(57)【要約】  本発明は、スルホリポ−シクロデキストリン（ＳＬ−ＣＤ）およびサポニンまたはＱｕｉｌ  Ａ、ならびに場合により、少なくとも１つの抗原を含む免疫学的組成物に関する。本発明は、動物抗原であってよい少なくとも１つの抗原を含む方法および免疫学的組成物に関する。本発明の方法および免疫学的組成物における動物抗原は、ウシ抗原であってよい。本発明は、ウシ流行熱ウイルス（ＢＥＦＶ）、ウシヘルペスウイルス１（ＩＢＲ）、またはブルータングウイルス（ＢＴＶ）を含む方法および免疫学的組成物に関する。本発明は、動物においてＢＥＦＶ、ＩＢＲ、またはＢＴＶに対する免疫応答を引き起こすための方法であって、本発明の組成物を動物に投与することを含む方法を含む。本発明において、特に、免疫応答は、防御免疫応答である。本発明は、Ｑｕｉｌ  Ａをウイルスに添加することを含む免疫学的組成物を調製するための方法を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
スルホリポ−シクロデキストリン（ＳＬ−ＣＤ）およびサポニンを含む免疫学的組成物。
【請求項２】
少なくとも１つの抗原をさらに含む、請求項１に記載の免疫学的組成物。
【請求項３】
少なくとも１つの抗原が、細菌、ウイルス、ペプチド、ポリペプチド、核酸、またはそれらの組合せから選択される、請求項２に記載の免疫学的組成物。
【請求項４】
少なくとも１つの抗原が動物抗原である、請求項３に記載の免疫学的組成物。
【請求項５】
少なくとも１つの抗原がウシ抗原である、請求項４に記載の免疫学的組成物。
【請求項６】
少なくとも１つの抗原がウイルス抗原である、請求項３に記載の免疫学的組成物。
【請求項７】
ウイルス抗原が、ウシ流行熱ウイルス（ＢＥＦＶ）、ウシヘルペスウイルス１（ＩＢＲ）、またはブルータングウイルス（ＢＴＶ）である、請求項６に記載の免疫学的組成物。
【請求項８】
ＳＬ−ＣＤが約０．２ｍＬ／ｍＬの最終濃度で存在する、請求項１から７のいずれか一項に記載の免疫学的組成物。
【請求項９】
サポニンが約０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在する、請求項１から８のいずれか一項に記載の免疫学的組成物。
【請求項１０】
サポニンがＱｕｉｌ  Ａである、請求項１から８のいずれか一項に記載の免疫学的組成物。
【請求項１１】
Ｑｕｉｌ  Ａが約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約０．２ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在する、請求項１０に記載の免疫学的組成物。
【請求項１２】
Ｑｕｉｌ  Ａが約０．１５８ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在する、請求項１０または１１に記載の免疫学的組成物。
【請求項１３】
それを必要としている動物において免疫応答を引き起こすための方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載の免疫学的組成物を動物に投与することを含む方法。
【請求項１４】
少なくとも１つの追加アジュバントを添加する前にＱｕｉｌ  Ａおよび少なくとも１つのウイルス抗原を混ぜ合わせることにより調製される免疫学的組成物。
【請求項１５】
少なくとも１つの追加アジュバントをさらに含む、請求項１４に記載のとおり調製される免疫学的組成物。
【請求項１６】
少なくとも１つの追加アジュバントが、ＳＬ−ＣＤ、水酸化アルミニウム、ＳＰ−油、またはカルボポールから選択される、請求項１５に記載のとおり調製される免疫学的組成物。
【請求項１７】
少なくとも１つの追加アジュバントがＳＬ−ＣＤである、請求項１６に記載のとおり調製される免疫学的組成物。
【請求項１８】
ＳＬ−ＣＤが約０．２ｍＬ／ｍＬの最終濃度で存在する、請求項１７に記載のとおり調製される免疫学的組成物。
【請求項１９】
Ｑｕｉｌ  Ａが約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約０．２ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在する、請求項１４から１８のいずれか一項に記載のとおり調製される免疫学的組成物。
【請求項２０】
Ｑｕｉｌ  Ａが約０．１５８ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在する、請求項１４から１９のいずれか一項に記載のとおり調製される免疫学的組成物。
【請求項２１】
ウイルス抗原がウシ抗原である、請求項１４から２０のいずれか一項に記載のとおり調製される免疫学的組成物。
【請求項２２】
ウイルス抗原が、ＢＥＦＶ、ＩＢＲ、およびＢＴＶから選択される、請求項１４から２１のいずれか一項に記載のとおり調製される免疫学的組成物。
【請求項２３】
動物においてＢＥＦＶに対する免疫応答を引き起こすための方法であって、請求項２２に記載の組成物を動物に投与することを含む方法。
【請求項２４】
免疫応答が、組成物の単一投与量の投与後に引き起こされる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
免疫応答が防御免疫応答である、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＳＬ−ＣＤおよびサポニンを含む、動物において免疫応答を引き起こすためのキット。
【請求項２７】
サポニンがＱｕｉｌ  Ａである、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
少なくとも１つの抗原をさらに含む、請求項２６または２７に記載のキット。
【請求項２９】
少なくとも１つの抗原が、細菌、ウイルス、ペプチド、ポリペプチド、核酸、またはそれらの組合せから選択される、請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
少なくとも１つの抗原がウイルス抗原である、請求項２９に記載のキット。
【請求項３１】
ウイルス抗原が、ＢＥＦＶ、ＩＢＲ、およびＢＴＶから選択される、請求項３０に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００８年８月１９日出願のオーストラリア仮出願第２００８９０４２６１号の利益を米国特許法第１１９条（ａ）の下で、および２００８年８月２７日出願の米国仮出願第６１／０９２０９１号の利益を米国特許法第１１９条（ｅ）の下で主張するものである。これらの出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【０００２】
本発明は、スルホリポ（ｓｕｌｐｈｏｌｉｐｏ）−シクロデキストリン（ＳＬ−ＣＤ）およびサポニンまたはＱｕｉｌ  Ａ、ならびに場合により、少なくとも１つの抗原を含む免疫学的組成物に関する。本発明は、ＳＬ−ＣＤ、サポニンまたはＱｕｉｌ  Ａ、および抗原を含む免疫学的組成物を調製するための方法にも関する。本発明は、ウシ流行熱ウイルス（ＢＥＦＶ）、ウシヘルペスウイルス１（ＩＢＲ）、またはブルータングウイルス（ＢＴＶ）に対する免疫応答を引き起こすために免疫原性組成物を使用するための方法も提供する。本発明は、本発明の免疫学的組成物を含むキットを提供する。
【背景技術】
【０００３】
サポニンアジュバントは、動物用のワクチンにおいて商業的に使用されてきた、知られているクラスのアジュバントである。サポニンは、様々な植物種において見いだされる二次代謝産物の１クラスである。それらは、水溶液中で振盪された場合にそれらが作り出す石鹸様の発泡により現象学的に寄せ集められる両親媒性グリコシドである。構造的に、サポニンは、親油性トリテルペン誘導体と組み合わせられている１つまたは複数の親水性グリコシド部分で構成されている。市販のサポニンは、南アメリカの樹木キラヤサポナリアモリーナ（Ｑｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ）およびユッカシジゲラ（Ｙｕｃｃａ  ｓｃｈｉｄｉｇｅｒａ）とも呼ばれるモハベユッカ（Ｍｏｈａｖｅ  Ｙｕｃｃａ）植物の樹皮から主に単離される。サポニンは、Ｂｅｒｇｈａｕｓｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨ）を包含するいくつかの供給源から入手可能である。サポニンの精製形態は、Ｑｕｉｌ  Ａと一般に呼ばれ、Ｂｅｒｇｈａｕｓｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｅｒｇｅａｎｔ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｃｌｉｆｔｏｎ、ＮＪ）、Ｓｕｐｅｒｆｏｓ  ａ／ｓ（Ｖｅｄｂａｅｋ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、およびＢｒｅｎｎｔａｇ  Ｂｉｏｓｅｃｔｏｒ（Ｆｒｅｄｅｒｉｋｓｓｕｎｄ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を包含するいくつかの供給源から市販されている。Ｑｕｉｌ−Ａの物理的および化学的な特性は、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ  Ｓａｐｏｎｉｎ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｑｕｉｌ−Ａという表題で、Ｓｕｐｅｒｆｏｓから入手可能な営業用文献に記されている。Ｑｕｉｌ−Ａは、トリテルペノイドキラ酸とのグリコシド結合における炭水化物部分として化学的に特徴付けられている。
【０００４】
アジュバントとしてＱｕｉｌ  Ａについて議論しているいくつかの米国特許が出願されている。例えば、米国特許第６，４１６，７６４号および第６，２９１，２２８号は、アジュバントとしてＱｕｉｌ  Ａを使用し、ウシウイルス性下痢ウイルスの非細胞病原性株を含むワクチンに関する。米国特許第４，４３２，９６９号は、吸入アレルゲンおよびサポニンまたはＱｕｉｌ  Ａアジュバントを含む吸入アレルゲン組成物に関する。
【０００５】
米国特許第４，９００，５４９号は、Ｑｕｉｌ  Ａを含有する免疫原性複合体を調製するためのプロセスについて記載している。
【０００６】
米国特許第６，１６５，９９５号は、ＳＬ−ＣＤ誘導体の調製に関する。米国特許第６，６１０，３１０号は、アジュバントとしての、ＳＬ−ＣＤなどのポリイオン性ポリマーに関連している。
【０００７】
ウシ流行熱（ＢＥＦ）は、特に、北部オーストラリアにおいて、乳牛と肉牛の両方に影響を及ぼす衰弱性ウイルス疾患である。ＢＥＦは、ウシが商業的に飼育されている大部分のアジア諸国においても認められる。ＢＥＦは、「三日病（ｔｈｒｅｅ  ｄａｙ  ｓｉｃｋｎｅｓｓ）」として知られており、乳生産量に実質的な影響を与えるか肉牛および乳牛において病的状態を引き起こす恐れがある（Ｗａｌｋｅｒ，Ｐ．Ｊ．、２００５、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９２：５７〜８０）。
【０００８】
ＢＥＦの原因因子は、ウシ流行熱ウイルス（ＢＥＦＶ）である。このウイルスは、エフェメロウイルス属（ｇｅｎｕｓ  Ｅｐｈｅｍｅｒｏｖｉｒｕｓ）に分類されてきたラブドウイルスである。ＢＥＦＶビリオンは、弾丸型または円錐型であり、マイナス一本鎖ＲＮＡゲノムを含有する。ＢＥＦＶゲノムは、核タンパク質、ポリメラーゼ関連タンパク質、マトリクスタンパク質、大きなＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、および２つの糖タンパク質をコードする。
【０００９】
修飾生ＢＥＦワクチンは、何年にもわたってオーストラリアにおいて入手可能であり、ＢＥＦシーズンの前に年１回のブースターにより与えられる。このワクチンは、獣医の処方箋を必要とし、投与前にアジュバントを含有する希釈液による再構成を必要とする凍結乾燥形態で提供される。ナイーブ動物は、２回のワクチン投薬と、それに続く、年１回のワクチン再接種を必要とする。
【００１０】
ＰＣＴ公開第ＷＯ／１９９４００４６８５号は、ＢＥＦＶ表面糖タンパク質を含むＢＥＦＶワクチンの調製に関する。
【００１１】
Ｖａｎｓｅｌｏｗら（１９９５、Ｖｅｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４６：１１７〜１３０）は、様々なＢＥＦワクチンの試験について記載している。
【００１２】
Ｈｓｉｅｈら（２００６、Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．６８：５４３〜５４８）は、ウイルス株Ｔｎ８８１２８およびＴｎ７３を使用するＢＥＦＶワクチンに関する。これらのワクチンは、バイナリーエチレンイミンおよび水酸化アルミニウムまたは水中油中水型アジュバントの添加によりウイルスを不活化することにより調製された。
【００１３】
ランピースキン病ウイルス（ＳＡ−Ｎｅｅｔｈｌｉｎｇ型）ベクター中にクローニングされたＢＥＦＶ構造糖タンパク質を含む組み換えワクチンは、Ｗａｌｌａｃｅ，Ｄ．Ｂ．およびＶｉｌｊｏｅｎ  Ｇ．Ｊ．（２００５、Ｖａｃｃｉｎｅ  ２３：３０６１〜３０６７）によって報告されている。
【００１４】
Ｃｈｕａｎｇら（２００７、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈ．１４５：８４〜８７）は、ＲＮＡ干渉およびＢＥＦＶ表面糖タンパク質遺伝子発現の抑制を使用することに関する。
【００１５】
ウシヘルペスウイルス１は、伝染性ウシ鼻気管炎ウイルスとしても知られている。それは、ＢＨＶかＩＢＲのどちらかと略される。ウシヘルペスウイルス−１は、鼻気管炎、膣炎、亀頭包皮炎、流産、結膜炎、および腸炎を包含する、ウシにおける疾患を引き起こすヘルペスウイルス科（ｆａｍｉｌｙ  Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）のウイルスである。ＢＨＶ−１は、輸送熱における寄与因子でもある。それは、性的接触、人工授精、およびエアロゾル感染を通して広がる。他のヘルペスウイルスのように、ＢＨＶ−１は、生涯にわたる潜伏感染およびウイルスの排出を引き起こす。疾患の重症度および発生率を軽減する利用可能なワクチンがある。ＢＨＶ−１により引き起こされる呼吸器疾患は、伝染性ウシ鼻気管炎として一般に知られている。
【００１６】
ブルータングウイルス（ＢＴＶ）は、二本鎖ＲＮＡレオウイルス科（ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）に属するオルビウイルス属（ｇｅｎｕｓ  Ｏｒｂｉｖｉｒｕｓ）のプロトタイプウイルスである。ＢＴＶは、ヒツジ、ヤギ、ウシおよびシカなどの家畜において重篤な疾患を引き起こす。２４の血清型が、不顕性感染から急性劇症型感染に及ぶ問題を引き起こすと文献で報告されている。慢性的にかつ持続的にウイルスを排出するウシも認められてきた。ワクチンは、家畜におけるブルータングの治療のために入手可能である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本開示は、スルホリポ−シクロデキストリン（ＳＬ−ＣＤ）およびサポニン、ならびに場合により、少なくとも１つの抗原を含む免疫学的組成物を提供する。本発明の一部の実施形態において、サポニンはＱｕｉｌ  Ａである。本発明の一部の実施形態において、少なくとも１つの抗原は、細菌、ウイルス、ペプチド、ポリペプチド、核酸、またはそれらの組合せから選択される。本発明の一部の実施形態において、少なくとも１つの抗原は、動物抗原である。本発明の一部の実施形態において、動物抗原はウシ抗原である。本発明の一部の実施形態において、抗原はウイルス抗原である。本発明の一部の実施形態において、ウイルス抗原は、ウシヘルペスウイルス１（ＩＢＲ）、ブルータングウイルス（ＢＴＶ）、またはウシ流行熱ウイルス（ＢＥＦＶ）である。ウイルス抗原は、生菌弱毒化型、組み換え型、死菌型、または不活化型であってよい。一部の実施形態において、本発明は、抗原が生菌弱毒化ウイルスである免疫原性組成物を提供する。本発明の一部の実施形態において、ウイルスはウシ流行熱ウイルス（ＢＥＦＶ）である。本発明の様々な実施形態において、ウイルスは、凍結ストック、乾燥ストック、凍結乾燥ストック、または新鮮ストック由来である。様々な実施形態において、サポニンは、本発明の免疫学的組成物中に約０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在する。様々な実施形態において、Ｑｕｉｌ  Ａは、本発明の免疫学的組成物中に約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約０．２ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在する。一部の実施形態において、Ｑｕｉｌ  Ａは、本発明の免疫学的組成物中に約０．１５８ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在する。様々な実施形態において、ＳＬ−ＣＤは、本発明の免疫学的組成物中に約０．２ｍＬ／ｍＬの最終濃度で存在する。一部の実施形態において、サポニンおよびＳＬ−ＣＤを含むかＱｕｉｌ  ＡおよびＳＬ−ＣＤを含む本発明の免疫学的組成物は、少なくとも１つの追加アジュバントを含む。本発明の様々な実施形態において、追加アジュバントは、水酸化アルミニウム、ＳＰ−油、またはカルボポールから選択される。本発明の一部の実施形態において、抗原は、一部の実施形態においてウイルスサブユニットであるポリペプチドである。本発明の一部の実施形態において、ウイルスサブユニットは、ＢＥＦＶ、ＩＢＲ、またはＢＴＶから選択される。
【００１９】
一実施形態において、本発明は、動物において動物抗原に対して免疫応答を引き起こすための方法であって、サポニン、ＳＬ−ＣＤ、および少なくとも１つの動物抗原を含む免疫原性組成物を動物に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫応答は、免疫原性組成物の単一投与量の投与後に引き起こされる。一実施形態において、本発明は、動物においてＩＢＲに対して免疫応答を引き起こすための方法であって、サポニン、ＳＬ−ＣＤ、および少なくとも抗原としてのＩＢＲを含む免疫原性組成物を動物に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、動物においてＢＴＶに対して免疫応答を引き起こすための方法であって、サポニン、ＳＬ−ＣＤ、および少なくとも抗原としてのＢＴＶを含む免疫原性組成物を動物に投与することを含む方法を提供する。
【００２０】
一実施形態において、本発明は、動物においてＢＥＦＶに対して免疫応答を引き起こすための方法であって、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＳＬ−ＣＤ、および抗原を含む免疫原性組成物を動物に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫応答は、免疫原性組成物の単一投与量の投与後に引き起こされる。一実施形態において、本発明は、動物においてＩＢＲに対して免疫応答を引き起こすための方法であって、サポニン、ＳＬ−ＣＤ、および抗原を含む免疫原性組成物を動物に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、動物においてＢＴＶに対して免疫応答を引き起こすための方法であって、サポニン、ＳＬ−ＣＤ、および抗原を含む免疫原性組成物を動物に投与することを含む方法を提供する。本発明の一部の実施形態において、本発明の免疫原性組成物の投与後に引き起こされる免疫応答は、防御免疫応答である。
【００２１】
一実施形態において、本発明は、ＳＬ−ＣＤを添加する前にＱｕｉｌ  Ａおよびウイルスを混ぜ合わせることにより調製される免疫原性組成物を提供する。ウイルスは、生菌弱毒化型、組み換え型、死菌型、または不活化型であってよい。本発明の一部の実施形態において、Ｑｕｉｌ  Ａおよびウイルスは、室温にて混ぜ合わせられる。本発明の一部の実施形態において、Ｑｕｉｌ  Ａおよびウイルスは、少なくとも１５分にわたって混ぜ合わせられる。本発明の一部の実施形態において、Ｑｕｉｌ  Ａおよびウイルスは、少なくとも１２０分にわたって混ぜ合わせられる。
【００２２】
一実施形態において、本発明は、動物において免疫応答を引き起こすための本発明の免疫原性組成物を含むキットを提供する。
【００２３】
様々な実施形態において、本発明は、ＢＥＦＶにより引き起こされるウイルス感染、すなわちウシ流行熱に対してウシにおいて免疫応答を誘導するための方法を提供する。ＢＥＦＶに対して免疫応答を誘導するための方法は、ＢＥＦＶ、ＳＬ−ＣＤ、およびＱｕｉｌ  Ａを含む組成物をウシに投与することを含む。
【００２４】
一実施形態において、本発明は、免疫学的有効量のＢＥＦＶ、ＳＬ−ＣＤ、およびＱｕｉｌ  Ａを含む免疫原性組成物またはワクチンを提供する。
【００２５】
様々な実施形態において、本発明は、ＩＢＲにより引き起こされるヘルペスウイルス感染、すなわちウシ鼻気管炎に対して免疫応答をウシにおいて誘導するための方法を提供する。ＩＢＲに対して免疫応答を誘導するための方法は、ＩＢＲ、ＳＬ−ＣＤ、およびサポニンを含む組成物をウシに投与することを含む。
【００２６】
様々な実施形態において、本発明は、ＢＴＶにより引き起こされるウイルス感染、すなわちウシブルータングに対して免疫応答をウシにおいて誘導するための方法を提供する。ＢＴＶに対して免疫応答を誘導するための方法は、ＢＴＶ、ＳＬ−ＣＤ、およびサポニンを含む組成物をウシに投与することを含む。
【００２７】
一実施形態において、本発明は、免疫学的有効量のＩＢＲ、ＳＬ−ＣＤ、およびサポニンを含む免疫原性組成物またはワクチンを提供する。
【００２８】
一実施形態において、本発明は、免疫学的有効量のＢＴＶ、ＳＬ−ＣＤ、およびサポニンを含む免疫原性組成物またはワクチンを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本開示は、部分的に、ＳＬ−ＣＤ、およびサポニンまたはＱｕｉｌ  Ａを含む免疫学的組成物が、少なくとも１つの抗原の免疫原性を増強することができるという発見に基づいている。本発明の様々な実施形態において、少なくとも１つの抗原は、細菌、ウイルス、ペプチド、ポリペプチド、核酸、またはそれらの組合せから選択することができる。
【００３０】
本発明の一部の実施形態において、少なくとも１つの抗原は、動物抗原である。本発明の様々な実施形態において、動物抗原は、ウシ抗原であってよい。
【００３１】
本発明の一実施形態において、動物抗原は、ウイルス抗原であってよい。本発明の一部の実施形態において、ウイルス抗原は、ＢＥＦＶ、ＩＢＲ、またはＢＴＶの株を包含するが、それらに限定されるものではない。ＢＥＦＶは、オーストラリア、アフリカ、中東、およびアジアにおいてウシ流行熱を引き起こすことが知られているラブドウイルスである。ＢＢ２２７１−９１９およびその親株（９１９）、ＴＮ７３、Ｔｎ８８１２８、ＢＥＦＶ２００１の株１〜１１、またはＢＥＦＶ２００４の株１〜３などのＢＥＦＶの多くの株が知られている。株の選択は、本発明の免疫原性組成物が使用されることになる国によって変わることがある。ウシヘルペスウイルス−１は、ＢＨＶまたはＩＢＲとも呼ばれ、鼻気管炎、膣炎、亀頭包皮炎、流産、結膜炎、および腸炎を包含する、ウシにおける疾患を引き起こすヘルペスウイルス科（ｆａｍｉｌｙ  Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）のウイルスである。ＩＢＲは、輸送熱における寄与因子でもある。それは、性的接触、人工授精、およびエアロゾル感染を通して広がる。他のヘルペスウイルスのように、ＩＢＲは、生涯にわたる潜伏感染およびウイルスの排出を引き起こす。ＩＢＲにより引き起こされる呼吸器疾患は、伝染性ウシ鼻気管炎として一般に知られている。
【００３２】
ブルータングウイルス（ＢＴＶ）は、二本鎖ＲＮＡレオウイルス科（ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）に属するオルビウイルス属（ｇｅｎｕｓ  Ｏｒｂｉｖｉｒｕｓ）のプロトタイプウイルスである。ＢＴＶは、ヒツジ、ヤギ、ウシおよびシカなどの家畜において重篤な疾患を引き起こす。２４の血清型が、不顕性感染から急性劇症型感染に及ぶ問題を引き起こすと文献で報告されている。慢性的にかつ持続的にウイルスを排出するウシも認められてきた。ブルータングは、オーストラリア、北アメリカ、アフリカ、中東、アジア、およびヨーロッパにおいて観察されてきた。
【００３３】
本発明の様々な実施形態において、免疫原性組成物中のウイルスは、生菌弱毒化型、組み換え型、死菌型、または不活化型であってよい。生菌弱毒化ウイルスを調製するための方法は、文献で知られている。例えば、ウイルスを、組織培養、孵化卵、または生きた動物などの異種宿主内のウイルスの通過を介して弱毒化することができる。弱毒化ＢＥＦＶを、非ウシ細胞において優先的成長について選択し、選択の過程で、ウシ細胞において成長しにくくすることができる。これらの弱毒化株は、ウシ宿主において不完全に複製するため、ウシに与えられた場合、疾患ではなく免疫を誘導する。ウイルスは、自然宿主に対する病原性が低下し新宿主に対するその病原性が増大した場合に弱毒化型であると言われている。一部の弱毒化ウイルス株は、天然に存在することがある。遺伝子工学を使用し、確定した方法でウイルスを弱毒化することができる。免疫原性組成物、ワクチン、および方法において使用するために死菌ウイルスまたは不活化ウイルスを調製する方法は、当技術分野において知られている。化学的不活化プロセスにおいて、適当なウイルスサンプル、またはウイルスを含有する血清サンプルは、ウイルスを不活化するための十分に高い（または、不活化剤に応じて低い）温度またはｐＨにおいて、十分な量または濃度の不活化剤により、十分な長さの時間にわたって処理される。例えば、ウイルスは、ホルマリン、バイナリーエチレンイミン（ＢＥＩ）、または疎水性溶媒、酸などの不活化剤で処理することができる。ウイルスは、紫外線またはＸ線の照射、加熱などにより不活化することができる。加熱による不活化は、ウイルスを不活化するのに十分な温度にてかつ十分な長さの時間にわたって行われる。照射による不活化は、ウイルスを不活化するのに十分な長さの時間にわたって光の波長または他のエネルギー源を使用して行われる。本発明の一部の実施形態において、免疫原性組成物は、生菌弱毒化ウイルスを含む。
【００３４】
本発明の一部の実施形態において、免疫原性組成物は、凍結ストック、乾燥ストック、または新鮮ストックから得られる抗原を含む。抗原が、乾燥ストックから得られる場合、凍結乾燥ストックから得ることができる。一部の実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、凍結ストックからの抗原を含む。
【００３５】
サポニンは、植物および海生動物界に広く分布しているステロイドまたはトリテルペングリコシドである。サポニンは、水中でコロイド溶液を形成し、振盪すると発泡し、コレステロールを沈殿させることで知られている。サポニンが、細胞膜の近くにある場合、膜に細孔様構造を作り出し、膜を破裂させる。サポニンは、動物用のワクチンにおいてアジュバントとして使用される。個々のサポニンのアジュバント活性および溶血活性は、広く研究されてきた（Ｌａｃａｉｌｌｅ−ＤｕｂｏｉｓおよびＷａｇｎｅｒ、１９９６、Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｓａｐｏｎｉｎｓ」  Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  第２巻  ｐｐ３６３〜３８６）。サポニンは、様々な植物種において見いだされる二次代謝産物の１クラスである。それらは、水溶液中で振盪された場合にそれらが作り出す石鹸様の発泡により現象学的に寄せ集められる両親媒性グリコシドである。構造的に、サポニンは、親油性トリテルペン誘導体と組み合わせられている１つまたは複数の親水性グリコシド部分で構成されている。市販のサポニンは、キラヤサポナリアモリーナ（Ｑｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ）およびユッカシジゲラ（Ｙｕｃｃａ  ｓｃｈｉｄｉｇｅｒａ）から主に抽出される。「Ｑｕｉｌ  Ａ」とは、サポニンの精製形態を指す。
【００３６】
サポニンは、本発明の免疫原性組成物中に約０．４ｍｇ／ｍＬ〜約０．６ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在することがある。サポニンは、本発明の免疫原性組成物中に約０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在することがある。Ｑｕｉｌ  Ａは、本発明の免疫原性組成物中に約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約０．２ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在することがある。Ｑｕｉｌ  Ａは、本発明の免疫原性組成物中に約０．１２ｍｇ／ｍＬ〜約０．１８ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在することがある。Ｑｕｉｌ  Ａは、本発明の免疫原性組成物中に約０．１４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１６ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在することがある。Ｑｕｉｌ  Ａは、本発明の免疫原性組成物中に約０．１５８ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在することがある。一実施形態において、Ｑｕｉｌ  Ａは、本発明の免疫原性組成物中に約０．１５８ｍｇ／ｍＬの最終濃度で存在する。
【００３７】
水中スクアラン型エマルジョン中のスルホリポ（ｓｕｌｆｏｌｉｐｏ）−シクロデキストリン（ＳＬ−ＣＤ／スクアラン）を、様々なワクチンの調製において使用した。ＳＬ−ＣＤ／スクアランは、Ｈｉｌｇｅｒｓら（Ｓｕｌｆｏｌｉｐｏ−ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  ｉｎ  ｓｑｕａｌａｎｅ  ｉｎ−ｗａｔｅｒ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  ｓａｆｅ  ｖａｃｃｉｎｅ  ａｄｊｕｖａｎｔ．Ｖａｃｃｉｎｅ  １７（１９９９）、ｐｐ．２１９〜２２８；Ｆｏｒｔ  Ｄｏｄｇｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｈｏｌｌａｎｄ、Ｗｅｅｓｐ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）により記載されているように調製することができる。
【００３８】
ＳＬ−ＣＤは、本発明の免疫原性組成物中に約０．０９ｍＬ／ｍＬ〜約０．３ｍＬ／ｍＬの最終濃度で存在することがある。ＳＬ−ＣＤは、本発明の免疫原性組成物中に約０．１ｍＬ／ｍＬ、約０．１５ｍＬ／ｍＬ、約０．１７ｍＬ／ｍＬ、約０．２ｍＬ／ｍＬ、または約０．２５ｍＬ／ｍＬの最終濃度で存在することがある。本発明の免疫原性組成物は、Ｑｕｉｌ  ＡおよびＳＬ−ＣＤに加えて、少なくとも１つのアジュバントをさらに含むことがある。そのような追加アジュバントは、本明細書においてさらに詳細に議論されるように、当技術分野において知られているアジュバントのうちのいずれか１つから選択することができる。
【００３９】
一部の実施形態において、本発明は、免疫応答を引き起こすための方法であって、サポニンおよびＳＬ−ＣＤを含む免疫学的組成物を動物に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、該方法は、サポニン、ＳＬ−ＣＤ、および少なくとも１つの抗原を含む免疫学的組成物を動物に投与することを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの抗原は、動物抗原である。本発明の一部の実施形態において、動物抗原は、ウシ抗原である。本発明の一部の一実施形態において、動物抗原は、ウイルス抗原である。一部の実施形態において、ウイルス抗原は、ＢＥＦＶ、ＩＢＲ、またはＢＴＶである。一部の実施形態において、ウイルスは、生菌弱毒化型、組み換え型、死菌型、または不活化型である。一部の実施形態において、ウイルスは、死菌型である。一部の実施形態において、抗原は、凍結ストック、乾燥ストック、または新鮮ストックから得られる。抗原が、乾燥ストックから得られる場合、凍結乾燥ストックから得ることができる。一部の実施形態において、抗原は、凍結ストックから得られる。
【００４０】
一部の実施形態において、本発明は、免疫応答を引き起こすための方法であって、Ｑｕｉｌ  ＡおよびＳＬ−ＣＤを含む免疫学的組成物を動物に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、該方法は、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＳＬ−ＣＤ、および少なくとも１つの抗原を含む免疫学的組成物を動物に投与することを含む。一部の実施形態において、該方法において使用される少なくとも１つの抗原は、動物抗原である。一部の実施形態において、該方法において使用される動物抗原は、ウシ抗原である。一部の実施形態において、抗原は、ウイルス抗原である。一部の実施形態において、ウイルス抗原は、ＩＢＲ、ＢＥＦＶ、またはＩＢＲである。一部の実施形態において、ウイルス抗原は、生菌弱毒化型、組み換え型、死菌型、または不活化型である。一部の実施形態において、ウイルスは、生菌弱毒化型である。一部の実施形態において、抗原は、凍結ストック、乾燥ストック、または新鮮ストックから得られる。抗原が、乾燥ストックから得られる場合、凍結乾燥ストックから得ることができる。一部の実施形態において、抗原は、凍結ストックから得られる。
【００４１】
本発明の免疫原性組成物は、複数投与量の投与後に免疫応答を引き起こすことができる。一部の実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、２投与量の投与後に免疫応答を引き起こすことができる。一部の実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、単一投与量の投与後に免疫応答を引き起こす。本発明の免疫原性組成物により引き起こされる免疫応答は、防御免疫応答であってよい。本発明の免疫原性組成物の初回投与量の投与後に、ブースター投与量を、約４週間後に投与し、免疫原性応答を増強することができる。さらなるブースター用量も投与することができる。
【００４２】
一実施形態において、本発明は、動物において免疫応答を引き起こすためのキットを提供する。一部の実施形態において、該キットは、サポニンおよびＳＬ−ＣＤならびに場合により、少なくとも１つの抗原を含む免疫原性組成物を含む。一部の実施形態において、キット中のサポニンは、Ｑｕｉｌ  Ａである。一部の実施形態において、キット中の少なくとも１つの抗原は、動物抗原である。一部の実施形態において、キット中の動物抗原は、ウシ抗原である。一部の実施形態において、キット中の動物抗原は、ウイルス抗原である。一部の実施形態において、キット中のウイルス抗原は、ＢＥＦＶ、ＩＢＲ、またはＢＴＶである。一部の実施形態において、キット中の抗原は、生菌弱毒化型、組み換え型、死菌型または不活化型であってよい。一部の実施形態において、キット中の抗原は、生菌弱毒化型である。一部の実施形態において、キット中の抗原は、死菌型である。一部の実施形態において、キット中の抗原は、凍結ストック、乾燥ストック、または新鮮ストックから得ることができる。一部の実施形態において、キット中の抗原は、凍結ストックから得られる。
【００４３】
本発明は、少なくとも１つの追加アジュバントを含むことができる、ＳＬ−ＤＣおよびサポニンおよび／またはＱｕｉｌ  Ａを含むキット、免疫学的組成物、およびワクチンを提供する。使用することができるアジュバントの中では、例として、水酸化アルミニウム、アブリジン、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢまたはＤＯＤＡＢとしても知られている）、ポリホスファゼン、ＳＰＴエマルジョンなどの鉱油をベースとする水中油型エマルジョン（例えば、Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、１９９５、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｆ．ＰｏｗｅｌおよびＭａｒｋ  Ｊ．Ｎｅｗｍａｎ編、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ａｎｄ  Ｌｏｎｄｏｎ、１４７〜２０４ページを参照）、米国特許第６，３６８，６０１号に記載されているような代謝性油をベースとする油中水型エマルジョン、ならびに米国特許第５，４２２，１０９号に記載されているエマルジョンを挙げることができる。適当なアジュバントの他の例は、スクアランおよびスクアレン（または、動物起源の他の油）；ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）（Ｌ１２１）サポニンなどのブロックコポリマー；Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０などの洗浄剤、ＤＲＡＫＥＯＬ（登録商標）、またはＭａｒｃｏｌ（登録商標）などの鉱油；ピーナッツ油などの植物油；コリネバクテリウムパルブム（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）などのコリネバクテリウム由来のアジュバント；プロピオニバクテリウム由来のアジュバント；マイコバクテリウムボビス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ）（カルメットゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ  ａｎｄ  Ｇｕｅｒｉｎ）、すなわちＢＣＧ）；インターロイキン２およびインターロイキン−１２などのインターロイキン；インターロイキン１などのモノカイン；腫瘍壊死因子；γインターフェロンなどのインターフェロン；リポソーム；ＩＳＣＯＭアジュバント；マイコバクテリア細胞壁抽出物；ムラミルジペプチドまたは他の誘導体などの合成糖ペプチド；アブリジン；脂質Ａ；硫酸デキストラン；ＤＥＡＥ−デキストランまたはリン酸アルミニウムと一緒のＤＥＡＥ−デキストラン；Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）などのカルボキシポリメチレン；ＥＭＡ；ＮｅｏＣｒｙｌ（登録商標）Ａ６４０などのアクリルコポリマーエマルジョン（米国特許第５，０４７，２３８号を参照）；ワクシニアまたは動物ポックスウイルスタンパク質；オルビウイルスなどのサブウイルス粒子アジュバント；コレラ毒素；臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム；またはそれらの混合物を包含する。他のアジュバントは、界面活性剤（例えば、ヘキサデシルアミン、オクタデシルアミン（ｏｃｔａｄｅｃｙｌａｍｉｎｅ）、リゾレシチン、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム、Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−ｎ’−Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチルプロパンジ−アミン）、メトキシヘキサデシルグリセロール、およびプルロニックポリオール）；ポリアニオン（例えば、ピラン、硫酸デキストラン、ポリＩＣ、ポリアクリル酸、カルボポール）、ペプチド（例えば、ムラミルジペプチド、ジメチルグリシン、タフトシン）、油エマルジョン、ミョウバン、およびそれらの混合物から選択することができる。アジュバントの組合せを選択することも可能である。
【００４４】
一実施形態において、本発明は、ＳＬ−ＣＤなどの追加抗原を添加する前にＱｕｉｌ  Ａおよび抗原を混ぜ合わせることにより調製される免疫原性組成物を提供する。ウイルスをＱｕｉｌ  Ａと混ぜ合わせることが、有効ウイルス力価を下げるであろうことは、当業者により理解されている（Ｗａｌｋｅｒ，Ｐ．Ｊ．、２００５、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９２：５７〜８０）。免疫原性組成物に少なくとも１つの他の成分を添加する前にＱｕｉｌ  Ａおよび抗原を混ぜ合わせることは、任意の長さの時間にわたって行うことができる。当業者は、本発明の免疫原性組成物が、様々な時間にわたって、免疫原性組成物に少なくとも１つの他の成分を添加する前にＱｕｉｌ  Ａおよび抗原を混ぜ合わせることにより調製することができることを容易に理解するであろう。例えば、Ｑｕｉｌ  Ａおよび抗原は、少なくとも５分〜少なくとも２００分混ぜ合わせることができる。一部の実施形態において、Ｑｕｉｌ  Ａおよび抗原は、少なくとも１０分〜少なくとも１９０分を包含する任意の長さの時間にわたって混ぜ合わせられる。一部の実施形態において、Ｑｕｉｌ  Ａおよび抗原は、少なくとも１５分にわたって混ぜ合わせられる。本発明の免疫原性組成物が、多くの温度のうちのいずれか１つにおいてＱｕｉｌ  Ａおよび抗原を混ぜ合わせることにより調製することができることは当業者により理解されている。Ｑｕｉｌ  Ａおよび抗原を混ぜ合わせることは、得られる組成物が免疫原性である限りは、室温より低いか室温より高い温度にて行うことができる。Ｑｕｉｌ  Ａおよび抗原は、室温にて混ぜ合わせることができる。一部の実施形態において、ＳＬ−ＣＤを添加する前にＱｕｉｌ  Ａおよび抗原を混ぜ合わせることにより調製される免疫原性組成物中の抗原は、ウイルスである。一部の実施形態において、ウイルスは、ＢＥＦＶである。一部の実施形態において、ウイルスは、生菌弱毒化型、組み換え型、死菌型または不活化型であってよい。一部の実施形態において、抗原は、生菌弱毒化型である。一部の実施形態において、抗原は、凍結ストック、乾燥ストック、または新鮮ストックから得ることができる。一部の実施形態において、抗原は、凍結ストックから得られる。
【００４５】
一実施形態において、本発明は、免疫応答を引き起こすための免疫原性組成物であって、サポニンおよびＳＬ−ＣＤを含む免疫原性組成物を提供する。本発明の一部の実施形態において、免疫応答を引き起こすための免疫原性組成物は、サポニンおよびＳＬ−ＣＤ；ならびに少なくとも１つの抗原を含む。本発明の一部の実施形態において、免疫応答を引き起こすための免疫原性組成物中のサポニンは、Ｑｕｉｌ  Ａである。本発明の一部の実施形態において、免疫応答を引き起こすための免疫原性組成物中の少なくとも１つの抗原は、細菌、ウイルス、ペプチド、ポリペプチド、核酸、またはそれらの組合せから選択することができる。一部の実施形態において、本発明の免疫原性組成物では、少なくとも１つの抗原は、動物抗原である。一部の実施形態において、本発明の免疫原性組成物では、動物抗原は、ウシ抗原である。一部の実施形態において、本発明の免疫原性組成物では、抗原は、ウイルス抗原である。本発明の一部の実施形態において、ウイルス抗原は、少なくともＢＥＦＶ、ＢＴＶ、またはＩＢＲの株である。一部の実施形態において、サポニンまたはＱｕｉｌ  Ａは、ＳＬ−ＣＤを添加する前にウイルス抗原に添加される。一部の実施形態において、抗原は、生菌弱毒化型、組み換え型、死菌型または不活化型であってよい。一部の実施形態において、抗原は、生菌弱毒化型である。一部の実施形態において、抗原は、死菌型である。一部の実施形態において、抗原は、凍結ストック、乾燥ストック、または新鮮ストックから得ることができる。一部の実施形態において、抗原は、凍結ストックから得られる。
【００４６】
本発明の免疫学的組成物は、当技術分野において標準的である方法によりウイルス培養液から調製することができる。例えば、ウイルスは、アフリカミドリザル腎臓上皮細胞（Ｖｅｒｏ細胞）、ヒト２倍体線維芽細胞、ＭＤＢＫ（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙウシ腎臓）、または他のウシ細胞などの組織培養細胞中で増殖させることができる。ウイルスの成長は、標準的技法（細胞変性効果の観察、免疫蛍光または他の抗体ベースのアッセイ）によりモニターされ、十分に高いウイルス力価（１０６ＴＣＩＤ５０／ｍＬなど）が達成された場合に収集される。ウイルスストックは、ワクチン製剤への包含の前に、従来の方法によりさらに濃縮するか凍結乾燥することができる。Ｔｈｏｍａｓら（１９８６、Ａｇｒｉ−Ｐｒａｃｔｉｃｅ、７（５）：２６〜３０）により記載されているものなどのウイルスストックを調製するための他の方法を用いることができる。
【００４７】
本発明の免疫学的組成物は、単独か、多価免疫学的組成物の構成成分として、すなわち、他の免疫学的組成物と組み合わせて与えることができる。免疫原性製剤中のウイルスは、生菌型または死菌型であってよく、生菌ウイルスか死菌ウイルスのどちらかを凍結乾燥し、場合により、当技術分野において知られているように再構成することができる。免疫原性組成物は、適切なラベリングおよび動物対象（例えば、家畜、有蹄動物、コンパニオンアニマル）または鳥（例えば、家禽）に免疫原性組成物を投与するための説明書を含むこともできるキットで提供することができる。
【００４８】
ＳＬ−ＣＤおよびサポニンまたはＱｕｉｌ  Ａ；ならびに少なくとも１つのウイルス抗原を含む免疫原性組成物は、薬学的および獣医学的に許容できる担体を含むこともある。そのような担体は、当業者によく知られており、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、および不活性ウイルス粒子などの、大きくゆっくりと代謝される巨大分子を包含する。薬学的および獣医学的に許容できる塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、または硫酸塩などの鉱塩、ならびに酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、または安息香酸塩などの有機酸の塩もワクチンにおいて使用することができる。ワクチンは、水、食塩水、グリセロール、およびエタノールなどの液体、ならびに湿潤剤、乳化剤、またはｐＨ緩衝剤などの物質も含有することができる。リポソームも、死菌ウイルス用の担体として使用することができる。（例えば、米国特許第５，４２２，１２０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１３７９６号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／１４４４５号、または欧州特許第５２４，９６８Ｂ１号を参照。）
【００４９】
本発明の免疫原性組成物は、筋肉内または皮下経路により、または鼻腔内、腹腔内、静脈内、皮内、気管内、もしくは経口経路により投与することができる。本発明の免疫原性組成物は、エアースプレーにより、眼接種により、または乱刺（ｓｃａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）により投与することができる。哺乳動物（家畜、有蹄動物、またはコンパニオンアニマルなど）に本発明の免疫原性組成物を送達する別の好都合な方法は、経口投与による（例えば、食物もしくは飲用水の中または餌の中）。食物に免疫原性組成物を敷肥するか食物を免疫原性組成物と混ぜることが特に好都合である。典型的には、大きな動物（例えば、ウシなどの家畜／有蹄動物）は、免疫原性組成物の投与量当たり約１０６ＴＣＩＤ５０／ｍＬ、おそらく１０６。５〜１０７ＴＣＩＤ５０が投与される。
【００５０】
単一投与量投与については、免疫原性組成物は、約１０４〜約１０７ＴＣＩＤ５０／ｍＬ、好ましくは１０６ＴＣＩＤ５０／ｍＬに相当する量のＢＥＦＶを含有するべきである。動物１匹当たり、免疫原性組成物約１〜５ｍＬ、好ましくは２ｍＬを筋肉内、皮下、または腹腔内に投与することができる。
【００５１】
免疫原性組成物は、約６．８ｌｏｇ／ｍＬに相当する量のＩＢＲを含有するべきである。動物１匹当たり、ＩＢＲを含む免疫原性組成物約１〜５ｍＬ、好ましくは２ｍＬを筋肉内、皮下、または腹腔内に投与することができる。
【００５２】
免疫原性組成物は、ＢＴＶ血清型１約１０６．７ＴＣＩＤ５０および／またはＢＴＶ血清型８約１０７．３ＴＣＩＤ５０に相当する量のＢＴＶを含有するべきである。動物１匹当たり、ＢＴＶを含む免疫原性組成物約１〜５ｍＬ、好ましくは２ｍＬを筋肉内、皮下、または腹腔内に投与することができる。
【００５３】
免疫原性組成物の調製は、文献、例えば、上に述べられている「Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」、および「Ｖａｃｃｉｎｅｓ」（２００８、第５版、Ｐｌｏｔｋｉｎ，Ｓ．Ａ．ら、編者、Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）中に見いだされる。
【００５４】
本発明は、動物におけるＢＥＦ、ＩＢＲ、またはＢＴＶ感染の予防および治療に特に有用である免疫原性組成物を提供する。したがって、本発明のさらなる態様は、本発明による免疫原性組成物が、そのような予防または治療を必要としている動物に投与されることを特徴とする、動物においてＢＥＦ、ＩＢＲ、またはＢＴＶ感染を予防および治療するための方法に関する。本発明の免疫原性組成物は、筋肉内もしくは皮下注射により、または、鼻腔内、気管内、経口、皮膚、経皮もしくは皮内投与を介して投与することができる。ＢＥＦＶ、ＩＢＲ、またはＢＴＶのワクチンについては、ワクチン接種は、皮下または筋肉内であることが好ましく、筋肉内であることが最も好ましい。ＢＥＦＶ、ＩＢＲ、またはＢＴＶのための生菌ワクチンは、６月齢から投与されることが好ましい。
【００５５】
本発明は、１つの感染性因子または同時に様々な感染性因子に対して動物、特に、ウシを免疫化するための方法であって、免疫学的有効量の本発明により提供される組成物を含有するワクチンの経口、鼻腔、皮下、皮内、腹腔内、筋肉内、またはエアロゾル投与（またはそれらの組合せ）を含む方法も提供する。
【００５６】
定義
本明細書において使用される用語は、当業者に認識されかつ知られている意味を有するが、便宜および完全性のため、特定の用語およびそれらの意味を下に記載する。
【００５７】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるように、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」という単数形は、文脈が他の意味を明確に指示していない限り、複数の指示対象を包含する。すなわち、例えば、「その方法（ｔｈｅ  ｍｅｔｈｏｄ）」への言及は、１つまたは複数の方法、および／または本明細書に記載されておりかつ／または本開示などを読むことで当業者に明らかになるであろうタイプのステップを包含する。
【００５８】
「約」または「およそ」という用語は、ある値の統計的に有意な範囲内を意味する。そのような範囲は、所与の値または範囲の同じ桁内、典型的には５０％以内、より典型的には２０％以内、より典型的には１０％以内、さらにより典型的には５％以内であってよい。「約」または「およそ」という用語により包含される許容変動は、研究中の特定のシステムに左右され、当業者が容易に理解することができる。
【００５９】
ＢＥＦＶの「感染単位」は、組織培養細胞の５０％に感染するか５０％を死滅させるのに必要とされるウイルスの量として定義される。これは、５０％組織培養感染量またはＴＣＩＤ５０として表されることがある。
【００６０】
ウイルスは、自然宿主に対する病原性が低下した場合に弱毒化型であると言われている。ウイルスは、そのウイルスによる感染を受けやすい細胞において増殖することができない場合に不活化されたと見なされる。
【００６１】
「抗原」という用語は、免疫応答を刺激することがある分子を意味する。抗原は、適応免疫系により認識されることがある任意の物質である。抗原は、通常、タンパク質または多糖である。抗原は、被膜、莢膜、細胞壁、鞭毛、線毛、または毒素などの細菌、ウイルス、または他の微生物の一部であってよい。抗原は、脂質または核酸であってもよい。組成物において使用される抗原は、新鮮培養液、凍結ストック、凍結乾燥ストック、または任意の他の一般に利用可能なストックから得ることができる。抗原がウイルスである場合、生菌不活化型または生菌弱毒型であってよい。
【００６２】
「アジュバント」とは、組成物、典型的には、ワクチン組成物の抗原性を増強する１つまたは複数の物質を意味する。アジュバントは、抗原をゆっくりと放出する組織デポーとしての役割を果たすことができ、免疫応答を非特異的に増強するリンパ系活性化因子としての役割も果たすことができる（Ｈｏｏｄら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２版、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ：Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ、１９８４、ｐ．３８４）。多くの場合、アジュバント非存在下での抗原単独による一次ワクチン接種は、体液性免疫応答も細胞性免疫応答も引き起こすことはできないであろう。また、環境に応じて、アジュバント非存在下での抗原単独による一次チャレンジは、十分な体液性免疫応答も細胞性免疫応答も引き起こすことができないことがある。多くのサイトカインまたはリンホカインは、免疫調節活性を有するためにアジュバントとして有用であることが明らかにされており、インターロイキン１−α、１−β、２、４、５、６、７、８、１０、１２（例えば、米国特許第５，７２３，１２７号を参照）、１３、１４、１５、１６、１７および１８（およびその突然変異型）；インターフェロン−α、βおよびγ；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）（例えば、米国特許第５，０７８，９９６号を参照）；マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）；ならびに腫瘍壊死因子αおよびβを包含する。本明細書に記載されている免疫原性組成物について有用であるさらに他のアジュバントは、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）、例えば、ＣＣＬ−３およびＣＣＬ−４としても知られているＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１βを包含するがそれらに限定されないケモカイン；ならびにＲｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ（ＲＡＮＴＥＳ）；セレクチン、例えば、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチンおよびＥ−セレクチンなどの接着分子；ムチン様分子、例えば、ＣＤ３４（シアロホリン、ロイコシアリン、またはＳＰＮとしても知られている）、ＧｌｙＣＡＭ−１およびＭａｄＣＡＭ−１；リンパ球機能関連分子ＬＦＡ−１、２、および３、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１およびｐ１５０．９５などのインテグリンファミリーのメンバー；血小板内皮細胞接着分子（ＰＥＣＡＭ）、細胞内接着分子、例えば、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＩＣＡＭ−４、およびＩＣＡＭ−５、ＣＤ２ならびにＬＦＡ−３などの免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー；ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌなどの共刺激分子；血管成長因子、神経成長因子、線維芽細胞成長因子、上皮成長因子、Ｂ７．２、ＰＤＧＦ、ＢＬ−１、および血管内皮成長因子を包含する成長因子；Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、およびＤＲ６を包含する受容体分子；ならびにカスパーゼ（ＩＣＥ）を包含する。
【００６３】
免疫応答を増強するために使用される適当なアジュバントは、米国特許第４，９１２，０９４号に記載されているＭＰＬ（商標）（３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａ、Ｃｏｒｉｘａ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）をさらに包含するが、それに限定されるものではない。Ｃｏｒｉｘａ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）から入手可能であり、米国特許第６，１１３，９１８号に記載されている合成脂質Ａ類似体もしくはアミノアルキルグルコサミンホスフェート化合物（ＡＧＰ）、またはそれらの誘導体もしくは類似体も、アジュバントとして使用するのに適している。１つのそのようなＡＧＰは、５２９としても知られている（正式にはＲＣ５２９として知られている）、２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］エチル２−デオキシ−４−Ｏ−ホスホノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイル］−２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイル−アミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシドである。この５２９アジュバントは、水性形態（ＡＦ）または安定エマルジョン（ＳＥ）として製剤化される。
【００６４】
さらに他のアジュバントは、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）などのムラミルペプチド；ＭＦ５９（国際ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／１４８３７号）（１１０Ｙ型ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｎｅｗｔｏｎ、ＭＡ）などのミクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子に製剤化された５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、および０．５％Ｓｐａｎ８５（場合により、様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含有する）を含有する）、およびＳＡＦ（サブミクロンエマルジョンにミクロフルイダイズされるか、より大きな粒子サイズエマルジョンを作成するためにボルテックスされかのどちらかで、１０％スクアレン、０．４％  Ｔｗｅｅｎ８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有する）などの水中油型エマルジョン；不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）；水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムなどのアルミニウム塩（ミョウバン）；アムフィゲン（Ａｍｐｈｉｇｅｎ）；アブリジン；Ｌ１２１／スクアレン；Ｄ−ラクチド−ポリラクチド／グリコシド；プルロニックポリオール；死菌ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）；米国特許第５，０５７，５４０号に記載されているＳｔｉｍｕｌｏｎ（商標）ＱＳ−２１（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ）、米国特許第５，２５４，３３９号に記載されているＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（ＣＳＬ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｐａｒｋｖｉｌｌｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、および免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）などのサポニン；結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）；細菌性リポ多糖；ＣｐＧモチーフを含有するオリゴヌクレオチド（例えば、米国特許第６，２０７，６４６号）などの合成ポリヌクレオチド；欧州特許第１，２９６，７１３号および第１，３２６，６３４号に記載されているＩＣ−３１（Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌ  ＡＧ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ）；百日咳毒素（ＰＴ）またはその変異体、コレラ毒素またはその変異体（例えば、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ００／１８４３４号、第ＷＯ０２／０９８３６８号および第ＷＯ０２／０９８３６９号）；または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）易熱性毒素（ＬＴ）、特に、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、ＰＴ−Ｋ９／Ｇ１２９（例えば、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／１３３０２号および第ＷＯ９２／１９２６５号を参照）を包含する。
【００６５】
本発明の組成物に添加することができるアジュバントは、ＳＬ−ＣＤ、水酸化アルミニウム、ＳＰ−油、もしくはカルボポール、または１つもしくは複数の不飽和テルペン炭化水素、例えば、スクアレンもしくはスクアランなどの代謝性油、ならびにＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）などのポリオキシエチレン−ポリプロピレンブロックコポリマーを包含することがある。
【００６６】
「哺乳動物」という用語は、単孔動物（例えば、カモノハシ）、有袋動物（例えば、カンガルー）、および家畜（ブタ、ヒツジ、ウシ、およびウマなどの食品、乳、または繊維のために飼育される家畜）およびコンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ）を包含する胎盤動物を包含する。「有蹄動物」は、ウシ（ｃａｔｔｌｅ）（ウシ（ｂｏｖｉｎｅ  ａｎｉｍａｌ））、スイギュウ、バイソン、ヒツジ、ブタ、シカ、ゾウ、およびヤクを包含するが、それらに限定されるものではない。これらの各々は、成熟した形態と発育中の形態（例えば、子ウシ、子ブタ、子ヒツジなど）の両方を包含する。本発明の免疫原性組成物は、成熟した哺乳動物か発育中の哺乳動物のどちらか、好ましくは、家畜に投与することができる。
【００６７】
「免疫学的有効量」は、免疫応答を引き起こすであろう抗原の量である。免疫学的有効量のウシ流行熱ウイルス（ＢＥＦＶ）は、ウシ流行熱ウイルスに対して免疫応答を引き起こすであろうＢＥＦＶの量である。免疫学的有効量のウシヘルペスウイルス１（ＩＢＲ）は、ＩＢＲ感染に対して免疫応答を引き起こすであろうＩＢＲの量である。免疫学的有効量のブルータングウイルス（ＢＴＶ）は、ＢＴＶ感染に対して免疫応答を引き起こすであろうＢＴＶの量である。「免疫学的有効量」は、レシピエント動物の種、血統、年齢、サイズ、および健康状態によって変わるであろう。「免疫学的有効量」は、１つまたは複数の株が、ウイルスの病原性株であろうと非病原性株であろうと、抗原の１つまたは複数の株への動物の以前の曝露により影響を受けるであろう。本明細書において使用されるように、「免疫学的有効量」のウシ流行熱ウイルス（ＢＥＦＶ）は、少なくとも１つの適当なアジュバントと組み合わせて用いられた場合、ウシ流行熱ウイルスの免疫原性を増強し、したがって病原性のウシ流行熱ウイルス株によるチャレンジに対して防御免疫を提供するのに十分であるＢＥＦＶの量である。一実施形態において、免疫学的有効量のＢＥＦＶは、組成物１ｍＬ当たり約１０６．２０ＴＣＩＤ５０である。
【００６８】
本明細書において使用されるように、「免疫学的有効量」のウシヘルペスウイルス１（ＩＢＲ）は、少なくとも１つの適当なアジュバントと組み合わせて用いられた場合、ウシヘルペスウイルスの免疫原性を増強し、したがって病原性のウシヘルペス株によるチャレンジに対して防御免疫を提供するのに十分である量である。一実施形態において、免疫学的有効量のＩＢＲは、組成物１ｍＬ当たり約６．８ｌｏｇである。
【００６９】
本明細書において使用されるように、「免疫学的有効量」のブルータングウイルス（ＢＴＶ）は、少なくとも１つの適当なアジュバントと組み合わせて用いられた場合、ブルータングウイルスの免疫原性を増強し、したがって病原性のブルータングウイルス株によるチャレンジに対して防御免疫を提供するのに十分である量である。一実施形態において、免疫学的有効量のＢＴＶは、組成物１ｍＬ当たりＢＴＶ血清型１約１０６．７ＴＣＩＤ５０および／またはＢＴＶ血清型８約１０７．３ＴＣＩＤ５０である。
【００７０】
本発明の一部の実施形態において、ウイルス抗原は、少なくとも伝染性ウシヘルペスウイルス１（ウシ鼻気管炎ウイルスまたはＩＢＲとも呼ばれる）、パラインフルエンザウイルス、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス、口蹄疫ウイルス、ブルータングウイルス、ウシ流行熱ウイルス、イヌパルボウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌアデノウイルス、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、狂犬病ウイルス、ネコ汎白血球減少症ウイルス、ネコカリシウイルス、ネコウイルス性鼻気管炎ウイルス、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス、ウエストナイルウイルス、ウマ脳脊髄炎ウイルス、ウマインフルエンザウイルス、ウマヘルペス（鼻肺炎）ウイルス、ウマ動脈炎ウイルス、ブタパルボウイルス、ブタサーコウイルス、ブタ生殖および呼吸器症候群ウイルス、ブタロタウイルス、ブタインフルエンザウイルス、仮性狂犬病ウイルス、伝染性ファブリーキウス嚢病ウイルス、マレック病ウイルス、ニューカッスル病ウイルス、伝染性気管支炎ウイルス、伝染性喉頭気管炎ウイルス、トリ脳脊髄炎ウイルス、トリレオウイルス、トリインフルエンザウイルスの株であってよい。
【００７１】
本明細書において使用されるように、「ウイルスサブユニット」という用語は、ビリオンの一部を意味する。例えば、ウシ流行熱ウイルス（ＢＥＦＶ）サブユニットは、ＢＥＦＶビリオンの少なくとも一部、ＢＥＦＶゲノムの少なくとも一部、ＢＥＦＶ核タンパク質、ＢＥＦＶポリメラーゼ関連タンパク質、ＢＥＦＶマトリクスタンパク質、ＢＥＦＶ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、またはＢＥＦＶ糖タンパク質などのＢＥＦＶコードタンパク質の少なくとも一部であってよい。
【００７２】
本明細書において使用されるように、「免疫原性の」という用語は、組成物が、体液性および／または細胞性の免疫応答を引き起こすことができることを意味する。免疫原性株は、抗原性でもある。免疫原性組成物は、動物に投与された場合、体液性および／または細胞性の免疫応答を引き起こす組成物である。
【００７３】
「免疫原性組成物」という用語は、抗原、例えば、微生物を含有する任意の医薬組成物に関し、その組成物を使用し、動物において免疫応答を引き起こすことができる。免疫応答は、Ｔ細胞応答、Ｂ細胞応答、またはＴ細胞応答とＢ細胞応答の両方を包含することがある。該組成物は、細胞表面におけるＭＨＣ分子と併せた抗原の提示により哺乳動物を感作する役目を果たすことができる。さらに、抗原特異的なＴリンパ球または抗体を生成し、免疫化宿主の将来の防御を可能にすることができる。「免疫原性組成物」は、生菌、弱毒化、または死菌／不活化抗原を含むことがある。該抗原は、免疫応答を誘導する丸ごとの微生物またはそれから誘導される免疫原性部分であってよい。免疫原性組成物は、微生物による感染に伴う１つまたは複数の症状から動物を守るか、微生物による感染に起因する死から動物を守ることができる。
【００７４】
本明細書において使用されるような「非経口投与」という用語は、胃腸管を通じて以外の一部の手段による、特に、静脈内、皮下、筋肉内、または髄内注射による生物体内への物質の導入だけでなく、腹腔内注射もしくは局所塗布などの他の非経口および非鼻腔投与経路による投与を意味する。
【００７５】
「ワクチン」または「ワクチン組成物」という用語は、本明細書において互換的に使用され、動物において免疫応答を誘導する少なくとも１つの免疫原性組成物を含む医薬組成物を指す。ワクチンまたはワクチン組成物は、感染に起因する疾患または起こりうる死から動物を守ることができ、活性な構成成分の免疫学的活性を増強する１つまたは複数の追加構成成分を包含しても包含しなくてもよい。ワクチンまたはワクチン組成物は、医薬組成物に典型的なさらなる構成成分をさらに含むことがある。さらなる構成成分は、例えば、１つまたは複数のアジュバントまたは免疫調節剤を包含することがある。ワクチンの免疫学的に活性な構成成分は、修飾生菌ワクチンでは、それらの元の形態で、または弱毒化生物体として完全な生きた生物体を、死菌もしくは不活化ワクチン、またはウイルスの１つまたは複数の免疫原性構成成分を含むサブユニットワクチン、または当業者に知られている方法により調製される遺伝子操作された、突然変異した、もしくはクローン化されたワクチンでは適切な方法により不活化された生物体を含むことがある。ワクチンまたはワクチン組成物は、上に記載されている要素のうちの１つか同時に２つ以上を含むことがある。
【００７６】
したがって、本出願において、当技術分野の技術内で従来の分子生物学、微生物学、および免疫学技法を用いることができる。そのような技法は、文献において十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【実施例】
【００７７】
（実施例１）
ウシ流行熱ウイルス／Ｑｕｉｌ  Ａミックスの調製
生ウシ流行熱（ＢＥＦ）ウイルス抗原は、凍結ストックから得た。室温にて解凍した後、ウイルスを、ワクチン用の残りの成分を添加する前にＱｕｉｌ  Ａと混ぜ合わせた。
【００７８】
Ｂｒｅｎｎｔａｇにより製造されたＱｕｉｌ  Ａ粉末は、製品コード番号０４３０７５０３としてＡＰＳ（Ａ  ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｐｌｅｘ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から得た。
【００７９】
Ｑｕｉｌ  Ａストック溶液は、水の中で１０ｍｇ／ｍＬまで希釈することにより製造した。
【００８０】
手短に言うと、生菌ＢＥＦ抗原ストック（１．３８×１０７ＴＣＩＤ５０／ｍＬ）１４９．９６ｍＬを、９．６４３ｇ／ｍＬ  ＮａＣｌ３６．３４ｍＬで希釈し、１０ｍｇ／ｍＬ  Ｑｕｉｌ  Ａ２０．７０ｍＬを１ｍｇ／ｍＬにて添加した。該混合物を、室温にて２．５時間にわたって撹拌した。
【００８１】
（実施例２）
ＢＥＦＶワクチンの調製
ＢＥＦＶワクチンを調製するため、下記の成分を、添加の間に５分にわたって混合物を撹拌しながら、順番に添加した。
８．５ｇ／ｍＬ  ＮａＣｌ３８４．３ｍＬ
実施例１のとおり調製されたＢＥＦＶ／ＱＵＩＬ  Ａ混合物９４．８７ｇ
２０％（ｖ／ｖ）を得るための１０ｍｇ／ｍＬ  ＳＬ−ＣＤ＊ストック１２０．００ｍＬ
チオマーサル９．９％（ｗ／ｖ）１．３６ｇ
＊ＳＬ−ＣＤは、Ｈｉｌｇｅｒｓら（Ｓｕｌｐｈｏｌｉｐｏ−ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  ｉｎ  ｓｑｕａｌｅｎｅ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  ｓａｆｅ  ｖａｃｃｉｎｅ  ａｄｊｕｖａｎｔ．Ｖａｃｃｉｎｅ  １７（１９９９）、ｐｐ２１９〜２２８）に記載のとおり調製した。
【００８２】
すべての成分を添加した後、ワクチンを３０分にわたって撹拌し、ｐＨを７．１８に調整した。
【００８３】
ワクチンを、さらに３０分にわたって撹拌し、ラベル付きのピローパックに充填するために使用した。
【００８４】
（実施例３）
ＢＥＦＶワクチンの動物試験：
ワクチン安全性試験は、Ｆｏｒｔ  Ｄｏｄｇｅ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ、Ｐｅｎｒｉｔｈサイトにて行った。ワクチン安全性は、ＥＰ２００２：００６２ガイドラインに従ってウシで試験した。
【００８５】
１０匹のモルモットおよび２頭のウシに、上記で調製されたワクチンを接種し、ＢＥＦ抗原画分に対する血清学的応答を決定した。体重２５０ｇ〜４００ｇの１０匹のモルモットに各々、ワクチン２．０ｍＬを皮下接種した。モルモットを、接種から６週後に採血した。１歳より若い２頭のウシに、ワクチン４ｍＬを皮下接種した。接種後１４日目にウシから採血した。これらの動物に由来する血清を、Ｂｉｏｓｅｃｕｒｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ａｎｄ  Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ（Ａｕｓｔｒａｌｉａ）のプロトコルに従ってウイルス中和（ＶＮ）により試験した。使用されるウイルス中和試験法は、「Ａｕｓｔｒａｌｉａ  ｓｔａｎｄａｒｄ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ」に従う。
【００８６】
ワクチンの２つのバッチについての試験の結果は、下の表１に示す。
【００８７】
【表１】
2012500282.tif 000002
【００８８】
ウシおよびウサギ試験における不活化ＢＥＦワクチンを使用した実験に基づき、実験動物血清学とＢＥＦＶからのウシ防御の間に相関の証拠がある。すなわち、表１に示されているモルモット結果は、本発明の免疫原性組成物がウシにＢＥＦＶからの防御を提供することを裏付けている。
【００８９】
上のように調製された単一投与量ＢＥＦワクチン製剤は、安定エマルジョンを作り出した。このワクチンは、安全性について試験され、最初はウシ安全性試験において部位反応を与えなかった。全身性および行動的反応は認められなかったが、ワクチンは、観察期間の終わり頃に注射部位において局所反応をいくつか生じた。
【００９０】
下の表２は、上に列挙したワクチン製剤４ｍＬによる単一投与量ワクチン接種後にウシに現れる症状を記載する。
【００９１】
【表２】
2012500282.tif 000003
【００９２】
要約すると、ＢＥＦＶを含む製剤におけるアジュバントとしてのサポニン（Ｑｕｉｌ  Ａ）およびＳＬ−ＣＤを含む免疫原性組成物の使用は、単一投与量ワクチンとして有用である有効なＢＥＦＶワクチンを生み出す。
【００９３】
（実施例４）
ＩＢＲワクチンブレンドの調製
未来のワクチンにとって適切なアジュバントを選択するため、伝染性ウシ鼻気管炎ウイルス（ＩＢＲ）としても知られている死菌組み換えウシヘルペスウイルス−１ワクチンを調製し、異なるアジュバントとブレンドし、評価した。３つの異なるアジュバントを組み合わせたワクチンを、ＩＢＲ（ＥＵ）１ｍｌ当たり６．０４ｌｏｇの１×力価で調製した。ワクチンＡは、水酸化アルミニウム（ＡｌＯＨ）（１５％）およびサポニンを含有し、ワクチンＢは、５％ＳＰ油を含有し、ワクチンＣは、２０％ＳＬ−ＣＤおよびサポニンを含有した。サポニンは、Ｂｅｒｇｈａｕｓｅｎカタログ番号＃６０３０１３から得た。
【００９４】
【表３】
2012500282.tif 000004
【００９５】
【表４】
2012500282.tif 000005
【００９６】
【表５】
2012500282.tif 000006
【００９７】
（実施例５）
ＩＢＲワクチンの動物試験
ワクチン試験は、Ｉｏｗａにおいて行った。５〜６月齢の合計２７頭の子ウシを、下の表６に示す群に無作為化した。
【００９８】
【表６】
2012500282.tif 000007
【００９９】
群４〜６からの子ウシを除き、子ウシに、３週おいて２回、皮下にワクチン接種した。第２回ワクチン接種から２週後（または、群４についてはワクチン接種から３週後）、すべての子ウシ（群６からの２頭の子ウシを除いて）に、病原性ＩＢＲウイルスを鼻腔内にチャレンジした。すべての子ウシを、疾患の臨床的徴候についてチャレンジ後１４日にわたって毎日モニターした。臨床的徴候は、粘液膿性鼻漏、眼漏、呼吸困難、食欲不振（ｐｏｏｒ  ａｐｐｅｔｉｔｅ）（食欲不振（ｏｆｆ−ｆｅｅｄ））、および抑鬱を包含するが、それらに限定されるものではなかった。直腸温度も、チャレンジ後１４日にわたって毎日測った。動物からは試験中定期的に血清について採血し、ＩＢＲに対する抗体を、血清中和アッセイを使用して決定した。鼻腔スワブを、チャレンジ２日前からチャレンジ後１４日にわたってウイルス単離のために毎日集めた。各日について各子ウシから単離されたウイルス力価を決定した。群２からの１頭の動物は、健康不良のためチャレンジの前に試験から取り除いた。
【０１００】
ＩＢＲチャレンジに関係している観察された臨床的徴候は下の表７に要約し、ウイルス排出結果は表８に記載する。抗ＩＢＲ血清中和抗体力価は、表９に列挙する。
【０１０１】
【表７】
2012500282.tif 000008
【０１０２】
群サイズが小さいため、ワクチン接種された動物と対照との間の観察された差は、統計的に異なっていなかった。しかしながら、数字上の差は、特に最初の３群について、ワクチン接種効果を示す。
【０１０３】
ウイルス排出の発生率および力価は、下の表８に記載する。
【０１０４】
【表８】
2012500282.tif 000009
【０１０５】
ウイルス排出からの結果は、ＳＬ−ＣＤ＋サポニンが、排出されたウイルスの数（少なくとも１００倍）および発生率を低下させることにより最良の防御をもたらしたことを示す。この証明された防御は、下の表９に示す実験的チャレンジの時点での有意に高い抗体力価に起因している可能性が高い。
【０１０６】
【表９】
2012500282.tif 000010
【０１０７】
この試験からの結果は、評価された３つのアジュバントの中で、ＳＬ−ＣＤ／サポニン組合せが最良の性能をもたらすことを示す。
【０１０８】
（実施例６）
ブルータングウイルスワクチンの調製
ブルータングウイルス血清型１および８に対する５つの異なる不活化ワクチンを、異なるＢＴＶ８抗原濃度および異なるアジュバント組成で製剤化した。ＢＴＶ血清型１の力価（１０６．７ＴＣＩＤ５０）は、試験されたすべてのワクチンで一定のままであった。子ウシは、２週おいて２回の接種を受けた。ワクチンＥ−４３、Ｅ−４４、Ｅ−４５、Ｅ−４７、およびＥ−４８の組成は、下の表１０から１４に記載する。
【０１０９】
【表１０】
2012500282.tif 000011
【０１１０】
【表１１】
2012500282.tif 000012
【０１１１】
【表１２】
2012500282.tif 000013
【０１１２】
【表１３】
2012500282.tif 000014
【０１１３】
【表１４】
2012500282.tif 000015
【０１１４】
（実施例７）
血清中和結果
中和抗体力価は、ワクチン接種後１週目（＋２８）および２週目（＋３５）にすべての子ウシで測定した。血清中和結果は、下の表１５から２０に示す。中和抗体の存在は、防御を示すが、中和抗体のない動物も、細胞媒介性応答によって防御されることもある。
【０１１５】
【表１５】
2012500282.tif 000016
【０１１６】
【表１６】
2012500282.tif 000017
【０１１７】
【表１７】
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【０１１８】
【表１８】
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【０１１９】
【表１９】
2012500282.tif 000020
【０１２０】
【表２０】
2012500282.tif 000021
【０１２１】
ＢＴＶ１およびＢＴＶ８についてのウイルス血症の存在は、ワクチンＥ−４３：ＺＵＬＶＡＣ１＋８（ＢＴＶ１：１０６．７＋ＢＴＶ８：１０７．３）（Ａｌ３＋  ＋サポニン：現在の製剤）およびＥ−４７：ＺＵＬＶＡＣ１＋８（ＢＴＶ１  １０６．７＋ＢＴＶ８：１０７．３）（ＳＬＣＤ＋２．５×サポニン：新アジュバント）をワクチン接種された動物においてチャレンジ後４、５、および８日目に決定した。
【０１２２】
ワクチンＥ−４３：ＺＵＬＶＡＣ１＋８（ＢＴＶ１：１０６．７＋ＢＴＶ８：１０７．３）（Ａｌ３＋＋サポニン：現在の製剤）
ＢＴＶ１についてウイルス血症の１００％防御（０／８）
ＢＴＶ８についてウイルス血症の８７．５％防御（１／８）
ワクチンＥ−４４：ＺＵＬＶＡＣ１＋８（ＢＴＶ１：１０６．７＋ＢＴＶ８：１０７．５）（Ａｌ３＋＋サポニン：現在の製剤よりＢＴＶ８の抗原が１．５８倍多い）
ＢＴＶ１についてウイルス血症の１００％防御（０／８）
ＢＴＶ８についてウイルス血症の８７．５％防御（１／８）
【０１２３】
直上の結果は、１．５８×投与量のワクチンにおけるＢＴＶ血清型８の増加が、より良い防御を誘導しないことを示す。
ワクチンＥ−４７：ＺＵＬＶＡＣ１＋８（ＢＴＶ１：１０６．７＋ＢＴＶ８：１０７．３）（ＳＬＣＤ＋２．５×サポニン：新アジュバント）
ＢＴＶ１についてウイルス血症の１００％防御（０／８）
ＢＴＶ８についてウイルス血症の１００％防御（０／８）
ワクチンＥ−４５：ＺＵＬＶＡＣ１＋８（ＢＴＶ１：１０６．７＋ＢＴＶ８：１０７．３）（Ａｌ３＋  ＋２×サポニン：現在の製剤より２倍多いサポニン）
ＢＴＶ１についてウイルス血症の１００％防御（０／８）
ＢＴＶ８についてウイルス血症の１００％防御（０／８）
【０１２４】
（実施例８）
γインターフェロンの産生
Ｂｏｖｉｇａｍ  ＴＢ試験（Ｐｒｉｏｎｉｃｓ）を、血液サンプルにおけるγインターフェロンの検出のために使用した。手短に述べると、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を調製し、ＶＰ７およびＶＰ２で別々に刺激した。γインターフェロンの産生は、ＶＰ７による血液細胞の刺激後にのみ検出された。
【０１２５】
ワクチンＥ−４３およびＥ−４７をワクチン接種された動物におけるγ−ＩＦＮの特異的産生の評価の結果が続く。第１回ワクチン接種（Ｄ＋０）；第２回ワクチン接種（Ｄ＋２１）；チャレンジ（Ｄ＋４５）
【０１２６】
ＢＴＶに対する抗体を持たない合計３０頭の３月齢Ｆｒｉｓｅａｎ子ウシを試験に包含した。子ウシの性別は考慮に入れなかった。正常で健康な動物のみを試験に包含した。それらの健康状態は、到着時に確認した。動物は、耳タグで個々に識別した。３０頭の血清反応陰性のＦｒｉｓｅａｎ子ウシを、以下のとおり４つの処置群（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌプログラムを使用して）に無作為に割り当てた。
群１：ワクチンＥ−４３をワクチン接種およびワクチン再接種された１０頭の子ウシ
群２：ワクチンＥ−４７をワクチン接種およびワクチン再接種された１０頭の子ウシ
群３：ワクチン接種されない１０頭の対照子ウシ
【０１２７】
ワクチン接種は、ワクチン２ｍＬを使用し、ウシにおけるワクチン投与の最も一般的経路である筋肉内経路（ｉ．ｍ．）により行った。
【０１２８】
群１および２の子ウシには、０日目（Ｄ＋０）にワクチン接種し、３週後（Ｄ＋２１）にワクチン再接種した。
【０１２９】
群３の子ウシは、ワクチン接種しない対照として残した。
【０１３０】
血液は、第１回ワクチン接種の前、０日目（Ｄ＋０）；３週後のワクチン再接種（すなわち、第２回ワクチン接種）前（Ｄ＋２１）；およびチャレンジ前の４２日目（Ｄ＋４２）に子ウシから採取した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を個々のサンプルから調製した。
【０１３１】
第２回ワクチン接種から２４日後に、子ウシを、Ｆｏｒｔ  Ｄｏｄｇｅ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａ’ｓ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  Ｆａｃｉｌｌｉｔｉｅｓ  Ｎｏ．３に移動し、ワクチン再接種から２４日後（Ｄ＋４５）に、各群の８頭の動物にＢＴＶ−１またはＢＴＶ−８をチャレンジした。血液を、ＶＰ７およびＶＰ２に対するγ−ＩＦＮの特異的産生を評価するために、チャレンジから５日後に動物から採取した。
【０１３２】
γ−ＩＦＮ検出
ヘパリンの存在下で集められた血液を、各ワクチン接種日、チャレンジ前日および感染５日後に実験中のすべての動物から採取した。ＰＢＭＣを、密度勾配（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ１０７７）で抽出し、洗浄し、再懸濁して、ウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で５×１０６細胞／ｍＬの最終濃度とした。細胞を、組み換えタンパク質ＶＰ２およびＶＰ７（１μｇ／ｍＬ）のどちらかと共に９６ウェルプレートにプレートした。コンカナバリンＡ（５μｇ／ｍＬ）を陽性対照として使用した。プレートを、１６ｈｒｓ〜一晩にわたって３７℃にてインキュベートした。γ−ＩＦＮアッセイは、ウシインターフェロン試験（Ｂｏｖｉｇａｍ  ＴＢ、Ｐｒｉｏｎｉｃｓ）を使用して上清において行った。結果は、各動物の非刺激値の減算後にＡ４５０単位で表した。
【０１３３】
ＶＰ７組み換えタンパク質だけが、第２回ワクチン接種後のワクチン接種動物においてγ−ＩＦＮの特異的産生を誘導することができた。
【０１３４】
チャレンジの日、ワクチンＥ−４７をワクチン接種された１０頭のうち３頭（３０％）の子ウシが、ＶＰ７に対するγ−ＩＦＮの産生を示した。チャレンジから５日後、陽性動物の比率は、６３％まで増加した。ワクチンＥ−４３をワクチン接種された動物は、チャレンジの日ではなく、チャレンジから５日後にＶＰ７に対するγ−ＩＦＮの陽性産生を示した（８頭のうち２頭、２５％）。
【０１３５】
結果は、Ａ４５０単位として、およびγ−ＩＦＮの陽性産生（＞０．０６５）の比率として表されている表２１、および表２２-２６に示す。
【０１３６】
【表２１】
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【０１３７】
【表２２】
2012500282.tif 000023
【０１３８】
【表２３】
2012500282.tif 000024
【０１３９】
【表２４】
2012500282.tif 000025
【０１４０】
【表２５】
2012500282.tif 000026
【０１４１】
【表２６】
2012500282.tif 000027
【０１４２】
結論
ＺＵＬＶＡＣ１＋８、バッチＥ−４７（ＢＴＶ１：１０６．７＋ＢＴＶ８：１０７．３）（ＳＬＣＤ＋２．５×サポニン：新アジュバント）をワクチン接種された子ウシは、対照と比べ、またＺＵＬＶＡＣ１＋８（ＢＴＶ１：１０６．７＋ＢＴＶ８：１０７．３）（Ａｌ３＋＋サポニン：現在の製剤）をワクチン接種された子ウシに比べ、チャレンジの日（第２回ワクチン接種から３週後）およびチャレンジから５日後に、より高い量のγ−ＩＦＮを示した。
ワクチンＥ−４３（現在の製剤）をワクチン接種された子ウシは、チャレンジから５日後までＶＰ７に対するγ―ＩＦＮの産生を示さなかった。その値は、ワクチンＥ−４７（新アジュバント）によって誘導される値よりも有意に低かった（ｐ＝０．０２１）。
ＶＰ７組み換えタンパク質のみが、検出可能な量のγ−ＩＦＮを誘導することができ、したがって、ＶＰ７は、細胞性免疫の増強剤である可能性がある。
【国際調査報告】
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