(57)【要約】  本発明は、被験体のサンプルにおけるナトリウム利尿ペプチドとアディポネクチンの測定に基づき、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測する方法に関する。さらに本発明は、上記マーカーの測定に基づき、被験体におけるアディポネクチンレベルの増加を意図した治療に対して感受性である被験体を同定する方法に関する。本発明は、本発明の方法の実施に適したキットおよびデバイスをさらに包含する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測する方法であって、以下：
a) 該被験体のサンプル中でアディポネクチンの量を測定するステップ、
b) 該被験体のサンプル中でナトリウム利尿ペプチドの量を測定するステップ、
c) ステップa)およびb)で測定した量を参照量と比較するステップ、および
d) ステップc)で得た情報に基づき、被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測するステップ
を含んでなる、前記方法。
【請求項２】
前記被験体がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
サンプルが、血液、血清または血漿サンプルである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
アディポネクチンが高分子量アディポネクチンであり、および/またはナトリウム利尿ペプチドがNT-プロBNPである、請求項１〜３のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか1項に記載の方法であって、
a) 前記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多いナトリウム利尿ペプチドの量、および前記アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量は、前記被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが上昇していることを示し、
b) 前記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないナトリウム利尿ペプチドの量、および前記アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量は、前記被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが低下していることを示し、さらに
c) 前記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないまたは多いナトリウム利尿ペプチドの量、および前記アディポネクチンの参照量より少ないアディポネクチンの量は、前記被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが平均的であることを示す、
前記方法。
【請求項６】
(i) 前記アディポネクチンが高分子量アディポネクチンであり、アディポネクチンの参照量が2.4μg/ml、好ましくは2.4μg/ml +/-0.5もしくは+/-0.2μg/mlであり、および/または(ii) 前記ナトリウム利尿ペプチドがNT-プロBNPであり、NT-プロBNPの参照量が40pg/ml、好ましくは40pg/ml +/-5もしくは+/-3pg/mlである、請求項１〜５のいずれか1項に記載の方法。
【請求項７】
メタボリックシンドロームに罹患している被験体がアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られるかどうかを評価する方法であって、以下：
a) 該被験体のサンプル中でアディポネクチンの量を測定するステップ、
b) 該被験体のサンプル中でナトリウム利尿ペプチドの量を測定するステップ、
c) ステップa)およびb)で測定した量を参照量と比較するステップ、および
d) 該被験体が、該治療から利益を得られるかどうかを評価するステップ、
を含んでなる、前記方法。
【請求項８】
被験体中のアディポネクチンレベルを増加させ得る治療が、好ましくは内臓脂肪症の減少による少なくとも10％の体重減少、ACE阻害剤の投与、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体-α(PPARα)アゴニスト、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体-γ(PPARγ)アゴニストの投与、血糖降下薬の投与、リノール酸摂取の増加からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記治療がチアゾリジンジオンの投与である、請求項７または８のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１０】
メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測するためのデバイスであって、該被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とする、前記デバイス。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか1項に記載の方法の実施に適したキットであって、該キットが、該方法を実施するための説明書、ならびにメタボリックシンドロームに罹患している被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とする、前記キット。
【請求項１２】
被験体が、該被験体中のアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られるかどうかを評価するためのデバイスであって、メタボリックシンドロームに罹患している被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、被験体がアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られるかどうかを評価することを可能とする、前記デバイス。
【請求項１３】
請求項７または８のいずれか1項に記載の方法の実施に適したキットであって、該キットが、該方法を実施するための説明書、ならびにメタボリックシンドロームに罹患している被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、被験体がアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られるかどうかを評価することを可能とする、前記キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被験体のサンプルにおけるナトリウム利尿ペプチドとアディポネクチンの測定に基づき、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測する方法に関する。さらに本発明は、上記のマーカーの測定に基づき、被験体におけるアディポネクチンレベルの増加を意図した治療に対して感受性である被験体を同定する方法に関する。本発明は、本発明の方法の実施に適したキットおよびデバイスをさらに包含する。
【背景技術】
【０００２】
メタボリックシンドロームは、エネルギー摂取量とエネルギー貯蔵能との不均衡に関連し、内臓脂肪、肝臓、骨格筋、膵臓β細胞および血管壁における異所性脂質沈着を生じる（Smith (2006) Obesity Vol. 14 Suppl. 128S-134S）。これは、アテローム硬化性心血管疾患および2型糖尿病の発症を直接的に促進すると考えられる代謝性の原因のリスク相関因子の群である（Grundy et al. (2005) Circulation 112, 2735-2752）。
【０００３】
このシンドロームの主な根本的リスク因子は、おそらく、腹部肥満、インスリン抵抗性である。メタボリックシンドロームと関連する他の状態は、運動不足およびホルモン不均衡である。メタボリックシンドロームは、肥満患者および非肥満患者の両方で生じうる。非肥満患者では、内臓貯蔵所に脂質が貯蔵される。これらの貯蔵所がいっぱいになると、脂質は他の組織および器官にも貯蔵される。特に、内臓型肥満が存在する場合には、2型糖尿病および心血管疾患に進行するリスクが有意に高まる。一般に、メタボリックシンドロームは、糖尿病と心血管疾患の2つの世界的流行を促進していると考えられている。メタボリックシンドロームの罹患率は、先進工業国の人口の約20〜25％であると推測される。
【０００４】
メタボリックシンドロームの発症に関与する主なホルモンは、アディポネクチンである。アディポネクチンは、脂肪細胞によって分泌される最も豊富なアディポカインである。脂肪細胞は、遊離脂肪酸を放出し、アディポネクチンに加えて腫瘍壊死因子(TNF)α、レプチン、およびインターロイキンなどの幾つかのサイトカインを産生する内分泌細胞である。
【０００５】
一般的に、アディポネクチンは体をインスリンに対して感作させると推測されている。糖尿病およびメタボリックシンドロームを有する患者ではアディポネクチンレベルの低下が観察され、インスリン抵抗性において重要な役割を果たしていると考えられている(例えば、Hanら、Journal of the American College of Cardiology, Vol. 49(5)531-8を参照のこと)。
【０００６】
この10年間、ヒトにおいて、特に心血管疾患および2型糖尿病に関するアディポネクチンの代謝作用の広範囲な研究が行われてきた。しかし、アディポネクチンレベルと転帰との関係に関する科学文献中のデータは、極めて一貫性がない。一部の研究グループは、アディポネクチンレベルが低い被験体は心血管イベントに罹患するリスクが低下していると報告しているが、他の研究グループは、増加量のアディポネクチンを有する被験体は、心血管イベントのリスクが高まっていると報告している。例えば、Pischonら(JAMA, 2004; 291:1730-1737)は、6年間の追跡調査期間にわたって、高血漿アディポネクチンレベルが、以前に心血管疾患を患ったことのない人々の心筋梗塞のリスクの低下に関連していることを見出した。Kumadaら(Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2003; 23:85-89)の研究は、周知のCAD(冠動脈疾患)リスク因子とは無関係に、低アディポネクチン血症(4.0g/mlより少ない)を有する男性患者はCAD罹患率が2倍高まったことを示唆した。KumadaおよびPischonと一致して、Inoueら(Am J Cardiol. 2007 Aug 15;100(4):569-74)は、低HMW(高分子量)アディポネクチンレベルが、7年間の追跡調査期間中の心血管イベントを予測したことを示した。しかしこれとは反対に、Pilzら(Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism 91 (11):4277-4286)は、高アディポネクチンが、冠動脈疾患(CAD)を有する被験体の全死因・心血管および非心血管死亡を独立に予測することを示した。またTamuraら(Circ. J. 2007; 71: 623-630)も、高アディポネクチンレベルが、鬱血性心不全を有する患者の死亡の独立した予測因子であることを示した。Kistorpらの研究(Circulation, 2005;112, 1756-1762)は、アディポネクチンレベルとNT-プロBNPレベルの増加が、心不全患者の死亡の増加に関連していることを示唆した。さらに、Haugenらの研究(International Journal of Cardiology, 2008, 125: 216-219)は、重篤な心不全を有する70歳超の患者において、アディポネクチンレベルとNT-プロBNPレベルが増加したことを示した。また、Tsutamotoら(European Heart Journal, 2007, 28: 1723-1730)も、高分子量アディポネクチン、総アディポネクチンおよびNT-プロBNPが、慢性心不全を有する患者の独立した予測因子であることを示した。しかし、Lawlorらは、アディポネクチンが、女性の冠動脈性心疾患を全く予測しないことを示した(J Clin Endocrinol Metab 2005;90: 5677-5683)。
【０００７】
アディポネクチンレベルは肥満に伴って低下し、メタボリックシンドロームを有する患者では、健常人より著しく少ない(Salmenniemi Uら, "Multiple abnormalities in glucose and energy metabolism and coordinated changes in levels of adiponectin, cytokine, and adhesion molecules in subjects with metabolic syndrome" Circulation 2004;110:3842-3848)。多くの研究において、アディポネクチンは、メタボリックシンドロームの幾つかの要素と一貫して相関していた。腹部脂肪蓄積、血漿グルコース、ヘモグロビンA1cおよびインスリン抵抗性が増加する場合に、アディポネクチンレベルが低下することが示された(Lara-Castroら, Current Opinion in Lipidology, 2007, 18:263-270)。
【０００８】
アディポネクチンレベルの増加は、インスリン抵抗性、メタボリックシンドロームおよび2型糖尿病の治療のための有望な治療ストラテジーとして示唆されてきた(例えば、Kadowakiら, (2006) Adiponectin and adiponectin receptor in insulin resistance, diabetes, and the metabolic syndrome. J Clin Invest. 116(7): 1784-1792を参照のこと)。最近、チアゾリジンジオンが、アディポネクチンレベルを有意に増加させることが示された。この効果は、チアゾリジンジオンの薬物作用の重要な要素であり得る(Lara-Castroら,前掲を参照のこと)。しかし、患者が、アディポネクチンレベルの増加を目的とする治療から一般に利益を得るかどうかは未だにわかっていない。
【０００９】
ナトリウム利尿ペプチド、特に脳ナトリウム利尿ペプチドは、心疾患、特に慢性心不全において十分に確立されたマーカーである。一般に、BNPおよび/またはNT-プロBNPの濃度が高いほど転帰が悪い。WO 02/083913は、脳ナトリウム利尿ペプチド(BNP)およびその変異体が、既に心不全に罹患している患者の短期死亡率および罹患率を予測するのに使用し得ることを開示している。心血管疾患、特に心筋虚血を診断しようとする試みにおいて、WO 02/089657もまた、一旦診断された上記の疾患および障害の予後指標として使用し得る様々なバイオマーカーを開示している。特にBNPは好適なバイオマーカーとして言及されている。さらに、Hutflessらは、心臓手術後の患者の血液中のBNP濃度に基づいて、当該手術後30日の期間内の罹患率または死亡率を予測することが可能であることを示している(Hutfless 2004, Utility of B-type natriuretic peptide in predicting postoperative complications and outcomes in patients undergoing heart surgery. J Am Coll Cardiol 43: 1873-9). J Am Coll Cardiol 45: 1043-50)。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
死亡または心血管イベントのリスクが高まっている、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の早期同定が極めて望ましい。しかし、リスクがある被験体を同定するための信頼性の高い方法は、未だに報告されていない。
【００１１】
本発明の根底にある技術的課題は、上述のニーズを満たす手段および方法の提供として理解することができる。上記技術的課題は、特許請求の範囲および本明細書中の以下で特徴付けられる実施形態により解決される。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
従って、本発明は、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測する方法であって、以下：
a) 該被験体のサンプル中でアディポネクチンの量を測定するステップ、
b) 該被験体のサンプル中でナトリウム利尿ペプチドの量を測定するステップ、
c) ステップa)およびb)で測定した量を参照量と比較するステップ、および
d) ステップc)で得た情報に基づき、該被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測するステップ
を含んでなる、前記方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の方法は、好ましくはin vitroの方法である。さらに、前記方法は上記で明示的に述べたものに加えて他のステップを含み得る。例えば、別のステップは、サンプルの前処理、または上記方法で得られる結果の評価に関連するものであってよい。本発明の方法はまた、モニタリング、確認および下位分類のために使用することも可能である。本方法は、手動で行うか、および／または自動化により支援することができる。好ましくは、ステップ（a）、（b）、（c）および／または（d）は、その全体または一部を自動化によって、例えば、ステップ（a）および／または（b）での測定のための適切なロボットおよびセンサ装置、またはステップ（c）でのコンピュータで行う比較によって、支援することができる。
【００１４】
本明細書で用いる「被験体」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトに関する。しかしながら、本発明は、被験体がメタボリックシンドロームに罹患していることを想定している。
【００１５】
「メタボリックシンドローム」という用語は当業者に周知である。本明細書で用いるこの用語は、好ましくは、高トリグリセリド血症、腹部肥満、動脈性高血圧（arterial hypertony）、および種々の代謝障害（脂質異常症および高血糖など）を含むリスク因子群に関連する。当技術分野では、メタボリックシンドロームに関して、メタボリックシンドロームX、症候群X、インスリン抵抗性症候群、およびリーブン（Reaven）症候群などの種々の用語が知られている。メタボリックシンドロームを有する個体を同定するための種々の基準が存在することも知られている。本明細書で用いるメタボリックシンドロームは、好ましくはWHO（世界保健機関、Definition, Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus and its Complications; Part 1: Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus. Geneva: WHO Department of Noncommunicable Disease Surveillance; 1999も参照のこと）による基準、またはEGIR（インスリン抵抗性の欧州研究グループ）による基準、またはNECP（米国教育プログラム成人治療パネルIII、ATP III基準と称されることも多い）による基準、またはAHA/NHLBI基準（米国心臓協会/改訂NCEP）により定義される。これらのうち、メタボリックシンドロームの診断にはEGIR基準がより好ましく、ATP III基準が最も好ましい。上記機関により定義された種々の基準は当技術分野で公知である（概説としてScott M. Grundyら, Circulation;2005(112):2735-2752参照。その開示内容に関して全体を参照により本明細書に組み入れる）。本発明において、本明細書中で言及される様々な機関によって規定される特定の基準を満たす被験体は、メタボリックシンドロームに罹患しており、従ってメタボリックシンドロームを発症している。
【００１６】
WHOによる基準(1999年)は、被験体におけるメタボリックシンドロームの診断については、糖尿病、耐糖能異常、空腹時グルコース異常のうちの1つにより同定されるインスリン抵抗性の存在を必要とし、または正常な空腹時グルコースレベル（＜110 mg/dL）を示す被験体については、グルコース取り込みが、高インスリン血症の正常血糖状態において調査中のバックグラウンド集団の下位4分の1を下回ることを必要とする。インスリン抵抗性に加えて、以下の少なくとも2つの存在が必要である：
（a）血圧：≧140 mmHg 収縮期もしくは≧90 mmHg 拡張期（または高血圧の治療中）
（b）血漿トリグリセリド（TG）：≧1.695 mmol/L、および高密度リポタンパク質コレステロール（HDL-C）≦0.9 mmol/L（男性被験体）、≦1.0 mmol/L（女性被験体）
（c）ウエストとヒップの比率：＞0.90（男性被験体）、＞0.85（女性被験体）、および／またはボディマスインデックス（BMI）：＞30 kg/m2
（d）尿アルブミン排出率：≧20μg/分、またはアルブミンとクレアチニンの比率：≧30 mg/g。
【００１７】
米国国立コレステロール教育プログラム成人治療パネルIII（ATP-III/NCEP、2001年、以下も参照のこと：成人高血中コレステロールの検出、評価および治療に関する専門家パネル、「国立コレステロール教育プログラム(NCEP)の、成人高血中コレステロールの検出、評価および治療に関する専門家パネル(成人治療パネルIII)の第3報告要旨(成人治療パネルIII)」JAMA 2001;285:2486-97、または国立コレステロール教育プログラム(NCEP)の、成人高血中コレステロールの検出、評価および治療に関する専門家パネル(成人治療パネルIII)、「国立コレステロール教育プログラム(NCEP)の、成人高血中コレステロールの検出、評価および治療に関する専門家パネル(成人治療パネルIII)の第3報告、最終報告」Circulation 2002;106:3143-3421）は、メタボリックシンドロームの存在／診断に、以下のうちの少なくとも3つを必要としている：
（a）胴囲として示される腹部肥満：≧102 cm（男性被験体）、≧88 cm（女性被験体）
（b）血漿トリグリセリド：≧1.695 mmol/L（150 mg/dl）
（c）HDL-C：＜40 mg/dL（男性被験体）、＜50 mg/dL（女性被験体）
（d）血圧：≧130/≧85 mmHg
（e）空腹時血漿グルコース：≧6.1 mmol/L（110 mg/dl）。
【００１８】
インスリン抵抗性の欧州研究グループ（EGIR）は、メタボリックシンドロームの存在／診断に、非糖尿病個体群における空腹時インスリン値の上位25％として規定されるインスリン抵抗性と、以下のうちの2つ以上を必要としている（Balkau B, Charles MA、「WHO協議会による仮報告書に関するインスリン抵抗性の欧州研究グループ（EGIR）の意見」Diabet Med 1999;16:442-443も参照のこと）：
（a）中心性肥満：胴囲≧94 cm（男性）、≧80 cm（女性）、および／またはボディマスインデックス（BMI）＞30 kg/m2
（b）血漿トリグリセリド：≧150 mg/dLおよび／またはHDL-C：＜39 mg/dL（または脂質異常症の治療中）
（c）高血圧：血圧≧140/90 mm Hg（または降圧剤の投薬治療中）
（d）空腹時血漿グルコース：≧6.1 mmol/L。
【００１９】
AHA/NHLBI基準(米国心臓協会/改訂NCEP、以下も参照のこと：Grundy SM、Brewer HB、Cleeman JI、Smith SC、Lenfant D(会議参加者)、「メタボリックシンドロームの定義：定義に関連する科学的問題に関する国立心臓・肺・血液研究所/米国心臓協会の会議の報告」Circulation. 2004;109:433-438）は、メタボリックシンドロームの存在／診断に、以下のうちの少なくとも3つを必要としている：胴囲の増加（男性：102 cm以上、女性：88 cm以上）；高トリグリセリド（150 mg/dl以上）；低HDLコレステロール（男性：40 mg/dL未満、女性50 mg/dL未満）；高血圧（130/85 mm Hg以上、または高血圧用医薬の使用）；高空腹時グルコース（100 mg/dL（5.6 mmol/L）以上、または高血糖用医薬の使用）。
【００２０】
本明細書で用いる「予測する」という用語は、メタボリックシンドロームに罹患している被験体が、将来的に規定の時間窓(予測窓)内に死亡する(例えば心不全による死亡)、および/または心血管イベント(好ましくは急性冠症候群(ACS)などの急性心血管イベント)を発症する確率を評価することを指す。予測窓は、被験体が、予測確率により心血管イベントを発症するか、または死亡するであろう区間である。この予測窓は、本発明の方法による分析時点の被験体の全余命であってよい。しかし好ましくは、予測窓は、本発明の方法を実施した後(さらに好ましくまた正確には、本発明の方法による分析対象のサンプルを採取した後)1ヶ月、6ヶ月、または1、2、3、4、5、8または10年間の区間である。最も好ましくは、上記の予測窓は、8年間の区間である。当業者であれば理解されるように、このような評価は通常、分析対象の被験体の100％について正確であることは意図されていない。しかし、この用語は、上記の評価が、統計的に有意な割合の分析対象の被験体に当てはまることを必要とする。当業者であれば、種々の周知の統計学的評価ツール、例えば、信頼区間の決定、p値の決定、スチューデントのt検定、マン・ホイットニー検定などを用いて、割合が統計学的に有意であるかどうかを苦もなく決定することができる。詳細は、Dowdy and Wearden、Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983に見い出される。好ましい信頼区間は、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも97％、少なくとも98％、または少なくとも99％である。p値は、好ましくは、0.1、0.05、0.01、0.005、または0.0001である。好ましくは、本発明により想定される確率は、所与のコホートの被験体のうちの少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％または少なくとも90％について、正しく予測することができる。
【００２１】
本明細書で用いる「死亡(mortality)」という用語は、任意の原因による（好ましくは心血管合併症または心血管イベントによる）死亡に関する。本明細書で用いる「心血管イベント」という用語は、心血管系の任意の障害(好ましくは任意の急性心血管イベントなど)を指す。急性心血管イベントは、好ましくは安定狭心症(SAP)または急性冠症候群(ACS)である。ACS患者は、不安定狭心症(UAP)または心筋梗塞(MI)を示す可能性がある。MIは、ST上昇型MI(STEMI)または非ST上昇型MI(NSTEMI)であり得る。本明細書で用いるNSTE-ACSは、UAPおよびNSTEMIを包含する。MIの発生後、左心室機能障害(LVD)、心不全の発症が起こる可能性があり、または死亡する可能性すらある。さらに好ましい心血管イベントは、心臓徐脈性-または頻脈性不整脈(突然心臓死および脳卒中(脳血管イベントまたは脳血管発作)を含む)を包含する。また「死亡率(mortality)」は、死亡の割合または所与の被験体集団に対する死亡数の比も指し得る。
【００２２】
本明細書で用いる「死亡および/または心血管イベントのリスクを予測する」という表現は、本発明の方法による分析対象の被験体が、急性心血管イベントの発症もしくは死亡のリスクが正常な、すなわち平均的である集団の被験体群、またはリスクが上昇している被験体群、またはリスクが低下している群のいずれかに割り当てられるかどうかを意味する。本発明により言及される「リスクが上昇している」とは、好ましくは、ある被験体について、所定の予測窓内の心血管イベントを発症するリスクまたは死亡のリスクが、(メタボリックシンドロームを有する)被験体集団中の心血管イベントまたは心臓死亡の平均的リスクに対して有意に上昇している(すなわち有意に増加している)ことを意味する。本発明により言及される「リスクが低下している」とは、好ましくは、ある被験体について、所定の予測窓内の心血管イベントを発症するリスクまたは死亡のリスクが、メタボリックシンドロームを有する被験体集団中の心血管イベントまたは心臓死亡の平均的リスクに対して有意に低下していることを意味する。特に、リスクの有意な増加または低下は、予後について有意であると考えられるサイズのリスクの増加または低下であり、特にこの増加または低下は統計的に有意であると考えられる。「有意な」および「統計的に有意な」という用語は、当業者に公知である。このように、リスクの増加または低下が有意である、あるいは統計的に有意であるかどうかは、当業者が様々な周知の統計的評価ツールを用いて苦もなく決定することができる。
【００２３】
好ましくは、8年間の予測窓について、平均死亡リスクは10.0％〜19.0％、より好ましくは 12.0％〜17.0％、最も好ましくは14.0％〜16.0％である。本明細書で用いる「死亡リスクが低下している」は、好ましくは8年間の予測窓について、10％未満のリスク、またより好ましくは5.0％〜10.0％のリスクに関することが好ましい。本明細書で用いる「死亡リスクが上昇している」従って「増加している」とは、好ましくは、8年間の予測窓について、19％超、さらにより好ましくは20％超、および最も好ましくは20.0％〜30.0％のリスクに関する。
【００２４】
「サンプル」という用語は、体液サンプル、分離された細胞のサンプル、または組織もしくは器官に由来するサンプルを指す。体液サンプルは、周知技術によって採取することが可能であり、好ましくは血液、血漿、血清、または尿のサンプル、より好ましくは血液、血漿または血清のサンプルを含む。組織または器官サンプルは、例えば生検によって、任意の組織または器官から得ることができる。分離細胞は、遠心またはセルソーティングなどの分離技術によって、体液または組織もしくは器官から得ることができる。好ましくは、細胞、組織または器官サンプルは、本明細書中で言及されるペプチドを発現または産生する細胞、組織または器官から採取される。
【００２５】
「ナトリウム利尿ペプチド」という用語は、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ANP）型および脳性ナトリウム利尿ペプチド（BNP）型のペプチド、ならびに同じ予測可能性を有するそれらの変異体を含む。本発明によるナトリウム利尿ペプチドはANP型およびBNP型のペプチドとそれらの変異体を含む（例えば、Bonow, 1996, Circulation 93: 1946-1950を参照）。ANP型ペプチドはプレ-プロANP、プロANP、NT-プロANP、およびANPを含む。BNP型ペプチドはプレ-プロBNP、プロBNP、NT-プロBNP、およびBNPを含む。プレ-プロペプチド(プレ-プロBNPの場合、134アミノ酸)は短いシグナルペプチドを含み、これがプロペプチド(プロBNPの場合、108アミノ酸)を酵素的に切断して放出する。このプロペプチドはさらにN末端プロペプチド（NT-プロペプチド、NT-プロBNPの場合、76アミノ酸）および活性ホルモン（BNPの場合、32アミノ酸、ANPの場合、28アミノ酸）に切断される。好ましくは、本発明によるナトリウム利尿ペプチドは、NT-プロANP、ANPであり、より好ましくは、NT-プロBNP、BNP、およびそれらの変異体である。ANPおよびBNPは活性ホルモンでありかつそれぞれの不活性対応物であるNT-プロANPおよびNT-プロBNPより短い半減期を有する。BNPは血液中で代謝されるが、NT-プロBNPはインタクトな分子として血液中で循環し、それ自体は腎臓で排出される。NT-プロBNPのin-vivo半減期は、20分であるBNPの半減期より120分長い（Smith 2000, J Endocrinol. 167: 239-46）。NT-プロBNPの分析前状態はより頑強で、サンプルの中央実験室への輸送が容易にできる（Mueller 2004, Clin Chem Lab Med 42: 942-4.）。血液サンプルは室温にて数日間貯蔵することができ、または回収ロスなく郵送もしくは配送することができる。対照的に、BNPを室温または摂氏4℃において48時間保存した場合には、少なくとも20％の濃度ロスが生じる(Mueller 前掲；Wu 2004, Clin Chem 50: 867-73.)。このため、時間経過または目的の特性に応じて、ナトリウム利尿ペプチドの活性型または不活性型のいずれかの測定が有利でありうる。本発明による最も好ましいナトリウム利尿ペプチドは、NT-プロBNPまたはそれらの変異体である。上記に簡単に述べたように、本発明により言及されるヒトNT-プロBNPは、ヒトNT-プロBNP分子のN末端部分に対応する、好ましくは76アミノ酸長を含むポリペプチドである。ヒトBNPおよびNT-プロBNPの構造は、先行技術（例えば、WO 02/089657、WO 02/083913、またはBonow 前掲）に既に詳細に記載されている。好ましくは、本明細書で用いる「ヒトNT-プロBNP」は、EP 0 648 228 B1に開示されたヒトNT-プロBNPである。これらの先行技術文献は、そこに開示されたNT-プロBNPおよびその変異体の特定の配列について参照により本明細書に組み入れるものとする。本発明により言及されるNT-プロBNPは、上述したヒトNT-プロBNPの上記特定の配列のアレル変異体および他の変異体をさらに包含する。具体的には、ヒトNT-プロBNPと（好ましくはヒトNT-プロBNPの全長にわたって）アミノ酸レベルで好ましくは少なくとも50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、または99％同一の変異体ポリペプチドが想定される。2つのアミノ酸配列間の同一性の程度は、当技術分野で周知のアルゴリズムによって決定することができる。好ましくは、同一性の程度は2つの最適にアラインメントさせた配列を比較ウインドウにわたって比較することによって決定され、その際、比較ウインドウ中のアミノ酸配列の断片は最適なアライメント用の参照配列（付加もしくは欠失を含んでいない）と比較して、付加もしくは欠失（例えば、ギャップもしくはオーバーハング）を含んでいてもよい。パーセンテージは、2つの配列の両方で同一のアミノ酸残基が存在する位置の数を決定して一致している位置の数を求め、一致している位置の数を比較ウインドウ中の位置の総数で割り、その結果に100を掛けて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出される。比較のための配列の最適なアライメントは、SmithおよびWatermannのローカルホモロジーアルゴリズム（Add. APL. Math. 2:482(1981)）によって、NeedlemanおよびW
unschのホモロジーアライメントアルゴリズム（J. Mol. Biol. 48:443(1970)）によって、PearsonおよびLipmanの類似性探索法（Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85:2444(1988)）によって、これらのアルゴリズムのコンピュータによる実施（Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group(GCG), 575 Science Dr., Madison, WI中のGAP、BESTFIT、BLAST、PASTA、およびTFASTA）によって、または目視検査によって行うことができる。比較のために2つの配列が同定されている場合は、GAPおよびBESTFITを用いてそれらの最適なアライメントを決定することによって、同一性の程度を求めることが好ましい。好ましくは、ギャップウエイトについては5.00、ギャップウエイトレングスについては0.30のデフォルト値が使用される。上記変異体は、アレル変異体、または任意の他の種の特定のホモログ、パラログもしくはオーソログであってもよい。さらに、診断手段によりまたはそれぞれの全長ペプチドに対するリガンドにより依然として認識されるタンパク質分解生成物も実質的に類似し、また想定される。また、ヒトNT-プロBNPのアミノ酸配列と比較してアミノ酸欠失、置換および／または付加を有する変異体ポリペプチドも、上記ポリペプチドがNT-プロBNPの特性を有する限りにおいて、包含される。本明細書において言及されるNT-プロBNPの特性は免疫学的および／または生物学的特性である。また、生物学的特性は、NT-プロBNPまたはプレプロBNP前駆体ポリペプチドの特性およびこれらの他のサブフラグメントの特性も包含する。従って、変異体NT-プロBNPは、上記に特定したNT-プロBNPを生じさせるプレプロBNP分子と本質的に同じ生物学的特性を有するプロBNPまたはプレプロBNP分子のN末端フラグメントを含む。サブフラグメントの生物学的特性は、成熟BNP分子の、血管弛緩活性を含む生物学的活性を包含する。このように、変異体NT-プロBNPは、変異体プロBNPまたはプレプロBNPから誘導することが可能であり、これらは、一方では変異体NT-プロBNPを生じさせ、また他方では少なくとも血管弛緩活性を有する変異体成熟型BNPを生じさせる。
【００２６】
変異体が血管弛緩活性を有するか有さないかは、当技術分野で周知の方法によって決定することができる(例えば、El Bardeiら, Planta Med 2003; 69: 75-77またはMorelら, J Cardiovasc. Pharmacol 1994; 24: 524 ffを参照のこと)。好ましくは、血管弛緩活性は、上記変異体の存在下および非存在下で大動脈収縮を測定することによって評価し得る。大動脈収縮および、従って血管弛緩活性は、好ましくは以下のとおりに評価される：大動脈切片(好ましくはラットまたはウサギ由来)を、95％ O2、5％ CO2のガス混合物で泡立てた生理溶液(NaCl：122mM；KCl 5.9mM；NaHCO3：15mM；MgCl2 1.25mM；CaCl2、1.25mM；グルコース11mM)を満たした臓器バス中で懸濁し、37℃に保つ。生理溶液を脱分極100mM KCl溶液(NaCl 27mM；KCl 100mM；NaHCO3 15mM、MgCl2 1.25mM；CaCl2 1.25mM；グルコース11mM)に交換することによって収縮を引き起こす。試験対象の変異体の存在下で引き起こされた収縮の振幅を、その後、試験対象の変異体の非存在下で測定した応答と比較する。参照化合物としてベラパミルを使用することができる。
【００２７】
好ましくは、NT-プロBNP変異体は、NT-プロBNPの免疫学的特性と同等の免疫学的特性（すなわちエピトープ組成）を有する。このため、上記変異体はナトリウム利尿ペプチドの量の測定に用いる上記の手段またはリガンドにより認識可能でなければならない。NT-プロBNPの生物学的および／または免疫学的特性は、好ましくはKarlら（Karl 1999, Scand J Clin Invest 230：177-181）またはYeoら（Yeo 2003, Clinica Chimica Acta 338：107-115）に記載のアッセイにより検出することができる。また、変異体には、グリコシル化ペプチドなどの翻訳後修飾ペプチドも含まれる。さらに、本発明による変異体は、サンプルの採取後に修飾された、例えば、標識（特に放射性または蛍光標識）とペプチドとの共有結合または非共有結合により修飾されたペプチドまたはポリペプチドでもある。
【００２８】
アディポネクチンは、脂肪細胞によって分泌されるポリペプチド(幾つかの公知のアディポサイトカインのうちの1つ)である。当技術分野において、アディポネクチンはAcrp30およびapM1と呼ばれることも多い。アディポネクチンは、最近、抗炎症活性、抗動脈硬化活性、メタボリックシンドロームの予防、およびインスリン感作活性などの様々な活性を有することが示されている。アディポネクチンは単一の遺伝子によってコードされ、244アミノ酸を有し、分子量は約30キロダルトンである。成熟ヒトアディポネクチンタンパク質は、全長アディポネクチンのアミノ酸19〜244を包含する。球状ドメインは、全長アディポネクチンのアミノ酸107〜244を包含すると考えられる。アディポネクチンポリペプチドの配列は当技術分野で周知であり、例えば、WO2008/084003に開示されている。
【００２９】
アディポネクチンは、自身をさらに大きな構造中に結合させる。3つのアディポネクチンポリペプチドが共に結合し、ホモ3量体を形成する。これらの3量体は共に結合し、6量体または12量体を形成する。アディポネクチンは血漿中に様々な多量体として存在し、そのコラーゲンドメインを介して結合して3つの主要なオリゴマー形態：低分子量(LMW)3量体、中分子量(MMW)6量体、および高分子量(HMW)12〜18量体アディポネクチンを生成することが知られている(Kadowakiら(2006) Adiponectin and adiponectin receptors in insulin resistance, diabetes, and the metabolic syndrome. J Clin Invest. 116(7): 1784-1792；Rexford S. Ahima, Obesity 2006;14:242S-249S)。アディポネクチンは、アテローム性動脈硬化症に対する保護活性、インスリン感受性の向上、および肝線維症の予防などの幾つかの生理作用を有することが報告されている。
【００３０】
本明細書で用いる「アディポネクチン」は、好ましくは低分子量アディポネクチン、中分子量アディポネクチン、より好ましくは総アディポネクチン、また最も好ましくは高分子量アディポネクチンに関する。「高分子量アディポネクチン(12〜18量体アディポネクチン、好ましくは18量体アディポネクチン)」、「低分子量および中分子量アディポネクチン」および「総アディポネクチン」という用語は、当業者に理解される。好ましくは、上記のアディポネクチンはヒトアディポネクチンである。アディポネクチンの測定方法は、例えば、US 2007/0042424 A1ならびにWO2008/084003に開示されている。好ましくは、アディポネクチンの量は、血清サンプル中で測定される。
【００３１】
本発明により言及されるアディポネクチンは、上述したヒトアディポネクチンの上記特定の配列のアレル変異体および他の変異体をさらに包含する。具体的には、ヒトアディポネクチンと（（好ましくはヒトアディポネクチンの全長にわたって））、アミノ酸レベルで好ましくは少なくとも50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、または99％同一の変異体ポリペプチドが想定される。2つのアミノ酸配列間の同一性の程度は、当技術分野で周知のアルゴリズムによって決定することができる。好ましくは、同一性の程度は2つの最適にアラインメントさせた配列を比較ウインドウにわたって比較することによって決定され、その際、比較ウインドウ中のアミノ酸配列の断片は最適なアライメント用の参照配列（付加もしくは欠失を含んでいない）と比較して、付加もしくは欠失（例えば、ギャップもしくはオーバーハング）を含んでいてもよい。パーセンテージは2つの配列の両方で同一のアミノ酸残基が一致している位置の数を求め、一致している位置の数を比較ウインドウ中の位置の総数で割り、その結果に100を掛けて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出される。比較のための配列の最適なアライメントは、SmithおよびWatermannのローカルホモロジーアルゴリズム（Add. APL. Math. 2:482(1981)）によって、NeedlemanおよびWunschのホモロジーアライメントアルゴリズム（J. Mol. Biol. 48:443(1970)）によって、PearsonおよびLipmanの類似性探索法（Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85:2444(1988)）によって、これらのアルゴリズムのコンピュータによる実施（Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group(GCG), 575 Science Dr., Madison, WI中のGAP、BESTFIT、BLAST、PASTA、およびTFASTA）によって、または目視検査によって行うことができる。比較のために2つの配列が同定されている場合は、GAPおよびBESTFITを用いてそれらの最適なアライメントを決定することによって同一性の程度を求めることが好ましい。好ましくは、ギャップウエイトについては5.00、ギャップウエイトレングスについては0.30のデフォルト値が使用される。上記変異体は、アレル変異体、または任意の他の生物種特異的なホモログ、パラログもしくはオーソログであってもよい。診断手段によりまたはそれぞれの全長ペプチドに対するリガンドにより依然として認識されるタンパク質分解生成物も実質的に類似し、また想定される。また、ヒトアディポネクチンのアミノ酸配列と比較してアミノ酸欠失、置換および／または付加を有する変異体ポリペプチドも包含される。好ましくは、アディポネクチン変異体は、アディポネクチン特性（好ましくは、公知の動物モデル中で試験し得る、脂肪組織を減少させる能力を含む）を有する。
【００３２】
アディポネクチンの変異体が脂肪組織を減少させることができるかどうかは、例えば以下のとおりに試験される：試験対象の変異体を、脂肪細胞、脂肪細胞を含む組織、または非ヒト動物に投与することができる。好ましくは、アディポネクチンの変異体は、上記の脂肪細胞、組織または非ヒト動物に含まれる脂肪の量が、上記変異体と接触したことのない対照脂肪細胞、対照組織または非ヒト動物と比較して減少した場合、脂肪組織を減少させることができる。好ましくは、非ヒト動物は、上記変異体が脂肪組織を減少させるかどうかを決定した後、屠殺される(このため、かかる決定はヒトまたは動物の体の治療方法であるとは見なされないことが理解される)。
【００３３】
本明細書において言及されるアディポネクチンもしくはナトリウム利尿ペプチドまたは任意の他のペプチドもしくはポリペプチドの量の測定は、その量または濃度を、好ましくは半定量的または定量的に測定することに関する。測定は、直接的または間接的に行うことができる。直接的な測定は、ペプチドもしくはポリペプチド自体から得られ、その強度がサンプル中に存在するペプチド分子数と直接相関するシグナルに基づいて、ペプチドもしくはポリペプチドの量または濃度を測定することに関する。（本明細書中で強度シグナルと呼ばれることもある）そのようなシグナルは、例えばペプチドまたはポリペプチドの特定の物理的または化学的特性の強度値を測定することによって得ることができる。間接的な測定は、二次成分（即ちペプチドもしくはポリペプチドそれ自体ではない成分）または生物学的な読み取り系、例えば測定可能な細胞応答、リガンド、標識もしくは酵素反応生成物から得られるシグナルの測定を含む。
【００３４】
本発明によれば、ペプチドまたはポリペプチドの量の測定は、サンプル中のペプチドの量を測定するためのあらゆる公知の手段によって達成することができる。この手段は、種々のサンドイッチ、競合または他のアッセイ形式において標識した分子を利用し得るイムノアッセイのデバイスおよび方法を含む。該アッセイは、ペプチドまたはポリペプチドの存在または非存在を示すシグナルを生成する。さらにシグナル強度は、好ましくは、サンプル中に存在するポリペプチドの量と直接的にまたは間接的に（例えば反比例で）相関し得る。他の好適な方法は、ペプチドまたはポリペプチドに特有の物理的または化学的特性（例えばそれらの正確な分子量またはNMRスペクトル）を測定することを含む。上記の方法は、好ましくは、バイオセンサー、イムノアッセイと連結した光学装置、バイオチップ、質量分析計、NMR分析器またはクロマトグラフィー装置等の分析装置を含む。さらに、方法として、マイクロプレートELISAに基づく方法、完全に自動化またはロボット化したイムノアッセイ（例えばElecsysTM分析器を利用できる）、CBA（酵素的コバルト結合アッセイ法（enzymatic Cobalt Binding Assay）、例えばRoche-HitachiTM分析器を利用できる）、およびラテックス凝集アッセイ（例えばRoche-HitachiTM分析器を利用できる）が挙げられる。
【００３５】
好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドの量の測定は、（a）細胞応答の強度がペプチドまたはポリペプチドの量を示す細胞応答を誘導することができる細胞に、該ペプチドまたはポリペプチドを適切な時間にわたり接触させるステップと、（b）その細胞応答を測定するステップを含む。細胞応答を測定するためには、好ましくは、サンプルまたは処理したサンプルを、培養細胞に加え、内部または外部の細胞応答を測定する。その細胞応答としては、測定可能なレポーター遺伝子の発現、または、例えばペプチド、ポリペプチドもしくは小分子の物質などの分泌が挙げられる。その発現または物質は、ペプチドまたはポリペプチドの量と相関する強度シグナルを生じるはずである。
【００３６】
また好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドの量の測定は、サンプル中のペプチドまたはポリペプチドから得られる特有の強度シグナルを測定するステップを含む。上記のとおり、このようなシグナルは、質量スペクトルで観察されるペプチドもしくはポリペプチドに特有のm/z変数、またはペプチドもしくはポリペプチドに特有のNMRスペクトルで観察されるシグナル強度であってもよい。
【００３７】
ペプチドまたはポリペプチドの量の測定は、好ましくは、（a）該ペプチドを特異的リガンドに接触させるステップ、（b）（場合により）非結合リガンドを除去するステップ、（c）結合リガンドの量を測定するステップを含んでいてもよい。その結合リガンドは強度シグナルを生じるだろう。本発明による結合は、共有結合と非共有結合の両方を含む。本発明によるリガンドは、任意の化合物、例えば本明細書中に記載のペプチドまたはポリペプチドに結合する、ペプチド、ポリペプチド、核酸または小分子であり得る。好ましいリガンドとしては、抗体、核酸、ペプチドまたはポリペプチド、例えば、該ペプチドまたはポリペプチドの受容体または結合パートナー、および該ペプチドに対する結合ドメインを含むそれらの断片、ならびにアプタマー（例えば核酸またはペプチドアプタマー）が挙げられる。このようなリガンドを調製する方法は当技術分野で周知である。例えば、好適な抗体またはアプタマーの同定および作製は、市販の業者からも提供されている。当業者は、より高い親和性または特異性を有するかかるリガンドの誘導体を開発する方法に精通している。例えば、ランダム変異を核酸、ペプチドまたはポリペプチドに導入することができる。その後これらの誘導体は、例えばファージディスプレイ法等の当技術分野で公知のスクリーニング法により、結合について試験することができる。本明細書中で言及される抗体は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方、ならびに抗原またはハプテンに結合し得るFv、FabおよびF(ab)2フラグメント等のそのフラグメントも含む。また本発明は、一本鎖抗体、および所望の抗原特異性を示す非ヒトドナー抗体のアミノ酸配列をヒトアクセプター抗体の配列と組み合わせたヒト化ハイブリッド抗体も含む。ドナー配列は通常、少なくとも抗原に結合するドナーのアミノ酸残基を含むが、他の構造的および／または機能的に適切なドナー抗体のアミノ酸残基を含んでもよい。このようなハイブリッドは、当技術分野で周知の種々の方法により調製することができる。好ましくは、リガンドまたは薬剤がペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合する。本発明による「特異的な結合」は、そのリガンドまたは薬剤が、分析対象サンプル中に存在する別のペプチド、ポリペプチドまたは物質には実質的に結合（「交差反応」）しないはずであることを意味する。好ましくは、特異的に結合するペプチドまたはポリペプチドは、任意の他の関連ペプチドまたはポリペプチドよりも、少なくとも3倍、より好ましくは少なくとも10倍、またさらにより好ましくは少なくとも50倍高い親和性で結合するはずである。非特異的結合は、例えばウェスタンブロット上のサイズにより、またはサンプル中の比較的高い存在量により、依然として明確に区別および測定し得る場合は許容することができる。リガンドの結合は、当技術分野で公知の任意の方法によって測定することができる。好ましくは、該方法は、半定量的または定量的である。好適な方法を以下に記載する。
【００３８】
第一に、リガンドの結合は、例えばNMRまたは表面プラズモン共鳴によって直接測定することができる。
【００３９】
第二に、リガンドが、対象とするペプチドまたはポリペプチドの酵素活性の基質としても機能する場合は、酵素反応生成物を測定することができる（例えばプロテアーゼの量は、例えばウェスタンブロットで、切断された基質の量を測定することによって測定することができる）。あるいは、リガンドが酵素特性自体を示す場合があり、「リガンド／ペプチドもしくはポリペプチド」複合体、またはペプチドもしくはポリペプチドと結合したリガンドを、それぞれ、強度シグナルの発生による検出を可能とする好適な基質と接触させることができる。酵素反応生成物の測定については、好ましくは基質の量は飽和している。基質は、反応前に検出可能な標識で標識化してもよい。好ましくは、サンプルを適切な時間にわたり、基質と接触させる。適切な時間は、検出可能な、好ましくは測定可能な量の生成物が生成されるのに必要な時間を指す。生成物の量を測定する代わりに、所定の（例えば検出可能な）量の生成物が出現するために必要な時間を測定することができる。
【００４０】
第三に、リガンドの検出および測定を可能とする標識に、リガンドを共有結合または非共有結合により結合させることができる。標識は、直接的または間接的な方法により行うことができる。直接標識は、リガンドに標識を直接（共有結合または非共有結合により）結合させることを含む。間接標識は、一次リガンドに二次リガンドが（共有結合または非共有結合により）結合することを含む。二次リガンドは、一次リガンドに特異的に結合するはずである。上記の二次リガンドは、好適な標識と結合する、および／またはその二次リガンドに結合する三次リガンドの標的（受容体）となることができる。二次、三次またはさらに高次のリガンドの使用は、シグナルを増強するために用いられる場合が多い。好適な二次および高次のリガンドとしては、抗体、二次抗体、および周知のストレプトアビジン-ビオチン系（Vector Laboratories, Inc.）が挙げられる。リガンドまたは基質は、当技術分野で公知のタグの1つ以上で「タグ化」してもよい。このようなタグは、より高次のリガンドの標的となり得る。好適なタグとしては、ビオチン、ジゴキシゲニン、Hisタグ、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ、FLAG、GFP、mycタグ、A型インフルエンザウイルスヘマグルチニン（HA）、マルトース結合タンパク質等が挙げられる。ペプチドまたはポリペプチドの場合は、タグは、好ましくはN末端および／またはC末端にある。好適な標識は、適切な検出法によって検出可能な全ての標識である。典型的な標識としては、金粒子、ラテックスビーズ、アクリダンエステル、ルミノール、ルテニウム、酵素活性標識、放射性標識、磁性標識（例えば、常磁性および超常磁性標識等の「磁性ビーズ」）、および蛍光標識が挙げられる。酵素活性標識としては、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼおよびそれらの誘導体が挙げられる。検出用の好適な基質としては、ジアミノベンジジン（DAB）、3,3'-5,5'-テトラメチルベンジジン、NBT-BCIP（Roche Diagnosticsの既製のストック溶液として入手可能な、4-ニトロブルーテトラゾリウムクロリドおよび5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-ホスフェート）、CDP-StarTM（Amersham Biosciences）、ECFTM（Amersham Biosciences）が挙げられる。好適な酵素と基質の組み合わせによって、当技術分野で公知の方法により（例えば、感光膜または好適なカメラシステムを用いて）測定可能な着色反応生成物、蛍光または化学発光を生じさせることができる。酵素反応の測定については、上述の基準を同様に適用する。典型的な蛍光標識としては、蛍光タンパク質（例えばGFPおよびその誘導体）、Cy3、Cy5、テキサスレッド、フルオレセインおよびAlexa色素（例えばAlexa 568）が挙げられる。他の蛍光標識は、例えばMolecular Probes（Oregon）から入手可能である。蛍光標識として量子ドットの使用も考えられる。典型的な放射性標識としては、35S、125I、32P、33P等が挙げられる。放射性標識は、任意の公知の適切な方法(例えば感光膜またはホスファーイメージャー（phosphor imager）)によって検出することができる。本発明による好適な測定法として、沈降（特に免疫沈降）、電気化学発光（電気的に生成された化学発光）、RIA（ラジオイムノアッセイ）、ELISA（酵素結合免疫吸着アッセイ）、サン��イッチ酵素免疫法、電気化学発光サンドイッチイムノアッセイ（ECLIA）、解離増感ランタニド蛍光イムノアッセイ（dissociation-enhanced lanthanide fluoro immuno assay （DELFIA））、シンチレーション近接アッセイ（SPA）、比濁法、ネフェロメトリ、ラテックスにより増感される比濁法もしくはネフェロメトリ、または固相免疫法も挙げられる。当技術分野で公知の別の方法（例えばゲル電気泳動、二次元ゲル電気泳動、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）、ウェスタンブロッティングおよび質量分析法）は、単独で、または上記の標識化もしくは他の検出法と組み合わせて用いることができる。
【００４１】
ペプチドまたはポリペプチドの量は、また好ましくは、次のように測定することができる：(a)上記で特定したペプチドまたはポリペプチド用のリガンドを含む固体担体を、当該ペプチドまたはポリペプチドを含むサンプルと接触させ、(b)担体に結合しているペプチドまたはポリペプチドの量を測定する。好ましくは、核酸、ペプチド、ポリペプチド、抗体、およびアプタマーからなる群より選択されるリガンドは、好ましくは、固定化形態で固体担体上に存在する。固体担体を製造するための材料は、当技術分野で周知であり、特に、市販のカラム材料、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁性ビーズ、コロイド金属粒子、ガラスおよび／またはシリコンのチップおよび表面、ニトロセルロースストリップ、膜、シート、デュラサイト（duracyte）、反応トレーのウェルおよび壁、プラスチックチューブなどが挙げられる。リガンドまたは薬剤は、多種多様な担体に結合可能である。周知の担体の例としては、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、デキストラン、ナイロン、アミロース、天然セルロースおよび変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびにマグネタイトが挙げられる。担体の性質は、本発明の目的のためには、可溶性または不溶性のいずれも可能である。上記のリガンドの固定／固定化に好適な方法は周知であり、例えば限定されるものではないが、イオン性相互作用、疎水性相互作用、共有結合相互作用などが挙げられる。本発明によるアレイとして「懸濁アレイ」を使用することも考えられ（Nolan 2002, Trends Biotechnol. 20(1): 9-12）。そのような懸濁アレイでは、マイクロビーズやマイクロスフェアなどの担体は、懸濁状態で存在する。アレイは、標識化されていてもよい、さまざまなリガンドを有するさまざまなマイクロビーズまたはマイクロスフェアで構成される。かかるアレイ、例えば、固相化学および光感受性保護基に基づくアレイの製造方法は、一般的に公知である（米国特許第5,744,305号）。
【００４２】
本明細書で用いる用語「量」は、ポリペプチドまたはペプチドの絶対量、該ポリペプチドまたはペプチドの相対量もしくは濃度、ならびにこれに関連するまたはこれから導かれる任意の値またはパラメータを包含する。このような値またはパラメータは、直接的な測定によって上記ペプチドから得られる全ての特有の物理的または化学的特性に由来する強度シグナル値、例えば、質量スペクトルまたはNMRスペクトルの強度値を含む。さらに、本明細書中の他の箇所で特定される間接的な測定により得られる全ての値またはパラメータ、例えば、ペプチドに対する応答として生物学的読み取り系で測定される応答レベル、または特異的に結合したリガンドから得られる強度シグナルが包含される。上記の量またはパラメータと相関する値は、全ての標準的な数学的手法によっても得られることが理解される。
【００４３】
本明細書で用いる用語「比較する」は、分析対象のサンプルに含まれるペプチドまたはポリペプチドの量を、本明細書中の他の箇所で特定される好適な参照源の量と比較することを包含する。本明細書で用いる「比較する」とは、対応するパラメータまたは値の比較を指し、例えば絶対量は絶対参照量と比較されるが、濃度は参照濃度と比較され、あるいは試験サンプルから得られる強度シグナルは参照サンプルの同種の強度シグナルと比較されることが理解される。本発明の方法のステップ（c）で言及される比較は、手動でまたはコンピュータ支援によって行うことができる。コンピュータ支援による比較については、測定した量の値を、コンピュータプログラムによって、データベース中に格納されている適切な参照に対応する値と比較することができる。コンピュータプログラムは比較結果をさらに評価する、すなわち、適切な出力形式で所望の評価を自動的に提供することができる。ステップ（a）で測定した量と参照量との比較に基づいて、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の心血管イベントまたは死亡のリスクを予測する。従って、参照量は、比較される量の相違（差）または類似性のいずれかによって、被験体を、リスクが上昇している、低下している、または平均的であるグループに割り当てることが可能となるように選択される。
【００４４】
従って、本明細書で用いる「参照量」という用語は、上述のメタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とする量を指す。このため、参照は、（i）サンプルを採取した後、特定の窓期間中に死亡したまたは心血管イベントに罹患したことがわかっている被験体の当該サンプル、または（ii）サンプルを採取した後、特定の窓期間中に死亡しなかったおよび/または心血管イベントに罹患しなかったことがわかっている被験体の当該サンプルのいずれかから導くことができる。さらに、本発明による参照量は閾値を規定するものであってよく、それによりアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの両方の量が閾値より多い場合、被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが上昇していることを示し、他方、閾値より多いアディポネクチンの量および閾値より少ないナトリウム利尿ペプチドの量は、被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが低下していることの指標となる。好ましくは、閾値より少ないアディポネクチンの量は、ナトリウム利尿ペプチドの量に関わらず(このためナトリウム利尿ペプチドの量は、該ナトリウム利尿ペプチドの閾値より少なくても多くてもよい)、被験体が死亡するまたは心血管イベントに罹患するリスクが平均的であることの指標となる。
【００４５】
個々の被験体に適用できる参照量は、種々の生理学的パラメーター、例えば年齢、性別、または亜集団、ならびに本明細書中で言及されるポリペプチドもしくはペプチドの測定に用いられる手段によって変わり得る。適切な参照量は、本発明の方法により、試験サンプルと共に（すなわち同時にまたは順次的に）、分析対象の参照サンプルから決定することができる。閾値となる好ましい参照量は、正常値の上限(ULN)、すなわち、集団において見出される生理学的な量の上限値から導くことができる。所与の被験体集団のULNは種々の周知技術によって決定することができる。適切な技術は、本発明の方法で測定するペプチドまたはポリペプチドの量について、集団の中央値を決定することでありうる。
【００４６】
診断マーカー(すなわち、NTプロBNPおよびアディポネクチン)の参照量を確立することは可能であり、患者サンプル中のマーカーのレベルは、参照量と容易に比較することができる。診断および/または予後試験の感度および特異性は、単に試験の分析上の「質」に依存するだけでなく、何が異常な結果を構成しているのかの明確性にも依存する。実際、受信者動作特性曲線(Receiver Operating Characteristic curves)、すなわち「ROC」曲線は、通常、「正常」集団および「疾患」集団中のその相対度数に対して変数値をプロットすることにより計算される。任意の特定のマーカーについて、疾患を有するおよび有さない被験体のマーカーレベルの分布は重複する可能性が高い。このような条件下で、試験は、正常集団を疾患集団と100％の精度で完全に識別するわけではなく、重複領域は、上記の試験が正常集団を疾患集団と区別し得ない箇所を示す。閾値は、それを上回る(またはそれを下回る、マーカーが疾患に伴ってどのように変化するかに依存する）場合に試験は異常であると考えられ、それを下回る場合に試験は正常であると考えられるように選択される。ROC曲線下面積は、認識される測定値が状態の正確な同定を可能とする確率の尺度である。ROC曲線は、試験結果が必ずしも正確な数を与えるわけではない場合でも使用することができる。結果を順位付けすることができる限り、ROC曲線を作成し得る。例えば、「疾患」サンプル上の試験の結果は、程度(l=低、2=正常、3=高と呼ぶ)に従って順位付けすることができる。この順位付けは、「正常」集団の結果、および作成されるROC曲線と相関し得る。これらの方法は、当技術分野で周知である。例えば、Hanleyら, Radiology 143: 29-36 (1982)を参照のこと。
【００４７】
特定の実施形態において、マーカーは、少なくとも約70％の特異性、より好ましくは少なくとも約80％の特異性、さらに好ましくは少なくとも約85％の特異性、さらにより好ましくは少なくとも約90％の特異性、また最も好ましくは少なくとも約95％の特異性と組み合わせて、少なくとも約70％の感度、より好ましくは少なくとも約80％の感度、さらに好ましくは少なくとも約85％の感度、さらにより好ましくは少なくとも約90％の感度、また最も好ましくは少なくとも約95％の感度を示すように選択される。特に好ましい実施形態において、感度と特異性はいずれも、少なくとも約75％、より好ましくは少なくとも約80％、さらに好ましくは少なくとも約85％、さらにより好ましくは少なくとも約90％、および最も好ましくは少なくとも約95％である。本発明において、「約」という用語は、所与の測定値の+/-5％を指す。
【００４８】
本発明により言及される、(特に血清サンプル中の)アディポネクチン、特に高分子量アディポネクチンの閾値を規定する参照量は、好ましくは2.0μg/ml、より好ましくは2.4μg/ml、または2.8μg/mlである。本発明における、(特に血清サンプル中の)アディポネクチンの最も好ましい参照量は、2.4μg/mlである。
【００４９】
本発明により言及される、ナトリウム利尿ペプチド、特にNT-プロBNPの閾値を規定する参照量は、好ましくは30pg/ml、より好ましくは40pg/mlまたは50pg/mlである(このように、心血管系合併症を示す参照量として考えられるNT-プロBNPの量よりかなり少ない)。本発明における、(特に血清サンプル中の)NT-プロBNPの最も好ましい参照量は、40pg/mlである。
【００５０】
好ましくは、参照量より多いアディポネクチンおよびNT-プロBNPの量は、死亡および/または心血管イベントのリスクが上昇していることを示す。好ましくは、参照量より多いアディポネクチンの量および参照量より少ないNT-プロBNPの量は、死亡および/または心血管イベントのリスクが低下していることを示す。より好ましくは、参照量より(i)少ないアディポネクチンの量および(ii)多いまたは少ないNT-プロBNPの量は、死亡および/または心血管イベントのリスクが平均的であることを示す。
【００５１】
有利にも、本発明の基礎となる研究において(例えば実施例も参照のこと)、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを確実に予測するためには、アディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定することが必要であることが見出された。具体的には、NT-プロBNPとHMWアディポネクチンの量を、健常人とメタボリックシンドロームに罹患している被験体の血清サンプル中で測定した。アディポネクチンレベルが増加した(参照量(例えば中央値)より多い)メタボリックシンドロームに罹患している被験体は、NT-プロBNPレベルも増加した(参照量(例えば中央値)より多い)場合には、死亡および/または心血管イベントの長期リスクが最大であったが、NT-プロBNPレベルが低下した(中央値より少ない)場合には死亡リスクが最低であったことが示された。このように、NT-プロBNPレベルに依存して、アディポネクチンレベルが増加した被験体を、死亡および/または心血管イベントの反対のリスクを有する2つの群（低リスク群と高リスク群）に割り当てることができた。さらに、アディポネクチン量が低下しているメタボリックシンドローム患者は、彼らのNT-プロBNPレベルに関わらず、8年間の追跡調査期間中の死亡および/または心血管イベントのリスクが平均的である。本発明の基礎となる研究において観察された結果は驚くべきものである。当技術分野において、メタボリックシンドロームは低アディポネクチンレベルと関連しており、一般的に、アディポネクチンレベルが低いメタボリックシンドローム患者は転帰が最も悪いと考えられている。本発明において、メタボリックシンドロームに罹患している被験体は、アディポネクチンの量が低下ではなく増加している場合、特に死亡および/または心血管イベントのリスクに曝されていることが示された。アディポネクチン量が増加している被験体は、NT-プロBNPレベルも増加している場合、リスクが上昇していることが示された。NT-プロBNPレベルが低下している場合、これらの被験体は、他のメタボリックシンドロームに罹患している被験体と比較して予後が最も良い。これらの結果は、メタボリックシンドロームを有する被験体におけるアディポネクチンレベルの低下は、リスクの低下ではなくリスクの増加の指標であると考えられていたため、驚くべきことである(例えば、Trujillo M. E.ら：“Adiponectin-journey from an adipocyte secretory protein to biomarker of the metabolic syndrome.” Journal of Internal Medicine Feb. 2005, vol. 257, no. 2, pp. 167-175を参照のこと)。「マーカーレベル/量の増加」、「マーカーレベル/量の低下」、「〜より多いマーカーレベル/量」、および「〜より少ないマーカーレベル/量」という用語は、各参照値に対するマーカー分子の量/レベルを指すことを意味する。
【００５２】
興味深いことに、アディポネクチン量が低下している被験体では、NT-プロBNPは重要な役割を果たさない。メタボリックシンドロームに罹患しており、アディポネクチン量が参照量(本発明では中央値)より低い被験体では、NT-プロBNPの量に関わらず、死亡および/または心血管イベントの長期リスクが平均的である。このことは、当技術分野においては、NT-プロBNPレベルが増加している被験体は、通常、NT-プロBNPレベルが低下している被験体と比べて死亡および心血管イベントのリスクが有意に増加していると考えられていたため、極めて驚くべき結果である。これは、例えば対照群についても観察された。本発明において分析された対照群(メタボリックシンドロームを有さない被験体)では、NT-プロBNPレベルが参照量多い被験体は、NT-プロBNPレベルが参照量より少ない被験体と比べて、リスクが有意に高かった。
【００５３】
本発明の方法は、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とするため、使用されれば極めて有益であろう。リスクに応じて、好適な治療を策定することができる。本発明は、アディポネクチンレベルの増加を目的とする治療に対して感受性である被験体の同定に特に有利である。本発明において得られたデータは、全てのメタボリックシンドローム患者がアディポネクチンレベルの増加を目的とする治療から利益を得られる（治療が有効である）わけではないことを強く示唆している。このため本発明は、医師が早期に死亡および/または心血管イベントのリスクを検出することを可能とし、それにより診断を受けた患者が、予測されるリスクが顕在化する可能性を回避または低下させる適切な治療を受けることができるようにする有効な手段を提供する。結果として、個々の患者が本発明から利益を得られるだけでなく、社会全体として高価な治療費用を節減することができる。
【００５４】
従って本発明は、メタボリックシンドロームに罹患している被験体中のアディポネクチンレベルを増加させる治療に対して感受性である被験体を同定する方法であって、以下：
a) 該被験体のサンプル中でアディポネクチンの量を測定するステップ、
b) 該被験体のサンプル中でナトリウム利尿ペプチドの量を測定するステップ、
c) ステップa)およびb)で測定した量を参照量と比較するステップ、および
d) アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性である被験体を同定するステップ
を含んでなる、上記方法に関する。
【００５５】
上記および下記の用語の定義および説明は、別段に示される場合を除き、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載される全ての実施形態/方法について準用することを理解されたい。
【００５６】
本明細書で用いる「同定する」という用語は、メタボリックシンドロームに罹患している被験体が、被験体中のアディポネクチンレベルを増加させる治療に対して適格である(従って感受性である)かどうかを評価することを意味する。上記治療に対して感受性である被験体は、好ましくはこの治療から利益を得られるであろうことが理解される。特に、上記治療の結果として、該被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクは低下するであろう。さらに、上記治療に対して感受性ではない被験体は、好ましくは上記治療からは利益を得ないであろう。特に該被験体は、上記治療の結果(副作用)として死亡および/または心血管イベントのリスクが増加し、または死亡または心血管イベントのリスクが変化しないであろう。第1の場合(リスクが増加した場合)、本発明の方法を実施する場合に上記被験体に有害であり得る治療を回避することが可能であり、第2の場合(変化しなかった場合)、上記被験体に対して特に有益でも特に有害でもないであろう治療を回避することが可能であり、これにより医療費全体にプラスの影響を与え得るだろう。
【００５７】
本明細書で用いる「アディポネクチンレベルを増加させる治療」とは、好ましくは、被験体中のアディポネクチンレベル(好ましくは高分子量アディポネクチンレベル)を増加させる任意の治療を指す。このようなアディポネクチンレベルを増加させる治療は当技術分野で周知である。さらに、特定の治療が被験体中のアディポネクチンレベルを増加させるか否かは、当業者が苦もなく決定することができる。例えば、上記被験体の第1のサンプル中でアディポネクチンの量を測定し、その後アディポネクチンレベルに与える影響について試験すべき治療を策定し、次いで治療を開始した後(例えば、1ヶ月または2ヶ月後)に第2のサンプルを採取し、上記第2のサンプル中でアディポネクチンの量を測定することができる。上記の第1のサンプルと比較した、上記の第2のサンプルにおけるアディポネクチンの量の増加（好ましくは有意な増加）は、好ましくは、特定の治療が被験体中のアディポネクチンレベルを増加させたことを示す。好ましくは、被験体中のアディポネクチンレベルを増加させ得る治療は、アディポネクチンレベル(好ましくは、血清高分子量アディポネクチンレベル)を有意に、より好ましくは少なくとも10％〜15％、15〜20％、20〜25％、25〜30％、30％〜35％、35％〜40％またはそれ以上増加させる治療である。好ましくは、上記の増加は、3ヶ月、6ヶ月、9ヶ月または12ヶ月の期間中に達成される。最も好ましくは、上記の治療は、6ヶ月の期間中に被験体中の上記のアディポネクチンレベルを25〜35％増加させる。Kadowakiら(Journal of Clinical Investigation (2006), Adiponectin and adiponectin receptors in insulin resistance, diabetes, and the metabolic syndrome, vol. 117 (7):1784-1792)およびHanら(Journal of the American College of Cardiology (2007), Adiponectin and Cardiovascular disease: response to therapeutic interventions, Vol. 49(5) 531-8)の文献は、被験体中のアディポネクチンレベルに影響を与える（特に増加させる）ことを目的とする治療についてまとめている。さらに、被験体中のアディポネクチンレベルを増加させる薬剤が、WO2007007732に開示されている。上述の文献は、その開示内容について、本明細書にその全体が組み込まれる。
【００５８】
本発明において、被験体中のアディポネクチンレベルを増加させ得る治療は、好ましくは内臓脂肪症の減少による有意な（好ましくは体重の少なくとも10％、より好ましくは少なくとも15％の）体重減少、ACE阻害剤(特にベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、リシノプリル、モエクシプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、スピラプリル、およびトランドラプリル)の投与、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体-α(PPARα)アゴニスト、好ましくはフィブラート類(特にベザフィブラート、シプロフィブラート、クロフィブラート、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート)、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体-γ(PPARγ)アゴニスト(好ましくはロシグリタゾンおよびピオグリタゾンなどのチアゾリジンジオン類)の投与、アンジオテンシンII I型受容体遮断薬の投与、血糖降下薬(好ましくはグリメピリド(メトホルミンではない))の投与、リノール酸摂取の増加からなる群から選択されることが好ましい。被験体中のアディポネクチンレベルを増加させ得る治療として、アディポネクチンの投与も考えられる。特に本発明における被験体中のアディポネクチンレベルを増加させ得る治療として特に考えられるのは、少なくとも10％の体重減少およびチアゾリジンジオン(好ましくはロシグリタゾンおよびピオグリタゾン)の投与である。チアゾリジンジオン類は、白色脂肪組織中でアディポネクチン発現を有意にアップレギュレートすることが知られている(例えばMaedaら, Diabetes 2001. 50:2094-2099を参照のこと)。アディポネクチンレベルを増加させる治療のための他の医薬は、ナイアシン（noacin）およびカンナビノイド受容体アンタゴニスト（例えばリモナバント）である。
【００５９】
当業者であれば理解されようが、上記の評価は、通常、同定しようとする被験体の全て（すなわち100％）について正しいものとなることは意図していない。しかし、この用語は、統計学的に有意な割合の被験体を同定し得ることを要する（例えば、コホート研究におけるコホート）。ある割合が統計学的に有意であるかどうかは、当業者であれば、様々な周知の統計評価ツール、例えば、信頼区間の決定、p値の決定、スチューデントのt検定、マン-ホイットニー検定などを用いて苦もなく決定することができる。それらの詳細は、Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983に見出される。好ましい信頼区間は、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも97％、少なくとも98％、または少なくとも99％である。p値は、好ましくは、0.l、0.05、0.01、0.005、または0.0001である。より好ましくは、本発明の方法により、被験体集団の少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、または少なくとも90％を正しく同定することができる。
【００６０】
好ましくは、上記の方法における「参照量」という用語は、アディポネクチンの量を増加させる治療に対して感受性である、または感受性でない(メタボリックシンドロームに罹患している)被験体の同定を可能とするポリペプチドの量を指す。従って、参照は、(i) 上記治療に対して感受性であることがわかっている被験体、特に首尾よく治療されたことがわかっている被験体(特に、上記治療を受けた場合に死亡または心血管イベントに羅患しなかった被験体)または(ii) 上記治療に対して感受性でないことがわかっている被験体、特に首尾よく治療されなかったことがわかっている被験体(特に上記治療の結果として、死亡または心血管イベントに羅患した被験体)のいずれかから導くことができる。好ましい参照量は、本明細書中の他の箇所に見出すことができる。
【００６１】
好ましくは、被験体サンプル中の、アディポネクチンの参照量より少ないアディポネクチンの量および上記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないナトリウム利尿ペプチドの量は、被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性であることを示す。
【００６２】
好ましくは、アディポネクチンの参照量より少ないアディポネクチンの量および上記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多いナトリウム利尿ペプチドの量は、上記被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性であることを示す。上記被験体は、心臓治療(この用語の説明については下記を参照のこと)に対しても感受性である。さらに上記被験体は、好ましくは心臓治療(この用語の説明については下記を参照のこと)に対して感受性である。
【００６３】
好ましくは, アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量および上記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないナトリウム利尿ペプチドの量は、上記被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性ではないことを示す。しかし、上記被験体は、好ましくは心臓治療(この用語の説明については下記を参照のこと)に対して感受性である。
【００６４】
好ましくは、アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量および上記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多いナトリウム利尿ペプチドの量は、上記被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性ではないことを示す。
【００６５】
「心臓治療」という用語は、好ましくは、心機能障害（好ましくは心不全）の回復を目的とする治療レジメンを包含する。好ましくは、上記治療は、心機能障害および、特に心不全の治療に好適な医薬の投与を想定している。心不全の治療に好適な医薬は当技術分野で周知であり、例えばHeart Disease, 2005、第7版、Braunwald, Elsevier Sounders編、表23-1、23-6、23-7、23-8、23-9、23-10を参照されたい。好ましくは、このような医薬の投与は心不全の症状および兆候を治療することを目的とし、また心不全のさらなる進行を予防することを目的とする。
【００６６】
心不全の治療に好適な薬剤は、好ましくはカルシウムアンタゴニスト(カルシウムチャネル遮断薬)、ジゴキシン、ジギトキシン、アルドステロンアンタゴニスト、および利尿剤である。
【００６７】
このように、上述の方法は、心臓治療に対して感受性であり、このため心臓治療から利益を得られるであろう被験体の同定も可能とする。好ましくは、参照量より多いナトリウム利尿ペプチドの量は、上記被験体が心臓治療に対して感受性であり、このため心臓治療から利益を得られるであろうことを示す。好ましくは、ナトリウム利尿ペプチドの量が参照量より少ない場合、上記被験体が心臓治療に対して感受性ではなく、このため(特に医療費の増加および副作用のリスクの増加の結果として）上記治療から利益を得られないであろうことを示す。
【００６８】
このように、本発明は、メタボリックシンドロームに罹患している被験体がアディポネクチンレベルを増加させる治療および/または心臓治療から利益を得られるかどうかを評価する方法であって、以下
a) 該被験体のサンプル中でアディポネクチンの量を測定するステップ、
b) 該被験体のサンプル中でナトリウム利尿ペプチドの量を測定するステップ、
c) ステップa)およびb)で測定した量を参照量と比較するステップ、および
d) 上記被験体がアディポネクチンレベルを増加させ得る治療および/または心臓治療から利益を得られるかどうかを評価するステップ
を含んでなる、上記方法にも関する。
【００６９】
好ましくは、a) アディポネクチンの参照量より少ないアディポネクチンの量および上記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないナトリウム利尿ペプチドの量は、上記被験体がアディポネクチンレベルを増加させ得る治療からは利益を得られ、且つ該被験体が心臓治療からは利益を得られないことを示し；また
b) アディポネクチンの参照量より少ないアディポネクチンの量および上記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多いナトリウム利尿ペプチドの量は、上記被験体がアディポネクチンレベルを増加させ得る治療から利益を得られ、且つ心臓治療からも利益を得られることを示し；また
c) アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量および上記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多いナトリウム利尿ペプチドの量は、上記被験体がアディポネクチンレベルを増加させ得る治療からは利益を得られず、且つ心臓治療からは利益を得られることを示し；また
d) アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量および上記ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないナトリウム利尿ペプチドの量は、上記被験体がアディポネクチンレベルを増加させ得る治療から利益を得られず、且つ該被験体が心臓治療から利益を得られないことを示す。
【００７０】
好ましい参照量は、本明細書の他の箇所に記載されている。驚くべきことに、本発明において得られた結果は、ナトリウム利尿ペプチドの量が有意に増加している(特にNT-プロBNPが40pg/mlより多い)メタボリックシンドロームを有する被験体は、リスクが増加しているため、心臓治療から利益を得られるであろうということを示す。当技術分野において、心臓治療の必要性を示すNT-プロBNPの参照量は、一般に、本発明によるNT-プロBNPの参照量よりかなり多い(例えば125pg/ml)。
【００７１】
さらに、本発明はまた、本発明の方法の実施に適したキットおよびデバイスも想定する。
【００７２】
従って本発明は、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測するためのデバイスであって、被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とする、上記デバイスに関する。
【００７３】
また本発明は、被験体中のアディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性である被験体を同定するためのデバイスであって、メタボリックシンドロームに罹患している被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、該被験体中のアディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性である被験体を同定することを可能とする、上記デバイスも想定する。
【００７４】
本明細書で用いる用語「デバイス」は、被験体中のアディポネクチンレベルを増加させる治療に対して感受性である該被験体の同定、あるいはメタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とするために、互いが動作可能となるよう連結された少なくとも上記の手段を備える手段からなるシステムを指す。アディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定するための好ましい手段、および比較を行うための好ましい手段は、本発明の方法に関連して上に開示されている。動作し得るように手段を連結する方法は、デバイスに含まれる手段の種類に応じて変わる。例えば、ペプチドの量を自動的に測定するための手段を適用する場合には、その自動的に作動する手段により得られるデータを、所望の結果を得るために、例えばコンピュータプログラムによって処理することができる。好ましくは、そのような場合、その手段は単一のデバイスによって構成される。従って該デバイスは、アプライされるサンプル中のペプチドまたはポリペプチドの量の測定について解析するユニット、および評価のためにその得られたデータを処理するコンピュータユニットを備えることができる。あるいは、ペプチドまたはポリペプチドの量をテストストリップのような手段を測定するために使用する場合には、比較のための手段は、対照ストリップ、または測定量を参照量に割り当てる表を含んでもよい。テストストリップは、好ましくは、本明細書で言及されるペプチドまたはポリペプチドと特異的に結合するリガンドと結合させる。ストリップまたはデバイスは、好ましくは該ペプチドまたはポリペプチドと該リガンドとの結合を検出するための手段を含む。検出のための好ましい手段は、上記の本発明の方法に関する実施形態と関連して開示されている。そのような場合、その手段は、システムの使用者がその量の測定結果と使用説明書に記載される指示および解釈によりその診断値または予測値を結びつけるように、動作可能に連結される。その手段は、かかる実施形態において個々のデバイスとして現れてもよく、好ましくはキットとして一緒にパッケージングされる。当業者は、その手段を連結する方法を苦もなく実現することができる。好ましいデバイスは、専門の臨床医の特別な知識がなくても適用することができるものであり、例えば、単にサンプルをローディングすればよいテストストリップまたは電子デバイスである。結果は、臨床医による解釈を必要とする未加工データのアウトプットとして得ることができる。しかし好ましくは、デバイスのアウトプットは、その解釈にあたり臨床医を必要としないように処理された、即ち評価された未加工データである。他の好ましいデバイスは、分析ユニット／デバイス（例えば、バイオセンサ、アレイ、量を測定すべきポリペプチドを特異的に認識するリガンドと結合させた固体担体、表面プラズモン共鳴装置、NMR分光装置、質量分析装置等）、または本発明の方法による上記の評価ユニット／デバイスを含む。
【００７５】
さらに本発明は、本発明の方法の実施に適し、このためメタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することに適したキットであって、該キットが、該方法を実施するための説明書、ならびにメタボリックシンドロームに罹患している被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とする、上記キットに関する。
【００７６】
さらに本発明は、本発明の方法の実施に適し、このため被験体中のアディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性である被験体を同定することに適したキットであって、該キットが、該方法を実施するための説明書、ならびにメタボリックシンドロームに罹患している被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性であるかどうかを評価することを可能とする、上記キットに関する。
【００７７】
本明細書で用いる「キット」という用語は、前述の本発明の化合物、手段または試薬の集合を指し、これらは一緒に梱包してよい場合もあるし、または一緒に梱包できない場合もある。キットの成分は別個のバイアルに（すなわち別個のパーツのキットとして）含めてもよいし、または単一のバイアルで提供してもよい。さらに、本発明のキットは本明細書中の上記の方法を実施するために使用すべきであることが理解されよう。好ましくは、全ての成分は、上記の方法を実施するために即時使用可能に提供されることが想定される。さらに、キットは該方法を実施するための説明書を含むことが好ましい。説明書は、紙または電子形式のユーザマニュアルによって提供することができる。例えば、マニュアルは、本発明のキットを用いて上記の方法を実施する際に得られた結果を解釈するための説明を含み得る。
【００７８】
本明細書で引用される全ての参考文献は、それらの全体の開示内容および本明細書で特に言及した開示内容について、参照により本明細書に組み入れられる。
【００７９】
以下の実施例は本発明を単に説明するにすぎず、本発明の範囲を限定するとは全く解釈されないものとする。
【実施例】
【００８０】
実施例1：メタボリックシンドロームに罹患している患者のサンプルにおける高分子量アディポネクチンおよびNT-プロBNPの測定
合計2656人の無作為に選択した被験体から採取した血清サンプル、およびメタボリックシンドロームを有する356人の被験体の血清サンプル中で、高分子量アディポネクチンおよびNT-プロBNPを測定した。メタボリックシンドロームに罹患している356人の被験体は、インスリン抵抗性の欧州研究グループ(EGIR)によって規定されるメタボリックシンドロームの存在に関する基準（44 pmol/lより多い血清インスリンと、以下の基準のうちの2つ：30 kg/m2より高いBMI、2 mmol/lより多い血清トリグリセリドまたは1 mmol/lより少ないS-HDL、6.1 mmol/lより多いグルコース、収縮期140 /拡張期90 mm Hgより高い血圧）に従って選択した。HMWアディポネクチンは、アディポネクチン（多量体）EIAキット（Alpco Diagnostics, Salem, USA カタログ番号47-ADPH-9755）を用いて測定した。
【００８１】
NT-プロBNPおよびアディポネクチンについて、両群(健常人、メタボリックシンドロームに罹患している人)の中央値を測定した：
健常人：                                      NTプロBNP         53pg/ml、
アディポネクチン  3.6μg/ml；
メタボリックシンドロームに罹患している人：    NTプロBNP         39.7 pg/ml、
アディポネクチン  2.38μg/ml。
【００８２】
追跡調査において、サンプル採取後8年間の死亡率を測定した(表1を参照)。
【表１】
2012502290.tif 000002
【００８３】
実施例2：個々の事例研究
他の点では全く不快症状がない52歳の女性の肥満患者(BMI：34、血圧145/90mmHg、メタボリックシンドローム)が、彼女の主治医を訪れた。定期健診を行うと(胸部X線、心電図検査(ECG)、負荷心電図検査)、左室肥大の存在が示された。HMWアディポネクチン(3.8μg/ml)およびNT-プロBNP(215pg/ml)の血清レベルが著しく増加していた。この患者は、減量するよう勧められた。ACE阻害剤、β遮断薬および穏やかな利尿剤が処方された。しかし15ヶ月後、この患者はACE(トロポニンTレベルが0.5μg/lの非ST上昇型心筋梗塞(Non-Stemi)を発症した。血管造影法を行うと、有意な動脈硬化が示された。この事例は、本発明の方法の予測値を示す。この患者はメタボリックシンドロームを有し、参照量(中央値)より多い血清中アディポネクチンレベルおよびNT-プロBNPレベルを有していたため、死亡および/または心血管イベントのリスクが増加していた。最初の健診の15ヶ月後、この患者は、心血管イベントに罹患した。幾つかの研究はアディポネクチンレベルの増加が心血管イベントのリスクの低下と関連していることを示していたため、これは驚くべきことである(例えば、Kumadaら、PischonらおよびInoueら、前掲を参照)。しかし、本発明の基礎となる研究において、メタボリックシンドロームを有する患者におけるアディポネクチンレベルの増加は、この患者のNT-プロBNPも増加している場合、心血管イベントのリスクの上昇に関連していることが示されている。
【００８４】
過体重(肥満度指数32)であるが、その他の点では体調が良い48歳の男性患者が、彼の主治医を訪ねた。ECGおよび胸部X線を含む定期健診を行った(病理学的所見なし)。血圧は150/95であった。しかしメタボリックシンドロームであると診断された。患者から採取した血清サンプル中で、HMWアディポネクチン(1.8μg/ml）およびNT-プロBNP(43pg/ml)が測定された。その後数年間、HMWアディポネクチンおよびNT-プロBNPの血清中レベルに関して有意な変化はなかった。しかし、この患者は減量するよう勧められた。グルコース負荷試験の結果により、この患者は、さらにロシグリタゾンを飲むよう勧められた。4.5年後、彼はACS(急性冠症候群)の症状を示した(しかし心筋梗塞ではなかった)。冠動脈造影法を行うと、右冠動脈の50％狭窄が示された。この事例は、本発明の方法の予測値を示す。この患者は、参照量(中央値)より少ない血清アディポネクチンレベルおよび参照量(中央値)より多い血清NT-プロBNPレベルを有していた。従って、この患者は死亡および/または心血管イベントのリスクは平均的であった。最初の健診の2.5年後、この患者は心血管イベントに罹患した。
【００８５】
53歳の男性患者(メタボリックシンドロームを有する)が、定期健診のため彼の主治医を訪ねた。心電図検査、胸部X線および負荷心電図検査は正常(すなわち、病理学的所見なし)であった。患者から採取した血清サンプル中で、HMWアディポネクチン(4.1μg/ml)およびNT-プロBNP(26pg/ml)が測定された。その後5年間は、これらの検査に関して変化はなかった。さらに、その5年間は、急性心イベントは見られなかった。この事例は、アディポネクチンレベルが参照量(中央値)より多く、NT-プロBNPレベルが参照量(中央値)より少ないメタボリックシンドロームを有する患者は、死亡および/または心血管イベントのリスクが低下していることを示す。
【００８６】
実施例3：メタボリックシンドロームを有さない患者
46歳の男性患者(過体重ではなく、血圧は125/75mmHgで、メタボリックシンドロームではない)が、定期健診のため彼の主治医を訪れた。心電図検査と胸部X線、負荷心電図検査、および心エコー図検査を行ったが、病理学的所見はなかった。患者から採取した血清サンプル中で、HMWアディポネクチン(3.1μg/ml)およびNT-プロBNP(47pg/ml)が測定された。その5年間は、これらの検査に関して有意な変化はなかった。さらに、心電図検査、負荷心電図検査および胸部X線についても変化はなかった。その5年間、ACS(急性冠症候群)は観察されなかった。
【手続補正書】
【提出日】平成22年10月27日(2010.10.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測する方法であって、以下：
a) 該被験体の血液、血清または血漿サンプル中で総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量を測定するステップ、
b) 該被験体の血液、血清または血漿サンプル中で脳ナトリウム利尿ペプチドの量を測定するステップ、
c) ステップa)およびb)で測定した量を参照量と比較するステップ、および
d) ステップc)で得た情報に基づき、被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測するステップ
を含んでなり、ここで
i) 該脳ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多い脳ナトリウム利尿ペプチドの量、および該総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量は、該被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが上昇していることを示し、
ii) 該脳ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ない脳ナトリウム利尿ペプチドの量、および該総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの参照量より多い総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量は、該被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが低下していることを示し、
iii) 該ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないまたは多い脳ナトリウム利尿ペプチドの量、および該総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの参照量より少ない総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量は、該被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが平均的であることを示す、
前記方法。
【請求項２】
前記被験体がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アディポネクチンが高分子量アディポネクチンであり、および/または脳ナトリウム利尿ペプチドがNT-プロBNPである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
(i) 前記アディポネクチンが高分子量アディポネクチンであり、アディポネクチンの参照量が2.4μg/ml、好ましくは2.4μg/ml +/-0.5もしくは+/-0.2μg/mlであり、および/または(ii) 前記脳ナトリウム利尿ペプチドがNT-プロBNPであり、NT-プロBNPの参照量が40pg/ml、好ましくは40pg/ml +/-5もしくは+/-3pg/mlである、請求項１〜３のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５】
メタボリックシンドロームに罹患している被験体がアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られるかどうかを評価する方法であって、以下：
a) 該被験体の血液、血清または血漿サンプル中で総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量を測定するステップ、
b) 該被験体の血液、血清または血漿サンプル中で脳ナトリウム利尿ペプチドの量を測定するステップ、
c) ステップa)およびb)で測定した量を参照量と比較するステップ、および
d) 該被験体が、該治療から利益を得られるかどうかを評価するステップ、
を含んでなり、ここで
i) 総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの参照量より少ない総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量および該脳ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ない脳ナトリウム利尿ペプチドの量は、該被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性であることを示し、
ii) 総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの参照量より少ない総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量および該脳ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多い脳ナトリウム利尿ペプチドの量は、該被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性であることを示し、
iii) 総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの参照量より多い総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量および該脳ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ない脳ナトリウム利尿ペプチドの量は、該被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性ではないことを示し、または
iv) 総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの参照量より多い総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量および該脳ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多い脳ナトリウム利尿ペプチドの量は、該被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性ではないことを示し、
この場合、該参照量より多い該脳ナトリウム利尿ペプチドの量は、該被験体が心臓治療に対して感受性であることを示す、
前記方法。
【請求項６】
被験体中のアディポネクチンレベルを増加させ得る治療が、好ましくは内臓脂肪症の減少による少なくとも10％の体重減少、ACE阻害剤の投与、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体-α(PPARα)アゴニスト、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体-γ(PPARγ)アゴニストの投与、血糖降下薬の投与、リノール酸摂取の増加からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記治療がチアゾリジンジオンの投与である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測するためのデバイスであって、該被験体の血液、血清または血漿サンプル中で総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量と脳ナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段と、該手段によって測定した総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンと脳ナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とする、前記デバイス。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか1項に記載の方法の実施に適したキットであって、該キットが、該方法を実施するための説明書、ならびにメタボリックシンドロームに罹患している被験体の血液、血清または血漿サンプル中で総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量と脳ナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定した総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンと脳ナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とする、前記キット。
【請求項１０】
被験体が、該被験体中のアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られるかどうかを評価するためのデバイスであって、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の血液、血清または血漿サンプル中で総アディポネクチンもしくは高分子アディポネクチンの量と脳ナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定した該アディポネクチンと該脳ナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、被験体がアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られるかどうか評価することを可能とする、前記デバイス。
【請求項１１】
請求項６または７のいずれか1項に記載の方法の実施に適したキットであって、該キットが、該方法を実施するための説明書、ならびにメタボリックシンドロームに罹患している被験体の血液、血清または血漿サンプル中で総アディポネクチンもしくは高分子量アディポネクチンの量と脳ナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定した該アディポネクチンと該脳ナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、被験体がアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られるかどうか評価することを可能とする、前記キット。
【手続補正書】
【提出日】平成23年5月11日(2011.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測する方法であって、以下：
a) 該被験体のサンプル中でアディポネクチンの量を測定するステップ、
b) 該被験体のサンプル中でナトリウム利尿ペプチドの量を測定するステップ、
c) ステップa)およびb)で測定した量を参照量と比較するステップ、および
d) ステップc)で得た情報に基づき、被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測するステップ
を含んでなり、ここで
i) 該ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多いナトリウム利尿ペプチドの量、および該アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量は、該被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが上昇していることを示し、
ii) 該ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないナトリウム利尿ペプチドの量、および該アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量は、該被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが低下していることを示し、
iii) 該ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないまたは多いナトリウム利尿ペプチドの量、および該アディポネクチンの参照量より少ないアディポネクチンの量は、該被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクが平均的であることを示す、
前記方法。
【請求項２】
前記被験体がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
サンプルが、血液、血清または血漿サンプルである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
アディポネクチンが高分子量アディポネクチンであり、および/またはナトリウム利尿ペプチドがNT-プロBNPである、請求項１〜３のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５】
(i) 前記アディポネクチンが高分子量アディポネクチンであり、アディポネクチンの参照量が2.4μg/ml、好ましくは2.4μg/ml +/-0.5もしくは+/-0.2μg/mlであり、および/または(ii) 前記ナトリウム利尿ペプチドがNT-プロBNPであり、NT-プロBNPの参照量が40pg/ml、好ましくは40pg/ml +/-5もしくは+/-3pg/mlである、請求項１〜４のいずれか1項に記載の方法。
【請求項６】
メタボリックシンドロームに罹患している被験体がアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られるかどうかを評価する方法であって、以下：
a) 該被験体のサンプル中でアディポネクチンの量を測定するステップ、
b) 該被験体のサンプル中でナトリウム利尿ペプチドの量を測定するステップ、
c) ステップa)およびb)で測定した量を参照量と比較するステップ、および
d) 該被験体が、該治療から利益を得られるかどうかを評価するステップ、
を含んでなり、ここで
i) 該アディポネクチンの参照量より少ないアディポネクチンの量および該ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないナトリウム利尿ペプチドの量は、該被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性であることを示し、
ii) 該アディポネクチンの参照量より少ないアディポネクチンの量および該ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多いナトリウム利尿ペプチドの量は、該被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性であることを示し、
iii) 該アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量および該ナトリウム利尿ペプチドの参照量より少ないナトリウム利尿ペプチドの量は、該被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性ではないことを示し、または
iv) 該アディポネクチンの参照量より多いアディポネクチンの量および該ナトリウム利尿ペプチドの参照量より多いナトリウム利尿ペプチドの量は、該被験体が、アディポネクチンレベルを増加させ得る治療に対して感受性ではないことを示す、
前記方法。
【請求項７】
被験体中のアディポネクチンレベルを増加させ得る治療が、好ましくは内臓脂肪症の減少による少なくとも10％の体重減少、ACE阻害剤の投与、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体-α(PPARα)アゴニスト、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体-γ(PPARγ)アゴニストの投与、血糖降下薬の投与、リノール酸摂取の増加からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記治療がチアゾリジンジオンの投与である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測するためのデバイスであって、該被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段と、該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とする、前記デバイス。
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれか1項に記載の方法の実施に適したキットであって、該キットが、該方法を実施するための説明書、ならびにメタボリックシンドロームに罹患している被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、メタボリックシンドロームに罹患している被験体の死亡および/または心血管イベントのリスクを予測することを可能とする、前記キット。
【請求項１１】
被験体が、該被験体中のアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られるかどうかを評価するためのデバイスであって、メタボリックシンドロームに罹患している被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、被験体がアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られられるかどうか評価することを可能とする、前記デバイス。
【請求項１２】
請求項６または７のいずれか1項に記載の方法の実施に適したキットであって、該キットが、該方法を実施するための説明書、ならびにメタボリックシンドロームに罹患している被験体のサンプル中でアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を測定する手段、および該手段によって測定したアディポネクチンとナトリウム利尿ペプチドの量を参照量と比較する手段を含み、被験体がアディポネクチンレベルを増加させる治療から利益を得られられるかどうか評価することを可能とする、前記キット。
【国際調査報告】
2012502290.tif 000003
2012502290.tif 000004
2012502290.tif 000005
2012502290.tif 000006
2012502290.tif 000007