(57)【要約】  本発明は、T細胞抗原受容体(TCR)に特異的に結合するモノクローナル抗体、またはその抗原結合性フラグメントの製造および使用、および免疫調節のためのそれらの使用に関する。好ましい実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは、TCRのアルファ鎖の定常領域に特異的に結合するか、またはさもなければ、TCRクローンの起源にかかわらず、アルファ鎖に特異的に結合する(すなわちTCRに汎特異的である)。本発明の抗体は、例えば、移植片維持のための免疫抑制療法および自己免疫疾患の治療に使用することができ、かつ/または、T細胞悪性腫瘍の治療での使用のためのターゲティング分子として使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列を有するVHドメインを含む、単離された抗TCR抗体。
【請求項２】
配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列を有するVLドメインを含む、単離された抗TCR抗体。
【請求項３】
配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列を有するVLドメインを含む、請求項１に記載の抗TCR抗体。
【請求項４】
配列番号６のアミノ酸配列を有するVHドメインおよび配列番号１２のアミノ酸配列を有するVLドメインを含む、単離された抗TCR抗体。
【請求項５】
TCRα鎖の細胞外定常ドメインに免疫特異的に結合する、請求項１、２、３または４に記載の抗TCR抗体。
【請求項６】
Fc領域を欠くか、またはエフェクター機能を欠くかもしくは減少したエフェクター機能を有するFc領域を含む、請求項１、２、３または４に記載の抗TCR抗体。
【請求項７】
ヒトIgG1由来のFc領域を含む、請求項１、２、３または４に記載の抗TCR抗体。
【請求項８】
Fc領域の残基297に対応するアミノ酸がアスパラギンではない、請求項６に記載の抗TCR抗体。
【請求項９】
一本鎖抗体である、請求項１、２、３または４に記載の抗TCR抗体。
【請求項１０】
四量体抗体である、請求項１、２、３または４に記載の抗TCR抗体。
【請求項１１】
キメラ化またはヒト化されている、請求項１、２、３または４に記載の抗TCR抗体。
【請求項１２】
その必要がある患者での自己免疫性障害を治療するかまたはその症状を改善する方法であって、請求項１、２、３または４の抗TCR抗体の治療有効量を該患者に投与するステップを含む、方法。
【請求項１３】
その必要がある患者でのT細胞悪性腫瘍の治療方法であって、請求項１、２、３または４の抗体の治療有効量を該患者に投与するステップを含む、方法。
【請求項１４】
抗体が、Fc領域を欠くか、またはエフェクター機能を欠くかもしくは減少したエフェクター機能を有するFc領域を含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
自己免疫性障害が有害な炎症反応と関連している、請求項１２の方法。
【請求項１６】
自己免疫性障害が、1型糖尿病、乾癬、関節リウマチ、ループス、炎症性腸疾患(IBD)、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、臓器移植の影響、または移植片対宿主病(GVHD)である、請求項１２の方法。
【請求項１７】
抗TCR抗体を少なくとも1日1回投与する、請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも10日の期間にわたって少なくとも1日1回抗TCR抗体を投与する、請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
週1回、週2回、2週毎に1回、月1回、6週毎に1回、2か月毎に1回、年2回または年1回抗TCR抗体を投与する、請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
抗TCR抗体を哺乳動物に、局所、経口、静脈内、皮内、または皮下投与する、請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
抗TCR抗体を哺乳動物に少なくとも1時間にわたって静脈内投与する、請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
抗TCR抗体を哺乳動物に少なくとも30分にわたって静脈内投与する、請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
抗TCR抗体を哺乳動物に少なくとも15分にわたって静脈内投与する、請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
TCRのα鎖に対する結合に関してBMA 031と競合する、請求項１、２、３または４の抗体。
【請求項２５】
投与後6か月にわたり、患者が、自己免疫性障害を管理するための補助療法の増加を必要としない、請求項１２に記載の方法。
【請求項２６】
患者が自己免疫疾患の初期段階にある、請求項１２に記載の方法。
【請求項２７】
請求項１の抗体の重鎖可変ドメイン、またはその断片をコードする核酸配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項２８】
請求項２の抗体の軽鎖可変ドメイン、またはその断片をコードする核酸配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項２９】
請求項２７または２８の核酸分子を含むベクター。
【請求項３０】
重鎖をコードする第1の核酸分子および軽鎖をコードする第2の核酸分子を含み、該重鎖および軽鎖が請求項３の抗体またはその断片の重鎖および軽鎖である、ベクター。
【請求項３１】
発現ベクターである、請求項２９または３０のベクター。
【請求項３２】
請求項３０の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項３３】
異種プロモーターに作動可能に連結された第1の核酸および同一のまたは異なる異種プロモーターに作動可能に連結された第2の核酸を含む宿主細胞であって、該第1の核酸および第2の核酸が請求項３の抗体の、それぞれ、重鎖および軽鎖をコードする、宿主細胞。
【請求項３４】
TCR特異的抗体を組換え生産する方法であって、(i) 該抗体の発現に好適な条件下で請求項３１の宿主細胞を培地中で培養するステップ; および(ii) 該抗体を培地から回収するステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
1.  序論
本発明は、T細胞抗原受容体(TCR)に特異的に結合するモノクローナル抗体、またはその抗原結合性フラグメントの生産および使用、および免疫調節のためのそれらの使用に関する。好ましい実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは、TCRのα鎖の定常領域に特異的に結合するか、またはさもなければ、TCRクローンの起源にかかわらず、α鎖に特異的に結合する(すなわちTCRに対し汎特異的である)。本発明の抗体は、例えば、移植維持のための免疫抑制療法および自己免疫疾患の治療で使用することができ、かつ/またはT細胞悪性腫瘍の治療用のターゲティング分子として使用することができる。
【背景技術】
【０００２】
2.  発明の背景
2.1  T細胞およびT細胞抗原受容体
Tリンパ球(T細胞としても知られる)は、その表面に見出される抗原決定基ならびに機能的活性および抗原認識能力の差異によって一般的に規定される種々のサブセットに分類される。例えば、CD8+ T細胞は、外来細胞または外来抗原を提示する宿主細胞を特定して死滅させるように機能する細胞傷害性T細胞として一般に認識され、CD4+ T細胞は、T細胞とその刺激性細胞との間のアビディティーを増加させることによって体液性応答および炎症反応を促進するヘルパー細胞として分類される。
【０００３】
T細胞活性は、任意の数のリガンドがT細胞表面のそのそれぞれの受容体に結合することによって制御される。そのような結合が典型的なT細胞活性(例えばリンホカインまたはサイトカインの生産の増加、細胞傷害性細胞活性、増殖)を生じさせる場合、T細胞は活性化されたとされる。特に興味深いのは、抗原特異的T細胞受容体(TCR)が、抗原提示細胞の表面の主要組織適合複合体(MHC)に結合している抗原に結合することを介するT細胞の活性化である。しかし、T細胞活性化は、種々のT細胞表面分子の関与に依存する複雑なイベントである。例えば、抗原特異的T細胞受容体(TCR)は、実際、ジスルフィド結合しているヘテロ二量体の複合体であり、それは2つのクローン的に分布する膜貫通糖タンパク質鎖(αおよびβ、またはγおよびδ)を含み、それは不変の低分子量タンパク質の複合体(CD3複合体)と非共有結合によって結合している。
【０００４】
TCRαおよびβまたはγおよびδ鎖は抗原特異性を決定し、その結果、異なる特異性のT細胞の間で高度に多型のTCRが生じる。末梢血T細胞の約90パーセントはαおよびβヘテロ二量体を発現し、一方、少数のみが、γおよびδ種からなるTCRを発現すると示されている。TCRの鎖は、それぞれ、可変(V)、多様(D)、連結(J)、および定常(C)と称されるドメインの独自の組み合わせからなる。各T細胞クローンでは、αおよびβ両鎖の(またはγおよびδ両鎖の) V、DおよびJドメインの組み合わせが独自の結合部位の規定に関与し、該独自の結合部位はT細胞クローンのイディオタイプとしても知られる。Cドメインは抗原結合に関与しない。
【０００５】
TCRの大きな不均質性は、依然として、TCR抗体の臨床適用での限定要因である。TCRに免疫特異的に結合可能な抗体が開発されてきたが、これらの抗体は、それらがクロノタイピック(clonotypic)である(すなわち、特定のT細胞クローンとのみ反応する)傾向がある点で非常に適用性が特異的であることがわかっており、かつ/または臨床的に不適切である。例えば、Acuto et al.は、比較的未分化のT3+細胞のTCRを特定する、ヒト胸腺細胞セルラインに対するクロノタイピックモノクローナル抗体を製造した(1983, Cell 34:717-726)。Meuer et al.は、セファロースビーズに結合させた抗TCRクロノタイピックモノクローナル抗体がインターロイキン-2の生産を誘導できることを示した(1984, Proc. Natl. Acad. Sci. 81:1509-1513)。CT8セルラインに対する抗TCRクロノタイピック抗体は、特定のTセルラインの細胞傷害性エフェクター細胞機能をブロックするだけであった(Meuer et al., 1984, Ann. Rev. Immunol. 2.23-50)。したがって、複数の取り組みによって、汎特異的抗体、または多数のTセルライン由来のTCRを認識する抗体の開発が試みられている。最初はそのような汎特異的抗体は不可能であると考えられた。Brenner et al.は、異なるクローン化Tセルラインは抗原決定基を共有したが、いずれも細胞表面でアクセス可能ではないと思われることを見出した(1984, J. Exp. Med. 160:541-551)。理論的に細胞表面の共有された決定基が発見されたが、これらのエピトープに対する抗体は限定的にしか有用でないことがわかった。Brenner et al,は、そのようなエピトープと反応するβ-フレームワーク-1 (βF1)モノクローナル抗体を製造したが、それは生存T細胞の表面の「隠れた決定基」に結合し、ウエスタンブロットでしかTCRβポリペプチドを認識しないことが見出された(1987, J. Immunol. 138:1502-1509)。最初、TCRのフレームワーク領域に結合すると考えられた別の抗体WT31は、細胞結合アッセイで有用であることが見出されたが、免疫沈降にはあまり役に立たないことが見出された(Spits et al., 1985, J. Immunol. 135:1922-1928)。さらに、WT31はCD3決定基を特異的に認識することが見出された。対照的に、BMA 031抗体は独自の臨床的可能性を表す。その理由は、それが、成熟した免疫担当T細胞上のTCRに汎特異的であるからである。BMA 031は多型α/β-TCRの決定基を認識し、より多数の未成熟γ/δ-T細胞集団との交差反応性を有さない(Jisukawa et al., 1987, J Exp Med 166:1192-1197; Faure et al., 1988, J Immunol 140:2128-2132)。したがって、特定の実施形態では、本適用は汎特異的抗TCR抗体に向けられる。(前節で種々の刊行物が引用されるが、各刊行物は、参照によりその全体がここに組み入れられる)。
【０００６】
2.2  自己免疫疾患
自己免疫疾患は、通常、細菌、ウイルスおよび他の感染性物質から身体を防御する身体の免疫系が、「自己」組織、細胞および臓器を攻撃する場合に生じる。そのような自己標的に対する免疫系の動員は自己免疫と称される。ある程度の自己免疫はすべての個体に存在するが、厳重なコントロールシステムが免疫系の自己認識細胞を、自己免疫が通常無症候性である程度に抑制する。疾患状態は、コントロールシステムに何らかの障害が存在し、それにより自己免疫細胞が抑制を回避するようになる場合、または標的組織に、それがもはや自己として認識されないような何らかの変化が存在する場合に生じる。これらの変化の根底にある機構はよく理解されていないが、遺伝的素因のある個体での異常な免疫刺激の結果であると理論付けられている。
【０００７】
自己免疫疾患は臓器特異的または全身性でありうるが、それらは異なる発病機構によって引き起こされる。臓器特異的自己免疫は、T細胞コンパートメント内での寛容および抑制、主要組織適合複合体(MHC)抗原の異常な発現、抗原擬態およびMHC遺伝子の対立遺伝子変異によって特徴付けられる。全身性自己免疫疾患は、通常、ポリクローナルB細胞活性化および免疫調節性T細胞、T細胞受容体およびMHC遺伝子の異常を伴う。臓器特異的自己免疫疾患の例は、糖尿病、皮膚乾癬、潰瘍性大腸炎、甲状腺機能亢進症、自己免疫性副腎不全、溶血性貧血、多発性硬化症およびリウマチ性心炎である。代表的な全身性自己免疫疾患には、全身性ループス、エリテマトーデス、関節リウマチ、乾癬性関節炎、シェーグレン症候群多発性筋炎、皮膚筋炎および強皮症が含まれる。
【０００８】
また、自己免疫性障害を有さないが、臓器移植レシピエントは類似の症状を経験することがよくあり、自己免疫患者と類似の治療を必要とする。免疫系は、移植された臓器(群)を攻撃し、臓器不全または、より重大な全身性合併症、例えば、骨髄移植レシピエントでの移植片対宿主病(GVHD)を生じさせる。
【０００９】
自己免疫性障害を治療しかつ/または免疫応答を調節するための改善されたストラテジーについての明らかな必要性が存在する。現在、免疫系障害は、免疫抑制剤、例えばコルチゾン、アスピリン誘導体、ヒドロキシクロロキン、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、および種々の生物学的製剤、例えば抗TNF抗体、および/または前記のものの組み合わせで治療される。治療は、個別の患者および障害に応じて結果がさまざまである。しかし、そのような一般的免疫抑制療法の使用でのジレンマは、免疫抑制が大きいほど、ゆえに自己免疫性障害の治療が成功する可能性が高いほど、患者が日和見感染を発症する、より高いリスクにさらされることにある。さらに、患者の免疫系の性質が損なわれるせいで、わずかな感染でさえ、急速に重大な懸念になる。
【００１０】
2.3  自己免疫性障害でのT細胞機能性
糖尿病でのβ細胞の破壊、多発性硬化症でのミエリンの破壊、または他の自己免疫性障害の標的細胞の破壊は、主に、抗原性の標的細胞由来ペプチドを特異的に認識する細胞傷害性Tリンパ球(CTL - CD8+ T細胞としても知られる)によって媒介されると考えられている。CTL、ならびに他のタイプのT細胞は、これらの抗原性ペプチドをその特異的T細胞受容体(TCR)によって認識する。可溶性外来タンパク質全体を抗原として認識する抗体と異なり、TCRは、その代わりに、主要組織適合複合体(MHC)タンパク質との複合体としてのみ提示される小さいペプチド抗原と相互作用する。
【００１１】
身体のほとんどの細胞は、その表面に種々のクラスのMHC分子を発現し、発現されるMHCのクラスに依存して、可溶性抗原、リンパ系および/または循環系内に分散されているもの、またはその細胞質タンパク質の断片を提示する。MHC分子(ヒトではヒト白血球抗原またはHLAと称される)およびTCRは極めて多型性であり、各クローン変種は、単一のペプチド配列、または類似のペプチドアナログのセットを認識し、それに結合する。免疫系に特有の細胞、すなわちB細胞およびT細胞以外に、身体の細胞は、MHC分子の複数の変異体(variant)を発現し、各変異体は異なるペプチド配列に結合する。対照的に、成熟の際、BおよびT細胞はそれぞれMHCおよびTCRの複数の変異体を発現する能力を失う。したがって、成熟T細胞はTCRの変異体候補の1つしか発現せず、ゆえに単一のMHC/抗原複合体を認識し/それと結合する。
【００１２】
TCRがMHC/抗原複合体に結合すると、活性化と称されるT細胞内の細胞内シグナルカスケードが誘発され、T細胞のクローン増殖およびクラス特異的T細胞応答が生じる。例えば、CTLでは、活性化に対する応答には、細胞傷害性酵素の放出も含まれ、その結果、標的細胞のアポトーシス/破壊が生じる。
【００１３】
2.4  モノクローナル抗体によるT細胞活性化の調節(modulation)
自己免疫疾患が少なくとも部分的に異常なT細胞作用によって引き起こされるという知見は、問題のあるT細胞クローン(自己抗原に対するTCRを発現するもの)を排除するか、または望ましくないT細胞活性/活性化を選択的に減らす療法の研究につながっている。しかし、TCR結合に起因するT細胞活性化は、応答性T細胞集団上で発現される種々の細胞表面分子の関与のせいで、予想外に複雑な現象である(Billadeau et al., 2002, J. Clin. Invest. 109:161-168; Weiss, 1990, J. Clin. Invest. 86:1015-1022; Leo et al., 1987, PNAS 84:1374-1378; Weiss et al., 1984, PNAS 81:4169-4173; Hoffman et al., 1985, J. Immunol. 135:5-8)。
【００１４】
一般的T細胞活性化に対する標的化療法は、TCRが、2つのクローン的に分布する不可欠な膜糖タンパク質鎖、αおよびβ、またはγおよびδを含む、ジスルフィド結合しているヘテロ二量体からなる点で問題があった。T細胞活性化の調節に関するほとんどの研究は、臓器移植レシピエントでの免疫抑制の改善に関連して行われた。しかし、TCRα/β鎖に対する抗体は、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)および関節炎の急性モデルにおいて治療効力を示した(例えばMasumoto et al., 1994, Immunology 81:1-7; Goldschmidt et al., 1991, Eur J Immunol 21:1327-1330; Yoshino et al., 1992, J Exp Med 175:907-915, 各文献は参照によりその全体が組み入れられる)が、抗TCR抗体の影響は明らかでない。一般に、治療効果は、自己免疫反応に関与するT細胞の機能的ブロックのT細胞枯渇によって生じるが、研究では、TCRシグナル伝達および/またはT細胞活性化が治療効果に必要であることが示された(Goldschmidt et al., 1991, Eur J Immunol 21:1327-1330, 該文献は参照によりその全体が組み入れられる)。
【００１５】
2.5  T細胞活性化の減少を示す免疫抑制性モノクローナル抗体
T細胞および/またはTCRの成分に対する免疫調節性抗体の使用は、有毒な「初回投与応答」によって妨げられることがよくある。初回投与応答は、T細胞の活性化、およびその後のT細胞応答および/または活性化の抑制前のサイトカインの放出に関連することが示されている。初回投与応答を引き起こす抗体の一次活性化特性は、T細胞と、Fc受容体(FcR)保持細胞との、抗体Fcドメインを介する架橋によって媒介されると考えられている。生じた架橋は両タイプの細胞を活性化し、サイトカインの大量全身性放出である「サイトカインストーム(cytokine storm)」を生じる。F(ab')2断片および/またはFcR結合の減少または無効を示すFc領域を有する抗体を使用する実験では、Fc結合の排除が、抗T細胞抗体の有害な副作用を、その免疫調節特性を損なうことなく効果的に媒介することが示された。抗体のFcドメインとFcRとの結合を減少させるかまたは無効にするいくつかの方法が当技術分野で公知である。例えば、U.S. Pat. No. 6,491,916、U.S. Pat. Application Pub. No. 2005/0064514およびU.S. Pat. Application Pub. No. 2005/0037000は、変異体分子が、野生型Fcドメインを有する免疫グロブリンと比較して、種々のFc受容体に対する結合の増強または減少を示すような、免疫グロブリンのFc領域の改変を記載する。特に、該特許/出願は、FcγRに対する親和性が選択的に増強または減少されるようなIgG抗体のFc領域の改変を記載する。活性化または抑制性Fc受容体に対する親和性を目的に合わせることによって、治療的mAbによって誘発される特異的免疫応答を、より選択的にコントロールすることができる。例えば、ヒトおよびマウスFcγRIおよびIIへのmAbの結合を大きく減少させるヒト化抗体のCH2部分の突然変異が同定され(P234AおよびL235A)、それは、in vitroでコントロールと比較して活性化表現型の顕著な減少を生じさせる。重要なことに、この変異体mAbはTcR調節および免疫抑制を誘発する能力を保持した。抗CD3抗体のFcドメインに対する他の改変、例えば抗体を非グリコシル化する突然変異またはFcγRとの結合を減少させるFcドメイン残基の他の突然変異は、免疫抑制活性を維持しつつ、毒性を減少させることが見出された(例えばU.S. Patent 6,491,916; U.S. Patent 5,834,597, Keymeulen et al., 2005, N. Eng. J. Med. 325:2598 (すべての文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと)。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
3.  発明の要旨
本発明は、T細胞抗原受容体(TCR)に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合性フラグメントに関する。本発明の抗体は、その必要がある患者での免疫調節に使用することができ、例えば、臓器および骨移植での免疫抑制療法および自己免疫疾患の治療に使用することができ、かつ/または、T細胞悪性腫瘍の治療のためのターゲティング分子として使用することができる。
【００１７】
該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、α、β、γおよび/またはδ鎖を含む、TCRを形成する1以上のポリペプチド鎖と結合し、可変、多様、連結および/または定常領域を含む、該鎖の1以上の領域に結合することができる。本発明の抗体は、それらがTCRの単一クローン(すなわちT細胞集団内で発現されるTCRの規定サブセット)または任意のT細胞サブセットに特異的に結合する点でクロノタイピックであってよく、または、好ましい実施形態では、クロノタイプの起源にかかわらず、TCRと特異的に反応してもよい。本発明の抗体は、インタクトのTCR複合体の部分としてのTCRのα、β、γまたはδ鎖に免疫特異的に結合するか、または個別のペプチドまたはその断片としてのα、β、γまたはδ鎖に結合することができる。好ましい実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、TCRのα鎖に特異的に結合し、より好ましくは、TCRのα鎖の定常および/または細胞外ドメインに結合する。他の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、TCRのβ鎖に特異的に結合し、好ましくは、TCRのβ鎖の定常および/または細胞外ドメインに結合する。さらに他の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、TCRのγ鎖に特異的に結合し、好ましくは、TCRのγ鎖の定常および/または細胞外ドメインに結合する。さらに他の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、TCRのδ鎖に特異的に結合し、好ましくは、TCRのδ鎖の定常および/または細胞外ドメインに結合する。
【００１８】
好ましい実施形態では、本発明は、TCRのα鎖の定常領域に特異的に結合するか、またはさもなければ、T細胞のクローン起源にかかわらずα鎖に特異的に結合する、抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供し; そのような実施形態では、本発明の抗体はTCRα鎖、およびゆえにα/βTCRを概して認識する(すなわち、汎特異的TCR抗体、および、特に、汎特異的TCRα鎖抗体である)。他の実施形態では、本発明は、TCRのβ鎖の定常領域に特異的に結合するか、またはさもなければ、T細胞のクローン起源にかかわらずβ鎖に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供し; そのような実施形態では、本発明の抗体はTCRβ鎖、およびゆえにα/βTCRを概して認識する(すなわち、汎特異的TCR抗体、および、特に、汎特異的TCRβ鎖抗体である)。さらに他の実施形態では、本発明は、TCRのγ鎖の定常領域に特異的に結合するか、またはさもなければ、T細胞のクローン起源にかかわらずγ鎖に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供し; そのような実施形態では、本発明の抗体はTCRγ鎖、およびゆえにγ/δTCRを概して認識する(すなわち、汎特異的TCR抗体、および、特に、汎特異的TCRγ鎖抗体である)。さらに他の実施形態では、本発明は、TCRのδ鎖の定常領域に特異的に結合するか、またはさもなければ、T細胞のクローン起源にかかわらずδ鎖に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供し; そのような実施形態では、本発明の抗体はTCRδ鎖、およびゆえにγ/δTCRを概して認識する(すなわち、汎特異的TCR抗体、および、特に、汎特異的TCRδ鎖抗体である)。
【００１９】
特定の実施形態では、本発明は、TCRα鎖に汎特異的な抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供する。この実施形態にしたがう特定の例では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１(図１)および配列番号７(図２)に記載のマウス抗体BMA 031の重鎖または軽鎖由来の重鎖または軽鎖可変ドメイン、および/またはその誘導体または変異体を含む。他の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１３または配列番号１４のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1、配列番号１５のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号１６のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1、配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3および/またはそれらの変異体または誘導体の1種以上を含む。特定の実施形態では、本発明のTCR結合分子は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび/または配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含まない。他の実施形態では、本発明のTCR結合分子は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1を含まず、かつ/または配列番号１５のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2を含まず、かつ/または配列番号１６のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含まず、かつ/または配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1を含まず、かつ/または配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2を含まず、かつ/または配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含まない。他の実施形態では、本発明の抗体、その抗原結合性フラグメントは、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列を有するVHドメイン(図１に記載される)および/または配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列を有するVLドメイン(図２に記載される)、またはそれらの変異体または誘導体を含む。好ましい実施形態では、本発明は、配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号１２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。
【００２０】
本発明はまた、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１および／または配列番号１２のアミノ酸配列に対して、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも99%同一のアミノ酸配列を含むTCR結合分子を包含する。特定の実施形態では、本発明のTCR結合分子は、Shearman et al., J Immunol 147:4366-4373 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)に開示されているBMA 031-EUCIV2、BMA 031-EUCIV3またはBMA EUCIV7由来のVH、VL、および/またはCDRを含まない。
【００２１】
特定の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントはTCRに特異的に結合し、例えば、TCRのα、β、γ、δ鎖、好ましくはTCRのα鎖に結合するが、受容体の抗原/MHC結合部位に結合せず、かつ/またはCD3複合体に結合しない。ゆえに、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、複合体化または非複合体化TCRに結合することができる。他の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、複合体化TCRにのみ結合する。代替の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、非複合体化TCRにのみ結合する。関連の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、非複合体化TCRに特異的に結合し、TCRとそのリガンド(すなわち抗原/MHC複合体)の結合および/または複合体形成を妨害または阻止する。
【００２２】
本発明は、TCRに特異的に結合し、かつ受容体活性を調節する抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、該TCRを発現するT細胞の活性を調節することによって免疫調節を達成する抗体またはその抗原結合性フラグメントを包含する。特定の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、TCRの少なくとも1つの活性をアゴナイズし、すなわちシグナル伝達を誘発する。当技術分野で周知のように、TCRシグナル伝達はT細胞活性化を生じさせ、該T細胞活性化には、細胞増殖の増加ならびにサイトカインおよびサイトカイン受容体(例えば、IL-2およびIL-2受容体)の発現の増加が含まれる。この実施形態にしたがう特定の例では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、複合体化TCRと結合し、本発明の抗体の不存在下での受容体シグナル伝達と比較して受容体シグナル伝達を増加させ、それにより免疫応答の増強を導く。他の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、TCRの少なくとも1つの活性をアンタゴナイズし、すなわちシグナル伝達を阻害する。この実施形態にしたがう特定の例では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、複合体化TCRと結合し、本発明の抗体の不存在下での受容体シグナル伝達と比較して受容体シグナル伝達を減少させ、それにより免疫応答の減少を導く。
【００２３】
特定の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、TCRのリガンド結合部位をブロックする。他の実施形態では、本発明の抗体はTCRに結合し、該受容体のCD3と複合体形成する能力を阻害するかまたは無効にする。これらの実施形態では、ブロック活性は、該TCRを発現するT細胞の、免疫複合体によってトリガーされる活性化をブロックし、結果的に免疫応答を抑制することができる。別の特定の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、T細胞とAPC (例えば、樹状細胞、B細胞、マクロファージなど)との架橋をブロックし、それにより免疫抑制を導く。
【００２４】
本発明の抗体を使用して、ヒトを含む哺乳動物でin vivoで、T細胞を枯渇させ、かつ/またはT細胞活性化を阻害することができる。T細胞表面TCRに結合させ、それによってTCRの可変領域と、抗原性ペプチドおよびMHC分子の特異的複合体との間の相互作用を立体構造的にブロックすることによって抗原認識を阻害するために、標準的方法を使用して抗体を投与する治療方式を設計することができる。あるいは、またはさらに、TCR特異的抗体と細胞表面TCRとの間で形成された複合体は、抗体結合T細胞を破壊する免疫系のアクセサリー要素を利用することによって、望ましくないT細胞、例えば、白血病またはリンパ腫に関連する異常なT細胞を枯渇させることができる。そのような実施形態では、T細胞表面のTCRに結合した抗体のFc領域が、補体系、マクロファージ、単球、または抗体依存性細胞傷害性細胞によって媒介される細胞傷害性機構を利用しかつ活性化することが予測される。したがって、そのような実施形態では、Fc領域と、免疫系の成分、例えば補体系またはFcRとの結合を、当技術分野で周知の方法を使用するFc領域の改変によって増加させることができる。T細胞枯渇の効率は、細胞傷害性または抗代謝性物質、例えば、ペプチド毒素または毒素に関連するポリペプチドを含む微生物または合成起源の毒素、酵素、放射性物質、または細胞傷害性薬物と共有結合によってコンジュゲートされたTCR特異的抗体を投与することによって増強してもよい。免疫応答調節剤(例えば、免疫調節剤、免疫抑制剤、免疫活性化剤)としてのTCR特異的抗体のin vivo適用では、特定の特異性を有する抗体の選択は、個別の動物またはヒト内のT細胞集団全体、または特定のT細胞亜集団のターゲティングを可能にする。例えば、クロノタイピックエピトープに特異的な抗体は、単一のT細胞クロノタイプのメンバーのみを標的にし、一方、ファミリー特異的エピトープ(例えば、可変α、β、γ、またはδ鎖)に特異的な抗体は、エピトープ保持セグメントを使用して、特定のファミリーに属する、TCRを有するすべてのT細胞クローンを標的にする。特定の疾患または医学的に望ましくない免疫応答に関与するT細胞のみが調節または排除の標的になり; 感染性物質に対する免疫の維持に関与する大多数のT細胞はそれを回避する。抗体を直接投与することができ; あるいは、それらを、母系伝達(妊娠期間中の哺乳動物の子孫への経胎盤伝達、または育児中の伝達)によるもののようにして間接的に投与することができる。
【００２５】
本発明は、その必要がある被験体での免疫調節を達成するための、抗TCR抗体、および/またはその抗原結合性フラグメントの使用を包含する。好ましい実施形態では、被験体は哺乳動物であり、より好ましくは、ヒトである。本発明の方法は、当業者が容易に確かめることができる種々の目的のための、その必要がある被験体での免疫調節を包含する。そのような使用の例には、非限定的に、移植手順(例えば造血組織または臓器移植)中の全身的または特定の(すなわちT細胞のサブセットのみに対する)免疫抑制が含まれる。他の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、自己免疫疾患、感染、癌または他の悪性腫瘍または免疫不全の治療または管理に使用することができる。免疫調節(immunomodulation)とは、免疫系の抑制または増強によって免疫系を変化させる任意の治療過程を表す。したがって、免疫抑制および免疫賦活は免疫調節のサブセットである。
【００２６】
当技術分野で周知のように、免疫系の細胞に対する治療用抗体の使用は、「初回投与」副作用の問題によって制限される。軽度のインフルエンザ様症状から重度の毒性におよぶ初回投与副作用は、軽度から重度まであり得、高熱、悪寒/硬直、頭痛、振戦、吐き気/嘔吐、下痢、腹痛、倦怠感、筋肉/関節痛および疼痛、および全身衰弱などの症状が含まれる。初回投与副作用は、FcγR発現細胞上のFcγRに結合し、それを活性化する抗体のFc領域によって刺激されるリンホカイン生産およびサイトカイン放出によって引き起こされると考えられる。ゆえに本発明は、初回投与副作用の減少または無効を示すか、または初回投与副作用に関連する少なくとも1つの症状の減少または無効を示すTCR抗体を提供する。Fcエフェクター機能の無効または減少を示す抗体は、Fc領域媒介性免疫応答が所望でないかまたは不必要である治療的適用での特定の用途を満たす(例えば自己免疫疾患の治療での、例えば、TCRと標的抗原/MHC複合体との相互作用を阻害するための本発明の抗体の使用)。特定の実施形態では、本発明の抗体は、それらが免疫グロブリンFc領域を含まない(例えば、Fab断片、F(ab')2断片または一本鎖抗体である)点で、初回投与効果、または1種以上のその症状を減少させるかまたは無効にする。他の実施形態では、本発明の抗体は、それらが、1種以上のエフェクターリガンドとの結合の減少を示すか、該リガンドとの検出可能な結合を示さないFcドメインを含む点で、初回投与効果、または1種以上のその症状を減少させるかまたは無効にする。Fcエフェクターリガンドは任意のFcR (例えばFcγR)、または任意の補体成分(例えばC1q)であってよい。この実施形態にしたがう一例では、本発明の抗体は、野生型Fc領域と比べて1以上のアミノ酸改変を有する変異体Fc領域を含む。1以上の改変は、同等の野生型Fc領域と比べて、Fcと1種以上のFcγRまたは1種以上の補体成分との結合を減少させるかまたは排除する。1以上の改変は典型的にアミノ酸置換であるが、アミノ酸挿入または欠失、またはアミノ酸挿入、欠失および置換の任意の組み合わせであってもよい。FcRに結合するFcドメインの改変はFc CH2および/またはヒンジ領域の改変を含んでよい。あるいは、Fcと1種以上のエフェクターリガンドとの結合を、1以上のFc領域の1以上のグリコシル基を改変または排除することによって減少させるかまたは排除することができる。Fcグリコシル化は、当技術分野で周知の方法によって改変または排除することができる。例えば、Fcグリコシル化は、フコシル化が欠損している細胞(例えばfuc6ヌル細胞)中でFcを生産することによって改変することができ、またはグリコシル化部位(例えばCH2ドメインの297〜299位のN-X-S/Tグリコシル化部位)を改変するかまたは排除する脱グリコシル酵素またはアミノ酸改変によって排除することができる。特定の実施形態では、本発明は、CH2ドメインの297位に対応するアミノ酸が非グリコシルである、Fcドメインを含む抗体を提供する。別の実施形態では、本発明の抗体は、未改変Fc領域を含む参照抗体またはタンパク質と比較して、少なくとも1種のFcエフェクターリガンドに対する、減少した結合を有する非グリコシルFc領域を含む。好ましい実施形態では、本発明の抗体は、当技術分野で慣用のアッセイによって測定された場合に、1種以���の任意のFcγR (例えばFcγRI、FcγRIIまたはFcγRIII)に対して、そのFcドメインを介する、減少した(例えば、非限定的に、野生型のグリコシル化Fcドメインを有する抗体による結合と比較して、50%未満、40%未満、30%未満、20%未満、10%未満、5%未満または1%未満の)結合を有するかまたは、より好ましくは、検出可能な結合を有さない。さらにまたはあるいは、本発明の抗体は、慣用のアッセイによって測定された場合に、C1qなどの任意の補体受容体に対して、減少した(例えば、非限定的に、野生型のグリコシル化Fcドメインを有する抗体による結合と比較して、50%未満、40%未満、30%未満、20%未満、10%未満、5%未満または1%未満の)結合を有するかまたは、より好ましくは、検出可能な結合を有さない。
【００２７】
特定の実施形態では、本発明の抗体は変異体Fc領域(任意のヒト免疫グロブリンタイプ(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY)、またはクラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、およびIgA2)またはサブクラスに由来するFcを含む)を含み、ここに、該変異体Fc領域は、野生型Fc領域と比べて少なくとも1つのアミノ酸改変を含み、該変異体Fc領域は、当技術分野で公知でかつ本明細書中で開示される標準アッセイによって測定された場合に、野生型Fc領域を含む同等の分子と比べて、1種以上のエフェクターリガンドに対する結合の減少または無効を示す。特定の実施形態では、本発明の抗体の変異体Fcドメインは、残基233、234、235、236、237、238、265、270、297、298、299の1つ以上の位置でアミノ酸改変(すなわち、挿入、置換、欠失)を含む。特定の実施形態では、1種以上のエフェクターリガンドに対する結合を減少させるかまたは無効にする1つ以上のアミノ酸改変は、フェニルアラニンまたはプロリンでの233位の置換; アラニンでの234位の置換; アラニンまたはグルタミン酸での235位の置換; アラニンでの236位の置換、アラニンでの237位の置換、アルギニンでの238位の置換; アラニンまたはグルタミン酸での265位の置換; アラニンまたはアスパラギンでの270位の置換; アラニンまたはグルタミンでの297位の置換; フェニルアラニン、アスパラギンまたはプロリンでの298位の置換; セリンまたはスレオニン以外の任意のアミノ酸での299位の置換; または上で列挙される置換の2つ以上の組み合わせである。特定の実施形態では、本発明の抗体は、アラニンでの265位および297位の置換; アラニンでの265位の置換およびグルタミンでの297位の置換; グルタミン酸での265位の置換およびアラニンでの297位の置換; またはグルタミン酸での265位の置換およびグルタミンでの297位の置換を有するFcドメインを含む。好ましい実施形態では、本発明の抗体は、Fc領域の234位および235位の改変(例えば、置換、挿入、欠失)を有するFcドメインを含む。この実施形態にしたがう特定の例では、本発明の抗体は、アラニンでの234位の置換およびグルタミン酸での235位の置換を有するFcドメインを含む。さらにより好ましい実施形態では、本発明の抗体は、アラニンでの234位の置換およびアラニンでの235位の置換を有するFcを含む。
【００２８】
他の実施形態では、本発明の抗体はFc領域を含み、該変異体Fc領域は、当技術分野で公知でかつ本明細書中で開示される標準アッセイによって測定された場合に、同等のコントロール分子と比べて、1種以上のエフェクターリガンドに対する結合の減少または無効を示す。特定の実施形態では、本発明の抗体は、1種以上のエフェクターリガンドに対する結合の減少または無効を示すFc領域を有し、該Fc領域は、233位のフェニルアラニンまたはプロリン; 234位のアラニン; 235位のアラニンまたはグルタミン酸; 236位のアラニン、237位のアラニン、238位のアルギニン; 265位のアラニンまたはグルタミン酸; 270位のアラニンまたはアスパラギン; 297位のアラニンまたはグルタミン; 298位のフェニルアラニン、アスパラギンまたはプロリン; 299位の、セリンまたはスレオニン以外の任意のアミノ酸; または上で列挙される置換の2つ以上の組み合わせを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体は、265位および297位のアラニン; 265位のアラニンおよび297位のグルタミン; 265位のグルタミン酸および297位のアラニン; または265位のグルタミン酸および297位のグルタミンを有するFcドメインを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体は、234位のアラニンおよび235位のグルタミン酸を有するFcドメインを含む。好ましい実施形態では、本発明の抗体は、234位のアラニンおよび235位のアラニンを有するFcを含む。
【００２９】
Kabatのナンバリングスキームにしたがって234および235位に対応する位置にアラニンを有するFcドメインを含む本発明の抗体は「ala-ala」抗体として知られる。特定の実施形態では、「ala-ala」Fcドメインおよび/または本明細書中に記載のアミノ酸の組み合わせの他の組み合わせ(「ala-ala」Fcドメインを含む組み合わせを含む)の使用は、FcドメインとすべてのFcγRとの結合を無効にする。Fcドメインと1種以上のFcγRとの結合は、本明細書中に記載されかつ/または当技術分野で公知の任意の方法によって決定することができる。
【００３０】
特定の実施形態では、すべてのFcγRに対する結合を無効にするかまたは1種以上のエフェクターリガンドに対する結合を減少させるかもしくは無効にする1以上のアミノ酸改変は、本明細書中で列挙される改変の組み合わせまたは、本明細書中で開示されるかまたは当業者に公知の方法によって測定された場合に、任意のFcR (例えば、FcγRIIIA、FcγRIIIB、FcγRIIA)に対するヌル結合を付与する任意のものと本明細書中で列挙される改変の組み合わせを含む。当業者に容易に理解されるように、本発明のそのような抗体は、抗TCR抗体が、抗免疫細胞抗体に共通の初回投与応答を伴わずに免疫機能の調節に役立つ点において、自己免疫疾患の治療での特定の使用に達する。
【００３１】
特定の実施形態では、本発明の抗TCR抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、当技術分野で慣用のアッセイによって測定された場合に、1種以上の任意のFcγR (例えば、FcγRI、FcγRIIまたはFcγRIII)に対して、そのFcドメインを介する、減少した(例えば、非限定的に、コントロールFcドメインを含むタンパク質による結合と比較して、50%未満、40%未満、30%未満、20%未満、10%未満、5%未満または1%未満の)結合を有するかまたは、より好ましくは、検出可能な結合を有さない。さらにまたはあるいは、本発明の抗TCR抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、慣用のアッセイによって測定された場合に、C1qなどの任意の補体受容体に対して、減少した(例えば、非限定的に、コントロールFcドメインを含むコントロールタンパク質による結合と比較して、50%未満、40%未満、30%未満、20%未満、10%未満、5%未満または1%未満の)結合を有するかまたは、より好ましくは、検出可能な結合を有さない。特定の実施形態では、抗体は非グリコシル化型である。他の実施形態では、抗体はFcドメインを欠いている(例えば、Fab断片、F(ab')2または一本鎖抗体である)。
【００３２】
ゆえに、本発明の抗体は特に有用である。その理由は、それらが示す、リンホカイン生産またはサイトカイン放出によって引き起こされるin vivo毒性は減少しているか、またはそのin vivo毒性を有さないからである。リンホカイン生産およびサイトカイン放出を測定する方法は当技術分野で公知かつ典型的であり、本明細書中に包含される。例えば、サイトカイン放出は、サイトカインの分泌を測定することによって測定することができ、該サイトカインには、非限定的にインターロイキン-2 (IL-2)。インターロイキン-4 (IL-4)、インターロイキン-6 (IL-6)、インターロイキン-12 (IL-12)、インターロイキン-16 (IL-16)、PDGF、TGF-α、TGF-β、TNF-α、TNF-β、GCSF、GM-CSF、MCSF、IFN-α、IFN-β、TFN-γ、IGF-I、IGF-IIが含まれる。例えば、Isaacs et al., 2001, Rheumatology, 40: 724-738; Soubrane et al., 1993, Blood, 81(1): 15-19 (各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。
【００３３】
本発明は、TCR、好ましくはTCRの細胞外ドメイン、最も好ましくはTCRのα鎖の細胞外定常ドメイン、に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性フラグメントに関する。抗原またはエピトープに関する抗体またはその抗原結合性フラグメントの結合特異性を測定するためのアッセイには、非限定的にELISA、ウエスタンブロット、表面プラズモン共鳴(例えばBIAcore)およびラジオイムノアッセイが含まれる。タンパク質-タンパク質結合特異性を評価するための当技術分野で公知の任意の方法を使用して、0.001 nMより大きいが5 nM以下、10 nM以下、15 nM以下、20 nM以下、25 nM以下、30 nM以下、35 nM以下、40 nM以下、45 nM以下、または50 nM以下のKdを示す本発明の抗体または抗原結合性フラグメントを特定することができる。特定の実施形態では、本発明の単離されたVHまたはVLドメインは、例えばBIAcoreアッセイによって測定された場合に、5 nM未満、10 nM未満、15 nM未満、20 nM未満、25 nM未満、30 nM未満、35 nM未満、40 nM未満、45 nM未満、または50 nM未満のKdを示す。
【００３４】
本発明はまた、TCR、好ましくはTCRの細胞外ドメイン、最も好ましくはTCRのα鎖の細胞外ドメイン、に高い結合親和性を示す抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供する。特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、少なくとも105 M-1 s-1、少なくとも5x105 M-1 s-1、少なくとも106 M-1 s-1、少なくとも5x106 M-1 s-1、少なくとも107 M-1 s-1、少なくとも5x107 M-1 s-1、または少なくとも108 M-1 s-1の、会合速度定数すなわちkon値(抗体(Ab)+抗原(Ag) Ab-Ag)を有する。好ましい実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、少なくとも2x105 M-1 s-1、少なくとも5x105 M-1 s-1、少なくとも106 M-1 s-1、少なくとも5x106 M-1 s-1、少なくとも107 M M-1 s-1、少なくとも5x107 M-1 s-1、または少なくとも108 M-1 s-1のkonを有する。
【００３５】
別の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、10-1 s-1未満、5x10-1 s-1未満、10-2 s-1未満、5x10-2 s-1未満、10-3 s-1未満、5x10-3 s-1未満、10-4 s-1未満、5x10-4 s-1未満、10-5 s-1未満、5x10-5 s-1未満、10-6 s-1未満、5x10-6 s-1未満、10-7 s-1未満、5x10-7 s-1未満、10-8 s-1未満、5x10-8 s-1未満、10-9 s-1未満、5x10-9 s-1未満、または10-10 s-1未満のkoff値(抗体(Ab)+抗原(Ag) Ab-Ag)を有する。好ましい実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、5x10-4 s-1未満、10-5 s-1未満、5x10-5 s-1未満、10-6 s-1未満、5x10-6 s-1未満、10-7 s-1未満、5x10-7 s-1未満、10-8 s-1未満、5x10-8 s-1未満、10-9 s-1未満、5x10-9 s-1未満、または10-10 s-1未満のkoffを有する。
【００３６】
さらに他の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、少なくとも102 M-1、少なくとも5x102 M-1、少なくとも103 M-1、少なくとも5x103 M-1、少なくとも104 M-1、少なくとも5x104 M-1、少なくとも105 M-1、少なくとも5x105 M-1、少なくとも106 M-1、少なくとも5x106 M-1、少なくとも107 M-1、少なくとも5x107 M-1、少なくとも108 M-1、少なくとも5x108 M-1、少なくとも109 M-1、少なくとも5x109 M-1、少なくとも1010 M-1、少なくとも5x1010 M-1、少なくとも1011 M-1、少なくとも5x1011 M-1、少なくとも1012 M-1、少なくとも5x1012 M-1、少なくとも1013 M-1、少なくとも5x1013 M-1、少なくとも1014 M-1、少なくとも5x1014 M-1、少なくとも1015 M-1、または少なくとも5x1015 M-1の親和性定数またはKa (kon /koff)を有する。さらに別の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、10-2 M未満、5x10-2 M未満、10-3 M未満、5x10-3 M未満、10-4 M未満、5x10-4 M未満、10-5 M未満、5x10-5 M未満、10-6 M未満、5x10-6 M未満、10-7 M未満、5x10-7 M未満、10-8 M未満、5x10-8 M未満、10-9 M未満、5x10-9 M未満、10-10 M未満、5x10-10 M未満、10-11 M未満、5x10-11 M未満、10-12 M未満、5x10-12 M未満、10-13 M未満、5x10-13 M未満、10-14 M未満、5x10-14 M未満、10-15 M未満、または5x10-15 M未満の解離定数またはKd (koff /kon)を有する。
【００３７】
本発明の特定の実施形態では、抗TCR抗体は、モノクローナル抗体、合成抗体、組換えによって生産された抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ラクダ化抗体、一本鎖Fv (scFv)、一本鎖抗体、Fab断片、F(ab')断片、ジスルフィド結合Fv (sdFv)、イントラボディ、または上記のいずれかのエピトープ結合断片である。特定の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原断片は、Johnson et al.のU.S.特許出願公開US 2007/0004909で開示されるものなどの共有結合性ダイアボディ(diabodies)であるか、またはいずれもJohnson et al.のU.S.特許出願番号61/019,051および12/138,867に開示されるものなどのIg-DARTSである(各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)。
【００３８】
本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、ヒトでの治療的使用のためにタンパク質を改変するための当技術分野で公知の任意の方法によってヒト化することができる。異種CDR配列とヒトフレームワークおよび/または定常ドメインとを組み合わせるための当技術分野で一般に公知の方法に加えて、用語「ヒト化」はまた、タンパク質および/または抗体リサーフェイシング(resurfacing)の方法、例えば、いずれもStudnicka et al.のU.S.特許5,770,196; 5,776,866; 5, 821,123; および5,896,619に開示されるものを含む(各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)。
【００３９】
本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは任意の種(例えば、ウサギ、マウス、ラット、ロバ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、霊長類)由来であってよいが、好ましくは、任意のタイプ(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY)、またはクラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、およびIgA2)またはサブクラスであってよいヒト免疫グロブリン分子由来である。本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、化学合成または組換え技術によって製造することができる。
【００４０】
本発明は、該疾患と診断された被験体(および/または該疾患または障害を発症しやすい被験体)でのT細胞媒介性免疫学的疾患、特に自己免疫疾患およびT細胞癌の治療、予防、その進行の減速および/またはその症状の改善の方法であって、TCR抗体、またはその抗原結合性フラグメントの治療的または予防的有効量をその必要がある被験体に投与することによる方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は自己免疫疾患の治療のための抗体であって、野生型Fc領域の結合と比べて、1種以上のFcエフェクターリガンドに対する結合の減少を示す変異体Fc領域を含む抗体を提供する。
【００４１】
特定の実施形態では、本発明の抗体はT細胞媒介性疾患、特にT細胞癌および/またはT細胞悪性腫瘍の予防または治療に単剤療法として有用である。特定の実施形態では、本発明はT細胞癌またはT細胞悪性腫瘍の治療のための抗体であって、野生型Fc領域の結合と比べて、1種以上のFcエフェクターリガンドに対する結合の増加を示す変異体Fc領域を含む抗体を提供する。本発明は、T細胞悪性腫瘍、または1種以上のその症状を予防、治療、管理または改善するための方法であって、本発明のTCR抗体、またはそのアナログ、誘導体、変異体または抗原結合性フラグメントの予防的または治療的有効量をその必要がある被験体に投与するステップを含む方法を提供する。特に、本発明は、無痛性または攻撃的T細胞白血病、T細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病、成人T細胞白血病またはホジキンリンパ腫を予防、治療、管理または改善するための方法を提供する。本発明の方法にしたがって治療される追加のT細胞リンパ球増殖性障害には、非限定的に、胸腺および胸腺後(post-thymic)の悪性腫瘍; リンパ様前駆細胞、胸腺の細胞(thymic cells)、間質細胞、上皮細胞、胸腺細胞(thymocytes)、T細胞、ナチュラルキラー(「NK」)細胞、または抗原提示細胞の腫瘍; リンパ腫; 胸腺腫; および非ホジキン病; リンパ芽球性リンパ腫; 未分化大細胞リンパ腫; 末梢T細胞リンパ腫; 血管免疫芽細胞性リンパ腫; 血管中心性リンパ腫(鼻性T細胞リンパ腫); および腸管T細胞リンパ腫が含まれる。特定の実施形態では、被験体の癌は1種以上の標準または実験的療法に不応性である。特定の実施形態では、T細胞悪性腫瘍の予防または治療での使用のための本発明の抗体は、野生型または未改変Fcドメインを含むコントロール抗体(例えば、Fcドメインと1種以上のエフェクターリガンドとの結合を減少させるかまたは無効にする本明細書中に記載されかつ/または当技術分野で公知の1以上のアミノ酸改変を含まないFcドメインを含むコントロール抗体)に匹敵する、1種以上のエフェクターリガンドに対する結合を示すか、または1種以上のエフェクター-リガンド結合媒介性活性を示す。特定の実施形態では、T細胞悪性腫瘍の予防または治療での使用のための本発明の抗体は野生型Fcドメインを含むか、またはFcドメインと1種以上のFcRとの結合を減少させるかまたは無効にする本明細書中に記載されかつ/または当技術分野で公知の1以上のアミノ酸改変を含まないFcドメインを含む。
【００４２】
本発明は、T細胞悪性腫瘍の標準または実験的治療方式(例えば、化学療法、放射免疫療法、または放射線療法)と組み合わせたTCR特異的抗体の使用を提供する。そのような併用療法は標準または実験的治療の効力を増強する。T細胞悪性腫瘍の予防、治療、管理、または改善のためにTCR特異的抗体またはその抗原結合性フラグメントと組み合わせて特に有用な治療剤の例には、非限定的に、当技術分野で公知のCAMPATHTM、抗Tac、プリンアナログ、ペントスタチン、細胞傷害剤、抗レトロウイルス剤、三酸化ヒ素、インターフェロン-アルファ、および/または化学療法剤および抗癌剤が含まれる。化学療法剤には、非限定的にアルキル化剤、代謝拮抗剤、天然物、およびホルモンが含まれる。本発明の併用療法は、治療的または予防的効果を達成するための、低用量の抗TCR抗体またはその抗原結合性フラグメントおよび/またはT細胞悪性腫瘍を有する被験体への抗TCR抗体またはその抗原結合性フラグメントの低頻度の投与を可能にする。
【００４３】
別の実施形態では、抗TCR抗体またはその抗原結合性フラグメントの使用は、T細胞悪性腫瘍と診断された被験体の生存を延長するか、または悪性腫瘍と診断された被験体でのT細胞悪性腫瘍に関連する1種以上の症状の悪化を予防する。
【００４４】
特定の実施形態では、T細胞悪性腫瘍の診断は、被験体の末梢血および/または悪性腫瘍の標的組織中の異常な濃度のTリンパ球の検出に基づく。特定の実施形態では、本発明の抗TCR抗体は、イムノスポットアッセイ(例えばELISPOT)によって測定された場合に、治療前の状態と比べて、被験体のTリンパ球の絶対数、または濃度の少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも35%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、または少なくとも85%の減少を達成するために投与される。該測定は、以前の治療の6か月、9か月、12か月、15か月、18か月、または24か月後の時点で行われる。
【００４５】
特定の実施形態では、本発明は、治療剤または薬物にコンジュゲートされたTCR特異的抗体、またはその抗原結合性フラグメントの使用を提供する。抗TCR抗体またはその抗原結合性フラグメントにコンジュゲートされる治療剤の例には、非限定的に、サイトカイン、毒素、放射性元素、および代謝拮抗剤が含まれる。
【００４６】
本発明はまた、移植片拒絶、移植片対宿主病、望ましくない遅延型過敏性反応(例えば遅延型アレルギー反応)、T細胞媒介性肺疾患、および自己免疫疾患を含むT細胞媒介性疾患または障害の治療、予防、その進行の減速および/またはその症状の改善の方法を提供する。T細胞媒介性肺疾患には、サルコイドーシス、過敏性間質性肺炎、急性間質性肺炎、肺胞炎、肺線維症、特発性肺線維症および、炎症性肺損傷によって特徴付けられる他の疾患が含まれる。T細胞自己免疫疾患には、多発性硬化症、神経炎、多発性筋炎、乾癬、白斑、シェーグレン症候群、関節リウマチ、1型糖尿病、自己免疫性膵炎、炎症性腸疾患(例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎)、セリアック病、糸球体腎炎、強皮症、サルコイドーシス、自己免疫性甲状腺疾患(例えば、橋本甲状腺炎およびグレーブス病)、重症筋無力症、アジソン病、自己免疫性ブドウ膜網膜炎、尋常性天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、悪性貧血、および全身性エリテマトーデス(systemic lupus erythematosis)、ループス(特に皮膚)、臓器移植の影響、移植片対宿主病(GVHD)、などが含まれる。特に、本発明の方法は、自己免疫からの損傷を減速するかまたは減少させ、かつ高レベルの機能を維持しかつ/または他の療法の必要性を減少させるために初期段階の疾患を有する被験体で有益である(例えば、I型糖尿病の治療または予防では、本発明の方法は被験体での外因性インスリン投与の必要性を減少させる)。さらに、本発明の方法は、好都合に、治療用抗体、および、特に、抗T細胞(例えば抗TCR)抗体の投与に以前に伴ったサイトカイン放出症候群の発生率を減少させるか、またはその発生をなくす。
【００４７】
特定の実施形態では、T細胞悪性腫瘍ではない(例えば、自己免疫疾患または障害である) T細胞媒介性疾患または障害の予防または治療での使用のための本発明の抗体は、1種以上のエフェクターリガンドに対する結合の減少または無効を示すFcドメインを含む。特定の実施形態では、T細胞悪性腫瘍ではない(例えば、自己免疫疾患または障害である) T細胞媒介性疾患または障害の予防または治療での使用のための本発明の抗体はFcドメインを含まない。他の実施形態では、T細胞悪性腫瘍ではない(例えば、自己免疫疾患または障害である) T細胞媒介性疾患または障害の予防または治療での使用のための本発明の抗体は、コントロール抗体と比べて、1種以上のエフェクターリガンドに対するFcドメインの結合を減少させるかまたは無効にするように改変されているFcドメインを含む。そのような改変には、非限定的に、コントロールFcドメインと比べてFcドメインのグリコシル化パターンを改変するアミノ酸改変(置換、挿入または欠失を含む)および、1種以上のFcRに対するFcドメインの結合を減少させるかまたは無効にするアミノ酸改変が含まれる。そのような改変は、1種以上のエフェクターリガンドに対するポリペプチドの結合を減少させるかまたは無効にする本明細書中に記載されかつ/または当技術分野で公知の任意の改変から選択してよい。
【００４８】
他の実施形態では、本発明は、該疾患または障害を発症する素因があるが、まだその症状を経験していないかまたは当技術分野で許容される基準(例えば、I型糖尿病では、American Diabetes Associationによって確立された基準にしたがう診断: 例えばMayfield et al., et al., 2006, Am. Fam. Physician 58:1355-1362 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと)にしたがって該疾患または障害と診断された被験体での自己免疫疾患または障害の発症を予防または遅延する方法を提供する。他の実施形態では、本発明の抗体の投与は、障害の発症および/または発症を予防し、障害の症状の発症を予防し、かつ/または該障害の陽性診断を、類似の臨床パラメータを有する、治療を受けなかった被験体と比べて2か月、4か月、6か月、8か月、10か月、12か月、15か月、18か月、21か月、または24か月遅延させる。
【００４９】
本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントの投与は自己免疫疾患または障害の発症を遅延させるか、または、いったん診断可能な疾患または障害が生じたら、自己寛容を誘導するかまたは回復させ、それによって疾患進行を減速させるか、または該疾患の症状を治療する必要性を減少および/または遅延させることができる。さらに、本発明は、抗TCR抗体での単一ラウンドの治療または6か月毎、9か月毎、12か月毎、15か月毎、18か月毎、または24か月毎のラウンドの治療(好ましくは、抗TCR抗体でのいかなる中間の治療も行わない)が、以前のラウンドの治療または第1ラウンドの治療の6か月、9か月、12か月、15か月、18か月、または24か月後に標準的方法によって測定された場合に、該疾患または障害の臨床進行を生じさせないか、または最小の臨床進行しか生じさせないような治療方法を提供する。特定の実施形態では、抗TCR抗体での単一ラウンドの治療または6か月毎、9か月毎、12か月毎、15か月毎、18か月毎、または24か月毎のラウンドの治療(好ましくは、抗ヒトTCR抗体でのいかなる中間の治療も行わない)は、患者での自己免疫疾患または障害の1種以上の臨床指標を、以前のラウンドの治療または第1ラウンドの治療の6か月、9か月、12か月、15か月、18か月、または24か月後の時点で治療前のレベルと比較して約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%または約70%減少させる。他の実施形態では、単一ラウンドの治療または6か月毎、9か月毎、12か月毎、15か月毎、18か月毎、または24か月毎に反復されるラウンドの治療での本発明のTCR抗体での治療後(好ましくは、抗ヒトTCR抗体でのいかなる中間の治療も行わない)、患者での自己免疫疾患の1種以上の臨床指標は、以前のラウンドの治療または第1ラウンドの治療の6か月、9か月、12か月、15か月、18か月、または24か月後の時点で治療前のレベルと比較された場合に、約0.5%、約1%、約2.5%、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、または約50%しか増加しない。他の実施形態では、本発明の方法にしたがうTCR抗体での単一ラウンドの治療または6か月毎、9か月毎、12か月毎、15か月毎、18か月毎、または24か月毎のラウンドの治療後(好ましくは、TCR抗体でのいかなる中間の治療も行わない)、患者の自己免疫疾患の1種以上の臨床指標の平均は、類似の臨床パラメータで慣用の治療を開始して同一量の期間後に慣用の治療を施された患者の同一の指標の平均のほんの約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、または約80%である。該レベルは、以前のラウンドの治療または第1ラウンドの治療の6か月、9か月、12か月、15か月、18か月、または24か月後の時点で測定された。
【００５０】
特定の実施形態では、自己免疫性障害、または自己免疫性障害の素因の発現についての診断は、被験体の末梢血および/または免疫不全の標的組織中の、ドナー特異的抗原を認識する細胞傷害性T-リンパ球(「CTL」)(すなわち自己反応性CTL)の検出に基づく。特定の実施形態では、本発明の抗TCR抗体は、イムノスポットアッセイ(例えばELISPOT)によって測定された場合に、治療前の状態と比べて、被験体の自己反応性CTLの絶対数、または割合の少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも35%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、または少なくとも85%の減少を達成するように投与される。該測定は、以前の治療の6か月、9か月、12か月、15か月、18か月、または24か月後の時点で行われる。
【００５１】
本発明はまた、併用療法の方法を提供する。本発明の方法は、自己免疫疾患の治療または改善のために投与される標準的免疫抑制剤および/または抗炎症性治療などの特定の適応に関する任意の標準的治療と組み合わせて実行することができる。例えば、1型糖尿病の治療では、本発明のTCR抗体療法を、非限定的に、インスリン、エクセナチド、プラムリンチドまたはそれらの組み合わせの投与などの糖尿病に関する他の療法とともに施すことができる。多発性硬化症の治療では、本発明のTCR抗体療法を、非限定的に、ベータインターフェロン(例えば、AVONEX(登録商標)、BETASERON(登録商標)、REBIF(登録商標))、免疫抑制剤(例えばミトキサントロン)、ミエリン塩基性タンパク質コポリマー1 (例えばCOPAXONE(登録商標))、またはそれらの組み合わせの投与などの多発性硬化症の治療のための当技術分野で公知の他の療法とともに施すことができる。本発明のTCR抗体は、さらに、他の療法、例えば抗IL-2抗体、サイトカインアンタゴニスト、およびステロイド療法(例えば、非限定的に、糖質コルチコイド、デキサメタゾン、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、アザルフィジン、など)、非ステロイド性抗炎症剤(NSAIDS)、例えば、非限定的にアスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン、インドメタシン、ケトロラク(ketolorac)、オキサプロジン、ナブメトン、スリンダク、トルメンチン(tolmentin)、ナプロキセン、またはケトプロフェン、免疫抑制剤、例えば、メトトレキセートまたはシクロスポリン、およびTNF-αインヒビター、例えば、非限定的に、エタネルセプトおよびインフリキシマブとともに投与することができる。本発明の特定の実施形態では、本発明の方法を使用して、従来の治療に不応性になっている被験体を治療する。特定の実施形態では、自己免疫疾患または障害を特徴付ける1種以上の抗原(すなわち、該自己免疫疾患または障害を有する患者に見出される自己抗体(すなわち自己反応性抗体)に結合している抗原)と組み合わせて抗TCR抗体を投与する。例えば、1型糖尿病の治療では、島細胞抗原、例えばGADおよびIA-2と組み合わせて本発明の抗体を投与することができ; 多発性硬化症の治療では、1種以上の推定自己抗原αB-クリスタリン、S100β、プロテオリピドタンパク質(PLP)および/またはミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)と組み合わせて本発明の抗体を投与することができる。
【００５２】
本発明は、治療剤、例えば、異種ポリペプチド(すなわち無関係のポリペプチド; またはその部分、好ましくは少なくとも10、少なくとも20、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90または少なくとも100アミノ酸のポリペプチド)に組換えによって融合されたかまたは化学的にコンジュゲート(共有結合性コンジュゲーションおよび非共有結合性コンジュゲーションの両者を含む)されて融合タンパク質を形成している抗体を包含する。融合は、必ずしも直接である必要ではなく、リンカー配列経由または化学的コンジュゲーション経由で存在してもよい。本発明の抗体を使用して、例えば、特定の細胞表面受容体(すなわちTCR)に特異的な本発明の抗体または抗原結合性フラグメントに治療剤を融合させるかまたはコンジュゲートすることによってin vitroまたはin vivoで治療剤を特定の細胞タイプ(例えばT細胞)にターゲティングすることができる。治療用抗体またはその抗原結合性フラグメントは、当技術分野で公知の方法を使用するin vitroイムノアッセイおよび精製方法で使用してもよい。例えばPCT公開番号WO 93/21232; EP 439,095; Naramura et al., Immunol. Lett., 39:91-99, 1994; U.S. Pat. No. 5,474,981; Gillies et al., PNAS, 89:1428-1432, 1992; およびFell et al., J. Immunol., 146:2446-2452, 1991 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。本発明の方法にしたがって使用するための治療剤は、従来の化学的治療剤(例えば化学療法剤)に制限されると解釈されるべきではなく、生物学的応答を改変または変化させるかさせないペプチド、薬物部分、放射性物質、大環状キレート剤、およびsiRNAを含んでよい。非限定的な例では、ポリペプチドには、アルブミン、プロタミン、アルブミン相互作用タンパク質(例えば、gp60、gp30、gp18)、プロテインA、Gタンパク質、タンパク質導入ドメイン(例えばBogoyevitch et al., 2002, DNA Cell Biol 12:879-894 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと)、毒素、細胞毒、または抗体分子の部分(例えば、Fcドメイン、CH1ドメイン、CH2ドメイン、CH3ドメイン、ヒンジドメイン、CLドメイン、など)が含まれ; 前記放射性核種には、標識用に(すなわちin vivoまたはin vitroで検出可能なシグナルを生じさせる)当技術分野で公知でかつ/または治療効果を生じさせる(例えば、125I、131I、14C、など)放射性核種(例えば、アルファ-、ベータ-、ガンマ-放射体、など)が含まれ; 前記大環状キレート剤には、ラジオメタルイオン(radiometal ions)をコンジュゲートするために当技術分野で公知のもの(例えばDOTA)が含まれる。
【００５３】
好ましい実施形態では、患者は、21歳未満、18歳、15歳未満、12歳未満、9歳未満、または5歳未満であるか、または乳児期〜3歳、2〜5歳、5〜9歳、9〜12歳、12〜20歳である。他の実施形態では、患者は成人である。
【００５４】
本発明のTCR抗体は、例えばボーラス注入によって1回の治療過程として、または例えば静脈内投与によって長期間にわたって、投与することができる。本発明の抗体は、ボーラスまたは一連のボーラスとして投与することができる。そのようなボーラスは、連続するボーラス投与の間に、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、24、26、28、30日、またはそれ以上を有する、時間差の時間経過にわたって送達することができる。特定の実施形態では、本発明のTCR抗体を治療方式の部分として投与し、ここに、抗TCR抗体の複数回投与は、治療方式あたりトータルで例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、または14回の投与に関して複数の日にわたって施される。複数回投与は、連日の投与である必要はなく、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、1.5週間または2週間間隔であってよい。特定の実施形態では、治療方式の1日目の用量は、治療用量の1/2、1/4、1/5、1/8、1/10、1/12、1/15または1/20であり、治療方式の後日に投与される用量は、治療方式の例えば3回目、4回目、5回目、6回目または7回目の投与までに必要な1日量に増加する。他の実施形態では、本発明の抗TCR抗体の最初2、3、4、または5回の投与で、用量は各後日ごとに1.5倍、2倍、3倍、または4倍増加する。特定の実施形態では、サイトカイン放出および他の悪影響の可能性を減少させるために、治療方式の最初の1、2、3、または4回の投与またはすべての投与を静脈内投与によって、ボーラス注入と比べてゆっくり施す。例えば、約5分間、約15分間、約30分間、約45分間、約1時間、約2時間、約4時間、約6時間、約8時間、約10時間、約12時間、約14時間、約16時間、約18時間、約20時間、または約22時間にわたって個別の投与を施してよい。特定の実施形態では、例えば20〜24時間の期間にわたってゆっくり注入することによって投与を施す。特定の実施形態では、ポンプによって投与量を注入し、好ましくは注入の進行に応じて投与される抗体の濃度を増加させる。あるいは、トータルの1日量を2以上の等しい部分に分け、6、8、10または12時間間隔でのその日にわたるボーラス注入として投与して、抗体の投与によって引き起こされるサイトカイン放出のレベルを減少させてよい。他の実施形態では、用量を増加させながら、トータルの1日量のフラクションセットを投与する。他の実施形態では、連続した一定の日数で治療方式の投与を施し、いかなる投与も施さない一定の日数が続き、連続した一定の日数で施される投与が再び続き、トータルで例えば14 (または、例えば、6、7、8、9、10、11、12、13、15、16、17、18、19または20)回の投与が施されるまで続く。例えば、治療方式の1つの1日目、2日目、3日目および4日目の投与を連続4日にわたって施し、次いでいかなる投与も行わない3日間であり、次いで5、6、7および8日目の投与を施し、次いで再び投与を行わない3日間であり、次いで9、10、11、12日目の投与、3日間オフ、そして最後に13および14日目の投与を行う。
【００５５】
特定の実施形態では、静脈内投与される場合の抗TCR抗体のトータルの1日量との薬理学的等価性を提供する静脈内投与以外の様式を使用して、本発明の抗体をその必要がある被験体に投与する。本発明は、さらに、低用量の抗TCR抗体を患者に慢性的に投与する方法および場合により臨床パラメータに応じて、初回治療の約6か月、9か月、12か月、18か月、2年、3年または5年後の1以上の追加のラウンドの抗TCR抗体治療方式を患者に施すか、または場合により臨床パラメータに応じて、抗TCR抗体での、約6か月、9か月、12か月、18か月、2年、3年または5年毎の別のラウンドの治療を施す方法を想定する。
【００５６】
本発明の抗体は、免疫系を調節するために有効な量で投与する。当業者は、適切な投与時間経過および量を決定するために、適切な用量を決定する公知の方法および本明細書の教示内容を用いることができる。特定の実施形態では、1 pg/kg〜20,000 pg/kg、10 pg/kg〜2,000 pg/kgまたは10 pg/kg〜1,000 pg/kgの範囲の用量で本発明の抗体を投与する。
【００５７】
特定の実施形態では、当技術分野で周知の方法によって測定された場合に、T細胞上のT細胞受容体複合体の、特定レベルのコーティングおよびモジュレーションの組み合わせを達成するように抗ヒトTCR抗体を投与する。例えばU.S.特許出願公開US 2003/0108548 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)の実施例11を参照のこと。特定の実施形態では、投薬治療方式によって、少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、95%または100%のT細胞受容体コーティングおよびモジュレーションの組み合わせが達成され、特定の実施形態では、検出可能な遊離の抗ヒトTCR抗体はほとんど〜まったく伴わない(例えば、当技術分野で公知の標準的方法によって患者の血液中で200 ng/mL未満の薬物しか検出されない)。
【００５８】
特定の実施形態では、抗ヒトTCR抗体を1日量単位で数日間投与するのではなく、4時間、6時間、8時間、10時間、12時間、15時間、18時間、20時間、24時間、30時間または36時間にわたる連続様式での注入によって投与する。注入は一定であるか、または、例えば注入の最初の1、2、3、5、6、または8時間は低用量で出発し、その後、高用量に増加する。注入の経過にわたって、患者は、例えば上記の複数回投与治療方式で投与される量と等しい用量を服用する。特に、注入の速度および持続時間は、投与後の被験体中の遊離抗TCR抗体のレベルを最小にするように設計される。特定の実施形態では、遊離抗TCR抗体のレベルは200 ng/ml遊離抗体を超えないべきである。さらに、注入は、少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、95%または100%のT細胞受容体コーティングおよびモジュレーションの組み合わせを達成するように設計される。
【００５９】
他の実施形態では、自己免疫疾患または障害を治療するか、管理するか、維持するか、予防するか、またはその進行を減速するか、またはその発症を遅延させるために、抗TCR抗体を慢性的に投与する。例えば、特定の実施形態では、上で述べた6〜14日の投与方式の代わりとして、または前記治療方式の実施後にその治療効果を増強または維持するために、月1回、月2回、月3回、週1回またはさらにより頻繁に低用量の抗TCR抗体を投与する。そのような低用量は、1μg/m2〜100μg/m2のいずれか、好ましくは、約5μg/m2、10μg/m2、15μg/m2、20μg/m2、25μg/m2、30μg/m2、35μg/m2、40μg/m2、45μg/m2、または50μg/m2であってよい。特定の実施形態では、上記のような投薬治療方式の実施後に、例えば該治療方式の治療効果を維持するために抗TCR抗体を慢性的に投与する。
【００６０】
他の実施形態では、抗TCR抗体投薬治療方式の実施後のいつかの時点で、好ましくは1以上の生理学的パラメータに基づいて被験体に再び投薬することができるが、必然的に行ってもよい。投薬治療方式の実施の6か月、9か月、1年、15か月、18か月、2年、30か月または3年後にそのような再投薬を施し、かつ/またはそのような再投薬の必要性を評価してよく、それには、6か月、9か月、1年、15か月、18か月、2年、30か月または3年毎に治療過程を施すことが含まれる。
【００６１】
特定の実施形態では、当技術分野で周知のように、CD4/CD8細胞比、CD8細胞カウント、CD4/CD3インバージョン(inversion)、CD4/CD25細胞比、CD4/FoxP3細胞比、CD4/CD40細胞比、CD4/IL-10細胞比、および/またはCD4/TGF-β細胞比の1つまたは組み合わせに基づいて、次のラウンドの抗TCR抗体治療を被験体に施す。次のラウンドの治療を実施するかどうかを決定するための他のパラメータには、本明細書中で記載されかつ/または当技術分野で公知の自己免疫疾患または障害に関する診断指標の出現または悪化が含まれる。
【００６２】
好ましい実施形態では、抗TCR抗体を非経口で、例えば、静脈内、筋肉内または皮下で投与するか、あるいは、経口投与する。抗ヒトTCR抗体は、徐放性製剤として投与してもよい。
【００６３】
本発明はまた、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドを包含する。一実施形態では、本発明は、TCR、好ましくはTCRの細胞外ドメイン、最も好ましくはTCRのα鎖の細胞外ドメインに特異的に結合する抗体またはその断片の重鎖または軽鎖をコードする単離された核酸配列を提供する。本発明はまた、該核酸を含むベクターに関する。本発明はさらに、重鎖をコードする第1の核酸分子および軽鎖をコードする第2の核酸分子を含むベクターを提供し、該重鎖および軽鎖は、TCR、好ましくはTCRの細胞外ドメイン、最も好ましくはTCRのα鎖の細胞外ドメイン、に特異的に結合する抗体またはその断片のものである。特定の1実施形態では、該ベクターは発現ベクターである。本発明はさらに、本発明の抗体のベクターまたは本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。
【００６４】
本発明は、本発明の抗体またはその断片の製造のための方法、特に、TCR、好ましくはTCRの細胞外ドメイン、最も好ましくはTCRのα鎖の細胞外定常ドメイン、に対する特異性を有する新規モノクローナル抗体(「MAb」)の製造のための方法を包含する。本発明の抗体またはその断片は、抗体の製造のための当技術分野で公知の任意の方法によって、特に、当技術分野で公知の、培養されたハイブリドーマ細胞からの分泌、化学合成または組換え発現技術によって製造することができる。特定の1実施形態では、本発明は、TCR特異的抗体を組換えによって製造する方法であって、(i) 培地中の該抗体の発現に好適な条件下で、異種プロモーターに作動可能に連結された第1の核酸分子および同一のまたは異なる異種プロモーターに作動可能に連結された第2の核酸を含む宿主細胞を培養し、該第1の核酸および第2の核酸は、TCR、好ましくはTCRの細胞外ドメイン、最も好ましくはTCRのα鎖の細胞外ドメイン、に特異的に結合する抗体またはその断片の重鎖および軽鎖をそれぞれコードする、ステップ; および(ii) 該培地から該抗体を回収するステップを含む方法に関する。
【００６５】
3.1  用語法
本明細書中で使用される用語「約(about)」または「約(approximately)」は、数値とともに使用される場合、参照される数値の1、5または10%以内または測定のために使用される方法に典型的な実験誤差内の任意の数値を表す。
【００６６】
本明細書中でポリペプチドに関して使用される用語「アナログ」とは、第2のポリペプチドと類似または同一の機能を有するが、第2のポリペプチドの類似または同一のアミノ酸配列を必ずしも含まないか、または第2のポリペプチドと類似または同一の構造を必ずしも有さないポリペプチドを表す。類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、以下の条件: (a) 第2のポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%または少なくとも99%同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド; (b) 少なくとも5個の連続するアミノ酸残基、少なくとも10個の連続するアミノ酸残基、少なくとも15個の連続するアミノ酸残基、少なくとも20個の連続するアミノ酸残基、少なくとも25個の連続するアミノ酸残基、少なくとも40個の連続するアミノ酸残基、少なくとも50個の連続するアミノ酸残基、少なくとも60個の連続するアミノ残基、少なくとも70個の連続するアミノ酸残基、少なくとも80個の連続するアミノ酸残基、少なくとも90個の連続するアミノ酸残基、少なくとも100個の連続するアミノ酸残基、少なくとも125個の連続するアミノ酸残基、または少なくとも150個の連続するアミノ酸残基の第2のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド; および(c) 第2のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%または少なくとも99%同一のヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、の少なくとも1つを満たす第2のポリペプチドを表す。第2のポリペプチドと類似の構造を有するポリペプチドとは、第2のポリペプチドと類似の二次、三次または四次構造を有するポリペプチドを表す。ポリペプチドの構造は、当業者に公知の方法によって決定することができ、該方法には、非限定的に、ペプチドシークエンシング、X線結晶構造解析、核磁気共鳴、円偏光二色性、および結晶学的電子顕微鏡検査が含まれる。
【００６７】
2つのアミノ酸配列または2核酸配列の同一性パーセントを決定するために、最適な比較のために配列をアライメントする(例えば、第2のアミノ酸または核酸配列との最適なアライメントのために第1のアミノ酸または核酸配列の配列中にギャップを導入することができる)。そして、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第1の配列中の位置が、第2の配列中の対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められている場合、該分子は該位置で同一である。2配列間の同一性パーセントは、該配列によって共有される同一の位置の数の関数である(すなわち、%同一性= (同一のオーバーラップ位置の数)/(位置の総数)x 100%)。一実施形態では、2配列は同じ長さである。
【００６８】
2配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することもできる。好ましい、2配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの非限定的な例は、Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873-5877のように改変された、Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264-2268のアルゴリズムである。該アルゴリズムはAltschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403のNBLASTおよびXBLASTプログラムに組み込まれている。BLASTヌクレオチド検索は、NBLASTヌクレオチドプログラムパラメータを、例えばスコア=100、ワード長=12にセットして実施し、本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を取得することができる。BLASTタンパク質検索は、XBLASTプログラムパラメータを、例えばスコア-50、ワード長=3にセットして実施し、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を取得することができる。比較のためのギャップ付きアライメントを得るために、Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402に記載のようにGapped BLASTを利用することができる。あるいは、PSI-BLASTを使用して、分子間の遠い関連性を検出する反復された検索を実施することができる(Id.)。BLAST、Gapped BLAST、およびPSI-Blastプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムの(例えばXBLASTおよびNBLASTの)デフォルトパラメータを使用することができる(例えばNCBIウェブサイトを参照のこと)。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、Myers and Miller, 1988, CABIOS 4:11-17のアルゴリズムである。該アルゴリズムはALIGNプログラム(バージョン2.0)に組み込まれている。ALIGNプログラムはGCG配列アライメントソフトウェアパッケージの1部分である。アミノ酸配列を比較するためにALIGNプログラムを利用する場合、PAM120ウエイト残基テーブル、ギャップ長ペナルティ12、およびギャップペナルティ4を使用することができる。
【００６９】
2配列間の同一性パーセントは、ギャップを許容するか許容せずに、上記の技術と類似の技術を使用して決定することができる。同一性パーセントの算出では、典型的に正確な適合のみをカウントする。
【００７０】
本明細書中で非タンパク質性アナログに関して使用される用語「アナログ」とは、第1の有機または無機分子と類似または同一の機能を有し、かつ第1の有機または無機分子と構造的に類似する第2の有機または無機分子を表す。
【００７１】
本明細書中で使用される用語「アンタゴニスト」および「アンタゴニスト群」とは、別の分子の機能、活性および/または発現をブロック、阻害、低減または中和する任意のタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片、大分子、または小分子(10 kD未満)を表す。種々の実施形態では、アンタゴニストは、別の分子の機能、活性および/または発現を、リン酸緩衝食塩水(PBS)などのコントロールと比べてかつ当技術分野で公知でかつ/または本明細書中に記載の任意の方法によって測定された場合に、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%または少なくとも99%低減する。
【００７２】
本明細書中で使用される用語「抗体」および「抗体群」とは、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖Fv (scFv)、一本鎖抗体、Fab断片、F(ab')断片、ジスルフィド結合Fv (sdFv)、イントラボディ、ミニボディ、ダイアボディおよび抗イディオタイプ(抗Id)抗体(例えば、本発明の抗体に対する抗Id抗体を含む)、および上記のいずれかのエピトープ結合断片を表す。用語「抗体」および「抗体群」はまた、Johnson et al.のU.S.特許出願公開US 2007/0004909で開示されるものなどの共有結合性ダイアボディ、およびいずれもJohnson et al.のU.S.特許出願番号61/019,051および12/138,867に開示されるものなどのIg-DARTSを表す(各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)。特に、抗体には、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち抗原結合部位を含む分子が含まれる。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY)、クラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2)またはサブクラスのものであってよい。
【００７３】
本明細書中で使用される用語「誘導体」とは、ポリペプチドの関連で、アミノ酸残基置換、欠失または付加の導入によって改変されているアミノ酸配列を含むポリペプチドを表す。本明細書中で使用される用語「誘導体」はまた、すなわち該ポリペプチドに任意のタイプの分子を共有結合によって取り付けることによって改変されているポリペプチドを表す。例えば、限定のためではないが、抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護/封鎖基による誘導体化、タンパク質分解による切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結、などによって改変することができる。誘導体ポリペプチドは、当業者に公知の技術を使用する化学修飾によって製造することができ、該技術には、非限定的に特定の化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝的合成、などが含まれる。さらに、誘導体ポリペプチドは1以上の非従来型のアミノ酸を含んでよい。ポリペプチド誘導体は、その派生元のポリペプチドと類似または同一の機能を有する。
【００７４】
本明細書中で使用される用語「障害」および「疾患」は、互換的に使用され、被験体の状態を表す。特に、用語「自己免疫疾患」は用語「自己免疫性障害」と互換的に使用され、自身の細胞、組織および/または器官に対する被験体の免疫反応によって引き起こされる細胞、組織および/または器官傷害によって特徴付けられる、被験体の状態を表す。
【００７５】
本明細書中で使用される用語「エピトープ」とは、動物で、好ましくは哺乳動物で、最も好ましくはヒトで抗原性または免疫原性活性を有する、ポリペプチドまたはタンパク質の断片を表す。免疫原性活性を有するエピトープは、動物での抗体応答を誘発する、ポリペプチドまたはタンパク質の断片である。抗原性活性を有するエピトープは、当業者に周知の任意の方法によって、例えばイムノアッセイによって測定された場合に、抗体が免疫特異的に結合するポリペプチドまたはタンパク質の断片である。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。
【００７６】
本明細書中で使用される用語「Fc領域」は、IgG重鎖のC末端領域を定義するために使用される。境界はわずかに変動するが、ヒトIgG重鎖Fc領域はCys226〜カルボキシ末端の範囲であるように定義される。IgGのFc領域は2つの定常ドメイン、CH2およびCH3を含む。ヒトIgG Fc領域のCH2ドメインは、通常、アミノ酸231〜アミノ酸341におよぶ。ヒトIgG Fc領域のCH3ドメインは、通常、アミノ酸342〜アミノ酸447におよぶ。IgGのFc領域は2つの定常ドメイン、CH2およびCH3を含む。ヒトIgG Fc領域のCH2ドメイン(「Cγ2」ドメインとも称される)は、通常、アミノ酸231〜340におよぶ。CH2ドメインは、別のドメインと密接にペアになっていない点で独特である。むしろ、2つのN結合型分岐糖鎖が、インタクトのネイティブIgGの2つのCH2ドメインの間に挿入される。
【００７７】
本明細書を通して、IgG重鎖の残基のナンバリングは、参照により明示的にここに組み入れられるKabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991)のようなEUインデックスのナンバリングに一致する。「KabatのようなEUインデックス」とは、ヒトIgG1 EU抗体のナンバリングを表す。本発明のIgG重鎖の残基およびKabatのようなEUインデックスの残基を、当技術分野で公知の方法にしたがってアライメントして、対応する残基を特定する。
【００７８】
「ヒンジ領域」は、一般に、ヒトIgG1のGlu216〜Pro230におよぶ領域として定義される。重鎖間S-S結合を形成する最初および最後のシステイン残基を同じ位置に置くことによって他のIgGアイソタイプのヒンジ領域をIgG1配列とアライメントすることができる。
【００７９】
本明細書中で使用される用語「断片(フラグメント)」とは、第2のポリペプチドのアミノ酸配列の少なくとも5個の連続するアミノ酸残基、少なくとも10個の連続するアミノ酸残基、少なくとも15個の連続するアミノ酸残基、少なくとも20個の連続するアミノ酸残基、少なくとも25個の連続するアミノ酸残基、少なくとも40個の連続するアミノ酸残基、少なくとも50個の連続するアミノ酸残基、少なくとも60個の連続するアミノ残基、少なくとも70個の連続するアミノ酸残基、少なくとも連続する80個のアミノ酸残基、少なくとも連続する90個のアミノ酸残基、少なくとも連続する100個のアミノ酸残基、少なくとも連続する125個のアミノ酸残基、少なくとも150個の連続するアミノ酸残基、少なくとも連続する175個のアミノ酸残基、少なくとも連続する200個のアミノ酸残基、または少なくとも連続する250個のアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを表す。特定の実施形態では、断片は、第2のポリペプチドの少なくとも1つの機能を保持する点で機能的断片である。
【００８０】
本明細書中で使用される用語「融合タンパク質」とは、第1のタンパク質またはその機能的断片、アナログもしくは誘導体のアミノ酸配列、および異種タンパク質(すなわち、第1のタンパク質またはその機能的断片、アナログもしくは誘導体と異なる第2のタンパク質またはその機能的断片、アナログもしくは誘導体)のアミノ酸配列を含むポリペプチドを表す。特定の実施形態では、融合タンパク質はTCR結合分子および異種タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを含む。
【００８１】
本明細書中で使用される用語「宿主細胞」とは、核酸分子でトランスフェクトされた特定の被験細胞およびそのような細胞の子孫または潜在的子孫を表す。そのような細胞の子孫は、後の世代で生じる突然変異もしくは環境影響または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みに起因して、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一でなくてよい。
【００８２】
本明細書中で使用される用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」とは、互いに少なくとも60% (65%、70%、好ましくは75%、80%または85%、より好ましくは90%または95%)同一のヌクレオチド配列が典型的に互いにハイブリダイズしたままである、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を説明する。そのようなストリンジェントな条件は当業者に公知であり、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6に見出せる。非限定的な1例では、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、6X塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウム(SSC)で約45℃でのハイブリダイゼーション、およびその後の約68℃での0.1XSSC、0.2% SDS中の1回以上の洗浄である。好ましい非限定的な例では、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、約45℃での6XSSC中のハイブリダイゼーション、およびその後の50〜65℃での0.2 X SSC、0.1% SDS中の1回以上の洗浄(すなわち50℃、55℃、60℃または65℃での1回以上の洗浄)である。本発明の核酸には、これらの条件下でAまたはTヌクレオチドのみからなるヌクレオチド配列にのみハイブリダイズする核酸分子は含まれないことが理解される。
【００８３】
本明細書中で使用される用語「免疫調節剤」およびそのバリエーションは、宿主の免疫系を調節(modulate)する物質を表す。特定の実施形態では、免疫調節剤は免疫抑制剤である。特定の他の実施形態では、免疫調節剤は免疫賦活剤である。免疫調節剤には、非限定的に、小分子、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質、抗体、無機分子、模倣剤、および有機分子が含まれる。
【００８４】
本明細書中で使用される用語「抗原に免疫特異的に結合する」および類似の用語は、抗原または断片に特異的に結合し、かつ他の抗原に特異的に結合しないペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質および抗体またはその断片を表す。抗原に免疫特異的に結合するペプチドまたはポリペプチドは、例えば、イムノアッセイ、BIAcore、または当技術分野で公知の他のアッセイによって測定された場合に、低い親和性で他のペプチドまたはポリペプチドに結合してよい。抗原に免疫特異的に結合する抗体または断片は関連抗原と交差反応性であってよい。好ましくは、抗原に免疫特異的に結合する抗体または断片は他の抗原と交差反応しない。
【００８５】
本明細書中で使用される用語「TCRに免疫特異的に結合する」および類似の用語は、TCR複合体を形成する1種以上のポリペプチド、またはその断片に特異的に結合し、かつ他のポリペプチドに特異的に結合しないペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質および抗体またはその断片を表す。好ましい実施形態では、本発明の抗TCR抗体は、検出可能な程度にCD3に結合しない。TCRポリペプチドに免疫特異的に結合するペプチドまたはポリペプチドは、例えば、イムノアッセイ、BIAcore、または当技術分野で公知の他のアッセイによって測定された場合に、低い親和性で他のペプチドまたはポリペプチドに結合してよい。TCRポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体または断片は関連抗原と交差反応性であってよい。好ましくは、TCRポリペプチド、またはその断片に免疫特異的に結合する抗体または断片は他の抗原と交差反応しない。TCRポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体または断片は、例えば、イムノアッセイ、BIAcore、または当業者に公知の他の技術によって特定することができる。抗体またはその断片は、ラジオイムノアッセイ(RIA)および酵素結合免疫吸着検定(ELISA)などの実験技術を使用して測定された場合に、任意の交差反応性抗原に対してより、高い親和性でTCRポリペプチドに結合する場合にTCRポリペプチドに特異的に結合する。抗体特異性に関する考察に関して、例えばPaul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336を参照のこと。
【００８６】
本明細書中で使用される用語「組み合わせて」とは、2種以上の予防および/または治療剤の使用を表す。用語「組み合わせて」の使用は、疾患または障害を有する被験体に予防および/または治療剤を投与する順序を制限しない。疾患または障害を有する被験体に対する第2の予防または治療剤(第1の予防または治療剤と異なる)の投与の前(例えば、5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、8週間、または12週間前)に、該投与と同時に、または該投与の後(例えば、5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、8週間、または12週間後)に第1の予防または治療剤を投与することができる。
【００８７】
本明細書中で使用される用語「単離された」とは、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体の関連で、その由来元の細胞または組織供給源由来の細胞性物質または混入タンパク質を実質的に含まないか、または化学的に合成された場合に化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まないペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体を表す。言語「細胞性物質を実質的に含まない」には、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体が、その単離元または組換え生産元の細胞の細胞成分から分離されている、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体の調製物が含まれる。ゆえに、細胞性物質を実質的に含まないペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体には、約30%、20%、10%、または5% (乾燥重量単位で)未満の異種タンパク質(本明細書中で「混入タンパク質」とも称される)しか有さないペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体の調製物が含まれる。ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体が組換えによって製造される場合、それもまた、好ましくは、培養培地を実質的に含まず、すなわち、培養培地はタンパク質調製物の容量の約20%、10%、または5%未満にしか相当しない。ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体が化学合成によって製造される場合、それは、好ましくは、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まず、すなわち、それは、該ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離されている。したがってペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体のそのような調製物は、目的のペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体以外の、約30%、20%、10%、5% (乾燥重量単位で)未満の化学的前駆体または化合物しか有さない。好ましい実施形態では、TCR結合分子は単離されている。別の好ましい実施形態では、抗ヒトTCR抗体は単離されている。
【００８８】
本明細書中で使用される用語「単離された」とは、核酸分子の関連で、該核酸分子の天然供給源中に存在する他の核酸分子から分離された核酸分子を表す。さらに、cDNA分子などの「単離された」核酸分子は、他の細胞性物質、または組換え技術によって製造される場合の培養培地を実質的に含まないか、または化学的に合成される場合に化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まず、かつ、例えば、核酸ライブラリー中の他のクローンから単離されたcDNAまたは他のゲノムDNA分子を含まない。好ましい実施形態では、TCR結合分子をコードする核酸分子は単離されている。別の好ましい実施形態では、抗ヒトTCR抗体をコードする核酸分子は単離されている。
【００８９】
本明細書中で使用される用語「非応答性」および「不応性」は、自己免疫性障害に関連する1種以上の症状を軽減するために臨床的に適切でない、現在利用可能な自己免疫性障害の予防または治療剤で治療された患者を説明する。典型的に、そのような患者は、重度の、持続的に活動性の疾患を患い、自己免疫性障害に関連する症状を改善するための追加の療法を必要とする。
【００９０】
本明細書中で使用される用語「核酸」および「ヌクレオチド配列」には、DNA分子(例えば、cDNAまたはゲノムDNA)、RNA分子(例えばmRNA)、DNAおよびRNA分子の組み合わせまたはハイブリッドDNA/RNA分子、およびDNAまたはRNA分子のアナログが含まれる。そのようなアナログは、例えばヌクレオチドアナログを使用して作製することができ、該ヌクレオチドアナログには、非限定的に、イノシンまたはトリチル化塩基が含まれる。そのようなアナログは、例えばヌクレアーゼ抵抗性または細胞膜を横切る高い能力などの有益な属性を分子に加える改変された主鎖を含むDNAまたはRNA分子を含むこともできる。核酸またはヌクレオチド配列は一本鎖、二本鎖であってよく、一本鎖および二本鎖の両部分を含んでよく、三本鎖部分を含んでよいが、好ましくは二本鎖DNAである。
【００９１】
本明細書中で使用される用語「予防剤」および「予防剤群」とは、自己免疫疾患の1種以上の症状の予防、治療、管理または改善に使用できる、TCR結合分子、例えば、抗体またはその抗原結合性フラグメントを表す。好ましい実施形態では、用語「予防剤」とは、抗TCR抗体(例えば、BMA 031およびその変異体および誘導体)を表す。
【００９２】
本明細書中で使用される用語「予防有効量」とは、疾患または障害の1種以上の症状の発生、再発または発症を予防するために十分なTCR結合分子の量を表す。
【００９３】
本明細書中で使用される用語「予防する(prevent)」、「preventing」および「prevention」とは、予防または治療剤の投与に起因する、被験体の疾患または障害、例えば自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍の1種以上の症状の再発または発症の予防を表す。
【００９４】
本明細書中で使用される「プロトコール」には、投薬スケジュールおよび投薬治療方式が含まれる。本明細書中のプロトコールは使用方法であり、それには、予防および治療プロトコールが含まれる。「投薬治療方式」または「治療過程」には、1〜20日にわたる治療または予防剤の数回の投与の実施が含まれる。
【００９５】
本明細書中で使用されるフレーズ「副作用」は、予防または治療剤の望ましくない影響および悪影響を包含する。悪影響は常に望ましくないが、望ましくない影響は必ずしも有害ではない。
【００９６】
本明細書中で使用される用語「被験体」および「患者」は互換的に使用される。本明細書中で使用される用語「被験体」および「被験体群」とは、動物、好ましくは非霊長類(例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、およびマウス)および霊長類(例えば、サルまたはヒト)を含む哺乳動物、より好ましくはヒトを表す。
【００９７】
本明細書中で使用される用語「相乗的」とは、個別に投与された場合の該組み合わせ中の薬剤の相加効果より有効な予防または治療剤の組み合わせを表す。予防または治療剤の組み合わせの相乗効果は、低用量の1種以上の薬剤の使用および/または自己免疫性障害を有する被験体への該薬剤の低頻度の投与を可能にする。低用量の予防または治療剤を利用しかつ/または該薬剤を低頻度で投与する能力は、自己免疫性障害の予防または治療での該薬剤の効力を減少させることなく、被験体(subjected)への該薬剤の投与に関連する毒性を減少させる。さらに、相乗効果は、自己免疫性障害の予防または治療での薬剤の効力を向上させることができる。最後に、予防または治療剤の組み合わせの相乗効果は、単剤療法に関連する有害な副作用または望ましくない副作用を回避するかまたは減少させることができる。
【００９８】
本明細書中で使用される用語「治療剤」および「治療剤群」とは、疾患または障害の1種以上の症状の予防、治療、管理または改善に使用できるTCR結合分子を表す。好ましい実施形態では、用語「治療剤」とは、ヒトまたはヒト化抗TCR抗体(例えば、ヒト化BMA 031およびその変異体または誘導体)を表す。
【００９９】
本明細書中で使用される用語「治療有効量」とは、障害の1種以上の症状の改善を生じさせるために十分な治療剤の量を表す。糖尿病に関して、治療有効量は、好ましくは、被験体の平均の1日のインスリン必要量を少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%減少させる治療剤の量を表す。
【０１００】
本明細書中で使用される用語「治療する(treat)」、「treatment」および「treating」とは、1種以上のTCR結合分子の投与に起因する、自己免疫性または炎症性障害に関連する1種以上の症状の改善を表す。特に、該用語は、1種以上の抗TCR抗体の投与に起因する、自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍に関連する1種以上の症状の改善を表す。
【０１０１】
4.  図面の説明
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１】図１は、抗TCR抗体由来の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す。配列番号１はマウスBMA 031の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列である。
【図２】図２は、抗TCR抗体由来の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す。配列番号７はマウスBMA 031の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列である。
【図３】図３は、BMA 031可変重鎖および軽鎖CDRのアミノ酸配列を示す。
【図４】図４は、コラーゲン誘発関節炎を有するマウスの平均の足の厚みを示す。モノクローナル抗体H57 (ハムスター抗マウスTCR抗体)、H57 AA (「ala-ala」突然変異を有するH57)または2C11 (マウス抗CD3抗体)でマウスを処置した。
【図５】図５は、図４に示される処置群由来の雌性マウスでの平均の足の厚みを示す。
【図６】図６は、図４に示される処置群由来の雄性マウスでの平均の足の厚みを示す。
【図７】図７は、マウスEAEモデルで少なくとも1の麻痺スコアを示すマウスのパーセンテージを示す。未処置(n=6)と比較されたEAE誘発後の6〜10 (n=7)または10〜14 (n=7)日のそれぞれの日に50μgのマウス抗TCR抗体H57 AAでマウスを処置した。
【図８】図８は、抗TCR抗体での処置後の糖尿病性NODマウスの生存を示す。5日間にわたって50μg (n=8)または100μg (n=4)のマウス抗TCR抗体H57 AAでマウスを処置した。図８に示した日数は治療後の日数である。処置マウスの生存度を、PBSで処置された糖尿病性NODコントロール(n=10)の生存度と比較する。
【発明を実施するための形態】
【０１０３】
5.  発明の詳細な説明
本発明は、T細胞受容体(TCR)、好ましくはTCRα鎖の細胞外定常ドメインに、免疫特異的に結合する抗体を提供する。他の実施形態では、本発明の抗体はTCRのβ、γまたはδ鎖に結合し、特定の実施形態では、TCRのβ、γ、またはδ鎖の細胞外ドメインの定常領域に結合する。本発明の抗体は、インタクトのTCR複合体の部分としてのTCRのα、β、γまたはδ鎖に免疫特異的に結合するか、または個々のペプチドまたはその断片としてのα、β、γまたはδ鎖に結合することができる。
【０１０４】
好ましい実施形態では、本発明は、TCRのα鎖の定常領域に特異的に結合するか、またはさもなければ、T細胞のクローン起源にかかわらずα鎖に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供し; そのような実施形態では、本発明の抗体はTCRα鎖、およびゆえにα/βTCRを概して認識する(すなわち、汎特異的TCR抗体、および、特に、汎特異的TCRα鎖抗体である)。他の実施形態では、本発明は、TCRのβ鎖の定常領域に特異的に結合するか、またはさもなければ、T細胞のクローン起源にかかわらずβ鎖に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供し; そのような実施形態では、本発明の抗体はTCRβ鎖、およびゆえにα/βTCRを概して認識する(すなわち、汎特異的TCR抗体、および、特に、汎特異的TCRβ鎖抗体である)。さらに他の実施形態では、本発明は、TCRのγ鎖の定常領域に特異的に結合するか、またはさもなければ、T細胞のクローン起源にかかわらずγ鎖に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供し; そのような実施形態では、本発明の抗体はTCRγ鎖、およびゆえにγ/δTCRを概して認識する(すなわち、汎特異的TCR抗体、および、特に、汎特異的TCRγ鎖抗体である)。さらに他の実施形態では、本発明は、TCRのδ鎖の定常領域に特異的に結合するか、またはさもなければ、T細胞のクローン起源にかかわらずδ鎖に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供し; そのような実施形態では、本発明の抗体はTCRδ鎖、およびゆえにγ/δTCRを概して認識する(すなわち、汎特異的TCR抗体、および、特に、汎特異的TCRδ鎖抗体である)。
【０１０５】
特定の実施形態では、本発明は、TCRα鎖に汎特異的な抗体、またはその抗原結合性フラグメントを提供する。この実施形態にしたがう特定の例では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１(図１)および配列番号７(図２)に記載のマウス抗体BMA 031の重鎖または軽鎖由来の重鎖または軽鎖可変ドメイン、および/またはその誘導体または変異体を含む。他の実施形態では、本発明の抗体は、マウス抗体BMA 031、またはその変異体もしくは誘導体由来の1以上の重鎖および/または軽鎖CDRを含む。他の実施形態では、本発明の抗体、その抗原結合性フラグメントは、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列を有するVHドメイン(図１に記載される)および/または配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列を有するVLドメイン(図２に記載される)、またはそれらの変異体または誘導体を含む。他の実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１３または配列番号１４のアミノ酸配列を有するVH CDR1、配列番号１５のアミノ酸配列を有するVH CDR2、配列番号１６のアミノ酸配列を有するVH CDR3、配列番号１７のアミノ酸配列を有するVL CDR1、配列番号１８のアミノ酸配列を有するVL CDR2、配列番号１９のアミノ酸配列を有するVL CDR3および/またはそれらの変異体または誘導体の1種以上を含む。本発明はまた、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１および／または配列番号１２のアミノ酸配列に対して、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも99%同一のアミノ酸配列を含むTCR結合分子を包含する。
【０１０６】
代替の実施形態では、本発明にしたがって使用するためのTCR結合タンパク質は、非ヒト抗TCR抗体、例えば、マウスBMA 031由来の配列を有するVLおよび/またはVHドメインおよび/または1以上のCDR、および1種以上のヒトの免疫グロブリンのフレームワーク配列由来の1以上のフレームワーク領域を含む。CDRおよび他の配列の取得元になりうる多数の非ヒト抗TCRモノクローナル抗体が知られている(例えば、3H2906, IP26, T10B9, WT31, G-11, H-197, H-41, A-20, FL-189, H-20, H-250, C-17, H57, KJ1-26, KJ12-98, H28-710, UC3-10A6, GL3, 3H2928, 5K24, 3A10およびUC7-13D5 (例えばKubo et al., 1986, Mol Immunol 23:869-878; Itohara et al., 1989, PNAS USA 86:5094-5098; Kubo et al., 1989, J Immunol, 142:2736-2742; Waid et al., 1989, Am J Kidney Dis 14:61-70; Borst et al., 1990, Hum Immunol 29:175-188; Dent et al., 1990, Nature 343:714-719; Goodman et al., 1989, J Exp Med 170:1569-1581; Houlden et al., 1990, Cold Spring Harbor Symp Quant Biol 54:45およびKaraivanova et al., 1999, Hybridoma 18:497-503 (各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと; H57はATCC(登録商標)番号HB-218TMの下にATCC(登録商標)に寄託されている)。
【０１０７】
なんらかの目的で、BMA 031が結合する同一エピトープで、または少なくとも、BMA 031の結合をブロックするためにこのエピトープに十分に接近して、TCR受容体、またはその特定のペプチドに結合するTCR結合タンパク質を使用することが有益であると想定される。所望の結合特性を有する結合タンパク質を同定するためのエピトープマッピングおよび競合結合実験のための方法は、実験免疫学の技術分野の当業者に周知である。例えば、Harlow and Lane, 上記引用; Stahl et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-53; Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-19; Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15; Cheung et al., 1990, Virology 176:546-52; およびMoldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82を参照のこと。例えば、ELISAプレート上の抗原を捕獲するために抗体の一方を使用した後、第2の抗体が、捕獲された抗原に結合する能力を測定することによって2つの抗体が同一部位に結合するかどうかを決定することが可能である。エピトープ比較は、酵素、放射性核種またはフルオロフォアで、直接または間接的に第1の抗体を標識して、標識されていない第2の抗体が、細胞上、溶液中、または固相上の抗原に対する第1の抗体の結合を阻害する能力を測定することによって達成することもできる。
【０１０８】
以下で詳細に説明されるように、本発明のTCR結合タンパク質(例えば抗体)はヒト免疫グロブリンFc領域を含んでも含まなくてもよい。例えばscFv結合タンパク質中にはFc領域は存在しない。例えばヒトまたはヒト化四量体モノクローナルIgG抗体中にはFc領域が存在する。本発明の一部の実施形態では、TCR結合タンパク質は、改変されたエフェクター機能、例えば、未改変のFc領域(例えば、天然に存在するIgG1タンパク質のFc)と比較してFc受容体または補体C1成分などのエフェクターリガンドに対する減少した親和性を有するFc領域を含む。一実施形態では、Fc領域は、297位に対応するFc領域アミノ酸でグリコシル化されていない。そのような抗体はFcエフェクター機能を欠いている。
【０１０９】
ゆえに、本発明の一部の実施形態では、TCR結合タンパク質は、該結合タンパク質中のFcドメインの不存在のせいで、Fc受容体または補体C1成分などのエフェクターリガンドに対するFc媒介性結合を示さないが、他の事例では、結合またはエフェクター機能の欠如は抗体の定常領域の変化に起因する。
【０１１０】
特定の実施形態では、本発明の実施に使用できるTCR結合タンパク質には、マウスモノクローナル抗体BMA 031のCDR由来の(すなわちそれと同一または類似の配列を有する) CDR配列を含むタンパク質が含まれる。当技術分野で一般に公知の方法にしたがって、CDRコード配列を含むマウスBMA 031モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖可変領域をコードする相補的cDNAをクローニングおよびシークエンシングすることができる。BMA031のアミノ酸配列は本明細書中で提供され、配列番号１(VHに関して)および配列番号７(VLに関して)に指定される。マウス可変領域およびCDR配列を使用して、BMA 031 CDR由来の相補性決定領域を含む多数のキメラおよびヒト化モノクローナル抗体を製造および分析することができる。TCRおよび、特にTCRα鎖の細胞外定常ドメインに高親和性で結合し、かつ他の望ましい特性を有するヒト化抗体を特定するために、BMA 031由来のCDRを有するVH領域を含む抗体重鎖を製造し、BMA 031由来のCDRを有するVL領域を含む抗体軽鎖と(共発現によって)組み合わせて、分析のための四量体抗体を得る。得られた四量体抗体の特性は、当技術分野で公知でかつ/または本明細書中に記載の任意の方法によって評価することができる。BMA 031のもの由来のCDRを含むTCR結合タンパク質を本発明にしたがって使用して、自己免疫疾患および/またはT細胞悪性腫瘍の症状の1種を管理、治療、または改善することができる。
【０１１１】
当技術分野で公知でありかつ本明細書中に記載されるように、免疫グロブリン軽鎖および重鎖は、それらが会合して四量体抗体になる条件下で組換え発現させるか、またはin vitroでそのように組み合わせることができる。同様に、VLおよび/またはVHドメインの組み合わせを一本鎖抗体の形式で発現させることができ、VLおよび/またはVHドメインを含むさらに他のTCR結合タンパク質を公知の方法によって発現させることができる。ゆえに、BMA 031由来VLドメインをBMA 031由来VHドメインと組み合わせて新規TCR結合タンパク質を取得できることが理解される。
【０１１２】
本明細書中で提示される方法にしたがって誘導されるVLおよびVHドメインの配列は、親和性成熟などの当技術分野で公知の方法によってさらに改変することができる(Schier et al., 1996, J. Mol. Biol. 263:551-67; Daugherty et al., 1998, Protein Eng. 11:825-32; Boder et al., 1997, Nat. Biotechnol. 15:553-57; Boder et al., 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A 97:10701-705; Hudson and Souriau, 2003, Nature Medicine 9:129-39を参照のこと)。例えば、親和性成熟技術を使用してTCR結合タンパク質を改変して、親BMA 031と比べて、TCRに対して高い親和性を有するタンパク質を特定することができる。
【０１１３】
5.1  ヒト化抗体
好ましい実施形態では、本発明の抗TCR抗体はヒトまたはヒト化抗体である。ヒト化抗体は、あらかじめ決められた抗原に結合可能でかつヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域および非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するCDRを含む抗体、その変異体または断片である。ヒト化TCR特異的抗体は、すべてのまたは実質的にすべてのCDR領域が非ヒト免疫グロブリン(すなわちドナー抗体、例えばマウス抗TCR抗体BMA 031由来)のものに対応し、かつすべてのまたは実質的にすべてのフレームワーク領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、実質的にすべての少なくとも1つの、および典型的に2つの、可変ドメインを含んでよい。本発明のヒト化抗体は、典型的にヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域(Fc)の少なくとも1部分を含んでもよい。本発明のヒト化抗体の定常ドメインは、提案される抗体機能、特に必要なエフェクター機能に関して選択することができる。一部の実施形態では、本発明のヒト化抗体の定常ドメインはヒトIgA、IgE、IgGまたはIgMドメインである。特定の実施形態では、本発明のヒト化抗体が治療的使用のためのものであり、かつ抗体エフェクター機能が必要である場合、特にIgG1およびIgG3アイソタイプの、ヒトIgG定常ドメインを使用する。代替の実施形態では、本発明のヒト化抗体が治療のためのものであり、かつ抗体エフェクター機能が必要とされない場合、IgG2およびIgG4アイソタイプを使用する。
【０１１４】
本発明の抗体は、それが重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインのみを含む点で単ドメイン抗体であってよい。一部の実施形態では、抗体は軽鎖ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインをともに含む。他の実施形態では、抗体は、さらに、重鎖のCH1、ヒンジ、CH2、CH3、およびCH4領域の1つ以上を含んでよい。ヒト化抗体は、IgM、IgG、IgD、IgAおよびIgEを含む任意のクラスの免疫グロブリン、およびIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4を含む任意のアイソタイプから選択することができる。一部の実施形態では、ヒト化抗体が細胞傷害性活性を示すことが所望である場合、定常ドメインは補体結合定常ドメインであり、クラスは典型的にIgG1である。他の実施形態では、そのような細胞傷害性活性が望ましくない場合、定常ドメインはIgG2クラスの定常ドメインであってよい。ヒト化抗体は2以上のクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含んでよく、所望のエフェクター機能を最適化するために特定の定常ドメインを選択することは当技術分野の通常の技術の範囲内である。
【０１１５】
ヒト化抗体のフレームワークおよびCDR領域は親配列に正確に一致する必要はなく、例えば、ドナーCDRまたはコンセンサスフレームワークは、少なくとも1残基の置換、挿入または欠失によって該部位のCDRまたはフレームワーク残基がコンセンサスまたはドナー抗体と一致しないように突然変異させることができる。しかし、そのような突然変異は、好ましくは、大規模ではない。通常、少なくとも75%のヒト化抗体残基は親フレームワーク領域(FR)およびCDR配列の残基と一致し、より頻繁には90%であり、最も好ましくは95%を超える。ヒト化抗体は、当技術分野で公知の種々の技術を使用して製造することができ、該技術には、非限定的に、CDR移植(European Patent No. EP 239,400; International Publication No. WO 91/09967; およびU.S. Patent Nos. 5,225,539, 5,530,101, および5,585,089)、ベニアリング(veneering)またはリサーフェイシング(U.S. Patent Nos. 5,770,196; 5,776,866; 5, 821,123; および5,896,619; European Patent Nos. EP 592,106およびEP 519,596; Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805-814; およびRoguska et al., 1994, Proc Natl Acad Sci USA 91:969-973)、鎖シャフリング(U.S. Patent No. 5,565,332)、および例えばU.S. Patent Nos. 6,407,213, 5,766,886, 5,585,089, International Publication No. WO 9317105, Tan et al., 2002, J. Immunol. 169:1119-25, Caldas et al., 2000, Protein Eng. 13:353-60, Morea et al., 2000, Methods 20:267-79, Baca et al., 1997, J. Biol. Chem. 272:10678-84, Roguska et al., 1996, Protein Eng. 9:895-904, Couto et al., 1995, Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s-5977s, Couto et al., 1995, Cancer Res. 55:1717-22, Sandhu, 1994, Gene 150:409-10, Pedersen et al., 1994, J. Mol. Biol. 235:959-73, Jones et al., 1986, Nature 321:522-525, Riechmann et al., 1988, Nature 332:323, およびPresta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596で開示される技術が含まれる。フレームワーク領域中のフレームワーク残基を、CDRドナー抗体由来の対応する残基で置換して、抗原結合を改変し、好ましくは向上させることがよくある。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法によって、例えば抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定するためのCDRとフレームワーク残基の相互作用のモデリングおよび特定の位置での異常なフレームワーク残基を特定するための配列比較によって特定される。(例えばQueen et al., U.S. Patent No. 5,585,089; U.S. Publication Nos. 2004/0049014および2003/0229208; U.S. Patent Nos. 6,350,861; 6,180,370; 5,693,762; 5,693,761; 5,585,089; および5,530,101およびRiechmann et al., 1988, Nature 332:323 (すべての文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと)。
【０１１６】
本発明は、TCR、好ましくはTCRα鎖の定常ドメインに特異的なヒト化抗体分子であって、ヒト抗体(レシピエント抗体)の重鎖および/または軽鎖可変領域の1以上のCDRの1以上の領域が、TCRに特異的に結合するドナーモノクローナル抗体、例えばマウスモノクローナル抗体BMA031の1以上のCDRの類似部分によって置換されているヒト化抗体の使用を提供する。特定の実施形態では、ヒト化抗体はBMA031抗体と同一のエピトープに結合する。最も好ましい実施形態では、ヒト化抗体はドナーマウス抗体と同一のエピトープに特異的に結合する。本発明が抗体のCDR移植を一般に包含することは当業者に理解される。ゆえに、ドナーおよびアクセプター抗体は、同種の動物由来であってよく、同一の抗体クラスまたはサブクラス由来でさえあってよい。しかし、より通常には、ドナーおよびアクセプター抗体は異なる種の動物由来である。典型的にドナー抗体はげっ歯類MAbなどの非ヒト抗体であり、アクセプター抗体はヒト抗体である。
【０１１７】
一部の実施形態では、ドナー抗体由来の少なくとも1つのCDRをヒト抗体上に移植する。他の実施形態では、重鎖および/または軽鎖可変領域のそれぞれの少なくとも2つおよび好ましくはすべての3つのCDRをヒト抗体上に移植する。CDRは、Kabat CDR、構造的ループCDRまたはそれらの組み合わせを含んでよい。一部の実施形態では、本発明は、少なくとも1つのCDR移植された重鎖および少なくとも1つのCDR移植された軽鎖を含むヒト化TCR抗体を包含する。
【０１１８】
好ましい実施形態では、ヒト化TCR特異的抗体のCDR領域は、TCRに特異的なマウス抗体由来である。一部の実施形態では、本明細書中に記載のヒト化抗体は、ドナーモノクローナル抗体の結合特異性の保持に必要な、アクセプター抗体、すなわちヒト重鎖および/または軽鎖可変ドメインフレームワーク領域の、アミノ酸欠失、挿入、改変を非限定的に含む変化を含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載のヒト化抗体のフレームワーク領域は、天然に存在するヒト抗体可変領域のフレームワーク領域の正確なアミノ酸配列から必ずしも構成されず、ヒト化抗体の特性を変化させる、例えばマウスTCR特異的抗体と同一の標的に特異的なヒト化抗体領域の結合特性を向上させるアミノ酸欠失、挿入、改変を非限定的に含む種々の変化を含む。最も好ましい実施形態では、非ヒトフレームワーク残基の大規模な導入を回避し、かつヒトでのヒト化抗体の最小の免疫原性を保証するために、最小数の変化をフレームワーク領域に施す。ドナーモノクローナル抗体は好ましくはマウスモノクローナル抗体BMA 031である。
【０１１９】
特定の実施形態では、本発明は、TCRに特異的に結合するヒト化抗体であって、レシピエント抗体のフレームワーク残基および、TCRに特異的に結合するドナーモノクローナル抗体、例えばモノクローナル抗体BMA 031、3H2906、IP26、T10B9、WT31、G-11、H-197、H-41、A-20、FL-189、H-20、H-250、C-17、H57、KJ1-26、KJ12-98、H28-710、UC3-10A6、GL3、3H2928、5K24、3A10またはUC7-13D5由来の残基を含む重鎖可変領域ドメインを含むヒト化抗体の使用を包含する。別の特定の実施形態では、本発明は、TCRに特異的に結合するCDR移植抗体であって、レシピエント抗体のフレームワーク残基および、TCRに特異的に結合するドナーモノクローナル抗体、例えばモノクローナル抗体BMA 031、3H2906、IP26、T10B9、WT31、G-11、H-197、H-41、A-20、FL-189、H-20、H-250、C-17、H57、KJ1-26、KJ12-98、H28-710、UC3-10A6、GL3、3H2928、5K24、3A10またはUC7-13D5由来の残基を含む軽鎖可変領域ドメインを含むCDR移植抗体の使用を包含する。本発明の抗体は、組換えまたは、好ましくは、ネイティブヒトTCRの細胞外ドメインに結合することができる。本明細書中で使用される用語「ネイティブTCR」とは、内因的に発現されて細胞表面に提示されるTCR複合体を表す。一部の実施形態では、「ネイティブTCR」は、哺乳動物細胞中で組換え発現されたタンパク質を包含する。好ましくは、ネイティブTCRは細菌細胞、すなわちE. coli中で発現されない。最も好ましくは、ネイティブTCRは変性されず、すなわち、その生物活性コンフォメーションの状態である。
【０１２０】
特定の1実施形態では、VH領域が、ヒト生殖細胞系VHセグメントVH1-18 (Matsuda et al., 1998, J. Exp. Med. 188:2151062)およびJH6 (Ravetch et al., 1981, Cell 27(3 Pt. 2): 583-91)由来のFRセグメント、およびマウス抗TCR抗体(例えば、BMA 031、3H2906、IP26、T10B9、WT31、G-11、H-197、H-41、A-20、FL-189、H-20、H-250、C-17、H57、KJ1-26、KJ12-98、H28-710、UC3-10A6、GL3、3H2928、5K24、3A10またはUC7-13D5)の1以上のVH CDR領域からなる、ヒト化TCR抗体を提供する。別の特定の実施形態では、ヒト化TCR抗体は、さらに、ヒト生殖細胞系VLセグメントVK-A26 (Lautner-Rieske et al., 1992, Eur. J. Immunol. 22:1023-1029)およびJK4 (Hieter et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:1516-22)のFRセグメント、およびマウス抗TCR抗体(例えば、BMA 031、BMA 031、3H2906、IP26、T10B9、WT31、G-11、H-197、H-41、A-20、FL-189、H-20、H-250、C-17、H57、KJ1-26、KJ12-98、H28-710、UC3-10A6、GL3、3H2928、5K24、3A10またはUC7-13D5)の1以上のVL CDR領域からなるVL領域を含む。
【０１２１】
特に、ヒトTCR、好ましくはTCRα鎖の細胞外定常ドメインに免疫特異的に結合するヒト化抗体であって、BMA 031、3H2906、IP26、T10B9、WT31、G-11、H-197、H-41、A-20、FL-189、H-20、H-250、C-17、H57、KJ1-26、KJ12-98、H28-710、UC3-10A6、GL3、3H2928、5K24、3A10またはUC7-13D5のCDR配列を、本明細書中で開示されるVH CDRおよびVL CDRの任意の以下の組み合わせ: VH CDR1およびVL CDR1; VH CDR1およびVL CDR2; VH CDR1およびVL CDR3; VH CDR2およびVL CDR1; VH CDR2およびVL CDR2; VH CDR2およびVL CDR3; VH CDR3およびVH CDR1; VH CDR3およびVL CDR2; VH CDR3およびVL CDR3; VH1 CDR1、VH CDR2およびVL CDR1; VH CDR1、VH CDR2およびVL CDR2; VH CDR1、VH CDR2およびVL CDR3; VH CDR2、VH CDR3およびVL CDR1、VH CDR2、VH CDR3およびVL CDR2; VH CDR2、VH CDR2およびVL CDR3; VH CDR1、VL CDR1およびVL CDR2; VH CDR1、VL CDR1およびVL CDR3; VH CDR2、VL CDR1およびVL CDR2; VH CDR2、VL CDR1およびVL CDR3; VH CDR3、VL CDR1およびVL CDR2; VH CDR3、VL CDR1およびVL CDR3; VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3およびVL CDR1; VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3およびVL CDR2; VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3およびVL CDR3; VH CDR1、VH CDR2、VL CDR1およびVL CDR2; VH CDR1、VH CDR2、VL CDR1およびVL CDR3; VH CDR1、VH CDR3、VL CDR1およびVL CDR2; VH CDR1、VH CDR3、VL CDR1およびVL CDR3; VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1およびVL CDR2; VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1およびVL CDR3; VH CDR2、VH CDR3、VL CDR2およびVL CDR3; VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1およびVL CDR2; VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1およびVL CDR3; VH CDR1、VH CDR2、VL CDR1、VL CDR2、およびVL CDR3; VH CDR1、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、およびVL CDR3; VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、およびVL CDR3; またはそれらの任意の組み合わせを含む(あるいは、からなる)、抗体を提供する。
【０１２２】
5.2  ヒト抗体
本発明はまた、ヒト抗TCR抗体を提供する。ヒト抗体は、機能的内因性免疫グロブリンを発現不可能であるが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して製造することもできる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体をランダムに、または相同組換えによってマウス胚幹細胞に導入することができる。あるいは、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、および多様性領域をマウス胚幹細胞に導入することができる。ヒト免疫グロブリン遺伝子座を相同組換えによって導入して、マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子を別々にまたは同時に非機能的にさせることができる。特に、JH領域のホモ接合性欠失は内因性抗体生産を妨げる。改変された胚幹細胞をエクスパンドし、胚盤胞中にマイクロインジェクションしてキメラマウスを得る。次いでキメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現するホモ接合性子孫を得る。慣用の方法論を使用して選択抗原、例えば本発明のポリペプチドの全体または部分でトランスジェニックマウスを免疫化する。慣用のハイブリドーマテクノロジーを使用して、免疫化されたトランスジェニックマウスから該抗原を標的にするモノクローナル抗体を取得することができる。トランスジェニックマウスによって収容されるヒト免疫グロブリン導入遺伝子はB細胞分化中に再構成し、次いでクラススイッチおよび体細胞突然変異を受ける。ゆえに、前記技術を使用して、治療上有用なIgG、IgA、IgMおよびIgE抗体を製造することが可能である。ヒト抗体を製造するためのこのテクノロジーの概要に関しては、Lonberg and Huszar (1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93, 該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を製造するためのこのテクノロジーの詳細な考察およびそのような抗体を製造するためのプロトコールに関しては、例えば、International Publication Nos. WO 98/24893, WO 96/34096, およびWO 96/33735; およびU.S. Patent Nos. 5,413,923, 5,625,126, 5,633,425, 5,569,825, 5,661,016, 5,545,806, 5,814,318, および5,939,598 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。さらに、Abgenix, Inc. (Freemont, CA)およびMedarex (Princeton, NJ)などの企業を、上記テクノロジーと類似のテクノロジーを使用して選択抗原を標的にするヒト抗体を提供するように従事させることができる。
【０１２３】
5.3  キメラ抗体
本発明はまた、マウス抗体BMA 031由来の重鎖および/または軽鎖可変ドメインを例えば含む、キメラ抗TCR抗体を提供する(BMA 031の重鎖および軽鎖可変ドメインはそれぞれ配列番号１および配列番号６に記載される)。キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子由来である分子であり、例えば非ヒト抗体由来の可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体である。本発明は、公知の抗TCR抗体(例えば、BMA 031、3H2906、IP26、T10B9、WT31、G-11、H-197、H-41、A-20、FL-189、H-20、H-250、C-17、H57、KJ1-26、KJ12-98、H28-710、UC3-10A6、GL3、3H2928、5K24、3A10およびUC7-13D5)から製造された抗体由来のキメラ抗体を提供する。キメラ抗体を製造するための方法は当技術分野で公知である。例えば、Morrison, 1985, Science 229:1202; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202; およびU.S. Patent Nos. 6,311,415, 5,807,715, 4,816,567, および4,816,397 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。非ヒト種由来の1以上のCDRおよびヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を含むキメラ抗体は、当技術分野で公知の種々の技術を使用して製造することができ、該技術には、例えば、CDR移植(EP 239,400; International Publication No. WO 91/09967; およびU.S. Patent Nos. 5,225,539, 5,530,101, および5,585,089)、ベニアリングまたはリサーフェイシング(EP 592,106; EP 519,596; Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7:805; およびRoguska et al., 1994, PNAS 91:969)、および鎖シャフリング(U.S. Patent No. 5,565,332)が含まれる。上で特定される各参考文献は参照によりその全体がここに組み入れられる。
【０１２４】
5.4  Fc領域の改変
本発明は、U.S. Patent Application Publication Nos. U.S. 2005/0037000およびU.S. 2005/0064514; U.S. Patent Nos. 5,624,821および5,648,260およびEuropean Patent No. EP 0 307 434 (すべての文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)で開示されるものなどの、抗体エフェクター機能を変化させる1以上のアミノ酸改変を含むFc定常ドメインを有する抗体を包含する。これらの抗体は、アミノ酸改変を有さない同等の抗体と比較して、向上したADCC活性(すなわち、2倍、10倍、100倍、500倍、など)を示す。
【０１２５】
本発明は、1種以上のFcγRに対する抗体の結合親和性を改変する、好ましくはFc領域中の改変を含む抗体を包含する。1種以上のFcγRに対する改変された結合を有する抗体の改変のための方法は当技術分野で公知であり、例えば、PCT Publication Nos. WO 04/029207, WO 04/029092, WO 04/028564, WO 99/58572, WO 99/51642, WO 98/23289, WO 89/07142, WO 88/07089, およびU.S. Patent Nos. 5,843,597および5,642,821 (各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。一部の実施形態では、本発明は、活性化FcγR、例えばFcγRIIIAについての改変された親和性を有する抗体を包含する。好ましくはそのような改変はまた、改変されたFc媒介性エフェクター機能を有する。Fc媒介性エフェクター機能に影響する改変は当技術分野で公知である(U.S. Patent No. 6,194,551 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと)。International Publication No. WO 00/42072およびU.S. Patent No. 6,194,551 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。
【０１２６】
本発明の抗体のFc領域の改変は、当技術分野で理解される治療的使用にしたがってFc媒介性エフェクター機能を選択または調節することを可能にする。例えば、特定の実施形態では、本発明は、T細胞癌または悪性腫瘍の予防または治療のための本発明の抗体の使用を提供する。そのような実施形態では、所望の治療上の転帰は癌性または悪性T細胞の枯渇であってよい。そのような枯渇を達成するための1手段は、野生型Fc領域と比べて、1種以上のFcエフェクターリガンドに対する結合を増加させ、およびそれによって、Fc媒介性細胞傷害性機構の関与/活性化(例えば、補体系の活性化、またはマクロファージ、単球、または他の抗体依存的細胞傷害性細胞の細胞傷害性活性の活性化)を向上/増加させるようにFc領域を改変することである。対照的に、他の実施形態では、Fc媒介性エフェクター機能を減少させるかまたは無効にすることが望ましく; そのような実施形態の例は、本明細書中に記載されるかまたは当技術分野で公知のような、自己免疫疾患の治療または予防、または1種以上のその症状の改善のための抗体の使用での例である。
【０１２７】
特定の1実施形態では、Fc領域の改変はFc領域中の1つ以上の突然変異を含む。Fc領域中の1つ以上の突然変異の結果、改変された抗体媒介性エフェクター機能、他のFc受容体(例えばFc活性化受容体)に対する改変された結合、改変されたADCC活性、または改変されたC1q結合活性、または改変された補体依存的細胞傷害性活性、またはそれらの任意の組み合わせを有する抗体が生じる。
【０１２８】
一部の実施形態では、本発明は、以下の位置:  119, 125, 132, 133, 141, 142, 147, 149, 162, 166, 185, 192, 202, 205, 210, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 227, 229, 231, 232, 233, 235, 240, 241, 242, 243, 244, 246, 247, 248, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 258, 261, 262, 263, 268, 269, 270, 272, 274, 275, 276, 279, 280, 281, 282, 284, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 295, 298, 301, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 323, 326, 327, 328, 330, 333, 334, 335, 337, 339, 340, 343, 344, 345, 347, 348, 352, 353, 354, 355, 358, 359, 360, 361, 362, 365, 366, 367, 369, 370, 371, 372, 375, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 404, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 414, 415, 416, 417, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 427, 428, 431, 433, 435, 436, 438, 440, 441, 442, 443, 446, または447の1つ以上の位置でアミノ酸改変を有する変異体Fc領域を含む分子を包含する。
【０１２９】
本発明は、以下の表の表2に列挙される突然変異のいずれかからなるかまたはそれを含む変異体Fc領域を含む分子を包含する。
【０１３０】
2012501178.tif 000002
2012501178.tif 000003
【０１３１】
さらに他の実施形態では、本発明は、3つ以上のアミノ酸改変を有する変異体Fc領域を含む分子を包含する。そのような変異体の非限定的な例を以下の表に列挙する(表3)。本発明は、本明細書中で開示されるものなどの1つ以上のアミノ酸改変をさらに含む、表3に列挙される突然変異を包含する。
【０１３２】
2012501178.tif 000004
2012501178.tif 000005
2012501178.tif 000006
【０１３３】
5.5  炭水化物の改変
本発明はまた、改変されたオリゴ糖含量を有する抗体を提供する。本明細書中で使用されるオリゴ糖とは、2以上の単糖を含む炭水化物を表し、2つの用語は本明細書中で互換的に使用される。本発明の糖鎖は、当技術分野で一般に使用される命名法に準拠して記載される。炭水化物化学のレビューに関しては、例えばHubbard et al., 1981 Ann. Rev. Biochem., 50: 555-583 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。この命名法には、例えば、マンノースを表すMan; 2-N-アセチルグルコサミンを表すGlcNAc; ガラクトースを表すGal; フコースを表すFucおよびグルコースを表すGlcが含まれる。シアル酸は、5-N-アセチルノイラミン酸についてNeuNAc、5-グリコールノイラミン酸についてNeuNGcの簡略表記によって記載される。
【０１３４】
一般に、抗体は、重鎖の定常領域の保存された位置に糖鎖を含み、30%までのヒトIgGはグリコシル化Fab領域を有する。IgGは、CH2ドメイン中にあるAsn 297の位置に単一のN結合バイアンテナ型(biantennary)糖鎖構造を有する(Jefferis et al., 1998, Immunol. Rev. 163: 59-76; Wright et al., 1997, Trends Biotech 15: 26-32)。ヒトIgGは典型的に以下の構造; GlcNAc(Fucose)-GlcNAc-Man-(ManGlcNAc)2の炭水化物を有する。しかしIgG間で炭水化物含量の変動が実際に存在し、機能の変化を生じさせる。例えば、Jassal et al., 2001 Biochem. Biophys. Res. Commun. 288: 243-9; Groenink et al., 1996 J. Immunol. 26: 1404-7; Boyd et al., 1995 Mol. Immunol. 32: 1311-8; Kumpel et al., 1994, Human Antibody Hybridomas, 5: 143-51を参照のこと。本発明は、Asn 297に結合している糖鎖中に変異を含む抗体を包含する。一実施形態では、該糖鎖は、末端GlcNAcの一方または両方および/または第3のGlcNacアーム(分岐GlcNAc)にガラクトースおよび/またはガラクトース-シアル酸を有する。
【０１３５】
一部の実施形態では、本発明の抗体は1以上の選択された糖基、例えば1以上のシアル酸残基、1以上のガラクトース残基、1以上のフコース残基を実質的に含まない。1以上の選択された糖基を実質的に含まない抗体は、当業者に公知の一般的方法を使用して製造することができ、該方法には、例えば抗体の糖鎖への選択された糖基(群)の付加について欠損している宿主細胞中で本発明の抗体を組換え法で製造し、組成物中の約90〜100%の抗体が、糖鎖に結合している選択糖基(群)を欠くようにすることが含まれる。そのような抗体を製造するための代替法には、例えば、1以上の選択糖基の付加を妨げるかまたは減少させる条件下で細胞を培養すること、または1以上の選択糖基の翻訳後除去が含まれる。
【０１３６】
特定の実施形態では、本発明は、組成物中の約80〜100%の抗体がその糖鎖上のフコース、例えばAsn 297上の糖鎖結合物を欠いている、実質的に均質の抗体調製物を製造する方法を包含する。抗体は、例えば(a) フコース代謝が欠損していて、宿主細胞中で発現されたタンパク質をフコシル化する、減少した能力を有するように操作された宿主細胞の使用; (b) フコシル化(fusocylation)を妨げるかまたは減少させる条件下で細胞を培養すること; (c) 例えばフコシダーゼ酵素でのフコースの翻訳後除去; または(d) フコシル化されていない生成物に関して選択するための抗体の精製、によって製造することができる。最も好ましくは、宿主細胞中で発現された抗体をフコシル化するための、減少した能力を有する宿主細胞中で、所望の抗体をコードする核酸を発現させる。好ましくは宿主細胞はジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO)、例えばLec 13 CHO細胞(レクチン耐性CHO突然変異体セルライン; Ribka & Stanley, 1986, Somatic Cell & Molec. Gen. 12(1): 51-62; Ripka et al., 1986 Arch. Biochem. Biophys. 249(2): 533-45)、CHO-K1、DUX-B11、CHO-DP12またはCHO-DG44であり、それは、抗体が実質的にフコシル化されないように改変されている。ゆえに、該細胞は、酵素が細胞中で減少した活性および/または減少した発現レベルを有するように、フコシルトランスフェラーゼ(fucoysltransferase)酵素、またはN結合オリゴ糖へのフコースの付加に関与する別の酵素または基質の改変された発現および/または活性を示す。改変されたフコース含量を有する抗体の製造方法に関しては、例えば、WO 03/035835およびShields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277(30): 26733-40 (両文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。
【０１３７】
一部の実施形態では、改変された糖鎖修飾は、以下のもの: 抗体の可溶化、細胞内輸送の促進および抗体の分泌、抗体組み立ての促進、コンフォメーションの完全性、および抗体媒介性エフェクター機能の1種以上を調節する。特定の実施形態では、糖鎖修飾の改変は、糖鎖修飾を欠く抗体と比べて抗体媒介性エフェクター機能を増強する。改変された抗体媒介性エフェクター機能を生じさせる糖鎖修飾は当技術分野で周知である(例えば、Shields R.L. et al., 2001, J. Biol. Chem. 277(30): 26733-40; Davies J. et al., 2001, Biotechnology & Bioengineering, 74(4): 288-294を参照のこと)。別の特定の実施形態では、糖鎖修飾の改変は、TCR、またはその任意のペプチド成分への本発明の抗体の結合を増強する。本発明の方法にしたがう糖鎖修飾の改変には、例えば、抗体の炭水化物含量の増加または抗体の炭水化物含量の減少が含まれる。炭水化物含量を改変する方法は当業者に公知であり、例えば、Wallick et al., 1988, Journal of Exp. Med. 168(3): 1099-1109; Tao et al., 1989 Journal of Immunology, 143(8): 2595-2601; Routledge et al., 1995 Transplantation, 60(8): 847-53; Elliott et al. 2003; Nature Biotechnology, 21: 414-21; Shields et al. 2002 Journal of Biological Chemistry, 277(30): 26733-40 (すべての文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。
【０１３８】
一部の実施形態では、本発明は、1以上のグリコシル化部位を含み、1以上の糖鎖が共有結合によって抗体に結合している抗体を包含する。他の実施形態では、本発明は1以上のグリコシル化部位および1以上のFc領域の改変、例えば上で開示されるものおよび当業者に公知のものを含む抗体を包含する。好ましい実施形態では、1以上のFc領域の改変は、野生型Fc領域を含む抗体と比べて、活性化FcγR、例えばFcγRIIIAに対する抗体の親和性を高める。1以上のグリコシル化部位および/または1以上のFc領域の改変を有する本発明の抗体は、増強された抗体媒介性エフェクター機能、例えば増強されたADCC活性を有する。一部の実施形態では、本発明は、さらに、限定するものではないが、241、243、244、245、245、249、256、258、260、262、264、265、296、299、および301位のアミノ酸などの、直接または間接的に、抗体の糖鎖と相互作用することが知られているアミノ酸の1以上の改変を含む抗体を含む。直接または間接的に抗体の糖鎖と相互作用するアミノ酸は当技術分野で公知であり、例えばJefferis et al., 1995 Immunology Letters, 44: 111-7 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。
【０１３９】
本発明は、好ましくは抗体の機能性、例えばTCRへの結合活性を変化させることなく、抗体の1以上の部位に1以上のグリコシル化部位を導入することによって改変されている抗体を包含する。グリコシル化部位は、本発明の抗体の可変領域および/または定常領域に導入することができる。本明細書中で使用される「グリコシル化部位」には、オリゴ糖(すなわち互いに連結された2以上の単糖を含む炭水化物)が特異的にかつ共有結合によって結合する、抗体中の任意の特定のアミノ酸配列が含まれる。オリゴ糖側鎖は、典型的に、N結合またはO結合によって抗体の主鎖に連結される。N結合グリコシル化とは、アスパラギン残基の側鎖へのオリゴ糖部分の結合を表す。O結合グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、例えばセリン、スレオニンへのオリゴ糖部分の結合を表す。本発明の抗体は、N結合およびO結合グリコシル化部位を含む1以上のグリコシル化部位を含んでよい。当技術分野で公知のN結合またはO結合グリコシル化のための任意のグリコシル化部位を本発明にしたがって使用してよい。本発明の方法にしたがって有用な典型的なN結合グリコシル化部位は、アミノ酸配列: Asn-X-Thr/Serであり、ここにXは任意のアミノ酸であってよく、Thr/Serはスレオニンまたはセリンを示す。そのような部位または部位群は、本発明が関係する技術分野で周知の方法を使用して本発明の抗体に導入することができる。例えば、"In vitro Mutagenesis," Recombinant DNA: A Short Course, J. D. Watson, et al. W.H. Freeman and Company, New York, 1983, chapter 8, pp. 106-116 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。本発明の抗体にグリコシル化部位を導入するための典型的な方法は、所望のAsn-X-Thr/Ser配列が得られるように抗体のアミノ酸配列を改変するかまたは突然変異させるステップを含んでよい。
【０１４０】
一部の実施形態では、本発明は、グリコシル化部位を付加するかまたは欠失させることによって本発明の抗体の炭水化物含量を改変する方法を包含する。抗体の炭水化物含量を改変する方法は当技術分野で周知であり、本発明の範囲内に包含される。例えば、U.S. Patent No. 6,218,149; EP 0 359 096 B1; U.S. Publication No. US 2002/0028486; WO 03/035835; U.S. Publication No. 2003/0115614; U.S. Patent No. 6,218,149; U.S. Patent No. 6,472,511 (すべての文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。他の実施形態では、本発明は、抗体の1以上の内因性糖鎖を欠失させることによって本発明の抗体の炭水化物含量を改変する方法を包含する。
【０１４１】
一部の特定の実施形態では、本発明は、CDR2領域のNグリコシル化コンセンサス部位Asn50-Val-Serが改変されて50位のグリコシル化部位が排除されている、改変されたTCR抗体の使用を包含する。特定の作用機序によって拘束されることを意図しないが、グリコシル化部位の除去は、抗体生産における変動の可能性ならびに医薬適用での免疫原性の可能性を限定することができる。特定の実施形態では、本発明は、50位のアミノ酸が改変、例えば欠失または置換されているヒト化TCR抗体の使用を包含する。別の特定の実施形態では、本発明は、さらに、51位のアミノ酸改変、例えば欠失または置換を有する抗体の使用を包含する。特定の1実施形態では、本発明は、50位のアミノ酸がチロシンで置換されているヒト化TCR抗体の使用を包含する。別のより具体的な実施形態では、本発明は、50位のアミノ酸がチロシンで置換されかつ51位のアミノ酸がアラニンで置換されているTCR抗体の使用を包含する。
【０１４２】
5.6  抗体コンジュゲート
本発明は、異種ポリペプチド(すなわち無関係のポリペプチド; またはその部分、好ましくは少なくとも10、少なくとも20、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90または少なくとも100アミノ酸のポリペプチド)に組換えによって融合されたかまたは化学的にコンジュゲート(共有結合性コンジュゲーションおよび非共有結合性コンジュゲーションの両者を含む)されて融合タンパク質を形成している抗体を包含する。融合は、必ずしも直接である必要ではなく、リンカー配列経由で存在してよい。抗体を使用して、例えば、抗体を特定の細胞表面受容体に特異的な抗体に融合させるかまたはコンジュゲートすることによって、in vitroまたはin vivoで、異種ポリペプチドを特定の細胞タイプにターゲティングすることができる。異種ポリペプチドに融合またはコンジュゲートされている抗体を、当技術分野で公知の方法を使用するin vitroイムノアッセイおよび精製方法で使用してもよい。例えば、PCT Publication No. WO 93/21232; EP 439,095; Naramura et al., 1994, Immunol. Lett., 39:91-99; U.S. Patent No. 5,474,981; Gillies et al., 1992, Proc Natl Acad Sci, 89:1428-1432; およびFell et al., 1991, J. Immunol., 146:2446-2452 (各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。
【０１４３】
さらに、所定の生物学的応答を改変する治療剤または薬物部分に抗体をコンジュゲートすることができる。治療剤または薬物部分は、従来の化学的治療剤に制限されると解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであってよい。そのようなタンパク質には、例えば、毒素、例えばアブリン、リシンA、シュードモナス外毒素(すなわちPE-40)、またはジフテリア毒素、リシン、ゲロニン、およびポークウィード抗ウイルス性タンパク質、タンパク質、例えば腫瘍壊死因子、α-インターフェロン(IFN-α)、β-インターフェロン(IFN-β)を非限定的に含むインターフェロン、神経成長因子(NGF)、血小板由来成長因子(PDGF)、組織プラスミノゲンアクチベータ(TPA)、アポトーシス剤(例えば、TNF-α、TNF-β、PCT Publication No. WO 97/33899で開示されるAIM I)、AIM II (例えばPCT Publication No. WO 97/34911を参照のこと)、Fas Ligand (Takahashi et al., 1994 J. Immunol., 6:1567-1574)、およびVEGI (PCT Publication No. WO 99/23105)、血栓剤(thrombotic agent)または抗血管新生剤(例えばアンギオスタチンまたはエンドスタチン)、または生物学的応答調節剤、例えば、リンホカイン(例えば、インターロイキン-1 (「IL-1」)、インターロイキン-2 (「IL-2」)、インターロイキン-6 (「IL-6」)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(「GM-CSF」)、および顆粒球コロニー刺激因子(「G-CSF」))、マクロファージコロニー刺激因子、(「M-CSF」)、または成長因子(例えば成長ホルモン(「GH」); プロテアーゼ、またはリボヌクレアーゼ)が含まれる。
【０１４４】
精製を容易にするために、ペプチドなどのマーカー配列に抗体を融合させることができる。好ましい実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、とりわけpQEベクター(QIAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatsworth, CA, 91311)中で提供されるタグなどのヘキサ-ヒスチジンペプチドであり、多数のものが市販されている。Gentz et al., 1989 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:821-824に記載されるように、例えば、ヘキサ-ヒスチジンは融合タンパク質の好都合な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグには、非限定的に、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに相当する赤血球凝集素「HA」タグ(Wilson et al.,  1984 Cell, 37:767)および「flag」タグ(Knappik et al., 1994 Biotechniques, 17(4):754-761)が含まれる。
【０１４５】
本発明はまた、本発明の抗体またはその断片に融合またはコンジュゲートされた異種ポリペプチドを含む組成物の使用を含む。例えば、該異種ポリペプチドは、Fab断片、Fd断片、Fv断片、F(ab)2断片、またはそれらの部分に融合させるかまたはコンジュゲートしてよい。ポリペプチドを抗体部分に融合させるかまたはコンジュゲートする方法は当技術分野で公知である。例えば、U.S. Patent Nos. 5,336,603, 5,622,929, 5,359,046, 5,349,053, 5,447,851, および5,112,946; EP 307,434; EP 367,166; International Publication Nos. WO 96/04388およびWO 91/06570; Ashkenazi et al., 1991,  Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 10535-10539; Zheng et al., 1995, J. Immunol. 154:5590-5600; およびVil et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337- 11341 (該文献は参照によりその全体が組み入れられる)を参照のこと。
【０１４６】
追加の融合タンパク質は、遺伝子シャフリング、モチーフシャフリング、エキソンシャフリング、および/またはコドンシャフリング(包括的に「DNAシャフリング」と称される)の技術によって作製することができる。DNAシャフリングを用いて、本発明の抗体またはその断片の活性を変化させることができる(例えば、高い親和性および低い解離速度を有する抗体またはその断片)。概して、U.S. Patent Nos. 5,605,793; 5,811,238; 5,830,721; 5,834,252; および5,837,458, およびPatten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16:76; Hansson, et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265; およびLorenzo and Blasco, 1998, BioTechniques 24:308 (前記特許および刊行物のそれぞれは、参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。抗体またはその断片、またはコードされている抗体またはその断片を、組換え前にエラープローンPCRによるランダム突然変異誘発、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法に付することによって改変することができる。TCR、またはその任意のポリペプチド成分に特異的に結合する、抗体または抗体断片をコードするポリヌクレオチドの1以上の部分を、1以上の異種分子の1以上の成分、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、断片、などと組み合わせることができる。
【０１４７】
本発明はまた、血清半減期を増加させることが望まれる診断剤または治療剤または任意の他の分子にコンジュゲートされた抗体を包含する。該抗体を診断上使用して、例えば所定の治療方式の効力を測定するための臨床検査手順の部分として疾患、障害または感染の発生または進行を例えばモニターすることができる。抗体を、検出可能な薬剤にカップリングすることによって検出を容易にすることができる。検出可能な薬剤の例には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、陽電子放出金属、および非放射性常磁性金属イオンが含まれる。検出可能な物質は、当技術分野で公知の技術を使用して抗体に直接または中間物(例えば当技術分野で公知のリンカー)を介して間接的にカップリングまたはコンジュゲートすることができる。例えば、本発明にしたがう診断剤としての使用のために抗体にコンジュゲートすることができる金属イオンに関しては、U.S. Patent No. 4,741,900を参照のこと。そのような診断および検出は、非限定的に、種々の酵素、非限定的に、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含む酵素; 補欠分子族複合体、例えば、非限定的に、ストレプトアビジン/ビオチンおよびアビジン/ビオチン; 蛍光物質、例えば、非限定的に、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライドまたはフィコエリトリン; 発光物質、例えば、非限定的に、ルミノール; 生物発光物質、例えば、非限定的に、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリン; 放射性物質、例えば、非限定的に、ビスマス(213Bi)、炭素(14C)、クロム(51Cr)、コバルト(57Co)、フッ素(18F)、ガドリニウム(153Gd, 159Gd)、ガリウム(68Ga, 67Ga)、ゲルマニウム(68Ge)、ホルミウム(166Ho)、インジウム(115In, 113In, 112In, 111In)、ヨウ素(131I, 125I, 123I, 121I)、ランタン(lanthanium)(140La)、ルテチウム(177Lu)、マンガン(54Mn)、モリブデン(99Mo)、パラジウム(103Pd)、リン(phosphorous)(32P)、プラセオジム(142Pr)、プロメチウム(149Pm)、レニウム(186Re, 188Re)、ロジウム(105Rh)、ルテニウム(ruthemium)(97Ru)、サマリウム(153Sm)、スカンジウム(47Sc)、セレン(75Se)、ストロンチウム(85Sr)、硫黄(35S)、テクネチウム(99Tc)、タリウム(201Ti)、スズ(113Sn, 117Sn)、トリチウム(3H)、キセノン(133Xe)、イッテルビウム(169Yb, 175Yb)、イットリウム(90Y)、亜鉛(65Zn); 種々のポジトロン放出断層撮影を使用する陽電子放出金属、および非放射性常磁性金属イオンを含む検出可能な物質に抗体をカップリングすることによって達成することができる。
【０１４８】
抗体は、治療薬部分、例えば細胞毒(例えば、細胞増殖抑制剤または細胞破壊剤)、治療剤または放射性元素(例えば、アルファ-エミッタ、ガンマ-エミッタ、など)にコンジュゲートすることができる。細胞毒または細胞傷害性物質には、細胞に有害な任意の物質が含まれる。その例には、パクリタキソール、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド(tenoposide)、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン(colchicin)、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン(dihydroxy anthracin dione)、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1-デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンおよびそれらのアナログまたはホモログが含まれる。治療剤には、非限定的に、代謝拮抗剤(例えば、メトトレキセート、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、シタラビン、5-フルオロウラシルデカルバジン(5-fluorouracil decarbazine))、アルキル化剤(例えば、メクロレタミン、チオエパクロランブシル(thioepa chlorambucil)、メルファラン、カルムスチン(BSNU)およびロムスチン(CCNU)、シクロトスファミド(cyclothosphamide)、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンC、およびシスジクロロジアミン白金(II)(DDP)シスプラチン)、アントラサイクリン(例えば、ダウノルビシン(以前のダウノマイシン)およびドキソルビシン)、抗生物質(例えば、ダクチノマイシン(以前のアクチノマイシン)、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン(AMC))、および有糸分裂阻害剤(例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン)が含まれる。
【０１４９】
さらに、抗体は、治療薬部分、例えばラジオメタルイオンをコンジュゲートするために有用な放射性物質または大環状キレート剤にコンジュゲートすることができる(例えば放射性物質についての上記内容を参照のこと)。特定の実施形態では、大環状キレート剤は、1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-N,N',N'',N''-四酢酸(DOTA)であり、それはリンカー分子を介して抗体に結合させることができる。そのようなリンカー分子は当技術分野で一般に公知であり、Denardo et al., 1998, Clin Cancer Res. 4:2483-90; Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem. 10:553; およびZimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol. 26:943-50 (各文献は参照によりその全体が組み入れられる)に記載されている。
【０１５０】
そのような治療薬部分を抗体にコンジュゲートするための技術は周知である; 例えば、Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), 1985, pp. 243-56, Alan R. Liss, Inc.); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), 1987, pp. 623-53, Marcel Dekker, Inc. ); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), 1985, pp. 475-506); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), 1985, pp. 303-16, Academic Press; およびThorpe et al., Immunol. Rev., 62:119-58, 1982を参照のこと。
【０１５１】
単独でまたは細胞傷害性因子(群)および/またはサイトカイン(群)と組み合わせて投与される抗体またはその断片は、それにコンジュゲートされた治療薬部分を伴うかまたは伴わずに、治療薬として使用することができる。
【０１５２】
あるいは、抗体を二次抗体にコンジュゲートして、Segal in U.S. Patent No. 4,676,980 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)に記載のように抗体ヘテロコンジュゲートを形成させることができる。
【０１５３】
抗体は、イムノアッセイまたは標的抗原の精製に特に有用な固体支持体に結合させてもよい。そのような固体支持体には、非限定的に、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルまたはポリプロピレンが含まれる。
【０１５４】
5.7  アミノ酸変異体
抗体分子のアミノ酸配列変異体は、それらが置換、挿入または欠失変異体であるように作製することができる。欠失変異体は、機能または免疫原性活性に必須でない、未変性タンパク質の1以上の残基を欠いている。挿入突然変異体は、典型的に、ポリペプチドの終点でない位置での物質の付加を含む。これには、免疫反応性エピトープまたは単に単一残基の挿入が含まれる。置換変異体は、典型的に、タンパク質内の1以上の部位での1アミノ酸と別のアミノ酸との交換を含み、ポリペプチドの1種以上の特性、例えばタンパク質分解による切断に対する安定性を、他の機能または特性を損なうことなく、調節するように設計することができる。この種の置換は、好ましくは、保存的であり、すなわち、1アミノ酸が類似の形状および電荷のアミノ酸と置換される。保存的置換は当技術分野で周知であり、それには、例えば、アラニンからセリン; アルギニンからリシン; アスパラギンからグルタミンまたはヒスチジン; アスパラギン酸からグルタミン酸; システインからセリン; グルタミンからアスパラギン; グルタミン酸からアスパラギン酸; グリシンからプロリン; ヒスチジンからアスパラギンまたはグルタミン; イソロイシンからロイシンまたはバリン; ロイシンからバリンまたはイソロイシン; リシンからアルギニン; メチオニンからロイシンまたはイソロイシン; フェニルアラニンからチロシン、ロイシンまたはメチオニン; セリンからスレオニン; スレオニンからセリン; トリプトファンからチロシン; チロシンからトリプトファンまたはフェニルアラニン; およびバリンからイソロイシンまたはロイシンへの変化が含まれる。
【０１５５】
遺伝子の一般的領域が、本明細書中に記載の特定のタンパク質ドメインをコードすると特定されたら、点突然変異誘発を用いて、特定の機能に関連する特定の活性においてどのアミノ酸残基が重要であるかを詳細に特定することができる。ゆえに、当業者は、改変されたコドンおよびミスセンス突然変異を生じさせるDNA鎖中の1塩基変化を作製することができる。
【０１５６】
特定の実施形態では、本発明のTCR結合分子は、BMA 031の対応するCDR (図３に示される)と比べて、1、2、3、または4残基改変(置換、欠失または挿入を含む)を有するCDRを含む。他の実施形態では、本発明のTCR結合分子は、BMA 031の対応するVHおよび/またはVLドメインと比べて、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、または24残基の改変(置換、挿入または欠失を含む)を有するVHおよび/またはVLドメインを含む。さらに他の実施形態では、本発明のTCR結合分子は、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列を有するVHドメインと比べて、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、または24残基の改変(置換、挿入または欠失を含む)を有するVHドメインを含む。さらに他の実施形態では、本発明のTCR結合分子は、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列を有するVLドメインと比べて、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、または24残基の改変(置換、挿入または欠失を含む)を有するVLドメインを含む。
【０１５７】
好ましくは、タンパク質のアミノ酸の突然変異は、同等の、またはさらに向上した、第2世代分子を創出する。例えば、親和性またはアビディティーを検出可能に損なうことなく、特定のアミノ酸をタンパク質構造中の他のアミノ酸の代わりに用いることができる。そのような変化を施す際に、アミノ酸の疎水性親水性指標を考慮することができる。タンパク質に相互作用的生物学的機能を付与する際の疎水性親水性アミノ酸指標の重要性は当技術分野で一般に理解される。アミノ酸の相対的な疎水性親水性指標の特性は、得られるタンパク質の二次構造に寄与し、ひいては該タンパク質の他の分子、例えば酵素、基質、受容体、DNA、抗体、抗原、などとの相互作用を規定することが容認される。各アミノ酸は、その疎水性および電荷特性に基づいて疎水性親水性指標を割り当てられている; 例えば: イソロイシン(+4.5); バリン(+4.2); ロイシン(+3. 8) ; フェニルアラニン(+2.8); システイン/シスチン(+2.5); メチオニン(+1.9); アラニン(+1.8); グリシン(-0.4); スレオニン(-0.7); セリン(-0.8); トリプトファン0.9); チロシン(-1.3); プロリン(-1.6); ヒスチジン(-3.2); グルタミン酸(-3.5); グルタミン(-3.5); アスパラギン酸(-3.5); アスパラギン(-3.5); リシン(-3.9); およびアルギニン(-4.5)。
【０１５８】
また、親水性に基づいて効果的に類似のアミノ酸の置換を施すことができることが当技術分野で理解される。疎水性と同様に、親水性の値が各アミノ酸に割り当てられている: アルギニン(+3.0); リシン(+3.0); アスパラギン酸(+3.0±1); グルタミン酸(+3.0±1); セリン(+0.3); アスパラギン(+0.2); グルタミン(+0.2); グリシン(0); スレオニン(-0.4); プロリン(-0.5±1); アラニン(-0.5); ヒスチジン(-0.5); システイン(-1.0); メチオニン(-1.3); バリン(-1.5); ロイシン(-1.8); イソロイシン(-1.8); チロシン(-2.3); フェニルアラニン(-2.5)およびトリプトファン(-3.4)。親水性指標が互いに±2、好ましくは±1、最も好ましくは±5以内である場合に1アミノ酸を別のアミノ酸の代わりに用いることによって同等の分子を得ることができる。
【０１５９】
5.8  抗TCR治療的または予防的有用性の特徴付け
TCR結合分子は種々の方法で特徴付けることができる。特に、TCRポリペプチドに免疫特異的に結合する能力に関してTCR結合分子をアッセイすることができる。そのようなアッセイは、溶液中で(例えばHoughten, 1992, Bio/Techniques 13:412-421)、ビーズ上で(Lam, 1991, Nature 354:82-84)、チップ上で(Fodor, 1993, Nature 364:555-556)、細菌上で(U.S. Patent No. 5,223,409)、胞子上で(U.S. Patent Nos. 5,571,698; 5,403,484; および5,223,409)、プラスミド上で(Cull et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:1865-1869)またはファージ上で(Scott and Smith, 1990, Science 249:386-390; Devlin, 1990, Science 249:404-406; Cwirla et al., 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6378-6382; およびFelici, 1991, J. Mol. Biol. 222:301-310)(前記の各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)実施することができる。
【０１６０】
TCR結合分子は、当技術分野で公知の任意の方法によって、TCRポリペプチドへの免疫特異的結合および他のポリペプチドとの交差反応性に関してアッセイすることができる。免疫特異的結合および交差反応性を分析するために使用できるイムノアッセイには、いくつか挙げると、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ELISA (酵素結合免疫吸着測定法)、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線アッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインAイムノアッセイなどの技術を使用する競合的および非競合的アッセイ系が非限定的に含まれる。そのようなアッセイは当技術分野で慣用的でありかつ周知である(例えば、Ausubel et al, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと)。典型的なイムノアッセイを以下に簡潔に記載する(が、限定のためのものではない)。
【０１６１】
免疫沈降プロトコールは、一般に、プロテインホスファターゼおよび/またはプロテアーゼインヒビター(例えば、EDTA、PMSF、アプロチニン、バナジン酸ナトリウム)を補充したRIPAバッファー(1% NP-40またはTriton X-100、1%デオキシコール酸ナトリウム、0.1% SDS、0.15 M NaCl、0.01 Mリン酸ナトリウムpH 7.2、1% Trasylol)などの溶解バッファー中で細胞集団を溶解するステップ、目的のTCR結合分子を細胞ライセートに加えるステップ、40℃で一定期間(例えば1〜4時間)インキュベートするステップ、プロテインAおよび/またはプロテインGセファロースビーズを細胞ライセートに加えるステップ、40℃で約1時間またはそれ以上インキュベートするステップ、溶解バッファー中でビーズを洗浄するステップおよびビーズをSDS/サンプルバッファーに再懸濁するステップを含む。目的のTCR結合分子が特定の抗原を免疫沈降させる能力は例えばウエスタンブロット分析によって評価することができる。当業者は、TCR結合分子とTCRポリペプチドとの結合を増加させかつバックグラウンドを減少させるために改変できるパラメータ(例えばセファロースビーズでの細胞ライセートの事前除去)に関して精通しているであろう。免疫沈降プロトコールに関するさらなる考察に関しては、例えば、Ausubel et al, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York at 10.16.1を参照のこと。
【０１６２】
ウエスタンブロット分析は、一般に、タンパク質サンプルを調製するステップ、ポリアクリルアミドゲル(例えば抗原の分子量に応じて8%〜20% SDS-PAGE)でのタンパク質サンプルの電気泳動ステップ、ポリアクリルアミドゲルからタンパク質サンプルをメンブレン、例えばニトロセルロース、PVDFまたはナイロンにトランスファーするステップ、ブロッキング溶液(例えば3% BSAまたは脱脂乳を含むPBS)中でメンブレンをブロックするステップ、洗浄バッファー(例えばPBS-Tween 20)中でメンブレンを洗浄するステップ、ブロッキングバッファー中で希釈された目的のTCR結合分子(例えば目的の抗体)でメンブレンをブロックするステップ、洗浄バッファー中でメンブレンを洗浄するステップ、ブロッキングバッファー中で希釈された酵素基質(例えば西洋わさびペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ)または放射性分子(例えば32Pまたは125I)にコンジュゲートされた抗体(TCR結合分子を認識する)でメンブレンをブロックするステップ、洗浄バッファー中でメンブレンを洗浄するステップ、およびTCRポリペプチドの存在を検出するステップを含む。当業者は、検出されるシグナルを増加させかつバックグラウンドノイズを減少させるために改変できるパラメータに関して精通しているであろう。ウエスタンブロットプロトコールに関するさらなる考察に関しては、例えば、Ausubel et al, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York at 10.8.1を参照のこと。
【０１６３】
ELISAは、TCRポリペプチドを調製するステップ、96ウェルマイクロタイタープレートのウェルをTCRポリペプチドでコーティングするステップ、検出可能な化合物、例えば酵素基質(例えば西洋わさびペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ)にコンジュゲートされた目的のTCR結合分子をウェルに加え、一定期間インキュベートするステップ、およびTCRポリペプチドの存在を検出するステップを含む。ELISAでは、目的のTCR結合分子は、検出可能な化合物にコンジュゲートされている必要はなく; その代わりに、検出可能な化合物にコンジュゲートされた抗体(目的のTCR結合分子を認識する)をウェルに加えることができる。さらに、TCRポリペプチドでウェルをコーティングする代わりに、TCR結合分子をウェルにコーティングしてよい。この場合、コーティングされたウェルにTCRポリペプチドを加えた後、検出可能な化合物にコンジュゲートされた抗体を加えることができる。当業者は、検出されるシグナルを増加させるために改変できるパラメータならびに当技術分野で公知のELISAの他のバリエーションに精通しているであろう。ELISAに関するさらなる考察に関しては、例えば、Ausubel et al, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York at 11.2.1を参照のこと。
【０１６４】
TCRポリペプチドに対するTCR結合分子の結合親和性およびTCR結合分子-TCRポリペプチド相互作用のオフレート(off-rate)は競合的結合アッセイによって測定することができる。競合的結合アッセイの1例は、増加量の非標識TCRポリペプチドの存在下での標識されたTCRポリペプチド(例えば、3Hまたは125I)と目的のTCR結合分子とのインキュベーションステップ、および標識されたTCRポリペプチドに結合しているTCR結合分子の検出ステップを含むラジオイムノアッセイである。TCRポリペプチドに関するTCR結合分子の親和性および結合オフレートは、スキャッチャードプロット分析によってデータから決定することができる。第2のTCR結合分子との競合を、ラジオイムノアッセイを使用して測定することもできる。この場合、増加量の第2の非標識TCR結合分子の存在下で、標識化合物(例えば、3Hまたは125I)にコンジュゲートされたTCR結合分子とTCRポリペプチドをインキュベートする。
【０１６５】
好ましい実施形態では、BIAcore動態解析を使用して、TCRポリペプチドに対するTCR結合分子の結合オンおよびオフレートを測定する。BIAcore動態解析は、チップ由来のTCRポリペプチドと、その表面に固定化されたTCR結合分子との結合および解離を分析するステップを含む。
【０１６６】
本発明のTCR結合分子、特に抗ヒトTCR抗体、および組成物は、T細胞活性化を調節するその能力に関してアッセイすることもできる。T細胞活性化は、例えばサイトカインおよび/またはT細胞活性化マーカーの発現レベルの変化を測定することによって決定することができる。免疫沈降およびその後のウエスタンブロット分析、ELISA、フローサイトメトリー、ノーザンブロット分析、およびRT-PCRを非限定的に含む当業者に公知の技術を使用して、サイトカインおよびT細胞活性化マーカーの発現を測定することができる。好ましい実施形態では、本発明のTCR結合分子または組成物を、IFN-γおよび/またはIL-2の発現を誘導するその能力に関して検査する。
【０１６７】
本発明の抗TCR抗体、および組成物は、T細胞シグナル伝達を誘導するその能力に関してアッセイすることもできる。T細胞シグナル伝達を誘導する本発明の抗TCR抗体または組成物の能力は例えばキナーゼアッセイおよび電気泳動シフトアッセイ(EMSA)によってアッセイすることができる。
【０１６８】
本発明の抗TCR抗体、および組成物は、T細胞増殖を調節するその能力に関してin vitroまたはin vivoで検査することができる。例えば、T細胞増殖を調節する本発明の抗TCR抗体または組成物の能力は、例えば3H-チミジン取り込み、トリパンブルー細胞カウント、および蛍光標識細胞選別(FACS)によって評価することができる。
【０１６９】
本発明の抗ヒトTCR抗体、および組成物は、細胞溶解を誘発するその能力に関してin vitroまたはin vivoで検査することができる。例えば、細胞溶解を誘発する本発明の抗TCR抗体または組成物の能力は、例えば51Cr放出アッセイによって評価することができる。
【０１７０】
本発明の抗TCR抗体、および組成物は、末梢血T細胞の枯渇を媒介するその能力に関してin vitroまたはin vivoで検査することができる。例えば、末梢血T細胞の枯渇を媒介する本発明の抗TCR抗体または組成物の能力は、例えばフローサイトメトリー分析を使用してT細胞カウントを測定することによって評価することができる。
【０１７１】
本発明の抗TCR抗体、および組成物は、末梢血リンパ球カウントを媒介するその能力に関してin vivoで検査することができる。例えば、末梢血リンパ球カウントを媒介する本発明の抗TCR抗体または組成物の能力は、例えば、被験体から末梢血のサンプルを取得し、例えばフィコール勾配を使用して末梢血の他の成分、例えば血漿からリンパ球を分離し、かつトリパンブルーを使用してリンパ球をカウントすることによって評価することができる。
【０１７２】
一部の実施形態では、本発明のTCR抗体のin vivo活性を異種移植ヒト腫瘍モデルにおいて決定することができる。TCRおよび/またはその抗原を発現する任意の癌セルラインを使用して腫瘍を確立することができる。一部の実施形態では、2種の癌セルラインを用いて腫瘍を確立し、第1の癌セルラインは該抗原の低い発現によって特徴付けられ、第2の癌セルラインは、第2の癌セルラインは該同一抗原の高い発現によって特徴付けられる。そして腫瘍クリアランスは、当業者に公知の方法を使用して、第1および第2の癌セルライン上の抗原に免疫特異的に結合する抗TCR抗体、および養子移入されたヒト単球およびMDMをエフェクター細胞として有する適切なマウスモデル、例えばBalb/cヌードマウスモデル(例えばJackson Laboratories, Taconic)を使用して測定することができる。
【０１７３】
本発明の抗体のin vivo活性を検査するための典型的な方法は、以下のステップ: TCRまたはその抗原の発現によって特徴付けられる癌セルラインを使用して異種移植マウスモデルを確立するステップおよび腫瘍クリアランスの媒介での本発明の抗体の影響を測定するステップを含んでよい。好ましくは、2種の癌セルラインを使用して並行してin vivo活性を検査し、第1の癌セルラインは該抗原の低レベルの発現によって特徴付けられ、第2の癌セルラインは、第1の癌セルラインと比べて高レベルで発現される同一抗原によって特徴付けられる。ゆえにこれらの実験は、腫瘍クリアランスにおける本発明の抗体の役割についての評価の厳密さを高める。異種移植腫瘍モデルを確立するために、例えばMatrigel (Becton Dickinson)を使用して例えば8匹の年齢および体重適合雌性ヌード胸腺欠損マウスに例えばs.c.で5x106生細胞を注射することができる。腫瘍の推定重量は式: 長さx (幅)2/2によって決定することができ; 好ましくは3グラムを超えない。それぞれマウス体重(mbw) 1グラムあたり例えば1〜5μgの用量で抗体を注射することができる。初回注射の後、4〜6週間、2μg/週で抗体を毎週注射する。ある群のマウスは治療用抗体を受けず、無関係のアイソタイプコントロール抗体が注射される。マウスを4群に配置し、毎週3回モニターする。
【０１７４】
異種移植腫瘍モデルのエンドポイントは、当業者に公知の方法を使用して、腫瘍のサイズ、マウスの体重、生存期間、および癌の組織化学的および組織病理学的検査に基づいて決定される。腫瘍増殖の基準は、腹腔膨張、腹腔中の明らかな塊の存在であってよい。好ましくは接種後の日数に対する腫瘍重量の評価を算出する。対照群の基準と比較された処置群のマウスの上述の基準の比較は、腫瘍クリアランスの増強における本発明の抗体の役割を規定する。好ましくは、抗体処置動物は、対照群の後のさらに2か月間、観察下に置かれる。
【０１７５】
好ましくは、本発明の抗体は、癌治療用抗体と比べて、少なくとも14日、少なくとも21日、少なくとも28日、または少なくとも35日の期間にわたって同一の用量、例えば10μg /gで投与された場合に、腫瘍を減少させる増強された効力を有する。最も好ましい実施形態では、本発明の抗体は、同一用量での癌治療用抗体の投与と比べて、少なくとも10倍、少なくとも100倍、少なくとも1000倍、腫瘍サイズを減少させる。さらに別の好ましい実施形態では、本発明の抗体は腫瘍を完全に根絶する。
【０１７６】
本発明の医薬組成物または抗TCR抗体のいくつかの態様は、好ましくは、ヒトでの使用前に所望の治療活性に関して、in vitroで、細胞培養系で、および動物モデル生物、例えばげっ歯類動物モデル系で試験される。例えば、特定の医薬組成物の投与が望ましいかどうかを決定するために使用できるアッセイには、細胞培養アッセイが含まれ、該アッセイでは、患者組織サンプルを培養物中で培養し、医薬組成物に曝露するかまたは他の様式で医薬組成物と接触させ、組織サンプルに対する該組成物の影響を観察する。組織サンプルは患者からの生検によって取得することができる。この試験は、個別の各患者についての治療的に最も有効な腫瘍標的化細菌および治療的に最も有効な治療用分子)の特定を可能にする。種々の特定の実施形態では、自己免疫性または炎症性障害に関与する細胞タイプの代表的細胞(例えばT細胞)を用いてin vitroアッセイを実施し、本発明の医薬組成物が該細胞タイプに対して所望の効果を有するかどうかを決定することができる。
【０１７７】
本発明によれば、抗TCR抗体の予防的および/または治療的効力を実証するためにヒト被験体での臨床試験を実施する必要はない。抗TCR抗体を使用するin vitroおよび動物モデル研究をヒトに外挿することができ、該抗TCR抗体の予防的および/または治療的有用性を実証するために十分である。
【０１７８】
抗TCR抗体は、ヒトでの使用前に、好適な動物モデル系で試験することができる。そのような動物モデル系には、非限定的に、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ブタ、イヌ、ウサギ、などが含まれる。当技術分野で周知の任意の動物系を使用してよい。本発明の特定の実施形態では、マウスモデル系でTCR結合分子を試験する。そのようなモデル系は広く使用され、当業者に周知である。TCR結合分子は繰り返し投与することができる。該手順のいくつかの態様はさまざまである。該態様には、TCR結合分子を投与する時間方式、およびそのような物質を別々にまたは混合物として投与するかどうか、が含まれる。
【０１７９】
当技術分野で公知でかつ広く使用される関節炎または炎症性疾患の原理的な動物モデルには、アジュバント誘発関節炎ラットモデル、コラーゲン誘発関節炎ラットおよびマウスモデルおよび抗原誘発関節炎ラット、ウサギおよびハムスターモデルが含まれ、それらはすべて、Crofford L.J. and Wilder R.L., "Arthritis and Autoimmunity in Animals", in Arthritis and Allied Conditions: A Textbook of Rheumatology, McCarty et al.(eds.), Chapter 30 (Lee and Febiger, 1993)(該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)に記載される。コラーゲン誘発関節炎(CIA)はヒト自己免疫疾患である関節リウマチ(RA)の動物モデルである(Trenthorn et al., 1977, J. Exp. Med.146:857)。この疾患は、異種II型コラーゲンの投与によって多数の"種で誘発することができる(Courtenay et al., 1980, Nature 283:665; およびCathcart et at, 1986, Lab. Invest.54:26)。関節炎の動物モデルに関しては、さらに、例えばHolmdahl, R., 1999, Curr. Biol. 15:R528-530を参照のこと。
【０１８０】
さらに、炎症性腸疾患の動物モデルを使用して、本発明の抗TCR抗体または医薬組成物の効力を評価することもできる(Kim et al., 1992, Scand. J. Gastroentrol. 27:529-537; Strober, 1985, Dig. Dis. Sci. 30(12 Suppl):3S-lOS)。潰瘍性大腸炎(ulcerative cholitis)およびクローン病は、動物で誘発できるヒト炎症性腸疾患である。アミロペクチン、カラゲーン、硫酸アミロペクチン、および硫酸デキストランを非限定的にを含む硫酸化多糖またはトリニトロベンゼンスルホン酸(TNBS)および酢酸を非限定的に含む化学刺激剤を動物に経口投与して、炎症性腸疾患を誘発することができる。
【０１８１】
喘息の動物モデルを使用して、本発明の抗TCR抗体または医薬組成物の効力を評価することもできる。そのような1モデルの例はマリン養子移入モデル(marine adoptive transfer model)であり、該モデルでは、TH 1またはTH2レシピエントマウスのエアロアレルゲン誘発がTHエフェクター細胞の気道への遊走を生じさせ、激しい好中球(TH 1)およびエオシン好性(TH2)肺粘膜炎症反応と関連している(Cohn et al., 1997, J. Exp. Med. 1861737-1747)。
【０１８２】
自己免疫性障害の動物モデルを使用して、本発明の抗TCR抗体または医薬組成物の効力を評価することもできる。1型糖尿病、甲状腺自己免疫、全身性エリテマトーデス(systemic lupus eruthematosus)、および糸球体腎炎などの自己免疫性障害の動物モデルが開発されている(Bluestone et al., 2004, PNAS 101:14622-14626; Flanders et al., 1999, Autoimmunity 29:235-246; Krogh et al., 1999, Biochimie 81:511-515; Foster, 1999, Semin. Nephrol. 19:12-24)。
【０１８３】
本発明の抗TCR抗体または医薬組成物の効力は、そのような自己免疫性障害モデルにおいて実験的アレルギー性脳脊髄炎(EAE)モデルとして試験することもできる。EAEは中枢神経系(CNS)の実験的自己免疫疾患であり(Zamvil et al, 1990, Ann. Rev, Immunol. 8:579)、ヒト自己免疫症状である多発性硬化症(MS)の疾患モデルである。EAEは、T細胞によって媒介される細胞媒介性自己免疫性障害の例である。EAEは、CNSから精製されたミエリン塩基性タンパク質(MBP)または脳炎誘発性プロテオリピド(PLP)の免疫化によって哺乳動物種で容易に誘発される。SJL/Jマウスはマウス(H-2u)の感受性系統であり、EAEを誘発されると、これらのマウスは急性麻痺性疾患を発症し、CNS内で急性細胞浸潤が特定可能である。EAEは、RAG-1-欠損バックグラウンドのMBP1-17ペプチド特異的T細胞受容体(TCR)トランスジェニックマウス(TgMBP+)で自然に発生する(Lafaille et al., 1994, Cell 78:399)。
【０１８４】
さらに、当業者に公知の任意のアッセイを使用して、本明細書中で開示される抗TCR抗体または医薬組成物を自己免疫性および/または炎症性疾患に関して評価することができる。
【０１８５】
本発明の抗TCR抗体または医薬組成物の毒性および/または効力は、例えばLD50 (集団の50%に対して致死の用量)およびED50 (集団の50%で治療的に有効な用量)を決定するための細胞培養物または実験動物での標準製薬手順によって決定することができる。毒作用と治療効果との間の用量比が治療係数であり、それはLD50/ED50比として表記することができる。大きい治療係数を示す抗TCR抗体が好ましい。毒性副作用を示す抗TCR抗体を使用してよいが、非感染細胞への潜在的な損傷を最小にし、それにより副作用を減少させるためにそのような物質を罹患組織の部位にターゲティングする送達系を設計するよう注意するべきである。
【０１８６】
細胞培養アッセイおよび動物試験から得られるデータを、ヒトでの使用のための抗TCR抗体の用量範囲の処方において使用することができる。そのような物質の用量は、好ましくは、毒性をほとんど伴わないかまたはまったく伴わないED50を含む循環濃度の範囲内である。用いられる剤形および利用される投与経路に応じて用量はこの範囲内で変動する。本発明の方法で使用される任意の物質に関して、治療有効量を、細胞培養アッセイから最初に評価することができる。用量は、細胞培養物中で決定されるIC50 (すなわち症状の最大半減阻害を達成する試験化合物の濃度)を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて処方することができる。そのような情報を使用して、ヒトで有用な用量を、より正確に決定することができる。血漿中のレベルは例えば高性能液体クロマトグラフィーによって測定することができる。
【０１８７】
自己免疫性障害の予防または治療での効力は、例えば自己免疫性障害の1種以上の症状を減少させるか、平均の絶対的リンパ球カウントを減少させるか、T細胞活性化を減少させるか、T細胞増殖を減少させるか、サイトカイン生産を減少させるか、または1種以上の特定のサイトカインプロファイルを調節する、本発明の抗TCR抗体または組成物の能力を検出することによって示すことができる。糖尿病の治療での効力は、例えば糖尿病の1種以上の症状を減少させるか、MMTTに対するCペプチド応答を保存するか、HA1またはHA1cのレベルを減少させるか、日々のインスリン必要量を減少させるか、または膵島組織でのT細胞活性化を減少させる、本発明の抗TCR抗体または組成物の能力を検出することによって示すことができる。炎症性障害の予防または治療での効力は、例えば炎症性障害の1種以上の症状を減少させるか、T細胞活性化を減少させるか、T細胞増殖を減少させるか、1種以上のサイトカインプロファイルを調節するか、サイトカイン生産を減少させるか、関節、器官または組織の炎症を減少させるか、または生活の質を向上させる、抗TCR抗体の能力を検出することによって示すことができる。
【０１８８】
炎症性疾患活性の変化は、圧通性(tender)および腫脹した関節カウント、疼痛および疾患活性に関する患者および医師のグローバルスコア、およびESRICRPによって評価することができる。構造的関節損傷の進行は、手、手関節、および足のX線の定量的スコアリングによって評価することができる(Sharp法)。炎症性障害を有するヒトでの機能状態の変化は、Health Assessment Questionnaire (HAQ)を使用して評価することができ、生活の質の変化をSF-36で評価する。
【０１８９】
5.9  抗体の製造方法
TCRポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体は、抗体の合成のための技術分野で公知の任意の方法によって、特に化学合成または好ましくは組換え発現技術によって製造することができる。
【０１９０】
抗原に免疫特異的に結合するポリクローナル抗体は、当技術分野で周知の種々の手順によって製造することができる。例えば、ウサギ、マウス、ラット、などを非限定的に含む種々の宿主動物にヒト抗原を投与して、ヒト抗原に特異的なポリクローナル抗体を含む血清の生産を誘発することができる。種々のアジュバントを使用して、宿主種に応じて、免疫学的応答を増加させることができ、該アジュバントには、非限定的に、フロイント(完全および不完全)、鉱物ゲル、例えば水酸化アルミニウム、表面活性物質、例えばリゾレシチン、プルロニックポリオール(pluronic polyols)、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、および潜在的に有用なヒトアジュバント、例えばBCG (カルメット・ゲラン桿菌)およびcorynebacterium parvumが含まれる。そのようなアジュバントも当技術分野で周知である。
【０１９１】
当技術分野で公知の多種多様な技術を使用してモノクローナル抗体を製造することができ、該技術には、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイテクノロジー、またはそれらの組み合わせの使用が含まれる。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野で公知でかつ例えば、Harlow et al., Antibodies:  A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling, et al., in:  Monoclonal Antibodies and T cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)(該文献は参照によりその全体が組み入れられる)で教示されるものを含むハイブリドーマ技術を使用して製造することができる。本明細書中で使用される用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマテクノロジーによって製造される抗体に限定されない。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む単一クローン由来の抗体を表し、その製造方法ではない。
【０１９２】
ハイブリドーマテクノロジーを使用する特定の抗体の製造およびスクリーニング方法は、当技術分野で慣用的でかつ周知である。簡潔に言えば、マウスをTCR抗原で免疫化し、免疫応答が検出されたら、例えば、TCR抗原(好ましくはTCRα鎖の細胞外定常ドメインの抗原)に特異的な抗体をマウス血清中で検出し、マウス脾臓を回収し、脾細胞を単離することができる。そして脾細胞を周知の技術によって任意の好適な骨髄腫細胞、例えばATCCから入手可能なセルラインSP20由来の細胞に融合させる。ハイブリドーマを選択し、限界希釈によってクローニングする。そして当技術分野で公知の方法によって本発明のポリペプチドに結合可能な抗体を分泌する細胞に関してハイブリドーマクローンをアッセイする。陽性ハイブリドーマクローンでマウスを免疫化することによって、高レベルの抗体を一般に含む腹水を作製することができる。
【０１９３】
したがって、本発明は、本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することによって抗体を製造する方法を提供し、該方法では、好ましくは、TCR抗原で免疫化されたマウスから単離された脾細胞を骨髄腫細胞と融合させ、そして融合から得られたハイブリドーマを、TCR抗原に結合できる抗体を分泌するハイブリドーマクローンに関してスクリーニングするることによってハイブリドーマを製造する。
【０１９４】
特定のTCR抗原(好ましくはTCRα鎖の細胞外定常ドメインの抗原)を認識する抗体断片は、当業者に公知の任意の技術によって作製することができる。例えば、本発明のFabおよびF(ab')2断片は、パパイン(Fab断片を製造するため)またはペプシン(F(ab')2断片を製造するため)などの酵素を使用する免疫グロブリン分子のタンパク質分解による切断によって製造することができる。F(ab')2断片は、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のCH1ドメインを含む。さらに、本発明の抗体は、当技術分野で公知の種々のファージディスプレイ法を使用して製造することもできる。
【０１９５】
ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインを、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保持するファージ粒子の表面にディスプレイする。特に、VHおよびVLドメインをコードするDNA配列を動物cDNAライブラリー(例えば罹患組織のヒトまたはマウスcDNAライブラリー)から増幅する。VHおよびVLドメインをコードするDNAをscFvリンカーとともにPCRによって組換えて、ファージミドベクターにクローニングする。ベクターをE. coliにエレクトロポレーションし、E. coliにヘルパーファージを感染させる。これらの方法で使用されるファージは典型的にfdおよびM13を含む繊維状ファージであり、VHおよびVLドメインは、通常、組換えによってファージ遺伝子IIIまたは遺伝子VIIIに融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、例えば標識抗原または、固体表面またはビーズに結合しているかまたは捕獲されている抗原を使用して選択または特定することができる。本発明の抗体を作製するために使用できるファージディスプレイ法の例には、Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50; Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186; Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958; Persic et al., 1997, Gene 187:9-18; Burton et al., 1994, Advances in Immunology 57:191-280; PCT Application No. PCT/GB91/O1 134; International Publication Nos. WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/1 1236, WO 95/15982, WO 95/20401, およびWO97/13844; およびU.S. Patent Nos. 5,698,426, 5,223,409, 5,403,484, 5,580,717, 5,427,908, 5,750,753, 5,821,047, 5,571,698, 5,427,908, 5,516,637, 5,780,225, 5,658,727, 5,733,743および5,969,108 (各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)に開示されるものが含まれる。
【０１９６】
上記参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージから抗体コード領域を単離し、ヒト抗体を含む完全抗体、または任意の他の所望の抗原結合性フラグメントを作製するために使用し、例えば下記のように哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の所望の宿主中で発現させることができる。PCT publication No. WO 92/22324; Mullinax et al., 1992, BioTechniques 12(6):864-869; Sawai et al., 1995, AJRI 34:26-34; およびBetter et al., 1988, Science 240:1041-1043 (該文献は参照によりその全体が組み入れられる)に開示される方法などの当技術分野で公知の方法を使用して、Fab、Fab'およびF(ab')2断片を組換え生産するための技術を用いることもできる。
【０１９７】
完全抗体を作製するために、VHまたはVLヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するためのフランキング配列を含むPCRプライマーを使用してscFvクローン中のVHまたはVL配列を増幅することができる。当業者に公知のクローニング技術を利用して、PCR増幅されたVHドメインを、VH定常領域、例えばヒトガンマ4定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、PCR増幅されたVLドメインを、VL定常領域、例えばヒトカッパまたはラムダ(lamba)定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。好ましくは、VHまたはVLドメインを発現するためのベクターは、EF-1αプロモーター、分泌シグナル、可変ドメインのためのクローニング部位、定常ドメイン、および選択マーカー、例えばネオマイシンを含む。VHおよびVLドメインを、必要な定常領域を発現する1ベクターにクローニングしてもよい。そして重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターをセルラインに共トランスフェクトして、当業者に公知の技術を使用して、完全長抗体、例えばIgGを発現する安定または一時的セルラインを作製する。
【０１９８】
ヒトでの抗体のin vivo使用およびin vitro検出アッセイを含む一部の用途では、ヒトまたはキメラ抗体を使用することが好ましい。完全ヒト抗体はヒト被験体の治療処置に特に望ましい。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを使用する上記ファージディスプレイ法を含む当技術分野で公知の種々の方法によって作製することができる。また、U.S. Patent Nos. 4,444,887および4,716,111; およびInternational Publication Nos. WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735, およびWO 91/10741 (各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。
【０１９９】
当技術分野で周知の方法によって、単ドメイン抗体、例えば軽鎖を欠く抗体を製造することができる。Riechmann et al., 1999, J. Immuno. 231:25-38; Nuttall et al., 2000, Curr. Pharm. Biotechnol. 1(3):253-263; Muylderman, 2001, J. Biotechnol. 74(4):277302; U.S. Patent No. 6,005,079; およびInternational Publication Nos. WO 94/04678, WO 94/25591, およびWO 01/44301 (各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。
【０２００】
5.10  抗TCR抗体療法
特定の実施形態では、本発明の方法にしたがう抗TCR抗体での治療過程は、2か月、4か月、6か月、8か月、9か月、10か月、12か月、15か月、18か月、24か月、30か月、または36か月間隔で反復される。特定の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での治療の効力は、以前の治療後の2か月、4か月、6か月、9か月、12か月、15か月、18か月、24か月、30か月、または36か月の時点で、本明細書中に記載されるように、または当技術分野で知られているように測定される。
【０２０１】
別の実施形態では、自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍の1種以上の症状を予防、治療または改善するために、1種以上の抗TCR抗体の約0.5〜50μg/kg、約0.5〜40μg/kg、約0.5〜30μg/kg、約0.5〜20μg/kg、約0.5〜15μg/kg、約0.5〜10μg/kg、約0.5〜5μg/kg、約1〜5μg/kg、約1〜10μg/kg、約20〜40μg/kg、約20〜30μg/kg、約22〜28μg/kgまたは約25〜26μg/kgの1以上の単位用量を被験体に投与する。別の実施形態では、自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍の1種以上の症状を予防、治療または改善するために、1種以上の抗TCR抗体の200μg/kg、178μg/kg、180μg/kg、128μg/kg、100μg/kg、95μg/kg、90μg/kg、85μg/kg、80μg/kg、75μg/kg、70μg/kg、65μg/kg、60μg/kg、55μg/kg、50μg/kg、4Sμg/kg、40μg/kg、35μg/kg、30μg/kg、26μg/kg、25μg/kg、20μg/kg、15μg/kg、13μg/kg、10μg/kg、6.5μg/kg、5μg/kg、3.2μg/kg、3μg/kg、2.5μg/kg、2μg/kg、1.6μg/kg、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.25μg/kg、0.1μg/kg、または0.05μg/kgの1以上の単位用量を被験体に投与する。
【０２０２】
1実施形態では、自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍の1種以上の症状を予防、治療または改善するために、本発明の1種以上の抗TCR抗体の200μg/kg以下、175μg/kg以下、150μg/kg以下、128μg/kg以下、100μg/kg以下、95μg/kg以下、90μg/kg以下、85μg/kg以下、80μg/kg以下、75μg/kg以下、70μg/kg以下、65μg/kg以下、60μg/kg以下、55μg/kg以下、50μg/kg以下、45μg/kg以下、40μg/kg以下、35μg/kg以下、30μg/kg以下、25μg/kg以下、20μg/kg以下、15μg/kg以下、10μg/kg以下、5μg/kg以下、2.5μg/kg以下、2μg/kg以下、1.5μg/kg以下、1μg/kg以下、0.5μg/kg以下、0.25μg/kg以下、0.1μg/kg以下、または0.05μg/kg以下の1以上の用量を被験体に投与する。
【０２０３】
特定の実施形態では、約5〜1200μg/m2、好ましくは51〜826μg/m2の1以上の用量を被験体に投与する。別の実施形態では、自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍の1種以上の症状を予防するか、治療するか、その進行を減速させるか、その発症を遅延させるかまたは改善するための、1種以上の抗TCR抗体の1200μg/m2、1150μg/m2、1100μg/m2、1050μg/m2、1000μg/m2、950μg/m2、900μg/m2、850μg/m2、800μg/m2、750μg/m2、700μg/m2、650μg/m2、600μg/m2、550μg/m2、500μg/m2、450μg/m2、400μg/m2、350μg/m2、300μg/m2、250μg/m2、200μg/m2、150μg/m2、100μg/m2、50μg/m2、40μg/m2、30μg/m2、20μg/m2、15μg/m2、10μg/m2、または5μg/m2の1以上の単位用量を被験体に投与する。
【０２０４】
別の実施形態では、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量の1以上の用量を含む治療方式を被験体に実施し、該治療方式では、治療過程は2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、11日、12日、13日または14日にわたって実施される。1実施形態では、治療方式は、毎日、1日おき、2日おき、または3日おきに1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量の用量を投与するステップを含む。特定の実施形態では、治療方式は、14用量、13、用量、13用量、12用量、11用量、10用量、9用量、または8用量が投与されるまで、所定の週の月曜日、火曜日、水曜日、木曜日に1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量の用量を投与し、かつ同じ週の金曜日、土曜日、および日曜日には1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量の用量を投与しないステップを含む。特定の実施形態では、投与される用量は治療方式のそれぞれの日で同一である。特定の実施形態では、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量の1以上の用量を含む治療方式を被験体に実施し、該治療方式では、予防または治療有効量は、200μg/kg/日、175μg/kg/日、150μg/kg/日、125μg/kg/日、100μg/kg/日、95μg/kg/日、90μg/kg/日、85μg/kg/日、80μg/kg/日、75μg/kg/日、70μg/kg/日、65μg/kg/日、60μg/kg/日、55μg/kg/日、50μg/kg/日、45μg/kg/日、40μg/kg/日、35μg/kg/日、30μg/kg/日、26μg/kg/日、25μg/kg/日、20μg/kg/日、15μg/kg/日、13μg/kg/日、10μg/kg/日、6.5μg/kg/日、5μg/kg/日、3.2μg/kg/日、3μg/kg/日、2.5μg/kg/日、2μg/kg/日、1.6μg/kg/日、1.5μg/kg/日、1μg/kg/日、0.5μg/kg/日、0.25μg/kg/日、0.1μg/kg/日、または0.05μg/kg/日であり; および/または該治療方式では、予防または治療有効量は、1200μg/m2/日、1150μg/m2/日、1100μg/m2/日、1050μg/m2/日、1000μg/m2/日、950μg/m2/日、900μg/m2/日、850μg/m2/日、800μg/m2/日、750μg/m2/日、700μg/m2/日、650μg/m2/日、600μg/m2/日、550μg/m2/日、500μg/m2/日、450μg/m2/日、400μg/m2/日、350μg/m2/日、300μg/m2/日、250μg/m2/日、200μg/m2/日、150μg/m2/日、100μg/m2/日、50μg/m2/日、40μg/m2/日、30μg/m2/日、20μg/m2/日、15μg/m2/日、10μg/m2/日、または5μg/m2/日である。別の実施形態では、自己免疫疾患またはT細胞悪性腫瘍の1種以上の症状を予防、治療または改善するために、1種以上の抗TCR抗体の1200μg/m2以下、1150μg/m2以下、1100μg/m2以下、1050μg/m2以下、1000μg/m2以下、950μg/m2以下、900μg/m2以下、850μg/m2以下、800μg/m2以下、750μg/m2以下、700μg/m2以下、650μg/m2以下、600μg/m2以下、550μg/m2以下、500μg/m2以下、450μg/m2以下、400μg/m2以下、350μg/m2以下、300μg/m2以下、250μg/m2以下、200μg/m2以下、150μg/m2以下、100μg/m2以下、50μg/m2以下、40μg/m2以下、30μg/m2以下、20μg/m2以下、15μg/m2以下、10μg/m2以下、または5μg/m2以下の静脈内用量を約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約50分、約40分、約30分、約20分、約10分、約5分、約2分、約1分、約30秒または約10秒にわたって投与する。治療方式の期間にわたる総用量は、好ましくは、トータルで9000μg/m2、8000μg/m2、7000μg/m2、6000μg/m2未満であり、5000μg/m2、4000μg/m2、3000μg/m2、2000μg/m2、または1000μg/m2未満であってよい。特定の実施形態では、治療方式で投与される総用量は、100μg/m2〜200μg/m2、100μg/m2〜500μg/m2、100μg/m2〜1000μg/m2、または500μg/m2〜1000μg/m2である。
【０２０５】
好ましい実施形態では、用量は、1種以上の抗TCR抗体の1日の予防または治療有効量を達成するまで、治療方式の最初の1/4、最初の1/2または最初の2/3の投与にわたって(例えば、1日1回投与の10、12、14、16、18または20日治療方式の最初の2、3、4、5、または6日にわたって)増加する。特定の実施形態では、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量の1以上の用量を含む治療方式を被験体に実施し、該治療方式では、予防または治療有効量を、治療が進行する1日ごとに、例えば、0.01μg/kg、0.02μg/kg、0.04μg/kg、0.05μg/kg、0.06μg/kg、0.08μg/kg、0.1μg/kg、0.2μg/kg、0.25μg/kg、0.5μg/kg、0.75μg/kg、1μg/kg、1.5μg/kg、2μg/kg、4μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、15μg/kg、20μg/kg、25μg/kg、30μg/kg、35μg/kg、40μg/kg、45μg/kg、50μg/kg、55μg/kg、60μg/kg、65μg/kg、70μg/kg、75μg/kg、80μg/kg、85μg/kg、90μg/kg、95μg/kg、100μg/kg、または125μg/kgずつ増加させるか; または、例えば、1μg/m2、5μg/m2、10μg/m2、15μg/m2、20μg/m2、30μg/m2、40μg/m2、50μg/m2、60μg/m2、70μg/m2、80μg/m2、90μg/m2、100μg/m2、150μg/m2、200μg/m2、250μg/m2、300μg/m2、350μg/m2、400μg/m2、450μg/m2、500μg/m2、550μg/m2、600μg/m2、または650μg/m2ずつ増加させる。特定の実施形態では、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量の1以上の用量を含む治療方式を被験体に実施し、該治療方式では、1種以上の抗TCR抗体の1日の予防または治療有効量が達成されるまで、予防または治療有効量を1.25倍、1.5倍、2倍、2.25倍、2.5倍、または5倍増加させる。
【０２０６】
特定の実施形態では、自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍の1種以上の症状を予防、治療または改善するために、1種以上の抗TCR抗体の200μg/kg以下、好ましくは175μg/kg以下、150μg/kg以下、125μg/kg以下、100μg/kg以下、95μg/kg以下、90μg/kg以下、85μg/kg以下、80μg/kg以下、75μg/kg以下、70μg/kg以下、65μg/kg以下、60μg/kg以下、55μg/kg以下、50μg/kg以下、45μg/kg以下、40μg/kg以下、35μg/kg以下、30μg/kg以下、25μg/kg以下、20μg/kg以下、15μg/kg以下、10μg/kg以下、5μg/kg以下、2.5μg/kg以下、2μg/kg以下、1.5μg/kg以下、1μg/kg以下、0.5μg/kg以下、または0.5μg/kg以下の1以上の用量を被験体に筋肉内投与する。
【０２０７】
別の実施形態では、自己免疫性障害の1種以上の症状を予防、治療または改善するために、1種以上の抗TCR抗体の200μg/kg以下、好ましくは175μg/kg以下、150μg/kg以下、125μg/kg以下、100μg/kg以下、95μg/kg以下、90μg/kg以下、85μg/kg以下、80μg/kg以下、75μg/kg以下、70μg/kg以下、65μg/kg以下、60μg/kg以下、55μg/kg以下、50μg/kg以下、45μg/kg以下、40μg/kg以下、35μg/kg以下、30μg/kg以下、25μg/kg以下、20μg/kg以下、15μg/kg以下、10μg/kg以下、5μg/kg以下、2.5μg/kg以下、2μg/kg以下、1.5μg/kg以下、1μg/kg以下、0.5μg/kg以下、または0.5μg/kg以下の1以上の用量を被験体に皮下投与する。
【０２０８】
別の実施形態では、自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍の1種以上の症状を予防、治療または改善するために、1種以上の抗TCR抗体の100μg/kg以下、好ましくは95μg/kg以下、90μg/kg以下、85μg/kg以下、80μg/kg以下、75μg/kg以下、70μg/kg以下、65μg/kg以下、60μg/kg以下、55μg/kg以下、50μg/kg以下、45μg/kg以下、40μg/kg以下、35μg/kg以下、30μg/kg以下、25μg/kg以下、20μg/kg以下、15μg/kg以下、10μg/kg以下、5μg/kg以下、2.5μg/kg以下、2μg/kg以下、1.5μg/kg以下、1μg/kg以下、0.5μg/kg以下、または0.5μg/kg以下の1種以上の用量を被験体に静脈内投与する。別の実施形態では、自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍の1種以上の症状を予防、治療または改善するために、1種以上の抗TCR抗体の100μg/kg以下、95μg/kg以下、90μg/kg以下、85μg/kg以下、80μg/kg以下、75μg/kg以下、70μg/kg以下、65μg/kg以下、60μg/kg以下、55μg/kg以下、50μg/kg以下、45μg/kg以下、40μg/kg以下、35μg/kg以下、30μg/kg以下、25μg/kg以下、20μg/kg以下、15μg/kg以下、10μg/kg以下、5μg/kg以下、2.5μg/kg以下、2μg/kg以下、1.5μg/kg以下、1μg/kg以下、0.5μg/kg以下、または0.5μg/kg以下の静脈内用量を約6時間、約4時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約50分、約40分、約30分、約20分、約10分、約5分、約2分、約1分、約30秒または約10秒にわたって投与する。
【０２０９】
投薬治療方式の最初の日々に増加用量を投与する特定の実施形態では、治療方式の1日目の用量は5〜100μg/m2/日、好ましくは51μg/m2/日であり、3、4、5、6または7日目までにすぐ上で列挙される一日量に増加する。例えば、1日目に、約51μg/m2/日、2日目に約103μg/m2/日、3日目に約207μg/m2/日、4日目に約413μg/m2/日および治療方式のその後の日(例えば5〜14日目)に826μg/m2/日の用量を被験体に投与する。別の実施形態では、1日目に約227μg/m2/日、2日目に約459μg/m2/日、3日目およびその後の日に約919μg/m2/日の用量を被験体に投与する。別の実施形態では、1日目に約284μg/m2/日、2日目に約574μg/m2/日、3日目およびその後の日に約1148μg/m2/日の用量を被験体に投与する。
【０２１０】
他の実施形態では、初回量は1/4であり、1/2になり、治療方式の終了時に一日量に等しくなるが、6、8、10または12時間間隔で少しずつ投与される。例えば、13 ug/kg/日の用量を3〜4μg/kgの4回の用量で6時間間隔で投与して、抗体の投与によって引き起こされるサイトカイン放出のレベルを減少させる。
【０２１１】
特定の実施形態では、サイトカイン放出および他の悪影響の可能性を減少させるために、治療方式の最初の1、2、3、または4回の用量またはすべての用量を静脈内投与によってゆっくり投与する。例えば、約5分、約15分、約30分、約45分、約1時間、約2時間、約4時間、約6時間、約8時間、約10時間、約12時間、約14時間、約16時間、約18時間、約20時間、および約22時間にわたって51μg/m2/日の用量を投与してよい。特定の実施形態では、例えば20〜24時間の期間にわたってゆっくり注入することによって用量を投与する。特定の実施形態では、用量をポンプで注入し、好ましくは注入の進行に応じて投与される抗体の濃度を増加させる。
【０２１２】
他の実施形態では、用量を増加させながら、治療方式のフラクションセットを投与してよい。例えば、51μg/m2/日〜826μg/m2/日の上記治療方式では、フラクションは一日量の1/10、1/4、1/3、1/2、2/3または3/4であってよい。したがって、フラクションが1/10である場合、一日量は、1日目には5.1μg/m2であり、2日目には10.3μg/m2であり、3日目には20.7μg/m2であり、4日目には41.3μg/m2であり、5〜14日目には82.6μg/m2である。フラクションが1/4である場合、用量は、1日目には12.75μg/m2であり、2日目には25.5μg/m2であり、3日目には51μg/m2であり、4日目には103μg/m2であり、5〜14日目には207μg/m2である。フラクションが1/3である場合、用量は、1日目には17μg/m2であり、2日目には34.3μg/m2であり、3日目には69μg/m2であり、4日目には137.6μg/m2であり、5〜14日目には275.3μg/m2である。フラクションが1/2である場合、用量は、1日目には25.5μg/m2であり、2日目には51μg/m2であり、3日目には103μg/m2であり、4日目には207μg/m2であり、5〜14日目には413μg/m2である。フラクションが2/3である場合、用量は、1日目には34μg/m2であり、2日目には69μg/m2であり、3日目には137.6μg/m2であり、4日目には275.3μg/m2であり、5〜14日目には550.1μg/m2である。フラクションが3/4である場合、用量は、1日目には38.3μg/m2であり、2日目には77.3μg/m2であり、3日目には155.3μg/m2であり、4日目には309.8μg/m2であり、5〜14日目には620μg/m2である。
【０２１３】
特定の実施形態では、抗TCR抗体を1日量単位で数日間投与するのではなく、4時間、6時間、8時間、10時間、12時間、15時間、18時間、20時間、24時間、30時間または36時間にわたる連続様式での注入によって投与する。注入は一定であるか、または、例えば注入の最初の1、2、3、5、6、または8時間は低用量で出発し、その後、高用量に増加する。注入の経過にわたって、患者は、上記の代表的な治療方式で投与される量と等しい用量を服用する。例えば、約150μg/m2、200μg/m2、250μg/m2、500μg/m2、750μg/m2、1000μg/m2、1500μg/m2、2000μg/m2、3000μg/m2、4000μg/m2、5000μg/m2、6000μg/m2、7000μg/m2、8000μg/m2、または9000μg/m2の用量である。特に、注入の速度および持続時間は、投与後の被験体中の遊離抗ヒトTCR抗体のレベルを最小にするように設計される。特定の実施形態では、遊離抗TCR抗体のレベルは200 ng/ml遊離抗体を超えないべきである。さらに、注入は、少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、95%または100%のT細胞受容体コーティングおよびモジュレーションの組み合わせを達成するように設計される。
【０２１４】
特定の実施形態では、当技術分野で周知の方法によって測定された場合に、T細胞上のT細胞受容体複合体の、特定レベルのコーティングおよびモジュレーションの組み合わせを達成するように抗TCR抗体を投与する。例えばU.S.特許出願公開US 2003/0108548 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)の実施例11を参照のこと。特定の実施形態では、投薬治療方式によって、少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、95%または100%のT細胞受容体コーティングおよびモジュレーションの組み合わせが達成され、特定の実施形態では、遊離の抗TCR抗体はほとんど〜まったく検出されない(例えば、患者の血液中で200 ng/mL未満の薬物しか検出されない)。
【０２１５】
好ましい実施形態では、抗TCR抗体を非経口で、例えば、静脈内、筋肉内または皮下で投与するか、あるいは、経口投与する。抗TCR抗体は、徐放性製剤として投与してもよい。
【０２１６】
特定の実施形態では、1種以上の抗ヒトTCR抗体の予防または治療有効量の1以上の用量の投与または投薬方式の実施は、以下の望ましくない影響または悪影響: 生命徴候異常(発熱、頻脈、徐脈(bardycardia)、高血圧、低血圧)、血液学的イベント(貧血、リンパ球減少、白血球減少、血小板減少)、頭痛、悪寒、めまい、吐き気、無力、背痛、胸痛(胸部圧迫)、下痢、筋肉痛、疼痛、そう痒、乾癬、鼻炎、発汗、注射部位反応、血管拡張、日和見感染のリスクの増加、エプスタイン・バーウイルスの活性化、T細胞のアポトーシスおよび特定タイプの癌を発症するリスクの増加の1種以上を誘発しないか、または他の免疫抑制剤と比べて減少させる。別の特定の実施形態では、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量の1以上の用量の投与は、以下の望ましくない影響または悪影響: 生命徴候異常(発熱、頻脈、徐脈、高血圧、低血圧)、血液学的イベント(貧血、リンパ球減少、白血球減少、血小板減少)、頭痛、悪寒、めまい、吐き気、無力、背痛、胸痛(胸部圧迫)、下痢、筋肉痛、疼痛、そう痒、乾癬、鼻炎、発汗、注射部位反応、血管拡張、日和見感染のリスクの増加、エプスタイン・バーウイルスの活性化、T細胞のアポトーシスおよび特定タイプの癌を発症するリスクの増加の1種以上を誘発しないか、または他の免疫抑制剤と比べて減少させる。
【０２１７】
本発明にしたがって、自己免疫性障害の治療のための1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量を含む用量または投薬方式は、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量を含む最初または以前の投与または投薬方式後1か月、2か月、4か月、6か月、8か月、12か月、15か月、18か月または24か月またはそれ以上の時点で反復することができる。最初または以前の用量または投薬方式後の改善後に該自己免疫性障害に関連する症状が再発した場合、または本発明の方法にしたがう抗TCR抗体の初回量または最初の投薬方式後に該自己免疫性障害に関連する症状が改善しない場合に、当然、反復投与または投薬方式を施すことができる。例えば、糖尿病に関して、例えば、被験体の平均の1日のインスリン使用が、抗TCR抗体での最初または以前の治療後1か月、2か月、4か月、6か月、8か月、12か月、15か月、18か月または24か月またはそれ以上の時点で、治療前レベルと比較して少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%または少なくとも90%減少しない場合に、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量を含む反復投与または投薬方式を被験体に施すことができる。あるいは、糖尿病に関して、例えば、被験体のHA 1またはHA 1 Cレベルが、抗TCR抗体での最初または以前の治療後1か月、2か月、4か月、6か月、8か月、12か月、15か月、18か月または24か月またはそれ以上の時点で、治療前レベルと比較して少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%または少なくとも90%減少しない場合に、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量を含む反復投与または投薬方式を被験体に施すことができる。別の実施形態では、糖尿病に関して、例えば、被験体のCペプチド応答が、抗TCR抗体での最初または以前の治療後1か月、2か月、4か月、6か月、8か月、12か月、15か月、18か月または24か月またはそれ以上の時点で、治療前レベルと比較して5%を超えて、10%を超えて、20%を超えて、30%を超えて、40%を超えて、50%を超えて、60%を超えて、70%を超えて、80%を超えてまたは90%を超えて減少した場合に、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量を含む反復投与または投薬方式を被験体に施すことができる。
【０２１８】
5.10.1  糖尿病
他の実施形態では、1型糖尿病の1種以上の症状を治療するか、予防するか、またはその発症もしくは進行を減速もしくは遅延させるか、または改善するために、抗TCR抗体を慢性的に投与する。例えば、特定の実施形態では、上で考察された6〜14日の投薬方式の代わりとして、または前記治療方式の実施後にその治療効果を増強または維持するために、月1回、月2回、月3回、週1回またはさらにより頻繁に低用量の抗TCR抗体を投与する。そのような低用量は、1μg/m2〜100μg/m2のどこか、好ましくは、約5μg/m2、10μg/m2、15μg/m2、20μg/m2、25μg/m2、30μg/m2、35μg/m2、40μg/m2、45μg/m2、または50μg/m2であってよい。
【０２１９】
他の実施形態では、抗TCR抗体投薬方式の実施後のいつかの時点で、好ましくは1以上の生理学的パラメータに基づいて被験体に再び投薬してよく、または必然的に行ってもよい。投薬方式の実施の2か月、4か月、6か月、8か月、9か月、1年、15か月、18か月、2年、30か月または3年後にそのような再投薬を施し、かつ/またはそのような再投薬の必要性を評価してよく、それには、6か月、9か月、1年、15か月、18か月、2年、30か月または3年毎に無期限に治療過程を施すことが含まれる。
【０２２０】
特定の実施形態では、以下のもの: CD4/CD8細胞比、CD8細胞カウント、CD4/CD3インバージョン、CD4/CD25細胞比、CD4/FoxP3細胞比、CD4/CD40細胞比、CD4/IL-10細胞比、および/またはCD4/TGF-β細胞比の1つまたは組み合わせの測定に基づいて、次のラウンドの抗ヒトTCR抗体治療を被験体に施す。
【０２２１】
1型糖尿病の管理の治療に関して、次のラウンドの治療を施すかどうかを決定するための他のパラメータには、GADA、IA-2抗体または抗インスリン抗体などの抗島細胞抗体の出現または増加、または島細胞抗原に特異的なT細胞の出現もしくはそのレベルの増加が含まれる。β細胞の数またはβ細胞活性もしくは機能が、先行するラウンドの治療の実施中のβ細胞数または活性または機能と比較された場合に、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%または90%減少した場合に、次の投与を施すことができる。β細胞機能は、上で考察されるように、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、MMTT、OGTT、IGTT、または2相グルコースクランプに対するCペプチド応答、またはFirst Phase Insulin Release (FPIR)試験によって測定することができる。本明細書中で使用される用語「Cペプチド」とは、プロインスリンから、それがインスリンに変換されるときに、切断される31アミノ酸ペプチドを表す。プロインスリンは、A鎖、結合ペプチド(Cペプチド)、およびB鎖からなる。プロインスリンが切断された後、Cペプチドは、インスリンとともに膵臓のベータ細胞の分泌顆粒中にとどまり、グルコース刺激に応答してインスリンとともに分泌される。ゆえに、Cペプチドはインスリンと等モル量で膵臓から放出され、内因性インスリン生産のマーカーとして使用することができる。
【０２２２】
再投薬するかどうかを決定するために使用することができる他のパラメータには、HA1またはHA1cレベル、外因性インスリンの投与の必要性または外因性インスリンの用量の0.1 U/kg/日、0.2 U/kg/日、0.5 U/kg/日、0.6 U/kg/日、1 U/kg/日、または2 U/kg/日を超える増加が含まれる。例えば、MMTT、OGTT、IGTTまたは2相グルコースクランプ法に対する患者のCペプチド応答またはFPIRが治療前レベルの1%を超えて、5%を超えて、10%を超えて、20%を超えて、30%を超えて、40%を超えてまたは50%を超えて減少した場合に、次のラウンドの治療を被験体に施すことができる。特定の実施形態では、被験体が、40 pmol/ml/240分未満、50 pmol/ml/240分未満、60 pmol/ml/240分未満、70 pmol/ml/240分未満、80 pmol/ml/240分未満、または少なくとも90 pmol/ml/240分未満のAUCを生じさせる、MMTT、OGTT、IGTTまたは2相グルコースクランプ法(好ましくはMMTT)に対するCペプチド応答を有する場合に再投薬する。特定の実施形態では、被験体が300 pmol/l未満、400 pmol/l未満、500 pmol/l未満、600 pmol/l未満、または700 pmol/l未満のFPIRを有する場合に再投薬することができる。また、例えば、被験体のHA1またはHA1Cレベルが、治療前レベルと比較して少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%または少なくとも90%増加した場合、または絶対レベルが8%を超えるか、7.5%を超えるか、または7%を超えた場合に被験体に再投薬することができる。他の実施形態では、日、週または月ベースの低血糖エピソードまたはケトアシドーシスエピソードの出現またはその数の増加(例えば平均で1、2、3、4、5、8、10 15、または20の増加)、持続時間および/または重症度に基づいて、さらなる投与を施すことができる。
【０２２３】
特定の実施形態では、同一集団(すなわち、年齢、性別、人種、および全般的健康)中の糖尿病の指標または糖尿病の素因を有さない個体と比較され、本明細書中に記載されるかまたは当業者に公知の方法によって測定された場合に少なくとも99%、少なくとも95%、少なくとも90%、少なくとも85%、少なくとも80%、少なくとも75%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも60%、少なくとも50%の残存β細胞機能を有する1型糖尿病患者で抗ヒトTCR療法を使用する。特定の実施形態では、I型糖尿病の発症への素因は、絶食グルコースレベルの障害、すなわち絶食(8時間食物なし)後の100〜125 mg/dLのグルコースレベルの少なくとも1回の決定として現れるか、または75グラム経口ブドウ糖負荷試験(OGTT)に応答する糖耐性の障害、すなわち75 OGTTに応答する140〜199 mg/dLの2時間グルコースレベルの少なくとも1回の決定である。他の実施形態では、被験体は島細胞抗原、例えばGAD抗体、例えばGAD 65および/またはGAD 67、IA-2または抗インスリン抗体に対して反応性の1種以上の自己抗体に関して陽性である。他の実施形態では、1型糖尿病の発症への素因は、診断された1型糖尿病性である第1度または第2度近親者を有することである。特定の実施形態では、素因は、甲状腺疾患、1型糖尿病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性内分泌アデノパシー(multiple endocrine adenopathy)、およびセリアック病を非限定的に含む少なくとも1種の他の自己免疫性障害についての、当技術分野で許容される基準に基づく患者または第1度もしくは第2度近親者での陽性診断である。一部の実施形態では、自己免疫性障害はMHC DR3-および/またはDR4-関連自己免疫疾患である。
【０２２４】
別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での治療過程後に、患者のβ細胞機能のレベルは、治療前レベルの1%未満、5%未満、10%未満、20%未満、30%未満、40%未満または50%未満しか減少しない。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での治療過程後に、患者のβ細胞機能のレベルは、治療終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、または少なくとも30か月間、治療前レベルの少なくとも99%、少なくとも95%、少なくとも90%、少なくとも80%、少なくとも70%、少なくとも60%、または少なくとも50%で維持される。
【０２２５】
特定の実施形態では、自己免疫性糖尿病に関連するβ細胞集団の減少を予防するかまたは減速させるために、1型糖尿病を有する被験体に1種以上のTCR結合分子(例えば1種以上の抗TCR抗体)を含む1種以上の医薬組成物を投与する。一部の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での治療過程後に、患者のβ細胞集団のレベルは、治療前レベルの1%未満、5%未満、10%未満、20%未満、30%未満、40%未満、50%未満、60%未満、または70%未満しか減少しない。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での治療過程後に、患者のβ細胞機能のレベルは、治療終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、または少なくとも30か月間、治療前レベルの少なくとも99%、少なくとも95%、少なくとも90%、少なくとも80%、少なくとも70%、少なくとも60%、少なくとも50%、少なくとも40%、または少なくとも30%で維持される。
【０２２６】
本発明の方法では、毎日のインスリンを必要としないか、または0.05 U/kg/日未満、0.1 U/kg/日未満、0.2 U/kg/日未満、0.4 U/kg/日未満、0.6 U/kg/日未満、0.8 U/kg/日未満、1 U/kg/日未満、2 U/kg/日未満、5 U/kg/日未満、10 U/kg/日未満または50 U/kg/日未満の平均インスリン必要量を有する患者に抗TCR療法を施す。別の実施形態では、インスリンを投与する必要性または6か月、1年、18か月、24か月、30か月、36か月、5年、7年または10を超えて投与されるインスリンの用量を増加させる必要性を回避するかまたは遅延させるために、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量の投与方式を自己免疫性糖尿病障害を有する患者に施す。他の実施形態では、外因性インスリンを実際に必要とする患者で、本発明の方法は、1日のインスリン必要量についての、治療前レベルの少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、または少なくとも90%の減少を達成する。本発明のさらに別の実施形態では、外因性インスリンを必要とする患者で、本発明の抗TCR抗体での治療過程後に、患者の1日のインスリン必要量についての、治療前レベルの少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、または少なくとも90%の減少は、治療過程後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、または少なくとも30か月間維持される。
【０２２７】
他の実施形態では、外因性インスリンを実際に必要とする患者で、本発明の方法は、1日のインスリン必要量についての、治療前レベルと比較して1%以下、5%以下、10%以下、15%以下、20%以下、25%以下、30%以下、40%以下、45%以下、50%以下、55%以下、60%以下、65%以下、70%以下、または75%以下の増加しか生じさせない。本発明のさらに別の実施形態では、外因性インスリンを必要とする患者で、本発明の抗TCR抗体での治療過程後に、患者の1日のインスリン必要量についての、治療前レベルの1%以下、5%以下、10%以下、15%以下、20%以下、25%以下、30%以下、40%以下、45%以下、50%以下、55%以下、60%以下、65%以下、70%以下、または75%以下の増加は、治療過程後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、または少なくとも30か月間維持される。
【０２２８】
さらに別の実施形態では、1型糖尿病を有するヒト被験体、または1型糖尿病を発症する素因を有すると特定されたヒトに、治療後、約2週間、約1か月、約2か月、約4か月、約5か月、約6か月、約7か月、約8か月、約9か月、約10か月、約11か月、約12か月、約15か月、約18か月、約21か月または約24か月にわたって、MMTT、OGTT、IGTTまたは2相グルコースクランプ法に対する被験体のCペプチド応答またはFPIRを保存するために、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量の過程を施す。好ましい実施形態では、患者は、最初に、MMTT、OGTT、IGTT、または2相グルコースクランプ法(好ましくはMMTT)に対するCペプチド応答を有し、少なくとも80 pmol/ml/240分、好ましくは少なくとも90 pmol/ml/240分、より好ましくは少なくとも100 pmol/ml/240分、またはさらに、少なくとも110 pmol/ml/240分の曲線下面積(AUC)を生じさせる。好ましい実施形態では、患者は、本発明の抗TCR抗体での治療前に、少なくとも300 pmol/l、少なくとも350 pmol/l、少なくとも400 pmol/l、少なくとも450 pmol/l、少なくとも500 pmol/l、好ましくは、少なくとも550 pmol/l、より好ましくは少なくとも600 pmol/l、またはさらに、少なくとも700 pmol/lのFPIRを有する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での治療過程後に、MMTT、OGTT、IGTT、または2相グルコースクランプ法に対する患者のCペプチド応答またはFPIRは、治療前レベルの1%未満、5%未満、10%未満、20%未満、30%未満、40%未満または50%未満しか減少しない。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での治療過程後に、MMTT、OGTT、IGTTまたは2相グルコースクランプ法に対する患者のCペプチド応答またはFPIRは、治療前レベルの少なくとも99%、少なくとも95%、少なくとも90%、少なくとも80%、少なくとも70%、少なくとも60%、または少なくとも50%で、治療過程後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、または少な
くとも30か月間維持される。
【０２２９】
特定の実施形態では、本発明は、抗TCR抗体での単一ラウンドの治療または6か月毎、9か月毎、12か月毎、15か月毎、18か月毎、または24か月毎のラウンドの治療(好ましくは、抗TCR抗体でのいかなる中間の治療も行わない)が、以前のラウンドの治療または第1ラウンドの治療の6か月、9か月、12か月、15か月、18か月、または24か月後に、7%以下、6.5%以下、6%以下、5.5%以下、または5%以下のHA1またはHA1cのレベルしか生じさせないような治療方法を提供する。特定の実施形態では、本発明の方法にしたがう抗TCR抗体での単一ラウンドの治療または6か月毎、9か月毎、12か月毎、15か月毎、18か月毎、または24か月毎のラウンドの治療(好ましくは、抗TCR抗体でのいかなる中間の治療も行わない)後に、患者は、少なくとも40 pmol/ml/240分、50 pmol/ml/240分、60 pmol/ml/240分、70 pmol/ml/240分、80 pmol/ml/240分、好ましくは、少なくとも90 pmol/ml/240分、より好ましくは少なくとも100 pmol/ml/240分、またはさらに、少なくとも110 pmol/ml/240分のAUCを生じさせる、MMTT、OGTT、IGTTまたは2相グルコースクランプ法(好ましくはMMTT)に対するCペプチド応答を有し、該応答は、以前のラウンドの治療または以前のラウンドの治療の6か月、9か月、12か月、15か月、18か月、または24か月後に測定される。特定の実施形態では、本発明の方法にしたがう抗TCR抗体での単一ラウンドの治療または6か月毎、9か月毎、12か月毎、15か月毎、18か月毎、または24か月毎のラウンドの治療(好ましくは、抗TCR抗体でのいかなる中間の治療も行わない)後に、患者は、少なくとも300 pmol/l、少なくとも400 pmol/l、好ましくは、少なくとも500 pmol/l、より好ましくは少なくとも600 pmol/l、またはさらに、少なくとも700 pmol/lのFPIRを有し、該FPIRは、以前のラウンドの治療または最初のラウンドの治療後6か月、9か月、12か月、15か月、18か月、または24か月の時点で測定される。
【０２３０】
5.10.2  多発性硬化症(MS)
別の実施形態では、MSの治療に関して、被験体のMSに関連するEDSSスコアの増加を予防するかもしくは減少させるか、または増加を減速させるかもしくは減少させるために、1種以上のTCR結合分子(例えば1種以上の抗TCR抗体)を含む医薬組成物を1回以上投与する。さらに別の実施形態では、被験体のMSに関連する攻撃の頻度、重症度および/または持続時間の増加を予防するために、1種以上のTCR結合分子(例えば1種以上の抗TCR抗体)を含む1種以上の医薬組成物を1回以上投与する。さらに別の実施形態では、被験体のMSに関連する、例えばMRIによって検出される、病変の数および/または総容積の増加を予防するために、1種以上のTCR結合分子(例えば1種以上の抗TCR抗体)を含む1種以上の医薬組成物を1回以上投与する。これらの実施形態では、被験体のEDSSスコアおよび/または攻撃の頻度、持続時間および/または重症度の決定は、当技術分野で一般に許容されかつ周知である方法にしたがって、資格を有する医療従事者が評価することができる。特定の実施形態では、被験体は良性MSを有する。他の実施形態では、被験体は、RRMS、SPMS、PRMS、またはPPMSを有する。特定の実施形態では、本明細書中に記載されるかまたは当技術分野で公知の、被験体のMSに関連する症状の発生率、重症度および/または持続時間を減少させるために、1種以上のTCR結合分子(例えば1種以上の抗TCR抗体)を含む1種以上の医薬組成物を1回以上投与する。特定の実施形態では、MSに関連する症状には、非限定的に疲労、視力の障害、強度の障害、協調の障害、バランスの障害、膀胱/腸機能の障害、1以上の四肢の脱力または麻痺、1以上の四肢の振戦、筋痙縮、筋萎縮(atropy)、運動機能障害、任意の領域のしびれ感または知覚異常、刺痛、顔面痛、四肢痛、片目または両目の視力の喪失、複視、眼不快感、制御できない急速眼球運動、協調低下、バランスの喪失、小さい運動または複雑な運動を制御する能力の低下、歩行または歩調異常、筋痙攣、仮性めまい(dizziness)、真性めまい(vertigo)、尿の流れ初めの障害(urinary hesitancy)、尿意切迫、排尿回数の増加、失調症、記憶低下、自発性低下、判断低下、抽象的に考える能力の喪失、一般化する能力の喪失、うつ病、集中力の持続時間の低下、不明瞭言語、会話または言語理解の困難、疲労、便秘、聴力喪失、および/または陽性バビンスキー反射が含まれる。
【０２３１】
特定の実施形態では、本明細書中に記載されるかまたは当業者に公知の方法によって測定された場合に、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0または9.5のKurtzke Expanded Disability Scale (EDSS)に基づく能力障害スコアを有する患者でのMSの治療に抗TCR療法を使用する。別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、患者のEDSSスコアは、治療前スコアと比べて多くとも1/2ステップ、多くとも1ステップ、多くとも1と1/2ステップ、多くとも2ステップ、多くとも2と1/2ステップ、多くとも3ステップ、多くとも3と1/2ステップ、多くとも4ステップ、多くとも4と1/2ステップ、多くとも5ステップ(not more than more than five steps)、多くとも5と1/2ステップ、多くとも6ステップ、多くとも6と1/2ステップ、多くとも7ステップ、多くとも7と1/2ステップ、多くとも8ステップ、または多くとも8と1/2ステップしか増加しない。
【０２３２】
本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗TCR.抗体での1以上の治療過程後に、患者のEDSSスコアは、治療の終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも15か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、少なくとも2.5年または少なくとも3年間、維持されるかまたは治療前スコアと比べて多くとも1/2ステップ、多くとも1ステップ、多くとも1と1/2ステップ、多くとも2ステップ、多くとも2と1/2ステップ、多くとも3ステップ、多くとも3と1/2ステップ、多くとも4ステップ、多くとも4と1/2ステップ、多くとも5ステップ、多くとも5と1/2ステップ、多くとも6ステップ、多くとも6と1/2ステップ、多くとも7ステップ、多くとも7と1/2ステップ、多くとも8ステップ、または多くとも8と1/2ステップしか増加しない。
【０２３３】
本発明の別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、患者のEDSSスコアは、治療の終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも15か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、少なくとも2.5年または少なくとも3年間、維持されるかまたは治療前スコアと比べて多くとも1/2ステップ、多くとも1ステップ、多くとも1と1/2ステップ、多くとも2ステップ、多くとも2と1/2ステップ、多くとも3ステップ、多くとも3と1/2ステップ、多くとも4ステップ、多くとも4と1/2ステップ、多くとも5ステップ、多くとも5と1/2ステップ、多くとも6ステップ、多くとも6と1/2ステップ、多くとも7ステップ、多くとも7と1/2ステップ、多くとも8ステップ、または多くとも8と1/2ステップしか増加しない。
【０２３４】
他の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、患者のMSに関連する症状および/または攻撃の平均発生率、頻度、重症度または持続時間は、治療前状態と比べて多くとも2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、b5%、70%または75%しか増加しない。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、患者のMSに関連する症状および/または攻撃の平均発生率、頻度、重症度または持続時間は、治療の終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも15か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、少なくとも2.5年または少なくとも3年間、治療前状態と比べて多くとも2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%または75%しか増加しない。
【０２３５】
本発明の別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、患者のMSに関連する症状および/または攻撃の平均頻度、重症度または持続時間は、治療の終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも15か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、少なくとも2.5年または少なくとも3年間、治療前状態と比べて多くとも2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%または75%しか増加しない。
【０２３６】
別の特定の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、患者での、MRIによって測定されるMSに関連する病変の数および/または総容積は、治療前状態の多くとも2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%または75%しか増加しない。本発明の別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、患者での、MRIによって測定されるMSに関連する病変の数および/または総容積は、治療の終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも15か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、少なくとも2.5年または少なくとも3年間、治療前状態と比べて多くとも2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%または75%しか増加しない。
【０２３７】
5.10.3  乾癬
別の特定の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、乾癬を有する患者のPsoriasis Area and Severity Index (PASI)スコアは、治療前状態と比べて少なくとも20%、少なくとも35%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、または少なくとも85%減少する。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、乾癬を有する患者のPsoriasis Area and Severity Index (PASI)スコアは、治療の終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも15か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、少なくとも2.5年または少なくとも3年間、治療前状態と比べて少なくとも20%、少なくとも35%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、または少なくとも85%減少する。
【０２３８】
本発明の別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、乾癬と診断された患者のPsoriasis Area and Severity Index (PASI)スコアは、治療の終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも15か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、少なくとも2.5年または少なくとも3年間、治療前状態と比べて少なくとも20%、少なくとも35%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、または少なくとも85%減少する。
【０２３９】
別の特定の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、乾癬と診断された患者のグローバル評価スコアは、治療前状態と比べて少なくとも少なくとも25%(by at least by at least 25%)、少なくとも35%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも95%改善する。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、乾癬と診断された患者のグローバル評価スコアは、治療の終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも15か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、少なくとも2.5年または少なくとも3年間、治療前状態と比べて少なくとも少なくとも25%、少なくとも35%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも95%改善する。
【０２４０】
別の特定の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、当技術分野で公知の任意の関節炎重症度スケール(例えばRASS)によって評価された場合の被験体の状態は、治療前状態と比べて少なくとも25%、少なくとも35%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも100%改善する。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、当技術分野で公知の任意の関節炎重症度スケール(例えばRASS)によって評価された場合の被験体の状態は、治療の終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも15か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、少なくとも2.5年または少なくとも3年間、治療前状態と比べて少なくとも25%、少なくとも35%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも100%改善する。
【０２４１】
別の特定の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、イムノスポットアッセイ(例えばELISPOT)によって測定された場合の被験体の自己反応性CTLの絶対数、または割合は、治療前状態と比べて少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも100%減少する。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗TCR抗体での1以上の治療過程後に、イムノスポットアッセイ(例えばELISPOT)によって測定された場合の被験体の自己反応性CTLの絶対数、または割合は、治療の終了後、少なくとも4か月、少なくとも6か月、少なくとも9か月、少なくとも12か月、少なくとも15か月、少なくとも18か月、少なくとも24か月、少なくとも2.5年または少なくとも3年間、治療前状態と比べて少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも100%減少する。
【０２４２】
5.11  組み合わせ療法
本発明は、1種以上の抗TCR抗体および抗TCR抗体以外の1種以上の予防または治療剤を含む組成物、およびその必要がある被験体での(例えば、自己免疫性障害および/またはT細胞悪性腫瘍に関連する1種以上の症状を予防するか、治療するか、その発症を遅延させるか、その進行を減速させるか、または改善する)免疫調節のための方法であって、1以上の該組成物を該被験体に投与するステップを含む方法を提供する。治療または予防剤には、非限定的に、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質、核酸分子、小分子、模倣剤、合成薬物、無機分子、および有機分子が含まれる。自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍に関連する1種以上の症状の予防、治療または改善のために有用であることが公知であるかまたは使用されてきたかもしくは現在使用されている任意の薬剤を、本明細書中に記載の本発明の抗TCR抗体と組み合わせて使用することができる。例えば、1種以上の自己免疫性障害の治療に一般に使用される薬剤には、非限定的に、抗体断片、GLP-1アナログまたは誘導体、GLP-1アゴニスト(例えばエキセンディン-4; エクセンタチド(exentatide))、アミリンアナログまたは誘導体(dericatives)、インスリン、発疹および腫脹のための皮膚用薬剤(dermatological agents)(例えば、光線療法(すなわち紫外線B照射)、光化学治療(例えばPUVA)および局所用剤、例えば皮膚軟化剤、サリチル酸、コールタール、局所用ステロイド、局所用コルチコステロイド、局所用ビタミンD3アナログ(例えばカルシポトリエン)、タザロテン、および局所用レチノイド)、抗炎症剤(例えば、コルチコステロイド(例えば、プレドニゾンおよびヒドロコルチゾン}、糖質コルチコイド、ステロイド、非ステロイド性抗炎症剤(例えば、アスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク、およびCOX-2インヒビター)、ベータ-アゴニスト、抗コリン剤およびメチルキサンチン}、免疫調節剤(例えば、有機小分子、T細胞受容体モジュレーター、サイトカイン受容体モジュレーター、T細胞枯渇剤、サイトカインアンタゴニスト、モノカインアンタゴニスト、リンパ球インヒビター、または抗癌剤)、金注射(gold injections)、スルファサラジン、ペニシラミン、血管新生阻害剤(例えば、アンギオスタチン、TNF-aアンタゴニスト(例えば抗TNFα抗体)、およびエンドスタチン)、ダプソン、ソラレン(例えば、メトキサレン(methoxalen)およびトリオキサレン)、抗マラリア剤(例えばヒドロキシクロロキン)、抗ウイルス剤、および抗生物質(例えば、エリトマイシン(erythomycin)およびペニシリン)が含まれる。当業者に周知の、本発明の抗TCR抗体以外の追加の免疫調節剤を本発明の方法および組成物で使用してもよい。そのような免疫調節剤は、被験体の免疫応答の1以上またはすべての態様に影響する可能性があり、本発明の抗体と同一の態様に影響してもしなくてもよい。免疫応答の態様には、非限定的に、炎症反応、補体カスケード、白血球およびリンパ球分化、増殖、および/またはエフェクター機能、単球および/または好塩基球カウント、および免疫系の細胞間の細胞情報交換が含まれる。本発明の特定の実施形態では、免疫調節剤は、本発明の抗TCR抗体によって調節される態様とは別の免疫応答の1態様を調節する。本発明の他の実施形態では、免疫調節剤は、本発明の抗TCR抗体によって調節される態様と同じ免疫��答の1態様を調節する。他の実施形態では、免疫調節剤は、本発明の抗TCR抗体によって調節される態様(群)と同じであってもなくてもよい免疫応答の2以上の態様を調節する。本発明の好ましい実施形態では、被験体への免疫調節剤の投与は、被験体の免疫応答能の1以上の態様を阻害するかまたは減少させる。本発明の特定の実施形態では、免疫調節剤は被験体の免疫応答を阻害または抑制する。本発明では、免疫調節剤は抗TCR抗体ではない。特定の実施形態では、免疫調節剤は抗炎症剤ではない。他の実施形態では、免疫調節剤はTCR結合分子ではない。
【０２４３】
本発明のTCR抗体および/または免疫調節剤は、Tヘルパーサブセット(TH1またはTH2)とB細胞との間の相互作用を妨げて中和抗体形成を阻害するように選択することができる。本発明のTCR抗体および/または免疫調節剤は、TH1細胞とCTLとの間の相互作用を阻害してCTL媒介性死滅の発生を減少させるように選択することができる。本発明のTCR抗体および/または免疫調節剤は、CD4+および/またはCD8+ T細胞の増殖、分化、活性および/または機能を変化させる(例えば、阻害または抑制する)ように選択することができる。
【０２４４】
特定の実施形態では、抗TCR抗体をサイトカインアンタゴニストと共投与する。他の実施形態では、抗TCR抗体を、抗IL-2抗体、例えば、ダクリズマブ、バシリキシマブまたはMT204 (Micromet)または他のIL-2インヒビター、例えば非限定的にラパマイシン、シクロスポリン、またはタクロリムスと共投与する。
【０２４５】
好ましい実施形態では、予防剤、治療剤または免疫調節剤として利用されるタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド(抗体を含む)は、該タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドに対する免疫応答の可能性を減少させるために、該タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドのレシピエントと同一の生物種由来である。別の好ましい実施形態では、被験体がヒトである場合、免疫調節剤として利用されるタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドはヒトまたはヒト化のものである。
【０２４６】
本発明にしたがって、炎症性疾患または自己免疫疾患を有する被験体に、本発明の治療および/または予防剤の前に、その後に、またはそれと同時に、1種以上の予防剤、治療剤または免疫調節剤を投与する。好ましくは、炎症性疾患または自己免疫疾患を有する被験体に、該疾患の1種以上の症状または免疫応答の態様を、必要に応じて、減少させるかまたは阻害するために、1種以上の予防剤、治療剤または免疫調節剤を投与する。当業者に周知の任意の技術を使用して、特定の被験体の免疫応答の1種以上の態様を測定し、それによって該被験体に免疫調節剤を投与することがいつ必要であるかを決定することができる。
【０２４７】
1実施形態では、本発明は、糖尿病に関連する1種以上の症状を予防、治療、管理または改善する方法であって、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量およびインスリンの予防または治療有効量を該被験体に投与するステップを含む方法を提供する。1実施形態では、本発明は、糖尿病に関連する1種以上の症状を予防、治療、管理または改善する方法であって、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量およびGLP 1またはGLP 1アナログの予防または治療有効量を該被験体に投与するステップを含む方法を提供する。1実施形態では、本発明は、糖尿病に関連する1種以上の症状を予防、治療、管理または改善する方法であって、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量およびエキセンディン-4またはそのアナログの予防または治療有効量を該被験体に投与するステップを含む方法を提供する。1実施形態では、本発明は、糖尿病に関連する1種以上の症状を予防、治療、管理または改善する方法であって、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量およびアミリンまたはそのアナログの予防または治療有効量を該被験体に投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、糖尿病に関連する1種以上の症状を予防、治療、管理または改善する方法であって、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量およびインスリンの予防または治療有効量を該被験体に投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、乾癬に関連する1種以上の症状を予防、治療、管理または改善する方法であって、1種以上の抗TCR抗体の予防または治療有効量およびメトトレキセートの予防または治療有効量を該被験体に投与するステップを含む方法を提供する。
【０２４８】
好ましい実施形態では、自己免疫性障害を有する被験体に、該疾患または免疫応答の1種以上の態様を一時的に減少させるかまたは阻害するために、1種以上の予防剤、治療剤または免疫調節剤を投与する。疾患または免疫系の1種以上の態様のそのような一時的阻害または減少は、数時間、数日、数週間、または数か月続く。好ましくは、疾患または免疫応答の1種以上の態様の一時的阻害または減少は、数時間(例えば、2時間、4時間、6時間、8時間、12時間、14時間、16時間、18時間、24時間、36時間、または48時間)、数日(例えば、3日、4日、5日、6日、7日、または14日)、または数週間(例えば、3週間、4週間、5週間または6週間)続く。疾患または免疫応答の1種以上の態様の一時的減少または阻害は抗TCR抗体の予防および/または治療能力を増強する。
【０２４９】
本発明にしたがって、1型糖尿病、多発性硬化症または乾癬(または他の自己免疫性障害)、またはそれらへの素因を有する被験体に、本発明の治療および/または予防剤の前に、その後に、またはそれと同時に、1種以上の予防剤、治療剤または免疫調節剤を投与する。そのような方法を用いて、1型糖尿病、多発性硬化症または乾癬、または他の自己免疫性障害の1種以上の症状を治療するか、予防するか、その発症を遅延させるか、その進行を減速させるか、または改善することができる。
【０２５０】
本発明の方法にしたがって、予防的、治療的または免疫調節性活性を有するタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドをコードする核酸分子または、予防的、治療的または免疫調節性活性を有するタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを、自己免疫性障害を有する被験体に投与することができる。さらに、本発明の方法にしたがって、予防的、治療的または免疫調節性活性を有するタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドの誘導体、アナログ、断片または変異体をコードする核酸分子、または、予防的、治療的または免疫調節性活性を有するタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドの誘導体、アナログ、断片または変異体を被験体に投与することができる。好ましくは、そのような誘導体、アナログ、変異体および断片は、完全長野生型タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドの予防的、治療的または免疫調節性活性を保持する。
【０２５１】
予防剤、治療剤または免疫調節剤として使用できるタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを、当技術分野で周知であるかまたは本明細書中に記載の任意の技術によって製造することができる。例えば、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドの製造方法を記載するChapter 16 Ausubel et al. (eds.), 1999, Short Protocols in Molecular Biology, Fourth Edition, John Wiley & Sons, NY (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。予防剤、治療剤または免疫調節剤として使用できる抗体は、例えば、U.S. Patent No. 6,245,527およびHarlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1988 (該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)に記載の方法によって製造することができる。好ましくは、市販の、予防剤、治療剤または免疫調節剤として機能することが知られている物質を本発明の組成物および方法で使用する。物質の予防的、治療的または免疫調節性活性は、当業者に周知の任意の技術によってin vitroおよび/またはin vivoで決定することができ、該技術には、例えば、CTLアッセイ、増殖アッセイ、および、特定のタンパク質、例えば共刺激分子およびサイトカインの発現に関するイムノアッセイ(例えばELISA)によるものが含まれる。
【０２５２】
1種以上の抗TCR抗体および抗TCR抗体以外の1種以上の予防または治療剤の組み合わせは、被験体において、いずれかの単独の治療より良好な予防または治療効果を生じさせる。特定の実施形態では、抗TCR抗体および抗TCR抗体以外の予防または治療剤の組み合わせは、自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍、またはそれらへの素因を有する被験体において、いずれかの単独の治療より20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%または98%良好な予防または治療効果を達成する。特定の実施形態では、1種以上の抗TCR抗体および抗TCR抗体以外の予防または治療剤の組み合わせは、炎症性障害または炎症と関連する自己免疫性障害を有する被験体での特定の器官、組織または関節の炎症についての、いずれか単独の治療より20%、好ましくは25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%または98%大きい減少を達成する。他の実施形態では、1種以上の抗TCR抗体および抗TCR抗体以外の1種以上の予防または治療剤の組み合わせは、自己免疫性または炎症性障害を有する被験体で、相加作用どころか、相乗効果を有する。
【０２５３】
本発明の併用療法は、予防または治療効果を達成するための、低用量の抗TCR抗体および/または自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍を有する被験体への抗TCR抗体の低頻度の投与を可能にする。本発明の併用療法は、予防または治療効果を達成するための、抗TCR抗体とともに利用される低用量の予防または治療剤および/またはそのような予防または治療剤の低頻度の投与を可能にする。
【０２５４】
本発明の併用療法の予防または治療剤は、同時に、並行してまたは逐次投与することができる。本発明の併用療法の予防または治療剤は、周期的に投与することもできる。周期的療法は、薬剤の1つに対する耐性の発生を減少させるため、薬剤の1つの副作用を回避するかまたは減少させるため、および/または治療の効力を向上させるための、一定期間の第1の予防または治療剤の投与、その後の一定期間の第2の予防または治療剤の投与およびこの逐次投与の反復、すなわちサイクルを含む。
【０２５５】
5.12  T細胞悪性腫瘍
本発明は、T細胞悪性腫瘍の治療のために、例えばターゲティング分子として、抗TCR抗体を使用する方法を包含する。T細胞起源およびT細胞発生に関与する他の細胞の腫瘍が特定されている。T細胞リンパ球増殖性障害には、胸腺および胸腺後の悪性腫瘍が含まれる。T細胞新生物には、リンパ様前駆細胞、胸腺の間質細胞または上皮細胞、胸腺細胞、T細胞、ナチュラルキラー(「NK」)細胞、または抗原提示細胞の腫瘍が含まれる。T細胞悪性腫瘍には、急性リンパ性白血病、リンパ腫、胸腺腫、急性リンパ性白血病、ホジキンおよび非ホジキン病が含まれる。リンパ腫は、T細胞がどのように影響されるかによって分類される。T細胞リンパ腫には、例えば、リンパ芽球性リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、末梢T細胞リンパ腫、血管免疫芽細胞性リンパ腫、血管中心性リンパ腫(鼻T細胞リンパ腫)、腸T細胞リンパ腫、および成人T細胞リンパ腫/白血病が含まれ、そのいくつかを以下で考察する。他のT細胞リンパ球増殖性障害には、T細胞およびNK細胞新生物、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、古典的ホジキンリンパ腫、結節性硬化症、リンパ球豊富型古典的ホジキンリンパ腫、混合細胞型古典的ホジキンリンパ腫、リンパ球減少型古典的ホジキンリンパ腫、前駆T細胞新生物、前駆Tリンパ芽球性白血病リンパ腫、芽球型NK細胞リンパ腫、成熟T細胞およびNK T細胞前リンパ球性白血病細胞新生物、T細胞大顆粒リンパ球性白血病、アグレッシブNK細胞白血病、成人T細胞白血病/リンパ腫、結節外NK/T細胞リンパ腫(鼻型)、腸疾患型T細胞リンパ腫、肝脾T細胞リンパ腫、皮膚原発未分化大細胞リンパ腫、末梢T細胞リンパ腫、不特定血管免疫芽細胞性T細胞リンパ腫、および未分化大細胞リンパ腫が含まれる。
【０２５６】
5.12.1  リンパ芽球性リンパ腫
リンパ芽球性リンパ腫は、主に子供および青年で発生する攻撃的な主にT細胞リンパ腫であり、子供および青年では、それは小児期リンパ腫の約1/2を占める。患者の約2/3は男性である。第2のピークは40歳を超える患者で再び観察される。リンパ芽球性リンパ腫と急性リンパ性白血病との間の区別は、部分的に、任意に、髄関与の程度に基づく。主要な生物学的差異は、髄外の主にT細胞リンパ芽球性リンパ腫と異なり、リンパ芽球性白血病は主にB細胞疾患であることである。
【０２５７】
5.12.2  T細胞前リンパ球性白血病(「T-PLL」)
T細胞前リンパ球性白血病はまれな攻撃的胸腺後悪性腫瘍であり、特有の臨床および形態学的および細胞遺伝学的特徴を有する(Matutes E. et al., 1991 Blood, 78: 3269-74のレビューを参照のこと)。T-PLLは化学療法に耐性であり、不十分な生存期間の中央値(7.5か月)を有する。初期に無痛性の疾患を示す患者もいるが、それらは最終的に進行し、転帰は類似している。この致死的疾患の転帰を改善するために新規治療アプローチが必要である。
【０２５８】
5.12.3  成人T細胞白血病/リンパ腫(「ATL」)
成人T細胞白血病(「ATL」)は、ヒトT細胞白血病ウイルスI型(HTLV-I)に関連するT細胞悪性新生物の1つである。それは、成熟CD4+リンパ球の攻撃的致死的悪性腫瘍である(Hatta et al., 2002, Leukemia, 16: 1069-85; Yamada Y. 1983, Blood, 61: 192-9のレビューを参照のこと)。ATLはSouthern JapanおよびCaribbean地域で流行し、Africa、Latin America、Middle East、およびUnited Statesで散発的に発生する。慣用の化学療法に対する白血病性細胞の本質的な耐性のせいで、ATLは不十分な予後を有する。
【０２５９】
ATLは4つの主なサブタイプに分類されている。相対的なくすぶり型および慢性型では、生存期間の中央値は2年以上である。急性またはリンパ腫性(lymphomatous)型では、生存期間の中央値(media survival)は13か月である。造血幹細胞(hematopoeitic stem cell)移植および化学療法がATLの治療に使用されている。
【０２６０】
5.12.4  未分化大細胞リンパ腫
未分化大細胞リンパ腫(「ALCL」)は、子供または若年成人における全身性であるか、または皮膚性(皮膚中/皮膚上)である。皮膚に限局された疾患は、かなりゆっくり増大し(無痛性)、皮膚に局在化されたままであり、自然寛解の多数の例がある--このいわゆる「古典的」ALCLは子供および青年で最も一般的であり、高頻度の遺伝子転座t(2;5)を有する。原発皮膚ALCLは成人でより多く発生する傾向があり、転座を欠く。ほとんどの症例はT細胞または細胞型未知(ヌル)である。全身性ALCLはリンパ節およびリンパ節外部位を含む。全身性ALCLを治療するために化学療法が使用されている。
【０２６１】
5.13  医薬組成物
本発明は、自己免疫性障害またはT細胞悪性腫瘍に関連する1種以上の症状の治療、予防、および改善のための組成物を提供する。特定の実施形態では、組成物は1種以上の抗TCR抗体を含む。別の実施形態では、組成物は、1種以上の抗TCR抗体の重鎖および軽鎖をコードする1種以上の核酸分子を含む。
【０２６２】
特定の実施形態では、組成物は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である抗TCR抗体を含み、特定の実施形態では、それは、Fc受容体へのFcドメインの結合を減少させ、それによって抗体の毒性を減少させるように改変されている。別の実施形態では、組成物は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である抗TCR抗体を含み、それは、Fc受容体へのFcドメインの結合を増加させ、それによって、TCRを発現する細胞に対する抗体の細胞傷害性を増加させるように改変されている。さらに別の好ましい実施形態では、組成物は、TCRα鎖の細胞外定常ドメインに免疫特異的に結合するヒト化BMA 031、そのアナログ、誘導体、断片を含む。他の実施形態では、本発明の組成物は、ヒト化3H2906、IP26、T10B9、WT31、G-11、H-197、H-41、A-20、FL-189、H-20、H-250、C-17、H57、KJ1-26、KJ12-98、H28-710、UC3-10A6、GL3、3H2928、5K24、3A10、UC7-13D5、またはそれらのアナログ、誘導体もしくは抗原結合性フラグメントを含む。
【０２６３】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は医薬組成物である。そのような組成物は、予防または治療有効量の1種以上の抗TCR抗体、またはその抗原結合性フラグメント、および製薬的に許容される担体を含む。特定の実施形態では、用語「製薬的に許容される」とは、動物での使用、およびさらに特にヒトでの使用に関して、連邦または州政府の規制当局によって承認されているかまたは米国薬局方または他の一般に認められる薬局方に列挙されていることを意味する。用語「担体」とは、治療薬とともに投与される希釈剤、アジュバント(例えばフロイントアジュバント(完全および不完全))、賦形剤、またはビヒクルを表す。そのような医薬用担体は、滅菌液体、例えば水および、石油、動物、植物または合成起源のものを含む油、例えばピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などであってよい。水は、医薬組成物が静脈内投与される場合に好ましい担体である。生理食塩水溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液を、特に注射用溶液のための、液体担体として用いることもできる。好適な医薬賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、穀粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアラート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる(例えば、Handbook of Pharmaceutical Excipients, Arthur H. Kibbe (ed., 2000, 該文献は参照によりその全体がここに組み入れられる), Am. Pharmaceutical Association, Washington, DCを参照のこと。該組成物には、所望であれば、少量の湿潤剤または乳化剤、またはpH緩衝剤を含ませることもできる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、徐放性製剤などの剤形をとることができる。経口製剤は、標準的担体、例えば医薬品等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、などを含むことができる。好適な医薬用担体の例は、E.W. Martinの"Remington’s Pharmaceutical Sciences"に記載される。そのような組成物は、患者への適正な投与のための形式を提供するために、好ましくは精製された形式の予防または治療有効量の予防または治療剤を、好適な量の担体とともに含む。製剤は投与様式に好適であるべきである。好ましい実施形態では、医薬組成物は滅菌性であり、被験体、好ましくは動物被験体、より好ましくは哺乳動物被験体、最も好ましくはヒト被験体への投与に好適な形式である。
【０２６４】
特定の実施形態では、治療が必要な領域に局所的に本発明の医薬組成物を投与することが望ましく; これは、例えば、限定のためではなく、局所注入、注射、またはインプラントによって達成することができ、該インプラントは、シアラスティック(sialastic)メンブレンなどのメンブレン、またはファイバーを含む多孔性、非多孔性、またはゼラチン様材料のインプラントである。好ましくは、抗ヒトTCR抗体を投与する場合、抗TCR抗体の吸収対象でない材料を使用するように注意する必要がある。
【０２６５】
別の実施形態では、組成物を小胞、特にリポソーム中で送達することができる(Langer, Science 249:1527-1533 (1990); Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353- 365 (1989); Lopez-Berestein, 同書, pp. 3 17-327を参照のこと; 同書を全般に参照のこと)。
【０２６６】
さらに別の実施形態では、制御放出または徐放系で組成物を送達することができる。1実施形態では、ポンプを使用して制御放出または徐放を達成することができる(Langer, 上記; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574を参照のこと)。別の実施形態では、ポリマー材料を使用して本発明の抗体またはその断片の制御放出または徐放を達成することができる(例えば、Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61を参照のこと; また、Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 7 1:105); U.S. Patent No. 5,679,377; U.S. Patent No. 5,916,597; U.S. Patent No. 5,912,015; U.S. Patent No. 5,989,463; U.S. Patent No. 5,128,326; PCT Publication No. WO 99/15154; およびPCT Publication No. WO 99/20253を参照のこと。徐放性製剤中で使用されるポリマーの例には、非限定的に、ポリ(2-ヒドロキシエチルメタクリラート)、ポリ(メタクリル酸メチル)、ポリ(アクリル酸)、ポリ(エチレン-co-酢酸ビニル)、ポリ(メタクリル酸)、ポリグリコリド(polyglycolides)(PLG)、ポリ無水物(polyanhydrides)、ポリ(N-ビニルピロリドン)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリアクリルアミド、ポリ(エチレングリコール)、ポリラクチド(PLA)、ポリ(ラクチド-co-グリコリド)(PLGA)、およびポリオルトエステルが含まれる。好ましい実施形態では、徐放性製剤中で使用されるポリマーは不活性で、浸出性不純物を含まず、保存時に安定であり、滅菌性で、かつ生分解性である。さらに別の実施形態では、制御放出または徐放系は、治療標的、すなわち肺に近接して配置することができ、ゆえに全身性用量の一部分しか必要としない(例えばGoodson, in Medical Applications of Controlled Release, 上記, vol. 2, pp. 115-138 (1984)を参照のこと)。
【０２６７】
制御放出系はLangerのレビュー(1990, Science 249:1527-1533)で考察される。当業者に公知の任意の技術を使用して、1種以上の本発明の抗体またはその断片を含む徐放性製剤を製造することができる。例えば、U.S. Patent No. 4,526,938; PCT publication WO 91/05548; PCT publication WO 96/20698; Ning et al., 1996, Radiotherapy & Oncology 39:179-189; Song et al., 1995,  PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397; Cleek et al., 1997, Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854; およびLam et al., 1997, Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760 (各文献は参照によりその全体がここに組み入れられる)を参照のこと。
【０２６８】
本発明の医薬組成物は、その意図される投与経路と適合性であるように製剤化される。投与経路の例には、非限定的に、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口(例えば吸入)、鼻内、経皮(局所)、経粘膜、および経直腸投与が含まれる。特定の実施形態では、慣用の手順にしたがってヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻内または局所投与に適した医薬組成物として組成物を製剤化する。好ましい実施形態では、慣用の手順にしたがってヒトへの皮下投与用に医薬組成物を製剤化する。典型的に、静脈内投与用の組成物は滅菌等張性水性バッファー中の溶液である。必要ならば、組成物に、可溶化剤および、注射部位での痛みを和らげるためのリグノカムネ(lignocamne)などの局所麻酔薬を含ませてもよい。
【０２６９】
本発明の組成物を局所投与しようとする場合、例えば、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアロゾル、溶液、エマルジョンの形式、または当業者に周知の他の形式で組成物を製剤化することができる。例えばRemington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th ed., Lea & Febiger, Philadelphia, PA (1985)を参照のこと。非スプレー性局所剤形では、局所適用に適合する担体または1種以上の賦形剤を含みかつ好ましくは水より大きい動的粘性を有する粘性〜半固形または固形を典型的に用いる。好適な製剤には、非限定的に、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏、粉末、リニメント、膏薬(salves)、などが含まれ、それらは、所望であれば、滅菌されるか、または種々の特性、例えば浸透圧に影響する助剤(例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、バッファー、または塩)と混合される。他の好適な局所剤形には、スプレー可能なエアロゾル調製物が含まれ、該調製物では、活性成分が、好ましくは固体または液体不活性担体と組み合わせて、加圧揮発物(例えばガス状噴射剤、例えばフレオン)との混合物中に、またはスクイーズボトル中にパッケージされる。所望であれば、保湿剤または湿潤剤を医薬組成物および剤形に加えることもできる。そのような追加の成分の例は当技術分野で周知である。
【０２７０】
本発明の組成物を鼻内投与しようとする場合、エアロゾル形式、スプレー、ミストまたは液滴の形式で組成物を製剤化することができる。特に、本発明にしたがって使用するための予防または治療剤は、加圧パックまたは噴霧器から、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガスを使用して、エアロゾルスプレー体裁の形式で好都合に送達することができる。加圧されたエアロゾルの場合、定量を送達するためのバルブを備えることによって投与単位を決定することができる。吸入器(inhaler)または空気吸入器(insufflator)での使用のための、例えばゼラチンの、カプセルおよびカートリッジは、化合物および好適な粉末基剤、例えばラクトースまたはデンプンの混合粉末を含むように製剤化することができる。
【０２７１】
本発明の組成物を経口投与しようとする場合、例えば、錠剤、カプセル、カシェ、ゲルキャップ、溶液、懸濁液などの形式で経口的に組成物を製剤化することができる。錠剤またはカプセルは、製薬的に許容される賦形剤、例えば結合剤(例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース); 充填剤(例えば、ラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム); 潤滑剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ); 崩壊剤(例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム); または湿潤剤(例えばラウリル硫酸ナトリウム)とともに慣用の手段によって製造することができる。錠剤は、当技術分野で周知の方法によってコーティングすることができる。経口投与用の液体調製物は、例えば、溶液、シロップまたは懸濁液の形式をとるか、または使用前に水または他の好適なビヒクルを用いて組成するための乾燥生成物として提供してもよい。そのような液体調製物は、製薬的に許容される添加物、例えば懸濁化剤(例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または硬化食用脂肪); 乳化剤(例えば、レシチンまたはアカシア); 非水性ビヒクル(例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分留植物油(fractionated vegetable oils)); および保存剤(例えば、メチルまたはプロピル-p-ヒドロキシベンゾアートまたはソルビン酸)とともに慣用の手段によって製造することができる。調製物は、必要に応じて、バッファー塩、香味物質、発色剤および甘味剤を含んでもよい。経口投与用の調製物は、予防または治療剤(群)の緩徐な放出、制御放出または徐放に好適に製剤化することができる。
【０２７２】
本発明の組成物は、注射、例えばボーラス注入または持続注入による非経口投与用に製剤化することができる。注射用製剤は、保存剤を加えて、例えばアンプルまたは複数回投与容器中で単位投与剤形として提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形式をとってよく、懸濁化、安定化および/または分散剤などの製剤化物質を含んでよい。あるいは、活性成分は、使用前に、好適なビヒクル、例えば滅菌性の、発熱因子を含まない水で組成するための粉末形式であってよい。
【０２７３】
特定の実施形態では、本発明は、数時間または数日の期間(例えばそのような送達のためのポンプまたは他のデバイスに関連する)にわたって、例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、6時間、8時間、10時間、12時間、16時間、20時間、24時間、30時間、36時間、4日、5日、7日、10日または14日の期間にわたって継続的に抗TCR抗体の投与を可能にする剤形を提供する。他の特定の実施形態では、本発明は、24時間、30時間、36時間、4日、5日、7日、10日または14日の期間にわたって連続的に増加する用量、例えば51μg/m2/日から826μg/m2/日に増加する用量の投与を可能にする剤形を提供する。
【０２７４】
本発明の組成物は、カカオバターまたは他のグリセリドなどの慣用の坐剤基剤を例えば含む坐剤または停留浣腸などの経直腸組成物として製剤化してもよい。
【０２７５】
以前に記載される製剤に加えて、本発明の組成物は、デポー製剤として製剤化してもよい。そのような長時間作用型製剤は、インプランテーション(例えば皮下または筋肉内)または筋肉内注射によって投与することができる。ゆえに、例えば、組成物は、好適なポリマー材料または疎水性材料(例えば許容される油中のエマルジョンとして)またはイオン交換樹脂を用いて、またはやや難溶性の誘導体として、例えばやや難溶性の塩として製剤化してよい。
【０２７６】
本発明の組成物は中性または塩形式として製剤化することができる。製薬的に許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、など由来のものなどのアニオンと形成される塩、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、第二鉄の水酸化物、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン、など由来のものなどのカチオンと形成される塩が含まれる。
【０２７７】
一般に、本発明の組成物の成分は、別々にまたは単位投与剤形中で、例えば乾燥凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として、ともに混合されて、活性物質の量を示すアンプルまたはサシェ(sachette)などの密封容器中で供給される。組成物を注入によって投与しようとする場合、滅菌医薬品等級の水または生理食塩水を含む注入ボトルでそれを分配することができる。組成物を注射によって投与する場合、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供して、投与前に成分を混合することができるようにすることができる。
【０２７８】
特に、本発明は、本発明の1種以上の抗TCR抗体(またはその抗原結合性フラグメント)、または医薬組成物を、物質の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封容器にパッケージすることを提供する。1実施形態では、本発明の1種以上の抗TCR抗体、または医薬組成物を、密封容器中の乾燥滅菌凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として供給し、例えば水または生理食塩水で再組成して、被験体への投与に適切な濃度にすることができる。好ましくは、本発明の1種以上の抗TCR抗体、または医薬組成物を、少なくとも5 mg、より好ましくは少なくとも10 mg、少なくとも15 mg、少なくとも25 mg、少なくとも35 mg、少なくとも45 mg、少なくとも50 mg、少なくとも75 mg、または少なくとも100 mgの単位用量で、密封容器中の乾燥滅菌凍結乾燥粉末として供給する。本発明の凍結乾燥された予防または治療剤、または医薬組成物は、その元の容器中で2〜8℃の範囲で保存するべきであり、本発明の予防または治療剤、または医薬組成物は、再組成された後、1週間以内、好ましくは5日以内、72時間以内、48時間以内、24時間以内、12時間以内、6時間以内、5時間以内、3時間以内、または1時間以内に投与するべきである。代替の実施形態では、本発明の1種以上の抗TCR抗体、または医薬組成物を、薬剤の量および濃度を示す密封容器中で液体形式で供給する。好ましくは、投与される液体形式の組成物を、密封容器中で、少なくとも0.25 mg/ml、より好ましくは少なくとも0.5 mg/ml、少なくとも1 mg/ml、少なくとも2.5 mg/ml、少なくとも5 mg/ml、少なくとも8 mg/ml、少なくとも10 mg/ml、少なくとも15 mg/kg、少なくとも25 mg/ml、少なくとも50 mg/ml、少なくとも75 mg/mlまたは少なくとも100 mg/mlで供給する。液体形式はその元の容器中で2℃〜8℃の範囲で保存するべきである。
【０２７９】
好ましい実施形態では、本発明は、抗TCR抗体の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封容器中で本発明の組成物をパッケージすることを提供する。
【０２８０】
組成物は、所望であれば、活性成分を含む1以上の単位投与剤形を含むパックまたはディスペンサデバイス中で提供することができる。パックは、例えば、金属ホイルまたはプラスチックホイル、例えばブリスター包装を含んでよい。
【０２８１】
一般に、本発明の組成物の成分は、そのような組成物のレシピエントと同一の種起源または種反応性の被験体由来である。ゆえに、好ましい実施形態では、治療または予防のためにヒトまたはヒト化抗体をヒト患者に投与する。
【０２８２】
自己免疫性糖尿病障害に関連する1種以上の症状の治療、予防または改善において有効な本発明の組成物の量は標準的臨床技術によって決定することができる。製剤中で用いられる正確な用量はまた、投与経路、および症状の深刻さに依存し、開業医の判断および各患者の状況にしたがって決定されるべきである。有効量は、in vitroまたは動物モデル試験系由来の用量反応曲線から外挿することができる。
【０２８３】
5.14  抗体をコードするポリヌクレオチド
本発明は、TCRポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、例えば上で定義される高ストリンジェンシー、中または低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドを包含する。
【０２８４】
当技術分野で公知の任意の方法によって、ポリヌクレオチドを取得し、該ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定することができる。TCRポリペプチドに免疫特異的な抗体のヌクレオチド配列は、例えば、文献またはGenBankなどのデータベースから取得することができる。例えばBMA 031のアミノ酸配列は公知であるため、当技術分野で周知の方法を使用して、これらの抗体をコードするヌクレオチド配列を決定することができ、すなわち、特定のアミノ酸をコードすると知られているヌクレオチドコドンを、抗体をコードする核酸が得られるように組み立てる。そのような抗体をコードするポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから(例えばKutmeier et al., 1994、BioTechniques 17:242に記載されるように)組み立てることができ、それは、簡潔に言えば、抗体をコードする配列の部分を含むオーバーラップオリゴヌクレオチドの合成、該オリゴヌクレオチドのアニーリングおよびライゲーション、およびライゲートされたオリゴヌクレオチドのPCRによる増幅を含む。
【０２８５】
あるいは、抗体をコードするポリヌクレオチドを、好適な供給源由来の核酸から作製することができる。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンが入手できないが、該抗体分子の配列が公知である場合、該免疫グロブリンをコードする核酸を化学的に合成するかまたは好適な供給源(例えば、抗体cDNAライブラリー、または該抗体を発現する任意の組織または細胞、例えば本発明の抗体を発現するように選択されるハイブリドーマ細胞から作製されたcDNAライブラリー、またはそれらから単離された核酸、好ましくはポリA+ RNA)から、該配列の3'および5'末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用するPCR増幅によって、または、例えば、該抗体をコードするcDNAライブラリーからcDNAクローンを特定するための、特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって取得することができる。PCRによって作製された増幅核酸は、当技術分野で周知の任意の方法を使用して複製可能なクローニングベクターにクローニングすることができる。
【０２８６】
抗体のヌクレオチド配列が決定されたら、ヌクレオチド配列の操作のための当技術分野で周知の方法、例えば組換えDNA技術、部位特異的突然変異誘発、PCRなど(例えば、Sambrook et al., 1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NYおよびAusubel et al., eds., 1998, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (該文献はともに参照によりその全体がここに組み入れられる)に記載の技術を参照のこと)を使用して該抗体のヌクレオチド配列を操作して、異なるアミノ酸配列を有する抗体を作製し、例えばアミノ酸置換、欠失、および/または挿入を創出することができる。
【０２８７】
特定の実施形態では、慣用の組換えDNA技術を使用して、1以上のCDRをフレームワーク領域内に挿入する。フレームワーク領域は、天然に存在するフレームワーク領域またはコンセンサスフレームワーク領域、および好ましくはヒトフレームワーク領域であってよい(ヒトフレームワーク領域の表に関しては、例えばChothia et al., 1998, J. Mol. Biol. 278: 457-479を参照のこと)。好ましくは、フレームワーク領域とCDRの組み合わせによって作製されたポリヌクレオチドは、TCRポリペプチドに特異的に結合する抗体をコードする。好ましくは、上で考察されるように、フレームワーク領域内に1以上のアミノ酸置換を施すことができ、好ましくは、該アミノ酸置換は抗原に対する抗体の結合を向上させる。さらに、そのような方法を使用して、鎖内ジスルフィド結合に関与する1以上の可変領域システイン残基のアミノ酸置換または欠失を施し、1以上の鎖内ジスルフィド結合を欠く抗体分子を作製することができる。ポリヌクレオチドに対する他の改変は本発明によって包含され、かつ当分野の技術の範囲内である。
【０２８８】
5.15  本発明の分子の組換え発現
本発明の分子(すなわち抗体)をコードする核酸配列が取得されたら、当技術分野で周知の技術を使用する組換えDNAテクノロジーによって該分子を生産するためのベクターを製造することができる。当業者に周知の方法を使用して、本発明の分子のコード配列および適切な転写調節シグナルおよび翻訳調節シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、in vitro組換えDNA技術、合成技術、およびin vivo遺伝子組換えが含まれる。(例えば、Sambrook et al., 1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NYおよびAusubel et al. eds., 1998, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NYに記載の技術を参照のこと)。
【０２８９】
本発明の方法によって特定される分子(すなわち抗体)のヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、慣用の技術(例えば、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、およびリン酸カルシウム沈殿)によって宿主細胞に導入し、トランスフェクトされた細胞を慣用の技術によって培養して、本発明の分子を得ることができる。特定の実施形態では、構成的、誘導性または組織、特異的プロモーターによって本発明の分子の発現を調節する。特定の実施形態では、発現ベクターはpMGX1303である(図３)。
【０２９０】
本発明の方法によって特定される分子を発現するために使用される宿主細胞は、細菌細胞、例えばEscherichia coli、または特に組換え免疫グロブリン分子全体の発現に関しては、好ましくは真核細胞であってよい。特に、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間初期遺伝子プロモーター要素などのベクターと組み合わせたチャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO)などの哺乳動物細胞は免疫グロブリンの有効な発現系である(Foecking et al., 1998, Gene 45:101; Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2)。
【０２９１】
種々の宿主・発現ベクター系を利用して、本発明の方法によって特定される分子を発現することができる。そのような宿主・発現系は、本発明の分子のコード配列を生産し、次いで精製するためのビヒクルであり、配列をコードする適切なヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされた場合に、in situで本発明の分子を発現する細胞でもある。これらには、非限定的に、本発明の方法によって特定される分子のコード配列を含む組換えバクテリオファージDNA、プラスミドDNAまたはコスミドDNA発現ベクターで形質転換された細菌(例えばE. coliおよびB. subtilis)などの微生物; 本発明の方法によって特定される分子をコードする配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母(例えばSaccharomyces Pichia); 本発明の方法によって特定される分子をコードする配列を含む組換えウイルス発現ベクター(例えばバキュロウイルス)で感染させた昆虫細胞系; 本発明の方法によって特定される分子をコードする配列を含む組換えウイルス発現ベクター(例えば、カリフラワーモザイクウイルス(CaMV)およびタバコモザイクウイルス(TMV)で感染させたかまたは組換えプラスミド発現ベクター(例えばTiプラスミド)で形質転換された植物細胞系; または哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーター(例えばメタロチオネインプロモーター)または哺乳動物ウイルス由来のプロモーター(例えばアデノウイルス後期プロモーター; ワクシニアウイルス7.5Kプロモーター)を含む組換え発現構築物を保持する哺乳動物細胞系(例えば、COS、CHO、BHK、293、293T、3T3細胞、リンホティック細胞(lymphotic cells)(U.S. 5,807,715を参照のこと)、Per C.6細胞(Crucellによって開発されたヒト網膜細胞)が含まれる。
【０２９２】
細菌系では、発現される分子の意図される用途に応じて、いくつかの発現ベクターを好都合に選択することができる。例えば、抗体の医薬組成物の作製のために大量の該タンパク質を製造しようとする場合、容易に精製できる高レベルの融合タンパク質産物の発現を導くベクターが望ましい。そのようなベクターには、非限定的に、E. coli発現ベクターpUR278 (Ruther et al., 1983, EMBO J. 2:1791)(該ベクターでは、抗体をコードする配列をlac Zコード領域とインフレームでベクターに個別にライゲートして、融合タンパク質が生産されるようにする); pINベクター(Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109; Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509); などが含まれる。pGEXベクターを使用して、グルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させてもよい。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオン・アガロースビーズへの吸着および結合、およびその後の遊離グルタチオンの存在下での溶出によって、溶解された細胞から容易に精製することができる。pGEXベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物をGST部分から遊離させることができるよう、トロンビンまたは因子Xaプロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
【０２９３】
昆虫系では、Autographa californica核多角体病ウイルス(AcNPV)をベクターとして使用して外来遺伝子を発現させる。該ウイルスはSpodoptera frugiperda細胞中で増殖する。抗体をコードする配列を該ウイルスの非必須領域(例えばポリヘドリン(polyhedrin)遺伝子)に個別にクローニングし、AcNPVプロモーター(例えばポリヘドリンプロモーター)のコントロール下に配置することができる。
【０２９４】
哺乳動物宿主細胞では、いくつかのウイルスベースの発現系を利用することができる。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、目的の抗体をコードする配列をアデノウイルス転写/翻訳コントロール複合体、例えば後期プロモーターおよびトリパータイト(tripartite)リーダー配列にライゲートすることができる。次いで、このキメラ遺伝子をin vitroまたはin vivo組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイルスゲノムの非必須領域(例えば領域E1またはE3)への挿入の結果、感染宿主中で生存可能でかつ免疫グロブリン分子を発現可能な組換えウイルスが生じる(例えばLogan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:355-359を参照のこと)。挿入された抗体をコードする配列の効率的翻訳のために特定の開始シグナルが必要とされることもある。これらのシグナルにはATG開始コドンおよび隣接配列が含まれる。さらに、挿入物全体の翻訳を確保するために、開始コドンは所望のコード配列のリーディングフレームと同相である必要がある。これらの外因性翻訳調節シグナルおよび開始コドンは種々の起源であってよく、天然および合成のどちらであってもよい。適切な転写エンハンサー要素、転写ターミネーター、などを含ませることによって発現の効率を高めることができる(Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544を参照のこと)。
【０２９５】
さらに、挿入された配列の発現を調節するかまたは遺伝子産物を所望の特定の様式で改変およびプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような改変(例えばグリコシル化)およびプロセシング(例えば切断)はタンパク質の機能に関して重要である。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後プロセシングおよび改変のための特徴的かつ特異的な機構を有する。発現される外来タンパク質の正しい改変およびプロセシングを確保するために適切なセルラインまたは宿主系を選択することができる。この目的を達成するために、一次転写物の適正なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化、およびリン酸化のための細胞機構を有する真核生物の宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳動物宿主細胞には、非限定的にCHO、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、293T、3T3、WI38、BT483、Hs578T、HTB2、BT20およびT47D、CRL7030およびHs578Bstが含まれる。
【０２９６】
組換えタンパク質の長期間の高収率生産のために、安定な発現が好ましい。例えば、本発明の抗体を安定に発現するセルラインを操作することができる。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを使用するのではなく、適切な発現調節領域(例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位、など)、および選択マーカーによってコントロールされるDNAで宿主細胞を形質転換することができる。外来DNAの導入後、操作された細胞を強化培地中で1〜2日増殖させ、次いで選択培地に切り替える。組換えプラスミド中の選択マーカーは選択に対する耐性を付与し、細胞の染色体にプラスミドを安定に組み込ませ、該細胞を増殖させて増殖巣を形成させ、次いでそれをクローニングし、エクスパンドしてセルラインにすることができる。この方法は、本発明の抗体を発現するセルラインを操作するために好都合に使用することができる。そのような操作されたセルラインは、本発明の抗体と直接または間接的に相互作用する化合物のスクリーニングおよび評価において特に有用である。
【０２９７】
いくつかの選択系を使用することができ、それには、非限定的に、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(Wigler et al., 1977, Cell 11:223)、ヒポキサンチン-グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(Szybalska & Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202)、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(Lowy et al., 1980, Cell 22: 817)遺伝子が含まれ、それらはそれぞれtk-、hgprt-またはaprt-細胞において用いることができる。また、以下の遺伝子に関する選択の基礎として代謝拮抗剤耐性を使用することができる: メトトレキセートに対する耐性を付与するdhfr (Wigler et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:357; O'Hare et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 1527); ミコフェノール酸に対する耐性を付与するgpt (Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 2072); アミノグリコシドに対する耐性を付与するneo, G-418 Clinical Pharmacy 12: 488-505; Wu and Wu, 1991,  3:87-95; Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596; Mulligan, 1993, Science 260:926-932; およびMorgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; May, 1993, TIB TECH 11(5):155-215)。使用できる組換えDNAテクノロジーの技術分野で一般に公知の方法は、Ausubel et al. (eds.), 1993, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY; Kriegler, 1990, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY; およびin Chapters 12 and 13, Dracopoli et al. (eds), 1994, Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY.; Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1に記載され; およびハイグロマイシンに対する耐性を付与するhygro (Santerre et al., 1984, Gene 30:147)である。
【０２９８】
本発明の抗体の発現レベルをベクター増幅によって高めることができる(レビューに関して、Bebbington and Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987)を参照のこと。抗体を発現するベクター系のマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在するインヒビターレベルの増加はマーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅領域は抗体のヌクレオチド配列に関連しているため、抗体の生産もまた増加する(Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257)。
【０２９９】
第1のベクターが重鎖由来のポリペプチドをコードし、第2のベクターが軽鎖由来のポリペプチドをコードする本発明の2つの発現ベクターで宿主細胞を共トランスフェクトすることができる。該2つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択マーカーを含んでよい。あるいは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両者をコードする単一のベクターを使用することができる。そのような状況では、過剰の有毒な遊離重鎖を回避するために軽鎖は重鎖の前に配置されるべきである(Proudfoot, 1986, Nature 322:52; Kohler, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:2197)。重鎖および軽鎖のコード配列はcDNAまたはゲノムDNAを含んでよい。
【０３００】
本発明の分子(すなわち抗体)が組換え発現されたら、ポリペプチドまたは抗体の精製のための当技術分野で公知の任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィー(例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、特に、プロテインA後の特定の抗原に関する親和性によるアフィニティークロマトグラフィー、およびサイジングカラムクロマトグラフィー)、遠心分離、溶解度差によって、またはポリペプチドまたは抗体の精製のための任意の他の標準的技術によって、それを精製することができる。
【０３０１】
6.  実施例
【実施例１】
【０３０２】
6.1  自己免疫疾患のマウスモデルであるコラーゲン誘発関節炎での抗TCRモノクローナル抗体療法
自己免疫性障害の治療に関する抗TCR抗体の治療効力をマウスコラーゲン誘発関節炎(CIA)モデルで評価した。CIAは、マウスにII型コラーゲンを接種することによって開始され、CD4+応答によって媒介され、CIA誘発マウスの関節炎の関節および末梢リンパ様組織内の複数系列のTCR陽性細胞(CD4+、CD4-、およびCD8-を含む)の存在および増殖によって特徴付けられる。CIA誘発マウスへの抗TCR抗体の投与は、治療期間中および治療終了後の延長期間の両期間で疾患症状を回復に向かわせるかまたは疾患進行を阻止した。これは、治療薬としての抗TCR抗体の潜在能力を実証する。
【０３０３】
方法:  雄性および雌性マウスでII型コラーゲンの皮内注射によってCIAを誘発した。初回注射後の21日目および42日目にコラーゲンの追加の注射ですべてのマウスに追加免疫した。次いで、足腫脹(paw swelling)によって決定される関節炎の徴候に関してマウスを検査した。カリパスを使用して足の厚みを測定することによって疾患進行をモニターした。
【０３０４】
マウスをランダムに処置群に入れ、コラーゲンの初回注射後14〜18日のそれぞれの日に50μgのH57 (ハムスターモノクローナルIgG2a抗マウスTCR抗体; ATCC(登録商標)番号HB-218TMの下にATCC(登録商標)から入手可能)、H57 AA、または、コントロールとしての2C11 AA (マウスモノクローナルIgG2a抗CD3抗体)を腹腔内(i.p.)注射した。H57または2C11の後の「AA」は、「ala-ala」突然変異を有するFcドメインを含む抗体を表す。ala-ala突然変異は、抗体のFc領域とすべてのFc受容体との結合を無効にする、Kabatに基づく234位および235位に対応する残基位置にアラニンを有するFc領域を含む。
【０３０５】
結果:  抗TCR抗体での治療の結果、治療直後および治療後の少なくとも25日間の期間の両方で疾患進行の抑制または疾患症状の改善が生じた(図４)。しかし、42日目のコラーゲンの2回目の追加免疫後、ala-ala突然変異を有する抗TCR抗体での治療を受けていたマウスは、3日以内に未処置コントロールでのレベルに匹敵するレベルへの急速な疾患進行を示した。野生型Fc領域を有する抗TCR抗体を投与されているマウスは、研究期間にわたって疾患症状の改善を示し、該症状は研究終了までに最終的に治療コントロールレベルに低下した。
【０３０６】
野生型Fcドメイン実験群で観察された疾患状態の初期スパイクの調査では、この処置群の雌性マウスにおいては、そのピークが急速な疾患進行の結果であることが示された(図５)が、該進行は対応する雄性マウスでは観察されなかった(図６)。しかし、この初期進行にもかかわらず、雌性マウスでは、野生型Fcを含む抗TCRは実際に疾患症状の改善を達成し、研究の終了までに、足の厚みはその21日目のピークと比べて大きく減少した。野生型Fc領域を有する抗TCR抗体を投与された雄性マウス(H57群)では、抗体療法は開始後少なくとも70日まで疾患進行を抑制した(図６)。
【０３０７】
雌性および雄性マウスはまた、「ala-ala」抗体(H57 AA)での治療に対する応答の差異を示した。雌性マウスでは、ala-ala抗体は、コラーゲンの2回目の追加免疫まで、疾患進行を効果的に抑制した。2回目の追加免疫後、ala-ala治療群およびコントロール2C11雌性群はともに、未処置コントロールを上回るレベルへの急速な疾患進行を示した。雄性ala-ala群でも2回目の追加免疫後の疾患進行が観察されたが、その後、研究終了までに症状は治療コントロール群のレベルに匹敵するレベルに低下した。この結果は、本発明の分子の治療効力が性別間で異なり、性別特異的治療実施形態につながることを示唆する。
【実施例２】
【０３０８】
6.2  自己免疫疾患のマウスモデルである実験的アレルギー性脳脊髄炎での抗TCRモノクローナル抗体療法
自己免疫性障害の治療に関する抗TCR抗体の治療効力をマウス実験的アレルギー性脳脊髄炎モデルで評価した。実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は中枢神経系の炎症性脱髄性疾患であり、多発性硬化症の動物モデルとして広く研究されている。EAEは、ホモジナイズされたCNS組織または高度に精製されたミエリンタンパク質、例えばミエリン塩基性タンパク質(MBP)またはプロテオリピドタンパク質(PLP)を動物に接種することによって誘発することができる。確立された疾患を示すEAE誘発マウスへの抗TCR抗体の投与は、治療期間中および治療の終了後の延長期間に、疾患症状を回復に向かわせ、疾患進行を阻止した。
【０３０９】
方法:  マウスで、50μgの、完全フロイントアジュバント中で乳化されたPLP139-151、H37Ra (非病原性Mycobacterium tuberculosis株H37Raから調製)の皮下注射およびその後の200 ng百日咳毒素の腹腔内(IP)注射によってEAEを誘発した。疾患の発生に関してマウスをモニターし、当技術分野で公知の標準EAEスコアリングにしたがって疾患進行を評価した。
【０３１０】
マウスをランダムに処置群に入れ、PLPの初回注射後6〜10日のそれぞれの日(n=7)または14〜17日のそれぞれの日(n=7)に50μgのH57 AAを静脈内(i.v.)注射するか、またはコントロールとして治療を施さなかった(n=6)。
【０３１１】
結果:  抗TCR抗体での治療は疾患進行を停止させ、治療直後および研究の残りの期間の両方で、疾患症状の抑制を生じさせた(図７)。しかし、治療効力は、疾患が確立されていたことを必要とした。コントロールマウスは、10日〜14日の間に初期疾患症状(少なくとも1のEAEスコア(だらりとした尾、不全対麻痺なし))を示し始めた。対照群と比べて、疾患の発症前に治療を受けたマウス(6〜10日目に治療)は、より著しい疾病経過を示した。
【実施例３】
【０３１２】
6.3  自己免疫疾患である1型糖尿病のマウスモデルでの抗TCRモノクローナル抗体療法
また、自己免疫性障害の治療に関する抗TCR抗体の効力を1型糖尿病のマウスモデルで評価した。非肥満性糖尿病(NOD)マウスは、特発性膵島炎の結果として自己免疫性インスリン依存的真性糖尿病の発症に対する感受性を示す。NODモデルでの糖尿病の発病は、中等度の糖尿および食後高血糖を伴う。糖尿病(diabetetic) NODマウスへの高用量の抗TCR抗体の投与は、治療を受けなかった対照群と比べて生存期間を改善した。
【０３１３】
方法:  糖尿に関して検査することによって、13週齡雌性NODマウスを糖尿病の自然発生に関して評価した。火曜日または水曜日に尿グルコースを検査し、陽性測定値を有するマウスを木曜日に再検査した。また、金曜日に絶食血清グルコースレベルを検査することによってすべてのマウスをモニターした。1週間に2回の陽性尿測定値を有するマウスを単離し、実験群に割り当てた。
【０３１４】
糖尿病を発生しているとして特定される単離マウスをランダムに処置群に入れ、5日間の過程にわたって50μg (n=8)または100μg (n=4)のH57 AA /日、またはPBS (コントロール/治療なし、n=10)をi.v.注射した。
【０３１５】
結果:  5日間にわたる100μg H57 AA /日での治療は、治療を受けなかった対照群と比べて糖尿病マウスの生存期間を改善した。5日間にわたる50μg H57 AA /日での治療はコントロールと比べて生存期間を改善しなかった。
【実施例４】
【０３１６】
6.4  自己免疫性糖尿病を有する患者に対する抗TCRモノクローナル抗体療法
患者:  以下の基準: 年齢7〜20歳、American Diabetes Association基準に基づく診断の6週間以内、および抗GAD65、抗ICA512、および/または抗インスリン自己抗体の存在の確認、にしたがって40人の1型糖尿病患者を参加者として集めた。患者は、研究過程の期間中、依然としてかかりつけの医師のケアの下にある。
【０３１７】
適格な患者をランダムに対照群およびヒト化抗TCR抗体処置群に割り当てる。ランダム化後、血液サンプルを採取してベースラインHA1cレベルを確立し、MMTTに対する治療前Cペプチド応答を確立し、IGTTに対する治療前FPIRを実施する。両群の患者を入院させて、ヒト化抗TCRモノクローナル抗体(ala-ala)またはプラセボの6日の治療過程を受けさせる。以下の用量: 1日目17μg/m2、2日目34.3μg/m2、3日目69μg/m2、4日目137.6μg/m2、および5および6日目275.3μg/m2で抗体を静脈内投与する。あるいは、以下の用量: 1日目1.6μg/kg/日; 2日目3.2μg/kg/日; 3日目6.5μg/kg/日; 4日目13μg/kg/日; および5〜14日目26μg/kg/日で抗体を静脈内投与してもよい。用量増加研究では、治療は、例えば、l日目1.42μg/kg/日; 2日目5.7μg/kg/日; 3日目11μg/kg/日; 4日目26μg/kg/日; および5〜14日目45.4μg/kg/日であってよい。以後の研究では、治療の用量を増加させかつ/または時間経過を減少させるように療法を改変する。例えば、以後の研究では、患者に、4日間の治療: l日目6.4μg/kg/日; 2日目13μg/kg/日、および3および4日目26μg/kg/日を施してよく; 追加の用量増加研究の期間には、治療は、1日目8μg/kg/日; 2日目16μg/kg/日; および3および4日目32μg/kg/日であってよい。
【０３１８】
初期研究の期間には、最初の3日の治療の抗体用量を、有害反応に関してモニターするために、20時間にわたる緩徐なIV注入によって投与する。以後の研究では、投与期間を減少させ、かつ/またはその用量を、12時間の経過にわたって均等に分配したボーラス注入として投与するために2〜4つの等しい部分に分ける。対照群の患者は代謝性および免疫性試験を受けるが、モノクローナル抗体を投与されない。抗TCRモノクローナル抗体(ala-ala)の免疫抑制作用に関して、研究中ずっと、患者をモニターする。
【０３１９】
治療後18か月間、患者をモニターする。糖耐性障害の症例では6か月毎に、正常な糖耐性の症例では、12か月毎にβ細胞機能を測定する。患者は通常食を食べるようにされ、研究の期間中ずっと、依然としてかかりつけの医師のケアの下にある。免疫学的アッセイを6か月間隔で繰り返す。かかりつけの医師による指示通りに患者にインスリン療法が施される。
【０３２０】
ラジオイムノアッセイによって測定されるCペプチドレベルの変化にしたがってβ細胞機能を分析する。ベースラインCペプチドおよびグルコースのためのサンプルを採取した後、患者に混合食を与える。15、30、60、90、120、150、180、210、および240分後に採取されたサンプル中のCペプチドレベルを測定する。混合食負荷試験(MMTT)に対するCペプチド応答を応答曲線下総面積(AUC)として表記する。応答が研究開始時の応答から7.5パーセントを超えて異なる場合に、応答の変化が生じたと考えられる。MMTTに対する患者のCペプチド応答を、治療後6か月、9か月、12か月、15か月および18か月間継続的にモニターする。あるいは、IGTTに対するFPIRによってβ細胞機能を評価する。モノヨウ化チロシンA14標識インスリン(Amersham Pharmacia)を使用する二重抗体ラジオイムノアッセイ法の変法によって血清インスリンレベルを測定する。グルコース負荷(0.5 g/kg)後1および3分の時点でのインスリンレベルの和としてFPIRを算出する。ラテックス凝集阻害試験によってグリコシル化ヘモグロビンレベルを測定する。
【０３２１】
免疫学的モニタリング:  GAD65、IA2/ICA512、およびインスリンに対する自己抗体のレベルを、当技術分野で公知の放射性結合アッセイ(例えばWoo  et al., 2000, J. Immunol Methods 244:91-103)で測定する。PCR増幅後のエキソン2多型のダイレクトシークエンシングによってHLA-DQAおよびHLA-DQB遺伝子型判定を実施する。モノクローナル抗体投与後の血清中のサイトカインレベルを酵素結合免疫吸着検定(ELISA)によって測定する。プレート結合抗TCR (ala-ala)を使用するELISAアッセイによって、または抗TCR-FITCとTCRのα鎖との結合の遮断を測定するためのフローサイトメトリーによって抗イディオタイプ抗体の生産をモニターする。
【０３２２】
統計解析:  残存ベータ細胞機能、自己抗体レベル、サイトカインレベル、およびグリコシル化ヘモグロビンレベルに関してデータ解析を行う。薬物投与前後の薬物療法の影響を検査するためにχ2分析を実施する。対照群と処置群との間の比較はマン・ホイットニーU検定で行う。
【実施例５】
【０３２３】
6.5  1型糖尿病の素因を有する被験体での抗TCRモノクローナル抗体療法
患者:  1型糖尿病を発症する素因を有する被験体に関するスクリーニングは、1型糖尿病の診断; 絶食グルコースレベルの障害; OGTTに対するグルコース応答の障害; GAD65に対する、IA2/ICA512に対する、および/またはインスリンに対する血清自己抗体の存在; またはCペプチド応答またはFPIRによって決定される、MMTT、OGTT、IGTTまたは2相グルコースクランプ法の後のインスリン生産の障害を有する、1親等または2親等の血縁関係に基づく。American Diabetes Associationによって確立された基準にしたがって、医師によって、または該基準を他の様式で満たす者によって1型糖尿病と診断されている患者は、本研究から除外される。
【０３２４】
研究に選択された患者を2つの等しいサイズの群にランダムに入れる。治療プロトコールおよび臨床モニタリングは、セクション6.1に記載される通りである。さらに、抗体療法を残存β細胞機能に関して適合させ、すなわち、Cペプチド応答またはFPIRによる測定でより障害されたβ細胞機能を示した患者には、より高い総用量の抗TCRモノクローナル抗体を投与する。例えば、40および110 pmol/ml/240分のCペプチド応答を有する2人の患者を仮定すると、応答障害を有する患者には、試験される2つの用量のより高い方、例えば、1日目1.42μg/kg/日; 2日目5.7μg/kg/日; 3日目11μg/kg/日; 4日目26μg/kg/日; および5〜14日目45.4μg/kg/日を投与する。
【０３２５】
治療後18か月間、患者をモニターする。糖耐性障害の症例では6か月毎に、正常な糖耐性の症例では、12か月毎にβ細胞機能を測定する。患者は通常食を食べるようにされ、研究の期間中ずっと、依然としてかかりつけの医師のケアの下にある。免疫学的アッセイを6か月間隔で繰り返す。かかりつけの医師による指示通りに患者にインスリン療法が施される。
【実施例６】
【０３２６】
6.6  T細胞悪性腫瘍の治療のための抗TCRモノクローナル抗体療法
T細胞悪性腫瘍の治療において本発明の抗体の効果があるかどうかを試験するために、例えばTセルライン、Raji Burkittのリンパ腫および/またはJurkat細胞を使用して、SCIDマウスでそのような悪性腫瘍のin vivo異種移植モデルを確立することができる。例えば、1〜2 X 106 RajiまたはJurkat細胞を、年齢および体重適合8週齢マウスの側腹部に皮下注射して、局所で増殖する腫瘍を生じさせる。腫瘍が直径約5 mmのサイズに達したら、治療を開始する。マウスを5匹からなる4群: 処置群IV、処置群IP、無関係の抗体コントロール、PBSに分ける。腫瘍細胞接種後0、7、および15日目に、1mg/kgの抗TCR抗体または無関係のコントロールを含む50μlのPBSをIVまたはIPで各動物に投与する。式: 体積=(長さx幅2)/2にしたがって腫瘍増殖を評価できる。腫瘍が直径15 mmの最大許容サイズに達したら、動物を犠牲にする。腫瘍を回収して腫瘍形態を決定するために種々の時点で動物を犠牲にすることができる。
【０３２７】
7.  等価物
本明細書中に記載の本発明の具体的実施形態に等価な多数の実施形態を当業者は認識するか、または日常的に過ぎない実験法を使用して確かめることができる。そのような等価物は、特許請求の範囲によって包含されるものとする。
【０３２８】
本明細書中に記載のすべての刊行物、特許および特許出願は、本明細書中への参照により、個々の各刊行物、特許または特許出願が参照によりここに組み入れられると具体的かつ個別に記載されているのと同じ程度にここに組み入れられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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