(57)【要約】フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群（真性赤血球増加症、本態性血小板血症または特発性骨髄線維症）の治療処置のためのヒストンデアセチラーゼファミリーに属する１種または複数の酵素を阻害する能力を有する物質（ヒストンデアセチラーゼ阻害剤）の使用が説明される。上述の物質の投与量は、他の腫瘍性症候群のケアのために通常的に使用される投与量と比べてかなり少なく、１０から１５０ｍｇ／日／患者でよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群の治療における使用を特徴とする、ジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド、または他の薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。
【請求項２】
一水和物形態であることを特徴とする請求項１に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【請求項３】
一水和物の結晶性形態であることを特徴とする請求項１に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【請求項４】
１日投与量が、患者当たり１０から１５０ｍｇであることを特徴とする請求項１に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【請求項５】
１日投与量が、患者当たり３０から１２０ｍｇであることを特徴とする請求項４に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【請求項６】
１日投与量が、患者当たり５０から１００ｍｇであることを特徴とする請求項５に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【請求項７】
前記フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群が、真性赤血球増加症であることを特徴とする請求項１に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【請求項８】
前記フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群が、本態性血小板血症であることを特徴とする請求項１に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【請求項９】
前記フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群が、原発性骨髄線維症であることを特徴とする請求項１に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【請求項１０】
前記フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群が、続発性骨髄線維症であることを特徴とする請求項１に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【請求項１１】
他の活性成分と組み合わせて投与されないことを特徴とする請求項１に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【請求項１２】
少なくとも１種の他の細胞増殖抑制性活性成分と組み合わせて投与されることを特徴とする請求項１に記載のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリド。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
骨髄増殖性症候群は、それらが、骨髄からの多能性幹細胞、すなわち分裂によって種々のタイプの血液細胞を形成できる細胞に源を発するという事実を共通に有する腫瘍性タイプの障害である。
【０００２】
骨髄増殖性症候群は、４つのタイプ：慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、真性赤血球増加症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、および特発性骨髄線維症（ＩＭ）に分類される。
【０００３】
慢性骨髄性白血病に関する分子的基盤は、かねてから知られており、フィラデルフィア染色体、または９；２２転座の形成、およびＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子の発生にあり、これらの事例ではフィラデルフィア陽性骨髄増殖性症候群と呼ばれ、特定のＡＢＬチロシンキナーゼ阻害剤（イマチニブまたはデサチニブなど）を使用すると、病理の原因である細胞に選択的に介入することが可能になり、健常細胞の損傷に対して起こり得る非特異的細胞毒性の事象を制限する。
【０００４】
フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群の名称の下に分類される他の３つの病理に関して、分子的基盤は、より最近なって確認され（例えば、非特許文献１、非特許文献２を参照されたい）、ＪＡＫ２チロシンキナーゼに影響を及ぼす遺伝子突然変異に関連すると思われる。
【０００５】
これらの症候群に関して、最近の療法は、また、非特異的作用を有する細胞増殖抑制薬、主にヒドロキシウレアの使用を提供するが、それは、ある期間の治療の後に、骨髄異形成状態へ向かう、および白血病の形態に向かう病理の発現を誘導するリスクを示す。
【０００６】
ヨーロッパにおいて、フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群の発生率は、１年に１００，０００人の住民につきほぼ５症例である。
【０００７】
したがって、フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群（ＰＶ、ＥＴおよびＩＭ）の場合にも、より選択的な方式で、かつ無毒性投与量（ｎｏｎ−ｔｏｘｉｃ  ｄｏｓｅ）で作用することができる新たな薬物を発見する必要があることは明白である。
【０００８】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）は、ヒストンのＮ末端部分または他のタンパク質中のリシン残基に結合されたアセチル基を取り去る能力を有する酵素である。
【０００９】
ＨＤＡＣは、構造的相同性に基づいて４つのクラスに再分類することができる。クラスＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ  １、２、３および８）はＲＰＤ３酵母タンパク質に類似し、細胞核内に配置される。クラスＩＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ  ４、５、６、７、９および１０）は、ＨＤＡ１酵母タンパク質に類似し、核内および細胞質中の双方に配置される。クラスＩＩＩのＨＤＡＣは、ＳＩＲ２酵母タンパク質と相互に関係のある、構造的の別個の形態のＮＡＤ依存性酵素である。クラスＩＶ（ＨＤＡＣ１１）は、現在のところ、特定の構造的特徴を有する単一酵素からなる。クラスＩ、ＩＩおよびＩＶのＨＤＡＣは、亜鉛酵素であり、種々のクラスの分子：ヒドロキサム酸誘導体、環状テトラペプチド、短鎖脂肪酸、アミノベンズアミド、求電子性ケトンの誘導体などによって阻害され得る。クラスＩＩＩのＨＤＡＣは、ヒドロキサム酸で阻害されず、それらの阻害剤は、他のクラスのものとは異なる構造的特徴を有する。
【００１０】
本発明に関して表現「ヒストンデアセチラーゼ阻害剤」は、クラスＩ、クラスＩＩまたはクラスＩＶのヒストンデアセチラーゼとして分類される酵素の少なくとも１種の活性を阻害する能力を有する、天然、組換えまたは合成起源の任意の分子を意味すると理解されたい。
【００１１】
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、抗腫瘍および抗炎症活性を有するクラスの分子である。
【００１２】
腫瘍細胞中で、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、細胞増殖を阻害し、細胞死および分化を誘導する（例えば、非特許文献３参照）。
【００１３】
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、また、免疫担当細胞の一部でのサイトカインおよび他の炎症促進因子の産生を調節する能力を有し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、抗炎症特性を示した（例えば、非特許文献４、非特許文献５参照）。
【００１４】
腫瘍病理および炎症病理の双方に関する多数の臨床研究が、最近、種々の阻害剤を使用して進行中であり、種々の段階の前進状態にある（例えば、非特許文献６参照）。
【００１５】
最近、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（Ｚｏｌｉｎｚａ、ボリノスタット）が、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫の治療に関して承認された。
【００１６】
現在、臨床研究段階にあるヒストンデアセチラーゼ阻害剤の一部は、それらの他の類似体と共に、それらの内容がそれらの全体で参照により本明細書に組み込まれる次の特許：特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、および特許文献１３中に記載されている。
【００１７】
双方とも参照により本明細書に組み込まれる特許文献１４（無水形態）および特許文献１５（一水和物の結晶性形態）中に記載されているジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリドは、良好な抗炎症活性を有するＨＤＡＣ阻害剤であり、このような活性成分はＩＴＦ２３５７および／またはＧｉｖｉｎｏｓｔａｔとしても知られている。
【００１８】
リポ多糖（ＬＰＳ）で刺激して培養したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において、ＩＴＦ２３５７は、１０から２２ｎＭで腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の放出を、１２ｎＭで細胞内インターロイキン（ＩＬ）−１αの放出を、１２．５から２５ｎＭでＩＬ−１βの分泌を、かつ２５ｎＭでインターフェロン−γ（ＩＦＮγ）の産出を５０％低減した。マウスへの１．０から１０ｍｇ／ｋｇのＩＴＦ２３５７の経口投与は、ＬＰＳで誘導された血清ＴＮＦαおよびＩＦＮγを５０％超低減した（例えば、非特許文献７参照）。
【００１９】
ＩＴＦ２３５７が、μＭ以下の濃度で、ＰＶまたはＥＴを患う患者から得られた幹細胞のクローン形成活性（ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）を阻害する能力を有することが最近報告された（例えば、非特許文献８参照）。しかし、クローン形成活性の阻害が得られる濃度は、分子マーカー（ＪＡＫ２V617FおよびＳＴＡＴタンパク質）の修飾または細胞毒性効果を得るのに必要な濃度に比べてはるかに低く、これらの結果の不明確性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで得られたこれらの効果を、特にヒトにおける任意の治療処置のためのｉｎ  ｖｉｖｏでの治療状況に応用することを困難にする。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】国際公開第２００４／０９２１１５号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００５／０１９１７４号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００３／０７６４２２号パンフレット
【特許文献４】国際公開第１９９７／０４３２５１号パンフレット
【特許文献５】国際公開第２００６／０１０７５０号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００６／００３０６８号パンフレット
【特許文献７】国際公開第２００２／０３０８７９号パンフレット
【特許文献８】国際公開第２００２／０２２５７７号パンフレット
【特許文献９】国際公開第１９９３／００７１４８号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第２００８／０３３７４７号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第２００４／０６９８２３号パンフレット
【特許文献１２】ＥＰ  ０８４７９９２
【特許文献１３】国際公開第２００４／０７１４００号パンフレット
【特許文献１４】国際公開第９７／４３２５１号パンフレット
【特許文献１５】国際公開第２００４／０６５３５５号パンフレット
【特許文献１６】国際公開第２００７／０６７７９５号パンフレット
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Robert Kralovicsら、The New England Journal of Medicine 352、1779〜1790(2005)
【非特許文献２】Chloe Jamesら、Nature 434、1144〜1148(2005)
【非特許文献３】Gaofeng BiおよびGuosheng Jiang、Cellular & Molecular Immunology 3、285〜290(2006)
【非特許文献４】Frederic BlanchardおよびCeline Chipoy、Drug Discovery Today 10、197〜204(2005)
【非特許文献５】IM Adcock、British Journal of Pharmacology 150、829〜831(2007)
【非特許文献６】Marielle Parisら、Journal of Medicinal Chemistry 51、1505〜1529(2008)
【非特許文献７】Flavio Leoniら、Molecular Medicine 11、1〜15(2005)
【非特許文献８】V. Gueriniら、Leukemia 22、740〜747(2008)
【非特許文献９】P.A.Marksら、J.Natl.Cancer Inst.92、1210〜1215(2000)
【非特許文献１０】L.M.Butlerら、Cancer Res.60、5165〜5170(2000)
【非特許文献１１】V.M.Richonら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95、3003〜3007(1998)
【非特許文献１２】M.Yoshidaら、J.Biol.Chem.265、17174〜17179(1990)
【非特許文献１３】Zhou,N.ら、J Med Chem 51、4072(2008)
【非特許文献１４】Jones,P.ら、J Med Chem 51、2350(2008)
【非特許文献１５】Payne,J.E.ら、Bioorg Med Chem Lett 18、6093(2008)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明者らは、好ましくは一水和物形態の、より好ましくは一水和物の結晶性形態のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリドの、真性赤血球増加症、本態性血小板血症または骨髄線維症を患う患者への投与が、完全または部分的な応答を引き起こし、加えて、脾腫の状態を始めに示した患者において、脾臓体積のかなりの縮小が観察されることを見出し、このことは、本発明の一態様を構成する。
【００２３】
本発明らは、また、ヒトにおけるフィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群を治療するためのこのような活性成分の治療量は、腫瘍性症候群をケアするために通常的に使用される量に比べてかなり少なく、１０から１５０ｍｇ／日／患者、好ましくは３０から１２０ｍｇ／日／患者、さらにより好ましくは５０から１００ｍｇ／日／患者でよいことを見出し、このことは、本発明の第２の態様を構成する。
【００２４】
まったくの例として、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫の治療について指示されるＺｏｌｉｎｚａ（商標）（ボリノスタット）の投与量は、４００ｍｇ／日である。
【００２５】
本発明は、フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群（真性赤血球増加症、本態性血小板血症、または特発性骨髄線維症）の治療処置のための、好ましくは一水和物形態の、より好ましくは一水和物の結晶性形態のジエチル−［６−（４−ヒドロキシカルバモイル−フェニルカルバモイルオキシメチル）−ナフタレン−２−イル−メチル］−アンモニウムクロリドの使用に関する。このような活性成分は、単独で、すなわち他の活性成分と組み合わせないで、またはまったくの例としてヒドロキシウレアもしくはピポブロマンなどの他の細胞増殖抑制性活性成分と組み合わせて使用することができる。
【００２６】
本発明は、また、このような活性成分の、フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群を治療するための、腫瘍病理（例えば：皮膚Ｔ細胞性リンパ腫）を治療するのに使用される１日投与量に比べてより少ない１日投与量での治療的使用に関し、これらの投与量は、１０から１５０ｍｇ／日／患者、好ましくは３０から１２０ｍｇ／日／患者、さらにより好ましくは５０から１００ｍｇ／日／患者である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明に関して、用語「治療」は、疾患の病理学的状態または進行に由来する有害効果を軽減、緩和、最小化、排除または遮断するためにケアする行動を意味すると理解されたい。
【００２８】
特定化合物のヒストンデアセチラーゼに関する阻害活性は、例えば、これらの酵素の少なくとも１種の阻害を立証する酵素試験を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定することができる。このタイプの試験は、文献で既知であり、例えば、非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２を参照されたい。ＨＤＡＣの阻害を測定するためのキットも、市販されている（例えば、Ｂｉｏｍｏｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＬＰ社（米国）、ＨＤＡＣ１  Ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｋｉｔ、製品番号ＢＭＬ−ＡＫ５１１−０００１）。
【００２９】
以下の実施例は、本発明の範囲を限定するものではなく、むしろ本発明の実例となるものと意図される。
【実施例１】
【００３０】
フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群を患う患者におけるＩＴＦ２３５７の臨床研究
計画：第ＩＩ相、オープン、非ランダム化研究。
研究の個体数：標準的な薬理学的治療（ヒドロキシウレア）によって十分には抑制されていない骨髄増殖性症候群を患う、ＪＡＫ２V617F突然変異を有する２７名の患者。
被試験薬物：１日２回５０ｍｇの投与量のＩＴＦ２３５７。
治療継続時間：最長で２４週間までの継続投与。
主目標：ＪＡＫ２V617F−陽性骨髄増殖性疾患（ＰＶ、ＥＴ、ＩＭ）を有する患者の治療におけるＩＴＦ２３５７の効率および耐容性を評価すること。
二次目標：変異ＪＡＫ２アレル量（ｍｕｔａｔｅｄ  ＪＡＫ２  ａｌｌｅｌｅ  ｂｕｒｄｅｎ）に関する治療効果を定量的ＰＣＲによって評価すること。
【００３１】
予備的データ（４から１２週間の治療継続期間）の吟味は、真性赤血球増加症、本態性血小板血症または骨髄線維症を患う患者へのＩＴＦ２３５７の投与が、症例のほぼ６０％で完全または部分的な応答を誘導し、加えて、脾臓体積のかなりの縮小が、始めに脾腫状態を示した患者において観察されることを示す。
【実施例２】
【００３２】
ヒト細胞系ＳＥＴ−２のクローン形成効率に関する比較効果
ＪＡＫ２V617F変異ヒト細胞系ＳＥＴ−２（本態性血小板血症の白血病性形質転換を有する患者の末梢血から樹立された巨核芽球細胞系）を、ドイツ細胞バンクＤＳＭＺから入手し（カタログ番号ＡＣＣ６０８）、２４ウェルプレート中、培養培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液＋ペニシリン１０．０００ＩＵ／ｍｌ＋ストレプトマイシン１０．０００μｇ／ｍｌ＋２０％ウシ胎児血清）中で増殖させた。再現性のある計数を行うために、事前実験を実施して、各ペトリ皿中で十分な数のクローンを与える最適細胞数を決定した。ＳＥＴ−２系の場合、その数は、３×１０3細胞／ペトリ皿に相当した。十分な数の細胞を得たら、細胞を、遠心分離（１０3ｒｐｍで１０分）で回収し、次いで、培養培地に９０×１０3細胞／ｍｌの濃度で懸濁した。１００μｌの懸濁液を、製造業者が説明するように調製された３．０ｍｌのメチルセルロース（Ｍｅｔｈｏｃｕｌｔ（商標）、カタログ番号Ｈ４２３０、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）に添加し、次いで、ＨＤＡＣ阻害剤の０．１％ＤＭＳＯ中の６３倍濃縮溶液５０μｌを添加した。各化合物について、５種の段階希釈（１０００〜１２ｎＭの範囲）を試験した。次いで、ＨＤＡＣ阻害剤を含むメチル−セルロース溶液を、泡の形成を回避する無菌のプラスチック製パスツールピペットを使用して注意深く混合した。最後に、１ｍｌの溶液を、１８Ｇニードルを備えたシリンジを使用してペトリ皿（格子表示付きの直径３５ｍｍ、カタログ番号１７４９２６、Ｎｕｎｃ社）に均一に分注した。各実験点について２枚のペトリ皿で実施した。２枚の実験皿を、一定湿度を確保するため、無菌水リザーバーと一緒により大きなペトリ皿中に入れた。次いで、すべての皿を、湿度およびＣＯ2を制御した無菌インキュベーター中で３７℃に維持した。増殖１４日後に、各皿中のクローン数を、双眼顕微鏡を使用することによって決定した。各１対の皿についてのクローンの平均数を計算し、いずれの化合物も存在しない状態（対照皿）で得られたクローン数に関連させて、クローン形成のパーセント阻害を判定した。ＥＣ50値（クローン数を５０％低減するのに必要な濃度）を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５．０ソフトウェアを使用して計算し、下表に報告した。ｒｈＨＤＡＣ１阻害に関する値も報告する：酵素は、ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社（カタログ番号５０００１）から入手し、試験は、ＢＩＯＭＯＬキットを使用し、供給業者の説明書により実施した。
【００３３】
【表１】
2012504112.tif 000002
【００３４】
ＭｏｃｅｔｉｎｏｓｔａｔおよびＥｎｔｉｎｏｓｔａｔは、クラスＩに特異的なＨＤＡＣ阻害剤と考えられ（例えば、非特許文献１３および非特許文献１４参照）、ＫＤ−５１７０は、広範なスペクトルのクラスＩおよびクラスＩＩのＨＤＡＣ阻害剤であることが報告されており（例えば、特許文献１６、非特許文献１５参照）、ＩＴＦ２３５７と同様である。
【００３５】
ＳＥＴ−２細胞のクローン形成効率の阻害が、フィラデルフィア陰性、ＪＡＫ２V617F陽性の骨髄増殖性症候群の治癒についての予測であるとは証明されないが、ＩＴＦ２３５７の強力な阻害効果は、他のＨＤＡＣ阻害剤と比較した場合、ヒストンデアセチラーゼ阻害の存在が、フィラデルフィア陰性骨髄増殖性症候群に関してＩＴＦ２３５７によって示される臨床的有効性を得るのに本質的ではないことを示していると思われる。
【００３６】
被試験化合物は、次式に相当する：
【００３７】
【化１】
2012504112.tif 000003
【国際調査報告】
2012504112.tif 000004
2012504112.tif 000005
2012504112.tif 000006