅｎ  ８０、およびＨ２Ｏ中の３５％ＰＥＧ３００／１０％ＨＰＢＣＤ／１０％ＰＳ８）を併用して与えた（各０．１ｍＬ）。治療を３８日間続けた。腫瘍体積を標準的な技術を使用して、１週間に２度測定して記録した。腫瘍サイズおよび体重を記録し、隔週で分析した。腫瘍体積を、式：ｖ＝ｌ×ｗ２×０．５３６（式中、ｌ＝測定された直径のうち大きいもの、およびｗ＝垂直径のうち小さいもの）を使用することによって評価した。当該分析においては、ＳＡＳ  ソフトウェア  バージョン  ８．２（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ社、ノースカロライナ州、キャリー）を、空間的検出共分散構造（ｓｐａｔｉａｌ  ｐｏｗｅｒ  ｃｏｖａｒｉａｎｃｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）を有する反復測定ＡＮＯＶＡ  モデルを使用して、対数の腫瘍体積（ｌｏｇ  ｔｕｍｏｒ  ｖｏｌｕｍｅ）のデータを分析するために使用した。測定した各時点について、治療群を媒体対照群と比較した。腫瘍体積は、各群についての反復測定ＡＮＯＶＡから特定された各治療群についての平均値±標準誤差として与えられる（ＳＡＳ  ｆｏｒ  Ｍｉｘｅｄ  Ｍｏｄｅｌｓ、第２版、Ｌｉｔｔｅｌｌら、２００６、ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ社、ノースカロライナ州、キャリー）。
【００４９】
（化合物の交互作用の統計解析）
各動物についての、時間データに対する腫瘍体積を、台形公式を使用して、曲線下面積（ＡＵＣ）を算出するために使用した。これらのＡＵＣは、群にわたって分散を同等化するために対数変換を使用して、二元配置ＡＮＯＶＡによって分析した。２つの因子は、４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンの用量、および、エルロチニブ塩酸塩の用量である。因子間の交互作用効果を、相加性からの逸脱について検定するために使用した（Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ、Ｒ．  Ｌｙｍａｎ  Ｏｔｔ、１９９３、Ｄｕｘｂｕｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、カリフォルニア州、ベルモント）。
【００５０】
この研究の結果を下記の表中に示す。ｎ（マウスの数）は、全てのデータについて９である。ただし、データが８である、媒体群における１７日目以降からのデータ、およびエルロチニブ塩酸塩群における３８日目以降からのデータは除く。上枠に、有意性とあるカラム中のデータは、媒体群に対する相違が統計的に有意であるかどうかを示す：ＮＳ＝有意でない（ｐ＞０．０５）；＊＝０．０１＜ｐ≦０．０５；＊＊＝０．００１＜ｐ≦０．０１；＊＊＊＝ｐ≦０．００１。
【００５１】
【表２】
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【００５２】
併用についての対数の腫瘍体積のＡＵＣ（３．５８）は、媒体（３．９１）とは統計的に異なる（ｐ＜０．０００８）。一方、ｐ７０  Ｓ６キナーゼ阻害剤のみ（３．８５）およびエルロチニブ塩酸塩のみ（３．７６）による治療群についての対数の腫瘍体積のＡＵＣ値は、媒体とは有意に異ならない。ｐ７０  Ｓ６キナーゼ阻害剤のみ、およびエルロチニブ塩酸塩のみによる治療群はまた、対数の腫瘍体積のＡＵＣ値の対比較において、併用群とは有意に異なる。
【００５３】
ＥＧＦＲ阻害剤エルロチニブ塩酸塩と併用した場合、４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンは、Ａ５４９非小細胞肺癌の増殖の阻害能を示す。この研究において、４−［４−［４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンは、２．５ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ×３５で投与し、エルロチニブ塩酸塩は２０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ×３５で投与した。これらの用量は、各薬剤について、最適以下の用量であり、その併用は、ｐ７０  Ｓ６キナーゼ阻害剤のみ、およびエルロチニブ塩酸塩のみの群と比較して、増強された有効性を示した。当該併用治療は、明白な毒性は全くもたらさなかった。
【００５４】
これらの結果は、上流および下流のＰＩ３Ｋ経路の調節が、より大きな有効性をもたらすことを示す。
【国際調査報告】
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