(57)【要約】  本発明は、式(Ｉ)2012531454.tif 000157〔式中、置換基は明細書に定義した通りである。〕の化合物およびその塩、組成物、および該化合物のホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害により改善する疾患の処置における使用に関する。
2012531454.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(Ｉ)
【化１】
2012531454.tif 000156
〔式中、
Ａは記号＊で示す位置で分子の残りに縮合している非置換または置換アリール環または非置換または置換ヘテロ環式環であり；
Ｘ−Ｙは(ＣＨ２)ｒまたはＯ(ＣＨ２)ｔまたは(ＣＨ２)ｔＯであり、ここで、
ｒは１、２または３であり；
ｔは１または２であり；
ｎは０、１または２であり；
ｑは０、１、２、３または４であり；
Ｒ１は、独立して、
ハロ；
ヒドロキシ；
非置換または置換アリール；
非置換または置換アミノ；
非置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
１回以上ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、非置換または置換アミノ、アリールまたはヘテロシクリル(ここで、アリールはハロで一置換または多置換されていてよい)により置換されているＣ１−Ｃ７−アルキル；または
２個のアルカンジイル置換基が一体となってアルカンジイルを形成し、場合よりヒドロキシまたはハロで置換されていてよい環基を形成する。〕
の化合物またはその塩。
【請求項２】
環Ａが、独立して
非置換または置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
非置換または置換アミノ；
非置換または置換Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキル
から選択される１個、２個または３個のＲ２基で置換されている、
請求項１に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３】
Ｒ２が
非置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
ジ(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ；
Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキルまたはハロで１回以上置換されているＣ１−Ｃ７−アルキル；
非置換Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキル；
ハロ、(ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル)またはＣ１−Ｃ７−アルキルで１回以上置換されているＣ１−Ｃ７−シクロアルキルから選択される、
請求項１または２に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４】
環ＡがＮ、ＳまたはＯから選択される１個または２個のヘテロ原子を含む非置換または置換５員または６員環であり、ここで、少なくとも１個のヘテロ原子がＮである、
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物、またはその塩。
【請求項５】
環Ａが非置換または置換ピリジン環、非置換または置換ピリミジン環または非置換または置換チアゾール環から選択される、
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物、またはその塩。
【請求項６】
Ｘ−Ｙが(ＣＨ２)ｒまたはＯ(ＣＨ２)ｔ(式中、ｒは２であり、ｔは１である)である、
請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、独立して、
ハロ；
ヒドロキシ；
非置換または置換フェニル；
ジ(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ；
非置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、ジ(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ、ジ−(過重水素化Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ、フェニル、モルホリニル、アセチルアミノ、またはＮ−(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)−Ｎ−(フェニルＣ１−Ｃ７−アルキル)アミノ(ここで、各フェニルはハロで一置換または多置換されていてよい)で１回以上置換されているＣ１−Ｃ７−アルキル
である、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
ｎが１であり、ｑが１である、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
以下のものから選択される、請求項１に記載の化合物：
(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｒ)−２−ベンジル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｒ)−２−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
ｄ６−(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
(Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
(Ｒ)−２−{[(３−フルオロ−ベンジル)−メチル−アミノ]−メチル}−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
５−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｓ)−４−フルオロ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１,２−ジカルボン酸１−アミド２−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１,２−ジカルボン酸１−アミド２−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｓ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
５−フェニル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；(Ｓ)−アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｓ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｒ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[７−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド}；
(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−シクロプロピルメチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１,２−ジカルボン酸１−アミド２−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−(アセチルアミノ−メチル)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−メチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル]−アミド}；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル]−アミド}；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル]−アミド}；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[７−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド}；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[７−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド}；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および場合によりさらなる治療剤を薬学的に許容される担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項１１】
脂質および／またはタンパク質キナーゼ依存性疾患の処置に使用するための、請求項１〜９のいずれかに記載の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
脂質および／またはタンパク質キナーゼ依存性疾患の処置用医薬組成物の製造のための、請求項１〜９のいずれかに記載の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１３】
脂質および／またはタンパク質キナーゼの阻害に応答する疾患の処置方法であって、予防有効量または治療有効量の請求項１〜９のいずれかに記載の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、かかる処置を必要とする温血動物に投与することを含む、方法。
【請求項１４】
疾患がクラスＩ  ＰＩ３Ｋに依存する脂質キナーゼ依存性疾患である、請求項１１に記載の使用のための化合物、または請求項１２に記載の化合物の使用、または請求項１３に記載の処置方法。
【請求項１５】
疾患がＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３Ｋベータ、ＰＩ３Ｋデルタ、ＰＩ３Ｋガンマからなる群から選択されるクラスＩ  ＰＩ３Ｋに依存する脂質キナーゼ依存性疾患である、請求項１１に記載の使用のための化合物、または請求項１２に記載の化合物の使用、または請求項１３に記載の処置方法。
【請求項１６】
疾患が増殖性疾患；良性または悪性腫瘍；次のものから選択される癌；肉腫；肺；気管支；前立腺；乳房(孤発性乳癌およびカウデン病罹患者を含む)；膵臓；消化器癌；結腸；直腸；結腸癌腫；結腸直腸腺腫；甲状腺；肝臓；肝内胆管；肝細胞；副腎；胃；胃の；神経膠腫；神経膠芽腫；子宮内膜；黒色腫；腎臓；腎盂；膀胱；子宮体；子宮頸；膣；卵巣；多発性骨髄腫；食道；白血病；急性骨髄性白血病；慢性骨髄性白血病；リンパ性白血病；骨髄性白血病；脳；脳の癌腫；口腔および咽頭；喉頭；小腸；非ホジキンリンパ腫；黒色腫；絨毛結腸腺腫；新生物；上皮特性の新生物；リンパ腫；乳癌腫；基底細胞癌腫；扁平上皮細胞癌腫；光線性角化症；固形腫瘍を含む腫瘍疾患；頭頚部の腫瘍；真性多血症；本態性血小板血症；および骨髄異型を伴う骨髄線維症である、請求項１１に記載の使用のための化合物、または請求項１２に記載の化合物の使用、または請求項１３に記載の処置方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ホスファチジルイノシトール(ＰＩ)３−キナーゼ阻害剤化合物としての置換２−カルボキサミドシクロアミノウレア類、その薬学的に許容される塩、そのプロドラッグおよびその製造方法に関する。本発明はまた、これらの化合物の、単独または少なくとも１種のさらなる治療剤と組み合わせた、および場合により薬学的に許容される担体と組み合わせた組成物にも関する。本発明はなおさらに、これらの化合物の、単独でまたは少なくとも１種のさらなる治療剤と組み合わせた、多くの疾患、特に、増殖因子、受容体チロシンキナーゼ類、タンパク質セリン／ヘロインキナーゼ類、Ｇタンパク質共役受容体およびリン脂質キナーゼ類およびホスファターゼ類の１種以上の異常活性が仲介する疾患の予防または処置における、使用方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ類(ＰＩ３Ｋ)は、イノシトール脂質のＤ−３'位へのホスフェートの移動を触媒し、ホスホイノシトール−３−ホスフェート(ＰＩＰ)、ホスホイノシトール−３,４−ジホスフェート(ＰＩＰ２)およびホスホイノシトール−３,４,５−トリホスフェート(ＰＩＰ３)を産生する脂質キナーゼ類のファミリーを含み、これが、プレクストリン相同性、ＦＹＶＥ、Ｐｈｏｘおよび他のリン脂質結合ドメインを含むタンパク質を、種々のシグナリング複合体に、しばしば原形質膜でドッキングさせることにより、シグナリングカスケードの二次メッセンジャーとして働く((Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70: 535 (2001); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17: 615 (2001))。クラス１ＰＩ３Ｋの中で、クラス１Ａ  ＰＩ３Ｋはｐ８５α、ｐ５５α、ｐ５０α、ｐ８５βまたはｐ５５γであり得る調節サブユニットと構成的に関連している触媒的ｐ１１０サブユニット(α、β、δアイソフォーム)から成るヘテロ二量体である。クラス１Ｂサブクラスは一つのファミリーメンバーである、ｐ１０１またはｐ８４である２個の調節サブユニットの一つと関連している触媒的ｐ１１０γサブユニットからなるヘテロ二量体を有する(Fruman et al., Annu Rev. Biochem. 67: 481 (1998); Suire et al., Curr. Biol. 15: 566 (2005))。ｐ８５／５５／５０サブユニットのモジュラードメインは、クラス１Ａ  ＰＩ３Ｋの活性化および局在化をもたらす、活性化受容体および細胞質チロシンキナーゼ類上の特異的配列状況中のホスホチロシン残基と結合するＳｒｃ相同性(ＳＨ２)ドメインを含む。クラス１Ｂ  ＰＩ３Ｋはペプチドおよび非ペプチドリガンドの多様なレパートリーと結合するＧタンパク質−共役受容体により直接活性化される(Stephens et al., Cell 89: 105 (1997)); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17: 615-675 (2001))。その結果、クラスＩ  ＰＩ３Ｋの得られたリン脂質産物は上流受容体と、増殖、生存、走化性、細胞輸送、運動性、代謝、炎症性およびアレルギー性応答、転写および翻訳を含む下流細胞活動を関連させる(Cantley et al., Cell 64: 281 (1991); Escobedo and Williams, Nature 335: 85 (1988); Fantl et al., Cell 69: 413 (1992))。
【０００３】
多くの場合、ＰＩＰ２およびＰＩＰ３は、ウイルス癌遺伝子ｖ−Ａｋｔのヒトホモログの産物であるＡｋｔを原形質膜に集め、そこで、それは増殖および生存に重要な多くの細胞内シグナリング経路の接点として働く(Fantl et al., Cell 69: 413-423(1992); Bader et al., Nature Rev. Cancer 5: 921 (2005); Vivanco and Sawyer, Nature Rev. Cancer 2: 489 (2002))。ＰＩ３Ｋの異常制御は、しばしばＡｋｔ活性化を介して生存を高め、ヒト癌における最も多い事象の一つであり、多くのレベルで起こることが示されている。ホスホイノシチド類をイノシトール環の３'位で脱リン酸し、そうすることによりＰＩ３Ｋ活性に拮抗する腫瘍サプレッサー遺伝子ＰＴＥＮは、種々の腫瘍で機能が消失している。他の腫瘍で、ｐ１１０αアイソフォーム、ＰＩＫ３ＣＡ、およびＡｋｔのための遺伝子は増幅され、それらの遺伝子産物の増加したタンパク質発現が数種のヒト癌において証明されている。さらに、ｐ８５−ｐ１１０複合体を上方制御するように働くｐ８５αの変異および転座がヒト癌において報告されている。最後に、下流シグナリング経路を活性化するＰＩＫ３ＣＡにおける体細胞性ミスセンス変異が広範なヒト癌において相当な頻度で報告されている(Kang at el., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 802 (2005); Samuels et al., Science 304: 554 (2004); Samuels et al., Cancer Cell 7: 561-573 (2005))。これらの観察は、ホスホイノシトール−３キナーゼおよびこのシグナリング経路の上流および下流要素の脱制御が、ヒト癌および増殖性疾患と関連する最も一般的な脱制御の一つであることを示す(Parsons et al., Nature 436: 792 (2005); Hennessey at el., Nature Rev. Drug Disc. 4: 988-1004 (2005))。
【０００４】
上記の点から、ＰＩ３Ｋの阻害剤は、増殖性疾患および他の障害の処置において特定の価値がある。ＰＩ３Ｋαアイソフォームに対する選択性は望ましく、さらに望ましい特性は薬物動態学的特性および／または化学的安定性改善である。
【０００５】
ＷＯ２００４／０９６７９７はある種のチアゾール誘導体をＰＩ３キナーゼ阻害剤として、および医薬としてのそれらの使用を開示する。
ＷＯ２００５／０２１５１９もまたある種のチアゾール誘導体をＰＩ３キナーゼ阻害剤として、および医薬としてのそれらの使用を開示する。
【０００６】
本発明により、以下に示す式Ｉの２−カルボキサミドシクロアミノウレア類が有利な薬理学的特性を有し、例えば、ＰＩ３キナーゼ類(ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ)を阻害することが判明した。特に、好ましくは、これらの化合物は、生化学および／または細胞アッセイにおいて、ＰＩ３Ｋアルファに対するする選択性を、ベータおよび／またはデルタおよび／またはガンマサブタイプに比して有する。式(Ｉ)の化合物に好ましくは望まれるさらなる特性は、安定性改善、例えば固体形態でのおよび／または緩衝液中での化学的安定性の改善を含む。それ故、式(Ｉ)の化合物は、例えば、ＰＩ３キナーゼ(特にＰＩ３Ｋアルファ、例えば、ＰＩＫ３ＣＡの体細胞突然変異またはＰＴＥＮの生殖系列変異もしくは体細胞突然変異を示すもの)に依存する疾患、特に腫瘍疾患および白血病のような増殖性疾患の処置に使用される。
【０００７】
第一の面において、本発明は式(Ｉ)
【化１】
2012531454.tif 000003
〔式中、
Ａは、記号＊で示す位置で分子の残りに縮合している非置換または置換アリール環または非置換または置換ヘテロ環式環であり；
Ｘ−Ｙは(ＣＨ２)ｒまたはＯ(ＣＨ２)ｔまたは(ＣＨ２)ｔＯであり、ここで、
ｒは１、２または３であり；
ｔは１または２であり；
ｎは０、１または２であり；
ｑは０、１、２、３または４であり；
Ｒ１は、独立して、
ハロ；
ヒドロキシ；
非置換または置換アリール；
非置換または置換アミノ；
非置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
１回以上ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、非置換または置換アミノ、アリールまたはヘテロシクリル(ここで、アリールはハロで一置換または多置換されていてよい)により置換されているＣ１−Ｃ７−アルキル；または
２個のアルカンジイル置換基が一体となってアルカンジイルを形成し、場合よりヒドロキシまたはハロで置換されていてよい環基を形成する。〕
の化合物、またはその塩、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを提供する。
【０００８】
本発明は、以下の用語集および最後の実施例を含む、以下の記載を参照してより完全に認識できる。ここで使用する用語“含む”、“含み”および“含んで”は、その開放的な、非限定的意味で使用する。
【０００９】
ここに記載するいずれかの式は、構造式により示される構造を有する化合物ならびにある種の変形または形態を表すことを意図する。特に、ここに記載するいずれかの式の化合物は不斉中心を有する可能性があり、それ故、立体異性形態、例えば異なるエナンチオマー形態で存在し得る。少なくとも１個の不斉炭素原子が式(Ｉ)の化合物に存在するならば、かかる化合物は光学活性形態または光学異性体混合物形態、例えばラセミ混合物形態で存在し得る。それ故に不斉炭素原子は(Ｒ)−、(Ｓ)−または(Ｒ,Ｓ)−立体配置、好ましくは(Ｒ)−または(Ｓ)−立体配置で存在し得る。全ての光学異性体およびそれらの混合物は、ラセミ混合物を含み、本発明の一部である。それ故に、ここに記載するいずれかの式はラセミ体、１個以上のエナンチオマー形態、１個以上のジアステレオマー形態、１個以上のアトロプ異性体形態、およびそれらの混合物を表すことを意図する。さらに、ある種の構造は、幾何異性体(例えばｃｉｓおよびｔｒａｎｓ異性体)、互変異性体、またはアトロプ異性体として存在し得る。例えば、二重結合または環上の置換基はｃｉｓ−(＝Ｚ−)またはｔｒａｎｓ−(＝Ｅ−)形態で存在し得る。本発明の化合物は、それ故に異性体混合物として、または好ましくは純粋異性体、好ましくはエナンチオマー純粋ジアステレオマーまたは純粋エナンチオマーとして存在し得る。
【００１０】
ここに記載するいずれかの式は、かかる化合物の水和物、溶媒和物、および多形、およびそれらの混合物を表すことを意図する。
【００１１】
ここに記載するいずれかの式はまた本化合物の非標識形態ならびに同位体標識形態を表すことも意図する。同位体標識化合物は、１個以上の原子が選択した原子質量または質量数を有する原子で置換されている以外、ここに記載した式により表される構造を有する。本発明の化合物に取り込み得る同位体の例は、水素の同位体、炭素の同位体、窒素の同位体、酸素の同位体、リンの同位体、フッ素の同位体、および塩素の同位体、例えばそれぞれ２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、３１Ｐ、３２Ｐ、１８Ｆ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２５Ｉを含む。種々の同位体標識本発明の化合物、例えば放射性同位体、例えば３Ｈ、１３Ｃ、および１４Ｃが取り込まれているものがある。かかる同位体標識化合物は薬剤または基質組織分布アッセイを含む代謝試験(好ましくは１４Ｃを用いる)、反応動態試験(例えば２Ｈまたは３Ｈを用いる)、検出または造影法、例えば陽電子放出断層撮影(ＰＥＴ)または単光子放射線コンピュータ断層撮影(ＳＰＥＣＴ)に、または患者の放射活性処置に有用である。特に、１８Ｆまたは標識化合物は、特にＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ試験に好ましいことがある。さらに、重い同位体、例えば重水素(すなわち、２Ｈ)での置換は、大きな代謝安定性に基づくある種の治療利益、例えばインビボ半減期の延長または必要投与量の減少をもたらし得る。同位体標識した本発明の化合物およびそのプロドラッグは、一般に、下に記載するスキームまたは実施例および製造に開示する方法を実施することにより、非同位体標識反応材を容易に入手可能な同位体標識反応材に置き換えることにより製造できる。
【００１２】
さらに重い同位体、特に重水素(すなわち、２ＨまたはＤ)での置換は、大きな代謝安定性に基づくある種の治療利益、例えばインビボ半減期の延長または必要投与量の減少または治療指数改善をもたらし得る。この状況での重水素は、式(Ｉ)の化合物の置換基と見なすと解釈される。かかる重い同位体、特に重水素の濃度は、同位体富化指数により定義され得る。ここで使用する用語“同位体富化指数”は、特定の同位体についての同位体量対天然での量の比を意味する。本発明の化合物における置換基が重水素と記載されているならば、かかる化合物は各指定の重水素原子について少なくとも３５００(各指定の重水素原子で５２.５％重水素取り込み)、少なくとも４０００(６０％重水素取り込み)、少なくとも４５００(６７.５％重水素取り込み)、少なくとも５０００(７５％重水素取り込み)、少なくとも５５００(８２.５％重水素取り込み)、少なくとも６０００(９０％重水素取り込み)、少なくとも６３３３.３(９５％重水素取り込み)、少なくとも６４６６.７(９７％重水素取り込み)、少なくとも６６００(９９％重水素取り込み)、または少なくとも６６３３.３(９９.５％重水素取り込み)の同位体富化指数を有する。本発明の化合物において、特定の同位体と特定されていない全ての原子は、その原子の任意の安定な同位体を表すことを意味する。特にことわらない限り、ある位置が特に“Ｈ”または“水素”と特定されているとき、その位置は、その天然量の同位体組成で水素を有すると解釈される。したがって、本発明の化合物において、重水素(Ｄ)と特に指定されている任意の原子は、例えば、上記範囲の重水素を表すことを意味する。
【００１３】
ここに記載するいずれかの式について説明するとき、特定の可変基についての可能な化学種の一覧からの特定の基の選択は、他の場所に存在する該可変基の基を規定することを意図しない。言い換えると、可変基が１回以上記載されているとき、特定した一覧からの化学種の選択は、式におけるどこかの同じ可変基の化学種の選択とは無関係である(上および下で態様における好ましいとして特徴付けられる１個所から最大全ての一般的表現をより具体的な定義に置き換え、それにより本発明のより好ましい態様をそれぞれもたらし得る)。
【００１４】
複数形態(例えば化合物群、塩類、医薬製剤群、疾患群など)が使用されているとき、これは単数を含む(例えば１個の化合物、１個の塩、１個の医薬製剤、１種の疾患など)。“化合物”は(例えば医薬製剤において)１個以上の式(Ｉ)の化合物(またはその塩)が存在することを除外しない。
【００１５】
塩類は、好ましくは式(Ｉ)の化合物が塩形成基を有する場合、その薬学的に許容される塩類である。塩類の形成に必要な酸／塩基は一般に当分野で既知である。
【００１６】
以下の一般的定義は、特にことわらない限り、本明細書において適用すべきである：
ハロゲン(またはハロ)はフッ素、臭素、塩素またはヨウ素、特にフッ素、塩素を意味する。ハロゲン置換された基および部分、例えばハロゲンで置換されたアルキル(ハロゲンアルキル)は、一、多、または過ハロゲン化されていてよい。
【００１７】
ヘテロ原子は炭素および水素以外の原子、好ましくは窒素(Ｎ)、酸素(Ｏ)または硫黄(Ｓ)、特に窒素である
【００１８】
“アルキル”は、直鎖または分枝鎖アルキル基を意味し、Ｃ１−７アルキルおよびより好ましくはＣ１−４アルキルを含む。かかるアルキル基は、例えば、メチル、エチル、ｎ−またはイソ−プロピル、ｎ−、イソ−、ｓｅｃ−またはｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチルを含み、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチルおよびイソ−ブチルが特に好ましい。アルキルは置換されていなくても置換されていてもよい。例示的置換基はヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン(特にフルオロ)、アミノおよびジ−置換アミノ、モノ−またはジ−アルキル置換アミノ、アセチルアミノ、モルホリニル、アリールを含むが、これらに限定されない。置換アルキルの例はトリフルオロメチルである。シクロアルキルもアルキルの置換基であり得る。かかる場合の例は、部分(アルキル)−シクロアルキル、例えば(アルキル)−シクロプロピルまたは(アルキル)−シクロブチル、例えばメチル−シクロプロピルまたはメチル−シクロブチルである。(アルキル)−シクロアルキル部分のより具体的な例は、ジェミナルタイプの置換パターン、例えば１−アルキルシクロアルキル、例えば１−メチルシクロプロピルを含む。アルキルの置換基としてのシクロアルキルのさらなる例はアルカンジイル−シクロアルキル、例えばアルカンジイル−シクロプロピル、例えば−ＣＨ２−シクロプロピルを含む。Ｃ１−Ｃ７−アルキルは、１〜７個(両端を含む)の炭素原子のアルキル、好ましくは１〜４個(両端を含む)の炭素原子のアルキル(Ｃ１−Ｃ４−アルキル)であり、直鎖または分枝鎖である；好ましくは、低級アルキルはブチル、例えばｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、プロピル、例えばｎ−プロピルまたはイソプロピル、エチルまたは好ましくはメチルである。
【００１９】
“アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルコキシ−カルボニルアルキル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシル、アルキルアミノ、ハロゲンアルキル”のような他の基の各アルキル部分は、上に記載した“アルキル”の定義に記載したものと同じ意味を有するべきである。
【００２０】
“Ｃ３−７−シクロアルキル”は、炭素環あたり３〜７環原子を有する、飽和または部分的に飽和の、単環式、縮合多環式、またはスピロ多環式炭素環である。シクロアルキル基の説明的例は以下の部分を含む：シクロプロピル、シクロブチル、シクロ(cycl)ペンチルおよびシクロ(cylclo)ヘキシル。Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキルは置換されていなくても置換されていてもよい；例示的置換基はアルキルの定義に提供されている。Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキルはまた他の基、例えばアルキル基の置換基であり得る。
【００２１】
“アリール”は、好ましくは、１６個を超えない炭素原子、特に１０個を超えない、例えば６〜１６個、好ましくは６〜１０個の環炭素原子を有する不飽和炭素環式芳香環系であり、好ましくは単または二環式であり、非置換または置換されている。例えば、アリールは非置換または置換フェニルである。
【００２２】
“ヘテロシクリル”は、結合環において不飽和(特に最大に不飽和、例えば、環内に可能な最大数の共役二重結合を担持する)、例えばヘテロアリール)、飽和または部分的飽和であり、好ましくは単環式または本発明の広い面において二環式環であり；３−１６個の環原子、より好ましくは４−１０個の環原子を有し、少なくとも式(Ｉ)の分子の基に結合する環において１個以上、好ましくは１−４個の環原子、特に１個または２個の環原子が窒素、酸素および硫黄からなる群から選択されるヘテロ原子であり；結合環は、好ましくは４−１２個の環原子、特に４−７個の環原子、例えば６−１０個の環原子、特にヘテロアリールについて、例えば５個、６個、９個または１０個の環原子を有する、ヘテロ環基を意味する。ヘテロシクリルは、非置換でも、アルキルからなる群からまたは上に置換アルキルについて定義した置換基からおよび／または以下の置換基：オキソ(＝Ｏ)、チオカルボニル(＝Ｓ)、イミノ(＝ＮＨ)、イミノ−低級アルキルからある群から独立して選択される１個以上、特に１〜３個の置換基で置換されていてよく、窒素含有ヘテロアリール類について、そのＮ−オキシド類を含む。
【００２３】
“処置”は予防(防止)および治療的処置ならびに疾患または障害の進行遅延を含む。
【００２４】
“ＰＩ３キナーゼ仲介疾患”(特にＰＩ３Ｋアルファ仲介疾患)は、特に有益な方法(例えば１種以上の症状の改善、疾患発症治験、築環の一時的または完全な治癒)でＰＩ３キナーゼ阻害、特にＰＩ３Ｋアルファ阻害に応答するこのような障害である(ここで、処置すべき疾患は、ＰＩＫ３ＣＡの体細胞突然変異またはＰＴＥＮの生殖系列変異または体細胞突然変異を示すものを含み得る)。処置すべき疾患は、特に増殖性疾患、例えば固形腫瘍、白血病、神経膠芽腫を含む腫瘍疾患を含む(乳癌および前立腺癌を特記し得る)。
【００２５】
“塩”(これは、“またはその塩類”または“またはその塩”により意味されるもの)は、単独で、または式Ｉの遊離化合物との混合物で存在してよく、好ましくは薬学的に許容される塩である。式(Ｉ)の化合物中の塩形成基は、塩基性または酸性特性を有する基またはラジカルである。少なくとも１個の塩基性基または少なくとも１個の塩基性ラジカル、例えば、アミノ；ペプチド結合を形成しない二級アミノ基またはピリジル基は、酸付加塩を、例えば、無機酸類、例えば塩酸、硫酸またはリン酸；または適当な有機カルボン酸またはスルホン酸、例えば、脂肪族モノ−またはジ−カルボン酸類、例えばトリフルオロ酢酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、ヒドロキシマレイン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸またはシュウ酸；またはアミノ酸類、例えばアルギニンまたはリシン；芳香族性カルボン酸類、例えば安息香酸；２−フェノキシ−安息香酸；２−アセトキシ−安息香酸；サリチル酸；４−アミノサリチル酸；芳香族性−脂肪族カルボン酸類、例えばマンデル酸または桂皮酸；ヘテロ芳香族性カルボン酸類、例えばニコチン酸またはイソニコチン酸；脂肪族スルホン酸類、例えばメタン−、エタン−または２−ヒドロキシエタンスルホン酸；または芳香族性スルホン酸類、例えば、ベンゼン−、ｐ−トルエン−またはナフタレン−２−スルホン酸と形成し得る。数個の塩基性基が存在するとき、単または多酸付加塩が形成され得る。
【００２６】
酸性基、カルボキシ基またはフェノール性ヒドロキシ基を有する式(Ｉ)の化合物は、金属塩またはアンモニウム塩、例えばアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩またはカルシウム塩；またはアンモニアまたは適当な有機アミン類、例えば３級モノアミン類、例えば、トリエチルアミンまたはトリ(２−ヒドロキシエチル)−アミン、またはヘテロ環式塩基、例えば、Ｎ−エチル−ピペリジンまたはＮ,Ｎ'−ジメチルピペラジンとのアンモニウム塩を形成し得る。塩の混合物が可能である。
【００２７】
酸性基および塩基性基の両方を有する式(Ｉ)の化合物は分子内塩を形成できる。
【００２８】
単離または精製目的で、薬学的に許容されない塩類、例えばピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することも可能である。治療使用のために、薬学的に許容される塩類または遊離化合物のみが使用され(適用可能であれば医薬製剤の形で)、それ故にこれらが好ましい。遊離形および中間体として、例えば、新規化合物の精製または同定において使用できる塩を含むその塩の形の新規化合物の密接な関係の点から、上におよび下における遊離化合物の記載は、適当であり、好都合である限り、その対応する塩もまた言うと解釈すべきである。
【００２９】
本発明の化合物はまた溶媒和物および水和物も形成でき、そのようなものとして、適当であり、好都合である限り、式(Ｉ)の化合物の記載はまた対応する式(Ｉ)の化合物の溶媒和物および／または水和物も言うと解釈すべきである。
【００３０】
本発明はまたインビボで式(Ｉ)の化合物自体に変換する式(Ｉ)の化合物のプロドラッグにも関する。それ故に、式(Ｉ)の化合物についての記載は、適当であり、好都合である限り、対応する式(Ｉ)の化合物のプロドラッグも言うと解釈すべきである。
【００３１】
組合せは、一つの投与単位形態の固定された組合せ、または式(Ｉ)の化合物および組合せ相手(例えば以下に説明し、“治療剤”または“併用剤”と呼ぶ他の薬剤)を、独立して同時にまたは別々に、一定間隔で、特に、複数組合せパートナーが協調的、例えば相乗効果を示す間隔で投与してよい組合せ投与のためのキット・オブ・パーツを意味する用語“共投与”または“組合せ投与”またはここで使用する類似のものは、選択した組合せパートナーのそれを必要とする一対象(例えば患者)への投与を意味し、複数薬剤が必ずしも同一投与経路でまたは同時に投与されるものではない処置レジメンを含むことを意図する。ここで使用する用語“医薬組合せ剤”は、１種を超える有効成分の混合または組合せに由来する製品を意味し、複数有効成分の固定されたおよび固定されていない組合せの両方を含む。用語“固定された組合せ”は、複数有効成分、例えば式(Ｉ)の化合物と組合せパートナーを両方とも患者に同時に一つのものまたは投与量の形態で投与することを意味する。用語“固定されていない組合せ”は、複数有効成分、例えば式(Ｉ)の化合物と組合せパートナーを両方とも別々のものとして、同時に、一緒にまたは逐次的に特定の時間制限なく一患者に投与することを意味し、ここで、かかる投与が患者体内で２化合物の治療有効レベルを提供する。後者はまたカクテル療法、例えば、３種以上の有効成分の投与にも適用される。
【００３２】
好ましい態様において、それは、独立して、集合的に、または任意の組合せもしくは下位の組み合わせで好ましいが、本発明は、遊離塩基形または塩形の式(Ｉ)の化合物に関し、ここで、置換基はここに定義する通りである。
【００３３】
式Ｉに示す通り、アルファ−アミド置換基はピロリジン環上の２位であり、この位置の立体化学は記載する通りである。
【００３４】
環Ａは好ましくは、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、少なくとも１個のヘテロ原子がＮである、非置換または置換５員または６員ヘテロ環式(好ましくはヘテロアリール)環である。
【００３５】
より好ましくは、環Ａは非置換または置換ピリジン環、非置換または置換ピリミジン環、非置換または置換チアゾール環、非置換または置換ピラゾール環または非置換または置換オキサゾール環から選択される。より好ましいのは非置換または置換ピリジン環、非置換または置換ピリミジン環または非置換または置換チアゾール環である。
【００３６】
好ましくは、環Ａは、式(Ｉ)の分子の残りに環Ａの炭素原子を介して縮合している。
【００３７】
環Ａは、好ましくは置換１個、２個または３個のＲ２基、好ましくは２個のＲ２基、最も好ましくは２個のＲ２基により置換され、Ｒ２基は各々、
非置換または置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
非置換または置換アミノ；
非置換または置換Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキル
から独立して選択される。
【００３８】
好ましくは、Ｒ２は
非置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
ジ(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ；
Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキルまたはハロ(好ましくはフルオロ)で１回以上置換されているＣ１−Ｃ７−アルキル；
非置換Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキル；
１回以上ハロ(好ましくはフルオロ)、(ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル)またはＣ１−Ｃ７−アルキルで置換されているＣ３−Ｃ７−シクロアルキルから選択され；
より好ましくは、Ｒ２はメチル、ｔ−ブチル、ジエチルアミノ、シクロプロピルメチル、２−フルオロ−１,１−ジメチルエチルまたは２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチルから選択される。
【００３９】
他の態様において、Ｒ２はメチル、ｔ−ブチル、ジエチルアミノ、シクロプロピルメチルまたは２−フルオロ−１,１−ジメチルエチルから選択される。
【００４０】
環Ａはより好ましくはＡ１またはＡ２またはＡ３またはＡ４またはＡ５またはＡ６から選択される：
【化２】
2012531454.tif 000004
〔式中、
ＺはＮまたはＣＨであり、Ｒ２は上に定義した通りである。〕。
【００４１】
好ましくは、環ＡはＡ１またはＡ２から選択される。
【００４２】
Ｘ−Ｙは好ましくは(ＣＨ２)ｒまたはＯ(ＣＨ２)ｔであり、ここで、
ｒは１、２または３であり；
ｔは１または２であり；
Ｘ−Ｙはより好ましくは(ＣＨ２)ｒまたはＯ(ＣＨ２)ｔであり、ここで、ｒは２であり、ｔは１である。誤解を避けるため、すなわち、Ｘ−Ｙは、好ましくは−ＣＨ２−ＣＨ２−または−Ｏ−ＣＨ２−であり、後者の場合、Ｘ−ＹのＸは−Ｏ−ＣＨ２−のＯである。
【００４３】
Ｒ１は好ましくは、各々独立して、
ハロ；
ヒドロキシ；
非置換または置換フェニル；
ジ(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ；
非置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、ジ(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ、ジ−(過重水素化Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ、フェニル、モルホリニル、アセチルアミノ、またはＮ−(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)−Ｎ−(フェニルＣ１−Ｃ７−アルキル)アミノ(ここで、各フェニルはハロで一置換または多置換されていてよい)で１回以上置換されているＣ１−Ｃ７−アルキルである。
【００４４】
Ｒ１はより好ましくは独立して
フルオロ；
ヒドロキシ；
非置換フェニル；
ジメチルアミノ；
メチル；
ヒドロキシ、メトキシ、ジメチルアミノ、ジ−(過重水素化メチル)アミノ、フェニル、モルホリニル、アセチルアミノ、またはＮ−(メチル)−Ｎ−(フェニルメチル)アミノ(ここで、各フェニルはフルオロで一置換または多置換されていてよい)で一回以上置換されている(好ましくは１回置換)メチルである。
【００４５】
Ｒ１は最も好ましくは独立して、
フルオロ；
ヒドロキシ；
非置換フェニル；
ジメチルアミノ；
メチル；
ヒドロキシメチル；
メトキシメチル；
ジメチルアミノメチル；
ジ−(過重水素化メチル)アミノメチル；
ベンジル；
モルホリン−４−イルメチル；
Ｎ−アセチルアミノメチル；
Ｎ−(メチル)−Ｎ−(３−フルオロ−フェニルメチル)アミノメチルである。
【００４６】
本発明の一態様は、ｎが０または１である式(Ｉ)の化合物を含む。好ましくは、ｎは１である。
【００４７】
本発明の他の態様は、ｑが０である、すなわち、窒素含有ヘテロ環式環が、２位のアミドでのみ置換されている、式(Ｉ)の化合物を含む。この態様において、ｎが０または１であるのが好ましく、より好ましくは１である。
【００４８】
本発明の他の態様は、ｑが１である、すなわち、窒素含有ヘテロ環式環が２位のアミドで一Ｒ１でのみ置換されている式(Ｉ)の化合物を含む。この態様において、ｎが０または１であるのが好ましく、より好ましくは１である。この態様において、Ｒ１基は窒素含有ヘテロ環式環の２位(すなわちアミド基により置換されているのと同じ炭素)または３位または４位または５位で置換していてよい。
【００４９】
好ましくは、この態様において、Ｒ１基は、窒素含有ヘテロ環式環の３位で置換されており、すなわち式(ＩＡ)：
【化３】
2012531454.tif 000005
〔式中、置換基は式(Ｉ)の化合物について定義した通りである。〕
の化合物である。
【００５０】
好ましくは式(ＩＡ)の化合物において、ｎが１であり、それ故に、窒素含有ヘテロ環式環が、２位を記載する立体化学でアミドにより置換され、３位をＲ１基で置換されているピロリジン環である。
【００５１】
好ましくは、Ｒ１基は、２位のアミドに対してｃｉｓ−の立体化学を有し、すなわち式(ＩＡ')：
【化４】
2012531454.tif 000006
〔式中、置換基は式(Ｉ)の化合物について定義した通りである。〕
の化合物である。
【００５２】
好ましくは式(ＩＡ')の化合物において、ｎは１であり、それ故に、窒素含有ヘテロ環式環が、２位をアミドにより記載した立体化学で置換され、３位を記載した立体化学のＲ１基で置換され、それ故にアミドとＲ１基が互いにｃｉｓ−である、ピロリジン環である化合物を提供する。
【００５３】
本発明のさらなる態様は、ｑが２または３であり、故に少なくとも２個のＲ１置換基が存在し、各Ｒ１が独立してここに記載した式(Ｉ)に定義した基から選択される式(Ｉ)の化合物を提供する。この態様において、少なくとも２個のＲ１の各々がピロリジン環の３位であり、場合により第三のＲ１基が、存在するならば、窒素含有ヘテロ環式環のどこかに結合しているのが好ましい。ｎが１であり、第三のＲ１基が、存在するならば、得られたピロリジン環の４位または５位で結合している、すなわち式(ＩＢ)：
【化５】
2012531454.tif 000007
〔式中、置換基は式(Ｉ)の化合物について定義した通りである。〕
の化合物を提供するのがさらに好ましい。
【００５４】
式(ＩＢ)の化合物において、第三のＲ１がピロリジン環の４位に結合しているのが好ましい。
【００５５】
本発明のさらなる態様は、ｎが１であり、そして、２３個のＲ１がピロリジン環の３位に結合し、互いにアルカンジイル、好ましくはＣ３−Ｃ８−シクロアルキル、特にシクロプロピルを形成する、すなわち式(ＩＣ)：
【化６】
2012531454.tif 000008
〔式中、置換基は式(Ｉ)の化合物について定義した通りであり、第三のＲ１基は任意であり、存在するならば、好ましくはピロリジン環の４位に結合している。〕
の化合物となる、式(Ｉ)の化合物を含む。
【００５６】
式(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)または(ＩＣ)のいずれかにおいて、とくに断らない限り、環Ａ、Ｘ−Ｙ、Ｒ１およびｎについて好ましいとした定義も適用できる。
【００５７】
本発明はさらに式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の薬学的に許容されるプロドラッグに関する。
本発明はさらに式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の薬学的に許容される代謝物に関する。
【００５８】
本発明は特に実施例に示した式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物、ならびにここに記載する製造方法に関する。
【００５９】
本発明はまた式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の製造方法にも関する。原則として２種のアミン類を対応するウレア誘導体に変換する全ての既知方法が適し、各出発物質を使用して適用され得る。
【００６０】
それ故に、本発明は特に式(II)
【化７】
2012531454.tif 000009
〔式中、置換基は上で定義した通りである。〕
の化合物と、式(IIIＡ)
【化８】
2012531454.tif 000010
〔式中、置換基は上で定義した通りである。〕
の化合物を活性化剤の存在下で反応させるか(“方法Ａ”)または式(IIIＢ)
【化９】
2012531454.tif 000011
〔式中、Ｒ１は上に定義した通りであり；ＲＧは反応性基である(例えばイミダゾリルカルボニル)である。〕
の化合物と反応させ(“方法Ｂ”)、
いずれの場合も、場合により希釈剤の存在下、そして場合により反応助剤の存在下であり、そして
得られた式(II)の化合物を遊離形または塩の形で回収し、そして、
場合により方法Ａまたは方法Ｂに従い得られた式(Ｉ)の化合物を異なる式(Ｉ)の化合物に変換し、および／または得られる式(Ｉ)の化合物の塩を異なるその塩に変換し、および／または得られる遊離の式(Ｉ)の化合物をその塩に変換し、および／または得られる式(Ｉ)の化合物の異性体を、１種以上の異なる得られる式(Ｉ)の異性体から分離することを含む、方法に関する。
【００６１】
反応条件
本方法は当業者に既知の方法に従い、または下の実施例に記載の通りに行い得る。例えば式(II)の化合物を、式(IIIＡ)または(IIIＢ)の化合物と、溶媒、例えばジメチルホルムアミド中、塩基、例えば有機アミン、例えばトリエチルアミン存在下で反応させ得る。
【００６２】
上または下において温度が記載さｒているとき、記載した数値からの僅かな逸脱、例えば、±１０％の逸脱が一般的に耐容性であるため、“約”を付けるべきである。
【００６３】
全ての反応は１種以上の希釈剤および／または溶媒の存在下で行い得る。出発物質は当モル量で使用してよい；あるいは、ある化合物を、例えば、溶媒として機能させるため、または平衡をシフトさせるため、または一般に反応速度を上げるために過剰で使用してよい。
【００６４】
反応助剤、例えば酸類、塩基または触媒を、当分野で既知の通り、反応に必要な適当な量で、および一般的に既知の方法に従い、添加してよい。
【００６５】
保護基
１個以上の他の官能基、例えばカルボキシ、ヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリルなどがここに記載されている出発物質においてまたは何らかの他の前駆体において、反応に参加すべきではないかまたは反応を妨害するために保護されているか、または保護する必要があるならば、これらは通常ペプチド化合物、およびまたセファロスポリンおよびペニシリン類、ならびに核酸誘導体および糖類の合成において使用されているこのような基である。保護基は一度除去されたら最終化合物にはもはや存在しない基であり、置換基として残る基は、ここで使用する意味では、出発物質または中間体段階で添加し、最終化合物を得るために除去される保護基ではない。ある式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物から異なる式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物への変換の場合、保護基を、有用であるか必要であるならば、導入し、除去してよい。
【００６６】
保護基は前駆体に既に存在してよく、意図する官能基を望まない二次反応、例えばアシル化、エーテル化、エステル化、酸化、加溶媒分解、および類似反応から保護しなければならない。それ自体容易に、すなわち望まない二次反応なしに、典型的にアセトリシス、プロトノリシス、加溶媒分解、還元、光分解または酵素活性によっても、例えば生理学的条件に準ずる条件下除去され、最終産物に存在しないのが保護基の特徴である。専門家は、どの保護基が上におよび下に記載する反応に適当であるか知っているか、または容易に決定できる。
【００６７】
かかる保護基によるかかる官能基の保護、保護基自体およびそれらの除去反応は、例えば標準参考書、例えばJ. F. W. McOmie, “Protective Groups in Organic Chemistry”, Plenum Press, London and New York 1973, in T. W. Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis”, Third edition, Wiley, New York 1999, in “The Peptides”; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981, in “Methoden der organischen Chemie” (Methods of organic chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke and H. Jescheit, “Aminosaeuren, Peptide, Proteine” (Amino acids, peptides, proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982, およびJochen Lehmann, “Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate” (Chemistry of carbohydrates: monosaccharides and derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974に記載されている。
【００６８】
場合により行う反応および変換
式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物を異なる式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物に変換してよい。
【００６９】
置換基がアミノまたはアミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル置換基を担持する式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物において、該アミノをアシルアミノ、例えばＣ１−Ｃ７−アルカノイルアミノに、対応するＣ１−Ｃ７−アルカノイルハロゲニド、例えば対応するクロライドと、３級窒素塩基、例えばトリエチルアミンまたはピリジンの存在下、適当な溶媒、例えば塩化メチレンの非存在下または存在下、例えば、−２０〜５０℃の範囲の温度で、例えばおおよそ室温で反応させることにより変換できる。
【００７０】
塩形成基を有する式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の塩は、それ自体既知の方法で製造できる。式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の酸付加塩は、故に、酸または適当なアニオン交換試薬での処理により得ることができる。２酸分子を有する塩(例えば式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物のジハロゲニド)もまた化合物あたり１酸分子の塩に変換してよい(例えばモノハロゲニド)；これは、融解まで加熱することにより、または例えば固体として高真空下、高温で、例えば、１３０〜１７０℃で加熱することにより、酸の１分子を式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の１分子から除去することにより行い得る。塩は通常、例えば、適当な塩基性化合物、例えば、アルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属炭酸水素塩またはアルカリ金属水酸化物、典型的には炭酸カリウムまたは水酸化ナトリウムで処理することにより遊離化合物に変換できる。
【００７１】
立体異性混合物、例えばジアステレオマー混合物を、適当な分離法の手段によるそれ自体既知の方法により対応する異性体に分離してよい。ジアステレオマー混合物は、例えば、その個々のジアステレオマーに分別結晶、クロマトグラフィー、溶媒分配および類似法の手段により分離できる。この分離は、出発化合物または式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物自体のレベルで行い得る。エナンチオマーは、例えば、エナンチオマー純粋キラル酸との塩形成によるジアステレオマー塩の形成を介して、または、キラルリンガンドのクロマトグラフィー支持体を使用するクロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣにより分離できる。
【００７２】
ここに記載する慣用法に準じる反応はまた適当な中間体のレベルでも行い得ることは注意すべきである(そしてそれ故に対応する出発物質の製造に有用である)。
【００７３】
出発物質：
式(II)および(III)の出発物質ならびにここに、例えば下に記載する他の出発物質は当分野で既知の方法に従い、またはそれに準じて製造でき、当分野で既知でありおよび／または市販されている。出発物質の製造が特に記載されていない限り、該化合物は既知であるか、または文献において、例えばＷＯ０５／０２１５１９またはＷＯ０４／０９６７９７において既知の方法に準じて、または、下に記載するとおり製造できる。新規出発物質、ならびにその製造方法は同様に本発明の一態様である。好ましい態様において、かかる出発物質は、好ましい化合物が得られるように使用し、反応を選択する。
【００７４】
適当であり、好都合である限り、塩としても使用できおよび／または得られる出発物質(中間体を含む)において、置換基は、好ましくは式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物において定義した通りである。
【００７５】
医薬組成物、使用および処置方法
本発明はまたここに開示する式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の医薬としての使用にも関する。本発明は一態様において、例えば、ＰＩ３Ｋ阻害が支持される、ヒトまたは獣医使用のための、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物を含む組成物を含む。
【００７６】
一態様において、本発明は、例えばＰＩ３Ｋが仲介する、細胞増殖性疾患、例えば腫瘍(良性または悪性)および／または癌細胞増殖の処置に関する。疾患は、ＰＩＫ３ＣＡの体細胞突然変異またはＰＴＥＮの生殖系列変異もしくは体細胞突然変異を示すものを含み得る。特に、本化合物は、例えば、肉腫；肺；気管支；前立腺；乳房(孤発性乳癌およびカウデン病罹患者を含む)；膵臓；消化器癌；結腸；直腸；結腸癌腫；結腸直腸腺腫；甲状腺；肝臓；肝内胆管；肝細胞；副腎；胃；胃の；神経膠腫；神経膠芽腫；子宮内膜；黒色腫；腎臓；腎盂；膀胱；子宮体；子宮頸；膣；卵巣；多発性骨髄腫；食道；白血病；急性骨髄性白血病；慢性骨髄性白血病；リンパ性白血病；骨髄性白血病；脳；脳の癌腫；口腔および咽頭；喉頭；小腸；非ホジキンリンパ腫；黒色腫；絨毛結腸腺腫；新生物；上皮特性の新生物；リンパ腫；乳癌腫；基底細胞癌腫；扁平上皮細胞癌腫；光線性角化症；固形腫瘍を含む腫瘍疾患；頭頚部の腫瘍；真性多血症；本態性血小板血症；および骨髄異型を伴う骨髄線維症を含む、ヒトまたは動物(例えばマウス)癌の処置に有用であり得る。
【００７７】
他の態様において、状態または障害(例えばＰＩ３Ｋ仲介)は：上皮過増殖、前立腺肥大、新生物、上皮特性の新生物、カウデン症候群、レルミッテ・デュドス疾患またはバナヤン・ゾナナ症候群、喘息、ＣＯＰＤ、ＡＲＤＳ、レフレル症候群、好酸球性肺炎、寄生虫(特に後生動物)感染(熱帯好酸球増加症を含む)、気管支肺アスペルギルス症、結節性多発性動脈炎(チャーグ・ストラウス症候群を含む)、好酸球性肉芽腫、薬剤応答により誘発される気道に影響する好酸球関連障害、乾癬、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、多形性紅斑、疱疹状皮膚炎、強皮症、白斑症、過敏性血管炎、蕁麻疹、類天疱瘡、エリテマトーデス、天疱瘡、後天性表皮水疱症、自己免疫性血液学的障害(例えば溶血性貧血、再生不良性貧血、赤芽球癆(pure red cell anaemia)および特発性血小板減少症)、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、スティーブン−ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患(例えば潰瘍性大腸炎およびクローン病)、内分泌眼疾患、グレーブス病、サルコイドーシス、肺胞炎、慢性過敏性肺炎、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎(前部および後部)、間質性肺線維症、乾癬性関節炎、糸球体腎炎、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、深部静脈血栓症、卒中、心筋梗塞、不安定狭心症、血栓塞栓症、肺塞栓症、血栓溶解疾患、急性動脈性虚血、末梢血栓性閉塞、および冠動脈疾患、再灌流傷害、網膜症、例えば糖尿病性網膜症または高圧酸素誘発網膜症、および眼内圧上昇または眼性水性体液の分泌の増加により特徴付けられる状態、例えば緑内障からなる群から選択される。
【００７８】
上記使用のために、必要投与量は当然、投与方式、処置する特定の状態および望む効果により変わる。一般に、満足いく結果が、約０.０３〜１０.０mg／体重kgの１日投与量で前進的に得られることが示される。大型哺乳動物、例えばヒトに支持される１日量は約０.５mg〜約１ｇの範囲であり、簡便には、例えば、１日４回までに分割して、または持続形態で投与する。経口投与のための単位投与形態は約０.１〜５００mg活性成分を含む。
【００７９】
式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物を、任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば経口で、例えば、錠剤またはカプセル剤の形態で、または非経腸的に、例えば注射可能溶液または懸濁液の形態で、局所的に、例えば、ローション、ゲル、軟膏またはクリームの形態で、吸入により、経鼻的にまたは坐薬形態で投与してよい。
【００８０】
式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物を遊離形で、または例えば上に示す薬学的に許容される塩形態で投与してよい。かかる塩は、慣用法で製造でき、遊離化合物と同程度の活性を示す。
【００８１】
結果として、本発明はまた次のものを提供する：
・ＰＩ３、例えばＰＩ３キナーゼアルファ酵素の活性化が仲介する状態、障害または疾患、例えば上に示す疾患の、処置を必要とする対象における処置方法であって、該対象に有効量の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法。
・遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の、例えば、ここに記載する方法のいずれかにおける、医薬としての使用。
・例えば、ここに示す方法のいずれかにおける医薬として使用するための、特に、１種以上のホスファチジルイノシトール３−キナーゼ介在疾患において使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物。
・ここに示すいずれかの方法における、特に、１種以上のホスファチジルイノシトール３−キナーゼ仲介疾患の処置のための、遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の使用。
・ここに示す方法におずれかにおける、特に、１種以上のホスファチジルイノシトール３−キナーゼ仲介疾患の処置用医薬の製造のための、遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の使用。
【００８２】
ＰＩ３Ｋは並行したシグナリング経路を統合する二次メッセンジャー結節として働き、ＰＩ３Ｋ阻害剤と他の経路の阻害剤の組合せがヒトにおける癌および増殖性疾患の処置に有用であるとの証拠が増えている。
【００８３】
ヒト乳癌の約２０−３０％がトラスツマブの標的であるＨｅｒ−２／ｎｅｕ−ＥｒｂＢ２を過発現する。トラスツマブはＨｅｒ２／ｎｅｕ−ＥｒｂＢ２を発現する患者の幾分かでの永続的な応答が証明されているが、これらの患者のサブセットのみが応答する。最近の仕事は、この限界がある応答率はトラスツマブとＰＩ３Ｋの阻害剤またはＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の組合せにより相当改善できることが示されている(Chan et al., Breast Can. Res. Treat. 91: 187 (2005), Woods Ignatoski et al., Brit. J. Cancer 82: 666 (2000), Nagata et al., Cancer Cell 6: 117 (2004))。
【００８４】
多様なヒト悪性腫瘍が活性化変異したまたは増加したレベルのＨｅｒ１／ＥＧＦＲを発現し、そして多くの抗体および小分子阻害剤が、タルセバ、ゲフィチニブおよびアービタックスを含み、この受容体チロシンキナーゼに対して開発されている。しかしながら、ＥＧＦＲ阻害剤はある種のヒト腫瘍(例えば、ＮＳＣＬＣ)で抗腫瘍活性が証明されているものの、ＥＧＦＲ発現腫瘍を有する全患者の全体的患者生存を増加しない。これは、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路を含む、Ｈｅｒ１／ＥＧＦＲの多くの下流標的が、多くの悪性腫瘍で高頻度で変異または脱制御されているとの事実により説明され得る。例えば、ゲフィチニブはインビトロアッセイで腺癌細胞株の増殖を阻害する。それにも係わらず、これらのゲフィチニブに対する耐性細胞株のサブクローンが選択でき、ＰＩ３／Ａｋｔ経路の活性上昇を証明する。この経路の下方制御または阻害は、耐性サブクローンをゲフィチニブ感受性とする(Kokubo et al., Brit. J. Cancer 92: 1711 (2005))。さらに、ＰＴＥＮ変異を有し、ＥＧＦＲを過発現する細胞株の乳癌のインビトロモデルにおいて、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路およびＥＧＦＲ両方の阻害は相乗作用を生じる(She et al., Cancer Cell 8: 287-297(2005))。これらの結果は、ゲフィチニブとＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路阻害剤の組合せが、癌における魅力的な治療標的であることを示す。
【００８５】
ＡＥＥ７７８(Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ／ＥｒｂＢ２、ＶＥＧＦＲおよびＥＧＦＲの阻害剤)とＲＡＤ００１(Ａｋｔの下流標的であるｍＴＯＲの阻害剤)の組合せは、神経膠芽腫異種移植モデルにおいていずれかの薬剤単独よりも大きな併用効果を生じる(Goudar et al., Mol. Cancer. Ther. 4: 101-112 (2005))。
【００８６】
抗エストロゲン類、例えばタモキシフェンは、細胞サイクル阻害剤ｐ２７Ｋｉｐの作用を必要とする細胞サイクル停止の誘発を介して乳癌増殖を阻害する。最近、Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＡＰキナーゼ経路活性化が、ｐ２７Ｋｉｐのリン酸化状態を、その細胞サイクル停止の阻害活性が減弱され、それ故に抗エストロゲン耐性を付与するように変えることが示されている(Donovan, et al, J. Biol. Chem. 276: 40888, (2001))。Donovan et al.により報告されている通り、ＭＥＫ阻害剤での処置を介するＭＡＰＫシグナリング阻害は、ホルモン耐性乳癌細胞株におけるｐ２７の異常リン酸化状態を逆転させ、そうしてホルモン感受性を回復する。同様に、Ａｋｔによるｐ２７Ｋｉｐのリン酸化もその細胞サイクル停止における役割を無くす(Viglietto et al., Nat Med. 8: 1145 (2002))。
【００８７】
したがって、本発明は、さらになる面において、ホルモン依存性癌、例えば乳および前立腺癌の処置に使用するための式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物を提供する。この使用により、慣用の抗癌剤で癌に一般に見られるホルモン抵抗性を回復することが目的である。
【００８８】
血液学的癌、例えば慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)において、慢性的転座が構成的活性化ＢＣＲ−Ａｂｌチロシンキナーゼに関与する。罹患患者は、Ａｂｌキナーゼ活性阻害の結果として、小分子チロシンキナーゼ阻害剤であるイマチニブに応答する。しかしながら、最初はイマチニブに応答した進行段階の疾患の患者でも、Ａｂｌキナーゼドメインにおける耐性付与変異のために、その後再発する。インビトロ試験は、ＢＣＲ−Ａｂ１がＲａｓ−Ｒａｆキナーゼ経路を使用してその作用を顕在化させることを証明している。加えて、同経路中の１種を超えるキナーゼの阻害は、耐性付与変異に対するさらなる保護を提供する。
【００８９】
したがって、他の面において、本発明は、血液学的癌、例えば慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)の処置において、キナーゼ阻害剤から選択される少なくとも１種のさらなる薬剤、例えばGleevec(登録商標)と組み合わせて使用するための式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物を提供する。この使用により、少なくとも１種の該さらなる薬剤に対する抵抗性を回復または予防することが目的である。
【００９０】
ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の活性化が細胞生存を駆動するため、放射線療法および化学療法を含む癌細胞のアポトーシスと組み合わせた該経路の阻害は、応答の改善をもたらす(Ghobrial et al., CA Cancer J. Clin 55: 178-194 (2005))。一例として、ＰＩ３キナーゼ阻害剤とカルボプラチンの組合せが、インビトロ増殖およびアポトーシスアッセイならびに卵巣癌の異種移植モデルにおけるインビボ腫瘍効果の両方で相乗効果が証明されている(Westfall and Skinner, Mol. Cancer Ther. 4: 1764-1771 (2005))。
【００９１】
癌および増殖性疾患に加えて、クラス１Ａおよび１Ｂ  ＰＩ３キナーゼ類の阻害剤が他の疾患領域においても治療的に有用であるとの証拠が蓄積されつつある。ＰＩＫ３ＣＢ遺伝子のＰＩ３Ｋアイソフォーム産物であるｐ１１０βの阻害が、剪断誘発血小板活性化に関与することが示されている(Jackson et al., Nature Medicine 11: 507-514 (2005))。それ故に、ｐ１１０βを阻害するＰＩ３Ｋ阻害剤は、単剤として、または抗血栓治療と組み合わせて有用である。ＰＩＫ３ＣＤ遺伝子の産物であるアイソフォームｐ１１０δはＢ細胞機能および分化(Clayton et al., J. Exp. Med. 196: 753-763 (2002))、Ｔ細胞依存性および非依存性抗原応答(Jou et al., Mol. Cell. Biol. 22: 8580-8590 (2002))および肥満細胞分化(Ali et al., Nature 431: 1007-1011 (2004))に重用である。それ故に、ｐ１１０δ阻害剤がＢ細胞駆動自己免疫性疾患および喘息の処置に有用であることが予測される。最後に、ＰＩ３ＫＣＧ遺伝子のアイソフォーム産物であるｐ１１０γの阻害は、Ｔ細胞応答を減少させるが、Ｂ細胞応答を減少させず(Reif et al., J. Immunol. 173: 2236-2240 (2004))、その阻害は、動物モデルにおいて自己免疫性疾患に有用であることが証明されている(Camps et al., Nature Medicine 11: 936-943 (2005), Barber et al., Nature Medicine 11: 933-935 (2005))。
【００９２】
本発明は、さらに少なくとも１種の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物を、ヒトまたは動物対象への投与に適する薬学的に許容される賦形剤と共に、単独で、または他の治療剤、例えば他の抗癌剤と共に含む医薬組成物を提供する。
【００９３】
本発明は、さらに細胞増殖性疾患、例えば癌を有するヒトまたは動物対象の処置方法を提供する。本発明は、それ故に、処置を必要とするヒトまたは動物対象の処置方法であって、治療有効量の(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の化合物を単独でまたは１種以上の他の治療剤、例えば他の抗癌剤と組み合わせて投与することを含む、方法を提供する。特に、組成物は、組合せ治療剤と共に製剤しても、別々に投与してもよい。式(Ｉ)の化合物と共に使用するのに適当な抗癌剤は、下に明示するキナーゼ阻害剤、抗エストロゲン類、抗アンドロゲン、他の阻害剤、癌化学療法剤、アルキル化剤、キレート化剤、生物学的応答修飾剤、癌ワクチン、アンチセンス治療のための薬剤を含むが、これらに限定されない：
Ａ. キナーゼ阻害剤：式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と共に抗癌剤として使用するキナーゼ阻害剤は、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)キナーゼ類の阻害剤、例えば小分子キナゾリン類、例えばゲフィチニブ(ＵＳ５４５７１０５、ＵＳ５６１６５８２、およびＵＳ５７７０５９９)、ZD-6474(ＷＯ０１／３２６５１)、エルロチニブ(タルセバ(登録商標)、ＵＳ５,７４７,４９８およびＷＯ９６／３０３４７)、およびラパチニブ(ＵＳ６,７２７,２５６およびＷＯ０２／０２５５２)；SU-11248(ＷＯ０１／６０８１４)、ＳＵ５４１６(ＵＳ５,８８３,１１３およびＷＯ９９／６１４２２)、SU6668(ＵＳ５,８８３,１１３およびＷＯ９９／６１４２２)、CHIR-258(ＵＳ６,６０５,６１７およびＵＳ６,７７４,２３７)、バタラニブまたはPTK-787(ＵＳ６,２５８,８１２)、VEGF-Trap(ＷＯ０２／５７４２３)、Ｂ４３−ゲニステイン(ＷＯ−０９６０６１１６)、フェンレチニド(レチノイン酸ｐ−ヒドロキシフェニルアミン)(ＵＳ４,３２３,５８１)、IM-862(ＷＯ０２／６２８２６)、ベバシズマブまたはAvastin(登録商標)(ＷＯ９４／１０２０２)、KRN-951、３−[５−(メチルスルホニルピペラジンメチル)−インドリル]−キノロン、AG-13736およびAG-13925、ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン類、ZK-304709、Veglin(登録商標)、VMDA-3601、EG-004、CEP-701(ＵＳ５,６２１,１００)、Cand5(ＷＯ０４／０９７６９)を含む血管内皮細胞増殖因子受容体(ＶＥＧＦＲ)キナーゼ阻害剤；Ｅｒｂ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えばペルツズマブ(ＷＯ０１／００２４５)、トラスツマブ、およびリツキシマブ；Ａｋｔタンパク質キナーゼ阻害剤、例えばRX-0201；タンパク質キナーゼＣ(ＰＫＣ)阻害剤、例えばLY-317615(ＷＯ９５／１７１８２)、およびペリホシン(ＵＳ２００３１７１３０３)；ソラフェニブ(BAY43-9006)、ARQ-350RP、LErafAON、BMS-354825AMG-548、およびＷＯ０３／８２２７２に開示されるその他のものを含むＲａｆ／Ｍａｐ／ＭＥＫ／Ｒａｓキナーゼ阻害剤；線維芽細胞増殖因子受容体(ＦＧＦＲ)キナーゼ阻害剤；CYC-202またはロスコビチン(ＷＯ９７／２０８４２およびＷＯ９９／０２１６２)を含む細胞依存性キナーゼ(ＣＤＫ)阻害剤；血小板由来増殖因子受容体(ＰＤＧＦＲ)キナーゼ阻害剤、例えばCHIR-258、3G3mAb、AG-13736、SU-11248およびSU6668；およびＢｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害剤および融合タンパク質、例えばSTI-571またはGleevec(登録商標)(イマチニブ)を含む。
【００９４】
Ｂ. 抗エストロゲン類：式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と組み合わせて抗癌治療に使用するためのエストロゲン標的剤はタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェンを含む選択的エストロゲン受容体モジュレーター(ＳＥＲＭ)；Arimidex(登録商標)またはアナストロゾールを含むアロマターゼ阻害剤；Faslodex(登録商標)またはフルベストラントを含むエストロゲン受容体下方制御剤(ＥＲＤ)を含む。
【００９５】
Ｃ. 抗アンドロゲン：式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の化合物と組み合わせて抗癌治療に使用するためのアンドロゲン標的剤はフルタミド、ビカルタミド、フィナステリド、アミノグルテアミド、ケトコナゾール、およびコルチコステロイドを含む。
【００９６】
Ｄ. 他の阻害剤：式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と組み合わせて抗癌剤として使用するための他の阻害剤は、ティピファルニブまたはR-115777(ＵＳ２００３１３４８４６およびＷＯ９７／２１７０１)、BMS-214662、AZD-3409、およびFTI-277を含むタンパク質ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；メルバロンおよびジフロモテカン(diflomotecan)(BN-80915)を含むトポイソメラーゼ阻害剤；SB-743921およびMKI-833を含む有糸分裂キネシン紡錘タンパク質(ＫＳＰ)阻害剤；プロテアソームモジュレーター、例えばボルテゾミブまたはベルケイド(登録商標)(ＵＳ５,７８０,４５４)、XL-784；および非ステロイド性抗炎症性剤Ｉ(NSAID)を含むシクロオキシゲナーゼ２(ＣＯＸ−２)阻害剤を含む。
【００９７】
Ｅ. 癌化学療法剤：式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と組み合わせて抗癌剤として使用する特定の癌化学療法剤はアナストロゾール(Arimidex(登録商標))、ビカルタミド(Casodex(登録商標))、ブレオマイシンスルフェート(Blenoxane(登録商標))、ブスルファン(Myleran(登録商標))、ブスルファン注射(Busulfex(登録商標))、カペシタビン(Xeloda(登録商標))、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン(Paraplatin(登録商標))、カルムスチン(BiCNU(登録商標))、クロラムブシル(Leukeran(登録商標))、シスプラチン(Platinol(登録商標))、クラドリビン(Leustatin(登録商標))、シクロホスファミド(Cytoxan(登録商標)またはNeosar(登録商標))、シタラビン、シトシンアラビノシド(Cytosar-U(登録商標))、シタラビンリポソーム注射(DepoCyt(登録商標))、ダカルバジン(DTIC-Dome(登録商標))、ダクチノマイシン(Actinomycin D, Cosmegan)、ダウノルビシンヒドロクロライド(Cerubidine(登録商標))、ダウノルビシンシトレートリポソーム注射(DaunoXome(登録商標))、デキサメサゾン、ドセタキセル(タキソテール(登録商標)、US2004073044)、ドキソルビシンヒドロクロライド(アドリアマイシン(登録商標)、Rubex(登録商標))、エトポシド(Vepesid(登録商標))、フルダラビンホスフェート(Fludara(登録商標))、５−フルオロウラシル(Adrucil(登録商標)、Efudex(登録商標))、フルタミド(Eulexin(登録商標))、テザシチビン、ゲムシタビン(ジフルオロデオキシシチジン)、ヒドロキシウレア(Hydrea(登録商標))、イダルビシン(Idamycin(登録商標))、イホスファミド(IFEX(登録商標))、イリノテカン(Camptosar(登録商標))、Ｌ−アスパラギナーゼ(ELSPAR(登録商標))、ロイコボリンカルシウム、メルファラン(Alkeran(登録商標))、６−メルカプトプリン(Purinethol(登録商標))、メトトレキサート(Folex(登録商標))、ミトキサントロン(Novantrone(登録商標))、ミロタルグ、パクリタキセル(タキソール(登録商標))、フェニックス(Yttrium90/MX-DTPA)、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを伴うポリフェプロサン２０(グリアデル(登録商標))、タモキシフェンシトレート(Nolvadex(登録商標))、テニポシド(Vumon(登録商標))、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン(Tirazone(登録商標))、注射用トポテカンヒドロクロライド(Hycamptin(登録商標))、ビンブラスチン(Velban(登録商標))、ビンクリスチン(Oncovin(登録商標))、およびビノレルビン(Navelbine(登録商標))を含む。
【００９８】
Ｆ. アルキル化剤：式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と組み合わせて使用するためのアルキル化剤はＶＮＰ−４０１０１Ｍまたはクロレチジン、オキサリプラチン(ＵＳ４,１６９,８４６、ＷＯ０３／２４９７８およびＷＯ０３／０４５０５)、グルフォスファミド、マフォスファミド、エトポフォス(ＵＳ５,０４１,４２４)、プレドニムスチン；トレオスルファン；ブスルファン；イロフルベン(アシルフルベン)；ペンクロメジン；ピラゾロアクリジン(PD-115934)；Ｏ６−ベンジルグアニン；デシタビン(５−アザ−２−デオキシシチジン)；ブロスタリシン；マイトマイシンＣ(MitoExtra)；ＴＬＫ−２８６(Telcyta(登録商標))；テモゾロミド；トラバクテジン(ＵＳ５,４７８,９３２)；AP-5280(シスプラチンのプラチネート製剤)；ポルフィロマイシン；およびクレアラジド(メクロエタミン)を含む。
【００９９】
Ｇ. キレート化剤：式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と組み合わせて使用するためのキレート化剤はテトラチオモリブデート(ＷＯ０１／６０８１４)；RP-697；キメラＴ８４.６６(cT84.66)；ガドフォスベセット(Vasovist(登録商標))；デフェロキサミン；および場合によりエレクトロポレーション(ＥＰＴ)と組み合わせたブレオマイシンを含むその巨環アナログ。
【０１００】
Ｈ. 生物学的応答修飾剤：式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と組み合わせて使用するための生物学的応答修飾剤、例えば免疫調節剤はスタウロスポリンおよびＵＣＮ−０１、ＣＥＰ−７０１およびミドスタウリン(ＷＯ０２／３０９４１、ＷＯ９７／０７０８１、ＷＯ８９／０７１０５、ＵＳ５,６２１,１００、ＷＯ９３／０７１５３、ＷＯ０１／０４１２５、ＷＯ０２／３０９４１、ＷＯ９３／０８８０９、ＷＯ９４／０６７９９、ＷＯ００／２７４２２、ＷＯ９６／１３５０６およびＷＯ８８／０７０４５参照)を含むその巨環アナログ；スクアラミン(ＷＯ０１／７９２５５)；ＤＡ−９６０１(ＷＯ９８／０４５４１およびＵＳ６,０２５,３８７)；アレムツズマブ；インターフェロン類(例えばＩＦＮ−ａ、ＩＦＮ−ｂなど)；インターロイキン類、特にＩＬ−２またはアラデスロイキンならびにＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、および天然ヒト配列の７０％を超えるアミノ酸配列を有するその活性生物学的変異体；アルトレタミン(Hexalen(登録商標))；SU 101またはレフルノミド(ＷＯ０４／０６８３４およびＵＳ６,３３１,５５５)；イミダゾキノリン類、例えばレスキモドおよびイミキモド(ＵＳ４,６８９,３３８、５,３８９,６４０、５,２６８,３７６、４,９２９,６２４、５,２６６,５７５、５,３５２,７８４、５,４９４,９１６、５,４８２,９３６、５,３４６,９０５、５,３９５,９３７、５,２３８,９４４、および５,５２５,６１２)；およびベンズアゾール類、アントラキノン類、チオセミカルバゾン類、およびトリプタンスリン類(ＷＯ０４／８７１５３、ＷＯ０４／６４７５９、およびＷＯ０４／６０３０８)を含むＳＭＩＰを含む。
【０１０１】
Ｉ. 癌ワクチン：式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と組み合わせて使用するための抗癌ワクチンはAvicine(登録商標)(Tetrahedron Lett. 26: 2269-70 (1974))；またはエゴボマブ(OvaRex(登録商標))；Theratope(登録商標)(STn-KLH)；黒色腫ワクチン；Ｒａｓタンパク質の５種の変異を指向するＧＩ−４０００シリーズ(GI-4014、GI-4015およびGI-4016)；GlioVax-1；MelaVax；Advexin(登録商標)またはINGN-201(ＷＯ９５／１２６６０)；HPV-16 E7をコードするSig/E7/LAMP-1；MAGE-3ワクチンまたはM3TK(ＷＯ９４／０５３０４)；HER-2VAX；腫瘍に特異的Ｔ細胞を刺激するＡＣＴＩＶＥ；ＧＭ−ＣＳＦ癌ワクチン；およびListeria monocytogenesベースのワクチンを含む。
【０１０２】
Ｊ. アンチセンス治療：式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と組み合わせて使用する抗癌剤はまたアンチセンス組成物、例えばAEG-35156(GEM-640)；AP-12009およびAP-11014(ＴＧＦ−ベータ２特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド類)；AVI-4126；AVI-4557；AVI-4472；オブリメルセン(Genasense(登録商標))；ＪＦＳ２；アプリノカルセン(ＷＯ９７／２９７８０)；GTI-2040(Ｒ２リボヌクレオチドレダクターゼｍＲＮＡアンチセンスオリゴ)(ＷＯ９８／０５７６９)；GTI-2501(ＷＯ９８／０５７６９)；リポソーム封入ｃ−Ｒａｆアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド(LErafAON)(ＷＯ９８／４３０９５)；およびSirna-027(ＶＥＧＦＲ−１  ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉベースの治療剤)を含む。
【０１０３】
式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物はまた、医薬組成物において気管支拡張剤または抗ヒスタミン剤と組み合わせてもよい。かかる気管支拡張剤は抗コリン剤または抗ムスカリン剤、特にグリコピロレート、イプラトロピウムブロマイド、オキシトロピウムブロマイド、およびチオトロピウムブロマイド、OrM3、アクリジニウム、CHF5407、GSK233705およびβ−２−アドレナリン受容体アゴニスト、例えばサルブタモール、テルブタリン、サルメテロール、カルモテロール、ミルベテロールおよび、特に、インダカテロールおよびフォルモテロールを含む。併用抗ヒスタミン剤はセチリジンヒドロクロライド、フマル酸クレマスチン、プロメタジン、ロラタジン、デスロラタジンジフェンヒドラミンおよびフェキソフェナジンヒドロクロライドを含む。
【０１０４】
本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と、血栓溶解疾患、心臓疾患、卒中などの処置に有用な１種以上の組合せを提供する。かかる化合物はアスピリン、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、抗凝血剤、抗血小板剤(例えば、PLAVIX；硫酸クロピドグレル)、スタチン(例えば、LIPITORまたはアトルバスタチンカルシウム)、ZOCOR(シンバスタチン)、CRESTOR(ロスバスタチン)、など)、ベータブロッカー(例えば、アテノロール)、NORVASC(アムロジピンベシレート)、およびＡＣＥ阻害剤(例えば、リシノプリル)を含む。
【０１０５】
本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と、抗高血圧の処置に有用な１種以上の化合物の組合せを提供する。かかる化合物はＡＣＥ阻害剤、脂質低下剤、例えばスタチン、LIPITOR(アトルバスタチンカルシウム)、カルシウムチャネルブロッカー、例えばNORVASC(アムロジピンベシレート)を含む。
【０１０６】
本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と、フィブラート、ベータブロッカー、ＮＥＰＩ阻害剤、アンギオテンシン−２受容体アンタゴニストおよび血小板凝集阻害剤からなる群から選択される１種以上の化合物の組合せを提供する。
【０１０７】
本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と、リウマチ性関節炎を含む炎症性疾患の処置に適当な化合物の組合せを提供する。かかる化合物はＴＮＦ−α阻害剤、例えば抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体(例えばREMICADE、CDP-870)およびD2E7(HUMIRA)およびＴＮＦ受容体免疫グロブリン融合分子(例えばENBREL)、ＩＬ−１阻害剤、受容体アンタゴニストまたは可溶性ＩＬ−１Ｒα(例えばKINERETまたはＩＣＥ阻害剤)、非ステロイド性抗炎症剤(NSAIDＳ)、ピロキシカム、ジクロフェナク、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェンイブプロフェン、フェナメート、メフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、ピラゾロン類、フェニルブタゾン、アスピリン、ＣＯＸ−２阻害剤(例えばCELEBREX(セレコキシブ)、PREXIGE(ルミラコキシブ))、メタロプロテアーゼ阻害剤(好ましくはＭＭＰ−１３選択的阻害剤)、ｐ２ｘ７阻害剤、α２α阻害剤、NEUROTIN、プレガバリン、低用量メトトレキサート、レフルノミド、ヒドロキシクロロキン、ｄ−ペニシラミン、オーラノフィンまたは非経腸または経口金からなる群から選択される。
【０１０８】
本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と、骨関節症の処置に適当な化合物の組合せを提供する。かかる化合物は標準非ステロイド性抗炎症剤(以後NSAID)、例えばピロキシカム、ジクロフェナク、プロピオン酸類、例えばナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェンおよびイブプロフェン、フェナメート例えばメフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、ピラゾロン類、例えばフェニルブタゾン、サリチレート類例えばアスピリン、ＣＯＸ−２阻害剤、例えばセレコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブおよびエトリコキシブ、鎮痛剤および関節内治療、例えばコルチコステロイドおよびヒアルロン酸類、例えばヒアルガンおよびシンビスクからなる群から選択され得る。
【０１０９】
本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と抗ウイルス剤および／または抗敗血症化合物の組合せを提供する。かかる抗ウイルス剤はViracept、ＡＺＴ、アシクロビルおよびファムシクロビルからなる群から選択され得る。かかる抗敗血症化合物はValantからなる群から選択され得る。
【０１１０】
本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物とＣＮＳ剤、例えば抗鬱剤(セルトラリン)、抗パーキンソン病剤(例えばデプレニル、Ｌ−ｄｏｐａ、Requip、Mirapex；ＭＡＯＢ阻害剤(例えばセレギリン(selegine)およびラサギリン)；ｃｏｍＰ阻害剤(例えばタスマール)；Ａ−２阻害剤；ドーパミン再取り込み阻害剤；ＮＭＤＡアンタゴニスト；ニコチンアゴニスト；ドーパミンアゴニスト；および神経型一酸化窒素合成酵素の阻害剤)から成る群から選択される１種以上の薬剤の組合せを提供する。
【０１１１】
本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と１種以上の抗アルツハイマー剤の組合せを提供する。かかる抗アルツハイマー剤はドネペジル、タクリン、α２δ阻害剤、NEUROTIN、プレガバリン、ＣＯＸ−２阻害剤、プロペントフィリンまたはメトリホネート(metryfonate)からなる群から選択され得る。
【０１１２】
本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物と骨粗鬆症剤および／または免疫抑制剤の組合せを提供する。かかる骨粗鬆症剤はEVISTA(ラロキシフェンヒドロクロライド)、ドロロキシフェン、ラソフォキシフェンまたはフォサマックス(fosomax)からなる群から選択され得る。かかる免疫抑制剤はＦＫ−５０６およびラパマイシンからなる群から選択され得る。
【０１１３】
好ましい態様の他の面において、１種以上の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物とここに開示する組合せパートナーを含むキットが提供される。代表的キットはＰＩ３Ｋ阻害剤化合物(例えば、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物)と、ＰＩ３Ｋ阻害量の化合物(複数もある)を投与することにより細胞増殖性疾患を処置するための支持を含む添付文書または他のラベルを含む。
【０１１４】
一般に、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物は類似の有用性をもたらす薬剤についての許容される投与方式のいずれかにより、治療有効量で投与する。実際の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物、すなわち、有効成分の量は、多くの因子、例えば処置する疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康状態、使用する化合物の効力、投与経路および形態ならびに他の因子に依存する。薬剤は１日１回を超えて、好ましくは１日１回または２回投与してよい。これらの因子の全ては担当医の技術の範囲内である。式(Ｉ)の化合物の治療有効量は約０.０５〜約５０mg／受け手の体重kg／日の範囲であり得る；好ましくは約０.１−２５mg／kg／日、より好ましくは約０.５〜１０mg／kg／日である。それ故に、７０kgのヒトへの投与のために、投与範囲は最も好ましくは約３５−７０mg／日である。
【０１１５】
一般に、式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物は、医薬組成物として以下の経路のいずれか一つにより投与する：経口、全身(例えば、経皮、鼻腔内または坐薬により)、または非経腸(例えば、筋肉内、静脈内または皮下)投与。好ましい投与方法は、疾患の程度により調節できる簡便な１日投与レジメンを使用する経口である。組成物は錠剤、丸剤、カプセル、半固体、散剤、徐放性製剤、溶液、懸濁液、エリキシル、エアロゾルまたは任意の他の適当な組成物の形態をとり得る。式(Ｉ)の化合物の他の好ましい投与方法は吸入である。これは呼吸管に治療剤を送達させる有効な方法である。
【０１１６】
製剤の選択は、種々の因子、例えば投与方式および医薬物質ののバイオアベイラビリティによる。吸入を介する送達のために、化合物を液体溶液、懸濁液、エアロゾル噴射剤または乾燥粉末として製剤し、適当な投与用ディスペンサーに充填してよい。いくつかの種類の医薬吸入装置、ネブライザー吸入装置、定量吸入器(ＭＤＩ)および乾燥粉末吸入器(ＤＰＩ)がある。ネブライザーは高速の気流を発生させ、それにより治療剤(それは液体形態に製剤されている)をミストとして噴霧させ、それが患者の呼吸器に入る。典型的に、ＭＤＩは圧縮ガスと共に充填された製剤である。動作することにより、デバイスは一定量の治療剤を圧縮ガスにより噴射し、それによって予め定められた量の薬剤を投与する信頼できる方法を提供する。ＤＰＩは、自由流動性粉末形態の治療剤を計量し、それをデバイスによる吸気により患者の吸気流中に分散させる。自由流動性粉末を得るために、治療剤を添加剤、例えばラクトースと製剤する。治療剤の定量をカプセル中に貯蔵し、各駆動毎に投与する。
【０１１７】
本発明はまた、式(Ｉ)の化合物の粒子径が１０−１０００nm、好ましくは１０−４００nmである製剤にも関する。かかる医薬製剤は、特に、表面積を大きくすることにより、すなわち、粒子径を小さくすることによりバイオアベイラビリティを上げることができるとの原則に基づき、バイオアベイラビリティが低い薬剤について特に開発されている。例えば、Ｕ.Ｓ.４,１０７,２８８は、活性物質が巨大分子の架橋マトリックス上に支持されている１０−１,０００nmの範囲の粒子径の医薬製剤を記載する。Ｕ.Ｓ.５,１４５,６８４は、医薬物質を、表面修飾剤の存在下でナノ粒子(平均粒子径４００nm)まで粉砕し、そして液体媒体に分散させて、顕著に高いバイオアベイラビリティを示す製剤を得る、医薬製剤の製造法を記載する。両文献とも引用により本明細書に包含させる。
【０１１８】
さらなる面において、本発明は(治療有効量)の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物、および少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤を含む医薬組成物を提供する。許容される添加剤は非毒性であり、投与を助け、かつ式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の治療利益に有害な影響を与えないものである。かかる添加剤は、当業者が一般的に利用可能な任意の固体、液体、半固体、またはエアロゾル組成物の場合、ガス状添加剤であり得る。
【０１１９】
固体医薬添加剤はデンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルクなどを含む。
【０１２０】
液体および半固体添加剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールおよび石油由来、動物由来、植物由来または合成由来のものを含む種々の油、例えばピーナツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などから選択してよい。好ましい液体担体は、特に、注射溶液のために、水、食塩水、水性デキストロース、およびグリコール類を含む。
【０１２１】
圧縮ガスをエアロゾル形態の式(Ｉ)の化合物の投与に使用し得る。この目的に適当な不活性ガスは、窒素、二酸化炭素などである。他の適当な医薬添加剤およびその製剤はRemington's Pharmaceutical Sciences, edited by E. W. Martin (Mack Publishing Company, l8th ed., l990)に記載されている。
【０１２２】
製剤中の化合物の量は、当業者により用いられる全範囲にわたって変えることができる。典型的に、製剤は、重量パーセント(ｗｔ％)ベースで約０.０１−９９.９９ｗｔ％の式(Ｉ)の化合物を全製剤に基づき含み、残りは１種以上の適当な医薬添加剤である。好ましくは、化合物は約１−８０ｗｔ％のレベルで存在する。
【０１２３】
本発明はさらに少なくとも１種の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物および少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤を含む(すなわちこれらを包含するまたはこれらから成る)医薬組成物に関する。
【０１２４】
遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物を少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤(例えば担体および／または希釈剤)と共に含む医薬組成物は、これらの成分の混合による慣用法により製造し得る。
【０１２５】
遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の化合物を含み、さらに組合せパートナーを(一つの単位形態としてまたはキット・オブ・パーツとして)を少なくとも１種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤と共に含む組合せ医薬組成物は、薬学的に許容される担体および／または希釈剤とこれらの有効成分の混合による慣用法により製造し得る。
【０１２６】
結果として、本発明はさらに以下の面を提供する：
・遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物を薬学的に許容される希釈剤および／または担体と共に含む、例えば、ここに記載する方法のいずれかにおいて使用するための、組合せ医薬組成物。
・有効成分としての遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物；１種以上の薬学的に許容される担体物質および／または希釈剤および場合により１種以上のさらなる医薬物質を含む、組合せ医薬組成物。かかる組合せ医薬組成物は一投与単位形態でも、複数部分で構成されるキットでもよい。
・治療有効量の遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物および同時のまたは逐次的投与のための第二医薬物質を含む、組合せ医薬組成物。
・治療有効非毒性量の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも第二医薬物質、例えば、上に示すものの、例えば、同時のまたは逐次的共投与を含む、上に定義する方法。
・ａ)ここに開示する遊離形または薬学的に許容される塩形の式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物である第一剤およびｂ)少なくとも１種の併用剤、例えば上に示すものを含む、医薬組合せ、例えばキット；ここで、かかるキットはその投与のための指示を含んでよい。
【０１２７】
式(Ｉ)、(ＩＡ)、(ＩＡ')、(ＩＢ)および／または(ＩＣ)の化合物の実施例は、本発明を、その範囲を限定することなく説明する。かかる化合物の製造方法を記載する。
【０１２８】
温度は摂氏で測定する。特にことわらない限り、反応はアルゴン雰囲気下、ｒｔで行い、ＭＳはＥＳＩを用いて得る。以下のＨＰＬＣ／ＭＳ法を中間体および実施例化合物の製造および分析に使用する：
方法Ａ１〜Ａ３(ＬＣＭＳ：分析的ＨＰＬＣ／ＭＳ)：
システム：Agilent 1100 SeriesとWaters Micromass ZQ 2000 ESI+および/またはESI-
カラム：XBridge C18、３×３０mm、２.５ミクロン
温度：５０℃
溶離剤Ａ：５％ＣＨ３ＣＮおよび０.８％ＨＣＯＯＨ含有Ｈ２Ｏ
溶離剤Ｂ：０.６％ＨＣＯＯＨ含有ＣＨ３ＣＮ
流速：１.２−２.４mL／分
【０１２９】
方法Ａ１：方法Polar4a_p_100-900および方法Polar4a_pn_100-900:
勾配：０−２.９分間：１％から９５％のＢ
方法Ａ２：方法Fast4_p_100-900および方法Fast4a_pn_100-900：
勾配：０−２.４分間：１０％からら９５％のＢ
方法Ａ３：方法Slow4a_pn_100-900：
勾配：０−４.４分間：５％から９５％のＢ
【０１３０】
方法Ｂ(分取ＨＰＬＣ)装置：Waters分取ＨＰＬＣシステム、カラム：SunfireTM Prep C18 OBDTM  ５ミクロン３０×１００mm、温度：２５℃、溶離剤：５−１００％ＣＨ３ＣＮの０.０５％水性ＴＦＡの２０分間にわたる勾配、流速：３０ml／分、検出：ＵＶ  ２５４nm。
【０１３１】
方法Ｃ(分取ＨＰＬＣ)装置：Waters分取ＨＰＬＣシステム、カラム：SunfireTM Prep C18 OBDTM  ５ミクロン３０×１００mm、温度：２５℃、溶離剤：５−５０％ＣＨ３ＣＮの０.０５％水性ＴＦＡ溶液の２０分間にわたる勾配、流速：３０ml／分、検出：ＵＶ  ２５４nm。
【０１３２】
方法Ｄ(分析的ＨＰＬＣ)：直線勾配２−１００％ＣＨ３ＣＮ(０.１％ＴＦＡ)およびＨ２Ｏ(０.１％ＴＦＡ)を５分間＋１.５分間１００％ＣＨ３ＣＮ(０.１％ＴＦＡ)；２１５nmで検出、３０℃で流速１mL／分。カラム：Nucleosil 100-3 C18(７０×４mm)
【０１３３】
方法Ｅ(分取ＨＰＬＣ／ＭＳ)装置：Gilson分取ＨＰＬＣシステム、カラム：SunfireTM Prep C18 OBDTM  ５ミクロン３０×１００mm、温度：２５℃、溶離剤：５−１００％ＣＨ３ＣＮの０.０５％水性ＴＦＡ溶液の２０分間にわたる勾配、流速：３０ml／分、検出：ＵＶ  ２５４nm。
【０１３４】
方法Ｆ(分析的ＨＰＬＣ)装置：Shimadzu SIL-10A、方法：直線勾配２−１００％ＣＨ３ＣＮ(０.１％ＴＦＡ)およびＨ２Ｏ(０.１％ＴＦＡ)を４分間＋２分間１００％ＣＨ３ＣＮ(０.１％ＴＦＡ)；−１００％ＣＨ３ＣＮ(０.１％ＴＦＡ)に３分間で戻す；２１５nmで検出、ＲＴで流速２mL／分。カラム：Nucleosil OD-5-100 C18(１５０×４.６mm)
【０１３５】
方法Ｇ(分析的ＨＰＬＣ)装置：
システム：Agilent 1100 Series
カラム：HP Hypersil BDS C18、４×１２５mm、５ミクロン
温度：２５℃
溶離剤Ａ：０.１％ｖ／ｖ  ＴＦＡ含有Ｈ２Ｏ
溶離剤Ｂ：０.１％ｖ／ｖ  ＴＦＡ含有ＣＨ３ＣＮ
勾配：１０％→１００％Ｂを５分間、２.５分間１００％Ｂ、→１０％Ｂを１分間
流速：１.５mL／分
検出：ＵＶ  ２１５nm
【０１３６】
方法Ｈ(分析的ＨＰＬＣ)装置：
システム：Agilent 1100 Series
カラム：Macherey-Nagel Nucleosil 100-3 C18HD、４×１２５mm、３ミクロン
温度：３０℃
溶離剤Ａ：０.１％ｖ／ｖ  ＴＦＡ含有Ｈ２Ｏ
溶離剤Ｂ：０.１％ｖ／ｖ  ＴＦＡ含有ＣＨ３ＣＮ
勾配：２％→１００％Ｂを７分間、２分間１００％Ｂ、→２％Ｂを１分間
流速：１.０mL／分
検出：ＵＶ  ２１５nm
【０１３７】
方法Ｉ(ＬＣＭＳ：分析的ＨＰＬＣ／ＭＳ)：
システム：Waters Acquity UPLCとWaters Micromass ZQ 2000 ESI+/-
カラム：Acquity HSS T3 C18、２.１×５０mm、１.８ミクロン
温度：５０℃
溶離剤Ａ：０.０５％ｖ／ｖ  ＨＣＯＯＨおよび３.７５mM  酢酸アンモニウム含有Ｈ２Ｏ
溶離剤Ｂ：０.０４％ＨＣＯＯＨ含有ＣＨ３ＣＮ
勾配：２％→９８％Ｂを４.３分間、０.７分間９８％Ｂ、→２％Ｂを０.１分間および０.９分間２％Ｂ
流速：１.０mL／分
【０１３８】
方法Ｊ(ＬＣＭＳ：分析的ＨＰＬＣ／ＭＳ)：
システム：Agilent 1100 Series; MS: G1946D
カラム：Symmetry C8、２.１×５０mm、３.５ミクロン
溶離剤Ａ：０.１％ｖ／ｖ  ＨＣＯＯＨ含有Ｈ２Ｏ
溶離剤Ｂ：０.１％ｖ／ｖ  ＨＣＯＯＨ含有ＣＨ３ＣＮ
勾配：０−３.３分間：５％ｔｏ  ９５％のＢ
流速：１.０mL／分
【０１３９】
方法Ｋ(ＬＣＭＳ：分析的ＨＰＬＣ／ＭＳ)：
システム：Waters Acquity UPLC
カラム：Acquity HSS T3 C18、２.１×５０mm、１.８ミクロン
溶離剤Ａ：０.０５％ｖ／ｖ  ＨＣＯＯＨおよび０.０５％酢酸アンモニウム含有Ｈ２Ｏ
溶離剤Ｂ：０.０４％ＨＣＯＯＨ含有アセトニトリル
勾配：２％→９８％Ｂを１.７分間、０.４５分間９８％Ｂ、→２％Ｂを０.０４分間
流速：１.２ml／分
【０１４０】
方法Ｌ(ＬＣＭＳ：分析的ＨＰＬＣ／ＭＳ)：
システム：Waters Aquity UPLC; MS: Waters AQ Detector
カラム：Aquity HSS、１.８μm  ２.１×５０mm、３／ｐｋ
溶離剤Ａ：０.１％ｖ／ｖ  ＨＣＯＯＨ含有Ｈ２Ｏ
溶離剤Ｂ：０.１％ｖ／ｖ  ＨＣＯＯＨ含有ＣＨ３ＣＮ
勾配：０−１.５分間：１０％から９５％のＢ、１分間：９５％Ｂ
流速：１.２mL／分
【０１４１】
ＥＳＩ−ＭＳ：
装置：Micromass Platform II
溶離剤：０.２％ｖ／ｖの２５％水酸化アンモニウム溶液を含むＨ２Ｏ中の１５％ｖ／ｖＭｅＯＨ
流速：０.０５mL／分
【０１４２】
以下の実施例において、下に示す略語を使用する：
【表１】
2012531454.tif 000012
【実施例】
【０１４３】
中間体Ａ：イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド
【化１０】
2012531454.tif 000013
８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イルアミン(工程Ａ.１、０.３１９ｇ、１.２２５mmol)およびＣＤＩ(２７８mg、１.７１５mmol)を、ＤＣＭ(５ml)およびＤＭＦ(０.２５ml)にアルゴン雰囲気下添加した。１８時間後、残留物を４℃に冷却し、沈殿を濾過により回収した。固体を５０℃で高真空で乾燥させて、表題化合物を淡黄色固体として得た。(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−カルバミン酸メチルエステルについてLCMS: tR 0.95分およびM+H 319.0(方法A2)；ＭｅＯＨ溶液としてサンプル調製中の表題化合物とＭｅＯＨの反応産物。
【０１４４】
工程Ａ.１：８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イルアミン
【化１１】
2012531454.tif 000014
中間体Ａ.１を２種の経路により得た。両経路とも２−アミノ−５,６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾチアゾール−７−オンから出発し、以下に記載する：
【０１４５】
経路１：
Ｎ'−{６−[１−ジメチルアミノ−メト−(Ｅ)−イリデン]−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル}−Ｎ,Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン(工程Ａ.２、２.２ｇ、７.９０mmol)の２−メトキシエタノール(２０mL)中の混合物に、ｒｔで水酸化ナトリウム(１.１８５ｇ、２９.６mmol)および２,２−ジメチル−プロピオンアミジンヒドロクロライド(１.６２０ｇ、１１.８５mmol)を添加した。ＲＭを１２５℃で３時間撹拌した。ｒｔに冷却後、ＲＭをＭｅＯＨで希釈し、シリカゲルに吸着させ、フラッシュクロマトグラフィー(CombiFlash(登録商標)Companion System(登録商標)とRediSep(登録商標)シリカゲルカラム、溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／アンモニア９５：５：０.５)で精製した。LC: tR 3.64分(方法D)。MS: M+H=261。1H-NMR in DMSO-d6: 8.24 (s, 1H); 7.70 (s, 2H); 2.89 - 2.84 (m, 2H); 2.76 - 2.71 (m, 2H); 1.28 (s, 9H)。
【０１４６】
工程Ａ.２：Ｎ'−{６−[１−ジメチルアミノ−メト−(Ｅ)−イリデン]−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル}−Ｎ,Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン
【化１２】
2012531454.tif 000015
２−アミノ−５,６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾチアゾール−７−オン(３.５ｇ、２０.８１mmol)のジメトキシメチルジメチルアミン(１２mL、９０mmol)懸濁液を１００℃で撹拌しながら６５時間撹拌した。ＲＭを真空で蒸発乾固し、残留物をＥｔＯＡｃに懸濁した。１時間、４℃の後、固体を濾別し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、高真空下、６０℃で乾燥させて、純粋表題生成物を褐色結晶として得た。LC: tR 3.25分(方法D)。MS: M+H=279。1H-NMR in DMSO-d6: 8.40 (s, 1H); 7.23 (s, 1H); 3.15 (s, 3H); 3.05 (s, 6H); 2.97 (s, 3H); 2.91 (t, 2H); 2.67 (t, 2H)。
【０１４７】
経路２：
【化１３】
2012531454.tif 000016
炭酸カリウム(０.４３４ｇ、３.１４mmol)をＮ−(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アセトアミド(工程Ａ.３、０.３８ｇ、１.２５７mmol)のＭｅＯＨ中の混合物に添加した。ＲＭを５０℃で５２時間、ｒｔで撹拌したに冷却し、真空で蒸発させて、赤色塊を得た。水(２０mL)を添加し、混合物をｒｔでさらに３時間撹拌した。赤色懸濁液を４℃に冷却し、濾過して、高真空で乾燥後、表題化合物をベージュ色固体として得た。LCMS: tR 0.99分およびM+H=261(方法A3)。1H-NMR in DMSO-d6, 400MHz: 8.24 (s, 1H); 7.70 (s, 2H); 2.89 - 2.84 (m, 2H); 2.76 - 2.71 (m, 2H); 1.28 (s, 9H)。
【０１４８】
工程Ａ.３：Ｎ−(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アセトアミド
【化１４】
2012531454.tif 000017
ピリジン(１３mL)をＮ−(６−ホルミル−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程Ａ.４、３.０５ｇ、１２.８mmol)およびｔｅｒｔ.ブチルアミジンヒドロクロライド(１.７８８ｇ、１２.８mmol)に添加し、混合物を密閉容器で、１６０℃で６.５時間加熱した。冷却後反応混合物を濾過して、固体を得た。濾過母液蒸発させて、さらに固体物質を得た。合わせた固体を熱ＣＨ３ＣＮで素早く摩砕し、ＣＨ３ＣＮ母液を蒸発させて、固体を得て、それは主として表題生成物であることが示された。粗生成物を約１０mlのＭｅＯＨ中１０％ＤＭＳＯに溶解して、僅かに濁った橙色溶液を得て、それを濾過し、水(１００ml)にｒｔで撹拌しながら滴下した。沈殿した固体を濾過により回収して、表題化合物を橙色固体として得た。LCMS: tR 1.37分およびM+H=303.0(方法A3)。1H-NMR in DMSO-d6, 400MHz: 12.40 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 2.88 - 3.00 (m, 4H); 2.17 (s, 3H); 1.32 (s, 9H)。
【０１４９】
工程Ａ.４：Ｎ−(６−ホルミル−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド
【化１５】
2012531454.tif 000018
ＬｉＨＭＤＳ溶液(１Ｍ、２７.７mL)を、１０分間かけて、−７８℃に冷却したＮ−(７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程Ａ.５、２.０ｇ、９.２３mmol)の乾燥ＴＨＦ(２０mL)懸濁液にアルゴン雰囲気下下滴下した。ＲＭを次いで−７８℃で２.５時間撹拌し、ギ酸メチル(２.３０８mL、３６.９mmol)を３０分間かけて滴下した。ＲＭをゆっくりｒｔに温め、１８時間、ｒｔで撹拌した。ＲＭを水性１Ｍ  ＨＣｌ(７０mL)に取り、ＤＣＭで３回抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、表題化合物を固体として得た。HPLC: tR 3.65分(方法D)。MS: M-H=237。1H-NMR in DMSO-d6 (400MHz): 12.50 (s, br, 1H); 7.55 (s, 1H); 2.90 - 2.60 (m, 4H); 2.15 (s, 3H)。
【０１５０】
工程Ａ.５：Ｎ−(７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド
【化１６】
2012531454.tif 000019
酢酸無水物(８０mL)に、ｒｔで２−アミノ−５,６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾチアゾール−７−オン(１０ｇ、５９.４mmol)を添加し、得られた懸濁液を加熱還流した。１.７５時間、還流で撹拌後、ＲＭを撹拌しながら冷却し、１８時間、ｒｔで撹拌し、さらに氷／ＮａＣｌ浴で冷却し、固体を濾過により回収した。固体を２回還流しながらアセトン(１０mL、次いで１５mL)で摩砕し、濾過し、真空下４０℃で乾燥させて、表題生成物をベージュ色固体として得た。HPLC: tR 3.47分(方法D)。MS: M-H=211.1。1H-NMR in DMSO-d6 (600MHz): 12.55 (s, br, 1H); 2.84 (t, 2H); 2.48 (t, 2H); 2.17 (s, 3H); 2.065 (qt, 2H)。
【０１５１】
中間体Ｂ：(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化１７】
2012531454.tif 000020
(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル(工程Ｂ.１、２２５mg)および７Ｍ  アンモニアのＭｅＯＨ(７mL)溶液を１８時間、ｒｔで密閉容器に静置した。蒸発およびＥｔ２Ｏでの摩砕により、表題化合物を白色固体として得た。
【０１５２】
工程Ｂ.１  (２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル
【化１８】
2012531454.tif 000021
(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ベンジルエステル２−メチルエステル(工程Ｂ.２、４２０mg)、１０％パラジウム炭素(８０mg)およびＭｅＯＨ(１０mL)の混合物を、１６時間、水素雰囲気下撹拌した。濾過および蒸発により表題化合物を得て、それを精製せずに次工程に使用した。
【０１５３】
工程Ｂ.２  (２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ベンジルエステル２−メチルエステル
【化１９】
2012531454.tif 000022
ナトリウムシアノボロハイドライド(２００mg)を(２Ｓ,４Ｒ)−４−アミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ベンジルエステル２−メチルエステル(４００mg)、ホルマリン(０.６８ml)、酢酸(０.７２ml)、トリエチルアミン(０.２ml)およびＭｅＯＨ(２ml)の混合物に添加し、混合物を２時間、ｒｔで撹拌した。ＲＭをＤＣＭおよび水性ＮａＨＣＯ３溶液に分配し、ＤＣＭ層を蒸発させ、順相クロマトグラフィー、溶離剤；ＥｔＯＡｃから２０％ＥｔＯＨのＥｔＯＡｃ溶液の勾配で精製して、優勢なＵＶ活性成分を得た。ｃクロマトグラフィーした物質を１Ｍ  ＨＣｌに溶解し、２回Ｅｔ２Ｏで洗浄し、水性層をＮａＨＣＯ３で塩基性化し、３回Ｅｔ２Ｏで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、表題化合物を淡黄色油状物として得た。
【０１５４】
中間体Ｃ：イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド
【化２０】
2012531454.tif 000023
２−アミノ−８−Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロチアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン(工程Ｃ.１、１ｇ、３.６３mmol)のＤＣＭ(３５mL)中の混合物に、ＣＤＩ(１.１７８ｇ、７.２６mmol)を添加した。ＲＭを４０℃で９０時間撹拌した。ｒｔに冷却後、固体を濾過により回収して、表題化合物を得た。表題化合物とＭｅＯＨの反応産物としての(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−カルバミン酸メチルエステルについてHPLC: tR 4.11分(方法D)。
MS: M+H=334。
【０１５５】
工程Ｃ.１：２−アミノ−８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロチアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン
【化２１】
2012531454.tif 000024
Ｎ'−{６−[１−ジメチルアミノ−メト−(Ｅ)−イリデン]−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル}−Ｎ,Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン(工程Ａ.２、１ｇ、３.５９mmol)の２−メトキシエタノール(１０mL)溶液に、ＮａＯＨ(０.５３９ｇ、１３.４７mmol)およびＮ,Ｎ−ジエチルグアニジン(０.４５４ｇ、３.９４mmol)をアルゴン下ｒｔで添加した。ＲＭを３.５時間、１２５℃で、ｒｔで撹拌したに冷却した。真空蒸発後残留物を０.１Ｍ  ＨＣｌ(５０mL)に溶解し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。水性層を６Ｎ  ＮａＯＨで塩基性化し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、高真空下、６０℃で乾燥させて、表題化合物を橙色結晶として得た。LC: tR 3.60分(方法D)。MS: M+H=276。1H-NMR in DMSO-d6: 7.91 (s, 1H); 7.59 (s, 2H); 3.50 (q, 4H); 2.69 (dd, 4H); 1.07 (t, 6H)。
【０１５６】
中間体Ｄ：(２Ｓ,３Ｓ)−３−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化２２】
2012531454.tif 000025
１,４−ジオキサン中ＨＣｌの４Ｍ溶液(１.５mL)を(２Ｓ,３Ｓ)−３−メチルピロリジン−２−カルボン酸(０.５ｇ)のＥｔＯＨ(５mL)懸濁液にｒｔで添加し、混合物を２０時間加熱還流した。ＲＭを蒸発させ、ＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液(５.６mL)を添加した。ＲＭをｒｔに６日間静置し、蒸発させ、残留物をＭｅＯＨ(０.５mL)で摩砕し、濾過し、冷ＭｅＯＨ(２mL)で洗浄して、表題化合物を白色固体として得た。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 8.06 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 3.60 (d, 1H), 3.25-3.14 (m, 2H), 2.24-2.15 (m, 1H), 2.09-1.98 (m, 1H), 1.57-1.45 (m, 1H), 1.13 (d, 3H)。
【０１５７】
中間体Ｅ：(Ｒ)−２−ベンジル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化２３】
2012531454.tif 000026
(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−ベンジル−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン(１.４０ｇ、WangおよびGermanas Synlett 1999, 33-36.に記載の通り製造)およびＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア(１５ml)を、５０℃で３日間、密閉容器中で加熱した。冷却したＲＭを蒸発させ、クロロホルムで摩砕して、表題化合物を白色固体として得た。
【０１５８】
中間体Ｆ(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化２４】
2012531454.tif 000027
(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸ブチルエステル(工程Ｆ.１、２.３ｇ)のＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液(２２.２ml)をボンベ中７０℃で１０日間加熱した。ＲＭの蒸発およびヘキサン(２０mL)での摩砕により、表題化合物を灰白色固体として得た。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 7.40 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 2.95-2.84 (m, 1H), 2.72-2.60 (m, 1H), 2.06-1.95 (m, 1H), 1.66-1.44 (m, 2H), 1.42-1.30 (m, 1H), 1.22 (s, 3H)。
【０１５９】
工程Ｆ.１：(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸ブチルエステル
【化２５】
2012531454.tif 000028
濃ＨＣｌ(２ml)を(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸(２ｇ)のブタン−１−オール(５０ml)懸濁液に添加し、それを６０℃で１８時間加熱し、４日間還流した。ＲＭを蒸発させ、飽和水性ＮａＨＣＯ３およびＤＣＭに分配し、ＤＣＭで３回抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。単離油状物を１０mbarでクーゲルロール蒸留して、表題化合物を透明無色油状物として、オーブン温度１００−１２０℃で蒸留フラクションから得たする。
【０１６０】
中間体Ｇ：(Ｒ)−２−メトキシメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化２６】
2012531454.tif 000029
(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−メトキシメチル−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン(工程Ｇ.１、０.６ｇ)およびＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア(６mL)の混合物を、ｒｔで２日間、密閉容器中静置した。ＲＭを蒸発させて、表題化合物を淡黄色油状物として得て、それをさらに精製せずに使用した。
【０１６１】
工程Ｇ.１：(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−メトキシメチル−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン
【化２７】
2012531454.tif 000030
ヘキサン／ＴＨＦ３：５混合物中のリチウムジイソプロピルアミドの１Ｍ溶液を(８.２５ml)、(３Ｒ,７ａＳ)−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン(１.５１ｇ、WangおよびGermanas Synlett 1999, 33-36.に記載の通り製造)のＴＨＦ(５ml)溶液に、−７８℃で滴下した。３０分間、−７８℃で撹拌後メトキシメチルクロライド(１.１４ml)を添加した。ＲＭを−３０℃に３時間かけて温め、水を添加した。水性層をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層を蒸発させ、残留物をＤＣＭで溶出する順相クロマトグラフィーで精製して、表題化合物を淡黄色油状物として得た。
【０１６２】
中間体Ｈ：(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化２８】
2012531454.tif 000031
(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−ジメチルアミノメチル−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン(工程Ｈ.１、０.２６ｇ)およびＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア(４mL)の混合物を、５０℃で３日間、密閉容器中で加熱した。冷却したＲＭを蒸発させて、表題化合物を褐色油状物として得て、それをさらに精製せずに使用した。ＭＳ：M+H=172.1。
【０１６３】
工程Ｈ.１：(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−ジメチルアミノメチル−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン
【化２９】
2012531454.tif 000032
ヘキサン／ＴＨＦ３：５混合物中のリチウムジイソプロピルアミド１Ｍ溶液(８.２５ml)を、(３Ｒ,７ａＳ)−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン(１.５１ｇ、WangおよびGermanas Synlett 1999, 33-36.に記載の通り製造)のＴＨＦ(５ml)溶液に−７８℃で滴下した。３０分間、−７８℃撹拌後、エッシェンモーザー塩(２.７８ｇ)を添加した。ＲＭを−４０℃に激しく撹拌しながら１時間かけて温め、２時間、−４０℃に維持した。水を添加し、水性層ＤＣＭで抽出し、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。残留物をＤＣＭから２０％ＥｔＯＡｃのＤＣＭ溶液の勾配で溶出する順相クロマトグラフィーで精製して、表題化合物を淡黄色油状物として得た(M+H=301/303/305 3: 3: 1)。
【０１６４】
中間体Ｉ：ｄ６−(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化３０】
2012531454.tif 000033
ｄ６−(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−ジメチルアミノメチル−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン(工程Ｉ.１、４４０mg、１.４３０mmol)をアンモニアのＭｅＯＨ溶液(１０.２mL、７１.４mmol)に密閉容器中溶解し、７５℃で５日間加熱した。反応混合物を蒸発させ、２回ＣＨＣｌ３で摩砕して、表題生成物を淡褐色固体として得た。
【０１６５】
工程Ｉ.１：ｄ６−(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−ジメチルアミノメチル−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン
【化３１】
2012531454.tif 000034
(３Ｒ,７ａＲ)−１−オキソ−３−トリクロロメチル−ジヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−７ａ−カルバルデヒド(J. Org. Chem. 2006, 71(1), 97-102に記載の通り得た、１ｇ、３.６７mmol)、ジメチルアミン−ｄ７のＴＨＦ溶液(１.０mL、１４.０９mmol)、酢酸(０.５２５mL、９.１７mmol)およびＤＣＥ(４mL)をアルゴン下合わせて、ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(１.０８９ｇ、５.１４mmol)を少しずつ添加した。ｒｔで３時間撹拌後、ＲＭをＤＣＭに溶解し、１Ｍ  ＮａＯＨと分配し、さらに１回ＤＣＭで抽出した。有機層を合わせ、２回水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶液をその体積が半分になるまで蒸発させ、１Ｍ  ＨＣｌのＨ２Ｏ溶液を添加し、層を分離し、水性層を２回ＤＣＭで洗浄した。水性層のｐＨを飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液で〜８に合わせ、３回ＤＣＭで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、所望の表題生成物を薄黄色油状物として得た。
【０１６６】
中間体Ｊ：(Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化３２】
2012531454.tif 000035
(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−ヒドロキシメチル−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン(工程Ｊ.１、３０８mg、１.１２２mmol)を、ＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア(８.０１４mL、５６.１mmol)にアルゴン下添加し、７５℃で密閉容器中、７２時間加熱し、蒸発させて、表題化合物を粘性淡褐色油状物として得て、それをさらに精製せずに使用した。
【０１６７】
工程Ｊ.１：(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−ヒドロキシメチル−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン
【化３３】
2012531454.tif 000036
ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(５４４mg、２.５７mmol)を(３Ｒ,７ａＲ)−１−オキソ−３−トリクロロメチル−ジヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−７ａ−カルバルデヒド(J. Org. Chem. 2006, 71(1), 97-102に記載の通り得た、５００mg、１.８３５mmol)のＤＣＥ(４mL)溶液に添加した。ＲＭを１８時間、ｒｔで撹拌し、ＤＣＭに溶解し、有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。粗生成物を２０ｇ  RediSep(登録商標)シリカゲルカラム(溶離剤ＤＣＭから１０％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液)を使用するフラッシュクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を透明淡黄色油状物として得た。
【０１６８】
中間体Ｋ：(Ｒ)−２−{[(３−フルオロ−ベンジル)−メチル−アミノ]−メチル}−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化３４】
2012531454.tif 000037
(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−{[(３−フルオロ−ベンジル)−メチル−アミノ]−メチル}−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン(工程Ｋ.１、３８５mg、０.９７３mmol)をＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア(６.９５０mL、４８.７mmol)にアルゴン下添加し、密閉容器中、５０℃で６日間、７５℃で５日間加熱した。ＲＭを蒸発させ、残留物を１２ｇ  RediSep(登録商標)シリカゲルカラム(溶離剤５％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液)を使用するフラッシュクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を黄色油状物として得た。
【０１６９】
工程Ｋ.１：(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−{[(３−フルオロ−ベンジル)−メチル−アミノ]−メチル}−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン
【化３５】
2012531454.tif 000038
ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(８８９mg、４.１９mmol)  を(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−[(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−メチル]−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン(工程Ｋ.２、４００mg、１.０４８mmol)、ホルムアルデヒド(３７％Ｈ２Ｏ溶液、０.１０２mL、１.３６mmol)および酢酸(０.１５０mL、２.６２mmol)のＤＣＥ(４mL)中の混合物にアルゴン雰囲気下添加した。２時間、ｒｔで撹拌後、ＲＭをＤＣＭおよび水に分配した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、表題化合物を淡褐色油状物として得て、それをさらに精製せずに使用した。
【０１７０】
工程Ｋ.２：(３Ｒ,７ａＲ)−７ａ−[(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−メチル]−３−トリクロロメチル−テトラヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−１−オン
【化３６】
2012531454.tif 000039
ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(５４４mg、２.５７mmol)を(３Ｒ,７ａＲ)−１−オキソ−３−トリクロロメチル−ジヒドロ−ピロロ[１,２−ｃ]オキサゾール−７ａ−カルバルデヒド(J. Org. Chem. 2006, 71(1), 97-102に記載の通り得た、５００mg、１.８３５mmol)、３−フルオロベンジルアミン(０.２５１mL、２.２０mmol)および酢酸(０.２６３mL、４.５９mmol)のＤＣＥ(４mL)中の混合物にアルゴン雰囲気下添加した。ＲＭをｒｔで３時間撹拌し、水およびＤＣＭに分配し、合わせた有機Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、表題化合物を淡黄色油状物として得て、それをさらに精製せずに使用した。
【０１７１】
中間体Ｌ：(Ｓ)−アゼチジン−２−カルボン酸アミド
【化３７】
2012531454.tif 000040
(Ｓ)−２−カルバモイル−アゼチジン−１−カルボン酸ベンジルエステル(工程Ｌ.１、１.８ｇ)および１０％パラジウム炭素(０.２ｇ)のＭｅＯＨ(２５ml)中の混合物を水素雰囲気下、ｒｔで５時間撹拌した。濾過および蒸発により表題化合物を得て、それをさらに精製せずに使用した。
【０１７２】
工程Ｌ.１：(Ｓ)−２−カルバモイル−アゼチジン−１−カルボン酸ベンジルエステル
【化３８】
2012531454.tif 000041
(Ｓ)−アゼチジン−１,２−ジカルボン酸１−ベンジルエステル２−メチルエステル(２.５ｇ)およびＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア(１０ml)の混合物を、ｒｔで１８時間、密閉容器中静置した。ＲＭを蒸発させて、表題化合物を白色固体として得て、それをさらに精製せずに使用した。MS: M+H 235.1およびM-H 233.1。
【０１７３】
中間体Ｍ：(２Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化３９】
2012531454.tif 000042
ＥｔＯＨ中ＨＣｌの１.２５Ｍ溶液(２.３ml)を(２Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロ−ピロリジン−２−カルボン酸(０.２５ｇ)のＥｔＯＨ(２ml)懸濁液にｒｔで添加し、混合物を６２時間、５５℃加熱した。ＲＭを蒸発させ、ＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液(５.６ml)を添加した。ＲＭをｒｔで３６時間静置し、蒸発させ、残留物をＭｅＯＨ(０.５ml)で摩砕し、濾過して、表題化合物を白色固体として得た。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 7.68 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 5.30 (d, 1H), 3.96 (t, 1H), 3.40-3.12 (m, 2H), 2.48-2.31 (m, 1H), 2.02-1.81 (m, 1H)。
【０１７４】
中間体Ｎ：(２Ｓ,４Ｓ)−４−フルオロ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化４０】
2012531454.tif 000043
(２Ｓ,４Ｓ)−２−カルバモイル−４−フルオロ−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(１.０ｇ)、濃ＨＣｌ(０.６ml)および１−ブタノール(１０ml)の混合物を４８時間、５０℃で加熱した。ＲＭを蒸発させ、ＤＣＭおよび水性ＮａＨＣＯ３に分配し、ＤＣＭ層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。メタノール中７Ｍアンモニア溶液(１０ml)を残留物に添加し、混合物を６０時間、ｒｔで密閉容器中静置した。蒸発およびＥｔＯＨでの摩砕により、表題化合物を白色固体として得た。
【０１７５】
中間体Ｏ：(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１−カルボン酸アミド
【化４１】
2012531454.tif 000044
(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１−カルボン酸エチルエステル(２.５ｇ、Hercouet Tetrahedron Asymmetry 1996, 7, 1267-1268.の方法により製造)およびＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア(２０ml)の混合物を密閉容器中、８０℃で５日間加熱した。冷却したＲＭを蒸発させ、ヘキサン／ＤＣＭで摩砕して、表題化合物をベージュ色固体として得た。1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz): 7.15 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 3.00 - 2.91 (m, 1H), 2.67 (q, 1H), 1.94 - 1.83 (m, 1H), 1.74 - 1.67 (m, 1H), 1.64 - 1.55 (m, 1H), 1.38 - 1.31 (m, 1H), 0.90 (t, 1H))。
【０１７６】
中間体Ｐ：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化４２】
2012531454.tif 000045
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程Ｐ.１、１.１ｇ、４.７６mmol)およびＰｄ炭１０％(０.１０１ｇ、０.９４７mmol)のＭｅＯＨ(２０mL)をＨ２雰囲気下、４６時間、ｒｔで振盪した。ＲＭをフルオロポア膜フィルター(０.２μm  ＦＧ)を通して濾過し、蒸発させた。残留物をＤＣＭで希釈し、蒸発乾固して、表題化合物を白色結晶として得た。MS: M+H=129.0。
1H-NMR(d6-DMSO, 600MHz): 7.34 (s, br,1H), 7.10 (s, br,1H), 3.48 (d, 1H), 3.0.2 - 2.97 (m, 1H), 2.80 - 2.75 (m, 1H), 2.35- 2.28 (m, 1H), 1.88 - 1.81 (m, 1H), 1.39 - 1.32 (m, 1H), 0.83 (d, 3H)。
【０１７７】
工程Ｐ.１：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化４３】
2012531454.tif 000046
トリメチルアルミニウムのトルエン溶液(２Ｍ、３.２３mL)を塩化アンモニウム(０.３４６ｇ、６.４７mmol)のトルエン(３.２mL)中の混合物に、０℃アルゴン雰囲気下滴下し、メタンガスの形成が伴った。ＲＭをｒｔに温め、ｒｔでさらに１５分間撹拌し、(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル(Tetr. Lett. 1997, 38 (1), 85-88に記載の通り製造；１.６ｇ、６.４７mmol)をゆっくり添加した。ＲＭをｒｔで５６時間撹拌し、１Ｍ  ＨＣｌを冷却しながら添加し、ＲＭを３回ＤＣＭで洗浄した。水性相をＮａ２ＣＯ３で塩基性化し、ＤＣＭで３回抽出し、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。蒸発により、表題化合物を帯黄色油状物として得た。MS: M+H=233.2。HPLC: tR 3.17分(方法D)。1H-NMR(d6-DMSO, 600MHz): 7.37 - 7.33 (m, 2H), 7.30 (t, 2H), 7.25 (s, br,1H), 7.21 (t, 1H), 7.12 (s, br,1H), 3.55 (q, 1H), 3.40 (d, 1H), 2.71 (t, 1H), 2.28- 2.22 (m, 1H), 2.21 - 2.16 (m, 1H), 1.71 (qt, 1H), 1.38 - 1.31 (m, 1H), 1.21 (d, 3H), 0.90 (d, 3H)。
【０１７８】
中間体Ｑ：(２Ｓ,４Ｓ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化４４】
2012531454.tif 000047
(２Ｓ,４Ｓ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−２−カルボン酸ブチルエステル(工程Ｑ.１、３２６mg)およびＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア(８ml)溶液を、１８時間、ｒｔで密閉容器中静置した。濾過、蒸発およびＥｔ２Ｏ／ＭｅＯＨでの摩砕により、表題化合物をベージュ色固体として得た。
【０１７９】
工程Ｑ.１：(２Ｓ,４Ｓ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−２−カルボン酸ブチルエステル
【化４５】
2012531454.tif 000048
濃ＨＣｌ(０.３ml)を(２Ｓ,４Ｓ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステルジヒドロクロライド(４００mg)および１−ブタノール(４ml)の混合物に添加し、１８時間、１１５℃で加熱した。冷却後ＲＭを蒸発させ、ＤＣＭおよび水性ＮａＨＣＯ３溶液に分配し、ＤＣＭ層を乾燥させ、蒸発させて、表題化合物を褐色油状物として得て、それをさらに精製せずに使用した。
【０１８０】
中間体Ｒ：(２Ｓ,４Ｓ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化４６】
2012531454.tif 000049
(２Ｓ,４Ｓ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステルヒドロクロライド(１ｇ)のＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液(１０ml)を１８時間撹拌し、蒸発させ、Ｅｔ２Ｏで摩砕した。残留物を最少量の熱ＭｅＯＨに溶解し、４℃で４時間静置した。表題化合物を濾過により白色固体として単離した。
【０１８１】
中間体Ｓ：(２Ｓ,４Ｒ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化４７】
2012531454.tif 000050
(２Ｓ,４Ｒ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸ベンジルエステル(１ｇ)の８８０  アンモニア(５ml)溶液を１８時間撹拌し、蒸発させ、Ｅｔ２Ｏで摩砕して、表題化合物を白色固体として得た。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 9.15 (s, br, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.27-4.16 (m, 1H), 3.27 (d, 1H), 3.02 (d, 1H), 2.33-2.19 (m, 1H), 1.89-1.76 (m, 1H)。
【０１８２】
中間体Ｔ：イミダゾール−１−カルボン酸(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド
【化４８】
2012531454.tif 000051
７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イルアミン(工程Ｔ.１、１７５mg、０.６５９mmol)をＤＣＭ(１０mL)に溶解し、ＣＤＩ(２９７mg、１.６４８mmol)を添加し、ＲＭをｒｔで２時間撹拌した。表題化合物を濾過により単離し、ＤＣＭで洗浄し、ＨＶ下乾燥させた。
【０１８３】
工程Ｔ.１：７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イルアミン
【化４９】
2012531454.tif 000052
Ｎ−(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程Ｔ.２、２２５mg、０.７３２mmol)をＥｔＯＨ(１０mL)に溶解し、ＨＣｌ  ３６％(１.４８ｇ、１４.６４mmol)を添加し、ＲＭを加熱還流した。１８時間、還流後、ＲＭをｒｔに冷却し、５％水性重炭酸ナトリウム溶液添加によりｐＨ８−９に調節し、ＥｔＯＡｃで抽出し、２回Ｈ２Ｏで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、表題生成物を得た(tR 4.408分(方法F))。
【０１８４】
工程Ｔ.２：Ｎ−(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アセトアミド
【化５０】
2012531454.tif 000053
Ｎ−(６−ブロモ−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程Ｔ.３、４７３mg、１.６３５mmol)をＭｅＯＨ(１０mL)に溶解し、２,２−ジメチルチオプロピオンアミド(２３０mg、１.９６２mmol)およびアンモニウムホスホモリブデート(３０７mg、０.１６４mmol)を添加し、ＲＭを２５℃で２０時間撹拌した。ＲＭを２日間静置し、５０℃で２４時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。粗物質を３０ｇのシリカゲル、溶離剤ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝９９：１でクロマトグラフィーにかけた。生成物含有フラクションを蒸発させ、ジオキサンから凍結乾燥させて、２２５mgの表題化合物を白色固体として得た(M+H=308; M-H=306; tR 5.525分(方法F))。
【０１８５】
工程Ｔ.３：Ｎ−(６−ブロモ−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド
【化５１】
2012531454.tif 000054
Ｎ−(７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程Ｔ.４、２.２８６ｇ、１０.８７mmol)をＡｃＯＨ(６０ml)に溶解し、ＡｃＯＨ(１０mL)に溶解した臭素(１.７４ｇ、１０.８７mmol)をゆっくり添加し、ＲＭを７５℃で２０時間加熱した。赤色からベージュ色に色が変わった。混合物を蒸発させ、残留物をＭｅＯＨ(１０mL)に溶解し、Ｈ２Ｏで沈殿させた。混合物を濾過し、ＨＶで乾燥させた。粗物質をＭＰＬＣ  Ｃ１８  Ｈ２Ｏ  ０.１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ  ０.１％ＴＦＡ、勾配０−５０％でクロマトグラフィーにかけた。生成物含有フラクションをＮａＨＣＯ３で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ジオキサンから凍結乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た(M+H=291; M-H=289; tR 4.29(方法F))。1H-NMR(d6-DMSO, 600.13MHz) 12.75 (s, 1H) 4.95 (t, 1H), 2.95-2.84 (m, 2H), 2.62-2.52 (m, 1H), 2.40-2.30 (m, 1H), 2.20 (s, 3H)。
【０１８６】
工程Ｔ.４：Ｎ−(７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド
【化５２】
2012531454.tif 000055
酢酸無水物(８０mL)に、ｒｔで２−アミノ−５,６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾチアゾール−７−オン(１０ｇ、５９.４mmol)を添加し、黄色懸濁液を加熱還流した。この温度で１.７５時間撹拌後、ＲＭを撹拌しながら冷却し、一夜、ｒｔで撹拌した。さらに氷／ＮａＣｌ浴で冷却後、懸濁液を濾過した。固体を２回アセトン(１０mL、次いで１５mL)と還流し、濾過した。得られた固体を、真空下、４０℃で一夜乾燥させて、表題化合物をベージュ色固体として得た(HPLC: tR 3.47分(方法A3), M-H=211.1), 1H-NMR in DMSO-d6 (600MHz): 12.55 (s, br, 1H); 2.84 (t, 2H); 2.48 (t, 2H); 2.17 (s, 3H); 2.065 (qt, 2H))。
【０１８７】
中間体Ｕ：イミダゾール−１−カルボン酸[７−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド
【化５３】
2012531454.tif 000056
７−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−ｌアミン(工程Ｕ.１  ６１.６mg、０.２１７mmol)をＤＣＭ(２mL)に溶解し、ＣＤＩ(２９７mg、１.６４８mmol)を添加して、透明無色溶液を得た。ＲＭを一夜、ｒｔに静置して、白色懸濁液を得た。混合物を４℃で１時間冷却し、濾過し、ＤＣＭで洗浄し、真空下で乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た(ＭｅＯＨ中のサンプルの分析；M+H=342.0は、ＭＳでのメチルカルバメート生成物を示す；tR 2.14分(方法A3))。
【０１８８】
工程Ｕ.１  ７−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−ｌアミン
【化５４】
2012531454.tif 000057
３−フルオロ−２,２−ジメチル−チオプロピオンアミド(工程Ｕ.２、３９４mg、２.３３１mmol)をＥｔＯＨに溶解し、Ｎ−(６−ブロモ−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程Ｔ.３、４７３mg、１.６３５mmol)およびアンモニウムホスホモリブデート(８０mg、０.０４２mmol)を添加して、黄色懸濁液を得た。ＲＭを加熱還流して、暗青緑色懸濁液を得た。反応混合物を６５℃で３日間撹拌した。ＲＭを濾過し、濾液蒸発させた。残留物をＤＭＦに溶解し、分取ＨＰＬＣ(方法Ｅ)で精製した。生成物含有フラクションを合わせ、蒸発させて、表題化合物を白色固体として得た(M+H=284.1; tR 1.30分(方法A3))。
【０１８９】
工程Ｕ.２  ３−フルオロ−２,２−ジメチル−チオプロピオンアミド
【化５５】
2012531454.tif 000058
表題化合物をBoys, M. L.; Downs, V. L. Synth. Commun. 2006, 36, 295の方法により製造した。硫化水素ナトリウム水和物(３.８９ｇ、６９.４mmol、吸湿性)を３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニトリル(工程Ｕ.３、１.１７ｇ、１１.５７mmol)およびジエチルアミンヒドロクロライド(７.６１ｇ、６９.４mmol)の１,４−ジオキサン(７mL)およびＨ２Ｏ(７mL)溶液にｒｔで添加した。ＲＭを５５℃に加熱し、この温度で３日間撹拌した。反応混合物を水(５０ml)で希釈し、５回ＥｔＯＡｃ(５０mL)で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、橙色油状物を得た。ＤＣＭ(５mL)を添加して、白色懸濁液を得た。懸濁液を濾過し、濾液をＤＣＭで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製した。生成物含有フラクションを蒸発させて、表題化合物を淡黄色油状物として得た(M+H=136.1, M-H=134.1; tR 0.69分(方法A3))。19F-NMR(d6-DMSO, 400MHz 218ppm (t, 1F))。
【０１９０】
工程Ｕ.３  ３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニトリル
【化５６】
2012531454.tif 000059
３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミド(工程Ｕ.４、１.８２ｇ、１５.２８mmol)および五酸化リン(２.１６８ｇ、１５.２８mmol)を合わせて自由に流動する白色粉末を得て、それを油浴中、浴温度１８０℃で５０分間、アルゴン雰囲気で加熱した。３００mbar真空をゆっくり適用して、移動する透明無色油状物を蒸留し、それは低融点蝋状固体が表題化合物の静置により形成した。19F-NMR(d6-DMSO, 400MHz 219.5 ppm (t, 1F))。
【０１９１】
工程Ｕ.４  ３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミド
【化５７】
2012531454.tif 000060
３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニルフルオライド(ＤＥ３３２６８７４およびＤＥ３６１１１９５、２.５ｇ、２０.４７mmol)を０℃で、水性アンモニア(１０mL)およびＴＨＦ(２０mL)の混合物に添加した。ＲＭをｒｔに温め、一夜、ｒｔで静置した。体積を真空下５０％に減少させて、濃白色懸濁液を得た。懸濁液をＤＣＭ／Ｈ２Ｏで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、表題化合物を白色結晶性固体として得た。
【０１９２】
中間体Ｖ：イミダゾール−１−カルボン酸(７−シクロプロピルメチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド
【化５８】
2012531454.tif 000061
７−シクロプロピルメチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イルアミン(工程Ｖ.１、７２mg、０.２７３mmol)を５mL  ＤＣＭに溶解し、ＣＤＩ(７３.９mg、０.４１０mmol)を添加し、ＲＭをｒｔで２０時間撹拌した。さらにＣＤＩ(３７mg、０.２０５mmol)を添加し、ＲＭをｒｔでさらに２時間撹拌した。混合物を濾過し、ＤＣＭで洗浄し、濾液を蒸発させて、表題化合物を得た(Ｍ＋Ｈ＝３２２.１；Ｍ−Ｈ＝３２０.２  ＭｅＯＨ中のＭＳ−ＥＳはメチルカルバメート生成物を示す)。
【０１９３】
工程Ｖ.１  ７−シクロプロピルメチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イルアミン
【化５９】
2012531454.tif 000062
Ｎ−(７−シクロプロピルメチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程Ｖ.２、１８０mg、０.５８９mmol)をＥｔＯＨ(１０mL)に溶解し、３６％ＨＣｌ(１.１９３ｇ、１１.７９mmol)を添加した。ＲＭを９０℃で１６時間加熱し、冷却し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。粗物質を、ＭＰＬＣ  Ｃ１８  Ｈ２Ｏ  ０.１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ  ０.１％ＴＦＡ、勾配０−５０％でクロマトグラフィーにかけた。生成物含有フラクションをＮａＨＣＯ３で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ジオキサンから凍結乾燥させて、表題化合物を得た(M+H=264.2; M-H=262.1; tR 4.183分(方法F))。
【０１９４】
工程Ｖ.２  Ｎ−(７−シクロプロピルメチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アセトアミド
【化６０】
2012531454.tif 000063
Ｎ−(６−ブロモ−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程Ｔ.３、３４７mg、１.２００mmol)をＭｅＯＨ(１０mL)に溶解し、２−シクロプロピル−チオアセトアミド(Can.J.Chem 1995 Vol.73 1468-1477、１６６mg、１.４４０mmol)およびアンモニウムホスホモリブデート(２２５mg、０.１２０mmol)を添加した。ＲＭをｒｔで２０時間撹拌し、５０℃で３時間、６０℃で２時間加熱し、２４時間還流した。ＲＭをＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏに分配した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。生物質をＭＰＬＣ  Ｃ１８  Ｈ２Ｏ  ０.１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ  ０.１％ＴＦＡ、勾配０−５０％でクロマトグラフィーにかけた。生成物含有フラクションをＮａＨＣＯ３で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ジオキサンから凍結乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た(M+H=306.2; M-H=304.2; tR 5.12分(方法F))。
【０１９５】
実施例１：(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化６１】
2012531454.tif 000064
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、４５.１mg、０.１２７mmol)のＤＭＦ(１mL)溶液に、(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｂ、２２mg、０.１４０mmol)およびトリエチルアミン(０.０５３ml、０.３８２mmol)を添加した。ＲＭをｒｔで１７時間撹拌し、分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションを合わせ、Bond Elut-SCX、３００mgカートリッジを通して溶出した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で洗浄し、蒸発させて、表題化合物を得た。MS: M+H=444。
HPLC: tR 3.17分(方法D)。
【０１９６】
実施例２：(２Ｓ,３Ｓ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化６２】
2012531454.tif 000065
(２Ｓ,３Ｓ)−３−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｄ、６.２４mg、０.０４９mmol)、イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、１８mg、０.０４９mmol)およびトリエチルアミン(０.０２０mL、０.１４６mmol)のＤＭＦ(０.４mL)の混合物をｒｔで６時間撹拌した。ＲＭを直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションを３００mg  Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出し、溶離剤を蒸発させて、表題化合物を黄色固体として得た。MS: M+H=430.1。HPLC: tR 3.72分(方法D)。1H-NMR(DMSO-d6, 600MHz): 11.05 (s, 1H); 8.04 (s, 1H); 7.44 (s, br, 1H); 6.95 (s, br, 1H); 3.78 (s, br, 1H); 3.60 - 3.50 (m, 6H); 2.82 (s, br, 4H); 2.18 (s, br, 1H); 2.03 (s, br, 1H); 1.55 (s, br, 1H); 1.10 (t, 6H); 1.05 (d, 3H)。
【０１９７】
実施例３：(Ｒ)−２−ベンジル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化６３】
2012531454.tif 000066
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、５０mg、０.１３５mmol)のＤＭＦ(１mL)中の混合物に(Ｒ)−２−ベンジル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｅ、３３.２mg、０.１６２mmol)およびトリエチルアミン(０.０５７mL、０.４０６mmol)を添加した。ＲＭを２１時間、４０℃で撹拌し、直接分取ＨＰＬＣ(方法Ｂ)で精製した。生成物含有フラクションを３００mg  Bond Elut−SCXカートリッジを通して溶出した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出し、蒸発させて、表題化合物を黄色固体として得た。MS: M+H=506.1。HPLC: tR 4.38分(方法D)。
【０１９８】
実施例４：(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化６４】
2012531454.tif 000067
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、７５mg、０.２０３mmol)のＤＭＦ(２mL)の混合物に、(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｆ、３９mg、０.３０５mmol)およびトリエチルアミン(０.０８５mL、０.６０９mmol)を添加した。ＲＭを４０℃で１７時間撹拌し、直接分取ＨＰＬＣ(方法Ｂ)で精製した。生成物含有フラクションを３００mg  Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出し、蒸発させて、表題化合物を黄色固体として得たMS:M+H=430.2。HPLC:tR 3.80分(方法D)。
【０１９９】
実施例５：(Ｒ)−２−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化６５】
2012531454.tif 000068
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、７５mg、０.２０３mmol)、(Ｒ)−２−メトキシメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｇ、３５.３mg、０.２２３mmol)およびトリエチルアミン(０.０８５mL、０.６０９mmol)のＤＭＦ(２mL)中の混合物を６時間、４０℃で撹拌した。ｒｔに冷却後、ＲＭをＭｅＯＨ(１mL)に溶解し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションを３００mg  Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出し、蒸発させて、表題生成物を黄色固体として得た。MS: M+H=460.1。HPLC: tR 3.94分(方法D)。
【０２００】
実施例６：(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化６６】
2012531454.tif 000069
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、１３２mg、０.３７２mmol)を(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｈ、７０mg、０.４０９mmol)およびトリエチルアミン(０.１５５mL、１.１１５mmol)のＤＭＦ(１mL)中の混合物にｒｔで添加した。１８時間後ＭｅＯＨ(０.５ml)を添加し、ＲＭをＰＴＦＥ膜フィルターを通して濾過し、分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションを合わせ、蒸発してＣＨ３ＣＮを除去し、固体ＮａＨＣＯ３を添加して、塩基性にして、黄色白色沈殿を得た。４℃に冷却後、固体を濾過により再回収し、さらに分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｃ)。生成物含有フラクションを３００mg  Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出し、蒸発させて、表題生成物を黄色無定形ガラス状物として得た。LCMS: tR 0.98分およびM+H=458.1(方法A3)。1H-NMR(CD3OD, 400MHz): 8.28 (s, 1H); 3.92 - 3.82 (m, 1H); 3.67 - 3.44 (m, 2H); 3.04 - 2.88 (m, 4H); 2.85 - 2.71 (m, 1H); 2.56 (s, br, 6H); 2.29 - 2.19 (m, 1H); 2.08 - 1.87 (m, 3H); 1.37 (s, 9H)。
【０２０１】
実施例７：ｄ６−(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化６７】
2012531454.tif 000070
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、９１mg、０.２５６mmol)およびトリエチルアミン(０.０３６mL、０.２５６mmol)を、ＤＭＦ(２mL)に懸濁したｄ６−(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｉ、５０mg、０.２８２mmol)にアルゴン雰囲気下添加した。ＲＭを２.７５時間、４０℃で撹拌し、直接２回分取ＨＰＬＣ(方法Ｂ、方法Ｃ)で精製した。各回、生成物含有フラクションを合わせ、３００mg  Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出し、蒸発させて、黄色固体。固体をＤＣＭに懸濁し、濾過し、真空乾燥して、表題化合物を黄色固体として得た。LCMS: tR 1.21分およびM+H=464.0(方法A1)。
【０２０２】
実施例８：(Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化６８】
2012531454.tif 000071
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、５０mg、０.１３５mmol)を(Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｊ、２５.４mg、０.１７６mmol)およびトリエチルアミン(０.０４７mL、０.３３８mmol)のＤＭＦ(１mL)中の混合物にｒｔで添加した。１８時間、ｒｔの後ＲＭをＰＴＦＥ膜を通して濾過し、分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションを合わせ、Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出し、蒸発させて、橙色ガラス状物を得て、それをMｅＯＨ／水から再結晶して、表題化合物を黄色固体として得た。LCMS: tR 1.09分およびM+H=446.0(方法A3)。
【０２０３】
実施例９：(Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化６９】
2012531454.tif 000072
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、１２４mg、０.３５０mmol)を(Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｊ、６３mg、０.３５０mmol)およびトリエチルアミン(０.０４９mL、０.３５０mmol)のＤＭＦ(２mL)中の混合物に添加した。ＲＭを２時間、４０℃で撹拌し、１８時間、ｒｔで静置し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションを３００mg  Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で溶出し、蒸発させて、黄色固体を得た。単離固体をＤＣＭに懸濁し、濾過し、乾燥させて、表題化合物を淡黄色／白色固体として得た。LCMS: tR 1.31分およびM+H=430.9(方法A1)。
【０２０４】
実施例１０：(Ｒ)−２−{[(３−フルオロ−ベンジル)−メチル−アミノ]−メチル}−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化７０】
2012531454.tif 000073
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、４０.１mg、０.１１３mmol)およびトリエチルアミン(０.０４７mL、０.３３９mmol)を、ＤＭＦ(１mL)に懸濁した(Ｒ)−２−{[(３−フルオロ−ベンジル)−メチル−アミノ]−メチル}−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｋ、３０mg、０.１１３mmol)に、ｒｔでアルゴン下添加した。ＲＭを２.５時間、４０℃で撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｃ)。生成物含有フラクションをBond Elut-SCX、３００mgカートリッジを通して溶出した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で溶出し、蒸発させて、黄色固体。固体をＤＭＣで摩砕し、濾過し、乾燥させて、表題化合物を淡黄色固体として得た。LCMS: tR 0.81分およびM+H=552.3(方法A2)。
【０２０５】
実施例１１：(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化７１】
2012531454.tif 000074
(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｆ、２２.１４mg、０.１６９mmol)およびトリエチルアミン(０.０３５mL、０.２５４mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、３０mg、０.０８５mmol)のＤＭＦ(１mL)にアルゴン下、ｒｔで添加した。１６時間、ｒｔで撹拌後、ＲＭを直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションを３００mg  Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で溶出し、蒸発させて、表題化合物を黄色結晶性固体として得た。MS: M+H=415.1。HPLC: tR 3.73分(方法D)。
【０２０６】
実施例１２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化７２】
2012531454.tif 000075
(Ｓ)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(１４８mg、１.２９９mmol)およびトリエチルアミン(０.２７２mL、１.９４９mmol)を、イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、２４０mg、０.６５mmol)および(ＤＭＦ(１mL)にアルゴン下、ｒｔで添加した。ＲＭを１５.５時間、ｒｔで撹拌し、分取ＨＰＬＣ(方法Ｃ)で精製した。生成物含有フラクションを合わせ、Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で溶出し、蒸発させて、表題化合物を橙色結晶として得た。MS: M+H=416.1。HPLC: tR 3.56分(方法D)。
【０２０７】
実施例１３：(Ｓ)−アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化７３】
2012531454.tif 000076
(Ｓ)−アゼチジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｌ、２６.４mg、０.２６４mmol)、イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、７５mg、０.２０３mmol)およびトリエチルアミン(０.０８５mL、０.６０９mmol)のＤＭＦ(２mL)中の混合物を、４０℃で２時間撹拌した。ＲＭを直接分取ＨＰＬＣ(方法Ｂ)で精製した。生成物含有フラクションを３００mg  Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で溶出し、蒸発させて、表題化合物を白色結晶性固体として得た。MS: M+H=402.1。HPLC: tR 3.56分(方法D)。
【０２０８】
実施例１４：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化７４】
2012531454.tif 000077
(Ｓ)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(１６mg、０.１４mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、４５mg、０.１２７mmol)およびトリエチルアミン(０.０５３mL、０.３８１mmol)のＤＭＦ(１mL)中の混合物にｒｔで添加した。ＲＭを一夜、ｒｔで静置し、蒸発させ、残留物をMｅＯＨおよび水から結晶化した。表題化合物を濾過により回収した。MS: M+H=401.1 (MS-ESI)。1H-NMR(CD3OD, 400MHz): 8.31 (s, 1H), 4.46 (d, 1H), 3.77 - 3.54 (m, 2H), 3.08 - 2.90 (m, 4H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 3H), 1.38 (s, 9H))。
【０２０９】
実施例１５：５−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化７５】
2012531454.tif 000078
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、７５mg、０.２０３mmol)のＤＭＦ(２mL)懸濁液に、５−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(Arch. Pharm., 1936, 274, 40に記載の通り製造；３９mg、０.３０５mmol)およびトリエチルアミン(０.０８５mL、０.６０９mmol)を添加した。ＲＭを４０℃で２.５時間撹拌した。直接分取ＨＰＬＣ(方法Ｂ)で精製した。生成物含有フラクションをBond Elut-SCXカートリッジを通して溶出した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で溶出し、蒸発させ、残留物をＤＣＭで摩砕して、表題化合物を黄色固体として得た。LCMS: tR 0.77分およびM+H=430.0(方法A2)。
【０２１０】
実施例１６：(２Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化７６】
2012531454.tif 000079
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、７５mg、０.２０３mmol)のＤＣＭ(２mL)溶液に(２Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｍ、４０.２mg、０.３０５mmol)およびトリエチルアミン(０.０８５mL、０.６０９mmol)を添加した。ＲＭを４０℃で１７.５時間撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションをBond Elut-SCXカートリッジを通して溶出した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で溶出し、蒸発させて、表題化合物を黄色固体として得た。HPLC: tR 3.66分(方法D)。MS: M+H=434.1。
【０２１１】
実施例１７：(２Ｓ,４Ｓ)−４−フルオロ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化７７】
2012531454.tif 000080
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、１７mg、０.０４６mmol)のＤＭＦ(０.４mL)に(２Ｓ,４Ｓ)−４−フルオロ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｎ、６.０８mg、０.０４６mmol)およびトリエチルアミン(０.０１９mL、０.１３８mmol)を添加した。ＲＭを４０℃で１７時間撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションをBond Elut-SCXカートリッジを通して溶出した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で溶出し、蒸発させて、表題化合物を黄色固体として得た。HPLC: tR 3.55分(方法D)。MS: M+H=434.1。
【０２１２】
実施例１８：(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１,２−ジカルボン酸１−アミド２−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化７８】
2012531454.tif 000081
(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１−カルボン酸アミド(中間体Ｏ、２０８mg、１.６５mmol)を撹拌しているイミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、５３２mg、１.５mmol)およびトリエチルアミン(０.６２７mL、４.５０mmol)のＤＭＦ(４mL)中の混合物にｒｔで添加した。５６時間および８０時間後にさらに(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１−カルボン酸アミド(中間体Ｏ、１０４mg、０.８２５mmol)を添加し、ＲＭを１８時間、ｒｔ静置した。ＲＭをＰＴＦＥ膜を通して濾過し、分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションをBond Elut-SCXカートリッジを通して溶出した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出し、蒸発させた。残留物を分取ＨＰＬＣ(方法Ｂ)で２回目の精製をし、同じ方法で単離した。粗生成物を水／ＭｅＯＨの１：１混合物から再結晶して、表題化合物を黄色結晶性固体として得た。LCMS: tR 1.22分およびM+H=413.1(方法A3)。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 11.22 (s, 1H), 8.40 (s, 1H); 7.33 (s, br, 1H); 7.05 (s, br, 1H); 3.97 - 3.84 (m, 1H); 3.64 - 3.52 (m, 1H); 3.01- 2.83 (m, 4H); 2.28 - 2.13 (m, 1H); 1.95 - 1.74 (m, 3H); 1.33 (s, 9H); 1.04 - 0.97 (m, 1H))。
【０２１３】
実施例１９：(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１,２−ジカルボン酸１−アミド２−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化７９】
2012531454.tif 000082
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、７５mg、０.２０３mmol)のＤＣＭ(２mL)溶液に(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１−カルボン酸アミド(中間体Ｏ、３８.４mg、０.３０５mmol)およびトリエチルアミン(０.０８５mL、０.６０９mmol)を添加した。ＲＭを４０℃で１７.５時間撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションをBond Elut-SCXカートリッジを通して溶出した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で溶出し、蒸発させて、表題化合物を黄色固体として得た。HPLC: tR 3.73分(方法D)。MS: M+H=428.1。
【０２１４】
実施例２０：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化８０】
2012531454.tif 000083
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、６０mg、０.１６９mmol)のＤＭＦ(１mL)溶液に、(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｐ、３２.５mg、０.２５４mmol)およびトリエチルアミン(０.０７１mL、０.５０８mmol)を添加した。ＲＭをアルゴン下、２時間、ｒｔで撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。ＣＨ３ＣＮを生成物含有フラクションから蒸発させ、残った液体をBond Elut-SCXカートリッジを通して溶出した。カートリッジをＭｅＯＨ中アンモニア７Ｍ溶液で溶出し、蒸発させた。残留物をメタノールで摩砕し、表題化合物を、濾過および乾燥後白色結晶として回収した。HPLC: tR 3.66(方法D)。MS: M+H=415.1。1H-NMR(CD3OD, 600MHz): 7.96 (s, 1H), 4.04 (d, 1H), 3.47 (t, 1H), 3.18 (q, 1H), 2.71 - 2.67 (m, 2H), 2.64 - 2.58 (m, 2H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 1.76 (s, br, 1H), 1.53 (s, br, 1H), 1.03 (s, 9H), 0.78 (d, 3H)。
【０２１５】
実施例２１：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化８１】
2012531454.tif 000084
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、８２mg、０.２２２mmol)のＤＭＦ(１.５mL)に、アルゴン下、(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｐ、４２.７mg、０.３３３mmol)およびトリエチルアミン(０.０９３mL、０.６６６mmol)を添加した。ＲＭをｒｔで２時間撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。ＣＨ３ＣＮを真空下生成物含有フラクションから除去し、残った溶液をBond Elut-SCXカートリッジを通して溶出した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出し、蒸発させ、残留物をメタノールで摩砕して、表題化合物を白色結晶性固体として得た。HPLC: tR 3.74(方法D)。MS: M+H=430.1。1H-NMR(CD3OD, 600MHz): 7.62 (s, 1H), 4.03 (d, 1H), 3.46 (t, 1H), 3.26 (q, 4H), 3.17 (q, 1H), 2.54 (s, 4H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 1.80 - 1.72 (m, 1H), 1.58 - 1.47 (m, 1H), 0.83 (t, 6H), 0.77 (d, 3H)。
【０２１６】
実施例２２：(２Ｓ,４Ｓ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化８２】
2012531454.tif 000085
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、６０mg、０.１６２mmol)のＤＭＦ(１.５mL)溶液に、(２Ｓ,４Ｓ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｑ、２８.１mg、０.１７９mmol)およびトリエチルアミン(０.０６８mL、０.４８７mmol)を添加した。ＲＭを４０℃で１７時間撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションをBond Elut-SCXカートリッジを通した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出した。溶液を蒸発させて、表題化合物を得た。HPLC: tR 3.23分(方法D)。MS: M+H=459.1。
【０２１７】
実施例２３：５−フェニル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化８３】
2012531454.tif 000086
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、６５mg、０.１７６mmol)のＤＭＦ(２mL)懸濁液に５−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(特許ＵＳ３１６４５９７、実施例４２に記載の通り製造、５０.２mg、０.２６４mmol)およびトリエチルアミン(０.０７４mL、０.５２８mmol)を添加した。ＲＭを４０℃で２時間撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションをBond Elut-SCXカートリッジを通した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出した。溶液を蒸発させ、残留物をＤＣＭで摩砕して、表題化合物を黄色固体として得た。LCMS: tR 0.99分およびM+H=492.0(方法A2)。
【０２１８】
実施例２４：アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化８４】
2012531454.tif 000087
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、１００mg、０.２８２mmol)のＤＭＦ(２mL)溶液にアゼチジン−２−カルボン酸アミド(５６.５mg、０.５６４mmol)およびトリエチルアミン(０.１１８mL、０.８４６mmol)を添加した。ＲＭを、アルゴン雰囲気下、ｒｔで１６時間撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションをBond Elut-SCXカートリッジを通した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出した。溶液を蒸発させ、残留物を０.５％８８０  ＮＨ３含有ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９５：５で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、  表題化合物を黄色固体として得た。HPLC: tR 3.55分(方法D)。MS: M+H=387.1。
【０２１９】
実施例２５：(Ｓ)−アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化８５】
2012531454.tif 000088
(Ｓ)−アゼチジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｌ、６８.１mg、０.６８０mmol)を、撹拌しているイミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、２４１mg、０.６８０mmol)およびトリエチルアミン(０.２８４mL、２.０４０mmol)のＤＭＦ(３mL)の混合物にｒｔで添加した。ＲＭを６６時間、ｒｔで静置し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションを蒸発させてＣＨ３ＣＮを除去し、ＮａＨＣＯ３で塩基性化した。水性相を４回１０％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液で抽出し、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、固体それをＭｅＯＨ／水で摩砕して、表題化合物を灰白色結晶性固体として得た。LCMS: tR 1.08分およびM+H=386.9(方法A3)。
【０２２０】
実施例２６：(２Ｓ,４Ｓ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化８６】
2012531454.tif 000089
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、７５mg、０.２０３mmol)のＤＭＦ(２mL)懸濁液に、(２Ｓ,４Ｓ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｒ、３９.６mg、０.３０５mmol)およびトリエチルアミン(０.１１３mL、０.８１２mmol)を添加した。ＲＭを４０℃で２.５時間撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションをBond Elut-SCXカートリッジを通した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出した。溶液を蒸発させて、表題化合物を黄色固体として得た。HPLC: tR 3.44分(方法D)。MS: M+H=432.1。
【０２２１】
実施例２７：(２Ｓ,４Ｒ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化８７】
2012531454.tif 000090
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ｃ、７５mg、０.２０３mmol)のＤＭＦ(２mL)懸濁液に、(２Ｓ,４Ｒ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｓ、３９.６mg、０.３０５mmol)およびトリエチルアミン(０.１１３mL、０.８１２mmol)を添加した。ＲＭを４０℃で４.５時間撹拌し、直接分取ＨＰＬＣで精製した(方法Ｂ)。生成物含有フラクションをBond Elut-SCXカートリッジを通した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出した。溶液を蒸発させ、残留物をＤＣＭから再結晶して、表題化合物を黄色固体として得た。HPLC: tR 3.31分(方法D)。MS: M+H=432.1。
【０２２２】
実施例２８：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]
【化８８】
2012531454.tif 000091
Ｌ−プロリンアミド(５９.４mg、０.５２１mmol)およびＴＥＡ(０.１２１mL、０.８６８mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド(中間体Ｔ、１５６mg、０.４３４mmol)のＤＭＦ(１mL)溶液に添加した。ＲＭをｒｔで１０分間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。粗物質をＭＰＬＣ  Ｃ１８  Ｈ２Ｏ  ０.１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ  ０.１％ＴＦＡ、勾配０−５０％でクロマトグラフィーにかけた。生成物含有フラクションをＮａＨＣＯ３で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ジオキサンから凍結乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た(M+H=406; M-H=404; tR 4.75分(方法F)。1H-NMR(d6-DMSO, 600.13MHz) 10.80 (s, 1H) 7.40 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.30 (s, 1H) 3.65-3.55 (m 1H), 3.48-3.38 (m, 1H), 3.10 (t, 2H), 2.94 (t, 2H), 2.14-2.05 (m, 1H), 1.95-1.78 (m, 3H), 1.40 (s, 9H))。
【０２２３】
実施例２９：(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]
【化８９】
2012531454.tif 000092
(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｆ、７.７mg、０.０６０mmol)およびＴＥＡ(０.０１４mL、０.１００mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド(中間体Ｔ、１８mg、０.０５０mmol)のＤＭＦ(３mL)溶液に添加した。ＲＭをｒｔで１０分間撹拌した。ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。粗物質をＭＰＬＣ  Ｃ１８  Ｈ２Ｏ  ０.１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ  ０.１％ＴＦＡ、勾配０−５０％でクロマトグラフィーにかけた。生成物含有フラクションをＮａＨＣＯ３で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ジオキサンから凍結乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た(M+H=420; M-H=418; tR 4.875分(方法F)。1H-NMR(d6-DMSO, 600.13MHz) 10.60 (s, br, 1H) 7.68 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 3.68-3.60 (m 1H), 3.60-3.50 (m 1H), 3.08 (t, 2H), 2.90 (t, 2H), 2.10-1.98 (m, 1H), 1.90-1.68 (m, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.37 (s, 9H))。
【０２２４】
実施例３０：(Ｓ)−アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]
【化９０】
2012531454.tif 000093
(Ｓ)−アゼチジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｌ、３７.１mg、０.３７０mmol)およびＴＥＡ(０.１４mL、１.０１０mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド(中間体Ｔ、１２１mg、０.３３７mmol)のＤＭＦ(２mL)溶液に添加した。ＲＭを５分間撹拌し、２日間、ｒｔで静置した。ＲＭを濾過し、直接分取ＨＰＬＣ(方法Ｅ)で精製した。生成物含有フラクションを合わせ、Bond Elute-SCX、３００mgカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液(２ml)で洗浄した。濾液を蒸発させて、表題化合物を白色固体として得た(M+H=391.8; M-H=389.8; tR 1.84分(方法A3)。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz) 11.12 (s, 1H) 7.52 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 4.74-4.62 (m, 1H), 3.92 (t, 2H), 3.08 (t, 2H), 2.90 (t, 2H), 2.46-2.36 (m, 1H), 2.18-2.02 (m, 1H), 1.39 (s, 9H))。
【０２２５】
実施例３１：(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]
【化９１】
2012531454.tif 000094
(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｂ、９.３３mg、０.０５９mmol)およびＴＥＡ(０.０１９ml、０.１３５mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド(中間体Ｔ、１９.４mg、０.０５４mmol)のＤＭＦ(１ml)に添加した。ＲＭを５分間撹拌し、一夜、ｒｔで静置した。ＲＭを濾過し、直接分取ＨＰＬＣ(方法Ｅ)で精製した。生成物含有フラクションを合わせ、Bond Elute-SCX、３００mgカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で洗浄した。濾液を蒸発させて、表題化合物を白色固体として得た(M+H=449.1; M-H=447.3; tR 1.47分(方法A3)。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz) 7.40 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 4.44-4.25 (m, 1H), 3.86-3.76 (m 1H), 3.35-3.25 (m 1H), 3.08 (t, 2H), 2.92 (t, 2H), 2.96-2.78 (m, 1H), 1.18 (s, br, 6H), 2.08-1.85 (m, 2H), 1.38 (s, 9H))。
【０２２６】
実施例３２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[７−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド}
【化９２】
2012531454.tif 000095
Ｌ−プロリンアミド(２３.９８mg、０.２１０mmol)およびＴＥＡ(０.０８０mL、０.５７３mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸[７−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド(中間体Ｕ、７２.１mg、０.１９１mmol)のＤＭＦ(１mL)溶液に添加した。ＲＭを５分間撹拌し、一夜、ｒｔで静置した。ＲＭを蒸発させ、ＭｅＯＨ(２mL)およびＨ２Ｏ(１mL)で摩砕した。混合物を４℃に冷却した。懸濁液を濾過し、冷ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ＝２：１で洗浄し、固体をＨＶ下４０℃で乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た(M+H=424.0; M-H=422.1; tR 1.7分(方法A3)。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz) 7.19 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.58 (s, 1H) 4.44 (s, 1H), 4.28 (s, br, 1H) 3.64-3.50 (m 1H), 3.48-3.38 (m 1H), 3.10 (t, 2H), 2.92 (t, 2H), 2.18-1.98 (m, 1H), 1.94-1.78 (m, 3H), 1.38 (s, 6H) 19F-NMR(d6-DMSO, 600.13MHz) 219ppm (t, 1F))。
【０２２７】
実施例３３：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−シクロプロピルメチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]
【化９３】
2012531454.tif 000096
Ｌ−プロリンアミド(１６.７mg、０.１４７mmol)およびＴＥＡ(０.０２７mL、０.１９６mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸(７−シクロプロピルメチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド  (中間体Ｖ、３５mg、０.０９８mmol)のＤＭＦ(１.５mL)溶液に添加した。ＲＭをｒｔで１５分間撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。粗物質をＭＰＬＣ  Ｃ１８  Ｈ２Ｏ  ０.１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ  ０.１％ＴＦＡ、勾配０−５０％でクロマトグラフィーにかけた。生成物含有フラクションをＮａＨＣＯ３で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ジオキサンから凍結乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た(M+H=404; M-H=402; tR 4.49分(方法F)。1H-NMR(d6-DMSO, 600.13MHz) 10.78 (s, 1H) 7.40 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.28 (s, br, 1H) 3.65-3.55 (m, 1H), 3.48-3.38 (m, 1H), 3.08 (t, 2H), 2.97 (t, 2H), 2.84 (d, 2H), 2.14-2.04 (m, 1H), 1.93-1.72 (m, 3H), 1.10 (q, 1H), 0.60-0.50 (m, 2H), 0.40-0.38 (m, 2H))。
【０２２８】
実施例３４：(２Ｓ,３Ｓ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]
【化９４】
2012531454.tif 000097
(２Ｓ,３Ｓ)−３−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｄ、１３.３７mg、０.１０４mmol)およびＴＥＡ(０.０３９mL、０.２７８mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド(中間体Ｔ、２５mg、０.０７０mmol)のＤＭＦ(２mL)溶液に添加した。ＲＭをｒｔで１０分間撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。粗物質をさらに精製せずにジオキサンから凍結乾燥して、表題化合物を白色固体として得た(M+H=420.1; M-H=418.1; tR 4.85分(方法F)。1H-NMR(d6-DMSO, 600.13MHz) 10.78 (s, br, 1H) 7.44 (s, br, 1H), 6.97 (s, br, 1H), 3.90-3.70 (m, 1H) 3.62-3.42 (m, 2H), 3.08 (t, 2H), 2.94 (t, 2H), 2.22-2.12 (m, 1H), 2.06-1.94 (m, 1H), 1.58-1.48 (m, 1H), 1.39 (s, 9H), 1.04 (d, 3H))。
【０２２９】
実施例３５：(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１,２−ジカルボン酸１−アミド２−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]
【化９５】
2012531454.tif 000098
表題化合物を、実施例３４の記載に準じる方法を使用して、中間体Ｏを中間体Ｄの代わりに使用して合成した。(M+H=418.0; M-H=416.1; tR 4.90分(方法F)。1H-NMR(d6-DMSO, 600.13MHz) 10.78 (s, br, 1H) 7.40 (s, br, 1H), 7.06 (s, br, 1H), 3.92-3.82 (m, 1H) 3.62-3.52 (m, 1H), 3.08 (t, 2H), 2.94 (t, 2H), 2.26-2.14 (m, 1H), 1.92-1.72 (m, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.05-0.95 (m, 1H))。
【０２３０】
実施例３６：(２Ｓ,３Ｓ)−３−(アセチルアミノ−メチル)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化９６】
2012531454.tif 000099
トリエチルアミン(０.３３９mmol)を、イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ)(０.１１３mmol)および(２Ｓ,３Ｓ)−３−(アセチルアミノ−メチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程３６.１)(０.１３５mmol)の溶液にｒｔで添加した。８５分間撹拌後、反応混合物を濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、Ｅｔ２Ｏで摩砕して、表題化合物を黄色固体として得た。HPLC: tR=4.20分(方法H); LCMS: tR=1.48分, [M+H]+ 472(方法I); TLC: Rf=0.14 (9: 1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR(d6-DMSO, 600MHz): 11.15 (br s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.81 (br s, 1H), 7.53 (br s, 1H), 7.13 (br s, 1H), 4.28 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.40 (m, 1H), 3.25 (m, 1H), 2.98 (m, 2H), 2.93 (m, 3H), 2.42 (m, 1H), 2.02 (m, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.74 (m, 1H), 1.33 (s, 9H)。
【０２３１】
工程３６.１：(２Ｓ,３Ｓ)−３−(アセチルアミノ−メチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化９７】
2012531454.tif 000100
(２Ｓ,３Ｓ)−３−(アセチルアミノ−メチル)−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程３６.２)(０.４８mmol)および５０％Ｈ２Ｏで湿らせた１０％Ｐｄ炭(Aldrich 330108)(０.０９６mmol)のＭｅＯＨ(５mL)の混合物を６.５時間、ｒｔで水素化した。反応混合物をフルオロポア膜フィルター(０.２μm  ＦＧ)を通して濾過し、蒸発させた。残留物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、蒸発乾固して、表題化合物を灰白色固体として得た。ESI-MS: [M+H]+ 186; TLC: Rf=0.08 (200: 20: 1 CH2Cl2/MeOH/濃NH4OH)。
【０２３２】
工程３６.２：(２Ｓ,３Ｓ)−３−(アセチルアミノ−メチル)−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化９８】
2012531454.tif 000101
チオ酢酸(２.３１２mmol)を(２Ｓ,３Ｓ)−３−アジドメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程３６.３)(０.５７８mmol)にｒｔで添加し、窒素ガスの形成が伴った。１６時間撹拌後、反応混合物をＥｔ２Ｏで希釈し、固体を濾過により除去し、濾液を濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を明黄色油状物として得た(チオール臭)。HPLC: tR=3.71分(方法H); LC-MS: tR=0.64分, [M+H]+ 290(方法I); TLC: Rf=0.38 (200: 20: 1 CH2Cl2/MeOH/濃NH4OH)。
【０２３３】
工程３６.３：(２Ｓ,３Ｓ)−３−アジドメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化９９】
2012531454.tif 000102
トリメチルアルミニウムのトルエン溶液(２Ｍ、１５.９５mmol)を、ＮＨ４Ｃｌ(１５.９５mmol)のトルエン(２mL)中の混合物に０℃で滴下し、メタンガスの形成が伴った。反応混合物をｒｔに温め、さらに１５分間撹拌し、(２Ｓ,３Ｓ)−３−アジドメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル(工程３６.４)(７.９８mmol)のトルエン(８mL)溶液でゆっくり処理した。ＮＨ４Ｃｌ(１５.９５mmol)のトルエン(２mL)溶液およびトリメチルアルミニウムのトルエン溶液(２Ｍ、１５.９５mmol)から０℃で調製したさらなる反応材を１８時間後添加した。４４時間撹拌後、混合物を０℃に冷却し、１Ｍ  ＨＣｌでクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２(３×)で洗浄した。水性相を１：１  ＮａＨＣＯ３飽和溶液／ロッシェル塩飽和溶液で塩基性化し、ＴＨＦ(１０×)で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮した。残留物をRediSep(登録商標)シリカゲルカラムでを使用して精製して、表題化合物を黄色油状物として得た。HPLC: tR=2.50分(方法G); ESI-MS: [M+H]+ 274; TLC: Rf=0.26 (3: 1 Hex/EtOAc)。
【０２３４】
工程３６.４：(２Ｓ,３Ｓ)−３−アジドメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル
【化１００】
2012531454.tif 000103
ナトリウムアジド(５.３４mmol)を(２Ｓ,３Ｒ)−３−ヨードメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル(工程３６.５)(３.５６mmol)のＤＭＦ(３０mL)溶液にｒｔで添加した。１８時間後、反応混合物を水に注ぎ、ＭＴＢＥ(２×)で抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮した。残留物をRediSep(登録商標)シリカゲルカラムを使用して精製して、表題化合物を褐色油状物として得た。HPLC: tR=3.26分(方法G); ESI-MS: [M+H]+ 289。
【０２３５】
工程３６.５：(２Ｓ,３Ｒ)−３−ヨードメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル
【化１０１】
2012531454.tif 000104
[ブト−３−エニル−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−アミノ]−酢酸メチルエステル[432555-77-6](２０.２２mmol)のＴＨＦ(１０mL)溶液を、リチウムジイソプロピルアミド(２４.２６mmol)の１：２  ヘキサン／ＴＨＦ(３０mL)中の溶液に−７８℃で滴下した。反応混合物を０℃に温め、１時間撹拌し、−７８℃に再冷却した。臭化亜鉛(５０.５mmol)のＥｔ２Ｏ(４０mL)溶液を添加し、反応混合物をｒｔに温めた。１時間撹拌後、混合物を０℃に冷却し、ヨウ素(２２.２４mmol)を数回に分けて添加した。反応混合物を０℃で２時間およびｒｔでさらに２時間撹拌し、Ｅｔ２Ｏで希釈し、連続的にＮａ２Ｓ２Ｏ３飽和溶液およびＮＨ４Ｃｌ飽和溶液で洗浄した。水性層をＥｔ２Ｏでそれぞれ逆抽出した。合わせた有機相を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を赤色油状物として得た。HPLC: tR=3.46分(方法G); ESI-MS: [M+H]+ 374。
【０２３６】
実施例３７：(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化１０２】
2012531454.tif 000105
トリエチルアミン(０.４２３mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ)(０.１４１mmol)および(２Ｓ,３Ｓ)−３−(アセチルアミノ−メチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程３７.１)(０.１５５mmol)のＤＭＦ(０.５mL)溶液にｒｔで添加した。３時間撹拌後、反応混合物を濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を白色固体として得た。HPLC: tR=4.04分(方法H); LCMS: tR=1.36分, [M+H]+ 500(方法I); TLC: Rf=0.09 (19: 1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR(d6-DMSO, 600MHz): 11.15 (br s, 1H), 8.39 (m, 1H), 7.37 (br s, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.59 (m, 4H), 3.42 (m, 1H), 2.97 (m, 2H), 2.90 (m, 2H), 2.58 (m, 1H), 2.38 (m, 4H), 2.35 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 2.02 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.32 (s, 9H)。
【０２３７】
工程３７.１：(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化１０３】
2012531454.tif 000106
(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程３７.２)(１.０４６mmol)および５０％Ｈ２Ｏで湿らせた１０％Ｐｄ炭(Aldrich 330108)(０.１０５mmol)のＭｅＯＨ(５mL)中の混合物を６.５時間、ｒｔで水素化した。反応混合物をフルオロポア膜フィルター(０.２μm  ＦＧ)を通して濾過し、蒸発させた。残留物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、蒸発乾固して、表題化合物を無色油状物として得た。ESI-MS: [M+H]+ 214; TLC: Rf=0.14 (200: 20: 1 CH2Cl2/MeOH/濃NH4OH)。
【０２３８】
工程３７.２：(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化１０４】
2012531454.tif 000107
トリメチルアルミニウムのトルエン溶液(２Ｍ、２.８９mmol)をＮＨ４Ｃｌ(２.８９mmol)のトルエン(３mL)中の混合物に０℃で滴下し、メタンガスの形成が伴った。反応混合物をｒｔに温め、さらに１５分間撹拌し、(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル(工程３７.３)(１.４４４mmol)のトルエン(９mL)溶液でさらに処理した。ＮＨ４Ｃｌ(２.８９mmol)のトルエン(２mL)溶液およびトリメチルアルミニウムのトルエン溶液(２Ｍ、２.８９mmol)から０℃で調製したさらなる反応材を１８時間後添加した。６０時間撹拌後、混合物を０℃に冷却し、１Ｍ  ＨＣｌでクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２(３×)で洗浄した。水性相を１：１  ＮａＨＣＯ３飽和溶液／ロッシェル塩飽和溶液で塩基性化し、ＴＨＦ(１０×)で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を黄色油状物として得た。HPLC: tR=2.18分(方法G); ESI-MS: [M+H]+ 318。
【０２３９】
工程３７.３：(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル
【化１０５】
2012531454.tif 000108
(２Ｓ,３Ｒ)−３−ヨードメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル(工程３６.５)(７.０７mmol)、Ｋ２ＣＯ３(２１.２２mmol)およびモルホリン(１０.６１mmol)のＣＨ３ＣＮ(２４mL)中の混合物を５０℃で６２時間撹拌した。反応混合物を氷水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ(３×)で抽出した。合わせた有機層を連続的に水および塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮した。残留物をRediSep(登録商標)シリカゲルカラムでを使用して精製して、表題化合物を黄色油状物として得た。HPLC: tR=2.56分(方法G); ESI-MS: [M+H]+ 333。
【０２４０】
実施例３８：(２Ｓ,３Ｒ)−３−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化１０６】
2012531454.tif 000109
表題化合物を、実施例２０の記載に準じる方法を使用して、(２Ｓ,３Ｒ)−３−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(H. Fukushima et al. Bioorg. Med. Chem. 2004, 12, 6053; H. Ji et al. J. Med. Chem. 2006, 49(21), 6254)を中間体Ｐの代わりに使用して合成した。LCMS: tR=1.45分, M+H=417.0, M-H=415(方法J)。1H-NMR(d6-DMSO, 600.13MHz): 12-11 (s, br, 1H) 8.4 (s, 1H), 7.2-6.9 (m, 2H), 5.2 (s, 1H), 4.4 (s, 1H), 4.25 (s, br, 1H), 3.6 (m, 1H); 3.45 (m, 1H), 2.95 (m, 2H), 2.9 (m, 2H), 2.0 (m, 1H), 1.9 (m, 1H), 1.3 (s, 9H)。
【０２４１】
実施例３９：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]
【化１０７】
2012531454.tif 000110
表題化合物を、実施例３４の記載に準じる方法を使用して、(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｐ)を中間体Ｄの代わりに使用して合成した。LCMS: tR=1.32分, M+H=420.0, M-H=418.1(方法J)。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 10.65 (s, br, 1H) 7.39 (s, br, 1H), 6.99 (s, br, 1H), 4.2 (m, 1H), 3.67 (t, 1H), 3.3 (m, 1H), 3.08 (t, 2H), 2.93 (t, 2H), 2.38 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.7 (m, 1H), 1.39 (s, 9H), 0.97 (d 3H)。
【０２４２】
合成スキーム：
【化１０８】
2012531454.tif 000111
【０２４３】
実施例４０：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−メチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド]
【化１０９】
2012531454.tif 000112
表題化合物をイミダゾール−１−カルボン酸(８−メチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド(工程４０.１)から、実施例２０の製造において記載する合成法を使用して合成した。LCMS: tR=0.29分, M+H=374.0, M-H=372(方法J)。1H-NMR 1H-NMR(CD3OD, 400MHz): 7.9 (s, 1H), 7.0 (s, 1H), 5.27 (s, 2H), 4.38 (d, 1H), 3.8 (dd, 1H), 3.5 (m, 1H), 2.5 (m, 1H), 2.4 (s, 1H), 2.08 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.12 (d, 3H)。
【０２４４】
工程４０.１：イミダゾール−１−カルボン酸(８−メチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド
【化１１０】
2012531454.tif 000113
イミダゾール−１−カルボン酸(８−メチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミドをＮ−(８−メチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アセトアミド(工程４０.２)から、中間体Ａの製造に関して記載する合成法を使用して合成した。
【０２４５】
工程４０.２：Ｎ−(８−メチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アセトアミド
【化１１１】
2012531454.tif 000114
４６３mg(１.５３mmol)Ｎ−[４−(４−ブロモ−６−メチル−ピリジン−３−イルオキシメチル)−チアゾール−２−イル]−アセトアミド(工程４０.３)、９００mg(２.７１mmol)炭酸セシウム、３０.４mg(０.１３５mmol)酢酸パラジウムおよび８１mg(０.２７１mmol)トリブチルホスフィンテトラフルオロボレートの３mL  ＤＭＦ中の混合物を１１５℃で７時間、アルゴン下撹拌した。反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃを添加し、Hyflo Super Gel媒体(Fluka 56678)の層を通して濾過した後、濾液をＥｔＯＡｃ(２×)で抽出した。合わせた有機層を水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過した。濾液を真空で濃縮して残留物を残し、それをシリカゲル(＝−１００％ＥｔＯＡｃのヘプタン溶液)で精製して、９３mgの表題化合物を固体として得た。LCMS: tR=0.27分, M+H=262, M-H 260(方法J)。
【０２４６】
工程４０.３：Ｎ−[４−(４−ブロモ−６−メチル−ピリジン−３−イルオキシメチル)−チアゾール−２−イル]−アセトアミド
【化１１２】
2012531454.tif 000115
２７０mg(１.４４mmol)４−ブロモ−６−メチル−ピリジン−３−オール(工程４０.４)のＤＭＦ(５mL)溶液に、４４.８mg  ＮａＨ(１.８７mmol)を添加し、この混合物を１時間、ｒｔで撹拌した。３０１mg(１.５８mmol)２−アセトアミド−４−(クロロメチル)−１,３−チアゾール(Apollo OR15549)を添加し、撹拌をさらに１７時間続けた。反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ(２×)で抽出した。合わせた有機層を水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過した。濾液を真空で濃縮して、３５０mgの表題化合物(白色固体)を得て、さらに精製せずとも十分に純粋であると見なされた。LCMS: tR=1.36分, M+H=342 (79Br), 344 (81Br)(方法J)。
【０２４７】
工程４０.４：４−ブロモ−６−メチル−ピリジン−３−オール
【化１１３】
2012531454.tif 000116
９２０mg(３.０５mmol)４−ブロモ−５−メトキシメトキシ−２−メチル−ピリジン(工程４０.５)を５mL  ＭｅＯＨに溶解し、濃ＨＣｌ(１mL、１２mmol)を添加し、反応混合物を２時間、ｒｔで撹拌した。混合物を真空で濃縮中、表題化合物(ヒドロクロライドとして)が結晶化した。濾過により５７０mg  白色結晶を得た。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 8.19 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 2.53 (s, 3H)。
【０２４８】
工程４０.５：４−ブロモ−５−メトキシメトキシ−２−メチル−ピリジン
【化１１４】
2012531454.tif 000117
１０００mg(６.５３mmol)５−メトキシメトキシ−２−メチル−ピリジン(J.-P. Behr et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003, 13(10), 1713)の１０mL  ＴＨＦ溶液を−７８℃に冷却し、４.０３mL(６.８５mmol)ｔ−ＢｕＬｉ(ペンタン中１.７Ｍ溶液)を添加した。得られた混合物をアルゴン下１時間撹拌し、２.１２６ｇ(６.５３mmol)１,２−ジブロモテトラクロロエタン(５mL  ＴＨＦ中)を添加した。撹拌を１時間、−７８℃で続け、反応混合物をｒｔに温めた。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を添加し、水性混合物をＥｔＯＡｃ(２×)で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏおよび塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過した。濾液を真空で濃縮して残留物を残し、それをシリカゲル(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１)で精製して、９２０mgの表題化合物を油状物として得た。LCMS: tR=0.29分, M+H=232 (79Br), 234 (81Br)(方法J)。
【０２４９】
実施例４１：(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]
【化１１５】
2012531454.tif 000118
表題化合物を、実施例３４の記載に準じる方法を使用して、(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程３７.１)を中間体Ｄの代わりに使用して合成した。LCMS: tR=0.68分, M+H=505.3.0, M-H=503.2(方法J)。1H-NMR(d6-DMSO, 600.13MHz): 10.65 (s, b, 1H), 7.4 (s, b, 1H), 7.05 (s, b, 1H), 4.3 (s, b, 1H), 3.7 (m, 1H), 3.6 (m, 4H), 3.3 (m, 1H), 3.1 (t, 2H), 2.9 (t, 2H), 2.6 (m, 1H), 2.4 (m, 1H), 2.35 (m, 4H), 2.15 (m, 1H), 2.0 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.35 (s, 9H)。
【０２５０】
実施例４２：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化１１６】
2012531454.tif 000119
トリエチルアミン(０.５２５mmol)を、イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ)(０.１７５mmol)および(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程４２.１)(０.１９２mmol)のＤＭＦ(０.７mL)溶液にｒｔで添加した。３時間撹拌後、反応混合物を濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を白色固体として得た。HPLC: tR=2.84分(方法G); LCMS: tR=1.71分, [M+H]+ 445(方法I); TLC: Rf=0.41 (19: 1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR(d6-DMSO, 600MHz): 11.15 (br s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.42 (br s, 1H), 7.05 (br s, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.46 (m, 1H), 3.42 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 3.16 (m, 1H), 2.98 (m, 2H), 2.91 (m, 2H), 2.54 (m, 1H), 2.03 (m, 1H), 1.77 (m, 1H), 1.32 (s, 9H)。
【０２５１】
工程４２.１：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化１１７】
2012531454.tif 000120
表題化合物を、工程３７.１に記載する方法に準じるが、(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程４２.２)を(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミドの代わりに使用して製造した。
表題化合物を白色固体として得た。ESI-MS: [M+H]+ 159。
【０２５２】
工程４２.２：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化１１８】
2012531454.tif 000121
表題化合物を、工程３７.２に記載する方法に準じるが、(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル(工程４２.３)を(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステルの代わりに使用して製造した。
表題化合物を黄色油状物として得た。HPLC: tR=2.35分(方法G); LC-MS: tR=0.47分, [M+H]+ 263(方法K); TLC: Rf=0.05 (1: 1 ヘプタン/EtOAc)。
【０２５３】
工程４２.３：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステル
【化１１９】
2012531454.tif 000122
(３ａＲ,６ａＳ)−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ヘキサヒドロ−フロ[３,４−ｂ]ピロール−６−オン[805246-48-4](１７.０５mmol)、ＫＯＨ(７１.６０mmol)およびヨードメタン(６８.２０mmol)のトルエン(７９mL)中の混合物を８０℃で１.５時間撹拌した。反応混合物をｒｔに冷却し、水およびＭＴＢＥに分配した。水性層をＭＴＢＥ(３×)で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を黄色油状物として得た。HPLC: tR=2.98分(方法G); LC-MS: tR=0.69分, [M+H]+ 278(方法K); TLC: Rf=0.25 (1: 3 ヘプタン/EtOAc)。
【０２５４】
実施例４３：(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化１２０】
2012531454.tif 000123
トリエチルアミン(０.３０５mmol)を、イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ)(０.１０２mmol)および(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程４３.１)(０.１０２mmol)のＤＭＦ(０.３mL)溶液にｒｔで添加した。０.５時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、一夜、真空下、５０℃で乾燥させた。残留物をＥｔＯＡｃ(１mL)に懸濁し、濾過し、真空下乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た。HPLC: tR=4.01分(方法H); LCMS: tR=1.33分, [M+H]+ 458(方法I); TLC: Rf=0.08 (4: 1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR(d6-DMSO, 600MHz): 11.14 (br s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.42 (br s, 1H), 7.06 (br s, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.71 (m, 1H), 3.42 (m, 1H), 2.98 (m, 2H), 2.90 (m, 2H), 2.52 (m, 1H), 2.33 (m, 1H), 2.18 (m, 1H), 2.18 (s, 6H), 2.01 (m, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.32 (s, 9H)。
【０２５５】
工程４３.１：(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化１２１】
2012531454.tif 000124
表題化合物を、工程３７.１に記載する方法に準じるが、(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
(工程４３.２)を(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミドの代わりに使用して製造した。さらに、水素化を４バール圧下で行った。
表題化合物を黄色油状物として得た。ESI-MS: [M+H]+ 172。
【０２５６】
工程４３.２：(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化１２２】
2012531454.tif 000125
(２Ｓ,３Ｓ)−３−アミノメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程４３.３)(０.４１８mmol)、ナトリウムシアノボロハイドライド(２.８６mmol)および３７％水性ホルムアルデヒド(２.１４mmol)のＭｅＯＨ(３.３mL)中の混合物を５５℃で１６時間撹拌した。反応混合物をｒｔに冷却し、濃縮した。残留物をRediSep(登録商標)シリカゲルカラムでを使用して精製して、表題化合物を白色泡状物として得た。HPLC: tR 3.59分(方法H); LC-MS: tR=0.86分, [M+H]+ 276(方法I); TLC: Rf=0.13 (9: 1 CH2Cl2/MeOH)。
【０２５７】
工程４３.３：(２Ｓ,３Ｓ)−３−アミノメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド
【化１２３】
2012531454.tif 000126
(２Ｓ,３Ｓ)−３−アジドメチル−１−((Ｓ)−１−フェニル−エチル)−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程３６.３)(０.７２３mmol)およびトリフェニルホスフィン(０.８６７mmol)のＴＨＦ(３mL)中の混合物をｒｔで２５時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、粗表題化合物を明褐色固体として得た。HPLC: tR 3.53分(方法H); ESI-MS: [M+H]+ 248。
【０２５８】
実施例４４：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル]−アミド}
【化１２４】
2012531454.tif 000127
トリエチルアミン(１.７１４mmol)を、イミダゾール−１−カルボン酸[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル]−アミド(工程４４.１)(０.４９０mmol)および(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｐ)(０.９７９mmol)のＤＭＦ(１.５mL)溶液にｒｔで添加した。１.５時間撹拌後、反応混合物を濃縮した。残留物をＮａＨＣＯ３飽和溶液で希釈し、ＥｔＯＡｃ(２×)で抽出した。合わせた有機層を連続的に水および塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮した。残留物をRediSep(登録商標)シリカゲルカラムを使用して精製して、表題化合物をベージュ色固体として得た。HPLC: tR=5.77分(方法H); LCMS: tR=2.18分, [M+H]+ 469(方法I); TLC: Rf=0.16 (19: 1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR(d6-DMSO, 600MHz): 11.19 (br s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.43 (br s, 1H), 7.01 (br s, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.72 (m, 1H), 3.40 (m, 1H), 3.03 (m, 2H), 2.94 (m, 2H), 2.38 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.58 (s, 6H), 0.99 (d, 3H)。
【０２５９】
工程４４.１：イミダゾール−１−カルボン酸[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル]−アミド
【化１２５】
2012531454.tif 000128
表題化合物を、中間体Ａに関して記載する方法に準じるが、工程Ａ.３において、３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミジンヒドロクロライド(工程４４.２)をｔｅｒｔ−ブチルアミジンヒドロクロライドの代わりに使用して製造した。
表題化合物をベージュ色固体として得た。HPLC: tR=6.73分(方法H); LCMS: tR=1.11分, [M+H]+ 373(方法J)。注：特徴付け目的で、表題化合物をＭｅＯＨに溶解した−−＞メチルカルバメート誘導体。
【０２６０】
工程４４.２：３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミジンヒドロクロライド
【化１２６】
2012531454.tif 000129
３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニトリル(工程４４.３)(１２.４０mmol)をナトリウムメトキシド(４８.４０mmol  ナトリウム金属および１０２mL  ＭｅＯＨから新たに調製)の溶液にｒｔで添加した。４時間後、酢酸(４８.４０mmol)、ＮＨ４Ｃｌ(１４.８８mmol)をゆっくり添加し、反応混合物を７０℃で４０時間撹拌した。反応混合物を濃縮(４０℃、１００mbar)後、残留物をアセトンに懸濁し、濾過し、真空下乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た。ESI-MS: [M+H]+ 155。
【０２６１】
工程４４.３：３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニトリル
【化１２７】
2012531454.tif 000130
３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミド(工程４４.４)(１２１.２mmol)および五酸化リン(１２１.２mmol)の混合物を２００℃にゆっくり加熱し、得られた留出物を回収した。表題化合物を無色液体として得た。
【０２６２】
工程４４.４：３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミド
【化１２８】
2012531454.tif 000131
塩化オキサリル(１４０.８mmol)を３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオン酸[889940-13-0](１２８mmol)のＣＨ２Ｃｌ２(１２８mL)溶液に０℃で滴下した。ガス発生が見られる間に数滴のＤＭＦを滴下し、撹拌を３０分間続けた。ｒｔに温め、一夜撹拌後、反応混合物を濃縮した(４０℃、００mbar)。残留物をＴＨＦ(１２８mL)に溶解し、０℃に冷却し、濃水性アンモニア(６４mL)溶液でゆっくり処理した。０℃で３０分間、ｒｔで４時間撹拌後、反応混合物をその半量まで濃縮して、濃白色懸濁液を得た。  濾過および乾燥後、表題化合物を白色固体として得た。ESI-MS: [M+H]+ 156。
【０２６３】
実施例４５：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル]−アミド}
【化１２９】
2012531454.tif 000132
トリエチルアミン(１.７１４mmol)をイミダゾール−１−カルボン酸[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル]−アミド(工程４４.１)(０.４９０mmol)および(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程４２.１)(０.０.９７９mmol)のＤＭＦ(１.５mL)溶液にｒｔで添加した。２時間撹拌後、反応混合物を濃縮した。残留物をＮａＨＣＯ３飽和溶液で希釈し、ＥｔＯＡｃ(２×)で抽出した。合わせた有機層を連続的に水および塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮した。残留物をRediSep(登録商標)シリカゲルカラムを使用して精製して、表題化合物をベージュ色固体として得た。HPLC: tR=5.71分(方法H); LCMS: tR=2.15分, [M+H]+ 499(方法I); TLC: Rf=0.40 (19: 1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR(d6-DMSO, 600MHz): 11.23 (br s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.42 (br s, 1H), 7.06 (br s, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.46 (m, 1H), 3.42 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 3.16 (m, 1H), 3.03 (m, 2H), 2.94 (m, 2H), 2.55 (m, 1H), 2.03 (m, 1H), 1.77 (m, 1H), 1.58 (s, 6H)。
【０２６４】
実施例４６：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド]
【化１３０】
2012531454.tif 000133
LCMS: tR=0.50分, M+H=416, M-H=414(方法L)。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 8.05 (s, 1H), 7.37 (bs, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.97 (bs, 1H), 5.31 (s, 2H), 4.18 (m, 1H), 3.69 (dd, 1H), 3.39 (m, 1H), 2.35 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.71 (m, 1H), 1.27 (s, 9H), 0.975 (d, 3H)。
表題化合物を２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メトキシメトキシ−ピリジンから、実施例４０の製造について記載する合成法を使用して、製造した。出発物質、２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メトキシメトキシ−ピリジンを２−ブロモ−５−メトキシメトキシ−ピリジンから下記の通り製造した：
【０２６５】
２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メトキシメトキシ−ピリジン：
【化１３１】
2012531454.tif 000134
６.６９ｇ(７４.７mmol)シアン化銅(Ｉ)の１５ml乾燥ＴＨＦ溶液を−７５℃に冷却し、１４９ml(１４９mmol)の１Ｍ  ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロライド溶液を滴下した。撹拌を４０分間続けた。その後、３０ml乾燥ＴＨＦに溶解した４.０７ｇ(１８.６７mmol)２−ブロモ−５−メトキシメトキシ−ピリジン(Zhong, W. et al. ＷＯ２００８１４７５４７)を滴下した。反応混合物を−７５℃で１時間撹拌し、室温にさせ、撹拌をさらに６時間続けた。３０mlの２５％水性アンモニアを反応混合物に添加した。混合物を濾過し、２回ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ、ヘプタン)で精製して、２.６４ｇの純粋表題化合物を油状物として得た。LCMS: tR=0.55分, M+H=196(方法K)。
【０２６６】
実施例４７：(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド]
【化１３２】
2012531454.tif 000135
表題化合物を、実施例４６の製造に関して記載する合成法を使用し、合成の最終工程で(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程４３.１)を(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミドの代わりに使用して、製造した。
LC-MS: tR=0.24分, M-H=457(方法L)。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 11.15 (bs, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.0 (s, 1H), 5.28 (s, 2H), 4.23 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 3.40 (m, 1H), 2.6-2.45 (m, 2H), 2.30 (m, 1H), 2.17 (s, 6H), 2.15 (m, 1H)1.70 (m, 1H), 1.27 (s, 9H)。
【０２６７】
実施例４８：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル]−アミド}
【化１３３】
2012531454.tif 000136
LC-MS: tR=1.59分, M+H=470(方法F)。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 11.25 (bs, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.19 (s, 1H), 3.71 (m, 1H), 約3.4 (m, 1H), 2.5-2.35 (m, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.68 (m, 1H), 1.56 (s, 6H), 0.99 (d, 3H)。
表題化合物を４−ブロモ−５−メトキシメトキシ−２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジンから、実施例４０および４２の製造に関して記載する合成法を使用して製造した。
【０２６８】
４−ブロモ−５−メトキシメトキシ−２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジンを次の通り製造した：
【化１３４】
2012531454.tif 000137
ａ)  ４−ブロモ−５−メトキシメトキシ−２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン：
【化１３５】
2012531454.tif 000138
表題化合物を、実施例４０、工程４０.５の製造について記載する合成法を使用して、製造した。油状物として得た。LCMS(方法L): tR=1.26分, M+H=328 (79Br), 330 (81Br)。
【０２６９】
ｂ)  ５−メトキシメトキシ−２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン
【化１３６】
2012531454.tif 000139
１.７ｇ(４.１３mmol)メタンスルホン酸２,２,２−トリフルオロ−１−(５−メトキシメトキシ−ピリジン−２−イル)−１−メチル−エチルエステルを２０ml  ジクロロメタンに溶解した。反応混合物を０℃に冷却し、２.０６５ml(４.１３mmol)トリメチルアルミニウムをゆっくり添加した。反応混合物を室温で２０時間撹拌した。その後水をゆっくり添加し、混合物を２回ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ、ヘプタン)で精製して、０.５５ｇの純粋表題化合物を得た。LCMS(方法L): tR=1.09分, M+H=250。
【０２７０】
ｃ)  メタンスルホン酸２,２,２−トリフルオロ−１−(５−メトキシメトキシ−ピリジン−２−イル)−１−メチル−エチルエステル
【化１３７】
2012531454.tif 000140
撹拌している０.２１３ｇ(８.４４mmol)水素化ナトリウムの６ml乾燥ＴＨＦ中の粉合物に、１.０６ｇ(４.２２mmol)１,１,１−トリフルオロ−２−(５−メトキシメトキシ−ピリジン−２−イル)−プロパン−２−オール(４.９ml乾燥ＴＨＦに溶解)を０℃で滴下した。添加完了後、撹拌を３時間、室温で続けた。メタンスルホニルクロライド(７.３ml乾燥ＴＨＦに溶解)を室温で添加し、撹拌をさらに２時間続けた。水および飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加した。この混合物を２回ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、１.７ｇの表題化合物を得て、それを直接次工程に使用した。LCMS(方法L): tR=0.96分, M+H=330。
【０２７１】
ｄ)  １,１,１−トリフルオロ−２−(５−メトキシメトキシ−ピリジン−２−イル)−プロパン−２−オール
【化１３８】
2012531454.tif 000141
１.４８ｇ(４.５８mmol)５−メトキシメトキシ−２−(２,２,２−トリフルオロ−１−メチル−１−トリメチルシラニルオキシ−エチル)−ピリジンおよび５ml(１０mmol)２Ｎ  ＨＣｌの１５ml  ＴＨＦ溶液の混合物を室温で２時間撹拌した。その後反応混合物を水に注ぎ、２Ｎ  ＨＣｌ添加によりｐＨ１−２に調節した。反応混合物を２回ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、１.０６ｇの表題化合物を油状物として得て(８８％純粋)、それを次工程に精製せずに使用した。LCMS(方法L): tR=0.88分, M+H=252。
【０２７２】
ｅ)  ５−メトキシメトキシ−２−(２,２,２−トリフルオロ−１−メチル−１−トリメチルシラニルオキシ−エチル)−ピリジン
【化１３９】
2012531454.tif 000142
１.１２ｇ(６.１８mmol)１−(５−メトキシメトキシ−ピリジン−２−イル)−エタノン、１.０５５ｇ(７.４２mmol)トリメチル(トリフルオロメチル)シランおよび０.０２５ｇ(０.３０９mmol)酢酸ナトリウムの９ml  ＤＭＦ溶液の混合物を１時間、０℃および１時間、室温で撹拌した。その後反応混合物を水に注ぎ、２Ｎ  ＨＣｌ添加によりｐＨ１−２に調節した。反応混合物を２回ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ、ヘプタン)で精製して、１.８７ｇの純粋表題化合物を油状物として得た。LCMS(方法L): tR=1.38分, M+H=324。
【０２７３】
ｆ)  １−(５−メトキシメトキシ−ピリジン−２−イル)−エタノン：
【化１４０】
2012531454.tif 000143
ＮａＨを１ｇ(７.２９mmol)１−(５−ヒドロキシ−ピリジン−２−イル)−エタノン(Anichem)の１５ml  ＤＭＦ溶液に０℃で添加した。この混合物を１時間撹拌後、０.７８ml(８.７５mmol)ＭＯＭＣｌを０℃で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を水に注ぎ、２回ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ、ヘプタン)で精製して、１.１２ｇの純粋表題化合物を油状物として得た。LCMS(方法L): tR=0.66分, M+H=182。
【０２７４】
実施例４９：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[７−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド}
【化１４１】
2012531454.tif 000144
LCMS: tR=0.97分, M+H=474, M-H=414(方法L)。1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 10.7 (bs, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.69 (dd, 1H), 3.39 (m, 1H), 3.14 (t, 2H), 2.95 (t, 2H), 2.34 (m, 1H), 1.94 (m, 1H), 1.68 (m, 1H), 1.62 (s, 6H), 0.965 (d, 3H)。
表題化合物を２,２−ジメチル−チオプロピオンアミドから、実施例３９の製造に関して記載する合成法を使用して製造した。出発物質、３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−チオプロピオンアミドを下記の通り製造した：
【０２７５】
３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−チオプロピオンアミドの製造：
ａ)  ３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミド
【化１４２】
2012531454.tif 000145
２ｇ(１２.８１mmol)３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチルプロピオン酸(Aldrich)、２.０７７ｇ(１２.８１mmol)カルボニル−ジイミダゾールおよび５.５５ml(６４.１mmol)水性アンモニアの５０ml  ＣＨ２Ｃｌ２溶液の混合物を室温で２０時間撹拌した。その後、ジエチルエーテルを添加し、得られた混合物を０.１Ｎ  ＨＣＬ、０.１Ｎ  ＮａＯＨ、水および塩水で洗浄した。有機層を乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、１.１５ｇの表題化合物を白色結晶として得て、それをさらに精製せずに次工程に使用した。MS: M+H=156。
【０２７６】
ｂ)  ３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−チオプロピオンアミド
【化１４３】
2012531454.tif 000146
１.０５ｇ(６.７７mmol)  ３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミドおよび１.４８ｇ(３.６６mmol)ローソン試薬の３２ml乾燥ＴＨＦ中の混合物を還流温度で２０時間撹拌した。その後反応混合物を室温に冷却し、真空で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘプタン、ＥｔＯＡｃ)で精製して、０.８１ｇの表題化合物を純粋白色結晶として得た。ＭＳ：Ｍ＋Ｈ＝１７２。
【０２７７】
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程４２.１)を合成の最終工程で使用して、以下の実施例化合物を類似の方法で製造した：
【０２７８】
実施例５０：(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[７−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド}
【化１４４】
2012531454.tif 000147
LC-MS: tR=0.96分, M+H=504, M-H=502(方法L). 1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 10.76 (bs, 1H), 7.34 (bs, 1H), 7.02 (bs, 1H), 4.29 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 3.42 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.14 (m, 3H), 2.97 (m, 2H), 2.48 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.62 (s, 6H)。
【０２７９】
実施例５１：(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]
【化１４５】
2012531454.tif 000148
表題化合物を、実施例３９の製造に関して記載する合成法を使用し、合成の最終工程で(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(工程４３.１)を(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミドの代わりに使用して、製造した。
LC-MS: tR=0.91分, M+H=463, M-H=461(方法L).1H-NMR(d6-DMSO, 400MHz): 10.7 (bs, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.01 (bs, 1H), 4.28 (m, 1H), 3.67 (dd, 1H), 3.39 (m, 1H), 3.07 (m, 2H), 2.92 (m, 2H), 2.5-2.44 (m, 2H), 2.30 (m, 1H), 2.14 (s, 6H), 1.95 (m, 1H), 1.40 (m, 1H), 1.36 (s, 9H)。
【０２８０】
ＰＩ３キナーゼ阻害剤としての効果
ＰＩ３ＫキナーゼＧｌｏアッセイ：５０nLの化合物希釈を、黒色３８４ウェル低体積Non Binding Styrene(ＮＢＳ)プレート(Costar Cat. No. NBS#3676)に分配した。メタノール中１０mg／ml溶液として提供されたＬ−ａ−ホスファチジルイノシトール(ＰＩ)をガラス管に移し、窒素ビーム下に乾燥させた。次いで、それを３％オクチルグルコシド(ＯＧ)にボルテックス処理により再懸濁させ、４℃で貯蔵した。KinaseGloLuminescentキナーゼアッセイ(Promega, Madison/WI, USA)は、キナーゼ反応後に溶液に残るＡＴＰ量を提供することにより、キナーゼ活性を測定する均一ＨＴＳ法である。
【０２８１】
５μLのＰＩ／ＯＧとＰＩ３Ｋサブタイプの混合物を添加した(表１)。キナーゼ反応を、最終体積１０μL中１０mM  ＴＲＩＳ−ＨＣｌ  ｐＨ７.５、３mM  ＭｇＣｌ２、５０mM  ＮａＣｌ、０.０５％ＣＨＡＰＳ、１mM  ＤＴＴおよび１μM  ＡＴＰを含む５μlのＡＴＰミックスの添加により開始させ、室温で反応させた。１０μlのKinaseGloで反応を停止させ、プレートを１０分後Synergy2リーダーで、ウェルあたり０.１秒の積分時間を使用して読んだ。２.５μMのパン−クラス１  ＰＩ３キナーゼ阻害剤(標準)をアッセイプレートに添加して、キナーゼ反応の１００％阻害とし、０％阻害を溶媒媒体(９０％ＤＭＳＯの水溶液)で作成した。標準を参照化合物として使用し、全アッセイプレートに１６希釈点のデュプリケートの形態で包含させた。
【０２８２】
【表２】
2012531454.tif 000149
【０２８３】
ＰＩ３Ｋのクローニング
ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβおよびＰＩ３Ｋδ構築物は、ｐ８５α  ｉＳＨ２ドメインおよび各ｐ１１０アイソフォームの構築物である。ｐ８５αフラグメントおよびｐ１１０アイソフォーム遺伝子を、以下に記載する胎盤、精巣および脳由来の市販ＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲにより作成した第一鎖ｃＤＮＡからＰＣＲにより得た。ＰＩ３Ｋγ構築物をRoger Williams lab, MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK (November, 2003)から得て、記載する(Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)。
【表３】
2012531454.tif 000150
【０２８４】
BV1075：バキュロウイルスBV-1075のための構築を、ｐ８５フラグメントおよびベクターpBlueBac4.5にクローン化したｐ１１０αフラグメントから成る３パートライゲーションにより作成した。ｐ８５フラグメントはＮｈｅ／Ｓｐｅで消化したプラスミドp1661-2であった。このクローン由来のｐ１１０αフラグメントを配列決定により確認し、LR410においてＳｐｅＩ／ＨｉｎｄIIIフラグメントとして使用した。バキュロウイルス発現ベクターLR410の作成のために、インサートをGateway適合pBlueBac4.5(Invitrogen)ベクターに移すためのゲイトウェイＬＲ反応を使用した。クローニングベクターpBlueBac4.5(Invitrogen)をＮｈｅ／ＨｉｎｄIIIで消化させた。これは構築物PED 153.8をもたらした。ｐ８５要素(ｉＳＨ２)を、鋳型としてORF 318(上記)および順方向プライマーKAC1028(5'-GCTAGCATGCGAGAATATGATAGAT-TATATGAAG-AATATACC)(配列番号１)および２種の逆方向プライマーKAC1029(5'-GCCTCCACCAC-CTCCGCCTG-GTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC)(配列番号２)およびKAC1039(5'-TACTAGTC-CGCCTCCAC-CACCTCCGCCTCCACCACCTCCGCC)(配列番号３)を使用するＰＣＲにより作成した。２種の逆方向プライマーは重複し、１２×Ｇｌｙリンカーおよびｐ１１０α遺伝子のＮ末端配列をＳｐｅＩ部位に取り込む。１２×Ｇｌｙリンカーは、BV1052構築物の１個のＧｌｙリンカーを置き換える。ＰＣＲフラグメントをpCR2.1 TOPO(Invitrogen)にクローニングした。得られたクローン中、p1661-2が配列決定により正しいと確認された。このプラスミドをＮｈｅおよびＳｐｅＩで消化し、得られたフラグメントをサブクローニングのためにゲル単離および精製した。
【０２８５】
ｐ１１０αクローニングフラグメントを、クローンLR410(上記の)ＳｐｅＩおよびＨｉｎｄIIIでの酵素消化により作成した。ＳｐｅＩ部位はｐ１１０α遺伝子のコーディング部位である。得られたフラグメントをサブクローニングのためにゲル単離および精製した。クローニングベクターpBlueBac4.5(Invitrogen)をＮｈｅおよびＨｉｎｄIIIでの酵素消化により作成した。切断ベクターをQiagenカラムから精製し、ウシ腸アルカリホスファターゼ(ＣＩＰ)(BioLabs)で脱リン酸化した。ＣＩＰ反応完了後、切断ベクターを再びカラム精製して、最終ベクターを作成した。Roche Rapidリガーゼおよびベンダー明細を使用して３パートライゲーションを行った。最終プラスミドを配列決定により確認した。
【０２８６】
キナーゼドメイン。
BV 1075のタンパク質配列：
1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK
61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGGGGGGG
121 GLVECLLPNG MIVTLECLRE ATLITIKHEL FKEARKYPLH QLLQDESSYI FVSVTQEAER
181 EEFFDETRRL CDLRLFQPFL KVIEPVGNRE EKILNREIGF AIGMPVCEFD MVKDPEVQDF
241 RRNILNVCKE AVDLRDLNSP HSRAMYVYPP NVESSPELPK HIYNKLDKGQ IIVVIWVIVS
301 PNNDKQKYTL KINHDCVPEQ VIAEAIRKKT RSMLLSSEQL KLCVLEYQGK YILKVCGCDE
361 YFLEKYPLSQ YKYIRSCIML GRMPNLMLMA KESLYSQLPM DCFTMPSYSR RISTATPYMN
421 GETSTKSLWV INSALRIKIL CATYVNVNIR DIDKIYVRTG IYHGGEPLCD NVNTQRVPCS
481 NPRWNEWLNY DIYIPDLPRA ARLCLSICSV KGRKGAKEEH CPLAWGNINL FDYTDTLVSG
541 KMALNLWPVP HGLEDLLNPI GVTGSNPNKE TPCLELEFDW FSSVVKFPDM SVIEEHANWS
601 VSREAGFSYS HAGLSNRLAR DNELRENDKE QLKAISTRDP LSEITEQEKD FLWSHRHYCV
661 TIPEILPKLL LSVKWNSRDE VAQMYCLVKD WPPIKPEQAM ELLDCNYPDP MVRGFAVRCL
721 EKYLTDDKLS QYLIQLVQVL KYEQYLDNLL VRFLLKKALT NQRIGHFFFW HLKSEMHNKT
781 VSQRFGLLLE SYCRACGMYL KHLNRQVEAM EKLINLTDIL KQEKKDETQK VQMKFLVEQM
841 RRPDFMDALQ GFLSPLNPAH QLGNLRLEEC RIMSSAKRPL WLNWENPDIM SELLFQNNEI
901 IFKNGDDLRQ DMLTLQIIRI MENIWQNQGL DLRMLPYGCL SIGDCVGLIE VVRNSHTIMQ
961 IQCKGGLKGA LQFNSHTLHQ WLKDKNKGEI YDAAIDLFTR SCAGYCVATF ILGIGDRHNS
1021 NIMVKDDGQL FHIDFGHFLD HKKKKFGYKR ERVPFVLTQD FLIVISKGAQ ECTKTREFER
1081 FQEMCYKAYL AIRQHANLFI NLFSMMLGSG MPELQSFDDI AYIRKTLALD KTEQEALEYF
1141 MKQMNDAHHG GWTTKMDWIF HTIKQHALNE LGGAHHHHHH(配列番号４)
【０２８７】
【表４】
2012531454.tif 000151
【０２８８】
ＢＶ９４９：ｐ８５  ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβおよびＰＩ３ＫδサブユニットのインターＳＨ２ドメイン(ｉＳＨ２)のためのおよび完全長ｐ１１０βサブユニットのためのＰＣＲ産物を、オーバーラッピングＰＣＲにより作成し、融合させた。ｉＳＨ２  ＰＣＲ産物を胎盤、精巣および脳(Clontech)由来の市販ヒトＲＮＡから、最初にプライマーgwG130-p01(5'-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3')(配列番号５)およびgwG130-p02(5'-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3')(配列番号６)を使用してＲＴ−ＰＣＲにより作成した第一鎖ｃＤＮＡから得た。続いて、二次ＰＣＲ反応において、Gateway組み換えAttB1部位およびリンカー配列をそれぞれｐ８５  ｉＳＨ２フラグメントの５'端および３'端に、プライマーgwG130-p03(5'-GGGACAAGTT-TGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3')(配列番号７)およびｇwG130-p05(5'-ACTGAAGCATCCTCCTC-CTCCTCCT-CCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3')(配列番号８)を使用して付加した。ｐ１１０βフラグメントを、鋳型としてｐ１１０βクローン(配列を確認した未知源由来)を使用し、リンカー配列およびｐ１１０βの５'端を含むプライマーgwG130-p04(5'-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGATGCTT-CAGTTTCATAATGCCTCCTGCT-3')(配列番号９)およびヒスチジンタグに融合したｐ１１０−βの３'端の配列を含むプライマーgwG130-p06(5'-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCAGATC-TGTAGTCTTTCCGAA-CTGTGTG-3')(配列番号１０)を使用するＰＣＲにより得た。ｐ８５−ｉＳＨ２／ｐ１１０β融合タンパク質を、上記ｇｗG130-p03プライマーおよびオーバーラッピングヒスチジンタグおよびＡｔｔＢ２組み換え配列(5'-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3')(配列番号11)を含むプライマーを使用して、ｉＳＨ２フラグメントの３'端とｐ１１０βフラグメントの５'端でのリンカーの反応であるオーバーラッピングＰＣＲにより集合させた。この最終生成物をGateway(Invitrogen)OR反応によりドナーベクターｐDONR201(Invitrogen)に組み換えして、ORF253エントリークローンを作成した。このクローンを配列決定により確認し、バキュロウイルス発現ベクターLR280作成のためにインサートをGateway適合pBlueBac4.5(Invitrogen)に移すGatewayLR反応(Invitrogen)に使用した。このLR280はｐ８５配列にアミノ酸変異を有する。
【０２８９】
キナーゼドメイン。
BV949のタンパク質配列：
1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGKEK
61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGGCFSFI
121 MPPAMADILD IWAVDSQIAS DGSIPVDFLL PTGIYIQLEV PREATISYIK QMLWKQVHNY
181 PMFNLLMDID SYMFACVNQT AVYEELEDET RRLCDVRPFL PVLKLVTRSC DPGEKLDSKI
241 GVLIGKGLHE FDSLKDPEVN EFRRKMRKFS EEKILSLVGL SWMDWLKQTY PPEHEPSIPE
301 NLEDKLYGGK LIVAVHFENC QDVFSFQVSP NMNPIKVNEL AIQKRLTIHG KEDEVSPYDY
361 VLQVSGRVEY VFGDHPLIQF QYIRNCVMNR ALPHFILVEC CKIKKMYEQE MIAIEAAINR
421 NSSNLPLPLP PKKTRIISHV WENNNPFQIV LVKGNKLNTE ETVKVHVRAG LFHGTELLCK
481 TIVSSEVSGK NDHIWNEPLE FDINICDLPR MARLCFAVYA VLDKVKTKKS TKTINPSKYQ
541 TIRKAGKVHY PVAWVNTMVF DFKGQLRTGD IILHSWSSFP DELEEMLNPM GTVQTNPYTE
601 NATALHVKFP ENKKQPYYYP PFDKIIEKAA EIASSDSANV SSRGGKKFLP VLKEILDRDP
661 LSQLCENEMD LIWTLRQDCR EIFPQSLPKL LLSIKWNKLE DVAQLQALLQ IWPKLPPREA
721 LELLDFNYPD QYVREYAVGC LRQMSDEELS QYLLQLVQVL KYEPFLDCAL SRFLLERALG
781 NRRIGQFLFW HLRSEVHIPA VSVQFGVILE AYCRGSVGHM KVLSKQVEAL NKLKTLNSLI
841 KLNAVKLNRA KGKEAMHTCL KQSAYREALS DLQSPLNPCV ILSELYVEKC KYMDSKMKPL
901 WLVYNNKVFG EDSVGVIFKN GDDLRQDMLT LQMLRLMDLL WKEAGLDLRM LPYGCLATGD
961 RSGLIEVVST SETIADIQLN SSNVAAAAAF NKDALLNWLK EYNSGDDLDR AIEEFTLSCA
1021 GYCVASYVLG IGDRHSDNIM VKKTGQLFHI DFGHILGNFK SKFGIKRERV PFILTYDFIH
1081 VIQQGKTGNT EKFGRFRQCC EDAYLILRRH GNLFITLFAL MLTAGLPELT SVKDIQYLKD
1141 SLALGKSEEE ALKQFKQKFD EALRESWTTK VNWMAHTVRK DYRSGAHHHH HHGA(配列番号１２)
【０２９０】
キナーゼドメイン。
【表５】
2012531454.tif 000152
【０２９１】
Roger Williams lab, MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK (November, 2003)から得た構築物。構築物の記載(Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)。構築物はＮ末端１４４ａａを欠く。
【０２９２】
BV950のタンパク質配列：
1 MSEESQAFQR QLTALIGYDV TDVSNVHDDE LEFTRRGLVT PRMAEVASRD PKLYAMHPWV
61 TSKPLPEYLW KKIANNCIFI VIHRSTTSQT IKVSPDDTPG AILQSFFTKM AKKKSLMDIP
121 ESQSEQDFVL RVCGRDEYLV GETPIKNFQW VRHCLKNGEE IHVVLDTPPD PALDEVRKEE
181 WPLVDDCTGV TGYHEQLTIH GKDHESVFTV SLWDCDRKFR VKIRGIDIPV LPRNTDLTVF
241 VEANIQHGQQ VLCQRRTSPK PFTEEVLWNV WLEFSIKIKD LPKGALLNLQ IYCGKAPALS
301 SKASAESPSS ESKGKVRLLY YVNLLLIDHR FLLRRGEYVL HMWQISGKGE DQGSFNADKL
361 TSATNPDKEN SMSISILLDN YCHPIALPKH QPTPDPEGDR VRAEMPNQLR KQLEAIIATD
421 PLNPLTAEDK ELLWHFRYES LKHPKAYPKL FSSVKWGQQE IVAKTYQLLA RREVWDQSAL
481 DVGLTMQLLD CNFSDENVRA IAVQKLESLE DDDVLHYLLQ LVQAVKFEPY HDSALARFLL
541 KRGLRNKRIG HFLFWFLRSE IAQSRHYQQR FAVILEAYLR GCGTAMLHDF TQQVQVIEML
601 QKVTLDIKSL SAEKYDVSSQ VISQLKQKLE NLQNSQLPES FRVPYDPGLK AGALAIEKCK
661 VMASKKKPLW LEFKCADPTA LSNETIGIIF KHGDDLRQDM LILQILRIME SIWETESLDL
721 CLLPYGCIST GDKIGMIEIV KDATTIAKIQ QSTVGNTGAF KDEVLNHWLK EKSPTEEKFQ
781 AAVERFVYSC AGYCVATFVL GIGDRHNDNI MITETGNLFH IDFGHILGNY KSFLGINKER
841 VPFVLTPDFL FVMGTSGKKT SPHFQKFQDI CVKAYLALRH HTNLLIILFS MMLMTGMPQL
901 TSKEDIEYIR DALTVGKNEE DAKKYFLDQI EVCRDKGWTV QFNWFLHLVL GIKQGEKHSA
961 HHHHHH(配列番号１３)
【０２９３】
【表６】
2012531454.tif 000153
【０２９４】
ＢＶ１０６０：ｐ８５サブユニットのインターＳＨ２ドメイン(ｉＳＨ２)のためのおよび完全長ｐ１１０δサブユニットのためのＰＣＲ産物をオーバーラッピングＰＣＲにより作成し、融合させた。ｉＳＨ２  ＰＣＲ産物を鋳型としてORF318(上記)およびプライマーgwG130-p03(5'-GGGACAAG-TTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGC-GAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3')(配列番号７)およびgwG154-p04(5'-TCCTCCTCCT-CCTCCTCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3')(配列番号１４)を使用して作成した。ｐ１１０δフラグメントを、胎盤、精巣および脳(Clontech)由来の市販ヒトＲＮＡから、最初にプライマーgwG154-p01(5'-ATGCCCCCTGGGGTGGACTGCCCCAT-3')(配列番号１５)およびgwG154-p02(5'-CTACTGCCTGT-TGTCTTTGGACACGT-3')(配列番号１６)を使用してＲＴ−ＰＣＲにより作成した第一鎖ｃＤＮＡから得た。続くＰＣＲ反応において、リンカー配列およびヒスチジンタグを、プライマーｇw154-p03(5'-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGACCCCCTGGGGTGGAC-TGCCCCATGGA-3')(配列番号１７)およびgwG154-p06(5'-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGAT-GTGCT-CCCTGCCTGTTGTCTTTGGACACGTTGT-3')(配列番号１８)を使用して、それぞれのｐ１１０δフラグメントの５'端および３'端に付加した。ｐ８５−ｉＳＨ２／ｐ１１０δ融合タンパク質を、第三のＰＣＲ反応において、オーバーラッピングリンカーにより、ｉＳＨ２フラグメントの３'端とｐ１１０δフラグメントの５'端で、上記gwG130-p03プライマーおよびオーバーラッピングヒスチジンタグおよびGateway(Invitrogen)AttB2組み換え配列(5'-GGG-ACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAA-GCTCCGTGATGGTGATGGTGAGTGCTCC-3')(配列番号１９)を含むプライマーを使用して、集合させた。この最終産物をGateway OR反応でドナーベクターpDONR201(Invitrogen)に組み換えし、ＯＲＦ３１９エントリークローンを作成した。このクローンを配列決定により確認し、バキュロウイルス発現ベクターLR415を作成するためのインサートのGateway適合pBlueBac4.5(Invitrogen)ベクターへの移動のためのGatewayＬＲ反応(Invitrogen)に使用した。
【０２９５】
BV1060のタンパク質配列：
1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK
61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGGPPGVD
121 CPMEFWTKEE NQSVVVDFLL PTGVYLNFPV SRNANLSTIK QLLWHRAQYE PLFHMLSGPE
181 AYVFTCINQT AEQQELEDEQ RRLCDVQPFL PVLRLVAREG DRVKKLINSQ ISLLIGKGLH
241 EFDSLCDPEV NDFRAKMCQF CEEAAARRQQ LGWEAWLQYS FPLQLEPSAQ TWGPGTLRLP
301 NRALLVNVKF EGSEESFTFQ VSTKDVPLAL MACALRKKAT VFRQPLVEQP EDYTLQVNGR
361 HEYLYGSYPL CQFQYICSCL HSGLTPHLTM VHSSSILAMR DEQSNPAPQV QKPRAKPPPI
421 PAKKPSSVSL WSLEQPFRIE LIQGSKVNAD ERMKLVVQAG LFHGNEMLCK TVSSSEVSVC
481 SEPVWKQRLE FDINICDLPR MARLCFALYA VIEKAKKARS TKKKSKKADC PIAWANLMLF
541 DYKDQLKTGE RCLYMWPSVP DEKGELLNPT GTVRSNPNTD SAAALLICLP EVAPHPVYYP
601 ALEKILELGR HSECVHVTEE EQLQLREILE RRGSGELYEH EKDLVWKLRH EVQEHFPEAL
661 ARLLLVTKWN KHEDVAQMLY LLCSWPELPV LSALELLDFS FPDCHVGSFA IKSLRKLTDD
721 ELFQYLLQLV QVLKYESYLD CELTKFLLDR ALANRKIGHF LFWHLRSEMH VPSVALRFGL
781 ILEAYCRGST HHMKVLMKQG EALSKLKALN DFVKLSSQKT PKPQTKELMH LCMRQEAYLE
841 ALSHLQSPLD PSTLLAEVCV EQCTFMDSKM KPLWIMYSNE EAGSGGSVGI IFKNGDDLRQ
901 DMLTLQMIQL MDVLWKQEGL DLRMTPYGCL PTGDRTGLIE VVLRSDTIAN IQLNKSNMAA
961 TAAFNKDALL NWLKSKNPGE ALDRAIEEFT LSCAGYCVAT YVLGIGDRHS DNIMIRESGQ
1021 LFHIDFGHFL GNFKTKFGIN RERVPFILTY DFVHVIQQGK TNNSEKFERF RGYCERAYTI
1081 LRRHGLLFLH LFALMRAAGL PELSCSKDIQ YLKDSLALGK TEEEALKHFR VKFNEALRES
1141 WKTKVNWLAH NVSKDNRQEL GGAHHHHHH(配列番号２０)
【０２９６】
ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβおよびＰＩ３Ｋγ構築物の精製
ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβおよびＰＩ３Ｋγを２回のクロマトグラフィー工程により精製した：Ｎｉセファロース樹脂(GE Healthcare)上の固定化金属親和性クロマトグラフィー(ＩＭＡＣ)およびSuperdex 200 26/60カラム(GE Healthcare)を使用するゲル濾過。全緩衝液を４℃に冷却し、溶解を氷上で冷やしながら行った。カラム分画を室温で行った。ＰＩ３Ｋβ精製に使用した全緩衝液は、以下に記載するものに加えて０.０５％Triton X100を含んだ。
典型的に１０ＬのＴｎ５細胞培養からの凍結細胞を、“溶解緩衝液”(２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM  ＮａＣｌ、５％グリセロール、５mM  イミダゾール、１mM  ＮａＦ、０.１μg／mL  オカダ酸(ＯＡＡ)、５mM  ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル−無ＥＤＴＡ(２０錠／１Ｌ緩衝液、Roche Applied Sciences)、ベンゾナーゼ(２５Ｕ／mL緩衝液、EMD Biosciences))に、１：６ｖ／ｖペレット対溶解緩衝液比で再懸濁させ、密接に適合した杵を使用する２０回のダウンシングにより機械的に溶解した。溶解物を４５,０００ｇで３０分間遠心分離し、上清を予め平衡化したＩＭＡＣカラムに載せた(３mL樹脂／１００mL溶解物)。カラムを３−５カラム体積の溶解緩衝液で洗浄し、続いて３−５カラム体積で、２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM  ＮａＣｌ、５％グリセロール、４５mM  イミダゾール、１mM  ＮａＦ、０.１μg／mL  ＯＡＡ、５mM  ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル−無ＥＤＴＡで２回目の洗浄をした。タンパク質を２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、０.５Ｍ  ＮａＣｌ、５％グリセロール、２５０mM  イミダゾール、１mM  ＮａＦ、０.１μg／mL  ＯＡＡ、５mM  ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル−無ＥＤＴＡで溶出した。適切なフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それに従いプールした。タンパク質をさらに２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、０.５Ｍ  ＮａＣｌ、５％グリセロール、１mM  ＮａＦ、５mM  ＤＴＴ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル−無ＥＤＴＡで平衡化したSuperdex 200 26/60カラムでのゲル濾過により精製した。適切なフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それに従いプールした。当量の透析緩衝液(２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM  ＮａＣｌ、５０％グリセロール、５mM  ＮａＦ、５mM  ＤＴＴ)をプールに添加し、２回変えて透析緩衝液に対して透析した(一夜１回交換)。タンパク質を−２０℃で貯蔵した。
【０２９７】
ＰＩ３Ｋδの精製
ＰＩ３Ｋδを３回のクロマトグラフィー工程により精製した：Ｎｉセファロース樹脂(GE Healthcare)での固定化金属親和性クロマトグラフィー、Superdex 200 26/60カラム(GE Healthcare)でのゲル濾過および最後にＱ−ＨＰカラム(GE Healthcare)でのイオン交換。全緩衝液を４℃に冷却し、溶解を氷上で冷やしながら行った。カラム分画を室温で行った。
典型的に１０ＬのＴｎ５細胞培養からの凍結細胞を、“溶解緩衝液”(２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM  ＮａＣｌ、５％グリセロール、５mM  イミダゾール、１mM  ＮａＦ、０.１μg／mL  オカダ酸(ＯＡＡ)、５mM  ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル−無ＥＤＴＡ(２０  錠剤／１Ｌ緩衝液、Roche Applied Sciences)、ベンゾナーゼ(２５Ｕ／mL  溶解緩衝液、EMD Biosciences))に、１：１０  ｖ／ｖペレット対溶解緩衝液比で再懸濁させ、密接に適合した杵を使用する２０回のダウンシングにより機械的に溶解した。溶解物を４５,０００ｇで３０分間遠心分離し、上清を予め平衡化したＩＭＡＣカラムに載せた(５mL樹脂／１００mL溶解物)。カラムを３−５カラム体積の溶解緩衝液で洗浄し、続いて３−５カラム体積の２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM  ＮａＣｌ、５％グリセロール、４０mM  イミダゾール、１mM  ＮａＦ、０.１μg／mL  ＯＡＡ、５mM  ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル−無ＥＤＴＡで２回目の洗浄をした。タンパク質を２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM  ＮａＣｌ、５％グリセロール、２５０mM  イミダゾール、１mM  ＮａＦ、０.１μg／mL  ＯＡＡ、５mM  ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル−無ＥＤＴＡで溶出した。適切なフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それに従いプールした。タンパク質をさらに２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM  ＮａＣｌ、５％グリセロール、１mM  ＮａＦ、０.１μg／mL  ＯＡＡ、５mM  ＤＴＴ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル−無ＥＤＴＡで平衡化したSuperdex 200で精製した。適切なフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それに従いプールした。これらのフラクションを１：１０  ｖ／ｖプール体積対緩衝液比で“緩衝液Ａ”(２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ８.２、５％グリセロール、１mM  ＮａＦ、０.１μg／mL  ＯＡＡ、５mM  ＤＴＴ)で希釈し、分取Ｑ−ＨＰカラムに載せた。サンプル充填完了後、我々は緩衝液Ａおよび５％“緩衝液Ｂ”(２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ８.２、１Ｍ  ＮａＣｌ、５％グリセロール、１mM  ＮａＦ、０.１μg／mL  ＯＡＡ、５mM  ＤＴＴ)で３−５カラム体積洗浄した。我々は、タンパク質を緩衝液Ｂの５％−３０％勾配を使用して溶出した。典型的に本タンパク質は〜２００mM  ＮａＣｌで溶出する。適切なフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それに従いプールした。当量の透析緩衝液(２０mM  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM  ＮａＣｌ、５０％グリセロール、１mM  ＮａＦ、０.１μg／mL  ＯＡＡ、５mM  ＤＴＴ)をプールに添加し、２回変えて透析緩衝液に対して透析した(一夜１回交換)。タンパク質を−２０℃で貯蔵した。
【０２９８】
以下の結果が、上記アッセイを使用して得られた。
【表７】
2012531454.tif 000154
【表８】
2012531454.tif 000155
ｎ.ｄ.＝行わず
【配列表】
2012531454000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成24年2月24日(2012.2.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2012531454000001.app
【国際調査報告】
2012531454.tif 000158
2012531454.tif 000159