(57)【要約】【化１】2012502956.tif 000010  本発明は、式（Ｉ）の化合物又はその製薬学的に許容され得る塩及び式（ＩＩ）の化合物又はその製薬学的に許容され得る塩の相乗性組み合わせに関する。
2012502956.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2012502956.tif 000007
の化合物又はその製薬学的に許容され得る塩
及び式ＩＩ：
【化２】
2012502956.tif 000008
の化合物又はその製薬学的に許容され得る塩；あるいは式ＩＩａ：
【化３】
2012502956.tif 000009
［式中、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はＣ１−１８アルキル−ＣＯ−であるか；あるいはＲ２は水素であり、Ｒ１はＣ１−１８アルキル−ＣＯ−であるか；あるいはＲ１及びＲ２の両方はＣ１−１８アルキル−ＣＯ−である］
により示され得るそのエステルプロドラッグ；又はその製薬学的に許容され得る塩
を含んでなる相乗性組み合わせ剤。
【請求項２】
式Ｉの化合物が式ＩＩの化合物と組み合わせられる請求項１の組み合わせ剤。
【請求項３】
式Ｉの化合物が式ＩＩａの化合物と組み合わせられる請求項１の組み合わせ剤。
【請求項４】
Ｒ１及びＲ２の両方がイソプロピル−ＣＯ−である請求項３の組み合わせ剤。
【請求項５】
化合物Ｉ及びＩＩの両者の間のＥＣ５０比が３：１〜１：３の範囲内である請求項１〜４の組み合わせ剤。
【請求項６】
化合物Ｉ及びＩＩの両者の間のＥＣ５０比が約１：１である請求項１〜４の組み合わせ剤。
【請求項７】
約２５ｍｇ〜約２００ｍｇの遊離−形態相当量の式Ｉの化合物及び約３０００ｍｇ〜約１２，０００ｍｇの遊離−形態相当量の式ＩＩの化合物を含有する請求項１〜４の組み合わせ剤。
【請求項８】
リバビリン及びインターフェロンから選ばれるさらに別の薬剤と組み合わされた請求項１〜７のいずれかの組み合わせ剤。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれかに記載の相乗性組み合わせ剤及び製薬学的に許容され得る担体を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項１０】
ＨＣＶ治療における同時、個別又は逐次的使用のための組み合わせ調製物として、すべて請求項１において定義される式Ｉの化合物及び式ＩＩ又は式ＩＩａの化合物を含んでなる製品。
【請求項１１】
ＨＣＶ感染又はそれと関連する疾患の予防及び処置における請求項１〜８のいずれかに記載の組み合わせの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ＨＣＶの大環状ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ阻害剤及びＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害性ヌクレオシドの相乗性組み合わせ剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ヘパシウイルス（ｈｅｐａｃｉｖｉｒｕｓ）属のウイルスのフラビウイルス（ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）科のメンバーであるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、世界中で慢性肝臓病の第１の原因である。診断薬及び血液スクリーニングの開発は新しい感染の割合（ｒａｔｅ）を有意に低下させたが、ＨＣＶはその慢性の性質及びその長期間の肝臓損傷の可能性の故に、世界的規模の健康上の重荷のままである。６個の主要なＨＣＶ遺伝子型（１−６）及び多くのサブタイプ（文字により示される）がある。遺伝子型１ｂはヨーロッパで優勢であり、遺伝子型１ａは北アメリカで優勢である。遺伝子型は、治療への反応の可能性及びそのような治療の必要な持続期間の決定において臨床的に重要である。
【０００３】
ＨＣＶは主に血液接触により伝染する。初期の急性の感染に続き、感染した患者の大部分は慢性肝炎を発症し、それはＨＣＶが肝細胞中で優先的に複製するが、直接細胞障害性ではないからである。数十年を経て、感染した人の中の有意な数は線維症、肝硬変及び肝細胞ガンを発症し、慢性ＨＣＶ感染は肝臓移植に関する第１の原因である。この事実（ｔｈｉｓ）及び含まれる患者の数は、ＨＣＶを有意な医学的研究の焦点としてきた。
【０００４】
ＨＣＶのゲノムの複製は複数の酵素により媒介され、それらの中にＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａセリンプロテアーゼ及びその関連補因子、ＮＳ４Ａがある。このプロセス中の他の必須の酵素は、ＮＳ５Ｂポリメラーゼである。ＮＳ３／４Ａセリンプロテアーゼ及びＮＳ５Ｂポリメラーゼの両方がウイルス複製に必須であると考えられ、これらの酵素の阻害剤はＨＣＶ処置のための候補薬剤であると考えられる。
【０００５】
現在の治療の標準は、週に１回のペグ化されたインターフェロン−α（ＩＮＦ−α）及び１日２回のリバビリンの組み合わせ治療から成り、遺伝子型２又は３に感染した患者の〜８０％を治癒させることができるが、遺伝子型１の患者の４０〜５０％しか治癒させることができない。遺伝子型１の患者における低い成功率と別に、この処置は、インフルエンザ−様症状、貧血及びうつ病を含むある範囲の副作用も伴う。従って、特に副作用、限られた有効性、低い許容性、耐性の出現ならびにコンプライアンスの不足のような現在のＨＣＶ治療の欠点を克服するより安全且つより有力な薬剤が必要である。
【０００６】
ＨＣＶポリメラーゼの高い過誤率は、高いウイルス代謝回転（ｔｕｒｎｏｖｅｒ）と一緒になって、各患者内にＨＣＶゲノムの不均一な集団を生じ、これらの変異体の頻度及び適応度（ｆｉｔｎｅｓｓ）に依存して、ウイルス撲滅に関する高いハードルを与える。かくして将来の治療は、おそらく、必要ならＩＦＮ−α及びリバビリンと一緒のいくつかの抗ウイルス薬の組み合わせから成り、抗ウイルス効果を強化し、且つ耐性の発現に関する閾値も上昇させ、結局、持続的ウイルス学的応答（ＳＶＲ）率を向上させる。
【０００７】
ＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａセリンプロテアーゼを阻害する種々の薬剤が記載されている。特許文献１は、中心の置換プロリン部分を有する線状及び大環状ＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤を開示しており、特許文献２は、中心のシクロペンチル部分を有する線状及び大環状ＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤を開示している。これらの中で大環状誘導体は、それ
らの力価及び興味深い薬物動態学的側面の故に魅力的である。特許文献３は、一系列の大環状ＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤を開示している。これらの中で、（１Ｒ，４Ｒ，６Ｓ，７Ｚ，１５Ｒ，１７Ｒ）−Ｎ−［１７−［２−（４−イソプロピルチアゾール−２−イル）−７−メトキシ−８−メチル−キノリン−４−イルオキシ］−１３−メチル−２，１４−ジオキソ−３，１３−ジアザトリシクロ［１３．３．０．０４，６］オクタデセ−７−エン−４−カルボニル］（シクロプロピル）スルホンアミドとも呼ばれ得る化合物（１Ｒ，４Ｒ，６Ｓ，１５Ｒ，１７Ｒ）−シス−Ｎ−［１７−［２−（４−イソプロピルチアゾール−２−イル）−７−メトキシ−８−メチル−キノリン−４−イルオキシ］−１３−メチル−２，１４−ジオキソ−３，１３−ジアザトリシクロ［１３．３．０．０４，６］オクタデセ−７−エン−４−カルボニル］（シクロプロピル）スルホンアミド、すなわち本明細書下記に描かれる化学構造を有する式Ｉの化合物は、特に興味深い。この化合物はＨＣＶに対して顕著な活性を示し、魅力的な薬物動態学的側面を有し、且つ十分に許容される。この化合物は、特許文献３の実施例５に記載されている合成法により製造され得る。
【０００８】
ＲＮＡ−依存性ＲＮＡポリメラーゼＮＳ５Ｂは、ＲＮＡゲノムの複製に必須である。この酵素のヌクレオシド及び非−ヌクレオシド阻害剤の両方が既知である。例えば特許文献４は複数のヌクレオシド阻害剤を記載しており、その１つは４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−アジド−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２−オン、すなわち本明細書下記に描かれる化学構造を有する式ＩＩの化合物である。この化合物は、特許文献４の実施例１に記載されている合成法により製造され得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第０５／０７３１９５号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０５／０７３２１６号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００７／０１４９２６号パンフレット
【特許文献４】国際公開第２００８／０４３７０４号パンフレット
【発明の概要】
【００１０】
発明の記述
本発明は、式Ｉ：
【００１１】
【化１】
2012502956.tif 000003
【００１２】
の化合物又はその製薬学的に許容され得る塩
及び式ＩＩ：
【００１３】
【化２】
2012502956.tif 000004
【００１４】
の化合物又はその製薬学的に許容され得る塩
を含んでなる相乗性組み合わせに関する。
【００１５】
両活性成分は相乗的に作用し、有効なＨＣＶ阻害効果を及ぼすのに必要な活性成分がより少量であることが見出された。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
式Ｉ又は式ＩＩの化合物を、製薬学的に許容され得る塩の形態で、又は遊離の（すなわち非−塩の）形態で用いることができる。遊離の形態を酸又は塩基で処理することにより、塩の形態を得ることができる。興味深いのは、製薬学的に許容され得る酸及び塩基付加塩であり、それらは、式Ｉ及びＩＩの化合物が形成することができる治療的に活性な無毒性の酸及び塩基付加塩の形態を含むものとする。式Ｉ及びＩＩの化合物の製薬学的に許容され得る酸付加塩は、そのような適した酸を用いて遊離の形態を処理することにより簡単に得ることができる。適した酸は例えば無機酸、例えばハロゲン化水素酸、例えば臭化水素酸もしくは特に塩酸；又は硫酸、硝酸、リン酸などの酸；あるいは有機酸、例えば酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸（すなわちヒドロキシブタン二酸）、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸などの酸を含む。式Ｉの化合
物を、適した有機もしくは無機塩基を用いる処理により、製薬学的に許容され得る金属もしくはアミン付加塩の形態に転換することもできる。適した塩基塩の形態は、例えばアンモニウム塩、アルカリ及びアルカリ土類金属塩、例えばリチウム、ナトリウムもしくはカリウム塩；あるいはマグネシウム又はカルシウム塩；有機塩基との塩、例えばベンザチン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ヒドラバミン塩、ならびに例えばアルギニン、リシンなどのようなアミノ酸との塩を含む。付加塩の形態という用語は、式Ｉ又は式ＩＩの化合物ならびにそれらの塩が形成することができる溶媒和物も含むものとする。そのような溶媒和物は、例えば水和物、アルコラート、例えばエタノラートなどである。興味深いのは、式ＩＩの化合物の遊離の（すなわち非−塩の）形態あるいは式Ｉの化合物の製薬学的に許容され得る塩の形態である。
【００１７】
本発明の組み合わせ中の両活性成分Ｉ及びＩＩの間のＥＣ５０比は変り得る。１つの態様において、該比は１０：１〜１：１０あるいは５：１〜１：５あるいは３：１〜１：３、あるいは２：１〜１：２の範囲内である。特別な組み合わせにおいて、該比は約１：１である。本明細書で用いられる場合、「ＥＣ５０比」という用語は、式Ｉの化合物のＥＣ５０値対式ＩＩの化合物のＥＣ５０値の比を指し、該ＥＣ５０値はＨＣＶレプリコン試験において得られる。後者は特に、本明細書下記に記載される試験法である。この試験において、化合物Ｉの平均ＥＣ５０値は８ｎＭであり、化合物ＩＩの平均ＥＣ５０値は５μＭであることが見出された。
【００１８】
上記のＥＣ５０値に基づき、血漿タンパク質結合を表わす因子及び安全限界（ｓａｆｅｔｙ  ｍａｒｇｉｎ）を示す因子をＥＣ５０値に掛けることにより、有効血漿レベルを決定することができる。後者の因子を約１０に設定することができる。タンパク質結合は、ヒト血清アルブミン、リポタンパク質、糖タンパク質、α、β及びγグロブリンのような血液タンパク質に結合する量を測定することにより、決定され得る。ウイルス学的活性用量とも呼ばれ得る有効血漿レベルは、有効な抗−ウイルス活性を与えるのに必要な用量、すなわちウイルス負荷を有効に低下させる用量を示す。ウイルス負荷は、それが約２桁かもしくはそれより大きく（ａｂｏｕｔ  ｔｗｏ  ｏｒ  ｍｏｒｅ  ｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  ｍａｇｎｉｔｕｄｅ）、好ましくはウイルスの検出限界より低くまで減少する時に、有効に低下する。ウイルス学的活性用量から、見かけの分布容積としても知られる分布容積（ＶＤ）を用いて、投与されるべき用量（もしくは薬剤の量）を計算することができる。分布容積は、経口的又は非経口的投薬の後の血漿と体の残りの部分の間の薬剤（ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）の分布を定量するために用いられる薬理学的用語である。それは、観察される血液濃度を生ずるために、その量の薬剤が均一に分布することを必要とする容積として定義される。あらかじめ決められた量の活性物質を投与し、血漿レベルを測定する動物モデルにおいて、ＶＤを決定することができる。
【００１９】
１日基準で（ｏｎ  ａ  ｄａｉｌｙ  ｂａｓｉｓ）投与される本発明の組み合わせ中の式Ｉの化合物の量は、約１ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０００ｍｇ又は約１０ｍｇ〜約５００ｍｇ又は約２５ｍｇ〜約２５０ｍｇ又は約２５ｍｇ〜約２００ｍｇで変わることができる。式Ｉの化合物の１日の量の例は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ及び４００ｍｇである。１日基準で投与される本発明の組み合わせ中の式ＩＩの化合物の量は、約２５０ｍｇ〜約２０，０００ｍｇ又は約５００ｍｇ〜約１６，０００ｍｇ又は約１０００ｍｇ〜約１２，０００ｍｇ又は約３０００ｍｇ〜約１２，０００ｍｇ又は約３０００ｍｇ〜約６０００ｍｇで変わることができる。式ＩＩの化合物の１日の量の例は、３０００ｍｇ、４５００ｍｇ、６０００ｍｇ、１２，０００ｍｇである。この節及び以下の節において言及するすべての量は、遊離の形態（すなわち非−塩形態）を指す。上記の値は遊離形態の相当量、すなわち遊離の形態が投与される場合の量を示す。塩が投与される場合、塩と遊離の形態の間の分子量比の関数において量を計算する必要がある。
【００２０】
１日当たりのｍｇ／１日当たりのｍｇにおける式Ｉの化合物及び式ＩＩの化合物の代表的な組み合わせには、例えば２５／３０００；２５／６０００；２５／１２０００；５０／３０００，５０／６０００，５０／１２０００，１００／３０００，１００／６０００，１００／１２０００，２００／３０００，２００／６０００，２００／１２０００が含まれる。
【００２１】
上記で言及した１日の用量は、約７０ｋｇの平均体重に関して計算され、小児科用途の場合、あるいは実質的に様々な体重を有する患者で用いられる場合には、再計算されるべきである。
【００２２】
１日を通じて適した間隔で投与される１、２、３もしくは４回か又はそれより多くの細分−投薬量として投薬量を与えることができる。用いられる投薬量は、好ましくは上記で言及した式Ｉの化合物又は式ＩＩの化合物の１日の量あるいはその細分−投薬量、例えばその１／２、１／３又は１／４に相当する。投薬形態物は、化合物Ｉ又は化合物ＩＩあるいは両方を、前の節で言及した範囲又は量に等しい量で含有することができ、例えば投薬形態物は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇの化合物Ｉあるいは２５０ｍｇ、５００ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇ又は２０００ｍｇの化合物ＩＩを個別の調剤中に、あるいは一緒にされた（ｃｏｍｂｉｎｅｄ）調剤中に含有することができる。１つの態様において、式Ｉの化合物は１日１回（ｑ．ｄ．）、特に１日当たり１回の投薬量として投与され、式ＩＩの化合物は１日１回又は２回（ｑ．ｄ．又はｂ．ｉ．ｄ．）、特に１日当たり１回又は２回の投薬量として投与される。式Ｉ及び式ＩＩの両化合物を１日１回投与するべき場合、化合物Ｉを有する１つと化合物ＩＩを有する他の２つの個別の投薬量を投与するか、あるいは化合物Ｉ及び化合物ＩＩの両方を含有する一緒にされた投薬量を投与することにより、これを行うことができる。式Ｉの化合物を１日１回投与し、且つ式ＩＩの化合物を１日２回投与するべき場合、化合物Ｉを有する１つと化合物ＩＩを有する２つの３つの個別の投薬量を投与するか、あるいは化合物Ｉ及び化合物ＩＩの両方を含有する一緒にされた投薬量ならびに所望なら化合物ＩＩを用いる追加の投薬量を投与することにより、これを行うことができる。
【００２３】
本発明の組み合わせを１日１回、２回、３回、４回又は所望なら多数回投与することができる。１つの態様において、組み合わせを１日１回投与する。他の態様において、組み合わせを１日２回又は１日当たり３回投与する。投薬量の投与は、個別の投薬形態物、すなわち化合物Ｉのみ又は化合物ＩＩのみを含有する投薬形態物によるか；あるいは両活性成分Ｉ及びＩＩを含有する一緒にされた投薬形態物によることができる。上記の通り、一緒にされた投薬形態物ならびに化合物Ｉを含有するか、又は好ましくは化合物ＩＩを含有する１、２又はそれより多い投薬形態物の使用の混合を用いることもできる。投与され得る投薬形態物は本明細書下記に記載され、経口的投薬形態物、特に錠剤又はカプセルが好ましい。
【００２４】
両活性成分を製薬学的組成物において個別に、又は一緒にされた製薬学的組成物として調製することができる。後者の場合、本明細書で規定される通りの式Ｉの化合物又はその製薬学的に許容され得る塩及び式ＩＩの化合物又はその製薬学的に許容され得る塩の治療的に有効な量ならびに製薬学的に許容され得る担体を含んでなる製薬学的組成物を提供する。これに関して治療的に有効な量は、感染した患者又は感染する危険にある人においてＨＣＶ感染に対して予防的に、あるいはＨＣＶ感染を安定化させるか又は縮小させる（ｒｅｄｕｃｅ）ように働くのに十分な量である。治療的に有効な量は特に、１日基準での、あるいは多数回の１日の投与を容易にするその細分投薬量の投与に関して上記で言及した量に対応することができる。
【００２５】
さらに別の側面において、本発明は本明細書に規定される製薬学的組成物の調製方法に関し、それは製薬学的に許容され得る担体を式Ｉの化合物又はその製薬学的に許容され得る塩の治療的に有効な量及び式ＩＩの化合物又はその製薬学的に許容され得る塩の治療的に有効な量と緊密に混合することを含んでなる。
【００２６】
本明細書で提供される組み合わせを、ＨＣＶ治療における同時、個別又は逐次的使用のための組み合わせ調剤として調製することもできる。そのような場合、式Ｉの化合物を他の製薬学的に許容され得る賦形剤を含有する製薬学的組成物において調製し、式ＩＩの化合物を他の製薬学的に許容され得る賦形剤を含有する製薬学的組成物において別に調製する。簡便には、これらの２つの個別の製薬学的組成物は、同時、個別もしくは逐次的使用のためのキットの一部であることができる。
【００２７】
本発明の組み合わせの個々の成分を同時に、又は治療の経過の間の異なる時点に個別に、あるいは分けられた又は単一の組み合わせ形態物において同時に投与することができる。
【００２８】
従って、式Ｉ及びＩＩの化合物を、個別に、又は一緒にして（ｃｏｍｂｉｎｅｄ）、投与目的に適した種々の製薬学的組成物に調製することができる。これらにおいて、特定の化合物又は両化合物の治療的に有効な量を、製薬学的に許容され得る担体と合わせ、その担体は、投与のために望ましい調製物の形態に依存して多様な形態をとることができる。製薬学的組成物を、経口的、非経口的（皮下、筋肉内及び静脈内を含む）、直腸的、経皮的、頬的又は鼻的に投与されるべき薬剤として調製することができる。経口的投与に適した組成物には、粉剤、顆粒剤、凝集剤（ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ）、錠剤、圧縮されたかもしくはコーティングされた丸薬、糖衣錠、サッシェ、硬質もしくはゼラチンカプセル、シロップ及び懸濁剤が含まれる。非経口的投与に適した組成物には、水性もしくは非−水性溶液又は乳剤が含まれるが、直腸的投与に関し、投与に適した組成物には親水性もしくは疎水性ビヒクルを用いる座薬が含まれる。局所的投与のために、適した経皮送達系を用いることができ、鼻的送達のために、適したエアゾール送達系を用いることができる。
【００２９】
例えば経口的投与のための組成物の調製において、通常の製薬学的媒体のいずれか、例えば懸濁剤、シロップ、エリキシル剤、乳剤及び溶液のような経口用液体調製物の場合、水、グリコール、油、アルコールなど；あるいは固体組成物の場合、澱粉、糖類、カオリン、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などのような固体担体を用いることができる。非経口用組成物の場合、担体は通常少なくとも大部分において無菌水を含んでなるであろうが、可溶化剤、乳化剤又はさらに別の助剤のような他の成分をそれに加えることができる。担体が食塩水、グルコース溶液又は両者の混合物を含んでなる注入可能な溶液を調製することができる。注入可能な懸濁剤も調製することができ、その場合には適した液体担体、懸濁化剤などを用いることができる。使用の直前に液体形態の調製物に転換されることが意図されている固体形態の調製物、例えば再構築用の粉剤も含まれる。経皮的投与に適した組成物において、担体は場合により皮膚浸透促進剤及び／又は湿潤剤を含んでなることができ、それらは場合により小さい割合における適した皮膚−適合性添加剤と組み合わされていることができる。式Ｉ又はＩＩの化合物あるいはそれらの組み合わせを、経口的吸入又は吹入を介して、この型の投与に適した調剤、例えば溶液、懸濁剤又は乾燥粉剤により投与することもできる。エアゾール又はスプレーの形態における投与に適した製薬学的組成物は、例えばエタノール又は水あるいはそれらの混合物のような製薬学的に許容され得る液体担体中の式Ｉ又はＩＩの化合物あるいは両方の懸濁液である。必要なら、調剤はさらに他の製薬学的助剤、例えば界面活性剤、乳化剤及び安定剤ならびにプロペラントを含有することもできる。そのような調製物は通常、約０．１〜５０重量％、特に約０．３〜３重量％の濃度で活性化合物を含有する。
【００３０】
製薬学的組成物は、約０．１％〜約５０％又は約１％〜約３０％又は約３％〜約２０％又は約５％〜約２０％の濃度で式Ｉの活性成分又は式ＩＩの活性成分あるいは両方を含有することができ、すべてのパーセンテージは重量による。式Ｉの化合物及び式ＩＩの化合物の両方を含有する組成物において、式Ｉの化合物は約０．１〜約５０％又は約１％〜約３０％又は約３％〜約２０％又は約５％〜約２０％の濃度で存在し；式ＩＩの化合物は約３％〜約５０％又は約５％〜約５０％又は約１０％〜約５０％又は約１０％〜約５０％又は約１０％〜約３０％の濃度で存在する。
【００３１】
製薬学的組成物を、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、簡便に単位投薬形態物において与えることができる。例には錠剤（刻み付き又はコーティング錠を含む）、カプセル、丸薬、座薬、粉剤小包、ウェハース、注入可能な溶液又は懸濁剤など、ならびに分離されたそれらの複数が含まれる。興味深いのは、カプセル上の錠剤のような経口的投与のための固体投薬形態物である。
【００３２】
単位投薬形態における固体投薬形態物をいずれかの既知の包装品中に包装することができ、特に錠剤及びカプセルの場合、ブリスターパックが好ましい。式Ｉの化合物及び式ＩＩの化合物を個別に調製する場合、それらを個別のブリスター中に包装することができるが、１個のブリスターが化合物ＩＩの単位投薬形態物と同様に化合物Ｉの単位投薬形態物を含むことができ、例えば１列は化合物Ｉの単位を有し、他の列は化合物ＩＩを有することができる。他の可能性が、例えば化合物ＩＩのｂｉｄ投与のために同様に可能であり得、１列の錠剤が化合物Ｉ及びＩＩの両方の組み合わせ投薬単位を有し、１列が式ＩＩの化合物を有する。その場合、患者は、例えば朝に組み合わせ投薬量を摂取し、夜に式ＩＩの化合物の投薬量を摂取する。
【００３３】
本発明の組み合わせを、ＨＣＶ感染ならびにＨＣＶと関連する疾患の処置のために用いることができる。ＨＣＶと関連する疾患には、進行性肝線維症、炎症及び肝硬変に導く壊死、末期肝臓病ならびにＨＣＣ（肝細胞ガン）が含まれる。
【００３４】
式Ｉ又は式ＩＩの化合物のＨＣＶに対する試験管内抗ウイルス活性を、Ｌｏｈｍａｎｎ
ｅｔ  ａｌ．著，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：１９９９年，１１０−１１３に基づき、Ｋｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７５：２００１年，４６１４−４６２４（引用することによりその記載事項は本明細書の内容となる）により記載されたさらなる修正を有し、実施例の節でさらに例示される細胞ＨＣＶレプリコン系において調べることができる。このモデルは、ＨＣＶに関する完全な感染モデルではないが、現在利用できる自律ＨＣＶ  ＲＮＡ複製の最も頑健（ｒｏｂｕｓｔ）且つ有効なモデルとして広く受け入れられている。ＨＣＶに対する試験管内抗ウイルス活性を、酵素試験によって調べることもできる。
【００３５】
本明細書に規定される式Ｉの化合物及び式ＩＩの化合物の組み合わせは、ＨＣＶに感染した温血動物、特に人間の処置において、ならびにＨＣＶ感染の予防のために有用である。
【００３６】
従って本発明はさらに、ＨＣＶに感染したか、もしくはＨＣＶに感染する危険にある温血動物、特に人間の処置方法に関し、該方法は、本明細書に規定される式Ｉの化合物及び式ＩＩの化合物の組み合わせの抗−ＨＣＶ有効量を投与することを含んでなる。本発明は同様に、本明細書に規定される式Ｉの化合物及び式ＩＩの化合物の組み合わせの抗−ウイルス的に有効な量を投与することを含んでなる、哺乳類におけるＨＣＶ−関連状態の処置又はＨＣＶ−関連状態の予防の方法を提供する。
【００３７】
本発明の組み合わせを薬剤として用いることができる。本発明は、ＨＣＶ感染又はＨＣ
Ｖ関連状態の処置又は予防用の薬剤の製造のための、本明細書に記載される組み合わせの使用にも関する。
【００３８】
さらに別の側面において、本発明は、式Ｉの化合物及び式ＩＩの化合物ならびに場合により他の抗−ＨＣＶ化合物を、ＨＣＶ関連の処置における同時、個別もしくは逐次的使用のための組み合わせ調製物として含有する製品に関する。
【００３９】
本発明の組み合わせを、今度は１種もしくはそれより多いさらに別の抗−ＨＣＶ化合物と組み合わせることができる。興味深いのは、ＩＦＮ−α（ポリエチレングリコール化されているか、もしくはされていない）及び／又はリバビリンとの組み合わせである。
【００４０】
本発明の組み合わせと一緒に共−投与することができる他の薬剤を、別の調剤として投与することができるか、あるいは式Ｉ又は式ＩＩの活性成分の１つもしくは両方と共−調製することができる。
【００４１】
他の抗−ＨＣＶ薬と一緒のものを含む本発明の組み合わせを、薬剤代謝及び／又はバイオアベイラビリティーを向上させる薬物動態学に正の効果を有する薬剤、例えばリトナビル又はその製薬学的に許容され得る塩と組み合わせることもできる。リトナビルを別の調剤として用いることができるか、あるいは本発明の組み合わせの活性薬剤の１つもしくはそれより多くと共−調製することができる。式Ｉの化合物又は式ＩＩの化合物対リトナビルの重量／重量比は、約１０：１〜約１：１０又は約６：１〜約１：６又は約１：１〜約１０：１又は約１：１〜約６：１又は約１：１〜約４：１又は約１：１〜約３：１又は約１：１〜約２：１の範囲内であることができる。
【００４２】
本発明のさらにもっと別の側面において、式（Ｉ）の化合物及び式ＩＩの化合物のエステルプロドラッグの組み合わせを提供する。これらは、国際公開第２００８／０４３７０４号パンフレットに記載されている式ＩＩの化合物、特に式ＩＩａ：
【００４３】
【化３】
2012502956.tif 000005
【００４４】
［式中、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はＣ１−１８アルキル−ＣＯ−であるか；あるいはＲ２は水素であり、Ｒ１はＣ１−１８アルキル−ＣＯ−であるか；あるいはＲ１及びＲ２の両方はＣ１−１８アルキル−ＣＯ−であり；ここで各Ｃ１−１８アルキルは独立して１〜１８個の炭素原子を有する非分枝鎖状もしくは分枝鎖状飽和炭化水素基であり；且つここで各Ｃ１−１８アルキルは特にＣ１−６アルキルであり、そしてさらに特定的にＣ３−４アルキルである］
により示され得る４’及び５’ヒドロキシエステルあるいはその製薬学的に許容され得る塩を含む。そのようなエステルプロドラッグの例は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がイソプロピルであるか；あるいはＲ２が水素であり、Ｒ１がイソプロピル−ＣＯ−であるか；あるいはＲ１及びＲ２の両方がイソプロピル−ＣＯ−である式ＩＩａの化合物である。イソプロピル−ＣＯ−という用語は、イソ酪酸のエステルを指し、それをイソブチリルと呼ぶこともできる。式ＩＩａのプロドラッグの製薬学的に許容され得る塩は、式ＩＩの化合物の塩に関して上記に記載した通りである。
【００４５】
この側面では、上記の組み合わせ、調剤、使用又は方法において式（ＩＩ）の化合物を当量のエステルプロドラッグにより置き換える。
【００４６】
本明細書で用いられる場合、「約」という用語はその通常の意味を有する。特定の態様において、数値に関する場合、それを数値±１０％又は±５％又は±２％又は±１％又は±０．５％又は±０．１％を意味すると解釈することができる。他の態様において、すなわち「約」という用語を省くことにより、正確な値を意味する。
【実施例】
【００４７】
以下の実施例は本発明を例示することを意図しており、本発明をそれに制限することを意図してはいない。
【実施例１】
【００４８】
式Ｉ及びＩＩの化合物の活性
レプリコンアッセイ
ＨＣＶ  ＲＮＡ複製の阻害における活性に関し、細胞アッセイにおいて式Ｉの化合物を調べた。アッセイは、式Ｉの化合物が細胞培養中で機能性のＨＣＶレプリコンに対して活性を示すことを示した。細胞アッセイは、多重−標的スクリーニング（ｍｕｌｔｉ−ｔａｒｇｅｔ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）戦略において、Ｋｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７５：２００１年，４６１４−４６２４により記載された修正を有するＬｏｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｖｏｌ．２８５：１９９９年，１１０−１１３により記載されたビシストロン性発現構築物（ｂｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）に基づいた。本質的に、方法は以下の通りであった。
【００４９】
アッセイは、安定にトランスフェクションされた細胞系Ｈｕｈ−７  ｌｕｃ／ｎｅｏ（下記でＨｕｈ−Ｌｕｃと呼ぶ）に基づいた。この細胞系は、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）からの内部リボソーム侵入部位（Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｉｂｏｓｏｍｅ  Ｅｎｔｒｙ  Ｓｉｔｅ）（ＩＲＥＳ）から翻訳されたＨＣＶ１ｂ型の野生型ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ領域を含んでなり、それにリポーター部分(ＦｆＬ−ルシフェラーゼ）及び選択可能マーカー部分（ｎｅｏＲ，ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ）が先行しているビシストロン性発現構築物をコードするＲＮＡを宿している。構築物はＨＣＶ１ｂ型からの５’及び３’ＮＴＲｓ（非−翻訳領域）により境界付けられている。Ｇ４１８（ｎｅｏＲ）の存在下におけるレプリコン細胞の培養の継続は、ＨＣＶ  ＲＮＡの複製に依存する。自律的に且つ高いレベルまで複製され、中でもルシフェラーゼをコードするＨＣＶ  ＲＮＡを発現する安定にトランスフェクションされたレプリコン細胞を、抗ウイルス性化合物のスクリーニングに用いる。
【００５０】
レプリコン細胞を、種々の濃度で加えられる試験化合物及び標準化合物の存在下で３８４ウェルプレートにおいて平板培養した。３日間のインキュベーションの後、ルシフェラーゼ活性のアッセイ（標準的なルシフェラーゼアッセイ基質及び試薬ならびにＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＶｉｅｗＬｕｘＴｍ  ｕｌｔｒａＨＴＳ  ミクロプレートイメージャーを用いて）によりＨＣＶ複製を測定した。標準培養中のレプリコン細胞は、阻害剤の不在下で高いルシフェラーゼ発現を有した。化合物の阻害活性をＨｕｈ−Ｌｕｃ細胞上で監視し、各試験化合物に関する用量−反応曲線を可能にした。次いでＥＣ５０値を計算し、その値は、検出されるルシフェラーゼ活性、あるいはもっと特定的に、遺伝子的に連鎖したＨＣＶレプリコンＲＮＡが複製する能力のレベルを５０％低下させるのに必要な化合物の量を示す。
【実施例２】
【００５１】
式Ｉ及びＩＩの化合物を組み合わせる場合の効果の決定
Ｌｏｅｗｅモデルを用いて、相乗作用の存在又は不在を決定した。多くの場合に「用量加算（ｄｏｓｅ  ａｄｄｉｔｉｏｎ）」と呼ばれるＬｏｅｗｅの加算性モデル（Ｌｏｅｗｅ  Ｓ，Ｍｕｉｓｃｈｎｅｋ  Ｈ．著，Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ：ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｐｒｏｂｌｅｍ，Ａｒｃｈ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｐｈａｒｍａｋｏｌ．１１４：１９２６年；３１３−３２６）は、用量Ａにより生ずる反応プラス用量Ｂにより生ずる反応が用量Ａ＋Ｂにより生ずる反応に等しい場合、ゼロの相互作用が起こっているという概念に基づく。単一の薬剤の場合これは常に保たれ、従って単一の薬剤はそれ自身と相互作用しない。用量加算を示す異なる薬剤は、単に互いの希釈剤として行動し、それらの予測される効果は、式：
Ｄａ／ＤＡ  ＋  Ｄｂ／ＤＢ  ＝  １
に従うそれらの用量及び相対的力価の合計であり、式中、ＤＡ及びＤＢは、単独で投与される場合に特定されるレベルの反応を生ずる薬剤Ａ及びＢの用量であり、Ｄａ及びＤｂは、組み合わされて投与される場合に同じレベルの反応を生ずる薬剤の用量である。Ｌｏｅｗｅの加算性からの変動は通常、組み合わせ指数：
ＣＩ  ＝  Ｄａ／ＤＡ  ＋  Ｄｂ／ＤＢを用いて定量される。
【００５２】
Ｌｏｅｗｅの加算性モデルに関してＨＣＶレプリコン阻害データを分析するために、ＣａｌｃｕＳｙｎ（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，Ｍｏ．）を用いた。＜０．９、０．９−１．１及び＞１．１のＣＩ値は、それぞれ相乗作用、加算効果又は拮抗作用を示す。
【００５３】
５０％、７５％又は９０％阻害の有効用量に関する組み合わせ指数（ＣＩ）値を計算した。式Ｉの化合物及び式ＩＩの化合物の組み合わせを用いる２つの別の試験を行った。１つの試験は５個の試験プレートを用い、他の試験は４個の試験プレートを用いた。メジアンＥＤ５０、ＥＤ７５及びＥＤ９０値（ＣＩ値）ならびに標準偏差（ＳＤ値）を計算し、これらを以下の表に挙げる。これらの値は相乗関係を示している。
【００５４】
【表１】
2012502956.tif 000006
【実施例３】
【００５５】
プロドラッグからの親化合物の放出
式ＩＩａの範囲内のあるプロドラッグは、活性種への細胞内リン酸化の前に、例えば胃壁又は肝臓における、遊離のヌクレオシドへの生体内変換を必要とする。従ってこれらのプロドラッグは、実施例１で用いられたレプリコン系のような細胞系における直接の相乗作用試験を受けられない。しかしながら、適した動物種への式ＩＩａのプロドラッグの投与に続く式ＩＩの親化合物の放出を測定し、それにより式Ｉのプロテアーゼ阻害剤と一緒のプロドラッグの投与が生体内で相乗作用を示すであろうことを推論することができる。ラットは、ヌクレオシド類似体の薬物動態学的パラメーターの評価のために有用なモデルとして認められる。
【００５６】
Ｒ１及びＲ２がイソブチリルである式ＩＩａの化合物（化合物３ａ）又はＲ１がイソブチリルであり、Ｒ２がＨである式ＩＩａの化合物（化合物３ｂ）を、２８％（ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンビヒクル）中の６．７ｍＭとして調製した。２０μモル／ｋｇの１回の用量を、１６時間断食させた二匹の（ｄｕｐｌｉｃａｔｅ）雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに、強制栄養法（３ｍＬ／ｋｇ）により経口的に投与した。１５、３０、６０、１２０、２４０、３６０及び４８０分の時点に、血液の試料を採取した。血清において、親化合物４’−アジド−２’−デオキシ−２’−メチルアラビノシトシンをＭＳ／ＭＳにより以下の通りに定量した：内部標準ワルファリンを含有する１５０μｌの氷冷アセトニトリルを用い、０μｌの血漿を沈殿させた。試料を３７００ｒｐｍで２０分間遠心した。１００μｌの上澄み液を最初に１００μｌの水で希釈し、７５μｌの希釈された試料をさらに７５μｌの水で希釈した。カラム：Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＰＯＬＡＲ−ＲＰＴＭ，４μｍ，５．０＊４．６ｍｍ。移動相：１０ｍＭ酢酸アンモニウム中のアセトニトリル勾配。
【００５７】
このアッセイにおいて、化合物３ａは４．５６μＭの親Ｃｍａｘ及び１５．３μＭ．時のＡＵＣ０−ｔを生じ、化合物３ｂは４．６５μＭ．時の親Ｃｍａｘ及び１２．７μＭ．時のＡＵＣ０−ｔを生じた。標準的なラットの重量を約２５０ｇであると仮定すると、式ＩＩａのプロドラッグの経口的投与後の親種の血漿濃度に関するこれらの数字は、レプリコン系における親のＩＣ５０より十分に高い数字を示しており、それにより、プロドラッグが生体内に適用される時、親ヌクレオシドに関して示された相乗性を共有するという確証を与える。
【国際調査報告】
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