(57)【要約】  本発明は、Ｂ細胞疾患および障害の治療のためにＡＤＣＣ、ＣＤＣ、および／またはアポトーシスを媒介し得る、抗ＣＤ１９マウスモノクローナル抗体のキメラおよびヒト化バージョンを含む、安定液体製剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ、ヒト化、またはヒト抗ＣＤ１９抗体を含む、滅菌された安定な水性製剤。
【請求項２】
前記抗体は、凍結乾燥に供しなかった、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＹ、およびＩｇＧからなる群から選択される免疫グロブリン型からの抗体である、請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
前記抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプの抗体である、請求項１に記載の製剤。
【請求項５】
前記抗体は、複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含み、フコースは、前記糖鎖中の還元末端におけるＮ−アセチルグルコサミンに結合されない、請求項１に記載の製剤。
【請求項６】
前記抗体は、配列番号１０４の配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項７】
前記抗体は、配列番号１１１の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項８】
前記抗体は、配列番号１０４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１１１の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９】
前記抗体は、配列番号１０４の配列を含む重鎖可変領域、配列番号１１１の配列を含む軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含み、フコースは、前記糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない、請求項１〜５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０】
前記抗体の濃度は、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約３００ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１１】
前記抗体の濃度は、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１２】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１３】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４】
前記抗体の濃度は、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１５】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１６】
前記抗体の濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１７】
前記抗体の濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１８】
前記製剤は、少なくとも約１つの緩衝構成成分をさらに含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１９】
前記製剤は、少なくとも約１つの賦形剤をさらに含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２０】
前記緩衝構成成分は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、および酢酸塩からなる群から選択される、請求項１８または１９に記載の製剤。
【請求項２１】
前記緩衝構成成分は、ヒスチジンである、請求項１８または１９に記載の製剤。
【請求項２２】
前記ヒスチジンは、約１ｎＭ〜約２００ｎＭの濃度である、請求項２１に記載の製剤。
【請求項２３】
前記ヒスチジンは、約１ｎＭ〜約５０ｎＭの濃度である、請求項２１に記載の製剤。
【請求項２４】
前記ヒスチジンは、約５ｎＭ〜約２０ｎＭの濃度である、請求項２１に記載の製剤。
【請求項２５】
前記ヒスチジンは、約１０ｎＭ、約１５ｎＭ、または約２０ｎＭの濃度である、請求項２１に記載の製剤。
【請求項２６】
前記賦形剤は、糖類である、請求項１９に記載の製剤。
【請求項２７】
前記糖類は、二糖類である、請求項２６に記載の製剤。
【請求項２８】
前記二糖類は、トレハロースまたはスクロースである、請求項２７に記載の製剤。
【請求項２９】
前記二糖類は、トレハロースである、請求項２７に記載の製剤。
【請求項３０】
前記トレハロースは、約１％〜約４０％の濃度である、請求項２９に記載の製剤。
【請求項３１】
前記トレハロースは、約２％〜約２０％の濃度である、請求項２９に記載の製剤。
【請求項３２】
前記トレハロースは、約２％〜約１０％の濃度である、請求項２９に記載の製剤。
【請求項３３】
前記トレハロースは、約２％、約４％、または約８％の濃度である、請求項２９に記載の製剤。
【請求項３４】
前記賦形剤は、塩である、請求項１９に記載の製剤。
【請求項３５】
前記塩は、塩化ナトリウムである、請求項３４に記載の製剤。
【請求項３６】
前記塩化ナトリウムは、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度である、請求項３５に記載の製剤。
【請求項３７】
前記塩化ナトリウムは、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２０ｍＭ、または約１５０ｍＭの濃度である、請求項３５に記載の製剤。
【請求項３８】
前記賦形剤は、界面活性剤である、請求項１９に記載の製剤。
【請求項３９】
前記界面活性剤は、ポリソルベートである、請求項３８に記載の製剤。
【請求項４０】
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０である、請求項３９に記載の製剤。
【請求項４１】
前記ポリソルベートは、ポリソルベート８０である、請求項３９に記載の製剤。
【請求項４２】
前記ポリソルベート８０は、約０．００１％〜約２％の濃度である、請求項４１に記載の製剤。
【請求項４３】
前記ポリソルベート８０は、約０．０１％、約０．０２％、約０．０４％、または約０．０８％の濃度である、請求項４１に記載の製剤。
【請求項４４】
前記製剤は、約５．５〜約６．５のｐＨを有する、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４５】
前記製剤は、約６．０のｐＨを有する、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４６】
前記製剤は、等張性である、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４７】
前記製剤は、４０℃で少なくとも約４週間の保管時に安定である、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４８】
前記製剤は、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に安定である、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４９】
前記製剤は、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に安定である、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５０】
前記抗体は、前記製剤の４０℃で少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて２０％を失う、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５１】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて２０％を失う、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５２】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて２０％を失う、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５３】
前記抗体は、前記製剤の４０℃で少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて１０％を失う、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５４】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて１０％を失う、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５５】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて１０％を失う、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５６】
前記抗体は、前記製剤の４０℃で少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５％を失う、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５７】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５％を失う、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５８】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５％を失う、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５９】
前記抗体は、凝集または断片化の影響を受けやすい、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６０】
ＨＰＳＥＣによって決定されたときによって決定されたとき、前記抗体の約２％未満が、４０℃で少なくとも約４週間の保管時に凝集体を形成する、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６１】
ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約２％未満が、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に凝集体を形成する、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６２】
ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約２％未満が、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に凝集体を形成する、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６３】
ＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約５％未満が、４０℃で少なくとも約４週間の保管時に断片化される、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６４】
ＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約５％未満が、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に断片化される、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６５】
ＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約５％未満が、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に断片化される、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６６】
前記製剤は、注射用製剤である、請求項１〜６５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６７】
前記製剤は、静脈内、皮下、または筋肉内投与に好適である、請求項６６に記載の製剤。
【請求項６８】
前記製剤は、静脈内投与に好適であり、前記抗体または抗体断片濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬである、請求項６７に記載の製剤。
【請求項６９】
前記製剤は、皮下投与に好適であり、前記抗体または抗体断片濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬである、請求項６７に記載の製剤。
【請求項７０】
前記製剤は、エアロゾル投与に好適である、請求項１〜６５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項７１】
ヒトへの非経口投与に好適であり、好適な容器中に請求項１〜６５のいずれか１項に記載の抗体製剤を含む、薬学的単位剤形。
【請求項７２】
抗体製剤は、静脈内に、皮下に、または筋肉内に投与される、請求項７１に記載の薬学的単位剤形。
【請求項７３】
ヒトへのエアロゾル投与に好適であり、好適な容器中に請求項１〜６５のいずれか１項に記載の抗体製剤を含む、薬学的単位剤形。
【請求項７４】
抗体製剤は、鼻腔内に投与される、請求項７３に記載の薬学的単位投薬。
【請求項７５】
請求項１〜７４のいずれか１項に記載の製剤を含有する、密封容器。
【請求項７６】
請求項１〜７４のいずれか１項に記載の製剤を含む、キット。
【請求項７７】
ヒトにおけるＢ細胞疾患または障害を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、請求項１〜７４のいずれか１項に記載の製剤の治療上有効量を投与することを含む、方法。
【請求項７８】
前記Ｂ細胞疾患または障害は、Ｂ細胞悪性腫瘍、自己免疫疾患、自己免疫障害、ヒト移植患者における体液性拒絶反応、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、およびヒト移植受容者における移植後リンパ増殖性障害からなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記Ｂ細胞疾患または障害は、Ｂ細胞悪性腫瘍である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記Ｂ細胞疾患または障害は、強皮症である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
ヒト患者におけるＣＤ１９発現Ｂ細胞を枯渇させる方法であって、それを必要とするヒトに、請求項１〜７４のいずれか１項に記載の製剤の治療上有効量を投与することを含む、方法。
【請求項８２】
前記枯渇は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、および少なくとも１２ヶ月間からなる群から選択される期間にわたって持続する、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記枯渇は、Ｂ細胞レベルを、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少させる、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
前記ＣＤ１９発現Ｂ細胞は、循環Ｂ細胞、血液Ｂ細胞、脾臓Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、腹膜Ｂ細胞、骨髄Ｂ細胞、または癌幹細胞である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８５】
キメラ、ヒト化、またはヒト抗ＣＤ１９抗体を含み、ヒスチジン、塩化ナトリウム、およびトレハロースをさらに含む、滅菌された安定な水性製剤であって、前記抗体は、配列番号１０４の配列を含む重鎖可変領域、配列番号１１１の配列を含む軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含み、フコースは、前記糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない、製剤。
【請求項８６】
前記製剤は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの前記抗ＣＤ１９抗体、約１ｍＭ〜約５０ｍＭヒスチジン、および約１％〜約１０％トレハロースを含み、前記製剤のｐＨは、約５〜約７である、請求項８５に記載の製剤。
【請求項８７】
前記製剤は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの前記抗ＣＤ１９抗体、約５ｍＭ〜約２０ｍＭヒスチジン、および約２％〜約８％トレハロースを含み、前記製剤のｐＨは、約５．５〜約６．５である、請求項８５に記載の製剤。
【請求項８８】
前記製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬの前記抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、および約４％トレハロースを含み、前記製剤のｐＨは、約６である、請求項８５に記載の製剤。
【請求項８９】
前記製剤は、等張性である、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９０】
前記製剤は、４０℃で少なくとも約４週間の保管時に安定である、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９１】
前記製剤は、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に安定である、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９２】
前記製剤は、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に安定である、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９３】
前記抗体は、前記製剤の４０℃で少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて２０％を失う、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９４】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて２０％を失う、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９５】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて２０％を失う、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９６】
前記抗体は、前記製剤の４０℃で少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて１０％を失う、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９７】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて１０％を失う、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９８】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて１０％を失う、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９９】
前記抗体は、前記製剤の４０℃で少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５％を失う、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１００】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５％を失う、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０１】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５％を失う、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０２】
前記抗体は、凝集または断片化の影響を受けやすい、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０３】
ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約２％未満が、４０℃で少なくとも約４週間の保管時に凝集体を形成する、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０４】
ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約２％未満が、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に凝集体を形成する、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０５】
ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約２％未満が、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に凝集体を形成する、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０６】
ＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約５％未満が、４０℃で少なくとも約４週間の保管時に断片化される、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０７】
ＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約５％未満が、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に断片化される、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０８】
ＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約５％未満が、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に断片化される、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０９】
目視検査によって決定されたとき、前記製剤は、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に透明および無色である、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１１０】
目視検査によって決定されたとき、前記製剤は、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に透明および無色である、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１１１】
前記製剤は、注射用製剤である、請求項８５〜１１０のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１１２】
前記製剤は、静脈内、皮下、または筋肉内投与に好適である、請求項１１１に記載の製剤。
【請求項１１３】
前記製剤は、静脈内投与に好適である、請求項１１２に記載の製剤。
【請求項１１４】
前記製剤は、皮下投与に好適である、請求項１１２に記載の製剤。
【請求項１１５】
前記製剤は、エアロゾル投与に好適である、請求項８５〜１１０のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１１６】
前記抗ヒトＣＤ１９抗体溶液を、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬになるまで濃縮することと、
前記濃縮抗体を、ヒスチジンを含む溶液によりダイアフィルターすることと、を含む、請求項８５〜１１０のいずれか１項に記載の製剤の調製のためのプロセス。
【請求項１１７】
前記濃縮抗体溶液を、少なくとも約１つの賦形剤を含む少なくとも約１つの溶液と混和することをさらに含む、請求項１１６に記載のプロセス。
【請求項１１８】
ヒトへの非経口投与に好適であり、好適な容器中に請求項８５〜１１５のいずれか１項に記載の抗体製剤を含む、薬学的単位剤形。
【請求項１１９】
抗体製剤は、静脈内に、皮下に、または筋肉内に投与される、請求項１１８に記載の薬学的単位剤形。
【請求項１２０】
ヒトへのエアロゾル投与に好適であり、好適な容器中に請求項８５〜１１５のいずれか１項に記載の抗体製剤を含む、薬学的単位剤形。
【請求項１２１】
請求項８５〜１１５のいずれか１項に記載の製剤を含有する密封容器。
【請求項１２２】
請求項８５〜１１５のいずれか１項に記載の製剤を含むキット。
【請求項１２３】
ヒトにおけるＢ細胞疾患または障害を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、請求項８５〜１１５のいずれか１項に記載の製剤の治療上有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１２４】
前記Ｂ細胞疾患または障害は、Ｂ細胞悪性腫瘍、自己免疫疾患、自己免疫障害、ヒト移植患者における体液性拒絶反応、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、およびヒト移植受容者における移植後リンパ増殖性障害からなる群から選択される、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
前記Ｂ細胞疾患または障害は、Ｂ細胞悪性腫瘍である、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２６】
前記Ｂ細胞疾患または障害は、強皮症である、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２７】
それを必要とするヒトに、請求項８５〜１１５のいずれか１項に記載の製剤の治療上有効量を投与することを含む、ヒト患者におけるＣＤ１９発現Ｂ細胞を枯渇させる方法。
【請求項１２８】
前記枯渇は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、および少なくとも１２ヶ月間からなる群から選択される期間にわたって持続する、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記枯渇は、Ｂ細胞レベルを、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少させる、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１３０】
前記ＣＤ１９発現Ｂ細胞は、循環Ｂ細胞、血液Ｂ細胞、脾臓Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、腹膜Ｂ細胞、骨髄Ｂ細胞、または癌幹細胞である、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１３１】
１０ｍｇ／ｍＬヒト化抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、および約４％トレハロースを含む、滅菌された安定な水性製剤であって、前記製剤のｐＨは、約６であり、前記ヒト化抗ＣＤ１９抗体は、配列番号１０４の配列を有する重鎖可変領域、配列番号１１１の配列を有する軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含み、フコースは、前記糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない、製剤。
【請求項１３２】
前記製剤は、等張性である、請求項１３１に記載の製剤。
【請求項１３３】
前記製剤は、４０℃で少なくとも約４週間の保管時に安定である、請求項１３１〜１３２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１３４】
前記製剤は、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に安定である、請求項１３１〜１３３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１３５】
前記製剤は、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に安定である、請求項１３１〜１３４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１３６】
前記抗体は、前記製剤の４０℃で少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて２０％を失う、請求項１３１〜１３５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１３７】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて２０％を失う、請求項１３１〜１３６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１３８】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて２０％を失う、請求項１３１〜１３７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１３９】
前記抗体は、前記製剤の４０℃で少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて１０％を失う、請求項１３１〜１３８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４０】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて１０％を失う、請求項１３１〜１３９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４１】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて１０％を失う、請求項１３１〜１４０のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４２】
前記抗体は、前記製剤の４０℃で少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５％を失う、請求項１３１〜１４１のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４３】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５％を失う、請求項１３１〜１４２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４４】
前記抗体は、前記製剤の５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５％を失う、請求項１３１〜１４３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４５】
前記抗体は、凝集または断片化の影響を受けやすい、請求項１３１〜１４４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４６】
ＨＰＳＥＣによって決定されたときによって決定されたとき、前記抗体の約２％未満が、４０℃で少なくとも約４週間の保管時に凝集体を形成する、請求項１３１〜１４５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４７】
ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約２％未満が、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に凝集体を形成する、請求項１３１〜１４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４８】
ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約２％未満が、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に凝集体を形成する、請求項１３１〜１４７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４９】
ＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約５％未満が、４０℃で少なくとも約４週間の保管時に断片化される、請求項１３１〜１４８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１５０】
ＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約５％未満が、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に断片化される、請求項１３１〜１４９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１５１】
ＳＥＣによって決定されたとき、前記抗体の約５％未満が、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に断片化される、請求項１３１〜１５０のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１５２】
目視検査によって決定されたとき、前記製剤は、５℃で少なくとも約３ヶ月間の保管時に透明および無色である、請求項１３１〜１５１のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１５３】
目視検査によって決定されたとき、前記製剤は、５℃で少なくとも約１２ヶ月間の保管時に透明および無色である、請求項１３１〜１５２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１５４】
前記製剤は、注射用製剤である、請求項１３１〜１５３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１５５】
前記製剤は、静脈内、皮下、または筋肉内投与に好適である、請求項１５４に記載の製剤。
【請求項１５６】
前記製剤は、静脈内投与に好適である、請求項１５４に記載の製剤。
【請求項１５７】
前記製剤は、皮下投与に好適である、請求項１５５に記載の製剤。
【請求項１５８】
前記製剤は、エアロゾル投与に好適である、請求項１３１に記載の製剤。
【請求項１５９】
ヒトへの非経口投与に好適であり、好適な容器中に請求項１３１に記載の抗体製剤を含む、薬学的単位剤形。
【請求項１６０】
抗体製剤は、静脈内に、皮下に、または筋肉内に投与される、請求項１５９に記載の薬学的単位剤形。
【請求項１６１】
ヒトへのエアロゾル投与に好適であり、好適な容器中に請求項１３１に記載の抗体製剤を含む、薬学的単位剤形。
【請求項１６２】
請求項１３１に記載の製剤を含有する密封容器。
【請求項１６３】
請求項１３１に記載の製剤を含むキット。
【請求項１６４】
ヒトにおけるＢ細胞疾患または障害を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、請求項１３１に記載の製剤の治療上有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１６５】
前記Ｂ細胞疾患または障害は、Ｂ細胞悪性腫瘍、自己免疫疾患、自己免疫障害、ヒト移植患者における体液性拒絶反応、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、およびヒト移植受容者における移植後リンパ増殖性障害からなる群から選択される、請求項１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記Ｂ細胞疾患または障害は、Ｂ細胞悪性腫瘍である、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６７】
前記Ｂ細胞疾患または障害は、強皮症である、請求項１６４に記載の方法。
【請求項１６８】
ヒト患者におけるＣＤ１９発現Ｂ細胞を枯渇させる方法であって、それを必要とするヒトに、請求項１３１に記載の製剤の治療上有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１６９】
前記枯渇は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間からなる群から選択される期間にわたって持続する、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７０】
前記枯渇は、Ｂ細胞レベルを、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少させる、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７１】
前記ＣＤ１９発現Ｂ細胞は、循環Ｂ細胞、血液Ｂ細胞、脾臓Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、腹膜Ｂ細胞、骨髄Ｂ細胞、または癌幹細胞である、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７２】
前記製剤は、薬学的に許容される製剤である、請求項１〜７０、８５〜１１５、または１３１〜１５８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１７３】
キメラ、ヒト化、またはヒト抗ＣＤ１９抗体を含む、滅菌された安定な水性製剤であって、前記抗体は、
（ａ）ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号２２）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号１１５）、およびＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号１２１）、を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）ＶＫ  ＣＤＲ１（配列番号２８）、ＶＫ  ＣＤＲ２（配列番号１２５）、およびＶＫ  ＣＤＲ３（配列番号３２）、を含む軽鎖可変領域と、
（ｃ）複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域であって、フコースは、前記糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない、Ｆｃ領域と、
（ｄ）緩衝剤、塩、炭水化物賦形剤、および界面活性剤と、を含む、製剤。
【請求項１７４】
前記緩衝剤は、ヒスチジンである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項１７５】
前記ヒスチジンは、約１ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度で存在する、請求項１７４に記載の製剤。
【請求項１７６】
前記ヒスチジンは、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１７４に記載の製剤。
【請求項１７７】
前記ヒスチジンは、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在する、請求項１７４に記載の製剤。
【請求項１７８】
前記ヒスチジンは、約１０ｍＭの濃度で存在する、請求項１７４に記載の製剤。
【請求項１７９】
前記ヒスチジンは、約２０ｍＭの濃度で存在する、請求項１７４に記載の製剤。
【請求項１８０】
前記ヒスチジンは、少なくとも約１０ｍＭの濃度で存在する、請求項１７４に記載の製剤。
【請求項１８１】
前記塩は、塩化ナトリウムである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項１８２】
前記塩化ナトリウムは、約１０ｍＭ〜約３００ｍＭの濃度で存在する、請求項１８１に記載の製剤。
【請求項１８３】
前記塩化ナトリウムは、約６０ｍＭ〜約１７５ｍＭの濃度で存在する、請求項１８１に記載の製剤。
【請求項１８４】
前記塩化ナトリウムは、約５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１８１に記載の製剤。
【請求項１８５】
前記塩化ナトリウムは、約７５ｍＭの濃度で存在する、請求項１８１に記載の製剤。
【請求項１８６】
前記塩化ナトリウムは、少なくとも５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１８１に記載の製剤。
【請求項１８７】
前記炭水化物賦形剤は、トレハロースである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項１８８】
前記トレハロースは、約１％〜約１０％の濃度で存在する、請求項１８７に記載の製剤。
【請求項１８９】
前記トレハロースは、約２％〜約８％の濃度で存在する、請求項１８７に記載の製剤。
【請求項１９０】
前記トレハロースは、約３％ｍＭの濃度で存在する、請求項１８７に記載の製剤。
【請求項１９１】
前記トレハロースは、約４％の濃度で存在する、請求項１８７に記載の製剤。
【請求項１９２】
前記トレハロースは、少なくとも約３％の濃度で存在する、請求項１８７に記載の製剤。
【請求項１９３】
前記界面活性剤は、ポリソルベート８０である、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項１９４】
前記ポリソルベート８０は、約０．００１％〜約２％の濃度で存在する、請求項１９３に記載の製剤。
【請求項１９５】
前記ポリソルベート８０は、約０．０１％の濃度で存在する、請求項１９３に記載の製剤。
【請求項１９６】
前記ポリソルベート８０は、約０．０２％の濃度で存在する、請求項１９３に記載の製剤。
【請求項１９７】
前記ポリソルベート８０は、約０．０４％の濃度で存在する、請求項１９３に記載の製剤。
【請求項１９８】
前記ポリソルベート８０は、約０．０５％の濃度で存在する、請求項１９３に記載の製剤。
【請求項１９９】
前記ポリソルベート８０は、約０．０８％の濃度で存在する、請求項１９３に記載の製剤。
【請求項２００】
前記ポリソルベート８０は、約０．０１％〜約０．２％の濃度で存在する、請求項１９３に記載の製剤。
【請求項２０１】
約５．５〜約６．５のｐＨを有する、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２０２】
約６．０のｐＨを有する、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２０３】
前記製剤は、タングステン除去シリンジ中に存在する、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２０４】
前記製剤は、ろ過される、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２０５】
前記製剤は、２２μｍフィルターによってろ過される、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２０６】
前記製剤は、前記界面活性剤の添加前および後にろ過される、請求項２０５に記載の製剤。
【請求項２０７】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２０８】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２０９】
前記抗体の濃度は、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２１０】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２１１】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２１２】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２１３】
前記抗体の濃度は、約５ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２１４】
前記抗体の濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２１５】
前記抗体の濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２１６】
前記抗体の濃度は、約２５ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２１７】
前記抗体の濃度は、約３０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２１８】
前記抗体の濃度は、約４０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２１９】
前記抗体の濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２２０】
前記抗体の濃度は、約６０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２２１】
前記抗体の濃度は、約７０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２２２】
前記抗体の濃度は、少なくとも約８０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２２３】
前記抗体の濃度は、少なくとも約９０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２２４】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１１０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２２５】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２２６】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１３０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２２７】
前記抗体の濃度は、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２２８】
前記抗体の濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬである、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２２９】
前記製剤は、−２０℃で保管される、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２３０】
前記製剤は、−４０℃で保管される、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２３１】
前記製剤は、−７０℃で保管される、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２３２】
前記製剤は、−８０℃で保管される、請求項１７３に記載の製剤。
【請求項２３３】
水性製剤の保管安定性を強化する方法であって、前記製剤は、
ａ．配列番号１０４の配列を含む重鎖可変領域と、
ｂ．配列番号１１１の配列を含む軽鎖可変領域と、
ｃ．複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域であって、フコースは、前記糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない、Ｆｃ領域と、を含む、キメラ、ヒト化、またはヒト抗ＣＤ１９抗体を含み、
前記方法は、前記製剤の前記保管安定性を強化するために有効な量の界面活性剤を前記製剤に添加することを含む、方法。
【請求項２３４】
前記界面活性剤は、ポリソルベート８０である、請求項２３２に記載の方法。
【請求項２３５】
前記ポリソルベート８０は、約０．００１％〜約２％の濃度で存在する、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２３６】
前記ポリソルベート８０は、約０．０１％の濃度で存在する、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２３７】
前記ポリソルベート８０は、約０．０２％の濃度で存在する、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２３８】
前記ポリソルベート８０は、約０．０４％の濃度で存在する、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２３９】
前記ポリソルベート８０は、約０．０５％の濃度で存在する、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２４０】
前記ポリソルベート８０は、約０．０８％の濃度で存在する、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２４１】
前記ポリソルベート８０は、約０．０１％〜約０．２％の濃度で存在する、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２４２】
前記界面活性剤の前記添加の前に、前記組成物をろ過するステップをさらに含む、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２４３】
前記界面活性剤の前記添加の後に、前記組成物をろ過するステップをさらに含む、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２４４】
前記界面活性剤の前記添加の前および後に、前記組成物をろ過するステップをさらに含む、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２４５】
前記抗ＣＤ１９抗体が、その活性を保持する、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２４６】
前記抗ＣＤ１９抗体が、その純度を保持する、請求項２３３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して提出されており、参照によりその全体がこれによって組み込まれる配列表を含有する。２０１０年３月５日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、０００５８０００．ｔｘｔと名付けられ、７９，９３２バイトのサイズである。
【０００２】
１．優先権データ
本出願は、２００９年３月６日に出願された米国出願第６１／１５８，１５３号に対する優先権を主張し、その出願は参照によりその全体がこれによって組み込まれる。
【０００３】
２．序論
本発明は、ヒトＣＤ１９抗原に特異的に結合し、次のうちの１つ以上を媒介し得るヒト、ヒト化、またはキメラ抗体の液体製剤に関する。補体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＣＤＣ）、抗原依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、およびプログラム細胞死（アポトーシス）。該製剤は、長期間の保管中であっても、安定性、すなわち低レベル〜検出不可能なレベルの抗体断片化、低レベル〜検出不可能なレベルの凝集、および非常にわずか〜ゼロの抗体の生物学的活性の喪失を示す。本発明はさらに、ヒトＣＤ１９抗原に結合する治療用ヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む液体製剤を利用する、Ｂ細胞悪性腫瘍を含む、ヒト対象におけるＢ細胞障害または疾患を治療するための方法に関する。本発明は、ヒトＣＤ１９抗原に結合する治療用ヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む液体製剤を利用する、自己免疫疾患の治療および予防、ならびにヒト移植受容者における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、体液性拒絶反応、および移植後リンパ増殖性障害を治療および予防するための方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
３．背景
Ｂ細胞は、それらの分化および増殖中に、多様な細胞表面分子を発現する。例としては、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、およびＣＤ８６白血球表面マーカーが挙げられる。これらのマーカーは、概して、Ｂ細胞悪性腫瘍、自己免疫疾患、および移植拒絶反応等のＢ細胞障害または疾患を治療するための治療標的として示唆されている。それらに特異的に結合する抗体が開発されており、幾つかは、疾患および障害を治療するための治療剤として試験されている。
【０００５】
例えば、成熟Ｂ細胞およびそれらの悪性相対物に特異的なＣＤ２０細胞表面分子に対して向けられる、キメラまたは放射標識モノクローナル抗体（ｍＡｂ）ベースの療法は、非ホジキンリンパ腫のためのインビボ治療に有効であることが示されている（Ｔｅｄｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １５：４５０−４５４（１９９４）、Ｐｒｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ：２２１−２４０（２００１）、Ｋａｍｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２９：４５９−４６５（１９９３）、Ｗｅｉｎｅｒ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２６：４３−５１（１９９９）、Ｏｎｒｕｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇｓ  ５８：７９−８８（１９９９）、ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １２：１７６３−１７６９（１９９８）、Ｒｅｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８３：４３５−４４５（１９９４）、Ｍａｌｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９０：２１８８−２１９５（１９９７）、Ｍａｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１５：３２６６−３２７４（１９９７）、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃ．２５：７０５−７０８（１９９７））。また、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体療法は、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、特発性血小板減少性紫斑病、および溶血性貧血の症状、ならびに他の免疫媒介型疾患を軽減するのに部分的に有効であることも見出されている（Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４８：１４８４−１４９２（２００２）、Ｅｄｗａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ４０：１−７（２００１）、Ｄｅ  Ｖｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４６：２０２９−２０３３（２００２）、Ｌｅａｎｄｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．６１：８８３−８８８（２００２）、Ｌｅａｎｄｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４６：２６７３−２６７７（２００１））。抗ＣＤ２０（ＩｇＧ１）抗体、ＲＩＴＵＸＡＮは、成人免疫性血小板減少性紫斑病、リウマチ性関節炎、および自己免疫性溶血性貧血等の特定の疾患の治療に首尾よく使用されている（Ｃｕｒｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第００／６７７９６号）。これらの療法の有効性にもかかわらず、Ｂ細胞枯渇は、Ｂ細胞がＣＤ２０を発現しないか、または低レベルのＣＤ２０を発現する場合（例えば、プレＢ細胞または未成熟Ｂ細胞上で）、あるいはＣＤ２０免疫療法に続いてＣＤ２０発現を喪失している場合、さほど有効でない（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２：７３５９−７３６８（２００３））。
【０００６】
マウスモノクローナル抗ＣＤ１９抗体は、当技術分野で説明されており、例えば、ＨＤ３７（ＩｇＧ１、カッパ）（ＤＡＫＯ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）、ＢＵ１２（Ｃａｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４８（１０）：２９８３−７（１９９２））、４Ｇ７（ＩｇＧ１）（Ｍｅｅｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，３（４）：３０５−２０（１９８４  Ｗｉｎｔｅｒ））、Ｊ４．１１９（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｋｒｅｆｅｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｂ４３（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＳＪ２５Ｃ１（ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＦＭＣ６３（ＩｇＧ２ａ）（Ｚｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６９（ＰＴ６）：４１１−２２（１９９１）、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＭｏＩ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３４：１１５７−１１６５（１９９７）、Ｐｉｅｔｅｒｓｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，４１：５３−６０（１９９５））、８９Ｂ（Ｂ４）（ＩｇＧ１）（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｍｉａｍｉ，ＦＬ；Ｎａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２４４−２５０（１９８３））、および／またはＨＤ２３７（ＩｇＧ２ｂ）（Ｆｏｕｒｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ，１９８９、およびＰｅｚｚｕｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３８（９）：２７９３−２７９９（１９８７））である。また、抗ＣＤ１９抗体またはその共役は、Ｂ細胞障害または疾患の種々の動物モデルにおける治療可能性も示している（Ｆａｌｖｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．１３４（２）：１５７−７０（２００６）、Ｖａｌｌｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１（２１）：７９２０−８（２００５）、Ｙａｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２（４２）：１５１７８−８３（２００５））。
【０００７】
特に、ヒト化ＣＤ１９抗体の使用は、Ｂ細胞疾患等のリンパ腫、白血病、または自己免疫疾患の治療のために記載されている（Ｈａｎｓｅｎ米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００７０６９３号を参照されたい）。
【０００８】
癌療法の近年の進歩にもかかわらず、非ホジキンリンパ腫のＢ細胞サブタイプ等のＢ細胞悪性腫瘍、および慢性リンパ性白血病は、癌関連死の主な寄与因子である。したがって、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療のための、さらなる、改善された療法レジメンに対する大きな必要性が存在する。
【０００９】
細胞性（Ｔ細胞媒介型）免疫および体液性（抗体、Ｂ細胞媒介型）免疫の双方は、移植片拒絶反応に有意な役割を果たすことが現在知られている。移植片拒絶反応におけるＴ細胞媒介型免疫の重要性が定着している一方で、急性および慢性拒絶反応における体液性免疫の必須の役割は、近年明白となったにすぎない。結果として、移植片拒絶反応の治療および予防における進歩のほとんどは、Ｔ細胞活性を標的とする治療剤から発展している。移植片拒絶反応の治療のためにＦＤＡ承認された最初の治療モノクローナル抗体は、Ｔ細胞のＣＤ３受容体に対して向けられる、マウスモノクローナル抗体ＯＲＴＨＯＣＬＯＮＥ−ＯＫＴ３（商標）（ムロモナブ−ＣＤ３）であった。ＯＫＴ３の後に、モノクローナル抗ＣＤ５２ＣＡＭＰＡＴＨ（商標）抗体、ＣＡＭＰＡＴＨ−ＩＧ、ＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ（アレムツズマブ）、およびＣＡＭＰＡＴＨ−ＩＭ）、およびポリクローナル抗胸腺細胞抗体調製物（抗胸腺細胞グロブリンまたは「ＡＴＧ」と称される、「サイモグロビン」または「サイモグロブリン」とも呼ばれる）を含む複数の他の抗リンパ球指向性抗体が加わった。移植拒絶反応の予防のために承認された他のＴ細胞抗体には、キメラモノクローナル抗体ＳＩＭＵＬＥＣＴ（商標）（バシリキシマブ）およびヒト化モノクローナル抗体ＺＥＮＡＰ  ＡＸ（商標）（ダクリズマブ）が含まれ、それらの双方は、活性化Ｔ細胞の高親和性ＩＬ−２受容体を標的とする。
【００１０】
移植片拒絶反応における体液性免疫の重要性は、移植片受容者が移植の前に抗ドナーＨＬＡ抗体を有し、抗体抑制の有効な療法レジメンの非存在下で移植片の迅速な破壊をもたらす、超急性拒絶反応に限定されると当初は考えられていた。近年、体液性免疫もまた、急性および慢性拒絶反応の双方を媒介する重要な要因であることが明白となってきた。例えば、臨床所見は、クラスＩまたはクラスＩＩ抗ＨＬＡ同種抗体（「抗ＭＨＣ同種抗体」とも称される）を産生することができる患者における移植片生着が、かかる抗体を産生することができない患者における移植片生着と比較して低減されることを示した。また、臨床および実験データは、他のドナー特異的同種抗体および自己抗体が、拒絶反応の必須のメディエーターであることも示す。同種移植片拒絶反応におけるドナー特異的抗体の役割を支持する証拠の現在の概説については、Ｒｉｆｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，７９：Ｓ１４−Ｓ１８（２００５）を参照されたい。したがって、急性および慢性移植片拒絶反応における体液性免疫の役割への、比較的近年の理解に起因して、体液性免疫を標的とするための現在の治療剤および戦略は、細胞性免疫を標的とするための治療剤および戦略ほど十分には開発されていない。したがって、当技術分野で、移植片拒絶反応、すなわち、ヒト移植受容者における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、体液性拒絶反応、および移植後リンパ増殖性障害を治療および予防するための、改善された試薬および方法に対する必要性が存在する。
【００１１】
自己免疫疾患は、全体として、有意な罹患率および身体障害を引き起こす。１９６５〜１９９５年に収集された発生率データに基づいて、約１２０万人の人々が、今後５年間で新たな自己免疫疾患を発症するであろうことが推定されている。Ｊａｃｏｂｓｅｎら（Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８４：２２３（１９９７））は、１３０件超の公開研究を評価し、１９９６年に、米国の８５０万人の人々（人口の３．２％）が、これらの研究で検査された２４つの自己免疫疾患のうちの少なくとも１つを有することを推定した。自己免疫疾患の公共衛生に与える大きな影響を考慮すると、これらの障害の負担に対処するための有効で安全な治療が必要とされる。したがって、当技術分野で、自己免疫疾患を治療するための改善された試薬および方法に対する必要性が存在する。
【００１２】
従来の液体抗体調製物は、短い貯蔵寿命を有し、保管中の化学的および物理的不安定性の結果として、抗体の生物学的活性を喪失する可能性がある。化学的不安定性は、脱アミド化、ラセミ化、加水分解、酸化、ベータ脱離、またはジスルフィド交換によって引き起こされる可能性があり、物理的不安定性は、抗体変性、凝集、沈殿、または吸着によって引き起こされる可能性がある。これらの中で、凝集、脱アミド化、および酸化は、抗体分解の最も一般的な原因であることが知られている（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．ｏｆ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４２（Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ４−Ｓ２６、Ｃｌｅｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  １０（４）：３０７−３７７）。したがって、抗体の安定液体製剤、特に、抗ヒトＣＤ１９抗体の安定液体製剤に対する必要性が存在する。
【発明の概要】
【００１３】
４．要約
本発明は、ヒトＣＤ１９抗原に特異的に結合するキメラ、ヒト、またはヒト化抗体を含む、滅菌された安定な水性製剤を提供する。一実施形態では、本発明は、抗ＣＤ１９マウスモノクローナル抗体、ＨＢ１２ＡおよびＨＢ１２Ｂのキメラおよびヒト化バージョンを含む製剤を提供する。別の実施形態では、本発明は、２００７年９月７日に出願された米国特許出願第１１／８５２，１０６号に記載される抗ＣＤ１９抗体を含む製剤を提供し、その特許の開示は、参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれる。さらなる実施形態では、本発明は、次のうちの１つ以上を媒介し得、かつ強化されたエフェクター機能を有する、本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む製剤を提供する：補体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＣＤＣ）、抗原依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、およびプログラム細胞死（アポトーシス）。別の実施形態では、本発明の製剤は、複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む、本発明の抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変配列、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【００１４】
本発明は、本発明のキメラ、ヒト、またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を安定化させる方法を提供する。
【００１５】
本発明はさらに、ヒトＣＤ１９抗原に特異的に結合する、本発明のキメラ、ヒト、またはヒト化抗体を含む、滅菌された安定な水性製剤を作製するプロセスに関する。
【００１６】
本発明はさらに、ヒトＣＤ１９抗原に結合する本発明の治療用ヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む液体製剤を利用する、Ｂ細胞悪性腫瘍を含む、ヒト対象におけるＢ細胞障害または疾患を治療するための方法に関する。本発明は、ヒトＣＤ１９抗原に結合する本発明の治療用ヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む液体製剤を利用する、自己免疫疾患の治療および予防、ならびにヒト移植受容者における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、体液性拒絶反応、および移植後リンパ増殖性障害を治療および予防するための方法に関する。
【００１７】
本発明は、ヒトＣＤ１９抗原に結合するヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体、ならびにそれらの抗体を含む組成物に関する。一実施形態では、本発明は、抗ＣＤ１９マウスモノクローナル抗体、ＨＢ１２ＡおよびＨＢ１２Ｂのキメラおよびヒト化バージョンを提供する。
【００１８】
別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２Ａ（クローンＢ４１０Ｆ１２−２−Ａ６−Ｃ２は、２００５年２月１１日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」）、ＡＴＣＣ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ：ＰＴＡ−６５８０により寄託された）または  ＨＢ１２Ｂ（クローンＢ４３Ｈ１２−３−Ｂ２−Ｂ６は、２００５年２月１１日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」）、ＡＴＣＣ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ：ＰＴＡ−６５８１により寄託された）のＣＤＲのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てを含む。
【００１９】
Ｋａｂａｔに従って定められる（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）ＨＢ１２Ａの重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３についてのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、配列番号８、および配列番号１０として特定される。Ｋａｂａｔに従って定められるＨＢ１２Ａの軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３についてのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１２、配列番号１４、および配列番号１６として特定される。
【００２０】
Ｋａｂａｔに従って定められるＨＢ１２Ｂの重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３についてのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号２２、配列番号２４、および配列番号２６として特定される。Ｋａｂａｔに従って定められるＨＢ１２Ｂの軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３についてのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号２８、配列番号３０、および配列番号３２として特定される。
【００２１】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、次の表１に列挙されるＣＤＲのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む。
【表１】
2012519712.tif 000002
2012519712.tif 000003
2012519712.tif 000004
2012519712.tif 000005
2012519712.tif 000006
【００２２】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ＡまたはＨＢ１２Ｂの１つ以上のフレームワーク領域を含んでもよい。一実施形態では、本発明の抗体は、ヒト抗体からの（例えば、ＶＨ３−７２、ＪＨ４、Ｖｋ  Ａ１０、またはＪｋ４等のヒト生殖細胞系抗体配列からの）重鎖および／または軽鎖フレームワーク（ＦＷ）領域をさらに含んでもよく、該ヒトフレームワーク領域は、ヒトＦＷ残基が親マウス（例えば、ＨＢ１２ＡまたはＨＢ１２Ｂ）重鎖または軽鎖中に存在する対応する残基と交換される、１つ以上の突然変異を含んでもよい。
【００２３】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＣＤＲのアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含んでもよく、またＶＨ領域指定ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）の１つ以上の重鎖フレームワーク（ＦＷ）領域をさらに含んでもよい。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＣＤＲのアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み、またＶＨ領域指定ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）の１つ以上の重鎖フレームワーク（ＦＷ）領域をさらに含む。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＣＤＲのアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含んでもよく、またＶＫ領域指定ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）（配列番号５２）の１つ以上の軽鎖フレームワーク（ＦＷ）領域をさらに含んでもよい。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＣＤＲのアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み、またＶＫ領域指定ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）（配列番号５２）の１つ以上の軽鎖フレームワーク（ＦＷ）領域をさらに含む。別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＣＤＲのアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲ、ＶＫ領域指定ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）の１つ以上の軽鎖フレームワーク領域、およびＶＨ領域指定ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）の１つ以上の重鎖フレームワーク領域を含んでもよい。さらなる実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＣＤＲのアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲ、ＶＫ領域指定ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）の１つ以上の軽鎖フレームワーク領域、およびＶＨ領域指定ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）の１つ以上の重鎖フレームワーク領域を含む。
【００２４】
例えば、一実施形態では、本発明のヒト化抗ＣＤ１９抗体は、４つのフレームワーク領域、ＦＷｌ、ＦＷ２、ＦＷ３、およびＦＷ４を含む重鎖可変領域を含んでもよく、ここでＦＷｌは、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＦＷ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＦＷ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＦＷ４は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、本発明のヒト化抗ＣＤ１９抗体は、４つのフレームワーク領域、ＦＷｌ、ＦＷ２、ＦＷ３、およびＦＷ４を含む重鎖可変領域を含み、ここでＦＷｌは、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＦＷ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＦＷ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＦＷ４は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む。
【００２５】
加えて、本発明のヒト化抗ＣＤ１９モノクローナル抗体は、４つのフレームワーク領域、ＦＷｌ、ＦＷ２、ＦＷ３、およびＦＷ４を含む軽鎖可変領域を含んでもよく、ここでＦＷｌは、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、さらにＦＷ２が、配列番号５６、配列番号６４、および配列番号７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む領域、ＦＷ３が、配列番号５８および配列番号６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む領域、かつＦＷ４が、配列番号６０のアミノ酸配列を含む領域である。一実施形態では、本発明のヒト化抗ＣＤ１９モノクローナル抗体は、４つのフレームワーク領域、ＦＷｌ、ＦＷ２、ＦＷ３、およびＦＷ４を含む軽鎖可変領域を含み、ここでＦＷｌは、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、さらにＦＷ２が、配列番号５６、配列番号６４、および配列番号７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む領域、ＦＷ３が、配列番号５８、および配列番号６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む領域、かつＦＷ４が、配列番号６０のアミノ酸配列を含む領域である。
【００２６】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＨまたは配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＶＬを含んでもよく、該抗体は、ヒトＣＤ１９抗原に結合する。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【００２７】
特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２Ｂ  ＶＫ（配列番号２０）、ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）（配列番号５２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９８７（配列番号６２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９（配列番号６８）、ＨＢ１２Ｂ−３６（配列番号７０）、ＨＢ１２Ａ  ＶＫ（配列番号４）、７Ｅ１２  ＶＫ（配列番号１１０）、１４Ｈ５  ＶＫ（配列番号１１１）、１５Ｄｌ  ＶＫ（配列番号１１２）、１６Ｃ９  ＶＫ（配列番号１１３）、３Ｃ３  ＶＫ（配列番号１９３）、３Ｅ５  ＶＫ（配列番号１９４）、３Ｄ４  ＶＫ（配列番号１９５）、３Ｆ１  ＶＫ（配列番号１９６）、５Ｂ５  ＶＫ（配列番号１９７）、６Ｆ７  ＶＫ（配列番号１９８）、ＩＣ１１  ＶＫ（配列番号１９９）、２Ｂ１１  ＶＫ（配列番号２００）、２Ｄ１０  ＶＫ（配列番号２０１）、５Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０２）、５Ｄ４  ＶＫ（配列番号２０３）、６Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０４）、９Ｇ７  ＶＫ（配列番号２０５）、１Ｈ４  ＶＫ（配列番号２０６）、および５Ｃ４  ＶＫ（配列番号２０７）からなる群から選択される軽鎖可変領域を含んでもよい。
【００２８】
具体的な実施形態では、本発明はさらに、ＨＢ１２Ｂ  ＶＨ（配列番号１８）、ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）、ＨＢ１２Ａ  ＶＨ（配列番号２）、７Ｅ１２  ＶＨ（配列番号１０２）、１４Ｈ５  ＶＨ（配列番号１０３）、１５Ｄ１  ＶＨ（配列番号１０４）、１５Ｄ７  ＶＨ（配列番号１０５）、１６Ｃ４  ＶＨ（配列番号１０６）、１４Ｈ５−ＹＧ（配列番号１０７）、１４Ｈ５−ＤＧ（配列番号１０８）、１４Ｈ５−ＬＧ（配列番号１０９）、１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）、３Ｃ３  ＶＨ（配列番号１９１）、６Ｃ１１  ＶＨ（配列番号１９１）、９Ｇ７（配列番号１９１）、３Ｂ４  ＶＨ（配列番号２３６）、および３Ｆ１１  ＶＨ（配列番号１９２）からなる群から選択される重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１９抗体に関する。
【００２９】
特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２Ｂ−３６４９（配列番号６８）軽鎖可変領域およびＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）重鎖可変領域を含む。ヒト化抗ｈＣＤ１９ＶＨ  ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）を含むＤＮＡクローンは、２００６年１０月２６日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」）に寄託され、すなわち「ＴＯＰＯの３６４９Ｈｅａｖｙ」ＡＴＣＣ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−７９５２である。ヒト化抗ｈＣＤ１９  ＶＫ  ＨＢ１２Ｂ−３６４９を含むＤＮＡクローンは、２００６年１０月２６日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」）に寄託され、すなわち「ＴＯＰＯの３６４９Ｌｉｇｈｔ」ＡＴＣＣ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−７９５３である。
【００３０】
一実施形態では、本発明のヒト化抗ＣＤ１９抗体は、マウスモノクローナル抗体ＨＢ１２Ａおよび／またはＨＢ１２Ｂの親和性に匹敵する親和性により、またはＨＢ１２Ｂ  ＶＨ（配列番号１８）およびＨＢ１２Ｂ  ＶＫ（配列番号２０）を含むｃｈＨＢ１２Ｂ抗体の親和性に匹敵する親和性により、ヒトＣＤ１９に結合することができる。
【００３１】
本発明は、本発明のヒト、ヒト化、もしくはキメラ抗ＣＤ１９抗体またはそれらの断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドをさらに提供する。
また、本発明は、ヒトＣＤ１９に特異的に結合するヒト、ヒト化、またはキメラ抗体をコードするポリヌクレオチドと、本明細書に定められるような、厳格なまたはより低い厳格度のハイブリダイゼーション条件下でハイブリッド形成するポリヌクレオチドも包含する。
【００３２】
本発明の別の実施形態は、本明細書に記載されるヒト、ヒト化、もしくはキメラ抗ＣＤ１９抗体またはそれらの断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むベクターである。
【００３３】
本発明はさらに、ベクターを含む単離された細胞に関し、該ベクターは、本発明のヒト、ヒト化、もしくはキメラ抗ＣＤ１９抗体またはそれらの断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む。
【００３４】
本明細書に記載されるキメラ、ヒト、およびヒト化抗ＣＤ１９モノクローナル抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプの抗体を含む。
【００３５】
一実施形態では、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ１９抗体は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＣＤＣ）、および／またはアポトーシスを媒介する。
【００３６】
さらなる実施形態では、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ１９抗体は、抗ＩｇＭ／ＣｐＧ刺激性Ｂ細胞増殖を阻害する。
【００３７】
本発明はさらに、キメラ、ヒト、およびヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。
【００３８】
さらに別の他の態様では、本発明は、それを必要とするヒトに、キメラ、ヒト、またはヒト化抗ＣＤ１９モノクローナル抗体の治療上有効量を投与することを含む、ヒトにおけるＢ細胞悪性腫瘍を治療する方法に関する。
【００３９】
さらなる態様では、本発明は、それを必要とするヒトに、キメラ、ヒト、またはヒト化抗ＣＤ１９モノクローナル抗体の治療上有効量を投与することを含む、ヒトにおける自己免疫疾患または障害を治療する方法に関する。
【００４０】
本発明はさらに、それを必要とするヒトに、キメラ、ヒト、またはヒト化抗ＣＤ１９モノクローナル抗体の治療上有効量を投与することを含む、ヒト移植患者における体液性拒絶反応を治療または予防する方法に関する。
【００４１】
本発明は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗ＣＤ１９抗体を含む水性製剤の保管安定性を強化する方法に関し、それは製剤の保管安定性を強化するために有効な量の界面活性剤を該製剤に添加することを含み、該抗体は、配列番号１０４の配列を含む重鎖可変領域、配列番号１１１の配列を含む軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。本発明のこの態様に従って、界面活性剤は、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０であってもよい。一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０であり、約０．０１％、約０．０２％、約０．０４％、約０．０８％、または約０．１％の量で存在する。また、本発明さらに、界面活性剤の添加前および／または添加後に組成物をろ過することを含む、保管安定性のための製剤のさらなる滅菌に関する。
【００４２】
４．１．定義
本明細書で使用されるとき、「抗体（単数および複数）」（免疫グロブリン）という用語は、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの無処置抗体から形成される多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、１本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、１本鎖抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、所望の生物学的活性を示す抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、細胞内抗体、ならびにＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片を含むが、それらに限定されない上のいずれのエピトープ結合断片、二重特異性抗体、線状抗体、１本鎖抗体分子、および抗体断片から形成される多特異性抗体を包含する。特に、抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち、抗原結合部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、いずれのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスの分子であってもよい。
【００４３】
天然抗体は、通常、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、２本の同一軽（Ｌ）鎖および２本の同一重（Ｈ）鎖からなる。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に結合されるが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で異なる。また、各重鎖および軽鎖は、規則的間隔の鎖間ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、１つの末端に、可変ドメイン（ＶＨ）とそれに続く幾つかの定常領域を有する。各軽鎖は、１つの末端（ＶＬ）に可変ドメイン、およびそのもう一つの末端に定常領域を有し、軽鎖の定常領域は、重鎖の第１の定常領域と整列させられ、軽鎖可変領域は、重鎖の可変領域と整列させられる。軽鎖は、軽鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、ラムダ鎖またはカッパ鎖のいずれかとして分類される。また、カッパ軽鎖の可変ドメインは、本明細書でＶＫとして示されてもよい。また、「可変ドメイン」という用語は、重鎖または軽鎖の可変領域を説明するために使用されてもよい。特定のアミノ酸残基は、軽鎖と重鎖可変ドメインとの界面を形成すると考えられる。かかる抗体は、ヒト、サル、ブタ、ウマ、ウサギ、イヌ、ネコ、マウス等を含むが、それらに限定されないいずれの哺乳動物に由来してもよい。
【００４４】
「可変」という用語は、可変ドメインのある部分が、抗体間の配列において大いに異なり、その特定の抗原に対する、特定の抗体の結合特異性に関与するという事実を指す。しかしながら、変動性は、抗体の可変ドメインにわたって均等には分配されない。それは、軽鎖および重鎖可変ドメインの双方における、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれるセグメント中に集中させられる。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＷ）と呼ばれる。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々４つのＦＷ領域を含み、βシート配置を主に採用しており、βシート構造を結合するループを形成し、また場合によってはβシート構造の部分を形成する、３つのＣＤＲによって結合される。各鎖のＣＤＲは、ＦＷ領域によって近接して結合され、他の鎖からのＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、概して抗原結合に直接に関与しないが、抗原結合親和性に影響を及ぼし得、抗体のＡＤＣＣ、ＣＤＣ、および／またはアポトーシスへの関与等の種々のエフェクター機能を示し得る。
【００４５】
本明細書で使用されるとき、「高度可変領域」という用語は、抗原への結合に関連する抗体のアミノ酸残基を指す。高度可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変領域の残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）、および８９−９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変領域の残基３１−３５（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）、および９５−１０２（Ｈ３）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））、および／または「高度可変ループ」からのそれらの残基（例えば、軽鎖可変領域の残基２６−３２（Ｌｌ）、５０−５２（Ｌ２）、および９１９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変領域の２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、および９６−１０１（Ｈ３）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７））を包含する。「フレームワーク」または「ＦＷ」残基とは、ＣＤＲの側面に位置するそれらの可変ドメイン残基である。ＦＷ残基は、キメラ、ヒト化、ヒト、領域抗体、二重特異性抗体、ワクチボディ、線状抗体、および二重特異性抗体中に存在する。
【００４６】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体、すなわち、集団を含む個々の抗体が、少量で存在し得る潜在的な自然発生突然変異を除いて同一であることを指す。モノクローナル抗体は、高特異的であり、単一の抗原部位に対して向けられる。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して向けられる異なる抗体を典型的に含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物と対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが、他の免疫グロブリン産生細胞により汚染されていないハイブリドーマ細胞によって合成され得るという点で有利である。代替的な産生方法は、当業者に既知であり、例えば、モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体をコードする重鎖および軽鎖遺伝子により安定にまたは一過性でトランスフェクトされた細胞によって産生されてもよい。
【００４７】
「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の操作を必要とするものとして解釈されないものとする。本明細書で使用される「モノクローナル」という用語は、任意の真核性、原核性、またはファージクローンを含む細胞のクローン集団に由来する抗体を指し、抗体が操作された方法を指さない。例えば、本発明に従って使用されるべきモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製されてもよく、または例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載される技術を用いたファージ抗体ライブラリからの単離を含む、いずれの組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）によって作製されてもよい。これらの方法を使用して、モノクローナルの哺乳類、キメラ、ヒト化、ヒト、ドメイン抗体、二重特異性抗体、ワクチボディ、線状抗体、および二重特異性抗体を産生することができる。
【００４８】
「キメラ」抗体という用語は、それらが所望の生物学的活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の少なくとも一部が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であり、かつその鎖（単数または複数）の少なくとも別の一部が、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である抗体、ならびにかかる抗体の断片を含む（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本明細書で、目的のキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、ヒヒ、アカゲザル、またはカニクイザル等の旧世界ザル）およびヒト定常領域配列（米国特許第５，６９３，７８０号）に由来する可変ドメイン抗原結合配列を含む「霊長類化」抗体を含む。
【００４９】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、天然ＣＤＲ残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）の対応するＣＤＲからの残基によって置換される、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦＷ領域残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中またはドナー抗体中で見出されない残基を含んでもよい。これらの修飾は、抗体性能をさらに改良するために行われる。概して、ヒト化抗体重鎖または軽鎖は、少なくとも１つ以上の可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ここでＣＤＲの全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのそれらに相当し、ＦＷの全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のそれらである。ある種の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８）およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２）を参照されたい。
【００５０】
「ヒト抗体」は、抗原チャレンジに応答して特異性ヒト抗体を産生するように「操作され」たトランスジェニック生物から得られたヒトまたは抗体に由来する抗体であり得、当技術分野で既知のいずれの方法によっても産生することができる。ある種の技術では、ヒト重鎖および軽鎖座の要素は、内因性重鎖および軽鎖座の標的破壊を含有する胚性幹細胞株に由来する生物の株に導入される。トランスジェニック生物は、ヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、その生物を使用してヒト抗体分泌ハイブリドーマを産生することができる。また、ヒト抗体は、重鎖および軽鎖が、ヒトＤＮＡの１つ以上の源に由来するヌクレオチド配列によってコードされる場である抗体でもあり得る。また、完全ヒト抗体は、遺伝子または染色体トランスフェクション法、ならびにファージディスプレイ技術、あるいはインビトロ活性化Ｂ細胞によって構築することができ、それらの全ては、当技術分野で既知である。
【００５１】
「抗体依存性細胞媒介型細胞傷害性」および「ＡＤＣＣ」は、非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介型反応を指す。一実施形態では、かかる細胞は、ヒト細胞である。特定の作用の機構に限定されることを決して望むものではないが、ＡＤＣＣを媒介するこれらの細胞傷害性細胞は、概してＦｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介する初代細胞は、ＦｃγＲＩＩＩを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＶを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）に要約される。分子のＡＤＣＣ活性を査定するために、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載される検定等のインビトロＡＤＣＣ検定が行われてもよい。かかる検定のために有用なエフェクター細胞には、抹消血液単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替的に、または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性が、インビボで、例えば、ｄｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるモデル等の動物モデルにおいて査定されてもよい。
【００５２】
「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」は、補体活性を開始し、補体の存在下で標的を溶解させる、分子の能力を指す。補体活性経路は、補体系（ＣＩｑ）の第１の構成成分の、同族抗原と複合される分子（例えば、抗体）への結合によって開始される。補体活性を査定するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載されるようなＣＤＣ検定が行われてもよい。
【００５３】
「エフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を実施する白血球である。細胞は、少なくともＦｃγＲＩ、ＦＣｙＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよび／またはＦｃγＲＩＶを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実施する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、抹消血液単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞、および好中球が含まれる。
【００５４】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体上のＦｃ領域に結合する受容体を説明するために使用される。一実施形態では、ＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。また、ある種の実施形態では、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、およびＦｃγＲＩＶサブクラスの受容体を含むものであり、これらの受容体の対立遺伝子変異体および代替的にスプライスされた形態を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）を含み、それらは主にその細胞質ドメインにおいて異なる、類似したアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する。（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５：２０３−２３４（１９９７）を参照されたい）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）、Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５−３４（１９９４）、およびｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１（１９９５）に概説される。将来特定されるであろうＦｃＲを含む他のＦｃＲが、本明細書で「ＦｃＲ」という用語により包含される。また、この用語は、新生児型受容体、ＦｃＲｎを含み、それは母系ＩｇＧｓの胎児への転移に関与する（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９（１９９４））。
【００５５】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含有する最小抗体断片である。この領域は、非共有または共有会合の、密着した１本の重鎖および１本の軽鎖可変領域のダイマーからなる。各可変領域の３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬダイマーの表面上に抗原結合部位を定めるのは、この配置内である。集団的に、６つのＣＤＲは、抗体に抗原結合特異性を与える。しかしながら、単一の可変領域でさえ（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含む、Ｆｖの半分）、結合部位全体よりも低い親和性ではあっても、抗原を認識し、抗原に結合する能力を有する。
【００５６】
本明細書に記載される治療（単数また複数）に使用されるべきエピトープに対する抗体の「親和性」とは、当技術分野において十分理解され、抗体のエピトープへの結合の程度または強度を意味する用語である。親和性は、当技術分野で既知の複数の方法で測定され、かつ／または発現させてもよく、それには平衡解離定数（ＫＤまたはＫｄ）、見かけの平衡解離定数（ＫＤ’またはＫｄ’）、およびＩＣ５０（競合検定で５０％阻害を達成するために必要とされる量）が含まれるが、それらに限定されない。本発明の目的として、親和性は、エピトープに結合する抗体の所定の集団に対する平均的親和性であることが理解される。１ｍＬ当たりのＩｇＧ  ｍｇまたはｍｇ／ｍＬを単位とする、本明細書で報告されるＫＤ’の値は、血清１ｍＬ当たりのＩｇＧ  ｍｇを示すが、血漿を使用することもできる。抗体親和性が、本明細書に記載される治療方法の投与または本明細書に記載される治療方法に対する選択の根拠として使用されるとき、抗体親和性は、治療前および／または治療中に測定することができ、臨床医は、得られた値を、ヒト患者が治療に適切な候補であるかどうかを査定する際に使用することができる。
【００５７】
本明細書で使用されるとき、「結合力」という用語は、抗体がそれにより抗原に結合する、全体的結合強度（すなわち、抗体の双方のアーム）の測定値である。抗体結合力は、Ｇｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈ．，４４：１１−２４．（１９９３）によって記載される間接蛍光抗体の修飾等であるが、それらに限定されない当技術分野で既知のいずれの手段を用いても、抗原過剰中の抗原−抗体結合の解離を測定することによって決定することができる。
【００５８】
「エピトープ」とは、当技術分野で十分理解される用語であり、抗体への特異的結合を示すあらゆるキメラ部分を意味する。「抗原」は、エピトープを含有する部分または分子であり、したがって、それもまた抗体に特異的に結合する。
【００５９】
本明細書で使用される「Ｂ細胞表面マーカー」は、
それに結合する薬剤により標的とされ得るＢ細胞の表面上で発現させられる抗原である。Ｂ細胞表面マーカーには、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、およびＣＤ８６白血球表面マーカーが含まれる。特に目的とするＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比較してＢ細胞上で優先的に発現させられ、前駆Ｂ細胞および成熟Ｂ系列細胞の双方の上で発現させられてもよい。一実施形態では、マーカーは、ＣＤ１９であり、Ｂ細胞上で種々の分化の段階で見出される。
【００６０】
本明細書で使用される「抗体半減期」という用語は、それらの投与に続く、抗体分子の平均生存時間の測定値である抗体の薬物動態学的特性を意味する。抗体半減期は、例えば、血清もしくは血漿中（すなわち、循環半減期）で、または他の組織中で測定されたとき、既知の量の免疫グロブリンの５０パーセントを、患者の体またはその特定の部分から排除するために必要とされる時間として示すことができる。半減期は、１つの免疫グロブリンまたは免疫グロブリンのクラスと、別の免疫グロブリンまたは免疫グロブリンのクラスとの間で異なってもよい。概して、抗体半減期の増加は、投与された抗体の循環における平均滞留時間（ＭＲＴ）の増加をもたらす。
【００６１】
「アイソタイプ」という用語は、抗体の重鎖または軽鎖定常領域の分類を指す。抗体の定常領域は、抗原（複数または単数）への結合には関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。重鎖定常領域のアミノ酸配列に応じて、所定のヒト抗体または免疫グロブリンを、免疫グロブリンの５つの主なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのうちの１つに割り当てることができる。これらのクラスのうちの複数は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１（ガンマ１）、ＩｇＧ２（ガンマ２）、ＩｇＧ３（ガンマ３）、およびＩｇＧ４（ガンマ４）、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分割されてもよい。免疫グロブリンの異なるクラスに相当する重鎖定常領域は、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスの構造および３次元配置は、周知である。種々のヒト免疫グロブリンクラスのうち、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびＩｇＭのみが補体を活性化することが知られる。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、ヒトにおけるＡＤＣＣを媒介することが知られる。ヒト軽鎖定常領域は、２つの主なクラスである、カッパおよびラムダに分類されてもよい。
【００６２】
本明細書で使用されるとき、「免疫原性」という用語は、化合物が免疫応答を刺激する（特異的抗体の産生および／または特異的Ｔ細胞の増殖を刺激する）ことができることを意味する。
【００６３】
本明細書で使用されるとき、「抗原性」という用語は、化合物が抗体によって認識されるか、抗体に結合して免疫応答を誘導することができることを意味する。
【００６４】
「治療する」、「治療すること」、または「の治療」という用語（または文法的に同等の用語）は、対象の病態の重症度が低減されるか、少なくとも部分的に改善もしくは寛解されること、および／または少なくとも１つの臨床症状において、ある種の緩和、軽減、もしくは減少が達成されること、ならびに／あるいは病態の進行の阻害もしくは遅延および／または疾患もしくは病気の発現の予防もしくは遅延が存在することを意味する。したがって、「治療する」、「治療すること」、または「の治療」という用語（または文法的に同等の用語）は、予防的および療法的治療養生法の双方を指す。
【００６５】
本明細書で使用されるとき、「十分な量」または特定の結果を達成するため「に十分な量」とは、所望の効果を産生するために有効な、本発明の抗体または組成物の量を指し、それは任意に治療効果（すなわち、治療上有効量の投与による）である。例えば、「十分な量」または「に十分な量」は、Ｂ細胞を枯渇させるために有効な量であり得る。
【００６６】
本明細書で使用される「治療上有効」量とは、対象に、ある種の改善または利益を提供する量である。別の方法で述べると、「治療上有効」量とは、少なくとも１つの臨床症状における、ある種の緩和、軽減、および／または減少を提供する量である。本発明の方法によって治療することができる障害に関連する臨床症状は、当業者に周知である。さらに、当業者であれば、対象にある種の利益が提供される限り、治療効果が完全または治癒的である必要はないことを理解するであろう。
【００６７】
本明細書で使用される「賦形剤」という用語は、増加したタンパク質安定性、増加したタンパク質溶解性、および減少した粘性等の有益な物理的特性を製剤に与える、薬物のための希釈剤、賦形剤、防腐剤、結合剤、または安定剤として一般的に使用される不活性物質を指す。賦形剤の例としては、タンパク質（例えば、血清アルブミン等であるが、それに限定されない）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、グリシン等であるが、それらに限定されない）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０、ポリソルベート、および非イオン性界面活性剤等であるが、それらに限定されない）、糖類（例えば、グルコース、スクロース、マルトース、およびトレハロース等であるが、それらに限定されない）、ポリオール（例えば、マンニトールおよびソルビトール等であるが、それらに限定されない）、脂肪酸およびリン脂質（例えば、スルホン酸アルキルおよびカプリル等であるが、それらに限定されない）が含まれるが、それらに限定されない。賦形剤に関するさらなる情報については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ｂｙ  Ｊｏｓｅｐｈ  Ｐ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，１８ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）を参照されたく、この参考文献は、その全体が本明細書に組み込まれる。
【００６８】
本明細書で使用される「薬学的に許容される」という語句は、動物に、また特にはヒトに使用するために、連邦政府または州政府の規制当局によって承認され、米国薬局方、欧州薬局方、または他の一般的に認められている薬局方に列挙されていることを意味する。
【００６９】
目的の抗原（例えば、ＣＤ１９）に特異的に結合する抗体を含む（その抗体断片を含む）、本明細書の液体製剤の文脈で使用される「安定性」および「安定な」という用語は、所定の製造、調製、輸送、および保管条件下での、製剤中の抗体の凝集、分解、または断片化に対する抵抗性を指す（その抗体断片を含む）。本発明の「安定な」製剤は、所定の製造、調製、輸送、および保管条件下で、生物学的活性を保持する。該抗体（その抗体断片を含む）の安定性は、ＨＰＳＥＣ、逆相クロマトグラフィー、静的光散乱（ＳＬＳ）、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）、円偏光二色性（ＣＤ）、尿素アンフォールディング技術、内因性トリプトファン蛍光、示差走査熱量測定、および／またはＡＮＳ結合技術によって測定されたときの、参照製剤と比較した凝集、分解、または断片化の程度によって査定することができる。例えば、参照製剤は、７５ｍＭＮａＣｌおよび４％トレハロースを含有する１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ６．０）中、１０ｍｇ／ｍＬの抗体（その抗体断片を含む）（例えば、１６Ｃ４可変領域および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域（フコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない）を含む抗体等であるが、それらに限定されない）からなる、−７０℃で凍結された参照基準であってもよく、その参照製剤は、ＨＰＳＥＣによって規則的に単一のモノマーピーク（例えば、９５％以上の領域）をもたらす。抗体（その抗体断片を含む）を含む製剤の全体的安定性は、例えば、単離された抗原分子を用いるＥＬＩＳＡおよび放射免疫測定法を含む、種々の免疫学的検定によって査定することができる。
【００７０】
本明細書で使用される「凝集の低レベル〜検出不可能なレベル」という語句は、高速サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）または静的光散乱（ＳＬＳ）技術によって測定されたとき、タンパク質の約５重量％以下、約４重量％以下、約３重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、および約０．５重量％以下の凝集を含有する試料を指す。
【００７１】
本明細書で使用される「断片化の低レベル〜検出不可能なレベル」という用語は、例えば、ＨＰＳＥＣもしくは逆相クロマトグラフィーによって決定される単一ピーク中に、または還元キャピラリーゲル電気泳動（ｒＣＧＥ）による２つのピーク中に（例えば、重鎖および軽鎖）（またはサブユニットの存在と同数のピーク）、総タンパク質の約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％、または約９９％と等しいかそれを超える量を含有し、また非分解抗体またはその非分解断片を表し、かつ各ピーク中に総タンパク質の約５％超、約４％超、約３％超、約２％超、約１％超、または約０．５％超を有する他の単一ピークを含有しない試料を指す。本明細書で使用される「還元キャピラリーゲル電気泳動」という用語は、抗体のジスルフィド結合を還元するために十分な還元条件下のキャピラリーゲル電気泳動を指す。
【００７２】
本明細書で使用されるとき、「管理する」、「管理すること」、および「管理」という用語は、疾患の治癒をもたらさない、対象が療法（例えば、予防剤または治療剤）から得る有益な効果を指す。ある種の実施形態では、対象は、疾患の進行または悪化を予防するよう、疾患を「管理する」ために、１つ以上の療法（例えば、１つ以上の予防剤または治療剤）を投与される。
【００７３】
本明細書で使用されるとき、「予防する」、「予防すること」、および「予防」という用語は、療法の投与からもたらされる、疾患または障害の発症もしくは発現の阻害、または対象における疾患または障害の１つ以上の症状の再発、発現、もしくは発症の予防（例えば、予防剤または治療剤）、あるいは療法の組み合わせの投与（例えば、予防剤または治療剤の組み合わせ）を指す。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、「十分な量」または特定の結果を達成するため「に十分な量」とは、所望の効果を産生するために有効な、本発明の抗体または組成物の量を指し、それは任意に治療効果（すなわち、治療上有効量の投与による）である。例えば、「十分な量」または「に十分な量」は、ＣＤ１９発現Ｂ細胞を枯渇させるために有効な量であり得る。
【００７５】
本明細書で使用される「治療上有効」量とは、対象に、ある種の改善または利益を提供する量である。別の方法で述べると、「治療上有効」量とは、少なくとも１つの臨床症状における、ある種の緩和、軽減、および／または減少を提供する量である。本発明の方法によって治療することができる障害に関連する臨床症状は、当業者に周知である。さらに、当業者であれば、対象にある種の利益が提供される限り、治療効果が完全または治癒的である必要はないことを理解するであろう。
【００７６】
本明細書で使用されるとき、「対象」という用語は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類等の哺乳動物および非哺乳動物等であるが、それらに限定されない全ての脊椎動物を含む。
【００７７】
本明細書中で、濃度、量、細胞数、百分率、および他の数値は範囲の形式で提示される。かかる範囲の形式は単に便宜および簡潔さのために使用されるものであり、範囲の限界として明示的に列挙される数値を含むだけでなく、該範囲内に包含されるすべての個々の数値または部分的な範囲も、各数値および部分的な範囲が明示的に列挙されているのと同様に含むと柔軟に解釈されるべきであることも理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１Ａ−Ｂ】（Ａ）ＨＢ１２Ｂ  ＶＫ（配列番号２０）、ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）（配列番号５２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９８７（配列番号６２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９（配列番号６８）、およびＨＢ１２Ｂ−３６（配列番号７０）軽鎖可変領域のアミノ酸配列整列。配列残基は、Ｋａｂａｔに従って付番される。Ｋａｂａｔに従って定められるＣＤＲ残基は、枠で囲まれている。ＨＢ１２Ｂ  ＶＫ（配列番号２０）のＶｅｒｎｉｅｒ、Ｉｎｔｅｒｃｈａｉｎ、およびＣａｎｏｎｉｃａｌ残基  は、明るい灰色でハイライトされている。移植抗体ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）（配列番号５２）可変ドメインに相対的な、ＨＢ１２Ｂ−３６４９８７（配列番号６２）（Ｙ４０Ｆ、Ｋ５３Ｈ、Ｙ９１Ｆ）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９（配列番号６８）（Ｙ４０Ｆ、Ｋ５３Ｈ）、およびＨＢ１２Ｂ−３６（配列番号７０）（Ｙ４０Ｆ）のアミノ酸置換  は、明るい灰色でハイライトされている。（Ｂ）ＨＢ１２Ｂ  ＶＨ（配列番号１８）、ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）、およびＨＢ１２Ｂ−９ｍ（配列番号４４）重鎖可変領域のアミノ酸配列整列。配列残基は、Ｋａｂａｔに従って付番される。Ｋａｂａｔに従って定められるＣＤＲ残基は、枠で囲まれている。ＨＢ１２Ｂ  ＶＨのＶｅｒｎｉｅｒ、Ｉｎｔｅｒｃｈａｉｎ、およびＣａｎｏｎｉｃａｌ残基は、明るい灰色でハイライトされている。移植抗体ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）可変ドメインに相対的な、ＨＢ１２Ｂ−９ｍ（配列番号４４）（Ｌ２０Ｉ、Ｆ２７Ｙ、Ｔ２８Ａ、Ｒ３８Ｉ、Ｖ４９Ｉ、Ｆ６７Ａ、Ｒ７１Ａ、Ｌ８０Ｍ、１９ＩＹ）のアミノ酸置換は、明るい灰色でハイライトされている。
【図２】５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体のＤＳＣプロフィール。
【図３】種々のｐＨでの５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体のコロイド安定性。グラフは、温度の関数として３５０ｎｍでの吸光度を示す。
【図４】種々のｐＨでの５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体の熱安定性。グラフは、温度の関数として３２６ｎｍで測定されたトリプトファン蛍光を示す。
【図５】種々の温度での５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体の熱不安定化率。グラフは、時間の関数として３５０ｎｍでの吸光度を示す。
【図６】種々の賦形剤を含む製剤中の、５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体の熱不安定化率。グラフは、時間の関数として３５０ｎｍでの吸光度を示す。
【図７】種々の濃度のＮａＣｌを含む製剤中の、５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体の熱不安定化率。グラフは、時間の関数として３５０ｎｍでの吸光度を示す。
【図８】種々の濃度のトレハロースを含む製剤中の、５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体の熱不安定化率。グラフは、時間の関数として３５０ｎｍでの吸光度を示す。
【図９】種々の濃度のＮａＣｌおよびトレハロースを含む製剤中の、５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体の熱不安定化率。グラフは、時間の関数として３５０ｎｍでの吸光度を示す。
【図１０】４０℃の種々の５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数としてモノマー濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図１１】４０℃の種々の５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数として凝集体濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図１２】４０℃の種々の５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の断片化率。時間の関数として断片濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図１３】４０℃で測定された、種々の抗体濃度を含む５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数としてモノマー濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図１４】４０℃で測定された、種々の抗体濃度を含む５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤のダイマー形成率。時間の関数としてダイマー濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図１５】４０℃で測定された、種々の抗体濃度を含む５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数としてマルチマー濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図１６】４０℃で測定された、種々の抗体濃度を含む５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の断片化率。時間の関数として断片濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図１７】種々のｐＨでの５５１抗体のＤＳＣプロフィール。
【図１８】種々のｐＨでの５５１抗体のＤＳＣプロフィール。
【図１９】５℃の１０ｍｇ／ｍＬ抗体を含む種々の５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数としてモノマー濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図２０】５℃の１０ｍｇ／ｍＬ抗体を含む種々の５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数としてマルチマー濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図２１】５℃の１０ｍｇ／ｍＬ抗体を含む種々の５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数として総凝集体濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図２２】種々の温度の１０ｍｇ／ｍＬ抗体を含む５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数としてモノマー濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図２３】種々の温度の１０ｍｇ／ｍＬ抗体を含む５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数として総凝集体およびマルチマー濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図２４】種々の温度の１０ｍｇ／ｍＬ抗体を含む５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の断片化率。時間の関数として断片濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図２５】ｐＨ６．０で１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、および４％トレハロースを含む、５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の安定性プロフィール。
【図２６】４時間の振とうに供された、種々の濃度のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含む５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集体形成。最終モノマー濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図２７】４時間の振とうに供された、種々の濃度のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含む５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤中の凝集体形成。最終総凝集体濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図２８】シリンジ中で２４時間の振とうに供された、種々の濃度のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含む５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤中の凝集体形成。最終総凝集体濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図２９】２５℃および４０℃の、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）の存在および非存在下での５５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数として凝集体濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図３０】２５℃および４０℃の、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）の存在および非存在下での５１アフコシル化ヒト化抗ＣＤ１９抗体製剤の凝集率。時間の関数として総マルチマー濃度（総タンパク質の％）を示す。
【図３１】ＡＮ  ＢＬ６、Ｈ９２９、およびＲＰＭＩ８２２６多発性骨髄腫細胞株のＣＤ１３８／ＣＤ１９発現プロフィール。
【図３２】ＡＮＢＬ６培養物中でＣＤ１３８またはＣＤ１９を発現する細胞の画分は、経時的に変化する。時間の関数として、細胞を発現するＣＤ１９およびＣＤ１３８の比率を示す。
【図３３】ＡＮＢＬ６培養物から単離されたＣＤ１９＋ＣＤ１３８−細胞は、軟寒天中のコロニーを形成することができるが、ＣＤ１９−ＣＤ１３８＋細胞はできない。
【図３４】多発性骨髄腫細胞上の抗ＣＤ１９ｍＡｂのＡＤＣＣ活性  抗ＣＤ１９−ａＦｕｃは、選別されていない多発性骨髄腫細胞培養物からＣＤ１９＋細胞を特異的に枯渇させる。
【図３５】５５１アフコシル化抗ＣＤ１９抗体は、ＳＣＩＤマウスにおける骨髄腫異種移植片増殖を抑制する。時間の関数として腫瘍容積を示す。
【図３６】ＰＶＤＦろ過のみに供された抗ＣＤ１９試料バイアルについての粒子数対サイズの両対数プロット。
【図３７】ＰＶＤＦろ過、続いてＰＳ８０の添加に供された抗ＣＤ１９試料バイアルについての粒子数対サイズの両対数プロット。
【図３８】ＰＶＤＦろ過、次いでＰＳ８０の添加、および再び１回のＰＶＤＦろ過に供された抗ＣＤ１９試料バイアルについての粒子数対サイズの両対数プロット。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
６．詳細な説明
本発明は、ヒトＣＤ１９抗原に特異的に結合するキメラ、ヒト、またはヒト化抗体を含む、滅菌された安定な水性製剤を提供する。一実施形態では、本発明は、抗ＣＤ１９マウスモノクローナル抗体、ＨＢ１２ＡおよびＨＢ１２Ｂのキメラおよびヒト化バージョンを含む製剤を提供する。別の実施形態では、本発明は、２００７年９月７日に出願された米国特許出願第１１／８５２，１０６号に記載される抗ＣＤ１９抗体を含む製剤を提供し、この特許の開示は、参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれる。さらなる実施形態では、本発明は、次のうちの１つ以上を媒介することができ、かつ強化されたエフェクター機能を有する、本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む製剤を提供する：補体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＣＤＣ）、抗原依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、およびプログラム細胞死（アポトーシス）。別の実施形態では、本発明の製剤は、複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む、本発明の抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、を含む抗ＣＤ１９抗体を含む。配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変配列、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。ある種の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む安定液体製剤は、ヒト対象への非経口投与に好適である。具体的な実施形態では、本発明の安定液体製剤は、ヒト対象への皮下投与に好適である。
【００８０】
６．１．抗体製剤
具体的な実施形態では、本発明は、ヒトＣＤ１９に特異的に結合し、強化されたエフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＣＤＣ）、および／または抗体依存性食作用）を有する抗体の安定液体製剤を包含し、ここで製剤は、製造、調製、輸送、および長期間の保管中に、非常にわずか〜ゼロの抗体の生物学的活性の喪失と共に、低レベル〜検出不可能なレベルの抗体凝集および／または断片化を示す。また、本発明は、ヒトＣＤ１９に特異的に結合し、強化されたエフェクター機能を有し、かつ増加したインビボ半減期を有する抗体の安定液体製剤も包含し、該製剤は、製造、調製、輸送、および長期間の保管中に、低レベル〜検出不可能なレベルの抗体凝集および／または断片化、ならびに非常にわずか〜ゼロの抗体の生物学的活性の喪失（例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＣＤＣ）、および／または抗体依存性食作用）を示す。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、増加したインビボＡＤＣＣ活性を有する抗ヒトＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、製造、調製、輸送、および長期間の保管中に、低レベル〜検出不可能なレベルの抗体凝集および／または断片化、ならびに非常にわずか〜ゼロの抗体の生物学的活性の喪失を示す。
【００８１】
一実施形態では、本発明の液体製剤は、水性製剤である。具体的な実施形態では、本発明の液体製剤は、水性製剤であり、ここで水性担体は、蒸留水である。
【００８２】
一実施形態では、本発明の製剤は、滅菌されている。
【００８３】
一実施形態では、本発明の製剤は、均一である。
【００８４】
一実施形態では、本発明の製剤は、等張性である。
【００８５】
具体的な実施形態では、本発明は、強化されたエフェクター機能を有する抗ＣＤ１９抗体を含む安定液体製剤を提供する。一実施形態では、本発明の製剤は、２００７年９月７日に出願された米国特許出願第１１／８５２，１０６号に記載される抗ＣＤ１９抗体を含み、この特許の開示は、参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれる。
【００８６】
一実施形態では、本発明の製剤は、本発明の抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン  および配列番号１１１のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ヒトＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【００８７】
本発明は、目的の単一の抗体（その抗体断片を含む）、例えば、ＣＤ１９ポリペプチドに特異的に結合する本発明の抗体を含む安定液体製剤を包含する。また、本発明は、目的の２つ以上の抗体（それらの抗体断片を含む）、例えば、ＣＤ１９ポリペプチド（単数または複数）に特異的に結合する本発明の抗体を含む安定液体製剤も包含する。
【００８８】
一実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約３００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。別の実施形態では、本発明の製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、または約７．５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。さらなる実施形態では、本明細書に記載される製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約１５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【００８９】
一実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも３００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。別の実施形態では、本発明の製剤は、１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬ、または７．５ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、５ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。さらなる実施形態では、本明細書に記載される製剤は、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、または３００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、１５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【００９０】
任意に、本発明の製剤は、緩衝剤、糖類、塩、および界面活性剤等の一般的な賦形剤ならびに／または添加物をさらに含んでもよい。追加的にまたは代替的に、本発明の製剤は、可溶化剤、希釈剤、結合剤、安定剤、塩、親油性溶媒、アミノ酸、キレート剤、防腐剤等であるが、それらに限定されない一般的な賦形剤および／または添加物をさらに含んでもよい。
【００９１】
ある種の実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、および酢酸塩からなる群から選択される。他の実施形態では、糖類賦形剤は、トレハロース、スクロース、マンニトール、マルトース、およびラフィノースからなる群から選択される。さらに他の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート８０、およびＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８からなる群から選択される。また他の実施形態では、塩は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２、およびＣａＣｌ２からなる群から選択される。
【００９２】
任意に、本発明の製剤は、好適な賦形剤、ポリオール、可溶化剤、希釈剤、結合剤、安定剤、親油性溶媒、キレート剤、防腐剤等であるが、それらに限定されない他の一般的な補助構成成分をさらに含んでもよい。
【００９３】
本発明の製剤は、改善されたｐＨ調節を提供するための緩衝剤またはｐＨ調整剤を含む。一実施形態では、本発明の製剤は、約３．０〜約９．０、約４．０〜約８．０、約５．０〜約８．０、約５．０〜約７．０、約５．０〜約６．５、約５．５〜約８．０、約５．５〜約７．０、または約５．５〜約６．５のｐＨを有する。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、または約９．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約６．０のｐＨを有する。
【００９４】
本発明の製剤は、改善されたｐＨ調節を提供するための緩衝またはｐＨ調整剤を含む。一実施形態では、本発明の製剤は、３．０〜９．０、４．０〜８．０、５．０〜８．０、５．０〜７．０、５．０〜６．５、５．５〜８．０、５．５〜７．０、または５．５〜６．５のｐＨを有する。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．５、８．０、８．５、または９．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、６．０のｐＨを有する。
【００９５】
本製剤のｐＨは、概して、本製剤に使用されるべき特定の抗体（その抗体断片を含む）の等電点と等しくあるべきではなく（例えば、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域（フコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない）を含む抗ＣＤ１９抗体の等電点等であるが、それらに限定されない）、約４．０〜約８．０の範囲に及んでもよく、または約５．５〜約６．５の範囲に及んでもよい。
【００９６】
典型的には、緩衝剤は、有機酸もしくは有機塩基または無機酸もしくは無機塩基から調製される塩である。代表的な緩衝剤には、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、もしくはフタル酸の塩等の有機酸塩、トリス、トロメタミン塩酸塩、またはリン酸塩緩衝剤が含まれるが、それらに限定されない。加えて、アミノ酸構成成分はまた、緩衝能力において機能することもできる。緩衝剤として本発明の製剤に利用されてもよい代表的なアミノ酸構成成分には、グリシンおよびヒスチジンが含まれるが、それらに限定されない。ある種の実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、および酢酸塩からなる群から選択される。具体的な実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジンである。別の具体的な実施形態では、緩衝剤は、クエン酸塩である。緩衝剤の純度は、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％であるべきである。本明細書で使用されるとき、ヒスチジンの文脈で「純度」という用語は、例えば、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，１３ｔｈ  ｅｄ．，Ｏ’Ｎｅｉｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄ．（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，２００１）に記載されるような、当技術分野で理解されるヒスチジンの化学的純度を指す。
【００９７】
緩衝剤は、所望のイオン強度および必要とされる緩衝能力に応じて、典型的に、約１ｍＭ〜約２００ｍＭまたは任意の範囲もしくは範囲内の値の濃度で使用される。非経口製剤に用いられる、従来の緩衝剤の通常の濃度は、次に見出すことができる：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅ  １，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５，ｐ．１９４，Ｄｅ  Ｌｕｃａ  ａｎｄ  Ｂｏｙｌａｎ，”Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｍａｌｌ  Ｖｏｌｕｍｅ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｓ”，Ｔａｂｌｅ  ５：Ｃｏｍｍｏｎｌｙ  ｕｓｅｄ  ａｄｄｉｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ。一実施形態では、緩衝剤は、約１ｍＭの、または約５ｍＭの、または約１０ｍＭの、または約１５ｍＭの、または約２０ｍＭの、または約２５ｍＭの、または約３０ｍＭの、または約３５ｍＭの、または約４０ｍＭの、または約４５ｍＭの、または約５０ｍＭの、または約６０ｍＭの、または約７０ｍＭの、または約８０ｍＭの、または約９０ｍＭの、または約１００ｍＭの濃度である。一実施形態では、緩衝剤は、１ｍＭの、または５ｍＭの、または１０ｍＭの、または１５ｍＭの、または２０ｍＭの、または２５ｍＭの、または３０ｍＭの、または３５ｍＭの、または４０ｍＭの、または４５ｍＭの、または５０ｍＭの、または６０ｍＭの、または７０ｍＭの、または８０ｍＭの、または９０ｍＭの、または１００ｍＭの濃度である。具体的な実施形態では、緩衝剤は、約５ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度である。別の具体的な実施形態では、緩衝剤は、５ｍＭ〜２０ｍＭの濃度である。
【００９８】
緩衝剤は、所望のイオン強度および必要とされる緩衝能力に応じて、典型的に、１ｍＭ〜２００ｍＭまたは任意の範囲もしくは範囲内の値の濃度で使用される。非経口製剤に用いられる、従来の緩衝剤の通常の濃度は、次に見出すことができる：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅ  １，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５，ｐ．１９４，Ｄｅ  Ｌｕｃａ  ａｎｄ  Ｂｏｙｌａｎ，”Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｍａｌｌ  Ｖｏｌｕｍｅ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｓ”，Ｔａｂｌｅ  ５：Ｃｏｍｍｏｎｌｙ  ｕｓｅｄ  ａｄｄｉｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ。一実施形態では、緩衝剤は、１ｍＭの、または５ｍＭの、または１０ｍＭの、または１５ｍＭの、または２０ｍＭの、または２５ｍＭの、または３０ｍＭの、または３５ｍＭの、または４０ｍＭの、または４５ｍＭの、または５０ｍＭの、または６０ｍＭの、または７０ｍＭの、または８０ｍＭの、または９０ｍＭの、または１００ｍＭの濃度である。一実施形態では、緩衝剤は、１ｍＭの、または５ｍＭの、または１０ｍＭの、または１５ｍＭの、または２０ｍＭの、または２５ｍＭの、または３０ｍＭの、または３５ｍＭの、または４０ｍＭの、または４５ｍＭの、または５０ｍＭの、または６０ｍＭの、または７０ｍＭの、または８０ｍＭの、または９０ｍＭの、または１００ｍＭの濃度である。具体的な実施形態では、緩衝剤は、５ｍＭ〜５０ｍＭの濃度である。別の具体的な実施形態では、緩衝剤は、５ｍＭ〜２０ｍＭの濃度である。
【００９９】
ある種の実施形態では、本発明の製剤は、緩衝剤を含む。一実施形態では、該緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、および酢酸塩からなる群から選択される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、緩衝剤としてヒスチジンを含む。
【０１００】
一実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約１ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約１００ｍＭ、少なくとも約１５０ｍＭ、または少なくとも約２００ｍＭのヒスチジンを含む。別の実施形態では、本発明の製剤は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１ｍＭ〜約７５ｍＭ、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約７５ｍＭ、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約４０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約７５ｍＭ、約２０ｍＭ〜約５０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約４０ｍＭ、または約２０ｍＭ〜約３０ｍＭのヒスチジンを含む。本発明のさらなる実施形態では、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、または約２００ｍＭのヒスチジンを含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約１０ｍＭのヒスチジンを含む。
【０１０１】
一実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも１ｍＭ、少なくとも５ｍＭ、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも５０ｍＭ、少なくとも７５ｍＭ、少なくとも１００ｍＭ、少なくとも１５０ｍＭ、または少なくとも２００ｍＭのヒスチジンを含む。別の実施形態では、本発明の製剤は、１ｍＭ〜２００ｍＭ、１ｍＭ〜１５０ｍＭ、１ｍＭ〜１００ｍＭ、１ｍＭ〜７５ｍＭ、１０ｍＭ〜２００ｍＭ、１０ｍＭ〜１５０ｍＭ、１０ｍＭ〜１００ｍＭ、１０ｍＭ〜７５ｍＭ、１０ｍＭ〜５０ｍＭ、１０ｍＭ〜４０ｍＭ、１０ｍＭ〜３０ｍＭ、２０ｍＭ〜７５ｍＭ、２０ｍＭ〜５０ｍＭ、２０ｍＭ〜４０ｍＭ、または２０ｍＭ〜３０ｍＭのヒスチジンを含む。本発明のさらなる実施形態では、１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１５０ｍＭ、または２００ｍＭのヒスチジンを含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約１０ｍＭのヒスチジンを含む。
【０１０２】
ある種の実施形態では、本発明の製剤は、炭水化物賦形剤を含む。炭水化物賦形剤は、例えば、粘度強化剤、安定剤、充填剤、可溶化剤、および／またはそれらの同等物として作用することができる。炭水化物賦形剤は、概して、約１重量または容量％〜約９９重量または容量％で存在する。一実施形態では、炭水化物賦形剤は、約０．１％〜約２０％で存在する。別の実施形態では、炭水化物賦形剤は、約０．１％〜約１５％で存在する。具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、約０．１％〜約５％、または約１％〜約１５％、または約２％〜約１０％、または約２％〜約８％、または約２％〜約６％で存在する。具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、０．１％〜５％、または１％〜１５％、または２％〜１０％、または２％〜８％、または２％〜６％で存在する。さらに別の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、約０．１％〜約１０％で存在する。さらに別の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、約１％〜約８％で存在する。また別の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、約２％〜約６％で存在する。さらに他の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、約１％で、または約１．５％で、または約２％で、または約２．５％で、または約３％で、または約４％で、または約５％で、または約１０％で、または約１５％で、または約２０％で存在する。
【０１０３】
ある種の実施形態では、本発明の製剤は、炭水化物賦形剤を含む。炭水化物賦形剤は、例えば、粘度強化剤、安定剤、充填剤、可溶化剤、および／またはそれらの同等物として作用することができる。炭水化物賦形剤は、概して、１重量または容量％〜９９重量または容量％で存在する。一実施形態では、炭水化物賦形剤は、０．１％〜２０％で存在する。別の実施形態では、炭水化物賦形剤は、０．１％〜１５％で存在する。具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、０．１％〜５％、または１％〜１５％、または２％〜１０％、または２％〜８％、または２％〜６％で存在する。具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、０．１％〜５％、または１％〜１５％、または２％〜１０％、または２％〜８％、または２％〜６％で存在する。さらに別の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、０．１％〜１０％で存在する。さらに別の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、１％〜８％で存在する。また別の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、２％〜６％で存在する。さらに他の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、１％で、または１．５％で、または２％で、または２．５％で、または３％で、または４％で、または５％で、または１０％で、または１５％で、または２０％で存在する。
【０１０４】
本発明の製剤における使用に好適な炭水化物賦形剤には、例えば、果糖、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース等の単糖類、ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオース等の二糖類、ラフィノース、メレチトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプン等の多糖類、およびマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール  ソルビトール（グルシトール）等のアルジトールが含まれる。一実施形態では、本発明に使用するための炭水化物賦形剤は、スクロース、トレハロース、ラクトース、マンニトール、およびラフィノースからなる群から選択される。具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、トレハロースである。別の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、マンニトールである。また別の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、スクロースである。さらに別の具体的な実施形態では、炭水化物賦形剤は、ラフィノースである。炭水化物賦形剤の純度は、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％であるべきである。
【０１０５】
一実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約８％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％のトレハロースを含む。別の実施形態では、本発明の製剤は、約１％〜約３０％、約１％〜約２０％、約１％〜約１０％、約２％〜約３０％、約２％〜約２０％、約２％〜約１０％、約２％〜約８％、約２％〜約６％、または約３％〜約６％のトレハロースを含む。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約８％、約２０％、約３０％、または約４０％のトレハロースを含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約４％のトレハロースを含む。
【０１０６】
一実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、または少なくとも４０％のトレハロースを含む。別の実施形態では、本発明の製剤は、１％〜３０％、１％〜２０％、１％〜１０％、２％〜３０％、２％〜２０％、２％〜１０％、２％〜８％、２％〜６％、または３％〜６％のトレハロースを含む。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、１％、２％、３％、４％、５％、６％、８％、２０％、３０％、または４０％のトレハロースを含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、４％のトレハロースを含む。
【０１０７】
一実施形態では、本発明の製剤は、賦形剤を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、糖、塩、界面活性剤、アミノ酸、ポリオール、キレート剤、乳化剤、および防腐剤からなる群から選択される少なくとも１つの賦形剤を含む。一実施形態では、本発明の製剤は、塩を含む。一実施形態では、本発明の製剤は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２、およびＭｇＣｌ２からなる群から選択される塩を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、ＮａＣｌを含む。
【０１０８】
一実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約８０ｍＭ、少なくとも約１００ｍＭ、少なくとも約１２５ｍＭ、少なくとも約１５０ｍＭ、少なくとも約１７５ｍＭ、少なくとも約２００ｍＭ、または少なくとも約３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。さらなる実施形態では、本明細書に記載される製剤は、約１０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜約３００ｍＭ、約２５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約２５ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約６０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約６０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約６０ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約６０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１００ｍＭ〜約３００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭ、または約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、約１０ｍＭ、約２５ｍＭ、約５０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１７５ｍＭ、約２００ｍＭ、または約３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、７５ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
【０１０９】
一実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも２５ｍＭ、少なくとも５０ｍＭ、少なくとも７５ｍＭ、少なくとも８０ｍＭ、少なくとも１００ｍＭ、少なくとも１２５ｍＭ、少なくとも１５０ｍＭ、少なくとも１７５ｍＭ、少なくとも２００ｍＭ、または少なくとも３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。さらなる実施形態では、本明細書に記載される製剤は、１０ｍＭ〜３００ｍＭ、１０ｍＭ〜２００ｍＭ、１０ｍＭ〜１７５ｍＭ、１０ｍＭ〜１５０ｍＭ、２５ｍＭ〜３００ｍＭ、２５ｍＭ〜２００ｍＭ、２５ｍＭ〜１７５ｍＭ、２５ｍＭ〜１５０ｍＭ、５０ｍＭ〜３００ｍＭ、５０ｍＭ〜２００ｍＭ、５０ｍＭ〜１７５ｍＭ、５０ｍＭ〜１５０ｍＭ、６０ｍＭ〜３００ｍＭ、６０ｍＭ〜２００ｍＭ、６０ｍＭ〜１７５ｍＭ、６０ｍＭ〜１５０ｍＭ、１００ｍＭ〜３００ｍＭ、１００ｍＭ〜２００ｍＭ、１００ｍＭ〜１７５ｍＭ、または１００ｍＭ〜１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、１０ｍＭ、２５ｍＭ、５０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、１００ｍＭ、１２５ｍＭ、１５０ｍＭ、１７５ｍＭ、２００ｍＭ、または３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、７５ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
【０１１０】
本発明の製剤は、界面活性剤をさら含んでもよい。本明細書で使用される「界面活性剤」という用語は、両親媒性構造を有する有機物質を指し、つまり、それらは相反する溶解性傾向、典型的には、油溶性炭化水素鎖および水溶性イオン基の基からなる。界面活性剤は、表面活性部分の電荷に応じて、陰イオン性、陽イオン性、および非イオン性界面活性剤に分類することができる。界面活性剤は、しばしば、種々の薬学的組成物および生物学的物質の調製物のための湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、および分散剤として使用される。ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０または８０）；ポリオキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−、またはセチル−ベタイン；ラウロアミドプロピル−、コカミドプロピル−、リノレアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、またはイソステアラミドプロピル−ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、またはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−、またはジナトリウムメチルオレイル−タウラート、およびＭＯＮＡＱＵＡ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、およびエチレンおよびプロピレングリコールのコポリマー（例えば、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）、ＰＦ６８等）等の薬学的に許容される界面活性剤は、凝集を減少させるために本発明の製剤に任意に添加することができる。界面活性剤は、ポンプまたはプラスチック容器を使用して製剤を投与する場合に、特に有用である。薬学的に許容される界面活性剤の存在は、タンパク質が凝集する傾向を軽減する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約０．００１％〜約１％、または約０．００１％〜約０．１％、または約０．０１％〜約０．１％の範囲の濃度でポリソルベートを含む。他の具体的な実施形態では、本発明の製剤は、０．００１％、または０．００２％、または０．００３％、または０．００４％、または０．００５％、または０．００６％、または０．００７％、または０．００８％、または０．００９％、または０．０１％、または０．０１５％、または０．０２％の濃度でポリソルベートを含む。別の具体的な実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート８０である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、０．００１％〜１％、または０．００１％〜０．１％、または０．０１％〜０．１％の範囲の濃度でポリソルベートを含む。他の具体的な実施形態では、本発明の製剤は、０．００１％、または０．００２％、または０．００３％、または０．００４％、または０．００５％、または０．００６％、または０．００７％、または０．００８％、または０．００９％、または０．０１％、または０．０１５％、または０．０２％の濃度でポリソルベートを含む。別の具体的な実施形態では、ポリソルベ���トは、ポリソルベート８０である。
【０１１１】
一実施形態では、本発明の製剤は、界面活性剤を含む。一実施形態では、本発明の製剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、またはポリソルベート８０を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、ポリソルベート８０を含む。
【０１１２】
一実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約０．００１％、少なくとも約０．００２％、少なくとも約０．００５％、少なくとも約０．０１％、少なくとも約０．０２％、少なくとも約０．０５％、少なくとも約０．１％、少なくとも約０．２％、または少なくとも約０．５％のポリソルベート８０を含む。別の実施形態では、本発明の製剤は、約０．００１％〜約０．５％、約０．００１％〜約０．２％、約０．００１％〜約０．１％、約０．００１％〜約０．０５％、約０．００２％〜約０．５％、約０．００２％〜約０．２％、約０．００２％〜約０．１  ％、約０．００２％〜約０．０５％、約０．００５％〜約０．５％、約０．００５％〜約０．２％、約０．００５％〜約０．１％、約０．００５％〜約０．０５％、約０．０１％〜約０．５％、約０．０１％〜約０．２％、約０．０１％〜約０．１％、または約０．０１％〜約０．０５％のポリソルベート８０を含む。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００５％、約０．０１％、約０．０２％、約０．０５％、約０．１％、約０．２％、および約０．５％のポリソルベート８０を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約０．０２％のポリソルベート８０を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約０．０４％のポリソルベート８０を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、約０．０５％のポリソルベート８０を含む。
【０１１３】
一実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも０．００１％、少なくとも０．００２％、少なくとも０．００５％、少なくとも０．０１％、少なくとも０．０２％、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、または少なくとも０．５％のポリソルベート８０を含む。別の実施形態では、本発明の製剤は、０．００１％〜０．５％、０．００１％〜０．２％、０．００１％〜０．１％、０．００１％〜０．０５％、０．００２％〜０．５％、０．００２％〜０．２％、０．００２％〜０．１％、０．００２％〜０．０５％、０．００５％〜０．５％、０．００５％〜０．２％、０．００５％〜０．１％、０．００５％〜０．０５％、０．０１％〜０．５％、０．０１％〜０．２％、０．０１％〜０．１％、または０．０１％〜０．０５％のポリソルベート８０を含む。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、０．００１％、０．００２％、０．００５％、０．０１％、０．０２％、０．０５％、０．１％、０．２％、および０．５％のポリソルベート８０を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、０．０２％のポリソルベート８０を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、０．０４％のポリソルベート８０を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、０．０５％のポリソルベート８０を含む。
【０１１４】
任意に、本発明の製剤は、希釈剤、結合剤、安定剤、親油性溶媒、防腐剤、アジュバント等を含むが、それらに限定されない他の一般的な賦形剤および／または添加物をさらに含んでもよい。薬学的に許容される賦形剤および／または添加物が、本発明の製剤に使用されてもよい。薬学的に許容されるキレート剤等（例えば、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、またはＥＧＴＡ等であるが、それらに限定されない）の、一般的に使用される賦形剤／添加物を、凝集を減少させるために本発明の製剤に任意に添加することができる。これらの添加物は、ポンプまたはプラスチック容器を使用して製剤を投与する場合に、特に有用である。
【０１１５】
フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、六水和物等であるが、それらに限定されない）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、およびチメロサール、またはそれらの混合物等の防腐剤は、任意に、約０．００１％〜約５％または任意の範囲もしくは範囲内の値等の任意の好適な濃度で本発明の製剤に添加することができる。本発明の製剤に使用される防腐剤の濃度は、抗菌効果を得るために十分な濃度である。かかる濃度は、選択される防腐剤に応じ、当業者によって容易に決定される。
【０１１６】
本発明の製剤に利用されてもよい他の企図される賦形剤／添加物には、例えば、香料剤、抗菌剤、甘味料、酸化防止剤、帯電防止剤、リン脂質もしくは脂肪酸等の脂質、コレステロール等のステロイド、血清アルブミン等のタンパク質賦形剤（ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組み換えヒトアルブミン（ｒＨＡ））、ゼラチン、カゼイン、ナトリウム等の塩形成対イオンが含まれる。本発明の製剤における使用に好適な、これらのおよびさらなる既知の薬学的賦形剤および／または添加物は、例えば、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，（２００５）に、および”Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”，６０ｔｈ  ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ．（２００５）に列挙されるように、当技術分野で既知である。Ｆｃ変異型タンパク質の投与の様式、溶解性、および／または安定性に好適な、薬学的に許容される担体は、当技術分野で周知の通り、または本明細書に記載される通り、通常に選択することができる。
【０１１７】
当業者であれば、本発明の製剤がヒト血液と等張であり得ること、つまり本発明の製剤がヒト血液と本質的に同一の浸透圧を有することを理解するであろう。かかる等張性製剤は、概して、約２５０ｍＯＳｍ〜約３５０ｍＯＳｍの浸透圧を有するであろう。等張性は、例えば、蒸気圧または製氷型浸透圧計を用いることによって測定することができる。製剤の張性は、張性調節剤の使用によって調節される。「張性調節剤」とは、製剤の等張性を提供するために製剤に添加することができるような、薬学的に許容される不活性物質である。本発明に好適な張性調節剤には、糖類、塩、およびアミノ酸が含まれるが、それらに限定されない。
【０１１８】
ある種の実施形態では、本発明の製剤は、約１００ｍＯＳｍ〜約１２００ｍＯＳｍ、または約２００ｍＯＳｍ〜約１０００ｍＯＳｍ、または約２００ｍＯＳｍ〜約８００ｍＯＳｍ、または約２００ｍＯＳｍ〜約６００ｍＯＳｍ、または約２５０ｍＯＳｍ〜約５００ｍＯＳｍ、または約２５０ｍＯＳｍ〜約４００ｍＯＳｍ、または約２５０ｍＯＳｍ〜約３５０ｍＯＳｍの浸透圧を有する。
【０１１９】
ある種の実施形態では、本発明の製剤は、１００ｍＯＳｍ〜１２００ｍＯＳｍ、または２００ｍＯＳｍ〜１０００ｍＯＳｍ、または２００ｍＯＳｍ〜８００ｍＯＳｍ、または２００ｍＯＳｍ〜６００ｍＯＳｍ、または２５０ｍＯＳｍ〜５００ｍＯＳｍ、または２５０ｍＯＳｍ〜４００ｍＯＳｍ、または２５０ｍＯＳｍ〜３５０ｍＯＳｍの浸透圧を有する。
【０１２０】
本発明の製剤の種々の構成成分のうちの任意の１つまたは任意の組み合わせの濃度は、最終製剤の所望の張性を達成するために調節される。例えば、炭水化物賦形剤と抗体との比率は、当技術分野で既知の方法に従って調節されてもよい（例えば、米国特許第６，６８５，９４０号）。ある種の実施形態では、炭水化物賦形剤と抗体とのモル比は、約１００モル〜約１０００モルの炭水化物賦形剤対約１モルの抗体、約２００モル〜約６０００モルの炭水化物賦形剤対約１モルの抗体、または約１００モル〜約５１０モルの炭水化物賦形剤対約１モルの抗体、または約１００モル〜約６００モルの炭水化物賦形剤対約１モルの抗体であってもよい。
【０１２１】
本発明の製剤の種々の構成成分のうちの任意の１つまたは任意の組み合わせの濃度は、最終製剤の所望の張性を達成するために調節される。例えば、炭水化物賦形剤と抗体との比率は、当技術分野で既知の方法に従って調節されてもよい（例えば、米国特許第６，６８５，９４０号）。ある種の実施形態では、炭水化物賦形剤と抗体とのモル比は、１００モル〜１０００モルの炭水化物賦形剤対１モルの抗体、または２００モル〜６０００モルの炭水化物賦形剤対１モルの抗体、または１００モル〜５１０モルの炭水化物賦形剤対１モルの抗体、または１００モル〜６００モルの炭水化物賦形剤対１モルの抗体であってもよい。
【０１２２】
また、最終製剤の所望の等張性は、製剤の塩濃度を調節することによって達成することもできる。張性調節剤として薬学的に許容され、かつ本発明に好適である塩には、塩化ナトリウム、コハク酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、および塩化カルシウムが含まれるが、それらに限定されない。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、および／またはＣａＣｌ２を含む。一実施形態では、ＮａＣｌの濃度は、約７５ｍＭ〜約１５０ｍＭである。別の実施形態では、ＭｇＣｌ２の濃度は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭである。張性調節剤として薬学的に許容され、かつ本発明に好適であるアミノ酸には、プロリン、アラニン、Ｌ−アルギニン、アスパラギン、Ｌ−アスパラギン酸、グリシン、セリン、リシン、およびヒスチジンが含まれるが、それらに限定されない。
【０１２３】
一実施形態では、本発明の製剤は、ヒスチジン、塩化ナトリウム、トレハロース、およびポリソルベート８０を含む。一実施形態では、本発明の製剤は、ヒスチジン、塩化ナトリウム、およびトレハロースを含む。
【０１２４】
一実施形態では、本発明の製剤は、ヒスチジン、塩化ナトリウム、およびトレハロースを含む。一実施形態では、本発明の製剤は、約５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭ〜約３００ｍＭ塩化ナトリウム、および約０．３％〜約１０％トレハロースを含み、該製剤は、約５．０〜約７．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約５ｍＭ〜約５０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ塩化ナトリウム、および約１％〜約８％トレハロースを含み、該製剤は、約５．５〜約６．５のｐＨを有する。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、および約４％トレハロースを含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。
【０１２５】
一実施形態では、本発明の製剤は、ヒスチジン、塩化ナトリウム、トレハロース、およびポリソルベート８０を含む。一実施形態では、本発明の製剤は、約５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭ〜約３００ｍＭ塩化ナトリウム、約０．３％〜約１０％トレハロース、および約０．００５％〜約０．１％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、約５．０〜約７．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約５ｍＭ〜約５０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１％〜約８％トレハロース、および約０．０１％〜約０．０５％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、約５．５〜約６．５のｐＨを有する。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。
【０１２６】
一実施形態では、本発明の製剤は、ヒスチジン、塩化ナトリウム、およびトレハロースを含む。一実施形態では、本発明の製剤は、５ｍＭ〜１００ｍＭヒスチジン、１０ｍＭ〜３００ｍＭ塩化ナトリウム、および０．３％〜１０％トレハロースを含み、該製剤は、５．０〜７．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、５ｍＭ〜５０ｍＭヒスチジン、５０ｍＭ〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、および１％〜８％トレハロースを含み、該製剤は、５．５〜６．５のｐＨを有する。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースを含み、該製剤は、６．０のｐＨを有する。
【０１２７】
一実施形態では、本発明の製剤は、ヒスチジン、塩化ナトリウム、トレハロース、およびポリソルベート８０を含む。一実施形態では、本発明の製剤は、５ｍＭ〜１００ｍＭヒスチジン、１０ｍＭ〜３００ｍＭ塩化ナトリウム、０．３％〜１０％トレハロース、および０．００５％〜０．１％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、５．０〜７．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、５ｍＭ〜５０ｍＭヒスチジン、５０ｍＭ〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１％〜８％トレハロース、および０．０１％〜０．０５％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、５．５〜６．５のｐＨを有する。さらなる実施形態では、本発明の製剤は、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、６．０のｐＨを有する。
【０１２８】
一実施形態では、本発明の製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約２０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約２０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約２０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０１％、約０．０２％、約０．０４％、約０．０８％、または約０．１％ポリソルベート８０、および約６．０のｐＨを含む。
【０１２９】
一実施形態では、本発明の製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、および約４％トレハロースを含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、および約４％トレハロースを含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、および約４％トレハロースを含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１３０】
一実施形態では、本発明の製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、最大１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１３１】
一実施形態では、本発明の製剤は、１ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースを含み、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースを含み、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースを含み、該製剤は、６．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１３２】
一実施形態では、本発明の製剤は、１ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含み、該製剤は、６．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１３３】
一実施形態では、本発明の製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、および約４％トレハロースからなり、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、および約４％トレハロースからなり、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、および約４％トレハロースからなり、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１３４】
一実施形態では、本発明の製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、約５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、約１０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約４％トレハロース、および約０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、約６．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１３５】
一実施形態では、本発明の製剤は、１ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースからなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースからなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースからなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１３６】
一実施形態では、本発明の製剤は、１０、２５、５０、または１００ｍｇ／ｍＬ６０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースからなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースからなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースからなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースからなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロースからなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１３７】
一実施形態では、本発明の製剤は、１ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１３８】
一実施形態では、本発明の製剤は、１０、２５、５０、または１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、１０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。別の実施形態では、本発明の製剤は、１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０からなり、該製剤は、６．０のｐＨを有する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１３９】
一実施形態では、本発明の製剤は、実質的に内毒素および／または関連する発熱物質がない、パイロジェン除去製剤である。内毒素には、微生物内に限定されていて微生物が破壊されるかまたは死滅した場合にのみ放出される毒素が含まれる。また、発熱物質には、細菌および他の微生物の外膜由来の発熱誘発性熱安定物質（糖タンパク質）が含まれる。これらの物質の双方は、ヒトに投与された場合に、発熱、低血圧、およびショックを引き起こし得る。潜在的な弊害に起因して、低量の内毒素でさえ、静脈内に投与される医薬品溶液から除去される必要がある。Ｆｏｏｄ＆Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（「ＦＤＡ」）は、静脈内薬物投与の１回の１時間の期間中、５内毒素単位（ＥＵ）／用量／キログラム体重の上限を定めている（Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｆｏｒｕｍ  ２６（１）：２２３（２０００））。抗体の場合のように、治療タンパク質が数百または数千ミリグラム／キログラム体重の量で投与される場合、有害かつ危険な内毒素は微量でさえ除去される必要がある。ある種の具体的な実施形態では、組成物中の内毒素およびパイロジェンレベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、または５ＥＵ／ｍｇ未満、または１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である
【０１４０】
インビボ投与に使用される場合、本発明の製剤は、滅菌されているべきである。
本発明の製剤は、滅菌されたろ過、放射線等を含む種々の滅菌法によって滅菌されてもよい。一実施形態では、抗体製剤は、滅菌済み０．２２ミクロンフィルターによりフィルター滅菌されている。注射のための滅菌組成物は、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，（２００５）に記載される従来の薬務に従って製剤化することができる。本明細書に開示される製剤等、抗体を含む製剤は、通常、凍結乾燥形態でまたは溶液中で保管されるであろう。抗体を含む滅菌された組成物は、概して、滅菌アクセスポート、例えば、皮下注射針によって貫通可能な栓等の、製剤の取り込みを可能にするアダプタを有する静注液バッグまたはバイアルを有する容器に配置されることが企図される。一実施形態では、本発明の組成物は、プレフィルドシリンジとして提供される。一実施形態では、シリンジは、高透明度、低水蒸気透過性、および低酸素透過性を有し、タングステン残留物がない。別の実施形態では、本発明の組成物は、「ウルトラ−１００」シリンジ等のプレフィルドタングステン除去シリンジ中で提供される。別の実施形態では、シリンジは、Ｃｌｅａｒｊｅｃｔ（商標）（Ｇｅｒｅｓｈｅｉｍｅｒ，ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ）またはＩｎＪｅｎｔｌｅ（商標）（ＳＣＨＯＴＴ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）シリンジである。
【０１４１】
６．２．製剤の安定性
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を安定化させる。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の凝集を予防する。別の実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の断片化を予防する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１４２】
一実施形態では、本発明の製剤は、約４０℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管時に安定である。一実施形態では、本発明の製剤は、約４０℃で少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管時に安定である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中での保管時に安定である。
【０１４３】
一実施形態では、本発明の製剤は、約２５℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管時に安定である。一実施形態では、本発明の製剤は、約２５℃で少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管時に安定である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中での保管時に安定である。
【０１４４】
一実施形態では、本発明の製剤は、約５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間の保管時に安定である。一実施形態では、本発明の製剤は、約５℃で少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間の保管時に安定である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中での保管時に安定である。
【０１４５】
一実施形態では、本発明の製剤は、約４０℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の保管時に安定である。一実施形態では、本発明の製剤は、約４０℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の保管時に安定である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中での保管時に安定である。
【０１４６】
一実施形態では、本発明の製剤は、約２５℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の保管時に安定である。一実施形態では、本発明の製剤は、約２５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の保管時に安定である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中での保管時に安定である。
【０１４７】
一実施形態では、本発明の製剤は、約５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間の保管時に安定である。一実施形態では、本発明の製剤は、約５℃で約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間の保管時に安定である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中での保管時に安定である。
【０１４８】
一実施形態では、本発明の製剤は、約−１０℃、約−１５℃、約−２５℃、約−３０℃、約−３５℃、約−３５℃、約−４５℃、約−５０℃、約−５５℃、約−６０℃、約−６５℃、約−７０℃約−７５℃、約−８０℃での保管時に安定である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、これらの温度で、プレフィルドシリンジ中での保管時に安定である。
【０１４９】
本発明は、本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む安定液体製剤を提供する。該抗体の安定性は、ＨＰＳＥＣ、逆相クロマトグラフィー、静的光散乱（ＳＬＳ）、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）、円偏光二色性（ＣＤ）、尿素アンフォールディング技術、内因性トリプトファン蛍光、示差走査熱量測定、および／またはＡＮＳ結合技術によって測定されたときの、参照抗体を含む参照製剤と比較した凝集、分解、または断片化の程度によって査定することができる。例えば、参照製剤は、７５ｍＭＮａＣｌおよび４％トレハロースを含有する１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ６．０）中、１０ｍｇ／ｍＬの参照抗体抗体（その抗体断片を含む）（例えば、１６Ｃ４可変領域および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域（フコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない）を含む抗体等であるが、それらに限定されない）からなる、−７０℃で凍結された参照基準であってもよく、その参照製剤は、ＨＰＳＥＣによって規則的に単一のモノマーピーク（例えば、９５％領域以上）をもたらす。ある種の実施形態では、参照製剤は、その安定性が試験される製剤と同一であり、すなわち参照製剤は、安定性試験中、参照製剤をその元の状態で保存するために、−７０℃で凍結されて保管されてもよい。例えば、４０℃で保管された製剤中のＣＤ１９抗原結合活性のあらゆる喪失を査定するための参照基準は、−７０℃で３０日間保管された同一製剤であってもよい。また、抗体（その抗体断片を含む）を含む製剤の全体的安定性は、例えば、単離された抗原分子を用いるＥＬＩＳＡおよび放射免疫測定法を含む、種々の免疫学的検定によって査定されてもよい。さらに、抗体を含む製剤の安定性はまた、抗体の機能的特徴を測定するように設計された種々の検定、例えば、抗原結合親和性、インビトロＡＤＣＣ活性、インビボ除去活性、インビトロＣＤＣ活性を測定するように設計された検定を用いて査定されてもよい。
【０１５０】
一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約４０℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間保管された。一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約４０℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間保管された。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１５１】
一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約２５℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間保管された。一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約２５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間保管された。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１５２】
一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間保管された。一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約５℃で少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間保管された。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１５３】
一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約４０℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間保管された。一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約４０℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間保管された。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１５４】
一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約２５℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間保管された。一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約２５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間保管された。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１５５】
一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間保管された。一実施形態では、本発明の製剤は、参照抗体のＣＤ１９結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％であるＣＤ１９結合活性を有する抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、約５℃で約約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間保管された。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１５６】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約４０℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約４０℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。本明細書で使用されるとき、「多くて」および「以下」という用語は、同一の意味を有する。
【０１５７】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約４０℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約４０℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１５８】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約２５℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約２５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１５９】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約５℃で少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１６０】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約４０℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約４０℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１６１】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約２５℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約２５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１６２】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、ここで抗体は、製剤の約５℃で約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間の保管中に、そのＣＤ１９結合活性の多くて５０％、多くて４０％、多くて３０％、多くて２０％、多くて１０％、多くて５％、または多くて１％を失う。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１６３】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約４０℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管時に凝集体を形成する。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約４０℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管時に凝集体を形成する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１６４】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約２５℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管時に凝集体を形成する。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約２５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管時に凝集体を形成する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１６５】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間の保管時に凝集体を形成する。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約５℃で少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間の保管時に凝集体を形成する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１６６】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約４０℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の保管時に凝集体を形成する。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約４０℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の保管時に凝集体を形成する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１６７】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約２５℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の保管時に凝集体を形成する。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約２５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の保管時に凝集体を形成する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１６８】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間の保管時に凝集体を形成する。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＨＰＳＥＣによって決定されたとき、約５℃で約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間の保管時に凝集体を形成する。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１６９】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約４０℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管時に断片化される。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約４０℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管時に断片化される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１７０】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約２５℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管時に断片化される。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約２５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管時に断片化される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１７１】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間の保管時に断片化される。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約５℃で少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間の保管時に断片化される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１７２】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約４０℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の保管時に断片化される。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約４０℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の保管時に断片化される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１７３】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約２５℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の保管時に断片化される。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約２５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の保管時に断片化される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１７４】
一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間の保管時に断片化される。一実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該抗体の１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満は、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって決定されたとき、約５℃で約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間の保管時に断片化される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１７５】
一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約４０℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管時に透明および無色である。一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約４０℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管時に透明および無色である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１７６】
一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約２５℃で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の保管時に透明および無色である。一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約２５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の保管時に透明および無色である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１７７】
一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約５℃で少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間の保管時に透明および無色である。一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約５℃で少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間の保管時に透明および無色である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１７８】
一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約４０℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の保管時に透明および無色である。一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約４０℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の保管時に透明および無色である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１７９】
一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約２５℃で約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の保管時に透明および無色である。一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約２５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の保管時に透明および無色である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１８０】
一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約５℃で約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間の保管時に透明および無色である。一実施形態では、本発明の製剤は、目視検査によって決定されたとき、約５℃で約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間の保管時に透明および無色である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１８１】
ある種の実施形態では、本発明の製剤は、例えば、室温もしくは４℃での長期間の（例えば、１週間、１ヶ月間、６ヶ月間、１年間、２年間、３年間、または５年間等であるが、それらに限定されない）または３８℃〜４２℃等での昇温で一定期間の（１週間、２週間、３週間、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、または６ヶ月間等であるが、それらに限定されない）保管時に改善された凝集プロフィールを維持する。ある種の実施形態では、製剤は、最大１０％、または最大２０％、または最大３０％、または最大４０％、または最大５０％、または最大６０％、または最大７０％、または最大８０％、または最大９０％、または最大１００％の相対湿度を含むが、それらに限定されない多種多様の湿度条件で光に曝露されるか、暗所に保管されながらの保管時に改善された凝集プロフィールを維持する。ことは当技術分野で理解されるであろう。「周囲」条件という用語は、概して、光に曝露されながら１０％〜６０％の相対湿度で、約２０℃の温度を指す。同様に、約１０％未満の相対湿度で約２℃〜約８℃の温度は、集団的に「４℃」または「５℃」と称され、約６０％の相対湿度で約２３℃〜約２７℃の温度は、集団的に「２５℃」と称され、約７５％の相対湿度で約３８℃〜約４２℃の温度は、集団的に「４０℃」と称される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。
【０１８２】
ある種の実施形態では、４℃で少なくとも１ヶ月間の保管後、本発明の製剤は、粒子マルチサイザーによって決定されたとき、直径２−４μｍの約３．４Ｅ＋５粒子／ｍＬ未満、直径４−１０μｍの約４．０Ｅ＋４粒子／ｍＬ未満、直径１０−２０μｍの約４．２Ｅ＋３粒子／ｍＬ未満、直径２０−３０μｍの約５．０Ｅ＋２粒子／ｍＬ未満、直径３０−４０μｍの約７．５Ｅ＋１粒子／ｍＬ未満、および直径４０−６０μｍの約９．４粒子／ｍＬ未満の粒子プロフィールを含む（または凝集断片としての粒子プロフィールからなる）。ある種の実施形態では、本発明の製剤は、４０μｍを超える、または３０μｍを超える検出可能な粒子を含有しない。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。
【０１８３】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の保管安定性を強化するために、界面活性剤が製剤に添加されてもよい。かかる界面活性剤を含有する本発明の製剤は、種々の保管条件下にありながら、長期間にわたってさえも強化された保管安定性を有することが見出されている。この強化された安定性は、抗ＣＤ１９抗体の純度を保持しながら、保管された製剤中の粒子形成を阻害することを含んでもよい。この強化された安定性は、種々の条件下での抗ＣＤ１９抗体の活性の保持をさらに含んでもよい。ある種の実施形態では、本発明の製剤は、界面活性剤、ポリソルベート８０を含む。別の実施形態では、ポリソルベート８０は、重量／容量で約０．０１％、約０．０２％、約０．０４％、約０．０８％、または約０．１％ポリソルベート８０等の、組成物を保管安定化させるために十分な量で抗ＣＤ１９抗体製剤に添加される。本明細書による「保管安定化」とは、組成物の純度を保持しながら、経時的なおよび保管条件下での本発明の製剤中の汚染物質または粒子の産生を、薬学的に許容されるレベル未満に阻害することを意味する。
【０１８４】
タンパク質製剤（例えば、本発明の抗体製剤）中に存在する凝集の程度、および／または凝集体の型および／またはサイズを決定するのに有用な多数の方法は、当技術分野で既知であり、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、高速サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）、静的光散乱（ＳＬＳ）、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）、円偏光二色性（ＣＤ）、尿素誘導タンパク質アンフォールディング技術、内因性トリプトファン蛍光、示差走査熱量測定、およびｌ−アニリノ−８−ナフタレンスルホン酸（ＡＮＳ）タンパク質結合技術を含むが、それらに限定されない。例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を行い、分子を適切な樹脂で充填されたカラム上に通過させることによって、それらのサイズに基づいて分子を分離することができ、大きい分子（例えば、凝集体）は、小さい分子（例えば、モノマー）より先に溶出するであろう。分子は、概して、２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によって検出され、さらなる特性評価のために収集されてもよい。高圧液体クロマトグラフィーカラムは、しばしばＳＥＣ分析（ＨＰ−ＳＥＣ）に利用される。具体的なＳＥＣ法は、下の「実施例」と題される節で詳述される。代替的に、分析用超遠心法（ＡＵＣ）が利用されてもよい。ＡＵＣは、液体試料中の高分子の沈降係数（Ｓｖｅｄｂｅｒｇ，Ｓに報告される）を決定する直交技術である。ＳＥＣと同様に、ＡＵＣは、モノマーから抗体断片／凝集体を分離および検出することができ、さらに分子量に関する情報を提供することができる。また、製剤中のタンパク質凝集は、コールターカウンターを用いたパーティクルカウンター分析によってまたは濁度計を用いた濁度測定によって特徴付けられてもよい。濁度は、溶液中の粒子が光を散乱する量の測定値であり、したがって、タンパク質凝集の一般的指標として使用されてもよい。加えて、非還元ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）またはキャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）を使用して、本発明の製剤中の抗体またはその断片の凝集および／または断片化状態を特徴付けてもよい。
【０１８５】
一実施形態では、本発明の製剤は、非経口投与用である。一実施形態では、本発明の製剤は、注射用製剤である。一実施形態では、本発明の製剤は、静脈内、皮下、または筋肉内投与用である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、抗ＣＤ１９抗体を含み、該製剤は、皮下注射用である。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で保管される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１８６】
一実施形態では、本発明の製剤は、静脈内投与用であり、該製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１８７】
一実施形態では、本発明の製剤は、皮下投与用であり、該製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＣＤ１９抗体を含む。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で提供される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１８８】
一実施形態では、本発明の製剤は、エアロゾル投与用である。
【０１８９】
また、本発明は、好適な容器中に抗ＣＤ１９抗体製剤を含む、ヒトへの非経口投与に好適な薬学的単位剤形も提供する。一実施形態では、本発明の薬学的単位投薬は、静脈内に、皮下に、または筋肉内に送達される抗ＣＤ１９抗体製剤を含む。別の実施形態では、本発明の薬学的単位投薬は、エアロゾル送達される抗ＣＤ１９抗体製剤を含む。具体的な実施形態では、本発明の薬学的単位投薬は、皮下に送達される抗ＣＤ１９抗体製剤を含む。別の実施形態では、本発明の薬学的単位投薬は、エアロゾル送達される抗ＣＤ１９抗体製剤を含む。さらなる実施形態では、本発明の薬学的単位投薬は、鼻腔内に投与される抗ＣＤ１９抗体製剤を含む。一実施形態では、好適な容器は、プレフィルドシリンジである。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１９０】
一実施形態では、本発明の製剤は、密封容器中で提供される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、プレフィルドシリンジ中で提供される。具体的な実施形態では、本発明の製剤は、配列番号１０４の重鎖可変領域、配列番号１１１の軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗ＣＤ１９抗体を含み、ここでフコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない。
【０１９１】
本発明はさらに、本発明の抗ＣＤ１９抗体製剤を含むキットを提供した。
【０１９２】
また、本発明は、Ｂ細胞媒介型疾患および障害を治療ならびに予防する方法にも関する。また、本発明は、炎症性疾患もしくは障害、自己免疫疾患もしくは障害、または増殖性疾患もしくは障害等のＢ細胞媒介型疾患および障害を予防する、管理する、治療する、または寛解させる方法も提供する。一実施形態では、本発明の方法は、それを必要とする対象に、抗ＣＤ１９抗体製剤の予防的または治療上有効量を投与することを含む。
【０１９３】
一実施形態では、疾患もしくは障害の予防、治療、管理、または寛解のための本発明の方法は、該対象に、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体もしくは抗体断片以外の予防剤もしくは治療剤の予防的または治療上有効量を投与することをさらに含む。
【０１９４】
一実施形態では、疾患もしくは障害の予防、治療、管理、または寛解のための本発明の方法は、該対象に、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体もしくは抗体断片以外の予防剤もしくは治療剤の予防的または治療上有効量を投与することをさらに含み、該予防剤または治療剤は、抗炎症剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、または抗癌剤である。
【０１９５】
６．３．抗ＣＤ１９抗体
本発明は、ヒトＣＤ１９抗原に結合するヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体、ならびにそれらの抗体を含む組成物に関する。ある種の実施形態では、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体は、抗原依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介し得る。他の実施形態では、本発明は、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む組成物に、ならびにヒトＡＤＣＣ、ＣＤＣ、および／またはアポトーシスを媒介し得るＩｇＧ２および／またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプのヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体に関する。さらなる実施形態では、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体は、抗ＩｇＭ／ＣｐＧ刺激性Ｂ細胞増殖を阻害し得る。
【０１９６】
本発明は、抗ＣＤ１９マウスモノクローナル抗体ＨＢ１２ＡおよびＨＢ１２Ｂのキメラおよびヒト化バージョンを提供する。一実施形態では、本発明のヒト化抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ＡまたはＨＢ１２Ｂの結合親和性に匹敵するか、キメラＨＢ１２Ｂ抗体の結合親和性に匹敵する親和性によりヒトＣＤ１９に結合することができる。
【０１９７】
一実施形態では、本発明のヒト化抗ＣＤ１９モノクローナル抗体は、ＶＨおよびＶＫを含んでもよく、ここでＶＨは、４つのフレームワーク領域である、Ｖ３−７２のヒト生殖細胞系ＶＨセグメントのＦＷｌ、ＦＷ２、およびＦＷ３（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ．ＭｏＩ  Ｂｉｏｌ．，２２７，７７６−７９８にＤＰ２９として記載される）、ならびにヒト生殖細胞系ＪＨ４セグメントのＦＷ４（Ｍａｔｔｉｌａ，Ｐ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２５，２５７８−２５８２）と、ＨＢ１２Ｂ抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲ配列、ＣＤＲ１（配列番号２２）、ＣＤＲ２（配列番号２４）、およびＣＤＲ３（配列番号２６）とを含み、ＶＫは、４つのフレームワーク領域である、ヒト生殖細胞系ＶカッパセグメントＡ１０のＦＷｌ、ＦＷ２、ＦＷ３（Ｓｔｒａｕｂｉｎｇｅｒ，Ｂ．Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ，３６９，６０１−６０７）、およびヒト生殖細胞系免疫グロブリンカッパＪ４セグメントのＦＷ４（Ｈｉｅｔｅｒ、Ｐ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．、（１９８２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５７、１５１６−１５２２）と、ＨＢ１２Ｂ抗体の３つのＶＫ  ＣＤＲ配列、ＣＤＲ１（配列番号２８）、ＣＤＲ２（配列番号３０）、およびＣＤＲ３（配列番号３２）とを含む。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨおよびＶＫを含んでもよく、ＶＨは、４つのフレームワーク領域である、Ｖ３−７２のヒト生殖細胞系ＶＨセグメントのＦＷ１、ＦＷ２、およびＦＷ３（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ．ＭｏＩ  Ｂｉｏｌ，２２７，７７６−７９８にＤＰ２９として記載される）、ならびにヒト生殖細胞系ＪＨ４セグメントのＦＷ４（Ｍａｔｔｉｌａ，Ｐ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２５，２５７８−２５８２）と、上の表１に列挙されるＣＤＲのアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲとを含み、ＶＫは、４つのフレームワーク領域である、ヒト生殖細胞系ＶカッパセグメントＡ１０のＦＷｌ、ＦＷ２、ＦＷ３（Ｓｔｒａｕｂｉｎｇｅｒ，Ｂ．Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ，３６９，６０１−６０７）、およびヒト生殖細胞系免疫グロブリンカッパＪ４セグメントのＦＷ４（Ｈｉｅｔｅｒ，Ｐ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７，１５１６−１５２２）と、および上の表１に列挙されるＣＤＲのアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲとを含む。一実施形態では、本抗体は、Ｙ４０Ｆ、Ｋ５３Ｈ、およびＹ９１Ｆからなる群から選択される１つ以上のＶＫフレームワーク突然変異を含んでもよい。一実施形態では、ＶＫフレームワーク領域は、点突然変異Ｙ４０Ｆ、Ｋ５３Ｈ、およびＹ９１Ｆの各々を含有してもよい。別の実施形態では、ＶＫフレームワーク領域は、Ｙ４０ＦおよびＫ５３Ｈ点突然変異のみを含有してもよい。別の実施形態では、ＶＫフレームワークは、Ｙ４０Ｆ点突然変異のみを含んでもよい。
【０１９８】
６．３．１．抗ＣＤ１９抗体のＣＤＲ領域
ある種の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２２、配列番号２４、および配列番号２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよく、また配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２２、配列番号２４、および配列番号１２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよく、また配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２２、配列番号１２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよく、また配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２０８、配列番号１１６、および配列番号１２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよく、また配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２０８、配列番号１１６、および配列番号１２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよく、また配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２０８、配列番号２１０、および配列番号１２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよく、また配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、またはＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよく、また配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。
【０１９９】
さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２２、配列番号２４、および配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよい。
【０２００】
追加的な実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、配列番号６、配列番号８、および配列番号１０からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよい。
【０２０１】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２２、配列番号２４、および配列番号１２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよい。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２２、配列番号１１６、および配列番号１２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよい。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２０８、配列番号１１６、および配列番号１２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよい。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２０８、配列番号２１０、および配列番号１２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよい。
【０２０２】
別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、またはＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよい。
【０２０３】
別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙される抗体のうちの任意の１つのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよい。本発明の抗ＣＤ１９抗体は、軽鎖可変領域、ＶＬをさらに含んでもよい。
【０２０４】
別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙される抗体のうちの任意の１つのＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、ＶＬを含んでもよい。本発明の抗ＣＤ１９抗体は、重鎖可変領域、ＶＨをさらに含んでもよい。
【０２０５】
別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙される抗体のうちの任意の１つのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０２０６】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、ヒト化ＶＨ指定ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）のＶＨドメインを含んでもよい。
【０２０７】
一実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体は、配列番号１０３、１０６、１９１、および１９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよい。別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＶＨドメインのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、ＶＨを含んでもよい。
【０２０８】
ある種の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２８、配列番号３０、および配列番号３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよく  、また配列番号５４、配列番号５６、配列番号７２、配列番号８２、配列番号６４、配列番号５８、配列番号６６、および配列番号６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。
【０２０９】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２８、配列番号１２５、および配列番号３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよく  、また配列番号５４、配列番号５６、配列番号７２、配列番号８２、配列番号６４、配列番号５８、配列番号６６、および配列番号６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２１１、配列番号２１８、および配列番号２２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよく、また配列番号５４、配列番号５６、配列番号７２、配列番号８２、配列番号６４、配列番号５８、配列番号６６、および配列番号６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２８、配列番号２２０、および配列番号２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよく、また配列番号５４、配列番号５６、配列番号７２、配列番号８２、配列番号６４、配列番号５８、配列番号６６、および配列番号６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２１５、配列番号２２１、および配列番号２２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよく、また配列番号５４、配列番号５６、配列番号７２、配列番号８２、配列番号６４、配列番号５８、配列番号６６、および配列番号６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＶＫ  ＣＤＲ１、ＶＫ  ＣＤＲ２、またはＶＫ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよく、また配列番号５４、配列番号５６、配列番号７２、配列番号８２、配列番号６４、配列番号５８、配列番号６６、および配列番号６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＦＷ領域をさらに含んでもよい。
【０２１０】
さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２８、３０、および３２からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよい。
【０２１１】
さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号１２、１４、および１６からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよい。
【０２１２】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２８、配列番号１２５、および配列番号３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよい。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２１１、配列番号２１８、配列番号２２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよい。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２８、配列番号２２０、および配列番号２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよい。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２１５、配列番号２２１、および配列番号２２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよい。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＶＫ  ＣＤＲ１、ＶＫ  ＣＤＲ２、またはＶＫ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域、ＶＫを含んでもよい。
【０２１３】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）（配列番号５２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９８７（配列番号６２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９（配列番号６８）、ＨＢ１２Ｂ−３６（配列番号７０）、７Ｅ１２  ＶＫ（配列番号１１０）、１４Ｈ５  ＶＫ（配列番号１１１）、１６Ｃ９  ＶＫ（１１３）、１５Ｄ１  ＶＫ（配列番号１１２）、３Ｃ３  ＶＫ（配列番号１９３）、６Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０４）、および９Ｇ７  ＶＫ（配列番号２０５）からなる群から選択されるヒト化ＶＫドメイン配列を含んでもよい。
【０２１４】
本発明は、ヒトＣＤ１９に結合する抗体を包含し、それはヒトＣＤ１９に結合することができる、本明細書に記載されるＶＨドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＫドメイン、ＶＫ  ＣＤＲ１、ＶＫ  ＣＤＲ２、またはＶＫ  ＣＤＲ３の誘導体を含む（例えば、上の表１に列挙される変異体を参照されたい）。当業者に既知の標準技術を使用して、抗体をコードするヌクレオチド配列内に突然変異（例えば、付加、欠失、および／または置換）を導入することができ、それは例えば、アミノ酸置換を生成するために通常使用される部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介型突然変異誘発を含む。一実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＫ  ＣＤＲ誘導体は、ＨＢ１２ＡまたはＨＢ１２Ｂ抗ＣＤ１９抗体の元のＶＨおよび／またはＶＫ  ＣＤＲに相対的な、２５個未満のアミノ酸置換、２０個未満のアミノ酸置換、１５個未満のアミノ酸置換、１０個未満のアミノ酸置換、５個未満のアミノ酸置換、４個未満のアミノ酸置換、３個未満のアミノ酸置換、２個未満のアミノ酸置換、１個未満のアミノ酸置換を含んでもよい。別の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＫ  ＣＤＲ誘導体は、１つ以上の予測非必須アミノ酸残基（すなわち、ヒトＣＤ１９に特異的に結合するための抗体に必須でないアミノ酸残基）で行われる保存的アミノ酸置換（例えば、上の）を有してもよい。突然変異はまた、飽和突然変異誘発等によって、ＶＨおよび／またはＶＫ  ＣＤＲコード配列の全てまたは一部にわたって無作為に導入することができ、得られた突然変異体を、生物学的活性についてスクリーニングして、活性を保持する突然変異体を特定することができる。突然変異誘発に続いて、コードされた抗体を発現させることができ、抗体の活性を決定することができる。一実施形態では、本明細書に開示される本発明の抗体は、ＵＳ２００５００７０６９３Ａ１に記載されるｈＡ１９抗体のＶＨ  ＣＤＲ１およびＶＨ  ＣＤＲ２を除外し得る。
【０２１５】
一実施形態では、本明細書に記載されるヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体は、上の表１に列挙されるＶＨ  ＣＤＲのうちの任意の１つの変異型を含んでもよく、該変異型ＶＨ  ＣＤＲは、アミノ酸置換を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、表１に列挙されるＶＨ  ＣＤＲの変異型を含み、該変異型ＶＨ  ＣＤＲは、次の天然または置換アミノ酸残基のうちの１つ以上を含む：Ｋａｂａｔに従って付番される、ＶＨ  ＣＤＲ１の３２位のトレオニン（Ｔ）、ＶＨ  ＣＤＲ２の６０位のチロシン（Ｙ）、ＶＨ  ＣＤＲ２の６０位アスパラギン酸（Ｄ）、ＶＨ  ＣＤＲ２の６０位のロイシン（Ｌ）、ＶＨ  ＣＤＲ２の６１位のアラニン（Ａ）、ＶＨ  ＣＤＲ２の６１位のバリン（Ｖ）、ＶＨ  ＣＤＲ３の１００Ｂ位のチロシン（Ｙ）、ＶＨ  ＣＤＲ３の１００Ｂ位のアルギニン（Ｒ）、およびＶＨ  ＣＤＲ３の１００Ｂ位のアスパラギン（Ｎ）（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。
【０２１６】
一実施形態では、本明細書に記載されるヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体は、表１に列挙されるＶＨ  ＣＤＲの変異型を含んでもよく、該変異型ＶＨ  ＣＤＲは、次の天然または置換アミノ酸残基のうちの１つ以上を含む：Ｋａｂａｔに従って付番される、ＶＨ  ＣＤＲ１の３３位のグルタミン酸（Ｅ）、ＶＨＣＤＲ１の３３位のロイシン（Ｌ）、ＶＨ  ＣＤＲ１の３５位のフェニルアラニン（Ｆ）、ＶＨ  ＣＤＲ１の３５位のチロシン（Ｙ）、ＶＨ  ＣＤＲ１の３５位のアスパラギン酸（Ｄ）、ＶＨ  ＣＤＲ１の３５位のロイシン（Ｌ）、ＶＨ  ＣＤＲ２の５７位のセリン（Ｓ）、ＶＨ  ＣＤＲ２の５７位のプロリン（Ｐ）、ＶＨ  ＣＤＲ２の５７位のアスパラギン（Ｎ）、ＶＨ  ＣＤＲ３の１００Ｂ位のヒスチジン（Ｈ）、ＶＨ  ＣＤＲ３の１００Ｂ位のフェニルアラニン（Ｆ）、およびＶＨ  ＣＤＲ３の９９位のプロリン（Ｐ）、（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。
【０２１７】
一実施形態では、本明細書に記載されるヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体は、表１に列挙されるＶＨ  ＣＤＲの変異型を含んでもよく、該変異型ＶＨ  ＣＤＲは、次の天然または置換アミノ酸残基のうちの１つ以上を含む：Ｋａｂａｔに従って付番される、ＶＨ  ＣＤＲ１の３２位のバリン（Ｖ）、およびＶＨＣＤＲ２の５２Ａ位のロイシン（Ｌ）。
【０２１８】
別の実施形態では、本発明のヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体は、表１に列挙されるＶＫ  ＣＤＲの変異型を含んでもよく、該ＶＫ  ＣＤＲは、次の天然または置換アミノ酸残基のうちの１つ以上を含む：Ｋａｂａｔに従って付番される、ＶＫ  ＣＤＲ１の２７Ｄ位のヒスチジン（Ｈ）、ＶＫ  ＣＤＲ１の３３位のイソロイシン（Ｉ）、ＶＫ  ＣＤＲ２の５０位のグルタミン酸（Ｅ）、ＶＫ  ＣＤＲ３の９１位のトレオニン（Ｔ）、およびＶＫ  ＣＤＲ３の９６位のイソロイシン（Ｉ）。
【０２１９】
別の実施形態では、本発明のヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体は、表１に列挙されるＶＫ  ＣＤＲの変異型を含んでもよく、該ＶＫ  ＣＤＲは、次の天然または置換アミノ酸残基のうちの１つ以上を含む：Ｋａｂａｔに従って付番される、ＶＫ  ＣＤＲ１の２７Ｃ位のイソロイシン（Ｉ）、ＶＫ  ＣＤＲ１の３０位のロイシン（Ｌ）、ＶＫ  ＣＤＲ１の３３位のアルギニン（Ｒ）、ＶＫ  ＣＤＲ１の３３位のトレオニン（Ｔ）、ＶＫ  ＣＤＲ２の５０位のチロシン（Ｙ）、ＶＫ  ＣＤＲ２の５４位のトレオニン（Ｔ）、ＶＫ  ＣＤＲ２の５４位のプロリン（Ｐ）、ＶＫ  ＣＤＲ２の５５位のチロシン（Ｙ）、およびＶＫ  ＣＤＲ３の９６位のアスパラギン（Ｎ）。
【０２２０】
別の実施形態では、本発明のヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体は、表１に列挙されるＶＫ  ＣＤＲの変異型を含んでもよく、該ＶＫ  ＣＤＲは、次の天然または置換アミノ酸残基のうちの１つ以上を含む：Ｋａｂａｔに従って付番される、ＶＫ  ＣＤＲ２の５４位のアルギニン（Ｒ）、ＶＫ  ＣＤＲ２の５４位のトレオニン（Ｔ）、ＶＫ  ＣＤＲ２の５４位のアラニン（Ａ）、およびＶＫ  ＣＤＲ３の８９位のアラニン（Ａ）。
【０２２１】
本発明は、ヒトＣＤ１９に結合する抗体をさらに包含し、該抗体または抗体断片は、１つ以上のＣＤＲを含み、該ＣＤＲは、ＨＢ１２ＡまたはＨＢ１２Ｂ抗ＣＤ１９抗体の１つ以上のＣＤＲのアミノ酸配列と、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。２つのアミノ酸配列の同一性百分率は、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を含むが、それらに限定されない、当業者に既知のいずれの方法によっても決定することができる。
【０２２２】
６．３．２．抗ＣＤ１９抗体のフレームワーク領域
一実施形態では、本発明のヒト化抗ＣＤ１９モノクローナル抗体のＶＨは、ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）ＶＨ（配列番号３４）の対応するフレームワーク領域（すなわち、抗体ＹのＦＷ１と比較した抗体ＸのＦＷ１）との、約６４％〜約１００％の範囲内のアミノ酸配列同一性を有するフレームワーク領域を含んでもよい。この実施形態の特定の態様では、本明細書に記載される抗体のヒトまたはヒト化ＶＨフレームワーク領域は、ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）ＶＨ（配列番号３４）との、少なくとも６４％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％である、アミノ酸配列同一性を有してもよい。
【０２２３】
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体のヒトまたはヒト化ＶＨフレームワーク領域は、ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）ＶＨ（配列番号３４）の対応するフレームワーク領域との、８７個のアミノ酸のうち少なくとも５６個の（５６／８７個）アミノ酸配列同一性を有してもよい。特定の実施形態では、ＶＨフレームワークアミノ酸配列同一性は、少なくとも５６／８７個、５７／８７個、５８／８７個、５９／８７個、６０／８７個、６１／８７個、６２／８７個、６３／８７個、６４／８７個、６５／８７個、６６／８７個、６７／８７個、６８／８７個、６９／８７個、７０／８７個、７１個、８７個、７２／８７個、７３／８７  ７４／８７個、７５／８７個、７６／８７個、７７．８７個、７８／８７個、７９／８７個、８０／８７個、８１／８７個、８２／８７個、８３／８７個、８４／８７個、８５／８７個、８６／８７個、または８７／８７個のアミノ酸であってもよい。本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体のＶＨ配列は、ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）のＶｅｒｎｉｅｒアミノ酸残基に対して高い配列同一性、例えば、１６個のＶｅｒｎｉｅｒ残基のうち少なくとも１０個（１０／１６個）、少なくとも１１／１６個、少なくとも１２／１６個、少なくとも１３／１６個、少なくとも１４／１６個、または少なくとも１５／１６個のＶｅｒｎｉｅｒ残基のＶｅｒｎｉｅｒ配列同一性を有してもよい。別の実施形態では、Ｖｅｒｎｉｅｒアミノ酸残基のミスマッチは、保存的アミノ酸置換であってもよい。保存的アミノ酸置換であるミスマッチは、ミスマッチアミノ酸が、Ｖｅｒｎｉｅｒアミノ酸に類似した物理的および化学的特性を有するようなミスマッチであり、例えば、ミスマッチ残基は、Ｖｅｒｎｉｅｒ残基に類似した極性（極性または非極性）、酸性度（酸性または塩基性）、側鎖構造（例えば、分枝鎖もしくは直鎖、またはフェニル環、ヒドロキシル部分、もしくは硫黄部分を含む）の特徴を有する。
【０２２４】
他の実施形態では、Ｖｅｒｎｉｅｒアミノ酸残基のミスマッチは、非保存的アミノ酸置換であってもよい。非保存的アミノ酸置換であるミスマッチは、ミスマッチアミノ酸が、Ｖｅｒｎｉｅｒアミノ酸に類似した物理的および化学的特性を有さないようなミスマッチであり、例えば、ミスマッチ残基は、置換されるべきＶｅｒｎｉｅｒ残基と比較して、異なる極性、酸性度、または側鎖構造（例えば、分枝もしくは直鎖、またはフェニル環、ヒドロキシル部分、もしくは硫黄部分を含む）を有する。
【０２２５】
他の実施形態では、本発明のヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨフレームワーク領域を含んでもよく、該ＶＨフレームワーク領域は、次の残基のうちの１つ以上を含んでもよい：Ｋａｂａｔに従って付番される、フレームワーク領域１の２０位のロイシン（Ｌ）、フレームワーク領域１の２７位のフェニルアラニン（Ｆ）、フレームワーク領域１の２８位のトレオニン（Ｔ）、フレームワーク領域２の３８位のアルギニン（Ｒ）、フレームワーク領域２の４８位のバリン（Ｖ）、フレームワーク領域３の６７位のフェニルアラニン（Ｆ）、フレームワーク領域３の７１位のアルギニン（Ｒ）、フレームワーク領域３の８０位のロイシン（Ｌ）、およびフレームワーク領域３の９１位のチロシン（Ｙ）。
【０２２６】
Ｋａｂａｔ付番は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅより３巻セットとして公開されたＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２（これ以降、「Ｋａｂａｔ」）の萌芽的研究に基づく。Ｋａｂａｔは、多数の種抗体アイソタイプからの免疫グロブリン鎖の多重配列整列を提供する。整列した配列は、単一の付番体系である、Ｋａｂａｔ付番体系に従って付番される。Ｋａｂａｔ配列は、１９９１年の公開以来、更新されてきており、電子配列データベースとして入手可能である（ダウンロード可能な最新のバージョンは、１９９７年である）。Ｋａｂａｔに従って、Ｋａｂａｔ参照配列を用いた整列を行うことによって、任意の免疫グロブリン配列を付番することができる。したがって、Ｋａｂａｔ付番体系は、免疫グロブリン鎖を付番するための統一体系を提供する。特に指示がない限り、本明細書に記載される全ての免疫グロブリンアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ付番体系に従って付番される。同様に、本明細書に言及される全ての単一のアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ付番体系に従って付番される。
【０２２７】
さらなる特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体のヒトまたはヒト化ＶＨフレームワーク領域は、次のＶｅｒｎｉｅｒ、Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ、またはＣａｎｏｎｉｃａｌ残基位置のうちの１つ以上における同一性または保存的ミスマッチのために選択されるフレームワーク領域を有してもよい：２０、２２、２４、２６、２７、２８、２９、３０、３６、３７、３９、４５、４７、４８、４９、６７、６９、７１、７３、７８、８０、９０、９１、９２、９３、９４、および１０３。ミスマッチＶｅｒｎｉｅｒ、Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ、およびＣａｎｏｎｉｃａｌ残基のうちの１つ以上は、例えば、突然変異誘発によって、ＨＢ１２ＡまたはＨＢ１２Ｂ  ＶＨフレームワーク領域の対応するアミノ酸残基にマッチするように変化させられてもよい。
【０２２８】
本発明の一実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体のヒトまたはヒト化ＶＫフレームワーク領域は、ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）ＶＫ（配列番号５２）のフレームワーク領域との、約６５％〜約１００％の範囲内のアミノ酸配列同一性を有してもよい。この実施形態の特定の態様では、本明細書に記載される抗体のヒトまたはヒト化ＶＫフレームワーク領域は、ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）抗体ＶＫとの、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％であるアミノ酸配列同一性を有してもよい。
【０２２９】
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のヒトまたはヒト化ＶＫフレームワーク領域は、ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）ＶＨ（配列番号５２）の対応するフレームワーク領域（すなわち、抗体ＹのＦＷ１と比較した抗体ＸのＦＷ１）との、８０個のアミノ酸のうち少なくとも５２個（５２／８０個）のアミノ酸配列同一性を有してもよい。特定の実施形態では、ＶＨフレームワークアミノ酸配列同一性は、少なくとも５２／８０個、５３／８０個、５４／８０個、５５／８０個、５６／８０個、５７／８０個、５８／８０個、５９／８０個、６０／８０個、６１／８０個、６２／８０個、６３／８０個、６４／８０個、６５／８０個、６６／８０個、６７／８０個、６８／８０個、６９／８０個、７０／８０個、７１個、８０個、７２／８０個、７３／８０  ７４／８０個、７５／８０個、７６／８０個、７７／８０個、７８／８０個、７９／８０個、または８０／８０個のアミノ酸であってもよい。本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体のＶＫ配列は、ＨＢ１２Ｂ（図１参照）のＶｅｒｎｉｅｒアミノ酸残基に対して高い配列同一性、例えば、１４個のＶｅｒｎｉｅｒ残基のうち少なくとも９個（９／１４個）、少なくとも１０／１４個、少なくとも１１／１４個、少なくとも１２／１４個、少なくとも１３／１４個のＶｅｒｎｉｅｒ残基のＶｅｒｎｉｅｒ配列同一性を有してもよい。別の実施形態では、Ｖｅｒｎｉｅｒアミノ酸残基のミスマッチは、保存的アミノ酸置換であってもよい。保存的アミノ酸置換であるミスマッチは、ミスマッチアミノ酸が、Ｖｅｒｎｉｅｒアミノ酸に類似した物理的および化学的特性を有するようなミスマッチであり、例えば、ミスマッチ残基は、Ｖｅｒｎｉｅｒ残基に類似した極性（極性または非極性）、酸性度（酸性または塩基性）、側鎖構造（例えば、分枝鎖もしくは直鎖、またはフェニル環、ヒドロキシル部分、または硫黄部分を含む）の特徴を有する。
【０２３０】
他の実施形態では、Ｖｅｒｎｉｅｒアミノ酸残基のミスマッチは、非保存的アミノ酸置換であってもよい。非保存的アミノ酸置換であるミスマッチは、ミスマッチアミノ酸が、Ｖｅｒｎｉｅｒアミノ酸に類似した物理的および化学的特性を有さないようなミスマッチであり、例えば、ミスマッチ残基は、置換されるべきＶｅｒｎｉｅｒ残基と比較して、異なる極性、酸性度、または側鎖構造（例えば、分枝もしくは直鎖、またはフェニル環、ヒドロキシル部分、もしくは硫黄部分を含む）を有する。
【０２３１】
他の実施形態では、本明細書に記載されるヒトまたはヒト化ＶＫフレームワーク領域は、次の残基のうちの１つ以上を含んでもよい：Ｋａｂａｔに従って付番される、フレームワーク領域２の３６位のフェニルアラニン（Ｆ）、フレームワーク領域２４９の位のヒスチジン（Ｈ）、およびフレームワーク領域３の８７位のフェニルアラニン（Ｆ）。
【０２３２】
さらなる特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のヒトまたはヒト化ＶＫフレームワーク領域は、次のＶｅｒｎｉｅｒ、Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ、またはＣａｎｏｎｉｃａｌ残基位置のうちの１つ以上における同一性または保存的ミスマッチのために選択されるフレームワーク領域を有してもよい：２、３、４、２３、３５、３６、３８、４４、５６、４７、４８、４９、６４、６６、６８、６９、７１、８７、８８、および９８。ミスマッチＶｅｒｎｉｅｒ、Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ、およびＣａｎｏｎｉｃａｌ残基のうちの１つ以上は、例えば、突然変異誘発によって、ＨＢ１２ＡまたはＨＢ１２Ｂフレームワーク領域の対応するアミノ酸残基にマッチするように変化させられてもよい。
【０２３３】
特定の実施形態では、本発明のヒト化ＶＨを含む重鎖は、ヒト化抗ＣＤ１９抗体を産生するために、本発明のヒト化ＶＫを含む軽鎖により発現させてもよい。具体的な実施形態では、本発明のヒト化抗ＣＤ１９抗体は、配列指定ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）、７Ｅ１２  ＶＨ（配列番号１０２）、１４Ｈ５  ＶＨ（配列番号１０３）、１５Ｄ１  ＶＨ（配列番号１０４）、１５Ｄ７  ＶＨ（配列番号１０５）、１６Ｃ４  ＶＨ（配列番号１０６）、１４Ｈ５−ＹＧ（配列番号１０７）、１４Ｈ５−ＤＧ（配列番号１０８）、１４Ｈ５−ＬＧ（配列番号１０９）、１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）、３Ｃ３  ＶＨ（配列番号１９１）、６Ｃ１１  ＶＨ（配列番号１９１）、９Ｇ７（配列番号１９１）、３Ｂ４  ＶＨ（配列番号２３６）、および３Ｆ１１  ＶＨ（配列番号１９２）からなる群から選択されるＶＨ配列を含んでもよく、また配列指定ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０／ＪＫ４）（配列番号５２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９８７（または３６４９８７）（配列番号６２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９（または３６４９）（配列番号６８）、ＨＢ１２Ｂ−３６（または３６）（配列番号７０）、７Ｅ１２  ＶＫ（配列番号１１０）、１４Ｈ５（配列番号１１１）、１５Ｄｌ（配列番号１１２）、１６Ｃ９（配列番号１１３）、３Ｃ３  ＶＫ（配列番号１９３）、３Ｅ５  ＶＫ（配列番号１９４）、３Ｄ４  ＶＫ（配列番号１９５）、３Ｆ１  ＶＫ（配列番号１９６）、５Ｂ５  ＶＫ（配列番号１９７）、６Ｆ７  ＶＫ（配列番号１９８）、ＩＣ１１  ＶＫ（配列番号１９９）、２Ｂ１１  ＶＫ（配列番号２００）、２Ｄ１０  ＶＫ（配列番号２０１）、５Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０２）、５Ｄ４  ＶＫ（配列番号２０３）、６Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０４）、９Ｇ７  ＶＫ（配列番号２０５）、１Ｈ４  ＶＫ（配列番号２０６）、および５Ｃ４  ＶＫ（配列番号２０７）からなる群から選択されるＶＫ配列をさらに含んでもよい。特定の実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）およびＶＫ配列ＨＢ１２Ｂ−３６４９８７（配列番号６２）を含む。特定の実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）およびＶＫ配列ＨＢ１２Ｂ−３６４９（配列番号６８）を含む。さらに別の実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）およびＶＫ配列ＨＢ１２Ｂ−３６（配列番号７０）を含む。
【０２３４】
具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列７Ｅ１２  ＶＨ（配列番号１０２）およびＶＫ配列７Ｅ１２  ＶＫ（配列番号１１０）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１４Ｈ５  ＶＨ（配列番号１０３）およびＶＫ配列１４Ｈ５  ＶＫ（配列番号１１１）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１４Ｈ５−ＹＧ  ＶＨ（配列番号１０７）およびＶＫ配列１４Ｈ５  ＶＫ（配列番号１１１）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１４Ｈ５−ＤＧ  ＶＨ（配列番号１０８）およびＶＫ配列１４Ｈ５  ＶＫ（配列番号１１１）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１４Ｈ５−ＬＧ  ＶＨ（配列番号１０９）およびＶＫ配列１４Ｈ５  ＶＫ（配列番号１１１）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１４Ｈ５  ＶＨ（配列番号１０３）およびＶＫ配列１６Ｃ９  ＶＫ（配列番号１１３）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１５Ｄ１  ＶＨ（配列番号１０４）およびＶＫ配列１５Ｄｌ  ＶＫ（配列番号１１２）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１５Ｄ７  ＶＨ（配列番号１０５）およびＶＫ配列１４Ｈ５  ＶＫ（配列番号１１１）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１６Ｃ４  ＶＨ（配列番号１０６）およびＶＫ配列１４Ｈ５  ＶＫ（配列番号１１１）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列１４Ｈ５  ＶＫ（配列番号１１１）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列３Ｃ３  ＶＫ（配列番号１９３）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列３Ｅ５  ＶＫ（配列番号１９４）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列３Ｄ４  ＶＫ（配列番号１９５）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列５Ｂ５  ＶＫ（配列番号１９７）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列６Ｆ７  ＶＫ（配列番号１９８）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列２Ｄ１０  ＶＫ（配列番号２０１）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列５Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０２）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列９Ｇ７  ＶＫ（配列番号２０５）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列１Ｈ４  ＶＫ（配列番号２０６）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１Ａ７  ＶＨ（配列番号１９１）およびＶＫ配列５Ｃ４  ＶＫ（配列番号２０７）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列３Ｂ４  ＶＨ（配列番号２３６）およびＶＫ配列１４Ｈ５  ＶＫ（配列番号１１１）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列３Ｆ１１  ＶＨ（配列番号１９２）およびＶＫ配列３Ｆ１１  ＶＫ（配列番号１９６）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１６Ｃ４  ＶＨ（配列番号１０６）およびＶＫ配列ＩＣ１１  ＶＫ（配列番号１９９）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１６Ｃ４  ＶＨ（配列番号１０６）およびＶＫ配列２Ｂ１１  ＶＫ（配列番号２００）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１６Ｃ４  ＶＨ（配列番号１０６）およびＶＫ配列５Ｄ４  ＶＫ（配列番号２０３）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列１６Ｃ４  ＶＨ（配列番号１０６）およびＶＫ配列６Ｆ７  ＶＫ（配列番号１９８）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＶＨ配列３Ｆ１１  ＶＨ（配列番号１９２）およびＶＫ配列６Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０４）を含む。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、表１に列挙されるＶＨおよびＶＬの任意の組み合わせを含む。
【０２３５】
ある種の実施形態では、本発明のヒト化ＶＫを含む軽鎖は、ヒト化抗ＣＤ１９抗体を産生するために、本発明のヒト化ＶＨを含む重鎖により発現させてもよい。一実施形態では、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ１９抗体は、配列指定ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０／ＪＫ４）（配列番号５２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９８７（または３６４９８７）（配列番号６２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９（または３６４９）（配列番号６８）、ＨＢ１２Ｂ−３６（または３６）（配列番号７０）、７Ｅ１２  ＶＫ（配列番号１１０）、１４Ｈ５（配列番号１１１）、１５Ｄｌ（配列番号１１２）、１６Ｃ９（配列番号１１３）、３Ｃ３（配列番号１９３）、３Ｅ５（配列番号１９４）、３Ｄ４（配列番号１９５）、３Ｆ１１（配列番号１９６）、５Ｂ５（配列番号１９７）、６Ｆ７（配列番号１９８）、ＩＣ１１（配列番号１９９）、２Ｂ１１（配列番号２００）、２Ｄ１０（配列番号２０１）、５Ｃ１１（配列番号２０２）、５Ｄ４（配列番号２０３）、６Ｃ１１（配列番号２０４）、９Ｇ７（配列番号２０５）、１Ｈ４（配列番号２０６）、および５Ｃ４（配列番号２０７）からなる群から選択されるＶＫ配列を含む。前述のＶＫ配列は、配列番号３６、３８、４０、および４２からなる群から選択される、そのフレームワーク領域内にアミノ酸配列を含むＶＨ配列と対形成されてもよい。
【０２３６】
ある種の実施形態では、本発明のヒト化ＶＨを含む重鎖は、ヒト化抗ＣＤ１９抗体を産生するために、本発明のヒト化ＶＫを含む軽鎖により発現させてもよい。一実施形態では、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ１９抗体は、配列指定ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）、７Ｅ１２  ＶＨ（配列番号１０２）、１４Ｈ５  ＶＨ（配列番号１０３）、１５Ｄ１  ＶＨ（配列番号１０４）、１５Ｄ７  ＶＨ（配列番号１０５）、１６Ｃ４  ＶＨ（配列番号１０６）、１４Ｈ５−ＹＧ（配列番号１０７）、１４Ｈ５−ＤＧ（配列番号１０８）、１４Ｈ５−ＬＧ（配列番号１０９）、１Ａ７（配列番号１９１）、３Ｃ３  ＶＨ（配列番号１９１）、６Ｃ１１  ＶＨ（配列番号１９１）、９Ｇ７（配列番号１９１）、３Ｂ４  ＶＨ（配列番号２３６）、および３Ｆ１１  ＶＨ（配列番号１９２）からなる群から選択されるＶＨ配列を含む。前述のＶＨ配列は、５４、配列番号５６、配列番号７２、配列番号８２、配列番号６４、配列番号５８、配列番号６６、および配列番号６０からなる群から選択される、そのフレームワーク領域内にアミノ酸配列を含むＶＫ配列と対形成されてもよい。
【０２３７】
ある種の実施形態では、親ＨＢ  １２ＡまたはＨＢ  １２Ｂハイブリドーマに由来するヒト化ＶＨまたはＶＫは、キメラ抗ＣＤ１９抗体を産生するために、キメラ免疫グロブリン軽鎖またはキメラ免疫グロブリン重鎖として発現させてもよい。特定の実施形態では、ヒト化ＶＨは、ＨＢ１２Ａ  ＶＫ（配列番号４）またはＨＢ１２Ｂ  ＶＫ（配列番号２０）を含むキメラ抗体として発現させてもよい。別の特定の実施形態では、ヒト化ＶＫは、ＨＢ１２Ａ  ＶＨ（配列番号２）またはＨＢ１２Ｂ  ＶＨ（配列番号１８）を含むキメラ抗体として発現させてもよい。別の実施形態では、キメラ抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２Ａ  ＶＫ（配列番号４）またはＨＢ１２Ｂ  ＶＫ（配列番号２０）のＶＫ配列を含んでもよく、またＨＢ１２Ａ  ＶＨ（配列番号２）またはＨＢ１２Ｂ  ＶＨ（配列番号１８）のＶＨ配列をさらに含んでもよい。
【０２３８】
特定の実施形態では、本発明のヒト化ＶＨは、ＭＧＤＮＤ１ＨＦＡＦＬＳＴＧＶＨＳ（配列番号８３）のリーダー配列をさらに含んでもよい。
【０２３９】
別の実施形態では、本発明のヒト化ＶＫは、ヒトＶＫＩ−Ｌ１２遺伝子のリーダーペプチドから選択されるリーダー配列ＭＤＭＲＶＰ  ＡＱＬＬＧＬＬＬＬ  ＷＬＰＧＡＫＣ（配列番号８４）をさらに含んでもよい。
【０２４０】
本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９（ｈＣＤ１９）抗原に対する高い結合親和性を有してもよい。例えば、本明細書に記載される抗体は、少なくとも２Ｘ１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５Ｘ１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５Ｘ１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０７Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５Ｘ１０７Ｍ−１ｓ−１、または少なくとも１０８Ｍ−１ｓ−１の会合速度定数またはｋｏｎ速度（抗体（Ａｂ）＋抗原（Ａｇ）ｋｏｎ→Ａｂ−Ａｇ）を有してもよい。
【０２４１】
別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、５ｘ１０−１ｓ−１未満、１０−１ｓ−１未満、５ｘ１０−２ｓ−１未満、１０−２ｓ−１未満、５ｘ１０−３ｓ−１未満、１０−３ｓ−１未満、５ｘ１０−４ｓ−４未満、または１０−４ｓ−１未満のｋｏｆｆ速度（（Ａｂ−Ａｇ）ｋｏｆｆ→抗体（Ａｂ）＋抗原（Ａｇ））を有してもよい。別の実施形態では、本発明の抗体は、５ｘ１０−５ｓ−１未満、１０−５ｓ−１未満、５ｘ１０−６ｓ−１未満、１０−６ｓ−１未満、５ｘ１０−７ｓ−１未満、１０−７ｓ−１未満、５ｘ１０−８未満、１０−８ｓ−１未満、５ｘ１０−９ｓ−１未満、１０−９ｓ−１未満、または１０−１０ｓ−１未満のｋｏｆｆを有する。
【０２４２】
別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも１０２Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０２Ｍ−１、少なくとも１０３Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０３Ｍ−１、少なくとも１０４Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０４Ｍ−１、少なくとも１０５Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０５Ｍ−１、少なくとも１０６Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０６Ｍ−１、少なくとも１０７Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０７Ｍ−１、少なくとも１０８Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０８Ｍ−１、少なくとも１０９Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０９Ｍ−１、少なくとも１０１０Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０１０Ｍ−１、少なくとも１０１１Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０１１Ｍ−１、少なくとも１０１２Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０１２Ｍ−１、少なくとも１０１３Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０１３Ｍ−１、少なくとも１０１４Ｍ−１、少なくとも５Ｘ１０１４Ｍ−１、少なくとも１０１５Ｍ−１、または少なくとも５Ｘ１０１５Ｍ−１の親和定数またはＫａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）を有してもよい。さらに別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、５ｘ１０−２Ｍ未満、１０−２Ｍ未満、５ｘ１０−３Ｍ未満、１０−３Ｍ未満、５ｘ１０−４Ｍ未満、１０−４Ｍ未満、５ｘ１０−５Ｍ未満、１０−５Ｍ未満、５ｘ１０−６Ｍ未満、１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０−１１Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、５ｘ１０−１３Ｍ未満、１０−１３Ｍ未満、５ｘ１０−１４Ｍ未満、１０−１４Ｍ未満、５ｘ１０−１５Ｍ未満、または１０−１５Ｍ未満の解離定数またはＫｄ（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を有してもよい。
【０２４３】
一実施形態では、本明細書に記載される方法に従って使用される本発明の抗体は、ヒトＣＤ１９に免疫特異的に結合してもよく、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ検定、ＥＬＩＳＡ）（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて査定されたとき、３０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、２０００ｐＭ未満、１５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、７５０ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、７５ｐＭ未満の解離定数（Ｋ（ｊ）を有してもよい。具体的な実施形態では、本明細書に記載される方法に従って使用される本発明の抗体は、ヒトＣＤ１９抗原に免疫特異的に結合してもよく、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ検定、ＥＬＩＳＡ）を用いて査定されたとき、２５〜３４００ｐＭ、２５〜３０００ｐＭ、２５〜２５００ｐＭ、２５〜２０００ｐＭ、２５〜１５００ｐＭ、２５〜１０００ｐＭ、２５〜７５０ｐＭ、２５〜５００ｐＭ、２５〜２５０ｐＭ、２５〜１００ｐＭ、２５〜７５ｐＭ、２５〜５０ｐＭの解離定数（Ｋｄ）を有してもよい。別の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って使用される本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ｈＣＤ１９に免疫特異的に結合してもよく、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ検定、ＥＬＩＳＡ）を用いて査定されたとき、５００ｐＭ、１００ｐＭ、７５ｐＭ、または５０ｐＭの解離定数（Ｋｄ）を有してもよい。
【０２４４】
本発明は、本明細書に記載されるヒト、ヒト化、もしくはキメラ抗ＣＤ１９抗体またはそれらの断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドをさらに提供する。また、本発明は、ｈＣＤ１９に結合する、本明細書に記載されるヒト、ヒト化、またはキメラ抗体をコードするポリヌクレオチドと、例えば、本明細書に定められるような、厳格なまたはより低い厳格度のハイブリダイゼーション条件下でハイブリッド形成するポリヌクレオチドも包含する。
【０２４５】
厳格なハイブリダイゼーション条件には、６倍の塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃でのフィルター結合ＤＮＡとのハイブリダイゼーションと、それに続く０．２倍のＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中、約５０〜６５℃での１回以上の洗浄、６倍のＳＳＣ中、約４５℃でのフィルター結合ＤＮＡとのハイブリダイゼーションと、それに続く０．１倍のＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中、約６０℃での１回以上の洗浄等の非常に厳格な条件、または当業者に既知の他の任意の厳格なハイブリダイゼーション条件が含まれるが、それらに限定されない（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．１９８９  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ  ａｔ  ｐａｇｅｓ  ６．３．１  ｔｏ  ６．３．６  ａｎｄ  ２．１０．３を参照されたい）。
【０２４６】
当技術分野で既知のいずれの方法によって、ポリヌクレオチドが獲得され、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が決定されてもよい。例えば、抗体のヌクレオチド配列が知られている場合、抗体をコードするポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てられてもよく（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：２４２（１９９４）に記載される通り）、それは、手短に、抗体をコードする配列部分を含有する重複オリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニールおよび連結、次いで連結されたオリゴヌクレオチドのＰＣＲによる増幅を伴う。
【０２４７】
また、抗体をコードするポリヌクレオチドは、好適な源に由来する核酸から生成されてもよい。特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンが利用可能でないが、抗体分子の配列が知られている場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、配列の３’および５’末端とハイブリッド形成可能な合成プライマーを用いるＰＣＲ増幅によって、または例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリからのｃＤＮＡクローンを特定するための特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いるクローン化によって、化学的に合成または好適な源から獲得されてもよい（例えば、抗体を発現するために選択されるハイブリドーマ細胞等の、抗体を発現する任意の組織もしくは細胞から生成された抗体ｃＤＮＡライブラリまたはｃＤＮＡライブラリ、あるいは抗体を発現する任意の組織または細胞から単離されたポリＡ＋ＲＮＡを含む核酸）。次いでＰＣＲによって生成された増幅された核酸は、当技術分野で周知のいずれの方法を用いて、複製可能なクローン化ベクターへとクローン化されてもよい。
【０２４８】
また、本発明は、本明細書に記載される抗体のＶＨおよびＶＫフレームワーク領域ならびにＣＤＲをコードするポリヌクレオチド配列、ならびに哺乳類細胞中のそれらの効率的発現のための発現ベクターも提供する。
【０２４９】
本発明は、ｈＣＤ１９トランスジェニックマウスモデル系中で組み換えヒトＣＤ１９分子を発現するＢ細胞を効率的に枯渇させることができる抗体をさらに提供する（Ｙａｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０２（４２）：１５１７８−８３（２００５）を参照されたい）。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２Ｂモノクローナル抗体によって達成される枯渇の少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％である、Ｂ細胞枯渇を達成することができる。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２Ｂ抗体によって達成される枯渇よりも完全である、Ｂ細胞枯渇を達成することができる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、循環Ｂ細胞、血液Ｂ細胞、脾臓Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、腹膜Ｂ細胞、および／または骨髄Ｂ細胞を枯渇させることができる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、前駆Ｂ細胞、早期プロＢ細胞、後期プロＢ細胞、大型プレＢ細胞、小型Ｂ細胞、未成熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞、抗原  刺激性Ｂ細胞、および／または形質細胞の枯渇を達成することができる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇は、少なくとも１日、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、または少なくとも３０日間持続することができる。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、または少なくとも１０週間持続することができる。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇は、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間持続することができる。
【０２５０】
また、本発明は、ヒト対象におけるＢ細胞を効率的に枯渇させる抗体も提供する。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％のＢ細胞枯渇を達成することができる。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ヒト対象におけるＢ細胞サブセットを枯渇させることができる。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、循環Ｂ細胞、血液Ｂ細胞、脾臓Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、腹膜Ｂ細胞、および／または骨髄Ｂ細胞を枯渇させることができる。ＣＤ１９は、全ての発症段階においてＢ細胞の表面上に存在する。したがって、抗ＣＤ１９抗体は、全ての発症段階のＢ細胞を枯渇させることができる。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、前駆Ｂ細胞、早期プロＢ細胞、後期プロＢ細胞、大型プレＢ細胞、小型Ｂ細胞、未成熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞、抗原  刺激性Ｂ細胞、および／または形質細胞の枯渇を達成することができる。Ｂ細胞の枯渇は、長期間持続することができる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇は、少なくとも１日、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、または少なくとも３０日間持続することができる。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、または少なくとも１０週間持続することができる。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇は、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間持続することができる。
【０２５１】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、循環Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、血液Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、脾臓Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、辺縁帯Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、濾胞性Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、腹膜Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、骨髄Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、前駆Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、早期プロＢ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、後期プロＢ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、大型Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、小型Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、未成熟Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、成熟Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、抗原刺激性Ｂ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、形質細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％を枯渇させる。Ｂ細胞の枯渇は、長期間持続することができる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇は、少なくとも１日、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、または少なくとも３０日間持続することができる。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、または少なくとも１０週間持続することができる。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇は、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間持続することができる。
【０２５２】
Ｂ細胞悪性腫瘍は、特異的Ｂ細胞サブセットの病的増殖によって特徴付けられ、例えば、前駆Ｂ細胞急性リンパ性白血病は、プロＢ細胞／プレＢ細胞発症段階に相当するＢ細胞の異常増殖によって特徴付けられる。悪性Ｂ細胞は、ＣＤ１９等の正常Ｂ細胞マーカーの細胞表面発現を維持する。したがって、抗ＣＤ１９抗体は、ヒト対象における悪性Ｂ細胞を枯渇させることができる。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ヒト対象における悪性Ｂ細胞の少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％の枯渇を達成することができる。
【０２５３】
一実施形態では、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ１９抗体は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＣＤＣ）、および／またはアポトーシスを媒介する。一実施形態では、本発明のヒト化抗ＣＤ１９抗体は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／またはアポトーシスを媒介する。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、強化された抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有する。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、強化された抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する変異型Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、Ａｓｎ２９７に結合される複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含み、ここでフコースは、還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されず、該Ｆｃ領域は、強化された抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する。
【０２５４】
本発明は、インビトロ刺激性Ｂ細胞増殖を効率的に阻害することができる抗ＣＤ１９抗体をさらに提供する。単離された抹消Ｂ細胞の増殖は、例えば、抗ＩｇＭ抗体であるＣＤ４０またはＣｐＧによる刺激等であるが、それらに限定されない種々の刺激によって誘発されてもよい。これらの刺激は、単独でまたは互いに組み合わせて送達されてもよい。
【０２５５】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、インビトロ刺激性Ｂ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体は、抗ＩｇＭ／ＣｐＧまたは抗ＩｇＭ／ＣＤ４０刺激によって誘発されるインビトロＢ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、インビトロ刺激性Ｂ細胞増殖を、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約７５％阻害する。
【０２５６】
一実施形態では、本発明のＦｃ変異体抗ＣＤ１９抗体は、抗ＩｇＭ／ＣｐＧまたは抗ＩｇＭ／ＣＤ４０刺激によって誘発されるインビトロＢ細胞増殖を阻害し、該Ｆｃ変異型は、同等の非変異型分子に相対的な１つ以上のＦｃリガンドへの、変化した結合親和性を有する。具体的な実施形態では、本発明のＦｃ変異体抗ＣＤ１９抗体は、抗ＩｇＭ／ＣｐＧまたは抗ＩｇＭ／ＣＤ４０刺激によって誘発されるインビトロＢ細胞増殖を阻害し、該Ｆｃ変異型は、同等の非変異型Ｆｃドメインに相対的なＦｃガンマ受容体ＨＢへの、強化された結合を有する。さらなる具体的な実施形態では、本発明のＦｃ変異体抗ＣＤ１９抗体は、インビトロ刺激性Ｂ細胞増殖を、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約７５％阻害する。別の実施形態では、本発明のＦｃ変異体抗ＣＤ１９抗体は、インビトロ刺激性Ｂ細胞増殖を阻害し、該変異型Ｆｃドメインは、同等の非変異型Ｆｃドメインの親和性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍高い、Ｆｃガンマ受容体ＨＢに対する親和性を有する。
【０２５７】
また、本発明は、それを必要とするヒトに、循環Ｂ細胞を枯渇させるために十分な量の、ヒト抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＣＤＣ）、および／またはアポトーシスを媒介し得るヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を投与することを含む、ヒトにおけるＢ細胞悪性腫瘍を治療する方法に関する。また、特定の態様では、本発明は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプである、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体の治療的有効レジメンの投与を含む、ヒトにおけるＢ細胞悪性腫瘍を治療する方法にも関する。
【０２５８】
本発明はさらに、それを必要とするヒトに、循環Ｂ細胞を枯渇させるために十分な量の、ヒトＡＤＣＣ、ＣＤＣ、および／またはアポトーシスを媒介し得るヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を投与することを含む、ヒトにおける自己免疫疾患または障害を治療する方法に関する。また、本発明は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプである、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体の治療的有効レジメンの投与を含む、自己免疫障害を治療する方法に関する。
【０２５９】
また、本発明は、受容者に、循環Ｂ細胞、または循環免疫グロブリン、または双方を枯渇させることができる量の、本発明のヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を投与することを含む、それを必要とするヒト移植受容者における体液性拒絶反応を治療または予防する方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、移植の前に、移植片を、移植片からＢ細胞を枯渇させることができる量のヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体と接触させることを含む、ヒト移植受容者における移植片拒絶反応または移植片対宿主病を予防する方法を提供する。
【０２６０】
６．４．ヒト化抗ＣＤ１９抗体の産生
本明細書に記載されるヒト化抗体は、ＣＤＲ移植（例えば、欧州特許第２３９，４００号、国際公開第９１／０９９６７号、および米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号、および第５，５８５，０８９号を参照されたく、これらの特許および公開の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ベニアリングまたはリサーフェシング（例えば、欧州特許第５９２，１０６号および第５１９，５９６号、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４、ならびにＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ，９１：９６９−９７３を参照されたく、これらの特許および参考文献の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、鎖シャフリング（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号を参照されたく、この特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開第９３１７１０５号、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６９：１１１９−２５（２００２）、Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ，１３（５）：３５３−６０（２０００）、Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０（３）：２６７−７９（２０００）、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２（１６）：１０６７８−８４（１９９７）、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ，９（１０）：８９５−９０４（１９９６）、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ（１９９５）、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（８）：１７１７−２２（１９９５）、Ｓａｎｄｈｕ  ＪＳ，Ｇｅｎｅ，１５０（２）：４０９−１０（１９９４）、およびＰｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ  Ｂｉｏｌ，２３５（３）：９５９−７３（１９９４）に開示され、これらの特許、公開、および参考文献の各々が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる技術を含むが、それらに限定されない、当技術分野で既知の多種多様の技術を用いて産生することができる。しばしば、ＦＷ領域内のＦＷ残基は、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基により置換されて、抗原結合を改善する等、抗原結合を変化させるであろう。これらのＦＷ置換は、当技術分野で周知の方法によって、例えば、抗原結合に重要なＦＷ残基を特定するためのＣＤＲおよびＦＷ残基の相互作用のモデル化、および特定の位置における異常なＦＷ残基を特定するための配列比較によって特定される。（例えば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，５８５，０８９号およびＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３を参照されたく、これらの特許および参考文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。）
【０２６１】
ヒト化抗ＣＤ１９抗体は、非ヒトである源から抗体に導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば「インポート」残基と称され、典型的に「インポート」可変ドメインから得られる。したがって、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリン分子由来の１つ以上のＣＤＲおよびヒト由来のフレームワーク領域を含む。抗体のヒト化は、当技術分野で周知であり、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓ（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）、およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））の方法に従って、ヒト抗体の対応する配列の代わりに齧歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列で置換すること、すなわち、ＣＤＲ移植によって行うことができる（欧州特許第２３９，４００号、ＰＣＴ公開第９１／０９９６７号、および米国特許第４，８１６，５６７号、第６，３３１，４１５号、第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号、第５，５８５，０８９号、第６，５４８，６４０号、これらの特許および公開の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。かかるヒト化キメラ抗体において、無処置ヒト可変ドメインよりも実質的に少ない部分が、非ヒト種由来の対応する配列によって置換されている。実際には、ヒト化抗体は、典型的に、幾つかのＣＤＲ残基および潜在的に幾つかのＦＷ残基が齧歯類抗体の類似した部位由来の残基によって置換されている、ヒト抗体である。抗ＣＤ１９抗体のヒト化はまた、ベニアリングもしくはリサーフェシング（欧州特許第５９２，１０６号、欧州特許第５１９，５９６号、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４（１９９４）、およびＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ，９１：９６９−９７３（１９９４））、または鎖シャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）によって達成することができ、これらの特許および参考文献の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０２６２】
ヒト化抗体を作製する際に使用されるべき軽鎖および重鎖の双方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を減少させることである。いわゆる「最適な」方法に従って、齧歯類抗体の可変ドメインの配列は、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に照らしてスクリーニングされる。次いで、抗原結合、意図されるヒト化ｍＡｂの適切な構造形成、および／または安定性に必須であり得る特定の残基の存在について、齧歯類に最も密接に関連するヒト配列がスクリーニングされる（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５１：２２９６（１９９３）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ  Ｂｉｏｌ，１９６：９０１（１９８７）、これらの参考文献の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。次いで所望の基準にマッチする得られたＦＷ配列は、ヒト化抗体のヒトドナーＦＷ領域として使用される。
【０２６３】
別の方法では、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサスの配列に由来する特定のＦＷが使用される。幾つかの異なるヒト化抗ＣＤ１９抗体のために同一のＦＷが使用されてもよい（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５１：２６２３（１９９３）、これらの参考文献の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２６４】
抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に対する高親和性および他の好ましい生物学的特性を保持しながら、ヒト化することができる。本発明の一態様に従って、ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の３次元モデルを用いて、配列および種々の概念的ヒト化産物の分析のプロセスによって調製される。３次元免疫グロブリンモデルは、一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の潜在的な３次元立体配座構造を例証し、表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の検査は、候補免疫グロブリン配列の機能において、残基の可能性のある役割の分析、すなわち、ＣＤ１９に結合するための候補免疫グロブリンの能力に影響を及ぼす残基の分析を可能にする。このようにして、ＦＷ残基は、レシピエントおよびインポート配列から選択および組み合わせることができ、その結果、所望の抗体特徴、例えばＣＤ１９に対する親和性が達成される。概して、ＣＤＲ残基は、直接におよび最も実質的に、抗原結合に影響を及ぼすことに関与する。
【０２６５】
「ヒト化」抗体は、元の抗体と類似した抗原特異性、すなわち、本発明において、ヒトＣＤ１９抗原に結合する能力を保持することができる。しかしながら、ヒト化の特定の方法を用いて、ヒトＣＤ１９抗原に対する抗体の結合の親和性および／または特異性は、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ  Ｂｉｏｌ，２９４：１５１（１９９９）によって記載される「定向進化」の方法を用いて変化させられてもよく、この参考文献の内容は、本明細書での参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０２６６】
本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ＡもしくはＨＢ１２Ｂ相補性決定領域の、または次の節に記載される「ＣＤＲの」移植のための、特定のヒトフレームワーク領域の選択によって構築することができる。本発明は、マウスＨＢ１２ＡおよびＨＢ１２Ｂ抗体ならびにキメラバージョンである指定ｃｈＨＢ１２ＡおよびｃｈＨＢ１２Ｂの複数のヒト化バージョンを包含する。
【０２６７】
６．５．モノクローナル抗ＣＤ１９抗体
モノクローナル抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９抗原に対する結合特異性を示し、ヒトＡＤＣＣ、ＣＤＣ、および／またはアポトーシス機構を媒介し得る。かかる抗体は、ハイブリドーマ、組み換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当技術分野で既知の多種多様の技術を用いて生成することができる。抗体は、高特異的であり、単一の抗原部位に対して向けられる。操作された抗ＣＤ１９抗体は、下に記載される技術およびそれらの技術に対する改善を含むが、それらに限定されない、当技術分野で既知のいずれの手段によっても産生することができる。大規模な高収率産生は、典型的に、操作された抗ＣＤ１９抗体を産生する宿主細胞を培養することおよび抗ＣＤ１９抗体を宿主細胞培養物から回収することを伴う。
【０２６８】
６．５．１．ハイブリドーマ技術
モノクローナル抗体は、当技術分野で既知であり、かつ例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に教示される技術を含む、ハイブリドーマ技術を用いて産生することができ  る（該参考文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。例えば、ハイブリドーマ法では、マウスまたはハムスターもしくはマカクサル等の他の適切な宿主動物を免疫付与して、免疫付与に使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生することができるリンパ球を引き出す。また、リンパ球は、インビトロで免疫付与されてもよい。次いでリンパ球は、ポリエチレングリコール等の好適な融合剤を用いて骨髄腫細胞と融合され、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０２６９】
そのようにして調製されたハイブリドーマ細胞は、融合されていない親骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する好適な培養培地中に播種され、増殖させられる。例えば、親骨髄腫細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培養培地は、典型的に、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）を含むこととなり、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を予防する。
【０２７０】
具体的な実施形態は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの産生を支持し、ＨＡＴ培地等の培地に感受性がある骨髄腫細胞を用いる。これらの骨髄腫細胞株には、ＳａＩｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来する細胞株、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８．６５３細胞等の、マウス骨髄腫株が含まれる。また、ヒト骨髄腫およびマウス−ヒト異種骨髄腫細胞株は、ヒトモノクローナル抗体の産生のためにも説明されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０２７１】
ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地は、ヒトＣＤ１９抗原に対して向けられるモノクローナル抗体の産生のために検定される。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降性によって、または放射免疫測定法（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）等のインビトロ結合検定によって決定することができる。
【０２７２】
所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が特定された後、クローンは、希釈手順を制限することによってサブクローン化され、標準方法で増殖させられてもよい（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的のための好適な培養培地は、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ１６４０培地を含む。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物における腹水腫瘍としてインビボで増殖させられてもよい。
【０２７３】
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、タンパク質Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製手順によって、好適に培養培地、腹水液、または血清から分離される。
【０２７４】
６．５．２．組み換えＤＮＡ技術
本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて、容易に単離され、配列決定される（例えば、抗ＣＤ１９抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）。ハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの源として機能する。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター中に配置されてもよく、次いでそれは、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しないＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞等の宿主細胞にトランスフェクトされて、組み換え宿主細胞中の抗ＣＤ１９抗体の合成を得る。
【０２７５】
ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面上に示される。特に、ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリ（例えば、患部組織のヒトまたはマウスｃＤＮＡライブラリ）から増幅される。ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと共に組み換えられ、ファージミドベクターへとクローン化される。ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉ中で電気穿孔処理され、Ｅ．ｃｏｌｉは、ヘルパーファージに感染させられる。これらの方法で使用されるファージは、典型的に、ｆｄおよびＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶＨおよびＶＬドメインは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組み換え的に融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、例えば、標識化抗原または抗原結合を用いて抗原により選択または特定するか、または固体表面もしくはビーズに捕捉することができる。本発明の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８２：４１−５０、Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８４：１７７−１８６、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２４：９５２−９５８、Ｐｅｒｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｇｅｎｅ，１８７：９−１８、Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，５７：１９１−２８０、国際出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／Ｏ１  １３４号、国際公開第９０／０２８０９号、第９１／１０７３７号、第９２／０１０４７号、第９２／１８６１９号、第９３／１１２３６号、第９５／１５９８２号、第９５／２０４０１号、および第９７／１３８４４号、ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、第５，２２３，４０９号、第５，４０３，４８４号、第５，５８０，７１７号、第５，４２７，９０８号、第５，７５０，７５３号、第５，８２１，０４７号、第５，５７１，６９８号、第５，４２７，９０８号、第５，５１６，６３７号、第５，７８０，２２５号、第５，６５８，７２７号、第５，７３３，７４３号、および第５，９６９，１０８号に開示される例が挙げられ、これらの参考文献、公開、および特許の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２７６】
上の参考文献に記載される通り、ファージ選択後、ファージ由来の抗体コード領域は、ヒト抗体を含む全抗体、または他の任意の所望の抗原結合断片を生成するために単離および使用することができ、例えば、下記の通り、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の所望の宿主中で発現することができる。また、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片を組み換え的に産生する技術は、ＰＣＴ公開第９２／２２３２４号、Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１２（６）：８６４−８６９、Ｓａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＡＪＲＩ，３４：２６−３４、およびＢｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１−１０４３（該参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる）に開示される方法等の当技術分野で既知の方法を用いて利用することができる。
【０２７７】
抗体は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載される技術を用いて生成された抗体ファージライブラリから単離されてもよい。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）。Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．ＭｏＩ  Ｂｏｉｌ．、２２２：５８１−５９７（１９９１）は、それぞれファージライブラリを用いたマウスおよびヒト抗体の単離を記載している。鎖シャフリング、ならびに非常に大型のファージライブラリ（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６（１９９３））を構築するための戦略としてのコンビナトリアル感染およびインビボ組み換えは、高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生に使用することができる（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））。したがって、これらの技術は、抗ＣＤ１９抗体の単離のための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替手段である。
【０２７８】
全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、Ｆｖクローン中のＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に既知のクローン化技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインは、重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ４定常領域を発現するベクターへとクローン化することができ、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインは、軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターへとクローン化することができる。ＶＨまたはＶＬドメインを発現するためのベクターは、ＥＦ−１αプロモーター、分泌シグナル、可変ドメインのためのクローン化部位、定常ドメイン、およびネオマイシン等の選択マーカーを含んでもよい。また、ＶＨおよびＶＬドメインは、必要な定常領域を発現する１つのベクターへとクローン化されてもよい。次いで、重鎖転換ベクターおよび軽鎖転換ベクターは、当業者に既知の技術を用いて細胞株へコトランスフェクトされ、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定または一過性細胞株を生成する。
【０２７９】
また、ＤＮＡは、例えば、相同マウス配列の代わりに、ヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列で置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））、または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てまたは一部である免疫グロブリンコード配列に共有結合することによって修飾されてもよい。
【０２８０】
６．６．キメラ抗体
本明細書の抗ＣＤ１９抗体は、具体的に、それらが所望の生物学的活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するもしくは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（単数または複数）の別の一部が、別の種に由来するもしくは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である、キメラ抗体（免疫グロブリン）、ならびにかかる抗体の断片を含む（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本明細書の目的のキメラ抗体目的は、非ヒト霊長類（例えば、ヒヒ、アカゲザル、またはカニクイザル等の旧世界ザル）およびヒト定常領域配列（米国特許第５，６９３，７８０号）に由来する可変ドメイン抗原結合配列を含む「霊長類化」抗体を含む。
【０２８１】
６．７．変化した／突然変異抗体
組成物の抗ＣＤ１９抗体および本明細書に記載される方法は、突然変異抗体であり得る。本明細書で使用されるとき、「抗体突然変異」または「変化した抗体」は、抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸残基の１つ以上が修飾されている、抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列変異型を指す。抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列に対する修飾は、その抗原のための抗体の親和性または結合力を改善することができる配列に対する修飾、および／またはエフェクター機能を改善することができる抗体のＦｃ部分に対する修飾を含む。
【０２８２】
したがって、本発明は、本明細書に開示されるヒト、ヒト化、およびキメラ抗ＣＤ１９抗体、ならびに変化したヒトＣＤ１９結合特徴、例えば、変化した会合定数ｋＯＮ、解離定数ｋＯＦＦ、および／または平衡定数もしくは結合親和性ＫＤを示す抗体を含むが、それらに限定されないその変化した／突然変異誘導体に関する。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体またはヒトＣＤ１９のためのその変化した／突然変異誘導体のＫＤは、約１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、または１０−９Ｍ以下であってもよい。本発明の抗体またはその変化した／突然変異誘導体のかかる結合特徴の決定に好適な方法および試薬は、当技術分野で既知であり、および／または市販されている（上ならびに例えば、米国特許第６，８４９，４２５号、米国特許第６，６３２，９２６号、米国特許第６，２９４，３９１号、および米国特許第６，１４３，５７４号を参照されたく、これらの特許の各々は、参照によりその全体がこれによって組み込まれる）。また、かかる動力学分析のために設計された装置およびソフトウェアが市販されている（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ａ１００、およびＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）２０００機器、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）。
【０２８３】
本明細書に記載される通りに特定される、あらゆる既知の抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体に対する修飾が行われてもよい。かかる変化した抗体は、必然的に、既知の抗ＣＤ１９抗体との１００％未満の配列同一性または類似性を有する。例として、変化した抗体は、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体の重鎖または軽鎖可変ドメインのいずれかのアミノ酸配列と約２５％〜約９５％の範囲内で同一であるか、またはそれに類似したアミノ酸配列を有してもよい。変化した抗体は、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体の重鎖または軽鎖可変ドメインのいずれかのアミノ酸配列との少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有してもよい。別の実施形態では、変化した抗体は、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のアミノ酸配列との少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有してもよい。一実施形態では、変化した抗体は、ヒトＣＤ１９結合能力を維持することができる。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）、ＨＢ１２Ａ  ＶＨ（配列番号２）ＨＢ１２Ｂ  ＶＨ（配列番号１８）、７Ｅ１２  ＶＨ（配列番号１０２）、１４Ｈ５  ＶＨ（配列番号１０３）、１５Ｄ１  ＶＨ（配列番号１０４）、１５Ｄ７  ＶＨ（配列番号１０５）、１６Ｃ４  ＶＨ（配列番号１０６）、１４Ｈ５−ＹＧ（配列番号１０７）、１４Ｈ５−ＤＧ（配列番号１０８）、１４Ｈ５−ＬＧ（配列番号１０９）、１Ａ７  ＶＨ、３Ｃ３  ＶＨ、３Ｅ５  ＶＨ、３Ｄ４  ＶＨ、９Ｇ７  ＶＨ（配列番号１９１）、３Ｂ４  ＶＨ（配列番号２３６）、３Ｆ１１  ＶＨ、または６Ｃ１１  ＶＨ（配列番号１９２）のアミノ酸配列と少なくともまたは約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるＶＨを含んでもよい。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体は、表１に列挙されるＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＣＤＲのいずれのアミノ酸配列と少なくともまたは約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるＶＨを含んでもよい。
【０２８４】
別の実施形態では、変化した抗体は、ＨＢ１２Ｂ−（３−７２／ＪＨ４）（配列番号３４）、ＨＢ１２Ａ  ＶＨ（配列番号２）ＨＢ１２Ｂ  ＶＨ（配列番号１８）、７Ｅ１２  ＶＨ（配列番号１０２）、１４Ｈ５  ＶＨ（配列番号１０３）、１５Ｄ１  ＶＨ（配列番号１０４）、１５Ｄ７  ＶＨ（配列番号１０５）、１６Ｃ４  ＶＨ（配列番号１０６）、１４Ｈ５−ＹＧ（配列番号１０７）、１４Ｈ５−ＤＧ（配列番号１０８）、１４Ｈ５−ＬＧ（配列番号１０９）、１Ａ７  ＶＨ、３Ｃ３  ＶＨ、３Ｅ５  ＶＨ、３Ｄ４  ＶＨ、９Ｇ７  ＶＨ（配列番号１９１）、３Ｂ４  ＶＨ（配列番号２３６）、３Ｆ１１  ＶＨまたは６Ｃ１１  ＶＨ（配列番号１９２）のＦＷｌ、ＦＷ２、ＦＷ３、またはＦＷ４領域のアミノ酸配列との少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有してもよい。別の実施形態では、変化した抗体は、表１に列挙されるＶＨまたはＶＬドメインのＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３、またはＦＷ４領域のアミノ酸配列との少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有してもよい。
【０２８５】
別の実施形態では、変化した抗体は、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のアミノ酸配列との少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有してもよい。ある種の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２Ａ  ＶＫ（配列番号４）、ＨＢ１２Ｂ  ＶＫ（配列番号２０）、ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）（配列番号５２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９８７（または３６４９８７）（配列番号６２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９（または３６４９）（配列番号６８）、ＨＢ１２Ｂ−３６（または３６）（配列番号７０）、７Ｅ１２  ＶＫ（配列番号１１０）、１４Ｈ５（配列番号１１１）、１５Ｄｌ（配列番号１１２）、１６Ｃ９（配列番号１１３）、３Ｃ３  ＶＫ（配列番号１９３）、３Ｅ５  ＶＫ（配列番号１９４）、３Ｄ４  ＶＫ（配列番号１９５）、３Ｆ１  ＶＫ（配列番号１９６）、５Ｂ５  ＶＫ（配列番号１９７）、６Ｆ７  ＶＫ（配列番号１９８）、ＩＣ１１  ＶＫ（配列番号１９９）、２Ｂ１１  ＶＫ（配列番号２００）、２Ｄ１０  ＶＫ（配列番号２０１）、５Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０２）、５Ｄ４  ＶＫ（配列番号２０３）、６Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０４）、９Ｇ７  ＶＫ（配列番号２０５）、１Ｈ４  ＶＫ（配列番号２０６）、または５Ｃ４  ＶＫ（配列番号２０７）のアミノ酸配列と少なくともまたは約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるＶＬを含んでもよい。
【０２８６】
別の実施形態では、変化した抗体は、ＨＢ１２Ａ  ＶＫ（配列番号４）、ＨＢ１２Ｂ  ＶＫ（配列番号２０）、ＨＢ１２Ｂ−（Ａ１０−Ｊｋ４）（配列番号５２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９８７（または３６４９８７）（配列番号６２）、ＨＢ１２Ｂ−３６４９（または３６４９）（配列番号６８）、ＨＢ１２Ｂ−３６（または３６）（配列番号７０）、７Ｅ１２  ＶＫ（配列番号１１０）、１４Ｈ５（配列番号１１１）、１５Ｄ１（配列番号１１２）、１６Ｃ９（配列番号１１３）、３Ｃ３  ＶＫ（配列番号１９３）、３Ｅ５  ＶＫ（配列番号１９４）、３Ｄ４  ＶＫ（配列番号１９５）、３Ｆ１  ＶＫ（配列番号１９６）、５Ｂ５  ＶＫ（配列番号１９７）、６Ｆ７  ＶＫ（配列番号１９８）、１Ｃ１１  ＶＫ（配列番号１９９）、２Ｂ１１  ＶＫ（配列番号２００）、２Ｄ１０  ＶＫ（配列番号２０１）、５Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０２）、５Ｄ４  ＶＫ（配列番号２０３）、６Ｃ１１  ＶＫ（配列番号２０４）、９Ｇ７  ＶＫ（配列番号２０５）、１Ｈ４  ＶＫ（配列番号２０６）、または５Ｃ４  ＶＫ（配列番号２０７）のＦＷｌ、ＦＷ２、ＦＷ３、またはＦＷ４領域のアミノ酸配列との少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有してもよい。
【０２８７】
配列に対する同一性または類似性は、本明細書で、最大の配列同一性百分率を達成するために、配列を整列させ、必要な場合、ギャップを導入した後の、抗ＣＤ１９抗体残基と同一の（すなわち、同一残基）または類似した（すなわち、一般的な側鎖特性に基づいた同一塩基からのアミノ酸残基、下を参照されたい）候補配列中のアミノ酸残基の百分率として定められる。Ｎ末端、Ｃ末端、または内部伸長、欠失、または可変ドメインの外側の抗体配列への挿入のいずれも、配列同一性または類似性に影響を及ぼすものとして解釈されるべきではない。
【０２８８】
当技術分野で既知の「同一性％」は、それらの配列を比較することによって決定される、２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチドの間の関係の測定値である。概して、比較対象の２つの配列は、配列間の最大の相関を得るために整列させられる。２つの配列の整列が検査され、２つの配列間の完全なアミノ酸またはヌクレオチド対応関係をもたらす位置の数が決定され、それを整列の全長で割り、１００を掛けて同一性％の数字を得る。この同一性％の数字は、比較対象の配列の全長にわたって決定されてもよく、それは同一のまたは非常に類似した長さの配列および非常に相同な配列に特に好適であり、あるいはより短い規定の長さにわたって決定されてもよく、それは不均等な長さの配列またはより低レベルの相同性を有する配列により好適である。
【０２８９】
例えば、配列は、「．ａｌｎ」拡張子を備えるファイルを生成するＵｎｉｘ下でのソフトウェアＣｌｕｓｔａｌｗにより整列させることができ、次いでこのファイルは、．ａｌｎファイルを開くＢｉｏｅｄｉｔプログラムへとインポートすることができる（Ｈａｌｌ，Ｔ．Ａ．１９９９，ＢｉｏＥｄｉｔ：ａ  ｕｓｅｒ−ｆｒｉｅｎｄｌｙ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｅｄｉｔｏｒ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ  ９５／９８／ＮＴ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．４１：９５−９８）。Ｂｉｏｅｄｉｔウィンドウでは、個々の配列（１度に２つ）を選択し、それらを整列させることができる。この方法は、配列全体の比較を可能にする。
【０２９０】
２つ以上の配列の同一性を比較するための方法は、当技術分野で周知である。したがって、例えば、プログラムは、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，ｖｅｒｓｉｏｎ  ９．１（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１２：３８７−３９５，１９８４、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡから入手可能）で入手可能である。２つの配列間の百分率同一性の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。例えば、プログラムＢＥＳＴＦＩＴおよびＧＡＰを使用して、２つのポリヌクレオチドの間の同一性％および２つのポリペプチド配列の間の同一性％を決定してもよい。ＢＥＳＴＦＩＴは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎの「局地的相同性」アルゴリズムを使用し（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ，２：４８２−４８９，１９８１）、２つの配列間の類似性の最適な単一領域を見出す。ＢＥＳＴＦＩＴは、長さの異なる２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド配列を比較するのにより適しており、このプログラムは、より短い配列がより長い配列の部分を表すことを想定する。比較すると、ＧＡＰは、２つの配列を整列させ、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈのアルゴリズムに従って「最大類似性」を見出す（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３−３５４，１９７０）。ＧＡＰは、およそ同一の長さである配列を比較するのにより適しており、整列は、全長にわたって予測される。例えば、各プログラムで使用されるパラメータ「Ｇａｐ  Ｗｅｉｇｈｔ」および「Ｌｅｎｇｔｈ  Ｗｅｉｇｈｔ」は、それぞれ、ポリヌクレオチドについて５０および３、ならびにポリペプチドについて１２および４である。本発明の幾つかの態様では、同一性および類似性％は、比較されている２つの配列が最適に整列させられているときに決定される。
【０２９１】
また、配列間の同一性および／または類似性を決定するための他のプログラム、例えば、ＢＬＡＳＴのプログラムのファミリー（Ｋａｒｌｉｎ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８７：２２６４−２２６８，ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ａｓ  ｉｎ  Ｋａｒｌｉｎ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９０：５８７３−５８７７、ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢ），Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡから入手可能であり、ＮＣＢＩのホームページｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを通じてアクセス可能）も、当技術分野で既知である。これらのプログラムは、２つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの非限定的例である。かかるアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２１５：４０３−４１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、スコア＝１００、ワード長＝１２としたＮＢＬＡＳＴプログラムにより行い、本発明の抗ＣＤ１９抗体の全てまたは一部をコードする核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、スコア＝５０、ワード長＝３としたＸＢＬＡＳＴプログラムにより行い、本発明のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のためのギャップ整列を得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２５：３３８９−３４０２に記載される通り、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを利用することができる。また、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔを使用して分子の間の距離関係を検出する反復検索を行うこともできる（同文献）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を参照されたい。
【０２９２】
当技術分野で既知である、配列間の同一性および／または類似性を決定するためのプログラムの別の非限定的例としては、ＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ  Ｗ．Ｒ．ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ  Ｄ．Ｊ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：２４４４−２４４８，１９８８、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅの一部として入手可能）が挙げられる。ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換マトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  Ｓ．ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  Ｊ．Ｇ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８９：１０９１５−１０９１９，１９９２）は、比較前にヌクレオチド配列が最初にアミノ酸配列に翻訳される場合を含む、ポリペプチド配列比較に使用されてもよい。
【０２９３】
アミノ酸配列間の同一性および／または類似性を決定するための、当技術分野で既知のプログラムのさらに別の非限定的例としては、ＳｅｑＷｅｂ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ：Ｇａｐプログラムとのウェブベースのインターフェース）が挙げられ、それはプログラムの次のデフォルトアルゴリズムおよびパラメータ設定により利用される：ｂｌｏｓｕｍ６２、ｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔ８、ｌｅｎｇｔｈ  ｗｅｉｇｈｔ２。
【０２９４】
２つの配列間の同一性百分率は、ギャップを許容しながら、または許容せずに、上述の技術に類似した技術を用いて決定することができる。同一性百分率を算出する際には、典型的に完全なマッチが数えられる。
【０２９５】
プログラムＢＥＳＴＦＩＴを使用して、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの配列に対する、問い合わせポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の同一性％を決定してもよく、問い合わせおよび参照配列は、最適に整列させられ、プログラムのパラメータは、デフォルト値に設定される。
【０２９６】
変化した抗体を生成するために、１つ以上のアミノ酸変化（例えば、置換）が、種依存性抗体の高度可変領域の１つ以上に導入される。また、フレームワーク領域残基の１つ以上の変化（例えば、置換）は、これらが第２の哺乳類種由来の抗原に対する抗体突然変異体の結合親和性の改善をもたらす抗ＣＤ１９抗体に導入されてもよい。修正するためのフレームワーク領域残基の例としては、非共有で抗原に直接結合する（Ａｍｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３：７４７−７５３（１９８６））、ＣＤＲの立体配座と相互作用する／ＣＤＲの立体配座を有効にする（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９６：９０１−９１７（１９８７））、および／またはＶＬ−ＶＨインターフェースに関与する（欧州特許第２３９  ４００Ｂ  １号）残基が含まれる。ある種の実施形態では、かかるフレームワーク領域残基の１つ以上の修飾は、第２の哺乳類種由来の抗原に対する抗体の結合親和性の強化をもたらす。例えば、本発明のこの実施形態で、約１つ〜約５つのフレームワーク残基が変化させられてもよい。時に、これは、高度可変領域残基が全く変化させられていない場合でさえも、前臨床試験における使用に好適な抗体突然変異を得るために十分であり得る。しかしながら、変化した抗体は、通常は、さらなる高度可変領域変化（単数または複数）を含むであろう。
【０２９７】
変化させられた高度可変領域残基は、無作為に変化させられてもよく、それは特に第２の哺乳類種由来の抗原に対する抗ＣＤ１９抗体の出発結合親和性が、かかる無作為に産生された変化した抗体が容易にスクリーニングされ得るような親和性である場合に当てはまる。
【０２９８】
かかる変化した抗体を生成するための１つの有用な手順は、「アラニン走査突然変異誘発」と呼ばれる（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９））。ここで、高度可変領域残基の１つ以上は、アラニンまたはポリアラニン残基（単数または複数）によって置換され、第２の哺乳類種由来の抗原とのアミノ酸の相互作用に影響を及ぼす。次いで置換に対する機能的感度を示すこれらの高度可変領域残基（単数または複数）は、置換の部位におけるまたは置換の部位のための、さらなるまたは他の突然変異を導入することによって改良される。したがって、アミノ酸配列変形を導入するための部位が事前に決定される一方で、突然変異の性質それ自体は、事前に決定される必要がない。このようにして産生されたＡｌａ−突然変異体は、本明細書に記載される通り、それらの生物学的活性についてスクリーニングされる。
【０２９９】
かかる変化した抗体を生成するための別の手順は、ファージディスプレイを用いた親和性成熟を伴う（Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２５４：８８９−８９６（１９９２）ａｎｄ  Ｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０（４５）：１０８３２−１０８３７（１９９１））。手短に述べると、複数の高度可変領域部位（例えば、６−７位）は、突然変異させられて、各部位における全ての可能なアミノ酸置換を生じさせる。このようにして生成された抗体突然変異体は、各粒子内に包囲されたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物との融合体として、繊維状ファージ粒子から一価的に示される。次いでファージディスプレイ突然変異体は、本明細書に開示される通り、それらの生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０３００】
抗体配列内の突然変異は、置換、内部欠失を含む欠失、融合タンパク質を産出する付加を含む付加、またはアミノ酸配列内および／もしくはアミノ酸配列に隣接したアミノ酸残基の保存的置換を含んでもよいが、それは、その変化が機能的に同等の抗ＣＤ１９抗体を産生するという点で、「サイレントな」変化をもたらす。保存的アミノ酸置換は、関与する残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、および／または両親媒性性質の類似性に基づいて行われてもよい。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸は、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、およびメチオニンを含み、極性中性アミノ酸は、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、およびグルタミンを含み、正電荷性（塩基性）アミノ酸は、アルギニン、リシン、およびヒスチジンを含み、負電荷性（酸性）アミノ酸は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。加えて、グリシンおよびプロリンは、鎖配向に影響を及ぼし得る残基である。非保存的置換は、これらのクラスのメンバーを別のクラスのメンバーと置換することを伴うであろう。さらに、所望の場合、非古典的アミノ酸または化学的アミノ酸類自体を、置換または抗体配列への付加として導入することができる。非古典的アミノ酸には、一般的なアミノ酸のＤ−異性体、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロ−アミノ酸、β−メチルアミノ酸、Ｃα−メチルアミノ酸、Ｎα−メチルアミノ酸、および一般的なアミノ酸類似体等のデザイナーアミノ酸が含まれるが、それらに限定されない。
【０３０１】
別の実施形態では、修飾のために選択される部位は、ファージディスプレイを用いて成熟させられた親和性である（上を参照）。
【０３０２】
抗体配列内のアミノ酸置換（単数または複数）を行う目的のために、または制限部位を作り出して／欠失させてさらなる操作を促進するために、当技術分野で既知の、突然変異誘発のための任意の技術を使用してＤＮＡ配列内の個々のヌクレオチドを修飾することができる。かかる技術には、化学的突然変異誘発、インビトロ部位特異的突然変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８２：４８８（１９８５）、Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５３：６５５１（１９７８））、オリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発（Ｓｍｉｔｈ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，１９：４２３−４６３（１９８５）、Ｈｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１５５：５５８−５６８（１９８７））、ＰＣＲベースの重複伸長（Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，７７：５１−５９（１９８９））、ＰＣＲベースのメガプライマー突然変異誘発（Ｓａｒｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，８：４０４−４０７（１９９０））等が含まれるが、それらに限定されない。修飾は、２本鎖ジデオキシＤＮＡ塩基配列決定によって確認することができる。
【０３０３】
本発明のある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体を修飾して、融合タンパク質、すなわち、異種タンパク質であるポリペプチドまたはペプチドに融合された抗体またはその断片を産生することができる。ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体の一部に融合されたタンパク質は、Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｐｒｏｄｒｕｇ  Ｔｈｅｒａｐｙ（ＡＤＥＰＴ）の酵素構成成分である。抗ＣＤ１９抗体との融合タンパク質として操作することができる、他のタンパク質またはポリペプチドの例としては、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリン毒素、緑膿菌外毒素、および緑膿菌内毒素等の毒素が挙げられるが、それらに限定されない。例えば、Ｐａｓｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４７：６４１（１９８６）、およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ，４４：４３（１９９４）を参照されたい。使用することができる酵素的に活性な毒素およびそれらの断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォルディイタンパク質、ジアンシンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・カランチア阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、リストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセネスが含まれる。例えば、１９９３年１０月２８日に公開された国際公開第９３／２１２３２号を参照されたい。
【０３０４】
さらなる融合タンパク質は、遺伝子シャフリング、モチーフシャフリング、エキソンシャフリング、および／またはコドンシャフリング（集団的に「ＤＮＡシャフリング」と称される）の技術を通じて生成されてもよい。ＤＮＡシャフリングを用いて、抗ＣＤ１９抗体またはそれらの断片の活性を変化させてもよい（例えば、より高い親和性およびより低い解離率を備える抗体またはその断片）。一般的には、米国特許第５，６０５，７９３号、第５，８１１，２３８号、第５，８３０，７２１号、第５，８３４，２５２号、および第５，８３７，４５８号、ならびにＰａｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，８：７２４−３３、Ｈａｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６−８２、Ｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．ＭｏＩ  Ｂｉｏｌ，２８７：２６５−７６、およびＬｏｒｅｎｚｏ  ａｎｄ  Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２４（２）：３０８−３１３を参照されたい（これらの特許および公開の各々は、参照によりその全体がこれによって組み込まれる）。抗体はさらに、全てＬｅｄｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国公開第２００３０１１８５９２号、米国公開第２００３３０１３３９３９号、およびＰＣＴ公開第０２／０５６９１０号に記載される結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質であり得、これらの公開は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０３０５】
本発明のある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、親抗体である。「親抗体」は、本明細書に開示される変化した／突然変異抗体と比較して、その１つ以上の高度可変領域内の、もしくはその１つ以上の高度可変領域に隣接した１つ以上のアミノ酸残基を欠き得るか、または欠損し得るアミノ酸配列を含む抗体である。したがって、親抗体は、本明細書に開示される抗体突然変異体の対応する高度可変領域よりも短い高度可変領域を有してもよい。親ポリペプチドは、天然抗体配列（すなわち、天然産対立遺伝子変異体を含む天然産）または天然産配列の既存のアミノ酸配列修飾（他の挿入、欠失、および／または置換等）を備える抗体配列を含んでもよい。親抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体であってもよい。
【０３０６】
６．８．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的二重特異性抗体は、Ｂ細胞表面マーカーの２つの異なるエピトープに結合することができる。他のかかる抗体は、第１のＢ細胞マーカーに結合することができ、さらに第２のＢ細胞表面マーカーに結合することができる。また、抗Ｂ細胞マーカー結合アームは、細胞性防御機構をＢ細胞に集中させるために、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２またはＣＤ３）等の白血球上の誘発分子、またはＩｇＧ（ＦｃγＲ）のためのＦｃ受容体に結合するアームと組み合わされてもよい。また、二重特異性抗体を使用して、細胞傷害性薬物をＢ細胞に局在化させてもよい。これらの抗体は、Ｂ細胞マーカー結合アームおよび細胞傷害性薬物（例えば、サポリン、抗インターフェロン−α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトラ・エキセート、または放射性同位体ハプテン）に結合するアームを有する。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）：二重特異性抗体）として調製することができる。
【０３０７】
二重特異性抗体を作製するための方法は、当技術分野で既知である。（例えば、Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３）、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯＪ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５２：５３６８（１９９４）、米国特許第４，４７４，８９３号、第４，７１４，６８１号、第４，９２５，６４８号、第５，５７３，９２０号、第５，６０１，８１号、第９５，７３１，１６８号、第４，６７６，９８０号、および第４，６７６，９８０、国際公開第９４／０４６９０号、国際公開第９１／００３６０号、国際公開第９２／２００３７３号、国際公開第９３／１７７１５号、国際公開第９２／０８８０２号、および欧州特許第０３０８９号を参照されたい。）
【０３０８】
一実施形態では、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体が二重特異性である場合、抗ＣＤ１９抗体は、ヒトまたはヒト化であってもよく、かつヒトＣＤ１９およびＴ細胞上のエピトープに対する特異性を有してもよいか、または例えば、細胞死を有効にするための単球／マクロファージおよび／またはナチュラルキラー細胞等のヒトエフェクター細胞に結合することができてもよい。
【０３０９】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、第１および第２の抗原に特異的に結合することができる二重特異性抗体であり、該第１の抗原は、ヒトＣＤ１９であり、該第２の抗原は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＶからなる群から選択されるＦｃガンマ受容体である。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９およびＦｃγＲＩＩＢに特異的に結合することができる二重特異性抗体である。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９およびヒトＦｃγＲＩＩＢに特異的に結合することができる二重特異性抗体である。
【０３１０】
６．９．変異型Ｆｃ領域
本発明は、変異型Ｆｃ領域を含むタンパク質の製剤を提供する。
つまり、非天然産Ｆｃ領域、例えば、１つ以上の非天然産アミノ酸残基を含むＦｃ領域である。また、アミノ酸欠失、付加および／または修飾を含むＦｃ領域も、本発明の変異型Ｆｃ領域に包含される。
【０３１１】
本明細書で使用されるＦｃ領域は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除外する抗体の定常領域を含むポリペプチドを含むことが理解されよう。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにこれらのドメインに対する柔軟なヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭについては、Ｆｃは、Ｊ鎖を含んでもよい。ＩｇＧについては、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣガンマ２およびＣガンマ３（Ｃγ２およびＣγ３）、ならびにＣガンマｌ（Ｃγｌ）とＣガンマ２（Ｃγ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は、異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシル末端に対する残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むように定められ、ここで付番は、Ｋａｂａｔら（１９９１，Ｎ１Ｈ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ）にあるＥＵインデックスに従う。「Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックス」とは、上のＫａｂａｔらに記載されるヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基の付番を指す。Ｆｃは、単離されたこの領域、または抗体、抗体断片、もしくはＦｃ融合タンパク質の文脈におけるこの領域を指してもよい。Ｆｃ変異型タンパク質は、抗体、Ｆｃ融合体、またはＦｃの非天然産変異体である変異型Ｆｃ領域を含むタンパク質を含むが、それらに限定されないＦｃ領域を含むいずれのタンパク質もしくはタンパク質ドメインであってもよい。注：Ｋａｂａｔ２７０、２７２、３１２、３１５、３５６、および３５８を含むが、それらに限定されない複数のＦｃ位置で多形が観察されており、したがって、提示の配列と先行技術分野における配列との間に僅かな差異が存在し得る。
【０３１２】
本発明は、同等の分子（例えば、野生型Ｆｃ領域を有することを除いて同一のアミノ酸配列を有するタンパク質）と比較して、Ｆｃリガンド（例えば、Ｆｃ受容体、Ｃｌｑ）に対する変化した結合特性を有するＦｃ変異型タンパク質を包含する。結合特性の例としては、結合特異性、平衡解離定数（ＫＤ）、解離率および会合率（それぞれｋｏｆｆおよびｋｏｎ）、結合親和性、ならびに／または結合力が挙げられるが、それらに限定されない。概して、低いＫＤを備える結合分子（例えば、抗体等のＦｃ変異型タンパク質）は、高いＫＤを備える結合分子よりも好ましい可能性があることが理解される。しかしながら、幾つかの例では、ｋｏｎおよびｋｏｆｆの値は、ＫＤの値よりも適切である可能性がある。当業者は、どの動力学パラメータが、所定の抗体用途に最も重要であるかを決定することができる。
【０３１３】
そのリガンドに対するＦｃドメインの親和性および結合特性は、Ｆｃ−ＦｃγＲ相互作用、すなわち、ＦｃγＲへのＦｃ領域の特異的結合を決定するための、当技術分野で既知の多種多様のインビトロ検定法（生化学的または免疫学的ベースの検定）によって決定されてもよく、それには平衡方法（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、または放射免疫測定法（ＲＩＡ））、または動力学（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析）、ならびに間接結合検定、競合阻害検定、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動、およびクロマトグラフィー（例えば、ゲルろ過）等の他の方法が含まれるが、それらに限定されない。これらのおよび他の方法は、検査されている構成成分の１つ以上に対する標識を利用してもよく、および／または色素生成法、蛍光法、発光法、または同位体法を含むが、それらに限定されない多種多様の検出方法を用いてもよい。結合親和性および動力学の詳細な説明は、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）に見出すことができ、それは抗体−免疫原相互作用に焦点を合わせている。
【０３１４】
一実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、１つ以上のＦｃリガンドへの強化された結合を有する。別の実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子の親和性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍高い、Ｆｃリガンドに対する親和性を有する。具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、Ｆｃ受容体への強化された結合を有する。別の具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの強化された結合を有する。さらなる具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＢへの強化された結合を有する。さらに別の具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃＲｎへの強化された結合を有する。また別の具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、ＣＩｑへの強化された結合を有する。
【０３１５】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、変異型Ｆｃドメインを含み、該変異型Ｆｃドメインは、同等の非変異型Ｆｃドメインと比較して、Ｆｃガンマ受容体ＨＢへの強化された結合親和性を有する。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、変異型Ｆｃドメインを含み、該変異型Ｆｃドメインは、同等の非変異型Ｆｃドメインの親和性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍高い、Ｆｃガンマ受容体ＨＢに対する親和性を有する。
【０３１６】
Ｆｃ領域を含むタンパク質の血清半減期は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合親和性を増加させることによって、増加させられてもよい。一実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、増大された血清半減期を有する。
【０３１７】
「抗体依存性細胞媒介型細胞傷害性」または「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に結合された分泌Ｉｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が、抗原含有標的細胞に特異的に結合し、その後、細胞傷害性により標的細胞を死滅させることを可能にする、細胞傷害性の形態を指す。標的細胞の表面を対象とした特異的高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞を「作動可能にし（ａｒｍ）」、かかる死滅に不可欠である。標的細胞の溶解は、細胞外性であり、直接の細胞対細胞の接触を必要とし、補体を伴わない。抗体に加えて、抗原含有標的細胞に特異的に結合する能力を有するＦｃ領域を含む他のタンパク質、具体的にＦｃ融合タンパク質は、細胞媒介型細胞傷害性を有効にすることができることが企図される。簡潔にするために、Ｆｃ融合タンパク質の活性からもたらされる細胞媒介型細胞傷害性もまた、本明細書でＡＤＣＣ活性と称される。
【０３１８】
任意の特定のＦｃ変異型タンパク質の、ＡＤＣＣによって標的細胞の溶解を媒介する能力を検定することができる。ＡＤＣＣ活性を査定するために、目的のＦｃ変異型タンパク質は、免疫エフェクター細胞と組み合わせて標的細胞に付加され、免疫エフェクター細胞は、抗原抗体複合体によって活性化され得、標的細胞の細胞溶解をもたらす。細胞溶解は、概して、溶解した細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光色素、または天然細胞内タンパク質）の放出によって検出される。かかる検定のために有用なエフェクター細胞には、抹消血液単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。インビトロＡＤＣＣ検定の特異的の例は、Ｗｉｓｅｃａｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７９：２７７−２８２、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １６６：１３５１−１３６１、Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５８：１８３−１９１、Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：２９−３８に記載される。また、目的のＦｃ変異型タンパク質のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６に開示されるモデル等の動物モデルにおいて、インビボで査定されてもよい。
【０３１９】
一実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、強化されたＡＤＣＣ活性を有する。具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子のＡＤＣＣ活性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍高いＡＤＣＣ活性を有する。別の具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの強化された結合を有し、強化されたＡＤＣＣ活性を有する。他の実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、強化されたＡＤＣＣ活性および増大された血清半減期の双方を有する。
【０３２０】
一実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、低減されたＡＤＣＣ活性を有する。具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子のＡＤＣＣ活性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍低いＡＤＣＣ活性を有する。別の具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの低減された結合を有し、低減されたＡＤＣＣ活性を有する。他の実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、低減されたＡＤＣＣ活性および増大された血清半減期の双方を有する。
【０３２１】
「補体依存性細胞傷害性」および「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。補体活性経路は、補体系（ＣＩｑ）の第１の構成成分の、同族抗原と複合される分子、例えば、抗体への結合によって開始される。補体活性を査定するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３に記載されるＣＤＣ検定が行われてもよい。一実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、強化されたＣＤＣ活性を有する。具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子のＣＤＣ活性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍高いＣＤＣ活性を有する。他の実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、強化されたＣＤＣ活性および増大された血清半減期の双方を有する。
【０３２２】
一実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、１つ以上のＦｃリガンドへの低減された結合を有する。別の実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子の親和性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍低い、Ｆｃリガンドに対する親和性を有する。具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、Ｆｃ受容体への低減された結合を有する。別の具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの低減された結合を有する。さらなる具体的な実施形態では、本明細書に記載されるＦｃ変異体は、同等の分子の親和性よりも少なくとも約５倍低い、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性を有し、該Ｆｃ変異体は、同等の分子の親和性の約２倍以内である、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＢに対する親和性を有する。さらに別の具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃＲｎへの低減された結合を有する。また別の具体的な実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、同等の分子と比較して、ＣＩｑへの低減された結合を有する。
【０３２３】
一実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異体を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２５１、２５２、２５４、２５５、２５６、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７９、２８０、２８４、２９２、２９６、２９７、２９８、２９９、３０５、３１３、３１６、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３９、３４１、３４３、３７０、３７３、３７８、３９２、４１６、４１９、４２１、４４０、および４４３からなる群から選択される１つ以上の位置に非天然産アミノ酸残基を含む。任意に、Ｆｃ領域は、当業者に既知のさらなるおよび／または代替的位置に非天然産アミノ酸残基を含んでもよい（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、第６，２７７，３７５号、第６，７３７，０５６号、ＰＣＴ特許公開第０１／５８９５７号、第０２／０６９１９号、第０４／０１６７５０号、第０４／０２９２０７号、第０４／０３５７５２号、第０４／０７４４５５号、第０４／０９９２４９号、第０４／０６３３５１号、第０５／０７０９６３号、第０５／０４０２１７号、第０５／０９２９２５号、および第０６／０２０１１４号を参照されたい）。
【０３２４】
一実施形態では、本発明は、製剤を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２５１、２５２、２５４、２５５、２５６、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７９、２８０、２８４、２９２、２９６、２９７、２９８、２９９、３０５、３１３、３１６、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３９、３４１、３４３、３７０、３７３、３７８、３９２、４１６、４１９、４２１、４４０、および４４３からなる群から選択される１つ以上の位置に非天然産アミノ酸残基を含む。任意に、Ｆｃ領域は、当業者に既知のさらなるおよび／または代替的位置に非天然産アミノ酸残基を含んでもよい（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、第６，２７７，３７５号、第６，７３７，０５６号、ＰＣＴ特許公開第０１／５８９５７号、第０２／０６９１９号、第０４／０１６７５０号、第０４／０２９２０７号、第０４／０３５７５２号、第０４／０７４４５５号、第０４／０９９２４９号、第０４／０６３３５１号、第０５／０７０９６３号、第０５／０４０２１７号、第０５／０９２９２５号、および第０６／０２０１１４号を参照されたい）。
【０３２５】
具体的な実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異体を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｎ、２３４Ｑ、２３４Ｔ、２３４Ｈ、２３４Ｙ、２３４Ｉ、２３４Ｖ、２３４Ｆ、２３５Ａ、２３５Ｄ、２３５Ｒ、２３５Ｗ、２３５Ｐ、２３５Ｓ、２３５Ｎ、２３５Ｑ、２３５Ｔ、２３５Ｈ、２３５Ｙ、２３５１、２３５Ｖ、２３５Ｆ、２３６Ｅ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２３９Ｎ、２３９Ｑ、２３９Ｆ、２３９Ｔ、２３９Ｈ、２３９Ｙ、２４０１、２４０Ａ、２４０Ｔ、２４０Ｍ、２４１Ｗ、２４１Ｌ、２４１Ｙ、２４１Ｅ、２４１Ｒ、２４３Ｗ、２４３Ｌ、２４３Ｙ、２４３Ｒ、２４３Ｑ、２４４Ｈ、２４５Ａ、２４７Ｌ、２４７Ｖ、２４７Ｇ、２５１Ｆ、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５５Ｌ、２５６Ｅ、２５６Ｍ、２６２１、２６２Ａ、２６２Ｔ、２６２Ｅ、２６３１、２６３Ａ、２６３Ｔ、２６３Ｍ、２６４Ｌ、２６４１、２６４Ｗ、２６４Ｔ、２６４Ｒ、２６４Ｆ、２６４Ｍ、２６４Ｙ、２６４Ｅ、２６５Ｇ、２６５Ｎ、２６５Ｑ、２６５Ｙ、２６５Ｆ、２６５Ｖ、２６５１、２６５Ｌ、２６５Ｈ、２６５Ｔ、２６６１、２６６Ａ、２６６Ｔ、２６６Ｍ、２６７Ｑ、２６７Ｌ、２６８Ｅ、２６９Ｈ、２６９Ｙ、２６９Ｆ、２６９Ｒ、２７０Ｅ、２８０Ａ、２８４Ｍ、２９２Ｐ、２９２Ｌ、２９６Ｅ、２９６Ｑ、２９６Ｄ、２９６Ｎ、２９６Ｓ、２９６Ｔ、２９６Ｌ、２９６１、２９６Ｈ、２６９Ｇ、２９７Ｓ、２９７Ｄ、２９７Ｅ、２９８Ｈ、２９８１、２９８Ｔ、２９８Ｆ、２９９１、２９９Ｌ、２９９Ａ、２９９Ｓ、２９９Ｖ、２９９Ｈ、２９９Ｆ、２９９Ｅ、３０５１、３１３Ｆ、３１６Ｄ、３２５Ｑ、３２５Ｌ、３２５１、３２５Ｄ、３２５Ｅ、３２５Ａ、３２５Ｔ、３２５Ｖ、３２５Ｈ、３２７Ｇ、３２７Ｗ、３２７Ｎ、３２７Ｌ、３２８Ｓ、３２８Ｍ、３２８Ｄ、３２８Ｅ、３２８Ｎ、３２８Ｑ、３２８Ｆ、３２８１、３２８Ｖ、３２８Ｔ、３２８Ｈ、３２８Ａ、３２９Ｆ、３２９Ｈ、３２９Ｑ、３３０Ｋ、３３０Ｇ、３３０Ｔ、３３０Ｃ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３０Ｖ、３３０１、３３０Ｆ、３３０Ｒ、３３０Ｈ、３３  ＩＧ、３３１Ａ、３３１Ｌ、３３１Ｍ、３３１Ｆ、３３１Ｗ、３３１Ｋ、３３１Ｑ、３３１Ｅ、３３１Ｓ、３３１Ｖ、３３１１、３３１Ｃ、３３１Ｙ、３３１Ｈ、３３１Ｒ、３３  ＩＮ、３３  ＩＤ、３３  ＩＴ、３３２Ｄ、３３２Ｓ、３３２Ｗ、３３２Ｆ、３３２Ｅ、３３２Ｎ、３３２Ｑ、３３２Ｔ、３３２Ｈ、３３２Ｙ、３３２Ａ、３３９Ｔ、３７０Ｅ、３７０Ｎ、３７８Ｄ、３９２Ｔ、３９６Ｌ、４１６Ｇ、４１９Ｈ、４２１Ｋ、４４０Ｙ、および４３４Ｗからなる群から選択される少なくとも１つの非天然産アミノ酸残基を含む。任意に、Ｆｃ領域は、当業者に既知のさらなるおよび／または代替的な非天然産アミノ酸残基を含んでもよい（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、第６，２７７，３７５号、第６，７３７，０５６号、ＰＣＴ特許公開第０１／５８９５７号、第０２／０６９１９号、第０４／０１６７５０号、第０４／０２９２０７号、第０４／０３５７５２号、および第０５／０４０２１７号を参照されたい）。
【０３２６】
具体的な実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異体を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｎ、２３４Ｑ、２３４Ｔ、２３４Ｈ、２３４Ｙ、２３４Ｉ、２３４Ｖ、２３４Ｆ、２３５Ａ、２３５Ｄ、２３５Ｒ、２３５Ｗ、２３５Ｐ、２３５Ｓ、２３５Ｎ、２３５Ｑ、２３５Ｔ、２３５Ｈ、２３５Ｙ、２３５Ｉ、２３５Ｖ、２３５Ｆ、２３６Ｅ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２３９Ｎ、２３９Ｑ、２３９Ｆ、２３９Ｔ、２３９Ｈ、２３９Ｙ、２４０１、２４０Ａ、２４０Ｔ、２４０Ｍ、２４１Ｗ、２４１Ｌ、２４１Ｙ、２４１Ｅ、２４１Ｒ、２４３Ｗ、２４３Ｌ、２４３Ｙ、２４３Ｒ、２４３Ｑ、２４４Ｈ、２４５Ａ、２４７Ｌ、２４７Ｖ、２４７Ｇ、２５１Ｆ、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５５Ｌ、２５６Ｅ、２５６Ｍ、２６２Ｉ、２６２Ａ、２６２Ｔ、２６２Ｅ、２６３Ｉ、２６３Ａ、２６３Ｔ、２６３Ｍ、２６４Ｌ、２６４Ｉ、２６４Ｗ、２６４Ｔ、２６４Ｒ、２６４Ｆ、２６４Ｍ、２６４Ｙ、２６４Ｅ、２６５Ｇ、２６５Ｎ、２６５Ｑ、２６５Ｙ、２６５Ｆ、２６５Ｖ、２６５Ｉ、２６５Ｌ、２６５Ｈ、２６５Ｔ、２６６Ｉ、２６６Ａ、２６６Ｔ、２６６Ｍ、２６７Ｑ、２６７Ｌ、２６８Ｅ、２６９Ｈ、２６９Ｙ、２６９Ｆ、２６９Ｒ、２７０Ｅ、２８０Ａ、２８４Ｍ、２９２Ｐ、２９２Ｌ、２９６Ｅ、２９６Ｑ、２９６Ｄ、２９６Ｎ、２９６Ｓ、２９６Ｔ、２９６Ｌ、２９６Ｉ、２９６Ｈ、２６９Ｇ、２９７Ｓ、２９７Ｄ、２９７Ｅ、２９８Ｈ、２９８Ｉ、２９８Ｔ、２９８Ｆ、２９９Ｉ、２９９Ｌ、２９９Ａ、２９９Ｓ、２９９Ｖ、２９９Ｈ、２９９Ｆ、２９９Ｅ、３０５Ｉ、３１３Ｆ、３１６Ｄ、３２５Ｑ、３２５Ｌ、３２５１、３２５Ｄ、３２５Ｅ、３２５Ａ、３２５Ｔ、３２５Ｖ、３２５Ｈ、３２７Ｇ、３２７Ｗ、３２７Ｎ、３２７Ｌ、３２８Ｓ、３２８Ｍ、３２８Ｄ、３２８Ｅ、３２８Ｎ、３２８Ｑ、３２８Ｆ、３２８Ｉ、３２８Ｖ、３２８Ｔ、３２８Ｈ、３２８Ａ、３２９Ｆ、３２９Ｈ、３２９Ｑ、３３０Ｋ、３３０Ｇ、３３０Ｔ、３３０Ｃ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３０Ｖ、３３０Ｉ、３３０Ｆ、３３０Ｒ、３３０Ｈ、３３１Ｇ、３３１Ａ、３３１Ｌ、３３１Ｍ、３３１Ｆ、３３１Ｗ、３３１Ｋ、３３１Ｑ、３３１Ｅ、３３１Ｓ、３３１Ｖ、３３１Ｉ、３３１Ｃ、３３１Ｙ、３３１Ｈ、３３１Ｒ、３３１Ｎ、３３１Ｄ、３３１Ｔ、３３２Ｄ、３３２Ｓ、３３２Ｗ、３３２Ｆ、３３２Ｅ、３３２Ｎ、３３２Ｑ、３３２Ｔ、３３２Ｈ、３３２Ｙ、３３２Ａ、３３９Ｔ、３７０Ｅ、３７０Ｎ、３７８Ｄ、３９２Ｔ、３９６Ｌ、４１６Ｇ、４１９Ｈ、４２１Ｋ、４４０Ｙ、および４３４Ｗからなる群から選択される少なくとも１つの非天然産アミノ酸残基を含む。任意に、Ｆｃ領域は、当業者に既知のさらなるおよび／または代替的な非天然産アミノ酸残基を含んでもよい（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、第６，２７７，３７５号、第６，７３７，０５６号、ＰＣＴ特許公開第０１／５８９５７号、第０２／０６９１９号、第０４／０１６７５０号、第０４／０２９２０７号、第０４／０３５７５２号、および第０５／０４０２１７号を参照されたい）。
【０３２７】
別の実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異体を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３９、３３０、および３３２からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含む。具体的な実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異体を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含む。任意に、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される１つ以上の位置にさらなる非天然産アミノ酸をさらに含んでもよい。具体的な実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異体を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１個の非天然産アミノ酸、およびＫａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅからなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含む。
【０３２８】
別の実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異体を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４、２３５、および３３１からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含む。具体的な実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異体を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含む。さらなる具体的な実施形態では、本発明のＦｃ変異体は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４Ｆ、２３５Ｆ、および３３１Ｓの非天然産アミノ酸残基を含む。別の具体的な実施形態では、本発明のＦｃ変異体は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓの非天然産アミノ酸残基を含む。任意に、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される１つ以上の位置にさらなる非天然産アミノ酸をさらに含んでもよい。具体的な実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異体を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含み、１つ以上の位置での少なくとも１個の非天然産アミノ酸は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅからなる群から選択される。
【０３２９】
別の実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異型タンパク質製剤を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３９、３３０、および３３２からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含む。具体的な実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異型タンパク質製剤を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含む。任意に、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される１つ以上の位置にさらなる非天然産アミノ酸をさらに含んでもよい。具体的な実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異型タンパク質製剤を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅからなる群から選択される、少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含み、１つ以上の位置での少なくとも１個の非天然産アミノ酸は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅからなる群から選択される。
【０３３０】
別の実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異型タンパク質製剤を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されるとき、２３４、２３５、および３３１からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含む。具体的な実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異型タンパク質製剤を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含む。任意に、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される１つ以上の位置にさらなる非天然産アミノ酸をさらに含んでもよい。具体的な実施形態では、本発明は、Ｆｃ変異型タンパク質製剤を提供し、ここでＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される、少なくとも１個の非天然産アミノ酸を含み、１つ以上の位置での少なくとも１個の非天然産アミノ酸は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅからなる群から選択される。
【０３３１】
一実施形態では、本発明のＦｃ変異体は、Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：６３７−４０、Ｄｕｎｃａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：５６３−５６４、Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７：２６５７−２６６２、Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＭｏＩ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：５３−５９、Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３、Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９２：１１９８０−１１９８４、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ．４４：１１１−１１７、Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｆａｓｅｂ  Ｊ  ９：１１５−１１９、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ５４：１０１−１０４、Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５７：４９６３−４９６９、Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：２６１３−２６２４、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：４１７８−４１８４、Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：１９２５−１９３３、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００：１６−２６、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６：２５７１−２５７５、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６：６５９１−６６０４、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２：５７−６５、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ３０：４８７−４９０、米国特許第５，６２４，８２１号、第５，８８５，５７３号、第５，６７７，４２５号、第６，１６５，７４５号、第６，２７７，３７５号、第５，８６９，０４６号、第６，１２１，０２２号、第５，６２４，８２１号、第５，６４８，２６０号、第６，５２８，６２４号、第６，１９４，５５１号、第６，７３７，０５６号、第６，８２１，５０５号、第６，２７７，３７５号、米国特許公開第２００４／０００２５８７号、およびＰＣＴ公開第９４／２９３５１号、第９９／５８５７２号、第００／４２０７２号、第０２／０６０９１９号、第０４／０２９２０７号、第０４／０９９２４９号、第０４／０６３３５１号に開示される変異体等の他の既知のＦｃ変異体と組み合わされてもよい。また、欠失、付加、および／または修飾を含むＦｃ領域も本発明に包含される。Ｆｃドメインのさらに他の修飾／置換／付加／欠失は、当業者に容易に明らかであろう。
【０３３２】
非天然産Ｆｃ領域を生成する方法は、当技術分野で既知である。例えば、アミノ酸置換および／または欠失は、部位特異的突然変異誘発法（Ｋｕｎｋｅｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２（１９８５））、ＰＣＲ突然変異誘発法（Ｈｉｇｕｃｈｉ，ｉｎ  ”ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ｐｐ．１７７−１８３（１９９０））、およびカセット突然変異誘発法（Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ３４：３１５−３２３（１９８５））を含むが、それらに限定されない突然変異誘発法によって生成することができる。部位特異的突然変異誘発は、重複伸長ＰＣＲ法（Ｈｉｇｕｃｈｉ，ｉｎ  ”ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ’’，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．６１−７０（１９８９））によって行われてもよい。また、重複伸長ＰＣＲ（Ｈｉｇｕｃｈｉ、同書）の技術を使用して、任意の所望の突然変異（単数または複数）を標的配列（出発ＤＮＡ）に導入することもできる。例えば、重複伸長法における、第１回目のＰＣＲは、外部プライマー（プライマー１）および内部突然変異誘発プライマー（プライマー３）を用いて、ならびに別に第２の外部プライマー（プライマー４）および内部プライマー（プライマー２）を用いて標的配列を増幅することを伴い、それによって２つのＰＣＲセグメント（セグメントＡおよびＢ）を産出する。内部突然変異誘発プライマー（プライマー３）は、所望の突然変異（単数または複数）を特定する標的配列に対するミスマッチを含有するように設計される。第２回目のＰＣＲにおいては、第１回目のＰＣＲ（セグメントＡおよびＢ）の産物は、２つの外部プライマー（プライマー１および４）を用いて、ＰＣＲによって増幅される。得られた完全長のＰＣＲセグメント（セグメントＣ）は、制限酵素で分解され、得られた制限フラグメントは、適切なベクターへとクローン化される。突然変異誘発の第１ステップとして、出発ＤＮＡ（例えば、Ｆｃ融合タンパク質、抗体、または単にＦｃ領域をコードする）は、突然変異誘発ベクターへと、操作可能にクローン化される。プライマーは、所望のアミノ酸置換を反映するように設計される。変異型Ｆｃ領域の生成に有用な他の方法は、当技術分野で既知である（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、第５，８８５，５７３号、第５，６７７，４２５号、第６，１６５，７４５号、第６，２７７，３７５号、第５，８６９，０４６号、第６，１２１，０２２号、第５，６２４，８２１号、第５，６４８，２６０号、第６，５２８，６２４号、第６，１９４，５５１号、第６，７３７，０５６号、第６，８２１，５０５号、第６，２７７，３７５号、米国特許公開第２００４／０００２５８７号、およびＰＣＴ公開第９４／２９３５１号、第９９／５８５７２号、第００／４２０７２号、第０２／０６０９１９号、第０４／０２９２０７号、第０４／０９９２４９号、第０４／０６３３５１号を参照されたい）。
【０３３３】
幾つかの実施形態では、Ｆｃ変異型タンパク質は、１つ以上の操作された糖型、すなわち、Ｆｃ領域を含む分子に共有結合された炭水化物組成物を含む。操作された糖型は、エフェクター機能を強化することまたは低減することを含むが、それらに限定されない種々の目的に有用であり得る。操作された糖型は、当業者に既知の任意の方法によって、例えば、操作された発現株または変異体発現株を用いることによって、１つ以上の酵素、例えばＤＩ  Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩ１１）との共発現によって、種々の有機体または種々の有機体からの細胞株中のＦｃ領域を含む分子を発現することによって、またはＦｃ領域を含む分子が発現させられた後で、炭水化物を修飾することによって生成されてもよい。操作された糖型を生成する方法は、当技術分野で既知であり、Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７：１７６−１８０、Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１７  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ７４：２８８−２９４、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３−２６７４０、Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６−３４７３、
米国特許第６，６０２，６８４号、米国第１０／２７７，３７０号、米国第１０／１１３，９２９号、ＰＣＴ第００／６１７３９Ａｌ号、ＰＣＴ第０１／２９２２４６Ａ１号、ＰＣＴ第０２／３１１１４０Ａｌ号、ＰＣＴ第０２／３０９５４Ａ１号、Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（商標）技術（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ．）、ＧｌｙｃｏＭＡｂ（商標）ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＧＬＹＣＡＲＴ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に記載される方法を含むが、それらに限定されない。例えば、第０００６１７３９号、欧州出願第０１２２９１２５号、米国第２００３０１１５６１４号、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，ＪＭＢ，３３６：１２３９−４９を参照されたい。
【０３３４】
本明細書に記載されるＦｃ変異体が、抗フルオレセインモノクローナル抗体、４−４−２０（Ｋｒａｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７（１２）：６９８７−６９９５）、ヒト化抗ＴＡＧ７２抗体（ＣＣ４９）（Ｓｈａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ．９（４）：３４１−９）、ＰＣＴ公開第０４／０１４２９２号、第０３／０９４８５９号、および米国特許出願第１０／８６３，７２９号に開示される抗体を含むが、それらに限定されないＥｐｈ受容体に特異的に結合する抗体、ＬＭ６０９（Ｓｃｒｉｐｐｓ）、マウスモノクローナルＬＭ６０９（ＰＣＴ公開第８９／０１５１５５号および米国特許第５，７５３，２３０号）を含むが、それらに限定されないＩｎｔｅｇｒｉｎ  αＶβ３に特異的に結合する抗体、ヒト化モノクローナル抗体ＭＥＤＩ−５２２（別名ＶＩＴＡＸＩＮ（登録商標）、Ｍｅｄｌｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９５（１１）：６０３７−６０４２、ＰＣＴ公開第９０／３３９１９号、および第００／７８８１５号）、第／２００５／０５０５９１０６号に開示されるインターフェロンアルファに対する抗体、第／２００６／０５９１０６号に開示されるインターフェロン受容体１に対する抗体、Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標）（別名ＩＭＣ−Ｃ２２５）（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．）、ＥＧＦＲに対するキメラ化モノクローナル抗体、転移性乳癌を有する患者を治療するためのヒト化抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体であるＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，ＣＡ）、血餅形成の予防のための血小板上の抗糖タンパク質Ｉｌｂ／ＩＩＩａ受容体であるＲＥＯＰＲＯ（登録商標）（ａｂｃｉｘｉｍａｂ）（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、急性腎同種移植片拒絶反応の予防のための免疫抑制ヒト化抗ＣＤ２５モノクローナル抗体であるＺＥＮＡＰ  ＡＸ（登録商標）（ダクリズマブ）（Ｒｏｃｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を含むが、それらに限定されない、当技術分野で記載されるいずれの抗体から生成されてもよく、または本明細書に記載される変異型Ｆｃ領域が、それらのいずれの抗体に導入されてもよいことが企図される。他の例としては、ヒト化抗ＣＤ１８Ｆ（ａｂ’）２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ヒト化抗ＣＤ１８Ｆ（ａｂ’）２であるＣＤＰ８６０（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ、ＵＫ）、ＣＤ４と融合された抗ＨＩＶｇｐｌ２０抗体であるＰＲＯ５４２（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ／Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓ）、抗ＣＤ１４抗体であるＣ１４（ＩＣＯＳ  Ｐｈａｒｍ）、ヒト化抗ＶＥＧＦ  ＩｇＧ１抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、マウス抗ＣＡ１２５抗体であるＯＶＡＲＥＸ（商標）（Ａｌｔａｒｅｘ）、マウス抗１７−ＩＡ細胞表面抗原ＩｇＧ２ａ抗体であるＰＡＮＯＲＥＸ（商標）（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ／Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、キメラ抗ＥＧＦＲ  ＩｇＧ抗体であるＩＭＣ−Ｃ２２５（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ）、ヒト化抗αＶβ３インテグリン抗体であるＶＩＴＡＸＩＮ（商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ／Ｍｅｄｌｍｍ���ｎｅ）、ヒト化抗ＣＤ５２  ＩｇＧ１抗体であるＣａｍｐａｔｈ  １Ｈ／ＬＤＰ−０３（Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ）、ヒト化抗ＣＤ３３  ＩｇＧ抗体であるＳｍａｒｔ  Ｍ１９５（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ／Ｋａｎｅｂｏ）、キメラ抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１抗体であるＲＩＴＵＸＡＮ（商標）（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｒｏｃｈｅ／Ｚｅｔｔｙａｋｕ）、ヒト化抗ＣＤ２２  ＩｇＧ抗体であるＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ（商標）（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、ヒト化抗ＨＬＡ抗体であるＳｍａｒｔ  ＩＤ１０（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ）が挙げられ、ＯＮＣＯＬＹＭ（商標）（Ｌｙｍ−１）は、放射標識マウス抗ＨＬＡ  ＤＲ抗体（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ）であり、抗ＣＤ１１ａは、ヒト化ＩｇＧ１抗体（Ｇｅｎｅｔｅｃｈ／Ｘｏｍａ）であり、ＩＣＭ３は、ヒト化抗ＩＣＡＭ３抗体（ＩＣＯＳ  Ｐｈａｒｍ）であり、ＩＤＥＣ−１１４は、霊長類化抗ＣＤ８０抗体（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ／Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）であり、ＺＥＶＡＬＩＮ（商標）は、放射標識マウス抗ＣＤ２０抗体（ＩＤＥＣ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）であり、ＩＤＥＣ−１３１は、ヒト化抗ＣＤ４０Ｌ抗体（ＩＤＥＣ／Ｅｉｓａｉ）であり、ＩＤＥＣ−１５１は、霊長類化抗ＣＤ４抗体（ＩＤＥＣ）であり、ＩＤＥＣ−１５２は、霊長類化抗ＣＤ２３抗体（ＩＤＥＣ／Ｓｅｉｋａｇａｋｕ）であり、ＳＭＡＲＴ抗ＣＤ３は、ヒト化抗ＣＤ３  ＩｇＧ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ）であり、５Ｇ１．１は、ヒト化抗補体因子５（Ｃ５）抗体（Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍ）であり、ＩＤＥＣ−１５１は、霊長類化抗ＣＤ４  ＩｇＧ１抗体（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ）であり、ＭＤＸ−ＣＤ４は、ヒト抗ＣＤ４  ＩｇＧ抗体（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｅｉｓａｉ／Ｇｅｎｍａｂ）であり、ＣＤＰ５７１は、ヒト化抗ＴＮＦ−α  ＩｇＧ４抗体（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）であり、ＬＤＰ−０２は、ヒト化抗α４β７抗体（ＬｅｕｋｏＳｉｔｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）であり、ＯｒｔｈｏＣｌｏｎｅ  ０ＫＴ４Ａは、ヒト化抗ＣＤ４  ＩｇＧ抗体（Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）であり、ＡＮＴＯＶ  Ａ（商標）は、ヒト化抗ＣＤ４０Ｌ  ＩｇＧ抗体（Ｂｉｏｇｅｎ）であり、ＡＮＴＥＧＲＥＮ（商標）は、ヒト化抗ＶＬＡ−４  ＩｇＧ抗体（Ｅｌａｎ）であり、ＭＤＸ−３３は、ヒト抗ＣＤ６４（ＦｃγＲ）抗体（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｃｅｎｔｅｏｎ）であり、ｒｈｕＭａｂ−Ｅ２５は、ヒト化抗ＩｇＥ  ＩｇＧ１抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｒｖａｒｔｉｓ／Ｔａｎｏｘ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）であり、ＩＤＥＣ−１５２は、霊長類化抗ＣＤ２３抗体（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ）であり、ＡＢＸ−ＣＢＬは、マウス抗ＣＤ−１４７  ＩｇＭ抗体（Ａｂｇｅｎｉｘ）であり、ＢＴＩ−３２２は、ラット抗ＣＤ２  ＩｇＧ抗体（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／Ｂｉｏ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）であり、Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ／ＯＫＴ３は、マウス抗ＣＤ３  ＩｇＧ２ａ抗体（ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）であり、ＳＩＭＵＬＥＣＴ（商標）は、キメラ抗ＣＤ２５  ＩｇＧ１抗体（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍ）であり、ＬＤＰ−０１は、ヒト化抗β２−インテグリンＩｇＧ抗体（ＬｅｕｋｏＳｉｔｅ）であり、抗��Ｆ  Ａ−Ｉは、マウス抗ＣＤ１８  Ｆ（ａｂ’）２（Ｐａｓｔｅｕｒ−Ｍｅｒｉｅｕｘ／Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ）であり、ＣＡＴ−１５２は、ヒト抗ＴＧＦ−β２抗体（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｂ  Ｔｅｃｈ）であり、Ｃｏｒｓｅｖｉｎ  Ｍは、キメラ抗Ｆａｃｔｏｒ  ＶＩＩ抗体（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）である。
【０３３５】
本明細書に記載されるＦｃ変異体領域を含み得るさらなる抗体は、例えば、ＫＳ１／４汎癌腫抗原（Ｐｅｒｅｚ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９０，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：３６６２−３６６７、Ｂｕｍａｌ，１９８８，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ７（４）：４０７−４１５）、卵巣癌抗原（ＣＡ１２５）（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１（２）：４６８−４７５）、前立腺酸性リン酸塩（Ｔａｉｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８（１６）：４９２８）、前立腺特異的抗原（Ｈｅｎｔｔｕ  ａｎｄ  Ｖｉｈｋｏ，１９８９，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１６０（２）：９０３−９１０、Ｉｓｒａｅｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：２２７−２３０）、黒色腫関連抗原ｐ９７（Ｅｓｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔ．８１（６）：４４５−４４６）、黒色腫抗原ｇｐ７５（Ｖｉｊａｙａｓａｒｄａｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１（４）：１３７５−１３８０）、高分子量黒色腫抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）（Ｎａｔａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ  ５９：５５−６３、Ｍｉｔｔｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８６：２１３６−２１４４）、前立腺特異的膜抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）（Ｆｏｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１３：２９４）、多形性上皮性ムチン抗原、ヒト乳脂肪球抗原、ＣＥＡ、ＴＡＧ−７２（Ｙｏｋａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：３４０２−３４０８）、ＣＯ１７−ＩＡ（Ｒａｇｎｈａｍｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５３：７５１−７５８）、ＧＩＣＡ１９−９（Ｈｅｒｌｙｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１３５）、ＣＴＡ−Ｉ、およびＬＥＡ等の直腸結腸腫瘍関連抗原、バーキットリンパ腫抗原−３８．１３、ＣＤ１９（Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｂｌｏｏｄ  ８３：１３２９−１３３６）、ヒトＢ−リンパ腫抗原−ＣＤ２０（Ｒｅｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｂｌｏｏｄ  ８３：４３５−４４５）、ＣＤ３３（Ｓｇｏｕｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３４：４２２−４３０）、ガングリオシドＧＤ２（Ｓａｌｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１，３３９０−３３９８）、ガングリオシドＧＤ３（Ｓｈｉｔａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３６：３７３−３８０）、ガングリオシドＧＭ２（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２：１０３６−１０４４）、ガングリオシドＧＭ３（Ｈｏｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：５２４４−５２５０）等の黒色腫特異的抗原、Ｔ−抗原ＤＮＡ腫瘍ウイルスおよびＲＮＡ腫瘍ウイルスのエンベロープ抗原を含むウイルス誘発腫瘍抗原等の細胞表面抗原の腫瘍特異的移植型（ＴＳＴＡ）、結腸のＣＥＡ等の癌胎児性抗原−アルファ−フェトプロテイン、膀胱腫瘍癌胎児性抗原（Ｈ���ｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．４５：２２１０−２１８８）、ヒト肺癌抗原Ｌ６、Ｌ２０等の分化抗原（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４６：３９１７−３９２３）、線維肉腫の抗原、ヒト白血病Ｔ細胞抗原−Ｇｐ３７（Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ−Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ  １４１：１３９８−１４０３）、ネオ糖タンパク質、スフィンゴ脂質、乳癌抗原等のＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、ＨＥＲ２抗原（ｐｌ８５ＨＥＲ２）、多形性上皮性ムチン（ＰＥＭ）（Ｈｉｌｋｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１７：３５９）、悪性ヒトリンパ球抗原−ＡＰＯ−１（Ｂｅｒｎｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４５：３０１−３０４）、胎児赤血球に見出されるＩ抗原等の分化抗原（Ｆｅｉｚｉ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：５３−５７）、成人赤血球に見出される一次内胚葉Ｉ抗原、着床前胚、胃腺癌に見出される１（Ｍａ）、乳房上皮に見出されるＭ１８およびＭ３９、骨髄性細胞に見出されるＳＳＥＡ−Ｉ、直腸結腸癌に見出されるＶＥＰ８、ＶＥＰ９、ＭｙＩ、ＶＩＭ−Ｄ５、およびＤ１５６−２２、ＴＲＡ−１−８５（血液群Ｈ）、結腸腺癌に見出されるＣ１４、肺腺癌に見出されるＦ３、胃癌に見出されるＡＨ６、Ｙハプテン、胎児性癌細胞に見出されるＬｅｙ、ＴＬ５（血液群Ａ）、Ａ４３１細胞に見出されるＥＧＦ受容体、膵癌に見出されるＥ１系列（血液群Ｂ）、胎児性癌細胞に見出されるＦＣ１０．２、胃腺癌抗原、腺癌に見出されるＣＯ−５１４（血液群Ｌｅａ）、腺癌に見出されるＮＳ−１０、ＣＯ−４３（血液群Ｌｅｂ）、Ａ４３１細胞のＥＧＦ受容体に見出されるＧ４９、結腸腺癌に見出されるＭＨ２（血液群ＡＬｅｂ／Ｌｅｙ）、結腸癌に見出される１９．９、胃癌ムチン、骨髄性細胞に見出されるＴ５Ａ７、黒色腫に見出されるＲ２４、胎児性癌細胞に見出される４．２、ＧＤ３、Ｄ１．１、ＯＦＡ−１、ＧＭ２、ＯＦＡ−２、ＧＤ２、およびＭｌ：２２：２５：８、ならびに４〜８細胞期胚に見出されるＳＳＥＡ−３およびＳＳＥＡ−４を含むが、それらに限定されない癌または腫瘍抗原に特異的に結合することができる。一実施形態では、抗原は、皮膚Ｔ細胞リンパ腫由来のＴ細胞受容体由来ペプチドである（Ｅｄｅｌｓｏｎ，１９９８，Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４：６２を参照されたい）。
【０３３６】
本明細書に記載されるＦｃ変異体は、いずれの抗体から生成されてもよく、または本明細書に記載される変異型Ｆｃ領域は、いずれの抗体に導入されてもよい。さらに、本明細書に記載される変異型Ｆｃ領域を利用して、Ｆｃ融合タンパク質を生成してもよい。したがって、事実上あらゆる分子が、次のタンパク質のリスト、ならびに次のタンパク質のリストに属するサブユニット、ドメイン、モチーフ、およびエピトープを含むが、それらに限定されない、本明細書に記載されるＦｃ変異体を含む抗体および／もしくはＦｃ融合タンパク質によって標的とされ、ならびに／またはそれらに組み込まれてもよい：レニン；ヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンを含む成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；アルファ−１−アンチトリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体化ホルモン；グルカゴン；因子ＶＩＩ、因子ＶＩＩＩＣ、因子ＩＸ、組織因子（ＴＦ）、およびフォンウィルブランド因子等の凝固因子；
Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ等の抗凝固因子；心房性ナトリウム利尿因子；肺表面活性剤；ウロキナーゼもしくはヒト尿または組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）等のプラスミノーゲン活性化因子；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死因子−アルファおよび−ベータ；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（活性時に制御される、通常は発現させられ、分泌されるＴ細胞（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｎｏｒｍａｌｌｙ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ））；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ−Ｉ−アルファ）；ヒト血清アルブミン等の血清アルブミン；ミュラー管抑制物質；リラキシンＡ−鎖；リラキシンＢ−鎖；プロリラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；ベータ−ラクタマーゼ等の微生物タンパク質；Ｄｎａｓｅ；ＩｇＥ；ＣＴＬＡ−４等の細胞傷害性Ｔ−リンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）；例えば、ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲ等のホルモンもしくは成長因子のための受容体；アルファインターフェロン（α−ＩＦＮ）、ベータインターフェロン（β−ＩＦＮ）、およびガンマインターフェロン（γ−ＩＦＮ）等のインターフェロン；インターフェロン受容体１等のインターフェロン受容体構成成分；タンパク質ＡまたはＤ；リウマトイド因子；骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）であるニューロトロフィン−３，−４，−５、もしくは−６（ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＮＴ−５、もしくはＮＴ−６）または神経成長因子等の神経栄養因子；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）；αＦＧＦおよびβＦＧＦ等の線維芽細胞成長因子；上皮成長因子（ＥＧＦ）；ＴＧＦ−１、ＴＧＦ−２、ＴＧＦ−３、ＴＧＦ−４、またはＴＧＦ−５を含むＴＧＦ−アルファおよびＴＧＦ−ベータ等のトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ（ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩ）；インスリン様成長因子結合タンパク質であるｄｅｓ（ｌ−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ５２、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ８０、およびＣＤ１４７等のＣＤタンパク質；エリスロポエチン；骨形成誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；インターフェロン−アルファ、−ベータ、および−ガンマ等のインターフェロン；Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＧ−ＣＳＦ等のコロニー刺激因子（ＣＳＦｓ）；例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−１３であるインターロイキン（ＩＬｓ）；ＴＮＦαおよびＨＭＧＢｌ；ＨＭＧＢ２；スーパーオキシドディスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；例えば、ＡＩＤＳエンベロープの一部、例えば、ｇｐｌ２０等のウイルス抗原；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；ＬＦＡ−Ｉ、Ｍａｃ、ｐｉ５０．９５、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３、およびＶＣＡＭ等の細胞接着分子；ａ４／ｐ７インテグリン、および（ａまたはそのサブユニットのいずれかを含むＸｖ／ｐ３インテグリン、ＣＤ４９ａ、��Ｄ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、アルファ７、アルファδ、アルファ９、アルファＤ、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ５１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ４１、アルファｌｌｂ、アルファｌＥＬｂ等のインテグリンアルファサブユニット；ＣＤ２９、ＣＤ１８、ＣＤ６１、ＣＤ１０４、ベータ５、ベータ６、ベータ７、およびベータδ等のインテグリンベータサブユニット；αＶβ３、αＶβ５、およびα４β７を含むが、それらに限定されないインテグリンサブユニットの組み合わせ；アポトーシス経路のメンバー；ＩｇＥ；血液群抗原；ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体；肥満（ＯＢ）受容体；ｍｐｌ受容体；ＣＴＬＡ−４；プロテインＣ；ＹＫＬ−４０およびＡＭＣａｓｅ等のキチナーゼまたはキチナーゼ様分子；ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＢ２等のＥｐｈ受容体；ＨＬＡ−ＤＲ等のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）；補体受容体ＣＲｌ、ＣｌＲｑならびにＣ３およびＣ５等の補体タンパク質等の他の補体因子；Ｇｐｌｂα、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ、およびＣＤ２００等の糖タンパク質受容体；ならびにＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ／ＡＩＬＩＭ、およびＰＤ−１等の共刺激分子。
【０３３７】
本明細書に記載される変異型Ｆｃ領域を含み得るさらなる分子は、癌抗原に特異的に結合する分子であり、ＡＬＫ受容体（プレイオトロフィン受容体）、プレイオトロフィン、ＫＳ１／４汎癌腫抗原；卵巣癌抗原（ＣＡ１２５）；前立腺酸性リン酸塩；前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）；黒色腫関連抗原ｐ９７；黒色腫抗原ｇｐ７５；高分子量黒色腫抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）；前立腺特異的膜抗原；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；多形性上皮性ムチン抗原；ヒト乳脂肪球抗原；ＣＥＡ、ＴＡＧ−７２、ＣＯ１７−１Ａ、ＧＩＣＡ１９−９、ＣＴＡ−１、およびＬＥＡ等の直腸結腸腫瘍関連抗原；バーキットリンパ腫抗原−３８．１３；ＣＤ１９；ヒトＢ−リンパ腫抗原−ＣＤ２０；ＣＤ３３、ガングリオシドＧＤ２、ガングリオシドＧＤ３、ガングリオシドＧＭ２、およびガングリオシドＧＭ３等の黒色腫特異的抗原；腫瘍特異的移植型細胞表面抗原（ＴＳＴＡ）；Ｔ−抗原；ＤＮＡ腫瘍ウイルス、およびＲＮＡ腫瘍ウイルスのエンベロープ抗原を含むウイルス誘発腫瘍抗原；結腸のＣＥＡ、５Ｔ４癌胎児性栄養膜、糖タンパク質、および膀胱腫瘍癌胎児性抗原等の癌胎児性抗原−アルファ−フェトプロテイン；Ｌ６およびＬ２０等の分化抗原ヒト肺癌抗原；線維肉腫の抗原；ヒト白血病Ｔ細胞抗原−Ｇｐ３７；ネオ糖タンパク質；スフィンゴ脂質；ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）等の乳癌抗原；ＮＹ−ＢＲ−１６；ＮＹ−ＢＲ−１６およびＨＥＲ２抗原（ｐ１８５ＨＥＲ２）；多形性上皮性ムチン（ＰＥＭ）；悪性ヒトリンパ球抗原−ＡＰＯ−１；胎児赤血球に見出される抗原等の分化抗原Ｉ；成人赤血球に見出される一次内胚葉Ｉ抗原；着床前胚；胃腺癌Ｉに見出される（Ｍａ）；乳房上皮に見出されるＭ１８およびＭ３９；骨髄性細胞に見出されるＳＳＥＡ−１；ＶＥＰ８；ＶＥＰ９；ＭｙＩ；ＶＩＭ−Ｄ５；直腸結腸癌に見出されるＤ１５６−２２；ＴＲＡ−１−８５（血液群Ｈ）；精巣および卵巣癌に見出されるＳＣＰ−１；結腸腺癌に見出されるＣ１４；肺腺癌に見出されるＦ３；胃癌に見出されるＡＨ６；Ｙハプテン；胎児性癌細胞に見出されるＬｅｙ；ＴＬ５（血液群Ａ）；Ａ４３１細胞に見出されるＥＧＦ受容体；膵癌に見出されるＥ１系列（血液群Ｂ）；胎児性癌細胞に見出されるＦＣ１０．２；胃腺癌抗原；腺癌に見出されるＣＯ−５１４（血液群Ｌｅａ）；腺癌に見出されるＮＳ−ＩＯ；ＣＯ−４３（血液群Ｌｅｂ）；Ａ４３１細胞のＥＧＦ受容体に見出されるＧ４９；結腸腺癌に見出されるＭＨ２（血液群ＡＬｅｂ／Ｌｅｙ）；結腸癌に見出される１９．９；胃癌ムチン；骨髄性細胞に見出されるＴ５Ａ７；黒色腫に見出されるＲ２４；胎児性癌細胞に見出される４．２、ＧＤ３、Ｄ１．１、ＯＦＡ−１、ＧＭ２、ＯＦＡ−２、ＧＤ２、およびＭ１：２２：２５：８ならびに４〜８−細胞期胚に見出されるＳＳＥＡ−３およびＳＳＥＡ−４；皮膚Ｔ細胞リンパ腫抗原；ＭＡＲＴ−１抗原；Ｓｉａｌｙ  Ｔｎ（ＳＴｎ）抗原；結腸癌抗原ＮＹ−ＣＯ−４５；肺癌抗原ＮＹ−ＬＵ−１２変異型Ａ；腺癌抗原ＡＲＴ１；腫瘍随伴性関連脳−精巣−癌抗原（オンコニューロナル抗原ＭＡ２；腫瘍随伴性ニューロン抗原）；神経腫瘍腹側抗原２（ＮＯＶ  Ａ２）；肝細胞癌抗原遺伝子５２０；腫瘍関連抗原ＣＯ−０２９；腫��関連抗原ＭＡＧＥ−Ｃ１（癌／精巣抗原ＣＴ７）、ＭＡＧＥ−Ｂ１（ＭＡＧＥ−ＸＰ抗原）、ＭＡＧＥ−Ｂ２（ＤＡＭ６）、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−４ａ、ＭＡＧＥ−４ｂ、およびＭＡＧＥ−Ｘ２；癌−精巣抗原（ＮＹ−ＥＯＳ−Ｉ）；ＹＫＬ−４０；ならびに上で列挙される任意のポリペプチドの断片が含まれるが、それらに限定されない。
【０３３８】
６．１０．抗体のグリコシル化
さらに別の実施形態では、本発明に従って利用される抗体のグリコシル化が修飾される。例えば、非グリコシル化抗体を作製することができる（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば、標的抗原に対する抗体の親和性を増加させるように変化させることができる。かかる炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化の部位を変化させることによって達成することができる。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の排除をもたらす１つ以上のアミノ酸置換を行い、それによってその部位のグリコシル化を排除することができる。かかる非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加し得る。かかるアプローチは、米国特許第５，７１４，３５０号および第６，３５０，８６１号にさらに詳細に記載される。また、Ｆｃ領域に存在するグリコシル化部位（例えば、ＩｇＧのアスパラギン２９７）の排除をもたらす１つ以上のアミノ酸置換を行うこともできる。さらに、非グリコシル化抗体は、必要なグリコシル化機構を欠く細菌細胞中で産生されてもよい。
【０３３９】
また、フコシル残基の量が減少した低フコシル化抗体、または分岐ＧＩｃＮＡｃ構造の増加した抗体等、グリコシル化の変化型を有する抗体を作製することができる。かかる変化したグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが示されている。かかる炭水化物修飾は、例えば、変化したグリコシル化機構を備える宿主細胞中で抗体を発現させることによって、達成することができる。変化したグリコシル化機構を備える細胞は、当技術分野で説明されており、本発明の組み換え抗体を発現させて、それによって変化したグリコシル化を備える抗体を産生させる場となる宿主細胞として使用することができる。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０、Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１、ならびに米国特許第ＵＳ６，９４６，２９２号、欧州特許第１，１７６，１９５号、ＰＣＴ公開第０３／０３５８３５号、第９９／５４３４２号を参照されたく、これらの参考文献、特許、および公開の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０３４０】
６．１１．エフェクター機能の操作
例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療する際の抗体の有効性を増大させるために、エフェクター機能に関して、本発明の抗ＣＤ１９抗体を修飾することが望ましい可能性がある。例えば、システイン残基（単数または複数）は、Ｆｃ領域に導入されてもよく、それによってこの領域における鎖間ジスルフィド結合形成が可能となる。そのようにして生成されたホモダイマー抗体は、改善された内部移行能力、および／または増加した補体媒介型細胞致死および／または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有することができる。Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．，１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照されたい。また、強化された抗腫瘍活性を備えるホモダイマー抗体は、Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載されるヘテロ二機能性クロスリンカーを用いて調製されてもよい。また、二重Ｆｃ領域を有する抗体が操作されてもよく、それによって強化された補体溶解およびＡＤＣＣ能力を有することができる。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，３：２１９−２３０（１９８９）を参照されたい。
【０３４１】
エフェクター機能を変化させるために抗体のＦｃ領域を操作する他の方法は、当技術分野で既知である（例えば、双方ともＫｏｅｎｉｇらに対する米国特許公開第２００４０１８５０４５号およびＰＣＴ公開第２００４／０１６７５０号は、Ｆｃ領域を変化させて、ＦＣγＲＩＩＡに対する結合親和性と比較してＦｃγＲＩＩＢに対する結合親和性を強化することを説明しており、また、Ａｒｍｏｕｒらに対するＰＣＴ公開第９９／５８５７２号、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらに対する第９９／５１６４２号、およびＤｅｏらに対する米国第６，３９５，２７２号を参照されたく、これらの特許および公開の開示は、それらの全体が本明細書に組み込まれる）。また、ＦｃγＲＩＩＢへの結合親和性を減少させるためにＦｃ領域を修飾する方法も当技術分野で既知である（例えば、双方ともＲａｖｅｔｃｈらに対する米国特許公開第２００１００３６４５９号およびＰＣＴ公開第０１／７９２９９号、これらの特許および公開の開示は、それらの全体が本明細書に組み込まれる）。また、野生型Ｆｃ領域と比較してＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対する強化された結合親和性を備える、変異型Ｆｃ領域を有する修飾された抗体も説明されている（例えば、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎらに対するＰＣＴ公開第２００４／０６３３５１号、この公開の開示は、その全体が本明細書に組み込まれる）。
【０３４２】
当技術分野で既知のインビトロ検定を使用して、本発明の組成物中に使用される抗ＣＤ１９抗体および方法が、本明細書に記載されるＡＤＣＣ等のＡＤＣＣを媒介することができるかどうかを決定することができる。
【０３４３】
６．１２．抗ＣＤ１９抗体の製造／産生
一旦、所望の抗ＣＤ１９抗体が操作されると、抗ＣＤ１９抗体は、当技術分野で周知である抗体の大規模な製造のための方法を用いて商業規模で産生することができる。例えば、下記の系等であるが、それらに限定されない組み換え発現系を用いて、これを達成することができる。
【０３４４】
６．１３．組み換え発現系
抗体またはその変異型の組み換え発現は、概して、抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を必要とする。一旦、抗体分子または抗体の重鎖もしくは軽鎖、あるいはそれらの一部をコードするポリヌクレオチドが獲得されると、抗体分子の産生のためのベクターは、当技術分野で周知の技術を用いる組み換えＤＮＡ技術によって産生されてもよい。例えば、米国特許第６，３３１，４１５号を参照されたく、この特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このようにして、ヌクレオチド配列をコードする抗体を含有するポリヌクレオチドを発現することによってタンパク質を調製するための方法が本明細書に記載される。当業者に周知である方法を用いて、抗体コード配列ならびに適切な転写および翻訳調節シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、インビトロ組み換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組み換えが含まれる。したがって、本発明は、プロモーターに操作可能に結合される、抗体分子、抗体の重鎖または軽鎖、抗体またはその一部の重鎖もしくは軽鎖可変ドメイン、あるいは重鎖または軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターを提供する。かかるベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含んでもよく（例えば、国際公開第８６／０５８０７号および第８９／０１０３６号、ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照されたい）、抗体の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖および軽鎖両者全体の発現のためにかかるベクターへとクローン化されてもよい。
【０３４５】
別の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、抗ＣＤ１９抗体の全てまたは一部を産生するために、標的相同組み換えを用いて作製することができる（米国特許第６，０６３，６３０号、第６，１８７，３０５号、および第６，６９２，７３７号）。ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、抗ＣＤ１９抗体の全てまたは一部を産生するために、無作為組み換え技術を用いて作製することができる（米国特許第６，３６１，９７２号、第６，５２４，８１８号、第６，５４１，２２１号、および第６，６２３，９５８号）。また、抗ＣＤ１９抗体は、Ｃｒｅ媒介型部位特異的相同組み換えを用いて、修飾された免疫グロブリン遺伝子座を含む細胞のゲノム配列から、抗体を発現する細胞中で産生することができる（米国特許第６，０９１，００１号を参照されたい）。宿主細胞株は、ヒトまたはマウスおよびチャイニーズハムスターを含むが、それらに限定されない非ヒト種に由来してもよい。ヒトまたはヒト化抗体産生が所望される場合、宿主細胞株は、ヒト細胞株であるべきである。これらの方法を有利に使用して、抗体分子を永続的に発現する安定細胞株を操作してもよい。
【０３４６】
一旦、発現ベクターが従来の技術によって宿主細胞に転移されると、次いでトランスフェクトされた細胞は、従来の技術によって培養されて抗体を産生する。したがって、本発明は、異種プロモーターに操作可能に結合される、本発明の抗体またはそれらの断片、またはそれらの重鎖もしくは軽鎖、またはそれらの一部、あるいは本発明の１本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を含む。２本鎖抗体発現についてのある種の実施形態では、重鎖および軽鎖の双方をコードするベクターは、下に詳述する通り、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞中で共発現させてもよい。
【０３４７】
多種多様の宿主発現ベクター系を利用して、抗ＣＤ１９抗体の操作および生成に使用され得る抗ＣＤ１９抗体またはその一部を発現させてもよい（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）等の哺乳類細胞は、ヒトサイトメガロウイルス由来の主な中間型初期遺伝子プロモーターエレメント等のベクターと併せて、抗体のための有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，４５：１０１（１９８６）およびＣｏｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：２（１９９０））。加えて、所望される具体的な方法で、挿入された抗体配列の発現を調節する、または抗体遺伝子産物を修飾およびプロセスする宿主細胞株が選択されてもよい。タンパク質産物のかかる修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能に重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後プロセシングならびに修飾のための、特徴的および特異的機構を有する。適切な細胞株または宿主系を選択して、発現させた抗体またはその一部の正しい修飾およびプロセシングを確保することができる。この目的のために、遺伝子産物の適切な一次転写、グリコシル化、およびリン酸化のプロセシングのための細胞機構を有する真核性宿主細胞が使用されてもよい。かかる哺乳類宿主細胞には、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、ＨｅＩａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳＯ（いかなる機能的免疫グロブリン鎖も内因性で産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ならびにＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が含まれるが、それらに限定されない。
【０３４８】
一実施形態では、不死化ヒトリンパ球によって開発されたヒト細胞株を使用して、モノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体を組み換え的に産生することができる。一実施形態では、ヒト細胞株ＰＥＲ．Ｃ６．（Ｃｒｕｃｅｌｌ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、モノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体を組み換え的に産生することができる。
【０３４９】
細菌系において、幾つかの発現ベクターは、発現させられている抗体分子のために意図される使用に応じて、有利に選択されてもよい。例えば、抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物の生成のために、大量のかかる抗体が産生されるべきである場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を誘導するベクターが望ましい可能性がある。かかるベクターには、融合タンパク質が産生されるように、抗体コード配列が、Ｚコード領域と同相であるベクターへと個々に連結され得るＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ，１２：１７９１（１９８３））、ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ＆Ｉｎｏｕｙｅ，１９８５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９（１９８５）、Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２４：５５０３−５５０９（１９８９））等が含まれるが、それらに限定されない。また、ｐＧＥＸベクターを使用して、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させてもよい。概して、かかる融合タンパク質は、可溶性であり、グルタチオン−アガロース親和性マトリックスへの吸着および結合、続いて遊離グルタチオンの存在下での溶出によって、溶解した細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、アトロンビンおよび／または因子Ｘａプロテアーゼ切断部位を発現させたポリペプチドに導入し、その結果、クローン化された標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように設計される。
【０３５０】
昆虫系では、オートグラファ・カリフォルニカ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）をベクターとして使用して外来遺伝子を発現させる。このウイルスは、スポドプテラ・フルギペルダ細胞中で成長する。抗体コード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）へと個々にクローン化され、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の調節下に配置されてもよい。
【０３５１】
哺乳類宿主細胞では、複数のウイルスベースの発現系が利用されてもよい。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、目的の抗体コード配列は、アデノウイルス転写／翻訳調節複合体、例えば、後期プロモーターおよびトリパータイトリーダー配列に連結されてもよい。次いでこのキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組み換えによって、アデノウイルスゲノムに挿入されてもよい。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域ＥｌまたはＥ３）への挿入は、感染宿主中で生存可能で、かつ抗体分子を発現することができる組み換えウイルスをもたらすであろう（例えば、Ｌｏｇａｎ＆Ｓｈｅｎｋ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８１：３５５−３５９（１９８４）を参照されたい）。また、挿入された抗体コード配列の効率的翻訳のために、具体的な開始シグナルが必要とされ得る。これらのシグナルには、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列が含まれる。さらに、挿入物全体の翻訳を確保するために、開始コドンは、所望のコード配列のリーディングフレームと同相であるべきである。これらの外因性翻訳調節シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の双方で、多種多様の起源由来であってもよい。発現の効率は、適切な転写エンハンサー要素、転写ターミネーター等の組み込みによって強化されてもよい（例えば、Ｂｉｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１５３：５１−５４４（１９８７）を参照されたい）。
【０３５２】
組み換えタンパク質の長期的、高収率産生のために、安定な発現を使用することができる。例えば、抗体分子を安定に発現する細胞株が生成されてもよい。宿主細胞は、発現調節要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位等）を含む適切に操作されたベクター、および選択可能マーカー遺伝子により形質転換することができる。外来ＤＮＡの導入に続いて、細胞は、強化培地中で１〜２日間増殖させられてもよく、次いでそれは選択培地に切り替えられる。組み換えプラスミド中の選択可能マーカーは、選択に対する耐性を付与し、プラスミドをそれらの染色体に安定に統合した細胞が増殖し、増殖巣を形成することを可能にし、次いでそれは、クローン化され、細胞株に拡大され得る。抗ＣＤ１９抗体をコードするプラスミドを使用して、遺伝子／ｃＤＮＡを培養物中の産生に好適な任意の細胞株に導入することができる。
【０３５３】
複数の選択系を使用することができ、それには、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１１：２２３（１９７７））、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，４８：２０２（１９９２））、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２２：８−１７（１９８０））が含まれるが、それらに限定されず、遺伝子は、それぞれｔｋ−、ｇｓ−、ｈｇｐｒｔ−、またはａｐｒｔ−細胞において用いることができる。また、次の遺伝子に関する選択の基礎として抗代謝耐性を使用することができる：メトトレキセートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：３５７（１９８０）、Ｏ’Ｈａｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，７８：１５２７（１９８１））、ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅｒｇ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，７８：２０７２（１９８１））、アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５（１９９１）、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６（１９９３）、Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２（１９９３）、およびＭｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）、Ｍａｙ，ＴＩＢ  ＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２  １５（１９９３））、およびハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，３０：１４７（１９８４））。組み換えＤＮＡ技術の技術分野において公知の方法は、所望の組換えクローンを選択するために通常に適用されてもよく、かかる方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、およびｉｎ  Ｃｈａｐｔｅｒｓ  １２  ａｎｄ  １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）、Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１５０：１に記載され、これらの参考文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０３５４】
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加させることができる（概説については、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３．Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８７）を参照されたい）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤レベルの増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させるであろう。増幅領域は抗体遺伝子と関連しているため、抗体の産生もまた増加するであろう（Ｃｒｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＭｏＩ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ，３：２５７（１９８３））。抗体発現レベルは、組み換えタンパク質産生の技術分野に精通する者に既知の組み換え方法およびツールの使用を通じて増幅されてもよく、それには、周囲のクロマチンを再構築し、活性人工転写ドメインの形態でトランス遺伝子発現を強化する技術が含まれる。
【０３５５】
宿主細胞は、２つの発現ベクターによりコトランスフェクトされてもよく、第１のベクターは、重鎖由来ポリペプチドをコードし、第２のベクターは、軽鎖由来ポリペプチドをコードする。２つのベクターは、同一のまたは異なる選択可能マーカーを含有してもよい。また、重鎖および軽鎖ポリペプチドの双方をコードし、かつそれらを発現することができる単一のベクターが使用されてもよい。かかる状況では、軽鎖は、過剰の毒素のない重鎖を回避するために、重鎖に対して５’に配置されるべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：５６２−６５（１９８６）およびＫｏｈｌｅｒ，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，７７：２１９７（１９８０））。重鎖および軽鎖に関するコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含んでもよい。
【０３５６】
一旦、抗体分子が組み換え発現によって産生されると、それは、免疫グロブリン分子の精製のための、当技術分野で既知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特に、特異的抗原タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇに対する親和性によって、およびサイズ排除（ｓｉｚｉｎｇ）カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差によって、またはタンパク質の精製のための他の任意の標準技術によって精製されてもよい。さらに、本発明の抗体またはそれらの断片は、精製を促進するために、本明細書に記載される、または当技術分野で既知の異種ポリペプチド配列に融合されてもよい。
【０３５７】
６．１４．抗体精製および単離
組み換え技術を用いるとき、抗体は、細胞周辺腔において細胞内で産生され得るか、または培地中に直接分泌され得る。抗体が細胞内で産生される場合、第１ステップとして、微粒子破片は、宿主細胞または溶解断片のいずれであれ、例えば、遠心分離または限外ろ過によって除去される。Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：１６３−１６７（１９９２）は、Ｅ．ｃｏｌｉの細胞周辺腔中に分泌された抗体を単離するための手順を記載する。手短に述べると、ナトリウム酢酸塩（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、およびフェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）の存在下で、細胞ペーストを約３０分間にわたって解凍する。細胞破片は、遠心分離によって枯渇させることができる。抗体突然変異が培地中に分泌されるとき、かかる発現系由来の上清は、概して最初に、市販のタンパク質濃度フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外ろ過ユニットを用いて濃縮される。タンパク質分解を阻害するために、ＰＭＳＦ等のプロテアーゼ阻害剤が上述のステップのいずれに含まれてもよく、外来汚染物質の増殖を予防するために、抗生物質が含まれてもよい。
【０３５８】
細胞から調製される組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および／または親和性クロマトグラフィーを単独でまたは他の精製ステップと組み合わせて用いて精製することができる。親和性リガンドとしてのタンパク質Ａの適合性は、抗体突然変異体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。タンパク質Ａを使用して、ヒトγｌ、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体を精製することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６２：１−１３（１９８３））。全てのマウスアイソタイプおよびヒトγ３については、タンパク質Ｇが推奨される（Ｇｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯＪ．，５：１５６７１５７５（１９８６））。親和性リガンドが結合されるマトリックスは、最も頻繁にはアガロースであるが、他のマトリックスも利用可能である。調節細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等の機械的に安定なマトリックスは、アガロースにより達成され得るそれらよりも早い流速および短いプロセシング時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含むとき、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，ＮＪ）は、精製に有用である。また、回収対象の抗体に応じて、イオン交換カラム上の分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上のクロマトグラフィー、ヘパリン上のクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラム等）上のＳＥＰＨＡＲＯＳＥクロマトグラフィー、等電点電気泳動、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫安塩析等の、タンパク質精製のための他の技術も利用可能である。
【０３５９】
任意の予備精製ステップ（単数または複数）に続いて、目的の抗体および汚染物質を含む混合物は、ｐＨ約２．５〜４．５の溶出緩衝剤を用いて、かつ低塩濃度（例えば、約０〜０．２５Ｍ塩）で行われる低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供されてもよい。
【０３６０】
６．１５．抗体製剤を調製する方法
本発明は、目的の抗原（例えば、ＣＤ１９抗原）に特異的に結合する抗体または誘導体、類似体、もしくはそれらの断片の液体製剤を調製するための方法を提供する。本発明の液体製剤を調製するための方法は、次のものを含んでもよい：抗体（その抗体断片を含む）を条件培地（培地の単一のロットまたはプールされたロットのいずれか）から精製すること、および精製された抗体の画分（その抗体断片を含む）を、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１７５ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬの最終濃度になるまで濃縮すること。抗体（その抗体断片を含む）を含有する条件培地、例えば、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体は、ＣＵＮＯろ過に供されてもよく、ろ過された抗体は、ＨＳ５０陽イオン交換クロマトグラフィーに供される。次いでＨＳ５０陽イオン交換クロマトグラフィーからの画分は、低ｐＨ処理、続いてＭＥＰ  Ｈｙｐｅｒｃｅｌクロマトグラフィーに供される。ＭＥＰ  Ｈｙｐｅｒｃｅｌクロマトグラフィーからの画分は、ナノフィルトレーションに供される。次いでナノフィルトレーション後に得られた精製された抗体またはその断片は、ダイアフィルトレーションおよび緩衝剤交換への限外ろ過に供され、同一の膜を用いて製剤緩衝剤に濃縮する。
【０３６１】
本発明の液体製剤は、１回限りの使用のための液体製剤のアリコートを含有するバイアルを調製することによって、単位剤形として調製することができる。例えば、単位用量／バイアルは、約５ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬの範囲のＣＤ１９に特異的に結合する１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ、１０ｍＬ、１５ｍＬ、または２０ｍＬの異なる濃度の抗体（その抗体断片を含む）を含有してもよい。必要な場合、これらの調製物は、各バイアルに滅菌された希釈剤を添加することによって所望の濃度に調節することができる。具体的な実施形態では、本発明の液体製剤は、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、および４％トレハロースを含有する滅菌された液体として単回用量バイアル中に製剤化される。別の実施形態では、本発明の液体製剤は、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含有する滅菌された液体として単回用量バイアル中に製剤化される。別の実施形態では、本発明の液体製剤は、ｐＨ６．０の２０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含有する滅菌された液体として単回用量バイアル中に製剤化される。１．０ｍＬの各溶液は、１０ｍｇの抗体（その抗体断片を含む）を含有する。一実施形態では、本発明の抗体（その抗体断片を含む）は、３ｃｃ  ＵＳＰ  Ｔｙｐｅ  Ｉホウケイ酸アンバーバイアル中、１００ｍｇ／ｍＬで供給される（Ｗｅｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ−Ｐａｒｔ  Ｎｏ．６８００−０６７５）。標的充填容積は、１．２ｍＬである。別の実施形態では、本発明の抗体（その抗体断片を含む）は、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース中で、３ｃｃバイアル中１００ｍｇ／ｍＬで供給される。別の実施形態では、本発明の抗体（その抗体断片を含む）は、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０中で、３ｃｃバイアル中１００ｍｇ／ｍＬで供給される。別の実施形態では、本発明の液体製剤は、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含有する滅菌された液体として単回用量バイアル中に製剤化され、ここで各１．０ｍＬの溶液の製剤は、２５、５０、または１００ｍｇの抗体（その抗体断片を含む）を含有する。
【０３６２】
本発明の液体製剤は、１回限りの使用のための液体製剤のアリコートを含有するプレフィルドシリンジを調製することによって、単位剤形として調製することができる。例えば、単位用量／プレフィルドシリンジは、約５ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬの範囲のＣＤ１９に特異的に結合する０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．３ｍＬ、０．４ｍＬ、０．５ｍＬ、０．６ｍＬ、０．７ｍＬ、０．８ｍＬ、０．９ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ、１０ｍＬ、１５ｍＬ、または２０ｍＬの異なる濃度の抗体（その抗体断片を含む）を含有してもよい。具体的な実施形態では、本発明の液体製剤は、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、および４％トレハロースを含有する滅菌された液体として単回用量プレフィルドシリンジ中に製剤化される。別の実施形態では、本発明の液体製剤は、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含有する滅菌された液体として単回用量プレフィルドシリンジ中に製剤化される。各１．０ｍＬの溶液は、１０ｍｇの抗体（その抗体断片を含む）を含有する。別の実施形態では、本発明の液体製剤は、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含有する滅菌された液体として単回用量プレフィルドシリンジ中に製剤化され、ここで各１．０ｍＬの溶液は、２５、５０、または１００ｍｇの抗体（その抗体断片を含む）を含有する。別の実施形態では、本発明の液体製剤は、ｐＨ６．０の２０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含有する滅菌された液体として単回用量プレフィルドシリンジ中に製剤化される。各１．０ｍＬの溶液は、１０ｍｇの抗体（その抗体断片を含む）を含有する。別の実施形態では、本発明の液体製剤は、ｐＨ６．０の２０ｍＭヒスチジン緩衝剤、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、および０．０２％ポリソルベート８０を含有する滅菌された液体として単回用量プレフィルドシリンジ中に製剤化され、ここで各１．０ｍＬの溶液は、２５、５０、または１００ｍｇの抗体（その抗体断片を含む）を含有する。さらに別の実施形態では、液体製剤は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬの範囲を含む好適な濃度レベルの皮下注射のためにプレフィルドシリンジまたは自動注入装置中に製剤化されてもよい。別の実施形態では、液体抗体製剤は、最大１００ｍｇ／ｍＬの濃度の皮下注射のためにプレフィルドシリンジまたは自動注入装置中に存在する。別の実施形態では、液体抗体製剤は、「ウルトラ−１００」等のプレフィルドタングステン除去シリンジ中に存在する。「．別の実施形態では、シリンジは、Ｃｌｅａｒｊｅｃｔ（商標）（Ｇｅｒｅｓｈｅｉｍｅｒ，ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ）またはＩｎＪｅｎｔｌｅ（商標）（ＳＣＨＯＴＴ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）シリンジである。
【０３６３】
本発明の液体製剤は、滅菌されたろ過、放射線等を含む種々の滅菌法によって滅菌されてもよい。具体的な実施形態では、ジフィルトレーションされた抗体製剤は、滅菌済み０．２ミクロンフィルターによりフィルター滅菌される。界面活性剤が添加される場合のある種の実施形態では、界面活性剤の添加の前および／または界面活性剤の添加の後に、抗体製剤がフィルター滅菌されてもよい。幾つかの実施形態では、抗体製剤は、界面活性剤の添加の前にフィルター滅菌される。また、製剤は、１回以上フィルター滅菌されてもよい。幾つかの実施形態では、ポリソルベート８０は、抗体製剤に添加され、次いでフィルター滅菌される。別の実施形態では、抗体製剤は、フィルター滅菌され、次いでポリソルベート８０が製剤のために添加される。別の実施形態では、抗体製剤は、最初にフィルター滅菌され、次いでポリソルベート８０が製剤に添加され、次いで製剤は、第２のフィルター−滅菌を経る。本発明の滅菌された液体製剤は、Ｂ細胞媒介型疾患もしくは障害、またはそれらの１つ以上の症状を予防、治療および／または管理するために、対象に投与されてもよい。
【０３６４】
本発明は、液体非凍結乾燥製剤に関するが、等価物の目的のために、所望の場合、本発明の製剤が凍結乾燥されてもよいことに留意すべきである。したがって、本発明は、本発明の製剤の凍結乾燥形態を包含する。
【０３６５】
６．１５．１．免疫複合体および融合タンパク質
本発明の特定の態様に従って、治療剤または毒素は、本発明の組成物および方法に使用するためのキメラ化、ヒト、またはヒト化抗ＣＤ１９抗体と共役させることができる。ある種の実施形態では、これらの共役は、融合タンパク質として生成することができる。治療剤および毒素の例には、カリケアマイシンおよびエスペラミシン等の、分子のエンジインファミリーのメンバーが含まれるが、それらに限定されない。化学的毒素はまた、ズオカルマイシン（例えば、米国特許第５，７０３，０８０号および米国特許第４，９２３，９９０号を参照されたい）、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ＡＰｖＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シス−プラチナム、エトポシド、ブレオマイシン、および５−フルオロウラシルからなる群から採取することができる。また、化学療法剤の例としては、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、ブスルファン、サイトキシン、タキソール、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照されたい）、メルファラン、および他の関連した窒素マスタードが挙げられる。
【０３６６】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、細胞分裂阻害剤、細胞傷害性薬剤、または免疫抑制剤と共役させられ、ここで細胞傷害性薬剤は、エンジイン、レクシトロプシン、ズオカルマイシン、タキサン、ピューロマイシン、ドラスタチン、マイタンシノイド、およびビンカアルカロイドからなる群から選択される。より具体的なある実施形態では、細胞傷害性薬剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノ−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、ドラスタチン−１０、エキノマイシン、コンブレタスタチン、カリケアマイシン、メイタンシン、ＤＭ−１、アウリスタチンＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＡＥＦＰ、ＭＭＡＥ（米国特許出願第１０／９８３，３４０号を参照されたい）、またはネトロプシンである。
【０３６７】
ある種の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体−細胞傷害性薬剤共役体の細胞傷害性薬剤は、抗チューブリン剤である。具体的な実施形態では、細胞傷害性薬剤は、ビンカアルカロイド、ポドフィロトキシン、タキサン、バッカチ誘導体、クリプトフィジン、マイタンシノイド、コンブレタスタチン、およびドラスタチンからなる群から選択される。他の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ＶＰ−１６、カンプトテシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロンＡ、エポチロンＢ、ノコダゾール、コルヒチン、コルセミド、エストラムスチン、セマドチン、ディスコデルモリド、メイタンシン、ＤＭ−Ｉ、ＡＥＦＰ、アウリスタチンＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＡＥＦＰ、ＭＭＡＥ、またはエリュテロビンである。
【０３６８】
具体的な実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、リンカーを介して細胞傷害性薬剤と共役させられ、ここでリンカーは、ペプチドリンカーである。他の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、リンカーを介して細胞傷害性薬剤と共役させられ、ここでリンカーは、ｖａｌ−ｃｉｔリンカー、ｐｈｅ−ｌｙｓリンカー、ヒドラゾンリンカー、またはジスルフィドリンカーである。
【０３６９】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体−細胞傷害性薬剤共役体の抗ＣＤ１９抗体は、リンカーを介して細胞傷害性薬剤と共役させられ、ここでリンカーは、５．５未満のｐＨで加水分解性である。具体的な実施形態では、リンカーは、５．０未満のｐＨで加水分解性である。
【０３７０】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体−細胞傷害性薬剤共役体の抗ＣＤ１９抗体は、リンカーを介して細胞傷害性薬剤と共役させられ、ここでリンカーは、プロテアーゼによって切断可能である。具体的な実施形態では、プロテアーゼは、リソソームプロテアーゼである。他の実施形態では、プロテアーゼは、とりわけ、膜関連プロテアーゼ、細胞内プロテアーゼ、またはエンドソームプロテアーゼである。
【０３７１】
本発明の免疫複合体に使用することができる他の毒素には、毒性レクチン、リシン等の植物毒素、アブリン、モデシン、ボツリヌス、およびジフテリア毒素が含まれる。当然のことながら、種々の毒素の組み合わせもまた、１個の抗体分子に結合され得、それによって可変細胞傷害性を適応させる。本発明の併用療法に好適に用いられる毒素の例証としては、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリン毒素、緑膿菌外毒素、および緑膿菌内毒素が挙げられる。例えば、Ｐａｓｔａｎ  ｅｔ  ａ．ｌ，Ｃｅｌｌ，４７：６４１（１９８６）およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ，４４：４３（１９９４）を参照されたい。使用することができる酵素的に活性な毒素およびそれらの断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォルディイタンパク質、ジアンシンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・カランチア阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、リストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセネスが含まれる。例えば、１９９３年１０月２８日に公開された国際公開第９３／２１２３２号を参照されたい。
【０３７２】
好適な毒素および化学療法剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９９５）に、またＧｏｏｄｍａｎ  Ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９８５）に記載される。他の好適な毒素および／または化学療法剤は、当業者に既知である。
【０３７３】
本発明は、診断目的に好適である放射性薬剤を含むかまたはそれと共役させられる抗体（抗体断片またはその変異体を含む）をさらに包含する。好適な放射性物質の例としては、ヨウ素（１２１Ｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１１５ｍＩｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、ゼノン（１３５Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、および９７Ｒｕが挙げられるが、それらに限定されない。
【０３７４】
さらに、本発明の抗ＣＤ１９抗体（抗体断片もしくはその変異体を含むか、または代替的に抗体断片もしくはその変異体からなるｓｃＦｖまたは他の分子を含む）は、治療目的に利用される放射性金属イオンに結合するか、またはそれと共役させられてもよい。好適な放射性イオンの例としては、２１３Ｂｉ等のアルファ−放出体、または１０３Ｐｄ、１３５Ｘｅ、１３１Ｉ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、３５Ｓ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、９０Ｙ、１１７Ｔｉｎ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、および１６６Ｈｏ等の他の放射性同位体が挙げられるが、それらに限定されない。具体的な実施形態では、抗体またはその断片は、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、１６６Ｈｏ、および１５３Ｓｍを含むが、それらに限定されない放射性金属イオンをキレートする大環状キレート剤、ポリペプチドに結合される。具体的な実施形態では、大環状キレート剤は、１，４，７，１０−テトラアザシクロ−ドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ’”−四酢酸（ＤＯＴＡ）である。他の具体的な実施形態では、ＤＯＴＡは、リンカー分子を介して本発明の抗体またはその断片に結合される。ＤＯＴＡをポリペプチドに共役させるために有用なリンカー分子の例は、当技術分野で公知である−例えば、ＤｅＮａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４（１０）：２４８３−９０，１９９８、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  １０（４）：５５３−７，１９９９、およびＺｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ  ２６（８）：９４３−５０，１９９９を参照されたく、これらの参考文献は、参照によりそれらの全体がこれによって組み込まれる。
【０３７５】
また、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、抗体を、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、国際公開第８１／０１１４５号を参照されたい）を活性抗癌薬に転換するプロドラッグ活性化酵素と共役させることによって、ＡＤＥＰＴに使用されてもよい。例えば、国際公開第８８／０７３７８号および米国特許第４，９７５，２７８号を参照されたい。ＡＤＥＰＴに有用な免疫複合体の酵素構成成分には、プロドラッグに対して、それをより活性な細胞傷害性形態に転換するような方法で作用することができる任意の酵素が含まれる。
【０３７６】
本発明の方法に有用な酵素には、リン酸塩含有プロドラッグを遊離薬物へと転換するのに有用なアルカリホスファターゼ；硫酸塩含有プロドラッグを遊離薬物へと転換するのに有用なアリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗癌薬である５−フルオロウラシルへと転換するのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物へと転換するに有用なセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、およびカテプシン（カテプシンＢおよびＬ等）等のプロテアーゼ；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを転換するのに有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物へと転換するのに有用なβ−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ等の炭水化物切断酵素；α−ラクタムにより誘導体化された薬物を遊離薬物へと転換するのに有用なβ−ラクタマーゼ；およびそれらのアミン窒素が、それぞれフェノキシアセチルまたはフェニルアセチル基により誘導体化された薬物を遊離薬物へと転換するのに有用なペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼ等のペニシリンアミダーゼが含まれるが、それらに限定されない。当技術分野で「アブザイム」としても知られる、酵素活性を備える抗体を使用して、プロドラッグを遊離活性薬物へと転換することもできる（例えば、Ｍａｓｓｅｙ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２８：４５７−４５８（１９８７）を参照されたい）。抗体−アブザイム共役体は、Ｂ細胞悪性腫瘍に侵されたヒトの部分への所望に応じたアブザイムの送達について本明細書に記載される通りに調製することができる。
【０３７７】
本発明の抗体は、上述のヘテロ二機能性架橋試薬の使用等の、当技術分野で周知の技術によって酵素に共有結合されてもよい。また、当技術分野で周知の組み換えＤＮＡ技術を用いて、少なくとも１つの機能的に活性な酵素の部分に結合される、少なくとも抗ＣＤ１９抗体の抗原結合領域を含む融合タンパク質が構築されてもよい（例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照されたい）。
【０３７８】
抗ＣＤ１９抗体の共有修飾が本発明の範囲内に含まれる。これらは、妥当な場合、化学的合成によってまたは抗体の酵素的もしくは化学的切断によって作製されてもよい。抗ＣＤ１９抗体の共有修飾の他のタイプは、抗体の標的アミノ酸残基を、選択される側鎖またはＮ末端残基もしくはＣ末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることによって、分子内に導入される。
【０３７９】
最も一般的には、システイニル残基は、クロロ酢酸またはクロロアセトアミド等のα−ハロ酢酸塩（および対応するアミン）と反応させられ、カルボキシメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体をもたらす。また同様に、ヨード試薬が使用されてもよい。また、システイニル残基は、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルリン酸、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロメルクリベンゾエート、２−クロロメルクリ−４−ニトロフェノー、またはクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールとの反応によって誘導体化される。
【０３８０】
ヒスチジル残基は、この薬剤が比較的、ヒスチジル側鎖に特異的であるため、ｐＨ５．５〜７．０のジエチルピロカーボネートとの反応によって誘導体化される。また、パラ−ブロモフェナシルブロミドも有用であり、この場合反応は、ｐＨ６．０の０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中で行うことができる。
【０３８１】
リシルおよびアミノ末端残基は、コハク酸または他のカルボン酸無水物と反応させられる。これらの薬剤による誘導体化は、リシニル残基の電荷を逆にする効果を有する。α−アミノ含有残基および／またはε−アミノ含有残基を誘導体化するために好適な他の試薬には、メチルピコリンイミデート等のイミドエステル、ピリドキサールリン酸、ピリドキサール、クロロボロヒドリド、トリニトロベンゼンスルホン酸、０−メチルイソ尿素、２，４−ペンタンジオン、およびトランスアミナーゼ触媒反応グリオキシル酸塩が含まれる。
【０３８２】
アルギニル残基は、１つまたは複数の従来の試薬との反応によって修飾され、その中でもフェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１  ，２−シクロヘキサンジオン、およびニンヒドリンが挙げられる。アルギニル残基の誘導体化は、概して、グアニジン官能基の高いｐＫａのため、反応がアルカリ性条件で行われることを必要とする。さらに、これらの試薬は、リシンのε−アミノ基ならびにアルギニンイプシロン−アミノ基と反応することができる。
【０３８３】
スペクトル標識をチロシル残基に導入することを特定の目的としながら、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によって、チロシル残基の特異的修飾が行われてもよい。最も一般的には、Ｎ−アセチルイミヂゾール（ａｃｅｔｙｌｉｍｉｄｉｚｏｌｅ）およびテトラニトロメタンを使用して、それぞれＯ−アセチルチロシル種および３−ニトロ誘導体を形成する。チロシル残基は、放射免疫測定法で使用するための標識化タンパク質を調製するために、１２５Ｉまたは１３１Ｉを用いてヨウ素化される。
【０３８４】
カルボキシル側基（アスパルチルまたはグルタミル）は、カルボジイミド（Ｒ−−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−−Ｒ’）との反応によって選択的に修飾され、この場合ＲおよびＲ’は、ｌ−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−−４−エチル）カルボジイミドまたはｌ−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミド等の異なるアルキル基である。さらに、アスパルチルおよびグルタミル残基は、アンモニウムイオンとの反応によって、アスパラギニルおよびグルタミニル残基に転換される。
【０３８５】
グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、それぞれ対応するグルタミルおよびアスパルチル残基へと頻繁に脱アミド化される。これらの残基は、中性または塩基性条件下で脱アミド化される。これらの残基の脱アミド化形態は、本発明の範囲に入る。
【０３８６】
他の修飾には、プロリンおよびリシンのヒドロキシル化、セリルまたはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、およびヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９−８６（１９８３））、Ｎ末端アミンのアセチル化、および任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が含まれる。
【０３８７】
共有修飾の別のタイプは、グリコシドを抗体に化学的または酵素的に結合させることを伴う。これらの手順は、それらがＮ結合またはＯ結合グリコシル化のためのグリコシル化能力を有する宿主細胞中で抗体の産生を必要としないという点で有利である。使用される結合様式に応じて、糖（単数または複数）は、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）システインの遊離スルフヒドリル基等の遊離スルフヒドリル基、（ｄ）セリン、トレオニン、もしくはヒドロキシプロリンの遊離ヒドロキシル基等の遊離ヒドロキシル基、（ｅ）フェニルアラニン、チロシン、もしくはトリプトファンの芳香族残基等の芳香族残基、または（ｆ）グルタミンのアミド基に結合されてもよい。これらの方法は、１９８７年９月１１日に公開された国際公開第８７／０５３３０号、およびＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６（１９８１）に記載される。
【０３８８】
６．１６．化学療法併用
他の実施形態では、抗ＣＤ１９ｍＡｂは、１つ以上のさらなる化学療法剤と組み合わせて投与することができる。例えば、「ＣＶＢ」（１．５ｇ／ｍ２シクロホスファミド、２００〜４００ｍｇ／ｍ２エトポシド、および１５０〜２００ｍｇ／ｍ２カルムスチン）は、本発明の併用療法に使用することができる。ＣＶＢは、非ホジキンリンパ腫を治療するためのレジメンである（Ｐａｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，５１：１８（１９９３））。他の好適な併用化学療法レジメンは、当業者に周知である。例えば、Ｆｒｅｅｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ  ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ，”  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｈｏｌｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ（ｅｄｓ．），ｐｐ．２０２８−２０６８（Ｌｅａ＆Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９３）を参照されたい。例証の通り、中悪性度非ホジキンリンパ腫を治療するための第１世代化学療法レジメンには、Ｃ−ＭＯＰＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロカルバジン、およびプレドニゾン）およびＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）が含まれる。有用な第２世代化学療法レジメンは、ｍ−ＢＡＣＯＤ（メトトレキサート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、デキサメタゾン、およびロイコボリン）である一方で、好適な第３世代レジメンは、ＭＡＣＯＰ−Ｂ（メトトレキサート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシン、およびロイコボリン）である。追加の有用な薬物には、フェニルブチレートおよびブロスタチン−１が含まれる。
【０３８９】
本発明に従って、癌またはその１つ以上の症状は、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、および／または生物学的療法／免疫療法等であるが、それらに限定されない１つ以上の療法の投与と組み合わせた抗ＣＤ１９ｍＡｂの投与によって、予防、治療、管理、または寛解されてもよい。
【０３９０】
具体的な実施形態では、本発明の方法は、次のもの等であるが、それらに限定されない１つ以上の血管新生アンタゴニストの投与を包含する：アンギオスタチン（プラスミノーゲン断片）、抗血管新生抗トロンビンＩＩＩ、アンジオザイム、ＡＢＴ−６２７、ベイ１２−９５６６、ベネフィン、ベバシズマブ、ＢＭＳ−２７５２９１、軟骨由来阻害剤（ＣＤＩ）、ＣＡＩ、ＣＤ５９補体断片、ＣＥＰ−７０５５、Ｃｏｌ３、コンブレタスタチンＡ−４、エンドスタチン（コラーゲンＸＶＩＩＩ断片）、フィブロネクチン断片、Ｇｒｏ−ベータ、ハロフジノン、ヘパリナーゼ、ヘパリン六糖断片、ＨＭＶ８３３、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、ＩＭ−８６２、インターフェロンアルファ／ベータ／ガンマ、インターフェロン誘導性プロテイン（ＩＰ−ＩＯ）、インターロイキン−１２、クリングル５（プラスミノーゲン断片）、マリマスタット、メタロプロテアーゼ阻害剤（ＴＩＭＰ）、２−メトキシエストラジオール、ＭＭＩ２７０（ＣＧＳ２７０２３Ａ）、ＭｏＡｂ  ＩＭＣ−１Ｃ１１、ネオバスタット、ＮＭ−３、パンゼム、ＰＩ−８８、胎盤リボヌクレアーゼ阻害剤、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、血小板因子−４（ＰＦ４）、プリノマスタット、プロラクチン１６ｋＤ断片、プロリフェリン関連タンパク質（ＰＲＰ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５９４、レチノイド、ソリマスタット、スクアラミン、ＳＳ３３０４、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＳＵｌ１２４８、テトラヒドロコルチゾール−Ｓ、テトラチオモリブデート、サリドマイド、トロンボスポンジン−１（ＴＳＰ−１）、ＴＮＰ−４７０、トランスフォーミング成長因子−ベータ（ＴＧＦ−ｂ）、バスキュロスタチン、バソスタチン（カルレチクリン断片）、ＺＤ６１２６、ＺＤ６４７４、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（ＦＴＩ）、およびビスホスホネート（アレンドロネート、クロドロネート、エチドロネート、イバンドロネート、パミドロネート、リセドロネート、チルドロネート、およびゾレドロネート等であるが、それらに限定されない）。
【０３９１】
具体的な実施形態では、本発明の方法は、化学療法剤および非化学療法免疫調節剤等であるが、それらに限定されない１つ以上の免疫調節剤の投与を包含する。化学療法剤の非限定的例としては、メトトレキサート、シクロスポリンＡ、レフルノミド、シスプラチン、イホスファミド、タキソールおよびパクリタキソール等のタキサン、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、ＣＰＴ−１１、トポテカン、９−ＡＣ、およびＧＧ−２１１）、ゲムシタビン、ビノレルビン、オキサリプラチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ビノレルビン、テモダール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン相同体、およびシトキサンが挙げられる。非化学療法免疫調節剤の例としては、抗Ｔ細胞受容体抗体（例えば、抗ＣＤ４抗体（例えば、ｃＭ−Ｔ４１２（Ｂｏｅｒｉｎｇｅｒ）、ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１（登録商標）（ＩＤＥＣおよびＳＫＢ）、ｍＡＢ４１６２Ｗ９４、オルソクローンおよびＯＫＴｃｄｒ４ａ（Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ））、抗ＣＤ３抗体（例えば、ヌビオン（Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ）、ＯＫＴ３（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、またはリツキサン（ＩＤＥＣ））、抗ＣＤ５抗体（例えば、抗ＣＤ５リシン結合免疫複合体）、抗ＣＤ７抗体（例えば、ＣＨＨ−３８０（Ｎｏｖａｒｔｉｓ））、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４０リガンドモノクローナル抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１３１（ＩＤＥＣ））、抗ＣＤ５２抗体（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ  １Ｈ（Ｉｌｅｘ））、抗ＣＤ２抗体（例えば、ＭＥＤＩ−５０７（Ｍｅｄｌｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．，国際公開第０２／０９８３７０号および第０２／０６９９０４号）、抗ＣＤ１１ａ抗体（例えば、ザネリム（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））および抗Ｂ７抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）（ＩＤＥＣ））；抗サイトカイン受容体抗体（例えば、抗ＩＦＮ受容体抗体、抗ＩＬ−２受容体抗体（例えば、ゼナパックス（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ））、抗ＩＬ−４受容体抗体、抗ＩＬ−６受容体抗体、抗ＩＬ−１０受容体抗体、および抗ＩＬ−１２受容体抗体）、抗サイトカイン抗体（例えば、抗ＩＦＮ抗体、抗ＴＮＦ−α抗体、抗ＩＬ−ｌβ抗体、抗ＩＬ−６抗体、抗ＩＬ−８抗体（例えば、ＡＢＸ−ＩＬ−８（Ａｂｇｅｎｉｘ））、抗ＩＬ−１２抗体および抗ＩＬ−２３抗体））；ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン；ＬＦＡ−３ＴＩＰ（Ｂｉｏｇｅｎ、国際公開第９３／０８６５６号および米国特許第６、１６２，４３２号）；可溶性サイトカイン受容体（例えば、ＴＮＦ−α受容体またはその断片の細胞外ドメイン、ＩＬ−ｌβ受容体またはその断片の細胞外ドメイン、およびＩＬ−６受容体またはその断片の細胞外ドメイン）；サイトカインまたはそれらの断片（例えば、インターロイキン（ＩＬ）−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−ＩＯ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、およびＧＭ−ＣＳＦ）；ならびに抗サイトカイン抗体（例えば、抗ＩＬ−２抗体、抗ＩＬ−４抗体、抗ＩＬ−６抗体、抗ＩＬ−１０抗体、抗ＩＬ−１２抗体、抗ＩＬ−１５抗体、抗ＴＮＦ−α抗体、および抗ＩＦＮ−γ抗体）、およびに腫瘍関連抗原に免疫特異的に結合する抗体（例えば、ハーセプチン（登録商標））が挙げられるが、それらに限定されない。ある種の実施形態では、免疫調節剤は、化学療法剤以外の免疫調節剤である。他の実施形態では、免疫調節剤は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＮＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、またはエリスロポエチン等のサイトカイン薬剤または造血性薬剤以外の免疫調節剤である。さらに他の実施形態では、免疫調節剤は、化学療法剤およびサイトカイン因子または造血性因子以外の薬剤である。
【０３９２】
具体的な実施形態では、本発明の方法は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド性抗炎症薬、ベータ−アゴニスト、抗コリン剤、およびメチルキサンチン等であるが、それらに限定されない１つ以上の抗炎症剤の投与を包含する。ＮＳＡＩＤの例としては、アスピリン、イブプロフェン、セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（商標））、ジクロフェナク（ＶＯＬＴＡＲＥＮ（商標））、エトドラク（ＬＯＤＩＮＥ（商標））、フェノプロフェン（ＮＡＬＦＯＮ（商標））、インドメタシン（ＩＮＤＯＣＩＮ（商標））、ケトロラク（ＴＯＲＡＤＯＬ（商標））、オキサプロジン（ＤＡＹＰＲＯ（商標））、ナブメトン（ＲＥＬＡＦＥＮ（商標））、スリンダク（ＣＬＩＮＯＲＩＬ（商標））、トルメンチン（ＴＯＬＥＣＴＩＮ（商標））、ロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸ（商標））、ナプロキセン（ＡＬＥＶＥ（商標）、ＮＡＰＲＯＳＹＮ（商標））、ケトプロフェン（ＡＣＴＲＯＮ（商標））、およびナブメトン（ＲＥＬＡＦＥＮ（商標））が挙げられるが、それらに限定されない。かかるＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼ酵素（例えば、ＣＯＸ−Ｉおよび／またはＣＯＸ−２）を阻害することによって機能する。ステロイド性抗炎症性薬物の例としては、グルココルチコイド、デキサメタゾン（ＤＥＣＡＤＲＯＮ（商標））、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン（ＤＥＬＴＡＳＯＮＥ（商標））、プレドニゾロン、トリアムシノロン、アザルフィジン、およびプロスタグランジン、トロンボキサン、およびロイコトリエン等のエイコサノイドが挙げられるが、それらに限定されない。
【０３９３】
別の具体的な実施形態では、本発明の方法は、１つ以上の抗ウイルス剤（例えば、アマンタジン、リバビリン、リマンタジン、アシクロビル、ファムシクロビル、ホスカルネット、ガンシクロビル、トリフルリジン、ビダラビン、ジダノシン、スタブジン、ザルシタビン、ジドブジン、インターフェロン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（元アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、制吐薬（例えば、アルプラゾラム、デキサメタゾン、ドンペリドン、ドロナビノール、ドロペリドール、グラニセトロン、ハロペリドール、ハロペリドール、イオラゼパム、メチルプレドニゾロン、メトクロプラミド、ナビロン、オンダンセトロン、プロクロルペラジン）、抗真菌剤（例えば、アンホテリシン、クロトリマゾール、エコナゾール、フルコナゾール、フルシトシン、グリセオフルビン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、およびニスタチン）、抗寄生虫剤（例えば、デヒドロエメチン、ジロキサニドフロエート、エメチン、メフロキン、メラルソプロール、メトロニダゾール、ニフルチモックス、パロモマイシン、ペンタビジン、ペンタミジンイセチオナート、プリマキン、キナクリン、キニジン）、またはそれらの組み合わせの投与を包含する。
【０３９４】
薬学的組成物および剤形およびキットを含む本発明の種々の実施形態に使用することができる抗癌剤の具体的例としては、次のものが挙げられるが、それらに限定されない：アシビシン、アクラルビシン、塩酸アコダゾール、アクロニン、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンボマイシン、酢酸アメタントロン、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アザシチジン、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタット、ベンゾデパ、ビカルタミド、塩酸ビサントレン、ビスナフィドジメシレート、ビゼレシン、硫酸ブレオマイシン、ブレキナールナトリウム、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン；カルムスチン、塩酸カルビシン、カルゼレシン、セデフィンゴール、クロランブシル、シロレマイシン、シスプラチン、クラドリビン、クリスナトールメシレート、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、塩酸ダウノルビシン、デシタビン、デキソルマプラチン、デザグアニン、デザグアニンメシラート、ジアジクオン、ドセタキセル、ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシン、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、デュアゾマイシン、エダトレキサート、塩酸エフロルニチン、エルサミトルシン、エンロプラチン、エンプロマート、エピプロピジン、塩酸エピルビシン、エルブロゾール、塩酸エソルビシン、エストラムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エタニダゾール、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン、塩酸ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フロクスウリジン、リン酸フルダラビン、フルオロウラシル、フルロシタビン、フォスキドン、フォストリエシンナトリウム、ゲムシタビン、塩酸ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、塩酸イダルビシン、イホスファミド、イルモフォシン、インターロイキンＩＩ（を含む組み換えインターロイキンＩＩ、またはｒＩＬ２）、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファ−ｎｌ、インターフェロンアルファ−ｎ３、インターフェロンベータ−Ｉａ、インターフェロンガンマ−Ｉｂ、イプロプラチン、塩酸イリノテカン、酢酸ランレオチド、レトロゾール、酢酸ロイプロリド、塩酸リアロゾール、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、塩酸ロソキサントロン、マソプロコール、メイタンシン、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メトプリン、メツレデパ、ミチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトマルシン、マイトマイシン、ミトスパー、ミトタン、塩酸ミトキサントロン、ミコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オルマプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、ペガスパルガーゼ、ペリオマイシン、ペンタムスチン、硫酸ペプロマイシン、ペルホスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン、塩酸ピロキサントロン、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、塩酸プロカルバジン、ピューロマイシン、塩酸ピューロマイシン、ピラゾフリン、リボプリン、ログレチミド、サフィンゴール、塩酸サフィンゴール、セムスチン、シムトラゼン、スパルフォサートナトリウム、スパルソマイシン、塩酸スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、スロフェヌル、タリソマイシン、テコガランナトリウム、テガフール、塩酸テロキサントロン、テモポルフィン、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、チアミプリン、チオグアニン、チオテパ、チアゾフリン、チラパザミン、クエン酸トレミフェン、酢酸トレストロン、リン酸トリシリビン、トリメトレキセート、グルクロン酸トリメトレキセート、トリプトレリン、塩酸ツブロゾール、ウラシルマスタード、ウレデパ、バプレオチド、ベルテポルフィン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、硫酸ビネピジン、硫酸ビングリシネート、硫酸ビンロイロシン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンロシジン、硫酸ビンゾリジン、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、塩酸ゾルビシン。他の抗癌薬には、次のものが含まれるが、それらに限定されない：２０−ｅｐｉ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３，５−エチニルウラシル；アビラテロン、アクラルビシン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドックス、アミフォスチン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、血管新生阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリックス、抗背方化形態形成タンパク質−１、抗アンドロゲン抗前立腺癌剤、抗エストロゲン剤、新生物剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィディコリングリシネート、アポトーシス遺伝子モジュレータ；アポトーシス調節因子、アプリン酸、ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト、ベンゾクロリン類、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、ベータ−アレチン、ベータクラマイシンＢ、ベツリン酸、ｂＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレフレート、ブロピリミン、ブドチタン、ブチオニンスルホキシイミン、カルシポトリオール、カルフォスチンＣ、カンプトテシン誘導体、カナリア痘ＩＬ−２、カペシタビン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３、ＣＡＲＮ  ７００、軟骨由来阻害剤、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セトロレリックス、クロリン類、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シス−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマ��シンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クランベシジン８１６、クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、クラシンＡ、シクロペントアトラキノン類、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビンオクホスフェート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダクリキシマブ、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、デスロレリン、デキサメタゾン、デキシホスファミド、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、ジアジクオン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジヒドロタキソール、９−、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドセタキセル、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、ズオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、エレメン、エミテフール、エピルビシン、エプリステリド、エストラムスチン類似体、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、リン酸エトポシド、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フルアステロン、フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン、フォルフェニメックス、フォルメスタン、フォストリエシン、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリックス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イルモフォシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン類、イミキモド、インターフェロンアゴニスト、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン、ヨードドキソルビシン、イポメアノール，４−、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、三酢酸ラメラリン−Ｎ、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病阻害因子、白血球アルファインターフェロン、ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン、ロイプロレリン、レバミゾール、リアロゾール、線状ポリアミンアナログ、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リッソクリナミド７、ロバプラチン、ロンブリシン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロソキサントロン免疫賦活ペプチド、インスリン様成長因子−１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン、ヨードドキソルビシン、イポメアノール、４−、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、三酢酸ラメラリン−Ｎ、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病阻害性因子、白血球アルファインターフェロン、ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン、ロイプロレリン、レバミゾー��、リアロゾール、線状ポリアミン類似体、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リッソクリナミド７、ロバプラチン、ロンブリシン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロソキサントロン、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（ロバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、スタチン、シンバスタチン、およびアトルバスタチン等であるが、それらに限定されない）、ロキソリビン、ルルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶解性ペプチド、マイタンシン、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリリシン阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、メノガリル、メルバロン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプリストーン、ミルテフォシン、ミリモスチム、ミスマッチ２本鎖ＲＮＡ、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン類似体、ミトナフィド、ミトトキシン線維芽細胞成長因子−サポリン、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、モノホスホリルリピドＡ＋マイコバクテリウム細胞壁ｓｋ、モピダモール、多剤耐性遺伝子阻害剤、多重腫瘍サプレッサー１ベースの治療、マスタード抗癌剤、ミカペルオキシドＢ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミリアポロン、Ｎ−アセチルジナリン、Ｎ−置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、一酸化窒素モジュレータ、窒素酸化物酸化防止剤、ニトルリン、Ｏ６−ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカイン誘発剤、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペガスパルガーゼ、ペルデシン、ポリ硫酸ペントサンナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、ペルフルブロン、ペルホスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、酢酸フェニル、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニール、塩酸ピロカルピン、ピ
ラルビシン、ピリトレキシム、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、白金錯体、白金化合物、白金−トリアミン錯体、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニゾン、プロピルビス−アクリドン、プロスタグランジンＪ２、プロテアソーム阻害剤、プロテインＡベースの免疫モジュレータ、プロテインキナーゼＣ阻害剤、プロテインキナーゼＣ阻害剤、微細藻類、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、プルプリン類、ピラゾロアクリジン、ピリドキシ化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート、ｒａｆアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ｒａｓファルネシルプロテイントランスフェラーゼ阻害剤、ｒａｓ阻害剤、ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤、脱メチル化レテリプチン、エチドロン酸レニウムＲｅ  １８６、リゾキシン、リボザイム、ＲＩＩレチナミド、ログレチミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメックス、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、サイントピン、ＳａｒＣＮＵ、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、Ｓｄｉ  １模倣体、セムスチン、老化由来阻害剤１、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達モジュレータ、単鎖抗原結合タンパク質、シゾフィラン、ソブゾキサン、ナトリウムボロカプタート、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルフォシン酸、スピカマイシンＤ、スピロムスチン、スプレノペンチン、スポンギスタチン１、スクアラミン、幹細胞インヒビター、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、ストロメリシン阻害剤、スルフィノシン、過活性血管作用性腸ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリムスチン、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、テモポルフィン、テモゾロマイド、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、タリブラスチン、チオコラリン、トロンボポエチン、トロンボポエチン模倣体、チマルファシン、サイモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、スズエチルエチオプルプリン、チラパザミン、二塩化チタノセン、トプセンチン、トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、トリメトレキセート、トリプトレリン、トロピセトロン、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チルホスチン類、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメクス、尿生殖洞由来成長阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベクター系、赤血球遺伝子治療、ベラレソール、ベラミン、ベルジン類、ベルテポルフィン、ビノレルビン、ビンキサルチン、ビタキシン（Ｖｉｔａｘｉｎ）（登録商標）、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、およびジノスタチンスチマラマー。追加的抗癌薬は、５−フルオロウラシルおよびロイコボリンである。これらの２つの薬剤は、サリドマイドおよびトポイソメラーゼ阻害剤を用いる方法で使用される場合に有用であり得る。具体的な実施形態では、抗癌剤��化学療法剤ではない。
【０３９５】
より特定の実施形態では、本発明はまた、上述の乳癌、卵巣癌、黒色腫、前立腺癌、結腸癌および肺癌を治療するための、表１に開示される抗癌剤等の抗癌剤等であるが、それらに限定されない１つ以上の療法の投与と組み合わせた抗ＣＤ１９ｍＡｂの投与を含む。併用療法で使用されるとき、表２に列挙される投与の用量および／または頻度は減少し得る。
【０３９６】
【表２】
2012519712.tif 000007
2012519712.tif 000008
2012519712.tif 000009
【０３９７】
また、本発明は、癌細胞を破壊するためのＸ線、ガンマ線、および他の放射線源の使用を含む放射線療法と組み合わせた抗ＣＤ１９ｍＡｂの投与も包含する。特定の実施形態では、放射線治療は、体外照射または遠隔照射療法として投与され、ここで照射は、遠隔源から導かれる。他の実施形態では、放射線治療は、内部療法または近接密封小線源療法として投与され、ここで放射線源は、癌細胞または腫瘤に近接して体内に配置される。
【０３９８】
癌療法およびそれらの用量、投与経路および推奨される使用は、当技術分野で既知であり、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（５６ｔｈ  ｅｄ．，２００２）等の文献に記載されている。
【０３９９】
６．１７．薬学的組成物
また、本発明は、ＣＤ１９抗原に結合し、かつヒトＡＤＣＣを媒介し得る治療用抗体を用いて、Ｂ細胞悪性腫瘍等であるが、それらに限定されない、ヒト対象におけるＢ細胞疾患および障害を治療するための免疫療法組成物および方法、ヒト移植受容者におけるＧＶＨＤ、移植片拒絶反応、および移植後リンパ球増殖性障害を治療および予防するための免疫療法組成物および方法、ならびにヒト対象における自己免疫疾患および障害を治療するための免疫療法組成物および方法に関する。
【０４００】
本発明は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。また、本発明は、ヒトＡＤＣＣを媒介し得るＩｇＧ２またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプのヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。ある種の実施形態では、本発明はまた、当技術分野で既知の手段によって産生することができるモノクローナルヒト、ヒト化、またはキメラ化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。
【０４０１】
急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、前リンパ性白血病、有毛細胞白血病、一般的な急性リンパ性白血病、および一部のヌル急性リンパ性白血病を含むが、それらに限定されない、Ｂ細胞およびそれらの前駆体に由来するＢ細胞悪性腫瘍であると診断されたヒト対象を治療するための治療製剤およびレジメンが記載される。
【０４０２】
他の特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、ＡＤＣＣ、補体依存性細胞傷害性、またはアポトーシスを媒介することができる。また、本発明の組成物および方法は、他のＢ細胞指向性免疫療法よりも広範なＢ細胞の集団を標的とする利点を有する。例えば、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、骨髄細胞、循環Ｂ細胞、および成熟した抗体分泌Ｂ細胞を標的とするために有効であり得る。したがって、本発明の方法および組成物は、循環Ｂ細胞ならびに循環免疫グロブリンを減少させるかまたは枯渇させるために有効であり得る。
【０４０３】
したがって、一態様では、本発明は、ＧＶＨＤ、移植片拒絶反応、および移植後リンパ増殖性障害を治療および予防するための組成物および方法を提供し、それらは、低標的化の治療剤およびレジメンよりも少ないおよび／または重症度の低い合併症に関連する。一実施形態では、本発明の組成物および方法は、本発明の方法および組成物の非存在下で可能であろう用量よりも低い用量の従来の治療剤と共に使用される。別の実施形態では、本発明の組成物および方法は、放射線療法、高用量化学療法、または脾臓摘出等のより過酷な治療形態に対する必要性を取り除く。
【０４０４】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体および組成物は、ＧＶＨＤおよび移植片拒絶反応の治療または予防のために、移植前または後に、単独でまたは他の治療剤もしくはレジメンと組み合わせて移植受容患者に投与されてもよい。例えば、抗ＣＤ１９抗体および組成物を使用して、同種間移植片の移植前または後に移植受容者から同種抗体を枯渇させてもよい。また、抗ＣＤ１９抗体および組成物を使用して、エクスビボで、移植前に、またはドナー中で、またはＧＶＨＤおよび移植片拒絶反応に対する予防として、移植片から抗体産生細胞を枯渇させてもよい。
【０４０５】
６．１８．薬学的製剤、投与、および投薬
本発明の薬学的製剤は、活性成分としてヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含有する。製剤は、ヒト患者への投与に好適な重量または容量単位中に、所望の応答を産生するために有効な量の裸の抗体、免疫複合体、または融合タンパク質を含有し、好ましくは滅菌されている。応答は、例えば、循環Ｂ細胞枯渇、組織Ｂ細胞枯渇、Ｂ細胞悪性腫瘍の退行、または疾患症状の減少等であるが、それらに限定されない、抗ＣＤ１９抗体組成物の生理的効果を決定することによって測定することができる。他の検定は、当業者に既知であり、応答のレベルを測定するために用いることができる。
【０４０６】
６．１８．１．薬学的製剤
抗ＣＤ１９抗体組成物は、薬学的に許容される担体により製剤化されてもよい。「薬学的に許容される」という用語は、活性成分の生物学的活性の有効性を妨げない１つ以上の非毒性物質を意味する。かかる調製物は、通常、塩、緩衝剤、防腐剤、適合性担体、および任意に他の治療剤を含有する。また、かかる薬学的に許容される調製物は、通常、ヒトへの投与に好適な適合性固体または液体充填剤、希釈剤またはカプセル化物質も含有する。医薬において使用される場合、塩は、薬学的に許容されるべきであろうが、薬学的に許容されない塩を好都合に使用して、その薬学的に許容される塩を調製してもよく、薬学的に許容されない塩は本発明の範囲から除外されない。かかる薬理学的および薬学的に許容される塩には、次の酸から調製される塩が含まれるが、それらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ホウ酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸等。また、薬学的に許容される塩は、ナトリウム、カリウム、またはカルシウム塩等のアルカリ金属またはアルカリ土類塩として調製することができる。「担体」という用語は、適用を促進するために活性成分がそれと組み合わされる、天然または合成の有機または無機成分を指す。また、薬学的組成物の構成成分は、本発明の抗体と、および互いに、所望の薬学的有効性を実質的に損なうであろう相互作用が存在しないような様式で混合することができる。
【０４０７】
本発明の特定の態様に従って、抗ＣＤ１９抗体組成物は、所望の程度の純度を有する抗体または免疫複合体を任意の生理的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９９９））と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で保管用に調製することができる。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる用量および濃度で受容者に対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。
【０４０８】
また、抗ＣＤ１９抗体組成物は、任意に、次のもの等の好適な防腐剤を含有する：塩化ベンザルコニウム；クロロブタノール；パラベンおよびチメロサール。
【０４０９】
抗ＣＤ１９抗体組成物は、単位剤形で好都合に提示されてもよく、薬学技術分野で周知のいずれの方法によって調製されてもよい。すべての方法は、１つ以上の副成分を構成する活性剤を担体と混合するステップを含む。概して、抗ＣＤ１９抗体組成物は、液体担体、微粉化された固体担体、または両者と均一かつ密接に混合し、次いで、必要な場合、産物を成形することによって調製される。
【０４１０】
非経口投与に好適な組成物は、好都合には、抗ＣＤ１９抗体の滅菌された水性または非水性調製物を含み、それは、受容者の血液と等張性であり得る。この調製物は、既知の方法に従って好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤用いて製剤化されてもよい。また、滅菌注射用調製物は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液としての、滅菌注射用溶液または懸濁液であってもよい。用いることができる許容される賦形剤および溶媒には、水、リンゲル液、および等張性塩化ナトリウム溶液が含まれる。加えて、溶媒または懸濁媒体として滅菌固定油が慣習的に用いられる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含むいずれの無菌性の固定油が用いられてもよい。加えて、注射剤の調製にオレイン酸等の脂肪酸を使用してもよい。経口、皮下、静脈内、筋肉内等の投与に好適な担体製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに見出すことができる。ある種の実施形態では、種々の投与経路に好適な担体製剤は、ＲＩＴＵＸＡＮ（商標）に関して記載されるものと同一または類似であってもよい。Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ，２００５），ｐｐ．９５８−９６０および１３５４−１３５７を参照されたく、この参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本発明のある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体組成物は、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、ポリソルベート８０、および滅菌水により静脈内投与用に製剤化され、その場合、組成物のｐＨは、約６．５に調節される。静脈内注射が、抗体の高速分散における十分な循環に起因して有用な投与様式を提供することを当業者は承知している。
しかしながら、静脈内投与は、血管構造および内皮下マトリックスの内皮細胞を含む血管障壁によって制限を受ける。依然として、血管障壁は、固形腫瘍による治療用抗体の取り込みに関してより顕著な問題である。リンパ腫は比較的高い血流速度を有し、有効な抗体送達に寄与する。また、皮下もしくは筋肉内注射等、またはリンパ管のカテーテル法によるリンパ管内投与経路も、Ｂ細胞リンパ腫を治療する有用な手段を提供する。ある種の実施形態では、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体は、皮下に自己投与される。かかる実施形態では、組成物は、凍結乾燥薬物としてまたは液体緩衝剤（例えば、ＰＢＳおよび／またはクエン酸塩）中で、約５０ｍｇ／ｍＬで製剤化される。
【０４１１】
また、本明細書の製剤は、治療対象の特定の徴候に対する必要に応じて、互いに不都合な影響を及ぼさない相補的活性を備える化合物等の１つを超える活性化合物を含有してもよい。例えば、免疫抑制剤をさらに提供することが望ましい可能性がある。かかる分子は、意図される目的のために有効な量の組み合わせにおいて好適に存在する。
【０４１２】
また、活性成分は、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）で、またはマクロエマルジョン中で、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタシラート）マイクロカプセル中に取り込まれてもよい。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示される。
【０４１３】
インビボ投与に使用されるべき製剤は、典型的に滅菌されている。これは滅菌ろ過膜を通すろ過によって容易に達成される。
【０４１４】
徐放性調製物が調製されてもよい。好適な徐放性調製物の例としては、抗ＣＤ１９抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、そのマトリックスは、造形品、例えば、薄膜またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタミン酸のコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）等の分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用ミクロスフェア）、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−酢酸ビニルおよび乳酸−グリコール酸等のポリマーが、１００日超にわたって分子の放出を可能にする一方で、特定のヒドロゲルはそれより短い期間にタンパク質を放出する。カプセル化抗体が長期間体内に残留する場合、それらは、３７℃の水分への曝露の結果として変性または凝集し、生物学的活性の喪失および免疫原性の変化の可能性をもたらす。関与する機構に応じて、安定化のための合理的戦略を考案することができる。例えば、凝集機構がチオ−ジスルフィド交換を通じた分子間Ｓ−Ｓ結合形成であることが見出される場合、スルフヒドリル残基を修飾し、酸性溶液から凍結乾燥させ、含水量を調節し、適切な添加物を用い、かつ具体的なポリマーマトリックス組成物を開発することによって安定化を達成することができる。ある種の実施形態では、本発明の組成物において使用される薬学的に許容される担体は、ヒトＡＤＣＣまたはＣＤＣに影響を及ぼさない。
【０４１５】
また、本明細書中で開示される抗ＣＤ１９抗体組成物は、免疫リポソームとして製剤化されてもよい。「リポソーム」は、ヒトへの薬物（本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗体等）の送達に有用な種々のタイプの脂質、リン脂質、および／または界面活性剤からなる小胞である。リポソームの構成成分は、一般的に、生体膜の脂質配列に類似した二重層構成で配列される。本発明の抗体を含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）、Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）、ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号に記載される方法等の、当技術分野で既知の方法によって調製される。増大された循環期間を備えるリポソームが米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いる逆相蒸発法によって製造することができる。リポソームを規定の細孔サイズのフィルターに通して押し出し、所望の直径を備えるリポソームを得る。本発明の抗体は、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載される通り、ジスルフィド交換反応を介して、リポソームと共役させることができる。また、治療剤をリポソーム内に含有させることもできる。Ｇａｂｉｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，（１９）１４８４（１９８９）を参照されたい。
【０４１６】
幾つかの薬学的製剤には、次のものが含まれるが、それらに限定されない：
【０４１７】
（ａ）１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）のいずれかの使い捨てバイアル中で１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、抗ＣＤ１９抗体を静脈内（ｉ．ｖ．）投与するための、防腐剤を含まない滅菌液体濃縮物。塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、ポリソルベート、および注射用滅菌水を用いて、製品を静脈内投与用に製剤化することができる。例えば、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、および注射用滅菌水中で製品を製剤化することができる。ｐＨは、６．５に調節される。
【０４１８】
（ｂ）皮下（ｓ．ｃ．）注射用の使い捨てガラスバイアル中の滅菌凍結乾燥粉末。スクロース、塩酸Ｌ−ヒスチジン一水和物、Ｌ−ヒスチジン、およびポリソルベート２０を用いて製品を製剤化することができる。例えば、各使い捨てバイアルは、１５０ｍｇ抗ＣＤ１９抗体、１２３．２ｍｇスクロース、６．８ｍｇ塩酸Ｌ−ヒスチジン一水和物、４．３ｍｇ  Ｌ−ヒスチジン、および３ｍｇポリソルベート２０を含有することができる。使い捨てバイアルを１．３ｍＬの注射用滅菌水で再構成すると、１．２５ｍＬ当たり１２５ｍｇ（１００ｍｇ／ｍＬ）の抗体を送達するための約１．５ｍＬの溶液が得られる。
【０４１９】
（ｃ）静脈内（ｉ．ｖ．）投与用の、防腐剤を含まない滅菌凍結乾燥粉末。α−トレハロース二水和物、Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ、ヒスチジン、およびポリソルベート２０（ＵＳＰ）を用いて製品を製剤化することができる。例えば、各バイアルは、４４０ｍｇ抗ＣＤ１９抗体、４００ｍｇα，α−トレハロース二水和物、９．９ｍｇ  Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ、６．４ｍｇ  Ｌ−ヒスチジン、および１．８ｍｇポリソルベート２０、ＵＳＰを含有することができる。１．１％ベンジルアルコールを防腐剤として含有する２０ｍＬの注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ＵＳＰで再構成すると、ｐＨ約６の２１ｍｇ／ｍＬの抗体を含有する複数回投与溶液が得られる。
【０４２０】
（ｄ）抗ＣＤ１９抗体が、スクロース、ポリソルベート、リン酸二水素ナトリウム一水和物、およびリン酸水素二ナトリウム二水和物を用いて製剤化されている、静脈内注入用の滅菌凍結乾燥粉末。例えば、各使い捨てバイアルは、１００ｍｇ抗体、５００ｍｇスクロース、０．５ｍｇポリソルベート８０、２．２ｍｇリン酸二水素ナトリウム一水和物、および６．１ｍｇリン酸水素二ナトリウム二水和物を含有することができる。防腐剤は存在しない。１０ｍＬの注射用滅菌水、ＵＳＰで再構成すると、得られるｐＨは約７．２である。
【０４２１】
（ｅ）使い捨て１ｍＬプレフィルドシリンジ中で供給される皮下投与用の、防腐剤を含まない滅菌溶液。塩化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム二水和物、リン酸水素二ナトリウム二水和物、クエン酸ナトリウム、クエン酸一水和物、マンニトール、ポリソルベート８０、および注射用水、ＵＳＰを用いて製品を製剤化することができる。水酸化ナトリウムを添加してｐＨを約５．２に調整してよい。
【０４２２】
例えば、各シリンジは、０．８ｍＬ（４０ｍｇ）の製剤を送達するように製剤化することができる。各０．８ｍＬは、４０ｍｇ抗ＣＤ１９抗体、４．９３ｍｇ塩化ナトリウム、０．６９ｍｇリン酸二水素ナトリウム二水和物、１．２２ｍｇリン酸水素二ナトリウム二水和物、０．２４ｍｇクエン酸ナトリウム、１．０４クエン酸一水和物、９．６ｍｇマンニトール、０．８ｍｇ  ポリソルベート８０、および注射用水、ＵＳＰを含有する。
【０４２３】
（ｆ）注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、ＵＳＰで再構成され、皮下（ｓ．ｃ．）注射として投与される、使い捨てバイアルに含有された、防腐剤を含まない滅菌凍結乾燥粉末。スクロース、塩酸ヒスチジン一水和物、Ｌ−ヒスチジン、およびポリソルベートを用いて製品を製剤化することができる。例えば、７５ｍｇバイアルは、１２９．６ｍｇまたは１１２．５ｍｇの抗ＣＤ１９抗体、９３．１ｍｇスクロース、１．８ｍｇ  Ｌ−塩酸ヒスチジン一水和物、１．２ｍｇ  Ｌ−ヒスチジン、および０．３ｍｇポリソルベート２０を含有することができ、０．９ｍＬのＳＷＦＩ、ＵＳＰで再構成された後に０．６ｍＬ中で７５ｍｇの抗体を送達するように設計される。１５０ｍｇバイアルは、２０２．５ｍｇまたは１７５ｍｇ抗ＣＤ１９抗体、１４５．５ｍｇスクロース、２．８ｍｇ  Ｌ−塩酸ヒスチジン一水和物、１．８ｍｇ  Ｌ−ヒスチジン、および０．５ｍｇポリソルベート２０を含有することができ、１．４ｍＬのＳＷＦＩ、ＵＳＰで再構成された後に１．２ｍＬ中で１５０ｍｇの抗体を送達するように設計される。
【０４２４】
（ｇ）注射用滅菌水で再構成するための滅菌凍結乾燥製品。
マンニトール、ヒスチジン、およびグリシンを用いて筋肉内（ＩＭ）注射用の使い捨てバイアルとして製品を製剤化することができる。例えば、各使い捨てバイアルは、１００ｍｇ抗ＣＤ１９抗体、６７．５ｍｇのマンニトール、８．７ｍｇヒスチジン、および０．３ｍｇグリシンを含有することができ、１．０ｍＬの注射用滅菌水で再構成されたとき１．０ｍＬ中で１００ｍｇ抗体を送達するように設計される。別の例として、各使い捨てバイアルは、５０ｍｇ抗ＣＤ１９抗体、４０．５ｍｇマンニトール、５．２ｍｇヒスチジン、および０．２ｍｇグリシンを含有することができ、０．６ｍＬの注射用滅菌水で再構成されたとき５０ｍｇの抗体を送達するように設計される。
【０４２５】
（ｈ）１００ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、筋肉内（ＩＭ）注射用の、防腐剤を含まない滅菌溶液。使い捨てバイアル中で、ヒスチジン、グリシン、および注射用滅菌水を用いて製品を製剤化することができる。例えば、各使い捨てバイアルは、１．２ｍＬの容量中、１００ｍｇ抗体、４．７ｍｇヒスチジン、および０．１ｍｇグリシンを用いて製剤化することができ、１ｍＬ中で１００ｍｇの抗体を送達するように設計される。別の例として、各使い捨てバイアルは、０．７ｍＬまたは０．５ｍＬの容量中、５０ｍｇ抗体、２．７ｍｇヒスチジン、および０．０８ｍｇグリシンを用いて製剤化することができ、０．５ｍＬ中で５０ｍｇの抗体を送達するように設計される。
【０４２６】
（ｉ）タングステン除去ウルトラ−１００シリンジ、または自動注入装置等の使い捨て１ｍＬプレフィルドシリンジ中、１００ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、抗ＣＤ１９抗体の皮下投与用の、防腐剤を含まない滅菌溶液。塩化ナトリウム、ヒスチジン、トレハロース、ポリソルベート、および注射用滅菌水を用いて製品を製剤化することができる。例えば、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロース中で製品を製剤化することができ、該製剤は、６．０のｐＨを有する。
【０４２７】
（ｊ）タングステン除去ウルトラ−１００シリンジ、または自動注入装置等の使い捨て１ｍＬプレフィルドシリンジ中、５０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、抗ＣＤ１９抗体の皮下投与用の、防腐剤を含まない滅菌溶液。塩化ナトリウム、ヒスチジン、トレハロース、ポリソルベート、および注射用滅菌水を用いて製品を製剤化することができる。例えば、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロース中で製品を製剤化することができ、該製剤は、６．０のｐＨを有する。
【０４２８】
（ｋ）タングステン除去ウルトラ−１００シリンジ、または自動注入装置等の使い捨て１ｍＬプレフィルドシリンジ中、２５ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、抗ＣＤ１９抗体の皮下投与用の、防腐剤を含まない滅菌溶液。塩化ナトリウム、ヒスチジン、トレハロース、ポリソルベート、および注射用滅菌水を用いて製品を製剤化することができる。例えば、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロース中で製品を製剤化することができ、該製剤は、６．０のｐＨを有する。
【０４２９】
（ｌ）タングステン除去ウルトラ−１００シリンジ、または自動注入装置等の使い捨て１ｍＬプレフィルドシリンジ中、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、抗ＣＤ１９抗体の皮下投与用の、防腐剤を含まない滅菌溶液。塩化ナトリウム、ヒスチジン、トレハロース、ポリソルベート、および注射用滅菌水を用いて製品を製剤化することができる。例えば、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロース中で製品を製剤化することができ、該製剤は、６．０のｐＨを有する。
（ｍ）１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）のいずれかの使い捨てバイアル中で１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、抗ＣＤ１９抗体を静脈内（ｉ．ｖ．）投与するための、防腐剤を含まない滅菌液体濃縮物。塩化ナトリウム、ヒスチジン、トレハロース、ポリソルベート、および注射用滅菌水を用いて、製品を静脈内投与用に製剤化することができる。例えば、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％トレハロース中で製品を製剤化することができ、該製剤は、６．０のｐＨを有する。
【０４３０】
ある種の実施形態では、本発明の薬学的組成物は、４℃で安定である。ある種の実施形態では、本発明の薬学的組成物は、室温で安定である。
【０４３１】
６．１８．２．抗体半減期
ある種の実施形態では、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の半減期は、少なくとも約４〜７日間である。ある種の実施形態では、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の平均半減期は、少なくとも約２〜５日間、３〜６日間、４〜７日間、５〜８日間、６〜９日間、７〜１０日間、８〜１１日間、８〜１２、９〜１３、１０〜１４、１１〜１５、１２〜１６、１３〜１７、１４〜１８、１５〜１９、または１６〜２０日間である。他の実施形態では、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の平均半減期は、少なくとも約１７〜２１日間、１８〜２２日間、１９〜２３日間、２０〜２４日間、２１〜２５日間、２２〜２６日間、２３〜２７日間、２４〜２８日間、２５〜２９日間、または２６〜３０日間である。またさらなる実施形態では、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の半減期は、最大約５０日間であり得る。ある種の実施形態では、本発明の組成物および方法の抗体の半減期は、当技術分野で既知の方法によって延長することができる。かかる延長は、次に抗体組成物の投薬の量および／または頻度を減少させることができる。改善されたインビボ半減期を備える抗体およびそれらを調製する方法は、米国特許第６，２７７，３７５号、ならびに国際公開第９８／２３２８９号および第９７／３４６１号に開示される。
【０４３２】
また、多機能的リンカーを用いてまたは用いずに、ＰＥＧの、抗体のＮ末端またはＣ末端との部位特異的共役を通じて、またはリシル残基上に存在するイプシロン−アミノ基を介してのいずれかで、高分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の不活性ポリマー分子を抗体に結合させることによって、インビボでの抗ＣＤ１９抗体の血清循環を延長することもできる。生物学的活性の最小限の欠失をもたらす、線状または分枝ポリマー誘導体化が使用されるであろう。共役の程度は、ＰＥＧ分子の、抗体との適切な共役を確保するために、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析法によって、綿密にモニターすることができる。未反応のＰＥＧは、サイズ排除によって、またはイオン交換クロマトグラフィーによって、抗体−ＰＥＧ共役体から分離することができる。当業者に既知の方法を用いて、例えば、本明細書に記載される免疫検定によって、結合活性について、ならびにインビボ有効性について、ＰＥＧ誘導体化抗体を検査することができる。
【０４３３】
さらに、本発明の組成物および方法の抗体は、抗体がインビボでより安定となるように、またはインビボでより長い半減期を有するように、アルブミンと共役させることができる。この技術は、当技術分野で周知であり、例えば、国際公開第９３／１５１９９号、第９３／１５２００号、および第０１／７７１３７号、ならびに欧州特許第４１３，６２２号を参照されたく、これらの公開および特許のすべては、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４３４】
６．１８．３．投与および投薬
本発明の組成物のヒト患者への投与は、静脈内、皮内、経皮、皮下、筋肉内、吸入（例えば、エアロゾルを介して）、口腔（例えば、舌下）、局所（すなわち、気道表面を含む皮膚および粘膜表面の双方）、髄腔内、関節内、胸腔内、脳内、動脈内、腹腔内、経口、リンパ管内、鼻腔内、経腸、または膣投与を含むが、それらに限定されない任意の経路によって、局所カテーテルを通じるかん流によって、または直接の病巣内注射によって行うことができる。一実施形態では、本発明の組成物は、静脈内プッシュまたは規定の期間にわたって投与される静脈内注入によって投与される（例えば、０．５〜２時間）。本発明の組成物は、蠕動手段によってまたはデポの形態で送達することができるが、任意のケースにおける最も好適な経路は、当技術分野で周知の通り、対象の種、年齢、性別、および全体的病態、治療されている病態の性質および重症度、ならびに／または投与されている特定の組成物の性質（すなわち、用量、処方）等の因子に応じる。特定の実施形態では、投与経路は、週１回または２回の一定期間にわたるボーラスまたは連続注入を介する。他の特定の実施形態では、投与経路は、任意に週１回または２回の皮下注射による。一実施形態では、本発明の組成物および／または方法は、外来患者ベースで投与される。
【０４３５】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、ｍｇ／ｋｇ患者体重の単位で測定される。他の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、ｍｇ／ｋｇ患者の除脂肪体重（すなわち、体重マイナス体脂肪含量）の単位で測定される。さらに他の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、ｍｇ／ｍ２患者の体表面積の単位で測定される。さらに他の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、患者に投与される１用量当たりのｍｇ単位で測定される。本発明の組成物および方法と併せて、用量の任意の測定法を使用することができ、用量単位は、当技術分野で標準の手段によって変換することができる。
【０４３６】
当業者であれば、用量が、対象の年齢、性別、種、および病態（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍の病期）、所望の細胞枯渇の程度、治療対象の疾患、ならびに／または使用されている特定の抗体もしくは抗原結合断片を含む複数の因子に基づいて選択され得、当業者によって決定され得ることを理解するであろう。例えば、本発明の組成物の有効な量は、インビトロ試験系で得られたまたは動物モデル（例えば、コットンラットまたはサル）試験系由来の用量−反応曲線から推定されてもよい。抗体の効果の評価のためのモデルおよび方法は、当技術分野で既知である（Ｗｏｏｌｄｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，８９（８）：２９９４−２９９８（１９９７））、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ある種の実施形態では、特定のＢ細胞悪性腫瘍のために、抗体療法に関して当技術分野で標準の療法レジメンを本発明の組成物および方法と共に使用することができる。
【０４３７】
本発明の方法に使用することができる投薬レジメンの例としては、毎日、週３回（間欠的）、毎週、または１４日間毎が挙げられるが、それらに限定されない。ある種の実施形態では、投薬レジメンには、毎月の投薬または６〜８週間毎の投薬が含まれるが、それらに限定されない。
【０４３８】
当業者であれば、維持レジメンと比較して、初期治療では用量が概して高く、かつ／または投与の頻度が高いことを理解するであろう。
【０４３９】
本発明の幾つかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、Ｂ細胞に結合し、Ｂ細胞（本明細書に記載される）の効率的（すなわち、低用量で）枯渇をもたらすことができる。患者のＢ細胞の表面上のヒトＣＤ１９の密度が高い場合、より高い結合度を達成することができる。ある種の実施形態では、抗体（任意に、薬学的組成物の一部としての薬学的に許容される担体中の抗体）の用量は、少なくとも約０．０００５、０．００１、０．０５、０．０７５、０．１、０．２５、０．３７５、０．５、１、２．５、５、１０、２０、３７．５、もしくは５０ｍｇ／ｍ２、および／または約５００、４７５、４５０、４２５、４００、３７５、３５０、３２５、３００、２７５、２５０、２２５、２００、１７５、１５０、１２５、１００、７５、６０、５０、３７．５、２０、１５、１０、５、２．５、１、０．５、０．３７５、０．１、０．０７５、もしくは０．０１ｍｇ／ｍ２未満である。ある種の実施形態では、用量は、約０．０００５〜約２００ｍｇ／ｍ２、約０．００１〜１５０ｍｇ／ｍ２、約０．０７５〜１２５ｍｇ／ｍ２、約０．３７５〜１００ｍｇ／ｍ２、約２．５〜７５ｍｇ／ｍ２、約１０〜７５ｍｇ／ｍ２、および約２０〜５０ｍｇ／ｍ２である。関連する実施形態では、使用される抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５、２０、２０．５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。ある種の実施形態では、使用される裸の抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約１〜１０、５〜１５、１０〜２０、または１５〜２５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。ある種の実施形態では、使用される抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約１〜２０、３〜１５、または５〜１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。他の実施形態では、使用される抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。ある種の実施形態では、抗体（任意に、薬学的組成物の一部としての薬学的に許容される担体中の抗体）の単回用量単位は、少なくとも約０．５、１、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、または２５０マイクログラム／ｍ２であってもよい。他の実施形態では、用量は、最大１ｇ／単回用量単位である。
【０４４０】
上の用量の全ては、例示的であり、本発明の組成物および方法と併用することができるが、抗ＣＤ１９抗体が毒素または放射線治療剤と併用される場合、上述のより低い用量が好まれ得る。ある種の実施形態では、患者が低レベルのＣＤ１９密度を有する場合、上述のより低い用量が好まれ得る。
【０４４１】
キメラ抗ＣＤ１９抗体が使用される本発明のある種の実施形態では、キメラ抗体の用量または量は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６ｍｇ／ｋｇ患者体重を超える。キメラ抗ＣＤ１９抗体が使用される本発明の他の実施形態では、キメラ抗体の用量または量は、約１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、または０．１ｍｇ／ｋｇ患者体重未満である。
【０４４２】
本発明の方法の幾つかの実施形態では、本発明の抗体および／または組成物は、約３７５ｍｇ／ｍ未満の用量で、約３７．５ｍｇ／ｍ２未満の用量で、約０．３７５ｍｇ／ｍ２未満の用量で、および／または約０．０７５ｍｇ／ｍ２〜約１２５ｍｇ／ｍの用量で投与することができる。本発明の方法のある種の実施形態では、用量レジメンは、低用量を含み、間隔を置いて反復的に投与される。例えば、一実施形態では、本発明の組成物は、約３７５ｍｇ／ｍ２未満の用量で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、または２００日間毎の間隔で投与することができる。
【０４４３】
特定の用量は、少なくとも約１、２、３、５、７、１０、１４、２０、３０、４５、６０、７５、９０、１２０、１５０、または１８０日間以上の期間にわたって、本発明の組成物および方法を用いて治療されるヒトにおけるＢ細胞枯渇をもたらすことができる。ある種の実施形態では、プレＢ細胞（表面免疫グロブリンを発現しない）が枯渇させられる。ある種の実施形態では、成熟Ｂ細胞（表面免疫グロブリンを発現する）が枯渇させられる。他の実施形態では、Ｂ細胞の全ての非悪性型が枯渇を示す。Ｂ細胞のこれらの型の任意のものを使用して、Ｂ細胞枯渇を測定することができる。Ｂ細胞枯渇は、血液血清等の体液中で、または骨髄等の組織中で測定することができる。本発明の方法のある種の実施形態では、Ｂ細胞は、本発明の組成物および方法の使用前の、治療されている患者におけるＢ細胞レベルと比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％枯渇させられる。本発明の方法の他の実施形態では、Ｂ細胞は、ヒトの典型的標準Ｂ細胞レベルと比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％枯渇させられる。関連する実施形態では、ヒトの典型的標準Ｂ細胞レベルは、年齢、性別、体重、および他の因子に関して治療されている患者に匹敵する患者を用いて決定される。
【０４４４】
本発明のある種の実施形態では、抗体または抗原結合断片の約１２５ｍｇ／ｍ２未満の用量が、少なくとも約７、１４、２１、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０、または２００日間の期間にわたってＢ細胞枯渇をもたらす。別の代表的な実施形態では、約３７．５ｍｇ／ｍ２未満の用量が、少なくとも約７、１４、２１、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０、または２００日間の期間にわたってＢ細胞を枯渇させる。さらに他の実施形態では、約０．３７５ｍｇ／ｍ２未満の用量が、少なくとも約７、１４、２１、３０、４５、または６０日間にわたってＢ細胞の枯渇をもたらす。別の実施形態では、約０．０７５ｍｇ／ｍ２未満の用量が、少なくとも約７、１４、２１、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０、または２００日間の期間にわたってＢ細胞の枯渇をもたらす。さらに他の実施形態では、約０．０１ｍｇ／ｍ２、０．００５ｍｇ／ｍ２、またはさらに０．００１ｍｇ／ｍ２未満の用量が、少なくとも約３、５、７、１０、１４、２１、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０、または２００日間にわたってＢ細胞の枯渇をもたらす。これらの実施形態に従って、用量は、いずれの好適な経路によっても投与することができるが、任意に皮下経路または静脈内経路によって投与される。
【０４４５】
別の態様として、本発明は、現在利用可能な方法に用いられる用量よりも低い用量の抗体または抗体断片で、Ｂ細胞枯渇および／またはＢ細胞障害の治療が達成され得るという発見を提供する。したがって、別の実施形態では、本発明は、ヒトに、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体の有効な量を投与することを含む、Ｂ細胞を枯渇させるおよび／またはＢ細胞障害を治療する方法を提供し、ここで約５００、４７５、４５０、４２５、４００、３７５、３５０、３２５、３００、２７５、２５０、２２５、２００、１７５、１５０、１２５、１００、７５、６０、５０、３７．５、２０、１０、５、２．５、１、０．５、０．３７５、０．２５、０．１、０．０７５、０．０５、０．００１、０．０００５ｍｇ／ｍ２未満の用量は、少なくとも約３、５、７、１０、１４、２１、３０、４５、６０、７５、９０、１２０、１５０、１８０、または２００日間以上の期間にわたって、２５％、３５％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％以上のＢ細胞（循環および／または組織Ｂ細胞）の枯渇をもたらす。代表的な実施形態では、約１２５ｍｇ／ｍ２または７５ｍｇ／ｍ２未満の用量が、少なくとも約７、１４、２１、３０、６０、７５、９０、１２０、１５０、または１８０日間にわたって、少なくとも約５０％、７５％、８５％、または９０％のＢ細胞の枯渇をもたらす。他の実施形態では、約５０、３７．５、または１０ｍｇ／ｍ２の用量が、少なくとも約７、１４、２１、３０、６０、７５、９０、１２０、または１８０日間にわたって、少なくとも約５０％、７５％、８５％、または９０％のＢ細胞の枯渇をもたらす。さらに他の実施形態では、約０．３７５または０．１ｍｇ／ｍ２の用量が、少なくとも約７、１４、２１、３０、６０、７５、または９０日間にわたって、少なくとも約５０％、７５％、８５％、または９０％のＢ細胞の枯渇をもたらす。さらなる実施形態では、約０．０７５、０．０１、０．００１、または０．０００５ｍｇ／ｍ２の用量が、少なくとも約７、１４、２１、３０、または６０日間にわたって、少なくとも約５０％、７５％、８５％、または９０％のＢ細胞の枯渇をもたらす。
【０４４６】
本発明のある種の実施形態では、骨髄等であるが、それらに限定されない、血液中または組織中の一定用量を維持するために、用量を増加または減少させることができる。関連する実施形態では、本発明の組成物および方法の抗体の所望のレベルを維持するために、用量は、約２％、５％、８％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、および９５％増加または減少させられる。
【０４４７】
ある種の実施形態では、本発明の組成物および方法に対する患者の免疫原反応に基づいて、用量を調節することができ、および／または注入速度を減少させることができる。
【０４４８】
本発明の方法の一態様に従って、本発明の抗ＣＤ１９抗体および／または組成物の負荷用量を最初に投与し、続いて、治療されているＢ細胞悪性腫瘍が進行するまで維持用量を投与、あるいは続いて規定の治療経過を行うことができる（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ（商標）、ＭＹＬＯＴＡＲＧ（商標）、またはＲＩＴＵＸＡＮ（商標）、このうちの後者は、追加的データの生成に応じて増加した規定の数の用量分だけ患者を治療することを可能にする）。
【０４４９】
本発明の方法の別の態様に従って、患者は、免疫原反応を検出もしくは最小化する、または本発明の組成物および方法の有害作用を最小化するために、本発明の組成物および方法により前治療されてもよい。
【０４５０】
６．１８．４．毒性試験
例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）、ＥＤ５０（集団の５０％において治療上に有効な用量）、およびＩＣ５０（５０％阻害を達成するのに有効な用量）を決定するための、本発明の組成物および／または治療レジメンの耐性、毒性および／または有効性は、細胞培養物または実験動物における標準薬学的手順によって決定することができる。一実施形態では、用量は、循環Ｂ細胞もしくは循環免疫グロブリン、または両者の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の枯渇を達成するのに有効な用量である。毒性と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、それはＬＤ５０／ＥＤ５０比として表すことができる。高い治療指数を示す療法が好まれ得る。毒性副作用を示す療法が使用されてもよい一方で、ＣＤ１９陰性細胞に対する潜在的損傷を最小化し、それによって副作用を減少させるために、かかる薬剤をＣＤ１９発現細胞に向ける送達系を設計するよう注意が払われるべきである。
【０４５１】
細胞培養検定および動物試験から得られたデータは、ヒトに使用するための組成物および／または治療レジメンの用量の範囲の処方において使用することができる。かかる薬剤の用量は、毒性をほとんどまたは全く有さないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にあってもよい。用いられる剤形および利用される投与経路に応じて、用量は、この範囲内で異なってもよい。本発明の方法に使用される任意の療法のために、治療上有効用量を適切な動物モデルによって推定することができる。動物モデルの種に応じて、例えば、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ，ｒａｔ，ｍｏｎｋｅｙ，ｄｏｇ，ａｎｄ  ｈｕｍａｎ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，ＮＣＩ  １９６６  ４０：２１９−２４４によって提供されるような当技術分野において確立されている公式に従って、ヒトの使用のために用量をスケーリングすることができる。動物試験を使用して、細胞培養において決定されたＩＣ５０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するための具体的用量を処方することができる。かかる情報を使用して、ヒトにおいて有用な用量を、より正確に決定することができる。血漿薬物レベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィー、ＥＬＩＳＡ、または細胞ベースの検定によって測定されてもよい。
【０４５２】
６．１９．患者診断、病期分類、および療法レジメン腫瘍学
本発明の特定の態様に従って、本発明の組成物および方法と共に使用される治療レジメンおよび用量は、治療されているＢ細胞疾患または障害の病期を含むが、それらに限定されない複数の因子に基づいて選択される。当業者は、患者または患者集団におけるＢ細胞疾患または障害の特定の病期に適切な治療レジメンを決定することができる。異なる病期のＢ細胞疾患または障害を有する患者を治療するための本発明の組成物の有効な量を決定するために、当技術分野の標準プロトコルを用いて用量反応曲線を生成することができる。概して、より進行した病期のＢ細胞疾患または障害を有する患者は、早期Ｂ細胞疾患または障害を有する患者と比較して、より長期間にわたって投与され得る、より高い用量および／またはより頻繁な投薬を必要とするであろう。
【０４５３】
本発明の抗ＣＤ１９抗体、組成物、および方法を実施して、Ｂ細胞悪性腫瘍を含むＢ細胞疾患を治療することができる。「Ｂ細胞悪性腫瘍」という用語には、Ｂ細胞系統の細胞に由来するいずれの悪性腫瘍も含まれる。例示的Ｂ細胞悪性腫瘍には、次のものが含まれるが、それらに限定されない：Ｂ細胞サブタイプ非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、低悪性度／濾胞性ＮＨＬ、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬを含むＢ細胞サブタイプ非ホジキンリンパ腫；マントル細胞リンパ腫、および巨大病変ＮＨＬ；バーキットリンパ腫；多発性骨髄腫；プレＢ急性リンパ性白血病および早期Ｂ細胞前駆体に由来する他の悪性腫瘍；一般的急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；免疫グロブリン突然変異型ＣＬＬおよび免疫グロブリン非突然変異型ＣＬＬを含む慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；有毛細胞白血病；ヌル急性リンパ性白血病；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性型Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、および３型ＤＬＢＣＬを含むびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；前リンパ性白血病；軽鎖疾患；プラズマ細胞腫；骨硬化性骨髄腫；形質細胞白血病；意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）；くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）；無痛性多発性骨髄腫（ＩＭＭ）；古典的および結節性リンパ球優位型を含むホジキンリンパ腫；リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；ならびに胃粘膜関連リンパ様組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を含む辺縁層リンパ腫。
【０４５４】
さらなる実施形態では、本発明を用いて、成熟Ｂ細胞悪性腫瘍（すなわち、細胞表面上にＩｇを発現するＢ細胞）を治療することができ、成熟Ｂ細胞悪性腫瘍には、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性型Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、および３型ＤＬＢＣＬを含むびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、古典的および結節性リンパ球優位型を含むホジキンリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、胃粘膜関連リンパ様組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を含む辺縁層リンパ腫、ならびに免疫グロブリン突然変異型ＣＬＬおよび免疫グロブリン非突然変異型ＣＬＬを含む慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が含まれるが、それらに限定されない。
【０４５５】
さらに、ＣＤ１９は、Ｂ細胞発症において、例えば、ＣＤ２０よりも早期に発現させられ、したがって、例えば骨髄中の、プレＢ細胞および未成熟Ｂ細胞悪性腫瘍（すなわち、細胞表面上にＩｇを発現しないＢ細胞）を治療するのに特に適している。例証的プレＢ細胞および未成熟Ｂ細胞悪性腫瘍には、急性リンパ性白血病が含まれるが、それらに限定されない。
【０４５６】
他の特定の実施形態では、本発明を実施して結節外腫瘍を治療することができる。
【０４５７】
６．１９．１．Ｂ細胞悪性腫瘍の診断および病期分類
腫瘍形成が可能なＢ細胞疾患または障害（例えば、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、およびバーキットリンパ腫）等の癌の進行は、典型的に、癌が身体全体に伝播している程度によって特徴付けられ、しばしば、転帰の予後である次の４つの病期に分けられる。病期Ｉ：癌は特定の組織に限局され、リンパ節に伝播していない。病期ＩＩ：癌は近くのリンパ節に伝播しており、すなわち転移である。病期ＩＩＩ：癌は元の組織から離れた身体領域のリンパ節で見出され、１腫瘍とは対照的に集団または複数の腫瘍を含み得る。病期ＩＶ：癌は身体の遠い部分に伝播している。癌の病期は、当業者に周知の臨床所見および試験方法によって決定することができる。上述の癌の病期は、従来より、腫瘍形成によって特徴付けられる癌の臨床診断と併用され、本発明の組成物および方法と併用してＢ細胞疾患および障害を治療することができる。典型的に早期疾患とは、疾患が患者の身体の一部分に限局されたままであるか、または転移していないことを意味する。
【０４５８】
多発性骨髄腫等であるが、それらに限定されない非腫瘍形成Ｂ細胞疾患および障害に関して、疾患の病期を決定するための基準は異なる。Ｄｕｒｉｅ−Ｓａｌｍｏｎ病期分類系が広範に使用されている。この病期分類系では、臨床の病期疾患（病期Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩ）は、Ｍタンパク質のレベル、溶解性骨病変の数、ヘモグロビン値、および血清カルシウムレベルを含む複数の測定値に基づく。病期は、腎（ｒｅｎａｌ）（腎臓（ｋｉｄｎｅｙ））機能に従ってさらに分割される（ＡまたはＢとして分類される）。Ｄｕｒｉｅ−Ｓａｌｍｏｎ  Ｓｔａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍに従って、病期Ｉ（低細胞集団）は、次の全てによって特徴付けられる：ヘモグロビン値１０ｇ／ｄＬ超；血清カルシウム値正常または１２ｍｇ／ｄＬ以下；骨ｘ線、正常骨構造（スケール０）または孤立性骨形質細胞腫のみ；および低Ｍ構成成分産生速度：ＩｇＧ値５ｇ／ｄＬ未満、ＩｇＡ値３ｇ／ｄ未満、ベンス・ジョーンズタンパク質４ｇ／２４時間未満。病期Ｉの患者は、典型的に、関連する器官または組織機能障害または症状を有さない。病期ＩＩ（中細胞集団）は、病期Ｉにも病期ＩＩＩにも一致しないことによって特徴付けられる。病期ＩＩＩ（高細胞集団）は、次のうちの１つ以上によって特徴付けられる：ヘモグロビン値８．５ｇ／ｄＬ未満；血清カルシウム値１２ｍｇ／ｄＬ超；進行した溶解性骨病変（スケール３）；高Ｍ成分産生速度：ＩｇＧ値７ｇ／ｄＬ超、ＩｇＡ値５ｇ／ｄＬ超、ベンス・ジョーンズタンパク質１２ｇ／２４時間超、細分類（ＡまたはＢ）（この場合Ａは比較的正常な腎機能（血清クレアチニン値２．０ｍｇ／ｄＬ未満）であり、Ｂは異常な腎機能（血清クレアチニン値２．０ｍｇ／ｄＬ以上）である）。
【０４５９】
骨髄腫についての別の病期分類系は、骨髄腫のＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＩＳＳ）である。この系は病期群をより効果的に識別することができ、容易に測定されるベータ２−ミクログロブリン（β２−Ｍ）およびアルブミンの血清レベルに基づく。骨髄腫についてのＩＳＳに従って、病期Ｉは、β２−Ｍ３．５未満およびアルブミン３．５以上によって特徴付けられ、病期ＩＩは、β２−Ｍ３．５未満およびアルブミン３．５未満またはβ２−Ｍ３．５〜５．５によって特徴付けられ、病期ＩＩＩは、β２−Ｍ５．５超によって特徴付けられる（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｃａｎａａｎ，ＣＴ）。
【０４６０】
患者におけるＢ細胞悪性腫瘍の病期は臨床決定である。上に示される通り、固形腫瘍に関して、腫瘍の伝播、位置、および数は、病期の臨床決定における主要な要因である。非腫瘍形成Ｂ細胞悪性腫瘍を有する患者における病期の決定は、より複雑であり得、上述の血清レベルの測定を必要する。
【０４６１】
上のＢ細胞疾患および障害の病期の説明は、限定的でない。Ｂ細胞疾患および障害の診断に関する技術分野において既知の他の特徴を、患者のＢ細胞疾患または障害の病期を決定する基準として使用することができる。
【０４６２】
６．１９．１．１．多発性骨髄腫
多発性骨髄腫は、形質細胞の悪性腫瘍である。腫瘍性細胞は、骨髄に位置し、溶骨性骨病変が、特徴的である。免疫グロブリン遺伝子座の１つと多種多様の他の遺伝子、例えば、サイクリンＤ１、サイクリンＤ３、ｃ−ＭＡＦ、ＭＭＳＥＴ（多発性骨髄腫ＳＥＴ−ドメインタンパク質）または線維芽細胞成長因子受容体３）との間の相互の染色体転座が、主要な発癌事象であると考えられる。多発性骨髄腫は、ＳＨＭによって特徴付けられ、推定される元の細胞は、ＧＣ後Ｂ細胞である。多発性骨髄腫は、典型的に、反復性の感染、疲労、疼痛、および腎臓の問題等の症状によってまず特定され、臨床試験により確認される（例えば、Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ．ＤｅＶｉｔａ，Ｖ．Ｔ．，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｓ．ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．ｅｄｉｔｏｒｓ．２００１  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ  １９１０６  ｐｐ．２４６５−２４９９を参照されたい）。
【０４６３】
ある種の実施形態では、本発明の組成物および方法による治療に対する候補である患者は、血液および／または尿についてのさらなる診断試験を受け得、多発性骨髄腫の診断または疑いを確認し、その診断試験には、ＣＢＣにおいて報告された細胞の型が当技術分野で周知のそれらの正常範囲内にあるかどうかを決定するための全血球計算（ＣＢＣ）試験、アルブミン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、カルシウム、クレアチニン、および乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）等の種々の血液構成成分のレベルが、標準値から逸脱しているかどうかを決定するための血液化学プロフィールが含まれるが、それらに限定されない。また、ベータ２−ミクログロブリン（β２−Ｍ）の血清レベルも、検査することができ、それは骨髄腫細胞の成長因子であるＩＬ−６についてのマーカーを代理する。検尿を使用して、尿中のタンパク質のレベルを測定することができる。電気泳動を使用して、血液中のＭタンパク質を含む種々のタンパク質（血清タンパク質電気泳動、またはＳＰＥＰと呼ばれる）または尿（尿電気泳動、またはＵＥＰと呼ばれる）のレベルを測定することができる。また、免疫固定電気泳動（ＩＦＥ）または免疫電気泳動と呼ばれるさらなる試験を行い、異常な抗体タンパク質の型の存在についてのより具体的な情報を提供してもよい。種々のタンパク質、特に、Ｍタンパク質の変化および割合の査定を使用して、骨髄腫疾患の進行および治療レジメンに対する反応を追跡することができる。多発性骨髄腫は、骨髄腫腫瘍細胞によって分泌されるＭタンパク質の大幅な増加によって特徴付けられる。
【０４６４】
また、骨に対する診断試験を行い、多発性骨髄腫の診断または疑いを確認することができ、それにはＸ線ならびに骨（骨格）検索、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、およびコンピュータ連動断層撮影（ｃｏｍｐｕｔｅｄ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）（ＣＴ）としても知られるコンピュータ連動断層撮影（ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  ａｘｉａｌ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）（ＣＡＴ）を含む他の画像化試験（骨構造の変化を査定し、骨中の腫瘍の数およびサイズを決定し得することができる）が含まれるが、それらに限定されない。骨髄吸引または骨髄生検を使用して、骨髄中の形質細胞の数の増加を検出することができる。吸引は、液体骨髄の試料を必要とし、生検は、固体骨組織の試料を必要とする。双方の試験において、試料は、骨盤（寛骨）から採取することができる。また、骨髄の吸引のために、胸骨（ｓｔｕｒｎｕｍ）（胸骨（ｂｒｅａｓｔ  ｂｏｎｅ））を使用することができる。
【０４６５】
多発性骨髄腫を有する患者は、典型的に、有効な治療レジメンを規定する一助となる次の３つの群に分類される。意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）は、典型的に、３ｇ／ｄＬ未満の血清Ｍタンパク質レベル、１０％未満の骨髄クローン形質細胞、他のＢ細胞障害の形跡がないこと、および高カルシウム血症（増大した血清カルシウムレベル）、増大した血清クレアチニンによって示される腎機能の障害、貧血、もしくは骨病変等の関連した器官または組織の機能障害がないことによって特徴付けられる。無症候性の骨髄腫は、典型的に、第Ｉ期であり、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）および無痛性多発性骨髄腫（ＩＭＭ）を含む。ＳＭＭは、３ｇ／ｄＬを超えるか、または３ｇ／ｄＬに等しい血清Ｍタンパク質によって特徴付けられ、ＩＭＭは、骨髄細胞の１０％を超えるか、または１０％に等しい骨髄クローン形質細胞によって特徴付けられる。症候性の骨髄腫は、血清および／または尿中のＭタンパク質によって特徴付けられ、骨髄クローン形質細胞または形質細胞腫の存在によって特徴付けられる第ＩＩ期の多発性骨髄腫、および関連する器官または組織の機能障害によって特徴付けられる第ＩＩＩ期の多発性骨髄腫を含む。
【０４６６】
骨硬化性骨髄腫は、稀なＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器巨大症、内分泌障害、単クローン性ガンマグロブリン血症、および皮膚病変）の構成要素である。ピークの発生率は、４０〜５０歳にある。全身的な特徴には、骨格病変、５％未満の骨髄−形質細胞、正常なＣＢＣ、増加した血小板、および臓器巨大症が含まれる。ＣＳＦは、細胞の存在を伴わずに高いタンパク質を有する。Ｍタンパク質レベルは、低く（３ｇ／ｄｌ未満、中央値＝１．１ｇ／ｄｌ）、重鎖のクラスは、通常、αまたはγであり、軽鎖のクラスは、通常、λであり、稀な尿のモノクローナルタンパク質および臨時のクリオグロブリン血症。神経障害は、近位および遠位の双方の脱力を伴って５０％の患者で生じ、感覚の損失は、小線維よりも大線維において大きく、したがって脱髄および長い遠位潜時である。
【０４６７】
くすぶり型多発性骨髄腫患者は、概して、数ヶ月／数年にわたって安定な疾患を呈し、すなわち貧血、骨病変、腎不全、または高カルシウム血症を伴わず、１０％超の骨髄中の形質細胞およびモノクローナル血清タンパク質を有する。くすぶり型多発性骨髄腫についての基準は、多発性骨髄腫の診断と適合するが、進行過程の形跡は、存在しない。これらは、遅い進行を伴う症例であり、その腫瘍細胞集団は、診断時に低く、Ｓ期の骨髄形質細胞の割合は、低い（０．５％未満）。特徴的な臨床的特徴には次のものが含まれる：血清Ｍタンパク質レベル３ｇ／ｄＬ超および／または骨髄形質細胞１０％以上、貧血、腎不全、高カルシウム血症、溶解性骨病変の非存在。
【０４６８】
無痛性（または無症候性）多発性骨髄腫は、通常はスクリーニング研究所での試験後に、症状の非存在によって偶然に診断される多発性骨髄腫である。無痛性多発性骨髄腫は、くすぶり型骨髄腫に類似するが、幾つかの骨病変および軽度の貧血を伴う。無症候性多発性骨髄腫のほとんどの症例は、３年以内に顕性の多発性骨髄腫を発症する。診断基準は、次のものを除いて多発性骨髄腫に対するものと同様である：骨病変がないことまたは１つの無症候性の溶解性病変（Ｘ線調査）、Ｍ構成成分レベルはＩｇＧについて３ｇ／ｄＬ未満、ＩｇＡについて２ｇ／ｄＬ、尿軽鎖４ｇ／２４時間未満、ヘモグロビン１０ｇ／ｄｌ超、血清カルシウムは正常、血清クレアチニン２ｍｇ／ｄＬ未満、および感染がないこと。
【０４６９】
多発性骨髄腫（ＭＭ）の発症および維持に関与する細胞の正体は、ＭＭ細胞をインビトロおよびインビボで増殖させることが困難なため、未だに不明確である。多発性骨髄腫において多くの薬剤が活性であるが、患者の大部分に再発が起こる。この臨床パターンは、ほとんどの癌細胞が排除されるが、腫瘍再増殖を媒介するクローン形成性能を備える細胞が、比較的、化学療法抵抗性であることを示唆する。癌幹細胞の仮説は、ヒトＭＭ細胞株が、小（５％未満）副次集団（ＣＤ１３８発現を欠き、かつ対応するＣＤ１３８＋形質細胞よりも高いインビトロのクローン形成性能を有する）を含有していたという知見によって支持される（Ｍａｔｓｕｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００４  Ｍａｒ  １５；１０３（６）：２３３２−６）。臨床ＭＭ試料由来のＣＤ１３８−細胞は、インビトロおよび非肥満性糖尿病／重症複合性免疫不全（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）マウスのいずれにおいても同様にクローン形成性である一方で、ＣＤ１３８＋細胞は、クローン形成性ではない。さらに、細胞株および臨床試料の双方由来のＣＤ１３８−細胞は、表現型としてポスト胚中心Ｂ細胞に類似しており、それらのクローン形成性増殖は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブによって阻害された。追加的に、細胞株および臨床試料の双方由来のＣＤ１３８−細胞は、ＣＤ２７およびＣＤ１９Ｂ細胞マーカーを発現した。これらのデータは、ＭＭ「幹細胞」が、複製し、その後、悪性ＣＤ１３８＋形質細胞へと分化する能力を備えるＣＤ１３８−Ｂ細胞であることを示唆する。多発性骨髄腫における癌幹細胞の仮説を支持する追加的結果は、Ｈｕｆｆ＆Ｍａｔｓｕｉ（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．（２００８）２６（１７）：２８９５−９００）およびＭａｔｓｕｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００８）６８（１）：１９０−７）に概説された。
【０４７０】
本発明は、ヒト多発性骨髄腫患者におけるＣＤ１３８クローン形成性Ｂ細胞を効率的に枯渇させる抗体を提供する。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ヒト多発性骨髄腫患者において少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％のＣＤ１３８クローン形成性Ｂ細胞枯渇を達成することができる。ＣＤ１３８クローン形成性Ｂ細胞の枯渇は、長期間持続することができる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＣＤ１３８クローン形成性Ｂ細胞枯渇は、少なくとも１日、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、または少なくとも３０日間持続することができる。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＣＤ１３８クローン形成性Ｂ細胞枯渇は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、または少なくとも１０週間持続することができる。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体によるＣＤ１３８クローン形成性Ｂ細胞枯渇は、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間持続することができる。
【０４７１】
本発明は、ヒト多発性骨髄腫患者における癌幹細胞を効率的に枯渇させる抗体を提供する。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ヒト多発性骨髄腫患者において少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％の癌幹細胞枯渇を達成することができる。癌幹細胞の枯渇は、長期間持続することができる。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体による癌幹細胞枯渇は、少なくとも１日、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、または少なくとも３０日間持続することができる。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体による癌幹細胞枯渇は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、または少なくとも１０週間持続することができる。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体による癌幹細胞枯渇は、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間持続することができる。
【０４７２】
また、本発明は、それを必要とするヒトに、循環Ｂ細胞を枯渇させるために十分な量の、ヒト抗体依存性細胞障害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞媒介型細胞障害性（ＣＤＣ）、および／またはアポトーシスを媒介し得るヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を投与することを含む、ヒトにおける多発性骨髄腫を治療する方法に関する。一実施形態では、ヒトにおける多発性骨髄腫を治療する方法は、ＣＤ１３８クローン形成性Ｂ細胞の枯渇を含む。別の実施形態では、ヒトにおける多発性骨髄腫を治療する方法は、癌幹細胞の枯渇を含む。具体的な実施形態では、枯渇は、ＣＤ１３８クローン形成性Ｂ細胞または癌幹細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％の減少を達成することができる。枯渇は、長期間持続することができる。一実施形態では、ＣＤ１３８クローン形成性Ｂ細胞または癌幹細胞の枯渇は、少なくとも１日、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、または少なくとも３０日間持続することができる。別の実施形態では、枯渇は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、または少なくとも１０週間持続することができる。さらなる実施形態では、枯渇は、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間持続することができる。
【０４７３】
６．２０．患者診断および療法レジメン：自己免疫疾患
本発明の特定の態様に従って、本発明の組成物および方法と共に使用される治療レジメンおよび用量は、治療されている自己免疫疾患または障害の病期を含むが、それらに限定されない複数の因子に基づいて選択される。当業者は、患者または患者集団における自己免疫疾患または障害の特定の病期に適切な治療レジメンを決定することができる。異なる病期の自己免疫疾患または障害を有する患者を治療するための本発明の組成物の有効量を決定するために、当技術分野の標準プロトコルを用いて用量反応曲線を生成することができる。概して、より活性な自己免疫疾患または障害を有する患者は、活性の低い自己免疫疾患または障害を有する患者と比較して、より長期間にわたって投与され得る、より高い用量および／またはより頻繁な投薬を必要とするであろう。
【０４７４】
本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体、組成物、および方法を行い、自己免疫疾患または障害を治療してもよい。「自己免疫疾患または障害」という用語は、自らの細胞、組織、および／または臓器に対する対象の免疫学的反応によって引き起こされる細胞性、組織、および／または臓器損傷によって特徴付けられる対象における病態を指す。「炎症性疾患」という用語は、「炎症性障害」という用語と交換可能に使用され、慢性炎症を含むが、それらに限定されない炎症によって特徴付けられる、対象における病態を指す。自己免疫障害は、炎症に関連しても、しなくてもよい。また、炎症は、自己免疫障害によって引き起こされても、引き起こされなくてもよい。したがって、特定の障害は、自己免疫性および炎症性障害の双方として特徴付けられてもよい。例示的自己免疫疾患または障害には、次のものが含まれるが、それらに限定されない：円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および睾丸炎、自己免疫性血小板減少、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷擬集素病、クローン病、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、糖尿病、好酸球性筋膜炎、線維筋痛−線維筋症、糸球体腎炎、グレーヴス病、ギランバレー、橋本甲状腺炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、特発性肺線維症、特発性／自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、扁平苔癬、エリテマトーデス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、１型または免疫媒介型糖尿病、重症筋無力症、天疱瘡関連障害（例えば、尋常性天疱瘡）、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ性関節炎、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、スイート症候群、スティル病、エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、疱疹状皮膚炎血管炎等の血管炎、白斑、ならびにウェゲナー肉芽腫症。炎症性障害の例には、喘息、脳炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー障害、敗血症ショック、肺線維症、未分化脊椎関節症、未分化関節症、関節炎、炎症性骨溶解、移植片対宿主病、蕁麻疹、フォークト−小柳−原田症候群、および慢性ウイルスまたは細菌感染からもたらされる慢性炎症が含まれるが、それらに限定されない。
【０４７５】
抗ＣＤ１９免疫療法は、自己免疫疾患または障害の治療に治療用の単一薬剤としての抗ＣＤ１９抗体の投与を包含する。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、インビトロ刺激性Ｂ細胞増殖を阻害することができる抗ＣＤ１９抗体の投与を包含する。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、Ｆｃ変異体抗ＣＤ１９抗体の投与を包含し、該Ｆｃ変異体は、同等の非変異型分子に相対的な１つ以上のＦｃリガンドへの変化した結合親和性を有する。具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、Ｆｃ変異体抗ＣＤ１９抗体の投与を包含し、該Ｆｃ変異体は、同等の非変異型Ｆｃドメインに相対的なＦｃガンマ受容体ＨＢへの強化された結合を有する。
【０４７６】
抗ＣＤ１９免疫療法は、自己免疫疾患または障害の治療に治療用の単一薬剤として抗ＣＤ１９二重特異性抗体の投与をさらに包含する。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、第１および第２の抗原に特異的に結合することができる抗ＣＤ１９二重特異性抗体の投与を包含し、該第１の抗原は、ヒトＣＤ１９であり、該第２の抗原は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、および／またはＦｃγＲＩＶからなる群から選択されるＦｃガンマ受容体である。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、ヒトＣＤ１９およびＦｃγＲＩＩＢに特異的に結合することができる抗ＣＤ１９二重特異性抗体の投与を包含する。
【０４７７】
ＣＤ１９は、未成熟Ｂ細胞上で発現させられるため、抗ＣＤ１９ｍＡｂは、例えば、骨髄中のプレＢ細胞および未成熟Ｂ細胞を枯渇させるのに特に適している可能性がある。
【０４７８】
６．２０．１．自己免疫疾患または障害を診断するための臨床基準
異なる自己免疫疾患または障害についての診断基準は、当技術分野で既知である。歴史的には、診断は、典型的に身体症状の組み合わせに基づく。より近年には、遺伝子発現プロファイリング等の分子技術が自己免疫疾患または障害の分子定義を開発するために適用されている。特定の自己免疫疾患または障害の臨床診断についての例示的方法を下に提供する。他の好適な方法は、当業者に明らかであろう。
【０４７９】
低レベルの自己免疫疾患活性を有する患者または早期の自己免疫疾患を有する患者（病期が認識されている疾患について）を、抗ＣＤ１９抗体組成物および方法を用いる治療のために特定することができる。その症状が一般的でかつ自己免疫疾患の間で症状が重複することに起因して、自己免疫疾患の早期診断は困難である。かかる実施形態では、早期に治療されるかまたは低レベルの自己免疫疾患活性を有する患者は、自己免疫疾患または障害の少なくとも１つの症状を含む症状を有する。関連する実施形態では、早期に治療されるかまたは低レベルの自己免疫疾患活性を有する患者は、自己免疫疾患または障害の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５症状を含む症状を有する。症状はいずれの自己免疫疾患および障害の症状またはそれらの組み合わせであってもよい。自己免疫疾患および障害の症状の例を下に記載する。
【０４８０】
６．２０．２．全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、関節、筋肉、および身体の他の部分に影響を及ぼす慢性（長期持続性）リウマチ疾患である。ＳＬＥに対する治療を必要とする患者または患者集団は、身体症状および／または研究室試験の結果を検査することによって特定することができる。身体症状は、患者の間で大幅に異なる。例えば、ＳＬＥでは、患者がＳＬＥであると診断される前に、典型的に、次の１１症状のうちの４症状が存在する：１）頬部紅斑：頬上の紅斑、２）円柱状紅斑：隆起性紅斑、３）光線過敏症：日光に対する反応の結果生じた皮疹または皮疹の増加、４）口腔内潰瘍：鼻部または口腔潰瘍、通常は無痛性、５）関節炎：圧痛，腫脹あるいは関節液貯留により特徴づけられ，２つ以上の末梢関節を伴う非びらん性関節炎（関節周囲の骨が破壊されない関節炎）、６）漿膜炎性胸膜炎または心膜炎：肺粘膜または心臓内膜の炎症、７）腎障害：尿中の過剰なタンパク質（０．５ｇｍ／日を超えるまたは試験紙上で３＋）および／または細胞性円柱（赤血球および／または白血球細胞および／または尿細管細胞に由来する異常要素尿）、８）神経障害：そのような効果を引き起こすことが知られる薬物もしくは代謝異常の非存在下での発作（けいれん）および／または精神病、９）血液学的障害：溶血性貧血もしくは白血球減少症（白血球数４，０００細胞／立方ミリメートル未満）、またはリンパ球減少症（１，５００リンパ球／立方ミリメートル未満）、または血小板減少症（１００，０００血小板／立方ミリメートル未満）（この場合、白血球減少症またはリンパ球減少症が２回以上の測定時に検出されなければならない。血小板減少症は、それを誘発することが知られる薬物の非存在下で検出されなければならない）、１０）抗核抗体：それを誘発することが知られる薬物の非存在下の抗核抗体（ＡＮＡ）の試験陽性、ならびに／または１１）免疫学的障害：抗２本鎖抗ＤＮＡ試験陽性、抗ｓｍ試験陽性、抗リン脂質抗体等の抗カルジオリピン陽性、もしくは梅毒試験偽陽性（ｖｄｒｌ）。
【０４８１】
ＳＬＥの指標となり得る他の身体症状には、貧血、疲労、発熱、皮疹、筋肉痛、吐き気、嘔吐および下痢、腺腫脹、食欲不振、冷え性（レイノー現象）、ならびに体重減少が含まれるが、それらに限定されない。
【０４８２】
また、研究室試験を使用して、治療を必要とする患者または患者集団を特定することができる。例えば、血液試験を使用して、ＳＬＥを有するほぼ全ての人々の血液中に見出される自己抗体を検出することができる。かかる試験には、それを誘発することが知られる薬物の非存在下での抗核抗体（ＡＮＡ）（Ｒａｈｍａｎ，Ａ．ａｎｄ  Ｈｉｅｐｅ，Ｆ．Ｌｕｐｕｓ．（２００２）１１（１２）：７７０−７７３）、抗２本鎖抗ＤＮＡ（Ｋｅｒｅｎ，Ｄ．Ｆ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．（２００２）２２（２）：４４７−４７４）、抗Ｓｍ、抗カルジオリピン等の抗リン脂質抗体（Ｇｅｚｅｒ，Ｓ．Ｄｉｓ．Ｍｏｎ．２００３．４９（１２）：６９６−７４１）、または偽陽性梅毒試験（ＶＤＲＬ）についての試験が含まれてもよい。
【０４８３】
他の試験には、血液中を循環する補体タンパク質の量を測定するために使用することができる補体試験（Ｃ３、Ｃ４、ＣＨ５０、ＣＨ１００）が含まれてもよく（Ｍａｎｚｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｕｐｕｓ  ２００４．１３（５）：２９８−３０３）、沈降速度（ＥＳＲ）またはＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を使用して、炎症レベルを測定してもよく、尿検査を使用して、腎障害を検出することができ、胸部Ｘ線を撮り、肺障害を検出してもよく、ＥＫＧを使用して、心臓障害を検出することができる。
【０４８４】
慢性ＳＬＥは、関与する臓器、特に腎臓に対する蓄積した二次的被害に関連する。したがって、早期の、すなわち、例えば、腎不全前の治療介入が望ましい。ＳＬＥに対して有効な治療は、リウマチ性関節炎に対して有効な治療に類似する。これらには、鎮痛剤または非ステロイド性抗炎症性（ＮＳＡＩＤ）化合物のいずれかによる初期治療が含まれる。疾患が進行する、かつ／または症状が重症度を増すにつれて、ＳＬＥは、デキサメタゾンおよびプレドニゾン等であるが、それらに限定されないステロイドの投与によって治療されてもよい。
【０４８５】
より重度の症例では、メトトレキサートまたはサイトキシン等であるが、それらに限定されない化学療法剤を投与して、ＳＬＥの症状を緩和してもよい。しかしながら、このアプローチは、患者が妊娠可能年齢の女性である場合には好ましくない。かかる例では、患者の生殖能力を妨げない治療アプローチが好ましい。
【０４８６】
ある種の例では、ＳＬＥは、抗体または受容体（または受容体類似体）等の生物学的製剤の投与を用いて治療されてもよい。かかる治療用抗体の例としては、リツキサンおよびレミケードが挙げられる。ＳＬＥを治療するために投与することができる炎症性サイトカインに対する可溶性受容体の例証的例としては、エンブレルがある。
【０４８７】
本発明の方法のある種の実施形態では、患者は、ＳＬＥの治療のために使用される上に開示される任意の療法前、療法と同時、または療法後に、抗ＣＤ１９抗体を用いて治療することができる。また、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上で言及される鎮痛剤、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、または化学療法剤のいずれと組み合わせて、ならびにＳＬＥの治療のために投与される生物学的製剤と組み合わせて投与されてもよい。
【０４８８】
６．２０．３．全身性硬化症（強皮症）および関連する障害
強皮症としても知られる全身性硬化症は、局性皮膚病、びまん性皮膚病、皮膚硬化のない強皮症、未分化結合組織病、重複症候群、限局性強皮症、斑状強皮症、線状強皮症、サーベル状切痕、ブシュケの成年性浮腫性硬化症、硬化性粘液水腫、慢性移植片対宿主病、好酸球性筋膜炎、糖尿病における浮腫性硬化症、原発性アミロイドーシス、および多発性骨髄腫に関連するアミロイドーシスを含むが、それらに限定されない疾患の異質の群を包含する。（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１６ｔｈ  ｅｄ．／ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｄｅｎｎｉｓ  Ｌ．Ｋａｓｐｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．２００５  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに概説される）。
【０４８９】
強皮症に関連する臨床的特徴には、レイノー現象、皮膚肥厚、皮下石灰沈着症、末梢血管拡張症、関節痛／関節炎、ミオパシー、食道蠕動低下、肺線維症、孤立性肺動脈性肺高血圧症、鬱血性心不全、および腎発症が含まれ得る。患者がこれらの疾患症状の１つ以上を示す程度は、診断および潜在的治療計画に影響を及ぼし得る。
【０４９０】
自己抗体には次のものが含まれる：抗トポイソメラーゼ１、抗セントロメア、抗ＲＮＡポリメラーゼＩ、ＩＩ、および／またはＩＩＩ、抗Ｔｈ  ＲＮＰ、抗Ｕ、ＲＮＰ（抗フィブリラリン）、抗ＰＭ／Ｓｃｉ、抗核抗体（ＡＮＡ）。
【０４９１】
強皮症の治療を必要とする患者および患者集団の特定は、臨床歴および身体所見に基づいてもよい。強皮症に対する治療を必要とする患者または患者集団は、患者の病歴、身体症状、および／または研究室試験の結果を検査することによって特定することができる。診断は、有意な皮膚肥厚を有さない患者においては遅延し得る。研究室、Ｘ線、肺機能検査、および皮膚または腎（腎臓）生検を使用して、内臓障害の程度および重症度を決定することができる。
【０４９２】
疾患発現の初期の月または年には、強皮症は、全身性エリテマトーデス、多発性筋炎、およびリウマチ性関節炎等であるが、それらに限定されない他の多くの結合組織疾患に類似し得る。
【０４９３】
全身性硬化症（強皮症）の最も典型的症状は、強指症である。初期症状には、手のむくみが含まれ、それは時にはこのテーパリングおよびかぎづめのような変形にまで進行する。強皮症を有する患者の全てがこの程度の皮膚硬化を発症するわけではない。他の症状には、斑状強皮症、線状強指症（指硬化）、レイノー症候群、石灰沈着症、および末梢血管拡張症が含まれ得る。
【０４９４】
抗核抗体（ＡＮＡ）試験等の血液試験は、限局性強皮症および全身性強皮症の双方の診断に使用することができる。例えば、抗セントロメア抗体（ＡＣＡ）および抗Ｓｃｌ−７０抗体は、全身性硬化症に対する治療を必要とする患者の指標であり（Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ．５：８０−９３）、抗ｔｏｐｏ  ＩＩアルファ抗体は、限局性強皮症に対する治療を必要とする患者の指標であり、抗ｔｏｐｏ  Ｉアルファ抗体は、全身性強皮症に対する治療を必要とする患者の指標である。強皮症の複数の型およびこれらの型を診断するための方法は、当技術分野で認識され、周知であり、それらの型には、若年性強皮症（Ｆｏｅｌｄｖａｒｉ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １４：６９９−７０３（２００２）、Ｃｅｆｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ．５８：６３５−６３８（２００４））、限局性強皮症、結節性強皮症（Ｃａｎｎｉｃｋ，Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３０：２５００−２５０２（２００３））、ならびに石灰沈着症、レイノー症、食道症、強指症、および末梢血管拡張症（ＣＲＥＳＴ）、限局性全身性強皮症、およびびまん性全身性強皮症を含むが、それらに限定されない全身性強皮症が含まれるが、それらに限定されない。また、全身性強皮症は、全身性硬化症（ＳＳｃ）としても知られる。また、それは、全身性進行性硬化症（ＰＳＳｃ）、または家族性全身性進行性硬化症（ＦＰＳＳｃ）（Ｎａｄａｓｈｋｅｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ｍｏｎｉｔ．１０：ＣＲ６１５−６２１（２００４）、Ｆｒａｎｃｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｖ  Ｐｒａｔ．５２：１８８４−９０（２００２））と称され得る。全身性硬化症は、結合組織硬化症、小型動脈および微小循環に関する血管異常、ならびに自己免疫性の変化の存在によって特徴付けられる多系統障害である。
【０４９５】
ＣＲＥＳＴとして知られる全身性強皮症の型は、いかなる皮膚の張りも特徴としない。ＣＲＥＳＴは、通常指における石灰沈着症（カルシウム沈着）、レイノー症、嚥下困難を引き起こし得る食道の筋肉調節の喪失、指の骨の先細り変形である強指症、および指、顔面、または口腔内の皮膚上の小紅斑である末梢血管拡張症によって特徴付けられる。典型的に、これらの症状のうちの２つがＣＲＥＳＴの診断に十分である。ＣＲＥＳＴは、単独で、または強皮症の他の任意の型もしくは他の自己免疫疾患と組み合わせて生じ得る。
【０４９６】
限局性強皮症は、指の陥凹性潰瘍（レイノーに続発する）および／または肺線維症と共に、指に限局される堅い皮膚によって特徴付けられる。また、顔面および頚部の皮膚も、限局性強皮症に関与する。
【０４９７】
近位の堅い皮膚が存在する場合はいずれも、びまん性強皮症が診断される。近位とは、基準点に最も近い位置を意味する。近位の堅い皮膚は、手首より上または肘より上の皮膚緊張であり得る。典型的に、肘と手首との間にのみ皮膚硬化を有する患者は、診断する臨床医が使用する近位の意味に応じて、びまん性または限局性全身性強皮症のいずれかの診断を受けるであろう。
【０４９８】
強皮症に対する現在の療法には、６−メトキシプソラレンに続く体外循環光療法、および自家幹細胞移植が含まれる。
【０４９９】
強皮症に対する現在の治療には、次の薬剤、ペニシラミン、コルヒチン、インターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、クロランブシル、シクロスポリン、５−フルオロウラシル、シクロホスファミド、ミノサイクリン、サリドマイド、エタネルセプト、またはメトトレキサートの投与が含まれる。
【０５００】
本発明の方法のある種の実施形態では、患者は、自己免疫性糖尿病の治療のために使用される上に開示される任意の療法前、療法と同時、または療法後に、抗ＣＤ１９抗体を用いて治療することができる。また、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上で言及される薬剤のいずれと組み合わせて投与されてもよい。
【０５０１】
６．２１．免疫療法プロトコル
本明細書で「抗ＣＤ１９免疫療法」と称される、療法レジメン／プロトコルに使用される抗ＣＤ１９抗体組成物は、裸の抗体、免疫複合体、および／または融合タンパク質であり得る。本発明の組成物は、単一薬剤療法として、または他の治療剤もしくはレジメンと組み合わせて使用することができる。抗ＣＤ１９抗体または免疫複合体は、１つ以上の治療剤の投与前、投与と同時、または投与後に投与することができる。本発明の組成物との併用療法レジメンに使用することができる治療剤には、細胞の機能を阻害もしくは妨害し、かつ／または細胞の破壊を引き起こすいずれの物質も含まれる。例としては、放射性同位体、化学療法剤、および細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素またはそれらの断片等の毒素が挙げられるが、それらに限定されない。
【０５０２】
本明細書に記載される療法レジメンまたは任意の所望の治療レジメンは、天然ＣＤ１９抗原の代わりにヒトＣＤ１９抗原を発現するトランスジェニック動物モデルを使用して、有効性について試験することができる。したがって、抗ＣＤ１９抗体治療レジメンを動物モデルにおいて試験し、ヒトへの投与前に有効性を決定することができる。
【０５０３】
抗ＣＤ１９抗体、組成物、および方法を実施して、Ｂ細胞悪性腫瘍を含むＢ細胞疾患を治療することができる。「Ｂ細胞悪性腫瘍」という用語には、Ｂ細胞系統の細胞に由来するいずれの悪性腫瘍も含まれる。例示的Ｂ細胞悪性腫瘍には、次のものが含まれるが、それらに限定されない：Ｂ細胞サブタイプ非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、低悪性度／濾胞性ＮＨＬ、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬを含むＢ細胞サブタイプ非ホジキンリンパ腫；マントル細胞リンパ腫、および巨大病変ＮＨＬ；バーキットリンパ腫；多発性骨髄腫；プレＢ急性リンパ性白血病および早期Ｂ細胞前駆体に由来する他の悪性腫瘍；一般的急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；免疫グロブリン突然変異型ＣＬＬおよび免疫グロブリン非突然変異型ＣＬＬを含む慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；有毛細胞白血病；ヌル急性リンパ性白血病；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性型Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、および３型ＤＬＢＣＬを含むびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；前リンパ性白血病；軽鎖疾患；プラズマ細胞腫；骨硬化性骨髄腫；形質細胞白血病；意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）；くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）；無症候性多発性骨髄腫（ＩＭＭ）；古典的および結節性リンパ球優位型を含むホジキンリンパ腫；リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；ならびに胃粘膜関連リンパ様組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を含む辺縁層リンパ腫。
【０５０４】
さらなる実施形態では、本発明を用いて、成熟Ｂ細胞悪性腫瘍（すなわち、細胞表面上にＩｇを発現する）を治療することができ、成熟Ｂ細胞悪性腫瘍には、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性型Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、および３型ＤＬＢＣＬを含むびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、古典的および結節性リンパ球優位型を含むホジキンリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、胃粘膜関連リンパ様組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を含む辺縁層リンパ腫、ならびに免疫グロブリン突然変異型ＣＬＬおよび免疫グロブリン非突然変異型ＣＬＬを含む慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が含まれるが、それらに限定されない。
【０５０５】
さらに、ＣＤ１９は、Ｂ細胞発症において、例えば、ＣＤ２０よりも早期に発現させられ、したがって、例えば骨髄中の、プレＢ細胞および未成熟Ｂ細胞悪性腫瘍（すなわち、細胞表面上にＩｇを発現しないＢ細胞）を治療するのに特に適している。例証的プレＢ細胞および未成熟Ｂ細胞悪性腫瘍には、急性リンパ性白血病が含まれるが、それらに限定されない。
【０５０６】
他の特定の実施形態では、本発明を実施して結節外腫瘍を治療することができる。
【０５０７】
６．２２．抗ＣＤ１９免疫療法
本発明に従って、「抗ＣＤ１９免疫療法」は、本明細書に記載される任意の療法レジメンに従った本発明の抗ＣＤ１９抗体のいずれかの投与を包含する。抗ＣＤ１９抗体は、裸の抗体、または免疫複合体もしくは融合タンパク質として投与することができる。
【０５０８】
抗ＣＤ１９免疫療法は、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療に治療用の単一薬剤としての抗ＣＤ１９抗体の投与を包含する。抗ＣＤ１９免疫療法は、Ｂ細胞悪性腫瘍からもたらされる早期疾患を治療する方法を包含する。抗ＣＤ１９免疫療法は、Ｂ細胞悪性腫瘍治療する方法を包含し、ここで抗ＣＤ１９抗体は、ＡＤＣＣを媒介する。抗ＣＤ１９免疫療法は、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療する方法を包含し、ここで抗ＣＤ１９抗体は、その療法が化学療法、放射線化学ベースの療法、または外科的療法であれ、患者が悪性腫瘍に対する任意の治療を受ける前に投与される。
【０５０９】
一実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍を有するヒト対象は、ヒトＡＤＣＣを媒介することができる可能性のあるヒトまたはヒト化抗体を投与することによって治療することができる。早期疾患または単一薬剤療法の場合、ＡＤＣＣを媒介し得る任意の抗ＣＤ１９抗体をヒト対象（マウスおよびキメラ抗体を含む）に使用することができるが、ヒトおよびヒト化抗体が好ましい。
【０５１０】
場合によっては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプの抗体が療法に好ましい。しかしながら、それらが関連するエフェクター機能、例えばヒトＡＤＣＣを有するならば、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプを使用することもできる。かかるエフェクター機能は、目的の抗体の、インビトロまたはインビボでのエフェクター細胞によって標的細胞の溶解を媒介する能力を測定することによって査定することができる。
【０５１１】
一実施形態では、使用される抗体の用量は、循環Ｂ細胞を枯渇させるのに十分であるべきである。血液試料を分析することによって、療法の進行を患者においてモニターすることができる。他の臨床的な改善の徴候を使用して、治療をモニターすることができる。
【０５１２】
本発明の組成物および方法に関連して使用することができるＢ細胞の枯渇を測定するための方法は、当技術分野で周知であり、それには次の実施形態が含まれるが、それらに限定されない。一実施形態では、循環Ｂ細胞の枯渇は、Ｂ細胞の量を規定するためにＢ細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体以外の試薬を用いて、フローサイトメトリーにより測定することができる。他の実施形態では、標準血清分析を用いて血液中のＢ細胞レベルをモニターすることができる。かかる実施形態では、Ｂ細胞枯渇は、Ｂ細胞によって産生されることが知られる抗体に対する量を規定することによって間接に測定される。次いで、その抗体のレベルがモニターされ、Ｂ細胞の枯渇および／または機能的枯渇を決定する。別の実施形態では、Ｂ細胞枯渇は、Ｂ細胞を特定するための免疫化学的染色によって測定することができる。かかる実施形態では、患者から抽出されたＢ細胞またはＢ細胞を含む組織もしくは血清を、顕微鏡スライド上に配置し、標識化し、存在の有無について検査することができる。関連する実施形態では、療法前と療法後に抽出されたＢ細胞間の比較が行われ、Ｂ細胞の存在の差異を決定する。
【０５１３】
腫瘍量を測定し、本発明の組成物および方法に関連して使用することができる。腫瘍量を測定するための方法は、当技術分野で周知であり、それには次の実施形態が含まれるが、それらに限定されない。ある種の実施形態では、ＰＥＴスキャンを使用して、代謝活性を測定し、腫瘍の指標である高活性領域を特定することができる。また、ＣＴスキャンおよびを使用して、腫瘍の存在およびサイズについて軟組織を検査することができる。他の実施形態では、骨スキャンを使用して、腫瘍容積および位置を測定することができる。さらに他の実施形態では、ドップラー技術（例えば、超音波）を用いて腫瘍へのおよび腫瘍からの血流を検査することによって腫瘍量を測定することができる。かかる実施形態では、患者の適切な組織における経時的な血流の変化または正常な血流からの逸脱を使用して、腫瘍量に対する推定値を算出することができる。腫瘍量を測定するためのかかる方法は、本発明の治療方法の前および後に使用することができる。
【０５１４】
本発明の方法のある種の実施形態では、ＡＤＣＣ機能が維持されながら、Ｂ細胞が枯渇させられ、かつ／または腫瘍量が減少させられる。
【０５１５】
抗ＣＤ１９抗体が単一薬剤療法として投与される本発明の実施形態では、本発明は、異なる治療レジメンの使用を企図する。
【０５１６】
本発明の特定の態様に従って、本発明の組成物および方法に使用される抗ＣＤ１９抗体は、裸の抗体である。関連する実施形態では、使用される裸の抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５、２０、または２０．５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。ある種の実施形態では、使用される裸の抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約１〜１０、５〜１５、１０〜２０、または１５〜２５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。ある種の実施形態では、使用される抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約１〜２０、３〜１５、または５〜１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。他の実施形態では、使用される抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。
【０５１７】
ある種の実施形態では、用量は、約３７５ｍｇ／ｍ２の抗ＣＤ１９抗体を含み、４〜８週間連続して毎週投与される。ある種の実施形態では、用量は、患者体重少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５ｍｇ／ｋｇであり、４〜８週間連続して毎週投与される。
【０５１８】
上述の抗ＣＤ１９抗体の例示的用量は、６．１８．３．節に記載される通りに投与することができる。一実施形態では、上の用量は、単回用量注射である。他の実施形態では、用量は、一定期間にわたって投与される。他の実施形態では、用量は、一定期間にわたって複数回投与される。期間は、日単位、週単位、または月単位で測定されてもよい。抗ＣＤ１９抗体の反復投与は、毒性の副作用とのバランスを取りながら治療有益性を達成するために好適な間隔で行うことができる。例えば、反復投与が使用される場合、抗体による治療を反復する前に患者が単球数を回復できるような間隔を計ることが好ましい可能性がある。単球集団が、患者におけるＡＤＣＣ機能を反映するため、この投薬レジメンは、治療の効率を最適化するであろう。
【０５１９】
ある種の実施形態では、本発明の組成物は、患者が療法に反応する限り、ヒト患者に投与される。他の実施形態では、本発明の組成物は、患者の疾患が進行しない限り、ヒト患者に投与される。関連する実施形態では、本発明の組成物は、患者の疾患が進行しなくなるまで、または一定期間進行しなくなるまで、ヒト患者に投与され、次いで、その患者は、疾患が再発しないか、再度進行を始めない限り、本発明の組成物を投与されない。例えば、患者は、上の用量のいずれかを用いて約４〜８週間治療され、その間、患者は、疾患の進行についてモニターされる。疾患の進行が停止するか、または逆行する場合、その患者に再発が起こるまで、すなわち、治療されている疾患が再発、または進行するまで、患者は、本発明の組成物を投与されなくなる。この再発時または進行時に、患者は、最初に使用されていたのと同一の投薬レジメンを用いて、または上述の他の用量を使用して、再び治療され得る。
【０５２０】
ある種の実施形態では、本発明の組成物は、負荷用量として投与し、続いて一定期間にわたって複数回の低用量（維持用量）で投与することができる。かかる実施形態では、用量は、時期を計られてもよく、量は、有効なＢ細胞枯渇を維持するように調節されてもよい。ある種の実施形態では、負荷用量は、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８ｍｇ／ｋｇ患者体重であり、維持用量は、少なくとも約５〜１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。他の実施形態では、維持用量は、７、１０、１４、または２１日毎の間隔で投与される。維持用量は、毒性が現れるまで、血小板数が減少するまで、疾患の進行がなくなるまで、患者が免疫原性を示すまで、または疾患が末期の状態に進行するまで、無期限に継続することができる。さらに他の実施形態では、本発明の組成物は、疾患が末期の段階に進行するまで、ヒト患者に投与される。
【０５２１】
本発明の実施形態で、治療レジメンの一部として患者の循環単球レベルがモニターされる場合、投与される抗ＣＤ１９抗体の用量は、単球数を回復できるように間隔をあけられてもよい。例えば、本発明の組成物は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０日毎の間隔で投与されてもよい。
【０５２２】
本発明の実施形態で、抗ＣＤ１９抗体が毒素と共役させられるか、または毒素と併せて投与される場合、当業者は、抗ＣＤ１９抗体の用量が毒素用量に基づいて調節され得、毒素用量が使用されている毒素の具体的なタイプに応じることを理解するであろう。典型的に、毒素が使用される場合、抗ＣＤ１９抗体の用量は、裸の抗ＣＤ１９抗体により使用される用量未満であろう。適切な用量は、当技術分野で周知の技術を用いて特定の毒素につき決定することができる。例えば、毒素と共に、または毒素と共役させられて投与される場合、用量範囲研究を行い、抗ＣＤ１９抗体の最大耐用量を決定することができる。
【０５２３】
本発明の実施形態で、抗ＣＤ１９抗体が放射線治療剤と共役させられるか、または放射線治療剤と併せて投与される場合、抗ＣＤ１９抗体の用量は、使用される放射線治療剤に応じて異なるであろう。ある種の実施形態では、２ステップのプロセスが使用される。第１に、ヒト患者は、裸の抗ＣＤ１９抗体を含む組成物を投与され、約６、７、８、９、または１０日後に少量の放射線治療剤が投与される。第２に、一旦、低用量療法の耐性、分配、およびクリアランスが決定されると、患者は、ある用量の裸の抗ＣＤ１９抗体を投与され、続いて治療量の放射線治療剤が投与される。かかる治療レジメンは、ＺＥＶＡＬＩＮ（商標）（インジウム標識化抗ＣＤ２０ｍＡｂ）（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｅ）またはＢＥＸＸＡＲ（商標）（ＧＳＫ，Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）を用いる非ホジキンリンパ腫の治療に対して承認された治療レジメンに類似する。
【０５２４】
６．２３．化学療法剤との併用
抗ＣＤ１９免疫療法（裸の抗体、免疫複合体、または融合タンパク質を用いる）は、他の療法と併用することができ、それには、単独または併用の化学療法、放射免疫療法（ＲＩＴ）、化学療法および体外照射（集学的療法、ＣＭＴ）、または集学的放射免疫療法（ＣＭＲＩＴ）等が含まれるが、それらに限定されない。ある種の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１９抗体療法は、非ホジキンリンパ腫を治療するための最も一般的な化学療法レジメンである、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド−ヒドロキシドキソルビシン−オンコビン（ビンクリスチン）−プレドニゾロン）と併せて投与することができる。本明細書で使用されるとき、「投与されると併せて」という用語は、抗ＣＤ１９免疫療法が、用いられる他の療法の前、療法中または療法後に施され得ることを意味する。
【０５２５】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９免疫療法は、細胞傷害性放射性核種または放射線治療剤同位体と併用される。例えば、２２５Ａｃ、２２４Ａｃ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２２４Ｒａ、または２２３Ｒａ等のアルファ放射同位体である。また、細胞傷害性放射性核種は、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、９０Ｙ、１３１１、６７Ｃｕ、１７７Ｌｕ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、または６４Ｃｕ等のベータ放射同位体であってもよい。さらに、細胞傷害性放射性核種は、オージェ電子および低速電子を放出してもよく、同位体１２５Ｉ、１２３Ｉ、または７７Ｂｒを含む。他の実施形態では、同位体は、１９８Ａｕ、３２Ｐ等であってもよい。ある種の実施形態では、対象に投与される放射性核種の量は、約０．００１ｍＣｉ／ｋｇ〜約１０ｍＣｉ／ｋｇである。
【０５２６】
幾つかの実施形態では、対象に投与される放射性核種の量は、約０．１ｍＣｉ／ｋｇ〜約１．０ｍＣｉ／ｋｇである。他の実施形態では、対象に投与される放射性核種の量は、約０．００５ｍＣｉ／ｋｇ〜０．１ｍＣｉ／ｋｇである。
【０５２７】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９免疫療法は、化学的毒素または化学療法剤と併用される。化学的毒素または化学療法剤は、カリケアマイシンおよびエスペラミシン等のエンジイン、ズオカルマイシン、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロランブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シス−プラチナム、エトポシド、ブレオマイシン、および５−フルオロウラシルからなる群から選択されてもよい。
【０５２８】
抗ＣＤ１９免疫療法との併用療法に使用することができる好適な化学的毒素または化学療法剤には、カリケアマイシンおよびエスペラミシン等の分子のエンジインファミリーのメンバーが含まれる。化学的毒素はまた、ズオカルマイシン（例えば、米国特許第５，７０３，０８０号および米国特許第４，９２３，９９０号を参照されたい）、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロランブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シス−プラチナム、エトポシド、ブレオマイシン、および５−フルオロウラシルからなる群から得ることができる。また、化学療法剤の例としては、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、ブスルファン、サイトキシン、タキソール、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照されたい）、メルファラン、および他の関連する窒素マスタードが挙げられる。
【０５２９】
他の実施形態では、例えば、「ＣＶＢ」（１．５ｇ／ｍ２シクロホスファミド、２００〜４００ｍｇ／ｍ２エトポシドおよび１５０〜２００ｍｇ／ｍ２カルムスチン）を本発明の併用療法に使用することができる。ＣＶＢは、非ホジキンリンパ腫を治療するために使用されるレジメンである。Ｐａｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．５１：１８（１９９３）。他の好適な併用化学療法レジメンは、当業者に周知である。例えば、Ｆｒｅｅｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ，”  ｉｎ  ＣＡＮＣＥＲ  ＭＥＤＩＣＩＮＥ，ＶＯＬＵＭＥ  ２，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｈｏｌｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２０２８−２０６８（Ｌｅａ＆Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９３）を参照されたい。例証の通り、中悪性度非ホジキンリンパ腫の治療のための第１世代の化学療法レジメンには、Ｃ−ＭＯＰＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロカルバジン、およびプレドニゾン）およびＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）が挙げられる。有用な第２世代の化学療法レジメンは、ｍ−ＢＡＣＯＤ（メトトレキサート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、デキサメタゾン、およびロイコボリン）である一方で、好適な第３世代のレジメンは、ＭＡＣＯＰ−Ｂ（メトトレキサート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシン、およびロイコボリン）である。さらなる有用な薬物には、フェニルブチレートおよびブロスタチン−１が含まれる。集学的療法では、化学療法用薬物およびサイトカインの双方が、本発明に従って抗体、免疫複合体、または融合タンパク質と同時投与される。サイトカイン、化学療法用の薬物および抗体、免疫複合体または融合タンパク質は、任意の順序でまたは一緒に投与することができる。
【０５３０】
本発明の組成物および方法に使用され得る他の毒素には、毒性レクチン、リシン等の植物毒素、アブリン、モデシン、ボツリヌス、およびジフテリア毒素が含まれる。当然のことながら、種々の毒素の組み合わせもまた、１個の抗体分子に結合され得、それによって可変の細胞傷害性に適応する。本発明の併用療法に好適に用いられる毒素の例証としては、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリン毒素、緑膿菌外毒素、および緑膿菌内毒素が挙げられる。例えば、Ｐａｓｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ４７：６４１（１９８６）およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ  ４４：４３（１９９４）を参照されたい。使用され得る酵素的に活性な毒素およびそれらの断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォルディイタンパク質、ジアンチンタンパク質、ジアンシンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・カランチア阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、リストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセネスが含まれる。例えば、１９９３年１０月２８日に公開された国際公開第９３／２１２３２号を参照されたい。
【０５３１】
好適な毒素および化学療法剤は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１９ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９９５）に、またＧＯＯＤＭＡＮ  ＡＮＤ  ＧＩＬＭＡＮ’  Ｓ  ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＢＡＳＩＳ  ＯＦ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ，７ｔｈ  Ｅｄ．（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９８５）に記載される。他の好適な毒素および／または化学療法剤は、当業者に既知である。
【０５３２】
また、本発明のＡｎ抗ＣＤ１９免疫療法は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、国際公開第８１／０１１４５号を参照されたい）を活性抗癌薬に転換するプロドラッグ活性化酵素と併用されてもよい。例えば、国際公開第８８／０７３７８号および米国特許第４，９７５，２７８号を参照されたい。かかる組み合わせの酵素構成成分には、プロドラッグに対して、それをより活性な細胞傷害性形態に転換するような方法で作用することができるいずれの酵素も含まれる。本出願に使用される「プロドラッグ」という用語は、親薬物と比較して腫瘍細胞に対する細胞傷害性が低く、酵素的に活性化されるか、またはより活性な親型に転換されることができる薬学的に活性な物質の前駆体または誘導体形態を指す。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，”Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ”  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４，ｐｐ．３７５−３８２，６１５ｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）およびＳｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄ．），ｐｐ．２４７−２６７，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照されたい。抗ＣＤ１９抗体と組み合わせて使用され得るプロドラッグには、リン酸塩含有プロドラッグ、チオリン酸塩含有プロドラッグ、硫酸塩含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、α−ラクタム含有プロドラッグ、任意に置換されるフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは任意に置換されるフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシン、およびより活性な細胞傷害性遊離薬物に転換され得る他の５−フルオロウリジンプロドラッグが含まれるが、それらに限定されない。本発明で使用するためにプロドラッグ型に誘導体化され得る細胞傷害性薬物の例としては、上述の化学療法剤が挙げられるが、それらに限定されない。
【０５３３】
ある種の実施形態では、本発明の組成物および方法の投与は、毒性の療法を延期することを可能にすることができ、不要な副作用および化学療法に関連する合併症の危険性を回避する一助となることができ、また化学療法に対する耐性の発生を遅延させる。ある種の実施形態では、毒性の療法および／または毒性の療法に対する耐性は、本発明の組成物および方法を投与される患者において最大約６ヶ月、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年遅延される。
【０５３４】
６．２４．治療用抗体との併用
本明細書に記載される抗ＣＤ１９免疫療法は、抗ＣＤ２０ｍＡｂ、抗ＣＤ５２ｍＡｂ、抗ＣＤ２２抗体、およびＲＩＴＵＸＡＮ（商標）（Ｃ２Ｂ８、ＲＩＴＵＸＩＭＡＢ（商標）、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓｓ）等の抗ＣＤ２０抗体を含むが、それらに限定されない他の抗体と組み合わせて投与されてもよい。本発明の抗体と組み合わせて使用され得るか、または本発明の組成物に使用され得る治療用抗体の他の例としては、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（トラスツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＭＹＬＯＴＡＲＧ（商標）（ゲムツズマブオゾガミシン、Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＣＡＭＰＡＴＨ（商標）（アレムツズマブ、Ｂｅｒｌｅｘ）、ＺＥＶＡＬＩＮ（商標）（イブリツモマブチウキセタン、Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｅ）、ＢＥＸＸＡＲ（商標）（トシツモマブ、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｃｏｒｉｘａ）、ＥＲＢＩＴＵＸ（商標）（セツキシマブ、Ｉｍｃｌｏｎｅ）、およびＡＶＡＳＴＩＮ（商標）（ベバシズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）が挙げられるが、それらに限定されない。
【０５３５】
本明細書に記載される抗ＣＤ１９免疫療法は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＶからなる群から選択されるＦｃ受容体に特異的な抗体と組み合わせて投与されてもよい。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９免疫療法は、ＦｃγＲＩＩＢに特異的な抗体と組み合わせて投与されてもよい。この目的に好適な抗ＦｃγＲＩＩＢ抗体は、米国特許出願公開第２００４１８５０４５号、ＰＣＴ国際公開第０５０５１９９９Ａ号、第０５０１８６６９号、および第０４０１６７５０号に記載されている。
【０５３６】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９および抗ＣＤ２０、および／または抗ＣＤ２２ｍＡｂ、および／または抗ＣＤ５２ｍＡｂは、任意に同一の薬学的組成物中で、任意の好適な比率で投与することができる。例証として、抗ＣＤ１９と抗ＣＤ２０抗体との比率は、約１０００：１、５００：１、２５０：１、１００：１、９０：１、８０：１、７０：１、６０：１、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０、１：９０．１：１００、１：２５０、１：５００、または１：１０００もしくはそれを超える比率であってもよい。同様に、抗ＣＤ１９と抗ＣＤ２２抗体との比率は、約１０００：１、５００：１、２５０：１、１００：１、９０：１、８０：１、７０：１、６０；１、５０：１、４０：１、３０：１．２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０、１：９０．１：１００、１：２５０、１：５００、または１：１０００もしくはそれを超える比率であってもよい。同様に、抗ＣＤ１９と抗ＣＤ５２抗体との比率は、約１０００：１、５００：１、２５０：１、１００：１、９０：１、８０：１、７０：１、６０：１、５０：１、４０：１、３０：１．２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０、１：９０．１：１００、１：２５０、１：５００、または１：１０００もしくはそれを超える比率であってもよい。
【０５３７】
６．２５．単球またはマクロファージ機能を強化する併用化合物
本発明の方法のある種の実施形態では、単球またはマクロファージ機能を強化する（例えば、少なくとも約２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％またはそれを超える）化合物は、抗ＣＤ１９免疫療法と併用することができる。かかる化合物は、当技術分野で既知であり、制限なしに、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１２）等のサイトカイン、およびインターフェロン（例えば、アルファまたはガンマインターフェロン）を含む。
【０５３８】
単球またはマクロファージの機能または増強を強化する化合物は、抗体、免疫複合体、または抗原結合断片として、同一の薬学的組成物中に処方することができる。別個で投与される場合、抗体／断片および化合物は、同時に（互いに数時間以内に）投与することができるか、同一の経過の療法中に投与することができるか、または連続的に投与することができる（すなわち、患者は、最初に抗体／断片治療の経過を受け、次いでマクロファージ／単球機能を強化する化合物の経過を受けるか、またはその逆）。かかる実施形態では、単球またはマクロファージ機能を強化する化合物は、他の療法レジメンおよび／または本発明の組成物を用いる治療前、治療と同時、または治療後にヒト対象に投与される。一実施形態では、ヒト対象は、ヒトの正常範囲内の血中白血球数、単球数、好中球数、リンパ球数、および／または好塩基球数を有する。ヒト血中白血球（総数）の正常範囲は、約３．５〜約１０．５（１０９／Ｌ）である。ヒト血液好中球についての正常範囲は、約１．７〜約７．０（１０９／Ｌ）であり、単球は、約０．３〜約０．９（１０９／Ｌ）であり、リンパ球は、約０．９〜約２．９（１０９／Ｌ）であり、好塩基球は、約０〜約０．３（１０９／Ｌ）であり、好酸球は、約０．０５〜約０．５（１０９／Ｌ）である。他の実施形態では、ヒト対象は、ヒトの正常範囲未満である血液白血球数、例えば、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、または０．８（１０９／Ｌ）白血球を有する。
【０５３９】
本発明のこの実施形態は、本発明の抗体、免疫複合体、もしくは抗体断片を用いて、または当技術分野で既知の抗体を用いて行うことができ、また、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ５２および／または抗ＣＤ２０抗体療法（例えば、Ｃ２Ｂ８等の既存の抗体による療法）に耐性である対象、化学療法により現在治療されているか、または治療されたことがある対象、Ｂ細胞障害を再発したことがある対象、免疫無防備状態の被験体、または他でマクロファージもしくは単球機能に障害を有する対象に特に好適である。療法に耐性であるか、またはＢ細胞障害の再発を有する患者の罹患率は、少なくとも一部には、マクロファージまたは単球機能の障害に起因し得る。したがって、本発明は、抗ＣＤ１９抗体および抗原結合断片を投与する方法と併用されるべき、ＡＤＣＣおよび／またはマクロファージおよび／または単球機能を強化する方法を提供する。
【０５４０】
６．２６．免疫調節剤との併用
また、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、免疫調節剤と併用されてもよい。このアプローチでは、キメラ、ヒト、またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を使用することができる。併用療法について本明細書で使用される「免疫調節剤」という用語は、宿主の免疫系を抑制、遮断、または強化するように作用する物質を指す。これには、サイトカイン産生を抑制するか、自己抗原発現を下方制御もしくは抑制するか、またはＭＨＣ抗原を遮断する物質が含まれ得る。かかる薬剤の例としては、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許第４，６６５，０７７号を参照されたい）、アザチオプリン（またはアザチオプリンに対して有害反応がある場合、シクロホスファミド）；ブロモクリプチン；グルタルアルデヒド（米国特許第４，１２０，６４９号に記載される通りＭＨＣ抗原を遮蔽する）；ＭＨＣ抗原およびＭＨＣ断片に対する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；副腎皮質ステロイド、例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、およびデキサメタゾン等のステロイド；抗インターフェロン−γ、−β、もしくは−α抗体を含むサイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト；抗腫瘍壊死因子−α抗体；抗腫瘍壊死因子−β抗体；抗インターロイキン−２抗体および抗ＩＬ−２受容体抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種性抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体、例えば、抗ＣＤ３もしくは抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド（１９９０年７月２６日に公開された国際公開第９０／０８１８７号）；ストレプトキナーゼ；ＴＧＦ−β；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシスペルグアリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞受容体断片（Ｏｆｆｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：４３０−４３２（１９９１）；国際公開第９０／１１２９４号および国際公開第９１／０１１３３号）；ならびにＴ１０Ｂ９等のＴ細胞受容体抗体（ＥＰ３４０，１０９）が挙げられる。サイトカインの例としては、リンフォカイン、モノカイン、および従来のポリペプチドホルモンが挙げられるが、それらに限定されない。サイトカインの中には、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモン等の成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）等の糖タンパク質ホルモン；肝臓成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトーゲン；腫瘍壊死因子−α；ミュラー阻害性物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−α等の神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−α等のトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリトロポイエチン（ＥＰＯ）；骨形成誘導因子；インターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）等のコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージ−ＣｇＰ（ＧＭ−Ｃ���Ｐ）；ならびに顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、１Ｌ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１Ｉ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５）；ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β等の腫瘍壊死因子；ならびにＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が含まれる。本明細書で使用されるとき、用語サイトカインは、天然源由来または組み換え細胞培養由来のタンパク質および天然配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。ある種の実施形態では、この方法は、１以上の免疫調節剤、例えば、サイトカインを対象に投与することをさらに含む。好適なサイトカインは、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、トロンボポエチン、およびγインターフェロンからなる群から選択されてもよい。
【０５４１】
これらの免疫調節剤は、抗ＣＤ１９抗体と同時に、または別個の時間に投与される。好ましい免疫調節剤は、治療されている障害のタイプ、ならびに患者の病歴を含む多くの因子に応じるであろうが、薬剤は、頻繁には、シクロスポリンＡ、副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロン）、ＯＫＴ−３モノクローナル抗体、アザチオプリン、ブロモクリプチン、異種抗リンパ球グロブリン、またはそれらの混合物から選択することができる。
【０５４２】
６．２７．他の治療剤との併用
また、腫瘍新生血管系に作用する薬剤を、抗ＣＤ１９免疫療法と併用することもでき、それにはコンブレスタチンＡ４（Ｇｒｉｇｇｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．２：８２，（２００１））、ならびにアンギオスタチンおよびエンドスタチン（Ｒｏｓｅｎ，Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  ５：２０（２０００）に概説され、参照により本明細書に組み込まれる）等のチューブリン結合剤が含まれる。抗ＣＤ１９抗体と組み合わせた使用に好適な免疫調節剤には、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）が含まれるが、それらに限定されない。ある種の実施形態では、本発明の組成物および方法を用いた併用療法に使用される治療剤は、ペプチドである。
【０５４３】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９免疫療法は、１つ以上のカリケアマイシン分子と併用される。抗生物質のカリケアマイシンファミリーは、ピコモル未満の濃度で２本鎖ＤＮＡ切断をもたらすことができる。使用され得るカリケアマイシンの構造類似体には、γ１Ｉ、γ２Ｉ、γ３Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１Ｉ、ＰＳＡＧ、および０１１（Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３３３６−３３４２（１９９３）およびＬｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５−２９２８（１９９８））が含まれるが、それらに限定されない。
【０５４４】
また、抗ＣＤ１９抗体および細胞傷害性薬剤を含む融合タンパク質は、例えば、組み換え技術またはペプチド合成によって作製されてもよい。
【０５４５】
さらに別の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、腫瘍の前標的化に利用するための「受容体」（ストレプトアビジン等）と共役させられてもよく、ここでアンタゴニスト−受容体共役体は、患者に投与され、続いて洗浄剤を用いて未結合の共役体が循環から除去され、次いで治療剤（例えば、放射性ヌクレオチド）と共役させられた「リガンド」（例えば、アビジン）が投与される。
【０５４６】
ある種の実施形態では、治療レジメンは、抗ＣＤ１９抗体組成物の細胞傷害性効果を軽減する化合物を含む。かかる化合物には、鎮痛薬（例えば、アセトアミノフェン）、ビスホスホネート、抗ヒスタミン剤（例えば、マレイン酸クロルフェニラミン）およびステロイド（例えば、デキサメタゾン、レチノイド、デルトイド、ベタメタゾン、コルチゾル、コルチゾン、プレドニゾン、デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、鉱質コルチコイド、エストロゲン、テストステロン、プロゲスチン）が含まれる。
【０５４７】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９免疫療法と組み合わせて使用される治療剤は、小分子（すなわち、約２５００ダルトン未満の分子量を有する無機または有機化合物）である。例えば、小分子のライブラリは、Ｓｐｅｃｓ  ａｎｄ  ＢｉｏＳｐｅｃｓ  Ｂ．Ｖ．（Ｒｉｊｓｗｉｊｋ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ），Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、Ｃｏｍｇｅｎｅｘ  ＵＳＡ  Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）、およびＭａｙｂｒｉｄｇｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｌｔｄ．（Ｃｏｒｎｗａｌｌ  ＰＬ３４  ＯＨＷ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）から商業的に入手することができる。
【０５４８】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９免疫療法は、抗細菌剤と組み合わせて投与することができる。抗細菌剤の非限定的例としては、細菌感染を阻害および／もしくは低減させる、細菌の複製を阻害および／もしくは低減させる、または他の細胞または対象への細菌の伝播を阻害および／もしくは低減させる、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質、抗体、核酸分子、有機分子、無機分子、および小分子が挙げられる。抗細菌剤の具体的例としては、ペニシリン、セファロスポリン、イミペネム、アクストレオナム、バンコマイシン、サイクロセリン、バシトラシン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシン、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、スペクチノマイシン、トリメトプリム、ノルフロキサシン、リファンピン、ポリミキシン、アンホテリシンＢ、ニスタチン、ケトカナゾール、イソニアジド、メトロニダゾール、およびペンタミジン等の抗生物質が挙げられるが、それらに限定されない。
【０５４９】
ある種の実施形態では、抗ＣＤ１９免疫療法は、抗真菌剤と組み合わせて投与することができる。抗真菌剤の具体的例には、アゾール薬物（例えば、ミコナゾール、ケトコナゾール（ＮＩＺＯＲＡＬ（登録商標））、カスポファンギン酢酸塩（ＣＡＮＣＩＤＡＳ（登録商標））、イミダゾール、トリアゾール（例えば、フルコナゾール（ＤＩＦＬＵＣＡＮ（登録商標）））、およびイトラコナゾール（ＳＰＯＲＡＮＯＸ（登録商標）））、ポリエン（例えば、ニスタチン、アンホテリシンＢ（ＦＵＮＧＩＺＯＮＥ（登録商標））、アンホテリシンＢ脂質複合体（「ＡＢＬＣ」）（ＡＢＥＬＣＥＴ（登録商標））、アンホテリシンＢコロイド分散（「ＡＢＣＤ」）（ＡＭＰＨＯＴＥＣ（登録商標））、リポソームアンホテリシンＢ（ＡＭＢＩＳＯＮＥ（登録商標）））、ヨウ化カリウム（ＫＩ）、ピリミジン（例えば、フルシトシン（ＡＮＣＯＢＯＮ（登録商標）））、ならびにボリコナゾール（ＶＦＥＮＤ（登録商標））が挙げられるが、それらに限定されない。抗細菌剤および抗真菌剤の投与は、患者のＢ細胞が有意に枯渇される場合の、本発明の方法において起こり得る感染性疾患の効果または悪化を軽減することができる。
【０５５０】
本発明のある種の実施形態では、抗ＣＤ１９免疫療法は、本発明の組成物の投与に伴い得る毒性副作用を軽減するために、上述の薬剤の１つ以上と組み合わせて投与することができる。他の実施形態では、抗ＣＤ１９免疫療法は、抗体投与、化学療法、毒素、または薬物の副作用を軽減する際の使用について当技術分野で周知である１つ以上の薬剤と組み合わせて投与することができる。
【０５５１】
本発明のある種の実施形態で、多発性骨髄腫を治療するために抗ＣＤ１９免疫療法が投与される場合、本発明の組成物は、高用量化学療法（メルファラン、メルファラン／プレドニゾン（ＭＰ）、ビンクリスチン／ドキソルビシン／デキサメタゾン（ＶＡＤ）、リポソームのドキソルビシン／ビンクリスチン、デキサメタゾン（ＤＶｄ）、シクロホスファミド、エトポシド／デキサメタゾン／シタラビン、シスプラチン（ＥＤＡＰ））、幹細胞移植（例えば、自家幹細胞移植もしくは同種幹細胞移植および／またはミニ同種（非骨髄破壊的）幹細胞移植）、放射線治療、ステロイド（例えば、コルチコステロイド、デキサメタゾン、サリドマイド／デキサメタゾン、プレドニゾン、メルファラン／プレドニゾン）、支持的治療（例えば、ビスホスホネート、成長因子、抗生物質、静脈内免疫グロブリン、低線量放射線治療および／または整形外科的介入）、ＴＨＡＬＯＭＩＤ（商標）（サリドマイド、Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ならびに／またはＶＥＬＣＡＤＥ（商標）（ボルテゾミブ、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）と組み合わせて、またはそれらを用いた治療レジメンにおいて投与されてもよい。
【０５５２】
本発明の実施形態で、抗ＣＤ１９免疫療法が、別の抗体（単数または複数）および／または薬剤と組み合わせて投与される場合、追加的抗体（単数または複数）および／または薬剤は、本発明の抗体の投与に対して任意の順番で投与することができる。例えば、追加的抗体（単数または複数）は、ヒト対象への抗ＣＤ１９抗体または免疫複合体の投与前、投与と同時、および／または投与後に投与することができる。追加的抗体（単数または複数）は、本発明の抗体として同一の薬学的組成物中に存在してもよく、かつ／または異なる薬学的組成物中に存在してもよい。本発明の抗体の投与の用量および様式、ならびに追加的抗体（単数または複数）の用量は、本出願に提供され、当技術分野で周知であるような投与の投薬量および様式の教示のいずれに従って、同一であっても、異なってもよい。
【０５５３】
６．２８．キット
本発明は、Ｂ細胞悪性腫瘍、またはＢ細胞悪性腫瘍によって増強されているか、もしくはＢ細胞悪性腫瘍を増強するその１つ以上の症状の予防、治療、管理、または寛解のための、本発明の組成物で満たされた１つ以上の容器を含む薬学的パックまたはキットを提供する。
【０５５４】
一実施形態では、本発明の液体製剤で満たされた容器は、プレフィルドシリンジである。当業者に既知の任意のプレフィルドシリンジが、本発明の液体製剤と組み合わせて使用されてもよい。使用され得るプレフィルドシリンジは、例えば、ＰＣＴ国際公開第０５０３２６２７号、第０８０９４９８４号、第９９４５９８５号、第０３０７７９７６号、米国特許第６７９２７４３号、第５６０７４００号、第５８９３８４２号、第７０８１１０７号、第７０４１０８７号、第５９８９２２７号、第６８０７７９７号、第６１４２９７６号、第５８９９８８９号、米国特許公開第２００７０１６１９６１Ａ１号、第２００５００７５６１１Ａ１号、第２００７００９２４８７Ａ１号、第２００４０２６７１９４Ａ１号、第２００６０１２９１０８Ａ１号等に記載されるが、それらに限定されない。プレフィルドシリンジは、種々の物質からなってもよい。一実施形態では、プレフィルドシリンジは、ガラスシリンジである。別の実施形態では、プレフィルドシリンジは、プラスチックシリンジである。当業者は、シリンジを製造するために使用される物質の性質および／または品質が、シリンジ中に保管されるタンパク質製剤の安定性に影響を及ぼし得ることを理解する。例えば、シリンジチャンバの内面に堆積されるシリコンベースの潤滑剤が、タンパク質製剤中の粒子形成に影響を及ぼし得ることが理解される。一実施形態では、プレフィルドシリンジは、シリコンベースの潤滑剤を含む。一実施形態では、プレフィルドシリンジは、焼成されたシリコンを含む。別の実施形態では、プレフィルドシリンジは、シリコンベースの潤滑剤を含まない。また、当業者は、シリンジバレル、シリンジ先端キャップ、プランジャ、または栓から製剤中に浸出する少量の汚染要素もまた、製剤の安定性に影響を与え得ることを理解する。例えば、製造プロセス中に導入されるタングステンが、製剤の安定性に不都合な影響を及ぼし得ることが理解される。一実施形態では、プレフィルドシリンジは、５００ｐｐｂを上回るレベルのタングステンを含んでもよい。別の実施形態では、プレフィルドシリンジは、低タングステンシリンジである。別の実施形態では、プレフィルドシリンジは、約５００ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂ、約４００ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂ、約３００ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂ、約２００ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂ、約１００ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂ、約５０ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂ、約２５ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂのレベルのタングステンを含んでもよい。別の実施形態では、シリンジは、タングステン除去シリンジである。別の実施形態では、シリンジは、タングステン除去「ウルトラ−１００」シリンジである。別の実施形態では、シリンジは、Ｃｌｅａｒｊｅｃｔ（商標）（Ｇｅｒｅｓｈｅｉｍｅｒ，ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ）またはＩｎＪｅｎｔｌｅ（商標）（ＳＣＨＯＴＴ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）シリンジである。
【０５５５】
本発明は、上述の方法に使用することができるキットを提供する。一実施形態では、キットは、１つ以上の容器中に本発明の組成物を含む。別の実施形態では、キットは、１つ以上の容器中に、Ｂ細胞悪性腫瘍、またはＢ細胞悪性腫瘍によって増強されているか、もしくはＢ細胞悪性腫瘍を増強するその１つ以上の症状の予防、管理、または治療に有用な本発明の組成物、ならびに１つ以上の他の容器中に、１つ以上の同様の他の予防剤または治療剤を含む。キットは、Ｂ細胞悪性腫瘍を予防、治療、管理、または寛解させるための指示書、ならびに副作用および投与方法についての投薬情報をさらに含んでもよい。医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を管理している行政機関によって規定されている形態の注意書きが、かかる容器（単数または複数）に任意に付随してもよく、そのような注意書きは、ヒト投与のための製造、使用、または販売に関する機関による承認を反映している。
【実施例】
【０５５６】
７．実施例
次に、本発明は、次の実施例を参照して説明される。これらの実施例は、例証目的のために提供されるにすぎず、本発明は、これらの実施例に限定されるものとして決して解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書に提供される教示の結果としてより明白となる任意かつ全ての変形を包含するものとして解釈されるべきである。
【０５５７】
７．１．製剤開発
次の節は、抗ヒトＣＤ１９抗体を含む製剤の開発を説明する。特に指示しない限り、本明細書に提示する実験結果は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、配列番号１１１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、および複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域（フコースは、糖鎖中の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに結合されない）を含む１６Ｃ４抗ヒトＣＤ１９抗体を用いて得たものである（２００７年９月７日に出願された米国特許出願第１１／８５２，１０６号を参照されたく、この特許の開示は、参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれる）。
【０５５８】
７．１．１．ヒト化抗ＣＤ１９抗体の構築、発現、および結合特徴
ヒト化アフコシル化抗ＣＤ１９抗体、例えば、１６Ｃ４−ａＦｕｃ（５５１抗体とも称される）の構築、発現、および特性評価は、２００７年９月７日に出願された米国特許出願第１１／８５２，１０６号に記載された。
【０５５９】
７．１．２．実験方法
精製された抗ヒトＣＤ１９抗体は、本明細書に記載される次の標準的産業規模のプロトコルに従って得ることができる。タンパク質濃度は、２８０ｎｍの光学密度測定値から推定することができる。
【０５６０】
Ｐｌａｎｏｖａ２ＯＮフィルターを用いて、精製抗ヒトＣＤ１９抗体をナノろ過し、粒子状物質を除去する。タンジェント流ろ過（ＴＦＦ）を用いて、抗ヒトＣＤ１９抗体製剤を調製する。ナノろ過した抗ヒトＣＤ１９抗体を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｌａｂｓｃａｌｅ  ＴＦＦデバイス上で約２５ｍｇ／ｍＬになるまで濃縮する。次いで抗ヒトＣＤ１９抗体を、適切な緩衝剤（例えば、１０ｍＭヒスチジン−ＨＣＬ（ｐＨ６．０）、７５ｍＭ  ＮａＣｌ）中に５回ダイアフィルターする。一旦、緩衝剤交換が完了すると、抗体を約１５０ｍｇ／ｍＬになるまでさらに濃縮してもよい。適切な濃縮保存溶液により抗体調製物をスパイクすることによって、賦形剤を導入する。例えば、１１ｍＬの１０ｍＭヒスチジン−ＨＣｌ、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４０％トレハロース（ｐＨ６．０）を、各１００ｍＬの抗体調製に添加することによって、４％トレハロースの最終濃度を達成する。複数の賦形剤を連続したステップで導入してもよい。例えば、トレハロースの添加後に、１０ｍＭヒスチジン−ＨＣｌ（ｐＨ６．０）、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、２％ポリソルベート８０の保存溶液を、抗体調製物を含有するトレハロースにより１００倍に希釈することによって、０．０２％ポリソルベート８０の最終濃度を導入してもよい。最終抗体濃度を、最終製剤緩衝剤（例えば、１０ｍＭヒスチジン−ＨＣｌ（ｐＨ６．０）、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース）により、所望のレベル（例えば、１０ｍｇ／ｍＬ）に調節する。
【０５６１】
次の節は、液体抗体製剤、例えば、滅菌された水溶液中に、１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ６．０）、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース中、１０ｍｇ／ｍＬの抗ＣＤ１９抗体を含む製剤を特徴付けるために使用することができる方法を説明する。
【０５６２】
長期間保管された単回用量アリコートの物理的特性を分析することによって、製剤安定性を検査する。一部のアリコートを、臨床保管に推奨される温度（５℃）の下で保管する。他のアリコートを、非常に長期的な保管の影響をシミュレートするために昇温（２５℃または４０℃）の下で保管する。試験用アリコートを、バイアル（例えば、ガラスまたはプラスチックバイアル）、シリンジ、または他のいずれの好適な槽中で保管してもよい。また試験用アリコートを、例えば、振とう、凍結−解凍等であるが、それらに限定されないストレス条件に供してもよい。製剤の安定性に影響を及ぼし得るさらなる保管条件には、光強度、光波長、湿度、バイアルの組成、および栓の組成が含まれるが、それらに限定されない。また、本明細書に記載される方法を用いて、製剤安定性に対するこれらのパラメータの影響も決定する。
【０５６３】
また、逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用して、製剤中の抗体断片の量を決定してもよい。Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）システムを用いてＲＰ−ＨＰＬＣを行う。試料を、Ｍｉｃｈｒｏｍ  ＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓからのＰＬＲＰ−Ｓ（８ｕｍ、４０００Ａ、２．０ｘ１５０ｍｍ）カラム上で分析する。２８０ｎＭの溶出液の光学密度に従うことによって、タンパク質溶出プロフィールを決定する。ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ）自動積分パラメータを用いてデータ分析を行ってもよい。
【０５６４】
７．１．２．１．サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
サイズ排除クロマトグラフィーを行い、抗体凝集体および断片の存在について抗体製剤を分析してもよい。試験試料を、高分離サイズ排除カラム（例えば、Ｇ３０００  ＳＷＸＬ  ５μｍ、３００Å、７．８ｘ３００ｍｍ、ＴｏｓｏＨａａｓ）上に注入する。移動相は、０．１Ｍリン酸二ナトリウム、０．１Ｍ硫酸ナトリウム、および０．０５％アジ化ナトリウム（ｐＨ６．７）であり、０．２５〜１．０ｍＬ／分の流速で、均一濃度で流動する。溶出したタンパク質を２８０ｎｍのＵＶ吸光度によって検出し、さらなる特性評価のために収集してもよい。検出した任意のタンパク質種の相対量を、最初に除外した容量ピークを除外して、検出した全ての他のピークの総領域と比較した産物のピークの領域百分率として報告する。抗体モノマーのピークよりも先に溶出したピークを、総計のパーセンタイルとして記録する一方で、抗体モノマーのピークよりも後であるが、緩衝剤のピークよりも先に溶出したピークを断片パーセンタイルとして記録する。個々のピークの流体力学半径および分子量を、連結した多角光散乱検出器により得てもよい。
【０５６５】
ＳＥＣを使用して、長期間保管された製剤中の抗体凝集体形成および抗体断片化をモニターしてもよい（例えば、複数の測定を９ヶ月間にわたって行う）。異なる温度範囲（例えば、２〜８℃、２０〜２４℃、および）３８〜４２℃）で製剤を保管してもよい。９ヶ月間を超える保管の影響をシミュレートする目的で、提案される臨床保管温度（２〜８℃）を上回る温度範囲を使用して製剤にストレスをかける。断片および凝集体の比率は、経時的に増加することが予想され、この増加は昇温で加速する可能性が高い。断片化および凝集率が、各温度範囲内で一定であるという知見は、より高い保管温度が、加速した時間尺度を正確にシミュレートすることを示すであろう。
【０５６６】
また、断片化／凝集の推定率の対数（ｌｏｇ（率））を決定してもよい。ｌｏｇ（率）が、保管温度（１／Ｔ（Ｋ−１）の逆数に対して線形従属を示すという知見から、研究者は、任意の温度での製剤の凝集／断片化の率、またはより重要なことに、所定の温度で任意の時点での製剤の特徴を予測することができるであろう。
【０５６７】
凝集体および断片に相当するクロマトグラフィーのピークが互いに、またはモノマーピーク（例えば、低い相対レベルの凝集体／断片）から十分に異ならない状況では、ＳＥＣは、断片化／凝集の正確な測定として機能しない可能性がある。
【０５６８】
代替的に、次の通り、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）システムを用いてＳＥＣを行ってもよい。試料を１０ｍｇ／ｍＬになるまで希釈する。２５０ｕｇタンパク質を含有する２５μｌ希釈試料を、ＴＳＫ−ＧｅＩ  ３０００カラム（サイズ７．８ｍｍ  ｘ  ３０．０ｃｍ、Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）上に注入する。２８０ｎＭの溶出液の光学密度に従うことによって、タンパク質溶出プロフィールを決定する。ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ）自動積分パラメータを用いてデータ分析を行ってもよい。
【０５６９】
７．１．２．２．分析用超遠心法
また、分析用超遠心法（ＡＵＣ）を使用して、抗体凝集体および断片の存在について抗体製剤を特徴付けてもよい。ＡＵＣは、液体試料中の高分子の沈降係数（Ｓｖｅｄｂｅｒｇ，Ｓに報告される）を決定する直交技術である。ＳＥＣと同様に、ＡＵＣは、抗体断片／凝集体をモノマーから分離し、検出することができ、またさらに分子量についての情報を提供することができる。ＳＥＣと比較して、ＡＵＣは、固相相互作用に起因する凝集体喪失の可能性を排除し、所定の高分子の異なる種を分解するのにより優れている。
【０５７０】
分析用超遠心機、例えば、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｏｐｔｉｍａ  ＸＬ−Ａを用いて沈降速度実験を行ってもよい。試験試料を、参照緩衝剤（例えば、２０ｍＭクエン酸、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１．５％マンニトール、５０μＭジエチレントリアミン五酢酸、０．０２％ポリソルベート８０、ｐＨ６．０）により０．５ｍｇ／ｍＬの抗体濃度になるまで希釈する。４１５μｌの希釈した抗体試料および４１２μｌの参照緩衝剤を、それぞれ試料および参照チャネルの１２ｍｍの遠心機セル中に充填する。充填細胞をＡＮ−５０Ｔｉ分析用ローター中に配置し、２５℃に平衡化する。試料を、完全真空の４２０００ｒｐｍのローター速度により２８０ｎｍで走査する。各セルにつき合計８０個の走査結果を分析のために収集する。メニスカスによって引き起こされたアーチファクトを回避するために、各試料の最初の走査結果を下流データプロセシングから除外する。
【０５７１】
Ｎ．Ｉ．Ｈ．のＰｅｔｅｒ  Ｓｈｕｃｋによって開発されたｃ（ｓ）法および実行ｃ（ｓ）によるＳＥＤＦＩＴ（バージョン８．８）プログラムを用いてデータを分析する。沈降係数の分布を導くために、ｃ（ｓ）法を用いて、原データ走査結果をＳのＬａｍｍ関数に直接適合させる。適合手順に使用されるパラメータは、解像度４００、信頼区間０．７５、グリッドサイズ１０００、偏比容０．７２４５、緩衝剤密度１．０００、および緩衝剤粘度０．１００２である。摩擦比、メニスカス、および底辺位置を、適合したパラメータとして設定する。また、時間独立性ノイズも適合させる。検出したピークを積分し、次の通り分類する：０〜６Ｓ、断片；６〜９Ｓ、モノマー；および９〜２０Ｓ、凝集体。
【０５７２】
ＡＵＣを使用して、低い相対レベルの凝集および断片化を有する抗体製剤を特徴づけてもよい。ＡＵＣは、ＳＥＣピークの分解能力を超える状況で、抗体断片および凝集体をモノマー種から分解するのにより優れている可能性がある。また、凝集体ピークの分子量のＡＵＣ推定を、その組成物（例えば、ダイマー対より高いマルチマー）の指標として使用してもよい。
【０５７３】
また、ＳＥＣと比較して、ＡＵＣは、所定の高分子の異なる種を分解するのにより優れている可能性がある。しかしながら、ＡＵＣのノイズ／シグナル比は、試料中の抗体濃度に応じるため、最初に適切な試料希釈率を確立することが必要である。
【０５７４】
７．１．２．３．濁度測定：
また、抗体製剤中のタンパク質凝集を、濁度測定によって特徴付けてもよい。濁度は、溶液中の粒子が光を散乱する量の測定値であり、したがって、タンパク質凝集または変性の一般的指標として使用されてもよい。高い濁度は、高レベルの凝集または増加した数／増加したサイズの粒子を示す可能性がある。
【０５７５】
濁度測定は、製造業者の指示に従って、濁度計（例えば、２１００ＡＮまたは２１００Ｎ、Ｈａｔｃｈ）により行われてもよい。約３〜４ｍＬの製剤試料をガラス試験管中に移し、インライン真空システムを用いて２分間脱気する。次いで脱気した試料を、分析のために室温の濁度計（例えば、２１００ＡＮまたは２１００Ｎ、Ｈａｔｃｈ）試料コンパートメント中に配置する。濁度計を、４０、２００、１０００、および４０００ＮＴＵ（ネフェロメ濁度単位）のＳＴＡＢＬＣＡＬ（登録商標）Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｆｏｒｍａｚｉｎ  Ｔｕｒｂｉｄｉｔｙスタンダード（Ｈａｔｃｈ）により校正し、３、６、１８、３０、および６０ＮＴＵのホルマジンの対照懸濁液を分析することによって検証する。
【０５７６】
７．１．２．４．粒子数
製造業者の指示に従って、パーティクルカウンター（例えば、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ３）を用いて特定の製剤中の粒子の数およびサイズを決定してもよい。
【０５７７】
７．１．２．５．粘度プロフィール
粘度計（例えば、ＶｉｓｃｏＬａｂ  Ｐｉｓｔｏｎ（０．３０５５”，１−２０ｃＰ）を装着した、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  ＳｙｓｔｅｍｓからのＶｉｓｃｏＬａｂ  ４０００  Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて、抗体製剤の粘度を測定してもよい。使用前に、適切な基準（例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．からのＳ６Ｓ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄ）により粘度計を校正する。粘度計を水浴に接続して、システムを２０℃に平衡化する。Ｓ６Ｓ粘度参照基準（２０．００℃で８．５３０ｃＰ）を用いてピストンを確認する。また、ＲＯＤＩ  Ｈ２Ｏ（２０．０℃で１．００ｃＰ）を用いてピストンを確認する。各々異なる溶液タイプの測定の間に、ピストンを石鹸および水で完全に洗浄し、すすぐ。
その後、システムを２℃以下に冷却する。一旦、システムの温度が２℃またはそれを下回ると、試料をチャンバ中に充填し、ピストンを試料の中へ下げる。試料をチャンバの温度に平衡化した後、測定を開始する。温度を、２５℃以上の最終温度になるまで、１℃の増分で７〜１０分毎に増加させる。温度を増加させる直前に粘度結果を記録する。ピストンは、再平衡化の必要性を最小化するために、測定中、動いている状態にしておく。Ｒｈｅｏｍｅｔｅｒを使用して、製剤の粘度を測定してもよい。
【０５７８】
７．１．２．６．示差走査熱量測定
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、特定の製剤中の抗体の熱安定性における経時的変化を確認してもよい。製造業者の指示に従って、熱融点（Ｔｍ）を示差走査熱量計（例えば、ＭｉｃｒｏＣａｌ，ＬＬＣからのＶＰ−ＤＳＣ）により決定する。一例では、１．０℃／分の走査率および２５〜１２０℃の温度範囲によりＶＰ−ＤＳＣを使用する。５分間の走査前恒温と共に８秒のろ過時間を使用する。Ｐｉｅｒｃｅ透析カップ（３．５ｋＤ）を用いて、２０ｍＭヒスチジン−ＨＣｌ、ｐＨ６中への透析によって試料を調製した。Ａ２80によって決定された平均Ｍａｂ濃度は、５００μｇ／ｍＬである−製造業者の指示に従って、システムと共に供給されたソフトウェアを用いて融点を決定した。
【０５７９】
７．１．２．７．液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）
液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）を使用して、抗体製剤中の、ＳＥＣまたはＡＵＣによって検出された分解断片を特徴付けてもよい。
【０５８０】
分解断片を含有するピークＳＥＣカラム断片を収集し、ＰＮＧａｓｅ  Ｆとしても知られるＮ−Ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅ  Ｆにより３７℃で一晩分解する。ＰＮＧａｓｅ  Ｆは、タンパク質試料を脱グリコシル化するために使用されるアミダーゼである。この酵素は、最も内側のＧｉｃＮＡｃと、Ｎ結合糖タンパク質上の、高マンノースでハイブリッドかつ複合のオリゴ糖のアスパラギン残基との間を切断する。脱グリコシル化試料を還元緩衝剤（例えば、２．５ｍｇ／ｍＬ  ＤＴＴ、６．０ｍグアニジンＨＣｌ、ｐＨ８．２）と混合し、水浴中５６℃で６０分間維持する。次いで原液の４−ビニルピリジン（例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，ＷＩ）を試料に添加し、反応混合物を、周囲温度で３０分間保持する。修飾された試料を反応物から分離するために、脱グリコシル化、還元、かつアルキル化した試料を逆相カラム上に即座に充填する。
【０５８１】
バイナリ勾配ＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００）による逆相カラム（例えば、Ｊｕｐｉｔｅｒ  ５μｍ  Ｃ４、３００Å、２５０ｘ２．００ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を用いて、脱グリコシル化、還元、かつアルキル化した試料を断片化する。移動相Ａは、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中、３０％アセトニトリルからなり、移動相Ｂは、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中、５０％アセトニトリルからなる。水中、３０〜５０％アセトニトリルの直線勾配を用いて、約２００μＬ／分の流速により１６分間にわたって試料を分離する。カラム流出物をＵＶ検出器に向け、次いで１：１に分割し、一方をイオントラップ質量分析計上（例えば、ＬＴＱ，ＴｈｅｒｍｏＥｌｅｃｔｒｏ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）のスイッチング弁に通し、残りの半分を廃棄する。
【０５８２】
カフェイン、Ｌ−メチオニル−アルギニル−フェニルアラニル−アラニン（配列番号２３９）、酢酸塩Ｈ２Ｏ、およびＵｌｔｒａｍａｒｋ１６２の混合物を用いて、実験実行前にイオントラップ質量分析計を校正する。エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）データを、陽ＥＳＩ完全走査モードで得る。Ｂｉｏ  Ｗｏｒｋデコンボリューションプログラム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ）を使用して、質量スペクトルを再構築し、元の質量スペクトルからペプチド／タンパク質の分子量を得てもよい。その後、質量データを使用して、分解断片の識別を決定する。
【０５８３】
７．１．２．８．結合親和性特性評価
長期保管（例えば、４０℃で１ヶ月間または５℃で６ヶ月間）に続いて、製剤から回収されたモノクローナル抗体の結合親和性を、当技術分野で既知の任意の検定、例えば、ＥＬＩＳＡ検定、フローサイトメトリー検定等であるが、それらに限定されない検定によって決定してもよい。また、インビトロおよびインビボ検定（例えば、ＡＤＣＣ検定、インビボ枯渇検定）を用いて抗体の機能的特性を分析してもよい。抗ＣＤ１９抗体の機能的特性評価に好適な検定は、２００７年９月７日に出願された米国特許出願第１１／８５２，１０６号に提供される。
【０５８４】
７．１．３．製剤開発
５５１抗体の物理化学特性を次の通り特徴付けた。５５１抗体のＤＳＣプロフィールを上述の通り決定した。０．２５ｍｇ／ｍＬ抗体濃度の２０ｍＭヒスチジン（ｐＨ６．０）緩衝剤中でＤＳＣ測定を行った。５５１抗体のＤＳＣプロフィールを図２に示す。
【０５８５】
種々のｐＨでの温度の関数としてコロイド安定性（図３）およびトリプトファン蛍光（図４）を測定することによって、５５１抗体安定性に対するｐＨの影響を確認した。コロイド安定性データは、５５１がｐＨ４〜５で最も安定であることを示した。試験された範囲内で、５５１は、ｐＨ７で最もコロイド的に不安定であった。
【０５８６】
種々の温度での５５１のコロイド不安定化率を査定して、高処理賦形剤スクリーニングのための最適温度を選択した。時間の関数として、種々の温度の５５１製剤の濁度（Ａ３５０ｎｍ）を測定することによって、コロイド不安定化率を査定した。実験結果の代表的な試料を図５に示す。これらの結果に基づいて、高処理賦形剤スクリーニングのための温度として６８℃を選択した。
【０５８７】
高処理スクリーンを使用して、５５１抗体を安定化させる性能を有する賦形剤を特定した。５５１抗体のｐＨ感度に基づくスクリーンのために、準安定調節緩衝剤（ｐＨ７．０の２０ｍＭヒスチジン）を選択した。対照緩衝剤中の５５１のコロイド安定性を、さらなる賦形剤を単独または組み合わせのいずれかで含む緩衝剤中の５５１コロイド安定性と比較することによって、賦形剤をスクリーニングした。種々の試験製剤のコロイド不安定化率を査定することによって、コロイド安定性の変化を追跡した。安定化賦形剤が、不安定化率を減少させる一方で、不安定化賦形剤は、それを増加させる。代表的な結果を図６に示す。不安定化率は、塩またはアミノ酸を含まない製剤の濁度曲線の右側にシフトした濁度曲線が示す通り、ＮａＣｌ、リシン、アルギニン、またはグリシンの添加によって減少した。高処理賦形剤スクリーニングからのさらなる試料を図７〜９に示す。高処理スクリーニングは、５５１抗体のための安定化賦形剤として、グリシン、アルギニン、リシン、ＮａＣｌ、およびトレハロースを特定した。スクリーニングはまた、そのイオン強度が１５０ｍＭ  ＮａＣｌのイオン強度と同等である製剤により最適安定化が達成され得ることを示した。さらなる実験を行い、５５１安定性に対するこれらの賦形剤の組み合わせの影響を確認した（図９）。試験された組み合わせのうち、４％または８％トレハロースと組み合わせた１５０ｍＭ  ＮａＣｌで、最も顕著な安定化効果を観察した。
【０５８８】
賦形剤スクリーニングに基づいて、４０℃でのリアルタイム加速安定性研究のために６つの製剤を選択した：
Ａ：２０ｍＭヒスチジン、ｐＨ６
Ｂ：２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭグリシン、ｐＨ６．０
Ｃ：２０ｍＭヒスチジン、４％トレハロース、ｐＨ６．０
Ｄ：２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．０
Ｅ：２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、ｐＨ６．０
Ｆ：２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ  ＡｒｇＨＣｌ、ｐＨ６．０
各製剤は、１５ｍｇ／ｍＬの５５１抗体を含んだ。ＳＥＣを用いて抗体凝集および断片化を査定した。実験結果の試料を図１０〜１２に示す。試験された全ての製剤中で、経時的な高次凝集体における小幅な増加を観測した。
【０５８９】
さらなるリアルタイム安定性研究を行い、抗体凝集に対する抗体濃度の影響を確認した。１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、または６０ｍｇ／ｍＬの５５１および１０ｍＭヒスチジンｐＨ６．０を含む製剤を５℃または４０℃で保管した。長期保管後の抗体凝集を、ＳＥＣによって決定した。実験結果の試料を図１３〜１６に示す。５℃で３０日間の保管中にモノマー濃度の変化は観測されなかった。４０℃でのモノマー喪失率は、抗体濃度の増加と共に増加する。ダイマー形成は、５℃よりも４０℃でより高く、またそれは、抗体濃度の増加と共に増加した。マルチマー濃度は、５℃で３０日間変化しなかった。４０℃のより高い抗体濃度で、マルチマー形成率は増加した。抗体断片化は、５℃よりも４０℃でより高く、また断片化は、抗体濃度の増加と共に増加した。
【０５９０】
さらなる短期研究を行い、５５１製剤の安定性に対するｐＨの影響を研究した。異なるｐＨで測定されたＤＳＣプロフィール（図１７および１８）は、ｐＨ７．５を例外として、Ｔｍ中のｐＨ依存性が変化しないことを示す。２０ｍＭヒスチジン緩衝剤中、０．２５ｍｇ／ｍＬタンパク質濃度で、ＤＳＣプロフィールを決定した。種々のｐＨ（ｐＨ４．０〜７．５）を有する製剤を伴う凝集研究により、ｐＨ６．５を除く全てのｐＨでマルチマー形成が示された。ｐＨ６．５製剤中のマルチマー形成は、５℃および４０℃の双方で阻止された。他の研究では、ｐＨ６．０もまた、凝集およびマルチマー形成に関してｐＨ６．５に類似した影響を示した。最も高いマルチマー形成率をｐＨ４および７．５で観測した。２０ｍＭヒスチジン中、２．４ｍｇ／ｍＬの５５１を含む製剤を用いて、抗体凝集のｐＨ依存性を研究した。これにこのように基づいて、次の一連の研究のために、さらなる評価についてｐＨ６．０およびｐＨ６．５を考慮した。
【０５９１】
１０ｍｇ／ｍＬの５５１抗体を含む７つの製剤を５℃、２５℃、および４０℃の安定性研究に供した：
製剤１．１０ｍＭヒスチジン、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．０
製剤２．１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、ｐＨ６．０
製剤３．１０ｍＭヒスチジン、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、２％トレハロース、ｐＨ６．０
製剤４．１０ｍＭヒスチジン、９％トレハロース、ｐＨ６．０
製剤５．１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、ｐＨ６．５
製剤６．１０ｍＭヒスチジン、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、９％トレハロース、ｐＨ６．０
製剤７．１０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ  ＬｙｓＨＣｌ、４％トレハロース、ｐＨ６．０
ＳＥＣを用いて、モノマー、マルチマー、および総凝集体濃度を経時的に追跡した。結果の例を図１９〜２１に示す。全ての製剤は、類似した安定性を示した。製剤４および５において、２つの最も高いモノマー喪失率を観察した。
【０５９２】
１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、ｐＨ６．０、および１０ｍｇ／ｍＬまたは５０ｍｇ／ｍＬの５５１抗体を含む製剤を、５℃、２５℃、および４０℃の安定性研究に供した。ＳＥＣを用いて凝集および断片化を追跡した。結果を図２２〜２４に示す。製剤中の凝集および断片化を要約した表を図２５に提示する。
【０５９３】
１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、ｐＨ６．０、および１０ｍｇ／ｍＬの５５１抗体を含む製剤を、複数周期の冷凍−解凍を用いて純粋なストレスに供した。１．７ｍＬの製剤で満たしたＮｕｎｃの２．０ｍＬ  Ｃｒｙｏバイアルをストレス研究に使用した。試料を５回の冷凍−解凍周期に供した（−８０℃〜２５℃、各周期は、２時間の冷凍、続いて２時間の室温を含む）。目視検査、ＳＥＣ、ならびに２８０ｎｍおよび３４０ｎｍの吸光度測定によって試料を分析した。出発物質は、幾つかのマルチマーを含み、研究の経過中、マルチマー濃度をモニターした。冷凍−解凍研究中、外観またはマルチマーレベルにおける変化は検出されなかった。結果を表３に要約する。
【０５９４】
【表３】
2012519712.tif 000010
【０５９５】
１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、ｐＨ６．０、および１０ｍｇ／ｍＬの５５１抗体を含む製剤を、振とうによる機械的ストレスに供した。また、この研究には、０．００２％、０．０１％、および０．０５％ポリソルベート８０を含む製剤も含まれた。１ｍＬ製剤を含有する４４３２／５０血清栓を備えた３ｍＬバイアルを機械的ストレス研究に使用した。速度設定１のボルテックス（ＶＷＲ  Ｍｉｎｉ  Ｖｏｒｔｅｘｅｒ９４５３００番）上で４時間振とうすることによって、試料を機械的ストレスに供した。目視検査、ＳＥＣ、ならびに２８０ｎｍおよび３４０ｎｍの吸光度測定によって試料を分析した。出発物質は、幾つかのマルチマーを含み、研究中、マルチマー濃度をモニターした。結果を図２６および２７に示す。研究の経過中、外観、ダイマーレベル、マルチマーレベル、または回収における変化は観測されなかった。５５１は、ポリソルベート８０の存在または非存在に関わりなく、バイアル中での振とう誘発性凝集の影響を受けにくい。
【０５９６】
１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、ｐＨ６．０、および１０ｍｇ／ｍＬの５５１抗体を含む製剤を、１０ｍＬテルモシリンジ中の振とうによる機械的ストレスに供した。また、研究には、０．００２％、０．０１％、および０．０５％ポリソルベート８０を含む製剤も含まれた。総プランジャ延長は７ｍＬで、７ｍＬの空隙ギャップを残し、１０ｍＬテルモシリンジを０．７ｍＬ製剤で満たした。試料をニューテーター上で２４時間穏やかに振とうした。１５分および６時間での乳光または微粒子化における任意の変化について、試料を視覚的に検査した。２４時間の振とう後、試料を目視検査、ＳＥＣ、２８０ｎｍでの吸光度測定によって分析した。製剤を、シリンジ中で、およびバイアル中に移した後の双方で目視検査に供した。結果を図２８に示す。ポリソルベート８０を含まない製剤は、６時間で視覚的に変化しなかったが、２４時間の終了時には乳白色となった。０．０１％未満のポリソルベート８０を含む試料中でマルチマー％の増加が見られた。０．０１％以上のポリソルベート８０を含む試料中でマルチマー％の変化は見られなかった。
【０５９７】
１０ｍｇ／ｍＬの５５１抗体、１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、ｐＨ６．０、および０％または０．０２％ポリソルベート８０を含む製剤を、２５℃および４０℃の安定性研究に供した。ＳＥＣを用いて凝集およびマルチマー形成を追跡した。結果を図２９および３０に示す。
【０５９８】
６．１．４製剤安定化開発
次の製剤緩衝剤（ＦＢ）中、異なる濃度の抗ＣＤ１９抗体、５５１（１０、２５、５０、および１００ｍｇ／ｍＬ）を有する製剤を調製した：０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０（ＰＳ−８０）を含むかまたは含まない、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、４％（ｗ／ｖ）トレハロース二水和物。上述の方法に従って製剤を調製し、推奨され保管温度で保管し、目視検査によって分析した。表４に示す通り、より高い濃度の抗ＣＤ１９抗体を有する製剤を含めて、ＰＳ−８０を組み込んだ製剤のいずれでも粒子を観察しなかった。しかしながら、ＰＳ−８０を含まない製剤で粒子を観察した。
【０５９９】
【表４】
2012519712.tif 000011
【０６００】
ＦｌｏｗＣＡＭ器具およびＨＩＡＣ液体パーティクルカウンターを用いて、粒子の数およびサイズをさらに分析して、粒子の性質を決定した。粒子についてのＣＡＭデータおよびＨＩＡＣデータの結果を、それぞれ表５および６に示す。
【０６０１】
【表５】
2012519712.tif 000012
【０６０２】
【表６】
2012519712.tif 000013
【０６０３】
１０ｍｇ／ｍＬの５５１抗体、１ＯｍＭヒスチジン、７５ｍＭ  ＮａＣｌ、４％トレハロース、ｐＨ６．０、および０％または０．０２％ポリソルベート８０の製剤をさらに分析に供した。冷凍−解凍周期に供した試料が、５回の冷凍／解凍後、純度の変化を示さなかったことを見出した。また、目視検査時に微粒子化は観察されなかった。試料をさらに、バイアル中での振とう誘発性凝集に供し、５５１は、ＰＳ−８０の存在または非存在に関わりなく、振とう誘発性凝集の影響を受けにくいことが示された。Ｔｅｒｒｕｍｏ  Ｓｙｒｉｎｇｅｓ中の振とうでは、ＡＵＣにおける変化は示されなかった一方で、ＰＳ−８０を含有しない対照試料は、２４時間の終了時には乳白色となった。ＰＳ−８０を含まない試料および０．０１％未満のＰＳ−８０の試料中で、マルチマーの百分率の増加が見られた一方で、０．０１％以上のＰＳ−８０を有する試料中では変化は見られなかった。
【０６０４】
６．１．５ろ過研究
ろ過研究を行い、ろ過が、他の品質特性に影響を及ぼすことなく、可視的でない粒子数を改善するか否かを査定した。ロットからの試料バイアルは、この研究に使用したｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、および４％（ｗ／ｖ）トレハロース二水和物中の１０ｍｇ／ｍＬ抗ＣＤ１９抗体、５５１の製剤中の粒子を示す。これらのバイアル中にＰＳ−８０（２％ストック）をスパイクして、０．０２％の最終濃度を得た。次いで０．２２μｍ  Ｓｙｒｉｎｇｅ  ＰＶＤＦまたはＰＥＦフィルターを用いて、ＰＳ−８０の添加前または後のいずれかに試料をろ過した。最初のＡ２８０タンパク質濃度、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）、目視検査、およびＨＩＡＣ試験を含む検定を行った（ろ過前および後）。
【０６０５】
限定された粒子サイズ範囲にわたって、微粒子懸濁液は、しばしば、より大きい粒子の数（Ｎ）が粒子サイズ（Ｌ）のべき関数として減少する指数型サイズ分布（Ｋａｖａｎａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０）を示す。
ｄＮ／ｄＬ＝Ａｘ（Ｌ）β
【０６０６】
かかる体系についての粒子数対サイズの両対数プロットは、関数の指数と等しい負勾配βを有する直線関係を示した（典型的に、液体懸濁液について１．６〜４．６、エアロゾルについて３．２〜４．０）。
【０６０７】
製剤のバイアルは、ろ過の前に約２．５の指数を有する指数型関数によって適切に説明される粒子サイズ分布を示した（表７および図３６）。ＰＶＤＦ膜を通すろ過は、１μｍ粒子について粒子数を２桁近く減少させる。より小さい粒子の優先的な除去は、指数型分布の指数を約１．６にまで減少させる。
【０６０８】
２ステップのろ過処理、続いてＰＳ−８０の添加は、ろ過のみによって達成される除去を上回って、２〜３の因数のさらなる粒子除去をもたらした（図３７および表７）。処理終了時の両対数プロットにおける勾配の、約２．５から約１．２へのさらなる減少（ろ過のみによる約１．６と比較して）は、界面活性剤、ＰＳ８０の添加が粒子をより小さいサイズの凝集体に分解し得ることを示唆した。
【０６０９】
種々の処理ステップの効果をよりよく決定するために、ろ過および界面活性剤添加ステップ後の製剤試料対象の粒子サイズ分布を特徴付けた（図３８および表７）。前に示す通り（図３６）、第１のろ過ステップは、粒子数（１μｍ）の約３０倍の減少、および勾配の約２．５から約１．５への減少をもたらした。ＰＳ−８０によるさらなる処理は、図３７に記載される結果に類似して、１μｍの粒子数の４倍の減少を示し、指数型分布をさらに平坦化した。最終的なろ過ステップは、より小さい粒子の数に有意に影響を及ぼさなかったが、より大きい可視的でない粒子の数を幾らか減少させ、したがって、試料中のこのサイズ範囲の粒子が少数であることを前提とすると、総粒子数に対する影響はわずかであろう。
【０６１０】
【表７】
2012519712.tif 000014
【０６１１】
最初のＡ２８０および純度結果が予想範囲内であることを見出した。また、ＨＩＡＣによる可視的でない粒子数のバイアル対バイアルの変動性を観察し、その結果を表７に示す。ＰＶＤＦフィルターが、１回のろ過でＰＥＳフィルターよりも効果的に機能する一方で（データ示されず）、可視的でない粒子数を減少させるための２回のろ過では、双方のフィルターが同等であることを見出した。を図３６（ＰＶＤＦろ過のみ）、３７（ＰＶＤＦろ過、次いでＰＳ８０添加）、および３８（ＰＶＤＦろ過＋ＰＳ８０添加＋ＰＶＤＦろ過）に示す通り、試料バイアル中の粒子は、指数的関係（直線両対数プロット）に従った。０．２２μｍ  ＰＶＤＦ膜を通すろ過は、１μｍの粒子数を約１００倍超減少させた。また、より小さい粒子は、特に０．０２％ＰＳ−８０の添加により、より容易に除去された。第１のＰＶＤＦろ過ステップが、粒子数（１μｍ）の約３０倍の減少を示した一方で、ＰＳ−８０添加は、粒子除去さらに約４倍明確に増加させた。さらに、最終的なＰＶＤＦろ過ステップは、より大きい可視的でないおよび可視的な粒子の数の減少のみを示した。０．２２μｍ  ＰＶＤＦフィルターを用いたろ過が、可視的でない粒子の数を減少させるという結論に達した。
【０６１２】
７．２．多発性骨髄腫治療における抗ＣＤ１９抗体の使用
多発性骨髄腫は、形質細胞の悪性腫瘍である。概して、多発性骨髄腫細胞ＣＤ１９−ＣＤ１３８＋が理解される。しかしながら、多発性骨髄腫細胞のごく一部がＣＤ１９＋ＣＤ１３８−表現型を有することが指摘されている。ＣＤ１９＋ＣＤ１３８−細胞が、その子孫が成熟してＣＤ１９−ＣＤ１３８＋細胞になる癌幹細胞として機能するという説が出ている。
【０６１３】
種々の多発性骨髄腫細胞のＣＤ１９およびＣＤ１３８発現プロフィールを、標準プロトコルを用いてフローサイトメトリーによって分析した。代表的な結果の試料を図３１に示す。Ｈ９２９およびＲＰＭＩ８２２６細胞株は、それぞれＣＤ１９＋ＣＤ１３８−およびＣＤ１９−ＣＤ１３８＋細胞のほぼ均一な集団を含む。他方でＡＮＢＬ６細胞株は、２つの特定の細胞集団を含み、その１つがＣＤ１９＋ＣＤ１３８−である一方で、もう１つはＣＤ１９−ＣＤ１３８＋である。２つの集団２つの集団の比率は、経時的に変化する。図に示す通り３２、ＣＤ１９＋ＣＤ１３８−の比率は、ＣＤ１９−ＣＤ１３８＋細胞と引き換えに経時的に増加した。
【０６１４】
ＡＮＢＬ６培養物からＣＤ１９＋ＣＤ１３８−およびＣＤ１９−ＣＤ１３８＋細胞を精製した。単離された細胞の表現型および純度を示すフローサイトメトリーデータを図３３に示す。培地を含有する０．４％寒天中に精製細胞をプレートし、培養物を適切な条件下で４〜５週間インキュベートした。図３３に示す通り、この検定でＣＤ１９＋ＣＤ１３８−細胞のみが、コロニーを形成することができた。
【０６１５】
抗ＣＤ１９−ａＦｕｃ抗体は、選別されていない多発性骨髄腫細胞培養物からＣＤ１９＋細胞を特異的に枯渇させる。インビトロ抗ＣＤ１９抗体媒介型ＡＤＣＣ検定において、ＡＮＢＬ６、ＫＡＳ、およびＭＤＡ８２２６細胞の選別されていない集団を標的として使用した。２００７年９月７日に出願された米国特許出願第１１／８５２，１０６に記載される通り、実質的にＡＤＣＣ検定を行った。選別されていない集団中のＣＤ１９＋ＣＤ１３８−およびＣＤ１９−ＣＤ１３８＋細胞の比率を、図３４の最下部の表に示す。１６Ｃ４−ａＦｕｃ抗ＣＤ１９抗体媒介型ＡＤＣＣは、ＣＤ１９＋細胞を集団から特異的に排除した。抗体濃度の関数としてのＣＤ１９＋細胞の減少％を図３４に示す。この検定の経過において、ＣＤ１３８＋細胞の総数は、減少しなかった。
【０６１６】
５５１抗体の、多発性骨髄腫細胞増殖を調節する能力を、スキッド（ｓｃｉｄ）マウスのインビボ皮下異種移植片モデルにおいて確認した。担癌マウス（１０コホート）を、３ｍｇ／ｋｇで５用量の５５１、抗ＣＤ２０、または対照抗体を用いて処置した。抗体治療を週２回投与した。標準測定によって腫瘍増殖を追跡した。ＡＮＢＬ−６細胞株を用いて得られた結果を図３５に提示する。５５１処置動物における腫瘍増殖は、対象動物のいずれにおけるそれよりも有意に低かった。５５１処置は、ＡＮＢＬ−６細胞による腫瘍形成の８０％の減少をもたらした。ＲＰＭＩ８２２６およびＨ９２９細胞を用いて類似した結果を得た。ＲＰＭＩ８２２６およびＨ９２９細胞による腫瘍形成は、５５１処置動物において、それぞれ７５％〜６７％減少した。また、抗ＣＤ２０抗体処置動物においても腫瘍形成は減少し、それぞれＲＰＭＩ８２２６、ＡＮＢＬ−６、およびＨ９２９細胞担持マウスにおいて、腫瘍サイズの４４％、２０％〜８３％の減少が見られた。
【０６１７】
当業者であれば、単なる通常の実験を用いて、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態との多くの等価物を認識し、または確認することができるであろう。かかる等価物は、次の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【０６１８】
種々の刊行物が本明細書に引用され、これらの刊行物の開示は、参照によりその全体が全目的で組み込まれる。加えて、２００７年９月７日に出願された米国特許出願第１１／８５２，１０６は、参照によりその全体が全目的でこれによって組み込まれる。 
【０６１９】
配列
配列番号２
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹ  ＦＮＰＹＮＤＧＴＤＹＹＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＡＹＭＡＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＴ  ＹＹＹＧＳＳＹＰＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号４
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配列番号６
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配列番号８
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配列番号１０
ＧＴＹＹＹＧＳＳＹＰＦＤＹ
配列番号１２
ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＮＧＫＴＹＬＮ
配列番号１４
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配列番号１６
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配列番号１８
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配列番号２２
ＳＳＷＭＮ
配列番号２４
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配列番号２６
ＳＧＦＩＴＴＶＬＤＦＤＹ
配列番号２８
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配列番号３０
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配列番号３２
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配列番号３４
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配列番号３６
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配列番号３８
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配列番号４０
ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ配列番号４２
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配列番号４４
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配列番号５２
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配列番号５４
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配列番号５６
ＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫ
配列番号５８
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配列番号６０
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配列番号６２
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配列番号６４
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配列番号６６
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配列番号６８
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配列番号７０
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配列番号７２
ＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫ
配列番号８２
ＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＨ
配列番号８３
ＭＧＤＮＤＩＨＦＡＦＬＳＴＧＶＨＳ
配列番号８４
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＫＣ
配列番号１０２
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配列番号１０３
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配列番号１０４−１５Ｄ１  ＶＨ領域のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＳＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＹＰＧＤＧＤＴＮＹＮＡＫＦＫＧＲＦＴＩ
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配列番号１０５
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配列番号１０６
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配列番号１０７
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配列番号１０８
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配列番号１０９
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配列番号１１０
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配列番号１１１
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配列番号１１２
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配列番号１１３
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配列番号１１４
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配列番号１１６
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配列番号１１９
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配列番号１２０
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配列番号１２７
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配列番号１９１
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配列番号１９２
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配列番号１９３
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配列番号１９５
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ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＡＱＳＫＲＶＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１９６
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配列番号１９７
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配列番号１９８
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ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＫＥＶＰＩＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１９９
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＤＴＦＧＩＳＦＩＮＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＨＥＡＳＮＰＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ  ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＫＥＶＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２００
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＤＴＦＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＨＥＡＳＮＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ
ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＡＱＴＫＥＶＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２０１
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＤＴＦＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＨＥＡＳＮＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ
ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＡＱＴＫＥＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２０２
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＩＴＦＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＨＥＡＳＮＴＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ
ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＡＱＳＫＲＶＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２０３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＤＴＦＧＩＳＦＲＮＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＨＥＡＳＮＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ
ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＫＥＶＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２０４
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＤＴＦＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬ１ＨＥＡＳＮＰＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ
ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＴＫＲＶＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２０５
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＩＨＦＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＨＥＡＳＮＲＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ
ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＡＱＳＫＥＶＰＩＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２０６
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＤＴＦＧＬＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＨＥＡＳＮＰＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ
ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＫＥＶＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２０７
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＩＴＦＧＩＳＦＩＮＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＨＥＡＳＮＰＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ
ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＡＱＴＫＲＶＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２０８
ＳＶＷＭＮ
配列番号２０９
ＳＴＷＭＮ
配列番号２１０
ＲＩＹＬＧＤＧＤＴＮＹＮＶＫＦＫＧ
配列番号２１１
ＲＡＳＥＳＶＤＨＦＧＩＳＦＩＮ
配列番号２１２
ＲＡＳＥＳＶＩＴＦＧＩＳＦＭＮ
配列番号２１３
ＲＡＳＥＳＶＤＴＦＧＩＳＦＩＮ
配列番号２１４
ＲＡＳＥＳＶＤＴＦＧＩＳＦＲＮ
配列番号２１５
ＲＡＳＥＳＶＩＨＦＧＩＳＦＭＮ
配列番号２１６
ＲＡＳＥＳＶＤＴＦＧＬＳＦＭＮ
配列番号２１７
ＲＡＳＥＳＶＩＴＦＧＩＳＦＩＮ
配列番号２１８
ＥＡＳＮＰＹＳ
配列番号２１９
ＥＡＳＮＴＹＳ
配列番号２２０
ＥＡＳＮＰＧＳ
配列番号２２１
ＥＡＳＮＲＧＳ
配列番号２２２
ＡＱＳＫＥＶＰＩＴ
配列番号２２３
ＡＱＳＫＥＶＰＦＴ
配列番号２２４
ＡＱＳＫＲＶＰＦＴ
配列番号２２５
ＡＱＴＫＲＶＰＦＴ
配列番号２２６
ＱＱＳＫＥＶＰＩＴ
配列番号２２７
ＡＱＴＫＥＶＰＦＴ
配列番号２２８
ＡＱＴＫＥＶＰＮＴ
配列番号２２９
ＱＱＴＫＲＶＰＦＴ
配列番号２３０
Ｓ（Ｓ／Ｔ／Ｖ）ＷＭＮ
配列番号２３１
ＲＩＹ（Ｐ／Ｌ）ＧＤＧＤＴＮＹ（Ｎ／Ｙ／Ｄ／Ｌ）（Ｇ／Ａ／Ｖ）ＫＦＫＧ
配列番号２３２
ＳＧＦＩＴＴＶ（Ｌ／Ｒ／Ｙ／Ｈ）ＤＦＤＹ
配列番号２３３
ＲＡＳＥＳＶ（Ｄ／Ｉ）（Ｔ／Ｈ）ＦＧ（Ｉ／Ｌ）ＳＦ（Ｍ／Ｉ／Ｒ）Ｎ
配列番号２３４
（Ａ／Ｅ）ＡＳＮ（Ｑ／Ｐ／Ｔ）（Ｇ／Ｙ）Ｓ
配列番号２３５
（Ｑ／Ａ）Ｑ（Ｓ／Ｔ）Ｋ（Ｅ／Ｒ）ＶＰ（Ｆ／Ｉ／Ｎ）Ｔ
配列番号２３６
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＴＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＹＰＧＤＧＤＴＮＹＮＶＫＦＫＧＲＦＴＩ
ＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＦＩＴＴＶＲＤＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２３７
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＳＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＹＰＧＤＧＤＴＮＹＮＧＫＦＫＧＲＦＴＩ
ＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＦＩＴＴＶＬＤＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２３８
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＤＴＦＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＨＡＡＳＮＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ
ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＫＥＶＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
【図１】
2012519712.tif 000015
【図２】
2012519712.tif 000016
【図３】
2012519712.tif 000017
【図４】
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【図５】
2012519712.tif 000019
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2012519712.tif 000023
【図１０】
2012519712.tif 000024
【図１１】
2012519712.tif 000025
【図１２】
2012519712.tif 000026
【図１３】
2012519712.tif 000027
【図１４】
2012519712.tif 000028
【図１５】
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【図１６】
2012519712.tif 000030
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
2012519712.tif 000040
【図２７】
2012519712.tif 000041
【図２８】
2012519712.tif 000042
【図２９】
2012519712.tif 000043
【図３０】
2012519712.tif 000044
【図３１】
2012519712.tif 000045
【図３２】
2012519712.tif 000046
【図３３】
2012519712.tif 000047
【図３４】
2012519712.tif 000048
【図３５】
2012519712.tif 000049
【図３６】
2012519712.tif 000050
【図３７】
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【図３８】
2012519712.tif 000052
【配列表】
2012519712000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成23年11月7日(2011.11.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
2012519712.tif 000058
2012519712.tif 000059
2012519712.tif 000060
2012519712.tif 000061