(57)【要約】  本発明は、抗ウイルス免疫応答を誘導する方法に関する。該方法は、細胞表面ターゲットに結合した際に、ウイルス感染を阻害するケモカインの産生を生じる抗体の産生を誘導する抗原を、その必要がある患者に投与する工程を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＩＶ−１のＣＣＲ５向性株による、ヒト被験体の感受性細胞の感染を阻害する方法であって、前記被験体の細胞に結合する抗体の産生を誘導する免疫原を、前記被験体に投与する工程を含み、前記細胞が：
ｉ）ＣＣＲ５結合性ケモカインを産生し、そして
ｉｉ）その細胞表面上に該抗体によって認識される抗原を有し、
前記免疫原を、単独でまたはＨＩＶ−１の前記ＣＣＲ５向性株の存在下のいずれかで、産生されるＣＣＲ５結合性ケモカインのレベルが前記感受性細胞感染の前記阻害を達成するのに十分であるような量および条件下で、投与する
前記方法。
【請求項２】
前記被験体の前記感受性細胞がＴ細胞である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ＣＣＲ５結合性ケモカインを産生する前記被験体の前記細胞が、単球、マクロファージまたは樹状細胞である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記抗原が細胞脂質二重層の表面脂質である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記抗原がホスファチジルセリン（ＰＳ）またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）である、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記免疫原が陰イオン性脂質を含む、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記陰イオン性脂質が、ＰＳ、ＰＥ、カルジオリピン（ＣＬ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、または死菌梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）である、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記免疫原が、ＰＳ、ＰＥまたはＣＬを含むリポソームを含む、請求項６記載の方法。
【請求項９】
モノホスホリル脂質Ａ、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）−７またはＴＬＲ−９を含むアジュバントを前記被験体に投与する工程をさらに含む、請求項６記載の方法。
【請求項１０】
前記免疫原がＰＳまたはＰＥの六方晶ＩＩ型である、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記抗原がＣＤ４０である、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫原が遊離または誘導体化ヒトまたはアカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ）ＣＤ４０である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前記ＣＤ４０が破傷風毒素またはキーホールリンペット（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ）・ヘモシアニンで誘導体化されている、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記免疫原が、アカゲザル、モルモット（ｇｕｉｎｅａ  ｐｉｇ）もしくはマウスＣＤ４０またはその突然変異型、あるいはアカゲザル、モルモットもしくはマウスＣＤ４０またはその突然変異型をコードする核酸配列を含み、そしてＣＤ４０に結合するが、ＣＤ４０上のＣＤ４０リガンド結合部位には結合しない、抗ＣＤ４０抗体の誘導を生じる、請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
前記免疫原が、アカゲザル、モルモットもしくはマウスＣＤ４０またはその突然変異型
をコードする核酸配列を含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記核酸配列が、機能可能であるようにプロモーターに連結されて、ベクター中に存在する、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体が非病原性である、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
ＨＩＶ−１によるヒト被験体感受性細胞の感染を阻害する方法であって、前記被験体に、ｍ４３型またはｍ９型抗体の産生を誘導する免疫原を投与する工程を含み、前記免疫原を、抗ＨＩＶケモカインが産生され、そしてそれによって感染の前記阻害が達成されるような量および条件下で投与する、前記方法。
【請求項１９】
ＨＩＶ−１のＣＸＣＲ４を利用する株によるヒト被験体感受性細胞の感染を阻害する方法であって、前記被験体に、ターゲット細胞からＳＤＦ−１の放出を生じる抗体の産生を誘導する免疫原を投与する工程を含み、前記免疫原を、前記阻害が達成されるような量および条件下で投与する、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全内容が本明細書に援用される、２００８年９月５日出願の米国仮出願第６１／１３６，４４８号、および２００８年９月２９日出願の米国仮出願第６１／１３６，７３４号の優先権を請求する。
【０００２】
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与された助成金番号第ＵＯ１  ＡＩ０６７８５４号のもとに米国政府の援助を受けて作成された。米国政府は、本発明において特定の権利を有する。
【０００３】
技術分野
本発明は、抗ウイルス免疫応答を誘導する方法に関する。該方法は、細胞表面ターゲットに結合した際に、ウイルス感染を阻害するサイトカイン（例えばケモカイン）の産生を生じる抗体の産生を誘導する免疫原を、その必要がある患者に投与する工程を含む。
【背景技術】
【０００４】
ＨＩＶおよび他のウイルスワクチン開発（例えばＣ型肝炎ワクチン開発）の大きな課題は、迅速な抗ウイルス免疫応答を誘導する必要があることである（Ｇａｓｐｅｒ−Ｓｍｉｔｈら，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ８２：７７００−７７１０（２００８））。自然免疫応答は、その特質の１つとして、病原体伝染後の迅速な免疫応答誘導を有する。伝染病原体に対する自然免疫応答は、数時間から数日で生じうる。しかし、自然免疫は、免疫記憶を欠き、そしてしたがって、応答の加速または増進のため、病原体またはワクチンによってプライミングされえない（Ｈａｙｎｅｓら，  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  “Ｈａｒｒｉｓｏｎｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ”中，  第３０８章：第１７版，  Ｆａｕｃｉ，  Ｋａｓｐｅｒ，  Ｈａｕｓｅｒ，  Ｌｏｎｇｏ，  Ｊａｍｅｓｏｎ，  Ｌｏｓｃａｌｚｏ（監修），  ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，  ニューヨーク（２００８））。対照的に、適応または獲得免疫系は、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）再編成遺伝子による免疫記憶能を有する（Ｈａｙｎｅｓら，  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  “Ｈａｒｒｉｓｏｎｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ”中，  第３０８章：第１７版，  Ｆａｕｃｉ，  Ｋａｓｐｅｒ，  Ｈａｕｓｅｒ，  Ｌｏｎｇｏ，  Ｊａｍｅｓｏｎ，  Ｌｏｓｃａｌｚｏ（監修），  ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，  ニューヨーク（２００８））。しかし、適応免疫応答は、生じるのに数日から数週間かかりうる。免疫系の適応ＴおよびＢ細胞アームは、特定の病原体に対して抗原特異的応答を作製しうる。自然免疫系は、抗原受容体再編成遺伝子を持たないため、所定の病原体に非常に特異的な応答を生じえない。
【０００５】
伝統的なワクチン（はしか、流行性耳下腺炎および風疹ワクチンなど）は、予防的ワクチンとしての成功のため、記憶適応ＴおよＢ細胞応答の誘導に頼る（Ｐｌｏｔｋｉｎ，  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｄｉｓ．  ４７：４０１−４０９（２００８））。これらの成功したワクチンが防御する病原体に関しては、こうした生物が比較的緩慢に発生し、そしてその遺伝物質を宿主ゲノム内に挿入して、免疫系から防御される病原体リザーバーを形成することがないため、迅速な記憶応答（例えば数時間以内）の必要がない。
【０００６】
ＨＩＶ−１は、「暗黒」期、すなわち伝染から、血漿中にウイルスが出現するまでの期間が非常に短い（Ｇａｓｐｅｒ−Ｓｍｉｔｈら，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ８２：７７００−７７１０（２００８））。さらに、ＨＩＶ−１は、おそらく感染の最初の週以内に、感染ＣＤ４  Ｔ細胞の潜在性プールを確立し、こうした潜在性ウイルスプールは、免疫系には不可視である（Ｓｈｅｎら，  Ａｌｌｅｒ．  ＆  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２２：２２−２８（２００８））。
【０００７】
ＨＩＶ−１は、共受容体としてケモカイン受容体を、最も一般的には、伝染したウイルスによってＣＣＲ５（Ｋｅｅｌｅら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  １０５：７５５２−７５５７（２００８））を、または慢性ウイルスによってＣＸＣＲ４（Ｋｉｎｔｅｒら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ９３：１４０７６−１４０８１（１９９６）、Ｒｕｂｂｅｒｔら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  １３：６３−６９（１９９７）、Ｋｉｎｔｅｒら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １７７：８８−９８（２０００））を利用する。ＣＣＲ５のリガンドは、ケモカインであるマクロファージ炎症タンパク質−１α（ＭＩＰ−１α）、ＭＩＰ−１βおよびＲＡＮＴＥＳである（Ｋｉｎｔｅｒら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １７７：８８−９８（２０００））。これらのケモカインは、存在し、そしてＣＤ８＋  Ｔ細胞または単球（あるいは組織マクロファージ、樹状細胞などの骨髄系譜の他の細胞、または限定されるわけではないが上皮細胞などの非骨髄系譜の細胞）によって産生された際、ＣＣＲ５を利用するＨＩＶ株の感染性に顕著な遮断効果を有しうる（Ｋｉｎｔｅｒら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １７７：８８−９８（２０００））。同様に、ＳＤＦ−１は、ＣＸＣＲ４のリガンドであり、そしてＣＸＣＲ４を利用するＨＩＶ株を阻害可能である（Ｋｉｎｔｅｒら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １７７：８８−９８（２０００））。
【０００８】
ＣＤ４０とＣＤ４０リガンドが連結されると、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１βおよりＲＡＮＴＥＳなどのケモカインの産生、ならびにＴＮＦ−α、インターロイキン（ＩＬ）−１２、ＩＬ−１、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１５などのサイトカインの産生が誘導される（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２：８８１−９２２（１９９４）、Ｃｈｅｓｓら，  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  第２版，  ４４１−４５６ページ（２００１）、Ｂｒｏｄｅｕｒら，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８３７−８４８（２００３）、ｄｉ  Ｍａｒｚｉｏら，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １２：１４８９−１４９５（２０００）、Ｃｈｏｕｇｎｅｔら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６３：１６６６−１６７３（１９９９））。ＣＤ４０およびその同族（ｃｏｇｎａｔｅ）リガンド、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）の間の相互作用は、生産的免疫応答に非常に重要である（Ｅｌｌｍａｒｋら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  ２４：３６７−３７３（２００８）、Ａｂａｙｎｅｈら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  ２４：４４７−４５２（２００８）、Ｍｕｎｃｈら，  Ｃｅｌｌ  １２９：２６３−２７５（２００７））。ｃ４ｂ結合性タンパク質などの他の分子もまた、ＣＤ４０に結合する（Ｓｃｈｏｎｂｅｃｋら，  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  ５８：４−４３（２００１））。単球、マクロファージおよび樹状細胞上のＣＤ４０は、Ｔ細胞上のＣＤ４０リガンドに結合し、そしてこの相互作用は、Ｔ細胞抗原認識の仲介、Ｔ細胞ヘルプの誘導、およびＢ細胞免疫グロブリン・クラススイッチングの誘導において、中心的である。ＣＤ４０分子またはＣＤ４０リガンド分子のいずれかに突然変異を有するヒトは、免疫グロブリンをクラススイッチ不能であり、これは高ＩｇＭ症候群と呼ばれる（Ｋｉｅｎｅｒら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５：４９１７−４９２５  （１９９５））。
【０００９】
Ｅｌｌｍａｒｋおよび同僚らは、ＨＩＶ非感染被験体由来のファージディスプレイライブラリーから、一連の抗ＣＤ４０抗体を単離してきている（Ｅｌｌｍａｒｋら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  ２４：３６７−３７３（２００８））。彼らは、これらのヒトＣＤ４０抗体の１つ、Ｂ４４が、Ｂ細胞および単球を誘発してケモカインを作製させることも可能であり、そしてＢ細胞分裂を活性化可能であることを示してきている。Ｂ４４モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、正常Ｔ細胞−抗原提示細胞相互作用の仲介に向かう、同族ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンド相互作用に干渉しない（Ｅｌｌｍａｒｋら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  ２４：３６７−３７３（２００８））。Ｅｌｌｍａｒｋおよび同僚らはまた、ＣＤ４０  ｍＡｂ、Ｂ４４が、ＭｏｎｏＭａｃ単球細胞株のＨＩＶ感染性を阻害することもまた示してきている。さらに、Ａｂａｙｎｅｈらは、ＭｏｎｏＭａｃ細胞感染のＣＤ４０  ｍＡｂ  Ｂ４４による阻害の機構が、ＣＣＲ５向性ウイルスを阻害する細胞株からのケモカイン誘導によることを示してきている（Ｅｌｌｍａｒｋら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  ２４：３６７−３７３（２００８）、Ａｂａｙｎｅｈら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  ２４：４４７−４５２（２００８））。したがって、この研究によって、限定されるわけではないが、単球、マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞を含む多様な細胞種上のＣＤ４０は、該分子に抗体が連結された際、ＣＣＲ５結合性ケモカイン（ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、およびＲａｎｔｅｓ）の誘導を誘発可能であることが示される。Ｅｌｌｍａｒｋらは、Ｂ４４  ｍＡｂが活性ＨＩＶ−１感染を治療するのに適した療法抗体でありうると提唱してきている（Ｅｌｌｍａｒｋら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  ２４：３６７−３７３（２００８））。
【００１０】
本発明は、ウイルス伝染および曝露に対する応答が、ウイルス感染の数時間以内に起こるように、自然抗ウイルス免疫応答において、記憶を誘導しうるワクチンを提供する（Ｈａｙｎｅｓら，  Ｊ．  Ａｌｌｅｒ．  ＆  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２２：３−９（２００８）、Ｇａｓｐｅｒ−Ｓｍｉｔｈら，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ８２：７７００−７７１０（２００８））。現在最も成功しているワクチンにおいて、アジュバントが自然免疫系を誘発して、適応免疫系を補充し、成熟まで数週間かかる抗ウイルス免疫応答を生じる；ワクチン接種された被験体が感染性病原体に曝露されると、生じるまで数日から数週間かかる、より迅速な適応（ＴおよびＢ細胞）応答が起こる。提唱されるＨＩＶ−１ワクチンは、大部分、この同じ戦略に基づいて設計されてきており、そしてしたがって有効性のために、自然免疫応答、そして次いで適応免疫応答の連続活性化を必要とする。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｇａｓｐｅｒ−Ｓｍｉｔｈら，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ８２：７７００−７７１０（２００８）
【非特許文献２】Ｈａｙｎｅｓら，  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  “Ｈａｒｒｉｓｏｎｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ”中，  第３０８章：第１７版，  Ｆａｕｃｉ，  Ｋａｓｐｅｒ，  Ｈａｕｓｅｒ，  Ｌｏｎｇｏ，  Ｊａｍｅｓｏｎ，  Ｌｏｓｃａｌｚｏ（監修），  ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，  ニューヨーク（２００８）
【非特許文献３】Ｐｌｏｔｋｉｎ，  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｄｉｓ．  ４７：４０１−４０９（２００８）
【非特許文献４】Ｓｈｅｎら，  Ａｌｌｅｒ．  ＆  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２２：２２−２８（２００８）
【非特許文献５】Ｋｅｅｌｅら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  １０５：７５５２−７５５７（２００８）
【非特許文献６】Ｋｉｎｔｅｒら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ９３：１４０７６−１４０８１（１９９６）
【非特許文献７】Ｒｕｂｂｅｒｔら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  １３：６３−６９（１９９７）
【非特許文献８】Ｋｉｎｔｅｒら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １７７：８８−９８（２０００）
【非特許文献９】Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２：８８１−９２２（１９９４）
【非特許文献１０】Ｃｈｅｓｓら，  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  第２版，  ４４１−４５６ページ（２００１）
【非特許文献１１】Ｂｒｏｄｅｕｒら，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８３７−８４８（２００３）
【非特許文献１２】ｄｉ  Ｍａｒｚｉｏら，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １２：１４８９−１４９５（２０００）
【非特許文献１３】Ｃｈｏｕｇｎｅｔら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６３：１６６６−１６７３（１９９９）
【非特許文献１４】Ｅｌｌｍａｒｋら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  ２４：３６７−３７３（２００８）
【非特許文献１５】Ａｂａｙｎｅｈら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．  ２４：４４７−４５２（２００８）
【非特許文献１６】Ｍｕｎｃｈら，  Ｃｅｌｌ  １２９：２６３−２７５（２００７）
【非特許文献１７】Ｓｃｈｏｎｂｅｃｋら，  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  ５８：４−４３（２００１）
【非特許文献１８】Ｋｉｅｎｅｒら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５：４９１７−４９２５  （１９９５）
【非特許文献１９】Ｈａｙｎｅｓら，  Ｊ．  Ａｌｌｅｒ．  ＆  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２２：３−９（２００８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、大規模な免疫系機能不全を迅速に誘導する、迅速作用感染（例えばＨＩＶ−１）のための新規ワクチン開発戦略が、あらかじめ存在する適応Ｂ応答の存在を有することであり、この応答を、ＨＩＶ−１伝染ウイルスが、伝染ウイルスと宿主接触の際に直ちに拡大し、その後、抗体が直ちにそして頑強な自然免疫応答を補充するという認識に基づく。本発明は、抗体応答における免疫記憶を用いた、特定の自己分子（例えばＣＤ４０分子または細胞表面脂質）に対する抗体の誘導を利用し、そしてワクチンが誘導する免疫応答のエフェクターアームとして、自然抗ウイルスサイトカイン（例えばＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１βおよびＲＡＮＴＥＳなどのケモカイン）の誘導を有し、すなわち現在のワクチンのちょうど逆である。緩慢な適応（免疫含有）Ｂ細胞応答（ウイルス感染前にワクチンによって誘導されるもの）と、ウイルス（例えばＨＩＶ−１）感染後にブーストされる迅速な自然サイトカイン応答の、このユニークな連結によって、非病原性宿主抗体応答は、自然抗ウイルス応答と相乗作用して、防御抗ウイルスサイトカイン応答を誘発可能である。したがって、事実上、本明細書に開示するアプローチは、ＨＩＶ−１による感染の数時間以内に、ワクチンがプライミングする抗ＨＩＶ−１応答のための「自然記憶」誘導を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、一般的に、迅速な抗ウイルス免疫応答を誘導する方法を含む、新規抗ウイルス（例えば抗ＨＩＶ−１）ワクチン戦略に関する。より具体的には、本発明は、細胞表面ターゲットに結合した際に、ウイルス感染を阻害するのに十分な量のサイトカイン（例えばケモカイン）の産生および放出を生じる宿主抗体の産生を誘導する免疫原を、その必要がある患者に投与する工程を含む、抗ウイルス免疫応答を誘導する方法に関する。
【００１４】
本発明の目的および利点は、以下の説明から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ＨＩＶ−１感染の存在下および非存在下で、抗脂質抗体によって誘導されたＰＢＭＣにおけるケモカイン発現レベルに対する抗体の効果。
【図１−１】ＨＩＶ−１感染の存在下および非存在下で、抗脂質抗体によって誘導されたＰＢＭＣにおけるケモカイン発現レベルに対する抗体の効果。
【図１−２】ＨＩＶ−１感染の存在下および非存在下で、抗脂質抗体によって誘導されたＰＢＭＣにおけるケモカイン発現レベルに対する抗体の効果。
【図１−３】ＨＩＶ−１感染の存在下および非存在下で、抗脂質抗体によって誘導されたＰＢＭＣにおけるケモカイン発現レベルに対する抗体の効果。
【図１−４】ＨＩＶ−１感染の存在下および非存在下で、抗脂質抗体によって誘導されたＰＢＭＣにおけるケモカイン発現レベルに対する抗体の効果。
【図１−５】ＨＩＶ−１感染の存在下および非存在下で、抗脂質抗体によって誘導されたＰＢＭＣにおけるケモカイン発現レベルに対する抗体の効果。
【図２】アッセイしたＨＩＶ−１阻害活性。ウイルスまたは細胞いずれかとｍＡｂのプレインキュベーション。
【図３】Ｐ１、ＩＳ４およびＣＬ１のＨＩＶ−１阻害活性は、カルジオリピンおよびＤＯＰＥなどの脂質によって阻害される。
【図４】アカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ）、マウスおよびヒトＣＤ４０の配列比較。下線のアミノ酸は、ＣＤ４０Ｌの塩基性アミノ酸と相互作用するヒトＣＤ４０の酸性アミノ酸（ＣＤ８４、Ｅ１１４およびＥ１１７）である。
【図５】抗ＣＤ４０抗体を誘導するための免疫原設計。
【図６】抗ケモカイン抗体によるＣＬ１  ＨＩＶ−１阻害活性の遮断。
【図７】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−３】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−４】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−５】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−６】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−７】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−８】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−９】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１０】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１１】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１２】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１３】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１４】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１５】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１６】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１７】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１８】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−１９】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２０】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２１】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２２】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２３】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２４】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２５】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２６】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２７】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２８】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−２９】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−３０】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−３１】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−３２】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−３３】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−３４】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−３５】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【図７−３６】ＨＩＶ−１感染性の抗脂質抗体阻害の作用機構：Ｒ５伝染ウイルスに対する自然記憶応答のＨＩＶ−１ワクチン誘導のための新規戦略。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、少なくとも部分的に、特定のＢ細胞抗体が、ウイルス（例えばＨＩＶ−１）の存在下で、高レベルのサイトカイン（例えばケモカイン）を作製する能力を自然免疫系に与えうるという認識から生じる。本発明のワクチン接種法は、単独でそしてウイルス（例えばＨＩＶ−１）の存在下の両方で、迅速な自然抗ウイルス免疫応答を誘導する抗体の産生を、特定の免疫原が誘導する能力を利用する。さらに、ウイルス（例えばＨＩＶ−１）での感染は、この抗ウイルス効果を持つ抗脂質抗体を誘導し、したがって、自然ケモカイン誘発抗体応答のためのブースター効果を提供することも可能である。本発明は、適応Ｂ細胞免疫応答の記憶を用いて、迅速な抗ウイルス自然サイトカイン（例えばケモカイン）応答を誘発することも可能である。本発明にしたがって、特定の自己分子は、誘導された抗体が結合した際に、特に病原体の存在下で、抗ウイルス自然物質（例えばケモカイン）を誘発可能であり、そしてさらに、病原体はまた、抗脂質抗体のブーストを誘導可能である。
【００１７】
本発明は、１つの態様において、ＨＩＶ−１のＣＣＲ５向性株による被験体の感受性細胞（例えばＴ細胞）の感染を阻害する方法に関する。該方法は被験体細胞に結合する抗体の産生を誘導する免疫原を、被験体に投与する工程を含み、該細胞は：ｉ）ＣＣＲ５結合性ケモカインを産生し、そしてｉｉ）その表面上に該抗体によって認識される抗原を有する。細胞表面抗原に抗体が結合すると、こうした細胞によるＣＣＲ５結合性ケモカインの産生が誘導される。ＨＩＶ−１のＣＣＲ５向性株の存在下または非存在下で、産生されるケモカインのレベルは、被験体のＴ細胞の感染を阻害するのに十分である。したがって、本発明にしたがって、ＣＣＲ５結合性ケモカインの産生および放出を誘導する抗体を用いて、記憶（免疫原投与によってプライミングされる抗体応答由来）を伴う、抗ＨＩＶ自然（ケモカイン）応答を誘導することも可能である。
【００１８】
適切な細胞表面ターゲット抗原には、抗体が結合した際に、ＣＣＲ５結合性ケモカイン産生を誘発する能力を有する、単球、マクロファージまたは樹状細胞表面上の（あるいはＣＣＲ５結合性ケモカインを産生可能な、上皮細胞などの任意の他の細胞表面上の）任意の分子が含まれる。好ましいターゲットには、細胞脂質二重層の表面脂質、例えばホスファチジルセリン（ＰＳ）およびホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）が含まれる。
【００１９】
望ましい抗脂質抗体を誘導可能な免疫原の適切な型には、モノホスホリル脂質Ａ、ＴＬＲ−７またはＴＬＲ−９含有アジュバント中でアジュバント化されたＰＳおよびＰＥ含有リポソームが含まれる（例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００４７０９を参照されたい）。ＰＳまたはＰＥの六方晶ＩＩ型などのさらなる多形型の脂質もまた用いてもよい（Ｒａｕｃｈら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ８７：４１１２−４１１４（１９９０））。やはり、抗脂質抗体を誘導する際に使用するのに適しているのは、死菌梅毒スピロヘータである（Ｗｏｎｇら，  Ｂ．  Ｊ．  Ｖｅｎｅｒ．  Ｄｉｓ．  ５９：２２０−２２４（１９８３）、Ｊｏｎｅｓら，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｖｅｎｅｒ．  Ｄｉｓ．  ５２：９−１７（１９７６））。誘導される抗体が非病原性であることが好ましいことが認識されるであろう。抗脂質抗体の病原性に関する基準には、脂質に結合するための補因子としてβ−２糖タンパク質１分子に依存すること、およびマウスのピンチした（ｐｉｎｃｈｅｄ）耳垂において血栓症を引き起こす能力が含まれる（Ｚｈａｏら，  Ａｒｔｈ．  Ｒｈｅｕ．  ４２：２１３２−２１３８（１９９９））。したがって、好ましい抗脂質抗体の特性には：β−２糖タンパク質１に結合しないこと、および生理学的濃度で抗体を産生する宿主において血栓症を起こさないことが含まれる。Ａｌｖｉｎｇらは、多様な脂質を用いて、多様な抗脂質抗体を誘導してきており（Ｓｃｈｕｓｔｅｒら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２２：９００−９０５（１９７９））；梅毒および他の感染性疾患で作製される抗脂質抗体を含めて、大部分は非病原性である（Ａｌｖｉｎｇ，  Ｊ．  Ｌｉｐ．  Ｒｅｓ．  １６：１５７−１６６（２００６））。
【００２０】
本発明で使用するのに適した免疫原には、ＣＬ、ＰＳ、ＤＯＰＥおよびＰＥなどの非常に精製された陰イオン性脂質、ならびに例えばＡｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ由来の他の脂質またはＶＤＲＬ抗原（例えばＬｅｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ由来のもの）または死菌梅毒トレポネーマ（例えばＬｅｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ由来のもの）が含まれる。
【００２１】
抗脂質抗体を誘導する免疫原を、筋内（ＩＭ）、皮下または静脈内（ＩＶ）投与してもよい。ヒト被験体で使用するのに適した最適免疫原用量は、当業者によって容易に決定可能であり、そして例えば免疫原および被験体に応じて多様でありうる。免疫原用量は、例えば、約１００μｇの精製脂質、約１０５〜約１０６の死菌梅毒トレポネーマ生物、約１００μｇのＶＤＲＬ脂質、または約２００μｇのＣＬおよび／またはＰＳリポソームであってもよい。粘膜部位で抗脂質抗体を誘導するため、コレラ毒素（ＣＴ）またはＣＴの不活性化型または別の粘膜アジュバント、例えばＩＬ−１（ＵＳＰ  ７，０４１，２９４および６，２７０，７５８）を用いて、粘膜経路によって、免疫原を投与してもよい。再び、ヒトで使用するのに適した最適用量は、当業者によって容易に決定可能である。用量範囲の例には、鼻内（ＩＮ）の１０〜１００μｇ  ＩＬ−１、および５〜２５μｇの不活性化ＣＴ  ＩＮが含まれる。
【００２２】
さらなる好ましい細胞表面ターゲット抗原は、ＣＤ４０分子である。ＣＤ４０は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーのメンバーである。該分子は、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、角化細胞、内皮細胞、胸腺上皮細胞、線維芽細胞、および腫瘍細胞などの非常に多様な細胞によって発現される。
【００２３】
抗ＣＤ４０抗体を誘導可能な適切な免疫原には、遊離または誘導体化ヒトＣＤ４０（破傷風毒素またはキーホールリンペット（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ）・ヘモシアニンなどのキャリアーによって誘導体化される）あるいはヒトＣＤ４０に類似であるが同一でなく、そしてしたがって、ヒト患者において、抗ＣＤ４０抗体を誘導するために最適に認識される、遊離または誘導体化アカゲザルＣＤ４０または他の種のＣＤ４０が含まれる。適切な免疫原には、ヒトに免疫された場合、ＣＤ４０上のＣＤ４０リガンド結合部位でなく、ＣＤ４０上の他の部位に結合して、ＣＤ４０＋細胞からＲ５ケモカイン放出を誘発する、抗ＣＤ４０抗体を作製する、アカゲザル、モルモット（ｇｕｉｎｅａ  ｐｉｇ）またはマウスＣＤ４０由来の、組換えタンパク質またはＤＮＡが含まれる。ヒト、マウスおよびアカゲザルＣＤ４０分子の配列整列を図４に示す。ヒトＣＤ４０のＤ８４位、Ｅ１１４位およびＥ１１７位の酸性アミノ酸は、ＣＤ４０Ｌの塩基性アミノ酸と相互作用することが決定されてきている（Ｓｉｎｇｈら，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ７：１１２４−１１３５（１９９８））。アカゲザルのＣＤ４０Ｌ界面領域（Ｄ８４、Ｅ１１４およびＥ１１７）中のアミノ酸は、ヒトＣＤ４０中のものと同一であり（図４）、一方、界面のスパン領域（アミノ酸８１位〜１１４位）中の２つのアミノ酸のみ（１０９位および１１２位のアミノ酸）が、アカゲザルおよびヒトＣＤ４０タンパク質間で異なる（図５）。界面の対応するスパン領域中のアミノ酸は、マウスＣＤ４０およびヒトＣＤ４０間で実質的に異なる（図４および５）。ＣＤ４０へのＣＤ４０Ｌの結合は、ＣＤ４０の全体の生理学的機能に対して非常に重要であり、そしてＣＤ４０Ｌの結合部位領域に結合する抗体の誘導は好ましくないため、２つの突然変異体マウスＣＤ４０構築物および１つの突然変異体アカゲザルＣＤ４０構築物が、ヒトＣＤ４０により近いかまたは同一であるＣＤ４０Ｌ界面領域を反映するように設計されてきている（図５）。
【００２４】
抗ＣＤ４０抗体を誘導するために用いられる免疫原は、図５に記載するものなどのタンパク質であってもよい。あるいは、免疫原は、こうしたタンパク質をコードする核酸（例えばＤＮＡ）であってもよい。裸のＤＮＡとして核酸を投与してもよいし、または核酸はベクター中に存在してもよい。本発明には、タンパク質およびコード配列、ならびにコード配列およびベクターを含む構築物、ならびにこうした配列および構築物を用いて、被験体（ヒト）において抗体を誘導する方法が含まれる。適切なベクターには、ＢＣＧまたは他の組換えマイコバクテリア、組換えポックスウイルスベクター、例えばＮＹＶＡＣ、組換えアデノウイルスベクター、またはフラビウイルスベクター、例えば黄熱病ワクチンが含まれる。機能可能であるように核酸をプロモーターに連結してもよい。タンパク質またはコード核酸を、例えばＩＭまたは皮下投与してもよい。ヒトで使用するのに適した最適用量は、当業者によって容易に決定可能である。用量範囲の例には、ｒＡｄ＝約１０８ｐｆｕ〜約１０９ｐｆｕ、タンパク質＝約１００〜２００μｇ／用量  ＩＭ、ＤＮＡ＝約１〜５ｍｇのＤＮＡが含まれる。また、タンパク質またはコード配列を粘膜経路を介して投与してもよい。後者の場合、タンパク質またはコード核酸を、コレラ毒素またはＣＴの弱毒化型またはＩＬ−１などの別の粘膜アジュバント（ＵＳＰ  ６，２７０，７５８または７，０４１，２９４）とともに投与してもよい。再び、ヒトで使用するのに適した最適用量は、当業者によって容易に決定可能である。用量範囲の例には、１０〜１００μｇ  ＩＬ−１鼻内（ＩＮ）、および５〜２５μｇの不活性化ＣＴ  ＩＮが含まれる。
【００２５】
本発明は、宿主細胞表面ターゲット（例えば脂質およびＣＤ４０）に特異的な抗体の産生に関して詳細に上述されている。しかし、本発明には、ターゲット分子への結合に際して、抗ＨＩＶケモカイン応答を誘発する抗体の産生を生じる、任意の免疫原の投与が含まれる。例えば、使用に適しているのは、ビリオン上の分子に結合する抗体の産生を誘導する免疫原、またはビリオン上の分子および宿主細胞表面上の分子に結合する抗体の産生を誘導する免疫原であり、この場合、ターゲット分子にこうした抗体が結合すると、伝染数時間から数日以内に抗ＨＩＶケモカインが誘導される。こうした適切な免疫原の例には、ｍ４３型またはｍ９型抗体（すなわち、ｍ４３またはｍ９の特異性を有する抗体）の産生を生じるものが含まれる（Ｃｈｏｕｄｈｒｙら，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍ．．  ３４８：１１０７−１１１５（２００６）、Ｚｈａｎｇら，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍ．  Ｄｅｓｉｇｎ．  １３：２０３−２１２（２００７））。（ＷＯ  ２００６／０５０２１９もまた参照されたい）。
【００２６】
本方法にしたがって産生される抗体（例えば抗脂質抗体）は、療法レベルのケモカインを誘導可能である。ＨＩＶ−１ビリオンの存在下で、抗体は、より多くのＣＣＲ５結合性ケモカイン（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで２０，０００ｐｇ／ｍｌを超える）を誘導可能である。これは、戦略の成功および安全性に関して重要である。ＨＩＶ−１を加えた抗体の存在下で最高レベルのケモカインが生じることによって、自然免疫系には通常は存在しない、応答に対する抗原特異性が与えられる。
【００２７】
本発明は、ＣＣＲ５向性ＨＩＶ−１感染に関して詳細に記載されてきているが、本開示を読むと、ＣＸＣＲ４を利用するＨＩＶ−１株に関しても類似の戦略を採用可能であることが認識されるであろう。ＣＸＣＲ４株の場合、投与される免疫原は、ターゲット細胞からのＳＤＦ−１の放出を誘発する抗体の産生を誘導すあるように設計されたものであってもよい。同様に、本戦略は、Ｂ型およびＣ型肝炎感染に関して採用可能である。ここで、投与される免疫原は、α−インターフェロンまたは他の防御サイトカインの産生を誘導するものであってもよい。
【００２８】
ケモカインは、抗体を設計して誘導可能な抗ウイルス分子の唯一の種類ではない。α−１抗トリプシンのＶＩＲＩＰ断片（Ｚｈｕら，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １０５：１０２−１０９（１９９９））、可溶性アミロイドＡ、およびβ−ディフェンシンなどの自然系小分子はすべて、抗ウイルス（例えば抗ＨＩＶ）活性を有し、そしてＣＣＲ５結合性ケモカインの誘導と類似の方式でこれらの分子を誘導すると、ＨＩＶ感染の防止または治療に対して、有益な効果があることが予期されうる。
【００２９】
さらなる態様において、本発明は、上述のような免疫原およびキャリアーを含む組成物（例えば薬学的組成物）に関する。適切なキャリアーには、例えば、無菌生理食塩水または緩衝液が含まれる。組成物は、例えば粘膜表面への注射または局所適用に適した型であってもよい。
【００３０】
本発明の特定の側面は、以下の限定されない実施例により詳細に記載されうる（Ｌｉｎら，  Ａｒｔｈ．  Ｒｈｅｕ．  ５６：１６３８−１６４７（２００７）、Ｚｈｕら，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｈａｅｍ．  １０５：１０２−１０９（１９９９）、Ｌｉｎら，  Ａｒｔｈ．  Ｒｈｅｕ．  ５６：１６３８−１６４７（２００７）、２００８年９月５日出願の米国仮出願６１／１３６，４４８もまた参照されたい）。
【実施例】
【００３１】
実施例１
以前、自己免疫疾患を有する被験体で、ＨＩＶ−１感染の発症率がより低い理由は、自己免疫疾患被験体における寛容の欠陥に関連すると仮定されてきていた。さらに、これらの欠陥は、ＨＩＶ−１によるヒト細胞感染を防止可能な、特定の種類の抗体の産生を導きうると仮定されてきていた（Ｈａｙｎｅｓら，  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  １４：５９−６７（２００５）、Ｈａｙｎｅｓら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０８：１９０６（２００５））。全身性エリテマトーデス（ｍＡｂ  ＣＬ１）および抗リン脂質症候群（Ｐ１およびＩＳ４）などの自己免疫疾患を有するヒトに由来する抗脂質抗体の研究中、これらの抗体が、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）アッセイにおいて、ＨＩＶ−１感染を防止する（Ｂｕｒｅｓら，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．  Ｈｕｍ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  １６：２０１９−２０３５（２０００）、Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｉら，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ７２：１８８６−１８９３（１９９８）、Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｉら，  Ｊ．  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｄｉｓ．  １７３：６０−６７（１９９６））（表１）が、ＣＤ４、ＣＣＲ５およびＣＸＣＲ４トランスフェクション上皮細胞ＴＺＭＢＬ偽ウイルスアッセイにおいては防止しないことが見出されてきている（Ｗｅｉら，  Ｎａｔｕｒｅ  ４２２：３０７−３１２（２００３）、Ｄｅｒｄｅｙｎら，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ７４：８３５８−８３６７（２０００）、Ｌｉら，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ７９：１０１０８−１０１２５（２００５）、Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｉ，  ＤＣ  ｐｐ．  １２．１１．１−１２．１１．１５，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ中（２００４））（表２）（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００４７０９を参照されたい）。
【００３２】
ＰＢＭＣアッセイにおいて、脂質抗体は、ＨＩＶのＣＣＲ５を利用する株のみを中和し、ＣＸＣＲ４を利用する株は中和しないことが見出されている（表３）。したがって、これらの抗脂質抗体を誘導可能であれば、これらは、ＨＩＶ−１に対して防御性でありうる（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００４７０９を参照されたい）。
【００３３】
現在、単離ＣＤ４＋  Ｔ細胞（ＨＩＶ−１で感染可能であるが）のＨＩＶ−１感染性は、ＣＬ１、Ｐ１またはＩＳ４  ｍＡｂによっては防止不能であり、むしろこれらの抗体は、末梢血単球が存在する場合にのみ、ＨＩＶ−１感染を防止可能であることが見出されてきている（表４）。ＣＣＲ５を利用するＨＩＶ株の感染を防止可能であるが、ＣＸＣＲ４を利用するＨＩＶ株の感染を防止不能な、ケモカイン産生に対するＣＬ１、Ｐ１およびＩＳ４の効果の研究によって：
１．  Ｐ１、ＣＬ１およびＩＳ４  ｍＡｂは、ＣＣＲ５リガンド、ＲＡＮＴＥＳ（弱い）、ＭＩＰ−１α、およびＭＩＰ−１βの産生を誘導するが、ＣＸＣＲ４リガンドＳＤＦ−１の産生を誘導せず（図１）；
２．  ＨＩＶ−１は、単独で、ある被験体においては、これらのＣＣＲ５結合性ケモカインを最小限の量で、そして他の被験体においては、頑強な量で誘導し（図１）；そして
３．  ＨＩＶ−１および抗脂質抗体の１つ（Ｐ１、ＩＳ４およびＣＬ１のいずれか）の組み合わせは、ＣＣＲ５ケモカインの極端に多い産生を導く（図１）
ことが示されてきている。
【００３４】
これらの観察は、本ＨＩＶ−１ワクチンの設計のため、広範囲の暗示を有する。
ルシフェラーゼ・レポーター遺伝子が付着するよう操作されたＣＣＲ５伝染ウイルス（ＷＩＴＯ）およびＣＸＣＲ４を利用する伝染ウイルス（ＷＥＡＵ）を用いて、ＰＢＭＣを感染させた（表５を参照されたい）。抗脂質抗体はすべて、ＰＢＭＣのＷＩＴＯ感染を阻害するが、ＰＢＭＣのＷＥＡＵ  ＨＩＶ−１感染性を阻害しないことが見出された。やはり用いたのは、ＨＩＶ感染１３２日後の急性ＨＩＶ感染を伴う被験体（７００−１２−０３７）に由来する血液Ｂ細胞のＥＢＶ形質転換であり、この被験体から、ＩｇＡ二量体であるｍＡｂ  ＡＣＬ４が単離された（このＢ細胞クローンのヘテロハイブリドーマ安定細胞株が確立されてきている）。生じたヒトｍＡｂは、伝染Ｒ５ウイルスＷＩＴＯを強力に阻害し、したがって、被験体０３７における伝染ウイルスが、抗脂質抗体が産生されるのを誘導し、したがって、ＨＩＶ−１がこの種類の抗体をブーストまたは誘導可能であることが立証される。この症例では、患者を救うには誘導が遅すぎた。これにより、この種類の抗体をプライミングする方法が示される。患者０３７からのＡＣＬ４抗体単離によって、ＨＩＶ−１がこの種類の抗体を刺激可能であり、したがって、ＨＩＶが、事実上、この抗脂質「自己自然抗体」を「ＨＩＶ特異的」方式でブーストすることを可能にすることが示される。すなわち、ＨＩＶ−１感染前に、ワクチンを用いて、ＡＣＬ４型抗体に関してプライミングすることによって、ＨＩＶ−１が、伝染に際して直ちに同じ抗体をブーストすることが可能になる。このアプローチは、感染数時間以内（例えば４８時間以内）にＨＩＶを阻害することを可能にし、そしてしたがって、ＨＩＶ−１を消滅させることを可能にする。
【００３５】
Ｐ１、ＣＬ１およびＩＳ４  ｍＡｂが宿主ＰＢＭＣに結合し、そしてビリオンではなく、宿主細胞に結合することによって阻害することもまた、先に指摘された（図２）。さらに、Ｐ１、ＣＬ１およびＩＳ４  ｍＡｂは、脂質ラフトを示唆するパターンで、ＰＢＭＣ細胞に結合する。Ｐ１、ＩＳ４およびＣＬ１のウイルス阻害活性は、カルジオリピンなどの脂質によって阻害可能であることもまた先に示されてきており（図３および７）、すなわち、これらの抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでカルジオリピンに、ならびにＰＳおよびＰＥに結合可能である（Ｚｈｕら，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １０５：１０２−１０９（１９９９）、Ｌｉｎら，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ５６：１６３８−１６４７（２００７））。しかし、カルジオリピンは、外細胞膜中でなく、ミトコンドリア膜中にあり、したがって、ＰＳおよびＰＥがターゲットである。さらに、ＰＳおよびＰＥは、アポトーシス細胞の細胞表面上で発現され、生存細胞表面上にはより少なくしか発現されない（最近、より少量のＰＳおよびＰＥが生存細胞表面上に存在すると認識されてきている（Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎら，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２８２：  １８３５７−１８３６４（２００７）））。
【００３６】
実施例２
ヒト（ｈＣＤ４０）、マウス（ｍＣＤ４０）およびアカゲザル（ＲｈＣＤ４０）の野生型ＣＤ４０、ならびにアカゲザルＣＤ４０ならびにマウスＣＤ４０およびアカゲザル突然変異体ＣＤ４０の配列整列を図５に示す。ＣＤ４０リガンドと相互作用するヒトＣＤ４０のアミノ酸を太字および下線で示す。ＣＤ４０およびＣＤ４０リガンドの相互作用に干渉しうる抗体を誘導することを回避するため、マウスＣＤ４０の対応する界面のアミノ酸（Ｋ１１４）をヒトＣＤ４０と同じようにＥに突然変異させた、突然変異体ｍＣＤ４０、ｍＣＤ４０ｍｕｔＥＫを設計した。ＣＤ４０とＣＤ４０リガンドの界面のスパン領域（囲みで示す）（アミノ酸８３位〜１１７位）において、アカゲザルおよびヒトＣＤ４０タンパク質間で異なるアミノ酸が領域中に２つあり（１０９位および１１２位のアミノ酸）、そしてマウスおよびヒトＣＤ４０間の配列に実質的な相違がある。このスパン領域中のアミノ酸相違による、ＣＤ４０およびＣＤ４０リガンドの相互作用に干渉しうる抗体を誘導する可能性を最小限にするため、別のマウスＣＤ４０突然変異体（ｍＣＤ４０ｄ８１−１１４）およびアカゲザルＣＤ４０突然変異体（ＲｈＣＤ４０ｄ１０９／１１２）を、界面スパン領域中のそのアミノ酸配列が、野生型からヒトＣＤ４０のような配列に突然変異されるように設計した。
【００３７】
実施例３
ＣＣＲ５ケモカインに対する抗体が、ＰＢＭＣのＨＩＶ−１感染を阻害する抗脂質抗体の能力を阻害する能力を研究した。提示する疑問は、ＰＢＭＣ  ＨＩＶ−１感染性アッセイに添加された際、ＣＣＲ５ケモカインの効果を中和する抗体が、ＨＩＶ−１によるＰＢＭＣ感染を阻害するｍＡｂ  ＣＬ１の能力を阻害可能であるかどうかであった（図６）。ＣＣＲ５ケモカインＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１βを中和する抗体は、ＨＩＶ感染性を阻害する抗脂質抗体の能力の、最強の阻害剤であることが見出された。したがって、実際、抗脂質抗体によって、ＨＩＶ−１の存在下で、ＣＣＲ５ケモカインを誘導すると、ＰＢＭＣのＨＩＶ−１感染を阻害可能である。
【００３８】
上に引用するすべての文献および他の情報供給源は、その全体が本明細書に援用される。
表１．  ＰＢＭＣにおいてアッセイした抗脂質およびＨＩＶ−１  ｍＡｂのＨＩＶ−１阻害活性
【００３９】
【表１】
2012502031.tif 000002
【００４０】
表２．  ＴＺＭ−ｂｌ細胞においてアッセイした抗脂質およびＨＩＶ−１  ｍＡｂのＨＩＶ−１阻害活性
【００４１】
【表２】
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【００４２】
表３．  抗脂質抗体は、２Ｆ５、２Ｇ１２および１ｂ１２  ｍＡｂよりも広い幅で、Ｒ５  ＨＩＶ−１初代単離体を阻害する
【００４３】
【表３】
2012502031.tif 000004
【００４４】
表４．  多様な細胞種でアッセイしたＨＩＶ−１阻害活性
【００４５】
【表４】
2012502031.tif 000005
【００４６】
表５．  ＬｕｃＲ取り込みＨＩＶ−１を用いたＰＢＭＣに基づく中和アッセイにおける、抗脂質抗体によるＨＩＶ−１の阻害
【００４７】
【表５】
2012502031.tif 000006
【図１】
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【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図７−４】
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【図７−５】
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【図７−６】
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【図７−７】
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【図７−８】
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【図７−９】
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【図７−１０】
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【図７−１１】
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【図７−１２】
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【図７−１３】
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【図７−１４】
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【図７−１５】
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【図７−１６】
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【図７−１７】
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【図７−１８】
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【図７−１９】
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【図７−２０】
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【図７−２１】
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【図７−２２】
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【図７−２３】
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【図７−２４】
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【図７−２５】
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【図７−２６】
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【図７−２７】
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【図７−２８】
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【図７−２９】
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【図７−３０】
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【図７−３１】
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【図７−３２】
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【図７−３３】
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【図７−３４】
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【図７−３５】
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【図７−３６】
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