(57)【要約】本発明は、複数のＨ因子結合タンパク質を発現するか、または発現し得る病原性細菌株に対する免疫に関する。本発明の特定の態様は、複数のＨ因子結合タンパク質を発現する病原性細菌株に由来する少なくとも２つのＨ因子結合タンパク質を含むワクチン組成物を含む。ここで、上記２つのＨ因子結合タンパク質は、ＮＭＢ１０３０およびＮＭＢ２０９１、ＮＭＢ２０９１およびＮＭＢ１８７０、またはＮＭＢ１０３０およびＮＭＢ１８７０ではない。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つのＨ因子結合タンパク質を含む組成物であって、前記２つのＨ因子結合タンパク質が、ＮＭＢ１０３０およびＮＭＢ２０９１、ＮＭＢ２０９１およびＮＭＢ１８７０、またはＮＭＢ１０３０およびＮＭＢ１８７０ではない、組成物。
【請求項２】
ＮＭＢ０６７７および第２のＨ因子結合タンパク質を含む組成物。
【請求項３】
アジュバントをさらに含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記Ｈ因子結合タンパク質が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａタンパク質である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記Ｈ因子結合タンパク質が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓタンパク質である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質が、
（ａ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のいずれか１つと同一であるアミノ酸配列；
（ｂ）（ａ）と比較して１〜１０の単一アミノ酸改変を有するアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のいずれか１つと少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のいずれかの少なくとも１０個の連続したアミノ酸の断片であるアミノ酸配列；または
（ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のいずれかと整列させられた場合、Ｎ末端からＣ末端のｘ個のアミノ酸の各異動ウィンドウが、少なくともｘ・ｙ個の同一の整列させられたアミノ酸を有し、ｘが３０であり、ｙが０．７５であるアミノ酸配列
を含むポリペプチドから選択される、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、複数のＨ因子結合タンパク質を発現するか、または発現し得る病原性細菌株に対する免疫に関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景技術）
逆ワクチン学（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｖａｃｃｉｎｏｌｏｇｙ）は、Ｒｉｎｏ  Ｒａｐｐｕｏｌｉらによって開発された細菌性病原体に対するワクチンの作製についての新たなパラダイムである。逆ワクチン学では、有望な抗原について目的の病原体のゲノムをスキャンし、その病原体に対して殺菌応答を生成できる抗原を同定し、次いで病原体の複数の菌株に渡ってどれが十分に保存されているかを同定することによって可能な抗原のリストをさらに狭めて、可能な限り完全な範囲を提供する。逆ワクチン学の最初の成功は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型群Ｂに対する多成分組換えタンパク質ベースのワクチンの開発であった（Ｍ．Ｇｉｕｌｉａｎｉら、ＰＮＡＳ（２００６）  １０３（２９）：１０８３４−１０８３９を参照）。複数の菌株に渡って最も広い可能な範囲を提供できる有望な候補の同定およびスクリーニングは、時間のかかる作業である。したがって、このような強力な候補の同定の改善された方法およびこのような強力な候補を含む多成分ワクチンが求められている。
【０００３】
１つのこのような候補は、タンパク質「７４１」、「ＮＭＢ１８７０」、「ＧＮＡ１８７０」としても知られる髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である［参考文献：Ｎ６、Ｎ１０（特許文献１）、Ｎ２１］。このリポタンパク質は、すべての髄膜炎菌血清型群に渡って発現され、複数の髄膜炎菌株において見出された。ＮＭＢ１８７０は、代替補体経路のインヒビターであるＨ因子のリガンドであることが同定された［参考文献：Ｎ２２、Ｎ２３］。ｆＨＢＰは、補体媒介殺菌活性を有すると共に、Ｈ因子の細菌表面への結合を阻害して、ヒト補体による細菌の溶解しやすさを増大させる抗体を誘導することが示された［参考文献：Ｎ２１］。ｒＨＢＰは、ヒト血中、ヒト血清中、および抗菌ペプチドの存在下での細菌の生存にとって重要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第９９/５７２８０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、様々な病原菌株に対して広く防御する、病原体に対する２つ以上のＨ因子結合ポリペプチドを含む改善された多成分ワクチンを提供することが本発明の目的である。
【０００６】
Ｈ因子結合活性をアッセイすることによる広範な防御についての抗原候補のスクリーニングの方法を提供することが本発明のさらなる目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の開示）
本発明の目的上、用語「Ｈ因子結合」は、Ｈ因子に結合する能力を指し、参考文献Ｎ２２およびＮ２３に記載されている方法および基準によって同定され、測定される。以下は、本発明のポリペプチドの組み合わせに使用され得る目的の様々な病原体由来の代表的なＨ因子結合タンパク質である。
【０００８】
（ＮＭＢ１８７０タンパク質）
血清型群ＢのＮＭＢ１８７０タンパク質は、参考文献Ｎ６（また、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＧＩ：７２２７１２８も参照）に開示され、参考文献Ｎ１０に「７４１」（配列番号２５３５および２５３６）として開示されている。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号７３７９３２２．７４１を有する血清型群Ａ（Ｎ５）の対応するタンパク質は、当然、リポタンパク質である。
【０００９】
本発明に従って使用される場合、ＮＭＢ１８７０タンパク質は、様々な形態をとり得る。ＮＭＢ１８７０の好ましい形態は、参考文献Ｎ１４〜Ｎ１６に開示されているような切断改変体または欠失改変体である。具体的には、ＮＭＢ１８７０のＮ末端は、ポリ−グリシン配列を含みそのポリ−グリシン配列まで欠失され得る（すなわち、菌株ＭＣ５８の残基１〜７２の欠失）。この欠失は、発現を亢進し得る。この欠失はまた、ＮＭＢ１８７０の脂質化部位を除去する。
【００１０】
好ましいＮＭＢ１８７０の配列は、配列番号１に対して５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上）の同一性を有する。これには、ＮＭＢ１８７０改変体（例えば、対立遺伝子改変体、相同体、オーソログ、パラログ、変異体など）が含まれる。ＮＭＢ１８７０の対立遺伝子形（allelic form）は、参考文献Ｎ１６の配列番号１〜２２および参考文献Ｎ１９の配列番号１〜２３で見られ得る。参考文献Ｎ２０の配列番号１〜２９９は、さらなるＮＭＢ１８７０の配列を提供する。
【００１１】
他の好ましいＮＭＢ１８７０の配列は、配列番号１の少なくともｎ個の連続したアミノ酸を含み、このｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、または２５０以上）である。好ましい断片には、ＮＭＢ１８７０のエピトープが含まれる。他の好ましい断片は、配列番号１のＣ末端および／またはＮ末端の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５以上）のアミノ酸が欠失している。
【００１２】
タンパク質ＮＭＢ１８７０は、抗髄膜炎菌抗体応答を誘導する非常に有効な抗原であり、すべての髄膜炎菌血清型群に渡って発現される。系統発生分析により、このタンパク質が２つの群に分けられ、分けられた群の一方は、合計３つの改変体にさらに分けられ（Ｎ２１）、ある改変体に対して生成された血清は、同じ改変体群内で殺菌性であるが、この血清は、他の２つの改変体の一方を発現する菌株に対して活性がない、すなわち改変体内では交差防御が存在するが改変体間では交差防御が存在しないことが示されている。したがって、最大の菌株横断的効力を得るためには、好ましくは、組成物が、タンパク質ＮＭＢ１８７０の２つ以上の改変体を含むべきである。
【００１３】
（ＮＭＢ２０９１タンパク質）
血清型群ＢのＮＭＢ２０９１タンパク質は、参考文献Ｎ６（また、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＧＩ：７２２７３５３も参照）に開示され、参考文献Ｎ１０に「９３６」（配列番号２８８３および２８８４）として開示されている。血清型群Ａ（Ｎ５）の対応する遺伝子は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号７３７９０９３を有する。
【００１４】
本発明に従って使用される場合、ＮＭＢ２０９１タンパク質は、様々な形態をとり得る。ＮＭＢ２０９１の好ましい形態は、参考文献Ｎ１４〜Ｎ１６に開示されているような切断改変体または欠失改変体である。具体的には、ＮＭＢ２０９１のＮ末端リーダーペプチドが欠失されて（すなわち、菌株ＭＣ５８（配列番号４１）の残基１〜２３の欠失）、ＮＭＢ２０９１（ＮＬ）が得られ得る。
【００１５】
好ましいＮＭＢ２０９１の配列は、配列番号４１と５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上）の同一性を有する。これには、改変体（例えば、対立遺伝子改変体、相同体、オーソログ、パラログ、変異体など）が含まれる。
【００１６】
他の好ましいＮＭＢ２０９１の配列は、配列番号４１の少なくともｎ個の連続したアミノ酸を含み、このｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、または２５０以上）である。好ましい断片には、ＮＭＢ２０９１のエピトープが含まれる。他の好ましい断片は、配列番号４１のＣ末端および／またはＮ末端の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５以上）のアミノ酸が欠失している。
【００１７】
（ＮＭＢ１０３０タンパク質）
血清型群ＢのＮＭＢ１０３０タンパク質は、参考文献Ｎ６（また、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＧＩ：７２２６２６９も参照）に開示され、参考文献１０に「９５３」（配列番号２９１７および２９１８）として開示されている。血清型群Ａ（Ｎ５）の対応するタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号７３８０１０８を有する。
【００１８】
本発明に従って使用される場合、ＮＭＢ１０３０タンパク質は、様々な形態をとり得る。ＮＭＢ１０３０の好ましい形態は、参考文献Ｎ１４〜Ｎ１６に開示されているような切断改変体または欠失改変体である。具体的には、ＮＭＢ１０３０のＮ末端リーダーペプチドが欠失されて（すなわち、菌株ＭＣ５８（配列番号１１）の残基１〜１９の欠失）、ＮＭＢ１０３０（ＮＬ）が得られ得る。
【００１９】
好ましいＮＭＢ１０３０の配列は、配列番号１１に対して５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上）の同一性を有する。これには、ＮＭＢ１０３０改変体（例えば、対立遺伝子改変体、相同体、オーソログ、パラログ、変異体など）が含まれる。ＮＭＢ１０３０の対立遺伝子形は、参考文献Ｎ１２の図１９で見られ得る。
【００２０】
他の好ましいＮＭＢ１０３０の配列は、配列番号１１の少なくともｎ個の連続したアミノ酸を含み、このｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、または２５０以上）である。好ましい断片には、ＮＭＢ１０３０のエピトープが含まれる。他の好ましい断片は、配列番号１１のＣ末端および／またはＮ末端の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５以上）のアミノ酸が欠失している。
【００２１】
（ＮＭＢ０６６７）
ＮＭＢ０６６７（仮想タンパク質）は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号９０２７７８を有する。代表的なＮＭＢ０６６７は、相同体Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群型ＡおよびＣ（配列番号５３、５５、および５７）を有し、Ｎ．ｇｏｎｎｈｏｒｏｅａｅ（配列番号５９）に由来する配列番号５１として提供される。
【００２２】
（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａの参考文献）
【００２３】
【化１】
2012502073.tif 000002
（Ｐｏｒ１Ａ）
ポーリン（Ｐｏｒ）は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅの主要な外膜タンパク質であり、２つの主たる免疫化学クラス、Ｐｏｒ１ＡおよびＰｏｒ１Ｂ（Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１９８４、１５０：４４−４８）において存在する。Ｐｏｒ１Ａは、Ｈ因子の受容体分子であり、ハイブリッドＰｏｒ１Ａ／Ｂ分子を発現する菌株が使用されて、Ｈ因子結合部位がＰｏｒ１Ａのループ５に局在化された（Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９９８年８月  １７；１８８（４）：６７１−８０）。代表的なＰｏｒ１Ａは、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号９９で提供される。
【００２４】
（Ｏｍｐ１００（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ種））
Ｏｍｐ１００（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ  Ｙ４の主要な外膜タンパク質）は、Ｙｅｒｓｈｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａのＹａｄＡを含む多数の毒性因子に対して相同性を有する。Ｏｍｐ１００は、Ａ．ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓの細胞表面にランダムに局在化し、Ｈ因子に結合する（Ｍｏｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２００３、５０（４）：１１２５−１１３９）。代表的なＯｍｐ１００は、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号９３で提供される。
【００２５】
（補体制御因子獲得表面タンパク質（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ−ａｃｑｕｉｒｉｎｇ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＡＳＰＳ））（Ｂｏｒｒｅｌｉａ種））
補体制御因子獲得表面タンパク質（ＣＲＡＳＰＳ）は、Ｈ因子に結合することによってＢｏｒｒｅｌｉａ種の血清耐性を向上させる（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００４、２７９：２４２１−２４２９）。ＣＲＡＳＰ−１、ＣＲＡＳＰ−２、ＣＲＡＳＰ−３、ＣＲＡＳＰ−４、およびＣＲＡＳＰ５は、高い親和性でＨ因子のショート・コンセンサス・リピート（ＳＣＲ）ドメインに結合する。いくつかのＣＲＡＳＰのＣ末端は、この結合のために必要であることが示された（Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６、４３：３１−４４）。具体的には、ＢｂＣＲＡＳＰ−３のＨ因子結合部位は、このタンパク質のＣ末端の９個のアミノ酸配列、ＬＥＶＬＫＫＮＬＫに局在化した（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２２０３、３３：６９７−７０７）。代表的なＣＲＡＳＰＳは、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号６３および６５で提供される。
【００２６】
（ＯｓｐＥ／Ｆ関連タンパク質（ＥＲＰ）ファミリー（Ｂｏｒｒｅｌｉａ種））
Ｅｒｐタンパク質をコードする遺伝子は、すべてのライム病Ｂｏｒｒｅｌｉａ種に存在する。Ｅｒｐタンパク質は、細菌の外面に局在化し、哺乳動物感染に際し発現される（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２００１、１４７：８２１−８３０；Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０００、２：４１１−４２２）。ＯｓｐＥ、ｐ２１／ｏｒｆ２８、ＥｒｐＡ（ＢＢＬ３９）、ＥｒｐＣ、およびＥｒｐＰ（ＢＢＮ３８）を含む殆どのＥｒｐタンパク質は、Ｈ因子に結合する（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００２、７０（２）：４９１−４９７；Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６、４３：３１−４４）。これらのタンパク質は、一般に、それらのＣ末端によってＨ因子のＳＣＲ１９〜２０に結合する。代表的なｅｒｐｓは、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号９７、７３、７５、および７７で提供される。
【００２７】
（ＦＨＢＰ１９／ＦｈｂＡおよびＦＨＢＰ２８）
２つのＨ因子結合タンパク質が、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｈｅｒｍｓｉｉで同定された（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２００３、４１：３９０５−３９１０；Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ  ２００４、１８６：２６１２−２６１８）。ＦＨＢＰ１９／ＦｈｂＡは、１９ｋＤａタンパク質であり、ＣＲＡＳＰまたは他のスピロヘータＨ因子結合タンパク質に対して相同性を示していない。ＦＨＢＰ２８は、２８ｋＤａタンパク質である。代表的なＦｈｂＡは、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号８５で提供される。
【００２８】
（ＬｆｈＡ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ））
ＬｅｐｔｏｓｐｉｒａＨ因子結合タンパク質Ａ（ＬｆｈＡ）が、Ｈ因子に結合するクローンについてのＬ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓのλ発現ライブラリーのスクリーニングによって同定された（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ２００６、７４：２６５９−２６６６）。組換えＬｆｈＡを用いたリガンド親和性ブロットアッセイにより、組換えＬｆｈＡのＨ因子に結合する能力が確認された。ＬｆｈＡは、哺乳動物感染中に発現され、外膜および内膜に局在化する。代表的なＬｆｈＡは、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号９１で提供される。
【００２９】
（Ｔｕｆ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種））
延長因子Ｔｕｆが、Ｈ因子親和性マトリックスおよび質量分析を用いてＨ因子結合タンパク質としてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａから単離された（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００７、１７９：２９７９−２９８８）。Ｔｕｆは、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの表面に局在化する。ＴｕｆのＨ因子への結合は、Ｈ因子のＳＣＲドメイン６〜７および１９〜２０によって媒介される。代表的なＴｕｆは、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号１０５で提供される。
【００３０】
（Ｂａｃ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種））
Ｂａｃまたはβタンパク質は、Ｂ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓの表面タンパク質である。Ｂａｃは、変異分析および組換えタンパク質を用いた結合実験によってＨ因子に結合することが示された（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００２、２７７：１２６４２−１２６４８）。Ｂａｃおよびヘパリンは、ＳＣＲ１３または２０内でＨ因子への結合を競合し、ＢａｃのＣ末端も、結合に必要である（Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６、４３：３１−４４）。代表的なＢａｃは、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号６１で提供される。
【００３１】
（Ｆｂａ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種））
Ｆｂａは、Ｈ因子を含む補体活性のヒト制御因子に結合することが示されたＡ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓの最初の非Ｍ様タンパク質であった（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ２００２、７０：６２０６−６２１４）。Ｔｅｒａｏらは、Ｈｅｐ−２細胞の浸潤に関与するフィブロネクチン結合タンパク質と同じタンパク質を同定した（Ｍｏｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２００１、４２：１９１−１９９）。コイルドコイルを含むと推定されたＦｂａのＮ末端領域は、Ｈ因子への結合に必要であり、Ｈ因子のＦｂａ結合部位は、ＳＣＲ７に局在化した（Ｉｎｆｅｃ  Ｉｍｍｕｎ  ２００３、７１：７１１９−７１２８）。代表的なＦｂａは、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号７９で提供される。
【００３２】
（Ｈｉｃ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種））
補体のＨ因子結合インヒビター（Ｈｉｃ）遺伝子は、３型ｐｎｕｅｍｏｃｏｃｃｉのｐｓｐＣ遺伝子座の新規な表面タンパク質をコードする（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２０００、２７５：３７２５７−３７２６３）。Ｈｉｃは、他のＰｓｐＣタンパク質に対して全体として低い配列相同性を有する。ＨｉｃのＮ末端ヘリックス領域（アミノ酸３９〜２６１）は、ＨｉｃのＨ因子への結合に必要である。Ｈ因子のＳＣＲ８〜１１および１２〜１４も、結合に必要である。
【００３３】
（Ｍ／ｅｍｍタンパク質（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種））
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓのＭ＋菌株とＭ−菌株との比較により、Ｈ因子がＭ＋菌株の細胞表面に結合することが初めて実証された（ＰＮＡＳ  １９８８、８５：１６５７−１６６１）。ｅｍｍ５、ｅｍｍ６、およびｅｍｍ１８間の特異的な結合が実証された。３つすべてがＨ因子のＳＣＲ７に結合する（Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６、４３：３１−４４）。代表的なＭタンパク質相同体は、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号６７、６９、および７１で提供される。
【００３４】
（ＰｓｐＣ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種））
ＰｓｐＣファミリーのメンバーは、Ｃ末端アンカーによって細胞表面に付着する。これらは、保存された３７のアミノ酸リーダーペプチドおよびプロリンリッチ領域が続くＮ末端αヘリックスドメインを含む（Ｇｅｎｅ  ２００２、２８４：６３−７１）。ＰｓｐＣのＨ因子結合部位は、Ｎ末端αヘリックス領域（アミノ酸１〜２２５）にマップされ、Ｈ因子のＰｓｐＣ結合部位は、ＳＣＲ１３〜１５にマップされた（Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  ２００４、１１９（Ｓｕｐｐｌ，）：６６−７３；Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ２００２、７０：５６０４−５６１１）。代表的なＰｓｐＣは、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号８９および１０１で提供される。
【００３５】
（Ｓｅ１８．９（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ））
Ｓｅ１８．９は、Ｓ．ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓではなくＳ．ｅｑｕｉによって分泌される新規な表面結合タンパク質である（Ｖｅｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２００７、１２１：１０５−１１５）。Ｓｅ１８．９は、Ｈ因子に結合し、回復期血清および粘膜ＩｇＡに対して免疫反応性である。代表的なＳｅ１８．９は、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号１０３で提供される。
【００３６】
（ＹａｄＡ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ種））
ＹａｄＡは、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａの表面に原線維構造を形成する、４７ｋＤａサブユニットから形成される約２００ｋＤａのポリマーである（ＥＭＢＯ  Ｊ  １９８５、４：１０１３−１０１８）。ウェスタンブロット分析により、ＹａｄＡがＨ因子に結合することが実証された（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  １９９３、６１：３１２９−３１３６）。代表的なＹａｄＡは、すべての関連種における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号１０７で提供される。
【００３７】
（Ｇｍｐ１ｐ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ））
Ｇｍｐ１ｐは、宿主補体制御因子に結合することが同定された最初の真菌タンパク質であった。ＣａＧＰＭ１ｐは、Ｈ因子の２つ領域、ＳＣＲ６および７とＳＣＲ１９および２０に結合する表面タンパク質である（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００７、２８２：３７５３７−３７５４４）。Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ由来の代表的なＣａＧＰＭ１ｐは、すべての真菌病原体における相同体を同定するためにも使用され得る配列番号８７で提供される。
【００３８】
（本発明と共に使用されるポリペプチド）
本発明は、
（ａ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のいずれか１つと同一（すなわち、１００％の同一性）であるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７の１つ以上に対して少なくともａ％の配列同一性を有するアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７の１つ以上の少なくともｂ個の連続したアミノ酸の断片であるアミノ酸配列；
（ｄ）（ａ）または（ｂ）の配列と比較して、離れた位置または連続した位置であり得る、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０（またはそれ以上）の単一アミノ酸改変（欠失、挿入、置換）を有するアミノ酸配列；および／または
（ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のいずれか１つと整列させられた場合、Ｎ末端からＣ末端のｘ個のアミノ酸の各異動ウィンドウ（ｐ個のアミノ酸まで延長されたアラインメントに対して、ｐ＞ｘの場合、ｐ−ｘ＋１のようなウィンドウが存在するような）は、少なくともｘ・ｙ個の同一の整列させられたアミノ酸を有し、ｘが２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００から選択され；ｙが０．５０、０．６０、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９から選択され；ｘ・ｙの値が整数でない場合は、その値が最も近い整数に切り上げられるアミノ酸配列、を含む２つ以上のポリペプチドの組み合わせを提供する（いずれの場合も異なる非相同配列から選択され、唯２つのポリペプチドの場合は、ＮＭＢ１８７０とＮＭＢ１０３０、ＮＭＢｌ８７０とＮＭＢ２０９１、またはＮＭＢ１０３０とＮＭＢ２０９１ではない）。好ましいペアワイズアラインメントアルゴリズムは、デフォルトパラメーター（例えば、ギャップオープニングペナルティー（Ｇａｐ  ｏｐｅｎｉｎｇ  ｐｅｎａｌｔｙ）＝１０．０、およびギャップ伸長ペナルティー（Ｇａｐ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｐｅｎａｌｔｙ）＝０．５で、ＥＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（ｓｃｏｒｉｇ  ｍａｔｒｉｘ）を使用）を用いるＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈグローバルアラインメントアルゴリズム（１）である。このアルゴリズムは、ＥＭＢＯＳＳパッケージ（２）のｎｅｅｄｌｅツールで好都合に実行される。
【００３９】
これらのポリペプチドには、対立遺伝子改変体、多形型（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ｆｏｒｍ）、相同体、オーソログ、パラログ、変異体などを含め、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７の改変体が含まれる。
【００４０】
ａの値は、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８７．５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．５％以上から選択され得る。
【００４１】
ｂの値は、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、または２５０以上から選択され得る。好ましい断片には、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のエピトープが含まれる。他の好ましい断片は、好ましくは配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７の少なくとも１つのエピトープを維持したまま、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のＣ末端の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５以上）のアミノ酸および／またはそのＮ末端の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５以上）のアミノ酸が欠けている。他の断片は、例えば、シグナルペプチドの脱落、細胞質ドメインの脱落、膜貫通ドメインの脱落、細胞外ドメインの脱落など、１つ以上のタンパク質ドメインが脱落している。
【００４２】
断片内のエピトープは、Ｂ細胞エピトープおよび／またはＴ細胞エピトープであり得る。このようなエピトープは、実験的に同定され得（例えば、ＰＥＰＳＣＡＮ（３、４）または同様の方法を用いて）、または予測され得る（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原指標（５）、マトリックスをベースにした手法（６）、ＭＡＰＩＴＯＰＥ（７）、ＴＥＰＩＴＯＰＥ（８、９）、神経回路網（１０）、ＯｐｔｉＭｅｒ＆ＥｐｉＭｅｒ（１１、１２）、ＡＤＥＰＴ（１３）、Ｔｓｉｔｅｓ（１４）、親水性（１５）、抗原指標（１６）、または参考文献１７〜２１などに開示された方法などを用いて）。エピトープは、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合部位によって認識され結合される抗原の一部であり、「抗原決定基」とも呼ばれ得る。
【００４３】
これらの組み合わせに使用される本発明のポリペプチドには、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のいずれか１つと比較して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９など）のアミノ酸の置換、例えば、保存的な置換（すなわち、１つのアミノ酸の、関連した側鎖を有する別のアミノ酸での置換）などが含まれ得る。遺伝的にコードされたアミノ酸は、一般に、４つのファミリー：（１）酸性、すなわちアスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性、すなわちリジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性、すなわちアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性、すなわちグリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンに分類される。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、時にはまとめて芳香族アミノ酸として分類される。一般に、これらのファミリー内での単一アミノ酸の置換は、生物活性に大きな影響を与えない。
【００４４】
ポリペプチドは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のいずれか１つに対して１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９など）の単一アミノ酸の欠失を含み得る。同様に、ポリペプチドは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のいずれか１つに対して１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９など）の挿入（例えば、それぞれが１、２、３、４、または５つのアミノ酸）を含み得る。
【００４５】
群（ｃ）内では、欠失または置換は、Ｎ末端および／またはＣ末端であっても、または２つの末端間であっても良い。したがって、切断は、欠失の一例である。切断は、Ｎ末端および／またはＣ末端における最大４０（またはそれ以上）のアミノ酸の欠失を伴い得る。
【００４６】
一般に、本発明のポリペプチドが、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７の完全な１つと同一でない配列を含む場合（例えば、このポリペプチドが、１つの完全な配列に対して１００％未満の配列同一性でリストに載せられた配列を含む場合、またはこのポリペプチドが、１つの完全な配列の断片を含む場合）、好ましくは、このポリペプチドは、完全な配列番号の配列からなるポリペプチドを認識する抗体、すなわち前記配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７の１つ以上のエピトープに結合する抗体を誘導し得る。
【００４７】
一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７のいずれか１つに対して少なくともａ％の同一性を有し；そして（ｂ）前記配列番号の少なくともｂ個の連続したアミノ酸の断片を含む、アミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。
【００４８】
本発明のポリペプチドは、金属イオン、例えば、このポリペプチド鎖の１つ以上のアミノ酸が配位された金属イオンを含み得る。例えば、このポリペプチドは、１価、２価、または３価の金属カチオンを含み得る。２価のカチオンは、典型的には、例えば、Ｍｎ２＋、Ｆｅ２＋、Ｃｏ２＋、Ｎｉ２＋、Ｃｕ２＋などである。２価のカチオンは、好ましくはＺｎ２＋である。イオンは、ＨＥＡＧＨまたはＨＥＶＧＨアミノ酸配列が配位され得る。
【００４９】
本発明と共に使用されるポリペプチドは、様々な形態（例えば、天然、融合、グリコシル化、非グリコシル化、脂質化、非脂質化、リン酸化、非リン酸化、ミリストイル化、非ミリストイル化、単量体、多量体、微粒子、変性など）をとり得る。
【００５０】
本発明と共に使用されるポリペプチドは、様々な手段（例えば、組換え発現、細胞培養物からの精製、化学合成など）によって調製され得る。組換え的に発現されるタンパク質が好ましい。
【００５１】
本発明と共に使用されるポリペプチドは、好ましくは、精製されたかまたは実質的に精製された形態、すなわち他のポリペプチドを実質的に含まない（例えば、天然に存在するポリペプチドを含まない）、特に目的の病原体または宿主細胞のポリペプチドに由来する他のポリペプチドを実質的に含まない形態で提供され、一般に、少なくとも約５０％（重量）純粋、通常は少なくとも約９０％純粋であり、すなわち組成物の約５０％未満、より好ましくは約１０％未満（例えば、５％）が、他の発現されたポリペプチドからなる。したがって、組成物中の抗原は、分子が発現される生物全体から分離される。
【００５２】
本発明と共に使用されるポリペプチドは、好ましくはＨ因子結合ポリペプチドである。
【００５３】
用語「ポリペプチド」は、任意の長さのアミノ酸ポリマーを指す。このポリマーは、線状でも分岐でもよく、修飾されたアミノ酸を含み得、非アミノ酸によって中断され得る。この用語はまた、天然に修飾されたか、あるいは介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作もしくは修飾、例えば、標識成分との結合などによって修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。また、例えば、１つ以上のアミノ酸の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）および当分野で公知の他の修飾を含むポリペプチドも含む。ポリペプチドは、１本鎖または結合鎖として生じ得る。
【００５４】
本発明は、配列−Ｐ−Ｑ−または−Ｑ−Ｐ−を含むポリペプチドを提供し、この−Ｐ−は、上で定義したアミノ酸であり、−Ｑ−は、上で定義した配列ではなく、すなわち本発明は、融合タンパク質を提供する。−Ｐ−のＮ末端コドンがＡＴＧではなく、このコドンがポリペプチドのＮ末端に存在しない場合は、Ｍｅｔではなくそのコドンに標準のアミノ酸として翻訳される。しかし、このコドンがポリペプチドのＮ末端にある場合は、Ｍｅｔとして翻訳される。−Ｑ−部分の例には、限定されるものではないが、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、または１０以上）、マルトース結合タンパク質、またはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）が含まれる。
【００５５】
本発明はまた、本発明のポリペプチドを含むオリゴマータンパク質も提供する。オリゴマーは、２量体、３量体、４量体などであり得る。オリゴマーは、ホモオリゴマーまたはヘテロオリゴマーであり得る。オリゴマー中のポリペプチドは、共有結合または非共有結合され得る。
【００５６】
本発明はまた、ポリペプチドの発現を誘導する条件下で、本発明の核酸で形質転換された宿主細胞を培養するステップを含む本発明のポリペプチドを作製するプロセスも提供する。次いで、このポリペプチドは、例えば、培養上清から精製され得る。
【００５７】
本発明は、本発明のポリペプチドをコードするプラスミドを含む宿主細胞を提供する。宿主細胞の染色体は、Ｈ因子結合ポリペプチドの相同体を含んでも、このような相同体が存在しなくてもよく、いずれの場合も、本発明のポリペプチドは、プラスミドから発現され得る。プラスミドは、マーカーなどをコードする遺伝子を含み得る。適したプラスミドのこれらおよび他の詳細を以下に説明する。
【００５８】
本発明のポリペプチドの発現は、ポリペプチドが由来する菌株で起こり得るが、本発明は、通常は、発現用に異種宿主を用いる。異種宿主は、原核生物（例えば、細菌）または真核生物であり得る。適した宿主には、限定されるものではないが、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｃｉｎｅｒｅａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、酵母などが含まれる。
【００５９】
本発明は、ポリペプチドの少なくとも一部を化学手段によって合成するステップを含む本発明のポリペプチドを作製するプロセスを提供する。
【００６０】
（核酸）
本発明はまた、本発明のポリペプチドおよびハイブリッドポリペプチドをコードする核酸も提供する。本発明はまた、本発明の１つ以上のポリペプチドまたはハイブリッドポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸も提供する。
【００６１】
本発明はまた、このようなヌクレオチド配列に対して配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸も提供する。配列間の同一性は、好ましくは、上記したようにＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。このような核酸は、同じアミノ酸をコードする代替コドンを用いるものも含む。
【００６２】
本発明はまた、これらの核酸にハイブリダイズできる核酸も提供する。ハイブリダイゼーション反応は、異なる「ストリンジェンシー」の条件下で行われ得る。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーを高める条件は、当分野で周知であり、公表されている（例えば、参考文献２１４の頁７．５２）。適切な条件の例は（ストリンジェンシーが増加していく順に）：２５℃、３７℃、５０℃、５５℃、および６８℃のインキュベーション温度；１０×ＳＳＣ、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣおよび他の緩衝系を用いたそれらの同等物の緩衝液濃度（ＳＳＣは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸緩衝液）；０％、２５％、５０％、および７５％のホルムアミド濃度；５分〜２４時間のインキュベーション時間；１回、２回、またはそれ以上の洗浄ステップ；１分、２分、または１５分の洗浄インキュベーション時間；および６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄液を含む。ハイブリダイゼーション技術およびそれらの最適化は、当分野で周知である（例えば、参考文献２２、２３、２１４、２１６などを参照）。
【００６３】
一部の実施形態では、低いストリンジェンシー条件下で、本発明の核酸を標的にハイブリダイズさせ；他の実施形態では、中程度のストリンジェンシー条件下で、本発明の核酸をハイブリダイズさせ；好ましい実施形態では、高いストリンジェンシー条件下で、本発明の核酸をハイブリダイズさせる。低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件の例示的なセットは、５０℃および１０×ＳＳＣである。中程度のストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件の例示的なセットは、５５℃および１×ＳＳＣである。高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件の例示的なセットは、６８℃および０．１×ＳＳＣである。
【００６４】
本発明は、これらの配列に相補的な配列を含む核酸（例えば、アンチセンスまたはプロービング用、またはプライマーとしての使用のため）を含む。
【００６５】
本発明の核酸は、ハイブリダイゼーション反応（例えば、ノーザンブロットまたはサザンブロット、または核酸マイクロアレイすなわち「遺伝子チップ」）および増幅反応（例えば、ＰＣＲ、ＳＤＡ、ＳＳＳＲ、ＬＣＲ、ＴＭＡ、ＮＡＳＢＡなど）および他の核酸技術で使用され得る。
【００６６】
本発明による核酸は、様々な形態（例えば、１本鎖、２本鎖、ベクター、プライマー、プローブ、標識など）をとり得る。本発明の核酸は、環状または分岐でも良いが、通常は線状である。特段の記載または必要がない限り、核酸を利用する本発明のどの実施形態も、２本鎖の形態、および２本鎖の形態を形成するそれぞれが相補的な２つの１本鎖の形態の両方を利用し得る。プライマーおよびプローブは、アンチセンス核酸であるため、通常は１本鎖である。
【００６７】
本発明の核酸は、好ましくは、精製されたかまたは実質的に精製された形態、すなわち他の核酸を実質的に含まない（例えば、天然に存在する核酸を含まない）、特に目的の他の病原体または宿主細胞の核酸を実質的に含まない形態で提供され、一般に、少なくとも約５０％（重量）純粋、通常は少なくとも約９０％純粋である。
【００６８】
本発明の核酸は、様々な方法、例えば、全体または部分的な化学合成（例えば、ＤＮＡのホスホラミダイト合成）によって、ヌクレアーゼ（例えば、制限酵素）を用いた長い核酸の消化によって、ゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリー由来の短い核酸またはヌクレオチドの結合（例えば、リガーゼまたはポリメラーゼを用いた）などによって調製され得る。
【００６９】
本発明の核酸は、固形支持体（例えば、ビーズ、プレート、フィルター、フィルム、スライド、マイクロアレイ支持体、樹脂など）に付着させられ得る。本発明の核酸は、例えば、放射性標識または蛍光標識、またはビオチン標識で標識され得る。これは、核酸が検出技術で使用される場合、例えば、核酸がプライマーまたはプローブである場合に特に有用である。
【００７０】
用語「核酸」は、一般に、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を意味し、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および／またはそれらの類似体が含まれる。核酸には、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドが含まれる。また核酸には、例えば、修飾された骨格（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはホスホロチオエート）または修飾された塩基などを含むようなＤＮＡまたはＲＮＡの類似体も含まれる。したがって、本発明は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、組換え核酸、分岐核酸、プラスミド、ベクター、プローブ、プライマーなどを含む。本発明の核酸がＲＮＡの形態をとる場合は、本発明の核酸は、５’キャップを備えても備えなくても良い。
【００７１】
本発明の核酸は、ベクターの一部、すなわち１つ以上の細胞型のトランスダクション／トランスフェクション用に設計された核酸構築物の一部であり得る。ベクターは、例えば、挿入されたヌクレオチドの単離、増殖、および複製用に設計された「クローニングベクター」、宿主細胞でのヌクレオチド配列の発現用に設計された「発現ベクター」、組換えウイルスまたはウイルス様粒子の生産をもたらすように設計された「ウイルスベクター」、またはベクターの２つ以上の型の特性を備える「シャトルベクター」であり得る。好ましいベクターは、上述したようにプラスミドである。「宿主細胞」には、外来性核酸のレシピエントであり得るか、またはレシピエントである個々の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には、単一宿主細胞の子孫が含まれ、この子孫は、天然、偶発的、または計画的な変異および／または変化によって元の親細胞に対して必ずしも完全に同一（形態学的に、または全ＤＮＡ相補体において）ではないであろう。宿主細胞には、本発明の核酸でインビボまたはインビトロでトランスフェクトまたは感染させられた細胞が含まれる。
【００７２】
核酸がＤＮＡである場合は、ＲＮＡ配列中の「Ｕ」は、ＤＮＡ中の「Ｔ」に置き換えられることを理解されたい。同様に、核酸がＲＮＡの場合は、ＤＮＡ配列中の「Ｔ」は、ＲＮＡ中の「Ｕ」に置き換えられることを理解されたい。
【００７３】
用語「相補体」または「相補的」は、核酸に関連して使用される場合は、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対合を指す。したがって、Ｃの相補体はＧであり、Ｇの相補体はＣであり、Ａの相補体はＴ（またはＵ）であり、Ｔ（またはＵ）の相補体はＡである。また、例えば、相補ピリミジン（ＣまたはＴ）に対して塩基、例えば、Ｉ（プリンのイノシン）を使用することも可能である。
【００７４】
本発明の核酸は、例えば：ポリペプチドを作製するために；生物学的サンプル中の核酸の検出用のハイブリダイゼーションプローブとして；核酸の追加コピーを作製するために；リボザイムまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドを作製するために；１本鎖ＤＮＡプライマーまたはプローブとして；または３本鎖形成オリゴヌクレオチドとして、使用され得る。
【００７５】
本発明は、本発明の核酸を作製するためのプロセスを提供し、この核酸は、一部または全体が化学手段を用いて合成される。
【００７６】
本発明は、本発明のヌクレオチド配列を含むベクター（例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター）およびこのようなベクターで形質転換された宿主細胞を提供する。
【００７７】
本発明による核酸の増幅は、定量的および／またはリアルタイムであり得る。
【００７８】
本発明の特定の実施形態では、核酸は、好ましくは少なくとも７のヌクレオチドの長さである（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２５、２５０、２７５、３００ヌクレオチド、またはそれよりも長い）。
【００７９】
本発明の特定の実施形態では、核酸は、好ましくは最大でも５００ヌクレオチドの長さである（例えば、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５ヌクレオチド、またはそれよりも短い）。
【００８０】
本発明のプライマーおよびプローブ、ならびにハイブリダイゼーション用に使用される他の核酸は、好ましくは１０〜３０ヌクレオチドの長さである（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチド）。
【００８１】
（免疫原性組成物および薬剤）
本発明のポリペプチドは、免疫原性組成物中の活性成分（免疫原）として有用であり、このような組成物は、ワクチンとして有用であり得る。本発明によるワクチンは、予防用（すなわち、感染を防止する）または治療用（すなわち、感染を処置する）のいずれかであり得るが、典型的には予防用である。
【００８２】
免疫原性組成物は、薬学的に許容される。免疫原性組成物には、通常は、抗原に加えて成分が含まれ、例えば、これらの成分には、典型的には、１つ以上の薬学的担体（複数可）、賦形剤（複数可）、および／またはアジュバント（複数可）が含まれる。担体および賦形剤の詳細な議論は、参考文献２１１に記載されている。ワクチンアジュバントの詳細な議論は、参考文献２４および２５に記載されている。
【００８３】
組成物は、一般に、水性形態で哺乳動物に投与される。しかし、投与前は、組成物は、非水性形態であっても良い。例えば、一部のワクチンは、水性形態で製造され、また、後に水性形態のまま充填され、流通させられ、投与されるが、他のワクチンは、製造中に凍結乾燥され、使用時に水性形態に再構成される。したがって、本発明の組成物は、凍結乾燥処方物のように乾燥させても良い。
【００８４】
組成物は、チオマーサルまたは２−フェノキシエタノールなどの保存剤を含み得る。しかし、好ましくは、ワクチンは、水銀性物質を実質的に含まない（すなわち、５μｇ／ｍｌ未満）、例えば、チオマーサルフリーであるべきである。水銀を含まないワクチンがより好ましい。保存剤を含まないワクチンが特に好ましい。
【００８５】
熱安定性を改善するために、組成物は、熱保護剤を含み得る。
【００８６】
張度を調整するために、生理的塩、例えばナトリウム塩を含むのが好ましい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が好ましく、塩化ナトリウムは、１〜２０ｍｇ／ｍｌ、例えば、約１０±２ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌで存在しても良い。存在しても良い他の塩には、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二ナトリウム脱水物、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどが含まれる。
【００８７】
組成物は、一般に、２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、好ましくは２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇの容量オスモル濃度を有し、より好ましくは２９０〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲である。
【００８８】
組成物は、１つ以上の緩衝液を含み得る。典型的な緩衝液には、リン酸緩衝液；トリス緩衝液；ホウ酸緩衝液；コハク酸緩衝液；ヒスチジン緩衝液（特に水酸化アルミニウムアジュバントと共に使用）；またはクエン酸緩衝液が含まれる。緩衝液は、典型的には、５〜２０ｍＭの範囲で含められる。
【００８９】
組成物のｐＨは、一般に、５．０〜８．１であり、より典型的には６．０〜８．０、例えば、６．５および７．５、または７．０〜７．８である。
【００９０】
組成物は、好ましくは無菌である。組成物は、好ましくは発熱物質を含まず、例えば、１用量当たり＜１ＥＵ（エンドトキシン単位、標準的な測定単位）、好ましくは１用量当たり＜０．１ＥＵを含む。組成物は、好ましくはグルテンを含まない。
【００９１】
組成物は、単回免疫化用の材料を含んでも、複数回免疫化用の材料を含んでも良い（すなわち、「複数回投与」キット）。複数回投与配合では、保存剤を含めることが好ましい。複数回投与組成物中に保存剤を含める代わりに（またはこれに加えて）、組成物は、材料の取り出し用の無菌アダプターを備えた容器内に含めても良い。
【００９２】
ヒトワクチンは、典型的には、約０．５ｍｌの投薬量で投与されるが、子供には半分の用量（すなわち、約０．２５ｍｌ）を投与しても良い。
【００９３】
本発明の免疫原性組成物は、１つ以上の免疫調節剤も含み得る。好ましくは、１つ以上の免疫調節剤は、１つ以上のアジュバントを含む。アジュバントは、さらに以下に説明するように、ＴＨ１アジュバントおよび／またはＴＨ２アジュバントを含み得る。
【００９４】
本発明の組成物中に使用され得るアジュバントには、限定されるものではないが、以下のものが含まれる。
【００９５】
（Ａ．無機物含有組成物）
本発明のアジュバントとしての使用に適した無機物含有組成物には、無機塩、例えば、アルミニウム塩およびカルシウム塩（またはこれらの混合物）が含まれる。カルシウム塩には、リン酸カルシウム（例えば、参考文献２６に開示された「ＣＡＰ」粒子）が含まれる。アルミニウム塩には、塩が任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）をとっている水酸化物、リン酸塩、硫酸塩などが含まれる。これらの塩への吸着が好ましい。無機物含有組成物は、金属塩の粒子としても処方され得る（２７）。
【００９６】
水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして知られるアジュバントを使用しても良い。これらの名称は、いずれも存在する実際の化学化合物の正確な記載ではないため、慣習的であるが、利便のためだけに使用される（例えば、参考文献２４の第９章を参照）。本発明は、一般にアジュバントとして使用される「水酸化物」アジュバントまたは「リン酸塩」アジュバントのいずれもを使用することができる。「水酸化アルミニウム」として知られるアジュバントは、典型的にはオキシ水酸化アルミニウム塩であり、オキシ水酸化アルミニウム塩は、通常は少なくとも部分的に結晶である。「リン酸アルミニウム」として知られるアジュバントは、典型的には、少量の硫酸塩も含む場合が多いヒドロキシリン酸アルミニウムである（すなわち、ヒドロキシリン酸アルミニウム硫酸塩）。これらは、沈殿によって得てよく、そして沈殿中の反応条件および濃度が、塩におけるヒドロキシルへのリン酸塩の置換度に影響を与える。
【００９７】
線維形態（例えば、透過電子顕微鏡写真で見られるような）は、水酸化アルミニウムアジュバントの典型である。水酸化アルミニウムアジュバントのｐＩは、典型的には約１１、すなわちアジュバント自体が、生理的ｐＨで正の表面電荷を有する。ｐＨ７．４で、Ａｌ＋＋＋  １ｍｇ当たりタンパク質１．８〜２．６ｍｇの吸着能が、水酸化アルミニウムアジュバントで報告されている。
【００９８】
リン酸アルミニウムアジュバントは、一般に、０．３〜１．２、好ましくは０．８〜１．２、より好ましくは０．９５±０．１のＰＯ４／Ａｌモル比を有する。リン酸アルミニウムは、一般に非晶質であり、特にヒドロキシリン酸塩では非晶質である。典型的なアジュバントは、０．６ｍｇ  Ａｌ＋＋＋／ｍｌで含まれる、ＰＯ４／Ａｌモル比が０．８４〜０．９２の非晶質ヒドロキシリン酸アルミニウムである。リン酸アルミニウムは、一般に粒子状である（例えば、透過電子顕微鏡写真で見られるようにプレート様の形態）。この粒子の典型的な直径は、いかなる抗原吸着の後も０．５〜２０μｍの範囲（例えば、約５〜１０μｍ）である。ｐＨ７．４で、Ａｌ＋＋＋  １ｍｇ当たりタンパク質０．７〜１．５ｍｇの吸着能が、リン酸アルミニウムアジュバントで報告されている。
【００９９】
リン酸アルミニウムのゼロ電荷点（ＰＺＣ）は、ヒドロキシルのリン酸塩での置換度に逆相関し、この置換度は、沈殿による塩の調製に使用される反応条件および反応物の濃度によって異なり得る。ＰＺＣはまた、溶液中の遊離リン酸イオンの濃度を変化させることによって（リン酸が多い＝より酸性のＰＺＣ）、またはヒスチジン緩衝液などの緩衝液を添加することによって（ＰＺＣの塩基性が上昇）、変更される。本発明に従って使用されるリン酸アルミニウムは、一般に４．０〜７．０、より好ましくは５．０〜６．５、例えば、約５．７のＰＺＣを有する。
【０１００】
本発明の組成物を調製するために使用されるアルミニウム塩の懸濁物は、緩衝液（例えば、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、またはトリス緩衝液）を含んで良いが、常に含む必要はない。懸濁物は、好ましくは無菌であり、発熱物質を含まない。懸濁物は、例えば、１．０〜２０ｍＭ、好ましくは５〜１５ｍＭ、より好ましくは約１０ｍＭの濃度で存在する遊離水性リン酸イオンを含み得る。懸濁物は、塩化ナトリウムも含み得る。
【０１０１】
本発明は、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムの両方の混合物を使用することができる。この場合、水酸化アルミニウムよりもリン酸アルミニウムの方が多く存在することができ、例えば、少なくとも２：１、例えば、≧５：１、≧６：１、≧７：１、≧８：１、≧９：１などの重量比である。
【０１０２】
患者に投与される組成物中のＡｌ＋＋＋の濃度は、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌ未満、例えば、≦５ｍｇ／ｍｌ、≦４ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌなどである。好ましい範囲は、０．３〜１ｍｇ／ｍｌである。最大で０．８５ｍｇ／用量であるのが好ましい。
【０１０３】
（Ｂ．油乳剤）
本発明のアジュバントとして使用するのに適した油乳剤組成物には、スクアレン−水乳剤、例えば、ＭＦ５９（参考文献２４の第１０章；参考文献２８も参照）（マイクロフルイダイザー（microfluidizer）を用いてサブミクロン粒子に処方された５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０、および０．５％Ｓｐａｎ８５）が含まれる。完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロインドアジュバント（ＩＦＡ）も使用され得る。
【０１０４】
様々な水中油型乳剤アジュバントが知られており、これらは、典型的には、少なくとも１つの油および少なくとも１つの界面活性剤を含み、油（複数可）および界面活性剤（複数可）は、生分解性（代謝可能）かつ生体適合性である。乳剤中の油滴は、一般に５μｍ未満の直径であり、理想的にはサブミクロンの直径であり、これらの小さいサイズは、マイクロフルイダイザーで達成され、安定な乳剤を提供する。ろ過滅菌できるようにサイズが２２０ｎｍ未満の小滴が好ましい。
【０１０５】
乳剤は、動物（例えば、魚）の供給源または植物の供給源に由来するような油を含むことができる。植物油の供給源には、堅果、種、および穀物が含まれる。ピーナッツ油、大豆油、ヤシ油、およびオリーブ油は、最も入手しやすく、堅果油の例である。例えば、ホホバ豆から得られるホホバ油が使用され得る。種油には、ヒマワリ油、綿実油、ヒマワリ種子油、およびゴマ油などが含まれる。穀物群では、コーン油が、最も容易に入手可能であるが、他のシリアル穀物、例えば、コムギ、カラスムギ、ライムギ、コメ、テフ、およびライコムギなどの油も使用され得る。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの６〜１０炭素脂肪酸エステルは、種油では自然に発生しないが、堅果油および種油に由来する適切な材料の加水分解、分離、およびエステル化によって調製され得る。哺乳動物乳由来の脂肪および油は、代謝可能であり、従って本発明の実施に使用され得る。動物の供給源由来の純粋な油を得るために必要な分離、精製、鹸化、および他の手段の手順は、当分野で周知である。殆どの魚には、容易に回収され得る代謝可能な油が含まれている。例えば、タラ肝油、サメ肝油、および鯨ろうなどの鯨油は、本発明に使用され得るいくつかの魚油の例である。多数の分岐鎖油が、５−炭素イソプレン単位で生化学的に合成され、一般にテルペノイドと呼ばれる。サメ肝油は、スクアレン、２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエンとして知られる分岐不飽和テルペノイドを含み、これは、本発明に特に好ましい。スクアラン、スクアレンの飽和類似体も好ましい油である。スクアレンおよびスクアランを含む魚油は、商業的供給源から容易に入手可能であるか、または当分野で公知の方法によって得られ得る。他の好ましい油は、トコフェロールである（以下を参照）。油の混合物も使用され得る。
【０１０６】
界面活性剤は、そのＨＬＢ（親水／親油平衡）によって分類され得る。本発明の好ましい界面活性剤は、少なくとも１０、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６のＨＬＢを有する。本発明は、限定されるものではないが：ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般にＴｗｅｅｎｓと呼ばれる）、特にポリソルベート２０およびポリソルベート８０；エチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）、および／またはブチレンオキシド（ＢＯ）のコポリマー、ＤＯＷＦＡＸＴＭ商用名として販売されており、例えば、線状ＥＯ／ＰＯブロックコポリマー；オクトキシノール、これは反復エトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の数が様々であり得、オクトキシノール−９（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）が特に目的のものである；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ  ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；リン脂質、例えば、ホスファチジルコリン（レシチン）；ノニルフェノールエトキシレート、例えば、ＴｅｒｇｉｔｏｌＴＭＮＰシリーズ；ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、およびオレイルアルコールに由来するポリオキシエチレン脂肪エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として知られている）、例えば、トリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３０）；およびソルビタンエステル（一般にＳＰＡＮとして知られている）、例えば、三オレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８５）およびモノラウリン酸ソルビタン、を含む界面活性剤と共に使用され得る。非イオン性界面活性剤が好ましい。乳剤中に含めるのに好ましい界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、Ｓｐａｎ８５（三オレイン酸ソルビタン）、レシチン、およびＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００である。
【０１０７】
界面活性剤の混合物、例えば、Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５混合物が使用され得る。ポリオキシエチレンソルビタンエステルの組み合わせ、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０）およびオクトキシノール、例えば、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）も適している。別の有用な組み合わせには、ラウレス９とポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールが含まれる。
【０１０８】
界面活性剤の好ましい量（重量％）は：ポリオキシエチレンソルビタンエステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０）が０．０１〜１％、特に約０．１％；オクチル−またはノニルフェノキシポリオキシエタノール（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、またはＴｒｉｔｏｎシリーズの他の界面活性剤）が０．００１〜０．１％、特に０．００５〜０．０２％；ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ラウレス９）が０．１〜２０％、好ましくは０．１〜１０％、特に０．１〜１％または約０．５％である。
【０１０９】
好ましい乳剤アジュバントは、＜１μｍ、例えば、≦７５０ｎｍ、≦５００ｎｍ、≦４００ｎｍ、≦３００ｎｍ、≦２５０ｎｍ、≦２２０ｎｍ、≦２００ｎｍ、またはそれよりも小さい平均小滴サイズを有する。これらの小滴サイズは、マイクロフルイダイゼーションなどの技術によって好都合に達成され得る。
【０１１０】
本発明に有用な具体的な水中油型乳剤アジュバントには、限定されるものではないが、以下のものが含まれる。
【０１１１】
・スクアレン、Ｔｗｅｅｎ８０、およびＳｐａｎ８５のサブミクロン乳剤。乳剤の容積組成は、約５％スクアレン、約０．５％ポリソルベート８０、および約０．５％Ｓｐａｎ８５であり得る。重量では、これらの比は、４．３％スクアレン、０．５％ポリソルベート８０、および０．４８％Ｓｐａｎ８５となる。このアジュバントは、参考文献３２の第１０章および参考文献３３の第１２章に詳細に記載されているように、「ＭＦ５９」（２９〜３１）として知られている。ＭＦ５９乳剤には、クエン酸イオン、例えば、１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液が有利に含まれる。
【０１１２】
・スクアレン、トコフェロール、およびＴｗｅｅｎ８０の乳剤。この乳剤は、リン酸緩衝生理食塩水を含み得る。乳剤は、Ｓｐａｎ８５（例えば、１％で）および／またはレシチンも含み得る。これらの乳剤は、２〜１０％スクアレン、２〜１０％トコフェロール、および０．３〜３％Ｔｗｅｅｎ８０を有し得、スクアレン：トコフェロールの重量比は、≦１がより安定な乳剤を提供するため、≦１が好ましい。スクアレンおよびＴｗｅｅｎ８０は、約５：２の容積比で存在し得る。１つのこのような乳剤は、Ｔｗｅｅｎ８０をＰＢＳに溶解して２％溶液を得、次いでこの溶液９０ｍｌを混合物（ＤＬ−α−トコフェロール５ｇおよびスクアレン５ｍｌ）と混合し、この混合物をマイクロフルイダイズすることによって作製され得る。得られる乳剤は、例えば、１００〜２５０ｎｍ、好ましくは約１８０ｎｍの平均直径のサブミクロン油滴を有し得る。
【０１１３】
・スクアレン、トコフェロール、およびＴｒｉｔｏｎ界面活性剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）の乳剤。この乳剤は、３ｄ−ＭＰＬ（以下を参照）も含み得る。乳剤は、リン酸緩衝液を含み得る。
【０１１４】
・ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０）、Ｔｒｉｔｏｎ界面活性剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）、およびトコフェロール（例えば、α−コハク酸トコフェロール）を含む乳剤。この乳剤は、約７５：１１：１０の質量比でこれら３つの成分（例えば、７５０μｇ／ｍｌポリソルベート８０、１１０μｇ／ｍｌ  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、および１００μｇ／ｍｌ  α−コハク酸トコフェロール）を含み得、これらの濃度は、抗原由来のこれらの成分の任意の寄与を含むべきである。この乳剤は、スクアレンも含み得る。乳剤はまた、３ｄ−ＭＰＬ（以下を参照）も含み得る。水相は、リン酸緩衝液を含み得る。
【０１１５】
・スクアレン、ポリソルベート８０、およびポロキサマー４０１（「ＰｌｕｒｏｎｉｃＴＭＬ１２１」）の乳剤。この乳剤は、ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水で処方され得る。この乳剤は、ムラミルジペプチドの有用な送達ビヒクルであり、「ＳＡＦ−１」アジュバント（３４）（０．０５〜１％Ｔｈｒ−ＭＤＰ、５％スクアレン、２．５％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ１２１、および０．２％ポリソルベート８０）においてトレオニル−ＭＤＰと共に使用された。乳剤はまた、「ＡＦ」アジュバント（３５）（５％スクアレン、１．２５％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ１２１、および０．２％ポリソルベート８０）においてのようにＴｈｒ−ＭＤＰを用いずに使用しても良い。マイクロフルイダイゼーションが好ましい。
【０１１６】
・スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）、および疎水性非イオン性界面活性剤（例えば、ソルビタンエステルまたはマンニドエステル、例えば、モノオレイン酸ソルビタンまたは「Ｓｐａｎ８０」）を含む乳剤。この乳剤は、好ましくは熱可逆性であり、および／または少なくとも９０％（容積）の、サイズが２００ｎｍ未満の油滴を有する（３６）。乳剤は、アルジトール；凍結防止剤（例えば、糖、例えば、ドデシルマルトシドおよび／またはスクロース）；および／またはアルキルポリグリコシドの１つ以上も含み得る。このような乳剤は、凍結乾燥され得る。
【０１１７】
・スクアレン、ポリオキサマー１０５、およびＡｂｉｌ−Ｃａｒｅの乳剤（３７）。アジュバントワクチン中のこれらの成分の最終濃度（重量）は、５％スクアレン、４％ポリオキサマー１０５（プルロニックポリオール）、および２％Ａｂｉｌ−Ｃａｒｅ８５（Ｂｉｓ−ＰＥＧ／ＰＰＧ−１６／１６  ＰＥＧ／ＰＰＧ−１６／１６  ジメチコーン；トリカプリルグリセリル／トリカプリン酸グリセリル）である。
【０１１８】
・０．５〜５０％の油、０．１〜１０％のリン脂質、および０．０５％〜５％の非イオン性界面活性剤を有する乳剤。参考文献３８に記載されているように、好ましいリン脂質成分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、およびカルジオリピンである。サブミクロン小滴サイズが有利である。
【０１１９】
・非代謝油（例えば、軽鉱油）および少なくとも１つの界面活性剤（例えば、レシチン、Ｔｗｅｅｎ８０、またはＳｐａｎ８０）のサブミクロン水中油型乳剤。添加物、例えば、ＱｕｉｌＡサポニン、コレステロール、サポニン−親油結合体（例えば、グルクロン酸のカルボキシル基を介した脂肪族アミンのデサシルサポニン(desacylsaponin)への添加によって作製される、参考文献３９に記載されているＧＰＩ−０１００）、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ｄｉｍｅｔｈｙｉｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｂｏｍｉｄｅ）、および／またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミンが含まれ得る。
【０１２０】
・サポニン（例えば、ＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１）およびステロール（例えば、コレステロール）が螺旋ミセル（ｈｅｌｉｃａｌ  ｍｉｃｅｌｌｅ）として結合している乳剤（４０）。
【０１２１】
・鉱油、非イオン性親油性エトキシル化脂肪アルコール、および非イオン性親水性界面活性剤（例えば、エトキシル化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）を含む乳剤（４１）。
【０１２２】
・鉱油、非イオン性親水性エトキシル化脂肪アルコール、および非イオン性親油性界面活性剤（例えば、エトキシル化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）を含む乳剤（４１）。
【０１２３】
一部の実施形態では、乳剤は、送達時に抗原と即席に混合され得るため、アジュバントと抗原は、使用時の最終処方に備えて、パッケージワクチンまたは分散ワクチンにおいて別個に維持され得る。他の実施形態では、乳剤は、製造中に抗原と混合されるため、この組成物は、液体アジュバントの形態でパッケージされる。抗原は、ワクチンが２つの液体の混合によって最終的に調製されるように、一般に水性形態である。混合される２つの液体の容積比は、様々であり得るが（例えば、５：１〜１：５）、一般に約１：１である。成分の濃度が、特定の乳剤の上記である場合、これらの濃度は、典型的には不希釈組成物用であるため、抗原液との混合後の濃度は低下する。
【０１２４】
組成物がトコフェロールを含む場合、α、β、γ、δ、ε、またはξトコフェロールのいずれもが使用され得るが、α−トコフェロールが好ましい。トコフェロールは、いくつかの形態、例えば、異なる塩および／または異性体の形態をとり得る。塩には、有機塩、例えば、コハク酸塩、酢酸塩、ニコチン酸塩などが含まれる。Ｄ−α−トコフェロールおよびＤＬ−α−トコフェロールは共に使用され得る。トコフェロールは、ビタミンＥが高齢患者群（例えば、６０歳以上）における免疫応答に好ましい効果を有することが報告されたため、この患者群で使用されるワクチンに有利に含められる（４２）。トコフェロールは、乳剤を安定させるのを助け得る抗酸化特性も有する（４３）。好ましいα−トコフェロールは、ＤＬ−α−トコフェロールであり、そしてこのトコフェロールの好ましい塩は、コハク酸塩である。コハク酸塩は、インビボでＴＮＦ関連リガンドと協働することが分かっている。
【０１２５】
（Ｃ．サポニン処方物（参考文献２４の第２２章））
サポニン処方物も、本発明のアジュバントとして使用され得る。サポニンは、広範囲の植物種の樹皮、葉、茎、根、および花にも見られるステーロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種グループ（heterogeneous group）である。Ｑｕｉｌｌａｉａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ樹木の樹皮に由来するサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ  ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ  ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライダルベール（ｂｒｉｄｅｓ  ｖｅｉｌ））、およびＳａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（サボンソウ（ｓｏａｐ  ｒｏｏｔ））から商業的に得られ得る。サポニンアジュバント処方物には、精製処方物、例えば、ＱＳ２１、および脂質処方物、例えば、ＩＳＣＯＭが含まれる。ＱＳ２１は、ＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭとして市販されている。
【０１２６】
サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製された。これらの技術を用いて精製された特定の画分は、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−Ｂ、およびＱＨ−Ｃを含め、同定されている。好ましくは、サポニンは、ＱＳ２１である。ＱＳ２１の生産方法は、参考文献４４に開示されている。サポニン処方物はまた、ステロール、例えば、コレステロールも含み得る（４５）。
【０１２７】
サポニンとコレステロールの組み合わせは、免疫賦活性複合体（ＩＳＣＯＭ）（参考文献２４の第２３章）と呼ばれる独特の粒子を形成するために使用され得る。ＩＳＣＯＭは、典型的には、リン脂質、例えば、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンも含む。いずれの公知のサポニンも、ＩＳＣＯＭで使用され得る。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡ、およびＱＨＣの１つ以上を含む。ＩＳＣＯＭは、さらに、参考文献４５〜４７に記載されている。任意選択で、ＩＳＣＯＭは、付加的な界面活性剤を含まなくても良い（４８）。
【０１２８】
サポニンをベースとしたアジュバントの開発の概説は、参考文献４９および５０で見られ得る。
【０１２９】
（Ｄ．ビロゾームおよびウイルス様粒子）
ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）も、本発明のアジュバントとして使用され得る。これらの構造は、一般に、任意選択でリン脂質と組み合わせられるかまたは処方されるウイルス由来の１つ以上のタンパク質を含む。これらは、一般に非病原性で非複製性であり、一般に天然ウイルスのゲノムを一切含まない。ウイルスタンパク質は、組換え的に作製されるかまたはウイルス全体から単離され得る。ビロゾームまたはＶＬＰに使用するのに適したこれらのウイルスタンパク質には、インフルエンザウイルスに由来するタンパク質（例えば、ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルスに由来するタンパク質（例えば、コアタンパク質またはキャプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルスに由来するタンパク質、麻疹ウイルスに由来するタンパク質、シンドビスウイルスに由来するタンパク質、ロタウイルスに由来するタンパク質、口蹄疫ウイルスに由来するタンパク質、レトロウイルスに由来するタンパク質、ノーウォークウイルスに由来するタンパク質、ヒトパピローマウイルスに由来するタンパク質、ＨＩＶに由来するタンパク質、ＲＮＡファージに由来するタンパク質、Ｑβファージに由来するタンパク質（例えば、外被タンパク質）、ＧＡファージに由来するタンパク質、ｆｒファージに由来するタンパク質、ＡＰ２０５ファージに由来するタンパク質、およびＴｙに由来するタンパク質（例えば、レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１）が含まれる。ＶＬＰは、参考文献５１〜５６でさらに議論されている。ビロゾームは、例えば、参考文献５７でさらに議論されている。
【０１３０】
（Ｅ．細菌誘導体または微生物誘導体）
本発明に使用するのに適したアジュバントには、細菌誘導体または微生物誘導体、例えば、腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、リピドＡ誘導体、免疫賦活オリゴヌクレオチド、ならびにＡＤＰリボシル化毒素およびその解毒誘導体が含まれる。
【０１３１】
ＬＰＳの非毒性誘導体には、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が含まれる。３ｄＭＰＬは、３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡと４、５、または６アシル化鎖との混合物である。３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡの好ましい「小粒子」形態が、参考文献５８に開示されている。このような３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２μＭの膜に通して滅菌ろ過されるべく十分に小さい（５８）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体には、モノホスホリルリピドＡ模倣体、例えば、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体、例えば、ＲＣ−５２９が含まれる（５９、６０）。
【０１３２】
リピドＡ誘導体には、大腸菌由来リピドＡの誘導体、例えば、ＯＭ−１７４が含まれる。ＯＭ−１７４は、例えば、参考文献６１および６２に記載されている。
【０１３３】
本発明のアジュバントとして使用するのに適した免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧモチーフ（グアノシンにリン酸結合によって連結された非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）を含むヌクレオチド配列を含む。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む２本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドも、免疫賦活性であることが示されている。
【０１３４】
ＣｐＧ’ｓは、ヌクレオチド修飾体／類似体、例えば、ホスホロチオエート修飾体を含み得、２本鎖または１本鎖であり得る。参考文献６３、６４、および６５は、可能な類似体の置換、例えば、グアノシンの２’−デオキシ−７−デアザグアノシンでの置換を開示している。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献６６〜７１にさらに記載されている。
【０１３５】
ＣｐＧ配列は、ＴＬＲ９、例えば、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴに対して向けられ得る（７２）。ＣｐＧ配列、例えば、ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮは、Ｔｈ１免疫応答の誘導に特異的であり得、またはＣｐＧ配列、例えば、ＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮは、Ｂ細胞応答の誘導により特異的であり得る。ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮは、参考文献７３〜７５で議論されている。好ましくは、ＣｐＧは、ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮである。
【０１３６】
好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端が受容体の認識のためにアクセス可能であるように構築される。任意選択で、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列は、それらの３’末端で付着されて「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成し得る。例えば、参考文献７２および７６〜７８を参照されたい。
【０１３７】
有用なＣｐＧアジュバントは、ＰｒｏＭｕｎｅＴＭ（Ｃｏｌｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）としても知られているＣｐＧ７９０９である。もう１つは、ＣｐＧ１８２６である。代替として、またはＣｐＧ配列の使用に加えて、ＴｐＧ配列が使用され得（７９）、これらのオリゴヌクレオチドは、非メチル化ＣｐＧモチーフを含まなくても良い。免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、ピリミジンリッチであり得る。例えば、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、２つ以上の連続したチミジンヌクレオチド（例えば、参考文献７９に開示されているようなＴＴＴＴ）を含み、および／またはチミジンが＞２５％（例えば、＞３５％、＞４０％、＞５０％、＞６０％、＞８０％など）のヌクレオチド組成物を有し得る。例えば、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、２つ以上の連続したシトシンヌクレオチド（例えば、参考文献７９に開示されているようなＣＣＣＣ）を含み得、および／またはシトシンが＞２５％（例えば、＞３５％、＞４０％、＞５０％、＞６０％、＞８０％など）のヌクレオチド組成物を有し得る。これらのオリゴヌクレオチドは、非メチル化ＣｐＧモチーフを含まなくても良い。免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、典型的には少なくとも２０のヌクレオチドを含む。免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、１００未満のヌクレオチドを含み得る。
【０１３８】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドなどをベースにした特に有用なアジュバントは、ＩＣ−３１TMとして知られている（８０）。したがって、本発明に使用されるアジュバントは、（ｉ）少なくとも１つ（より好ましくは複数）のＣｐＩモチーフ（すなわち、シトシンがイノシンに連結されてジヌクレオチドを形成している）を含むオリゴヌクレオチド（例えば、１５〜４０のヌクレオチド）と、（ｉｉ）ポリカチオンポリマー、例えば、少なくとも１つ（より好ましくは複数）のＬｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓトリペプチド配列（複数可）を含むオリゴペプチド（例えば、５〜２０のアミノ酸）との混合物を含み得る。オリゴヌクレオチドは、２６−ｍｅｒ配列５’−（ＩＣ）１３−３’（配列番号９６）を含むデオキシヌクレオチドであり得る。ポリカチオンポリマーは、１１−ｍｅｒアミノ酸配列ＫＬＫＬＬＬＬＬＫＬＫ（配列番号９７）を含むペプチドであり得る。
【０１３９】
細菌ＡＤＰリボシル化毒素およびその解毒誘導体は、本発明のアジュバントとして使用され得る。好ましくは、このタンパク質は、大腸菌（大腸菌易熱性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ菌（「ＣＴ」）、または百日咳菌（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての解毒ＡＤＰリボシル化毒素の使用は、参考文献８１に記載され、参考文献８２には非経口アジュバントとして記載されている。毒素またはトキソイドは、好ましくは、ＡサブユニットおよびＢサブユニットを含むホロトキシンの形態である。好ましくは、Ａサブユニットは、解毒変異を含み；好ましくは、Ｂサブユニットは変異されていない。好ましくは、アジュバントは、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴ−Ｇ１９２などの解毒ＬＴ変異体である。ＡＤＰリボシル化毒素およびその解毒誘導体、特にＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２のアジュバントとしての使用は、参考文献８３〜９０で見られ得る。有用なＣＴ変異体は、ＣＴ−Ｅ２９Ｈである（９１）。アミノ酸置換の参考数値は、好ましくは、特に参照によりその全容が本明細書に組み入れられる参考文献９２に記載されているＡＤＰリボシル化毒素のＡサブユニットとＢサブユニットのアラインメントに基づいている。
【０１４０】
（Ｆ．ヒト免疫調節因子）
本発明のアジュバントとして使用するのに適したヒト免疫調節因子には、サイトカイン、例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２（９３）など）（９４）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子が含まれる。好ましい免疫調節因子は、ＩＬ−１２である。
【０１４１】
（Ｇ．生体接着物および粘膜接着物）
生体接着物および粘膜接着物も、本発明のアジュバントとして使用され得る。適した生体接着物には、エステル化ヒアルロン酸マイクロスフェア（９５）または粘膜接着物、例えば、ポリ（アクリル酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖、およびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体が含まれる。キトサンおよびその誘導体も、本発明のアジュバントとして作用され得る（９６）。
【０１４２】
（Ｈ．微小粒子）
微小粒子も、本発明のアジュバントとして使用され得る。ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）と共に、生分解性かつ非毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど）から形成された微小粒子（すなわち、直径が約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）が好ましく、任意選択で、負に帯電した表面（例えば、ＳＤＳを使用）または正に帯電した表面（例えば、陽イオン性界面活性剤、例えば、ＣＴＡＢを使用）を有するように処置される。
【０１４３】
（Ｉ．リポソーム（参考文献２４の第１３章および第１４章））
アジュバントとして使用するのに適したリポソーム処方物の例が、参考文献９７〜９９に記載されている。
【０１４４】
（Ｊ．ポリオキシエチレンエーテル処方物およびポリオキシエチレンエステル処方物）
本発明に使用するのに適したアジュバントには、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが含まれる（１００）。このような処方物には、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（１０１）および少なくとも１つの追加の非イオン性界面活性剤、例えば、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（１０２）がさらに含まれる。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテルから選択される。
【０１４５】
（Ｋ．ホスファゼン）
ホスファゼン、例えば、参考文献１０３および１０４に記載されているようなポリ（ジ（カルボキシラトフェノキシ）ホスファゼン）（「ＰＣＰＰ」）が使用され得る。
【０１４６】
（Ｌ．ムラミルペプチド）
本発明のアジュバントとして使用するのに適したムラミルペプチドの例には、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）が含まれる。
【０１４７】
（Ｍ．イミダゾキノロン化合物）
本発明のアジュバントとして使用するのに適したイミダゾキノロン化合物の例には、イミキモド（「Ｒ−８３７」）（１０５、１０６）、レシキモド（「Ｒ−８４８」）（１０７）、およびこれらの類似体；およびこれらの塩（例えば、塩酸塩）が含まれる。免疫賦活性イミダゾキノリンについてのさらなる詳細は、参考文献１０８〜１１２で見られ得る。
【０１４８】
（Ｎ．置換尿素）
アジュバントとして有用な置換尿素には、式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩの化合物：
【０１４９】
【化２】
2012502073.tif 000003
またはこれらの塩が含まれ、参考文献１１３に、例えば、「ＥＲ８０３０５８」、「ＥＲ８０３７３２」、「ＥＲ８０４０５３」、「ＥＲ８０４０５８」、「ＥＲ８０４０５９」、「ＥＲ８０４４４２」、「ＥＲ８０４６８０」、「ＥＲ８０４７６４」、「ＥＲ８０３０２２」、または「ＥＲ８０４０５７」として定義されている。例えば：
【０１５０】
【化３】
2012502073.tif 000004
である。
【０１５１】
（Ｏ．さらなるアジュバント）
本発明と共に使用され得るさらなるアジュバントには以下のものが含まれる。
【０１５２】
・アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体、例えば、ＲＣ−５２９（１１４、１１５）。
【０１５３】
・チオセミカルバゾン化合物、例えば、参考文献１１６に開示されているもの。活性化合物の処方、製造、およびスクリーニングの方法も、参考文献１１６に記載されている。チオセミカルバゾンは、ヒト末梢血単核細胞を刺激して、サイトカイン、例えば、ＴＮＦ−αを産生させるのに特に有効である。
【０１５４】
・トリプタントリン化合物、例えば、参考文献１１７に開示されているもの。活性化合物の処方、製造、およびスクリーニングの方法も、参考文献１１７に記載されている。チオセミカルバゾンは、ヒト末梢血単核細胞を刺激して、サイトカイン、例えば、ＴＮＦ−αを産生させるのに特に有効である。
【０１５５】
・ヌクレオシド類似体、例えば：（ａ）Ｉｓａｔｏｒａｂｉｎｅ（ＡＮＡ−２４５；７−チア−８−オキソグアノシン）：
【０１５６】
【化４】
2012502073.tif 000005
およびそのプロドラッグ；（ｂ）ＡＮＡ９７５；（ｃ）ＡＮＡ−０２５−１；（ｄ）ＡＮＡ３８０；（ｅ）参考文献１１８から１２０に開示されている化合物。
【０１５７】
・ロキソリビン（７−アリル−８−オキソグアノシン）（１２１）。
【０１５８】
・アシルピペラジン化合物、インドールジオン化合物、テトラヒドライソキノリン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒａｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ）（ＴＨＩＱ）化合物、ベンゾシクロジオン（Ｂｅｎｚｏｃｙｃｌｏｄｉｏｎｅ）化合物、アミノアザビニル（Ａｍｉｎｏａｚａｖｉｎｙｌ）化合物、アミノベンズイミダゾールキノリノン（Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ  ｑｕｉｎｏｌｉｎｏｎｅ）（ＡＢＩＱ）化合物（１２３、１２４）、ヒドラプタルアミド（Ｈｙｄｒａｐｔｈａｌａｍｉｄｅ）化合物、ベンゾフェノン化合物、イソキサゾール化合物、ステロール化合物、キナジリノン（Ｑｕｉｎａｚｉｌｉｎｏｎｅ）化合物、ピロール化合物（１２５）、アントラキノン化合物、キノキサリン化合物、トリアジン化合物、ピラザロピリミジン（Ｐｙｒａｚａｌｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ）化合物、およびベンザゾール化合物（１２６）を含む、参考文献１２２に開示されている化合物。
【０１５９】
・ホスフェート含有非環式骨格に連結された脂質を含む化合物、例えば、ＴＬＲ４拮抗薬Ｅ５５６４（１２７、１２８）。
【０１６０】
・ポリオキシドニウム（ｐｏｌｙｏｘｉｄｏｎｉｕｍ）ポリマー（１２９、１３０）または他のＮ−酸化ポリエチレン−ピペラジン誘導体。
【０１６１】
・メチルイノシン５’−モノホスフェート（「ＭＩＭＰ」）（１３１）。
【０１６２】
・ポリヒドロキシル化ピロリジジン化合物（１３２）、例えば、式：
【０１６３】
【化５】
2012502073.tif 000006
を有する化合物(Ｒは、水素、線状または分岐、非置換または置換、飽和または不飽和アシル基、アルキル基（例えば、シクロアルキル基）、アルケニル基、アルキニル基、およびアリル基を含む群から選択される)、または薬学的に許容されるこれらの塩もしくは誘導体。例には、限定されるものではないが、カスアリン（ｃａｓｕａｒｉｎｅ）、カスアリン−６−α−Ｄ−グルコピラノース、３−エピ−カスアリン、７−エピ−カスアリン、３，７−ジエピ−カスアリンなどが含まれる。
【０１６４】
・ＣＤ１ｄリガンド、例えば、α−グリコシルセラミド（１３３〜１４０）（例えば、α−ガラクトシルセラミド）、フィトスフィンゴシン含有α−グリコシルセラミド、ＯＣＨ、ＫＲＮ７０００（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタデカントリオール）、ＣＲＯＮＹ−１０１、３’’−Ｏ−スルホ−ガラクトシルセラミドなど。
【０１６５】
・γイヌリン（１４）またはその誘導体、例えば、アルガムリン（ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）。
【０１６６】
【化６】
2012502073.tif 000007
（アジュバントの組み合わせ）
本発明はまた、上で同定した１つ以上のアジュバントの局面の組み合わせも含み得る。例えば、以下のアジュバント組成物：（１）サポニンおよび水中油型乳剤（１４２）；（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（１４３）；（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（任意選択で、＋ステロール）（１４４）；（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型乳剤との組み合わせ（１４５）；（６）サブミクロン乳剤にマイクロフルイダイズされたか、またはボルテックスされてそれより大きい粒径の乳剤にされた、１０％スクアレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０ＴＭ、５％プルロニック−ブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含むＳＡＦ；（７）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、ならびにモノホスホリルリピド（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｉｐｉｄ）Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群からの１つ以上の細菌細胞壁成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ）を含むＲｉｂｉＴＭアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）；および（８）１つ以上の無機塩（例えば、アルミニウム塩）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）が、本発明に使用され得る。
【０１６７】
免疫賦活剤として作用する他の物質は、参考文献２４の第７章に開示されている。
【０１６８】
水酸化アルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウムのアジュバントの使用は、特に好ましく、抗原が、一般にこれらの塩に吸着される。リン酸カルシウムは、別の好ましいアジュバントである。他の好ましいアジュバントの組み合わせには、Ｔｈ１アジュバントとＴｈ２アジュバントの組み合わせ、例えば、ＣｐＧとミョウバンまたはレシキモドとミョウバンの組み合わせが含まれる。リン酸アルミニウムと３ｄＭＰＬの組み合わせを使用しても良い。
【０１６９】
本発明の組成物は、細胞媒介免疫応答および体液性免疫応答の両方を誘導し得る。この免疫応答は、好ましくは、長期的に持続する（例えば、中和）抗体および肺炎球菌（ｐｎｕｅｍｏｃｏｃｃｕｓ）への曝露に際し迅速に応答し得る細胞媒介免疫を誘導する。
【０１７０】
２種類のＴ細胞、ＣＤ４細胞およびＣＤ８細胞は、一般に、細胞媒介免疫および体液性免疫を開始、および／または亢進するために必要であると考えられている。ＣＤ８Ｔ細胞は、ＣＤ８共受容体（co-receptor）を発現することができ、一般に細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）と呼ばれている。ＣＤ８Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子上に提示された抗原を認識でき、またはその抗原と相互作用することができる。
【０１７１】
ＣＤ４Ｔ細胞は、ＣＤ４共受容体を発現することができ、一般にヘルパーＴ細胞と呼ばれている。ＣＤ４Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合した抗原ペプチドを認識することができる。ＭＨＣクラスＩＩ分子との相互作用に際し、ＣＤ４細胞は、因子、例えば、サイトカインを分泌することができる。これらの分泌されたサイトカインは、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、マクロファージ、および免疫応答に寄与する他の細胞を活性化させることができる。ヘルパーＴ細胞またはＣＤ４＋細胞は、機能的に異なる２つのサブセット：サイトカインおよびエフェクター機能が異なるＴＨ１表現型およびＴＨ２表現型にさらに分類され得る。
【０１７２】
活性化ＴＨ１細胞は、細胞性免疫（抗原特異的ＣＴＬ産生の増加を含む）を亢進するため、細胞内感染に対する応答で特に有用である。活性化ＴＨ１細胞は、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦ−βの１つ以上を分泌し得る。ＴＨ１免疫応答は、マクロファージ、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、およびＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を活性化させることによって局所炎症反応を引き起こし得る。ＴＨ１免疫応答はまた、Ｂ細胞およびＴ細胞の増殖をＩＬ−１２で刺激することによって免疫応答を拡大するように作用し得る。ＴＨ１刺激Ｂ細胞は、ＩｇＧ２ａを分泌し得る。
【０１７３】
活性化ＴＨ２細胞は、抗体の産生を促進するため、細胞外感染に対する応答で有用である。活性化ＴＨ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０の１つ以上を分泌し得る。ＴＨ２免疫応答は、将来の防御のためにＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞の産生を引き起こし得る。
【０１７４】
免疫応答の亢進には、ＴＨ１免疫応答の亢進およびＴＨ２免疫応答の亢進の１つ以上が含まれ得る。
【０１７５】
ＴＨ１免疫応答には、ＣＴＬの増加、ＴＨ１免疫応答に関連した１つ以上のサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦ−β）の増加、活性化マクロファージの増加、ＮＫ活性の増加、またはＩｇＧ２ａ産生の増加の１つ以上が含まれ得る。好ましくは、ＴＨ１免疫応答の亢進には、ＩｇＧ２ａ産生の増加が含まれる。
【０１７６】
ＴＨ１免疫応答は、ＴＨ１アジュバントを使用して誘導され得る。ＴＨ１アジュバントは、一般に、アジュバントを使用しない抗原の免疫と比較して、ＩｇＧ２ａ産生レベルの増加を誘導する。本発明に使用するのに適したＴＨ１アジュバントには、例えば、サポニン処方物、ビロゾームおよびウイルス様粒子、腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、免疫賦活性オリゴヌクレオチドが含まれ得る。免疫賦活性オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドは、本発明に使用するのに好ましいＴＨ１アジュバントである。
【０１７７】
ＴＨ２免疫応答には、ＴＨ２免疫応答に関連した１つ以上のサイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０）の増加、またはＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞の産生の増加の１つ以上が含まれ得る。好ましくは、ＴＨ２免疫応答の亢進には、ＩｇＧ１産生の増加が含まれる。
【０１７８】
ＴＨ２免疫応答は、ＴＨ２アジュバントを使用して誘導され得る。ＴＨ２アジュバントは、一般に、アジュバントを使用しない抗原の免疫と比較して、ＩｇＧ１産生レベルの増加を誘導する。本発明に使用するのに適したＴＨ２アジュバントには、例えば、無機物含有組成物、油乳剤、ならびにＡＤＰリボシル化毒素およびその解毒誘導体が含まれる。無機物含有組成物、例えば、アルミニウム塩は、本発明に使用するのに好ましいＴＨ２アジュバントである。
【０１７９】
好ましくは、本発明は、ＴＨ１アジュバントとＴＨ２アジュバントの組み合わせを含む組成物を含む。好ましくは、このような組成物は、ＴＨ１応答の亢進およびＴＨ２応答の亢進、すなわちアジュバントを使用しない免疫と比較して、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの両方の産生の増加を誘導する。なおより好ましくは、ＴＨ１アジュバントとＴＨ２アジュバントの組み合わせを含む組成物は、１つのアジュバントを使用した免疫と比較して（すなわち、ＴＨ１アジュバントのみを使用した免疫またはＴＨ２アジュバントのみを使用した免疫と比較して）、ＴＨ１の免疫応答の亢進および／またはＴＨ２の免疫応答の亢進を誘導する。
【０１８０】
免疫応答は、ＴＨ１免疫応答およびＴＨ２応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答は、ＴＨ１応答の亢進およびＴＨ２応答の亢進の一方または両方をもたらす。
【０１８１】
免疫応答の亢進は、全身免疫応答および粘膜免疫応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答は、全身免疫応答の亢進および粘膜免疫応答の亢進の一方または両方をもたらす。好ましくは、粘膜免疫応答は、ＴＨ２免疫応答である。好ましくは、粘膜免疫応答には、ＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０１８２】
Ｈ因子結合タンパク質を発現する病原体は、多数の解剖学的位置に疾患を引き起こし得るため、本発明の組成物は、様々な形態で調製され得る。例えば、組成物は、液体溶液または懸濁物の注射剤として調製され得る。注射前の液体ビヒクルにおける溶液または懸濁物に適した固形にも調製され得る（例えば、凍結乾燥組成物またはスプレー凍結乾燥組成物）。組成物は、例えば、軟膏、クリーム、または粉末として局所投与用に調製され得る。組成物は、例えば、タブレットまたはカプセルとして、スプレーとして、またはシロップ（任意選択で風味付けされた）として経口投与用に調製され得る。組成物は、微粉またはスプレーを使用して、例えば、吸入剤として肺投与用に調製され得る。組成物は、座薬またはペッサリーとして調製され得る。組成物は、例えば、液滴として点鼻投与、点耳投与、または点眼投与用に調製され得る。組成物は、患者への投与の直前に組み合わせ組成物が再構成されるように設計されたキットの形態でもよい。このようなキットは、１つ以上の液体形態の抗原および１つ以上の凍結乾燥抗原を含み得る。
【０１８３】
組成物が、使用前に即席に調製されるものであり（例えば、成分が凍結乾燥形態で提示される）、キットとして提示される場合は、このキットは、２つのバイアルを含むか、または１つの充填済みシリンジおよび１つのバイアルを含む場合があり、シリンジの内容物は、注射の前にバイアルの内容物を再活性化するために使用される。
【０１８４】
ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的有効量の抗原（複数可）、および必要に応じて任意の他の成分を含む。「免疫学的有効量」は、単回投与または連続投与の一部としての、個体へのこの量の投与が処置または予防に有効であることを意味する。この量は、処置される個体の健康状態および身体的状態、年齢、処置される個体の分類学的群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系の抗体を合成する能力、望まれる防御の程度、ワクチンの処方、処置する医師の医学的状態の評価、および他の適切な因子によって異なる。この量は、ルーチンの試験によって決定され得る比較的広い範囲に渡ると推定される。
【０１８５】
（処置方法およびワクチン投与）
本発明はまた、本発明の有効量の組成物を投与するステップを含む、哺乳動物において免疫応答を惹起する方法も提供する。免疫応答は、好ましくは防御であり、好ましくは抗体および／または細胞媒介免疫を伴う。この方法は、追加応答を惹起し得る。
【０１８６】
本発明はまた、薬剤として使用するための、例えば、哺乳動物における免疫応答の惹起に使用するための本発明のポリペプチドも提供する。
【０１８７】
本発明はまた、哺乳動物の免疫応答を惹起するための薬剤の製造における本発明のポリペプチドの使用も提供する。
【０１８８】
本発明はまた、本発明の免疫原性組成物が予め満たされた送達デバイスも提供する。
【０１８９】
これらの使用および方法によって哺乳動物における免疫応答を惹起することにより、哺乳動物が、すべての血清型、特に、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹの血清型のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ菌株を含む、Ｈ因子結合タンパク質を発現する病原体による感染から保護され得る。哺乳動物は、好ましくはヒトであるが、本明細書で取り扱われる病原体は広範な種に渡って問題であり得るため、例えば、ウシ、ブタ、ニワトリ、ネコ、またはイヌであり得る。ワクチンが予防用である場合は、ヒトは、好ましくは子供（例えば、幼児または乳児）または十代であり；ワクチンが治療用である場合は、ヒトは、好ましくは十代または成人である。子供用のワクチンは、例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価するために成人にも投与して良い。
【０１９０】
治療処置の効力をチェックする１つの方法には、本発明の組成物の投与後の大腸菌感染のモニタリングが含まれる。予防処置の効力をチェックする１つの方法には、本発明の組成物の投与後のこの組成物中の抗原に対する全身免疫応答のモニタリング（例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの産生レベルのモニタリング）および／または粘膜免疫応答のモニタリング（例えば、ＩｇＡの産生レベルのモニタリング）が含まれる。典型的には、抗原特異的血清抗体応答は、曝露前(pre-challenge)ではなく免疫化後に決定されるが、抗原特異的粘膜抗体応答は、免疫化後および曝露前に決定される。
【０１９１】
本発明の組成物の免疫原性を評価する別の方法では、免疫ブロットおよび／またはマイクロアレイによる患者の血清または粘膜分泌物のスクリーニングのために組換え的にタンパク質を発現させる。タンパク質と患者のサンプルとの間の陽性反応は、患者が問題のタンパク質に対して免疫応答を開始（mount）したことを示す。この方法はまた、免疫優勢抗原および／または抗原中のエピトープを同定するためにも使用され得る。
【０１９２】
ワクチン組成物の効力はまた、目的とする感染の病原体への適切な動物モデルの曝露(challenge)によってインビボで決定され得る。
【０１９３】
本発明の組成物は、一般に、患者に直接投与される。直接送達は、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または組織の間質腔へ）、または経粘膜投与、例えば、直腸投与、経口投与（例えば、タブレット、スプレー）、膣投与、局所投与、経皮投与（transdermal）もしくは経皮投与（transcutaneous）、鼻腔投与、眼投与、耳投与、肺投与、または他の粘膜投与によって達成され得る。
【０１９４】
本発明は、全身免疫および／または粘膜免疫を誘導するため、好ましくは全身免疫および／または粘膜免疫の亢進を誘導するために使用され得る。
【０１９５】
好ましくは、全身免疫および／または粘膜免疫の亢進は、ＴＨ１免疫応答および／またはＴＨ２免疫応答の亢進に反映される。好ましくは、免疫応答の亢進には、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＡの産生の上昇が含まれる。
【０１９６】
投薬は、単回投与スケジュールまたは複数回投与スケジュールによるものであり得る。複数回投与は、一次免疫スケジュールおよび／または追加免疫スケジュールに使用され得る。複数回投与スケジュールでは、様々な用量が、同じかまたは異なる経路、例えば、一次は非経口および追加は粘膜、一次は粘膜および追加は非経口など、によって投与され得る。複数回投与は、典型的には、少なくとも１週間（例えば、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約８週間、約１０週間、約１２週間、約１６週間など）離して投与される。
【０１９７】
本発明のワクチンは、子供および成人の両方を処置するために使用され得る。したがって、ヒト患者は、１歳未満、１〜５歳、５〜１５歳、１５〜５５歳、または少なくとも５５歳であり得る。ワクチンを受けるのに好ましい患者は、高齢者（例えば、≧５０歳、≧６０歳、および好ましくは≧６５歳）、若年（例えば、≦５歳）、入院患者、医療従事者、軍人および兵士、妊婦、慢性疾患患者、または免疫不全患者である。しかし、ワクチンは、これらの群だけに適しているのではなく、より広く集団に使用され得る。
【０１９８】
本発明のワクチンは、他のワクチンと実質的に同時に（例えば、同じ診察中、または医療従事者もしくはワクチンセンターを訪問した際）、例えば、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、風疹ワクチン、ＭＭＲワクチン、水痘ワクチン、ＭＭＲＶワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン、ＤＴＰワクチン、結合Ｈ．influenzaeｂ型ワクチン、不活化ポリオウイルスワクチン、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、髄膜炎菌結合ワクチン（例えば、４価Ａ−Ｃ−Ｗ１３５−Ｙワクチン）、ＲＳウイルスワクチンなどと実質的に同時に患者に投与され得る。
【０１９９】
（核酸免疫法）
上記した免疫原性組成物には、ポリペプチド抗原が含まれる。しかし、全ての場合において、ポリペプチド抗原は、核酸免疫法に基づいて組成物、方法、および使用を提供するために、これらのポリペプチドをコードする核酸（典型的にはＤＮＡ）によって置き換えられ得る。核酸免疫法は、現在高度に発展した分野である（例えば、参考文献１４６〜１５３などを参照）。
【０２００】
免疫原をコードする核酸は、患者への送達後にインビボで発現され、次いで発現された免疫原が免疫系を刺激する。活性成分は、典型的には、（ｉ）プロモーター；（ｉｉ）プロモーターに作動可能に連結された、免疫原をコードする配列；および任意選択で（ｉｉｉ）選択マーカーを含む核酸ベクターの形態をとる。好ましいベクターは、（ｉｖ）複製起点；および（ｖ）（ｉｉ）に作動可能に連結された下流の転写終結因子をさらに含み得る。一般に、（ｉ）および（ｖ）は、真核生物性であり、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）は、原核生物性である。
【０２０１】
好ましいプロモーターは、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のウイルスプロモーターである。ベクターは、プロモーターに加えて転写調節配列（例えば、エンハンサー）も含み得、この転写調節配列は、プロモーターと機能的に相互作用する。好ましいベクターは、前初期ＣＭＶエンハンサー／プロモーターを含み、より好ましいベクターは、ＣＭＶイントロンＡも含む。プロモーターは、免疫原をコードする配列の発現がプロモーターの制御下となるように、免疫原をコードする下流の配列に作動可能に連結されている。
【０２０２】
マーカーが使用される場合、マーカーは、好ましくは微生物宿主内（例えば、原核生物内、細菌内、酵母内）で機能する。マーカーは、好ましくは原核生物選択マーカー（例えば、原核生物のプロモーターの制御下で転写される）である。便宜上、典型的なマーカーは、抗生物質耐性遺伝子である。
【０２０３】
本発明のベクターは、好ましくは、自律複製エピソームベクターまたは染色体外ベクター、例えば、プラスミドである。
【０２０４】
本発明のベクターは、好ましくは複製起点を含む。この複製起点は、真核生物ではなく原核生物で活性であることが好ましい。
【０２０５】
したがって、好ましいベクターは、ベクター選択用の原核生物マーカー、原核生物の複製起点を含むが、免疫原をコードする配列の転写を駆動する真核生物のプロモーターは含まない。したがって、ベクターは、（ａ）原核生物宿主では、ポリペプチドが発現されずに増幅され選択されるが、（ｂ）真核生物宿主では、増幅されずに発現される。この構成が、核酸免疫法ベクターにとって理想的である。
【０２０６】
本発明のベクターは、コード配列の下流の真核生物転写終結配列を含み得る。これは、転写レベルを亢進させることができる。コード配列が独自の真核生物転写終結配列を有さない場合は、本発明のベクターは、好ましくはポリアデニル化配列を含む。好ましいポリアデニル化配列は、ウシ成長ホルモン由来である。
【０２０７】
本発明のベクターは、複数のクローニング部位を含み得る。
【０２０８】
免疫原およびマーカーをコードする配列に加えて、ベクターは、第２の真核生物コード配列を含み得る。ベクターは、免疫原と同じ転写物からの第２の真核生物ポリペプチドの翻訳を可能にするために、前記第２の配列の上流のＩＲＥＳも含み得る。別法では、免疫原コード配列は、ＩＲＥＳの下流でも良い。
【０２０９】
本発明のベクターは、非メチル化ＣｐＧモチーフ、例えば、２つの５’プリンおよび２つの３’ピリミジンが隣接した、グアノシンの前のシトシンを共通して有する非メチル化ＤＮＡ配列を含み得る。それらの非メチル化形態では、これらのＤＮＡモチーフは、いくつかの種類の免疫細胞の強力な刺激因子であることが実証された。
【０２１０】
ベクターは、目的とする方法で送達され得る。受容体媒介ＤＮＡ送達技術が、例えば、参考文献１５４〜１５９に記載されている。核酸を含む治療組成物が、遺伝子治療プロトコルで、局所投与としてＤＮＡ約１００ｎｇ〜約２００ｍｇの範囲で投与される。また、約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、および約２０μｇ〜約１００μｇの濃度範囲のＤＮＡも、遺伝子治療プロトコル中に使用され得る。因子、例えば、処置の方法（例えば、コードされた遺伝子産物のレベルの亢進または阻害のための）ならびに形質転換および発現の効力は、最終的な効力に必要な投薬量に影響を与える検討事項である。組織の広い面積にわたる高い発現が望ましい場合は、種々の隣接もしくは近接した組織部分への、投与の連続プロトコルまたはいくつかの投与において再投与される（re-administer）より多量のベクターまたは同量のベクターが、良好な治療結果を得るために必要であり得る。いずれの場合も、臨床試験でのルーチンの実験で、最適な治療効果についての特定の範囲を決定する。
【０２１１】
ベクターは、遺伝子送達ビヒクルを用いて送達され得る。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルスまたは非ウイルス起源であり得る（参考文献１６０〜１６３を一般に参照）。
【０２１２】
望ましい核酸の送達用および望ましい細胞での発現用のウイルスベースのベクターは、当分野で周知である。例示的なウイルスベースのビヒクルには、限定されるものではないが、組換えレトロウイルス（例えば、参考文献１６４〜１７４）、アルファウイルスベースのベクター（例えば、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４６）、およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−９２３；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２５０；ＡＴＣＣ  ＶＲ  １２４９；ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３２）；これらのウイルスのハイブリッドまたはキメラも使用され得る）、ポックスウイルスベクター（例えば、ワクシニア、鶏痘、カナリア痘、改変ワクシニアアンカラなど）、アデノウイルスベクター、およびアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、参考文献１７５〜１８０を参照）が挙げられる。死滅アデノウイルスに連結されたＤＮＡの投与（１８１）も利用され得る。
【０２１３】
限定されるものではないが、死滅アデノウイルスに連結されたポリカチオン濃縮ＤＮＡまたは連結されていないポリカチオン濃縮ＤＮＡ単独（例えば、１８１）、リガンド連結ＤＮＡ（１８２）、真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、参考文献１８３〜１８７）、および核電荷の中和（ｎｕｃｌｅｉｃ  ｃｈａｒｇｅ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ）または細胞膜との融合を含め、非ウイルス送達ビヒクルおよび方法も利用され得る。裸ＤＮＡも利用され得る。例示的な裸ＤＮＡの導入方法が、参考文献１８８および１８９に記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして機能し得るリポソーム（例えば、免疫リポソーム）が、参考文献１９０〜１９４に記載されている。さらなる方法は、参考文献１９５および１９６に記載されている。
【０２１４】
使用に適したさらなる非ウイルス送達には、機械送達系、例えば、参考文献１９６に記載されている手法が含まれる。さらに、コード配列およびこの発現産物が、光重合ヒドロゲル材料の堆積または電離放射線の使用によって送達され得る（例えば、参考文献１９７および１９８）。コード配列の送達に使用され得る遺伝子送達の他の慣習的な方法には、例えば、ハンドヘルド型遺伝子導入パーティクルガンの使用（１９９）または導入された遺伝子を活性化させるための電離放射線の使用（１９７および１９８）が含まれる。
【０２１５】
ＰＬＧ{ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）}微粒子を使用するＤＮＡ送達は、特に好ましい方法であり、例えば、微粒子に吸着させることによって行われ、微粒子は、任意選択で、負に帯電した表面（例えば、ＳＤＳで処理）または正に帯電した表面（例えば、陽イオン性界面活性剤、例えば、ＣＴＡＢで処理）を有するように処理される。
【０２１６】
（免責事項）
一部の実施形態では、本発明は、ＮＭＢ１８７０、ＮＭＢ２０９１、およびＮＭＢ１０３０（または先の２つ）である複数のＨ因子結合ポリペプチドの使用を含まなくてもよい。このようなポリペプチドの組み合わせは、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染に対する免疫化での使用について、少なくともＷＯ０４／０３２９５８に開示されている。
【０２１７】
しかし、他の実施形態では、ＷＯ０４／０３２９５８のポリペプチドの組み合わせが含まれるが、例えば、新規な医療目的に対してまたはさらなる組み合わせにおいてである。例えば、本明細書に開示されているように、ＮＭＢ０６６７はまた、Ｈ因子結合タンパク質であることが実証されているため、ＷＯ０４／０３２９５８のポリペプチドの組み合わせとのさらなる組み合わせに使用され得る。
【０２１８】
一部の実施形態では、本発明は、関連菌株内の相同体である複数のＨ因子結合ポリペプチドの使用を含まなくてもよい。例として、関連Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ菌株由来のＮＭＢ１８７０である複数のＨ因子結合ポリペプチドの使用は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染に対する免疫化での使用について、少なくともＷＯ２００４／０４８４０４に開示されている。さらなる例として、関連菌株由来のＭタンパク質である複数のＨ因子結合ポリペプチドの使用は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染に対する免疫化での使用について、少なくともＷＯ２００３／０６５９７３に開示されている。
【０２１９】
しかし、他の実施形態では、ＷＯ２００４／０４８４０４およびＷＯ２００３／０６５９７３のポリペプチドの組み合わせが含まれるが、例えば、新規な医療目的に対してまたはさらなる組み合わせにおいてである。
【０２２０】
（抗体）
Ｈ因子結合タンパク質に対する抗体は、受動免疫法に使用され得る（２００）。特定の実施形態では、組成物は、目的の病原生物に由来するか、またはＮｅｉｓｓｅｒｉａ菌株（例えば、ＮＭＢ１８７０、ＮＭＢ２０９１、ＮＭＢ１０３０、ＮＭＢ０６６７、またはＰｏｒ１Ａに対する抗体）、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ菌株（例えば、Ｏｍｐ１００に対する抗体）、Ｂｏｒｒｅｌｉａ菌株（例えば、ＣＲＡＳＰＳ、ＥＲＰ、ＦＨＢＰ１９／ＦｈｂＡ、およびＦＨＢＰ２８に対する抗体）、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ菌株（例えば、ＬｆｈＡに対する抗体）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌株（例えば、Ｔｕｆ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌株（例えば、Ｂａｃ、Ｆｂａ、Ｈｉｃ、Ｍタンパク質、ＰｓｐＣ、またはＳｅ１８．９に対する抗体）、Ｙｅｒｓｉｎｉａ菌株（例えば、ＹａｄＡに対する抗体）、またはＣａｎｄｉｄａ菌株（例えば、Ｇｍｐ１ｐに対する抗体）由来の少なくとも２つの異なるＨ因子結合タンパク質に対する抗体を含む。したがって、本発明は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１−８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７から選択されるポリペプチドに結合する抗体を提供する。
【０２２１】
本発明は、治療におけるこのような抗体または組成物の使用も提供する。本発明はまた、薬剤の製造におけるこのような抗体または組成物の使用も提供する。本発明はまた、本発明の有効量の抗体または組成物を投与するステップを含む哺乳動物を処置する方法も提供する。免疫原性組成物について上記したように、これらの方法および使用により、目的の病原体による感染から、またはＮｅｉｓｓｅｒｉａ菌株、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ菌株、Ｂｏｒｒｅｌｉａ菌株、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ菌株、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌株、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌株、Ｙｅｒｓｉｎｉａ菌株、もしくはＣａｎｄｉｄａ菌株から哺乳動物を保護することができる。
【０２２２】
用語「抗体」には、完全な免疫グロブリン分子、および抗原に結合できるその断片が含まれる。これらには、ハイブリッド（キメラ）抗体分子（２０１、２０２）；Ｆ（ａｂ’）２およびＦ（ａｂ）断片ならびにＦｖ分子；非共有結合へテロ二量体（２０３、２０４）；１本鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）（２０５）；二量体および三量体抗体断片構築物；ミニボディー（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）（２０６、２０７）；ヒト化抗体分子（２０８〜２１０）；およびこのような分子から得た任意の機能的な断片、ならびに慣習的ではないプロセス、例えば、ファージディスプレイによって得られる抗体が含まれる。好ましくは、抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体を得る方法は、当分野で周知である。ヒト化または完全ヒト抗体が好ましい。
【０２２３】
（総則）
本発明の実施には、特段の記載がない限り、当業者の技術範囲内の化学、生化学、分子生物学、免疫学、および薬理学の慣習的な方法を利用する。このような技術は、文献に詳細に説明されている。例えば、参考文献２１１〜２１８などを参照されたい。
【０２２４】
用語「含む（comprising）」は、「含む（including）」および「からなる（consisting）」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、完全にＸからなっても、または追加物、例えば、Ｘ＋Ｙを含んでも良い。
【０２２５】
数値ｘについての用語「約」は、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０２２６】
本明細書では「ＧＩ」付番が使用される。ＧＩ番号または「Ｇｅｎｌｎｆｏ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ」は、配列がＮＣＢＩのデータベースに加えられたときにＮＣＢＩによって処理された各配列記録に対して連続的に割り当てられる連続した数字である。ＧＩ番号は、配列記録のアクセッション番号とは全く異なる。配列が最新にされると（例えば、修正のため、またはさらなる注釈や情報を付け加えるため）、その配列には、新しいＧＩ番号が付される。したがって、所定のＧＩ番号が付けられた配列は、決して変わらない。
【０２２７】
２つのアミノ酸配列間のパーセント配列同一性について述べた場合は、整列させられたときに、２つの配列の比較においてアミノ酸が同じであるパーセントを意味する。このアラインメントおよびパーセント相同性または配列同一性は、当分野で公知のソフトウエアプログラム、例えば、参考文献２１９の節７．７．１８に記載されているものを用いて決定され得る。好ましいアラインメントは、ギャップオープンペナルティーが１２およびギャップ伸長ペナルティーが２で、ＢＬＯＳＵＭマトリックスが６２のアフィンギャップ検索を用いて、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献２２０に開示されている。
【図面の簡単な説明】
【０２２８】
【図１】図１は、様々なＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原に対するＨ因子の結合を示している。マイクロタイタープレートの各ウェルは、適用可能な抗原１μｇでコートされた。結合は、総量１００μｌ／ウェルで、１μｇ／ｍｌ（白色のバー）または１０μｇ／ｍｌ（灰色のバー）のＨ因子を用いてアッセイされた。
【図２】図２は、１μｇ／ウェルの異なる抗原に対するＨ因子の結合の用量反応を示している。Ｈ因子の結合は、Ｈ因子の４つの濃度：０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、および１０μｇ／ｍｌで試験された。
【図３】図３は、１μｇ／ウェルのＮＭＢ１０３０に対するＨ因子の結合の経時変化（time-course）を示している。結合の経時変化は、Ｈ因子の２つの濃度：１μｇ／ｍｌおよび１０μｇ／ｍｌでアッセイされた。Ｈ因子の結合は、３０分、６０分、９０分、および１２０分に各濃度でアッセイされた。
【図４】図４および図５は、２つの異なる濃度のＰＴＸ３（Ｈ因子の天然の結合パートナー）を用いて、Ｈ因子に対する、ＰＴＸ３と異なるＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原との間の競合的結合の結果を示している。
【図５】図４および図５は、２つの異なる濃度のＰＴＸ３（Ｈ因子の天然の結合パートナー）を用いて、Ｈ因子に対する、ＰＴＸ３と異なるＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原との間の競合的結合の結果を示している。
【発明を実施するための形態】
【０２２９】
（配列表の簡単な説明）
【０２３０】
【表１】
2012502073.tif 000008
【０２３１】
【表２】
2012502073.tif 000009
【０２３２】
【表３】
2012502073.tif 000010
【０２３３】
【表４】
2012502073.tif 000011
【０２３４】
【表５】
2012502073.tif 000012
（本発明を実施するための様式）
ＷＯ０４／０３２９５８に開示されているように、ＮＭＢ１８７０、ＮＭＢ１０３０、およびＮＭＢ２０９１は単独で、ワクチン組成物に有効な抗原であり、組み合わせると特に有効で、広範な保護を提供することが知られていた。ＮＭＢ１８７０は、Ｈ因子結合タンパク質であることが知られていたが、ＮｅｉｓｓｅｒｉａにおけるＮＭＢ１０３０およびＮＭＢ２０９１の役割は知られていなかった。以下に記載するように、ＮＭＢ１０３０およびＮＭＢ２０９１の両方が、ＮＭＢ１８７０と同様にＨ因子に結合することが判明した。Ｈ因子結合タンパク質としてのＮＭＢ１０３０およびＮＭＢ２０９１のこの新規な特徴に基づいて、Ｈ因子結合タンパク質は単独で、ワクチン組成物として良好に作用するが、これらのＨ因子結合タンパク質は、組み合わせると予想外にかなり良好に作用して、関連菌株に対して幅広い効力を提供することが判明した。この効力は、ＷＯ０４／０３２９５８で実証されているが、効力の根拠が、これらのタンパク質がＨ因子結合タンパク質であるという事実にあることは理解されていなかった。
【０２３５】
図１は、種々のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型群Ｂ抗原および１つのＮ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ抗原を使用した結合アッセイを示している。予想通り、ＮＭＰ１８７０は、ヒトＨ因子に対して顕著な結合の度合いを示している。予想外に、３つの追加の抗原：ＮＭＢ１０３０、ＮＭＢ０６６７、およびＮＭＢ２０９１も、ヒトＨ因子に対する結合性を示した。Ｈ因子のさらなるの濃度を使用して用量反応をアッセイし（図２）、そして新規に同定されたＨ因子結合タンパク質の１つ（ＮＭＢ１０３０）への結合の経時変化をアッセイすることにより（図３）、結合活性が確認され、さらに明確になった。図２および図３は、ＮＭＢ１８７０よりも親和性がやや低いが、ＮＭＢ１０３０、ＮＭＢ０６６７、およびＮＭＢ２０９１はＨ因子に結合することを裏付けている。
【０２３６】
競合的結合を、ｂＰＴＸ３（インビボでのＨ因子の天然の結合パートナーの１つ）の漸増量が添加される、結合を測定する同じアッセイを使用してアッセイした。図４および図５の両方から分かるように、漸増量のｂＰＴＸ３が、Ｈ因子に対してＮＭＢ１８７０およびＮＭＢ０６６７の両方と結合を競合した。これは、ＮＭＢ１８７０およびＮＭＢ０６６７は、Ｈ因子の同じ部位または重複部位に結合するが、ＮＭＢ１０３０およびＮＭＢ２０９１は、Ｈ因子の異なる部位に結合することを示している。これはまた、本発明の複数のＨ因子結合タンパク質組成物における使用の効力は、Ｈ因子結合タンパク質がＨ因子の同様の部位に結合すること、またはＨ因子の結合に際して同じ効果を有することに依存しないことを示している。
【０２３７】
本発明は、ほんの一例として記載されたものであり、本発明の範囲および趣旨を維持したまま変更が可能であることを理解されたい。
【０２３８】
（参考文献（これらの内容は、その全容が本明細書に援用される））
【０２３９】
【数１】
2012502073.tif 000013
【０２４０】
【数２】
2012502073.tif 000014
【０２４１】
【数３】
2012502073.tif 000015
【０２４２】
【数４】
2012502073.tif 000016
【０２４３】
【数５】
2012502073.tif 000017
【０２４４】
【数６】
2012502073.tif 000018
【図１】
2012502073.tif 000019
【図２】
2012502073.tif 000020
【図３】
2012502073.tif 000021
【図４】
2012502073.tif 000022
【図５】
2012502073.tif 000023
【配列表】
2012502073000001.xml
【国際調査報告】
2012502073.tif 000065
2012502073.tif 000066
2012502073.tif 000067
2012502073.tif 000068
2012502073.tif 000069
2012502073.tif 000070
2012502073.tif 000071
2012502073.tif 000072
2012502073.tif 000073
2012502073.tif 000074
2012502073.tif 000075
2012502073.tif 000076
2012502073.tif 000077