(57)【要約】本発明は、非対称単層膜を有するポリマーベシクルに関し、該膜は、２つの異なる層、すなわち層（Ａ）及び層（Ｂ）、によって構成されており、該２つの層は、該層（Ｂ）とは対照的に、少なくとも１つの刺激可能な疎水性ポリマーブロックを有する両親媒性ブロックコポリマーの有効量を有する層（Ａ）を有する各両親媒性ブロックコポリマーを有し、該ブロックポリマーは、外因性刺激に応答して新規立体配置を採ることができる該コポリマーにより提供され、該単層膜の破裂を条件付ける。本発明は、該ベシクルの製造方法、該ベシクル中に活性成分をカプセル化する方法、該活性成分の制御された放出の方法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
非対称単層膜を有するベシクルであって、該膜は、２つの異なる層、すなわち層（Ａ）及び層（Ｂ）、によって構成されており、該２つの層は重ね合わせられており、且つ、それそれが少なくとも１つのそれぞれの両親媒性ブロックコポリマーを有するところの該ベシクルにおいて、層（Ａ）が、外因性刺激によって刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する両親媒性ブロックコポリマーの有効量を有し、該コポリマーによって提供される該刺激可能なブロックは、該外因性刺激に応答して、該単層膜の破裂を条件付ける新規立体配置を採ることができること、および、該層（Ｂ）が、該外因性刺激により刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する両親媒性ブロックコポリマーの有効量を有さないことを特徴とする、前記ベシクル。
【請求項２】
該刺激可能な両親媒性ブロックコポリマーが、少なくとも１つの親水性ブロックと少なくとも１つの光刺激可能な液晶疎水性ブロックとを有するコポリマーから選ばれたものである、請求項１に記載のベシクル。
【請求項３】
該光刺激可能な液晶疎水性ブロックが少なくとも１つのアゾベンゼン基を有する、請求項２に記載のベシクル。
【請求項４】
該光刺激可能な液晶疎水性ブロックが、ポリ(4-ブチルオキシ-2'-(4-(メタクリロイルオキシ)ブチルオキシ)-4'-(4-ブチルオキシベンゾイルオキシ)アゾベンゼン)、ポリ(4-ブチル-2'-(4-(メタクリロイルオキシ)ブチルオキシ)-4'-(4-ブチルオキシ-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(4-ブチルオキシ-2'-(4-(アクリロイルオキシ)ブチルオキシ)-4'-(4-ブチルオキシ-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(4-ブチル-2'-(4-(アクリロイルオキシ)ブチルオキシ)-4'-(4-ブチルオキシ-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(4-アルキルオキシ-2'-(メタクリロイルオキシアルキルオキシ)-4'-(4-アルキルオキシ-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(4-アルキルオキシ-2'-(アクリロイルオキシアルキルオキシ)-4'-(4-アルキルオキシ-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(4-アルキル-2'-(メタクリロイルオキシアルキルオキシ)-4'-(4-アルキルオキシ-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(4-アルキル-2'-(アクリロイルオキシアルキルオキシ)-4'-(4-アルキルオキシ-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(4-アルキル-2'-(メタクリロイルオキシアルキルオキシ)-4'-(4-アルキル-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(4-アルキル-2'-(アクリロイルオキシアルキルオキシ)-4'-(4-アルキル-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(4-アルキルオキシ-2'-(メタクリロイルオキシアルキルオキシ)-4'-(4-アルキル-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(4-アルキルオキシ-2'-(アクリロイルオキシアルキルオキシ)-4'-(4-アルキル-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ポリ(6-[4-(4-メトキシフェニルアゾ)フェノキシ]ヘキシルメタクリレート、及びポリ(6-[4-(4-メトキシフェニルアゾ)フェノキシ]ヘキシルアクリレートから選ばれたものである、請求項３に記載のベシクル。
【請求項５】
該疎水性ブロックが、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリ（Ｎ−アルキルアクリルアミド）、ポリ（Ｎ−アルキルアミノアクリレート）、ポリ（アクリル酸−コ−オリゴ（エチレングリコール）アクリレート）、ポリ（メタクリル酸−コ−オリゴ（エチレングリコール）メタクリレート）、ポリ（オリゴ（エチレングリコール）メタクリレート）、ポリ（オリゴ（エチレングリコール）アクリレート）、及びポリ（２−（２’−メトキシエトキシ）エチルメタクリレート−コ−オリゴ（エチレングリコール）メタクリレート）から選ばれたものである、請求項２〜４のいずれか１項に記載のベシクル。
【請求項６】
層（Ｂ）が、該外因性刺激に対して非感受性であるコポリマーから主に形成されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載のベシクル。
【請求項７】
層（Ｂ）が、ポリエチレングリコール−ポリブタジエンブロックコポリマー、ポリアクリル酸−ポリスチレンブロックコポリマー、ポリエチレングリコール−ポリスチレンブロックコポリマー、ポリエチレングリコール−ポリエチルエチレンブロックコポリマー、ポリエチレングリコール−ポリブタジエンブロックコポリマー、ポリエチレングリコール−ポリ−Ｌ−乳酸ブロックコポリマー、及びポリエチレングリコール−ポリカプロラクトンブロックコポリマーから選ばれる少なくとも１つのコポリマーから形成されたものであることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載のベシクル。
【請求項８】
層（Ａ）が、該単層膜中のコポリマーの全重量に対して、少なくとも７０重量％の量の刺激可能両親媒性ブロックコポリマーから形成されており；且つ
層（Ｂ）が、該単層膜中のコポリマーの全重量に対して、少なくとも７０重量％の量の少なくとも１つの非刺激可能なコポリマーから形成されていることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載のベシクル。
【請求項９】
層（Ａ）が、少なくとも該刺激可能な両親媒性ブロックコポリマーとして、ポリ(エチレングリコール)−b−ポリ(4−ブチルオキシ−2'−(4−(メタクリロイルオキシ)ブチルオキシ)−4'−(4−ブチルオキシ−ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、これはＵＶ光に対して感受性である、を有し；
層（Ｂ）が、ＵＶ光に対して非感受性であるポリ(エチレングリコール)−ｂ−ポリ(ブタジエン)から本質的に形成される、請求項１〜８のいずれか１項に記載のベシクル。
【請求項１０】
該外因性刺激が、ＵＶ光、赤外光、電場、磁場、及び温度から選ばれたものであることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載のベシクル。
【請求項１１】
該非対称単層膜中のコポリマーの全重量に対して、該ベシクルの層（Ａ）が、１０重量％超、特には２０〜９５重量％、特には３０〜７０重量％、あるいは４０重量％超さえの刺激可能な両親媒性ブロックコポリマーを有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のベシクル。
【請求項１２】
該非対称単層膜中のコポリマーの全重量に対して、該ベシクルの層（Ｂ）が、１０重量％〜９５重量％、好ましくは３０重量％〜７０重量％の、外因性刺激に対して非感受性の両親媒性ブロックコポリマーを含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のベシクル。
【請求項１３】
その平均直径が１００μｍ〜２０ｎｍ、又は７５μｍ〜５０ｎｍ、及びより特には５０μｍ〜１００ｎｍである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のベシクル。
【請求項１４】
少なくとも１つの親水性活性成分、特にはポリマー、化学的試薬、及び医薬的活性成分及び植物病理学的活性成分、皮膚科学的活性成分及び／又は化粧料活性成分から選ばれる親水性活性成分をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のベシクル。
【請求項１５】
親水性又は生理学的に許容できる媒体中に請求項１〜１４のいずれか１項に記載の少なくとも１つのベシクルを有する組成物。
【請求項１６】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の非対称単層膜を有するベシクルを製造する方法であって、
ａ）少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の存在下において、水性滴のまわりの該両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の層の形成に好都合な条件下で、油性相中に水性相を分散させること、
ｂ）前記ステップの最後に得られた該覆われた滴を、該両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）と異なる少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）と、ステップａ）において形成された層に重ねられた該両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）を有する層の形成に好都合な条件下で、接触させること、及び
ｃ）非対称単層膜を有する該ベシクルを水性相中に回収すること
からなるステップを少なくとも含むこと、および
ステップａ）及びｂ）のステップのうちただ一つが、該両親媒性ブロックコポリマーとして、外因性刺激により刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマーの有効量を用いることを特徴とする前記方法。
【請求項１７】
ステップｂ）の層の形成が油性相と水性相との界面で起こる、請求項１６に記載の製造方法。
【請求項１８】
他のステップが、該外因性刺激により刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する両親媒性ブロックコポリマーを有さない、請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載のベシクル中に、少なくとも１つの親水性活性成分、特には化粧料分子、皮膚科学的分子又は医薬的分子、ポリマー及び／又は化学的試薬、をカプセル化する方法において、
ａ）少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の存在下において、１または複数の該活性成分を有する水性滴のまわりにおける該両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の層の形成に好都合である条件下において、少なくとも１つの活性成分を有する水性相を油性相中に分散させること、
ｂ）前のステップから得られた該覆われた滴を、ステップａ）において形成された該層に重ねあわされた該両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）を有する層の形成に好都合な条件下で、該両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）と異なる少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）の存在下に持ち込み、そして
ｃ）１または複数の該活性成分を有する非対称単層膜を有する該ベシクルを水性相中に回収すること、
からなるステップを少なくとも含むこと、および、
ステップａ）又はｂ）のうち１つだけが、該両親媒性ブロックコポリマーとして、外因性刺激により刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマーの有効量を用いることを特徴とする、前記方法。
【請求項２０】
請求項１３に記載の非対称単層膜を有するベシクル中に含まれる少なくとも１つの活性成分の制御された放出の方法であって、外因性刺激により刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する該両親媒性ブロックコポリマーの立体配置の修正を誘発することができる外因性刺激に、該ベシクルの該単層膜の破壊を誘発するのに十分である条件下において、該ベシクルをさらすことからなる前記方法。
【請求項２１】
該外因性刺激が、ＵＶ光、赤外光、電場、磁場、及び該刺激可能なコポリマーの化学的構造により調節されうる温度、特には２０℃〜１００℃、好ましくは３０℃〜８０℃の誘発温度、から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで少なくとも１つの活性成分をカプセル化、輸送、ベクター化及び／又は放出する為に、請求項１〜１３のいずれか１項に定義されたベシクルを使用する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１以上の親水性活性成分をカプセル化すること及び輸送すること並びに１以上の親水性活性成分の制御放出を提供することが意図されたベシクル、特にはポリマーソームに関する。
【背景技術】
【０００２】
語「ポリマーソーム」は、両親媒性合成ポリマーから形成された膜によって定められたベシクルを意味する。以下で、表現「ポリマーソーム」又は「単層膜を有するベシクル」は、同じ実体を示す為に交換可能に用いられる。
【０００３】
構造的見地から、ポリマーソームはリポソームに似ており、唯一の違いは、リポソームが脂質から作られることである。ポリマーソームは、リポソームの特性の多くを有するが、加えて、それらはより大きな安定性及びより低い透過性を有する。
【０００４】
一般に、ポリマーソームは単層膜を有する。この単層膜は、それを形成する２つの重ねられた層が同一のコポリマーにより構成される場合に「対称な」ものと称される。対照的に、「非対称な」単層膜は、それらを構成するコポリマーの特定の性質により互に区別される２つの重ねられた膜を有する。該２種類のコポリマーの間のこの違いは、該コポリマーを形成する疎水性ブロックの特徴に及び／又は親水性ブロックの特徴に存する。
【０００５】
ポリマーソームの開発は、カプセル化、輸送及び制御放出の分野において特に関心がもたれている。さらに、生体適合性親水性ブロック（これは有利にはポリエチレングリコールタイプのものでありうる）の外層のそのようなベシクルの表面の存在が、これらのポリマーソームを、免疫系に関して、ひそかなものとしうる。この特徴（これは或る形の無害性とも関連する）は、それらを、活性成分についての、例えば化学的、化粧的、皮膚科学的及び又は医薬的成分についての、理想的なトランスポーター又はベクターとする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ポリマーソームが含む活性成分の放出の有効な制御を許す新しいタイプのポリマーソームを提案することを特に試みる。
【０００７】
既に提案されており且つ特に言及されうる制御放出ポリマーソームの説明となる例は、ブロックコポリマーの二重層を有する対称単層ポリマーソームであり、これは両親媒性であり且つ加水分解に感受性であり、例えばポリエチレングリコール−ポリ乳酸又はポリエチレングリコール−ポリカプロラクトンブロックコポリマーであり、及び、これは任意的に米国特許出願公開第２００５／０００３１６号明細書に記載されたポリエチレングリコール−ポリブタジエンブロックコポリマーと混合されうる。そのポリマーソームは、膜中のコポリマーの加水分解の後に制御された様式で放出される例えば薬剤などの活性成分を含むことにおける用途の為であるとして記載されている。この放出は、環境的な刺激により条件付けられ、及び、単層膜が穴をあけられて該ベシクルの完全な崩壊の段階に達するところの段階を含み、該段階はそれにもかかわらず、数時間又は数日さえである比較的長い時間に及び、及びすなわち、所望の適用と常には適合しない。
【０００８】
両親媒性である感熱性ブロックコポリマーを含む二重層を有する対称な単層ポリマーソームの他の種類が、文献国際公開第２００７／０７５５０２号パンフレットに記載されている。それらのポリマーソームもまた、活性成分を含むことができ及びそれらを標的臓器へ輸送することができる。該コポリマーは、ポリエチレングリコール−ｂ−ポリ（Ｎ−アルキルアクリルアミド）タイプ又はポリエチレングリコール−ｂ−ポリ（Ｎ−アルキルアミノアクリレート）タイプのものである。或る臨界溶液温度を越えると、該感熱性ブロックは、疎水的特性を有し、該特性はそれらが自己集合してポリマーソームを形成することを結果する。対照的に、その温度より低いと、該感熱性ブロックは、親水的特性を取り戻し、該ポリマーソームの解離を結果する。該ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）タイプの感熱性ブロックコポリマーの該臨界溶液温度は約３２℃である。しかしながら、そのタイプの制御放出系を使用することは、いくつかの問題をもたらし、特にはｉｎ  ｖｉｖｏでの問題をもたらし、すなわちクーリングパッチによってそれらにとってそれらが含む該活性素を放出することが可能となるように、該ポリマーソームの温度が３２℃より低くされなければならず、すなわち３７．２℃である体温より十分に低くされなければならない。
【０００９】
すなわち、局所的な様式で及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏで容易に適用可能である外部刺激に応答して、仕立てられた、制御された、実質的に即時の、且つ完全な、それらの内容物の放出を引き起こすことができるポリマーソームについてのニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは今、該コポリマーの特定の選択によって、これらの基準を満足する合成単層膜を有するポリマーソーム又はベシクルを提供することが可能であることを発見した。
【００１１】
本発明の第一の例となる実施態様は、非対称単層膜を有するベシクルを提供し、該膜は、２つの異なる層、すなわち層（Ａ）及び層（Ｂ）、によって構成され、該２つの層は重ね合わせられており、且つ、それそれが少なくとも１つのそれぞれの両親媒性ブロックコポリマーを有するところの該ベシクルにおいて、層（Ａ）が、外因性刺激によって刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する両親媒性ブロックコポリマーの有効量を有し、該コポリマーによって提供される該刺激可能なブロックは、該外因性刺激に応答して、該単層膜の破裂を条件付ける新規立体構造をとることができること、および、該層（Ｂ）が、該外因性刺激により刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する両親媒性ブロックコポリマーの有効量を有さないことを特徴とする。
【００１２】
より正確には、該単層膜を構成する両親媒性ブロックコポリマーにより形成された層（Ａ）及び（Ｂ）は、頭と頭を付き合わせて重ねられており、すなわち該コポリマーの疎水性ブロックが該膜の内面を構成し及び該コポリマーの親水性ブロックが該膜の外面を構成するように重ねられている。
【００１３】
好ましい例示の実施態様において、本発明のベシクルはさらに、少なくとも１つの活性成分を含む。
【００１４】
本発明の第二の例示の実施態様は、任意的に親水性又は生理学的に許容できる媒体中に、本発明に従う少なくとも１つのベシクルを有する組成物、特には化学的、化粧的、皮膚科学的、及び／又は医薬的組成物、を提供する。
【００１５】
語「生理学的に許容できる媒体」は、ｅｘ  ｖｉｖｏ用途、例えば角質物質上の用途、又はｉｎ  ｖｉｖｏ用途、例えば生きている生物、特にはヒト又は動物、による摂取による用途、と適合する非毒性媒体を意味する。
【００１６】
本発明の第三の例示の実施態様は、本発明に従う非対称単層膜を有するベシクルを製造する方法であって、
ａ）少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の存在下において、水性滴のまわりの該両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の層の形成に好都合な条件下で、油性相中に水性相を分散させること、
ｂ）前記ステップの最後に得られた該覆われた滴を、該両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）と異なる少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）と、ステップａ）において形成された層に重ねられた該両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）を有する層の形成に好都合な条件下で接触させること、そして
ｃ）非対称単層膜を有する該ベシクルを水性相中に回収すること
からなるステップを少なくとも含むこと、および
ステップａ）及びｂ）のステップのうち一つだけが、該両親媒性ブロックコポリマーとして、外因性刺激により刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマーの有効量を用いることを特徴とする前記方法を提供する。
【００１７】
実施において、ステップｂ）の層は、油性相と水性相との界面で形成される。
【００１８】
明白な理由のために、外因性刺激により刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する両親媒性ブロックコポリマーが、考慮下のステップにおいて、該コポリマーが受容的である該外因性刺激への該ポリマーソームの曝露に応答して、それが形成する該ポリマーソームの該膜の破裂を引き起こすことができるのに十分な量で用いられる。
【００１９】
対照的に、他のステップにおいて、そのようなコポリマーは、有効でない量で存在し、又は完全に不在でさえある。
【００２０】
すなわち、変形において、その２つのステップのうちのただ一つが、該両親媒性ブロックコポリマーとして、少なくとも１つの刺激可能なブロックを有する少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマーを採用する。
【００２１】
該製造方法の実施において、ステップｂ）の層は、油性相と水性相との界面で形成される。
【００２２】
本発明の第四の例示となる実施態様は、本発明に従うベシクル中に、少なくとも１つの親水性活性成分、特には化粧的、皮膚科学的又は医薬的分子、ポリマー及び／又は化学的試薬をカプセル化する方法であって、
ａ）少なくとも１つの活性成分を含む水性相を、油性相中に、少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の存在下において、１または複数の該活性成分を含む水性滴ののまわりに該両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の層を形成するのに好都合な条件下において、分散させること、
ｂ）前記ステップから得られた該覆われた滴を、該両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）と異なる少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）の存在下に、ステップａ）において形成された該層に重ねあわされた該両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）を有する層の形成に好都合な条件下に持ち込み、そして
ｃ）水性相中に１または複数の該活性成分を含む非対称単層膜を有する該ベシクルを回収すること、ステップａ）及びｂ）は上で定義されたとおりである、
からなるステップを少なくとも含むことを特徴とする前記方法を提供する。
【００２３】
すなわち、２つのステップａ）又はｂ）のうちただ一つが有利に、該両親媒性ブロックコポリマーとして、少なくとも１つの刺激可能ブロックを有する少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマーを採用する。
【００２４】
本発明の第五の例示となる実施態様は、本発明に従う非対称単層膜を有するベシクル中に含まれる少なくとも１つの活性成分の制御された放出の方法を提供し、該方法は、外因性刺激により刺激されることができる少なくとも１つのブロックを有する該両親媒性ブロックコポリマーの立体構造に修正を誘発することができる前記外因性刺激に、該ベシクルを、該ベシクルの該単層膜の破裂を誘発するのに十分な条件下においてさらすことからなる。
【００２５】
本発明の最後の例示となる実施態様は、少なくとも１つの活性成分の、ｅｘ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏでのカプセル化、輸送、ベクター化（vectorizing）及び／又は放出の為に、本発明に従うベシクルを使用する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】アゾベンゼン分子の可逆的異性化を示す図である。
【図２】PEG-b-PMAazo444及びPEG-b-PBDの化学構造を示す図である。
【図３】該刺激可能な非対称ポリマーソーム膜の層（Ａ）中の光刺激可能な液晶ブロックの形における変化の概略図である。
【図４ａ】ポリマーソームの破裂シーケンスを示す写真並びにこの破裂を示す図である。
【図４ｂ】ポリマーソームの破裂シーケンスを示す写真並びにこの破裂を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
ポリマーソーム
【００２８】
本発明に従う単層ポリマー膜を有するベシクル、又はポリマーソーム、は１００μｍ（マイクロメートル）〜２０ｎｍ（ナノメートル）の範囲の、又は７５μｍ〜５０ｎｍの範囲の及びより特には５０μｍ〜１００ｎｍの範囲の平均直径を有しうる。
【００２９】
本発明のベシクルは、該ベシクルの殻を構成する単層膜と、有利には完全に又は部分的に水から形成された液相、特には水性の液相、を形成するコアとを有する。これは、「コア／シェル」型構造と称される。
【００３０】
該コアに関して、該液相は、もっぱら水により構成されてよく、又は、それは、水性溶液、すなわわち水と１以上（１又はそれより多い）水溶性溶媒との混合物、を有しうる。
【００３１】
本発明において用いられるときに、語「水溶性溶媒」は、周囲温度で液状であり且つ水と混和性（２５℃且つ大気圧で５０重量％超の水中での混和性）である化合物を意味する。
【００３２】
本発明のベシクルのコアを形成する液相として用いられることができ且つ言及されうる水溶性溶媒の例は、１〜５の炭素原子を有する低級アルコール、例えばエタノール又はイソプロパノールなど、２〜８の炭素原子を有するグリコール、例えばエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール又はジプロピレングリコールなど、Ｃ３及びＣ４ケトン、及びＣ２−Ｃ４アルデヒドである。
【００３３】
該単層膜は、２つの層により構成される：「内層」と称される第一の層、これは該ベシクルの該コアと直接に接触している、及び「外層」と称される第二の層、これは該第一の層と重ね合わせられており及びすなわち該第一の層と隣接しており且つ該媒体と直接に接触しており、該媒体中において該ベシクルが、「外側媒体／外層／内層／コア」型の構造を形成する順で見られる。
【００３４】
該親水性ブロックは、それらが最も親和性を有する媒体と接触するように方向付けられる。すなわち、該内層において、それらは、該ベシクルの水性液相コアに向けて方向付けられており、及び、該外層において、それらは該ベシクルが浸されている外部媒体に向けて方向付けられており、一方で該疎水性ブロックは、該ベシクルのシェルの内側に、「外側媒体／親水性ブロック／疎水性ブロック／疎水性ブロック／親水性ブロック／コア」型の構造を形成するように位置される。
【００３５】
上記で議論されたとおり、本発明のベシクルの単層膜もまた対照的であり、すなわちそれは層（Ａ）と重ね合わせられた層（Ｂ）とにより構成され、これらは互に異なる。本文中において、表現「非対称単層膜を有するベシクル」及び「非対照的ポリマーソーム」は交換可能に用いられる。
【００３６】
層（Ａ）
【００３７】
本発明の文脈において、層（Ａ）は、外因性刺激に応答して新たな立体構造をとることができる少なくとも１つのポリマーブロックを有する１または複数の両親媒性コポリマーを含む層として定義される。そのようなブロックは、「刺激可能なブロック」と称される。
【００３８】
簡素化目的の為に、少なくとも１つの刺激可能なブロックを有するそのような両親媒性ブロックコポリマーは、「刺激可能な両親媒性ブロックコポリマー」又は「刺激可能なブロックコポリマー」又は「刺激可能な両親媒性コポリマー」又は「刺激可能なコポリマー」さえとも称され、これらの表現のすべてが等価である。
【００３９】
「刺激可能なコポリマーの有効量」は、外因性刺激への該コポリマーの曝露に応答した該刺激可能なコポリマーの立体構造における変化に続く、該ベシクルの膜の破裂を許すのに十分な量の１または複数の該コポリマーを意味する。
【００４０】
上記から分かるとおり、該刺激可能なブロックは、「刺激可能なモチーフ」と称される少なくとも１つのモチーフを含み、これは外因性刺激に感受性である。
【００４１】
本発明の好ましい変形において、刺激可能なコポリマーは、「液晶ブロック」と称される、有利には液晶性質を有する、少なくとも１つの刺激可能なブロックを有する。
【００４２】
液晶性質を有する該刺激可能なモチーフは、外因性刺激、特には光放射、磁場、電場、又は温度、に応答してそれらの構造的組織（配向性（orientation）、中間相（mesomorphous  phase））を修正することができる。
【００４３】
より特には、それはアゾベンゼン基を有する少なくとも１つのモチーフからなる光刺激可能な液晶ブロックである。
【００４４】
語「光刺激可能な」は、光放射への曝露に応答して修正を受けることができることを意味する。
【００４５】
すなわち、光放射への曝露に応答して、少なくとも１つのアゾベンゼン基を有するモチーフは、ｔｒａｎｓ立体配置からｃｉｓ立体配置への、立体配置における変化を受けることができる。モチーフ中のこの立体配置の変化は、該刺激可能なブロックにおける新規の立体配置（形状）を誘発する結果を有する。これらの構造的修正の全体的な効果は、特には対応するコポリマーにより形成された該単層構造における、該２層のうちの１つだけの表面積の増加を誘発すること、及びすなわち、該膜の曲率における自発的変化を誘発することであり、これは本発明のベシクルの迅速な破裂を誘発することにおいて有効であると分かる。
【００４６】
好ましい例示となる実施態様において、該刺激可能なコポリマーは、少なくとも１つの親水性ブロックと少なくとも１つの液晶疎水性ブロックとを有するコポリマーから選ばれる。これらの特に有利な例示となる実施態様において、該液晶疎水性ブロックは、少なくとも１つのアゾベンゼン基を有する光刺激可能な液晶疎水性ブロックにより構成される。
【００４７】
言及されうるこの種のブロックの例示となり非限定的である特定の例は、ポリマーブロック、 ポリ (4-ブチルオキシ-2 ' - (4- (メタクリロイルオキシ) ブチルオキシ)-4'-(4- ブチルオキシベンゾイルオキシ) アゾベンゼン) , ポリ (4-ブチル-2 ' - (4- (メタクリロイルオキシ) ブチルオキシ) -4 ' - (4-ブチルオキシ- ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ (4-ブチルオキシ-2 ' - (4- (アクリロイルオキシ) ブチルオキシ) -4'- (4-ブチルオキシ- ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ (4-ブチル-2 ' - (4- (アクリロイルオキシ) ブチルオキシ) -4'- (4-ブチルオキシ- ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ (4-アルキルオキシ-2 ' - (メタクリロイルオキシアルキルオキシ) -4 ' - (4-アルキルオキシ- ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ (4-アルキルオキシ-2 ' - (アクリロイルオキシアルキルオキシ) -4 ' - (4-アルキルオキシ- ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ (4-アルキル-2 ' - (メタクリロイルオキシアルキルオキシ) -4 ' - (4-アルキルオキシ- ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ (4-アルキル-2 ' - (アクリロイルオキシアルキルオキシ) -4 ' - (4-アルキルオキシ- ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ (4-アルキル-2 ' - (メタクリロイルオキシアルキルオキシ) -4 ' - (4-アルキル- ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ (4-アルキル-2 ' - (アクリロイルオキシアルキルオキシ) -4 ' - (4-アルキル-ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ (4-アルキルオキシ-2 ' - (メタクリロイルオキシアルキルオキシ) -4 ' - (4-アルキル- ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ (4-アルキルオキシ-2 ' - (アクリロイルオキシアルキルオキシ) -4 ' - (4-アルキル-ベンゾイルオキシ) アゾベンゼン, ポリ(6- [4- (4-メトキシフェニルアゾ) フェノキシ] ヘキシルメタクリレート, 及び ポリ(6- [4- (4-メトキシフェニルアゾ) フェノキシ] ヘキシルアクリレートである。
【００４８】
この変形において、光刺激可能な１または複数のブロックに加えて、層（Ａ）における考慮下のコポリマーは、少なくとも１つの他の非刺激可能な液晶ポリマーブロックを有しうる。
【００４９】
言及されうるこの種の非光刺激可能な液晶ポリマーブロックの例示となり非限定的な特定の例は、ポリマーブロック、ポリ ( (4 ' ' -メタクリルオキシブチル) 2, 5-ジ (4'- ブチルオキシベンゾイルオキシ) ベンゾエート) , ポリ((6''- メタクリルオキシへキシル) 2, 5-ジ (4 ' -ブチルオキシベンゾイルオキシ) ベンゾエート), ポリ ( (メタクリルオキシアルキル) 2, 5-ジ (4'- アルキルオキシベンゾイルオキシ) ベンゾエート), ポリ ( (アクリルオキシアルキル) 2,5- ジ (4 ' -アルキルオキシベンゾイルオキシ) ベンゾエート), ポリ(4''- アクリロイルオキシブチル) , 及び 2, 5-ジ (4'- ペンチルシクロヘキシルカルボキシルオキシ) ベンゾエートである。
【００５０】
この変形において、これらの非光刺激可能な液晶ポリマーブロックの組織が、該光刺激可能な液晶ブロックと同時に及び同じ様式で、これらが光放射への曝露に応答して反応するときに、変化するということが利用される。該液晶ポリマーブロックの全ての立体配置（形状）がそれによって変化し、該膜の曲率の即時の変化を、該膜が破裂し及び該ベシクルの非常に迅速な破裂を引き起こすように、誘発する。
【００５１】
該光刺激可能な応答を特に有効にする為に、層（Ａ）は、１０重量％〜１００重量％の光刺激可能な液晶ポリマーを有しうる。
【００５２】
層（Ａ）における考慮下にある該コポリマーもまた、外部刺激により刺激可能でない少なくとも１つの他のブロック、及び特には層（Ｂ）について以下で提示されるものから選ばれるものを有しうる。どの状況であっても、該刺激可能なコポリマーを形成する種々のタイプのポリマーブロックの化学的性質が調節されて、それらに、本発明の為に要求される両親媒性性質を備える。
【００５３】
有利な変形に従い、該刺激可能な両親媒性コポリマーは、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリ（Ｎ−アルキルアクリルアミド）、ポリ（Ｎ−アルキルアミノアクリレート）、ポリ（アクリル酸−コ−オリゴ（エチレングリコール）アクリレート）、ポリ（メタクリル酸−コ−オリゴ（エチレングリコール）メタクリレート）、ポリ（オリゴ（エチレングリコール）メタクリレート）、ポリ（オリゴ（エチレングリコール）アクリレート）、及びポリ（２−（２’−メトキシエトキシ）エチルメタクリレート−コ−オリゴ（エチレングリコール）メタクリレート）から選ばれる少なくとも１つの親水性ポリマーブロックを有する。
【００５４】
特に言及されうる、本発明にとって適した刺激可能な両親媒性コポリマーの例は、ブロックコポリマー、ポリエチレングリコール-b-ポリ(4-ブチルオキシ-2 ' - (4-メタクリルオキシルオキシ) ブチルオキシ)-4'-(4- ブチルオキシ-ベンゾイルオキシ) アゾベンゼンである。
【００５５】
該刺激可能な１または複数のコポリマーの数平均分子量は、２０００〜３００００の範囲、有利には３０００〜１００００の範囲にありうる。
【００５６】
該刺激可能な１または複数のコポリマーを含む層（Ａ）はまた、追加的に、少なくとも１つの他の「非刺激可能な（non-stimulatable）」コポリマーを含んでよく、特には層（Ｂ）について以下で記載されるものから選ばれ、ただし、該非刺激可能な１または複数のコポリマーの存在は、該刺激可能な１または複数のコポリマーの立体的変化の発現への障害を構成しないことを条件とする。
【００５７】
層（Ａ）は、該非対称単層膜中において、該コポリマーの全重量に対し、１０重量％超、特には２０〜９５重量％、特には３０〜７０重量％、あるいは４０重量％超さえの刺激可能な両親媒性ブロックコポリマーを含みうる。
【００５８】
層（Ｂ）
【００５９】
層（Ａ）と対照的に、層（Ｂ）は、層（Ａ）を刺激することができる外因性刺激の影響下で該ベシクルの膜の崩壊を誘発することができる刺激可能な１または複数のコポリマーの有効量を含まない。
【００６０】
言い換えると、層（Ｂ）は、層（Ａ）を形成する１または複数のコポリマーが活性である外因性刺激に対して不活性であるコポリマーから本質的に形成される。
【００６１】
特に、該単層膜中のコポリマーの全重量に対して、層（Ｂ）は、５０重量％未満、特には３０重量％未満の刺激可能な１または複数の両親媒性ブロックコポリマーを含んでよく、又は該刺激可能両親媒性ブロックコポリマーは不在でさえあり得る。
【００６２】
その結果、層（Ｂ）は、層（Ａ）を刺激する為に選択された該外因性刺激に対して非感受性（無反応）である少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマーを有する。
【００６３】
簡素化の為に、層（Ａ）を刺激する為に選択された外因性刺激に対して非感受性である該両親媒性ブロックコポリマーはまた、以下で、「非刺激可能両親媒性ブロックコポリマー」又は「非刺激可能ブロックコポリマー」又は「非刺激可能両親媒性コポリマー」又は「非刺激可能コポリマー」とさえ称され、これら表現のすべてが等価である。
【００６４】
特に及び該組成物への制限無く、そのようなコポリマーは、以下の親水性及び疎水性ポリマーから選ばれるポリマーブロックから形成されうる：
・ポリオキシアルキレンタイプのホモポリマー及びランダムコポリマー、例えばポリオキシプロピレン、ポリオキシブチレン、ポリオキシエチレン（ポリエチレングリコール等価物）、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレン又はポリオキシエチレン／ポリオキシブチレンなど；
・アクリル酸及びメタクリル酸、アルキル  アクリレート及びメタクリレート、例えばメチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ヒドロキシプロピル又はヒドロキシエチル  アクリレート及びメタクリレート、オリゴ（エチレングリコール）  アクリレート及びメタクリレート、Ｎ−アルキル−アクリルアミド又はメタクリルアミド、例えばＮ−エチルアクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアクリルアミド又はメタクリルアミド  Ｎ，Ｎ−ジアルキルアクリルアミドから選ばれるモノマーの単独重合又は共重合から得られるポリアクリル酸誘導体；
・ポリエーテル；
・ポリエステル、例えばポリグリコール酸など；
・セルロース誘導体、例えばヒドロキシアルキルセルロース、例えばヒドロキシエチルセルロース又はメチルセルロース；
・多糖；
・ポリビニルアルコール；
・ポリビニルピロリドン；
・ポリスチレンスルホネート；
・ポリスルホキシド；
・アルキレン  ホモポリマー及びコポリマー、例えばブチレン−プロピレン、エチレン−プロピレン、エチレン−ブチレン、ポリ（エチルエチレン）又はポリ（ブタジエン）；
・ポリビニルアルキルエーテル、例えばポリビニルメチルエーテルなど；
・ポリ（スチレン）；
・ポリ（乳酸）；
・ポリ（カプロラクトン）；
・ポリウレタン；
・ポリアミド；及び
・ポリシロキサン誘導体、例えばポリジメチルシロキサンなど。
【００６５】
該非刺激可能コポリマーを形成する種々の種類のポリマーブロックの化学的性質が調節されて、それに本発明の要求される該両親媒性性質を授ける。この調節は、当業者の能力の範囲内である。
【００６６】
非刺激可能コポリマーは、特には、該親水性ブロックとして、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリヒドロキシエチルアクリレート、オリゴ（エチレングリコール）アクリレート又はメタクリレートホモポリマー、又はアクリル酸又はメタクリル酸を有するそれらのコポリマーから選ばれる少なくとも１つのブロックを有しうる。
【００６７】
それは、該疎水性ブロックとして、ポリスチレン、ポリエチルエチレン、ポリブタジエン、ポリＬ−乳酸、ポリカプロラクトン、及びそれらの混合物から選ばれる少なくとも１つのブロックもまた含みうる。
【００６８】
言及されうる本発明における使用の為の非刺激可能コポリマーの説明となり且つ非限定的な特定の実施例は、ポリエチレングリコール−ポリブタジエンブロックコポリマー、 ポリアクリル酸−ポリスチレンブロックコポリマー、ポリエチレングリコール−ポリスチレンブロックコポリマー、ポリエチレングリコール−ポリエチルエチレンブロックコポリマー、ポリエチレングリコール−ポリブタジエンブロックコポリマー、ポリエチレングリコール−ポリ−Ｌ−乳酸ブロックコポリマー、及びポリエチレングリコール−ポリカプロラクトンブロックコポリマーである。
【００６９】
１または複数の非刺激可能コポリマーの数平均分子量は、２０００〜３００００、有利には３０００〜１００００でありうる。
【００７０】
１または複数の非刺激可能コポリマーを有する層（Ｂ）はまた、特には層（Ａ）について上記で記載されたものから選ばれる刺激可能ポリマーブロックを含む少なくとも１つのコポリマーをさらに含みうるが、ただし１または複数の該対応する刺激可能コポリマーの存在は、該単層膜の破裂に対する障害を構成しないことを条件とする。
【００７１】
例となる実施態様において、及び該膜中のコポリマーの全重量に対して、該層（Ｂ）は、５０重量％未満、特には３０重量％未満の、該層（Ａ）を活性化する外因性刺激に対して及びより特には任意の外因性刺激に対して感受性である両親媒性ブロックコポリマーを含み、又は、当該両親媒性ブロックコポリマー不含でありさえする。
【００７２】
層（Ｂ）は、層（Ａ）について選択される外因性刺激に対して非感受性である１または複数のコポリマーから主として形成されうる。
【００７３】
該膜中のコポリマーの全重量に対して、層（Ｂ）は、１０重量％〜９５重量％、好ましくは３０重量％〜７０重量％の、外因性刺激に対して非感受性の両親媒性ブロックコポリマーを含みうる。
【００７４】
本発明のベシクルの特に有利な例示の実施態様において、
・層（Ａ）は、該単層膜中の１または複数のコポリマーの全重量に対して、少なくとも７０重量％の量の刺激可能両親媒性ブロックコポリマーから形成され；且つ
・層（Ｂ）は、該単層膜中の１または複数のコポリマーの全重量に対して、少なくとも７０重量％の量の少なくとも１つの非刺激可能コポリマーから形成される。
【００７５】
より特には、層（Ａ）は、該刺激可能両親媒性ブロックコポリマーとして、該ブロックコポリマー  ポリ(エチレングリコール)−b−ポリ(4−ブチルオキシ−2'−(4−(メタクリロイルオキシ) ブチルオキシ)−4'−(4−ブチルオキシ−ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン (PEG−b−PMAazo444と示される)を有し、ここで該PMAazo444ブロックはＵＶ光に対して感受性である。
【００７６】
より特には、層（Ｂ）は、ＵＶ光に対して非感受性であるポリ(エチレングリコール)−ｂ−ポリ(ブタジエン)(PEG-b-PBDと示される)から本質的に形成される。
【００７７】
例となる実施態様において、層（Ａ）は、該ベシクルの外層を構成し、及び、層（Ｂ）は内層を構成する。
【００７８】
他の例となる実施態様において、層（Ａ）は該ベシクルの内層を構成し、及び、層（Ｂ）は外層を構成する。
【００７９】
有利には、本発明の該ベシクルは、外層における、生体適合性親水性ブロックを備えられた、すなわちヒト又は動物の体への局所的又はｉｎ  ｖｉｖｏでの適用に適合した、両親媒性ブロックコポリマーの存在に好都合である構造を有する。言及されうる好ましい生体適合性親水性ブロックは、ポリエチレングリコールである。
【００８０】
液相、特には水性液相、を有する「コア」を含む本発明のベシクルはまた、該液相中に、少なくとも１つの活性成分、特には水溶性活性成分、を含みうる。これは次に、本発明に従うカプセル化された１または複数の活性成分を有するベシクルと称されうる。
【００８１】
活性成分
【００８２】
該活性成分は、すなわち例えば化粧料活性成分、皮膚科学的活性成分、医薬的活性成分、植物病理学的活性成分、ポリマー、及び／又は化学的試薬から選ばれる親水性活性成分でありうる。
【００８３】
該活性成分は、例えば、ポリマー、殺虫剤、殺菌剤、化学的試薬、例えば酸化剤又は還元剤、磁性流体（ferrofluids）、及びこれらの混合物から選ばれうる。
【００８４】
より特には、医薬的又は化粧的分野において、該活性成分は、保湿剤、落屑剤、着色剤、栄養素、糖、塩、電解質、酵素、ビタミン、タンパク質若しくはタンパク質の断片、遺伝子若しくは遺伝子の断片、遺伝子工学産物、ステロイド、アジュバント、鎮痛剤（soothing  agents）及び／若しくは抗刺激剤、収斂剤、治療剤（healing  agents）、抗炎症剤、抗ニキビ剤、抗酸化剤、皮膚弛緩剤（dermo-relaxing  agents）、及び抗バクテリア剤から選ばれうる。
【００８５】
本発明のベシクル中の活性成分の量は、関係する分野で慣用的に用いられるものである。
【００８６】
本発明のポリマーソームは有利には、以下の適用分野において用いられうる：触媒反応器（例：ポリマー合成において収率を増加する）；高分子産業プロセス；デポリューション（depollution）；光反応器。
【００８７】
他の特定の例示の実施態様に従い、本発明のポリマーソームは、以下の適用分野で特に有利である：環境（クリーンプロセス（clean  processes）、自動車用デポリューション、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）の除去）；エネルギー；ファインケミカル；ナノテクノロジー；ドラッグデリバリー；ソーラー反応器。
【００８８】
上記言及された適用分野と関係する活性成分のうち、量子ドット、電解質、高分子電解質、無機材料のための無機前駆体溶液（例えばＴｉＣｌ４、Ｓｉ（ＯＥｔ）３など）、制御されたラジカル重合の触媒、モノマー（例えば導電性又は半導性ポリマーの為のモノマーなど）、有機反応物などが言及されうる。
【００８９】
本発明に従う非対称単層膜を有するベシクルは、異なる層（Ａ）及び（Ｂ）の製造を許す任意の方法を用いて製造されてよく、該方法は、特に、非対称単層ベシクルを形成する為に、他と独立にそれぞれ層（Ａ）及び（Ｂ）を集合させることからなる。
【００９０】
製造方法
【００９１】
上記で示されたとおり、本発明に従う非対称単層膜を有するベシクルを製造する方法は、以下を実行する：
・水性相を油性相中に、少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の存在下において分散させて、水性滴の周りに該両親媒性ブロックコポリマーの層を形成すること；及び
・次に、該覆われた滴の周りに、該両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）と異なる少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）を有する層を形成すること；
前記２つの工程のうちの１つだけが、該両親媒性ブロックコポリマーとして、外因性刺激により刺激されることができるブロックコポリマーの有効量を用いる。
【００９２】
より特には、本発明のポリマーソームは、以下の技術を用いて得られてよく、これは、文献"Engineering  asymmetric  vesicles",  PNAS,  2003年9月16日,  vol.100,  No.19,  10718-10721頁、に記載された非対称膜を有する脂質ベシクルを合成する方法からの着想をとる。
【００９３】
それは、以下の相を含む三相系の使用に基づく：
第一に；
・上部の液状油性相（Ｏ１）、好ましくはトルエン、少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）を含み、主に本発明に従うポリマーソームの外層を構成することが意図される；
・下部の水性相（Ｗ１）、これは該上部の液状油性相（Ｏ１）と隣接しており、該下部の水性相（Ｗ１）は該油性相（Ｏ１）よりも高密度である；
該上部油性相（Ｏ１）と該下部水性相（Ｗ１）との交差部分で、該上部油性相（Ｏ１）から得られる該両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）により形成される中間層を有する；及び、
第二に
・第３の相、水性相（Ｗ２）を液状油性相（Ｏ２）、好ましくはトルエン、の中に、少なくとも１つの両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の存在下において分散させることにより形成される。該両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）は、前記両親媒性ブロックコポリマー（Ｙ）と異なり、該コポリマー（Ｘ）又は（Ｙ）のうち１つだけが外因性刺激により刺激可能である。より正確には、該第３の相は、本質的には本発明のポリマーソームの内側層を形成することが意図された、両親媒性ブロックコポリマー（Ｘ）の層により覆われた水性滴を含む。
【００９４】
該方法は、該第３の相を、重ねられた先立つ２つの相、すなわち相（Ｗ１）上の相（Ｏ１）、により形成された構造体の上面と接触させることを含み；本発明のベシクルは次に、該第３の相中に存在する該覆われた水性滴が、（Ｙ）コポリマーの該中間層を通過するときに得られる。（Ｙ）コポリマーの分子は、それ自体を、これらの覆われた水性滴の周りに組織して、該単層膜の該外層を形成し、該内層は、該水性滴を覆う（Ｘ）コポリマーにより形成される。今、二重に覆われたベシクルが、該下部の水性相（Ｗ１）中に回収される。
【００９５】
所望の適用によって、種々の活性成分が、本発明のベシクル中にカプセル化されうる。
【００９６】
一般に、該活性成分は水溶性であり、及び、当初の逆エマルジョンの水性相（Ｗ２）中に存在する。
【００９７】
上記で議論されたとおり、少なくとも１つの活性成分を含む本発明のベシクルまたは該ベシクルを含む組成物は、１または複数の活性成分、特には水溶性活性成分、例えば医薬的分子、皮膚科学的分子、化粧料分子、合成若しくは天然のポリマー、殺バクテリア剤、農薬、殺菌剤、及び／又は化学的試薬など、のカプセル化、輸送、ベクター化（vectorization）、及び／又は放出の為に特に役立つ。活性成分のこのカプセル化、輸送、ベクター化、及び／又は放出は、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏで、特には角質物質、例えば皮膚またはケラチン繊維など、の上で、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで、制御された化学応用（規定の時間及び場所における反応）の為に及び微小流体の分野において、実施される。
【００９８】
制御された放出
【００９９】
本発明に従う１以上の（１又はそれより多い）ポリマーソーム中にカプセル化された１または複数の活性成分の制御された放出は、層（Ａ）及び（Ｂ）の１つを形成する少なくとも１つの刺激可能なコポリマーに関して反応性である外因性刺激に１または複数の該ポリマーソームを曝すことからなる。
【０１００】
本発明の文脈において用いられるときに語「外因性刺激」は、興奮性の（刺激に反応できる）非対称単層膜における応答を引き起こすことができる外部の物理的又は化学的な、好ましくは物理的な作用因子を意味する。
【０１０１】
この刺激の性質が本発明のベシクルにおいて用いられる１または複数の刺激可能なコポリマーの種類に直接に関連付けられることが、理解されるべきである。
【０１０２】
当業者は、適当な刺激を選択するのに注意を払うであろう。該刺激は、実際には、該刺激可能な両親媒性ブロックコポリマーの性質に応じて（或るコポリマーは或る刺激について、他よりもより顕著な感受性を有する）、及び／又は本発明のポリマーソームについて意図される適用の種類に応じて、選択されるであろう。
【０１０３】
該外因性刺激は、例えばＵＶ光、赤外光、電場、磁場、及び該刺激可能なコポリマーの化学的構造により調節されうる温度、特には２０℃〜１００℃、及び好ましくは３０℃〜８０℃の誘発温度、から選択されうる。
【０１０４】
好ましくは、刺激可能な該外因性刺激はＵＶ光である。
【０１０５】
この外因性刺激は、本発明のベシクルに対して、例えばｔｒａｎｓ配置からｃｉｓ配置へのアゾベンゼンモチーフにおける変化により引き起こされる該刺激可能なコポリマーの立体配置への修正により該ベシクルが破裂することを引き起こす為に、十分であり且つ該刺激可能な両親媒性ブロックコポリマーの性質による強度及び期間を用いて、働かされなければならない。理論にとらわれることを望まないで、刺激可能なコポリマーの有効量の立体配置へのこの修正は、該２つの層（Ａ）及び（Ｂ）のただ一つにおいて過剰な表面積を生成し、そしてすなわち、該ベシクルの単層膜内に十分大きな曲率の変化を生成して、その破裂を引き起こすとみえ、その結果が、該ベシクルが破裂し及び該カプセル化された１または複数の活性成分が放出されることである。
【０１０６】
この現象は、該刺激可能なコポリマーの場所に関係なく起こり、すなわち内層又は外層において起こることが注意されるべきである。
【０１０７】
この制御された放出の方法は、（i）ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、巨視的環境、または微小流体的環境、またはナノ流体的環境さえで、（ii）生きている生物で（ｉｎ  ｖｉｖｏで）、標的臓器中で、又は（iii）生きている生物上で（ｅｘ  ｖｉｖｏで）、実施されうる。この実施において、該ベシクルは例えば、それらを含む組成物を介して局所的に施与されうる。
【０１０８】
以下の実施例及び図面が、本発明の非限定的な説明の為に与えられる。略称PEG-b-PMAazo444、PEG-b-PA444、及びPEG-b-PBDは夫々、ブロックコポリマー  ポリエチレングリコール-b-ポリ((4-ブチルオキシ-2'-(4-(メタクリロイルオキシ)ブチルオキシ)-4'-(4-ブチルオキシ-ベンゾイルオキシ)アゾベンゼン、ブロックコポリマー  ポリエチレングリコール-b-ポリ(4''-アクリルオキシブチル2,5-ジ(4'-ブチルオキシ-ベンゾイルオキシ)ベンゾエート、及びブロックコポリマー  ポリエチレングリコール-b-ポリブタジエンを意味する。
【０１０９】
図１は、アゾベンゼン分子の可逆的異性化を示す。
【０１１０】
図２は、PEG-b-PMAazo444及びPEG-b-PBDの化学構造を示す。
【０１１１】
図３は、該刺激可能な非対称ポリマーソーム膜の層（Ａ）中の光刺激可能な液晶ブロックの形における変化の概略図であり、該真っ直ぐなシリンダーは、ＵＶ照射前の液晶性質を有するアゾベンゼン基を有するモチーフを表し、及び、該曲がったシリンダーは、ＵＶ照射後のアゾベンゼン基を有し、それらの液晶的特徴を失ったモチーフを表す。
【０１１２】
図４ａ及び４ｂは、ポリマーソームの破裂シーケンスを示す写真並びにこの破裂を示す図であり、図４ａについて内層として刺激可能層（Ａ）を有し、又は、図４ｂについて外層として層（Ａ）を有する。図４ａ及び４ｂにおいてバースケールは１０μｍを表す。時間Δｔ＝０は、該ポリマーソームの破裂が開始し及び該カプセル化されたスクロースが放出されたときに対応する。
【実施例１】
【０１１３】
本発明に従う非対称単層膜を有するベシクルの合成方法
【０１１４】
以下の文において、コポリマー（Ｘ）はPEG-b-PMAazo444であり、この合成は、Chem.  Commun.,  2005,  4345-4347,  及びLiq.  Cryst.,  2000,  27,  1497、に記載されており、そして化合物（Ｙ）はPEG-b-PBD(Polymer  Sourceにより販売されている)(Mn=2300/5000)であった。
【０１１５】
例１〜４のポリマーソームの合成方法は、Langmuir,  2003,  19,  2870に記載された方法の適応に由来する。
【０１１６】
より正確には、本発明に従うポリマーソーム、すなわち例えば実施例２において用いられるもの、を調製する場合に、以下が実施された：
【０１１７】
ａ）第１の油性相は、コポリマー（Ｘ）を３ｍｇ／ｍＬ（ミリグラム／ミリメートル）の濃度で、トルエン中で５０℃で２時間、ソニケーション及び溶解をすることにより調製された。
【０１１８】
同時に、水性溶液もまた、Ｄｅｘｔｒａｎ（ＳＩＧＭＡから市販入手可能である、Ｍｗ＝４００００ｇ／ｍｏｌ（グラム／モル））を１ｍＬ当たり１００ｍｇの濃度で補われた、３８０ｍＯｓｍ（ミリオスモル）を有するバッファー溶液から調製された。
【０１１９】
５μＬのこの水性溶液が次に、遠心チューブ（ＥＰＰＥＮＤＯＲＦ）中の前記油性相の５００μＬへと添加された；逆乳化が、穏やかな条件下で、シリンジを用いた繰り返しのピペッティングにより実施された。
【０１２０】
ｂ）同時に、グルコースの３８０ｍＯｓｍ溶液の３０μＬが遠心チューブ中に置かれ、そして、３０μＬのコポリマー（Ｙ）含有油性相（コポリマー（Ｙ）を３ｍｇ／ｍＬの濃度でトルエン中で５０℃で２時間ソニケーション及び溶解することにより調製された）が、この水性相の表面に穏やかに添加された。それらの両親媒性性質の故に、（Ｙ）コポリマーは、該油性相から界面に向かって拡散する傾向があった。該油性相と該水性相との間の界面の完全な被覆は、コポリマー（Ｙ）を用いて５分後に達成された。
【０１２１】
ｃ）最後に、ａ）において調製されたエマルジョン５０μＬが、ｂ）に従い調製された遠心チューブの表面に移され、そして次に、集合物が直接に且つ即時に、以下のサイクルの１つを選択して遠心された（５４  １７Ｒ、ＥＰＰＥＮＤＯＲＦ）：１００ｇ（グラム）で１２分間、３５０ｇで８分間の次に５００ｇで３分間、又は１００ｇで１２分間。比較すると、第１のサイクルが、ベシクルの数の点でより良い収率を与えた；第２のサイクルがわずかにより大きな直径を有するベシクルの集団を与えた。遠心することは、両親媒性ポリマーの単層により覆われた界面を横切って該逆エマルジョンの滴の沈降及びすなわち期待されたポリマーソーム（すなわちPEG-b-PMAazo444の外層（Ａ）、PEG-b-PBDの内層（Ｂ）及びカプセル化された活性成分としてのスクロースを有する非対照的単層膜を有するポリマーソーム）の形成を加速する利点を有した。
【実施例２】
【０１２２】
スクロースについての制御された放出プロセスの実証
【０１２３】
以下の方法が、この放出を観察する為に用いられた：PEG-b-PMAazo444の外層（Ａ）、PEG-b-PBDの内層（Ｂ）及びカプセル化された活性成分としてのスクロースを有する非対照的単層膜を有するポリマーソームを含む溶液（水性の外側、該ベシクルの内側媒体を構成するスクロースの水性溶液と同一のオスモル濃度（osmolarity）を有するグルコース；２０〜５００ｍＯｓｍ、及び好ましくは約３５０ｍＯｓｍのオスモル濃度）が実施例１に記載されたとおりに調製された。
【０１２４】
同時に、PEG-b-PMAazo444の内層（Ａ）、PEG-b-PBDの外層（Ｂ）及びカプセル化された活性成分としてのスクロースを有するポリマーソームを含む溶液も調製され、該ポリマーソームは、コポリマー（Ｘ）としてのPEG-b-PBD及びコポリマー（Ｙ）としてのPEG-b-PMAazo444により、実施例１に記載されたものと同様の方法を用いて合成された。
【０１２５】
該溶液は、それぞれ、スペーサー、例えばＶｉｔｒｅｘシーリングペースト（sealing  paste）、により隔てられた２つのガラススライドから構成される封されたセル中に導入された。次に、該セルが、３６０ｎｍフィルター（Ｕ−３６０  Ｂａｎｄ  Ｆｉｌｔｅｒ、Ｅｄｍｕｎｄ  Ｏｐｔｉｃｓ）、及びもし該セルの加熱が限定されるべきであるならば任意的に熱反射ミラー（heat-relfective  mirror、Ｍｉｒｒｏｒ  Ｈｏｔ  ０ｄｅｇ  ５０ＭＭ  ＳＱ、Ｅｄｍｕｎｄ  Ｏｐｔｉｃｓ）、を備えられた慣用のＵＶランプを用いて、マイクロスコープの対物レンズ（objective）を通じて照射された。
【０１２６】
３０秒〜４分間の照射後、該曝されたポリマーソームの破裂／全デフラグメンテーション（total  defragmentation）が、スクロースの開放により観察され、該ベシクルの破裂に先立つ曝露時間が、該ランプの電力（the  power  of  the  lamp）に反比例したことが分かった。
【０１２７】
該マイクロスコープのオプティクス（optics）は、最大量のＵＶ光を中継する為に好ましく適合された（ＵＶ対物−Ｏｌｙｍｐｕｓ、４０×、ＵＡｐｏ３４０；ＵＶ反射ミラー−Ｏｍｅｇａ）。
【０１２８】
比較例３及び４
溶液（外側水性グルコース溶液、該ベシクルの内部媒体を構成するスクロースの水性溶液と同一のオスモル濃度；２０ｍＯｓｍ〜５００ｍＯｓｍ、好ましくは約３５０ｍＯｓｍのオスモル濃度）であって、PEG-b-PMAazo444の外層及び内層並びにカプセル化された活性成分としてスクロースを有する対称な単層膜を有するポリマーソームを有する上記溶液（比較例３）、並びに、PEG-b-PBDの外層及び内層並びにカプセル化された活性成分としてスクロースを有するポリマーソームを有する上記溶液（比較例４）が調製された。
【０１２９】
該２種類のポリマーソームは、比較例３についてはコポリマー（Ｘ）及びコポリマー（Ｙ）としてPEG-b-PMAazo444を用いたこと及び比較例４についてはコポリマー（Ｘ）及びコポリマー（Ｙ）としてPEG-b-PBDを用いたこと以外は、実施例１において上記記載されたものと同様の方法を用いて合成された。
【０１３０】
これらの溶液がそれぞれ、スペーサーによって隔てられた２のガラススライドから構成される封されたセルに導入された。次に、該セルが、３６０ｎｍフィルター（Ｕ−３６０  Ｂａｎｄ  Ｆｉｌｔｅｒ、Ｅｄｍｕｎｄ  Ｏｐｔｉｃｓ）及び熱反射ミラー（Ｍｉｒｒｏｒ  Ｈｏｔ  ０ｄｅｇ  ５０ＭＭ  ＳＱ、Ｅｄｍｕｎｄ  Ｏｐｔｉｃｓ）を備えられた慣用のＵＶランプを用いて、マイクロスコープの対物レンズを通じて照射された。
【０１３１】
PEG-b-PMAazo444に基づく対称ポリマーソームの溶液（比較例３）に関して、それらの体積の減少が、該ベシクルの集団について３０％〜７０％の範囲で、１分〜４分の照射の終わりで、しかし、最終的な破裂／デフラグメンテーション（explosion/defragmentation）ステージに至ること無く、観察された。さらに、所定の最小体積に達した後、該ベシクルは、さらに１０分間の照射が維持されたにもかかわらず、もはや変化しなかった。
【０１３２】
PEG-b-PBDに基づく対称ポリマーソームの溶液（比較例４）に関して、該ポリマーソームの修正は、３６０ｎｍフィルター（Ｕ−３６０  Ｂａｎｄ  Ｆｉｌｔｅｒ、Ｅｄｍｕｎｄ  Ｏｐｔｉｃｓ）及び熱反射ミラー（Ｍｉｒｒｏｒ  Ｈｏｔ  ０ｄｅｇ  ５０ＭＭ  ＳＱ、Ｅｄｍｕｎｄ  Ｏｐｔｉｃｓ）を備えられた慣用のＵＶランプによる、実施例２で用いられたものと同一の条件下での照射への１５分の曝露後に観察されなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【国際調査報告】
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