(57)【要約】水溶性オリゴマーの共有結合によって化学修飾される小分子薬物を提供する。本発明のコンジュゲートは、いくつかの投与経路のいずれかによって投与される場合、水溶性オリゴマーに結合していない小分子薬物とは異なる特徴を示す。本発明により、例えば、安定な連結を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合したプロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなる化合物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定な連結を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合したプロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなる化合物。
【請求項２】
前記プロテアーゼ阻害剤は、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤ではない、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記プロテアーゼ阻害剤は、肝炎プロテアーゼ阻害剤である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記肝炎プロテアーゼ阻害剤は、ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
前記肝炎プロテアーゼ阻害剤は、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤である、請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
前記肝炎プロテアーゼ阻害剤は、ＨＢＶプロテアーゼ阻害剤である、請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
以下の構造：
【化２０】
2012502906.tif 000021
［ここで：
【化２１】
2012502906.tif 000022
は、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基であり；
（ａ）は１〜３の値を有する整数であり、
Ｘは、それぞれ、安定な連結であり；および
ＰＯＬＹは、それぞれ、水溶性非ペプチド性オリゴマーである］
を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
前記水溶性非ペプチド性オリゴマーは、１〜３０のモノマーを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
前記水溶性非ペプチド性オリゴマーは、１、２、３、４、５、６、７、９、９、および１０から選択されるいくつかのモノマーサブユニットを有する、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記水溶性非ペプチド性オリゴマーは、オリゴマー性（エチレンオキシド）である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記オリゴマー性（エチレンオキシド）は、アルコキシまたはヒドロキシル末端キャッピング部分を有する、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記プロテアーゼ阻害剤は、Ｔｅｌａｐｒｅｖｉｒ、Ｂｏｃｅｐｒｅｖｉｒ、ＩＴＭＮ−１９１およびＢＩＬＮ−２０６１から選択される、請求項１、５、７、および８〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
前記安定な連結は、エーテル、カルバメート、アミド、スルホニルアミド、および尿素から選択される、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容できる賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物を含んでなる、剤形。
【請求項１６】
前記プロテアーゼ阻害剤による治療に応答性の病態を治療するための請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００８年９月１７日に出願された米国仮特許出願第６１／１９２，４３８号明細書（その開示内容は、本明細書においてその全体が参考として援用される）の優先権を主張する。
【０００２】
本開示物は、化学修飾を有さない小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤より優れた所定の利点を有する化学的に修飾された小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤を提供する。本明細書に記載の化学的に修飾された小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤は、（とりわけ）薬物の発見、薬物療法、生理学、有機化学および高分子化学の分野に関し、および／またはそれらの分野において用途を有する。
【背景技術】
【０００３】
Ｃ型肝炎ウイルス（「ＨＣＶ」）感染は、慢性肝疾患の主な原因の１つであり；世界中で１億７０００万人を超える人がＣ型肝炎ウイルスに感染しており、米国ではＨＣＶ遺伝子型１型が優勢である。現在の標準的な治療は、単独かまたはリバビリンとの併用でのＰＥＧ化インターフェロン−α（ｐｅｇＩＦＮ）からなる。併用治療は、ＨＣＶ遺伝子型１型感染を伴う患者の僅か５０％にしか有効ではなく、そして患者の中には、治療に応答して、重大な副作用を経験する者もいる。それ故、より副作用が少ないより有効な薬剤の開発に大きな関心が集められている。
【０００４】
肝炎ウイルス（Ｂ型肝炎ウイルス、「ＨＢＶ」、およびＣ型肝炎ウイルス、「ＨＣＶ」を含む）に関しては、肝炎プロテアーゼ阻害剤が作用して、感染性ウイルス粒子の作製に必要なｇａｇおよびｇａｇ／ｐｏｌ融合ポリペプチドのタンパク質分解性切断に必要なウイルスプロテアーゼを阻害する。それ故、このタンパク質分解性切断を阻害することによって、肝炎プロテアーゼ阻害剤は、より大きなポリペプチド前駆体が有効なウイルスの複製に必要な成熟型のタンパク質を形成する能力を低減する。
【０００５】
肝炎プロテアーゼ阻害剤は、肝炎を患う患者を治療することが見込まれるが、それらの使用は、（とりわけ）比較的広範な代謝、比較的不良な経口バイオアベイラビリティ、および比較的高い容量に関連する課題によって妨げられている。
【０００６】
本開示物は、当該技術分野におけるこのような必要性およびその他の必要性に取り組もうとするものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
１つ以上の態様では、安定な連結を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合したプロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなる化合物が提供される。
【０００８】
１つ以上の関連する実施形態では、安定な結合を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合したプロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなるが、但し、プロテアーゼ阻害剤は、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤ではない、化合物が提供される。
【０００９】
１つ以上の実施形態では、安定な連結を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合した肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなる化合物が提供される。
【００１０】
１つ以上の態様では、安定な連結を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合したＮＳ３プロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなる化合物が提供される。
【００１１】
１つ以上の態様では、安定な連結を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合したＨＣＶプロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなる化合物が提供される。
【００１２】
１つ以上の態様では、安定な連結を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合したＨＢＶプロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなる化合物が提供される。
【００１３】
１つ以上の実施形態では、以下の構造を有する化合物が提供される：
【００１４】
【化１】
2012502906.tif 000002
ここで：
【００１５】
【化２】
2012502906.tif 000003
は、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基であり；
（ａ）は１〜３の値を有する整数であり；
Ｘは、それぞれ、安定な連結であり；および
ＰＯＬＹは、それぞれ、水溶性非ペプチド性オリゴマーである。
【００１６】
１つ以上の態様では、安定な連結を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合した肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなる組成物；および任意に薬学的に許容できる賦形剤、を含んでなる組成物が提供される。
【００１７】
１つ以上の実施形態では、以下を含んでなる組成物が提供される：
（ｉ）以下の構造を有する化合物：
【００１８】
【化３】
2012502906.tif 000004
ここで：
【００１９】
【化４】
2012502906.tif 000005
は、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基であり；
（ａ）は包括的に１〜３の値を有する整数であり；
Ｘは、それぞれ、安定な連結であり；および
ＰＯＬＹは、それぞれ、水溶性非ペプチド性オリゴマーである；および
（ｉｉ）場合により、薬学的に許容できる賦形剤。
【００２０】
１つ以上の実施形態では、安定な連結を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合した肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなる化合物を含んでなる剤形が提供される。
【００２１】
１つ以上の実施形態では、以下の構造を有する化合物を含んでなる剤形が提供される：
【００２２】
【化５】
2012502906.tif 000006
ここで：
【００２３】
【化６】
2012502906.tif 000007
は、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基であり；
（ａ）は１〜３の値を有する整数であり；
Ｘは、それぞれ、安定な連結であり；および
ＰＯＬＹは、それぞれ、水溶性非ペプチド性オリゴマーである。
【００２４】
１つ以上の実施形態では、水溶性非ペプチド性オリゴマーを小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤に共有結合させる工程を含んでなる方法が提供される。
【００２５】
本発明の１つ以上の実施形態では、以下の構造を有する化合物：
【００２６】
【化７】
2012502906.tif 000008
ここで：
【００２７】
【化８】
2012502906.tif 000009
は、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基であり；
（ａ）は１〜３の値を有する整数であり；
Ｘは、それぞれ、安定な連結であり；および
ＰＯＬＹは、それぞれ、水溶性非ペプチド性オリゴマーである；および
（ｉｉ）場合により、薬学的に許容できる賦形剤
を投与する工程を含んでなる方法が提供される。
【００２８】
本発明のこれらのならびに他の目的、態様、実施形態および特徴については、以下の詳細な説明と併せて読むことにより、明らかとなろう。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
定義
本明細書において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他を指示しない限り、複数形にも言及する。
【００３０】
本発明の説明および請求の範囲において、以下の用語が下記の定義に従って使用される。
【００３１】
「水溶性非ペプチド性オリゴマー」は、室温で水において少なくとも３５（重量）％可溶性、好ましくは、７０（重量）％を超える、およびより好ましくは、９５（重量）％を超える可溶性であるオリゴマーを示す。典型的に、「水溶性」オリゴマーの非ろ過水性調製物では、ろ過後に同じ溶液を透過する光の量のうちの少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも９５％が透過する。しかし、水溶性オリゴマーが、水において少なくとも９５（重量）％可溶性であるか、または水に完全に可溶性であることが、最も好適である。「非ペプチド性」であることに関して、オリゴマーが３５（重量）％未満のアミノ酸残基を有する場合、それは非ペプチド性である。
【００３２】
用語「モノマー」、「モノマーサブユニット」および「モノマー単位」は、本明細書において交換可能に使用され、そしてポリマーまたはオリゴマーの基本構造単位の１つを指す。ホモオリゴマーの場合、単一の反復構造単位がオリゴマーを形成する。コオリゴマーの場合、２つ以上の構造単位が、あるパターンかまたは無作為のいずれかで反復して、オリゴマーを形成する。本開示物に関連して使用される好適なオリゴマーは、ホモオリゴマーである。水溶性非ペプチド性オリゴマーは、典型的に、連続的に結合して、モノマーの鎖を形成する１つ以上のモノマーを含んでなる。オリゴマーは、単一のモノマータイプ（即ち、ホモオリゴマー性である）または２つもしくは３つのモノマータイプ（即ち、コオリゴマー性である）から形成することができる。
【００３３】
「オリゴマー」は、約２〜約５０のモノマー、好ましくは、約２〜約３０のモノマーを有する分子である。オリゴマーの構成は変動し得る。本発明に使用するための具体的なオリゴマーとして、線状、分岐、またはフォーク状のような多様なジオメトリーを有するものが挙げられ、下記において、より詳細に説明する。
【００３４】
本明細書において使用する「ＰＥＧ」または「ポリエチレングリコール」は、任意の水溶性のポリ（エチレンオキシド）を包含することを意味する。他に示さない限り、「ＰＥＧオリゴマー」（また、オリゴエチレングリコールとも呼ばれる）は、実質的にすべての（およびより好ましくは、すべての）モノマーサブユニットがエチレンオキシドサブユニットであるものである。しかし、オリゴマーは、例えば、コンジュゲーションのための別個の末端キャッピング部分または官能基を含有してもよい。典型的に、本発明に使用するためのＰＥＧオリゴマーは、次の２つの構造のうちの１つを含んでなる：「−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−」または「−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−１ＣＨ２ＣＨ２−」であって、例えば、合成変換中に末端の酸素が置き換えられているかどうかに依存する。ＰＥＧオリゴマーでは、「ｎ」値は、約２〜５０、好ましくは、約２〜約３０で変動し、そして、全体的なＰＥＧの末端基および構成も変動し得る。ＰＥＧが、例えば、小分子の薬物に結合するための官能基、Ａをさらに含んでなる場合、官能基は、ＰＥＧオリゴマーに共有結合する場合、（ｉ）酸素−酸素結合（−Ｏ−Ｏ−、過酸化連結）の形成も、または（ｉｉ）窒素−酸素結合（Ｎ−Ｏ、Ｏ−Ｎ）の形成も生じない。
【００３５】
「末端キャッピング基」は、一般的に、ＰＥＧオリゴマーの末端の酸素に結合した非反応性炭素含有基である。例示的な末端キャッピング基は、Ｃ１−５アルキル基、例えば、メチル、エチルおよびベンジル）、ならびにアリール、ヘテロアリール、シクロ、ヘテロシクロなどを含んでなる。本発明の目的のために、好適なキャッピング基は、メチルまたはエチルのような比較的低い分子量を有する。末端キャッピング基はまた、検出可能な標識を含んでなり得る。そのような標識として、蛍光物質（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｒ）、化学発光物質（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｒ）、酵素標識において使用される部分、比色標識（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｌａｂｅｌ）（例えば、染料）、金属イオン、および放射性部分が挙げられるが、これらに限定されない。オリゴマーのジオメトリーまたは全体的構造に関して、「分岐」は、分岐点から延在する別個の「アーム」を表す２つ以上のポリマーを有するオリゴマーを指す。
【００３６】
オリゴマーのジオメトリーまたは全体的構造に関して、「フォーク状」は、分岐点から延在する（典型的に、１個以上の原子を介して）２つ以上の官能基を有するオリゴマーを指す。
【００３７】
「分岐点」は、オリゴマーが、線状構造から１つ以上のさらなるアームへ分岐またはフォーク構造を形成する１個以上の原子を含んでなる分岐点を指す。
【００３８】
用語「反応性」または「活性化された」は、有機合成の従来の条件下で容易にまたは実際的な速度で反応する官能基を指す。これは、反応しないか、あるいは反応するためには強力な触媒または実際的ではない反応条件が必要であるかのいずれかである基（即ち、「非反応性」もしくは「不活な」基）とは対照的である。
【００３９】
反応混合物中の分子状に存在する官能基に関して、「容易に反応しない」は、基が、反応混合物において所望される反応を生じるのに有効である条件下で主にインタクトの状態を保つことを指す。
【００４０】
「保護基」は、所定の反応条件下で分子中の特定の化学的に反応性の官能基の反応を防止または阻止する部分である。保護基は、保護される化学反応性基のタイプならびに用いようとする反応条件および分子におけるさらなる反応性基または保護基の存在に依存して変動する。保護することができる官能基として、例えば、カルボン酸基、アミノ基、ヒドロキシル基、チオール基、カルボニル基などが挙げられる。カルボン酸については、代表的な保護基として、エステル（例えば、ｐ−メトキシベンジルエステル）、アミドおよびヒドラジドが挙げられ；アミノ基については、カルバメート（例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）およびアミドが挙げられ；ヒドロキシル基については、エーテルおよびエステルが挙げられ；チオール基については、チオエーテルおよびチオエステルが挙げられ；カルボニル基については、アセタールおよびケタールなどが挙げられる。そのような保護基は、当業者に周知であり、そして例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９、および本明細書において引用した参考文献に記載されている。
【００４１】
「保護された形態」の官能基は、保護基を有する官能基を指す。本明細書において使用する用語「官能基」またはその任意の類義語は、その保護された形態を包含する。
【００４２】
「生理学的に切断可能な」または「加水分解可能な」または「分解可能な」結合は、通常の生理学的条件下で水と反応する（即ち、加水分解される）比較的変化を起こし易い結合である。通常の生理学的条件下で水中で結合が加水分解する傾向は、２個の中心原子を接続する一般的なタイプの連結だけではなく、これらの中心原子に結合する置換基にも依存する。そのような結合は、一般的に、当業者であれば認識することができる。適切な加水分解可能な不安定または弱い連結として、カルボン酸エステル、リン酸エステル、無水物、アセタール、ケタール、アシルオキシアルキルエーテル、イミン、オルトエステル、ペプチド、オリゴヌクレオチド、チオエステル、およびカルボネートが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】
「酵素的に分解可能な連結」は、通常の生理学的条件下で１つ以上の酵素による分解に供される連結を意味する。
【００４４】
「安定な」連結または結合は、水中で実質的に安定である、即ち、通常の生理学的条件下、任意の適切な程度で、長期間にわたって、加水分解を受けない化学部分または結合、典型的には、共有結合を指す。加水分解に安定な連結の例として次のものが挙げられるが、これらに限定されない：（例えば、脂肪族鎖における）炭素−炭素結合、エーテル、アミド、ウレタン、アミンなど。一般的に、安定な連結は、通常の生理学的条件下で１日あたり約１〜２％未満の加水分解の速度を示す連結である。代表的な化学結合の加水分解速度については、ほとんどの標準的な化学の教科書において見出すことができる。
【００４５】
所与の組成のオリゴマーの一貫性について説明する場合、「実質的に」または「本質的に」とは、ほぼすべてまたは完全に、例えば、９５％以上、より好ましくは、９７％以上、なおより好ましくは、９８％以上、さらにより好ましくは、９９％以上、なおより好ましくは、９９．９％以上を意味し、９９．９９％以上が、いくつかの所与の量のうちで最も好適である。
【００４６】
「単分散」は、オリゴマー組成物を指し、ここで、組成物中の実質的にすべてのオリゴマーが、良好に限定された単一の分子量および限定された数のモノマーを有し、クロマトグラフィーまたは質量分析によって決定される。単分散オリゴマー組成物は、ある程度純粋であり、即ち、いくらかの異なる数のモノマー（即ち、３つ以上の異なるオリゴマーサイズを有するオリゴマー組成物）ではなく、単一かつ限定可能な数のモノマーを有する分子を実質的に含んでなる。単分散オリゴマー組成物は、１．０００５以下のＭＷ／Ｍｎ値、およびより好ましくは、１．００００のＭＷ／Ｍｎ値を有する。拡大解釈すると、単分散コンジュゲートからなる組成物は、組成物中のすべてのコンジュゲートの実質的にすべてのオリゴマーが、分布しておらず、（整数として）単一かつ限定された数のモノマーを有し、そしてオリゴマーが小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基に結合していない場合、１．０００５のＭＷ／Ｍｎ値、およびより好ましくは、１．００００のＭＷ／Ｍｎ値を有することを意味する。しかし、単分散コンジュゲートからなる組成物として、溶媒、試薬、賦形剤などのような１つ以上の非コンジュゲート物質を挙げることができる。
【００４７】
オリゴマー組成物に関して、「二峰性」は、オリゴマー組成物を指し、ここで、組成物中の実質的にすべてのオリゴマーは、分布ではなく、（整数として）２つの限定可能なかつ異なる数のモノマーのうちの１つを有し、そして多くの画分対分子量としてプロットした場合、その分子量の分布は、２つの個別の同定可能なピークとして出現する。好ましくは、本明細書に記載の二峰性オリゴマー組成物について、各ピークは、一般的に、その平均について対称であるが、２つのピークのサイズは異なっていてもよい。理想的には、二峰性分布における各ピークの多分散指数、Ｍｗ／Ｍｎは、１．０１以下、より好ましくは、１．００１以下、およびさらにより好ましくは、１．０００５以下、および最も好ましくは、１．００００のＭＷ／Ｍｎ値である。拡大解釈すると、二峰性コンジュゲートからなる組成物は、組成物中のすべてのコンジュゲートの実質的にすべてのオリゴマーが、大きな分布ではなく、（整数として）２つの限定可能なかつ異なる数のモノマーのうちの１つを有し、そしてオリゴマーが小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤アゴニストの残基に結合していない場合、１．０１以下のＭＷ／Ｍｎ値、より好ましくは、１．００１以下、およびさらにより好ましくは、１．０００５以下、および最も好ましくは、１．００００のＭＷ／Ｍｎ値を有することを意味する。しかし、二峰性コンジュゲートからなる組成物として、溶媒、試薬、賦形剤などのような１つ以上の非コンジュゲート物質を挙げることができる。
【００４８】
「小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤」は、本明細書において広範に使用され、典型的に、約１０００未満の分子量を有し、そしてレトロウイルス肝炎プロテアーゼ阻害剤としていくつかの程度の活性を有する有機、無機、または有機金属化合物を指す。小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤は、オリゴペプチドおよび約１０００未満の分子量を有する他の生体分子を包含する。
【００４９】
「生体膜」は、典型的に、少なくともいくつかの外来性の実体もしくはそうでなければ所望されない材料に対する関門として役立つ分化した細胞または組織から作製される任意の膜である。本明細書において使用する「生体膜」として、例えば、次のものを含む生理学的保護関門に関連するそれらの膜が挙げられる：血液脳関門（ＢＢＢ）；血液脳脊髄液関門；血液胎盤関門；血液乳関門；血液精巣関門；および膣粘膜、尿道粘膜、肛門粘膜、頬粘膜、舌下粘膜、直腸粘膜などを含む粘膜関門。文脈が明らかに他を指示しない限り、用語「生体膜」は、中間の胃腸間（例えば、胃および小腸）に関連する膜を含まない。
【００５０】
本明細書において使用する「生体膜横断速度」は、生体膜（例えば、血液脳関門に関連する膜）を横断する化合物の能力の尺度を提供する。多様な方法を使用して、あらゆる所与の生体膜を横断する分子の輸送を評価することができる。あらゆる所与の生物学的関門（例えば、血液脳脊髄液関門、血液胎盤関門、血液乳関門、腸関門など）に関連する生体膜横断速度を評価する方法は、当該技術分野において公知であり、本明細書および／または関連文献に記載されており、ならびに／あるいは当業者によって決定することができる。
【００５１】
本発明に関して、「代謝速度の減少」とは、水溶性オリゴマー（即ち、小分子薬物自体）に結合していない小分子薬物、または対照標準物質の代謝速度と比較した、水溶性オリゴマー−小分子薬物コンジュゲートの代謝速度の測定可能な減少を指す。「代謝の初回通過速度の減少」の特殊な場合においても、小分子薬物（または対照標準物質）および対応するコンジュゲートが経口投与されることを除き、同じ「代謝速度の減少」が求められる。経口投与された薬物は、胃腸管から門脈循環へ吸収され、そして体循環に到達する前に、肝臓を通過しなければならない。肝臓は、薬物代謝または生体内変化の主要部位であるため、体循環に到達する前に、相当量の薬物代謝することができる。初回通過代謝の程度、従って、その任意の減少は、いくつかの異なるアプローチによって測定することができる。例えば、動物血液サンプルを、定められた時間間隔で回収し、そして代謝物レベルについて、血漿または血清を、液体クロマトグラフィー／質量分析によって分析することができる。初回通過代謝および他の代謝プロセスに関連する「代謝速度の減少」を測定するための他の技術については、当該技術分野において公知であり、本明細書および／または関連文献に記載されており、ならびに／あるいは当業者によって決定することができる。好ましくは、本発明のコンジュゲートは、次の値のうちの少なくとも１つを満たす代謝速度の減少を提供することができる：少なくとも約３０％；少なくとも約４０％；少なくとも約５０％；少なくとも約６０％；少なくとも約７０％；少なくとも約８０％；および少なくとも約９０％。「経口的に生物学的に利用可能」である（小分子薬物またはそのコンジュゲートのような）化合物とは、好ましくは、経口投与される場合、２５％を超える、および好ましくは、７０％を超えるバイオアベイラビリティを有する化合物であって、ここで、化合物のバイオアベイラビリティは、代謝されていない形態で体循環に到達する投与された薬物の画分である。
【００５２】
「アルキル」は、典型的に、約１〜２０個の原子の長さの炭化水素鎖を指す。そのような炭化水素鎖は、飽和されていることが好ましいが、必ずしもそうである必要はなく、また、分岐鎖であってもよく、または直鎖であってもよいが、典型的に直鎖が好ましい。例示的なアルキル基として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、１−メチルブチル、１−エチルプロピル、３−メチルペンチルなどが挙げられる。本明細書において使用する「アルキル」は、３個以上の炭素原子に言及する場合、シクロアルキルを含む。「アルケニル」基は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を伴う２〜２０個の炭素原子のアルキルである。
【００５３】
用語「置換アルキル」または「置換Ｃｑ−ｒアルキル」（ここで、ｑおよびｒは、アルキル基に含有される炭素原子の範囲を同定する整数である）は、１つ、２つもしくは３つのハロ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、Ｃ１−７アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチルなど）、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７アシルオキシ、Ｃ３−７ヘテロ環、アミノ、フェノキシ、ニトロ、カルボキシ、カルボキシ、アシル、シアノによって置換された上記のアルキル基を示す。置換アルキル基は、同じまたは異なる置換基で１回、２回もしくは３回置換され得る。
【００５４】
「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含有するアルキル基を指し、そしてメチル、エチル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルによって例示されるように、直鎖であってもよく、または分岐鎖であってもよい。「低級アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する２〜６個の炭素原子の低級アルキル基である。
【００５５】
「非干渉置換基」は、分子中に存在する場合、典型的に、分子内に含有される他の官能基と非反応性である基である。
【００５６】
「アルコキシ」は、−Ｏ−Ｒ基を指し、ここで、Ｒは、アルキルまたは置換アルキル、好ましくは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル（例えば、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ベンジルなど）、好ましくは、Ｃ１−Ｃ７である。
【００５７】
「薬学的に許容できる賦形剤」または「薬学的に許容できるキャリア」は、成分を含まない組成物より優れた利点（例えば、患者への投与にさらに適切である）を有し、そして患者に対して顕著な有害な毒性学的影響を生じないことが認識される組成物を提供するために、本発明の組成物に含めることができる成分を指す。
【００５８】
用語「アリール」は、１４個までの炭素原子を有する芳香族基を意味する。アリール基として、フェニル、ナフチル、ビフェニル、フェナントレニル、ナフタセニルなどが挙げられる。「置換フェニル」および「置換アリール」は、それぞれ、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキル）、アルコキシ（例えば、Ｃ１−６アルコキシ）、ベンジルオキシ、カルボキシ、アリールなどから選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つ（例えば、１−２、１−３もしくは１−４置換基）によって置換されたフェニル基およびアリール基を示す。
【００５９】
「芳香族含有部分」は、少なくともアリール、および場合により１個以上の原子含有する原子のコレクションである。適切な芳香族含有部分については、本明細書において説明する。
【００６０】
簡潔のため、化学的部分は、全体を通して、一価の化学的部分（例えば、アルキル、アリールなど）として定義され、そしてそのように称される。それにもかかわらず、そのような用語はまた、当業者に明らかである適切な構造的環境下で、対応する多価の部分を伝えることにも使用される。例えば、「アルキル」部分は、一般的に、一価のラジカル（例えば、ＣＨ３−ＣＨ２−）を指す一方、所定の環境では、二価の連結部分は、「アルキル」であり得、その場合、当業者は、そのアルキルが、用語「アルキレン」に等価である二価のラジカル（例えば、−ＣＨ２−ＣＨ２−）であることを理解するであろう。（同様に、二価の部分が必要であり、そして「アリール」と述べられる環境では、当業者は、用語「アリール」が、対応する二価の部分、アリーレンを指すと理解するであろう）。すべての原子は、結合形成のためのそれらの正常な原子価数（即ち、炭素では４、Ｎでは３、Ｏでは２、およびＳの酸化状態に依存して、Ｓでは２、４、もしくは６）を有すると理解される。
【００６１】
「薬理学的有効量」、「生理学的有効量」、および「治療有効量」は、本明細書において交換可能に使用され、血流中あるいは標的組織中において、閾値レベルの有効因子および／またはコンジュゲートを提供するのに必要な組成物中に存在する水溶性オリゴマー−小分子薬物コンジュゲートの量を意味する。正確な量は、多数の因子、例えば、組成物の特定の有効因子、成分および物理特性、意図される患者集団、患者の考慮事項などに依存し、そして本明細書において提供する情報、および関連文献において利用可能な情報に基づいて、当業者が容易に決定することができる。
【００６２】
「二官能性」オリゴマーは、典型的に、その末端において、２つの官能基がその中に含有されるオリゴマーである。官能基が同じである場合、オリゴマーは、ホモ二官能性と呼ばれる。官能基が異なる場合、オリゴマーは、ヘテロ二官能性と呼ばれる。
【００６３】
本明細書に記載の塩基性反応物質または酸性反応物質は、中性で荷電したもの、およびその任意の対応する塩形態を含む。
【００６４】
用語「患者」は、必ずしもその必要はないが典型的に、水溶性オリゴマー−小分子薬物コンジュゲートの形態で、本明細書に記載のコンジュゲートの投与によって、予防または治療することができる病態を患っている、またはその傾向がある生きている生物体を指し、ヒトおよび動物の両方を含む。
【００６５】
「随意的」または「場合により」は、後に説明する状況が生じてもよいが、必ずしもその必要があるわけではなく、そのため、その説明には、状況が生じる場合と、それが生じない場合とが含まれることを意味する。
【００６６】
概観
上記のように、本開示物は、（とりわけ）安定な連結を介して直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合した肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基を含んでなる化合物に関する。
【００６７】
本開示物はまた、以下の構造を有する化合物を提供する：
【００６８】
【化９】
2012502906.tif 000010
ここで：
【００６９】
【化１０】
2012502906.tif 000011
は、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基であり；
（ａ）は１〜３の値を有する整数であり；Ｘは、それぞれ、安定な連結であり；およびＰＯＬＹは、それぞれ、水溶性非ペプチド性オリゴマーである。本発明の化合物は、オリゴマーおよび肝炎プロテアーゼ阻害剤のコンジュゲートである。
【００７０】
本発明のコンジュゲートの利点は、ある程度のプロテアーゼ活性を保持する一方、代謝の減少も示すそれらの能力であると考えられる。理論に拘束されようとは思わないが、オリゴマーは、肝炎プロテアーゼ阻害剤を代謝することができる物質に対する化合物の全体的親和性を減少するのに役立つため、本明細書に記載のオリゴマー含有コンジュゲートは、コンジュゲートされていない「本来の」または「改変されていない」プロテアーゼ阻害剤とは対照的に、容易に代謝されないと考えられる。
【００７１】
小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤
上記のように、例示的な化合物として、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基が挙げられる。小分子プロテアーゼ阻害剤（例えば、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤）は、レトロウイルスプロテアーゼの活性を減少することができる任意の小分子である。化合物（化合物がコンジュゲートされた形態であるかどうかに関わらない）がプロテアーゼ阻害剤であるかどうかを決定するためのアッセイは、当業者に公知である。
【００７２】
小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤として作用することが公知の化合物として、次のクラス：ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤から選択されるものが挙げられる。上記のクラスに必ずしも属していない他の小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤もまた、使用することができる。
【００７３】
特異の肝炎プロテアーゼ阻害剤の例について、以下に考察する。
【００７４】
ＶＸ−９５０（ＴｅｌａｐｒｅｖｉｒがＶｅｒｔｅｘおよびＪｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎから市販されている）は、以下の構造を有する：
【００７５】
【化１１】
2012502906.tif 000012
そのＩＵＰＡＣ命名法は、次のものに対応する：１Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−シクロヘキシル−２−（ピラジン−２−カルボニルアミノ）アセチル］アミノ］−３，３−ジメチルブタノイル］−Ｎ−［（３Ｓ）−１−（シクロプロピルアミノ）−１，２−ジオキソヘキサン−３−イル］−３，３ａ，４，５，６，６ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピロール−１−カルボキサミド。
【００７６】
Ｔｅｌａｐｒｅｖｉｒは、ポリタンパク質プロセシングを担う非構造タンパク質ＮＳ３−４Ａセリンプロテアーゼのペプチド模倣阻害剤である（Ｐｅｒｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ５０：８９９−９０９）。Ｔｅｌａｐｒｅｖｉｒは、ＨＣＶ遺伝子型１型ＮＳ３プロテアーゼと可逆的な共有結合複合体を形成する。水溶性オリゴマーがｔｅｌａｐｒｅｖｉｒに結合した化合物は、本開示物の化合物を代表する。
【００７７】
ＳＣＨ５０３０３４（ＢｏｃｅｐｒｅｖｉｒがＳｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈから市販されている）は、以下の構造を有する：
【００７８】
【化１２】
2012502906.tif 000013
そのＩＵＰＡＣ命名法は、次のものに対応する：（１Ｒ，２Ｓ，５Ｓ）−Ｎ−［（２Ξ）−４−アミノ−１−シクロブチル−３，４−ジオキソブタン−２−イル）］−３−｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）アミノ］−３，３−ジメチルブタノイル｝−６，６−ジメチル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボキサミド。
【００７９】
Ｂｏｃｅｐｒｅｖｉｒは、ＨＣＶプロテアーゼＮＳ３のカルボキサミドに基づく阻害剤として開発された（Ｖｅｎｋａｔｒａｍａｎ（２００６）Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ４９：６０７４）。Ｂｏｃｅｐｒｅｖｉｒは、ｐｅｇＩＦＮ−α２ａ療法が奏功しなかったＨＣＶ遺伝子型１型を伴う患者での用量範囲探索試験（１００〜４００ｍｇを１日２回）において、単剤療法としての抗ウイルス活性を示した。ｐｅｇＩＦＮ−α２ａと併用した２００または４００ｍｇを１日３回での１４日間の第Ｉｂ相試験では、ＨＣＶ遺伝子型１型を伴う不応答患者において有効性が認められた。水溶性オリゴマーがｂｏｃｅｐｒｅｖｉｒに結合した化合物は、本発明の化合物を代表する。
【００８０】
ＩＴＭＮ−１９１（「Ｒ７２２７」とも称される）は、ＩｎｔｅｒＭｕｎｅ，Ｒｏｃｈｅから市販されており、そして以下の構造を有する：
【００８１】
【化１３】
2012502906.tif 000014
ＩＴＭＮ−１９１は、ＨＣＶ  ＮＳ３Ａ／４プロテアーゼの強結合非共有結合性阻害剤である。第Ｉｂ相治験では、１日２回投与、１４日間のＩＴＭＮ−１９１単剤療法により、ウイルスＲＮＡレベルの迅速な減少が生じた。ラットおよびサルでは、７日間のＩＴＭＮ−１９１の１日２回経口投与により、研究の最終投与後、インビトロＥＣ９０値を超える肝臓トラフ濃度を保持した。水溶性オリゴマーがＩＴＭＮ−１９１に結合した化合物は、本発明の化合物を代表する。
【００８２】
本発明のさらなる化合物として、水溶性オリゴマーが、ＢＩＬＮ２０６１のような他の肝炎プロテアーゼ阻害剤に結合した化合物が挙げられる（Ｌａｍａｒｒｅ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２６，１８６−１８９（１３Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２００３）。ＢＩＬＮ２０６１は、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤である。
【００８３】
これら（および他の）プロテアーゼ阻害剤のそれぞれは、（直接的かまたは１個以上の原子を介するかのいずれかによって）水溶性非ペプチド性オリゴマーに共有結合させることができる。
【００８４】
本発明において有用な小分子薬物は、一般的に、約１０００Ｄａ未満の分子量を有する。小分子薬物の例示的分子量として、約９５０未満；約９００未満；約８５０未満；約８００未満；約７５０未満；約７００未満；約６５０未満；約６００未満；約５５０未満；約５００未満；約４５０未満；約４００未満；約３５０未満；および約３００未満の分子量が挙げられる。
【００８５】
本発明において使用される小分子薬物は、キラルの場合、ラセミ混合物、もしくは光学活性形態、例えば、単一の光学活性エナンチオマーであってもよく、または任意の組み合わせもしくは比率のエナンチオマー（即ち、スケールミック混合物）であってもよい。加えて、小分子薬物は、１つ以上の幾何異性体を有してもよい。幾何異性体に関して、組成物は、単一の幾何異性体、または２つ以上の幾何異性体の混合物を含んでなり得る。本発明に使用するための小分子薬物は、その慣習的な活性形態であり得るか、またはある程度の修飾を有してもよい。例えば、小分子薬物は、オリゴマーの共有結合の前もしくは後に、それに結合させたターゲティング剤、タグ、またはトランスポーターを有してもよい。あるいは、小分子薬物は、リン脂質（例えば、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンもしくは「ＤＳＰＥ」、ジパルミトイルジホスファチジルエタノールアミンもしくは「ＤＰＰＥ」など）または小さな脂肪酸のようなそれに結合させた親油性部分を有してもよい。しかし、場合によっては、小分子薬物部分は、親油性部分への結合を含まないことが好ましい。
【００８６】
水溶性非ペプチド性オリゴマーに結合させるための小分子プロテアーゼ阻害剤（例えば、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤）は、オリゴマーの共有結合に適切なヒドロキシル、アミド、カルボキシル、チオ、アミノ基など（即ち、「ハンドル」）のような遊離の反応基を有する。加えて、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤は、反応基の導入によって、好ましくは、その既存の官能基の１つを、オリゴマーと薬物との間の安定な共有結合の形成に適切な反応基へ変換することによって、修飾することができる。
【００８７】
水溶性オリゴマー
水溶性非ペプチド性オリゴマーは、典型的に、連続的に結合して、モノマーの鎖を形成する１つ以上のモノマーを含んでなる。オリゴマーは、単一のモノマータイプ（即ち、ホモオリゴマー性である）または２つもしくは３つのモノマータイプ（即ち、コオリゴマー性である）から形成することができる。好ましくは、各オリゴマーは、２つのモノマーのコオリゴマーであるか、またはより好ましくは、ホモオリゴマーである。
【００８８】
従って、各オリゴマーは、次のものからなる群から選択される３つまでの異なるモノマータイプからなる：アルキレンオキシド、例えば、エチレンオキシドまたはプロピレンオキシド；オレフィン性アルコール、例えば、ビニルアルコール、１−プロペノールまたは２−プロペノール；ビニルピロリドン；ヒドロキシアルキルメタクリルアミドまたはヒドロキシアルキルメタクリレートであって、ここで、アルキルは、好ましくは、メチルである；α−ヒドロキシ酸、例えば、乳酸またはグリコール酸；ホスファゼン、オキサゾリン、アミノ酸、炭水化物、例えば、単糖類、糖類またはマンニトール；およびＮ−アクリロイルモルホリン。好適なモノマータイプとして、アルキレンオキシド、オレフィン性アルコール、ヒドロキシアルキルメタクリルアミドまたはメタクリレート、Ｎ−アクリロイルモルホリン、およびα−ヒドロキシ酸が挙げられる。好ましくは、各オリゴマーは、独立して、この基から選択される２つのモノマータイプのコオリゴマーであるか、または、より好ましくは、この基から選択される１つのモノマータイプのホモオリゴマーである。
【００８９】
コオリゴマーにおける２つのモノマータイプは、同じモノマータイプ、例えば、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのような２つのアルキレンオキシドであってもよい。好ましくは、オリゴマーは、エチレンオキシドのホモオリゴマーである。通常、必ずしも必要ではないが、小分子に共有結合していないオリゴマーの末端（または複数の末端）は、キャッピングされて非反応性にされる。あるいは、末端は、反応基を含んでもよい。末端が反応基である場合、反応基は、最終的なオリゴマーの形成条件下で、もしくはオリゴマーの小分子薬物への共有結合中に非反応性になるように、または必要に応じて、保護されるように、選択される。１つの一般的な末端官能基は、特に、オリゴエチレンオキシドに対して、ヒドロキシルまたは−ＯＨである。
【００９０】
水溶性非ペプチド性オリゴマー（例えば、コンジュゲートの式
【００９１】
【化１４】
2012502906.tif 000015
中「ＰＯＬＹ」）は、異なるいくつかのジオメトリーのいずれかを有することができる。例えば、水溶性非ペプチド性オリゴマーは、線状、分岐状、またはフォーク状であり得る。最も典型的に、水溶性非ペプチド性オリゴマーは、線状であるか、または分岐しており、例えば、１つの分岐点を有する。本明細書における考察の多くが、例示的なオリゴマーとしてポリ（エチレンオキシド）に集中しているが、本明細書に示す考察および構造は、上記の水溶性非ペプチド性オリゴマーのいずれをも包含するように容易に拡張することができる。
【００９２】
リンカー部分を除く水溶性非ペプチド性オリゴマーの分子量は、一般的に、比較的低い。水溶性ポリマーの分子量の例示的な値として：約１５００ダルトン未満；約１４５０ダルトン未満；約１４００ダルトン未満；約１３５０ダルトン未満；約１３００ダルトン未満；約１２５０ダルトン未満；約１２００ダルトン未満；約１１５０ダルトン未満；約１１００ダルトン未満；約１０５０ダルトン未満；約１０００ダルトン未満；約９５０ダルトン未満；約９００ダルトン未満；約８５０ダルトン未満；約８００ダルトン未満；約７５０ダルトン未満；約７００ダルトン未満；約６５０ダルトン未満；約６００ダルトン未満；約５５０ダルトン未満；約５００ダルトン未満；約４５０ダルトン未満；約４００ダルトン未満；約３５０ダルトン未満；約３００ダルトン未満；約２５０ダルトン未満；約２００ダルトン未満；約１５０ダルトン未満；および約１００ダルトン未満が挙げられる。
【００９３】
水溶性非ペプチド性オリゴマー（リンカーを除く）の分子量の例示的な範囲として：約１００〜約１４００ダルトン；約１００〜約１２００ダルトン；約１００〜約８００ダルトン；約１００〜約５００ダルトン；約１００〜約４００ダルトン；約２００〜約５００ダルトン；約２００〜約４００ダルトン；約７５〜１０００ダルトン；および約７５〜約７５０ダルトンが挙げられる。
【００９４】
好ましくは、水溶性非ペプチド性オリゴマー中のモノマーの数は、次の範囲（提供される各範囲の末端値も含まれる）の１つ以上に当てはまる：約１〜約３０の間；約１〜約２５の間；約１〜約２０の間；約１〜約１５の間；約１〜約１２の間；約１〜約１０の間。ある場合において、オリゴマー中の連続するモノマーの数（および対応するコンジュゲート）は、１、２、３、４、５、６、７、または８のうちの１つである。さらなる実施形態では、オリゴマー（および対応するコンジュゲート）は、連続する９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のモノマーを含有する。なおさらなる実施形態では、オリゴマー（および対応するコンジュゲート）は、連続する２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のモノマーを有する。それ故、例えば、水溶性非ペプチド性ポリマーがＣＨ３−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−を含む場合、「ｎ」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０であり得、そして次の範囲：約１〜約２５の間；約１〜約２０の間；約１〜約１５の間；約１〜約１２の間；約１〜約１０の間の１つ以上に当てはまり得る整数である。
【００９５】
水溶性非ペプチド性オリゴマーが１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のモノマーを有する場合、これらの値は、それぞれ、約７５、１１９、１６３、２０７、２５１、２９５、３３９、３８３、４２７、および４７１ダルトンの分子量を有するメトキシ末端キャップ化オリゴ（エチレンオキシド）に対応する。オリゴマーが１１、１２、１３、１４、または１５のモノマーを有する場合、これらの値は、それぞれ、約５１５、５５９、６０３、６４７、および６９１ダルトンに対応する分子量を有するメトキシ末端キャップ化オリゴ（エチレンオキシド）に対応する。
【００９６】
（小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤上へオリゴマーを効果的に「成長させる」ために、１つ以上のモノマーを段階的に付加することとは対照的に）水溶性非ペプチド性オリゴマーが、小分子プロテアーゼ阻害剤（例えば、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤）に結合させる場合、水溶性非ペプチド性オリゴマーの活性型を含有する組成物は、単分散されることが好ましい。しかし、それらの場合では、二峰性の組成物を用いる場合、組成物は、モノマーの上記の数のうちのいずれか２つを中心とする二峰性分布を有する。理想的には、二峰性分布の各ピークの多分散指数、Ｍｗ／Ｍｎは、１．０１以下であり、およびさらにより好ましくは、１．００１以下であり、およびさらにより好ましくは、１．０００５以下である。最も好ましくは、各ピークは、１．００００のＭＷ／Ｍｎ値を有する。例えば、二峰性オリゴマーは、モノマーサブユニットの次の例示的な組み合わせのいずれか１つを有してもよい：１−２、１−３、１−４、１−５、１−６、１−７、１−８、１−９、１−１０など；２−３、２−４、２−５、２−６、２−７、２−８、２−９、２−１０など；３−４、３−５、３−６、３−７、３−８、３−９、３−１０など；４−５、４−６、４−７、４−８、４−９、４−１０など；５−６、５−７、５−８、５−９、５−１０など；６−７、６−８、６−９、６−１０など；７−８、７−９、７−１０など；および８−９、８−１０など。
【００９７】
場合によっては、水溶性非ペプチド性オリゴマーの活性型を含有する組成物は、三峰性またはなお四峰性でもあり、先に記載のようなある範囲のモノマー単位を有する。オリゴマーの良好に定義された混合物を有するオリゴマー組成物（即ち、二峰性、三峰性、四峰性などである）は、オリゴマーの所望のプロファイル（モノマーの数だけが異なる２つのオリゴマーの混合物は二峰性であり；モノマーの数だけが異なる３つのオリゴマーの混合物は三峰性であり；モノマーの数だけが異なる４つのオリゴマーの混合物は四峰性である）を得るように、精製された単分散オリゴマーを混合することによって調製することができるか、あるいは、所望および定義された分子量範囲のオリゴマーの混合物を得るように、「センターカット」を回収することによって、多分散オリゴマーのカラムクロマトグラフィーから得ることができる。
【００９８】
水溶性非ペプチド性オリゴマーは、好ましくは、単分子または単分散である組成物から得るのが好ましい。即ち、組成物中のオリゴマーは、分子量の分布ではなく、同じ別個の分子量値を有する。いくつかの単分散オリゴマーは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能なもののように、商業的供給源から購入することができるか、あるいは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈのような市販の出発物質から直接調製することができる。水溶性非ペプチド性オリゴマーは、Ｃｈｅｎ  Ｙ．，Ｂａｋｅｒ，Ｇ．Ｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６８７０−６８７３（１９９９）、国際公開第０２／０９８９４９号パンフレット、および米国特許出願公開第２００５／０１３６０３１号明細書に記載されているように調製することができる。
【００９９】
リンカー
リンカーまたは連結（それを介して、水溶性非ペプチド性ポリマーが小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤に結合する）は、少なくとも、共有結合を含み、そしてしばしば、１個以上の原子、例えば、酸素、２個の原子、またはいくつかの原子を含む。リンカーは、必ずしもその必要はないが、典型的に、事実上線状である。連結「Ｘ」（
【０１００】
【化１５】
2012502906.tif 000016
中）は、安定な連結であり、そして好ましくはまた、酵素的に安定である。好ましくは、連結「Ｘ」は、約１２個未満の原子、および好ましくは、約１０個未満の原子、およびさらにより好ましくは、約８個未満の原子、およびさらにより好ましくは、約５個未満の原子の鎖長を有するものであり、ここで、長さは、置換基を数に入れない、単一鎖内の原子の数を意味する。例えば、このＲオリゴマー−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ’薬物のような尿素連結は、３個の原子（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）の鎖長を有するものと見なされる。選択された実施形態では、連結は、さらなるスペーサー基を含まない。
【０１０１】
場合によっては、リンカー「Ｘ」は、エーテル、アミド、ウレタン、アミン、チオエーテル、尿素、または炭素−炭素結合を含んでなる。以下に説明し、そして実施例において例示するような官能基は、典型的に、連結を形成するために使用される。連結はまた、それほど好ましくはないが、スペーサー基を含んでなる（またはそれに隣接するか、もしくは側面にある）こともある。スペーサーは、オリゴマーが小分子薬物の残基の比較的近位に配置されることにより、コンジュゲートの生体活性が有意に減少する場合、最も有用であり、ここで、スペーサーは、オリゴマーと小分子薬物の残基との間の距離を増加するのに役立ち得る。
【０１０２】
より具体的には、選択された実施形態では、スペーサー部分、Ｘは、次のもののいずれであってもよい：「−」（即ち、共有結合、安定であっても、または分解性であってもよく、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤の残基と水溶性非ペプチド性オリゴマーとの間にある）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＨ２−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ＣＨ２−、−ＯＣ（Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、−Ｃ（Ｓ）−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、二価のシクロアルキル基、−Ｎ（Ｒ６）−（Ｒ６は、Ｈ、またはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリールおよび置換アリールからなる群から選択される有機ラジカルである）。
【０１０３】
しかし、本発明の目的のために、一群の原子は、それがオリゴマーセグメントに直接隣接している場合、スペーサー部分とはみなされず、そしてその一群の原子は、その群がオリゴマー鎖の単なる伸長を表すように、オリゴマーのモノマーと同じとされる。
【０１０４】
コンジュゲートの形成
水溶性非ペプチド性オリゴマーと小分子との間の連結「Ｘ」は、典型的に、オリゴマーの末端上の官能基（または肝炎プロテアーゼ阻害剤上でオリゴマーを「成長させる」ことが所望される場合、１つ以上のモノマー）と、肝炎プロテアーゼ阻害剤内の対応する官能基との反応によって形成される。以下に、例示的な反応を簡単に説明する。例えば、オリゴマー上のアミノ基を、アミド連結を生成するように、小分子上のカルボン酸もしくは活性化カルボン酸誘導体と反応させてもよく、またはその逆でもよい。あるいは、オリゴマー上のアミンと薬物上の活性化カルボネート（例えば、スクシンイミジルもしくはベンゾトリアジルカルボネート）、またはその逆の反応、は、カルバメート連結を形成する。オリゴマー上のアミンと薬物上のイソシアネート（Ｒ−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ）、またはその逆の反応は、尿素連結（Ｒ−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ’）を形成する。さらに、オリゴマー上のアルコール（アルコキシド）基と、薬物内のハロゲン化アルキル、もしくはハライド基、またはその逆の反応は、エーテル連結を形成する。なおもう１つの結合アプローチでは、アルデヒド機能を有する小分子を、還元的アミノ化によってオリゴマーアミノ基に結合させ、オリゴマーと小分子との間の第二級アミン連結の形成を生じさせる。
【０１０５】
特に好適な水溶性非ペプチド性オリゴマーは、アルデヒド官能基を有するオリゴマーである。これに関して、オリゴマーは、次の構造を有する：ＣＨ３Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−Ｃ（Ｏ）Ｈ［式中、（ｎ）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０のうちの１つであり、そして（ｐ）は、１、２、３、４、５、６および７のうちの１つである］。好適な（ｎ）値として、３、５および７が挙げられ、そして好適な（ｐ）値として、２、３および４が挙げられる。加えて、−Ｃ（Ｏ）Ｈ部分に対する炭素原子αは、場合により、アルキルで置換することができる。
【０１０６】
典型的に、官能基を有さない水溶性非ペプチド性オリゴマーの末端は、キャッピングされて、非反応性にされる。オリゴマーがコンジュゲートの形成を目的とする以外に、末端にさらなる官能基を含む場合、その基は、連結「Ｘ」の形成条件下で非反応性であるか、または連結「Ｘ」の形成中に保護されるように、選択される。
【０１０７】
上記のように、水溶性非ペプチド性オリゴマーは、コンジュゲーションの前に、少なくとも１つの官能基を含む。官能基は、典型的に、小分子内に含有されるか、もしくは小分子に導入される反応基に依存して、小分子への共有結合のための求電子または求核基を含んでなる。オリゴマーまたは小分子のいずれかに存在し得る求核基の例として、ヒドロキシル、アミン、ヒドラジン（−ＮＨＮＨ２）、ヒドラジド（−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２）、およびチオールが挙げられる。好適な求核剤として、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、およびチオール、好ましくは、アミンが挙げられる。オリゴマーへの共有結合のためのほとんどの小分子薬物は、遊離のヒドロキシル、アミノ、チオ、アルデヒド、ケトン、またはカルボキシル基を有する。
オリゴマーまたは小分子のいずれかに存在し得る求電子官能基の例として、カルボン酸、カルボキシルエステル、特に、イミドエステル、オルトエステル、カルボネート、イソシアネート、イソチオシアネート、アルデヒド、ケトン、チオン、アルケニル、アクリレート、メタクリレート、アクリルアミド、スルホン、マレイミド、ジスルフィド、ヨード、エポキシ、スルホネート、チオスルホネート、シラン、アルコキシシラン、およびハロシランが挙げられる。これらの基のさらなる具体例として、スクシンイミジルエステルまたはカルボネート、イミダゾイルエステルまたはカルボネート、ベンゾトリアゾールエステルまたはカルボネート、ビニルスルホン、クロロエチルスルホン、ビニルピリジン、ピリジルジスルフィド、ヨードアセトアミド、グリオキサール、ジオン、メシレート、トシレート、およびトレシレート（２，２，２−トリフルオロエタンスルホネート）が挙げられる。
【０１０８】
また、チオン、チオン水和物、チオケタール、ｉｓ２−チアゾリジンチオンなどのようなこれらの基のうちのいくらかの硫黄アナログ、ならびに上記の部分のいずれかの水和物または保護された誘導体（例えば、アルデヒド水和物、ヘミアセタール、アセタール、ケトン水和物、ヘミケタール、ケタール、チオケタール、チオアセタール）も挙げられる。
【０１０９】
カルボン酸の「活性化誘導体」は、一般的に、非誘導体化カルボン酸より極めて容易に求核剤と反応するカルボン酸誘導体を指す。活性化カルボン酸として、例えば、酸ハロゲン化物（例えば、酸塩化物）、無水物、カルボネートおよびエステルが挙げられる。そのようなエステルとして、一般形が−（ＣＯ）Ｏ−Ｎ［（ＣＯ）−］２であるイミドエステル；例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステルまたはＮ−ヒドロキシフタルイミジルエステルが挙げられる。また、イミダゾリルエステルおよびベンゾトリアゾールエステルもまた好適である。共同所有の米国特許第５，６７２，６６２号明細書に記載の活性化プロピオン酸またはブタン酸エステルが特に好適である。これらは、−（ＣＨ２）２−３Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｑの形態の基を含み、ここで、Ｑは、好ましくは、Ｎ−スクシンイミド、Ｎ−スルホスクシンイミド、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−グルタルイミド、Ｎ−テトラヒドロフタルイミド、Ｎ−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド、ベンゾトリアゾール、７−アザベンゾトリアゾール、およびイミダゾールから選択される。
【０１１０】
他の好適な求電子基として、スクシンイミジルカルボネート、マレイミド、ベンゾトリアゾールカルボネート、グリシジルエーテル、イミダゾイルカルボネート、ｐ−ニトロフェニルカルボネート、アクリレート、トレシレート、アルデヒド、およびオルトピリジルジスルフィドが挙げられる。
【０１１１】
これらの求電子基は、求核剤、例えば、ヒドロキシ、チオ、またはアミノ基との反応に供されて、さまざまな結合型を生成する。本発明には、加水分解に安定な連結の形成を選好する反応が好ましい。例えば、オルトエステル、スクシンイミジルエステル、イミダゾリルエステル、およびベンゾトリアゾールエステルを含むカルボン酸およびその活性化誘導体は、上記のタイプの求核剤と反応して、それぞれ、エステル、チオエステル、およびアミドを形成するが、それらのうちアミドが最も加水分解的に安定である。スクシンイミジル、イミダゾリル、およびベンゾトリアゾールカルボネートを含むカルボネートは、アミノ基と反応して、カルバメートを形成する。イソシアネート（Ｒ−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ）は、ヒドロキシルまたはアミノ基と反応して、それぞれ、カルバメート（ＲＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ’）または尿素（ＲＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ’）連結を形成する。アルデヒド、ケトン、グリオキサール、ジオン、およびそれらの水和物またはアルコール付加物（即ち、アルデヒド水和物、ヘミアセタール、アセタール、ケトン水和物、ヘミケタール、およびケタール）は、好ましくは、アミンと反応し、続いて、得られるイミンを還元して、所望であれば、アミン連結を提供する（還元的アミノ化）。
【０１１２】
求電子官能基のいくらかは、チオールのような求核基を添加して、例えば、チオエーテル結合を形成させることができる求電子二重結合を含む。これらの基として、マレイミド、ビニルスルホン、ビニルピリジン、アクリレート、メタクリレート、およびアクリルアミドが挙げられる。他の基は、求核剤によって置き換えることができる脱離基を含んでなり、これらには、クロロエチルスルホン、ピリジルジスルフィド（切断可能なＳ−Ｓ結合を含む）、ヨードアセトアミド、メシレート、トシレート、チオスルホネート、およびトレシレートが含まれる。エポキシドは、求核剤による開環によって反応して、例えば、エーテルまたはアミン結合を形成する。オリゴマーおよび小分子上に上記のような相補的な反応基に関与する反応を利用して、本発明のコンジュゲートを調製する。
【０１１３】
場合によっては、小分子プロテアーゼ阻害剤（例えば、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤）は、コンジュゲーションに適切な官能基を有さなくてもよい。この場合、「本来の」プロテアーゼ阻害剤が所望される官能基を有するように、それを改変することが可能である。例えば、プロテアーゼ阻害剤はアミド基を有するが、アミン基が所望される場合、Ｈｏｆｍａｎｎ転移、Ｃｕｒｔｉｕｓ転移（一旦、アミドがアジドに変換される）またはＬｏｓｓｅｎ転移（一旦、アミドがヒドロキサミドに変換され、続いて、トリエン（ｔｏｌｙｅｎｅ）−２−塩化スルホニル／塩基により処理される）によって、アミド基をアミン基に改変することが可能である。
【０１１４】
カルボキシル基を有する小分子プロテアーゼ阻害剤（例えば、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤）（ここで、カルボキシル基を有する小分子プロテアーゼ阻害剤は、アミノ末端化オリゴマー性エチレングリコールに結合される）のコンジュゲートを調製して、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤アゴニストをオリゴマーに共有結合させるアミド基を有するコンジュゲートを提供することが可能である。これは、例えば、無水の有機溶媒中で（ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは「ＤＣＣ」のような）カップリング試薬の存在下で、カルボキシル基を有する小分子プロテアーゼ阻害剤を、アミノ末端化オリゴマー性エチレングリコールに結合させることによって、実施することができる。
【０１１５】
さらに、ヒドロキシル基を有する小分子プロテアーゼ阻害剤（例えば、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤）（ここで、ヒドロキシル基を有する小分子プロテアーゼ阻害剤は、オリゴマー性エチレングリコールハロゲン化物に結合される）のコンジュゲートを調製して、エーテル（−Ｏ−）連結小分子コンジュゲートをもたらすことが可能である。これは、例えば、水素化ナトリウムを使用して、ヒドロキシル基を脱プロトン化し、続いて、ハライド末端化オリゴマー性エチレングリコールと反応させることによって、実施することができる。
【０１１６】
もう１つの実施例では、最初にケトン基を還元して、対応するヒドロキシル基を形成させることによって、ケトン基を有する小分子プロテアーゼ阻害剤（例えば、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤）のコンジュゲートを調製することが可能である。その後、その段階でヒドロキシル基を有する小分子プロテアーゼ阻害剤を、本明細書に記載のように結合させることができる。
【０１１７】
なおもう１つの場合では、アミン基を有する小分子プロテアーゼ阻害剤（例えば、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤）のコンジュゲートを調製することが可能である。１つのアプローチでは、アミン基を有する小分子プロテアーゼ阻害剤およびアルデヒドを有するオリゴマーを、適切な緩衝液に溶解し、その後、適切な還元剤（例えば、ＮａＣＮＢＨ３）を添加する。還元後、結果として、アミン基含有小分子プロテアーゼ阻害剤のアミン基とアルデヒドを有するオリゴマーのカルボニル炭素との間に、アミン連結が形成される。
【０１１８】
アミン基を有する小分子（例えば、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤）プロテアーゼ阻害剤のコンジュゲートを調製するためのもう１つのアプローチでは、典型的に、カップリング試薬（例えば、ＤＣＣ）の存在下で、カルボン酸を有するオリゴマーとアミン基を有する小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤とが組み合わされる。結果として、アミン基含有小分子プロテアーゼ阻害剤のアミン基とカルボン酸を有するオリゴマーのカルボニルとの間に、アミド連結が形成される。
【０１１９】
ｔｅｌａｐｒｅｖｉｒに結合した水溶性オリゴマーの例示的化合物として、以下の構造を有するものが挙げられる：
【０１２０】
【化１６】
2012502906.tif 000017
ここで、それぞれ、Ｘは、安定な連結であり、そしてＰＯＬＹは水溶性非ペプチド性オリゴマーである。
【０１２１】
ｂｏｃｅｐｒａｖｉｒに結合した水溶性オリゴマーの例示的化合物として、以下の構造を有するものが挙げられる：
【０１２２】
【化１７】
2012502906.tif 000018
ここで、それぞれ、Ｘは、安定な連結であり、そしてＰＯＬＹは水溶性非ペプチド性オリゴマーである。
【０１２３】
ＩＴＭＮ−１９１に結合した水溶性オリゴマーの例示的化合物として、以下の構造を有するものが挙げられる：
【０１２４】
【化１８】
2012502906.tif 000019
ここで、それぞれ、Ｘは、安定な連結であり、そしてＰＯＬＹは水溶性非ペプチド性オリゴマーである。
【０１２５】
日常的な実験を使用する当業者は、最初に、異なる重量および官能基を伴う一連のオリゴマーを調製し、次いで、患者に複合体を投与し、そして定期的に血液および／または尿採取を行い、そして代謝物の存在および量を試験することにより必要なクリアランスプロファイルを入手することによって、代謝を減少させるのに最も適切な分子サイズおよび連結を決定することができる。一旦、試験した各コンジュゲートの一連の代謝プロファイルが得られたら、適切なコンジュゲートを同定することができる。
【０１２６】
プロテアーゼ阻害剤の活性
小分子プロテアーゼ阻害剤（例えば、小分子肝炎プロテアーゼ阻害剤）または小分子プロテアーゼ阻害剤と水溶性非ペプチド性ポリマーとのコンジュゲートが活性を有するかどうかを決定するために、当業者に公知のアプローチを使用して、そのような化合物を試験することが可能である。例示的アッセイを、以下に説明する。
【０１２７】
抗Ｂ型肝炎ウイルスに関して、安定的にトランスフェクトされたＨＢＶゲノムを含有するＨｅｐＧ２−２．２．１５細胞において、評価を行うことができる。それ故、ウイルスの複製の後期の工程、例えば、転写、翻訳、プレゲノムのカプシド形成、逆転写、粒子アセンブリおよび変異を阻止する化合物は、この特定の細胞系統において評価することができる。各ウイルス粒子は、リラックスド環形（ＲＣ）ウイルスＤＮＡの１つの分子のゲノムを有するため、処置した培養物から放出されるウイルスＤＮＡの測定を行うことができる。この方法では、培養細胞から放出されるＲＣ  ＤＮＡの量は、粒子の量だけではなく、粒子の質の影響も受ける。この特定の形態のＤＮＡを測定するために、抗Ｂ型肝炎ウイルス活性の指標として（ウイルス粒子内のＲＣ  ＤＮＡのマイナス鎖の半定量的評価に関与する）「ドットブロット」アッセイまたは（ビリオン関連ＲＣ分子の実数を定量するための）定量的ＰＣＲアッセイを介して、アッセイすることが可能である。加えて、処置した培養物から放出されるＨＢｓＡｇのレベルを、示されたまたは抗Ｂ型肝炎ウイルス活性として使用することができる。ビリオン関連ＲＣの測定とは異なり、この定量化は、小エンベロープ糖タンパク質の量、感染細胞から放出されるＨＢＶビリオンの成分の影響を受けるのみである。さらに、細胞質における細胞内複製中間体および核における閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）は、ドットブロットハイブリダイゼーションにより半定量的か、またはリアルタイムＰＣＲアッセイを使用して定量的のいずれかで測定することができる。
【０１２８】
Ｃ型肝炎ウイルスに関して、細胞ベースアッセイを使用して、ＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ活性に対する化合物の活性を測定することが可能である。内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）アッセイを使用して、化合物が、ウイルスのＩＲＥＳを介して仲介されるウイルスタンパク質翻訳の阻害にどのようにして影響を及ぼすかの指標として、ウイルスタンパク質の蓄積をモニターすることができる。また、細胞ベースアッセイを使用して、細胞への進入を化合物が阻止するかどうかについて研究することができる。最終的に、ＨＶＣでは利用可能なインビトロ複製システムが存在しないため、サロゲート動物ウイルス（例えば、ウシウイルス性下痢「ＢＶＤＶ」アッセイ）を、スクリーニング目的のために使用することができる。それ故、サロゲート動物ウイルス、ＢＶＤＶを使用して、インビトロでＢＶＤＶ複製に対する化合物の活性を評価することができる。
【０１２９】
医薬組成物
本発明はまた、医薬品賦形剤と組み合わせた、本明細書において提供されるコンジュゲートを含んでなる製剤も含む。一般的に、コンジュゲート自体は、固体形態（例えば、沈殿物）となり、固体または液体のいずれかの形態となり得る適切な医薬品賦形剤と組み合わせることができる。
【０１３０】
例示的な賦形剤として、炭水化物、無機塩、抗微生物剤、抗酸化剤、界面活性剤、緩衝液、酸、塩基、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３１】
炭水化物、例えば、糖、誘導体化糖、例えば、アルジトール、アルドン酸、エステル化糖、および／または糖ポリマーが、賦形剤として存在し得る。具体的な炭水化物賦形剤として、例えば：単糖類、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース；二糖類、例えば、ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオース；多糖類、例えば、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプン；およびアルジトール類、例えば、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ピラノシルソルビトール、ミオイノシトールが挙げられる。
【０１３２】
賦形剤としてはまた、無機塩または緩衝液、例えば、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、およびそれらの組み合わせを挙げることもできる。
【０１３３】
調製物はまた、微生物の増殖を防止または抑止するための抗微生物剤を含んでもよい。本発明に適切な抗微生物剤の非制限的例として、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、およびそれらの組み合わせが挙げられる。製剤中には、抗酸化剤を存在させることもできる。抗酸化剤は、酸化を防止するために使用され、それによって、コンジュゲート、または製剤の他の成分の劣化を防止する。本発明に使用するのに適切な抗酸化剤として、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、プロピルガレート、重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１３４】
界面活性剤が、賦形剤として存在してもよい。例示的な界面活性剤として：ポリソルベート、例えば、「Ｔｗｅｅｎ２０」および「Ｔｗｅｅｎ８０」ならびにプルロニック、例えば、Ｆ６８およびＦ８８（両方とも、ＢＡＳＦ，Ｍｏｕｎｔ  Ｏｌｉｖｅ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙから入手可能である）；ソルビタンエステル；脂質、例えば、リン脂質、例えば、レシチンおよび他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン（但し、好ましくは、リポソーム形態ではない）、脂肪酸および脂肪エステル；ステロイド、例えば、コレステロール；ならびにキレート剤、例えば、ＥＤＴＡ、亜鉛および他のそのような適切なカチオンが挙げられる。
【０１３５】
酸または塩基が、製剤中に賦形剤として存在してもよい。使用することができる酸の非制限的例として、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル酸、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるものが挙げられる。適切な塩基の例として、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、フマル酸カリウム、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される塩基が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３６】
組成物中のコンジュゲートの量は、いくつかの因子に依存して変動するが、最適には、組成物が単位用量容器内に貯蔵される場合、治療有効用量である。治療有効用量は、どの量が臨床的に所望されるエンドポイントを生じるかを決定するために、漸増量のコンジュゲートを反復投与することによって、実験的に決定することができる。
【０１３７】
組成物中の任意の個々の賦形剤の量は、賦形剤の活性および組成物の特定の必要性に依存して、変動する。典型的に、任意の個々の賦形剤の最適な量は、日常的な実験を介して、即ち、（少量から多量の範囲の）賦形剤の種々の量を含有する組成物を調製し、安定性および他のパラメータを調べ、次いで、重大な有害作用を伴わずに最適な性能が達成される範囲を決定することによって、決定される。
【０１３８】
しかし、一般的に、賦形剤は、約１％〜約９９重量％、好ましくは、約５％〜９８重量％、より好ましくは、約１５％〜９５重量％の賦形剤の量で存在し、３０重量％未満の濃度が最も好ましい。
【０１３９】
他の賦形剤と共に、これらの上記の医薬品賦形剤については、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）、ｔｈｅ”Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”，５２ｎｄｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ（１９９８）、およびＫｉｂｂｅ，Ａ．Ｈ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，２０００に記載されている。
【０１４０】
医薬組成物には、取り得る形態がいくらでもあり、本発明は、これに関して限定されない。例示的な製剤は、最も好ましくは、経口投与に適切な形態、例えば、錠剤、カプレット、カプセル、ゲルキャップ、トローチ、分散体、懸濁液、溶液、エリキシル、シロップ、ロゼンジ、経皮パッチ、スプレー、坐剤、および粉末である。
【０１４１】
経口用の剤形は、経口的に活性であるコンジュゲートに好適であり、そして錠剤、カプレット、カプセル、ゲルキャップ、懸濁液、溶液、エリキシル、およびシロップが挙げられ、そしてまた、場合により、カプセル化される複数の顆粒、ビーズ、粉末またはペレットを含んでなり得る。そのような剤形は、医薬製剤の分野において公知であり、そして関連する文書に記載されている従来の方法を使用して、調製される。
【０１４２】
錠剤およびカプレットは、例えば、標準的な錠剤処理手順および装置を使用して、製造することができる。本明細書に記載のコンジュゲートを含有する錠剤またはカプレットを調製する場合、直接圧縮および造粒技術が好適である。コンジュゲートに加えて、錠剤およびカプレットは、一般的に、不活性の薬学的に許容できるキャリア材料、例えば、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、充填剤、安定剤、界面活性剤、着色剤などを含有する。結合剤は、粘着の性質を錠剤に付与し、それ故、錠剤がそのままの状態を保持することを確実にするために使用される。適切な結合剤材料として、デンプン（トウモロコシデンプンおよびアルファ化デンプンを含む）、ゼラチン、糖（スクロース、グルコース、デキストロースおよびラクトースを含む）、ポリエチレングリコール、蝋、ならびに天然および合成のガム、例えば、アカシアアルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、セルロースポリマー（ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースなどを含む）、ならびにＶｅｅｇｕｍが挙げられるが、これらに限定されない。潤滑剤は、錠剤製造を容易にし、粉末の流動を促進し、そして圧力が軽減された場合の粒子のキャッピング（即ち、粒子破砕）を防止するために使用される。有用な潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、およびステアリン酸である。崩壊剤は、錠剤の崩壊を容易にするために使用され、そして一般的に、デンプン、クレイ、セルロース、アルギン、ガム、または架橋ポリマーである。充填剤として、例えば、二酸化ケイ素、二酸化チタン、アルミナ、タルク、カオリン、粉末セルロース、および結晶セルロースのような材料、ならびにマンニトール、尿素、スクロース、ラクトース、デキストロース、塩化ナトリウム、およびソルビトールのような可溶性材料が挙げられる。安定剤、当該技術分野において公知であり、例えば、酸化的反応を含む薬物分解反応を阻害または妨害するために使用される。
【０１４３】
カプセルはまた、好適な経口用剤形でもあり、その場合、コンジュゲート含有組成物は、液体またはゲル（例えば、ゲルキャップの場合）あるいは固体（顆粒、ビーズ、粉末もしくはペレットのような粒状物を含む）の形態でカプセル化することができる。適切なカプセルとして、ハードおよびソフトカプセルが挙げられ、そして一般的に、ゼラチン、デンプン、またはセルロース材料から作製される。ツーピースハードゼラチンカプセルは、好ましくは、ゼラチンの帯などで封止される。
【０１４４】
実質的に可能形態の非経口処方物（典型的に、粉末またはケーキの形態であり得る凍結乾燥または沈殿物として）、ならびに典型的に、液体であり、そして乾燥形態の非経口処方物を再構成する工程を必要とする注射用に調製された処方物が挙げられる。注射前に固体組成物を再構成するのに適切な希釈剤の例として、注射用静菌水、水中５％デキストロース、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、塩水、滅菌水、脱イオン水、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１４５】
場合によって、非経口投与を目的とした組成物は、非水溶液、懸濁液、またはエマルジョンの形態をとることができ、典型的に、それぞれ無菌的である。非水溶媒またはビヒクルの例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油およびコーン油のような植物油、ゼラチン、ならびに注射可能なオレイン酸エチルのような有機エステルがある。
【０１４６】
本明細書に記載の非経口処方物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤のような補助剤を含有することができる。処方物は、滅菌剤、細菌を保持するフィルターを介するろ過、照射、または加熱を組み入れることによって、滅菌される。
【０１４７】
コンジュゲートはまた、従来の経皮パッチまたは他の経皮送達システムを使用して、皮膚を介して投与することもでき、ここで、コンジュゲートは、皮膚に固定される薬物送達デバイスとして役立つ積層構造内に含有される。そのような構造では、コンジュゲートは、上部支持層の下側にある層、または「貯蔵器」に含有される。積層構造は、単一の貯蔵器を含有することができるか、または複数の貯蔵器を含有することができる。
【０１４８】
コンジュゲートはまた、直腸投与のための坐剤に処方することができる。坐剤に関して、コンジュゲートは、コカバター（カカオ脂）、ポリエチレングリコール、グリセリンゼラチン、脂肪酸、およびそれらの組み合わせのような（例えば、室温では固体のままであるが、体温では軟化、融解または溶解する賦形剤）坐剤基剤材料と混合される。坐剤は、例えば、次の工程を実施する（必ずしも示された順序ではない）ことによって、調製することができる：坐剤基剤材料を融解させて、融解物を形成する工程；コンジュゲートを（坐剤基剤材料の融解前または後のいずれかに）組み入れる工程；融解物を鋳型に注ぐ工程；融解物を冷却して（例えば、融解物を含有する鋳型を室温環境に置く）、それによって、坐剤を形成させる工程；および鋳型から坐剤を取り出す工程。
【０１４９】
投与および使用
本発明はまた、本明細書において提供されるコンジュゲートを、化合物による治療に応答する病態を患う患者に投与するための方法を提供する。方法は、一般的に、経口的に、治療有効量の化合物（好ましくは、製剤の一部として提供される）を投与する工程を含んでなる。また、肺、鼻、口内、直腸、舌下、経皮、および非経口のような他の投与様式も考慮される。本明細書において使用する用語「非経口」は、皮下、静脈内、動脈内、腹腔内、心臓内、髄腔内、および筋肉内注射、ならびに点滴注射を含む。
【０１５０】
非経口投与が利用される場合、先に記載のものより若干大きいオリゴマー、即ち、約５００〜３０Ｋダルトンの範囲の分子量を伴う（例えば、約５００、１０００、２０００、２５００、３０００、５０００、７５００、１００００、１５０００、２００００、２５０００、３００００以上の分子量を有する）ポリマーを用いることが必要であり得る。
【０１５１】
投与方法を使用して、特定のコンジュゲートの投与によって、治すかまたは予防することができる任意の病態を治療してもよい。当業者は、どう病態を特定の複合体が効果的に治療することができるかを理解している。投与しようとする実際の用量は、被験体の年齢、重量、および全般的状態、ならびに治療される病態の重症度、医療従事者の判断、および投与されるコンジュゲートに基づいて変動する。治療有効量は、当業者に公知であり、ならびに／あるいは関連する参考文書および文献に記載されており、ならびに／あるいは実験的に決定することができる。一般的に、治療有効量は、次の範囲の１つ以上内の量である：０．００１ｍｇ／日〜１００００ｍｇ／日；０．０１ｍｇ／日〜７５００ｍｇ／日；０．１０ｍｇ／日〜５０００ｍｇ／日；１ｍｇ／日〜４０００ｍｇ／日；および１０ｍｇ／日〜２０００ｍｇ／日。
【０１５２】
任意の所与の化合物（さらに、好ましくは、製剤の部分として提供される）の単位用量は、臨床家の判断、患者の要求などに依存する多様な投薬スケジュールで投与することができる。特定の投薬スケジュールは、当業者に公知であり、または日常的方法を使用して、実験的に決定することができる。例示的な投薬スケジュールとして、１日５回、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、週３回、週２回、週１回、月２回、月１回、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。一旦、臨床的なエンドポイントが達成されると、組成物の投薬は停止される。
【０１５３】
本発明の化合物を投与する１つの利点は、親薬物に対する初回通過代謝の減少が達成され得ることである。そのような結果は、腸を通過することによって、実質的に代謝される多くの経口投与薬物に有利である。この方法では、化合物のクリアランスは、所望されるクリアランス特性を提供するオリゴマー分子のサイズ、連結、および共有結合の位置を選択することによって、モジュレートすることができる。当業者は、本明細書の教示内容に基づいて、オリゴマーの理想的な分子サイズを決定することができる。対応する非コンジュゲート小薬物分子と比較した化合物の初回通過代謝の好適な減少は、次を含む：少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％および少なくとも約９０％。
【０１５４】
多くのタイプの代謝（第Ｉ相および第ＩＩ相代謝の両方を含む）を減少させることは有用であるが、コンジュゲートは、小分子薬物が肝酵素（例えば、１つ以上のシトクロムＰ４５０アイソフォーム）によって、および／または１つ以上の腸酵素によって代謝される場合、特に有用である。
【０１５５】
本明細書において参照されるすべての記事、本、特許、特許公報および他の刊行物は、それらの全体が参考として援用される。本明細書の教示内容と参考として援用された当該技術分野との間に矛盾が生じた場合、本明細書の教示内容の意味を優先するものとする。
【実施例】
【０１５６】
本発明について、ある種の好適かつ特定の実施形態と共同して説明してきたが、上記の説明ならびに以下の実施例は、例示することを意図したものであり、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。本発明の範囲内の他の態様、利点、および変更は、本発明に関係する当業者には明らかであろう。
【０１５７】
別途明記しない限り、添付の実施例において言及したすべての化学試薬は、市販のものである。ＰＥＧ−ｍｅｒｓの調製については、例えば、米国特許出願公開第２００５／０１３６０３１号明細書に記載されている。
【０１５８】
本発明の化合物を調製するためのアプローチを、以下に図式的に示す。
当業者は、本明細書において提供する説明を鑑みて、これらの化合物を調製することが可能である。
【０１５９】
【化１９】
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【国際調査報告】
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