(57)【要約】  多血小板血漿（ＰＲＰ）の組成物が提供される。一般的に、これら組成物は、全血より高い濃度の血小板及び白血球を含む。血小板及び／又は白血球の濃度は、全血中のそれぞれの濃度の２〜８倍であってもよい。これら組成物は、赤血球及びヘモグロビンの濃度が抑制されていてもよい。幾つかの変法では、本組成物は、損傷結合組織を治療するのに、及び／又は心臓発作後に心臓アポトーシスを遅延又は停止させるのに有用であってもよい。本ＰＲＰ組成物は、再灌流療法と併せて送達されてもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
全血に由来し、全血中の血小板濃度の少なくとも約１．１倍である第１の濃度の血小板と、
全血に由来し、少なくとも全血中の白血球濃度である第２の濃度の白血球を含み、前記白血球が、
全血中の単球濃度の少なくとも２倍である第３の濃度の単球、
全血中のリンパ球濃度の少なくとも２倍である第４の濃度のリンパ球、及び
全血中の好酸球濃度の約１．５倍である第５の濃度の好酸球を含む組成物。
【請求項２】
前記第１の濃度が、全血中の血小板濃度の２〜８倍である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記第１の濃度が、全血中の血小板濃度の約４倍〜約６倍である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記第１の濃度が、１マイクロリットル当たり約５００，０００〜約１，５００，０００個の血小板、より好ましくは１マイクロリットル当たり約６００，０００〜約９００，０００個の血小板である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記第２の濃度が、全血中の白血球濃度の４〜８倍である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記第２の濃度が、１マイクロリットル当たり約１５，０００〜約５０，０００個の白血球である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記第３の濃度が、全血中の単球濃度の約８倍未満である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記３の濃度が、１マイクロリットル当たり約１，０００〜約５，０００個の単球である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記第４の濃度が、全血中のリンパ球濃度の約８倍未満である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記４の濃度が、１マイクロリットル当たり約５，０００〜約２０，０００個のリンパ球である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記第５の濃度が、１マイクロリットル当たり約２００〜約１，０００個の好酸球である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
全血中の赤血球濃度未満である第６の濃度の赤血球を更に含み、前記第６の濃度が、全血中の赤血球濃度の約０．１〜約０．９倍である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
全血中のヘモグロビン濃度の約０．２５倍である第７の濃度のヘモグロビンを更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記第７の濃度が、１デシリットル当たり約５グラム未満、より好ましくは１デシリットル当たり約３．５グラム未満である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記白血球が、第８の濃度の好中球を更に含み、前記第８の濃度が、全血中の好中球の濃度未満である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記好中球が除去されている、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記第８の濃度が、全血中の好中球濃度の約４倍〜約８倍である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記第８の濃度が、１マイクロリットル当たり約１０，０００〜約４０，０００個の好中球である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、遠心分離、重力ろ過、又は直接細胞選別により、全血から調製される、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
心臓の状態を治療するための方法であって、
急性虚血、心筋梗塞、不整脈、アポトーシス、又は心機能低下からなる群から選択される患者の心臓の状態を特定すること；及び
請求項１〜１９のいずれかに記載の組成物を前記患者に送達して、前記心臓の状態を治療することを含む方法。
【請求項２１】
前記患者の全血に由来する前記組成物を調製することを更に含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記組成物を送達する前に、前記組成物に対する適合性に関して多血小板血漿を試験することを更に含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
急性虚血性組織損傷が、直近の２４時間以内に生じた、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
心筋梗塞を治療する再灌流療法が、直近の２４時間以内に行われ、前記組成物の送達が、前記再灌流療法の前又は後の約２４時間以内に行われる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
損傷結合組織を治療するための方法であって、
外側上顆炎、足底筋膜炎、膝蓋腱炎、アキレス腱炎、回旋筋腱板腱炎、足首捻挫、及び靱帯裂傷からなる群から選択される患者の損傷結合組織を特定すること、及び
請求項１〜１９のいずれかに記載の組成物を前記患者に送達して、前記損傷結合組織を治療することを含む方法。
【請求項２６】
前記患者の全血に由来する前記組成物を調製することを更に含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項２７】
患者からＰＲＰを調製するための方法であって、
前記患者から血液を採取すること、
前記血液からＰＲＰを調製すること、及び
前記患者に再灌流療法を施すことを含み、血栓溶解剤が、前記血液を採取する前に前記患者に投与されていない方法。
【請求項２８】
前記血栓溶解剤が、ヘパリン、ｔＰＡ、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標）、及びアスピリンからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記患者が、前記血液を採取する前の少なくとも２時間、好ましくは１日間、より好ましくは２週間、更により好ましくは１か月間、血栓溶解剤を受容していない、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記血液からのＰＲＰの調製が、
前記血液から血漿画分を取得するステップ、
前記血漿画分から血小板を単離するステップ、
低減された量の血漿中に前記血小板を再懸濁するステップ、及び
前記再懸濁された血小板に７．３〜７．５のｐＨをもたらすようにｐＨを調整して多血小板血漿組成物を準備するステップを含み、前記多血小板血漿の活性化因子が前記多血小板血漿組成物に添加されていない、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
疾患又は状態を治療するための薬物候補を特定するための方法であって、
請求項１〜１９のいずれかに記載の多血小板血漿組成物を、疾患又は状態を罹患している個体に、又は細胞培養、コンピュータモデル、及び動物モデルからなる群から選択されるその疾患の疾患モデルに、治療として投与すること、
前記疾患又は状態を罹患している個体、又はその疾患の前記モデルにおいて、前記治療の効能をモニターすること、
前記治療に応答する個体又は前記治療に応答する前記モデルからの結果を選択すること、
前記応答個体又は応答モデルから血液、唾液、又は組織試料を取得すること、
前記試料を、所定のマーカー（複数可）について分析すること、
前記試料の分析を、前記治療に応答しない前記疾患の個体又はモデルと比較すること、及び
前記治療に応答する被検体を特定すること、及び
前記被検体に影響を及ぼす薬物についてスクリーニングし、それにより前記疾患又は状態を治療するための薬物候補を特定することを含む方法。
【請求項３２】
前記治療に応答しない前記個体又はモデルが、前記疾患又は状態を有していない、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記治療に応答しない前記個体又はモデルが、前記疾患又は状態を有しているが、前記治療に応答しない、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記疾患又は状態が、虚血、癌、免疫系疾患、結合組織傷害、皮膚疾患、及び神経系疾患からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記疾患又は状態が虚血であり、前記虚血が心虚血である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記疾患又は状態が癌であり、前記癌が脳癌である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記疾患又は状態が、肘、肩、又は膝の腱症である結合組織傷害である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記疾患又は状態が、パーキンソン病である神経系疾患である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
前記治療が、ＰＲＰ組成物を、腫瘍、心臓組織、又は結合組織に投与することを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＰＲＰ組成物が、全血の濃度の０〜０．９のレベルである好中球を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項４１】
前記分析が、遺伝子プロファイルを決定することを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項４２】
前記分析が、タンパク質、脂質、抗体、抗原、酵素、又は低分子のレベルを測定することを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項４３】
患者の疾患診断をするための方法であって
前記患者から血液試料を取得すること、
前記血液試料からＰＲＰを取得すること、
前記ＰＲＰから分析を取得すること、及び
前記患者に由来する前記ＰＲＰの前記分析を、前記疾患を有する集団のＰＲＰから得られた分析と比較すること、及び
前記患者の前記ＰＲＰの分析が、前記疾患集団の前記ＰＲＰの前記分析と一致することを決定し、それにより前記疾患を診断することを含み、
前記分析が、イムノアッセイ又は遺伝子プロファイルである方法。
【請求項４４】
請求項１〜１９のいずれか１つに記載の多血小板血漿を、単独で又はステント、縫合糸、ネジ、及び埋め込み可能なデバイスからなる群から選択される固定デバイスと組合せて含むデバイス。
【請求項４５】
前記デバイスが、チャンバーであり、前記チャンバー内の条件が、低酸素分圧、高酸素分圧、低ｐＨ、高ｐＨ、低圧力、高圧力、低ＵＶ、高ＵＶ、低温、及び高温のうちの１つ又は複数を含む、請求項４４に記載のデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２００８年１０月９日に出願された米国特許仮出願第６１／１０４，０７４号の優先権を請求するものであり、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願は、一般的に、種々の医学的状態の治療に使用することができる多血小板血漿製剤に関する。より具体的には、多血小板血漿製剤は、全血と比べて異なるレベルの血小板及び白血球を含むことができる。幾つかの変法では、本製剤は、全血中の単球濃度の少なくとも２倍の濃度の単球と、全血中のリンパ球濃度の少なくとも２倍の濃度のリンパ球と、全血中の好酸球濃度の約１．５倍の濃度の好酸球とを含むことができる。
【背景技術】
【０００３】
組織損傷及び変性は、種々の医学的状態の原因及び結果の両方であり得る。損傷の原因は、機械的傷害から、炎症等に伴う他の複雑な生理学的プロセスまで多岐にわたる場合がある。例えば、組織損傷は、傷害、酷使、血流低下、又は他の相応な原因の結果であり得る。損傷が停止又は遅延する場合でさえ、変性した未熟で無血管性の瘢痕組織が形成されるため完全には治癒しない場合がある。
【０００４】
腱、靱帯、関節襄、及び筋膜組織等の結合組織は、特に損傷しやすい場合がある。例えば、筋骨格障害の全体的な有病率は、国立健康統計センターによる１９９５年の調査によると、米国では１０００人当たりおよそ１４０人である。同じ調査によると、生産性損失に関する直接費用は８８７億ドルであると推定され、間接費用は１１１９億ドルに及ぶと推定された。筋骨格傷害は、抗炎症薬、ブレイシング、安静、及び理学療法等の標準的治療に抵抗性である場合がある。可動性の比較的無血管性の結合組織（以降は、「結合組織（単数）」又は「結合組織（複数）」）に対する傷害又は他の損傷は、治癒するのに非常に長い時間がかかる場合がある（例えば、数か月又は数年も）。多くの場合、結合組織に対する傷害は、決して適切に治癒せず、外科的介入を必要とする場合がある。
【０００５】
筋骨格障害の１つの例は、外側上顆炎である。外側上顆炎又は「テニス肘」は、肘の短橈側手根伸筋腱の酷使による傷害及び微小裂傷に伴うことが多い周知のスポーツ医学的及び整形外科的な障害である。身体は、これら微小裂傷の修復を試みるが、多くの場合、治癒プロセスは不完全である。慢性外側上顆炎の手術を受ける患者の病理学的標本では、無秩序な血管線維芽細胞異形成が明らかである。この不完全な修復の試みは、その結果として変形性で未熟な無血管性の組織をもたらす。この不完全に修復された組織は、正常な腱組織より弱い場合があり、正常な機能を欠如している場合がある。この不十分な治癒は、疼痛を引き起こし続ける場合があり、患者が日常活動を行う能力及び患者の生活の質に否定的な影響を及ぼす場合がある。
【０００６】
同様の不完全な治癒は、膝蓋腱炎（ジャンパー膝）、アキレス腱炎（ランナーに一般的）、回旋筋腱板腱炎（野球ピッチャー等の「オーバーヘッド」スポーツ選手に一般的に見られる）、足首靭帯の慢性傷害（「足首捻挫」）、又は靱帯裂傷等の、他のタイプの筋骨格傷害又は損傷に見られる場合がある。
【０００７】
現在、多数の異なる非手術的及び手術的治療法が存在する。非手術的処置には、安静、活動修正、経口抗炎症薬投与、及びコルチゾン注射剤が含まれる。安静及び活動修正は、患者のこれら状態の幾つかを改善する場合があるが、これら療法では十分に治療されない
著しい臨床集団が依然として存在する。広範な使用にも関わらず、経口抗炎症薬投与の有用性は、対照研究では証明されていない。幾つかの研究では、非ステロイド薬投与が、実際に靱帯傷害の治癒プロセスに対して有害作用を示す場合があることが更に示唆されている。また、外側上顆炎の症例の病理学的試料には、急性炎症細胞は見出されていない。コルチゾン注射剤は、腱症の治療において議論が別れており、急性靱帯傷害では禁忌とされている。幾つかの研究では、短期追跡調査ではコルチゾンで治療された患者に改善が認められたが、１年を超えるより長期的な結果では、高い症状再発率及び有効率が不確かに過ぎないことが明らかにされている。これら注射剤には、糖尿病患者において、腱断裂、感染症、皮膚色素脱失、皮下萎縮、及び血糖値上昇のリスクもある。手術的処置には、関連する病理学的腱のデブリドマン及び修復が含まれる。しかしながら、観血手術又は関節鏡下手術には、深部感染症、神経血管構造の損傷、及び瘢痕形成等の多くの潜在的な合併症がある。また、外科手術は高額であり、領域又は全身麻酔に伴う追加的なリスクがある。
【０００８】
筋骨格傷害は、物理的又は機械的プロセスに関連している場合があるが、他のタイプの組織傷害は、生理学的プロセスに関与している場合がある。例えば、心臓血管系不全に由来する心筋傷害は、その結果として細胞虚血又は細胞死さえもたらす場合がある。米国心臓協会によると、冠状動脈性心疾患は、米国において単独の主要死因である。米国における心臓発作の有病率は、２００５年ではおよそ８１０万人であり、それらのうち９２０，０００人は、新患又は再発である。心臓発作は、急性心筋梗塞（ＭＩ）としても知られており、心臓への血液供給が中断される場合、通常はプラークが心臓血管から剥離し心臓血管を閉塞することにより生じる。血流が制限された結果、隣接した心臓組織は虚血状態になり死滅し始める。治療しないでおくと、ＭＩは死に結び付くことになる。
【０００９】
急性心筋梗塞は、非ＳＴ上昇型心筋梗塞又はＳＴ上昇型心筋梗塞を含んでもよい。ＳＴ上昇型心筋梗塞では、心電図（ＥＣＧ）のＳＴ部分が上昇し、これは、心室が健常心臓で脱分極するほど迅速に脱分極しないことを意味する。心臓への血流が長期間にわたって損なわれると、虚血カスケード及び心臓アポトーシスが起こる場合があり、心臓細胞の死滅及び再生阻害を引き起こす。虚血組織の代りに、瘢痕組織が形成される。瘢痕組織は、心不整脈の可能性を増加させ、その結果として心室動脈瘤の形成をもたらす場合がある。
【００１０】
ＭＩを治療するために、再灌流療法を実施することができる。再灌流療法には、血栓溶解療法、経皮的冠状動脈介入（ＰＣｌ）、及び／又はバイパス手術が含まれる。再灌流療法は、虚血組織への血流を回復させるが、瘢痕組織の増殖に起因する不整脈のリスクを軽減させない。不整脈のリスクが高くなるため、患者は、抗不整脈剤の処置下におかれるか及び／又はペースメーカーを必要とする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
そのため、組織損傷を治療するための追加的治療法が望まれている。組織損傷を治療するためのキットも望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
組織損傷を治療するための多血小板血漿（ＰＲＰ）組成物が提供される。本組成物は、一般的に、特定の濃度の血小板、赤血球、及び白血球を含む多血小板血漿を含むことができる。幾つかの例では、本組成物は、本組成物が直接的に又は間接的に由来する全血の血小板、赤血球、及び／又は白血球の基準値濃度に対して特徴付けることができる。本明細書で開示されているＰＲＰ組成物は、結合組織及び／又は心臓組織を治療するのに有用であり得る。例えば、本明細書に記載のＰＲＰ組成物は、アポトーシスを遅延又は停止させることにより組織損傷を修復することができ、ＰＲＰ組成物の抗アポトーシス効果は、カスパーゼ−３等の血中カスパーゼの減少に基づいて測定することができると考えられる。
【００１３】
幾つかの例では、ＰＲＰ組成物は、全血中の血小板濃度の少なくとも１．１倍の濃度の血小板細胞を含む。ＰＲＰ組成物中の血小板濃度は、基準値の約１．１〜約２倍、基準値の約２〜約４倍、基準値の約４〜約６倍、又は基準値の約６〜約８倍、又はそれ以上であってもよい。ＰＲＰ組成物中の血小板濃度は、１マイクロリットル当たり約５００，０００〜約１，５００，０００個の血小板であってもよい。
【００１４】
ＰＲＰ組成物は、全血中の白血球より高い濃度の白血球（ＷＢＣ）を更に含んでいてもよい。ＷＢＣ濃度は、基準値の約１．１〜約２倍、基準値の約２〜約４倍、基準値の約４〜約６倍、又は基準値の約６〜約８倍、又はそれ以上であってもよい。幾つかの変法では、ＷＢＣ濃度は、１マイクロリットル当たり約１５，０００〜約５０，０００個のＷＢＣである。
【００１５】
幾つかの変法では、ＰＲＰ組成物は、特定の濃度の種々のタイプの白血球を含んでいてもよい。リンパ球及び単球濃度は、基準値の約１．１〜約２倍、基準値の約２〜約４倍、基準値の約４〜約６倍、又は基準値の約６〜約８倍、又はそれ以上であってもよい。ＰＲＰ組成物中の好酸球濃度は、基準値の約１．５倍であってもよい。幾つかの変法では、リンパ球濃度は、１マイクロリットル当たり約５，０００〜約２０，０００個であり、単球濃度は、１マイクロリットル当たり約１，０００〜約５，０００個である。好酸球は、１マイクロリットル当たり約２００〜約１，０００個であってもよい。
【００１６】
ある変法では、ＰＲＰ組成物は、特定の濃度の好中球を含有していてもよい。好中球の濃度は、好中球の基準値濃度未満から好中球の基準値濃度の８倍まで異なっていてもよい。幾つかの変法では、好中球濃度は、基準値の０〜約０．１倍、基準値の約０．１〜約０．５倍、基準値の約０．５〜約１．０倍、基準値の約１．０〜約２倍、基準値の約２〜約４倍、基準値の約４〜約６倍、又は基準値の約６〜約８倍、又はそれ以上であってもよい。それに加えて又はその代わりに、好中球濃度は、リンパ球及び／又は単球の濃度に対して指定されてもよい。好ましい実施形態では、好中球濃度は、全血中の濃度未満である。より好ましい実施形態では、好中球濃度は、全血中に見出される濃度の０．１〜０．９であるが、より好ましくは全血中に見出される濃度の０．１未満である。最も好ましい実施形態では、好中球は、ＰＲＰ組成物から除去されているか又は検出不能である。
【００１７】
幾つかの実施形態では、ＰＲＰ組成物は、全血中の濃度より低い濃度の赤血球（ＲＢＣ）及び／又はヘモグロビンを含んでいてもよい。ＲＢＣ濃度は、基準値の約０．０１〜約０．１倍、基準値の約０．１〜約０．２５倍、基準値の約０．２５〜約０．５倍、又は基準値の約０．５〜約０．９倍であってもよい。ヘモグロビン濃度は、５ｇ／ｄｌ以下であってもよい。
【００１８】
ＰＲＰ組成物は、典型的には、例えば遠心分離、重力ろ過、及び／又は直接細胞選別を含む様々な技術を使用して、全血又は全血の部分から生成される。ＰＲＰ組成物は、生成されると、種々の成分の濃度及び／又は活性化を確認するために１つ又は複数のプロセスにかけることができる。
【００１９】
好ましい実施形態では、上述のＰＲＰ組成物のいずれかは、ヘパリン、ｔＰＡ、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標）、又はアスピリン等の血栓溶解剤で以前に治療されていない患者から調製される。好ましくは、患者は、ＰＲＰを抽出するための血液採取前の少なくとも２時間、好ましくは１日間、より好ましくは２週間、更により好ましくは１か月間、血栓溶解剤を受容していない。特に、患者が再灌流療法の候補である場合、ＰＲＰの抽出に使用される血液は、再灌流療法を施す前に患者から採取される。
【００２０】
本発明の実施形態は、上述のＰＲＰ組成物等のＰＲＰ組成物に対する応答に基づいて、疾患又は状態を治療するための薬物候補を特定する方法に関する。好ましい実施形態では、上述のＰＲＰ組成物は、疾患又は状態を罹患している個体の治療薬として投与される。或いは、動物又は細胞培養系等のその疾患のモデルが使用される場合がある。ＰＲＰ組成物は、モデル動物に投与されるか、又は細胞培養培地に含まれる。他の実施形態では、コンピューターを使用してシミュレーションが実施される。治療の効能は、個体又は動物モデルにおいて、又は細胞培養若しくはコンピューターシミュレーションにおいてモニターされる。治療に応答する個体が選択され、応答する個体から試料が取得される。ヒト患者又は動物モデルの場合、この試料は、血液又は唾液の体液試料又は組織試料であってもよい。細胞培養では、応答する細胞が選択される。コンピュータモデルでは、陽性シミュレーションが特定される。
【００２１】
分析は、患者、動物、又は細胞培養から得られる生体試料について実施される。典型的には、そのような分析は、特異的抗体又は抗原の存在を決定するためのイムノアッセイ、又は遺伝子分析によることになる。遺伝子分析では、上方制御又は下方制御される遺伝子を特定することができる。コンピューターシミュレーションの場合、陽性応答を示すパラメーターが特定される。
【００２２】
上記のようにして得られる結果を、非疾患集団又は疾患を有するが治療に応答しない亜集団から得られる結果と比較して、応答集団に存在する標的を決定する。特定された標的に基づいて、タンパク質又は低分子等の、疾患状態を治療のための薬物候補を特定し、更に試験する。
【００２３】
好ましい実施形態では、疾患又は状態は、虚血、癌、免疫系疾患、結合組織傷害、皮膚疾患、又は神経系疾患である。虚血は、脳虚血であってもよく又は心虚血であってもよい。癌は、脳癌、甲状腺癌、膵臓癌、肝臓癌、乳癌、又は前立腺癌であってもよい。結合組織傷害は、テニス肘、回旋筋腱板傷害、膝傷害、脊髄傷害、又は足底筋膜炎等の腱症であってもよい。神経系疾患は、パーキンソン病であってもよい。
【００２４】
好ましい実施形態では、ＰＲＰ組成物は、好中球が、好ましくは全血濃度の０〜０．９のレベルに枯渇されている。
【００２５】
好ましい実施形態では、分析には、遺伝子プロファイルの生成が伴う。例えば、ＤＮＡアレイを使用して、欠陥遺伝子を決定することができ、又は遺伝子発現のパターンを決定することができる。幾つかの好ましい実施形態では、分析には、タンパク質、脂質、抗体、抗原、酵素、又は低分子のレベルを測定することが伴う。
【００２６】
本発明の実施形態は、以下のステップの１つ又は複数により患者の疾患を診断する方法に関する：
該患者から血液試料を取得するステップ、
該血液試料からＰＲＰを取得するステップ、
該ＰＲＰから分析を取得するステップ、及び
該患者に由来するＰＲＰの分析を、その疾患を有する集団のＰＲＰから得られた分析と比較するステップ、及び
該患者のＰＲＰの分析が、該疾患集団のＰＲＰの分析と一致することを決定し、それにより該疾患を診断するステップ。好ましい実施形態では、分析は、イムノアッセイ又は遺伝子プロファイルである。
【００２７】
本発明の実施形態は、上述の多血小板血漿組成物を、単独で又はステント、縫合糸、ネジ、若しくは埋め込み可能なデバイス等の固定デバイスと組合せて有するデバイスに関す
る。好ましくは、デバイスは、チャンバーである。より好ましくは、チャンバー内の条件には、以下のうちの１つ又は複数が含まれる：低酸素分圧、高酸素分圧、低ｐＨ、高ｐＨ、低圧力、高圧力、低ＵＶ、高ＵＶ、低温、及び高温。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】マウスモデルで使用される例示的なＰＲＰ組成物の表である。
【図２】本組成物で治療された対象体の心駆出率を対照群と比較するグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
概観
種々の医学的状態を治療するために使用することができる生物学的組成物が提供される。本生物学的組成物は、一般的に、全血中の濃度より高い濃度の白血球及び血小板を含む多血小板血漿を含む。結合組織では、このＰＲＰ組成物を使用して、傷害、創傷、外傷、病変、及び／又は組織変性により損傷を受けた組織を治療することができる。心臓組織では、このＰＲＰ組成物を、急性ＭＩ後の虚血組織を治療するために使用して、心筋組織を保存し、再増殖を促進することができる。加えて、ＰＲＰ組成物は、アポトーシスを遅延又は停止させ、梗塞サイズを低減させ、心不整脈を減少させ、及び／又は細胞機能を回復させることができる。
【００３０】
ＰＲＰ組成物は、アポトーシスを遅延又は停止させることにより、再増殖を促進することができると仮定されている。例えば、心臓組織では、心臓アポトーシスは、うっ血性心不全の発症に寄与する、後生動物細胞におけるプロセスである。心臓アポトーシスは、プログラム細胞死により、心筋層中の収縮性心筋細胞の数を低減させる場合がある。低いが異常な速度での心筋細胞アポトーシスは、少なくとも部分的には、成人ヒト心筋細胞が典型的には増殖能力を失っているため、成人ヒト心筋層の著しい喪失であり得る。非心筋細胞のアポトーシスは、収縮性集団を減少させる場合があり、これも心不全に結び付く場合がある。非心筋細胞のアポトーシスは、不適応リモデリング（maladaptive remodeling）及び代その後の代償不全性うっ血性心不全（decompensated congestive heart failure）への移行に寄与する場合もある。
【００３１】
心臓アポトーシスは、血中のシステインプロテアーゼのレベルにより測定することができる。具体的には、カスパーゼ−３は、心臓アポトーシスのマーカーとして使用することができるシステイン−アスパラギン酸プロテアーゼである。一般的に、カスパーゼ−３は、細胞内のタンパク質基質を切断して、その結果としてアポトーシスプロセスをもたらすエフェクターカスパーゼである。カスパーゼカスケードは、カスパーゼ−３が細胞間で自律的に活性化されると生じる場合がある。心臓組織では、カスパーゼ−３は、心筋梗塞の早ければ１日後には著しく上昇し、最長４週間継続することが示されている。
【００３２】
例えば、アポトーシス、傷害、創傷、外傷、病変、又は変性により損傷を受けた組織を治療するために、ＰＲＰ組成物を結合組織及び／又は心筋層に送達するための種々の方法が開示される。種々の実施形態では、本組成物は、損傷結合組織に、損傷組織に直接隣接している結合組織の領域に、及び／又は健常組織に送達することができる。幾つかの実施形態では、ＰＲＰ組成物は、虚血組織に、虚血組織に直接隣接している組織の領域に、及び／又は健常組織に送達することができる。ＰＲＰ組成物は、血小板ゲル、又は流動可能な物質若しくは液体、本明細書に記載の他の物質、又は損傷若しくは虚血組織の所望レベルの治療を提供するのに好適な任意の物質を含むことができる。
【００３３】
ＰＲＰ組成物は、緊急事態の患者に又は選択的処置の一部として配達することができる。損傷結合組織を治療するために、ＰＲＰ組成物は、入院患者又は外来患者の処置の一部として、組織損傷が生じた数日後、数週間後、数か月後、又は数年後に送達することがで
きる。ＰＲＰを使用して処理することができる結合組織損傷の例には、これらに限定されないが、外側上顆炎（つまり、テニス肘）、足底筋膜炎、膝蓋腱炎（つまり、ジャンパー膝）、アキレス腱炎、回旋筋腱板腱炎、足首捻挫、及び靱帯裂傷が含まれる。組織損傷は、これらに限定されないが、Ｘ線画像法、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、及び超音波画像法等の、１つ又は複数の医用画像技術を使用して特定することができる。心筋層に対する損傷を治療するために、ＰＲＰ組成物は、ＭＩが特定されると、緊急処置室で及び／又は救急医療供給者により送達することができる。他の場合では、ＰＲＰ組成物は、ＭＩ後の再灌流療法中に送達してもよい。
【００３４】
ＭＩは、心筋トロポニン（例えば、トロポニン−Ｉ又はＴ）、ＣＫ−ＭＢを含むクレアチンキナーゼ（ＣＫ）、アスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）／グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ／ＳＧＯＴ）／アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＡＴ）、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、及び／又はミオグロビン（Ｍｂ）等の酵素が血流中に存在するかどうかを決定することにより特定することができる。本明細書に記載のＰＲＰ組成物は、それら酵素が存在しない場合に送達してもよい。心筋梗塞は、ＥＣＧ（例えば、安静中、薬学的ストレス検査中、及び／又は生理学的ストレス検査中）におけるＳＴ上昇の特定、冠血管造影法（例えば、心筋層に供給する血管の急性閉塞のリスクを察知する）、核医学的走査（例えば、テクネチウム−９９ｍ又はタリウム−２０１）等により決定することができる。
【００３５】
損傷結合組織又は心筋層を治療するために使用されるＰＲＰ組成物は、例えば遠心分離、重力ろ過、及び／又は直接細胞選別を含む様々な技術を使用して、全血又は全血の部分から生成することができる。ＰＲＰ組成物は、生成されると、種々の成分の濃度及び／又は活性化を確認するために１つ又は複数のプロセスにかけることができる。
【００３６】
本明細書に記載の組成物、デバイス、方法、及びキットは、種々の実施形態、変法、及び適応を例証する。その開示は、記述されている実施形態にのみ限定されることを意図してない。
【００３７】
組成物
ＰＲＰ組成物は、一般的に、全血と比べて高い濃度の血小板及びＷＢＣを含む。典型的には、ＲＢＣ及びヘモグロビンの濃度は抑制されている。幾つかの変法では、血小板及びＷＢＣの濃度は、ＰＲＰ組成物が、損傷組織及び／又は虚血組織を効果的に治療する可能性を増加させるように指定される。
【００３８】
ＰＲＰ組成物は、一般的に、全血中の血小板の基準値濃度より高い血小板濃度の血小板を含む。基準値濃度とは、患者の血液中に見出される濃度を意味し、それは、細胞選別、遠心分離、又はろ過等の実験技術により試料の操作をしていない、その患者の血液試料に見出される濃度と同じであろう。血小板濃度は、基準値の約１．１〜約２倍、基準値の約２〜約３倍、基準値の約３〜約４倍、基準値の約４〜約５倍、基準値の約５〜約６倍、基準値の約６〜約７倍、基準値の約７〜約８倍、基準値の約８〜約９倍、基準値の約９〜約１０倍、基準値の約１１〜約１２倍、基準値の約１２〜約１３倍、又は基準値の約１３〜約１４倍、又はそれ以上であってもよい。幾つかの実施形態では、血小板濃度は、基準値の約４〜約６倍であってもよい。典型的には、１マイクロリットルの全血は、少なくとも１４０，０００〜１５０，０００個の血小板、最大で４００，０００〜５００，０００個の血小板を含む。ＰＲＰ組成物は、１マイクロリットル当たり約５００，０００〜約７，０００，０００個の血小板を含んでいてもよい。幾つかの場合では、ＰＲＰ組成物は、１マイクロリットル当たり約５００，０００〜約７００，０００個、約７００，０００〜約９００，０００個、約９００，０００〜約１，０００，０００個、約１，０００，０００〜約１，２５０，０００個、約１，２５０，０００〜約１，５００，０００個、約１，５
００，０００〜約２，５００，０００個、約２，５００，０００〜約５，０００，０００個、又は約５，０００，０００〜約７，０００，０００個の血小板を含んでいてもよい。
【００３９】
ＷＢＣ濃度は、ＰＲＰ組成物中では、典型的には上昇されている。例えば、ＷＢＣ濃度は、基準値の約１．１〜約２倍、基準値の約２〜約４倍、基準値の約４〜約６倍、基準値の約６〜約８倍、又は基準値の約８〜約１０倍、又はそれ以上であってもよい。１マイクロリットルの全血中のＷＢＣ数は、典型的には、少なくとも４，１００〜４，５００個であり、最大１０，９００〜１１，０００個である。１マイクロリットルのＰＲＰ組成物中のＷＢＣ数は、約８，０００〜約１０，０００個、約１０，０００〜約１５，０００個、約１５，０００〜約２０，０００個、約２０，０００〜約３０，０００個、約３０，０００〜約５０，０００個、約５０，０００及び約７５，０００個、及び約７５，０００〜約１００，０００個であってもよい。
【００４０】
ＰＲＰ組成物中のＷＢＣの中では、濃度は、細胞タイプによって異なっていてもよいが、一般的に各々は上昇されている。幾つかの変法では、ＰＲＰ組成物は、特定の濃度の種々のタイプの白血球を含んでいてもよい。ＰＲＰ組成物中の細胞タイプ毎の相対的濃度は、全血中の細胞タイプの相対的濃度と同じであってもよく、又は異なっていてもよい。例えば、リンパ球及び／又は単球の濃度は、基準値の約１．１〜約２倍、基準値の約２〜約４倍、基準値の約４〜約６倍、又は基準値の約６〜約８倍、又はそれ以上であってもよい。幾つかの変法では、リンパ球及び／又は単球の濃度は、基準値濃度未満であってもよい。ＰＲＰ組成物中の好酸球濃度は、基準値未満、基準値の約１．５倍、基準値の約２倍、基準値の約３倍、又は基準値の約５倍、又はそれ以上であってもよい。
【００４１】
全血中では、リンパ球数は、典型的には１マイクロリットル当たり１，３００〜４，０００細胞であるが、他の例では、リンパ球濃度は、１マイクロリットル当たり約５，０００〜約２０，０００個であってもよい。幾つかの場合では、リンパ球濃度は、１マイクロリットル当たり５，０００個未満であってもよく、又は１マイクロリットル当たり２０，０００個を超えていてもよい。１マイクロリットルの全血中の単球数は、典型的には２００〜８００個である。ＰＲＰ組成物中では、単球濃度は、１マイクロリットル当たり約１，０００個未満、１マイクロリットル当たり約１，０００〜約５，０００個、又は１マイクロリットル当たり約５，０００個を超えていてもよい。好酸球濃度は、全血中の約４０〜４００個から上昇されている、１マイクロリットル当たり約２００〜約１，０００個であってもよい。幾つかの変法では、好酸球濃度は、１マイクロリットル当たり約２００個未満であってもよく、又は１マイクロリットル当たり約１，０００個を超えていてもよい。
【００４２】
ある変法では、ＰＲＰ組成物は、特定の濃度の好中球を含有していてもよい。好中球濃度は、好中球の基準値濃度未満から好中球の基準値濃度の８倍まで異なっていてもよい。幾つかの変法では、好中球濃度は、基準値の約０．０１〜約０．１倍、基準値の約０．１〜約０．５倍、基準値の約０．５〜約１．０倍、基準値の約１．０〜約２倍、基準値の約２〜約４倍、基準値の約４〜約６倍、又は基準値の約６〜約８倍、又はそれ以上であってもよい。それに加えて又はその代わりに、好中球濃度は、リンパ球及び／又は単球の濃度に対して指定されてもよい。１マイクロリットルの全血は、典型的には２，０００〜７，５００個の好中球を含む。幾つかの変法では、ＰＲＰ組成物は、１マイクロリットル当たり約１，０００個未満、１マイクロリットル当たり約１，０００〜約５，０００個、１マイクロリットル当たり約５，０００〜２０，０００個、１マイクロリットル当たり約２０，０００〜約４０，０００個、又は１マイクロリットル当たり約４０，０００〜約６０，０００個の濃度の好中球を含んでいてもよい。好ましい実施形態では、好中球は除去されているか又は実質的に除去されており、ＰＲＰ等の血液産物の好中球を枯渇させる手段は、米国特許第７４６２２６８号明細書で考察されているように公知であり、それは参照に
より本明細書に組み込まれる。
【００４３】
典型的には、男性患者から採取される全血は、１マイクロリットル当たり少なくとも４，３００，０００〜４，５００，０００個、最大で５，９００，０００〜６，２００，０００個のＲＢＣ数を有する場合があり、その一方で女性患者に由来する全血は、１マイクロリットル当たり少なくとも３，５００，０００〜３，８００，０００個、最大で５，５００，０００〜５，８００，０００個のＲＢＣ数を有する場合がある。これらＲＢＣ数は、一般的に、男性の場合は少なくとも１３２ｇ／Ｌ〜１３５ｇ／Ｌ、最大で１６２ｇ／Ｌ〜１７５ｇ／Ｌの、女性の場合は少なくとも１１５ｇ／Ｌ〜１２０ｇ／Ｌ、最大で１５２ｇ／Ｌ〜１６０ｇ／Ｌのヘモグロビンレベルに相当する。
【００４４】
幾つかの実施形態では、ＰＲＰ組成物は、全血中の濃度より低い濃度の赤血球（ＲＢＣ）及び／又はヘモグロビンを含んでいてもよい。ＲＢＣ濃度は、基準値の約０．０１〜約０．１倍、基準値の約０．１〜約０．２５倍、基準値の約０．２５〜約０．５倍、又は基準値の約０．５〜約０．９倍であってもよい。ヘモグロビン濃度は抑制されていてもよく、幾つかの変法では、約１ｇ／ｄｌ以下、約１ｇ／ｄｌ〜約５ｇ／ｄｌ、約５ｇ／ｄｌ〜約１０ｇ／ｄｌ、約１０ｇ／ｄｌ〜約１５ｇ／ｄｌ、又は約１５ｇ／ｄｌ〜約２０ｇ／ｄｌであってもよい。
【００４５】
製作方法
ＰＲＰ組成物は、ヒト又は動物の全血供給源に由来するＰＲＰを含んでいてもよい。ＰＲＰは、自己供給源、同種異系供給源、単一供給源、又は貯溜供給源の血小板及び／又は血漿から調製することができる。ＰＲＰを得るためには、全血を、例えば血液採取用注射器を使用して採取してもよい。採取される血液の量は、例えば、所望のＰＲＰ量、患者の健康、結合組織損傷及び／又はＭＩの重症度又は位置、準備したＰＲＰの有効性、又は任意の適切な要因の組合せを含む、多数の要因に依存する場合がある。任意の好適な量の血液を採取することができる。例えば、約２０ｃｃ〜約１５０ｃｃの血液を採取することができる。より具体的には、約２７ｃｃ〜約１１０ｃｃ又は約２７ｃｃ〜約５５ｃｃの血液を採取することができる。幾つかの実施形態では、血液は、結合組織損傷及び／又はＭＩに現在罹患しているか、又は以前に罹患したことがある患者から採取してもよい。患者自身の血液から製作されたＰＲＰは、有害反応又は感染症のリスクを著しく低減することができる。
【００４６】
例示的な実施形態では、約５５ｃｃの血液を、クエン酸デキストロース溶液等の抗凝血剤を約５ｃｃ含有する６０ｃｃ注射器（又は別の好適な注射器）に採取する。注射器には、アフェレーシス針を取り付けてもよく、抗凝血剤でプライミングしてもよい。血液（約２７ｃｃ〜約５５ｃｃ）は、標準的無菌操作を使用して患者から採取することができる。幾つかの実施形態では、アンベソル（anbesol）、ベンゾカイン、リドカイン、プロカイン、ブピビカイン（bupivicaine）、又は当技術分野で公知の任意の適切な麻酔薬等の局所麻酔薬を使用して、挿入区域に麻酔をかけてもよい。
【００４７】
ＰＲＰは、任意の好適な方法で調製することができる。例えば、ＰＲＰは、遠心機を使用して全血から調製することができる。全血は、採取後に冷却してもよく、又は冷却しなくともよい。全血からの血小板の単離は、血小板と赤血球と間の密度の違いに依存する。血小板及び白血球は、血小板枯渇血漿（最上部層）と赤血球（底部層）との間の層（つまり、「軟膜」）に濃縮される。例えば、底部ブイ（buoy）及び最上部ブイを使用して、上部相と下部相との間に多血小板層を捕捉することができる。その後、この多血小板層を、注射器又はピペットを使用して吸引することができる。一般的に、血液試料内にある利用可能な血小板の少なくとも６０％又は少なくとも８０％を捕捉することができる。これら血小板は、試料容積の約３％〜約２０％、又は約５％〜約１０％であってもよい容積中に
再懸濁してもよい。
【００４８】
幾つかの例では、その後、血液を、Ｃｅｌｌ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＧＰＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）遠心機等の重力血小板システムを使用して遠心分離することができる。約２０ｃｃ〜約１５０ｃｃの血液（例えば、約５５ｃｃの血液）及び約５ｃｃのクエン酸デキストロースを含有する、血液で満たされている注射器を、使い捨て分離管にゆっくりと移すことができ、それをＧＰＳ遠心機のポートに負荷することができる。試料に蓋をして、遠心機に配置してもよい。遠心機は、約６０ｃｃの滅菌生理食塩水を遠心機の対向側に配置して均衡させることができる。或いは、２つの試料を調製する場合、２つのＧＰＳ使い捨て管を、等量の血液及びクエン酸デキストロースで満たしてもよい。その後試料を遠心して、血液及び血漿から血小板を分離することができる。試料は、約２０００ｒｐｍ〜約５０００ｒｐｍで約５分〜約３０分間遠心してもよい。例えば、遠心分離は、分離管の側面から抽出するために３２００ｒｐｍで実施してもよく、その後単離された血小板を、撹拌により約３ｃｃ〜約５ｃｃの血漿に懸濁してもよい。その後、ＰＲＰは、例えば１０ｃｃの注射器を使用して、側面ポートから抽出することができる。約５５ｃｃの血液を患者から採取することができれば、約５ｃｃのＰＲＰを取得することができる。
【００４９】
ＰＲＰ組成物は活性化血小板を含むため、血小板内の活性作用剤が放出される。これら作用剤には、これらに限定されないが、サイトカイン（例えば、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−６、ＴＮＦ−Ａ）、ケモカイン（例えば、ＥＮＡ−７８（ＣＸＣＬ５）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＭＣＰ−３（ＣＣＬ７）、ＭＩＰ−１Ａ（ＣＣＬ３）、ＮＡＰ−２（ＣＸＣＬ７）、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５））、炎症性メディエーター（例えば、ＰＧＥ２）、及び増殖因子（例えば、アンジオポイチン−１（Angiopoitin-1）、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＰＤＡＦ、ＰＤＥＧＦ、ＰＤＧＦ  ＡＡ及びＢＢ、ＴＧＦ−ベータ１、２、及び３、並びにＶＥＧＦ）が含まれる。
【００５０】
ＰＲＰ組成物は、液体、固体、半固体（例えば、ゲル）、吸入可能な粉末、又はそれらの幾つかの組合せとして送達することができる。ＰＲＰは、液体として送達される場合、液剤、乳剤、懸濁剤等で構成されていてもよい。ＰＲＰ半固体又はゲルは、ＰＲＰに凝固剤（例えば、トロンビン）を添加することにより調製することができる。ゲルは、溶液より粘性が高い場合があり、従ってゲルが標的組織に送達されると、その位置をより良好に保持することができる。
【００５１】
幾つかの場合、ＰＲＰ組成物を液体として送達し、それをｉｎ  ｓｉｔｕでゲル化又は硬化させることが望ましい場合がある。例えば、ＰＲＰ組成物には、例えば、コラーゲン、シアノアクリレート、組織に注射した際に硬化する接着剤、組織に注射した後で凝固又はゲル化する液体、縫合材料、寒天、ゼラチン、光活性化歯科コンポジット、他の歯科コンポジット、シルクエラスチンポリマー、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）ゼラチンタンパク質混合物（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）、ヒドロゲル、及び／又は他の好適な生体ポリマーが含まれていてもよい。或いは、上記の言及されている作用剤は、ＰＲＰ混合物の一部を形成する必要はない。例えば、上記で言及されている作用剤は、ＰＲＰが標的組織に送達される前に又は後で標的組織に送達され、ＰＲＰのゲル化を引き起こすことができる。幾つかの実施形態では、ＰＲＰ組成物は、温度、ｐＨ、タンパク質等の１つ又は複数の環境因子又は化学因子に反応して硬化又はゲル化させることができる。
【００５２】
ＰＲＰは、アルカリ性緩衝剤を使用して生理学的ｐＨに緩衝化されていてもよい。緩衝剤は、ＰＲＰを約６．５〜約８．０の生理学的ｐＨに調整することが可能であり得るＨＥＰＥＳ、トリス、一塩基性リン酸塩、一塩基性重炭酸塩、又はそれらの任意の好適な組合せ等の生体適合性緩衝剤であってもよい。ある実施形態では、生理学的ｐＨは、約７．３
〜約７．５であってもよく、約７．４であってもよい。例えば、緩衝剤は、８．４％重炭酸ナトリウムであってもよい。これら実施形態では、全血から単離されたＰＲＰの１ｃｃ毎に、０．０５ｃｃの８．４％重炭酸ナトリウムを添加してもよい。幾つかの実施形態では、注射器は、ＰＲＰ及び重炭酸塩を混合するためにゆっくりと振とうしてもよい。
【００５３】
上記に述べられているように、ＰＲＰ組成物は、１つ又は複数の追加的作用剤、希釈剤、溶媒、又は他の成分を含んでいてもよい。追加的作用剤の例には、これらに限定されないが、トロンビン、エピネフリン、コラーゲン、カルシウム塩、ｐＨ調整剤、脱顆粒を促進するか又は血小板を保存する物質、追加的な増殖因子又は増殖因子阻害剤、ＮＳＡＩＤＳ、ステロイド、抗感染剤、及び先述の混合物及び組合せが含まれる。
【００５４】
更に、ＰＲＰ組成物は、Ｘ線、磁気共鳴画像（ＭＲｌ）、又は超音波等の画像化技術により検出するための造影剤を含んでいてもよい。そのような造影剤の例には、これらに限定されないが、Ｘ線造影剤（例えば、ＩｓｏＶｕｅ）、ＭＲＩ造影剤（例えば、ガドリニウム）、及び超音波造影剤が含まれる。
【００５５】
試験方法
幾つかの変法では、ＰＲＰ組成物は、患者への送達前に分析及び／又は改変することができる。ＰＲＰ組成物は、例えば、治療される状態、初期全血球数、患者の遺伝子プロファイル、及び他の好適な因子に基づいて改変することができる。
【００５６】
幾つかの実施形態では、患者の遺伝子プロファイルが決定される。同一又は同様の遺伝子プロファイルを有する健常個体のＰＲＰ組成物が決定される。同じ遺伝子プロファイルを有する健常個体のＰＲＰと成分が一致するＰＲＰ組成物が調製される。改変されたＰＲＰ組成物は、疾患又は状態を治療するために患者に投与される。
【００５７】
幾つかの実施形態では、疾患又は状態からの回復に成功した患者のＰＲＰ組成物をモデルとして使用して、同じ疾患又は状態を有すると診断された患者に投与するためのＰＲＰ組成物を調製することができる。言い換えれば、ＰＲＰ組成物は、回復した又は回復中の個体に基づいて、疾患の治療に有効な成分が最初に濃縮されている。その後、改変されたＰＲＰ組成物を、その疾患を罹患している患者に投与する。
【００５８】
ＰＲＰ、又はＰＲＰの一部を、全血球計数（ＣＢＣ）を実施する自動血液分析器に配置してもよい。ＣＢＣの一部として、自動血液分析器は、典型的には、試料中に存在する血小板、ＷＢＣ、及びＲＢＣの数の計数を返す。ＷＢＣ計数は、リンパ球、単球、好塩基球、好中球、及び／又は好酸球の計数を更に含むことができる。使用することができる血液分析器の例には、これらに限定されないが、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社製ＬＨシリーズ、Ｓｙｓｍｅｘ社製ＸＥ−２１００、Ｓｉｅｍｅｎｓ社製ＡＤＶｌＡ１２０＆２１２０、及びＡｂｂｏｔｔ社製Ｃｅｌｌ−Ｄｙｎシリーズが含まれる。
【００５９】
ＰＲＰを使用する治療の有効性は、患者の遺伝子プロファイルに少なくとも部分的に依存する場合があると考えられている。患者の全血を、ＰＲＰ組成物を生成する前及び／又は後で試験して、ＰＲＰ組成物が組織再生能力に効果を及ぼす可能性が高いかどうかを決定してもよい。ＰＲＰは、有用であることが判明してから、患者に送達してもよい。
【００６０】
ある変法では、患者のＤＮＡ、ｍＲＮＡ、又はタンパク質等の１つ又は複数の遺伝子マーカーを、ＰＲＰ組成物を送達する前に、送達中に、及び／又は送達後に評価することができる。患者のＤＮＡ又は他のバイオマーカーは、典型的には、血液、唾液、又は他の好適な体液若しくは体組織等の試料から捕捉される。試料は、ＰＲＰ組成物を使用した治療の有効性に相関可能な遺伝子マーカーについて試験することができる。幾つかの場合、特
定された遺伝子マーカーは、遺伝子チップ又は他の遺伝子発現技術等の遺伝子ツールを使用して検出可能であってもよい。幾つかの場合、試験することができる遺伝子には、これらに限定されないが、Ｉ型コラーゲン（ＣＯＬ１Ａ１）、ＩＩＩ型コラーゲン（ＣＯＬ３Ａ１）、軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質（ＣＯＭＰ）、マトリックスメタロプロテアーゼ−３（ＭＭＰ−３）、及びマトリックスメタロプロテアーゼ−１３（ＭＭＰ−１３）が含まれる。そのような遺伝子ツールは、発現レベルの変化を測定するために、又は疾患状態に関連している可能性がある一塩基多型（ＳＮＰ）を検出するために使用することができる。Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製Ｇｅｎｅ  Ｃｈｉｐ（登録商標）、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ社製ＣｏｄｅＬｉｎｋ（登録商標）、及びＥｐｐｅｎｄｏｒｆ社製ＤｕａｌＣｈｉｐ＆Ｓｉｌｖｅｒｑｕａｎｔ（登録商標）を含む、多数の遺伝子チップが市販されている。
【００６１】
幾つかの変法では、遺伝子ツールを分析して、患者がＰＲＰ組成物及び／又はその後の治療に（有利に又は不利に）応答する可能性が高いかどうかを決定することができる。ある変法では、ＰＲＰ組成物は、ある範囲のｐＨ値で試験してもよく、及び／又はＰＲＰのｐＨは、遺伝子プロファイルに少なくとも部分的に基づいて変更してもよい。幾つかの場合、種々の遺伝子プロファイルは、ＰＲＰ組成物の種々の成分について、他の濃度より幾らか有効である特定の濃度（又は濃度の範囲）に関連している場合がある。ＰＲＰ組成物に対する応答は、心臓アポトーシスの遅延又は停止、抗不整脈効果、又はそうでなければ再灌流療法に伴うリスク減少であってもよい。
【００６２】
自動血液分析器により得られたＣＢＣが指定範囲内でない場合、ろ過デバイス及び／又は細胞選別器を使用して、ＰＲＰ組成物を改変することができる。ろ過デバイスは、真空及び／又は重力を使用して、血小板、ＷＢＣ、及び／又はＲＢＣの一部を除去することができる。幾つかの変法では、細胞選別器は、自動血液分析器及び／又は遺伝子チップ読取器からのＣＢＣ入力を受け取ることができる。使用者は、１つ又は複数の改変を選択又は確認して、ＰＲＰ組成物に加工することができる。無論、細胞選別器は、全血、全血の部分、及び／又はＰＲＰを用いて使用することができる。細胞選別器は、電荷、密度、サイズ、変形性、又は蛍光等に基づいて、ＰＲＰ組成物を選別することができる。細胞選別器の例には、ＢＤ社製ＦＡＣＳＡｒｉａ（登録商標）細胞選別器、Ｃｙｔｏｐｅｉａ社製ｉｎＦｌｕｘ（登録商標）細胞選別器、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社により製造されたもの、及びＣｙｔｏｎｏｍｅ社製Ｇｉｇａｓｏｒｔ（登録商標）細胞選別器等が含まれる。
【００６３】
創薬における多血小板血漿組成物の使用
本発明の実施形態は、創薬における、本明細書に記載の多血小板血漿組成物の使用に関する。ＰＲＰ組成物は、疾患モデル等のモデル系、好ましくは哺乳動物モデルに、又はヒト研究の過程に、又は植物等の哺乳動物以外の系に投与される。遺伝子発現に対する投与ＰＲＰ組成物の効果がモニターされる。例えば、１つの実施形態では、細胞培養系におけるＰＲＰ組成物の効果が、細胞の分子分析により研究される。ＤＮＡ、ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、及び／又はエピジェネティックマーカーを評価して、特定の障害に対する薬物の効能が決定される。幾つかの好ましい実施形態では、律速段階又はクリティカルパスで作用する既存の又は新規のタンパク質を発見するために、多血小板血漿が虚血組織又は細胞のアポトーシスを防止する機序が研究される。その後このタンパク質は精製され、疾患の治療において低分子薬として使用される。薬物の用量も評価される。
【００６４】
好ましい実施形態では、ＰＲＰ組成物を疾患モデル（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、動物、ヒト、コンピューター）で使用して、遺伝子発現が評価される。好ましくは、疾患モデルは、細胞若しくは組織培養、又は動物モデル、又はヒト研究である。ＰＲＰ組成物は、未治療又は他の公知の治療と比較した、疾患モデルにおける試験治療として使用される。ＤＮＡマ
イクロアレイ、ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、エピジェネティクス、又は他の分子分析技術を使用して、モデルにおけるＰＲＰ治療による遺伝子発現の変化を決定する。細胞遺伝子発現のパターンが評価及び分析される。特定された分子が精製される。特定の疾患を治療するための薬物が生成され、効能が試験される。具体的には、特定の疾患又は状態を治療するために使用することができる酵素、タンパク質、又は分子が特定される。
【００６５】
幾つかの実施形態では、薬物スクリーニングは、疾患又は状態を有する患者又は患者の亜集団に対して特異的である。幾つかの実施形態では、多血小板血漿組成物が、疾患又は状態を罹患している患者に投与され、ＰＲＰ組成物の有効性が患者でモニターされる。治療が有効である場合、試料、典型的には血液若しくは唾液等の体液又は組織試料が、患者から採取される。試料は、回復と関連するマーカーについて分析される。試料は、ＤＮＡアレイ（遺伝子チップ）又は特異的マーカーを使用して、患者の遺伝子プロファイルを決定するために使用される。このプロファイルを、治療に応答しない患者と比較する。これらは、ＰＲＰ組成物による治療に応答しなかった疾患個体又は健常個体であってもよい。遺伝子プロファイルにおける違いに基づいて、特定の遺伝子が、ＰＲＰ組成物に応答する患者集団の薬物標的であると特定される。他のマーカーは、抗原、抗体、又は低分子であってもよい。ＰＲＰの効果を模倣する薬物を選択してもよい。そのような薬物は、疾患治療の候補である。
【００６６】
任意の及び／又は全てのタイプのヒト、植物、及び動物の障害は、上記で概説されている方法を用いて、潜在的な創薬に関して評価することができるか又はできる可能性がある。また、時間の経過と共に、細胞、組織、又は生物の遺伝子発現を評価する新しい方法が開発されるだろう。これら新しい技術は、創薬用に多血小板血漿を使用する方法に関する評価及び分析に組み込むことができる。
【００６７】
使用方法
ＰＲＰ組成物は、任意の好適な用量で送達することができる。幾つかの実施形態では、用量は、約１ｃｃ〜約３ｃｃ、約３ｃｃ〜約５ｃｃ、約５ｃｃ〜約１０ｃｃ、又は約１０ｃｃ〜約２０ｃｃ、又はそれ以上であってもよい。用量は、医学的処置に従って（例えば、処置の特定の時点で）及び／又はスケジュールに従って送達することができる。例えば、ＰＲＰ組成物は、待機的除細動の前に、その処置を開始する約２４時間、約１２時間、約６時間、約２時間、及び／又は約１時間前に送達してもよい。
【００６８】
幾つかの例では、ＰＲＰ組成物は、罹患関節の又はその周辺の損傷結合組織に送達してもよい。ＰＲＰ組成物は、注射器又はカテーテルを使用して注射により、その必要性のある個体に送達してもよい。ＰＲＰ組成物は、皮膚パッチ、噴霧デバイスにより、又は軟膏、骨移植片、若しくは薬物と組合せて送達することもできる。ＰＲＰ組成物は、更に、縫合糸、ステント、ネジ、プレート、又は他の埋め込み可能なデバイスのコーティングとして使用することができる。最後に、ＰＲＰ組成物は、生体吸収可能な薬物又はデバイスと共に使用することができる。
【００６９】
好ましい実施形態では、ＰＲＰ組成物は、縫合材料に組み込まれる。ＰＲＰ組成物は、縫合材料に織り込まれていてもよい。或いは、縫合材料は、使用前にＰＲＰと共にインキュベートすることができる。インキュベーション時間は、数秒から任意の便利な時間までであってもよく、医学的処置が継続している期間であってもよい。ＰＲＰは、１分未満、５〜１０分、１０分〜１時間、１〜３時間、４〜１２時間、１３〜２４時間、１〜３日、又は３〜３１日等、使用前に数秒から数十時間、縫合材料と共にインキュベートしてもよい。
【００７０】
ＰＲＰをコーティングした縫合材料は、適切なチャンバー中で便利に保管することがで
きる。幾つかの実施形態では、ＰＲＰをコーティングした縫合材料は、冷凍で、及び／又は低酸素濃度又は高酸素濃度下で保管してもよい。幾つかの実施形態では、ＰＲＰは、単独で、又は縫合糸、ネジ、ステント、埋め込み不能なデバイス、若しくは他のデバイス等の固定デバイスと組合せて、低酸素分圧及び／又は高酸素分圧、低ｐＨ及び／又は高ｐＨ、低圧力及び／又は高圧力、低ＵＶ及び／又は高ＵＶ又は他の光条件、低温及び／又は高温等の種々の条件下で、インキュベート又は保管してもよい。すなわち、チャンバー中の酸素分圧、ｐＨ、圧力、ＵＶ若しくは他の光、又は温度の条件は、生理学的及び／又は周囲条件とは異なる。
【００７１】
１つの特定な例は、時間により変化する酸素供給量を有するＰＲＰ順化チャンバーである。酸素分圧は、２０％に又は２０％を超えて、好ましくは２０〜２５％の酸素分圧で、２〜１０分間、好ましくは約５分間に設定され、その後徐々に又は急激に、２０％未満の酸素分圧に、好ましくは２〜１０％酸素分圧に、最も好ましくは約５％の酸素分圧に、２〜１０分間、好ましくは約５分間変更される。この相対的低酸素負荷は、組織修復用の多血小板血漿の価値を、肯定的な様式で変更することができる。これら酸素値は、ＰＲＰに対する特定の効果に望ましい条件に基づいて、０〜１００％の範囲で変化してもよい。
【００７２】
保管時間は、１分未満、５〜１０分、１０分〜１時間、１〜３時間、４〜１２時間、１３〜２４時間、１〜３日、３〜３１日、又は１〜１２か月、又は１〜５年等、異なっていてもよい。その後ＰＲＰ組成物は、必要に応じて単独で又は固定デバイスと組合せて臨床的に使用することができる。縫合糸及び／又は他のデバイスを、多血小板血漿と一緒に製造し、多血小板血漿組成物をそのデバイスに組み込むこともできる。
【００７３】
簡単な例は、２０〜３０％の酸素、好ましくは約２２％の酸素を有するチャンバー内で、１０〜３０分間、好ましくは約１５分間、多血小板血漿を有する縫合糸をインキュベーションすることである。その後、縫合糸は、アキレス腱又は心臓弁を修復するために使用することができる。
【００７４】
代替的な実施形態では、多血小板血漿組成物は、デバイスの製造中に、縫合糸、ステント、ネジ、プレート、又は幾つかの他の埋め込み可能な医療デバイス等のデバイスに組み込まれる。その後、多血小板血漿が既に組み込まれているデバイスは、組織修復に使用される。
【００７５】
別の実施形態では、多血小板血漿組成物は、１〜３０分間、好ましくは約１０分間、適切な低酸素チャンバー内で調製されステントと組合せる。その後、チャンバーを、１〜６０秒間、１〜５分間、又は５〜１５分間等の短期間、紫外線に曝す。その後、ステントをチャンバーから取り出し、患者に埋め込む。このチャンバーは、多血小板血漿及び／又はデバイスの生物学的活性を向上させることになると予測される。
【００７６】
ＰＲＰ組成物の送達部位は、典型的には、組織損傷部位又はその周辺である。組織損傷部位は、画像化研究及び患者の反応、又はそれらの組合せを含む、十分に確立した方法により決定される。使用される好ましい画像化研究は、組織タイプに基づいて決定することができる。一般的に使用される画像化法には、これらに限定されないが、ＭＲＩ、Ｘ線、ＣＴスキャン、陽電子放射形断層撮影法（ＰＥＴ）、単光子放出断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、電気インピーダンス断層撮影法（ＥＩＴ）、電気源イメージング（ＥＳｌ、Electrical Source Imaging）、磁気源イメージング（ＭＳＩ、Magnetic Source Imaging）、レーザー光イメージング（laser optical imaging）、及び超音波技術が含まれる。患者は、特定の疼痛及び／又は不快な区域を指摘することにより、組織傷害又は損傷部位の特定を支援することもできる。
【００７７】
幾つかの例では、ＰＲＰ組成物は、急性心筋梗塞と診察された患者を治療するために使用することができる。ＰＲＰ組成物による治療は、屋外又は緊急処置室の状況で行うことができる。例えば、ＰＲＰ組成物治療の判断基準は、陽性の心臓マーカー、ＳＴ上昇、又は心エコー図で特定された新たな壁運動異常を含んでいてもよい。ＰＲＰ組成物による治療の決定及び治療位置（複数可）は、心筋梗塞の１つ又は複数の特徴に依存する場合がある。例えば、心筋梗塞は、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）又は非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、Ｑ波型又は非Ｑ波型心筋梗塞として、及びそれらが心内膜下であるか又は貫壁性かであるかで特徴付けることができる。心筋梗塞は、心臓壁領域及び／又は心臓血管構造中で閉塞が疑われる部位により解剖学的に特徴付けることもできる。心筋梗塞は、位置が心室の前部か、外側か、下方か、後側か、中隔か、又は右側かにより特徴付けることもでき、例えば、冠動脈左前下行枝、冠動脈左回旋枝、冠動脈左主幹動脈、冠動脈後下行枝、及び右冠状動脈の疾患又は閉塞状態を伴っている場合がある。
【００７８】
他の例では、ＰＲＰ調製及び適用のタイミングは、心筋梗塞の患者に施される他の治療に基づいてもよい。幾つかの場合では、ＰＲＰ組成物は、急性心筋梗塞又は以前の心筋梗塞を治療するために再灌流療法が実施される前に、実施中に、及び／又は実施後に調製及び送達することができる。再灌流療法には、血栓溶解療法（ヘパリン、ＴＰＡ、及び／又は他の薬理学的作用剤等）、血管形成術、ステント留置（ベアメタルステント及び薬物溶出ステントを含む）、又は冠動脈バイパスグラフト（ＣＡＢＧ）手術が含まれていてもよい。幾つかの場合では、再灌流療法は、突然死を含む不整脈リスクの増加と関連している場合がある。また、再潅流性不整脈の病因又は再潅流性不整脈のリスクは、心筋梗塞自体と関連する不整脈病因とは異なる場合があると考えられている。例えば、幾つかの再潅流性不整脈は、激発活性及び／又は再入により引き起こされる場合がある。ＰＲＰ組成物は、再灌流処置の開始前又は開始時に調製してもよいが、処置中に不整脈が生じるまでは使用されなくともよい。他の再灌流処置では、再灌流を行う前に、例えば、ガイドワイヤーが閉塞を通過する前に、ステント配置前に、ステント拡張前に、又はバイパスセグメントを通る冠血流の回復前に、患者を、ＰＲＰ組成物で予防的に事前処置してもよい。
【００７９】
血栓溶解剤に曝された患者からＰＲＰを調製することにより得られる結果は、患者が血栓溶解剤に全身的に曝されていない場合に得られる結果とは著しく異なる。血栓溶解剤には、ヘパリン、ＴＰＡ、ｐｌａｖｉｘ、及びアスピリンが含まれる。
【００８０】
ＰＲＰは、ブタモデルでは、ヘパリン処置の前、及びその後ヘパリン処置の後で調製される。下記の表に示されているように、明白で著しい差異があった。ヘパリンを全身的に投与する前に、ＰＲＰを標準的方法で調製し、血小板濃度は基準値の５．１２倍であることが見出された。正確に同じ調製方法を使用してヘパリンと接触させた後では、血小板濃度は、基準値の０．７１倍であることが見出された（下記の表を参照）。血小板濃度のこの変化は、その結果として、再生治療としてのＰＲＰの効能に重大な変化をもたらす場合がある。このように、ヘパリンとの接触前後で、ＰＲＰ組成物に明らかな相異がある。
【００８１】
【表１】
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【００８２】
幾つかの処置では、ＰＲＰ組成物は、非特異的ＭＩ治療として使用することができる。
従って、梗塞の特定タイプ及び／又は位置は、ＰＲＰ組成物を患者に送達する前に特定してもよく、又は特定されていなくともよい。例えば、患者が、急性ＭＩを罹患したことがあるか又は現在罹患していると単に決定することで十分な場合がある。従って、ＥＣＧは、ＰＲＰを送達するために必ずしも必要とされるわけではない。無論、ＥＣＧの使用は、ある状況では有益であり得る。例えば、調製及び使用されるＰＲＰ組成物の量は、ＭＩが上昇ＳＴ部分を伴うかどうかに基づいて異なっていてもよい。幾つかの変法では、ＥＣＧを記録する前に全血を採取して、ＰＲＰ組成物の調製を始める。その後、ＥＣＧを使用して、適切な送達機構を、ＰＲＰ組成物の調製と同時に決定することができる。
【００８３】
幾つかの変法では、ＰＲＰ組成物は、ＭＩの位置、タイプ、及び重症度（又はその幾つかの部分）が特定された後で、心臓に注射される。ある場合には、治療が有効になる可能性を増加させるために、ＰＲＰ組成物を送達する心臓内の１つ又は複数の別々の位置を特定することが有益であり得る。
【００８４】
ＭＩの位置は、種々の技術を使用して決定又は推定することができる。例えば、幾つかの変法では、心臓に関する電気生理学研究又は電気的マッピング研究等の診断法を使用することができる。他の変法では、ＭＲＩ、Ｘ線、ＣＴスキャン、陽電子放射形断層撮影法（ＰＥＴ）、単光子放出断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、電気インピーダンス断層撮影法（ＥＩＴ）、電気源イメージング（ＥＳｌ）、磁気源イメージング（ＭＳＩ）、レーザー光イメージング、及び超音波技術等の１つ又は複数の画像化技術を使用することができる。使用することができる他の技術及び手法には、開胸外科手術処置中の目視検査、局所的血流測定、局所的電気及び構造活性、核心臓学、超音波心臓検査法、心エコーストレス試験、冠動脈造影法、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、及び脳室造影法が含まれる。
【００８５】
ゲル又は他の粘性液体として製剤化されているＰＲＰ組成物は、針又は注射器で送達するのが難しい場合がある。従って、針又は注射器の使用が望ましい変法では、ゲル化剤及び／又は硬化剤をｉｎ  ｓｉｔｕでＰＲＰ組成物に添加することが望ましい場合がある。１つ又は複数の針又はカテーテルを配置して、ＰＲＰ組成物及び／又は作用剤を同時に又は実質的に同時に心臓組織に送達してもよい。例えば、針を使用してＰＲＰ組成物を送達する場合、針は、ＰＲＰ組成物及び作用剤が別々に移動する複数の管腔を備えていてもよい。その代わりに又はそれに加えて、別々の針を使用して、成分を同時に又は交互に組織へと送達してもよい。
【００８６】
ＰＲＰ組成物は、侵襲性を最小限に抑えて及び／又は外科的に送達することができる。例えば、ＰＲＰ組成物は、大腿静脈若しくは動脈、内頚静脈若しくは動脈、又は他の好適な静脈若しくは動脈から患者に挿入されたカテーテルを使用して、心臓に送達することができる。ＰＲＰ組成物は、ＭＩ及び／又は他の心臓の状態を治療するための１つ又は複数の医療デバイス、器具、又は作用剤と共に送達することができる。
【００８７】
医師は、ＰＲＰ組成物を虚血組織に送達するために、様々な接近技術のうちの１つを使用することができる。これらには、外科的（例えば、胸骨切開、開胸、ミニ開胸、剣状突起下（sub-xiphoidal））手法、内視鏡検査手法（例えば、肋間及び経剣状突起（transxiphoidal））、及び経皮的（例えば、経血管的（transvascular）、心内膜的、及び心膜的）手法が含まれる。接近が得られれば、組成物を、心外膜的又は心内膜的又は経血管的手法により送達することができる。組成物は、１つ又は複数の位置で心臓壁組織又は心臓血管に送達することができる。これは、心筋内、心内膜下、及び／又は心外膜下投与を含む。
【００８８】
心臓の虚血組織への接近が得られたら、送達デバイスを、任意の適切な血管を通して挿
入することができる。その後、送達デバイスの遠位端部を、心筋層の表面に対して配置することができ、１つ又は複数の針を組織へ進めることができる。ＰＲＰ組成物の１つ又は複数の成分を送達した後、もしあれば、針を撤収することができる。その後送達デバイスは、組成物の１つ又は複数の成分を更に送達するために再配置してもよく、又は患者から取り除いてもよい。その後、標準的技術を使用して切開部を閉じることができる。
【００８９】
実際は、ＰＲＰ組成物の送達中に、拍動している心臓を安定させることができる。例えば、幾つかの変法では、拍動している心臓を、１つ又は複数の薬物の送達により、及び／又は心臓の電気刺激により、緩徐又は停止させることができる。例えば、心臓は、薬理学的心停止を使用して安定させることができる。その代わりに又はそれに加えて、心臓を相当に静的にするペーシング又は他のアルゴリズムを使用して、心臓を安定させることができる。これら処置により、心停止、細動、又は持続性不応状態の可逆的な開始等の、種々の心臓状態を開始することができる。更に別の実施形態では、心臓組織の機械的な安定化は、様々な機械的安定化システムのいずれを使用して達成することができる。幾つかの例では、安定化処置の組合せを使用してもよい。
【００９０】
ＰＲＰ組成物は、心臓周期の特定の期間中に送達してもよく、これら変法では、ペースメーカーとして作用する１つ又は複数の刺激電極の使用が望ましい場合がある。例えば、心臓周期の特定の相中にＰＲＰ組成物を送達するために、心拍間期間を人為的に延長することができる。これら変法では、送達デバイスは、１つ又は複数の刺激及び／又は検知電極を含んでいてもよい。例えば、検知電極を使用して心収縮を検知することができ、それにより組成物の送達タイミングを心収縮と合わせることが可能になる。ＰＲＰ組成物の１つ又は複数の成分は、心収縮間に送達することが望ましい場合がある。
【００９１】
幾つかの例では、治療処置中に１つ又は複数の心臓センサーを使用することができる。センサーは、心収縮又は心拍動を示す１つ又は複数のシグナルを検出可能な任意の好適なセンサーシステム（例えば、電気的センサー、化学的センサー、圧力センサー、血管内画像化センサー、又はバイオセンサー）であってもよい。心臓センサーを使用して心臓からの電気信号を検出及び増幅し、視覚出力を表示及び／又は音声出力を提供することにより、心臓の電気的活性をモニターすることができる。例えば、出力は、ディスプレイインターフェースに表示されてもよい。医師は、この出力を使用して、心臓周期の特定の時点で針及び／又は組成物を組織に注射することができる。心臓センサーは、心リズムを操作又は制御するために、心臓刺激装置に接続されていてもよい。
【００９２】
幾つかの変法では、神経刺激装置を使用して、迷走神経を刺激することにより心リズムを電気的に操作することができる。迷走神経の刺激は、心停止をもたらす場合がある（心臓の緩徐又は停止）。迷走神経の刺激を止めると、心臓は正常リズムに回復することができる。或いは、心臓をペーシングしてもよい。迷走神経の刺激を、単独で又は電気的ペーシングと組合せて、選択的及び断続的に使用し、医師が、一時的に停止された心臓への組成物の１つ又は複数の成分の送達を実施することを可能にする。
【００９３】
典型的には、迷走神経の刺激は、心収縮を緩徐又は防止さえすることができる。心臓の初期緩徐又は停止の後で、ＰＲＰ組成物の１つ又は複数の成分を心臓に送達することができる。短間隔で神経刺激をしながら送達を実施することができ、その後神経刺激を止め、心臓を収縮させることができる。心臓刺激装置又はペースメーカーを使用して心臓の収縮を引き起こしてもよく、又は心臓を自由に独力で拍動させてもよい。幾つかの変法では、所望のように心臓をペーシングするために、１つ又は複数の電極を使用してもよい。プロセッサーは、心臓刺激及び神経刺激を両方とも制御することができる。例えば、プロセッサーは、神経刺激を停止させ、自動的に心臓刺激を始めることができる。
【００９４】
送達システムは、所定の比率（例えば、ＷＢＣと血小板との比率）でＰＲＰ組成物の成分を送達することができる。所定の比率は、事前に計算してもよく、又は送達が始まってから臨機応変に決定してもよい。所定の比率で成分を送達するために、送達デバイスは、対応するギア比を有する１つ又は複数のギア、比例した管腔サイズを有する１つ又は複数の管腔、又は任意の他の好適な機構を備えていてもよい。幾つかの送達デバイスは、１つ又は複数の混合チャンバーを備えていてもよい。複数の成分は、別々の送達デバイスを使用して送達されてもよく、又は同じ送達デバイスを使用して交互に送達されてもよい。
【００９５】
送達デバイスは、治療される虚血組織に隣接している血管を通って進行させてもよい。ＰＲＰ組成物は、針及び／又は先端部針状カテーテルを使用して、虚血組織に直接注射してもよい。その代わりに又はそれに加えて、ＰＲＰ組成物は、血管に点滴してもよい。
【００９６】
１つ又は複数のカテーテルを使用してＰＲＰ組成物を送達する場合、任意の好適なカテーテルを使用することができる。例えば、カテーテルは、１つ又は複数の管腔、及びジグザグ状又は平滑状の先端部を備えていてもよい。カテーテルは、遠位端部に位置する針又は他のデバイス（例えば、画像化デバイス）、及び近位端部に位置するプランジャー又は任意の他の制御部を備えていてもよい。カテーテル及び／又は他の送達デバイスは、所定の比率でＰＲＰ組成物の複数の成分を送達するために、異なるサイズの管腔を有していてもよい。カテーテルを使用する場合、医師は、ＰＲＰ組成物を心外膜、心内膜、及び／又は経血管的に送達するために心腔へと辿り着くことを含むがそれに限定されない、脈管構造を通って心臓に接近するために知られている経路のうちの１つを使用して、心臓に辿り着くことができる。
【００９７】
ＰＲＰ組成物の心内膜送達は、経皮的に順行性接近で上大静脈又は下大静脈を通って右心室に進行する送達デバイスを使用して、例えば心臓の左心室の治療部位に接近することを含む。送達デバイスは、心房中隔を通過して左心房に至り、次いで左心室に至り、治療部位に到達してもよい。或いは、デバイスは、中隔通過処置を使用して、例えば心室中隔を通って左心室に進行させてもよい。別の実施形態では、ＰＲＰ組成物は、右心室から心室中隔に直接注射してもよい。代替的な心内膜送達法は、経皮的に逆行性接近で大動脈を通って左心房に、次いで左心室へと進行する送達デバイスを使用して、治療部位に接近することを含んでいてもよい。
【００９８】
組成物の経血管性送達は、冠状静脈洞を通り心臓静脈を介して心臓静脈系へと送達デバイスを通過させること、及び必要に応じて、心筋組織をたどることにより静脈から出ることを含んでいてもよい。代替的な経血管性送達法は、大動脈から冠状動脈を通って治療部位に到着することにより治療部位に接近することを含む。
【００９９】
ＰＲＰ組成物を注射又は送達するためのデバイス（カテーテル又は別様のもの）は、ＰＲＰ組成物を所望の温度に維持するための、冷却部分又は他の温度制御機構を備えていてもよい。送達デバイスの種々の実施形態は、冷却チャンバー、及び／又はＰＲＰチャンバー若しくは注射チャンバーに、ＰＲＰ成分の沈殿若しくは凝集を防止するための撹拌機構を備えていてもよい。例えば、幾つかの変法では、カテーテル又は他の送達デバイスは、送達中にＰＲＰ組成物を冷却しておくための１つ又は複数の冷却管腔を有する。それに加えて又はその代わりに、送達デバイスは、送達の前にＰＲＰ組成物を混合するための混合チャンバーを備えていてもよい。ＰＲＰ組成物は、また、撹拌／振動チャンバーに保管されてもよく、又はＰＲＰ組成物は、送達デバイス内部に入れられた際に、傾けることにより又はそうでなければデバイスを操作することにより、医師が撹拌してもよい。
【０１００】
施術医は、単一のデバイスを使用して、種々の位置への複数の送達を行ってもよく、複数のデバイスを使用して、種々の位置への複数の送達を行ってもよく、単一のデバイスを
使用して、単一位置への単一送達を行ってもよく、又は複数のデバイスを使用して、単一位置への単一送達を行ってもよい。送達デバイスは、少なくとも１つの再使用可能な針又はカテーテルを備えていてもよい。幾つかの実施形態は、自動投薬システム（例えば、注射器押出システム）を有する送達デバイスを備えていてもよい。自動投薬システムは、各用量を事前に決定し、目盛りで設定することを可能にしてもよい（可変でもよく又は固定でもよい）幾つかの実施形態では、イオン泳動デバイスを使用して、ＰＲＰ組成物を虚血組織に送達することができる。
【０１０１】
その代わりに又はそれに加えて、ＰＲＰ組成物は、例えば縫合糸、ステント、ネジ、及び／又はプレート等の１つ又は複数のデバイスにコーティングされていてもよい。ペースメーカー等の抗不整脈デバイスが指導的役割を果たし、自動除細動器もまた、埋め込みの前に、同時に、又はその後で、ＰＲＰ組成物でコーティングされていてもよく、ＰＲＰ組成物が噴霧されていてもよく、又はＰＲＰ組成物に浸漬されてもよい。
【０１０２】
他の心臓組織又は心臓に隣接している他の位置へ偶発的送達を回避しつつ、ＰＲＰ組成物を虚血組織に送達することが望ましい場合がある。例えば、送達の際にＰＲＰ組成物をゲル化又は硬化して、拡散を防止することができる。幾つかの変法では、ＰＲＰ組成物が凝固又は少なくとも部分的に固定化されるまで、送達中にバルーン付きカテーテルを冠状静脈洞に留置して膨張させることができる。他の変法では、ＰＲＰ組成物の圧力駆動拡散を防止するために、圧力制御システムが送達デバイスに備えられていてもよい。逆流出血は、注射した後の数秒間（例えば、約５〜約３０秒間、又は約５〜約１２０秒間）針を適所に維持することにより防止することもできる。
【０１０３】
センサーを使用して、送達デバイスを所望の位置に誘導し、及び／又はＰＲＰ組成物を送達することができる。例えば、電気活性（例えば、ＥＣＧ）、ｐＨ、酸素化、乳酸等の代謝産物、又はＣＯ2等のリアルタイム記録を使用することができる。センサーは、１つ又は複数の電気センサー、光ファイバーセンサー、化学センサー、画像化センサー、構造センサー、及び／又はコンダクタンスを測定する近接センサーであってもよい。センサーは、送達デバイスに組み込まれていてもよく、又は送達デバイスと分離していてもよい。幾つかの実施形態では、センサーは、針挿入深度、血液ガス、血圧又は血流、ヘモクリット（hemocrit）、光、温度、振動、電圧、電流、力、及び／又はインピーダンスを感知又はモニターすることができる。センサーは、１つ又は複数の画像化システムを備えていてもよく、任意の適切な出力デバイス、例えば、情報を受信及び表示するＬＣＤ又はＣＲＴモニターに接続されていてもよい。
【０１０４】
患者に送達されるＰＲＰ組成物の総容積は、心臓のサイズ、罹患虚血組織の量、及び／又は処置の所望の転帰に基づいていてもよい。例えば、注射される組成物の総容積は、１５０００μＬ未満であってもよい。
【０１０５】
心臓における送達部位の数は、梗塞（複数可）のタイプ及び位置、ＰＲＰ組成物の所望位置、及びその所望位置を隔てる距離に基づいてもよい。送達部位の数は、約１〜約２５部位の範囲であってもよい。送達部位を隔てる距離は、１送達部位当たりの送達される血小板ゲルの所望容積、送達される所望の総容積、及び／又は虚血組織の状態に基づいて異なってもよい。送達部位では、ＰＲＰ組成物は、注射されてもよく、点滴されてもよく、又はそうでなければ虚血組織に若しくは虚血組織に隣接して配置されてもよい。ＰＲＰ組成物は、標的部位の上流の脈管構造（つまり、血管）に点滴することもでき、その結果ＰＲＰ組成物は、罹患虚血組織に向かって流れて行くことになる。
【０１０６】
送達部位の位置は、虚血組織のサイズ及び形状、並びに組織治療の所望の範囲に基づいて異なってもよい。例えば、ＰＲＰ組成物は、虚血組織に送達されてもよく、及び／又は
虚血組織に接する組織に送達されてもよい。同様に、本組成物は、虚血組織及び他の心臓組織の領域の任意の組合せに送達されてもよい。
【０１０７】
急性ＭＩに関するＰＲＰ送達のタイミングは、梗塞形成の重症度、虚血組織の範囲、患者の状態、及び任意の併発ＭＩ又は不整脈治療の進行度に基づいてもよい。ＰＲＰ組成物は、任意の好適な時点で送達することができる。例えば、ＰＲＰ組成物は、ＭＩ発症の直後に、ＭＩの１時間以内に、ＭＩ後の１〜８時間以内に、又は患者が別の処置を受けるほうが安全な場合は、患者が臨床的に安定した後、ＭＩの３〜４日後に送達することができる。タイミングは、カスパーゼ−３の血中レベルに基づいていてもよい。幾つかの変法では、組成物は、ＭＩの約１週間後、約１〜３週間後、約１〜約６か月後、又は最長約１年後以降にさえ送達される。虚血組織に組成物を注射するための他時点も企図されており、それらには、あらゆる考え得るＭＩの前、及び虚血組織の区域を見出した直後が含まれる。無論、組成物は、ＭＩの数年後に虚血組織に注射されてもよい。
【０１０８】
再灌流の後、本デバイス及び方法は、現行の抗不整脈療法と共に、及び／又は不整脈の可能性を増加させることが一般的に知られている他の医学的処置と同時に使用してもよい。例えば、本方法及びデバイスに関して一般的に考察されているように、種々の心臓処置は、心臓の緩徐（徐脈）及び／又は停止（心停止）をある期間必要とする場合がある。
【０１０９】
以前に言及されているように、ＰＲＰ組成物は、それに加えて又はその代わりに、他の心臓処置に使用することができる。これら心臓処置には、抗不整脈処置、先天性心臓疾患又は他の病態を治療する処置が含まれていてもよい。他の心臓処置の例には、これらに限定されないが、血管形成術、冠動脈バイパス術、低侵襲冠動脈バイパス術（ＭｌＤＣＡＢ）、オフポンプ冠動脈バイパス術、完全内視鏡下冠動脈バイパス術（ＴＥＣＡＢ）、大動脈弁修復術、大動脈弁置換術、僧帽弁修復術、僧帽弁置換術、Ｒｏｓｓ手術、Ｂｅｎｔａｌｌ手術、肺血栓内膜摘除術、経心筋血行再建術（ＴＭＲ）、自己弁温存大動脈基部置換術、心筋形成術、Ｄｏｒ手術、心臓移植、中隔筋切除術、心室縮小術、心膜穿刺術、心膜切除術、心房中隔開口術、ブラロック−タウシグ短絡術、フォンタン手術、ノーウッド手術、ラステリ手術、メイズ手術（Ｃｏｘメイズ及びミニメイズ）、及び／又はペースメーカー挿入が含まれる。ＰＲＰ組成物は、心臓組織の再灌流に伴う不整脈を防止するために、上記の処置のいずれの最中でも使用することができる。周知のように、再灌流は、心臓外科手術後に自然発症不整脈を引き起こす場合がある。
【０１１０】
ＰＲＰ組成物は、単独で使用されてもよく、又はこれらに限定されないが、幹細胞（胚性又は成体）、臍帯血、薬物、遺伝子操作された分子、又は他の生理活性物質を含む他の療法と組合せて使用されてもよい。
【０１１１】
キット
キットは、本明細書に記載の任意のデバイス、部品、又はデバイス及び／若しくは部品の組合せを含んでいてもよい。例えば、キットは、１つ又は複数の調製デバイス、１つ又は複数の送達デバイス、１つ又は複数の収集デバイス、及び／又は使用説明書を含んでいてもよい。１つ又は複数の調製デバイスは、ＰＲＰを調製するためのものであり、例えば、遠心機を含んでいてもよい。１つ又は複数の送達デバイスは、損傷結合組織に、又はＭＩを治療するために心臓の領域に、ＰＲＰを含むＰＲＰ組成物を送達するように構成されていてもよい。１つ又は複数の収集デバイスは、１つ又は複数の注射器、アフェレーシス針、又は患者から血液を収集するための他のデバイスを含んでいてもよい。患者は、ＭＩ及び／又は結合組織損傷を現在罹患しているか又は過去に罹患していてもよい。キットの部品は、滅菌容器に包装されていてもよい。キットは、１つ又は複数の使い捨て部品を含んでいてもよい。説明書は、文字又は絵文字の形態であってもよく、又は音声テープ、音声ＣＤ、ビデオテープ、ＤＶＤ、又はＣＤ−ＲＯＭ等を含む記録媒体にあってもよい。
【０１１２】
本明細書に記載の組成物、方法、及びシステムに関する先述の使用に加えて、当業者であれば、傷害心臓組織及び結合組織だけでなく他の傷害組織も、傷害を治療するための構造的支持物質の送達から利益を得ることになることは明白だろう。そのような組織の非限定的な例には、胃、食物摂取量を低減し満腹を増加させるため；腹壁、ヘルニアを予防及び治療するため；及び膀胱、失禁を予防又は治療するため、が含まれる。そのような組織には、血管組織が更に含まれていてもよい。
【実施例】
【０１１３】
実施例１：マウスモデルにおけるＰＲＰによる心筋梗塞の治療
Ｂｉｏｍｅｔ社製ＧＰＳシステム、Ｄｅｐｕｙ社製Ｓｙｍｐｈｏｎｙ機、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ社製Ｍａｇｅｌｌａｎ機、Ｈａｒｖｅｓｔ社（プリマス、マサチューセッツ州）、Ｇｅｎｅｓｉｓ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ社、Ｓｏｒｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ社、及びＲｅｇｅｎ  Ｌａｂ社製のもの等の遠心機ユニットを使用して、ＰＲＰを調製した。およそ５５ｃｃのヒト全血を、標準的滅菌注射器を使用して採取し、血液凝固阻止のために５ｃｃのクエン酸デキストロース溶液と混合し、その後製造業者のプロトコールに従って遠心沈降して、血小板を単離した。その後これら血小板を、およそ３ｃｃの血漿に再懸濁した。種々の濃度が、図１の表に示されている。
【０１１４】
ヒト由来ＰＲＰ組成物又は生理食塩水対照を、恒久的な左前下行枝動脈結紮術後に、マウスモデルの心筋層に筋肉内に注射した。この結紮術は、その結果として心筋梗塞又は心臓発作もたらした。駆出率を、７日目にＭＲＬにより測定した。図２に示されているように、結紮術の７日後の駆出率、生理食塩水対照の駆出率は２６％であったが、ＰＲＰで治療された群の駆出率は３６％だった。
【０１１５】
実施例２：抗血液凝固剤投与前のＰＲＰの調製
心臓発作が疑われる患者の全血を、緊急処置室に運び込まれた直後に採取する。血液を臨床検査用に送ってもよいが、ヘパリン、ＴＰＡ、ｐｌａｖｉｘ、アスピリン、及び／又は他の薬理学的作用剤又は介入作用剤の投与前に、多血小板血漿（ＰＲＰ）を調製するために十分な余分の血液も採取されている。ＰＲＰは、再灌流療法開始後の送達用に取っておくか、及び／又はそのような介入の前に送達する。
【０１１６】
ＰＲＰは、これらに限定されないが、遠心機、重力ろ過デバイス、又は細胞選別器等を含む様々な技術を使用して調製することができる。ＰＲＰは、幹細胞、遺伝子操作、又は恒久的若しくは生体吸収性ペースメーカー若しくはステント等の機械的デバイスと組合せることができる。ＰＲＰを製作し、その後冷凍又は凍結乾燥状態で保管することができる。好ましい形態では、ＰＲＰは、生理学的ｐＨに緩衝化されることになるが、異常伝導経路の切除等の特定の臨床適応のために、酸性又は塩基性ｐＨのいずれかでＰＲＰを滴下注入することも有用であり得る。更に別の実施形態では、好中球又は白血球の他の画分が部分的に又は完全のいずれかで枯渇されている形態で、ＰＲＰを調製することもできる。
【０１１７】
実施例３：虚血関連状態の創薬におけるＰＲＰの使用。
多血小板血漿を、ｉｎ−ｖｉｔｒｏ、動物、又はヒトモデルにおける虚血再灌流治験（心臓発作等の）に使用する。組織又は細胞の発現分析を、様々な時点で行う。マイクロアレイ出力のコンピューター分析を行って、アポトーシス、細胞調節、又は任意の新規若しくは既存のシグナル経路のマーカーの特異的上方制御又は下方制御を捜し出す。ＰＲＰに応答して上方制御又は下方制御された遺伝子を特定する。これら特定された遺伝子に効果を及ぼす薬物を、虚血状態に対するそれらの効果について試験する。遺伝子発現に基づいて、心臓発作、脳卒中、又は外傷性傷害で生じる場合があるもの等の、虚血又は再灌流組織の問題を治療するのに有用な薬物を特定する。
【０１１８】
実施例４：癌治療の創薬におけるＰＲＰの使用
ＰＲＰ組成物を使用する治療を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、動物、又はヒトモデルにおける癌治験で使用する。例えば、ＰＲＰを腫瘍に又は腫瘍の周辺に注射することができる。遺伝子発現に対する治療の効果を、マイクロアレイを使用して決定する。マイクロアレイ出力のコンピューター分析を行って、アポトーシス、細胞調節、又は任意の新規若しくは既存のシグナル経路のマーカーの特異的上方制御又は下方制御を捜し出す。治療が成功した個体の遺伝子発現に基づいて、有効な治療に応答して上方制御又は下方制御された遺伝子を特定する。特定された遺伝子に効果を及ぼす薬物を、これらに限定されないが、脳癌、肺癌、乳癌、結腸癌、又は他の腫瘍性疾患を含む、いずれか又は全てのタイプの癌の治療に使用する。
【０１１９】
実施例５：結合組織傷害の創薬におけるＰＲＰの使用
実施例３及び４のように、ＰＲＰ組成物を使用する。これらに限定されないが、腱、靭帯、軟骨、脊椎円板、筋肉、又は硬骨等を含む結合組織傷害等の別の疾患状態又は障害が、特定される。様々な用量又は製剤の多血小板血漿又はその誘導体を添加した及び添加しない細胞又は組織の遺伝子発現を評価するために、特定のプロトコールを開発する。その後、この発現を分析して、そのような障害に関する薬物開発の新規な標的を探し出す。
【０１２０】
本明細書には、方法、デバイス、及びキットが、説明及び例示のために、ある程度詳細に記述されているが、そのような説明及び例示は、理解の明瞭さのためのものに過ぎない。当業者であれば、本明細書の教示に照らして、添付の特許請求の範囲の趣旨及び範囲から逸脱せずに、ある種の変更及び改変をなすことができることは、直ちに明白だろう。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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