(57)【要約】本発明は、式：2012522827.tif 000045の三糖の改良された合成方法、該合成に用いる新規中間体、および該中間体の製造方法に関する。
2012522827.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式1：
【化１】
2012522827.tif 000031
[式中、R1は水素化分解により除去することができる基であり、R2は水素化分解により除去することができる基もしくはHである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を触媒的水素化分解にかけることを特徴とする2’-O-フコシルラクトースを製造するための一般式1の化合物の使用。
【請求項２】
触媒的水素化分解が、水中、1またはそれ以上のC1-C6アルコール中、または水と1またはそれ以上のC1-C6アルコールの混合物中で、パラジウムまたはラネーニッケルの存在下、好ましくはパラジウム/チャコールまたはパラジウムブラックの存在下で実施されることを特徴とする請求項1記載の使用。
【請求項３】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R2がHである、一般式1の化合物を用いることを特徴とする請求項1または2に記載の使用。
【請求項４】
一般式1：
【化２】
2012522827.tif 000032
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R2は、水素化分解により除去することができる基またはHである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項５】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R2がHである、請求項4記載の化合物。
【請求項６】
一般式2：
【化３】
2012522827.tif 000033
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R3は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、またはHである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキル環を形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を酸触媒弱加水分解にかけることを特徴とする請求項4記載の一般式1の化合物の製造方法。
【請求項７】
酸触媒弱加水分解が、水および1またはそれ以上のC1-C6アルコールの混合物中、スルホン酸の存在下で、好ましくは、水-イソプロパノール混合物中、p-トルエンスルホン酸の存在下で行われることを特徴とする請求項6記載の方法。
【請求項８】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり；R3がHであり；RおよびR’がメチルである、一般式2の化合物を適用することを特徴とする請求項6または7記載の方法。
【請求項９】
一般式2：
【化４】
2012522827.tif 000034
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R3は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、またはHである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキル環を形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１０】
R1がベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジル、または4-メチルベンジルであり、R3がHであり、RおよびR’がメチルである請求項9記載の化合物。
【請求項１１】
一般式3：
【化５】
2012522827.tif 000035
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R5は、水素化分解により除去することができる基または所望により置換されたアシルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を脱アシル化反応にかけることを特徴とする請求項4に記載の一般式1の化合物の製造方法。
【請求項１２】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり；R4がベンゾイルもしくは4-クロロベンゾイルであり；R5がピバロイル、ベンゾイル、もしくは4-クロロベンゾイルである、一般式3の化合物を、NaOMeまたはNaOHの存在下、メタノール中で脱アシル化することを特徴とする請求項11記載の方法。
【請求項１３】
（原文に記載なし）
【請求項１４】
一般式3：
【化６】
2012522827.tif 000036
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R5は、水素化分解により除去することができる基または所望により置換されたアシルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１５】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R4がベンゾイルもしくは4-クロロベンゾイルであり、R5がピバロイル、ベンゾイル、もしくは4-クロロベンゾイルである請求項14記載の化合物。
【請求項１６】
一般式4：
【化７】
2012522827.tif 000037
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R6は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、または所望により置換されたアシルである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキルを形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を脱アシル化することを特徴とする請求項9記載の一般式2の化合物の製造方法。
【請求項１７】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R4がベンゾイルもしくは4-クロロベンゾイルであり、R6がピバロイル、ベンゾイル、もしくは4-クロロベンゾイルであり、RおよびR’がメチルである、一般式4の化合物を、NaOMeまたはNaOHの存在下、メタノール中で脱アシル化することを特徴とする請求項16記載の方法。
【請求項１８】
一般式4：
【化８】
2012522827.tif 000038
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R6は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、または所望により置換されたアシルである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキルを形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を酸触媒弱加水分解にかけることを特徴とする請求項14記載の一般式3の化合物の合成方法。
【請求項１９】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R4がベンゾイルもしくは4-クロロベンゾイルであり、R6がピバロイル、ベンゾイル、もしくは4-クロロベンゾイルであり、RおよびR’がメチルである、一般式4の化合物を適用し、酸触媒弱加水分解を水性アセトニトリルもしくは水性アセトン中、p-トルエンスルホン酸またはHClの存在下で行うことを特徴とする請求項18記載の方法。
【請求項２０】
一般式4：
【化９】
2012522827.tif 000039
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R6は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、または所望により置換されたアシルである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキルを形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項２１】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R4がベンゾイルもしくは4-クロロベンゾイルであり、R6がピバロイル、ベンゾイル、もしくは4-クロロベンゾイルであり、RおよびR’がメチルである請求項20記載の化合物。
【請求項２２】
一般式5：
【化１０】
2012522827.tif 000040
[式中、R1およびR4は請求項20と同意義である；Xは、ハロゲン、-OC(=NH)CCl3、-O-ペンテニル、-OAc、-OBz、または-SR7であり、R7は、アルキルまたは所望により置換されたフェニルである。]
の化合物を、一般式6：
【化１１】
2012522827.tif 000041
[式中、R、R’、およびR6は、請求項20と同意義である。]
の化合物とグリコシル化条件下で反応させることを特徴とする請求項20記載の一般式4の化合物の合成方法。
【請求項２３】
THF、トルエン、DCM、またはそれらの混合物、好ましくは、THF-DCM混合物中、プロモーターとして臭素またはNBS、好ましくはNBSを用いて、トリフリル酸とのグリコシル化反応を行うことを特徴とする22記載の方法。
【請求項２４】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジルであり；R4がベンゾイルもしくは4-クロロベンゾイルであり；Xが所望により1またはそれ以上のアルキルで置換されたフェニルチオである一般式5の化合物を、RおよびR’がメチルであり、R6が、ピバロイル、ベンゾイル、または4-クロロベンゾイルである一般式6の化合物と反応させることを特徴とする請求項22または23に記載の方法。
【請求項２５】
請求項22に記載の一般式5の化合物に属する一般式7：
【化１２】
2012522827.tif 000042
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は、所望により置換されたアシルである；R7は、アルキルまたは所望により置換されたフェニルである。]
の化合物、ただし、フェニル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-ベンジル-1-チオ-L-フコピラノシド、メチル 3,4-ジ-O-アセチル-2-O-ベンジル-1-チオ-L-フコピラノシド、エチル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-ベンジル-1-チオ-L-フコピラノシド、およびエチル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-(4-メトキシベンジル)-1-チオ-L-フコピラノシドを除く。
【請求項２６】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、1-ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、3-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジルであり、R4がベンゾイルもしくは4-クロロベンゾイルであり、R7が非置換フェニルである請求項25記載の化合物。
【請求項２７】
一般式8：
【化１３】
2012522827.tif 000043
[式中、R1およびR7は請求項25と同意義である。]
の化合物をアシル化剤によりアシル化することを特徴とする請求項25に記載の一般式7の化合物の合成方法。
【請求項２８】
ベンゾイルもしくは塩化4-クロロベンゾイルをアシル化剤として用いる請求項27記載の方法。
【請求項２９】
一般式1：
【化１４】
2012522827.tif 000044
[式中、R1は水素化分解により除去することができる基であり、R2は水素化分解により除去することができる基もしくはHである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を触媒的水素化分解にかけること特徴とする2’-O-フコシルラクトースの製造方法。
【請求項３０】
触媒的水素化分解を、水中、1またはそれ以上のC1-C6アルコール中、または水および1またはそれ以上のC1-C6アルコールの混合物中で、パラジウムまたはラネーニッケルの存在下、好ましくはパラジウム/チャコールまたはパラジウムブラックの存在下で行うことを特徴とする請求項29記載の方法。
【請求項３１】
R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルまたは4-メチルベンジルであり、R2がHである、一般式1の化合物を適用することを特徴とする請求項29または30記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、三糖の新規合成方法、該合成に用いる新規中間体、および該中間体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、その生体内で生じる多くの生物学的プロセスにおける役割により、分泌オリゴ糖を含む複合炭水化物の合成を商業化する努力が著しく増加している。分泌オリゴ糖、例えば、ヒト乳オリゴ糖は、栄養産業および治療産業において重要な商業的目標になってきた。しかしながら、該オリゴ糖およびその中間体の合成および精製は、依然として科学的に困難な課題である。最も重要なヒト乳オリゴ糖の1つが、母乳中の濃度が最も高い2’-O-フコシルラクトース(α-L-フコピラノシル-(1→2)-β-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-D-グルコース、「2’-FL」)である。
【０００３】
【化１】
2012522827.tif 000003
スキーム1.  2’-O-フコシルラクトースの構造
【０００４】
限定されるものではないが、前生物的、抗菌的、抗ウイルス的な作用、免疫系増強、脳の発達増強などの作用を含む2’-O-フコシルラクトースの種々の生物学的役割が示唆されており、これが栄養産業および治療産業用に大規模製造/単離/精製するための魅力的な目標にする。2’-O-フコシルラクトースは、化学的方法論および酵素的方法論で合成されているが、効率的な精製方法や合成方法が無いため、商業的に魅力的な製造方法は開発されていなかった。現在の科学的知識によれば、2’-O-フコシルラクトースは結晶三糖ではないので、高純度の2’-O-フコシルラクトースを製造するのに適した大規模/低コストの製造技術を困難な課題にしている。
【０００５】
単離、化学合成、酵素的合成、およびバイオテクノロジー的方法論を用いる4つの異なるアプローチにより2’-O-フコシルラクトースを得ることができる。
【０００６】
HMOの文献への最初の記載は1950年代であった。その際は、特定のヒト乳オリゴ糖は洗練されたクロマトグラフィプロトコールを用いてヒト乳から単離された。しかしながら、そのような初期に単離された試料の純度は、母乳中に存在するヒト乳オリゴ糖異性体の数が多いためかなり不明確である。例えば、2’-O-フコシルラクトースおよび3-O-フコシルラクトースは、共にヒト乳中に存在し、それらのクロマトグラフィによる分離は数十年後に解決された。後になって、他の哺乳動物由来の乳もこれらのオリゴ糖のいくつかを、ヒト乳とは異なる割合できわめて低濃度で含むことがわかった。後年、化学的、酵素的、およびバイオテクノロジー的な方法論による2’-O-フコシルラクトースの製造は大きく進歩した。しかしながら、これらの方法論のほとんどは商業的に魅力的な価格帯でバルク量の2’-O-フコシルラクトースを提供する大規模生産に成功しなかった。
【０００７】
2’-O-フコシルラクトースの酵素的合成は、酵素的クローニング/突然変異技術を用いて最近10年間の間に著しく発達した。ある特定のアプローチは、フコシダーゼ酵素を1,2-α-L-フコシンターゼに変換して、グリコシド結合の合成を促進し、同時にこの加水分解を避ける。残念ながら、1,2-α-L-フコシンターゼは、大量には市販されておらず、今日まで製造技術の開発に適していない。第2の酵素的アプローチは、α-(1→2)フコシルトランスフェラーゼ、α-(1→2)-L-ガラクトシルトランスフェラーゼを用いてグリコシド間(interglycosidic)結合を作成することである。これら酵素は、かなり不安定であり、実際に大規模生産には適していない。さらに、そのような酵素は、ほとんど利用できず、きわめて高価な糖ヌクレオチド形ドナーを必要とする。第3のアプローチは、保持α-L-フコシダーゼの使用に基づくが、達成された選択性および収量は通常かなり少量である。
【０００８】
遺伝子操作された微生物または哺乳動物を、2’-O-フコシルラクトースを合成するためのバイオテクノロジー方法論に用いる。そのような技術では、前駆体の生合成と必要なグリコシル化の両方を促進する複雑な酵素系を用いる。これまで、そのようなアプローチは、遺伝子操作された生物を用いること、および非天然オリゴ糖が混入する可能性があることにより厳しい規制認可の問題を抱えている。
【０００９】
化学合成は、今日まで依然として2’-O-フコシルラクトースの最も経済的に効率的な製造方法である。大規模化学合成の問題には、立体選択性が低く、全体収量が低いこと、洗練された高価な精製方法論、例えばカラムクロマトグラフィを用いること、および食品/治療用製品の開発に適していない毒性試薬を用いることがある。
【００１０】
従来技術では、全ての合成に、必須の構成要素としてラクトースアクセプターおよび完全に保護されたL-フコースドナーを用いてきた。アプローチ間の違いは、異なる保護基戦略、グリコシル化方法論、および最終精製方針に関連する。本発明者らの知る限り、2’-O-フコシルラクトースの最初の化学合成は1981年[1]に発表され、それ以来、さらに4つの化学合成[2-5]と1つの化学酵素合成[6]が発表された。
【００１１】
2’-O-フコシルラクトースの最初の化学合成は、6-O-ベンゾイル化ラクトースアクセプターおよびトリ-O-ベンジル化α-フコピラノシルブロミドドナーを用い、次いで保護基を連続して除去するものが1981年[1]にK.L. Mattaらによって発表された。該合成は、中間体段階において、ベンジル保護基のみを含む最終中間体に達するために数回のクロマトグラフィ精製工程を含む。この化合物をクロマトグラフィにかけ、精製した試料を二水和物としてメタノール-エーテルから結晶化する。しかしながら、この二水和物は、扱いにくい溶解性により最終脱保護(触媒的水素化分解)工程においてかなり不都合であることがわかった。実際に、極度に希釈した溶液はアルコール/水/酢酸混合物中のそのような二水和物からのみ製造することができ、これを効率的な製造技術の開発に適さないものにしている。さらに、合成の最初から(二糖段階および三糖段階の両方で)結晶中間体を欠くことが、製造技術の開発を妨げる。複数のクロマトグラフィ分離およびきわめて不安定なパー-O-ベンジル化ブロモ糖の使用は該アプローチを技術開発に適さないものにしている。
【００１２】
1986年に、M. Martin-Lomas [2]らは、イソプロピリデン保護された最終2’-FL中間体を製造する2’-O-フコシルラクトースの合成法を発表した。最終脱保護段階は、20％水性酢酸を用いる環式ケタール加水分解である。該合成戦略では、非常に希少なラクトースジオールアクセプターを利用し、これが大量製造を困難にする。実際に、前駆体それ自体が、該アプローチを大規模技術の開発において競争力のないものにする。さらに、多くのクロマトグラフィ精製が中間体の単離に必要であり、該アプローチは結晶化による安価な精製法の選択を促すかもしれない結晶中間体を提供しない。最終脱保護は、環式ケタール加水分解であり、これはL-フコース残基が酸に不安定であるためデリケートな工程である。環式ケタールの加水分解開裂条件は、副産物の形成を防ぐためかなり穏やかでなくてはならない。しかしながら、穏やかな加水分解条件では反応混合物中に加水分解されない環式ケタールが存在することになる。すなわち、粗2’-O-フコシルラクトースの産生にはさらにクロマトグラフィ精製が必要である。上記欠点により、該アプローチは製造技術開発に適さない。
【００１３】
K.L. Mattaらは、最終2’-FL中間体のトリフルオロ酢酸支援加水分解を促進する保護基戦略を選択するさらなる2つの合成法[3、4]を発表した。両合成法では、同じアクセプターを用いるが、用いる4-メトキシベンジル化ドナー分子が異なる。1つのアプローチではIDCPで活性化したn-ペンテニルを用いるが、第2のアプローチはチオグリコシド活性化に基づく。IDCPプロモーターを有するペンテニルグリコシドの使用は、それ自体が該ドナーの利用可能性が限られ、該アクセプターが高額であるため製造技術の開発を妨げる。チオグリコシド活性化の場合は、該フコシル化工程は比(9:1)のα/β混合物をもたらし、目的としないβ-生成物から目的とする立体異性体を分離するにはかなり困難なクロマトグラフィ精製が必要であった。すなわち、これら方法論にはいずれも何トン規模で2’-O-フコシルラクトースを製造する能力はない。
【００１４】
1997年に、H. Hashimotoらは、アクセプターおよびドナー分子の両方(イソプロピリデンおよび4-メトキシベンジル)上に、硝酸セリウムアンモニウム処理[5]を介して三糖中間体において除去される酸/酸性不安定性保護基を用いる合成戦略を開発した。該アプローチは、取り扱いがかなり難しく、大量のセリウムアンモニウム塩が混入している極性生成物をもたらす。2’-O-フコシルラクトースおよび無機不純物は共に水溶性物質であり、合成の必須の精製工程としてO-アセチル化、次いでZemplen脱保護が必要であった。該アプローチには、カップリング試薬としてのIDCPの使用、CAN(高価で毒性がある)を用いるp-メトキシベンジル基の除去、および塩基感受性最終産物の存在下でのナトリウムメトキシドを用いる最終2’-FL中間体のO-脱アセチル化などの多くの欠点がある。一般的には、還元糖を強塩基で処理すると高純度の2’-O-フコシルラクトースを製造することはできない。
【００１５】
2001年に、L. Layらは、酵素的方法と化学的方法の両方を用いる2’-O-フコシルラクトースの合成方法を紹介した[6]。このアプローチでは、β-ベンジルラクトシド由来アクセプターを、位置選択的に直角な保護基を組み込む酵素的操作を用いて合成した。合成戦略の最終部分は、フコシル化、O-脱アセチル化、および水素化分解の3工程からなる。残念なことに、該方法は、リパーゼ支援アシル化の収量が比較的少ないこと、毒性および爆発性があるヒドラジン誘導体を使用すること、および結晶中間体を欠くことにより商業化の関心が全く持たれなかった。全ての合成にわたる複数のクロマトグラフィ工程は、製造技術の開発を妨げた。
【００１６】
まとめると、単離技術は、ヒト乳中に存在する多数のオリゴ糖により2’-O-フコシルラクトースを含む大量のヒト乳オリゴ糖を得ることを可能にしない。さらに、きわめて同様な構造を特徴とする位置異性体の存在は、分離技術を失敗させた。酵素的方法論は、酵素の利用可能性が低く、糖ヌクレオチドドナーの価格がきわめて高いこと、および遺伝子修飾された生物により産生される酵素を用いることによる規制上の困難さに悩まされる。バイオテクノロジーによるヒト乳オリゴ糖の製造は、種々の非天然グリコシル化産物が形成される可能性があるため多大な規制的障害がある。今までに、2’-O-フコシルラクトースを合成するために開発されたすべての化学的方法には種々の欠点があり、数十グラム量の2’-O-フコシルラクトースの製造すら妨げられた。化学的アプローチの最も重大な欠点は、低コストの精製方法論を促進し、規模拡大の機会を増すための結晶中間体のための設計が無いことである。すなわち、2’-O-フコシルラクトースを製造するのに適したしっかりした合成方法の開発に対する要望が増加してきている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明は、2’-O-フコシルラクトースの大規模製造に適した方法論および2’-O-フコシルラクトースを合成するための新規中間体を提供する。本発明は、新規の保護2’-O-フコシルラクトース中間体のO-ベンジル/置換O-ベンジル部分の水素化分解を利用することに基づく。さらに、上記新規O-ベンジル化/置換O-ベンジル化2’-O-フコシルラクトース中間体が強力な精製方法を支援するすばらしい結晶特性を有することも本発明の重要な特性である。例えば、2’-O-フコシルラクトース誘導体の高い結晶特性の認識は、生成物/中間体精製のための完全な結晶化を用いる強力な製造方法の開発を可能にした。より重要なことは、本発明が提供する新規2’-O-フコシルラクトース中間体を採用することで規模拡大の選択肢の最初の機会が開かれる。本発明以前には、安価な精製の選択肢が無いため複雑な一連の反応を連続的に行う必要があった。新規結晶2’-O-フコシルラクトース中間体は、化学工程を互いに分離し、規模拡大した開発の機会を現実に与えることができる。本発明が提供する結晶新規中間体は、栄養産業および医薬産業用にバルク量の高純度の2’-O-フコシルラクトースをもたらすのに適した最初の2’-O-フコシルラクトース製造技術の開発を担う。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
(発明の要約)
本発明の第1の局面は、一般式1：
【化２】
2012522827.tif 000004
[式中、R1は水素化分解により除去することができる基であり、R2は水素化分解により除去することができる基もしくはHである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を触媒的水素化分解にかけることを特徴とする2’-O-フコシルラクトースを製造するための一般式1の化合物の使用に関する。
【００１９】
本発明の第2の局面は新規一般式1の化合物を提供することである。一般式1の化合物は触媒的水素化分解により2’-O-フコシルラクトースに変換される。
【００２０】
本発明の第3の局面は、一般式2：
【化３】
2012522827.tif 000005
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R3は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、またはHである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキル環を形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を酸触媒弱加水分解にかけることを特徴とする一般式1の化合物の製造方法に関する。
【００２１】
本発明の第4の局面は、一般式2の新規化合物を提供することである。
【００２２】
本発明の第5の局面は、一般式3：
【化４】
2012522827.tif 000006
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R5は、水素化分解により除去することができる基または所望により置換されたアシルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を脱アシル化反応にかけることを特徴とする一般式1の化合物の製造方法に関する。
【００２３】
本発明の第6の局面は、一般式3の新規化合物を提供することである。
【００２４】
本発明の第7の局面は、一般式4：
【化５】
2012522827.tif 000007
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R6は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、または所望により置換されたアシルである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキルを形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を脱アシル化することを特徴とする一般式2の化合物の製造方法に関する。
【００２５】
本発明の第8の局面は、一般式4：
【化６】
2012522827.tif 000008
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R6は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、または所望により置換されたアシルである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキルを形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を酸触媒弱加水分解にかけることを特徴とする一般式3の化合物の製造方法に関する。
【００２６】
本発明の第9の局面は、一般式4の化合物を提供することである。
【００２７】
本発明の第10の局面は、一般式5：
【化７】
2012522827.tif 000009
[式中、R1およびR4は上記と同意義である；Xは、ハロゲン、-OC(=NH)CCl3、-O-ペンテニル、-OAc、-OBz、または-SR7であり、R7は、アルキルまたは所望により置換されたフェニルである。]
の化合物を、一般式6：
【化８】
2012522827.tif 000010
[式中、R、R’、およびR6は、上記と同意義である。]
の化合物とグリコシル化条件下で反応させることを特徴とする一般式4の化合物の合成方法に関する。
【００２８】
本発明の第11の局面は、一般式7：
【化９】
2012522827.tif 000011
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は、所望により置換されたアシルである；R7は、アルキルまたは所望により置換されたフェニルである。]
の新規化合物(ただし、フェニル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-ベンジル-1-チオ-L-フコピラノシド、メチル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-ベンジル-1-チオ-L-フコピラノシド、エチル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-ベンジル-1-チオ-L-フコピラノシド、およびエチル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-(4-メトキシベンジル)-1-チオ-L-フコピラノシドを除く)を提供することである。
【００２９】
本発明の第12の局面は、一般式8：
【化１０】
2012522827.tif 000012
[式中、R1およびR7は上記と同意義である。]
の化合物をアシル化剤によりアシル化することを特徴とする一般式7の新規化合物の製造に適した方法論を提供することである。
【００３０】
本発明の第13の局面は、一般式1：
【化１１】
2012522827.tif 000013
[式中、R1は水素化分解により除去することができる基であり、R2は水素化分解により除去することができる基もしくはHである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を触媒的水素化分解にかけること特徴とする2’-O-フコシルラクトースの製造方法に関する。
(発明の詳細な開示)
【００３１】
本明細書を通して、用語「アルキル」は、炭素数1〜20、好ましくは炭素数1〜6の直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素基、例えば、メチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、i-ブチル、s-ブチル、t-ブチル、n-ヘキシルなどを表す。用語「所望により置換されたアルキル」は、アルキル鎖が1、2、3、4、または5個の置換基を有するか、もしくは置換されていないことを意味するものとする。考えられる置換基は、互いに独立してハロゲン、ヒドロキシル、所望により置換されたアルキルオキシ、ニトロ、アミノ、所望により置換されたアルキルアミノ、所望により置換されたジアルキルアミノ、所望により置換されたアシル、所望により置換されたアシルアミノ、カルボキシル、所望により置換されたアルキルオキシカルボニル、カルバモイル、所望により置換されたN-アルキルカルバモイル、所望により置換されたN,N-ジアルキルカルバモイル、所望により置換されたN-アリールカルバモイル、チオール、所望により置換されたアルキルスルファニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたアリールオキシ、および所望により置換されたアリールオキシカルボニルから選ばれる。ベンジル基は置換アルキルのメンバーとみなされる(すなわち、フェニルメチル)ことが強調される。所望により置換されたベンジルは、メチル基と結合した所望により置換されたフェニル(下記参照)、例えば4-メチルベンジル、3-フェニルベンジル、4-メトキシベンジルなどを意味するものとする。
【００３２】
本願において、用語「アリール」は、単独でまたは別の原子もしくは基と結合している場合は、ホモ芳香族基、例えば、フェニルもしくはナフチルを表す。これらのグループが「所望により置換された」場合は、それらは置換されていないか、または互いに独立して以下のものを含む1、2、3、4、または5個の基を有しうる：所望により置換されたアルキル、所望により置換されたアルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、アミノ、所望により置換されたアルキルアミノ、所望により置換されたジアルキルアミノ、所望により置換されたアシル、所望により置換されたアシルアミノ、カルボキシル、所望により置換されたアルコキシカルボニル、カルバモイル、所望により置換されたN-アルキルカルバモイル、所望により置換されたN,N-ジアルキルカルバモイル、チオール、所望により置換されたアルキルスルファニル、および所望により置換されたフェニル。
【００３３】
本明細書において、用語「アシル」は、R”が、H、アルキル(上記参照)、もしくはアリール(上記参照)、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、ピバロイル、ベンゾイルなどであるR”-C(=O)-基を表す。「所望により置換されたアシル」の場合は、該アルキルもしくはアリール残基は、置換されていないか、または置換されており(上記参照)、アシル基、例えば、クロロアセチル、トリクロロアセチル、4-クロロベンゾイル、4-ニトロベンゾイル、4-フェニルベンゾイル、4-ベンズアミドベンゾイル、4-(フェニルカルバモイル)-ベンゾイルなどを生じ得る。RがHもしくはアルキルを意味する場合は、該基はアルカノイルとも呼ばれ、Rがアリールである場合は、該基はアロイルと呼ばれる。
【００３４】
用語「アルキルオキシ」または「アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子部分と結合しているアルキル基(上記参照)、例えばメトキシ、エトキシ、t-ブトキシなどを意味する。「所望により置換されたアルキルオキシ」または「所望により置換されたアルコキシ」は、置換されていないか、または上記アルキル部分で置換されているアルキルオキシ基、例えばトリフルオロメトキシ、2,2,2-トリクロロエトキシなどであってよい。
【００３５】
「C3-C6シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルを表す。
【００３６】
「C1-C6アルコール」は、炭素数1〜6のヒドロキシ-またはジヒドロキシ-アルカン、例えば、メタノール、エタノール、n-プロパノール、i-プロパノール、n-ブタノール、i-ブタノール、s-ブタノール、t-ブタノール、アミルアルコール、n-ヘキサノール、エチレングリコール、プロピレングリコールなどを表す。
【００３７】
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを意味する。
【００３８】
「アミノ」は-NH2基を表す。
【００３９】
「アルキルアミノ」は、-NH-基を介して親分子部分と結合しているアルキル基(上記参照)、例えばメチルアミノ、エチルアミノなどを意味する。「所望により置換されたアルキルアミノ」は、置換されていないか、または上記アルキル部分で置換されうるアルキルアミノ基を表す。
【００４０】
「ジアルキルアミノ」は、窒素原子を介して親分子部分と結合している同じかまたは異なる2つのアルキル基(上記参照)、例えばジメチルアミノ、ジエチルアミノなどを表す。「所望により置換されたジアルキルアミノ」は、該アルキル部分の少なくとも1が置換されていないか、または上記のごとく置換されうるジアルキルアミノ基を表す。
【００４１】
「アシルアミノ」は、-NH-基を介して親分子部分と結合しているアシル基(上記参照)、例えばアセチルアミノ(アセトアミド)、ベンゾイルアミノ(ベンズアミド)などを表す。「所望により置換されたアシルアミノ」は、置換されていないか、または上記アシル部分で置換されうるアシルアミノ基である。
【００４２】
「カルボキシル」は-COOH基を表す。
【００４３】
「アルキルオキシカルボニル」は、-C(=O)-基を介して親分子部分と結合しているアルキルオキシ基(上記参照)、例えばメトキシカルボニル、t-ブトキシカルボニルなどを意味する。「所望により置換されたアルキルオキシカルボニル」は、置換されていないか、または上記アルキル部分で置換されうるアルキルオキシカルボニル基、例えばベンジルオキシカルボニルなどである。
【００４４】
「カルバモイル」はH2N-C(=O)-基である。
【００４５】
「N-アルキルカルバモイル」は、-HN-C(=O)-基を介して親分子部分と結合しているアルキル基(上記参照)、例えばN-メチルカルバモイルなどを意味する。「所望により置換されたN-アルキルカルバモイル」は、置換されていないか、または上記アルキル部分で置換されうるN-アルキルカルバモイル基である。
【００４６】
「N,N-ジアルキルカルバモイル」は、>N-C(=O)-基を介して親分子部分と結合している同じまたは異なる2つのアルキル基(上記参照)、例えばN,N-メチルカルバモイルなどを意味する。「所望により置換されたN,N-ジアルキルカルバモイル」は、アルキル部分の少なくとも1が置換されていないか、または上記のごとく置換されうるN,N-ジアルキルカルバモイル基である。
【００４７】
「N-アリールカルバモイル」は、-HN-C(=O)-基を介して親分子部分と結合しているアリール基(上記参照)、例えばN-フェニルカルバモイルなどである。「所望により置換されたN-アリールカルバモイル」は、置換されていないか、または上記アリール部分で置換されうるN-アリールカルバモイル基である。
【００４８】
「チオール」は-SH基を表す。
【００４９】
「アルキルスルファニル」または「アルキルチオ」は、硫黄原子を介して親分子部分と結合しているアルキル基(上記参照)、例えばメチルスルファニル(メチルチオ)、エチルスルファニル(エチルチオ)などを意味するものとする。「所望により置換されたアルキルスルファニル」は、置換されていないか、または上記アルキル部分で置換されうるアルキルスルファニル基を表す。
【００５０】
「アリールオキシ」は、酸素原子を介して親分子部分と結合しているアリール基(上記参照)、例えばフェノキシ、ナフチルオキシなどを意味する。「所望により置換されたアリールオキシ」は、置換されていないか、または上記アリール部分で置換されうるアリールオキシ基、例えば4-メトキシ-フェノキシ、4-メチルフェノキシなどを表す。
【００５１】
「アリールオキシカルボニル」は、-C(=O)-基を介して親分子部分と結合しているアリールオキシ基(上記参照)、例えばフェノキシカルボニルなどを表す。「所望により置換されたアリールオキシカルボニル」は、置換されていないか、または上記アリール部分で置換されうるアリールオキシカルボニル基である。
【００５２】
「アジド」は-N3基を意味する。
【００５３】
複合オリゴ糖、例えば2’-O-フコシルラクトースの合成は、保護および脱保護戦略を用いる多段階合成経路に従う。オリゴ糖合成の広範な中間体構造にも関わらず、最終合成目的物は、通常、もっぱら水溶性を特徴とする非保護オリゴ糖それ自身である。合成製造工程に通常用いる有機溶媒は、オリゴ糖合成の最終段階の反応に適していない。水素化分解は、水を溶媒として用いることができる保護基化学の例外を表す。水素化分解それ自体は、副産物の形成を抑制するきわめて穏やかな条件下でほとんどの定量的方法でオリゴ糖骨格からO-ベンジル/置換O-ベンジル部分を除去するのに適した強力な脱保護工程である。また、水素化分解は、もっぱらトルエンまたは置換トルエン誘導体を副産物としてもたらす反応の完結に触媒量の試薬しか必要としない複雑な合成経路内で最終脱ブロック化法として利点がある。トルエンと置換トルエン誘導体は、トンの規模でも水溶性オリゴ糖産物から蒸発および/または抽出プロセスを介して容易に除去することができる。
【００５４】
多数のパー-O-ベンジル化オリゴ糖の製造は先の科学文献に記載されているが、これらのオリゴ糖誘導体は、ほとんど結晶固体にならず、水和誘導体の油状物またはシロップをもたらす。しかしながら、本発明は、例えば、最も進歩的なオリゴ糖中間体に複数のO-ベンジル部分を導入することにより極性分子領域を作製し、および/またはアノマー純度を調節するなどの注意深い構造設計により簡単なO-ベンジル化新規オリゴ糖に結晶固体をもたらす多くの例を提供する。他方、本発明は、選択した置換O-ベンジル保護基で修飾した、高結晶特性のオリゴ糖中間体も利用する。
【００５５】
高結晶O-ベンジル化および/または置換O-ベンジル化オリゴ糖中間体の水素化分解を用いる組み合わせは、潜在的オリゴ糖製造技術の根本となる。
【００５６】
上記のように、多くのオリゴ糖は、油状物またはシロップをもたらし、製造精製技術を高価なクロマトグラフィに限定する。非保護オリゴ糖の高水溶性および低有機溶媒溶解性は、精製技術の範囲を高コストの逆相分離にさらに狭める。本発明は、最初に粗オリゴ糖混合物を結晶O-ベンジル化/置換O-ベンジル化オリゴ糖に変換し、第2段階で低コストの精製手段である結晶化を用い、最終段階でO-ベンジル/置換O-ベンジル保護基を除去することにより、高純度の保護されていないオリゴ糖を製造するための別の低コストの精製プロトコールを提供する。
【００５７】
実際に、本発明では、水素化分解のきわめて有利な特性と高結晶特性のO-ベンジル化/置換O-ベンジル化オリゴ糖中間体を組み合わせる。
【００５８】
本発明の第1の局面は、一般式1：
【化１２】
2012522827.tif 000014
［式中、R1は水素化分解により除去することができる基であり、R2は水素化分解により除去することができる基もしくはHである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を触媒的水素化分解にかけること特徴とする2’-O-フコシルラクトースを製造するための一般式1の化合物の使用に関する。
【００５９】
用語「水素化分解により除去することができる基」は、酸素と結合した結合が、保護された1またはそれ以上のOH-基を再生させるパラジウム、ラネーニッケル、または適切な金属触媒の存在下で水素の添加により簡単に分離する基をいう。保護基の種類は、当業者によく知られており、その多くはP.G.M. Wuts and T.W. Greene：Protective groups in organic organic synthesis、John Wiley & Sons(2007)に記載されており、これには、限定されるものではないが、ベンジル、ジフェニルメチル(ベンズヒドリル)、1-ナフチルメチル、2-ナフチルメチル、ベンジルオキシメチル、ベンジルオキシカルボニル、またはトリフェニルメチル(トリチル)基が含まれる(これらはすべて、所望により、1またはそれ以上のアルキル、アルコキシ、フェニル、アミノ、アシルアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、カルバモイル、N-アルキルカルバモイル、N,N-ジアルキルカルバモイル、アジド、ハロゲンアルキル、もしくは芳香族環上のハロゲンで置換されることがある)。
【００６０】
用語「触媒的水素化分解」は、典型的にはプロトン性溶媒またはプロトン性溶媒の混合物中で生じる、触媒存在下で水素で還元することを意味するものとする。プロトン性溶媒は、水、酢酸、またはC1-C6アルコールからなる群から選ぶことができる。1またはそれ以上のプロトン性溶媒と、プロトン性溶媒(例えば、THF、ジオキサン、酢酸エチル、アセトンなど)と部分的もしくは完全に混和する1またはそれ以上の適切な非プロトン性有機溶媒の混合物も適用することができる。水、1またはそれ以上のC1-C6アルコール、または水と1またはそれ以上のC1-C6アルコールの混合物を、好ましくは溶媒系として用いる。あらゆる濃度の炭化水素誘導体を含む溶液、および用いる溶媒と該炭化水素誘導体とのサスペンジョンも適用することができる。該反応混合物を、10〜100℃の温度範囲、好ましくは20〜50℃で、触媒、例えば、パラジウム、ラネーニッケル、またはあらゆる他の適切な金属触媒、好ましくは、パラジウム/チャコールまたはパラジウムブラックの存在下、1〜50barの水素雰囲気中で該反応が完結するまで撹拌する。触媒金属濃度は、一般に炭化水素の重量に基づいて0.1％〜10％の範囲である。好ましくは、該触媒濃度は、0.15％〜5％、より好ましくは0.25％〜2.25％の範囲である。水素がin situでシクロヘキセン、シクロヘキサジエン、ギ酸、またはギ酸アンモニウムから生じる場合は、移動水素化を行うこともできる。水素化分解混合物のpHは、好ましくは中性であるが、有機または無機塩基/酸および/または塩基性および/または酸性イオン交換樹脂を用いて水素化分解の動力学を改善することもできる。該前駆体の置換ベンジル部分にハロゲン置換基が存在する場合は、塩基性物質の使用が特に好ましい。有機酸は、複数のベンジル基を該前駆体から除去しなければならない場合に共溶媒または添加剤として用いることが好ましい。好ましい有機塩基には、限定されるものではないがトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、アンモニア、カルバミン酸アンモニウム、ジエチルアミンなどが含まれる。好ましい有機酸には、限定されるものではないがギ酸、酢酸、プロピオン酸、クロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸などが含まれる。提案した条件は、大規模な方法の研究を可能にし、2’−FLを製造するための産業的方法の開発を可能にする。さらに、該溶媒の簡単な好都合で繊細な除去を適用し、高純度の2’−FLを高収量で得ることができる。
【００６１】
ある好ましい態様において、本発明の方法論により製造した2’-O-フコシルラクトースは、冷却するか、またはエーテル(限定されるものではないがMTBE、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテルなどを含む)および/またはC1-C6アルコールの添加により水/有機溶媒/水性溶液から沈殿させることにより非晶質固体として単離することができる。あるいはまた、2’-O-フコシルラクトースは凍結乾燥およびスプレー乾燥により単離することもできる。
【００６２】
ある好ましい態様において、一般式1によって特徴づけられる化合物の水素化分解は、中性条件で、水または水-アルコール混合物を溶媒に用い、2〜10％パラジウム/チャコールまたはパラジウムブラックを触媒に用いて、温度20〜60℃、水素圧1〜10atmで行われる。水素化分解が完結した後、反応混合物を濾過し、好ましくは有機溶媒成分を除去して濃縮し、沈殿、スプレー乾燥、凍結乾燥により調節的に無水および/または水和2’-O-フコシルラクトース(水含有率0〜20％)を製造する。
【００６３】
別の好ましい態様において、一般式1によって特徴づけられる化合物の水素化分解は、中性条件で、水または水-アルコール混合物を溶媒に用い、2〜10％パラジウム/チャコールまたはパラジウムブラックを触媒に用いて、水素圧1〜10atm、温度20〜60℃で行う。水素化分解が完結した後、反応混合物を濾過し、好ましくは濃縮して、濃度10〜95％の2’-O-フコシルラクトースを含む2’-O-フコシルラクトース水性溶液/シロップを得る。
【００６４】
本発明の好ましい実現では、一般式1の化合物(ここで、R1は、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、もしくは2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルまたは4-メチルベンジルであり、R2はHである。)を水素化分解に用いる。
【００６５】
本発明により提供される固体形の2’-O-フコシルラクトース、例えば、非晶質/凍結乾燥/スプレー乾燥、ならびに液体形の2’-O-フコシルラクトース、例えば、水性溶液/シロップはいずれも、限定されるものではないが幼児用調整粉乳(infant formula)、乳児用シリアル、臨床用乳児用栄養製品などを含む乳児の栄養的使用に適した高純度の2'-FLを有する。一般的に、本発明の方法論により製造される固体および液体形の2’-O-フコシルラクトースはいずれも、乳児、幼児、小児、成人、および高齢者の種々の栄養的使用に適している。本発明が提供する固体形および液体形の2’-O-フコシルラクトースはいずれも、食品添加物、栄養補助剤、アルコール性および非アルコール性飲料(例えばソフトドリンク、フルーツジュース、容器入り飲料水、ワイン、ビールなど)の成分として用いることもできる。本発明が提供する固体形および液体形の2’-O-フコシルラクトースはいずれも、限定されるものではないが、細菌およびウイルス感染の予防、下痢の予防、免疫系の増強、および脳の発達などを含む広い治療的適用領域において治療剤として用いることもできる。本発明が提供する固体形および液体形の2’-O-フコシルラクトースはいずれも、限定されるものではないが、家畜の感染症の処置を含む獣医的適用に用いることもできる。本発明が提供する2’-O-フコシルラクトースは、細菌およびウイルスとの多価結合をもたらす重合/ポリマー組み込み生成物を製造するための重要なモノマーとして用いることもできる。本発明が提供する2’-O-フコシルラクトースは、さらなるフコシル化、さらなるシアリル化、N-アセチルラクトサミニル化/N-アセチルイソラクトサミン化などを介するコア構造のさらなる伸長といった単純な構造的修飾を含む化学的および/または酵素的方法論を適用することにより他のヒト乳オリゴ糖を製造するために用いることもできる。
【００６６】
本発明の第2の局面は、一般式1：
【化１３】
2012522827.tif 000015
[式中、R1は水素化分解により除去することができる基であり、R2は水素化分解により除去することができる基もしくはHである。]
で示される新規三糖、またはその水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００６７】
一般式1で示される新規誘導体は、唯一の化学的存在、例えばαおよびβアノマー、またはαおよびβ異性体のアノマー混合物と考えることができることが強く強調される。一般式1の新規2’-O-フコシルラクトース中間体は、結晶固体、油状物、シロップ、沈殿非晶質物質、またはスプレー乾燥産物で特徴づけることができる。結晶の場合は、一般式1の化合物は、無水結晶形、または1分子またはそれ以上の水を結晶構造中に取り込むことにより水和結晶形で存在するかもしれない。同様に、一般式1で示される新規化合物は、リガンド、例えば有機分子および/またはイオンをその結晶構造中に取り込んだ結晶物質として存在するかもしれない。
【００６８】
ある好ましい態様において、新規三糖は、R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ベンジルオキシカルボニル、ナフチルメチル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルまたは4-メチルベンジルであり、R2がHである一般式1により特徴づけられる。
【００６９】
本発明が提供する新規一般式1の化合物は、当該分野で知られた化学的/酵素的方法論を用いて2’-O-フコシルラクトースそれ自体や他の2’-O-フコシルラクトース誘導体を製造するのに用いることができる。一般式1の新規化合物は、多くのヒト乳オリゴ糖を産生/製造するための進歩的な前駆体/中間体として用いることもできる。一般式1の新規化合物は、治療的/栄養的使用に適した複合オリゴ糖/オリゴ結合体を合成するための有用な中間体とみなすこともできる。
【００７０】
本発明の第3の局面は、一般式2：
【化１４】
2012522827.tif 000016
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R3は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、またはHである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキル環を形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を酸触媒弱加水分解にかけることを特徴とする一般式1の化合物の製造方法に関する。
【００７１】
用語「アセタルタイプの基」は、保護されるヒドロキシル基の酸素原子と共に、下記一般構造：
【化１５】
2012522827.tif 000017
[式中、Ra、Rb、およびRcは炭素結合基である。]
で特徴づけられる同じ炭素原子と結合した2個の単結合酸素を有する構造を形成する保護基を意味する。この種の基は当業者によく知られており、その多くは、P.G.M. Wuts and T.W. Greene：Protected groups in organic sythesis John Wiley & Sons(2007)に記載されており、限定されるものではないが、メトキシメチル、t-ブトキシメチル、2-メトキシ-エトキシメチル、ベンジルオキシメチル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、1,4-ジオキサン-2-イル、1-メチル-1-メトキシエチル、1-メチル-1-フェノキシエチルなどが含まれる。アセタールタイプの保護基は弱酸性条件下で不安定である。
【００７２】
用語「シリル基」は、保護すべきヒドロキシ基の酸素原子と共有結合したケイ素原子を含む保護基(シリルエーテル)を意味する。この種の基は当業者によく知られており、その多くはP.G.M. Wuts and T.W. Greene：Protected groups in organic sythesis John Wiley & Sons(2007)に記載されており、限定されるものではないが、トリメチルシリル、トリイソプロピルシリル、t-ブチルジメチルシリル、t-ブチルジフェニルシリルなどが含まれる。該シリルエーテルは弱酸性条件下で不安定である。
【００７３】
用語「酸触媒弱(mild)加水分解」は、水を、pH＞2の酸の存在下で酸に不安定な保護基を有する別の物質と反応させて保護された官能基を再生する化学反応を表す。この文脈において、酸に不安定な保護基は、第1もしくは第2ヒドロキシル(非環式アセタールもしくはシリルエーテルの形の)、1,2-ジオール系(環式アセタールの形の)、またはホルミル基(アセタールの形の)の保護基であり得る。出発化合物は、同時もしくは連続的に除去することができる1またはそれ以上の酸に不安定な保護基を有し得る。さらに、出発化合物は、アシル保護基も含むことができる。当業者は、アシル基を強酸性加水分解(pH＜2)によってのみ脱保護することができることを十分認識している。当業者は、どの保護条件がアシル基を完全にしたままでアセタールおよび/またはシリル基に影響を及ぼすかを区別することができる。また、さらにグリコシド間結合は酸に感受性であり得る。当業者は、グリコシド間結合を強酸性加水分解(pH＜2)によってのみ分離することができることを十分認識している。当業者は、どの保護条件がグリコシド間結合を完全にしたままでアセタールおよび/またはシリル基に影響を及ぼすかを区別することができる。反応環境中に試薬として存在すべき水は、溶媒または共溶媒としても働くことがある。酸性条件下で安定であり、水と完全もしくは部分的に混和性の有機プロトン性または非プロトン性溶媒、例えば、C1-C6アルコール、アセトン、THF、ジオキサン、酢酸エチル、MeCNなどを水との混合物に用いることができる。用いる酸は、一般的には、触媒的量〜大過剰で存在し得る、限定されるものではないが酢酸、トリフルオロ酢酸、HCl、ギ酸、硫酸、過塩素酸、シュウ酸、p-トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、陽イオン交換樹脂などから選ばれるプロトン酸である。加水分解は、完結するまで20℃〜環流温度で行うことができ、これは温度、濃度、およびpHに応じて約2時間〜3日間かかる。好ましくは、限定されるものではないが、酢酸、ギ酸、クロロ酢酸、シュウ酸などの水溶液を含む有機酸を40〜75℃で用いる。別の好ましい態様では、HClもしくはスルホン酸、例えば、p-トルエンスルホン酸もしくはカンファースルホン酸の存在下でC1-C6アルコール-アセトニトリルもしくはC1-C6アルコール-水混合物を用いる。
【００７４】
あるいはまた、限定されるものではないがメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどを含む無水C1-C6アルコールを、酸触媒トランスアセタール化/トランスケタール化工程を介する非環式/環式アセタール/ケタール部分の必要な開裂に用いることもできる。触媒的量の塩化水素、硫酸、過塩素酸、p-トルエンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、カンファースルホン酸、強酸性イオン交換樹脂などを20℃〜環流温度で該目的に用いることができる。
【００７５】
好ましい態様において、該酸触媒弱加水分解は、水および1またはそれ以上のC1-C6アルコールの混合物中で、スルホン酸の存在下で、好ましくは、水-イソプロパノール混合物中、p-トルエンスルホン酸の存在下で行う。
【００７６】
好ましい態様において、R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R3がHであり、RおよびR’がメチルである一般式2を特徴とする化合物を適用する。
【００７７】
本発明の第4の局面は、一般式2：
【化１６】
2012522827.tif 000018
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R3は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、またはHである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキル環を形成する基である；R’はアルキルである。]
を特徴とする新規オリゴ糖誘導体またはその水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００７８】
一般式2の新規2’-O-フコシルラクトース中間体は、結晶固体、油状物、シロップ、沈殿非晶質物質、またはスプレー乾燥生成物として特徴づけることができる。結晶の場合は、一般式2の化合物は、無水結晶形または結晶構造中に1または数分子の水を取り込むことにより水和結晶形で存在し得る。同様に、一般式2で特徴づけられる新規化合物は、リガンド、例えば、有機分子および/またはイオンを結晶構造中に取り込んだ結晶物質として存在するかも知れない。
【００７９】
ある好ましい態様において、該新規オリゴ糖は、R1が、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R3がHであり、RおよびR’が共にメチルである一般式2によって特徴づけられる。
【００８０】
本発明によって提供される一般式2の新規化合物は、当該分野で知られた化学/酵素的方法論を用いることにより、2’-O-フコシルラクトースおよび他の2’-O-フコシルラクトース誘導体の製造に用いることができる。一般式2の新規化合物は、多くのヒト乳オリゴ糖を産生/製造するための進歩した前駆体/中間体として用いることもできる。一般式2の新規化合物は、治療的/栄養的使用に適した複合オリゴ糖/糖複合体を合成するための有用な中間体と考えることもできる。
【００８１】
本発明の第5の局面は、一般式3：
【化１７】
2012522827.tif 000019
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R5は、水素化分解により除去することができる基、または所望により置換されたアシルである。]
の化合物の脱アシル化を含む一般式1の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物の製造方法に関する。
【００８２】
用語「脱アシル化」はO-アシル保護基を除去することを意味する。脱アシル化方法は、ヒドロキシルからアシル保護基を、アルコール溶媒、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、t-ブタノールなど中で、アルコラート、例えばNaOMe、NaOEt、KOtBuなどの存在下、20〜100℃の温度で除去する塩基触媒エステル交換(トランスエステル化)脱保護でありうる。該アルコールと該アルコラートを適合させるべきである。生成物の粒子サイズを調節し、ゲルの形成を避けるために、トルエンまたはキシレンのような共溶媒を用いるのが有用かもしれない。好ましい態様において、触媒的量のNaOMeを40〜60℃にてメタノールまたはメタノール-トルエン混合物中で用いる(Zemplen脱アシル化)。さらなる脱アシル化方法は、塩基性加水分解であり得、これは、一般的には、0〜100℃の変化する温度で均一または不均一反応条件下、水、アルコール、または水-有機溶媒混合物中の塩基触媒加水分解を意味する。選択する塩基は、一般的には強塩基、例えば、LiOH、NaOH、KOH、Ba(OH)2、K2CO3、塩基性イオン交換樹脂、テトラアルキルアンモニウムヒドロキシドなどである。該塩基は、水性溶液の形でも用いることができる。好ましい態様において、該塩基はNaOHであり、該溶媒はメタノールである。別の脱アシル化方法は、アミノ分解(N-アシル転移ベースの脱保護)であり得、これは20〜120℃の温度で水、アルコール、または水-有機溶媒混合物中のアンモニア、ヒドラジン、置換ヒドラジン、エチレンジアミン、または第1アミンで処理することを意味する。上記のいずれかの脱アシル化条件下で、酸に不安定な保護基またはグリコシド間結合は影響を受けない。
【００８３】
より好ましい条件では、一般式3の化合物[式中、R1は、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R4は、ベンゾイルまたは4-クロロベンゾイルであり、R5はピバロイル、ベンゾイル、もしくは4-クロロベンゾイルである。]を、NaOMeまたはNaOHの存在下、メタノール中で脱アシル化する。
【００８４】
本発明の第6の局面は、一般式3：
【化１８】
2012522827.tif 000020
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R5は水素化分解により除去することができる基または所望により置換されたアシルである。]
で特徴づけられる新規オリゴ糖誘導体またはその水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００８５】
一般式3で特徴づけられる新規誘導体は、単一の化学的存在、例えばαまたはβアノマーまたはαおよびβ異性体のアノマー混合物とも考えることができることが強く強調される。一般式3の新規2’-O-フコシルラクトース中間体は、結晶固体、油状物、シロップ、沈殿非晶質物質、またはスプレー乾燥生成物として特徴づけることができる。結晶の場合、一般式3の化合物は、無水結晶形、または1またはそれ以上の水分子が結晶構造中に組み込まれた水和結晶形で存在するかも知れない。同様に、一般式3で特徴づけられる新規化合物は、リガンド、例えば、有機分子および/またはイオンが結晶構造中に組み込まれた結晶物質として存在するかもしれない。
【００８６】
好ましい態様において、新規オリゴ糖は、一般式3［式中、R1は、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R4は、所望により1またはそれ以上のハロゲンで置換されたベンゾイルであり、R5は、所望により1またはそれ以上のハロゲンで置換されたアルカノイルまたはベンゾイルである。]により特徴づけられる。さらにより好ましい態様では、R1は、ベンジルまたは4-メチルベンジルであり、R4はベンゾイルもしくは4-クロロベンゾイルであり、R5は、ピバロイル、ベンゾイル、もしくは4-クロロベンゾイルである。
【００８７】
本発明により提供される一般式3の新規化合物は、当該分野で知られた化学的/酵素的方法論を用いることにより2’-O-フコシルラクトースおよび他の2’-O-フコシルラクトース誘導体を製造するために用いることができる。一般式3の新規化合物は、多くのヒト乳オリゴ糖を産生/製造するための進歩的な前駆体/中間体として用いることもできる。一般式3の新規化合物は、治療的/栄養的使用に適した複合オリゴ糖/糖複合体を合成するための有用な中間体とみなすこともできる。
【００８８】
本発明の第7の局面は、一般式4：
【化１９】
2012522827.tif 000021
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R6は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、または所望により置換されたアシルである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキルを形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物の脱アシル化を含む一般式2の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物の製造方法に関する。
【００８９】
より好ましい条件では、一般式4の化合物[式中、R1は、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R4はベンゾイルもしくは4-クロロベンゾイルであり、R6はピバロイル、ベンゾイル、もしくは4-クロロベンゾイルであり、RおよびR’はメチルである。]を、NaOMeまたはNaOHの存在下、メタノール中で脱アシル化する。
【００９０】
本発明の第8の局面は、一般式3：
【化２０】
2012522827.tif 000022
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R5は、水素化分解により除去することができる基または所望により置換されたアシルである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物の製造方法であって、一般式4：
【化２１】
2012522827.tif 000023
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R6は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、または所望により置換されたアシルである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキルを形成する基である；R’はアルキルである。]
の化合物の酸触媒弱加水分解を含む製造方法に関する。
【００９１】
好ましい態様では、一般式4の化合物[式中、R1は、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルであり、R4はベンゾイルもしくは4-クロロベンゾイルであり、R6はピバロイル、ベンゾイル、もしくは4-クロロベンゾイルであり、RおよびR’はメチルである。]を、p-トルエンスルホン酸またはHClの存在下、水性アセトニトリルまたは水性アセトン中で加水分解する。
【００９２】
本発明の第9の局面において、一般式4：
【化２２】
2012522827.tif 000024
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は所望により置換されたアシルである；R6は、水素化分解により除去することができる基、アセタルタイプの基、シリル基、または所望により置換されたアシルである；Rはアルキルもしくは2個のジェミナルR-基であってそれらが結合している炭素原子と一緒になってC3-C6シクロアルキルを形成する基である；R’はアルキルである。]
で特徴づけられる新規オリゴ糖誘導体、またはその水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００９３】
一般式4の新規2’-O-フコシルラクトース中間体は、結晶固体、油状物、シロップ、沈殿非晶質物質、またはスプレー乾燥生成物として特徴づけることができる。結晶の場合、一般式4の化合物は、無水結晶形、または1または数個の水分子が結晶構造中に組み込まれた水和結晶形で存在するかもしれない。同様に、一般式4で特徴づけられる新規化合物は結晶構造中にリガンド、例えば有機分子および/またはイオンが組み込まれた結晶物質として存在するかもしれない。
【００９４】
ある好ましい態様において、該新規オリゴ糖は、一般式4[式中、R1は、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルもしくは4-メチルベンジルである；R4は、所望により1またはそれ以上のハロゲンで置換されたベンゾイルである；R6は、アルカノイルまたは所望により1またはそれ以上のハロゲンで置換されたベンゾイルである；RおよびR’はメチルである。]で特徴づけられる。さらにより好ましい態様では、R1は、ベンジルまたは4-メチルベンジルであり、R4はベンゾイルまたは4-クロロベンゾイルであり、R6は、ピバロイル、ベンゾイル、または4-クロロベンゾイルである。
【００９５】
本発明により提供される一般式4の新規化合物は、当該分野で知られた化学的/酵素的方法論を用いることにより2’-O-フコシルラクトースおよび他の2’-O-フコシルラクトース誘導体を製造するために用いることができる。一般式4の新規化合物は、多くのヒト乳オリゴ糖を産生/製造するための進化した前駆体/中間体として用いることもできる。一般式4の新規化合物は、治療的/栄養的使用に適した複合オリゴ糖/糖複合体を合成するための有用な中間体とみなすこともできる。
【００９６】
本発明の第10の局面は、一般式5：
【化２３】
2012522827.tif 000025
[式中、R1およびR4は前記と同意義であり、Xはハロゲン、-OC(=NH)CCl3、-O-ペンテニル、-OAc、-OBz、または-SR7であり、R7は、アルキルまたは所望により置換されたフェニルである。]
のドナー化合物を、一般式6：
【化２４】
2012522827.tif 000026
[式中、R、R'、およびR6は前記と同意義である。]
のアクセプター化合物とグリコシル化条件下でカップリング反応させることを含む一般式4の化合物の製造方法に関する。
【００９７】
用語「グリコシド化条件」は、本発明の文脈において、非隣接基活性保護基戦略、溶媒効果、ハロゲン化物効果、プロモーター選択、および温度調節により結合体の立体選択性を調節することにより目的とするグリコシル化生成物を得るために、活性化剤の存在下、プロトン性溶媒またはプロトン性溶媒混合物中で反応させることを意味する。炭化水素の場合、グリコシル化のためのアノマー活性化のアレイが開発され、合成炭化水素化学分野の当業者が利用することができる。これら方法論は、総説や参考書で詳細に考察されている(例えば、Demchenko(Ed.)：Handbook of Chemical Glycosylation Wiley(2008))。例として、ある一般的な考察を、X-基に応じて以下に簡単に記載する(アクセプターおよびドナーの保護基はグリコシル化下で完全なままである。)。
【００９８】
ハロゲン化グリコシル(Xは、F、Cl、Br、Iを意味する。)は、利用しやすく、充分な反応性があるためグリコシル化反応に頻繁に用いられる。典型的には、アノマーハロゲン化物は、求核性置換についての反応性はF<Cl<Br<Iの順である。該グリコシル化反応は、一般的には、重金属イオン、主として水銀もしくは銀、およびルイス酸により促進される。フッ化グリコシルは、適切な前駆体、例えば、ヘミアセタール、ハロゲン化グリコシル、グリコシルエステル、およびS-グリコシドを、フッ素化試薬、例えば、HF、AgF、AgBF4、フッ化テトラブチルアンモニウム、三フッ化ジエチルアミノ硫黄、2-フルオロ-1-メチルピリジニウムトシレート、Selectfluor、Deoxo-Fluor、4-メチル(ジフルオロヨード)ベンゼンなどで処理することにより製造することができる。
【００９９】
グリコシルトリクロロアセトイミデート(X= -OC(=NH)CCl3)は、無機または有機塩基触媒下、遊離アノマーOHをトリクロロアセトニトリルに付加することにより容易に製造することができる。典型的グリコシル化反応において、触媒量のルイス酸、例えば、トリメチルシリルトリフラートまたはBF3-エーテルはカップリングを促進する。
【０１００】
グリコシル化反応において、最初にグリコシルアセテートもしくはベンゾエート(Xは、-OAcまたは-OBzを表す)を求電子的活性化して反応中間体を得、次いで求核OH-アクセプターで処理する。選択される典型的活性化剤は、ブレンステッド酸(例えば、p-TsOH、HClO4、スルファミン酸)、ルイス酸(例えば、ZnCl2、SnCl4、トリフラート塩、BF3-エーテル、トリチル過塩素酸塩、AlCl3、トリフリル酸無水物)、およびそれらの混合物である。
【０１０１】
グリコシルドナーとして、ペンテニルグリコシド(Xは-O-(CH2)3-CH=CH2を意味する)を、プロモーター、例えばNBSおよびNISの存在下、適切なグリコシルアクセプターでグリコシル転移させることができる。プロトン酸またはルイス酸(トリフリル酸、Ag-トリフラートなど)は該反応を増強しうる。ペンテニルグリコシドは、酸性条件下でのヘミアセタールの標準的Fischerグリコシル化、グリコシルブロミドの銀(I)塩促進カップリング(Koenigs-Knorr法)または塩化スズ(IV)存在下での1-アセチルグリコシドのグリコシル化によりn-ペンテノールを用いて製造することができる。
【０１０２】
チオグリコシド(Xは、アルキルチオ基または所望により置換されたフェニルチオ基を表す)は、縮合反応において、チオフィリックプロモーター、例えば、水銀(II)塩、Br2、I2、NBS、NIS、トリフリル酸、トリフラート塩、BF3-エーテル、トリメチルシリルトリフラート、ジメチル-メチルチオスルホニウムトリフラート、フェニルセレニルトリフラート、ヨードニウムジコリジン過塩素酸塩、ヨウ化テトラブチルアンモニウム、またはそれらの混合物により、好ましくは、Br2、NBS、NIS、またはトリフリル酸により、活性化することができる。
【０１０３】
好ましい方法において、選択されるグリコシルドナーは、一般式5：
【化２５】
2012522827.tif 000027
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4は、所望により置換されたアシルである；Xは、所望により1またはそれ以上のアルキルで置換されたフェニルチオである；より好ましくはR1は、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジルである；R4は、所望により1またはそれ以上のハロゲンで置換されたベンゾイルである；Xは非置換フェニルチオである；より好ましくは、R1はベンジルまたは4-メチルベンジルであり、R4はベンゾイルまたは4-クロロベンゾイルである。]
の化合物である。
【０１０４】
さらに好ましい方法において、選択されるグリコシルアクセプターは、一般式6の化合物[式中、RおよびR’はメチルであり、R6はピバロイル、ベンゾイル、または4-クロロベンゾイルである。]である。
【０１０５】
グリコシル化反応は、プロトン性溶媒、例えば、トルエン、THF、DCM、クロロホルム、ジオキサン、アセトニトリル、クロロベンゼン、エチレンジクロリド、DMSO、DMF、N-メチルピロリドンなど、またはそれらの混合物、好ましくは、THF、トルエン、DCM、またはそれらの混合物、より好ましくはTHF-DCM混合物中で、-20〜20℃、好ましくは、-10〜0℃で行う。チオフィリック活性化には、好ましくはトリフリル酸の存在下で、Br2、NBS、またはNISを用いる。通常、アクセプターに比べてわずかに過剰なドナー(1.1〜1.2eq)を用いる。反応時間は5分間から2時間まで変化する。反応を止めるには、一般的には、水またはアルコール、好ましくはアンモニアまたはトリエチルアミンのような塩基の水性もしくはアルコール性溶液、より好ましくは25％水酸化アンモニウムを用いる。
【０１０６】
一般式6のアクセプターの合成は、既知の方法で行うことができる。酸、例えばp-トルエンスルホン酸存在下、環流温度にて対称ケトンのジアルコキシケタールでラクトースを処理すると、2,3:5,6-ジ-O-アルキリデン-4-O-(3,4-O-アルキリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-D-グルコースジアルキルアセタールを生じる。ラクトースケトニドジオールの第1ヒドロキシル基の選択的6’-O-置換を、例えばR1-ヒドリドを含む塩基触媒反応により達成し、一般式6[式中、R6は水素化分解により除去することができる基である。]の化合物を得ることができる。限定されるものではないが水素化ナトリウム、カリウムtert-ブトキシド、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、炭酸カリウム、ジイソプロピルエチルアミン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデコ-7-エンを含む無機塩基および有機塩基はいずれも、例えばラクトースケトニドジオールの選択的6’-O-置換工程を触媒するのに適している。そのような反応は、溶媒、例えば、DMF、THF、ジオキサンなどを用いる均一溶液中、または水性相トランスアルキル化条件下で行うことができる。好ましくはNaHまたはカリウムtert-ブトキシドを、ジオキサンまたはDMF中、20〜80℃で用いる。選択的6-O-アシル化は、ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン存在下、有機溶媒、例えば、DCM、クロロホルム、THF、ジオキサン、アセトニトリルなどまたはそれらの混合物を-20〜80℃で用い、アシルハロゲン化物、無水物、活性エステルなどのような伝統的アシル化剤を用いて、R6がアシルである一般式6の化合物を得ることができる。6’-位のラクトースアセトニドジオールの選択的非環式アセタール形成を、例えばメトキシメチル、t-ブトキシメチル、2-メトキシエチル、ベンジルオキシメチル、2-テトラヒドロフラニルハロゲニドなどを用い、トリエチルアミン、モルホリン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンなどの存在下で、または例えば、ジヒドロピラン、1,4-ジヒドロジオキシン、ジヒドロフラン、2-メトキシプロペン、2-フェノキシプロペンなどを用い、有機溶媒、例えば、DMF、THF、ジオキサン、アセトニトリルなど中の酸存在下で、0〜60℃の温度で実施し、R6がアセタルタイプの基である一般式6の化合物を得ることができる。室温でアミン塩基(例えば、イミダゾール、トリエチルアミンなど)存在下でシリルクロリドを用いるか、または低温でヒンダードアミン塩基(例えば2,6-ルチジン)存在下でシリルトリフラートを用いるラクトースアセトニドジオールの選択的一次OH-シリル化反応は、R6がシリルである一般式6の化合物をもたらすことができる。
【０１０７】
本発明の第11の局面は、一般式5に属する一般式7：
【化２６】
2012522827.tif 000028
[式中、R1は、水素化分解により除去することができる基である；R4はアシルである；R7は、アルキルまたは所望により置換されたフェニルである；]
の化合物(ただし、フェニル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-ベンジル-1-チオ-L-フコピラノシド、メチル 3,4-ジ-O-アセチル-2-O-ベンジル-1-チオ-L-フコピラノシド、エチル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-ベンジル-1-チオ-L-フコピラノシド、およびエチル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-(4-メトキシ-ベンジル)-1-チオ-L-フコピラノシドを除く。)を提供することである。
【０１０８】
一般式7で特徴づけられる新規誘導体は、単一の化学的存在、例えば、αまたはβアノマー、またはαおよびβ異性体のアノマー混合物ともみなすことができる。一般式7の新規2’-O-フコシルラクトース中間体は、結晶固体、油状物、シロップ、沈殿非晶質物質、またはスプレー乾燥生成物として特徴づけることができる。結晶の場合、一般式7の化合物は、無水結晶形、または1または数個の水分子が結晶構造中に組み込まれた(これは、グリコシル化前に通常の方法で除去される。)水和結晶形で存在するかもしれない。同様に、一般式7で特徴づけられる新規化合物は、結晶構造中にリガンド、例えば有機分子および/またはイオンが組み込まれた結晶物質として存在するかもしれない。有機分子がアルコールの場合、該有機分子はグリコシル化前に通常の方法で除去される。
【０１０９】
ある好ましい態様において、該新規オリゴ糖は、一般式7[式中、R7は、所望により1またはそれ以上のアルキルで置換されたフェニルであり、該アノマー配置はβである；より好ましくはR1は、ベンジル、4-メチルベンジル、1-ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、3-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジルである；R4は、所望により1またはそれ以上のハロゲンで置換されたベンゾイルである；R7は非置換フェニルである；より好ましくは、R1はベンジルまたは4-メチルベンジルであり、R4はベンゾイルまたは4-クロロベンゾイルである。]
で特徴づけられる。
【０１１０】
本発明により提供される一般式7の新規化合物は、当該分野で知られた化学/酵素的方法論を用いることにより2’-O-フコシルラクトースおよび他の2’-O-フコシルラクトース誘導体を製造するのに用いることができる。一般式7の新規化合物は、多くのヒト乳オリゴ糖を産生/製造するための進化した前駆体/中間体として用いることもできる。一般式7の新規化合物は、治療的/栄養的使用に適した複合オリゴ糖/糖複合体を合成するための有用な中間体とみなすこともできる。
【０１１１】
本発明の第12の局面は、一般式8：
【化２７】
2012522827.tif 000029
[式中、R1は水素化分解により除去することができる基である；R7は、アルキルまたは所望により置換されたフェニルである。]
の化合物をアシル化剤でアシル化することを特徴とする一般式7の新規化合物を製造するのに適した方法論を提供する。
【０１１２】
用語「アシル化剤」は、R4-ハロゲニド、一般式(R4)2Oの無水物、式R4-OHのカルボン酸の活性誘導体、例えば、イミダゾリド、チオエステル、シリルエステル、ビニルエステル、テトラゾリド、オルトエステル、ヒドロキシ-ベンズトリアゾリルエステルなど、または式R4-OHのカルボン酸を意味することを意図し、適切なカップリング試薬は、例えば、Me3SiCl、DCC、BOP-Cl、TsCl/TEBACなどである(ここで、R4は前記の所望により置換されたアシルである。)。アシル化は、有機溶媒、例えば、DCM、クロロホルム、THF、ジオキサン、アセトニトリルなど、またはそれらの混合物中、ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどの存在下、-20〜80℃で行うことができる。好ましくは、ピリジンとDCMの混合物中のアシルクロリドを0〜20℃で用い、より好ましくはアシルはベンゾイルまたは4-クロロベンゾイルである。
【０１１３】
一般式8の化合物は、当該分野でよく知られた方法により容易に利用可能である。L-フコースをペルアセチル化し、次いでL-フコーステトラアセテートを、ルイス酸存在下R7SH(ここで、R7は前記と同意義である。)でチオール化して、所望により置換されたフェニル2,3,4-トリ-O-アセチル-1-チオ-β-L-フコピラノシドを得る。アセチル基の除去をZemplen条件下で達成し、得られたトリオールをジメトキシ-プロパン/酸で処理して3,4-アセトニドを形成する。次に、第2位の遊離OH-基をNaHで脱保護し、次いでアルコラートをR1-ハロゲニド(ここで、R1は前記と同意義である。)と反応させる。酸加水分解によるイソプロピリデンの除去により簡単に一般式8の化合物が得られる。
【０１１４】
本発明の第13の局面は、一般式1：
【化２８】
2012522827.tif 000030
[式中、R1は水素化分解により除去することができる基であり、R2は水素化分解により除去することができる基もしくはHである。]
の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を触媒的水素化分解にかけること特徴とする2’-O-フコシルラクトースの製造方法に関する。
【０１１５】
ある好ましい態様において、本発明の方法論により製造される2’-O-フコシルラクトースは、水/有機溶媒/水性溶液からの沈殿、冷却、またはエーテル(限定されるものではないがMTBE、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテルなどを含む)および/またはC1-C6アルコールの添加により非晶質固体として単離することができる。あるいはまた、2’-O-フコシルラクトースは、凍結乾燥およびスプレー乾燥により単離することができる。
【０１１６】
ある好ましい態様において、一般式1で特徴づけられる化合物の水素化分解は、中性条件下、水または水-アルコール混合物を溶媒とし、2〜10％パラジウム/チャコールまたはパラジウムブラックを触媒として用い、1〜10atmの水素圧中、20〜60℃の温度で行う。水素化分解が完結した後、反応混合物を濾過し、好ましくは有機溶媒成分を除去して濃縮し、次いで、沈殿、スプレー乾燥、凍結乾燥にかけて制御下で無水および/または水和2’-O-フコシルラクトース(水含有率0〜20％)を得る。
【０１１７】
別の好ましい態様において、一般式1で特徴づけられる化合物の水素化分解は、中性条件下、水または水-アルコール混合物を溶媒とし、2〜10％パラジウム/チャコールまたはパラジウムブラックを触媒として用い、1〜10atmの水素圧中、20〜60℃の温度で行う。水素化分解が完結した後、反応混合物を濾過し、好ましくは濃縮して2’-O-フコシルラクトース水性溶液/シロップを得る(2’-O-フコシルラクトース濃度は10〜95％)。
【０１１８】
本発明の好ましい実現には、一般式1の化合物[式中、R1は、ベンジル、4-メチルベンジル、ナフチルメチル、ベンジルオキシカルボニル、4-フェニルベンジル、4-クロロベンジル、4-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、2,4,6-トリメチルベンジル、または2,3,4,5,6-ペンタメチルベンジル、より好ましくはベンジルまたは4-メチルベンジルであり、R2はHである。]を水素化分解に用いる。
【０１１９】
本発明の他の特徴は、以下の具体的態様の説明により明らかになるだろう。この態様は本発明の例示であって、本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【０１２０】
4-O-(3,4-O-シクロヘキシリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-シクロヘキシリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
ラクトース(1.15 g)をシクロヘキサノンジメトキシケタール(10ml)に懸濁する。p-トルエンスルホン酸(45mg)を加え、反応混合物を85℃で２．５時間加熱する。次に、該混合物にEt3Nを加えて中和し、該溶媒を真空で濃縮し、残渣をDCM(60ml)に溶解し、有機相をH2O(2×50ml)および飽和NaHCO3(50ml)で洗浄する。さらにフラッシュクロマトグラフィ(EtOAc/ヘプタン6:4)で精製し、白色泡沫状の生成物を得る(1.35g、64％)。
1H NMR(300 MHz, CDCl3)：δ=4.54(dd, 1H, J=6.6, 7.9), 4.42(d, 1H, J=8.3), 4.35(m, 1H), 4.34(d, 1H, J=6.6), 4.26(dd, 1H, J=5.3, 8.7), 4.09-3.92(5H), 3.87(dd, 1H, J=1.3, 7.9), 3.80(m, 1H), 3.65(m, 1H), 3.49(m, 1H), 3.48および3.47(2s、それぞれ3H), 1.69-1.26(m, 30H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ=110.9, 110.3, 108.9, 107.2, 103.4, 79.0, 77.8, 77.5, 75.6, 75.1, 74.7, 74.4, 73.1, 63.9, 62.4, 57.4, 54.4, 37.8, 36.4, 35.8, 35.4, 34.9, 33.1, 25.2-23.6.
【実施例２】
【０１２１】
4-O-(6-O-アセチル-3,4-O-シクロヘキシリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-シクロヘキシリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
実施例1の化合物(0.526 g、0.83 mmol)を乾燥DCM(5ml)に溶解する。ピリジン(0.4ml、5.0 mmol)を加え、該混合物を-30℃に冷却する。DCM(0.5ml)に溶解した塩化アセチル(0.07ml、0.98 mmol)を10分間で加える。該混合物を-20℃で1時間撹拌する。MeOH(1ml)を加え、該混合物を室温に温める。DCM(20ml)を加え、該混合物を、H2O(50ml)、冷aq. HCl(0.5 M、30ml)、H2O(30ml)、NaHCO3(30ml)で洗浄し、次いで乾燥(Na2SO4)し、濾過し、次いで真空で蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィで精製し(ヘプタン/EtOAc、6:4)、白色泡沫状の生成物を得る(0.47 g、85％)。
1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ：4.43-4.26(6H, 非分割), 4.17(1H, dd, J=7.1, 8.6), 4.13(1H, dd, J=1.7, 1.7), 4.09-4.00(3H, 非分割), 3.93(1H, ddd, J=1.8, 4.6, 7.7), 3.85(1H, dd, J=1.5, 7.5), 3.61(1H, br s, OH), 3.51(1H, dd, J=6.6, 8.3, H-2´), 3.42(6H, s, 2×CH3O), 2.08(3H, s, CH3CO), 1.81-1.25(30H, 非分割, シクロヘキシル).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz) δ:170.82(CO), 110.9, 110.6, 108.9(3×(CH3)2C), 105.3, 103.7(C-1, C-1´), 78.5, 77.6, 77.6, 76.3, 74.7, 74.6, 72.8, 71.5(C-2, C-3, C-4, C-5, C-2´, C-3´, C-4´, C-5´), 64.3, 63.6(C-6, C-6´), 56.1, 53.3(2×OCH3), 37.7-33.9, 25.1-23.6(シクロヘキシル).
【実施例３】
【０１２２】
4-O-(6-O-トリチル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
3’,4’:2,3:5,6-トリ-O-イソプロピリデン-ラクトースジメチルアセタール(5.52 g、10.9 mmol)を乾燥ピリジン(100ml)に溶解する。塩化トリチル(6.0 g、21.5 mmol)をDMAP(0.30 g)と共に加え、該混合物を65℃に4時間加熱する。該混合物を真空で蒸発させ、次いでトルエン(3×30ml)と共蒸発させる。残渣をEtOAc(50ml)に溶解し、H2O(50ml)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、次いで真空で蒸発させる。フラッシュクロマトグラフィで精製し(ヘキサン/EtOAc、8:2、次いで4:6)、油状の生成物を得る(3.0 g、37％)。
1H NMR(CDCl3, 500 MHz) δ:7.45-7.22(15H, 3×Ph), 4.38(1H, d, J=8.5, H-1´), 4.38(1H, m), 4.36(1H, dd, J=6.5, 7.7), 4.27(1H, d, J=6.1, H-1), 4.26(1H, m), 4.14(1H, dd, J=6.4, 8.8), 4.08(1H, dd, J=5.6, 7.1), 4.00-3.97(2H, 非分割), 3.85(1H, dd, J=1.0, 7.6), 3.817(1H, ddd, J=1.8, 5.3, 7.7), 3.56-3.52(2H, 非分割), 3.25(1H, dd, J=5.3, 8.5), 3.22(3H, s, CH3O), 3.09(3H, s, CH3O), 1.52, 1.50, 1.42, 1.34, 1.33, 1.32(6 × C(CH3)2).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz) δ：143.8, 128.6, 127.7, 127.0(Ph), 110.1, 109.8, 108.2(3×(CH3)2C), 104.5, 103.9(C-1, C-1´), 86.7(C(Ph)3), 78.9, 77.9, 77.8, 76.1, 74.3, 74.2, 73.3, 72.5(C-2, C-3, C-4, C-5, C-2´, C-3´, C-4´, C-5´), 64.5, 62.0(C-6, C-6´), 55.7, 52.2(2×OMe), 28.2, 27.1, 26.3, 26.3, 25.5, 24.2(6× C(CH3)2).
【実施例４】
【０１２３】
4-O-(6-O-ピバロイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
3’,4’:2,3:5,6-トリ-O-イソプロピリデン-ラクトースジメチルアセタール(10 g、19.7 mmol)をDCM(80ml)およびピリジン(8ml、98.9 mmol)に溶解し、0℃に冷却した。塩化ピバロイル(8ml、39 mmol)を滴下し、該混合物を室温で20時間撹拌した。DCM(50ml)を加え、該混合物をH2O(80ml)、aq. HCl(1M、80ml)、H2O(80ml)、sat. NaHCO3(80ml)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、蒸発させ、次いでトルエンと共蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィで精製し(ヘキサン/EtOAc、3:2)、白色泡沫状の生成物を得た(7.1 g、61％)。
1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ：4.435(1H, d, J=8.2, H-1´), 4.411(1H, dd, J=6.0, 7.3, H-2), 4.361(1H, d, J=6.03, H-1), 4.312(1H, dd, J=6.8, 11.2, H-6´), 4.277(1H, m), 4.243(1H, dd, J=6.3, 11.1, H-6´), 4.173-4.034(4H, 非分割), 3.997(1H, dd, J=6.8, 8.8, H-6), 3.950(1H, ddd, J=2.2, 6.3, 6.4), 3.905(1H, dd, J=1.6, 7.3), 3.547(1H, dd, J=7.1, 8.1, H-2´), 3.428, 3.416(6H, 2×OMe), 1.500, 1.479, 1.374, 1.366, 1.318, 1.313(6×3H, s, 6×C(CH3)2), 1.200(9H, s, C(CH3)3). 
13C NMR(CDCl3, 75 MHz) δ:178.02(CO), 110.11, 110.07, 108.19(3×C(CH3)2),  104.99(C-1), 103.44(C-1´), 78.76, 77.79, 77.69, 75.93, 74.93, 74.07(C-2´), 72.99, 64.53(C-6´), 62.69(C-6), 56.20, 53.05(2×OCH3), 38.62(C(CH3)3), 28.02, 27.13, 27.01(C(CH3)3), 26.34, 26.11, 25.55, 24.347(6×CH3).
【実施例５】
【０１２４】
一般式6の化合物を適切なアシル化剤を用い実施例4に従って合成した。
a) 4-O-(6-O-(4-ニトロベンゾイル)-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
収率：98％、油状物
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ=8.30-8.23(m, 4H), 4.65(dd, 1H, J=4.5, 11.8), 4.58(dd, 1H, J=7.3, 11.8), 4.44(d, 1H, J=8.3), 4.42(dd, 1H, J=6.2, 7.8), 4.27(d, 1H, J=6.1), 4.27(ddd, 1H, J=6.7, 6.7, 2.3), 4.18(dd, 1H, J=5.5, 2.2), 4.16-4.10(4H), 4.01(dd, 1H, J=6.7, 8.8), 3.87(dd, 1H, J=1.5, 7.8), 3.79(s, 1H), 3.60(dd, 1H, J=7.8, 7.8), 3.36, 3.35(s, 2×3H), 1.52, 1.49, 1.36, 1.35, 1.34, 1.33(s, 6×3H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ=164.5, 150.6, 135.1, 131.0, 123.5, 110.5, 110.1, 108.3, 105.8, 103.9, 78.9, 77.8, 77.8, 76.6, 75.6, 74.2, 73.3, 71.4, 64.8, 64.7, 56.6, 54.3, 28.1, 27.2, 26.4, 26.3, 25.6, 24.7。
b) 4-O-(6-O-(4-フェニルベンゾイル)-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１２５】
収率：48％, 無色油状物
1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ：8.14-7.15(9H, 芳香族) 4.64(1H, dd, J=4.9, 11.6, H-6a´), 4.55(1H, dd, J=7.1, 11.6, H-6b´), 4.48(1H, dd, J=5.9, 7.8, H-2), 4.48(1H, d, J=8.1, H-1´), 4.27(1H, d, J=6.1, H-1), 4.27(1H, m), 4.22(1H, dd, J=5.5, 2.3), 4.19-4.10(4H, 非分割), 4.02(1H, dd, J=6.8, 8.8, H-6b), 3.91(1H, dd, J=1.5, 7.7, H-3), 3.63(1H, s, OH), 3.61(1H, dd, J=7.0, 6.9, H-2´), 3.35, 3.34(2×3H, s,OCH3), 1.54, 1.50, 1.40, 1.37, 1.36, 1.33(6×3H, s, 6×C(CH3)2).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz) δ：166.2(CO), 145.9, 139.8, 130.3-125.2(芳香族C), 110.4, 110.1, 108.3(3×C(CH3)2), 105.0, 103.7(C-1, C-1´), 78.9, 77.8, 77.8, 76.4, 75.0, 74.2, 73.4, 71.6(C-2, C-3, C-4, C-5, C-2´, C-3´, C-4´, C-5´), 64.6, 64.0(C-6, C-6´), 56.3, 53.2(2×OCH3), 28.1, 27.2, 26.4, 26.3, 25.6, 24.5(6×CH3)。
c) 4-O-(6-O-プロピオニル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１２６】
収率：81％, 無色油状
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ=4.42(dd, 1H, J=6.2, 7.5), 4.40(d, 1H, J=8.2), 4.35(d, 1H, J=6.1), 4.32-4.24(3H), 4.16-4.03(4H), 3.99(dd, 1H, J=6.8, 8.8), 3.93(ddd, 1H, J=2.1, 5.2, 7.2), 3.88(dd, 1H, J=1.6, 7.5, H-3), 3.54(dd, 1H, J=8.0, 8.0, H-2´), 3.41, 3.41(s, 2×3H), 2.34(q, 2H), 1.49, 1.47, 1.37, 1.36, 1.31, 1.31(s, 6×3H), 1.13(t, 3H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ=174.1, 110.3, 110.2, 108.3, 105.0, 103.6, 78.9, 77.9, 77.8, 76.3, 74.9, 74.1, 73.2, 71.4, 64.6, 63.2, 56.1, 53.0, 28.0, 27.3, 27.2, 26.3, 26.2, 25.6, 24.4, 8.95。
d) 4-O-(6-O-(4-クロロベンゾイル)-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１２７】
白色泡沫状
1H NMR(CDCl3)：δ=8.10および7.42(2 m、それぞれ2H), 4.55(2 ABq、それぞれ1H, J=4.6, 7.4, 11.7), 4.45(d, 1H, J=8.3), 4.43(m, 1H), 4.27(d, 1H, J=5.9), 4.11(m, 2H), 3.37および3.34(2 s、それぞれ3H), 1.52, 1.48, 1.38, 1.36, 1.36、および1.34(6 s、それぞれ3H).
13C NMR(CDCl3)：δ=165.4, 139.6, 131.2, 128.7, 128.2, 110.4, 110.1, 108.3, 105.2, 103.8, 78.9, 77.8, 77.8, 76.5, 75.2, 74.2, 73.3, 71.5, 64.6, 64.2, 56.4, 53.5, 28.07, 27.2, 26.3, 26.2, 25.6, 24.6。
e) 4-O-(6-O-(4-フェニルカルバモイル-ベンゾイル)-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１２８】
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ=1.33(s, 3H), 1.35(s, 3H), 1.37(s, 3H), 1.38(s, 3H), 1.50(s, 3H), 1.53(s, 3H), 3.33(s, 3H), 3.35(s, 3H), 3.58-3.64(m, 1H), 3.70(d, 1H, J=1.1), 3.89(dd, 1H, J=7.7, 1.4), 4.02(dd, 1H, J=8.8, 6.8), 4.10-4.15(m, 3H), 4.18-4.22(m, 1H), 4.26-4.30(m, 2H), 4.43-4.48(m, 2H), 4.54-4.67(m, 2H), 7.17(t, 1H, J=7.4), 7.39(t, 2H, J=7.6), 7.65(d, 2H, J=7.6), 7.94(d, 3H, J=8.5), 8.17(d, 2H, J=8.4).
f) 4-O-(6-O-(4-(4-ブロモフェニルカルバモイル)-ベンゾイル)-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１２９】
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ=1.33(s, 3H), 1.34(s, 3H), 1.36(s, 3H), 1.37(s, 3H), 1.49(s, 3H), 1.53(s, 3H), 3.32(s, 3H), 3.35(s, 3H), 3.5(d, 1H, J=4.5), 3.6(t, 1H, J=7.9), 3.86-3.89(m, 1H), 3.98-4.04(m, 1H), 4.08-4.13(m, 3H), 4.18-4.21(m, 1H), 4.27-4.30(m, 2H), 4.39-4.47(m, 2H), 4.57-4.64(m, 2H), 7.48(d, 2H, J=8.8), 7.56(d, 2H, J=8.8), 7.91(d, 2H, J=8.3), 8.01(s, 1H), 8.15(d, 2H, J=8.3)。
g) 4-O-(6-O-(4-ベンズアミドベンゾイル)-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１３０】
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ=1.33(s, 3H), 1.35(s, 3H), 1.37(s, 3H), 1.39(s, 3H), 1.50(s, 3H), 1.53(s, 3H), 3.33(s, 3H), 3.37(s, 3H), 3.60(t, 1H, J=7.8), 3.89(dd, 1H, J =7.7, 1.4), 4.01(dd, 1H, J=8.7, 6.8), 4.09-4.22(m, 5H), 4.26-4.32(m, 2H), 4.46-4.64(m, 4H), 7.50-7.58(m, 3H), 7.76(d, 2H, J=8.7), 7.88(d, 2H, J=7.9), 8.05(s, 1H), 8.08(d, 2H, J=8.7).
13C-NMR(75 MHz, CDCl3)：δ=24.52, 25.63, 26.27, 26.38, 27.21, 28.11, 53.10, 56.34, 63.89, 64.64, 71.59, 73.37, 74.26, 74.99, 76.35, 77.85, 78.93, 103.73, 104.98, 108.27, 110.16, 110.38, 119.14, 125.37, 127.04, 128.90, 131.09, 132.26, 134.42, 142.36, 165.77。
h) 4-O-(6-O-(4-(4-ニトロベンズアミド)-ベンゾイル)-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１３１】
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ=1.33(s, 3H), 1.34(s, 3H), 1.37(s, 3H), 1.38(s, 3H), 1.49(s, 3H), 1.51(s, 3H), 3.33(s, 3H), 3.37(s, 3H), 3.60(t, 1H, J=7.8 Hz), 3.89(dd, 1H, J1 =7.7, 1.4 Hz), 4.01(dd, 1H, J1=8.7, 6.8 Hz), 4.08-4.26(m, 5H), 4.26-4.37(m, 2H), 4.40-4.63(m, 4H), 7.77(d, 2H, J=8.7 Hz), 8.04-8.09(m, 4H), 8.31-8.34(m, 3H).
13C-NMR(75 MHz, CDCl3)：δ=24.47, 25.59, 26.23, 26.34, 27.18, 28.06, 53.09, 56.30, 63.98, 64.59, 71.51, 73.33, 74.27, 74.97, 76.35, 77.78, 77.87, 78.90, 103.67, 105.04, 108.26, 110.15, 110.38, 119.48, 123.98, 125.22, 126.01, 128.15, 128.39, 128.96, 131.08, 139.96, 141.72, 149.81, 163.82, 165.62。
i) 4-O-(6-O-(3,5-ジニトロベンゾイル)-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１３２】
収率：84％, 淡黄色泡沫状
13C NMR(CDCl3)：162.57, 148.92(2炭素), 133.83, 129.80(2炭素), 122.64, 110.88, 110.37, 108.53, 106.05, 104.19, 79.26, 78.01, 77.82, 77.14, 76.10, 74.38, 73.49, 71.36, 65.71, 64.89, 57.09, 54.77, 28.32, 27.26, 26.55, 26.50, 25.93, 24.84.
j) 4-O-(6-O-(ナフタレン-2-イルアセチル)-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
収率：89％, 白色泡沫状
13C NMR(CDCl3)：171.48, 133.64, 132.70, 131.47, 128.52, 128.22, 127.88, 127.84, 127.45, 126.46, 126.13, 110.526, 110.50, 108.51, 105.53, 103.93, 79.14, 78.20, 78.07, 76.67, 75.47, 74.38, 73.30, 71.40, 64.84, 63.75, 56.47, 53.72, 41,49, 28.30, 27.51, 26.64, 26.39, 25.88, 24.66。
【実施例６】
【０１３３】
4-O-(6-O-(4-アミノベンゾイル)-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
実施例5aの化合物(400mg、608μmol)を10mlのTHFに溶解し、次いでPd/C(50mg)を加える。懸濁液を、全ての出発物質が消費されるまでH2大気下で3日間撹拌する(TLCシステム：トルエン-アセトン 4:1および10％MeOH-DCM)。触媒をセライトで濾過し、残渣をクロマトグラフィで単離して(5:1 トルエン-アセトン)白色泡沫状の生成物を得た(収率89％(341mg))。
13C NMR(CDCl3)：166.56, 151.12, 132.04(2炭素), 119.51, 114.11(2炭素), 110.55, 110.35, 108.51, 104.98, 103.98, 79.19, 78.07, 78.04, 76.55, 75.12, 74.53, 73.66, 71.94, 64.91, 63.59, 56.47, 53.12, 28.36, 27.44, 26.63, 26.51, 25.90, 24.75.
【実施例７】
【０１３４】
テトラ-O-アセチル-L-フコース
ピリジン(295ml, 3.65 mol)を0℃に冷却し、次いでL-フコース(100 g、609 mmol)を撹拌しながら加える。Ac2O(287ml、3.04 mol)を3時間以内に滴下する。反応混合物を0℃で2時間、次いで室温で24時間撹拌する。メタノール(25ml、618 mmol)を滴下し、次いで反応混合物を30分間撹拌する。次に、反応混合物をトルエン(400ml)で希釈し、水(3x300ml)で洗浄する。水性相を混合し、トルエン(300ml)で抽出する。有機相を混合し、1N HCl(3x500ml)、水(2x500ml)、およびsat. NaHCO3溶液(300ml)で洗浄する。有機相を乾燥し、濃縮して乾燥し、無色シロップ状の生成物197g(98％)を得る。
【実施例８】
【０１３５】
フェニル2,3,4-トリ-O-アセチル-1-チオ-β-L-フコピラノシド
トルエン(200ml)中の実施例7の化合物の溶液(196 g、590 mmol)にチオフェノール(76ml、737 mmol)を加え、混合物を0℃に冷却する。BF3Et2O(112ml、885 mmol)を60分間で滴下し、次いで反応混合物を0℃で3時間、5℃で12時間、次いで室温で2時間撹拌する。得られた混合物を水(500ml)、水/ブライン(1:1)混合物(700ml)、1N NaOH/ブライン(1:1)混合物(400ml)、水/ブライン(1:1)混合物(700ml)、およびブライン(300ml)で洗浄する。混合および乾燥有機相を70℃で蒸発乾燥させ、224 gの標記化合物を得る(99%)。
【実施例９】
【０１３６】
フェニル1-チオ-β-L-フコピラノシド
実施例8の化合物(224 g)をメタノール(500ml)に溶解し、次いでNaOMe(2 g、37 mmol)を加える。反応混合物を40℃で２．５時間撹拌する。メタノール(250ml)を蒸留除去し、CO2を残存溶液に5分間通気してpH= 7とする。反応混合物を蒸発させ、イソブチルアセテート(450ml)を加える。50mlの溶媒を蒸発させ、得られる混合物を室温で24時間放置して結晶させる。形成される白色結晶固体を濾過し、tert-ブチルメチルエーテル(200ml)で洗浄し、次いで乾燥させて110g(73％)の生成物を得る。
【実施例１０】
【０１３７】
フェニル3,4-O-イソプロピリデン-1-チオ-β-L-フコピラノシド
実施例9の化合物(150 g、0.58 mol)を2,2-ジメトキシプロパン(550ml、4.5 mol)に懸濁し、触媒量のp-TsOH(1.19 g、6.2 mmol)を加える。混合物を室温で12時間撹拌した後、Et3N(6ml)を徐々に加えて酸を中和する。溶液を蒸発させて乾燥し(174 g)、残渣をジエチルエーテル(250ml)に溶解し、0℃に冷却し、次いでヘキサン(250ml)を混合物に勢いよく撹拌しながら滴下する。該混合物を2日間冷蔵庫(5℃)に入れ、沈殿した白色固体を濾過し、次いでヘキサン(200ml)で洗浄し、145.48 gの化合物を得る(85％)。母液を蒸発させ、残渣をEt2O(25ml)に溶解し、次いでそれにヘキサン(25ml)を滴下して11,51 gの第2収穫物を結晶させる。混合収率：91.5％. M.p.：81℃、[α]D= -28.15(1.03、MeOH).
【実施例１１】
【０１３８】
フェニル2-O-ベンジル-3,4-O-イソプロピリデン-1-チオ-β-L-フコピラノシド
実施例10の化合物(157 g、0.53 mol)を乾燥DMF(800ml)に加え、0℃に冷却する。NaH(1,2 eq)を注意深く部分に分けて該冷溶液に加え、同じ温度で1/2時間撹拌し続ける。次に、ベンジルブロミド(76.3ml、0.635 mol)を滴下し、温度を室温に温める。反応混合物を1時間撹拌し、次いで0℃に冷却し、MeOH(60ml)を滴下する。得られる混合物を蒸発させ、残渣をCH2Cl2(1500ml)に溶解し、次いで水(3x750ml)で洗浄する。有機相を乾燥し(Na2SO4)、濾過し、次いで蒸発させて205.2 gの黄褐色シロップを得る(100％)。
【実施例１２】
【０１３９】
フェニル2-O-ベンジル-1-チオ-β-L-フコピラノシド
MeOH(300ml)中の実施例11の化合物(100.0 g、0.26 mol)の溶液に60％酢酸(500ml)を加える。該混合物をさらに80℃で4時間撹拌し、次いで蒸発させる。残存する溶媒をトルエン(100ml)と共に共蒸発させる。残渣を加熱下MeOH(200ml)に溶解し、該溶液を室温に冷却した。白色結晶が沈殿し、これを濾過し、冷メタノールで洗浄し、乾燥する。収率：50.52 g(56,1％)。生成物の第1(15.81 g、17.5％)および第2収穫物(10.42 g、11.6％)を母液から結晶させることができる。M.p.：105-107℃、[α]D= -16.93(1.00、CHCl3)。
【実施例１３】
【０１４０】
フェニル3,4-ジ-O-ベンゾイル-2-O-ベンジル-1-チオ-β-L-フコピラノシド
実施例12の化合物(10 g、29 mmol)をピリジン(12ml、145 mmol)、およびDCM(35ml)の混合物に溶解する。溶液を0℃に冷却し、次いで該混合物が粘度の高い懸濁液になるときに塩化ベンゾイル(10ml、87 mmol)を滴下する。室温で3.5時間撹拌し、次いで蒸発させ、残渣をトルエン(50ml)に溶解し、次いで、溶液を水(2x30ml)、1N HCl溶液(20ml)、水(30ml)、sat. NaHCO3溶液(30ml)、および水：ブライン=1:1(40ml)で洗浄する。有機相を乾燥し、蒸発させ、得られた黄色シロップをMeOH(50ml)から結晶させる。白色結晶沈殿物を濾過し、冷MeOH(25ml)で洗浄し、次いで乾燥する。収率：14.63 g(91％). M.p.：98〜100℃、[α]D= -112(1.02、CHCl3).
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.98-7.17(m, 20H), 5.67-5.65(m, 1H), 5.45(dd, 1H, J= 3.3 Hz, J= 9.6 Hz), 4.84-4.76(m, 2H), 4.57(d, 1H, J= 10.5), 4.07-3.90(m, 2H), 2.15(s, 3H), 2.25(d, 3H, J= 6.3 Hz).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 166.1, 165.7, 137.9-128.1, 87.2, 75.6, 75.6, 75.1, 73.7, 72.0, 17.1。
【実施例１４】
【０１４１】
フェニル3,4-ジ-O-アセチル-2-O-ベンジル-1-チオ-β-L-フコピラノシド
無水酢酸をアシル化剤として用い、実施例13に記載の方法により、標記化合物を得る。
白色結晶、収率：88％, m.p.：124℃(EtOH), [α]D= -14.9(1.00, CHCl3).
1H NMR(CDCl3)：7.61-7.58(m, 2H), 7.34-7.26(m, 8H), 5.25(dd, 1H), 5.02(dd, 1H), 4.84および4.57(AB-システム), 4.71(d, 1H), 3.79(qd, 1H), 3.72(t, 1H), 2.15(s, 3H), 1.93(s, 3H), 1.22(d, 3H).
【実施例１５】
【０１４２】
フェニル2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-1-チオ-β-L-フコピラノシド
塩化4-クロロベンゾイルをアシル化剤として用い、実施例13に記載の方法により、標記化合物を得る。M.p.：142-144.5℃.
1H NMR(600 MHz, CDCl3) δ：1.30 d 3H, 3.87 t 1H, 4.01 dq 1H, 4.54 and 4.81 ABq 2H, 4.78 d 1H, 5.28 dd 1H, 5.58 dd 1H, 7.15 m 5H, 7.25 m 2H, 7.37 m 3H, 7.43 m 2H, 7.65 m 2H, 7.69 m 2H, 7.84 m 2H.
13C NMR(150 MHz, CDCl3) δ：16.7, 71.9, 73.3, 74.8, 75.3, 75.4, 87.0, 127.8, 127.9, 128.0, 128.3, 128.7, 128.9, 129.0, 130.9, 131.2, 133.0, 164.5, 164.9。
【実施例１６】
【０１４３】
フェニル2-O-(4-メチルベンジル)-3,4-O-イソプロピリデン-1-チオ-β-L-フコピラノシド
4-メチルベンジルクロリド(60 g、430 mmol、1.1 eq)、25％NaOH溶液(120ml)、およびTBAHS(4.0 g、11.7 mmol、0.03 eq)を、実施例10の化合物に加える。該混合物を3時間90℃で撹拌する。反応が完結した後にMeOH(1.6ml、39.0 mmol、0.1 eq)を加える。該混合物を30分間撹拌し、次いで溶媒を50℃で除去する。残渣をさらに精製せずに次の工程に用いる。小試料を精製して特徴づける。
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.55-7.52(m, 4H), 7.32-7.26(m, 5H), 7.14(d, 2H, J= 8.2 Hz), 4.64-4.57(m, 2H), 4.22(t, 1H, J= 5.9 Hz, J= 5.9 Hz), 4.04(dd, 1H, J= 2.1 Hz, J= 5.6 Hz), 3.86-3.79(m, 1H), 3.52-3.47(m, 1H), 2.34(s, 3H), 1.42-1.36(m, 9H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 137.6, 135.1, 134.1, 132.3, 129.2, 129.0, 128.6, 127.6, 109.9, 86.3, 80.1, 78.1, 76.6, 73.6, 72.6, 28.2, 26.7, 21.5, 17.7.
【実施例１７】
【０１４４】
フェニル2-O-(4-メチルベンジル)-1-チオ-β-L-フコピラノシド
実施例16で得られる粗物質に、イソプロパノール(100ml)および水(15ml)を加え、次いで4N HCl溶液(4ml、pH= 3)を加えて、pHを調整する。次に、IR 120樹脂(15 g)を加え、該混合物を環流下で1時間撹拌する。反応が完結した後、反応混合物を70℃でろ過し、次いで水-MeOH-ヘキサン-イソプロパノール混合物(150ml /400ml/150ml/1.7 l)を加える。種結晶を加え、5〜10℃で数時間放置して該化合物を結晶させる。白色結晶固体をろ過し、200mLのヘキサンで洗浄して87.7 g(62％)の純粋な結晶化合物を得る。母液を処理した後、34.2 gの化合物も得る。全収率：121.9 g(86％). Mp：146〜147℃.
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.56-7.52(m, 2H), 7.3-7.24(m, 5H), 7.13(d, 2H, J= 7.9 Hz), 4.87(d, 1H, J= 10.8 Hz), 4.63-4.55(m, 2H), 3.66-3.49(m, 4H), 2.31(s, 3H), 1.30(d, 3H, J= 6.5 Hz).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 138.1, 135.3, 134.4, 131.8, 129.5, 129.2, 128.7, 127.6, 87.7, 78.1, 75.4, 75.4, 74.7, 71.9, 21.5。
【実施例１８】
【０１４５】
フェニル3,4-ジ-O-ベンゾイル-2-O-(4-メチルベンジル)-1-チオ-β-L-フコピラノシド
ピリジン(33.6ml、416 mmol、3 eq)を、0〜5℃でDCM(70ml)中の実施例17の化合物の混合物(50 g、138.7 mmol)に加える。次に、塩化ベンゾイル(35.4ml、305 mmol、2.2 eq)を1時間かけて該混合物に徐々に加える。添加後、反応混合物を室温で2時間撹拌する。次に、0〜5℃でMeOH(3ml、0.3 eq)を徐々に加え、反応混合物を室温で30分間撹拌する。再度0℃で4M HCl溶液(32ml)を徐々に加え、室温で30分間撹拌する。有機相を抽出し、水(2x30ml)で2回洗浄し、乾燥し、60℃で蒸発させ、次いでMeOH(200ml)を加える。次に、該混合物を一部60℃で蒸発させると、該化合物が結晶し始める：77.1 g(98％). Mp：81-83℃.
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.91-7.19(m, 15H), 6.98(d, 2H, J= 7.9 Hz), 6.86(d, 2H, 7.9 Hz), 5.57-5.56(m, 1H), 5.35(dd, 1H, J= 3.3 Hz, J= 9.6 Hz), 4.75-4.66(m, 2H), 4.46(d, 1H, J= 10.4), 3.99-3.84(m, 2H), 2.15(s, 3H), 2.25(d, 3H, J= 6.4 Hz).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 166.0, 165.7, 137.7, 134.8, 133.6, 133.3, 133.2, 133.2, 133.1, 130.2, 129.9, 129.8, 129.8, 129.3, 129.2, 128.8, 128.5, 128.0, 87.3, 75.5, 75.4, 74.9, 73.7, 72.0, 21.4, 17.0。
【実施例１９】
【０１４６】
フェニル3,4-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-2-O-(4-メチルベンジル)-1-チオ-β-L-フコピラノシド
実施例17の化合物(30 g)から出発し、塩化4-クロロベンゾイル(26.7ml)を用い、実施例18に記載の方法論を用いて標記化合物を得る：50.3 gの黄色シロップ。
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.92-7.15(17H), 5.50(m, 1H), 5.30(dd, 1H, J= 3.3, 9.6), 4.71(d, 1H, J= 9.6), 4.44(d, 1H, J= 10.8), 3.94(m, 1H, J= 0.6, 6), 3.80(t, 1H, 9.6), 2.15(s, 3H), 1.23(d, 1H, J= 6.3).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 165.2, 164.7, 140.2, 139.8, 137.8, 134.7, 133.2-128.0, 87.1, 75.6, 75.4, 74.8, 73.4, 72.2, 21.4, 17.0。
【実施例２０】
【０１４７】
一般式4の化合物を生じる典型的なグリコシル化方法
DCM-THF 5:1〜9:1(2.5〜4容量)中の、ドナー(1.1〜1.2 eq)およびアクセプター(1.0 eq)の0〜10℃の冷溶液に、NBS(1.1〜1.2 eq)、次いでトリフリル酸(0.01〜0.025 eq)を加える。反応混合物を15分間撹拌する。次に、25％水酸化アンモニウム溶液(2 eq)を加えて反応を止める。有機相を分離し、濃縮し、次いで残渣を結晶化、カラムクロマトグラフィで精製するか、さらに粗物質で使用する。収率は50〜87％の範囲である。
a) O-(2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-(4-クロロベンゾイル)-3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１４８】
ドナー：実施例15の化合物,アクセプター：実施例5dの化合物
白色結晶、mp：109.4-111.7℃.
1H NMR(CDCl3) δ：1.15(d, 3H, J= 5.7 Hz)；1.4(m, 12H)；1.55(m, 6H)；3.35(s, 3H)；3.38(s, 3H)；3.8(t, 1H, J= 6 Hz)；3.95-4.4(m, 10H)；4.5-4.8(m, 7H)；5.55(m, 1H)；4.63-4.71(m, 2H)；7.25(m, 7H)；7.4(m, 4H)；7.7(d, 2H, J=8.6)； 7.85(d, 2H, J=8 .6)； 8.00(d, 2H, J= 9.5).
13C NMR(CDCl3) δ：16.02, 24.62, 26.29, 26.68, 26.72, 27.16, 27.84, 52.64, 56.07, 63.81, 64.59, 64.85, 70.29, 70.71, 72.03, 72.61, 72.78, 73.64, 74.74, 74.84, 76.66, 76.87, 77.32, 79.96, 95.24, 100.84, 105.26, 108.74, 109.84, 110.33, 127.59, 127.78, 127.9, 128.11, 128.16, 128.21, 128.39, 128.62, 128.68, 130.77, 130.96, 137.66, 139.13, 139.46, 139.56, 164.17, 164.90, 165.24.
b) O-(2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-ベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-(4-クロロベンゾイル)-3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１４９】
ドナー：実施例13の化合物,アクセプター：実施例5dの化合物
白色泡沫状
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ=1.18(d, 3H, J=6.5 Hz), 1.37(s, 3H), 1.39(s, 3H), 1.41(s, 3H), 1.44(s, 3H), 1.56(s, 6H), 3.35(s, 3H), 3.39(s, 3H), 3.81(dd, 1H, J=6.6 Hz, J=7.6 Hz), 3.97(d, 1H, J=4.9 Hz), 4.07-4.14(m, 3H), 4.20-4.25(m, 3H), 4.31(d, 1H, J=6.2 Hz), 4.37(d, 2H, J=6.2 Hz), 4.54-4.60(m, 4H), 4.69(d, 2H, J=10.4 Hz), 4.76(d, 1H, J=7.9 Hz), 5.64(d, 1H, J=3.4 Hz), 5.68-5.73(m, 2H), 7.21-7.31(m, 8H), 7.41-7.48(m, 5H), 7.81(d, 2H, J=7.1 Hz), 7.96(d, 2H, 8.1 Hz), 8.01(d, 2H, J=8.6 Hz).
13C-NMR(75 MHz, CDCl3)：δ= 165.88, 165.38, 165.20, 139.58, 137.90, 133.06, 132.73, 131.06, 129.90, 129.75, 129.71, 129.56, 128.73, 128.34, 128.18, 128.10, 127.85, 127.59, 110.41, 109.97, 108.87, 105.39, 101.02, 95.56, 79.99, 76.87, 76.74, 74.96, 74.84, 73.68, 73.12, 72.48, 72.32, 70.78, 70.23, 65.02, 64.88, 63.92, 56.16, 52.66, 27.92, 27.29, 26.84, 26.80, 26.38, 24.78, 16.14。
c) O-(2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-ベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-ピバロイル-3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１５０】
ドナー：実施例13の化合物、アクセプター：実施例4の化合物
白色泡沫状
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ=1.17(d, 3H, J=6.5 Hz), 1.22(s, 9H), 1.36(s, 3H), 1.39(s, 3H), 1.41(s, 3H), 1.42(s, 3H), 1.54(s, 6H), 3.44(s, 6H), 3.77(dd, 1H, J=6.6 Hz, J=8.0 Hz), 3.90-3.96(m, 2H), 4.08-4.15(m, 3H), 4.21-4.24(m, 2H), 4.27-4.34(m, 4H), 4.40(d, 1H, J=6.3 Hz), 4.52-4.59(m, 2H), 4.63-4.75(m, 3H), 5.62(d, 1H, J=3.3 Hz), 5.67-5.71(m, 2H), 7.20-7.31(m, 8H), 7.40-7.47(m, 3H), 7.78-7.83(m, 2H), 7.93-7.97(m, 2H).
13C-NMR(75 MHz, CDCl3)：δ= 177.92, 165.85, 165.17, 137.89, 133.04, 132.70, 129.88, 129.73, 129.68, 129.54, 128.32, 128.15, 128.07, 127.82, 127.55, 110.18, 109.86, 108.82, 105.15, 101.11, 95.45, 79.95, 76.85, 76.75, 74.78, 74.54, 73.31, 73.04, 72.46, 72.20, 70.40, 70.20, 64.97, 64.81, 62.27, 56.04, 52.43, 38.66, 27.92, 27.22, 27.03, 26.82, 26.75, 26.29, 24.82, 16.11。
d) O-(2-O-(4-メチルベンジル)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-ピバロイル-3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１５１】
ドナー：実施例18の化合物,アクセプター：実施例4の化合物
白色泡沫状
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.95(d, 2H, J= 7.2 Hz), 7.79(d, 2H, J= 7.2 Hz), 7.59-7.23(m, 6H), 7.15(d, 2H, J= 7.9 Hz), 7.00(d, 2H, 7.8), 5.70-5.63(m, 3H), 4.72-3.89(m, 17H), 3.70(t, 1H, J= 7.2 Hz), 3.44(s, 6H), 2.27(s, 3H), 1.54-1.16(m, 30H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 178.2, 166.13, 165.5, 137.5, 135.1, 133.4, 133.0, 130.2, 130.0, 130.0, 129.9, 129.8, 129.1, 128.7, 128.6, 128.6, 128.5, 128.4, 128.3, 110.5, 110.1, 109.1, 105.5, 101.5, 95.8, 80.2, 75.1, 74.9, 73.6, 73.1, 72.8, 72.4, 70.7, 70.5, 65.3, 65.1, 62.6, 56.3, 52.8, 39.0, 28.2, 27.6, 27.3, 27.2, 27.1, 26.6, 25.1, 21.4, 16.4.
e) O-(2-O-(4-メチルベンジル)-3,4-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-ピバロイル-3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１５２】
ドナー：実施例19の化合物,アクセプター：実施例4の化合物
白色泡沫状
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.97-7.00(m, 12H), 5.68-5.58(m, 3H), 4.73-3.75(m, 18H), 3.45(s, 6H), 2.29(s, 3H), 1.55-1.16(m, 30H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 178.2, 165.3, 164.5, 139.9-127.4, 110.5, 110.2, 109.1, 105.5, 101.4, 95.6, 80.3, 75.0, 75.0, 73.7, 73.0, 72.9, 72.3, 70.7, 65.2, 65.0, 62.6, 56.4, 52.8, 52.5, 39.0, 28.2, 27.5, 27.4, 27.1, 26.6, 25.1, 21.4, 16.4。
f) O-(2-O-(4-メチルベンジル)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-(4-クロロベンゾイル)-3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１５３】
ドナー：実施例18の化合物,アクセプター：実施例5dの化合物
白色泡沫状
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.97-6.93(m, 18H), 5.64-5.54(m, 3H), 4.60-3.70(m, 18H), 3.31(s, 3H), 3.27(s, 3H), 2.22(s, 3H), 1.48-1.24(m, 18H), 1.11(d, 3H, J=6.3 Hz).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 165.7, 165.6, 165.5, 139.8-128.0, 110.7, 110.3, 109.1, 105.7, 102.4, 95.9, 80.2, 77.9-70.5, 65.3, 65.1, 64.2, 56.4, 52.9, 28.2, 27.7, 27.3, 27.2, 26.4, 25.1, 21.3, 16.4。
g) O-(2-O-(4-メチルベンジル)-3,4-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-(4-クロロベンゾイル)-3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１５４】
ドナー：実施例19の化合物,アクセプター：実施例5dの化合物
白色泡沫状
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.95-6.95(m, 16H), 5.59-5.50(m, 3H), 4.69-3.69(m, 18H), 3.31(s, 3H), 3.28(s, 3H), 2.23(s, 3H), 1.55-1.30(m, 18H), 1.09(d, 3H, J=6.6 Hz).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 165.6, 165.3, 164.5, 139.9-128.2, 110.7, 110.2, 109.1, 105.7, 101.2, 95.7, 80.3, 77.7-70.6, 65.2, 65.0, 64.2, 56.4, 53.0, 29.2, 28.2, 27.7, 27.1, 26.6, 25.0, 21.4, 16.4。
h) O-(2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-ベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-ベンゾイル-3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
ドナー：実施例の化合物13,アクセプター：4-O-(6-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール [1]
黄色シロップ
1H-NMR(CDCl3, 600 MHz)：δ 1.17(3H, d, J=6.5 Hz), 1.36(3H, s), 1.37(3H, s), 1.38(3H, s), 1.42(3H, s), 1.53(3H, s), 1.54(3H, s),  3.33(3H, s)；3.36(3H, s), 3.80(1H, dd, J=7.8, 6.5 Hz), 3.97(1H, dd, J=5.8, 1.3 Hz), 4.06-4.13(3H, m), 4.17-4.25(3H, m), 4.30(1H, dd, J=6.1, 6.0 Hz), 4.34-4.38(2H, m), 4.52-4.60(4H, m), 4.64(1H, d, J=12.3 Hz), 4.71(1H, d, J=12.3 Hz), 4.75(1H, d J=8.0 Hz), 5.62(1H, d J=3.9 Hz), 5.66(1H, d, J=3.8 Hz)；5.69(1H, dd, J=11.1, 3.8 Hz), 7.16-7.29(7H, m), 7.38-7.48(5H, m), 7.54-7.60(2H, m), 7.79(2H, m), 7.94(2H, m)；8.05(2H, m)。
i) O-(2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-(4-クロロベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-ピバロイル-3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
【０１５５】
ドナー：実施例15の化合物,アクセプター：実施例4の化合物
白色泡沫状
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.88-7.13(m, 13H), 5.70-5.58(m, 3H), 4.75-3.75(m, 18H), 3.45(s, 6H), 2.29(s, 3H), 1.55-1.16(m, 30H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 178.2, 165.3, 164.5, 139.9-128.0, 110.5, 110.1, 109.1, 105.5, 101.4, 95.6, 74.0, 73.7, 73.1, 72.9, 72.3, 70.7, 65.2, 65.0, 62.6, 56.4, 52.8, 39.0, 28.2, 27.5, 27.3, 27.1, 26.6, 25.1, 16.4。
【実施例２１】
【０１５６】
一般式4の化合物の一般式3の化合物への典型的変換方法
方法A：混合物MeCN-H2O 7:1(4〜8容量)中の一般式4の化合物の懸濁液/溶液を、pTsOH一水和物(0.2〜0.25 eq)の存在下、45℃に加熱し、7〜24時間撹拌する。酸をトリエチルアミンで中和し、溶媒を蒸発させ、次いで残渣を結晶させるか、またはクロマトグラフィで精製し、該化合物を収率29〜78％で得る。
【０１５７】
方法B：一般式4の化合物をアセトン(5-15容量)に溶解し、該溶液にcc.HCl-水 1:1(1〜3容量)を加える。40〜50℃で3〜6時間撹拌する。25％水酸化アンモニウム溶液を加えてpH=9とする。反応混合物を水および酢酸エチル(各5〜15容量)で希釈し、抽出し、次いで有機相を蒸発させて、最終生成物を収率85〜95％で得る。
a) O-(2-O-(4-メチルベンジル)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-(4-クロロベンゾイル)-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
【０１５８】
実施例20f方法Aの化合物から、無色固体
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.95-6.74(m, 18H), 5.67-5.21(m, 4H), 4.74-3.07(m, 17H), 2.16(s, 3H), 1.09-1.06(m, 3H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 166.1, 166.0, 165.8, 139.9-128.0, 101.8, 99.0, 92.4, 78.7- 60.9, 21.7, 16.3。
b) O-(2-O-(4-メチルベンジル)-3,4-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-(4-クロロベンゾイル)-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
【０１５９】
実施例20g方法Aの化合物から、白色結晶、mp.：235-237℃(トルエン/アセトン).
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.92-6.73(m, 16H), 5.60-5.18(m, 4H), 4.81-3.08(m, 17H), 2.18(s, 3H), 1.14-1.02(m, 3H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 165.8, 165.3, 164.8, 140.2-127.7, 101.8, 96.6, 92.5, 79.3- 60.9, 21.4, 16.2。
c) O-(2-O-(4-メチルベンジル)-3,4-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-ピバロイル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
【０１６０】
実施例20e方法Aの化合物から、無色固体
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.90-6.87(m, 12H), 5.69-5.30(m, 4H), 4.74-3.01(m, 17H), 2.27(s, 3H), 1.25-1.09(m, 12H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 178.8, 165.3, 165.2, 140.2-127.9, 101.5, 98.5, 92.4, 78.5- 58.9, 27.5, 21.4, 16.3。
d) O-(2-O-(4-メチルベンジル)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-ピバロイル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
【０１６１】
実施例20d方法Aの化合物から、無色固体
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.95-6.98(m, 14H), 5.86-5.13(m, 4H), 4.72-3.00(m, 17H), 2.26(s, 3H), 1.24-1.07(m, 12H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 178.8, 166.2, 166.0, 138.3-128.5, 101.6, 99.0, 92.3, 78.8- 58.9, 27.3, 21.4, 16.3。
e) O-(2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-(4-クロロベンゾイル)-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
【０１６２】
実施例20a方法Aの化合物、白色結晶
α/β アノマー混合物：mp. 226〜228℃.
1H NMR(CDCl3) δ= 1.15(d, 3H, J=6.5Hz)；3.15-4.2(m, 15H)；4.4-4.95(m, 15H)；5.12(d, 0.7H, J=3.9Hz)；5.6(m, 2H)；5.9(d, 1H, 3.6Hz)；7.25(m, 7H)；7.45(m, 4H)；7.65(d, 2H, J=8.5Hz)；7.85(d, 2H, J=8.6Hz)；8.1(d, 2H, J=8.1Hz).
13C NMR(CDCl3) δ= 15.28, 18.49, 60.16, 61.23, 61.65, 66.72, 68.92, 69.27, 69.29, 70.46, 71.39, 71.46, 71.72, 71.76, 72.08, 73.97, 74.00, 74.03, 74.08, 74.45, 75.05, 75.22, 75.30, 75.39, 75.43, 75.88, 91.92, 96.02, 96.92, 96.95, 100.21, 100.25, 128.50, 128.80, 128.91, 137.26, 137.27, 138.82, 140.57, 140.70, 140.93, 166.07, 166.52, 166.86.
β-アノマー：mp. 136-141℃.
1H NMR(CDCl3) δ=1.06(d, 3H, J=6.6Hz)；3.35(m, 3H)；3.5(m, 2H)；3.7(m, 1H)；3.8-4.2(m, 7H)；4.4-4.7(m, 6H)；5.55(m, 2H)；5.9(d, 1H, J=3.4Hz)；7.1-7.6(m, 11H)；7.65(d, 2H, J=8.5Hz)；7.85(d, 2H, J=8.6Hz)；8.1(d, 2H, J=8.1Hz).
13C NMR(CDCl3) δ= 16.30, 61.57, 65.18, 65.99, 66.02, 70.86, 71.70, 72.63, 73.83, 73.89, 74.23, 74.27, 75.83, 75.88, 75.96, 75.99, 76.19, 76.24, 76.66, 78.89, 97.95, 98.01, 102.24, 128.97, 129.30, 129.39, 129.46, 129.75, 129.82, 130.09, 132.08, 132.22, 132.48, 138.82, 140.57, 140.70, 140.93, 166.07, 166.52, 166.86。
f) O-(2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-ベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-(4-クロロベンゾイル)-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
【０１６３】
実施例20b方法Aの化合物、無色固体
1H-NMR(300 MHz, CDCl3/MeOH 9:1)：δ=1.10(d, 3H, J=6.5 Hz), 1.20(d, 0.7H, J=6.6 Hz), 3.37-3.55(m, 5H), 3.67-3.93(m, 6H), 3.98-4.10(m, 1H), 4.25-4.65(m, 5H), 5.12(d, 1H, J=3.7 Hz), 5.47-5.64(m, 3H), 7.00-7.60(m, 12H), 7.71(d, 2H, J=7.4 Hz), 7.85(d, 2H, J=8.3 Hz), 7.94-7.98(m, 3H)。
g) O-(2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-ベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
【０１６４】
実施例化合物20h方法Bから、淡黄色シロップ
13C-NMR(150 MHz, DMSO-d6) δ：165.6, 165.5, 164.7, 164.6, 138.0, 133.5, 133.4, 133.3, 131.1, 129.6, 129.4, 129.3, 129.2, 129.1, 128.9, 128.8, 128.7, 128.6, 128.5, 128.1, 128.0, 127.8, 127.7,127.6, 127.4, 127.3, 103.6, 99.9, 99.4, 95.9, 77.2, 74.8, 74.1, 74.0, 73.9, 73.8, 73.5, 72.4, 72.3, 72.0, 71.1, 70.0, 69.9, 69.7, 69.6, 68.9, 68.8, 63.9, 63.8, 63.7, 56.1, 54.4, 28.9, 15.5。
h) O-(2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-ピバロイル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
【０１６５】
実施例20i方法Aの化合物から、無色結晶、m.p.：126-128℃(トルエン-アセトン).
1H NMR(MeOD, 300 MHz)：δ= 7.85-7.18(m, 13H), 5.90-3.45(m, 21H), 1.22-1.15(m, 12H).
13C NMR(MeOD, 75 MHz)：δ= 178.7, 165.4, 165.0, 139.8, 139.8, 137.7, 131.1-131.0, 129.0-127.9, 101.0, 96.9, 92.6, 75.1-74.9, 73.1, 72.7, 71.7, 71.5, 70.6, 70.4, 69.7, 64.9, 63.3, 60.2, 38.7, 29.8, 26.5, 15.2。
i) O-(2-O-ベンジル-3,4-ジ-O-ベンゾイル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(6-O-ピバロイル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
【０１６６】
実施例20c方法Aから
1H NMR(CDCl3)：δ= 1.2(m, 12H)；3.00(m, 1H)；3.10-4.05(m, 13H)；4.07-4.77(m, 10H)；5.4-5.8(m, 4H)；7.15-7.35(m, 9H)；7.35-7.7(m, 5H), 7.8(d, 2H, J=7.9 Hz)；7.9(d, 2H, J=8.0 Hz).
13C NMR(CDCl3)：δ= 16.27, 27.37, 61.63, 65.41, 65.79, 66.02, 70.82, 70.99, 72.61, 73.23, 73.89, 74.43, 74.57, 75.88, 75.92, 75.96, 76.03, 76.21, 76.24, 76.77, 78.89, 92.38, 96.70, 98.67, 101.56, 128.97, 129.30, 129.39, 129.46, 129.75, 129.82, 130.09, 133.44, 133.49, 133.54, 136.79, 136.95, 166.05, 166.12, 166.17, 166.21, 178.84。
【実施例２２】
【０１６７】
O-(2-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
実施例20aの化合物(1.22 g)を、5mlのMeOH中の13mgのNaOHから調製した溶液に溶解し、室温で一夜撹拌する。NaOHをドライアイスで減衰させ、溶媒を乾燥除去する。残渣をTBME(10ml)に溶解し、次いで 水(3x4ml)で洗浄する。該溶媒を真空で蒸発させ、iPr2O(6ml)を加えて透明溶液を得、次いでシーディング後に生成物を沈殿させる。白色結晶をろ過し、洗浄し、および乾燥する(0.49 g)。母液を濃縮し、MeOHに再度溶解し、この溶液をヘキサンで3回洗浄し、次いで蒸発させる。次に残渣をiPr2Oに再度溶解し、該溶液にシーディングし、生成物をろ過し、洗浄し、次いで乾燥する(0.16 g)。
全収量は純粋なトリオールが0.65 g(83％)である。M.p.：146.8-149℃.
1H NMR(CDCl3) δ：1.23(d, 3H, J=6.7Hz)；1.28-1.50(6s, 18H)；3.49(s, 3H)；3.51(s, 3H)；3.6-3.75(m, 4H)；3.8(m, 2H)；3.9-4.0(m, 5H)；4.0-4.15(m, 4H)；4.27(q, 1H, J=5.4Hz)；4.36(d, 1H, 7Hz)；4.51-4.57(m, 2H)；4.63(dd, 1H, J=7.2Hz, J=8Hz)；4.78(d, 1H, J=11.6Hz), 5.61(d, 1H, J=3.67Hz)；7.25-7.4(m, 5H).
13C NMR(CDCl3) δ：16.57, 25.20, 26.69, 26.84, 27.32, 28.13, 54.42, 57.95, 62.58, 65.17, 65.73, 69.36, 71.91, 71.98, 74.13, 74.66, 75.14, 75.53, 77.40, 77.82, 78.10, 80.85, 94.30, 101.63, 107.81, 108.97, 109.92, 110.71, 127.85, 127.98, 128.54, 138.55。
【実施例２３】
【０１６８】
O-(2-O-(4-メチルベンジル)-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(3,4-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3:5,6-ジ-O-イソプロピリデン-D-グルコース ジメチルアセタール
MeOH(5ml)中の0.5M NaOMeを、メタノール(10ml)中の実施例20dの化合物(2.51 g, 2.4 mmol)の溶液に加える。反応混合物を6時間撹拌する。反応が完結した後にドライアイスを加え、該溶液を濃縮する。残渣をクロマトグラフィにかけて白色泡沫状の目的とする化合物を得る(1.15 g, 63％)。
【０１６９】
同じ方法を適用し、実施例20eの化合物(59％)、実施例20fの化合物(71％)、および実施例20gの化合物(51％)から出発する。
1H NMR(CDCl3, 300 MHz)：δ= 7.20(d, 2H, J=7.9 Hz), 7.08(d, 2H, 7.9 Hz), 5.54(d, 1H, J=3.5 Hz), 4.67(d, 1H, J=11.5 Hz), 4.59(t, 1H, J=7.6 Hz), 4.51-4.60(m, 2H), 4.32(d, 1H, J=6.9 Hz), 4.26-4.20(m, 1H), 4.10-3.58(m, 15H), 3.46(s, 6H), 2.29(s, 3H), 1.44 -1.17(m, 21H).
13C NMR(CDCl3, 75 MHz)：δ= 137.6, 135.4, 129.3, 128.2, 110.7, 109.9, 109.0, 107.9, 101.6, 94.3, 80.9, 78.1, 76.1, 75.6, 75.1, 74.7, 74.7, 74.1, 71.9, 71.8, 69.3, 65.7, 65.2, 62.6, 60.6, 58.0, 54.4, 28.1, 27.3, 26.9, 26.8, 26.7, 25.2, 21.4, 16.6, 14.4。
【実施例２４】
【０１７０】
O-(2-O-(4-メチルベンジル)-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
p-トルエンスルホン酸一水和物(76mg、0.4 mmol、0.15 eq)をiPrOH/H2O(2ml ：6ml)中の実施例23の化合物(2.0 g、2.64 mmol)の混合物に加える。反応混合物を55℃および250 mbarで撹拌する。4時間後、圧を90mbarに下げ、反応混合物をさらに15分間撹拌して、全ての有機溶媒を除去する。残存する水性溶液をAmberlite IR400(OH-)で中和し、樹脂をろ過して除去し、次いで濾液をEtOAc(20ml)で洗浄する。相を分離し、水相を凍結乾燥し、無色固体の目的とする化合物(1.53 g、98％)を得た。
1H NMR(MeOD, 300 MHz)：δ= 7.35(d, 2H, J=7.9 Hz), 7.14(d, 2H, J=7.9 Hz), 5.50(m, 1H), 5.14-3.22(m, 20H), 2.30(s, 3H), 1.19-1.14(m, 3H).
13C NMR(MeOD, 75 MHz)：δ= 138.4, 136.3, 129.9, 129.6, 102.2, 98.5, 76.8, 72.9, 69.7, 67.4, 31.7, 21.3, 16.4。
【実施例２５】
【０１７１】
O-(2-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-(1→2)-O-(β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-D-グルコース
a) 実施例22の化合物(5.0 g、6.71 mmol)およびH2O/iPrOH(5:2、20ml)をフラスコ中に加え、白色懸濁液を得る。ｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ（０．１９１ｇ）を加え、該混合物を250 mbarの圧で、撹拌しながら55℃(水 temp.)に加熱する。4時間後に圧を90 mbar(55℃)に下げ、透明溶液を減圧下でさらに20分間撹拌し、すべての有機溶媒を除去する。反応混合物をEtOAc(2 x 15ml)で洗浄し、次いで水性相をカラム上のAmberlite IR400(OH)樹脂(樹脂5.0gを充填)で中和する。カラムを水(8 mL)ですすぎ、水性相を蒸発させる(50 mbar/45℃)。粗三糖を2-プロパノール(25ml)に溶解し、次いで70℃(油温)に加熱する。透明溶液を7時間かけて徐々に4℃に冷却し、次いで一夜撹拌する。得られた固体をろ過し、冷EtOAcおよびペンタンで洗浄し、3.41 g(5.90 mmol、88%)の白色結晶を得る。
生成物の純度(HPLC UV)：96.4％. Mp：153〜156℃。
【０１７２】
b) 実施例21gの化合物(400mg)をMeOH(2ml)に溶解し、触媒量のNaOMeを該溶液に加え、次いで室温で12時間撹拌する。イオン交換樹脂(H+)を加え、混合物を3分間撹拌して、pH＝7とする。樹脂をろ過し、濾液を蒸発させて固体生成物を得る(229mg、87％)。
【０１７３】
c) メタノール(3ml)を実施例21eの化合物(1.0 g)に加え、次いで固体NaOMe(10mg)を加える。該混合物を40℃で10時間撹拌する。反応混合物をHCl/MeOHで中和する。活性炭(50mg)を加え、懸濁液を30分間撹拌する。活性炭をろ過して除去し、MeOHの小部分で洗浄し、次いで透明濾液をi-BuOH(3ml)で希釈する。MeOHを蒸留して除去し、溶媒から沈殿させた固体をろ過し、i-BuOH(1,5ml)で洗浄し、次いで乾燥させて510mg(88％)の白色固体を得る。
【０１７４】
d)実施例21fの三糖をメタノール中のNaOHの溶液に溶解し、室温で一夜撹拌する。NaOHをドライアイスで減衰させ、溶媒を蒸発させて定量的収量の標記生成物を得る。
【０１７５】
e) 再結晶プロトコール：得られた三糖(3.0 g)を70℃(油温)で2-プロパノール(22ml)に溶解し、次いで徐々に室温に冷却し、さらに一夜撹拌する。白色結晶をろ過し、冷EtOAcおよびペンタンで洗浄する。生成物の純度(HPLC UV)：97.2％. Mp：155〜159℃。
1H NMR(300 MHz, D2O)：δ 1.17(d, 3H, J=6.6 Hz), 3.25(dd, 0.6H, J=8.1, 9.3 Hz), 3.35-3.91(m, 14.4 H), 4.21(dq, 1H, J=3.9, 6.6 Hz), 4.49(d, 1H, J=7.5 Hz), 4.58(d, 0.6 H, J=8.1 Hz), 4.63(d, 1H, J=11.4 Hz), 4.82(d, 1H, J=11.4 Hz), 5.17(d, 0.4 H, J=3.6 Hz), 5.46(d, 1H, J=3.6 Hz), 7.36-7.46(m, 5H).
13C NMR(75 MHz, D2O(外部標準としてアセトンを使用、δ 30.9)) ：δ 15.9, 60.7, 60.8, 61.8, 67.2, 67.3, 69.4, 69.8, 71.0, 71.9, 72.0, 72.3, 72.6, 74.5, 74.6, 75.0, 75.6, 75.7, 75.9, 75.9, 76.4, 76.5, 92.4, 96.5, 97.5, 100.7, 100.8, 129.0, 129.3, 129.4, 137.8。
【実施例２６】
【０１７６】
2’-O-フコシルラクトース
a) メタノール(50ml) 100mg中の実施例25の化合物(5.0 g)の溶液に、10％パラジウム/チャコールを加える。懸濁液を水素雰囲気下、室温で8時間撹拌する。触媒をろ過して除去し、水で洗浄し、次いで濾液を蒸発させて非晶質白色固体の生成物を得る(4.1g)。
HPLC-MS：ESI+ 511.2 [M+Na]+, 527.2 [M+K]+；ESI- 487.4 [M-H]-、523.2 [M+Cl]-、577.3 [M2+H]-.
1H-NMR(600 MHz, D2O) δ：α-D-グルコース H-1 5.22 d, H-2 3.59 dd, H-3* 3.80 dd, H-4 3.71 dd, H-5 3.91 m, H-6x 3.90 m, H-6y 3.80 m；β-D-グルコース H-1 4.63 d, H-2 3.29 dd, H-3 3.58 dd, H-4 3.72 dd, H-5 3.47 ddd, H-6x 3.94 dd, H-6y 3.76 dd；D-ガラクトースH-1 4.52 d, H-2 3.66 dd, H-3 3.88 m, H-4 3.90 m, H-5 3.81 m, H-6x 3.81 m, H-6y 3.74 m；L-フコース H-1 5.30 d, H-2* 3.80 m, H-3* 3.80 m, H-4 3.82 d, H-5 4.22, 4.25 qd, CH3 1.22 d.
13C-NMR(150 MHz, D2O) δ：α-D-グルコース C-1 94.5, C-2 74.0, C-3* 72.3, C-4 77.9, C-5 73.1, C-6 62.7；β-D-グルコース C-1 98.6, C-2 76.6, C-3 77.0, C-4 78.5, C-5 78.0, C-6 62.9；D-ガラクトースC-1 102.9, C-2 79.0, C-3 76.3, C-4 71.9, C-5 74.0, C-6 63.8；L-フコース C-1 102.0, C-2* 72.4, C-3* 70.9, C-4 74.4, C-5 69.6, CH3 18.0。(* 互換性アサインメント)
【０１７７】
b) メタノール(7ml)および水(1ml)中の実施例25の化合物(2.0 g)の溶液に、200mgの10％パラジウム/チャコールを加える。懸濁液を水素雰囲気下(5atm)、50℃で0.5時間撹拌する。触媒を予備加熱したフィルターでろ過して除去し、熱水で洗浄し、次いで濾液を蒸発させて白色非晶質固体の生成物1.6gを得る。
参考文献リスト
【０１７８】
1. S.A. Abbas, J.J. Barlow, K.L. Matta, Carbohydr. Res. 1981, 88, 51-60.
2. A. Fernandez-Mayoralas, M. Martin-Lomas, Carbohydr. Res. 1986, 154, 93-101.
3. R.K. Jain, R.D. Locke, K.L. Matta, Carbohydr. Res. 1991, 212, c1-c3.
4. K.L. Matta, R.K. Jain, R.D. Locke, U.S. Patent  5,438,124A 19950801.
5. M. Izumi, O. Tsuruta, S. Harayama, H. Hashimoto, J. Org. Chem. 1997, 62, 992-998.
6. A. Rencurosi, L. Poletti, L. Panza, L. Lay, J. Carbohydr. Chem. 2001, 20, 761-765。
略号リスト
【０１７９】
Ac       アセチル
Bn       ベンジル
BOP-Cl   ビス-(2-オキソ-3-オキサゾリジニル)-ホスホン酸クロリド
Bz       ベンゾイル
CAN      硝酸セリウムアンモニウム
DCC      N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド
DCM      ジクロロメタン
DMF      ジメチルホルムアミド 
DMSO     ジメチルスルホキシド
ESI      エレクトロスプレーイオン化
EtOAc    酢酸エチル
2’-FL     2’-O-フコシルラクトース
IDCP     過塩素酸イオジニウムジ(sym-コリジン)
Me       メチル
MeCN     アセトニトリル
MTBE     メチルt-ブチルエーテル
Ph       フェニル
Piv      ピバロイル
rt       室温
TBAB     テトラブチルアンモニウムブロミド
TBAHS    テトラブチルアンモニウム硫酸水素塩
TEBAC    ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド
THF      テトラヒドロフラン
TLC      薄層クロマトグラフィ
Tr       トリチル。
【国際調査報告】
2012522827.tif 000046
2012522827.tif 000047
2012522827.tif 000048
2012522827.tif 000049
2012522827.tif 000050