(57)【要約】  本発明は、とりわけ、炎症状態を治療するために有用な新規の化合物、かかる化合物を含有する医薬組成物、ならびに少なくとも１つの追加の治療上有効な薬剤とこれらの化合物との組み合わせを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2012502037.tif 000089
による構造を有する化合物であって、
式中、
Ｘは、ＣＨ、Ｃ（ＣＮ）、ＣＲｂ、およびＮからなる群から選択され、
Ｙは、ＣＨ、Ｃ（ＣＮ）、ＣＲｂ、およびＮからなる群から選択され、
ａは、０または１であり、
ｂは、０または１であり、
Ｒｄは、Ｈ、非置換のＣ１−Ｃ６アルキル、ＣＯＲ１０、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、
式中、Ｒ１０は、Ｈまたは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルであるが、
但し、ＸまたはＹがＣ（ＣＮ）である場合、ａは０であり、
但し、ＸまたはＹがＣＲｂである場合、ｂは０であり、
但し、ＸおよびＹはともに、Ｃ（ＣＮ）ではあり得ず、
但し、ＸおよびＹはともに、ＣＲｂではあり得ず、
Ｒｂは、ＯＲ４、ＮＲ４Ｒ５、ＳＲ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、ニトロ、シアノ、ハロゲン、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択され、
式中、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択されるが、
但し、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している原子と一体となって、任意に組み合わせて、５〜７員の置換または非置換のヘテロシクロアルキル環を形成する、化合物、またはその塩。
【請求項２】
【化２】
2012502037.tif 000090
の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
【化３】
2012502037.tif 000091
の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
【化４】
2012502037.tif 000092
の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
【化５】
2012502037.tif 000093
の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
【化６】
2012502037.tif 000094
の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
【化７】
2012502037.tif 000095
の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
ＲｂはＯＲ４であり、Ｒ４は、Ｈ、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択される、請求項１〜７に記載の化合物。  
【請求項９】
ＲｂはＯＲ４であり、Ｒ４は、置換または非置換のアルキルである、請求項１〜８に記載の化合物。  
【請求項１０】
【化８】
2012502037.tif 000096
からなる群から選択される、構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
ＲｂはＯＲ４であり、Ｒ４は、シクロアルキル置換アルキルである、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。  
【請求項１２】
【化９】
2012502037.tif 000097
からなる群から選択される、構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
ＲｂはＯＲ４であり、Ｒ４は、置換または非置換のヘテロアルキルである、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。  
【請求項１４】
【化１０】
2012502037.tif 000098
からなる群から選択される、構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。  
【請求項１６】
ＲｂはＮＨＲ５であり、Ｒ５は、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。  
【請求項１７】
ＲｂはＮＨＲ５であり、Ｒ５は、置換または非置換のヘテロアルキルである、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。  
【請求項１８】
【化１１】
2012502037.tif 000099
からなる群から選択される、構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
（ａ）請求項１〜１８のいずれかに記載の化合物と、
（ｂ）医薬的に許容される賦形剤と、を含む、医薬製剤。  
【請求項２０】
前記製剤は、単位剤形である、請求項１９に記載の製剤。  
【請求項２１】
前記製剤は、経口または局所使用用である、請求項１９に記載の製剤。  
【請求項２２】
サイトカインまたはケモカインの放出を減少させる方法であって、請求項１に記載の化合物と細胞を接触させることを含み、前記細胞による前記サイトカインまたはケモカインの放出が減少される、方法。
【請求項２３】
前記サイトカインは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＬＴ、ＬＩＦ、オンコスタチン、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記サイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。  
【請求項２６】
前記ケモカインは、ＩＬ−８、Ｇｒｏ−α、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、ＰＧＥ２、ＥＮＡ−７８、およびランテスからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。  
【請求項２７】
動物における、状態を治療する方法であって、治療有効量の請求項１に記載の化合物を前記動物に投与し、それによって、前記状態を治療することを含む、方法。  
【請求項２８】
前記状態は、関節炎、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、乾癬、肺疾患、多発性硬化症、神経変性障害、うっ血性心不全、脳卒中、大動脈弁狭窄、腎不全、狼瘡、膵臓炎、アレルギー、線維症、貧血、アテローム性動脈硬化症、代謝性疾患、骨疾患、循環器疾患、化学療法／放射線関連合併症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肝疾患、胃腸障害、眼疾患、アレルギー性結膜炎、糖尿病性網膜症、シェーグレン症候群、ブドウ膜炎、肺疾患、腎疾患、皮膚炎、ＨＩＶ関連悪液質、脳性マラリア、強直性脊椎関節炎、ハンセン病、貧血、および線維筋痛症からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。  
【請求項２９】
前記状態は、乾癬、アトピー性皮膚炎、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、喘息、および慢性閉塞性肺疾患からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。  
【請求項３０】
前記状態は、乾癬であり、前記乾癬は、プラーク乾癬、間擦疹型乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、および乾癬性紅皮症からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。  
【請求項３１】
前記乾癬は、プラーク乾癬および爪乾癬からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。  
【請求項３２】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）を阻害する方法であって、請求項１に記載の化合物と前記ホスホジエステラーゼを接触させ、それによって、前記ホスホジエステラーゼを阻害することを含む、方法。
【請求項３３】
前記ホスホジエステラーゼは、ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）およびホスホジエステラーゼ７（ＰＤＥ７）からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００８年９月４日に出願の、米国特許仮出願第６１／０９４，４０５号の利益を主張し、あらゆる目的において、その全内容が、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
異常炎症は、多様なヒト疾患のうちの主要な要素である。変性障害を患う人々は、血中に過剰レベルの炎症誘発性調節因子を示すことが多い。このような炎症誘発性調節因子の１つのタイプは、ＩＬ−１α、β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＬＴ、ＬＩＦ、オンコスタチン、およびＩＦＮｃ１α、β、γを含むサイトカインである。
【０００３】
炎症性サイトカインが直接の原因となって惹起される一般的な医学的問題の非制限的なリストには、関節炎（炎症性サイトカインが滑膜における病変、ならびに関節軟骨および骨の破壊をもたらし得る）、腎不全（炎症性サイトカインが循環を制限し、ネフロンを損傷する）、狼瘡（炎症性サイトカインが免疫複合体の沈着および損傷を悪化させる）、喘息（炎症性サイトカインが気道を閉塞させる）、乾癬（炎症性サイトカインが皮膚炎を誘発する）、膵臓炎（炎症性サイトカインが膵臓細胞傷害を誘発する）、アレルギー（炎症性サイトカインが血管透過性およびうっ血を誘発する）、線維症（炎症性サイトカインが外傷組織を攻撃する）、外科的合併症（炎症性サイトカインが治癒を妨げる）、貧血（炎症性サイトカインがエリスロポエチン産生を攻撃する）、および線維筋痛（炎症性サイトカインが線維筋痛患者で上昇する）が挙げられる。
【０００４】
慢性炎症に関連する他の疾患には、癌、心臓発作（慢性炎症が冠状動脈硬化症の一因となる）、アルツハイマー病（慢性炎症が脳細胞を破壊する）、うっ血性心不全（慢性炎症が心筋消耗を引き起こす）、脳梗塞（慢性炎症が血栓塞栓事象を促進する）、および大動脈弁狭窄症（慢性炎症が心臓弁を損傷する）が挙げられる。動脈硬化症、骨粗鬆症、パーキンソン病、感染、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、ならびに多発性硬化症（典型的な自己免疫性の炎症関連疾患）も炎症に関連している（Ｂｅｂｏ，Ｂ．Ｆ．，Ｊｒ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ，４５：３４０−３４８，（１９９６）、Ｍｅｎｎｉｃｋｅｎ，Ｆ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ，２０：７３−７８，（１９９９）、Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｔ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ，６６  Ｓｕｐｐｌ  １：Ｓ４５−５３；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  Ｓ５５，（１９９８）、Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｇ．Ｗ．，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ，６７：５９１−６０２，（２０００）、Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｉ，Ｃ．，Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，９０８：２４４−２５４，（２０００）、Ｒｏｇｅｒｓ，Ｊ，Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，９２４：１３２−１３５，（２０００）、Ｌｉ，Ｙ．Ｊ．，Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ，１２：３２５９−３２６７，（２００３）、Ｍａｃｃａｒｒｏｎｅ，Ｍ．，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ  Ａｌｌｅｒｇｙ，１：５３−６３，（２００２）、Ｌｉｎｄｓｂｅｒｇ，Ｐ．Ｊ．，Ｓｔｒｏｋｅ，３４：２５１８−２５３２，（２００３）、ＤｅＧｒａｂａ，Ｔ．Ｊ．，Ａｄｖ  Ｎｅｕｒｏｌ，９２：２９−４２，（２００３）、Ｉｔｏ，Ｈ．，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ  Ａｌｌｅｒｇｙ，２：１２５−１３０，（２００３）、ｖｏｎ  ｄｅｒ  Ｔｈｕｓｅｎ，Ｊ．Ｈ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ，５５：１３３−１６６，（２００３）、Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｍ．Ｉ．，．Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｌａｂ  Ｍｅｄ，４１：１１２０−１１３０，（２００３）、Ｖｉｒｄｉｓ，Ａ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ，１２：１８１−１８７，（２００３）、Ｔｒａｃｙ，Ｒ．Ｐ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ，Ｓｕｐｐｌ  １０−１７，（２００３）、Ｈａｕｇｅｂｅｒｇ，Ｇ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，１５：４６９−４７５，（２００３）、Ｔａｎａｋａ，Ｙ．，Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｍｅｔａｂ，２１：６１−６６，（２００３）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．Ｄ．，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ，２７：５８５−５９０，（２００２））。進行した段階の一部の疾患は生命の脅威にもなり得る。このような炎症性疾患の治療にいくつかの方法が利用できるが、結果は、一般的に、効果の欠如および治療に伴う薬物関連の副作用からも明らかなように満足のいくものではない。
【０００５】
炎症性腸疾患
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を含み、これらはともに、世界各地で発生頻度が増加している、特発性の慢性疾患である。米国では、毎年６００，０００人を超える人が罹患している。ＩＢＤには、小腸および大腸のいずれかまたは両方が関与し得る。ＣＤには、胃腸管のあらゆる部分が関与し得るが、最も頻繁に生じるのは小腸末端および結腸である。直腸は免れるか、直腸周辺の排膿を伴う炎症または感染を起こすかのいずれかである。ＵＣは、通常、大腸下部に潰瘍を生じ、直腸が起点になることが多い。ＩＢＤを患う患者は、腸上皮のバリア機能に障害があり、これが、上皮への細菌定着を許している。結果として、細菌産物および炎症誘発性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、およびＩＬ−６）が、持続性の炎症性刺激をもたらす。細菌抗原は、粘膜の樹状細胞およびマクロファージによって免疫系に導入される。これに応答して、腸の食細胞（主に単球および好中球）が増殖し、炎症誘発性サイトカインの発現および分泌を増大させる。症状は多様であるが、下痢、発熱、および疼痛が含まれ得る。ＵＣを長期間患う患者には、結腸癌を発症するリスクが増大する。感染および免疫的機序が提唱されてはいるが、ＩＢＤの原因が依然として不明なため、現在のところ満足のいく治療法がない。ＩＢＤの治療は、炎症症状の制御を目指しているので、従来的には、コルチコステロイド、アミノサリチル酸、ならびに例えばアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、メトトレキサート、およびシクロスポリン等の標準的免疫抑制剤が使用されている。これらのうち、唯一の疾患修飾性療法は、免疫抑制剤のアザチオプリンおよびメトトレキサートであるが、これらはともに、作用の発現が緩やかで、中等度の有効性しかない。長期療法は、肝損傷（線維症または肝硬変）および骨髄抑制を引き起こし得る。また、患者は、このような治療に対して不応性となることが多い。他の治療体制は、症状に対処するだけにすぎない（Ｒｕｔｇｅｅｒｔｓ，Ｐ．Ａ，Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ，１７  Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１７６−１８５（２００２）、Ｒｕｔｇｅｅｒｔｓ，Ｐ．，Ａｌｉｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ，１７：１８５−１９２（２００３））。
【０００６】
乾癬
乾癬は、最も一般的な免疫媒介性の慢性皮膚疾患の１つで、形態も重症度も様々であり、米国では、人口の約２％または４５０万人を超える人が罹患し、そのうちの１５０万人が中等度から重度の疾患形態を有すると考えられている。乾癬患者の１０〜３０％は、関節炎の一形態である、乾癬性関節炎も発症し、これは関節周囲の骨および結合組織を損傷する。乾癬は、フレーク状の白色の積層で覆われた隆起した赤い皮膚のパッチとして現れる。吹き出物状（膿疱性乾癬）または火傷状（紅皮性）外観を有することもあり得る。また、乾癬は、強度の痒みおよび灼熱感も引き起こし得る。患者は、肉体的のみならず精神的にも苦痛を受ける。乾癬の治療には、局所治療、光線療法、および全身塗布を含む、いくつかの治療法が、現在、利用可能である。しかしながら、それらは、一般的に、疾患抑制的および疾患修飾的な治療法にすぎないと考えられ、いずれも疾患治癒的でない。さらに、多くの治療法は、美容上望ましくないか、長期使用に不便であるか、またはかなりの毒性を伴うかのいずれかである。
【０００７】
乾癬には、いくつかの型がある。プラーク乾癬（尋常性乾癬）は、乾癬のうちで最も一般的な形態である。乾癬を患う人の８０〜９０％に影響を及ぼす。プラーク乾癬は、一般的に、銀白色の鱗屑状の皮膚で覆われる炎症を起こしている皮膚の隆起した領域として現れる。これらの領域は、プラークと呼ばれる。間擦疹型乾癬（逆乾癬）は、皮膚の平滑な炎症性の斑として現れる。皮膚のひだ、特に、生殖器の周辺（大腿部と鼠径部の間）、腋窩、過重量の胃の下（パンヌス）、および胸下部（乳房下部）で生じる。摩擦および汗によって悪化し、真菌感染症に感染しやすい。滴状乾癬は、多数の小さな楕円形の（涙滴状の）斑点に特徴付けられる。これらの多数の乾癬のスポットは、胴体、脚、および頭皮等の身体の広い領域にわたって現れる。滴状乾癬は、連鎖球菌の咽喉感染症に関連する。膿疱性乾癬は、非感染性の膿（膿疱）で満たされた隆起した瘤として現れる。小膿疱下および囲まれる皮膚は、赤く、柔らかい。膿疱性乾癬は、一般に、手および足に局在する可能性もあり（掌蹠膿疱症）、または広範な斑が身体の任意の部分上にランダムに生じる全身性の可能性もある。爪乾癬は、手足の指爪の外観に様々な変化を生じさせる。これらの変化は、爪甲の下の変色、爪の点食、爪を横断する線、爪の下の皮膚の肥厚、ならびに爪のゆるみ（爪甲剥離症）および崩壊を含む。乾癬性関節炎には、関節および結合組織の炎症が関与する。乾癬性関節炎は、例えば手足の指の関節において最も一般的であるが、任意の関節に冒し得る。これは、指炎として知られている、手足の指のソーセージの形状の腫脹が生じ得る。乾癬性関節炎はまた、股関節、膝、および脊椎（脊椎炎）も冒し得る。乾癬に罹患する人の約１０〜１５％が、乾癬性関節炎に罹患する。乾癬性紅皮症は、体表面のほとんどにわたる皮膚の広範な炎症および剥脱に関与する。それは、激しい痒み、腫脹、および疼痛を伴うことがある。それは、しばしば、特に全身治療を突然中止した後の、不安定なプラーク乾癬の増悪の結果である。極度の炎症および剥脱が、温度を制御し、皮膚に防壁機能を果たさせる身体の能力を破壊するので、この型の乾癬は致死性となり得る。
【０００８】
この２０年の間に乾癬の生物学的特性の理解が進むにつれて、この疾患の炎症的性質の原因となっているＴリンパ球およびサイトカインの活性を標的にする生物学的療法が利用できるようになっている。現在、乾癬に処方される薬物は、最初はリウマチ様関節炎（ＲＡ）治療に使用されていたＴＮＦ−α阻害剤のＥＮＢＲＥＬ（登録商標）（エタネルセプト）、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）（インフリキシマブ）およびＨＵＭＩＲＡ（登録商標）（アダリムマブ）、ならびにＴ細胞阻害剤のＡＭＥＶＩＶＥ（登録商標）（アレファセプト）（Ｂｉｏｇｅｎ社、２００２年認可）およびＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）（エファリズマブ）（Ｇｅｎｅｔｅｃｈ／Ｘｏｍａ社、２００３年認可）等である（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｊ．Ｍ．，Ｊ  Ｄｒｕｇｓ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１：３０３−３１０，（２００２））。ＡＭＥＶＩＶＥ（登録商標）（アレファセプト）は、ヒトＩｇＧ（１）のヒンジ部、Ｃ（Ｈ）２およびＣ（Ｈ）３ドメインに融合する、ヒトＬＦＡ−３の第１の細胞外ドメインからなる、免疫グロブリン融合タンパク質である。これは、ＮＫ細胞を通してＴ細胞の増殖を阻害する（Ｃｏｏｐｅｒ，Ｊ．Ｃ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，３３：６６６−６７５，（２００３））。ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）も抗ＣＤ１１ａ、すなわち、Ｔ細胞接着分子の白血球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）を標的とするヒト化モノクローナル抗体として知られている。ＬＦＡ−１のそのリガンド（ＩＣＡＭ−１、細胞間接着分子−１）への結合を防止すると、リンパ球の活性化および移動が阻害され、それによって、リンパ球の浸潤が減少し、乾癬の兆候および症状をもたらす事象のカスケードが最終的には制限される（Ｃａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｃ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ，３：３６１−３７０，（２００３））。しかしながら、当該技術分野の現在のＴＮＦ−α阻害剤の潜在的副作用は、リンパ腫の発生（Ｂｒｏｗｎ，Ｓ．Ｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，４６：３１５１−３１５８，（２００２））、うっ血性心不全の悪化等の重篤で、重症感染および敗血症、ならびに多発性硬化症および中枢神経系の問題の増悪をもたらす（Ｗｅｉｓｍａｎ，Ｍ．Ｈ．，．Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  Ｓｕｐｐｌ，６５：３３−３８，（２００２）、Ａｎｔｏｎｉ，Ｃ．，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，２０：Ｓ１５２−１５７，（２００２））。Ｔ細胞阻害剤のＡＭＥＶＩＶＥ（登録商標）／ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）の副作用は、乾癬治療においては耐容可能であるが、ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）は免疫抑制剤である。免疫抑制剤は、感染、再活性化の遅れ、慢性感染のリスクを増大、または癌発生のリスクを増大させる可能性がある。
【０００９】
この２０年の間に乾癬の生物学的特性の理解に多大な進展があり、上記のように乾癬の非従来的治療も利用できるようになったが、それに由来する苦痛の多くはまだ適切に対処されていない。米国乾癬財団（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）が１９９８年に実施した４０，０００人を超える米国人乾癬患者に対する調査によれば、若年患者の７９％が治療の効果のなさに不満を感じていることが示された。重症疾患を有する患者のうち３２％が、治療が十分積極的でないと感じていた（Ｍｅｎｄｏｎｃａ，Ｃ．Ｏ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ，９９：１３３−１４７，（２００３）、Ｓｃｈｏｎ，Ｍ．Ｐ．，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１１２：４０５−４１０，（１９９９））。
【００１０】
リウマチ様関節炎
リウマチ様関節炎（ＲＡ）は、厄介な炎症性疾患の別の例を示す。これは、関節の内膜（滑膜）および／または他の内臓における慢性炎症を特徴とする一般的な慢性の炎症関連疾患である。また、炎症細胞は、骨および軟骨を侵襲し、損傷することもできる。その関節は、その形状および配置構造（アラインメント）を喪失し得るので、動きも失うことになる。ＲＡ患者には、関節の疼痛、硬直、温覚、発赤、および腫脹と、例えば発熱、疲労、および貧血等の他の全身的症状を有する。米国人口の約１％または２１０万人が、現在、罹患しており、女性（１５０万人）の方が男性（６０万人）より多い。ＲＡの病理は、十分理解されていないが、機序として不適切な免疫反応のカスケードが仮定されている。従来の治療は、残念なことに、ＲＡにおいて不十分である（Ｂｅｓｓｉｓ，Ｎ．，Ｊ  Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ，４：５８１−５９１，（２００２））（２９）。この疾患は、１９５０年代より使用されているコルチコステロイドおよび非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を含む、対症薬物療法に完全に反応するわけではない。また、これらの薬物療法には、重大な有害作用のリスクもある。メトトレキサート（ＭＴＸ）等の疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）の治療効果は、一貫性に欠け、一時的であることが多い。
【００１１】
ＲＡにおける炎症の媒介と関節破壊におけるサイトカインネットワークの役割は、近年大々的に研究されている。ＴＮＦ−αに加えて、ＩＬ−１もＲＡの病因および臨床症状に極めて重要な役割を果たしている（５４）。ＩＬ−１の、炎症と関節侵食を推進し、組織修復プロセスを阻害する能力は、体外系および動物モデルで明らかに確立されているので、ＲＡ患者の炎症症状の緩和は。ＩＬ−１の遮断によって達成されている（Ｂｒｅｓｎｉｈａｎ，Ｂ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，４１：２１９６−２２０４，（１９９８））。ＩＬ−６は、免疫応答、造血、急性期応答、および炎症を調節する多機能性サイトカインである。ＩＬ−６産生の異常は、ＲＡを含むいくつかの疾患の病理に関与している。ＩＬ−６シグナルを遮断する治療的アプローチは、ヒト化抗ＩＬ−６Ｒ抗体を用いて他の疾患の中でも特にＲＡのために実施されている（Ｉｔｏ，Ｈ．，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ  Ａｌｌｅｒｇｙ，２：１２５−１３０，（２００３）、Ｉｓｈｉｈａｒａ，Ｋ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ，１３：３５７−３６８，（２００２））。ＩＬ−１０は、抗炎症性サイトカインである。ＩＬ−１０の発現は、動物モデルで関節炎を予防またはこの疾患を改善することが示されている（５７，５８）。ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０等のサイトカインは、独立した役割を有していることは明らかであるが、それらは、ＲＡにおいて、ある種の病理生理学的過程の媒介と協力して作用している。本発明に記載の分子のクラスの発見は、分子がこれらの異なるサイトカインを調節することができるので、ＲＡの治療に劇的な治療的進歩をもたらすであろう。
【００１２】
最近、ＲＡ治療のための新規クラスの生物学的ＤＭＡＲＤ（疾患修飾性抗リウマチ薬）が、炎症プロセスにおけるサイトカインのＴＮＦ−αおよびＩＬ−１の役割の理解に基づいて開発されている。ＦＤＡは、１９９８年にＩｍｍｕｎｅｘ／Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．社のＥＮＢＲＥＬ（登録商標）（エタネルセプト）、２００２年にＣｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ社のＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）（インフリキシマブ）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．社のＨＵＭＩＲＡ（登録商標）（アダリムマブ）、および２００１年にＡｍｇｅｎ社のＫＩＮＥＲＥＴ（登録商標）（アナキンラ）を含む、いくつかのこのようなＤＭＡＲＤを認可している。ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）は、可溶性のＴＮＦ受容体（ＴＮＦＲ）組換えタンパク質である。ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）は、ヒト化マウス（キメラ）抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体である。ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）は、ヒト由来重鎖および軽鎖可変領域とヒトＩｇＧ１：ｋ定常領域を持つ抗体をもたらす、ファージディスプレイ技術を用いて作製された完全ヒト抗ＴＮＦモノクローナル抗体である。これら３つのタンパク質系薬物は全て、ＴＮＦ−αを標的にして結合し、ＴＮＦ−αの作用を遮断する。ＫＩＮＥＲＥＴ（登録商標）は、組換えＩＬ−１受容体アンタゴニストで、そのアミノ末端に単一のメチオニン残基が付加されていることを除いて、天然ヒトＩＬ−１Ｒａに類似している。ＫＩＮＥＲＥＴ（登録商標）は、ＩＬ−１のＩＬ−１のＩ型受容体（ＩＬ−１ＲＩ）への結合を競合的に阻害することによって、ＩＬ−１の生物活性を遮断し、結果的にＩＬ−１の前炎症作用を削減する。
【００１３】
多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、自己免疫疾患で、米国で３５０，０００〜５００，０００人の人がその診断を受けている。複数領域の脳や脊髄のミエリンの炎症と瘢痕化がこの疾患を意味している。ＭＳ患者は、ミエリンの瘢痕化の位置と範囲によって様々な程度の神経学的障害を示す。ＣＮＳの自己免疫性炎症時におけるケモカイン（ＩＬ−８ファミリーメンバー）の発現は、ＴＮＦ等の一部の炎症誘発性サイトカインによって調節されているという証拠がある（Ｇｌａｂｉｎｓｋｉ，Ａ．Ｒ．，Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，５８：８１−８８，（２００３））。ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０等の他の前／抗炎症性サイトカインの役割も、ＥＡＥ動物モデル（Ｄｉａｂ，Ａ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ，５６：６４１−６５０，（１９９７）、Ｓａｍｏｉｌｏｖａ，Ｅ．Ｂ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６１：６４８０−６４８６，（１９９８）、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｊ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，１５５：２１７−２２６，（２００１））、ならびにヒトで確認された（ｄｅ  Ｊｏｎｇ，Ｂ．Ａ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ，１２６：１７２−１７９，（２００２））。ＩＬ−１βはＭＳ病変部に存在する。ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ）は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の誘導を軽減する。ＭＳのリスク増大は、高ＩＬ−１の個人にみられる（ＩＬ−１Ｒａ産生比より３高い、およびＩＬ−１０産生比より高いＴＮＦ）（ｄｅ  Ｊｏｎｇ，Ｂ．Ａ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ，１２６：１７２−１７９，（２００２））。ＭＳの一般的症状は、疲労、衰弱、痙直、バランスの問題、膀胱および腸の問題、しびれ、失明、震え、およびうつ等である。ＭＳの現在の治療は、症状を緩和するだけ、または障害の進行を遅らせるだけであり、幹細胞移植および遺伝子療法を含むＭＳのいくつかの新規治療は、保存療法的である（Ｆａｓｓａｓ，Ａ．，Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ，１７：２３３−２４０，（２００３）、Ｆｕｒｌａｎ，Ｒ．，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ，９：２００２−２００８，（２００３））。抗ＴＮＦ抗体は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）で保護的効果を示したが、ＭＳ患者では疾患をより一層悪化させるので、ＴＮＦ−αの阻害のみでは不十分であることが示唆されている（Ｇｈｅｚｚｉ，Ｐ．，Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ，９：１７８−１８２，（２００１））。
【００１４】
神経変性障害
アルツハイマー病（ＡＤ）とパーキンソン病（ＰＫ）は２つの最も一般的な神経変性障害である。ＡＤは、人の日常活動を遂行する能力に深刻な影響を及ぼす。思考、記憶、および言語を司る脳の部分にかかわる。通常、６０歳以降の、約４００万人の米国人が、ＡＤを患っていると推定されている。
【００１５】
ＰＫは、中枢神経系の進行性障害で、米国では１５０万人を超える人が罹患している。臨床的には、この疾患は、自然な動きの減退、歩行困難、姿勢の不安定、硬直、および震えを特徴とする。ＰＫは、脳の黒質の色素性ニューロンの変性によって起こるので、ドパミン供給力が低下する。これらの神経変性障害の原因が不明なので、現在、これらの疾患の治癒法はない。
【００１６】
それ故に、上記および他の炎症関連疾患の治療に対する新規アプローチが必要とされている。炎症関連疾患の機序はまだ不明であり、相互に異なることも多いが、サイトカインの調節異常によって起こる免疫系の機能不全が、炎症の開始と進行に重要な役割を果たしていることが示されている（Ｓｃｈｏｎ，Ｍ．Ｐ．，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１１２：４０５−４１０，（１９９９）、Ａｎｄｒｅａｋｏｓ，Ｅ．Ｔ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ，１３：２９９−３１３，（２００２）、Ｎａｊａｒｉａｎ，Ｄ．Ｊ．，Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ，４８：８０５−８２１，（２００３））。
【００１７】
放射線治療後関連炎症：
直腸およびＳ状結腸に対する放射線障害関連炎症性疾患は、骨盤領域の癌（頸部、子宮、前立腺、膀胱、および精巣の癌を含む）の放射線療法に伴う最も一般的な合併症である。放射線直腸Ｓ状結腸炎は、骨盤照射後の臨床的に明白な最も一般的な結腸損傷の形態で、５％〜２０％の発生頻度を有する。患者は、典型的には、しぶり腹、出血、少量下痢、および直腸痛の症状を呈する。まれに軽度の閉塞または隣接臓器への瘻管を起こすこともあり得る。
【００１８】
サイトカインは、一般的に、以下の３つのタイプ：炎症誘発性（ＩＬ−１α、β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＬＴ、ＬＩＦ、オンコスタチン、およびＩＦＮｃ１α、β、γ）；抗炎症性（ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、Ｗ−１３、およびＴＧＦ−β）；ならびにケモカイン（ＩＬ−８、Ｇｒｏ−α、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、ＥＮＡ−７８、およびランテス）に分類できる。
【００１９】
腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン−１（ＩＬ−１）は、感染病原体および他の細胞ストレスに関連する炎症反応を仲介する炎症性サイトカインである。ＩＬ−１およびＴＮＦ−α等のサイトカインの過剰産生は、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、内毒素性ショック、骨粗鬆症、アルツハイマー病、うっ血性心不全、およびとりわけ、乾癬を含む、多くの炎症性疾患の進行を生じさせると考えられる（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｅａｓｅｓ  １９８４，６：５１、Ｓａｌｉｔｕｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９，６：８０７−８２３、Ｈｅｎｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇｓ  Ｆｕｔ．１９９９，２４：１３４５−１３５４）。これらの状態における潜在的な薬物介入のための容認されている治療的アプローチは、炎症性サイトカイン、例えばＴＮＦ−α（ＴＮＦａとも称される）およびインターロイキン−１β（ＩＬ−１ｂ）の低減である。
【００２０】
ホスホジエステラーゼ４
環状ヌクレオチドの特定のホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、様々な環状ヌクレオチドの一リン酸塩（ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰを含む）の加水分解を触媒する酵素のファミリーを示す。これらの環状ヌクレオチドは、細胞内セカンドメッセンジャーとして機能し、メッセンジャーとして、種々のホルモンおよび神経伝達物質が結合した細胞表面レセプターから刺激を運ぶ。ＰＤＥは、細胞内の環状ヌクレオチドのレベルを調節するように働き、それらのメッセンジャーの役割を終えたそのような環状モノヌクレオチドを分解することによって、環状ヌクレオチドのホメオスタシスを維持している。
【００２１】
ＰＤＥ酵素は、ｃＡＭＰもしくはｃＧＭＰの加水分解に対するそれらの特異性、カルシウム、カルモジュリン、もしくはｃＧＭＰによる調節に対する感受性、および種々の化合物によるそれらの選択的阻害に従って、１１のファミリーにグループ分けすることができる。例えば、ＰＤＥ１は、Ｃａ２＋／カルモジュリンによって刺激される。ＰＤＥ２は、ｃＧＭＰ依存性であり、心臓および副腎に見出される。ＰＤＥ３は、ｃＧＭＰ依存性であり、この酵素の阻害は、陽性変力性活性を生み出す。ＰＤＥ４は、ｃＡＭＰ特異的であり、その阻害は、気道の弛緩、抗炎症、および抗鬱活性を生ずる。ＰＤＥ５は、血管平滑筋におけるｃＧＭＰ含量を調節するのに重要であるらしく、したがって、ＰＤＥ５の阻害は、心血管系の活性を有し得る。ＰＤＥは、異なる生化学的性質を有していることから、それらは、おそらく、種々の形の調節を受けている。
【００２２】
ＰＤＥ４は、ｃＡＭＰに対する低いミカエリス定数を含む種々の速度論的特性およびある種の薬物に対する感受性によって区別される。ＰＤＥ４酵素ファミリーは、４個の遺伝子よりなり、それらは、ＰＤＥ４酵素の指定されたＰＤＥ４Ａ、ＰＤＥ４Ｂ、ＰＤＥ４Ｃ、およびＰＤＥ４Ｄの４種のアイソフォームを産生する［  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃＡＭＰ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ（ＰＤＥ４）Ｓｕｂｔｙｐｅｓ  Ａ，Ｂ，Ｃ，ａｎｄ  Ｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，２３４，３２０−３２４（１９９７）を参照のこと］。加えて、各ＰＤＥ４アイソフォームの種々のスプライス変異体が同定されている。
【００２３】
ＰＤＥ４イソ酵素は、細胞の細胞質に局在し、既知の膜構造のいかなるものとも関連していない。ＰＤＥ４イソ酵素は、アデノシン５’一リン酸（ＡＭＰ）への加水分解を触媒することによって、ｃＡＭＰを特異的に不活性化する。ｃＡＭＰ活性の調節は、炎症および記憶を含む多くの生物学的プロセスにおいて重要である。ロリプラム、ピクラミラスト、ＣＤＰ−８４０、およびアリフロ（ａｒｉｆｌｏ）等のＰＤＥ４イソ酵素の阻害剤は、強力な抗炎症剤であり、それ故に、喘息や関節炎等の炎症が問題である疾患を治療するのに有用であり得る。さらには、ロリプラムは、学習パラダイムにおけるラットおよびマウスの認知能力を改善する。
【００２４】
上皮成長因子またはＥＧＦ
上皮成長因子受容体（ヒトにおけるＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ−１、ＨＥＲ１）は、細胞外タンパク質リガンドの上皮成長因子ファミリー（ＥＧＦファミリー）のメンバーについての細胞表面受容体である。上皮成長因子受容体は、受容体のＥｒｂＢファミリーのメンバーである。ＥＧＦＲ発現または活性に影響を及ぼす突然変異は、癌をもたらし得る。
【００２５】
ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）は、細胞表面に存在し、上皮成長因子および形質転換増殖因子α（ＴＧＦα）を含む、その特異的なリガンドが結合することによって活性化される。
【００２６】
その成長因子リガンドによって活性化すると、予め形成された不活性な二量体がリガンド結合前にも存在し得る、いくつかの証拠はあるが、ＥＧＦＲは、不活性な単量体の形態から活性ホモ二量体への遷移を被る。リガンド結合後、ホモ二量体を形成することに加えて、ＥＧＦＲは、ＥｒｂＢ２／Ｈｅｒ２／ｎｅｕ等のＥｒｂＢ受容体ファミリーの別のメンバーと組み合わせて、活性化したヘテロ二量体を生成し得る。活性化したＥＧＦＲのクラスターが形成されることが示唆される証拠もあるが、このクラスターが、活性化自体に重要であるか否か、または、個々の二量体の活性化後に生じるかどうかは、依然として明らかではない。
【００２７】
ＥＧＦＲ二量化は、その内在性の細胞内タンパク質チロシンキナーゼ活性を刺激する。結果として、ＥＧＦＲのＣ末端ドメインのいくつかのチロシン（Ｙ）残基の自己リン酸化が起こる。これらは、左側の図表に示されるように、Ｙ９９２、Ｙ１０４５、Ｙ１０６８、Ｙ１１４８、およびＹ１１７３を含む。この自己リン酸化は、それらの固有のホスホチロシン結合ＳＨ２ドメインを通してリン酸化されたチロシンと会合するいくつかの他のタンパク質による下流活性化およびシグナル伝達を惹起する。これらの下流のシグナル伝達タンパク質は、いくつかのシグナル伝達カスケード、主として、ＭＡＰＫ、Ａｋｔ、およびＪＮＫ経路を開始し、ＤＮＡ合成および細胞増殖をもたらす。このようなタンパク質は、細胞の移動、接着、および増殖等の表現型を調節する。ＥＧＦＲのキナーゼドメインは、それとともに凝集している他の受容体のチロシン残基も交差リン酸化し、それ自体、このようにして活性化され得る。
【００２８】
ＨＭ７４Ａ
ＨＭ７４ＡまたはＧＰＲ１０９Ａは、ナイアシンに対するＧタンパク質共役型受容体である。それは、Ｇｉαサブユニットに共役する。ＨＭ７４Ａは、ナイアシンの生合成に関与することで知られている。
【００２９】
ヒスタミン
ヒスタミンは、局所免疫応答に関与し、腸内の生理機能を調節し、神経伝達物質として役割を果たす、生体アミンである。ヒスタミンは、特定の細胞ヒスタミン受容体と組み合わせることにより、その動作を発揮する。発見された４つのヒスタミン受容体は、Ｈ１からＨ４で示される。Ｈ１は、平滑筋、内皮、および中枢神経系組織に見出される。Ｈ１受容体は、血管拡張、気管支収縮、平滑筋の活性化、内皮細胞の分離（じんま疹に関与）、ならびに虫刺されによる疼痛および痒みの原因になる。Ｈ１はまた、アレルギー性鼻炎の症状および乗り物酔いのための主要な受容体でもある。Ｈ２は、壁細胞上に位置し、主として、胃酸分泌に関与する。Ｈ３は、神経伝達物質の放出の減少に関与している。Ｈ４は、知られていない生理的役割があり、主として、胸腺、小腸、脾臓、結腸、ならびに好塩基球および骨髄に見られる。
【００３０】
β−２アドレナリン作動性受容体
ＡＤＲＢ２としても知られる、β−２アドレナリン作動性受容体（β２アドレナリン受容体）は、βアドレナリン作動性受容体であり、それをコードするヒト遺伝子を示す。この受容体は、その最大のエフェクターの１つ、クラスＣのＬ型カルシウムチャンネルＣａＶ１．２．に直接会合する。この受容体−チャンネル複合体はまた、Ｇタンパク質−Ｇｓも含み、アデニリルシクラーゼ、ｃＡＭＰ依存性キナーゼ、および平衡化するホスファターゼ（ＰＰ２Ａ）を活性化する。シグナル伝達複合体の集合は、このＧタンパク質共役受容体による特定かつ迅速なシグナル伝達を確保する機序を提供する。２状態の生物物理および分子モデルは、これおよび他のＧＰＣＲのｐＨおよびＲＥＤＯＸ感度を考慮することを提案している。β−２アドレナリン作動性受容体は、子宮中の平滑筋の弛緩に関与している。β−２アドレナリン作動性受容体は、胃腸管中の消化に関与している。β−２アドレナリン作動性受容体はまた、平滑筋の弛緩、血管の拡張（冠状動脈、肝動脈、および骨格筋への動脈等）にも関与している。β−２アドレナリン作動性受容体はまた、横紋筋の弛緩にも関与している。
【００３１】
ＫＡＴＰ
ＫＡＴＰは、インスリン放出の抑制に関与している。
【００３２】
タンパク質キナーゼＣ
タンパク質キナーゼＣは、約１０個のアイソザイムからなるタンパク質キナーゼのファミリーである。それらは、それらのセカンドメッセンジャー要件：従来型（または古典型）、新型、および非定型に基づいて、３つのサブファミリーに分類される。従来型（ｃ）ＰＫＣは、アイソフォームα、βＩ、βＩＩ、およびγを含有する。これらは、Ｃａ２＋、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、および活性化のためにホスファチジルコリン等のリン脂質を必要とする。新型（ｎ）ＰＫＣは、δ、ε、η、およびθアイソフォームを含み、活性化のためにＤＡＧを必要とするが、Ｃａ２＋は必要としない。したがって、従来型および新型ＰＫＣは、ホスホリパーゼＣと同一のシグナル変換経路を通って活性化される。一方、非定型（ａ）ＰＫＣ（タンパク質キナーゼＭζおよびι／λアイソフォームを含む）は、活性化のためにＣａ２＋もしくはジアシルグリセロールを必要としない。「タンパク質キナーゼＣ」という用語は、通常、アイソフォームの全ファミリーを指す。ＰＫＣは、他のタンパク質をリン酸化し、それらの機能を改変する。ＰＫＣは、通常、平滑筋収縮に関与している。血管系において、ＰＫＣは、血管収縮に関与している。気管支系において、ＰＫＣは、気管支収縮に関与している。
【００３３】
タンパク質キナーゼＡ
タンパク質キナーゼＡは、活性が細胞中の環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の濃度に依存する酵素のファミリーである。ＰＫＡはまた、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼとしても知られている。タンパク質キナーゼＡは、グリコーゲン、糖、および脂質代謝の調節を含む、細胞中のいくつかの機能を有する。それぞれのＰＫＡは、２つの調節サブユニットおよび２つの触媒サブユニットからなるホロ酵素である。低濃度のｃＡＭＰ下では、ホロ酵素は、変化せず、触媒能はない。ｃＡＭＰの濃度が上昇すると（例えば、Ｇｓに共役するＧタンパク質共役受容体によるアデニル酸シクラーゼの活性化、ｃＡＭＰを分解するホスホジエステラーゼの阻害）、ｃＡＭＰは、調節サブユニットの２つの結合部位に結合して、触媒サブユニットの放出を起こす。次いで、遊離した触媒サブユニットは、セリンまたはスレオニン残基でのＡＴＰの末端リン酸塩のタンパク質基質への転移を触媒することができる。このリン酸化反応は、通常、基質の活性の変化をもたらす。ＰＫＡが、様々な細胞に存在し、異なる基質に作用するため、ＰＫＡおよびｃＡＭＰの調節は、多くの異なる経路に関与している。ＰＫＡは、通常、ｃＡＭＰにより影響を受ける。また、触媒サブユニット自体は、リン酸化反応によって調整することができる。タンパク質キナーゼＡの下方調節は、以下のフィードバックメカニズムによって生じる。キナーゼによって活性化される基質の１つは、ホスホジエステラーゼであり、これは、ｃＡＭＰをＡＭＰに迅速に変換し、ひいては、ｃＡＭＰの量の減少は、タンパク質キナーゼＡを活性化することができる。含脂肪細胞では、ＰＫＡは、脂肪分解に関与している。筋細胞では、ＰＫＡは、グルコースの産生および血管拡張に関与している。
【００３４】
プロテアーゼ活性化受容体１
プロテアーゼ活性化受容体は、それらの細胞外ドメインの切断によって活性化される関連Ｇタンパク質共役受容体のサブファミリーである。それらは、血小板だけでなく、内皮細胞、筋細胞、および神経細胞にも高度に発現する。ＰＡＲは、トロンビン（ＰＡＲ１に作用する）およびトリプシン等のセリンプロテアーゼの作用によって活性化される。これらの酵素は、受容体のＮ末端を切断し、同様に、連結リガンドとしての機能を果たす。切断状態では、受容体自体の一部は、アゴニストとしての機能を果たし、生理反応を引き起こす。
【００３５】
ＰＡＲファミリーのほとんどは、Ｇタンパク質ｉ（ｃＡＭＰ抑制）、１２／１３（Ｒａｆ／Ｒａｓ  活性化）、およびｑ（カルシウムシグナル伝達）の作用を通して機能し、細胞作用をもたらす。
【００３６】
ＴＬＲ３
ＴＬＲ３は、先天性の免疫系のパターン認識受容体のトール様受容体のメンバーである。２００１年に発見された、ＴＬＲ３は、レオウイルス等のいくつかのウイルスによって運ばれた遺伝子情報の形態の二本鎖ＲＮＡを認識する。認識すると、ＴＬＲ３は、それらの抗ウイルス防御を増大させるために他の細胞に合図するＩ型インターフェロンの産生を増加させるようにＮＦ−ｋＢの活性化を誘発する。二本鎖ＲＮＡはまた、細胞質受容体ＲＩＧ−ＩおよびＭＤＡ−５によっても認識される。ＴＬＲ３はまた、ＣＤ２８３（分化２８３のクラスター）としても示されている。
【００３７】
上記の生物学的部分を阻害するか、またはこれらの生物学的部分に関与する疾患を治療ことができる化合物は、当該技術分野において飛躍的な進歩であり得る。
【発明の概要】
【００３８】
第１の態様において、本発明は、本発明の化合物を提供する。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書で記載される化合物またはその医薬的に許容される塩である。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書で記載される式によるものである。
【００３９】
第１の態様において、本発明は、以下の式
【化１】
2012502037.tif 000002
による構造を有する化合物であって、
式中、Ｘは、ＣＨ、Ｃ（ＣＮ）、ＣＲｂ、およびＮからなる群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ（ＣＮ）、ＣＲｂ、およびＮからなる群から選択され；ａは０または１であり；ｂは０または１であり；Ｒｄは、Ｈ、非置換のＣ１−Ｃ６アルキル、ＣＯＲ１０、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、式中、Ｒ１０は、Ｈおよび非置換のＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；但し、ＸもしくはＹがＣ（ＣＮ）である場合、ａは０であり；但し、ＸもしくはＹがＣＲｂである場合、ｂは０であり；但し、ＸおよびＹはともに、Ｃ（ＣＮ）であり得ず；但し、ＸおよびＹはともに、ＣＲｂであり得ず；Ｒｂは、ＯＲ４、ＮＲ４Ｒ５、ＳＲ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、ニトロ、シアノ、ハロゲン、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択され、式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択されるが、但し、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している原子と一体となって、任意に組み合わせて、５〜７員の置換または非置換のヘテロシクロアルキル環を形成する、化合物、またはその塩を提供する。
【００４０】
別の態様において、本発明は、ａ）本発明の化合物、またはその塩と、ｂ）医薬的に許容される賦形剤と、を含む、医薬製剤を提供する。
【００４１】
別の態様において、本発明は、サイトカインまたはケモカインの放出を減少させる方法を提供し、方法は、本発明の化合物と細胞を接触させることを含み、細胞によるサイトカインまたはケモカインの放出が減少される。
【００４２】
別の態様において、本発明は、動物における、状態を治療する方法を提供し、方法は、治療有効量の本発明の化合物をその動物に投与し、それによって、状態を治療することを含む。
【００４３】
本発明はまた、本明細書に記載される化合物の作製方法も提供する。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
Ｉ．  定義および略語
本明細書で使用される、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、文脈によって明らかに別様に指示されない限り、複数の指示対象が含まれる。例えば、「活性剤」への言及は、単一の活性剤、ならびに２つ以上の異なる活性剤を組み合わせたものを含む。本教示は、本明細書に開示され、それ自体が異なり得る、特定の剤形、担体等に限定されないことを理解されよう。
【００４５】
本明細書で使用される略語は、一般に、化学および生物学的技術分野内でのそれらの従来の意味を有する。
【００４６】
以下の略語を使用している。ａｑ．は水性である；ＡｃＯＨは酢酸である；ＡＣＴＢｒは臭化セチルトリメチルアンモニウムである；Ｂ２ｐｉｎ２−ビス（ピナコラト）ジボロン；Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである；Ｂｏｃ２Ｏ−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート；ＢｚＯＯＨ−過酸化ベンゾイル；Ｃｓ２ＣＯ３は炭酸セシウムである；ＤＡＢＣＯは１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタンである；ＤＣＭはジクロロメタンまたは塩化メチレンである；ＤＩＡＤはジイソプロピルアゾジカルボキシレートである；ＤＩＥＡはジイソプロピルエチルアミンである；Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンはＤＩＰＥＡである；ＤＭＡＰは４−（ジメチルアミノ）ピリジンである；ＤＭＥは１，２−ジメトキシエタンである；ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドである；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドである；ｅｑ．は当量である；ＥｔＯＡｃは酢酸エチルである；ＥｔＯＨはエタノールである；Ｅｔ２Ｏはジエチルエーテルである；ＥＤＣＩ−Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩である；ｍ−ＣＰＢＡ−３−クロロペロキシ安息香酸；ｅｑｕｉｖ−当量；ｈは時間である；ＨＡＴＵはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩である；ＨＣｌは塩酸である；ＨＰＬＣは高圧液体クロマトグラフィーである；ＩＳＣＯ  ＣｏｍｐａｎｉｏｎはＰｒｅｓｅａｒｃｈから市販の紫外線吸収による画分解析を伴う自動フラッシュクロマトグラフィー装置である；ＫＯＡｃは酢酸カリウムである；Ｋ２ＣＯ３は炭酸カリウムである；ＬｉＡｌＨ４またはＬＡＨは水素化アルミニウムリチウムである；ＬＤＡはリチウムジイソプロピルアミドである；ＬＨＭＤＳはリチウムビス（トリメチルシリル）アミドである；ＫＨＭＤＳはカリウムビス（トリメチルシリル）アミドである；ＬｉＯＨは水酸化リチウムである；ｍ−ＣＰＢＡは３−クロロペロキシ安息香酸である；ＭｅＣＮはアセトニトリルである；ＭｅＯＨはメタノールである；ＭｇＳＯ４は硫酸マグネシウムである；ｍｉｎｓまたはｍｉｎは分間である；ＭｐまたはＭＰは融点である；ＮａＣＮＢＨ３はシアノ水素化ほう素ナトリウムである；ＮａＯＨは水酸化ナトリウムである；Ｎａ２ＳＯ４は硫酸ナトリウムである；ＮＨ４Ｃｌは塩化アンモニウムである；Ｎ２は窒素である；ＮＭＭ−Ｎ−メチルモルホリン；ｎ−ＢｕＬｉはｎ−ブチルリチウムである；一晩はＯ／Ｎである；ＰｄＣｌ２（ｐｄｄｆ）は１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）である；ＰｒＯＨは１−プロパノールである；ｉＰｒＯＨは２−プロパノールである；ＰＯＣｌ３はリンクロリドオキシドである；ＲＴまたはｒｔは室温である；ＴＦＡはトリフルオロ酢酸である；Ｔｆ２Ｏはトリフルオロメタンスルホン酸無水物である；ＴＨＦはテトラヒドロフランである；ＴＨＰ−テトラヒドロピラニル；ＴＭＳＩはトリメチルシリルヨージドである；Ｈ２Ｏは水である；Ａｃ−アセチル；ＰＴＳＡ−パラトルエンスルホン酸；Ｐｙｒ．−ピリジン；Ｃｂｚ−ベンジルオキシカルボニル；ＰＭＢ−ｐ−メトキシベンジル；ＤＨＰ���ジホドロピラン；ＣＳＡ−カルファースルホン酸；ＣＴＡＢ−臭化セチルトリメチルアンモニウム；ｓａｔ．−飽和；Ｃｙ−シクロヘキシル；Ｐｈ−フェニル；Ａｒ−アリール。
【００４７】
本明細書で使用される「本発明の化合物」とは、本明細書で論じられる化合物、これらの化合物の塩（医薬的に許容される塩）、プロドラッグ、溶媒、および水和物を指す。
【００４８】
「阻害する」および「遮断する」は、本明細書では交換可能に使用でき、本発明の方法による炎症誘発性サイトカインの発現の部分的または完全な遮断を指し、動物におけるサイトカイン量の低下をもたらす。
【００４９】
置換基が左から右に表記される、これらの従来の化学式により特定される場合、これらは同様に、構造を右から左に表記することにより得られる、化学的に同一の置換基も包含し、例えば、−ＣＨ２Ｏ−は、−ＯＣＨ２−を列挙することも意図される。
【００５０】
本明細書で使用される「多（ｐｏｌｙ）」との用語は、少なくとも２つを意味する。例えば、多価金属イオンは、価数が少なくとも２つの金属イオンである。
【００５１】
「部分」とは、別の部分に結合している分子のラジカルを指す。
【００５２】
記号
2012502037.tif 000003
は、結合として利用されるか、あるいは結合と垂直に表示されるかにかかわらず、表示部分が分子の残部に結合している点を示す。
【００５３】
「アルキル」という用語は、単独で、または別の置換基の一部として、別途言及されない限り、直鎖もしくは分枝鎖、または環状炭化水素ラジカル、またはそれらの組み合わせを意味し、これらは完全飽和か、一価不飽和あるいは多価不飽和であってもよく、言及した数の炭素原子を有する（すなわち、Ｃ１−Ｃ１０は１〜１０個の炭素を意味する）二価および多価ラジカルを含むことができる。いくつかの実施形態において、「アルキル」という用語は、直鎖もしくは分枝鎖、またはそれらの組み合わせを意味し、これらは完全飽和か、一価不飽和あるいは多価不飽和であってもよく、二価および多価ラジカルを含むことができる。飽和炭化水素ラジカルの例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル、例えばｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等の相同体および異性体等の基が挙げられるが、これらに限定されない。不飽和アルキル基は、１つ以上の二重結合または三重結合を有する基である。不飽和アルキル基の例としては、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−および３−プロピニル、３−ブチニル、ならびにより高級の相同体および異性体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５４】
「非置換のアルキル」という用語は、直鎖もしくは分枝鎖の飽和炭化水素ラジカルを包含する。飽和炭化水素ラジカルの例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル等の基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
「アルキレン」という用語は、単独で、または別の置換基の一部として、アルカンから誘導される二価ラジカルを意味し、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−によって例示されるが、これに限定されず、以下に「ヘテロアルキレン」として記載される基をさらに含む。典型的には、アルキル（またはアルキレン）基は、１〜２４個の炭素原子を有し、１０個以下の炭素原子を有する基が本発明においては好ましい。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、一般に、８個以下の炭素原子を有する、より短鎖のアルキルまたはアルキレン基である。
【００５６】
「アルコキシ」、「アルキルアミノ」、および「アルキルチオ」（またはチオアルコキシ）という用語は、それらの従来の意味で使用され、それぞれ酸素原子、アミノ基、または硫黄原子を介して分子の残部に結合しているアルキル基を指す。
【００５７】
「ヘテロアルキル」という用語は、別途言及されない限り、単独で、または別の用語との組み合わせで、規定数の炭素原子と少なくとも１つのヘテロ原子からなる、安定した直鎖もしくは分枝鎖、または環式炭化水素ラジカル、またはそれらの組み合わせを意味する。いくつかの実施形態において、「ヘテロアルキル」という用語は、単独で、または別の用語との組み合わせで、規定数の炭素原子と少なくとも１つのヘテロ原子からなる、安定した直鎖もしくは分枝鎖、またはそれらの組み合わせを意味する。例示的な実施形態において、ヘテロ原子は、Ｂ、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択することができ、窒素および硫黄原子は、任意に酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は、任意に四級化されていてもよい。ヘテロ原子Ｂ、Ｏ、Ｎ、およびＳは、ヘテロアルキル基のあらゆる内部位置、またはアルキル基が分子の残部に結合する位置に配置されてもよい。例としては、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３、および−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３のように、２個までのヘテロ原子が連続していてもよい。同様に、「ヘテロアルキレン」という用語は、単独で、または別の置換基の一部として、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−および−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−によって例示されるがこれに限定されない、ヘテロアルキルから誘導される二価ラジカルを意味する。ヘテロアルキレン基では、ヘテロ原子はまた、鎖末端の片方または両方を占有できる（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノ等）。またさらに、アルキレンおよびヘテロアルキレン結合基では、連結基の式が記述される方向によって連結基のいかなる配向も暗示されない。例えば、式−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−は、−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−およびＲ’Ｃ（Ｏ）２−の両方を表す。
【００５８】
「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」という用語は、単独で、または他の用語との組み合わせで、別途言及されない限り、それぞれ「アルキル」および「ヘテロアルキル」の環型を表す。さらに、ヘテロシクロアルキルでは、ヘテロ原子は、ヘテロ環が分子の残部に結合する位置を占有することができる。シクロアルキルの例としては、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチル等が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクロアルキルの例としては、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５９】
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、単独で、または別の置換基の一部として、別途言及されない限り、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を意味する。さらに、「ハロアルキル」等の用語は、モノハロアルキルおよびポリハロアルキルを含むことを意味する。例えば、「ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル」という用語は、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピル等を含むことを意味するが、これらに限定されない。
【００６０】
「アリール」という用語は、別途言及されない限り、ともに縮合したまたは共有結合的に結合した、単一環または多環（好ましくは１〜３個の環）であることができる多価不飽和、芳香族、置換基を意味する。「ヘテロアリール」という用語は、１〜４個のヘテロ原子を含有するアリール基（または環）を指す。例示的な実施形態において、ヘテロ原子は、Ｂ、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択され、窒素および硫黄原子は、任意に酸化され、窒素原子は、任意に四級化される。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子を通じて分子の残部に結合することができる。アリールおよびヘテロアリール基の限定されない例には、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンゾイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、および６−キノリル、ジオキサボロラン、ジオキサボリナン、およびジオキサボレパンが含まれる。上述したアリールおよびヘテロアリール環系の各々の置換基は、下述する許容可能な置換基の群から選択される。
【００６１】
簡潔にするために、「アリール」という用語は、他の用語（例えば、アリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル）との組み合わせで用いる場合、アリール基が、分子の残部に次の部分を通して結合するそれらのラジカルを含む。したがって、「アリールアルキル」という用語は、アリール基がアルキル基に結合するそれらのラジカル（例えば、ベンジル、１−（３−ニトロフェニル）エチル等）を含む。また、ベンジルまたは１−（３−ニトロフェニル）エチル等の置換基は、「置換アルキル」によって表すこともでき、エチルラジカルは、３−ニトロフェニル部分で置換される。「アリールオキシ」という用語は、アリール基が酸素原子に結合するそれらのラジカルを含むことを意味する。「アリールオキシアルキル」という用語は、アリール基が酸素原子に結合し、次いで、アルキル基（例えば、フェノキシメチル、３−（１−ナフチルオキシ）プロピル等）に結合するそれらのラジカルを含むことを意味する。
【００６２】
簡潔にするために、「ヘテロアリール」という用語は、他の用語（例えば、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールチオキシ、ヘテロアリールアルキル）との組み合わせで用いる場合、ヘテロアリール基が、分子の残部に次の部分を通して結合するそれらのラジカルを含む。したがって、「ヘテロアリールアルキル」という用語は、ヘテロアリール基がアルキル基に結合するそれらのラジカル（例えば、ピリジルメチル等）を含むことを意味する。「ヘテロアリールオキシ」という用語は、ヘテロアリール基が酸素原子に結合するそれらのラジカルを含むことを意味する。「ヘテロアリールオキシアルキル」という用語は、アリール基が酸素原子に結合し、次いで、アルキル基に結合するそれらのラジカル  （例えば、２−ピリジルオキシメチル等）を含むことを意味する。
【００６３】
上記各のそれぞれの用語（例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」、および「ヘテロアリール」）は、示されたラジカルの置換および非置換形態の両方を含むことを意味する。それぞれのタイプのラジカルに好ましい置換基を以下に示す。
【００６４】
アルキルおよびヘテロアルキルラジカルの置換基（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクロアルケニルと称されることが多い基を含む）は、総称的に「アルキル基置換基」と称され、それらは０〜（２ｍ’＋ｌ）の範囲の数（式中、ｍ’はこのようなラジカルの炭素原子総数である）で、−Ｒ’、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ’’’’’−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ’’’’−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’ＳＯ２Ｒ’、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＨ（Ｐｈ）２、フルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、およびフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルの１つ以上の多様な基から選択されるが、これらに限定されない。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、Ｒ’’’’、およびＲ’’’’’は、それぞれ好ましくは独立して、水素、置換または非置換ヘテロアルキル、例えば、１−３ハロゲンで置換されたアリール等の置換または非置換アリール、置換または非置換アルキル、アルコキシまたはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基を指す。例えば、本発明の化合物が１個を超えるＲ基を含む場合、Ｒ基の各々が独立して選択され、１個を超えるＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’Ｒ’’’’、およびＲ’’’’’基が存在する場合はこれらも同様である。Ｒ’およびＲ’’が同一窒素原子に結合する場合、それらは、窒素原子と組み合わさって、５、６、または７員環を形成することができる。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’は、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを含むことを意味するが、これらに限定されない。置換基の上記考察から、当業者は、「アルキル」という用語が、ハロアルキル（例えば、−ＣＦ３および−ＣＨ２ＣＦ３）およびアシル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３等）の水素基以外の基に結合する炭素原子を含む基を含むことを意味することを理
解されよう。
【００６５】
アルキルラジカルについて記載される置換基と同様、アリールおよびヘテロアリール基の置換基は、総称的に「アリール基置換基」と称される。置換基は、０から芳香族環系上の開放原子価総数範囲内の数で、例えば、Ｒ’、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ’’’’’−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ’’’’−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’ＳＯ２Ｒ’、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＨ（Ｐｈ）２、フルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、およびフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され、式中、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、およびＲ’’’’は、好ましくは独立して、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールから選択される。例えば、本発明の化合物が１個を超えるＲ基を含む場合、Ｒ基の各々が独立して選択され、１個を超えるＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’Ｒ’’’’、およびＲ’’’’’基が存在する場合はこれらも同様である。
【００６６】
アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の置換基の２つは、任意に、式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）ｑ−Ｕ−（式中、ＴおよびＵは独立して、−ＮＲ−、−Ｏ−、−ＣＲＲ’−、または単結合であり、ｑは０〜３の整数である）の置換基によって置換されてもよい。代替として、アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の置換基の２つは、任意に、式−Ａ−（ＣＨ２）ｒ−Ｂ−（式中、ＡおよびＢは独立して、−ＣＲＲ’−、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−、または単結合であり、ｒは１〜４の整数である）の置換基によって置換されてもよい。このように形成された新しい環の単結合の１つは、任意に、二重結合によって置換されてもよい。代替として、アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の置換基の２つは、任意に、式−（ＣＲＲ’）ｓ−Ｘ−（ＣＲ’’Ｒ’’’）ｄ−、（式中、ｓおよびｄは独立して、０〜３の整数であり、Ｘは−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−である）の置換基によって置換されてもよい。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、およびＲ’’’’は、好ましくは独立して、水素、または置換または非置換（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキルから選択される。
【００６７】
本明細書で使用される「環」とは、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、または置換または非置換ヘテロアリールを意味する。環は、縮合した環部分を含む。環中の原子数は、典型的には、環中の環員数によって定義される。例えば、「５〜７員環」は、環状配置中に５〜７個の原子があることを意味する。別途特定されない限り、環は、任意に、ヘテロ原子を含む。したがって、「５〜７員環」という用語は、例えば、フェニル、ピリジニル、およびピペリジニルを含む。一方、「５〜７員のヘテロシクロアルキル環」という用語は、ピリジニルおよびピペリジニルを含むが、フェニルを含まない。「環」という用語は、１個を超える「環」を含む環系をさらに含み、各「環」は独立して、上記のように定義される。
【００６８】
本明細書で使用される「ヘテロ原子」という用語は、炭素（Ｃ）および水素（Ｈ）以外の原子を含む。例としては、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、ケイ素（Ｓｉ）、ゲルマニウム（Ｇｅ）、アルミニウム（Ａｌ）、およびホウ素（Ｂ）が挙げられる。
【００６９】
「Ｒ」という記号は、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のシクロアルキル、および置換または非置換のヘテロシクロアルキル基から選択される置換基を表す一般略語である。
【００７０】
「有効」量の薬物、製剤、または浸透剤とは、所望の局所的または全身的効果を提供するのに十分な量の活性剤を意味する。「局所的に有効な」、「美容的に有効な」、「医薬的に有効な」、または「治療的に有効な」量とは、所望の治療的結果をもたらすために必要とされる薬物の量を指す。
【００７１】
「局所的に有効な」とは、皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄に塗布すると、適用箇所において局所的に、または物質中の活性成分の経皮通過の結果として全身的に、所望の薬理学的結果を生み出す物質を指す。
【００７２】
「美容的に有効な」とは、皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄に塗布すると、物質中の活性成分の適用箇所において局所的に所望の美容的な結果を生み出す物質を指す。
【００７３】
「医薬的に許容できる塩」または「その塩」という用語は、本明細書で記載される化合物上に見られる特定の置換基に依存して、比較的無毒の酸または塩基を使用して調製される本発明の化合物の塩を含むことを意味する。本発明の化合物が比較的酸性の官能基を含有する場合、無希釈で、あるいは好適な不活性溶剤中で、このような化合物の中性形態と十分な量の所望の塩基とを接触させることにより、塩基付加塩を得ることができる。医薬的に許容できる塩基付加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、またはマグネシウム塩、または同様の塩が挙げられる。本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含有する場合、無希釈で、あるいは好適な不活性溶剤中で、このような化合物の中性形態と十分な量の所望の酸とを接触させることで、酸付加塩を得ることができる。医薬的に許容できる酸付加塩の例には、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸一水素、リン酸、リン酸一水素、リン酸二水素、硫酸、硫酸一水素、ヨウ化水素酸、または亜リン酸等の無機酸から誘導されるもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸等の比較的無毒の有機酸から誘導される塩が含まれる。アルギン酸等のアミノ酸の塩、およびグルクロン酸またはガラクツロン酸等の有機酸の塩も含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６６：１−１９（１９７７）を参照のこと）。本発明のある特定の化合物は、化合物が塩基または酸付加塩のどちらかに転換できるようにする、塩基性および酸性官能基の両方を含有する。
【００７４】
化合物の中性形態は、好ましくは、従来の様式で、塩を塩基または酸と接触させて、親化合物を単離することによって再生される。化合物の親形態は、極性溶剤中の溶解性等の特定の物理性質において、様々な塩形態とは異なる。
【００７５】
塩形態に加え、本発明は、プロドラッグ形態の化合物を提供する。本明細書で記載される化合物または複合体のプロドラッグは、生理学的条件下で容易に化学変化を受けて、本発明の化合物を提供する。さらに、プロドラッグは、生体外環境で化学的または生化学的方法により本発明の化合物に変換することができる。
【００７６】
本発明の特定の化合物は、非溶媒和形態および水和物形態を含む、溶媒和形態で存在することができる。一般に、溶媒和形態は、非溶媒和形態と同等であり、本発明の範囲内に包含される。本発明の特定の化合物は、多結晶性または非晶質の形態で存在してもよい。一般に、全ての物理的形状は、本発明で意図される使用において同等であり、本発明の範囲内であることが企図される。
【００７７】
本発明の特定の化合物は、非対称性炭素原子（光学中心）または二重結合を有し、ラセミ体、ジアステレオマー、幾何学的異性体、および個々の異性体は、本発明の範囲内に包含される。本明細書で使用されるラセミ、アンビスカレミック（ａｍｂｉｓｃａｌｅｍｉｃ）およびスカレミック（ｓｃａｌｅｍｉｃ）または鏡像異性的に純粋な化合物の図面は、Ｍａｅｈｒ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｅｄ．１９８５，６２：１１４−１２０から取る。実線および破線の楔は、別途注記されない限り、立体中心の絶対立体配置を示すために用いる。本明細書で記載される化合物がオレフィン二重結合または幾何学的不斉の他の中心を含む場合、かつ別途特定されない限り、化合物にはＥおよびＺ幾何異性体がどちらも含まれることを意図する。同様に、全ての互変異性体が含まれる。
【００７８】
本発明の化合物は、特定の幾何学または立体異性体で存在することができる。本発明は、シス−およびトランス−異性体、（−）−および（＋）−鏡像異性体、（Ｒ）−および（Ｓ）−鏡像異性体、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、そのラセミ混合物、およびそれの他の混合物、例えば、本発明の範囲内にある鏡像異性体またはジアステレオマーに富む混合物を含む、全てのこのような化合物を企図する。さらなる不斉炭素原子がアルキル基等の置換基中に存在することができる。全てのこのような異性体、およびその混合物が、本発明に含まれることが意図される。
【００７９】
光学活性のある（Ｒ）−および（Ｓ）−異性体、ならびにｄおよびｌ異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を用いて調製するか、または従来の技術を用いて分解することができる。例えば、本発明の化合物の特定の鏡像異性体を所望する場合は、これを不斉合成によって、またはキラル補助剤（ｃｈｉｒａｌ  ａｕｘｉｌｉａｒｙ）による誘導体化によって調製し、得られたジアステレオマー混合物を分離し、補助基を切断して純粋な所望の鏡像異性体を得ることができる。代替として、分子がアミノ基等の塩基性官能基、またはカルボキシル基等の酸性官能基を含有する場合、適切な光学活性のある酸または塩基を用いてジアステレオマー塩を形成することができ、次いで、このようにして形成されたジアステレオマーを分別結晶化または当該技術分野で既知のクロマトグラフィー手段によって分解し、次いで、純粋な鏡像異性体を回収する。さらに、鏡像異性体およびジアステレオマーの分離は、しばしば、キラルの固定相を用いたクロマトグラフィーを使用して、任意に、化学誘導体化と組み合わせて（例えば、アミンからカルバメートの形成）、達成する。
【００８０】
本発明の化合物はまた、このような化合物を構成する１つ以上の原子に、自然に反する割合の原子の同位体を含有してもよい。例えば、化合物は、例えば、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、または炭素−１４（１４Ｃ）等の放射性同位体で放射標識されてもよい。本発明の化合物の全ての同位体の変形は、放射性の有無を問わずに本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００８１】
「医薬的に許容される担体」または「医薬的に許容されるビヒクル」という用語は、本明細書で定義されるような有効量の活性剤の適切な送達を提供し、活性剤の生物学的活性の有効性を妨げず、宿主または患者にとって十分に無毒である、あらゆる製剤または担体媒体を指す。代表的な担体としては、水、植物性および鉱物性の両方の油、クリーム基剤、ローションベース基剤、軟膏基剤等が挙げられる。これらの基剤は、懸濁剤、増粘剤、浸透促進剤等を含む。それらの製剤については、化粧品および局所医薬品の当業者に公知である。担体に関するさらなる情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）に見ることができ、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８２】
「医薬的に許容される担体」または「医薬的に許容されるビヒクル」という用語は、本明細書で定義されるような有効量の活性剤の適切な送達を提供し、活性剤の生物学的活性の有効性を妨げず、宿主または患者にとって十分に無毒である、あらゆる製剤または担体媒体を指す。代表的な担体としては、水、植物性および鉱物性の両方の油、クリーム基剤、ローションベース基剤、軟膏基剤等が挙げられる。これらの基剤は、懸濁剤、増粘剤、浸透促進剤等を含む。それらの製剤については、化粧品および局所医薬品の当業者に公知である。担体に関するさらなる情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）に見ることができ、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８３】
「医薬的に許容される局所用担体」および等価用語は、上記の通り、上の本明細書に記載されるように、局所適用に好適な医薬的に許容される担体を指す。活性剤の懸濁化または溶解することが可能な、皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄に適用されるときに非毒性および非炎症性の性質を有する、不活性な液体またはクリーム媒体が、医薬的に許容される局所用担体の例である。この用語は、具体的には、局所用化粧品における使用のために承認された担体物質も同様に包含することが意図される。
【００８４】
「医薬的に許容される添加剤」という用語は、活性剤の生物活性の有効性を過度に妨げず、宿主または患者にとって十分に無毒である、製薬分野で既知であるか、または使用されている、保存剤、抗酸化剤、芳香剤、乳化剤、染色剤（ｄｙｅｓ）、および賦形剤を指す。局所製剤用の添加剤は、当該技術分野において公知であり、それらが医薬的に許容され、上皮細胞またはその機能にとって有害でない限り、局所用組成物に添加することができる。さらに、添加剤は、組成物の安定性の低下を引き起こしてはならない。例えば、不活性な充填剤、抗刺激剤、粘着付与剤、賦形剤、芳香剤、乳白剤、抗酸化剤、ゲル化剤、安定化剤、界面活性剤、皮膚軟化剤、着色剤、保存剤、緩衝剤、他の透過促進剤、および他の従来の局所または経皮送達製剤の成分が、当該技術分野において既知である。
【００８５】
「促進」、「浸透促進」、または「透過促進」という用語は、薬物の皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄を介した透過率が増加するように、皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄の薬物に対する透過性が増加することに関する。このような促進剤の使用によりもたらされる透過性の向上は、例えば、動物の皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄を通じた薬物の拡散率を、拡散セル装置を用いて計測することにより観察することができる。拡散セルについては、Ｍｅｒｒｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ  ｆｏｒ  Ｓｋｉｎ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ，Ｊ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，１（１９８４）ｐｐ．１６１−１６２に記載されている。「透過促進剤」または「浸透促進剤」という用語は、単独または組み合わせで、皮膚、爪、毛髪、または蹄の薬物に対する透過性を増加させるよう作用する薬剤または薬剤の混合物を意図する。
【００８６】
「賦形剤」という用語は、所望の使用に有効な薬物組成物の製剤化に使用される担体、希釈剤、および／またはビヒクルを意味するものとして従来既知である。
【００８７】
薬物または薬理学的活性剤の「有効量」または「治療有効量」という用語は、所望の効果を提供するための無毒であるが十分な量の薬物または薬剤を指す。本開示の経口剤形において、併用剤の「有効量」の１つの活性剤は、併用剤の他の活性剤と併用して使用される場合、所望の効果を提供するために有効である活性剤の量である。「有効な」量は、個人の年齢および全身状態に依存して、対象から対象によって異なり得、特定の活性剤およびあらゆる個人の場合における適切な「有効な」量は、日常の実験を用いて当業者によって決定され得る。
【００８８】
「活性成分」、「治療剤」、「活性」、または「活性剤」という語句は、標的とされる疾患、疾病、または状態を治療する際に有効であり得る化学物質を意味する。
【００８９】
「医薬的に許容される」という語句は、例えば、過度の毒性、刺激、アレルギー反応等の望ましくない生物学的効果を引き起こすことなくヒトに用いるのに好適な、医学的判断の範囲内で部分または化合物を意味する。
【００９０】
「経口剤形」という語句は、口腔により対象に投与される任意の医薬組成物を意味し、１つ以上の抗血小板剤および１つ以上の酸阻害剤を、任意に、１つ以上の追加の薬物とともに、組み合わせて同時に投与する。例示的な経口剤形には、錠剤、カプセル剤、フィルム剤、粉剤、サシェ剤、顆粒剤、液剤、固形剤、懸濁剤、または１つを超える異なる単位（例えば、異なる活性剤を含有する顆粒剤、錠剤、および／またはカプセル剤）が同時投与用に一緒に包装される場合、および当技術分野において既知の他の製剤が含まれる。経口剤形は、１、２、３、４、５または６単位であり得る。経口剤形が複数の単位を有する場合、単位の全ては、単一の包装（例えば、瓶、またはブリスターパック等の他の形態の包装）内に含まれる。経口剤形が単一の単位である場合、単一の包装であってもなくてもよい。好ましい実施形態において、経口剤形は、１、２、または３単位である。特に好ましい実施形態において、経口剤形は、１単位である。
【００９１】
「単位」という語句は、本明細書で使用される場合、剤形を含む投与される別個の対象物の数を意味する。いくつかの実施形態において、剤形には、１つのカプセル内に本発明の化合物が含まれる。これは単一の単位である。いくつかの実施形態において、剤形には、治療的に有効な用量のクリームまたは軟膏の一部として、本発明の化合物が含まれる。これも単一の単位である。いくつかの実施形態において、剤形は、本発明の化合物、および１つのカプセル内に含有する別の活性成分、または治療的に有効な用量のクリームまたは軟膏またはローションの一部として含まれる。これは、カプセルの内部が活性成分の複数の別個の顆粒を含むかどうかにかかわらず、単一の単位である。いくつかの実施形態において、剤形には、１つのカプセル内に本発明の化合物、および第２のカプセル内に活性成分が含まれる。これは、２つのカプセルまたは錠剤等の２単位経口剤形であり、そのような単位は単一の包装に含まれる。したがって、「単位」という用語は、動物に投与される対象物を指し、対象物の内部成分を指さない。
【００９２】
「プロドラッグ」という用語は、本明細書で定義される場合、生体内でその活性形態に化学的および／または酵素的変換した後でのみ、その薬理学的効果を発揮する親薬物分子の生物学的に不活性な誘導体である。プロドラッグには、親薬物の送達に関連する問題を回避するように設計されたものが含まれる。これは、化学安定性の低下または水溶解度が低い等の物理化学的性質の低下によるものであり得、バイオアベイラビリティーの低下または半減期の低下等の薬物動態的性質の低下によるものでもあり得る。したがって、プロドラッグの特定の利点には、親カルボン酸の向上した化学安定性、吸収、および／またはＰＫ性質が含まれ得る。また、プロドラッグは、回数（例えば、１日１回）、または投薬の経路（例えば、経口）を最小化することによって、さらに「患者に優しい」薬物を作製するため、経口投与される場合、味覚または嗅覚を向上するため、または非経口的に投与される場合、疼痛を最小限に抑えるためにも使用され得る。
【００９３】
いくつかの実施形態において、プロドラッグは、活性薬物の「持続放出」をもたらし、それによって、親化合物の有効性を向上する方法において、Ｄ−セリンの増加の経時変化を変化させる。例えば、Ｄ−セリンレベルの増加を拡大する本発明の化合物は、認知（例えば、恐怖条件付け文脈学習（Ｃｏｎｔｅｘｔｕａｌ  Ｆｅａｒ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ）または新規物質認識（Ｎｏｖｅｌ  Ｏｂｊｅｃｔ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ））の動物モデルにおいて向上した有効性を示している。
【００９４】
いくつかの実施形態において、プロドラッグは、薬物のみと比較して、活性薬物よりもさらに化学的に安定しており、それにより、親薬物の製剤化および送達を向上する。
【００９５】
本発明のカルボン酸類自体のプロドラッグは、様々なエステルを含み得る。例示的な実施形態において、本発明の医薬組成物には、カルボン酸エステルが含まれる。例示的な実施形態において、プロドラッグは、血液脳関門を横断させるために薬物分子を必要とするこれらの疾病および状態を治療／予防するのに好適である。例示的な実施形態において、プロドラッグは、脳に入り、そこで薬物分子の活性形態に変換される。一実施形態において、プロドラッグを使用して、プロドラッグを眼に局所的適用した後、眼の内部に達することを可能にする。さらに、プロドラッグは、生体外環境で化学的または生化学的方法によって、その親化合物に変換することができる。例えば、プロドラッグは、好適な酵素または化学試薬とともに経皮パッチリザーバ内に入れた場合に、その親化合物にゆっくりと変換することができる。
【００９６】
「局所投与」という用語は、薬剤が皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄の外表面を介して下層の組織に進入するように、医薬品の皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄の外表面へ適用することを指す。局所投与は、無傷の皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄に対する、あるいは皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄の損傷した未治療の傷または開放創に対する組成物の適用を含む。医薬品の局所投与により、薬剤の皮膚および周囲組織への分布を限定的にすることができ、または血流によって薬剤が治療範囲から取り除かれるときには薬剤を全身に分布させることができる。
【００９７】
「経皮送達」という用語は、組成物の局所投与または他の適用から得られる皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄の障壁を通り抜ける薬剤の拡散を指す。角質層は、障壁として機能を果たし、無傷の皮膚にはわずかな医薬品しか浸透できない。対照的に、表皮および真皮は、多くの溶質に対し透過性であり、したがって、擦過あるいは角質層が剥がれて表皮が露出した皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄を介した薬物の吸収は、より容易に行われる。経皮送達には、皮膚、爪、毛髪、鉤爪、もしくは蹄または粘膜の任意の部分を介した注入または他の送達、および残部を介した吸収または透過が含まれる。無傷の皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄を介した吸収は、皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄への適用前に、活性剤を適切な医薬的に許容されるビヒクル中に入れることにより向上させることができる。受動的局所投与は、皮膚軟化剤または浸透促進剤と組み合わせて、活性剤を治療部位に直接適用することから構成されてもよい。本明細書で使用される経皮送達は、外皮、すなわち皮膚、爪、毛髪、鉤爪、または蹄を介したあるいは通る透過による送達を含むことが意図される。
【００９８】
「基質」という用語は、経口剤形における、ビーズ、粒子、顆粒、ペレット等の医薬的に許容される粒子状物質を意味する。
【００９９】
「実質的に含まない」という用語は、本明細書で使用される場合、組成物が意図される任意の既知の目的のために、物質を全く含有しない、または治療有効量未満の物質を含有する組成物を指す。
【０１００】
「微生物感染」という用語は、ウイルス、バクテリア、マイコバクテリア、真菌、および寄生生物が挙げられるが、これらに限定されない、感染物質による宿主組織の任意の感染を指す（例えば、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｐｐ．９３−９８（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１２ｔｈ  ｅｄ．１９９１）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍ．４２：１４８１−１４８５（１９９９）を参照されたく、参照によってその全体が本明細書でそれぞれ組み込まれる）。
【０１０１】
本明細書で使用される「生物学的媒体」とは、体外および生体内両方の生物学的環境を指す。例示的な体外の「生物学的媒体」としては、細胞培養、組織培養、ホモジネート、血漿、および血液が挙げられるが、これらに限定されない。生体内の適用は、一般的に哺乳動物、好ましくはヒトにおいて行う。
【０１０２】
「離脱基」という用語は、求核置換反応等の置換反応で、別の官能基または原子が置き換わることができる官能基または原子を意味する。例示として、代表的な脱離基には、トリフレート、クロロ、ブロモ、およびヨード基；メシレート、トシレート、ブロシレート、ノシレート等のスルホン酸エステル基；アセトキシ、トリフルオロアセトキシ等のアシルオキシ基が含まれる。
【０１０３】
「アミノ保護基」という用語は、アミノ窒素での望ましくない反応を妨げるのに適した保護基を意味する。代表的なアミノ保護基としては、ホルミル；アシル基、例えば、アセチル、トリクロロアセチル、またはトリフルオロアセチル等のアルカノイル基；ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）等のアルコキシカルボニル基；ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）等のアリールメトキシカルボニル基；ベンジル（Ｂｎ）、トリチル（Ｔｒ）および１，１−ジ−（４’−メトキシフェニル）メチル等のアリールメチル基；トリメチルシリル（ＴＭＳ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）等のシリル基等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０４】
「ヒドロキシ保護基」という用語は、ヒドロキシ基での望ましくない反応を妨げるのに適した保護基を意味する。代表的なヒドロキシ保護基としては、メチル、エチル、およびｔｅｒｔ−ブチル等のアルキル基；アシル基、例えば、アセチル等のアルカノイル基；ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）、９−フルオレニルメチル（Ｆｍ）、およびジフェニルメチル（ベンズヒドリル、ＤＰＭ）等のアリールメチル基；トリメチルシリル（ＴＭＳ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）等のシリル基が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０５】
ホウ素は、本発明のいくつかの状況下で、酸素、硫黄、または窒素との供与結合（または配位結合）を形成することができる。供与結合は、通常、共有結合よりも弱い。ホウ素原子が少なくとも１つの酸素、硫黄、または窒素に共有結合し、同時に、それぞれ、酸素、硫黄、または窒素に供与結合している状況では、ホウ素と２つの等しいヘテロ原子との供与結合および共有結合が相互互換でき、あるいは共鳴混成体の形態をとることができる。これらの状況では、電子共有の正確な性質および程度を取り巻く潜在的な不確定要素がある。提供される構造は、ホウ素とこれが結合する原子との間のあらゆる、および全ての可能な結合のシナリオを含むことを意図したものではない。これらの結合の限定されない例は、以下の通りである。
【化２】
2012502037.tif 000004
【０１０６】
炭素および３個のヘテロ原子（この項で説明する３個の酸素等）に結合されるホウ素を含む化合物は、任意に、ホウ素と酸素の１つと間の供与結合の性質により、完全に負に荷電したホウ素または部分的に負に荷電したホウ素を含有することができる。負電荷によって、正に荷電した対イオンがこの化合物に会合し、ひいては、塩を形成してもよい。正に荷電した対イオンの例には、Ｈ＋、Ｈ３Ｏ＋、カルシウム、ナトリウム、アンモニウム、カリウムが含まれる。これらの化合物の塩は、これらの化合物についての説明に必然的に含まれる。
【０１０７】
本発明はまた、例えば、本発明において用いられる化合物の二量体、三量体、四量体、およびこれより上のホモログ等の種またはその反応性類似体を含む多価（ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ）または多価（ｍａｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ）の種である化合物も包含する。例えば、以下の条件下で、二量体が形成することができる。
【化３】
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【０１０８】
本発明はまた、環状ボロン酸エステルの無水物である化合物も包含し、これらの化合物を脱水条件に付すことで合成される。これらの無水物の例を以下にあげる。
【化４】
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【０１０９】
本発明の化合物の三量体も生成される。例えば、非環式ボロン酸エステルの三量体を以下のように形成することができる。
【化５】
2012502037.tif 000007
【０１１０】
また、本発明の化合物のポリマーは、強酸中で特定の保護基を除去することにより生成される。例えば、三量体は、以下の通りに形成することができる。
【化６】
2012502037.tif 000008
【０１１１】
例えば、本発明において用いられる化合物の二量体、三量体、四量体、およびこれより上のホモログ等の種またはその反応性類似体を含む、多価（ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ）または多価（ｍａｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ）の種である化合物も、本発明において用いられる。多価（ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ）または多価（ｍａｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ）の種を、本発明の単一の種または１つを超える種から組み立てることが可能である。例えば、二量体の構築物は、「ホモ二量体」または「ヘテロ二量体」であり得る。さらに、本発明の化合物またはその反応性類似体が、オリゴマーまたはポリマー骨格（例えば、ポリリシン、デキストラン、ヒドロキシエチルスターチ等）に結合している多価（ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ）または多価（ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ）の構築物も、本発明の範囲内である。骨格は、好ましくは、多官能性である（すなわち、本発明で用いる化合物を結合するための反応部位のアレイを有する）。さらに、本発明の単一の種または本発明の１つを超える種で骨格を誘導体化することもできる。
【０１１２】
さらに、本発明には、同様に官能化されていない類似の化合物に対して高い水溶解性を持つ化合物が得られるよう官能化される、本明細書に含まれる式に示されるモチーフ内で化合物を使用することが含まれる。このように、本明細書に記載の置換基はいずれも、水溶性を高める類似のラジカルで置換することが可能である。例えば、ヒドロキシル基をジオールで置換すること、あるいはアミンを第４級アミン、ヒドロキシアミン、またはより水溶性の類似部分で置換することは、本発明の範囲内である。好ましい実施形態において、本明細書に記載の化合物の修正ドメインに対する活性に重要ではない部位において、親化合物の水溶解性を高める部分を用いて置換を行うことによって、さらに水溶解性を与える。有機化合物の水溶解性を高める方法は、当該技術分野において既知である。このような方法としては、例えば、第４級アンモニウム等の永続的に荷電した部分、または例えば、カルボン酸やアミン等の生理学的に関連するｐＨで荷電した基で有機核を官能化することが挙げられるが、これらに限定されない。他の方法には、有機核に加えて、例えば、アルコール、ポリオール、ポリエーテル等のヒドロキシル含有基またはアミン含有基がある。代表例としては、ポリリシン、ポリエチレンイミン、ポリ（エチレングリコール）、およびポリ（プロピレングリコール）が挙げられるが、これらに限定されない。これらの化合物に適した官能化化学および戦略は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｄｕｎｎ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．ＰＯＬＹＭＥＲＩＣ  ＤＲＵＧＳ  ＡＮＤ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＳＹＳＴＥＭＳ，ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｖｏｌ．４６９，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９９１を参照のこと。
【０１１３】
ＩＩ．  導入
本発明は、多数の態様を有する。これらの態様は、化合物、医薬製剤、状態を治療する、効果を増強させる、サイトカインおよび／またはケモカインの産生を増大させる、サイトカインおよび／またはケモカインの産生を減少させる、サイトカインおよび／またはケモカインの放出を増大させる、サイトカインおよび／またはケモカインの放出を減少させる、またはホスホジエステラーゼを阻害する方法を対象にする発明を含む。
【０１１４】
ＩＩＩ．  化合物
ＩＩＩａ．
第１の態様において、本発明は、本発明の化合物を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書で記載される化合物である。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書で記載される式によるものである。
【０１１５】
第２の態様において、本発明は、式
【化７】
2012502037.tif 000009
による構造を有する化合物を提供し、
式中、Ｘは、ＣＨ、Ｃ（ＣＮ）、ＣＲｂ、およびＮからなる群から選択される。Ｙは、ＣＨ、Ｃ（ＣＮ）、ＣＲｂ、およびＮからなる群から選択される。ａは０または１である。ｂは０または１である。Ｒｄは、Ｈ、非置換のＣ１−Ｃ６アルキル、ＣＯＲ１０、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、式中、Ｒ１０は、Ｈおよび非置換のＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択される。但し、ＸまたはＹがＣ（ＣＮ）である場合、ａは０である。但し、ＸまたはＹがＣＲｂである場合、ｂは０である。但し、ＸおよびＹはともに、Ｃ（ＣＮ）ではあり得ない。但し、ＸおよびＹはともに、ＣＲｂではあり得ない。Ｒｂは、ＯＲ４、ＮＲ４Ｒ５、ＳＲ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、ニトロ、シアノ、ハロゲン、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択され、式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択される。但し、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している原子と一体となって、任意に組み合わせて、５〜７員の置換または非置換のヘテロシクロアルキル環を形成する。
【０１１６】
例示的な実施形態において、ＸはＮであり、Ｙ、ａ、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、ＸはＣＨであり、Ｙ、ａ、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、ＸはＣ（ＣＮ）であり、ａは０であり、Ｙ、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、ＸはＣＲｂであり、Ｙ、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０１１７】
例示的な実施形態において、ＸはＮであり、ＹはＣＨであり、ａ、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、ＸはＣＨであり、ＹはＣＨであり、ａ、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、ＸはＣ（ＣＮ）であり、ＹはＣＨであり、ａは０であり、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、ＸはＣＲｂであり、ＹはＣＨであり、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０１１８】
例示的な実施形態において、ＹはＮであり、Ｘ、ａ、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、ＹはＣＨであり、Ｘ、ａ、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、ＹはＣ（ＣＮ）であり、ａは０であり、Ｘ、ａ、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、ＹはＣＲｂであり、Ｘ、ａ、ｂ、Ｒｂ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０１１９】
例示的な実施形態において、ＲｄはＨであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｄはメチルであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｄはエチルであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｄはプロピルであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｄは非置換のＣ４アルキルであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｄはブチルであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｄは非置換のＣ５アルキルであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｄはペンチルであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｄは非置換のＣ６アルキルであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｄはヘキシルであり、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りである。
【０１２０】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ６非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はプロピルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はイソプロピルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はｎ−ブチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はイソブチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はｔ−ブチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はｓｅｃ−ブチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はペンチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はイソペンチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はヘキシルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＨである。
【０１２１】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０はＣ１−Ｃ６非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄ−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０はプロピルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄ−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０はイソプロピルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０はｎ−ブチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０はイソブチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０はｔ−ブチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０はｓｅｃ−ブチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０はペンチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０はイソペンチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０はヘキシルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、ｂ、およびＲｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）Ｈである。
【０１２２】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、ＯＲ４、ＮＲ４Ｒ５、ＳＲ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、ニトロ、シアノ、ハロゲン、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択され、式中、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ、本明細書に記載される通りである。
【０１２３】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ６、および−ＣＨ２ＮＲ６Ｒ７からなる群から選択され、式中、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、メチル、トリフルオロメチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、−Ｃ（Ｏ）Ｈからなる群から選択され、式中、Ｒ６およびＲ７は、それらが結合している窒素と一体となって、任意に組み合わせて、４−メチルピペラジニル、ピペリジニル、モルホリノ、およびピロリジニルからなる群から選択される員を形成する。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、メチル、トリフルオロメチル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、
【化８】
2012502037.tif 000010
からなる群から選択される。
【０１２４】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、−ＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択され、式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、メチル、エチル、メトキシエチル、シクロプロピル、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、２−（ジメチルアミノ）エチル、２−ピリジニルメチル、２−（４−シアノ）ピリジニルからなる群から選択されるが、但し、Ｒ８およびＲ９は、それらが結合している原子と一体となって、任意に組み合わせて、５〜７員の置換または非置換のヘテロシクロアルキル環を形成する。
【０１２５】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、
【化９】
2012502037.tif 000011
からなる群から選択される。
【０１２６】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ａ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、Ｆ、Ｃｌ、メチル、トリフルオロメチル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、
【化１０】
2012502037.tif 000012
からなる群から選択される。
【０１２７】
例示的な実施形態において、化合物は、式
【化１１】
2012502037.tif 000013
による構造を有し、
式中、Ｘは、ＮまたはＣＨまたはＣＲｂである。Ｙは、Ｎ、ＣＨ、およびＣＲｂからなる群から選択される。Ｒｄは、Ｈ、非置換のＣ１−Ｃ６アルキル、ＣＯＲ１０、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、式中、Ｒ１０は、Ｈおよび非置換のＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択される。但し、ＸまたはＹがＣＲｂではなく、ｂが０でない場合、ｂは１である。但し、ＸおよびＹはともに、ＣＲｂであり得ない。Ｒｂは、ＯＲ４、ＮＲ４Ｒ５、ＳＲ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、ニトロ、シアノ、ハロゲン、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択され、式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択される。但し、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している原子と一体となって、任意に組み合わせて、５〜７員の置換または非置換のヘテロシクロアルキル環を形成する。
【０１２８】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂはアルキルであり、ハロゲン、ＯＲ４ａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４ａ、ＮＲ４ａＲ４ｂ、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、または非置換のアリールからなる群から選択される員で任意に置換され、式中、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、それぞれ独立して、Ｈ、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択される。例示的な実施形態において、Ｒ４ａはＨまたは非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｂは、Ｈまたは非置換のアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｈである。例示的な実施形態において、Ｒｂはフルオロである。例示的な実施形態において、Ｒｂはクロロである。
【０１２９】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は、少なくとも１つのハロゲン、ヒドロキシル、エーテル、カルボキシ、またはエステル部分で任意に置換される、アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は、１個のハロゲンまたは１個のヒドロキシルまたは１個のエーテルまたは１個のカルボキシまたは１個のエステル部分で任意に置換される、アルキルである。
【０１３０】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は非置換のＣ１またはＣ２またはＣ３アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は非置換のＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は、メチルまたはエチルまたはプロピルまたはイソプロピルまたはイソブチルである。
【０１３１】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は、少なくとも１個のハロゲンで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は、１個または２個または３個のハロゲンで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯ（ＣＨ２）ｍ１Ｒ３１であり、式中、ｍ１は、０または１または２または３または４または５または６であり、Ｒ３１はメチル部分であり、式中、メチルヒドロゲンの少なくとも１つは、ハロゲンで置換される。例示的な実施形態において、ハロゲンはクロロである。例示的な実施形態において、ハロゲンはフルオロである。例示的な実施形態において、Ｒ３１は−ＣＦ３である。例示的な実施形態において、Ｒ３１は−ＣＨＦ２である。例示的な実施形態において、ｍ１は、１または２または３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−ＯＣＨ２ＣＦ３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−ＯＣＨ２ＣＨＦ２である。
【０１３２】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−Ｏ（ＣＨ２）ｍ１ＯＣ（Ｏ）Ｒ４ｄであり、式中、ｍ１は、１または２または３または４または５または６から選択される数であり、Ｒ４ｄは非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、ｍ１は、１または２または３である。例示的な実施形態において、ｍ１は２である。例示的な実施形態において、Ｒ４ｄは非置換のＣ１またはＣ２またはＣ３アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｄは非置換のＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１３３】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−Ｏ（ＣＨ２）ｍ１Ｃ（Ｏ）Ｒ４ｄであり、式中、ｍ１は、１または２または３または４または５または６から選択される数であり、Ｒ４ｄは非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、ｍ１は、２または３または４である。例示的な実施形態において、ｍ１は３である。例示的な実施形態において、Ｒ４ｄは非置換のＣ１またはＣ２またはＣ３アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｄは非置換のＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−Ｏ（ＣＨ２）３Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１３４】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−Ｏ（ＣＨ２）ｍ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ４ｄであり、式中、ｍ１は、１または２または３または４または５または６から選択される数であり、Ｒ４ｄはＨまたは非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ４ｄであり、式中、Ｒ４ｄは本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｄは、Ｈまたはメチルまたはエチルまたはｔ−ブチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−Ｏ（ＣＨ２）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３または−Ｏ（ＣＨ２）Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｏ（ＣＨ２）Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３である。
【０１３５】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は、置換または非置換のアミノで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−Ｏ（ＣＨ２）ｍ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ４ｅＲ４ｆであり、式中、ｍ２は、１または２または３または４または５または６から選択される数であり、Ｒ４ｅは、Ｈまたは非置換のアルキルであり、Ｒ４ｆは、Ｈまたは非置換のアルキルであるか、またはＲ４ｅおよびＲ４ｆは、それらが結合している窒素と一体となって、任意に接合して、置換または非置換の４〜８員環を形成する。
【０１３６】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ４ｅＲ４ｆであり、式中、Ｒ４ｅおよびＲ４ｆは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｅおよびＲ４ｆは、同一であり、それぞれは、独立して選択される非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｅおよびＲ４ｆは、異なり、それぞれは、独立して選択される非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｅはＨである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｆはＨである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｅおよびＲ４ｆは、エチルである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｅおよびＲ４ｆは、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、ピペラジニルを形成し、置換されないか、あるいは４位の窒素上で非置換のアルキルで置換される。例示的な実施形態において、Ｒ４ｅおよびＲ４ｆは、それらが結合している窒素と一体となって、接合し、Ｎ−メチルピペラジニルを形成する。例示的な実施形態において、Ｒ４ｅおよびＲ４ｆは、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、ピペリジニルを形成し、置換されないか、あるいは非置換のアルキルで置換される。例示的な実施形態において、Ｒ４ｅおよびＲ４ｆは、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、４−メチルピペリジニルを形成する。例示的な実施形態において、Ｒ４ｅおよびＲ４ｆはそれらが結合している窒素と一体となって、接合して、非置換のモルホリニルを形成する。
【０１３７】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４は、Ｃ１またはＣ２またはＣ３またはＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４はＣ１アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は、非置換のピリジニルで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは
【化１２】
2012502037.tif 000014
であり、式中、ｍ３は、１または２または３または４または５または６である。例示的な実施形態において、ｍ３は１である。
【０１３８】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は、置換または非置換のシクロアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は非置換のシクロアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４はシクロペンチルである。例示的な実施形態において、Ｒ４は非置換のシクロヘキシルである。
【０１３９】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は、非置換のアルコキシで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−Ｏ（ＣＨ２）ｍ５ＯＲ３０であり、式中、ｍ５は、１または２または３または４または５または６であり、Ｒ３０は、Ｈまたは非置換のアルキル、または非置換のテトラヒドロピランである。例示的な実施形態において、Ｒ３０は、Ｃ１またはＣ２またはＣ３またはＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、ｍ５は、１または２または３である。例示的な実施形態において、ｍ５は２である。例示的な実施形態において、Ｒ３０は、Ｃ１またはＣ２またはＣ３アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ３０は、Ｃ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ３０はＨである。例示的な実施形態において、Ｒ３０は、メチルまたはイソプロピルである。例示的な実施形態において、Ｒ３０は２−テトラヒドロピランである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ（ＣＨ３）２または−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＨまたは−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ−ＴＨＰ（テトラヒドロピラン）である。
【０１４０】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＯＲ４であり、式中、Ｒ４は、非置換のシクロアルキルで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−Ｏ（ＣＨ２）ｍ５ＯＲ３０であり、式中、ｍ５は、１または２または３または４または５または６であり、Ｒ３０は、３〜８員のシクロアルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ３０は、３〜６員のシクロアルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ３０はシクロプロピルまたはシクロペンチルである。例示的な実施形態において、ｍ５は、１または２または３である。例示的な実施形態において、ｍ５は１である。
【０１４１】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＣ（Ｏ）Ｒ４であり、式中、Ｒ４は非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４は、Ｃ１またはＣ２またはＣ３またはＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ４はＣ１アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＣ（Ｏ）Ｈである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＣ１またはＣ２またはＣ３またはＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、ＲｂはＣ１アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、ハロゲンで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、少なくとも１個のハロゲンで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、少なくとも１個のフルオロで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＣＦ３である。
【０１４２】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、ヒドロキシで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−（ＣＨ２）ｍ４ＯＨであり、式中、ｍ４は、１または２または３または４または５または６から選択される数である。例示的な実施形態において、ｍ４は１である。
【０１４３】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、カルボキシまたはエステルで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−（ＣＨ２）ｍ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ４ａであり、式中、ｍ１は、１または２または３または４または５または６から選択される数であり、Ｒ４ａは、Ｈまたは非置換のアルキルである。
【０１４４】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ４ａであり、式中、Ｒ４ａは本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒ４ａは、Ｈまたはメチルまたはエチルまたはｔ−ブチルである。
【０１４５】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、アミノで置換されるアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−（ＣＨ２）ｍ７ＮＲ４ａＲ４ｂであり、式中、ｍ７は、１、２、３、４、５、および６からなる群から選択され、Ｒ４ａは、Ｈ、非置換のアルキル、およびホルミルからなる群から選択され、Ｒ４ｂは、Ｈ、非置換のアルキル、およびホルミルからなる群から選択されるか、またはＲ４ａおよびＲ４ｂは、それらが結合している窒素と一体となって、任意に接合して、置換または非置換の４〜８員環を形成する。例示的な実施形態において、Ｒ４ｂは本明細書に記載される通りであり、Ｒ４ａはＨである。例示的な実施形態において、Ｒ４ａは本明細書に記載される通りであり、Ｒ４ｂはＨである。例示的な実施形態において、Ｒ４ｂは本明細書に記載される通りであり、Ｒ４ａはメチルである。例示的な実施形態において、Ｒ４ａは本明細書に記載される通りであり、Ｒ４ｂはメチルである。例示的な実施形態において、ｍ７は１である。例示的な実施形態において、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、ピペラジニルを形成し、置換されないか、あるいは４位の窒素上で非置換のアルキルで置換される。例示的な実施形態において、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、Ｎ−メチルピペラジニルを形成する。例示的な実施形態において、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、ピペリジニルを形成し、置換されないか、あるいは非置換のアルキルで置換される。例示的な実施形態において、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、４−メチルピペリジニルを形成する。例示的な実施形態において、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、非置換のモルホリニルを形成する。
【０１４６】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＨ２である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４はＨまたは非置換のアルキルであり、Ｒ５は、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択される。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４は本明細書に記載される通りであり、Ｒ５は非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４はＨであり、Ｒ５は本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４は非置換のアルキルであり、Ｒ５は本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ５は本明細書に記載される通りであり、Ｒ４は、非置換のＣ１またはＣ２またはＣ３またはＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４は非置換のＣ１またはＣ２またはＣ３アルキルであり、Ｒ５は本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４はメチルであり、Ｒ５は本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４は本明細書に記載される通りであり、Ｒ５は非置換のＣ１またはＣ２またはＣ３またはＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ５はメチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ４は本明細書に記載される通りである。
【０１４７】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４は本明細書に記載される通りであり、Ｒ５は、ＯＨ、非置換のアリールアルコキシ、非置換のアルコキシ、および非置換のアリールから選択される員で置換される、アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ５は−（ＣＨ２）ｍ８Ｐｈである。
【０１４８】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ５は−（ＣＨ２）ｍ８ＯＲ２６であり、式中、ｍ８は、１、２、３、４、５、および６からなる群から選択され、Ｒ２６は、Ｈおよび非置換またはアリール置換のＣ１またはＣ２またはＣ３またはＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルからなる群から選択される。例示的な実施形態において、ｍ８は、１または２または３である。例示的な実施形態において、ｍ８は２である。例示的な実施形態において、Ｒ２６は非置換のＣ１またはＣ２またはＣ３またはＣ４またはＣ５またはＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒ２６はメチルである。例示的な実施形態において、Ｒ２６はベンジルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４は本明細書に記載される通りであり、Ｒ５は−（ＣＨ２）ｍ８Ｏ（ＣＨ２）ｍ９Ｐｈであり、式中、ｍ８は、１または２または３または４または５または６であり、ｍ９は、１または２または３または４または５または６である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４は本明細書に記載される通りであり、Ｒ５は−（ＣＨ２）ｍ８Ｏ（ＣＨ２）ｍ９Ｐｈであり、式中、ｍ８は、１または２または３であり、ｍ９は、１または２または３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４は本明細書に記載される通りであり、Ｒ５は−（ＣＨ２）ｍ８Ｏ（ＣＨ２）Ｐｈである。例示的な実施形態においてＸ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４は本明細書に記載される通りであり、Ｒ５は−（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）ｍ９Ｐｈである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４は本明細書に記載される通りであり、Ｒ５は−（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）Ｐｈである。
【０１４９】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、−ＮＨ（ＣＨ２）２ＯＨ、−ＮＨ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ（ＣＨ３）３、−ＮＨ（ＣＨ２）Ｐｈ、および−ＮＨ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）Ｐｈからなる群から選択される。
【０１５０】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２ＯＨ、−Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ（ＣＨ３）３、−ＮＨ（ＣＨ２）Ｐｈ、および−ＮＨ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）Ｐｈからなる群から選択される。
【０１５１】
例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−ＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、置換または非置換の４〜８員環を形成する。例示的な実施形態において、環を形成する非炭素原子のみが、Ｒ４およびＲ５が結合している窒素である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−ＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、置換または非置換のピロリジニル、または置換または非置換のピペリジニルを形成する。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−ＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、非置換のピロリジニルまたは非置換のピペリジニルを形成する。例示的な実施形態において、環を形成する非炭素原子のみが、窒素である。例示的な実施形態において、環は、１個の窒素原子および１個の酸素原子を含有する。例示的な実施形態において、環は、１個の窒素原子および１個の酸素原子を含有する。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−ＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、置換または非置換のモルホリニルを形成する。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｂは１であり、Ｒｂは−ＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している窒素と一体となって、接合して、非置換のモルホリニルを形成する。
【０１５２】
例示的な実施形態において、本発明は、式
【化１３】
2012502037.tif 000015
による構造を有する化合物を提供し、
式中、Ｒｄは、Ｈ、非置換のＣ１−Ｃ６アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、式中、Ｒ１０は、Ｈまたは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒｄは、Ｈ、メチル、およびｔ−ブトキシカルボニルからなる群から選択される。例示的な実施形態において、Ｒｄは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルからなる群から選択される。例示的な実施形態において、Ｒ１０は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、およびシクロヘキシルからなる群から選択される。
【０１５３】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化１４】
2012502037.tif 000016
による構造およびその塩を有し、式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、ＯＲ４、ＮＲ４Ｒ５、ＳＲ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、ニトロ、シアノ、ハロゲン、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択され、それぞれのＲ４およびＲ５は、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１５４】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化１５】
2012502037.tif 000017
による構造およびその塩を有し、式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１５５】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化１６】
2012502037.tif 000018
による構造およびその塩を有し、式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１５６】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化１７】
2012502037.tif 000019
による構造
およびその塩を有し、式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１５７】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化１８】
2012502037.tif 000020
による構造
およびその塩を有し、式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１５８】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化１９】
2012502037.tif 000021
による構造
およびその塩を有し、式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１５９】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化２０】
2012502037.tif 000022
による構造
およびその塩を有し、式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１６０】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化２１】
2012502037.tif 000023
による構造
およびその塩を有し、式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｒｂは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１６１】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化２２】
2012502037.tif 000024
による構造を有し、
式中、Ｒ４は、非置換のＣ１−Ｃ６アルキルであり、ＸはＣＨまたはＮであり、ＹはＣＨまたはＮであり、Ｒｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは、非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１６２】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化２３】
2012502037.tif 000025
による構造を有し、
式中、Ｒ４は、非置換のＣ１−Ｃ６シクロアルキルであり、ＸはＣＨまたはＮであり、ＹはＣＨまたはＮであり、Ｒｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは、非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１６３】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化２４】
2012502037.tif 000026
による構造を有し、
式中、Ｒ４は、非置換のＣ１−Ｃ６アルキルであり、ＸはＣＨまたはＮであり、ＹはＣＨまたはＮであり、Ｒｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは、非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。
【０１６４】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化２５】
2012502037.tif 000027
による構造を有し、
式中、Ｒ４、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化２６】
2012502037.tif 000028
による構造を有し、
式中、Ｒ４、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０１６５】
例示的な実施形態において、化合物は、
【化２７】
2012502037.tif 000029
からなる群から選択される構造を有する。
【０１６６】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化２８】
2012502037.tif 000030
による構造を有し、
式中、Ｒ４は、非置換のＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり、ＸはＣＨまたはＮであり、ＹはＣＨまたはＮであり、Ｒｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは、非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＲ４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化２９】
2012502037.tif 000031
による構造を有し、
式中、Ｒ４、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化３０】
2012502037.tif 000032
による構造を有し、
式中、Ｒ４、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０１６７】
例示的な実施形態において、化合物は、
【化３１】
2012502037.tif 000033
からなる群から選択される構造を有する。
【０１６８】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化３２】
2012502037.tif 000034
による構造を有し、
式中、ｎは、１〜６から選択される整数であり、Ｒ１１は非置換のＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびＲ１１は、本明細書に記載される通りであり、ｎは１である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびＲ１１は、本明細書に記載される通りであり、ｎは２である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびＲ１１は、本明細書に記載される通りであり、ｎは３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびＲ１１は、本明細書に記載される通りであり、ｎは４である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ｎ、およびＲ１１は、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ｎ、およびＲ１１は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ｎ、およびＲ１１は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ｎ、およびＲ１１は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ｎ、およびＲ１１は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化３３】
2012502037.tif 000035
による構造を有し、
式中、ｎ、Ｒ１１、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化３４】
2012502037.tif 000036
による構造を有し、
式中、ｎ、Ｒ１１、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０１６９】
例示的な実施形態において、化合物は、
【化３５】
2012502037.tif 000037
からなる群から選択される構造を有する。
【０１７０】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化３６】
2012502037.tif 000038
による構造を有し、
式中、ｎは、１〜６から選択される整数であり、Ｒ１２は、Ｈまたは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３であり、式中、Ｒ１３は、非置換のＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびＲ１２は、本明細書に記載される通りであり、ｎは１である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびＲ１２は、本明細書に記載される通りであり、ｎは２である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびＲ１２は、本明細書に記載される通りであり、ｎは３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびＲ１２は、本明細書に記載される通りであり、ｎは４である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびｎは、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１２はＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびｎは、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１２はメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびｎは、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１２はエチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびｎは、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１２はイソプロピルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、およびｎは、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１２はＣ（Ｏ）ＣＨ３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１２、およびｎは、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１２、およびｎは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１２、およびｎは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１２、およびｎは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１２、およびｎは、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化３７】
2012502037.tif 000039
による構造を有し、
式中、ｎ、Ｒ１２、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化３８】
2012502037.tif 000040
による構造を有し、
式中、ｎ、Ｒ１２、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０１７１】
例示的な実施形態において、化合物は、
【化３９】
2012502037.tif 000041
からなる群から選択される構造を有する。
【０１７２】
例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化４０】
2012502037.tif 000042
による構造を有し、
式中、ｎは、１〜６から選択される整数であり、Ｒ１２は、Ｈまたは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３であり、式中、Ｒ１３は非置換のＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ｒ１４は、Ｈまたは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ｘ、Ｙ、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｎは１である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｎは２である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｎは３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、ｎは４である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、ｎ、Ｒ１４、およびＲｄは、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１２はＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、ｎ、Ｒ１４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１２はメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、ｎ、Ｒ１４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１２はエチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、ｎ、Ｒ１４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１２はイソプロピルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、ｎ、Ｒ１４は、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１２はＣ（Ｏ）ＣＨ３である。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、ｎ、Ｒ１２は、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１４はＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒｄ、ｎ、Ｒ１２は、本明細書に記載される通りであり、Ｒ１４はメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１４、ｎ、Ｒ１２は、本明細書に記載される通りであり、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１４、ｎ、Ｒ１２は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ１−Ｃ６アルキルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１４、ｎ、Ｒ１２は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１４、ｎ、Ｒ１２は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、Ｘ、Ｙ、Ｒ１４、ｎ、Ｒ１２は、本明細書に記載される通りであり、Ｒｄは非置換のＣ３アルキルである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化４１】
2012502037.tif 000043
による構造を有し、
式中、ｎ、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化４２】
2012502037.tif 000044
による構造を有し、
式中、ｎ、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化４３】
2012502037.tif 000045
による構造を有し、
式中、ｎ、Ｒ１２、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化４４】
2012502037.tif 000046
による構造を有し、
式中、ｎ、Ｒ１２、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化４５】
2012502037.tif 000047
による構造を有し、
式中、ｎ、Ｒ１２、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。例示的な実施形態において、化合物は、以下の式
【化４６】
2012502037.tif 000048
による構造を有し、
式中、ｎ、Ｒ１２、およびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０１７３】
例示的な実施形態において、化合物は、
【化４７】
2012502037.tif 000049
からなる群から選択される構造を有する。
【０１７４】
例示的な実施形態において、本発明は、式
【化４８】
2012502037.tif 000050
による構造を有する化合物であって、
式中、Ｒｄは、Ｈ、非置換のＣ１−Ｃ６アルキル、ＣＯＲ１０、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、式中、Ｒ１０は、Ｈおよび非置換のＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６の可能性を、以下の表に表す、化合物、またはその塩を提供する。
【表１】
2012502037.tif 000051
例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはプロピルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはイソプロピルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは非置換のＣ４アルキルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは、ブチル、イソブチル、ｓｅｃブチル、およびｔ−ブチルからなる群から選択される。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは非置換のＣ５アルキルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはペンチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはイソペンチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは非置換のＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はＣ１−Ｃ６非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３である。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３である。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はプロピルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はイソプロピルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はｎ−ブチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はイソブチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はｔ−ブチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はｓｅｃ−ブチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はペンチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はイソペンチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はヘキシルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＨである。
【０１７５】
例示的な実施形態において、本発明は、式
【化４９】
2012502037.tif 000052
による構造を有する化合物であって、
式中、Ｒｄは、Ｈ、非置換のＣ１−Ｃ６アルキル、ＣＯＲ１０、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、式中、Ｒ１０は、Ｈまたは本明細書に記載される非置換のＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６の可能性を、以下の表に表す、化合物、またはその塩を提供する。
【表２】
2012502037.tif 000053
例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、ＲｄはＨである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはメチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはエチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはプロピルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはイソプロピルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは非置換のＣ４アルキルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは、ブチル、イソブチル、ｓｅｃブチル、およびｔ−ブチルからなる群から選択される。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは非置換のＣ５アルキルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはペンチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄはイソペンチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは非置換のＣ６アルキルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はＣ１−Ｃ６非置換のアルキルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３である。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３である。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はプロピルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はイソプロピルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はｎ−ブチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はイソブチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はｔ−ブチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はｓｅｃ−ブチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はペンチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はイソペンチルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はヘキシルである。例示的な実施形態において、上表の項目のいずれかにおいては、Ｒｄは−Ｃ（Ｏ）ＯＨである。
【０１７６】
別の例示的な実施形態において、本発明は、本発明の化合物の多（ｐｏｌｙ−）または多（ｍｕｌｔｉ−）価種を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本発明の化合物の二量体を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物の二量体を提供する。
【０１７７】
例示的な実施形態において、本発明は、本発明の化合物の無水物を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物の無水物を提供する。
【０１７８】
例示的な実施形態において、本発明は、本発明の化合物の三量体を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物の三量体を提供する。
【０１７９】
例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物、またはその塩、水和物、もしくは溶媒、またはその組み合わせを提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物、またはその塩、水和物、もしくは溶媒を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物、またはその塩を提供する。例示的な実施形態において、塩は、医薬的に許容される塩である。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物、またはその水和物を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物、またはその溶媒を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物、またはそのプロドラッグを提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物の塩を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物の医薬的に許容される塩を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物の水和物を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物の溶媒を提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本明細書に記載の化合物のプロドラッグを提供する。
【０１８０】
例示的な実施形態において、アルキルは直鎖アルキルである。例示的な実施形態において、アルキルは分岐鎖アルキルである。例示的な実施形態において、ヘテロアルキルは直鎖ヘテロアルキルである。例示的な実施形態において、ヘテロアルキルは分岐鎖ヘテロアルキルである。
【０１８１】
ＩＩＩｅ．  化合物の作製方法
本発明で用いる化合物は、市販の出発物質または既知の中間体を用いて調製することができる。本発明で用いる化合物は、当該技術分野において既知の合成方法または本明細書に記載の合成方法を用いて調製することができる。
【０１８２】
以下の例示的なスキームは、本発明のホウ素含有分子を調製する方法を例示する。これらの方法は、示される化合物を産生することに限定されないが、本明細書に記載の化合物および複合体等の様々な分子を調製するために使用することができる。本発明の化合物はまた、スキームに明確に例示されないが、十分当業者の範囲内である方法によって合成することもできる。化合物は、容易に入手可能な既知の中間体材料を用いて調製することができる。
【０１８３】
本発明の化合物は、本明細書に記載の戦略に従って産生することができる。５−（アリールアミノ）ベンゾオキサボロール誘導体の産生のための戦略Ａを、以下に説明する。
【化５０】
2012502037.tif 000054
【０１８４】
工程１：塩基の存在下、化合物１および２を反応させて、化合物３を得る。塩基は、一般には、水素化ナトリウム、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等である。溶媒は、一般には、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン等である。−２０℃から使用する溶媒の沸点まで、好ましくは、０℃〜６０℃の範囲で反応を実行し、１〜約４８時間で反応を完了する。代替として、Ｎ−アシルまたはアルコキシカルボニル化合物４は、同一の反応のために使用することができる。化合物１および２、または１および４は、一般には、同一のモル量であるが、１つの量が他の量を超えることも可能である。
【０１８５】
工程２：化合物２を、１〜１０当量の酸塩化物、酸無水物、ジアルキルジカルボネート、またはアルキルクロロギ酸エステルと反応させて、化合物５を得る。トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン、炭酸ナトリウム、または炭酸カリウム等の塩基を使用し得る。溶媒は、一般には、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン等から選択される。−２０℃から使用する溶媒の沸点まで、好ましくは、０℃〜６０℃の範囲で反応を実行し、１〜約４８時間で反応を完了する。
【化５１】
2012502037.tif 000055
【０１８６】
工程３：ラジカル開始剤の存在下、化合物５を、０．９〜３当量のＮ−ブロモコハク酸イミドで処理して、化合物６を得る。ラジカル開始剤は、一般には、アゾビスイソブチロニトリルまたは過酸化ベンゾイルから選択される。テトラクロロメタンは、一般には、溶媒として使用される。室温で還流させ、反応を実行する。約１〜約２４時間で反応を完了する。
【０１８７】
工程４：化合物６を１〜１０当量の炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムで処理して、化合物７を得る。溶媒は、一般には、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン等から選択される。０℃から使用する溶媒の沸点まで、好ましくは、５０℃〜８０℃の範囲で反応を実行し、１〜約４８時間で反応を完了する。
【化５２】
2012502037.tif 000056
【０１８８】
工程５：化合物７を宮浦カップリングに供し、ホウ素原子を導入する。溶媒中の化合物７、ビスピナコラトジボラン、ジクロロメタンとの［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）複合体、および炭酸カリウムの混合物を約５０℃で還流まで撹拌する。溶媒は、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等から選択される。パラジウム触媒は、約１〜約５モル％で使用され、塩基は、約２〜約５当量で使用される。約１〜約２４時間で反応を完了する。
【０１８９】
工程６：化合物８を、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等の塩基で処理して、化合物９を得る。塩基は、約０．５〜約５当量で使用される。溶媒は、一般に、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン等からのものである。約０℃から室温で反応を実行し、約１〜約２４時間で反応を完了する。
抽出中、水性ホウ酸を用いて有機層を洗浄することによって、水を用いて粗生成物を洗浄することによって、または精製後、生成物を凍結乾燥させることによって、ピナコールを除去する。
【化５３】
2012502037.tif 000057
【０１９０】
工程７：塩基あるいは酸のいずれかによって化合物９のアシル基を除去し、化合物１０を得る。酸の場合、トリフルオロ酢酸、塩酸、臭化水素酸、および硫酸が、溶媒とともに、または溶媒を用いずに使用される。塩基の場合、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、および炭酸カリウムが、溶媒中で使用される。溶媒は、一般に、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、２−プロパノール、テトラヒドロフラン、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン等から選択される。約０℃から還流まで反応を実行し、約１〜約２４時間で反応を完了する。
【０１９１】
工程８：塩基の存在下、５−Ｎ位の化合物１０を様々なハロゲン化アルキルでアルキル化して、化合物１１を得る。ハロゲン化アルキルに関しては、ヨードメタン、ヨードエタン、ヨードプロパン、ヨードブタン、ヨードペンタン、ヨードヘキサン、ヨードシクロプロパン、ヨードシクロブタン、ヨードシクロペンタン、ヨードシクロヘキサン等が、１〜１０当量で使用される。塩基は、一般に、水素化ナトリウム、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等から選択される。溶媒は、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、トルエン等から選択される。約０℃〜室温で、約１〜約２４時間で、反応を実行する。
５−Ｎ−置換誘導体の代替的な産生のための戦略Ｂを、以下に説明する。
【化５４】
2012502037.tif 000058
【０１９２】
工程９：反応条件は、工程７で説明されるものと同一である。
【０１９３】
工程１０：反応条件は、工程８で説明されるものと同一である。
【０１９４】
工程１１：反応条件は、工程５で説明されるものと同一である。
【０１９５】
工程１２：反応条件は、工程６で説明されるものと同一である。
【０１９６】
本発明の化合物は、本明細書で説明されるものと類似の方法によって水和物および溶媒に変換することができる。
【０１９７】
ＩＩＩ．ｆ）  さらなる治療剤を含む組み合わせ
本発明の化合物はまた、さらなる治療剤と組み合わせて使用してもよい。したがって、さらなる態様において、本発明は、少なくとも１つのさらなる治療剤と一緒に本明細書に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組み合わせを提供する。例示的な実施形態において、さらなる治療剤は、本発明の化合物である。例示的な実施形態において、さらなる治療剤には、ホウ素原子が含まれる。例示的な実施形態において、さらなる治療剤には、ホウ素原子を含有しない。例示的な実施形態において、さらなる治療剤は、ＩＩＩ項ａ）〜ｅ）で説明される化合物である。
【０１９８】
本発明の化合物が、同一の疾患状態に対して、第２の治療剤と組み合わせて使用される場合、それぞれの化合物の用量は、化合物が単独で使用される場合とは異なり得る。適切な用量は、当業者により容易に理解されよう。治療で用いるのに必要とされる本発明の化合物の量は、治療すべき状態の性質、患者の年齢および状態によって異なり得、最後には、医師または獣医の裁量であり得ることを理解されよう。例示的な実施形態において、さらなる治療剤は、抗炎症剤である。例示的な実施形態において、さらなる治療剤は、ステロイドまたはシクロスポリンまたはソラレンまたはＵＶＡまたはレチノイドまたはメトトリメプラジンまたはビタミンＤ３類似体である。例示的な実施形態において、ステロイドは、全身ステロイドまたは局所ステロイドである。例示的な実施形態において、さらなる治療剤は、局所ステロイドまたは抗ヒスタミン剤またはカルシニューリン阻害剤である。例示的な実施形態において、さらなる治療剤は、ＣＣ−１０００４またはＡＷＤ−１２−２８１である。例示的な実施形態において、さらなる治療剤は、コルチコステロイドまたはＮＳＡＩＤである。例示的な実施形態において、さらなる治療剤は、ＰＤＥ４阻害剤である。例示的な実施形態において、さらなる治療剤は、ロリプラムまたはロフルミラストである。
【０１９９】
このような組み合わせの個々の成分は、単位剤形において、同時に、あるいは連続的に投与され得る。単位剤形は、単一または複数の単位剤形であり得る。例示的な実施形態において、本発明は、単一の単位剤形における組み合わせを提供する。単一の単位剤形の例は、カプセル剤であり、本発明の化合物およびさらなる治療剤はともに、同一のカプセル剤内に含有される。例示的な実施形態において、本発明は、２単位剤形における組み合わせを提供する。２単位剤形の例は、本発明の化合物を含有する第１のカプセル剤、およびさらなる治療剤を含有する第２のカプセル剤である。したがって、「単一の単位」、「２単位」、または「複数の単位」という用語は、患者が摂取する対象物を指し、対象物の内部成分を指すものではない。適切な既知の治療剤の用量は、当業者によって容易に理解されよう。
【０２００】
本明細書に言及される組み合わせは、医薬製剤の形態で用いるために便宜に示され得る。したがって、本発明の例示的な実施形態は、ａ）本発明の化合物、ｂ）さらなる治療剤、およびｃ）医薬的に許容される賦形剤を含む医薬製剤である。例示的な実施形態において、医薬製剤は、単位剤形である。例示的な実施形態において、医薬製剤は、単一の単位剤形である。例示的な実施形態において、医薬製剤は、２単位剤形である。例示的な実施形態において、医薬製剤は、第１の単位剤形および第２の単位剤形を含む２単位剤形であり、第１の単位剤形は、ａ）本発明の化合物およびｂ）第１の医薬的に許容される賦形剤を含み、第２の単位剤形は、ｃ）さらなる治療剤およびｄ）第２の医薬的に許容される賦形剤を含む。
【０２０１】
ＩＶ．  方法
ａ）サイトカインおよび／またはケモカインの産生を減少させること
別の態様において、本発明は、サイトカインおよび／またはケモカインの産生を減少させるための方法を提供し、この方法には、本発明の化合物と細胞を接触させることを含み、細胞によるサイトカインまたはケモカインの産生が減少される。別の態様において、本発明は、サイトカインおよび／またはケモカインの産生を減少させるための方法を提供し、この方法には、本明細書に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩と細胞を接触させることを含み、細胞によるサイトカインまたはケモカインの産生が減少される。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物である。例示的な実施形態において、細胞は、治療有効量の化合物と接触させる。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書に記載の式によるものである。例示的な実施形態において、化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される。
【０２０２】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカイン（ＴＨ１サイトカイン）の産生を減少させるためのものである。例示的な実施形態において、ＴＨ１サイトカインは、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−２である。
【０２０３】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカイン（ＴＨ２サイトカイン）の産生を減少させるためのものである。例示的な実施形態において、ＴＨ２サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１０からなる群から選択される。例示的な実施形態において、サイトカインはＩＬ−４である。例示的な実施形態において、サイトカインはＩＬ−５である。例示的な実施形態において、サイトカインはＩＬ−１０である。
【０２０４】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカインの産生を減少させるためのものであり、これは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＬＴ、ＬＩＦ、オンコスタチン、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。別の例示的な実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＬＴ、ＬＩＦ、オンコスタチン、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。別の例示的な実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。別の例示的な実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。別の例示的な実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。別の例示的な実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。
【０２０５】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカインの放出を減少させるためのものであり、これは、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。
【０２０６】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカインの産生を減少させるためのものであり、これは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、Ｗ−１３、およびＴＧＦ−βからなる群から選択される。
【０２０７】
例示的な実施形態において、方法は、ケモカインの産生を減少させるためのものであり、これは、ＩＬ−８、Ｇｒｏ−α、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、ＰＧＥ２、ＥＮＡ−７８、およびランテスからなる群から選択される。例示的な実施形態において、ケモカインは、ＭＣＰ−１およびＰＧＥ２からなる群から選択される。
【０２０８】
例示的な実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかにおいては、本発明の化合物は、少なくとも約５〜約１００％、または少なくとも約３０〜約１００％、４０〜約１００％、または少なくとも約５０〜約１００％、または少なくとも約６０〜約１００％、または少なくとも約７０〜約１００％、または少なくとも約８０〜約１００％、または少なくとも約９０〜約１００％、または少なくとも約３０〜約７０％、または少なくとも約４０〜約９０％、または少なくとも約４５〜約８０％、または少なくとも約５５〜約７５％、または少なくとも約７５〜約９８％、または少なくとも約５５〜約９９％、または少なくとも約５％〜約２０％、または少なくとも約１０％〜約２５％で、サイトカインおよび／またはケモカインの産生を阻害し得る量で存在する。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物である。
【０２０９】
ｂ）サイトカインおよび／またはケモカインの産生を増大させること
別の態様において、本発明は、サイトカインおよび／またはケモカインの産生を増大させるための方法を提供し、この方法には、本発明の化合物と細胞を接触させることを含み、細胞によるサイトカインまたはケモカインの産生が増大される。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書に記載されるものか、またはその医薬的に許容される塩である。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物である。例示的な実施形態において、細胞は、治療有効量の化合物と接触させる。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書に記載の式によるものである。例示的な実施形態において、化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される。
【０２１０】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカイン（ＴＨ１サイトカイン）の産生を増大させるためのものである。例示的な実施形態において、ＴＨ１サイトカインは、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−２である。
【０２１１】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカイン（ＴＨ２サイトカイン）の産生を増大させるためのものである。例示的な実施形態において、ＴＨ２サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１０からなる群から選択される。
【０２１２】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカインの産生を増大させるためのものであり、これは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、Ｗ−１３、およびＴＧＦ−βからなる群から選択される。
【０２１３】
例示的な実施形態において、方法は、ケモカインの産生を増大させるためのものであり、これは、ＩＬ−８、Ｇｒｏ−α、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、ＰＧＥ２、ＥＮＡ−７８、およびランテスからなる群から選択される。例示的な実施形態において、ケモカインはＭＣＰ−１またはＰＧＥ２である。
【０２１４】
例示的な実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかにおいては、本発明の化合物は、少なくとも約５〜約１００％、または少なくとも約３０〜約１００％、４０〜約１００％、または少なくとも約５０〜約１００％、または少なくとも約６０〜約１００％、または少なくとも約７０〜約１００％、または少なくとも約８０〜約１００％、または少なくとも約９０〜約１００％、または少なくとも約３０〜約７０％、または少なくとも約４０〜約９０％、または少なくとも約４５〜約８０％、または少なくとも約５５〜約７５％、または少なくとも約７５〜約９８％、または少なくとも約５５〜約９９％、または少なくとも約５％〜約２０％、または少なくとも約１０％〜約２５％で、サイトカインおよび／またはケモカインの産生を増大させ得る量で存在する。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物である。
【０２１５】
ｃ）サイトカインおよび／またはケモカインの放出を減少させること
別の態様において、本発明は、サイトカインおよび／またはケモカインの放出を減少させるための方法を提供し、この方法には、本発明の化合物と細胞を接触させることを含み、細胞によるサイトカインまたはケモカインの放出が減少される。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物である。例示的な実施形態において、細胞は、治療有効量の化合物と接触させる。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書に記載の式によるものである。例示的な実施形態において、化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される。
【０２１６】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカイン（ＴＨ１サイトカイン）の放出を減少させるためのものである。例示的な実施形態において、ＴＨ１サイトカインは、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−２である。
【０２１７】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカイン（ＴＨ２サイトカイン）の放出を減少させるためのものである。例示的な実施形態において、ＴＨ２サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１０からなる群から選択される。
【０２１８】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカインの放出を減少させるためのものであり、これは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＬＴ、ＬＩＦ、オンコスタチン、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。別の例示的な実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＬＴ、ＬＩＦ、オンコスタチン、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。別の例示的な実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。別の例示的な実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。
【０２１９】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカインの放出を減少させるためのものであり、これは、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。
【０２２０】
例示的な実施形態において、本発明の化合物は、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γからなる群から選択されるサイトカインの放出を減少させる。
【０２２１】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカインの放出を減少させるためのものであり、これは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、Ｗ−１３、およびＴＧＦ−βからなる群から選択される。
【０２２２】
例示的な実施形態において、方法は、ケモカインの放出を減少させるためのものであり、これは、ＩＬ−８、Ｇｒｏ−α、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、ＰＧＥ２、ＥＮＡ−７８、およびランテスからなる群から選択される。例示的な実施形態において、ケモカインはＭＣＰ−１またはＰＧＥ２である。例示的な実施形態において、化合物はＣ１７であり、ケモカインはＭＣＰ−１またはＰＧＥ２である。
【０２２３】
例示的な実施形態において、本発明の化合物は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＩＬ−５、およびＩＬ−１０からなる群から選択されるサイトカインの放出を減少させ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＩＬ−８の放出を実質的に減少させない。例示的な実施形態において、化合物は、ＩＬ−１２またはＩＬ−２３の放出を減少させる。
【０２２４】
例示的な実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかにおいては、本発明の化合物は、少なくとも約５〜約１００％、または少なくとも約３０〜約１００％、４０〜約１００％、または少なくとも約５０〜約１００％、または少なくとも約６０〜約１００％、または少なくとも約７０〜約１００％、または少なくとも約８０〜約１００％、または少なくとも約９０〜約１００％、または少なくとも約３０〜約７０％、または少なくとも約４０〜約９０％、または少なくとも約４５〜約８０％、または少なくとも約５５〜約７５％、または少なくとも約７５〜約９８％、または少なくとも約５５〜約９９％、または少なくとも約５％〜約２０％、または少なくとも約１０％〜約２５％で、サイトカインおよび／またはケモカインの放出を減少させ得る量で存在する。別の例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。
【０２２５】
ｄ）サイトカインおよび／またはケモカインの放出を増大させること
別の態様において、本発明は、サイトカインおよび／またはケモカインの産生を増大させるための方法を提供し、方法には、本発明の化合物と細胞を接触させることを含み、細胞によるサイトカインまたはケモカインの放出が増大される。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書に記載される。例示的な実施形態において、細胞は、治療有効量の化合物と接触させる。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書に記載の式によるものである。例示的な実施形態において、化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される。
【０２２６】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカイン（ＴＨ１サイトカイン）の放出を増大させるためのものである。例示的な実施形態において、ＴＨ１サイトカインは、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−２である。
【０２２７】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカイン（ＴＨ２サイトカイン）の放出を増大させるためのものである。例示的な実施形態において、ＴＨ２サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１０からなる群から選択される。
【０２２８】
例示的な実施形態において、方法は、サイトカインの放出を増大させるためのものであり、これは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、Ｗ−１３、およびＴＧＦ−βからなる群から選択される。
【０２２９】
例示的な実施形態において、方法は、ケモカインの放出を増大させるためのものであり、これは、ＩＬ−８、Ｇｒｏ−α、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、ＰＧＥ２、ＥＮＡ−７８、およびランテスからなる群から選択される。例示的な実施形態において、ケモカインはＭＣＰ−１またはＰＧＥ２である。
【０２３０】
例示的な実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかにおいては、本発明の化合物は、少なくとも約５〜約１００％、または少なくとも約３０〜約１００％、４０〜約１００％、または少なくとも約５０〜約１００％、または少なくとも約６０〜約１００％、または少なくとも約７０〜約１００％、または少なくとも約８０〜約１００％、または少なくとも約９０〜約１００％、または少なくとも約３０〜約７０％、または少なくとも約４０〜約９０％、または少なくとも約４５〜約８０％、または少なくとも約５５〜約７５％、または少なくとも約７５〜約９８％、または少なくとも約５５〜約９９％、または少なくとも約５％〜約２０％、または少なくとも約１０％〜約２５％で、サイトカインおよび／またはケモカインの放出を増大させ得る量で存在する。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。
【０２３１】
ｅ）ホスホジエステラーゼを阻害すること
別の態様において、本発明は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）を阻害するための方法を提供し、方法には、本発明の化合物とホスホジエステラーゼを接触させることを含み、ホスホジエステラーゼが阻害される。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物である。例示的な実施形態において、化合物の量は、治療有効量である。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書に記載の式によるものである。例示的な実施形態において、化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される。
【０２３２】
例示的な実施形態において、ホスホジエステラーゼは、ＰＤＥ１、ＰＤＥ２、ＰＤＥ３、ＰＤＥ４、ＰＤＥ５、ＰＤＥ６、ＰＤＥ７、ＰＤＥ８、ＰＤＥ９、ＰＤＥ１０、およびＰＤＥ１１からなる群から選択される。例示的な実施形態において、ホスホジエステラーゼはＰＤＥ４である。例示的な実施形態において、ＰＤＥ４は、ＰＤＥ４Ａ、ＰＤＥ４Ｂ、ＰＤＥ４Ｃ、およびＰＤＥ４Ｄからなる群から選択される。例示的な実施形態において、ＰＤＥ４はＰＤＥ４Ｂである。例示的な実施形態において、ホスホジエステラーゼはＰＤＥ７である。
【０２３３】
例示的な実施形態において、本発明は、ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）を阻害するが、ＰＤＥ１、ＰＤＥ２、ＰＤＥ３、ＰＤＥ５、およびＰＤＥ６からなる群から選択される、少なくとも１つのＰＤＥを有意に阻害しない、方法を提供し、方法には、本発明化合物と細胞を接触させ、それによって阻害を提供することを含む。
【０２３４】
別の例示的な実施形態において、本発明は、ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）を阻害するための方法を提供し、方法には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される化合物、またはその医薬的に許容される塩とホスホジエステラーゼを接触させることを含み、ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）が阻害される。別の例示的な実施形態において、本発明は、ホスホジエステラーゼ７（ＰＤＥ７）を阻害するための方法を提供し、方法には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される化合物、またはその医薬的に許容される塩とホスホジエステラーゼを接触させることを含み、ホスホジエステラーゼ７（ＰＤＥ７）が阻害される。別の例示的な実施形態において、本発明は、ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）を阻害するための方法を提供し、方法には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される化合物、またはその医薬的に許容される塩とホスホジエステラーゼを接触させることを含み、ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）が阻害される。別の例示的な実施形態において、本発明は、ホスホジエステラーゼ７（ＰＤＥ７）を阻害するための方法を提供し、方法には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される化合物、またはその医薬的に許容される塩とホスホジエステラーゼを接触させることを含み、ホスホジエステラーゼ７（ＰＤＥ７）が阻害される。例示的な実施形態において、化合物の量は、治療有効量である。
【０２３５】
例示的な実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかにおいては、本発明の化合物、または本明細書に示される式によって記載される化合物は、少なくとも約５〜約１００％、または少なくとも約３０〜約１００％、４０〜約１００％、または少なくとも約５０〜約１００％、または少なくとも約６０〜約１００％、または少なくとも約７０〜約１００％、または少なくとも約８０〜約１００％、または少なくとも約９０〜約１００％、または少なくとも約３０〜約７０％、または少なくとも約４０〜約９０％、または少なくとも約４５〜約８０％、または少なくとも約５５〜約７５％、または少なくとも約７５〜約９８％、または少なくとも約５５〜約９９％、または少なくとも約５％〜約２０％、または少なくとも約１０％〜約２５％で、本明細書に記載のホスホジエステラーゼを阻害し得る量で存在する。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。
【０２３６】
ｆ）状態および効果
別の態様において、本発明は、動物における、状態を治療するおよび／または予防する、または効果を増強させる方法を提供し、方法は、本発明の化合物のある量をその動物に投与し、それによって、状態を治療するまたは予防することを含む。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物である。例示的な実施形態において、その量は、治療有効量である。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書に記載の式によるものである。例示的な実施形態において、化合物は、「ホスホジエステラーゼを阻害すること」と題された項目に記載の式によるものである。例示的な実施形態において、化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される。
【０２３７】
例示的な実施形態において、本状態は、疾患である。例示的な実施形態において、本状態は、炎症関連状態である。例示的な実施形態において、本状態は、サイトカインおよび／またはケモカインの産生の増大を含む。例示的な実施形態において、本状態は、サイトカインおよび／またはケモカインの産生の減少を含む。例示的な実施形態において、本状態は、サイトカインおよび／またはケモカインの放出の増大を含む。例示的な実施形態において、本状態は、サイトカインおよび／またはケモカインの放出の減少を含む。例示的な実施形態において、本状態は、ホスホジエステラーゼの阻害を含む。例示的な実施形態において、化合物は、炎症誘発性サイトカイン発現を阻害するか、あるいは抗炎症性サイトカイン発現を刺激することによって、炎症関連疾患を治療するのに十分な量であるが、その量は、サイクリン依存性キナーゼを実質的に阻害するのには十分ではない。例示的な実施形態において、本状態は、サイトカインによって媒介される。例示的な実施形態において、本状態は、ケモカインによって媒介される。例示的な実施形態において、本状態は、好中球によって媒介される。例示的な実施形態において、本状態は、ホスホジエステラーゼによって媒介される。例示的な実施形態において、本状態は、ホスホジエステラーゼ４によって媒介される。例示的な実施形態において、本状態は、ホスホジエステラーゼ７によって媒介される。
【０２３８】
例示的な実施形態において、本状態は、歯周炎、ドライアイ疾患、リウマチ性関節炎、変形性関節症、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬性関節炎、外傷性関節炎、風疹性関節炎、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、移植片対宿主病、全身性エリテマトーデス、毒素性ショック症候群、過敏性腸症候群、筋肉変性、同種移植片拒絶、膵臓炎、インスリン炎（ｉｎｓｕｌｉｎｉｔｉｓ）、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、腎線維症、慢性腎不全、痛風、ハンセン病、急性滑膜炎、ライター症候群、痛風関節炎、ベーチェット病、脊椎炎、子宮内膜症、例えば椎間板症候群病態、滑液包炎、腱炎、腱滑膜炎、または線維筋痛症候群の非関節性炎症病態；ならびに神経性疼痛、神経障害、多発性神経障害、糖尿病関連多発性神経障害、外傷、片頭痛、緊張性および群発性頭痛、急性または慢性疼痛、ホートン病、静脈瘤性潰瘍、神経痛、筋骨格痛、骨外傷性疼痛、骨折、疼痛ジストロフィ、脊椎関節炎、線維筋痛症、幻肢痛、背痛、脊椎痛、術後疼痛、椎間板ヘルニア誘発性坐骨神経痛、癌関連疼痛、血管痛、内臓痛、分娩、またはＨＩＶ関連疼痛が挙げられるが、これらに限定されない、急性または慢性疼痛からなる群から選択される。別のサイトカイン媒介性疾患は、アレルギー、代謝疾患、化学療法／放射線関連合併症；Ｉ型糖尿病；ＩＩ型糖尿病；肝疾患；胃腸障害；眼疾患；アレルギー性結膜炎；糖尿病性網膜症；シェーグレン症候群；ブドウ膜炎；肺疾患、腎疾患；皮膚炎；ＨＩＶ関連悪液質；脳性マラリア；強直性脊椎関節炎；ハンセン病；貧血；線維筋痛症、腎不全、脳卒中、慢性心不全、内毒素血症、再灌流傷害、虚血再灌流傷害、心筋虚血、再狭窄、血栓症、血管新生、冠動脈心疾患、冠動脈疾患、急性冠症候群、高安動脈炎、心臓の不全、例えば、心不全、大動脈弁狭窄、心筋症、心筋炎、血管炎、血管再狭窄、弁膜症、または冠動脈バイパス；高コレステロール血症、血液凝固または線維素溶解に関連する疾患または病態、例えば、急性静脈血栓症、肺塞栓症、妊娠中の血栓症、出血性皮膚壊死、急性または慢性播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、手術、長期臥床、または長期間の固定化による血栓形成、静脈血栓症、劇症髄膜炎菌血症、急性血栓性脳卒中、急性冠閉塞、急性末梢動脈閉塞、広範性肺塞栓症、腋窩静脈血栓症、広範性腸骨大腿静脈血栓症、動脈または静脈カニューレの閉塞、心筋症、肝静脈閉塞性疾患、低血圧症、心拍出量の低下、血管抵抗の低下、肺高血圧症、肺コンプライアンスの減少、白血球減少症、または血小板減少症；およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される。
【０２３９】
例示的な実施形態において、本状態は、アレルギー性結膜炎、ブドウ膜炎、緑内障、視神経炎、網膜虚血、糖尿病性網膜症、レーザー誘発性眼傷害、手術誘発性増殖性硝子体網膜症、および外傷誘発性増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される。
【０２４０】
例示的な実施形態において、本状態は、アレルギー性鼻炎、喘息、成人呼吸窮迫症候群、慢性肺炎症、慢性閉塞性肺疾患、気腫、気管支炎、粘液分泌過多、珪肺症、ＳＡＲＳ感染症、および気道炎症からなる群から選択される。
【０２４１】
例示的な実施形態において、本状態は、乾癬、湿疹、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、または座瘡からなる群から選択される。
【０２４２】
例示的な実施形態において、本状態は、ギラン・バレー症候群、パーキンソン病、ハンチントン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、および他の脱髄性疾患、ウイルス性および細菌性髄膜炎、ＣＮＳ外傷、脊髄損傷、発作、痙攣、オリーブ橋小脳萎縮症、エイズ認知症複合、ＭＥＲＲＦおよびＭＥＬＡＳ症候群、レーバー病、ウェルニッケ脳症、レット症候群、ホモシスチン尿症、高プロリン血症、高ホモシステイン血症、非ケトン性高グリシン血症、ヒドロキシ酪酸アミノ酸尿症、亜硫酸酸化酵素欠損症、脊髄索状変性、鉛脳症、ツレット症候群、肝性脳症、薬物中毒、薬物耐性、薬物依存症、鬱病、不安、および統合失調症、動脈瘤、ならびに癲癇からなる群から選択される。
【０２４３】
例示的な実施形態において、本状態は、骨吸収疾患、大理石骨病、骨粗鬆症、および変形性関節症からなる群から選択される。
【０２４４】
例示的な実施形態において、本状態は、糖尿病、全身性悪液質、感染症または悪性腫瘍の二次的な悪液質、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の二次的な悪液質、肥満、食欲不振症、および神経性過食症からなる群から選択される。例示的な実施形態において、本状態は、敗血症、ＨＩＶ、ＨＣＶ、マラリア、感染性関節炎、リーシュマニア症、ライム病、乳癌、結腸癌、肺癌、前立腺癌、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、または濾胞性リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない癌、キャッスルマン病、および薬物耐性からなる群から選択される。
【０２４５】
例示的な実施形態において、本状態は、気管支喘息、鼻炎、インフルエンザ、脳卒中、心筋梗塞、熱傷、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、外傷の二次的な多臓器損傷、急性糸球体腎炎、急性炎症性成分による皮膚病、急性化膿性髄膜炎、血液透析、白血球フェレーシス、顆粒球輸血関連症候群、および壊死性腸炎からなる群から選択される。
【０２４６】
例示的な実施形態において、本状態は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、神経変性障害、心血管疾患（ＣＶＤ）およびアテローム性動脈硬化症、ならびに代謝性疾患（メタボリックシンドロームおよび糖尿病）、ならびに感染症による炎症からなる群から選択される。例示的な実施形態において、本状態は、アルツハイマー病およびパーキンソン病からなる群から選択される神経変性障害である。例示的な実施形態において、本状態は、クローン病または潰瘍性大腸炎からなる群から選択される炎症性腸疾患である。例示的な実施形態において、本状態は、消化管の合併症である。例示的な実施形態において、本状態は、下痢である。例示的な実施形態において、本状態は、セリアック病および非特異性大腸炎からなる群から選択される。例示的な実施形態において、本状態は、肝疾患である。例示的な実施形態において、本状態は、自己免疫性肝炎、Ｃ型肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、または劇症肝不全からなる群から選択される。例示的な実施形態において、本状態は、骨疾患である。例示的な実施形態において、本状態は、骨粗鬆症である。例示的な実施形態において、本状態は、肺疾患である。例示的な実施形態において、本状態は、アレルギー性鼻炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、慢性肉芽腫性炎症、嚢胞性線維症、およびサルコイドーシスからなる群から選択される。例示的な実施形態において、本状態は、心血管疾患である。例示的な実施形態において、心血管疾患は、アテローム動脈硬化性心血管疾患、うっ血性心不全、および再狭窄からなる群から選択される。例示的な実施形態において、本状態は、腎疾患である。例示的な実施形態において、本状態は、糸球体腎炎および血管炎からなる群から選択される。例示的な実施形態において、本状態は、放射線治療後関連疾患およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される。また別の実施形態において、本状態は、アトピー性皮膚炎である。また別の実施形態において、本状態は、光線角化症である。
【０２４７】
例示的な実施形態において、ＰＤＥ４阻害は、障害を治療するおよび／または予防することであり、この障害は、乾癬、炎症性関節炎、リウマチ性関節炎、喘息、慢性気管支炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アトピー性皮膚炎、じんま疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季結膜炎、大腸炎、好酸球性肉芽腫、敗血症性ショック、心筋の再灌流傷害、脳の再灌流傷害、慢性糸球体腎炎、内毒素性ショック、成人呼吸窮迫症候群、嚢胞性線維症、動脈再狭窄、動脈硬化、角化症、リウマチ様脊椎炎、変形性関節症、発熱、真性糖尿病、塵肺症、慢性閉塞性気道疾患、毒性接触湿疹、アレルギー性接触湿疹、アトピー性湿疹、脂漏性湿疹、単純苔癬、日焼け、肛門性器部の掻痒、円形脱毛症、肥厚性瘢痕、円板状エリテマトーデス、全身性エリテマトーデス、濾胞性膿皮症、広範性膿皮症、内因性座瘡、外因性座瘡、酒土性座瘡、ベーチェット疾患、アナフィラキシー性紫斑病性腎炎、白血病、多発性硬化症、胃腸疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される。例示的な実施形態において、大腸炎は、潰瘍性大腸炎、クローン大腸炎、空置大腸炎、虚血性大腸炎、感染性大腸炎、劇症大腸炎、薬剤性大腸炎（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｌｉｔｉｓ）、顕微鏡的大腸炎、リンパ球性大腸炎、および非定型的大腸炎からなる群から選択される。例示的な実施形態において、大腸炎は、潰瘍性大腸炎およびクローン大腸炎からなる群から選択される。
【０２４８】
例示的な実施形態において、本状態は、乾癬である。例示的な実施形態において、乾癬は、プラーク乾癬、間擦疹型乾癬（逆乾癬）、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎、および乾癬性紅皮症からなる群から選択される。例示的な実施形態において、乾癬は、プラーク乾癬および爪乾癬からなる群から選択される。例示的な実施形態において、本状態は、乾癬であり、化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選択される。例示的な実施形態において、本状態は、プラーク乾癬または爪乾癬であり、化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選択される。
【０２４９】
例示的な実施形態において、本疾患は、認知機能の障害または低下および記憶障害からなる群から選択される。例示的な実施形態において、記憶障害は、認知症によるものである。例示的な実施形態において、患者は、アルツハイマー病、統合失調症、パーキンソン病、ハンチントン病、ピック病、クロイツフェルトヤコブ病、鬱病、加齢、頭部外傷、脳卒中、中枢神経系低酸素症、大脳性老衰、多発脳梗塞性認知症、急性神経性疾患、加齢関連認知衰退、ＨＩＶ、または心血管疾患により記憶障害に苦しんでいる。
【０２５０】
例示的な実施形態において、ＰＤＥ４阻害は、効果を増強させ、増強した効果が、認知または記憶である。
【０２５１】
例示的な実施形態において、本発明は、女性における卵胞の成長を刺激するための方法を提供し、方法は、本発明の化合物を含む薬剤を女性に投与することを含み、それによって、女性における卵胞の成長を刺激する。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。例示的な実施形態において、この女性は、排卵誘発を受けている。例示的な実施形態において、この女性は、過排卵誘起を受けている。例示的な実施形態において、薬剤は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、またはＦＳＨ活性を有する薬剤、または内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤とともに、同時に、別個に、または連続して投与される。
【０２５２】
本発明はまた、サイトカイン発現レベルに関連する炎症関連疾患を治療する方法も提供し、これは、本発明の化合物のかかる治療を必要とする動物に投与することを含む。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書に記載の式によるものである。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。
【０２５３】
例示的な実施形態において、本発明は、動物における炎症関連疾患を治療する、または予防する方法を提供し、方法は、治療有効量の本発明の化合物を動物に投与することを含み、化合物は、炎症誘発性サイトカイン発現を阻害するか、化合物は、炎症誘発性サイトカイン発現を阻害するか、あるいは抗炎症性サイトカイン発現を刺激することによって、炎症関連疾患を治療するのに十分な量であるが、その量は、サイクリン依存性キナーゼを実質的に阻害するのには十分ではない。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。
【０２５４】
例示的な実施形態において、本発明は、炎症性サイトカインを産生することが可能な細胞によって炎症性サイトカインの産生を阻害するための方法を提供し、方法には、治療量の本発明の化合物と細胞を接触させることを含み、細胞による炎症性サイトカインの産生が阻害される。例示的な実施形態において、治療量は、約５０％〜約９９％の炎症性サイトカインタンパク質の産生を阻害するのに十分である。
【０２５５】
例示的な実施形態において、本発明は、動物における炎症反応を阻害するための方法を提供し、方法は、  治療量の本発明の化合物と動物を接触させることを含み、炎症反応が阻害される。
【０２５６】
例示的な実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかにおいては、動物は、ヒト、ウシ、シカ、トナカイ、ヤギ、ミツバチ、ブタ、ヒツジ、ウマ、雌牛、雄牛、イヌ、モルモット、アレチネズミ、ウサギ、ネコ、ラクダ、ヤク、ゾウ、ダチョウ、カワウソ、ニワトリ、カモ、ガン、ホロホロ鳥、ハト、ハクチョウ、およびシチメンチョウからなる群から選択される。別の例示的な実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかにおいては、動物は、ヒト、ウシ、ヤギ、ブタ、ヒツジ、ウマ、雌牛、雄牛、イヌ、モルモット、アレチネズミ、ウサギ、ネコ、ニワトリ、およびシチメンチョウからなる群から選択される。別の例示的な実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかにおいては、動物はヒトである。
【０２５７】
例示的な実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかにおいては、本発明の化合物、および／または本明細書に記載の医薬製剤を使用することができる。
【０２５８】
別の例示的な実施形態において、本明細書に記載の、状態を治療する／予防する、または効果を増強させる方法のいずれかにおいて、本発明の化合物による治療を必要としない限り、動物は、本発明の化合物を投与されない。
【０２５９】
別の例示的な実施形態において、方法は、本発明の化合物を、本発明の化合物による治療を必要としない限り、動物に投与することによって乾癬を治療することを含む。
【０２６０】
別の例示的な実施形態において、方法は、本発明の化合物を、本発明の化合物による治療を必要としない限り、動物に投与することによってアトピー性皮膚炎を治療することを含む。
ｇ）
【０２６１】
別の態様において、本発明は、受容体を阻害するまたは活性化する方法を提供し、方法は、本明細書に記載の化合物と受容体を接触させることを含み、受容体は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲまたはＥｒｂＢ−１またはＨＥＲ１）、ＨＭ７４Ａ（ＧＰＲ１０９Ａ）、ヒスタミン１、ヒスタミン２、ヒスタミン３、ヒスタミン４、β−アドレナリン作動性受容体キナーゼ（β２ＡＲ）、ＫＡＴＰ  （ＡＴＰ感受性カリウムチャネル）、タンパク質キナーゼＣ、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡまたはｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ）、ＰＡＲ１（Ｆ２Ｒ）、およびＴＬＲ３（ＣＤ２８３）からなる群から選択される。
【０２６２】
別の態様において、本発明は、受容体に関与する疾患を治療するおよび／または予防する方法を提供し、方法は、動物に治療有効量の本明細書に記載の化合物を投与することを含み、受容体は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲまたはＥｒｂＢ−１またはＨＥＲ１）、ＨＭ７４Ａ（ＧＰＲ１０９Ａ）、ヒスタミン１、ヒスタミン２、ヒスタミン３、ヒスタミン４、β−アドレナリン作動性受容体キナーゼ（β２ＡＲ）、ＫＡＴＰ（ＡＴＰ感受性カリウムチャネル）、タンパク質キナーゼＣ、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡまたはｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ）、ＰＡＲ１（Ｆ２Ｒ）、およびＴＬＲ３（ＣＤ２８３）からなる群から選択される。例示的な実施形態において、疾患は、前記受容体の過剰発現、過少発現、または異常によって引き起こされる。
【０２６３】
別の態様において、本発明は、受容体の下流標的を阻害するまたは活性化する方法を提供し、方法は、本明細書に記載の化合物を前記下流標的と接触させることを含み、受容体は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲまたはＥｒｂＢ−１またはＨＥＲ１）、ＨＭ７４Ａ（ＧＰＲ１０９Ａ）、ヒスタミン１、ヒスタミン２、ヒスタミン３、ヒスタミン４、β−アドレナリン作動性受容体キナーゼ（β２ＡＲ）、ＫＡＴＰ（ＡＴＰ感受性カリウムチャネル）、タンパク質キナーゼＣ、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡまたはｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ）、ＰＡＲ１（Ｆ２Ｒ）、およびＴＬＲ３（ＣＤ２８３）からなる群から選択される。
【０２６４】
別の態様において、本発明は、受容体の下流標的に関与する疾患を治療するまたは予防する方法を提供し、方法は、治療有効量の本明細書に記載の化合物をかかる治療を必要とする動物に投与することを含み、受容体は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲまたはＥｒｂＢ−１またはＨＥＲ１）、ＨＭ７４Ａ（ＧＰＲ１０９Ａ）、ヒスタミン１、ヒスタミン２、ヒスタミン３、ヒスタミン４、β−アドレナリン作動性受容体キナーゼ（β２ＡＲ）、ＫＡＴＰ（ＡＴＰ感受性カリウムチャネル）、タンパク質キナーゼＣ、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡまたはｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ）、ＰＡＲ１（Ｆ２Ｒ）、およびＴＬＲ３（ＣＤ２８３）からなる群から選択される。例示的な実施形態において、疾患は、受容体の過剰発現、過少発現、または異常によって引き起こされる。別の例示的な実施形態において、化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される。別の例示的な実施形態において、化合物は、前記動物に投与される本明細書に記載の医薬製剤の一部である。別の例示的な実施形態において、動物は、ヒトである。別の例示的な実施形態において、動物が、本発明の化合物による治療を必要しない条件付きである。
【０２６５】
Ｖ．  医薬製剤
別の態様において、本発明は、（ａ）本発明の化合物と、（ｂ）医薬的に許容される賦形剤と、を含む、医薬製剤を提供する。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。例示的な実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。例示的な実施形態において、化合物は、本明細書に記載の式によるものである。例示的な実施形態において、化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５からなる群から選択される。例示的な実施形態において、製剤は、単位剤形である。例示的な実施形態において、製剤は、経口単位剤形または局所単位剤形である。例示的な実施形態において、局所単位剤形は、ローション、軟膏、およびクリームからなる群から選択される。例示的な実施形態において、製剤は、局所使用用である。例示的な実施形態において、本明細書に記載の医薬製剤は、本明細書に記載の方法に使用することができる。
【０２６６】
本明細書に詳細に説明されるように、本発明の医薬組成物は、経口投与に適しているもの、例えば、錠剤、ドレンチ剤（水性または非水性の液剤または懸濁剤）、非経口投与（静脈内および筋肉内を含む）、または硬膜外注射、例えば、無菌溶液もしくは懸濁液、または持続放出製剤を含む、固体または液体形態で投与のために特別に製剤化され得る。本発明の医薬組成物はまた、経皮投与用に特に製剤化され得る。
【０２６７】
本発明の医薬組成物は、経口的に、非経口的に、皮下的に、経皮的に、経鼻的に、または肛門の座薬によって投与され得る。本発明の医薬組成物はまた、制御送達装置を用いて投与され得る。
【０２６８】
本発明の製剤は、経口および非経口投与、特に、筋肉内、静脈内、および皮下投与に適しているものを含む。製剤は、単位剤形として好都合に示し得、薬学の技術分野で周知の任意の方法によって調製され得る。担体材料と組み合わせて、単一の剤形を生成することができる活性成分の量は、治療する宿主および特定の投与形態に依存して変化し得る。担体材料と組み合わせて、単一の剤形を生成することができる活性成分の量は、一般に、患者に対して毒性を示すことなく、治療効果を生成する化合物の量であり得る。一般に、この量は、百パーセント中、活性成分が、約１パーセント〜約９９パーセントまでに及ぶ得る。
【０２６９】
ある実施形態において、本発明の製剤は、シクロデキストリン、リポソーム、ミセル形成物質、例えば、胆汁酸、ならびにポリマー性の担体、例えば、ポリエステルおよびポリ酸無水物からなる群から選択される賦形剤と、本発明の化合物と、を含む。ある実施形態において、上記の製剤は、本発明の化合物は、経口的に体内に吸収され利用され得る。
【０２７０】
これらの製剤または組成物を調製する方法は、本発明の化合物を、担体、および任意に、１つ以上の付属の成分と混ぜ合わせる工程を含む。一般に、本発明の化合物を、液体の担体、もしくは微粉化した固体の担体または両方と均一かつ密接に混ぜ合わせ、次いで、必要に応じて、製品の形状となすことによって製剤を調製する。
【０２７１】
経口投与に適した本発明の製剤は、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、カプレット剤、（芳香剤を添加した基剤、通常スクロースおよびアラビアゴムもしくはトラガカントを使用する）トローチ剤、粉末剤、顆粒剤の形態であってもよく、あるいは水性もしくは非水性の液体中の液剤もしくは懸濁剤としても、または水中油型もしくは油中水型の乳濁剤としても、またはエリキシル剤もしくはシロップ剤としても、あるいは（ゼラチンおよびグリセリン等の不活性な基剤またはスクロースおよびアラビアゴムを使用する）芳香錠剤（ｐａｓｔｉｌｌｅ）としてもよく、それぞれが、予め決定した量の本発明の化合物を、活性成分として含有する。本発明の化合物はまた、ボーラス、舐剤、またはペースト剤としても投与してもよい。
【０２７２】
経口投与のための本発明の固体剤形（カプセル剤、錠剤、カプレット剤、丸剤、糖衣錠剤、粉末剤、顆粒剤等）においては、活性成分を、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム等の１つ以上の医薬的に許容される担体、ならびに／または以下のいずれかと混合する：（１）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、シアル酸および／もしくはケイ酸等の充填剤もしくは増量剤、（２）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／もしくはアラビアゴム等の結合剤、（３）グリセロール等の湿潤剤、（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤、（５）パラフィン等の溶解遅延剤、（６）四級アンモニウム化合物等の吸収促進剤、（７）例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、および非イオン性界面活性剤等の湿潤剤、（８）カオリンおよびベントナイトクレイ等の吸収剤、（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物等の滑沢剤、ならびに（１０）着色剤。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合には、医薬組成物はまた、緩衝剤も含んでもよい。類似の型の固体組成物はまた、ラクトースもしくは乳糖、および高分子量ポリエチレングリコール等のような賦形剤を用いて、軟質および硬質の殻のゼラチンカプセル剤中で、充填剤としても使用することができる。
【０２７３】
錠剤は、任意に、１つ以上の付属の成分とともに、圧縮または成型によって作製することができる。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性な希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムもしくは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤、または分散剤を用いて調製することができる。成型錠剤は、不活性な液体の希釈剤を用いて湿潤させた粉末化合物の混合物を、好適な機械中で成型することによって作製することができる。
【０２７４】
本発明の医薬組成物の錠剤および糖衣錠剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤等の他の固体剤形は、任意に、腸溶コーティングおよび医薬品製剤技術分野で周知の他の被覆等の被覆および殻を用いて収容するか、または調製され得る。これらはまた、その中の活性成分を緩慢に、または制御して放出するように、例えば、所望の放出プロファイルをもたらすために様々な比率のヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して、他のポリマー性マトリックス、リポソーム、および／またはマイクロスフェアを使用して製剤化することができる。これらは、急速に放出するように、例えば、凍結乾燥して製剤化することができる。これらは、例えば、細菌を保持するフィルターを通す濾過によって、または使用直前に無菌水もしくは何らかの他の無菌の注射用媒体中に溶解させることができる無菌の固体組成物の形態で無菌剤を組み込むことによって無菌化することができる。これらの組成物はまた、任意に、乳白剤を含有することができ、胃腸管の特定の部分においてのみ、またはそこにおいて優先的に、任意に、遅延様式で、（１つ以上の）活性成分を放出する組成のものであり得る。使用することができる包埋組成物の例には、高分子物質およびワックスが含まれる。活性成分はまた、適切な場合には、１つ以上の上記の賦形剤とともに、マイクロカプセルの形態となすこともできる。
【０２７５】
本発明の化合物の経口投与のための液体剤形には、医薬的に許容される乳剤、マイクロエマルション、液剤、懸濁剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が含まれる。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒等の当技術分野で一般に使用される不活性な希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物等の可溶化剤ならびに乳化剤も含有することができる。
【０２７６】
不活性希釈剤に加えて、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味剤、着色剤、香料、ならびに保存剤等のアジュバントも含むことができる。
【０２７７】
懸濁剤は、活性化合物に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにそれらの混合物も含有することができる。
【０２７８】
非経口投与に適した本発明の医薬組成物は、１つ以上の医薬的に許容される無菌の等張な水性または非水性の液剤、分散剤、懸濁剤もしくは乳剤、または使用直前に無菌の注射用の液剤もしくは分散剤の中に再構成することができる無菌の粉末剤と組み合わせた、１つ以上の本発明の化合物を含み、これは、糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、意図するレシピエントの血液と処方を等張にする溶質、または懸濁化剤、もしくは増粘剤を含有し得る。
【０２７９】
本発明の医薬組成物において利用され得る、好適な水性および非水性の担体の例には、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、およびそれらの好適な混合物、オリーブ油等の植物油、ならびにオレイン酸エチル等の注射用の有機エステルが含まれる。適切な流動性を、例えば、レシチン等の被覆材料を使用することによって、分散剤の場合には、必要な粒子サイズを維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。
【０２８０】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤等のアジュバントも含有し得る。対象化合物に対する微生物の作用の予防を、種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等を含めることによって確実に行い得る。また、糖、塩化ナトリウム等の等張化剤を、組成物中に含めることが望ましい場合もある。さらに、注射用の医薬品の形態の持続的吸収を、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン等の吸収を遅延させる薬剤を含めることによってもたらすこともできる。
【０２８１】
場合によっては、薬物の効果を持続させるために、皮下または筋肉内の注射からの薬物の吸収を遅くすることが望ましい。これは、低い水溶性を有する結晶性または非結晶性の材料の液体懸濁液を使用することによって達成することができる。次いで、薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、同様に、結晶サイズおよび結晶形態に依存し得る。代替として、非経口投与用の薬物の形態の遅延吸収は、薬物を油性のビヒクル中に溶解または懸濁させることによっても達成される。
【０２８２】
注射用デポーの形態は、対象化合物のマイクロカプセルのマトリックスを、ポリ乳酸−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中に形成することによって作製される。薬物のポリマーに対する比および利用する特定のポリマーの性質に依存して、薬物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（酸無水物）が含まれる。また、デポー注射用製剤は、身体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルションの中に薬物を捕捉することによっても調製される。持続作用型の錠剤の形態で本発明の医薬組成物または単位剤形は、薬物治療を一定期間にわたってもたらす手段において、薬物物質を放出するように製剤化された圧縮錠剤を含むことができる。薬物物質の放出が、投与後の一定期間にわたり、または特定の生理的状態が存在するようになるまで阻止される遅延作用型の錠剤を含む、いくつかの錠剤の型がある。薬物物質の完全な用量を胃腸液に定期的に放出する反復作用型の錠剤を形成することができる。また、含有する薬物物質の一定量を胃腸液に連続的に放出する徐放性の錠剤も形成することができる。
【０２８３】
本発明の化合物はまた、制御放出手段によっても、または当業者によく知られている送達デバイスによっても投与することができる。例としては、米国特許第３，８４５，７７０号、第３，９１６，８９９号、第３，５３６，８０９号、第３，５９８，１２３号、第４，００８，７１９号、第５，６７４，５３３号、第５，０５９，５９５号、第５，５９１，７６７号、第５，１２０，５４８号、第５，０７３，５４３号、第５，６３９，４７６号、第５，３５４，５５６号、および第５，７３３，５６６号に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。このような剤形を使用して、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーのマトリックス、ゲル、透過性の膜、浸透圧によるシステム、多層被覆、微小粒子、リポソーム、マイクロスフェア、またはそれらの組み合わせを用いて、様々な比率で所望の放出プロファイルをもたらして、１つ以上の活性成分の緩除放出または制御放出を得ることができる。本明細書に記載するものを含めて、当業者に既知の好適な制御放出性の製剤を容易に選択して、本発明の化合物とともに使用することができる。したがって、本発明は、制御放出するのに適している錠剤、カプセル剤、ジェルキャップ剤、およびカプレット剤等に限定されないが、経口投与に適した単一の単位剤形を包含する。
【０２８４】
全ての制御放出性の医薬製品は、それらの非制御性の対応物によって達成されたものを上回るように薬物療法を改善するという共通の目標を有する。理想的には、医学的治療における最適に設計された制御放出性の調製物の使用は、最小の薬物物質を利用して、最短時間で状態を治癒または制御することによって特徴付けられる。制御放出性の製剤の利点には、薬物活性の長期化、投与頻度の低下、および患者のコンプライアンスの向上が含まれる。さらに、制御放出性の製剤を使用して、作用の開始時期、または薬物の血中レベル等の他の特徴に影響を及ぼすことができ、したがって、副作用（例えば、有害作用）の発生率に影響を及ぼすことができる。
【０２８５】
大部分の制御放出性の製剤は、所望の治療効果を即座にもたらす薬物（活性成分）の量を最初に放出し、このレベルの治療または予防の効果を長期の期間にわたって維持するための薬物の別の量を次第にかつ連続的に放出するように設計される。体内でこの一定のレベルの薬物を維持するためには、代謝され、身体から排泄される薬物の量を置換する速度で、剤形から薬物が、放出されなければならない。活性成分の制御放出を、ｐＨ、温度、酵素、水、もしくは他の生理的条件に限定されない種々の条件、または化合物によって刺激することができる。
【０２８６】
本発明の化合物はまた、経皮、局所、および粘膜の剤形として製剤化することもでき、こうした剤型には、眼科用液剤、スプレー剤、エアロゾル剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、ジェル剤、液剤、乳剤、懸濁剤、または当業者に既知の他の型が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ａｎｄ  １８ｔｈ  ｅｄｓ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡ（１９８０  ＆  １９９０）、およびＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，４ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｅａ  ＆  Ｆｅｂｉｇｅｒ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９８５）を参照されたい。経皮剤形には、「リザーバ型」または「マトリックス型」のパッチがあり、これを皮膚に適用し、特定の期間にわたり着用して、所望の量の活性成分を浸透させる。
【０２８７】
本発明が包含する経皮、局所、および粘膜の剤形を得るために使用することができる好適な賦形剤（例えば、担体および希釈剤）および他の材料は、薬学の技術分野の当業者にはよく知られており、所与の医薬組成物または剤形が適用される特定の組織によって異なる。
【０２８８】
治療しようとする特異的な組織に依存して、追加の構成成分を、本発明の活性成分を用いる治療の前に、治療に併せて、または治療の後に使用することができる。例えば、浸透増強剤を使用して、活性成分の組織への送達を支援することができる。
【０２８９】
また、医薬組成物もしくは剤形のｐＨ、または医薬組成物もしくは剤形を適用する組織のｐＨを調節して、１つ以上の活性成分の送達を改善することもできる。同様に、溶媒担体の極性、そのイオン強度、またはその浸透圧を調節して、送達を改善することもできる。また、ステアリン酸等の化合物を、医薬組成物または剤形に添加して、送達を改善するように、１つ以上の活性成分の親水性または親油性を有利に変化させることもできる。この点において、ステアリン酸が、製剤のための脂質ビヒクルとして、乳化剤または界面活性剤として、および送達増強剤または浸透増強剤として役立つ場合がある。活性成分の異なる塩、水和物、または溶媒和化合物を使用して、得られた組成物の性質をさらに調節することができる。
【０２９０】
本発明の化合物を医薬品として、ヒトおよび動物に投与する場合、それ自体で、または医薬的に許容される担体と組み合わせて、例えば、活性成分を０．１〜９９．５％を含有する医薬組成物として与えることができる。
【０２９１】
本発明の調製物は、経口的および非経口的に与えることができる。もちろん、これらは、それぞれの投与経路に適した形態で与えられる。例えば、それらは、錠剤またはカプセル剤の形態で、注射により、および静脈内投与により投与される。１つの実施形態において、経口投与が好ましい。
【０２９２】
「非経口投与」および「非経口的に投与した」という語句は、本明細書で使用する場合、腸内投与および局所投与以外の、通常注射による投与形態を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、角質下、関節腔内、嚢下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内への注射および注入が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９３】
選択する投与量のレベルは、利用される特定の本発明の化合物またはそのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与経路、投与の時期、利用される特定の化合物の排泄および代謝の速度、治療期間、利用される特定の化合物と併用する他の薬物、化合物、および／または材料、治療する患者の年齢、性別、体重、状態、全般的な健康状態、および過去の病歴、ならびに医学の技術分野で周知の類似の要因を含む、多様な要因に依存し得る。
【０２９４】
当技術分野の通常の技術を有する医師または獣医師であれば、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師または獣医師は、所望の治療効果を達成するために必要な用量よりも低いレベルの、医薬組成物中で利用される本発明の化合物の用量から開始し、投与量を所望の効果を達成するまで次第に増加させることができるであろう。
【０２９５】
一般に、本発明の化合物の好適な１日当たりの用量は、治療効果をもたらすために有効な最も低い用量である化合物の量である。このような有効用量は、一般に、上記の要因に依存し得る。一般に、本発明の化合物の患者に対する、静脈内、脳室内、および皮下への投与量は、１日当たり、体重１キログラム当たり約０．００５ｍｇ〜約５ｍｇまでの範囲である。
【０２９６】
「治療」または「治療する」という用語は、療法、予防（予防法）、再発の予防、および急性症状の緩和を包含することを意図する。「治療する」とは、症状の緩和および基底状態の消散のいずれかまたは両方を指すことに留意されたい。本発明の状態の多くにおいては、本発明の化合物または組成物の投与が、疾患状況に対して直接的ではなく、むしろ何らかの悪質な症状に対して作用する場合があり、そうした症状の改善が、疾患状況の全般的なかつ所望の緩和をもたらす。
【０２９７】
この治療を受ける患者は、霊長類、特にヒト、ならびにウマ、ウシ、ブタ、およびヒツジ等の他の哺乳動物、ならびに家禽および一般的なペットを含む、それを必要とする任意の動物である。
【０２９８】
本発明の化合物および医薬組成物は、他の医薬品、例えば、ペニシリン、セファロスポリン、アミノグリコシド、およびグリコペプチド等の抗菌剤と併用して投与することができる。したがって、併用療法は、活性化合物を、最初に投与した薬剤の治療効果が、それに続く薬剤を投与するときに、完全には消失していないように、逐次、同時、および別個に投与することを含む。
【０２９９】
本発明は、上記の例示的な実施形態と組み合わせて説明されているが、多くの等価の修正および変更は、本開示を規定する場合、当業者には明らかであろう。したがって、説明される本発明の例示的な実施形態は、例示的なものであり、限定されるものでないと見なされる。記載の実施形態への様々な変更は、本発明の精神および範囲から逸脱されることなくなされ得る。
【０３００】
例示的な実施形態は、本明細書の以下に要約される。
【０３０１】
例示的な実施形態において、本発明は、以下の式
【化５５】
2012502037.tif 000059
による構造を有する化合物であり、
式中、Ｘは、ＣＨ、Ｃ（ＣＮ）、ＣＲｂ、およびＮからなる群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ（ＣＮ）、ＣＲｂ、およびＮからなる群から選択され；ａは０または１であり；ｂは０または１であり；Ｒｄは、Ｈ、非置換のＣ１−Ｃ６アルキル、ＣＯＲ１０、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、式中、Ｒ１０は、Ｈおよび非置換のＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；但し、ＸもしくはＹがＣ（ＣＮ）である場合、ａは０であり；但し、ＸもしくはＹがＣＲｂである場合、ｂは０であり；但し、ＸおよびＹはともに、Ｃ（ＣＮ）であり得ず；但し、ＸおよびＹはともに、ＣＲｂであり得ず；Ｒｂは、ＯＲ４、ＮＲ４Ｒ５、ＳＲ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、ニトロ、シアノ、ハロゲン、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択され、式中、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択されるが、但し、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している原子と一体となって、任意に組み合わせて、５〜７員の置換または非置換のヘテロシクロアルキル環を形成する、化合物、またはその塩である。
【０３０２】
例示的な実施形態において、上記段落によると、化合物は、
【化５６】
2012502037.tif 000060
の構造を有し、
式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０３０３】
例示的な実施形態において、上記段落によると、化合物は、
【化５７】
2012502037.tif 000061
の構造を有し、
式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０３０４】
例示的な実施形態において、上記段落によると、化合物は、
【化５８】
2012502037.tif 000062
の構造を有し、
式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０３０５】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化５９】
2012502037.tif 000063
の構造を有し、
式中、Ｒｂは、本明細書に記載される通りである。
【０３０６】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化６０】
2012502037.tif 000064
の構造を有し、
式中、Ｒｂは、本明細書に記載される通りである。
【０３０７】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化６１】
2012502037.tif 000065
の構造を有し、
式中、Ｒｂは、本明細書に記載される通りである。
【０３０８】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化６２】
2012502037.tif 000066
の構造を有し、
式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０３０９】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化６３】
2012502037.tif 000067
の構造を有し、
式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０３１０】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化６４】
2012502037.tif 000068
の構造を有し、
式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０３１１】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化６５】
2012502037.tif 000069
の構造を有し、
式中、Ｒｂは、本明細書に記載される通りである。
【０３１２】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化６６】
2012502037.tif 000070
の構造を有し、
式中、Ｒｂは、本明細書に記載される通りである。
【０３１３】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化６７】
2012502037.tif 000071
の構造を有し、
式中、Ｒｂは、本明細書に記載される通りである。
【０３１４】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化６８】
2012502037.tif 000072
の構造を有し、
式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０３１５】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化６９】
2012502037.tif 000073
の構造を有し、
式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０３１６】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化７０】
2012502037.tif 000074
の構造を有し、
式中、ＲｂおよびＲｄは、本明細書に記載される通りである。
【０３１７】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化７１】
2012502037.tif 000075
の構造を有し、
式中、Ｒｂは、本明細書に記載される通りである。
【０３１８】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化７２】
2012502037.tif 000076
の構造を有し、
式中、Ｒｂは、本明細書に記載される通りである。
【０３１９】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化７３】
2012502037.tif 000077
の構造を有し、
式中、Ｒｂは、本明細書に記載される通りである。
【０３２０】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＯＲ４であり、Ｒ４は、Ｈ、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択される。
【０３２１】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＯＲ４であり、Ｒ４は、置換または非置換のアルキルである。
【０３２２】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化７４】
2012502037.tif 000078
からなる群から選択される構造を有する。
【０３２３】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＯＲ４であり、Ｒ４は、シクロアルキル置換アルキルである。
【０３２４】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＯＲ４であり、Ｒ４は、シクロアルキル置換メチルである。
【０３２５】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化７５】
2012502037.tif 000079
からなる群から選択される構造を有する。
【０３２６】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＯＲ４であり、Ｒ４は、置換または非置換のヘテロアルキルである。
【０３２７】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化７６】
2012502037.tif 000080
からなる群から選択される構造を有する。
【０３２８】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択される。
【０３２９】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＮＨＲ５であり、Ｒ５は、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択される。
【０３３０】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＮＨＲ５であり、Ｒ５は、置換または非置換のアルキルである。
【０３３１】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＮＨＲ５であり、Ｒ５は、ヒドロキシ置換アルキルである。
【０３３２】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＮＨＲ５であり、Ｒ５は、ヒドロキシエチルである。
【０３３３】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＮＨＲ５であり、Ｒ５は、アルコキシ置換アルキルである。
【０３３４】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＮＨＲ５であり、Ｒ５は、アルコキシエチルである。
【０３３５】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＮＨＲ５であり、Ｒ５は、メトキシ置換アルキルである。
【０３３６】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ＲｂはＮＨＲ５であり、Ｒ５は、置換または非置換のヘテロアルキルである。
【０３３７】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、
【化７７】
2012502037.tif 000081
からなる群から選択される構造を有する。
【０３３８】
例示的な実施形態において、本発明は、ａ）上記段落のいずれかによる化合物、またはその塩、およびｂ）医薬的に許容される賦形剤を含む、医薬製剤を提供する。
【０３３９】
例示的な実施形態において、上記段落によると、医薬製剤は、単位剤形である。
【０３４０】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、医薬製剤中の化合物の塩は、医薬的に許容される塩である。
【０３４１】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、医薬製剤は、経口用または局所用である。
【０３４２】
例示的な実施形態において、本発明は、サイトカインまたはケモカインの放出を減少させる方法を提供し、方法は、本発明の化合物と細胞を接触させることを含み、細胞によってサイトカインまたはケモカインの放出が減少される。
【０３４３】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、本明細書に記載の構造を有する。
【０３４４】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、サイトカインは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＬＴ、ＬＩＦ、オンコスタチン、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。
【０３４５】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、サイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。
【０３４６】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γからなる群から選択される。
【０３４７】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、ケモカインは、ＩＬ−８、Ｇｒｏ−α、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、ＰＧＥ２、ＥＮＡ−７８、およびランテスからなる群から選択される。
【０３４８】
例示的な実施形態において、本発明は、動物における、状態を治療する方法を提供し、方法は、治療有効量の本発明の化合物をその動物に投与することを含み、それによって、状態を治療することを含む。
【０３４９】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、化合物は、本明細書に記載の構造を有する。
【０３５０】
例示的な実施形態において、本状態は、関節炎、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、乾癬、肺疾患、多発性硬化症、神経変性障害、うっ血性心不全、脳卒中、大動脈弁狭窄、腎不全、狼瘡、膵臓炎、アレルギー、線維症、貧血、アテローム性動脈硬化症、代謝性疾患、骨疾患、循環器疾患、化学療法／放射線関連合併症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肝疾患、胃腸障害、眼疾患、アレルギー性結膜炎、糖尿病性網膜症、シェーグレン症候群、ブドウ膜炎、肺疾患、腎疾患、皮膚炎、ＨＩＶ関連悪液質、脳性マラリア、強直性脊椎関節炎、ハンセン病、貧血、および線維筋痛症からなる群から選択される。
【０３５１】
例示的な実施形態において、本状態は、乾癬、アトピー性皮膚炎、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、喘息、および慢性閉塞性肺疾患からなる群から選択される。
【０３５２】
例示的な実施形態において、本状態は、乾癬であり、この乾癬は、プラーク乾癬、間擦疹型乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、および乾癬性紅皮症からなる群から選択される。
【０３５３】
例示的な実施形態において、乾癬は、プラーク乾癬および爪乾癬からなる群から選択される。
【０３５４】
例示的な実施形態において、本発明は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）を阻害する方法を提供し、方法には、本発明の化合物とホスホジエステラーゼを接触させ、それによって、ホスホジエステラーゼを阻害することを含む。
【０３５５】
例示的な実施形態において、ホスホジエステラーゼは、ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）およびホスホジエステラーゼ７（ＰＤＥ７）からなる群から選択される。
【０３５６】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、本発明は、原虫感染の治療および／または予防のための薬剤の製造における、本発明の化合物の使用である。
【０３５７】
例示的な実施形態において、上記段落のいずれかによると、本発明は、原虫感染の治療および／または予防のための薬剤の製造における、本発明の組み合わせの使用である。
【０３５８】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明される。実施例は、本発明の範囲を定義または限定することを意図したものではない。
【実施例】
【０３５９】
Ｖａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ３００（３００ＭＨｚ）または４００−ＭＲ（４００ＭＨｚ）スペクトロメータでプラトンＮＭＲを記録し、化学シフトをテトラメチルシランから低磁場側へのδ（ｐｐｍ）として報告する。質量スペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００および６１２０  ＬＣ／ＭＳシステムで測定される。質量分析計は、陽または負モードで操作するエレクトロスプレーイオン源（ＥＳ）を備えた。
【０３６０】
使用した全ての溶媒は、市販されており、さらに精製せずに使用した。反応は、一般に、窒素の不活性雰囲気下で、無水溶媒を用いて行った。
【０３６１】
化合物は、ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  １１．０、または市販であれば、それらのカタログ名を用いて明記される。
【０３６２】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、Ｍａｎｃｈｅｒｅｙ−ＮａｇｅｌからのＡｌｕｇｒａｍ（登録商標）（シリカゲル６０  Ｆ２５４）で行われ、紫外線は、一般に、スポットを可視化するために使用された。また、さらなる可視法が、場合によって採用された。これらの場合において、ＴＬＣプレートは、ヨウ素（約１ｇのＩ２を１０ｇ  シリカゲルに添加することによって生成され、完全に混合される）、バニリン（１００ｍＬ  １０％  Ｈ２ＳＯ４中の約１ｇ  バニリンに溶解することによって生成される）、ニンヒドリン（Ａｌｄｒｉｃｈから市販される）、またはＭａｇｉｃ  Ｓｔａｉｎ（４５０ｍＬ  水および５０ｍＬ  濃縮したＨ２ＳＯ４中の２５ｇ  （ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４．４Ｈ２Ｏ、５ｇ  （ＮＨ４）２Ｃｅ（ＩＶ）（ＮＯ３）６を完全に混合することによって生成される）を用いて処理され、化合物を可視化した。フラッシュクロマトグラフィーを、Ｓｔｉｌｌ，Ｗ．Ｃ．、Ｋａｈｎ，Ｍ．、およびＭｉｔｒａ，Ｍ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９７８，４３，２９２３−２９２５に開示されるものに類似する技術に従って、一般に、Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ社からの４０〜６３μｍ（２３０〜４００メッシュ）シリカゲルを用いて行った。フラッシュクロマトグラフィーまたは薄層クロマトグラフィーのために使用される一般的な溶媒は、クロロホルム／メタノール、ジクロロメタン／メタノール、酢酸エチル／メタノール、およびヘキサン／酢酸エチルの混合物であった。逆相カラムクロマトグラフィーを、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｃ１８カートリッジおよび水／メタノール勾配（一般に、５％  ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ〜９０％  ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏから溶出）を用いて、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）で行った。
【０３６３】
分取液体クロマトグラフィーを、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００シリーズシステムで行った。使用したカラムは、ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８、５μｍ、３０×５０ｍｍであった。アセトニトリル／水を用いた、０．１％  トリフルオロ酢酸または０．１％  酢酸のいずれかを含有する水を用いた狭い勾配を使用して、約２０ｍＬ／分の流速で、２０〜３０分間の全ランタイムで、化合物を溶出した。
【０３６４】
実施例１
Ｃ１．  ５−［Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（４−シアノフェニルアミノ）］−１，３−ジヒドロ−１−ヒドロキシベンゾキサボロール
【化７８】
2012502037.tif 000082
窒素バルーン下、氷水浴で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１６０ｍＬ）中の４−フルオロベンゾニトリル（１２．６１ｇ、１０４ｍｍｏｌ）および４−ブロモ−３−メチルアニリン（１５．３６ｇ、８２．５６ｍｍｏｌ）の混合物に、カリウムｔｅｒｔ−ブチルオキシド（１８．５３ｇ、１６５．１２ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。反応物を、室温で一晩撹拌した。次いで、水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を得た。次いで、粗物を、酢酸エチルから再結晶し、４−（４−ブロモ−３−メチルフェニルアミノ）ベンゾニトリル（５．６７５ｇ、２４％）を得た。
【０３６５】
テトラヒドロフラン（２００ｍＬ）中の４−（４−ブロモ−３−メチルフェニルアミノ）ベンゾニトリル（５．３５ｇ、１８．６３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（６．１ｇ、２７．９５ｍｍｏｌ）、次いで、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２．２８ｇ、１８．６３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、溶媒の大部分を減圧下で除去した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣物をシリカゲルカラム（９：１  ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−Ｎ−（４−シアノフェニル）カルバミン酸塩（６．７９ｇ、９４％）を得た。
【０３６６】
四塩化炭素（１６０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−Ｎ−（４−シアノフェニル）カルバミン酸塩（６．１８ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（２．８４ｇ、１５．９６ｍｍｏｌ）、および２，２−アゾビスイソブチロニトリル（０．１３ｇ、０．７９８ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素雰囲気下で、９５℃で一晩撹拌した。次いで、さらにＮ−ブロモコハク酸イミド（０．５６６ｇ、３．１８ｍｍｏｌ）および２，２−アゾビスイソブチロニトリルを添加し、反応物を、窒素雰囲気下で、９５℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を、水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣物をシリカゲルカラム（９：１  ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［４−ブロモ−３−（ブロモメチル）フェニル］−Ｎ−（４−シアノフェニル）カルバミン酸塩を得た。
【０３６７】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中のｔｅｒｔ−ブチルｔｅｒｔ−ブチルＮ−［４−ブロモ−３−（ブロモメチル）フェニル］−Ｎ−（４−シアノフェニル）カルバミン酸塩（８．６８ｇ、１８．６２ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（７．６４ｇ、９３．１ｍｍｏｌ）を、５０℃で一晩撹拌した。次いで、水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を得た。粗物をシリカゲルカラム（８：２〜７：３  ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２−ブロモ−５−［Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（４−シアノフェニル）アミノ］酢酸ベンジル（３．９３ｇ、４７％）を得た。
【０３６８】
１，４−ジオキサン（１２０ｍＬ）中の２−ブロモ−５−［Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（４−シアノフェニル）アミノ］酢酸ベンジル（２．９３ｇ、６．５８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．８４ｇ、７．２４ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．１６ｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）、および酢酸カリウム（１．９４ｇ、１９．７４ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素で１５分間パージし、次いで、窒素雰囲気下で、８０℃で一晩撹拌した。
【０３６９】
混合物はセライトパッドを通して濾過し、溶媒を減圧下で除去した。シリカゲルカラム（８：２  ヘキサン／酢酸エチル）により、５−［Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（４−シアノフェニル）アミノ］−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）酢酸ベンジル（３．３３４ｇ、定量）を得た。
【０３７０】
メタノール（６８ｍＬ）中の５−［Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（４−シアノフェニル）アミノ］−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）酢酸ベンジル（３．３３４ｇ、６．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ  水酸化ナトリウム溶液（２０．３ｍＬ、２０．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で一晩し、次いで、ｐＨ＝６〜７まで、１ｍｏｌ／Ｌ  塩酸で中和した。次いで、これを酢酸エチルで抽出した。有機層をホウ酸（水中０．５ｍｏｌ／Ｌ  溶液）およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣物をシリカゲルカラム（８：２  ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、５−［Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（４−シアノフェニルアミノ）］−１，３−ジヒドロ−１−ヒドロキシベンゾキサボロール（１．４３ｇ、６０％）を得た。ＥＳ（−）ＭＳ  ｍ／ｅ＝３４９（Ｍ−１）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３７（ｓ，９Ｈ）４．９４（ｓ，２Ｈ）７．１８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）７．２５（ｓ，１Ｈ）７．３４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）７．７２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）７．８０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）９．２２（ｓ，１Ｈ）。
【０３７１】
Ｃ２．  ５−（４−シアノフェニルアミノ）−１，３−ジヒドロ−１−ヒドロキシベンゾキサボロール
【化７９】
2012502037.tif 000083
ｔｅｒｔ−ブチル５−［Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（４シアノフェニルアミノ）］−１，３−ジヒドロ−１−ヒドロキシベンゾキサボロール（１．４３ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）を、室温で一晩、ジオキサン（６０ｍＬ）中の４ｍｏｌ／Ｌ  塩化水素で処理した。次いで、混合物を、ｐＨ＝６〜７まで、１ｍｏｌ／Ｌ  水酸化ナトリウムで中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣物をシリカゲルカラム（３：７  ヘキサン／酢酸エチル）および分取ＨＰＬＣで精製し、５−（４−シアノフェニルアミノ）−１，３−ジヒドロ−１−ヒドロキシベンゾキサボロールを得た。ＥＳ（−）ＭＳ  ｍ／ｅ＝２４９（Ｍ−１）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ４．９（ｓ，２Ｈ）７．２（ｍ，４Ｈ）７．６（ｍ，３Ｈ）９．０（ｓ，１Ｈ）９．１（ｓ，１Ｈ）
【０３７２】
Ｃ３．  ５−［Ｎ−（４−シアノフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］−１，３−ジヒドロ−１−ヒドロキシベンゾキサボロール
【化８０】
2012502037.tif 000084
２−ブロモ−５−［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−シアノフェニルアミノ］酢酸ベンジル（３．０２ｇ、６．７８ｍｍｏｌ）を、室温で２時間、ジオキサン（２０ｍＬ）中の４ｍｏｌ／Ｌ  塩化水素で処理した。これを、氷水浴中で、ＰＨ＝６〜７まで、１ｍｏｌ／Ｌ  水酸化ナトリウムで中和し、次いで、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、２−ブロモ−５−（４−シアノフェニルアミノ）酢酸ベンジルを得、精製せずに次の工程で使用した。
【０３７３】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１１ｍＬ）中の２−ブロモ−５−（４−シアノフェニルアミノ）酢酸ベンジル（１．０ｇ、２．９ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下で、ヨードメタン（０．５４３ｍＬ、８．７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、氷水浴中で、５分間撹拌した。次いで、水素化ナトリウム（０．１７４ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で２４時間撹拌した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗物２−ブロモ−５−［Ｎ−（４−シアノフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］酢酸ベンジルを得た。
【０３７４】
１，４−ジオキサン（６．７ｍＬ）中の２−ブロモ−５−［Ｎ−（４−シアノフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］酢酸ベンジル（０．５９７ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（０．４６４ｇ、１．８３ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．０４１ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、および酢酸カリウム（０．４８９ｇ、４．９８ｍｍｏｌ）の混合物を窒素で１５分間パージし、次いで、窒素雰囲気下で、８０℃で一晩撹拌した。
【０３７５】
混合物はセライトパッドを通して濾過し、溶媒を減圧下で除去した。シリカゲルカラム（７：３  ヘキサン／酢酸エチル）により、５−［Ｎ−（４−シアノフェニル）−Ｎ−メチルアミノ）−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）酢酸ベンジル（０．７３３ｇ、定量）を得た。
【０３７６】
メタノール（１７ｍＬ）中の５−［Ｎ−（４−シアノフェニル）−Ｎ−メチルアミノ）−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）酢酸ベンジル（０．７１３４ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ  水酸化ナトリウム溶液（５．２８ｍＬ、５．２８ｍｍｏｌ）を得た。混合物を室温で一晩し、次いで、ｐＨ＝６〜７まで、１ｍｏｌ／Ｌ  塩酸で中和した。次いで、これを酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣物を逆相ＨＰＬＣで精製し、５−［Ｎ−（４−シアノフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］−１，３−ジヒドロ−１−ヒドロキシベンゾキサボロールを得た。ＥＳ（−）ＭＳ  ｍ／ｅ＝２６３（Ｍ−１）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．３３（ｓ，３Ｈ）４．９６（ｓ，２Ｈ）６．８７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ）７．１９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）７．２８（ｓ，１Ｈ）７．５６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ）７．７４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）９．１８（ｓ，１Ｈ）。
【０３７７】
Ｃ４．  ｔｅｒｔ−ブチル５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−５−イル）カルバミン酸塩
【化８１】
2012502037.tif 000085
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中の４−ブロモ−３−メチルアニリン（５ｇ、２６．８８ｍｍｏｌ）の溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（１１．７３ｇ、５３．７５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７．５ｍＬ、５３．７５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、室温で３日間撹拌した。水（１００ｍＬ）を添加し、生成物を溶液から沈殿させ、これを濾過し、減圧下で乾燥させた。沈殿物をヘキサンを添加することによって洗浄し、５分間超音波分解した。固体を濾過し、ｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−３−メチルフェニルカルバミン酸塩（３．８６３ｇ、５０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．４２（ｓ，９Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），９．４１（ｓ，１Ｈ）。
【０３７８】
窒素バルーン下、氷水浴で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−３−メチルフェニルカルバミン酸塩（４．３６ｇ、１５．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（０．６１０ｇ、１５．２４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、氷水浴で１０分間撹拌した。氷浴を除去し、溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中の６−クロロ−２−メトキシニコチンニトリル（３．８５ｇ、２２．８６ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。添加が完了した後、混合物を５０℃で一晩撹拌した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を得た。次いで、粗物をシリカゲルカラム（１００％  ヘキサン〜８：２  ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−３−メチルフェニル（５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル）カルバミン酸塩（３．１５ｇ、４９％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３７（ｓ，９Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ），７．００（ｄｄ，Ｊ＝２．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０３７９】
四塩化炭素（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−３−メチルフェニル（５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル）カルバミン酸塩（２．８５ｇ、６．８１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（０．９０９ｇ、５．１１ｍｍｏｌ）およびアゾビスイソブチロニトリル（０．０４２ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を窒素下で、９５℃で２時間還流させた。反応物を室温まで冷却し、水を添加し、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗物ｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−３−（ブロモメチル）フェニル（５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル）カルバミン酸塩（４．１２ｇ）を得た。生成物は、さらに精製せずに次の工程に使用した。
【０３８０】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−３−（ブロモメチル）フェニル（５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル）カルバミン酸塩（４．４６ｇ，  ８．９８ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸ナトリウム（３．６８ｇ、４４．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５０℃で２時間撹拌した。混合物を室温まで冷却し、一定分量として酢酸エチルおよび水で抽出した。それぞれの分量の有機層を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。分量を組み合わせて、溶媒を減圧下で除去した。残渣物をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈで精製し、２−ブロモ−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル）アミノ）酢酸ベンジル（１．９９ｇ、２工程４６％）を得た。
【０３８１】
１，４−ジオキサン（１７ｍＬ）中の２−ブロモ−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル）アミノ）酢酸ベンジル（１．９９ｇ、４．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸カリウム（１．２３ｇ、１２．５４ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．１７ｇ、４．６０ｍｍｏｌ）、および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．１０２ｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を窒素下で、８０℃で５時間撹拌した。反応物を室温まで冷却し、セライトパッドを通して濾過し、溶媒を減圧下で除去した。残渣物をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈで精製し、５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル）アミノ）−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）酢酸ベンジル（２．２０ｇ、９１％）を得た。
【０３８２】
メタノール（３８ｍＬ）中の５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル）アミノ）−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）酢酸ベンジル（２．２０ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）の溶液に、１ｍｏｌ／Ｌ  水酸化ナトリウム（１１．５ｍＬ、１１．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で３時間撹拌し、次いで、ｐＨ＝６〜７まで、１ｍｏｌ／Ｌ  塩酸で中和した。溶媒を減圧下で除去し、混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層をホウ酸水溶液（０．５Ｍ）で５回洗浄した。有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を減圧下で除去した。残渣物をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈを用いたカラムで精製し、ｔｅｒｔ−ブチル５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−５−イル）カルバミン酸塩（１．３０２ｇ、８９％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３６（ｓ，９Ｈ），３．５０（ｓ，２Ｈ），４．９４（ｓ，２Ｈ），７．１４（ｄｄ，Ｊ＝１．８，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），９．１９（ｓ，１Ｈ）。
【０３８３】
Ｃ５．  ６−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−５−イルアミノ）−２−メトキシニコチンニトリル
【化８２】
2012502037.tif 000086
ジオキサン（２０ｍＬ）中の４ｍｏｌ／Ｌ  塩化水素中のｔｅｒｔ−ブチル５−シアノ−６−メトキシピリジン−２−イル（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−５−イル）カルバミン酸塩（０．９４４ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で３時間撹拌した。次いで、溶液を、ｐＨ＝６〜７まで、６ｍｏｌ／Ｌ  水酸化ナトリウムで中和した。水を添加し、溶液を酢酸エチルで抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を減圧下で除去した。水層は、沈殿物を含有し、これを濾過によって収集し、減圧下で乾燥させた。残渣物をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈで精製し、６−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−５−イルアミノ）−２−メトキシニコチンニトリル（０．０８６ｇ、９．１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ４．９５（ｓ，２Ｈ），６．５０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ， 
１Ｈ），９．００（ｓ，１Ｈ），９．９４（ｓ，１Ｈ）。
【０３８４】
実施例２
生体外アッセイ
炎症誘発性サイトカインまたはホスホジエステラーゼを阻害するための本明細書に記載の化合物の能力を試験した。
【０３８５】
サイトカインアッセイ
凍結したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を解凍し、遠心分離した。低温保存培地を細胞ペレットから吸引し、細胞を９６ウェルプレート中でＲＰＭＩ  １６４０および１０％  ＦＢＳを含む新しい培養培地（ＣＭ）に再懸濁した。試験物質をＤＭＳＯに溶解し、１０ｍＭ  試料（ＤＭＳＯ、１００％）を形成した。１０ｍＭ  試料を、ＣＭ（ＤＭＳＯ、１％）中で１００μＭまで希釈し、次いで、２００μＬのＣＭ（ｎ＝３）中で１０、１、０．１、０．０１μＭまでさらに希釈した。ＴＮＦ−αに対しては、誘導物質（１μｇ／ｍＬ）ＬＰＳまたはＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１０に対しては、２０ｕｇ／ｍＬ  ＰＨＡ。ＴＨＰ−１細胞を用いて、１００ｎｇ／ｍＬ  ＩＦＮ−ｇ＋１ｍｇ／ｍＬ  ＬＰＳで、ＩＬ−２３を誘導した。ビヒクル（１％  ＤＭＳＯ）を、この実験の対照として使用した。誘導物質のないビヒクルを、陰性対照として使用した。細胞は、３７℃で５％  ＣＯ２でインキュベートした。上清を２４時間（ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、およびＩＦＮγに対して）および４８時間（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、およびＩＬ−２３に対して）で抽出し、−２０℃で保存した。上清を解凍し、蛍光色素標識したサイトカイン特異的ビーズおよびＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｒａｙ（商標）を用いて、サイトカイン発現についてアッセイした。ＩＬ−２３は、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてアッセイした。
【表３】
2012502037.tif 000087
【０３８６】
サイトカインアッセイ
凍結したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を解凍し、遠心分離することができる。低温保存培地を細胞ペレットから吸引することができ、細胞を９６ウェルプレート中でＲＰＭＩ  １６４０および１０％  ＦＢＳを含む新しい培養培地（ＣＭ）に再懸濁することができる。試験物質をＤＭＳＯに溶解し、１０ｍＭ  試料（ＤＭＳＯ、１００％）を形成することができる。１０ｍＭ  試料を、ＣＭ（ＤＭＳＯ、１％）中で１００μＭまで希釈し、次いで、２００μＬのＣＭ（ｎ＝３）中で１０、１、０．１、０．０１μＭまでさらに希釈することができる。ＩＬ−１βまたはＩＬ−６等のサイトカインに対しては、誘導物質（１μｇ／ｍＬ）ＬＰＳ。ビヒクル（１％  ＤＭＳＯ）を、この実験の対照として使用することができる。誘導物質のないビヒクルを、陰性対照として使用することができる。細胞は、３７℃で５％  ＣＯ２でインキュベートすることができる。上清を２４時間（ＩＬ−１βまたはＩＬ−６に対して）で抽出し、−２０℃で保存することができる。上清を解凍し、蛍光色素標識したサイトカイン特異的ビーズおよびＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｒａｙ（商標）を用いて、サイトカイン発現についてアッセイすることができる。
【０３８７】
ＰＤＥアイソフォームのプロファイリング
組換えヒトＰＤＥ酵素は、バキュロウイルス系において発現された。アッセイは、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＆  Ａｐｐｌｅｍａｎ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０：３１１−３１６，１９７１）の２工程法の修正であり、９６ウェルプレートの形式に適していた。１００％  ＤＭＳＯ中の４０ｍＭで、ストック溶液を調製した。最終［ＤＭＳＯ］は５％であった。それぞれの化合物を、１００ｍＭの出発濃度で４回の連続希釈中１回を行うことによって試験した。それぞれの濃度を、二重に試験した。ＩＣ５０は、１１個の点の曲線で生成され、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｉｎｃ．）を用いて分析した。試験したＰＤＥアイソフォームには、ＰＤＥ１Ａ３（ｃＡＭＰ）、ＰＤＥ１Ａ３（ｃＧＭＰ）、ＰＤＥ２Ａ３、ＰＤＥ３Ｃａｔ、ＰＤＥ４Ｃａｔ、ＰＤＥ４Ａ４、ＰＤＥ４Ｂ２、ＰＤＥ４Ｃ２、ＰＤＥ４Ｄ３、ＰＤＥ５Ｃａｔ、ＰＤＥ６ＡＢ、ＰＤＥ７Ａ１、ＰＤＥ８Ａ１、ＰＤＥ９Ａ１、ＰＤＥ１０Ａ１（ｃＡＭＰ）、ＰＤＥ１０Ａ１（ｃＧＭＰ）、ＰＤＥ１１Ａ１（ｃＡＭＰ）、およびＰＤＥ１１Ａ１（ｃＧＭＰ）が含まれる。
【０３８８】
ＰＤＥ４アッセイ
ヒトＵ−９３７骨髄性白血病細胞から部分的に精製されたＰＤＥ４を使用した。試験物質および／またはビヒクルは、２５℃で２０分間、０．２ｍｇ  酵素およびトリス緩衝液ｐＨ７．５中の０．０１ｍＭ  ［３Ｈ］ｃＡＭＰを含有する１ｍＭ  ｃＡＭＰでインキュベートした。２分間煮沸させることによって反応を停止させ、１０ｍｇ／ｍＬ  蛇毒ヌクレオチダーゼを添加し、３７℃で１０分間さらにインキュベートすることによって、得られたＡＭＰをアデノシンに変換する。加水分解されなかったｃＡＭＰをＡＧ１−Ｘ２樹脂に結合させ、残存している［３Ｈ］アデノシンをシンチレーションカウンターで計測する。試験物質を、ＩＣ５０決定のために１０、３、１、０．３、０．１、０．０３、０．０１、０．００３、および０．００１μＭで試験した。
【表４】
2012502037.tif 000088
【０３８９】
実施例３
生体内アッセイ
１．  ホルボールエステル誘発マウス耳浮腫モデルにおける生体内での抗炎症活性
ホルボール１２−ミリステート１３−酢酸塩（ＰＭＡ、２０μＬのアセトン中の５μｇ）は、それぞれ５匹の雄マウス（重量２２±２ｇ）に由来するＣＤ−１（対照）の８つの群に対して、右耳の前および後表面に局所的に適用することができる。試験物質およびビヒクル（アセトン：エタノール／１：１、２０μＬ／耳）をそれぞれ、ＰＭＡ適用から３０分前および１５分後に、局所的に両耳に適用することができる。デキサメタゾン（１ｍｇ／耳×２）は、陽性対照として使用することができ、同様の適用日程を用いて試験動物に局所的に投与することができる。次いで、耳の腫脹を、炎症の指標としてＰＭＡ適用してから６時間後に、Ｄｙｅｒモデルマイクロメータゲージによって計測することができる。阻害パーセントを式  ［（Ｉｃ−Ｉｔ）／Ｉｃ］×１００％（式中、ＩｃおよびＩｔは、それぞれ対照マウスおよびび治療マウスにおける耳の厚さの増加分（ｍｍ）を指す）に従い計算することができる。耳の腫脹において、３０パーセント以上の阻害パーセントを有意な抗炎症活性と見なすことができる。
【０３９０】
２．  オキサゾロン誘発マウス耳浮腫モデルにおける生体内での抗炎症活性
体重２３±２ｇの５匹のＢＡＬＢ／ｃ雄マウスの群を使用することができる。試験動物の予め剃られた腹部を、アセトンに溶解した１００μＬの１．５％  オキサゾロン溶液を適用することによって感作することができる。初期感作から７日後、試験物質、およびビヒクル（アセトン：エタノール／１：１、２０μＬ／耳）をそれぞれ、局所経路を介して、オキサゾロン（アセトン中の１％、２０ｍＬ／耳）の第２の適用による適用の３０分前および１５分後、右耳の前および後表面に局所的に投与することができる。陽性対照として、インドメタシン（０．３ｍｇ／耳×２）を、試験化合物と同様の治療レジメンを用いて局所的に投与することができる。オキサゾロンの第２の適用から２４時間後、それぞれのマウスの耳の厚さをＤｙｅｒモデルマイクロメータゲージを用いて計測することができる。ビヒクル対照と比較して３０パーセント以上の阻害が、有意と見なし、可能な抗炎症活性を示すことができる。
【０３９１】
実施例４
前述されるように、本発明の化合物は、様々な受容体およびこれらの受容体の下流標的に対して生物学的活性を有する。これらの性質は、例えば、以下に設定される１つ以上の手順を用いて評価され得る。
【０３９２】
ＥＧＦＲ試験
（ａ）ＥＧＦＲキナーゼを阻害する試験化合物の能力を決定する体外アッセイ
受容体キナーゼ（ＥＧＦＲ）活性を阻害する化合物の能力は、ＨＴＳｃａｎ（商標）ＥＧＦ受容体キナーゼアッセイキット（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｄａｎｖｅｒｓ，Ｍａｓｓ．）を用いてアッセイすることができる。ＥＧＦＲチロシンキナーゼは、アミノ末端ＧＳＴタグを有するヒトＥＧＦＲ（Ｈｉｓ６７２−Ａｌａ１２１０）（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ−−００５２２８）を発現する構築物から、バキュロウイルス発現系を用いて産生することができるＧＳＴ−キナーゼ融合タンパク質として得ることができる。タンパク質は、グルタチオンアガロースを用いたワン工程親和性クロマトグラフィーで精製することができる。抗ホスホチロシンモノクローナル担体、Ｐ−Ｔｙｒ−１００を使用して、ビオチン化基質ペプチド（ＥＧＦＲ、ビオチン−ＰＴＰ１Ｂ（Ｔｙｒ６６）のリン酸化反応を検出することができる。６０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２  ５ｍＭ  ＭｎＣｌ２  ２００μＭ  ＡＴＰ、１．２５ｍＭ  ＤＴＴ、３μＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１．５ｍＭペプチド、および５０ｎｇ  ＥＧＦ受容体キナーゼ中で酵素活性を試験することができる。ＤＥＬＦＩＡ（商標）Ｅｕｒｏｐｉｕｍ−標識抗マウスＩｇＧ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，＃ＡＤ０１２４）、ＤＥＬＦＩＡ（商標）増強溶液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，＃１２４４−１０５）、およびＤＥＬＦＩＡ（商標）ストレプトアビジンコート、９６ウェルプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＡＡＡＮＤ−０００５）からなるＤＥＬＦＩＡシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）を使用して、結合した抗体を検出することができる。ＷＡＬＬＡＣ  Ｖｉｃｔｏｒ  ２プレートリーダーで蛍光を測定し、相対蛍光単位（ＲＦＵ）として記録することができる。データは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ｖ４．０ａ）を用いてプロットし、ＩＣ５０は、シグモイド用量応答曲線適合アルゴリズムを用いて計算することができる。
【０３９３】
試験化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解して、２０ｍＭ作業ストック濃度を得ることができる。それぞれのアッセイは、以下のように設定することができる。１００μＬの１０ｍＭ  ＡＴＰを１．２５ｍＬの６ｍＭ基質ペプチドに添加した。混合物をｄＨ２Ｏで２．５ｍＬに希釈して、２Ｘ  ＡＴＰ／基質カクテルを作製した（［ＡＴＰ］＝４００ｍＭ、［基質］＝３ｍＭ）。酵素を、−８０℃から氷中に直ちに移した。酵素を氷上で解凍した。４℃で簡単に微小遠心分離を行い、液体をバイアルの底に落とした。直ちに氷中に戻した。１０μＬのＤＴＴ（１．２５ｍＭ）を２．５ｍＬの４Ｘ  ＨＴＳｃａｎ（商標）チロシンキナーゼ緩衝剤（２４０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５、２０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２０ｍＭ  ＭｎＣｌ、１２ｍＭ  ＮａＶＯ３）に添加して、ＤＴＴ／キナーゼ緩衝剤を作製した。１．２５ｍＬのＤＴＴ／キナーゼ緩衝剤を酵素チューブに移して４Ｘ反応カクテルを作製した（［酵素］＝４Ｘ反応カクテル中、４ｎｇ／μＬ）。１２．５μＬの４Ｘ反応カクテルを、１２．５μＬ／ウェルの予め希釈した対象となる化合物（通常およそ１０μＭ）と、５分間、室温でインキュベートした。２５μＬの２Ｘ  ＡＴＰ／基質カクテルを２５μＬ／ウェルの予めインキュベートした反応カクテル／化合物に添加した。反応プレートを室温で３０分間インキュベートした。反応を停止するために５０μＬ／ウェルの停止緩衝剤（５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８）を添加した。２５μＬのそれぞれの反応物および７５μＬのｄＨ２Ｏ／ウェルを、９６ウェルストレプトアビジンコートプレートに移して、室温で６０分間インキュベートした。２００μＬ／ウェルのＰＢＳ／Ｔ（ＰＢＳ、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄した。一次抗体、ホスホ−チロシンｍＡｂ（Ｐ−Ｔｙｒ−１００）を、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含んだＰＢＳ／Ｔで１：１０００に希釈した。１００μＬ／ウェルの一次抗体を添加した。室温で６０分間インキュベートした。２００μＬ／ウェルのＰＢＳ／Ｔで３回洗浄した。Ｅｕｒｏｐｉｕｍ標識抗マウスＩｇＧを、１％ＢＳＡを含んだＰＢＳ／Ｔで１：５００に希釈した。１００μＬ／ウェルの希釈抗体を添加した。室温で３０分間インキュベートした。２００μＬ／ウェルのＰＢＳ／Ｔで５回洗浄した。１００μＬ／ウェルのＤＥＬＦＩＡ（商標）増強溶液を添加した。室温で５分間インキュベートした。６１５ｎｍの蛍光発光を適当な時間分解プレートリーダーで検出した。
【０３９４】
（ｂ）ＥＧＦ−刺激性ＥＧＦＲリン酸化を阻害する試験化合物の能力を測定する体外アッセイ。
細胞がほぼコンフルエント（細胞）（約１．５ｘ１０７）になるまで、標準的な組織培養法を用いて、Ａ４３１細胞をＴ７５フラスコ中で増殖させた；Ｄ−ＭＥＭ、１０％  ＦＢＳ）。滅菌条件下で、９６ウェルマイクロプレートのウェル当たり、１００μＬの細胞懸濁物を分注した（１ウェル当たりｘ細胞をプレーティングした）。細胞をインキュベートし、ウェルごとの濃度がコンフルエントに達するまで、およそ３日間細胞密度をモニターする。吸引または手動廃棄によって、プレートのウェルから完全に培地を除去した。１ウェル当たり５０μＬの予め温めた無血清培地に変え、４〜１６時間インキュベートした。予め温めたＤ−ＭＥＭを用いて、阻害剤の最終濃度が１０μＭ〜９０ｐＭとなるように阻害剤の２倍連続希釈物を作製した。Ａ４３１細胞プレートの培地を除去した。細胞に、１００μＬの連続希釈阻害剤を添加し、１〜２時間インキュベートした。吸引または手動廃棄によって、プレートのウェルから阻害剤を除去した。休止細胞用の無血清培地（モック）または１００ｎｇ／ｍＬのＥＧＦを含む無血清培地のいずれかを添加した。１ウェル当たり、１００μＬの休止／活性化培地を使用した。３７℃で７．５分間インキュベーションした。手動または吸引によって活性化または刺激培地を除去した。１Ｘ  ＰＢＳ中４％ホルムアルデヒドで細胞を即座に固定した。室温で、振盪せずに、ベンチトップ上で２０分間インキュベーションした。０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含む１Ｘ  ＰＢＳで、１回の洗浄当たり５分間、５回洗浄した。固定用液を除去した。マルチチャンネルピペッターを用いて、２００μＬのＴｒｉｔｏｎ洗浄溶液（１Ｘ  ＰＢＳ＋０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）を添加した。洗浄して、室温で５分間、回転器の上で振盪させた。洗浄液を手動で除去した後、洗浄工程を４回以上繰り返した。マルチチャンネルピペッターを用いて、各ウェルに１００μＬのＬＩ−ＣＯＲ  Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝剤を添加して、細胞／ウェルをブロッキングした。回転器上、適度な振盪で、室温で９０分間ブロッキングした。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝剤を含む管に２種類の一次抗体を添加した。ウェルに添加する前に、一次抗体溶液をよく混ぜた（Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＧＦＲ  Ｔｙｒ１０４５、（ウサギ；１：１００希釈；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２２３７；Ｔｏｔａｌ  ＥＧＦＲ，マウス；１：５００希釈；Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＡＨＲ５０６２）。ブロッキング工程からブロッキング緩衝剤を除去して、４０μＬの所望の一次抗体またはＯｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝剤中の抗体を添加して、各ウェルの底を覆った。対照ウェルには１００μＬのＯｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝剤のみを添加した。室温で緩やかに振盪しながら、一次抗体とともに一晩インキュベートした。大量の緩衝剤を用いて、１ｘＰＢＳ＋０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０でプレートを５回、緩やかに振盪しながら室温で５分間洗浄した。マルチチャンネルピペッターを用いて、２００μＬのＴｗｅｅｎ洗浄溶液を添加した。洗浄して、回転器上で、室温で５分間振盪させた。洗浄工程を４回以上繰り返した。蛍光標識された二次抗体をＯｄｙｓｓ���ｙブロッキング緩衝剤に希釈した（ヤギ抗マウスＩＲＤｙｅ（商標）６８０（１：２００希釈；ＬＩ−ＣＯＲカタログ番号９２６−３２２２０）ヤギ抗ウサギＩＲＤｙｅ（商標）８００ＣＷ（１：８００希釈；ＬＩ−ＣＯＲカタログ番号９２６−３２２１１）。抗体溶液をよく混合し、４０μＬの二次抗体溶液を各ウェルに添加した。室温で緩やかに振盪して、６０分間インキュベートした。インキュベーション中、プレートを遮光した。大量の緩衝剤を用いて、１ｘＰＢＳ＋０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０でプレートを５回、緩やかに振盪しながら室温で５分間洗浄した。マルチチャンネルピペッターを用いて、２００μＬのＴｗｅｅｎ洗浄溶液を添加した。洗浄して、回転器上で、室温で５分間振盪させた。洗浄工程を４回以上繰り返した。最後の洗浄の後、ウェルから洗浄溶液を完全に除去した。プレートを逆さまにして、ペーパータオル上に軽くたたく、または緩やかに拭き取り、洗浄緩衝剤の残りを除去した。Ｏｄｙｓｓｅｙ近赤外線画像化システムを用いて、７００および８００チャンネルの両方の検出でプレートをスキャンした（ＩＲＤｙｅ（商標）６８０抗体について７００ｎｍ検出およびＩＲＤｙｅ（商標）８００ＣＷ抗体について８００ｎｍ検出）。Ｏｄｙｓｓｅｙソフトウェアを用いて、全体対リン酸化タンパク質の比（７００／８００）を決定し、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｖ４．０ａ）で結果をプロットした。データは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ｖ４．０ａ）を用いてプロットし、ＩＣ５０は、シグモイド用量応答曲線適合アルゴリズムを用いて計算することができる。
【０３９５】
（ｃ）ＨＤＡＣ酵素活性を阻害する試験化合物の能力を測定する体外アッセイ。
ＨＤＡＣ蛍光測定アッセイキット（ＡＫ−５００，Ｂｉｏｍｏｌ，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｐａ）を用いて、ＨＤＡＣ阻害剤をスクリーニングした。試験化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解して、２０ｍＭの作業ストック濃度を得た。ＷＡＬＬＡＣ  Ｖｉｃｔｏｒ  ２プレートリーダーで蛍光を測定し、相対蛍光単位（ＲＦＵ）として記録することができる。データは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ｖ４．０ａ）を用いてプロットし、ＩＣ５０は、シグモイド用量応答曲線適合アルゴリズムを用いて計算することができる。
【０３９６】
それぞれのアッセイは、以下のように設定することができる。全てのキット内容物を解凍して使用するまで氷上に維持した。ＨｅＬａ核抽出物を、アッセイ緩衝剤（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／Ｃｌ、ｐＨ８．０、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２）で１：２９に希釈した。トリコスタチンＡ（ＴＳＡ、陽性対照）および試験化合物の希釈物をアッセイ緩衝剤（５ｘの最終濃度）で調製した。Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ（商標）基質をアッセイ緩衝剤で１００μＭに希釈した（５０倍＝２ｘ最終）。Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ（商標）現像剤の濃度を、冷アッセイ緩衝剤で２０倍に希釈した（例えば、５０μＬ＋９５０μＬアッセイ緩衝剤）。次に、０．２ｍＭ  トリコスタチンＡを１ｘ現像剤で１００倍に希釈した（例えば、１ｍＬ中１０μＬ；１ｘ現像剤中のトリコスタチンＡの最終濃度＝２μＭ；ＨＤＡＣ／基質反応液に添加後の最終濃度＝１μＭ）。マイクロタイタープレートの適切なウェルにアッセイ緩衝剤、希釈トリコスタチンＡまたは試験阻害剤を添加した。陰性対照以外の全てのウェルに、希釈ＨｅＬａ抽出物または他のＨＤＡＣ試料を添加した。マイクロタイタープレート中の希釈Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ（商標）基質および試料をアッセイ温度（例えば、２５℃または３７℃）に平衡化した。各ウェルに希釈基質（２５μＬ）を添加し、完全に混合してＨＤＡＣ反応を開始させた。ＨＤＡＣ反応を１時間行い、Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ（商標）現像剤（５０μＬ）を添加して反応を停止させた。プレートを室温（２５℃）で１０〜１５分間インキュベートした。３５０〜３８０ｎｍの範囲の波長で励起し、４４０〜４６０ｎｍの範囲で発光した光を検出し得るマイクロタイタープレートリーディング蛍光測定器で、試料を読んだ。
【０３９７】
ＨＭ７４Ａ
ＨＭ７４Ａを活性化する化合物の能力は、例えば、以下の体外および生体内アッセイを用いて立証され得る。
【０３９８】
体外試験
一過性トランスフェクションのために、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＳＶ４０ラージＴ抗原を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞）を、１０％ウシ胎児血清および２ｍＭグルタミンを含有するＤＭＥＭに維持する。細胞を９０ｍｍの培養皿に播種し、トランスフェクション前に、６０〜８０％コンフルエンスに増殖させる（１８〜２４時間）。ヒトＨＭ７４Ａ（ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＡＹ１４８８８４）を、哺乳動物発現ベクター（ｐｃＤＮＡ３、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にサブクローニングし、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬を用いてトランスフェクトする。トランスフェクションのために、１．６ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭを添加する前に、９μｇのＤＮＡを、０．６ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．）中の３０μＬ  Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅと混合し、室温で３０分間インキュベートする。細胞をＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ／ＤＮＡ混合物に５時間曝露し、次いで、６ｍＬのＤＭＥＭ中２０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清を添加する。トランスフェクションから４８時間後、細胞を収集する。１６時間、５０ｎｇｍＬ−１で培地に追加することによって、百日咳毒素処理を行う。全ての一過性トランスフェクション試験は、Ｇｉ／ｏＧタンパク質、Ｇｏ１αに加えて受容体の共トランスフェクションを伴う。
【０３９９】
安定細胞系を産生するために、上述の方法を用いて、６ウェル皿に播種し、３０％コンフルエンスに増殖させたＣＨＯ−Ｋ１細胞をトランスフェクトする。これらの細胞を、１０％ウシ胎児血清および２ｍＭグルタミンを含有するＤＭＥＭ  Ｆ−１２  ＨＡＭ培地に維持する。トランスフェクションから４８時間後、抗生物質耐性細胞を選択するために、４００μｇ／ｍＬのＧｅｎｅｔｉｃｉｎ（Ｇ４１８、Ｇｉｂｃｏ）を培地に追加する。ＨＭ７４Ａを安定に発現するクローンＣＨＯ−Ｋ１細胞系を、ニコチン酸の添加後、［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合測定によって確認する。
【０４００】
Ｐ２膜の調製−原形質膜含有Ｐ２粒子画分を、採取後、−８０℃で凍結した細胞ペーストから調製する。全ての手順を４℃で行う。細胞ペレットを、１ｍＬの１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌおよび０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５（緩衝剤Ａ）に再懸濁し、Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘを用いて２０秒間ホモジナイズし、その後、２５ゲージの針に通す（５回）。細胞溶解物を、微量遠心分離機において、１０００ｇで１０分間遠心分離して、核と未破壊細胞をペレットにし、Ｐ２粒子画分を、１６０００ｇ、３０分間の微量遠心分離によって回収する。Ｐ２粒子画分を緩衝剤Ａに再懸濁し、必要になるまで−８０℃で保存する。
【０４０１】
［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合−アッセイは、前に記載されるような９６ウェル形式（Ｗｉｅｌａｎｄ，Ｔ．ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｓ，Ｋ．Ｈ．（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２３７、３〜１３）、または３８４ウェル形式で行われる適合プロトコルのいずれかにおいて、室温で行われる。
【０４０２】
９６ウェル形式：簡潔には、膜（１点当たり１０μｇ）を、サポニン（１０ｍｇ／ｌ）を補ったアッセイ緩衝剤（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４）に０．０８３ｍｇ／ｍＬまで希釈し、１０μＭ  ＧＤＰで予めインキュベートする。様々な濃度のニコチン酸または関連分子、次いで、０．３ｎＭ（全容量１００μＬ）で［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（１１７０Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ）を添加し、結合を室温で３０分間行う。非特異結合を０．６ｍＭ  ＧＴＰを含有することによって決定する。２５μＬ  アッセイ緩衝剤中のコムギ胚芽凝集素ＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）（０．５ｍｇ）を添加し、全体を、振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。プレートを１５００ｇで５分間遠心分離して、結合した［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳを、Ｗａｌｌａｃ  １４５０  ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンターでシンチレーションを計測することによって決定する。
【０４０３】
３８４ウェル形式：簡潔には、標準化合物または試験化合物の希釈物を調製し、１０μＬの容量で３８４ウェルプレートに添加する。各ウェルに添加する２０μＬの容量が５μｇの膜を含有するように、膜（ＨＭ７４ＡまたはＨＭ７４）を、サポニン（６０μｇ／ｍＬ）、Ｌｅａｄｓｅｅｋｅｒ  ＷＧＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、２５０μｇ／ウェル）、および１０μＭ  ＧＤＰを補ったアッセイ緩衝剤（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４）に希釈する。［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（１１７０Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ）をアッセイ緩衝剤に希釈し（１：１５００）、各ウェルに２０μＬを添加する。放射性リガンドを添加した後、プレートを密封し、パルススピンし、室温で４時間インキュベートする。インキュベーション終了時に、プレートをＬｅａｄｓｅｅｋｅｒ装置（ＶＩＥＷＬＵＸ  ＰＬＵＳ、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）で読み取り、特異的結合のレベルを決定する。
【０４０４】
生体内試験
ＨＭ７４Ａアゴニストを、試験前少なくとも１２時間絶食させた、雄のＳｐａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜２５０ｇ）で試験する。化合物を静脈内（５ｍＬ／ｋｇ）または強制経口（１０ｍＬ／ｋｇ）によって投与する。血液試料（尾静脈血０．３ｍＬ）を、投与前、および投与後に３回（投与後１５分〜８時間の時間範囲）採取する。各血液試料を、ヘパリン管（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ、ＰＳＴ  ＬＨ）に移し、遠心分離して（１０，０００ｇ、５分間）、血漿試料を生成する。この血漿試料を、市販のキット（Ｒａｎｄｏｘ）を用いて、非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）のレベルに関して分析する。投与前レベルに対する、血漿ＮＥＦＡレベルの抑制を、ＨＭ７４Ａアゴニスト活性の代理として用いる。
【０４０５】
本発明の化合物がニコチン酸に関連する紅潮反応を示すかどうかを判定するために、それらを、麻酔をしたモルモットに投与する。ニコチン酸を陽性対照として使用する。雄のＤｕｎｋｉｎ  Ｈａｒｔｌｅｙモルモット（３００〜８００ｇ）を、塩酸ケタミン（Ｖｅｔａｌａｒ、４０ｍｇ／ｋｇ、筋内）、キシラジン（Ｒｏｍｐｕｎ、８ｍｇ／ｋｇ、筋内）、およびペントバルビタールナトリウム（Ｓａｇａｔａｌ，３０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）の混合物で麻酔する前に、１２時間絶食させる。麻酔後、気管開口術を行い、動物を大気で人工的に換気する（１０〜１２ｍＬ／ｋｇ、６０呼吸数／分）。頸静脈および頸動脈を、それぞれ試験化合物の静脈内投与、および血液採取のためにカニューレ治療する。赤外線温度プローブ（Ｅｘｔｅｃｈ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を、左耳の先端から３〜５ｍｍに配置する。温度測定値を、試験化合物またはニコチン酸を投与する５分前から試験化合物またはニコチン酸を投与してから４０分後まで、毎分記録する。データは、自動的にＰｓｉｏｎコンピュータに集められ、その後、データ分析のために、エクセルの表計算シートに移す。化合物を投与する前、および化合物を投与した後の多くの時点で、頸動脈カニューレから血液試料（０．３ｍＬ）を採取し、ヘパリンリチウムを含有するＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（ＢＤ）管に移す。試料を血液ローラーで完全に混合し、次いで、氷上に保存し、その後、１２００ｇで５分間遠心分離する。
【０４０６】
ヒスタミン
本発明の化合物は、下記または類似のアッセイに従って、体外の生物学的活性について試験され得る。
【０４０７】
Ｈ１受容体細胞株の作製およびＦＬＩＰＲアッセイプロトコル
１．ヒスタミンＨ１細胞株の作製
ヒトＨ１受容体は、文献に記載されている公知の手順を用いてクローン化することができる［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、２０１（２）：８９４（１９９４）］。文献に記載されている公知の手順によって、ヒトＨ１受容体を安定的に発現しているチャイニーズハムスター卵巣細胞を作製することができる［Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１１７（６）：１０７１（１９９６）］。
【０４０８】
ヒスタミンＨ１機能的アンタゴニストアッセイ
コーティングされていないブラックウォールドクリアボトム３８４ウェル組織培養プレート中に、１０％透析ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  カタログ番号１２４８０−０２１）および２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号２５０３０−０２４）を添加したα最小必須培地（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号２２５６１−０２１）中でヒスタミンＨ１細胞株を播種し、５％ＣＯ２、３７℃で一晩維持することができる。
【０４０９】
過剰な培地を各ウェルから除去し、１０μＬを残すことができる。３０μＬのローディング色素（Ｔｙｒｏｄｅｓ緩衝剤＋プロベネシド（１４５ｍＭのＮａＣｌ、２．５ｍＭのＫＣｌ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＤ−グルコース、１．２ｍＭのＭｇＣｌ２、１．５ｍＭのＣａＣｌ２、２．５ｍＭのプロベネシド、ｐＨを１．０ＭのＮａＯＨで７．４０に調節）で希釈した２５０μＭのＢｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｂｌａｃｋ、２μＭのＦｌｕｏ−４））を各ウェルに添加し、プレートを５％ＣＯ２、３７℃で６０分間インキュベートすることができる。
【０４１０】
Ｔｙｒｏｄｅｓ緩衝剤＋プロベネシドで必要とされる濃度に希釈した、１０μＬの試験化合物（または対照として１０μＬのＴｙｒｏｄｅｓ緩衝剤＋プロベネシド）を各ウェルに添加し、プレートを３７℃、５％ＣＯ２で３０分間インキュベートすることができる。次いで、プレートをＦＬＩＰＲ（商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＵＫ）中に置き、ヒスタミンの最終アッセイ濃度がＥＣ８０となる濃度で、１０μＬのヒスタミンを添加する前および後に、Ｓｕｌｌｉｖａｎら（Ｉｎ：Ｌａｍｂｅｒｔ  ＤＧ（ｅｄ．），Ｃａｌｃｉｕｍ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ：Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９，ｐｐ．１２５−１３６）に記載されている方法で細胞蛍光（λｅｘ＝４８８ｎｍ、λＥＭ＝５４０ｎｍ）をモニターすることができる。
【０４１１】
機能的拮抗は、ＦＬＩＰＲ（商標）システム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）によって測定される、ヒスタミンにより誘発された蛍光の増加の抑制によって示される。濃度効果曲線によって、標準的な薬理学的数学的解析を使用して機能的親和性を決定する。
【０４１２】
２．  Ｈ３受容体細胞株の作製、膜調製、および機能的ＧＴＰγＳアッセイプロトコル
ヒスタミンＨ３細胞株の作製
ヒスタミンＨ３ｃＤＮＡを、酵素ＢａｍＨ１およびＮｏｔ−１によるプラスミドＤＮＡの制限酵素消化によって、その保持ベクターｐＣＤＮＡ３．１ＴＯＰＯ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）から単離し、同じ酵素で消化した誘導性発現ベクターｐＧｅｎｅ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）にライゲーションすることができる。ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ（商標）システム（トランス遺伝子発現が誘導物質の非存在下で停止し、誘導物質の存在下で開始されるシステム）を、米国特許第５，３６４，７９１号、第５，８７４，５３４号、および第５，９３５，９３４号に記載されているように行うことができる。ライゲーションしたＤＮＡを、コンピテントＤＨ５α大腸菌宿主細菌細胞に形質転換し、Ｚｅｏｃｉｎ（商標）（ｐＧｅｎｅおよびｐＳｗｉｔｃｈ上に存在するｓｈ  ｂｌｅ遺伝子を発現している細胞の選択を可能にする抗生物質）を含有するＬｕｒｉａ  Ｂｒｏｔｈ（ＬＢ）寒天上に５０μｇｍＬ−１でプレートすることができる。再ライゲーションしたプラスミドを含有するコロニーを、制限解析によって同定する。哺乳動物細胞へのトランスフェクションのためのＤＮＡを、ｐＧｅｎｅＨ３プラスミドを含有する宿主細菌の培養物２５０ｍＬから調製し、製造業者のガイドライン（Ｑｉａｇｅｎ）に従って、ＤＮＡ調製キット（Ｑｉａｇｅｎ  Ｍｉｄｉ−Ｐｒｅｐ）を用いて単離することができる。
【０４１３】
ｐＳｗｉｔｃｈ制御プラスミド（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）で予めトランスフェクトしたＣＨＯ  Ｋ１細胞を、１０％ｖ／ｖの透析ウシ胎児血清、Ｌ−グルタミン、およびハイグロマイシン（１００μｇｍＬ−１）を添加したＨａｍｓ  Ｆ１２（ＧＩＢＣＯＢＲＬ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）培地を含有する完全培地中にＴ７５フラスコ当たり２×１０６細胞で使用する２４時間前に播種することができる。プラスミドＤＮＡを、製造業者のガイドライン（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）に従って、リポフェクタミンプラスを用いて細胞にトランスフェクトする。トランスフェクションから４８時間後に、細胞を５００μｇｍＬ−１のＺｅｏｃｉｎ（商標）を添加した完全培地中にプレートすることができる。
【０４１４】
選択してから１０〜１４日後、１０ｎＭのミフェプリストン（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）を培地に添加し、受容体の発現を誘発することができる。誘発から１８時間後、細胞をエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ；１：５０００；ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、次いで、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）で数回洗浄することによってフラスコから剥がし、フェノールレッドを含まず、アール塩および３％Ｆｏｅｔａｌ  Ｃｌｏｎｅ  ＩＩ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を添加した最小必須培地（ＭＥＭ）を含有する選別用培地中で再懸濁させることができる。約１×１０７細胞を、ヒスタミンＨ３受容体のＮ末端ドメインに対して産生されたウサギポリクローナル抗体４ａで染色することによって受容体発現について調べ、氷上で６０分間インキュベートし、次いで、選別用培地中で２回洗浄することができる。受容体に結合した抗体を、細胞をＡｌｅｘａ４８８蛍光マーカー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）と接合しているヤギ抗ウサギ抗体とともに６０分間、氷上でインキュベートすることによって検出することができる。選別用培地によるさらに２回洗浄した後、細胞を５０μｍのＦｉｌｃｏｎ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で濾過し、次いで、Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  Ｕｎｉｔを取り付けたＦＡＣＳ  Ｖａｎｔａｇｅ  ＳＥフローサイトメーターで分析することができる。対照細胞は、類似の方法で処理した非誘導細胞であり得る。陽染された細胞を、単一細胞として５００μｇｍＬ−１のＺｅｏｃｉｎ（商標）を含有する完全培地を含む９６ウェルプレートに選別し、抗体およびリガンド結合研究によって受容体発現について再解析する前に増殖させることができる。１つのクローン３Ｈ３を、膜調製のために選択することができる。
【０４１５】
培養細胞からの膜調製
プロトコルの全ての工程を、４℃で、予冷した試薬を使用して行う。細胞ペレットを、１０容量のホモジナイゼーション緩衝剤（１０−６Ｍのロイペプチン（アセチル−ロイシル−ロイシル−アルギナル；Ｓｉｇｍａ  Ｌ２８８４）、２５μｇｍＬ−１のバシトラシン（Ｓｉｇｍａ  Ｂ０１２５）、１ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）、および２×１０−６Ｍ  のペプスタチンＡ（Ｓｉｇｍａ）を添加した、５０ｍＭのＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、１ｍＭのエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、ＫＯＨでｐＨ７．４）に再懸濁させることができる。次いで、細胞を、１リットルのガラス製Ｗａｒｉｎｇブレンダー中で２×１５秒のバースト、次いで、５００ｇで２０分間遠心分離することによってホモジナイズする。次いで、上清を４８，０００ｇで３０分間遠心する。ペレットを、５秒間のボルテックスすることによってホモジナイゼーション緩衝剤（当初の細胞ペレットの４倍容量）中で再懸濁させ、次いで、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザー（１０〜１５ストローク）でホモジナイズする。この時点で、調製物をポリプロピレン管に分注し、−８０℃で保存する。
【０４１６】
ヒスタミンＨ３機能的アンタゴニストアッセイ
アッセイするそれぞれの化合物について、白単色の３８４ウェルプレート中で、以下を添加する。
（ａ）ＤＭＳＯ中で必要とされる濃度に希釈した０．５μＬの試験化合物（または対照として０．５μＬのＤＭＳＯ）、
（ｂ）Ｗｈｅａｔ  Ｇｅｒｍ  Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ  Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ  ＬｅａｄＳｅｅｋｅｒ（商標）（ＷＧＡ  ＰＳ  ＬＳ）シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）ビーズを膜（上記の手法によって調製）と混合し、アッセイ緩衝剤（２０ｍＭのＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）＋１００ｍＭのＮａＣｌ＋１０ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４、ＮａＯＨ）中で希釈し、ウェルごとに５μｇのタンパク質、０．２５ｍｇのビーズを含有する３０μＬの最終容量を得、室温にてローラー上で６０分間インキュベートし、プレートに添加する直前に、１０μＭの最終アッセイ濃度のグアノシン５’二リン酸（ＧＤＰ）（Ｓｉｇｍａ、アッセイ緩衝剤で希釈）を添加することによって調製する、３０μＬのビーズ／膜／ＧＤＰ混合物、
（ｃ）１５μＬ  ０．３８ｎＭの［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（Ａｍｅｒｓｈａｍ；放射能濃度＝３７ＭＢｑｍＬ−１；比放射能＝１１６０Ｃｉｍｍｏｌ−１）、ヒスタミン（ヒスタミンの最終アッセイ濃度がＥＣ８０となる濃度）。
２〜６時間後、プレートを１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１プレート当たり５分間６１３／５５フィルターを用いてＶｉｅｗｌｕｘカウンターで計数する。４−パラメーターのロジスティック式を使用してデータを分析する。基礎活性を最小として使用し、すなわちヒスタミンをウェルに加えない。
【０４１７】
本発明の化合物のバイオアベイラビリテイーおよびＣＮＳ浸透は、下記または類似のアッセイにおいて分析され得る。
【０４１８】
１．ＣＮＳ浸透法
化合物を、１ｍｇｋｇ−１の公称用量レベルで雄のＣＤ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに静脈内投与することができる。化合物を５％ＤＭＳＯ／４５％ＰＥＧ２００／５０％水中に製剤化することができる。投与してから５分後にイソフルランによる終末麻酔下で血液試料を採取することができ、脳への浸透の評価のために脳も取り出すことができる。ヘパリン化試験管へ血液試料を直接採取することができる。タンパク質沈殿を用いて分析のために血液試料を調製することができ、ホモジナイゼーションおよびそれに続くタンパク質沈殿による脳からの薬物の抽出を用いて脳試料を調製することができる。化合物特異的な質量変化を用いた定量的ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析によって、血液および脳抽出物中の親薬物の濃度を決定することができる。
【０４１９】
２．ラット薬物動態法
化合物を、それぞれ、１ｍｇｋｇ−１および３ｍｇｋｇ−１の公称用量レベルで、単回の静脈内または経口投与によって雄のＣＤ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに投与することができる。化合物を５％ＤＭＳＯ／４５％ＰＥＧ２００／５０％水中に製剤化することができる。投与してから０．０８３時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、および７時間後に、連続的または終末血液試料を採取することによって、静脈内プロファイルを得ることができる。投与してから０．２５時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、７時間、および１２時間後に、連続的または終末血液試料を採取することによって、経口プロファイルを得ることができる。血液試料をヘパリン化試験管に直接採取することができる。血液試料をタンパク質沈殿によって調製し、化合物特異的な質量変化を用いて、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって定量分析に供することができる。薬物濃度−時間プロファイルを作製し、ノンコンパートメントＰＫ分析を使用して、半減期、クリアランス、分布容積、および経口バイオアベイラビリティーを見積もりを作製することができる。
【０４２０】
３．イヌ薬物動態法
化合物を、それぞれ１ｍｇｋｇ−１および２ｍｇｋｇ−１の公称用量レベルで単回の静脈内または経口投与によって、雄のビーグル犬に投与することができる。この研究を、同じイヌを両方の投与イベントに用い、投与イベントを１週間の間隔を開けて行うようにクロスオーバーデザインによって行うことができる。化合物を、５％ＤＭＳＯ／４５％Ｐｅｇ２００／５０％水中に製剤化することができる。投与してから０．０８３時間、０．２５時間、０．５時間、０．７５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、および１２時間後に、連続的に血液試料を採取することによって、静脈内プロファイルを得ることができる。投与してから０．２５時間、０．５時間、０．７５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、および２４時間後に、連続的に血液試料を採取することによって、経口プロファイルを得ることができる。血液試料をヘパリン化試験管に直接採取することができる。血液試料をタンパク質沈殿によって調製し、化合物特異的な質量変化を用いて、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって定量分析に供することができる。薬物濃度−時間プロファイルを作製し、ノンコンパートメントＰＫ分析を使用して、半減期、クリアランス、分布容積、および経口バイオアベイラビリティーを見積もりを作製することができる。
【０４２１】
β−アドレナリン作動性受容体キナーゼ
β−２−アドレナリン作動性受容体の体外機能的アッセイ
本発明の化合物のβ−２−アドレナリン作動性受容体機能活性を以下のように試験することができる。
【０４２２】
細胞播種および増殖：
２１歳男性からの主気管支平滑筋（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｃａｌｉｆ．）を、２４ウェル組織培養プレート中に５０，０００細胞／ウェルで播種することができる。使用した培地は、ｈＥＧＦ、インスリン、ｈＦＧＦ、および胎児ウシ血清で補充されたＣｌｏｎｅｔｉｃのＳｍＢＭ−２であり得る。融合性単層が見られ得るまで、細胞を３７℃、５％ＣＯで２日間増殖することができる。
【０４２３】
細胞のアゴニスト刺激
培地を各ウェルから吸引し、１ｍＭ  ＩＢＭＸ、ホスホジエステラーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）を含有する２５０ｍＬの新しい培地と交換することができる。細胞を、１５分間、３７℃でインキュベートし、次いで、２５０ｍＬの適切な濃度のアゴニストを添加することができる。次いで、細胞をさらに１０分間インキュベートすることができる。培地を吸引し、５００ｍＬの冷たい７０％ＥｔＯＨを細胞に添加し、次いで、約５分後に、空の９６ウェルディープウェルプレートを取り除くことができる。次いで、この工程を繰り返すことができる。次いで、ディープウェルプレートを、全てのＥｔＯＨが乾燥してなくなるまで高速バキューム（ｓｐｅｅｄ−ｖａｃ）で回転し、乾燥ペレットを残すことができる。ｃＡＭＰ（ｐｍｏｌ／ウェル）をＳｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）から市販のｃＡＭＰ  ＥＬＩＳＡキットを用いて定量化することができる。ＥＣ５０曲線を、４パラメーターフィット式を用いて作製することができる。
ｙ＝（ａ−ｄ）／（１＋（ｘ／ｃ）ｂ）＋ｄ，、ここで、
ｙ＝ｃｐｍ  ａ＝全結合ｃ＝ＩＣ５０
ｘ＝［化合物］ｄ＝ＮＳ結合ｂ＝勾配
ＮＳ結合を固定し、全ての他のパラメーターを変動させる。
【０４２４】
β−２−アドレナリン作動性受容体の体外放射性リガンド結合アッセイ
本発明の化合物のβ−１／２−アドレナリン作動性受容体結合活性を以下のように試験することができる。β−１−アドレナリン作動性受容体またはβ−２−アドレナリン作動性受容体のいずれかを含有するＳＦ９細胞膜（ＮＥＮ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）を、９６ウェルプレート中、７５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ、および２ｍＭ  ＥＤＴＡを含有し、試験化合物の濃度を変化させる結合緩衝剤、または緩衝剤のみ（対照）中、０．０７ｎＭの１２５Ｉ−ヨードシアノピンドロール（ＮＥＮ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）とともにインキュベートすることができる。プレートを、１時間振盪しながら室温でインキュベートすることができる。放射性リガンドに結合した受容体を、０．３％ポリエチレンイミンで予めブロックされた９６ウェルＧＦ／Ｂフィルタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，Ｃｏｎｎ．）で濾過して収集し、細胞収集器を用いて２００μＬ  ＰＢＳで２回洗浄することができる。フィルターを、細胞収集器を用いて２００μＬ  ＰＢＳで３回洗浄し、次いで、４０μＬ  シンチレーションカクテル中に再懸濁することができる。フィルター結合放射能を、シンチレーションカウンターで測定することができ、ＩＣ５０曲線を上記の標準的な４パラメーターフィット式を用いて作製する。
【０４２５】
生体内吸入モルモット唾液分泌アッセイ
体重２００〜３５０ｇのモルモット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）を、到着してから少なくとも３日間、屋内のモルモットコロニーで環境順化させる。試験化合物またはビヒクルを、パイ形状の投薬チャンバー（Ｒ＋Ｓ  Ｍｏｌｄｓ，  Ｓａｎ  Ｃａｒｌｏｓ，  Ｃａｌｉｆ．）中で１０分間にわたり、吸入（ＩＨ）により投薬する。試験溶液を無菌水に溶解し、５．０ｍＬの投与溶液で充填した噴霧器を用いて送達する。モルモットを、３０分間、吸入チャンバー中に拘束する。この期間中、モルモットを、約１１０ｃｍ２の領域に制限する。この空間は、動物が自由に向きを変えるため（動物自身が位置を変えること）に適切であり、毛づくろいを可能とする。２０分間の順化後、２２ｐｓｉの圧力で屋内の気体によって駆動するＬＳ  Ｓｔａｒ  Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ  Ｓｅｔ（Ｍｏｄｅｌ  ２２Ｆ５１，  ＰＡＲＩ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，  Ｉｎｃ．  Ｍｉｄｌｏｔｈｉａｎ，  Ｖａ．）発生させたエアロゾルにモルモットを曝露する。噴霧が完了すると、モルモットを、治療してから１．５時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、または７２時間後で評価する。
【０４２６】
試験する１時間前に、０．８８ｍＬ／ｋｇ容量で、ケタミン４３．７５ｍｇ／ｋｇ、キシラジン３．５ｍｇ／ｋｇ、およびアセプロマジン１．０５ｍｇ／ｋｇの混合物の筋肉内（ＩＭ）注射でモルモットに麻酔する。動物を、加熱した（３７℃）ブランケット上で腹側を上にして配置し、その頭を下向き勾配で２０°傾けた。４−ｐｌｙ  ２×２インチのガーゼパッド（Ｎｕ−Ｇａｕｚｅ  Ｇｅｎｅｒａｌ−ｕｓｅ  ｓｐｏｎｇｅ，Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｔｅｘ．）を、モルモットの口に挿入する。５分後、ムスカリン性アゴニストピロカルピン（３．０ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．）を投与し、ガーゼパッドを直ちに廃棄し、新しい予め秤量したガーゼパッドで置き換える。唾液を１０分間収集し、この時点で、ガーゼパッドを秤量し、蓄積した唾液の量（ｍｇ）を決定するために重量の差異を記録する。ビヒクルおよび各用量の試験化合物を受容する動物について、収集した唾液の平均量を計算する。ビヒクル群の平均を、１００％唾液分泌であると見なす。結果の平均値（ｎ＝３以上）を用いて結果を計算する。二元配置ＡＮＯＶＡを用いて各時点で各用量について信頼区間（９５％）を計算する。このモデルは、Ｒｅｃｈｔｅｒ，“Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  ｄｒｕｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｂｙ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓａｌｉｖａｔｉｏｎ”  Ａｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ，１９９６，２４：２４３−２５４に記載される手順の修正版である。
【０４２７】
各前治療時間で、ビヒクル−治療動物における唾液の平均重量を計算し、対応する前治療時間で、各用量で、唾液分泌の阻害％を計算するために使用する。Ｗｉｎｄｏｗｓ用のＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ、バージョン３．００（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を用いて阻害用量応答データを４パラメータロジスティック式にフィットさせ、抗唾液促進ＩＤ５０（５０％のピロカルピン誘発唾液分泌を阻害するのに必要な用量）を推定する。使用した式は以下の通りである。Ｙ＝Ｍｉｎ＋（Ｍａｘ−Ｍｉｎ）／（１＋１０（（ｌｏｇ  ＩＤ５０−Ｘ）＊勾配））  ここで、Ｘは用量の対数であり、Ｙは応答（唾液分泌の阻害％）である。Ｙは、Ｍｉｎで始まり、シグモイドの形で漸近的にＭａｘに近づく。
【０４２８】
抗唾液促進ＩＤ５０と気管支保護ＩＤ５０との比を使用して、試験化合物の見かけ上の肺選択性指標を計算する。概して、約５より大きい見かけ上の肺選択性指数を有する化合物が好ましい。
【０４２９】
タンパク質キナーゼＣ
体外タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）アッセイ
アッセイ成分は、４５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝剤ｐＨ７．５（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、０．７５ｍＭ  酢酸カルシウム（Ｗａｋｏ）、３．６ｍＭ  塩化マグネシウム（Ｗａｋｏ）、１．８７５ｍＭ  ＤＬ−ジチオスレイトール（Ｓｉｇｍａ）、１８．７５μｇ／ｍＬ  Ｌ−（α−ホスファチジル−Ｌ−セリン（Ｓｉｇｍａ）、１．５μｇ／ｍＬ  ホルボール１２−ミリステート１３−酢酸塩（Ｓｉｇｍａ）、２．５μＭ  ビオチン化ペプチド（ニューログラニン２８−４３、Ａｓａｈｉ  Ｔｅｃｈｎｏ  Ｇｌａｓｓ）、１０μＬの１．０％  水性ＤＭＳＯまたはＤＭＳＯ／阻害剤、および０．３μＭ（ｇａｍｍａ  ３３Ｐ）ＡＴＰ（ＮＥＮ）を含む、計１００μＬである。反応は、ヒト組換えＰＫＣα（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、ＰＫＣβ２（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、またはＰＫＣγ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍまたは社内調製）を添加することによって、開始し、室温で１５分間インキュベートし、リン酸緩衝生理食塩水（Ｎｉｓｓｕｉ）中の５０μＭ  ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ）、５ｍＭ  ＥＤＴＡ（Ｄｏｊｉｎｄｏ）、および０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｗａｋｏ）を含む１００μＬの５ｍｇ／ｍＬ  ストレプトアビジンＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を添加することによって停止させることができる。反応混合物を１５分間さらにインキュベートし、１０００ｒｐｍで１分間遠心分離することができ、放射能は、ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ）によって定量化することができる。
【０４３０】
生体内アッセイ：  神経因性疼痛モデル
慢性絞扼性神経損傷（ＣＣＩ）モデル（Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｉｎ  ３３  ８７  １９８８）を使用して、ラット神経因性疼痛モデルにおける化合物の有効性を調査することができる。ＳＤラット（雄、８週齢、Ｎｉｐｐｏｎ  ＳＬＣ）をこのアッセイで使用することができる。坐骨神経のＣＣＩは、１ｍｍ間隔で坐骨神経周囲を４−０クローミック腸線（ｃｈｒｏｍｉｃ  ｇｕｔ）にて４回緩く結紮することによって作製することができる。疑似手術マウスにおいて、神経は、結紮せずに曝露することができる。
【０４３１】
機械的異痛症の検出
ラット神経因性疼痛モデルにおける薬物の有効性は、ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  Ｈａｉｒ試験（Ｓｅｍｍｅｓ−Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ｍｏｎｏｆｉｌａｍｅｎｔｓ；Ｎｏｒｔｈ  Ｃｏａｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）を用いることによって調べることができる。（機械的異痛症は、ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  Ｈａｉｒ（Ｓｅｍｍｅｓ−Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ｍｏｎｏｆｉｌａｍｅｎｔｓ；Ｎｏｒｔｈ  Ｃｏａｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）を用いることによって調べることができる。ラットは、後肢の足底表面が下方より刺激することができるように、メッシュの床上に配置することができる。剛性を増加させるために、それぞれの毛を、後肢の足底中央に１０回適用することができる。少なくとも１回の反応を誘発する系列において第１の毛は、閾値を表すことができる。）  この試験は、手術から１４日後に行うことができる。
【０４３２】
タンパク質キナーゼＡ
体外アッセイ：  タンパク質キナーゼＡ活性の阻害
ＰＫＡキナーゼ活性アッセイは、放射性の読み出しとともに、９６ウェルＰＣＲプレート中の放射能ベースの形式を利用する。ＰＫＡ活性は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、２５０μＭ  ＡＴＰ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８）、２％  ＤＭＳＯ、２５０ｎｇ／ｍＬ  ヒストンＨ２Ｂ（Ｒｏｃｈｅ２２３  ５１４）、および２ｎｇ／ｍＬ  ＰＫＡ（触媒サブユニット、ウシ心臓、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ５３９４８６、比活性度＝１１７０ｐｍｏｌ／分＊μｇ）を含有する２５μＬ  アッセイ混合物においてアッセイすることができる。化合物は、１０μＭの濃度でＰＫＡキナーゼ活性の阻害のためにスクリーニングすることができる。キナーゼ反応を、３７℃で３０分間行い、次いで、５μＬの０．５Ｍ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８）を添加することによって反応を停止させることができる。次いで、５μＬの各溶液を対応する正方形のフィルターマット（８×１２ガラス繊維９０×１２０ｍｍ、ＰＥ−Ｗａｌｌａｃ  １４５０−４２１）にスポットすることができる。フィルターマットを乾燥させ、１０％  ＴＣＡ、２％  ＰＰＡ、５００ｍＭ  ＮａＣｌで、それぞれ、室温で３０分間洗浄することができる。さらに、１０％  ＴＣＡおよび２％  ＰＰＡの２つの洗浄を３０分間行って、次いで、最後に９９％  ＥｔＯＨを用いて、室温で３０分洗浄し、フィルターマットを風乾させることができる。次いで、乾燥させたフィルターマットは、フィルターマットを覆うメルチレックス（Ｍｅｌｔｉｌｅｘ）シート（メルト−オン  シンチレーターシート７３×１０９ｍｍ、フィルターマットＡ用ＰＥ−Ｗａｌｌａｃ１４５０−４４１）と一緒に試料バッグに置くことができる。バッグをマイクロプレートヒートシーラー（ＰＥ−Ｗａｌｌａｃ  １４９５−０２１）に適合するように切り取ることができる。ヒートシーラーを用いて、フィルターマット上のメルチレックスを溶かす。次いで、フィルターマットと溶解したメルチレックスを含むバッグは、フィルターカセットに収納し、マイクロベータジェットシンチレーションおよび発光計測器ＰＥ−Ｗａｌｌａｃ１４５０を用いて計数することができる。
【０４３３】
ＫＡＴＰ
齧歯類ＫＡＴＰチャネルに対する試験化合物の体外結合親和性
ハムスターＳＵＲ１上でのスルホニル尿素およびＫＡＴＰチャネル開口薬（＝ＫＣＯ）の結合部位に関する試験化合物の親和性を特徴付けるために、競合的結合実験を行うことができる。スルホニル尿素部位に関する親和性を評価するために、ＣＯＳ細胞一過性発現ハムスターＳＵＲ１は、［３Ｈ］グリベンクラミドの存在下で、試験化合物の濃度を増加させながら、インキュベートすることができる。ＫＣＯ部位への結合に関する親和性は、付加的な１００μＭ  ＭｇＡＴＰの存在下でのインキュベーションによって評価することができる（Ｓｃｈｗａｎｓｔｅｃｈｅｒ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ  Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３４３（１９９１）８３−８９およびＳｃｈｗａｎｓｔｅｃｈｅｒ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１７（１９９８）５５２９−５５３５（＝Ｓｃｈｗａｎｓｔｅｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）を参照のこと）。各試験化合物については、４個の置換曲線を測定することができる（ヒトおよびハムスターアイソフォームからの＋−ＭｇＡＴＰ）。曲線当たり、９〜１５の明白な濃度を、関連のある範囲にわたって試験することができる。全ての測定は、独立した実験において少なくとも５回繰り返すことができる。
【０４３４】
ＳＵＲ１（上記参照）と同様に、ラットＳＵＲ２Ａ上でのスルホニル尿素およびＫＣＯの結合部位に関する試験化合物の親和性を特徴付けるために、競合的結合実験を行うことができる。ＳＵＲ２Ａ上でのＫＣＯ部位への親和性を、［３Ｈ］Ｐ１０７５の置換によって評価することができる（Ｓｃｈｗａｎｓｔｅｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８、Ｄｏｒｓｃｈｎｅｒ  Ｈ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５５（１９９９）１０６０−１０６６（＝Ｄｏｒｓｃｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）を参照のこと）。
しかしながら、ヒトＳＵＲ２アイソフォームに関する［３Ｈ］グリベンクラミドの親和性は、濾過アッセイを用いる結合の直接検査を可能とするためには弱過ぎる。
したがって、ＳＵＲ２Ａ上でのスルホニル尿素部位への結合を検出するためには２つの戦略を使用することができる。第１には、［３Ｈ］Ｐ１０７５のアロステリック置換によって間接的に結合を検出することができる（Ｄｏｅｒｓｃｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。第２には、このトレーサーの直接置換を可能にする［３Ｈ］グリベンクラミドについての増加した親和性を有する突然変異ＳＵＲ２Ａ（ＳＵＲ２ＡＹ１２０５Ｓ、上記参照）を使用することができる。ＫＣＯ部位とのアロステリックかつ競合的な相互作用間の区別を可能にし、アロステリック置換を誘発しないリガンドの結合が失われないことを確認するために、この第２の方法を選択することができる。
【０４３５】
ＣＯＳ細胞一過性発現ラットＳＵＲ２Ａからの膜を、放射性リガンドの存在下で、試験化合物の濃度を増加させながら、前述のようにインキュベートすることができる。ＫＣＯ部位への結合に関する親和性は、付加的な１００μＭ  ＭｇＡＴＰの存在下でのインキュベーションによって評価することができる（Ｓｃｈｗａｎｓｔｅｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１  ａｎｄ  １９９８）。各試験化合物については、４個の置換曲線を測定することができる（野生型受容体のラットアイソフォーム由来の［３Ｈ］Ｐ１０７５の置換およびＳＵＲ２ＡＹ１２０５Ｓのラットアイソフォーム由来の［３Ｈ］グリベンクラミドの置換）。曲線当たり、９〜１５の明白な濃度を、関連のある範囲にわたって試験することができる。全ての測定は、独立した実験において少なくとも５回繰り返すことができる。
【０４３６】
［３Ｈ］Ｐ１０７５（比活性度１１６Ｃｉ  ｍｍｏｌ−１）は、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｕｃｈｌｅｒ（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入することができる。［３Ｈ］グリベンクラミド（比活性度５１Ｃｉ  ｍｍｏｌ−１）は、ＮＥＮ（Ｄｒｅｉｅｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手することができる。適切な場合、ストック溶液を１％以下の媒体中の最終溶媒濃度で、ジメチルスルホキシド中で調製することができる。
【０４３７】
ＳＵＲ−またはＫｉｒ６．ｘアイソフォームは、ｐｃＤＮＡ（ハムスターＳＵＲ１、マウスＫｉｒ６．２）またはｐＣＭＶベクター（ラット  ＳＵＲ２Ａ、ＳＵＲ２Ｂ）のいずれかにサブクローニングして用いることができる。
【０４３８】
齧歯類ＳＵＲ−アイソフォームおよびＫＡＴＰチャンネルは、記載されるようなＣＯＳ−１細胞中で一過性発現させることができる（Ｓｃｈｗａｎｓｔｅｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）、Ｄｏｒｓｃｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）、Ｕｈｄｅ  Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４（１９９９）２８０７９−２８０８２、Ｇｒｏｓｓ  Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５６（１９９９）１３７０−１３７３、Ｍａｒｋｗｏｒｔｈ  Ｅ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４９（２０００）１４１３−１４１８を参照のこと）。１２０５位においてセリンで置換されたフェニルアラニン残基を有するＳＵＲ２アイソフォームの突然変異型（ＳＵＲ２ＡＹ１２０５Ｓ）を用いて、［３Ｈ］グリベンクラミドの置換により、これらのアイソフォームのスルホニル尿素部位への結合を検出することができる（Ｕｈｄｅ  Ｉ．，Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ  ２００１）。簡潔には、１０％  ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を補充したＤＭＥＭ  ＨＧ（１０ｍＭグルコース）中で培養したＣＯＳ−１細胞を、皿（９４ｍｍ）当たり細胞５×１０５個の密度で培養し、一晩付着させることができる。トランスフェクションのために、細胞を、ＤＮＡ（５〜１０μｇ／ｍＬ）＋ＤＥＡＥ−デキストラン（１ｍｇ／ｍＬ）を含むトリス緩衝塩水中で４時間、ＨＥＰＥＳ緩衝塩水＋ジメチルスルホキシド（１０％）中で２分間、およびＤＭＥＭ−ＨＧ＋クロロキン（１００μＭ）中で４時間、インキュベートすることができる。次いで、細胞を、ＤＭＥＭ−ＨＧ＋１０％ＦＣＳに戻すことができる。記載されるように、膜をトランスフェクション後６０〜７２時間調製することができる（Ｓｃｈｗａｎｓｔｅｃｈｅｒ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１０６（１９９２）２９５−３０１（＝Ｓｃｈｗａｎｓｔｅｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２））。結合実験のために、再懸濁膜（最終タンパク質濃度５〜５０μｇ／ｍＬ）を、［３Ｈ］グリベンクラミド（最終濃度０．３ｎＭまたは３ｎＭ、およびＳＵＲ１またはＳＵＲ２ＡＹ１２０５Ｓ−アイソフォームのそれぞれに関してグリベンクラミド１００ｎＭまたは１μＭにより定められた非特異的結合）または［３Ｈ］Ｐ１０７５（最終濃度３ｎＭ、ピナシジル１００μＭにより定められた非特異的結合）を含有し、試験化合物の濃度を増加させた、「トリス緩衝剤」（５０ｍＭ、ｐＨ７．４）中でインキュベートすることができる。遊離Ｍｇ２＋濃度を、０．７ｍＭの近くに維持することができる。ＡＴＰ（０．１ｍＭ）を培養培地に添加して、ＫＣＯ（例えば、ジアゾキシド、［３Ｈ］Ｐ１０７５）結合を可能にすることができる（Ｓｃｈｗａｎｓｔｅｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８を参照のこと）。室温で１時間インキュベーションを行い、Ｗｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｂフィルターを通して急速濾過により終了することができる。
【０４３９】
試験物質の阻害定数（Ｋｉ値）をそれぞれのＩＣ５０値から計算し、それらの負対数値（ｐＫｉ）として示すことができる。
【０４４０】
所定の化合物のＳＵＲ１およびＳＵＲ２に対する結合親和性および選択性を、Ｋ−ＡＴＰチャネルの調節を反映する基準として用いることができる（例えば、ｐＫｉ６．２を有するＮＮ−４１４は、ｐＫｉ３．８を有するジアゾキシドより１００倍強力にグルコース刺激インスリン放出を阻害する）。結合データは、所定の化合物のβ細胞機能を保存し、糖尿病の進行を阻害または遅延する可能性の第１の推定値として用いることができる。
【０４４１】
２．  齧歯類ＣＢ１受容体に対する試験化合物の体外結合親和性（放射性リガンド：  アンタゴニスト［３Ｈ］−ＳＲ１４１７１６Ａ）
カンナビノイドＣＢ１受容体についての本発明の化合物の親和性を、ヒトカンナビノイドＣＢ１受容体が放射性リガンドとして［３Ｈ］−ＳＲ１４１７１６Ａと結合して安定的にトランスフェクトされるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞の膜調製物を用いて決定することができる。本発明の化合物を添加するかまたは添加しないで、［３Ｈ］−リガンドを有する新たに調製した細胞膜調製物のインキュベーション後、結合および遊離リガンドの分離を、ガラス繊維フィルターを用いる濾過によって行う。フィルター上の放射能を液体シンチレーション計測によって測定する。
【０４４２】
３．齧歯類ＣＢ１受容体に対する試験化合物の体外結合親和性（放射性リガンド：アゴニスト  ＣＰ−５５．９４０）
カンナビノイドＣＢ１受容体についての本発明の化合物の親和性を、ヒトカンナビノイドＣＢ１受容体が放射性リガンドとして［３Ｈ］−ＣＰ−５５，９４０と結合して安定的にトランスフェクトされるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞の膜調製物を用いて決定することができる。本発明の化合物を添加するかまたは添加しないで、［３Ｈ］−リガンドを有する新たに調製した細胞膜調製物のインキュベーション後、結合および遊離リガンドの分離を、ガラス繊維フィルターを用いる濾過によって行う。フィルター上の放射能を液体シンチレーション計測によって測定する。
【０４４３】
４．ヒトカンナビノイドＣＢ１受容体での試験化合物の機能活性
体外ＣＢ１受容体拮抗は、ＣＨＯ細胞中にクローニングされたヒトＣＢ１受容体を用いて評価することができる。ＣＨＯ細胞は、ダルベッコ変法イーグル培養培地（＝ＤＭＥＭ）中で増殖させ、１０％  加熱不活性化ウシ胎児血清を補充することができる。培地を吸引し、ウシ胎児血清を含有しないが、［３Ｈ］−アラキドン酸を含有するＤＭＥＭで置き換え、細胞培養ストーブ（ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｓｔｏｖｅ）（５％  ＣＯ２／９５％  空気；３７℃；水−飽和雰囲気）中で一晩インキュベートすることができる。この期間の間に、［３Ｈ］−アラキドン酸は、膜リン脂質中に導入することができる。試験日に、培地を吸引し、０．２％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する、０．５ｍＬのＤＭＥＭを用いて細胞を３回洗浄することができる。ＷＩＮ  ５５，２１２−２によるＣＢ１受容体の刺激は、ＰＬＡ２の活性化を導き、次いで、［３Ｈ］−アラキドン酸が培地中に放出された。このＷＩＮ  ５５，２１２−２誘導放出は、ＣＢ１受容体アンタゴニストにより濃度−依存的に拮抗され得る。試験化合物のＣＢ１拮抗の効力をｐＡ２値として表す。
【０４４４】
５．  灌流ラット膵島におけるインスリン分泌による化合物のアンタゴニスト効果の決定−アンタゴニスト活性についての単純なスクリーニング
動物：１７５〜２００ｇの範囲の体重の雄のウィスターラットを、標準的な動物檻で、２１±２℃の温度および５５±１０％の湿度でグループ飼育することができる。動物は、１２時間の明暗サイクル（明０６．００〜１８．００時間）で標準齧歯類食餌（Ｂ＆Ｋ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｌｔｄ  ｓｔａｎｄａｒｄ  ｒａｔ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  ｄｉｅｔ（ＢＫ  ００１Ｐ），Ｂｅｅｋａｙ  Ｆｅｅｄｓ，Ｂ＆Ｋ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｌｔｄ，Ｈｕｌｌ，Ｅａｓｔ  Ｒｉｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ）および水道水を自由に与えて保持することができる。ラットは、実験前の少なくとも１週間、これらの条件に慣らすものとする。
【０４４５】
実験手順：ラットを殺処分した後、肝臓に通じている胆管枝および膵臓中の管の十二指腸端部をクランプし、胆管中に、氷冷した０．９ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ溶液を注射することによって膵臓を広げることができる。次いで、膵臓を除去し、３７℃で１０〜１２分間静置してインキュベートすることができる。インキュベーション後、冷却した１０ｍＬの緩衝剤を添加し、懸濁液を手で１分間激しく振盪することができる。膵島を氷上で５分間沈殿させ、氷冷した緩衝液で３回洗浄することができる。３匹のラットからの良好な形および良好な大きさの膵島を手ですくい（低倍率の顕微鏡下で）、プールし、最終的に選択した膵島を灌流装置に移すことができる。別途言及されない限り、１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンおよび４ｍＭのグルコースを含有する酸素飽和（９５％Ｏ２／５％ＣＯ２）Ｇｅｙ＆Ｇｅｙ緩衝剤を、全実験中使用することができる（更なる詳細については、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １９９７；３３９：６９−７６を参照のこと）。
【０４４６】
化合物を推奨濃度で試験するか、または溶解度を実験条件で測定し、最大の溶解薬物濃度を実験に用いることができる（ＤＭＳＯまたはエタノールを溶剤としてアッセイ緩衝剤中、最大０．１％で用いる）。
【０４４７】
毎日、それぞれ十分な数のチャンバーからなる灌流装置の２個の同一で、独立したセットにおいて、２回の実験を同時に行うすることができる。各チャンバーに、２０個の手ですくった膵島を載せることができる。膵島を、４ｍＭ  グルコースを含む媒体で最初に３０分間灌流することができる。次いで、実験の残りで、２分間隔で灌流液を収集することができる。実験の開始から１０分後（ベースラインのインスリン値を収集するため）、各チャンバー内の媒体を、１１ｍＭ  グルコース、および関連のある薬物濃度／ビヒクル／ジアゾキシド濃度を含むものに交換し、灌流液をさらに６２分間収集し、各チャンバーについて合計３６個の画分を作製することができる。
【０４４８】
次いで、灌流液試料をプールし、以下、ベースライン（４ｍＭ）：試料１〜５（最初の１０分間）：０〜３０分間（１１ｍＭ  グルコース）  試料６〜２１；３０〜６０分間（１１ｍＭ  グルコース）：試料２２〜３６のように、１チャンバー当たり試料を３個作成することができる。
【０４４９】
インスリンアッセイに必要になるまで、灌流画分を−７５℃に保存することができる。画分のインスリン量は、９６ウェルのＥＬＩＳＡアッセイ（Ｍｅｒｃｏｄｉａ）を用いてアッセイすることができる。初期インスリンアッセイは、各チャンバーからの３個のプールした画分について三重に実施することができる（１個の実験当たり１８個の試料、６個の実験に対して合計で１０８個の試料）。
【０４５０】
プロテアーゼ活性化受容体（ＰＡＲ１）
トロンビン受容体アンタゴニストに関する体外試験手順：
［３Ｈ］ｈａＴＲＡＰの調製：Ａ（ｐＦ−Ｆ）Ｒ（ＣｈＡ）（ｈＲ）（Ｉ２−Ｙ）−ＮＨ２（１．０３ｍｇ）および１０％  Ｐｄ／Ｃ（５．０７ｍｇ）を、ＤＭＦ（２５０μＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（１０μＬ）中に懸濁することができる。容器をトリチウムラインに取り付け、液体窒素で凍結し、排気することができる。次いで、トリチウムガス（３４２ｍＣｉ）をフラスコに加え、室温で２時間撹拌することができる。反応完了時に、過剰のトリチウムを除去し、反応したペプチド溶液をＤＭＦ（０．５ｍＬ）で希釈し、濾過し、触媒を除去することができる。粗ペプチドの収集されたＤＭＦ溶液を水で希釈し、凍結乾燥し、不安定なトリチウムを除去することができる。固体ペプチドを水に再溶解し、凍結乾燥工程を繰り返すことができる。トリチウム化されたペプチド（［３Ｈ］ｈａＴＲＡＰ）を０．５ｍＬの０．１％ＴＦＡ水溶液で溶解し、以下の条件を用いてＨＰＬＣで精製することができる。カラム、Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８、２５ｃｍ×９．４ｍｍ  Ｉ．Ｄ．；移動相、（Ａ）水中０．１％  ＴＦＡ、（Ｂ）ＣＨ３ＣＮ中０．１％  ＴＦＡ；勾配、（Ａ／Ｂ）１００／０〜４０／６０まで３０分間にわたって；流速、５ｍＬ／分；検出、２１５ｎｍのＵＶ。［３Ｈ］ｈａＴＲＡＰの放射線化学純度は、ＨＰＬＣで分析し、９９％であり得る。１８．４Ｃｉ／ｍｍｏｌの比活性度で、１４．９ｍＣｉのバッチを得ることができる。
【０４５１】
血小板膜の調製：血小板膜をＮａｔａｒａｊａｎらの方法（Ｎａｔａｒａｊａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．，ｖｏｌ．４５，ｐｐ．１４５−１５１（１９９５）の方法を改変して用いて２０単位のＮｏｒｔｈ  Ｊｅｒｓｅｙ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｅａｓｔ  Ｏｒａｎｇｅ，Ｎ．Ｊ．）から入手した採取してから４８時間以内の血小板濃縮物から調製することができる。全ての工程は、承認されたバイオハザード安全対策の状態（ｂｉｏｈａｚａｒｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）において４０℃で行うことができる。血小板を４０℃で２０分間、１００×ｇで遠心分離し、赤血球を除去することができる。懸濁液をデカントし、１５分間、３０００×ｇで遠心分離し、血小板をペレット化することができる。血小板を、全容量が２００ｍＬになるまで、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ中で再懸濁し、１０分間、４４００×ｇで遠心分離することができる。この工程をさらに２回繰り返すことができる。血小板を、最終容積が約３０ｍＬになるまで、５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＥＤＴＡ中で再懸濁し、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーで、２０ストロークでホモジナイズすることができる。膜を、４１，０００×ｇでペレット化し、４０〜５０ｍＬの２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１ｍＭ  ジチオトレイトール中で再懸濁し、１０ｍＬのアリコートを液体Ｎ２で凍結させ、−８０℃で保存することができる。膜の調製を完全にするために、アリコートを解凍し、プールし、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーで、５ストロークでホモジナイズすることができる。膜をペレット化し、１０ｍＭ  トリエタノールアミン−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、５ｍＭ  ＥＤＴＡで３回洗浄し、２０〜２５ｍＬの５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、および１％ＤＭＳＯ中で再懸濁することができる。膜のアリコートを液体Ｎ２で凍結し、−８０℃で保存することができる。膜は少なくとも３ヶ月間安定であり得る。２０単位の血小板濃縮物は、一般的に２５０ｍｇの膜タンパク質を生成した。タンパク濃度は、Ｌｏｗｒｙアッセイ（Ｌｏｗｒｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．１９３，ｐｐ．２６５−２７５（１９５１）によって決定することができる。
【０４５２】
トロンビン受容体放射性リガンド結合アッセイの高速迅速処理：  トロンビン受容体アンタゴニストを、Ａｈｎらのトロンビン受容体放射性リガンド結合アッセイの改変を用いてスクリーニングすることができる  （Ａｈｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，ｖｏｌ．５１，ｐ．３５０−３５６（１９９７）。アッセイは、２００μＬの最終アッセイ容量で、９６ウェルＮｕｎｃプレート（カタログ番号２６９６２０）で行うことができる。血小板膜および［３Ｈ］ｈａＴＲＡＰは、それぞれ、結合緩衝剤（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１％ＢＳＡ）の中で０．４ｍｇ／ｍＬおよび２２．２ｎＭになるよう希釈することができる。試験化合物のストック溶液（１００％ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）を、さらに１００％  ＤＭＳＯ中に希釈することができる。別途示されない限り、１０μＬの希釈した化合物溶液および９０μＬの放射性リガンド（最終濃度５％  ＤＭＳＯ中１０ｎＭ）を、それぞれのウェルに加え、１００μＬの膜を添加（４０μｇタンパク質／ウェル）することによって反応を開始することができる。化合物を、３つの濃度（０．１μＭ、１μＭ、および１０μＭ）で試験することができる。プレートに覆いをし、Ｌａｂ−Ｌｉｎｅ  Ｔｉｔｅｒ  Ｐｌａｔｅ  Ｓｈａｋｅｒ上で、室温で１時間、穏やかに渦巻き混合することができる。Ｐａｃｋａｒｄ  ＵｎｉＦｉｌｔｅｒ  ＧＦ／Ｃフィルタープレートを、０．１％  ポリエチレンイミン中で少なくとも１時間浸すことができる。インキュベートした膜を、Ｐａｃｋａｒｄ  ＦｉｌｔｅｒＭａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを用いて採取し、３００μＬの氷冷した５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡで４回迅速に洗浄することができる。ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ  ２０シンチレーションカクテル（２５μＬ）を、それぞれのウェルに加え、プレートをＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅシンチレーションカウンターで計測することができる。全結合から過剰（５０μＭ）の標識化されていないｈａＴＲＡＰの存在下観察された非特異結合を引いた値を、特異的結合として定義することができる。トロンビン受容体に結合している［３Ｈ］ｈａＴＲＡＰの化合物による％阻害を以下の関係から計算することができる。％阻害＝全結合−試験化合物の存在下の結合  全結合−非特異的結合  １００
【０４５３】
次いで、親和性値（Ｋｉ）は、以下の式を用いて決定することができる。Ｋｉ＝ＩＣ５０  １＋［放射性リガンドの放射性リガンド親和性（ＫＤ）の濃度］  従って、Ｋｉの値が低いほど、より大きな結合親和性を示す。
【０４５４】
Ａ（ｐＦ−Ｆ）Ｒ（ＣｈＡ）（ｈＲ）Ｙ−ＮＨ２およびＡ（ｐＦ−Ｆ）Ｒ（ＣｈＡ）（ｈＲ）（Ｉｈｄ２−Ｙ）−ＮＨ２を、ＡｎａＳｐｅｃ  Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，Ｃａｌｉｆ．）によって特別に合成することができる。これらのペプチドの純度は、＞９５％であり得る。トリチウムガス（９７％）は、ＥＧ＆Ｇ  Ｍｏｕｎｄ，Ｍｉａｍｉｓｂｕｒｇ  Ｏｈｉｏから購入することができる。その後、ガスを装填し、ＩＮ／ＵＳ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．Ｔｒｉｓｏｒｂｅｒに保存することができる。ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ  ２０シンチレーションカクテルは、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．から入手することができる。
【０４５５】
カニクイザル全血薬物投与における、生体外での血小板凝集についてのプロトコルおよび血液収集
意識のあるイスにつかせたカニクイザルを、３０分間平衡にする。試験薬物の注入のために、針カーテルを上腕静脈に挿入する。別の針カーテルを、他方の上腕静脈または伏在静脈に挿入し、血液試料に使用する。化合物が経口投与される、これらの実験において、カーテルを１つのみ使用する。抗凝固剤として、トロンビン阻害剤ＣＶＳ  ２１３９（１００μｇ／０．１ｍＬ  生理食塩水）を含む、バチュテーナーチューブ中に、ベースライン血液試料（１〜２ｍＬ）を採取する。次いで、３０分間にわたって、薬物を静脈内に注入する。血液試料（１ｍＬ）を、薬物注入の間に５、１０、２０、３０分間で、薬物注入の終了から３０分後、６０分後、９０分後で収集する。経口実験では、動物に、強制経口カニューレを用いて薬物を投薬する。投薬から０、３０、６０、９０、１２０、１８０、２４０、３００、３６０分後に、血液試料を収集する。０．５ｍＬの血液が、全血凝集のために使用され、残りの０．５ｍＬは、薬物またはその代謝物の血漿濃度を決定するために使用される。以下に記載するように、血液試料の収集後、凝集が直ちに起こる。
【０４５６】
全血凝集
０．５ｍＬの血液試料を０．５ｍＬの生理食塩水に添加し、Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ全血血小板凝集計で、３７℃まで温める。同時に、インピーダンス電極を生理食塩水中で３７℃まで温める。撹拌棒を用いて血液試料を、加熱ブロックウェル中に設置し、インピーダンス電極を、血液試料中に設置し、収集ソフトウェアを開始する。ソフトウェアは、ベースラインが安定するまで作動させ、次いで、２０Ωのキャリブレーションチェックを行う。２０Ωは、コンピュータソフトウェアにより生成されたグラフ上の４ブロックに等しい。調整可能な容量ピペット（５〜２５μＬ）でアゴニスト（ｈａＴＲＡＰ）を添加し、１０分間、凝集曲線を記録する。アゴニストの添加後に６分間の最大凝集が、記録された値である。
【０４５７】
体外血小板凝集手順：
血小板凝集の研究を、Ｂｅｄｎａｒらの方法に従って行うことができる（Ｂｅｄｎａｒ，Ｂ．，Ｃｏｎｄｒａ，Ｃ．，Ｇｏｕｌｄ，Ｒ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｃｏｎｎｏｌｌｙ，Ｔ．Ｍ．，Ｔｈｒｏｍ．Ｒｅｓ．，ｖｏｌ．７７，ｐｐ．４５３−４６３（１９９５））。少なくとも７日間アスピリンを使用していない健常なヒト対象から、靜脈穿刺で、抗血液凝固剤としてＡＣＤを使用し、血液を得ることができる。
【０４５８】
血小板が豊富な血漿は、１５℃で、１００×ｇで１５分間遠心分離することによって調製することができる。血小板を、３０００×ｇでペレット化し、凝集を阻害するために、１ｍＭのＥＧＴＡおよび２０μｇ／ｍＬのアピラーゼを含む、緩衝化された生理食塩水で２回洗浄することができる。凝集を、室温で、０．２ｍｇ／ｍＬのヒトフィブリノゲンを補充した緩衝化された生理食塩水中で行うことができる。試験化合物および血小板を、９６ウェルの平底プレートで６０分間、予めインキュベートすることができる。０．３μＭ  ｈａＴＲＡＰまたは０．１Ｕ／ｍＬのトロンビンを天下し、Ｌａｂ  Ｌｉｎｅ  Ｔｉｔｅｒ  Ｐｌａｔｅ  Ｓｈａｋｅｒ（速度７）を用いて混合物を素早くボルテックスすることにより、凝集を開始することができる。パーセント凝集は、Ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒにおける４０５ｎｍでの光透過率の増加としてモニターすることができる。
【０４５９】
生体内抗腫瘍の手順：
ヌードマウスでのヒト胸部の癌腫モデルの試験を、Ｓ．Ｅｖｅｎ−Ｒａｍ  ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，４，８，ｐｐ．９０９−９１４（１９８８）に報告された手段に従って行う。
【０４６０】
トール様受容体
ヒトＴＬＲ９の阻害剤のための低分子のライブラリーの体外スクリーニング（およびＴＬＲ３に対しても同様）
初期スクリーニングについて候補小分子は、構造多様性に対して選択され、かつヒトにおけるバイオアベイラビリティーが証明された、特許切れの市販の８８０個の低分子ライブラリーから得ることができる（Ｐｒｅｓｔｗｉｃｋ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ）。ヒトＴＬＲ９（ｈＴＬＲ９）発現ベクターを使用して安定的にトランスフェクトしたヒト胚腎臓ＨＥＫ２９３細胞を、５０ｎＭ  ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６（すなわち、ＥＣ５０濃度のＯＤＮ  ２００６）の存在下で一晩インキュベートし、低分子候補化合物を、５×１０−７Ｍ〜５×１０−５Ｍの範囲の異なる濃度で選択することができる。ＴＬＲ９活性を、細胞に共トランスフェクトした６×ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター構築物の誘導期間においてアッセイすることができる。結果を、ＯＤＮ  ２００６の非存在下で測定した基準ラインのルシフェラーゼ活性に対する誘導倍率として測定し、ＥＣ５０濃度のＯＤＮ  ２００６単独の存在下における基準ラインに対する誘導倍率と比較することができる。この初期スクリーニングより、多くの低分子を、リード化合物と同定し、構造および活性により分類することができる。さらなるスクリーニングを、別のライブラリーまたはこの目的のために特別に調製したライブラリーから選択されたさらなる低分子を用いて、類似の様式で実行することができる。これらのアッセイのいくつかの結果を、図１、および表５〜１６に示す。
【０４６１】
この方法を、以下の通りにより詳細に記載する。それぞれの個別の細胞のクローン（ｈＴＬＲ３−ＮＦκＢ−２９３、ｈＴＬＲ７−ＮＦκＢ−２９３、ｈＴＬＲ８−ＮＦκＢ−２９３、およびｈＴＬＲ９−ＮＦκＢ−２９３）の細胞を計数し、刺激する前日に９６ウェルの細胞培養プレート中に１ウェル当たり１．５×１０４細胞で播種することができる。細胞を付着させるために、播種した後、５％  ＣＯ２加湿空気中で、３７℃で一晩インキュベートすることができる。
【０４６２】
それぞれの化合物のスクリーニングを、全ての受容体ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、およびＴＬＲ９に対して同時に行うことができる。１５個の試験化合物まで、３つの異なる最終濃度（０．５μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、および５０μｇ／ｍＬ）のそれぞれについて、それぞれ二重でアッセイしたものを、単一のマルチウェル培養プレート上で１６時間細胞刺激のために使用することができる。細胞に添加し得る前に、異なる試験化合物を調製するために４×最終濃度マスタープレートを作成することができる。
【０４６３】
ＴＬＲ３については、初期スクリーニングについて候補低分子を、ＨＥＫ２９３細胞が、ヒトＴＬＲ３（ｈＴＬＲ３）発現ベクターを用いて安定的にトランスフェクとされ得ることを除いて、アッセイで同定し、２．５μｇ／ｍＬ  ポリ（Ｉ：Ｃ）（ＴＬＲ３についてのＥＣ５０のポリ（Ｉ：Ｃ））の存在下で一晩インキュベートし、５×１０−７Ｍ〜５×１０−５Ｍの範囲の異なる濃度で低分子候補化合物を選択することができる。ＴＬＲ３活性を、細胞に共トランスフェクトした６×ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター構築物の誘導期間においてアッセイすることができる。結果を、ポリ（Ｉ：Ｃ）の非存在下で測定した基準ラインのルシフェラーゼ活性に対する誘導倍率として示すことができる。この初期スクリーニングより、多くの低分子を、リード化合物と同定し、構造および活性により分類することができる。さらなるスクリーニングを、別のライブラリーまたはこの目的のために特別に調製したライブラリーから選択されたさらなる低分子を用いて、類似の様式で実行することができる。評点付けは、上記の通りであるが、ＴＬＲ３に適合されるように報告される。
【０４６４】
対照を、細胞培養プレート上で各細胞のクローンに対して個別に二重として添加することができる。陽性対照を、以下の通りに使用することができる（最終濃度）：ｈＴＬＲ３−ＮＦκＢ−２９３について５０μｇ／ｍＬポリ（Ｉ：Ｃ）；ｈＴＬＲ７−ＮＦκＢ−２９３について８μＭ  レジキモッド（Ｒ８４８）；ｈＴＬＲ８−ＮＦκＢ−２９３について３０μＭ  Ｒ８４８；およびｈＴＬＲ９−ＮＦκＢ−２９３について２．５μＭ  ＣｐＧ−ＯＤＮ  ２００６。培地のみを、陰性対照として使用することができる。対照および低分子を添加した後、細胞のクローンを、さらに、ＥＣ５０濃度の適切な受容体特異的リガンドで刺激することができる。
【０４６５】
ＥＣ５０濃度の適切な受容体特異的なリガンドに応答する基準ラインを計算するために、ウェルＨ３およびウェルＨ６は、受容体特異的リガンドを受容しなかった。ウェルＨ２およびウェルＨ５（それぞれ、細胞およびＥＣ５０濃度の適切な受容体特異的リガンドを有する）の平均値を、ウェルＨ３およびウェルＨ６（それぞれ、細胞のみを有する）の平均で除算し、ＥＣ５０濃度の適切な受容体特異的リガンドに対する基準ラインの応答（すなわち、ルシフェラーゼ活性の誘導倍率）を得た。
【０４６６】
１６時間の刺激後、その上清を取り出し、細胞を、溶解緩衝剤で処理して、測定する前に−８０℃で保存することができる。
【０４６７】
選択した低分子の生体内スクリーニング
実験マウスに、公知の量の候補低分子およびＰＡＭＰまたはＣｐＧ核酸等の他の好適なＴＬＲリガンドの供給源を投与する。陰性対照のマウスに、ＰＡＭＰまたは例えば、ＣｐＧ核酸等の他の好適なＴＬＲリガンドの供給源のみを受容させる。適切な期間の後、血液試料を、対照マウスおよび実験マウスから得て、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等の好適な方法を用いてサイトカインの血清濃度について評価する。代替として、または加えて、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、両群の動物より単離して、例えば、蛍光細胞分析分離装置（ＦＡＣＳ）等の好適な技術を用いて活性化マーカーの発現について評価する。対照および実験の結果は、２つ１組の形態で比較する。陰性対照動物と比較して、実験動物における活性化マーカーの発現の減少、またはサイトカインの濃度の減少は、低分子が、ＴＬＲについてのリガンドに応答してＴＬＲ媒介性のシグナル伝達を阻害することを示す。陰性対照動物と比較して、実験動物における活性化マーカーの発現の増加、またはサイトカインの濃度の増加は、低分子が、ＴＬＲについてのリガンドに応答してＴＬＲ媒介性のシグナル伝達を促進することを示す。
【０４６８】
選択した小分子の生体内スクリーニング
実験マウスに、候補低分子を投与する。陰性対照マウスに、担体のみを投与する。低分子または担体のみを投与した後、ＰＢＭＣを単離し、次いで、低分子の非存在下で、ＰＢＭＣを刺激して、ＣＤ８６等の活性化マーカーを発現するか、あるいは、サイトカイン（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α）またはケモカイン（例えば、ＩＰ−１０））等の産物を分泌するような条件下において、体外でＣｐＧ核酸に曝露する。活性化マーカーの発現または生成物の分泌を、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡ、または他の好適な方法を用いて定量化し、比較は、低分子の有無にかかわらず、得られた結果の間でなされる。陰性対照動物と比較して、実験動物における活性化マーカーの発現の減少、またはサイトカインの濃度の減少は、低分子が、ＴＬＲについてのリガンドに応答してＴＬＲ媒介性のシグナル伝達を阻害することを示す。陰性対照動物と比較して、実験動物における活性化マーカーの発現の増加、またはサイトカインの濃度の増加は、低分子が、ＴＬＲについてのリガンドに応答してＴＬＲ媒介性のシグナル伝達を促進することを示す。
【０４６９】
本明細書に記載される例および実施形態は、例示目的に過ぎず、それらに照らして様々な修正または変更が当業者に示唆され、かつ本出願の精神および範囲、ならびに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが理解される。本明細書に引用される全ての刊行物、特許、および特許出願は、あらゆる目的のために全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【国際調査報告】
2012502037.tif 000100