(57)【要約】本発明は、貧血および同様の状態を治療するための、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ阻害剤として有用な、置換４−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミドに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物もしくはその医薬的に許容される塩、またはその立体異性体、またはその立体異性体の医薬的に許容される塩：
【化１】
2012532128.tif 000017
（Ｒ１は、−Ｃ１−１０アルキル、−Ｃ２−１０アルケニル、−Ｃ２−１０アルキニルおよび−Ｃ１−６アルコキシから選択され、ここで、Ｒ１における前記アルキル、アルケニル、アルキニル、およびアルコキシは、それぞれ、１、２または３個のＲ８置換基で場合により置換されており；
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素および−Ｃ１−１０アルキル（これは、ハロ、ヒドロキシルおよび−ＯＣ１−１０アルキルから選択される１、２または３個の置換基で場合により置換されている）から選択され；
Ｖ、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは、それぞれ独立して、ＮおよびＣＨから選択され、ここで、Ｖ、Ｗ、Ｘ、ＹまたはＺは、１または２個の窒素で置換されており、およびＶまたはＷの少なくとも一方はＮであり；ならびに
Ｒ８は、ハロゲン、ヒドロキシル、−Ｃ１−１０アルキル、−Ｃ１−１０アルケニル、−Ｃ１−１０アルキニル、シアノ、オキソ、Ｃ２−６−ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシおよび２，２，２−トリフルオロエトキシから選択される）。
【請求項２】
Ｒ１が、−Ｃ１−１０アルキルおよび−Ｃ１−６アルコキシから選択され、前記アルキルおよびアルコキシが、それぞれ、１、２または３個のＲ８置換基で場合により置換されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、−Ｃ１−６アルコキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２およびＲ３が、ハロ、ヒドロキシルおよび−ＯＣ１−１０アルキルから選択される１、２または３個の置換基で場合により置換されている−Ｃ１−１０アルキルから、それぞれ独立して選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２およびＲ３が、それぞれメチルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
ＷおよびＸが、それぞれＮであり、ならびにＶ、ＹおよびＺが、それぞれＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ＶおよびＷが、それぞれＮであり、ならびにＸ、ＹおよびＺが、それぞれＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
４−ヒドロキシ−Ｎ−｛１−［６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル］−１−メチルエチル｝−２−ピリダジン−３−イルピリミジン−５−カルボキサミドまたはその医薬的に許容される塩から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
４−ヒドロキシ−Ｎ−｛１−［６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル］−１−メチルエチル｝−２−ピリダジン−３−イルピリミジン−５−カルボキサミドの医薬的に許容される塩から選択される、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩、またはその立体異性体、またはその立体異性体の医薬的に許容される塩と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
エリスロポエチンの体内生産の増進に有効である量の請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩、またはその立体異性体、またはその立体異性体の医薬的に許容される塩、を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物におけるエリスロポエチンの体内生産を増進させる方法。
【請求項１２】
有効量の請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩、またはその立体異性体、またはその立体異性体の医薬的に許容される塩、を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における貧血の予防または治療のための方法。
【請求項１３】
ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼによって媒介される状態の治療のための薬物の製造における、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩、またはその立体異性体、またはその立体異性体の医薬的に許容される塩、の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
細胞および組織への酸素の不十分な送達は、血液の酸素運搬能の欠損と定義される貧血、および血管の狭窄または閉塞に起因して血液供給が制限される虚血に、関係づけられる。貧血は、赤血球の喪失（出血）、過剰な赤血球破壊（溶血）または赤血球生成（骨髄に見られる前駆体からの赤血球の生産）の不全によって引き起こされる場合がある。貧血の症状としては、虚弱、めまい、疲労、蒼白、認知機能障害および生活の質の全般的低下を挙げることができる。慢性および／または重度貧血は、心筋、脳または末梢虚血の憎悪におよび心不全につながることがある。虚血は、組織または器官への酸素の絶対的または相対的不足と定義され、およびアテローム性動脈硬化症、糖尿病、血栓塞栓症、低血圧などの疾患の結果として生じる場合がある。心臓、脳および腎臓は、少ない血液供給により引き起こされる虚血ストレスに対してとりわけ敏感である。
【０００２】
貧血の主な薬理治療は、組換えヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）の何らかの変異体の投与である。腎臓疾患と関連づけられる貧血、化学療法誘導性貧血、ＨＩＶ療法からの貧血または失血による貧血については、ホルモンの供給を増進させるために、赤血球の不足を修正するために、および血液の酸素運搬能を増大させるために、組換えＥＰＯが投与される。ＥＰＯ置換は、最適な赤血球生成を刺激するために必ずしも十分とは限らず（例えば、鉄のプロセッシングに欠陥のある患者の場合）、付随するリスクがある。
【０００３】
低酸素誘導因子（ＨＩＦ）は、低酸素に対する細胞応答の主要調節因子として確認されている。ＨＩＦは、高度に調節されたα−サブユニット（ＨＩＦ−α）と構成的に発現されるβ−サブユニット（ＨＩＦ−β；ＡＲＮＴ、すなわちアリール炭化水素受容体核輸送体、としても公知）とから成るヘテロ二量体遺伝子転写因子である。ＨＩＦターゲット遺伝子は、赤血球生成（例えば、エリスロポエチン（ＥＰＯ）およびＥＰＯ受容体）、解糖および血管形成（例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ））の、様々な態様に関連づけられることが報告されている。鉄吸収、輸送および利用ならびにヘム合成に関与するタンパク質についての遺伝子も、ＨＩＦのターゲットである。
【０００４】
正常な酸素化のもとで、ＨＩＦ−αは、分子酸素との反応における基質であり、この反応は、ＰＨＤ−１（ＥＧＬＮ２、すなわち産卵異常９ホモログ２）、ＰＨＤ２（ＥＧＬＮ１）およびＰＤＨ３（ＥＧＬＮ３）と呼ばれる、鉄（ＩＩ）依存性、２−ケトグルタラート依存性およびアスコルバート依存性ジオキシゲナーゼのファミリーによって触媒される。ＨＩＦ−αのプロリン残基（例えば、ＨＩＦ−１αのＰｒｏ−４０２およびＰｒｏ−５６４）は、ヒドロキシル化され、その結果として得られる生成物は、タンパク質ユビキチン化に関与するＥ３ユビキチンリガーゼ多タンパク質複合体の構成要素である、腫瘍サプレッサータンパク質フォン・ヒッペル・リンダウ（ｖｏｎ−Ｈｉｐｐｅｌ  Ｌｉｎｄａｕ）のターゲットである。低酸素化のもとでは、ＨＩＦ−αヒドロキシル化反応があまり効率的でなく、ＨＩＦ−αをＨＩＦ−βとの二量体化に利用できる。ＨＩＦ二量体は、細胞核に移行され、そこでＨＩＦターゲット遺伝子の低酸素応答性エンハンサーエレメントに結合する。
【０００５】
低酸素条件下でおよび低酸素模倣剤（ｈｙｐｏｘｉａ  ｍｉｍｅｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）への暴露後にＨＩＦの細胞レベルが増加することは公知である。後者（低酸素模倣剤）としては、特定の金属イオン（例えば、コバルト、ニッケル、マンガン）、鉄キレート剤（例えば、デスフェリオキサミン）および２−ケトグルラート（２−ｋｅｔｏｇｌｕｒａｔｅ）の類似体（例えば、Ｎ−オキサリルグリシン）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物は、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ（ＰＨＤ−１、ＰＨＤ−２、ＰＨＤ−３）を阻害し、およびＨＩＦレベルを調節する役割も果たすことができる。従って、これらの化合物は、ＨＩＦ調節が望ましい疾患または状態、例えば貧血および虚血、の治療および／または予防に役立つ。組換えエリスロポエチン療法の代替として、本発明の化合物は、より簡単でより幅広い貧血管理方法を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼを阻害する式Ｉの化合物：
【化１】
2012532128.tif 000002
、エリスロポエチンの体内生産を増進させるためのそれらの使用、およびエリスロポエチンの体内生産減少に関係づけられる状態、例えば貧血および同様の状態、を治療するためのそれらの使用、ならびにそのような化合物と製薬用担体とを含む医薬組成物に関する。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明は、式Ｉの化合物もしくはそれらの医薬的に許容される塩、またはそれらの立体異性体、またはその立体異性体の医薬的に許容される塩を提供する：
【化２】
2012532128.tif 000003
【０００８】
（Ｒ１は、−Ｃ１−１０アルキル、−Ｃ２−１０アルケニル、−Ｃ２−１０アルキニルおよび−Ｃ１−６アルコキシから選択され、ここで、Ｒ１における前記アルキル、アルケニル、アルキニル、およびアルコキシは、それぞれ、１、２または３個のＲ８置換基で場合により置換されており；
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素および−Ｃ１−１０アルキル（これは、ハロ、ヒドロキシルおよび−ＯＣ１−１０アルキルから選択される１、２または３個の置換基で場合により置換されている）から選択され；
Ｖ、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは、それぞれ独立して、ＮおよびＣＨから選択され、ここで、Ｖ、Ｗ、Ｘ、ＹまたはＺは、１または２個の窒素で置換されており、およびＶまたはＷの少なくとも一方はＮであり；ならびに
Ｒ８は、ハロゲン、ヒドロキシル、−Ｃ１−１０アルキル、−Ｃ１−１０アルケニル、−Ｃ１−１０アルキニル、シアノ、オキソ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシおよび２，２，２−トリフルオロエトキシから選択される）。
【０００９】
本発明の化合物の実例となる、しかし非限定的な、例は、４−ヒドロキシ−Ｎ−｛１−［６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル］−１−メチルエチル｝−２−ピリダジン−３−イルピリミジン−５−カルボキサミド；またはその医薬的に許容される塩である。
【００１０】
１つの実施形態において、Ｒ１は、−Ｃ１−１０アルキル、−Ｃ２−１０アルケニル、−およびＣ２−１０アルキニルから選択され、ここで、Ｒ１における前記アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、それぞれ、１、２または３個のＲ８置換基で場合により置換されている。
【００１１】
本発明のもう１つの実施形態において、Ｒ１は、−Ｃ１−１０アルキルおよび−Ｃ１−６アルコキシから選択され、前記アルキルおよびアルコキシは、それぞれ、１、２または３個のＲ８置換基で場合により置換されている。
【００１２】
本発明のもう１つの実施形態において、Ｒ１は、１、２または３個のＲ８置換基で場合により置換されている−Ｃ１−６アルコキシから選択される。この実施形態の変形において、Ｒ１は、メトキシである。
【００１３】
本発明の１つの実施形態において、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、ハロ、ヒドロキシルおよび−ＯＣ１−１０アルキルから選択される１、２または３個の置換基で場合により置換されている−Ｃ１−１０アルキルである。この実施形態の変形において、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１−１０アルキルである。もう１つの変形において、Ｒ２およびＲ３は、それぞれメチルである。
【００１４】
本発明の１つの実施形態において、Ｗは、Ｎであり、ならびにＶ、Ｘ、ＹおよびＺは、それぞれ、ＣＨである。１つの実施形態において、ＷおよびＸは、Ｎである。本発明のもう１つの実施形態において、ＷおよびＹは、Ｎである。本発明のもう１つの実施形態において、ＷおよびＺは、Ｎである。
【００１５】
本発明の１つの実施形態において、Ｖは、Ｎであり、ならびにＷ、Ｘ、ＹおよびＺは、それぞれ、ＣＨである。本発明のもう１つの実施形態において、ＶおよびＺは、Ｎである。本発明のもう１つの実施形態において、ＶおよびＹは、Ｎである。本発明のさらにもう１つの実施形態において、ＷおよびＸは、Ｎである。
【００１６】
本発明のもう１つの実施形態において、ＷおよびＶは、Ｎであり、ならびにＸ、ＹおよびＺは、それぞれ、ＣＨである。
【００１７】
本発明の化合物、特に実施例１（式中、Ｒ１はメトキシであり、Ｒ２＝Ｒ３はメチルであり、Ｗ＝Ｘ＝Ｎ、ならびにＶ、ＹおよびＺはそれぞれＣＨである、またはＶ＝Ｚ＝Ｎ、ならびにＷ、ＸおよびＹはそれぞれＣＨである）は、２００９年３月９日出願の国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ０９／０３６５０１に開示されている実施例１８７に比べて、予想外により望ましい薬物動態およびオフターゲット活性プロフィールを提供する。
【００１８】
本明細書において用いる場合、注記のある場合を除き、「アルキル」は、すべての異性体を含めて、指定数の炭素原子を有する、分岐鎖飽和脂肪族炭化水素基と直鎖飽和脂肪族炭化水素基の両方を含むことを意図したものである。アルキル基について一般に用いられる略記を、本明細書をとおして用いており、例えば、メチルを「Ｍｅ」もしくはＣＨ３によって表すことがあり、エチルを「Ｅｔ」もしくはＣＨ２ＣＨ３によって表すことがあり、プロピルを「Ｐｒ」もしくはＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３によって表すことがあり、またはブチルを「Ｂｕ」もしくはＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３によって表すことなどがある。例えば、「Ｃ１−６アルキル」（または「Ｃ１−Ｃ６アルキル」）は、すべての異性体を含めて、指定数の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキル基を意味する。Ｃ１−６アルキルは、ヘキシルアルキルおよびペンチルアルキル異性体ならびにｎ−、イソ−、ｓｅｃ−およびｔ−ブチル、ｎ−およびイソプロピル、エチルならびにメチルのすべてを含む。「Ｃ１−４アルキル」は、ｎ−、イソ−、ｓｅｃ−およびｔ−ブチル、ｎ−およびイソプロピル、エチルならびにメチルを意味する。用語「アルキレン」は、すべての異性体を含めて、指定数の炭素原子を有する、および２つの末端鎖結合部を有する、分岐鎖飽和脂肪族炭化水素基と直鎖飽和脂肪族炭化水素基の両方を指す。例として、用語「非置換Ａ−Ｃ４アルキレン−Ｂ」は、Ａ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｂを表す。用語「アルコキシ」は、酸素架橋によって連結している指示された数の炭素原子の線状または分岐アルキル基を表す。
【００１９】
用語「ハロゲン」（または「ハロ」）は、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素（代替的に、フルオロ（Ｆ）、クロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）、およびヨード（Ｉ）とも呼ばれる）を指す。
【００２０】
本発明の化合物を描写および説明するいずれの構造においてもまたはいずれの式においても、いずれかの変数が１回より多く出現する場合、各出現時のその定義は、いずれの他の出現時におけるその定義とも無関係である。また、置換基および／または変数の組合せは、そのような組合せが結果として安定な化合物を生じさせる場合にのみ許容される。
【００２１】
用語「置換されている」（例えば、「１個以上の置換基で場合により置換されているアリール」の場合）は、指名されている置換基による一および多置換を、そのような一または多置換（同じ部位での多置換を包む）が化学的に許される限り、含む。
【００２２】
用語「オキシ」は、酸素（Ｏ）原子を意味する。用語「チオ」は、硫黄（Ｓ）原子を意味する。用語「オキソ」は、「＝Ｏ」を意味する。用語「カルボニル」は、「Ｃ＝Ｏ」を意味する。
【００２３】
本開示全体をとおして用いている標準的な命名法の下では、示す側鎖の末端部分を最初に記載し、その後、隣接する官能基を結合点に向かって記載する。例えば、Ｃ１−５アルキルカルボニルアミノＣ１−６アルキル置換基は、
【化３】
2012532128.tif 000004
に相当する。
【００２４】
本発明の化合物を選択する際、様々な置換基、すなわちＲ１、Ｒ２、Ｒ３など、が、化学構造結合性についての周知の原理に従って選択されることは、通常の当業者には理解されるであろう。
【００２５】
置換基から環構造内へ描かれている線は、示されている結合が、置換可能な環原子のいずれに連結していてもよいことを示す。環構造が多環式である場合、その結合は、もっぱら近位の環上の適する炭素原子のいずれかに連結していることが、意図されている。
【００２６】
本発明化合物上の置換基および置換パターンを、通常の当業者が、化学的に安定な化合物であって、容易に入手できる出発原料から当該技術分野において公知の技術および下に示す方法によって容易に合成できる化合物を生じさせるように選択できることは、理解される。ある置換基が、それ自体、１個以上の基で置換されている場合、結果として安定な構造が生ずるならば、これら多数の基が、同じ炭素上にあってもよいし、異なる炭素上にあってもよいことは理解される。句「１個以上の置換基で場合により置換されている」は、句「少なくとも１個の置換基で場合により置換されている」と同等であると理解されるべきであり、そのような場合、１つの実施形態は、ゼロから３個の置換基を有するであろう。
【００２７】
メチル基を末端とする置換基を有する化合物の構造表示は、末端メチル基を、文字「ＣＨ３」、例えば「−ＣＨ３」、を用いて表示することもあり、メチル基の存在を表す直線、例えば「
【化４】
2012532128.tif 000005
」、を用いて表示することもあり、すなわち、「
【化５】
2012532128.tif 000006
」と「
【化６】
2012532128.tif 000007
」は、同等の意味を有する。
【００２８】
反復項を有する項、例えば（ＣＲｉＲｊ）ｒ（この場合、ｒは、整数２であり、Ｒｉは被定義変数であり、およびＲｊは、被定義変数である）、を含有する変数の定義について、Ｒｉの値は、それが出現するそれぞれの事例で異なることがあり、およびＲｊの値は、それが出現するそれぞれの事例で異なることがある。例えば、ＲｉおよびＲｊが、メチル、エチル、プロピル、およびブチルから成る群より、独立して選択される場合には、（ＣＲｉＲｊ）２は、
【化７】
2012532128.tif 000008
であることがある。
【００２９】
光学異性体−ジアステレオマー−幾何異性体−互変異性体
本明細書に記載する化合物は、不斉中心を含有することがあり、従って、エナンチオマーとして存在することがある。本発明による化合物が２つ以上の不斉中心を有する場合、それらは、さらに、ジアステレオマーとして存在することがある。本発明は、実質的に純粋な分割されたエナンチオマー、それらのラセミ混合物、ならびにジアステレオマーの混合物などの、可能な立体異性体すべてを含む。上記式Ｉは、一定の位置での明確な立体化学を伴わず示されている。本発明は、式Ｉのすべての立体異性体ならびにそれらの医薬的に許容される塩および溶媒和物を含む。別の具体的な論究がない限り、一方の異性体への言及は、可能な異性体のいずれにも適用される。異性体の組成が明記されていない場合は常に、すべての可能な異性体が含まれる。エナンチオマーのジアステレオ異性体ペアは、例えば、適する溶媒からの分別結晶によって分離することができ、このようにして得たエナンチオマーのペアは、従来の手段により、例えば、光学活性酸または塩基を分割剤として使用することにより、またはキラルＨＰＬＣカラムを用いて、個々の立体異性体に分離することができる。さらに、一般式Ｉの化合物のいずれのエナンチオマーまたはジアステレオマーも、光学的に純粋な出発原料または立体配置がわかっている試薬を使用する立体特異的合成によって得ることができる。
【００３０】
本明細書に記載する化合物が、オレフィン二重結合を含有する場合、特に別の指定がない限り、そのような二重結合は、Ｅ幾何異性体とＺ幾何異性体の両方を含むことを意図したものである。
【００３１】
本明細書に記載する化合物の一部は、異なる水素結合点を伴って存在することがあり、これらは互変異性体と呼ばれる。例えば、カルボニル−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−基を含む化合物（ケト型）は、互変異性を受けて、ヒドロキシル−ＣＨ＝Ｃ（ＯＨ）−基（エノール型）になることがある。ケト型とエノール型の両方が、個々に、ならびにそれらの混合物として、本発明の範囲内に含まれる。
【００３２】
塩
医薬的に許容される塩は、金属（無機）塩と有機塩の両方を含み；これらのリストは、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，１７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、ｐｇ．１４１８（１９８５）、に与えられている。適切な塩形態が、物理および化学的安定性、流動性、吸湿性（ｈｙｄｒｏ−ｓｃｏｐｉｃｉｔｙ）および溶解度に基づいて選択されることは、当業者に周知である。用語「医薬的に許容される塩」は、医薬的に許容される非毒性の塩基または酸から調製される塩を指す。本発明の化合物が酸性であるとき、その対応する塩を無機塩基または有機塩基から適便に調製することができる。そのような無機塩基から誘導される塩としては、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅（第二銅および第一銅）、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン（第二マンガンおよび第一マンガン）、カリウム、ナトリウム、および亜鉛およびこれらに類するものの塩が挙げられる。アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、およびナトリウム塩が好ましい。有機塩基から調製される塩としては、自然に存在する源および合成の源、両方から誘導される、第一級、第二級および第三級アミンの塩が挙げられる。塩を形成することができる医薬的に許容される有機非毒性塩基としては、例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、ジシクロヘキシルアミン、リシン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００３３】
本発明の化合物が塩基性である場合、その対応する塩を無機または有機酸から適便に調製することができる。そのような酸としては、例えば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、樟脳スルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびこれらに類するものが挙げられる。クエン酸、臭化水素酸、塩酸、マレイン酸、リン酸、硫酸、および酒石酸が好ましい。
【００３４】
溶媒
本発明は、その範囲内に、式Ｉの化合物の溶媒和物を含む。本明細書で用いる場合、用語「溶媒和物」は、溶質（すなわち、式Ｉの化合物）またはその医薬的に許容される塩と、該溶質の生物活性に干渉しない溶媒とによって形成される、可変化学量論比の複合体を指す。溶媒の例としては、水、エタノール、および酢酸が挙げられるが、これらに限定されない。溶媒が水であるとき、その溶媒和物は、水和物として公知であり；水和物としては、半−、一、セスキ−、二−、および三水和物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３５】
プロドラッグ
本発明は、その範囲内に、本発明の化合物のプロドラッグの使用を含む。一般に、そのようなプロドラッグは、本発明の化合物の官能性誘導体であって、所望の化合物へインビボで容易に変換可能なものであろう。従って、本発明の治療方法において、用語「投与すること」は、記載する様々な状態の、式Ｉの化合物での、または式Ｉの化合物でないことがあるが、患者への投与後にインビボで式Ｉの化合物に変換する化合物での、治療を含むものとする。適するプロドラッグ誘導体の選択および調製のための従来の手順は、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」、ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５、に記載されている。
【００３６】
有用性
本発明の化合物は、低酸素誘導性因子（ＨＩＦ）プロリルヒドロキシラーゼの阻害剤であり、それ故、ＨＩＦ調節が望ましい疾患および状態、例えば貧血および虚血、の治療および予防において有用である。選択的で管理された方法で本発明の化合物を使用して、低酸素誘導性因子の安定化を誘導すること、ならびにエリスロポエチン産生および分泌を迅速かつ可逆的に刺激することができる。従って、本発明のもう１つの態様は、哺乳動物における疾患または状態を治療または予防する方法を提供し、この治療または予防は、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ阻害によって果たされるまたは助長されるものであり、この方法は、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼを阻害するために有効である式Ｉの化合物の量を投与することを含む。本発明のこの態様は、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼによって変調される疾患または症状を治療または予防するための薬物の製造における式Ｉの化合物に使用をさらに含む。
【００３７】
１つの実施形態には、哺乳動物におけるエリスロポエチンの内因産生を増進させる方法があり、この方法は、エリスロポエチンの体内産生を増進させるために有効である式Ｉの化合物の量を、前記哺乳動物に投与することを含む。
【００３８】
もう１つの実施形態は、哺乳動物における貧血を治療する方法であり、この方法は、式Ｉの化合物の治療有効量を前記哺乳動物に投与することを含む。「貧血」としては、慢性腎疾患性貧血、化学療法誘発性貧血（例えば、ＨＩＶおよびＣ型肝炎ウイルスなどの感染性疾患、のための抗ウイルス薬レジメンの結果として生ずる貧血）、慢性疾患からの貧血、癌状態に関連づけられる貧血、癌の放射線治療の結果として生ずる貧血、慢性免疫障害、例えば関節リウマチ、炎症性腸疾患および狼瘡、からの貧血、ならびに月経による、または老化にからの、または鉄のプロセッシングに欠陥がある他の個体、例えば鉄を十分にもっているが鉄を適切に利用することができない個体、における貧血が挙げられる。
【００３９】
もう１つの実施形態は、哺乳動物における虚血性疾患を治療する方法であり、この方法は式Ｉの化合物の治療有効量を前記哺乳動物に投与することを含む。
【００４０】
併用療法
式Ｉの化合物を、式Ｉの化合物が有効である疾患または状態の治療／予防／抑制または改善において使用される他の薬物と、併用することができる。そのような他の薬物を、それらが一般に使用される経路によりおよび量で、式Ｉの化合物と同時にまたは逐次的に投与することができる。式Ｉの化合物を１つ以上の他の薬物と同時に使用するとき、そのような他の薬物を式Ｉの化合物に加えて含有する医薬組成物が好ましい。従って、本発明の医薬組成物は、式Ｉの化合物に加えて、１つ以上の他の活性成分も含有するものを含む。
【００４１】
投与経路／用量
本発明の化合物は、本発明による苦痛、疾患および疾病の治療または予防のために、活性成分化合物と温血動物の身体の作用部位とを接触させる任意の手段によって投与することができる。例えば、投与は、経口投与、局所投与（経皮投与を含む）、眼投与、口腔内投与、鼻腔内投与、吸入投与、膣内投与、直腸内投与、槽内投与および非経口投与である場合がある。本明細書において用いる場合の用語「非経口的」は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内注射もしくは注入、胸骨内および腹腔内を含む投与方式を指す。本開示に関連して、温血動物は、恒常性メカニズムをもつ動物界のメンバーであり、哺乳類および鳥類を含む。
【００４２】
前記化合物は、医薬との併用に利用できる任意の従来の手段により、個々の治療薬として、または治療薬の合剤で投与することができる。それらを単独で投与することができるが、一般には、選ばれる投与経路および標準的な薬務に基づいて選択される製薬用担体とともに投与される。
【００４３】
投与される用量は、レシピエントの年齢、健康状態および体重、疾患の程度、併用療法の種類（あれば）、治療の頻度、および所望の効果の性質に依存するであろう。通例、活性成分化合物の日用量は、１日あたり約０．１〜２０００ミリグラムであろう。通常、１回以上の適用で１日あたり１０から５００ミリグラムが、所望の結果を得るために有効である。これらの用量は、上記記載の苦痛、疾患および疾病、例えば貧血、の治療および予防のための有効量である。
【００４４】
医薬組成物
本発明のもう１つの態様は、式Ｉの化合物と医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。医薬組成物におけるような用語「組成物」は、活性成分（単数または複数）と、担体を構成する不活性成分（単数または複数）（医薬的に許容される賦形剤）とを含む生成物ばかりでなく、任意の２つ以上の成分の会合、複合体化もしくは凝集の結果として、または１つ以上の成分の解離の結果として、または１つ以上の成分の別のタイプの反応もしくは相互作用の結果として、直接もしくは間接的に生ずる任意の生成物も包含することを意図したものである。従って、本発明の医薬組成物は、式Ｉの化合物と追加の活性成分（単数または複数）と医薬的に許容される賦形剤とを混合することによって作られた、任意の組成物を包含する。
【００４５】
本発明の医薬組成物は、活性成分としての、式Ｉによって表される化合物（またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物）と、医薬的に許容される担体と、場合により他の治療成分もしくはアジュバントとを含む。前記組成物は、経口投与、直腸内投与、局所投与および非経口投与（皮下投与、筋肉内投与および静脈内投与を含む）に適する組成物を含むが、いずれの所与の場合においても、最も適する経路は、個々の宿主に、ならびに活性成分を投与することとなる状態の性質および重症度に依存するであろう。前記医薬組成物を単位剤形で適便に与えることができ、および薬学技術分野において周知の任意の方法によって調製することができる。
【００４６】
活性成分を、固体剤形、例えばカプセル、錠剤、トローチ、糖衣丸、顆粒および粉末、で、または液体剤形で、例えばエリキシル、シロップ、エマルジョン、分散液および懸濁液、で、経口投与することができる。活性成分を、滅菌液体剤形、例えば分散液、懸濁液または溶液、で、非経口投与することもできる。局所投与のための軟膏、クリーム、滴剤、経皮パッチもしくは粉末のような、眼投与のための眼科用溶液もしくは懸濁製剤、すなわち点眼剤、のような、吸入もしくは鼻腔内投与のためのエアロゾルスプレーもしくは粉末組成物のような、または直腸内もしくは膣投与のためのクリーム、軟膏、噴霧剤もしくは坐剤のような、他の剤形も、活性成分を投与するために使用することができる。
【００４７】
ゼラチンカプセルは、活性成分および粉末担体、例えばラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびこれらに類するもの、を含有する。類似の希釈剤を使用して、圧縮錠剤を作ることができる。錠剤も、カプセルも、一定時間にわたる薬物の継続的放出を生じさせる徐放性製品として製造されることがある。圧縮錠剤は、一切の不快な味をマスクするためにおよびその錠剤を雰囲気から保護するために糖衣が施されるもしくはフィルムコートされることがあり、または胃腸管内での選択的溶解のために腸溶コートされることがある。
【００４８】
経口投与のための液体剤形は、患者の受容を増すために着色剤および着香剤を含有することがある。
【００４９】
一般に、水、適する油、食塩水、水性デキストロース（グルコース）、ならびに関連糖溶液およびグリコール、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコール、は、非経口溶液に適する担体である。非経口投与のための溶液は、好ましくは、活性成分の水溶性塩、適する安定剤および、必要な場合には、緩衝物質を含有する。単独または併用いずれかでの抗酸化物質、例えば重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸、は、適する安定剤である。クエン酸およびその塩ならびにナトリウムＥＤＴＡも使用される。加えて、非経口溶液は、保存薬、例えばベンズアルコニウムクロリド、メチル−またはプロピルパラベン、およびクロロブタノール、を含有することがある。
【００５０】
適する製薬用担体は、本分野の標準的な参考テキストである、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ａ．Ｏｓｏｌに記載されている。
【００５１】
吸入による投与のために、本発明の化合物を、加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示の形態で適便に送達することができる。調合することができる粉末として前記化合物を送達することができ、吹入粉末吸入装置を使ってその粉末組成物を吸入することができる。吸入のための好ましい送達系は、定量噴霧式吸入（ＭＤＩ）エアロゾルであり、これは、適する噴射剤、例えばフルオロカーボンまたは炭化水素、中の式Ｉの化合物の懸濁液または溶液として調合することができる
眼投与については、適切な眼科用ビヒクル中の式Ｉの化合物の適切な重量パーセントの溶液もしくは懸濁液を用いて、該化合物を眼の角膜または内部領域に浸透させるために十分な時間、該化合物が眼表面と接触した状態で維持されるように、眼科用製剤を調合することができる。
【００５２】
本発明の化合物の投与に有用な医薬剤形としては、硬および軟ゼラチンカプセル、錠剤、非経口注射剤、および経口懸濁剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
標準的な２ピース硬ゼラチンカプセルの各々に、１００ミリグラムの粉末活性成分、１５０ミリグラムのラクトース、５０ミリグラムのセルロースおよび６ミリグラムのステアリン酸マグネシウムを充填することによって、多数の単位カプセルを調製する。
【００５４】
可消化油、例えば大豆油、綿実油またはオリーブ油、中の活性成分の混合物を調製し、容積式ポンプによってゼラチンに注入して、１００ミリグラムの活性成分を含有する軟ゼラチンカプセルを形成する。カプセルを洗浄し、乾燥させる。
【００５５】
多数の錠剤を、従来の方法により、投薬単位が１００ミリグラムの活性成分、０．２ミリグラムのコロイド状二酸化ケイ素、５ミリグラムのステアリン酸マグネシウム、２７５ミリグラムの微結晶性セルロース、１１ミリグラムのデンプンおよび９８．８ミリグラムのラクトースとなるように調製する。適切な被覆剤を塗布して、美味性を増すことまたは吸収を遅らせることができる。
【００５６】
１．５重量％の活性成分を１０容量％のプロピレングリコール中で攪拌することにより、注射による投与に適する非経口組成物を調製する。この溶液を注射用蒸留水で嵩増しし、滅菌する。
【００５７】
経口投与のために、水性懸濁液を、各５ミリリットルが１００ミリグラムの微粉活性成分、１００ミリグラムのカルボキシメチルセルロースナトリウム、５ミリグラムの安息香酸ナトリウム、１．０グラムのソルビトール溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および０．０２５ミリリットルのバニリンを含有するように調製する。
【００５８】
本発明の化合物を段階的にまたは別の治療薬と併用で投与するとき、一般に、同じ剤形を使用することができる。薬物を物理的併用で投与するとき、併用する薬物の相溶性に依存して剤形および投与経路を選択すべきである。従って、用語「併用投与」は、２つの薬剤の同時もしくは逐次的投与、または代替的に、２つの活性成分の固定用量合剤としての投与を含むと解する。
【００５９】
本発明の化合物を単独の活性成分として投与することができ、または患者のエリスロポエチンレベルの改善に有用であることが公知の他の活性成分をはじめとする第２の活性成分と併用で投与することができる。
【００６０】
本発明の化合物の調製の説明において用いる略記：
ＡｃＯＨ    酢酸
ａｑ    水性の
ブライン    塩化ナトリウム飽和水溶液
ＣＤＩ    １，１’−カルボニルジイミダゾール
ＣＯ    一酸化炭素
ＤＣＭ    ジクロロメタン
Ｄｐｐｆ    １，１’’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン
ＤＢＵ    １，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン
ＤＩＥＡ    Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ    ４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ    Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ    ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ    酢酸エチル
Ｅｔ（ｅｔ）    エチル
ＥｔＯＨ    エタノール
Ｅｔ２Ｏまたはエーテル    ジエチルエーテル
ｇ    グラム
ｈまたはｈｒ    時間
ＨＡＴＵ    Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスファート
ＨＣｌ    塩酸
ＨＰＬＣ    高速液体クロマトグラフィー
ｉ−ＰｒＯＨまたはＩＰＡ    イソプロピルアルコール
ｍ−ＣＰＢＡ    ３−クロロ過安息香酸
ｍｇ    ミリグラム
ｍＬ    ミリリットル
ｍｍｏｌ    ミリモル
ＭｅＣＮ    アセトニトリル
ＭｅＯＨ    メタノール
ｍｉｎ    分
ｍｓまたはＭＳ    質量スペクトル
ＭＴＢＥ    メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
μｇ    マイクログラム（単数または複数）
μＬ    マイクロリットル
ＮａＨＳＯ４    重硫酸ナトリウム
ＮａＯＥｔ    ナトリウムエトキシド
ＮａＯＭｅ    ナトリウムメトキシド
Ｎａ２ＳＯ４    硫酸ナトリウム
ＮＨ４Ｃｌ    塩化アンモニウム
ＮＨ４ＯＨ    水酸化アンモニウム
ＰＰＴＳ    ピリジニウム・ｐ−トルエンスルホナート
Ｒｔ    保持時間
ｒｔ    室温
ＴＥＡ    トリエチルアミン
ＴＦＡ    トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ    テトラヒドロフラン
【００６１】
一般法
湿分または空気に敏感な反応は、無水溶媒および試薬を用いて窒素下で行なった。Ｅ．ＭｅｒｃｋのＴＬＣ用プレコートプレート、シリカゲル６０Ｆ−２５４、層厚０．２５ｍｍを用いて行なう分析用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、または液体クロマトグラフィー−質量スペクトル（ＬＣ−ＭＳ）、いずれかによって、反応の進行を判定した。分析用ＨＰＬＣ／ＭＳ−標準法：質量分析は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ（登録商標）ＺＱ（商標）により、陽イオン検出モードでのエレクトロスプレーイオン化を用いて行った。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズＨＰＬＣにより、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ１８  ＸＴｅｒｒａ  ３．５μｍ  ３．０×５０ｍｍカラムを用いて、３．７５分にわたって勾配１０：９０〜１００  ｖ／ｖ  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡ、その後、１．７５分間、１００  ＣＨ３ＣＮ＋ｖ０．０５％ＴＦＡで保持；流量１．０ｍＬ／分、ＵＶ波長２５４ｎｍで行った（別の指示がない限り、すべてのＨＰＬＣ／ＭＳデータをこの方法で生成した）。分析用ＨＰＬＣ／ＭＳ−基本法：質量分析は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ（登録商標）ＺＱ（商標）により、陽イオン検出モードでのエレクトロスプレーイオン化を用いて行った。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズＨＰＬＣにより、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ１８  ＸＢｒｉｄｇｅ  ３．５μｍ  ３．０×５０ｍｍカラムを用いて、３．２５分にわたって勾配１０：９０〜９８：２  ｖ／ｖ  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０２５％ＮＨ４ＯＨ、その後、２．２５分間、９８：２  ＣＨ３ＣＮ＋ｖ０．０２５％ＮＨ４ＯＨで保持；流量１．０ｍＬ／分、ＵＶ波長２５４ｎｍで行った。溶液の濃縮は、ロータリーエバポレータにより減圧下で行なった。フラッシュクロマトグラフィーは、充填済みカートリッジでのシリカゲル（３２〜６３μＭ  粒径、ＫＰ−Ｓｉｌ６０Å充填材タイプ）を用いるＢｉｏｔａｇｅ  ＨｏｒｉｚｏｎもしくはＳＰ１フラッシュクロマトグラフィー装置（Ｄｙａｘ  Ｃｏｒｐ．）を使用して、または充填済みカートリッジでのシリカゲル（３２〜６３μＭ、６０Å）を用いるＩＳＣＯ  ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（商標）Ｓｑ  １６ｘもしくはＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ（商標）装置を使用して、行った。マイクロ波反応は、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｃｉａｔｏｒ（商標）２．０またはＣＥＭ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒ（商標）システムを用いて行なった。
【００６２】
中間体１
【化８】
2012532128.tif 000009
【００６３】
２−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−カルボニトリル。ＤＣＭ（３０ｍＬ）中のピリダジン（１．８０７ｍＬ、２４．９８ｍｍｏｌ）、塩化アルミニウム（０．０１０ｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）およびシアン化トリメチルシリル（６．０３ｍＬ、４５．０ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下、０℃で２０分間攪拌した。ＤＣＭ（６０ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホニルクロリド（８．１９ｇ、４３．０ｍｍｏｌ）の溶液を１時間かけて１滴ずつ添加した。その反応物を室温に温め、さらに６５時間攪拌して濃縮した。残留物をＥｔＯＨ（５０ｍＬ）で処理し、得られた固体を濾過して表題化合物を得た。ＨＰＬＣ／ＭＳ：２６２．１（Ｍ＋１）；Ｒｔ＝２．５１分。
【００６４】
中間体２
【化９】
2012532128.tif 000010
【００６５】
ピリダジン−３−カルボニトリル。ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の中間体１の生成物（４．９８ｇ、１９．０６ｍｍｏｌ）にＤＢＵ（３．５９ｍＬ、２３．８２ｍｍｏｌ）を添加した。その反応物を室温、窒素雰囲気下で１時間攪拌した。ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（５０ｍＬ）を添加し、その反応物を水（５０ｍＬ）に注入した。水性媒体をＥｔＯＡｃで抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残留物を、０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲル勾配を用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。ＨＰＬＣ／ＭＳ：１０６．２（Ｍ＋１）；Ｒｔ＝０．３８分。
【００６６】
中間体３
【化１０】
2012532128.tif 000011
【００６７】
アミノ（ピリダジン−３−イル）メタンイミニウム・クロリド。ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の中間体２の生成物（１．７ｇ、１６．１８ｍｍｏｌ）にナトリウムメトキシド（０．３７０ｍＬ、１．６１８ｍｍｏｌ、ＭｅＯＨ中２５重量％）を添加した。その反応物を一晩、室温で攪拌し、そのときに塩化アンモニウム（０．９５２ｇ、１７．７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２．５時間還流させ、室温に冷却し、ＭｅＯＨで希釈し、濃縮して、表題化合物を得た。ＨＰＬＣ／ＭＳ：１２３．１（Ｍ＋１）；Ｒｔ＝０．３４分。
【００６８】
中間体４
【化１１】
2012532128.tif 000012
【００６９】
４−ヒドロキシ−２−ピリダジン−３−イルピリミジン−５−カルボン酸。ＥｔＯＨ（８．０ｍＬ）中の中間体３の生成物（０．５００ｇ、３．１５ｍｍｏｌ）に、エトキシメチレンマロン酸ジエチル（０．６３７ｍＬ、３．１５ｍｍｏｌ）およびナトリウムメトキシド（０．７９３ｍＬ、３．４７ｍｍｏｌ、ＭｅＯＨ中２５重量％）を添加した。その反応物を１０分間、１２０℃で、マイクロウェーブで加熱した。追加のエトキシメチレンマロン酸ジエチル（０．３１９ｍＬ、１．５７６ｍｍｏｌ）を添加し、その反応物を１０分間、１２０℃で、マイクロウェーブで加熱した。水酸化カリウム（４．７３ｍＬ、９．４６ｍｍｏｌ、２．０Ｍ）を添加し、その反応物を１０分間、１２０℃で、マイクロウェーブで加熱した。反応物を水で希釈し、濃縮した。残留物を最少量の水に溶解し、ＥｔＯＡｃで抽出した。濃ＨＣｌ水溶液を使用して水性層をｐＨ＝２に調整し、１５分間攪拌した。固体を濾過し、水およびヘキサンですすいで、表題化合物を得た。ＨＰＬＣ／ＭＳ：２１９．０（Ｍ＋１）；Ｒｔ＝０．２８分（基本法）。
【実施例１】
【００７０】
【化１２】
2012532128.tif 000013
【００７１】
４−ヒドロキシ−Ｎ−｛１−［６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル］−１−メチルエチル｝−２−ピリダジン−３−イルピリミジン−５−カルボキサミド（Ｅ−１）
【化１３】
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【００７２】
工程Ａ：２−（６−クロロピリジン−３−イル）プロパン−２−オール（１−Ａ）
６−クロロニコチン酸エチル（３７．２ｇ、２００ｍｍｏｌ）（または当モル量の６−クロロニコチン酸メチル）をＴＨＦ（３１５ｍＬ）に溶解し、氷水浴内に配置した（反応器Ａ）。別の反応容器を氷水浴内に配置し、ＴＨＦ（３３５ｍＬ）およびメチルマグネシウムクロリド（２００ｍＬ、６０１ｍｍｏｌ）を順次投入した（反応器Ｂ）。反応器Ａの内容物を攪拌しながら反応器Ｂにゆっくりと添加し、この間、１５〜２５℃のコア温度範囲を維持した。添加後、氷水浴を使用して反応混合物を再び０℃に冷却し、２．５Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２４０ｍＬ、６００ｍｍｏｌ）で処理した。ＭＴＢＥを用いてその水性媒体を分配し、水性層をＭＴＢＥで再び抽出した。併せた有機層をＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をＣＨ３ＣＮで希釈し、濃縮した。これを１回繰り返した。生成物を高真空下で乾燥させた。ＨＰＬＣ／ＭＳ：１７２．０（Ｍ＋１）；Ｒｔ＝１．７１分。
【００７３】
工程Ｂ：Ｎ−［１−（６−クロロピリジン−３−イル）−１−メチルエチル］アセトアミド（１−Ｂ）
ＣＨ３ＣＮ（２５０ｍＬ）中の、工程Ａからの生成物、１−Ａ、（３３．４２ｇ、１９５ｍｍｏｌ）の溶液を、氷水浴を使用して０℃に冷却した。硫酸（７２．７ｍＬ、１３６３ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、その反応混合物を放置して室温に温め、４８〜７２時間の間、攪拌した。氷水浴を使用して反応混合物を０℃に冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈し、その後、２９％ＮＨ４ＯＨ水溶液（２０３ｍＬ）でゆっくりと処理した。その失活混合物をＭＴＢＥで抽出し、有機層を分離した。水性層をＭＴＢＥで抽出し、併せた有機層を、固体が存在するまで、減圧下で濃縮した。それらの固体をヘキサンで処理し、真空濾過によって回収し、高真空下で乾燥させた。ＨＰＬＣ／ＭＳ：２１３．０（Ｍ＋１）；Ｒｔ＝１．７１分。
【００７４】
工程Ｃ：Ｎ−｛１−［６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル］−１−メチルエチル｝アセトアミド（１−Ｃ）
工程Ｂからの生成物、１−Ｂ、（３７．１１ｇ、１７４ｍｍｏｌ）、４−メトキシフェニルボロン酸（４７．７ｇ、３１４ｍｍｏｌ）およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（６．１２ｇ、８．７２ｍｍｏｌ）をＤＭＡ（３２５ｍＬ）および２．０Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２８８ｍＬ、５７６ｍｍｏｌ）に懸濁させた。反応容器の雰囲気を排気し／Ｎ２でパージし（３×）、その反応混合物を９０℃で３時間にわたって加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃとＨ２Ｏとで分配した。有機層を分離し、Ｈ２Ｏ、ＮａＣｌ飽和水溶液、で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をＣＨ２Ｃｌ２に懸濁させ、真空濾過によって固体を単離し、高真空下で乾燥させた。代替の後処理：反応混合物を室温に冷却し、Ｈ２Ｏ（１．８５Ｌ）で希釈した。真空濾過によって固体を回収してヘキサンですすぎ、高真空下で乾燥させた。ＨＰＬＣ／ＭＳ：２８５．０（Ｍ＋１）；Ｒｔ＝１．５３分。
【００７５】
工程Ｄ：２−［６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル］プロパン−２−アミン・ベンゼンスルホネート（１−Ｄ）
工程Ｃの生成物、１−Ｃ、（２３．３４ｇ、８２ｍｍｏｌ）をＨ２Ｏ（６６ｍＬ）および濃ＨＣｌ（５８．１ｍＬ、７０８ｍｍｏｌ）に懸濁させた。その反応混合物を１００℃で４２時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ＭＴＢＥを用いて分配した。有機層を廃棄した。水性層を５．０Ｍ  ＨａＯＨ水溶液（１６０ｍＬ、８００ｍｍｏｌ）で処理し、ＥｔＯＡｃ（２×〜７００ｍＬ）で抽出した。併せた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で原容量の約１／４に濃縮した。ベンゼンスルホン酸（１２．９８ｇ、８２ｍｍｏｌ）を固体として添加し、その混合物を攪拌し、室温で１０分間放置した。真空濾過によって固体を単離し、ヘキサンですすぎ、高真空下で乾燥させた。ＨＰＬＣ／ＭＳ：２４３．０（Ｍ＋１）；Ｒｔ＝１．４９分。
【００７６】
工程Ｅ：４−ヒドロキシ−Ｎ−｛１−［６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル］−１−メチルエチル｝−２−ピリダジン−３−イルピリミジン−５−カルボキサミド（Ｅ−１）
ＮＭＰ（９７ｍＬ）中の中間体４（４−ヒドロキシ−２−ピリダジン−３−イルピリミジン−５−カルボン酸）（１２．１２ｇ、５５．６ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（２３．１０ｍＬ、１６７ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（９．０１ｇ、５５．６ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を７０℃で１時間にわたって加熱した。その高温溶液に、工程Ｄからの生成物（２６．７ｇ、６６．７ｍｍｏｌ）を固体として添加した。その反応混合物を７０℃で１時間にわたって熟成させ、その後、室温に冷却した。反応混合物をＨ２Ｏ（３００ｍＬ）で希釈し、分液漏斗に移した。水性媒体をＥｔＯＡｃ（２×１７５ｍＬ）で洗浄した（有機洗液を廃棄した）。水性層を分離し、２９０ｍＬのｐＨ＝７緩衝溶液（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製品番号ＳＢ１０８−１）で、その後、６．０Ｍ  ＨＣｌ（１８．５２ｍＬ、１１１ｍｍｏｌ）で処理した。得られた懸濁液を攪拌し、約２０分間放置した。真空濾過によって固体を単離し、Ｈ２Ｏ（３×）で、その後、ＥｔＯＡｃ（３×）ですすぎ、高真空下で乾燥させた。ＨＰＬＣ／ＭＳ：４４３．１（Ｍ＋１）；Ｒｔ＝２．０４分。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ９．４９（ｄｄ，Ｊ＝５．０６，１．６０Ｈｚ，１Ｈ）；８．６４（ｄ，Ｊ＝２．１１Ｈｚ，１Ｈ）；８．５２（ｄｄ，Ｊ＝８．４２，１．７２Ｈｚ，２Ｈ）；８．０２−７．９７（ｍ，３Ｈ）；７．８３−７．７６（ｍ，２Ｈ）；７．０２（ｄ，Ｊ＝８．７０Ｈｚ，２Ｈ）；３．８０（ｓ，３Ｈ）；１．７５（ｓ，６Ｈ）。
【００７７】
比較例
実施例１（Ｅ−１）の薬物動態およびシトクロムＰ４５０活性を評価し、２００９年３月９日出願の国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ０９／０３６５０１に開示されている実施例１８７のものと比較した。ＰＥＧ２００：水の（体積で）１：１の溶液で化合物を調合し、０．５ｍｇ／（体重のｋｇ）で投与した。調合物を２匹のイヌ（ビーグル犬）に静脈内投与し、次の時点（時間）で採血した：０．０８、０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４。下の表に示す血漿濃度は、タンパク質沈降、その後の液体クロマトグラフィー−タンデム質量分光分析によって決定した。
【表１】
2012532128.tif 000015
【００７８】
式中のＲ２およびＲ３がメチルであり、ならびにＲ１がメトキシである、本発明の実施例は、ＰＣＴ／ＵＳ０９／０３６５０１の類似実施例（実施例１８７）に比べて７倍速い固有クリアランスと、付随する平均停留時間（ＭＲＴ）および半減期（ｔ１／２）減少を有するという、予期せぬ利点を示す。より速いクリアランスを示すことなどの薬物動態特性の改善は、患者が有害事象を経験したとしても薬物が循環から除去されるのにかかる時間を減少させることにより化合物の安全性プロフィールに益する。
【００７９】
実施例１の化合物およびまたＰＣＴ／ＵＳ０９／０３６５０１の実施例１８７を、シトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ３Ａ４およびＣＹＰ２Ｃ８に対するそれらの活性について試験した。Ｗａｌａｓｋｙらによって記載されたものおよびその中の参考文献のものに類似した手順を利用して、以下のヒトＩＣ５０値を決定した（Ｗａｌｓｋｙ，Ｒ．Ｌ．、Ｏｂａｃｈ，Ｒ．Ｓ．、「Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．」、２００４、３２、６４７−６６０）。
【表２】
2012532128.tif 000016
【００８０】
上の表において示されるように、本発明の実施例は、ＰＨＤ２に対するおよびＨＩＰペプチドとのその相互作用に対する阻害についての予想外に改善された選択性、ならびにＣＹＰ３Ａ４およびＣＹＰ２Ｃ８に対する阻害に関するより低い活性を示す。結果として、本発明の化合物（式中、Ｒ２およびＲ３はメチルであり、ならびにＲ１はメトキシである）は、シトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ３Ａ４およびＣＹＰ２Ｃ８に対するオフターゲット活性の最小化に関して、ＰＣＴ／ＵＳ０９／０３６５０１の実施例１８７を超える改善を示す。これらの改善は、薬物−薬物相互作用（ある薬物の投与が別の薬物の作用を改変し得るおよび有害事象の原因となり得る状況）の可能性を減少させることができる。
【００８１】
生物学的アッセイ
例示化合物（本発明の実施例１）は、ＰＨＤ２とＨＩＦペプチドとの相互作用を阻害すること、および０．１ナノモルから１０マイクロモルの間にわたるＩＣ５０値を示すことが判明した。好適な活性を検出するために有用であり得るアッセイの非限定的な例は、次の出版物に開示されている：Ｏｅｈｍｅ，Ｆ．ら、「Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．」、３３０：７４−８０（２００４）；Ｈｉｒｓｉｌａ，Ｍ．ら、「Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．」、２７８（３３）：３０７７２−３０７８０（２００５）；Ｈｙｕｎｊｕ，Ｃ．ら、「Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．」、３３０（２００５）２７５−２８０；およびＨｅｗｉｔｓｏｎ，Ｋ．Ｓ．ら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」（Ｏｘｙｇｅｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｙｐｏｘｉａ）；Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ（２００７）、ｐｇ．２５−４２（ＩＳＳＮ：００７６−６８７９）。
【００８２】
本発明の化合物の生物学的活性は、本明細書において下で説明するアッセイを用いて評価することができる：
９６ウェルプレートの各ウェルに、ＤＭＳＯ中の１μＬの被験化合物と、バキュロウイルス感染Ｓｆ９細胞において発現されそこから精製した０．１５μｇ／ｍＬ  ＦＬＡＧタグ付き完全長ＰＨＤ２を含有する２０μＬのアッセイバッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４／０．０１％  Ｔｗｅｅｎ−２０／０．１ｍｇ／ｍＬ  ウシ血清アルブミン／１０μＭ  硫酸第一鉄／１ｍＭ  アスコルビン酸ナトリウム／２０μｇ／ｍＬ  カタラーゼ）とを添加した。室温で３０分間のプレインキュベーション後、４μＬの基質の添加により酵素反応を開始させた（０．２μＭ  ２−オキソグルタラートおよび０．５μＭ  ＨＩＦ−１αペプチドビオチニル−ＤＬＤＬＥＭＬＡＰＹＩＰＭＤＤＤＦＱＬの最終濃度）。室温で２時間後、２５μＬのクエンチ／検出ミックスを添加して、１ｍＭ  オルト−フェナントロリン、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５ｎＭ  抗（Ｈｉｓ）６ＬＡＮＣＥ試薬（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、１００ｎＭ  ＡＦ６４７標識ストレプトアビジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、および２μｇ／ｍＬ  （Ｈｉｓ）６−ＶＨＬ複合体（Ｓ．Ｔａｎ（２００１）「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．」２１、２２４−２３４）の最終濃度にすることによって、反応を停止させ、シグナルを発生させた。６６５ｎｍでの時間分解蛍光シグナルと６２０ｎｍでの時間分解蛍光シグナルの比を決定し、並行して実行した非阻害対照サンプルに対する阻害パーセントを計算した。
【００８３】
ＨＩＦ−ＰＨＤ１およびＨＩＦ−ＰＨＤ３の触媒活性の阻害を、同様に決定することができる。
【００８４】
実施例１に開示する本発明の化合物についての、ＩＣ５０（ｎＭ）で表す、ＰＤＨ２結合活性は、≦１０ｎＭであることが判明した。
【国際調査報告】
2012532128.tif 000018