(57)【要約】１つ以上のｔｏｌｌ様レセプターのアゴニストまたはアンタゴニストである小分子結合体が本明細書中に提供される。そのような結合体は、種々の方法（例えば、自己免疫、炎症および細胞増殖性の障害または疾患などの状態の処置が挙げられるがこれらに限定されない）において利用され得る。本発明はまた、被験体における炎症または自己免疫の状態（障害または疾患）（例えば、関節リウマチ）を予防するため、阻害するため、または処置するための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
その水和物を含む、式Ｉ：
【化１１】
2012517428.tif 000021
に記載の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩であって、ここで：
Ｘは、ＮまたはＣＲ２であり；
Ｒは、−ＯＲ１、−ＳＲ１または−ＮＲａＲｂであり、
Ｘ１は、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲｃ−であり；
Ｒｃは、水素、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルもしくは置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルであるか、またはＲｃおよびＲ１は、窒素原子と一体となって、複素環式環または置換複素環式環を形成し得；
各Ｒ１は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルＣ１〜Ｃ１０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルＣ１〜Ｃ１０アルコキシ、Ｃ５〜Ｃ１０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ９複素環式、置換Ｃ５〜Ｃ９複素環式、Ｃ３〜Ｃ９炭素環式または置換Ｃ３−Ｃ９炭素環式であり；
各Ｒ２は、独立して、水素、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（アルカノイル）、置換−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ６〜Ｃ１０アリール（アロイル）、置換−Ｃ（Ｏ）−Ｃ６〜Ｃ１０アリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ（カルボキシル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（アルコキシカルボニル）、置換−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ（カルバモイル）、置換Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、ハロ、ニトロまたはシアノであり；
該アルキル、アルコキシ、アリールまたは複素環式基における置換基は、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシＣ１〜Ｃ６アルキレン、カルボキシＣ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシＣ１〜Ｃ６アルキレン、アミノ、シアノ、ハロゲンまたはアリールであり；
ＲａおよびＲｂの各々は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ハロＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルカノイル、ヒドロキシＣ１〜Ｃ６アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６アルキル、Ｈｅｔ、ＨｅｔＣ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニルであり；
各Ｒｘは、独立して、−Ｘ２−（（Ｒ３）ｒ−（Ｒ４）ｓ）ｐ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂまたは−ＣＨ２ＮＨ−ビオチンであり；
各Ｘ２は、独立して、結合または連結基であり；
各Ｒ３は、独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分であり；
各Ｒ４は、独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｎ３、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ１、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲａＲｂ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＣＯＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＣＯＯＲ１、５〜６員環、置換５〜６員環、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−５〜６員環、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−置換５〜６員環、Ｃ２〜Ｃ９複素環式または置換Ｃ２〜Ｃ９複素環式であり；
ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
ｎは、０、１、２、３または４であり；
ｐは、１から１００であり；
ｑは、１、２、３、４または５であり；
ｒは、１から１，０００であり；
ｓは、１から１，０００であり；そして
ｎとｑとの和は、５に等しい、
化合物、またはその水和物を含むその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｘ１が、酸素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルＣ１〜Ｃ１０アルコキシ部分である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘ２が、アミド連結基である、請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ２が、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ（Ｏ）Ｃ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＨ（Ｏ）Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−ＮＨ（Ｏ）Ｃ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−−ＮＨ（Ｏ）Ｃ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｔ−であり、ここで、ｔは、１、２、３または４である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
ｎが、４であり、Ｒ２が、いずれの場合も水素である、請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
前記ＰＥＧ部分が、約１から約１，０００個のＰＥＧ単位を含む、請求項１から８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
各ＰＥＧ単位が、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
ｒが、約５から約１００である、請求項１から１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
ｒが、約５から約５０である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
ｒが、約５から約２５である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
ｒが、約５から約１５である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
ｒが、約１０である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
ｓが、約５から約１００である、請求項１から１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
ｓが、約５から約５０である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
ｓが、約５から約２５である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
ｓが、約５から約１５である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
ｓが、約１０である、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
前記ＰＥＧ部分の１つ以上が、線状である、請求項１から２０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２２】
前記ＰＥＧ部分の１つ以上が、分枝状である、請求項１から２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
各Ｒ４置換基が、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、−Ｃ１〜Ｃ２アルコキシ（例えば、−ＯＣＨ３）、−ＮＲａＲｂ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ１、−Ｃ１〜Ｃ２アルキル−ＮＲａＲｂ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−ＣＯＯＨまたはＣ１〜Ｃ２アルキル−ＣＯＯＲ１である、請求項１から２２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２４】
ｍが、１である、請求項１から２３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ２が、水素であり、ｎが、４であり、ｑが、１であり、ｐが、１であり、ｒが、約１０であり、ｓが、１である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
請求項１から２５のいずれか１項に記載の化合物の薬学的に許容可能な塩を含む、薬学的組成物。
【請求項２７】
前記薬学的に許容可能な塩が、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸および硝酸からなる群から選択される酸を用いて調製される、請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
前記薬学的に許容可能な塩が、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸およびイセチオン酸からなる群から選択される酸を用いて調製される、請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
前記薬学的に許容可能な塩が、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、カフェインおよびアミンからなる群から選択される塩基を用いて調製される、請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項３０】
哺乳動物における自己免疫状態を予防するため、阻害するため、または処置するための方法であって、該方法は、その必要のある哺乳動物に、該自己免疫状態を予防するか、阻害するか、または処置するのに有効な量で請求項１から２５のいずれか１項に記載の化合物または請求項２６から２９のいずれか１項に記載の薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３１】
哺乳動物における炎症状態を予防するため、阻害するため、または処置するための方法であって、該方法は、その必要のある哺乳動物に、該炎症状態を予防するか、阻害するか、または処置するのに有効な量で請求項１から２５のいずれか１項に記載の化合物または請求項２６から２９のいずれか１項に記載の薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３２】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
自己免疫障害もしくは自己免疫疾患または炎症性障害もしくは炎症性疾患の医学療法における、ポリエチレングリコール部分を介してリン脂質に結合体化されたＴＬＲ７アゴニストを含む化合物の使用。
【請求項３４】
前記化合物が、請求項１から２５に記載の化合物のうちのいずれか１つであるか、または請求項２６から２９のいずれか１項に記載の薬学的組成物に含まれる、請求項３３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２００９年２月１１日に出願された米国特許出願第６１／１５１，７３７号の出願日の利益を主張する。この米国特許出願の全体が本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
政府の権利の陳述
本明細書中に記載される発明は、国立衛生研究所により授与された認可番号ＡＩ０５６４５３およびＡＩ０７７９８９−０１の下での政府の援助を受けてなされた。米国政府は本発明に特定の権利を有する。
【０００３】
分野
本技術は、Ｔｏｌｌ様レセプターの機能を調節する分子、および疾患を処置する必要のある被験体にそのような分子を投与することによって疾患を処置するための方法に部分的に関するものである。
【背景技術】
【０００４】
背景
Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）は、微生物（例えば、細菌、ウイルスまたは真菌）に存在する特異的な分子パターンを認識する、多種多様な細胞型に存在するパターン認識レセプターである（１）。ＴＬＲは、リポタンパク質（ＴＬＲ２）、二本鎖ＲＮＡ（ＴＬＲ３）、リポ多糖（ＬＰＳ、ＴＬＲ４）、フラジェリン（ＴＬＲ５）、一本鎖ＲＮＡ（ＴＬＲ７／８）および細菌またはウイルスの非メチル化ＣｐＧＤＮＡ（ＴＬＲ９）を認識する。ＴＬＲ３を除くすべてのＴＬＲが、ＭｙＤ８８と呼ばれるアダプタータンパク質を介してシグナル伝達し、ＮＦカッパＢおよび関連するサイトカイン遺伝子の活性化をもたらす（２）。
【０００５】
細胞内のエンドソーム構成要素に位置するＴＬＲ７および８は、一本鎖ＲＮＡ、および宿主細胞の独特な合成グアノシンアナログを認識する（３，４）。グアニンおよびウリジンリッチな一本鎖ＲＮＡは、ＴＬＲ７に対する天然リガンドとして同定されている（５）。さらに、イミダゾキノリンおよびプリン様分子を含む、ＴＬＲ７のいくつかの低分子量アクチベーターが同定されている（３，６，７）。後者のうち、９−ベンジル−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）アデニン（「ＳＭ」）が、強力かつ特異的なＴＬＲ７アゴニストと同定されている（８）。ＳＭの誘導体は、ベンジル部分にアルデヒド官能基を組み込み、その中間体を、ヒドラジンおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミドを含む二官能性リンカー分子を介して種々の補助的な化学実体（ａｕｘｉｌｉａｒｙ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｅｎｔｉｔｙ）に結合することによって、合成されている（９）。マウス血清アルブミン（ＭＳＡ）タンパク質への結合体化によって、遊離薬物と比べて、効力が１０〜１００倍高まり、インビボ薬力学（ｐｈａｒｍａｋｏｄｙｎａｍｉｃｓ）が改善された。ＭＳＡ結合体を、鼻腔内投与または気管内投与によって呼吸器系に送達することができた。鼻腔内による薬物送達によって、細菌感染症およびウイルス感染症という２つの感染症のマウスモデルにおいて有効であることが証明された（９）。そのＳＭ中間体はまた、脂質であるジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）にも結合体化され、その結合体は、高いＴＬＲ７アゴニスト活性を有すると決定された（例えば、２００８年２月７日出願の国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００１６３１に基づく、２００８年９月２５日公開の特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００８／１１５３１９号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
要旨
１つ以上のｔｏｌｌ様レセプターの活性を調節し得る小分子結合体が本明細書中に提供される（例えば、その結合体は、アゴニスト、アンタゴニストまたはその両方である）。用語「ｔｏｌｌ様レセプター」（ＴＬＲ）とは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に結合し、哺乳動物において免疫応答を促進する、レセプターファミリーのメンバーのことを指す。１０種の哺乳動物ＴＬＲ、例えば、ＴＬＲ１〜１０が知られている。用語「ｔｏｌｌ様レセプターアゴニスト」（ＴＬＲアゴニスト）とは、ＴＬＲと相互作用してそのレセプターの活性を刺激する分子のことを指す。合成ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲと相互作用してそのレセプターの活性を刺激するように設計された化学物質である。ＴＬＲアゴニストの例としては、ＴＬＲ−７アゴニスト、ＴＬＲ−３アゴニストまたはＴＬＲ−９アゴニストが挙げられる。用語「ｔｏｌｌ様レセプターアンタゴニスト」（ＴＬＲアンタゴニスト）とは、ＴＬＲと相互作用してそのレセプターのシグナル伝達活性を阻害するかまたは中和する分子のことを指す。合成ＴＬＲアンタゴニストは、ＴＬＲと相互作用してそのレセプターの活性を干渉するように設計された化学物質である。ＴＬＲアンタゴニストの例としては、ＴＬＲ−７アンタゴニスト、ＴＬＲ−３アンタゴニストまたはＴＬＲ−９アンタゴニストが挙げられる。
【０００８】
したがって、１つの実施形態において、式Ｉ：
【０００９】
【化１】
2012517428.tif 000002
に記載の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（その水和物を含む）が本明細書中に提供され、ここで：
Ｘは、ＮまたはＣＲ２であり；
Ｒは、−ＯＲ１、−ＳＲ１または−ＮＲａＲｂであり、
Ｘ１は、結合であるか、または−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＲｃ−であり；
Ｒｃは、水素、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルもしくは置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルであるか、またはＲｃおよびＲ１は、窒素原子と一体となって、複素環式環または置換複素環式環を形成し得；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルＣ１〜Ｃ１０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルＣ１〜Ｃ１０アルコキシ、Ｃ５〜Ｃ１０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ９複素環式、置換Ｃ５〜Ｃ９複素環式、Ｃ３〜Ｃ９炭素環式または置換Ｃ３〜Ｃ９炭素環式であり；
各Ｒ２は、独立して、水素、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（アルカノイル）、置換−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ６〜Ｃ１０アリール（アロイル）、置換−Ｃ（Ｏ）−Ｃ６〜Ｃ１０アリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ（カルボキシル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（アルコキシカルボニル）、置換−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ（カルバモイル）、置換Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、ハロ、ニトロまたはシアノであり；
上記アルキル、アリールまたは複素環式基上の置換基は、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシＣ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシＣ１〜Ｃ６アルキレン、アミノ、シアノ、ハロゲンまたはアリールであり；
ＲａおよびＲｂの各々は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ハロＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルカノイル、ヒドロキシＣ１〜Ｃ６アルキル、アリール、アリールＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｈｅｔ、ＨｅｔＣ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニルであり；
各Ｒｘは、独立して、−Ｘ２−（（Ｒ３）ｒ−（Ｒ４）ｓ）ｐ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂまたは−ＣＨ２ＮＨ−ビオチンであり；
各Ｘ２は、独立して、結合または連結基であり；
各Ｒ３は、独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分であり；
各Ｒ４は、独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｎ３、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ１、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲａＲｂ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＯＨ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＣＮ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＣＯＯＨ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＣＯＯＲ１、５から６員（５〜６員）環、置換５〜６員環、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−５〜６員環、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−置換５〜６員環、Ｃ２〜Ｃ９複素環式、または置換Ｃ２〜Ｃ９複素環式であり；
ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
ｎは、０、１、２、３または４であり；
ｐは、１〜１００であり；
ｑは、１、２、３、４または５であり；
ｒは、１〜１，０００であり；
ｓは、１〜１，０００であり；そして
ｎとｑとの和は、５に等しい。
【００１０】
ある特定の実施形態において、式ＩＩ：
【００１１】
【化２】
2012517428.tif 000003
に記載の構造を有する化合物もしくはその薬学的に許容可能な塩またはそれらの水和物も提供され、ここで、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒおよびｓの実施形態は、式Ｉについて上で記載されている。
【００１２】
いくつかの実施形態において、式ＩＩＩ：
【００１３】
【化３】
2012517428.tif 000004
に記載の構造を有する化合物もしくはその薬学的に許容可能な塩またはそれらの水和物が提供され、ここで：
Ｘ、Ｘ１、Ｒ、Ｒ１およびＲ２の実施形態は、式Ｉについて上で記載されており；
Ｙは、−Ｘ２−（（Ｒ３）ｒ−（Ｘ３）ｔ−（Ｘ４）ｓ）ｐ）ｑ、
−Ｘ２−（（Ｒ３）ｒ−（Ｘ３）ｔ−（Ｘ４）ｓ−（Ｒ４）ｕ）ｐ）ｑ、
−Ｘ２−（（Ｘ４）ｓ−（Ｘ３）ｔ−（Ｒ３）ｒ）ｐ）ｑまたは
−Ｘ２−（（Ｘ４）ｓ−（Ｘ３）ｔ−（Ｒ３）ｒ−（Ｒ４）ｕ）ｐ）ｑであり；
Ｒ３、Ｒ４、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒおよびｓの実施形態は、式Ｉについて上で記載されており；
各Ｘ３は、独立して、結合または連結基であり；
各Ｘ４は、独立して、高分子であり；
ｔは、１〜１，０００であり；そして
ｕは、１〜１，０００である。
【００１４】
いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｎである。ある特定の実施形態において、Ｘ１は、酸素であり、いくつかの実施形態において、Ｒ１は、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルＣ１〜Ｃ１０アルコキシ部分（例えば、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３））である。Ｒ１は、いくつかの実施形態において、６個以下の非水素原子からなる。いくつかの実施形態において、ｎは、４であり、Ｒ２は、いずれの場合も水素である。
【００１５】
ある特定の実施形態において、Ｘ２および／またはＸ３は、独立して、アミド連結基（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨ（Ｏ）Ｃ−）；アルキルアミド連結基（例えば、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＨ（Ｏ）Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−ＮＨ（Ｏ）Ｃ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−−ＮＨ（Ｏ）Ｃ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｔ−（ｔは、１、２、３または４である））；置換５〜６員環（例えば、アリール環、ヘテロアリール環（例えば、テトラゾール、ピリジル、２，５−ピロリジンジオン（例えば、置換フェニル部分で置換された２，５−ピロリジンジオン））、炭素環式環または複素環式環）または酸素含有部分（例えば、−Ｏ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ）である。
【００１６】
ＰＥＧ部分は、１つ以上のＰＥＧ単位を含み得る。ＰＥＧ部分は、いくつかの実施形態において、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００または９００単位を含むがこれらに限定されない、約１〜約１，０００ＰＥＧ単位を含み得る。ある特定の実施形態において、ＰＥＧ部分は、約５〜約２５ＰＥＧ単位、約１０〜約５０ＰＥＧ単位、約５０〜約１５０ＰＥＧ単位、約１２０〜約３５０ＰＥＧ単位、約２５０〜約５５０ＰＥＧ単位または約６５０〜約９５０ＰＥＧ単位を含み得る。ＰＥＧ単位は、ある特定の実施形態において、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−である。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ｒは、約５〜約１００であり、時としてｒは、約５〜約５０または約５〜約２５である。ある特定の実施形態において、ｒは、約５〜約１５であり、時としてｒは、約１０である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は、ＰＥＧ単位であり、ｒは、約２〜約１０である（例えば、ｒは、約２〜約４である）。ある特定の実施形態において、Ｒ３は、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−である。
【００１８】
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−であり、ｒは、約１〜約１０００である（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００）。ある特定の関連実施形態において、ｒは、約５〜約２５、約１０〜約５０、約５０〜約１５０、約１２０〜約３５０、約２５０〜約５５０または約６５０〜約９５０である。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ｓは、約５〜約１００であり、時としてｓは、約５〜約５０または約５〜約２５である。ある特定の実施形態において、ｓは、約５〜約１５であり、時としてｓは、約１０である。いくつかの実施形態において、ｓは、約５以下である（例えば、ｓは、１である）。いくつかの実施形態において、（Ｒ３）ｒ置換基は、線状であり、ある特定の実施形態において、（Ｒ３）ｒ置換基は、分枝状である。線状部分について、ｓは、時として、ｒ未満であり（例えば、Ｒ３が、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−であるとき）、時には、ｓは、１である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は、線状ＰＥＧ部分（例えば、約１〜約１０００ＰＥＧ単位を有する）であり、ｓは、１であり、ｒは、１である。分枝状部分について、ｓは、時として、ｒより小さいか、ｒより大きいか、またはｒに等しく（例えば、Ｒ３が、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−であるとき）、時には、ｒは、１であり、ｓは、１であり、ｐは、約１〜約１０００である（例えば、ｐは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００である）。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ｔは、約５〜約１００であり、時としてｔは、約５〜約５０または約５〜約２５である。ある特定の実施形態において、ｔは、約５〜約１５であり、時としてｔは、約１０である。いくつかの実施形態において、ｔは、約５以下である（例えば、ｔは、１である）。ある特定の実施形態において、ｕは、約５〜約１００であり、時としてｕは、約５〜約５０または約５〜約２５である。いくつかの実施形態において、ｕは、約５〜約１５であり、時としてｕは、約１０である。ある特定の実施形態において、ｕは、約５以下である（例えば、ｕは、１である）。
【００２１】
ある特定の実施形態において、Ｒ４置換基は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、−Ｃ１〜Ｃ２アルコキシ（例えば、−ＯＣＨ３）、−ＮＲａＲｂ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ１、−Ｃ１〜Ｃ２アルキル−ＮＲａＲｂ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−ＣＯＯＨまたはＣ１〜Ｃ２アルキル−ＣＯＯＲ１である。いくつかの実施形態において、Ｒ４は、必要に応じて置換される５〜６員環（例えば、アリール環、ヘテロアリール環、炭素環式環、複素環式環）である。ある特定の実施形態において、Ｒ４は、水素ではなく、時としてＲ４は、ヒドロキシルではない。
【００２２】
式Ｉに記載の構造を有する化合物に関連するいくつかの実施形態において、ｍは、約１であり、Ｒ２は、水素であり、ｎは、４であり、ｑは、１であり、ｐは、１であり、ｒは、約１０であり、ｓは、１である。
【００２３】
各Ｘ４は、同じ高分子または異なる高分子であり得る。ある特定の実施形態において、高分子は、抗体、抗体フラグメント、抗原、病原体抗原（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ抗原）、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミンタンパク質またはそのフラグメント）、グリセロール、脂質、リン脂質（例えば、ＤＯＰＥ）、スフィンゴ脂質などからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、高分子は、ＤＯＰＥである。
【００２４】
１つの実施形態において、本発明は、被験体における炎症または自己免疫の状態（障害または疾患）（例えば、関節リウマチ）を予防するため、阻害するため、または処置するための方法を提供し、その方法は、以下の構造：
【００２５】
【化４】
2012517428.tif 000005
を有する化合物もしくはその薬学的に許容可能な塩またはそれらの水和物を、関節リウマチを予防するか、阻害するか、または処置するのに有効な量でその必要のあるヒト被験体に投与する工程を包含する。
【００２６】
式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩに記載の構造を有する化合物の薬学的に許容可能な塩を含む薬学的組成物もまた本明細書中に提供される。被験体における炎症状態を予防するため、阻害するため、または処置するための方法もまた本明細書中に提供され、その方法は、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩに記載の構造を有する化合物を、上記状態、例えば、自己免疫障害またはその症状を予防するか、阻害するか、または処置するのに有効な量でその必要のある被験体に投与する工程を包含する。被験体における自己免疫状態を予防するため、阻害するため、処置するための方法もまた本明細書中に提供され、その方法は、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩに記載の構造を有する化合物を、上記状態またはその症状、例えば、炎症を予防するか、阻害するか、または処置するのに有効な量でその必要のある被験体に投与する工程を包含する。
【００２７】
したがって、本発明は、必要に応じて他の化合物とともに、医学療法（例えば、炎症性障害もしくは炎症性疾患、例えば、関節リウマチ、または癌を予防するか、阻害するか、または処置する薬剤）において使用するための化合物を提供する。したがって、本発明の化合物は、自己免疫障害もしくは自己免疫疾患、炎症性障害もしくは炎症性疾患、または癌を予防するため、阻害するため、または処置するために有用である。
【００２８】
炎症性障害もしくは炎症性疾患および／または自己免疫障害もしくは自己免疫疾患あるいは癌を予防するか、阻害するか、または処置する薬物を製造するための化合物の使用もまた提供される。１つの実施形態において、本発明は、被験体における癌を予防するため、阻害するため、または処置するための方法を提供し、その方法は、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩに記載の構造を有する化合物を、癌を予防するか、阻害するか、または処置するのに有効な量でその必要のある被験体に投与する工程を包含する。１つの実施形態において、本発明の化合物は、癌を有する被験体に投与され、ここで、コルチコステロイド、例えば、デキサメタゾン、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｉｌｏｎｅ）、メチルプレドニゾロンまたはヒドロコルチゾンが指示され、癌、例えば、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫または脳腫瘍が指示される。１つの実施形態において、癌（その発症は炎症に関連し、例えば、結腸癌である）のリスクのある被験体が、本発明の化合物を投与される。ゆえに、本発明は、必要に応じて他の化合物とともに、医学療法（例えば、癌を予防するか、阻害するか、または処置する薬剤）において使用するための化合物を提供する。したがって、本技術の化合物は、種々の自己免疫障害／疾患、炎症性障害／疾患および癌を予防するため、阻害するため、または処置するために有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
図面は、本発明の実施形態を例証するものであって、限定するものではない。例証を明確にするためおよび容易にするために、これらの図面は、共通の尺度を持って作られていないこと、および場合によっては、本発明の様々な実施形態が、特定の実施形態の理解を促すために強調されるかまたは拡大されて示され得ることに注意すべきである。
【００３０】
以下の省略形が本文書全体にわたって使用される。Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）、リポ多糖（ＬＰＳ）、ミエロイド分化一次応答（Ｍｙｅｌｏｉｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）遺伝子（８８）（ＭｙＤ８８）、骨髄由来単核細胞（ＢＭＤＭ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミド（ＤＭＦ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、オボアルブミン（ＯＶＡ）、マウス血清アルブミン（ＭＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）および免疫グロブリン（Ｉｇ）
【図１】図１は、脂質−（６）、ＰＥＧ−（８）または脂質−ＰＥＧ（９）ＴＬＲ７結合体の合成に使用されるスキームを例証している。（６）、（８）および（９）とは、化合物の呼称を指す。
【図２】図２Ａ〜Ｄは、マウスマクロファージにおけるＴＬＲ７結合体のインビトロにおける免疫学的特徴づけの結果を示している。図２Ｅは、ＬＰＳ非応答性変異体マクロファージおよび野生型マクロファージを用いたエンドトキシン混入の評価の結果を示している。
【図３】図３Ａ〜Ｂは、ヒトＰＢＭＣにおけるＴＬＲ７結合体のインビトロ免疫学的特徴づけの結果を示している。
【図４】図４Ａ〜Ｂは、インビボにおけるＴＬＲ７結合体による炎症性サイトカイン誘導の動態を例証している。
【図５Ａ】図５Ａ〜Ｃは、インビボにおけるＴＬＲ７結合体のアジュバント活性（例えば、免疫学的応答を惹起する能力）を例証している。
【図５Ｂ】図５Ａ〜Ｃは、インビボにおけるＴＬＲ７結合体のアジュバント活性（例えば、免疫学的応答を惹起する能力）を例証している。
【図５Ｃ】図５Ａ〜Ｃは、インビボにおけるＴＬＲ７結合体のアジュバント活性（例えば、免疫学的応答を惹起する能力）を例証している。
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｃは、ＴＬＲ７結合体の潜在的有害作用の評価の結果を示している。
【図６Ｂ】図６Ａ〜Ｃは、ＴＬＲ７結合体の潜在的有害作用の評価の結果を示している。
【図６Ｃ】図６Ａ〜Ｃは、ＴＬＲ７結合体の潜在的有害作用の評価の結果を示している。
【図７】図７Ａ〜Ｂは、１Ｖ１３６（フリーのファーマコフォア）および１Ｖ２８２（化合物８）での処置による腹腔好中球浸潤の減少を例証している。
【図８】図８は、誘発された実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に対する、１Ｖ２８２（化合物（８））での処置の効果を例証している。
【図９Ａ】図９Ａ〜Ｅは、ＮＦｋＢｂｌａ  ＲＡＷ２６４．７細胞および骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）に対する、鎖の長さが様々なＴＬＲ７アゴニスト結合体のインビトロ活性を示している。
【図９Ｂ】図９Ａ〜Ｅは、ＮＦｋＢｂｌａ  ＲＡＷ２６４．７細胞および骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）に対する、鎖の長さが様々なＴＬＲ７アゴニスト結合体のインビトロ活性を示している。
【図９Ｃ】図９Ａ〜Ｅは、ＮＦｋＢｂｌａ  ＲＡＷ２６４．７細胞および骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）に対する、鎖の長さが様々なＴＬＲ７アゴニスト結合体のインビトロ活性を示している。
【図９Ｄ】図９Ａ〜Ｅは、ＮＦｋＢｂｌａ  ＲＡＷ２６４．７細胞および骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）に対する、鎖の長さが様々なＴＬＲ７アゴニスト結合体のインビトロ活性を示している。
【図９Ｅ】図９Ａ〜Ｅは、ＮＦｋＢｂｌａ  ＲＡＷ２６４．７細胞および骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）に対する、鎖の長さが様々なＴＬＲ７アゴニスト結合体のインビトロ活性を示している。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜Ｃは、マウスに投与されたＴＬＲ７アゴニストＰＥＧ結合体のインビボ薬力学を示している。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜Ｃは、マウスに投与されたＴＬＲ７アゴニストＰＥＧ結合体のインビボ薬力学を示している。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜Ｃは、マウスに投与されたＴＬＲ７アゴニストＰＥＧ結合体のインビボ薬力学を示している。
【図１０Ｄ】図１０Ａ〜Ｃは、マウスに投与されたＴＬＲ７アゴニストＰＥＧ結合体のインビボ薬力学を示している。
【図１１】図１１Ａ〜Ｂは、血清移入関節炎モデルにおいて、毎日の胃管栄養（Ａ）または皮下注射（Ｂ）によって投与された１Ｖ２８２の抗炎症性効果を例証している。
【図１２】図１２Ａ〜Ｂは、チオグリコレートで誘発された腹膜炎モデルにおけるＴＬＲ７アゴニストＰＥＧ結合体の抗炎症性効果を示している。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
詳細な説明
１つ以上のｔｏｌｌ様レセプターのアゴニストまたはアンタゴニストである小分子結合体が、本明細書中に提供される。そのような結合体は、種々の方法（例えば、自己免疫、炎症および細胞増殖性の障害または疾患などの状態の処置が挙げられるがこれらに限定されない）において利用され得る。
【００３２】
化合物
小分子ＴＬＲ調節因子（ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）が知られている。小分子の例は、２０００年５月２６日出願の特許出願番号０９／５５５，２９２からの２００１年１２月１１日発行の米国特許第６，３２９，３８１号、ならびに２００６年８月２１日出願（ＷＯ２００７／０２４７０７として２００７年３月１日公開）のＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３２３７１；２００８年２月７日出願（ＷＯ２００８／１１５３１９として２００８年９月２５日公開）のＰＣＴ／ＵＳ２００８／００１６３１；２００７年４月２３日出願（ＷＯ／２００７／１４２７５５として２００７年１２月１３日公開）のＰＣＴ／ＵＳ０７／００９８４０；および２００８年２月７日出願の米国仮出願番号６１／０２６，９９９に記載されている。
【００３３】
ある特定の小分子ＴＬＲアゴニスト（例えば、本明細書中で「小分子標的」と呼ばれる）は、１つ以上のＰＥＧ部分に結合体化され得、得られる結合体は、ＴＬＲアンタゴニスト活性を示し得ることが決定されている。小分子標的を１つ以上のＰＥＧ部分で結合体化するための方法がいくつか知られている。例えば、いくつかのＰＥＧ反応物が、商業的に入手可能であり、小分子の種々の反応基への結合体化に適している（例えば、ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ（ワールドワイドウェブＵＲＬ  ｐｅｇ−ｄｒｕｇ．ｃｏｍ／ｐｅｇ＿ｐｒｏｄｕｃｔ／ａｃｔｉｖａｔｅｄ＿ｐｅｇ．ｈｔｍｌ））。用語「ＰＥＧ反応物」とは、本明細書中で使用されるとき、ＰＥＧ−小分子標的結合体産物を生成する条件下で小分子標的と組み合わされる分子のことを指す。例えば、以下の構造を有するある特定のＰＥＧ反応物が、小分子上の種々の標的基と反応し得る：
ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｘ（ここで、Ｘは、表１：
【００３４】
【表１】
2012517428.tif 000006
に記載の反応基であり、ＮＨＳ＊は、Ｎ−スクシンイミジルである）
いくつかの実施形態において、ＰＥＧ反応物は、構造ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｘ−ＮＨＳ＊を有し、ここで、Ｘは、−ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−、−ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−、−ＣＨ２ＣＯＯ−および−（ＣＨ２）５ＣＯＯ−であり得る。ある特定の実施形態において、ＰＥＧ反応物は、構造
【００３５】
【化５】
2012517428.tif 000007
を有する。
【００３６】
ある特定のＰＥＧ反応物は、いくつかの実施形態において、二官能性である。二官能性ＰＥＧ反応物の例は、いくつかの実施形態において、構造Ｘ−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｘを有し、ここで、Ｘは、（Ｎ−スクシンイミジルオキシカルボニル）メチル（−ＣＨ２ＣＯＯ−ＮＨＳ）、スクシンイミジルグルタレート（−ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−ＮＨＳ）、（Ｎ−スクシンイミジルオキシカルボニル）ペンチル（−（ＣＨ２）５ＣＯＯ−ＮＨＳ）、３−（Ｎ−マレイミジル）プロパンアミド、（−ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２−ＭＡＬ）、アミノプロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）または２−スルファニルエチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＳＨ）である。
【００３７】
ある特定の実施形態において、いくつかのＰＥＧ反応物は、ヘテロ官能性である。ヘテロ官能性ＰＥＧ反応物の例は、構造
【００３８】
【化６】
2012517428.tif 000008
を有し、ここで、Ｘは、いくつかの実施形態において、（Ｎ−スクシンイミジルオキシカルボニル）メチル（−ＣＨ２ＣＯＯ−ＮＨＳ）、スクシンイミジルグルタレート（−ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−ＮＨＳ）、（Ｎ−スクシンイミジルオキシカルボニル）ペンチル（−（ＣＨ２）５ＣＯＯ−ＮＨＳ）、３−（Ｎ−マレイミジル）プロパンアミド、（−ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２−ＭＡＬ）、３−アミノプロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、２−スルファニルエチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＳＨ）、５−（Ｎ−スクシンイミジルオキシカルボニル）ペンチル（−（ＣＨ２）５ＣＯＯ−ＮＨＳ］またはｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル、（−ＣＯ２−ｐ−Ｃ６Ｈ４ＮＯ２）であり得る。
【００３９】
ある特定の分枝状ＰＥＧ反応物（例えば、構造：
【００４０】
【化７】
2012517428.tif 000009
（ここで、Ｘは、スペーサーであり、Ｙは、官能基（マレイミド、アミン、グルタリル−ＮＨＳ、カーボネート−ＮＨＳまたはカーボネート−ｐ−ニトロフェノールを含むがこれらに限定されない）である）を有するもの）もまた、いくつかの実施形態において利用され得る。分枝鎖ＰＥＧ反応物の利点は、それらが、徐放特性を有する結合体産物をもたらし得る点である。
【００４１】
ＰＥＧ反応物は、ある特定の実施形態において、
【００４２】
【化８】
2012517428.tif 000010
などのヘテロ官能性反応物でもあり得る。いくつかの実施形態において、Ｂｏｃ＊保護されたアミノ−ＰＥＧ−カルボキシル−ＮＨＳまたはマレイミド−ＰＥＧ−カルボキシル−ＮＨＳ反応物が利用され得る。
【００４３】
ある特定の実施形態では、いくつかのＰＥＧ単位を結合体に組み込むために、くし形ポリマーがＰＥＧ反応物として利用され得る。くし形ポリマーの例を以下に示す。
【００４４】
【化９】
2012517428.tif 000011
「化合物」という表題のこの項において具体的に示されるＰＥＧ反応物について、ＰＥＧ反応物において示される置換基「ｎ」または「ｍ」は、単に、いくつかの実施形態において式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩについて上で定義された「ｒ」と等しい。ＰＥＧ反応物および／またはＰＥＧ結合体産物は、約５グラム／モル〜約１００，０００グラム／モルの範囲の分子量を有し得る。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ反応物および／またはＰＥＧ結合体産物は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、２００００、３００００、４００００、５００００、６００００、７００００、８００００または９００００グラム／モルの平均（ａｖｅｒａｇｅ）分子量、平均（ｍｅａｎ）分子量または名目上の分子量を有する。いくつかの実施形態において、本明細書中の化合物におけるＰＥＧ部分は、均質であり、そのＰＥＧ部分の分子量は、特定のバッチの化合物の各分子について同じである（例えば、Ｒ３が、１つのＰＥＧ単位であり、ｒは、２〜１０である）。
【００４５】
ある特定の実施形態において、１つ以上のＲ４置換基が、ＰＥＧ部分（例えば、式Ｉ；線状または分枝状のＰＥＧ部分）の末端をなす。各Ｒ４置換基は、同じであっても異なっていてもよく、いくつかの実施形態において、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＲ１からなる群から独立して選択され得る。リンカーは、本明細書中に記載されるリンカーを含む任意の適当なリンカーであり得る。
【００４６】
適当なリンカーは、結合体（例えば、Ｘ２、Ｘ３）を構築するために利用され得、複数のリンカーが知られている。利用され得るリンカーの非限定的な例としては、以下：
【００４７】
【化１０】
2012517428.tif 000012
が挙げられる。
【００４８】
本明細書中で使用されるとき、用語「アルキル」、「アルケニル」および「アルキニル」は、直鎖、分枝鎖および環状の一価ヒドロカルビルラジカル、ならびにこれらの組み合わせを含み、それらは、置換されていないとき、ＣおよびＨだけを含む。例としては、メチル、エチル、イソブチル、シクロヘキシル、シクロペンチルエチル、２プロペニル、３ブチニルなどが挙げられる。そのような基の各々における炭素原子の総数は、時として、本明細書中に記載され、例えば、その基が、最大１０個の炭素原子を含み得るとき、１〜１０ＣまたはＣ１〜Ｃ１０もしくはＣ１〜１０と表され得る。ヘテロ原子（代表的には、Ｎ、ＯおよびＳ）が、ヘテロアルキル基におけるように炭素原子を置き換えることができるとき、例えば、なおもＣ１〜Ｃ６と記載されるがその基を説明する数字は、例えば、その基における炭素原子の数と、記載されている環または鎖の骨格における炭素原子に代わる置き換えとして含められるそのようなヘテロ原子の数との和を表す。
【００４９】
代表的には、本発明のアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基は、１つの１０Ｃ（アルキル）または２つの１０Ｃ（アルケニルまたはアルキニル）を含む。好ましくは、それらは、１つの８Ｃ（アルキル）または２つの８Ｃ（アルケニルまたはアルキニル）を含む。時として、それらは、１つの４Ｃ（アルキル）または２つの４Ｃ（アルケニルまたはアルキニル）を含む。単一の基が、２つ以上のタイプの多重結合または２つ以上の多重結合を含み得る；そのような基が、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含むとき、それらは、用語「アルケニル」の定義内に含められ、それらが、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含むとき、用語「アルキニル」に含められる。
【００５０】
アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、そのような置換が化学的に理にかなう限りにおいて、しばしば必要に応じて置換される。代表的な置換基としては、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ、＝ＮＲ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲおよびＮＯ２が挙げられるが、これらに限定されず、ここで、各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６〜Ｃ１０アリールまたはＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールであり、各Ｒは、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ’、＝ＮＲ’、ＯＲ’、ＮＲ’２、ＳＲ’、ＳＯ２Ｒ’、ＳＯ２ＮＲ’２、ＮＲ’ＳＯ２Ｒ’、ＮＲ’ＣＯＮＲ’２、ＮＲ’ＣＯＯＲ’、ＮＲ’ＣＯＲ’、ＣＮ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＲ’２、ＯＯＣＲ’、ＣＯＲ’およびＮＯ２で必要に応じて置換され、ここで、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリールまたはＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールである。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリールまたはＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールによっても置換され得、それらの各々は、特定の基にとって適した置換基によって置換され得る。
【００５１】
「アセチレン」置換基は、必要に応じて置換される２〜１０Ｃアルキニル基であり、式−Ｃ≡Ｃ−Ｒｉであり、ここで、Ｒｉは、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキルもしくはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、各Ｒｉ基は、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ’、＝ＮＲ’、ＯＲ’、ＮＲ’２、ＳＲ’、ＳＯ２Ｒ’、ＳＯ２ＮＲ’２、ＮＲ’ＳＯ２Ｒ’、ＮＲ’ＣＯＮＲ’２、ＮＲ’ＣＯＯＲ’、ＮＲ’ＣＯＲ’、ＣＮ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＲ’２、ＯＯＣＲ’、ＣＯＲ’およびＮＯ２から選択される１つ以上の置換基で必要に応じて置換され、ここで、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アシル、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜１２アリールアルキルまたはＣ６〜１２ヘテロアリールアルキルであり、それらの各々は、ハロ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アシル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアシル、ヒドロキシ、アミノおよび＝Ｏから選択される１つ以上の基で必要に応じて置換され；２つのＲ’は、連結することにより、Ｎ、ＯおよびＳから選択される最大３つのヘテロ原子を必要に応じて含む３〜７員環を形成し得る。いくつかの実施形態において、−Ｃ≡Ｃ−ＲｉのＲｉは、ＨまたはＭｅである。
【００５２】
「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルケニル」および「ヘテロアルキニル」などは、対応するヒドロカルビル（アルキル、アルケニルおよびアルキニル）基と同様に定義されるが、「ヘテロ」という用語は、骨格残基内に１〜３個のＯ、ＳもしくはＮヘテロ原子またはそれらの組み合わせを含む基のことを指し；ゆえに、対応するアルキル、アルケニルまたはアルキニル基の少なくとも１つの炭素原子が、明示されるヘテロ原子のうちの１つで置き換えられることにより、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニルまたはヘテロアルキニル基が形成される。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基のヘテロ型に対する代表的かつ好ましいサイズは、一般に、対応するヒドロカルビル基に対するサイズと同じであり、ヘテロ型に存在し得る置換基は、ヒドロカルビル基について上で記載された置換基と同じである。化学安定性を理由に、そのような基は、別段明示されない限り、オキソ基が、ニトロ基またはスルホニル基におけるようにＮまたはＳ上に存在する場合を除いて、３つ以上連続したヘテロ原子を含まないことも理解される。
【００５３】
「アルキル」は、本明細書中で使用されるとき、シクロアルキルおよびシクロアルキルアルキル基を含むが、用語「シクロアルキル」は、環炭素原子を介して接続される炭素環式の非芳香族基を記載するために本明細書中で使用され得、「シクロアルキルアルキル」は、アルキルリンカーを介して分子に接続される炭素環式の非芳香族基を記載するために使用され得る。同様に、「ヘテロシクリル」は、環メンバーとして少なくとも１つのヘテロ原子を含み、ＣまたはＮであり得る環原子を介して分子に接続される、非芳香族環式基を記載するために使用され得；「ヘテロシクリルアルキル」は、リンカーを介して別の分子に接続されるそのような基を記載するために使用され得る。シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキル基にとって適したサイズおよび置換基は、アルキル基について上で記載されたサイズおよび置換基と同じである。本明細書中で使用されるとき、環が芳香族でない限り、これらの用語には、１つまたは２つの二重結合を含む環も含まれる。
【００５４】
本明細書中で使用されるとき、「アシル」は、カルボニル炭素原子の２つの利用可能な原子価位置のうちの１つにおいて結合されたアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアリールアルキルラジカルを含む基を包含し、ヘテロアシルとは、カルボニル炭素以外の少なくとも１つの炭素が、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子によって置き換えられている対応する基のことを指す。したがって、ヘテロアシルには、例えば、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲおよび−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２ならびに−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリールが含まれる。
【００５５】
アシルおよびヘテロアシル基は、それらが空いている原子価（ｏｐｅｎ  ｖａｌｅｎｃｅ）のカルボニル炭素原子を介して結合される任意の基または分子に結合される。代表的には、アシルおよびヘテロアシル基は、ホルミル、アセチル、ピバロイルおよびベンゾイルを含むＣ１〜Ｃ８アシル基、ならびにメトキシアセチル、エトキシカルボニルおよび４−ピリジノイルを含むＣ２〜Ｃ８ヘテロアシル基である。アシル基またはヘテロアシル基を構成するヒドロカルビル基、アリール基およびそのような基のヘテロ型は、そのアシルまたはヘテロアシル基の対応する構成要素の各々に対する一般に適当な置換基として本明細書中に記載される置換基で置換され得る。
【００５６】
「芳香族」部分または「アリール」部分とは、芳香族性の周知の特徴を有する、単環式の部分または縮合された二環式の部分のことを指す；例としては、フェニルおよびナフチルが挙げられる。同様に、「ヘテロ芳香族」および「ヘテロアリール」とは、Ｏ、ＳおよびＮから選択される１つ以上のヘテロ原子を環メンバーとして含む、そのような単環式の環系または縮合された二環式の環系のことを指す。ヘテロ原子を含むことにより、５員環ならびに６員環において芳香族性がもたらされる。代表的なヘテロ芳香族系としては、単環式Ｃ５〜Ｃ６芳香族基（例えば、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、チエニル、フラニル、ピロリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリルおよびイミダゾリル）、およびＣ８〜Ｃ１０二環式基（例えば、インドリル、ベンズイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、イソキノリル、キノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、ピラゾロピリジル、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノリニルなど）を形成するためにこれらの単環式基の１つをフェニル環または任意のヘテロ芳香族の単環式基と縮合することによって形成される縮合された二環式の部分が挙げられる。環系全体にわたる電子分布に関して芳香族性の特徴を有する任意の単環式または縮合環二環式の系が、この定義に含められる。この定義には、分子の残りの部分に直接結合される環が芳香族性の特徴を少なくとも有する二環式基も含まれる。代表的には、その環系は、５〜１２個の環メンバー原子を含む。好ましくは、単環式ヘテロアリールは、５〜６個の環メンバーを含み、二環式ヘテロアリールは、８〜１０個の環メンバーを含む。
【００５７】
アリールおよびヘテロアリール部分は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ５〜Ｃ１２アリール、Ｃ１〜Ｃ８アシルおよびこれらのヘテロ型（それらの各々は、それ自体がさらに置換され得る）を含む種々の置換基で置換され得；アリールおよびヘテロアリール部分に対する他の置換基としては、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲおよびＮＯ２が挙げられ、ここで、各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキルまたはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、各Ｒは、アルキル基について上で記載されたように必要に応じて置換される。アリール基またはヘテロアリール基における置換基は、当然、そのような置換基の各タイプまたはその置換基の各構成要素に適するような本明細書中に記載される基でさらに置換され得る。したがって、例えば、アリールアルキル置換基は、アリール基にとって典型的であるような本明細書中に記載される置換基でアリール部において置換され得、アルキル基にとって典型的であるかまたは適当であるような本明細書中に記載される置換基でアルキル部においてさらに置換され得る。
【００５８】
同様に、「アリールアルキル」および「ヘテロアリールアルキル」とは、アルキレンなどの連結基（置換されているかまたは置換されておらず、飽和または不飽和であり、環式または非環式のリンカーを含む）を介して結合点に結合される芳香族環系および複素芳香族環系のことを指す。代表的には、リンカーは、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはそのヘテロ型である。これらのリンカーは、カルボニル基も含むことがあり、ゆえに、そのリンカーが置換基をアシルまたはヘテロアシル部分として提供することが可能になる。アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキル基におけるアリール環またはヘテロアリール環は、アリール基について上で記載された同じ置換基で置換され得る。好ましくは、アリールアルキル基には、アリール基について上で定義された基で必要に応じて置換されるフェニル環、および置換されていないかまたは１つもしくは２つのＣ１〜Ｃ４アルキル基もしくはヘテロアルキル基（ここで、そのアルキル基またはヘテロアルキル基は、必要に応じて環化することにより、シクロプロパン、ジオキソランまたはオキサシクロペンタンなどの環を形成し得る）で置換されたＣ１〜Ｃ４アルキレンで必要に応じて置換されるフェニル環が含まれる。同様に、ヘテロアリールアルキル基には、好ましくは、アリール基における典型的な置換基のような、および置換されていないかまたは１つもしくは２つのＣ１〜Ｃ４アルキル基もしくはヘテロアルキル基で置換されたＣ１〜Ｃ４アルキレンのような、上に記載された基で必要に応じて置換されるＣ５〜Ｃ６単環式ヘテロアリール基が含まれるか、あるいはヘテロアリールアルキル基には、必要に応じて置換されるフェニル環またはＣ５〜Ｃ６単環式ヘテロアリール、および置換されていないかまたは１つもしくは２つのＣ１〜Ｃ４アルキル基もしくはヘテロアルキル基（ここで、そのアルキル基またはヘテロアルキル基は、必要に応じて環化することにより、シクロプロパン、ジオキソランまたはオキサシクロペンタンなどの環を形成し得る）で置換されたＣ１〜Ｃ４ヘテロアルキレンが含まれる。
【００５９】
アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキル基が、必要に応じて置換されると記載される場合、その置換基は、その基のアルキル部またはヘテロアルキル部に存在してもよいし、その基のアリール部またはヘテロアリール部に存在してもよい。アルキル部またはヘテロアルキル部に必要に応じて存在する置換基は、通常、アルキル基について上で記載された置換基と同じであり；アリール部またはヘテロアリール部に必要に応じて存在する置換基は、通常、アリール基について上で記載された置換基と同じである。
【００６０】
「アリールアルキル」基は、本明細書中で使用されるとき、置換されていない場合、ヒドロカルビル基であり、環およびアルキレンリンカーまたは類似のリンカーにおける炭素原子の総数によって記載される。したがって、ベンジル基は、Ｃ７−アリールアルキル基であり、フェニルエチルは、Ｃ８−アリールアルキルである。
【００６１】
上に記載されたような「ヘテロアリールアルキル」とは、連結基を介して結合されたアリール基を含む部分のことを指し、それは、アリール部分の少なくとも１つの環原子または連結基内の１つの原子が、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子である点において「アリールアルキル」とは異なる。ヘテロアリールアルキル基は、組み合わされる環およびリンカー内の原子の総数に従って本明細書中に記載され、それらとしては、ヘテロアルキルリンカーを介して連結されたアリール基；アルキレンなどのヒドロカルビルリンカーを介して連結されたヘテロアリール基；およびヘテロアルキルリンカーを介して連結されたヘテロアリール基が挙げられる。したがって、例えば、Ｃ７−ヘテロアリールアルキルとしては、ピリジルメチル、フェノキシおよびＮ−ピロリルメトキシが挙げられる。
【００６２】
「アルキレン」とは、本明細書中で使用されるとき、二価のヒドロカルビル基のことを指し；それは、二価であるので、他の２つの基を同時に連結し得る。代表的には、アルキレンとは、−（ＣＨ２）ｎ−のことを指し、ここで、ｎは、明示される場合もあるが、１〜８であり、好ましくは、ｎは、１〜４であり、アルキレンは、他の基によっても置換され得、また、他の長さであり得、鎖の反対端が空いている原子価である必要はない。したがって、−ＣＨ（Ｍｅ）−および−Ｃ（Ｍｅ）２−は、シクロプロパン−１，１−ジイルなどの環式基であり得るので、アルキレンと呼ばれることもある。アルキレン基が置換される場合、その置換基としては、代表的には、本明細書中に記載されるようなアルキル基において存在する置換基が挙げられる。
【００６３】
通常、任意のアルキル、アルケニル、アルキニル、アシルまたはアリールもしくはアリールアルキル基、あるいは置換基に含められるこれらの基のうちの１つの任意のヘテロ型は、それ自体が、必要に応じてさらなる置換基によって置換され得る。これらの置換基の性質は、その置換基が別段記載されない場合、主要な置換基自体に関して列挙された性質と似たものである。したがって、例えば、Ｒ２がアルキルである実施形態の場合は、化学的に意味をなす場合およびアルキル自体に対して提供されたサイズ限度を壊さない場合、このアルキルは、Ｒ２に対する実施形態として列挙される残りの置換基によって必要に応じて置換され得る；例えば、アルキルまたはアルケニルによって置換されたアルキルは、これらの実施形態に対する炭素原子の上限を単純に拡張するものであり、含められない。しかしながら、アリール、アミノ、アルコキシ、＝Ｏなどによって置換されたアルキルは、本発明の範囲内に含められ、これらの置換基の原子は、説明されているアルキル、アルケニルなどの基を記載するために使用される数の中に数えられない。置換基の数が明示されない場合、そのようなアルキル、アルケニル、アルキニル、アシルまたはアリール基の各々は、その利用可能な原子価に従っていくつかの置換基で置換され得る；特に、任意のこれらの基が、例えば、その利用可能な原子価のいずれかまたはすべてにおいて、フッ素原子で置換され得る。
【００６４】
「ヘテロ型」とは、本明細書中で使用されるとき、アルキル、アリールまたはアシルなどの基の誘導体のことを指し、ここで、指摘される炭素環式基の少なくとも１つの炭素原子が、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子によって置き換えられている。したがって、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリールおよびアリールアルキルのヘテロ型は、それぞれ、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアシル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキルである。オキソ基がＮまたはＳに結合することにより、ニトロ基またはスルホニル基を形成する場合を除いて、２つ以下のＮ、ＯまたはＳ原子は、通常、連続して接続されることが理解される。ヘテロ型部分は、時として本明細書中で「Ｈｅｔ」と呼ばれる。
【００６５】
「ハロ」または「ハロゲン」は、本明細書中で使用されるとき、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを含む。フルオロおよびクロロが好ましいことが多い。「アミノ」とは、本明細書中で使用されるとき、ＮＨ２のことを指すが、アミノが、「置換」または「必要に応じて置換される」と記載される場合、この用語は、ＮＲ’Ｒ”を含み、ここで、Ｒ’およびＲ”の各々は、独立してＨであるか、あるいはアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリールもしくはアリールアルキル基またはこれらの基のうちの１つのヘテロ型であり、そのアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリールもしくはアリールアルキル基またはこれらの基のうちの１つのヘテロ型の各々は、対応する基にとって適当であると本明細書中に記載される置換基で必要に応じて置換される。この用語はまた、Ｒ’およびＲ”が一体となって連結することにより、３〜８員環を形成する形態も含み、その形態は、飽和であっても、不飽和であっても、芳香族であってもよく、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を環メンバーとして含み、アルキル基にとって適当であると記載される置換基で必要に応じて置換されるか、または、ＮＲ’Ｒ”が芳香族基である場合、ヘテロアリール基にとって代表的であると記載される置換基で必要に応じて置換される。
【００６６】
本明細書中で使用されるとき、用語「炭素環」とは、その環に炭素原子だけを含む環式化合物のことを指す一方で、「複素環」とは、ヘテロ原子を含む環式化合物のことを指す。炭素環式構造および複素環式構造は、単環式、二環式または多環式の系を有する化合物を含む。本明細書中で使用されるとき、用語「ヘテロ原子」とは、炭素または水素ではない任意の原子（例えば、窒素、酸素または硫黄）のことを指す。複素環の例証的な例としては、テトラヒドロフラン、１，３ジオキソラン、２，３ジヒドロフラン、ピラン、テトラヒドロピラン、ベンゾフラン、イソベンゾフラン、１，３ジヒドロイソベンゾフラン、イソオキサゾール、４，５ジヒドロイソオキサゾール、ピペリジン、ピロリジン、ピロリジン２オン、ピロール、ピリジン、ピリミジン、オクタヒドロピロロ［３，４ｂ］ピリジン、ピペラジン、ピラジン、モルホリン、チオモルホリン、イミダゾール、イミダゾリジン２，４ジオン、１，３ジヒドロベンズイミダゾール２オン、インドール、チアゾール、ベンゾチアゾール、チアジアゾール、チオフェン、テトラヒドロチオフェン１，１ジオキシド、ジアゼピン、トリアゾール、グアニジン、ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，５ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，３，４，４ａ，９，９ａヘキサヒドロ１Ｈベータカルボリン、オキシラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジオキサン、ラクトン、アジリジン、アゼチジン、ピペリジン、ラクタムが挙げられるがこれらに限定されず、ヘテロアリールも包含され得る。ヘテロアリールの他の例証的な例としては、フラン、ピロール、ピリジン、ピリミジン、イミダゾール、ベンズイミダゾールおよびトリアゾールが挙げられるがこれらに限定されない。
【００６７】
場合によっては、本明細書中に記載される化合物は、１つ以上のキラル中心を含む。本発明は、単離された各立体異性体、ならびに様々な程度のキラル純度での立体異性体の混合物（ラセミ混合物を含む）を含む。本発明はまた、形成され得る様々なジアステレオマーおよび互変異性体も包含する。本発明の化合物は、１つ以上の互変異性体として存在してもよい。例えば、Ｒが−ＯＨであるとき、本明細書中に記載される化合物は、１つ以上の互変異性体として存在し得る。
【００６８】
用語「必要に応じて置換される」は、本明細書中で使用されるとき、記載される特定の１つの基または複数の基が、非水素置換基を有しなくてもよいし、１つ以上の非水素置換基を有してもよいことを示す。別段明示されない限り、存在し得るそのような置換基の総数は、記載される基の非置換型に存在するＨ原子の数に等しい。任意の置換基が、二重結合（例えば、カルボニル酸素（＝Ｏ））を介して結合される場合、その基は、２つの利用可能な原子価を要するので、含められ得る置換基の総数は、利用可能な原子価の数に従って減少する。
【００６９】
薬学的組成物および製剤
本明細書中に記載される化合物は、薬学的に許容可能な塩として調製され得る。本明細書中で使用されるとき、用語「薬学的に許容可能な塩」とは、親化合物が、その酸または塩基の塩を生成することによって改変された、開示される化合物の誘導体のことを指す。薬学的に許容可能な塩の例としては、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩；などが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容可能な塩には、例えば、無毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の従来の無毒性の塩または第四級アンモニウム塩が含まれる。例えば、従来の無毒性の塩としては、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸など）から得られる塩；および有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸など）から調製される塩が挙げられる。他の例では、従来の無毒性の塩には、塩基（例えば、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、カフェイン、様々なアミンなど）から得られる塩が含まれる。薬学的に許容可能な塩は、従来の化学的な方法によって、塩基性部分または酸性部分を含む親化合物から合成され得る。一般に、そのような塩は、遊離酸または遊離塩基の形態のこれらの化合物を化学量論的な量の適切な塩基または酸と水もしくは有機溶媒またはそれら２つの混合物中で反応させることによって調製され得る；一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水性媒体が、好ましい。適当な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，ｐ．１４１８（１９８５）（この開示は、本明細書によって参考として援用される）に見られる。
【００７０】
用語「薬学的に許容可能」とは、本明細書中で使用されるとき、妥当な利点／リスク比に見合った、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー性応答または他の問題もしくは合併症なしに、人間および動物の組織と接触させて使用することに適している、まっとうな医学的判断の範囲内の、化合物、材料、組成物および／または剤形のことを指す。
【００７１】
用語「安定な化合物」および「安定な構造」は、有用な程度の純度への反応混合物からの単離および有効な治療薬への製剤化に耐えるのに十分強い化合物のことを示すことが意味される。安定な化合物は、記載される処置法において使用されることについて本明細書中で企図される。
【００７２】
本明細書中に記載される化合物は、１つ以上の他の薬剤とともに製剤化され得る。その１つ以上の他の薬剤としては、本明細書中に記載される別の化合物、抗細胞増殖性薬剤（例えば、化学療法剤）、抗炎症剤および抗原が挙げられ得るがこれらに限定されない。
【００７３】
本明細書中に記載される化合物は、薬学的組成物として製剤化され得、選択される投与経路、例えば、経口的または非経口的、静脈内、筋肉内、局所的または皮下の経路に適応された種々の形態で哺乳動物宿主（例えば、ヒト患者または非ヒト動物）に投与され得る。ある特定の実施形態において、組成物は、局所的、例えば、小胞内に投与される。組成物は、しばしば、希釈剤、ならびに場合によっては、アジュバント、緩衝剤、保存剤などを含む。化合物は、リポソーム組成物として、またはある特定の実施形態ではマイクロエマルジョンとしても投与され得る。薬物に対する様々な徐放系も考えられ、本明細書中に記載される化合物に適用され得る。例えば、米国特許第５，６２４，６７７号（その方法が、本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。
【００７４】
したがって、化合物は、全身的に、例えば、経口的に、薬学的に許容可能なビヒクル（例えば、不活性な希釈剤または同化できる可食キャリア）と組み合わせて投与され得る。
【００７５】
本明細書中に記載される化合物は、ハードシェルまたはソフトシェルゼラチンカプセル内に封入されてもよいし、錠剤に圧縮されてもよいし、患者の食餌の食物とともに直接取り込まれてもよい。経口による治療的な投与の場合、活性な化合物は、１つ以上の賦形剤と組み合わされ得、摂取可能な錠剤、頬側錠剤、トローチ剤、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ剤、オブラートなどの形態で使用され得る。そのような組成物および調製物は、少なくとも０．１％の活性な化合物を含むべきである。その組成物および調製物のパーセンテージは、当然のことながら、変動することがあり、都合よく、所与の単位剤形の重量の約２〜約６０％であり得る。そのような治療的に有用な組成物中の活性な化合物の量は、有効な投薬量レベルが得られるほどの量である。
【００７６】
錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセルなどは、以下のもの：結合剤（例えば、トラガカントゴム、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、リン酸二カルシウム）；崩壊剤（例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸など）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）；および甘味剤（例えば、スクロース、フルクトース、ラクトースまたはアスパルテーム）も含んでもよいし、香味料（例えば、ペパーミント、ウインターグリーン油またはサクランボ香料）が加えられてもよい。単位剤形が、カプセルであるとき、そのカプセルは、上記のタイプの材料に加えて、液体キャリア（例えば、植物油またはポリエチレングリコール）を含み得る。他の様々な材料が、コーティング剤として存在してもよいし、固体の単位剤形の物理的形状を別途改変するために存在してもよい。例えば、錠剤、丸剤またはカプセルは、ゼラチン、ろう、シェラックまたは糖などでコーティングされ得る。シロップ剤またはエリキシル剤は、活性な化合物、甘味剤としてスクロースまたはフルクトース、保存剤としてメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素、ならびに香料（例えば、サクランボまたはオレンジのフレーバー）を含み得る。当然のことながら、任意の単位剤形を調製する際に使用される任意の材料は、使用される量において、薬学的に許容可能かつ実質的に無毒であるべきである。さらに、活性な化合物は、徐放の調製物およびデバイスに組み込まれ得る。
【００７７】
活性な化合物は、注入または注射によって投与され得る。活性な化合物またはその薬学的に許容可能な塩の溶液は、水において調製され得、必要に応じて、無毒性の界面活性剤と混合され得る。また、分散物は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチンおよびそれらの混合物、ならびに油において調製され得る。これらの調製物は、貯蔵および使用の通常の条件下において微生物の成長を防止する保存剤を含む。
【００７８】
薬学的剤形としては、活性成分を含む滅菌された水溶液もしくは分散物または滅菌された粉末が挙げられ得、それらは、滅菌された溶液または分散物の即時調製に適応され、必要に応じて、リポソーム内に被包される。最終の剤形は、時として、滅菌された流体であり、製造および貯蔵の条件下で安定である。液体キャリアまたはビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、無毒性グリセリルエステルおよびそれらの適当な混合物を含む、溶媒または液体分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、リポソームの形成によって、分散物の場合は必要とされる粒径の維持によって、または界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって、もたらされ得る。等張剤、例えば、糖、緩衝剤または塩化ナトリウムが、いくつかの実施形態において含められる。注射可能な組成物の長時間にわたる吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に使用することによってもたらされ得る。滅菌された溶液は、活性な化合物を必要量で、時として上に列挙された他の成分の１つ以上とともに、適切な溶媒に組み込むことによって、調製された後、濾過滅菌されることが多い。滅菌された注射可能な溶液を調製するための滅菌された粉末の場合、時として利用される調製方法は、真空乾燥法および凍結乾燥法であり、それによって、あらかじめ濾過滅菌された溶液中に存在する任意の所望のさらなる成分が追加された活性成分の粉末が得られる。
【００７９】
局所的投与の場合、本明細書中の化合物は、純粋な形態で、例えば、液体形態のときに、適用され得る。しかしながら、許容可能なキャリアと組み合わされた、固体または液体であり得る組成物または製剤として化合物を投与することが一般に望ましい。有用な固体キャリアとしては、微粉化された（ｆｉｎｅｌｙ  ｄｉｖｉｄｅｄ）固体（例えば、タルク、粘土、微結晶性セルロース、シリカ、アルミナなど）が挙げられる。有用な液体キャリアとしては、水、アルコールもしくはグリコールまたは水−アルコール／グリコール混和物が挙げられ、ここで、本化合物は、必要に応じて無毒性の界面活性剤の助けを借りて、有効なレベルで溶解され得るかまたは分散され得る。芳香剤および追加の抗菌剤などのアジュバントが加えられることにより、所与の用途に対する特性が最適化され得る。得られた液体組成物は、吸収性のパッドから適用され得るか、得られた液体組成物を使用して帯具および他の包帯に含浸させ得るか、またはポンプタイプもしくはエアロゾルの噴霧器を用いて患部に噴霧され得る。
【００８０】
増粘剤（例えば、合成ポリマー、脂肪酸、脂肪酸の塩およびエステル、脂肪アルコール、修飾セルロースまたは修飾された無機物材料）もまた、液体キャリアとともに使用されることにより、使用者の皮膚に直接塗布するための塗り広げることのできるペースト、ゲル、軟膏、石鹸などが形成され得る。本化合物の有用な投薬量は、それらのインビトロ活性および動物モデルにおけるインビボ活性を比較することによって決定され得る。マウスおよび他の動物における有効な投薬量をヒトに対して外挿するための方法は、当該分野で公知である；例えば、米国特許第４，９３８，９４９号を参照のこと。本明細書中の化合物がＴＬＲアゴニストまたはＴＬＲアンタゴニストとして作用する能力は、Ｌｅｅら、ＰＮＡＳ，１００：６６４６（２００３）によって開示されている手順を含む、公知の薬理学的モデルを用いて決定され得る。一般に、液体組成物中の化合物（複数可）の濃度は、約０．１〜２５重量％、好ましくは、約０．５〜１０重量％である。ゲルまたは粉末などの半固体組成物中または固体組成物中の濃度は、約０．１〜５重量％、好ましくは、約０．５〜２．５重量％である。
【００８１】
処置に使用するために必要とされる本化合物またはその活性な塩もしくは誘導体の量は、選択される特定の塩だけでなく、投与経路、処置される状態の性質、ならびに患者の年齢および状態によっても変動し、最終的には担当の医師または臨床医の自由裁量による。一般に、適当な用量は、時として、約０．５〜約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１０〜約７５ｍｇ／ｋｇ体重／日（例えば、レシピエントの体重１キログラムあたり１日あたり３〜約５０ｍｇ）の範囲であり、しばしば、６〜９０ｍｇ／ｋｇ／日または約１５〜６０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。化合物は、単位剤形で都合よく投与され得、例えば、１単位剤形あたり５〜１０００ｍｇまたは１０〜７５０ｍｇまたは５０〜５００ｍｇの活性成分を含む。活性成分は、約０．０１〜約１００ｐＭ、約０．５〜約７５ｐＭ、約１〜５０ｐＭまたは約２〜約３０ｐＭという活性な化合物のピーク血漿濃度を達成するように投与され得る。そのような濃度（ｃｏｎｔｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）は、例えば、活性成分の０．０５〜５％溶液（必要に応じて食塩水における溶液）の静脈内注射によって達成され得るか、または約１〜１００ｍｇの活性成分を含むボーラスとして経口投与され得る。望ましい血中濃度は、約０．０１〜５．０ｍｇ／ｋｇ／時をもたらす持続注入、または約０．４〜１５ｍｇ／ｋｇの活性成分（複数可）を含む間欠的注入によって維持され得る。所望の用量は、単一用量、または適切な間隔で、例えば、２、３、４またはそれより多い、１日あたりの分割用量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅｓ）として、投与される分割量として都合よく表され得る。分割用量自体が、例えば、注入器からの複数回の吸入または複数回の点眼によって、例えば、いくつかのゆるく間隔のあいた不連続な投与にさらに分割されてもよい。
【００８２】
処置
用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」および「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、本明細書中で使用されるとき、（ｉ）病的状態が発生するのを防ぐこと（例えば、予防）；（ｉｉ）病的状態を阻害するか、またはその発症を抑止すること；（ｉｉｉ）病的状態を軽減すること；および／または（ｉｖ）ある状態の症状を回復すること、緩和すること、減らすこと、および取り除くことを指す。本明細書中に記載される候補分子または候補化合物は、製剤中または医薬中に治療有効量で存在し得、その治療有効量は、生物学的効果（例えば、炎症の阻害）をもたらし得るか、または例えば、ある状態、例えば、疾患の症状を回復させ得るか、緩和し得るか、減らし得るか、軽減し得るか、減少させ得るか、もしくは取り除き得る量である。これらの用語は、細胞増殖速度を低下させることもしくは停止すること（例えば、腫瘍成長を遅延することまたは休止すること）または増殖中の癌細胞の数を減少させること（例えば、腫瘍の一部または全部を除去すること）も指し得る。これらの用語は、微生物に感染した系（例えば、細胞、組織または被験体）における微生物の力価を低下させること、微生物の繁殖速度を低下させること、微生物感染に関連する症状の数もしくはその症状の作用を低減すること、および／または検出可能な量の微生物をその系から除去することにも適用可能である。微生物の例としては、ウイルス、細菌および真菌が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８３】
用語「治療有効量」とは、本明細書中で使用されるとき、被験体における疾患もしくは障害を処置するためもしくは予防するために、または疾患もしくは障害の症状を処置するために、本明細書中に提供される化合物の量、または本明細書中に提供される化合物の組み合わせの量のことを指す。本明細書中で使用されるとき、用語「被験体」および「患者」とは、通常、本明細書中に記載される方法に従って処置（例えば、本明細書中に記載される化合物の投与）を受けるかまたは受けている個体のことを指す。
【００８４】
本明細書中に記載される化合物は、１つ以上の炎症障害を潜在的に予防するため、阻害するため、または処置するために、その必要のある被験体に投与され得る。本明細書中以後使用されるとき、用語「処置する」、「処置」および「治療効果」とは、炎症応答を低減させるか、阻害するか、または停止（防止）すること（例えば、特定の抗原に対する抗体産生または抗体の量を遅延することまたは休止すること）、炎症組織の量を減少させること、および炎症状態を完全または部分的に緩和することを指し得る。炎症状態としては、アレルギー、喘息、自己免疫障害、慢性炎症、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症、炎症性腸疾患、ミオパシー（例えば、全身性硬化症、皮膚筋炎、多発性筋炎および／または封入体筋炎と併発するもの）、骨盤炎症性疾患、再灌流傷害、関節リウマチ、移植片拒絶、血管炎および白血球障害（例えば、チェディアック・東症候群、慢性肉芽腫症）が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の自己免疫障害は、炎症障害（例えば、関節リウマチ）でもある。いくつかの実施形態において、炎症障害は、慢性炎症、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症、ミオパシー、骨盤炎症性疾患、再灌流傷害、移植片拒絶、血管炎および白血球障害からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、炎症状態としては、気管支拡張症、細気管支炎、嚢胞性線維症、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、アテローム性動脈硬化症および敗血症性ショック（例えば、多臓器不全を伴う敗血症）が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、炎症状態は、アレルギー、喘息、ＡＲＤＳおよび自己免疫障害からなる群から選択される状態ではない。ある特定の実施形態において、炎症状態は、消化管の炎症、脳の炎症、皮膚の炎症および関節の炎症からなる群から選択される状態ではない。ある特定の実施形態において、炎症状態は、好中球媒介性の障害である。
【００８５】
本明細書中に記載される化合物は、その必要のある被験体に投与されることにより、１つ以上の自己免疫障害を潜在的に処置し得る。そのような処置において、用語「処置する」、「処置」および「治療効果」とは、自己免疫応答を低減させるか、阻害するか、または停止すること（例えば、特定の抗原に対する抗体産生または抗体の量を遅延することまたは休止すること）、炎症組織の量を減少させること、および自己免疫障害を完全または部分的に緩和することを指し得る。自己免疫障害としては、自己免疫性の脳脊髄炎、大腸炎、自己免疫性（ａｕｔｏｍｉｍｍｕｎｅ）インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）およびウェゲナー肉芽腫症および高安動脈炎が挙げられるがこれらに限定されない。そのような疾患に対して化合物を試験するためのモデルとしては、（ａ）（ｉ）ミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチドによって誘発されるＣ５ＢＬ／６、（ｉｉ）ＳＪＬマウスＰＬＰ１３９−１５１または１７８−１９１ＥＡＥ、および（ｉｉｉ）自己免疫性脳脊髄炎に対する、ＭＯＧまたはＰＬＰペプチドによって誘発されるＥＡＥの養子移入モデル；（ｂ）自己免疫性ＩＤＤＭに対する非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウス；（ｃ）大腸炎に対する、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）によって誘発される大腸炎モデルおよびトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によって誘発される大腸炎モデル；および（ｄ）ウェゲナー肉芽腫症および高安動脈炎に対するモデルとしての全身性の小血管炎障害が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書中に記載される化合物は、被験体に投与されることにより、以下の障害の１つ以上を潜在的に処置し得る：急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）；アジソン病；円形脱毛症；強直性脊椎炎；抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）；自己免疫性溶血性貧血；自己免疫性肝炎；自己免疫性内耳疾患；水疱性類天疱瘡；セリアック病（ｃｏｅｌｉａｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）；シャーガス病；慢性閉塞性肺疾患；クローン病（特発性炎症性腸疾患「ＩＢＤ」の２タイプのうちの１つ）；皮膚筋炎；１型真性糖尿病；子宮内膜症；グッドパスチャー症候群；グレーヴズ病；ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）；橋本病；化膿性汗腺炎；特発性血小板減少性紫斑病；間質性膀胱炎；エリテマトーデス；混合結合組織病；モルヘア；多発性硬化症（ＭＳ）；重症筋無力症；ナルコレプシー；神経性筋緊張症；尋常性天疱瘡；悪性貧血；多発性筋炎；原発性胆汁性肝硬変；関節リウマチ；統合失調症；強皮症；シェーグレン症候群；側頭動脈炎（「巨細胞性動脈炎」としても知られる）；潰瘍性大腸炎（特発性炎症性腸疾患「ＩＢＤ」の２タイプのうちの１つ）；血管炎；白斑；およびウェゲナー肉芽腫症。いくつかの実施形態において、自己免疫障害または自己免疫疾患は、クローン病（Ｃｈｒｏｈｎｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）（またはクローン病（Ｃｈｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ））、関節リウマチ、狼瘡および多発性硬化症からなる群から選択される障害および疾患ではない。
【００８６】
本明細書中に記載される化合物は、被験体において免疫応答を誘導するために、その必要のある被験体に投与され得る。その免疫応答は、ある特定の実施形態において、外来抗原（例えば、病原体感染）に対して被験体によって自発的にもたらされ得る。いくつかの実施形態において、抗原が、本明細書中に記載される化合物と同時に投与され、その抗原に対する免疫応答が被験体において開始される。ある特定の実施形態において、抗原は、特定の細胞増殖性状態（例えば、特定の癌抗原）または特定の病原体（例えば、グラム陽性菌細胞壁抗原（ｇｒａｍ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｗａｌｌ  ａｎｔｉｇｅｎ）；Ｓ．ａｕｒｅｕｓ抗原）に対して特異的であり得る。
【００８７】
本明細書中に記載される化合物は、１つ以上の細胞増殖性障害を潜在的に処置するために、その必要のある被験体に投与され得る。そのような処置において、用語「処置する」、「処置」および「治療効果」とは、細胞増殖速度を低下させるかまたは停止すること（例えば、腫瘍成長を遅延させることまたは休止すること）、増殖中の癌細胞の数を減少させること（例えば、腫瘍の一部または全部を切除すること）および細胞増殖状態を完全または部分的に緩和することを指し得る。細胞増殖性状態としては、結腸直腸、乳房、肺、肝臓、膵臓、リンパ節、結腸、前立腺、脳、頭頚部、皮膚、肝臓、腎臓および心臓の癌が挙げられるが、これらに限定されない。癌の例としては、造血起源の過形成細胞／新生細胞が関わる（例えば、骨髄性、リンパ系もしくは赤血球系またはそれらの前駆体細胞から生じる）疾患である造血性の新生物性障害が挙げられる。これらの疾患は、未分化型急性白血病、例えば、赤芽球性白血病および急性巨核芽球性白血病から生じ得る。さらなる骨髄性障害としては、急性前骨髄性白血病（ＡＰＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）（Ｖａｉｃｋｕｓ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．ｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．／Ｈｅｍｏｔｏｌ．１１：２６７−２９７（１９９１）に概説）が挙げられるが、これらに限定されず；リンパ系悪性疾患としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（Ｂ細胞型ＡＬＬおよびＴ細胞型ＡＬＬを含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＬＬ）およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）が挙げられるが、これらに限定されない。悪性リンパ腫のさらなる形態としては、非ホジキンリンパ腫およびそのバリアント、末梢Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫（ＣＴＣＬ）、大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＦ）、ホジキン病およびリード・シュテルンベルク病が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、細胞増殖性障害は、非内分泌腫瘍または内分泌腫瘍である。非内分泌腫瘍の例証的な例としては、腺癌、腺房細胞癌腫、腺扁平上皮癌腫、巨細胞腫瘍、腺管内乳頭粘液性新生物、粘液性嚢胞腺癌、膵芽腫、漿液性嚢胞腺腫、充実性偽乳頭状腫瘍（ｓｏｌｉｄ  ａｎｄ  ｐｓｅｕｄｏｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｔｕｍｏｒｓ）が挙げられるがこれらに限定されない。内分泌腫瘍は、島細胞腫瘍であり得る。
【００８８】
細胞増殖性状態には、皮膚の炎症状態（例えば、湿疹、円板状エリテマトーデス、扁平苔癬、硬化性苔癬、菌状息肉腫、光線皮膚症、バラ色粃糠疹、乾癬を含む）などの炎症状態も含まれる。肥満症（例えば、脂肪細胞の増殖）に関連する細胞増殖性状態も含まれる。
【００８９】
細胞増殖性状態としては、例えば、後天性免疫不全症候群、アデノウイルス科感染症、アルファウイルス感染症、アルボウイルス感染症、Ｂｏｒｎａ病、ブンヤウイルス科感染症、カリシウイルス科感染症、水疱、Ｃｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ感染症、コクサッキーウイルス感染症、サイトメガロウイルス感染症、デング熱、ＤＮＡウイルス感染症、伝染性膿痂疹、アルボウイルス脳炎、エプスタイン・バーウイルス感染症、伝染性紅斑、ハンタウイルス感染症、出血熱、ウイルス性肝炎、ウイルス性ヒト単純疱疹、帯状疱疹、耳帯状疱疹、ヘルペスウイルス科感染症、感染性単核球症、インフルエンザ、例えば、鳥類またはヒトにおけるもの、ラッサ熱、麻疹、伝染性軟属腫、耳下腺炎、パラミクソウイルス科（ｏａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）感染症、サシチョウバエ熱、ポリオーマウイルス感染症、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス感染症、リフトバレー熱、ＲＮＡウイルス感染症、風疹、遅発型ウイルス病、痘瘡、亜急性硬化性汎脳炎、腫瘍ウイルス感染症、疣贅、ウェストナイル熱、ウイルス病および黄熱を含むウイルス性疾患も挙げられる。例えば、ＳＶ４０形質転換ウイルスのラージＴ抗原は、ＵＢＦに対して作用し、ＵＢＦを活性化し、他のウイルス性タンパク質をＰｏｌ  Ｉ複合体にリクルートし、それによって、細胞増殖を刺激することにより、確実にウイルスが繁殖する。細胞増殖性状態には、新脈管形成に関する状態（例えば、癌）、ならびに脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）および他の脂肪細胞（ｆａｔ  ｃｅｌｌ）の増殖によって引き起こされる肥満症も含まれる。
【００９０】
細胞増殖性状態には、心臓のストレスに起因する心臓の状態（例えば、高血圧症、バルーン（ｂａｌｏｏｎ）血管形成術、弁疾患および心筋梗塞）も含まれる。例えば、心筋細胞は、心室壁の大部分を構成する、心臓における分化した筋細胞であり、血管平滑筋細胞は、血管を裏打ちしている。これらの両方が、筋細胞型であるが、心筋細胞および血管平滑筋細胞は、それらの収縮、成長および分化のメカニズムが異なる。心筋細胞は、心臓形成のすぐ後に高分化型となり、ゆえに分裂する能力を失っている（ｌｏｏｓｅ）一方、血管平滑筋細胞は、収縮性の表現型から増殖性の表現型へと絶えず調節を受けている。様々な病態生理学的ストレス（例えば、高血圧症、バルーン血管形成術、弁疾患および心筋梗塞）下において、例えば、心臓および血管は、心機能を低下させて最終的には心不全として顕われ得る形態学的な増殖関連の変質を起こす。したがって、本明細書中に記載される化合物を、心臓の細胞増殖性状態を処置するのに有効な量で投与することによって、その心臓の状態を処置するための方法が、本明細書中に提供される。本化合物は、心臓ストレスが起きるかまたは検出される前または後に投与され得、本化合物または核酸は、例えば、高血圧症、バルーン血管形成術、弁疾患または心筋梗塞の発生または検出の後に投与され得る。そのような化合物の投与によって、血管筋細胞および／または平滑筋細胞の増殖が低下し得る。
【００９１】
ある特定の実施形態は、本明細書中に記載される候補分子または候補核酸を投与することによって、加齢の症状を処置すること、および／または細胞老化に属する状態を処置することにも関する。例えば、ウェルナー症候群という早老疾患は、ＷＲＮ  ＤＮＡヘリカーゼをコードするウェルナー遺伝子の変質に起因する。理論によって限定されないが、このタンパク質は、核小体に局在すること、および四重のＧに特異的に結合することが知られており、ＷＲＮ  ＤＮＡヘリカーゼの変異は、老化をもたらす。
【実施例】
【００９２】
以下に示される実施例は、本発明を例証するものであって、限定するものではない。
【００９３】
ＴＬＲ分子は、レセプターの局在性、細胞の活性化およびサイトカインの産生に影響し得る。ＴＬＲ４および９については、ＴＬＲの位置は、著しいプロファイルのサイトカイン誘導に応答性である（１０−１２）。薬物への脂質の結合体化によって、極性脂質キャリアを介した細胞への薬物の移行が促進され得、それによって、従来の送達系よりも効率的かつ特異的に、薬物の有効な細胞内濃度が得られる。薬用の軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）または軟膏（ｓａｌｖｅ）を用いて製剤化される、脂質への薬物の結合体化によって、皮膚障害を処置するための皮膚への浸透がもたらされ得る。ＰＥＧ化は、インビボでの安定性を高めることによって薬物の血液循環を延長し得、さらには毒性を低下させる（１３）。本明細書中では、脂質およびポリエチレングリコールをＴＬＲ７アゴニスト（ＳＭ）に結合体化し、その結合体の免疫活性を試験した。個別のＴＬＲ７アゴニスト結合体は、インビボおよびインビトロにおいて、異なる免疫賦活性プロファイルを示した。脂質へのＴＬＲ７アゴニストの結合体化は、非結合体化ＴＬＲ７アゴニスト（ＳＭ）と比べて、先天免疫を刺激する能力を改善した。迅速に発生し、かつ持続性であるアジュバント作用を、脂質−ＴＬＲ７アゴニスト結合体はインビボにおいて示した。これらのデータから、脂質−ＴＬＲ７結合体が、治療のためのワクチン接種用アジュバントとしての潜在的な応用性を有することが示唆される。しかしながら、ＰＥＧへのＴＬＲ７アゴニストの結合体化は、ＳＭファーマコフォアの特性を改変し、その代わりその結合体は、ＴＬＲ７アンタゴニスト活性を示した。
【００９４】
実施例１：結合体の合成および特徴づけ
材料
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ（Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬ）から購入した。他のすべての試薬は、さらなる精製なしの少なくとも試薬グレードとしてＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ  ＭＯ）から購入した。溶媒は、Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）から購入し、購入したまま使用したか、または適切な乾燥剤を用いて再蒸留した。オボアルブミン（ＯＶＡ，グレードＶ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
【００９５】
免疫学的活性の実験用の試薬中および結合体中のエンドトキシンレベルを、ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ（Ｗａｌｋｅｒｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）から購入したＱＣＬ１０００（登録商標）Ｅｎｄｏｐｏｉｎｔ色素形成ＬＡＬアッセイを用いて測定した。１マイクログラム（μｇ）のタンパク質または薬物あたり１ピコグラム（ｐｇ）未満のエンドトキシンを含む試薬を実験全体にわたって使用した。ＤＯＰＥが、ＬＡＬアッセイにおいて偽陽性の結果をもたらしたので、エンドトキシンによる汚染を試験するために、リポサッカライド非応答性変異体マウス（Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ）から得られた骨髄由来単核（ＢＭＤＭ）細胞を使用した（図１Ｂを参照のこと）。Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスから得られたＢＭＤＭによるサイトカイン産生のレベルは、野生型Ｃ３Ｈ／ＨｅＯｕＪ系統から得られた細胞におけるレベルと似ていたことから、エンドトキシン混入が無視し得るものであったことが示唆される（図２Ｂを参照のこと）。すべての結合体を、−８０℃において乾燥粉末で保存した。それらの結合体をＤＭＳＯに１００ｍＭで溶解し、免疫学的アッセイの前にさらに希釈した。
【００９６】
分析用ＴＬＣを、ＥＭＤ（Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）から購入した予めコーティングされたＴＬＣシリカＧｅｌ  ６０  Ｆ２５４アルミニウムシートを用いて行い、ＵＶ光を用いて可視化した。フラッシュクロマトグラフィを、明示される溶媒系を用いてＥＭＤシリカゲル６０（４０〜６３μｍ）において行った。脂質を含まない化合物に対するクロマトグラフィおよび質量スペクトル（ＥＳＩ）を、パーセント範囲で９８％超の純度を有するＳｕｐｅｌｃｏ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＨＳ  Ｃ１８カラム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を備えた１１００ＬＣ／ＭＳＤ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ  ＣＡ）において記録した。脂質含有化合物の質量スペクトル（ＥＳＩ）は、Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱＤＥＣＡ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）において記録した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｐｌｕｓ  ４００（Ｖａｒｉａｎ，Ｉｎｃ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ  ＣＡ）において得た。化学シフトは、０ｐｐｍにおけるＴＭＳを基準として、適当な重水素化されたＮＭＲ溶媒を用いたときの百万分率（ｐｐｍ）で表される。
【００９７】
Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から購入した。Ｃ３Ｈ／ＨｅＪおよびＣ３Ｈ／ＨｅＯｕＪマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入した。ＴＬＲ７欠損マウス（Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンド）は、Ｄｒ．Ｓ．Ａｋｉｒａ（Ｏｓａｋａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）から寄贈されたものであり、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドに対して１０世代戻し交雑されたものである。動物を、ＵＣＳＤにおける２２±０．５℃、午前７時から午後７時の１２：１２時間の明暗サイクルの部屋で飼育し、維持した。すべての手順およびプロトコルは、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたものである。
【００９８】
化学合成
本明細書中に記載される化学合成スキームは、図１中の化合物を指すとき、括弧内の数字を使用し、反応工程（例えば、加えられる化学物質（複数可）および／または反応条件）を指すとき、括弧内の文字を使用する。例えば、（ａ）とは、ある反応物を加えることにより、化合物（１）と組み合わされ、反応するとき、化合物（２）を形成し得る工程を包含する、反応工程のことを指す。反応条件、および各反応工程に対して加えられる化合物は；（ａ）リチウムＮ，Ｎ’−メチルエチレンジアミノアルミニウム水素化物（Ｃｈａ，Ｊ．ら（２００２）Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｒｏｍａｔｉｃ  ｎｉｔｒｉｌｅｓ  ｔｏ  ａｌｄｅｈｙｄｅｓ  ｂｙ  ｌｉｔｈｉｕｍ  Ｎ，Ｎ’−ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｏａｌｕｍｉｎｕｍ  ｈｙｄｒｉｄｅ，Ｂｕｌｌ．Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２３，１６９７−１６９８）、ＴＨＦ，０℃；（ｂ）ＮａＩ、クロロトリメチルシラン、ＣＨ３ＣＮ，ｒ．ｔ．；（ｃ）ＰＢＳ，ｒ．ｔ．；（ｄ）ＮａＯＨ：ＥｔＯＨ  １：１，還流；（ｅ）ＤＯＰＥ、ＨＡＴＵ、トリエチルアミン、ＤＭＦ／ＤＣＭ  １：１，ｒ．ｔ．；（ｆ）Ｏ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−（２−アジドエチル）ノナエチレングリコール、ＨＡＴＵ、トリエチルアミン、ＤＭＦ，ｒ．ｔ．；（ｇ）４ペンチン酸、アスコルビン酸ナトリウム、Ｃｕ（ＯＡｃ）２、ｔ−ＢｕＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＴＨＦ  ２：２：１，ｒ．ｔ．；および（ｈ）ＤＯＰＥ、ＨＡＴＵ、トリエチルアミン、ＤＭＦ／ＤＣＭ  １：１，ｒ．ｔ．。
【００９９】
４−（（６−アミノ−２−（２−メトキシエトキシ）−８−オキソ−７Ｈ−プリン−９（８Ｈ）−イル）メチル）安息香酸の合成（図１を参照のこと，化合物５）。２０ｍＬの１：１のエタノール：水混合物を、０．１０ｇ（０．２８ｍｍｏｌ）の４−（（６−アミノ−８−メトキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９イル）メチル）ベンゾニトリル（図１を参照のこと，化合物１）に加え、その組み合わせたものを８時間還流した。その反応混合物を冷却し、濃ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。その水溶液をＤＣＭでさらに抽出し（３×２０ｍＬ）、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空中で蒸発させることにより、８−オキソ−９−安息香酸（化合物５）と、８−メトキシ−９−安息香酸と、８−オキソ−９−エチルベンゾエートとの混合物を得た。その生成物を乾燥させたら、ＣＨ３ＣＮ（２５ｍＬ）に溶解し、ＮａＩ（０．１４ｇ，０．９６ｍｍｏｌ）を加えた（図１，反応工程（ｂ））。撹拌しながらこの溶液に１２μＬ（０．９６ｍｍｏｌ）のクロロトリメチルシランを滴下して加えた。その反応混合物を４０℃で４時間加熱し、次いで冷却し、濾過し、水（２０ｍＬ）次いでジエチルエーテル（２０ｍＬ）で洗浄することにより、白色固体を８５％収率で得た。生じた生成物に対して核磁気共鳴（ＮＭＲ）解析を行ったところ、以下の結果が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.33 (s, 1H), 7.89(d, J = 8 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8 Hz, 2H), 6.65 (s, 2H), 4.92 (s, 2H), 4.24 (t,J = 4 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 4 Hz, 2H), 3.25 (s, 3H)。ＨＰＬＣにおける保持時間（Ｒｔ）＝１４．３分。ＥＳＩ−ＭＳ（陽イオンモード）：Ｃ１６Ｈ１７Ｎ５Ｏ５についての計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋１］３６０．３４；実測値３６０．２４。
【０１００】
２−（４−（（６−アミノ−２−（２−メトキシエトキシ）−８−オキソ−７Ｈ−プリン−９（８Ｈ）−イル）メチル）ベンズアミド）エチル２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロピルホスフェートの合成（図１を参照のこと，化合物６）。１ｍＬの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミド（ＤＭＦ）中の０．０２２ｇ（０．０６ｍｍｏｌ）の化合物５の溶液に、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（０．０２６ｇ，０．０６７ｍｍｏｌ）および無水トリエチルアミン（ＴＥＡ）（１７．０μＬ，０．１２ｍｍｏｌ）を加えた。無水１：１ジクロロメタン（ＤＣＭ）：ＤＭＦ（１ｍＬ）中の、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（０．０５ｇ，０．０６７ｍｍｏｌ）の溶液を調製し、上記反応混合物にゆっくり加えた（図１反応工程（ｅ））。完了するまでその反応混合物を室温で撹拌し、次いで、真空中で蒸発させた。その生成物を、ＤＣＭ中の１５％メタノール（ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュクロマトグラフィで精製することにより、０．０３８ｇの白色固体を５８％収率で得た。生じた生成物に対してＮＭＲ解析を行ったところ、以下の結果が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 9.7 (s, 1H), 7.87 (d,J = 8.3 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.61 (s, 2H), 5.30 (m, 4H), 5.05 (m,1H), 4.88 (s, 2H), 4.26 (m, 4H), 4.06 (m, 1H), 3.77 (m, 4H), 3.57 (m, 2H), 3.35(m, 2H), 3.26 (s, 3H), 2.23 (m, 4H), 1.95 (m, 8H), 1.46 (m, 4H), 1.22 (m, 40H),0.83 (m, 6H)。ＥＳＩ−ＭＳ（陰イオンモード）：Ｃ５７Ｈ９２Ｎ６Ｏ１２Ｐについての計算値ｍ／ｚ［Ｍ−１］１０８３．３５；実測値１０８３．７５。
【０１０１】
４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）−Ｎ−（３２−アジド−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−デカオキサドトリアコンチル）ベンズアミドの合成（図１を参照のこと，化合物７）。無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物５（０．１００ｇ，０．２７８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（０．１１７ｇ，０．３０６ｍｍｏｌ）および無水ＴＥＡ（７７．０１４μＬ，０．５５６ｍｍｏｌ）を加えた（図１を参照のこと，反応工程（ｆ））。無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＯ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−（２−アジドエチル）ノナエチレングリコール（０．１５０ｇ，０．３０６ｍｍｏｌ）の溶液を調製し、上記反応混合物にゆっくり加えた。完了するまでその反応混合物を室温で撹拌し、次いで、真空中で蒸発させた。その生成物を、ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨを用いるフラッシュクロマトグラフィで精製することにより、０．２２４ｇの不透明な油状物を９３％収率で得た。ＨＰＬＣにおける保持時間＝１２分。生じた生成物に対してＮＭＲ解析を行ったところ、以下の結果が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.01 (s, 1H), 8.45(t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.49(s, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.25 (t, J = 4 Hz, 2H), 3.57 (m, 4H), 3.5 (m, 36H), 3.4(M, 6H), 3.26 (s, 3H)。ＥＳＩ−ＭＳ（陽イオンモード）：Ｃ３８Ｈ６１Ｎ９Ｏ１４についての計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋１］８６８．９４；実測値８６８．５９。
【０１０２】
３−（１−（１−（４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）フェニル）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２−デカオキサ−２−アザテトラトリアコンタン−３４−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）プロパン酸の合成（図１を参照のこと，化合物８）。化合物７（０．２１８ｇ，０．２５１ｍｍｏｌ）および４−ペンチン酸（０．０７４ｇ，０．７５３ｍｍｏｌ）を１：１のｔ−ブタノール：Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）に溶解した（図１を参照のこと，反応工程（ｇ））。１：１のｔ−ブタノール：Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）中のアスコルビン酸ナトリウム（０．０２ｇ，１００ｍｍｏｌ）およびＣｕ（ＯＡｃ）２（０．００９ｇ，５０ｍｍｏｌ）を上記反応混合物にゆっくり加え、ＴＬＣによって化合物７が完全に反応するまで、室温で撹拌した。その生成物をＤＣＭ（１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥することにより、０．２３０ｇの不透明な油状物を９５％収率で得た。ＨＰＬＣにおける保持時間＝１１．５分。生じた生成物に対してＮＭＲ解析を行ったところ、以下の結果が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13.48 (s, 1H), 7.76(d, J = 8.29 Hz, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.23 (d, J = 8.29, 2H), 4.88 (s, 2H), 4.41(t, J = 5.12 Hz, 2H), 4.23 (t, J = 4 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 5.12 Hz, 2H), 3.57 (t,J = 4 Hz, 2H), 3.51 (m, 8H), 3.42 (m, 36H), 3.26 (s, 3H), 2.79 (t, J = 7.56 Hz,2H), 2.24 (t, J = 7.56 Hz, 2H）。ＥＳＩ−ＭＳ（陽イオンモード）：Ｃ４３Ｈ６７Ｎ９Ｏ１６についての計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋１］９６６．０４；実測値９６６．６７。
【０１０３】
２−（３−（１−（１−（４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）フェニル）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２−デカオキサ−２−アザテトラトリアコンタン−３４−イル）−１Ｈ−１，２，３トリアゾール−４−イル）プロパンアミド）エチル２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロピルホスフェートの合成（図１を参照のこと，化合物９）。無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中の、化合物８（９６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（４２ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）の溶液に、無水ＴＥＡ（２．７μＬ，０．２ｍｍｏｌ）を加えた。１：１のＤＣＭ：ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＤＯＰＥ（８１．４ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）の溶液を上記反応混合物に滴下して加え、完了するまで室温で撹拌した（図１を参照のこと，反応工程（ｈ））。完了したら、その生成物を、真空中での蒸発の後、ＤＣＭ中の１５％ＭｅＯＨを用いたフラッシュクロマトグラフィによって単離することにより、１５５ｍｇの不透明な油状物を９２％収率で得た。生じた生成物に対してＮＭＲ解析を行ったところ、以下の結果が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.5 (s, 2H), 8.39 (s,1H), 7.79 (m, 3H), 7.33 (d, J = 6.23 Hz, 2H), 6.91 (s, 2H), 5.31 (m, 4H), 5.05(m, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.46 (m, 2H), 4.23 (m, 4H), 4.08 (t, J = 8 Hz, 2 H),3.76 (m, 4H), 3.63 (t, J = 8 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 8 Hz, 2H), 3.48 (m, 36H),3.26 (m, 5H), 3.17 (m, 2H), 2.82 (t, J = 8 Hz, 2H), 2.39 (t, J = 8 Hz, 2H),2.24 (m, 4H), 1.96 (m, 8H), 1.48 (m, 4H), 1.23 (m, 40H), 0.84 (m, 6H）。ＥＳＩ−ＭＳ（陽イオンモード）：Ｃ８４Ｈ１４２Ｎ１０Ｏ２３Ｐについての計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋１］１６９１．０５；実測値１６９２．８２。
【０１０４】
同様の手法を用いて他の化合物を合成した（例えば、表２に示される化合物）。例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの代わりに一置換および二置換のヘキサデシルアミンを使用したことを除いて、それぞれ４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル０−Ｎ−ヘキサデシルベンザミン（化合物１Ｚ７）および４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル０−Ｎ，Ｎ−ジヘキサデシルベンザミン（化合物１Ｚ９）を、図１における化合物６の調製について上に記載したように調製し、精製した。ＥＳＩ−ＭＳを用いて化合物１Ｚ７について５８３．７という質量が観察された（陽イオンモード；Ｃ３２Ｈ５０Ｎ６Ｏ４についての質量の計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋１］は５８２．７８である）。ＥＳＩ−ＭＳを用いて化合物１Ｚ９について８０８．２という質量が観察された（陽イオンモード；Ｃ４８Ｈ８２Ｎ６Ｏ４についての質量の計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋１］は８０７．２０である）。
【０１０５】
ビオチン化誘導体Ｎ−（４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）ベンジル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド（化合物１Ｚ１８）をアミノメチル誘導体（１Ｖ１８４）から調製し、上に記載した手順と同じ手順を用いてビオチンに結合体化した。ＥＳＩ−ＭＳを用いて５７１．５という質量が観察された（陽イオンモード；Ｃ２６Ｈ３４Ｎ８Ｏ５Ｓについての質量の計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋１］は５７０．６６である）。
【０１０６】
実験方法
インビトロ方法
サイトカイン誘導のインビトロにおける測定を、マウス白血病単球マクロファージ細胞系であるＲＡＷ２６４．７を用いて行った。Ｒａｗ２６４．７マウスは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手し、ＤＭＥＭ完全培地［１０％熱不活化ウシ胎仔血清、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび１００Ｕ／ｍＬペニシリン／１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンが補充されたダルベッコ変法イーグル培地（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）］中で培養した。Ｗｕ，Ｃ．Ｃら、（２００７）“Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｏｆ  ａ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ７  ｌｉｇａｎｄ”，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０４，３９９０−５に記載されているように、ＢＭＤＭをＣ５７ＢＬ／６マウスおよびＴＬＲ７欠損マウスから調製した。
【０１０７】
通常は、ＲＡＷ２６４．７細胞またはＢＭＤＭを、３７℃、５％ＣＯ２において様々な濃度の結合体とともに１８時間インキュベートし、培養上清を回収した。その上清中のサイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−１２またはＴＮＦ−α）のレベルをＥＬＩＳＡ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）によって測定し（Ｃｈｏ，Ｈ．Ｊら、“Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ＤＮＡ−ｂａｓｅｄ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  ａ  Ｔ−ｈｅｌｐｅｒ  ｃｅｌｌ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ”［コメントを参照のこと］，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １８，５０９−１４（２０００））、結果を図２Ａ〜Ｄに示した。データは、３つ組の平均値±ＳＥＭであり、３回の独立した実験の代表である。これらのサイトカインの最小検出レベルは、１５ｐｇ／ｍＬであった。
【０１０８】
上に記載されたように約１×１０６／ｍＬのＲＡＷ２６４．７細胞を様々な結合体またはコントロールとともにインキュベートすることによって、ＴＮＦαレベルを測定した（図２Ａを参照のこと）。上に記載されたように０．５×１０６／ｍＬ  ＢＭＤＭを様々な結合体またはコントロールとともにインキュベートすることによって、ＩＬ−６およびＩＬ１２のレベルを測定した（図２Ｂ〜Ｄを参照のこと）。結合体を、原液（ＳＭならびに化合物（６）、（８）および（９）に対しては１０μｍ、化合物（４ａ）に対しては０．１μｍ）およびそれらから調製された段階希釈物（１：５）として調製した。
【０１０９】
ＢＭＤＭはまた、本明細書中に記載される合成スキームを用いて合成されたＴＬＲ７結合体のエンドトキシン混入のレベルを評価するためにも使用された。Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ（ＬＰＳ非応答性変異体）またはＣ３Ｈ／ＨｅＯｕＪ（野生型）に由来する０．５×１０６／ｍＬのＢＭＤＭを、ＴＬＲ７結合体（１０μＭ  ＳＭ、０．１μＭ化合物４ａ、１０μＭ化合物６、１０μＭ化合物８または１０μＭ化合物９）とともに１８時間インキュベートした。培養上清中のＩＬ−６またはＩＬ−１２のレベルをＥＬＩＳＡによって測定し、結果を図２Ｂに示した。ＴＬＲ７結合体の各々は、ＴＬＲ４変異体マウスと野生型マウスの両方において同様のレベルのＩＬ−６を誘導したことから、これらの結合体のＬＰＳ混入が最小であることが示唆される。
【０１１０】
ヒト血液の末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔら、“Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ＤＮＡ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ”，Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６９：６１５６−６４，（２００１）に記載されているように、Ｔｈｅ  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入したヒトバフィーコートから単離した。ＰＢＭＣ（１×１０６／ｍＬ）を、３７℃、５％ＣＯ２において、様々な濃度のＴＬＲ７結合体とともに１８時間インキュベートし、培養上清を回収した。その上清中のサイトカイン（ＩＬ−６、ＴＮＦ−αまたはＩＦＮα１）のレベルをＬｕｍｉｎｅｘビーズアッセイ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）によって測定し、結果を図３Ａ〜Ｂに示した。データは、３つ組の平均値±ＳＥＭであり、３回の独立した実験の代表である。ＩＬ−６、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮα１の最小検出レベルは、それぞれ６ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬおよび１５ｐｇ／ｍＬであった。
【０１１１】
インビボ方法
ＴＬＲ７結合体による炎症性サイトカイン誘導の薬物動態を、６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスを用いて調べた。それらのマウスに、ＴＬＲ７アゴニストおよびそれらの結合体（マウス１匹あたり４０ｎｍｏｌの化合物（４ａ）または２００ｎｍｏｌのＳＭおよび化合物（６）、（８）もしくは（９））を静脈内注射した。血液サンプルを注射の２、４、６、２４または４８時間後に回収した。血清を分離し、使用するまで−２０℃で維持した。その血清中のサイトカイン（例えば、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α）のレベルを、Ｌｕｍｉｎｅｘビーズマイクロアッセイによって測定し、結果を図４Ａ〜Ｂに示した。データは、５匹のマウスの平均値±ＳＥＭであり、２回の独立した実験の代表である。ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの最小検出レベルは、それぞれ５ｐｇ／ｍＬおよび１０ｐｇ／ｍＬである。
【０１１２】
ＴＬＲ７結合体による免疫学的反応の開始（例えば、アジュバント活性）もまた調べた。０および７日目にＣ５７ＢＬ／６マウスの群（ｎ＝５）の皮下に、約１０ｎｍｏｌの様々なＴＬＲ７結合体と混合された２０μｇのオボアルブミン（ＯＶＡ）で免疫した（ここで、１０ｎｍｏｌは、その結合体のＴＬＲ７部分に対する目標の投薬量であり、実際の量は、各結合体の実際の化学式に依存する）。ＴＬＲ９を活性化する免疫賦活性オリゴヌクレオチド配列（ＩＳＳ−ＯＤＮ；１０１８）を、Ｔｈ１誘導アジュバントについてのポジティブコントロールとして使用した（Ｒｏｍａｎ，Ｍら、Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ＤＮＡ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｓ  Ｔ  ｈｅｌｐｅｒ−１−ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ（１９９７），Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ３：８４９−５４）。血清を０、７、１４、２１、２８、４２および５６日目に回収した。食塩水、またはビヒクルと混合されたＯＶＡで免疫されたマウスをコントロールとして用いた。５６日目にマウスを屠殺し、脾細胞（ｓｐｌｅｅｎｏｃｙｔｅ）および組織学的スライドを調製するために脾臓を回収した。約２００マイクロリットルの２．５×１０６／ｍＬ脾臓細胞ストックを、総体積２００μｌのＲＰＭＩ１６４０完全培地［１０％熱不活化ＦＣＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび１００Ｕ／ｍＬペニシリン／１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ１６４０（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）］中に３つ組で丸底組織培養マイクロタイタープレートに等分し、１００μｇ／ｍＬのＯＶＡまたは培地のみで再刺激した。いくつかの実験では、免疫の２４時間後に炎症または局所反応の徴候について注射部位を調べた。免疫に対する潜在的な「不調（ｓｉｃｋｎｅｓｓ）」の応答の基準として活動についてマウスを観察し、次いで、毎週体重を測定した。脾臓の回収に加えて、肺、肝臓、心臓および腎臓もまた５６日目に回収し、１０％緩衝ホルマリン（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）中で固定し、パラフィンに包埋した。５μｍ厚の切片を、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、顕微鏡下で評価した。
【０１１３】
ＩｇＧサブクラス（および、いくつかの実施形態において、具体的にはＩｇＧ１およびＩｇＧ２）の抗ＯＶＡ抗体を、Ｃｈｏ，Ｈ．Ｊら、“Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ＤＮＡ−ｂａｓｅｄ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  ａ  Ｔ−ｈｅｌｐｅｒ  ｃｅｌｌ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ”［コメントを参照のこと］，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １８，５０９−１４（２０００）に記載されているようにＥＬＩＳＡによって測定し、結果を図５Ａおよび５Ｂに示した。各ＥＬＩＳＡプレートに、以前に定量化された血清の滴定結果を含めることにより、検量線を作成した。この標準の力価を、バックグラウンドの２倍の吸光度の読みを与える血清の最高希釈度として算出した。様々な血清サンプルを１：１００希釈において試験した。結果は、標準血清の単位／ｍＬに基づいて計算された、１ｍＬあたりの単位として表され、各群の５匹の動物の平均値＋ＳＥＭを意味する。＊およびＴは、ビヒクルと混合されたＯＶＡで免疫されたマウスと比較した１元配置分散分析による、それぞれＰ＜０．０５およびＰ＜０．０１を表す。
【０１１４】
脾細胞を、回収した脾臓から調製した。次いで、脾細胞培養物（１００μｇ／ｍＬのＯＶＡまたは培地のみで再刺激したもの）を３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートし、７２時間後に上清を回収した。培養上清中のＩＦＮγのレベルを、製造者の指示書に従ってＥＬＩＳＡ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）によって測定し（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈら、Ｐｒｅｐｒｉｍｉｎｇ：ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ＤＮＡ−ｂａｓｅｄ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ”，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  ２２：８５−９６（２０００）、結果を、図５Ｃに図示した。各群における総脾臓細胞数の平均を計算し、脾臓細胞増殖をモニターするためにＰＢＳで免疫された群と比較した。データは、５匹のマウスの平均値±ＳＥＭであり、３回の独立した実験の代表である。
【０１１５】
ＴＬＲ７結合体の潜在的有害作用の評価は、３つの部分からなる解析（ｔｈｒｅｅ−ｆｏｌｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ）（全脾細胞の計数、組織学的検査、ならびに注射領域と一般的な全身の健康状態の両方および処置されたマウスの行動の視覚的観察）によって行われた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、ＴＬＲ７結合体、ビヒクルまたはコントロールアゴニスト（オリゴヌクレオチド配列ＩＳＳ−ＯＤＮ）と混合された２０μｇのＯＶＡで免疫した。５６日目に、マウスを屠殺し、全脾細胞数を計数し、結果を図６Ａに示した。脾臓を回収し、図６Ｂ（倍率＝１００×）に示されるような組織学的検査にかけた。図６Ｃに示されるように、注射部位の皮膚を注射の２４時間後に視診した。ＯＶＡ＋ＴＬＲ７結合体で免疫されたマウスとＯＶＡ単独で免疫されたマウスとの間には、計数された脾細胞の数に有意差はない（図６Ａを参照のこと）。ＴＬＲ７結合体と混合されたＯＶＡで免疫されたマウス由来の脾臓の組織学的検査は、いかなる白脾髄の破壊または赤脾髄の細胞性の増大も示さなかった（図６Ｂを参照のこと）。注射部位の皮膚は、目に見える発赤または肉芽腫性（ｇｌａｕｃｏｍａｔｏｕｓ）の反応を有しなかった（図６Ｃを参照のこと）。
【０１１６】
処置されたマウスの腹膜を浸潤する好中球の数の減少を測定することによって、また、誘発された実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に対する効果によって、化合物（８）による処置の有効性を評価した。腹腔好中球の浸潤の減少は、５０ｎｍｏｌのフリーのファーマコフォア（１Ｖ１３６）または化合物（８）の静脈内注射（ｉ．ｖ．）でＣ５７ＢＬ／６マウスを３日間処置することによって測定された。好中球のリクルートを誘導するために、２ｍｌの３％チオグリコレート（ＴＧ）を、最後の化合物注射の１８時間後に腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。ＴＧ注射の４時間後に腹腔細胞を回収した。血球計数器によって全細胞を計数し、好中球を形態学的に同定した。結果を図７Ａおよび７Ｂに示す。
【０１１７】
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に対する化合物（８）の効果を、ミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）で処置されたＣ５７ＢＬ／６マウスを用いて決定した。ＭＯＧは、乏突起膠細胞の細胞表面およびミエリン鞘の最外側の表面に発現される膜タンパク質である。ＭＯＧは、破壊されたときに、例えば、多発性硬化症に伴う症状に類似した、ニューロンの脱髄を特徴とする疾患をもたらし得る自己抗原タンパク質である。ＭＯＧは、高度に脳炎誘発性であることが示されており、げっ歯類において強力なＴ細胞応答およびＢ細胞応答を誘導し得る。ＥＡＥは、中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性脱髄性疾患であり、多発性硬化症および急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）という疾患を含むヒトＣＮＳ脱髄性疾患の動物モデルならびに有用な脳の炎症の研究として広く研究されている。
【０１１８】
ＭＯＧ（またはＭＯＧペプチド）による処置を用いて、ＥＡＥが誘発され得る。マウスをＭＯＧタンパク質で６日間処置した。６日目以降に（図８を参照のこと）、５０ｎｍｏｌの化合物（８）またはＰＢＳを毎日、静脈内（ｉ．ｖ．）に注射した。ＥＡＥ臨床スコアを、脱髄に対する臨床上の測定規準として使用し、視覚的に決定した。統計的に有意な臨床スコアが、図８に示されるように化合物（８）処置の１１〜１７日目に観察された（データ点の上に＊を伴うデータ点を参照のこと）。
【０１１９】
いくつかの実験において、統計的評価を行うことにより、観察された結果の統計的有意性を決定した。統計ソフトウェアパッケージ（Ｐｒｉｓｍ４．０，ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）を、回帰分析を含む統計解析に使用した。データをプロットし、非線形回帰にあてはめることにより、群間で均一な標準偏差を有するガウス分布を仮定した。アジュバント活性実験では、ＯＶＡで免疫されたマウスとコントロールマウスとを比較するために、ボンフェローニの事後検定（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）を用いて２元配置分散分析によって群間の統計的有意差を解析した。Ｐ＜０．０５の値を統計的に有意とみなした。
【０１２０】
結果および考察
化学合成
化合物（１）からの化合物（４）の合成によって、５：１のＵＣ１Ｖ１５０とＭＳＡタンパク質という一貫した結合体化比が得られた（Ｗｕ，Ｃ．Ｃら、“Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｏｆ  ａ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ７  ｌｉｇａｎｄ”，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０４，３９９０−５（２００７））。化合物（１）の９−ベンジルニトリルの塩基性加水分解（図１，反応工程（ｄ））は、多用途の安息香酸官能基（化合物（５））を提供し、結合体（６）、（８）および（９）の組み立てを可能にする。無水ＤＭＦ中のＴＥＡの存在下におけるＨＡＴＵを用いた活性化によって、その安息香酸をＤＯＰＥと結合させることにより（図１，反応工程（ｅ））、５８％収率で化合物６を得た。
【０１２１】
試験に適した溶媒に化合物（６）を溶解することが困難であるため、溶解性を改善するために、ＰＥＧスペーサーを結合させた。無水ＤＭＦ中のＴＥＡの存在下におけるＨＡＴＵを用いた活性化によって、容易に入手可能なアミン／アジド二官能性ＰＥＧを上記安息香酸に結合させた（化合物（７）を生じる図１，反応工程（ｆ）を参照のこと）。４−ペンチン酸を用いた、銅（Ｉ）に触媒されるアジド−アルキン付加環化を介した１，２，３−トリアゾールの形成（図１，反応工程（ｇ））によって、９５％収率で化合物（８）が得られた。最後に、ＤＯＰＥ（図１，反応工程（ｈ））および化合物（８）を用いたＨＡＴＵ活性化アミド形成によって、化合物（９）を調製した。
【０１２２】
脂質結合体化ＴＬＲ７アゴニストによるサイトカイン誘導のインビトロ測定
ＴＬＲ７アゴニスト化合物（４ａ）は、マウス血清アルブミンと共有結合されるとき、非結合体化薬物（ＳＭ）と比べて、インビトロおよびインビボにおいて１０以上のサイトカイン誘導の効力を示した（Ｗｕ，Ｃ．Ｃら、“Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｏｆ  ａ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ７  ｌｉｇａｎｄ”，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０４，３９９０−５（２００７））。同様のアッセイを用いて、脂質−ＴＬＲアゴニスト結合体（図１，化合物６）、ＰＥＧ−ＴＬＲ７アゴニスト結合体（図１，化合物８）およびＰＥＧ−脂質（図１，化合物９）結合体のインビトロにおける効力を、マウスマクロファージ細胞系ＲＡＷ２６４および一次骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）を用いて比較した。それぞれの細胞を、段階希釈されたＴＬＲ７結合体で１８時間刺激し、培地中に放出されたサイトカインのレベルをＥＬＩＳＡによって測定し、非結合体化ＴＬＲ７アゴニスト（ＳＭ）と比較した（図２Ａ，パネルＡ〜Ｄを参照のこと）。
【０１２３】
化合物（４ａ）（例えば、ＴＬＲ７−ＭＳＡ結合体）は、非結合体化アゴニストと比較した場合、サイトカイン誘導物質として１００倍強力であると以前に示されたのに対し、脂質−ＴＬＲ７結合体は、モル濃度レベルの非結合体化アゴニストに対して正規化されたとき、１０倍強力であった。ＰＥＧ−ＴＬＲ７結合体（化合物８）は、非結合体化ＴＬＲ７（ＳＭ）に比べてより低い効力を示したが、ＰＥＧ−ＴＬＲ７結合体への脂質の結合体化（脂質ＰＥＧ−ＴＬＲ７）（化合物９）は、非結合体化ＴＬＲ７（ＳＭ）と同様のレベルに効力を回復した。ＴＬＲ７結合体化を有しない、実質的に類似の濃度のＭＳＡ、脂質またはＰＥＧ（結合体化型における最高レベルのもの）をネガティブコントロールとして使用し、それらは、それぞれＲＡＷ２６４．７細胞およびＢＭＤＭにおいて最低のサイトカインレベルを誘導したかまたはサイトカインを誘導しなかった（データ示さず）。
【０１２４】
非ＴＬＲ７マクロファージ刺激とは対照的に、結合体化型のＴＬＲ７アゴニストが単独でマクロファージ刺激を誘導しているか否かを評価するために、野生型マウスおよびＴＬＲ７欠損マウス（ＴＬＲ７−ＫＯまたはノックアウトマウス）由来のＢＭＤＭを化合物（４ａ）、（６）、（８）、（９）およびＳＭで処理した。化合物（４ａ）、（６）、（８）、（９）およびＳＭは、ＩＬ−１２およびＩＬ−６をほとんどまたは全く誘導しなかった一方で、これらの結合体は、野生型ＢＭＤＭにおいて活性であったことから、そのアゴニスト活性は、これらの結合体のＴＬＲ７活性に起因したことが示唆された（図２Ｃ〜Ｄを参照のこと）。エンドトキシン評価（図２Ｂおよび上に記載されたもの）は、そのアゴニスト活性がこれらの結合体のＴＬＲ７活性に起因したという結論をさらに支持した（例えば、産生されたＩＬ−６のレベルの統計的有意差はなかった）。
【０１２５】
ヒト細胞における免疫学的活性をさらに調べるために、３人のドナー由来のヒトＰＢＭＣをＴＬＲ７結合体で処理し、ＩＬ−６およびＩＦＮａ１のレベルをＬｕｍｉｎｅｘアッセイによって測定した（図３Ａ〜Ｂ）。この実験では、ＴＬＲ７（４ｂ）に結合体化されたヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）をＭＳＡ結合体（４ａ）の代わりに用いた。ＴＬＲ７結合体の効力の順序は、マウスマクロファージにおいて観察された順序と似ていた（（４ｂ）＞（６）＞（９）＞／＝ＳＭ＞（８））（図３Ａ）。化合物の効力の傾向は、すべてのドナーに由来するＰＢＭＣにおいて矛盾なく観察された。化合物（４ａ）とは異なり、化合物（４ｂ）（例えば、ＴＬＲ７−ＨＳＡ結合体）は、ヒトＰＢＭＣにおいて最低レベルのＩＦＮａ１を誘導した（３人のドナーにおいて観察された）（図３Ｂ）。
【０１２６】
ＴＬＲ結合体による炎症性サイトカインの誘導のインビボ動態
ＴＬＲ７結合体のインビボにおける免疫学的特性を比較するために、Ｃ５７ＢＬ／５マウスにＴＬＲ７アゴニスト結合体を静脈内投与し、血清中の炎症性サイトカインの動態を調べた（図４Ａおよび４Ｂ）。以前の研究（Ｗｕ，Ｃ．Ｃら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０４，３９９０−５（２００７））に基づいて、化合物（４ａ）を、化合物ＳＭ、（６）、（８）および（９）（動物１匹あたり２００ｎｍｏｌ）よりも低い濃度（動物１匹あたり４０ｎｍｏｌ）で使用した。ＴＮＦαおよびＩＬ−６の最大の誘導は、すべてのＴＬＲ７結合体について注射の２時間後に観察された（それぞれ図４Ａ〜Ｂ）。非結合体化ＴＬＲ７（ＳＭ）によって誘導されたサイトカインのレベルは、２時間後に急速に低下した。化合物（４ａ）、（６）および（９）によるサイトカイン誘導は、６時間後まで持続した。化合物（８）は、低レベルのＩＬ−６しか誘導せず（図４Ｂを参照のこと）、注射後のいずれの時点においても顕著なＴＮＦα誘導はなかった（図４Ｂを参照のこと）。食塩水、ＭＳＡまたはＤＯＰＥを投与されたコントロールマウス由来の血清は、検出可能なサイトカインレベルをほとんどまたは全く表さなかった（データ示さず）。
【０１２７】
脂質−ＴＬＲ７結合体は迅速かつ持続性の体液性（ｈｕｍｅｒａｌ）応答を促進する
アジュバント活性の効率を、ワクチンが誘導する抗原特異的ＩｇＧ、特に、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２のレベルおよびアイソタイプを測定することによって評価した（Ｍｏｓｍａｎｎ，Ｔ．Ｒ．およびＣｏｆｆｍａｎ，Ｒ．Ｌ．，‘ＴＨ１  ａｎｄ  ＴＨ２  ｃｅｌｌｓ：  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｌｅａｄ  ｔｏ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ’，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７：１４５−７３（１９８９））。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群（１群あたりｎ＝５匹の動物）の皮下に、ＴＬＲ７結合体と混合されたＯＶＡ（オボアルブミン）で免疫した。ＩＳＳ−ＯＤＮを強力なＴｈ１アジュバントポジティブコントロールとして使用した。食塩水またはＯＶＡ＋ビヒクル（０．１％ＤＭＳＯ）で免疫されたマウスをネガティブコントロールとして使用した。ＯＶＡ特異的なＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの血清誘導動態を０、７、１４、２１、２８、４２および５６日目にＥＬＩＳＡによってモニターした（図５Ａ〜Ｂ）。化合物（４ａ）または化合物（６）と混合されたＯＶＡで免疫されたマウスでは、ＩＧサブクラスの抗体の誘導が早くも１４日目に観察された（図５Ａを参照のこと）。抗ＯＶＡ  ＩｇＧ２ａレベルは、ＯＶＡ／化合物（６）混合物で免疫されたマウスでは継続的に増加したのに対し、図５Ａに例証されるように、ＯＶＡ／化合物（４ａ）混合物で免疫されたマウスにおけるレベルは、その後低下した。これらのデータは、化合物（４ａ）または（６）と組み合わされたＯＶＡで免疫されたマウスの脾臓細胞によるＯＶＡ特異的ＩＦＮγの分泌の増加と一致する（図５Ｃを参照のこと）。
【０１２８】
有害作用のインビボ評価
ＴＬＲ７アゴニスト（ＳＭ）は、マウスにおいて食欲不振作用および低体温を誘導し得（Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔら、“Ｍａｓｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎｏｒｅｘｉａ  ａｎｄ  ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｍｕｃｏｓａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ  ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ７”，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｇｕｌ  Ｉｎｔｅｇｒ  Ｃｏｍｐ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２９５，Ｒ１２３−３２（２００８））、マウスにおいて体重減少を引き起こし得る。ゆえに、実験プロトコルの一部として、脂質−ＴＬＲ７アゴニスト結合体で免疫されたマウスの体重および皮膚反応（注射部位におけるもの）をモニターした。マウスにおいて食欲不振反応を誘発した非結合体化ＴＬＲ７アゴニスト（ＳＭ）の最小用量は、粘膜投与において、マウス１匹あたり５０ｎｍｏｌであった（Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｇｕｌ  Ｉｎｔｅｇｒ  Ｃｏｍｐ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２９５，Ｒ１２３−３２（２００８））。ＴＬＲ７アゴニストによって引き起こされる不調の反応を回避するために、アジュバント実験に対する用量（マウス１匹あたり１０ｎｍｏｌ）が選択された。化合物（６）と混合されたＯＶＡで免疫されたマウスと食塩水を注射されたマウスの平均体重との間に有意差は認められなかった（データ示さず）。
【０１２９】
ＴＬＲ７の慢性投与は、骨髄性細胞の増殖も誘導し得る（Ｂａｅｎｚｉｇｅｒ，Ｓら、“Ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  ＴＬＲ７  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ，ｒｅｓｅｍｂｌｉｎｇ  ＨＩＶ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ”，Ｂｌｏｏｄ  １１３：３７７−３８８（２００９）。脾臓の骨髄性細胞の増殖の指標として脾臓細胞の総数を計算した（図６Ａを参照のこと）。ＯＶＡ、ＴＬＲ７アゴニスト結合体および食塩水コントロールで免疫されたマウス間の脾細胞の総数に有意差はなかった（図６Ｂを参照のこと）。ＴＬＲ７アゴニストと混合されたＯＶＡで免疫されたマウス由来の脾臓の組織学的検査は、白脾髄（胚中心）の構造的破壊および赤脾髄における細胞性の増加を示さなかった（図６Ｂを参照のこと）。さらに、各群から回収された肝臓、肺、心臓および腎臓サンプルの組織学的検査において、有意差は認められなかった（データ示さず）。また、脂質−ＴＬＲ７結合体の注射の部位または注射部位付近に巨視的に可視の発赤または肉芽腫性の反応はなかった（図６Ｃを参照のこと）。
【０１３０】
炎症部位に白血球およびマクロファージをリクルートする誘発剤としてチオグリコレート（ＴＧ）が使用され得る。感染または炎症に応答して、代表的には好中球が、感染または炎症の部位に到達する最初の顆粒球細胞型である。ゆえに、チオグリコレートで処置することにより、多くの免疫応答細胞型のリクルートメント（ＴＬＲ７結合体の投与に関連する潜在的な悪影響を決定するために有用であり得る）が引き起こされる。本研究に使用された方法は、マウスを様々なＴＬＲ７結合体化合物で３日間、前処置した後に、２ｍＬのチオグリコレートの３％溶液を、最後のＴＬＲ７結合体処置の１８時間後に注射することであった。ＴＧ注射の４時間後、全腹腔細胞を回収し、計数した。好中球を形態学的に同定し、計数した。結果を図７Ａ〜Ｂに示す。
【０１３１】
食塩水だけで処置されたマウスをネガティブコントロールとして使用し、そのマウスによって、全腹腔細胞の基礎レベル、および未処置マウスに対してリクルートされた好中球の総数が確立された。ＴＧ（食塩水中のもの）で処置されたがＴＬＲ７結合体で前処置されていないマウスを、リクルートに対するポジティブコントロールとして使用し、そのマウスは、腹膜にリクルートされた約５×１０６個の総細胞を示し、その約９０％が好中球であった（５×１０６個の全細胞のうち、４×１０６個を超える好中球）。フリーのＴＬＲ７ファーマコフォア（１Ｖ１３６）またはＴＬＲ７結合体（１Ｖ２８２，化合物（８））で前処置されたマウスが、リクルートされた全細胞とリクルートされた好中球の両方の減少を示したことから、フリーのファーマコフォアまたは化合物（８）による処置が、炎症／感染反応のレベル（白血球、顆粒球およびマクロファージが応答するが、リクルートされる細胞型の分布（例えば、各細胞型の相対量）にほとんどまたは全く影響しないことがある）を低下させ得ることが示唆される。ゆえに、フリーのファーマコフォアおよび化合物（８）は、ＴＧと比べた場合、追加の有害反応を示さず（例えば、上に記載されたような不調の反応を示さず）、白血球、顆粒球およびマクロファージのリクルートを減少させ得る。
【０１３２】
上に記載されたように、様々なＴＬＲ７結合体の潜在的な有害作用を評価するためにＭＯＧタンパク質も使用した。結果の評価は、ＭＯＧ誘発ＥＡＥに関連する様々な症状（例えば、脳の炎症、ニューロンの脱髄など）の観察によって行った。症状の重症度を「臨床スコア」として記録し、ＭＯＧ処置の最初の６日間の後に、未処置マウス（ＰＢＳ）と化合物（８）で処置されたマウスとを比較した（図８を参照のこと）。臨床スコアの統計的有意差は、１１〜１７日目の上の＊によって示される。化合物（８）での処置によって、１１〜１７日目にＥＡＥ症状の重症度が有意に低下し、ならびに、２本の線（８日目から始まり１１日目を通る線）の傾きの差によって示されるように、症状の重症度の最初の上昇が低下した。ゆえに、化合物８は、追加の有害反応を引き起こさない（例えば、上に記載されたような不調の反応を引き起こさない）ということができ、また、ＭＯＧ誘発ＥＡＥに関連する症状の重症度も低下させ得る。
【０１３３】
結論
非結合体化ＴＬＲ７（ＳＭ）は、水溶液に不溶性である。水溶解性は、薬物拡散を高めるかまたは細胞への取り込みを促すことによって薬物の可用性の制御に関与し得る。ＰＥＧ化は、薬物溶解性を改善し得、免疫原性を低下させ得る（Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．およびＭｅｒｏ，Ａ，“Ｔｈｅ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ”，ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２２，３１５−２９（２００８））。ＰＥＧ化はまた、血液中での結合体の滞留時間である薬物安定性も高め得、タンパク質分解および腎排泄を低減し得る（Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．およびＭｅｒｏ，Ａ，ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２２，３１５−２９（２００８））。ＴＬＲ７が、ＰＥＧに結合体化されるとき（例えば、化合物（８））、溶解性は、劇的に改善する（データ示さず）。しかしながら、サイトカイン誘導の効力は、インビトロ（図２Ａ，パネルＡおよびＢ）およびインビボ（図４Ａおよび４Ｂ）において、無改変ＴＬＲ７アゴニストと比較して、減弱される。インビトロとインビボの両方における活性は、ＤＯＰＥへのさらなる結合体化によって回復し得る（化合物（９））。化合物（９）は、最小のＴｈ１応答を示しつつ（ＩｇＧ２ａレベルによって示される）、Ｔｈ２免疫応答を誘導し得る（ＩｇＧ１レベルによって示される）。
【０１３４】
ＴＬＲ７アゴニスト結合体である化合物（４ａ）（ＭＳＡ結合体）および（６）（脂質結合体）は、ＩｇＧ２ａ力価の迅速な上昇を促進した（図５Ａ）。ＭＳＡ−ＴＬＲ７結合体（化合物（４ａ））で免疫されたマウスにおけるＩｇＧ２ａのレベルは、最後の免疫の３週間後に低下したが、脂質ＴＬＲ７結合体（化合物（６））と混合されたＯＶＡで免疫されたマウスは、持続していてさらに加速されたレベルの抗原特異的ＩｇＧ２ａを示した（図５Ａ）。化合物（４ａ）は、ＩｇＧ２ａのレベルを維持しなかったが、化合物（４ａ）と混合されたＯＶＡで免疫されたマウスの脾臓細胞によるＯＶＡ特異的ＩＦＮγの分泌は、比較的高いレベルを維持した（図５Ｃ）。区別可能な免疫プロファイルを与える、種々の部分に結合体化された同じＴＬＲ７アゴニストは、区別可能な疾患カテゴリー（例えば、感染症および自己免疫疾患など）を処置するためのアジュバントの設計において有用であり得る。
【０１３５】
ＴＬＲ７アゴニストの様々な結合体を合成し、それが、インビボとインビトロの両方において区別可能な免疫学的プロファイルを有することが見出された。報告されるＴＬＲ７アゴニスト結合体の物理的特性が多様であることによって、種々の疾患の処置においてより広い範囲に応用できる可能性がある。水溶性結合体は、全身投与のための経路を提供し得る。脂質含有結合体は、近接した免疫細胞の持続的な刺激を必要とする局所投与に適していることがある（例えば、感染症のためのアジュバントの適用）。脂質部分は、皮膚バリアへの薬物の浸透を促進し得、皮膚障害の処置に有益であり得る。脂質またはＰＥＧ部分へのＴＬＲ７アゴニストの結合体化は、感染症、癌または自己免疫疾患の臨床的な処置を拡大する有望なストラテジーであり得る。
【０１３６】
本明細書中に提示されるデータから、化合物（８）が、ある特定の条件下ではアンタゴニスト活性を有すると結論づけられる。図４Ａ〜Ｂは、化合物（８）が、ＩＬ−６またはＴＮＦαを刺激する活性をほとんどまたは全く有しないこと、およびＩＬ−６またはＴＮＦαの活性の上昇に通常関連する炎症応答または感染応答のある特定の局面を低減し得ること（図７Ａ〜Ｂおよび図８を参照のこと）を示している。これらの観察結果は、アンタゴニスト活性と一致する（例えば、化合物は、結合し得るが、レセプター活性化を刺激しない）。
【０１３７】
先天性免疫系の細胞におけるＴｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）の活性化は、抗原特異的な獲得免疫応答を惹起し、増幅し、指示する。ゆえに、ＴＬＲを刺激するリガンドは、潜在的な免疫アジュバントに該当する。本研究では、強力なＴＬＲ７アゴニストを、多用途の安息香酸官能基を介してポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、脂質または脂質−ＰＥＧと結合体化した。無改変ＴＬＲ７アゴニストと比べて、各結合体は、インビトロおよびインビボにおいて、特徴的な免疫学的プロファイルを示した。マウスマクロファージおよびヒト末梢血単核細胞では、脂質−ＴＬＲ７結合体は、フリーのＴＬＲ７リガンド（ｆｒｅｅ  ＴＬＲ７  ｌｉｇａｎｄ）よりも少なくとも１００倍強力であったが、ＰＥＧ結合体およびＰＥＧ−脂質結合体の効力は、そのフリーの形態（ｔｈｅ  ｆｒｅｅ  ｆｏｒｍ）と同様であった。それらの結合体をインビボにおいて全身投与したとき、脂質ＴＬＲ７結合体および脂質−ＰＥＧ  ＴＬＲ７結合体は、無改変ＴＬＲ７アクチベーターと比べて、持続したレベルの免疫賦活性サイトカインを血清中に提供した。それらの結合体をワクチン接種においてアジュバントとして使用したとき、脂質−ＴＬＲ７結合体だけが、持続したＴｈ１ならびにＴｈ２の抗原特異的応答を誘導した。これらのデータは、ＴＬＲ７リガンドの免疫賦活性の活性が、結合体化によって増幅され、集中され得、ゆえに、これらの薬剤の潜在的な治療的実用性が広がる可能性があることを示している。
【０１３８】
追加の化合物およびその特性
生物学的活性
様々な長さの鎖を有するＰＥＧに結合体化されたＴＬＲ７アゴニストのインビトロ活性を、ＧｅｎｅＢｌａｚｅｒＣｅｌｌＳｅｎｓｏｒ細胞系ＮＦｋＢ−ｂｌａ  ＲＡＷ２６４．７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および初代マウスＢＭＤＭによって測定した。細胞を様々な濃度のＴＬＲ７アゴニストＰＥＧ結合体とともにインキュベートした。Ｃｅｌｌｓｅｎｓｏｒ細胞系のＮＦｋＢ活性化を製造者の指示書に従って測定した。ＢＭＤＭを上記結合体とともに一晩インキュベートし、上清中のＩＬ−６のレベルをＥＬＩＳＡによって評価した。Ｐｒｉｓｍを用いてＥＣ５０推定値を計算した。
【０１３９】
６、１０および１８ＰＥＧ鎖を有する結合体は、ＮＦｋＢ−ｂｌａ  ＲＡＷ細胞とＢＭＤＭの両方において同様の効力を示した（図９Ａ〜Ｄ）。ＮＦｋＢ−ｂｌａ  ＲＡＷ細胞を用いたアッセイでは、より長いＰＥＧ鎖を含む結合体ほど、ＮＦｋＢ活性化に対して活性が低かった（図９Ｄ〜Ｅ）。対照的に、より長い鎖の結合体は、ＢＭＤＭによるＩＬ−６分泌に対してより高い活性を示した（図９Ｄ〜Ｅ）。６ＰＥＧ鎖を有する結合体のうち、ＮＨ２末端基を有する結合体が、ＣＯＯＨまたはＮ３の末端基を有する結合体よりもわずかに高い活性を示した（図９Ａ）。
【０１４０】
１００μＬの食塩水中の２００ｎｍｏｌの様々なＴＬＲ７アゴニスト−ＰＥＧ結合体をＣ５７ＢＬ／６マウスに注射した。記載されている時点において血清を回収し、サイトカイン（ＴＮＦアルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２）のレベルをｌｕｍｉｎｅｘビーズアッセイによって測定した（図１０Ａ〜Ｂ）。本研究において使用したすべての化合物が、０．１〜０．２％ＤＭＳＯ−食塩水溶液に明らかに可溶性であった。フリーのＴＬＲ７アゴニストを６ＰＥＧ鎖に結合体化したとき（１Ｚ２）、活性は低下した（図１０Ａ〜Ｂ）。より長い鎖を含む結合体（例えば、１Ｖ３０３（１８ＰＥＧ鎖）および１Ｚ３（約４７ＰＥＧ鎖））は、非結合体化アゴニスト（１Ｖ１３６）のレベルでサイトカインを誘導した。約２７１ＰＥＧ鎖を含む１Ｚ５は、非結合体化ＴＬＲ７アゴニストよりも高いレベルのサイトカインを誘導した。
【０１４１】
ＮＨ２末端基とＣＯＯＨ末端基とのインビボでの生物活性を比較するために、ＴＬＲ７アゴニストに結合体化された６ＰＥＧ鎖および１０ＰＥＧ鎖を使用した（図１０Ｃ）。ＮＨ２末端基を含む１Ｚ２および１Ｖ２９８は、ＣＯＯＨ末端基を含む対応する結合体よりも相対的に高いサイトカイン誘導を示した（図１０Ｃ〜Ｄ）。
【０１４２】
ＴＬＲ７アゴニスト−ＰＥＧ結合体の抗炎症性の有効性を、ヒト炎症性疾患（血清移入関節炎、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）（上記を参照のこと）およびチオグリコレート誘発腹膜炎）のマウスモデルにおいて試験した。血清移入関節炎の場合（図１１）、Ｋ／ＢｘＮ血清を０日目にＣ５７ＢＬ／６マウスに注射し、胃管栄養（図１１Ａ）または皮下注射（図１１Ｂ）によって毎日、１Ｖ２８２で処置した。１Ｖ２８２を毎日投与することによって、皮下注射による処置と胃管栄養による処置の両方において足の腫脹が減少した。
【０１４３】
チオグリコレート腹膜炎の場合（図１２）、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１Ｖ２８２を３日間、静脈内投与または経口投与した。最後の処置の１日後に、マウスに２ｍｌのチオグリコレート媒質を腹腔内注射した。１Ｖ１３６の静脈内投与および皮下投与をポジティブコントロールとして使用した。チオグリコレート注射の３時間後に、腹膜への好中球浸潤を評価した。全身経路と経口経路の両方による１Ｖ２８２の投与が、腹膜腔への細胞の浸潤、特に、好中球の浸潤を減少させた。
【０１４４】
ヒトの１型糖尿病は、免疫介在性損傷に通常関連する、膵β細胞の特異的な破壊によって特徴づけられている。化学的に誘発された糖尿病モデルを使用することにより、ＴＬＲ７アゴニスト−ＰＥＧ結合体の慢性投与が、この疾患の重症度または発生を減少させ得るか否かが試験される。複数回におよぶ小用量のストレプトゾトシン（アルキル化剤）を用いる（例えば、５日間連続での４０ｍｇ／ｋｇ）。感受性のげっ歯類では、これによって、ヒト１型糖尿病におけるように免疫破壊が関連するインスリン不足性糖尿病が誘発される。他の関連疾患において認められる作用様式に基づいても、ＴＬＲ７−ＰＥＧ結合体は、この疾患の経過を回復する。
【０１４５】
【表２−１】
2012517428.tif 000013
【０１４６】
【表２−２】
2012517428.tif 000014
【０１４７】
【表２−３】
2012517428.tif 000015
【０１４８】
【表２−４】
2012517428.tif 000016
【０１４９】
【表２−５】
2012517428.tif 000017
【０１５０】
【数１】
2012517428.tif 000018
【０１５１】
【数２】
2012517428.tif 000019
【０１５２】
【数３】
2012517428.tif 000020
本明細書中で参照された特許、特許出願、刊行物および文書の各々の全体が、本明細書によって参考として援用される。上記の特許、特許出願、刊行物および文書の引用は、どの前述のものも適切な従来技術であるという承認ではないし、これらの刊行物または文書の内容または日付に関していかなる承認を構成するともみなされない。
【０１５３】
本発明の基本的な局面から逸脱することなく、前述のものに対して改変が行われ得る。本発明は、１つ以上の特定の実施形態を参照して実質的に詳細に記載されてきたが、本願に具体的に開示された実施形態に対して変更が行われてもよく、なおもこれらの改変および改良が、本発明の範囲内および精神内であることを当業者は認識する。
【０１５４】
例証的に適切に本明細書中に記載された本発明は、本明細書中に具体的に開示されていない任意のエレメント（複数可）の非存在下において実施され得る。したがって、例えば、本明細書中のいずれの場合でも、用語「〜を含む」、「〜から本質的になる」および「〜からなる」のいずれかは、他の２つの用語のいずれとも置き換えられてもよい。使用されている用語および表現は、説明の用語であって限定ではない用語として使用され、そのような用語および表現の使用は、示される特徴および記載される特徴またはそれらの一部のいかなる等価物も排除せず、特許請求される本発明の範囲内で様々な改変が可能である。用語「ａ」または「ａｎ」は、１つのエレメントまたは２つ以上のエレメントが記載されていることが文脈上明らかでない限り、それが修飾する１つまたは複数のエレメントのことを指し得る（例えば、「試薬（ａ  ｒｅａｇｅｎｔ）」は、１つ以上の試薬を意味し得る）。用語「約」とは、本明細書中で使用されるとき、基礎をなすパラメータの１０％以内（すなわち、プラスまたはマイナス１０％）の値のことを指し、一連の値の始めに用語「約」を使用することにより、それらの値の各々が修飾される（すなわち、「約１、２および３」は、約１、約２および約３である）。例えば、「約１００グラム」という重量は、９０グラム〜１１０グラムの重量を含み得る。したがって、本発明は、代表的な実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示されてきたが、本明細書中に開示される概念の改変および変更が当業者によって行われてもよく、そのような改変および変更は本発明の範囲内であると考えられると理解されるべきである。
【図１】
2012517428.tif 000022
【図２Ａ】
2012517428.tif 000023
【図２Ｂ】
2012517428.tif 000024
【図２Ｃ】
2012517428.tif 000025
【図２Ｄ】
2012517428.tif 000026
【図２Ｅ】
2012517428.tif 000027
【図３Ａ】
2012517428.tif 000028
【図３Ｂ】
2012517428.tif 000029
【図４Ａ】
2012517428.tif 000030
【図４Ｂ】
2012517428.tif 000031
【図５Ａ】
2012517428.tif 000032
【図５Ｂ】
2012517428.tif 000033
【図５Ｃ】
2012517428.tif 000034
【図６Ａ】
2012517428.tif 000035
【図６Ｂ】
2012517428.tif 000036
【図６Ｃ】
2012517428.tif 000037
【図７】
2012517428.tif 000038
【図８】
2012517428.tif 000039
【図９Ａ】
2012517428.tif 000040
【図９Ｂ】
2012517428.tif 000041
【図９Ｃ】
2012517428.tif 000042
【図９Ｄ】
2012517428.tif 000043
【図９Ｅ】
2012517428.tif 000044
【図１０Ａ】
2012517428.tif 000045
【図１０Ｂ】
2012517428.tif 000046
【図１０Ｃ】
2012517428.tif 000047
【図１０Ｄ】
2012517428.tif 000048
【図１１】
2012517428.tif 000049
【図１２】
2012517428.tif 000050
【国際調査報告】
2012517428.tif 000051
2012517428.tif 000052
2012517428.tif 000053
2012517428.tif 000054
2012517428.tif 000055