(57)【要約】  ＣＤ２０発現細胞に関連する疾病および状態の治療のために使用することができるヒト化抗ＣＤ２０抗体を提供する。また、このような抗体をコードする核酸、このような抗体を作製する方法、およびこのような抗体を含む組成物も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト化抗体であって、
（ａ）
（１）Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ８６  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ（配列番号１）であって、
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅであり、
Ｘａａ８６はＴｙｒまたはＰｈｅである配列、および
（２）Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ（配列番号２）であって、
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅである配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、軽鎖と、
（ｂ）
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｘａａ６８  Ｔｈｒ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｘａａ７２  Ａｓｐ  Ｘａａ７４  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ（配列番号３）であって、
ここで、
Ｘａａ６８は、ＶａｌまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７０は、ＶａｌまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７２は、ＡｒｇまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７４は、ＴｈｒまたはＬｙｓであるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む重鎖と、を含み、
前記ヒト化抗体は、ヒトＣＤ−２０に結合する、ヒト化抗体。
【請求項２】
前記重鎖可変領域は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項３】
前記軽鎖可変領域は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項４】
前記軽鎖可変領域は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項５】
前記軽鎖可変領域は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項６】
前記軽鎖可変領域は、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項７】
前記重鎖可変領域は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４９、５４、５５、および５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項８】
前記重鎖可変領域は、配列番号１３および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項９】
前記軽鎖可変領域は、配列番号２８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、４２、５５、５６、５７、５８、および５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項１０】
前記軽鎖可変領域は、配列番号２８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、４２、５５、５６、５７、５８、および５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載のヒト化抗体。
【請求項１１】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５と同様の親和性で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項１２】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５よりも高い親和性で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項１３】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５よりも低いオフ速度で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項１４】
前記軽鎖は、ヒト軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項１５】
前記軽鎖は、配列番号６０、６１、６２、および６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載のヒト化抗体。
【請求項１６】
前記重鎖は、ヒト重鎖定常領域をさらに含む、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項１７】
前記重鎖は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載のヒト化抗体。
【請求項１８】
前記重鎖は、ヒト重鎖定領常域をさらに含む、請求項１４に記載のヒト化抗体。
【請求項１９】
前記重鎖は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、配列番号６０、６１、６２、および６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のヒト化抗体。
【請求項２０】
前記重鎖は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載のヒト化抗体。
【請求項２１】
前記重鎖は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載のヒト化抗体。
【請求項２２】
前記重鎖は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載のヒト化抗体。
【請求項２３】
前記重鎖は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載のヒト化抗体。
【請求項２４】
前述の請求項のいずれかに記載のヒト化抗体と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項２５】
請求項７に記載のヒト化抗体と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項２６】
前記抗体は、哺乳類細胞、酵母細胞、および植物細胞からなる群から選択される宿主細胞中に産生される、請求項１に記載のヒト化抗体。
【請求項２７】
Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ
Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  
Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ８６  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ（配列番号１）であって、
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅであり、
Ｘａａ８６は、ＴｙｒまたはＰｈｅであるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、軽鎖を含む、ヒト化抗体であって、
前記ヒト化抗体は、ヒトＣＤ−２０に結合する、ヒト化抗体。
【請求項２８】
前記軽鎖可変領域は、配列番号５４のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
【請求項２９】
前記軽鎖可変領域は、配列番号４９のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
【請求項３０】
前記軽鎖可変領域は、配列番号２８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載のヒト化抗体。
【請求項３１】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５と同様の親和性で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
【請求項３２】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５よりも高い親和性で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
【請求項３３】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５よりも低いオフ速度で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
【請求項３４】
Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  
Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  
Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ（配列番号２）
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅであるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、軽鎖を含む、ヒト化抗体であって、
前記ヒト化抗体は、ヒトＣＤ−２０に結合する、ヒト化抗体。
【請求項３５】
前記軽鎖可変領域は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載のヒト化抗体。
【請求項３６】
前記軽鎖可変領域は、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載のヒト化抗体。
【請求項３７】
前記軽鎖可変領域は、配列番号４２、５５、５６、５７、５８、および５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載のヒト化抗体。
【請求項３８】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５と同様の親和性で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項３４に記載のヒト化抗体。
【請求項３９】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５よりも高い親和性で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項３４に記載のヒト化抗体。
【請求項４０】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５よりも低いオフ速度で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項３４に記載のヒト化抗体。
【請求項４１】
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｘａａ６８  Ｔｈｒ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｘａａ７２  Ａｓｐ  Ｘａａ７４  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  （配列番号３）であって、
ここで、
Ｘａａ６８は、ＶａｌまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７０は、ＶａｌまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７２は、ＡｒｇまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７４は、ＴｈｒまたはＬｙｓであるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、重鎖を含む、ヒト化抗体であって、
前記ヒト化抗体は、ヒトＣＤ−２０に結合することができる、ヒト化抗体。
【請求項４２】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５と同様の親和性で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項４１に記載のヒト化抗体。
【請求項４３】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５よりも高い親和性で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項４１に記載のヒト化抗体。
【請求項４４】
前記抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５よりも低いオフ速度で、ヒトＣＤ２０に結合する、請求項４１に記載のヒト化抗体。
【請求項４５】
前記重鎖可変領域は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載のヒト化抗体。
【請求項４６】
前記重鎖可変領域は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載のヒト化抗体。
【請求項４７】
対象のＢ細胞疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１、２７、３４、または４１に記載の抗体を投与することを含む、方法。
【請求項４８】
対象のＢ細胞疾患を防止する方法であって、前記対象に、予防的有効量の請求項１、２７、３４、または４１に記載の抗体を投与することを含む、方法。
【請求項４９】
請求項１、２７、３４、または４１に記載のヒト化抗体を含むヒト化抗ＣＤ２０抗体組成物であって、前記組成物中に存在するＮグリカンの少なくとも９０％は、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｇ０）である、組成物。
【請求項５０】
請求項１、２７、３４、または４１に記載の抗体をコードする核酸配列を含む、単離した核酸。
【請求項５１】
請求項５０に記載の単離した核酸を含む、宿主細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００９年２月１６日、および２００９年２月１８日に出願された、それぞれ、米国仮出願第６１／１５２，７７８号および第６１／１５３，４９９号の利益を主張し、これらの出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
コンピュータ可読ＣＤを介して提出された配列リストの参照
本出願は、速達便で出願され、コンピュータ可読ＣＤの．ｔｘｔ形式の配列表を含む。．ｔｘｔファイルは、２０１０年２月１５日に作製された「１３７９０−９０．ｔｘｔ」と題される配列表を含有し、大きさは、９２，０６５バイトである。本．ｔｘｔファイルに含まれる配列表は、本明細書の一部であり、ここに、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本発明は、ヒト化抗ＣＤ２０抗体、ならびに種々の疾病および状態の治療におけるそれらの使用に関する。本発明は、また、このような抗体をコードする核酸、このような抗体を作製する方法、およびこのような抗体を含む組成物にも関する。
【背景技術】
【０００４】
ヒトＣＤ２０（ヒトＢリンパ球限定分化抗原ならびにＢｐ３５とも呼ばれる）は、プレＢリンパ球および成熟Ｂリンパ球に位置する約３５キロダルトンの分子量を有する疎水性の膜貫通型タンパク質である。ＣＤ２０は、血液幹細胞、プロＢ細胞、正常な形質細胞、または他の正常な組織には認められない。
【０００５】
ヒトＣＤ２０は、悪性Ｂ細胞の９０％以上の表面上に発現するが、造血性幹細胞、正常な形質細胞、骨髄、Ｔ系列、内皮、または他の非リンパ系細胞上では発現しないため、Ｂ細胞新生物の免疫療法にとって良好な標的である。Ｂ細胞枯渇が自己免疫疾病の治療に有効な戦略であることを示すように、ヒトＣＤ２０は、また、自己免疫疾病の免疫療法にとって良好な標的でもある。例えば、キメラ抗ＣＤ２０抗体Ｃ２Ｂ８（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）として市販され、Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ  Ｉｎｃ．およびＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．により販売される）であるリツキシマブは、非ホジキンリンパ腫および関節リウマチを含む、種々の適応症に承認された。
【０００６】
抗体の結合時、ＣＤ２０は、有意に調節も、分断もしない。単核エフェクター細胞による抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）、補体依存性溶解、カルシウム流等の細胞内シグナルの開始、細胞成長の阻害、および細胞分化の誘発を含む、過剰の抗体エフェクター機能は、抗ＣＤ２０抗体により補充されることが示されている。抗ＣＤ２０抗体は、特に、例えば、ＩｇＧのＦｃドメイン（ＦｃγＲ）の細胞発現レセプターによる強力な架橋後に、悪性Ｂ細胞株のアポトーシスを誘発することも示されている。
【０００７】
抗ＣＤ２０モノクローナル抗体であるリツキシマブ、抗Ｂ１、および１Ｆ５は、Ｂ細胞株に同様のアポトーシス作用を有する。
【０００８】
最近のマウスおよびキメラ抗体の制限は、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答およびヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）応答を含む。
【発明の概要】
【０００９】
一態様において、
（ａ）
（１）Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ８６  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ（配列番号１）であって、
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅであり、
Ｘａａ８６はＴｙｒまたはＰｈｅである配列、および
（２）Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ（配列番号２）であって、
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅである配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、軽鎖と、
（ｂ）
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｘａａ６８  Ｔｈｒ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｘａａ７２  Ａｓｐ  Ｘａａ７４  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ（配列番号３）であって、
ここで、
Ｘａａ６８は、ＶａｌまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７０は、ＶａｌまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７２は、ＡｒｇまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７４は、ＴｈｒまたはＬｙｓであるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、重鎖と、を含むヒト化抗体を提供し、
ヒト化抗体は、ヒトＣＤ−２０に結合する。
【００１０】
別の態様において、
Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ８６  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ  （配列番号１）
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅであり、
Ｘａａ８６は、ＴｙｒまたはＰｈｅであるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、軽鎖を含むヒト化抗体を提供し、
ヒト化抗体は、ヒトＣＤ−２０に結合する。
【００１１】
また別の態様において、
Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  （配列番号２）
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅであるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、軽鎖を含むヒト化抗体を提供し、
ヒト化抗体は、ヒトＣＤ−２０に結合する。
【００１２】
さらなる態様において、
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｘａａ６８  Ｔｈｒ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｘａａ７２  Ａｓｐ  Ｘａａ７４  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ（配列番号３）
ここで、
Ｘａａ６８は、ＶａｌまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７０は、ＶａｌまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７２は、ＡｒｇまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７４は、ＴｈｒまたはＬｙｓであるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、重鎖を含むヒト化抗体を提供し、
ヒト化抗体は、ヒトＣＤ−２０に結合することができる。
【００１３】
またさらなる態様において、対象のＢ細胞疾患を治療する方法を提供する。本方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の本明細書に開示されるヒト化抗体のいずれかを投与することを含む。
【００１４】
別の態様において、対象のＢ細胞疾患を防止する方法は、対象に、予防的有効量の本明細書に開示されるヒト化抗体のいずれかを投与することを含む。
【００１５】
さらなる態様において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体組成物は、本明細書に開示されるヒト化抗体のいずれかを含み、組成物中に存在するＮグリカンの少なくとも９０％は、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｇ０）である。
【００１６】
別の態様において、本明細書に開示されるヒト化抗体のいずれか、および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。
【００１７】
またさらなる態様において、本明細書に開示されるヒト化抗体のいずれかをコードする核酸配列を含む、単離した核酸を提供する。
【００１８】
前述の単離した核酸のいずれかを含む宿主細胞も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１Ａは、１Ｆ５ＲＨＡｓｓ核酸分子を生成するために使用した、種々の核酸分子（Ｘ６２１０９シグナルペプチド、Ｕ００５７０フレームワーク（ＦＲ）配列、および１Ｆ５ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む）の核酸配列の一実施形態を提供する図である。図１Ｂは、１Ｆ５ＲＨＡを生成するため、Ｕ００５７０の受容体ＦＲ（それぞれ、配列番号８０〜８３、左から右）の中にグラフトされた、１Ｆ５ＶＨからのＣＤＲ１、２、および３（それぞれ、配列番号７７〜７９、左から右）示す図である。
【図２】フレームワーク領域（ＦＲ）に変異を含まない、最適化した１Ｆ５ＲＨＡ核酸構築体の核酸（配列番号１５）およびアミノ酸配列（配列番号１６）を提供する図である。
【図３】次の４つの非保存バーニャ残基：Ｖ６７Ａ；Ｖ６９Ｌ；Ｒ７１Ａ；およびＴ７３Ｋ（Ｋａｂａｔ番号付け）で逆変異を含む、最適化した１Ｆ５ＲＨＢ核酸構築体の核酸（配列番号１７）およびアミノ酸配列（配列番号１８）を提供する図である。
【図４】図４Ａは、ヒト化抗ＣＤ２０抗体である１Ｆ５ＲＫＡ１１ｓｓの一例を生成するために使用した、フレームワーク領域（ＦＲ）および相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列を提供する図である。図４Ｂは、１Ｆ５ＲＫＡ１１を生成するために、ＦＲ（それぞれ、配列番号８７〜９０、左から右）およびＣＤＲ（それぞれ、配列番号８４〜８６、左から右）のアミノ酸配列を示す図である。
【図５】１Ｆ５ＲＫＡ１１構築体を生成するために、１Ｆ５ＲＫＡ１１ｓｓに基づく最適化した抗体の例の核酸配列（配列番号３０）およびアミノ酸配列（配列番号３１）を提供する図である。本構築体は、ＦＲ変異を含有しない。
【図６】次の３つの非保存バーニャ残基：Ｌ４６Ｐ、Ｌ４７Ｗ、およびＦ７１Ｙ（Ｋａｂａｔ番号付け）、およびＶＨ／ＶＫ境界面残基Ｙ８７Ｆ（Ｋａｂａｔ番号付け）で逆変異を含む、１Ｆ５ＲＫＡ１１に基づくヒト化抗体１Ｆ５ＲＫＢ１１の例の核酸（配列番号３２）およびアミノ酸配列（配列番号３３）を提供する図である。
【図７】図７Ａは、ヒト化抗ＣＤ２０抗体である１Ｆ５ＲＫＡ１２ｓｓの一例を生成するために使用した、フレームワーク領域（ＦＲ）および相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列を提供する図である。図７Ｂは、１Ｆ５ＲＫＡ１２を生成するために、ヒトＡＹ２６３４１５（それぞれ、配列番号９４〜９７、左から右）の受容体ＦＲの中にグラフトされた、１Ｆ５ＶＫ（それぞれ、配列番号９１〜９３、左から右）からのＣＤＲ１、２、および３を示す図である。
【図８】１Ｆ５ＲＫＡ１２構築体を生成するために、１Ｆ５ＲＫＡ１２ｓｓに基づく最適化した抗体の例の核酸配列（配列番号４４）およびアミノ酸配列（配列番号４５）を提供する図である。本構築体は、ＦＲ変異を含まない。
【図９】次の３つの非保存バーニャ残基：Ｌ４６Ｐ、Ｌ４７Ｗ、およびＦ７１Ｙ（Ｋａｂａｔ番号付け）で逆変異を含む、１Ｆ５ＲＫＡ１２に基づくヒト化抗ＣＤ２０抗体である１Ｆ５ＲＫＢ１２の例の核酸配列（配列番号４６）およびアミノ酸配列（配列番号４７）を提供する図である。
【図１０】図１０Ａは、１Ｆ５ＲＨＡの変異体の例のアミノ酸配列アライメントを提供する図である。図１０Ｂは、１Ｆ５ＲＫＡ１１の変異体の例のアミノ酸配列アライメントを提供する図である。図１０Ｃは、１Ｆ５ＲＫＡ１２の変異体の例のアミノ酸配列アライメントを提供する図である。ＣＤＲアミノ酸残基は、「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」と表示されたボックスにより示され、下線付きアミノ酸は、ヒト化配列の中に導入されたマウスＦＷ残基を示す。
【図１１】１Ｆ５ＲＫＧ１１、１Ｆ５ＲＫＢ１１、１Ｆ５ＲＫＦ１２、１Ｆ５ＲＫＢ１２、および１Ｆ５ＲＨＡタンパク質からの成熟可変領域および定常領域のアミノ酸配列を提供する。図１１Ａは、１Ｆ５ＲＫＧ１１（配列番号６０）の成熟可変領域および定常（下線付き）領域のアミノ酸配列を提供する図である。図１１Ｂは、１Ｆ５ＲＫＢ１１（配列番号６１）の成熟可変領域および定常（下線付き）領域のアミノ酸配列を提供する図である。図１１Ｃは、１Ｆ５ＲＫＦ１２（配列番号６２）の成熟可変領域および定常（下線付き）領域のアミノ酸配列を提供する図である。図１１Ｄは、１Ｆ５ＲＫＢ１２（配列番号６３）の成熟可変領域および定常（下線付き）領域のアミノ酸配列を提供する図である。図１１Ｅは、１Ｆ５ＲＨＡ（配列番号６４）の成熟可変領域および定常（下線付き）領域のアミノ酸配列を提供する図である。アミノ酸配列の定常領域は、下線付きである。
【図１２】図１２Ａは、キメラｃ１Ｆ５抗体（キメラ）と比較した、キメラＶＫ×１Ｆ５ＲＨＡ（ＲＨＡ）およびキメラＶＨ×（１Ｆ５ＲＫＡ１１、１Ｆ５ＲＫＡ１２、または１Ｆ５ＲＫＢ１１）のラジ結合アッセイの結果を提供する図である。図１２Ｂは、リツキサンと比較した、キメラＶＫに関連するヒト化１Ｆ５ＲＨＡ（ＲＨＡ）または１Ｆ５ＲＨＢ（ＲＨＢ）のラジ結合アッセイの結果を提供する図である。図１２Ｃおよび１２Ｄは、キメラ抗体ｃ１Ｆ５と比較した、キメラＶＨに関連するヒト化１Ｆ５ＶＫ型（ＫＢ１１等）のラジ結合アッセイの結果を提供する図である。
【図１３】図１３Ａおよび１３Ｂは、１Ｆ５のキメラ型と比較した、示されるヒト化１Ｆ５カッパ鎖に関連するヒト化１Ｆ５ＲＨＡによりコードされた抗体のラジ細胞結合の例を提供する図である。測定値は、二層ウェルの平均である。
【図１４】１Ｆ５のキメラ型と比較した、示されるヒト化１Ｆ５カッパ鎖に関連するヒト化１Ｆ５ＲＨＡによりコードされた抗体のラジ細胞結合の例を提供する図である。測定値は、四層ウェルの平均である。エラーバーは、四層間の標準偏差を示す。
【図１５】ヒト化抗ＣＤ２０抗体の幾つかの実施形態の耐熱性結果の例を提供する図である。各抗体を培地／ＰＢＳで１μｇ／ｍＬに希釈し、示される温度で１０分間加熱した後、ラジ細胞が室温でＥＬＩＳＡを結合する前に、４℃に冷却する。ヒト化抗体（リツキサンとは別に）は、示されｒｙ軽鎖構築体とともに１Ｆ５ＲＨＡによりコードされる。
【図１６】ヒト化抗ＣＤ２０抗体の幾つかの実施形態のラジ細胞における蛍光抗体結合アッセイの平均蛍光強度の例を提供する図である。
【図１７】最適化前キメラｃ１Ｆ５ＶＫ核酸（配列番号６５）および対応するアミノ酸配列（配列番号６６）の例を提供する図である。
【図１８】最適化したキメラｃ１Ｆ５ＶＫ核酸（配列番号６７）および対応するアミノ酸配列（配列番号６８）の例を提供する図である。
【図１９】最適化前キメラｃ１Ｆ５ＶＨ核酸（配列番号６９）および対応するアミノ酸配列（配列番号７０）の例を提供する図である。
【図２０】最適化したキメラｃ１Ｆ５ＶＨ核酸（配列番号７１）および対応するアミノ酸配列（配列番号７２）の例を提供する図である。
【図２１】Ｇ０グリカン構造を示す図である。
【図２２】キメラｃ１Ｆ５ＶＨタンパク質配列（成熟可変領域および定常領域）（配列番号７３）の例を提供する図である。アミノ酸配列の定常領域は、下線付きである。
【図２３】キメラｃ１Ｆ５ＶＫタンパク質配列（成熟可変領域および定常領域）（配列番号７４）の例を提供する図である。アミノ酸配列の定常領域は、下線付きである。
【図２４】実施例５に説明される、種々の濃度の検査した抗ＣＤ２０抗体のＣＤＣアッセイの結果を示す図である。
【図２５】実施例５に説明される、抗ＣＤ２０抗体のラジ細胞からの解離（すなわち、オフ速度）を測定するアッセイの結果を示す図である。
【図２６】実施例５に説明される、抗ＣＤ２０抗体に関するオフ速度試験のうちの１つから得た半減期の棒グラフを示す図である。
【図２７】種々の濃度の抗ＣＤ２０抗体を使用した、Ｂ細胞枯渇アッセイの結果を示す図である。
【図２８】抗ＣＤ１６抗体の存在下での種々の濃度の抗ＣＤ２０抗体を使用した、Ｂ細胞枯渇アッセイの結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、ＣＤ２０ならびにそれらの抗体を含む組成物に結合する、またはそれらに結合することができるヒト化１Ｆ５抗体に関する。本発明は、ヒト化１Ｆ５抗体をコードする核酸分子にも関する。つまり、ヒト化抗ＣＤ２０抗体およびこのような抗ＣＤ２０抗体をコードする核酸分子を提供する。
【００２１】
本明細書に提供される抗体およびその組成物は、リンパ腫、自己免疫疾病、および移植拒絶を含む、ＣＤ２０を発現する細胞（Ｂ細胞等）に関連する疾病および状態を治療するための方法に有用である。本組成物は、ヒト化抗ＣＤ２０抗体、ヒト化抗ＣＤ２０抗体の抗原結合断片、およびこのような抗体の薬学的組成物を含む。本組成物は、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ２０抗体をコードする単離した核酸分子、ヒト化抗ＣＤ２０抗体をコードする核酸分子を含むベクター、ベクターで形質転換された、またはヒト化抗体を発現する核酸分子を組み込む宿主細胞（トランスフェクトーマおよびハイブリドーマを含む）、抗ＣＤ２０ヒト化抗体の薬学的製剤、およびそれらの作製および使用方法も含む。ＣＤ２０を発現する細胞に関連する疾病または疾患（Ｂ細胞疾患等）を治療する、または防止するための方法も提供する。
【００２２】
さらに詳細に本発明を説明する前に、最初に以下の用語を定義する。特に記載のない限り、全ての核酸配列は、５′から３′配向で、左から右に書かれ、全てのアミノ酸配列は、アミノ末端からカルボキシ末端配向で、左から右に書かれる。
【００２３】
定義：
【００２４】
「抗体」および「免疫グロブリン」という用語は、互換的に使用され、本明細書において、それらの最も広い意味で使用される。具体的には、本用語は、それらが所望の生物活性および機能を示す限り、モノクローナル抗体、多選択性抗体、抗体断片、および他の抗体、ならびに免疫グロブリンを含む。
【００２５】
「複数の抗体断片」および「抗体断片」は、完全長抗体の一部を含み、一般に、その可変領域を含む。
【００２６】
本明細書に使用される、「ＣＤ２０」または「ヒトＣＤ２０」（ヒトＢリンパ球限定分化抗原、Ｂｐ３５とも呼ばれる）は、正常および悪性のＢ細胞に発現する、約３５キロダルトンの分子量を有する膜貫通型リンタンパク質を指す。
【００２７】
本明細書に使用される、「抗ＣＤ２０抗体」は、特異的にヒトＣＤ２０を結合する抗体を意味する。
【００２８】
本明細書に使用される、「キメラ抗体」とは、免疫活性または結合領域もしくは部位が、第１の種から得られる、またはそれに由来し、定常領域（無損傷、部分的、または修飾され得る）が、第２の種から得られる、あらゆる抗体を指す。例えば、標的結合領域または部位は、ヒト以外の供給源（例えば、マウスまたは霊長類）に由来し、定常領域は、ヒト抗体に由来する。
【００２９】
「ヒト化抗体」とは、可変領域の一部、好ましくは、実質的に無損傷ヒト可変ドメインより小さい部分が、ヒト以外の種からの対応する配列によって置換され、かつ、修飾された可変領域が、別のタンパク質の少なくとも別の部分、好ましくは、ヒト抗体の定常領域に連結される、ヒト抗体の修飾された可変領域の少なくとも一部を含むポリペプチドを指す。「ヒト化抗体」という表現は、１つ以上の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）アミノ酸残基および／または１つ以上のフレームワーク領域（「ＦＷ」または「ＦＲ」）アミノ酸残基が、ＣＤ２０に結合することができるゲッ齒または他のヒト以外の抗体の類似部位からのアミノ酸残基によって置換される、ヒト抗体を含む。「ヒト化抗体」という表現は、ＣＤ２０に結合することができ、かつ実質的にヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有するＦＲ、および実質的にヒト以外の免疫グロブリンのアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む、免疫グロブリンアミノ酸配列変異体またはその断片も含む。
【００３０】
免疫グロブリン重鎖は、それらの内に幾つかのサブクラス（例えば、γ１〜γ４）を伴う、ガンマ（γ）、ミュー（μ）、アルファ（α）、デルタ（δ）、またはイプシロン（ε）、に分類することができる。それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとしての抗体の分類（または「クラス」）は、免疫グロブリンへの機能的特殊化を付与する重鎖の性質により決定される。免疫グロブリンは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１等の、サブクラス（または「アイソタイプ」）に分類することができる。このようなアイソタイプは、良く特徴付けされており、免疫グロブリンにさらなる機能的特殊化を付与する。ＩｇＧに関して、標準免疫グロブリン分子は、２つの同一の軽鎖ポリペプチドと、２つの同一の重鎖ポリペプチドとを含む。４つの鎖は、典型的に、軽鎖が、「Ｙ」の湾口部で始まり、可変領域に続く重鎖をまとめる「Ｙ」配置で、ジスルフィド結合により連結される。
【００３１】
２つの種類の軽鎖：カッパ（κ）またはラムダ（λ）がある。各重鎖クラスは、カッパまたはλ軽鎖のいずれかと結合することができる。一般に、軽鎖および重鎖は、相互に共有結合的に結合され、２つの重鎖の「尾」部は、免疫グロブリンがＢ細胞ハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子組み換え宿主細胞のいずれかにより生成される時、共有結合ジスルフィド結合、および非共有結合により相互に結合される。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ配置のフォーク端のアミノ末端から各鎖の下部のカルボキシル末端まで伸びる。
【００３２】
軽鎖および重鎖の両方は、「定常領域」および「可変領域」と呼ばれる構造的および機能的相同の領域に分割される。「定常」および「可変」という用語は、機能的に使用される。軽鎖（ＶＬまたはＶＬ）および重鎖（ＶＨまたはＶＨ）部の両方の可変ドメインは、抗原認識および特異性を決定する。逆に、軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤性移動度、Ｆｃレセプター結合、補体結合等の重要な生物学的特性を付与する。慣例により、定常領域ドメインの番号付けは、それらが、抗原結合部位または抗体のアミノ末端からより遠位になるにつれ、増加する。可変領域は、アミノ末端にあり、定常領域は、カルボキシル末端にある；ＣＨ３およびＣＬドメインは、実際、それぞれ、重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を含む。
【００３３】
「相補性決定領域」、「超可変領域」、および「ＣＤＲ」という表現は、抗体の軽鎖または重鎖の可変領域に認められる超可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つ以上を指す（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，（１９８７）を参照）。これらの表現は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｋａｂａｔ  Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８３）により定義される超可変領域、または抗体の３次元構造の超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６  ９０１−９１７（１９８７））を含む。各鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域により近接に保持され、他の鎖からのＣＤＲとともに、抗原結合部位の形成に寄与する。
【００３４】
「フレームワーク領域」および「ＦＲ」という表現は、抗体の軽鎖および重鎖の可変領域内のフレームワーク領域のうちの１つ以上を指す（Ｋａｂａｔ，ＥＡ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，（１９８７）を参照）。これらの表現は、アミノ末端と第１のＣＤＲとの間に位置する、ＣＤＲ間に介在する、および第３のＣＤＲと定常領域の始めとの間の抗体の軽鎖および重鎖の両方のこれらのアミノ酸配列を含む。
【００３５】
ＣＤＲおよびＦＲ残基は、標準配列定義（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｍｄ．（１９８７））、および構造定義（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｔ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−２１７（１９８７）など）に従い決定することができる。
【００３６】
本明細書に示される場合、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）および（１９９１）の番号付けスキームを参照されたい。Ｋａｂａｔは、表に挙げられる配列の各アミノ酸に残基番号を割り当てる方法を使用し、残基番号を割り当てる本方法は、当該分野において標準となっている。示される場合、本説明において、Ｋａｂａｔ番号付けスキームに従う。Ｋａｂａｔ番号付けが示されない場合、連続したアミノ酸配列の番号付けが使用される（すなわち、配列しているアミノ酸は、アミノ末端からカルボキシ末端配向で、左から右に連続した整数（１、２、３等）を使用して番号付けされる）。
【００３７】
抗体の「抗原結合断片」は、ＣＤ２０に結合するために、完全長の１Ｆ５抗体と基本的に同様に機能する、本明細書に開示される生物学的に活性な抗体の断片を指す。このような断片は、完全長抗体の一部、一般に、抗原結合またはその可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；二重特異性抗体；線形抗体；一本鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成される多選択性抗体が挙げられる。
【００３８】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む、最小抗体断片である。本断片は、密接した非共有結合会合で、１本の重鎖と１本の軽鎖の可変領域ドメインのダイマーからなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためにアミノ酸残基を提供し、抗体への抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖からそれぞれ３ループ）を放射する。しかしならが、単一可変ドメイン（または抗原に対して３つのＣＤＲ特異的しか含まないＦｖの半分）は、完全な結合部位より低い親和性であるが、抗原を認識し、結合する能力を有する。
【００３９】
「リツキシマブ」または「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」という用語は、米国特許第５，７３６，１３７号で「Ｃ２Ｂ８」と称される抗体のアミノ酸配列を有するＣＤ２０に対して遺伝子組み換えされたキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体を指す。
【００４０】
「抗体依存細胞媒介細胞毒性」および「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃレセプター（ＦｃＲｓ）（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）を発現する非特異的細胞毒性細胞が、標的細胞上で結合抗体を認識し、後に標的細胞の溶解を生じる、細胞媒介応答を指す。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、一方、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。
【００４１】
抗原またはエピトープにおける抗原の「親和性」は、当該分野において良く理解されている用語であり、抗体のエピトープへの結合の程度、または強度を意味する。親和性は、平衡解離定数（抗体のオフ速度とオン速度の割合として定義することができる、ＫＤまたはＫｄ、すなわちＫｏｆｆ／Ｋｏｎ）、見かけ平衡解離定数（ＫＤ’またはＫｄ’）、およびＩＣ５０（競合アッセイで、５０％阻害をもたらすために必要な量）を含むがこれらに限定されない、当該分野に知られる多くの方式で測定および／または表現することができ、ヒト化抗体の相対親和性も、例えば、関連するマウスまたはキメラの抗体と比較して決定することができる。本発明の目的において、親和性は、抗原またはエピトープに結合する抗体の所与の集団に対する平均親和性であることを理解する。本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ２０抗体の親和性（または相対親和性）は、本明細書の実施例に記載される、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）または蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）アッセイを使用して測定することができる。
【００４２】
「オフ速度」とは、抗体の抗体／抗原複合体からの解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を意味する。したがって、低オフ速度の抗体は、高オフ速度の抗体より長く抗体に結合したままである。
【００４３】
「オン速度」とは、抗体／抗原複合体を形成するための抗体の抗原への会合速度定数（Ｋｏｎ）を意味する。
【００４４】
「有効量」とは、所望の治療または予防的結果を達成するために必要な用量および時間期間での有効量を指す。
【００４５】
「治療有効量」の抗体は、個人の疾病状態、年齢、性別、および体重、ならびに個人における所望の応答を顕在化するための抗体の能力等の要因により変動してもよい。治療有効量は、治療的に有益な効果が抗体のあらゆる毒性または悪影響を上回る量でもある。「予防的有効量」とは、所望の予防的結果を達成するために必要な用量および時間期間での有効量を指す。典型的に、しかし必ずしもそうではないが、予防的用量は、疾病の前、またはその初期の段階で、対象に使用されるため、予防的な有効量は、治療有効量より少なくてもよい。
【００４６】
「Ｂ細胞疾患」は、Ｂ細胞悪性病変、自己免疫疾患、Ｂ細胞白血病、および他の疾患を含むが、これらに限定されない種々の疾患を含む。
【００４７】
本明細書に使用される、「自己免疫疾患」または「自己免疫疾病」とは、個人自身の組織から生じ、かつそれに対する非悪性疾病または疾患を指す。自己免疫疾病または疾患の例としては、乾癬および皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎）を含む炎症性皮膚疾病等の炎症性応答；全身性強皮症および硬化症；炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎等）に関連する応答；呼吸促迫症候群（成人呼吸促迫症候群；ＡＲＤＳ）；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；大腸炎；糸球体腎炎；湿疹および喘息等のアレルギー性病態、ならびにＴ細胞の浸潤および慢性炎症性応答に関与する他の病態；粥状動脈硬化；白血球粘着不全症；関節リウマチ；全身性狼瘡エリテマトーデス（ＳＬＥ）；真性糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病またはインスリン依存性糖尿病）；多発性硬化症；レイノー病；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年発症糖尿病；ならびに典型的に結核、類肉腫症、多発性筋炎、肉芽腫症、および血管炎に認められるサイトカインおよびＴリンパ球により媒介される急性および遅延性過敏症に関連する免疫応答；悪性貧血（アジソン病）；白血球血管外漏出に関与する疾病；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患；多器官傷害症候群；溶血性貧血（低温型グロブリン血症またはクームス陽性貧血を含むが、これらに限定されない）；重症筋無力症；抗原−抗体複合体媒介疾病；抗糸球体基底膜疾病；抗リン脂質抗体症候群；アレルギー性神経炎；グレーブス病；ランバート−イートン筋無力症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫多内分泌疾患；ライター病；全身硬直症候群；ベーチェット病；巨細胞動脈炎；免疫複合体腎炎；ＩｇＡ腎障害；ＩｇＭ多発神経炎；免疫血小板減少性紫斑症（ＩＴＰ）または自己免疫血小板減少症等が挙げられるが、これらに限定されない。
ヒト化１Ｆ５抗体：
【００４８】
本発明は、ヒトＣＤ２０に結合することができる、ヒト化１Ｆ５抗体およびその抗原結合断片（すなわち、ヒト化抗ＣＤ２０抗体）を提供する。
【００４９】
一実施形態において、
（１）Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  
Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  
Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  
Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  
Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ８６  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  
Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ（配列番号１）
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅであり、
Ｘａａ８６はＴｙｒまたはＰｈｅである配列、および
（２）Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  
Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  
Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｒｇ  
Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  
Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  
Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ（配列番号２）
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅである配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、軽鎖を含むヒト化抗体（その抗原結合断片を含む）を提供する。
【００５０】
別の実施形態において、
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｘａａ６８  Ｔｈｒ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｘａａ７２  Ａｓｐ  Ｘａａ７４  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ（配列番号３）
ここで、
Ｘａａ６８は、ＶａｌまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７０は、ＶａｌまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７２は、ＡｒｇまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７４は、ＴｈｒまたはＬｙｓであるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、重鎖を含むヒト化抗体（その抗原結合断片を含む）を提供する。
【００５１】
したがって、抗ＣＤ２０抗体の軽鎖可変領域は、図１０Ｂおよび１０Ｃに記載される次のアミノ酸配列：配列番号２８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、４２、５５、５６、５７、５８、および５９を含む、種々のアミノ酸配列を有してもよい。一実施例において、抗ＣＤ２０抗体の軽鎖可変領域は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。別の実施例において、抗ＣＤ２０抗体の軽鎖可変領域は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む。また別の実施例において、抗ＣＤ２０抗体の軽鎖可変領域は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む。さらに別の実施例において、抗ＣＤ２０抗体の軽鎖可変領域は、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。
【００５２】
抗ＣＤ２０抗体の重鎖可変領域は、図１０Ａに記載される次のアミノ酸配列：配列番号１３および配列番号４８を含む、種々のアミノ酸配列を有してもよい。
【００５３】
一実施形態において、
（ａ）
（１）Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  
Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  
Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  
Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ８６  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  
Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ（配列番号１）
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅであり、
Ｘａａ８６はＴｙｒまたはＰｈｅである配列、および
（２）Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  
Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｒｇ  
Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  
Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  
Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ（配列番号２）
ここで、
Ｘａａ４５は、ＰｒｏまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ４６は、ＴｒｐまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７０は、ＴｙｒまたはＰｈｅである配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む軽鎖、および
（ｂ）
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  
Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  
Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  
Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｘａａ６８  Ｔｈｒ  Ｘａａ７０  Ｔｈｒ  Ｘａａ７２  Ａｓｐ  Ｘａａ７４  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ（配列番号３）
ここで、
Ｘａａ６８は、ＶａｌまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７０は、ＶａｌまたはＬｅｕであり、
Ｘａａ７２は、ＡｒｇまたはＡｌａであり、
Ｘａａ７４は、ＴｈｒまたはＬｙｓであるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、重鎖を含む、ヒト化抗体（その抗原結合断片を含む）を提供する。
【００５４】
一実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、（１）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む重鎖、および（２）配列番号４９に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む軽鎖を含んでもよい。
【００５５】
別の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、（１）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む重鎖、および（２）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む軽鎖を含んでもよい。
【００５６】
さらに別の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、（１）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む重鎖、および（２）配列番号５５に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む軽鎖を含んでもよい。
【００５７】
さらなる実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、（１）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む重鎖、および（２）配列番号５９に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む軽鎖を含んでもよい。
【００５８】
本明細書のヒト化抗ＣＤ２０抗体は、ヒトＣＤ２０に結合することができる。幾つかの実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、抗体１Ｆ５のそれと同様の親和性で（すなわち、抗体１Ｆ５がヒトＣＤ２０において有する親和性のそれと同様の親和性で）、ＣＤ２０に結合する。他の実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、少なくとも抗体１Ｆ５と同程度の親和性で、ＣＤ２０に結合する。さらに別の実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、抗体１Ｆ５のそれより大きい親和性で、ＣＤ２０に結合する。本明細書で使用される、「抗体１Ｆ５のそれと同様の親和性」とは、当業者が、親和性間の差異が、ほとんど、または全く生物学的有意性を持たないと考えるような、抗体１Ｆ５の親和性と同様の十分に高程度の親和性を意味する。
【００５９】
幾つかの実施形態において、ヒト化抗体ＣＤ２０抗体は、本明細書の実施例に記載されるキメラ抗体ｃ１Ｆ５のそれと同様の親和性で（すなわち、キメラ抗体ｃ１Ｆ５がヒトＣＤ２０において有する親和性のそれと同様の親和性で）、ＣＤ２０に結合する。他の実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、少なくともキメラ抗体ｃ１Ｆ５と同程度の親和性で、ＣＤ２０に結合する。さらに別の実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５のそれより大きい親和性で、ＣＤ２０に結合する。本明細書で使用される、「キメラ抗体ｃ１Ｆ５のそれと同様の親和性」とは、当業者が、親和性間の差異が、ほとんど、または全く生物学的有意性を持たないと考えるような、キメラ抗体ｃ１Ｆ５の親和性と同様の十分に高程度の親和性を意味する。
【００６０】
幾つかの実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５のそれより低いオフ速度で、ＣＤ２０に結合する。他の実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、キメラ抗体ｃ１Ｆ５のそれより低くない。
【００６１】
さらなる実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブのそれより大きい親和性でＣＤ２０に結合する。他の実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブのそれより低いオフ速度で、ＣＤ２０に結合する。
【００６２】
抗ＣＤ２０抗体は、あらゆるアイソタイプ、アロタイプ、およびイディオタイプの重鎖定常領域（またはその一部）、および／または軽鎖定常領域（またはその一部）を含んでもよい。このような重鎖および軽鎖定常領域は、自然に生じるか、または欠失、置換、または付加変異を含んでもよい。ヒト定常領域ＤＮＡ配列は公知であり、種々のヒト細胞から単離することができる。重鎖および／または軽鎖上に存在する時、定常領域は、重鎖および／または軽鎖の可変領域のカルボキシル末端に結合され得る。
抗体断片
【００６３】
幾つかの実施形態において、全抗体ではなく、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ２０抗体の断片を提供する。
【００６４】
あらゆる利用可能な方法が、このような抗体断片の産生に使用することができる。従来、これらの断片は、無傷抗体のタンパク質分解を介して誘導された。しかしながら、これらの断片は、現在、組み換え宿主細胞により、直接産生することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、およびＳｃＦｖ抗体断片は、全て、大腸菌で発現し、それから分泌され得、したがって、大量のこれらの断片の容易な産生を可能にする。抗体断片は、抗体ファージライブラリーから単離することができる。代替的に、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌から直接回収され、化学的に結合され、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組み換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。他の実施形態において、抗体断片は、１本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。
【００６５】
抗体断片は、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ２０抗体の抗原結合断片であってもよい。全抗体のあらゆる断片は、断片がＣＤ２０に結合する限り使用することができる。
二重特異性抗体
【００６６】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、二重特異性抗体の産生にも使用することができる。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに結合特異性を有する抗体である。代表的な二重特異性抗体は、ＣＤ２０タンパク質の２つの異なるエピトープに結合してもよい。他のこのような抗体は、ＣＤ２０結合部位を別のタンパク質の結合部位と組み合わせてもよい。代替的に、抗ＣＤ２０結合部位は、ＣＤ２０発現細胞への細胞防衛機能を集中させる、および局在化させるように、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、ＣＤ３）、またはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）等のＩｇＧ（ＦｃγＲ）のＦｃレセプター、もしくはＮＫＧ２Ｄ、もしくは他のＮＫ細胞活性リガンド等の白血球上の誘導分子に結合するドメイン、またはアームと組み合わせることができる。二重特異性抗体は、細胞毒性剤を、ＣＤ２０を発現する細胞に局在化させるために使用することができる。これらの抗体は、ＣＤ２０結合アーム、および細胞毒性剤（例えば、サポリン、抗インターフェロンａ、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサート、または放射性アイソトープハプテン）を結合するアームを有する。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製することができる。
多価の抗体
【００６７】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、多価の抗体の産生にも使用することができる。多価性抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞により、二価の抗体より速く内在化（および／または分解）され得る。ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、３つ以上の抗原結合部位（例えば、三価の抗体）を有する多価の抗体（ＩｇＭクラス以外である）であってもよく、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組み換え発現により、容易に産生することができる。多価の抗体は、二量体化ドメイン、および３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。好ましい二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはそれからなる）。本シナリオにおいて、抗体は、Ｆｃ領域およびＦｃ領域への３つ以上の抗原結合部位アミノ末端を含む。本明細書における好ましい多価の抗体は、３から約８つ、しかし、好ましくは４つの抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）。多価の抗体は、少なくとも１本のポリペプチド鎖を含み（および２本のポリペプチド鎖を含んでもよい）、ポリペプチド鎖は、２つ以上の可変ドメインを含む。
組み換え産生方法
【００６８】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、あらゆる利用可能な方法、例えば、組み換え発現技法等により産生することができる。任意に定常領域に連結される、軽鎖および重鎖可変領域をコードする核酸は、発現ベクターに挿入することができる。軽鎖および重鎖は、同じ、またはことなる発現ベクターにクローン化することができる。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡ区域は、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする発現ベクターの制御配列に、操作可能に連結することができる。発現制御配列は、プロモータ（例えば、自然に会合した、または非相同のプロモータ）、シグナル配列、エンハンサー要素、および転写終結配列を含むが、これらに限定されない。一実施形態において、発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換する、または形質移入することができるベクターの真核生物プロモータ系である。ベクターが適切な宿主の中に組み込まれると、宿主は、高レベルのヌクレオチド配列の発現、ならびに抗体の収集および精製に適した条件下で維持される。
【００６９】
発現ベクターは、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの不可欠な部分としてのいずれかで、あらゆる宿主生物において複製可能であってもよい。一実施形態において、発現ベクターは、選択マーカー（例えば、アンピシリン耐性、ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、またはネオマイシン耐性）を含み、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたこれらの細胞の検出を可能にする。
【００７０】
発現ベクターは、原核生物宿主細胞（例えば、大腸菌）、酵母宿主細胞、哺乳類宿主細胞、植物宿主細胞、および昆虫宿主細胞を含む、あらゆる宿主細胞からヒト化抗ＣＤ２０抗体を発現するために使用することができる。
【００７１】
一実施形態において、大腸菌は、ヒト化抗体の産生に使用される。このような使用に適した他の原核生物宿主は、枯草菌等の桿菌、ならびにサルモネラ、セラチア、および種々のシュードモナス種等の、他の腸内細菌を含む。これらの原核生物宿主において、発現ベクターを作製することもでき、これは、典型的に、宿主細胞（例えば、複製元）に適合する発現制御配列を含む。加えて、ラクトースプロモータ系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモータ系、βラクタマーゼプロモータ系、またはファージλからのプロモータ系等の、多くの種々の周知のプロモータが存在する。プロモータは、任意にオペレータ配列とともに、典型的に発現を制御し、転写および翻訳を開始し、完了するためのリボソーム結合部位配列等を有する。
【００７２】
酵母等の他の微生物も、ヒト化抗体の発現に有用である。例えば、酵母類は、所望の発現制御配列（例えば、プロモータ）、複製元、終結配列等を有する、適切なベクターとともに酵母宿主として使用することができる。酵母発現技法に使用するためのプロモータは、３−ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の糖分解酵素を含む。誘導性酵母プロモータは、特に、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソシトクロムＣ、ならびにマルトースおよびガラクトース利用に関与する酵素からのプロモータを含む。
【００７３】
別の実施形態において、哺乳類組織細胞培養物は、ヒト化抗ＣＤ２０抗体（例えば、免疫グロブリンまたはその断片をコードするポリヌクレオチド）を発現し、産生するために使用することができる。あらゆる哺乳類組織細胞は、このような方法で使用されてもよく、異種タンパク質（例えば、無傷免疫グロブリン）を分泌することができる多くの適切な宿主細胞株が、当該分野において開発され、ＣＨＯ細胞株、種々のＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、好ましくは、骨髄腫細胞株、または形質転換したＢ細胞もしくはハイブリドーマを含む。一実施形態において、細胞は、ヒト以外である。哺乳類細胞の発現ベクターは、複製元、プロモータ、およびエンハンサー等の発現制御配列、ならびにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写終結配列等の必要なプロセシング情報部位を含むことができる。一実施形態において、発現制御配列は、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス、サイトメガロウイルス等に由来するプロモータである。
【００７４】
関心のポリヌクレオチド配列（例えば、配列および発現制御配列をコードする重鎖および軽鎖）を含むベクターは、周知の方法により宿主細胞の中に移植することができ、これは、細胞宿主の種類により異なる。例えば、塩化カルシウム形質移入は、通常、原核生物細胞に利用され、一方、リン酸カルシウム治療、電気穿孔、リポフェクション、遺伝子銃、またはウイルスベースの形質移入が、他の細胞宿主に使用され得る。哺乳類細胞を形質転換するために使用される他の方法は、ポリブレン、プロトプラスト融合、リポソーム、電気穿孔、および微量注入法の使用を含む。遺伝子導入動物の産生において、導入遺伝子は、受精した卵母細胞の中に微量注入されるか、または胚性幹細胞のゲノムの中に組み込まれ、このような細胞の核は、除核された卵母細胞の中に移植することができる。
【００７５】
ヒト化重鎖および軽鎖をコードする核酸分子が、個別の発現ベクターにクローン化される時、ベクターは、同時導入され、無傷免疫グロブリンの発現および会合を得ることができる。発現すると、全抗体、それらのダイマー、個々の軽鎖および重鎖、または抗体の他の免疫グロブリン形態は、硫酸アンモニウム沈殿法、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ精製、ゲル電気泳動等を含む、当該分野の標準手順に従い精製することができる。少なくとも約９０〜９５％の均一性の実質的に純粋な免疫グロブリンは、薬学的用途用に調製することができる。別の実施形態において、少なくとも約９８〜９９％またはそれ以上の均一性の実質的に純粋なヒト化抗体は、薬学的製剤および方法に使用するために産生することができる。
【００７６】
したがって、（ａ）本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ２０抗体をコードする核酸分子を有する宿主細胞を形質転換すること、および（ｂ）ヒト化抗ＣＤ２０抗体の発現を可能にする条件下で、形質転換した宿主細胞を培養することを含む、ヒト化抗ＣＤ２０抗体を発現する方法も提供する。ヒト化およびキメラ抗体を発現する宿主細胞ならびにマーカーが容易に選択できるように、ベクター上に選択マーカーを含む、公知の技法が使用することができる。
【００７７】
本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ２０抗体を産生するための好ましい一実施形態において、抗体の発現および分泌のために、形質転換したウキクサ植物またはウキクサ根粒培養物が使用される。ウキクサを形質転換し、抗体をコードする発現カセットのヌクレオチド配列を最適化するための遺伝子操作は、米国特許第６，８１５，１８４号に記載されており、その全内容は、ここに、参照により本明細書に組み込まれる。
グリコシル化
【００７８】
本明細書に記載される抗ＣＤ２０抗体は、グリコシル化または非グリコシル化することができる。抗ＣＤ２０抗体がグリコシル化される時、存在するグリカン構造は、所望に応じて変化してもよい。例えば、ヒト化抗ＣＤ２０抗体の組み換え産生用の異なる宿主細胞の使用は、抗体のグリカン構造を変化させる。
【００７９】
抗体のグリカン構造は、宿主細胞株中で、ＲＮＡ干渉、アンチセンス、およびノックアウト技法等の公知の技法を使用しても最適化することができる。例えば、植物細胞および／または植物が、抗ＣＤ２０抗体を産生するために使用される時、未変性の抗体のＮグリコシル化パターンは、α１，３−フコシルトランスフェラーゼおよびβ１，２−キシロシルトランスフェラーゼ（例えば、ＲＮＡ干渉構築体を使用して）の発現を阻害するための方法を使用することにより変更することができる。このような技術および植物の例は、国際公開第ＷＯ２００７／０８４９２６号に記載され、その全体が本明細書に援用される。
【００８０】
したがって、一実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、Ｎ−グリコシル化パターンが、α１，３−フコシルトランスフェラーゼおよびβ１，２−キシロシルトランスフェラーゼの発現を阻害するための方法を使用せずに植物で産生されたこのような抗体と比較して、減少したα１，３−フコースおよびβ１，２−キシロースを有するように、植物で調製することができる。
【００８１】
別の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、フコースおよびキシロースの欠けたグリコシル化パターンを有してもよい。
【００８２】
さらに別の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、優性にＧ０グリカンであるＮグリコシル化パターンを有してもよい。「Ｇ０グリカン」とは、図２１に示す、構造ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２を有する複合Ｎ連結グリカンを意味し、ＧｌｃＮＡｃは、Ｎ−アセチルグルコサミンであり、Ｍａｎは、マンノースであり、ＧｌｃＮＡｃは、コアの１，３マンノースアームおよび１，６マンノースアームの両方に結合され、これは、抗体のアミノ酸残基に結合される。したがって、例えば、抗ＣＤ２０抗体組成物は、抗ＣＤ２０抗体組成物中のＮグリカンの総量の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％が、Ｇ０グリカン種によって表される、実質的に同種のＮグリコシル化特性を有してもよい。
【００８３】
幾つかの免疫グロブリンは、重鎖のＦｃ領域の保存されたＮ連結グリコシル化を有する。例えば、ＩｇＧ型免疫グロブリンは、アスパラギン２９７で、Ｎ連結オリゴ糖を有するグリコシル化ＣＨ２ドメインを有する。Ｆｃ領域の位置２９７でアスパラギンに結合するオリゴ糖中のフコース含量減少を伴う抗体は、ＦｃのＦｃγＲＩＩＩに対する親和性を増強し、これは、同時に抗体のＡＤＣＣを増加してもよい。
【００８４】
したがって、優性にＧ０であるＮグリコシル化特性を有する抗体は、α１，３−フコシルトランスフェラーゼの発現または機能の阻害を有さない植物で産生された抗体（したがって、より多くのα１，３−フコースを有する抗体を産生する）に対して、ＡＤＣＣ活性が増加してもよい。
治療方法
【００８５】
その抗原結合断片を含むヒト化抗ＣＤ２０抗体は、正常および悪性のＢ細胞発現ＣＤ２０抗原等の、ＣＤ２０発現細胞に関連するあらゆる疾病または疾患を有する対象の治療に使用することができる。したがって、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、Ｂ細胞疾患の治療に有用である。
【００８６】
「悪性」Ｂ細胞に関しては、低度、中程度、および高度のＢ細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）誘発されたリンパ腫、およびＡＩＤＳ関連リンパ腫、ならびにＢ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄芽球性白血病等を含むリンパ腫に由来するＢ細胞を含むが、これらに限定されないあらゆる腫瘍性Ｂ細胞を意図するものである。
【００８７】
したがって、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、自己免疫疾病および関連する状態を含む多くの悪性および非悪性疾病、ならびにＢ細胞リンパ腫および白血病を含むＣＤ２０陽性癌を治療するために有用である。骨髄の幹細胞（Ｂ細胞前駆体）は、ＣＤ２０抗原を欠損し、治療後、数カ月内で正常レベルへのＢ細胞の再生、および回復を可能にする。
【００８８】
抗ＣＤ２０抗体を使用して治療することができる自己免疫疾病または自己免疫関連状態は、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎）、乾癬、アトピー性皮膚炎を含む皮膚炎；慢性自己免疫蕁麻疹、多発性筋炎／皮膚筋炎、中毒性皮膚壊死症、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関連する応答（クローン病、潰瘍性大腸炎）、呼吸促迫症候群、成人呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、髄膜炎、アレルギー性鼻炎、脳炎、ブドウ膜炎、大腸炎、糸球体腎炎、アレルギー性状態、湿疹、喘息、Ｔ細胞および慢性炎症性応答の浸潤に関与する状態、粥状動脈硬化、自己免疫心筋炎、白血球粘着不全症、全身性狼瘡エリテマトーデス（ＳＬＥ）、狼瘡（腎炎、非腎性、円板状、脱毛症を含む）、若年発症糖尿病、多発性硬化症、アレルギー性脳脊髄炎、サイトカインおよびＴリンパ球により媒介される急性および遅延性過敏症に関連する免疫応答、結核、類肉腫症、ウェゲナー肉芽腫症を含む肉芽腫症、無顆粒球症、血管炎（ＡＮＣＡを含む）、再生不良性貧血、クームス陽性貧血、ダイアモンドブラックファン貧血、自己免疫免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）を含む溶血性貧血、悪性貧血、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、血友病Ａ、自己免疫好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球漏出に関与する疾病、ＣＮＳ炎症性疾患、多器官傷害症候群、重症筋無力症、抗原−抗体複合体媒介疾病、抗糸球体基底膜疾病、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病、キャッスルマン病、グッドパスチャー症候群、ランバートイートン症候群、レイノー病、シェーグレン病、スティーブンジョンソン症候群、固形臓器移植の拒絶反応（高パネル反応性抗体価の前治療、組織のＩｇＡ沈着等を含む）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、水疱性類天疱瘡、天疱瘡（尋常性および落葉性を含む全て）、自己免疫多内分泌疾患、ライター病、全身硬直症候群、巨細胞動脈炎、免疫複合腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発性神経炎またはＩｇＭ媒介神経炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫血小板減少症、自己免疫精巣炎および卵巣炎を含む精巣および卵巣の自己免疫疾病、原発性甲状腺機能低下症；自己免疫甲状腺炎を含む自己免疫内分泌疾病、慢性甲状腺炎（ハシモト甲状腺炎）、亜急性甲状腺炎、特発性甲状腺機能低下症、アジソン病、グレーブス病、自己免疫多腺性症候群（または多腺性内分泌疾患症候群）、Ｉ型糖尿病（インスリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ））、シーハン症候群、自己免疫肝炎、リンパ様間質性肺炎（ＨＩＶ）、閉塞性細気管支炎（非移植）対ＮＳＩＰ、ギランバレー症候群、大脈管血管炎（リウマチ性多発筋痛症および巨細胞（タカヤス）動脈炎を含む）、中脈管血管炎（カワサキ病および結節性多発性動脈炎を含む）、強直性脊椎炎、ベルジェ病（ＩｇＡ腎症）、急性進行性糸球体腎炎、原発性胆汁性肝硬変セリアック病（グルテン腸症）、クリオグロブリン血症、ＡＬＳ、冠動脈疾患を含む。
【００８９】
本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ２０抗体を使用して治療することができるＣＤ２０陽性癌は、細胞表面上にＣＤ２０を発現する細胞の異常増殖を含むものを含む。ＣＤ２０陽性Ｂ細胞腫瘍は、リンパ球優性ホジキン病（ＬＰＨＤ）を含むＣＤ２０陽性ホジキン病；非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；濾胞性中心細胞（ＦＣＣ）リンパ腫；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；および毛様細胞白血病を含む。非ホジキンリンパ腫は、低度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、中程度／濾胞性ＮＨＬ、中程度のびまん性ＮＨＬ、高度の免疫芽球性ＮＨＬ、高度のリンパ芽球性ＮＨＬ、高度の小型非切断細胞ＮＨＬ、巨大腫瘤ＮＨＬ、形質細胞様リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む。これらの癌の再発治療も考えられる。
【００９０】
幾つかの実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、リンパ球優性ホジキン病（ＬＰＨＤ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、慢性リンパ性白血病、関節リウマチおよび若年関節リウマチ、全身性狼瘡エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ウェゲナー病、炎症性腸疾患、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発性神経炎、重症筋無力症、血管炎、真性糖尿病、レイノー症候群、シェーグレン症候群、および糸球体腎炎を治療するために使用することができる。
【００９１】
本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ２０抗体は、例えば、再発または難治性の低度または濾胞性、ＣＤ２０陽性、Ｂ細胞ＮＨＬの単剤治療として有用であるか、または多剤レジメンにおいて、他の薬剤と併用して患者に投与することができる。
【００９２】
当該分野の医師が精通しているであろう治療される適応症および用量に関する要因により、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、毒性および副作用を最小にしながら、その適応症の治療に有効である用量で投与することができる。ＣＤ２０陽性癌または自己免疫疾病の治療において、より高いまたは低い投与量も使用することができるが、治療有効量は、約１００ｍｇ／ｍ２から約６００ｍｇ／ｍ２の範囲であってもよい。異なる実施形態において、用量は、１００ｍｇ／投与量、１２５ｍｇ／投与量、１５０ｍｇ／投与量、１７５ｍｇ／投与量、２００ｍｇ／投与量、２２５ｍｇ／投与量、２５０ｍｇ／投与量、２７５ｍｇ／投与量、３００ｍｇ、３２５ｍｇ／投与量、３５０ｍｇ／投与量、３７５ｍｇ／投与量、４００ｍｇ／投与量、４２５ｍｇ／投与量、４５０ｍｇ／投与量、４７５ｍｇ／投与量、５００ｍｇ／投与量、５２５ｍｇ／投与量、５５０ｍｇ／投与量、５７５ｍｇ／投与量、６００ｍｇ／投与量であってもよい。他の投与量、レジメン、および間隔も使用することができる。
【００９３】
疾病の治療において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、疾病に精通した医師により決定される通りに、慢性的または断続的に患者に投与することができる。
【００９４】
幾つかの実施形態において、患者は、初期状態の抗体の投与量、その後、あらゆる有害事象を緩和する、または最小にするために、治療投与量を受けてもよい。状態投与量は、高用量に耐えられるように患者を適切な状態にするために、治療投与量より低いものである。
【００９５】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、静脈内投与（例えば、ボーラスとして、または時間期間にわたり連続注入により）、または皮下、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、関節内、滑膜内、くも膜下腔内、または吸入による経路を含む、あらゆる利用可能な投与経路を使用して投与することができる。
【００９６】
一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、吸入ビヒクルとして０．９％塩化ナトリウム溶液を用いて、静脈内注入により投与される。
【００９７】
上述のＢ細胞腫瘍の治療において、患者は、多剤レジメンにおける化学療法剤等の、１つ以上の治療薬と併用して、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ２０抗体を用いても治療され得る。ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、同時に、順次、または化学療法剤と交互に、もしくは他の療法に応答性がない後に投与することができる。リンパ腫治療の標準化学療法は、シクロホスファミド、シタラビン、メルファラン、およびミトキサントロン＋メルファランを含んでもよい。別の実施形態において、ヒト化ＣＤ２０抗体は、ＣＨＯＰと併用して使用することができ、これは、非ホジキンリンパ腫の治療において、最も一般的な化学療法レジメンのうちの１つである。以下はＣＨＯＰレジメンに使用される薬剤である：シクロホスファミド（商品名ｃｙｔｏｘａｎ、ｎｅｏｓａｒ）；アドリアマイシン（ドキソルビシン／ヒドロキシドキソルビシン）；ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）；およびプレドニゾロン（ＤｅｌｔａｓｏｎｅまたはＯｒａｓｏｎｅと呼ばれる場合もある）。特定の実施形態において、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、以下の化学療法剤のうちの１つ以上と組み合わせて、それを必要とする患者に投与される：ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾロン。特定の実施形態において、リンパ腫（非ホジキンリンパ腫等）を患う患者は、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）療法と併用して、本明細書に記載される抗ＣＤ２０抗体を用いて治療され得る。別の実施形態において、癌患者は、ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）化学療法と併用して、ヒト化抗ＣＤ２０抗体を用いて治療され得る。
【００９８】
上述の自己免疫疾病または自己免疫関連状態の治療において、患者は、免疫抑制剤（多剤レジメンにおいて等）等の、第２の治療薬と併用して、ヒト化抗ＣＤ２０抗体を用いて治療され得る。ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、同時に、順次、または免疫抑制剤と交互に、もしくは他の治療に応答性がない時に投与することができる。
【００９９】
補助治療に使用する免疫抑制剤は、患者の免疫系を抑制または遮蔽するように作用するあらゆる物質を含む。このような薬剤は、サイトカイン産生を抑制する、自己抗原抑制を下方制御する、もしくは抑制する、またはＭＨＣ抗原を遮蔽する物質を含むがこれらに限定されない。このような薬剤の例としては、糖質コルチコイド（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン）等のステロイド系；２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン、アザチオプリン；ブロモクリプチン；グルタルアルデヒド；ＭＨＣ抗原およびＭＨＣ断片用の抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；抗インターフェロン−γ、−βまたは−α抗体を含むサイトカインまたはサイトカインレセプター拮抗薬；抗腫瘍壊死因子−α抗体；抗腫瘍壊死因子−β抗体；抗インターロイキン−２抗体および抗ＩＬ−２レセプター抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種抗リンパ球グロブリン；パン−Ｔ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド；ストレプトキナーゼ；ＴＧＦ−β；ストレプトドルナーゼ；デオキシスパガリン；ラパマイシン；Ｔ細胞レセプター；Ｔ細胞レセプター断面；およびＴ細胞レセプター抗体が挙げられる。
【０１００】
関節リウマチの治療において、患者は、以下の薬剤のうちのいずれか１つ以上と併用して、ヒト化抗ＣＤ２０抗体を用いて治療され得る：ＤＭＡＲＤＳ（疾病修飾性抗リウマチ剤（例えば、メトトレキサート））、ＮＳＡＩまたはＮＳＡＩＤ（非ステロイド系抗炎症性剤）、ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）（アダリムマブ；Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＡＲＡＶＡ（登録商標）（レフルノミド）、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）（インフリキシマブ；Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｐａ．のＣｅｎｔｏｃｏｒ  Ｉｎｃ．）、ＥＮＢＲＥＬ（エタネルセプト；Ｉｍｍｕｎｅｘ，Ｗａｓｈ．）、およびＣＯＸ−２阻害剤。
製剤
【０１０１】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体の治療製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望の程度の純度を有する抗体を、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することにより、保管または使用のために調製することができる。許容可能な担体、賦形剤、または安定剤は、利用される用量および濃度で受容者に非毒性であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム等；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化弁ゼとニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、デキストリン糖の単糖類、二糖類、および他の糖質；ＥＤＴＡ糖のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール糖の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）等の非イオン性界面活性剤、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【０１０２】
本明細書の製剤は、治療される特定の適応症に必要な活性化合物も１つ以上含んでもよい。例えば、細胞毒性薬、化学療法剤、サイトカイン、または免疫抑制剤をさらに提供することが望ましい場合がある。このような他の薬剤の有効量は、製剤に存在する抗体の量、疾病もしくは疾患または治療の種類、および前述の他の要因によって決まる。
【０１０３】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法により、あるいは例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルとの、コロイド性薬剤送達系（リポソーム、アルブミン微細球、ナノ粒子およびナノカプセル）中、またはマイクロエマルジョン中での界面重合により調製されたマイクロカプセルにも封入することができる。
【０１０４】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体を含む徐放性調製物も、調製することができる。徐放性調製物の適切な例としては、拮抗薬を含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられるが、このマトリックスは、成形物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリクスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリアクチド、Ｌ−グルタミン酸とエチル−Ｌグルタミンのコポリマー、非分解性−エチレン−ビニルアセテート、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシブチル酸が挙げられる。
抱合抗体および他の方法
【０１０５】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、１つ以上の治療薬または診断薬と抱合することができる。
【０１０６】
本明細書に記載されるヒト化抗体は、治療方法および診断方法に使用することができる。したがって、ヒト化抗体は、裸抗体として単独で投与されるか、または必ず治療薬に抱合されないが、投与レジメンに従い、時間的に、集学的療法として投与することができる。一実施形態において、裸ヒト化およびキメラ抗体の有効性は、１つ以上の他の裸抗体、すなわち、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、Ｂ７、ＭＵＣ１、Ｉａ、ＨＭ１．２４もしくはＨＬＡ−ＤＲ等の特定の抗原へのモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０の１つ以上の免疫抱合体とのテネシン、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、癌遺伝子、癌遺伝子産物もしくはそれらの組み合わせ、またはヒト化抗体と同時にもしくは順次、または処方された投与レジメンに従って投与される薬物、毒素、免疫モジュレータ−、ホルモン、治療用放射性核種等を含む治療薬、薬物、オリゴヌクレオチド、毒素、免疫モジュレータ−、ホルモン、治療用放射性核種等を含む１つ以上の治療薬と抱合される、これらの記載される抗原への抗体で、裸抗体を補足することにより強化することができる。
【０１０７】
免疫抱合体は、Ｂ細胞リンパ腫、自己免疫疾病、移植拒絶反応、および他の疾病または疾患での診断および治療使用のために投与することができる。したがって、ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、毒素等の細胞毒性剤、または放射活性アイソトープに抱合することができる。幾つかの実施形態において、毒素は、カリケアマイシン、マイタンシノイド、ドラスタチン、アウリスタチンＥ、およびそれらの類似体もしくは誘導体である。
【０１０８】
広範な診断薬および治療薬は、ヒト化抗ＣＤ２０抗体に抱合することができる。このような治療薬は、上述の裸抗体を用いて、別に投与するために使用することもできる。治療薬は、例えば、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、エピドフィロトキシン、タキサン、代謝拮抗薬、アルキル化剤、抗キナーゼ剤、抗生物質、Ｃｏｘ−２阻害剤、抗有糸分裂、抗血管新生およびアポトーシス剤、特にドキソルビシン、メトトレキサート、タキソール、ＣＰＴ−１１、カプトテカン等の化学療法剤、ならびにこれらおよび抗ガン剤等の他のクラスからのその他を含む。免疫抱合体および抗体融合タンパク質の調製用の他の有用な癌化学療法剤は、窒素マスタード、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、トリアゼン、葉酸類似体、ＣＯＸ−２阻害剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、白金調節複合体、ホルモン等を含む。
【０１０９】
ヒト化抗体との抱合に使用するためのさらなる毒素は、あらゆる薬学的に許容される毒素を含み、ＤＮＡ損傷剤、微小管重合または解重合および抗代謝の阻害剤を含むが、これらに限定されない。細胞毒性剤のクラスは、例えば、ジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤チミジル酸合成酵素阻害剤等の酵素阻害剤、ＤＮＡ干渉物質、ＤＮＡ開裂剤、トポイソメラーゼ阻害剤、アントラサイクリン系統の薬剤、ビンカ剤、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレオシド、プテリジン系統の薬剤、ジイネン、ポドフィロトキシン、および分化誘発剤を含む。
【０１１０】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、放射活性アイソトープにも抱合することができる。例えば、腫瘍の選択的破壊において、抗体は、高放射性原子を含んでもよい。種々の放射性アイソトープは、放射性抱合された抗ＣＤ２０抗体の産生に利用可能である。抱合体が、診断用に使用される時、シンチグラフィー試験用の放射活性原子、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）撮像用のスピン標識を含んでもよい。
【０１１１】
標識は、あらゆる方法を使用して、抱合体の中に組み込むことができる。例えば、ペプチドは、バイオ合成されるか、例えば、水素の代わりにフッ素−１９を含む、適切なアミノ酸前駆体を使用して、化学アミノ酸合成により合成され得る。
【０１１２】
アンチセンス分子等のオリゴヌクレオチドは、また、ヒト化抗ＣＤ２０抗体に抱合されるか、またはそれとともに投与することができる。
【０１１３】
以下の実施例は、例示を提供するものであって、制限するものではない。
【実施例】
【０１１４】
実施例１：ヒト化１Ｆ５抗体の調製
マウス抗体１Ｆ５の重鎖および軽鎖配列を使用して、キメラ発現ベクターを調製した（Ｐｒｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ，  ６９（２）：５８４−５９１（１９８７））。Ｇｅｎｂａｎｋ受け入れ番号ＡＹ０５８９０６は、マウス抗体１Ｆ５の軽鎖である１Ｆ５  ＶＫの配列を提供する。本ＶＫは、そのＤＮＡ配列と９８％同一である、ＡＪ２３１２１９生殖系列Ｖ遺伝子を使用する。ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＹ０５８９０７受け入れ番号は、マウス抗体１Ｆ５の重鎖である１Ｆ５  ＶＨの配列である。本ＶＨは、そのＤＮＡ配列と９５％同一である、ＡＣ０９０８４３生殖Ｖ遺伝子を使用する。
【０１１５】
キメラ発現ベクターの構成は、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位およびＫｏｚａｋ配列が先行する、マウスＶＨおよびＶＫへの適切なリーダー配列の追加を含んだ。Ｋｏｚａｋ配列は、可変領域配列の効率的な翻訳を確実にする。リボソームが翻訳を開始できる、正確なＡＵＧコドンを定義する。Ｋｏｚａｋ配列重要な塩基は、ＡＵＧが始まる上流である、位置−３のアデニンである。ヒト１２１０ＶＫリーダー配列は、１Ｆ５  ＶＫと近接する時、シグナルプロテアーゼにより正確に切断されることが予測された。ヒト１２１０ＶＨリーダー配列は、１Ｆ５  ＶＨと近接する時、シグナルプロテアーゼにより正確に切断されることが予測された。適切な１２１０リーダー配列は、したがって、１Ｆ５  ＶＨおよびＶＫコード領域の上流（５′）でクローン化された。
【０１１６】
キメラ発現ベクターの構成も、１Ｆ５のＪ領域の３′端に近接する、天然ＡｐａＩ制限部位までのヒトγ１定常領域の５′断片の導入を含んだ。ヒトγ１定常領域は、挿入したＶＨ配列の下流である、発現ベクターにコードされるが、カッパ構築体と異なり、Ｖ−Ｃイントロンを欠損する。カッパ鎖において、天然スプライスドナー部位およびＢａｍＨＩ部位は、Ｖ領域の下流に追加される。スプライスドナー配列は、カッパＶ−Ｃイントロンを切り出すことを容易にし、これは、ＶＫのカッパ定常領域へのインフレーム結合に有用である。
【０１１７】
サブクローン化に干渉する場合がある、あらゆる余分な制限部位を同定するために、マウス１Ｆ５  ＶＨおよびＶＫ遺伝子を分析した。制限部位の１つは、最適化前１Ｆ５ＶＫ配列（図１７）に認められたが、１Ｆ５ＶＨ配列では同定されなかった（図１９）。これらのＤＮＡ配列は、内部ＴＡＴＡボックス、ｃｈｉ部位およびリボソーム侵入部位、ＡＴ豊富またはＧＣ豊富配列領域；ＡＲＥ、ＩＮＳ、ＣＲＳ配列要素；反復配列およびＲＮＡ二次構造（陰性）スプライスドナーおよび受容体部位、分岐点を除去することにより、チャイニーズハムスター／ヒトのコドンバイアスへのコドン使用を適用することにより、およびｍＲＮＡの安定性を改善するためにＧＣ含量を増加することにより、発現用に最適化された。最適化したｃ１Ｆ５ＶＫ（図１８）およびｃ１Ｆ５ＶＨ（図２０）ＤＮＡ構築体配列は、合成され、クローン化ベクターｐＧＡ４（Ｇｅｎｅａｒｔ  ＡＧ，Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の中にクローン化された。ＶＫおよびＶＨ挿入断片は、それぞれ、（ＢａｍＨＩ＋ＨｉｎｄＩＩＩ）または（ＨｉｎｄＩＩＩ＋ＡｐａＩ）で切除された。次いで、切除された断片は、ゲル精製され、それぞれ、ｐＫＮ１００またはｐＧ１Ｄ２００の中に連結され、これは、同様に切断され、ホスファターゼ消化された。連結した構築体は、形質転換受容性ＴＯＰ１０バクテリアの中に形質転換された。発現クローンコロニーは、プライマーｇ１０５４５（５′−ＴＧＴＴＣＣＴＴＴＣＣＡＴＧＧＧＴＣＴＴ）（配列番号７５）およびｇ２３０７０（５′−ＧＴＧＴＧＣＡＣＧＣＣＧＣＴＧＧＴＣ）（配列番号７６）を使用して、正確な大きさの挿入断片の存在について、ＰＣＲによってスクリーニングされた。Ｍｉｎｉｐｒｅｐは、正確な発現クローンを生成し、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を形質転換するために使用された。
【０１１８】
図２２は、下線付きの定常領域を有する成熟キメラ１Ｆ５抗体の重鎖のアミノ酸配列を示す。図２３は、下線付きの定常領域を有する成熟キメラ１Ｆ５抗体の軽鎖のアミノ酸配列を示す。
【０１１９】
次いで、マウスモノクローナル抗体１Ｆ５のキメラ重鎖および軽鎖配列は、ヒトおよびマウス免疫グロブリンと比較した配列からの、適切なヒトＦＲ配列を同定することによりヒト化された。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓデータベース２００６  Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３１：３０７−３１０（２００３））およびＫａｂａｔデータベース（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，ＮＩＨ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，１−３２４２（１９９１））Ｒｅｌｅａｓｅ  ５  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（最終更新日１７−Ｎｏｖ−１９９９）からのヒトおよびマウス免疫グロブリンのタンパク質配列が、Ｋａｂａｔ整列の免疫グロブリンタンパク質配列のデータベースを編集するために使用された。データベースは、９３２２のヒトＶＨおよび２６８９のヒトＶＫ配列を含んだ。配列分析プログラムＧｉｂｂｓが、ヒトＶＨおよびＶＫデータベースを１Ｆ５  ＶＨおよびＶＫタンパク質配列と照会するために使用された。
１Ｆ５ＲＨＡおよび１Ｆ５ＲＨＢの生成
【０１２０】
ヒト化ＶＨ配列を生成するために、Ｖ領域フレームワーク内に位置する、バーニャ、カノニカルおよびＶＨ−ＶＫ界面（ＶＣＩ）残基で、１Ｆ５ＶＨに対して高い同一性を有したヒトＶＨ配列をデータベースで同定した。同定されたＶＨ配列について、受け入れ番号Ｕ００５７０を、１Ｆ５ＲＨＡのヒトＦＲドナーとして選んだ。Ｕ００５７０に最も一致するヒト生殖系列Ｖ遺伝子は、シグナルペプチドが抽出された、ＶＨＩ系統遺伝子Ｘ６２１０９（ＶＩ−３Ｂ）である。シグナルペプチダーゼで適切に切断されるであろうＳｉｇｎａｌＰアルゴリズムが予測された。図１Ａは、Ｘ６２１０９シグナル、１Ｆ５ＶＨ  ＣＤＲおよびＵ００５７０ＦＲの天然ＤＮＡ配列からのＤＮＡ配列１Ｆ５ＲＨＡｓｓの生成に使用された配列を示す。１Ｆ５ＶＨからのＣＤＲ１、２、および３をＵ００５７０の受容体ＦＲの中にグラフトし、１Ｆ５ＲＨＡを生成した（図１Ｂ）。ＤＮＡ配列は、内部ＴＡＴＡボックス、ｃｈｉ部位およびリボソーム侵入部位、ＡＴ−豊富またはＧＣ−ｒｉｃｈ豊富配列領域、ＡＲＥ、ＩＮＳ、ＣＲＳ配列要素、反復配列およびＲＮＡ二次構造（陰性）スプライスドナー、ならびに受容体部位および分岐点を除去するために、無変化の変異源性（ＧｅｎｅＡｒｔ）により最適化された。最適化した１Ｆ５ＲＨＡ構築体ＤＮＡおよびタンパク質配列を図２に示す。本構築体は、フレームワーク領域に変異を含まない。
【０１２１】
第２の構築体１Ｆ５ＲＨＢ（図３）は、以下の非保存バーニャ残基で、４つの逆変異を含むように、１Ｆ５ＲＨＡ配列に基づいた：Ｖ６７Ａ；Ｖ６９Ｌ；Ｒ７１ＡおよびＴ７３Ｋ（Ｋａｂａｔ番号付け）（図１０Ａ）。
１Ｆ５ＲＫＡ１１および１Ｆ５ＲＫＡ１２の生成
【０１２２】
ヒト化ＶＫ配列は、Ｖ領域フレームワーク内に位置する、ＶＣＩ残基で、１Ｆ５ＶＫに対して高い同一性を有するヒトＶＫ配列と比較した配列に基づき生成された。配列比較から、１Ｆ５ＶＫと同じ長さ（１０アミノ酸）のＣＤＲ１として同定されたヒトＶＫ遺伝子はなかった。次いで、最もＣＤＲ１に近い長さを有する（１１および１２アミノ酸）２つのヒトＦＲの群を分析し、これは、１Ｆ５ＶＫと同じ長さのＣＤＲ２および３を有した。
【０１２３】
１１アミノ酸ＣＤＲ１配列において、１Ｆ５ＲＫＡ１１に基づき、受け入れ番号ＡＢ０６４１４０をＦＷドナーとして選んだ。図４Ａは、１Ｆ５  ＶＫの天然ＤＮＡ配列、ヒトＶＫ配列ＡＢ０６４１４０、およびヒトＺ０００１３シグナル配列からの１Ｆ５ＲＫＡ１１ｓｓの生成を示す。本配列も、ＦＲ変異を含まない、１Ｆ５ＲＫＡ１１構築体（図５）を生成するために、最適化された。図４Ｂは、１Ｆ５ＲＫＡ１１を生成するために使用されたＦＲおよびＣＤＲのアミノ酸配列を提供する。
【０１２４】
１Ｆ５ＶＫからのＣＤＲ１、２、および３を、ヒトＡＢ０６４１４０の受容体ＦＲの中にグラフトし、１Ｆ５ＲＫＡ１１を生成した。ＡＢ０６４１４０に最も近い生殖系列Ｖ遺伝子は、シグナルペプチドが得られた、Ｚ０００１３（Ｖｄ／Ｌ８）である。ＳｉｇｎａｌＰアルゴリズムは、本シグナルペプチドの適切な切断を予測した。
【０１２５】
第２の構築体である１Ｆ５ＲＫＢ１１（図６）は、ＶＨ／ＶＫ界面残基Ｙ８７Ｆ（Ｋａｂａｔ番号付け）（図１０Ｂ）とともに、非保存バーニャ残基：Ｌ４６Ｐ、Ｌ４７Ｗ、およびＦ７１Ｙ（Ｋａｂａｔ番号付け）で、４つの逆変異を導入することにより、１Ｆ５ＲＫＡ１１から生成された。さらなる型：１Ｆ５ＲＫＢ１１、１Ｆ５ＲＫＤ１１、１Ｆ５ＲＫＥ１１、および１Ｆ５ＲＫＦ１１は、１Ｆ５ＲＫＢ１１に基づき、それぞれ、これらの４つの変異のうちの１つの異なる反転を含む（図１０Ｂ）。
【０１２６】
第２の一連のヒト化ＶＫ配列も、１２のアミノ酸を含むＣＤＲ１配列を有するヒトカッパ配列に基づき調製された。１Ｆ５ＲＫＡ１２に基づき、受け入れ番号ＡＹ２６３４１５をＦＲドナーとして選んだ。
【０１２７】
図７Ａは、１Ｆ５  ＶＫの天然配列、ヒトＶＫ配列ＡＹ２６３４１５、およびヒトＸ１２６８６シグナル配列から１Ｆ５ＲＫＡ１２ｓｓを生成するために使用された核酸配列を示す。１Ｆ５ＶＫからのＣＤＲ１、２、および３を、ヒトＡＹ２６３４１５の受容体ＦＲの中にグラフトし、１Ｆ５ＲＫＡ１２を生成した（図７Ｂ）。受容体ＡＹ２６３４１５に最も近い生殖系列Ｖ遺伝子は、シグナルペプチドが得られた、ＶＫＩＩＩ系統メンバーＸ１２６８６（Ａ２７）である。ＳｉｇｎａｌＰアルゴリズムは、本シグナルペプチドの適切な切断を予測した。最適化した１Ｆ５ＲＫＡ１２構築体ＤＮＡおよびタンパク質配列を図８に示す。本構築体は、ＦＲ変移を含まない。第２の構築体である１Ｆ５ＲＫＢ１２（図９）は、３つの非保存残基：Ｌ４６Ｐ、Ｌ４７Ｗ、およびＦ７１Ｙ（Ｋａｂａｔ番号付け）で、３つの逆変異を導入することにより、１Ｆ５ＲＫＡ１２から生成された。さらなる型：１Ｆ５ＲＫＣ１２、１Ｆ５ＲＫＤ１２、および１Ｆ５ＲＫＥ１２は、１Ｆ５ＲＫＢ１２に基づき、それぞれ、これらの３つの変異のうちの１つの異なる反転を含有する。
【０１２８】
重鎖には、可変領域に結合されたヒトγ１定常領域、軽鎖には、可変領域に結合されたカッパ定常領域を含む、発現ベクターが調製された。
【０１２９】
図１１Ａ〜Ｅは、それぞれ、１Ｆ５ＲＫＧ１１、１Ｆ５ＲＫＢ１１、１Ｆ５ＲＫＦ１２、１Ｆ５ＲＫＢ１２、および１Ｆ５ＲＨＡタンパク質からの成熟可変および定常領域のアミノ酸配列を提供する。図２２および２３は、それぞれ、ｃ１Ｆ５ＶＨおよびｃ１Ｆ５ＶＫの成熟可変および定常領域のキメラタンパク質配列のアミノ酸配列を提供する。アミノ酸配列の定常領域は、下線付きである。
【０１３０】
重鎖および軽鎖をコードする発現プラスミド調製物（ヒト化またはキメラ）は、ＨＥＫ２９３ｔ細胞を形質移入するために使用された。形質移入において、細胞を、フラスコ中の、１０％のＦＣＳ、ペニシリン、およびストレプトマイシンで補足されたＤＭＥＭ＋ＧｌｕｔａＭａｘ中で最初に成長させ、ＣＯ２ガス供給された細胞培養チャンバでインキュベートした。細胞培養物を２日毎に１：３、または３〜４日毎に１：４もしくは１：５に分けた。継代中、細胞をフラスコから剥離するために、軽いトリプシン処理を使用した。形質移入する１日前、各ウェルに２ｍＬの培地を添加した後、細胞（２×１０５細胞／ウェル）を添加することにより、６ウェルプレートを調製した。細胞を翌日チェックし、少なくとも８０％の培養密度であることを確認し、培地を２ｍＬ／ウェルで交換した。形質移入において、９６μＬのＯＰｔｉＰＲＯ  ＳＦＭを無菌の１．５ｍＬのチューブの中に分注し、６μＬのＦｕｇｅｎｅ６を培地に直接添加し、５分間、室温でインキュベートした。ＤＮＡ（総量１μｇ；０．５μｇの重鎖ベクター、０．５μｇの軽鎖ベクター）を添加し、１５分間、室温でインキュベートした。Ｆｕｇｅｎｅ６、ＤＮＡ、およびＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ混合物の混合物をウェルの周りに滴下して添加し、次いで、プレートを細胞培養インキュベータで、４日間、インキュベートした。状態調節された培地を４日後に採取し、ＩｇＧを定量化し、抗原結合アッセイを実施した。
【０１３１】
ラジ細胞結合を測定するために、これらの状態調節された培地のＩｇＧを、ＥＬＩＳＡにより測定した（実施例２）。使用した全ての形質移入された２９３細胞状態調節された培地のＩｇＧ１ｋ抗体の濃度を表１に示す。ヒト化およびキメラ抗体は、良好〜優れたレベルで発現し、以下のさらなる実施例２〜４に使用された。
【表１】
2012517806.tif 000002
実施例２：ヒト化１Ｆ５抗体によるラジ結合
【０１３２】
キメラヒト化１Ｆ５抗体のラジ細胞（ＣＤ２０を発現するヒトＢ細胞株）への結合を測定するために、アッセイを実施した。ラジ細胞（８０μＬ；０．１１容量の１０×ＰＢＳ（ＭＰＢＳ）で希釈された新しい成長培地を含む２４ｍＬ中１〜２ｘ１０６細胞／ｍＬ、および８ｍＬの８％パラホルムアルデヒド（ＰＢＳ中））を９６ウェルポリ−Ｄ−リジンコーティングされたプレートに添加し、６０分間、２５℃で、２５００ｒｐｍ（Ｂｅｃｋｍａｎ  ６Ｌ）で遠心分離した。ペレットを４００μＬのＰＢＳ、Ｔｗｅｅｎ２０（０．０２％ｖ／ｖ）で４回洗浄した。最終洗浄後に５０μＬのＭＰＢＳを各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした後、ブロッキング緩衝液を廃棄した。１Ｆ５抗体の段階希釈を、別の９６ウェルプレートで、ＭＰＢＳ中で調製し、ラジ細胞コーティングされたプレートに移し、１時間、室温でインキュベートした。次いで、抗体溶液を廃棄し、プレートを４００μＬのＰＢＳ緩衝液で６回洗浄した。ＭＰＢＳで１：２０００にストック抗体溶液を希釈することにより、ヤギ抗ヒトカッパ（Ｓｉｇｍａ  Ａ７１６４）を調製し、洗浄したウェルに添加し、再び、１時間、室温でインキュベートした。プレートを再度、４００μＬのＰＢＳ緩衝液で６回洗浄した。１００μＬのＫ−ｂｌｕｅ  ＴＭＢ溶液を各ウェルに添加した。３０分後、５０μＬの赤い停止液を添加して、反応を停止させ、６５０ｎｍで吸光度を読み取った。
【０１３３】
図１２に図示する、ヒト化ＶＫｓ：１Ｆ５ＲＫＡ１１、１Ｆ５ＲＫＡ１２、１Ｆ５ＲＫＣ１１、または１Ｆ５ＲＫＣ１２に関連するキメラｃ１Ｆ５ＶＨによりコードされた抗体のラジ細胞への結合は、キメラｃ１Ｆ５抗体のそれと比較して減少した（図１２Ａ、１２Ｃ、および１２Ｄ）。逆に、１Ｆ５ＲＨＡまたは１Ｆ５ＲＨＢのいずれかと組み合わせたキメラｃ１Ｆ５ＶＫによりコードされた抗体によるラジ細胞結合は、区別不能であり、リツキサンのそれと類似した（図１２Ｂ）。キメラｃ１Ｆ５ＶＨと組み合わせた他のＶＫ型：１Ｆ５ＲＫＢ１１、１Ｆ５ＲＫＤ１１、１Ｆ５ＲＫＥ１１、１Ｆ５ＲＫＦ１１（図１２Ｄ）；１Ｆ５ＲＫＢ１２、１Ｆ５ＲＫＤ１２、１Ｆ５ＲＫＥ１２（図１２Ｃ）は、キメラ抗体と同様に、またはそれより良好にラジ細胞に結合した。
【０１３４】
バーニャＬ４６Ｐ逆変異（Ｋａｂａｔ番号付け）が反転する、１Ｆ５ＲＫＣ１１および１Ｆ５ＲＫＣ１２型の低結合効力を考慮して、１Ｆ５ＲＫＧ１１および１Ｆ５ＲＫＦ１２は、それぞれ、Ｌ４６Ｐ逆変異（Ｋａｂａｔ番号付け）の単独導入を伴う、１Ｆ５ＲＫＡ１１または１Ｆ５ＲＫＡ１２に基づき設計された（それぞれ、１０ＢおよびＣ）。
追加のアッセイ（図１３〜１５）は、種々のヒト化カッパ鎖とともに、１Ｆ５ＲＨＡによりコードされる完全ヒト化抗体を検討した。図１３Ａ〜Ｂは、１Ｆ５ＲＫＣ型を除く全てのカッパ鎖構築体に関連する、１Ｆ５ＲＨＡによってコードされた完全ヒト化抗体によるラジ細胞結合は、キメラ抗体のそれと類似することを示す。カッパ構築体１Ｆ５ＲＫＣ１２および１Ｆ５ＲＫＣ１１（図示せず）によりコードされた抗体によるラジ細胞結合は、また不良であった。図１４は、１Ｆ５ＲＫＦ１２に関連する１Ｆ５ＲＨＡによりコードされた抗体のラジ細胞結合効力が、１Ｆ５ＲＫＧ１１によりコードされた抗体のそれより僅かに優れているようであり、それらの効力は、キメラ抗体のそれと類似することを確認した。
実施例３：ＦＡＣＳ結合アッセイ
【０１３５】
ＦＡＣＳｏｒｔフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  ＣＡ）を用いて、ヒト化１Ｆ５抗体によるラジ細胞結合も分析した。標準ＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞分類）手順をアッセイに利用した。細胞結合の測定のために、前方対側方散乱に基づき、細片および細胞凝集塊を除外した。死細胞は、ＰＩ取り込みに基づき、分析から除外された（「ｇａｔｅｄ  ｏｕｔ」）。５，０００から１０，０００の生細胞は、試料毎に分析され、蛍光分散の幾何学平均（平均蛍光強度またはＭＦＩ）は、計器ソフトウェア（ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ，Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｎｓｏｎ）を使用して決定された。ＭＦＩ血は、全ての試験について報告される。ヒト化抗体ＲＨＡ×ＲＫＦ１２、ＲＨＡ×ＲＫＢ１１、およびＲＨＡ×ＲＫＧ１１のそれぞれについて、２つの試験を実施した。ＦＡＣＳ結合アッセイの結果を図１６に提供する。図に示すように、検査されたヒト化抗体（ＲＨＡ×ＲＫＦ１２、ＲＨＡ×ＲＫＢ１１、およびＲＨＡ×ＲＫＧ１１）は、全て、キメラ１Ｆ５より高い結合親和性を有した。
実施例４：熱安定性
【０１３６】
２つの抗体（１Ｆ５ＲＫＧ１１×１Ｆ５ＲＨＡおよび１Ｆ５ＲＫＦ１２×１Ｆ５ＲＨＡ）が、同様の構造安定性であるかを検討するために、ＰＢＳによって緩衝された、培地中の各抗体の１ｍｇ／ｍＬ希釈物を５０から８０℃（５０°、５５°、６０°、６５°、７０°、７５°、および８０℃）の間の７つの温度で、１０分間加熱した。４℃への急速な冷却後、上述のように、ラジ結合分析を実施した。ラジ結合アッセイの結果（図１５）は、１Ｆ５ＲＫＧ１１×１Ｆ５ＲＨＡ抗体が、１Ｆ５ＲＫＦ１２×１Ｆ５ＲＨＡ抗体より高い温度で、結合効力を維持したことを示した。７５℃で、１Ｆ５ＲＫＧ１１抗体は、リツキサンより大きな残余効力を維持し、これは、本温度で１０分の差で非活性化された。
実施例５：ヒト化１Ｆ５抗体のＣＤＣ活性、オフ速度、およびＢ細胞枯渇
【０１３７】
上述のヒト化１Ｆ５抗体のうちの４つ（ＲＨＡ×ＲＫＢ１１（変異体Ｄ）、ＲＨＡ×ＲＫＧ１１（変異体Ｅ）、ＲＨＡ×ＲＫＢ１２（変異体Ｆ）およびＲＨＡ×ＲＫＦ１２（変異体Ｇ））ならびにキメラ抗体ｃ１Ｆ５は、主にＧ０グリコシル化を提供する、遺伝子導入アオクキクサ植物で産生された。キメラおよびヒト化抗体の分析（例えば、マトリクス補助レーザー脱イオン化飛行時間型質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ）分析により）は、抗体が優性にＧ０グリコシル化（データは図示せず）であったことを確証した。
【０１３８】
本実施例の目的は、標的としてラジ細胞を使用した補体依存細胞毒性活性（ＣＤＣ）、Ｂ細胞からの結合の解離（オフ速度）、および全血における生体外Ｂ細胞枯渇を含む、これらの抗体の生体外活性の幾つかの態様を評価するためであった。リツキシマブ（ＲＴＸ）の値も測定され、ヒト化およびキメラ１Ｆ５抗体について決定された値と比較された。
ＣＤＣ活性
【０１３９】
変異体抗体の補体依存細胞毒性（ＣＤＣ）は、死細胞を列挙するために、フローサイトメトリーを使用して、ラジバーキットリンパ腫細胞（ＡＴＣＣ受け入れ番号ＣＣＬ−８６）で測定された。つまり、９０マイクロリットルのＰＢＳ中の種々の濃度の異なる抗体を用いて細胞を処理した後、１０マイクロリットルの正常なヒト血清を添加し、最終濃度１０％の血清を得た。細胞を３７℃で３０分間インキュベートした後、氷上に設置した。ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を含有する冷（４℃）ＰＢＳを細胞に添加し、ＰＩ陽性細胞の頻度をＦＡＣＳにより決定した。
【０１４０】
図２４は、種々の濃度の検査した抗体のＣＤＣアッセイの結果を示す。図に示すように、Ｇ０グリコシル化ヒト化１Ｆ５抗体は、リツキシマブより補体依存細胞毒性が非常に低く、抗体ＥのＣＤＣがリツキシマブより約１０倍低かった。
【０１４１】
ＥＣ５０について、抗体は以下のようにランク付けされた：
ＲＴＸ＜変異体Ｇ＜変異体Ｆ＜変異体Ｄ＜キメラ＜変異体Ｅ（表２）。
【表２】
2012517806.tif 000003
細胞からの抗体オフ速度
【０１４２】
蛍光標識された抗体がラジ細胞から解離する速度を、４時間の時間期間にわたりＲＴＸと比較した。使用したアッセイフォーマットは、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  Ｄ．Ｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００９．Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ  １１３（５）：１０６２）に記載されるものに従い、以下に簡単に概説する。
【０１４３】
供給者（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔ．Ｎｏ．５３０２５）の指示に従い、全ての抗体をフルオレセイン様フルオロフォアのＤｙＬｉｇｈｔ４８８に抱合した。抱合後、標識キットに提供されたクロマトグラフィーカラムを使用して、標識された抗体を遊離染料から単離した。標識後のタンパク質濃度を分光光度的に測定し、濃度は、０．９３から１．１ｍｇ／ｍＬの間で変化することが分かった。精製した標識された抗体を、光から保護したＰＢＳ中で、４℃で保管した。
【０１４４】
細胞からの抗体解離を測定するために、１０６ラジ細胞を、１％ウシ血清アルブミン（ＰＢＳ／ＢＳＡ）を含むＰＢＳに懸濁した。標識された抗体を１．０ｍＬ容量の５ｕｇ／ｍＬの最終濃度に添加した。３７℃で３０分間インキュベートした後、非標識（「冷」）抗体を最終濃度の１０００ｕｇ／ｍＬに添加した。冷抗体と混合された標識された細胞を、４時間、３７℃に戻した。２０分の間隔で、１００ｕｌアリコートの細胞を各試料から取り除き、ヨウ化プロピジウムを含む４００ｕＬの冷ＰＢＳ／ＢＳＡを添加し、死細胞（ＰＩ＋）を除く細胞集団の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、ＦＡＣＳにより決定した。本プロトコルで、標識が抗体親和性に影響を及ぼさないことが、仮定された。
【０１４５】
ヒト化１Ｆ５抗体は、リツキシマブに対して有意に減少したオフ速度を有することが観察された（図２５）。図２５に示すように、ヒト化１Ｆ５抗体は、半減期において、リツキシマブに対してほぼ２〜３倍の増加を示すことが明らかである。
【０１４６】
オフ速度試験の結果を表３に要約する。抗体変異体ＤおよびＦは、２つの試験中、半減期においてある程度の変動を示したが、全体的な半減期は類似した。全てのヒト化１Ｆ５抗体は、リツキシマブと比較して有意に減少したオフ速度を有した（すなわち、ヒト化１Ｆ５抗体は、リツキシマブより約２〜３倍長く結合した）。
【表３】
2012517806.tif 000004
【０１４７】
図２６は、試験１の抗ＣＤ２０抗体から得た半減期の棒グラフを示す。
全血におけるＢ細胞の枯渇
【０１４８】
ヒト化１Ｆ５抗体のＢ細胞枯渇活性を評価した。つまり、検査抗体を、特定の濃度で、１００ｕｌの新しい全血に添加し、３７℃で４時間、インキュベートした。ＣＤ２０レセプター発現とは関係なく細胞を結合するＢ細胞特異的抗体であるＣＤ１９を使用して、Ｂ細胞の頻度を決定した。１つは、ＣＤ１６が検査抗体に曝露される前に抗ＣＤ１６抗体で遮断されず、もう１つは、ＣＤ１６が事前に遮断された、２つの試験が実施された。
【０１４９】
抗体ＣＤ１６なしの最初の一連の実験において、ヒト化１Ｆ５抗体の細胞毒性は、リツキシマブのそれより大きいことが観察された（図２７）。つまり、ヒト化１Ｆ５抗体は、リツキシマブより効果的にＢ細胞を枯渇する。図２７は、キメラ１Ｆ５、変異体Ｄ−Ｇ、リツキシマブ、およびアイソタイプ対照（すなわち、Ｂ細胞抗原特性を持たない対照ＩｇＧ１、Ｇ０抗体）についての、最初の一連の実験の結果を示す。
【０１５０】
第２の一連の実験において、エフェクター細胞上のＣＤ１６レセプターは、抗ＣＤ１６抗体で事前に遮断された。次いで、ヒト化抗体の変異体ＥおよびＧが、Ｂ細胞枯渇アッセイで検査された時、抗ＣＤ２０抗体のＢ細胞枯渇活性は、抗ＣＤ１６抗体を有するエフェクター細胞上のＣＤ１６を遮断することにより阻害されたことを示した（図２８）。抗ＣＤ１６の効果は、Ｂ細胞枯渇活性をほぼ完全に減少させることであり、ＡＤＣＣをヒト化１Ｆ５抗体についての主な作用様式と考える。抗ＣＤ１６抗体は、リツキシマブと同様に変異体ＥおよびＧについて、Ｂ細胞枯渇を阻害した。
結論
【０１５１】
Ｉ．ヒト化１Ｆ５抗体は、リツキシマブより非常に低いＣＤＣ活性を有する。
【０１５２】
ＩＩ．ヒト化１Ｆ５抗体の全てが細胞から解離する速度（すなわち、オフ速度）は、リツキシマブのオフ速度に対して、有意に減少した。
【０１５３】
ＩＩＩ．ヒト化１Ｆ５抗体の全ては、全血からのＢ細胞の枯渇において、リツキシマブより効率的であった。
【０１５４】
ＩＶ．検査した２つのヒト化１Ｆ５抗体変異体において、全血におけるＢ細胞の枯渇は、ＣＤ１６遮断抗体での治療によりほぼ完全に阻害された。
【０１５５】
本発明は、詳細に、かつその特定の実施形態を参照に説明されたが、種々の変更および修正が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、行うことができることを、当業者は理解するであろう。
【図１Ａ】
2012517806.tif 000005
【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
2012517806.tif 000010
【図５】
2012517806.tif 000011
【図６】
2012517806.tif 000012
【図７Ａ】
2012517806.tif 000013
【図７Ｂ】
2012517806.tif 000014
【図８】
2012517806.tif 000015
【図９】
2012517806.tif 000016
【図１０Ａ】
2012517806.tif 000017
【図１０Ｂ】
2012517806.tif 000018
【図１０Ｃ】
2012517806.tif 000019
【図１１Ａ】
2012517806.tif 000020
【図１１Ｂ】
2012517806.tif 000021
【図１１Ｃ】
2012517806.tif 000022
【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
2012517806.tif 000026
【図１２Ｃ】
2012517806.tif 000027
【図１２Ｄ】
2012517806.tif 000028
【図１３Ａ】
2012517806.tif 000029
【図１３Ｂ】
2012517806.tif 000030
【図１４】
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【図１５】
2012517806.tif 000032
【図１６】
2012517806.tif 000033
【図１７】
2012517806.tif 000034
【図１８】
2012517806.tif 000035
【図１９】
2012517806.tif 000036
【図２０】
2012517806.tif 000037
【図２１】
2012517806.tif 000038
【図２２】
2012517806.tif 000039
【図２３】
2012517806.tif 000040
【図２４】
2012517806.tif 000041
【図２５】
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【図２６】
2012517806.tif 000043
【図２７】
2012517806.tif 000044
【図２８】
2012517806.tif 000045
【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成23年10月19日(2011.10.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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