(57)【要約】  本明細書で開示されるのは、幹細胞集団からＴ細胞を産生するためのシステム及び方法である。本明細書で特に例示されるのは、造血幹細胞の試料を用いて、ＣＤ４系列からＣＤ４細胞及び／又はＴ細胞サブタイプを産生する培養系及び方法である。成人の造血前駆細胞／造血幹細胞（ＨＰＣ）は、免疫細胞のすべての系列への前駆体である。この使い勝手が良い培養系を用いた、機能的なＣＤ４  Ｔ細胞の生成における成功は限定的である。また、本明細書で開示されるのは、ＤＬ１、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、及び、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）を発現する斬新な間質細胞株である。この改良された培養系は、遅いＴ細胞成長に関する研究を大幅に促進することができ、かつ、免疫療法の適用を可能にする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
造血幹細胞（ＨＳＣ）から十分に成熟した機能的なＣＤ４  Ｔ細胞を産生する方法であって、該方法は、前記ＨＳＣの成長を該機能的なＣＤ４  Ｔ細胞に向かわせる培養条件の下、該ＨＳＣを培養することを備え、該培養条件は、
少なくとも２週間、ＩＬ−７の存在下、該ＨＳＣを培養し、かつ、
約２週間から約４週間までの間のある時点で、前記幹細胞をＩＬ−７にさらすことを終了する、
ことを備えることを特徴とする造血幹細胞（ＨＳＣ）から十分に成熟した機能的なＣＤ４  Ｔ細胞を産生する方法。
【請求項２】
前記方法は、約３週間から約４週間までの間のある時点で、前記幹細胞をＩＬ−７にさらすことを終了することを備えることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記方法は、２０日間から２８日間までの間のある時点で、前記幹細胞をＩＬ−７にさらすことを終了することを備えることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記培養することは、デルタ様１リガンド及びＩＬ−７、並びに／又は、Ｆｌｔ３ｌを発現するよう操作された、変性された胎児の間質細胞で前記ＨＳＣを共培養する備えることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記変性された胎児の間質細胞は、哺乳動物細胞であることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記変性された胎児の間質細胞は、マウス、ラット、ウサギ、又は、モルモット起源であることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記変性された胎児の間質細胞は、ＩＬ−７、又は、前記ＩＬ−７と少なくとも９５パーセントの同一性を有するポリペプチド分子をコード化するポリヌクレオチドを備えるベクターでトランスフェクトされていることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記ベクターは、ウイルスベクターであることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ベクターは、レンチウイルスベクターであることを特徴とする請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
成人の骨髄、及び、薬学的に許容できる担体、賦形剤、又は、希釈剤から培養され、かつ、産生された機能的なＣＤ４  Ｔ細胞を備える薬剤組成物。
【請求項１１】
治療上有効な量の請求項１０に記載の組成物を、その必要のある患者に対して、投与することによって癌を治療する方法。
【請求項１２】
前記癌は、黒色腫又は白血病であることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
デルタ様１リガンド及びＩＬ−７、並びに／又は、Ｆｌｔ３ｌを発現するよう操作された、変性された胎児の間質細胞の単離細胞試料。
【請求項１４】
前記細胞は、マウス、ラット、ウサギ、又は、モルモットの細胞であることを特徴とする請求項１３に記載の単離細胞試料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府支援のステートメント
本発明は、承認ＮＩＨグラントＨＬ５９４１２の下、政府支援でなされた。政府は、本発明に対して一定の権利を有している。
【０００２】
本願は、２００８年９月１１日出願の米国仮特許出願第６１／０９６，２４０号に対する３５  ＵＳＣ  １１９に基づく優先権を主張するものである。
【背景技術】
【０００３】
Ｔ細胞は、哺乳動物の免疫系の確立において重要な役割を果たす。この免疫系は、慢性感染症あるいは癌に苦しむ患者では、しばしば正常に機能しない（非特許文献１）。感染症及び癌の治療を目的としたＴ細胞の大量産生は、長年にわたって関心事項となっている。生体外で成長した抗原特異的リンパ球の自家移植は、健康でかつ機能的なＴ細胞のソース制限に挑戦される（非特許文献２）。同種異系の抗原特異的エフェクターＴ細胞の養子移植は、このような反応性のあるＴ細胞の可用性により制限され、そして、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の問題に直面する（非特許文献３）。従って、生体外において、成人の骨髄（ＢＭ）由来のＣＤ３４造血前駆細胞／造血幹細胞（ＨＰＣ）からの抗原特異的Ｔ細胞を大量に産生することにより、上述の制限を幾分克服することに役立ち得る。
【０００４】
胸腺器官培養及び上皮細胞の三次元のマトリクスのような、ヒトＴリンパ球を産生するための従来から確立された生体外の培養系は、大きな労力を要し、かつ、操作するのが困難である（非特許文献４〜６）。これらの生体外の培養系は、マウス及びヒト起源の胚性幹細胞からの初期のＴ細胞分化を実証した（非特許文献７，８）。最近、より簡便なＴ細胞成長培養系が報告されている。すなわち、ノッチリガンドデルタ様１（ＯＰ９−ＤＬ１）を発現するために操作されたマウス胎児の間質細胞（ここで、分化途上の胸腺細胞に対して均一の二次元の環境を提供する）を使用するものである（非特許文献９）。ＯＰ９−ＤＬ１培養系は、マウス胎児の肝臓（非特許文献１０）、成人の骨髄（ＢＭ）（非特許文献１１，１２）、並びに、ヒト臍帯血及び小児のＢＭ（非特許文献１３，１４）から分離された前駆体の分化をサポートすることが報告されている。
【０００５】
ＯＰ９−ＤＬ１培養系を用いて、成人のヒトＨＰＣからの十分に成熟したＴ細胞を生成することにおける成功は限定的である（非特許文献１３，１５）。レンチウイルスベクター（ＬＶ）で操作されたＯＰ９−ＤＬ１（ＬｍＤＬ１）培養系を用いた場合に、成人のＢＭからのＣＤ３４  ＨＰＣは、胎児及び臍帯血起源のものより、より遅いＴ細胞の成長速度を示すことを、我々は最近示している（非特許文献１６）。ＯＰ９−ＤＬ１培養系を用いて、臍帯血起源もしくは生後の胸腺のヒトＨＰＣの中へ、レトロウイルスを媒介としてヒトＣＤ８  Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を輸送することに関する原理を証明する研究が、実証された（非特許文献１７，１８）。患者の自身のＨＰＣからヒト白血球抗原（ＨＬＡ）に合ったＴ細胞を産生するための成人のＴ細胞成長系がなかった場合、後者のアプローチは、同種間移植の難問に直面する（非特許文献１９）。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、従来から利用されている生体外の成人のヒトＴ細胞成長系の少なくとも３つの制約に取り組む。プレＴ細胞の限定的な増殖、ダブルポジティブ（ＤＰ）段階への非効率的な分化、並びに、正の選択及び系列決定の欠如である。本発明者らは、ＤＬ１、Ｆｌｔ３−Ｌ、及び／又は、ＩＬ−７を発現する、操作された間質細胞を用いて、改良されたシステムを開発した。これは、ＣＤ３４  ＨＰＣからのプレＴ細胞増殖を高めることができる。注目すべきことに、本発明者らは、連続的なＩＬ−７シグナル伝達が、未熟なシングルポジティブ（ＩＳＰ）胸腺細胞からＤＰ胸腺細胞へのさらなる分化を損ない、従って、成長途上のリンパ球を機能的に未熟な状態にすることを発見した。正の選択のプロセスは、ＩＬ−７受容体（ＩＬ−７Ｒ）及びＴＣＲシグナルによって高度に調節される。興味深いことに、ＩＬ−７Ｒシグナルの除去とさらなるＴＣＲ結合により、ＣＤ４  Ｔ細胞への正の選択及び系列決定が、生体外で起こり得る。さらに、本発明者らは、これらのＣＤ４  Ｔ細胞が機能的に成熟していることを本明細書で実証する。成人のヒトＨＰＣからの機能的なＣＤ４  Ｔ細胞の生成のための簡便な生体外の培養系の出現により、多くの橋渡しとなる免疫療法の戦略を可能とする。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
図１  レンチウイルスベクターに変性されたマウス胎児の間質細胞株
【図１−Ａ】（Ａ）レンチウイルスベクター構成
【図１−Ｂ】（Ｂ）ＬｍＤＬ１細胞及びＬｍＤＬＦＬ７細胞によるＩＬ−７分泌のＥＬＩＳＡ分析
【図１−Ｃ】（Ｃ）マウスのデルタ様１（ＤＬ１）の表面発現のフローサイトメトリー分析
【図１−Ｄ】（Ｄ）レンチウイルスベクターで変性された間質細胞株ＬｍＤＬ１−ＦＬ及びＬｍＤＬ１−ＦＬ７のＦｌｔ３Ｌ発現のフローサイトメトリー分析
【０００８】
図２  レンチウイルスベクターで変性されたＬｍＤＬ１−ＦＬ７間質細胞は、初期のＴリンパ球のさらなる増殖をサポートする。
【図２−Ａ】（Ａ）ＩＬ−７及びＦｌｔ３Ｌで補充したＬｍＤＬ１上、あるいは、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７上で培養された成人のＢＭ  ＣＤ３４＋  ＨＰＣのＴ細胞成長の動態  成長途上のＨＰＣを、図のように異なる日に共培養からサンプリングし、ａｎｔｉ−ＣＤ４及びａｎｔｉ−ＣＤ８抗体で染色して、フローサイトメトリーで分析した。
【図２−Ｂ】（Ｂ）ＩＬ−７及びＦｌｔ３Ｌで補充したＬｍＤＬ１上、あるいは、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７上で培養された成人のＢＭ  ＣＤ３４＋  ＨＰＣのＣＤ３、及び、ＴＣＲαβ発現動態
【図２−Ｃ】（Ｃ）ＩＬ−７及びＦｌｔ３Ｌで補充したＬｍＤＬ１上、あるいは、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７上の分化途上のＴ細胞の増殖曲線
【図２−Ｄ】（Ｄ）４２日目の共培養から２週間、ａｎｔｉ−ＣＤ３／ａｎｔｉ−ＣＤ２８で刺激した後のＴ細胞成熟マーカー及び核のＫｉ６７のフローサイトメトリー分析  ＰＢＭＣ（未刺激）を対照として用いた。
【０００９】
図３  改良された生体外の培養系からの成熟したＣＤ４（ＣＤ８ではない）Ｔ細胞の成長
【図３−Ａ】（Ａ）実験計画法  ＬｍＤＬ１−ＦＬ７の上で２４日間培養し、その後、ＬｍＤＬ１−ＦＬ培養に移した成人のＢＭ  ＣＤ３４＋  ＨＰＣの成長曲線
【図３−Ｂ】（Ｂ）ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ３、及び、ＴＣＲαβの発現動態のフローサイトメトリー分析
【図３−Ｃ】（Ｃ）成人のＢＭ  ＣＤ３４＋  ＨＰＣを、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７の上で２４日間培養し、その後、ＬｍＤＬ１−ＦＬ培養に移した。４２日目に、これら細胞を刺激し、詳しい分析の前に１４日間培養した。成熟マーカー及び核のＫｉ６７のフローサイトメトリー分析を行った。上記と同じ状態の下で刺激されたＰＢＭＣを対照として用いた。
【００１０】
図４  生体外由来のＣＤ４  Ｔ細胞は、限定されたＶβレパートリーでは機能的である。
【図４−Ａ】（Ａ）２週間刺激されたＴ細胞を、ＰＭＡ及びイオノマイシンで５〜６時間再度刺激し、免疫のエフェクターであるサイトカイン及びタンパク質を検出する抗体で染色した。ＩＬ−７の除去の後、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７／Ｌ−ｍＤＬ１−ＦＬ共培養における、２人の独立したドナーからのＢＭ  ＣＤ３４＋  ＨＰＣ由来のＴリンパ球は、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、及び、ＩＬ−１７を産生することができ、ＣＤ２５を上方制御するのと同様に、ＦｏｘＰ３を発現した。通常のＰＢＭＣ、及び、初代単細胞由来のＣＤ４  Ｔ細胞クローンが、対照として含まれた。
【図４−Ｂ】（Ｂ）３人の異なる成人の骨髄ＣＤ３４＋  ＨＰＣドナーからの生体外由来のＴリンパ球のＶβレパートリーは、対照の成人のＰＢＭＣと比較して、狭く、かつ、偏っているようだった。
【００１１】
【図５】図５  この改良された生体外のＴ細胞成長系は、成人のヒトＨＰＣからの成熟したＣＤ４  Ｔ細胞を生成することができる。  上段の図表は、ＤＬ１、Ｆｌｔ３Ｌ、及び、ＩＬ−７のＴ細胞成長共培養系からの機能的なＴ細胞成長が不足していることを示した。  下段の図表は、レンチウイルスベクターで操作された、ＤＬ１、Ｆｌｔ３Ｌ、及び、ＩＬ−７の共発現、及び、断続的なＩＬ−７の除去があれば、更に多量の成熟した機能的なＣＤ４  Ｔ細胞が生成されることを示す。
【００１２】
図Ｓ１〜３
【図Ｓ３】（Ｓ３）フローサイトメトリーの分析は、（ＯＰ９ＦＬ７上で培養された４２日目の）Ｔ細胞前駆体が、刺激されたＰＢＭＣ対照と比較して、高レベルのＨＬＡクラスＩ、及び、低レベルのＨＬＡ  ＤＲ  ＤＱ  ＤＰを発現することを示す。
【図Ｓ２】（Ｓ２）図Ｓ２は、ＴＲＥＣ及びＲＡＧ２の分析結果である。
【図Ｓ１】（Ｓ１）ＣＤ３ε分析は、ＣＤ８細胞が、対照と同様にＴ細胞レセプター複合体のＣＤ３ε鎖を発現し、ＧＡＴＡ３（ＣＤ４系列マーカー）のレベルを低下させ、かつ、分化の未熟な段階において停止を示唆するＰＵ．１を発現することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
成人の骨髄由来の造血幹細胞（ＨＳＣ）は、機能的な免疫細胞のすべての系列への前駆体である。しかしながら、ＨＳＣから成熟したＴ細胞への十分な分化を導くのに必要な分子のシグナルは、はっきりしないままである。デルタ様１（ＯＰ９−ＤＬ１）を発現するよう操作されたマウス胚の間質細胞株は、初期のＴ細胞の分化をサポートするが、成人の骨髄由来のＣＤ３４＋  ＨＳＣから始まるＴリンパ球の十分な成熟をサポートしないことが報告されている。胸腺と無関係な成熟したＣＤ４Ｔリンパ球の生成における成功は限定的である。一実施形態によれば、本発明は、成人のヒトＣＤ３４＋  ＨＳＣから十分に成熟したＣＤ４Ｔリンパ球への分化を生体外でサポートすることができる、ウイルスベクターで変性された培養系に関する。ＤＬ１、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、及び、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬ）を発現する、操作された間質細胞株は、初期に分化したＴ細胞の増殖をサポートする。しかしながら、連続的なＩＬ−７シグナル伝達は、未熟なシングルポジティブ（ＩＳＰ）ＣＤ８の段階の間、分化停止へ導く。本発明者らは、ＩＬ−７受容体のシグナル伝達の一時的な停止、及び、ＣＤ３／ＣＤ２８シグナルの経路の活性化を通じた併用法によって、この問題を解決した。この修正は、刺激の際にＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αを含むエフェクターサイトカインを産生することができる、成熟したＣＤ４  Ｔ細胞の産生をもたらした。
【００１４】
一実施形態によれば、本発明は、成人のヒトＣＤ３４＋  造血幹細胞（ＨＳＣ）から十分に成熟したＣＤ４  Ｔリンパ球への分化を生体外でサポートすることができる培養系に関する。
【００１５】
より具体的な実施形態によれば、本発明は、ＩＬ−７の存在下でＨＳＣを培養し、かつ、成長過程における時間の一定枠において、これらの細胞をＩＬ−７にさらすことを停止することに関する。さらにより具体的な実施形態では、ＨＳＣは、１４〜２４日間の期間において、（通常はレンチウイルスのようなウイルスベクターでのトランスフェクションによって）ＩＬ−７、ｍＤＬ１、及び、Ｆｌｔ３Ｌを発現するようなＯＰ−９間質細胞などの細胞と共培養される。１４〜３０日の間は、これらのＨＳＣは、もはやＩＬ−７へさらされない。これらのＨＳＣは、後にＴＣＲ刺激にさらされる。これらのＨＳＣは、十分に成熟した機能的なＣＤ４  Ｔ細胞へ成長する。
【００１６】
また、本開示の主題は、対象において抗腫瘍免疫反応を誘発する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、複数のＴ細胞、及び、１又は複数の薬学的に許容できる担体又は添加剤を含む組成物を対象へ投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗腫瘍免疫反応は、（ａ）対象において腫瘍の発生を妨げ、（ｂ）対象において腫瘍の発生を遅らせ、（ｃ）対象において腫瘍が成長する速度を減少させ、（ｄ）対象において腫瘍の再発を妨げ、（ｅ）対象において腫瘍の増殖を抑え、あるいは、（ｆ）それらの組合わせが起こるのに十分である。いくつかの実施形態では、この抗腫瘍免疫反応は、腫瘍の細胞中、あるいは、細胞上に存在する抗原に対する細胞傷害性Ｔ細胞反応を含む。いくつかの実施形態では、この細胞傷害性Ｔ細胞反応は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞によって媒介される。
【００１７】
本開示の組成物及び方法は、多成分の抗腫瘍、及び／又は、抗癌治療法の一部としても使用することができる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、放射線、化学療法、外科的切除、免疫療法、及び、それらの組合わせよりなる群から選ばれたさらなる抗癌治療を対象に提供することをさらに含む。いくつかの実施形態では、このさらなる抗癌治療は、投与するステップの前、同時的、後、あるいは、それらの組合わせ時に、対象に提供される。いくつかの実施形態では、このさらなる抗癌治療は、投与するステップ前に提供され、この組成物は、アジュバント療法として投与される。
【００１８】
本開示の組成物及び方法は、任意の腫瘍及び／又は任意の癌の予防並びに／又は治療のために使用することができる。いくつかの実施形態では、この癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頚癌、胆管癌、結腸直腸癌、胃肉腫、神経膠腫、肺癌、リンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、胃癌、頭腫瘍、頸部腫瘤、及び、充実性腫瘍よりなる群から選ばれる。いくつかの実施形態では、癌は肺癌を含む。
【００１９】
本開示の組成物及び方法は、任意の対象における腫瘍及び／又は癌の予防並びに／又は治療のために使用することができる。いくつかの実施形態では、この対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、この哺乳動物はヒトである。
【００２０】
以下の用語は、この技術分野で通常の知識を有する者によってよく理解されると考えられるが、以下の定義は、本開示の主題の説明を容易にするために明記される。
【００２１】
本明細書で用いられる科学技術用語はすべて、以下で他に定義されない限り、この技術分野で通常の知識を有する者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有するように意図される。本明細書で使用された技術への言及は、これらの技術の変形、もしくは、この技術分野の知識を有する者にとって明らかであろう均等技術への置き換えを含め、この分野で一般的に理解されるような技術を指すように意図される。以下の用語は、この技術分野で通常の知識を有する者によってよく理解されると考えられるが、以下の定義は、本開示の主題の説明を容易にするために明記される。
【００２２】
他に示されない限り、本明細書及びクレームにおいて用いられた、成分量、反応条件などを表わすすべての数は、「ａｂｏｕｔ（約）」の用語により、すべての場合において変形されることとして理解される。従って、特段の断りがない限り、本明細書及び添付されたクレームにおいて明記された数値パラメータは、本開示の主題が得ようと探究した所望の性質に依存して変化し得る近似値である。
【００２３】
長年の特許法の慣行に従えば、「ａ」、「ａｎ」、及び、「ｔｈｅ」という用語は、クレームを含めて、本明細書で用いられるように１又は複数を指すことを意味する。例えば、「ａ  ｃｅｌｌ」という表現は、１又は複数の細胞を指すことができる。さらに、本明細書で用いられるように、「ａｎｏｔｈｅｒ」という用語は、少なくとも第二又は複数を指すことができる。
【００２４】
重量、時間、投与量（例えば細胞の数）の量などのような測定可能な値に言及する場合、本明細書で用いられるような「ａｂｏｕｔ（約）」という用語は、具体的な量から、いくつかの実施形態では±２０％、いくつかの実施形態では±１０％、いくつかの実施形態では±５％、いくつかの実施形態では±１％、また、いくつかの実施形態では±０．１％の変動を包含することを意味し、このような変動は、本開示の方法を行うのに適切である。
【００２５】
本明細書で用いられるように、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（備える）」（及び、「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」や「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」のようなｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇの任意の形）、「ｈａｖｉｎｇ（有する）」（及び、「ｈａｖｅ」や「ｈａｓ」のようなｈａｖｉｎｇの任意の形）、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」（及び、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」や「ｉｎｃｌｕｄｅ」のようなｉｎｃｌｕｄｉｎｇの任意の形）、あるいは、「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（包含する）」（及び、「ｃｏｎｔａｉｎｓ」や「ｃｏｎｔａｉｎ」のようなｃｏｎｔａｉｎｉｎｇの任意の形）の単語は、包括的又は非限定的であり、追加の列挙されていない要素又は方法ステップを除外しない。
【００２６】
本明細書で用いられるように、「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ（治療で有効な量）」「ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ（治療上有効な量）」、「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｍｏｕｎｔ（治療量）」また、「ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ（有効量）」という表現は、区別なく用いられ、測定可能な反応（例えば、治療されている対象において生物学的にあるいは臨床的に適切な反応）を起こすのに十分な組成物（例えば、薬学的に許容できる担体又は賦形剤中の複数のＥＳ細胞、及び／あるいは、他の多能性細胞）の量を指す。例えば、本開示の主題の組成物におけるＣＤ４  Ｔ細胞の実際の投薬レベルは、特定の対象に対して所望の免疫反応を達成するように、十分な数のＣＤ４  Ｔ細胞を投与するように変えることができる。選択された投薬レベルは、いくつかの因子（投与経路、他の薬又は治療との組み合わせ、治療されている症状の重症度、並びに、治療されている対象の症状及び先の病歴を含むが、これらに限定されない）に依存するだろう。
【００２７】
本明細書で用いられるように、ＩＬ−７という用語は、ＩＬ−７と少なくとも９５、９６、９７、又は、９８パーセントの同一性がある既知のＩＬ−７分子あるいはポリペプチドを意味する。いくつかの異なる種のＩＬ−７シーケンスは当業者に周知である。ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号の例は、ＡＡＩ１０５５４、ＢＣ１１０５５３、ＡＡＨ４７６９８、及び、ＢＣ０４７６９８を含む。パーセント同一性は、従来技術及びコンピュータプログラムに従って決定される。例えば、２つのシーケンス間のパーセント同一性は、デフォルトギャップウェイトを用いる、ＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴ（ペプチド）のプログラムによって、あるいは、ＢＬＡＳＴＸ又はＢＬＡＳＴＰのコンピュータアルゴリズムによって測定されたように、最適に配列された場合に、特定の同一性を共有する。好ましくは、同一でない残基位置は、同類アミノ酸置換によって異なる。例えば、電荷又は極性のような同様の化学的性質を有するアミノ酸の置換は、タンパク質の性質に作用しないだろう。非限定的な例は、アスパラギンに対するグルタミン、あるいは、アスパラギン酸に対するグルタミン酸を含む。
【００２８】
「癌」及び「腫瘍」という用語は、区別なく本明細書で用いられ、対象における任意の組織の初期の及び転移した充実性腫瘍並びに癌腫の両方を指すことができる。これらは、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢、胆管、小腸、腎臓と、膀胱と、尿路上皮とを含む尿路、頚部と、子宮と、卵巣とを含む女性生殖管（例えば、絨毛膜癌腫、及び、妊娠性絨毛性疾患）、前立腺と、精嚢と、精巣と、胚細胞腫瘍とを含む男性生殖管、甲状腺と、副腎と、脳下垂体とを含む内分泌腺、皮膚（例えば、血管腫及び黒色腫）又は骨か軟組織、血管（例えば、カポージ肉腫）、脳と神経と眼と髄膜（例えば、星状細胞腫、神経膠腫、膠芽腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュヴァン鞘腫、及び、髄膜腫）を含むが、これらに限定されない。また、「癌」及び「腫瘍」という用語は、緑色腫、形質細胞腫、菌状息肉腫のプラーク及び腫瘍、皮膚Ｔ細胞リンパ腫／皮膚Ｔ細胞白血病を含む白血病、並びに、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫の両方含むリンパ腫のような造血器悪性腫瘍から成長する充実性腫瘍を包含する。本明細書で用いられているように、「癌」及び「腫瘍」という用語は、個々の腫瘍細胞又は前腫瘍細胞と同様に、多細胞腫瘍を指すようにも意図される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、腺腫及び／又は腺癌であり、いくつかの実施形態では、肺腺腫及び／又は腺癌である。
【００２９】
本開示の主題の組成物は、いくつかの実施形態において、薬学的に許容できる担体を含む。対象への投与のために本開示の組成物を調合するため、任意の適切な配合物を用いることができる。いくつかの実施形態では、薬学的に許容できる担体は、ヒトで用いるために薬学的に許容できる。
【００３０】
例えば、適切な配合物は、対象となるレシピエントの体液と等張の配合物の状態にする酸化防止剤と、緩衝剤と、静菌剤と、殺菌性抗生物質と、溶質とを含み得る水溶性及び非水性の滅菌の注射溶液、並びに、懸濁化剤と増粘剤を含み得る水溶性及び非水性の滅菌の懸濁液を含むことができる。これらの配合物は、単位投与容器又は多重投与量容器（例えば、密封したアンプル及びバイアル）で提供することができ、また、使用直前に、滅菌の液状キャリア（例えば、注射用の水）の追加を必要とするだけの、凍結もしくは凍結乾燥された（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄともいう）状態で保存することができる。いくつかの例示された成分は、ＳＤＳ（いくつかの実施形態では、０．１〜１０ｍｇ／ｍｌの範囲、いくつかの実施形態では、約２．０ｍｇ／ｍｌ）、及び／又は、マンニトール又は別の糖質（いくつかの実施形態中では、１０〜１００ｍｇ／ｍｌの範囲、いくつかの実施形態では、約３０ｍｇ／ｍｌ）、及び／又は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。
【００３１】
問題となる配合物のタイプを考慮すれば、本開示の主題の配合物が、特に上記で言及された成分に加えて、この分野で通常の他の薬剤を含むことができることは理解されるべきである。これらの可能な配合物のうち、滅菌発熱性物質を除去された水溶性及び非水性の溶液を用いることができる。
【００３２】
本開示の主題の組成物は、対象における免疫反応を生成し高めると期待される任意の方法で、その必要のある対象へ投与することができる。本開示の主題の組成物の投与に適した方法は、静脈内（ｉ．ｖ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、皮膚下（ｓ．ｄ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、及び／又は、腫瘍内注射、並びに、吸入を含むが、これらに限定されない。
【００３３】
本開示の主題の方法は、その必要のある対象への本開示の主題の組成物を治療上有効な量で投与することを含む。本明細書の上記で定義されるように、「有効量」は、測定可能な反応（例えば、治療されている対象において高められた細胞崩壊、及び／又は、細胞傷害反応）を起こすのに十分な組成物の量である。
【００３４】
実施例１：単純化されたレンチウイルスベクターで変性された間質培養系における成人のヒトＣＤ３４＋  前駆体からの初期のＴリンパ球のさらなる増殖
マウスのデルタ様１リガンド（ＤＬ１）を発現する、レンチウイルスベクターで変性されたマウス胎児の間質細胞株（ＬｍＤＬ１）が、臍帯血、胎児の胸腺、胎生の肝臓、及び、成人の骨髄からのヒトＣＤ３４＋  ＨＰＣの初期のＴ細胞分化をサポートすることができることを我々は以前に報告している（非特許文献１６）。外因的に加えられた増殖因子と無関係の安定したサイトカイン環境を有する培養系を開発するために、我々は、ヒトＦｌｔ３Ｌ、あるいは、Ｆｌｔ３Ｌ及びＩＬ−７の両方を発現するレンチウイルスベクターを用いて、ＬｍＤＬ１細胞にさらに形質導入して、ＬｍＤＬ１−ＦＬ及びＬｍＤＬ１−ＦＬ７細胞株をそれぞれ生成した（図１−Ａ）。４８時間の培養後、ＥＬＩＳＡを介して、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７によるＩＬ−７の分泌を測定したところ、１０〜１４ｎｇ／ｍＬの範囲となった（図１−Ｂ）。３つのレンチウイルスベクターで形質導入された細胞株すべて（ＬｍＤＬ１、ＬｍＤＬ１−ＦＬ、及び、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７）の上における表面のＤＬ１の発現は、フローサイトメトリーによって示されるようにＯＰ９上の内因性のレベルよりかなり高かった（図１−Ｃ）。ａｎｔｉ−Ｆｌｔ３Ｌ抗体を用いて、ＬｍＤＬ１−ＦＬ及びＬｍＤＬ１−ＦＬ７細胞株におけるＦｌｔ３Ｌの表面の高い発現も示された（図１−Ｄ）。
【００３５】
組換え型ヒトＩＬ−７及びＦｌｔ３−Ｌで補充したＬｍＤＬ１細胞上、あるいは、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７細胞上で培養された、高度に精製された（＞９７％）成人のヒトＣＤ３４＋  ＢＭ細胞を用いることで、いかなる増殖因子を用いることなく、Ｔ細胞成長を実証した（図２）。ＬｍＤＬ１−ＦＬ７培養は、わずかに高いレベルのＣＤ８発現を有するＬｍＤＬ１培養のものと同様のＴ細胞成長過程を示した（図２−Ａ）。ＣＤ３及びＴＣＲαβ発現もまた、これら２つの培養系間でわずかに異なった（図２−Ｂ）。どちらの系も、５０〜６０日の過程を通じて、成人のＢＭ  ＣＤ３４＋  細胞からＣＤ３−ＴＣＲαβ−  ＳＰ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞への成長をサポートした（図２）。しかしながら、我々は、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７系を用いた場合に、ＬｍＤＬ１系と比較して、プレＴ細胞増殖が一貫して５倍増加することに注目した（図２−Ｃ）。従って、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７細胞株は、Ｔ細胞の分化能を変えることなく、さらなるＴ細胞前駆体増殖をサポートした。
【００３６】
ＩＬ−７を発現させるために、アデノウイルス、レトロウイルス、又は、ＡＡＶウイルス、もしくは、裸のＤＮＡ（しかし、これらに制限されない）のような他の複数のウイルスベクター（しかし、これらに制限されない）のような、細胞を形質転換する他の方法を活用することができることを、当業者は理解するだろう。さらに、胎児の間質細胞以外の細胞タイプは、共培養する目的としてＩＬ−７を発現させるために操作することができる。あるいは、培地へ手動で供給することにより、ＩＬ−７を標的細胞タイプへさらすことができる。
【００３７】
実施例２：ＬｍＤＬ１−ＦＬ７細胞株は、ＢＭ  ＣＤ３４  ＨＰＣから十分に成熟したＴ細胞の中への分化をサポートしない。
ダブルネガティブ（ＤＮ）段階からＤＰ段階への分化途上のＴ細胞、並びに、ＣＤ４及びＣＤ８系列の転換は、プレＴＣＲシグナル伝達と同様にノッチシグナル伝達も必要とする（非特許文献２２，２３）。これらのＤＰ  Ｔ細胞は、生存のため、もっぱらＴＣＲ下流のシグナルに依存する。つまりこの段階では、これらは、サイトカインに誘導された生存シグナルに対して無反応になる（非特許文献２４，２５）。我々は、Ｔ細胞前駆体はＣＤ３を発現するが、ＩＬ−７、Ｆｌｔ３Ｌ、及び、ノッチシグナル伝達の共培養において約４０日後に死滅することに気づいた（図２−Ｃ）。これらの成長途上のＴ細胞が成熟したＳＰ  Ｔ細胞になることができるかどうか確かめるために、我々は、４２日目においてａｎｔｉ−ＣＤ３／ａｎｔｉ−ＣＤ２８マイクロビーズを用いることにより、これらのＴ細胞にＴＣＲシグナルを提供した（図２−Ｄ）。ＣＤ３／ＣＤ２８刺激に続いて、これらの細胞は、その表面上に低レベルのＣＤ８を発現した。成熟したＴ細胞は、ＣＤ３、ＴＣＲαβ、及び、共同刺激的な分子であるＣＤ２８を発現し、かつ、ＣＤ１ａ（非特許文献２６）を欠くため、我々は、成長途上のＣＤ８  ＳＰ細胞においてこれらのマーカーを検討した。抗体染色結果は、低レベルのＣＤ３、ＣＤ２８、検出できないＴＣＲαβ、及び、際立った量のＣＤ１ａを示した（図２−Ｄ）。これは、これらのＣＤ８  ＳＰ細胞が、十分に成熟していなかったことを示唆した。これらの培養細胞は、成熟の徴候を示さず、増殖抗原Ｋｉ６７のための核染色によって示されるようにＴＣＲシグナルに対して反応しない（図２−Ｄ）。共培養の５０日目及び６０日目から得られた細胞を刺激することでも、同様の結果が得られた（データは示さず）。簡潔に言えば、これらの結果は、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７細胞で培養されたヒトＢＭ  ＨＰＣは、機能的なＣＤ８又はＣＤ４シングルポジティブＴ細胞を成長させないことを示す。
【００３８】
実施例３：ＩＬ−７除去後のプレＴ細胞からＤＰ  Ｔ細胞までのさらなる分化
上記の結果は、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７培養系が、ＩＳＰ  Ｔ細胞からＤＰ  Ｔ細胞への分化、及び、Ｔ細胞の十分な成熟をサポートしないことを示した。この共培養では、わずかな割合のＣＤ３＋  Ｔ細胞だけが、低レベルのＴＣＲαβを共発現した。これは、不適当なＴＣＲ転位又は処理を示唆した（図２−Ｂ）。ＩＬ−７受容体シグナル伝達の下向き調節は、これがＣＤ４ＣＤ８  ＤＰ段階への成熟に必要な転写因子を阻害するため、マウスにおけるプレＴリンパ球のさらなる分化に必要である（非特許文献２７〜３０）。このＩＬ−７シグナル伝達が、ＤＰ  Ｔ細胞においてブロックされているにもかかわらず、これらの細胞は、最小限のＩＬ−７産生細胞を有する胸腺のコンパートメント中に存在する（非特許文献３１）。我々はヒトにおけるＤＰ段階への効率的なＴ細胞分化は、ＩＳＰ細胞の発現後に、ＩＬ−７を除去することにより促進されるかもしれないと仮定した。これを試験するために、我々は、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７中で成人のヒトＢＭ  ＣＤ３４＋  細胞を２４日間培養し、その後、ＩＬ−７なしのＬｍＤＬ１−ＦＬへこれらの細胞を移した（図３−Ａ）。ＩＬ−７の除去後、我々は、３０日目にＤＰ段階への急速な転換を認めた（図２−Ａ対図３−Ｂ）。この転換は、ドナーにより異なるが、何人かのドナーでは、これらの細胞は３５日目にＤＰになった。ＤＰ細胞の発現に沿って、ＣＤ３及びＴＣＲαβの多数の集団の共発現が検出された。これは、これらの細胞がＩＬ−７の除去直後に正の選択を経たことを示唆した。興味深いことには、この経路に沿ったさらなる分化は、増殖停止及び細胞死に至った（図３−Ａ）。
【００３９】
実施例４：ＣＤ４  Ｔ細胞系列への決定は、ＩＬ−７を除去した分化途上のＴ細胞のＴＣＲ刺激で達成することができる。
Ｔ細胞系列決定は、サイトカイン及びコレセプターシグナルを必要とする（非特許文献２４）。我々は、ＴＣＲシグナルを与える場合に、ＩＬ−７を除去したＤＰ  Ｔ細胞が系列決定を受けるだろうと仮定した。ＣＤ３及びＴＣＲαβの共発現が、３０〜４２日目（ドナーにより異なる）の間で検出されたときに、ａｎｔｉ−ＣＤ３／ａｎｔｉ−ＣＤ２８マイクロビーズでＩＬ−７を除去したＴ細胞前駆体を刺激した。ＴＣＲシグナル伝達の後、Ｋｉ６７核染色によって示されるように、これらのＴ細胞は増殖した（図３−Ｃ）。さらに、これらのＴ細胞は、ＣＤ３、ＣＤ２８、及び、ＴＣＲαβを含むが、ＣＤ１ａを含まない、Ｔ細胞分化及び成熟マーカーの検出によって示されるように、ＩＳＰ段階以降に分化した（図３−Ｃ、同様に刺激されたＰＢＭＣとの比較）。従って、ＩＬ−７の継続した存在は、ＩＳＰ段階以降のさらなるＴ細胞分化を妨げ、成長途上の成人のヒトＴ細胞の機能的な成熟を損なう。さらに、これらの生体外由来の成熟したＴ細胞は、ほとんどがＣＤ４  Ｔ細胞だった。ＩＬ−７シグナルがＣＤ８＋  Ｔ細胞の成長に必要なため、ＩＬ−７の除去は、中間のＣＤ４＋  Ｔ細胞への細胞分化に偏り得る。長期に渡るＴＣＲシグナル伝達（あるいは、より高い強度及び長い持続）がＣＤ８＋  ＳＰへのコレセプター反転をブロックすることができるように、続くＴＣＲシグナル伝達は、中間のＣＤ４＋ＣＤ８−  胸腺細胞からＣＤ４＋  Ｔ細胞への決定を促進することができた（非特許文献２０，３２）。
【００４０】
実施例５：改良された生体外の培養系でのＣＤ４  Ｔ細胞の機能的な成長
生体外由来のＣＤ４＋  Ｔ細胞がエフェクターＴ細胞の機能を示し得るかどうか調査するために、我々は、ＣＤ３／ＣＤ２８で活性化された、４２日目のＴ細胞をＰＭＡ及びイオノマイシンで処理した。６〜８時間の後、我々は、細胞内、及び、表面を染色することによって、エフェクターサイトカインであるＩＦＮ−γ、ＩＬ−１７、及び、ＩＬ−４の分泌を分析し、さらに、制御Ｔ細胞に関連するＣＤ２５及びＦｏｘＰ３発現を評価した。生体外由来のＣＤ４＋  Ｔリンパ球は、２人の異なるドナーから示されたように、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１７、及び、ＩＬ−４を分泌することができ、また、対照のＰＢＭＣ由来ＣＤ４  Ｔ細胞、又は、精製された初期ＣＤ４  Ｔ細胞クローンに匹敵する、表面ＣＤ２５、及び、低レベルの細胞内のＦｏｘＰ３を発現した（図４−Ａ）。これらの結果は、培養状態を極性化することがない場合でさえ、これらの細胞が、様々なＣＤ４エフェクターＴ細胞のサブタイプに分化するように本質的にプログラムされていることを示唆する（非特許文献３３）。
【００４１】
実施例６：生体外で生成したＣＤ４  ＳＰ  Ｔ細胞のＶβレパートリーは、狭く、かつ、偏っている。
生体外由来のＴリンパ球のＴＣＲの多様性を評価するために、ＩＯＴｅｓｔ（登録商標）  Ｂｅｔａ  Ｍａｒｋ  ＴＣＲ  Ｖβ  レパトワキットを用いて、２３のＶβファミリーに対してＶβレパートリー分析を行った。ＣＤ４＋  ＳＰ  Ｔ細胞へ成長した４２日目のＴ細胞を、ＩＯＴｅｓｔ（登録商標）の抗体パネルで染色した。これらの生体外由来のＣＤ４＋  Ｔ細胞は、特定のＶβファミリーに偏った狭いＶβの使用を示した（図４−Ｂ）。例えば、ドナー１は、Ｖｂ５．１、Ｖｂ７．１、Ｖｂ１３．１、及び、Ｖｂ１８の中程度に偏った（＞１０％）使用を示した。ドナー２は、Ｖｂ２（１５％）、及び、Ｖｂ５．２（２９％）の偏った使用を示した。ドナー３は、Ｖｂ７．２（２９％）、及び、Ｖｂ４（４４％）の非常に偏った使用を示した。生体外由来のＴリンパ球のＶβレパートリーは、正常な成人のＰＢＭＣのものよりさらに制限されたように見えた。
【００４２】
実施例１〜６に関する考察
【００４３】
述べられた理論、機序、又は、有意性に縛られるものではないが、本発明者らは、上記に明記された実施例１〜６によって達成された結果に関して、以下の考察を提供する。
【００４４】
ＯＰ９−ＤＬ１培養系は、臍帯血、及び、胎児の肝臓のＨＰＣからの初期のＴ細胞の成長をサポートするが、成人のヒトＨＰＣから成熟したＴ細胞を成長することは示されていない（非特許文献８〜１０，１３，３４）。積み重ねられた研究は、ＯＰ９−ＤＬ１系がダブルポジティブ（ＤＰ）段階への初期のＴ細胞の分化をサポートすることを明らかにしたのみで、ＤＰ段階以降のこれらのＴ細胞の詳細な特徴づけ、及び、機能的な解析が不足している（非特許文献１０，１３）。ＯＰ９−ＤＬ１培養系は、ヒトＴ細胞成長研究を大幅に促進したが、成人のヒトのＨＰＣから多数の成熟したＴ細胞を生体外で産生することは困難なままである（非特許文献３５）。ここで、本発明者らは、間質培養系であるＬｍＤＬ１−ＦＬ７の変更バージョンを報告する。これは、外因性のサイトカインの必要性がなく、成人のＣＤ３４＋  ＨＰＣからの初期のＴ細胞のさらなる増加をサポートする。しかしながら、ＬｍＤＬ１−ＦＬ７細胞株単独では、成人のヒトＣＤ３４＋  ＨＰＣからの十分なＴ細胞成長をサポートしない。もっと正確に言えば、分化途上のＴ細胞は、未熟なシングルポジティブ（ＩＳＰ）ＣＤ８  Ｔ細胞段階で停止する。この問題は、図５にまとめられるように、ＤＮからＤＰ及びＳＰ  Ｔ細胞成長段階への間の共培養条件のさらなる修正によって解決される。
【００４５】
公表されたＴ細胞成長系はいずれも、成人のヒトＣＤ３４＋  ＨＰＣから、十分に成熟したＭＨＣクラスＩＩ拘束性ＣＤ４  ＳＰ  Ｔ細胞を誘導することができない（非特許文献１０，１５，３５〜３８）。本明細書で記述された培養系は、成人のヒトＣＤ３４＋  ＨＰＣからのＣＤ４  Ｔ細胞の分化及び成熟を生体外でサポートすることができる。ＣＤ３４＋  ＨＰＣからＣＤ４  Ｔ細胞への十分な分化は、ＩＬ−７を除去したＤＰ  Ｔ細胞のＣＤ３／ＣＤ２８刺激によって促された。活性化の際、これらの生体外で成長したＣＤ４  Ｔ細胞は、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−７、ＩＬ−４を分泌し、かつ、成熟した機能的なＴ細胞の特徴であるＣＤ２５及びＦｏｘＰ３を発現した。重要なことには、生体外で成長したＴ細胞の機能的な反応は、低形質のＲａｇ変異（これらは、ＤＮ３段階で停止して、異常に活性化され、かつ、ＣＤ３に無反応である）を担うマウス及びヒトにおいて特徴づけられた、制限を解除された異常ＣＤ４  Ｔ細胞のものとは異なる（非特許文献３９〜４１）。
【００４６】
マウスにおける従来の研究は、プロＴリンパ球からＤＰ  Ｔリンパ球への効率的な分化を可能にするためには、ＤＮ３段階以降の成長途上のＴリンパ球において、ＩＬ−７受容体のシグナル伝達の下向き調節が必要とされることを示唆した（非特許文献２７，２８，３０，４２，４３）。ＬｍＤＬ１−ＦＬ７共培養において成人のＨＰＣからのＣＤ８＋  ＩＳＰ  Ｔリンパ球の蓄積は、ＩＬ−７の連続的なシグナル伝達によるＤＰ段階の前の分化障害を最も反映しやすい。というのは、これらの細胞が、Ｔ細胞分化の初期段階での転写因子ＰＵ．１の発現を保持するからである（図Ｓ１−Ａ）。他のものは、ＩＬ−７は、生体外でのＴ細胞の生存及び増殖を助けるが、マウスにおけるＴ細胞成長の間、ＩＳＰのＤＰ  Ｔリンパ球へのさらなる進行を妨げることを示している（非特許文献２７〜２９，４２，４４）。ＩＬ−７Ｒシグナル伝達は、マウスにおけるＩＳＰからＤＰへの転換に必須の、転写因子−１（ＴＣＦ−１）、リンパ系エンハンサー結合因子１（ＬＥＦ１）、及び、オーファンホルモン受容体ＲＯＲγｔのような転写因子の発現を阻害することができる（非特許文献２８）。我々の結果は、ヒトにおけるＴ細胞成長でのＩＬ−７Ｒシグナル伝達の役割は、これがＩＳＰからＤＰへの転換に影響を及ぼすような、マウスにおけるのと同様であることを示す（非特許文献２７〜２９，４２，４４，４５）。ＩＬ−７は、成長途上のＴ細胞からＤＰ段階への転換を完全にはブロックしない、もっと正確に言えば、ＴＣＲ刺激に対して反応することができないため機能的でない、うまく分化できないＤＰ  Ｔ細胞の状態にするようである。ＤＰ  Ｔ細胞の機能的な成熟のＩＬ−７の役割のより進んだ検討が必要である。
【００４７】
本明細書で記述された系の実施形態では、本発明者らは、ＣＤ８  Ｔ細胞を消費して成熟したＣＤ４  Ｔ細胞を得ることができた。ＯＰ９間質細胞は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ及びクラスＩＩを発現しないが、ＤＰ  Ｔ細胞を成熟するために、ヒト胸腺細胞が十分なクラスＩ及びクラスＩＩ  ＨＬＡの接触を提供し、正の選択を誘発することができる可能性がある（図Ｓ１−Ｂ）（非特許文献４６，４７）。実際、ヒトＤＰ  Ｔ細胞におけるＭＨＣクラスＩＩ分子の発現は、それ自身の正の選択に必須である（非特許文献４８）。ＣＤ４  Ｔ細胞への系列決定は、シグナル伝達の動態モデルによって説明することができる。これは、正の選択であるＴＣＲシグナルの後に持続性のＴＣＲ刺激を受けた場合に、ＤＰ  Ｔ細胞がＣＤ４  Ｔ細胞経路を採用することを提案する。ＴＣＲシグナルが停止すれば、ＤＰ細胞は、ＣＤ８  Ｔ細胞経路を採用する（非特許文献２０，２４）。本明細書で記述されたある系の実施形態において、本発明者らは、ａｎｔｉ−ＣＤ３／ａｎｔｉ−ＣＤ２８抗体を介した長期に渡るＴＣＲシグナルを用いて、ＩＬ−７を除去した分化途上のＴ細胞前駆体を提供する。これは、ＣＤ４系列選択を説明し得る。
【００４８】
実施例に１〜６関する材料及び方法
【００４９】
ヒトＣＤ３４＋  細胞及び細胞株
正常なドナーからの成人の骨髄又は動員末梢血のＣＤ３４＋  造血前駆体／幹細胞（ＨＰＣ）、及び、臍帯血ＣＤ３４＋  細胞は、ＡｌｌＣｅｌｌ  Ｉｎｃ．（サンマテオ，カリフォルニア州，ＵＳＡ）、又は、Ｃａｍｂｒｅｘ（ウォーカーズヴィル，メリーランド州）から購入した。マウス胎児の間質細胞（ＯＰ９）は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ，マナッサス，バージニア州）から購入した。操作されたＬｍＤＬ１及びＬｍＤＬ１−ＦＬ７細胞株は、マウスデルタ様１（ＤＬ１）、並びに、ＤＬ１及びヒトＦｌｔ３ＬにヒトＩＬ−７をそれぞれ添加したものをコード化するレンチウイルスベクターを用いて、細胞に形質導入することにより生成した。２０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）、及び、１％のペニシリン−ストレプトマイシン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，マナッサス，バージニア州）で補充したα−ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ，グランドアイランド、ニューヨーク州）中で、これらの間質細胞を維持した。ヒトＩＬ−７  ＥＬＩＳＡキットを用いることにより、ＩＬ−７サイトカイン分泌を測定した。無細胞上清は、１ｍｌの培地（Ｒａｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ）を含む１２ウェルプレート中で４８時間（８０−９０％のコンフルエント）培養された、ＬｍＤＬ１及びＬｍＤＬＦＬ７の細胞から得た。ｍｏｄｅｌ  ６８０  ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｒｅａｄｅｒ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）で、これらの試料を測定した。ＤＬ１及びＦｌｔ３Ｌの表面の発現を、メーカーの指示（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従って、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７結合ａｎｔｉ−ＤＬ１  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及び、ｚｅｎｏｎ−ａｌｅｘａ  ４８８に結合した、精製ａｎｔｉ−Ｆｌｔ３Ｌ  Ａｂ（Ａｂｃａｍ  Ｉｎｃ．，ケンブリッジ，マサチューセッツ州）を用いて、フローサイトメトリーによって分析した。
【００５０】
ＬｍＤＬ１間質細胞−ＣＤ３４＋  ＨＰＣの共培養
ＣＤ３４＋  ＨＰＣを、ＬｍＤＬ１又はＬｍＤＬ１−ＦＬ７細胞のコンフルエントな単層を含む２４ウェルプレートに１×１０５個／ウェルで播種した。これらの共培養を、示されるように、５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−７（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．，ロッキーヒル，ニュージャージー州）、及び、５ｎｇ／ｍｌのＦｌｔ３Ｌ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．）で補充した、２０％のＦＢＳ、及び、１％のペニシリン−ストレプトマイシンを用いたα−ＭＥＭから成る完全培地中で１日目から開始して維持した。２〜３日ごとに、これらの共培養に新しい培地を補充した。単層が分化し始めた時点で、あるいは、成長途上の細胞が、８０〜９０％のコンフルエントに達する時に、懸濁液中のこれらの細胞を、新たなコンフルエントな間質細胞の単層に移した。激しいピペット操作によってこれらの細胞を移した後、７０μｍのフィルタ（ＢＤ／Ｆａｌｃｏｎ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，スパークス，メリーランド州）でろ過し、室温で１０分間、２５０ｇで遠心分離した。これらの細胞ペレットを新鮮でコンフルエントな単層に移した。分析のためのＴ細胞成長の間の指示された時点で、これらの細胞を採取した。
【００５１】
モノクローナル抗体及びフローサイトメトリー
ＣＤ４（クローンＲＰＡ−Ｔ４、ＰＥ、ＦＩＴＣ、ＰＥ−Ｃｙ７、及び、パシフィックブルー）、ＣＤ８（クローンＲＰＡ−Ｔ８  ＰＥ、ＦＩＴＣ、ＰＥ−Ｃｙ７、及び、パシフィックブルー）、ＣＤ３（クローンＳＫ７、ＰＥ−Ｃｙ７）、ＴＣＲαβ（クローンＴ１０Ｂ９．１Ａ−３１、ＦＩＴＣ）を含む、表面染色のために使用された抗体は、ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（サンホセ，カリフォルニア州）から得られたものである。細胞を、２％のＦＢＳを添加したＰＢＳで最初に洗浄し、４℃で３０分間、マウス及びヒト血清でブロックした。各抗体染色については、メーカーの指示により、抗体で細胞をインキュベートした。用いられた各蛍光色素で標識化されたＡｂについては、適切なアイソタイプコントロールが含まれていた。抗体染色の後、これらの細胞を２回洗浄し、２％のパラホルムアルデヒドで固定した。ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａにおいて、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｄｉｖａ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン５．０．１）を用いて、データを得て、Ｆｌｏｗｊｏ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン７．１．３．０，Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，Ｉｎｃ．，パサデナ，テキサス州）を用いて分析した。
【００５２】
ａｎｔｉ−ＣＤ３／ａｎｔｉ−ＣＤ２８ビーズによるＴ細胞刺激
ナイーブＴ細胞を刺激するため、メーカーの指示によりａｎｔｉ−ＣＤ３／ａｎｔｉ−ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｌ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，サンディエゴ，カリフォルニア州）を用いて、長期的な刺激のためのプロトコルに従った。これらの細胞及びビーズを混合し、Ｘ−ｖｉｖｏ  ２０（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｃａｍｂｒｅｘ，ウォーカーズヴィル，メリーランド州）培地の中に３７℃で２〜３日間、９６ウェルプレートへ播種した。３日目に、１２．５ＵのＩＬ−２、５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−７、及び、２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ１５を添加し、さらに１１〜１２日間、細胞を培養した。上述のように、以下の抗体を用いて、表面染色を行った。ＣＤ４（クローンＲＰＡ−Ｔ４、ＰＥ、ＦＩＴＣ、ＰＥ−Ｃｙ７、及び、パシフィックブルー）、ＣＤ８（クローンＲＰＡ−Ｔ８  ＰＥ、ＦＩＴＣ、ＰＥ−Ｃｙ７、及び、パシフィックブルー）、ＣＤ３（クローンＳＫ７、ＰＥ−Ｃｙ７）、ＴＣＲαβ（クローンＴ１０Ｂ９．１Ａ−３１、ＦＩＴＣ）、ＣＤ１ａ（クローンＨＩ１４９、ＡＰＣ）は、ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得られたものである。ＣＤ２８（クローンＣＤ２８．２、ＡＰＣ）は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｃ．（サンディエゴ，カリフォルニア州）から得られたものである。細胞内染色は、ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからの、ａｎｔｉ−Ｋｉ６７（クローンＢ５６、ＦＩＴＣ）及びアイソタイプＩｇＧ１κを用いて行った。細胞内染色は、ａｎｔｉ−Ｋｉ６７  ＦＩＴＣ及びアイソタイプＩｇＧ１κ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて行った。細胞内染色は、メーカーのプロトコルに従って、ＢＤ  ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍキットを用いて行った。
【００５３】
生体外で生成されたＣＤ４＋  Ｔ細胞のエフェクター機能分析
ＣＤ３／ＣＤ２８で増殖させたＣＤ４  Ｔ細胞を、ＰＭＡ及びイオノマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，セントルイス，ミズーリ州）で刺激し、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、及び、ＩＬ−１７の放出を分析した。簡潔に言えば、これらの細胞を２５ｎｇ／ｍｌのＰＭＡ、及び、１μｇ／ｍｌのイオノマイシンで１時間インキュベートした後、６μｇ／ｍｌのモネンシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加して、ゴルジを介したサイトカイン分泌を阻害した。４〜５時間のインキュベートの後、これらの細胞を採取した。また、表面染色のための、ＣＤ４（クローンＲＰＡ−Ｔ４、パシフィックブルー）、ＣＤ８（クローンＳＫ１、ＡＰＣ−Ｃｙ７）、ＣＤ３（クローンＳＫ７、ＰＥ−Ｃｙ７）、ＣＤ２５（クローンＭ−Ａ２５１、ＰＥ）、及び、細胞内染色のための、ＩＦＮ−γ（クローン２５７２３．１１、ＦＩＴＣ）、ＩＬ−４（クローンＭＰ４２５Ｄ２、ＡＰＣ）、ＦＯＸＰ３（クローンＰＣＨ１０１、Ａｌｅｘａ６４７）は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得られたものである。ＩＬ１７（クローン６４ＣＡＰ１７、ＰＥ）は、ｅ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得られたものである。ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａを用いて、フローサイトメトリーによってデータを集め、Ｆｌｏｗｊｏを用いて分析した。
【００５４】
生体外由来のＣＤ４＋  Ｔ細胞のＶβレパートリー分析
生体外で成長したＴリンパ球のＶβレパートリーは、ＩＯＴｅｓｔ（登録商標）  Ｂｅｔａ  Ｍａｒｋ  ＴＣＲ  Ｖβ  レパトワキット（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，フラートン，カリフォルニア州）を用いて分析した。２４のＶβファミリーのための染色は、メーカーのプロトコルに従って行った。
【００５５】
補足の図に関する材料と方法
【００５６】
抗体
用いられた抗体は、ＣｌａｔａｇからのＨＬＡクラスＩ（クローンＴＵ１４９、ＰＥ）、及び、ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからのＨＬＡ  ＤＲ  ＤＱ  ＤＰ（クローンＴＵ３９、ＦＩＴＣ）であった。
【００５７】
ＲＴ−ＰＣＲ
ＲＮＡは、ＴＲＩ試薬（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）用いて、ＣＤ８、ＣＤ４単細胞クローン、生体外で成長したＤＮ＋  ＣＤ８、生体外で成長したＣＤ４  Ｔ細胞から採取した。Ｔｗｏ−ｓｔｅｐ  ＡＭＶ  ＲＴ−ＰＣＲキット（Ｇｅｎｅ  ｃｈｏｉｃｅ、メリーランド州）を用いることにより、１ｕｇのＲＮＡをｃＤＮＡへ逆転写した。以下のプライマーが、ＰＣＲ反応ために用いられた。ＧＡＰＤＨ−Ｆ−５’ＣＣＧ  ＡＴＧ  ＧＣＡ  ＡＡＴ  ＴＣＧ  ＡＴＧ  ＧＣ  ３’、及び、Ｒ−５’  ＧＡＴ  ＧＡＣ  ＣＣＴ  ＴＴＴ  ＧＧＣ  ＴＣＣ  ＣＣ  ３’、ＰＵ．１  Ｆ−５’  ＴＧＧ  ＡＡＧ  ＧＧＴ  ＴＴＣ  ＣＣＣ  ＴＣＧ  ＴＣ  ３’、及び、Ｒ−５’  ＴＧＣ  ＴＧＴ  ＣＣＴ  ＴＣＡ  ＴＧＴ  ＣＧＣ  ＣＧ  ３’、ＣＤ３ｅ  Ｆ−５’  ＴＧＡ  ＡＧＣ  ＡＴＣ  ＡＴＣ  ＡＧＴ  ＡＧＴ  ＣＡＣ  ＡＣ  ３’、及び、Ｒ−５’  ＧＧＣ  ＣＴＣ  ＴＧＴ  ＣＡＡ  ＣＡＴ  ＴＴＡ  ＣＣ  ３’、ＧＡＴＡ−３  Ｆ−５’  ＧＡＣ  ＧＡＧ  ＡＡＡ  ＧＡＧ  ＴＧＣ  ＣＴＣ  ＡＡＧ  ３’、及び、Ｒ−５’  ＴＣＣ  ＡＧＡ  ＧＴＧ  ＴＧＧ  ＴＴＧ  ＴＧＧ  ＴＧ  ３’である。３０サイクルの増幅（９５℃で３０分間、５５℃で３０分間、及び、７２℃で６０分間）の後、ＰＣＲ産物を２％のアガロース・ゲルで分離した。
【００５８】
参照
【００５９】
関連する出願を含む、本明細書で引用されたすべての参考文献の開示は、本明細書の教示と不一致とならない程度にそれらの全体において盛り込まれる。
【００６０】
以下のリストは、上述の参考文献、及び、追加の関連する参考文献の完全な引用を含む。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００６１】
【非特許文献１】１．ダッドレー，Ｍ．Ｅ．（Ｄｕｄｌｅｙ，Ｍ．Ｅ．），及び，Ｓ．Ａ．ローゼンバーグ（Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）．  ２００３．  「癌を有する患者の治療のための養子細胞移入療法」（Ａｄｏｐｔｉｖｅ−ｃｅｌｌ−ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃａｎｃｅｒ．）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ３：６６６−６７５．
【非特許文献２】２．ジテルソン，Ｅ．（Ｇｉｔｅｌｓｏｎ，Ｅ．），Ｃ．ハモンド（Ｃ．Ｈａｍｍｏｎｄ），Ｊ．メナ（Ｊ．Ｍｅｎａ），Ｍ．ロレンツォ（Ｍ．Ｌｏｒｅｎｚｏ），Ｒ．バックスタイン（Ｒ．Ｂｕｃｋｓｔｅｉｎ），Ｎ．Ｌ．ベーリンスタイン（Ｎ．Ｌ．Ｂｅｒｉｎｓｔｅｉｎ），Ｋ．イムリー（Ｋ．Ｉｍｒｉｅ），及び，Ｄ．Ｅ．スパナー（Ｄ．Ｅ．Ｓｐａｎｅｒ）．  ２００３．  「疾患進行中の、及び、自己由来の腫瘍細胞ワクチンの後の慢性リンパ球性白血病に反応性のあるＴ細胞」（Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｆｔｅｒ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．）  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ９：１６５６−１６６５．
【非特許文献３】３．ガッティノーニ，Ｌ．（Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．），Ｄ．Ｊ．パウエル，Ｊｒ．（Ｄ．Ｊ．Ｐｏｗｅｌｌ，Ｊｒ．），Ｓ．Ａ．ローゼンバーグ（Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ），及び，Ｎ．Ｐ．レスティフォ（Ｎ．Ｐ．Ｒｅｓｔｉｆｏ）．  ２００６．  「癌のための養子免疫療法：成功を築き上げるために」（Ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ：  ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｏｎ  ｓｕｃｃｅｓｓ．）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：３８３−３９３．
【非特許文献４】４．プラム，Ｊ．（Ｐｌｕｍ，Ｊ．），Ｍ．デスメット（Ｍ．Ｄｅ  Ｓｍｅｄｔ），Ｍ．Ｐ．デフレーヌ（Ｍ．Ｐ．Ｄｅｆｒｅｓｎｅ），Ｇ．ルクレルク（Ｇ．Ｌｅｃｌｅｒｃｑ），及び，Ｂ．ファンデケルクホフ（Ｂ．Ｖａｎｄｅｋｅｒｃｋｈｏｖｅ）．  １９９４．  「ヒトＣＤ３４＋  胎児性肝幹細胞は、マウスの胸腺のミクロ環境においてＴ細胞に分化する。」（Ｈｕｍａｎ  ＣＤ３４＋  ｆｅｔａｌ  ｌｉｖｅｒ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ  ｔｏ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｔｈｙｍｉｃ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．）  Ｂｌｏｏｄ  ８４：１５８７−１５９３．
【非特許文献５】５．ヨーマン，Ｈ．（Ｙｅｏｍａｎ，Ｈ．），Ｒ．Ｅ．グレス（Ｒ．Ｅ．Ｇｒｅｓｓ），Ｃ．Ｖ．ベア（Ｃ．Ｖ．Ｂａｒｅ），Ａ．Ｇ．リアリー（Ａ．Ｇ．Ｌｅａｒｙ），Ｅ．Ａ．ボイゼ（Ｅ．Ａ．Ｂｏｙｓｅ），Ｊ．バード（Ｊ．Ｂａｒｄ），Ｌ．Ｄ．シュルツ（Ｌ．Ｄ．Ｓｈｕｌｔｚ），Ｄ．Ｔ．ハリス（Ｄ．Ｔ．Ｈａｒｒｉｓ），及び，Ｄ．デルーカ（Ｄ．ＤｅＬｕｃａ）．  １９９３．  「ヒト骨髄及び臍帯血の細胞は、マウス胎児の胸腺器官培養において、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋シングルポジティブＴ細胞を生成する。」（Ｈｕｍａｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ａｎｄ  ｕｍｂｉｌｉｃａｌ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌｓ  ｇｅｎｅｒａｔｅ  ＣＤ４＋  ａｎｄ  ＣＤ８＋  ｓｉｎｇｌｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｆｅｔａｌ  ｔｈｙｍｕｓ  ｏｒｇａｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ．）  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９０：１０７７８−１０７８２．
【非特許文献６】６．ポズナンスキー，Ｍ．Ｃ．（Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ，Ｍ．Ｃ．），Ｒ．Ｈ．エヴァンス（Ｒ．Ｈ．Ｅｖａｎｓ），Ｒ．Ｂ．フォックソール（Ｒ．Ｂ．Ｆｏｘａｌｌ），Ｉ．Ｔ．オーザック（Ｉ．Ｔ．Ｏｌｓｚａｋ），Ａ．Ｈ．ピアシック（Ａ．Ｈ．Ｐｉａｓｃｉｋ），Ｋ．Ｅ．ハルトマン（Ｋ．Ｅ．Ｈａｒｔｍａｎ），Ｃ．ブランダー（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｒ），Ｔ．Ｈ．マイヤー（Ｔ．Ｈ．Ｍｅｙｅｒ），Ｍ．Ｊ．ピケット（Ｍ．Ｊ．Ｐｙｋｅｔｔ），Ｋ．Ｔ．チャブナー（Ｋ．Ｔ．Ｃｈａｂｎｅｒ），Ｓ．Ａ．カラムズ（Ｓ．Ａ．Ｋａｌａｍｓ），Ｍ．ローゼンツワイク（Ｍ．Ｒｏｓｅｎｚｗｅｉｇ），及び，Ｄ．Ｔ．スキャデン（Ｄ．Ｔ．Ｓｃａｄｄｅｎ）．  ２０００．  「組織操作された胸腺オルガノイドからのヒトＴ細胞の効率的な生成」（Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｔｉｓｓｕｅ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｔｈｙｍｉｃ  ｏｒｇａｎｏｉｄ．）  Ｎａｔｕｒｅ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １８：７２９−７３４．
【非特許文献７】７．ヨーマン，Ｈ．（Ｙｅｏｍａｎ，Ｈ．），Ｄ．Ｒ．クラーク（Ｄ．Ｒ．Ｃｌａｒｋ），及び，Ｄ．デルーカ（Ｄ．ＤｅＬｕｃａ）．  １９９６．  「ヒト胸腺器官培養におけるＣＤ４及びＣＤ８シングルポジティブＴ細胞の成長：ＩＬ−７は、未熟なＴ細胞のサポートによりヒトＴ細胞生成を促進する。」（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ＣＤ４  ａｎｄ  ＣＤ８  ｓｉｎｇｌｅ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｈｙｍｕｓ  ｏｒｇａｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ：  ＩＬ−７  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  ｉｍｍａｔｕｒｅ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．）  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０：２４１−２６３．
【非特許文献８】８．ロビンソン，Ｋ．Ｌ．（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｋ．Ｌ．），Ｊ．アイロ（Ｊ．Ａｙｅｌｌｏ），Ｒ．ヒューズ（Ｒ．Ｈｕｇｈｅｓ），Ｃ．ヴァン・デ・ヴェン（Ｃ．ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｎ），Ｌ．イジット（Ｌ．Ｉｓｓｉｔｔ），Ｊ．カートバーグ（Ｊ．Ｋｕｒｔｚｂｅｒｇ），及び，Ｍ．Ｓ．カイロ（Ｍ．Ｓ．Ｃａｉｒｏ）．  ２００２．  「ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ａｎｔｉ−ＣＤ３、及び、ＩＬ−７を用いた、臍帯血を由来するＴリンパ球の生体外の増殖、成熟、及び、活性化。臍帯血移植後の養子細胞免疫療法の可能性」（Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ，  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｍｂｉｌｉｃａｌ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ−ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ＩＬ−２，  ＩＬ−１２，  ａｎｔｉ−ＣＤ３，  ａｎｄ  ＩＬ−７．  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｐｏｓｔ−ｕｍｂｉｌｉｃａｌ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．）  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ３０：２４５−２５１．
【非特許文献９】９．スニガ−フラッカー，Ｊ．Ｃ．（Ｚｕｎｉｇａ−Ｐｆｌｕｃｋｅｒ），Ｊ．Ｃ．  ２００４．  「簡略化したＴ細胞成長」（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｍａｄｅ  ｓｉｍｐｌｅ．）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：６７−７２．
【非特許文献１０】１０．シュミット，Ｔ．Ｍ．（Ｓｃｈｍｉｔｔ，Ｔ．Ｍ．），及び，Ｊ．Ｃ．スニガ−フラッカー（Ｊ．Ｃ．Ｚｕｎｉｇａ−Ｐｆｌｕｃｋｅｒ）．  ２００２．  「生体外におけるデルタ様１による造血前駆細胞からのＴ細胞成長の誘導」（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｒｏｍ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｄｅｌｔａ−ｌｉｋｅ−１  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １７：７４９−７５６．
【非特許文献１１】１１．シュミット，Ｔ．Ｍ．（Ｓｃｈｍｉｔｔ，Ｔ．Ｍ．），Ｒ．Ｆ．デプーター（Ｒ．Ｆ．  ｄｅ  Ｐｏｏｔｅｒ），Ｍ．Ａ．グロンスキー（Ｍ．Ａ．Ｇｒｏｎｓｋｉ），Ｓ．Ｋ．チョー（Ｓ．Ｋ．Ｃｈｏ），Ｐ．Ｓ．オオハシ（Ｐ．Ｓ．Ｏｈａｓｈｉ），及び，Ｊ．Ｃ．スニガ−フラッカー（Ｊ．Ｃ．Ｚｕｎｉｇａ−Ｐｆｌｕｃｋｅｒ）．  ２００４．  「生体外で分化した胚性幹細胞からのＴ細胞成長の誘導、及び、Ｔ細胞反応能の確立」（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｃｏｍｐｅｔｅｎｃｅ  ｆｒｏｍ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．）  Ｎａｔｕｒｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５：４１０−４１７．
【非特許文献１２】１２．ホアン，Ｊ．（Ｈｕａｎｇ，Ｊ．），Ｋ．Ｐ．ギャレット（Ｋ．Ｐ．Ｇａｒｒｅｔｔ），Ｒ．ペラヨ（Ｒ．Ｐｅｌａｙｏ），Ｊ．Ｃ．スニガ−フラッカー（Ｊ．Ｃ．Ｚｕｎｉｇａ−Ｐｆｌｕｃｋｅｒ），Ｈ．Ｔ．ピートリー（Ｈ．Ｔ．Ｐｅｔｒｉｅ），及び，Ｐ．Ｗ．キンケード（Ｐ．Ｗ．Ｋｉｎｃａｄｅ）．  ２００５．  「ノッチ受容体ライゲーションを用いて胸腺細胞をＤＮ２／３段階へ進行させるための、成人のリンパの前駆体の性向」（Ｐｒｏｐｅｎｓｉｔｙ  ｏｆ  ａｄｕｌｔ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ  ｔｏ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｔｏ  ＤＮ２／３  ｓｔａｇｅ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｎｏｔｃｈ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｔｉｏｎ．）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７５：４８５８−４８６５．
【非特許文献１３】１３．デスメット，Ｍ．（Ｄｅ  Ｓｍｅｄｔ，Ｍ．），Ｉ．ホーベッケ（Ｉ．Ｈｏｅｂｅｋｅ），及び，Ｊ．プラム（Ｊ．Ｐｌｕｍ）．  ２００４．  「胸腺ミクロ環境を有しないＯＰ９−ＤＬ１間質細胞株において、ヒト骨髄ＣＤ３４＋前駆細胞は、Ｔ細胞に成熟する。」（Ｈｕｍａｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ＣＤ３４＋  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｍａｔｕｒｅ  ｔｏ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｏｎ  ＯＰ９−ＤＬ１  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｔｈｙｍｕｓ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．）  Ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌｓ，  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ＆  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ３３：２２７−２３２．
【非特許文献１４】１４．ラ・モット−モース，Ｒ．Ｎ．（Ｌａ  Ｍｏｔｔｅ−Ｍｏｈｓ，Ｒ．Ｎ．），Ｅ．へラー（Ｅ．Ｈｅｒｅｒ），及び，Ｊ．Ｃ．スニガ−フラッカー（Ｊ．Ｃ．Ｚｕｎｉｇａ−Ｐｆｌｕｃｋｅｒ）．  ２００５．  「生体外におけるデルタ様１によるヒト臍帯血造血幹細胞からのＴ細胞成長の誘導」（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  Ｄｅｌｔａ−ｌｉｋｅ  １  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．）  Ｂｌｏｏｄ  １０５：１４３１−１４３９．
【非特許文献１５】１５．マルティニク，Ｍ．Ｍ．（Ｍａｒｔｉｎｉｃ，Ｍ．Ｍ．），Ｍ．Ｆ．ファン・デン・ブルーク（Ｍ．Ｆ．ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｒｏｅｋ），Ｔ．リューリケ（Ｔ．Ｒｕｌｉｃｋｅ），Ｃ．フーバー（Ｃ．Ｈｕｂｅｒ），Ｂ．オーダーマット（Ｂ．Ｏｄｅｒｍａｔｔ），Ｗ．リース（Ｗ．Ｒｅｉｔｈ），Ｅ．ホルバート（Ｅ．Ｈｏｒｖａｔｈ），Ｒ．ゼルウィガー（Ｒ．Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒ），Ｋ．フィンク（Ｋ．Ｆｉｎｋ），Ｍ．ルシェル（Ｍ．Ｒｅｃｈｅｒ），Ｂ．エシリ（Ｂ．Ｅｓｃｈｌｉ），Ｈ．ヘンガートナー（Ｈ．Ｈｅｎｇａｒｔｎｅｒ），及び，Ｒ．Ｍ．ツィンカーナーゲル（Ｒ．Ｍ．Ｚｉｎｋｅｒｎａｇｅｌ）．  ２００６．  「機能的なＣＤ８＋（ＣＤ４＋ではない）Ｔ細胞応答は、胸腺上皮のＭＨＣとは無関係に進展する。」（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＣＤ８＋  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｄｅｖｅｌｏｐ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｙｍｉｃ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ＭＨＣ．）  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０３：１４４３５−１４４４０．
【非特許文献１６】１６．パテール，Ｅ．（Ｐａｔｅｌ，Ｅ．），Ｂ．ワング（Ｂ．Ｗａｎｇ），Ｌ．リエン（Ｌ．Ｌｉｅｎ），Ｌ．−Ｊ．ヤン（Ｌ．−Ｊ．Ｙａｎｇ），Ｊ．Ｓ．モレブ（Ｊ．Ｓ．Ｍｏｒｅｂ），及び，Ｌ．−Ｊ．チャン（Ｌ．−Ｊ．Ｃｈａｎｇ）．  ２００８．  「レンチウイルスのデルタ様１で変性されたマウス間質細胞における、ヒトの胎児の胸腺、胎生期肝臓、臍帯血、及び、成人の骨髄ＣＤ３４細胞のＴ細胞の脱分化能」（Ｄｉｖｅｒｓｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｆｅｔａｌ  ｔｈｙｍｕｓ，  ｆｅｔａｌ  ｌｉｖｅｒ，  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  ａｄｕｌｔ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ＣＤ３４  ｃｅｌｌｓ  ｏｎ  ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｄｅｌｔａ−ｌｉｋｅ  １−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｍｏｕｓｅ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌｓ．）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （ｉｎ  ｐｒｅｓｓ）
【非特許文献１７】１７．チャオ，Ｙ．（Ｚｈａｏ，Ｙ．），Ａ．Ｄ．ベネット（Ａ．Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔ），Ｚ．ツェン（Ｚ．Ｚｈｅｎ），Ｑ．Ｊ．ワン（Ｑ．Ｊ．Ｗａｎｇ），Ｐ．Ｆ．ロビンズ（Ｐ．Ｆ．Ｒｏｂｂｉｎｓ），Ｌ．Ｙ．ユー（Ｌ．Ｙ．Ｙｕ），Ｙ．リー（Ｙ．Ｌｉ），Ｐ．Ｅ．モロイ（Ｐ．Ｅ．Ｍｏｌｌｏｙ），Ｓ．Ｍ．ダン（Ｓ．Ｍ．Ｄｕｎｎ），Ｂ．Ｋ．ヤコブセン（Ｂ．Ｋ．Ｊａｋｏｂｓｅｎ），Ｓ．Ａ．ローゼンバーグ（Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ），及び，Ｒ．Ａ．モーガン（Ｒ．Ａ．Ｍｏｒｇａｎ）．  ２００７．  「ファージディスプレーによって生成された高親和性のＴＣＲは、腫瘍細胞株を認識し、かつ、死滅させる能力をＣＤ４＋Ｔ細胞に提供する。」（Ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＴＣＲｓ  ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  ｂｙ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｐｒｏｖｉｄｅ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ａｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ  ａｎｄ  ｋｉｌｌ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７９：５８４５−５８５４．
【非特許文献１８】１８．ヴァン・レント，Ａ．Ｕ．（ｖａｎ  Ｌｅｎｔ，Ａ．Ｕ．），Ｍ．ナガサワ（Ｍ．Ｎａｇａｓａｗａ），Ｍ．Ｍ．ファン・ルーネン（Ｍ．Ｍ．ｖａｎ  Ｌｏｅｎｅｎ），Ｒ．スホット（Ｒ．Ｓｃｈｏｔｔｅ），Ｔ．Ｎ．Ｍ．シューマッハ（Ｔ．Ｎ．Ｍ．Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ），Ｍ．Ｈ．Ｍ．ヘームスケルク（Ｍ．Ｈ．Ｍ．Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ），Ｈ．スピッツ（Ｈ．Ｓｐｉｔｓ），及び，Ｎ．ルグラン（Ｎ．Ｌｅｇｒａｎｄ）．  ２００７．  「レトロウイルスから造血前駆体へのＴ細胞レセプター輸送を用いた、生体外で産生された機能的なヒトの抗原特異性のＴ細胞」（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｇｅｎ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｐｒｏｄｕｃｅｄ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｕｓｉｎｇ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎｔｏ  Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ．）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７９：４９５９−４９６８．
【非特許文献１９】１９．ヘームスケルク，Ｍ．Ｈ．（Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ，Ｍ．Ｈ．），Ｒ．Ｓ．ハーゲドールン（Ｒ．Ｓ．Ｈａｇｅｄｏｏｒｎ），Ｍ．Ａ．ファン・デル・ホールン（Ｍ．Ａ．ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｈｏｏｒｎ），Ｌ．Ｔ．ヴァン・デル・ヴェーケン（Ｌ．Ｔ．ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｋｅｎ），Ｍ．フーゲボーム（Ｍ．Ｈｏｏｇｅｂｏｏｍ），Ｍ．Ｇ．ケスター（Ｍ．Ｇ．Ｋｅｓｔｅｒ），Ｒ．ヴィレムズ（Ｒ．Ｗｉｌｌｅｍｚｅ），及び，Ｊ．Ｈ．ファルケンバーグ（Ｊ．Ｈ．Ｆａｌｋｅｎｂｕｒｇ）．  ２００７．  「二重特異性Ｔ細胞におけるＴ細胞受容体の発現効率は、ＴＣＲ−ＣＤ３複合体の内のＴＣＲ鎖の固有の性質によって制御される。」（Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｄｕａｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｑｕａｌｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＴＣＲ  ｃｈａｉｎｓ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ＴＣＲ−ＣＤ３  ｃｏｍｐｌｅｘ．）  Ｂｌｏｏｄ  １０９：２３５−２４３．
【非特許文献２０】２０．ブルニェーラ，Ｅ．（Ｂｒｕｇｎｅｒａ，Ｅ．），Ａ．ブハンドゥーラ（Ａ．Ｂｈａｎｄｏｏｌａ），Ｒ．チボッチ（Ｒ．Ｃｉｂｏｔｔｉ），Ｑ．ユー（Ｑ．Ｙｕ），Ｔ．Ｉ．ギンター（Ｔ．Ｉ．Ｇｕｉｎｔｅｒ），Ｙ．ヤマシタ（Ｙ．Ｙａｍａｓｈｉｔａ），Ｓ．Ｏ．シャロウ（Ｓ．Ｏ．Ｓｈａｒｒｏｗ），及び，Ａ．シンガー（Ａ．Ｓｉｎｇｅｒ）．  ２０００．  「胸腺におけるコレセプター反転：シグナルを受けたＣＤ４＋８＋胸腺細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞に分化する場合でさえ、最初にＣＤ８転写を終了する。」（Ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｈｙｍｕｓ：  ｓｉｇｎａｌｅｄ  ＣＤ４＋８＋  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ｉｎｉｔｉａｌｌｙ  ｔｅｒｍｉｎａｔｅ  ＣＤ８  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｅｖｅｎ  ｗｈｅｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ｉｎｔｏ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：５９−７１．
【非特許文献２１】２１．ユー，Ｑ．（Ｙｕ，Ｑ．），Ｂ．エルマン（Ｂ．Ｅｒｍａｎ），Ａ．ブハンドゥーラ（Ａ．Ｂｈａｎｄｏｏｌａ），Ｓ．Ｏ．シャロウＳ．Ｏ．Ｓｈａｒｒｏｗ，及び，Ａ．シンガー（Ａ．Ｓｉｎｇｅｒ）．  ２００３．  「ダブルポジティブ胸腺細胞から機能的に成熟したＣＤ８＋Ｔ細胞への分化には、サイトカイン受容体シグナルが必要であるという生体外の証拠」（Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｓ  ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｏｕｂｌｅ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ｉｎｔｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ  ｍａｔｕｒｅ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．）  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９７：４７５−４８７．
【非特許文献２２】２２．ガルベ，Ａ．Ｉ．（Ｇａｒｂｅ，Ａ．Ｉ．），Ａ．クリューガー（Ａ．Ｋｒｕｅｇｅｒ），Ｆ．グーナリ（Ｆ．Ｇｏｕｎａｒｉ），Ｊ．Ｃ．スニガ−フラッカー（Ｊ．Ｃ．Ｚｕｎｉｇａ−Ｐｆｌｕｃｋｅｒ），及び，Ｈ．フォン・ベーメル（Ｈ．ｖｏｎ  Ｂｏｅｈｍｅｒ）．  ２００６．  「ノッチ受容体及びＴ細胞受容体のシグナル伝達の分化の相乗作用は、アルファベータ対ガンマデルタの系列運命を決定する。」（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｓｙｎｅｒｇｙ  ｏｆ  Ｎｏｔｃｈ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ  ａｌｐｈａｂｅｔａ  ｖｅｒｓｕｓ  ｇａｍｍａｄｅｌｔａ  ｌｉｎｅａｇｅ  ｆａｔｅ．）  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０３：１５７９−１５９０．
【非特許文献２３】２３．レーキ，Ｋ．（Ｌａｋｙ，Ｋ．），及び，Ｂ．Ｊ．ファウルクス（Ｂ．Ｊ．Ｆｏｗｌｋｅｓ）．  ２００８．  「ＣＤ４及びＣＤ８  Ｔ細胞成長におけるノッチシグナル伝達」（Ｎｏｔｃｈ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ＣＤ４  ａｎｄ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．）  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ
【非特許文献２４】２４．シンガー，Ａ．（Ｓｉｎｇｅｒ，Ａ．），Ｓ．アドロ（Ｓ．Ａｄｏｒｏ），及び，Ｊ．Ｈ．パーク（Ｊ．Ｈ．Ｐａｒｋ）．  ２００８．  「系列運命及び激しい議論：ＣＤ４系列対ＣＤ８系列の選択の通念、モデル、及び、機序」（Ｌｉｎｅａｇｅ  ｆａｔｅ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｎｓｅ  ｄｅｂａｔｅ：  ｍｙｔｈｓ，  ｍｏｄｅｌｓ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ＣＤ４−  ｖｅｒｓｕｓ  ＣＤ８−ｌｉｎｅａｇｅ  ｃｈｏｉｃｅ．）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８：７８８−８０１．
【非特許文献２５】２５．デジャネット，Ｊ．Ｂ．（ＤｅＪａｒｎｅｔｔｅ，Ｊ．Ｂ．），Ｃ．Ｌ．ソマーズ（Ｃ．Ｌ．Ｓｏｍｍｅｒｓ），Ｋ．ホアン（Ｋ．Ｈｕａｎｇ），Ｋ．Ｊ．ウッドサイド（Ｋ．Ｊ．Ｗｏｏｄｓｉｄｅ），Ｒ．エモンズ（Ｒ．Ｅｍｍｏｎｓ），Ｋ．カッツ（Ｋ．Ｋａｔｚ），Ｅ．Ｗ．ショアズ（Ｅ．Ｗ．Ｓｈｏｒｅｓ），及び，Ｐ．Ｅ．ラブ（Ｐ．Ｅ．Ｌｏｖｅ）．  １９９８．  「Ｔ細胞成長の際のＣＤ３イプシロンのための具体的要件」（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ＣＤ３ｅｐｓｉｌｏｎ  ｉｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．）  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９５：１４９０９−１４９１４．
【非特許文献２６】２６．レス，Ｐ．（Ｒｅｓ，Ｐ．），Ｂ．ブロム（Ｂ．Ｂｌｏｍ），Ｔ．ホリ（Ｔ．Ｈｏｒｉ），Ｋ．ワイヤ（Ｋ．Ｗｅｉｊｅｒ），及び，Ｈ．スピッツ（Ｈ．Ｓｐｉｔｓ）．  １９９７．  「ＣＤ１のダウンレギュレーションは、ヒト胸腺細胞の機能的な成熟の獲得を示し、ヒトＴ細胞成長の後期における制御点を定義する。」（Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ１  ｍａｒｋｓ  ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ａ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｐｏｉｎｔ  ｉｎ  ｌａｔｅ  ｓｔａｇｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．）  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８５：１４１−１５１．
【非特許文献２７】２７．ヤスダ，Ｙ．（Ｙａｓｕｄａ，Ｙ．），Ａ．カネコ（Ａ．Ｋａｎｅｋｏ），Ｉ．ニシジマ（Ｉ．Ｎｉｓｈｉｊｉｍａ），Ｓ．ミヤタケ（Ｓ．Ｍｉｙａｔａｋｅ），及び，Ｋ．アライ（Ｋ．Ａｒａｉ）．  ２００２．  「インターロイキン−７は、プレＴ細胞受容体シグナルによって誘発されたプレＴ細胞分化を阻害する。また、この効果は、ｈＧＭ−ＣＳＦ受容体トランスジェニックマウスにおけるｈＧＭ−ＣＳＦによって模倣される。」（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−７  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｐｒｅ−Ｔ−ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｐｒｅ−Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｉｓ  ｍｉｍｉｃｋｅｄ  ｂｙ  ｈＧＭ−ＣＳＦ  ｉｎ  ｈＧＭ−ＣＳＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ．）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０６：２１２−２２１．
【非特許文献２８】２８．ユー，Ｑ．（Ｙｕ，Ｑ．），Ｂ．エルマン（Ｂ．Ｅｒｍａｎ），Ｊ．Ｈ．パーク（Ｊ．Ｈ．Ｐａｒｋ），Ｌ．ファイゲンバウム（Ｌ．Ｆｅｉｇｅｎｂａｕｍ），及び，Ａ．シンガー（Ａ．Ｓｉｎｇｅｒ）．  ２００４．  「ＩＬ−７受容体シグナルは、転写因子である、ＴＣＦ−１、ＬＥＦ−１、及び、ＲＯＲガンマｔの発現を阻害する：胸腺細胞成長への影響」（ＩＬ−７  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ  ＴＣＦ−１，  ＬＥＦ−１，  ａｎｄ  ＲＯＲｇａｍｍａｔ：  ｉｍｐａｃｔ  ｏｎ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．）  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００：７９７−８０３．
【非特許文献２９】２９．ハッサン，Ｊ．（Ｈａｓｓａｎ，Ｊ．），及び，Ｄ．Ｊ．リーン（Ｄ．Ｊ．Ｒｅｅｎ）．  １９９８．  「ＩＬ−７は、ヒトポスト胸腺ＣＤ４＋Ｔ細胞の生存及び成熟を促進するが、分化を促進はしない。」（ＩＬ−７  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｔｈｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｏｓｔ−ｔｈｙｍｉｃ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８：３０５７−３０６５．
【非特許文献３０】３０．デービッド−ファン，Ｅ．Ｓ．（Ｄａｖｉｄ−Ｆｕｎｇ，Ｅ．Ｓ．），Ｍ．Ａ．ユイ（Ｍ．Ａ．Ｙｕｉ），Ｍ．モラレス（Ｍ．Ｍｏｒａｌｅｓ），Ｈ．ワン（Ｈ．Ｗａｎｇ），Ｔ．タグホン（Ｔ．Ｔａｇｈｏｎ），Ｒ．Ａ．ダイヤモンド（Ｒ．Ａ．Ｄｉａｍｏｎｄ），及び，Ｅ．Ｖ．ローゼンバーグ（Ｅ．Ｖ．Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ）．  ２００６．  「胎児及び成人のプロＴ細胞の成長における調節遺伝子発現状態の進行」（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｔａｔｅｓ  ｉｎ  ｆｅｔａｌ  ａｎｄ  ａｄｕｌｔ  ｐｒｏ−Ｔ−ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０９：２１２−２３６．
【非特許文献３１】３１．ザミッシュ，Ｍ．（Ｚａｍｉｓｃｈ，Ｍ．），Ｂ．ムーア−スコット（Ｂ．Ｍｏｏｒｅ−Ｓｃｏｔｔ），Ｄ．Ｍ．スー（Ｄ．Ｍ．Ｓｕ），Ｐ．Ｊ．ルーカス（Ｐ．Ｊ．Ｌｕｃａｓ），Ｎ．マンリー（Ｎ．Ｍａｎｌｅｙ），及び，Ｅ．Ｒ．リッチー（Ｅ．Ｒ．Ｒｉｃｈｉｅ）．  ２００５．  「ＩＬ−７の発現する胸腺上皮細胞の個体発生及び調節」（Ｏｎｔｏｇｅｎｙ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−７−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｔｈｙｍｉｃ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７４：６０−６７．
【非特許文献３２】３２．スズキ，Ｈ．（Ｓｕｚｕｋｉ，Ｈ．），Ｙ．シンカイ（Ｙ．Ｓｈｉｎｋａｉ），Ｌ．Ｇ．グレンジャー（Ｌ．Ｇ．Ｇｒａｎｇｅｒ），Ｆ．Ｗ．アルト（Ｆ．Ｗ．Ａｌｔ），Ｐ．Ｅ．ラブ（Ｐ．Ｅ．Ｌｏｖｅ），及び，Ａ．シンガー（Ａ．Ｓｉｎｇｅｒ）．  １９９７．  「未熟なＣＤ４＋８＋胸腺細胞からＣＤ４系列へのコミットメントは、ＣＤ３シグナル伝達を必要とするが、クローン型のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）鎖の発現を必要としない。」（Ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｍｍａｔｕｒｅ  ＣＤ４＋８＋  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＣＤ４  ｌｉｎｅａｇｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｓ  ＣＤ３  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｂｕｔ  ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ｒｅｑｕｉｒｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｏｔｙｐｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  （ＴＣＲ）  ｃｈａｉｎｓ．）  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８６：１７−２３．
【非特許文献３３】３３．オガラ，Ａ．（Ｏ’Ｇａｒｒａ，Ａ）．  １９９８．  「サイトカインは、機能的に不均一なヘルパーＴ細胞のサブセットの成長を誘発する。」（Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｔ  ｈｅｌｐｅｒ  ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔｓ．）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ８：２７５−２８３．
【非特許文献３４】３４．シュミット，Ｔ．Ｍ．（Ｓｃｈｍｉｔｔ，Ｔ．Ｍ．），及び，Ｊ．Ｃ．スニガ−フラッカー（Ｊ．Ｃ．Ｚｕｎｉｇａ−Ｐｆｌｕｃｋｅｒ）．  ２００６．  「ディッシュ中で行うＴ細胞成長」（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，  ｄｏｉｎｇ  ｉｔ  ｉｎ  ａ  ｄｉｓｈ．）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０９：９５−１０２．
【非特許文献３５】３５．オフナー，Ｆ．（Ｏｆｆｎｅｒ，Ｆ．），Ｔ．ケッレ（Ｔ．Ｋｅｒｒｅ），Ｍ．デスメット（Ｍ．Ｄｅ  Ｓｍｅｄｔ），及び，Ｊ．プラム（Ｊ．Ｐｌｕｍ）．  １９９９．  「骨髄ＣＤ３４細胞は、加齢とともに、及び、化学療法の後に、生体外でのＴ細胞の生成が減少する。」（Ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ＣＤ３４  ｃｅｌｌｓ  ｇｅｎｅｒａｔｅ  ｆｅｗｅｒ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ａｇｅ  ａｎｄ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．）  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １０４：８０１−８０８．
【非特許文献３６】３６．フリードマン，Ａ．Ｒ．（Ｆｒｅｅｄｍａｎ，Ａ．Ｒ．），Ｈ．チュー（Ｈ．Ｚｈｕ），Ｊ．Ｄ．レヴァイン（Ｊ．Ｄ．Ｌｅｖｉｎｅ），Ｓ．カラムズ（Ｓ．Ｋａｌａｍｓ），及び，Ｄ．Ｔ．スキャデン（Ｄ．Ｔ．Ｓｃａｄｄｅｎ）．  １９９６．  「生体外における、骨髄ＣＤ３４＋細胞からのヒトＴリンパ球の生成」（Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｆｒｏｍ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ＣＤ３４＋  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．）  Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２：４６−５１．
【非特許文献３７】３７．マッキーン，Ｄ．Ｊ．（ＭｃＫｅａｎ，Ｄ．Ｊ．），Ｃ．Ｊ．ハントゥーン（Ｃ．Ｊ．Ｈｕｎｔｏｏｎ），Ｍ．Ｐ．ベル（Ｍ．Ｐ．Ｂｅｌｌ），Ｘ．タイ（Ｘ．Ｔａｉ），Ｓ．シャロウ（Ｓ．Ｓｈａｒｒｏｗ），Ｋ．Ｅ．ヘディン（Ｋ．Ｅ．Ｈｅｄｉｎ），Ａ．コンリー（Ａ．Ｃｏｎｌｅｙ），及び，Ａ．シンガー（Ａ．Ｓｉｎｇｅｒ）．  ２００１．  「成長途上のダブルポジティブ胸腺細胞の成熟対死は、Ｂｃｌ−２発現において競合効果を示し、また、ＣＤ２８共同刺激の強さによって調節することができる。」（Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｖｅｒｓｕｓ  ｄｅａｔｈ  ｏｆ  ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｄｏｕｂｌｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ｒｅｆｌｅｃｔｓ  ｃｏｍｐｅｔｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  Ｂｃｌ−２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｎ  ｂｅ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ  ｏｆ  ＣＤ２８  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６：３４６８−３４７５．
【非特許文献３８】３８．ガリック，Ｚ．（Ｇａｌｉｃ，Ｚ．），Ｓ．Ｇ．キッチン（Ｓ．Ｇ．Ｋｉｔｃｈｅｎ），Ａ．カシーナ（Ａ．Ｋａｃｅｎａ），Ａ．スブラマニアン（Ａ．Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ），Ｂ．バーク（Ｂ．Ｂｕｒｋｅ），Ｒ．コルタド（Ｒ．Ｃｏｒｔａｄｏ），及び，Ｊ．Ａ．ザック（Ｊ．Ａ．Ｚａｃｋ）．  ２００６．  「ヒト胚性幹細胞からのＴ系列分化」（Ｔ  ｌｉｎｅａｇｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ．）  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０３：１１７４２−１１７４７．
【非特許文献３９】３９．ソバッチ，Ｃ．（Ｓｏｂａｃｃｈｉ，Ｃ．），Ｖ．マルレラ（Ｖ．Ｍａｒｒｅｌｌａ），Ｆ．ルッチ（Ｆ．Ｒｕｃｃｉ），Ｐ．ヴェッツォーニ（Ｐ．Ｖｅｚｚｏｎｉ），及び，Ａ．ヴィラ（Ａ．Ｖｉｌｌａ）．  ２００６．  「ＲＡＧ依存の原発性免疫不全」（ＲＡＧ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ．）  Ｈｕｍａｎ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ２７：１１７４−１１８４．
【非特許文献４０】４０．キヒオン，Ｋ．（Ｋｈｉｏｎｇ，Ｋ．），Ｍ．ムラカミ（Ｍ．Ｍｕｒａｋａｍｉ），Ｃ．キタバヤシ（Ｃ．Ｋｉｔａｂａｙａｓｈｉ），Ｎ．ウエダ（Ｎ．Ｕｅｄａ），Ｓ．サワ（Ｓ．Ｓａｗａ），Ａ．サカモト（Ａ．Ｓａｋａｍｏｔｏ），Ｂ．Ｌ．コッツィン（Ｂ．Ｌ．Ｋｏｔｚｉｎ），Ｓ．Ｊ．ロッゾ（Ｓ．Ｊ．Ｒｏｚｚｏ），Ｋ．イシハラ（Ｋ．Ｉｓｈｉｈａｒａ），Ｍ．ベレラ−ガルシア（Ｍ．Ｖｅｒｅｌｌａ−Ｇａｒｃｉａ），Ｊ．カプラー（Ｊ．Ｋａｐｐｌｅｒ），Ｐ．マラック（Ｐ．Ｍａｒｒａｃｋ），及び，Ｔ．ヒラノ（Ｔ．Ｈｉｒａｎｏ）．  ２００７．  「恒常的に増殖するＣＤ４  Ｔ細胞は、オーメン症候群のマウスモデルの病因に関係する。」（Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃａｌｌｙ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ  ＣＤ４  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｒｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｎ  Ｏｍｅｎｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ．）  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １１７：１２７０−１２８１．
【非特許文献４１】４１．マルレラ，Ｖ．（Ｍａｒｒｅｌｌａ，Ｖ．），Ｐ．Ｌ．ポリアニ（Ｐ．Ｌ．Ｐｏｌｉａｎｉ），Ｃ．ソバッチ（Ｃ．Ｓｏｂａｃｃｈｉ），Ｆ．グラッシ（Ｆ．Ｇｒａｓｓｉ），及び，Ａ．ヴィラ（Ａ．Ｖｉｌｌａ）．  ２００８．  「オーメンとマウスについて」（Ｏｆ  Ｏｍｅｎｎ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ．）  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２９：１３３−１４０．
【非特許文献４２】４２．ワン，Ｈ．（Ｗａｎｇ，Ｈ．），Ｌ．Ｊ．ピアス（Ｌ．Ｊ．Ｐｉｅｒｃｅ），及び，Ｇ．Ｊ．スパングルード（Ｇ．Ｊ．Ｓｐａｎｇｒｕｄｅ）．  ２００６．  「ＯＰ９−ＤＬ１  Ｔ細胞分化培養系における、ＩＬ−７及び幹細胞刺激因子の別個の役割」（Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ＩＬ−７  ａｎｄ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＯＰ９−ＤＬ１  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ．）  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ３４：１７３０−１７４０．
【非特許文献４３】４３．スウェインソン，Ｌ．（Ｓｗａｉｎｓｏｎ，Ｌ．），Ｅ．フェルホーエン（Ｅ．Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ），Ｆ．Ｌ．コゼ（Ｆ．Ｌ．Ｃｏｓｓｅｔ），及び，Ｎ．テイラー（Ｎ．Ｔａｙｌｏｒ）．  ２００６．  「ＩＬ−７Ｒアルファ遺伝子発現は、ＩＬ−７を刺激されたＴリンパ球における細胞周期の進行と逆相関している。」（ＩＬ−７Ｒ  ａｌｐｈａ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  ｉｎｖｅｒｓｅｌｙ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ＩＬ−７−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７６：６７０２−６７０８．
【非特許文献４４】４４．エル・カサー，Ｎ．（Ｅｌ  Ｋａｓｓａｒ，Ｎ．），Ｐ．Ｊ．ルーカス（Ｐ．Ｊ．Ｌｕｃａｓ），Ｄ．Ｂ．クルーク（Ｄ．Ｂ．Ｋｌｕｇ），Ｍ．ザミッシュ（Ｍ．Ｚａｍｉｓｃｈ），Ｍ．マーチャント（Ｍ．Ｍｅｒｃｈａｎｔ），Ｃ．Ｖ．ベア（Ｃ．Ｖ．Ｂａｒｅ），Ｂ．チョードリー（Ｂ．Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙ），Ｓ．Ｏ．シャロウ（Ｓ．Ｏ．Ｓｈａｒｒｏｗ），Ｅ．リッチー（Ｅ．Ｒｉｃｈｉｅ），Ｃ．Ｌ．マッコール（Ｃ．Ｌ．Ｍａｃｋａｌｌ），及び，Ｒ．Ｅ．グレス（Ｒ．Ｅ．Ｇｒｅｓｓ）．  ２００４．  「胸腺細胞成長におけるＩＬ−７の用量効果」（Ａ  ｄｏｓｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ＩＬ−７  ｏｎ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．）  Ｂｌｏｏｄ  １０４：１４１９−１４２７．
【非特許文献４５】４５．マツケリー，Ｒ．（Ｍａｚｚｕｃｃｈｅｌｌｉ，Ｒ．），及び，Ｓ．Ｋ．デュラム（Ｓ．Ｋ．Ｄｕｒｕｍ）．  ２００７．  「インターロイキン−７受容体の発現：知的設計」（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−７  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：  ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  ｄｅｓｉｇｎ．）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７：１４４−１５４．
【非特許文献４６】４６．トラジャイ，Ｅ．（Ｔｒａｇｇｉａｉ，Ｅ．），Ｌ．チチャ（Ｌ．Ｃｈｉｃｈａ），Ｌ．マツケリー（Ｌ．Ｍａｚｚｕｃｃｈｅｌｌｉ），Ｌ．ブロンズ（Ｌ．Ｂｒｏｎｚ），Ｊ．Ｃ．ピファレッティ（Ｊ．Ｃ．Ｐｉｆｆａｒｅｔｔｉ），Ａ．ランツァヴェッキア（Ａ．Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ），及び，Ｍ．Ｇ．マンツ（Ｍ．Ｇ．Ｍａｎｚ）．  ２００４．  「臍帯血細胞を移植されたマウスにおける、ヒト適応性のある免疫系の開発」（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ−ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ  ｍｉｃｅ．）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ  ３０４：１０４−１０７．
【非特許文献４７】４７．リー，Ｗ．（Ｌｉ，Ｗ．），Ｍ．Ｇ．キム（Ｍ．Ｇ．Ｋｉｍ），Ｔ．Ｓ．ゴーリー（Ｔ．Ｓ．Ｇｏｕｒｌｅｙ），Ｂ．Ｐ．マッカーシー（Ｂ．Ｐ．ＭｃＣａｒｔｈｙ），Ｄ．Ｂ．サンタンジェロ（Ｄ．Ｂ．Ｓａｎｔ’Ａｎｇｅｌｏ），及び，Ｃ．Ｈ．チャン（Ｃ．Ｈ．Ｃｈａｎｇ）．  ２００５．  「ＣＤ４  Ｔ細胞成長のための代替経路：胸腺細胞に発現されたＭＨＣクラスＩＩは、別個のＴ細胞集団を選択する。」（Ａｎ  ａｌｔｅｒｎａｔｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｆｏｒ  ＣＤ４  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ−ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ  ｓｅｌｅｃｔｓ  ａ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２３：３７５−３８６．
【非特許文献４８】４８．チェ，Ｅ．Ｙ．（Ｃｈｏｉ，Ｅ．Ｙ．），Ｗ．Ｓ．パーク（Ｗ．Ｓ．Ｐａｒｋ），Ｋ．Ｃ．ジュン（Ｋ．Ｃ．Ｊｕｎｇ），Ｄ．Ｈ．チョン（Ｄ．Ｈ．Ｃｈｕｎｇ），Ｙ．Ｍ．ペ（Ｙ．Ｍ．Ｂａｅ），Ｔ．Ｊ．キム（Ｔ．Ｊ．Ｋｉｍ），Ｈ．Ｇ．ソン（Ｈ．Ｇ．Ｓｏｎｇ），Ｓ．Ｈ．キム（Ｓ．Ｈ．Ｋｉｍ），Ｄ．Ｉ．ハム（Ｄ．Ｉ．Ｈａｍ），Ｊ．Ｈ．ハーン（Ｊ．Ｈ．Ｈａｈｎ），Ｊ．キム（Ｊ．Ｋｉｍ），Ｋ．キム（Ｋ．Ｋｉｍ），Ｔ．Ｓ．ホワン（Ｔ．Ｓ．Ｈｗａｎｇ），及び，Ｓ．Ｈ．パーク（Ｓ．Ｈ．Ｐａｒｋ）．  １９９７．  「胸腺細胞は、ヒト系の中で胸腺細胞をポジティブ選択する。」（Ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ  ｓｅｌｅｃｔ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｙｓｔｅｍ．）  Ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５４：１５−２０
【００６２】
上記の実施形態及び構成は、完全でも網羅的でもない。十分に理解されるように、本発明の他の実施形態は、上記に明記された、あるいは、下記に詳細に記述された１又は複数の特徴を、単独で、又は、組み合わせて活用可能である。さらに、本明細書で表され、記述されるように、本発明は、様々な実施形態において、構成成分、方法、プロセス、システム、及び／又は、装置を実質的に含み、それらの様々な実施形態、サブコンビネーション、サブセットを含む。当業者は、本開示を理解した後であれば、いかに本発明を製造し使用するかを理解するだろう。本発明は、様々な実施形態において、本明細書、又は、本明細書の様々な実施形態において、表されない、かつ／あるいは、記述されない事項を欠く場合（例えば、性能の改良のため、容易さを達成するため、かつ／あるいは、実施のコストを下げるために、既存の装置又はプロセスにおいて使用される可能性のあるような事項を欠く場合を含む）でも、装置及びプロセスを提供することを含む。
【００６３】
さらに、本発明の記述は、１又は複数の実施形態、並びに、一定の変形及び修正の記述を含むが、他の変形及び修正は、例えば、本開示を理解した後であれば、当業者の技術及び知識の範囲内にあるようなものであるならば、本発明の範囲内である。許容される程度において他の実施例を含む権利を得るよう意図される。すなわち、クレームされたものに対する、代替の、置換可能な、かつ／あるいは、均等な、構造、機能、範囲、又は、ステップを、このような、代替の、置換可能な、かつ／あるいは、均等な、構造、機能、範囲、又は、ステップが、本明細書で開示されているかを問わず、含む権利を得るよう意図されるが、いかなる特許性のある主題を公にささげる意図はない。
【図１−Ａ】
2012508561.tif 000002
【図１−Ｂ】
2012508561.tif 000003
【図１−Ｃ】
2012508561.tif 000004
【図１−Ｄ】
2012508561.tif 000005
【図２−Ａ】
2012508561.tif 000006
【図２−Ｂ】
2012508561.tif 000007
【図２−Ｃ】
2012508561.tif 000008
【図２−Ｄ】
2012508561.tif 000009
【図３−Ａ】
2012508561.tif 000010
【図３−Ｂ】
2012508561.tif 000011
【図３−Ｃ】
2012508561.tif 000012
【図４−Ａ】
2012508561.tif 000013
【図４−Ｂ】
2012508561.tif 000014
【図５】
2012508561.tif 000015
【図Ｓ１】
2012508561.tif 000016
【図Ｓ２】
2012508561.tif 000017
【図Ｓ３】
2012508561.tif 000018
【配列表】
2012508561000001.app
【国際調査報告】
2012508561.tif 000019