(57)【要約】  薬理活性を有する式（Ｉ）のチアゾールもしくはチアジアゾール誘導体またはその医薬的な塩、それらを調製するためのプロセス、それらを含む医薬組成物、及びＳ１Ｐ１受容体により媒介される様々な障害の治療におけるそれらの使用が開示される。
2012530081.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩：
【化１】
2012530081.tif 000079
（式中、Ｘは、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ１は、ＯＲ３、ＮＨＲ４、Ｒ５、ＮＲ６Ｒ７、Ｒ８又はフッ素化されていてもよいＣ（３−６）シクロアルキルであり；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ（１−２）アルコキシ、及びハロゲンで置換されていてもよいＣ（１−３）アルキルであり；
Ｒ３及びＲ４は、Ｏが挿入されていてもよく、かつ、Ｆで置換されていてもよいＣ（１−５）アルキル、又はＦで置換されていてもよい（ＣＨ２）（０−１）Ｃ（３−５）シクロアルキルであり；
Ｒ５は、Ｆで置換されていてもよいＣ（１−６）アルキルであり；
Ｒ６及びＲ７は、Ｏが挿入されていてもよく、かつ、Ｆで置換されていてもよいＣ（１−５）アルキル、及びフッ素化されていてもよいＣ（３−５）シクロアルキルから独立して選択され（ただし、Ｒ６及びＲ７中の炭素原子の総数は６を越えない）；
Ｒ８は、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル及びモルホリニルから選択される、Ｆで置換されていてもよい３〜６員窒素含有ヘテロシクリル環（すべて、窒素原子を介して結合する）であり；
Ａは以下のものから選択される５員複素環であり：
【化２】
2012530081.tif 000080
Ｂは、以下のものから選択される二環式環であり：
【化３】
2012530081.tif 000081
Ｒ９は、水素又は（ＣＨ２）１−４ＣＯ２Ｈであり；
Ｒ１０は、水素、又はハロゲンで置換されていてもよいＣ（１−３）アルキルであり；そして
ｎは、０、１又は２である）。
【請求項２】
ＸがＮ又はＣＨであり；
Ｒ１がＯＲ３又はＲ５であり；
Ｒ３がイソプロピルであり；
Ｒ５がブチルであり；
Ｒ２がクロロ又はシアノであり；
Ａが（ａ）又は（ｂ）であり；
Ｂが（ｅ）、（ｄ）又は（ｈ）であり；
Ｒ９が、水素又は（ＣＨ２）２−３ＣＯ２Ｈであり；
Ｒ１０が、水素、メチル又はエチルであり；そして
ｎが０又は１である、式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン、
７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン、
４−［７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸、
４−［７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸、
７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン−７−イル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリルトリフルオロ酢酸、
４−［７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸塩酸塩、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
４−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドールトリフルオロ酢酸、
３−［５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］プロパン酸、
３−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
４−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸、
３−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
４−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸、
３−［６−｛５−［３−シアノ−４−（２−メチルプロピル）フェニル］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル｝−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
４−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸、
またはその塩から選択される、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項４】
Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される病態又は障害の治療のための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項５】
前記病態又は障害が、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、虚血再灌流障害、固形腫瘍及び腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛状態、急性ウイルス性疾患、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病及びインシュリン非依存性糖尿病である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記病態が紅斑性狼瘡である、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される病態又は障害の治療において用いるための薬剤を製造するための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
前記病態又は障害が、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、虚血再灌流障害、固形腫瘍及び腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛状態、急性ウイルス性疾患、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病及びインシュリン非依存性糖尿病である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記病態が紅斑性狼瘡である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１１】
Ｓ１Ｐ１受容体により媒介され得る、ヒトをはじめとする哺乳動物における病態又は障害の治療法であって、患者に、治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１２】
前記病態が紅斑性狼瘡である、請求項１１に記載の治療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬理活性を有する新規化合物、それらを調製するためのプロセス、それらを含有する医薬組成物及び様々な障害の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
スフィンゴシン１−リン酸（Ｓ１Ｐ）は、スフィンゴシンキナーゼによるスフィンゴシンのリン酸化によって形成される生理活性脂質メディエーターであり、血液中に高レベルで見られる。これは、血小板や肥満細胞などの造血起源のものを包含する多くの細胞型によって産生され、分泌される（Ｏｋａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ  １９９８  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７３（４２）：２７１０４；  Ｓａｎｃｈｅｚ  ａｎｄ  Ｈｌａ  ２００４，  ＪＣｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ９２：９１３）。これは、細胞増殖、分化、運動性、血管新生、ならびに炎症細胞及び血小板の活性化の調節をはじめとする広範囲の生物学的作用を有する（Ｐｙｎｅ  ａｎｄ  Ｐｙｎｅ  ２０００，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．  ３４９：３８５）。Ｓ１Ｐ反応性受容体の５つのサブタイプ、Ｓ１Ｐ１（Ｅｄｇ−１）、Ｓ１Ｐ２（Ｅｄｇ−５）、Ｓ１Ｐ３（Ｅｄｇ−３）、Ｓ１Ｐ４（Ｅｄｇ−６）、及びＳ１Ｐ５（Ｅｄｇ−８）が記載されており、受容体のＧタンパク質共役内皮分化遺伝子ファミリーの一部を形成する（Ｃｈｕｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００２  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５４：２６５，  Ｓａｎｃｈｅｚ  ａｎｄ  Ｈｌａ  ２００４  Ｊ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ９２：９１３）。これらの５つの受容体は様々なｍＲＮＡ発現を示し、Ｓ１Ｐ１−３は広範囲に発現され、Ｓ１Ｐ４はリンパ様組織及び造血組織上で発現され、そしてＳ１Ｐ５は主に脳において、そして程度は低いが脾臓で発現される。それらは、Ｇタンパク質の様々なサブセットを経てシグナルを送り、様々な生物学的反応を促進する（Ｋｌｕｋ  ａｎｄ  Ｈｌａ  ２００２  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １５８２：７２，  Ｓａｎｃｈｅｚ  ａｎｄ  Ｈｌａ  ２００４，  Ｊ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ９２：９１３）。
【０００３】
Ｓ１Ｐ１受容体について提案されている役割としては、リンパ球輸送、サイトカイン誘導／抑制及び内皮細胞に対する影響が挙げられる（Ｒｏｓｅｎ  ａｎｄ  Ｇｏｅｔｚｌ  ２００５  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ５：５６０）。Ｓ１Ｐ１受容体のアゴニストは、誘発された疾患の重症度を軽減するために、ＭＳの実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルをはじめとする多くの自己免疫及び移植動物モデルで用いられてきた（Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００３  ＪＢＣ  ２７７：２１４５３；  Ｆｕｊｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ  ２００３  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ３０５：７０；  Ｗｅｂｂ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １５３：１０８；  Ｒａｕｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  Ｊ  Ｍａｇｎ  Ｒｅｓｏｎ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ２０：１６）。この活性は、リンパ系中を通るリンパ球循環に対するＳ１Ｐ１アゴニストの影響が関与することが報告されている。Ｓ１Ｐ１アゴニストで治療すると、動物モデルにおける可逆性末梢リンパ球減少症をはじめとするリンパ節などの二次リンパ様器官内でリンパ球の排出（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎ）が起こる（Ｃｈｉｂａ  ｅｔ  ａｌ  １９９８，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６０：５０３７，  Ｆｏｒｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ３０９：７５８；  Ｓａｎｎａ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  ＪＢＣ  ２７９：１３８３９）。アゴニストに関して公開されたデータは、化合物処理によって、インターナリゼーションにより細胞表面からのＳ１Ｐ１受容体の損失が誘発され（Ｇｒａｌｅｒ  ａｎｄ  Ｇｏｅｔｚｌ  ２００４  ＦＡＳＥＢ  Ｊ  １８：５５１；  Ｍａｔｌｏｕｂｉａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  Ｎａｔｕｒｅ  ４２７：３５５；  Ｊｏ  ｅｔ  ａｌ  ２００５  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  １２：７０３）、免疫細胞上のＳ１Ｐ１受容体のこのような減少が、リンパ節から血流中へと戻るＴ細胞の移動が減る一因となることを示唆する。
【０００４】
Ｓ１Ｐ１遺伝子欠失は胚の死を引き起こす。リンパ球遊走及び輸送におけるＳ１Ｐ１受容体の役割を調べる実験は、標識されたＳ１Ｐ１欠損Ｔ細胞の野生型マウス中への養子移入を含む。これらの細胞は、二次リンパ様器官からの放出が減少していた（Ｍａｔｌｏｕｂｉａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  Ｎａｔｕｒｅ  ４２７：３５５）。
【０００５】
Ｓ１Ｐ１は、内皮細胞接合調節における役割にも起因する（Ａｌｌｅｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ  ２００３  １０２：３６６５，  Ｂｌｏｏｄ  Ｓｉｎｇｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ    ２００５  ＦＡＳＥＢ  Ｊ  １９：１６４６）。この内皮作用に関して、Ｓ１Ｐ１アゴニストは単離されたリンパ節に対して影響を及ぼし、免疫不全の調節における役割に関与し得ることが報告されている。Ｓ１Ｐ１アゴニストは、リンパ節を排液させたり、リンパ球の放出を防止したりするリンパ洞の内皮ストロマ「ゲート」を閉じさせた（Ｗｅｉ  ｗｔ  ａｌ  ２００５，  Ｎａｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：１２２８）。
【０００６】
免疫抑制化合物ＦＴＹ７２０（ＪＰ１１０８００２６−Ａ）は、動物及び人間において循環性リンパ球を減少させ、免疫不全の動物モデルにおいて疾患調節活性を有し、そして再発寛解型多発性硬化症の寛解率を低下させることが証明されている（Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００２  ＪＢＣ  ２７７：２１４５３，  Ｍａｎｄａｌａ  ｅｔ  ａｌ  ２００２  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：３４６，  Ｆｕｊｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ  ２００３  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ３０５：４５６５８，  Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ４：１０１９，  Ｗｅｂｂ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５３：１０８，  Ｍｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ  ２００５  ＥｕｒＪ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３５：３５７０，  Ｃｈｉｂａ  ２００５  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １０８：３０８，  Ｋａｈａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００３，  移植  ７６：１０７９，  Ｋａｐｐｏｓ  ｅｔ  ａｌ  ２００６  Ｎｅｗ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３３５：１１２４）。この化合物は、スフィンゴシンキナーゼによってインビボでリン酸化されて、Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４及びＳ１Ｐ５受容体でアゴニスト活性を有する分子を得る、プロドラッグである。臨床試験は、ＦＴＹ７２０での治療の結果、治療の最初の２４時間で徐脈が起こることを示している（Ｋａｐｐｏｓ  ｅｔ  ａｌ  ２００６  Ｎｅｗ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３３５：１１２４）。徐脈は、多くの細胞ベース及び動物実験に基づいて、Ｓ１Ｐ３受容体でのアゴニズムによると考えられている。これらは、Ｓ１Ｐ３ノックアウト動物の使用を含み、これらは野生型マウスと異なり、ＦＴＹ７２０投与及びＳ１Ｐ１選択性化合物の使用の後に徐脈を示さない。（Ｈａｌｅ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １４：３５０１，  Ｓａｎｎａ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  ＪＢＣ  ２７９：１３８３９，  Ｋｏｙｒａｋｈ  ｅｔ  ａｌ  ２００５  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５：５２９）。
【０００７】
それ故、徐脈を誘発する傾向が低減されていると予想されるＳ１Ｐ３を上回る選択性を有するＳ１Ｐ１受容体アゴニスト化合物が必要とされている。
【０００８】
以下の特許出願は、Ｓ１Ｐ１アゴニストとしてのオキサジアゾール誘導体を記載している：ＷＯ０３／１０５７７１、ＷＯ０５／０５８８４８、ＷＯ０６／０４７１９５、ＷＯ０６／１００６３３、ＷＯ０６／１１５１８８、ＷＯ０６／１３１３３６、ＷＯ０７／０２４９２２及びＷＯ０７／１１６８６６。
【０００９】
以下の特許出願は、Ｓ１Ｐ受容体アゴニストとしてのテトラヒドロイソキノリニル−オキサジアゾール誘導体を記載している：ＷＯ０６／０６４７５７、ＷＯ０６／００１４６３、ＷＯ０４／１１３３３０。
【００１０】
ＷＯ０８／０６４３７７は、Ｓ１Ｐ１受容体活性を有するベンゾシクロヘプチル類似体を記載している。
【発明の開示】
【００１１】
Ｓ１Ｐ１受容体のアゴニストを提供する、構造的に新規な化合物のクラスが見いだされた。
【００１２】
本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
2012530081.tif 000003
（式中、Ｘは、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ１は、ＯＲ３、ＮＨＲ４、Ｒ５、ＮＲ６Ｒ７、Ｒ８又はフッ素化されていてもよいＣ（３−６）シクロアルキルであり；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ（１−２）アルコキシ、及びハロゲンで置換されていてもよいＣ（１−３）アルキルであり；
Ｒ３及びＲ４は、Ｏが挿入されていてもよく、かつ、Ｆで置換されていてもよいＣ（１−５）アルキル、又はＦで置換されていてもよい（ＣＨ２）（０−１）Ｃ（３−５）シクロアルキルであり；
Ｒ５は、Ｆで置換されていてもよいＣ（１−６）アルキルであり；
Ｒ６及びＲ７は、Ｏが挿入されていてもよく（optionally interrupted by O）、かつ、Ｆで置換されていてもよいＣ（１−５）アルキル、及びフッ素化されていてもよいＣ（３−５）シクロアルキルから独立して選択され（ただし、Ｒ６及びＲ７中の炭素原子の総数は６を超えない）；
Ｒ８は、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル及びモルホリニルから選択される、Ｆで置換されていてもよい３〜６員窒素含有ヘテロシクリル環（すべて窒素原子を介して結合する）であり；
Ａは、以下のものから選択される５員複素環であり：
【化２】
2012530081.tif 000004
Ｂは、以下のものから選択される二環式環であり：
【化３】
2012530081.tif 000005
Ｒ９は、水素又は（ＣＨ２）１−４ＣＯ２Ｈであり；
Ｒ１０は、水素、またはハロゲンで置換されていてもよいＣ（１−３）アルキルであり；そして
ｎは、０、１又は２である）の化合物又はその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１３】
一実施形態では、ＸはＮである。別の実施形態では、ＸはＣＨである。
【００１４】
一実施形態では、Ｒ１はＯＲ３又はＲ５である。
【００１５】
一実施形態では、Ｒ３はイソプロピルである。
【００１６】
一実施形態では、Ｒ５はブチルである。
【００１７】
一実施形態では、Ｒ２はクロロ又はシアノである。
【００１８】
一実施形態では、Ａは（ａ）である。別の実施形態では、Ａは（ｂ）である。
【００１９】
さらなる実施形態では、Ａは（ｃ）である。
【００２０】
一実施形態では、Ｂは（ｅ）、（ｄ）又は（ｈ）である。別の実施形態では、Ｂは（ｅ）である。
【００２１】
一実施形態では、Ｒ９は水素又は（ＣＨ２）２−３ＣＯ２Ｈである。
【００２２】
一実施形態では、Ｒ１０は水素、メチル又はエチルである。
【００２３】
一実施形態では、ｎは０又は１である。
【００２４】
一実施形態では、
ＸはＮ又はＣＨであり；
Ｒ１はＯＲ３又はＲ５であり；
Ｒ３はイソプロピルであり；
Ｒ５はブチルであり；
Ｒ２はクロロ又はシアノであり；
Ａは（ａ）又は（ｂ）であり；
Ｂは（ｅ）、（ｄ）又は（ｈ）であり；
Ｒ９は水素又は（ＣＨ２）２−３ＣＯ２Ｈであり；
Ｒ１０は、水素、メチル又はエチルであり；そして
ｎは０又は１である。
【００２５】
一実施形態では、
ＸはＮ又はＣＨであり；
Ｒ１はＯＲ３であり；
Ｒ３がイソプロピルであり；
Ｒ２はクロロ又はシアノであり；
Ａは（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）であり；
Ｂは（ｅ）、（ｄ）又は（ｈ）であり；
Ｒ９  は水素又は（ＣＨ２）２−３ＣＯ２Ｈであり；
Ｒ１０は水素又はメチルであり；そして
ｎは０又は１である。
【００２６】
一実施形態では、
ＸはＮ又はＣＨであり；
Ｒ１はＯＲ３であり；
Ｒ３はイソプロピルであり；
Ｒ２はシアノであり；
Ａは（ａ）であり；
Ｂは（ｅ）又は（ｈ）であり；
Ｒ９は水素又は（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈであり；
Ｒ１０は水素又はメチルであり；そして
ｎは１である。
【００２７】
「アルキル」という用語は、１つの基として又はたとえばアルコキシ若しくはヒドロキシアルキルなどの基の一部として、あらゆる異性体形態における直線状又は分枝アルキル基を指す。「Ｃ（１−６）アルキル」という用語は、少なくとも１個で最高６個までの炭素原子を含む、前記定義のアルキル基を指す。そのようなアルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、又はｔｅｒｔ−ブチルが挙げられる。そのようなアルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｉｓｏ−プロポキシ、ブトキシ、ｉｓｏ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ及びｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。
【００２８】
好適なＣ（３−６）シクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられる。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、「ハロゲン」という用語は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）、又はヨウ素（Ｉ）を指し、「ハロ」という用語は、ハロゲン：フルオロ（−Ｆ）、クロロ（−Ｃｌ）、ブロモ（−Ｂｒ）及びヨード（−Ｉ）を指す。
【００３０】
「置換された」という用語は、置換された原子及び置換基の許容される価数と置換が合致し、置換の結果、安定な化合物（すなわち、転位、環化、又は脱離によるなど、自発的に変化しないもの）が得られるという暗黙の仮定を包含する。ある実施形態では、そのような置換が原子の許容される価数と合致する限り、１個の原子が２以上の置換基で置換されていてもよい。ある実施形態では、Ｆ又はＯＨで置換されていてもよいアルキル基は複数の炭素原子で複数回置換されていてもよい。
【００３１】
ある式（Ｉ）の化合物では、置換基の性質に応じて、キラル炭素原子が存在し、したがって式（Ｉ）の化合物は立体異性体として存在してもよい。本発明は、エナンチオマー、ジアステレオマー及びそれらの混合物、例えばラセミ体をはじめとする式（Ｉ）の化合物の立体異性体形態などのあらゆる光学異性体に及ぶ。異なる立体異性体形態は、通常の方法によって互いに分離若しくは分割することができるか、又は任意の所定の異性体は、通常の立体選択的若しくは不斉合成によって得ることができる。
【００３２】
本発明のいくつかの化合物は、様々な互変異性型で存在することができ、本発明は全てのそのような互変異性型を包含すると理解されるべきである。
【００３３】
本発明のある化合物は酸性基及び塩基性基の両方を含み、したがってあるｐＨ値で双性イオンとして存在することができると理解される。
【００３４】
好適な本発明の化合物は：
７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン；
７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン；
４−［７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸；
４−［７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸；
７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン；
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン−７−イル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリルトリフルオロ酢酸；
４−［７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸塩酸塩；
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル；
３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸；
４−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸；
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル；
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル；
５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドールトリフルオロ酢酸；
３−［５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］プロパン酸；
３−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸；
４−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸；
３−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸；
４−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸；
３−［６−｛５−［３−シアノ−４−（２−メチルプロピル）フェニル］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル｝−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸；
４−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸；
又はそれらの医薬的に許容される塩である。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される誘導体には、受容者に投与されると、（直接的若しくは間接的に）式（Ｉ）の化合物又はその活性代謝物若しくは残基を提供することができる任意の式（Ｉ）の化合物の任意の医薬的に許容される塩、エステル又はそのようなエステルの塩が含まれる。
【００３６】
式（Ｉ）の化合物は塩を形成することができる。医薬における使用に関して、式（Ｉ）の化合物の塩は医薬的に許容されなければならないことは言うまでもない。好適な医薬的に許容される塩は当業者には明らかであり、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．，  １９７７，  ６６，  １−１９に記載されているもの、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸又はリン酸などの無機酸；及びコハク酸、マレイン酸、酢酸、フマル酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸又はナフタレンスルホン酸などの有機酸と形成される酸付加塩などを包含する。いくつかの式（Ｉ）の化合物は、１当量以上の酸と酸付加塩を形成することができる。本発明は、その範囲内にあらゆる可能な化学量論的形態及び非化学量論的形態を包含する。塩は、無機塩基及び有機塩基をはじめとする医薬的に許容される塩基から調製することもできる。無機塩基由来の塩としては、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第２鉄、第１鉄、リチウム、マグネシウム、第２マンガン塩、第１マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛などが挙げられる。医薬的に許容される有機塩基由来の塩としては、第１、第２、及び第３アミン；天然に存在する置換アミンを包含する置換アミン；及び環状アミンの塩が挙げられる。特定の医薬的に許容される有機塩基としては、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチル−モルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ、トロメタモール）などが挙げられる。塩は、塩基性イオン交換樹脂、例えばポリアミン樹脂から形成することもできる。本発明の化合物が塩基性である場合、塩は、無機及び有機酸を包含する医薬的に許容される酸から調製することができる。そのような酸としては、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。
【００３７】
医薬的に許容される酸付加塩は、通常どおり、適切な酸又は酸誘導体との反応により調製することができる。塩基との医薬的に許容される塩は、通常どおり、適切な無機又は有機塩基との反応によって調製することができる。
【００３８】
式（Ｉ）の化合物は、結晶又は非結晶形態で調製することができ、結晶性である場合は、水和又は溶媒和されていてもよい。本発明は、その範囲内に化学量論的水和物または溶媒和物ならびに様々な量の水及び／又は溶媒を含む化合物を包含する。
【００３９】
本発明の範囲内に含まれるのは、式（Ｉ）の化合物の全ての塩、溶媒和物、水和物、複合体、多形体、プロドラッグ、放射性標識誘導体、立体異性体及び光学異性体である。
【００４０】
Ｓ１Ｐ１受容体についての本発明の化合物の効力及び有効性は、本明細書中に記載する様なヒトクローン化受容体に関して実施されるＧＴＰγＳアッセイによって決定することができる。式（Ｉ）の化合物は、本明細書中に記載する機能的アッセイを用いて、Ｓ１Ｐ１受容体でアゴニスト活性を示した。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩はしたがってＳ１Ｐ１受容体により媒介される病態または障害の治療において有用である。特に、式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩は、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、虚血再灌流障害、固形腫瘍及び腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛状態、急性ウイルス性疾患、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病及びインシュリン非依存性糖尿病の治療において有用である。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩はしたがって紅斑性狼瘡の治療において有用である。
【００４３】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩はしたがって乾癬の治療において有用である。
【００４４】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩はしたがって多発性硬化症の治療において有用である。
【００４５】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩はまた、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄筋萎縮症、ポリグルタミン伸長障害、血管性認知症、ダウン症候群、ＨＩＶ認知症、認知症、緑内障を含む眼性疾患、加齢黄斑変性、白内障、外傷性眼損傷、糖尿病性網膜症、外傷性脳損傷、脳卒中、タウオパシー及び難聴の治療においても有用であり得る。
【００４６】
本明細書中で用いられる「治療」とは、確立された症状の予防並びに緩和を包含すると理解されるべきである。
【００４７】
したがって、本発明は、治療物質として、特に、Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される病態又は障害の治療において用いられる式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容される塩も提供する。特に、本発明は、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、虚血再灌流障害、固形腫瘍及び腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛状態、急性ウイルス性疾患、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病及びインシュリン非依存性糖尿病の治療において治療物質として用いられる式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容される塩も提供する。
【００４８】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩は、紅斑性狼瘡の治療において治療物質として有用である。
【００４９】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩は、乾癬の治療において治療物質として有用である。
【００５０】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩は、多発性硬化症の治療において治療物質として有用である。
【００５１】
本発明は、Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される可能性があるヒトをはじめとする哺乳動物における病態又は障害の治療法であって、患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩を投与することを含む方法を更に提供する。特に、本発明は、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、虚血再灌流障害、固形腫瘍及び腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛状態、急性ウイルス性疾患、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病及びインシュリン非依存性糖尿病の治療法であって、患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００５２】
本発明は、紅斑性狼瘡の治療法であって、患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００５３】
本発明は、乾癬の治療法であって、患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００５４】
本発明は、多発性硬化症の治療法であって、患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００５５】
別の態様では、本発明は、Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される病態または障害の治療において用いられる薬剤の製造における式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩の使用を提供する。
【００５６】
特に、本発明は、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、虚血再灌流障害、固形腫瘍及び腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛状態、急性ウイルス性疾患、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病及びインシュリン非依存性糖尿病の治療において用いられる薬の製造において用いられる式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩を提供する。
【００５７】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩は、紅斑性狼瘡の治療において用いられる薬剤の製造において有用である。
【００５８】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩は、乾癬の治療において用いられる薬剤の製造において有用である。
【００５９】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの医薬的に許容される塩は、多発性硬化症の治療において用いられる薬剤の製造において有用である。
【００６０】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの医薬的に許容される塩を療法において使用するために、それらは通常、標準的な薬務にしたがって医薬組成物に処方されるであろう。本発明はまた、式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩、及び医薬的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物も提供する。
【００６１】
さらなる態様では、本発明は、医薬組成物を調製するためのプロセスを提供し、このプロセスは、式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩及び医薬的に許容される担体又は賦形剤を混合することを含む。
【００６２】
好適には周囲温度及び大気圧で混合することにより調製することができる本発明の医薬組成物は、通常、経口、非経口又は直腸投与に適応され、よって、錠剤、カプセル、経口液体製剤、粉末、顆粒、ロゼンジ、再構成可能な粉末、注射可能若しくは注入可能な溶液若しくは懸濁液又は坐剤の形態であってよい。経口投与可能な組成物が一般的に好ましい。
【００６３】
経口投与用錠剤及びカプセルは、単位投与形態であってもよく、通常の賦形剤、例えば結合剤（例えばアルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；フィラー（例えば、ラクトース、微結晶性セルロース又はリン酸水素カルシウム）；錠剤成形用潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）；及び許容可能な湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）を含んでもよい。錠剤は、通常の薬務で周知の方法に従ってコーティングしてもよい。
【００６４】
経口液体製剤は、例えば、水性若しくは油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ又はエリキシルの形態であってもよいし、或いは、水又は他の好適なビヒクルで使用前に再構成される乾燥製品の形態であってもよい。そのような液体製剤は、通常の添加剤、例えば懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は水素化食用脂）、乳化剤（例えば、レシチン又はアカシア）、非水性ビヒクル（食用油、例えばアーモンド油、油性エステル、エチルアルコール又は分別植物油を包含し得る）、防腐剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル若しくはプロピル又はソルビン酸）、及び所望により、通常の香味料又は着色剤、緩衝塩及び甘味料を必要に応じて含んでもよい。経口投与用製剤は、活性化合物の制御放出をもたらすために好適に処方することができる。
【００６５】
非経口投与に関して、流体単位投与形態は、本発明の化合物又はその医薬的に許容される塩及び無菌ビヒクルを用いて調製される。注射用処方は、本発明の化合物又はその医薬的に許容される誘導体及び無菌ビヒクルを利用し、防腐剤を添加してもよく、例えばアンプル中で単位投与形態において、又は複数回投与量で提供することができる。組成物は、油性若しくは水性ビヒクル中懸濁液、溶液又はエマルジョンなどの形態をとってもよく、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤などの処方剤を含んでもよい。或いは、活性成分は、使用前に好適なビヒクル、例えば無菌パイロジェンフリー（ｐｙｒｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ）水で構成される粉末形態であってよい。化合物は、使用されるビヒクル及び濃度に応じて、ビヒクル中に懸濁することができるか、又は溶解することができるかのいずれかである。溶液を調製する際に、化合物を注射用に溶解させることができ、好適なバイアル又はアンプル中に充填し、密封する前にろ過滅菌することができる。有利には、局部麻酔薬、防腐剤及び緩衝剤などのアジュバントをビヒクル中に溶解させる。安定性を増すために、バイアル中に充填し、水を真空下で除去した後に、組成物を凍結することができる。非経口懸濁液は、化合物を溶解させる代わりにビヒクル中に懸濁させ、滅菌をろ過によって行うことができない以外は、実質的に同じ方法で調製される。化合物は、無菌ビヒクル中に懸濁させる前にエチレンオキシドに暴露することよって滅菌することができる。有利には、界面活性剤又は湿潤剤を組成物中に含めて、化合物の均一な分配を促進する。
【００６６】
ローションは、水性又は油性基剤を用いて処方することができ、１以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、又は着色剤も含むであろう。滴剤は、１以上の分散剤、安定剤、可溶化剤又は懸濁剤も含む水性又は非水性基剤を配合することができる。それらは防腐剤を含んでもよい。
【００６７】
式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容される塩は、例えば、カカオバター又は他のグリセリド等の通常の坐剤基剤を含む、坐剤又は停留浣腸などの直腸組成物に処方することもできる。
【００６８】
式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容される塩は、デポ製剤として処方することもできる。そのような長時間作用性処方は、移植（例えば、皮下若しくは筋肉内）によるか、又は筋肉内注射によって投与することができる。したがって、例えば、本発明の化合物は、好適なポリマー若しくは疎水性材料（例えば許容される油中エマルジョンとして）又はイオン交換樹脂を配合してもよいし、或いはやや難溶性の誘導体として、例えばやや難溶性の塩として処方してもよい。
【００６９】
鼻内投与に関して、式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容される塩は、好適な定量若しくは単位投与装置による投与用溶液として、或いは好適な送達装置を用いた投与に適した担体を含む粉末ミックスとして、処方することができる。したがって、式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容される塩は、経口、頬側、非経口、局所（眼及び鼻を包含する）、デポ若しくは直腸投与用、又は吸入若しくは吹送（口若しくは鼻のいずれかを通して）による投与に適した形態で処方することができる。
【００７０】
式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容される塩は、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、ペッサリー、エアゾル又は滴剤（例えば、点眼剤、点耳剤、若しくは点鼻剤）の形態で局所投与用に処方することができる。軟膏及びクリームは、例えば水性又は油性を用い、好適な増粘剤及び／又はゲル化剤を添加して処方することができる。眼投与用軟膏は、滅菌された成分を用いて無菌的に製造することができる。
【００７１】
組成物は、投与方法に応じて、０．１重量％〜９９重量％、好ましくは１０〜６０重量％の活性材料を含むことができる。前記障害の治療において用いられる化合物の用量は、障害の重症度、患者の体重、及び他の同様の因子によって通常どおりに変化するであろう。しかし、一般的指針として、好適な用量は、０．０５〜１０００ｍｇ、１．０〜５００ｍｇ又は１．０〜２００ｍｇであってよく、そのような単位用量を、１日２回以上、例えば１日２回又は３回投与することができる。
【００７２】
式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容される塩を、他の活性成分と組み合わせた配合剤で用いることができる。例えば、本発明の化合物を、シクロスポリンＡ、メトトレキサート、ステロイド、ラパマイシン、炎症誘発性サイトカイン阻害剤、生物学的製剤若しくは他の治療活性化合物を含む免疫調節薬と組み合わせて用いることができる。
【００７３】
本発明は、１以上の原子が自然界で通常見出される原子質量又は質量数と異なる原子質量又は質量数を有する原子で置換されている以外は、式Ｉ及び以下で記載するものと同じである、同位体標識化合物も包含する。本発明の化合物中に組み入れることができる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、ヨウ素、及び塩素の同位体、例えば３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１８Ｆ、１２３Ｉ及び１２５Ｉが挙げられる。
【００７４】
前記同位体及び／又は他の原子の他の同位体を含む本発明の化合物及び前記化合物の医薬的に許容される塩は本発明の範囲内に含まれる。本発明の同位体標識化合物、例えば３Ｈ、１４Ｃなどの放射性同位体が組み入れられるものは、薬剤及び／又は基質組織分布アッセイで有用である。トリチウム化、すなわち３Ｈ、及び炭素１４、すなわち１４Ｃ同位体は、それらの調製の簡便性及び検出可能性のために特に好適である。１１Ｃ及び８Ｆ同位体はＰＥＴ（ポジトロン放出断層撮影）で特に有用であり、１２５Ｉ同位体はＳＰＥＣＴ（単光子放射型コンピューター断層撮影法）で特に有用である（すべて脳画像化において有用である）。さらに、重水素、すなわち２Ｈなどのより重い同位体での置換によって、より高い代謝安定性、例えばインビボ半減期の増加又は必要投与量の低減のためにある治療的利点が得られ、それ故、状況によっては好ましい可能性がある。同位体で標識された式（Ｉ）の化合物及び本発明の以下のものは、一般的に、容易に入手可能な同位体標識試薬を非同位体標識試薬と置換することにより、下記スキーム及び／又は実施例で開示される手順を実施することによって調製することができる。
【００７５】
さらなる態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物を調製するためのプロセスを提供する。
【００７６】
本明細書中で引用される特許及び特許出願を包含するが、これらに限定されない全ての刊行物は、個々の刊行物が十分に開示されているかのごとく具体的かつ個別に本明細書中に参照することによって組み入れられるように表示されているかのごとく本明細書中に組み入れられる。
【実施例】
【００７７】
以下の説明および実施例は、本発明の化合物の調製を例示する。
【００７８】
略語：
ｇ              グラム
ｍｇ            ミリグラム
ｍｌ            ミリリットル
ｕｌ            マイクロリットル
ＢＯＣ２Ｏ      ビス（１，１−ジメチルエチル）ジカーボネート
ＭｅＣＮ        アセトニトリル
ＭｅＯＨ        メタノール
ＥｔＯＨ        エタノール
Ｅｔ２Ｏ        ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ      酢酸エチル
ＤＣＭ          ジクロロメタン
ＤＩＡＤ        アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＰＥＡ      ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＥ          １，２−ビス（メチルオキシ）エタン
ＤＭＦ          Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ        ジメチルスルホキシド
ｄ６ＤＭＳＯ    重水素化ジメチルスルホキシド
ＥＤＡＣ        Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＤＣ          Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＤＣｌ        Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＨＯＢＴ／ＨＯＢｔ    ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＩＰＡ          イソプロピルアルコール
ＭｅＯＤ        重水素化メタノール
ＮＣＳ          Ｎ−クロロスクシンイミド
ＰＰｈ３        トリフェニルホスフィン
ＰｙＢＯＰ      ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＴＨＦ          テトラヒドロフラン
ＴＦＡ          トリフルオロ酢酸
ｄｂａ          ジベンジリデンアセトン
ＲＴ            室温
℃              セ氏温度
Ｍ              モル濃度
Ｈ              プロトン
ｓ              一重項
ｄ              二重項
ｔ              三重項
ｑ              四重項
ＭＨｚ          メガヘルツ
ＭｅＯＤ        重水素化メタノール
ＬＣＭＳ        液体クロマトグラフィー質量分析法
ＬＣ／ＭＳ      液体クロマトグラフィー質量分析法
ＭＳ            質量分析法
ＥＳ            エレクトロスプレー
ＭＨ＋          質量イオン＋Ｈ＋
ＭＤＡＰ        質量分離自動化分収液体クロマトグラフィー．
ｓａｔ．        飽和
ＳＣＸ          固相カチオン交換クロマトグラフィー
【００７９】
一般化学
以下で記載する方法は例示目的で記載され、実施例の調製における中間体は、必ずしも記載された特定のバッチから調製したものでなくてもよい。
【００８０】
調製１
２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾ−ル
【化４】
2012530081.tif 000006
【００８１】
フラスコに、２−ブロモチアゾ−ル（ＣＡＳ番号３０３４−５３−５、Ａｌｄｒｉｃｈから市販、４９２ｍｇ、３．００ミリモル）、｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝ボロン酸（ＣＡＳ番号４８０４３８−５６−０、Ａｌｄｒｉｃｈから市販、７７２ｍｇ、３．６０ミリモル）、２ＭのＮａ２ＣＯ３水溶液（３．００ｍｌ、６．００ミリモル）及びＰｈ３Ｐ（７９ｍｇ、０．３００ミリモル）を入れ、次いでＥｔＯＨ（１ｍｌ）及びトルエン（７ｍｌ）で満たした。結果として得られた混合物を真空下（約１５ミリバール）で数回脱気し、次いで窒素でフラッシュした。酢酸パラジウム（ＩＩ）（２０．２０ｍｇ、０．０９０ミリモル）を次に添加し、脱気操作を繰り返した。結果として得られた混合物を、窒素下、１００℃で５時間、室温で１６時間撹拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ及び水間で分配し、そして層を分離した。有機相を水及び生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から１０％の勾配）により精製して、２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾ−ル（４５４ｍｇ、５９％）を黄色油状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．３２分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５４．１
【００８２】
調製２
５−ブロモ−２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾ−ル
【化５】
2012530081.tif 000007
【００８３】
室温でＣＨＣｌ３（５ｍｌ）中２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾ−ル（調製１）（４４６ｍｇ、１．７５８ミリモル）を臭素（０．１００ｍｌ、１．９３３ミリモル）のＣＨＣｌ３（２ｍｌ）中溶液で処理した。２０分後、さらなる量の臭素，（４５μｌ、０．８７９ミリモル）を添加し、結果として得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。さらなる量の臭素，（４５μｌ、０．８７９ミリモル）を添加し、結果として得られた混合物を２時間攪拌し、次いで真空中で濃縮した。形成されたオレンジ色残留物をＥｔ２Ｏで摩砕し、形成された沈殿をろ過し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、次いでシリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から１０％）により精製して、５−ブロモ−２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾ−ル（４３８ｍｇ、７４％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．５５分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３４．０（１Ｂｒ）
【００８４】
調製３
７−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化６】
2012530081.tif 000008
【００８５】
７−｛［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（ＷＯ２００２０４０４７１に記載されているようにして調製することができる、２２ｇ、５５．７ミリモル）及び４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ−１，３，２−ジオキサボロラン（１５．５５ｇ、６１．２５ミリモル）を１，４−ジオキサン（２５０ｍｌ）中に溶解し、混合物を１５分間真空下（約１５ミリバール）で脱気し、次いで窒素でクエンチした。１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（２．９２ｇ、３．３４ミリモル）及び１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（１．８５ｇ、３．３４ミリモル）を添加し、結果として得られた混合物を窒素下で１０分間攪拌した後、酢酸カリウム（１６．３９ｇ、１６７．０ミリモル）を添加した。結果として得られた混合物を８０℃で３時間攪拌し、次いで室温まで冷却し、ＡｃＯＥｔ、水、及び生理食塩水で希釈した。２層を分離し、有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：１０％）により精製して、７−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（４．５ｇ、２２％）を白色固体として得た。
【００８６】
調製４
７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化７】
2012530081.tif 000009
【００８７】
７−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製３）（５３２ｍｇ、１．４２５ミリモル）及び５−ブロモ−２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾ−ル（調製２）（３９５ｍｇ、１．１８７ミリモル）の１，４−ジオキサン（７ｍｌ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３ｍｌ）中混合物を、室温にて、真空下（約１５ミリバール）で脱気し、窒素で数回フラッシュした。１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（８７ｍｇ、０．１１９ミリモル）を次に添加し、系を窒素で再度フラッシュした。反応混合物を９０℃で２時間攪拌し、次いで室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ及び水間で分配し、そして層を分離した。有機相を水、次いで生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から２０％）により残留物を精製して、７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（４６３ｍｇ、６９％）を黄色ガム状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．７１分。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９９．３
【００８８】
調製５
７−（１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化８】
2012530081.tif 000010
【００８９】
フラスコに、２−ブロモチアゾ−ル（ＣＡＳ番号３０３４−５３−５、Ａｌｄｒｉｃｈから市販、４９２ｍｇ、３．００ミリモル）、７−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製３）（１１２０ｍｇ、３．００ミリモル）及びＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（１７３ｍｇ、０．１５０ミリモル）を入れ、次いで２ＭのＮａ２ＣＯ３水溶液（４ｍｌ、８．００ミリモル）及びＤＭＥ（６ｍｌ）で満たした。結果として得られた混合物を、１２０℃で１時間、マイクロ波照射下で撹拌した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１７３ｍｇ、０．１５０ミリモル）を次いで添加し、結果として得られた混合物を１２０℃でさらに３時間、マイクロ波照射したで撹拌し、次いで室温まで冷却した。混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、２層を分離した。有機相を２ＭのＮａ２ＣＯ３水溶液、次いで生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から１０％の勾配）により残留物を精製して、７−（１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（３６８ｍｇ、３７％）を淡黄色ガム状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．２９分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３１．２０
【００９０】
調製６
７−（５−ブロモ−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化９】
2012530081.tif 000011
【００９１】
室温の７−（１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製５）（３５９ｍｇ、１．０８６ミリモル）のＣＨ３ＣＮ（５ｍｌ）中溶液をＮＢＳ（２１３ｍｇ、１．１９５ミリモル）で処理し、結果として得られた混合物をこの温度で６０時間撹拌し、次いで少量のタールからデカントし、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から２０％の勾配）により残留物を精製して、７−（５−ブロモ−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（３０７ｍｇ、６９％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．５１分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１１．０９（１Ｂｒ）
【００９２】
調製７
７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化１０】
2012530081.tif 000012
【００９３】
フラスコに、７−（５−ブロモ−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製６）（３０１ｍｇ、０．７３５ミリモル）、｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝ボロン酸（ＣＡＳ番号：４８０４３８−５６−０、Ａｌｄｒｉｃｈから市販、１８９ｍｇ、０．８８２ミリモル）を入れ、次いで１，４−ジオキサン（５ｍｌ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍｌ、０．７３５ミリモル）で満たし、次いで真空下（約１５ミリバール）で脱気し、窒素で数回フラッシュした。１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（５３．８ｍｇ、０．０７４ミリモル）を次に添加し、脱気の手順を繰り返した。反応混合物を次いで窒素下、９０℃で１時間攪拌し、次いで室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ及び水間で分配し、そして層を分離した。有機相を水及び生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から２０％の勾配）により残留物を精製して、７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（２９３ｍｇ、８０％）を無色結晶性固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．６８分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９９．２０
【００９４】
調製８
４−［７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸エチル
【化１１】
2012530081.tif 000013
【００９５】
７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン塩酸塩（実施例１）（２５６ｍｇ、０．６４２ミリモル）、４−ブロモ酪酸エチル（０．１１０ｍｌ、０．７７０ミリモル）及びＫ２ＣＯ３（３５５ｍｇ、２．５７ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（４ｍｌ）中混合物を窒素下、１０℃で３時間加熱し、次いで室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ及び水間で分配し、そして層を分離した。有機相を水及び生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から１００％の勾配）により残留物を精製して、４−［７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸エチル（２６８ｍｇ、８０％）を黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．１５分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５１３．３
【００９６】
調製９
４−［７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸エチル
【化１２】
2012530081.tif 000014
【００９７】
フラスコに、７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン塩酸塩（実施例２）（２０７ｍｇ、０．５１９ミリモル）、４−ブロモブタン酸エチル（０．０８９ｍｌ、０．６２３ミリモル）及びＫ２ＣＯ３（２８７ｍｇ、２．０７５ミリモル）を入れ、次いでＤＭＦ（３ｍｌ）で満たし、結果として得られた混合物を窒素下、１００℃で１時間攪拌し、次いで室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ及び水間で分配し、そして層を分離した。有機相を水、次いで生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から１００％の勾配）により残留物を精製して、４−［７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸エチル（２１５ｍｇ、８０％）を黄色ガム状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．２４分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５１３．２７
【００９８】
調製１０
５−（５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル
【化１３】
2012530081.tif 000015
【００９９】
フラスコに、３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］安息香酸（ＣＡＳ番号：２５８２７３−３１−３、Ｂｏａｏｐｈａｒｍａから市販、２０．９ｇ、１０２ミリモル）及びヒドラジンカルボチオアミド（ＣＡＳ番号：７９−１９−６、Ａｌｄｒｉｃｈから市販、１３．９ｇ、１５３ミリモル）を入れ、次いでオキシ塩化リン（ＣＡＳ番号：１００２５−８７−３、Ａｌｄｒｉｃｈから市販、９０ｇ、５８７ミリモル）を添加した。結果として得られた混合物を９０℃で３時間撹拌し、次いで室温まで冷却し、氷浴で冷却して温度が３５℃より決して高くならないようにした５ＭのＮａＯＨ水溶液に少量ずつきわめて慎重に添加した。結果として得られた混合物を塩基性化（５ＭのＮａＯＨ水溶液を使用）してｐＨ１０にし、次いで３０分間撹拌した。形成された沈殿をろ過により集め、ＤＣＭ（１ｌ）及びＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中に溶解させた。有機相を水（５００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮して、５−（５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル（２６．３ｇ、９９％収率）を淡黄色固体として得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。
ＬＣＭＳ：保持時間０．８６分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６１．１３
【０１００】
調製１１
５−（５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル
【化１４】
2012530081.tif 000016
【０１０１】
臭化第２銅（１９．６３ｇ、８８ミリモル）及び亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０．４４ｍｌ、８８ミリモル）をＣＨ３ＣＮ（４００ｍｌ）中に溶解させ、結果として得られた混合物を室温で１０分間撹拌した。５−（５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル（調製１０）（１３ｇ、４０．０ミリモル）を次いで少量ずつ３０分にわたって添加した。結果として得られた混合物を室温で１時間、７０℃で２時間攪拌し、次いで室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ（６００ｍｌ）及びＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中に溶解させ、還流状態で１時間攪拌した。不溶物質を、シリカパッドを通してろ過し、ＡｃＯＥｔ（２×２００ｍｌ）でリンスした。合した有機相を１ＭのＨＣｌ水溶液（３００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から１００％の勾配）により残留物を精製して、５−（５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル（８．８ｇ、６７．９％収率）を淡黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．１３分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２５．７（１Ｂｒ）
【０１０２】
調製１２
５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン
【化１５】
2012530081.tif 000017
【０１０３】
フラスコに、３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］安息香酸（ＣＡＳ番号：２１３５９８−０７−３、Ｂｏａｏｐｈａｒｍａから市販、２５ｇ、１１６ミリモル）及びヒドラジンカルボチオアミド（ＣＡＳ番号：７９−１９−６、Ａｌｄｒｉｃｈから市販、１５．９２ｇ、１７５ミリモル）を入れた。オキシ塩化リン（ＣＡＳ番号：１００２５−８７−３、Ａｌｄｒｉｃｈから市販、５０ｍｌ、５５６ミリモル）を次いで注意深く添加し、結果として得られた混合物を２０分間室温で、９０℃で１８時間撹拌し、次いで室温まで冷却した。混合物を激しく撹拌した氷と水との撹拌混合物（１ｌ）に非常に注意深く滴加した。結果として得られた混合物を１０ＭのＮａＯＨ水溶液で塩基性化（ｐＨ１２）し、氷／水浴中で冷却しながら３０分間撹拌した。残存する油状スラッジをろ過により集め、次いでＤＣＭ（１ｌ）中に溶解させた。有機相を生理食塩水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮して、５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン（９．８ｇ、３１．２％収率）を褐色固体として得、これをさらに精製することなく次のステップ（調製１３）で使用した。
ＬＣＭＳ：保持時間１．０２分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２７０．０５
【０１０４】
調製１３
２−ブロモ−５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール
【化１６】
2012530081.tif 000018
【０１０５】
フラスコに、臭化第２銅（１５．７３ｇ、７０．４ミリモル）及び亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（７．２６ｇ、７０．４ミリモル）を入れ、次いでＣＨ３ＣＮ（３００ｍｌ）で満たした。結果として得られた混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで少量に分けた５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン（調製１２）（９．５ｇ、３５．２ミリモル）のスラリーで１時間にわたって処理した。結果として得られた混合物を室温で１時間、次いで６０℃で１時間攪拌し、次いで室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ（４００ｍｌ）中に溶解させ、水（５０ｍｌ）を添加して、濃厚な懸濁液を得、これを、セライトを通してろ過した。濾液を水（４００ｍｌ）及び生理食塩水（３００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から３０％の勾配）により精製して、２−ブロモ−５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール（４．４ｇ、３７％）を黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．３３分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３５．０２（１Ｂｒ）。
【０１０６】
調製１４
７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化１７】
2012530081.tif 000019
【０１０７】
７−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製３）（３７３ｍｇ、０．９９９ミリモル）及び２−ブロモ−５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール（調製１３）（３６７ｍｇ、１．１００ミリモル）の１，４−ジオキサン（３ｍｌ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（０．６ｍｌ、０．９９９ミリモル）中混合物を室温で脱気し、窒素で数回フラッシュした。１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（７３．１ｍｇ、０．１００ミリモル）を次に添加し、系を再度フラッシュした。結果として得られた混合物を１００℃で２０時間撹拌し、次いで室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ及び水間で分配し、そして層を分離した。有機相を水及び生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から２０％の勾配）により残留物を精製して、７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（１００ｍｇ、２０％）をオレンジ色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．６２分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５００．３
【０１０８】
調製１５
７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化１８】
2012530081.tif 000020
【０１０９】
７−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製３）（２０３ｍｇ、０．５４４ミリモル）、５−（５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル（調製１１）（１７６ｍｇ、０．５４４ミリモル）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（６２．８ｍｇ、０．０５４ミリモル）及びリン酸三カリウム（２８９ｍｇ、１．３６０ミリモル）のＤＭＦ（４．５ｍｌ）及び水（０．９００ｍｌ）中混合物を、１２０℃で２０分間、マイクロ波照射下で撹拌し、次いで水（５０ｍｌ）及びＡｃＯＥｔ（５０ｍｌ）間で分配した。２層を分離し、水性相をＡｃＯＥｔで２回抽出した。合した有機相を生理食塩水で洗浄し（２ｘ５０ｍｌ）、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から５０％の勾配）により残留物を精製して、７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（２４６ｍｇ、８８％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．４５分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９１．１９
【０１１０】
調製１６
４−［７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸エチル
【化１９】
2012530081.tif 000021
【０１１１】
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン−７−イル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル塩酸塩（実施例６）（１５８ｍｇ、０．３７０ミリモル）のＤＭＦ（３ｍｌ）中スラリーをＫ２ＣＯ３（２０５ｍｇ、１．４８０ミリモル）で処理し、次いで４−ブロモ酪酸エチル（０．０６４ｍｌ、０．４４４ミリモル）で処理し、結果として得られた混合物を１００℃で９時間撹拌し、次いで室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ及び水間で分配し、２層を分離した。有機相を水、次いで生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から１００％の勾配）により残留物を精製して、４−［７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸エチル（１２６ｍｇ、６８％）を黄色ガム状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間０．９８分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５０５．３
【０１１２】
調製１７
５−メチル−６−オキソ−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２０】
2012530081.tif 000022
【０１１３】
４−オキソ−１−ピペリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（７０ｇ、３５１ミリモル）及びピロリジン（４３．６ｍｌ、５２７ミリモル）をトルエン（３００ｍｌ）中に溶解させ、結果として得られた混合物をディーン・スターク装置下で２４時間還流させ、次いで室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をトルエン（３００ｍｌ）中に溶解させ、ヒドロキノン（０．３９６ｇ）及び１−ペンテン−３−オン（２９．６ｇ、３５１ミリモル）で処理した。結果として得られた溶液を２４時間還流させ、次いで室温まで冷却し、ＡｃＯＥｔ（３００ｍｌ）で溶解させた。有機相を０．５ＮのＨＣｌ水溶液（５００ｍｌ）で洗浄し、そして水性相をＡｃＯＥｔ（３００ｍｌ）で抽出した。合した有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から６０％の勾配）により残留物を精製して、５−メチル−６−オキソ−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（５５．２ｇ、５９．２％収率）を淡黄色油状物として得、これを静置すると結晶化した。
ＬＣＭＳ：保持時間１．０５分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６６．２４
【０１１４】
調製１８
６−ヒドロキシ−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル。
【化２１】
2012530081.tif 000023
【０１１５】
リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＴＨＦ中１Ｍ、２４６ｍｌ、２４６ミリモル）を５−メチル−６−オキソ−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製１７）（５４．４ｇ、２０５ミリモル）のＴＨＦ（２００ｍｌ）中溶液に−６３℃で滴加し、添加中に若干発熱して−６０℃になった。混合物をこの温度で３０分間撹拌し、次いでクロロ（トリメチル）シラン（３１．４ｍｌ、２４６ミリモル）を滴加した。結果として得られた混合物を２時間、−７０℃で攪拌し、次いで２０分にわたって室温まで温め、Ｅｔ２Ｏ（８００ｍｌ）で希釈した。有機相を飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液に添加し、２層を分離した。水性相をＥｔ２Ｏで抽出し、合した有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。残留物をＣＨ３ＣＮ（２００ｍｌ）中に溶解させ、酢酸パラジウム（ＩＩ）（４６．０ｇ、２０５ミリモル）を添加した。結果として得られた混合物をボール１杯の水を用いて冷却して、発熱を３５℃未満におさめ、１６時間攪拌した。不溶物質を、セライトを通してろ過し、ＡｃＯＥｔ（３×３００ｍｌ）でリンスした。合した有機相を次いで、１インチのシリカゲルパッドを通してろ過し、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ（５００ｍｌ）中に溶解させ、テトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＨＦ中１Ｍ、２００ｍｌ、２００ミリモル）で処理した。結果として得られた混合物を３０分間静置した。有機相を次いで０．５ＭのＨＣｌ水溶液（３００ｍｌ）及び１０％ｗ／ｗのチオ硫酸ナトリウム水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から６０％の勾配）により残留物を精製して、６−ヒドロキシ−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（２９．９ｇ、５５．４％収率）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．０８分；［Ｍ−Ｈ］−＝２６２．３７
【０１１６】
調製１９
５−メチル−６−｛［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２２】
2012530081.tif 000024
【０１１７】
室温、窒素下で６−ヒドロキシ−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製１８）（３．１６ｇ、１２ミリモル）のＤＣＭ（５０ｍｌ）中溶液に、ピリジン（１．９４ｍｌ、２４．００ミリモル）を添加し、結果として得られた黄色溶液を−３０℃まで冷却した後、無水トリフルオロメタンスルホン酸（２．２３ｍｌ、１３．２０ミリモル）を滴加した。結果として得られた混合物を４０分間この温度で撹拌し、次いで室温まで温め、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｃ中に溶解させ、有機相を連続して１ＮのＨＣｌ水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び生理食塩水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮して、５−メチル−６−｛［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（４．８５ｇ、１０２％）を赤色油状物として得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。
ＬＣＭＳ：保持時間１．４６分；［Ｍ−Ｈ］−＝３９４．２２
【０１１８】
調製２０
５−メチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２３】
2012530081.tif 000025
【０１１９】
５−メチル−６−｛［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製１９）（０．７９１ｇ、２ミリモル）の１，４−ジオキサン（１０ｍｌ）中溶液を真空下（約１５ミリバール）で１０分間脱気し、次いで窒素でフラッシュした。１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．１４６ｇ、０．２００ミリモル）、酢酸カリウム（０．７８５ｇ、８．００ミリモル）、次いで４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ−１，３，２−ジオキサボロラン（０．６０９ｇ、２．４００ミリモル）を添加し、結果として得られた混合物を５時間還流させ、次いで室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ及び水間で分配し、結果として得られた二相混合物をろ過した後、２相を分離した。水性相をＡｃＯＥｔで抽出し、合した有機相を生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：３から１０％の勾配）により残留物を精製して、５−メチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（６６０ｍｇ、８８％）を無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．５６分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７４．２１
【０１２０】
調製２１
６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２４】
2012530081.tif 000026
【０１２１】
５−メチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製２０）のＤＭＥ（３ｍｌ）中溶液に、５−（５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル（調製１１）（３４４ｍｇ、１．０６１ミリモル）、Ｋ２ＣＯ３（６１１ｍｇ、４．４２ミリモル）、次いで塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（６２．０ｍｇ、０．０８８ミリモル）、続いて水（１ｍｌ）を添加し、結果として得られた混合物を窒素下、１２０℃で２０分間、マイクロ波照射下で撹拌した。２層を分離し、水性相を水で溶解させ、ＡｃＯＥｔで抽出した。合した有機相を生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：５から３０％の勾配）により精製して、６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（１７３ｍｇ、４０％）を白色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．４５分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９０．９
【０１２２】
調製２２
３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸エチル
【化２５】
2012530081.tif 000027
【０１２３】
フラスコに、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル塩酸塩（実施例８）（８５４ｍｇ、２ミリモル）、アクリル酸エチル（２４０ｍｇ、２６１μｌ、２．４ミリモル）及び２，３，４，６，７，８，９，１０−オクタヒドロピリミド［１，２−ａ］アゼピン（９１４ｍｇ、９０４μｌ、６ミリモル）を入れ、次いでＣＨ３ＣＮ（１０ｍｌ）で満たした。結果として得られた懸濁液を室温で４時間攪拌し、次いでＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）で希釈した。有機相を水で２回、次いで生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮して、３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸エチル（８９３ｍｇ、９１％）を淡褐色固体として得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。
ＬＣＭＳ：保持時間０．９６分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９１．０２
【０１２４】
調製２３
４−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸エチル
【化２６】
2012530081.tif 000028
【０１２５】
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル塩酸塩（実施例８）（８５４ｍｇ、２ミリモル）、Ｋ２ＣＯ３（８２９ｍｇ、６ミリモル）及び４−ブロモ酪酸エチル（４６８ｍｇ、２．４ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（５ｍｌ）中混合物を７０℃で８時間攪拌し、次いで室温まで冷却し、ＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）で希釈した。溶液を水（２ｘ２０ｍｌ）で洗浄し、次いでＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ）により精製して、４−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸エチル（６５０ｍｇ、６４％）を褐色油状物として得、これを静置すると固化した。
ＬＣＭＳ：保持時間０．９３分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５０５．０
【０１２６】
調製２４
６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２７】
2012530081.tif 000029
【０１２７】
室温、窒素下の６−ブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン塩酸塩（ＣＡＳ番号２２６９４２−２９−６、Ａｌｌｉｃｈｅｍ  ＬＬＣから市販、１ｇ、４．０２ミリモル）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１．８７ｍｌ、８．０５ミリモル）のＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中懸濁液をトリエチルアミン（２．８０ｍｌ、２０．１２ミリモル）で処理し、結果として得られた混合物を室温で２０時間攪拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＤＣＭ及び飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液間で分配し、相分離器カートリッジを用いて２層を分離した。有機相を真空中で濃縮し、残留物をＳＣＸカラムに負荷し、ＭｅＯＨで溶出させた。合したメタノール画分を真空中で濃縮して、６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（１．２１５ｇ、９７％）を淡黄色ガム状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．３８分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１４．０２（１Ｂｒ）
【０１２８】
調製２５
６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２８】
2012530081.tif 000030
【０１２９】
６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製２４）（１．２１５ｇ、３．８９ミリモル）及び４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ−１，３，２−ジオキサボロラン（１．０８７ｇ、４．２８ミリモル）を１，４−ジオキサン（１５ｍｌ）中に溶解させ、結果として得られた混合物を真空下（約１５ミリバール）で脱気し、次いで窒素でフラッシュした。１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン複合体（０．１７１ｇ、０．２３４ミリモル）及び１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（０．１２９ｇ、０．２３４ミリモル）を添加した。結果として得られた混合物を室温で５分間撹拌し、次いで酢酸カリウム（１．１４６ｇ、１１．６８ミリモル）で処理し、９０℃、窒素下で４時間撹拌し、次いで室温まで冷却した。混合物を飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２０ｍｌ）で溶解させ、そして不溶物質をろ過した。濾液をＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）で２回抽出し、合した有機物を生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：５から５０％の勾配）により残留物を精製して、６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（５８０ｍｇ、４１％）を淡黄色油状物として得、これは静置すると固化した。
ＬＣＭＳ：保持時間１．４２分；質量イオンは検出されなかった
【０１３０】
調製２６
６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２９】
2012530081.tif 000031
【０１３１】
５−（５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル（調製１１）（４９７ｍｇ、１．５３４ミリモル）及び６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製２５）（５８０ｍｇ、１．６１４ミリモル）の１，４−ジオキサン（６ｍｌ）及び飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１．５ｍｌ）中懸濁液を真空下（約１５ミリバール）で脱気し、次いで窒素でフラッシュした。１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン複合体（１１８ｍｇ、０．１６１ミリモル）を添加した。結果として得られた混合物を真空下で脱気し、窒素でフラッシュし、９０℃、窒素下で５時間攪拌し、次いで室温まで冷却し、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液及びＡｃＯＥｔで希釈した。不溶物質をろ過し、そして層を分離した。水性相をＡｃＯＥｔで２回抽出し、合した有機相を生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：５から５０％の勾配）により残留物を精製して、６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（３８６ｍｇ、５０％）を黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．４２分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７７．０
【０１３２】
調製２７
５−ブロモ−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化３０】
2012530081.tif 000032
【０１３３】
標記化合物を、６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製２４）の合成について記載した手順と同様にして、５−ブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（ＣＡＳ番号８１２３７−６９−６、Ｚａｎｎａｎ  Ｐｈａｒｍａから市販）から得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．４７分；［Ｍ−Ｈ］−＝３１０．９８
【０１３４】
調製２８
５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化３１】
2012530081.tif 000033
【０１３５】
５−ブロモ−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製２７）（０．２８１ｇ、０．８９９ミリモル）、酢酸カリウム（０．２６５ｇ、２．７０ミリモル）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．０６６ｇ、０．０９０ミリモル）及び４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ−１，３，２−ジオキサボロラン（０．２７４ｇ、１．０７９ミリモル）を１，４−ジオキサン（５ｍｌ）中に溶解させ、結果として得られた混合物を８０℃、窒素下で２時間攪拌し、次いで室温まで冷却し、水（１５ｍｌ）で希釈した。水性相をＡｃＯＥｔで抽出した（３×１０ｍｌ）。合した有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：１５％）により残留物を精製して、５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（１５８ｍｇ、５７％）を明黄色油状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．５４分；質量イオンは検出されなかった。
【０１３６】
調製２９
５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル。
【化３２】
2012530081.tif 000034
【０１３７】
５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製２８）（１５３ｍｇ、０．４２６ミリモル）、５−（５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル（調製１１）（１１５ｍｇ、０．３５５ミリモル）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（ＩＩ）（２４．９０ｍｇ、０．０３５ミリモル）及びＮａ２ＣＯ３（１８８ｍｇ、１．７７４ミリモル）を、ＤＭＥ（３．７５ｍｌ）と水（１．２５ｍｌ）との混合物中に溶解させた。混合物を１２０℃で２０分間、マイクロ波照射下で撹拌した。混合物を水（２０ｍｌ）で希釈し、水性相をＡｃＯＥｔで抽出した（２×１５ｍｌ）。合した有機相をＮａ２ＳＯ４下で乾燥し、真空中で濃縮した。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ：０から２０％の勾配）により残留物を精製して、５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（１０５ｍｇ、６２％）を明黄色油状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．４７分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７７．０１
【０１３８】
調製３０
１，３−ジブロモ−２−エチルベンゼン
【化３３】
2012530081.tif 000035
【０１３９】
三口丸底フラスコをアルゴンでパージし、次いで乾燥ＴＨＦ（６０ｍＬ）、１，３−ジブロモベンゼン（９．５ｇ、４０．２７ミリモル）及びヨウ化エチル（８．８ｇ、５６．３８ミリモル）で満たした。混合物を−７８℃まで冷却し、ＬＤＡ［４０ｍＬのＴＨＦ中８ｍＬのｉＰｒ２ＮＨ及び１０ｍＬのＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ）から調製］を−７０℃でゆっくりと添加した。２時間攪拌した後、反応を１００ｍＬのｓａｔ．ＮＨ４Ｃｌ水溶液中に注ぎ、２０分間激しく撹拌し、ＤＣＭ（２＊１００ｍＬ）で抽出した。有機層を蒸発させて、粗生成物を得、これを、ヘキサンを用いたカラムクロマトグラフィーにより精製して、１，３−ジブロモ−２−エチルベンゼン（８．５ｇ、７９．９％）を得た。
【０１４０】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：７．７６−７．７８（２Ｈ，  ｍ），  ６．８６−６．９０（１Ｈ，  ｍ），  ２．８９−３．０１（２Ｈ，  ｑ），  １．１２（３Ｈ，  ｔ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ８Ｈ８Ｂｒ２の計算値２６４；実測値２６５（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１４１】
調製４０
３−ブロモ−２−エチル−ベンズアルデヒド
【化３４】
2012530081.tif 000036
【０１４２】
１，３−ジブロモ−２−エチル−ベンゼン（２４ｇ、９０．９２ミリモル）のＴＨＦ（３００ｍＬ）中溶液に、３６．４ｍＬのＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ、９０．９２ミリモル）をＮ２下で添加した。混合物を２時間−７８℃で撹拌した。次いでＤＭＦ（１２ｇ、１６３．６６ミリモル）を添加し、２時間攪拌した後、反応を３００ｍＬのｓａｔ．ＮＨ４Ｃｌ水溶液上に注ぎ、ＤＣＭで抽出した（２＊１００ｍＬ）。有機層を蒸発させて、粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：２０）で溶出させて、３−ブロモ−２−エチルベンズアルデヒド（７．６ｇ、収率３９．２２％）を得た。
【０１４３】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：１０．２５（１Ｈ，  ｓ），  ７．７６−７．７８（２Ｈ，  ｍ），  ７．１０−７．２２（１Ｈ，  ｍ），  ３．２０−３．２７（２Ｈ，  ｑ），  １．２０（３Ｈ，  ｑ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ９Ｈ９ＢｒＯの計算値２１３；実測値２１４（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１４４】
調製４１
１−ブロモ−２−エチル−３−（２−ニトロビニル）ベンゼン
【化３５】
2012530081.tif 000037
【０１４５】
３−ブロモ−２−エチルベンズアルデヒド（６５．０ｇ、３０７ミリモル）及びＮＨ４ＯＡｃ（１２．０ｇ、１５４ミリモル）の２００ｍＬのＣＨ３ＮＯ２中混合物を３時間還流させた。溶媒を濃縮し、シリカゲル上で精製して、所望の生成物（６６．９ｇ、８８．５％収率）を得た。
【０１４６】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：８．２０（１Ｈ，  ｄ），  ７．５９（１Ｈ，  ｄ），  ７．３６−７．４０（１Ｈ，  ｍ），  ７．０２−７．０６（１Ｈ，  ｍ），  ２．８７−２．９３（４Ｈ，  ｑ），  １．１２（３Ｈ，  ｔ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ１０Ｈ１０ＢｒＮＯ２の計算値２５６；実測値２５７（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１４７】
調製４２
２−（３−ブロモ−２−エチルフェニル）エチルアミン
【化３６】
2012530081.tif 000038
【０１４８】
ＬｉＢＨ４（１１．０ｇ、５００ミリモル）と３００ｍＬのＴＨＦとの混合物にＴＭＳＣｌ（１０８ｇ、１モル）を０℃で添加した。反応を０℃で１０分間撹拌し、次いで１−ブロモ−２−エチル−３−（２−ニトロビニル）ベンゼン（２５．５ｇ、１００ミリモル）の１００ｍＬのＴＨＦ中溶液を添加した。反応混合物を室温まで温め、３時間還流させた。室温まで冷却した後、４０ｍＬのＭｅＯＨを注意深く添加した。溶媒を濃縮し、３００ｍＬのＥｔＯＡｃ及び１００ｍＬの水で希釈した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗生成物（１９．０ｇ、８４．０％収率）を得た。
【０１４９】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：８．３０（２Ｈ，  ｂｒｓ），  ７．３３−７．３６（１Ｈ，  ｍ），  ７．０４−７．１９（１Ｈ，  ｍ），  ６．８５−６．８９（１Ｈ，  ｍ），  ３．０９−３．１９（４Ｈ，  ｍ），  ２．７２−２．７８（２Ｈ，  ｍ），  １．０８（３Ｈ，  ｔ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ１０Ｈ１４ＢｒＮ計算値２２７；実測値２２８（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１５０】
調製４３
Ｎ−［２−（３−ブロモ−２−エチルフェニル）エチル］−２，２，２−トリフルオロアセトアミド
【化３７】
2012530081.tif 000039
【０１５１】
２−（３−ブロモ−２−エチルフェニル）エチルアミン（１９．０ｇ、８３．７ミリモル）、Ｅｔ３Ｎ（１６．９ｇ、１６７．４ミリモル）及び乾燥ＤＣＭ（２００ｍＬ）の混合物を０℃まで冷却した。無水トリフルオロ酢酸（３５．２ｇ、１６７．４ミリモル）を滴加した。反応を室温まで温め、１６時間攪拌した。水（１００ｍＬ）を添加した。反応をＤＣＭ（３Ｘ１５０ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。シリカゲル上で精製して、所望の生成物（２５．７９，  ９５．４％収率）を得た。
【０１５２】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：７．４５（２Ｈ，  ｄ），  ６．９０−７．１０（２Ｈ，  ｍ），  ３．５１−３．６０（２Ｈ，  ｍ），  ２．６４−２．９５（４Ｈ，  ｍ），  １．２２（３Ｈ，  ｔ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ１２Ｈ１３ＢｒＦ３ＮＯの計算値３２３；実測値３２４（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１５３】
調製４４
１−（６−ブロモ−５−エチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２，２，２−トリフルオロエタノン
【化３８】
2012530081.tif 000040
【０１５４】
氷酢酸（１００ｍＬ）、濃硫酸（４０ｍＬ）、Ｎ−［２−（３−ブロモ−２−エチル−フェニル）−エチル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（２５．０ｇ、７７．４ミリモル）及び（ＣＨ２Ｏ）ｎ（２．５ｇ）の混合物を７０℃で４時間加熱し、次いで室温まで冷却した。反応混合物を２００ｍＬの冷水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３＊２００ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。シリカゲル上で精製を実施して、所望の生成物を得た。
【０１５５】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：７．４１（２Ｈ，  ｄ），  ６．８１（２Ｈ，  ｄ），  ４．６６（２Ｈ，  ｄ），  ３．８３−３．８６（２Ｈ，  ｍ），  ２．９４−２．９８（２Ｈ，  ｍ），  ２．７７−２．８８（２Ｈ，  ｍ），  １．１９（３Ｈ，  ｔ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ１３Ｈ１３ＢｒＦ３ＮＯの計算値３３５；実測値３３６（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１５６】
調製４５
１−［５−エチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル］−２，２，２−トリフルオロエタノン
【化３９】
2012530081.tif 000041
【０１５７】
１−（６−ブロモ−５−エチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２，２，２−トリフルオロエタノン（６．０ｇ、１７．９ミリモル）、４，４，５，５，４’，４’，５’，５’−オクタメチル−［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］（５．４６ｇ、２１．５ミリモル）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．３１ｇ、１．７９ミリモル）及びＣＨ３ＣＯＯＫ（３．５ｇ、３５．８ミリモル）並びに１５０ｍＬの１，４−ジオキサンの混合物を１０時間還流させた。反応混合物を濃縮し、シリカゲル上で精製して、所望の生成物を得た。
【０１５８】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：７．５７（２Ｈ，  ｄ），  ６．９１（２Ｈ，  ｄ），  ４．６６（２Ｈ，  ｄ），  ３．７９−３．８２（２Ｈ，  ｍ），  ２．９１−２．９５（４Ｈ，  ｍ），  １．２５（１２Ｈ，  ｓ），  １．０９（３Ｈ，  ｔ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ１９Ｈ２５ＢＦ３ＮＯ３の計算値３８３；実測値３８４（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１５９】
調製４６
２−ヒドロキシ−５−ヨードベンゾニトリル
【化４０】
2012530081.tif 000042
【０１６０】
２−ヒドロキシベンゾニトリル（２０ｇ、０．１６８モル）のＣＨ３ＣＮ（２００ｍＬ）中溶液に、ＣＦ３ＳＯ３Ｈ（１６．５ｍＬ）を０℃で滴加し、続いてＮＩＳ（４５．４ｇ、０．２０１モル）を０℃で添加した。溶液をｒｔで一晩攪拌した。反応混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏ（１Ｌ）で洗浄し、ＤＣＭ（８００ｍＬ＊３）で抽出した。合した有機層を乾燥し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製を実施して、３０ｇの２−ヒドロキシ−５−ヨード−ベンゾニトリル（収率７３．２％）を得た。
【０１６１】
δＨ（ＤＭＳＯ，  ４００  ＭＨｚ）：７．６８（１Ｈ，  ｓ），  ７．６０−７．５８（１Ｈ，  ｄ），  ６．６７−６．６５（１Ｈ，  ｄ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ７Ｈ４ＩＮＯの計算値２４５；実測値２４６（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１６２】
調製４６
５−ヨード−２−イソプロポキシベンゾニトリル
【化４１】
2012530081.tif 000043
【０１６３】
２（４２ｇ、０．１７３モル）、ｉＰｒＩ（５８．７ｇ、０．３４５モル）及びＫ２ＣＯ３（４７．７ｇ  ０．３４５モル）並びにＣＨ３ＣＮ（４２０ｍＬ）の混合物を還流状態で一晩攪拌した。反応混合物をろ過し、濃縮した。残留物をＤＣＭ（３００ｍＬ）で希釈し、ろ過した。濾液を濃縮して、４８．５ｇの５−ヨード−２−イソプロポキシベンゾニトリル（収率９７．６％）を得た。
【０１６４】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：７．７９（１Ｈ，  ｓ），  ７．７５−７．７３（１Ｈ，  ｄ），  ６．７４−６．７２（１Ｈ，  ｄ），  ４．６２−４．５９（１Ｈ，  ｍ），  １．３９−１．３７（６Ｈ，  ｓ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ１０Ｈ１０ＩＮＯの計算値２８７；実測値２８８（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１６５】
調製４７
２−イソプロポキシ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）ベンゾニトリル
【化４２】
2012530081.tif 000044
【０１６６】
５−ヨード−２−イソプロポキシベンゾニトリル（１５ｇ、０．０５２モル）、Ｐｉｎ２Ｂ２（１５．９ｇ、０．０６２７モル）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４．３ｇ、５．２ミリモル）及びＫＯＡｃ（１５．３ｇ、０．１５６モル）並びにジオキサン（１５０ｍＬ）の混合物を９０℃、Ｎ２下で一晩攪拌した。反応混合物をろ過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２００：１）により精製を実施して、１３．８ｇの２−イソプロポキシ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンゾニトリル（収率９２％）を得た。
【０１６７】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：７．９−８．０（１Ｈ，  ｄ），  ７．８５−７．８９（１Ｈ，  ｄｄ），  ６．９２−６．９０（１Ｈ，  ｄ），  ４．６５−４．７４（１Ｈ，  ｍ），  １．３９−１．３７（６Ｈ，  ｓ），  １．２４（６Ｈ，  ｓ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ１６Ｈ２２ＢＮＯ３の計算値２８７；実測値２８８（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１６８】
調製４８
２−イソプロポキシ−５−チアゾール−２−イルベンゾニトリル
【化４３】
2012530081.tif 000045
【０１６９】
２−イソプロポキシ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）ベンゾニトリル（５ｇ、１７．４ミリモル）、２−ブロモ−チアゾ−ル（３．４３ｇ、２０．９ミリモル）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．４ｇ、１．７４ミリモル）及びＮａ２ＣＯ３（３．７ｇ、３４．８ミリモル）並びにＤＭＥ／Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ、１：１）の混合物を還流状態、Ｎ２下で一晩攪拌した。反応混合物をｒｔまで冷却し、ＤＣＭ（３００ｍＬ＊３）で抽出した。有機層を乾燥し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製を実施して、２ｇの２−イソプロポキシ−５−チアゾール−２−イル−ベンゾニトリル（収率４７．１％）を得た。
【０１７０】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：８．１３（１Ｈ，  ｓ），  ８．１０−８．１７（１Ｈ，  ｄ），  ７．８３−７．８２（１Ｈ，  ｄ），  ７．３２−７．３１（１Ｈ，  ｄ），  ７．０３−７．００（１Ｈ，  ｄ），  ４．７３−４．７０（１Ｈ，  ｍ），  １．４３−１．４１（６Ｈ，  ｓ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ１３Ｈ１２Ｎ２ＯＳの計算値２４４；実測値２４５（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１７１】
調製４９
５−（５−ブロモ−チアゾール−２−イル）−２−イソプロポキシベンゾニトリル
【化４４】
2012530081.tif 000046
【０１７２】
２−イソプロポキシ−５−チアゾール−２−イルベンゾニトリル（１．８８ｇ、７．７ミリモル）及びＤＭＦ（１９ｍＬ）の混合物に、ＮＢＳ（２．７４ｇ、１５．４ミリモル）を０℃で添加した。添加後、結果として得られた混合物をｒｔで３時間攪拌した。  Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）を添加した。反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ＊３）で抽出し、水（１００ｍＬ＊３）で洗浄した。有機相を分離し、乾燥し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１）により精製を実施して、１．９ｇの５−（５−ブロモ−チアゾール−２−イル）−２−イソプロポキシ−ベンゾニトリル（収率７６．３％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ１３Ｈ１１ＢｒＮ２ＯＳの計算値３２２；実測値３２３（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１７３】
調製５０
５−［５−（５−エチル−３，４−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−チアゾール−２−イル］−２−イソプロポキシベンゾニトリル
【化４５】
2012530081.tif 000047
【０１７４】
５−（５−ブロモ−チアゾール−２−イル）−２−イソプロポキシベンゾニトリル（４００ｍｇ、１．２４ミリモル）、１−［５−エチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル］−２，２，２−トリフルオロエタノン（５７０ｍｇ、１．４９ミリモル）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１０１ｍｇ、０．１２４ミリモル）及びＮａ２ＣＯ３（２６２ｍｇ、２．４８ミリモル）並びにＤＭＥ／Ｈ２Ｏ（８ｍＬ，１：１）の混合物を還流状態、Ｎ２下で一晩攪拌した。反応混合物をｒｔまで冷却し、ＤＣＭ（２０ｍＬ＊３）で抽出した。合した有機層を乾燥し、濃縮した。分取ＨＰＬＣにより精製を実施して、２６０ｍｇの５−［５−（５−エチル−３，４−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−チアゾール−２−イル］−２−イソプロポキシベンゾニトリル（収率５２．２％）を得た。
【０１７５】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：８．１５−８．１０（２Ｈ，  ｍ），  ７．８２−７．７０（１Ｈ，  ｄ），  ７．５５−７．５４（１Ｈ，  ｍ），  ７．１１−７．０８（２Ｈ，  ｄ），  ７．２８−７．２６（１Ｈ，  ｄ），  ７．０８−７．０１（２Ｈ，  ｍ），  ４．７６−４．７２（１Ｈ，  ｍ），  ４．４０（１Ｈ，  ｓ），４．１０−４．０８（１Ｈ，  ｄ），３．５４（１Ｈ，１），  ３．２５−３．２３（２Ｈ，  ｄ），２．８５−２．８４（１Ｈ，  ｍ），  ２．７１−２．６９（１Ｈ，  ｍ），  １．４６−１．４３（６Ｈ，  ｍ），  １．２１−１．１０（３Ｈ，  ｍ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ２４Ｈ２３Ｎ３ＯＳの計算値４０１；実測値４０２（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１７６】
調製５１
５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル）−チアゾール−２−イル］−２−イソプロポキシベンゾニトリル
【化４６】
2012530081.tif 000048
【０１７７】
５−［５−（５−エチル−３，４−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−チアゾール−２−イル］−２−イソプロポキシ−ベンゾニトリル（２５０ｍｇ、０．６２ミリモル）及びＮａＢＨ４（７０ｍｇ、１．２４ミリモル）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）中溶液を還流状態で２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、ろ過し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。分取ＨＰＬＣにより精製を実施して、１００ｍｇの５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル）−チアゾール−２−イル］−２−イソプロポキシ−ベンゾニトリル（収率４０％）を得た。
【０１７８】
δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：８．１２（１Ｈ，  ｓ），  ８．１０−８．０９（１Ｈ，  ｓ），  ７．７０（１Ｈ，  ｓ），  ７．２９−７．２５（１Ｈ，  ｄ），  ７．２８−７．２６（１Ｈ，  ｄ），  ７．０８−７．０２（２Ｈ，  ｍ），  ４．７７−４．７１（１Ｈ，  ｍ），  ４．３９（２Ｈ，  ｍ），  ３．６０−３．４８（２Ｈ，  ｍ），  ３．４０−３．０６（６Ｈ，  ｍ），  ２．７５−２．６８（２Ｈ，  ｍ），１．５１−１．４４（６Ｈ，  ｓ），  １．１４−１．１０（３Ｈ，  ｍ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ２４Ｈ２５Ｎ３ＯＳの計算値４０３；実測値４０４（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１７９】
調製５２
５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン
【化４７】
2012530081.tif 000049
【０１８０】
３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］安息香酸（５ｇ）、ヒドラジンカルボチオアミド（２．２２９ｇ）のリン酸トリクロリド（２１．４３ｇ）中混合物を７５℃で３時間攪拌した。混合物を真空中で濃縮してＰＯＣｌ３を除去し、残留物をクラッシュアイス中に注いだ。混合物を水性ＮａＯＨで塩基性化した。これをＥＡで２回抽出した。ＥＡ層を真空中で濃縮して、粗生成物５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン（７．５ｇ）を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ１１Ｈ１２ＣｌＮ３ＯＳの計算値２６９；実測値２７０．１（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１８１】
調製５３
２−ブロモ−５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール
【化４８】
2012530081.tif 000050
【０１８２】
５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン（６．２５ｇ）、臭化銅（ＩＩ）（１０．３５ｇ）のアセトニトリル（６０ｍＬ）中混合物を室温で撹拌し、次いで亜硝酸１，１−ジメチルエチル（５．５１ｍＬ）を添加した。混合物を室温で３時間攪拌した。これをＥＡ及び水性ＨＣｌで処理し、ＥＡ層を合し、カラムクロマトグラフィーにより精製して、２−ブロモ−５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール（４．７６ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ１１Ｈ１０ＢｒＣｌＮ２ＯＳの計算値３３３；実測値３３４．０（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１８３】
調製５４
５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル）−チアゾール−２−イル］−２−イソプロポキシベンゾニトリル
【化４９】
2012530081.tif 000051
【０１８４】
２−ブロモ−５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール（４００ｍｇ、１．２０ミリモル）、１−［５−エチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル］−２，２，２−トリフルオロエタノン（５７０ｍｇ、１．４９ミリモル）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１０１ｍｇ、０．１２４ミリモル）及びＮａ２ＣＯ３（２６２ｍｇ、２．４８ミリモル）並びにＤＭＥ／Ｈ２Ｏ（８ｍＬ，１：１）の混合物を還流状態、Ｎ２下で一晩攪拌した。反応混合物をｒｔまで冷却し、ＤＣＭ（２０ｍＬ＊３）で抽出した。合した有機層を乾燥し、濃縮した。分取ＨＰＬＣにより精製を実施して、２６０ｍｇの５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル）−チアゾール−２−イル］−２−イソプロポキシベンゾニトリル（収率５２％）を得た。
【０１８５】
ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ２２Ｈ２３ＣｌＮ３ＯＳの計算値４１３；実測値４１４（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１８６】
調製５５
３−シアノ−４−｛［（２−トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝安息香酸メチル
【化５０】
2012530081.tif 000052
【０１８７】
０℃、アルゴンのフラッシュ下で、３−シアノ−４−ヒドロキシ安息香酸メチル（３ｇ、１６．９３ミリモル）及びトリエチルアミン（３．５４ｍｌ、２５．４ミリモル）の乾燥ジクロロメタン（６０ｍｌ）中溶液に、無水トリフルオロメタンスルホン酸（３．１５ｍｌ、１８．６３ミリモル）をゆっくりと滴加した。反応を室温まで温め、１時間攪拌した。反応混合物を１０％の水性炭酸カリウム（２×５０ｍＬ）、次いで水性ＨＣｌ（２Ｍ、２×５０ｍＬ）で洗浄した後、有機相を乾燥し（相分離器）、溶媒を真空中で除去して、標記化合物を暗褐色油状物（５．１６５ｇ、１６．７０ミリモル）として得た。δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：８．４４（１Ｈ，  ｄ），  ８．３８（１Ｈ，  ｄｄ），  ７．６０（１Ｈ，  ｄ），  ３．９９（３Ｈ，  ｓ）．    ＭＳ（ＥＳ）：質量イオンは観察されなかった。
【０１８８】
調製５６
３−シアノ−４−（２−メチルプロピル）安息香酸メチル
【化５１】
2012530081.tif 000053
【０１８９】
３−シアノ−４−｛［（２−トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝安息香酸メチル（１．５ｇ、４．８５ミリモル）に、テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中ブロモ（２−メチルプロピル）亜鉛（４８．５ｍｌ、２４．２５ミリモル）をアルゴン下で添加した。溶液に、次いで１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン複合体（０．３５５ｇ、０．４８５ミリモル）を添加し、反応を６時間還流加熱した。混合物を水（２ｍＬ）でクエンチし、次いでセライトを通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。溶媒を真空中で除去した。残留物を酢酸エチル（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）間で分配し、有機相を乾燥し（相分離器）、溶媒を真空中で除去した。残留物をシリカクロマトグラフィーにより精製し、０〜１５％のイソヘキサン中ＥｔＯＡｃで４０分にわたって溶出させた。２バッチを集め、その一方は、無色油状物としての標記化合物（２３３ｍｇ、１．０７２ミリモル）であった。δＨ（ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：８．２８（１Ｈ，  ｄ），  ８．１５（１Ｈ，  ｄｄ），  ７．３８（１Ｈ，  ｄ），  ３．９４，  ３Ｈ，  ｓ），  ２．７８（２Ｈ，  ｄ），  ２．０２（１Ｈ，  ｍ），  ０．９６（６Ｈ，  ｄ）。
【０１９０】
調製５７
３−シアノ−４−（２−メチルプロピル）安息香酸
【化５２】
2012530081.tif 000054
【０１９１】
３−シアノ−４−（２−メチルプロピル）安息香酸メチル（２３３ｍｇ、１．０７２ミリモル）をエタノール（４ｍｌ）中に溶解させ、２Ｍの水性水酸化ナトリウム（１ｍｌ、２ミリモル）を添加した。反応を１時間攪拌した。２Ｍの水性ＨＣｌ（１０ｍＬ）を添加し、混合物をジクロロメタンで抽出した（２０ｍＬ＋１０ｍＬ）。有機相を単離し、相分離器により乾燥し、合した後、溶媒を真空中で除去して、標記化合物を白色固体（２０３ｍｇ、０．９９９ミリモル）として得た。δＨ（ｄ６−ＤＭＳＯ，  ４００  ＭＨｚ）１３．４３（１Ｈ，  ｂｒ．  ｓ），  ８．２９（１Ｈ，  ｄ），  ８．１４（１Ｈ，  ｄｄ），  ７．５９（１Ｈ，  ｄ），  ２．７４（２Ｈ，  ｄ），  １．９６（１Ｈ，  ｍ），  ０．９１（６Ｈ，  ｄ）。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ１２Ｈ１３ＮＯ２の計算値２０３；実測値２０２（Ｍ−Ｈ＋）。
【０１９２】
調製５８
５−（５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−（２−メチルプロピル）ベンゾニトリル
【化５３】
2012530081.tif 000055
【０１９３】
３−シアノ−４−（２−メチルプロピル）安息香酸（５ｇ）、ヒドラジンカルボチオアミド（２．２２９ｇ）のリン酸トリクロリド（２１．４３ｇ）中混合物を７５℃で３時間攪拌した。混合物を真空中で濃縮してＰＯＣｌ３を除去し、残留物をクラッシュアイス中に注いだ。混合物を水性ＮａＯＨで塩基性化した。これをＥＡで２回抽出した。ＥＡ層を真空中で濃縮して、粗生成物５−（５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−（２−メチルプロピル）ベンゾニトリル（７．５ｇ）を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ１３Ｈ１４Ｎ４Ｓの計算値２５８；実測値２５９．１（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１９４】
調製５９
５−（５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−（２−メチルプロピル）ベンゾニトリル
【化５４】
2012530081.tif 000056
【０１９５】
５−（５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−（２−メチルプロピル）ベンゾニトリル（６．２５ｇ）、臭化銅（ＩＩ）（１０．３５ｇ）のアセトニトリル（６０ｍＬ）中混合物を室温で撹拌し、次いで亜硝酸１，１−ジメチルエチル（５．５１ｍＬ）を添加した。混合物を室温で３時間攪拌した。これをＥＡ及び水性ＨＣｌで処理し、ＥＡ層を合し、カラムクロマトグラフィーにより精製して、５−（５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−（２−メチルプロピル）ベンゾニトリル（４．７６ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ１３Ｈ１２ＢｒＮ３Ｓの計算値３２２；実測値３２３．０（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１９６】
調製６０
５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−（２−メチルプロピル）ベンゾニトリル
【化５５】
2012530081.tif 000057
【０１９７】
５−（５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２−（２−メチルプロピル）ベンゾニトリル（４００ｍｇ、１．２０ミリモル）、１−［５−エチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル］−２，２，２−トリフルオロエタノン（５７０ｍｇ、１．４９ミリモル）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１０１ｍｇ、０．１２４ミリモル）及びＮａ２ＣＯ３（２６２ｍｇ、２．４８ミリモル）並びにＤＭＥ／Ｈ２Ｏ（８ｍＬ，１：１）の混合物をＮ２下で一晩還流状態にて撹拌した。反応混合物をｒｔまで冷却し、ＤＣＭ（２０ｍＬ＊３）で抽出した。合した有機層を乾燥し、濃縮した。分取ＨＰＬＣにより精製を実施して、２６０ｍｇの５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−（２−メチルプロピル）ベンゾニトリル（収率５２％）を得た。
【０１９８】
ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ２４Ｈ２６Ｎ４Ｓの計算値４０２；実測値４０３（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１９９】
実施例１
７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン塩酸塩
【化５６】
2012530081.tif 000058
【０２００】
１，４−ジオキサン（４ｍｌ）中７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製４）（４６３ｍｇ、０．８２６ミリモル）を室温で、４ＭのＨＣｌの１，４−ジオキサン中溶液（４ｍｌ、１６．００ミリモル）で処理した。２時間後、反応混合物をＥｔ２Ｏ（１０ｍｌ）で希釈した。形成された沈殿をろ過し、Ｅｔ２Ｏでリンスし、次いでアセトン中懸濁液として超音波処理した。沈殿をろ過し、アセトンでリンスして、７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン塩酸塩（６２ｍｇ、１７％）をレモンイエロー色固体として得た。合した有機層を真空中で濃縮し、残留物をＳＣＸカートリッジ上に負荷し、まずＭｅＯＨで、次いで２ＭのＮＨ３のＭｅＯＨ中溶液で溶出させた。アンモニア画分を合し、真空中で濃縮して、７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン（２５６ｍｇ、７７％）を淡黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．１０分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９９．３
【０２０１】
実施例２
７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン塩酸塩
【化５７】
2012530081.tif 000059
【０２０２】
７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製７）（２８９ｍｇ、０．５７９ミリモル）のＤＣＭ（４ｍｌ）中溶液を室温で、トリフルオロ酢酸（２ｍｌ、２６．０ミリモル）で処理し、結果として得られた混合物をこの温度で１時間攪拌し、次いで真空中で濃縮した。ＭｅＯＨ中に溶解させた残留物を、ＭｅＯＨで予洗したＳＣＸカートリッジ上に負荷し、ＭｅＯＨで、次いで２ＮのＮＨ３のＭｅＯＨ中溶液で溶出させた。アンモニア画分を合し、真空中で濃縮して、７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン（２２６ｍｇ、９８％）を淡黄色ガム状物として得た。１５ｍｇのアミンをＭｅＯＨ（０．５ｍｌ）中に溶解させ、１．３５ＭのＨＣｌのＭｅＯＨ中溶液（０．５ｍｌ）で処理し、結果として得られた混合物を真空中で濃縮した。残留物をＥｔ２Ｏで摩砕して、７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン塩酸塩を黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．１４分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９９．１７
【０２０３】
実施例３
４−［７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸
【化５８】
2012530081.tif 000060
【０２０４】
４−［７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸エチル（調製８）（２６８ｍｇ、０．５２２ミリモル）のＥｔＯＨ（７ｍｌ）中懸濁液を２ＮのＮａＯＨ水溶液（０．５２２ｍｌ、１．０４５ミリモル）で処理し、結果として得られた混合物を室温で１６時間攪拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物を水中に溶解させ、水性相を２ＮのＨＣｌ水溶液で酸性化（ｐＨ６）し、次いでＡｃＯＥｔで抽出し、溶解を助けるために、これに数滴のＭｅＯＨを添加した。有機相をＭｇＳＯ４下で乾燥し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＥｔ２Ｏで摩砕して、４−［７−（２−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸（４２ｍｇ、１６％）をクリーム色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．０９分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８５．３
【０２０５】
実施例４
４−［７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸
【化５９】
2012530081.tif 000061
【０２０６】
４−［７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸エチル（調製９）（２０９ｍｇ、０．４０７ミリモル）のＥｔＯＨ（３ｍｌ）中溶液を室温で、２ＮのＮａＯＨ水溶液（０．４０７ｍｌ、０．８１５ミリモル）で処理した。結果として得られた混合物を室温で２０時間攪拌した。酢酸（０．０４７ｍｌ、０．８１５ミリモル）を次に添加し、結果として得られた溶液を真空中で濃縮し、次いでＥｔＯＨとともに同時蒸発させた。残留物をＥｔ２Ｏで摩砕し、次いで６０℃、真空下（約１５ミリバール）で４８時間乾燥して、４−［７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン：ＡｃＯＥｔ（１：２）（１７４ｍｇ、６６％）をクリーム色のアモルファス固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．１３分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８５．１７
【０２０７】
実施例５
７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン塩酸塩
【化６０】
2012530081.tif 000062
【０２０８】
ＤＣＭ（１ｍｌ）中７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製１４）（１００ｍｇ、０．２００ミリモル）を室温で、トリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ、６．４９ミリモル）で処理した。結果として得られた混合物をこの温度で２時間攪拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＳＣＸカラム上に負荷し、ＭｅＯＨで、次いで２ＮのＮＨ３のＭｅＯＨ中溶液で溶出させた。アンモニア画分を真空中で濃縮した。残留物をＤＣＭ（１ｍｌ）中に溶解させ、４ＮのＨＣｌのＥｔ２Ｏ中溶液（０．５ｍｌ）で処理して、淡黄色沈殿を得た。混合物を真空中で濃縮した。残留物をＥｔ２Ｏで摩砕し、ろ過し、真空下（約１５ミリバール）、６０℃で１６時間乾燥して、７−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン塩酸塩（６９ｍｇ、７９％）を黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．０８分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４００．２
【０２０９】
実施例６
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−−ベンズアゼピン−７−イル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリルトリフルオロ酢酸塩
【化６１】
2012530081.tif 000063
【０２１０】
７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製１５）（２４６ｍｇ、０．５０１ミリモル）のＤＣＭ（５ｍｌ）中溶液をトリフルオロ酢酸（０．１９３ｍｌ、２．５０７ミリモル）で処理し、結果として得られた混合物を室温で１８時間攪拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＥｔ２Ｏ（５ｍｌ）で摩砕し、ろ過して、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン−７−イル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリルトリフルオロ酢酸塩（２９６ｍｇ、１１１％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間０．８１分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９０．９
【０２１１】
実施例６：別の手順
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン−７−イル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル塩酸塩
【化６２】
2012530081.tif 000064
【０２１２】
１，４−ジオキサン（２ｍｌ）中７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製１４）（２６０ｍｇ、０．５３０ミリモル）を４ＭのＨＣｌの１，４−ジオキサン中溶液（２ｍｌ、８．００ミリモル）で処理し、結果として得られた混合物を室温で１時間攪拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔで摩砕し、形成された沈殿をろ過し、真空下（約１５ミリバール）で乾燥して、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−３−ベンズアゼピン−７−イル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル塩酸塩（１８６ｍｇ、８０％）を灰色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間０．８１分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９０．９
【０２１３】
実施例７
４−［７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸塩酸塩
【化６３】
2012530081.tif 000065
【０２１４】
ＥｔＯＨ（２ｍｌ）中４−［７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸エチル（調製１６）（１２６ｍｇ、０．２５０ミリモル）を室温で、２ＮのＮａＯＨ水溶液（０．２５０ｍｌ、０．４９９ミリモル）で処理した。結果として得られた混合物をこの温度で２０時間攪拌し、次いで酢酸（０．０３１ｍｌ、０．５４９ミリモル）及び２ＭのＨＣｌ水溶液（０．５ｍｌ）で処理した。結果として得られた溶液を、凍結乾燥機を用いて濃縮して、４−［７−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンズアゼピン−３−イル］ブタン酸塩酸塩（１４６ｍｇ、８２％）を麦わら色アモルファス固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間０．９２分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７７．３
【０２１５】
実施例８
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル塩酸塩
【化６４】
2012530081.tif 000066
【０２１６】
室温の６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製２１）（１７３ｍｇ、０．３５３ミリモル）の１，４−ジオキサン（２ｍｌ）中溶液に、４Ｍの１，４−ジオキサン中ＨＣｌ溶液（２ｍｌ）を滴加し、結果として得られた混合物をこの温度で５時間攪拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＥｔ２Ｏで摩砕し、ろ過し、真空下（約１５ミリバール）で１６時間乾燥して、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル塩酸塩（１４０ｍｇ、８０％）を淡黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．１６分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９１．１５
【０２１７】
実施例９
３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸ナトリウム塩
【化６５】
2012530081.tif 000067
【０２１８】
３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸エチル（調製２２）（８８０ｍｇ、１．８ミリモル）のＥｔＯＨ（１０ｍｌ）中懸濁液を、２ＭのＮａＯＨ水溶液（１０ｍｌ、２０ミリモル）で処理した。結果として得られた混合物を５０℃で２時間攪拌し、次いで室温まで冷却した。大部分のＥｔＯＨを真空中で濃縮した。形成した沈殿をろ過し、水で洗浄し、真空下（約１５ミリバール）で乾燥して、３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸ナトリウム塩（７９０ｍｇ、９１％）を淡褐色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間０．８６分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６３．１８
【０２１９】
実施例１０
４−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸ナトリウム塩
【化６６】
2012530081.tif 000068
【０２２０】
４−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸エチル（調製２３）（６００ｍｇ、１．１９ミリモル）のＥｔＯＨ（３ｍｌ）中溶液を２ＭのＮａＯＨ水溶液（５ｍｌ）で処理した。結果として得られた混合物５０℃で１時間攪拌し、次いで室温まで冷却し、さらに１時間撹拌した。形成した沈殿をろ過し、水で洗浄し、乾燥して、４−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸ナトリウム塩（４３８ｍｇ、７４％）を淡褐色固体として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間０．８４分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７６．９
【０２２１】
実施例１１
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル
【化６７】
2012530081.tif 000069
【０２２２】
トリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ、６．４９ミリモル）を、６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製２６）（３８０ｍｇ、０．７９７ミリモル）のＤＣＭ（４ｍｌ）中溶液に０℃、窒素下で添加した。混合物を室温まで温めた。１時間後、トリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ、６．４９ミリモル）を添加し、結果として得られた混合物をこの温度で３時間攪拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＭｅＯＨ中ＳＣＸカートリッジ上に負荷し、ＭｅＯＨ、続いて２ＮのＮＨ３のＭｅＯＨ中溶液で溶出させた。アンモニア画分を真空中で濃縮して、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル（３２６ｍｇ、１０９％）を淡黄色油状物として得た
ＬＣＭＳ：保持時間０．８５分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７７．２１
【０２２３】
実施例１２
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル塩酸塩
【化６８】
2012530081.tif 000070
【０２２４】
５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製２９）（６０ｍｇ、０．１２６ミリモル）を１，４−ジオキサン（５ｍｌ）中に溶解させ、室温にて４ＭのＨＣｌの１，４−ジオキサン中溶液（０．１３８ｍｌ、０．５５４ミリモル）で処理した。結果として得られた混合物を３時間攪拌した。Ｅｔ２Ｏ（１５ｍｌ）を反応混合物に添加し、１０分攪拌した後、形成された白色沈殿をろ過し、真空下（約１５ミリバール）で乾燥して、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［５−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］ベンゾニトリル（２８ｍｇ、５４％）を得た。
ＬＣＭＳ：保持時間０．８６分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７７．０２
【０２２５】
実施例１３
５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドールトリフルオロ酢酸塩
【化６９】
2012530081.tif 000071
【０２２６】
フラスコに、５−ブロモ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（ＣＡＳ番号２０１９４０−０８−１、ＡＢ  ｃｈｅｍｉｃａｌから市販、５３．６ｍｇ、０．１８０ミリモル）、酢酸カリウム（５２．９ｍｇ、０．５４０ミリモル）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ−１，３，２−ジオキサボロラン（４５．７ｍｇ、０．１８０ミリモル）及び１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（１３．１６ｍｇ、０．０１８ミリモル）を入れ、次いでＤＭＥ（２ｍｌ）で満たし、結果として得られた混合物を１２０℃で６０分間、マイクロ波照射下で撹拌した。２−ブロモ−５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール（調製１１）（６０．０ｍｇ、０．１８０ミリモル）を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（０．２ｍｌ）とともに添加した。結果として得られた混合物を１２０℃で６０分間、マイクロ波照射下で撹拌し、次いで１４０℃で３０分間、依然としてマイクロ波照射下で撹拌した。不溶物質を、シリカゲルのパッドを通してろ過し、ＤＣＭ及びＡｃＯＥｔでリンスした。合した有機相を真空中で濃縮し、残留物をＤＣＭ（５ｍｌ）及びトリフルオロ酢酸（３ｍｌ、３８．９ミリモル）中に溶解させた。結果として得られた混合物を室温で２時間撹拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＳＣＸカートリッジ上に負荷し、ＭｅＯＨで、次いで２ＮのＮＨ３のＭｅＯＨ中溶液で溶出させた。合したアンモニア画分を合し、真空中で濃縮した。残留物をＭＤＡＰにより精製して、５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドールトリフルオロ酢酸塩（１５．１ｍｇ、１７．３％収率）を白色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．０７分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７２．２
【０２２７】
実施例１４
３−［５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］プロパン酸
【化７０】
2012530081.tif 000072
【０２２８】
フラスコに、５−ブロモ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（ＣＡＳ番号２０１９４０−０８−１、ＡＢ  ｃｈｅｍｉｃａｌから市販、７８ｍｇ、０．２６２ミリモル）、酢酸カリウム（７９ｍｇ、０．８０９ミリモル）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ−１，３，２−ジオキサボロラン（６８．５ｍｇ、０．２７０ミリモル）及び１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（１９．７４ｍｇ、０．０２７ミリモル）を入れ、次いでＤＭＥ（２ｍｌ）で満たした。結果として得られた混合物を１２０℃で６０分間、マイクロ波照射下で撹拌した。２−ブロモ−５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール（調製１３）（９０ｍｇ、０．２７０ミリモル）を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（０．２ｍｌ）とともに添加し、結果として得られた混合物を１２０℃で６０分間、マイクロ波照射下で撹拌した。不溶物質を、シリカゲルのパッドを通してろ過し、ＡｃＯＥｔでリンスした。合した有機相をＭｇＳＯ４下で乾燥し、真空中で濃縮した。残留物をＤＣＭ（５ｍｌ）中に溶解させ、トリフルオロ酢酸（１ｍｌ、１２．９８ミリモル）で処理した。結果として得られた混合物を１時間室温で撹拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＳＣＸカートリッジ上に負荷し、ＭｅＯＨで、次いで２ＮのアンモニアのＭｅＯＨ中溶液で溶出させた。合したアンモニア画分を合し、真空中で濃縮した。残留物をｎ−ＢｕＯＨ（２．０ｍｌ）中に溶解させ、アクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．０３９ｍｌ、０．２７０ミリモル）及びトリエチルアミン（０．０７５ｍｌ、０．５４０ミリモル）で処理した。結果として得られた混合物を１００℃で１時間撹拌し、室温まで冷却し、真空中で濃縮した。残留物をＳＣＸカートリッジ上に負荷し、ＭｅＯＨで、次いで２ＮのＮＨ３のＭｅＯＨ中溶液で溶出させた。合したアンモニア画分を合し、真空中で濃縮した。残留物をＤＣＭ（５ｍｌ）中に溶解させ、トリフルオロ酢酸（１ｍｌ、１２．９８ミリモル）で処理した。結果として得られた混合物を室温で２時間撹拌し、次いで真空中で濃縮した。残留物をＭＤＡＰにより精製して、３−［５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］プロパン酸（９．８ｍｇ、８％）を白色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ：保持時間１．０６分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４４．２
【０２２９】
実施例１５
３−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸（Ｅ１５）
【化７１】
2012530081.tif 000073
【０２３０】
空気中で撹拌した５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル（１５０ｍｇ、０．３７２ミリモル）及びＤＢＵ（０．０１７ｍｌ、０．１１２ミリモル）のアセトニトリル（５ｍＬ）中溶液に、２−プロペン酸エチル（１８６ｍｇ、１．８５９ミリモル）を一度に添加した。反応混合物を８０℃で２時間攪拌した。反応混合物を蒸発させると、黒色油状物が形成した。水酸化リチウム（２５．００ｍｇ、０．５９６ミリモル）を、得られた残留物、イソプロパノール（２．５ｍＬ）及び水（２．５００ｍＬ）の混合物に添加した。混合物をｒｔで２時間攪拌し、ＡｃＯＨで中和し、高真空下で蒸発させ、ＭＤＡＰについてＴＨＦ中に溶解させて、３−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸（８９ｍｇ、５０．２％収率）を得た。
【０２３１】
δＨ（ＤＭＳＯ，  ４００  ＭＨｚ）：１２．７８（１Ｈ，  ｂｒｓ），  ８．２１（１Ｈ，  ｄ），  ８．１５（１Ｈ，  ｄｄ），  ７．９６（１Ｈ，  ｓ），  ７．３７（１Ｈ，  ｄ），  ７．２８（１Ｈ，  ｄ），  ７．０９（１Ｈ，  ｓ），  ４．８６−４．８０（１Ｈ，  ｍ），  ４．５１−４．２７（２Ｈ，  ｍ），  ３．７４−３．４０（４Ｈ，  ｍ），  ３．０８−３．０７（２Ｈ，  ｍ），  ２．８２−２．７８（２Ｈ，  ｍ），  ２．６３−２．６１（２Ｈ，  ｍ），  １．２９（６Ｈ，  ｄ），  １．０２（３Ｈ，  ｔ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ２７Ｈ２９Ｎ３Ｏ３Ｓの計算値４７５；実測値４７６（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０２３２】
実施例１６
４−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸（Ｅ１６）
【化７２】
2012530081.tif 000074
【０２３３】
空気中で撹拌した５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−２−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾニトリル（１５０ｍｇ、０．３７２ミリモル）及び４−ブロモブタン酸エチル（１４５ｍｇ、０．７４３ミリモル）のアセトニトリル（５ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１０３ｍｇ、０．７４３ミリモル）を一度に添加した。反応混合物を還流状態で一晩攪拌した。反応混合物を蒸発させ、ＥＡで抽出し、水及び生理食塩水で洗浄し、蒸発させた。水酸化リチウム（３２．４ｍｇ、０．７７３ミリモル）を、残留物、イソプロパノール（２．５ｍＬ）及び水（２．５００ｍＬ）の混合物に添加した。混合物をｒｔで２時間攪拌した。反応混合物をＡｃＯＨで中和し、高真空下で蒸発させ、ＭＤＡＰについてＴＨＦ中に溶解させて、４−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸（８２ｍｇ、３４．８％収率）を得た。
【０２３４】
δＨ（ＤＭＳＯ，  ４００  ＭＨｚ）：１２．３４（１Ｈ，  ｂｒｓ），  ８．２１（１Ｈ，  ｄ），  ８．１５（１Ｈ，  ｄｄ），  ７．９６（１Ｈ，  ｓ），  ７．３７（１Ｈ，  ｄ），  ７．２８（１Ｈ，  ｄ），  ７．１２（１Ｈ，  ｓ），  ４．８６−４．８０（１Ｈ，  ｍ），  ４．６４−４．５０（１Ｈ，  ｍ），  ４．３５−４．３０（１Ｈ，  ｍ），  ３．７３（１Ｈ，  ｂｒｓ），  ３．３３−３．２７（１Ｈ，  ｍ），  ３．２４−３．１９（２Ｈ，  ｍ），  ３．１４−３．０９（２Ｈ，  ｍ），  ２．６３−２．６１（２Ｈ，  ｍ），  ２．３５−２．３２（２Ｈ，  ｍ），  １．９４−１．９０（２Ｈ，  ｍ），  １．２９（６Ｈ，  ｄ），  １．０２（３Ｈ，  ｔ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ２８Ｈ３１Ｎ３Ｏ３Ｓの計算値４８９；実測値４９０（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０２３５】
実施例１７
３−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸（Ｅ１７）
【化７３】
2012530081.tif 000075
【０２３６】
空気中で撹拌した５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル）−チアゾール−２−イル］−２−イソプロポキシベンゾニトリル（１５０ｍｇ、０．３７２ミリモル）及びＤＢＵ（０．０１７ｍｌ、０．１１２ミリモル）のアセトニトリル（５ｍＬ）中溶液に、２−プロペン酸エチル（１８６ｍｇ、１．８５９ミリモル）を一度に添加した。反応混合物を８０℃で２時間攪拌した。反応混合物を蒸発させると、黒色油状物が形成した。水酸化リチウム（２５．００ｍｇ、０．５９６ミリモル）を、得られた残留物、イソプロパノール（２．５ｍＬ）及び水（２．５００ｍＬ）の混合物に添加した。混合物をｒｔで２時間攪拌し、ＡｃＯＨで中和し、高真空下で蒸発させ、ＭＤＡＰについてＴＨＦ中に溶解させて、３−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸（１２５ｍｇ、６５％収率）を得た。
【０２３７】
δＨ（ＤＭＳＯ，  ４００  ＭＨｚ）：８．０３（１Ｈ，  ｄ），  ７．８９（１Ｈ，  ｄｄ），  ７．４８（１Ｈ，  ｄ），  ７．３１（１Ｈ，  ｄ），  ７．１７（１Ｈ，  ｄ），  ４．８０−４．７５（１Ｈ，  ｍ），  ４．４４−４．４３（２Ｈ，  ｍ），  ３．３９−３．３８（４Ｈ，  ｍ），  ３．１０−３．０９（２Ｈ，  ｍ），  ２．８１−２．７３（４Ｈ，  ｍ），  １．２８（６Ｈ，  ｄ），  １．０７（３Ｈ，  ｔ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ２５Ｈ２８ＣｌＮ３Ｏ３Ｓの計算値４８５；実測値４８６（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０２３８】
実施例１８
４−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸（Ｅ１８）
【化７４】
2012530081.tif 000076
【０２３９】
空気中で撹拌した５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル）−チアゾール−２−イル］−２−イソプロポキシベンゾニトリル（１５０ｍｇ、０．３７２ミリモル）及び４−ブロモブタン酸エチル（１４５ｍｇ、０．７４３ミリモル）のアセトニトリル（５ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１０３ｍｇ、０．７４３ミリモル）を一度に添加した。反応混合物を還流状態で一晩攪拌した。反応混合物を蒸発させ、ＥＡで抽出し、水及び生理食塩水で洗浄し、蒸発させた。水酸化リチウム（３２．４ｍｇ、０．７７３ミリモル）を、残留物、イソプロパノール（２．５ｍＬ）及び水（２．５００ｍＬ）の混合物に添加した。混合物をｒｔで２時間攪拌した。反応混合物をＡｃＯＨで中和し、高真空下で蒸発させ、ＭＤＡＰについてＴＨＦ中に溶解させて、４−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸（９２ｍｇ、３８％収率）を得た。
【０２４０】
δＨ（ＤＭＳＯ，  ４００  ＭＨｚ）：１２．３２（１Ｈ，  ｂｒｓ），  ８．０２（１Ｈ，  ｄ），  ７．８９（１Ｈ，  ｄｄ），  ７．４９（１Ｈ，  ｄ），  ７．３１（１Ｈ，  ｄ），  ７．２０（１Ｈ，  ｄ），  ４．８０−４．７５（１Ｈ，  ｍ），  ４．５８−４．５７（１Ｈ，  ｍ），  ４．３７−４．３６（１Ｈ，  ｍ），  ３．７５−３．５５（２Ｈ，  ｍ），  ３．２７−３．２０（２Ｈ，  ｍ），  ３．１２−３．１１（２Ｈ，  ｍ），  ２．７７−２．７５（２Ｈ，  ｍ），  ２．３５−２．３２（２Ｈ，  ｍ），  １．９４−１．９１（２Ｈ，  ｍ），  １．２８（６Ｈ，  ｄ），  １．０７（３Ｈ，  ｔ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ２６Ｈ３０ＣｌＮ３Ｏ３Ｓの計算値４９９；実測値５００（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０２４１】
実施例１９
３−［６−｛５−［３−シアノ−４−（２−メチルプロピル）フェニル］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル｝−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸（Ｅ１９）
【化７５】
2012530081.tif 000077
【０２４２】
空気中で撹拌した５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−（２−メチルプロピル）ベンゾニトリル（１５０ｍｇ、０．３７２ミリモル）及びＤＢＵ（０．０１７ｍｌ、０．１１２ミリモル）のアセトニトリル（５ｍＬ）中溶液に、２−プロペン酸エチル（１８６ｍｇ、１．８５９ミリモル）を一度に添加した。反応混合物を８０℃で２時間攪拌した。反応混合物を蒸発させると、黒色油状物が形成した。水酸化リチウム（２５．００ｍｇ、０．５９６ミリモル）を、得られた残留物、イソプロパノール（２．５ｍＬ）及び水（２．５００ｍＬ）の混合物に添加した。混合物をｒｔで２時間攪拌し、ＡｃＯＨで中和し、高真空下で蒸発させ、ＭＤＡＰについてＴＨＦ中に溶解させて、３−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸（９３ｍｇ、５２％収率）を得た。
【０２４３】
δＨ（ＤＭＳＯ，  ４００  ＭＨｚ）：８．３９（１Ｈ，  ｄ），  ８．２４（１Ｈ，  ｄｄ），  ７．６１（１Ｈ，  ｄ），  ７．５０（１Ｈ，  ｄ），  ７．１９（１Ｈ，  ｄ），  ４．４７−４．４６（２Ｈ，  ｍ），  ３．４２−３．３９（２Ｈ，  ｍ），  ３．１２−３．１１（２Ｈ，  ｍ），  ２．８２−２．７７（４Ｈ，  ｍ），  ２．７５−２．７０（２Ｈ，  ｍ），  １．９４−１．９１（１Ｈ，  ｍ），  １．０７（３Ｈ，  ｔ），  ０．８７（６Ｈ，  ｄ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ２７Ｈ３０Ｎ４Ｏ２Ｓの計算値４７４；実測値４７５（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０２４４】
実施例２０
４−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸（Ｅ２０）
【化７６】
2012530081.tif 000078
【０２４５】
空気中で撹拌した５−［５−（５−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−（２−メチルプロピル）ベンゾニトリル（１５０ｍｇ、０．３７２ミリモル）及び４−ブロモブタン酸エチル（１４５ｍｇ、０．７４３ミリモル）のアセトニトリル（５ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１０３ｍｇ、０．７４３ミリモル）を一度に添加した。反応混合物を還流状態で一晩攪拌した。反応混合物を蒸発させ、ＥＡで抽出し、水及び生理食塩水で洗浄し、蒸発させた。水酸化リチウム（３２．４ｍｇ、０．７７３ミリモル）を、残留物、イソプロパノール（２．５ｍＬ）及び水（２．５００ｍＬ）の混合物に添加した。混合物をｒｔで２時間攪拌した。反応混合物をＡｃＯＨで中和し、高真空下で蒸発させ、ＭＤＡＰについてＴＨＦ中に溶解させて、４−［６−（２−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，３−チアゾール−５−イル）−５−エチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］ブタン酸（８５ｍｇ、３６％収率）を得た。
【０２４６】
δＨ（ＤＭＳＯ，  ４００  ＭＨｚ）：１２．３２（１Ｈ，  ｂｒｓ），  ８．３９（１Ｈ，  ｄ），  ８．２４（１Ｈ，  ｄｄ），  ７．６１（１Ｈ，  ｄ），  ７．５１（１Ｈ，  ｄ），  ７．２２（１Ｈ，  ｄ），  ４．５８−４．５７（１Ｈ，  ｍ），  ４．３７−４．３６（１Ｈ，  ｍ），  ３．７５−３．５５（２Ｈ，  ｍ），  ３．２１−３．２０（２Ｈ，  ｍ），  ３．１３−３．１２（２Ｈ，  ｍ），  ２．７７−２．７５（２Ｈ，  ｍ），  ２．７０（２Ｈ，  ｄ），    ２．３５−２．３２（２Ｈ，  ｍ），  １．９６−１．８９（３Ｈ，  ｍ），  １．０８（３Ｈ，  ｔ），  ０．８７（６Ｈ，  ｄ）ｐｐｍ。ＭＳ（ＥＳ＋）：Ｃ２８Ｈ３２Ｎ４Ｏ２Ｓの計算値４８８；実測値４８９（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０２４７】
Ｓ１Ｐ１  ＧＴＰγＳアッセイ用膜調製物
全てのステップを４℃で実施した。２００ｍｌの緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのロイペプチン、２５μｇ／ｍｌのバシトラシン、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＰＭＳＦ、２μＭのペプスタチンＡ）中１５秒の２バーストで、細胞をガラス製ワーリングブレンダー内で均質化した。ブレンダーを最初のバースト後５分間及び最後のバースト後１０〜１４分間氷中に差し込んで、泡を消散させた。材料を次いで５００ｇで２０分間回転させ、上清を３６分間４８，０００ｇで回転させた。ペレットを、ＰＭＳＦ及びペプスタチンＡを含まない以外は前記と同じ緩衝液中に再懸濁させた。材料を０．６ｍｍの針を通して強制的に注入し、必要な容積にし、（通常、基の細胞ペレットの容積×４）、等分し、そしてマイナス８０℃で貯蔵した。
【０２４８】
Ｓ１Ｐ１  ＧＴＰγＳアッセイ
Ｓ１Ｐ１発現ＲＨ７７７７膜（１．５μｇ／ウェル）膜（１．５μｇ／ウェル）を、２３Ｇ針中を通過させることによって均質化した。これらを次いでアッセイ緩衝液（ＨＥＰＥＳ  ２０ｍＭ、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、ＮａＣｌ  １００ｍＭ、ＫＯＨ  ５Ｍを用いてｐＨを７．４に調節）中ＷＧＡコーティングされたＳＰＡビーズ（０．１２５ｍｇ／ウェル）に付着させた。ＧＤＰ  １０μＭ  ＦＡＣ及びサポニン  ９０μｇ／ｍｌ  ＦＡＣも添加した。
【０２４９】
３０分間氷上でプレカップリングさせた後、ビーズ及び膜懸濁液を、０．１μｌの化合物を含む白色ＧｒｅｉｎｅｒポリプロピレンＬＶ３８４ウェルプレート中に分注した（５μｌ／ウェル）。アッセイ緩衝液中で調製した、５μｌ／ウェルの［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（最終放射性リガンド濃度：Ｓ１Ｐ１について０．５ｎＭ又はＳ１Ｐ３について０．３ｎＭ）をプレートに添加した。最終アッセイカクテル（１０．１μｌ）を次いで密封し、遠心分離機で回転させ、次いでＶｉｅｗｌｕｘ装置で直ちに読み取った。
【０２５０】
実施例１〜１４は、このアッセイでｐＥＣ５０＞５を有していた。
【０２５１】
Ｓ１Ｐ１  Ｔａｎｇｏアッセイ−３８４ウェルフォーマット
組換えＥＤＧ１−ｂｌａ／Ｕ２ＯＳ細胞（ＴＥＶプロテアーゼ部位に結合したヒト内皮分化遺伝子１（ＥＤＧ１）及びＴａｎｇｏ  ＧＰＣＲ−ｂｌａ  Ｕ２ＯＳ親細胞系中に安定して組み入れられたＧａｌ４−ＶＰ１６転写因子を含む）を成長培地から収集し、アッセイ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ）中に継代させた。細胞を２４時間３７℃、５％ＣＯ２で欠乏させ、収集し、アッセイ培地中に〜２００，０００細胞／ｍｌの密度で再懸濁させた。
【０２５２】
全ての試験化合物をＤＭＳＯ中に１０ｍＭの濃度で溶解させ、１００％のＤＭＳＯ中で調製して、１０点用量反応曲線を得た。Ｂｒａｖｏ（Ｖｅｌｏｃｉｔｙ１１）によって調製した試験化合物を２〜１１及び１３〜２２列のウェルに添加し；ＤＭＳＯを非刺激対照として１２及び２３列のカラムに添加し、アッセイ培地を１及び２４列のウェルに無細胞対照として添加した。Ｓ１Ｐ１アゴニストを２行、２〜１１列のウェルに刺激対照として添加し、試験化合物を２行、１３〜２２列及び３〜１５行、２〜１１／１３〜２２列のウェルに添加した（１及び１６は空で使用しなかった）。溶液中の化合物を、Ｅｃｈｏ（Ｌａｂｃｙｔｅ）用量反応プログラム（５０ｎｌ／ウェル）を用いてアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ７８１０９０）に添加した。非刺激対照及び無細胞対照に５０ｎｌ／ウェルの純粋ＤＭＳＯを負荷して、ＤＭＳＯ濃度が全てのアッセイについてプレート全体にわたって一定であることを確実にした。
【０２５３】
５０μｌの細胞懸濁液をプレートの２〜２３列の各ウェルに添加した（１ウェルあたり〜１０，０００細胞）。５０μｌのアッセイ培地を無細胞対照の各ウェル（１及び２４列）に添加した。細胞を一晩３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートした。
【０２５４】
１０μｌの６×基質混合物（ＬｉｖｅＢＬＡｚｅｒ（商標）−ＦＲＥＴ  Ｂ／Ｇ基質（ＣＣＦ４−ＡＭ）Ｃａｔ＃Ｋ１０９６、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｉｎｃ．製）を、Ｂｒａｖｏを用いて各ウェルに添加し、プレートを室温で２時間、暗所にてインキュベートした。プレートを最終的にＥｎＶｉｓｉｏｎで、１つの励起チャンネル（４０９ｎｍ）及び２つの発光チャンネル（４６０ｎｍ及び５３０ｎｍ）を用いて読み取った。
【０２５５】
バックグラウンドを差し引いた青色発光値を、バックグラウンドを差し引いた緑色発光値で割ることによって、青／緑発光比（４６０ｎｍ／５３０ｎｍ）を各ウェルについて計算した。用量反応曲線はＳ字型用量反応モデルに基づく。すべての比データを各プレート上の正の対照の最大発光比及び負の対照（ＤＭＳＯ）の最小発光比に基づいて正規化した。各化合物の内因活性（ＩＡ）は、曲線適合後のその最大反応の正規化されたパーセンテージである。
【０２５６】
実施例１５〜２０は、このアッセイでｐＥＣ５０≧９を有していた。
【０２５７】
Ｓ１Ｐ３  ＧＴＰγＳアッセイ
Ｓ１Ｐ３発現ＲＢＬ膜（１．５μｇ／ウェル）を、２３Ｇ針を通過させることによって均質化した。これらを次いで、アッセイ緩衝液（ＨＥＰＥＳ  ２０ｍＭ、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、ＮａＣｌ  １００ｍＭ、ＫＯＨ  ５Ｍを用いてｐＨを７．４に調節）中、ＷＧＡコーティングされたＳＰＡビーズ（０．１２５ｍｇ／ウェル）に付着させた。ＧＤＰ  １０μＭ  ＦＡＣ及びサポニン  ９０μｇ／ｍｌ  ＦＡＣも添加した。
【０２５８】
氷上で３０分プレカップリングした後、ビーズ及び膜懸濁液を、０．１μｌの化合物を含む白色ＧｒｅｉｎｅｒポリプロピレンＬＶ３８４ウェルプレート中に分注した（５μｌ／ウェル）。アッセイ緩衝液中で調製した、５μｌ／ウェル［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（最終放射性リガンド濃度：Ｓ１Ｐ１について０．５ｎＭ又はＳ１Ｐ３について０．３ｎＭ）を次いでプレートに添加した。最終アッセイカクテル（１０．１μｌ）を次いで密封し、遠心分離機で回転させ、次いでＶｉｅｗｌｕｘ装置で直ちに読み取った。
【０２５９】
実施例１〜１４はこのアッセイでｐＥＣ５０＜４．５を有していた。
【０２６０】
Ｓ１Ｐ３  ＧｅｎｅＢｌａｚｅｒアッセイ
ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ  ＥＤＧ３−Ｇａ１５−ＮＦＡＴ−ｂｌａ  ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ヒト内皮分化Ｇタンパク質共役受容体３（ＥＤＧ３）及びＮＦＡＴ反応エレメントの制御下のベータ−ラクタマーゼレポーター遺伝子及びＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ  Ｇａ１５−ＮＦＡＴ−ｂｌａ  ＨＥＫ２９３Ｔ細胞系中に安定して組み入れられた乱交雑（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）Ｇタンパク質（Ｇａ１５）を含む）をアッセイ培地（９９％のＤＭＥＭ、１％の透析ＦＢＳ、０．１ｍＭのＮＥＡＡ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン）を３１２，５００細胞／ｍｌの密度で懸濁させた。Ｃｏｒｎｉｎｇ黒色ウェル透明底９６ウェルプレート中、１００μｌ／ウェルのアッセイ培地を無細胞対照ウェル（１２列）に添加し、１００μｌ／ウェルの細胞懸濁液を試験化合物ウェル（２〜８行、１〜１０列）、非刺激対照ウェル（ＤＭＳＯ）（１１列）、及び刺激対照ウェル（Ｓ１Ｐ）（１行、１〜１０列）に添加した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。
【０２６１】
２５μｌの、０．５％ＤＭＳＯを含むアッセイ培地中試験化合物のストック溶液（５×）を試験化合物ウェルに添加し、２５μｌの、０．５％ＤＭＳＯを含むアッセイ培地中アゴニスト（Ｓ１Ｐ）のストック溶液（５×）を刺激化合物ウェルに添加し、２５μｌの、アッセイ培地中０．５％ＤＭＳＯのストック溶液（×５）を非刺激対照及び無細胞対照ウェルに添加する。
【０２６２】
３７℃、５％ＣＯ２で５時間インキュベーションした後、２５μｌの６×基質混合物（６μｌ溶液Ａ（９１２μｌＤＭＳＯ中１ｍｇのＬｉｖｅＢＬＡｚｅｒ（商標）−ＦＲＥＴ  Ｂ／Ｇ基質（ＣＣＦ４−ＡＭ））＋６０μｌ溶液Ｂ＋９３４μｌ溶液Ｃ）を各ウェルに添加し、室温で２時間、暗所にてインキュベートした。プレートを最終的にＥｎＶｉｓｉｏｎで２つの発光チャンネル（４６０ｎｍ及び５３０ｎｍ）について読み取った。
【０２６３】
すべての試験化合物を１０ｍＭの濃度でＤＭＳＯ中に溶解させ、１／５希釈ステップ（１  ｉｎ  ５  ｄｉｌｕｔｉｏｎ  ｓｔｅｐ）を用いて１００％ＤＭＳＯ中で調製して、１０点用量反応曲線を得た。希釈物をアッセイプレートに移し、すべてのアッセイについてプレート全体にわたってＤＭＳＯ濃度が一定であることを確実にした。
【０２６４】
バックグラウンドを差し引いた青色発光値を、バックグラウンドを差し引いた緑色発光値で割ることによって、各ウェルについての青／緑発光比（４６０ｎｍ／５３０ｎｍ）を計算する。用量反応曲線は、Ｓ字型用量反応モデルに基づく。すべての比データを、各プレート上の正の対照（Ｓ１Ｐ）の最大発光比及び負の対照（ＤＭＳＯ）の最小発光比に基づいて正規化した。各化合物の内因活性（ＩＡ）は、曲線適合後のその最大反応の正規化されたパーセンテージである。
【０２６５】
実施例１５〜２０は、このアッセイでｐＥＣ５０＜５を有していた。
【国際調査報告】
2012530081.tif 000082
2012530081.tif 000083
2012530081.tif 000084
2012530081.tif 000085