(57)【要約】  本開示は、レプチン産物を含有する組成物ならびに進行性認知障害のための臨床治療方法及び診断方法を提供する。一態様によれば、記載されている発明は、進行性認知障害を治療するための方法を提供する。別の態様によれば、記載されている発明は、それを必要としている対象における認知機能の回復力を向上させるための方法を提供する。他の態様によれば、記載されている発明は、Ａβの蓄積、タウの過剰リン酸化、又は神経原線維のもつれの蓄積のうちの少なくとも１つに起因する進行性の認知機能不全疾患又は障害を治療するための有効な治療剤を同定するための方法を提供する。【選択図】図１
2012508242.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
進行性認知障害を治療するための方法であって、
（ａ）治療有効量のレプチン組成物を準備する工程、ここで、前記レプチン組成物は、
（ｉ）第１の治療剤としてのレプチン又はレプチン類似体；
（ｉｉ）任意で、少なくとも１つの第２の治療剤；及び
（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体、を含む；
（ｂ）それを必要としている対象に（ａ）の組成物を投与する工程；ならびに
（ｃ）前記進行性認知障害の少なくとも１つの病態の進行を低下させるか又は予防する工程、を含む方法。
【請求項２】
前記組成物が、Ａβの産生を減少させるか、Ａβの取込みを増加させるか、又はタウタンパク質のリン酸化を減少させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記タウタンパク質のリン酸化の部位が、Ｓｅｒ−２０２／Ｔｈｒ−２０５（ＡＴ８部位）、Ｓｅｒ−２１４、Ｓｅｒ−１８１、Ｓｅｒ−２１２（ＡＴ１００部位）、Ｔｈｒ−２３１、Ｓｅｒ−２３５（ＴＧ３部位）、及びＳｅｒ−３９６／Ｓｅｒ−４０４（ＰＨＦ−１部位）のうちの少なくとも１つを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記進行性認知障害が、アルツハイマー病、進行性核上まひ；認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病、前頭側頭認知症、ピック病、パーキンソニズム１７を伴う前頭側頭認知症、大脳皮質基底核変性症、前頭側頭葉変性症；ハンチントン病；又はパーキンソン病である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記進行性認知障害がアルツハイマー病である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
アルツハイマー病の病態が、タウタンパク質のリン酸化、神経原線維のもつれ；ＡＰＰのタンパク質分解の変化；脳間質液におけるＡβ42の蓄積；脳間質液におけるＡβ42の凝集；脳間質液におけるＡβ40の蓄積；Ａβ40の凝集；炎症応答；神経損傷；ニューロンの代謝恒常性の混乱；ニューロンのイオン恒常性の混乱；酸化損傷；キナーゼ活性の変化；ホスファターゼ活性の変化；ニューロン機能不全；神経細胞死；神経伝達物質欠損；認知症；神経ジストロフィー；ニューロン周核体の収縮、及びシナプス喪失の群から選択される少なくとも１つを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記任意の少なくとも１つの第２の治療剤が、抗生物質剤、抗真菌剤、キナーゼ阻害剤、抗ウイルス剤、抗原虫剤、ステロイド性抗炎症剤、酸化防止剤、ホルモン、ビタミン、抗ヒスタミン薬、及び化学療法剤からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記任意の第２の治療剤が少なくとも１つのキナーゼ阻害剤である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１つのキナーゼ阻害剤が、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩのキナーゼ阻害剤；タンパク質キナーゼＡのキナーゼ阻害剤；ＧＳＫ−３βのキナーゼ阻害剤；ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼのキナーゼ阻害剤；５−アデノシン一リン酸タンパク質キナーゼのキナーゼ阻害剤；Ｍｙｒ−ＡＩＰ、ＬｉＣｌ、ＫＴ５７２０、６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（（２’Ｚ，３’Ｅ）−６−ブロモインジルビン−３’−オキシム）；ＫＴ５７２０；Ｋ２５２ａ；スタウロスポリン；ＫＴ５２５２ｂ；ケレリトリン；及びＴＤＺＤ−８（４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン−８）からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物が、組成物構成要素（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）の合計よりも大きいレベルのキナーゼ阻害を提供する、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記レプチン組成物中のレプチン又はレプチン類似体の治療有効量が、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重から約１００ｇ／ｋｇ体重の量である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物が少なくとも１つの認知機能を改善する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの認知機能が記憶である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの認知機能が学習である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
それを必要としている対象における認知機能の回復力を向上させるための方法であって、
（ａ）それを必要としている対象に
（ｉ）第１の治療剤としての認知機能増強量のレプチン又はレプチン類似体；
（ｉｉ）任意で、少なくとも１つの第２の治療剤、及び
（ｉｉ）薬学的に許容される担体；
を含むレプチン組成物を投与する工程、
ここで、前記組成物は、Ａβ産生を減少させるか、Ａβの取込みを増加させるか、又はタウタンパク質のリン酸化を減少させる；ならびに
（ｂ）前記対象における認知機能の回復力を向上させる工程、を含む方法。
【請求項１６】
前記タウタンパク質のリン酸化の部位が、Ｓｅｒ−２０２／Ｔｈｒ−２０５（ＡＴ８部位）、Ｓｅｒ−２１４、Ｓｅｒ−１８１、Ｓｅｒ−２１２（ＡＴ１００部位）、Ｔｈｒ−２３１、Ｓｅｒ−２３５（ＴＧ３部位）、及びＳｅｒ−３９６／Ｓｅｒ−４０４（ＰＨＦ−１部位）のうちの少なくとも１つを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記認知機能が記憶である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記記憶が条件付け記憶である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記記憶が文脈記憶である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記認知機能が記憶保持である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記認知機能が学習である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記学習が文脈学習である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記学習が条件付け学習である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記任意の第２の治療剤が、抗生物質剤、抗真菌剤、キナーゼ阻害剤、抗ウイルス剤、抗原虫剤、ステロイド性抗炎症剤、酸化防止剤、ホルモン、ビタミン、抗ヒスタミン薬、及び化学療法剤からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
前記任意の第２の治療剤が少なくとも１つのキナーゼ阻害剤である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記少なくとも１つのキナーゼ阻害剤が、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩのキナーゼ阻害剤；タンパク質キナーゼＡのキナーゼ阻害剤；ＧＳＫ−３βのキナーゼ阻害剤；ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼのキナーゼ阻害剤；５−アデノシン一リン酸タンパク質キナーゼのキナーゼ阻害剤；Ｍｙｒ−ＡＩＰ、ＬｉＣｌ、ＫＴ５７２０、６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（（２’Ｚ，３’Ｅ）−６−ブロモインジルビン−３’−オキシム）；ＫＴ５７２０；Ｋ２５２ａ；スタウロスポリン；ＫＴ５２５２ｂ；ケレリトリン；及びＴＤＺＤ−８（４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン−８）からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記組成物が、組成物構成要素（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）の合計よりも大きいレベルのキナーゼ阻害を提供する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
レプチン組成物中のレプチン又はレプチン類似体の認知機能増強量が、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重から約１００ｇ／ｋｇ体重の量である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２９】
Ａβの蓄積、タウタンパク質のリン酸化、又は神経原線維のもつれの蓄積のうちの少なくとも１つに起因する進行性の認知機能不全疾患又は障害を治療するための有効な治療剤を同定するための方法であって、
（ａ）神経細胞を含む細胞培養物を準備する工程、
（ｂ）前記神経細胞を含む細胞培養物を候補治療剤と接触させる工程、
（ｃ）前記候補治療剤が、タンパク質キナーゼの活性に影響を及ぼす程度に該タンパク質キナーゼタンパク質の活性部分と会合するかどうかを決定する工程、及び
（ｄ）前記候補治療剤を前記進行性の認知機能不全疾患又は障害を治療するための有効な治療剤として同定する工程、を含む方法。
【請求項３０】
前記タンパク質キナーゼが５−アデノシン一リン酸タンパク質キナーゼ又はＧＳＫ−３βである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記候補治療剤又は有効な治療剤が組換えタンパク質である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記候補治療剤又は有効な治療剤が阻害剤である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
前記候補治療剤又は有効な治療剤がアンタゴニストである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
前記候補治療剤又は有効な治療剤がアゴニストである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３５】
前記候補治療剤又は有効な治療剤が抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３６】
前記候補治療剤又は有効な治療剤が、レプチン又はレプチン類似体の前記タンパク質キナーゼとの会合を妨げる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３７】
決定する工程（ｃ）が、対照と比べた、神経細胞によるアミロイドβの分泌の測定を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３８】
前記対照と比べた、神経細胞によるアミロイドβの分泌の測定がＥＬＩＳＡ又はイムノブロットによるものである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
アミロイドβ病態を治療するための有効な治療剤を用いる工程を更に含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項４０】
前記アミロイドβ病態が、タウタンパク質のリン酸化；神経原線維のもつれ；ＡＰＰのタンパク質分解の変化；脳間質液におけるＡβ42の蓄積；脳間質液におけるＡβ42の凝集；脳間質液におけるＡβ40の蓄積；Ａβ40の凝集；炎症応答；神経損傷；ニューロンの代謝恒常性の混乱；ニューロンのイオン恒常性の混乱；酸化損傷；キナーゼ活性の変化；ホスファターゼ活性の変化；ニューロン機能不全；神経細胞死；神経伝達物質欠損；認知症；神経ジストロフィー；ニューロン周核体の収縮、及びシナプス喪失の群から選択される少なくとも１つを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記有効な治療剤が少なくとも１つの認知機能を改善する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記少なくとも１つの認知機能が記憶である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記少なくとも１つの認知機能が学習である、請求項４１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００９年６月１１日に出願された米国特許出願第６１／１８６，１０２号、及び２００８年１１月４日に出願された米国特許出願第６１／１１１，１９７号の優先権の恩典を主張する。これらの出願の内容は各々、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、米国立老化研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｎ  Ａｇｉｎｇ）及びニュージャージー州科学技術委員会（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）によって授与されたＳＢＩＲ−１Ｒ４３ＡＧ０２９６７０の支援の下で行なわれた。政府は、本発明における一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
記載されている発明は、レプチン産物を用いて、神経原線維のもつれ又はアミロイドβの蓄積に起因する進行性認知機能障害を治療するための組成物及び方法に関する。
【０００４】
アミロイドβ（Ａβ）
アミロイドβは、連続的なタンパク質分解的切断によって、その大きな前駆体タンパク質（ＡＰＰ）から生じる。ＡＰＰは、そのシグナルペプチドによって翻訳と同時に小胞体に移行し、その後、分泌経路中で翻訳後修飾を受ける１回膜貫通ポリペプチドである。これは、遍在的に発現される不均質なポリペプチド群を含む。この不均質性は、選択的スプライシング（６９５残基、７５１残基及び７７０残基の３つの主要なアイソフォームを生じる）と、Ｎ結合型糖及びＯ結合型糖の付加、硫酸化、ならびにリン酸化を含む、種々の翻訳後修飾の両方から生じる。そのＮ結合型糖及びＯ結合型糖の獲得は、生合成後、速やかに生じ、その半減期は、比較的短い（４５〜６０分）。この不均質性にもかかわらず、ＡＰＰは進化において高度に保存されており、それについて調べられた全ての生物で発現している。ＡＰＰの部分相同体はショウジョウバエで発見されている（ＡＰＰＬ）。ＡＰＰは、アミロイド前駆体様タンパク質（ＡＰＬＰ）というより大きな遺伝子ファミリーのメンバーであり、このアミロイド前駆体様タンパク質は、大きな細胞外ドメインと細胞質テールの両方において大きい相同性を有するが、Ａβ領域は多様である。
【０００５】
７５１又は７７０アミノ酸からなるＡＰＰスプライス形態は、体中のニューロン以外の細胞で広く発現し、ニューロンでも生じる。しかしながら、ニューロンは、ニューロン以外の細胞では非常に少ない量でしか生じない６９５残基アイソフォームを高レベルで発現する。７５１／７７０残基形態と６９５残基形態の違いは、クニッツ（Ｋｕｎｉｔｚ）型のセリンプロテアーゼ阻害剤（ＫＰＩ）に相同な５６アミノ酸のモチーフをコードするエクソンが７５１／７７０残基アイソフォームに存在することであり、この存在は、これらのより長いＡＰＰアイソフォームの１つの潜在的機能を示している。ヒト血小板に見出されるＫＰＩ含有型のＡＰＰアイソフォームは、凝固カスケード中のセリンプロテアーゼである第Ｘｉａ因子の阻害因子としての役割を果たす。
【０００６】
Ａβ産生は正常な代謝事象である。ＡＰＰが分泌経路を通って輸送される間及び輸送された後に、ＡＰＰは種々のタンパク質分解的切断を受け、分泌型誘導体を小胞内腔及び細胞外空間に放出することができる。同定された第１のタンパク質分解的切断は、α−セクレターゼと呼ばれる活性によって行なわれるが、これは、ＡＰＰの１回膜貫通ドメインの１２アミノ酸ＮＨ2末端で起こる。このプロセシングは、大きな可溶性の細胞外ドメイン断片（α−ＡＰＰ）を内腔／細胞外スペースに放出し、８３残基のＣＯＯＨ−末端断片（ＣＴＦ）を膜に保持させる。あるいは、α−セクレターゼ切断を受けないいくつかのＡＰＰ分子は、β−セクレターゼと呼ばれる活性によって切断され得る。この活性は、主に、α−切断部位の１６残基ＮＨ2末端で切断して、わずかに小さい細胞外ドメイン誘導体（β−ＡＰＰ）を生成し、Ａβ領域の残基１から始まる９９残基のＣＦＴ（Ｃ９９）を膜に保持させる。そのため、このＣ９９断片は、γ−セクレターゼの結果として膜貫通ドメインの真ん中で切断される。ＡＰＰが、その複雑な細胞内輸送中に、α−、β−及びγ−セクレターゼを受ける可能性がある正確な場所については、まだ分かっていない。
【０００７】
細胞培養研究に基づき、いくつかの機能がＡＰＰホロタンパク質及び／又はその主な分泌型誘導体（α−ＡＰＰ）によるものとされている。可溶性α−ＡＰＰは、自己分泌因子として、及び神経保護因子、おそらくは向神経突起因子として作用することができるようである。インビトロ研究により、（ＫＰＩモチーフをコードする）７５１残基アイソフォームと７７０残基アイソフォームがトリプシンやキモトリプシンなどのセリンプロテアーゼを阻害することが示されている。分泌型ＡＰＰアイソフォームは、培養では細胞−細胞及び細胞−基質接着特性を付与することができる。帰せられたこれらの機能は全て、インビボでまだ確認されていない。
【０００８】
Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞などの極性のある上皮細胞では、ＡＰＰは、主に、側底膜にターゲッティングされ、そこで、α−セクレターゼ切断を受けて、側底にα−ＡＰＰを放出することができるが、ごく一部は頂端にターゲッティングされ、プロセシングされる。体の中で最も高いレベルのＡＰＰ（特に、ＡＰＰ６９５）を発現する細胞型の１つであるニューロンでは、ＡＰＰは、高速の軸索輸送構成要素の中で順行性に輸送されることができる。ＡＰＰは、軸索終末の小胞に存在するが、シナプス小胞に特に存在するというわけではない。細胞生物学的研究により、軸索終末のＡＰＰが軸索を上って細胞体へと逆行性に輸送されることができ、その後、いくつかの分子が細胞体樹状突起表面に完全に移されることが示されている。その逆行性軸索輸送の間に、いくつかのＡＰＰ分子は、軸索鞘表面に再循環されることができる。
【０００９】
ＡＰＰ軸索終末は、主要なＡβ生成部位であると仮定されているが、これは、明確には決定されておらず、様々なニューロン亜部位のエンドソームで再利用されるＡＰＰは、連続的なβ−及びγ−セクレターゼ切断を受けて、ペプチドを放出することができる。ＡＰＰはニューロンで特に大量に発現され、ニューロンはかなりの量のＡβペプチドを分泌することが分かっているが、これもまたＡＰＰを発現し、様々な量のＡβを放出する、星状細胞、ミクログリア、ならびに内皮細胞及び平滑筋細胞を含む、他の脳細胞が、最終的に細胞外沈着をもたらす分泌型Ａβを貯める一因となり得る。更に、（ｉ）ほとんど全ての末梢細胞もＡＰＰを発現し、Ａβを生成する、及び（ｉｉ）Ａβは血漿中に存在する、という事実は、循環Ａβが血液脳関門を越えて、脳にＡβを蓄積する一因となる可能性を提起する。
【００１０】
脂質ラフト
一般に、脳脂質は、Ａβが関連する発病経路に複雑に関与すると考えられている。Ａβペプチドは、ＡＤ患者の脳に見られるアミロイド斑の主要なタンパク質性構成要素であり、多くの人々によりこの障害の原因とみなされている。蓄積する細胞外Ａβの量は、ＡＤの病理生物学にとって極めて重要であり、その産生／分泌とそのクリアランスの拮抗の割合によって決まる。研究により、ニューロンは、Ａβの生成及びリポタンパク質受容体関連タンパク質（「ＬＲＰ」）経路を介したその取込みの両方を、プレセニリン１（「ＰＳ１」）と細胞質リンカータンパク質１７０（「ＣＬＩＰ−１７０」）の相互作用に依存していることが示されている。この要件に加え、Ａβの形成は、重要なタンパク質の脂質ラフト（「ＬＲ」）中での会合に依存する。本明細書で用いられる「脂質ラフト」という用語は、シグナル伝達、タンパク質輸送及びタンパク質分解に関与するコレステロール、スフィンゴ糖脂質及びグルコシルホスファチジル−イノシトール−（ＧＰＩ）タグ化タンパク質が豊富にある膜ミクロドメインを指す。ＬＲ内では、ＡＰＰがβ−セクレターゼ（ＢＡＣＥ）によって最初に切断されて、ＡＰＰのＣ末端中間体断片（ＣＦＴ（Ｃ９９））を生成し、これが膜の中に埋め込まれたまま残ると考えられている。その後、ＣＦＴ（Ｃ９９）は、プレセニリン（ＰＳ１／ＰＳ２）、ニカストリン、ＰＥＮ−２、及びＡＰＨ−１又はこれらの断片を含有する高分子量の多タンパク質複合体γ−セクレターゼにより、脂質二重層内に存在する部位で切断される。Ａβは最終的に細胞外に放出され、そこで、ｉ）オリゴマー化した後に蓄積して、ニューロンに対する毒性を発揮し始めるか、又はｉｉ）エンドサイトーシスの機構（アポリポタンパク質−Ｅ（アポＥ）及びＬＲＰもしくはスカベンジャー受容体を必要とする）によるか、もしくはインスリン分解酵素（ＩＤＥ）やネプリライシンを含む細胞外プロテアーゼによる分解によるかのいずれかで除去される可能性がある。
【００１１】
メチル−β−シクロデキストリンと類似したレプチンは、神経細胞におけるβ−セクレターゼ活性を低下させる。更に、レプチンは、インビトロでアポＥ依存的なＡβ取込みを増加させる。レプチンと同様に、メチル−β−シクロデキストリンは、理論に束縛されるものではないが、おそらく、膜ＬＲの脂質組成を変化させることにより、神経細胞におけるβ−セクレターゼ活性を低下させる。レプチンと同様に、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（例えば、ＴＯＦＡ）及び脂肪酸シンターゼ（セルレニン）の阻害剤は、レプチンの作用を模倣する、すなわち、レプチン模倣体として作用する。対照的に、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−１の阻害剤であるエトキソミールは、Ａβ産生を増加させることが知られている。
【００１２】
アルツハイマー病
アルツハイマー病（「ＡＤ」、「アルツハイマー型の老年性認知症（ＳＤＡＴ）」又は「アルツハイマー」とも呼ばれる）は、中枢神経系（「ＣＮＳ」）の進行性神経変性障害である。ＡＤは、通常、特徴的な神経学的及び神経心理学的特性の存在に基づいて、患者の病歴、血縁者の病歴、及び臨床的観察から臨床的に診断される。
【００１３】
ＡＤ病態としては、限定するものではないが、（１）ＡＰＰ、ＰＳ１及びＰＳ２遺伝子におけるミスセンス突然変異；（２）Ａβ４２のタンパク質分解の変化；（３）脳間質液におけるＡβ４２の進行性の蓄積及び凝集；（４）びまん性斑としての凝集したＡβ４２の沈着（プロテオグリカン及び他のアミロイド促進基質と関連する）；（５）びまん性のＡβ４２斑上へのＡβ４０の凝集及び（例えば、補体ｃ１ｑなどのような）特定の斑関連タンパク質の蓄積；（６）（ａ）ミクログリア活性化及びサイトカイン放出、（ｂ）星状細胞増加及び急性期タンパク質放出を含む炎症応答；（７）アミロイド斑内や神経網の別の場所における進行性の神経損傷（neuritic injury）；（８）ニューロンの代謝恒常性及びイオン恒常性の混乱；酸化損傷；（９）ＰＨＦ形成をもたらす過剰リン酸化タウを生じさせるキナーゼ／ホスファターゼ活性の変化；（１０）進行性の神経伝達物質欠損を伴う海馬及び大脳皮質における広範囲のニューロン／神経突起の機能不全及び死；ならびに（１１）認知症が挙げられる。罹患した皮質領域に更に存在し得る最終的な効果としては、神経ジストロフィー（neuritic dystrophy）、シナプス喪失、ニューロン周核体の収縮、及び選択的なニューロン喪失が挙げられる。
【００１４】
ＡＤは更に、大脳皮質及び特定の皮質下領域におけるニューロン及びシナプスの喪失を特徴とする。この喪失は、側頭葉及び頭頂葉、ならびに前頭皮質及び帯状回の一部における変性を含む、罹患した領域の全体的な萎縮を引き起こす。アミロイド斑（「ＡＰ」）と神経原線維のもつれ（「ＮＦＴ」）は両方とも、銀染色した後にＡＤ患者の脳を顕微鏡観察するとはっきりと見える。
【００１５】
斑
アミロイド斑は、ニューロンの外側及び周辺におけるアミロイドβ（「Ａβ」）タンパク質及び細胞性物質の高密度で、大部分は不溶性の蓄積物である。アミロイド前駆体ペプチド（「ＡＰＰ」）を含有する異栄養性神経突起は外傷性脳損傷に見られ、「びまん性斑」はボクサー認知症と関連して認められることがあるが、ＡＤにおけるアミロイド斑の出現は特有のものである。神経突起斑（すなわち、タウ神経原線維病変によって囲まれたＡβペプチド含有細胞外病変）の特有の出現は、ＡＤに特異的であると考えられている。一般に、非ＡＤタウオパチーにはアミロイド斑がないので、アミロイド斑は、神経原線維病変に非特異的な反応ではないと考えられている。ＡＤ型アミロイド斑の特異性を更に証明するものとして、ダウン症に見られるようなＡＰＰ遺伝子の突然変異又は重複が、臨床的及び病理学的に、ＡＤの具体的な特徴を生じさせるという事実がある。従って、ＡＤは神経突起アミロイド斑とＮＦＴの特定の組合せを含み、その場合、神経突起斑はこの疾患により特異的であるように思われ、また、ＮＦＴは神経変性を誘導する可能性がより高いように思われる。
【００１６】
神経突起斑
神経突起斑は、変性又は遡行変性（ｄｙｉｎｇ  ｂａｃｋ）している神経細胞突起によって囲まれたほぼ球状の細胞外アミロイド沈着を含む。これらの異常な樹状突起と軸索は、ＮＦＴで見られるものと同一の異常なタウ原線維を含有する。所与の神経突起斑において、異なる神経伝達物質シグネチャーを発現する種々の異なる源からの軸索が存在し得る。これらの神経突起は横に広がって、曲がりくねっていることが多く、肥大したリソソームと、数の多いミトコンドリアと、対になったらせん状線維とを含む微細構造の異常を特徴とする。対になったらせん状線維は、神経原線維のもつれを含むものと区別が付かない。このような斑は、活性化と関連する表面抗原（例えば、ＣＤ４５及びＨＬＡ−ＤＲ）を発現するミクログリアとも密接に関連し、また、これらの斑は、大量のグリア線維を示す反応性の星状細胞に囲まれている。ミクログリアが、通常、神経突起斑の中心アミロイドコアの内部にある、及びそれに隣接しているのに対し、星状細胞は、多くの場合、斑の外側を取り囲み、その突起の一部がアミロイドコアに向かって求心的に伸びている。このような神経突起斑が発生するのにかかる時間は不明であるが、これらの病変は、相当な時間、おそらくは何カ月又は何年もかけて、非常に穏やかに発達する可能性が高い。どの１つの斑の原因にもなる周辺神経炎は、多様な神経伝達物質群の局所ニューロンから生じることがある。神経突起斑に見られる原線維Ａβの大部分は、アミノ酸４２で終わる種（Ａβ４２）であり、これは、わずかにより長く、より疎水性の形態であって、特に凝集が起こりやすい。しかしながら、通常Ａβ４２よりも大量に細胞によって産生されるアミノ酸４０で終わるＡβ種（Ａβ４０）は、通常、斑の中でＡβ４２と共局在している。顕微鏡脳切片における神経突起斑の断面直径は、１０μｍから１２０μｍ超まで大きく異なり、細胞外コアを含むアミロイド原線維の密度と圧縮の程度も斑ごとに大きなばらつきを示す。
【００１７】
神経突起斑は、細胞外アミロイド斑病変が、細胞内神経原線維病変と明白な構造及び機能の混乱とを誘導する病巣に相当する。
【００１８】
びまん性斑（プレアミロイド沈着）
多くのＡβ沈着には、典型的な神経突起斑の圧縮された、線維状の外観がない。研究により、辺縁皮質及び連合皮質で見られる斑の多く、及び典型的なＡＤの症状への関与が明確でない脳領域（例えば、視床、尾状核、被殻、小脳）で見られる斑のほとんど全てが、内在性Ａβ又は合成Ａβに対して開発された診断用抗体に対する比較的薄い、無定形のＡβ免疫反応性を示し、この反応性は、明確に線維状の、圧縮された中心を持たない、細かい顆粒状のパターンで生じることが示されている。多くの神経突起斑も含む領域でこれらの斑が検出されたことから、これらの斑が神経突起斑の前駆体病変に相当し、従って、「びまん性斑」又は「プレアミロイド沈着」とみなされるものであるという仮説が導かれた。ＡＤ脳に沈着したＡβペプチドは、主として、Ａβ４０又はＡβ４２のいずれかで終わる。研究により、Ａβ４２で終わるペプチドは、びまん性斑を含む物質のサブユニットであり、原線維に富んだ神経突起斑で通常見られる混合型（Ａβ４２＋Ａβ４０）の沈着とは対照的に、Ａβ４０免疫反応性がほとんどないか又は全くないことが示されている。
【００１９】
神経原線維のもつれ
ＡＤで通常罹患する脳領域（嗅内皮質、海馬、海馬傍回、扁桃体（amygdale）、前頭連合皮質、側頭連合皮質、頭頂連合皮質及び後頭連合皮質、ならびにこれらの領域に投射する特定の皮質下核）中の多くのニューロンは、核周辺の細胞質の大部分を占める大きな非膜結合型の異常線維の束を含む。これらの線維のほとんどは、らせんの周期が約１６０ｎｍの、らせん状に巻かれた１０ｎｍ線維の対（対になったらせん状線維（ＰＨＦ））からなる。もつれ（ｔａｎｇｌｅ）を有するニューロンの中には、ＰＨＦが入り交じった直線状の１０ｎｍ〜１５ｎｍの線維のもつれ（ｓｋｅｉｎ）を含むものもある。神経原線維のもつれ（ＮＦＴ）は微小管関連タンパク質「タウ」の凝集体であり、このタウは、過剰リン酸化されるようになって、それ自体細胞内に蓄積する。タウは、ニューロンに比較的多く存在するが、全ての有核細胞に存在しており、微小管に結合して、重合のために微小管集合体を安定化するように生理的に機能する。１００キロ超の塩基から構成されて、１６個のエクソンを含むタウ遺伝子は、ＡＰ２やＳＰ１などの転写因子のコンセンサス結合部位を含有する。成人の脳では、エクソン２、３及び１０上で転写されるタウ核ＲＮＡの選択的スプライシングによって６つのタウアイソフォームが生じ、これらは各々（ｉ）エクソン１０上にコードされるＣ末端領域中の３１もしくは３２残基の、３回もしくは４回のペプチド反復を有するか、（ｉｉ）微小管結合ドメインを含むか、又は（ｉｉｉ）エクソン２及び３上にコードされる０、１もしくは２個の挿入の発現が異なる。これらのタウアイソフォーム、及びそれらのリン酸化状態は、挿入のない３回反復（「３Ｒ」）タウが胎児や出生後早期の乳児で発現される一方で、不均質なアイソフォームが成人の脳で発現されるように、発生段階で変化する。このＲＮＡスプライシングの切替えもタウリン酸化の低下に合致する。
【００２０】
神経変性の間に、タウはプロリン直前のセリン／スレオニンリン酸化部位で異常にリン酸化され、このセリン／スレオニンリン酸化部位は、特異的抗血清を用いて検出することができる。これらのセリン／スレオニン（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）リン酸化部位としては、Ｓｅｒ−２０２／Ｔｈｒ−２０５（ＡＴ８部位）、Ｓｅｒ−２１４及び／又はＳｅｒ−２１４、Ｓｅｒ−１８１、及び／又はＳｅｒ−２１２（ＡＴ１００部位）、Ｔｈｒ−２３１及び／又はＳｅｒ−２３５（ＴＧ３部位）、ならびにＳｅｒ−３９６／Ｓｅｒ−４０４（ＰＨＦ−１部位）が挙げられる。選択的タウスプライシングのプロファイルは、ＡＤにおけるタウ蓄積が３Ｒタウと４Ｒタウの混合物であり、ピック病は３Ｒタウとなりやすく、大脳皮質基底核変性症や進行性核上まひは４Ｒタウとなりやすく、いわゆる嗜銀顆粒性疾患（agryrophilic grain disease）は３Ｒタウから構成される小さな封入体を蓄積するというように、病理学的表現型によって異なる。「タウオパチー」という一般用語は、リン酸化タウを蓄積する神経変性疾患の幅広い分類を包含する。
【００２１】
種々のキナーゼは、インビトロにおいて様々な部位でタウをリン酸化することができることが示されている。それにもかかわらず、１以上のキナーゼが、その明白な微小管からの解離と不溶性の対になったらせん状線維への凝集とを引き起こすタウの過剰リン酸化をインビボで開始するのに主に関与するのかどうかが明らかになっていない。
【００２２】
リン酸化タウの局所的分布と臨床的兆候の相関は、タウとＡＤ発病の密接な関係を示唆する。ＡＤを伴うタウリン酸化の増加は、場合によっては、他の因子（例えば、Ａβ、酸化ストレス、炎症性メディエーター）の助けを借りて、微小管からタウを引き離し、ＮＦＴと神経絨毛糸とを隔離させる可能性がある。理論によって制限されるものではないが、正常なタウ機能（微小管の安定化及び維持）の喪失は、毒性のある機能獲得と相まって、軸索輸送を障害して、シナプス変性の一因となる可能性がある。しかしながら、ＮＦＴ毒性の役割はまだ分かっていない。研究により、抑制性のヒトタウを発現するマウスモデルがやはりＮＦＴ、ニューロン喪失、及び行動障害を発症し、タウ抑制後、行動の欠陥は安定化したが、ＮＦＴは蓄積し続けたことが示されている。別のＡＤ様モデルでは、タウの蓄積を伴う軸索病態が斑沈着へと進行した。ＮＦＴ（及び仮定される「中間体」）は、生きたニューロンの細胞質内に存在する。進行した疾患でのみ、多数の細胞外ＮＦＴが同定される。
【００２３】
特に、ＮＦＴのより大まかな定義に様々なタウアイソフォームが含まれる場合、又はＮＦＴの形態学的特徴の例外が拡大される場合、ＮＦＴはＡＤに特異的なものではない。神経突起斑とＮＦＴという、２つの典型的なＡＤ病変は、互いに独立に生じることがある。ＡＤにおけるもつれと生化学的に類似しているか、又は場合によっては区別が付かない、タウ凝集体から構成されるもつれは、十数例のあまり一般的でない神経変性疾患で記載されており、そのほとんど全てにおいて、Ａβ沈着と神経突起斑は発見されない。
【００２４】
ＮＦＴは複数の脳疾患で見られ、２つ以上の疾患状態において神経変性の一因となり得る。ＡＤの他に、ＮＦＴは、一部の前頭側頭認知症、筋硬直性ジストロフィー、ウイルス性全脳炎、ボクサー認知症、一部のプリオン病、及び他の脳疾患でも見られる。これらの障害の多くについて、ＮＦＴ病態の重症度は、末期ＡＤで観察されるものよりも低い。更に、広汎性の新皮質ＮＦＴを特徴とする状態が広範囲の神経変性と臨床的認知症とを欠くことはない。他方、前頭側頭認知症、シヌクレイン病、亜急性梗塞又は慢性梗塞、代謝性疾患、脱髄疾患、発達障害、及びトリヌクレオチド反復病の多くの亜型などの、ＮＦＴを伴わずに広範囲の神経変性と臨床的認知症とが見られる慢性脳疾患の亜型が多く存在する。タウタンパク質は、それ自体、神経変性を直接的に誘発することができ、タウにおける多くの生殖系列突然変異は、ＮＦＴを伴う臨床的認知症をもたらす。これらのタウオパチーは、ＡＤとは別のものであるが、共通の経路が関与している可能性がある。ＮＦＴは複数の脳疾患で見られ、２つ以上の疾患状態において神経変性の一因となり得る。
【００２５】
神経突起斑の内部及び外部の異栄養性皮質神経突起
アミロイド斑の内部に見られるか又はアミロイド斑を直接取り囲んでいる、横に広がって、曲がりくねった神経突起の多くは、ＮＦＴを含むＰＨＦと構造的、生化学的及び免疫細胞化学的に区別が付かないＰＨＦを含有する。更に、斑は、ＰＨＦタウについて免疫反応性ではない数多くの異栄養性神経突起を含有することが多い。タウ陽性の異栄養性神経突起も神経突起斑の外側の皮質神経網により広く分布して存在する。形態が変化したタウを含有する異栄養性皮質神経突起の発生率と密度は、ＡＤ患者間で大きく異なる。研究により、ＮＦＴが特に多いＡＤ患者は、タウ免疫反応性の異栄養性皮質神経突起を広範囲に示す患者でもあることが示されている。斑内及び斑外の異栄養性神経突起の一部は、リン酸化形態の神経線維サブユニットタンパク質について免疫反応性であり、従って、リン酸化形態の神経線維サブユニットタンパク質はホスホタウ反応性と共存することができる。これらの観察により、もつれを有するニューロン及び異栄養性神経突起に生じる変化したキナーゼ及びホスファターゼ活性に対するいくつかの基質が存在し得ることが示唆される。
【００２６】
アミロイド細小血管症
Ａβはもともと、ＡＤ又はダウン症の患者の脳のすぐ外側に多く見られる、アミロイドを含有する髄膜細動脈や髄膜細静脈から単離された。同様に、大脳皮質内の小さな細動脈、細静脈、及び毛細血管も、アミロイド沈着を有することが多い。この微小血管性の血管障害は、微細構造レベルでは、血管の反管腔側基底膜に見られるアミロイド原線維を特徴とし、この原線維が周囲の血管周囲神経網に明白に及んでいることもある（不快性血管障害）。微小血管基底膜に線維として生じるＡβペプチドは、免疫反応性に基づくと、主にＡβ４０種であるように見えるが、アミロイド血管障害を発症する運命にある、血管中に最初に沈着する種がＡβ４２であり得るという証拠が提示されている。アミロイド血管障害の程度は、脳実質のＡβの量が比較的よく似ているＡＤ脳の間で大きく異なる。この微小血管アミロイドーシスが、ＡＤで生じる皮質機能不全やアミロイドが微小血管機能を変化させるメカニズムにどう関わっているのかは、まだ分かっていない。ＡＤのＡβ沈着と本質的に区別が付かないＡβ沈着から構成されたアミロイド含有血管は、脳実質のＡβ沈着がほとんど存在しない中、ＡＤでない老齢者の脳に生じることがある。この状態におけるこのようなアミロイド含有血管（コンゴーレッド親和性アミロイド血管障害（ＣＡＡ））及びＡＤにおけるアミロイド含有血管がたまに破裂して、１回又は複数回の脳出血を引き起こすことがある。しかし、いくつかの又は多くの微小血管性アミロイド沈着が存在するにもかかわらず、ＡＤ患者の大多数は脳出血を経験することがない。
【００２７】
アルツハイマー病の主な根本原因は依然として不明である
アルツハイマー病の主な根本原因は依然として不明である。Ａβペプチドを多く含む斑又はＮＦＴが神経変性の主要素であるのかどうかということや、これらに病因学的関連があるのかどうかということに関して見解の相違が存在する。最終的には特徴的な病態をもたらすより早期の生化学的事象が存在するかどうかを検討する研究成果の間に大きな不一致がある。一般に、斑が蓄積する前に、可溶性Ａβオリゴマーが神経毒性効果を発揮して、神経変性、シナプス喪失及び認知症を引き起こすと考えられている。更に、Ａβレベルの増加は、異常な脂質蓄積によって生じ、それにより膜流動性や脂質ラフト組成の変化をもたらし得る。しかしながら、ＡＤ症例の圧倒的大部分に相当する孤発性ＡＤについて、Ａβカスケードを誘発する特定の原因についての説得力のある証拠はまだない。
【００２８】
レプチン
レプチンは、脂肪組織によって分泌されるらせん状のタンパク質であり、これは、体脂肪貯蔵が増加するにつれて、食欲を抑制し、エネルギー消費量を増加させるよう、視床下部腹内側核内の受容体部位に作用する。レプチンレベルは、女性では４０％より高く、初経直前には更に５０％の上昇を示すが、後にベースラインレベルまで戻る。レプチンレベルは絶食により低下し、炎症により増加する。
【００２９】
ｏｂ／ｏｂという遺伝子型を有するレプチン欠損肥満の高インスリン血症マウス；レプチン受容体遺伝子に突然変異を有し、ｄｂ／ｄｂという遺伝子型を有する糖尿病マウス（このマウスは、レプチンを産生するが、それに応答しない）；ｆａ／ｆａという遺伝子型を有するラット（このラットは、突然変異したレプチン受容体である「太っちょ（ｆａｔｔｙ）」肥満遺伝子を有している）；及び少数の稀な遺伝症例（Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４０４：６６１−７１（２０００））に例示されているように、レプチン又はレプチンシグナル伝達の除去は、肥満を引き起こすのに十分である。レプチンをコードするｏｂ遺伝子上に突然変異を有する実験用マウスは、病的肥満、糖尿病、及び不妊になる。これらのマウスにレプチンを投与すると、耐糖能が改善し、身体的活動性が増加し、体重が３０％減少し、生殖能力が回復する。レプチン受容体をコードするｄｂ遺伝子の突然変異を有するマウスも肥満や糖尿病になるが、レプチンを投与しても改善しない。レプチン部位とレプチン受容体部位をコードするヒト遺伝子は両方とも同定されている。レプチン遺伝子とレプチン受容体遺伝子の両方における突然変異が、異常な摂食行動をとる少数の病的肥満ヒト対象において見出されているが、肥満の人の大部分は、このような突然変異を示さず、正常な又は上昇した循環レプチンレベルを有している。飢餓時に見られる免疫不全は、レプチン分泌の低下に起因し得る。レプチン又はその受容体の遺伝子を欠くマウスはＴ細胞機能の障害を示し、実験的研究では、レプチンにより、ヒトＣＤ４リンパ球での増殖性応答が誘導された。
【００３０】
レプチンのその機能的受容体への結合により、ヤヌスチロシンキナーゼがリクルートされ、受容体が活性化される。その後、この受容体は、ＳＴＡＴなどの細胞質アダプターのドッキング部位として働く（Ｂａｕｍａｎｎ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８３７４  １９９６）。ＪＡＫ／ＳＴＡＴ活性化の一般的モデルによれば、ＳＴＡＴタンパク質は、最初、不活性形態で細胞質に存在する。リガンド刺激と受容体二量体化の後、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路が受容体結合型ＪＡＫキナーゼにより活性化される。これらのＪＡＫキナーゼがその後、チロシン残基で受容体をリン酸化し、それにより、ＳＴＡＴが受容体にリクルートされる。その後、ＳＴＡＴがリン酸化されて、ホスホＳＴＡＴを形成し、二量体化して、核に移行する。核内で、このホスホＳＴＡＴ二量体は、その標的遺伝子のプロモーター領域中の特定の配列に結合し、これらの遺伝子の転写を刺激する（Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６４：６２１−５１（１９９５））。これらの標的遺伝子としては、サイトカインシグナルのサプレッサー３（Ｂｊｏｒｂａｅｋ，Ｃ．，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：３００５９（１９９９））及びタンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（Ｃｈｅｎｇ，Ａ．Ｎ．ｅｔ  ａｌ．Ｄｅｖ．Ｃｅｌｌ  ２：４９７（２００２）、Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４０４：６６１−７１（２０００）、Ｌｏｕｉｓ  Ａ．Ｔａｒｔａｇｌｉａ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｍｉｎｉｒｅｖｉｅｗ，２７２：６０９３−６０９６（Ｍａｒｃｈ  １９９７））などの、負の調節因子が挙げられる。
【００３１】
ＪＡＫ２−ＳＴＡＴ３経路に加えて、他の経路も、脳における及び免疫細胞に対するレプチンの効果の仲介に関与している。例えば、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路、インスリン受容体基質１（ＩＲＳ１）経路、及びホスファチジルイノシトール３’−キナーゼ（ＰＩ３’Ｋ）経路（Ｍａｒｔｉｎ−Ｒｏｍｅｒｏ，Ｃ．，Ｖ．Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｒｇａｌｅｔ．Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１２：８３（２００１））も、レプチンの作用を仲介する（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｒｇａｌｅｔ，Ｖ．，Ｃ．Ｍａｒｔｉｎ−Ｒｏｍｅｒｏ，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１１：３０（２００１））。
【００３２】
レプチンは、カロリー摂取量の大きな変動に直面したときの細胞内恒常性の維持に関与する脂質調節ホルモンとしての生理的役割も有している可能性がある（Ｕｎｇｅｒ  Ｒ  Ｈ．２００３．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．６５：３３３−４７）。これは、直接、脂肪分解（脂肪の分解を意味する）を刺激し、脂質生成（脂質の合成を意味する）を阻害することにより達成される（Ｌｅｅ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７６（８）：５６２９−３５（２００１））。インスリンが脂肪生成を刺激することができるにもかかわらず（Ｋｅｒｓｔｅｎ，ＥＭＢＯ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２（４）：２８２−２８６（２００１）、レプチンは、完全には分かっていない機構によって、インスリン耐性や高血糖を改善することもできる（Ｔｏｙｏｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４６：４０２４−３５（２００５））。インスリンとＡβは、そのクリアランス、すなわち、インスリン分解酵素（ＩＤＥ）による分解の機構を共有しているので、レプチンの生理的役割のこの側面は重要である。
【００３３】
レプチンはインスリン感受性も制御する。中枢神経系（ＣＮＳ）において、レプチンは、血液脳関門を超えて、脳内の特異的受容体に結合し、食物摂取量、体重及びエネルギー消費量を調節する。一般に、（ｉ）レプチンは、体脂肪に比例したレベルで循環する；（ｉｉ）レプチンは、その血漿濃度に比例してＣＮＳに侵入する；（ｉｉｉ）レプチン受容体は、エネルギーの摂取量と消費量の調節に関与する脳のニューロンに見られる；及び（ｉｖ）レプチンは、基底正中視床下部（hypothalmus）の受容体に作用することにより、食物摂取量とエネルギー消費量を制御する。
【００３４】
一般に、レプチンは、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）とアグーチ関連ペプチド（ＡｇＲＰ）とを含有するニューロンの活性を阻害し、α−メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）を発現するニューロンの活性を増加させると考えられている。ＮＰＹニューロンは、食欲の調節に重要な要素である。実験動物の脳に注射された少量のＮＰＹが食物摂取を刺激する一方で、マウスのＮＰＹニューロンの選択的破壊はマウスを食欲不振にする。反対に、α−ＭＳＨは満腹感の重要なメディエーターであり、脳内でα−ＭＳＨが作用する受容体の遺伝子の違いは、ヒトでの肥満と関連がある。
【００３５】
ＡＭＰ活性化タンパク質キナーゼ（ＡＭＰＫ）
ＡＭＰ活性化タンパク質キナーゼ（ＡＭＰＫ）は、触媒サブユニットαと２つの調節サブユニットβ及びγとからなるヘテロ三量体複合体として存在する、系統発生的に保存されたセリン／スレオニンタンパク質キナーゼである。ＡＭＰＫの従来認められているセリン／スレオニン活性は、そのαサブユニットによって支持され、このαサブユニットは、そのリン酸化が活性化に必要となるスレオニン残基（Ｔｈｒ１７２）が（活性化ループ中に）存在することを特徴とする。αサブユニットのＣ末端領域は、他の２つのβサブユニット及びγサブユニットとの会合に必要とされる。βサブユニットは、αサブユニット及びγサブユニットとの会合に必要なＣ末端領域と、ＡＭＰＫ複合体のグリコーゲンへの結合を可能にする中心領域とを含有する。γサブユニットは、相互に排他的に２分子のＡＭＰ又はＡＴＰと結合するシスタチオニンβ−シンターゼ（「ＣＢＳ」）モチーフとして知られる４つのタンデム反復を含有する。（γサブユニット上の）ＡＭＰの結合は、直接的なアロステリック活性化や、タンパク質キナーゼＬＫＢ１（ヒトにおけるその生殖系列突然変異がポイツ・イエーガー症候群の原因である腫瘍抑制因子）、ＣａＭＫＫＩＩβ（カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼキナーゼＩＩβ）及び場合によっては、ＴＡＫ１（哺乳動物の形質転換増殖因子β活性化キナーゼ）などの上流のキナーゼによるＴｈｒ１７２でのαサブユニットのリン酸化を伴う複合機構を介してＡＭＰＫを活性化する。
【００３６】
３つ全てのサブユニットの相同体は、哺乳動物、ショウジョウバエ（キイロショウジョウバエ）、線虫（シノラブディス・エレガンス）、酵母（出芽酵母）、植物（シロイヌナズナ）及び原始的原生生物のランブル鞭毛虫で同定されており、高い保存性は、このタンパク質が、少なくとも１０億年前に代謝恒常性に対する幅広い作用を調節するまでに進化したことを示唆している。哺乳動物では、異なる遺伝子によってコードされた各々のサブユニット（α１、α２、β１、β２、γ１、γ２、γ３）の２ないし３個のアイソフォームが知られ、これにより、多種多様なヘテロ三量体の組合せが生じ、（γ２遺伝子とγ３遺伝子の場合）この多様性にスプライス変異体が加わる。更に、触媒アイソフォームと調節アイソフォームの発現パターンの組織分布の違いが報告されている。
【００３７】
ヒト骨格筋におけるＡＭＰＫ複合体のアイソフォーム組成の研究により、理論的に可能な１２のＡＭＰＫ複合体のうち３つだけが存在し（α２β２γ１＞＞α２β２γ３＝α１β２γ１）、運動の強度や持続時間に応じて異なった形で活性化されることが分かった。更に、各々の触媒アイソフォームの特異性が、その選択的に上流にあるキナーゼに対して、骨格筋と心臓の両方において示された。実際、ＬＫＢ１−／−マウスでは、心臓における虚血と骨格筋における収縮とにより、ＡＭＰＫα２サブユニットは活性化できなかったが、ＡＭＰＫα１活性化はほんのわずか影響を受けた。γ３サブユニットの発現は、解糖作用を引き起こす骨格筋に極めて特異的であるように見えたのに対し、γ１とγ２は、幅広い組織分布を示した。骨格筋では、β２サブユニットも高度に発現されているが、肝臓では、β１サブユニットが優位である。ＡＭＰＫα１含有する複合体とＡＭＰＫα２を含有する複合体は、各々、肝臓におけるＡＭＰＫ活性全体の約半分を占める。脂肪組織では、α１触媒サブユニットを含有するＡＭＰＫ複合体が主に発現しているのに対し、骨格筋と心筋では、α２触媒サブユニットを含有するＡＭＰＫ複合体が支配的である。
【００３８】
組織分布の違いに加えて、ＡＭＰＫ複合体の分布も細胞内レベルで調節されると一般に考えられている。ＡＭＰＫα２を含有する複合体は、核と細胞質の両方で見出されており、このことは、コアクチベーターと転写因子の直接的リン酸化の可能性を提起する。対照的に、ＡＭＰＫα１を含有する複合体は、主に細胞質に局在するが、気道上皮細胞や頸動脈小体細胞（cartoid body cells）の細胞膜にも認められている。異なるＡＭＰＫアイソフォームの組合せの機能的重要性、ならびにＡＭＰやＡＴＰに対するその特定の感受性、細胞内局在及び／又は特異的標的との関連における各々のヘテロ三量体ＡＭＰＫ複合体の機能はまだ分かっていないが、ヒト骨格筋における運動誘導性グルコース輸送の調節は、α２β２γ３ヘテロ三量体複合体ではなく、α２β１の活性化と関連する可能性があるという仮説が立てられている。更に、アイソフォームの組合せは、ＡＭＰＫの細胞内ターゲッティングを決定し、従って、ターゲッティング基質を決定し得ることも示唆されている。研究により、β１サブユニットの翻訳後修飾が、ＡＭＰＫ複合体を細胞膜にターゲッティングし得ることが示されている。更に、γ１サブユニットに結合することが示されている細胞骨格リンカータンパク質のプレクチンが、分化した筋管においてＡＭＰＫ複合体のサブユニット組成に影響を及ぼすことが分かった。従って、特定のＡＭＰＫ複合体を選択的に発現させることにより、異なる代謝ストレスに対する特化した細胞応答や全身応答が決定される可能性がある。
【００３９】
ＡＤ病理生物学ではレプチンによって誘発される代謝経路に関する研究がほとんどなく、ＡＤ病理生物学における５−アデノシン一リン酸タンパク質キナーゼ（ＡＭＰＫ）の役割はまだ分かっていない。
【００４０】
記載されている発明は、ＮＦＴ又はＡβの蓄積に起因する進行性認知機能不全の治療に関する方法を提供するものであるが、これは、レプチンと、神経細胞での異なるＡＭＰＫ依存的メカニズムを介した２つの主なＡＤ経路の調節におけるその役割とを用いてＡＤを治療するための方法及び組成物を提供するものでもある。レプチン、及び場合によってはＡＭＰＫアクチベーターのこの二相性の作用は、ＡＤ治療に対する新規の治療的手法を提供する。現在承認されている療法は、この疾患のＡＭＰＫが関連する相のいずれも標的とすることができず、症状を軽減することしかできない。更に、現在研究中の薬物は、ＡＭＰＫが関連する側面の高々１つにしか対処しない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００４１】
本開示は、進行性認知障害のための臨床治療の組成物及び方法ならびに診断方法を提供する。
【００４２】
一態様によれば、記載されている発明は、進行性認知障害を治療するための方法であって、（ａ）治療有効量のレプチン組成物を準備する工程、ここで、このレプチン組成物は、（ｉ）第１の治療剤としてのレプチン又はレプチン類似体；（ｉｉ）任意で、少なくとも１つの第２の治療剤；及び（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体を含む；（ｂ）それを必要としている対象に（ａ）の組成物を投与する工程；ならびに（ｃ）進行性認知障害の少なくとも１つの病態の進行を低下させるか又は予防する工程、を含む方法を提供する。一実施形態によれば、組成物は、Ａβの産生を減少させるか、Ａβの取込みを増加させるか、又はタウタンパク質のリン酸化を減少させる。別の実施形態によれば、タウタンパク質のリン酸化部位は、Ｓｅｒ−２０２／Ｔｈｒ−２０５（ＡＴ８部位）、Ｓｅｒ−２１４、Ｓｅｒ−１８１、Ｓｅｒ−２１２（ＡＴ１００部位）、Ｔｈｒ−２３１、Ｓｅｒ−２３５（ＴＧ３部位）、及びＳｅｒ−３９６／Ｓｅｒ−４０４（ＰＨＦ−１部位）のうちの少なくとも１つを含む。別の実施形態によれば、進行性認知障害は、アルツハイマー病、進行性核上まひ；認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病、前頭側頭認知症、ピック病、パーキンソニズム１７を伴う前頭側頭認知症、大脳皮質基底核変性症、前頭側頭葉変性症；ハンチントン病；又はパーキンソン病である。別の実施形態によれば、進行性認知障害はアルツハイマー病である。別の実施形態によれば、この病態は、タウタンパク質のリン酸化；神経原線維のもつれ；ＡＰＰのタンパク質分解の変化；脳間質液におけるＡβ４２の蓄積；脳間質液におけるＡβ４２の凝集；脳間質液におけるＡβ４０の蓄積；脳間質液におけるＡβ４０の凝集；炎症応答；神経損傷；ニューロンの代謝恒常性の混乱；ニューロンのイオン恒常性の混乱；酸化損傷；キナーゼ活性の変化；ホスファターゼ活性の変化；ニューロン機能不全；神経細胞死；神経伝達物質欠損；認知症；神経ジストロフィー；ニューロン周核体（neuronyl perikarya）の収縮、及びシナプス喪失の群から選択される少なくとも１つを含む。別の実施形態によれば、任意の少なくとも１つの第２の治療剤は、抗生物質剤、抗真菌剤、キナーゼ阻害剤、抗ウイルス剤、抗原虫剤、ステロイド性抗炎症剤、酸化防止剤、ホルモン、ビタミン、抗ヒスタミン薬、及び化学療法剤からなる群から選択される。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は少なくとも１つのキナーゼ阻害剤である。別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩのキナーゼ阻害剤；タンパク質キナーゼＡのキナーゼ阻害剤；ＧＳＫ−３βのキナーゼ阻害剤；ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼのキナーゼ阻害剤；５−アデノシン一リン酸タンパク質キナーゼのキナーゼ阻害剤；Ｍｙｒ−ＡＩＰ、ＬｉＣｌ、ＫＴ５７２０、６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（（２’Ｚ，３’Ｅ）−６−ブロモインジルビン−３’−オキシム）；ＫＴ５７２０；Ｋ２５２ａ；スタウロスポリン；ＫＴ５２５２ｂ；ケレリトリン；及びＴＤＺＤ−８（４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン−８）からなる群から選択される。別の実施形態に���れば、組成物は、組成物構成要素（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）の合計よりも大きいレベルのキナーゼ阻害を提供する。別の実施形態によれば、レプチン組成物中のレプチン又はレプチン類似体の治療有効量は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重から約１００ｇ／ｋｇ体重の量である。別の実施形態によれば、組成物は少なくとも１つの認知機能を改善する。別の実施形態によれば、少なくとも１つの認知機能は記憶である。別の実施形態によれば、少なくとも１つの認知機能は学習である。
【００４３】
別の態様によれば、記載されている発明は、それを必要としている対象における認知機能の回復力を向上させるための方法であって、（ａ）それを必要としている対象に（ｉ）第１の治療剤としての認知機能増強量のレプチン又はレプチン類似体；（ｉｉ）任意で、少なくとも１つの第２の治療剤、及び（ｉｉ）薬学的に許容される担体を含むレプチン組成物を投与する工程、ここで、この組成物は、Ａβ産生を減少させるか、Ａβの取込みを増加させるか、又はリン酸化タウのレベルを減少させる；ならびに（ｂ）対象における認知機能の回復力を向上させる工程、を含む方法を提供する。一実施形態によれば、リン酸化タウのセリン／スレオニンリン酸化部位は、Ｓｅｒ−２０２／Ｔｈｒ−２０５（ＡＴ８部位）、Ｓｅｒ−２１４、Ｓｅｒ−１８１、Ｓｅｒ−２１２（ＡＴ１００部位）、Ｔｈｒ−２３１、Ｓｅｒ−２３５（ＴＧ３部位）、及びＳｅｒ−３９６／Ｓｅｒ−４０４（ＰＨＦ−１部位）のうちの少なくとも１つを含む。別の実施形態によれば、認知機能は記憶である。別の実施形態によれば、記憶は条件付け記憶である。別の実施形態によれば、記憶は文脈記憶である。別の実施形態によれば、認知機能は記憶保持である。別の実施形態によれば、認知機能は学習である。別の実施形態によれば、学習は文脈学習である。別の実施形態によれば、学習は条件付け学習である。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、抗生物質剤、抗真菌剤、キナーゼ阻害剤、抗ウイルス剤、抗原虫剤、ステロイド性抗炎症剤、酸化防止剤、ホルモン、ビタミン、抗ヒスタミン薬、及び化学療法剤からなる群から選択される。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は少なくとも１つのキナーゼ阻害剤である。別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩのキナーゼ阻害剤；タンパク質キナーゼＡのキナーゼ阻害剤；ＧＳＫ−３βのキナーゼ阻害剤；ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼのキナーゼ阻害剤；５−アデノシン一リン酸タンパク質キナーゼのキナーゼ阻害剤；Ｍｙｒ−ＡＩＰ、ＬｉＣｌ、ＫＴ５７２０、６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（（２’Ｚ，３’Ｅ）−６−ブロモインジルビン−３’−オキシム）；ＫＴ５７２０；Ｋ２５２ａ；スタウロスポリン；ＫＴ５２５２ｂ；ケレリトリン；及びＴＤＺＤ−８（４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン−８）からなる群から選択される。別の実施形態によれば、組成物は、組成物構成要素（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）の合計よりも大きいレベルのキナーゼ阻害を提供する。別の実施形態によれば、レプチン組成物中のレプチン又はレプチン類似体の認知機能増強量は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重から約１００ｇ／ｋｇ体重の量である。
【００４４】
別の態様によれば、記載されている発明は、Ａβの蓄積、タウタンパク質のリン酸化、又は神経原線維のもつれの蓄積のうちの少なくとも１つに起因する進行性の認知機能不全疾患又は障害を治療するための有効な治療剤を同定するための方法であって、（ａ）神経細胞を含む細胞培養物を準備する工程、（ｂ）神経細胞を含む細胞培養物を候補治療剤と接触させる工程、（ｃ）候補治療剤が、タンパク質キナーゼの活性に影響を及ぼす程度にタンパク質キナーゼタンパク質の活性部分と会合するかどうかを決定する工程、及び（ｄ）候補治療剤を進行性の認知機能不全疾患又は障害を治療するための有効な治療剤として同定する工程、を含む方法を提供する。一実施形態によれば、タンパク質キナーゼは５−アデノシン一リン酸タンパク質キナーゼ又はＧＳＫ−３βである。別の実施形態によれば、候補治療剤又は有効な治療剤は組換えタンパク質である。別の実施形態によれば、候補治療剤又は有効な治療剤は阻害剤である。別の実施形態によれば、候補治療剤又は有効な治療剤はアンタゴニストである。別の実施形態によれば、候補治療剤又は有効な治療剤はアゴニストである。別の実施形態によれば、候補治療剤又は有効な治療剤は抗体である。別の実施形態によれば、候補治療剤又は有効な治療剤は、レプチン又はレプチン類似体のタンパク質キナーゼとの会合を妨げる。別の実施形態によれば、決定する工程（ｃ）は、対照と比べた、神経細胞によるアミロイドβの分泌の測定を含む。別の実施形態によれば、対照と比べた、神経細胞によるアミロイドβの分泌の測定はＥＬＩＳＡ又はイムノブロットによるものである。別の実施形態によれば、本方法は、アミロイドβ病態を治療するための有効な治療剤を用いる工程を更に含む。別の実施形態によれば、アミロイドβ病態は、タウタンパク質のリン酸化；神経原線維のもつれ；ＡＰＰのタンパク質分解の変化；脳間質液におけるＡβ４２の蓄積；脳間質液におけるＡβ４２の凝集；脳間質液におけるAβ42の蓄積；脳間質液におけるＡβ４０の凝集；炎症応答；神経損傷；ニューロンの代謝恒常性の混乱；ニューロンのイオン恒常性の混乱；酸化損傷；キナーゼ活性の変化；ホスファターゼ活性の変化；ニューロン機能不全；神経細胞死；神経伝達物質欠損；認知症；神経ジストロフィー；ニューロン周核体の収縮、及びシナプス喪失の群から選択される少なくとも１つを含む。別の実施形態によれば、有効な治療剤は少なくとも１つの認知機能を改善する。別の実施形態によれば、少なくとも１つの認知機能は記憶である。別の実施形態によれば、少なくとも１つの認知機能は学習である。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】ＣＲＮＤ８マウス及びｗｔマウスにおけるレプチン、インスリン及びＣＲＰの血清濃度を示す。（Ａ）レプチン、（Ｂ）インスリン及び（Ｃ）ＣＲＰの循環レベルをＥＬＩＳＡによりレプチン又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又は野生型（「ｗｔ」）マウス由来の血清中で評価した。結果（ｎ＝６）を平均濃度（ｎｇ／ｍｌ又はｐｇ／ｍｌ）±ＳＤとして示す。*対生理食塩水処置したＣＲＮＤ８。
【図２】ＣＲＮＤ８マウス及びｗｔマウスの脳におけるレプチン、レプチン受容体（ＯＢ−Ｒ）及び下流のシグナル伝達標的の発現を示す。（Ａ）レプチン又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又はｗｔマウスの脳を摘出し、（Ｂ）レプチン、（Ｃ）レプチン受容体及び（Ｄ、Ｅ）下流のシグナル伝達標的（ＳＯＣＳ３、ＰＰＡＲγ）の発現をイムノブロットで決定した。
【図３】ＣＲＮＤ８マウス及びｗｔマウスにおけるＡＰＰ  Ｃ末端断片（ＣＴＦ）及び可溶性Ａβ1-40の発現を示す。（Ａ）レプチン又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又はｗｔマウスの脳を摘出し、ＡＰＰ  ＣＴＦ（Ｃ９９、Ｃ８３）の発現をイムノブロットで決定した。（Ｂ）標準化したバンド（Ｃ９９／Ｃ８３と総ＣＴＦ／α−チューブリンの比）をデンシトメトリーで解析した。これを平均密度±ＳＤとして示す。（Ｃ）レプチン又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又はｗｔマウスの脳内に存在する可溶性Ａβ1-40のレベル、又は（Ｄ）血清中に存在する可溶性Ａβ1-40のレベルをＥＬＩＳＡで決定した。
【図４】レプチン処置したＴｇＣＲＮＤ８マウスにおけるアミロイド斑沈着を示す。（Ａ）脳スライスを海馬領域において４Ｇ８抗体で染色した。Ｌｅ−レプチンで処置したトランスジェニック動物；Ｓａ−生理食塩水で処置したトランスジェニック動物。（Ｂ）棒は、斑の平均サイズ（μｍｍ2）±Ｓ．Ｅ．Ｍ．又は（Ｃ）この領域中の染色された面積％±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。棒１つ当たりｎ＝８〜９。（Ｄ）４Ｇ８抗体で染色された皮質領域。
【図５】ＴｇＣＲＮＤ８マウス及びｗｔマウスの脳におけるＡＤ関連タウリン酸化を示す。（Ａ）レプチン又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又はｗｔマウスの脳を摘出し、（Ｂ）Ｓｅｒ３９６、（Ｃ）ＰＨＦ−１（Ｓｅｒ３９６／４０４）、（Ｄ）ＡＴ８（Ｓｅｒ２０２／２０４）及び（Ｅ）Ｓｅｒ１８１におけるタウリン酸化をイムノブロットで決定した。
【図６】ＣＲＮＤ８マウス及びｗｔマウスの認知評価を示す。（Ａ）物体認識テスト、（Ｂ）恐怖条件付けテスト。文脈：*ＷＴ対Ｔｇ＋Ｌｅｐの場合、ｐ＝０．００９；*ＷＴ対Ｔｇ＋Ｓａｌの場合、ｐ＝０．０００１；手がかり：*ＷＴ対Ｔｇ＋Ｌｅｐの場合、ｐ＝０．０１２；*ＷＴ対Ｔｇ＋Ｓａｌの場合、ｐ＝０．０００１；*Ｔｇ＋Ｌｅｐ対Ｔｇ＋ｓａｌの場合、ｐ＝０．０４。
【図７】ＲＡ−ＳＹ５Ｙにおけるタウリン酸化の酵素的調節を示す。
【図８】ＲＡ−ＳＹ５Ｙにおけるタウ特異的キナーゼ活性化に対するレプチン及びＡＩＣＡＲの効果を示す。ＲＡ−ＳＹ５Ｙをレプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ）で処置するか、又は無処置（ビヒクル）とし、（Ａ）ＣａＭＫＩＩ（ｐＴｈｒ２８６）、（Ｂ）ＰＫＡ（ｐＴｈｒ１９７）及び（Ｃ）ＧＳＫ−３β（ｐＳｅｒ９）のリン酸化をイムノブロットで測定した。
【図９】レプチン及びＡＩＣＡＲがＧＳＫ−３β依存的メカニズムを介してタウリン酸化をモジュレートすることを示す。（Ａ）ＲＡ−ＳＹ５ＹにＧＳＫ−３β特異的ｓｉＲＮＡを一過性にトランスフェクトするか、又はトランスフェクトせず（レーン１）、後にレプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ−レーン４）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ−レーン５）で処置するか、又は無処置（ビヒクル−レーン３）とした。トランスフェクション効率を評価するためにフルオレセインコンジュゲート対照ｓｉＲＮＡをトランスフェクトした細胞（レーン２）を用いた。これは、陰性対照としての役割を果たした。全細胞ライセートを調製し、ＧＳＫ−３β特異的抗体（パネルＩ）又はリン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６、ＰＨＦ−１、ＡＴ８もしくはｐＳｅｒ１８１；パネルＩＩ）を用いたイムノブロットで解析した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのＧＳＫ−３β抗体（パネルＩ）又はトータルのタウ抗体（パネルＩＩ）でリプロービングした。（Ｂ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙに、ＧＳＫ−３β全長ｃＤＮＡ発現ベクターを一過性にトランスフェクトするか、又はトランスフェクトせず（レーン１）、後にレプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ−レーン４）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ−レーン５）で処置するか、又は無処置（ビヒクル−レーン３）とした。空の発現ベクターをトランスフェクトした細胞（レーン２）は、陰性対照としての役割を果たした。全細胞ライセートをＡと同様に調製、解析、及び標準化した。*対陰性対照（レーン２）；**対ビヒクルで処置したＧＳＫ−３β過剰発現細胞（レーン３）。
【図１０】他のニューロンモデルにおけるレプチン及びＡＩＣＡＲの効果を示す。（Ａ）ヒトＩＭＲ−３２細胞；（Ｂ）ラット初代皮質ニューロン；（Ｃ）ＩＭＲ−３２細胞を、レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ）で処置するか又は無処置（ビヒクル）とした。全細胞ライセートを調製し、リン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６、ＰＨＦ−１、ＡＴ８又はｐＳｅｒ１８１）を用いたイムノブロットで解析した。ＩＭＲ−３２細胞（Ｃ）を（Ａ）と同様に処置し、ＧＳＫ−３β（Ｓｅｒ９）のリン酸化をイムノブロットで測定した。*対無処置（ビヒクル）。
【図１１】レプチン及びＡＩＣＡＲが、重複するシグナル伝達経路を介してタウリン酸化を調節することを示す。（Ａ）ＲＡＳＹ５Ｙを、レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、レプチンシグナル伝達の既知の下流エフェクター（ＳＴＡＴ３、ＡＭＰＫ、ＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ、ｐ３８）に対する阻害剤とともにインキュベートするか（レーン３〜７）、又は無処置（ビヒクル）とした（レーン１）。レプチンのみで処置した細胞は、陽性対照としての役割を果たした（レーン２）。全細胞ライセートを調製し、リン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６、ＰＨＦ−１、ＡＴ８又はｐＳｅｒ１８１）を用いたイムノブロットで解析した。（Ｂ）レプチンのみと比較してタウリン酸化をそれほど変化させなかったもの（ＳＴＡＴ３、ホスファチジル−イノシトール−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ））を除いて、（Ａ）からの全細胞ライセートを、リン酸化ＧＳＫ−３β特異的抗体を用いたイムノブロットで解析した。（Ｃ）細胞をレプチン、ＡＩＣＡＲで処置するか又は無処置（ビヒクル）とし、タウリン酸化の調節に関与するシグナル伝達分子（Ｊａｋ２、ＡＭＰＫ、ｐ３８、Ａｋｔ）の活性化を、リン酸化特異的抗体を用いたイムノブロットで調べた。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにα−チューブリン抗体でリプロービングした。*対無処置（ビヒクル−レーン１）；**レプチンのみ（レーン２）。
【図１２】レプチン及びＡＩＣＡＲが、重複するシグナル伝達経路を介してＡβ産生を調節することを示す。（Ａ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙを、レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ−レーン２）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ−レーン６）及び／又は以下のシグナル伝達タンパク質−ＡＭＰＫ（レーン３及び７）、ＰＰＡＲγ（レーン４及び８）もしくはｐ３８（レーン５及び９）の各々に対する阻害剤で６時間処置した。無処置（ビヒクル−レーン１）細胞又は阻害剤のみで処置した細胞（レーン１０〜１２）は対照としての役割を果たした。培養培地を回収し、Ａβ(１−４０）についてＥＬＩＳＡでアッセイした。（Ｂ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙを、レプチン、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ）で処置するか又は無処置（ビヒクル）とし、ＰＰＡＲγのレベルをイムノブロットで測定した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにα−チューブリン抗体でリプロービングした。*対無処置（ビヒクル−レーン１）；**対レプチンのみ（レーン２）；＃対ＡＩＣＡＲのみ（レーン６）。
【図１３】ＡＭＰＫの下流のレプチン及びＡＩＣＡＲシグナル伝達経路がタウリン酸化とＡβ産生の両方を仲介しないことを示す。（Ａ）レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）のみ又はＡｋｔ阻害剤（１Ｌ６ＨＣＩ）の存在下で６時間処置したＲＡ−ＳＹ５Ｙ。無処置（ビヒクル）細胞は、対照としての役割を果たした。培養培地を回収し、Ａβ（１−４０）についてＥＬＩＳＡでアッセイした。（Ｂ）レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）のみ又はＰＰＡＲγ阻害剤（Ｇ３３３５）の存在下で６時間処置したＲＡ−ＳＹ５Ｙ。無処置（ビヒクル）細胞は、対照としての役割を果たした。全細胞ライセートを調製し、リン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６、ＰＨＦ−１、ＡＴ８又はｐＳｅｒ１８１）を用いたイムノブロットで解析した。（Ｃ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙにおいてレプチン及びＡＩＣＡＲによって活性化されるシグナル伝達経路を示す図。レプチン又はＡＩＣＡＲのいずれかによるＡＭＰＫの活性化は、Ａβ産生とタウリン酸化の両方を減少させる。しかしながら、ＡＭＰＫの下流のシグナル伝達経路は、タウ又はＡβ特異的効果を仲介するように独立に働く；*対無処置（ビヒクル）。
【図１４】複合的なキナーゼ阻害によるタウのリン酸化の減少を示す。ＲＡ−ＳＹ５Ｙ細胞を、単独もしくは様々な組合せのＣａＭＫＩＩ、ＰＫＡもしくはＧＳＫ−３β阻害剤で１時間処置するか、又は無処置（ビヒクル）とし、タウのリン酸化を測定した。全細胞ライセートを調製し、リン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６）を用いたイムノブロットで解析した。*対無処置（ビヒクル）；**対任意の個々のキナーゼ阻害剤による処置。
【図１５】レプチン及びＡＩＣＡＲが、リチウムとともにインキュベートしたＲＡ−ＳＹ５Ｙ細胞においてタウリン酸化を有意には低下させないことを示す。ＲＡ−ＳＹ５Ｙを、レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ）の存在下で又は追加の処置なし（ビヒクル）で、リチウム（１０ｍＭ）とともに又はリチウムなしでインキュベートし、タウのリン酸化を測定した。
【図１６】酵素の阻害様式を評価するためのモデルからの実例データのプロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
用語の解説
本明細書で用いられる「活性部分」という用語は、ペプチド又はタンパク質の機能を可能にするペプチド又はタンパク質の領域を指す。
【００４７】
本明細書で用いられる「投与する」という用語は、摂取させること又は分配することを指し、インビボ投与、及びエクスビボでの組織への直接的な投与を含む。一般に、組成物は、望ましい場合には、従来の無毒な薬学的に許容される担体、アジュバント、及びビヒクルを含有する投薬単位製剤として、経口的に、口腔に、非経口的に、局所に、吸入もしくは吹送により（すなわち、口からもしくは鼻から）、又は直腸に全身投与してもよいし、あるいは限定するものではないが、注射、埋め込み、移植、局所適用、又は非経口などの手段により、局所投与されてもよい。
【００４８】
本明細書で用いられるその様々な文法的形態での「影響を及ぼす（ａｆｆｅｃｔ）」という用語は、影響（ｉｍｐａｃｔ）、重大な影響（ｍａｔｅｒｉａｌ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ）、もしくは変化を有すること又はこれらをもたらすことを指す。
【００４９】
本明細書で用いられる「アゴニスト」という用語は、受容体を活性化して、完全な又は部分的な薬理学的応答を誘導することができる化学物質を指す。受容体を、内在性又は外因性のいずれかのアゴニスト及びアンタゴニストによって活性化又は不活性化し、生物学的応答を刺激又は阻害することができる。生理的アゴニストは、同じ生体応答を生み出すが、同じ受容体には結合しない物質である。特定の受容体の内在性アゴニストは、その受容体に結合して、これを活性化する、体内で自然に産生される化合物である。スーパーアゴニストは、標的受容体の内在性アゴニストよりも大きい最大応答、従って１００％を超える効率を生み出すことができる化合物である。これは、スーパーアゴニストが内在性アゴニストよりも強力であることを必ずしも意味するものではなく、むしろ受容体結合の後に細胞内で生み出され得る最大可能応答の比較物となるものである。完全アゴニストは、受容体に結合して、これを活性化し、その受容体での完全な効力を示す。部分的アゴニストも所与の受容体に結合して、これを活性化するが、完全アゴニストと比べて受容体での部分的な効力しか有さない。インバースアゴニストは、その受容体のアゴニストと同じ受容体結合部位に結合し、受容体の構成的活性を無効にする薬剤である。インバースアゴニストは、受容体アゴニストと反対の薬理学的効果を発揮する。不可逆的アゴニストは、受容体が恒久的に活性化されるように受容体に恒久的に結合するアゴニストの一種である。アゴニストの受容体への会合が可逆的であるのに対して、不可逆的アゴニストの受容体への結合は不可逆的であると考えられているという点において、このインバースアゴニストは単なるアゴニストとは異なる。これにより、この化合物は、一時的なアゴニスト活性のバーストと、それに次ぐ受容体の脱感作及び内在化をもたらし、これは、長時間処理することで、むしろアンタゴニストに近い効果を生じさせる。選択的アゴニストは、１つの特定の種類の受容体に特異的である。
【００５０】
「アロステリック」という用語は、エフェクターの結合による立体構造の変化に関するものである。「アロステリック調節」という用語は、酵素又はタンパク質のアロステリック部位でエフェクター分子に結合することによる酵素又は他のタンパク質の調節を指す。アロステリックタンパク質の調節部位は、通常、その活性部位とは物理的に異なる。タンパク質の活性を増強するエフェクターが「アロステリックアクチベーター」と呼ばれるのに対し、タンパク質の活性を減少させるエフェクターは「アロステリックインヒビター」と呼ばれる。従って、「アロステリック活性化」は、あるリガンドの結合が基質分子と他の結合部位の間の引力を増強するときに生じ、「アロステリック阻害」は、あるリガンドの結合が他の活性部位での基質に対する親和性を減少させるときに生じる。
【００５１】
本明細書で用いられる「アロステリックモジュレーション」という用語は、受容体が、内在性リガンド（オルソステリックリガンド）の結合部位とは異なる調節部位でのアロステリックモジュレーターの結合により調節されるか、変化するか、適応するか又は調整され（モジュレートされ）、内在性リガンドの効果を増強するか又は阻害する過程を指す。アロステリックモジュレーターは、通常、受容体分子の立体構造変化を生じさせることにより作用し、この立体構造変化は、リガンドの結合親和性を変化させる。従って、アロステリックリガンドは、１次「リガンド」による受容体の活性化を「モジュレート」し、受容体の活性化の強度を調整することができる。多くのアロステリック酵素は、その基質によって調節され、このような基質は、「ホモトロピックなアロステリックモジュレーター」であるとみなされる。基質以外の調節分子は、「ヘテロトロピックなアロステリックモジュレーター」と呼ばれる。
【００５２】
本明細書で用いられる「改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）」という用語は、より良くすること又はより良くなること、すなわち改善する（ｉｍｐｒｏｖｅ）ことを意味する。
【００５３】
「アミロイドペプチド」、「アミロイドβペプチド」及び「Ａβ」という用語は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のタンパク質分解処理により生成されるペプチドのファミリーを指すために本明細書で互換的に用いられる。
【００５４】
本明細書で用いられる「アンタゴニスト」という用語は、別の物質の効果を中和する物質を指す。
【００５５】
本明細書で用いられる「足場依存性（付着）細胞」という語句は、分裂して単層を作り出すのに基質を必要とする細胞を指す。
【００５６】
本明細書で用いられる「抗生物質剤」という用語は、主に感染性疾患の治療に用いられる、細菌及び他の微生物の増殖を阻害するか、又は細菌及び他の微生物を破壊する能力を有する化学物質群のいずれかを意味する。抗生物質剤の例としては、ペニシリンＧ；メチシリン；ナフシリン；オキサシリン；クロキサシリン；ジクロキサシリン；アンピシリン；アモキシシリン；チカルシリン；カルベニシリン；メズロシリン；アズロシリン；ピペラシリン；イミペネム；アズトレオナム；セファロチン；セファクロル；セフォキシチン；セフロキシム；セフォニシド；セフメタゾール；セフォテタン；セフプロジル；ロラカルベフ；セフェタメト；セフォペラゾン；セフォタキシム；セフチゾキシム；セフトリアキソン；セフタジジム；セフェピム；セフィキシム；セフポドキシム；セフスロジン；フレロキサシン；ナリジクス酸；ノルフロキサシン；シプロフロキサシン；オフロキサシン；エノキサシン；ロメフロキサシン；シノキサシン；ドキシサイクリン；ミノサイクリン；テトラサイクリン；アミカシン；ゲンタマイシン；カナマイシン；ネチルマイシン；トブラマイシン；ストレプトマイシン；アジスロマイシン；クラリスロマイシン；エリスロマイシン；エリスロマイシンエストレート；エリスロマイシンエチルスクシネート；エリスロマイシングルコヘプトネート；エリスロマイシンラクトビオネート；エリスロマイシンステアレート；バンコマイシン；テイコプラニン；クロラムフェニコール；クリンダマイシン；トリメトプリム；スルファメトキサゾール；ニトロフラントイン；リファンピシン（Rifampin）；ムピロシン；メトロニダゾール；セファレキシン；ロキシスロマイシン；コ−アモキシクラブアネート；ピペラシリンとタゾバクタムの組合せ；ならびにこれらの様々な塩、酸、塩基、及び他の誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。抗菌抗生物質剤としては、ペニシリン、セファロスポリン、カルバセフェム、セファマイシン、カルバペネム、モノバクタム、アミノグリコシド、グリコペプチド、キノロン、テトラサイクリン、マクロライド、及びフルオロキノロンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
抗体は血清タンパク質であり、その分子は、その標的上の小さい化学的集団に相補的な小さいその表面部分を有する。これらの相補領域（抗体結合部位又は抗原結合部位と呼ばれる）は、抗体１分子当たりに少なくとも２カ所あり、いくつかのタイプの抗体分子では、１０カ所、８カ所、又はいくつかの種では、１２カ所もあるが、これらは、抗原上のその対応する相補領域（抗原性決定基又はエピトープ）と反応し、いくつかの多価抗原分子を結合させて、格子を形成し得る。
【００５８】
全抗体分子の基本構造単位は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖（各々約２２０個のアミノ酸を含む）と２つの同一の重（Ｈ）鎖（各々通常約４４０アミノ酸を含む）の、４つのポリペプチド鎖からなる。２つの重鎖と２つの軽鎖は、非共有結合と共有（ジスルフィド）結合の組合せによって結合している。この分子は、２つの同一の半分から構成されており、各々、軽鎖のＮ末端領域と重鎖のＮ末端領域から構成された同一の抗原結合部位を有する。通常、軽鎖と重鎖の両方が協調して、抗原結合表面を形成する。
【００５９】
ヒト抗体は、κ及びλという２種類の軽鎖を示し、免疫グロブリンの個々の分子は、通常、どちらか一方だけである。正常血清では、これらの分子の６０％がκ決定基を有し、３０％がλ決定基を有することが分かっている。多くの他の種は、２種類の軽鎖を示すことが分かっているが、その比率は様々である。例えば、マウス及びラットでは、λ鎖は、全体の数パーセントしか含まれない。イヌ及びネコでは、κ鎖は非常にわずかである。ウマはκ鎖を有していないようである。ウサギは、系統及びｂ遺伝子座アロタイプによって、５〜４０％のλを有し得る。ニワトリ軽鎖はκよりもλに相同である。
【００６０】
哺乳動物では、５つのクラスの抗体、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、各々がそれ自体のクラスの重鎖、すなわち、α（ＩｇＡに対するもの）、δ（ＩｇＤに対するもの）、ε（ＩｇＥに対するもの）、γ（ＩｇＧに対するもの）及びμ（ＩｇＭに対するもの）を有する。更に、それぞれ、γ１、γ２、γ３、及びγ４重鎖を有する、４つのサブクラスのＩｇＧ免疫グロブリン（ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4）がある。その分泌形態において、ＩｇＭは、５つの４鎖単位から構成される５量体であり、合計１０個の抗原結合部位が与えられる。各々の５量体は、２つの隣接するテール領域間に共有結合的に挿入される１コピーのＪ鎖を含む。
【００６１】
５つの免疫グロブリンクラスは全て、幅広い電気泳動移動度を示し、均質でないという点において他の血清タンパク質とは異なっている。この不均質性（例えば、個々のＩｇＧ分子の正味の電荷が互いに異なること）は、免疫グロブリンの固有特性である。
【００６２】
抗原性決定基又はエピトープは、分子上の抗原性部位である。連続的な抗原性決定基／エピトープは、本質的に線状鎖である。らせん状のポリマー又はタンパク質などの、秩序のある構造では、抗原性決定基／エピトープは、本質的に、互いに接近可能な分子の異なる部分からのアミノ酸側鎖を含む構造の内部又は表面上の限られた領域又は一画となるであろう。これらは立体構造的な決定基である。
【００６３】
相補性の原理は、しばしば鍵を鍵穴に差し込むことに例えられるが、これは、比較的弱い結合力（疎水性結合及び水素結合、ファン・デル・ワールス力、ならびにイオン相互作用）を必要とし、これらの力は、２つの反応分子が互いに非常に近くに、実際には、ある分子の突き出た構成原子又は原子団が他の分子中の相補的なくぼみ又はへこみに嵌ることができるほど近くに接近可能な場合にのみ、効果的に作用することができる。抗原−抗体相互作用は高度の特異性を示すが、このことは、様々なレベルで明らかである。分子レベルにまで下げると、特異性は、抗原に対する抗体の結合部位が無関係な抗原の抗原性決定基と全く異なる相補性を有することを意味する。２つの異なる抗原の抗原性決定基がある程度の構造的類似性を有する場合はいつも、一方の決定基が、いくつかの抗体ともう一方の決定基との結合部位にある程度嵌ってよく、この現象が交差反応を生じる。交差反応は、抗原抗体反応の相補性又は特異性を理解する上で非常に重要である。免疫学的な特異性又は相補性により、抗原中の微量の不純物／汚染物質の検出が可能になる。
【００６４】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、免疫した宿主由来のマウス脾臓細胞をマウス骨髄腫細胞株と融合して、選択培地中で増殖するマウスハイブリドーマクローンを樹立することにより作製することができる。ハイブリドーマ細胞は、抗体分泌Ｂ細胞と骨髄腫細胞とのインビトロ融合から得られる不死化ハイブリッド細胞である。インビトロ免疫は、培養下の抗原特異的Ｂ細胞の１次活性化を指すが、これは、マウスモノクローナル抗体を産生する別の十分に確立された手段である。
【００６５】
末梢血リンパ球由来の免疫グロブリン重（ＶH）鎖と軽（Ｖκ及びＶλ）鎖の可変遺伝子の多様なライブラリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅により増幅することもできる。ＰＣＲを用いて重鎖Ｖ遺伝子と軽鎖Ｖ遺伝子をランダムに組み合わせることにより、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインがポリペプチドスペーサーで連結されている単一のポリペプチド鎖（単鎖Ｆｖ又はｓｃＦｖ）をコードする遺伝子を作製することができる。その後、ファージ先端のマイナーコートタンパク質との融合による糸状バクテリオファージ表面上でのディスプレーについて、コンビナトリアルライブラリーをクローニングすることができる。
【００６６】
ガイド付き選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）の技術は、ヒト免疫グロブリンＶ遺伝子と齧歯類免疫グロブリンＶ遺伝子とのシャッフリングに基づくものである。この方法は、（ｉ）ヒトλ軽鎖のレパートリーを目的の抗原と反応するマウスモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインとシャッフルすること；（ｉｉ）その抗原に対して半分ヒトのＦａｂを選択すること；（ｉｉｉ）選択されたλ軽鎖遺伝子を２回目のシャッフルにおけるヒト重鎖のライブラリーのための「ドッキングドメイン」として用いて、ヒト軽鎖遺伝子を有するクローンＦａｂ断片を単離すること；（ｖ）これらの遺伝子を含む哺乳動物細胞発現ベクターをエレクトロポレーションでマウス骨髄腫細胞にトランスフェクトすること；及び（ｖｉ）抗原に反応するＦａｂのＶ遺伝子を完全なＩｇＧ１、λ抗体分子としてマウス骨髄腫で発現させることを伴う。
【００６７】
「抗原」という用語及びその様々な文法的形態は、抗体の産生を刺激することができ、かつ抗原に特異的に結合することができる任意の物質を指す。本明細書で用いられる「抗原性決定基」又は「エピトープ」という用語は、分子上の抗原性部位を指す。
【００６８】
本明細書で用いられる「抗真菌剤」という用語は、真菌の増殖を阻害するか又は真菌を破壊する能力を有する化学物質群のいずれかを意味する。抗真菌剤としては、アンホテリシンＢ、カンジシジン、デルモスタチン、フィリピン、ファンギクロミン、ハチマイシン、ハミシン、ルセンソマイシン、メパルトリシン、ナタマイシン、ナイスタチン、ペシロシン、ペリマイシン、アザセリン、グリセオフルビン、オリゴマイシン、ネオマイシン、ピロルニトリン、シッカニン、ツベルシジン、ビリジン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン、ビホナゾール、ブトコナゾール、クロルダントイン、クロルミダゾール、クロコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、エニルコナゾール、フェンチコナゾール、フルトリマゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ラノコナゾール、ミコナゾール、オモコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール、トルシクラート、トリンダート、トルナフタート、フルコナウル、イトラコナゾール、サペルコナゾール、テルコナゾール、アクリソルシン、アモロルフィン、ビフェナミン、ブロモサリチルクロラニリド、ブクロサミド、プロピオン酸カルシウム、クロルフェネシン、シクロピロクス、クロキシキン、コパラフィネート、ジアムタゾール、エキサラミド、フルシトシン、ハレタゾール、ヘキセチジン、ロフルカルバン、ニフラテル、ヨウ化カリウム、プロピオン酸、ピリチオン、サリチルアニリド、プロピオン酸ナトリウム、スルベンチン、テノニトロゾール、トリアセチン、ウジョチオン、ウンデシレン酸、及びプロピオン酸亜鉛が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
本明細書で用いられる「抗ヒスタミン薬」は、体内のヒスタミンを中和するものであって、アレルギー反応（例えば、枯草熱）及び風邪の症状を治療するために用いられる様々な化合物のいずれかを指す。記載されている発明の文脈で使用可能な抗ヒスタミン薬の非限定的な例としては、クロルフェニラミン、ブロムフェニラミン、デキシクロルフェニラミン、トリポリジン、クレマスチン、ジフェンヒドラミン、プロメタジン、ピペラジン、ピペリジン、アステミゾール、ロラタジン及びテルフェナジンが挙げられる。
【００７０】
本明細書で用いられる「酸化防止剤」という用語は、酸化又は酸素もしくは過酸化物によって促進される反応を阻害する物質を指す。記載されている発明の文脈で使用可能な酸化防止剤の非限定的な例としては、アスコルビン酸（ビタミンＣ）及びその塩、脂肪酸のアスコルビルエステル、アスコルビン酸誘導体（例えば、マグネシウムアスコルビルホスフェート、ナトリウムアスコルビルホスフェート、アスコルビルソルベート）、トコフェロール（ビタミンＥ）、トコフェロールソルベート、トコフェロールアセテート、トコフェロールの他エステル、ブチル化ヒドロキシ安息香酸及びその塩、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸（商標名トロロクス（登録商標）として市販されている）、没食子酸及びそのアルキルエステル、特にプロピルガレート、尿酸ならびにその塩及びアルキルエステル、ソルビン酸及びその塩、リポ酸、アミン（例えば、Ｎ，Ｎ−ジエチルヒドロキシルアミン、アミノグアニジン）、スルフヒドリル化合物（例えば、グルタチオン）、ジヒドロキシフマル酸及びその塩、グリシンピドレート、アルギニンピロレート、ノルジヒドログアイアレチン酸、ビオフラボノイド、クルクミン、リジン、メチオニン、プロリン、スーパーオキシドジスムターゼ、シリマリン、茶抽出物、ブドウの皮／種の抽出物、メラニン、ならびにローズマリー抽出物が挙げられる。
【００７１】
本明細書で用いられる「抗原虫剤」という用語は、原虫の増殖を阻害するか又は原虫を破壊する能力を有する、主に原虫症の治療に用いられる化学物質群のいずれかを意味する。抗原虫剤の例としては、ピリメタミン（ダラプリム（登録商標））、スルファジアジン、及びロイコボリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
本明細書で用いられる「抗ウイルス剤」という用語は、主にウイルス性疾患の治療に用いられるウイルスの複製を阻害するか又はウイルスを破壊する能力を有する化学物質群のいずれかを意味する。抗ウイルス剤としては、アシクロビル、シドフォビル、シタラビン、ジデオキシアデノシン、ジダノシン、エドクスジン、ファムシクロビル、フロキシウリジン、ガンシクロビル、イドキシウリジン、イノシンプラノベクス、ラミブジン、ＭＡＤＵ、ペンシクロビル、ソリブジン、スタブジン、トリフルリジン、バラシクロビル、ビダラビン、ザルシタビン（zaIcitabine）、ジドブジン、アセマンナン、アセチルロイシン、アマンタジン、アミジノマイシン、デラビルジン、ホスカメット、インジナビル、インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α）、ケトキサル、リゾチーム、メチサゾン、モロキシジン、ネビラピン、ポドフィロトキシン、リバビリン、リマンタジン、リトナビル２、サキナビル、スタイリマイシン、スタトロン、トロマンタジン、ジドブジン（ＡＺＴ）及びキサゾン酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７３】
本明細書で用いられる「会合する」という用語及びその様々な文法的形態は、直接的に、間接的に、能動的に、非能動的に、不活性に、完全に又は不完全に、連結するか、接続するか、又は結合することを指す。
【００７４】
本明細書で用いられる「遮断薬」という用語は、別の物質の生理的作用を阻害する物質を指す。
【００７５】
本明細書で用いられる「担持する」という用語は、細胞株の表現型及び遺伝子型を維持する栄養素を含有する組織培養培地中で細胞株を二次培養することにより細胞株を維持することを指す。
【００７６】
本明細書で用いられる「細胞培養」という用語は、原発組織、初代培養から得られた分散細胞、又は細胞株（ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）もしくは細胞株（ｃｅｌｌ  ｓｔｒａｉｎ）に由来する培養物の樹立又は維持を指す。
【００７７】
本明細書で用いられる「細胞株（ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）」という用語は、形質転換を受けた、培養下で無制限に継代することができる不死化細胞集団を指す。
【００７８】
本明細書で用いられる「細胞株（ｃｅｌｌ  ｓｔｒａｉｎ）」という用語は、繰り返し継代することができるが、継代数が限られている細胞を指す。
【００７９】
本明細書で用いられる「クローン」という用語は、それが由来した単位又は個体と遺伝的に同一の細胞、細胞産物、又は生物を指す。本明細書で用いられる「クローン性」は、細胞又は物質が１つの供給源又は他の供給源に由来している状態を指す。従って、「ポリクローナル」という用語は、多くのクローンに由来することを指し、「オリゴクローナル」は、少数のクローンに由来することを指し、「モノクローナル」は、１つのクローンに由来することを指す。
【００８０】
本明細書で用いられる「初代培養」という用語は、解離した組織を播種することにより得られる細胞を指す。初代培養は、数回の継代のうちにその表現型及び遺伝子型を失うことが多い。腫瘍由来のいくつかのものを除き、ほとんどの初代細胞培養は寿命が限られている。
【００８１】
本明細書で用いられる「細胞継代」という用語は、単層又は細胞懸濁液を分割（希釈）し、その後、新鮮な培地を含有する培養容器中に再び分配することを指す。
【００８２】
本明細書で用いられる「コンフルエンシー」という用語は、培養培地中の細胞の増殖の尺度を指す。通常、Ｔ型フラスコ中又はプレートもしくはディッシュ中の培養物のコンフルエンシーは、細胞間のスペースの量に基づく。例えば、１００％コンフルエンシーは、培養プレート又はディッシュが細胞で完全に覆われ、細胞が増殖する余地が全く残されていないことを意味し、５０％コンフルエンシーは、培養ディッシュ又はプレートの約半分が細胞で覆われ、増殖する余地がまだあることを意味する。
【００８３】
「化学療法剤」という用語は、疾患の治療又は制御において有用な化学物質を指す。記載されている発明の文脈で使用可能な化学療法剤の非限定的な例としては、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、アムルビシン、ピラルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、エトポシド、テニポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、マイトマイシンＣ、５−ＦＵ、パクリタキセル、ドセタキセル、アクチノマイシンＤ、コルヒチン、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビン、シクロスポリン、ベラパミル、バルスポドル、プロベネシド、ＭＫ５７１、ＧＦ１２０９１８、ＬＹ３３５９７９、ビリコダル、テルフェナジン、キニジン、ペルビレインＡ及びＸＲ９５７６が挙げられる。
【００８４】
「認知機能」という用語は、人の考えの理解、知覚、又は意識をもたらす知的過程、及び例えば、思考、学習、判断、想起、計算、運動機能の制御などの精神的作業を指す。
【００８５】
本明細書で用いられる「認知機能増強量」という用語は、認知機能増強量の組成物又は物質を投与していない対象と比較したときに、対象の精神的能力（例えば、知覚、記憶、判断、推論）を付加するか、向上させるか、又は増加させる治療的に有効な投薬量（すなわち、投与の用量及び頻度）を指す。認知機能増強量は約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から約１００ｇ／ｋｇ体重である。この量は、記載されている発明の組成物の予防量又は防止量を含む。
【００８６】
本明細書で用いられる「もとの認知機能レベル」という語句は、正常な健康対象によって示される認知機能を指す。
【００８７】
本明細書で用いられる「状態」という用語は、種々の健康状態を指し、任意の発症機序によって引き起こされる障害もしくは疾患、又は健康な組織や器官の障害、損傷、及び促進を含むよう意図される。
【００８８】
本明細書で用いられる「条件付けされた」という用語は、特定の行動、事象又は過程の準備ができていることを指し、これらは学習又は経験によって獲得されるものである。
【００８９】
本明細書で用いられる「接触」という用語及びその様々な文法的形態は、接触している又は密接もしくは近接している状態又は状況を指す。限定するものではないが、器官、組織、細胞、又は腫瘍などの、標的となる目的物に組成物を接触させるのは、当業者に公知の任意の投与手段により行なうことができる。
【００９０】
本明細書で用いられる「文脈」という用語及びその様々な文法的形態は、ある事象が起こる背景又は状況を指す。
【００９１】
本明細書で用いられる「認知症」という用語は、正常な老化から予想されるものを超えた、脳の傷害又は疾患による認知機能の低下又は進行性の低下を指す。
【００９２】
本明細書で用いられる「密度依存的な増殖阻害」という語句は、閾値密度に達したときの細胞の増殖応答の低下を指し、この閾値密度により、細胞は、コンフルエンスになったときに隣接細胞の境界を認識し、増殖パターンに応じて、単層を形成することにより、インビトロで応答する。通常、これらの細胞は、低下した速度で細胞周期を通過する（より遅く増殖する）。
【００９３】
本明細書で用いられる「分化」という用語は、あまり特化していない細胞がより特化した細胞型になる過程を指す。
【００９４】
本明細書で用いられる「疾患」又は「障害」又は「機能不全」という用語は、健康障害又は機能異常の状態を指す。
【００９５】
本明細書で用いられる「薬物」という用語は、疾患の予防、診断、緩和、治療、又は治癒において用いられる、食物以外の治療剤又は任意の物質を指す。
【００９６】
本明細書で用いられる「エフェクター」という用語は、タンパク質に結合し、それによりそのタンパク質の活性を変化させる分子を指す。
【００９７】
「エピトープ」及び「抗原性決定基」という用語は、抗原結合部位（ＡＣＳ）が認識する分子上の部位であって、抗体それ自体がそこに結合／付着する部位を指すために本明細書において互換的に用いられる。いくつかの実施形態では、エピトープは、キナーゼ阻害ペプチド上の抗原性決定基／抗原結合部位であり得る。エピトープは、１次配列、２次配列、又は３次配列が関連するものであり得る。
【００９８】
本明細書で用いられる「断片」という用語は、タンパク質、タンパク質複合体、ペプチド、ペプチド複合体、核酸、抗体又は他の物質の単離された部分を指す。
【００９９】
本明細書で用いられる「機能等価物」という用語は、同様又は同一の効果又は用途を有する物質、分子、タンパク質、ペプチド又はポリペプチドを指す。
【０１００】
本明細書で用いられる「半最大阻害濃度」（「ＩＣ」、「ＩＣ50」、「５０％  ＩＣ」）という用語は、生物学的又は生化学的活性の５０％阻害をもたらす量又は濃度を指す。ＩＣ50は、特定の薬物、薬剤、又は他の物質（阻害剤）が、所与の生物学的過程、又は例えば、酵素、細胞、細胞受容体、もしくは微生物などの、過程の構成要素を半分阻害するのにどの程度必要かということを示す定量的尺度である。
【０１０１】
本明細書で用いられる「孵化」（「解凍（ｔｈａｗ）」又は「解凍（ｄｅｆｒｅｅｚｅ）」）という用語は、細胞を冷凍庫から出すこと、又は冷凍ストックから培養を開始することを指す。
【０１０２】
本明細書で用いられる「ホルモン」という用語は、血液により運ばれて、他の場所での活性を誘発する、体内器官により産生される天然物質又はその合成類似体を指す。記載されている発明の文脈で用いられる好適なホルモンとしては、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、コルチコトロピン放出ホルモン（ＣＲＨ）、チロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）、プロラクチン阻害ホルモン（ドーパミン）及びオレキシン（ヒポクレチン）を含む、神経分泌細胞により産生される任意のホルモン、ならびに通常であれば一緒に生じることはない配列を含有するように操作されたＤＮＡを用い、そのＤＮＡを宿主の細胞に導入する過程により産生されるホルモンを意味する、組換えホルモンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
本明細書で用いられる「阻害剤」という用語は、酵素に結合し、それにより酵素活性を減少させる分子を指す。酵素阻害剤は、酵素に結合し、それにより酵素活性を減少させる分子を指す。阻害剤の結合は、基質が酵素の活性部位に侵入するのを阻止し得る及び／又は酵素がその反応を触媒するのを妨げ得る。阻害剤の結合は、可逆的又は不可逆的である。不可逆的阻害剤は、通常、酵素と反応し、それを、例えば、酵素活性に必要とされる重要なアミノ酸残基を改変することによって化学的に変化させる。対照的に、可逆的阻害剤は、非共有結合的に結合し、これらの阻害剤が酵素に結合するのか、酵素−基質複合体に結合するのか、又はその両方であるのかによって、異なるタイプの阻害をもたらす。酵素阻害剤は、多くの場合、その特異性及び効力によって評価される。
【０１０４】
本明細書で用いられる「損傷」という用語は、外部の作用因子又は力によって引き起こされる身体の構造又は機能の傷害又は損害を指し、この外部の作用因子又は力は、物理的なものであっても化学的なものであってもよい。
【０１０５】
本明細書に記載の組成物は、単離された分子を含有する。「単離された分子」は、実質的に純粋であり、かつ通常それが天然に又はインビボシステムにおいて一緒に見出される他の物質をその意図される用途にとって実用的かつ適切な程度にまで含まない分子を指す。特に、これらの組成物は、例えば、薬学的調製物の生産又は組成物が核酸、ペプチド、又は多糖である場合、シークエンシングに有用であるのに十分なほど純粋であり、かつそのような生産又はシークエンシングに十分なほど宿主細胞の他の生物学的成分を含まない。組成物は、薬学的調製物中で薬学的に許容される担体と混合されることがあるので、これらの組成物は、重量でわずかな割合しかこの調製物を含まない場合がある。それでもやはり、この組成物は、それが生きたシステムにおいて又は合成される時に会合し得る物質から実質的に分離されているという点で実質的に純粋である。本明細書で用いられるとき、「実質的に純粋」という用語は、分析的プロトコルで決定した場合に、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％純粋な純度を指す。このようなプロトコルとしては、例えば、ＦＡＣＳ、ＨＰＬＣ、ゲル電気泳動、クロマトグラフィーなどを挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１０６】
「アイソフォーム」という用語は、別のタンパク質と同じ機能を有するが、その配列にわずかな相違があるタンパク質のバージョンを指す。
【０１０７】
Ｉ型サイトカイン受容体スーパーファミリーのメンバーである、レプチン受容体（ＯＢ−Ｒ）は、選択的スプライシングの結果として少なくとも６つのアイソフォームを有する。ＯＢ−Ｒの全てのアイソフォームは、同一の細胞外リガンド結合ドメインを共有する。レプチンの機能的受容体（ＯＢ−Ｒｂ）であるｂアイソフォームは、それがエネルギー恒常性や神経内分泌機能を調節する視床下部だけでなく、他の脳領域及び自然免疫や適応免疫に関する全ての細胞型を含む末梢でも発現する。全長ｂアイソフォーム（ＯＢ−Ｒｂ）は、固有のチロシンキナーゼ活性を欠き、いくつかの下流のシグナル伝達経路に関与する。
【０１０８】
「レプチンアゴニスト」という用語は、レプチン受容体及び／又は下流のエフェクターを活性化し、対象におけるアミロイドペプチドレベル又はタウリン酸化をモジュレートすることができる化合物を指す。このようなエフェクターとしては、例えば、ＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ（「ＡＭＰＫ」）、ステロール調節エレメント結合タンパク質（「ＳＲＥＢＰ」）、及びＧＳＫ−３βを挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１０９】
本明細書で用いられる「モジュレートする」という用語は、特定の尺度又は比率に調節すること、変化させること、適応させること、又は調整することを意味する。
【０１１０】
本明細書で用いられる「モジュレーター分子」又は「モジュレーター」という用語は、アロステリックモジュレーションの間に調節部位に結合する分子であって、タンパク質の形状をアロステリックにモジュレートする分子を指す。
【０１１１】
本明細書で用いられる「単層」という用語は、培養で増殖した、１細胞分の厚さの細胞の層を指す。
【０１１２】
「神経原線維のもつれ」（「ＮＦＴ」）という用語は、通常、過剰にリン酸化されるようになって、それ自体細胞内に蓄積する微小管関連タンパク質「タウ」の凝集を指す。
【０１１３】
「非ステロイド性抗炎症剤」という語句は、その作用がアスピリンに似た、イブプロフェン（アドビル（登録商標））、ナプロキセンナトリウム（アリーブ（登録商標））、及びアセトアミノフェン（タイレノール（登録商標））を含む、大きい薬剤群を指す。記載されている発明との文脈において使用可能な非ステロイド性抗炎症剤のさらなる例としては、オキシカム、例えば、ピロキシカム、イソキシカム、テノキシカム、スドキシカム、及びＣＰ−１４，３０４；ジサルシド、ベノリラート、トリリサート、サファピリン、ソルプリン、ジフルニサル、及びフェンドサール；酢酸誘導体、例えば、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、イソキセパク、フロフェナク、チオピナク、ジドメタシン、アセマタシン、フェンチアザク、ゾメピラク、クリンダナク、オキセピナク、フェルビナク、及びケトロラク；フェナマート、例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、ニフルム酸、及びトルフェナム酸；プロピオン酸誘導体、例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、ベノキサプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、フェノプロフェン、フェンブフェン、インドプロフェン（indopropfen）、ピルプロフェン、カルプロフェン、オキサプロジン、プラノプロフェン、ミロプロフェン、チオキサプロフェン、スプロフェン、アルミノプロフェン、及びチアプロフェニック（tiaprofenic）；ピラゾール、例えば、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、フェプラゾン、アザプロパゾン、及びトリメタゾンが挙げられるが、これらに限定されない。これらの非ステロイド性抗炎症剤の混合物、ならびに皮膚科学的に許容されるこれらの薬剤の塩及びエステルも用い得る。例えば、フルフェナム酸誘導体であるエトフェナメートは、局所適用に特に有用である。
【０１１４】
「正常な」という用語は、大きい群の標準、モデル、中央値又は平均値を指す。
【０１１５】
「正常な健康対象」という用語は、認知障害の症状又は他の臨床所見のない対象を指す。
【０１１６】
「ペプチド」という用語は、ペプチド結合で連結された２以上のアミノ酸を指すために本明細書で用いられる。
【０１１７】
「ポリペプチド」という用語は、一連のサブユニットアミノ酸、アミノ酸類似体、又はペプチドミメティックを指すためにその最も広範な意味において本明細書で用いられる。サブユニットは、注記される場合を除いて、ペプチド結合によって連結されている。記載されている発明のレプチン又はレプチン類似体ポリペプチドは、化学合成されてもよく又は組換えで発現されてもよい。
【０１１８】
「タンパク質」という用語は、アミノ酸から構成された大きな複合体分子又はポリペプチドを指すために本明細書で用いられる。タンパク質中のアミノ酸の配列は、それをコードする核酸配列中の塩基配列により決定される。
【０１１９】
「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、天然のアミノ酸ポリマーだけでなく、１以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工的な化学的類似体であるアミノ酸ポリマーにも適用される。このような天然アミノ酸類似体の必須の性質は、タンパク質中に組み込まれたときに、そのタンパク質が、完全に天然アミノ酸からなることを除き、同じタンパク質に対して誘発される抗体に特異的に反応することである。「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、グリコシル化、脂質付加、硫酸化、グルタミン酸残基のγ−カルボキシル化、水酸化及びＡＤＰ−リボシル化を含むが、これらに限定されない、修飾も含む。周知の通り及び上記のように、ポリペプチドは完全には線状でなくてもよいことが理解される。例えば、ポリペプチドは、ユビキチン化の結果として分岐状であることができ、また、ポリペプチドは、通常、天然のプロセシング事象及びヒトの操作によりもたらされる天然には生じない事象を含む翻訳後修飾の結果として、分岐している又は分岐していない、環状物であることができる。環状ポリペプチド、分岐状ポリペプチド及び分岐状の環状ポリペプチドを、非翻訳天然過程により及び完全に合成的な方法により、同様に合成することができる。
【０１２０】
「残基」又は「アミノ酸残基」又は「アミノ酸」という用語は、限定するものではないが、天然アミノ酸及び天然アミノ酸と同じ様に機能することができる天然アミノ酸の既知の類似体を含む、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドに組み込まれるアミノ酸を指すために互換的に用いられる。
【０１２１】
核酸の文脈で用いられる、「変異体」、「突然変異体」及び「誘導体」という用語は、参照ヌクレオチド配列との実質的な同一性を有するヌクレオチド配列を指すために本明細書で用いられる。配列の違いは、天然か又は設計によるかのいずれかの、配列又は構造の変化の結果によるものであってもよい。天然の変化は、特定の核酸配列の本来の正常な複製又は重複の過程において起こり得る。設計された変化を、特定の目的のために特別に設計して、配列に導入することができる。このような特定の変化を、種々の突然変異生成技術を用いてインビトロで生じさせることができる。特別に生成されるこのような配列変異体を、もとの配列の「突然変異体」又は「誘導体」と呼ぶことができる。
【０１２２】
当業者は、同様に、単一又は複数のアミノ酸置換、欠失、付加又は交換を有するポリペプチド変異体を産生することができる。これらの変異体としては、とりわけ、（ａ）１以上のアミノ酸残基が保存的又は非保存的アミノ酸と置換された変異体；（ｂ）１以上のアミノ酸が付加された変異体；（ｃ）少なくとも１つのアミノ酸が置換基を含む変異体；（ｄ）１つの種に由来するアミノ酸残基が、保存された又は保存されていない位置で、別の種の対応する残基に置換された変異体；及び（ｄ）標的タンパク質が、例えば、抗体に対するエピトープなどの有用な特性を標的タンパク質に付与し得る別のペプチド又はポリペプチド、例えば、融合パートナー、タンパク質タグ又は他の化学的部分と融合された変異体を挙げることができる。遺伝的（抑制、欠失、突然変異など）、化学的、及び酵素的技術を含む、このような変異体を得るための技術は、当業者に公知である。本明細書で用いられるとき、「突然変異」という用語は、もとのタイプには見られない新しい特徴もしくは形質を生み出す生物の遺伝子もしくは染色体内でのＤＮＡ配列の変化、又はそのような変化が、遺伝子をコードするＤＮＡのヌクレオチド配列の変化によるかもしくは染色体の物理的配置の変化によるかのいずれかで、染色体中に生じる過程を指す。突然変異の３つのメカニズムとしては、置換（ある塩基対と別の塩基対との交換）、付加（配列中への１以上の塩基の挿入）、及び欠失（１以上の塩基対の喪失）が挙げられる。
【０１２３】
「置換」という用語は、ＤＮＡ中で塩基（単数又は複数）を別の塩基（単数又は複数）に置き換えることを指すために本明細書で用いられる。置換は、同義的置換又は非同義的置換であり得る。本明細書で用いられるとき、「同義的置換」は、産生されるアミノ酸配列が改変されないような、タンパク質をコードする遺伝子のエクソン中でのある塩基と別の塩基との置換を指す。本明細書で用いられる「非同義的置換」という用語は、産生されるアミノ酸配列が改変されるような、タンパク質をコードする遺伝子のエクソン中でのある塩基と別の塩基との置換を指す。
【０１２４】
「欠失」及び「欠失突然変異」は、塩基（単数又は複数）がＤＮＡから失われることを指すために本明細書で互換的に用いられる。
【０１２５】
本明細書で用いられる、核酸配列の文脈で用いられる場合の「付加」という用語は、配列中への１以上の塩基の挿入、又は１以上のアミノ酸の挿入を指す。
【０１２６】
以下は、互いに保存的置換となるアミノ酸の群を表す。
１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；
４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；及び
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。
【０１２７】
「同様の」という用語は、共通の形質又は特徴を有することを意味する、類似した、同程度の、又は似ているという用語と互換的に用いられる。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本発明のレプチン又はレプチン類似体は化学合成される。固相、液相、もしくはペプチド縮合技術といった周知の技術、又は任意のその組合せを用いて調製される、このような合成ポリペプチドは、天然及び非天然アミノ酸を含むことができる。ペプチド合成に用いられるアミノ酸は、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５４）のオリジナルの固相手順の標準的な脱保護、中和、カップリング及び洗浄プロトコルを伴う標準的なＢｏｃ（Ｎ−α−アミノ保護Ｎ−α−ｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノ酸樹脂であっても、又はＣａｒｐｉｎｏとＨａｎ（１９７２，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．３７：３４０３−３４０９）によって最初に記載された、塩基に不安定なＮ−α−アミノ保護９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）アミノ酸であってもよい。Ｆｍｏｃ  Ｎ−α−アミノ保護アミノ酸とＢｏｃ  Ｎ−α−アミノ保護アミノ酸は両方とも、Ｓｉｇｍａ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ、又は当業者によく知られた他の化学会社から入手することができる。更に、レプチン又はレプチン類似体ポリペプチドを、当業者によく知られた他のＮ−α−保護基を用いて合成することができる。
【０１２９】
固相ペプチド合成を、当業者によく知られた、例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ，１９８４，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．；Ｆｉｅｌｄｓ  ａｎｄ  Ｎｏｂｌｅ，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３５：１６１−２１４に示されている技術によるか、又は自動合成装置を用いて達成することができる。
【０１３０】
「ペプチドミメティック」という用語は、ペプチドを模倣する又は真似るように設計された小型のタンパク質様鎖を指す。ペプチドミメティックは、天然の親ペプチドの生物学的作用を模倣する（真似ることを意味する）か又はこのような作用に拮抗する（中和するもしくは反対に作用することを意味する）ことができる非ペプチド性構造エレメントを含むことができる。「レプチンペプチドミメティック」、「レプチン模倣体」、及び「レプチンミメティック」という用語は、生物学的効果をもたらすレプチンタンパク質の機能ドメインを含むレプチン誘導体を指すために本明細書で互換的に用いられる。化学において、誘導体は、少なくとも理論的には、前駆体化合物から形成され得る化合物である。これらの誘導体を別の分子と組み合わせて、生物学的効果を生成又は増強することができる。生物学的効果としては、例えば、対象におけるアミロイドペプチドレベルをモジュレートすること；対象におけるタウリン酸化レベルをモジュレートすること；対象におけるアミロイドペプチドレベルを減少させること；対象におけるタウリン酸化レベルをモジュレートすることなどを挙げることができるが、これらに限定されない。本明細書で用いられる「レプチン類似体」という用語は、野生型レプチンタンパク質と同様の構造又は機能の化合物又は物質を指す。例えば、レプチン受容体に結合するか、レプチンシグナル伝達カスケードを活性化するか、Ａβ産生を減少させるか、Ａβの取込みを増加させるか、又はタウのリン酸化を減少させるレプチン誘導体、レプチン模倣体、レプチンアゴニスト、薬学的に許容されるその塩、又はその機能等価物は、レプチン類似体の要件を満たす。
【０１３１】
本明細書で用いられる「リン酸化タウ蓄積をモジュレートする量」という用語は、タウタンパク質のリン酸化をモジュレートするレプチン組成物の治療有効量を指す。リン酸化タウ蓄積をモジュレートする量には、記載されている発明の組成物の予防量又は防止量が含まれる。
【０１３２】
本明細書で用いられる「プレーティングする」という用語は、培養培地中に又は培養培地上に細胞を分注する過程を指す。
【０１３３】
本明細書で用いられる「効力（ｐｏｔｅｎｃｙ）」という用語は、効力（ｅｆｆｉｃａｃｙ）、有効性、強度、又は典型的には、酵素を阻害するのに必要とされる濃度を示す解離定数を指す。
【０１３４】
本明細書で用いられる「組換えタンパク質」という用語は、遺伝子操作によって産生されたタンパク質を指す。
【０１３５】
本明細書で用いられる「低下させる」という用語及びその様々な文法的形態は、障害を発症するリスクのある個体において障害の発生を制限することを指す。
【０１３６】
本明細書で用いられる「回復力」という用語は、疾病、病気、疾患、症候群もしくは障害の後に又は疾病、病気、疾患、症候群もしくは障害の間にもとの形態、位置、又は機能に戻る能力を指す。
【０１３７】
本明細書で用いられる「溶液」という用語は、固体、液体、気体又はこれらの組合せであり得る、２以上の物質の均質な分子混合物を指す。
【０１３８】
本明細書で用いられる「特異性」という用語は、ある物質の他の物質に対する選択的な付着又は影響を指す。
【０１３９】
本明細書で用いられる「分割する」又は「継代する」という用語は、細胞の二次培養又は継代を指す。
【０１４０】
本明細書で用いられる「安定細胞株」という用語は、異種ＤＮＡが宿主ゲノムに組み込まれ、何世代にもわたって維持される細胞を指す。
【０１４１】
本明細書で用いられる「懸濁培養物」という用語は、増殖するために基質への付着を必要としない、すなわち、足場非依存性の細胞を指す。血液から得られた細胞培養物は、通常、懸濁状態で増殖する。懸濁培養された細胞は、単一の細胞又は塊として増殖することができる。単一の細胞として増殖する細胞は、細胞を希釈することにより二次培養することができる。しかしながら、塊として増殖する細胞については、培養物の二次培養の前に、塊をまず解離させなければならない。
【０１４２】
本明細書で用いられる「ステロイド性抗炎症剤」は、１７炭素４環系を含有する多くの化合物のいずれか１つを指し、これには、ステロール、（アナボリックステロイドとしての）様々なホルモン、及びグリコシドが含まれる。ステロイド性抗炎症剤の代表的な例としては、コルチコステロイド、例えば、ヒドロコルチゾン、ヒドロキシルトリアムシノロン、アルファ−メチルデキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、吉草酸クロベタゾール、デソニド、デソキシメタゾン、酢酸デソキシコルチコステロン、デキサメタゾン、ジクロリゾン、二酢酸ジフロラゾン、吉草酸ジフルコルトロン、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロコルチゾン、フルメタゾンピバレート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、酢酸フルプレドニデン（フルプレドニリデン）、フルランドレノロン、ハルシノニド、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、二酢酸ジフルロゾン、フルラドレノロン、フルドロコルチゾン、二酢酸ジフルロゾン、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベータメタゾン及びそのエステルの残余、クロロプレドニゾン、酢酸クロロプレドニゾン（chlorprednisone acetate）、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルルプレドネート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニゾロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、シクロペンチルプロピオン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルタメート、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、トリアムシノロン、及びこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４３】
「対象」又は「個体」又は「患者」という用語は、ヒトを含む、哺乳動物起源の動物種のメンバーを指すために互換的に用いられる。
【０１４４】
本明細書で用いられる「蓄積した神経原線維のもつれと関連する進行性認知疾患を有する対象」という語句は、蓄積した神経原線維のもつれと関連する進行性認知疾患と関連する診断マーカー及び／又は症状を呈する対象を指す。「蓄積したＮＦＴと関連する進行性認知疾患」という語句は、ＮＦＴの異常な凝集に帰着する、又はＮＦＴの異常な凝集の結果である疾患を指す。ＮＦＴの蓄積と関連する進行性認知疾患としては、進行性核上まひ；  認知症；ボクサー認知症；ＡＤ；クロイツフェルト・ヤコブ病；前頭側頭認知症；ピック病；パーキンソニズム１７を伴う前頭側頭認知症（ＦＴＤＰ−１７）、大脳皮質基底核変性症を含む、他のタウ陽性病態；前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）；及び特徴的な組織構造を欠く認知症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４５】
「それを必要としている対象」という語句は、蓄積したＮＦＴと関連する進行性認知疾患を有する、又はそれを有するリスクのある患者である。蓄積した神経原線維のもつれと関連する進行性認知疾患は、通常、特徴的な神経学的及び神経心理学的特性の存在や他に代わり得る状態の不在に基づいて、患者の病歴、血縁者の病歴、及び臨床的観察から臨床的に診断される。これらの基準は、認知機能障害、及び疑われる認知症症候群の存在が、神経心理学的試験によって確認される必要がある。他の脳病態又は認知症の亜型を排除するために、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）又は磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）による、及び単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）又は陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）による先端的な医用画像診断を用いることができる。記憶テストを含む知的機能の評価は、疾患の状態を更に特徴付けることができる。脳組織の顕微鏡検査を含む組織病理学的確認は、確定診断に必要となる場合がある。ＡＤについては、８つの認知領域、すなわち、記憶、言語、知覚能力、注意力、構成能力、位置確認、問題解決及び機能的能力が損傷していることが最も多い。これらの領域は、米国精神医学会によって出版されている（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）精神障害の診断と統計の手引き（ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ）に掲載されているＮＩＮＣＤＳ−ＡＤＲＤＡアルツハイマー基準と同等である。
【０１４６】
本明細書で用いられる「症候群」という用語は、何らかの疾患又は状態を示す症状のパターンを指す。
【０１４７】
本明細書で用いられる「治療剤」という用語は、治療効果をもたらす薬物、分子、核酸、タンパク質、組成物又は他の物質を指す。本明細書で用いられる「活性剤」という用語は、意図された治療効果に関与する記載されている発明の組成物の成分、構成要素又は構成成分を指す。「治療剤」及び「活性剤」という用語は本明細書で互換的に用いられる。活性剤は、治療有効量の、レプチン、レプチン模倣体、レプチン誘導体、レプチン断片、レプチン類似体、もしくはレプチンアゴニスト又は薬学的に許容されるその塩のうちの少なくとも１つであってもよい。
【０１４８】
本明細書で用いられる「治療構成要素」という用語は、集団のある割合において特定の疾患徴候の進行を消失させるか、低下させるか、又は予防する治療的に有効な投薬量（すなわち、投与の用量及び頻度）を指す。よく用いられる治療構成要素の一例としてはＥＤ50があり、これは、集団の５０％において特定の疾患徴候に対して治療的に有効な特定の投薬量における用量を説明するものである。
【０１４９】
本明細書で用いられる「治療効果」という用語は、その結果が望ましい又は有益であると判断される治療の結果を指す。治療効果には、直接的又は間接的に、疾患徴候の停止、低下、又は消失が含まれ得る。治療効果には、直接的又は間接的に、疾患徴候の進行の停止、低下又は消失が含まれ得る。
【０１５０】
１以上の活性剤の「治療有効量」、「有効量」、又は「薬学的有効量」という用語は、意図した治療の恩恵をもたらすのに十分な量を指すために互換的に用いられる。記載されている発明に従って使用することができる活性剤の有効量は、通常、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から約１００ｇ／ｋｇ体重の範囲である。しかしながら、投薬レベルは、損傷の種類、患者の年齢、体重、性別、医学的状態、状態の重症度、投与の経路、及び使用される特定の活性剤を含む種々の因子に基づく。従って、投薬レジメンは様々に異なり得るが、標準的な方法を用いて医師によりごく普通に決定されることができる。更に、「治療有効量」及び「薬学的有効量」という用語は、記載されている発明の組成物の予防量又は防止量を含む。記載されている発明の予防的適用又は防止的適用において、薬学的組成物又は医薬品は、疾患、障害又は病気のリスクを消失もしくは低下させるか、疾患、障害又は病気の重症度を軽減するか、又は疾患、障害又は病気の開始を遅らせるのに十分な量で、アミロイドペプチドの蓄積、ＮＦＴの蓄積、もしくはタウの過剰リン酸化のうちの少なくとも１つに起因する疾患、障害もしくは病気に感受性があるか、又はさもなければこれらの疾患、障害もしくは病気のリスクがある患者に投与され、この疾患、障害又は病気には、この疾患、障害又は病気の生化学的な、組織学的な及び／又は行動上の症状、その合併症、ならびにこの疾患、障害又は病気が発症する間に提示される中間的な病理学的表現型が含まれる。
【０１５１】
「治療する（ｔｒｅａｔ）」という用語又は「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、疾患、病気又は障害の進行を無効にすること、大幅に阻害すること、遅延させること又は逆転させること、病気の臨床的な又は美容上の症状を大幅に改善すること、疾患、病気、又は障害の臨床的な又は美容上の症状の出現を大幅に予防すること、及び有害な又は厄介な症状を防ぐことを含む。治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）は更に、以下のもの：（ａ）障害の重症度を低下させること；（ｂ）治療される障害の特徴を示す症状の発症を制限すること；（ｃ）治療される障害の特徴を示す症状の悪化を制限すること；（ｄ）過去にその障害を有していた患者において障害の再発を制限すること；及び（ｅ）過去にその障害が無症候性であった患者において症状の再発を制限すること、のうちの１つ以上を達成することを指す。
【０１５２】
本明細書で用いられる「一過性トランスフェクション」という用語は、ＤＮＡをゲノム中に組み込むことなく宿主細胞内でＤＮＡを発現させるために細胞内に外来ＤＮＡを導入することを指す。プラスミド、又はｓｉＲＮＡを細胞に侵入させる一時的な「穴」を細胞膜に開けるためのプロトコルが利用可能である。トランスフェクトすることができる細胞は、「コンピテント細胞」と呼ばれることが多い。
【０１５３】
本明細書で用いられる「ビタミン」は、代謝過程の調節において特に補酵素及び補酵素の前駆体として作用する、ほとんどの動物の栄養素に少量で不可欠な様々な有機物のいずれかを指す。記載されている発明の文脈で使用可能なビタミンの非限定的な例としては、ビタミンＡとその類似体及び誘導体：レチノール、レチナール、レチニルパルミテート、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン（まとめて、レチノイドとして知られている）、ビタミンＥ（トコフェロールとその誘導体）、ビタミンＣ（Ｌ−アスコルビン酸とそのエステル及び他の誘導体）、ビタミンＢ3（ナイアシンアミドとその誘導体）、αヒドロキシ酸（例えば、グリコール酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸など）ならびにβヒドロキシ酸（例えば、サリチル酸など）が挙げられる。
【０１５４】
本開示は、進行性認知障害のための臨床治療の組成物及び方法ならびに診断方法を提供する。
【０１５５】
（１）．進行性認知障害を治療するための方法
一態様によれば、記載されている発明は、進行性認知障害を治療するための方法であって、
（ａ）治療有効量のレプチン組成物を準備する工程、ここで、このレプチン組成物は、
（ｉ）第１の治療剤としてのレプチン又はレプチン類似体；
（ｉｉ）任意で、第２の治療剤；及び
（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体、を含む；
（ｂ）それを必要としている対象に工程（ａ）の組成物を投与する工程；ならびに
（ｃ）進行性認知障害の少なくとも１つの病態の進行を低下させるか又は予防する工程、を含む方法を提供する。
【０１５６】
いくつかの実施形態によれば、進行性認知障害は、進行性核上まひ；認知症；ボクサー認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；前頭側頭認知症；ピック病；ＦＴＤＰ−１７、大脳皮質基底核変性症を含む、他のタウ陽性病態；前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）；及び特徴的な組織構造を欠く認知症である。
【０１５７】
いくつかのそのような実施形態によれば、病態は神経原線維のもつれである。
【０１５８】
いくつかの実施形態によれば、進行性認知障害はアルツハイマー病（ＡＤ）である。
【０１５９】
いくつかのそのような実施形態によれば、ＡＤの病態は、ＡＰＰ、プレセニリン１（ＰＳ１）又はプレセニリン２（ＰＳ２）遺伝子のミスセンス突然変異を含む。
【０１６０】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は、Ａβ42のタンパク質分解の変化を含む。
【０１６１】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は、脳間質液におけるＡβ42の進行性の蓄積及び凝集を含む。
【０１６２】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は、びまん性斑としての凝集したＡβ42の沈着を含む。いくつかのそのような実施形態によれば、沈着は、プロテオグリカン及び他のアミロイド促進基質を更に含む。
【０１６３】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は、びまん性のＡβ42斑上へのＡβ40の凝集及び特定の斑関連タンパク質の蓄積を含む。
【０１６４】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は炎症応答を含む。炎症応答としては、ミクログリア活性化及びサイトカイン放出、ならびに星状細胞増加及び急性期タンパク質放出が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６５】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は、アミロイド斑内や神経網の別の場所における進行性の神経損傷を含む。
【０１６６】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は、ニューロンの代謝恒常性やイオン恒常性の混乱を含む。別の実施形態によれば、ＡＤ病態は酸化損傷を含む。
【０１６７】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は、ＰＨＦ形成をもたらす過剰リン酸化タウを生じさせるキナーゼ／ホスファターゼ活性の変化を含む。
【０１６８】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は、進行性の神経伝達物質欠損を伴う海馬及び大脳皮質における広範囲のニューロン／神経突起機能の不全及び死を含む。
【０１６９】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は認知症を含む。
【０１７０】
別の実施形態によれば、ＡＤの病態は皮質領域に関わる。いくつかのそのような実施形態によれば、病態は神経ジストロフィーである。いくつかのそのような実施形態によれば、病態はシナプス喪失である。いくつかのそのような実施形態によれば、病態はニューロン周核体の収縮である。いくつかのそのような実施形態によれば、病態は選択的なニューロン喪失である。
【０１７１】
一実施形態によれば、レプチン又はそのレプチン類似体は、レプチン断片、治療的に活性のあるレプチン断片、レプチン模倣体もしくはレプチンミメティック、又はレプチン誘導体のうちの少なくとも１つである。いくつかのそのような実施形態によれば、レプチン組成物は、レプチンミメティック、又は薬学的に許容されるその塩を含む。いくつかのそのような実施形態によれば、レプチン組成物は、レプチン誘導体、又は薬学的に許容されるその塩を含む。いくつかのそのような実施形態によれば、レプチン誘導体は、レプチンペプチド、又はレプチンペプチド断片である。いくつかのそのような実施形態によれば、レプチンペプチド又はレプチンペプチド断片は治療活性がある。
【０１７２】
別の実施形態によれば、レプチン又はそのレプチン類似体は、レプチン又はレプチン類似体の薬学的に許容される塩である。
【０１７３】
別の実施形態によれば、レプチン組成物は毎日投与される。別の実施形態によれば、レプチン組成物は毎週投与される。別の実施形態によれば、レプチン組成物は毎月投与される。
【０１７４】
別の実施形態によれば、記載されている発明は、中断されないサイクルの治療有効量のレプチン組成物を用いて、対象におけるアルツハイマー病を治療するための方法を提供する。本明細書で用いられる「中断されない」という用語は、レプチン投与が、少なくとも２サイクル、４サイクル、１２サイクル、２４サイクル、及び／又は５２サイクルあるいはそれより多く、対象に繰り返し施されることを意味し、ここで、サイクルの周期性は一定であり、あるサイクルの最後の投与と次のサイクルの最初の投与の間の最大期間は、２１日、１４日、７日、及び／又は１日を超えない。この定義の範囲内において、「サイクルの周期性は一定である」という語句は、連続した対応する投与間の期間が１２時間の範囲内で一定であることを意味する。例えば、周期性が７日（すなわち、１６８時間）であると示される場合、記載されている発明によれば、「サイクルの周期性は一定である」という語句は、連続したサイクルにおける対応する投与間の期間が１６２時間から１７４時間の範囲であり得ることを意味するとみなされる。いくつかの実施形態では、各サイクルにおけるレプチン組成物投与の回数は１回から５回の範囲であることができ、各々の個々の投与は１つ又は複数の個々の投薬形態をとることを含むことができる。いくつかの実施形態では、各サイクルにおけるレプチン組成物投与の回数は１回から６回の範囲であることができ、各々の個々の投与は１つ又は複数の個々の投薬形態をとることを含むことができる。
【０１７５】
別の実施形態によれば、周期性は日（すなわち、１日）である。別の実施形態によれば、治療有効量のレプチン組成物は単一サイクルで投与される。いくつかのそのような実施形態によれば、サイクルにおける投与の回数は１回である。
【０１７６】
別の実施形態によれば、レプチン組成物の１回の投与は、７日ごとに少なくとも２サイクルの間（すなわち、２週間（bimonthly））、対象に施される。別の実施形態によれば、レプチン組成物の１回の投与は、７日ごとに少なくとも４サイクルの間（すなわち、１カ月）、対象に施される。別の実施形態によれば、レプチン組成物の１回の投与は、７日ごとに少なくとも５２サイクルの間（すなわち、１年）、対象に施される。この場合、１サイクル当たりの投与回数は、わずか１回の投与であり、周期性は７日であり、あるサイクルの最後の投与と次のサイクルの最初の投与の間の最大期間は６日である。別の実施形態では、例えば、少なくとも５２サイクルの間、レプチン組成物の１回の投与が月曜日に投与され、レプチン組成物の１回の投与が火曜日に投与され投与される。この場合、１サイクル当たりの投与回数は２回であり、周期性は７日であり、あるサイクルの最後の投与と次のサイクルの最初の投与の間の最大期間は５日（すなわち、水曜日から日曜日まで）である。別の実施形態では、例えば、各投与で２錠服用することにより、レプチン組成物の１回の投与が、特定の曜日の朝に施され、レプチン組成物のもう１回の投与が夜に施されて、このサイクルが少なくとも５２サイクルの間、繰り返される。この場合、１サイクル当たりの投与回数は２回であり、その場合、各投与は２投薬量形態をとることを含み、周期性は７日であり、あるサイクルの最後の投与と次のサイクルの最初の投与の間の最大期間は６日（すなわち、投与が施された曜日からその曜日までの間の日）である。他のスケジュールが本発明の実施形態の範囲内であることが理解されるであろう。例えば、一実施形態では、少なくとも５２サイクルの間、レプチン組成物の１回の投与が月曜日に施され、レプチン組成物の１回の投与が水曜日に施される。この場合、１サイクル当たりの投与回数は２回であり、周期性は７日であり、あるサイクルの最後の投与と次のサイクルの最初の投与の間の最大期間は４日（すなわち、火曜日から日曜日まで）である。別の実施形態では、周期性は週（すなわち、７日）である。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物を他の治療剤と組み合わせて、局所に投与することができる。いくつかのそのような実施形態では、本発明の組成物と他の治療剤を同時に投与する。他の治療剤を同時に投与するとき、それらを同じ又は別々の製剤として投与することができるが、同時に投与する。いくつかのそのような実施形態では、本発明の組成物と他の治療剤を連続的に投与する。他の治療剤及び阻害剤の投与が時間的に離れているとき、他の治療剤を互いに及び本発明の組成物と連続的に投与する。これらの薬剤の投与と投与の間の時間間隔はほんの数分であってもよいし、又はもっと長くてもよい。
【０１７８】
いくつかの実施形態によれば、レプチン組成物は、少なくとも１つの第２の治療剤を更に含む。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤はキナーゼ阻害剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤は抗生物質剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤は抗真菌剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤は抗ウイルス剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤は抗原虫剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤はステロイド性抗炎症剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤は非ステロイド性抗炎症剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤は酸化防止剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤はホルモンである。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤はビタミンである。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤は抗ヒスタミン薬である。いくつかのそのような実施形態によれば、第２の治療剤は化学療法剤である。
【０１７９】
いくつかの実施形態によれば、レプチン組成物は、
（ａ）第１の治療剤としてのレプチン又はそのレプチン類似体；
（ｂ）少なくとも１つのキナーゼ阻害剤を含む任意の第２の治療剤、ここで、この少なくとも１つのキナーゼ阻害剤はキナーゼ阻害量である、及び
（ｃ）担体、
を含み、この組成物は、構成要素（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の合計よりも大きいレベルのキナーゼ阻害を提供する。
【０１８０】
一実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ、タンパク質キナーゼＡ及びＧＳＫ−３βからなる群から選択されるキナーゼ阻害剤である。
【０１８１】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ（ＣＡＭＫ２Ａ；Ｍｙｒ−ＡＩＰ）の阻害剤である。カルシウムシグナル伝達は、グルタミン作動性シナプスにおける可塑性のいくつかの側面に極めて重要である。カルシウム／カルモジュリン依存性キナーゼＩＩは、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼファミリーに、及びカルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質サブファミリーに属するキナーゼ酵素である。この酵素は、４つの異なる鎖：α、β、Δ及びγから構成される。α鎖は、海馬の長期増強や空間学習に必要とされる。そのカルシウム−カルモジュリン（ＣａＭ）依存的な活性に加えて、カルシウム／カルモジュリン依存性キナーゼＩＩは、自己リン酸化を受けて、ＣａＭ非依存的な活性を生じさせることができる。
【０１８２】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、タンパク質キナーゼＡのキナーゼ阻害剤である。タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ）は、その活性が細胞における環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）のレベルに依存的な酵素ファミリーを指す。ＰＫＡは、グリコーゲン、糖及び脂質代謝の調節を含む、細胞におけるいくつかの機能を有する。各々のＰＫＡは、２つの調節サブユニットと２つの触媒サブユニットからなるホロ酵素である。低レベルのｃＡＭＰの下では、ホロ酵素はインタクトのままであり、触媒として不活性である。ｃＡＭＰの濃度が増加すると、ｃＡＭＰは調節サブユニット上の２つの結合部位に結合し、これにより、触媒サブユニットの放出が生じる。その後、遊離の触媒サブユニットは、セリン又はスレオニン残基におけるＡＴＰ末端リン酸のタンパク質基質への転移を触媒することができる。このリン酸化は、通常、基質の活性を変化させる。ＰＫＡ活性の効果は、細胞型によって様々である。
【０１８３】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、グリコーゲンシンターゼキナーゼ−３β（ＧＳＫ−３β）のキナーゼ阻害剤である。ＧＳＫ−３βの機能は完全には理解されていない。
【０１８４】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、Ｍｙｒ−ＡＩＰ、ＬｉＣｌ及びＫＴ５７２０からなる群から選択される。
【０１８５】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤の塩化リチウム（ＬｉＣｌ）である。塩化リチウムは、阻害性Ｓｅｒ９残基のリン酸化を増加させることによりＧＳＫ−３β活性を減衰させる（ＩＣ50＝５ｍＭ）。いくつかのそのような実施形態によれば、ＬｉＣｌ濃度は約５×１０-2ｍｏｌ／Ｌから約１ｍｍｏｌ／Ｌである。
【０１８６】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤の６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（ＢＩＯ）である。キナーゼ阻害剤の６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（（２’Ｚ，３’Ｅ）−６−ブロモインジルビン−３’−オキシム）は、強力で、可逆性でかつＡＴＰ競合性のＧＳＫ−３β阻害剤であり、ヒト及びマウス胚性幹細胞における自己再生を維持することが示された最初の薬理学的薬剤である。
【０１８７】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤のＫＴ５７２０である。ＫＴ５７２０は、Ｋ５２５ａの細胞透過性の半合成誘導体である。これは、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼの選択的阻害剤（ＰＫＡ；ＩＣ50＝５６ｎＭ）であるが、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）、タンパク質キナーゼＧ（ＰＫＧ）又はミオシン軽鎖キナーゼ（ＭＬＣＫ）に対してはそれほど効果がない。
【０１８８】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、Ｋ２５２ａ、スタウロスポリン、ＫＴ５２５２ｂ及びケレリトリンからなる群から選択されるキナーゼ阻害剤である。
【０１８９】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤のＫ２５２ａである。Ｋ２５２ａは、ノカルジオプシス種（Nocardiopisis sp.）の土壌菌類から単離されたアルカロイドである。このＡＴＰ類似体は、ＣａＭキナーゼ及びホスホリラーゼキナーゼの極めて強力な細胞透過性阻害剤である（それぞれ、ＩＣ50＝１．８ｎＭ及び１．７ｎＭ）。より高濃度では、これは、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼの効率的な阻害剤でもある（ＩＣ50＝１０〜３０ｎＭ）。
【０１９０】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤のＫ２５２ｂである。Ｋ２５２ｂは、ノカルジオプシス種の土壌菌類から単離されたアルカロイドである。これは、細胞透過性キナーゼ阻害剤であるＫ２５２ａのあまり強力でない誘導体である。この化合物は、未知の機構によって特定のニューロンにおけるニューロトロフィン−３活性を増強する。
【０１９１】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤のスタウロスポリンである。スタウロスポリンは、ストレプトミセス・スタウロスポレスによって産生される真菌アルカロイドのＫ２５２ａファミリーのメンバーである。これは、最も強力な細胞透過性のタンパク質キナーゼ阻害剤の１つである（ＩＣ50＝０．７〜２０ｎＭ）。
【０１９２】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤のケレリトリン（chelrythrine）である。ケレリトリンは、ＰＫＣの触媒ドメインに結合する強力な細胞透過性のタンパク質キナーゼＣ阻害剤（ＩＣ50＝６６０ｎＭ）である。ケレリトリンは、他のキナーゼよりもＰＫＣに対して少なくとも１００倍選択的である。
【０１９３】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤のＳＢ２１６７６３である。ＳＢ２１６７６３（３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン）は、ＧＳＫ−３β活性を阻害する、透過性の、構造的に異なったマレイミドである。この強力かつ選択的なＧＳＫ−３β阻害剤（ＩＣ50＝３４ｎＭ）は、ヒト肝臓細胞におけるグリコーゲン合成を刺激し、他のインスリン作用を模倣する。
【０１９４】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤のＴＤＺＤ−８（４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン−８）である。ＴＤＺＤ−８は、選択的なＧＳＫ−３β阻害剤、チアジアゾリジノン誘導体、非ＡＴＰ競合性のＧＳＫ−３β阻害剤（ＩＣ50＝２μＭ）である。これは、１００μＭでＣｄｋ−１／サイクリンＢ、ＣＫＩＩ、ＰＫＡ、又はＰＫＣを阻害しない。いくつかのそのような実施形態によれば、ＴＤＺＤの濃度は、約２×１０-5ｍｏｌ／Ｌである。
【０１９５】
別の実施形態によれば、レプチン組成物の治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０００１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０００５ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００２ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００３ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００４ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００５ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００６ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００７ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００８ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００９ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約８５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約８０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約７５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約７０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約６５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約６０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約５５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約５０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約４５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約４０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約３５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約３０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約２５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約２０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約４ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約３ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約２ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約５００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約２５０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約５０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約２５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、治療有効量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１ｇ／ｋｇ体重である。
【０１９６】
（２）．認知機能の回復力を向上させるための方法
別の態様によれば、記載されている発明は、それを必要としている対象における認知機能の回復力を向上させるための方法であって、
（ａ）対象に
（ｉ）第１の治療剤としての認知機能増強量のレプチン又はレプチン類似体；
（ｉｉ）任意で、少なくとも１つの任意の第２の治療剤；及び
（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体；
を含むレプチン組成物を投与する工程、ならびに
（ｂ）対象における認知機能の回復力を向上させる工程、を含む方法を提供する。
【０１９７】
別の実施形態によれば、レプチン又はレプチン類似体は、レプチン、治療的に活性のあるレプチン断片、レプチンミメティック、レプチン誘導体、又は薬学的に許容されるその塩を含む。
【０１９８】
いくつかの実施形態によれば、レプチン組成物は少なくとも１つの任意の第２の治療剤を更に含む。いくつかのそのような実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、キナーゼ阻害剤である。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、抗生物質である。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、抗真菌剤である。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、抗ウイルス剤である。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、抗原虫剤である。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、任意の第２の治療剤は、ステロイド性抗炎症剤である。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、非ステロイド性抗炎症剤である。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、酸化防止剤である。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、ホルモンである。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、ビタミンである。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、抗ヒスタミン薬である。別の実施形態によれば、任意の第２の治療剤は、化学療法剤である。
【０１９９】
別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０００１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０００５ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００２ｇ／ｋｇ体重から約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００３ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００４ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００５ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００６ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００７ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００８ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．００９ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約９０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約８５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約８０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約７５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約７０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約６５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約６０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約５５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約５０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約４５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約４０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約３５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約３０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約２５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約２０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約４ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約３ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約２ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約１ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重から約５００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重から約２５０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重から約１００ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重から約５０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重から約２５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、レプチン又はレプチン類似体約０．０１ｇ／ｋｇ体重から約１０ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、約０．０１ｇ／ｋｇ体重からレプチン又はレプチン類似体約５ｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態によれば、認知機能増強量は、約０．０１ｇ／ｋｇ体重から約１ｇ／ｋｇ体重である。
【０２００】
別の実施形態によれば、認知機能増強量のレプチン組成物は毎日投与される。別の実施形態によれば、認知機能増強量のレプチン組成物は毎週投与される。別の実施形態によれば、認知機能増強量のレプチン組成物は毎月投与される。
【０２０１】
別の実施形態によれば、認知機能増強量のレプチン組成物は認知機能を増強し、ここで、認知機能は記憶である。いくつかの実施形態によれば、認知機能増強量のレプチン組成物は認知機能を増強し、ここで、認知機能は条件付け記憶である。いくつかの実施形態によれば、認知機能増強量のレプチン組成物は認知機能を増強し、ここで、認知機能は文脈記憶である。
【０２０２】
別の実施形態によれば、認知機能増強量のレプチン組成物は認知機能を増強し、ここで、認知機能は学習である。いくつかの実施形態によれば、認知機能増強量のレプチン組成物は認知機能を増強し、ここで、認知機能は文脈学習である。いくつかの実施形態によれば、認知機能増強量のレプチン組成物は認知機能を増強し、ここで、認知機能は条件付け学習である。
【０２０３】
別の実施形態によれば、認知機能増強量のレプチン組成物は認知機能を増強し、ここで、認知機能は記憶保持である。
【０２０４】
いくつかの実施形態によれば、認知機能の、もとの認知機能レベルに対する改善は、もとの認知機能レベルの少なくとも約１０％になる。いくつかの実施形態によれば、認知機能の、もとの認知機能レベルに対する改善は、もとの認知機能レベルの少なくとも約２５％になる。いくつかの実施形態によれば、認知機能の、もとの認知機能レベルに対する改善は、もとの認知機能レベルの５０％になる。いくつかの実施形態によれば、認知機能の、もとの認知機能レベルに対する改善は、もとの認知機能レベルの少なくとも約７５％になる。
【０２０５】
（１）．タウリン酸化を減少させるための組成物
記載されている発明の別の態様によれば、タウリン酸化を減少させるための本発明の組成物は、
（ａ）レプチン又はレプチン類似体；
（ｂ）少なくとも１つのキナーゼ阻害剤を含む任意の第２の治療剤、ここで、この少なくとも１つのキナーゼ阻害剤はキナーゼ阻害量である；及び
（ｃ）担体
を含み、この組成物は、構成要素（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の合計よりも大きいレベルの少なくとも１つのキナーゼの阻害を提供する。
【０２０６】
一実施形態によれば、レプチン又はそのレプチン類似体は、レプチン、治療的に活性のあるレプチン断片、レプチン模倣体もしくはレプチンミメティック、又はレプチン誘導体のうちの少なくとも１つである。いくつかのそのような実施形態によれば、レプチン誘導体はレプチンペプチド、又はレプチンペプチド断片である。
【０２０７】
別の実施形態によれば、レプチン又はそのレプチン類似体は、レプチン又はレプチン類似体の薬学的に許容される塩である。
【０２０８】
一実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩのキナーゼ阻害剤、タンパク質キナーゼＡのキナーゼ阻害剤及びＧＳＫ−３βのキナーゼ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つのキナーゼ阻害剤である。
【０２０９】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ（ＣＡＭＫ２Ａ；Ｍｙｒ−ＡＩＰ）の阻害剤である。別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ）のキナーゼ阻害剤である。別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、ＧＳＫ−３βのキナーゼ阻害剤である。
【０２１０】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、Ｍｙｒ−ＡＩＰ、ＬｉＣｌ及びＫＴ５７２０からなる群から選択される少なくとも１つのキナーゼ阻害剤である。
【０２１１】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤の塩化リチウム（ＬｉＣｌ）である。塩化リチウムは、阻害性Ｓｅｒ９残基のリン酸化を増加させることにより、ＧＳＫ−３β活性を減衰させる（ＩＣ50＝５ｍＭ）。いくつかのそのような実施形態によれば、ＬｉＣｌ濃度は約５×１０-2ｍｏｌ／Ｌから約１ｍｍｏｌ／Ｌである。
【０２１２】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、強力で、可逆性でかつＡＴＰ競合性のＧＳＫ−３β阻害剤である、キナーゼ阻害剤の６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（（２’Ｚ，３’Ｅ）−６−ブロモインジルビン−３’−オキシム）（ＢＩＯ）である。
【０２１３】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、Ｋ５２５ａの細胞透過性の半合成誘導体であり、かつ選択的なｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ阻害剤（ＰＫＡ；ＩＣ50＝５６ｎＭ）である、キナーゼ阻害剤のＫＴ５７２０である。
【０２１４】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、Ｋ２５２ａ、スタウロスポリン、ＫＴ５２５２ｂ及びケレリトリンからなる群から選択されるキナーゼ阻害剤である。
【０２１５】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤はキナーゼ阻害剤のＫ２５２ａであり、これはＡＴＰ類似体であってかつＣａＭキナーゼ及びホスホリラーゼキナーゼの極めて強力な細胞透過性阻害剤（それぞれ、ＩＣ50＝１．８ｎＭ及び１．７ｎＭ）であり、より高い濃度では、効率的なセリン／スレオニンタンパク質キナーゼ阻害剤（ＩＣ50＝１０ｎＭ〜３０ｎＭ）でもある。
【０２１６】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤はキナーゼ阻害剤のＫ２５２ｂであり、これは、ノカルジオプシス種の土壌菌類から単離されたアルカロイドであり、かつ未知の機構で特定のニューロンにおけるニューロトロフィン−３活性を増強する細胞透過性キナーゼ阻害剤であるＫ２５２ａのあまり強力でない誘導体である。
【０２１７】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、細胞透過性のタンパク質キナーゼ阻害剤（ＩＣ50＝０．７ｎＭ〜２０ｎＭ）である、キナーゼ阻害剤スタウロスポリンである。
【０２１８】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤のケレリトリンであり、これは、ＰＫＣの触媒ドメインに結合する強力な細胞透過性のタンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害剤（ＩＣ50＝６６０ｎＭ）である。別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤のＳＢ２１６７６３（３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン）であり、これは、ＧＳＫ−３βを選択的に阻害し（ＩＣ50＝３４ｎＭ）、ヒト肝臓細胞におけるグリコーゲン合成を刺激し、かつ他のインスリン作用を模倣する、透過性の、構造的に異なったマレイミドである。
【０２１９】
別の実施形態によれば、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤は、キナーゼ阻害剤のＴＤＺＤ−８（４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン−８）であり、これは、１００μＭでＣｄｋ−１／サイクリンＢ、ＣＫＩＩ、ＰＫＡ、又はＰＫＣを阻害しない選択的な非ＡＴＰ競合性のＧＳＫ−３β阻害剤（ＩＣ50＝２μＭ）である。いくつかのそのような実施形態によれば、ＴＤＺＤの濃度は約２×１０-5ｍｏｌ／Ｌである。
【０２２０】
別の実施形態によれば、担体は薬学的担体である。
【０２２１】
組成物
本明細書に記載の組成物は治療有効量で送達される。本明細書に提供される教示と組み合わせて、様々な活性化合物ならびに効力、相対的バイオアベイラビリティー、患者体重、有害副作用の重症度及び好ましい投与様式などの重み付け因子の中から選択することにより、それほど毒性を引き起こさないが、特定の対象を治療するのに効果的である有効な予防的又は治療的処置レジメンを計画することができる。任意の特定の用途のための有効量は、治療される疾患もしくは状態、投与される特定の治療的に活性のあるレプチンもしくはレプチン類似体及び任意の第２の治療剤、対象のサイズ、又は疾患もしくは状態の重症度のような因子によって変わり得る。当業者であれば、過度の実験を必要とすることなく特定のレプチン組成物及び／又は他の治療剤の有効量を実験的に決定し得る。最大用量を用いる、すなわち、何らかの医学的判断による最大安全用量を用いることが通常好ましい。「用量」及び「投薬量」は本明細書で互換的に用いられる。
【０２２２】
本明細書に記載の任意の化合物について、治療有効量を予備的なインビトロ研究及び／又は動物モデルから最初に決定し得る。また、治療有効用量を、レプチン又はレプチン類似体、及びヒトにおいてテストされた任意の第２の治療剤、及び同様の薬理学的活性を示すことが知られている化合物、例えば、他の関連する活性剤についてのヒトデータから決定し得る。適用される用量を投与される化合物又は組成物の相対的なバイオアベイラビリティー及び効力に基づいて調整し得る。上記の方法及び当該技術分野でよく知られているような他の方法に基づいて最大効力を達成するために用量を調整することは、完全に当業者の能力の範囲内である。
【０２２３】
レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を含むレプチン組成物の製剤を、薬学的に許容される濃度の塩、緩衝剤、防腐剤、適合性の担体、アジュバント、及び任意で他の治療的成分をごく普通に含有し得る薬学的に許容される溶液中で投与することができる。
【０２２４】
治療に用いるために、レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を含む有効量のレプチン組成物を、レプチン組成物を所望の表面に送達する任意の様式により対象に投与し得る。薬学的組成物の投与を当業者に公知の任意の手段により達成し得る。投与の経路としては、髄腔内、動脈内、非経口（例えば、静脈内）、又は筋肉内、経口、口腔、鼻腔内、直腸内、又は局所が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２５】
阻害剤及び他の治療薬をＮＦＴ又はＡβの蓄積に起因する病態の基礎疾患又は症状を治療するために手術中に対象に送達し得る。
【０２２６】
経口組成物
記載されている発明の組成物は、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁液、分散性粉末もしくは顆粒、エマルジョン、硬もしくは軟カプセル又はシロップもしくはエリキシルのような経口使用に好適な形態であってもよい。本明細書で用いられるとき、「経口」又は「経口的に」という用語は、口から体内に導入することを指し、吸収が以下の体の部分の１カ所以上で起こる：口、胃、小腸、肺（特に吸入とも呼ばれる）、及び舌の下の小血管（特に舌下とも呼ばれる）。経口使用が意図される組成物を任意の既知の方法によって調製することができ、そのような組成物は、薬学的に見た目も味も良い調製物を提供するために甘味剤、香味剤、着色剤、及び保存剤からなる群から選択される１以上の薬剤を含有することができる。錠剤は、錠剤の製造に好適な無毒の薬学的に許容される賦形剤と混合された活性成分を含有することができる。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、又はリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；顆粒化剤及び崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン又はアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン又はアラビアゴム；及び滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルクであることができる。錠剤はコーティングされていなくてもよく、又は錠剤は、消化管での崩壊及び吸収を遅らせ、それにより長期間にわたる持続的作用が得られるよう、既知の技術によってコーティングされてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を用いることができる。錠剤を制御放出用にコーティングすることもできる。
【０２２７】
記載されている発明の組成物を、経口使用するために、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合されている硬ゼラチンカプセルとして、又は活性成分が水もしくは油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィン、もしくはオリーブ油と混合されている軟ゼラチンカプセルとして製剤化することもできる。
【０２２８】
記載されている発明の組成物を、活性材料が水性懸濁液の製造に好適な賦形剤と混合された水性懸濁液として製剤化することもできる。このような賦形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、及びアラビアゴムであり；分散剤又は湿潤剤は、天然ホスファチド（例えば、レシチン）、又はアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）、又はエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、又はエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、又はエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエート）であることができる。水性懸濁液は、１以上の着色剤、１以上の香味剤、及び１以上の甘味剤、例えば、スクロース又はサッカリンを含有することもできる。
【０２２９】
記載されている発明の組成物を、活性成分を植物油、例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはヤシ油中に、又は流動パラフィンなどの鉱油中に懸濁させることによって油性懸濁液として製剤化することができる。油性懸濁液は、増粘剤、例えば、蜜蝋、固形パラフィン又はセチルアルコールを含有することができる。味の良い経口調製物を提供するために、上述のような甘味剤と香味剤とを添加してもよい。これらの組成物を、アスコルビン酸などの酸化防止剤を添加することによって保存することができる。
【０２３０】
記載されている発明の組成物は、水を添加して水性懸濁液を調製するのに好適な分散性の粉末及び顆粒の形態で製剤化してもよい。このような粉末及び顆粒中の活性成分は、分散剤又は湿潤剤、懸濁剤、及び１以上の防腐剤と混合されて提供される。好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤は、既に上述したものによって例示されている。さらなる賦形剤、例えば、甘味剤、香味剤及び着色剤が存在することもできる。
【０２３１】
記載されている発明の組成物はまた、エマルジョンの形態であってもよい。エマルジョンは、２つの不混和性液体担体を組み合わせることにより調製される２相系である。この２つの不混和性液体担体の一方は、もう一方の全体にわたって均一に分散し（disburse）、最大コロイド粒子の直径と等しいか又はそれより大きい直径を有する小球からなる。小球のサイズは極めて重要であり、この系が最大の安定性を達成する程度のものでなければならない。通常、乳化剤という第３の物質が組み入れられない限り、この２つの相の分離は起こらない。従って、基本的なエマルジョンは、２つの不混和性液体担体と乳化剤という少なくとも３つの構成要素、及び活性成分を含有する。ほとんどのエマルジョンは、水性相に組み入れられて非水性相になる（又は非水性相に組み入れられて水性相になる）。しかしながら、基本的に非水性のエマルジョン、例えば、非水性不混和系グリセリン及びオリーブ油のアニオン性及びカチオン性界面活性剤を調製することも可能である。従って、本発明の組成物は、水中油型エマルジョンの形態であることができる。油相は、植物油（例えば、オリーブ油もしくはラッカセイ油）、又は鉱油（例えば、流動パラフィン）、又はこれらの混合物であることができる。好適な乳化剤は、天然ゴム（例えば、アラビアゴムもしくはトラガカントゴム）、天然ホスファチド（例えば、大豆、レシチン）、ならびに脂肪酸及びヘキシトール無水物に由来するエステルもしくは部分エステル（例えば、モノオレイン酸ソルビタン）、ならびにこの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）であることができる。エマルジョンは、甘味剤及び香味剤を含有することもできる。
【０２３２】
記載されている発明の組成物をシロップ及びエリキシルとして製剤化することもできる。シロップ及びエリキシルを、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール又はスクロースとともに製剤化することができる。このような製剤は、粘滑剤、防腐剤、ならびに香味剤及び着色剤を含有することもできる。粘滑剤は、特に粘膜又は擦過した（裂けているか又は切れていることを意味する）組織における刺激を緩和するために主に用いられる保護剤である。いくつかの化学物質は鎮痛特性を有する。これらの物質としては、アルギネート、粘質物、ゴム、デキストリン、デンプン、ある種の糖、及びポリマー性の多価グリコールが挙げられる。他のものとしては、アラビアゴム、寒天、ベンゾイン、カルボマー、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、プロピレングリコール、アルギン酸ナトリウム、トラガカントゴム、ヒドロゲルなどが挙げられる。
【０２３３】
口腔組成物
口腔投与のために、記載されている発明の組成物は、従来の方法で製剤化された錠剤又はロゼンジの形態をとることができる。
【０２３４】
非経口組成物
記載されている発明の組成物は、滅菌注射用水性又は油性懸濁液の形態であることができる。本明細書で用いられる「非経口」という用語は、例えば、皮下（すなわち、皮下への注射）、筋肉内（すなわち、筋肉への注射）；静脈内（すなわち、静脈への注射）、髄腔内（すなわち、脊髄周辺の空間への注射）、胸骨内注射、又は注入技術を含む注射によって体内に導入すること（すなわち、注射による投与）を指す。記載されている発明の非経口投与される組成物は、針、例えば、手術針を用いて送達される。本明細書で用いられる「手術針」という用語は、記載されている発明の流動性のある（すなわち、流動可能な）組成物を選択された解剖学的構造に送達するのに適している任意の針を指す。注射用調製物、例えば、滅菌注射用水性又は油性懸濁液を、好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて既知の技術に従って製剤化することができる。
【０２３５】
局所的に送達することが望ましいとき、レプチン組成物を、注射による、例えば、ボーラス注射又は連続注入による、非経口投与用に製剤化することができる。注射用製剤を、単位投薬形態として、例えば、アンプル中又は複数用量容器中に、添加された防腐剤とともに提供することができる。これらの組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルジョンのような形態をとることができ、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤などの処方剤を含有することができる。非経口投与用の薬学的製剤としては、水溶性形態の活性化合物の水溶液が挙げられる。更に、活性化合物の懸濁液を適当な油性注射懸濁液として調製することができる。好適な親油性溶媒又はビヒクルとしては、ゴマ油などの脂肪油、又はオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、又はリポソームが挙げられる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランなどの、懸濁液の粘度を高める物質を含有することができる。場合によって、懸濁液は、化合物の溶解度を高めて高濃縮溶液の調製を可能にする好適な安定剤又は薬剤を含有することもできる。あるいは、活性化合物は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、滅菌パイロジェンフリー水で構成される粉末形態であることができる。
【０２３６】
薬学的組成物は、好適な固相又はゲル相の担体又は賦形剤を含有することもできる。このような担体又は賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３７】
好適な液体又は固体の薬学的調製物形態は、例えば、マイクロカプセル化され、また、適切な場合、１以上の賦形剤とともに、コヒレート化（ｅｎｃｏｃｈｌｅａｔｅ）されるか、微細金粒子にコーティングされるか、リポソームに含有されるか、組織に埋め込むためにペレット化されるか、組織にすりこむために物体上で乾燥させられる。このような薬学的組成物はまた、顆粒、ビーズ、粉末、錠剤、コーティング錠、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、エマルジョン、懸濁液、クリーム、滴剤又は、賦形剤及び添加剤及び／又は補助剤、例えば、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、滑沢剤もしくは可溶化剤が上記のように習慣的に用いられている、活性化合物を持続放出させる調製物の形態であることができる。これらの薬学的組成物は、種々の薬物送達系で用いるのに好適である。薬物送達方法の概説については、Ｌａｎｇｅｒ  １９９０  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９，１５２７−１５３３（これは、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０２３８】
レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を含むレプチン組成物を、それ自体（ニート）で又は薬学的に許容される塩の形態で投与することができる。医薬に用いる場合、塩は薬学的に許容されるものであるべきであるが、薬学的に許容されない塩は、薬学的に許容されるその塩を調製するために好都合に用いることができる。このような塩としては、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、及びベンゼンスルホン酸から調製される塩が挙げられるが、これらに限定されない。また、このような塩を、アルカリ金属塩又はアルカリ土類塩、例えば、カルボン酸基のナトリウム、カリウム又はカルシウム塩として調製することができる。「薬学的に許容される塩」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わないで、ヒト及び下等動物の組織との接触に用いるのに好適であり、妥当なベネフィット／リスク比に見合う塩を意味する。薬学的に許容される塩は当該技術分野で周知である。例えば、Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌらは、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ」（Ｗｉｌｅｙ  ＶＣＨ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ：２００２）に薬学的に許容される塩を詳細に記載している。これらの塩は、記載されている発明に記載されている化合物の最終分離精製中にその場で調製することもできるし、遊離の塩基官能基と好適な有機酸とを反応させることにより別々に調製することもできる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イセチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びウンデカン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。また、塩基性窒素含有基を、低級アルキルハライド、例えば、メチル、エチル、プロピル及びブチルクロライド、ブロマイド及びヨーダイド；ジアルキルスルフェート、例えば、ジメチル、ジエチル、ジブチル及びジアミルスルフェート；長鎖ハライド、例えば、デシル、ラウリル、ミリスチル及びステアリルクロライド、ブロマイド及びヨーダイド；アリールアルキルハライド、例えば、ベンジル及びフェネチルブロマイドなどのような薬剤で四級化することができる。水又は油に可溶性又は分散性の産物は、それにより得られる。薬学的に許容される酸付加塩を形成するために用い得る酸の例としては、塩酸、臭化水素酸��硫酸及びリン酸などの無機酸ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸及びクエン酸などの有機酸が挙げられる。塩基付加塩を、カルボン酸含有部分と好適な塩基、例えば、薬学的に許容される金属カチオンのヒドロキシド、カルボネート又はビカルボネートあるいはアンモニア又は有機第一級、第二級もしくは第三級アミンとを反応させることにより、本発明に記載の化合物の最終分離精製中にその場で調製することができる。薬学的に許容される塩としては、アルカリ金属又はアルカリ土類金属（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアルミニウム塩など）に基づくカチオンならびに毒性のない第四級アンモニア及びアミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミンなどを含む）が挙げられるが、これらに限定されない。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的有機アミンとしては、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、ピペラジンなどが挙げられる。薬学的に許容される塩を、当該技術分野で周知の標準的方法を用いて、例えば、アミンなどの十分に塩基性の化合物と生理学的に許容されるアニオンを生成する好適な酸とを反応させることにより、得ることもできる。カルボン酸のアルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウムもしくはリチウム）塩又はアルカリ土類金属（例えば、カルシウムもしくはマグネシウム）塩を生成させることもできる。
【０２３９】
本製剤は、好都合には、単位投薬形態で提供することができ、製薬業界で周知の方法のいずれかを用いて調製することができる。方法は全て、レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を含むレプチン組成物（「活性化合物」）と、１以上の補助薬剤を構成する担体とを関連させる工程を含む。一般に、これらの製剤は、活性剤と液体担体もしくは微細固体担体又はその両方とを均一かつ密接に関連させ、次いで、必要に応じてその生成物を所望の製剤に成形することにより調製される。
【０２４０】
本医薬品又は薬学的に許容されるそのエステル、塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを、所望の作用を損ねない他の活性物質と混合するか、又は所望の作用を補う物質と混合することができる。非経口、皮内、皮下、髄腔内、又は局所適用に用いられる溶液又は懸濁液は、限定するものではないが、例えば、以下の成分：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコール又はメチルパラベン；酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩及び張度調整剤、例えば、塩化ナトリウム又はデキストロースを含むことができる。非経口調製物は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ又は複数用量バイアルに封入することができる。静脈内投与する場合、特定の担体は、生理食塩水又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。
【０２４１】
非経口注射用の薬学的組成物は、薬学的に許容される滅菌水性又は非水性溶液、分散液、懸濁液又はエマルジョンと、滅菌注射溶液又は分散液に再構成するための滅菌粉末とを含む。溶液は、通常、２以上の物質の均質な混合物とみなされ、液体であることが多いが、必ずしもそうであるわけではない。溶液中では、溶質（すなわち、溶解した物質）の分子が、溶媒分子の中に均一に分布する。懸濁液は、微細な種が別の種と混合されている分散液（混合液）であり、微細な種は非常に細かく分割されて混合されるので、すぐには沈降しない。日常生活で、最もよく見られる懸濁液は、液体水中の固形物の懸濁液である。好適な水性及び非水性の担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、それらの好適な混合物、植物油（例えば、オリーブ油）及び注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが挙げられる。例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、必要な粒径の維持により（分散液の場合）及び界面活性剤の使用により、適切な流動性を維持することができる。
【０２４２】
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤を含むアジュバントを含有することもできる。様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などにより、微生物の活動を確実に予防することができる。等張剤、例えば、糖類、塩化ナトリウムなどを含むことが望ましい場合もある。吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用により、注射可能な薬学的形態の持続吸収をもたらすことができる。
【０２４３】
懸濁液は、活性化合物に加えて、懸濁剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天（agar-agar）、トラガカントゴム、ならびにそれらの混合物を含有することができる。
【０２４４】
注射用デポ形態は、ポリラクチド／ポリグリコリドなどの生体分解性ポリマー中で薬物のマイクロカプセル化マトリクスを形成させることにより製造される。薬物対ポリマーの比及び用いられる特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出速度を制御することができる。このような長時間作用型製剤を、好適なポリマー物質もしくは疎水性物質（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）又はイオン交換樹脂を用いて、あるいは難溶性誘導体（例えば、難溶性塩として）製剤化することができる。他の生体分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が挙げられる。デポ注射用製剤は、体の組織と適合するリポソーム又はマイクロエマルジョン中に薬物を捕捉することによっても調製される。
【０２４５】
局所注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過によるか又は使用直前に滅菌水もしくは他の滅菌注射用媒体に溶解もしくは分散可能な滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことにより滅菌することができる。注射用調製物、例えば、滅菌注射用水性又は油性懸濁液を、好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて、既知の技術に従って製剤化することができる。滅菌注射用調製物は、毒性のない、非経口的に許容される希釈液又は溶媒（例えば、１，３−ブタンジオール溶液）中の滅菌注射用溶液、懸濁液又はエマルジョンであることもできる。許容されるビヒクル及び使用可能な溶媒には、水、リンゲル液（ＵＳＰ）及び等張塩化ナトリウム溶液がある。更に、溶媒又は縣濁媒体として、滅菌固定油が通常用いられる。この目的のために、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む、任意の無菌固定油を用いることができる。更に、オレイン酸などの脂肪酸が注射剤の調製において用いられる。
【０２４６】
非経口（限定するものではないが、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、髄腔内及び関節内を含む）投与用製剤としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤及び意図されるレシピエントの血液と製剤とを等張にする溶質を含有し得る水性及び非水性滅菌注射溶液；ならびに懸濁剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液が挙げられる。これらの製剤は、単位用量又は複数用量容器、例えば、密封アンプル及びバイアル中に提供することができ、使用直前に滅菌液体担体、例えば、生理食塩水、注射用水を添加することだけを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することができる。前述のような滅菌粉末、顆粒及び錠剤から、即席の注射溶液及び懸濁液を調製することができる。
【０２４７】
本明細書に記載の組成物の別の製剤化方法は、水溶性を高めるポリマーに本明細書に記載の化合物をコンジュゲートすることを含む。好適なポリマーの例としては、ポリエチレングリコール、ポリ−（ｄ−グルタミン酸）、ポリ−（１−グルタミン酸）、ポリ−（１−グルタミン酸）、ポリ−（ｄ−アスパラギン酸）、ポリ−（１−アスパラギン酸）、ポリ−（１−アスパラギン酸）及びそれらのコポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。約５，０００から約１００，０００の分子量を有するポリグルタミン酸、約２０，０００から約８０，０００の分子量を有するポリグルタミン酸及び約３０，０００から約６０，０００の分子量を有するポリグルタミン酸も用いることができる。
【０２４８】
好適な緩衝剤としては、酢酸及び塩（１〜２％ｗ／ｖ）；クエン酸及び塩（１〜３％ｗ／ｖ）；ホウ酸及び塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）；ならびにリン酸及び塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）が挙げられる。好適な防腐剤としては、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）及びチメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０２４９】
レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を含むレプチン組成物を粒子中に提供することができる。本明細書で用いられる「粒子」という用語は、全体又は一部においてレプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を含むレプチン組成物を含有し得るナノ粒子又はマイクロ粒子（又は場合によっては更に大きい粒子）を指す。粒子は、コーティングに囲まれたコアの中にレプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を含有することができる。レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を粒子全体に分散させることもできる。レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を粒子中に吸着させることもできる。粒子は、ゼロ次放出、１次放出、２次放出、遅延放出、持続放出、即時放出など、ならびに任意のそれらの組み合わせを含む、任意の次数の放出動態のものであることもできる。粒子は、レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤に加えて、限定するものではないが、侵食性、耐食性、生体分解性、もしくは非生体分解性の物質又はそれらの組み合わせを含む、製薬及び医療の技術分野でごく普通に用いられている物質のいずれか含むことができる。粒子は、溶液又は半固体状態でレプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を含有するマイクロカプセルであることができる。粒子は、ほとんど全ての形状のものであることができる。
【０２５０】
非生体分解性ポリマー材料と生体分解性ポリマー材料の両方を、レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤を送達するための粒子の製造に用いることができる。このようなポリマーは、天然又は合成のポリマーであることができる。ポリマーは、望ましい放出期間に基づいて選択される。特に興味が持たれる生体接着性ポリマーとしては、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（１９９３）２６，５８１−５８７（その教示は本明細書に組み込まれる）にＳａｗｈｎｅｙらによって記載された生体浸食性ハイドロゲルが挙げられる。これらのものとしては、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリアンヒドリド、ポリアクリル酸、アルギネート、キトサン、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）及びポリ（オクタデシルアクリレート）が挙げられる。
【０２５１】
吹送組成物
記載されている発明の組成物は、（口からか又は鼻からかのいずれかの）吸入又は吹送による送達のための分散性乾燥粉末の形態であることができる。乾燥粉末組成物を、国際特許公開ＷＯ９１／１６０３８号に開示されているような及び米国特許第６，９２１，５２７号に開示されているような、凍結乾燥及びジェットミリングなどの、当該技術分野で公知の過程により調製することができる（これらの開示は参照により組み込まれる）。噴霧乾燥は、例えば、薬物と担体の均質な水性混合物を、ノズル（例えば、二流体ノズル）、スピニングディスク又は同等の装置を介して高温ガス流に導入して溶液を霧化し、微細液滴を形成させる過程である。水性混合物は、溶液、懸濁液、スラリーなどであることができるが、混合物中の構成要素が均一に分布し、最終的に粉末化組成物になることを保証するために均質である必要がある。溶媒（一般に水）は、液滴から速やかに蒸発して、直径約１μｍ〜５μｍの粒子を有する微細乾燥粉末を生じさせる。噴霧乾燥は、呼吸に適した粒径、低い水分及びすぐにエアロゾル化可能なフロー特性を有する均質な構成の実質的に非晶質の粉末が得られる条件下で行なわれる。好ましくは、得られる粉末の粒径は、質量の約９８％超が約１０μｍ以下の直径を有する粒子中にあり、質量の約９０％が５μｍ未満の直径を有する粒子中にあるようなものである。あるいは、質量の約９５％が１０μｍ未満の直径の粒子を有し、粒子の質量の約８０％が５μｍ未満の直径を有する。乾燥粉末組成物を、国際特許公開ＷＯ９１／１６０３８号（その開示は参照により組み込まれる）に開示されているような凍結乾燥及びジェットミリングにより調製することもできる。
【０２５２】
「分散性」又は「分散性の」という用語は、約１０重量％（％ｗ）未満、通常、約５％ｗ未満及び約３％ｗ未満の水分；約１．０〜５．０μｍの質量中央径（ＭＭＤ）、約１．０〜４．０μｍのＭＭＤ、及び約１．０〜３．０μｍのＭＭＤの粒径；約＞３０％、約＞４０％、約＞５０％、及び約＞６０％の送達用量；ならびに約１．０〜５．０μｍの空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）、約１．５〜４．５μｍのＭＭＡＤ、及び約１．５〜４．０μｍのＭＭＡＤのエアロゾル粒径分布を有する乾燥粉末を意味する。分散性を向上させるための方法及び組成物は、１９９５年４月１４日に出願された米国特許出願第０８／４２３，５６８号に開示されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５３】
「粉末」という用語は、自由流動性であり、かつ吸入装置中ですぐに分散した後、粒子が肺に達して肺胞に浸透するように対象により吸入されることができる微細分散した固体粒子からなる組成物を意味する。従って、粉末は「呼吸可能」であると言われる。好ましくは、この平均粒径は、直径約１０ミクロン（μｍ）未満であり、比較的均一な球状分布をしている。より好ましくは、この直径は約７．５μｍ未満であり、最も好ましくは約５．０μｍ未満である。通常、粒径分布は直径約０．１μｍから約５μｍであり、特に約０．３μｍから約５μｍである。
【０２５４】
「乾燥」という用語は、組成物が、粒子が吸入装置中ですぐに分散してエアロゾルを形成するような水分を有することを意味する。この水分は、通常、約１０重量％（％ｗ）未満であり、通常約５％ｗ未満であり、好ましくは約３％ｗ未満である。
【０２５５】
薬学的に許容される担体の量は、それを必要としている対象への組成物の均一な肺送達を確実にするために必要な安定性、分散性、粘稠度及び増量特性を提供するために必要とされる量である。数値的には、この量は、使用される薬物の活性に応じて、約０．０５％ｗから約９９．９５％ｗであることができる。好ましくは、約５％ｗから約９５％が用いられる。担体は、１つの薬学的賦形剤又は２以上の薬学的賦形剤の組合せであることができるが、通常、いかなる「浸透促進剤」も実質的に含まない。浸透促進剤は、粘膜又は粘膜内層からの薬物の浸透を促進し、鼻腔内、直腸内、及び膣内薬物製剤で用いることが提案される表面活性化合物である。例示的な浸透促進剤としては、胆汁塩、例えば、タウロコール酸塩、グリココール酸塩、及びデオキシコール酸塩；フシジン酸塩、例えば、タウロデヒドロフシジン酸塩；ならびに生体適合性洗浄剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ、Ｌａｕｒｅｔｈ−９などが挙げられる。しかしながら、肺の上皮血液関門がそのような表面活性化合物によって有害な影響を受けることがあるので、肺用製剤における浸透促進剤の使用は、通常、望ましくない。記載されている発明の乾燥粉末組成物は、浸透促進剤を用いる必要なく、肺ですぐに吸収される。
【０２５６】
肺送達用の担体として有用な薬学的賦形剤の種類としては、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの安定剤、炭水化物、アミノ酸及びポリペプチドなどの増量剤；ｐＨ調整剤又は緩衝剤；塩化ナトリウムなどの塩などが挙げられる。これらの担体は、結晶形態もしくは非晶質形態であってもよいし、又はこの２つの混合物であってもよい。
【０２５７】
肺送達に特に有用な増量剤としては、適合性の炭水化物、ポリペプチド、アミノ酸又はその組合せが挙げられる。好適な炭水化物としては、ガラクトース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどの単糖類；ラクトース、トレハロースなどの二糖類；２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン；ならびにラフィノース、マルトデキストリン、及びデキストランなどの多糖類；マンニトール、キシリトールなどのアルジトールが挙げられる。好ましい炭水化物群としては、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マルトデキストリン、及びマンニトールが挙げられる。好適なポリペプチドとしては、アスパルテームが挙げられる。アミノ酸としては、アラニン及びグリシンが挙げられ、グリシンが好ましい。
【０２５８】
噴霧乾燥時の立体構造安定性と粉末の分散性の向上のために、肺送達用の組成物の微量成分である添加剤を含めることができる。これらの添加剤としては、トリプトファン、チロシン、ロイシン、フェニルアラニンなどの疎水性アミノ酸が挙げられる。
【０２５９】
吸入又は吹送による送達のために、記載されている発明の組成物を、対象に単位投薬治療を提供するのに十分な量で好適な投薬レセプタクル内に入れる。投薬レセプタクルは、気流中に分散させてエアロゾルを形成させることにより乾燥粉末組成物をエアロゾル化するための好適な吸入装置内に嵌まり、治療を必要としている対象によるその後の吸入のために取り付けられたマウスピースを有するチャンバー内でこのように生成されたエアロゾルを捕捉するものである。このような投薬レセプタクルとしては、組成物を封入し、気体（例えば、空気）の流れを容器内に導いて乾燥粉末組成物を分散させるための取り外し可能な部分を有する、ゼラチン又はプラスチックカプセルなどの当該技術分野で公知の任意の容器が挙げられる。このような容器は、米国特許第４，２２７，５２２号；米国特許第４，１９２，３０９号；及び米国特許第４，１０５，０２７号に示されているものにより例示される。好適な容器としては、Ｇｌａｘｏ製のＶｅｎｔｏｌｉｎ（登録商標）Ｒｏｔｏｈａｌｅｒブランド粉末吸入器又はＦｉｓｏｎ製のＳｐｉｎｈａｌｅｒ（登録商標）ブランド粉末吸入器と組み合わせて用いられるものを挙げることもできる。優れた防湿バリアを提供する別の好適な単位用量容器は、アルミニウムホイルプラスチックラミネートから形成される。医薬品ベースの粉末を成形可能なホイルのくぼみに重量又は容量により充填し、カバー用のホイル−プラスチックラミネートで密閉する。粉末吸入装置とともに用いるためのこのような容器は、米国特許第４，７７８，０５４号に記載されており、Ｇｌａｘｏ製のＤｉｓｋｈａｌｅｒ（登録商標）とともに用いられる（米国特許第４，６２７，４３２号；第４，８１１，７３１号；及び第５，０３５，２３７号）。これらの参考文献は全て、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２６０】
記載されている発明の組成物を、液滴又はスプレー（例えば、鼻スプレー、エアロゾルスプレー、もしくはポンプスプレー）又は他の鼻投与（鼻腔内送達）用ビヒクルの形態で用いることができる。エアロゾルスプレー調製物を、炭化水素高圧ガスなどの好適な高圧ガスを含む加圧容器中に入れることができる。ポンプスプレーディスペンサーは、計量された用量又は特定の粒径もしくは小滴径を有する用量を分配することができる。単一用量のみ、又は複数用量を分配するために任意の分配装置を用意することができる。より一般的に、本発明の組成物、特に鼻腔内投与用に製剤化された組成物は、溶液、懸濁液、又は粘性組成物（例えば、ゲル、ローション、クリーム、もしくは軟膏）として提供することもできる。
【０２６１】
直腸組成物
記載されている発明の組成物は、組成物の直腸投与のために坐剤の形態であることができる。本明細書で用いられる「直腸」又は「直腸に」は、直腸壁から吸収が起こる直腸を通して体内に導入することを指す。これらの組成物は、通常の温度では固体であるが直腸内温度では液体であり、そのため直腸内で溶けて薬物を放出するココアバターやポリエチレングリコールなどの好適な非刺激性の賦形剤と薬剤とを混合することにより調製することができる。坐剤として製剤化する場合、本発明の組成物は、従来型の結合剤及び担体、例えば、トリグリセリドを用いて製剤化することができる。
【０２６２】
局所組成物
「局所」という用語は、適用の地点、又はその直下における本発明の組成物の投与を指す。「局所に適用する」という語句は、上皮表面を含む１以上の表面への適用を説明するものである。特に明記又は注記されない限り、局所投与は、経皮投与とは対照的に、本明細書で用いられるように、通常全身的効果ではなく局所的効果を提供するものであるが、局所投与及び経皮投与という用語は互換的に用いられる。本出願の目的のために、局所適用は、口内洗浄及びうがいを含むものとする。
【０２６３】
局所投与は、当該技術分野で周知の技術や方法に従って調製される経皮パッチ又はイオン導入装置などの経皮投与の使用を含むこともできる。「経皮送達系」、「経皮パッチ」又は「パッチ」という用語は、全身循環による分配に利用できるように投薬形態から皮膚を通過させることによって薬物を徐放性に投与するために皮膚上に置かれる接着剤系を指す。経皮パッチは、限定するものではないが、乗り物酔い用のスコポラミン、狭心症の治療用のニトログリセリン、高血圧用のクロニジン、閉経後症状用のエストラジオール、及び禁煙用のニコチンを含む、多種多様な医薬を送達するために用いられる十分に認められた技術である。
【０２６４】
記載されている発明で用いるのに好適なパッチとしては、（１）マトリクスパッチ；（２）貯蔵パッチ；（３）マルチラミネートの薬物含有接着剤パッチ；及び（４）モノリシックな薬物含有接着剤パッチが挙げられるが、これらに限定されない；Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  ａｎｄ  Ｔｏｐｉｃａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｐｐ．２４９−２９７（Ｔａｐａｓｈ  Ｋ．Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９９７）（これは参照により本明細書に組み込まれる）。これらのパッチは、当該技術分野で周知であり、通常、市販されている。
【０２６５】
担体及び他の構成要素
いくつかの実施形態では、記載されている発明の組成物は、溶媒、懸濁剤、結合剤、充填剤、滑沢剤、崩壊剤、及び湿潤剤／界面活性剤／可溶化剤から選択される賦形剤、ビヒクル又は担体とともに製剤化することができる。「賦形剤」、「ビヒクル」、又は「担体」という用語は、活性化合物と混合したときに、それを使用し易くするが、それと有害には反応しない物質を指す。「活性剤」という用語は、意図される治療効果に関与する記載されている発明の組成物の成分、構成要素又は構成成分を指す。担体は、治療される対象への投与に好適となるのに十分に純度が高く、かつ十分に毒性が低いものでなければならない。担体は不活性であることができるし、又はそれは薬学的利益を有することができる。
【０２６６】
担体は液体又は固体であることができ、所与の組成物の活性剤及び他の構成要素と組み合わせたときに、所望の嵩高さ、粘稠度などが提供されることを考慮して、計画された投与様式によって選択される。典型的な薬学的担体としては、結合剤（限定するものではないが、予めゼラチン化したトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む）；充填剤（限定するものではないが、ラクトース及び他の糖類、微結晶性セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート又はリン酸水素カルシウムを含む）；滑沢剤（限定するものではないが、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状（sollidal）二酸化ケイ素、ステアリン酸、ステアリン酸金属、水素化植物油、トウモロコシデンプン、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムを含む）；崩壊剤（限定するものではないが、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウムを含む）及び湿潤剤（限定するものではないが、ラウリル硫酸ナトリウムを含む）が挙げられるが、これらに限定されない。記載されている発明の組成物のためのさらなる好適な担体としては、水、塩溶液、アルコール、植物油、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、珪酸、粘性パラフィン、香油；脂肪酸モノグリセリド及びジグリセリド、ペトロエスラル（ｐｅｔｒｏｅｔｈｒａｌ）脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的調製物は、滅菌し、望ましければ、活性化合物と有害には反応しない補助剤、例えば、滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼすための塩、緩衝剤、着色剤、着香味物質及び／又は芳香物質などと混合することができる。
【０２６７】
本明細書で用いられる「薬学的に許容される担体」という用語は、活性のある構成要素が安定でかつ生物学的に利用可能であり続ける医薬を投与するために従来から有用な任意の実質的に無毒の担体を指す。いくつかの実施形態では、記載されている発明の組成物の薬学的に許容される担体としては、持続放出担体又は遅延放出担体などの放出薬剤が挙げられる。このような実施形態では、より効率的な投与を提供して、活性成分の投薬頻度の低下及び／又は投薬量の減少、取扱いやすさ、ならびに効果の延長又は遅延をもたらすために、担体は、レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤活性成分の持続放出又は遅延放出を可能にする任意の材料であることができる。このような担体の非限定的な例としては、天然及び合成ポリマーのリポソーム、マイクロスポンジ、マイクロスフェア、又はマイクロカプセルなどが挙げられる。リポソームをコレステロール、ステアリルアミン又はホスファチジルコリンなどの種々のリン脂質から形成させることができる。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、記載されている発明の組成物は、レプチン又はレプチン類似体及び任意の第２の治療剤により提供される薬学的効果の他に、別の薬学的効果を組成物に提供することを目的とした１以上の適合性の活性成分を更に含むことができる。本明細書で用いられる「適合性の」は、そのような組成物の活性成分を、通常の使用条件で各々の活性成分又は組成物の効力を大幅に低下させる相互作用がないような形で互いに組み合わせることができることを意味する。記載されている発明の別の態様では、組成物を、アミロイドペプチドの蓄積に起因する疾患、病気又は障害を治療するための他の組成物と連続して又は組み合わせて投与することもできる。例えば、限定するものではないが、このような他の組成物としては、モノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗β−アミロイド及びモノクローナル抗β−セクレターゼ）；ならびに抗炎症化合物（限定するものではないが、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えば、イブプロフェン、インドメタシン、及びフルルビプロフェンを含む）を挙げることができる。抗炎症化合物は、細胞培養及びＡＤ様アミロイドーシスのトランスジェニックモデルにおいてＡβ低下特性を導くことが示されている。
【０２６９】
活性物質の濃度は、その治療効果を発揮するが、当業者の範囲及び健全な判断の範囲内で顕著な副作用を避けるのに十分低いものとなるように選択される。組成物の有効量は、治療される生物学的対象の年齢及び健康状態、病気の重症度、治療の持続期間、併用療法の性質、用いられる特定の化合物、組成物又は他の活性成分活性成分、用いられる特定の担体、及び同様の因子とともに変わり得る。当業者は、このような因子を容易に評価することができ、かつこうした情報に基づいて、意図される目的のために用いられる記載されている発明の組成物の特定の有効濃度を決定することができる。更に、記載されている発明の治療適用では、組成物又は医薬品を、疾患、障害又は病気の発症におけるその合併症及び中間の病理学的表現型を含む、疾患、障害もしくは病気の症状を治癒させるか、又は少なくとも部分的に停止させるのに十分な量で、このような疾患、障害もしくは病気の疑いがあるか、これらを有するか、又は既にこれらに苦しんでいる患者に投与する。いくつかの方法では、記載されている発明の組成物の投与は、疾患、障害又は病気の特徴的病態をまだ発症していない患者における認知障害を低下させるか又は消失させる。
【０２７０】
治療的又は予防的治療を遂行するのに十分な量を、本明細書では治療有効用量と定義する。予防レジメンと治療レジメンの両方において、一定量の記載されている発明の組成物は、通常、十分な有益な応答が得られるまで数回の投薬量で投与される。典型的には、応答はモニタリングされ、応答が減弱し始める場合には繰り返し投薬が施される。当業者は、一定の強度の効果を生じさせる投薬単位（使用単位を意味する）の用量（本明細書では以後、「単位用量」と呼ぶ）を決定することにより本発明の組成物の薬学的有効量を決定することができる。「用量−強度関係」という用語は、個々のレシピエントにおける効果の強度が用量に関連する様式を指す。通常指定される効果の強度は、最大強度の５０％である。対応する用量は、５０％有効用量又は個別的ＥＤ50と呼ばれる。「個別的」という用語の使用により、本明細書で用いられる効果の強度に基づくＥＤ50と、集団の応答頻度のデータから決定される半有効用量（ＥＤ50とも略される）とが区別される。本明細書で用いられる「効力」は、所望の応答を達成する記載されている発明の組成物の特性を指し、「最大効力」は、最大限達成可能な効果を指す。特定の障害又は状態の治療において有効となる記載されている発明の組成物中の化合物の量は、その障害又は状態の性質よって決まり、標準的な臨床的技術により決定することができる（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＢＡＳＩＳ  ＯＦ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ，Ｊｏｅｌ  Ｇ．Ｈａｒｍａｎ，Ｌｅｅ  Ｅ．Ｌｉｍｂｉｒｄ，Ｅｄｓ．；ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；ＴＨＥ  ＰＨＹＳＩＣＩＡＮ’Ｓ  ＤＥＳＫ  ＲＥＦＥＲＥＮＣＥ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．，Ｏｒａｄｅｌｌ，Ｎ．Ｊ．，１９９５；及びＤＲＵＧ  ＦＡＣＴＳ  ＡＮＤ  ＣＯＭＰＡＲＩＳＯＮＳ，ＦＡＣＴＳ  ＡＮＤ  ＣＯＭＰＡＲＩＳＯＮＳ，ＩＮＣ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，１９９３を参照されたい）。製剤中で用いられる正確な用量は、投与の経路、及び疾患又は障害の重症度によっても決まり、医師の判断及び各々の患者の状況によって決定されるべきである。様々な投与パターンが当業者には明白であろう。
【０２７１】
記載されている発明の組成物の投与のための投薬量範囲は、所望の治療効果を生じさせるのに十分な大きさのものである。治療有効量の記載されている発明の組成物を定期的に１日１回又は複数回投与することができる。対象に投与される典型的な用量は、組成物約０．０００１ｍ／ｋｇ（体重）／日から組成物約１０ｇ／ｋｇ（体重）／日である。例えば、限定するものではないが、組成物の最小用量は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００２ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００６ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００７ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００８ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００９ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０７５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０８ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１７５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．２ｍｇ／ｋｇ／日、約０．２２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．２７５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．３ｍｇ／ｋｇ／日、約０．３２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．３５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．３７５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．４５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．４７５ｍｇ／ｋｇ／日、又は約０．５ｍｇ／ｋｇ／日と考えられ、最大用量は、約１０ｇ／ｋｇ／日、約９ｇ／ｋｇ／日、約８ｇ／ｋｇ／日、約７ｇ／ｋｇ／日、約６ｇ／ｋｇ／日、約５ｇ／ｋｇ／日、約４ｇ／ｋｇ／日、約３ｇ／ｋｇ／日、約２ｇ／ｋｇ／日、約１ｇ／ｋｇ／日、約０．５ｇ／ｋｇ／日、約０．２ｇ／ｋｇ／日、約０．１７５ｇ／ｋｇ／日、約０．１５ｇ／ｋｇ／日、約０．１２５ｇ／ｋｇ／日、約０．１ｇ／ｋｇ／日、約０．０８ｇ／ｋｇ／日、約０．０７５ｇ／ｋｇ／日、約０．０５ｇ／ｋｇ／日、約０．０２５ｇ／ｋｇ／日、又は約０．０１ｇ／ｋｇ／日と考えられる。ヒトにおける本発明のいくつかの実施形態では、用量は、組成物約０．０００１ｍｇから約１０ｇ／ｋｇ（体重）／日であることができ、ヒトにおける他の実施形態では、組成物０．０００１ｇから１０ｇ／ｋｇ（体重）／日であることができる。
【０２７２】
記載されている発明のさらなる組成物を、当該技術分野で公知の技術、例えば、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ  ｏｆ  Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａにより出版されている、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版又は第１９版（これは参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている技術を用いて容易に調製することができる。
【０２７３】
本方法の別の実施形態によれば、本方法は、薬物物質を目的の部位に送達するためにゲル、徐放性固体又は半固体形態のレプチン組成物を患者に外科的に埋め込むか又は注射する工程を含む。このレプチン組成物はその部位に特異的に（局所的に）送達されるので、進行性認知障害を治療するのに必要とされる投薬量は、より多い全身用量の投与を妨げる可能性がある任意の毒性を低下させるか、予防するか又は回避することができる。
【０２７４】
制御放出系
記載されている発明のレプチン組成物を制御放出系に含めることができる。薬物の効果を延長するために、多くの場合、皮下、髄腔内、又は筋肉内注射からの薬物の吸収を遅らせることが望ましい。これは、水にあまり溶けない結晶材料又は非晶質材料の液体懸濁液を用いることにより達成することができる。従って、薬物の吸収速度はその溶解速度によって決まり、この溶解速度が、今度は、結晶の大きさ及び結晶の形態によって決まり得る。
【０２７５】
「制御放出」という用語は、製剤からの薬物放出の様式及びプロファイルが制御される任意の薬物含有製剤を指すことを意図している。これは、即時及び非即時放出製剤を指し、非即時放出製剤には、持続放出製剤及び遅延放出製剤が含まれるが、これらに限定されない。「持続放出」（「延長放出」とも呼ばれる）という用語は、長時間かけて薬物を徐々に放出させる薬物製剤であって、必ずではないが、好ましくは長時間にわたって実質的に一定の血中薬物レベルをもたらす薬物製剤を指すために本明細書においてその従来的な意味で用いられる。あるいは、非経口投与される薬物形態の遅延吸収は、薬物を油ビヒクルに溶解又は懸濁することによって達成される。「遅延放出」という用語は、製剤の投与とそれからの薬物の放出との間に時間遅延がある薬物製剤を指すために本明細書においてその従来的な意味で用いられる。「遅延放出」は、長時間かけて薬物を徐々に放出させることを含んでも含まなくてもよく、従って、「持続放出」であってもなくてもよい。
【０２７６】
長時間持続放出インプラントの使用は、慢性疾患の治療に特に好適であり得る。本明細書で用いられる「長時間放出」という用語は、インプラントが、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約３０日間、少なくとも約４５日間、約６０日まで、治療レベルの活性成分を送達するように構築され、配置されることを意味する。長時間持続放出インプラントは当業者に周知であり、上記の放出系のいくつかを含む。
【０２７７】
別の実施形態によれば、記載されている発明の薬学的に許容される担体には、持続放出担体又は遅延放出担体が含まれる。担体は、より効率的な投与を提供して、化合物の投薬頻度の低下及び／又は投薬量の減少、取扱いやすさ、ならびに上皮関連疾患に対する効果の延長又は遅延をもたらすために、化合物の持続放出又は遅延放出を可能にする任意の材料であることができる。
【０２７８】
当業者は、本発明の組成物の適切な治療投薬量の初回表示を、インビトロやインビボの動物モデル系において、及びヒト臨床試験において決定することができることを認識するであろう。当業者であれば、動物研究やヒトでの経験を用いて、毒性又は他の副作用を発生させることなく安全に投与することができる投薬量を同定することを知っているであろう。急性治療については、治療投薬量が最大認容用量に近いことが好ましい。慢性的な予防的使用については、長期にわたる影響が懸念されるので、より低い投薬量が望ましい場合がある。
【０２７９】
記載されている発明の組成物及び方法の有効性を種々のプロトコルによりアッセイすることができる。ヒト対象において認知機能を増加させる効果は、当業者にとってルーチンの方法によって決定することができ、これらの方法には、筆記試験とコンピュータによる試験の両方が含まれるが、これらに限定されない。当業者は、動物モデルにおけるアミロイドペプチド蓄積レベル、神経原線維のもつれ形成及び神経変性を直接測定することもできる。更に、アミロイドペプチドを、脊髄穿刺により得られた対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）の試料中で測定することができる。アミロイドペプチドの蓄積の１つの尺度は、対象の血液中に循環するレベルの増加である。このようなレベルは、一方は捕捉用で、もう一方は検出用の一対の抗体を用いて、サンドイッチ酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により測定することができる。これらの方法は当業者に周知である。
【０２８０】
ＩＩＩ．薬物発見
ＡＤ病理生物学ではレプチンによって誘発される代謝経路に関する研究がほとんどないので、記載されている発明は、代謝ストレスセンサーとして生理的に機能する５−アデノシン一リン酸タンパク質キナーゼ（ＡＭＰＫ）が、タウリン酸化及びＡβ放出を低下させるレプチンの能力を仲介するという発見を利用して、ＮＦＴ又はＡβの蓄積に起因する進行性の認知機能不全疾患又は障害の治療に関連する薬物発見方法を更に提供する。
【０２８１】
（１）．認知機能不全疾患又は障害を治療又は予防するための治療剤の同定方法
別の態様によれば、記載されている発明は、Ａβ蓄積、タウ過剰リン酸化、又はＮＦＴ蓄積のうちの少なくとも１つに起因する進行性の認知機能不全疾患又は障害を治療又は予防するための有効な治療剤を同定するための方法であって、
ａ）神経細胞を含む細胞培養物を準備する工程；  
ｂ）神経細胞を含む細胞培養物を候補治療剤と接触させる工程；
ｃ）候補治療剤が接触したＡＭＰＫタンパク質の活性に影響を及ぼす程度に、候補治療剤がＡＭＰＫタンパク質の活性部分と会合するかどうかを決定する工程；及び
ｄ）対照と比べた培養液中の神経細胞によるアミロイドβの分泌を測定することにより、候補治療剤を、Ａβ蓄積、タウ過剰リン酸化、又はＮＦＴ蓄積のうちの少なくとも１つに起因する進行性の認知機能不全疾患又は障害を治療するための有効な治療剤として同定する工程、を含む方法を提供する。
【０２８２】
一実施形態によれば、進行性の認知機能不全は、神経原線維のもつれの蓄積に起因する。別の実施形態によれば、進行性の認知機能不全は、アミロイドβの蓄積に起因する。
【０２８３】
いくつかの実施形態によれば、Ａβ蓄積、タウ過剰リン酸化、又はＮＦＴ蓄積のうちの少なくとも１つに起因する進行性の認知疾患又は障害としては、アルツハイマー病、進行性核上まひ；認知症；ボクサー認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；前頭側頭認知症；ピック病；ＦＴＤＰ−１７、大脳皮質基底核変性症を含む、他のタウ陽性病態；前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）；及び特徴的な組織構造を欠く認知症が挙げられるが、これらに限定されない。別の実施形態によれば、進行性認知障害はアルツハイマー病である。別の実施形態によれば、進行性認知障害は進行性核上まひである。別の実施形態によれば、進行性認知障害は認知症である。別の実施形態によれば、進行性認知障害はボクサー認知症である。別の実施形態によれば、進行性認知障害はクロイツフェルト・ヤコブ病である。別の実施形態によれば、進行性認知障害は前頭側頭認知症である。別の実施形態によれば、進行性認知障害はピック病である。別の実施形態によれば、進行性認知障害はＦＴＤＰ−１７大脳皮質基底核変性症である。別の実施形態によれば、進行性認知障害は前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）である。別の実施形態によれば、進行性認知障害は特徴的な組織構造を欠く認知症である。
【０２８４】
別の実施形態によれば、候補治療剤は、ＡＭＰＫタンパク質を阻害するのに十分な量である。別の実施形態によれば、候補治療剤は、約１ｎｇ／ｍｌから約１００μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約２５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約７５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約１００ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約２５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約５００ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約７５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約１μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約２５μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約５０μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約７５μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤は約１００μｇ／ｍｌの量である。
【０２８５】
別の実施形態によれば、候補治療剤は組換えタンパク質である。別の実施形態によれば、組換えタンパク質である候補治療剤は、組換えＤＮＡにより発現される。本明細書で用いられる「発現される」という用語は、遺伝子からの遺伝情報、例えば、ＤＮＡ配列が機能的な遺伝子産物にされる過程を指す。組換えＤＮＡ（ｒＤＮＡ）は、通常インビトロで、２つの相同でないＤＮＡ分子を連結することにより形成されるＤＮＡ配列である。いくつかの実施形態によれば、組換えタンパク質はＡＭＰＫと関連するタンパク質である。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質はＡＭＰＫの阻害剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質はＡＭＰＫアンタゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質はＡＭＰＫアゴニストである。
【０２８６】
別の実施形態によれば、候補治療剤は阻害剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、阻害剤はＡＭＰＫ阻害剤である。別の実施形態によれば、候補治療剤はアンタゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤はＡＭＰＫアンタゴニストである。
【０２８７】
いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストを、機能的アンタゴニストアッセイを用いて同定することができる。機能的アンタゴニストアッセイでは、用量応答曲線を構築して、アゴニスト活性の逆転に対する様々なアンタゴニスト濃度の効果を調べることにより、薬物のＩＣ50を決定することができる。アゴニストの最大生物学的応答の半分を阻害するのに必要とされる濃度を決定することにより、ＩＣ50値を所与のアンタゴニストについて決定することができる。ＩＣ50値は測定される条件に左右される。一般に、ＩＣ50値は酵素濃度が増加するにつれて増加し、阻害剤の濃度が高ければ高いほど、そのアゴニスト活性はより低くなる。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５μＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１０μＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１μＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５ｎＭである。
【０２８８】
いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストを、競合結合アッセイを用いて同定することができる。競合結合アッセイでは、単一濃度の放射性リガンド（通常、アゴニスト）を各々のアッセイウェル中で用いる。リガンドは、低い濃度、通常、その解離定数（Ｋｄ）値又はそれ未満で用いられる。次いで、様々な濃度の他の競合する非放射性活性化合物（通常、アンタゴニスト）が放射性リガンドの結合を阻害する効力を測定するために、これらの非放射性活性化合物の存在下で、放射性リガンドの特異的結合のレベルを決定する。競合曲線は、計算により、直接当てはめを使って説明されるロジスティック関数に当てはめることもできる。この状況では、ＩＣ50は、放射性リガンドの特異的結合の５０％に取って代わる競合リガンドの濃度である。ＩＣ50値は、チェン−プルソフの方程式Ｋｉ＝（（ＩＣ50）／（１＋（［Ｓ］／Ｋｍ）））（式中、Ｋｉは阻害剤の結合親和性、ＩＣ50は阻害剤の機能強度、［Ｓ］は基質濃度、Ｋｍは酵素に対する基質の親和性である）を用いて絶対阻害定数（Ｋｉ）に変換される。化合物のＩＣ50値は、放射性リガンド濃度によって、実験ごとに異なり得るが、Ｋｉは絶対値である。Ｋｉは薬物の阻害定数であり、放射性リガンドが存在しなければ受容体の５０％を占める、競合アッセイにおける競合リガンドの濃度である。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５μＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１０μＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１μＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５ｎＭである。
【０２８９】
別の実施形態によれば、候補治療剤はアゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、候補治療剤はＡＭＰＫアゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、ＡＭＰＫアゴニストはＡＩＣＡＲペプチドミメティックである。アゴニストアッセイ及び刺激物質アッセイについて、最も一般的な要約尺度はＥＣ50である。アゴニストの効力は、その半最大有効濃度（ＥＣ50）に逆相関する。濃度測定値は、通常、シグモイド曲線に従い、比較的小さな濃度変化で急速に増加する。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＥＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＥＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＥＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＥＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＥＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＥＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１μＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＥＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１０μＭである。いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストのＥＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５μＭである。
【０２９０】
別の実施形態によれば、候補治療剤は抗体である。いくつかのそのような実施形態によれば、抗体は、ＡＭＰＫに対する抗体である。別の実施形態によれば、工程（ｃ）における対照と比べた培養液中の神経細胞によるアミロイドβの分泌の測定は、ＥＬＩＳＡアッセイによるものである。別の実施形態によれば、工程（ｃ）における対照と比べた培養液中の神経細胞によるアミロイドβの分泌の測定は、イムノブロットによるものである。
【０２９１】
別の実施形態によれば、本方法は、アミロイドβ病態を治療するための有効な治療剤を用いる工程を更に含む。
【０２９２】
そのような一実施形態によれば、アミロイドβ（Ａβ）病態は、アルツハイマー病である。いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は、ＡＰＰ、プレセニリン１（ＰＳ１）又はプレセニリン２（ＰＳ２）遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。
【０２９３】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は、Ａβ42のタンパク質分解の変化を含む。
【０２９４】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は、脳間質液における進行性のＡβ42の蓄積及び凝集を含む。
【０２９５】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は、びまん性斑としての凝集したＡβ42の沈着を含む。いくつかのそのような実施形態によれば、沈着は、プロテオグリカン及び他のアミロイド促進基質を更に含む。
【０２９６】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は、びまん性Ａβ４２斑へのＡβ40の凝集を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は、特定の斑関連タンパク質の発生を含む。
【０２９７】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は炎症応答を含む。いくつかのそのような実施形態によれば、炎症応答は、ミクログリア活性化、サイトカイン放出、星状細胞増加、及び急性期タンパク質放出のうちの少なくとも１つである。
【０２９８】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は進行性の神経損傷を含む。いくつかのそのような実施形態では、進行性神経損傷はアミロイド斑の内部にある。いくつかのそのような実施形態では、進行性神経損傷は、アミロイド斑の内部及び神経網の別の場所にある。
【０２９９】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態はニューロンの代謝恒常性の混乱を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態はイオン恒常性の混乱を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は酸化損傷を含む。
【０３００】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は、ＰＨＦ形成をもたらす過剰リン酸化タウを引き起こす少なくとも１つのキナーゼ／ホスファターゼ活性の変化を含む。
【０３０１】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤの病態は、進行性の神経伝達物質欠損を伴う海馬及び大脳皮質における広範囲のニューロン／神経突起の機能不全及び死を含む。
【０３０２】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は認知症を含む。
【０３０３】
いくつかの実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は皮質領域に影響を及ぼす。いくつかのそのような実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は神経ジストロフィーを含む。いくつかのそのような実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態はシナプス喪失を含む。いくつかのそのような実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態はニューロン周核体の収縮を含む。いくつかのそのような実施形態によれば、ＡＤのアミロイドβ病態は選択的なニューロン喪失を含む。
【０３０４】
別の実施形態によれば、Ａβ病態はハンチントン病である（ＭｃＧｏｗａｎ，ＤＰ，ｅｔ  ａｌ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １００（４）：６７７−８０（２０００））。ハンチントン病（舞踏病）は、筋協調及びいくつかの認知機能に影響を及ぼす神経変性障害である。身体検査は、心理検査と組み合わされることもあるが、これにより、疾患の発症が始まったかどうかを決定することができる。多くの場合、体の任意の部分の過剰な意図的でない動きが、医師に相談を求める理由である。これらが突然に起こり、タイミングや分布がランダムである場合、これは、ＨＤの診断を意味する。認知症状又は精神症状が最初に診断されることは稀である。これらの症状は、通常、後になって又は更に進んだときに初めて認識される。運動、行動、認知、及び機能の評価に基づく全体的な評価システムを提供する統合ハンチントン病評価尺度を用いて、疾患がどこまで進行しているかを測定することができる。コンピュータ断層撮影（ＣＴ）や磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）などの医用画像診断は、通常、かなり進んだ疾患段階における目に見える脳の萎縮を示す。ｆＭＲＩやＰＥＴなどの機能的な神経画像診断技術は、身体症状が出る前に脳活動の変化を示すことができる。最も特徴的な初期身体症状は、舞踏病と呼ばれる、痙攣性の、ランダムな、制御できない動きである。舞踏病は、初期には、全身的な落ち着きのなさ、非意図的に始まるかもしくは完了しない小さな動き、協調の欠如、又は鈍くなった衝動性眼球運動として表れる。これらのちょっとした運動異常は、通常、より明白な運動機能不全の徴候の少なくとも３年前に起こる。障害が進むにつれて、硬直、身もだえするような動き又は異常姿位などの症状がはっきりと現われる。これらは、運動に関与する脳のシステムに影響が及んでいる徴候である。精神運動機能が次第に損なわれるようになり、その結果、筋肉制御を必要とするいかなる行動にも影響が及ぶ。共通する結果は、身体的不安定、異常な顔つき、ならびに咀嚼、嚥下及び会話の困難である。摂食困難は、一般に、体重減少をもたらし、栄養失調に至ることもある。睡眠障害も関連症状である。若年性ＨＤは、進行がより速く、舞踏病は、あったとしても短く表れ、硬直が主な症状であるという点で、これらの症状とは異なる。発作もまた、この形態のＨＤの一般的な症状である。認知能力は進行性に損なわれる。特に影響を受けるのは、計画、認知の柔軟性、抽象的思考、規則獲得、適切な行為の開始、及び不適切な行為の抑制を含む実行機能である。疾患が進むにつれて、記憶障害が現われる傾向がある。報告されている機能的障害に範囲は、短期の記憶障害から長期の記憶困難にまで及び、これには、エピソード記憶（生活の記憶）、手続記憶（活動の仕方に関する体の記憶）及び作業記憶の障害も含まれる。認知的問題は、時間が経つとともにより悪くなる傾向があり、最終的には、認知症に至る。この障害パターンは、アルツハイマー病などの「皮質認知症」の典型的な効果から切り離すために「皮質下認知症」症候群と呼ばれている。
【０３０５】
別の実施形態によれば、Ａβ病態はパーキンソン病である（例えば、Ｃｏｎｗａｙ，ＫＡ，ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３９：  ２５５２−６３（２０００）；Ｈａｒｄｙ，Ｊ．及びＳｅｌｋｏｅ，ＤＪ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９７：３５３−５６（２００２）を参照されたい）。パーキンソン病（ＰＤ）は中枢神経系の変性障害である。ＰＤは運動に影響を及ぼし、運動症状をもたらす。非運動症状としては、自律神経機能不全、認知の問題及び神経行動学的な問題、ならびに感覚障害及び睡眠困難が挙げられる。ＰＤの４つの主な症状としては、振戦、固縮、寡動及び無動、姿勢の不安定が挙げられる。さらなる症状としては、反応時間の低下、実行機能不全、認知症、及び短期記憶喪失が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０６】
別の実施形態によれば、有効な治療剤は、ＡＭＰＫタンパク質を阻害するのに十分な量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は、約１ｎｇ／ｍｌから約１００μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約２５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約７５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約１００ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約２５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約５００ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約７５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約１μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約２５μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約５０μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約７５μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤は約１００μｇ／ｍｌの量である。
【０３０７】
別の実施形態によれば、有効な治療剤は組換えタンパク質である。いくつかの実施形態によれば、組換えタンパク質はＡＭＰＫと関連するタンパク質である。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質はＡＭＰＫの阻害剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質はＡＭＰＫアゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質はＡＭＰＫアンタゴニストである。
【０３０８】
別の実施形態によれば、有効な治療剤は阻害剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤はＡＭＰＫ阻害剤である。
【０３０９】
別の実施形態によれば、有効な治療剤はアンタゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤はＡＭＰＫアンタゴニストである。
【０３１０】
いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストを、機能的アンタゴニストアッセイを用いて同定することができる。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１０μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５ｎＭである。
【０３１１】
いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストを、競合結合アッセイを用いて同定することができる。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１０μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５ｎＭである。
【０３１２】
別の実施形態によれば、有効な治療剤はアゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤はＡＭＰＫアゴニストである。
【０３１３】
別の実施形態によれば、有効な治療剤は抗体である。いくつかのそのような実施形態によれば、有効な治療剤はＡＭＰＫに対する抗体である。
【０３１４】
別の実施形態によれば、有効な治療剤は少なくとも１つのＡＭＰＫ機能を阻害する。
【０３１５】
（２）．タウリン酸化のエフェクターの同定方法
ＮＦＴはＡＤの顕著な特徴であり、重合して直線状のＰＨＦになる過剰リン酸化タウタンパク質から主に構成される。タウタンパク質は、通常、可溶性が高く、ニューロンの微小管動態を調節するように機能する。タウの機能は、通常、制御されたリン酸化と脱リン酸化を介してモジュレートされるが、タウリン酸化の病的な脱調節は、ＡＤにおける認知症と相関すると考えられており、更に、重合とＮＦＴ形成に先立つようである。タウは多くのキナーゼによって容易にリン酸化されるが、ＡＤにおけるタウの過剰リン酸化に関与するキナーゼは同定されていない。
【０３１６】
グリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）は、特定の細胞基質中の特定のセリン及びスレオニンアミノ酸へのリン酸分子の付加を仲介する構成的活性型のプロリン指向性セリン／スレオニンキナーゼである。一般に、ＧＳＫ−３βがリン酸化を介してこれらの基質を阻害すると考えられている。ほとんどのＧＳＫ−３β基質は負の調節を受けており、この負の調節は、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）及びタンパク質キナーゼＢ（Ａｋｔ）などの他のキナーゼによるＳｅｒ９リン酸化によって緩和される。
【０３１７】
異常に重合されることに加えて、タウはＡＤ病態において過剰リン酸化されることが示されている。ＧＳＫ−３βが役割を果たしている可能性があるものの、過剰リン酸化タウがどのようにして生成されるかは分かっていない。
【０３１８】
別の態様によれば、記載されている発明は、タウリン酸化の少なくとも１つのエフェクターを同定するための方法であって、
ａ）神経細胞を含む細胞培養物を準備する工程；  
ｂ）細胞培養物をエフェクター候補と接触させる工程；
ｃ）エフェクター候補が接触したＧＳＫ−３βタンパク質の活性に影響を及ぼす程度に、エフェクター候補がＧＳＫ−３βタンパク質の活性部分と会合するかどうかを決定する工程；及び
ｄ）対照と比べた培養液中の神経細胞によるＧＳＫ−３βタンパク質活性を測定することにより、エフェクター候補を、タウリン酸化のエフェクターとして同定する工程、を含む方法を提供する。
【０３１９】
一実施形態によれば、エフェクターは、ＧＳＫ−３βタンパク質を阻害するのに十分な量である。別の実施形態によれば、エフェクターは、約１ｎｇ／ｍｌから約１００μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約２５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約７５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約１００ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約２５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約５００ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約７５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約１μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約２５μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約５０μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約７５μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターは約１００μｇ／ｍｌの量である。
【０３２０】
別の実施形態によれば、エフェクターは組換えタンパク質である。いくつかの実施形態によれば、組換えタンパク質は、ＧＳＫ−３βと関連するエフェクターである。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質は、ＧＳＫ−３βを阻害するエフェクターである。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質は、ＧＳＫ−３βのアゴニストであるエフェクターである。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質は、ＧＳＫ−３βのアンタゴニストであるエフェクターである。
【０３２１】
別の実施形態によれば、エフェクターは阻害剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターはＧＳＫ−３βの阻害剤である。
【０３２２】
別の実施形態によれば、エフェクターはアンタゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターはＧＳＫ−３βアンタゴニストである。
【０３２３】
いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストを、機能的なアンタゴニストアッセイを用いて同定することができる。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１０μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５ｎＭである。
【０３２４】
いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストを、競合結合アッセイを用いて同定することができる。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１０μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５ｎＭである。
【０３２５】
別の実施形態によれば、エフェクターはアゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターはＧＳＫ−３βアゴニストである。
【０３２６】
別の実施形態によれば、エフェクターは抗体である。いくつかのそのような実施形態によれば、エフェクターはＧＳＫ−３βに対する抗体である。
【０３２７】
別の実施形態によれば、同定する工程（ｃ）はＥＬＩＳＡアッセイによるものである。別の実施形態によれば、同定する工程（ｃ）はイムノブロットによるものである。
【０３２８】
（４）．レプチン遮断薬を同定するための方法
合成ペプチドは、タンパク質−ペプチド相互作用がどこで生じるかを理解するためのプローブとして用いることができる。阻害ペプチド（遮断薬）は、タンパク質キナーゼ、癌タンパク質及び他の障害の阻害に対するペプチドの効果を調べるための臨床研究で用いることができる。
【０３２９】
例えば、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）である、ＭＡＰＫタンパク質キナーゼ［細胞外刺激（抗原）に応答し、様々な細胞活性を調節する一群のタンパク質セリン／スレオニンキナーゼのいずれかを意味する］は、細胞の増殖及び分化に不可欠である。ＭＡＰＫの活性化は、ＭＡＰＫが上流のＭＡＰＫＫ（ＭＥＫ）によってリン酸化され、今度は、このＭＡＰＫＫ（ＭＥＫ）が、第３のキナーゼであるＭＡＰＫＫＫ（ＭＥＫＫ）によってリン酸化されるカスケード機構を必要とする。ＭＥＫ１のアミノ末端の１３個のアミノ酸を含有し、ＥＲＫに結合するＭＡＰＫは、ＥＲＫに結合することにより、ＭＥＫデコイとして機能する。ＥＲＫはＭＥＫと相互作用することができないので、ＭＡＰＫ結合は、ＭＥＫによるＥＲＫ活性化を遮断する。
【０３３０】
オートカムチド−２関連阻害ペプチド（ＡＩＰ）は、遮断ペプチドの別の例である。この合成ペプチドは、Ｃａ2+／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）の極めて特異的でかつ強力な阻害剤である。ＡＩＰは、ＣａＭＫＩＩの極めて選択的なペプチド基質である、オートカムチド−２のリン酸化されない類似体である。ＡＩＰは、１００ｎＭのＩＣ50でＣａＭＫＩＩを阻害する（ＩＣ50は、５０％阻害を得るために必要とされる阻害剤濃度である）。ＡＩＰ阻害は、シンチド−２（ＣａＭＫＩＩペプチド基質）及びＡＴＰに対して非競合的であるが、オートカムチド−２に対しては競合的である。ＡＩＰ阻害は、Ｃａ2+／カルモジュリンの有無によって影響されない。ＣａＭＫＩＩ活性は、１μＭのＡＩＰによって完全に阻害される。ＰＫＡ、ＰＫＣ及びＣａＭＫＩＶは影響されない。
【０３３１】
サイクリン依存性キナーゼ５（Ｃｄｋ５）阻害ペプチド（ＣＩＰ）は、遮断ペプチドの別の例である。Ｃｄｋ５は、ｐ２５調節成分と会合すると、アルツハイマー病（ＡＤ）に特異的なホスホエピトープでタウをリン酸化する。ｐ２５は、Ｃｄｋ−ｐ２５ヘテロ二量体（微小管関連タンパク質）の切断型のアクチベーターであり、これは、アミロイドβペプチドに曝露されたときに生理的なＣｄｋ５アクチベーターのｐ３５から生成される。  ＣＩＰは、ｐ２５／Ｃｄｋ５活性を選択的に阻害し、皮質ニューロンにおける異常なタウリン酸化を抑制する。ＣＩＰによって示される特異性の理由は完全には分かっていない。
【０３３２】
さらなる遮断ペプチドが、ＥＲＫ２、ＥＲＫ３、ｐ３８／ＨＯＧ１、タンパク質キナーゼＣ、カゼインキナーゼＩＩ、Ｃａ2+／カルモジュリンキナーゼＩＶ、カゼインキナーゼＩＩ、Ｃｄｋ４、Ｃｄｋ５、ＤＮＡ−ＰＫ、ＰＡＫ３、ＰＩ−３キナーゼ、ＰＩ−５キナーゼ、ＰＳＴＡＩＲＥ、リボソームＳ６キナーゼ、ＧＳＫ−４、ＧＣＫ、ＳＡＰＫ、ＳＥＫ１、及びＦＡＫについて同定されている。
【０３３３】
別の態様によれば、記載されている発明は、レプチンの遮断薬を同定するための方法であって、
（ａ）神経細胞を含む細胞培養物を準備する工程；  
（ｂ）細胞培養物中の神経細胞をレプチン又はレプチン類似体と接触させる工程；
（ｃ）細胞培養物中の神経細胞をレプチンの候補遮断薬と接触させる工程、ここで、この候補遮断薬は、レプチン又はレプチン類似体の活性部分と会合する、及び
（ｄ）神経細胞のＧＳＫ−３β活性を測定することにより、候補遮断薬を活性のあるレプチン遮断薬として同定する工程、を含む方法を提供する。
【０３３４】
一実施形態によれば、遮断薬はレプチンを阻害するのに十分な量である。別の実施形態によれば、遮断薬は約１ｎｇ／ｍｌから約１００μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約２５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約７５ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約１００ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約２５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約５００ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約７５０ｎｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約１μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約２５μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約５０μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約７５μｇ／ｍｌの量である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は約１００μｇ／ｍｌの量である。
【０３３５】
別の実施形態によれば、遮断薬は組換えタンパク質である。いくつかの実施形態によれば、組換えタンパク質はレプチンと関連する遮断薬である。くつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質はレプチンを阻害する遮断薬である。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質は、レプチンのアゴニストである遮断薬である。いくつかのそのような実施形態によれば、組換えタンパク質は、レプチンのアンタゴニストである遮断薬である。
【０３３６】
別の実施形態によれば、遮断薬は阻害剤である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬はレプチンの阻害剤である。
【０３３７】
別の実施形態によれば、遮断薬はアンタゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬はレプチンアンタゴニストである。
【０３３８】
いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストを、機能的アンタゴニストアッセイを用いて同定することができる。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１０μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５ｎＭである。
【０３３９】
いくつかの実施形態によれば、アンタゴニストを競合結合アッセイを用いて同定し得る。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１０μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１μＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約１００ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約５０ｎＭである。いくつかの実施形態によれば、同定されたアンタゴニストのＩＣ50値は、約０．００１ｎＭから約２５ｎＭである。
【０３４０】
別の実施形態によれば、遮断薬はアゴニストである。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬はレプチンアゴニストである。
【０３４１】
別の実施形態によれば、遮断薬は抗体である。いくつかのそのような実施形態によれば、遮断薬は、レプチン又はレプチン類似体に対する抗体である。
【０３４２】
別の実施形態によれば、工程（ｄ）における神経細胞のＧＳＫ−３β活性の測定は、ＥＬＩＳＡアッセイによるものである。別の実施形態によれば、工程（ｄ）における神経細胞のＧＳＫ−３β活性の測定は、イムノブロットによるものである。
【０３４３】
特に定義されない限り、本明細書で用いられる全ての科学用語及び技術用語は、本発明が属する当業者が共通に理解するものと同じ意味を有する。本明細書に記載される方法及び材料と同様又は同等の方法及び材料はいずれも、記載されている発明の実施又は試験において用いることができるが、ここでは好ましい方法及び材料を記載する。本明細書に記載される全ての刊行物は、それらの刊行物に関連させて引用された方法及び／又は材料を開示し記載するために、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３４４】
ある範囲の値が与えられる場合、その範囲の上限と下限との間にある各々の値（文脈によって別途明確に指示されない限り、下限の単位の１０分の１まで）、及びその記述された範囲内の任意の他の記述された又は間にある値は、本発明の範囲内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限及び下限は、記述された範囲で具体的に排除された何らかの限界を条件として、そのより小さい範囲内に独立して含まれることができ、それもまた本発明の範囲内に包含される。記述された範囲が一方又は両方の限界を含む場合、そのいずれか又は両方の限界を排除した範囲も本発明に含まれる。
【０３４５】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で用いられる場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈によって別途明確に指示されない限り、複数の指示物を含むことに留意しなければならない。本明細書で用いられる全ての科学用語及び技術用語は同じ意味を有する。
【０３４６】
本明細書で論じられる刊行物は、本出願の出願日以前のそれらの開示のためにのみ提供される。本明細書中のいかなる内容も、記載されている発明が、先行発明を理由に、このような刊行物に先行する資格を与えられないという承認と見なされるべきではない。更に、提供された公開日は、実際の公開日と異なる場合があり、この実際の公開日については、独立に確認する必要があり得る。
【０３４７】
記載されている発明を、その精神又は本質的な属性を逸脱することなく、他の特定の形態で具体化することができる。従って、本発明の範囲を指示するものとして、前述の明細書よりもむしろ付随する特許請求の範囲を参照すべきである。
【実施例】
【０３４８】
以下の実施例は、当業者に、記載されている発明を製造し、使用する方法についての完全な開示及び説明を与えるために提示されるものであって、本発明者らが自身の発明であるとみなす範囲を制限することを意図するものではなく、また、本発明者らが、以下の実験が全て又は唯一の実施された実験であることを示すことを意図するものでもない。使用される数（例えば、量、温度など）に関しての正確性を確実にするために努力したが、ある程度の実験上の誤差及び偏差は生じるはずである。別途指示されない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度はセ氏温度であり、圧力は常圧又はほぼ常圧である。
【０３４９】
実施例１．トランスジェニックＣＲＮＤ８マウスモデル系を用いたＡＤ様病理生物学及び認知低下に対する長期レプチン処置の効果
１．１．材料及び方法
１．１（ａ）．試薬及び抗体
アルツハイマー前駆体タンパク質（ＡＰＰ）６４３−６９５モノクローナル抗体（ｍＡｂ）をＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）から購入した。ウサギ抗ＰＰＡＲγ及び抗ＳＯＣＳ３、タウ（ｐＳｅｒ396）ｍＡｂ及びタウ（タウ４６）ｍＡｂをＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇから購入した。ＰＨＦ−タウｍＡｂ（クローンＡＴ８）をＰｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から購入した。ＰＨＦ−１  ｍＡｂは、Ａｌｂｅｒｔ  Ｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｂｒｏｎｘ，ＮＹ）のＰｅｔｅｒ  Ｄａｖｉｅｓ博士からの寄贈品である。ウサギ抗タウ（ｐＴｈｒ181）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。ウサギ抗α−チューブリン、抗レプチン及び抗レプチン受容体（ＯＢ−Ｒ）をＡｆｆｉｎｉｔｙ  ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔｓ（Ｇｏｌｄｅｎ，ＣＯ）から購入した。
【０３５０】
１．１（ｂ）．動物及び飼育
Ｃ３Ｈ／Ｈｅ−Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドに、Ｖ７１７Ｆ（インディアナ突然変異）とともに、ＫＭ６７０／６７１／ＮＬ（スウェーデン突然変異）における二重突然変異を含むＡＰＰ６９５遺伝子を担持するＣＲＮＤ８マウス（ｎ＝２２）と、野生型マウス（ｎ＝２０）とをこの研究で用いた。到着後すぐに、全ての動物をグループで飼育し、食餌と水を自由摂取させ、１２時間の明暗周期で維持した。全ての動物を、ケースウェスタンリザーブ大学の実験動物委員会（ＩＡＣＵＣ）による承認プロトコルに従って処置し、実験グループをランダムに決定した。健康状態の一般的な尺度として、全ての動物の体重を研究中に３回量った。
【０３５１】
１．１（ｃ）．レプチンポンプ埋め込み
ポンプ埋め込みを以下の通りに行なった。簡潔に述べると、アベルチンの腹腔内注射でマウスに麻酔をかけ、その後、皮下アルゼットミニ浸透圧ポンプ（モデル２００４，Ｄｕｒｅｃｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を手術で取り付けた。ＣＲＮＤ８動物のうちの１３匹には、ＰＢＳ中２０μｇの１日用量のレプチン（０．２５μｌ／ｈの３．３３ｍｇ／ｍｌ組換えマウスレプチン）を受容させ、９匹には、ＰＢＳを注入した。野生型マウスには全て、ＰＢＳを注入した。合計８週の処置期間の４週目に、浸透圧ポンプを再度取り付けて、古いポンプと交換した。
【０３５２】
１．１（ｄ）．ＥＬＩＳＡ
全てのアッセイを製造元の具体的な指示に従って行なった。全ての血清マーカーのレベルを、４５０ｎｍでのＯＤを用いて既知濃度の連続希釈液に対して作成した標準曲線から算出した。
【０３５３】
血清中のマウスインスリンレベルを、マウスインスリンＥＬＩＳＡキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて決定した。簡潔に述べると、このアッセイは、順次、１）予め滴定した量のモノクローナルマウス抗ラットインスリン抗体でコーティングしたマイクロタイタープレートのウェルに試料由来インスリン分子を捕捉し、捕捉されたインスリンにビオチン化ポリクローナル抗体を結合させること、２）試料から未結合物質の洗い流すこと、３）固定化されたビオチン化抗体に西洋ワサビペルオキシダーゼを結合させること、４）遊離の酵素コンジュゲートを洗い流すこと、ならびに５）基質の３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンの存在下で西洋ワサビペルオキシダーゼ活性をモニタリングすることにより、固定化された抗体−酵素コンジュゲートを定量すること、に基づくサンドイッチＥＬＩＳＡである。酵素活性を４５０ｎｍでの吸光度の増加により分光学的に測定し、形成された産物を酸性化した後で、５９０ｎｍでの吸光度から補正する。吸光度の増加は、未知試料中の捕捉されたインスリンの量に正比例するので、未知試料中の捕捉されたインスリンの量を、既知濃度のラットインスリンの参照標準を用いて同じアッセイにおいて作成される参照曲線から内挿することにより導出することができる。
【０３５４】
血清中のマウスα−ＴＮＦレベルを、マウスＴＮＦαＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて決定した。簡潔に述べると、このアッセイは、定量的サンドイッチ酵素イムノアッセイ技術を用いている。マイクロプレートに、マウスＴＮＦ−αに特異的なポリクローナル抗体を予めコーティングする。標準、対照、及び試料をピペッティングしてウェルに入れると、存在するマウスＴＮＦ−αは全て、固定化された抗体に結合する。未結合物質を全て洗い流した後、マウスＴＮＦ−αに特異的な酵素結合型ポリクローナル抗体をウェルに添加する。洗浄して、未結合の抗体−酵素試薬を全て除去した後、基質溶液をウェルに添加する。酵素反応により、青色の産物が得られ、これは、停止溶液を添加すると黄色に変わる。測定される色の強度は、最初の工程で結合したマウスＴＮＦ−αの量に比例する。次いで、試料の値を標準曲線から読み取る。
【０３５５】
血清中のマウスＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルを、マウスＣ反応性タンパク質ＥＬＩＳＡ定量キット（Ｇｅｎｗａｙ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて決定した。簡潔に述べると、血清試料中に存在するＣＲＰは、ポリスチレンマイクロタイターウェルの表面に吸着した抗ＣＲＰ抗体と反応する。洗浄により未結合の血清タンパク質の除去した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートした抗ＣＲＰ抗体を添加する。これらの酵素標識抗体は、先に結合した血清ＣＲＰとともに複合体を形成する。もう１回の洗浄工程の後、発色基質の３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を添加することにより、免疫吸着剤に結合した酵素をアッセイする。結合した酵素の量は、試験される試料中のＣＲＰの濃度に正比例し、従って、４５０ｎｍでの吸光度は、試験試料中のＣＲＰの濃度の尺度になる。試験試料中のＣＲＰの量を、標準から構築される標準曲線から内挿し、血清希釈液に対して補正することができる。
【０３５６】
血清中のマウスレプチンレベルを、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅマウスレプチンイムノアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて決定した。簡潔に述べると、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅマウスレプチンイムノアッセイは、定量的サンドイッチ酵素イムノアッセイ技術を用いている。マイクロプレートに、マウスレプチンに特異的な親和性精製ポリクローナル抗体を予めコーティングする。標準、対照、及び試料をピペッティングしてウェルに入れると、存在するマウスレプチンは全て、固定化された抗体に結合する。未結合物質を全て洗い流した後、マウスレプチンに特異的な酵素結合型ポリクローナル抗体をウェルに添加する。洗浄して、未結合の抗体−酵素試薬を全て除去した後、基質溶液をウェルに添加する。酵素反応により、青色の産物が得られ、これは、停止溶液を添加すると黄色に変わる。測定される色の強度は、最初の工程で結合したマウスレプチンの量に比例する。次いで、試料の値を標準曲線から読み取る。
【０３５７】
ヒトＡβ1-40血清レベルを、Ａβ1-40比色定量イムノアッセイキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて決定した。簡潔に述べると、ヒトアミロイドβ（Ｈｕ  Ａβ）のＮＨ2末端に特異的なモノクローナル抗体をマイクロタイターストリップのウェルに予めコーティングする。１回目のインキュベーションの間、既知のＨｕ  Ａβ含有量の標準、対照、及び未知試料をピペッティングしてウェルに入れ、１−４０Ａβ配列のＣＯＯＨ−末端に特異的なウサギ抗体とともに同時インキュベーションする。このＣＯＯＨ−末端配列は、解析される前駆体の切断によって生成される。西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗ウサギ抗体を用いることにより、結合したウサギ抗体を検出する。洗浄後、西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗ウサギ抗体（酵素）を添加する。２回目のインキュベーションを行ない、洗浄して未結合の酵素を全て除去した後、基質溶液を添加し、これにより、結合した酵素が作用して、発色する。この発色産物の強度は、もとの標本中に存在するＨｕ  Ａβ４０の濃度に正比例する。
【０３５８】
１．１（ｅ）．組織の回収、処理、抽出及びイムノアッセイ
解剖時に、脳を摘出し、正中線に沿って二等分した。一方の半分はドライアイス上で凍結させ、もう一方の半分は、１０％中性緩衝ホルマリン中で浸漬固定し、パラフィンろう中で処理した。
【０３５９】
１．１（ｅ）（ｉ）免疫化学
パラフィンブロック中の脳について、海馬を横断する矢状（sagitally）連続切片（５０μｍ）を作製し、４Ｇ８（Ａβ中の１７〜２４アミノ酸断片を認識する）を一次抗体として用いて免疫染色した。洗浄後、ヤギ抗マウス二次抗体を室温で更に３０分間インキュベートし、切片をＨ2Ｏ2中のアビジン−ビオチン−ＨＲＰ複合体（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  Ｅｌｉｔｅ  ＡＢＣキット，Ｖｅｃｔｏｒ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）及びジアミノベンジジンテトラヒドラクロリド（ＤＡＢ）を用いて可視化した。Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｃａｍ（Ｍｕｎｃｈｅｎ−Ｈａｌｌｂｅｒｇｍｏｓｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）と、適合する画像解析ソフトウェアのＡｘｉｏｖｉｓｉｏｎ（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｖｉｓｉｏｎ  ＧｍｂＨ，Ｍｕｎｃｈｅｎ−Ｈａｌｌｂｅｒｇｍｏｓｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とを用いて、Ａβ沈着の定量を行なった。各動物をＡβ沈着について定量した。簡潔に述べると、５倍対物レンズを用いて、海馬全体を包含する単一の視野を手作業で選択し、陽性の染色を視野全体の染色された面積のパーセントとして表した。動物１匹当たりの全切片から得られた値を平均化した。斑の数と、斑のサイズと、抗体で染色された面積のパーセンテージとして規定されるアミロイド量とについて切片を解析した。
【０３６０】
１．１（ｅ）（ｉｉ）イムノブロッティング
凍結脳試料を計量し、小刀で刻み、その後、等量の１０％ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に移した。組織をダウンスホモジナイザーを用いてホモジナイズし、プロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤（Ｐｉｅｒｃｅ）を補充したＴ−ＰＥＲ組織抽出試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）を抽出試薬１０ｍＬ当たり組織１グラムの比率で用いてタンパク質を抽出した。試料を１０，０００ｒｐｍで５分間短く遠心分離し、上清を新しいチューブに移した。各試料にＤＮアーゼ（Ｐｉｅｒｃｅ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。総タンパク質をクマシー（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）タンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）で決定し、試料（２５μｇ）をイムノブロットで解析した。タウ−ｐＳｅｒ396、トータルのタウ（全て１：５００）及びＰＨＦ−タウＡＴ８（１：２００）を除く、全ての一次抗体と、二次抗体とを、それぞれ、１：１０，０００の最終希釈で用いた。
【０３６１】
１．１（ｆ）行動評価
確立された認知能力基準に関する行動実験を処置の４週後と８週後に行なった。
【０３６２】
１．１（ｆ）（ｉ）トレース恐怖条件付け
文脈的恐怖条件付けテストと手がかり的恐怖条件付けテストは、不愉快な（条件付け）刺激を記憶し、それを特定の環境（文脈）と関連付ける能力を測定するものである。文脈的恐怖条件付けは、海馬依存的であると一般に考えられている学習の一形態であるのに対し、手がかり的恐怖条件付けは、海馬非依存的であると一般に考えられている。このプロトコルを２日間かけて実施する。
【０３６３】
１日目−訓練：最初の日、動物をチャンバー（Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＶＴ）の中で２分間慣れさせ、その後、白色雑音（８０ｄＢ）を３０秒間提示する。この刺激を条件付け刺激（ＣＳ）と表す。２秒間インターバルを置いた後、動物に０．５ｍＡのショックを施す。これを非条件付け刺激（ＵＳ）と表す。この手順を４回繰り返す。
【０３６４】
２日目−文脈的／変更された文脈的／手がかり的実験：訓練の２４時間後、動物をもとのチャンバーに戻し、５分間の間、フリージング反応をスコア化して、ＵＳと文脈との関連（文脈）を決定する。５分間で３０回の観察結果を集めるように設計された適切なソフトウェア（Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ  ＶＴ）を用いてフリージングを自動的に測定する。文脈的フリージングを測定した後、動物を１時間居住用ケージに戻す。チャンバーの環境を改変し（新しい壁、床及び匂い手がかり）、動物を「新しい」チャンバーに６分間導入する。ＣＳ（変更された文脈）の非存在下で３分間、文脈的テストで記載したようにフリージング率を定量化する。残りの３分間、変更された文脈において動物にＣＳを提示し、先に記載したようにフリージング行動についてスコア化し、手がかり的恐怖条件付けスコアを決定する。
【０３６５】
１．１（ｆ）（ｉｉ）新規物体認識
新規物体認識テストを多重オープンフィールドボックス（２０インチ×２０インチ×１７インチ×４）（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の中で実施した。訓練前、実験前日に５分間、オープンフィールドボックスを探索させておくことにより、マウスを１匹ずつ慣れさせた。訓練期間中、２つ同一の新規物体を、互いに１６インチ離してオープンフィールドの中に置き、動物に１０分間探索させた。動物の頭が物体から０．５ｃｍのところに近づくか又は物体に触れたとき、物体を探索したとみなした。動物が環境を探索するための支え台として物体を利用した場合、これは探索とはみなさなかった。各動物が各物体を探索するのに費やした時間を記録した。訓練後すぐに、動物を居住用ケージに戻した。訓練から１時間後、新規物体１つと以前に探索した物体１つとを含むオープンフィールドに動物を再び導入した。これらの物体は、同様の探索レベル／物理的複雑さ（すなわち、古い物体に穴が開いていれば、新しい物体にも穴が開いていた）及び同様のサイズであった。保持テスト中、動物をオープンフィールドボックスに導入し、５分間自由に探索させておいた。リアリングやグルーミングの頻度と持続時間に加えて、両方の物体に費やした時間と頻度を記録した。直感的な匂い物質が存在し得るのを防ぐために、各セッションの後、オープンフィールドボックスと物体とを７０％エタノールで徹底的に洗浄した。識別指数（新しい物体に費やした総時間／物体探索の総時間）を用いて認知記憶を測定した。
【０３６６】
１．１（ｇ）統計解析
分散分析とテューキー・クレイマーの多重比較検定とを用いて統計データ解析を行なった。ＵＮ−ＳＣＡＮ−ＩＴゲル６．１ソフトウェア（Ｓｉｌｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｏｒｅｍ，ＵＴ）を用いてデンシトメトリー解析を行なった。ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとみなした。
【０３６７】
実施例１．２．インスリン及び炎症促進性タンパク質に対するレプチン投与の効果
第１セットの研究では、ＴｇＣＲＮＤ８マウスの血清中で検出可能なレプチンのレベルを調べた。図１は、レプチン又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又はｗｔマウス由来の血清においてＥＬＩＳＡで評価したＣＲＮＤ８マウス及びｗｔマウスにおけるレプチン、インスリン及びＣＲＰの血清濃度（ｎｇ／ｍｌ）の棒グラフを示す。レプチン処置したトランスジェニック動物は、生理食塩水処置した動物（左、濃い灰色の棒）と比べて有意に（ｐ＜０．０５）上昇したレプチンのレベル（図１Ａ；左、薄い灰色の棒）を示した。生理食塩水処置したＴｇＣＲＮＤ８で検出可能なレベルは、野生型（ｗｔ）同腹子（右の棒）と同程度であった。レプチン又は生理食塩水処置したマウスにおいてインスリンレベルの有意な差は観察されなかった（図１Ｂ）。
【０３６８】
Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、炎症過程が体内で生じているときに、そのレベルが劇的に上昇するタンパク質であるが、これは、炎症のバイオマーカーとしての役割を果たした。レプチン又は生理食塩水処置した動物においてＣＲＰレベルの検出可能な差は観察されなかった（図１Ｃ）。これらの結果は、他の炎症性タンパク質、特に、レプチン処置に応答して変化しないＴＮＦαやコルチゾールでの知見と似ていた（データは示さない）。
【０３６９】
実施例１．３．脳におけるレプチン投与により調節される経路
一般に、レプチンの受容体結合後、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路が誘発され、中枢及び末梢組織におけるヤヌスチロシンキナーゼ２（ＪＡＫ２）と、シグナルトランスデューサー及びアクチベーター３（ＳＴＡＴ３）と、サイトカインシグナリングのサプレッサー３（ＳＯＣ３）の活性化を介して遺伝子転写変化が誘導されると考えられている。レプチン処置及び生理食塩水処置したマウスの脳におけるレプチンのレベルを調べ、レプチンの下流エフェクター候補、特に、ＳＯＣＳ３及びペルオキシソーム増殖因子活性化受容体−γ（ＰＰＡＲγ）が増加しているかどうかを決定するために、これらを調べた。
【０３７０】
図２は、レプチン処置又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又は野生型（ｗｔ）マウスの脳由来のレプチン、ＯＢ−Ｒ（長い）、ＳＯＣＳ３、ＰＰＡＲγ及びα−チューブリンを示したイムノブロットを示す。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにα−チューブリン抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。標準化したバンドをデンシトメトリーで解析した。これを平均密度±ＳＤとして示す。*対同様の生理食塩水処置したもの。レプチンレベルは、生理食塩水処置した動物と比べてレプチン処置した動物の脳で有意に（ｐ＜０．０５）高かった（図２Ａ、上の列；図２Ｂ、薄い灰色の棒）。対照と比べて、レプチン処置した脳におけるレプチン受容体（ＯＢ−Ｒ）の長いアイソフォームの発現に有意な変化はなかった（図２Ａ、２番目の列；図２Ｃ）。レプチン処置したＴｇＣＲＮＤ８動物におけるＳＯＣＳ３の発現に有意でない（ｐ＞０．０５）増加（図２Ｄ）があった（図２Ａ、３番目の列）。
【０３７１】
ＰＰＡＲγは、β−セクレターゼ（ＢＡＣＥ）を調節することが知られている転写因子であるが、これは、アミロイド前駆体ペプチド（ＡＰＰ）プロセシングにおける重要な酵素であり、通常、レプチンの作用をモジュレートするのに関与すると考えられている。レプチン処置したトランスジェニック動物は、対照と比べて、ＰＰＡＲγレベルの有意な（ｐ＜０．０５）増加を示した（図２Ａ、４番目の列；図２Ｅ、薄い灰色の棒）。
【０３７２】
実施例１．４．レプチン処置したＴｇＣＲＮＤ８マウスにおけるＡβレベル及び斑沈着
斑の形態でのＡβの細胞外蓄積は、ＡＤを象徴する病理学的特徴であり、沈着する量は、その産生、分泌、凝集及びクリアランスの速度によって決まる。
【０３７３】
ＴｇＣＲＮＤ８マウスは、スウェーデン（Ｋ６７０Ｎ及びＭ６７１Ｌ）ならびにインディアナ（Ｖ７１７Ｆ）家族性ＡＤ（ＦＡＤ）突然変異を含有するヒトＡＰＰ遺伝子を過剰発現する。通常、脳のＡβ全体のレベルが上昇し始める１０カ月齢で、前述のレプチン処置を開始し、ちょうど最初のＡβ沈着がＴｇ２５７６マウスで出現する、１２カ月齢までに終了した。ＴｇＣＲＮＤ８マウスを用いるこれらの研究では、３カ月齢頃から始まる斑後期間中に全処置（４カ月齢から６カ月齢）を行なった。
【０３７４】
図３は、ＣＲＮＤ８マウス及びｗｔマウスにおけるＡＰＰ  Ｃ末端断片（ＣＴＦ）及び可溶性Ａβ1-40の発現を示す。（Ａ）では、レプチン又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又はｗｔマウスから脳を摘出し、ＡＰＰ  ＣＴＦ（Ｃ９９、Ｃ８３）の発現をイムノブロットで決定した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにα−チューブリン抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。（Ｂ）では、標準化したバンド（Ｃ９９／Ｃ８３と総ＣＴＦ／α−チューブリンの比）をデンシトメトリーで解析した。これを平均密度±ＳＤとして示す。（Ｃ）では、レプチン又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又はｗｔマウスの脳に存在する可溶性Ａβ1-40のレベル、又は（Ｄ）では、レプチン又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又はｗｔマウスの血清に存在する可溶性Ａβ1-40のレベルをＥＬＩＳＡで決定した。可溶性の脳Ａβ1-40のレベルを可溶性の脳タンパク質の総量に対して標準化した。結果を平均濃度（脳−ｐｇ／ｍｇ総タンパク質、ｎ＝５；血清−ｐｇ／ｍｌ、ｎ＝１０）±ＳＤとして示す。*対生理食塩水処置したＴｇＣＲＮＤ８細胞。レプチン処置したＴｇＣＲＮＤ８マウスの脳（図３Ａ、灰色の棒）と血清（図３Ｂ、灰色の棒）の両方におけるＡβ1-40レベルの有意な（ｐ＜０．０５）低下が見られた。
【０３７５】
レプチン処置によって、ＡＰＰのＣ９９  Ｃ末端断片（ＣＴＦ）（これは、ＢＡＣＥの作用により得られる、Ａβの直接的な前駆体である（図３Ｃ））、又はＡＰＰのＣ８３  ＣＴＦ（これは、α−セクレターゼの作用により得られる非アミロイド原性産物である）への脳ＡＰＰのプロセシングが変化するかどうかを明らかにするために、レプチン処置を調べた。Ｃ９９断片対Ｃ８３種（図３Ｄ、上のパネル）及び総ＣＴＦ（下のパネル）の比の有意な（ｐ＜０．０５）低下が、生理食塩水処置した対照と比べてレプチン処置した動物で観察された。これは、ＢＡＣＥ活性のモジュレーションにおけるレプチンの関与と一致するものである。
【０３７６】
図４は、レプチン処置したＴｇＣＲＮＤ８マウスにおけるアミロイド斑沈着を示す。Ａでは、脳スライスを海馬領域において４Ｇ８抗体で染色した；Ｌｅ−レプチンで処置したトランスジェニック動物；Ｓａ−生理食塩水で処置したトランスジェニック動物。棒は、Ｂで、斑の平均サイズ（μｍｍ2）±Ｓ．Ｅ．Ｍを示すか、又は（Ｃ）で、この領域中の染色された面積％±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を示す。棒１つ当たりｎ＝８〜９。Ｄ．４Ｇ８抗体で染色した皮質領域。
【０３７７】
パラフィン包埋脳切片（図４）の免疫組織化学的検討により、８週間のレプチン処置は、年齢と性別が一致した生理食塩水処置したトランスジェニックマウスと比べて、６カ月齢のＴｇＣＲＮＤ８マウスの海馬（図４Ａ）におけるアミロイド量を有意に（ｐ＜０．０５）低下させることが明らかになった。これは、機能的な（ＯＢ−Ｒｂ）レプチン受容体が特に濃縮された領域である。海馬における有意に減少したアミロイド量（４Ｇ８抗体で染色された面積％として定量化されたもの）は、斑の平均サイズの減少と平行していた（図４Ｂ及び４Ｃ）。その領域における斑の総数に有意な変化はなかった（データは示さない）。皮質（図４Ｄ）などの他の脳領域の検討により、同様の染色パターンが示唆された。
【０３７８】
実施例１．５．レプチン処置したトランスジェニック動物はタウリン酸化の低下を示す
神経原線維のもつれ（ＮＦＴ）は、ＡＤにおける認知喪失と密接に相関する高度にリン酸化されたタウタンパク質の神経細胞内凝集体である。一般に、タウタンパク質の異常なリン酸化は、微小管機能の混乱、異常なタンパク質輸送、ＮＦＴの形成及び最終的なニューロンの死を生じさせると考えられている。
【０３７９】
ＴｇＣＲＮＤ８マウス又はＴｇ２５７６マウスはＮＦＴを発症しない。いくつかの研究では、Ｔｇ２５７６マウスにおける脳のタウリン酸化の増加が報告されている。レプチン処置又は生理食塩水処置したトランスジェニック又は野生型（ｗｔ）マウスの脳におけるホスホ−タウレベルを評価した。図５は、ＴｇＣＲＮＤ８マウス及びｗｔマウスの脳におけるＡＤ関連タウリン酸化を示す。Ａでは、レプチン又は生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス又はｗｔマウスの脳を摘出し、（Ｂ）Ｓｅｒ396、（Ｃ）ＰＨＦ−１（Ｓｅｒ396/404）、（Ｄ）ＡＴ８（Ｓｅｒ202/204）及び（Ｅ）Ｓｅｒ181におけるタウリン酸化をイムノブロットで決定した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのタウ抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。標準化したバンドをデンシトメトリーで解析した。これを平均密度±ＳＤとして示す。*対生理食塩水処置したＣＲＮＤ８マウス。
【０３８０】
生理食塩水処置したトランスジェニックマウスは、調べた全てのエピトープにおいて比較的高いレベルのホスホ−タウを発現していた（図５Ａ；図５Ｂ〜５Ｅ、左の濃い灰色の棒）。レプチン処置は、各々のＡＤ関連エピトープにおけるホスホ−タウ（左の薄い灰色の棒）を、ｗｔ動物（右の棒）の脳で観察されるレベルにまで有意に（ｐ＜０．０５）低下させた。これらの結果は、タウがＴｇＣＲＮＤ８マウスにおいて過剰リン酸化されていることを示す。
【０３８１】
実施例１．６．レプチンで処置したＴｇＣＲＮＤ８マウスの行動の改善
１．６（ｉ）新規物体認識
４週及び８週の処置期間の後、新規物体認識テストにおいて、３つのグループの動物：ａ）レプチンで処置したＴｇＣＲＮＤ８、ｂ）生理食塩水で処置したＴｇＣＲＮＤ８及びｃ）生理食塩水で処置した野生型を試験した。
【０３８２】
図６は、ＣＲＮＤ８マウス及びｗｔマウスの認知評価を示す。新規物体認識テスト（Ａ）では、作業記憶を、見慣れた物体と新規物体の探索に費やした時間としてｗｔマウス及び４週間又は８週間レプチン又は生理食塩水処置したトランスジェニックマウスにおいてスコア化した。点線は、記憶していた動物を示す（２つの物体間で費やされた総時間の半分超が、新規物体に関するものである）。この線の下にあるものはいずれも、記憶障害を示す。*Ｔｇ−Ｌｅｐ対Ｔｇ−生理食塩水の場合、ｐ＝０．０１；*Ｔｇ−ｓａｌ対ＷＴの場合、ｐ＝０．００３。恐怖条件付けテスト（Ｂ）では、嫌悪学習課題を用いて、ｗｔマウス及びレプチン又は生理食塩水処置したトランスジェニックマウスにおける不愉快な刺激に対する恐怖応答を測定した。文脈的恐怖条件付けのための数回の訓練セッション（軽い足刺激）の前後のもとのチャンバーにおいて又は事前に足刺激と組み合わせた聴覚手がかりを含む新規の環境において、フリージングを定量化した。文脈：*ＷＴ対Ｔｇ＋Ｌｅｐの場合、ｐ＝０．００９；*ＷＴ対Ｔｇ＋Ｓａｌの場合、ｐ＝０．０００１；手がかり：*ＷＴ対Ｔｇ＋Ｌｅｐの場合、ｐ＝０．０１２；*ＷＴ対Ｔｇ＋Ｓａｌの場合、ｐ＝０．０００１；*Ｔｇ＋Ｌｅｐ対Ｔｇ＋ｓａｌの場合、ｐ＝０．０４。
【０３８３】
レプチン処置したＴｇＣＲＮＤ８マウス及び野生型マウスは、生理食塩水で処置したトランスジェニック体と比べて、新規物体に関して統計的に（ｐ＜０．０５）より多い時間を費やした（図６Ａ）。これにより、生理食塩水処置したＴｇＣＲＮＤ８と比べて、４〜８週間のレプチン処置後のＴｇＣＲＮＤ８マウスの作業記憶能力に改善があることが示された。レプチン処置したトランスジェニック動物は、このテストでは、野生型マウスと区別が付かなかったが、生理食塩水処置したＴｇＣＲＮＤ８マウスは、両方の他のグループと比べて、非常に成績が悪かった（図６Ａ）。従って、１〜２カ月の長期的なレプチン処置は、６カ月齢のＴｇＣＲＮＤ８マウスにおけるこの認知課題での能力障害を無効にする。
【０３８４】
１．６（ｉｉ）恐怖条件付け（ＦＣ）
このテストでは、ＣＳ（聴覚手がかり）とＵＳ（軽い足刺激）の組合せを繰り返した後の文脈的恐怖及び手がかり的恐怖と関連する記憶の訓練及び測定のために嫌悪訓練チャンバーを用いた。動物を、文脈的恐怖条件付けをテストするために訓練の２４時間後にもとのチャンバーに置くか、又は手がかり的恐怖条件付けをテストするためにＣＳの存在下で新規の環境に置いた。図６Ｂ（ｘ軸はフリージング時間％を表す）に示すように、ＴｇＣＲＮＤ８マウスは、生理食塩水処置した動物と比べたとき、８週のレプチン処置後の文脈的恐怖条件付けテストにおいてより良好な成績を収めた。この知見は統計的有意に近かった（ｐ＜０．０６）。更に、レプチン処置は、手がかり的恐怖条件付けにおける統計的に有意な（ｐ＜０．０５）改善をもたらした。変更された文脈でテストしたとき、低いフリージング応答に統計的有意差はなく（データは示さない）、これは、動物が変更された文脈を認識しなかったことを示す。
【０３８５】
１．７．まとめ：
これらの結果は、生理食塩水対照と比べたときのトランスジェニックＣＲＮＤ８マウスモデル系を用いたＡＤ様病態及び認知減退に対する長期的なレプチン処置の効果を示す。レプチン処置した動物は、脳と血清の両方においてＡβ1-40のレベルが低下していることが分かった。脳では、アミロイド原性経路を経由するＡＰＰのプロセシングの低下が観察された。更に、レプチン処置した動物は、海馬におけるアミロイド量の有意な減少を示し、これは、４Ｇ８染色アミロイド斑の（数ではなく）平均サイズの減少を伴っていた（図４）。脳抽出物中の可溶性Ａβ1-40全体の量が有意に低下した（８週のレプチン処置の後に洗浄剤で抽出可能なＡβ1-40が５２％低下した）にもかかわらず、皮質領域はこの処置による影響をあまり受けなかった。
【０３８６】
レプチンは、生理食塩水処置と比べて、ＣＲＰ（図１Ｃ）、ＴＮＦα又はコルチゾール（データは示さない）のレベルを有意には変化させない。
【０３８７】
一般に、レプチンは、長期の受容体（ＯＢ−Ｒ）活性化後にＪａｋ２／ＳＴＡＴ３シグナル伝達を阻害する負のサイトカイン調節因子である、ＳＯＣＳ３とともにフィードバックループを形成すると考えられている。ＳＯＣＳ３シグナル伝達の過剰活性化は、炎症経路の長期抑制を引き起こし、ひいては免疫抑制のリスクを増加させる可能性がある。レプチン処置したＴｇＣＲＮＤ８動物及びｗｔ動物は、ＳＯＣＳ３発現の上昇を示さず（図２Ｄ）、長期間のレプチン投与が免疫不全を引き起こす可能性は低いことが示唆される。
【０３８８】
ＰＰＡＲγは、レプチンシグナル伝達の下流の標的である。レプチン処置したトランスジェニックマウスは、ＰＰＡＲγ発現の大きな増加を示した（図２Ｅ）。レプチン処置したＴｇＣＲＮＤ８マウスは、脳と血清の両方においてアミロイド原性Ｃ９９  ＡＰＰ断片レベル及びＡβ1-40レベルの低下を示した（図３）。
【０３８９】
ＴｇＣＲＮＤ８マウスのレプチン処置は、調べた全てのエピトープにおいてホスホ−タウのレベルを有意に低下させた（図５）。一般に、タウのオリゴマー化ではなく、タウの過剰リン酸化の誘導が、ＡＰＰを発現するトランスジェニックマウスで共通すると考えられている。
【０３９０】
レプチン処置したＴｇＣＲＮＤ８マウスは、生理食塩水処置した同腹子と比べて、新規物体認識テスト及び恐怖条件付けテストにおける認知能力の改善を示した（図６）。アミロイド量の低下が、レプチン処置したトランスジェニックマウスの海馬において見られた（図４Ａ）。
【０３９１】
本開示は、レプチンの（ｉ）ＡＤ様病理学的経路を改善する能力；及び（ｉｉ）ＴｇＣＲＮＤ８マウスの認知力低下を元に戻すか又は予防する効力を示す。レプチン処置は炎症を伴わなかった。
【０３９２】
実施例２．
２．１．材料及び方法
２．１（ａ）．培地
最小必須培地（ＭＥＭ）をＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入した。神経基本培地、Ｂ２７サプリメント及びＬ−グルタミンをＧｉｂｃｏ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から購入した。トリプシン−ＥＤＴＡ及びペニシリン溶液をＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ（Ｓｏｌｏｎ，Ｏｈｉｏ）から購入した。胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）、ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸（ＲＡ）及びヒト組換えレプチンをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。５−アミノイミダゾール−４−カルボキサミドリボヌクレオシド（ＡＩＣＡＲ）をＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）から購入した。ミリストイル化（Myristolated）−ＡＩＰ（Ｍｙｒ−ＡＩＰ）（ＣａＭキナーゼＩＩ阻害剤−１μＭ）をＢｉｏｍｏｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，ＰＡ）から購入した。化合物Ｃ（ＡＭＰＫ阻害剤−１μＭ）、Ｄ−エリスロ−スフィンゴシン、Ｎ−アセチル−（Ｃ2セラミド）（ＰＰ２Ａアクチベーター−１μＭ）、塩化リチウム（ＬｉＣｌ）（ＧＳＫ−３β阻害剤−１０ｍＭ）、Ｎ4−（６−アミノピリミジン−４−イル）−スルファニルアミド、ＨＣｌ（Ｎ６Ａ４Ｓ）（ＣＤＫ５阻害剤−２μＭ）、フラニル−ニトロアミノグアニジン（ＦＮＧ）（ＥＲＫ阻害剤−２０μＭ）、アントラ［１，９−コ］ピラゾール−６（２Ｈ）−オン−１，９−ピラゾロアントロン（ＳＰ６００１２５）（ＪＮＫ阻害剤−１００ｎＭ）、ＫＴ５７２０（ＰＫＡ阻害剤−１００ｎＭ）、２−ヒドロキシ−４−（（（４−メチルフェニル）スルホニルオキシ）アセチル）アミノ）−安息香酸（Ｓ３Ｉ−２０１）（ＳＴＡＴ３阻害剤−１００μＭ）、５−（２，２−ジフルオロ−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン（５２２ＤＢ１３Ｄ）（ＰＩ３Ｋ阻害剤−２０μＭ）、１Ｌ６−ヒドロキシメチル−ｃｈｉｒｏ−イノシトール−２−（Ｒ）−２−Ｏ−メチル−３−Ｏ−オクタデシル−ｓｎ−グリセロカルボネート（１Ｌ６ＨＣＩ）（Ａｋｔ阻害剤−５μＭ）、２−（４−クロロフェニル）−４−（４−フルオロフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１，２−ジヒドロピラゾール−３−オン（２４Ｃ４４Ｆ５Ｐ）（ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ阻害剤−１００ｎＭ）及びＨ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−ＯＨ（Ｇ３３３５）（ＰＰＡＲγアンタゴニスト−３０μＭ）をＥＭＤ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）から購入した。全ての阻害剤又はアクチベーターに用いられる最終濃度及びインキュベーション時間は、これまでの報告に基づくものであった（例えば、Ｉｓｈｉｄａ，Ａ．，ａｎｄ  Ｆｕｊｉｓａｗａ，Ｈ．（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７０：２１６３−２１７０；Ｚｈｏｕ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０８：１１６７−１１７４；Ｂａｌｌｏｕ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７：２００４４−２００５０；Ｋｌｅｉｎ，Ｐ．Ｓ．，ａｎｄ  Ｍｅｌｔｏｎ，Ｄ．Ａ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：８４５５−８４５９；Ｃｌａｒｅ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６：４８２９２−４８２９９；Ｃｈｅｎ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１６：６２８１−６２８７；Ｈａｎ，Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０８：７３−８１；Ｋａｓｅ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１４２：４３６−４４０；Ｓｉｄｄｉｑｕｅｅ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０４：７３９１−７３９６；Ｂｉｌａｎｃｉｏ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｂｌｏｏｄ，１０７：６４２−６５０；Ｈｕ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４３：３０４５−３０５１；ｄｅ  Ｌａｓｚｌｏ，Ｓ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，８：２６８９−２６９４；Ｙｅ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，（２００６），Ｃｈｅｍｂｉｏｃｅｍ．，７：７４−８２を参照されたい）。これらの参考文献の内容は各々、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３９３】
２．１（ｂ）．抗体
ウサギ抗Ａｋｔ（ｐＳｅｒ473）、Ｊａｋ２  ｐＴｙｒ1007/1008、ＡＭＰＫα（ｐＴｈｒ172）、ＧＳＫ−３β（ｐＳｅｒ9）、ＣａＭＫＩＩ（ｐＴｈｒ286）、ＰＫＡ（ｐＴｈｒ197）、ＰＰＡＲγ（８１Ｂ８）、ｐ３８  ＭＡＰＫ（ｐＴｈｒ180／Ｔｙｒ182）（２８Ｂ１０）ｍＡｂ、タウ（ｐＳｅｒ396）ｍＡｂ及びタウ（タウ４６）ｍＡｂをＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇから購入した。ＰＨＦ−タウｍＡｂ（クローンＡＴ８）をＰｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から購入した。ＰＨＦ−１  ｍＡｂは、Ａｌｂｅｒｔ  Ｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｂｒｏｎｘ，ＮＹ）のＰｅｔｅｒ  Ｄａｖｉｅｓ博士からの寄贈品であった。抗アルツハイマー前駆体タンパク質（ＡＰＰ）６４３−６９５  ｍＡｂをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）から購入した。ウサギ抗タウ（ｐＴｈｒ181）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。ウサギ抗α−チューブリンｍＡｂをＡｆｆｉｎｉｔｙ  ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔｓ（Ｇｏｌｄｅｎ，ＣＯ）から購入した。
【０３９４】
２．１（ｃ）．細胞株の培養及びニューロン誘導
ヒト神経芽細胞腫の細胞株であるＳＨ−ＳＹ５Ｙ及びＩＭＲ−３２をＡＴＣＣから購入した。製造元の具体的なガイドラインに従って細胞培養を行なった。簡潔に述べると、１０％ＦＢＳを含有するＭＥＭ中で８０〜９０％コンフルエンスになるまで細胞を繁殖させ、その後、トリプシン−ＥＤＴＡでフラスコから剥がし、１：５の比で二次培養した。
【０３９５】
ニューロン分化のために、１×１０6個のＳＹ５Ｙ細胞又はＩＭＲ−３２細胞をニューロン誘導培地（ＮＩＭ）中で増殖させた。この培地は、２％ＦＢＳを含有し、１０μＭ  ＲＡが補充されたＭＥＭからなっていた。細胞をＮＩＭ中で６日間インキュベートし、７日目の処理及び回収の前に、無血清ＮＩＭに移し換えた。
【０３９６】
２．１（ｄ）．ラット初代ニューロンの培養
初代ラット皮質ニューロンをＢｒａｉｎＢｉｔｓ  ＬＬＣ（Ｓｐｒｉｎｆｉｅｌｄ，ＩＬ）から購入し、製造元の指示の通りに培養した。簡潔に述べると、組織を分散させ、上清を新しいチューブに移し、１１００ｒｐｍで１分間遠心分離した。その後、ニューロンを、ポリ−Ｄ−リジン（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）をコーティングしたＥ−ウェルプレートに播種し、Ｂ２７と０．５ｍＭのＬ−グルタミンとが補充された神経基本培地中で増殖させた。培地を４日後に交換し、培養７日目に、ニューロンを、以下に記載するように処理し、回収した。
【０３９７】
２．１（ｄ）．タンパク質抽出及びイムノブロッティング
別途明記されない限り、神経細胞をレプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）で４時間又はＡＩＣＡＲ（２ｍＭ）もしくは特異的阻害剤で１時間処置し、その後、こすり取って回収した。細胞ペレットを、プロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤が補充された１×放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）溶解／抽出緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ）に再懸濁し、その後、ドライアイス／エタノール浴中での凍結／融解サイクルに供した。総タンパク質をクマシー（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）タンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）で決定した。全細胞抽出物（２５μｇ）を、１０％又は４−２０％トリス−グリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥプレキャストゲル（Ｌｏｎｚａ；Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＭＥ）を用いたイムノブロットで解析し、タンパク質をポリビニリデンジフルオライドメンブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に転写した。メンブレンを一次抗体とともに４℃で一晩インキュベートした後、次の日、ＨＲＰコンジュゲート二次ＩｇＧで検出した。タウ−ｐＳｅｒ396、トータルのタウ、ＡＰＰ（全て１：５００）及びＰＨＦ−タウＡＴ８（１：２００）を除く、全ての一次抗体と、二次抗体とを、それぞれ、１：１，０００と１：１０，０００の最終希釈で用いた。ＨＲＰをＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ化学発光基質（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて発色させ、ＢｉｏＲａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）ＣｈｅｍｉＤｏｃ  ＸＲＳシステムを用いて画像撮影した。他の抗体でリプロービングするために、メンブレンをＲｅｓｔｏｒｅ  ＰＬＵＳウェスタンブロットストリッピング緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ）でストリッピングした。
【０３９８】
２．１（ｅ）．ＧＳＫ−３β過剰発現及びノックダウン
グリコーゲンシンターゼキナーゼ−３β（ＧＳＫ−３β）のノックダウンのために、分化したＳＹ５Ｙに、ＴｒａｎｓＩＴ−ＴＫＯトランスフェクション試薬（Ｍｉｒｕｓ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて、５０ｎＭのＳｉｇｎａｌＳｉｌｅｎｃｅ  ＧＳＫ−３β  ｓｉＲＮＡ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を一過性に４８時間トランスフェクトした。簡潔に述べると、次の日に約６０〜８０％コンフルエンス（細胞のサイズと特性によって、２４ウェルプレートの１ウェル当たり３×１０4〜１．２×１０5細胞）を得るために、トランスフェクションの約２４時間前に、細胞を適切な細胞密度でプレーティングする。接着細胞を１ウェル当たり５００μｌの完全増殖培地中にプレーティングし、一晩インキュベートする。あるいは、懸濁細胞については、トランスフェクションの時点で約６０〜８０％コンフルエンス（１ウェル当たり３〜５×１０5細胞）を得るのに適切な密度で、トランスフェクション直前に、細胞を１ウェル当たり０．２５ｍｌの完全増殖培地中にプレーティングする。あるいは、トランスフェクションの時点で約６０〜８０％コンフルエンス（１ウェル当たり１．５〜２．５×１０5細胞）を得るように、トランスフェクション前日に、細胞をプレーティングしてもよい。滅菌プラスチックチューブに、５０μｌの無血清培地を添加する。その後、この無血清培地にＴｒａｎｓＩＴ−ＴＫＯトランスフェクション試薬を直接添加し（１ウェル当たり１〜４μｌ）、懸濁液をピペッティング又はボルテックスにより完全に混合し、室温で５〜２０分間インキュベートする。希釈したＴｒａｎｓＩＴ−ＴＫＯ試薬に（ウェル中での最終濃度が約２５ｎＭになるような濃度の）ｓｉＲＮＡを添加し、ピペッティングにより穏やかに混合し、その後、室温で５〜２０分間インキュベートする。接着細胞タイプについては、もとのプレーティング培地の約２５０μｌ（半分）を取り除くことにより、ウェル中の容量を完全増殖培地２５０μｌに調整する。ＴｒａｎｓＩＴ−ＴＫＯ試薬／ｓｉＲＮＡ複合体の混合物を細胞に滴加する。ディッシュを前後左右に穏やかに揺り動かす（回転させない）ことにより、複合体をディッシュに均等に分布させ、その後、２４〜７２時間インキュベートする。その後、標的遺伝子発現のノックダウンについて細胞をアッセイする。５０ｎＭのＳｉｇｎａｌＳｉｌｅｎｃｅ対照ｓｉＲＮＡ（フルオレセインコンジュゲート）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）をトランスフェクトした細胞を、陰性対照として、また、トランスフェクション効率を測定するために用いた。
【０３９９】
ＧＳＫ−３β過剰発現のために、製造元の具体的な指示に従って、分化したＳＹ５Ｙに、ＴｕｒｂｏＦｅｃｔｉｎ  ８．０トランスフェクション試薬（ＯｒｉＧｅｎｅ）を用いて、ＧＳＫ−３β全長ｃＤＮＡ配列（アクセッション番号：ＮＭ  ００２０９３．２）（ＯｒｉＧｅｎｅ；Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を含有する２μｇの発現ベクター（ｐＣＭＶ６−ＸＬ４）を一過性に４８時間トランスフェクトした。簡潔に述べると、発現ベクターに曝露する前に、トランスフェクション試薬を細胞培地に添加する。２μｇの空のｐＣＭＶ６−ＸＬ４（ＯｒｉＧｅｎｅ）をトランスフェクトした細胞は陰性対照としての役割を果たした。
【０４００】
トランスフェクション後、細胞を回収し、ＧＳＫ−３βのノックダウン又は過剰発現をイムノブロットで確認した。
【０４０１】
２．１（ｆ）．ＧＳＫ−３β及びβ−アミロイド(1-40)定量
製造元の具体的な指示に従って、それぞれ、ＰｈｏｓｐｈｏＤｅｔｅｃｔ  ＧＳＫ−３β（ｐＳｅｒ9）ＥＬＩＳＡキット（ＥＭＤ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）とヒトβ−アミロイド１−４０比色定量イムノアッセイキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて、細胞抽出物中のＧＳＫ−３βレベル及び細胞培養培地中のＡβ(1-40)レベルを決定した。ＧＳＫ−３βとＡβ(1-40)のレベルを、４５０ｎｍでのＯＤを用いて既知濃度の８つの連続希釈液に対して作成した標準曲線から算出した。
【０４０２】
２．１（ｇ）．統計解析
分散分析とテューキー・クレイマーの多重比較検定とを用いて統計データ解析を行なった。ＵＮ−ＳＣＡＮ−ＩＴゲル６．１ソフトウェア（Ｓｉｌｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｏｒｅｍ，ＵＴ）を用いてデンシトメトリー解析を行なった。ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとみなした。
【０４０３】
実施例２．２．分化したＳＹ５Ｙにおけるタウリン酸化の調節
研究により、ヒト神経芽細胞腫ＳＹ５Ｙ細胞におけるＡＤ関連部位でのタウリン酸化がＲＡ誘導性分化とともに増加することが示されている（ＲＡ−ＳＹ５Ｙ）。これらの変化は、タンパク質の過剰リン酸化よりもむしろ、分化時のタウの絶対レベルの増加に起因している。この基本的発現の増加のおかげで、ＲＡ−ＳＹ５Ｙ細胞は、ヒトタウリン酸化の変化をモニタリングするための好都合な培養系となっている。
【０４０４】
タウを直接リン酸化するのに関与するキナーゼ（図７及び表１）を調べた。特異的な対応するキナーゼ阻害剤を用いて細胞を１時間処置し（上の２．１、材料及び方法に記載）、ＡＤ関連部位でのタウリン酸化に対する効果を測定した。比較のために、タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）アクチベーターのＣ２セラミド（これは、ホスホ−タウのレベルに有意には影響を及ぼさなかった）で細胞を１時間処置した（図７及び表１）。
【０４０５】
図７は、ＲＡ−ＳＹ５Ｙにおけるタウリン酸化の酵素的調節を示す。ＲＡ−ＳＹ５Ｙを、ＰＰ２ＡアクチベーターのＣ２セラミド、もしくは様々なキナーゼ阻害剤とともに１時間インキュベートするか、又は無処置（ビヒクル）とし、複数の部位でのタウのリン酸化を測定した。レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）又はＡＩＣＡＲ（２ｍＭ）による処置は、陽性対照としての役割を果たした。全細胞ライセートを調製し、リン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６、ＰＨＦ−１、ＡＴ８又はｐＳｅｒ１８１）を用いたイムノブロットで解析した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのタウ抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。半定量的バンド密度解析を表１に示す。図７からの標準化したバンドをデンシトメトリーで解析した。結果を、ビヒクル（これには０という値を恣意的に割り当てた）と比べた、倍数変化パーセントの平均±ＳＤとして表１に示す；*対ビヒクル。
【表１】
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表中、†＝キナーゼ阻害剤。
【０４０６】
これらの結果は、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）（Ｍｙｒ−ＡＩＰ）、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）（ＫＴ５７２０）又はＧＳＫ−３β（ＬｉＣｌ）の阻害により、対照（ビヒクル処置細胞）と比べた、複数の部位でのタウリン酸化の最も有意な（ｐ＜０．０５）低下がもたらされることを示した（図７及び表１）。レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ、４時間）又はＡＩＣＡＲ（２ｍＭ、１時間）による処置はタウリン酸化を低下させ、従って、陽性対照として含めた。
【０４０７】
図１４は、複合的なキナーゼ阻害によるタウのリン酸化の減少を示す。ＲＡ−ＳＹ５Ｙを、単独又は様々な組合せのＣａＭＫＩＩ、ＰＫＡもしくはＧＳＫ−３β阻害剤とともに１時間インキュベートするか、又は無処置（ビヒクル）とし、タウのリン酸化を測定した。全細胞ライセートを調製し、リン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６）を用いたイムノブロットで解析した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのタウ抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。標準化したバンドをデンシトメトリーで解析した。結果を、無処置試料（これには０という値を恣意的に割り当てた）と比べた、倍数変化パーセントの平均±ＳＤとして示す；*対無処置（ビヒクル）；**対任意の個々のキナーゼ阻害剤による処置。図１４は、ＣａＭＫＩＩ特異的阻害剤、ＰＫＡ特異的阻害剤及びＧＳＫ−３β特異的阻害剤を用いた組合せ阻害により、いずれかの阻害剤のみと比べて、タウリン酸化の低下における相乗作用が生じたことを示す。
【０４０８】
これらのデータは、タウがいくつかのキナーゼの基質であることを示す。
【０４０９】
これらのキナーゼのいずれかのリン酸化状態に対するレプチン及び／又はＡＩＣＡＲの効果を調べた。通常、これらのキナーゼのリン酸化は、リフォールディングを引き起こし、これが引き金となって活性が変化する。図８は、ＲＡ−ＳＹ５Ｙにおけるタウ特異的キナーゼ活性化に対するレプチン及びＡＩＣＡＲの効果を示す。ＲＡ−ＳＹ５Ｙをレプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ）で処置するか又は無処置（ビヒクル）とし、（Ａ）ＣａＭＫＩＩ（ｐＴｈｒ２８６）、（Ｂ）ＰＫＡ（ｐＴｈｒ１９７）及び（Ｃ）ＧＳＫ−３β（ｐＳｅｒ９）のリン酸化をイムノブロットで測定した。メンブレンをストリッピングし、標準化のために、（Ａ、Ｂ）α−チューブリン又は（Ｃ）全ＧＳＫ−３βでリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。標準化したバンドをデンシトメトリーで解析した。結果を、無処置試料（これには０という値を恣意的に割り当てた）と比べた、倍数変化パーセントの平均±ＳＤとして示す。Ｄ．全細胞ライセートを調製し、ＧＳＫ−３β（ｐＳｅｒ９）についてＥＬＩＳＡで解析した。ＧＳＫ−３β阻害剤のＬｉＣｌ（１０ｍＭ）とともに１時間インキュベートした細胞は陽性対照としての役割を果たした。結果（ｎ＝３）を、無処置試料（これには０という値を恣意的に割り当てた）と比べた、標準化したＧＳＫ−３β（ｐＳｅｒ９）濃度（ユニット／ｍｇ総タンパク質）の平均±ＳＤとして示す。*対無処置（ビヒクル）。
【０４１０】
一般に、タウリン酸化は相応に影響を受けると考えられている。通常、リン酸化は、阻害されるＧＳＫ−３βを除いては、検討されるキナーゼの活性を増加させる。レプチン又はＡＩＣＡＲで処置したＲＡ−ＳＹ５Ｙは、無処置細胞と比べてＣａＭＫＩＩのリン酸化を有意には変化させず（ｐ＞０．０５）（図８Ａ）、レプチンしかＰＫＡリン酸化を有意に（ｐ＜０．０５）増加させることができなかった（図８Ｂ、真ん中の棒）。しかしながら、両方の処置により、対照と比べてＳｅｒ9でのＧＳＫ−３βリン酸化が有意に（ｐ＜０．０５）増加した（図８Ｃ、白色の棒）。これらの知見はＥＬＩＳＡで確認され、このＥＬＩＳＡにより、レプチン（図８Ｄ、左から２番目の棒）及びＡＩＣＡＲ（右から２番目の棒）によって誘導されるＧＳＫ−３β（ｐＳｅｒ9）の量の有意な（ｐ＜０．０５）増加が示された。この増加は、既知のＧＳＫ−３β阻害剤（一番右の棒）であるＬｉＣｌで観察されるレベルと同じかそれより大きかった。従って、レプチンは、ＧＳＫ−３βの阻害を通じてタウのリン酸化を低下させるようである。
【０４１１】
実施例２．３．レプチン及びＡＩＣＡＲはＧＳＫ−３βを介してタウリン酸化を調節する
レプチン及び／又はＡＩＣＡＲがタウのリン酸化の調節にＧＳＫ−３βを必要とするかどうかを明らかにするために、ＧＳＫ−３β活性をモジュレートしながら、上記の実験を繰り返した。酵素阻害剤又はｓｉＲＮＡ技術を用いて、ＧＳＫ−３β活性を遮断した。図９は、レプチン及びＡＩＣＡＲがＧＳＫ−３β依存的メカニズムを介してタウリン酸化をモジュレートすることを示す。（Ａ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙに、ＧＳＫ−３β特異的ｓｉＲＮＡを一過性にトランスフェクトするか、又はトランスフェクトせず（レーン１）、後にレプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ−レーン４）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ−レーン５）で処置するか、又は無処置（ビヒクル−レーン３）とした。トランスフェクション効率を評価するために、フルオレセインコンジュゲート対照ｓｉＲＮＡをトランスフェクトした細胞（レーン２）を用いた。これは、陰性対照としての役割を果たした。全細胞ライセートを調製し、ＧＳＫ−３β特異的抗体（パネルＩ）又はリン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６、ＰＨＦ−１、ＡＴ８もしくはｐＳｅｒ１８１；パネルＩＩ）を用いたイムノブロットで解析した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのＧＳＫ−３β抗体（パネルＩ）又はトータルのタウ抗体（パネルＩＩ）でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。標準化したタウバンドをデンシトメトリーで解析した。結果（パネルＩＩＩ〜ＩＶ）を、陰性対照試料（これには０という値を恣意的に割り当てた）と比べた、倍数変化パーセントの平均±ＳＤとして示す。（Ｂ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙに、ＧＳＫ−３β全長ｃＤＮＡ発現ベクターを一過性にトランスフェクトするか、又はトランスフェクトせず（レーン１）、後にレプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ−レーン４）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ−レーン５）で処置するか、又は無処置（ビヒクル−レーン３）とした。空の発現ベクターをトランスフェクトした細胞（レーン２）は、陰性対照としての役割を果たした。全細胞ライセートをＡと同様に調製し、解析し、標準化した。結果（ｎ＝３）をＡと同様に示す。*対陰性対照（レーン２）；**対ビヒクルで処置したＧＳＫ−３β過剰発現細胞（レーン３）。
【０４１２】
活性を増加させるために、強力なプロモーターを有する哺乳動物発現ベクターを用いて神経細胞でＧＳＫ−３βを過剰発現させた（図９）。具体的には、ＲＡ−ＳＹ５Ｙ細胞にＧＳＫ−３β特異的ｓｉＲＮＡを一過性にトランスフェクトし、その後、レプチン、ＡＩＣＡＲ又はビヒクルで処置した（図９Ａ）。これらを、対照ｓｉＲＮＡをトランスフェクトした細胞又はトランスフェクトしていない細胞と比較した。トータルのＧＳＫ−３β（活性形態＋不活性形態）発現及びリン酸化ＧＳＫ−３β（不活性形態）について細胞をアッセイし、特異的タンパク質のノックダウン（図９Ａ、パネルＩ）と、様々な形態のリン酸化タウのレベルにより測定されるような、キナーゼ活性に対するその効果（図９Ａ、パネルＩＩ〜ＩＶ）とを確認した。ＧＳＫ−３βノックダウン（パネルＩ、レーン３〜５）により、対照（レーン１〜２）と比べて、全ての部位でのタウリン酸化（パネルＩＩ〜ＩＶ、レーン３〜５）の有意な（ｐ＜０．０５）減少が示された。（ＡＩＣＡＲではなく）レプチンの存在下では、ノックダウン後の残りのＧＳＫ−３β（パネルＩ、レーン４）のリン酸化の増加は、ｐＳｅｒ396タウ（パネル、レーン４、白色の棒）及びｐＴｈｒ181タウ（パネルＩＩ及びＩＶ、レーン４、黒色の棒）のリン酸化の一層の減少を伴っていたが、これは有意ではなかった。
【０４１３】
同様の結果は、ＬｉＣｌ処置によるＧＳＫ−３β活性の除去後に観察された。図１５は、レプチン及びＡＩＣＡＲが、リチウムとともにインキュベートしたＲＡ−ＳＹ５Ｙにおけるタウリン酸化を有意には低下させないことを示す。ＲＡ−ＳＹ５Ｙを、レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ）の存在下で又は追加の処置なし（ビヒクル）で、リチウム（１０ｍＭ）とともに又はリチウムなしでインキュベートし、タウのリン酸化を測定した。全細胞ライセートを調製し、リン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６）を用いたイムノブロットで解析した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのタウ抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。標準化したバンドをデンシトメトリーで解析した。結果を、無処置試料（これには０という値を恣意的に割り当てた）と比べた、倍数変化パーセントの平均±ＳＤとして示す。
【０４１４】
更に、ＧＳＫ−３βを過剰発現するＲＡ−ＳＹ５Ｙ細胞を用いた研究により、メカニズムに関する洞察が更に得られた（図９Ｂ）。細胞にＧＳＫ−３β発現ベクターを一過性にトランスフェクトし、トランスフェクトしていない細胞又は空ベクターをトランスフェクトした細胞（パネルＩ、レーン１〜２）と比べて、有意に高いレベルの対応するタンパク質が産生された（パネルＩ、レーン３）。これらの細胞のレプチン又はＡＩＣＡＲ処置は、ビヒクル及びトランスフェクション対照と比べて、ＧＳＫ−３βリン酸化（ｐＳｅｒ9）のレベルを有意に増加させた（パネルＩ、レーン４〜５）。ＧＳＫ−３βの過剰発現は、調べた全てのホスホ−タウ部位の増加と一致したが（パネルＩＩ〜ＩＶ、レーン３）、レプチン処置とＡＩＣＡＲ処置は両方とも、これらの増加を有意に（ｐ＜０．０５）低下させた（パネルＩＩ〜ＩＶ、レーン４〜５）。この効果は、不活性なＧＳＫ−３βのレベルの増加によるものである可能性がある。
【０４１５】
要約すると、これらの知見は、レプチン及びその下流のシグナル伝達タンパク質であるＡＭＰＫが（ＡＩＣＡＲを介して）、ＧＳＫ−３βを阻害することにより、タウのリン酸化を低下させることを示唆する。
【０４１６】
実施例２．４．他の細胞型におけるレプチン及びＡＩＣＡＲ
レプチン及びＡＩＣＡＲを他の神経細胞で調べた。図１０は、他の神経細胞モデルにおけるレプチン及びＡＩＣＡＲの効果を示す。（Ａ）ヒトＩＭＲ−３２細胞及び（Ｂ）ラット初代皮質ニューロンを、レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ）又はビヒクル（無処置対照）で処置した。全細胞ライセートを調製し、リン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６、ＰＨＦ−１、ＡＴ８又はｐＳｅｒ１９１）を用いたイムノブロットで解析した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのタウ抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。半定量的バンド密度解析を表２に示す。（Ｃ）ＩＭＲ−３２細胞を（Ａ）と同様に処置し、リン酸化ＧＳＫ−３β（Ｓｅｒ９）をイムノブロットで測定した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのＧＳＫ−３βでリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。標準化したバンドをデンシトメトリーで解析した。結果を、無処置試料（これには０という値を恣意的に割り当てた）と比べた、倍数変化パーセントの平均±ＳＤとして示す。*対無処置（ビヒクル）。
【０４１７】
ＲＡで誘導した、ヒト神経芽細胞腫ＩＭＲ−３２細胞（図１０Ａ）及びラット初代皮質ニューロン（図１０Ｂ）をレプチン、ＡＩＣＡＲで処置するか又は無処置とした。この場合もやはり、レプチン及びＡＩＣＡＲは、ビヒクル処置細胞と比べて、全ての部位でのタウリン酸化の有意な（ｐ＜０．０５）減少を誘導した（表２）。表２では、図１０からの標準化したタウバンドをデンシトメトリーで解析した。結果を、ビヒクル（これには０という値を恣意的に割り当てた）と比べた、倍数変化パーセントの平均±ＳＤとして示す。*対ビヒクル。
【表２】
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【０４１８】
他のモデルでのタウリン酸化に対するレプチン及びＡＩＣＡＲの効果がＲＡ−ＳＹ５Ｙ（図８及び図９）と機構的に似ていることを確認するために、ＧＳＫ−３βのリン酸化を分化したＩＭＲ−３２細胞で測定した（図１０Ｃ）。レプチン及びＡＩＣＡＲは、ビヒクル対照と比べて、ＧＳＫ−３βリン酸化を有意に（ｐ＜０．０５）増加させた（灰色の棒）。
【０４１９】
これらの知見は、ＲＡ−ＳＹ５Ｙ細胞及び分化したＩＭＲ−３２細胞（図１０）でも観察されたように、レプチン及びＡＩＣＡＲが、ＧＳＫ−３βの不活性化を通じてタウを常にモジュレートしていることを示唆する。
【０４２０】
実施例２．５．タウリン酸化を調節する上流シグナル伝達事象
ＧＳＫ−３β不活性化の上流にあるＡＭＰＫの役割、より具体的には、レプチンのその受容体への結合からＧＳＫ−３βの不活性化へと至る上流のシグナル伝達事象を調べた。図１１は、レプチン及びＡＩＣＡＲが、重複するシグナル伝達経路を介してタウリン酸化を調節することを示す。（Ａ）ＲＡＳＹ５Ｙ細胞を、レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ−レーン３〜７）の存在下で、レプチンシグナル伝達の既知の下流エフェクター（ＳＴＡＴ３、ＡＭＰＫ、ＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ、ｐ３８）に対する阻害剤とともにインキュベートしたか、又は無処置（ビヒクル−レーン１）とした。レプチンのみで処置した細胞は、陽性対照（レーン２）としての役割を果たした。全細胞ライセートを調製し、リン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６、ＰＨＦ−１、ＡＴ８又はｐＳｅｒ１８１）を用いたイムノブロットで解析した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのタウ抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。標準化したタウバンドをデンシトメトリーで解析し、結果を、無処置試料（これには０という値を恣意的に割り当てた）と比べた、倍数変化パーセントの平均±ＳＤとして示す。（Ｂ）レプチンのみと比べてタウリン酸化を有意には変化させなかったもの（ＳＴＡＴ３、ホスファチジル−イノシトール−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ））を除き、（Ａ）からの全細胞ライセートを、リン酸化ＧＳＫ−３β特異的抗体を用いたイムノブロットで解析した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのＧＳＫ−３βでリプロービングした。結果（ｎ＝３）を（Ａ）と同様に示す。（Ｃ）レプチン、ＡＩＣＡＲ又はビヒクルで処置した細胞、及びタウリン酸化の調節に関与するシグナル伝達分子（Ｊａｋ２、ＡＭＰＫ、ｐ３８、Ａｋｔ）の活性化を、リン酸化特異的抗体を用いたイムノブロットで調べた。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにα−チューブリン抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。*対無処置（ビヒクル−レーン１）；**レプチンのみ（レーン２）。
【０４２１】
レプチンのその受容体への結合後に活性化される既知のシグナル伝達タンパク質に対する阻害剤の存在下又は非存在下において、ＲＡ−ＳＹ５Ｙ細胞をレプチンで処置した（濃度については、上記の第２．１節、材料及び方法を参照されたい）（図１１Ａ）。いくつかの異なるエピトープでのタウのリン酸化は、この場合もやはり、実験的エンドポイントの役割を果たした。レプチンのみ又はビヒクルで処置した細胞との比較を行なった。ＡＭＰＫ、Ａｋｔ（タンパク質キナーゼＢ）又はｐ３８  ＭＡＰキナーゼの阻害剤は、タウリン酸化を低下させるレプチンの能力を有意に（ｐ＜０．０５）妨げ（パネルＩ〜ＩＩＩ、レーン４、６及び７）、場合によっては、ビヒクル処置対照（すなわち、パネルＩＩ、レーン４、灰色の棒）と比べて、リン酸化を増加させた。同様のデータが、レプチンの非存在下において特異的阻害剤で処置した細胞から得られた（データは示さない）。
【０４２２】
ＡＭＰＫ、Ａｋｔ及び／又はｐ３８のレプチン介在性ＧＳＫ−３β不活性化への関与（図１１Ｂ）を調べた。ＡＭＰＫ、Ａｋｔ又はｐ３８  ＭＡＰキナーゼの阻害（レーン３〜５）は、レプチン誘導性のＧＳＫ−３βリン酸化の増加を有意に（ｐ＜０．０５）覆した（レーン２）。レプチンの非存在下において特異的阻害剤で処置した細胞は、ビヒクル対照と比べて、ＧＳＫ−３βリン酸化に有意には影響を及ぼさなかった（データは示さない）。
【０４２３】
レプチン処置後の上記のキナーゼのリン酸化（図１１Ｃ）を調べた。ＲＡ−ＳＹ５Ｙ細胞のレプチン処置は、調べた全てのキナーゼのリン酸化をもたらした（真ん中のレーン）。同様の結果が、ヤヌスキナーゼ２（Ｊａｋ２）（上の列、右のレーン）を例外として、ＡＭＰＫアクチベーターのＡＩＣＡＲについて観察され、従って、ＡＭＰＫがシグナル伝達カスケードにおいてＪａｋ２の下流にあることが確認された。
【０４２４】
要約すると、これらのデータは、レプチンのその受容体への結合とタウリン酸化をつなぐシグナル伝達経路に関する相当な情報を提供する。この経路は、ＡＭＰＫ、ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ、Ａｋｔ及びＧＳＫ−３βを含むが、これらに限定されない、いくつかの主なキナーゼによって調節されるようである。
【０４２５】
実施例２．６．レプチンはＡＭＰＫを介して全ての放出を調節する
Ａβ産生とタウリン酸化（両方とも、レプチンによりモジュレートされる）をもたらす経路の相互接続を調べた。
【０４２６】
Ａβ放出の調節におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）、ｐ３８及びレプチン−ＡＭＰＫ経路の役割を調べた。図１２は、レプチン及びＡＩＣＡＲが重複するシグナル伝達経路を介してＡβ産生を調節することを示す。（Ａ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙを、レプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ−レーン２）、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ−レーン６）及び／又は以下のシグナル伝達タンパク質−ＡＭＰＫ（レーン３及び７）、ＰＰＡＲγ（レーン４及び８）もしくはｐ３８（レーン５及び９）の各々に対する阻害剤で６時間処置した。無処置（ビヒクル−レーン１）細胞又は阻害剤のみで処置した細胞（レーン１０〜１２）は対照としての役割を果たした。培養培地を回収し、Ａβ（１−４０）についてＥＬＩＳＡでアッセイした。結果を細胞ライセート中の総タンパク質に対して標準化した。これを平均Ａβ濃度（ｐｇ／ｍｌ）±ＳＤとして示す。（Ｂ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙをレプチン、ＡＩＣＡＲ（２ｍＭ）で処置するか又は無処置（ビヒクル）とし、ＰＰＡＲγのレベルをイムノブロットで測定した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにα−チューブリン抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。*対無処置（ビヒクル−レーン１）；**レプチンのみ（レーン２）；＃対ＡＩＣＡＲのみ（レーン６）。
【０４２７】
可溶性Ａβの有意な（ｐ＜０．０５）減少は、レプチン（レーン２）又はＡＩＣＡＲ（レーン６）で処置した細胞で観察された。これらの効果は、ＡＭＰＫ（レーン３及び７）又はＰＰＡＲγ（レーン４及び８）阻害剤との共処置で打ち消されたが、ｐ３８阻害剤（レーン５及び９）との共処置では打ち消されなかった。
【０４２８】
更に、レプチン又はＡＩＣＡＲで６時間処置した細胞は、無処置対照と比べて、ＰＰＡＲγの発現を増加させ（図１２Ｂ）、それによりレプチンとＡＭＰＫとＰＰＡＲγの関連が証明された。
【０４２９】
これらの結果は、Ａβ産生が、タウのリン酸化に関係するエネルギー調節因子であるＡＭＰＫによってモジュレートされ得ることを示す。
【０４３０】
実施例２．７．タウ経路とＡβ経路はＡＭＰＫの下流で重複しない
ＡＭＰＫの先にあるレプチン介在性タウ経路とＡβ経路の重複（図１３）を調べた。図１３は、ＡＭＰＫの下流にあるレプチン及びＡＩＣＡＲシグナル伝達経路がタウリン酸化とＡβ産生の両方を仲介しないことを示す。（Ａ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙをレプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）のみ又はＡｋｔ阻害剤（１Ｌ６ＨＣＩ）の存在下で６時間処置した。無処置（ビヒクル）細胞は対照としての役割を果たした。培養培地を回収し、Ａβ（１−４０）についてＥＬＩＳＡでアッセイした。結果を細胞ライセート中の総タンパク質に対して標準化した。これを平均Ａβ濃度（ｐｇ／ｍｌ）±ＳＤとして示す。（Ｂ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙをレプチン（１６００ｎｇ／ｍｌ）のみ又はＰＰＡＲγ阻害剤（Ｇ３３３５）の存在下で６時間処置した。無処置（ビヒクル）細胞は対照としての役割を果たした。全細胞ライセートを調製し、リン酸化タウ特異的抗体（ｐＳｅｒ３９６、ＰＨＦ−１、ＡＴ８又はｐＳｅｒ１８１）を用いたイムノブロットで解析した。メンブレンをストリッピングし、標準化のためにトータルのタウ抗体でリプロービングした。代表的なブロットを示す（ｎ＝３）。標準化したタウバンドをデンシトメトリーで解析した。結果を、無処置試料（これには０という値を恣意的に割り当てた）と比べた、倍数変化パーセントの平均±ＳＤとして示す。（Ｃ）ＲＡ−ＳＹ５Ｙにおいてレプチン及びＡＩＣＡＲによって活性化されるシグナル伝達経路を示す図。レプチン又はＡＩＣＡＲのいずれかによるＡＭＰＫの活性化は、Ａβ産生とタウリン酸化の両方を減少させる。しかしながら、ＡＭＰＫの下流のシグナル伝達経路は、タウ又はＡβ特異的効果を仲介するように独立に働く；*対無処置（ビヒクル）。
【０４３１】
ＲＡ−ＳＹ５Ｙ細胞をＡｋｔ（図１３Ａ）又はＰＰＡＲγ（図１３Ｂ）阻害剤の存在下又は非存在下においてレプチンで処置した。ＡＩＣＡＲは、Ａｋｔのリン酸化（図１１Ｃ）とＰＰＡＲγの発現（図１２Ｂ）を増加させたが、Ａｋｔの阻害は、レプチン誘導性の可溶性Ａβ放出の低下を有意には覆すことができなかった（ｐ＞０．０５）（図１３Ａ、濃い灰色の棒）。同様に、ＰＰＡＲγの阻害は、調べた全ての部位でのレプチン誘導性のタウリン酸化の低下を有意には覆すことができなかった（ｐ＞０．０５）（図１３Ｂ、右側の棒セット）。従って、この２つの経路が共有するさらなる構成要素は同定されなかった。
【０４３２】
要約すると、レプチンは、神経細胞における異なるシグナル伝達経路を介してタウのリン酸化ならびにＡβの産生及び放出を調節する。これらの経路は、レプチン介在性のＡＭＰＫ活性化の下流で分岐して、特異的な効果を生じさせた。
【０４３３】
記載されている発明はその具体的な実施形態に関連して記載されているが、当業者は、本発明の真の精神及び範囲を逸脱することなく様々な変更を加えることが可能であり、同等物を代用することが可能であることを理解すべきである。更に、特定の状況、材料、物質の組成物、過程、過程の段階（単数又は複数）を、記載されている発明の目的、精神及び範囲に適応させるために多くの修正を加えることが可能である。このような修正はすべて、本明細書に添付される特許請求の範囲内であることが意図される。
【図１Ａ−Ｃ】
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【図２Ａ−Ｅ】
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【図３Ａ−Ｄ】
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【図４Ａ−Ｄ】
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【図５Ａ−Ｅ】
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【図６Ａ−Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ−Ｂ】
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【図８Ｃ−Ｄ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ−Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ−Ｃ】
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【図１２Ａ−Ｂ】
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【図１３Ａ−Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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