(57)【要約】  本発明は、ＣＤ１０５に対する標的結合剤およびかかる薬剤の使用に関する。より具体的には、本発明は、ＣＤ１０５を対象とする完全ヒトモノクローナル抗体に関する。記載される標的結合剤は、ＣＤ１０５の活性および／または過剰産生と関連する疾病の治療において、および診断薬として実用的である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１０５に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、
１ｎＭ未満のＫＤでヒトＣＤ１０５に結合することと、
５％を超えてＨＵＶＥＣ細胞の細胞増殖を阻害することと、
ＳＭＡＤ２リン酸化を増加させることと、
抗血管新生活性を示すことと、
ＡＤＣＣ活性を示すことと、
を含む特性のうちの１つ以上を示す、単離された抗体。
【請求項２】
前記抗体は、哺乳動物における腫瘍の成長および／または転移を阻害する、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
前記抗体は、５００ｐＭ未満のＫｄでＣＤ１０５に結合する、請求項１〜２のうちのいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項４】
前記抗体は、抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂｌ、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃｌ、または６Ａ６のうちのいずれか１つである、請求項１〜３のうちのいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項５】
前記抗体は、モノクローナル抗体４．１２０である、請求項４に記載の単離された抗体。
【請求項６】
前記抗体は、モノクローナル抗体４．３７である、請求項４に記載の単離された抗体。
【請求項７】
前記抗体は、モノクローナル抗体６Ｂ１０である、請求項４に記載の単離された抗体。
【請求項８】
前記抗体は、モノクローナル抗体４Ｄ４．１である、請求項４に記載の単離された抗体。
【請求項９】
前記抗体は、配列番号２６の配列を含み、配列番号２６は、表６の各行に示される生殖系列および非生殖系列の残基の一意的な組み合わせのうちのいずれか１つを含む、請求項１〜８のうちのいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
前記抗体は、配列番号２８の配列を含み、配列番号２８は、表７の各行に示される生殖系列および非生殖系列の残基の一意的な組み合わせのうちのいずれか１つを含む、請求項１〜９のうちのいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１１】
前記抗体は、配列番号３０の配列を含み、配列番号３０は、表８の各行に示される生殖系列および非生殖系列の残基の一意的な組み合わせのうちのいずれか１つを含む、請求項１〜１０のうちのいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１２】
前記抗体は、配列番号３２の配列を含み、配列番号３２は、表９の各行に示される生殖系列および非生殖系列の残基の一意的な組み合わせのうちのいずれか１つを含む、請求項１〜１１のうちのいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１３】
ＣＤ１０５への結合に対して、抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂｌ、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃｌ、または６Ａ６のうちのいずれか１つと競合する、完全ヒトモノクローナル抗体。
【請求項１４】
ＣＤ１０５上で、抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂｌ、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃｌ、または６Ａ６のうちのいずれか１つと同じエピトープに結合する、完全ヒトモノクローナル抗体。
【請求項１５】
ａ）表２に示されるＣＤＲ３配列、
ｂ）表２に示されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３配列のうちのいずれか１つ、
ｃ）表２に示される可変軽鎖配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、または
ｄ）表２に示される可変重鎖配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列
を含むアミノ酸配列を含む、単離された抗体。
【請求項１６】
ＣＤ１０５に免疫特異的に結合し、
（ａ）配列番号２のＶＨ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）配列番号２のＶＨ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）配列番号２のＶＨ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）配列番号４のＶＬ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号４のＶＬ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＬ  ＣＤＲ２と、
（f ）配列番号４のＶＬ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＬ  ＣＤＲ３と、
を含む、抗体。
【請求項１７】
前記抗体は、
（ａ）配列番号２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、
（ｂ）配列番号４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、
を含む、請求項１６に記載の単離された抗体。
【請求項１８】
ＣＤ１０５に免疫特異的に結合し、
（ａ）配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＬ  ＣＤＲ３と、
を含む、抗体。
【請求項１９】
前記薬剤は、
（ａ）配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、
（ｂ）配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、
を含む、請求項１８に記載の単離された抗体。
【請求項２０】
ＣＤ１０５に免疫特異的に結合し、配列番号２６のアミノ酸と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメインを含み、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤ１０５に結合する活性を有する、抗体。
【請求項２１】
ＣＤ１０５に免疫特異的に結合し、
（ａ）配列番号３０のＶＨ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）配列番号３０のＶＨ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）配列番号３０のＶＨ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）配列番号３２のＶＬ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号３２のＶＬ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号３２のＶＬ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、ＶＬ  ＣＤＲ３と、
を含む、抗体。
【請求項２２】
前記抗体は、
（ａ）配列番号３０のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、
（ｂ）配列番号３２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、
を含む請求項２１に記載の単離された抗体。
【請求項２３】
ＣＤ１０５に免疫特異的に結合し、配列番号３０のアミノ酸と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメインを含み、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤ１０５に結合する活性を有する、抗体。
【請求項２４】
前記抗体は、モノクローナル抗体の結合断片である、請求項１〜２３のうちのいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項２５】
前記抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である、請求項１〜２４のうちのいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項２６】
前記結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびｄＡｂ断片からなる群から選択される、請求項１０に記載の単離された抗体。
【請求項２７】
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１４の番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる重鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変重鎖アミノ酸配列、
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１３の番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変軽鎖アミノ酸配列、または、
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１４の番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる重鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変重鎖アミノ酸配列、およびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１３の番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む可変軽鎖アミノ酸配列、
のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項２８】
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１７の番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる重鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変重鎖アミノ酸配列、
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１２の番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変軽鎖アミノ酸配列、または、
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１７の番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる重鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変重鎖アミノ酸配列、およびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１２の番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変軽鎖アミノ酸配列、
のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項２９】
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１０の番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂｌ０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる重鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変重鎖アミノ酸配列、
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９４９９の番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂｌ０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変軽鎖アミノ酸配列、または、
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１０の番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂｌ０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる重鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変重鎖アミノ酸配列、およびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９４９９の番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂｌ０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む、可変軽鎖アミノ酸配列、
を含むアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項３０】
標的薬剤または請求項１〜２９のうちのいずれか１項に記載の抗体を含む、組成物。
【請求項３１】
前記抗体または請求項１〜３０のうちのいずれか１項に記載の抗体を含む、医薬組成物。
【請求項３２】
前記抗体または、請求項１〜３１のうちのいずれか１項に記載の抗体をコードする、核酸分子。
【請求項３３】
悪性腫瘍の治療を必要とする動物を選択することと、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の治療上有効な投与量の抗体を前記動物に投与することと、を含む、動物における悪性腫瘍の治療方法。
【請求項３４】
前記動物は、ヒトである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂｌ、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃｌ、または６Ａ６からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記悪性腫瘍は、黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、肝細胞（肝臓）癌、甲状腺腫瘍、胃癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、肺癌、神経膠芽腫、子宮内膜癌、腎癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、中皮腫、肉腫、胆管癌（胆管細胞癌）、小腸腺癌、小児悪性腫瘍、および類表皮癌からなる群から選択される、請求項３３〜３５のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
悪性腫瘍を治療するための、請求項３０に記載の組成物の使用。
【請求項３８】
前記悪性腫瘍は、黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、肝細胞（肝臓）癌、甲状腺腫瘍、胃癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、肺癌、神経膠芽腫、子宮内膜癌、腎癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、中皮腫、肉腫、胆管癌（胆管細胞癌）、小腸腺癌、小児悪性腫瘍、および類表皮癌からなる群から選択される、請求項３７に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＤ１０５に対する標的結合剤およびかかる薬剤の使用に関する。より具体的には、本発明は、ＣＤ１０５を対象とする完全ヒトモノクローナル抗体に関する。記載される標的結合剤は、ＣＤ１０５の活性および／または過剰産生と関連する疾病の治療において、および診断薬として有用である。
【背景技術】
【０００２】
別名エンドグリンと称されるＣＤ１０５は、活性化された血管内皮細胞上に発現される膜貫通糖タンパク質である（Ｌｅｔａｍｅｎｄｉａ  Ａ，Ｌａｓｔｒｅｓ  Ｐ，Ｂｏｔｅｌｌａ  ＬＭ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９８；２７３：３３０１１−９）。また、ＣＤ１０５は、腫瘍血管系で高度に発現し、マクロファージ、線維芽細胞、および合胞体栄養細胞を含む他の限定された数の細胞型上で弱く発現することが報告されている（Ｆｏｎｓａｔｔｉ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２００３：２２：６５５７−６５６３）。
【０００３】
ＣＤ１０５は、１８０ｋＤａのホモ二量体タンパク質を形成する、それぞれ９５ｋＤａの２つのジスルフィド結合されたサブユニットからなる（Ｂａｒｂａｒａ  ＮＰ，Ｗｒａｎａ  ＪＬ，Ｌｅｔａｒｔｅ  Ｍ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９９；２７４：５８４−９４．）。ＣＤ１０５遺伝子は、長さ４０ｋｂであり、ヒト染色体９ｑ３４に位置する（Ｆｏｎｓａｔｔｉ  Ｅ，Ｓｉｇａｌｏｔｔｉ  Ｌ，Ａｒｓｌａｎ  Ｐ，Ａｌｔｏｍｏｎｔｅ  Ｍ，Ｍａｉｏ  Ｍ．Ｃｕｒｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ２００３；３：４２７−３２、  Ｒｉｕｓ  Ｃ，Ｓｍｉｔｈ  ＪＤ，Ａｌｍｅｎｄｒｏ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １９９８；９２：４６７７−９０．）。ｍＲＮＡ転写物は、長さ３．４ｋｂであり、１４個のエクソンからなる。エクソン１〜１２は、細胞外ドメインをコードするが、膜貫通ドメインはエクソン１３によって、および細胞質ドメインはエクソン１４によってコードされる。２つの異なるＣＤ１０５のアイソフォームが同定されており、長（Ｌ−ＣＤ１０５／エンドグリン）および短（Ｓ−ＣＤ１０５／エンドグリン）と命名されている。上記アイソフォームは、細胞質尾部内で、アミノ酸組成が異なる。より具体的には、Ｌアイソフォームが主であり、細胞質ドメインに４７個の残基を含有するが、Ｓアイソフォームは、１４個のアミノ酸のみを含有する（Ｇｏｕｇｏｓ  Ａ，Ｌｅｔａｒｔｅ  Ｍ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９０；２６５：８３６１  −８３６４、  Ｌａｓｔｒｅｓ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ，１９９０；３０１：７６５−７６８）。
【０００４】
ＣＤ１０５は、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）受容体のための補助受容体であり、ＴＧＦ−βのシグナル伝達Ｉ型およびＩＩ型受容体と共に、ヘテロ二量体を形成し、ＴＧＦ−βに対する応答を調節することができる（Ｙａｍａｓｈｉｔａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，１９９４；２６９：１９９５−２００１、Ｇｕｅｒｒｅｒｏ−Ｅｓｔｅｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００２；２７７：２９１９７−２９２０９）。ＴＧＦ−βは、アクチビンおよび骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を含むタンパク質のより大きなスーパーファミリーの一部であるサイトカインである（Ｐｉｅｋ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ，１９９９；１３：２１０５−２１２４）。ＴＧＦ−βスーパーファミリーのメンバーは、Ｉ型およびＩＩ型セリン／スレオニンキナーゼ受容体、およびＳｍａｄと称されるそれらの下流核エフェクターを通して細胞応答を媒介する（Ｈｅｌｄｉｎ  Ｃ−Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９７；３９０：４６５−４７１）。内皮細胞において、ＴＧＦ−βが、２つのＩ型受容体経路、つまりアクチビン受容体様５キナーゼＡＬＫ５およびＡＬＫ１を活性化することが示されている。ＡＬＫ１の活性化は、Ｓｍａｄ１／５リン酸化反応を促進し、細胞増殖および移動を刺激する。対照的に、ＡＬＫ５の活性化は、Ｓｍａｄ２／３リン酸化反応を誘導し、細胞増殖および移動を阻害する（Ｇｏｕｍａｎｓ  Ｍ−Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  ２００２；２１：１７４３−１７５３）。したがって、静止内皮細胞では、ＡＬＫ５が、ＴＧＦ−βシグナル伝達の主な媒介物である。しかし、血管形成中は、ＡＬＫ１が優先的に活性化される（Ｌｅｂｒｉｎ  Ｆ，ｉｏ  Ｄｅｃｋｅｒｓ  Ｍ，Ｂｅｒｔｏｌｉｎｏ  Ｐ，ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ  Ｐ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  ２００５；６５：５９９−６０８）。
【０００５】
ＣＤ１０５における突然変異は、遺伝性出血性毛細血管拡張症Ｉ型（またはオスラーレンドゥウェーバー症候群１）の原因となる（Ｂｏｂｉｋ  Ａ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｅ  Ｂｉｏｌ  ２００６；２６：１７１２−２０．）。この症候群は、遺伝性の常染色体優性の疾患であり、多システムの血管異形成、鼻出血の再発、皮膚粘膜毛細血管拡張症、および肺、脳、肝臓、および消化管の動静脈奇形を特徴とする（Ｂｅｒｔｏｌｉｎｏ  Ｐ，Ｄｅｃｋｅｒｓ  Ｍ，Ｌｅｂｒｉｎ  Ｆ，ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ  Ｐ．Ｃｈｅｓｔ  ２００５；１２８：５８５−９０Ｓ、Ｂｏｂｉｋ  Ａ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｅ  Ｂｉｏｌ  ２００６；２６；１７１２−２０）。ＣＤ１０５における突然変異を特徴とする遺伝性出血性毛細血管拡張症１、およびＡＬＫ１における突然変異を特徴とする遺伝性出血性毛細血管拡張症２の疾病の２つの遺伝型が記載されている（Ｂｏｂｉｋ  Ａ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｅ  Ｂｉｏｌ  ２０  ２００６；２６：１７１２−２０、Ｌｅｂｒｉｎ  Ｆ，Ｄｅｃｋｅｒｓ  Ｍ，Ｂｅｒｔｏｌｉｎｏ  Ｐ，ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ  Ｐ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  ２００５；６５：５９９−６０８）。ＣＤ１０５（ＣＤ１０５＋／−）のへテロ接合体遺伝子型のトランスジェニックげっ歯類モデルでは、マウスは不規則な、拡張した、および薄壁の血管を示し、関連する血管平滑筋細胞は野生型動物より少ない。興味深いことに、ＣＤ１０５ヘテロ接合体マウスは、成人期まで生存するが、ホモ接合ヌル突然変異（ＣＤ１０５−／−）を示すマウスは発育せず、不完全な卵黄嚢血管新生、心臓弁の異常、および不規則な心室発生が原因でＥ１１．５までに胚の致死に至る（Ａｒｔｈｕｒ  ＨＭ，Ｕｒｅ  Ｊ，Ｓｍｉｔｈ  ＡＪ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２０００；２１７：４２−５３、Ｌｉ  ＤＹ，Ｓｏｒｅｎｓｅｎ  ＬＫ，Ｂｒｏｏｋｅ  ＢＳ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９；２８４：１５３４−７）。したがって、上記の結果は、血管恒常性におけるＣＤ１０５の重要性を強調する。近年、ＣＤ１０５は、内皮細胞移動および細胞骨格形成の調節にも関係するとされている（Ｃｏｎｌｅｙ  ＢＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００４；２７９：２７４４０−２７４４９、Ｓａｎｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２００４；２７９：３２８５８−３２８６８）。
【０００６】
ＣＤ１０５の発現は、癌患者の予後不良に関連することが報告されている。より具体的には、ＣＤ１０５の発現は、乳癌、肺癌、および結腸直腸癌患者の全体的の生存率の低さと相関関係が示された（Ｋｕｍａｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９９９；５９：８５６−８６１、Ｔａｎａｋａ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１；７：３４１０−３４１５、Ｌｉ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００３；８８：１４２４−５  １４３１）。また、上述の胃腸、乳房、前立腺、頭頸部の腫瘍では、ＣＤ１０５の発現が遠隔転移疾患の存在と関連していた（Ｄｉｎｇ  Ｓ，Ｌｉ  Ｃ，Ｌｉｎ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００６；３７：８６１−６、Ｓａａｄ  ＲＳ，Ｅｌ−Ｇｏｈａｒｙ  Ｙ，Ｍｅｍａｒｉ  Ｅ，Ｌｉｕ  ＹＬ，Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＪＦ．Ｈｕｍ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００５；３６：９５５−６１、Ｓａａｄ  ＲＳ，Ｌｉｕ  ＹＬ，Ｎａｔｈａｎ  Ｇ，Ｃｅｌｅｂｒｅｚｚｅ  Ｊ，Ｍｅｄｉｃｈ  Ｄ，Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＪＦ．Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００４；１７：１９７−２０３、Ｌｉ  Ｃ，Ｇｕｏ  Ｂ，Ｗｉｌｓｏｎ  ＰＢ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ  Ｊｏ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０００；８９：１２２−６、Ｙａｎｇ  ＬＹ，Ｌｕ  ＷＱ，Ｈｕａｎｇ  ＧＷ，Ｗａｎｇ  Ｗ．ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００６；６：１１０、Ｅｌ−Ｇｏｈａｒｙ  ＹＭ，Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＪＦ，Ｏｌｓｏｎ  ＰＲ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００７；１２７：５７２−９、Ｃｈｉｅｎ  ＣＹ，Ｓｕ  ＣＹ，Ｈｗａｎｇ  ＣＦ，Ｃｈｕａｎｇ  ＨＣ，Ｃｈｅｎ  ＣＭ，Ｈｕａｎｇ  ＣＣ．Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｏｎｃｏｌ  ２００６；９４：４１３−７）。
【０００７】
近年、ＶＥＧＦ経路の阻害後のＣＤ１０５の発現の濃度増加が報告されている。膵癌異種移植モデルでは、ＣＤ１０５転写レベルが、抗ＶＥＧＦ中和抗体で治療されたマウスで２倍以上上方制御された（Ｂｏｃｋｈｏｒｎ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３；９：４２２１−４２２６）。膀胱癌異種移植モデルでは、免疫組織化学によって測定されたＣＤ１０５濃度が、抗ＶＥＧＦ中和抗体で治療されたマウスの腫瘍コア内で上昇した（Ｄａｖｉｓ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００４；６４：４６０１−４６１０）。
【０００８】
さらに、ＣＤ１０５の発現は、低酸素症によって増加し、アポトーシスから低酸素細胞を防御することが報告されており、ＣＤ１０５の阻害は低酸素ストレスの下、細胞のアポトーシスを増加した（Ｌｉ  Ｃ，Ｉｓｓａ  Ｒ，Ｋｕｍａｒ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ  ２００３；１１６：２６７７−８５．）。ＣＤ１０５ｍＲＮＡおよびプロモーター活性も、低酸素状態の下、著しく上昇した。（Ｌｉ  Ｃ，Ｉｓｓａ  Ｒ，Ｋｕｍａｒ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ  ２００３；１１６：２６７７−８５）。したがって、低酸素症は、血管内皮細胞におけるＣＤ１０５遺伝子５の発現に対して強力な刺激であると考えられる。
【０００９】
したがって、ＣＤ１０５シグナル伝達を制御する新しい手段を同定する必要がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｌｅｔａｍｅｎｄｉａ  Ａ，Ｌａｓｔｒｅｓ  Ｐ，Ｂｏｔｅｌｌａ  ＬＭ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９８；２７３：３３０１１−９
【非特許文献２】Ｆｏｎｓａｔｔｉ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２００３：２２：６５５７−６５６３
【非特許文献３】Ｂａｒｂａｒａ  ＮＰ，Ｗｒａｎａ  ＪＬ，Ｌｅｔａｒｔｅ  Ｍ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９９；２７４：５８４−９４．
【非特許文献４】Ｆｏｎｓａｔｔｉ  Ｅ，Ｓｉｇａｌｏｔｔｉ  Ｌ，Ａｒｓｌａｎ  Ｐ，Ａｌｔｏｍｏｎｔｅ  Ｍ，Ｍａｉｏ  Ｍ．Ｃｕｒｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ２００３；３：４２７−３２
【非特許文献５】Ｒｉｕｓ  Ｃ，Ｓｍｉｔｈ  ＪＤ，Ａｌｍｅｎｄｒｏ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １９９８；９２：４６７７−９０．
【非特許文献６】Ｇｏｕｇｏｓ  Ａ，Ｌｅｔａｒｔｅ  Ｍ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９０；２６５：８３６１  −８３６４
【非特許文献７】Ｌａｓｔｒｅｓ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ，１９９０；３０１：７６５−７６８
【非特許文献８】Ｙａｍａｓｈｉｔａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，１９９４；２６９：１９９５−２００１
【非特許文献９】Ｇｕｅｒｒｅｒｏ−Ｅｓｔｅｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００２；２７７：２９１９７−２９２０９
【非特許文献１０】Ｐｉｅｋ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ，１９９９；１３：２１０５−２１２４
【非特許文献１１】Ｈｅｌｄｉｎ  Ｃ−Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９７；３９０：４６５−４７１
【非特許文献１２】Ｇｏｕｍａｎｓ  Ｍ−Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  ２００２；２１：１７４３−１７５３
【非特許文献１３】Ｌｅｂｒｉｎ  Ｆ，ｉｏ  Ｄｅｃｋｅｒｓ  Ｍ，Ｂｅｒｔｏｌｉｎｏ  Ｐ，ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ  Ｐ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  ２００５；６５：５９９−６０８
【非特許文献１４】Ｂｏｂｉｋ  Ａ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｅ  Ｂｉｏｌ  ２００６；２６：１７１２−２０．
【非特許文献１５】Ｂｅｒｔｏｌｉｎｏ  Ｐ，Ｄｅｃｋｅｒｓ  Ｍ，Ｌｅｂｒｉｎ  Ｆ，ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ  Ｐ．Ｃｈｅｓｔ  ２００５；１２８：５８５−９０Ｓ
【非特許文献１６】Ａｒｔｈｕｒ  ＨＭ，Ｕｒｅ  Ｊ，Ｓｍｉｔｈ  ＡＪ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２０００；２１７：４２−５３
【非特許文献１７】Ｌｉ  ＤＹ，Ｓｏｒｅｎｓｅｎ  ＬＫ，Ｂｒｏｏｋｅ  ＢＳ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９；２８４：１５３４−７
【非特許文献１８】Ｃｏｎｌｅｙ  ＢＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００４；２７９：２７４４０−２７４４９
【非特許文献１９】Ｓａｎｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２００４；２７９：３２８５８−３２８６８
【非特許文献２０】Ｋｕｍａｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９９９；５９：８５６−８６１
【非特許文献２１】Ｔａｎａｋａ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１；７：３４１０−３４１５
【非特許文献２２】Ｌｉ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００３；８８：１４２４−５  １４３１
【非特許文献２３】Ｄｉｎｇ  Ｓ，Ｌｉ  Ｃ，Ｌｉｎ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００６；３７：８６１−６
【非特許文献２４】Ｓａａｄ  ＲＳ，Ｅｌ−Ｇｏｈａｒｙ  Ｙ，Ｍｅｍａｒｉ  Ｅ，Ｌｉｕ  ＹＬ，Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＪＦ．Ｈｕｍ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００５；３６：９５５−６１
【非特許文献２５】Ｓａａｄ  ＲＳ，Ｌｉｕ  ＹＬ，Ｎａｔｈａｎ  Ｇ，Ｃｅｌｅｂｒｅｚｚｅ  Ｊ，Ｍｅｄｉｃｈ  Ｄ，Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＪＦ．Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００４；１７：１９７−２０３
【非特許文献２６】Ｌｉ  Ｃ，Ｇｕｏ  Ｂ，Ｗｉｌｓｏｎ  ＰＢ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ  Ｊｏ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０００；８９：１２２−６
【非特許文献２７】Ｙａｎｇ  ＬＹ，Ｌｕ  ＷＱ，Ｈｕａｎｇ  ＧＷ，Ｗａｎｇ  Ｗ．ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００６；６：１１０
【非特許文献２８】Ｅｌ−Ｇｏｈａｒｙ  ＹＭ，Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＪＦ，Ｏｌｓｏｎ  ＰＲ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００７；１２７：５７２−９
【非特許文献２９】Ｃｈｉｅｎ  ＣＹ，Ｓｕ  ＣＹ，Ｈｗａｎｇ  ＣＦ，Ｃｈｕａｎｇ  ＨＣ，Ｃｈｅｎ  ＣＭ，Ｈｕａｎｇ  ＣＣ．Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｏｎｃｏｌ  ２００６；９４：４１３−７
【非特許文献３０】Ｂｏｃｋｈｏｒｎ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３；９：４２２１−４２２６
【非特許文献３１】Ｄａｖｉｓ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００４；６４：４６０１−４６１０
【非特許文献３２】Ｌｉ  Ｃ，Ｉｓｓａ  Ｒ，Ｋｕｍａｒ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ  ２００３；１１６：２６７７−８５．
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、ＣＤ１０５に特異的に結合し、ＣＤ１０５の生物活性を阻害する標的結合剤に関する。本発明の実施形態は、ＣＤ１０５に特異的に結合し、ＣＤ１０５依存性のＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する標的結合剤に関する。例えば、本発明のＣＤ１０５の結合剤は、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β３、アクチビン−Ａ、ＢＭＰ−２、および／またはＢＭＰ−７等のＣＤ１０５リガンドとＴＧＦ−β１受容体複合体のＣＤ１０５部分との結合を阻害する。
【００１２】
本発明の実施形態は、ＣＤ１０５に特異的に結合し、ＣＤ１０５リガンドとＣＤ１０５の結合を阻害する標的結合剤に関する。本発明の一実施形態において、標的結合剤はＣＤ１０５と特異的に結合し、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β３、アクチビン−Ａ、ＢＭＰ−２、および／またはＢＭＰ−７のＣＤ１０５リガンドとＣＤ１０５との結合を阻害する。一実施形態において、標的結合剤は、標的結合剤なしで発生するであろう結合と比べて、ＣＤ１０５リガンドとＣＤ１０５との結合を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、阻害する。
【００１３】
本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤は、ＣＤ１０５と５ナノモル（ｎＭ）未満の結合親和性（ＫＤ）で結合する。他の実施形態において、標的結合剤は、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、または１ｎＭ未満のＫＤで結合する。本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤は、ＣＤ１０５と９５０ピコモル（ｐＭ）未満のＫＤで結合する。本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤は、ＣＤ１０５と９００ピコモル未満のＫＤで結合する。他の実施形態において、標的結合剤は、８００ｐＭ、７００ｐＭ、または６００ｐＭ未満のＫＤで結合する。本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤は、ＣＤ１０５と５００ピコモル未満のＫＤで結合する。他の実施形態において、標的結合剤は、４００ｐＭ未満のＫＤで結合する。さらに他の実施形態において、標的結合剤は、３００ｐＭ未満のＫＤで結合する。いくつかの他の実施形態において、標的結合剤は、２００ｐＭ未満のＫＤで結合する。いくつかの他の実施形態において、標的結合剤は、１００ｐＭ未満のＫＤで結合する。１つの特定の実施形態において、本発明の標的結合剤は、ヒトＣＤ１０５と１０ｐＭ未満の親和性ＫＤで結合することができる。別の特定の実施形態において、本発明の標的結合剤は、ヒトＣＤ１０５と１ｐＭ未満の親和性ＫＤで結合することができる。ＫＤは、本明細書に記載されるか、または当業者に知られる方法を使用して評価することができる（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ）（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）。
【００１４】
本発明の標的結合剤または抗体の結合特性は、解離または会合速度（それぞれｋＯｆｆおよびｋｏｎ）を参照することにより測定することもできる。
【００１５】
本発明の一実施形態において、標的結合剤または抗体は、少なくとも１０４Ｍ−１Ｓ−１、少なくとも５Ｘ１０４Ｍ−１Ｓ−１、少なくとも１０５Ｍ−１Ｓ−１、少なくとも２Ｘ１０５Ｍ−１Ｓ−１、少なくとも５Ｘ１０５Ｍ−１Ｓ−１、少なくとも１０６Ｍ−１Ｓ−１、少なくとも５Ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、少なくとも１０７Ｍ−１Ｓ−１、少なくとも５Ｘ１０７Ｍ−１Ｓ−１、または少なくとも１０８Ｍ−１Ｓ−１のｋｏｎ率（抗体（Ａｂ）＋抗原（Ａｇ）ｋｏｎ→Ａｂ−Ａｇ）を有することができる。
【００１６】
本発明の別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、５Ｘ１０−１ｓ−１未満、１０−１ｓ−１未満、５Ｘ１０−２ｓ−１未満、１０−２ｓ−１未満、５ｘ１０−３ｓ−１未満、１０−３ｓ−１未満、５Ｘ１０−４ｓ−１未満、１０−４ｓ−１未満、５ｘ１０−５ｓ−１未満、１０−５ｓ−１未満、５ｘ１０−６ｓ−１未満、１０−６ｓ−１未満、５Ｘ１０−７ｓ−１未満、１０−７ｓ−１未満、５ｘ１０−８ｓ−１未満、１０−８ｓ−１未満、５Ｘ１０−９ｓ−１未満、１０−９ｓ−１未満、または１０−１０ｓ−１未満のｋｏｆｆ率（（Ａｂ−Ａｇ）ｋｏｆｆ→抗体（Ａｂ）＋抗原（Ａｇ））を有することができる。
【００１７】
いくつかの例において、本発明の標的結合剤は、他種からの他のＣＤ１０５タンパク質と交差反応する。一実施形態において、標的結合剤、例えば本発明の４．１２０、６Ｂｌ、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６は、カニクイザルＣＤ１０５と交差反応する。別の実施形態において、本発明の標的結合剤は、マウスＣＤ１０５、例えば６Ｂ１と交差反応する。
【００１８】
本発明の標的結合剤は、抗増殖活性も有し得る。特定の例において、本発明の抗体は、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上で、増殖を阻害することができる。一実施形態において、本発明の抗体は、抗体濃度が５０μｇ／ｍＬの場合、２〜３０％、４〜２５％、または８〜２０％の範囲でＨＵＶＥＣ細胞の増殖を阻害することができる。
【００１９】
本発明の別の実施形態において、標的結合剤は、血管形成を調節することができる。１つの例において、本発明の抗体は、血管延長および／または分岐数を阻害することができる。１つの特定の実施形態において、本発明の抗体は、血管延長を少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上、阻害することができる。例えば、抗体６Ｂ１０は、実施例６において記載される全ウェル画像解析方法において、血管延長を少なくとも２０％、例えば２０〜３０％の間、および分岐数を少なくとも４０％、例えば４０〜６０％の間、阻害することができる。
【００２０】
本発明の別の実施形態において、本発明の抗体は、細胞のアクチン細胞骨格構造を調節することができる。１つの特定の例において、３Ｃ．１、６Ｂ１、６Ｂ１０、１０Ｃ９、４．１２０、または４．３７の標的抗体は、内皮細胞のアクチン細胞骨格構造の顕著な調節を引き起こすことができる。
【００２１】
本発明の別の実施形態において、本発明の標的結合剤は、ＴＧＦ−βシグナル伝達を妨害する。一実施形態において、本発明の標的結合剤、例えば４Ｄ４、６Ａ６、６Ｂ１０、９Ｈ１０、４．１２０、または４．３７は、ｐＳＭＡＤ２リン酸化反応を媒介する。
【００２２】
本発明の別の実施形態において、標的結合剤は、ＳＮ６抗体、例えば６Ａ６、６Ｂ１０、９Ｈ１０、または３Ｃ１と、交差競合する。
【００２３】
いくつかの実施形態において、標的結合剤は、血管形成と関連する状態を治療することができる。本発明の一実施形態において、標的結合剤は、哺乳動物における腫瘍成長および／または転移を阻害する。具体的には、標的結合剤は、固形腫瘍を治療するために使用可能である。標的結合剤は、化学療法計画等の、他の抗癌治療と組み合わせて、または単独で腫瘍成長および／または転移を阻害することができる。単独療法として使用される場合、本発明の標的結合剤は、抗ＶＥＧＦ療法等の他の療法が失敗した患者に使用され得る。別の実施形態において、標的結合剤は、糖尿病性網膜症および血管新生による黄斑変性症等の眼疾患を治療することができる。さらに別の実施形態において、標的結合剤は、関節リウマチ、変形性関節症、喘息、クローン病、潰瘍性大腸炎、および慢性炎症性疾患等の慢性炎症性疾患を治療するために使用することができる。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤は、抗体である。本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤は、モノクローナル抗体である。本発明の一実施形態において、標的結合剤は、完全ヒトモノクローナル抗体である。本発明の別の実施形態において、標的結合剤は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプの完全ヒトモノクローナル抗体である。本発明の別の実施形態において、標的結合剤は、ＩｇＧ２アイソタイプの完全ヒトモノクローナル抗体である。このアイソタイプは、他のアイソタイプと比べて、低減した、エフェクター機能を誘発する可能性を有し、これは、毒性低減をもたらし得る。本発明の別の実施形態において、標的結合剤は、ＩｇＧ１アイソタイプの完全ヒトモノクローナル抗体である。ＩｇＧ１アイソタイプは、他のアイソタイプと比べて、増加した、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを誘発する可能性を有し、これは、改善された有効性をもたらし得る。ＩｇＧ１のアイソタイプは、他のアイソタイプ、例えばＩｇＧ４と比べて、改善された安定性を有し、これは、改善された生物学的利用率、または改善された産生の容易さ、もしくはより長い半減期をもたらし得る。一実施形態において、ＩｇＧ１アイソタイプの完全ヒトモノクローナル抗体は、ｚ、ｚａ、またはｆアロタイプである。
【００２５】
本発明の一実施形態において、ＣＤ１０５と特異的に結合する標的結合剤は、
１ｎＭ未満のＫＤでヒトＣＤ１０５と結合することと、
５％を超えて、例えば５〜２０％の間でＨＵＶＥＣ細胞の細胞増殖を阻害することと、
ＳＭＡＤ２リン酸化反応を増加することと、
抗血管新生活性を示すことと、
ＡＤＣＣ活性を示すことと、を含む上記の特性のうちの１つ以上を示すことができる。
【００２６】
さらなる実施形態は、ＣＤ１０５に特異的に結合する標的結合剤または抗体であり、表２に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）配列のうち１つ以上を含む配列を含む。本発明の実施形態は、表２に示す重鎖可変ドメインからのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３配列のいずれか１つを含む配列を含む標的結合剤、または抗体を含む。さらなる実施形態は、ＣＤ１０５と特異的に結合する標的結合剤または抗体であり、表２に示す重鎖可変ドメインのＣＤＲ配列を２つ含む。別の実施形態において、標的結合剤、または抗体は、表２に示す重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む配列を含む。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す軽鎖可変ドメインのＣＤＲ配列のうちの１つを含む配列を含む。本発明の実施形態は、表２に示す重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３配列のいずれか１つの配列を含む標的結合剤または抗体を含む。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す重鎖可変ドメインのＣＤＲ配列の２つを含む配列を含む。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む配列を含む。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびに表２に示す軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む配列を含むことができる。いくつかの実施形態において、標的結合剤は、抗体である。特定の実施形態において、標的結合剤は、完全ヒトモノクローナル抗体である。特定の他の実施形態において、標的結合剤は、完全ヒトモノクローナル抗体の結合断片である。
【００２７】
一実施形態において、本発明の抗体は、
（ａ）配列番号２のＶＨ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号２のＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）配列番号２のＶＨ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号２のＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）配列番号２のＶＨ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号２のＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）配列番号４のＶＬ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号４のＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号４のＶＬ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号４のＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号４のＶＬ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号４のＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む。
【００２８】
別の実施形態において、本発明の抗体は、
（ａ）配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む。
【００２９】
さらに別の実施形態において、本発明は、
（ａ）配列番号３０のＶＨ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号３０のＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）配列番号３０のＶＨ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号３０のＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）配列番号３０のＶＨ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号３０のＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）配列番号３２のＶＬ  ＣＤＲ１に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号３２のＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号３２のＶＬ  ＣＤＲ２に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号３２のＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号３２のＶＬ  ＣＤＲ３に対して同一、または１、２、または３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有する、配列番号３２のＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む抗体を含む。
【００３０】
別の実施形態において、標的結合剤は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１４、ＰＴＡ−９５１１、またはＰＴＡ−９５１０の番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＨ、Ｍａｂ４．３７ＶＨ、またはＭａｂ６Ｂ１０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる可変重鎖配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のいずれか１つを含む配列を含むことができる。別の実施形態において、標的結合剤は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１３、ＰＴＡ−９５１２、またはＰＴＡ−９４９９番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＬ，Ｍａｂ４．３７ＶＬ、またはＭａｂ６Ｂ１０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる可変軽鎖配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のいずれか１つを含む配列を含むことができる。
【００３１】
一実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１４番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされるＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００３２】
一実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１４番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされるＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列、ならびに２００８年９月１７日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１３番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされるＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３３】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１４番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つを含む可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００３４】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１４番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つを含む可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３５】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１４番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む可変重鎖アミノ酸配列、ならびに２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１３番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３６】
一実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１１番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされるＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００３７】
一実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１１番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされるＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列、ならびに２００８年９月１７日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１２番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされるＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３８】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１１番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＨと指定されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つを含む可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００３９】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１２番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つを含む可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４０】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１１番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む可変重鎖アミノ酸配列、ならびに２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１２番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４１】
一実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１０番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされるＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００４２】
一実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１０番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされるＣＤＲ３を含む可変重鎖アミノ酸配列、ならびに２００８年９月１７日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９４９９番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされるＣＤＲ３を含む可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４３】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１０番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つを含む可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００４４】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９４９９番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つを含む可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４５】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１０番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む可変重鎖アミノ酸配列、ならびに２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９４９９番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体のＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４６】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１４番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変重鎖を含む。
【００４７】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１１番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変重鎖を含む。
【００４８】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１０番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変重鎖を含む。
【００４９】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１３番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変軽鎖を含む。
【００５０】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１２番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変軽鎖を含む。
【００５１】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９４９９番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変軽鎖を含む。
【００５２】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１４番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変重鎖、ならびに２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１３番号で寄託され、Ｍａｂ４．１２０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変軽鎖を含む。
【００５３】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１２番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変軽鎖、ならびに２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１１番号で寄託され、Ｍａｂ４．３７ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変重鎖を含む。
【００５４】
別の実施形態において、本発明の標的結合剤または抗体は、２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９５１０番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＨと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変重鎖、ならびに２００８年９月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−９４９９番号で寄託され、Ｍａｂ６Ｂ１０ＶＬと命名されたプラスミド中のポリヌクレオチドによってコードされる抗体の可変軽鎖を含む。
【００５５】
当業者は、ＣＤＲ決定を容易に達成することができることは、知られている。例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３を参照。Ｋａｂａｔは、多数の種類の抗体アイソタイプからの免疫グロブリン鎖の多配列アラインメントを提供する。整列された配列は、単一番号方式、すなわちＫａｂａｔ番号方式によって番号が付けられる。Ｋａｂａｔ配列は、１９９１の出版以来更新され、電子配列データベース（最新のダウンロード可能なバージョンは、１９９７）として利用可能である。任意の免疫グロブリン配列は、Ｋａｂａｔ参照配列で整列をすることによって、Ｋａｂａｔによって番号が付けることができる。したがって、Ｋａｂａｔ番号方式は、免疫グロブリン鎖の番号付けのための、統一システムを提供する。
【００５６】
一実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す重鎖配列のうちのいずれか１つの配列を含む。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、抗体４．１２０、４．３７、および６Ｂ１０の重鎖配列のうちのいずれか１つを含む配列を含む。
【００５７】
軽鎖の無差別性は、当該技術において確立されている。したがって、抗体４．１２０、４．３７、および６Ｂ１０、または本明細書に開示される別の抗体の重鎖配列のうちのいずれか１つを含む配列を含む標的結合剤または抗体は、表２に示す、または抗体４．１２０、４．３７、および６Ｂ１０、または本明細書に開示される別の抗体の軽鎖配列のうちのいずれか１つをさらに含むことができる。いくつかの実施形態において、抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００５８】
一実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す軽鎖配列のうちのいずれか１つの配列を含む。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、抗体４．１２０、４．３７、および６Ｂ１０の軽鎖配列のうちのいずれか１つを含む配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００５９】
いくつかの実施形態において、標的結合剤は、４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６を含む群から選択されるモノクローナル抗体である。一実施形態において、標的結合剤は、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６のうちの１つ以上を含む。特定の実施形態において、標的結合剤は、モノクローナル抗体４．１２０である。特定の他の実施形態において、標的結合剤は、モノクローナル抗体４．３７である。特定の他の実施形態において、標的結合剤は、モノクローナル抗体６Ｂ１０である。
【００６０】
一実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す配列のうちのいずれか１つから選択される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む配列を含むことができる。一実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す配列のうちのいずれか１つから選択される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む配列を含むことができる。一実施形態において、標的結合剤または抗体は、抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６のＣＤＲのうちのいずれか１つから選択される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む配列を含むことができる。一実施形態において、標的結合剤または抗体は、抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６のＣＤＲのうちのいずれか１つから選択される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む配列を含むことができる。
【００６１】
別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、４．３７、または６Ｂ１０のうちのいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちのいずれか１つを含む配列を含むことができる。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、４．３７、または６Ｂ１０のうちのいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちのいずれか１つを含む配列を含むことができる。一実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、４．３７、または６Ｂ１０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む配列を含むことができる。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、４．３７、または６Ｂ１０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む配列を含むことができる。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、４．３７、または６Ｂ１０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む配列、および表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、４．３７、または６Ｂ１０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含むことができる。いくつかの実施形態において、抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００６２】
別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む配列、および表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体４．３７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む配列、および表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体４．３７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体６Ｂ１０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む配列、および表２に示す完全ヒトモノクローナル抗体６Ｂ１０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００６３】
本発明のさらなる実施形態は、表２に示す配列のうちのいずれか１つのフレームワーク領域およびＣＤＲに及ぶ隣接配列、特にＦＲ１〜ＦＲ４またはＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、を含む配列を含む標的結合剤または抗体である。一実施形態において、標的結合剤または抗体は、表２に示すモノクローナル抗体４．１２０、４．３７、または６Ｂ１０の配列のうちのいずれか１つのフレームワーク領域およびＣＤＲに及ぶ隣接配列、特にＦＲ１〜ＦＲ４またはＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、を含む配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００６４】
別の実施形態において、薬剤もしくは抗体、またはこれらの抗原結合部分は、配列番号２の配列を含む重鎖ポリペプチドを含む。一実施形態において、薬剤もしくは抗体、またはこれらの抗原−結合部分は、配列番号４の配列を含む軽鎖ポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００６５】
一実施形態は、標的結合剤もしくは抗体、またはこれらの抗原結合部分を提供し、薬剤もしくは抗体、またはこれらの抗原結合部分は、配列番号２６の配列を含む重鎖ポリペプチドを含む。一実施形態において、薬剤もしくは抗体、またはこれらの抗原結合部分は、配列番号２８の配列を含む軽鎖ポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００６６】
別の実施形態において、薬剤もしくは抗体、またはこれらの抗原結合部分は、配列番号３０の配列を含む重鎖ポリペプチドを含む。別の実施形態において、薬剤もしくは抗体、または抗原結合部分は、配列番号３２の配列を含む軽鎖ポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００６７】
一実施形態において、標的結合剤もしくは抗体は、開示されたＣＤＲ、あるいは重鎖または軽鎖フレームワーク配列内に、２０、１６、１０、９、またはそれ以下、例えば１、２、３、４、または５もの数のアミノ酸添加、置換、欠失、および／もしくは挿入を含む。かかる修飾は、ＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列内の任意の残基において行われる可能性がある。いくつかの実施形態において、抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００６８】
一実施形態において、標的結合剤または抗体は、本明細書に開示されたＣＤＲ、フレームワーク領域およびＣＤＲに及ぶ隣接配列（特にＦＲ１〜ＦＲ４またはＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）、本明細書に開示された軽鎖もしくは重鎖配列、または本明細書に開示された抗体の変異体または誘導体を含む。変異体は、表２に示すＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３、表２に示すフレームワーク領域およびＣＤＲに及ぶ隣接配列（特にＦＲ１〜ＦＲ４またはＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）、本明細書に開示された軽鎖または重鎖配列、または本明細書に開示されたモノクローナル抗体のうちのいずれかにおいて、２０、１６、１０、９、またはそれ以下、例えば１、２、３、４、または５もの数のアミノ酸付加、置換、例えば保存アミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有する配列を含む標的結合剤または抗体を含む。変異体は、表２に示すＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３、表２に示すフレームワーク領域およびＣＤＲにおよぶ隣接配列（特にＦＲ１〜ＦＲ４またはＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）、本明細書に開示された軽鎖もしくは重鎖配列、または本明細書に開示されたモノクローナル抗体のうちのいずれかと少なくとも約６０、７０、８０、８５、９０、９５、９８、または約９９％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む標的結合剤または抗体を含む。２つのアミノ酸配列の同一性パーセントは、対タンパク質の整列を含むがこれに限定されない、当業者に知られている、任意の方法によって決定することができる。一実施形態において、変異体は、自然発生的であり、または組換えＤＮＡ技術もしくは突然変異誘発技術を使用した天然配列のインビボ操作によって導入される、本明細書に開示されたＣＤＲ配列もしくは軽鎖もしくは重鎖ポリペプチドの変化を含む。自然発生的変異体は、外来抗原に対する抗体の生成の間、対応する生殖系列のヌクレオチド配列においてインビボで生成されるものを含む。一実施形態において、誘導体は、２つ以上の抗体が結合される抗体である、異種抗体である可能性がある。誘導体は、化学修飾された抗体を含む。例は、水溶性ポリマー、Ｎ結合型、またはＯ結合型の炭水化物、糖類、リン酸塩、および／または他のかかる分子等の、１つ以上のポリマーの共有結合を含む。誘導体は、付着した分子の種類または位置のどちらかにおける、自然発生的または出発抗体と異なる方法で修飾される。誘導体は、自然に抗体の存在する、１つ以上の化学基の欠失をさらに含む。
【００６９】
一実施形態において、標的結合剤は、二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。二重特異性抗体を産生する方法は、当業者に知られている。（例えば、Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３）、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）、米国特許第４，４７４，８９３号、第４，７１４，６８１号、第４，９２５，６４８号、第５，５７３，９２０号、第５，６０１，８１号、第９５，７３１，１６８号、第４，６７６，９８０号、および第４，６７６，９８０号、ＷＯ第９４／０４６９０号、ＷＯ第９１／００３６０号、ＷＯ第９２／２００３７３号、ＷＯ第９３／１７７１５号、ＷＯ第９２／０８８０２号、およびＥＰ０３０８９。）一例において、本発明の二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるＣＤ１０５エピトープに対して結合特異性を有する抗体である。本発明のＣＤ１０５標的結合剤の多くは、異なるエピトープを有する、または異なる部分または重複エピトープを有するため、本発明の二重特異性抗体は、異なるまたは重複するエピトープを有するＣＤ１０５標的結合剤のいずれかの組み合わせを含むことができることが意図される。例えば、６Ａ６および６Ｂ１０は、４Ｄ４および１０Ｃ９とは異なるエピトープを有する。一例において、二重特異性抗体は、６Ａ６または６Ｂ１０の可変または超可変領域、および４Ｄ４または１０Ｃ９の可変または超可変領域を有する。
【００７０】
本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤または抗体は、配列番号２６を含む配列を含む。特定の実施形態において、配列番号２６は、表５の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の組み合わせのうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、配列番号２６は、表５に示す生殖系列残基のうちのいずれか１つ、いずれか２つ、またはすべての２つを含む。特定の実施形態において、配列番号２は、表５の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の一意的な組み合わせを含む。他の実施形態において、標的結合剤または抗体は、ＶＨ３−３３、Ｄ６−１３、およびＪＨ６、ドメインを有する生殖系列配列から生じ、１つ以上の残基は、この位置において、対応する生殖系列残基を産出するために突然変異された。
【００７１】
本発明のさらなる実施形態は、ＣＤ１０５との結合に対して本発明の標的結合剤または抗体と競合する、標的結合剤または抗体である。本発明の別の実施形態において、ＣＤ１０５との結合に対して本発明の標的結合剤または抗体と競合する抗体が存在する。別の実施形態において、標的結合剤または抗体は、ＣＤ１０５との結合に対して、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、または６Ａ６のうちのいずれか１つと競合する。「競合する」とは、標的結合剤または抗体が、ＣＤ１０５との結合に対して、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、または６Ａ６のうちのいずれか１つと競合する、すなわち競合が単一方向性であることを示す。
【００７２】
本発明の実施形態は、ＣＤ１０５との結合に対して、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、または６Ａ６のうちのいずれか１つと交差競合する、標的結合剤または抗体を含む。「交差競合する」とは、標的結合剤または抗体が、ＣＤ１０５との結合に対して、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、または６Ａ６のうちのいずれか１つと競合し、またその逆も同様に競合すること、すなわち、競合が二方向性であることを示す。
【００７３】
本発明のさらなる実施形態は、ＣＤ１０５との結合に対して競合する、標的結合剤または抗体である。本発明の別の実施形態において、ＣＤ１０５との結合に対して、本発明の標的結合剤または抗体と交差競合する、標的結合剤または抗体が存在する。
【００７４】
本発明のさらなる実施形態は、本発明の標的結合剤または抗体と同じ、ＣＤ１０５上のエピトープと結合する、標的結合剤または抗体である。本発明の実施形態は、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、または６Ａ６のうちのいずれか１つと同じ、ＣＤ１０５上のエピトープと結合する、標的結合剤または抗体も含む。
【００７５】
本発明の他の実施形態は、本明細書に記載される標的結合剤または抗体のいずれかをコードする単離核酸分子、本明細書に記載される標的結合剤または抗体をコードする単離核酸分子を有するベクター、またはかかる核酸分子のいずれかで形質転換された宿主細胞を含む。本発明の実施形態は、ＣＤ１０５と特異的に結合する完全ヒト単離標的結合剤をコードする核酸分子を含み、ＴＧＦ−β等のＣＤ１０５リガンドとＣＤ１０５受容体の結合を阻害する。本発明は、本明細書に定義される厳しい状況または低ストリージェンシーのハイブリダイゼーション状況で、本明細書に記載される標的結合剤または抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドにハイブリッドする、ポリヌクレオチドも包含する。本発明の実施形態は、結合剤をコードする核酸分子を含むベクターも含む。追加の実施形態は、核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を含む。
【００７６】
当業者に知られているように、抗体は、有利に、例えばポリクローナル、オリゴクローナル、モノクローナル、キメラの、ヒト化の、および／または完全ヒト抗体であることができる。
【００７７】
本発明の実施形態が、いかなる特定の形態の抗体、または生成もしくは産生の方法にも限定されないことが理解されるであろう。本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤は、完全ヒトモノクローナル抗体の結合断片である。例えば、標的結合剤は、全長抗体（例えば、無傷ヒトＦｃ領域を有する）または抗体結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２、ＦＶ、またはｄＡｂ）であることができる。さらに、抗体は、ｄＡｂ断片等の、ＣＤ１０５に結合する、らくだ科、またはヒト単一ＶＨまたはＶＬドメイン等の単一ドメイン抗体であることができる。
【００７８】
本明細書に記載される本発明の実施形態は、これらの抗体を産生する細胞も提供する。細胞の例は、ハイブリドーマ、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＨＯ細胞の変異体（例えばＤＧ４４）およびＣＤ１０５に対する抗体を産出するＮＳ０細胞等の組換え作製した細胞を含む。ＣＨＯ細胞の変異体についての追加情報は、本明細書にすべてが参照により組み込まれる、ＡｎｄｅｒｓｅｎとＲｅｉｌｌｙ（２００４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １５，４５６−４６２において見つけることができる。抗体は、抗体を分泌するハイブリドーマから、または遺伝子または抗体をコードする遺伝子で、形質転換されたまたはトランスフェクトされた組換え技術によって作られた細胞から製造することができる。
【００７９】
さらに、本発明の一実施形態は、核酸分子を発現して抗体を産出する条件下で宿主細胞を培養し、次いで抗体を回復することによって本発明の抗体を産出する方法である。本発明の実施形態が、抗体産出のために宿主細胞へトランスフェクトされた際に、抗体またはその断片の増加した収量ために最適化した核酸配列を含む本発明の抗体または抗体の断片をコードする任意の核酸分子も含むことを理解するべきである。
【００８０】
本明細書におけるさらなる実施形態は、ヒトＣＤ１０５を発現している細胞、ヒトＣＤ１０５を含有する単離細胞膜、精製したヒトＣＤ１０５、またはその断片、および／または１つ以上のオーソロガス配列またはその断片で哺乳動物に免疫を与えることによって、ＣＤ１０５と特異的に結合し、ＣＤ１０５の生物活性を阻害する抗体を産出する方法を含む。
【００８１】
他の実施形態において、本発明は、本発明の標的結合剤または抗体またはその結合断片、および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物を提供する。
【００８２】
本発明のさらなる実施形態は、増殖性、血管由来の疾病を患う動物を、ＣＤ１０５に特異的に結合する標的結合剤の治療効果のある量を投与することによって効果的に治療する方法を含む。特定の実施形態において、この方法は、腫瘍、癌、および／または細胞増殖疾患の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５と特異的に結合する標的結合剤の治療効果のある量を動物に投与することをさらに含む。
【００８３】
本発明のさらなる実施形態は、腫瘍性疾患を患う動物を、ＣＤ１０５に特異的に結合する標的結合剤の治療効果のある量を投与することによって効果的に治療する方法を含む。特定の実施形態において、この方法は、腫瘍性疾患の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５と特異的に結合する標的結合剤の治療効果のある量をその動物に投与することをさらに含む。
【００８４】
本発明のさらなる実施形態は、悪性腫瘍を患う動物を、ＣＤ１０５に特異的に結合する標的結合剤の治療効果のある量を投与することによって効果的に治療する方法を含む。特定の実施形態において、この方法は、悪性腫瘍の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５と特異的に結合する標的結合剤の治療効果のある量をその動物に投与することをさらに含む。
【００８５】
本発明のさらなる実施形態は、ＣＤ１０５発現と関連する疾病または状態に苦しむ動物を、ＣＤ１０５と特異的に結合する標的結合剤の治療効果のある量を投与することによって、効果的に治療する方法を含む。特定の実施形態において、この方法は、ＣＤ１０５発現と関連する疾患または状態に対する治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５と特異的に結合する標的結合剤の治療効果のある量をその動物に投与することをさらに含む。
【００８６】
悪性腫瘍は、黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、肝細胞（肝臓）癌、甲状腺腫瘍、胃癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、肺癌、神経膠芽腫、子宮内膜癌、腎癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、中皮腫、肉腫、胆管癌（胆管細胞癌）、小腸腺癌、小児悪性腫瘍、および類表皮癌からなる群から選択することができる。
【００８７】
治療可能な増殖または血管新生疾病は、黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、進行性非小細胞肺癌、肝細胞（肝臓）癌、甲状腺腫瘍胃癌、胆嚢癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、腎細胞癌、肺癌、神経膠芽腫、子宮内膜癌、腎癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、中皮腫、肉腫、胆管癌（胆管細胞癌）、小腸腺癌、小児悪性腫瘍、類表皮癌、および慢性骨髄性白血病を含む白血病等の、腫瘍性疾患を含む。
【００８８】
一実施形態において、本発明の標的結合剤は、肺、乳房、結腸直腸、前立腺、卵巣、肝細胞癌、頭頸部、神経膠芽腫、食道を含む固形腫瘍を治療するために使用することができる。
【００８９】
一実施形態において、本発明は、ＣＤ１０５に単独で、または部分的に依存している腫瘍患者においてＣＤ１０５を阻害するために使用することに適している。
【００９０】
本発明のさらなる実施形態は、増殖性、血管新生関連の疾病を患う動物を治療するための薬物の調合における、本発明の標的結合剤または抗体の使用を含む。特定の実施形態において、その使用は、増殖性、血管新生関連の疾病の治療を必要とする動物を選択することをさらに含む。
【００９１】
本発明のさらなる実施形態は、腫瘍性疾患を患う動物を治療するための薬物の調合における、本発明の標的結合剤または抗体の使用を含む。特定の実施形態において、その使用は、腫瘍性疾患の治療を必要とする動物を選択することをさらに含む。
【００９２】
本発明のさらなる実施形態は、非腫瘍性疾患を患う動物を治療するための薬物の調合における、本発明の標的結合剤または抗体の使用を含む。特定の実施形態において、その使用は、非腫瘍性疾患の治療を必要とする動物を選択することをさらに含む。
【００９３】
本発明のさらなる実施形態は、悪性腫瘍を患う動物を治療するための薬物の調合における、本発明の標的結合剤または抗体の使用を含む。特定の実施形態において、その使用は、悪性腫瘍の治療を必要とする動物を選択することをさらに含む。
【００９４】
本発明のさらなる実施形態は、疾病またはＣＤ１０５発現と関連する状況に苦しむ動物を治療するための薬物の調合における、本発明の標的結合剤または抗体の使用を含む。特定の実施形態において、その使用は、疾患またはＣＤ１０５発現と関連する状態に対する治療が必要な動物を選択することをさらに含む。
【００９５】
本発明のさらなる実施形態は、増殖性、血管新生関連の疾病を患う動物を治療するための薬物として、本発明の標的結合剤または抗体を使用することを含む。
【００９６】
本発明のさらなる実施形態は、非腫瘍性疾患を患う動物を治療するための薬物として、本発明の標的結合剤または抗体を使用することを含む。
【００９７】
本発明のさらなる実施形態は、悪性腫瘍を患う動物を治療するための薬物として、本発明の標的結合剤または抗体を使用することを含む。
【００９８】
本発明のさらなる実施形態は、疾病またはＣＤ１０５発現と関連する状況に苦しむ動物を治療するための薬物として、本発明の標的結合剤または抗体を使用することを含む。
【００９９】
本発明のさらなる実施形態は、ＣＤ１０５により誘発される疾患を患う動物を治療するための薬物として、本発明の標的結合剤または抗体を使用することを含む。
【０１００】
一実施形態において、
増殖性、血管新生関連の疾病、
腫瘍性疾患、
悪性腫瘍、
眼疾患、
慢性炎症性疾患、
疾病もしくはＣＤ１０５発現と関連する状態の治療は、
前述の疾病または状態のいずれかを管理する、改善する、防止することを含む。
【０１０１】
一実施形態において、腫瘍性疾患の治療は、腫瘍成長、腫瘍成長遅延、腫瘍の退行、腫瘍の縮小、治療の停止における腫瘍の再生までの時間増加、腫瘍再発までの時間増加、疾病の進行の遅れを阻害することを含む。
【０１０２】
本発明のいくつかの実施形態において、治療される動物はヒトである。
【０１０３】
本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤は完全ヒトモノクローナル抗体である。
【０１０４】
本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤は、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６からなる群から選択される。
【０１０５】
本発明の実施形態は、本明細書に記載される標的結合剤、および治療薬を含む複合体を含む。本発明のいくつかの実施形態において、治療薬は毒素である。他の実施形態において、治療薬は放射性同位体である。さらに他の実施形態において、治療薬は医薬組成物である。
【０１０６】
別の態様において、患者における癌性細胞を選択的に死滅させる方法が提供される。その方法は、患者へ完全ヒト抗体複合体を投与することを含む。その完全ヒト抗体複合体は、ＣＤ１０５および薬剤に結合することができる抗体を含む。その薬剤は、毒素、放射性同位体、または癌細胞を死滅させる別の物質のいずれかである。その抗体複合体は、このようにして癌細胞を選択的に死滅させる。
【０１０７】
一態様において、ＣＤ１０５と特異的に結合する抱合型の完全ヒト抗体が提供される。抗体に付属するものは、薬剤であり、抗体の細胞との結合は、細胞に対する薬剤の送達という結果となる。一実施形態において、上記の複合型完全ヒト抗体は、ＣＤ１０５の細胞外ドメインに結合する。別の実施形態において、抗体および複合化された毒素は、ＣＤ１０５を出現する細胞によって内部移行する。別の実施形態において、薬剤は細胞傷害性薬物である。別の実施形態において、薬剤は、例えばサポリン、またはアウリスタチン、緑膿菌外毒素、ゲロニン、リシン、カリチアマイシン、またはマイタンシンに基づいた免疫複合体等である。さらに別の実施形態において、薬剤は放射性同位体である。
【０１０８】
本発明の標的結合剤または抗体は、単独で投与され得る、または追加の抗体もしくは化学療法剤もしくは放射線療法と組み合わせて投与され得る。例えば、細胞粘着、浸潤、血管形成、または増殖を遮断するＣＤ１０５抗体のモノクローナル、オリゴクローナル、またはポリクローナル混合物は、腫瘍細胞増殖を阻害することが知られている薬物と組み合わせて投与され得る。さらに、本発明のＣＤ１０５標的薬剤は、他の化学療法治療、例えば抗ＶＥＧＦ薬剤を含む治療が失敗した患者において使用することができる。
【０１０９】
本発明の別の実施形態は、本明細書に開示される抗体が患者または患者試料におけるＣＤ１０５の濃度を検出するために利用される疾病または状態を診断する方法を含む。一実施形態において、その患者試料は血液もしくは血清もしくは尿である。さらなる実施形態において、危険因子の同定、疾病の診断、および疾病の病期分類の方法は、抗ＣＤ１０５抗体を使用して発現および／またはＣＤ１０５の過剰発現の同定を含むことを示す。いくつかの実施形態において、その方法は、細胞上でＣＤ１０５と特異的に結合する完全ヒト抗体複合体を患者に投与することを含む。その抗体複合体は、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体および標識を含む。その方法は、患者における標識の存在を観察することをさらに含む。比較的多い標識の量は、疾病の比較的高い危険性を示し、比較的低い標識の量は、疾病の比較的低い危険性を示す。一実施形態において、標識は緑色蛍光タンパク質である。
【０１１０】
本発明は、患者試料におけるＣＤ１０５の濃度をアッセイし、患者からの生体試料と本明細書に開示される抗体とを接触させることを含み、かかる試料におけるかかる抗体およびＣＤ１０５の間の結合度を検出するための方法をさらに提供する。さらに特定の実施形態において、その生体試料は血液、血漿、または血清である。
【０１１１】
本発明の別の実施形態は、本明細書に開示される抗体と血清または細胞が接触させることによって細胞におけるＣＤ１０５の発現と関連する状態を診断し、ＣＤ１０５の存在を検出するための方法を含む。一実施形態において、その状態は、腫瘍性疾患を含むがこれに限定されない、増殖性、血管新生、細胞粘着、または浸潤関連の疾病であることができる。
【０１１２】
別の実施形態において、本発明は、ＣＤ１０５関連の疾病を検査するために、哺乳類の組織、細胞、または体液におけるＣＤ１０５を検出するためのアッセイキットを含む。そのキットは、本明細書に開示される抗体および存在する場合、ＣＤ１０５との抗体の反応を示すための手段を含む。一実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。一実施形態において、ＣＤ１０５と結合する抗体は、標識される。別の実施形態において、抗体は非標識一次抗体であり、キットは一次抗体を検出するための手段をさらに含む。一実施形態において、その検出するための手段は、抗免疫グロブリンである標識二次抗体を含む。その抗体は、蛍光色素、酵素、放射性核種、および放射線不透過物質からなる群から選択されるマーカーで標識され得る。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される標的結合剤または抗体は、補体に結合し補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するそれらの能力を強化するために修飾され得る。他の実施形態において、標的結合剤または抗体は、エフェクター細胞を活性化し抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するそれらの能力を強化するために修飾され得る。さらに他の実施形態において、本明細書に開示される標的結合剤または抗体は、エフェクター細胞を活性化し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するそれらの能力を強化するため、および補体に結合し補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するそれらの能力を強化するために、修飾され得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される標的結合剤または抗体は、補体に結合し補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するそれらの能力を低減するために修飾され得る。他の実施形態において、標的結合剤または抗体は、エフェクター細胞を活性化し抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するそれらの能力を低減するために修飾され得る。さらに他の実施形態において、本明細書に開示される標的結合剤または抗体は、エフェクター細胞を活性化し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するそれらの能力を低減するため、および補体に結合し補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するそれらの能力を低減するために、修飾され得る。
【０１１５】
特定の実施形態において、本明細書に開示される標的結合剤または抗体、および本発明の組成物の半減期は、少なくとも約４〜７日である。特定の実施形態において、本明細書に開示される標的結合剤または抗体および本発明の組成物の平均半減期は、少なくとも約２〜５日、３〜６日、４〜７日、５〜８日、６〜９日、７〜１０日、８〜１１日、８〜１２、９〜１３、１０〜１４、１１〜１５、１２〜１６、１３〜１７、１４〜１８、１５〜１９、または１６〜２０日である。他の実施形態において、本明細書に開示される標的結合剤または抗体、および本発明の組成物の平均半減期は、少なくとも約１７〜２１日、１８〜２２日、１９〜２３日、２０〜２４日、２１〜２５日、２２〜２６日、２３〜２７日、２４〜２８日、２５〜２９日、または２６〜３０日である。さらなる実施形態において、本明細書に開示される標的結合剤または抗体、および本発明の組成物の半減期は、約５０日までであることができる。特定の実施形態において、抗体および本発明の組成物の半減期は、当業者に知られている方法で延長され得る。かかる延長は、順に抗体組成物の投薬の量および／または頻度を低減する。改善されたインビボ半減期を含む抗体およびそれを調合する方法は、米国特許第６，２７７，３７５号、および国際公開第ＷＯ９８／２３２８９号および第ＷＯ９７／３４６１号に開示される。
【０１１６】
別の実施形態において、本発明は容器を含む製品を提供する。その容器は、本明細書に開示される標的結合剤または抗体を含有する組成物、およびＣＤ１０５の発現または過剰発現を特徴とする疾病を含むがこれに限定されない、細胞粘着、浸潤、血管形成、および／または増殖関連の疾病を治療するために使用することができることを示す添付文書またはラベルを含む。
【０１１７】
他の実施形態において、本発明は、本明細書に開示される標的結合剤または抗体を含有する組成物、および治療を必要とする対象に組成物を投与する使用説明書を含むキットを提供する。
【０１１８】
本発明は、変異Ｆｃ領域を含むタンパク質の形成を提供する。すなわち、非自然発生的Ｆｃ領域、例えば１つ以上の非自然発生的アミノ酸残基を含むＦｃ領域である。また、本発明の変異Ｆｃ領域によって包含されるものは、アミノ酸欠失、添加、および／または修飾を含むＦｃ領域である。
【０１１９】
Ｆｃ領域を含むタンパク質の血清半減期は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合親和性を増加させることによって増加することができる。一実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子に比べて血清半減期が改善している。
【０１２０】
別の実施形態において、本発明はＦｃ変異体を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３９、３３０、および３３２からなる群から選択される１つ以上の位置おいて、少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明はＦｃ変異体を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅからなる群から選択される、少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。任意に、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付けられた２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される、１つ以上の位置において追加の非自然発生的アミノ酸をさらに含むことができる。特定の実施形態において、本発明はＦｃ変異体を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸、およびＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅからなる群から選択される１つ以上の位置において、少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。
【０１２１】
別の実施形態において、本発明はＦｃ変異体を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３４、２３５、および３３１からなる群から選択される１つ以上の位置おいて、少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明はＦｃ変異体を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３４、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。さらに特定の実施形態において、本発明のＦｃ変異体は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付けられた２３４Ｆ、２３５Ｆ、および３３１Ｓの非自然発生的アミノ酸残基を含む。別の特定の実施形態において、本発明のＦｃ変異体は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付けられた２３４Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓの非自然発生的アミノ酸残基を含む。任意に、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付けられた２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される、１つ以上の位置において追加の非自然発生的アミノ酸をさらに含むことができる。特定の実施形態において、本発明はＦｃ変異体を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸、およびＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅからなる群から選択される１つ以上の位置において、少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。
【０１２２】
別の実施形態において、本発明はＦｃ変異タンパク質製剤を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３９、３３０、および３３２からなる群から選択された１つ以上の位置おいて、少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明はＦｃ変異タンパク質製剤を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。任意に、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付けられた２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される、１つ以上の位置において追加の非自然発生的アミノ酸をさらに含むことができる。特定の実施形態において、本発明はＦｃ変異タンパク質製剤を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸、およびＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅからなる群から選択される１つ以上の位置における少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。
【０１２３】
別の実施形態において、本発明はＦｃ変異タンパク質製剤を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３４、２３５、および３３１からなる群から選択される１つ以上の位置において、少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明はＦｃ変異タンパク質製剤を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。任意に、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付けられた２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される、１つ以上の位置において追加の非自然発生的アミノ酸をさらに含むことができる。特定の実施形態において、本発明はＦｃ変異タンパク質製剤を提供し、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸、およびＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号づけされた２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅからなる群から選択される１つ以上の位置において、少なくとも１つの非自然発生的アミノ酸を含む。
【０１２４】
非自然発生的Ｆｃ領域を生成する方法は、当業者に知られている。例えば、アミノ酸置換および／または欠失は、部位特異的な変異原性（Ｋｕｎｋｅｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２（１９８５））、ＰＣＲ変異原性（Ｈｉｇｕｃｈｉ，ｉｎ“ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ｐｐ．１７７−１８３（１９９０））、およびカセット変異導入（Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，遺伝子  ３４：３１５−３２３（１９８５））を含むがこれに限定されない変異原性の方法によって生成され得る。好ましくは、部位特異的な変異原性は、重複伸長ＰＣＲ方法により実施される（Ｈｉｇｕｃｈｉ，ｉｎ“ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．６１−７０（１９８９））。重複伸長ＰＣＲの技術（Ｈｉｇｕｃｈｉ，ｉｂｉｄ．）は、任意の所望の突然変異を標的配列（出発ＤＮＡ）に導入するためにも使用され得る。例えば、重複伸長法におけるＰＣＲの第１回目は、２つのＰＣＲセグメント（セグメントＡおよびＢ）を産出する、外部プライマー（プライマー１）および内部変異原性プライマー（プライマー３）を含む、および別々に第２の外部プライマー（プライマー４）および内部プライマー（プライマー２）を含む標的配列を増幅することを含む。その内部変異原性プライマー（プライマー３）は、所望の突然変異を特定する標的配列に対するミスマッチを含有するように設計されている。ＰＣＲの第２回目において、ＰＣＲの第１回目の生成物（セグメントＡおよびＢ）は、２つの外部プライマー（プライマー１および４）を使用してＰＣＲによって増幅される。結果として生じた全長ＰＣＲのセグメント（セグメントＣ）は、制限酵素で消化され、結果として生じた断片は、適切なベクターにクローン化される。変異原性の第１段階として、出発ＤＮＡ（例えば、Ｆｃ融合タンパク質、抗体または単にＦｃ領域をコードする）は、変異原性ベクターに操作可能にクローン化される。プライマーは、所望のアミノ酸置換を反映するように設計される。変異Ｆｃ領域の生成に有用な他の方法は、当業者に知られている（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、第５，８８５，５７３号、第５，６７７，４２５号、第６，１６５，７４５号、第６，２７７，３７５号、第５，８６９，０４６号、第６，１２１，０２２号、第５，６２４，８２１号、第５，６４８，２６０号、第６，５２８，６２４号、第６，１９４，５５１号、第６，７３７，０５６号、第６，８２１，５０５号、第６，２７７，３７５号、米国特許公開第２００４／０００２５８７号およびＰＣＴ公開第ＷＯ９４／２９３５１号、第ＷＯ９９／５８５７２号、第ＷＯ００／４２０７２号、第ＷＯ０２／０６０９１９号、第ＷＯ０４／０２９２０７号、第ＷＯ０４／０９９２４９号、第ＷＯ０４／０６３３５１を参照）。
【０１２５】
本発明のいくつかの実施形態において、本明細書において提供される抗体の糖鎖付加パターンは、ＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を増強するように修飾される。Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）ＪＢＣ．２７７：２６７３３、Ｓｈｉｎｋａｗａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）ＪＢＣ．２７８：３４６６、およびＯｋａｚａｋｉ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３３６：１２３９を参照。いくつかの実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、操作された糖型、すなわちＦｃ領域を含む分子に、共有結合している炭水化物組成を１つ以上含む。操作された糖型は、エフェクター機能の増強または低減を含むがこれに限定されない、様々な目的で使用することができる。操作された糖型は、当業者に知られている任意の方法、例えば操作されたまたは変異発現株を使用することによる、１つ以上の酵素、例えばＤＩ  Ｎアセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴＩ１１）との同時発現によって、各種生物または各種生物からの細胞株におけるＦｃ領域を含む分子を発現することによって、またはＦｃ領域を含む分子が発現された後に炭水化物を修飾することによって、生成され得る。操作された糖型を生成する方法は、当業者に知られており、Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ，１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７：１７６−１８０、Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１７  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ７４：２８８−２９４、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ，２００２，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３−２６７４０、Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６−３４７３）米国特許第６，６０２，６８４号、米国第１０／２７７，３７０号、米国第１０／１１３，９２９号、ＰＣＴ第ＷＯ００／６１７３９Ａ１号、ＰＣＴ第ＷＯ０１／２９２２４６Ａ１号、ＰＣＴ第ＷＯ０２／３１１１４０Ａ１号、ＰＣＴ第ＷＯ０２／３０９５４Ａ１号、Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（登録商標）技術（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＧｌｙｃｏＭＡｂ（登録商標）糖鎖付加技術工学（ＧＬＹＣＡＲＴ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ、Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に記載されるものを含むがこれに限定されない。例えば、第ＷＯ０００６１７３９号、第ＥＡ０１２２９１２５号、米国第２００３０１１５６１４号、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，ＪＭＢ，３３６：１２３９−４９を参照。
【０１２６】
したがって、一実施形態において、本発明の抗ＣＤ１０５抗体のＦｃ領域は、アミノ酸残基の変化した糖鎖付加を含む。別の実施形態において、アミノ酸残基の変化した糖鎖付加は、エフェクター機能を低下させる。別の実施形態において、アミノ酸残基の変化した糖鎖付加は、エフェクター機能を増加させる。特定の実施形態において、Ｆｃ領域は低減したフコシル化を有する。別の実施形態において、Ｆｃ領域はアフコシル化される（例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２６８６７号）。一態様において、増加したエフェクター機能、特に、宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、コウキクサ）において生成されるＡＤＣＣを含むこれらの抗体は、親細胞による抗体の産出と比較して１００倍以上高いＡＤＣＣを含む非常に脱フコシル化された抗体を産出するために設計された（Ｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ８８：９０１−９０８、Ｃｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２４：１５９１−７）。
【０１２７】
Ｆｃ領域の糖鎖付加は、エフェクター機能を増加または減少するために修飾することができることも当業者に知られている（例えば、Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ，１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７：１７６−１８０、Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ７４：２８８−２９４、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ，２００２，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３−２６７４０、Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６−３４７３）米国特許第６，６０２，６８４号、米国第１０／２７７，３７０号、米国第１０／１１３，９２９号、ＰＣＴ第ＷＯ００／６１７３９Ａ１号、ＰＣＴ第ＷＯ０１／２９２２４６Ａ１号、ＰＣＴ第ＷＯ０２／３１１１４０Ａ１号、ＰＣＴ第ＷＯ０２／３０９５４Ａ１号、Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（登録商標）技術（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＧｌｙｃｏＭＡｂ（登録商標）糖鎖付加技術工学（ＧＬＹＣＡＲＴ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。したがって、一実施形態において、本発明の抗体のＦｃ領域は、アミノ酸残基の変化した糖鎖付加を含む。別の実施形態において、アミノ酸残基の変化した糖鎖付加は、エフェクター機能を低下させる。別の実施形態において、アミノ酸残基の変化した糖鎖付加は、エフェクター機能を増加させる。特定の実施形態において、Ｆｃ領域は低減したフコシル化を有する。別の実施形態において、Ｆｃ領域はアフコシル化される（例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２６８６７号）。
【図面の簡単な説明】
【０１２８】
【図１】抗体４．３７および４．１２０のＨＵＶＥＣ増殖アッセイの結果を示す棒グラフを描写する。
【図２】抗体４Ｄ４、６Ａ６、６Ｂ１、６Ｂ１０、１１Ｈ２、９Ｈ１０、３Ｃ１、および１０Ｃ９のＨＵＶＥＣ増殖アッセイの結果を示す棒グラフを描写する。
【図３】血管の長さ（ｍｍ）および分岐数に対する抗体４Ｄ４、６Ｂ１、６Ｂ１０、および１０Ｃ９の効果を示す棒グラフを描写する。
【図４】ビニング研究の結果を示す棒グラフを描写する。具体的には、ＨＵＶＥＣ細胞にＳＮ６が結合することを妨害するための、抗体４Ｄ４、６Ａ６、６Ｂ１、６Ｂ１０、１１Ｈ２、９Ｈ１０、３Ｃ１、４．３７、４．１２０、および１０Ｃ９の能力を示す。
【図５】抗体４．１２０、４Ｄ４、６Ｂ１０、および４．３７のヘモグロビン（ｈｂ）量を測定するＣｏｌｏ２０５マトリゲルプラグアッセイの結果を示す棒グラフを描写する。
【図６】抗体４．１２０、４Ｄ４、６Ｂ１０、および４．３７のＣＤ３１陽性染色を測定するＣｏｌｏ２０５マトリゲルプラグアッセイからの結果を示す棒グラフを描写する。
【図７】抗体４Ｄ４、６Ａ６、６Ｂ１、６Ｂ１０、１１Ｈ２、９Ｈ１０、３Ｃ１、４．３７、４．１２０、および１０Ｃ９のＡＤＣＣ活性を示す棒グラフを描写する。
【図８】抗体４．１２０のＣＤＣ活性を示す棒グラフを描写する。
【図９】抗体４Ｄ４、６Ａ６、６Ｂ１、６Ｂ１０、１１Ｈ２、９Ｈ１０、３Ｃ１、４．３７、４．１２０、および１０Ｃ９の内面化の結果を示す棒グラフを描写する。
【発明を実施するための形態】
【０１２９】
本発明の実施形態は、例えばＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する抗体等の一組の新規ＣＤ１０５遮断分子に関する。かかる分子は、単剤あるいは他の結合抗体／薬剤と組み合わせて使用され得る。それらは、任意の標準または新規の抗癌剤と組み合わせて使用することもできる。
【０１３０】
本発明の実施形態は、ＣＤ１０５に結合する標的結合剤に関する。いくつかの実施形態において、標的結合剤は、ＣＤ１０５に結合し、ＴＧＦ−β等のＣＤ１０５リガンドとその受容体、ＣＤ１０５との結合を阻害する。いくつかの実施形態において、この結合はＣＤ１０５関連効果のうち１つ以上の態様を中和、遮断、阻害、抑止、または妨げることができる。一実施形態において、標的結合剤はモノクローナル抗体、またはその結合断片である。かかるモノクローナル抗体は、本明細書において抗ＣＤ１０５抗体と称される。
【０１３１】
本発明の他の実施形態は、完全ヒト抗ＣＤ１０５抗体、および治療上有益である抗体調製を含む。一実施形態において、本発明の抗ＣＤ１０５抗体の調合物は、ＣＤ１０５の強い結合親和性、内皮細胞アポトーシスを促進するまたは内皮細胞の増殖を阻害する、細胞骨格形成を調節する、管形成を阻害する能力、およびＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を通して内皮細胞毒素に誘導する能力を含む、所望の治療特性を有する。
【０１３２】
さらに、本発明の実施形態は疾病を治療するためにこれらの抗体を使用する方法を含む。本発明の抗ＣＤ１０５抗体は、健康な組織のＣＤ１０５媒介された腫瘍形成および腫瘍浸潤を防止するために有益である。さらに、ＣＤ１０５抗体は、ＡＭＤ等の眼疾病、関節リウマチ等の炎症性疾患、および循環器疾患および敗血症ならびに腫瘍性疾患等の、血管形成と関連する疾病を治療するために有益であり得る。転移性癌、リンパ管腫瘍、および血液癌を含む、悪性腫瘍の任意のタイプを特徴とする任意の疾病を、この阻害機構によって治療することもできる。ヒトにおける代表的な癌は、膀胱腫瘍、腎細胞癌、乳房の腫瘍、前立腺腫瘍、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨肉腫、脳およびＣＮＳ癌（例えば、神経膠腫腫瘍）、子宮頸癌、絨毛腫、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌、上皮性内腫瘍、腎癌、喉頭癌、白血病、肝癌、肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、唇、舌、口、および咽頭）、卵巣癌、膵癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、腎癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿系の癌、ならびに他の細胞腫および肉腫を含む。犬、猫、および他のペットにおいて一般に診断される悪性疾患は、リンパ肉腫、骨肉腫、乳房腫瘍、マスト細胞腫、脳腫瘍、黒色腫、腺扁平上皮癌、カルチノイド肺腫瘍、気管支腺腫瘍、細気管支肺胞上皮癌、線維腫、粘液軟骨腫、肺肉腫、神経肉腫、骨腫、乳頭腫、網膜芽細胞腫、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、バーキットリンパ腫、小膠細胞腫、神経芽細胞腫、骨巨細胞腫、口腔腫瘍、線維肉腫、骨肉腫および横紋筋肉腫、性器扁平上皮癌、伝染性病腫瘍、精巣腫瘍、セミノーマ、セルトリ細胞腫瘍、血管周囲細胞腫、組織球腫、緑色腫（例えば顆粒球性肉腫）、角膜乳頭腫、角膜乳頭腫扁平上皮癌、血管肉腫、胸膜中皮腫、基底細胞腫、胸腺腫、胃腫瘍、副腎癌、口腔乳頭腫、血管内皮腫および嚢胞腺腫、濾胞性リンパ腫、腸リンパ肉腫、線維肉腫および肺扁平上皮癌を含むがこれに限定されない。フェレット等のげっ歯類において、代表的な癌は、インスリノーマ、リンパ腫、肉腫、神経腫、膵島細胞腫瘍、胃ＭＡＬＴリンパ腫、および胃腺癌を含む。農業家畜が患う新生物は、（牛における）白血病、血管周囲細胞腫および牛眼新生物、（馬における）包皮線維肉腫、潰瘍性扁平上皮癌、包皮癌、結合組織新生物およびマスト細胞腫、（豚における）肝細胞癌、（羊における）リンパ腫および肺腺腫症、（鳥類における）肺肉腫、リンパ腫、ラウス肉腫、細網内皮症、線維肉腫、腎芽細胞腫、Ｂ細胞リンパ腫およびリンパ性白血病、（魚における）網膜芽細胞腫、肝新生物、リンパ肉腫（リンパ芽球性リンパ腫）、形質細胞性白血病および浮袋肉腫、細菌ヒツジ偽結核菌に起因する羊およびヤギの慢性的な疾患、感染性疾患、伝染病、およびヤーグジークテに起因する羊の伝染性肺癌、乾酪性リンパ節炎（ＣＬＡ）を含む。
【０１３３】
本発明の他の実施形態は、生体試料におけるＣＤ１０５量を特に測定するための診断検査を含む。アッセイキットは、本明細書に開示される標的結合剤または抗体を、かかる抗体を検出するために必要な標識とともに含むことができる。これらの診断検査は、細胞粘着、浸潤、血管形成、または腫瘍性疾患を含むがこれに限定されない増殖に関係した疾病の検査をするために有益である。
【０１３４】
本発明の別の態様は、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬であり、拮抗薬はＣＤ１０５と結合する。一実施形態において、拮抗薬は抗体等の標的結合剤である。拮抗薬は、本明細書に記載される抗体、例えば抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６から選択され得る。
【０１３５】
一実施形態において、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬は、ＣＤ１０５に結合することができ、その結果ＣＤ１０５受容体にリガンド結合することを阻害するまたは抑圧して、それにより腫瘍の血管形成および／または細胞増殖を阻害する。
【０１３６】
一実施形態は、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６と同じ（単数または複数の）エピトープと結合する標的結合剤である。
【０１３７】
一実施形態は、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６と同じ（単数または複数の）エピトープと結合する抗体である。
【０１３８】
一実施形態は、本明細書に上述される標的結合剤を産出するハイブリドーマである。一実施形態において、本明細書に上述される抗体の軽鎖および／または重鎖を産出するハイブリドーマである。一実施形態において、ハイブリドーマは、完全ヒトモノクローナル抗体の軽鎖および／または重鎖の産出をする。別の実施形態において、ハイブリドーマは、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６の軽鎖および／または重鎖を産出する。あるいは、ハイブリドーマは、完全ヒトモノクローナル抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６と同じ（単数または複数の）エピトープと結合する抗体を産出することができる。
【０１３９】
別の実施形態は本明細書に上述の標的結合剤をコードする核酸分子である。一実施形態において、本明細書に上述される抗体の軽鎖または重鎖をコードする核酸分子である。一実施形態において、核酸分子は完全ヒトモノクローナル抗体の軽鎖または重鎖をコードする。さらに別の実施形態は、抗体４．１２０、９Ｈ１０、１０Ｃ９、４Ｄ４、１１Ｈ２、６Ｂ１、４．３７、６Ｂ１０、３Ｃ１、および６Ａ６から選択される完全ヒトモノクローナル抗体の軽鎖または重鎖をコードする核酸分子である。
【０１４０】
本発明の別の実施形態は、本明細書に上述される核酸分子または分子を含むベクターであり、ベクターは本明細書に上述定義される標的結合剤をコードする。本発明の一実施形態において、本明細書に上述される核酸分子または分子を含むベクターであり、ベクターは本明細書に上述定義される抗体の軽鎖および／または重鎖をコードする。
【０１４１】
本発明のさらに別の実施形態は、本明細書に上述されるベクターを含む宿主細胞である。あるいは、宿主細胞は２つ以上のベクターを含むことができる。
【０１４２】
さらに、本発明の一実施形態は、核酸分子を発現し、標的結合剤を産出する条件の下、宿主細胞を培養し、続いて標的結合剤を回収することによって本発明の標的結合剤を産出する方法である。本発明の一実施形態には、核酸分子を発現して抗体を産出する条件下で、宿主細胞を培養し、その後に、抗体を回収することによって本発明の抗体を産出する方法が含まれる。
【０１４３】
一実施形態において、本発明は、本明細書に上述の標的結合剤をコードする少なくとも１つの核酸分子で少なくとも１つの宿主細胞をトランスフェクトし、宿主細胞において核酸分子を発現し、標的結合剤を単離することによって標的結合剤を作る方法を含む。一実施形態において、本発明は、本明細書に上述の抗体をコードする少なくとも１つの核酸分子で少なくとも１つの宿主細胞をトランスフェクトし、宿主細胞において核酸分子を発現して、抗体を単離することによって抗体を作る方法を含む。
【０１４４】
別の態様によると、本発明は本明細書に記載される拮抗薬を投与することによってＣＤ１０５の生物活性を拮抗する方法を含む。その方法は、血管形成の治療が必要な動物および／または増殖を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。
【０１４５】
本発明の別の態様は、本明細書に上述の標的結合剤を投与することによってＣＤ１０５の生物活性を拮抗する方法を含む。その方法は、血管形成および／または増殖の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。
【０１４６】
本発明の別の態様は、本明細書に上述の抗体を投与することによってＣＤ１０５の生物活性を拮抗する方法を含む。その方法は、血管形成および／または増殖の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。
【０１４７】
別の態様によると、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬の治療上有効な量を投与することによって、動物における血管形成および／または増殖を治療する方法が提供されている。その方法は、血管形成および／または増殖の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。
【０１４８】
別の態様によると、ＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤の治療上有効な量を投与することによって動物における血管形成および／または増殖を治療する方法が提供されている。その方法は、血管形成および／または増殖の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。標的結合剤は、単独で投与され得る、または追加の抗体もしくは化学療法剤もしくは放射線療法と組み合わせて投与され得る。
【０１４９】
別の態様によると、ＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体の治療上有効な量を投与することによって動物における血管形成および／または増殖を治療する方法が提供されている。その方法は、血管形成および／または増殖の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。抗体は、単独で投与され得る、または追加の抗体もしくは化学療法剤もしくは放射線療法と組み合わせて投与され得る。
【０１５０】
別の態様によると、ＣＤ１０５の生物活性を拮抗する拮抗薬の治療上有効な量を投与することによって動物における癌を治療する方法が提供されている。その方法は、癌の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性を拮抗する拮抗薬の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。拮抗薬は、単独で投与され得る、または追加の抗体もしくは化学療法剤もしくは放射線療法と組み合わせて投与され得る。
【０１５１】
別の態様によると、ＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤の治療上有効な量を投与することによって動物における癌を治療する方法が提供されている。その方法は、癌の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。標的結合剤は、単独で投与され得る、または追加の抗体もしくは化学療法剤もしくは放射線療法と組み合わせて投与され得る。
【０１５２】
別の態様によると、ＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体の治療上有効な量を投与することによって動物における癌を治療する方法が提供されている。その方法は、癌の治療が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。抗体は、単独で投与され得る、または追加の抗体もしくは化学療法剤もしくは放射線療法と組み合わせて投与され得る。
【０１５３】
別の態様によると、ＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体の治療上有効な量を投与することによって動物における腫瘍細胞、増殖、接着、浸潤、および／または血管形成を低減するまたは阻害する方法が提供されている。その方法は、増殖、細胞粘着、浸潤および／または血管形成の低減または阻害が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。抗体は、単独で投与され得る、または追加の抗体もしくは化学療法剤もしくは放射線療法と組み合わせて投与され得る。
【０１５４】
別の態様によると、ＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体の治療上有効な量を投与することによって動物における腫瘍成長および／または転移を低減する方法が提供されている。その方法は、腫瘍成長および／または転移の低減が必要な動物を選択すること、およびＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体の治療上有効な投与量をその動物に投与することを含むことができる。抗体は、単独で投与され得る、または追加の抗体もしくは化学療法剤もしくは放射線療法と組み合わせて投与され得る。
【０１５５】
本発明の別の態様によると、腫瘍の血管形成および／または細胞増殖の治療するための薬物の製造のためのＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬の使用が提供されている。一実施形態において、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬は、本発明の標的結合剤である。一実施形態において、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬は、本発明の抗体である。
【０１５６】
本発明の別の態様によると、腫瘍の血管形成および／または細胞増殖の治療するための薬物の使用のためのＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬が提供されている。一実施形態において、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬は、本発明の標的結合剤である。一実施形態において、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬は、本発明の抗体である。
【０１５７】
本発明の別の態様によると、血管形成および／または増殖の治療のための薬物の製造のためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤または抗体の使用が提供されている。
【０１５８】
本発明の別の態様によると、血管形成および／または増殖の治療のための薬物として使用するためにＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤または抗体の使用が提供されている。
【０１５９】
本発明の別の態様によると、疾患関連の血管形成および／または増殖の治療のための薬物の製造のためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤または抗体の使用が提供されている。
【０１６０】
本発明の別の態様によると、疾患関連の血管形成および／または細胞増殖の治療をするための薬物を使用するためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体が提供されている。
【０１６１】
本発明の別の態様によると、哺乳動物における癌の治療をするための薬物の製造をするためのＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬の使用が提供されている。一実施形態において、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬は、本発明の標的結合剤である。一実施形態において、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬は、本発明の抗体である。
【０１６２】
本発明の別の態様によると、哺乳動物における癌の治療をするための薬物の使用のためのＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬が提供されている。一実施形態において、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬は、本発明の標的結合剤である。一実施形態において、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬は、本発明の抗体である。
【０１６３】
本発明の別の態様によると、哺乳動物における癌の治療をするための薬物の製造をするためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤の使用が提供されている。
【０１６４】
本発明の別の態様によると、哺乳動物における癌の治療をするための薬物の使用のためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤が提供されている。
【０１６５】
本発明の別の態様によると、哺乳動物における癌の治療をするための薬物の製造をするためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体の使用が提供されている。
【０１６６】
本発明の別の態様によると、哺乳動物における癌の治療をするための薬物の使用のためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する抗体が提供されている。
【０１６７】
本発明の別の態様によると、動物における増殖および／または血管形成の低減または阻害のための薬物の製造のためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤または抗体の使用が提供されている。
【０１６８】
本発明の別の態様によると、動物における増殖および／または血管形成の低減または阻害のための薬物の製造のためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤または抗体の使用が提供されている。
【０１６９】
本発明の別の態様によると、動物における腫瘍成長および／または転移を低減するための薬物の製造のためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤または抗体の使用が提供されている。
【０１７０】
本発明の別の態様によると、動物における腫瘍成長および／または転移を低減するための薬物の使用のためのＣＤ１０５の生物活性を拮抗する標的結合剤または抗体が提供されている。
【０１７１】
一実施形態において、本発明は、ＣＤ１０５受容体シグナル伝達に単独で、または部分的に依存している腫瘍を有する患者においてＣＤ１０５を拮抗するために使用することに特に適している。
【０１７２】
本発明の別の態様によると、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物が提供されている。一実施形態において、拮抗薬は抗体を含む。本発明の別の態様によると、ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物が提供されている。一実施形態において、拮抗薬は抗体を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ１０５と特異的に結合する抗体の以下の投与後、血液から余分な循環抗体を取り除くために、洗浄剤が投与される。
【０１７４】
抗ＣＤ１０５抗体は患者試料におけるＣＤ１０５の検出に有用である、したがって、本明細書に記載される病状の診断に有用である。さらに、（以下の実施例に明示する）ＣＤ１０５媒介されるシグナル伝達活性を大幅に阻害する能力に基づき、抗ＣＤ１０５抗体はＣＤ１０５発現に起因する症状および状態の治療において治療効果を有する。具体的な実施形態において、本明細書における抗体および方法はＣＤ１０５に誘導された血管形成、増殖および／または細胞内シグナル伝達に起因する症状の治療に関する。さらなる実施形態は、黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、肝細胞（肝臓）癌、甲状腺腫瘍胃癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、肺癌、神経膠芽腫、子宮内膜癌、腎癌、結腸癌、および膵癌等の、腫瘍性疾患を含む血管形成および／または増殖に関係する疾病を治療するために、本明細書に記載される抗体および方法を使用することを含む。抗体は、関節炎、アテローム性動脈硬化、および血管形成を含む疾病における細胞粘着および／または浸潤を治療する場合に有用であり得る。
【０１７５】
本発明の別の実施形態は、疾病に関係する細胞粘着、浸潤、血管形成、または増殖の検査をするため、哺乳類の組織、細胞、または体液におけるＣＤ１０５の検出をするためのアッセイキットを含む。そのキットは、ＣＤ１０５と結合する標的結合剤および存在する場合ＣＤ１０５と標的結合剤の反応を示す手段を含む。一実施形態において、ＣＤ１０５と結合する標的結合剤は標識される。別の実施形態において、標的結合剤は非標識であり、キットは標的結合剤を検出するための手段をさらに含む。好ましくは、標的結合剤は、蛍光色素、酵素、放射性核種、および放射線不透過性材料からなる群から選択されるマーカーで標識される。
【０１７６】
本発明の別の実施形態は、疾病に関係する細胞粘着、浸潤、血管形成、または増殖の検査をするため、哺乳類の組織、細胞、または体液におけるＣＤ１０５の検出をするためのアッセイキットを含む。そのキットは、ＣＤ１０５と結合する抗体および存在する場合、ＣＤ１０５との抗体の反応を示すための手段を含む。抗体は、モノクローナル抗体であり得る。一実施形態において、ＣＤ１０５と結合する抗体は、標識される。別の実施形態において、抗体は非標識一次抗体であり、キットは一次抗体を検出するための手段をさらに含む。一実施形態において、その手段は、抗免疫グロブリンである標識二次抗体を含む。好ましくは、その抗体は、蛍光色素、酵素、放射性核種、および放射線不透過性材料からなる群から選択されるマーカーで標識される。
【０１７７】
本明細書に開示される抗体について、さらなる実施形態、性質等は、以下に追加詳細を提供する。
【０１７８】
配列表
本発明の実施形態は以下の表１に記載される特定の抗体を含む。この表は、各抗ＣＤ１０５抗体の識別番号を、それぞれの対応する重鎖および軽鎖遺伝子およびポリペプチドの可変ドメインの配列番号とともに報告する。各抗体は識別番号を与えられている。
【表１】
2012502649.tif 000002
2012502649.tif 000003
【０１７９】
表２は、抗体重鎖領域とそれらの同族生殖系列重鎖領域、および抗体軽鎖領域とそれらの同族生殖系列軽鎖領域を比較する表である。
【表２】
2012502649.tif 000004
2012502649.tif 000005
2012502649.tif 000006
2012502649.tif 000007
2012502649.tif 000008
2012502649.tif 000009
【０１８０】
定義
別に定義されていない限り、本明細書に使用されている科学および技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有するものとする。さらに、内容によって特に必要とされていない限り、単数の用語は複数を含むものとし、複数の用語は単数を含むものとする。概して、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、およびタンパク質およびオリゴまたはポリヌクレオチド化学、およびハイブリダイゼーションに関連して、および、それらの手法で利用される用語は、当業者によく知られており一般的に使用される。
【０１８１】
標準的な技術は、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、および組織培養および形質転換（例えば、電気穿孔法、リポフェクション）に対して使用される。酵素反応および精製法は、製造者の仕様によって、または当該技術において一般的に達成されるか、または本明細書に記載されるように実施される。前述の手法および手順は、一般的に当業者によく知られている従来の方法によって、および本明細書に引用され論じられる様々な一般的なおよびより特定な指示において記載されるとおりに実施される。例えば本明細書に参照により組み込まれている、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１））を参照。本明細書に記載される分析化学、有機合成化学、および医薬品および薬化学に関して、および、その検査法および手法で使用される用語は、当業者によく知られており一般的に使用される。化学合成、化学分析、医薬品、製剤、および配達、および患者の治療に対して標準技術が使用される。
【０１８２】
本開示に従って利用される際、以下の用語は、別に示されない限り以下の意味を有することを理解すべきである。
【０１８３】
拮抗薬または阻害剤は、ポリペプチド、核酸、炭水化物、脂質、低分子量化合物、オリゴヌクレオチド、オリゴペプチド、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、アンチセンス、組換えタンパク質、抗体もしくはその断片、または複合体もしくはその融合タンパク質であることができる。ＲＮＡｉの概説については、Ｍｉｌｈａｖｅｔ  Ｏ，Ｇａｒｙ  ＤＳ，Ｍａｔｔｓｏｎ  ＭＰ．（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ．２００３  Ｄｅｃ；５５（４）：６２９−４８．Ｒｅｖｉｅｗ）およびアンチセンスを参照（Ｏｐａｌｉｎｓｋａ  ＪＢ，Ｇｅｗｉｒｔｚ  ＡＭ．を参照（Ｓｃｉ  ＳＴＫＥ．２００３  Ｏｃｔ  ２８；２００３（２０６）：ｐｅ４７．）
化合物は約２０００ダルトン未満の分子量を含む低分子量化合物のいずれをも指す。
【０１８４】
「ＣＤ１０５」という用語は、ＣＤ１０５抗原の別名でもしられるＣＤ１０５タンパク質、ＥＮＤ、エンドグリン、ＦＬＪ４１７４４、ＨＨＴ１、ＯＲＷ、およびＯＲＷ１である分子のことを指す。
【０１８５】
「中和する」または「阻害する」という用語は、抗体等の標的結合剤に言及する場合、標的抗原の活性を排除する、低減する、またはかなり低減するための抗体の能力に関する。したがって、「中和する」本発明の抗ＣＤ１０５抗体は、ＣＤ１０５の活性を排除するまたは大幅に低減することができる。中和ＣＤ１０５抗体は、例えば、ＣＤ１０５リガンドと例えばＴＧＦ−β等のＣＤ１０５との結合を妨害するために作用することができる。この結合を妨害することによって、ＣＤ１０５シグナル媒介する活性が、大幅にまたは完全に排除される。理想的には、ＣＤ１０５に対する中和抗体は、腫瘍血管形成および／または細胞増殖を阻害する。
【０１８６】
「ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬」は、ＣＤ１０５の活性を排除、低減または大幅に低減することができる。「ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬」は、ＣＤ１０５シグナル伝達を排除、低減または大幅に低減することができる。「ＣＤ１０５の生物活性の拮抗薬」は、腫瘍血管形成および／または細胞増殖を排除または大幅に低減することができる。
【０１８７】
「ＣＤ１０５シグナル伝達の低減」は、本発明の標的結合剤、抗体、または拮抗薬がない場合のシグナル伝達のレベルと比べて、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、ＣＤ１０５シグナル伝達の低減を包含する。
【０１８８】
「最適化した」配列は、非生殖系列の配列を生殖系列の配列に１つ以上の残基において突然変異するように、突然変異した抗体配列（本明細書に記載される抗体の可変重鎖または軽鎖のいずれか）であり、糖鎖付加部位または不対システイン等の配列から構造負担の低減をさらに含むことができる。
【０１８９】
本明細書で使用される「ポリペプチド」という用語は、ポリペプチド配列の天然タンパク、断片、または類似体に言及する、一般用語である。したがって、天然タンパク、断片、および類似体は、ポリペプチド属の種属である。本発明に従う好ましいポリペプチドは、ヒト重鎖免疫グロブリン分子およびヒトκ軽鎖免疫グロブリン分子、ならびに重鎖免疫グロブリン分子とκまたはλ軽鎖免疫グロブリン分子等の軽鎖免疫グロブリン分子を含む組み合わせ、および逆もまた同様に含む組み合わせ、ならびにそれらの断片および類似体によって形成された抗体分子を含む。本発明に従う好ましいポリペプチドは、単にヒト重鎖免疫グロブリン分子またはその断片も含むことができる。
【０１９０】
本明細書で使用され物体に適用される、物体に使用する際、「天然」または「自然発生的な」という用語は、物体を自然界で見つけることができる事実を指す。例えば、自然界における源から単離されることができ、研究室で、またはそれ以外で、人間によって意図的に修飾されていない、生物（ウイルスを含む）において存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は自然発生である。
【０１９１】
本明細書に使用される「操作可能に結合された」という用語は、意図された方法で機能することを可能にする関係にあるように記載された構成要素の位置を指す。例えば、コード配列と「操作可能に結合された」制御配列は、コード配列の発現が制御配列と適合性がある状態の下で実現するような方法で接続される。
【０１９２】
本明細書で参照される「ポリヌクレオチド」という用語は、少なくとも１０塩基長のヌクレオチドのポリマー形態、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドのいずれか、またはいずれかのヌクレオチド種の修飾形態、またはＲＮＡ−ＤＮＡヘテロ２本鎖を意味する。その用語は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖型を含む。
【０１９３】
本明細書で参照される「オリゴヌクレオチド」という用語は、自然発生的および非自然発生的結合によって結合された自然発生し、修飾されたヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは一般的に２００塩基以下の長さを含む、ポリヌクレオチドサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、１０〜６０塩基の長さおよび最も好ましくは１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０塩基の長さである。オリゴヌクレオチドは典型的には、例えばプローブ用に、一本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば遺伝子の突然変異体の構造において使用するために、二本鎖であることができる。オリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれであってもよい。
【０１９４】
本明細書に参照される「自然発生的ヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。本明細書で参照される「修飾ヌクレオチド」という用語は、修飾または置換糖類等を含むヌクレオチドを含む。本明細書に参照される「オリゴヌクレオチド結合」という用語は、ホスホロチオエート、ジチオリン酸、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホロアニラデート、ホスホロアミデート等のオリゴヌクレオチド結合を含む。例えば開示が本明細書に参照によって組み込まれている、ＬａＰｌａｎｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）、Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４）、Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８）、Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１）、Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））、Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第５，１５１，５１０号、Ｕｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０）、を参照。オリゴヌクレオチドは、検出のための標識を必要に応じて含むことができる。
【０１９５】
本明細書に参照される「選択的にハイブリッド形成する」という用語は、検出可能および特異的に結合することを意味する。ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、およびそれらの断片は、大量の非特異的核酸との検出可能な結合を最小限にするハイブリダイゼーションおよび洗浄条件の下、核酸鎖と選択的にハイブリッド形成する。高いストリンジェンシー条件は、当業者に知られていて、本明細書に論じられているように、選択的なハイブリダイゼーション状態を実現するために使用することができる。一般的に、対象のポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、または抗体の断片と核酸配列との間の核酸配列の相同性は、少なくとも８０％になり、より典型的には、好ましくは少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％、および１００％のより高い相同性が好ましい。
【０１９６】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、６Ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）（０．９Ｍ  ＮａＣｌ／９０ｍＭ  Ｎａクエン酸、ｐＨ７．０）において約４５°Ｃでのフィルター結合ＤＮＡとのハイブリダイゼーションの後、０．２Ｘ  ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳにおいて約５０〜６５°Ｃで１つ以上の洗浄が続き、高ストリンジェントな条件は、６Ｘ  ＳＳＣにおいて約４５°Ｃでフィルター結合ＤＮＡとのハイブリダイゼーションの後、０．１Ｘ  ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳにおいて約６０°Ｃで１つ以上の洗浄が続き、または当業者に知られている任意の他のストリンジェントなハイブリダイゼーション状態を含むがこれに限定されない（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．１９８９  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．およびＪｏｈｎ  ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ＮＹ  ａｔ  ｐａｇｅｓ  ６．３．１〜６．３．６および２．１０．３を参照）。２つのアミノ酸配列は、部分的または完全な同一性が配列間に存在する場合、「相同」である。例えば８５％の相同性は、２つの配列が最大限整合するように整列された際に、アミノ酸の８５％が同一であることを意味する。（整合された２つの配列のいずれかにおける）ギャップは、最大限の整合において許可され、５以下のギャップ長は好ましいが、２以下がより好ましい。もう１つの方法としておよび好ましくは、突然変異データ行列および６以上のギャップペナルティでＡＬＩＧＮプログラムを使用して５を超える整列スコア（標準偏差単位において）を有する場合、この用語が本明細書で使用されるように、２つのタンパク質配列（または少なくとも約３０アミノ酸長のタンパク質配列由来のポリペプチド配列）は、相同である。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｐｐ．１０１−１１０（Ｖｏｌｕｍｅ  ５，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（１９７２））およびこのｖｏｌｕｍｅのＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ２，ｐｐ．１−１０を参照。ＡＬＩＧＮプログラムを使用して最適に整列された際、その２つの配列またはその部分が、それらのアミノ酸が５０％以上同一の場合、より好ましくは相同である。２つのオルソロガス配列内に相同性の異なる領域が存在し得ることを理解すべきである。例えば、マウスおよびヒト相同分子種の機能部位は、非機能領域よりも高い相同性を有することができる。
【０１９７】
本明細書に使用される「に対応する」という用語は、ポリヌクレオチド配列が参照ポリヌクレオチド配列のすべてまたは一部と相同である（すなわち、厳密に進化的にではなく、同一である）、またはポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列と同一であることを意味する。
【０１９８】
対照的に、本明細書で使用される「に相補的である」という用語は、相補配列が参照ポリヌクレオチド配列のすべてまたは一部と相同であることを意味する。説明のため、ヌクレオチド配列「ＴＡＴＡＣ」は参照配列「ＴＡＴＡＣ」に対応し、参照配列「ＧＴＡＴＡ」に相補的である。
【０１９９】
「配列同一性」という用語は、比較ウィンドウ上で、２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列が同一である（すなわち、ヌクレオチド単位または残基単位基準で）ことを意味する。「配列同一性の割合（％）」という用語は、比較ウィンドウ上で２つの最適に整列された配列を比較すること、同一核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ、またはＩ）またはアミノ酸残基が両方の配列において発生する位置の数を決定して、整合された位置の数を得ること、比較ウィンドウにおける位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で整合された位置の数を割ること、および結果に１００をかけて、配列同一性の割合（％）を得ることによって計算される。本明細書で使用される「大幅な同一性」は、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の特徴を意味し、少なくとも１８ヌクレオチド（６アミノ酸）位置の比較ウィンドウ上、頻繁に少なくとも２４〜４８ヌクレオチド（８〜１６アミノ酸）位置のウィンドウ上で参照配列と比較して、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸は少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０〜９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含み、配列同一性の割合（％）は、参照配列と比較ウィンドウ上の参照配列の合計で２０％以下の欠失または添加を含むことができる配列を比較することによって計算される。その参照配列は、大きい配列のサブセットであることができる。
【０２００】
本明細書で使用される、２０の典型的にはアミノ酸およびそれらの略称は、従来の使用法に従う。本明細書に参照によって組み込まれるＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  −Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｄ．Ｒ．Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照。２０の通常アミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、α−、α二置換アミノ酸、Ｎアルキルアミノ酸、乳酸、および他の非通常アミノ酸等の非天然アミノ酸も、本発明のポリペプチドに対する適切な成分であることができる。非通常アミノ酸の例は、４ヒドロキシプロリン、γカルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ、Ｎ、Ｎトリメチルリジンε−Ｎアセチルリジン、Ｏリン酸化セリン、Ｎアセチルセリン、Ｎホルミルメチオニン、３メチルヒスチジン、５ヒドロキシリジン、σ−Ｎメチルアルギニン、および他の同様のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４ヒドロキシプロリン）を含む。本明細書で使用されるポリペプチド表記法において、標準的な使用方法および慣習に従って、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシル末端方向である。
【０２０１】
同様に、別に指定がない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左手末端は５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は５’方向と呼ばれる。新生ＲＮＡの転写の添加の５’から３’の方向は、転写方向として呼ばれ、ＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写の５’から５’末端であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と呼ばれ、ＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写の３’から３’末端であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と呼ばれる。
【０２０２】
ポリペプチドに適用される「大幅な同一性」という用語は、デフォルトギャップ量を使用してＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムによって等、最適に整列された際に、２つのペプチド配列が少なくとも８０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、および最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基位置は保存アミノ酸置換によって異なる。保存アミノ酸置換は、同様の側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンであり、脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸群はセリンおよびトレオニンであり、アミド含有の側鎖を有するアミノ酸の群はアスパラギンおよびグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の群はフェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンであり、基礎側鎖を有するアミノ酸の群はリジン、アルギニン、およびヒスチジンであり、硫黄含有の側鎖を有するアミノ酸の群はシステインおよびメチオニンである。好ましい保存アミノ酸置換群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。
【０２０３】
本明細書に記載の、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列における小さな変化は、アミノ酸配列における変化が本明細書に記載される抗体または免疫グロブリン分子と少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、および最も好ましくは９９％の配列同一性を維持することを条件として、本発明によって包含されることを意図する。特に、保存アミノ酸置換が意図される。保存的置換は、関連した側鎖を有するアミノ酸のファミリー内で起こるものである。遺伝的にコードされたアミノ酸は、一般的に以下のファミリーに分けられる：（１）酸性＝アスパラギン酸、グルタミン酸塩、（２）塩基性＝リジン、アルギニン、ヒスチジン、（３）非極性＝アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、および（４）非荷電極性＝グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン。より好ましいファミリーは以下のとおりである：セリンおよびトレオニンは、脂肪族ヒドロキシファミリーであり、アスパラギンおよびグルタミンは、アミド含有のファミリー、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンは、脂肪族ファミリー、およびフェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、芳香族ファミリーである。例えば、特に置換がフレームワーク部位内のアミノ酸を伴わない場合、ロイシンのイソロイシンまたはバリンとの、アスパラギン酸塩のグルタミン酸塩との、トレオニンとのセリンの単独の置換、またはアミノ酸の構造的に関係があるアミノ酸との同様の置換は、結合機能または結果として生じる分子の特性に大きな影響を与えないことを期待することは妥当である。アミノ酸変化が機能性ペプチドを生じるかは、容易にポリペプチド誘導体の比活性をアッセイすることによって測定することができる。アッセイを、本明細書において詳細に記載する。抗体または免疫グロブリン分子の断片または類似体は、当業者によって容易に調製され得る。断片または類似体の好ましいアミノおよびカルボキシ末端は、機能ドメインの境界近くに発生する。構造および機能ドメインは、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列データを公開または私有の配列データベースと比較することによって同定することができる。好ましくは、コンピュータによる比較方法が、知られている構造および／または機能の他のタンパク質において発生する配列モチーフまたは予測されたタンパク質配座ドメインを同定するために使用される。既知の三次元構造に折畳むタンパク質配列を同定する方法は、知られている。Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４（１９９１）。したがって、前述の例は、当業者は本明細書に記載される抗体に従って構造および機能ドメインを定義するために使用することができる配列モチーフおよび構造配座を、認めることができることを示す。
【０２０４】
グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、それぞれに対応するグルタミルおよびアスパルチル残基に頻繁に脱アミド化される。これらの残基は、中性または塩基条件で、脱アミド化される。これらの残基の脱アミド化された形態は、本発明の範囲内である。
【０２０５】
一般的に、タンパク質におけるシステイン残基は、システイン−システインジスルフィド結合に関与するか、または折り畳みタンパク質領域の一部である場合、ジスルフィド結合形成から立体的に保護される。タンパク質におけるジスルフィド結合形成は、複雑な過程であり、環境の酸化還元電位および特殊化したチオール−ジスルフィド交換酵素によって決定される（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０７，３０５−３２９，１９８４、Ｈｏｕｅｅ−Ｌｅｖｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．３５３，３５−４４，２００２）。システイン残基がタンパク質構造において対を有さず、折畳むことによって立体的に保護されない場合、ジスルフィド混合として知られている過程において溶液からの遊離システインと共にジスルフィド結合を形成することができる。ジスルフィドスクランブルとして知られる別のプロセスにおいて、遊離システインは自然発生的ジスルフィド結合（抗体構造において存在するもの等）を妨げ、低結合、低生物活性および／または低安定性を引き起こし得る。
【０２０６】
好ましいアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低減し、（２）酸化に対する感受性を低減し、（３）タンパク質複合体を形成するために結合親和性を変更し、（４）結合親和性を変更し、（４）かかる類似体の他の物理化学的または機能特性を与えるまたは修飾するものである。類似体は、自然発生的なペプチド配列以外の配列の様々な突然変異を含むことができる。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（好ましくは保存アミノ酸置換）は、自然発生的な配列において作製することができる（好ましくは分子間接触を形成するドメイン外のポリペプチドの一部において）。保存アミノ酸置換は、親配列の構造性を大幅に変更すべきではない（例えば、置換アミノ酸は、親配列において発生するらせんを破壊、または親配列を特徴づける他の種類の二次構造妨害する傾向があるべきではない）。当該技術分野で認められたポリペプチド二次および三次構造の例は、それぞれが本明細書に参照によって組み込まれるＰｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４））、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））、およびＴｈｏｒｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｔ．Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）に記載される。
【０２０７】
さらに、かかる方法は、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合が欠失する抗体分子を生成するために、鎖内ジスルフィド結合に加わる１つ以上の可変領域システイン残基のアミノ酸置換または欠失を作製するために使用することができる。
【０２０８】
「ＣＤＲ領域」または「ＣＤＲ」という用語は、抗体に抗原結合特異性を与える抗体の重鎖および軽鎖の超可変領域を示すことを意図している。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔシステム（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ヒト  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）およびそれ以降の版に従って定義され得る。抗体は、典型的には３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む。ＣＤＲ（単数または複数）とういう用語は、状況に従って、抗原に対する抗体、または抗体が認識するエピトープに対する抗体の親和性による結合に関与するアミノ酸残基の大部分を含むこれらの領域のうちの１つまたはこれらの領域の複数、またはすべてに従って示すために本明細書で使用される。
【０２０９】
重鎖の第３のＣＤＲ（ＨＣＤＲ３）は、より大きいサイズの可変性を有する（本質的に、それを引き起こす遺伝子の配列のメカニズムによる、より大きな多様性）。それは、２個のアミノ酸ほど短いこともあり得るが、既知の最長サイズは２６個である。ＣＤＲの長さは、特定の根本にあるフレームワークが適応することができる長さによって変化し得る。機能的に、ＨＣＤＲ３は抗体の特異性の決定において役割を果たす（Ｓｅｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，７１：４２９８−４３０２，１９７４、Ａｍｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３：７４７−７５３，１９８６、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７，１９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８８３，１９８９、Ｃａｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４４：１９６５−１９６８，１９９０、Ｓｈａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，８７：４８１４−４８１７，１９９０、Ｓｈａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４４：４８６３−４８６９，１９９０、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：１７０９−１７１９，１９９１）。
【０２１０】
本明細書に言及される「一組のＣＤＲ」という用語は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。したがって、一組のＨＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を指し、一組のＬＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を指す。
【０２１１】
アミノ酸配列が本明細書に提示されている、およびＣＤ１０５に対する標的薬剤および抗体に用いられることができるものを含む、ＶＨおよびＶＬドメインの変異体および本発明のＣＤＲは、配列変異または突然変異、および所望の特徴を有する抗原への標的に対するスクリーニングによって、得ることができる。所望の特徴の例は、抗原に特異的な既知の抗体と比較した、抗原に対する増加した結合親和性、活性が知られている場合、抗原に特異的である既知の抗体と比較した、抗原活性の増加した中和、特異的なモル比における、既知の抗体またはリガンドとの、抗原に対する特定の競合能力、リガンド−受容体複合体を免疫沈降させる能力、特定のエピトープに結合する能力、直線状エピトープ、例えばペプチド結合スキャンを使用して同定したペプチド配列（例えば直線状のおよび／または制約された配座において検査されるペプチドを使用する）、非連続残基によって形成される配座エピトープ、ＣＤ１０５の新規生物活性または下流分子を調節する能力、ＣＤ１０５に結合し、および／または中和する能力、および／または他の所望の特性のいずれかに対するもの、を含むがこれに限定されない。
【０２１２】
ＣＤＲのアミノ酸配列、抗体ＶＨまたはＶＬドメイン、および抗原結合部位内で置換作製するために必要な技術は、当該技術分野において利用可能である。本明細書に開示された抗体分子の変異体は、本発明において産出し使用することができる。構造／特性−活性関係に対して多変量データ解析技術を適用する計算化学の先導に従って（Ｗｏｌｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ  ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ  −Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｅｄ．：Ｂ．Ｋｏｗａｌｓｋｉ），Ｄ．Ｒｅｉｄｅｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ，Ｈｏｌｌａｎｄ，１９８４）抗体の定量的な活性と性質との関係は、統計的回帰、パターン認識および識別等の既知の数学的方法を使用して抽出することができる（Ｎｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ａｐｒｉｌ  １９９８）、Ｋａｎｄｅｌ，Ａｂｒａｈａｍ  ＆  Ｂａｃｋｅｒ，Ｅｒｉｃ．Ｃｏｍｐｕｔｅｒ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｒｅａｓｏｎｉｎｇ  ｉｎ  Ｃｌｕｓｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｅｎｔｉｃｅ  Ｈａｌｌ  ＰＴＲ，（Ｍａｙ  １１，１９９５）、Ｋｒｚａｎｏｗｓｋｉ，Ｗｏｊｔｅｋ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｕｓｅｒ’ｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｎｏ  ２２（Ｐａｐｅｒ））．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２０００）、Ｗｉｔｔｅｎ，Ｉａｎ  Ｈ．＆  Ｆｒａｎｋ，Ｅｉｂｅ．Ｄａｔａ  Ｍｉｎｉｎｇ：Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｍａｃｈｉｎｅ  Ｌｅａｒｎｉｎｇ  Ｔｏｏｌｓ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｊａｖａ  Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ．Ｍｏｒｇａｎ  Ｋａｕｆｍａｎｎ；（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １１，１９９９）、Ｄｅｎｉｓｏｎ  Ｄａｖｉｄ  Ｇ．Ｔ．（Ｅｄｉｔｏｒ），Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｃ．Ｈｏｌｍｅｓ，Ｂａｎｉ  Ｋ．Ｍａｌｌｉｃｋ，Ａｄｒｉａｎ  Ｆ．Ｍ．Ｓｍｉｔｈ．Ｂａｙｅｓｉａｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｎｏｎｌｉｎｅａｒ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ  Ｓｅｒｉｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ；（Ｊｕｌｙ  ２００２）、Ｇｈｏｓｅ，Ａｒｕｐ  Ｋ．＆  Ｖｉｓｗａｎａｄｈａｎ，Ｖｅｌｌａｒｋａｄ  Ｎ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｔｏｏｌｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）。いくつかの事例において、抗体の特性は、抗体配列、機能および三次元構造の経験的および理論モデル（例えば、接触され得る残基または計算された物理化学的性質の解析）から導くことができ、これらの性質は、単一および組み合わせとみなすことができる。
【０２１３】
ＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる抗体抗原−結合部位は、典型的には、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）から３つおよび重鎖可変ドメイン（ＶＨ）から３つの、６つのループのポリペプチドによって形成される。既知の原子構造の抗体の解析は、配列と抗体結合部位の三次構造との間の関係を解明した。これらの関係は、ＶＨドメインにおける第３の領域（ループ）を除き、結合部位ループが少数の主鎖配座である極限構造のうちの１つを有することを意味する。特定のループにおいて形成された極限構造は、ループにおけるおよびフレームワーク領域における両方において、サイズおよび重要な部位における特定の残基の存在によって測定されることが示された。
【０２１４】
配列−構造関係のこの研究は、配列は知られているが、三次元構造が未知の抗体内の、ＣＤＲループの三次元構造を維持するために重要であり、したがって結合特異性を維持する上で重要な残基を予測するために用いることができる。これらの予測は、予測と先導の最適化実験からの出力との比較によって裏づけされ得る。構造的アプローチにおいて、モデルは、ＷＡＭなどの、無料で使用できるまたは商用のパッケージのいずれかを使用して抗体分子を作製することができる。タンパク質の視覚化およびＩｎｓｉｇｈｔ  ＩＩ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．）またはＤｅｅｐ  Ｖｉｅｗ等の解析ソフトウェアパッケージは、ＣＤＲにおける各位で可能な置換を評価するために使用することができる。この情報は、最小限のまたは活性上の有益な効果を有する可能性があるまたは他の所望の特性を与える置換を作製することができる。
【０２１５】
本明細書で使用される「ポリペプチド断片」という用語は、アミノ末端および／またはカルボキシル末端欠失を有するが、残りのアミノ酸配列が例えば全長ｃＤＮＡ配列から推測される自然発生的な配列における対応する位置と同一である場所のポリペプチドを指す。断片は、典型的には少なくとも５、６、８、または１０アミノ酸長、好ましくは少なくとも１４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも２０アミノ酸長、通常は少なくとも５０アミノ酸長、およびさらにより好ましくは少なくとも７０アミノ酸長である。本明細書で使用される「類似体」という用語は、少なくとも次の特性のうちの１つを含む推測されたアミノ酸配列の一部と実質上同一性を有する少なくとも２５アミノ酸のセグメントからなるポリペプチドを指す：（１）適切な結合条件下での下ＣＤ１０５との特異結合、（２）適切なＴＧＦβ／ＣＤ１０５結合を遮断する能力、または（３）ＣＤ１０５活性を阻害する能力。典型的には、ポリペプチド類似体は、自然発生的な配列に関して保存アミノ酸置換（または付加もしくは欠失）を含む。類似体は、典型的には少なくとも２０アミノ酸長、好ましくは少なくとも５０アミノ酸長またはそれ以上であり、多くの場合、全長自然発生的なポリペプチドと同じ長さであることができる。
【０２１６】
ペプチド類似体は、医薬産業において鋳型ペプチドのものに類似している性質を有する非ペプチド薬として一般的に使用される。これらの種類の非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣薬（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」および、「ペプチド模倣薬（ｐｅｐｔｉｄｅｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と呼ぶ（本明細書で参照により組み込まれるＦａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６）、Ｖｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＮＳ  ｐ．３９２（１９８５）、およびＥｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７））。かかる化合物は、頻繁にコンピュータ化された分子モデリングの助けによって開発される。治療的に有用なペプチドと構造的に似ているペプチド模倣薬は、同等の治療または予防効果を産出するために使用することができる。一般的に、ペプチド模倣薬は、ヒト抗体等の、パラダイムポリペプチド（すなわち、生化学的性質または薬理活性を有するポリペプチド）と構造的に似ているが、当業者によく知られている方法によって−−ＣＨ２ＮＨ−−、−−ＣＨ２Ｓ−−、−−ＣＨ２−ＣＨ２−−、−−ＣＨ＝ＣＨ−−（シスおよびトランス）、−−ＣＯＣＨ２−−、−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−、および−ＣＨ２ＳＯ−−からなる群から選択された結合によって随意おきかえられた１つ以上のペプチド結合を有する。同じ種類のＤ−アミノ酸を含むコンセンサス配列のうち１つ以上のアミノ酸の計画的な置換（例えばＬ−リジンの代わりに、Ｄ−リジン）は、より安定したペプチドを生成するために使用することができる。さらに、コンセンサス配列または十分に等しいコンセンサス配列変化を含む制約されたペプチドは、例えばペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成する能力がある内部システイン残基を追加することによって、当業者に知られている方法で生成され得る（本明細書に参照により組み込まれているＲｉｚｏ  ａｎｄ  Ｇｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２））。
【０２１７】
抗体は、単独でまたは既知の技術で提供された他のアミノ酸配列と組み合わせて、オリゴクローナル、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラの抗体、ＣＤＲ移植された抗体、多特異的な抗体、二重特異性抗体、触媒抗体、キメラの抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、抗イディオタイプ抗体、および、可溶または結合形態で標識することができる抗体、ならびにそれらの断片、変異体、またはその誘導体であることができる。抗体は、任意の種から提供され得る。
【０２１８】
本明細書で使用される「抗体」（免疫グロブリン）（単数及び複数）は、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、ラクダ化抗体、およびキメラ抗体を包含する。本明細書で使用される「抗体」（単数および複数）は、抗原鎖の抗原決定基の特性と補完的である内側面形状および電荷分布を含む三次元結合空間を有するポリペプチド鎖の折畳みから形成される少なくとも１つの結合ドメインを含むポリペプチドまたはポリペプチドの群を指す。天然抗体は、典型的には２つの同一の軽鎖（Ｌ）および２つの同一の重鎖（Ｈ）からなる約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合による重鎖と結合されるが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変化する。それぞれの重鎖および軽鎖は、規則的間隔をおいた鎖内ジスルフィド架橋も有する。それぞれの重鎖は、一端においてく可変ドメイン（ＶＨ）を有し、後にある数の定常ドメインが続く。それぞれの軽鎖は、１つの末端に可変ドメインを（ＶＬ）、もう一方の末端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列する。軽鎖は、軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を基にλ鎖またはκ鎖のどちらかに分類される。κ軽鎖の可変ドメインは、本明細書においてＶＫとして示され得る。「可変領域」という用語は、重鎖または軽鎖の可変ドメインを説明するためにも使用することができる。特定のアミノ酸残基は、軽鎖および重鎖の可変ドメイン間のインターフェースとして形成されると考えられる。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、抗体の結合部位を形成する。かかる抗体は、ヒト、サル、ブタ、ウマ、ウサギ、イヌ、ネコ、マウス等を含むがこれに限定されない、哺乳動物から生じることができる。
【０２１９】
「抗体」（単数および複数）という用語は、本発明の抗体の結合断片を含み、例示的な断片は、一本鎖のＦｖｓ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、所望の生物活性を示す抗体、ジスルフィド安定した可変領域（ｄｓＦｖ）、二量体可変領域（二重特異性抗体）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば本発明の抗Ｉｄ抗体と抗体を含む）、細胞内抗体、直線状抗体、および上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片から生成された多特異的な抗体を含む。具体的には、抗体は免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち抗原−結合部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）またはサブクラスであることができる。
【０２２０】
酵素、パパインでの抗体の消化は、「Ｆａｂ」断片、および抗原結合活性を有さないが結晶化をする能力を有する「Ｆｃ」断片としても知られる２つの同一の抗原結合断片をもたらす。酵素、ペプシンでの抗体の消化は、抗体分子の２つの腕が結合されたままで残り、２つの抗原の結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片をもたらす。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗原に交差結合する能力を有する。
【０２２１】
本明細書で使用される場合、「Ｆｖ」は、抗原の認識、および抗原の結合部位の両方を保持する抗体の最小限の断片を指す。この領域は、タイトな非共有または共有結合にある、１つの重鎖および１つの軽鎖の可変ドメインの二量体からなる。これが、それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面において抗原結合部位を定義する構成である。全体的に、これらの６つのＣＤＲが、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、全体の結合部位のよりも低い親和性であるが、単一可変ドメイン（または３つのＣＤＲに特異的な抗原のみを含むＦｖの半分）でさえも、抗原を認識して結合する能力がある。
【０２２２】
本明細書で使用される場合、「Ｆａｂ」は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖のＣＨ１ドメインを含む抗体の断片を指す。
【０２２３】
本明細書で使用される場合、「ｄＡｂ」は、ヒト抗体の最小の機能結合単位である抗体の断片を指す。「ｄＡｂ」は単一ドメイン抗体であり、抗体重鎖の可変ドメイン（ＶＨドメイン）または抗体軽鎖の可変ドメイン（ＶＬドメイン）のいずれかを含む。各ｄＡｂは、６つの自然発生的ＣＤＲのうち３つを含有する（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ．Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６（１９８９）、Ｈｏｌｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｏｍａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１，４８４−４９（２００３））。１１〜１５ｋＤａの範囲の分子量で、それらは断片抗原結合（Ｆａｂ）２より４倍小さく、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子の半分のサイズである。
【０２２４】
本明細書で使用される場合、「らくだ科」は、軽鎖が欠けている重鎖二量体からなるが、それにも関わらず、広範囲におよぶ抗原結合レパートリーを有する抗体分子を指す。（Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  Ｃ，Ａｔａｒｈｏｕｃｈ  Ｔ，Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ｇ，Ｈａｍｅｒｓ  Ｃ，Ｓｏｎｇａ  ＥＢ，Ｂｅｎｄａｈｍａｎ  Ｎ，Ｈａｍｅｒｓ  Ｒ（１９９３）Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｅｖｏｉｄ  ｏｆ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８）。
【０２２５】
「二重特異性抗体」という用語は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と結合した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む断片の２つの抗原結合部位を含む小さい抗体の断片を指す。同じ鎖において２つのドメイン間で組み合わせることを可能にするには短すぎるリンカーを使用して、そのドメインは、強制的に別の鎖の相補ドメインと組み合わせられ、２つの抗原結合部位を作製する。二重特異性抗体は、例えば、ＥＰ第４０４，０９７号、ＷＯ第９３／１１１６１号、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）により詳しく記載される。
【０２２６】
完全抗体の断片が、抗原を結合する機能を行うことができることが示されている。断片の結合の例は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６）、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ，３４８，５５２−５５４）、単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片（Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１，４８４−４９０）、（ｉｖ）ＶＨまたはＶＬドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６（１９８９）、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ，３４８，５５２−５５４、Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１，４８４−４９０］、（ｖ）単離されたＣＤＲ領域、（ｖｉ）２つの結合されたＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（ｖｉｉ）ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、２つのドメインが会合して抗原結合部位を形成することを可能にするペプチドリンカーによって結合される、一本鎖のＦｖ分子（ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３−４２６、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８８）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，８５，５８７９−５８８３）、（ｖｉｉｉ）二重特異的な一本鎖のＦｖ二量体（ＰＣＴ／ＵＳ第９２／０９９６５号）および（ｉｘ）遺伝子融合によって構築される多価または多特異的な断片である「二重特異性抗体」（ＷＯ第９４／１３８０４号、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．（１９９３）ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０  ６４４４−６４４８）である。Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または二重特異性抗体分子は、ＶＨとＶＬドメインとを結合するジスルフィド架橋の取り込みによって安定化され得る（Ｒｅｉｔｅｒ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，１４，１２３９−１２４５，１９９６）。ＣＨ３ドメインとつながったｓｃＦｖを含むミニボディも作製され得る（Ｈｕ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ，（１９９６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６，３０５５−３０６１）。結合断片の他の例は、抗体ヒンジ領域から１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端における少数の残基の添加によってＦａｂ断片とは異なるＦａｂ’、および定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を持つＦａｂ’断片である、Ｆａｂ’−ＳＨである。
【０２２７】
「可変」という用語は、可変ドメインの特定部分が、抗体間で、配列において広範囲にわたって異なる、および特定の抗原に対して各特定の抗体の結合特異性の原因であるという事実を指している。しかし、可変性は、均一に抗体の可変ドメインにわたって分布されない。可変性は、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方における、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される部分に集中している。可変ドメインのより高度に保存された部位は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインのそれぞれは、大部分がループ結合を形成する３つのＣＤＲによって結び付けられるおよび場合によってはβシート構造の一部を形成するβシート配置をとる４つのＦＲ領域を含む。各鎖におけるＣＤＲは、他の鎖からのＣＤＲと、ＦＲ領域に極めて接近して結合される、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照）。定常ドメインは、一般的に抗原結合に直接関与しないが、抗原結合親和性に影響を与え、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、および／またはアポトーシスにおける抗体の関与等の様々なエフェクター機能を示すことができる。
【０２２８】
本明細書で使用される場合、「超可変領域」は、抗原への結合と関連する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変ドメインは、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメインの残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、および８９〜９７（Ｌ３）、および重鎖可変ドメインの残基３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、および９５〜１０２（Ｈ３）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））および／または「超可変ループ」からの残基（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基  ２６〜３２（Ｌｌ）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）、および重鎖可変ドメインにおける２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、および９６〜１０１（Ｈ３）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７））を包含する。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、ＣＤＲの側面に立つそれらの可変ドメイン残基である。ＦＲ残基は、キメラの、ヒト化の、ヒト、ドメイン抗体、二重特異性抗体、ワクチン抗体（ｖａｃｃｉｂｏｄｙ）、直線状抗体、および二重特異性抗体において存在する。
【０２２９】
本明細書で使用される標的結合剤、標的結合タンパク質、特異的に結合するタンパク質等の用語は、標的部位と優先的に結合する抗体またはその結合断片を指す。一実施形態において、標的結合剤は１つの標的部位のみに対して特異的である。他の実施形態において、標的結合剤は、２つ以上の標的部位に対して特異的である。一実施形態において、標的結合剤は、モノクローナル抗体であり得、標的部位はエピトープであり得る。
【０２３０】
抗体の「結合断片」は、組換えＤＮＡ技術または無傷の抗体の酵素的化学開裂によるによって産出される。結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、および一本鎖の抗体を含む。「二重特異性」または「二機能性」の抗体以外の抗体は、それぞれの結合部位が同一であると理解される。過度の抗体が対抗受容体に結合された受容体の量を少なくとも約２０％、４０％、６０％、または８０％、およびよりいつもは約８５％を超える（インビトロ競合結合アッセイで測定される）低減する場合、抗体は大幅に受容体と対抗受容体との接着を阻害する。
【０２３１】
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体と特異的に結合することができるタンパク質決定因子のいずれかを含む。エピトープ決定因子は、通常アミノ酸または糖側鎖等の分子の化学的活性表面群からなり、特定の三次構造性ならびに特定の電化特性を有し得るが必ずしも有すると限らない。解離定数が＜１μＭ、好ましくは＜１００ｎＭ、および最も好ましくは＜１０ｎＭの場合、抗体は抗原に特異的に結合すると言われる。
【０２３２】
本明細書で使用される「薬剤」という用語は、化学化合物、化学化合物の混合物、生体高分子、または生物由来物質から作製された抽出物を意味する。
【０２３３】
ＣＤ１０５ポリペプチドに関して、「活性である」または「活性」は、天然ＣＤ１０５ポリペプチドの生物または免疫学的活性を有するＣＤ１０５ポリペプチドの部分を指す。本明細書で使用される場合、「生物の」とは天然ＣＤ１０５ポリペプチドの活性に起因する生物機能を指す。好ましいＣＤ１０５生物活性は、例えばＣＤ１０５により誘導される細胞粘着および浸潤および／または血管形成および／または増殖を含む。
【０２３４】
本明細書で使用される「哺乳動物」は、哺乳動物と考えられる動物のいずれをも指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【０２３５】
本明細書で使用される「動物」は、哺乳動物と考えられる動物を包含する。好ましくは、動物はヒトである。
【０２３６】
「ｍＡｂ」という用語は、モノクローナル抗体を指す。
【０２３７】
本明細書で使用される場合、「リポソーム」は、哺乳動物に対するＣＤ１０５ポリペプチド等の本発明のＣＤ１０５ポリペプチドまたは抗体を含み得る、薬物の投与に有用であり得る小さい小胞を指す。
【０２３８】
本明細書で使用される「標識」または「標識された」は、ポリペプチドに検出可能な部分、例えば放射標識、蛍光ラベル、酵素標識、化学発光標識、またはビオチニル基を追加することを示す。放射性同位体または放射性核種は３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉを含むことができ、蛍光ラベルはローダミン、ランタニド蛍光体、またはＦＩＴＣを含むことができ、酵素標識は西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、発光酵素、アルカリ性ホスファターゼを含むことができる。
【０２３９】
追加標識は、例示説明するが、限定しない目的でグルコース−６−リン酸脱水素酵素（「Ｇ６ＰＤＨ」アルファ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコース酸化酵素、グルコースアミラーゼ、炭酸脱水酵素、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸脱水素酵素、およびペルオキシダーゼ等の酵素、色素、追加蛍光ラベルまたは蛍光物質は、ルオレセインおよびその誘導体、蛍光色素、ＧＦＰ（「緑色蛍光タンパク質」の代わりにＧＦＰ）、ダンシル、ウンベリフェロン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フトアルデヒド、およびフルオレサミン等を含み、ランタニドクリプテートおよびキレート、例えばユーロピウム等（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ａｎｄ  Ｃｉｓ  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）のフルオロフォア、イソルミノール、ルミノール、およびジオキセタン等の化学発光標識または化学発光物質、感光薬、補酵素、酵素基質、ラテックスまたは炭素粒子等の粒子、色素、触媒、または他の検出可能な基でさらに標識され得る金属ゾル、微結晶、リポソーム、細胞等、ビオチン、ジゴキシゲニン、または５−ブロモデオキシウリジン等の分子、例えば緑膿菌外毒素群（ＰＥまたは細胞傷害性断片またはその突然変異体）、ジフテリア毒素、または細胞傷害性断片、またはその突然変異体、ボツリヌス毒素Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、またはＦ、リシン、またはその細胞傷害性断片、例えばリシンＡ、アブリン、またはその細胞傷害性の断片、サポリンまたはその細胞傷害性断片、ヤマゴボウ抗ウイルス毒素またはその細胞傷害性断片、およびブリョジン１、またはその細胞傷害性断片から選択された毒素部分等の毒素部分を含む。
【０２４０】
本明細書に使用される「医薬品または薬剤」という用語は、患者に適切に投与された場合、好ましい治療効果を誘発することができる化学化合物または組成物を指す。本明細書における他の化学用語は、Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５））、（参照によって本明細書に組み込まれる）によって例示されるように、技術的に慣例的用法に従って使用される。
【０２４１】
本明細書に使用される「十分に純粋な」は、目的種が存在する主な種を意味し（すなわち、モルベースにおいて、組成物における他のどの個別の種よりもより豊富である）、および好ましくは十分に純粋な画分は、目的種が存在するすべての高分子種のうち少なくとも約５０％（モルベースにおいて）を含む組成物である。一般的に、十分に純粋な組成物は、組成物における約８０％を超える、より好ましくは約８５％、９０％、９５％、および９９％を超える存在するすべての高分子種を含む。最も好ましくは、目的種は本質的な均質に精製され（汚染物質種は従来の検出方法で組成物において検出されることができない）、組成物は本質的に単一の高分子種からなる。
【０２４２】
「患者」という用語は、ヒトおよび獣医学的対象を含む。
【０２４３】
「抗体依存の細胞媒介細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」は、ＩｇＦｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異性の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞における結合抗体を認識し、次に標的細胞の溶解を引き起こす細胞性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃｇγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲｓ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−９２（１９９１）のページ４６４の表３に要約される。対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載されるインビトロＡＤＣＣアッセイ等を、実施することができる。かかるアッセイの有用なエフェクター細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代わりに、またはさらに、対象の分子のＡＤＣＣ活性は、例えばＣｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９８８）に開示される動物モデル等においてインビボで評価され得る。「補体依存性細胞傷害」および「ＣＤＣ」は、抗体が殺細胞機能を実施するメカニズムを指す。それは、補体の第１成分の抗生物質Ｃ１ｑと、抗原と複合したＩｇｓ、ＩｇＧ、またはＩｇＭのＦｃドメインとの結合によって開始される（Ｈｕｇｈｓ−Ｊｏｎｅｓ，Ｎ．Ｃ．，ａｎｄ  Ｂ．Ｇａｒｄｎｅｒ．１９７９．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：６９７）。Ｃ１ｑは、大きく、７０μｇ／ｍＬの濃度でヒト血清において存在する約４１０ｋＤａの複雑な構造を持つ糖タンパク質である（Ｃｏｏｐｅｒ，Ｎ．Ｒ．１９８５．Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：１５１）。２つのセリンプロテアーゼＣ１ｒおよびＣ１ｓと共に、Ｃ１ｑは補体の第１の成分である複合体Ｃ１を形成する。Ｃ１ｑのＮ末端球状頭部の少なくとも２つは、Ｃ１活性化のため、したがって補体カスケードの開始のためにＩｇｓのＦｃと結合されなければならない（Ｃｏｏｐｅｒ，Ｎ．Ｒ．１９８５．Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：１５１）。
【０２４４】
本明細書に使用される「抗体半減期」とういう用語は、抗体分子の投与後の平均生存期間の単位である抗体の薬物動態特性を意味する。抗体半減期は、例えば血清または血漿において測定して（すなわち循環半減期）または他の組織において、患者の体または特定の部分から免疫グロブリンの既知量の５０％を排除するために必要な時間として表現され得る。半減期は、１つの免疫グロブリンまたは免疫グロブリンのクラスによって異なる。一般的には、抗体半減期における増加は、投与された抗体に対する循環における平均滞留時間（ＭＲＴ）の増加を引き起こす。
【０２４５】
「アイソタイプ」という用語は、抗体の重鎖または軽鎖の定常領域の分類を指す。抗体の定常ドメインは、抗原との結合に関与しないが、様々なエフェクター機能を示す。重鎖定常領域のアミノ酸配列に依存して、所与の」ヒト抗体または免疫グロブリンは、免疫グロブリンの５つの主要クラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのうちの１つに割り当てることができる。これらのクラスのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１（γ１）、ＩｇＧ２（γ２）、ＩｇＧ３（γ３）、およびＩｇＧ４（γ４）、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと称される。免疫グロブリンの異なるクラスの構造および三次元配置は、よく知られている。様々なヒト免疫グロブリンのクラスのうち、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびＩｇＭのみが補体を活性化することで知られている。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、ヒトにおいて媒介することで知られている。ヒト軽鎖定常領域は、κおよびλの２つの主要クラスに分類され得る。
【０２４６】
所望する場合、ＣＤ１０５と特異的に結合する抗体のアイソタイプは、例えば異なるアイソタイプの生物の性質を活用するために、切り替えることができる。例えば状況次第で、ＣＤ１０５に対する治療抗体として抗体の生成に関連して、抗体が補体に結合することおよび補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与することができることが望ましい場合がある。限定なしに以下を含むその能力を有する抗体のアイソタイプが多く存在する：マウスＩｇＭ、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、マウスＩｇＧ３、ヒトＩｇＭ、ヒトＩｇＡ、ヒトＩｇＧ１、およびヒトＩｇＧ３。他の実施形態において、ＣＤ１０５に対抗する治療抗体として抗体の生成に関連して、抗体がエフェクター細胞上のＦｃ受容体に結合することおよび抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与することができることが望ましい場合がある。限定なしに以下を含むその能力を有する抗体のアイソタイプが多く存在する：マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、マウスＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ１、およびヒトＩｇＧ３。生成される抗体は最初はかかるアイソタイプを持つ必要がなく、むしろ生成される抗体は任意のアイソタイプを持つことができ、抗体は当業者によく知られている従来の技術を使用してその後アイソタイプ切り替えができることが理解されるであろう。特にかかる技術は、直接組換え技術の使用を含む（例えば米国特許第４，８１６，３９７号を参照）、細胞間融合技術（例えば命国特許第５，９１６，７７１号および第６，２０７，４１８号）。
【０２４７】
一例として、本明細書で論じられる抗ＣＤ１０５抗体は、完全ヒト抗体である。抗体が所望のＣＤ１０５への結合を持つ場合、（抗体の特異性および親和性のいくつかを定義する）同じ可変領域を持ちながら、ヒトＩｇＭ、ヒトＩｇＧ１、またはヒトＩｇＧ３アイソタイプを生成するために容易にアイソタイプ切り替えをすることができるであろう。かかる分子は、補体を修理することおよびＣＤＣに関与することができ、および／またはエフェクター細胞にＦｃ受容体を結合することおよびＡＤＣＣに関与することが可能であろう。
【０２４８】
「全血アッセイ」は、天然エフェクターの源として未分画血液を使用する。血液は、多核白血球（ＰＭＮ）および単核球（ＭＮＣ）等のＦｃＲ発現細胞エフェクターとともに、血漿に補体を含有する。したがって、全血アッセイは、インビトロでの、ＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクターメカニズム両方の相乗効果の同時評価を可能にする。
【０２４９】
本明細書で使用される「治療効果のある」量は、対象にとっていくらかの改善または利益を提供する量である。別の言い方をすると、「治療効果のある」量は、少なくとも１つの臨床症状において、緩和、軽減、および／または低減を提供する量である。本発明の方法で治療され得る疾患と関連する臨床症状は、当業者によく知られている。さらに、当業者は、対象にいくつかの利益が提供される限り、治療効果は完全または治癒するものである必要がないことを理解するであろう。
【０２５０】
本明細書で使用される「および／または」という用語は、２つの特定の特性または成分の、片方と共にまたは片方なしでの、それぞれの特定の開示としてみなされる。例えば「Ａおよび／またはＢ」は、本明細書において（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、ならびに（ｉｉｉ）ＡおよびＢのそれぞれの特定の開示として、それぞれが個別に提示されているかのように、みなされる。
【０２５１】
抗体構造
基本抗体構造単位は、四量体を含むことで知られている。それぞれの四量体は、２つのポリペプチド鎖の相同対からなり、各対は１つの「軽」（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシル末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を定義する。ヒト軽鎖は、κおよびλ軽鎖として分類される。重鎖は、μ、δ、γ、α、またはεとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを定義する。軽鎖および重鎖内で、可変および定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖は、約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。一般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照（本明細書においてすべてが参照によって組み込まれる）。それぞれの軽／重鎖の対の可変領域は、抗体結合部位を形成する。
【０２５２】
したがって、無傷の抗体は２つの結合部位を有する。二機能性または二重特異性抗体を除いて、２つの結合部位は同一である。
【０２５３】
すべての鎖はＣＤＲとも称される３つの超可変領域によって結合される比較的に保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。各対の２つの鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域によって整列され、特定のエピトープと結合することを可能にする。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖および重鎖の両方は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４のドメインを含む。各ドメインに対するアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７  ａｎｄ  １９９１））、またはＣｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３（１９８９）の定義に従う。
【０２５４】
二重特異的または二機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖の対および２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。一例を挙げると、本発明の二重特異的抗体は、少なくとも２つの異なるＣＤ１０５エピトープに対する結合特異性を有する抗体である。本発明のＣＤ１０５標的結合剤の多くは、異なるエピトープを有する、または異なる部分または重複エピトープを有するため、本発明の二重特異性抗体は、異なるまたは重複するエピトープを有するＣＤ１０５標的結合剤のいずれかの組み合わせを含むことができることが意図される。例えば、６Ａ６および６Ｂ１０は、４Ｄ４および１０Ｃ９と異なるエピトープを有する。一例を挙げると、二重特異的抗体は、６Ａ６または６Ｂ１０の超可変領域、それに対して少なくとも５０、６０、７０、８０、または９０％の相同性を有する領域、および４Ｄ４または１０Ｃ９の可変または超可変領域、またはそれに対して少なくとも５０、６０、７０、８０、または９０％の相同性を有する領域を有する。
【０２５５】
二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の結合を含む様々な方法によって産出され得る。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ  Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０），Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）を参照。二重特異性抗体は、単一の結合部位を有する断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦｖ）の形で存在しない。典型的には、抗体抗原結合部位を提供するために、ＶＨドメインはＶＬドメインと対になるが、単独でＶＨまたはＶＬドメインは、抗原を結合するために使用することができるが。ＶＨドメイン（表２を参照）は、ＶＬドメイン（表２を参照）と対となり、ＶＨおよびＶＬドメインの両方を含む抗体抗原結合部位が形成されるようになる。       
【０２５６】
典型的には、二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。代表的な二重特異性抗体は、ＣＤ１０５タンパク質の２つの異なるエピトープに結合することができる。他のかかる抗体は、ＣＤ１０５結合部位と別のタンパク質の結合部位とを組み合わさることができる。あるいは、抗ＣＤ１０５のアームは、ＣＤ１０５発現細胞に対して細胞防御メカニズムを集中および局部集中するために、Ｔ細胞受容体分子（例えばＣＤ３）、またはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）等のＩｇＧ（ＦｃγＲ）に対するＦｃ受容体等の白血球において分子の誘発と結合するアームと組み合わさることができる。二重特異性抗体は、細胞傷害性薬物を、ＣＤ１０５を発現する細胞に局部集中するためにも使用され得る。これらの抗体は、ＣＤ１０５結合アームおよび細胞傷害性薬物（例えばサポリン、抗インターフェロン−α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサート、または放射性同位元素ハプテン）に結合するアームを持つ。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ′）２二重特異性抗体）として調製され得る。二重特異性抗体の作製方法は、当業者に知られている。（例えば、Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３）、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）、米国特許第４，４７４，８９３号、第４，７１４，６８１号、第４，９２５，６４８号、第５，５７３，９２０号、第５，６０１，８１号、第５，７３１，１６８号、第４，６７６，９８０号、第５，８９７，８６１号、第５，６６０，８２７号、第５，８１１，２６７号、第５，８４９，８７７号、第５，９４８，６４７号、第５，９５９，０８４号、第６，１０６，８３３号、第６，１４３，８７３号、および第４，６７６，９８０号、ＷＯ第９４／０４６９０号、およびＷＯ第９２／２０３７３号を参照。）
【０２５７】
全長二重特異性抗体の従来の産出は、２つの免疫グロブリンの重鎖と軽鎖の対の同時発現に基づいているが、２つの鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の無作為な類別のため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０個の異なる抗体分子の潜在的な混合物を産出し、そのうち１個のみが正確な二重特異的構造を有する。通常は親和性クロマトグラフィーの工程によって行われる正確な分子の精製は、かなり厄介であり、製品収率は低い。同様の手順は、ＷＯ第９３／０８８２９号、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示される。
【０２５８】
異なるアプローチによると、所望の結合特異性を含む抗体可変ドメイン（抗体抗原結合部位）は、免疫グロブリンの定常ドメイン配列と融合される。好ましくは、ヒンジＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含むＩｇ重鎖の定常ドメインと融合される。少なくとも１つの融合に存在する、軽鎖結合のために必要な部位を含有する第１の重鎖の定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリンの重鎖融合をコードするＤＮＡ、および、必要に応じて、免疫グロブリンの軽鎖が、別々の発現ベクターに挿入され、適切な宿主細胞にコトランスフェクトされる。構築において使用される３つのポリペプチド鎖の不等率が、所望の二重特異的抗体の最適生産量を提供する場合、これは実施形態における３つのポリペプチド断片の相互の割合を調整する中でより大きな柔軟性を提供する。しかし等比の少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収率を生じる場合、または比率が所望の鎖状結合の産出率において大きな影響を与えない場合、２つまたは３つのポリペプチド鎖のすべてに対してのコード配列を単一発現ベクターに挿入することが可能である。
【０２５９】
このアプローチの一実施形態では、二重特異性抗体は、片方のアームにおける第１の結合特異性を含むハイブリッド免疫グロブリンの重鎖、およびもう一方のアームにおける（第２の結合特異性を提供する）ハイブリッド免疫グロブリンの重鎖−軽鎖対からなる。二重特異性分子の半分のみにおける免疫グロブリンの軽鎖の存在が分離の安易な方法を提供するため、この非対称構造は、所望されない免疫グロブリン鎖状結合からの所望の二重特異的化合物の分離を容易にすることができる。二重特異性抗体の生成のさらなる詳細は、例えばＳｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照。
【０２６０】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載される別のアプローチによると、抗体分子の対の間のインターフェースは、組換え細胞培養から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にするために操作され得る。好ましいインターフェースは、少なくともＣＨ３ドメインの一部を含む。この方法では、第１の抗体分子のインターフェースからの１つ以上の小さいアミノ酸の側鎖が、より大きい側鎖と置き換えられる（例えば、チロシンまたはトリプトファン）。大きい側鎖に対して同一または同様のサイズの代償性の「腔」は、大きいアミノ酸の側鎖を小さいもの（例えば、アラニンまたはトレオニン）と置き換えることによって、第２の抗体分子のインターフェースにおいて作製される。これは、他の不要なホモ二量体等の最終産物上のヘテロ二量体の収率を増加するためのメカニズムを提供する。
【０２６１】
二重特異性抗体は、交差結合または「ヘテロ複合体」の抗体を含む。例えば、ヘテロ複合体における抗体のうちの１つは、アビジンと、他方はビオチンと複合することができる。かかる抗体は、例えば不要細胞に対して免疫細胞を標的にすること（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染の治療のために（米国特許第５，８９７，８６１号）提案されている。ヘテロ複合体の抗体は、任意の架橋法を使用して作製され得る。適切な架橋剤は、当業者によく知られていて、多くの架橋技術と共に、米国特許第４，６７６，９８０号に開示される。
【０２６２】
抗体断片から二重特異性抗体を生成するための技術も、文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は化学結合を使用して調合され得る。Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）は、無傷抗体が、タンパク分解で分割されて、Ｆ（ａｂ′）２断片を生成する手順を記載している。これらの断片は、近接のジチオールを安定するおよび分子間のジスルフィド形成を防止するために、ジチオール錯体形成剤、亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元される。生成されるＦａｂ′断片は、チオニトロ安息香酸（ＴＮＢ）の誘導体に変換される。Ｆａｂ′−ＴＮＢ誘導体のうちの１つは、メルカプトエチルアミンで還元することで、Ｆａｂ′−チオールに変換され、他のＦａｂ′−ＴＮＢ誘導体の等モル量と混合されて、二重特異的抗体が形成される。産出された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用することができる。
【０２６３】
最近の進歩は、二重特異性抗体を形成するために化学的に複合化することができる、大腸菌からのＦａｂ′−ＳＨ断片の直接回収を容易にしている。Ｓｈａｌａｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全ヒト化の二重特異的抗体Ｆ（ａｂ′）２分子の産出を記載する。それぞれのＦａｂ′断片は、大腸菌から別々に分泌され、インビトロで定向化学結合に供し、二重特異的抗体を形成した。このようにして形成された二重特異的抗体は、ＥｒｂＢ２受容体過剰発現する細胞および正常ヒトＴ細胞に結合することができ、ならびにヒト乳腺腫瘍標的に対してヒト細胞傷害性リンパ球の溶解作用を引き起こすことができた。
【０２６４】
組換え細胞培養から直接二重特異的抗体の断片を作製し単離するための様々な技術も、記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを使用して産出されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドが、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ′部分と結び付けられた。抗体ホモ二量体は、ヒンジ領域において還元されてモノマーを形成し、再酸化して抗体のヘテロ二量体を形成した。この方法は、抗体のホモ二量体の産出に対して利用することもできる。  Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）に記載された「二重特異性抗体」技術は、二重特異的抗体の断片を作製するための別のメカニズムを提供した。断片は、同じ鎖における２つのドメイン間で対にすることを許すには短すぎる、リンカーによってＶＬに連結されているＶＨを含む。したがって、１つの断片のＶＨおよびＶＬドメインは、別の断片の相補的なＶＬおよびＶＨドメインと強制的に対にされ、それにより２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用によって、二重特異的抗体の断片を作製するための別の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４および米国特許第５，５９１，８２８号、第４，９４６，７７８号、第５，４５５，０３０号、および第５，８６９，６２０号を参照。
【０２６５】
ヒト抗体および抗体のヒト化
ヒト抗体は、マウスまたはラット可変および／または定常領域を持つ、抗体に関連する問題のいくつかを避ける。かかるマウスまたはラット由来のタンパク質の存在は、抗体の迅速除去を引き起こし得、または患者による抗体に対する免疫反応の生成を引き起こし得る。マウスまたはラット由来の抗体の利用を避けるために、げっ歯類、他の哺乳動物または動物が完全ヒト抗体を産出するように、完全ヒト抗体はげっ歯類、他の哺乳動物または動物への機能的ヒト抗体の遺伝子座の導入を通して生成され得る。
【０２６６】
完全ヒト抗体を生成するための１つの方法は、ヒト重鎖遺伝子座およびカッパ軽鎖遺伝子座の、最大１０００ｋｂサイズまでであるがそれ未満の生殖系列形成された断片を含有するように操作されたマウスのＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）株の使用を通してである。Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７）およびＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−４９５（１９９８）を参照。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）株は、Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．より入手できる（Ｆｒｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｕ．Ｓ．Ａ）。
【０２６７】
かかるマウスは、ヒト免疫グロブリン分子および抗体を産出することができ、マウス免疫グロブリン分子および抗体の産出ができない。それを達成するために利用する技術は、１９９６年１２月３日に出願された米国特許出願第０８／７５９，６２０号、および１９９８年６月１１日に公開された国際特許出願ＷＯ第９８／２４８９３号、および２０００年１２月２１日に公開されたＷＯ第００／７６３１０号に開示され、それらの開示は本明細書に参照により組み込まれる。開示が、本明細書に参照と組み込まれるＭｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７）も参照。
【０２６８】
マウスのＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）株の産出は、１９９０年１月１２日に出願された米国特許出願第０７／４６６，００８号、１９９０年１１月８日に出願された第０７／６１０，５１５号、１９９２年７月２４日に出願された第０７／９１９，２９７号、１９９２年７月３０日に出願された第０７／９２２，６４９号、１９９３年３月１５日に出願された第０８／０３１，８０１号、１９９３年８月２７日に出願された第０８／１１２，８４８号、１９９４年４月２８日に出願された第０８／２３４，１４５号、１９９５年１月２０日に出願された第０８／３７６，２７９号、１９９５年４月２７日に出願された第０８／４３０，９３８号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４６４，５８４号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４６４，５８２号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４６３，１９１号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４６２，８３７号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４８６，８５３号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４８６，８５７号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４８６，８５９号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４６２，５１３１９９６年１０月２日に出願された第０８／７２４，７５２号、１９９６年１２月３日に出願された第０８／７５９，６２０号、２００１年１１月３０日に出願された米国公開第２００３／００９３８２０号および米国特許第６，１６２，９６３号、第６，１５０，５８４号、第６，１１４，５９８号、第６，０７５，１８１号、および第５，９３９，５９８号、および日本特許第３  ０６８  １８０  Ｂ２号、第３  ０６８  ５０６  Ｂ２号、および第３  ０６８  ５０７  Ｂ２号にさらに論じられ、描写される。１９９６年６月１２日に付与が公開された欧州特許ＥＰ第０  ４６３  １５１  Ｂ１号、１９９４年２月３日に公開された国際特許出願ＷＯ第９４／０２６０２号、１９９６年１０月３１日に公開された国際特許出願ＷＯ第９６／３４０９６号、１９９８年６月１１日に公開されたＷＯ第９８／２４８９３号、２０００年１２月２１日に公開されたＷＯ第００／７６３１０号も参照。上記の特許、出願、および参照のそれぞれの開示は、本明細書にすべてが参照により組み込まれる。
【０２６９】
代替アプローチでは、ＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．を含む他のものは、「ミニ遺伝子座」アプローチを利用している。ミニ遺伝子座アプローチでは、外因性Ｉｇ遺伝子座が、Ｉｇ遺伝子座から断片の（個々の遺伝子）包含を通して擬態される。したがって、１つ以上のＶＨ遺伝子、１つ以上のＤＨ遺伝子、１つ以上のＪＨ遺伝子、μ定常領域、および通常は第２の定常領域（好ましくはγ定常領域）は、動物に挿入するためにコンストラクトに形成される。このアプローチは、Ｓｕｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．に対して米国特許第５，５４５，８０７号、それぞれＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙに対しての米国特許第５，５４５，８０６号、第５，６２５，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，６６１，０１６号、第５，７７０，４２９号、第５，７８９，６５０号、第５，８１４，３１８号、第５，８７７，３９７号、第５，８７４，２９９号、および第６，２５５，４５８号、ＫｒｉｍｐｅｎｆｏｒｔおよびＢｅｒｎｓｅａｃｈに対しての米国特許第５，５９１，６６９号、および第６，０２３．０１０号、Ｂｅｒｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，に対しての第５，６１２，２０５号、第５，７２１，３６７号、第５，７８９，２１５号、およびＣｈｏｉおよびＤｕｎｎに対しての米国特許第５，６４３，７６３号、および１９９０年８月２９日に出願されたＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ米国特許出願第０７／５７４，７４８号、１９９０年８月３１日に出願された第０７／５７５，９６２号、１９９１年１２月１７日に出願された第０７／８１０，２７９号、１９９２年３月１８日に出願された第０７／８５３，４０８号、１９９２年６月２３日に出願された第０７／９０４，０６８号、１９９２年１２月１６日に出願された第０７／９９０，８６０号、１９９３年４月２６日に出願された第０８／０５３，１３１号、１９９３年７月２２日に出願された第０８／０９６，７６２号、１９９３年１１月１８日に出願された第０８／１５５，３０１号、１９９３年１２月３日に出願された第０８／１６１，７３９号、１９９３年１２月１０日に出願された第０８／１６５，６９９号、１９９４年３月９日に出願された第０８／２０９，７４１号に記載され、開示は本明細書で参照により組み込まれる。欧州特許第０  ５４６  ０７３  Ｂ１号、国際特許出願ＷＯ第９２／０３９１８号、ＷＯ第９２／２２６４５号、ＷＯ第９２／２２６４７号、ＷＯ第９２／２２６７０号、ＷＯ第９３／１２２２７号、ＷＯ第９４／００５６９号、ＷＯ第９４／２５５８５号、ＷＯ第９６／１４４３６号、ＷＯ第９７／１３８５２号、およびＷＯ第９８／２４８８４号、および米国特許第５，９８１，１７５号もさらに参照し、これらの開示は参照によりすべて本明細書に組み込まれる。Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）、およびＴｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）をさらに参照し、これらの開示は参照によってすべて本明細書に組み込まれる。
【０２７０】
Ｋｉｒｉｎは、染色体の大部分、または染色体のすべてが微小核体融合によって導入されたマウスからのヒト抗体の生成を示した。欧州特許出願第７７３  ２８８号、および第８４３  ９６１号を参照、これらの開示は本明細書で参照により組み込まれる。さらに、ＫｉｒｉｎのＴｃマウスをＭｅｄａｒｅｘのミニ遺伝子座（Ｈｕｍａｂ）マウスと異種交配させて生まれたＫＭ（登録商標）−マウスが、生成されている。これらのマウスは、ＫｉｒｉｎマウスのヒトＩｇＨ導入染色体およびＧｅｎｐｈａｒｍマウスのκ鎖導入遺伝子を有する（Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ，（２００２）４：９１−１０２）。
【０２７１】
ヒト抗体は、インビトロ方法によっても得ることができる。適切な例は、ファージディスプレイ（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｄｙａｘ、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｘｏｍａ、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ、Ａｌｅｘｉｏｎ（以前はＰｒｏｌｉｆｅｒｏｎ）、Ａｆｆｉｍｅｄ）、リボソームディスプレイ（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、イーストディスプレイ等を含むがこれに限定されない。
【０２７２】
抗体の調製
本明細書に記載される抗体は、以下に記載されるＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術の利用によって調製された。かかるマウスは、ヒト免疫グロブリン分子および抗体を産出することができ、マウス免疫グロブリン分子および抗体の産出ができない。それを達成するために利用される技術は、本明細書の背景の節に開示される特許、出願、および参照に開示される。しかし具体的には、マウスおよびそこからの抗体の遺伝子導入産出の好ましい実施形態は、１９９６年１２月３日に出願された米国特許出願第０８／７５９，６２０号、および１９９８年６月１１日に公開された国際特許出願ＷＯ第９８／２４８９３号、および２０００年１２月２１日に公開されたＷＯ第００／７６３１０号に開示され、これらの開示は本明細書で参照により組み込まれる。Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７）を参照、これらの開示は本明細書に参照により組み込まれる。
【０２７３】
かかる技術の使用によって、様々な抗原に対する完全ヒトモノクローナル抗体が、産出されている。基本的には、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）株のマウスが、対象の抗原（例えばＣＤ１０５）で免疫され、（Ｂ細胞等の）リンパ細胞が過免疫マウスから回収され、回収されたリンパ球は、骨髄型の細胞株と融合されて、不死化ハイブリドーマ細胞株を調製する。これらのハイブリドーマ細胞株は、対象の抗原に特異的な抗体を産出したハイブリドーマ細胞株を同定するために、スクリーニングされ、選択される。本明細書では、ＣＤ１０５に特異的な抗体を産出する複数のハイブリドーマ細胞株の産出方法を提供する。さらに本明細書では、かかる抗体の重鎖および軽鎖のヌクレオチドおよびアミノ酸配列解析を含むかかる細胞株によって産出された抗体の特性評価を提供する。
【０２７４】
あるいは、ハイブリドーマを精製するために骨髄腫細胞と融合する代わりに、Ｂ細胞を直接アッセイすることができる。例えば、ＣＤ１９＋Ｂ細胞は、過免疫ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）マウスから単離することができ、抗体を分泌する血漿細胞へ増殖および分化させることができる。細胞上清からの抗体は、ＣＤ１０５免疫原に対する反応性についてＥＬＩＳＡによってスクリーンニングされる。上清は、ＣＤ１０５上の、対象機能のドメインへの結合に対して異なる抗体をさらにマッピングするために、ＣＤ１０５の断片に対する免疫反応性についてスクリーンすることができる。抗体は他の関係したヒトエンドグリコシダーゼについて、およびＣＤ１０５の相同分子種であるラット、マウス、およびカニクイザル等の非ヒト霊長類に対してスクリーンすることができ、最後のものは、種の交差反応を決定するためである。対象の抗体を含有するウェルからのＢ細胞を、個々のまたは貯蔵されたウェルのいずれかからハイブリドーマを作製するための融合を含む様々な方法によって、またはＥＢＶの感染もしくは既知の不死化遺伝子による形質移入によって、次いで適切な培地に植えることによって、不死化することができる。あるいは、所望の特異性で抗体を分泌する単一血漿細胞は、ＣＤ１０５特異的溶血プラークアッセイを使用して単離される（例えばＢａｂｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３−４８（１９９６）を参照）。溶解を標的とした細胞は、好ましくはＣＤ１０５抗原で覆われているヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）である。
【０２７５】
対象の免疫グロブリンおよび補体を分泌する血漿細胞を含有するＢ細胞培養の存在下での、プラークの形成は対象の血漿細胞を取り囲むヒツジ赤血球の特定のＣＤ１０５媒介溶解を示す。プラークの中心における単一の抗原特異的血漿細胞は、単離することができ、抗体の特異性をコードする遺伝子情報が、単一の血漿細胞から単離される。逆転写の後にＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）を使用して、抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡをクローンすることができる。かかるクローン化されたＤＮＡは、適切な発現ベクター、好ましくはｐｃＤＮＡ等のベクターカセット、より好ましくは免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の定常ドメインを含有するようなｐｃＤＮＡベクターにさらに挿入され得る。生成されたベクターは、宿主細胞、例えばＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞に、トランスフェクトされ、転写の融合、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために、適切に修飾された従来の栄養培地において培養することができる。
【０２７６】
ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体が、ハイブリドーマ細胞株以外の細胞株で発現され得ることを理解されるであろう。特定の抗体をコードする配列を、適切な哺乳動物の宿主細胞を形質転換するために使用することができる。形質転換は、例えばウイルスに（またはウイルスベクターに）ポリヌクレオチドをパッケージし、ウイルス（またはベクター）で宿主細胞を形成導入することを含む、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための任意の既知の方法であることができ、または（特許が本明細書で参照によって組み込まれている）米国特許第４，３９９，２１６号、第４，９１２，０４０号、第４，７４０，４６１号、および第４，９５９，４５５号に例示される当業者に知られている形質移入手順であることができる。使用される形質転換の手順は、形質転換される宿主に依存する。異種性ポリヌクレオチドを哺乳動物細胞に導入するための方法は、当業者によく知られており、デキストラン媒介した形質移入、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介した形質移入、原形質融合、電気穿孔、リポソームにおけるポリヌクレオチドの被包、および核へのＤＮＡの直接微量注入を含む。
【０２７７】
発現のための宿主として使用できる哺乳動物細胞株は、当業者によく知られており、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株を含み、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えばＨｅｐ  Ｇ２）、ヒト上皮腎臓２９３細胞、および多くの他の細胞株を含むがこれに限定されない。特に好適な細胞株は、どの細胞株が高い発現量を有し、恒常的ＣＤ１０５結合特性を含む抗体を産出するか決定して選択される。
【０２７８】
細胞間の融合技術において、骨髄腫、ＣＨＯ細胞または他の細胞株は任意の所望のアイソタイプを含む重鎖を持つように調製され、別の骨髄腫、ＣＨＯ細胞または他の細胞株は軽鎖を持つように調製される。その後かかる細胞は融合され、無傷抗体を発現する細胞株を単離することができる。
【０２７９】
したがって、抗体の候補は、上記に論じたように所望の「構造的な」性状を満たすように生成されると、一般的にそれらは、アイソタイプ切り替えによって所望の「機能的な」性状の少なくとも確信とともに提供され得る。
【０２８０】
治療のための投与および製剤
本発明の実施形態は、疾患の治療として有用である抗ＣＤ１０５抗体の無菌の医療製剤を含む。かかる処方は、天然ＣＤ１０５特異的リガンド、例えばＴＧＦ−β等のＣＤ１０５への結合を阻害し、それにより例えば血清または組織ＣＤ１０５発現が異常に上昇される病態を効果的に治療するであろう。抗ＣＤ１０５抗体は、好ましくは例えばＴＧＦ−β等の天然ＣＤ１０５特異的リガンドを強く阻害するように適切な親和性を持ち、好ましくはヒトにおいて低頻度の投与を可能とするように適切な作用の持続時間を有する。作用の長期持続時間は、皮下または筋肉注射等の代わりの非経口経路による少ない頻度およびより便利な服薬スケジュールを可能にするであろう。
【０２８１】
無菌製剤は、凍結乾燥および抗体の再構成前または後に、例えば無菌ろ過膜を通してろ過することによって作製され得る。抗体は、通常、凍結乾燥した形態または溶液で保存される。治療抗体組成物は、一般的に無菌のアクセスポートを有する容器、例えば皮下注射針で穴を開けることができるストッパー等の製剤の取り出しを可能にするアダプターを有する静脈注射用の溶液袋またはバイアル中に配置される。
【０２８２】
抗体投与の経路は、既知の方法、例えば静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼球内、動脈内、くも膜下、吸入、または病巣内経路による注射または注入、腫瘍部位に直接注射、または以下に記載される徐放システムに従う。抗体は、好ましくは注入、またはボーラス注射によって継続して投与される。
【０２８３】
治療的に利用される抗体の有効量は、例えば治療目的、投与の経路、および患者の状態に依存する。したがって、治療専門家は、最適な治療効果を得るために、必要であれば、用量を滴定し投与の経路を修正することが好ましい。典型的には、臨床医は、用量が所望の効果を達成するまで抗体を投与する。この治療の進捗は、従来のアッセイによって、または本明細書に記載されるアッセイによって、簡単に観察される。
【０２８４】
本明細書に記載される抗体は、薬剤として許容できる担体との混合物において調製され得る。この治療組成物は、静脈内、または鼻もしくは肺を通して、好ましくは液体もしくは（凍結乾燥された）粉末エアロゾルとして投与され得る。組成物は、必要に応じて非経口でまたは皮下に投与される。全身的に投与される場合、治療組成物は無菌であり、発熱物質が含まれず、ｐＨ、等張性、および安定性を十分顧慮する、非経口的に許容できる溶液の中にあるべきである。この条件は、当業者に知られている。簡潔に述べると、本明細書に記載される化合物の投与製剤は、所望の純度を有する化合物を、薬剤として許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって、保存または投与するために調製される。かかる物質は、用量および利用される濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、ＴＲＩＳ  ＨＣｌ、リン酸塩、クエン酸、酢酸、および他の有機酸性塩等の緩衝液、アスコルビン酸等の抗酸化物、ポリアルギニン等の低分子量（約１０残基未満）のペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等のタンパク質、ポリビニルピロリドン等の親水性のポリマー、グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、またはアルギニン等のアミノ酸、セルロースまたはその誘導体、ブドウ糖、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、および他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、マンニトールまたはソルビトール等の糖アルコール、ナトリウム等の対イオンおよび／またはＴＷＥＥＮ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ、またはポリエチレングリコール等の非イオン界面活性剤を含む。
【０２８５】
注射のための無菌組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈ  ｅｄ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｅｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（２００３））に記載されるように従来の薬務に従って処方され得る。例えば、水、またはゴマ、ピーナッツ、もしくは綿実油等の自然発生的植物油、またはオレイン酸エチル等の合成脂肪質の媒体等の薬剤として許容される担体中で活性化合物の溶解または懸濁が所望であり得る。緩衝液、防腐剤、抗酸化物等を、認められた薬務に従って組み込まれることができる。
【０２８６】
持続放出製剤の適切な例は、ポリペプチドを含有する固形疎水性ポリマーの半透性のマトリクスであって、そのマトリクスが造形品、フィルム、マイクロカプセルの形であるものを含む。半透性のマトリクスの例は、Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ  Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，（１９８１）１５：１６７−２７７およびＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，（１９８２）１２：９８−１０５に記載されるようにポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリル酸）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ５８，４８１）、Ｌ−グルタミン酸およびγエチル−Ｌ−グルタミン酸塩のコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，，（１９８３）２２：５４７−５５６）、非分解性のエチレン酢酸ビニール（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）、ＬＵＰＲＯＮ  Ｄｅｐｏｔ（登録商標）等の分解性乳酸グリコール酸のコポリマー（乳酸グリコール酸コポリマーおよびリュープロリド酢酸塩からなる注射用微粒子）、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）を含む。
【０２８７】
エチレンビニル酢酸および乳酸グリコール酸等のポリマーは１００日以上にわたって分子を放出することを可能にするが、ある種のヒドロゲルは短い期間タンパク質を放出する。内包されたタンパク質が体内に長時間残る場合、それらは３７℃における水分の暴露により変性するまたは擬集し得、生物活性の損失および免疫原性の変化の可能性がある。合理的な戦略を、関与するメカニズムに依存して、タンパク質の安定のために考案することができる。例えば擬集メカニズムがジスルフィド交換による分子間のＳ−Ｓ結合形成であることが見出された場合、安定化は、スルフヒドリル残基を修飾し、酸性溶液から凍結乾燥し、水分含量を制御し、適切な添加剤を使用し、特定のポリマーマトリックス組成物を開発することによって達成することができる。
【０２８８】
持続放出される組成物は、懸濁液において結晶を維持することができる適切な製剤に懸濁している抗体の結晶の調製物も含む。これらの調製物は、皮下にまたは腹腔内に注入された時に持続放出効果を産出することができる。他の組成物は、リポソーム捕捉（ｌｉｐｏｓｏｍａｌｌｙ  ｅｎｔｒａｐｐｅｄ）抗体も含む。かかる抗体を含有するリポソームは、本来知られている方法で調製される。米国特許ＤＥ第３，２１８，１２１号、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，（１９８５）８２：３６８８−３６９２、Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，（１９８０）７７：４０３０−４０３４、ＥＰ  ５２，３２２、ＥＰ  ３６，６７６、ＥＰ  ８８，０４６、ＥＰ  １４３，９４９、１４２，６４１、日本特許出願第８３−１１８００８、米国特許第４，４８５，０４５、および第４，５４４，５４５号、およびＥＰ１０２，３２４を参照。
【０２８９】
ある患者に対する抗体製剤の用量は、担当医師によって、疾患の重症度および種類、体重、性別、食生活、時間および投与の経路、他の投与中の薬剤および他の関連臨床要因を含む、薬物の作用を変更することが知られている様々な要因を考慮して、決定される。治療効果のある用量は、インビトロまたはインビボ方法のいずれによっても決定され得る。
【０２９０】
本明細書に記載される治療的に利用される抗体の有効量は、例えば治療目的、投与の経路、および患者の状態に依存する。したがって、治療専門家は、最適な治療効果を得るために、必要であれば、用量を滴定し投与の経路を修正することが好ましい。典型的な１日の服用量は、上記の要因によって、患者の体重１ｋｇあたり、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、１００００ｍｇ／ｋｇ以上までにわたる可能性がある。用量は、上記の要因に依存して、患者の体重１ｋｇあたり、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、または０．０１〜０．１０ｍｇ／ｋｇであることができる。典型的には、臨床医は所望の効果を達成する用量に達するまで治療抗体を投与する。この療法の進捗は、従来のアッセイによって、または本明細書に記載されるアッセイによって、簡単に観察される。
【０２９１】
本発明の抗体の用量は、繰り返すことができ、投与間に、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２ヶ月、７５日、３ヶ月、または少なくとも６ヶ月の間を置くことができる。
【０２９２】
本明細書における組成物および方法に従った治療物質の投与は、改善された伝達、送達、耐性等を提供するために、製剤に組み込まれる適切な担体、賦形剤、および他の薬剤とともに投与されることが理解されるであろう。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）等の）小胞を含有する（陽イオン性または陰イオン性）脂質、ＤＮＡ複合体、無水吸収ペースト、水中油および油中水乳濁液、乳濁液カーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体のジェル、およびカーボワックスを含有する半固体の混合物を含む。前述の混合物のいずれも、製剤における活性成分が製剤によって不活性化されず、製剤は生理的に適合性を有し、投与の経路で許容できるという条件で、本発明に従う治療および療法において適切であり得る。Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ．”Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２（２）：２１０−８（２０００）、Ｗａｎｇ  Ｗ．“Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３（１−２）：１−６０（２０００）、Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ  “Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｓｏｍｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ”Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ．８９（８）：９６７−７８（２０００）、Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８−３１１（１９９８）、および薬剤師によく知られている製剤、賦形剤、および担体に関する追加情報に対するそれらの中の引用を参照。
【０２９３】
他の治療法のデザインおよび生成
本発明に従って、およびＣＤ１０５について本明細書において産出され特徴付けられた抗体の活性に基づいて、抗体部分を越える他の治療様式のデザインが容易にされる。かかる様式は、二重特異性抗体、抗毒素、および放射標識治療等の進化した抗体治療法、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｄＡｂ等の抗体断片、ペプチド治療の生成、新規骨格におけるＣＤ１０５結合ドメイン、遺伝子治療、特に細胞内抗体、アンチセンス治療、および小分子を含むがこれらに限定されない。
【０２９４】
抗原結合部位は、フィブロネクチンまたはシトクロムＢ等の非抗体タンパク質の骨格におけるＣＤＲの配置によって（Ｈａａｎ＆  Ｍａｇｇｏｓ（２００４）ＢｉｏＣｅｎｔｕｒｙ，１２（５）：Ａ１−Ａ６、Ｋｏｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２８４：１１４１−１１５１、Ｎｙｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，７：４６３−４６９）、または所望の標的に対する結合特異性を与えるようにタンパク質の骨格内のループのアミノ酸残基をランダム化するまたは突然変異することで、提供され得る。タンパク質において新しい結合部位を操作するための骨格は、Ｎｙｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎｙｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，７：４６３−４６９）によって詳細に考察されている。抗体模倣物のためのタンパク質の骨格は、発明者が少なくとも１つのランダム化されたループを有するフィブロネクチンタイプＩＩＩドメインを含むタンパク質（抗体模倣物）を説明する、本明細書に参照により全体が組み込まれているＷＯ／第００３４７８４号に開示される。１つ以上のＣＤＲ、例えば一組のＨＣＤＲが移植される適切な骨格は、免疫グロブリン遺伝子のスーパーファミリーの任意のドメインメンバーによって提供され得る。骨格は、ヒトまたは非ヒトタンパク質であることができる。非抗体タンパク質の骨組の強みは、少なくともいくつかの抗体分子よりも小さい、および／または製造が容易な骨格分子において抗原−結合部位が提供されることである。結合メンバーの小さなサイズは、細胞に進入する、組織に深く浸透する、または他の構造内の標的に到達する、または標的抗原のタンパク質の腔内で結合することができる能力等の有用な生理学的性質を付与し得る。非抗体タンパク質の骨格における抗原結合部位の使用は、Ｗｅｓｓ，２００４（Ｗｅｓｓ，Ｌ．Ｉｎ：ＢｉｏＣｅｎｔｕｒｙ，Ｔｈｅ  Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｎ  ＢｉｏＢｕｓｉｎｅｓｓ，１２（４２），Ａ１−Ａ７，２００４）によって概説されている。典型的には、安定した骨格を有するタンパク質であり、１つ以上のループのアミノ酸配列の可変ループは、標的抗原に結合する抗原結合部位を作るために特異的またはランダムに突然変異される。かかるタンパク質は、黄色ブドウ球菌からのＡタンパク質のＩｇＧ結合ドメイン、トランスフェリン、アルブミン、テトラネクチン、フィブロネクチン（例えば１０ｔｈフィブロネクチンタイプＩＩＩドメイン）、リポカリン、ならびにγ結晶性および他のＡｆｆｉｌｉｎ（登録商標）の骨格（Ｓｃｉｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）を含む。他のアプローチの例は、分子内のジスルフィド結合を有するタンパク質であるサイクロチドに基づく合成の「微小体」、マイクロタンパク質（Ｖｅｒｓａｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、Ａｍｕｎｉｘ）、およびアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ）を含む。
【０２９５】
抗体配列および／または抗原結合部位に加えて、本発明による標的結合剤は、例えば、折りたたんだドメイン等の例えばペプチドまたはポリペプチドを形成する、または抗原と結合する能力に加えて分子に別の機能的特徴を与える、他のアミノ酸を含むことができる。本発明の標的結合剤は、検出可能標識を保有することができる、または毒素または標的部分または酵素に（例えばぺプチジル結合またはリンカーを通して）複合化され得る。例えば、標的結合剤は（例えば酵素ドメインにおいて）触媒部位、ならびに抗原結合部位を含むことができ、そこでは、抗原結合部位は抗原と結合し、したがって、抗原に対して触媒部位を標的にする。触媒部位は、例えば開裂によって、抗原の生物学的機能を阻害することができる。
【０２９６】
進化した抗体治療の生成に関連して、補体結合が望ましい属性の場合、例えば二重特異性抗体、抗毒素、または放射標識を使用して細胞を殺減するための補体への依存を避けることが可能である。
【０２９７】
例えば、二重特異性抗体は、（ｉ）複合体にされた、１つはＣＤ１０５に対して特異性を有し、もう１つは第２の分子に対する特異性を有する２つの抗体、（ｉｉ）ＣＤ１０５に対して特異的な１つの鎖および第２の分子に対して特異的な第２の鎖を有する単一抗体、または（ｉｉｉ）ＣＤ１０５および他の分子に対して特異性を有する一本鎖の抗体を含むように生成され得る。かかる二重特異性抗体は、よく知られている技術を使用して生成され得る。例えば（ｉ）および（ｉｉ）に関しては、Ｆａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ４：７２−８１（１９９４）およびＷｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ（上記）、（ｉｉｉ）に関しては、例えば参照Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（Ｓｕｐｐｌ．）７：５１−５２（１９９２）を参照。  それぞれの場合、第２の特異性は、ＣＤ１６またはＣＤ６４（例えばＤｅｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １８：１２７（１９９７）を参照）またはＣＤ８９（例えばＶａｌｅｒｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ９０：４４８５−４４９２（１９９７）を参照）を含むがこれに限定されない重鎖活性化受容体に対して作製され得る。
【０２９８】
抗体は、当業者によく知られている技術を利用して、抗毒素として働くために修飾され得る。例えばＶｉｔｅｔｔａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １４：２５２（１９９３）を参照。  米国特許第５，１９４，５９４号も参照。放射標識された抗体の調製に関連して、かかる修飾された抗体は、当業者によく知られている技術を利用して容易に調製することもできる。例えばＪｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ６５５−６８６（２ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｆｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ，ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｒａｖｅｎ（１９９６））を参照。米国特許第４，６８１，５８１号、第４，７３５，２１０号、第５，１０１，８２７号、第５，１０２，９９０号（ＲＥ３５，５００）、第５，６４８，４７１号、および第５，６９７，９０２号も参照。それぞれの抗毒素、または放射標識された分子は、おそらく所望の多量体酵素サブユニットオリゴマー化ドメインを発現する細胞を殺滅するであろう。
【０２９９】
抗体が薬剤（例えば放射性同位体、医薬組成物、または毒素）に連結される場合、薬剤は、有糸分裂阻害、アルキル化、代謝拮抗、抗血管新生、アポトーシス性、アルカロイド、ＣＯＸ−２、および抗菌剤、およびその組み合わせの群から選択される薬剤学的性質を持つことが意図される。薬物は、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、トリアゼン、葉酸類似体、アントラサイクリン、タキサン、ＣＯＸ−２阻害剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、代謝拮抗、抗生物質、酵素、エピポドフィロトキシン、白金配位複合体、ビンカアルカロイド、置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制薬、拮抗薬、エンドスタチン、タキソール、カンプトテシン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、および類似体、およびその組み合わせの群から選択することができる。
【０３００】
ある特定の例では、本発明の標的薬剤は、治療薬または毒素、例えばカリチアマイシンおよびエスペラミシン等のエンジインファミリー分子のメンバーに複合化される。化学的毒素は、デュオカルマイシン（米国特許第５，７０３，０８０号、第４，９２３，９９０号）、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシン、および５−フルオロウラシルからなる群から採用することができる。化学療法剤の例は、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、ブスルファン、サイトキシン、タキソール、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン、（米国特許第４，６７５，１８７号）、メルファラン、および他の関係するナイトロジェンマスタードも、含む。
【０３０１】
特定の実施形態において、本発明の標的薬剤は、細胞分裂停止、細胞傷害性、または免疫抑制剤に複合化される。一実施形態において、細胞傷害性薬物は、エンジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、クリプトフィジン、バッカチン誘導体、ポドフィロトキシン、ピューロマイシン、ドラスタチン、マイタンシノイド、ドラスタチン、およびビンカアルカロイドからなる群から選択される。具体的な実施形態において、細胞傷害性薬物は、パクリタキセル、ドセタキセル、ＣＣ−１０６５、トリコテン、ＳＮ−３８、トポテカン、モルフォリノ−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、ドラスタチン−１０、エキノマイシン、コンブレタスタチン、カリチアマイシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ＶＰ−１６、カンプトテシン、エピチロンＡ、エピチロンＢ、ノコダゾール、コイチシン、コルシミド、エストラムスチン、セマドチン、ディスコデルモリド、エリュテロビン、マイタンシンＤＭ−１、アウリスタチンＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＡＥＦＰ、ＭＭＡＥ、またはネトロプシン（米国特許第２００５／０２３８６４９号）、およびそれらの誘導体である。
【０３０２】
特定の他の実施形態において、細胞毒性剤は、マイタンシンまたはマイタンシノイド、およびその誘導体であり、本発明の標的薬剤は１つ以上のマイタンシノイド分子と複合化される。マイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。マイタンシンは、最初に東アフリカの低木Ｍａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａ（米国特許第３，８９６，１１１号）から単離された。その後、ある微生物がマイタンシノールおよびＣ−３マイタンシノールエステル等のマイタンシノイドも産出することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成マイタンシノールおよび誘導体およびそれらの類似体は、例えば米国特許第４，１３７，２３０号、第４，２４８，８７０号、第４，２５６，７４６号、第４，２６０，６０８号、第４，２６５，８１４号、第４，２９４，７５７号、第４，３０７，０１６号、第４，３０８，２６８号、第４，３０８，２６９号、第４，３０９，４２８号、第４，３１３，９４６号、第４，３１５，９２９号、第４，３１７，８２１号、第４，３２２，３４８号、第４，３３１，５９８号、第４，３６１，６５０号、第４，３６４，８６６号、第４，４２４，２１９号、第４，４５０，２５４号、第４，３６２，６６３号、および第４，３７１，５３３号に開示される。それらの治療指数を改善する試みで、マイタンシンおよびマイタンシノイドは、腫瘍細胞抗原に特異的に結合する抗体に複合化されている。マイタンシノイドを含有する免疫複合体およびそれらの治療上の使用は、例えば米国特許第５，２０８，０２０号、第５，４１６，０６４号、および欧州特許ＥＰ第０  ４２５  ２３５  Ｂ１号に開示される。  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６）は、ヒト結腸直腸癌に向けられたモノクローナル抗体Ｃ２４２と結合したＤＭ１と命名されたマイタンシノイドを含む免疫複合体を記載する。その複合体は、培養された結腸癌細胞に対して高く細胞傷害性であること、およびインビボ腫瘍成長アッセイにおいて抗腫瘍性活性を示すことが分かった。Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）は、マイタンシノイドが、ヒト結腸癌細胞株において抗原と結合するマウス抗体Ａ７と、またはＨＥＲ−２／ｎｅｕ癌遺伝子と結合する別のマウスモノクローナル抗体ＴＡ．１と、ジスルフィドリンカーを通して複合化された免疫複合体を記載する。ＴＡ．１−マイタンシノイド複合体の細胞毒性は、１細胞につき３×１０５ＨＥＲ−２の表面抗原を発現するヒト乳癌細胞株ＳＫ−ＢＲ−３においてインビトロで試験された。この薬物複合体は、遊離マイタンシノイド薬剤と同様の細胞毒素の程度を達成し、抗体分子ごとのマイタンシノイド分子の数を増加することによって増加させることが可能であった。Ａ７マイタンシノイド複合体は、マウスにおいて低い全身性細胞毒素を示した。したがって、本発明は、ある癌の治療のためのマイタンシノイド薬剤と複合化される標的薬剤を意図する。
【０３０３】
特定の他の実施形態において、対象とする別の免疫複合体は、１つ以上のカリチアマイシン分子と複合化される本発明の標的薬剤を含む。カリチアマイシンファミリーの抗菌物質は、サブピコモル濃度において二本鎖のＤＮＡ切断を産出することができる。カリチアマイシンファミリーの複合体の調製については、米国特許第５，７１２，３７４号、第５，７１４，５８６号、第５，７３９，１１６号、第５，７６７，２８５号、第５，７７０，７０１号、第５，７７０，７１０号、第５，７７３，００１号、第５，８７７，２９６号（すべてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）を参照。使用することができるカリチアマイシンの構造的類似体は、γ１Ｉ、γ２Ｉ、γ３Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１Ｉ、ＰＳＡＧおよびθＩ１を含むがこれに限定されない（Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３３３６−３３４２（１９９３），Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５−２９２８（１９９８）および前述のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄに付与された米国特許）。抗体が複合化され得る別の抗腫瘍剤は、抗葉酸剤であるＱＦＡである。カリチアマイシンおよびＱＦＡの両方は、作用の細胞内部位を有し、細胞膜を容易に越えることはない。したがって、抗体を媒介した内部移行によるこれらの薬剤の細胞取り込みは、それらの細胞傷害性の効果を非常に高める。
【０３０４】
本発明の免疫複合体において使用できる他の毒素は、毒レクチン、リシン、アブリン、モデシン、ボツリヌス、およびジフテリア毒素等の植物毒素を含む。もちろん、様々な毒素の組み合わせを、１つの抗体分子と組み合わせることができ、それによって、可変細胞毒素を提供する。本発明の併用療法において適切に利用される毒素の実例は、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、デオキシリボヌクレアーゼＩ、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、緑膿菌外毒素、およびシュードモナスエンドトキシンである。例えばＰａｓｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４７：６４１（１９８６）、およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ，４４：４３（１９９４）を参照。使用することができる酵素的に活発な毒素およびその断片は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌から）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテシンを含む。
【０３０５】
適切な毒素および化学療法剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９９５）、およびＧｏｏｄｍａｎ  Ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９８５）に記載される。他の適切な毒素および／または化学療法剤は、当業者に知られている。
【０３０６】
放射性同位体の例は、局在化および／またはセラピーに使用され得るγ放出体、陽電子放出体、およびＸ線放出体、および療法に使用され得るβ放出体およびα放出体を含む。診断、予後、およびステージ分類に対して有用な前に記載した放射性同位体は、治療にも有用である。
【０３０７】
抗癌または抗白血病薬剤の限定されない例は、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、イダルビシン、デトルビシン、カルミノマイシン、エピルビシン、エソルビシン、およびモルフォリノ等のアントラサイクリン、ならびに置換誘導体、それらの組み合わせおよび修飾を含む。例示的な医薬品は、シスプラチン、タキソール、カリチアマイシン、ビンクリスチン、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、シクロホスファミド、プレドニゾン、ダウノルビシン、イダルビシン、フルダラビン、クロラムブシル、インターフェロンα、ヒドロキシウレア、テモゾロマイド、サリドマイド、およびブレオマイシン、および誘導体、それらの組み合わせおよび修飾を含む。好ましくは、抗癌または抗白血病は、ドキソルビシン、モルフォリノドキソルビシン、またはモルフォリノダウノルビシンである。
【０３０８】
本発明の抗体は、哺乳動物、好ましくはヒトにおいて、未修飾抗体のものを超える半減期（例えば、血清半減期）を有する抗体も包含する。該抗体半減期は、約１５日を超える、約２０日を超える、約２５日を超える、約３０日を超える、約３５日を超える、約４０日を超える、約４５日を超える、約２ヶ月を超える、約３ヶ月を超える、約４ヶ月を超える、または約５ヶ月を超えることができる。哺乳動物、好ましくはヒトにおける、本発明の抗体またはその断片の増加した半減期は、哺乳動物における該抗体または抗体断片の高い血清力価を生じ、したがって、該抗体または抗体断片の投与の頻度を低減し、および／または投与される該抗体または抗体断片の濃度を低減する。インビボ半減期を増加した抗体またはその断片は、当業者に知られている技術によって生成され得る。例えば、増加したインビボ半減期を有する抗体またはその断片は、ＦｃドメインおよびＦｃＲｎ受容体の間の相互作用に関与するとして同定されたアミノ酸残基を修飾する（例えば、置換する、欠失させる、または付加する）ことによって生成され得る（例えば、本明細書に参照によって全体が組み込まれている国際公開ＷＯ第９７／３４６３１号およびＷＯ第０２／０６０９１９号を参照）。増加したインビボ半減期を有する抗体またはその断片は、高分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等のポリマー分子を該抗体または抗体断片に結合させることによって生成され得る。ＰＥＧは、多機能リンカーの有無にかかわらず、該抗体または抗体断片のＮもしくはＣ末端に対するＰＥＧの部位特異的な複合化を通してまたはリジン残基に存在するεアミノ基を通して、該抗体または抗体断片に結合され得る。生物活性の最小の損失を生じる線状または分岐ポリマー誘導体化が使用される。複合度は、抗体とＰＥＧ分子との適切な複合を確かにするため、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析によって厳重に監視される。未反応ＰＥＧは、例えば、サイズ排除またはイオン交換クロマトグラフィーによって抗体ＰＥＧ複合体から分離され得る。
【０３０９】
上記の実施形態において、当業者によって理解されるように、親和性の値は重要であり得るが、抗体の特定の機能によっては、他の要因も同様にまたはそれ以上に重要であり得る。例えば、抗毒素（抗体に関連する毒素）に対して、標的と抗体と結合の作用は有用であるが、いくつかの実施形態において、所望の最終結果は、細胞への毒素の内部移行である。したがって、高率の内部移行を有するかかる抗体が、これらの状況において望ましい。したがって、一実施形態において、内部移行における高効率を有する抗体が意図される。内部移行の高効率は、内部移行された抗体率として測定することができ、低値から１００％まであることができる。例えば、様々の実施形態で、０．１〜５、５〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜４５、４５〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜９９、および９９〜１００％が、高効率であり得る。当業者に理解されるように、所望の効率は、例えば関連する薬剤、１つの範囲に投与可能な抗体の量、抗体薬剤の複合体の副作用、治療される問題の種類（例えば癌の種類）および重症度に依存して、異なる実施形態においては異なり得る。
【０３１０】
他の実施形態において、本明細書に開示される抗体は、ＣＤ１０５の発現における変化に関連する疾患または障害に対してスクリーニングするために、哺乳類の組織または細胞におけるＣＤ１０５発現の検出のためのアッセイキットを提供する。そのキットは、ＣＤ１０５と結合する抗体および存在する場合、抗原との抗体の反応を示すための手段を含む。
【０３１１】
組み合わせ
本明細書に定義される標的結合剤または抗体は、単独の療法として適用され得るか、または本発明の化合物に加えて、従来の手術または放射線治療または化学療法を伴うことができる。かかる化学療法は、以下の抗腫瘍剤のカテゴリーうちの１つ以上を含むことができる。
【０３１２】
（ｉ）  アルキル化剤（例えばシスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、テモゾロマイド、およびニトロソウレア）、代謝拮抗剤（例えばフロロピリミジン様５フルオロウラシルおよびテガフール等のゲムシタビンおよび抗葉酸剤、ラルチトレキセド、メトトレキサート、シトシンアラビノシド、ならびにヒドロキシウレア）、抗腫瘍性抗生物質（例えばアントラサイクリン様アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシンおよびミトラマイシン）、有糸分裂阻害剤（例えばビンカアルカロイド様ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビンおよびタキソイド様タキソールおよびタキソテールおよびポロキナーゼ阻害剤）、ならびにトポイソメラーゼ阻害剤（例えばエピポドフィロトキシン様エトポシドおよびテニポシド、アムサクリン、トポテカンおよびカンプトテシン）等の内科的腫瘍学において使用される、他の抗増殖／抗悪性腫瘍剤およびその組み合わせ、
（ｉｉ）  抗エストロゲン剤（例えばタモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、およびヨードキシフェン）、抗アンドロゲン（例えばビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、および酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨ拮抗薬またはＬＨＲＨアゴニスト（例えばゴセレリン、リュープロレリン、およびブセレリン）、プロゲストゲン（例えば酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えばアナストロゾール、レトロゾール、ボラゾールおよびエキセメスタン）、ならびにフィナステライド等の５α−レダクターゼの阻害剤等の細胞分裂停止剤、
（ｉｉｉ）  抗浸潤剤（例えばｃ−Ｓｒｃキナーゼファミリー阻害剤様４−（６−クロロ−２，３−メチレンジオキシアニリノ）−７−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エトキシ］−５−テトラヒドロピラン−４−イルオキシキナゾリン（ＡＺＤ０５３０、国際特許出願ＷＯ第０１／９４３４１号）およびＮ−（２−クロロ−６−メチルフェニル）−２−｛６−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］−２−メチルピリミジン−４−イルアミノ｝チアゾール−５−カルボキサミド（ｄａｓａｔｉｎｉｂ，ＢＭＳ−３５４８２５；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００４，４７，６６５８−６６６１）、ならびにメタロプロテイナーゼ阻害剤様マリマスタット、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体機能の阻害剤、またはカテプシンの阻害剤、セリンプロテアーゼの阻害剤、例えばマトリプターゼ、ヘプシン、ウロキナーゼ、ヘパラナーゼの阻害剤）、
（ｉｖ）  フルダラビン、２−クロロデオキシアデノシン、クロラムブシルまたはドキソルビシンおよびその組み合わせ、例えばフルダラビン＋シクロホスファミド、ＣＶＰ：シクロホスファミド＋ビンクリスチン＋プレドニゾン、ＡＣＶＢＰ：ドキソルビシン＋シクロホスファミド＋ビンデシン＋ブレオマイシン＋プレドニゾン、ＣＨＯＰ：シクロホスファミド＋ドキソルビシン＋ビンクリスチン＋プレドニゾン、ＣＮＯＰ：シクロホスファミド＋ミトキサントロン＋ビンクリスチン＋プレドニゾン、ｍ−ＢＡＣＯＤ：メトトレキサート＋ブレオマイシン＋ドキソルビシン＋シクロホスファミド＋ビンクリスチン＋デキサメタゾン＋ロイコボリン、ＭＡＣＯＰ−Ｂ：メトトレキサート＋ドキソルビシン＋シクロホスファミド＋ビンクリスチン＋プレドニゾン固定用量＋ブレオマイシン＋ロイコボリン、またはＰｒｏＭＡＣＥ  ＣｙｔａＢＯＭ：プレドニゾン＋ドキソルビシン＋シクロホスファミド＋エトポシド＋シタラビン＋ブレオマイシン＋ビンクリスチン＋メトトレキサート＋ロイコボリン等の等の細胞傷害性薬物、
（ｖ）  成長因子機能の阻害剤、例えばかかる阻害剤は、成長因子抗体および成長因子受容体抗体（例えば抗ｅｒｂＢ２抗体トラスツズマブ［Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）］、抗ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ、抗ｅｒｂＢ１抗体セツキシマブ［Ｅｒｂｉｔｕｘ、Ｃ２２５］およびＳｔｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２００５，Ｖｏｌ．５４，ｐｐ１１−２９）に開示される任意の成長因子または成長因子受容体抗体を含み、かかる阻害剤は、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば上皮性成長因子ファミリーの阻害剤（例えばＮ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ゲフィチニブ、ＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６、７−ｂｉｓ（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ、ＯＳＩ−７７４）および６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）−キナゾリン−４−アミン（ＣＩ１０３３）等のＲａｓ／Ｒａｆシグナル伝達阻害剤等のＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害剤、ラパチニブ等のｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害剤、肝細胞成長因子ファミリーの阻害剤、イマチニブ等の血小板由来の成長因子ファミリーの阻害剤、セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤（例えばファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばソラフェニブ（ＢＡＹ４３−９００６））、ＭＥＫおよび／またはＡＫＴキナーゼを通して細胞シグナリングの阻害剤、肝細胞成長因子ファミリーの阻害剤、ｃ−ｋｉｔ阻害剤、ａｂｌキナーゼ阻害剤、ＩＧＦ受容体（インスリン様成長因子）キナーゼ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤（例えばＡＺＤ１１５２、ＰＨ７３９３５８、ＶＸ−６８０、ＭＬＮ８０５４、Ｒ７６３、ＭＰ２３５、ＭＰ５２９、ＶＸ−５２８、およびＡＸ３９４５９）、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、ＣＤＫ２および／またはＣＤＫ４阻害剤、ならびにＢｃｌ−２、Ｂｃｌ−ＸＬ、例えばＡＢＴ−７３７等の生存シグナル伝達タンパク質の阻害剤も含む。
【０３１３】
（ｖｉ）  例えば血管内皮成長因子の効果を阻害する［例えば抗血管内皮細胞成長因子抗体ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、スニチニブリンゴ酸塩（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））および４−（４−臭素−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４、ＷＯ第０１／３２６５１号内の実施例２）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１、ＷＯ第００／４７２１２号内の実施例２４０）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＷＯ第９８／３５９８５号）およびＳＵ１１２４８（スニチニブ、ＷＯ第０１／６０８１４）等のＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤、国際特許出願ＷＯ第９７／２２５９６号、ＷＯ第９７／３００３５号、ＷＯ第９７／３２８５６号、ＷＯ第９８／１３３５４号、ＷＯ第００／４７２１２号、およびＷＯ第０１／３２６５１号に開示される化合物、ならびに他のメカニズムによって働く化合物（例えばリノマイド、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、およびアンギオスタチン）］またはコロニー刺激要因１（ＣＳＦ１）もしくはＣＳＦ１受容体の効果を阻害するものなどの、抗血管新生剤、
（ｖｉｉ）  コンブレタスタチンＡ４、および国際特許出願ＷＯ第９９／０２１６６号、ＷＯ第００／４０５２９号、ＷＯ第００／４１６６９号、ＷＯ第０１／９２２２４号、ＷＯ第０２／０４４３４号およびＷＯ第０２／０８２１３号に開示される化合物等の血管損傷剤、
（ｖｉｉｉ）  アンチセンス療法、例えば抗ｂｃｌ２アンチセンスであるＧ−３１３９（ゲナセンス）等の、上で列挙した標的に向けられたもの、
（ｉｘ）  例えば異常ｐ５３または異常ＢＲＣＡ１またはＢＲＣＡ２等の異常遺伝子を置換するアプローチ、シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼ、または細胞ニトロレダクターゼ酵素を使用したもの等のＧＤＥＰＴ（遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法）アプローチ、多剤耐性遺伝子セラピー等の、化学療法または放射線治療への患者の耐性を増加するためのアプローチを含む遺伝子セラピーアプローチ、ならびに
（ｘ）  例えばＣＤ５２に向けられたモノクローナル抗体であるアレムツズマブ（ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ（登録商標））での治療、またはＣＤ２２に向けられた抗体での治療、患者の腫瘍細胞の免疫原性を増加するエクスビボおよびインビボアプローチ、インターロイキン２、インターロイキン４、または顆粒球−マクロファージコロニー刺激要因等のサイトカインでの形質移入、ＣＴＬＡ−４機能を阻害するモノクローナル抗体での治療等のＴ細胞アネルギーを減らすためのアプローチ、サイトカインをトランスフェクトした樹枝状細胞等のトランスフェクトされた免疫細胞を使用したアプローチ、サイトカイントランスフェクトされた腫瘍細胞株を使用したアプローチ、および抗イディオタイプ抗体を使用したアプローチを含む免疫療法アプローチ、
（ｘｉ）  ベルケード（ボルテゾミド）等のプロテアソーム阻害剤等のタンパク質分解の阻害剤、
（ｘｉｉ）  例えば、受容体リガンドを隔離する、受容体と結合するリガンドを遮断する、または受容体シグナリング（例えば、増強された受容体分解または低下した発現量による）を減らす（抗体または可溶性外部受容体ドメイン構造等の）ペプチドまたはタンパク質を使用する生物学的治療アプローチ。
【０３１４】
一実施形態において、本明細書で定義される抗腫瘍治療は、本発明の化合物に加えて、アルキル化剤（例えばシスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、テモゾロマイド、およびニトロソウレア）、代謝拮抗剤（例えばフロロピリミジン様５フルオロウラシルおよびテガフール等のゲムシタビンおよび抗葉酸剤、ラルチトレキセド、メトトレキサート、シトシンアラビノシド、ならびにヒドロキシウレア）、抗腫瘍抗生物質（例えばアントラサイクリン様アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシンおよびミトラマイシン）、有糸分裂阻害剤（例えばビンカアルカロイド様ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビンおよびタキソイド様タキソールおよびタキソテールおよびポロキナーゼ阻害剤）、ならびにトポイソメラーゼ阻害剤（例えばエピポドフィロトキシン様エトポシドおよびテニポシド、アムサクリン、トポテカンおよびカンプトテシン）等の内科的腫瘍学で使用される他の抗増殖／抗悪性腫瘍剤およびその組み合わせでの治療を含むことができる。
【０３１５】
一実施形態において、本明細書に定義される抗腫瘍治療は、本発明の化合物に追加して、ゲムシタビンでの治療を含むことができる。
【０３１６】
かかる組み合わせ治療は、治療の個々の構成要素の同時、順次、または分離投与方法で達成され得る。かかる併用製品は、本明細書に記載される用量の範囲内の、本発明の化合物またはその薬剤として許容される塩、および許容できる用量の範囲内の他の薬剤を使用する。
【実施例】
【０３１７】
実施した実験、および得た結果を含む以下の実施例を例証目的のみのために提供し、これらは本明細書の教示にたいして限定すると解釈されるものではない。
【実施例１】
【０３１８】
免疫化および力価決定
細胞および形質移入
マウスプレＢ細胞株Ｂ３００−１９を、１０％ウシ胎仔血清、５０μＭ２−メルカプトエタノール、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、および１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地において培養した。ＨＥＫ２９３Ｆ細胞を、１０％ＦＢＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、５０μＭのＢＭＥ、１００単位のペニシリンｇ／ｍＬ、１００単位のＭＣＧストレプトマイシン／ｍＬを追加したＤＭＥＭ／Ｆ１２（５０／５０混合）培地で成長させた。ヒトＣＤ１０５発現プラスミドを、製造者の指示に従って、リポフェクタミン２０００試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用してＨＥＫ２９３ＦまたはＢ３００．１９細胞にトランスフェクトした。形質移入が４８時間進行した後、２週間の１ｍｇ／ｍＬＧ４１８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）による選択を行った。安定したＧ４１８耐性クローンを、一次マウス抗ヒトＣＤ１０５モノクローナル抗体で染色し、ＦＡＣＳで解析した。Ｂ３００．１９安定形質移入体を、免疫化のために使用したが、ＨＥＫ２９３Ｆ安定形質移入体は、スクリーニングのために使用した。
【０３１９】
免疫化
免疫化を組換え可溶性ＣＤ１０５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号１０９７−ＥＮ−０２５／ＣＦ）、またはヒトＣＤ１０５を発現する安定的にトランスフェクトされたＢ３００．１９細胞を使用して実施した。
【０３２０】
組換え可溶性ＣＤ１０５での免疫化のためには、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）株ＸＭ３Ｂ３Ｌ３：ＩｇＧ１ＫＬおよびＸＭ３Ｃ１Ｌ３：ＩｇＧ４ＫＬを使用して、可溶性タンパク質の１０μｇ／マウスを初期の追加免疫において提供した後、次の追加免疫において５μｇ／マウスを続けた。ヒトＣＤ１０５を安定的に発現するＢ３００．１９形質移入体細胞を使用する免疫化のためには、モノクローナル抗体を、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）マウス株ＸＭ３Ｃ１Ｌ３：ＩｇＧ４ＫＬおよびＸＭＧ２Ｌ３：ＩｇＧ２ＫＬを順次免疫化することによって開発した。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ動物を、すべての注射について、足蹠経路を通して従来の手段によって免疫化した。それぞれの注射の総容積は、１マウスにつき５０μｌ、１足蹠につき２５μｌであった。
【０３２１】
免疫化は、開示が本明細書に参照により組み込まれる１９９６年１２月３日に出願された米国特許出願第０８／７５９，６２０号、および１９９９８年６月１１日に公開された国際特許出願ＷＯ第９８／２４８９３号および２０００年１２月２１日に公開されたＷＯ第００／７６３１０号に開示される方法に準じて実施された。免疫化プログラムを、表３に要約する。
【０３２２】
力価による収集のための動物の選択
ヒトＣＤ１０５に対する抗体の力価を、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を使用した天然抗原結合のためのＦＡＣＳ染色によって試験した。免疫化プログラムの最後に、融合を、実施例２に記載される電気穿孔によって、マウス骨髄腫細胞および脾臓から単離されたリンパ球および免疫化したマウスのリンパ節を使用して実施した。
【表３】
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【実施例２】
【０３２３】
リンパ球の回収、Ｂ細胞の単離、融合、およびハイブリドーマの生成
免疫化したマウスを、頸椎脱臼によって屠殺し、流入領域リンパ節を収集し、それぞれのコホートからプールした。このプログラムのために４回収集を実施した。
【０３２４】
リンパ球系細胞を、ＤＭＥＭ中で粉砕して、組織から細胞を除去することにより解離し、細胞をＤＭＥＭに懸濁させた。細胞を数え、１億個のリンパ球につき０．９ｍＬのＤＭＥＭを細胞ペレットに追加して、細胞を静かではあるが、完全に再懸濁させた。１億個の細胞につき１００μｌのＣＤ９０＋電磁ビーズを使用して、細胞を１５分間４℃において電磁ビーズと細胞をインキュベートすることによって標識した。最大１０８個の陽性細胞（または最大２ｘ１０９個の全ての細胞）含有する磁気標識された細胞懸濁液を、ＬＳ＋カラムおよびＤＭＥＭで洗浄されたカラムに充填した。総流出液を、ＣＤ９０陰性画分として収集した（これらの細胞の大半はＢ細胞と予想された）。
【０３２５】
融合をＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ１５８０（Ｋｅａｒｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３，１９７９，１５４８−１５５０）より購入した非分泌性骨髄腫Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞を、洗浄されて濃縮されたＤａｙ６のＢ細胞と１対４の比率で、混合することによって実施した。細胞混合物を、静かに４分間４００ｘｇで遠心分離することによってペレット化した。容器を傾けて上清を移した後、静かに１ｍＬピペットを使用して細胞を混ぜた。予熱したＰＥＧ（１０６個のＢ−細胞につき１ｍＬ）を１分にわたって、静かにかき混ぜながらゆっくり加えた後、１分間混合した。予熱したＩＤＭＥＭ（１０６個のＢ−細胞につき２ｍＬ）を２分にわたって、静かにかき混ぜながら加えた。最後に予熱したＩＤＭＥＭ（１０６個のＢ−細胞につき８ｍＬ）を３分にわたって加えた。
【０３２６】
融合した細胞を６分間４００ｘｇで沈降させ、１０６個のＢ−細胞につき２０ｍＬの選択培地（ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｌ−グルタミン、ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ、ＭＥＭ非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、２−メルカプトエタノール（すべてＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから）、ＨＡ−アザセリンヒポキサンチン、およびＯＰＩ（オキサロ酢酸、ピルビン酸塩、ウシインシュリン）（両方ともＳｉｇｍａから）およびＩＬ−６（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）で補充した１５％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ））に再懸濁した。細胞を２０〜３０分３７℃にてインキュベートし、２００ｍＬの選択培地において再懸濁し、Ｔ１７５フラスコにおいて３〜４日間培養した。
【０３２７】
融合後３日目に、細胞を収集し、８分間４００ｘｇで沈降させ、１０６個の融合したＢ細胞につき１０ｍＬの選択培地において再懸濁した。ハイブリドーマ集団のＦＡＣＳ解析を実施し、細胞を次に凍らした。
【０３２８】
ハイブリドーマを選択培地において日常的に増殖させた。抗ヒトＣＤ１０５抗体を潜在的に産出するハイブリドーマから収集された全部の上清を次のスクリーニングアッセイに供した。
【実施例３】
【０３２９】
ＦＭＡＴおよびＦＡＣＳによる候補抗体の選択
培養の１４日後、ハイブリドーマ上清を蛍光微量アッセイ技術（ＦＭＡＴ）によってＣＤ１０５特異的抗体についてスクリーニングした。ハイブリドーマ上清を、ヒトＣＤ１０５を安定的に発現するＨＥＫ２９３Ｆ形質移入体細胞に対してスクリーニングを行い、親ＨＥＫ２９３Ｆ細胞に対して逆スクリーニングを行った。
【０３３０】
（一次スクリーニングに基づく）ＣＤ１０５陽性ハイブリドーマ細胞からの培養上清を除去し、ＣＤ１０５陽性ハイブリドーマ細胞を新鮮なハイブリドーマ培養培地で懸濁し、２４ウェルプレートに移した。培地内での２日後、これらの上清を二次確認スクリーニングにおいて評価した。二次確認スクリーニングにおいて、事前に陽性と同定されたものを、抗ＣＤ１０５抗体が完全ヒトであることを確認するために、以下のように、別々に使用した２組あるいは３組の検出抗体を用いて、ＨＵＶＥＣ細胞におけるＦＭＡＴおよび／またはＦＡＣＳにより、スクリーニングをおこなった：ヒトγ鎖検出のために１．２５μｇ／ｍＬＧＡＨ−γＣｙ５（ＪＩＲ＃１０９−１７６−０９８）、ヒトカッパ軽鎖検出のために１．２５μｇ／ｍＬＧＡＨ−κＰＥ（Ｓ．Ｂ．＃２０６３−０９）、およびヒトλ軽鎖検出のために１．２５μｇ／ｍＬＧＡＨ−λＰＥ（Ｓ．Ｂ．＃２０７３−０９）。
【０３３１】
総計８２４個の完全ヒト抗ＣＤ１０５抗体を、ヒトＣＤ１０５を安定的に発現するＨＥＫ２９３Ｆ形質移入体細胞を使用してＦＭＡＴで測定される第１のキャンペーンから同定した。第２の免疫化キャンペーンでは、ヒトＣＤ１０５を安定的に発現するＨＥＫ２９３Ｆ形質移入体細胞を使用したＦＭＡＴで決定して、７８８個の完全ヒト抗ＣＤ１０５抗体の合計を生成した。両方のキャンペーンについて、抗体を次にＨＵＶＥＣ細胞においてＦＭＡＴおよび／またはＦＡＣＳでスクリーニングし、カニクイザルおよびマウスＣＤ１０５オルソログに対する交差反応を評価した。カニクイザルおよびマウス由来のＣＤ１０５をクローンし、交差反応調査において使用するために、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞の表面に発現した。カニクイザルおよびマウスに対して交差反応を示す抗体を繰り越し、機能アッセイにおいてさらに評価した。
【表４】
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【実施例４】
【０３３２】
抗増殖活性
ＨＵＶＥＣ細胞株において抗増殖活性を示す抗体株をスクリーニングおよび同定するため、Ａｌｍａｒ  Ｂｌｕｅアッセイを実施した。手短に言えば、ＨＵＶＥＣ細胞をＣａｍｂｒｅｘ  Ｃｏｒｐ．から入手し、０．５％ＦＢＳを補充したＥＧＭ２培地において維持した。細胞を９６ウェルプレートにおいて、１０００細胞／ウェル（９０μｌ／ウェル）の濃度で播いた。細胞を３７℃および５％ＣＯ２で、７２時間インキュベートした。抗体を添加後７２時間でアッセイを終了し、Ａｌｍａｒ  Ｂｌｕｅアッセイを実施した。細胞を５０μｇ／ｍＬの濃度の抗体で処理した。処理試料の生存率の決定は、標準試料（すなわち処置なし）１００％生存可能に正規化することに基づいた。
【０３３３】
解析は、抗ＣＤ１０５抗体ハイブリドーマ株の大半が抗増殖活性を示さなかったことを明らかにした。図１に示すように、キャンペーン１から、２つのハイブリドーマを同定し、４．１２０および４．３７と命名したが、それらは、５０μｇ／ｍＬの抗体濃度において細胞増殖の顕著な阻害を示した。
【０３３４】
キャンペーン２について、８つの追加株を同定し増殖アッセイにて調査した。図２および表５に示すように、細胞増殖の阻害は、平均８％から２０％の範囲であった。
【表５】
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【実施例５】
【０３３５】
ＳＭＡＤ２リン酸化反応アッセイ
抗ＣＤ１０５抗体がｓｍａｄ２のリン酸化反応を媒介するか否かを測定するために、ｓｍａｄ２リン酸化反応アッセイを実施した。簡潔に述べると、６ウェルプレートにおいて、１ウェルにつき９０，０００個のＨＵＶＥＣ細胞を播いた。細胞を、０．５％ＦＢＳを補充したＥＧＭ２培地において培養した。細胞を増加する抗体の濃度（０．５、１．０、および２．０μｇ／ｍＬ）で２４時間処理した後、ウェスタンブロット分析を行った。ホスホ−ｓｍａｄ２の検出を、ｐＳｍａｄ２特異抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｃａｔ  ＃３１０１）を使用して実施した。Ｓｍａｄ２の総レベルを、特定のＳｍａｄ２抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｃａｔ  ＃３１０２）を使用して検出した。結果は、抗体４．３７がｓｍａｄ２リン酸化反応の用量依存的な阻害を媒介したことを示す。抗体４．１２０、４Ｄ４、６Ｂ１０、６Ａ６、および９Ｈ１０に対してこれらの結果を認めた。Ｓｍａｄ２のリン酸化反応が内皮細胞の増殖および移動を阻害することが報告されていることに注意することが重要である（Ｇｏｕｍａｎｓ  Ｍ−Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  ２００２；２１：１７４３−１７５３）。
【実施例６】
【０３３６】
ＣＤ１０５阻害抗体はインビトロでの管形成を低減する
ＣＤ１０５阻害抗体をインビトロ共培養アッセイにおいて内皮細胞管形成を低減する能力について試験した（ＴＣＳ  Ｃｅｌｌ  Ｗｏｒｋｓ  Ｃａｔ  ｎｏ．ＺＨＡ−１０００）。１日目に、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）およびヒト２倍体線維芽細胞を２４ウェルプレート内の共培養として得た。ＣＤ１０５遮断抗体を５０μｇ／ｍＬの抗体濃度で、１日目におよび１１日間にわたり一定の間隔で、培養に導入した。培地を４、７、および９日目に補充した。共培養モデルを、（共培養アッセイで供給された）ＴＣＳ最適化培地または、１％グルタミンおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充した、２％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）ＭＣＤＢ１３１培地（以下２％ＦＳ  ＭＣＤＢ１３１培地と称する）において維持した。共培養モデルを３７℃で、加湿の５％ＣＯ２／９５％の空気環境にて維持した。
【０３３７】
細管形成を製造者の指示によって細管染色キット（ＴＣＳ  Ｃｅｌｌ  Ｗｏｒｋｓ  Ｃａｔ  ｎｏ．ＺＨＡ−１２２５）を使用してＣＤ３１に対する細管の固定および染色した後、１１日目に検査した。簡潔に述べると、細胞を室温（ＲＴ）で３０分間７０％氷冷エタノールで固定した。細胞を遮断し、その後室温にて、６０分間抗ヒトＣＤ３１で処理した。プレートを洗浄し、室温で６０分間アルカリ性ホスファターゼ（ＡＰ）と複合化したヤギ抗マウスＩｇＧでおよび処理した。ＡＰ複合化した二次抗体と共にインキュベートした後、プレートを洗浄し５−臭素−４−クロロ−３−インドリルリン酸塩／ニトロブルーテトラゾリウム（ＢＣＩＰ／ＮＢＴ）基質を約１０分間添加した。１０分間以内の濃い紫色の発生は、細管形成を示した。プレートを次に洗浄し、放置して空気乾燥した。
【０３３８】
細管成長の定量化をＺｅｉｓｓ  ＫＳ４００  ３．０  Ｉｍａｇｅ  Ａｎａｌｙｓｅｒを使用して全ウェル画像解析法で実施した。定量化方法で測定された形態学的パラメーターは、細管の全長であった。各２４ウェル内のすべての細管形成を、エッジ後退アーティファクトを避けるために、１００μｍの深さの縁を除いて測定した。
【０３３９】
図３に図示すように、ｍＡｂ６Ｂ１０はインビトロで内皮細胞管形成を阻害することに有効であった。この抗体は、アイソタイプ対照と比較して、血管の長さを約２４％阻害し、分岐の数を４７％阻害した。データは、この抗体が血管新生プロセスをモデルする機能アッセイにおいて活性であることを示す。
【実施例７】
【０３４０】
アクチン調節アッセイ
キャンペーン１および２の抗ＣＤ１０５抗体のパネルがヒト内皮細胞の細胞骨格構造に影響するか解明するために、アクチン調節アッセイを実施した。手短に言うと、ＨＵＶＥＣ細胞を４ウェルｃｈａｍｂｅｒ  ｓｌｉｄｅに播き（４０，０００細胞／ウェル）、０．５％ＦＢＳを補充したＥＧＭ２培地において維持した。抗ＣＤ１０５抗体を３０μｇ／ｍＬの抗体濃度で７２時間、ＨＵＶＥＣ細胞とともにインキュベートした。抗体インキュベーション後、細胞を４％ホルムアルデヒドで１０分間固定した後、１０分間０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で透過化した。透過化後、細胞を室温でＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８ファロイジン（ファロイジン、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、＃Ａ１２３７９）で染色した。細胞を染色後ＰＢＳで洗浄し、共焦点顕微鏡を使用して検査した。モノクローナル抗体１０Ｃ９、３Ｃ１、６Ｂ１、４．１２０、４．３７、および６Ｂ１０は、ＨＵＶＥＣ細胞におけるアクチン細胞骨格構造の顕著な調節を媒介した。
【実施例８】
【０３４１】
抗体ＳＮ６（ＨＵＶＥＣＳ）と比較したＸＥＮＯＭＯＵＳＥモノクローナル抗ＣＤ１０５抗体のエピトープビニング
ＦＡＣＳベースのビニング解析を、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ抗体のパネルが市販のＳＮ６抗体と交差競合するか解明するために、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）において実施した。Ｓｅｏｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙは、先ずＳＮ６抗体を生成し、この抗体は、用量依存的な手法でヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の成長を抑えることが報告されているＳＮ６シリーズと称されるｍＡｂのパネルのうちの１つである（Ｓｈｅ  Ｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２００４，１０８：２５１−７）。
【０３４２】
手短に言うと、ＨＵＶＥＣ細胞におけるタイトレーション(ｔｉｔｒａｔｉｏｎ)をＦＩＴＣで蛍光標識されたＳＮ６抗体（Ａｂｃａｍ）で実施した。結合に対するＥＣ５０濃度は、２μｇ／ｍＬと決定された。その後、ＨＵＶＥＣ細胞を非標識ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ抗ＣＤ１０５ｍＡｂのタイトレーションでインキュベートし、洗浄し、そして２μｇ／ｍＬのＳＮ６抗体でインキュベートした。図４に示すように、ＳＮ６抗体の結合率を非標識ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ  ｍＡｂの５μｇ／ｍＬの存在下で示す。
【０３４３】
興味深いことに、抗体６Ａ６および６Ｂ１０は、ＳＮ６結合の顕著な阻害を示し、これらのｍＡｂが同じエピトープに対して競合することを示唆した。他の抗体は、部分的にＳＮ６と競合し、部分的または重複エピトープを示唆した。抗体４Ｄ４および１０Ｃ９は、弱い遮断を示し、これらのｍＡｂがＳＮ６抗体と同じエピトープを共有しない可能性があることを意味する。同様に重要であるが、これらの結果は、このＸｅｎｏＭｏｕｓｅ抗ＣＤ１０５抗体のパネルは広範なエピトープ特異性を示すことを示唆する。
【実施例９】
【０３４４】
ＣＤ１０５ＫＩ／ＫＯマウスにおけるＣＯＬＯ２０５マトリゲルプラグアッセイ
ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ  ｍＡｂのインビボ活性を試験するために、マトリゲルプラグアッセイを実施した。抗ＣＤ１０５抗体のマウス交差反応の欠如のため、この試験をＣＤ１０５ＫＩ／ＫＯ−ＳＣＩＤ動物において実施した。
【０３４５】
手短に述べると、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）と混合した５００万個のＣｏｌｏ２０５腫瘍細胞をＣＤ１０５ＫＩ／ＫＯ−ＳＣＩＤマウスに注入した。マウスは、１０ｍｐｋの抗体用量で腹腔内に抗体治療を週に２回受けた。プラグを８日目に単離し、ＩＨＣおよびヘモグロビン量によってＣＤ３１発現について解析した。ＩＨＣ染色を、抗ＣＤ３１抗体を使用して実施した（ＢＤ，Ｃａｔ  ５５０２７４）。試料を亜鉛固定剤において固定し、パラフィン遮断に埋め込んだ。組織薄片をＶｅｎｔａｎａ  ａｕｔｏｍａｔｉｏｎを使用してＣＤ３１抗体で染色した。画像をＡｐｅｒｉｏイメージングシステムを使用してスキャンした。ＩＨＣ陽性染色を、Ａｐｅｒｉｏカラーデコンボリューションソフトウェアを使用して解析した。
【０３４６】
ヘモグロビン量のために、脱イオン水を、プラグの重量（５．０ｍＬ／ｇ）に基づいて、マトリゲル試料チューブに追加した。マトリゲル試料を、Ｐｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーを使用して均質化した。試料を次に１０分間３７００ｒｐｍで遠心分離した。上清の一定分量２５０μＬを同量の２ｘＤｒａｂｋｉｎ溶液と混合した。混合物をボルテックスし、再度遠心分離した。この混合物の一定分量２００μＬを解析のために９６ウェルプレートに蒔いた。吸光度を５４０ｎｍで測定した。並行して、標準曲線希釈を１ｘＤｒａｂｋｉｎ溶液に中のヘモグロビン標準を使用して実施した。試料濃度を標準曲線から決定した。
【０３４７】
図５に示すように、この試験の結果は、ｍＡｂ４Ｄ４、６Ｂ１０、４．１２０、および４．３７がヘモグロビン量の低減を媒介したことを示す。抗体６Ｂ１０および４．３７は、ＣＤ３１染色（図６）の低減も媒介し、これらの抗体がインビボで抗血管新生活性を示すことを意味する。
【実施例１０】
【０３４８】
ＣＤ１０５抗体の構造解析
抗体の可変重鎖および可変軽鎖を、ＤＮＡ配列を決定するために配列決定した。抗ＣＤ１０５抗体の完全な配列情報を、各γおよびκ鎖状結合に対してヌクレオチドおよびアミノ酸配列とともに配列表に提供する。可変重配列をＶＨファミリー、Ｄ領域配列、およびＪ領域配列を測定するために解析した。配列を、一次アミノ酸配列を決定するために翻訳し、体細胞超変異を評価するために生殖系列ＶＨ、ＤおよびＪ領域配列と比較した。
【０３４９】
表２は抗体重鎖領域と同族の生殖系列重鎖領域とを、および抗体κ軽鎖領域と同族生殖細胞系軽鎖領域とを比較する表である。特定の抗体は、アミノ酸レベルで、それぞれの生殖系列配列と異なる場合、抗体配列は生殖系列配列に突然変異することができることも理解されるべきである。かかる補正突然変異は、標準分子生物学的技術を使用して、１、２、３、またはそれ以上の位置、または任意の突然変異した位置の組み合わせで発生することができる。限定されない例として、表５は、４．３７の重鎖配列（配列番号２６）が、位置３１（突然変異１）においてＤからＳまで、および位置１０２（突然変異２）においてＦからＹまで、対応する生殖系列配列（表２参照）と異なることを示す。したがって、４．３７の重鎖をコードするアミノ酸またはヌクレオチド配列は、これらの部位のいずれかまたはすべてにおいて修飾され得る。以下の表５〜９は、４．３７、６Ｂ１０、４．１２０の生殖系列からのかかる変動の位置を図示する。各行は、太字で示された位置における、生殖系列および非生殖系列の残基の一意的な組み合わせを表す。
【０３５０】
別の実施形態において、本発明は、本発明の抗体の不均一性に影響する可能性のある配列において任意の構造上の問題点を交換することを含む。かかる問題点は、糖鎖付加部位、不対システイン、表面が露出したメチオニン等を含む。かかる不均一性の危険性を低減するために、かかる構造上の問題点のうちの１つ以上を取り除くために、変更を行うことが提案される。
【０３５１】
本明細書に記載される「最適化した」配列は、非生殖系列配列を１つ以上の残基において生殖系列配列に逆変異し、さらに糖鎖付加部位等の配列から構造上の問題点を取り除くために修飾しうるように、突然変異された、表２に開示される抗体配列である。
【０３５２】
本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤または抗体は、配列番号２６を含む配列を含む。特定の実施形態において、配列番号２６は、表５の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の組み合わせのうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、配列番号２６は、表５に示す生殖系列残基のうちのいずれか１つ、いずれか２つ、または２つのすべてを含む。特定の実施形態において、配列番号２６は、表５の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の一意的な組み合わせを含む。他の実施形態において、標的結合剤または抗体は、ＶＨ３−３３、Ｄ６−１３、およびＪＨ６領域を有する生殖系列配列から生じ、１つ以上の残基が、この位置において、対応する生殖系列残基を産出するために突然変異されている。
【表６】
2012502649.tif 000013
【０３５３】
本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤または抗体は、配列番号２８を含む配列を含む。特定の実施形態において、配列番号２８は、表６の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の組み合わせのうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、配列番号２８は、表６に示す生殖系列残基のうちのいずれか１つ、いずれか２つ、または２つ両方、いずれか３つ、または３つすべてを含む。特定の実施形態において、配列番号２８は、表６の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の一意的な組み合わせを含む。他の実施形態において、標的結合剤または抗体は、ＶＫ  Ａ３／Ａ１９およびＪＫ３領域を有する生殖系列配列から生じ、生殖系列配列１つ以上の残基が、この位置において、対応する生殖系列残基を産出するために突然変異されている。
【表７】
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【０３５４】
本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤または抗体は、配列番号３０を含む配列を含む。特定の実施形態において、配列番号３０は、表７の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の組み合わせのうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、配列番号３０は、表７に示す生殖系列残基のうちのいずれか１つ、いずれか２つ、いずれか３つ、いずれか４つ、いずれか５つ、いずれか６つ、いずれか７つ、または７つすべてを含む。特定の実施形態において、配列番号３０は、表７の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の一意的な組み合わせを含む。他の実施形態において、標的結合剤または抗体は、ＶＨ３−３０＊０１、Ｄ３−１０、およびＪＨ４領域を有する生殖系列配列から生じ、１つ以上の残基が、この位置において、対応する生殖系列残基を産出するために突然変異されている。
【表８】
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【０３５５】
本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤または抗体は、配列番号３２を含む配列を含む。特定の実施形態において、配列番号３２は、表８の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の組み合わせのうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、配列番号３２は、表８に示す生殖系列残基のうちのいずれか１つ、いずれか２つ、いずれか３つ、いずれか４つ、いずれか５つ、いずれか６つ、いずれか７つ、いずれか８つ、いずれか９つ、または９つすべてを含む。特定の実施形態において、配列番号３２は、表８の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の一意的な組み合わせを含む。他の実施形態において、標的結合剤または抗体は、Ｖｋ、Ｖｋ０８／０１８、およびＪＫ４領域を有する生殖系列配列から生じ、生殖系列配列１つ以上の残基が、この位置において、対応する生殖系列残基を産出するために突然変異されている。
【表９】
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【０３５６】
本発明のいくつかの実施形態において、標的結合剤または抗体は、配列番号２を含む配列を含む。特定の実施形態において、配列番号２は、表９の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の組み合わせのうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、配列番号２は、表９に示す生殖系列残基のうちのいずれか１つ、いずれか２つ、いずれか３つ、いずれか４つ、いずれか５つ、いずれか６つ、または６つすべてを含む。特定の実施形態において、配列番号２は、表９の各行に示す生殖系列および非生殖系列残基の一意的な組み合わせを含む。他の実施形態において、標的結合剤または抗体は、ＶＨ４−５９、Ｄ５−１２、およびＪＨ４領域を有する生殖系配列から生じ、生殖系列配列１つ以上の残基は、この位置において、対応する生殖系列残基を産出するために突然変異されている。
【表１０】
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【０３５７】
当業者は、ＣＤＲ境界を定義する代替方法があることに気付くであろう。表２ａにおけるＶＨ  ＣＤＲ１の出発残基を、Ｓｃａｖｉｎｅｒ  Ｄ，Ｂａｒｂｉｅ  Ｖ，Ｒｕｉｚ  Ｍ，Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｉｓｐｌａｙｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｈｅａｖｙ，Ｋａｐｐａ  ａｎｄ  Ｌａｍｂｄａ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  ａｎｄ  Ｊｏｉｎｉｎｇ  Ｒｅｇｉｏｎｓ．Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ  １９９９，１６：２３４−２４０に記載される方法に従って定義した。表２における残りのＣＤＲ境界をＫａｂａｔの定義に従って定義する。
【０３５８】
表２における残りのＣＤＲ境界をＫａｂａｔの定義にしたがって定義する。
【実施例１１】
【０３５９】
ＦＡＣＳ  ＫＤ決定
抗ＣＤ１０５抗体の親和性をＦＡＣＳによって測定した。簡潔に述べると、ＣＤ１０５を発現するＨＵＶＥＣ細胞を、約５００万細胞／ｍＬの濃度で、ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、０．０５％ＮａＮ３）において再懸濁した。細胞を氷上に保持した。精製した抗体を、９６ウェルプレートにおいて１１ウェルにわたってろ過した１ｘＰＢＳ（２ｘ）において、連続的に希釈した。各列の１２番目のウェルは、緩衝液のみを含有した。細胞および１ｘＰＢＳを、最終容積が３０μＬ／ウェルとなり各ウェルは約１００，０００細胞を含有するように、各ｍＡｂウェルに添加した。プレートを４℃で３時間プレートシェーカーにおき、その後回転させ、ＰＢＳで３回洗浄した。蛍光色素標識された二次ヤギαヒトポリクローナル抗体を、２００μＬ容積で各ウェルに添加した。プレートを４℃で４０分間インキュベートした後、回転させ、ＰＢＳで３回洗浄した。
【０３６０】
各ｍＡｂ濃度に対する１０，０００細胞の幾何平均蛍光（ＧＭＦ）を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ機器を使用して測定した。分子ｍＡｂ濃度の関数としてのＧＭＦの非線形プロットを、以下の方程式を使用してＳｃｉｅｎｔｉｓｔソフトウェアを使用して当てはめた。
【数１】
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【０３６１】
上記の方程式において、Ｆ＝幾何平均蛍光、ＬＴ＝分子ｍＡｂ総濃度、Ｐ’＝恣意の蛍光単位を結合したｍＡｂに関連付ける比例定数、およびＫＤ＝平衡解離定数である。Ｐ’およびＫＤを非線形解析において自由に動かすようにして、各ｍＡｂに対してＫＤの推定値を得た。以下の表は、結果として得た、各ｍＡｂに対するＫＤ結果を列挙する。
【表１１】
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【実施例１２】
【０３６２】
ＣＤ１０５抗体のＡＤＣＣおよびＣＤＣ活性
（１）ＡＤＣＣアッセイ
ＰＭＢＣからのＮＫ濃縮を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）ヒトＮＫ細胞濃縮混合物およびプロトコール（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ）を使用して実施した。簡潔に述べると、ドナーからの全血をヘパリン化されたまたはＥＤＴＡ被覆管において採取し、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）プロトコールに従って室温で２０分間、２．２５ｍＬのＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）ヒトＮＫ細胞濃縮混合物（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ）でインキュベートした。試料を同等の容積の２％のＦＢＳを含有するＰＢＳで希釈し、３０ｍＬの血液混合物を１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ上に層にした（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、円錐管）。管を室温で３０分間、２１５０ｒｐｍで遠心分離し、界面層をきれいな５０ｍＬの円錐管に移した。２％のＦＢＳを含有するＰＢＳを添加した後、１２００ｒｐｍで１０分間、遠心分離した。上清を捨て、ペレットを１ｍＬのＰＢＳに懸濁し氷上で保存した。細胞を、血球計を使用して数え、溶液の１ｍＬごとのＮＫ細胞の濃度を決定した。
【０３６３】
カルセインＡＭは、カルセインの細胞透過性形態である。カルセインＡＭが細胞質に浸透すると、細胞におけるエステラーゼによって加水分解され細胞内に保持されるカルセインとなる。カルセインを使用する生死判別試験は、信頼でき、標準５１Ｃｒリリースアッセイと良好に相関する。簡潔に述べると、標的細胞（ＨＵＶＥＣ細胞）収集し、培地において、１ｘ１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。カルセインＡＭ（Ｓｉｇｍａ  Ｃ１３５９）を添加して最終濃度を１０μＭとした（２ｍＬ細胞において５μｌ）。細胞を３７℃で４５分間インキュベートした。細胞を１０分間１２００ＲＰＭで回転し、上清を捨て、ペレットを新たな増殖培地（２ｘ）に再懸濁した。ペレットを７５μｌの増殖培地につき１０，０００細胞に再懸濁した。丸底プレートにおいて標的細胞を７５μｌ（１０，０００細胞／ウェル）に蒔いた。抗体を１０μｇ／ｍＬで、培地において希釈した５０μｌ／ウェルで、標的細胞に添加し、室温で３０分間インキュベートさせた。インキュベーション後、７５μｌのエフェクター細胞を１００，０００細胞／ウェルで添加し、３７℃で４時間インキュベートさせた。インキュベーション後、プレートを１２００ＲＰＭで５分間回転した。上清（１００μＬ）を平らで黒く、透明な底のプレートに移し（Ｃｏｓｔａｒ、ｃａｔ．ｎｏ．３６０３）蛍光を測定した。ジギトニンを最大のカルセイン放出を測定するため、陽性対照として使用した。
【０３６４】
（図７に示す）データは、特性を試験した１０のｍＡｂすべてが、ＡＤＣＣ活性を示し、ｍＡｂ４Ｄ４、９Ｈ１０、および６Ｂ１０が最大レベルの溶解活性を示した。
【０３６５】
（２）ＣＤＣアッセイ
白血病細胞においてＣＤ１０５の発現が、報告されたため（Ｈａｒｕｔａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ，１９８６，ＰＮＡＳ，８３：７８９８−７９０２）、抗ＣＤ１０５ｍＡｂを、白血病細胞株のいくつかにわたる補体活性について特性試験をした。手短に言うと、白血病細胞株（ＫＧ１、ＲＥＨ、ＫＧ１ａ、Ｕ９３７）をウェルにつき１００，０００細胞でＣｏｓｔａｒ９６ウェル平底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｏｗｅｌｌ，ＭＡ）に蒔いた。１０個の抗ＣＤ１０５ｍＡｂ（１０μｇ／ｍＬ）を組織培養培地に添加し、室温で１０分間インキュベートさせた。正常ヒト血清を１０〜５０％の間の濃度で添加し、増殖培地で希釈した。血清を１時間３７℃でインキュベートさせた。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を細胞に添加し、暗闇で室温にて１０分間インキュベートさせ、プロトコール手順に従って値を読んだ。データ（図８）は、ｍＡｂ４．１２０のみが、すべての試験した白血病細胞株にわたって、補体活性を誘発したことを示す。
【実施例１３】
【０３６６】
ＣＤ１０５抗体の抗体内部移行
抗体の内部移行調査を、抗ＣＤ１０５ＭＡＢがＨＵＶＥＣ細胞におけるＣＤ１０５の内部移行を誘発することができるか否かを測定するために実施した。以下の内部移行アッセイを実施した。ＨＵＶＥＣ細胞を反応物ごとに３００，０００細胞で等分し、４℃で１時間、１０μＧ／ＭＬの各抗ＣＤ１０５ＭＡＢと共にインキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中２％のＦＣＳ）で２回洗浄し、次に５μＧ／ＭＬのＦＩＴＣに複合化したヤギＦＡＢ抗ヒト（重鎖＋軽鎖）二次抗体と共に、ＦＡＣＳ緩衝液において４℃で４５分間インキュベートした。次いでＨＵＶＥＣ細胞を２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で一度洗浄した。各試料の２つのチューブを４℃で、および１つのチューブを３７℃で１時間インキュベートし、その後細胞を２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で一度洗浄した。次に１００μＬの２００ＭＭのＴＲＩＳ（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を１つの試料に４℃でおよび１つの試料に３７℃で添加し、これらの試料を４℃で３０分間インキュベートした。最後に、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で一度洗浄し、フローサイトメトリーで値を読んだ。内部移行率（％）を以下の方程式で幾何平均より決定した。内部移行率＝（（３７℃＋ＴＣＥＰ）−（４℃＋ＴＣＥＰ））／（（４℃−ＴＣＥＰ）−（４℃＋ＴＣＥＰ））Ｘ［１００］。
【０３６７】
結果は、すべての抗ＣＤ１０５ＭＡＢが内部移行を媒介し、約２５〜３０％の細胞表面抗体を１時間以内にＣＤ１０５との相互作用を通して内部移行したことを示す（図９を参照）。急速に内部移行する１Ｃ１抗体を、陽性対照として使用した。（ＪＡＣＫＳＯＮ，Ｄ．ＥＴ  ＡＬ．，２００８，ＣＡＮＣＥＲ  ＲＥＳ．，６８：９３６７−７４）。結果は細胞表面抗体の約４０％が１Ｃ１抗体で内部移行したことを示す。
【０３６８】
したがって、これらのデータは、上述の抗ＣＤ１０５ＭＡＢがＣＤ１０５抗原を発現する細胞に対して毒素を送達するための免疫複合体として効果的な薬剤であり得ることを示唆する。
【０３６９】
参照による組み込み
特許、特許出願、論文、教科書等を含む本明細書に引用されるすべての文献、およびそれらに引用される文献は、すでに含まれていない限りにおいて、これによって、本明細書に全体が参照にすることにより組み込まれる。
【０３７０】
等価物
前述の明細書は、当業者が本発明を実行することを可能にするために十分であると考えられる。前述の記載および実施例は、本発明の特定の好ましい実施形態を詳述し、発明者によって意図される最良の形態を記載する。前述のものがいかに文章で詳細を詳述していても、本発明は多くの方法で実施することができ、本発明は添付の請求項およびその等価物のいずれかに従って解釈されるべきであることが理解されるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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