(57)【要約】第一の抗原は、後の望ましい親和性成熟抗体の産生に適した前駆Ｂ細胞を選択するために被験体に投与され、その後、第二の抗原は、親和性成熟抗体を産生するＢ細胞の増殖を刺激するために投与される。２つの異なる抗原が投与される（通例連続して、しかしいくつかの実施形態では同時に）免疫処置プロトコルが使用され、ここで、第一の抗原は、効率的な生殖系列抗体応答を誘発し、第二の抗原は、効率的かつ所望の親和性成熟抗体応答を誘発する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体において親和性成熟抗体の産生を誘発するための方法であって、該方法は、（ｉ）該被験体に、該親和性成熟抗体よりも強い親和性で生殖系列抗体に結合する第一の抗原を投与する工程、およびその後の、（ｉｉ）該被験体に、該生殖系列抗体よりも強い親和性で該親和性成熟抗体に結合する第二の抗原を投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、ここで、前記生殖系列抗体および前記親和性成熟抗体は両方とも前記第一の抗原に結合するが、該生殖系列抗体は、前記第二の抗原よりも緊密に該第一の抗原に結合する、方法。
【請求項３】
前述の請求項のいずれかに記載の方法であって、ここで、前記生殖系列抗体および前記親和性成熟抗体は両方とも前記第二の抗原に結合するが、該親和性成熟抗体は、前記第一の抗原よりも緊密に該第二の抗原に結合する、方法。
【請求項４】
前述の請求項のいずれかに記載の方法であって、前記第一の抗原は前記親和性成熟抗体に対して顕著な親和性を有さず、および／または、前記第二の抗原は前記生殖系列抗体対して顕著な親和性を有さない、方法。
【請求項５】
前述の請求項のいずれかに記載の方法であって、ここで、前記生殖系列抗体および前記親和性成熟抗体は両方とも、前記第一の抗原における同じエピトープに結合する、方法。
【請求項６】
前述の請求項のいずれかに記載の方法であって、ここで、前記生殖系列抗体および前記親和性成熟抗体は両方とも、前記第二の抗原における同じエピトープに結合する、方法。
【請求項７】
前述の請求項のいずれかに記載の方法であって、ここで、前記被験体はヒトなどの哺乳動物である、方法。
【請求項８】
前述の請求項のいずれかに記載の方法であって、ここで、前記被験体は前記第一の抗原と前記第二の抗原との間に第三の抗原を受容する、方法。
【請求項９】
前述の請求項のいずれかに記載の方法であって、ここで、前記生殖系列抗体は、ＶＨ１−６９重鎖を有する、方法。
【請求項１０】
目的の抗原に結合する目的の親和性成熟抗体を誘発する免疫処置スケジュールを設計するための方法であって、該方法は、（ｉ）該親和性成熟抗体の生殖系列起源抗体を同定する工程、および（ｉｉ）該親和性成熟抗体よりも該生殖系列起源抗体に対して高い親和性を有する抗原を同定する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００８年１０月２１日に出願された米国仮出願第６１／１９６，９６３号の優先権の利益を主張し、上記米国仮出願の全容は、参照によって本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、被験体を免疫状態にするために２つの異なる抗原が、逐次的にまたは連続的にのいずれかで使用される免疫処置プロトコルに関する。１つの抗原は生殖系列抗体の増殖を刺激し、１つまたは複数のさらなる抗原は、親和性成熟に向けられる。
【背景技術】
【０００３】
脊椎動物の免疫系において成熟（高親和性）抗体を産生することは、２つのプロセスを伴なう：（ａ）ＶＤＪ組換えを受けた生殖系列抗体の初期クローン増殖、次いで、（ｂ）哺乳動物における体細胞超変異のプロセスを含む、上記生殖系列抗体の親和性成熟。初期抗体応答において、投与された抗原は、生殖系列抗体発現Ｂ細胞の限られたセットの増殖を刺激する。これらの生殖系列抗体は、必ずしも投与された抗原に対して高親和性を有するのではなく、むしろ、単に、抗原上のエピトープへのほどほどの親和性を有するように生じるものである。その後、親和性成熟が起こり、これは、典型的には、生殖系列開始点よりも高い親和性を有するいくつかの抗体の産生をもたらす、生殖系列抗体をコードする遺伝子の体細胞変異を含む。より高い親和性で限られた量の抗原に結合し得る変異抗体を有するＢ細胞は、より効率的に刺激されて増殖する。
【０００４】
この全体のスキームにおいて、最も高い親和性の親和性成熟抗体は、最も高い親和性の生殖系列抗体に由来するはずであるということは、必ずしも当てはまらない。最も高い親和性の抗体は、その代わりに、当初増殖したＢ細胞によって示されるものの中で、顕著ではなかった生殖系列抗体から生じ得、そして抗原は、最も高い親和性の抗体を最後には提供するＢ細胞を非効率的に刺激し得る。さらに、エピトープはプロセスの開始時には正しいＢ細胞を刺激できないので、エピトープは有用な成熟抗体を時に刺激しそこない得る。全体のプロセスにおける初期イベントの過度の効果はまた、免疫優勢の現象を説明し得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
したがって、本発明は、後の望ましい親和性成熟抗体の産生に適した前駆Ｂ細胞を選択するために第一の抗原を使用し、その後、親和性成熟抗体を産生するＢ細胞の増殖を刺激するために第二の抗原を使用する。親和性成熟抗体は、前駆Ｂ細胞によって産生される生殖系列抗体によって示される親和性よりも所望の抗原に対してより強い親和性を有する。したがって、２つの（または、いくつかの実施形態では３つ以上の）異なる抗原が、連続して（または、いくつかの実施形態では組み合わせて）投与される免疫処置プロトコルが使用され、ここで、第一の抗原は、効率的な生殖系列抗体応答を誘発し、第二の抗原は、抗体応答の効率的かつ所望の親和性成熟を誘発する。最終的な結果は、所望の抗原に対して高親和性を有する抗体である。理想的には、本発明は、第二の抗原が第一の抗原の事前投与なしで投与された場合に、高い力価では産生されないか、迅速には産生されないか、または全く産生されないであろう親和性成熟抗体を提供する。
【０００６】
したがって、本発明は、被験体において親和性成熟抗体の産生を誘発するための方法を提供し、この方法は、（ｉ）被験体に、親和性成熟抗体よりも強い親和性で生殖系列抗体に結合する第一の抗原を投与する工程、およびその後の、（ｉｉ）被験体に、生殖系列抗体よりも強い親和性で親和性成熟抗体に結合する第二の抗原を投与する工程を含む。
【０００７】
生殖系列抗体および親和性成熟抗体は両方とも、両方の抗原に、しかし異なる親和性で結合し得る。したがって、生殖系列抗体は、第二の抗原よりも緊密に第一の抗原に結合し得、一方、親和性成熟抗体は、第一の抗原よりも緊密に第二の抗原に結合し得る。他の実施形態において、生殖系列抗体は、第一の抗原にのみ結合し得（すなわち、検出可能な親和性で結合し得）、親和性成熟抗体は、第二の抗原にのみ結合し得る（すなわち、検出可能な親和性で結合し得る）。いくつかの実施形態では、生殖系列抗体および親和性成熟抗体は両方とも共通のエピトープに、しかし異なる親和性で結合し得る。
【０００８】
抗体／抗原結合親和性は慣習的な分析技術を用いて、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅＴＭ器具において具現化されている表面プラズモン共鳴技術を用いて、製造業者の使用説明書にしたがって操作することで、決定され得る。放射性同位元素で標識した標的抗原を用いるラジオイムノアッセイおよび酵素結合イムノソルベントアッセイは、結合親和性を測定し得る他の方法である。本発明は、所望の標的抗原に対して異なる親和性を有する生殖系列抗体および親和性成熟抗体の誘発に関しているため、親和性を評価するために使用する正確な方法は、親和性における差異を同定するその能力よりも重要でない。生殖系列および親和性成熟抗体は、任意の対照抗原、例えば、宿主（典型的にはヒト）タンパク質よりも第一のおよび第二の抗原の一方または両方に緊密な結合親和性を有する。
【０００９】
本発明はまた、被験体において親和性成熟抗体の産生を誘発するための方法を提供し、ここで、その被験体には、あらかじめ、親和性成熟抗体よりも強い親和性で生殖系列抗体に結合する第一の抗原が与えられており、この方法は、その被験体に、生殖系列抗体よりも強い親和性で親和性成熟抗体に結合する第二の抗原を投与する工程を含む。
【００１０】
本発明はまた、被験体において親和性成熟抗体の産生を誘発するためのキットを提供し、このキットは、第一の成分および第二の成分を含み、ここで、その第一の成分は、親和性成熟抗体よりも強い親和性で生殖系列抗体に結合する抗原を含み、その第二の成分は、生殖系列抗体よりも強い親和性で親和性成熟抗体に結合する抗原を含む。２つのキット成分は、キットにおいて互いとは別個に保持され、混合されない。
【００１１】
本発明はまた、被験体において親和性成熟抗体の産生を誘発するための方法で使用するための第一の抗原を提供し、この方法は、（ｉ）その被験体に、親和性成熟抗体よりも強い親和性で生殖系列抗体に結合する第一の抗原を投与する工程、およびその後の、（ｉｉ）その被験体に、生殖系列抗体よりも強い親和性で親和性成熟抗体に結合する第二の抗原を投与する工程を含む。
【００１２】
本発明はまた、被験体において親和性成熟抗体の産生を誘発するための方法で使用するための第二の抗原を提供し、この方法は、（ｉ）その被験体に、親和性成熟抗体よりも強い親和性で生殖系列抗体に結合する第一の抗原を投与する工程、およびその後の、（ｉｉ）その被験体に、生殖系列抗体よりも強い親和性で親和性成熟抗体に結合する第二の抗原を投与する工程を含む。
【００１３】
本発明はまた、被験体において親和性成熟抗体の産生を誘発するための方法で使用するための第二の抗原を提供し、ここで、その被験体には、あらかじめ、親和性成熟抗体よりも強い親和性で生殖系列抗体に結合する第一の抗原が与えられており、この方法は、その被験体に、生殖系列抗体よりも強い親和性で親和性成熟抗体に結合する第二の抗原を投与する工程を含む。
【００１４】
本発明はまた、被験体において親和性成熟抗体の産生を誘発するための医薬の製造における第一の抗原の使用を提供し、ここで、第一の抗原は親和性成熟抗体よりも強い親和性で生殖系列抗体に結合し、その被験体には、後で、生殖系列抗体よりも強い親和性で親和性成熟抗体に結合する第二の抗原を与える。
【００１５】
本発明はまた、被験体において親和性成熟抗体の産生を誘発するための医薬の製造における第二の抗原の使用を提供し、ここで、その医薬は、あらかじめ、親和性成熟抗体よりも強い親和性で生殖系列抗体に結合する第一の抗原が与えられた被験体に投与される。
【００１６】
いくつかの実施形態において、第一の抗原および第二の抗原は、同時に別々の投与によって、または連続した投与によって、同時に投与される。このアプローチは、全ての状況で上手くいくわけではないかもしれないが、第二の抗原の存在が、第一の抗原によるＢ細胞の所望のサブセットの刺激を妨げない状態においては適している。したがって、第一の抗原は、効率的な生殖系列抗体応答をなお誘発し得、生殖系列抗体応答は第二の抗原の存在のために、例えば体細胞超変異によって所望の親和性成熟抗体応答へと成熟する。任意の特定の状態に対して、第一のおよび第二の抗原が、このような方法で機能し得るか、または第一のおよび第二の抗原が別個の時間に連続的に投与されることを必要とするか否かを決定することは簡単である。
【００１７】
初期−追加抗原免疫処置スケジュールの使用は周知である。例えば、小児は典型的に、１５月齢までに一連の初期免疫処置を受け（例えば、ＤＴＰａワクチン）、その後、４〜６年齢の間、さらにそれを超えた年齢で追加抗原投与を受ける（例えば、Ｔｄａｐワクチン）。初期および追加抗原ワクチンは、それらの正確な組成において異なり得るが（例えば、抗原比は、ＤＴＰａおよびＴｄａｐワクチンにおいて異なる）、２つのワクチンにおいて使用される抗原は、典型的には同じである。対照的に、本発明は、２つの異なる抗原の使用を含み、初期段階での抗原は、生殖系列抗体産生を刺激し、後の段階での抗原は、親和性成熟抗体産生を刺激する。
【００１８】
適切な第一のおよび第二の抗原を選択するために、本発明は典型的に、反対に使用され、すなわち、目的の抗原を認識する目的の親和性成熟抗体で開始する。成熟抗体の起源を、関連生殖系列抗体まで遡り、その後、生殖系列抗体の産生を効率的に刺激する第一の抗原を選択する。その後、目的の抗原が、この生殖系列抗体の成熟を刺激するために投与され得る。本発明は、この反対のプロセスを必要としないが、これは事が進行する通例の方法である。したがって、本発明はまた、目的の抗原に結合する目的の親和性成熟抗体を誘発するための免疫処置スケジュールを設計するための方法を提供し、この方法は、（ｉ）親和性成熟抗体の生殖系列起源抗体を同定する工程、および（ｉｉ）親和性成熟抗体よりも生殖系列起源抗体に高い親和性を有する抗原を同定する工程を含む。工程（ｉｉ）で同定された抗原は第一の抗原として使用され得、目的の抗原は第二の抗原として使用され得る。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
例えば、高死亡率を伴なう壊滅的な疾患エピソード後（例えば、２００３年のＳＡＲＳ、またはヒトにおけるトリインフルエンザ大発生）、感染から生き残った者は、防御抗体応答を備えることができたことを原因として、しばしば、生き残っている。そのような患者由来の血清は、防御抗体を見つけ出すために分析され得、そのような抗体は、治療目的のために産生され得る。したがって、参考文献１〜３の著者は、ＳＡＲＳまたは高病原性トリインフルエンザから生き残ったヒト免疫ドナーの記憶レパートリーを調べることができ、その後、天然の感染過程において選択された中和抗体を単離できた。そのような抗体から開始して、本発明は、それらの前駆生殖系列抗体へと遡り得、そして、免疫応答を防御抗体に向けるために、それらの生殖系列抗体の増殖を優先的にもたらす抗原を選択し得る方法を提供する。
【００２０】
例えば、多くの広範な中和抗体（インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、エボラウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスなどに対する）は、同じＶＨ生殖系列抗体、すなわち１〜６９（５１ｐ１対立遺伝子を含む）に由来することが見出されている。これらの抗体は、一般に成体のレパートリーから欠失させられており、おそらくこれは、これらの抗体が自己反応性の傾向の有するからであり、このことは、なぜウイルスはその影響を回避するように進化しなかったのを説明し得る。免疫系を、増幅されるべきこの生殖系列抗体に由来する抗体の産生に偏らせる抗原が選択され得、これにより、中和抗体を得る可能性が増加する。
【００２１】
目的の抗体は、標準的な分子生物学の技術によって配列決定され得る（アミノ酸の配列決定によって、または抗体を発現するＢ細胞の抗体コード遺伝子の配列決定によってのいずれかで）。または、目的の抗体の配列は、抗体の高解像度構造から推定され得る。この配列情報は、関連種からの生殖系列配列と容易に比較され得、抗体の起源生殖系列の基礎（体細胞変異が起こる前）を決定し得る。抗体生殖系列配列は、ゲノム配列決定から決定することができ、そしてそれは公開されたデータベースにおいて入手できる。例えば、参考文献４は、ＩＭＧＴ／ＧＥＮＥ−ＤＢ（ヒトおよびマウスの抗体遺伝子配列を含む網羅的なデータベース）を紹介した。
【００２２】
抗体の起源生殖系列の配列が確立したら、その後、その生殖系列配列を有するＢ細胞の増殖を刺激する抗原が選択される。この選択を行うために種々の方法が用いられ得る。例えば、ペプチドライブラリーは、関連Ｂ細胞のクローンに対してスクリーニングされ得る。このスクリーニングからの適切なペプチドはまた、所望の生殖系列配列を有するＢ細胞の増殖を刺激するための所望の能力を有するペプチドを残しながら、望ましくないＢ細胞系統の増殖を刺激するものを除外するためにスクリーニングされ得る。これらのアッセイにおいてＢ細胞を使用する代わりに、精製抗体を使用することが可能である（例えば、組換え抗体）。しかし、最終的に選択したペプチドの活性は、Ｂ細胞に対して確認され得る。
【００２３】
第一の抗原を選択する別の方法は、ペプチドライブラリー（例えば、ファージディスプレーライブラリー）を使用して、生殖系列抗体に対してパニング（ｐａｎ）をすることである。
【００２４】
第一の抗原を選択する別の方法は、目的の抗体によって認識される病原体因子の誘導体を使用することである。例えば、参考文献２および３の著者は、トリインフルエンザウイルスのＨ５株の赤血球凝集素抗原を認識する患者抗体を選択した。この赤血球凝集素抗原は、ランダム変異誘発に供され得、そして、生殖系列Ｂ細胞の増殖を刺激するための野生型および変異誘発された赤血球凝集素の相対的能力が、アッセイされ得る。分子的進化はまた、前駆Ｂ細胞を優先的に刺激できる改変赤血球凝集素を生み出すために使用され得る。もちろん、関連病原体においてどの抗原が目的の抗体によって認識されるかを決定することはありふれたことであり、それによって、変異誘発、進化などの開始点が提供される。
【００２５】
第一の抗原を選択する別の方法は、抗イディオタイプアプローチを使用することである。前駆Ｂ細胞によって産生される生殖系列抗体は、適切な宿主を免疫状態にするために使用され得、その後、抗イディオタイプ抗体が選択され得る。このスクリーニングからの抗Ｉｄ抗体はまた、所望の生殖系列抗体を産生するＢ細胞を刺激する抗原として作用するための所望の能力を有する抗Ｉｄ抗体を残しながら、望ましくないＢ細胞系統の増殖を刺激するものを除外するためにスクリーニングされ得る。
【００２６】
これらの方法はいずれも、生殖系列抗体をコードしているＢ細胞（これは、親和性成熟による目的の抗体（すなわち、親和性成熟抗体）の提供のために増殖し得る）を刺激する第一の抗原を同定するために使用できる。被験体へのそのような第一の抗原の投与は、これらのＢ細胞への優先的な刺激をもたらし、その後、Ｂ細胞は親和性成熟プロセスに入り、（哺乳動物において）体細胞超変異を経験する。これらのＢ細胞の成熟を高親和性抗体（例えば、目的の本来の抗体）を産生する方向に向けるために、第二の抗原が被験体に投与される。第二の抗原は、第一の抗原とは異なり、そして典型的には、目的の抗体によって認識される野生型抗原である。しかし、第二の抗原が関連親和性成熟を促進する限りにおいては、必ずしも野生型抗原を使用する必要はない。例えば、野生型抗原のフラグメントまたは誘導体が使用され得、上述のように、同じく抗Ｉｄ抗体が使用され得る。
【００２７】
第一の抗原および第二の抗原を設計できるさらなる方法は、標的抗原と生殖系列抗体および親和性成熟抗体との間の複合体の構造を分析し、その後、この分析の結果を、適切な第一のおよび第二の抗原の構造ベースの設計において使用することである。
【００２８】
第一の抗原および第二の抗原は、任意の適切な分子であり得、例えば、第一の抗原および第二の抗原は、ポリペプチド、糖類、脂質またはその組み合わせを含み得る。典型的には、第一の抗原および第二の抗原は両方とも、同じ化学クラスである（例えば、両方ともポリペプチドであるか、両方とも糖類であるなど）。しかし、これは必ずしも必要なこととは限らない。いくつかの実施形態では、例えば、第一のおよび第二の抗原は構造的または化学的類似性を少しも有さず、しかし第一の抗原および第二の抗原は、上述のような機能を果たす能力を有する（例えば、第一の分子は、有用な前駆Ｂ細胞を適切に刺激する（ａｇｏｎｉｚｅ）小有機分子（例えば、分子量＜１０００Ｄａ）であり得、一方、第二の抗原はタンパク質である）。
【００２９】
第一の抗原および第二の抗原を受容する被験体は、脊椎動物であり、そして魚類、両生類、爬虫類、鳥類または哺乳類であり得る。そのような脊椎動物の全ては、親和性成熟（これは、哺乳類における体細胞超変異、鳥類における遺伝子変換などを含む）を経験する抗体応答を有する。しかし目的の主たる範囲は哺乳動物であり、特にヒトである。しかし、ヒトの他にも、本発明はまた、ヒトから家畜動物または商業上重要な動物に伝染し得る疾患のレザバーとして機能し得る、家畜動物（例えば、ネコまたはイヌ）、他の商業上重要な動物（例えば、ウシ、家禽、ニワトリ、ウマ、ブタ、魚類）、または野生動物（例えば、鳥類（ｆｏｗｌ）、ガチョウ、アヒル、ニワトリ（ｃｈｉｃｋｅｎ）、キツネ、コウモリ）に有用である。本発明の方法および使用は、そのような被験体において防御免疫を提供するために有用である。
【００３０】
抗原は、直接投与され得る。直接的送達は、非経口的注入で（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内または組織の間質腔へ）、または粘膜性投与で、例えば、直腸投与、経口投与（例えば、錠剤、スプレー）、膣投与、局所投与、経皮投与（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）もしくは経皮投与（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、鼻内投与、眼内投与、耳内投与、肺投与または他の粘膜性投与で達成され得る。または、抗原を、宿主組織において目的の抗原の産生を指示するベクターまたは核酸の送達によって宿主において発現させ得る。
【００３１】
被験体は、第一の抗原の単一用量または複数用量を受容し得る。同様に、被験体は、第二の抗原の単一用量または複数用量を受容し得る。典型的に被験体には、第二の抗原の第一の用量を投与した後に、第一の抗原のさらなる用量を与えない。複数用量スケジュールにおいて、種々の用量を、同じ経路で与えてもよいし、または異なる経路で与えてもよい（例えば、初期は非経口で追加抗原は粘膜性、初期は粘膜性で追加抗原は非経口など）。抗原の複数用量は典型的に、少なくとも１週間（例えば、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約８週間、約１０週間、約１２週間、約１６週間など）離して投与される。
【００３２】
本発明は、被験体を、病原体（細菌、ウイルス、寄生生物および真菌を含む）に対して免疫状態にするため、および疾患から保護するために使用され得る。種々のそのような病原体および疾患は、本発明に適している。したがって本発明は、以下を含む（ただしこれらに限定されない）病原体に対して使用され得る：Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃ．ｔｅｔａｎｉ、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、ポリオウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅＢ型、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、風疹ウイルス、ロタウイルス、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒト免疫欠損ウイルス、ＲＳウイルス、ライノウイルス、パラインフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ノロウイルス、マラリア（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ種）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ株を含む）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種（「ＣｏＮＳ」、Ｓ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓおよびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓを含む）、Ｃａｎｄｉｄａ株（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓなど）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、および腸外病原性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（「ＥｘＰＥＣ」）。
【００３３】
第一の抗原または第二の抗原を含む免疫原性組成物は、薬学的に受容可能である。したがって、免疫原性組成物は通例、抗原に加えて成分を含み、例えば、典型的には、１つまたは複数の薬学的キャリアおよび／または賦形剤を含む。そのような成分の詳細な考察は参考文献５において入手できる。
【００３４】
組成物は一般に、水性形態で投与される。しかし、投与前は、組成物は非水性形態であり得る。例えば、いくつかのワクチンは、水性形態で製造され、その後、同様に水性形態で充填され、配送され、投与されるが、他のワクチンは、製造中に凍結乾燥され、そして使用のために水性形態に再構成される。
【００３５】
組成物は、ワクチンアジュバントなどの１つまたは複数の免疫調節剤を含み得る。そのようなアジュバントとしては、不溶性金属塩（例えば、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムのアジュバント）、水中油型エマルジョン（例えば、サブミクロン油小滴を伴なう水中スクアレン型エマルジョン、例えば、ＭＦ５９またはＡＳ０３）、サポニン、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ＡＤＰリボシル化毒素およびその無毒化誘導体、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル、ホスファゼン、ムラミルペプチド、イミダゾキノロン、置換尿素、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート、チオセミカルバゾン、Ｔｒｙｐｔａｎｔｈｒｉｎｓ、Ｉｓａｔｏｒａｂｉｎｅ、Ｌｏｘｏｒｉｂｉｎｅ、ポリオキシドニウムポリマー、Ｎ−酸化ポリエチレンピペラジン、メチルイノシン５’−モノホスフェート、ポリヒドロキシル化ピロリジジン、α−グリコシルセラミド、γインスリンが挙げられるが、これらに限定されない。アジュバントの組み合わせもまた使用され得る。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態において、免疫調節剤を、第一のおよび第二の抗原の所望の効果を強化するために使用し得る。クローン増殖は、クラススイッチおよび体細胞超変異を引き起こすようなものからの様々なシグナルによって刺激され、そのため、免疫調節剤は、適切なシグナルを提供または強化するために第一のおよび第二の抗原と共に投与され得る。
【００３７】
第一の抗原の後に第二の抗原を使用するいくつかの実施形態において、本発明は、１つまたは複数の中間抗原を使用し得る。第一の抗原は、所望の生殖系列前駆Ｂ細胞を刺激するために使用され、第二の抗原は、所望の変異した体細胞を促進するために使用されるが、この２つの工程の間において、抗体の進化を、中間抗原（例えば、各工程において抗原が第一の抗原に類似しなくなっていき第二の抗原に類似していくような一連の抗原）の投与によって指示し得る。
【００３８】
本発明の実施は、異なる記述がない限り、化学、生化学、分子生物学、構造生物学、免疫学および薬理学の慣習的な方法を使用し、これらは、当該分野の技術範囲内である。そのような技術は、文献において十分に説明されている。例えば、参考文献５〜１２などを参照のこと。
【００３９】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、Ｘのみからなり得、またはさらなる何かを含み得る（例えばＸ＋Ｙ）。
【００４０】
数値ｘに関連して「約」という用語は任意であり、そして例えばｘ±１０％を意味する。
【００４１】
本発明は、単に例示として記載され、そして本発明の範囲および精神の範囲内に留まりながら、改変を行い得ることが理解される。
【００４２】
（参考文献）
【００４３】
【数１】
2012506412.tif 000002
【国際調査報告】
2012506412.tif 000003
2012506412.tif 000004
2012506412.tif 000005
2012506412.tif 000006