(57)【要約】  ＩＬ−１アイソフォームを用いて炎症性障害を検出する方法を提供する。抗ＩＬ−１抗体を用いて炎症性障害を処置する方法も提供する。抗ＩＬ−１抗体、および抗ＩＬ−２２抗体、抗ＩＬ−１７抗体、または抗ＴＮＦα抗体のうちの少なくとも１つを用いて炎症性障害を処置する方法も提供する。    【図１−１】2012501184.tif 000007
2012501184.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者において（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つのアップレギュレーションを同定することを含む、炎症性障害を検出する方法であって、少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームが、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、またはＩＬ−１Ｆ９である方法。
【請求項２】
炎症性障害が乾癬、ループス、または関節炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つのアップレギュレーションが、ｍＲＮＡレベルを検出することによって決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つのアップレギュレーションが、タンパク質レベルを検出することによって決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも２つのアップレギュレーションの検出が、（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つのタンパク質レベルを検出することによって、ならびに（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つのｍＲＮＡレベルを検出することによって検出される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ＩＬ−２２関連障害を処置する方法であって、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９のうちの少なくとも１つの少なくとも１つの阻害剤を、前記ＩＬ−２２関連障害に罹患している患者に投与することを含む方法。
【請求項７】
少なくとも１つの阻害剤が抗ＩＬ−１Ｆ６抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１つの阻害剤が抗ＩＬ−１Ｆ８抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
少なくとも１つの阻害剤が抗ＩＬ−１Ｆ９抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
少なくとも１つの阻害剤が抗ＩＬ−１Ｒｒｐ２抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
ＩＬ−２２関連障害が乾癬、ループス、または関節炎である、請求項６から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
炎症性障害に罹患している患者に、（ａ）（ｉ）抗ＩＬ−１Ｆ６抗体、（ｉｉ）抗ＩＬ−１Ｆ８抗体、（ｉｉｉ）抗ＩＬ−１Ｆ９抗体、および（ｉｖ）抗ＩＬ−１Ｒｒｐ２抗体のうちの少なくとも１つと、（ｂ）抗ＩＬ−２２抗体との組合せを投与することを含む、炎症性障害を処置する方法。
【請求項１３】
炎症性障害に罹患している患者に抗ＩＬ−１抗体および抗ＩＬ−１７Ａ抗体を投与することを含む、炎症性障害を処置する方法。
【請求項１４】
炎症性障害に罹患している患者に、（ａ）（ｉ）抗ＩＬ−１Ｆ６抗体、（ｉｉ）抗ＩＬ−１Ｆ８抗体、（ｉｉｉ）抗ＩＬ−１Ｆ９抗体、および（ｉｖ）抗ＩＬ−１Ｒｒｐ２抗体のうちの少なくとも１つと、（ｂ）抗ＩＬ−２２抗体と、（ｃ）抗ＩＬ−１７Ａ抗体との組合せを投与することを含む、炎症性障害を処置する方法。
【請求項１５】
対照試料における遺伝子発現のレベルと比較した、対象における遺伝子発現のレベルを検出することによって、対象の炎症性障害の処置、低下、予防、および／または寛解における治療剤の有効性を決定する方法であって、検出される遺伝子発現が、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９、ＩＬ−１Ｒｒｐのうちの少なくとも１つからの遺伝子発現であり、対照と比較して対象における遺伝子発現のレベルがより低いことが、対象の炎症性障害の処置、低下、予防、および／または寛解における治療剤の有効性を示す方法。
【請求項１６】
炎症性疾患が乾癬、ループス、または関節炎である、請求項１２から１５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、そのそれぞれが任意の目的のために本明細書中に参考として組み込まれている、２００８年８月２８日出願の米国仮出願第６１／０９２，７４３号および２００８年１０月２７日出願の米国仮出願第６１／１９３，０８７号に関する。
【０００２】
ＩＬ−１アイソフォームを用いて炎症性障害を検出する方法を提供する。抗ＩＬ−１抗体を用いて炎症性障害を処置する方法も提供する。抗ＩＬ−１抗体、および抗ＩＬ−２２抗体、抗ＩＬ−１７抗体、または抗ＴＮＦα抗体のうちの少なくとも１つを用いて炎症性障害を処置する方法も提供する。
【背景技術】
【０００３】
古典的なインターロイキン−１（ＩＬ−１）ファミリーのサイトカインであるＩＬ−１α、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８は炎症において主要な役割を果たす。ＩＬ−１サイトカインファミリーのいくつかの新規メンバーがＩＬ−１相同体のＤＮＡデータベース検索から同定された。ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９はケラチノサイトによって産生され、炎症を起こした皮膚においてアップレギュレーションされ得る。Ｔｈ１７細胞由来の炎症誘発性サイトカインであるＩＬ−２２はケラチノサイトに作用し、抗細菌ペプチドおよび炎症誘発性サイトカインの遺伝子発現をどちらも誘導する。
【０００４】
インターロイキン２２（ＩＬ−２２）とは、ＩＩ型サイトカインのインターロイキン１０（ＩＬ−１０）様亜群のメンバーである。（Ｒｅｎａｕｌｄ，Ｊ．−Ｃ．、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、３、６６７〜７６（２００３））。この亜群のメンバー（すなわち、ＩＬ−１０、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２４、およびＩＬ−２６）は、インターフェロンとも共有される保存的な６本のα−ヘリックスの構造的かつ機能的ユニットを有すると提唱されている。（Ｒｅｎａｕｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、３、６６７〜７６（２００３）およびＬａｎｇｅｒら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ＆Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１５、３３〜４８（２００４））。ＩＬ−２２は活性Ｔヘルパー（Ｔｈ）１７ＣＤ４＋リンパ球および単球によって産生され、その発現はＩＬ−２３に高度に依存する（Ｌｉａｎｇ，Ｓ．Ｃ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０３、２２７１〜９（２００６）およびＺｈｅｎｇ，Ｙ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、４４５、６４８〜５１（２００７））。ＩＬ−２２は局所的な組織炎症を調節する一方で非免疫細胞のみに作用することが知られており、粘膜免疫および自己免疫疾患で観察される調節不全炎症において重要な役割を果たす。（Ｗｏｌｋ，Ｋ．ら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２１、２４１〜５４（２００４）、Ｗｏｌｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ＆Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１７、３６７〜８０（２００６）、Ｗｏｌｋら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６８、５３９７〜４０２（２００２）、Ｐａｎら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１、４３〜９（２００４）、Ｚｅｎｅｗｉｃｚら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２７、６４７〜５９（２００７）、Ａｕｊｌａ，Ｓ．Ｊ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１４、２７５〜８１（２００８）、およびＺｈｅｎｇ，Ｙ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１４、２８２〜８９（２００８））。最近の臨床および前臨床の研究では、皮膚のヒト自己免疫疾患である乾癬の進行におけるＴｈ１７細胞およびＩＬ−２２活性が強く関係づけられている（Ｚｈｅｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ、４４５、６４８〜５１（２００７）、Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１３、２４２〜２４４（２００７）、Ｚａｂａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０４、３１８３〜９４（２００７）、Ｍａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、印刷中（２００８）、Ｌｏｗｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、４４５、８６６〜７３（２００７）、およびＷｏｌｋら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、３６、１３０９〜２３（２００６）。ＩＬ−２２の投与は皮膚ケラチノサイトの過剰増殖およびその結果として表皮の肥厚を誘導することが示されており、これらはどちらも乾癬病変に特徴的である（Ｂｏｎｉｆａｃｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１７４、３６９５〜７０２（２００５））。さらに、ＩＬ−２２の投与は、免疫細胞の動員および乾癬組��炎症の維持に関与していると考えられるケラチノサイトからの遺伝子発現を誘導することが示されている（Ｗｏｌｋら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、３６、１３０９〜２３（２００６）、Ｂｏｎｉｆａｃｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１７４、３６９５〜７０２（２００５）、およびＳａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１７８、２２２９〜４０（２００７）［訂正がＪ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００７年６月１日；１７８（１１）：７４８７に見られる］）。
【０００５】
ＩＬ−２２の発現はＩＬ−９またはＣｏｎＡによってＴ細胞中でアップレギュレーションされる（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ら（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｉｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９７（１８）：１０１４４〜９）。さらなる研究により、ＩＬ−２２のｍＲＮＡの発現はＬＰＳ投与に応答してｉｎ  ｖｉｖｏで誘導され、また、ＩＬ−２２は急性期反応の指標であるパラメータを変調することが示されている（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ら（２０００）上記、Ｐｉｔｔｍａｎ  Ｄ．ら（２００１）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２：１７２）。総合すると、これらの観察は、ＩＬ−２２が炎症において重要な役割を果たすことを示している（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ＆Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１３（３）：２２３〜４０）。
【０００６】
ＩＬ−２２の細胞表面受容体は、そのそれぞれがＩＩ型サイトカイン受容体ファミリー（ＣＲＦ２）のメンバーである、ＩＬ−２２受容体（ＩＬ−２２Ｒ）およびＩＬ−２２受容体２（ＩＬ−１０Ｒ２）サブユニットからなる受容体複合体であると考えられている（Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ら（２０００）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７５（４０）：３１３３５〜９、Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ら（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７６（４）：２７２５〜３２）。ＣＲＦ２メンバーは、ＩＦＮα／β、ＩＦＮγ、第ＶＩＩａ凝固因子、ＩＬ−１０およびＩＬ−１０関連タンパク質ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２４、ＩＬ−２６、ならびに最近同定されたＩＦＮ様サイトカインであるＩＬ−２８およびＩＬ−２９の受容体である（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ＆Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１３（３）：２２３〜４０、Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ら（２０００）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９（２１）：２５５７〜６５、Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｐ．ら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、４（１）：６３〜８、Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、４（１）：６９〜７７）。ＩＬ−２２受容体複合体のサブユニット、すなわち鎖のそれぞれは、上皮細胞および様々な組織内の一部の線維芽細胞上に提示される（Ｗｏｌｋら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６８、５３９７〜４０２（２００２）、Ｘｉｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２７５、３１３３５〜９（２０００）、Ｋｏｔｅｎｋｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２７６、２７２５〜３２（２００１）、Ｉｋｅｕｃｈｉら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、５２、１０３７〜４６（２００５）、Ａｎｄｏｈら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１２９、９６９〜８４（２００５））。ＩＬ−２２受容体複合体の鎖はどちらも、いくつかの器官中でも構成的に発現され、これらの器官に由来する上皮細胞系はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２２に応答性であることが示されている（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ＆Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１３（３）：２２３〜４０。
【０００７】
ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２のサブユニットは他のＩＩ型サイトカインの様々な受容体複合体の形成に別々に寄与するが、これらのサブユニットは一緒になってＩＬ−２２に特異的な単一の受容体複合体を形成する。ＩＬ−２２は最初にＩＬ−２２Ｒの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と結合すると考えられている。（Ｌｏｇｓｄｏｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＆Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２２、１０９９〜１１２（２００２）およびＬｉら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、４、６９３〜７０８（２００４））。提唱されているＩＬ−２２Ｒ誘導のＩＬ−２２のコンホメーション変化により、ＩＬ−１０Ｒ２はＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒの表面と結合することができる（Ｌｉら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、４、６９３〜７０８（２００４）およびＬｏｇｓｄｏｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、３４２、５０３〜１４（２００４））。その結果ヘテロ三量体またはその多量体のいずれかとして生じるＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２複合体は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴおよびＭＡＰＫ（たとえばＥＲＫ）のシグナル伝達経路を介してシグナルを細胞内に伝達する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６４、１８１４〜９（２０００）、Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ、９７、１０１４４〜９（２０００）、およびＬｅｊｅｕｎｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２７７、３３６７６〜８２（２００２））。ＩＬ−２２はＪＡＫ／ＳＴＡＴ３およびＭＡＰＫ（たとえばＥＲＫ）経路ならびに他のＭＡＰＫ経路の中間体の活性化を誘導する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ら（２０００）上記、Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ら（２０００）上記、Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ら（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６４（４）：１８１４〜９、Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ら（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７６（４）：２７２５〜３２、Ｌｅｊｅｕｎｅ，Ｄ．ら（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７７（３７）：３３６７６〜８２）。
【０００８】
ＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２との間の相互作用は、ビオチン標識したサイトカインおよび受容体細胞外ドメイン（ＥＣＤ）Ｆｃ融合二量体を用いたＥＬＩＳＡに基づいた様式で特徴づけられている。たとえば米国公開特許出願第２００５−００４２２２０号を参照されたい。ＩＬ−２２はＩＬ−２２ＲのＥＣＤに対して測定可能な親和性を有し、ＩＬ−１０Ｒ２単独に対しては検出可能な親和性を有さないことが示された。また、ＩＬ−２２はＦｃヘテロ二量体として提示されるＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤに対して実質的により高い親和性を有することも示された。ＩＬ−１０Ｒ２はＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の会合によって生じた表面に結合すると考えられ、これは、ＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤがＩＬ−２２のそのサイトカイン受容体複合体内での会合をさらに安定化させることを示唆している。たとえば米国公開特許出願第２００５−００４２２２０号を参照されたい。
【０００９】
ＩＬ−２２受容体複合体と結合することに加えて、ＩＬ−２２は、ＩＬ−２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）とも結合する。ＩＬ−２２ＢＰは、ＩＬ−２２に特異的な分泌された「受容体」であり、ＩＬ−２２Ｒの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と３３％の一次配列同一性を有する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．、Ｌｅｊｅｕｎｅ，Ｄ．、Ｃｏｌａｕ，Ｄ．およびＲｅｎａｕｌｄ，Ｊ．Ｃ．、Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−２２  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ，ａ  ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  ＩＬ−１０−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｆａｃｔｏｒ／ＩＬ−２２．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６６、７０９０〜５（２００１））。ＩＬ−２２ＢＰの細胞表面形態は具体的に同定されていないが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは、ＩＬ−２２ＢＰはおとり受容体として作用し、細胞へのＩＬ−２２シグナル伝達を遮断することが示されている（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６６、７０９０〜５（２００１）およびＸｕら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ、９８、９５１１〜６（２００１））。
【００１０】
中和抗ＩＬ−２２抗体が作製されており、その結合特異性、親和性およびＩＬ−２２中和活性に関して特徴づけられている。たとえば米国公開特許出願第２００５−００４２２２０号を参照されたい。ＩＬ−２２のｉｎ  ｖｉｖｏ投与は急性期反応のパラメータを誘導することが示されており、中和抗ＩＬ−２２抗体の投与はＩＬ−２２活性を低下させ、マウスのコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルにおいて炎症症状を寛解させることが示されている。たとえば米国公開特許出願第２００５−００４２２２０号を参照されたい。さらに、ＩＬ−２２ｍＲＮＡの発現は炎症領域内でアップレギュレーションされることが示されている。したがって、たとえば中和抗ＩＬ−２２抗体およびその断片などのＩＬ−２２拮抗剤を用いて免疫抑制をｉｎ  ｖｉｖｏで誘導することができ、これらは様々な炎症性および／または自己免疫性の障害を処置するための有望な手法を提供する。
【００１１】
Ｔｈ１７細胞は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを発現するその能力によって定義される（Ａｇｇａｒｗａｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、（２００３）２７８：１９１０〜１４、Ｌａｎｇｒｉｓｈら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、（２００５）２０１：２３３〜４０、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、（２００５）６：１１２３〜３２、Ｐａｒｋら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、（２００５）６：１１３３〜４１、Ｖｅｌｄｈｏｅｎら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、（２００６）２４：１７９〜８９、Ｍａｎｇａｎら、Ｎａｔｕｒｅ、（２００６）４４１：２３１〜３４、Ｂｅｔｔｅｌｌｉら、Ｎａｔｕｒｅ、（２００６）４４１：２３５〜３８）。Ｔｈ１７細胞の分化は、炎症誘発性サイトカイン、特にＩＬ−６、ならびにＩＬ−１βおよびＴＮＦ−αのコンテキストにおけるＴＧＦ−βシグナル伝達によって開始される。対照的に、Ｔｈ１７細胞の維持および生存は、ＩＬ−１２ｐ４０およびＩＬ−２３ｐ１９サブユニットからなるＩＬ−１２のファミリーメンバーであるＩＬ−２３に依存する。ＩＬ−２３欠乏マウスは、いくつかのマウス疾患および感染症のモデルにおいて顕著に少ないＩＬ−１７を産生する（Ｌａｎｇｒｉｓｈら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、（２００５）２０１：２３３〜４０、Ｍｕｒｐｈｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、（２００３）１９８：１９５１〜５７、Ｈａｐｐｅｌら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、（２００５）２０２：７６１〜６９、Ｋｈａｄｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、（２００５）１７５：７８８〜９５）。したがって、Ｔｈ１７の分化はＴＧＦ−βおよび炎症誘発性サイトカインによって開始され、続いてＩＬ−２３によって維持される。
【００１２】
ＩＬ−１７ファミリーは、１７〜５５％の相対的な相同性を共有する５個のファミリーメンバー、すなわち、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ（ＩＬ−２５）、およびＩＬ−１７Ｆからなる（Ａｇｇａｒｗａｌら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．、（２００３）１４：１５５〜７４、Ｋｏｌｌｓら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、（２００４）２１：４６７〜７６）。ＩＬ−１７ファミリーメンバーの発現は非常に多様である。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆが最も相同的であり（５５％）、ヒト染色体１上で互いに隣接して位置している。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦのｍＲＮＡは、Ｔｈ１またはＴｈ２細胞と比較してＴｈ１７細胞においてより高いレベルで発現される。対照的に、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、およびＩＬ−１７Ｄは主に非リンパ組織中で発現される。ＩＬ−１７Ｅ（ＩＬ−２５）はＴｈ２細胞中で発現される（Ｆｏｒｔら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、（２００１）１５：９８５〜９５）。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに加えて、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、およびＧＭ−ＣＳＦも、ＩＬ−２３によって誘導され、Ｔｈ１７細胞によって潜在的に発現される遺伝子として同定されている（Ｌａｎｇｒｉｓｈら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、（２００５）２０１：２３３〜４０、Ｉｎｆａｎｔｅ−Ｄｕａｒｔｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、（２０００）１６５：６１０７〜１５）。しかし、Ｔｈ１細胞はＴＮＦ−αを発現することができ、Ｔｈ２細胞はＩＬ−６およびＧＭ−ＣＳＦを発現することができるため、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、およびＧＭ−ＣＳＦの発現はＴｈ１７系統に限定されない。対照的に、Ｔｈ１７細胞は系統特異的な様式でＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを産生すると考えられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
ＣＤ４エフェクター細胞のサブセットがいくつかの異なる疾患に関与している。一部の例では、それらの活性が生物に役立つ。しかし、他の疾患では、それらの活性は望ましくないか、または有害でさえある。ＣＤ４エフェクター集団内における、特定の病理を担っている細胞のサブセットを同定することにより、他のＣＤ４エフェクター細胞の不必要な抑制をせずにそれらの細胞を標的として調節することが可能となる。同様に、細胞のサブセットによって産生されるサイトカインおよびそれらのサイトカインがどのように相互作用するかの知識は、それらのサイトカインが関与する疾患の改良された管理を実現する包括的な療法の開発の必須条件である。
【００１４】
また、ＩＬ−２２も、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆと協同的に、また一部の例では相乗的に作用することができるＴｈ１７サイトカインである。米国公開特許出願第２００８００３１８８２号を参照されたい。さらに、ＩＬ−２３によるＩＬ−２２誘導が実証されている。同上。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
特定の実施形態では、炎症性障害を検出する方法を提供する。特定の実施形態では、炎症性障害を検出する方法は、患者において（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つのアップレギュレーションを同定することを含み、少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームは、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、またはＩＬ−１Ｆ９である。特定の実施形態では、炎症性障害は乾癬、ループス、または関節炎である。特定の実施形態では、（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つのアップレギュレーションは、ｍＲＮＡレベルを検出することによって決定する。特定の実施形態では、（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つのアップレギュレーションは、タンパク質レベルを検出することによって決定する。特定の実施形態では、（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも２つのアップレギュレーションの検出は、（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つのタンパク質レベルを検出することによって、ならびに（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つのｍＲＮＡレベルを検出することによって決定する。患者における（ａ）少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームおよび（ｂ）ＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つの発現を対照試料における発現レベルと比較することができ、対照試料における発現と比較した患者における少なくとも１つのＩＬ−１のアイソフォームまたはＩＬ−１Ｒｒｐ２の発現の増加は、患者における炎症性障害の存在を示す。
【００１６】
特定の実施形態では、ＩＬ−２２関連障害を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、ＩＬ−２２関連障害を処置する方法は、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９のうちの少なくとも１つの少なくとも１つの阻害剤を、前記ＩＬ−２２関連障害に罹患している患者に投与することを含む。特定の実施形態では、少なくとも１つの阻害剤は抗ＩＬ−１Ｆ６抗体である。特定の実施形態では、少なくとも１つの阻害剤は抗ＩＬ−１Ｆ８抗体である。特定の実施形態では、少なくとも１つの阻害剤は抗ＩＬ−１Ｆ９抗体である。特定の実施形態では、少なくとも１つの阻害剤は抗ＩＬ−１Ｒｒｐ２抗体である。
【００１７】
特定の実施形態では、ＩＬ−１関連障害を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、ＩＬ−１関連障害を処置する方法は、ＩＬ−２２の阻害剤を、前記ＩＬ−１関連障害に罹患している患者に投与することを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−２２の阻害剤は抗ＩＬ−２２抗体である。
【００１８】
特定の実施形態では、炎症性障害を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、炎症性障害を処置する方法は、炎症性障害に罹患している患者に、（ａ）（ｉ）抗ＩＬ−１Ｆ６抗体、（ｉｉ）抗ＩＬ−１Ｆ８抗体、（ｉｉｉ）抗ＩＬ−１Ｆ９抗体、および（ｉｖ）抗ＩＬ−１Ｒｒｐ２抗体のうちの少なくとも１つと、（ｂ）抗ＩＬ−２２抗体またはＩＬ−２２拮抗剤との組合せを投与することを含む。特定の実施形態では、炎症性障害を処置する方法は、炎症性障害に罹患している患者に、抗ＩＬ−１Ｆ６抗体、抗ＩＬ−１Ｆ８抗体、または抗ＩＬ−１Ｆ９抗体などの抗ＩＬ−１抗体と、抗ＩＬ−１７Ａ抗体またはＩＬ−１７Ａ拮抗剤とを投与することを含む。特定の実施形態では、炎症性障害を処置する方法は、炎症性障害に罹患している患者に、（ａ）（ｉ）抗ＩＬ−１Ｆ６抗体、（ｉｉ）抗ＩＬ−１Ｆ８抗体、（ｉｉｉ）抗ＩＬ−１Ｆ９抗体、および（ｉｖ）抗ＩＬ−１Ｒｒｐ２抗体のうちの少なくとも１つと、（ｂ）抗ＩＬ−２２抗体またはＩｌ−２２拮抗剤と、（ｃ）抗Ｉｌ−１７Ａ抗体またはＩＬ−１７Ａ拮抗剤との組合せを投与することを含む。他の実施形態では、炎症性障害を処置する方法は、患者に、（ａ）（ｉ）抗ＩＬ−１Ｆ６抗体、（ｉｉ）抗ＩＬ−１Ｆ８抗体、（ｉｉｉ）抗ＩＬ−１Ｆ９抗体、および（ｉｖ）抗ＩＬ−１Ｒｒｐ２抗体のうちの少なくとも１つと、（ｂ）抗ＴＮＦα抗体またはＴＮＦα拮抗剤との組合せを投与することを含む。特定の実施形態では、炎症性障害は乾癬、ループス、または関節炎である。
【００１９】
特定の実施形態では、対象の炎症性障害の処置、低下、予防、および／または寛解における治療剤の有効性を決定する方法を提供する。特定の実施形態では、治療剤の有効性を決定する方法は、対照試料における遺伝子発現のレベルと比較した対象における遺伝子発現のレベルを検出することを含み、検出される遺伝子発現は、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９、ＩＬ−１Ｒｒｐのうちの少なくとも１つからの遺伝子発現であり、対照と比較して対象における遺伝子発現のレベルがより低いことは、対象の炎症性障害の処置、低下、予防、および／または寛解における治療剤の有効性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】乾癬様マウス耳組織におけるＩＬ−１サイトカインＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９ならびにその受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の発現の増加を示す図である。乾癬（Ｐｓｏ．）は、野生型ＣＤ４＋ＣＤ２５−ＣＤ４５ＲＢｈｉＴ細胞の適応移入を用いてｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウスにおいて誘導し、一方で、対照（Ｃｏｎｔ．）マウスには生理食塩水の注射を与えた。マウス耳を注射の７０日後に収集した。図１（ａ）および（ｃ）は、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって評価したＩＬ−１サイトカインおよびその受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の転写レベルを示す。Ｙ軸は、推定１，０００コピー数のＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡ／細胞を有するハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨと比較した、示した遺伝子の相対的ｍＲＮＡコピー数を示す。統計分析は独立両側ｔ検定を用いて行った。「＊」は統計的有意性を示す（ｐ＜０．００１）。図１（ｂ）は、ウエスタンブロットにおいてそれぞれのタンパク質（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）に対する抗体によって検出した、個々の耳試料中のＩＬ−１Ｆ６およびβ−アクチンタンパク質を示す。
【図２】全身性ＩＬ−２２中和後の乾癬様マウス耳組織におけるＩＬ−１サイトカインの発現の減少を示す図である。ＣＤ４＋ＣＤ２５−ＣＤ４５ＲＢｈｉＴ細胞レシピエントマウス（ｎ＝５）に、１６ｍｇ／ｋｇのＩＬ−２２（ＩＬ２２−１０４、Ｗｙｅｔｈ、黒色記号）またはアイソタイプ対照（白色丸）抗体を腹膜内に週に１回、１１週間の間与えた。最後の処置の４８時間後、マウス耳を収集し、示した遺伝子の転写物コピー数を評価し、ＧＡＰＤＨに対する相対的発現として示した。「＊」は統計的有意性を示す（ｐ＜０．０１）。
【図３】ＩＬ−２２で処置したマウス耳におけるＩＬ−１サイトカインおよびその受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の発現の増加を示す図である。ＢＡＬＢ／ｃマウスの耳（ｎ＝４）に、隔日に２週間の間、５００ｎｇの組換えマウスＩＬ−２２（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）または生理食塩水を合計体積２０ｕｌで皮内注射した。最後の処置の６時間後、マウス耳を収集し、示した遺伝子の転写レベルを評価し、ＧＡＰＤＨに対する相対的発現として示した。「＊」は統計的有意性を示す（ｐ＜０．１）。
【図４】示した量の組換えヒトＩＬ−２２で４８時間処置した後の初代ヒトケラチノサイトにおける、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９、および受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の転写レベルを示す図である。ＲＮＡを細胞溶解液から精製し、示した遺伝子の転写物コピー数を評価し、ＧＡＰＤＨに対する相対的発現として示した。図４（ａ）および４（ｂ）のデータは独立した実験を表す。
【図５】ＩＬ−２２がヒト初代ケラチノサイトにおいてＩＬ−１７Ａと相乗作用してＩＬ−１アイソフォームの遺伝子発現を誘導することを示す図である。処置なし、２００ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−２２（Ｗｙｅｔｈ）単独、２０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−１７Ａ（Ｗｙｅｔｈ）単独、または２００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２および２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ａを与えた４８時間後に細胞を収集した。図５（ａ）および５（ｃ）は、細胞溶解液中のＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９の転写レベルを示す。図５（ｂ）は、それぞれタンパク質（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）に対する抗体を用いたウエスタンブロットによって評価した、細胞溶解液中のＩＬ−１Ｆ９およびβ−アクチンのタンパク質レベルを示す。
【図６】乾癬患者の対となる非損傷性および損傷性の皮膚試料におけるＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９、および受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の転写レベルを示す図である。ＲＮＡを凍結した組織生検から精製し、遺伝子発現を定量的ＲＴ−ＰＣＲによって評価した。図６（ａ）は示した遺伝子転写物の平均コピー数／群±標準偏差（ｎ＝１１）を示す。統計的有意性はそれぞれのプロット中に表すｐ値によって示した。図６（ｂ）および６（ｃ）は、個々の患者からの非損傷性および損傷性の試料における遺伝子発現を示す。
【図７】ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９とＴｈ１７サイトカインＩＬ−２２およびＩＬ−１７Ａとの間の直線的な遺伝子発現の相関を示す図である。ヒト患者の損傷性皮膚生検からのＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９、および受容体ＩＬ−１  ＩＬ−１Ｒｒｐ２の転写物コピー数を、同じ組織試料中のＩＬ−２２およびＩＬ１７Ａの転写物コピー数に対してプロットした。図７（ａ）は、乾癬皮膚病変におけるＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９とＩＬ−２２またはＩＬ−１７Ａとの間の遺伝子発現の正の相関を示す。Ｒ二乗およびＰ値もそれぞれのプロット中に示す。図７（ｂ）は、乾癬皮膚病変において受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２とＩＬ−２２またはＩＬ−１７Ａとの間に遺伝子発現の相関がないことを示す。Ｒ二乗およびＰ値もそれぞれのプロット中に示す。
【図８】ヒト乾癬皮膚病変におけるＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９と他の炎症誘発バイオマーカーとの間の遺伝子発現の相関の要約を示す図である。統計分析は９５％の信頼区間を有する両側ピアソン検定を用いて行った。ｐ＜０．０５であった場合に相関は有意であるとみなした。
【図９】コラーゲン誘導関節炎マウスの白血球中で検出されたＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９の遺伝子発現の増加を示す図である。ＤＢＡ１マウスを、ＣＦＡで乳化した２００ｎｇのウシＩＩ型コラーゲン（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ）を用いて皮内で免疫化した。２１日目に、すべてのマウスにＩＦＡ中の２００ｎｇのコラーゲンの追加免疫を与えた。３５日目に、マウスを屠殺し、遺伝子発現の分析のために血液を採取した。ＲＮＡを白血球からＱＩＡＧＥＮ  ＲＮｅａｓｙ（登録商標）血液ミニキット（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて精製し、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９のｍＲＮＡレベルをＲＴ−ＰＣＲで評価した。ＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９の相対的な転写物コピー数／群±標準偏差（ｎ＝５）を表した。ＩＬ−１Ｆ６のｍＲＮＡレベルは検出限界より下であった。図９のデータは２つの独立した実験のうちの一方を示す。
【図１０】乾癬様マウスの白血球中で検出されたＩＬ−１Ｆ６およびＩＬ−１Ｆ９の遺伝子発現の増加を示す図である。乾癬を図１に記載のようにマウスで誘導した。養子Ｔ細胞移入後の７０日目にマウス血液を採取し、図９に記載のように遺伝子発現の分析に供した。ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ９および受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の相対的な転写物コピー数／群±標準偏差（ｎ＝５）を表した。ＩＬ−１Ｆ８のｍＲＮＡレベルは検出限界より下であった。図１０のデータは２つの独立した実験のうちの一方を示す。
【図１１】ループス昜発性ＮＺＢＷＦ／１マウスの白血球中で検出された受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２、ＩＬ−１Ｆ６およびＩＬ−１Ｆ９サイトカインの遺伝子転写物の増加を示す図である。ループスの自発的発生を遺伝的に起こしやすいマウスの１０週齢および７カ月齢のＮＺＢＷＦ／１株から血液を採取した。ループスの自発的発生を起こしにくい１０週齢のナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスを対照として使用した。ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ９および受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の相対的な転写物コピー数／群±標準偏差（ｎ＝５）を表した。ＩＬ−１Ｆ８のｍＲＮＡレベルは検出限界より下であった。図１１のデータは２つの独立した実験のうちの一方を示す。
【図１２】ヒトＩＬ−２２ヌクレオチド配列およびヒトＩＬ−２２アミノ酸配列を示す図である。
【図１３】マウスＩＬ−２２ヌクレオチド配列およびマウスＩＬ−２２アミノ酸配列を示す図である。
【図１４】ヒトＩＬ−１Ｆ６ヌクレオチド配列およびヒトＩＬ−１Ｆ６アミノ酸配列を示す図である。
【図１５】ヒトＩＬ−１Ｆ８ヌクレオチド配列およびヒトＩＬ−１Ｆ８アミノ酸配列を示す図である。
【図１６】ヒトＩＬ−１Ｆ９ヌクレオチド配列およびヒトＩＬ−１Ｆ９アミノ酸配列を示す図である。
【図１７】ヒトＩＬ−１Ｒｒｐ２ヌクレオチド配列およびヒトＩＬ−１Ｒｒｐ２アミノ酸配列を示す図である。
【図１８】ヒトＩＬ−１７ＡのｍＲＮＡヌクレオチド配列およびヒトＩＬ−１７Ａアミノ酸配列を示す図である。
【図１９】２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αおよびＩＬ−２２（２００ｎｇ／ｍｌ）とＴＮＦ−α（２０ｎｇ／ｍｌ）との組合せと共にインキュベーションした４８時間後のケラチノサイトにおける、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９の発現の増加の倍数を示す図である。３人のドナーからのデータをプールした。平均±ＳＤを表す。
【図２０】２０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γを含むまたは含まない示した濃度のＩＬ−１２と共にインキュベーションした４８時間後のケラチノサイトにおける、ＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９の発現の増加の倍数を示す図である。ＩＬ−１Ｆ６の発現の増加の倍数は検出されなかった。５人のドナーからのデータをプールした。平均±ＳＤを表す。
【図２１】２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ａ、２０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γまたは両方の組合せと共にインキュベーションした４８時間後のケラチノサイトにおける、ＩＬ−１Ｆ８の発現の増加の倍数を示す図である。３人のドナーからのデータをプールした。平均±ＳＤを表す。
【図２２】２００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２１または２００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２１と２００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２との組合せと共にインキュベーションした４８時間後のケラチノサイトにおける、ＧＡＰＤＨと比較したＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９の発現を示す図である。２人の個々のドナーからのデータを示す。
【図２３】ＩＬ−２２（２００ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１７Ａ（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−２２（２００ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−１７Ａ（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１２（２００ｎｇ／ｍｌ）、ＩＦＮ−γ（２０ｎｇ／ｍｌ）、またはＩＬ−１２（２００ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＦＮ−γ（２０ｎｇ／ｍｌ）と共にインキュベーションした４８時間後のケラチノサイトにおける、ｉｌ１ａおよびｉｌ１ｂの発現の増加の倍数を示す図である。５人のドナーからのデータをプールした。平均±ＳＤを表す。
【図２４】１０００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１Ｆ６、Ｆ８およびＦ９またはＩＬ−１７Ａ（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＦＮ−γ（２０ｎｇ／ｍｌ）もしくはＴＮＦ−α（２０ｎｇ／ｍｌ）の組合せと共にインキュベーションした７２時間後のケラチノサイトにおける、ＩＬ１α（ａ）、ＩＬ１β（ｂ）、ＩＬ−１Ｆ６（ｃ）およびＩＬ−１Ｆ９（ｄ）の発現の増加の倍数を示す図である。１人のドナーからのデータを示す。
【図２５】１０００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９の単独、またはＩＬ−１７Ａ（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＦＮ−γ（２０ｎｇ／ｍｌ）もしくはＴＮＦ−α（２０ｎｇ／ｍｌ）との組合せと共にインキュベーションした６時間または７２時間（Ｇ−ｉｌ６のみ）後のケラチノサイトにおける、ｓａａ１／２（ａ）、セルピンｅ１（ｂ）、ｐｌａｕ（ｃ）、ｐｌａｔ（ｄ）、ｔｎｆａ（ｅ）およびｉｌ６（ｆ）の発現の増加の倍数を示す図である。１人のドナーからのデータを示す。
【図２６】１０００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９の単独、またはＩＬ−１７Ａ（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＦＮ−γ（２０ｎｇ／ｍｌ）もしくはＴＮＦ−α（２０ｎｇ／ｍｌ）との組合せと共にインキュベーションした７２時間後のケラチノサイトにおける、ＧＡＰＤＨと比較したｓ１００ａ７およびｄｅｆ４の発現、（ａ）および（ｃ）またはｓ１００ａ７およびｄｅｆ４遺伝子の発現の増加の倍数、（ｂ）および（ｄ）を示す図である。１人のドナーからのデータを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
別段に定義しない限りは、本明細書中で使用するすべての技術用語および科学用語は、当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中に記載のものに類似または均等な方法および材料を特許請求の範囲の実施または試験に使用することができるが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書中で引用するすべての出版物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参考として組み込まれている。不一致の場合は、定義を含めて本明細書が支配する。さらに、材料、方法、および実施例は例示的のみであり、限定することを意図しない。
【００２２】
本発明をより容易に理解し得るために、特定の用語を最初に定義する。さらなる定義を詳細な説明全体にわたって記載する。具体的な定義を提供しない限りは、本明細書中に記載する分析化学、合成有機化学、ならびに医学および薬学の化学に関連して利用する学名ならびにその実験室手順および技術は、当分野で周知かつ一般的に使用されているものである。標準技術を化学合成、化学分析、薬剤の調製、配合、送達、および患者の処置に使用し得る。
【００２３】
本出願中では、別段に具体的に指定しない限りは、単数形の使用には複数形が含まれる。本出願中では、「または（ｏｒ）」の使用は、別段に指定しない限りは「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。複数の従属クレームのコンテキストでは、「または（ｏｒ）」の使用は、複数の先行する独立または従属クレームを二者択一のみで言及する。さらに、用語「含める（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含めた（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は限定的でない。また、「要素」または「構成要素」などの用語には、別段に具体的に指定しない限りは、単一ユニットを含む要素および構成要素ならびに複数のサブユニットを含む要素および構成要素がどちらも包含される。
【００２４】
他の特長および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかとなろう。
【００２５】
本出願は、少なくとも部分的に、高い親和性および特異性でＩＬ−２２、特にヒトＩＬ−２２と結合する抗体およびその抗原結合断片を規定する。特定の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはその断片は、ＩＬ−２２関連障害および／または炎症性障害、たとえば、自己免疫障害、たとえば、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、ループス関連関節炎または強直性脊椎炎が含まれる）、強皮症、全身性エリテマトーデス、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、血管炎、多発性硬化症、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎が含まれる）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、真性糖尿病（Ｉ型）；たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）および膵臓（たとえば膵炎）の炎症状態；心血管障害、たとえば、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカル傷害、虚血；創傷治癒に関連する障害；呼吸障害、たとえば、喘息およびＣＯＰＤ（たとえば嚢胞性線維症）；急性炎症状態（たとえば、内毒血症；敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ）、毒素ショック症候群および感染症）、移植片拒絶およびアレルギーを診断、処置または予防するために使用することができる。一実施形態では、ＩＬ−２２関連障害は、関節障害、たとえば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、もしくは強直性脊椎炎のうちの１つまたは複数から選択される障害；呼吸障害（たとえば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；または、たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）、膵臓（たとえば膵炎）、ならびに胃腸器官、たとえば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤの炎症状態である。
【００２６】
用語「インターロイキン−２２」すなわち「ＩＬ−２２」とは、ＩＬ−２２Ｒおよび／またはＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２との受容体複合体と結合することができるクラスＩＩサイトカイン（哺乳動物であり得る）をいい、以下の特長のうちの少なくとも１つを有する：（１）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−２２ポリペプチド（完全長もしくは成熟形態）またはその断片のアミノ酸配列、たとえば、配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（マウス）またはその断片として示すアミノ酸配列、（２）配列番号１やそのアミノ酸３４〜１７９（ヒト）もしくは配列番号３（マウス）またはその断片として示すアミノ酸配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列、（３）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−２２ヌクレオチド配列またはその断片（たとえば、配列番号２やヌクレオチド７１〜６１０（ヒト）もしくは配列番号４（マウス）またはその断片）によってコードされているアミノ酸配列、（４）配列番号２やそのヌクレオチド７１〜６１０（ヒト）もしくは配列番号４（マウス）またはその断片として示すヌクレオチド配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、（５）天然に存在するＩＬ−２２ヌクレオチド配列またはその断片、たとえば、配列番号２（ヒト）もしくは配列番号４（マウス）またはその断片の縮重であるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、または（６）ストリンジェントな条件、たとえば高度にストリンジェントな条件下で前述のヌクレオチド配列のうちの１つとハイブリダイズするヌクレオチド配列。ＩＬ−２２は、哺乳動物起源、たとえばヒトまたはマウスのＩＬ−２２Ｒおよび／またはＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２との受容体複合体と結合し得る。
【００２７】
ヒトＩＬ−２２のｃＤＮＡは１９９９年４月２８日にブダペスト条約の下でオリジナルの寄託物としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ、米国、２０１１０−２２０９）に寄託し、受託番号ＡＴＣＣ２０７２３１が与えられた。
【００２８】
語句「ＩＬ−２２活性」または「ＩＬ−２２関連活性」とは、ＩＬ−２２ポリペプチド、たとえば、成熟ＩＬ−２２ポリペプチド（たとえば哺乳動物、たとえば、それぞれ配列番号２および４に示すアミノ酸配列を有するヒトまたはマウスＩＬ−２２）の生物活性のうちの１つまたは複数をいい、それだけには限定されないが、以下が含まれる：（１）ＩＬ−２２受容体（たとえば、好ましくは哺乳動物、たとえばマウスまたはヒト起源の、ＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２またはその複合体）と相互作用すること、たとえば結合すること、（２）１つまたは複数のシグナル伝達分子と会合すること、（３）プロテインキナーゼ、たとえば、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３、ＥＲＫ、およびＭＡＰＫのリン酸化および／または活性化を刺激すること、（４）ＩＬ−２２応答性細胞、たとえば、たとえば腎臓、肝臓、結腸、小腸、甲状腺、膵臓、皮膚）からの上皮細胞の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカインもしくはケモカインの分泌、および／または生存を変調、たとえば刺激または減少させること、（５）急性期反応、たとえば、代謝、肝臓、造血（たとえば、貧血、血小板増加）もしくは神経内分泌変化、あるいは変化（たとえば急性期タンパク質の増加もしくは減少、たとえばフィブリノーゲンおよび／もしくは血清アミロイドＡの増加、またはアルブミンの減少）の少なくとも１つのパラメータを変調すること、ならびに／あるいは（６）炎症状態の少なくとも１つのパラメータを変調すること、たとえば、サイトカイン媒介性炎症誘発作用（たとえば、発熱、および／またはプロスタグランジン合成、たとえばＰＧＥ２合成）を変調すること、細胞性免疫応答を変調すること、サイトカイン、ケモカイン（たとえばＧＲＯ１）、またはリンホカインの産生および／または分泌（たとえば炎症誘発性サイトカインの産生および／または分泌）を変調すること。
【００２９】
本出願は、少なくとも部分的に、高い親和性および特異性でＩＬ−１Ｆ６、特にヒトＩＬ−１Ｆ６と結合する抗体およびその抗原結合断片を規定する。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１Ｆ６抗体またはその断片は、ＩＬ−１Ｆ６関連障害および／または炎症性障害、たとえば、自己免疫障害、たとえば、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、ループス関連関節炎または強直性脊椎炎が含まれる）、強皮症、全身性エリテマトーデス、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、血管炎、多発性硬化症、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎が含まれる）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、真性糖尿病（Ｉ型）；たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）および膵臓（たとえば膵炎）の炎症状態；心血管障害、たとえば、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカル傷害、虚血；創傷治癒に関連する障害；呼吸障害、たとえば、喘息およびＣＯＰＤ（たとえば嚢胞性線維症）；急性炎症状態（たとえば、内毒血症、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ）、毒素ショック症候群および感染症）；移植片拒絶およびアレルギーを診断、処置または予防するために使用することができる。一実施形態では、ＩＬ−１Ｆ６関連障害は、関節障害、たとえば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、もしくは強直性脊椎炎のうちの１つまたは複数から選択される障害；呼吸障害（たとえば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；または、たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）、膵臓（たとえば膵炎）、ならびに胃腸器官、たとえば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤの炎症状態である。
【００３０】
用語「ＩＬ−１Ｆ６」とはＩＬ−１サイトカインをいい、以下の特長のうちの少なくとも１つを有する：（１）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−Ｆ６ポリペプチド（完全長もしくは成熟形態）またはその断片のアミノ酸配列、たとえば配列番号６またはその断片として示すアミノ酸配列、（２）配列番号６またはその断片として示すアミノ酸配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列、（３）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−１Ｆ６ヌクレオチド配列またはその断片（たとえば配列番号５またはその断片）によってコードされているアミノ酸配列、（４）配列番号５またはその断片として示すヌクレオチド配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、（５）天然に存在するＩＬ−１Ｆ６ヌクレオチド配列またはその断片、たとえば配列番号５またはその断片の縮重であるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、あるいは（６）ストリンジェントな条件、たとえば高度にストリンジェントな条件下で配列番号５とハイブリダイズするヌクレオチド配列。
【００３１】
本出願は、少なくとも部分的に、高い親和性および特異性でＩＬ−１Ｆ８、特にヒトＩＬ−１Ｆ８と結合する抗体およびその抗原結合断片を規定する。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１Ｆ８抗体またはその断片は、ＩＬ−１Ｆ８関連障害および／または炎症性障害、たとえば、自己免疫障害、たとえば、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、ループス関連関節炎または強直性脊椎炎が含まれる）、強皮症、全身性エリテマトーデス、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、血管炎、多発性硬化症、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎が含まれる）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、真性糖尿病（Ｉ型）；たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）および膵臓（たとえば膵炎）の炎症状態；心血管障害、たとえば、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカル傷害、虚血；創傷治癒に関連する障害；呼吸障害、たとえば、喘息およびＣＯＰＤ（たとえば嚢胞性線維症）；急性炎症状態（たとえば、内毒血症、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ）、毒素ショック症候群および感染症）；移植片拒絶およびアレルギーを診断、処置または予防するために使用することができる。一実施形態では、ＩＬ−１Ｆ８関連障害は、関節障害、たとえば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、もしくは強直性脊椎炎のうちの１つまたは複数から選択される障害；呼吸障害（たとえば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；または、たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）、膵臓（たとえば膵炎）、ならびに胃腸器官、たとえば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤの炎症状態である。
【００３２】
用語「ＩＬ−１Ｆ８」とはＩＬ−１サイトカインをいい、以下の特長のうちの少なくとも１つを有する：（１）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−Ｆ８ポリペプチド（完全長もしくは成熟形態）またはその断片のアミノ酸配列、たとえば配列番号８またはその断片として示すアミノ酸配列、（２）配列番号８またはその断片として示すアミノ酸配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列、（３）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−１Ｆ８ヌクレオチド配列またはその断片（たとえば配列番号７またはその断片）によってコードされているアミノ酸配列、（４）配列番号７またはその断片として示すヌクレオチド配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、（５）天然に存在するＩＬ−１Ｆ８ヌクレオチド配列またはその断片、たとえば配列番号７またはその断片の縮重であるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、あるいは（６）ストリンジェントな条件、たとえば高度にストリンジェントな条件下で配列番号７とハイブリダイズするヌクレオチド配列。
【００３３】
本出願は、少なくとも部分的に、高い親和性および特異性でＩＬ−１Ｆ９、特にヒトＩＬ−１Ｆ９と結合する抗体およびその抗原結合断片を規定する。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１Ｆ９抗体またはその断片は、ＩＬ−１Ｆ９関連障害および／または炎症性障害、たとえば、自己免疫障害、たとえば、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、ループス関連関節炎または強直性脊椎炎が含まれる）、強皮症、全身性エリテマトーデス、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、血管炎、多発性硬化症、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎が含まれる）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、真性糖尿病（Ｉ型）；たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）および膵臓（たとえば膵炎）の炎症状態；心血管障害、たとえば、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカル傷害、虚血；創傷治癒に関連する障害；呼吸障害、たとえば、喘息およびＣＯＰＤ（たとえば嚢胞性線維症）；急性炎症状態（たとえば、内毒血症、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ）、毒素ショック症候群および感染症）；移植片拒絶およびアレルギーを診断、処置または予防するために使用することができる。一実施形態では、ＩＬ−１Ｆ９関連障害は、関節障害、たとえば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、もしくは強直性脊椎炎のうちの１つまたは複数から選択される障害；呼吸障害（たとえば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；または、たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）、膵臓（たとえば膵炎）、ならびに胃腸器官、たとえば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤの炎症状態である。
【００３４】
用語「ＩＬ−１Ｆ９」とはＩＬ−１サイトカインをいい、以下の特長のうちの少なくとも１つを有する：（１）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−Ｆ９ポリペプチド（完全長もしくは成熟形態）またはその断片のアミノ酸配列、たとえば配列番号１０またはその断片として示すアミノ酸配列、（２）配列番号１０またはその断片として示すアミノ酸配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列、（３）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−１Ｆ９ヌクレオチド配列またはその断片（たとえば配列番号９またはその断片）によってコードされているアミノ酸配列、（４）配列番号９またはその断片として示すヌクレオチド配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、（５）天然に存在するＩＬ−１Ｆ９ヌクレオチド配列またはその断片、たとえば配列番号９またはその断片の縮重であるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、あるいは（６）ストリンジェントな条件、たとえば高度にストリンジェントな条件下で配列番号９とハイブリダイズするヌクレオチド配列。
【００３５】
本出願は、少なくとも部分的に、高い親和性および特異性でＩＬ−１Ｒｒｐ２、特にヒトＩＬ−１Ｒｒｐ２と結合する抗体およびその抗原結合断片を規定する。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１Ｒｒｐ２抗体またはその断片は、ＩＬ−１Ｒｒｐ２関連障害および／または炎症性障害、たとえば、自己免疫障害、たとえば、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、ループス関連関節炎または強直性脊椎炎が含まれる）、強皮症、全身性エリテマトーデス、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、血管炎、多発性硬化症、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎が含まれる）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、真性糖尿病（Ｉ型）；たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）および膵臓（たとえば膵炎）の炎症状態；心血管障害、たとえば、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカル傷害、虚血；創傷治癒に関連する障害；呼吸障害、たとえば、喘息およびＣＯＰＤ（たとえば嚢胞性線維症）；急性炎症状態（たとえば、内毒血症、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ）、毒素ショック症候群および感染症）；移植片拒絶およびアレルギーを診断、処置または予防するために使用することができる。一実施形態では、ＩＬ−１Ｒｒｐ２関連障害は、関節障害、たとえば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、もしくは強直性脊椎炎のうちの１つまたは複数から選択される障害；呼吸障害（たとえば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；または、たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）、膵臓（たとえば膵炎）、ならびに胃腸器官、たとえば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤの炎症状態である。
【００３６】
用語「ＩＬ−１Ｒｒｐ２」とはＩＬ−１サイトカイン受容体（インターロイキン１受容体様２（ＩＬ−１ＲＬ２））をいい、以下の特長のうちの少なくとも１つを有する：（１）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−Ｒｒｐ２ポリペプチド（完全長もしくは成熟形態）またはその断片のアミノ酸配列、たとえば配列番号１２またはその断片として示すアミノ酸配列、（２）配列番号１２またはその断片として示すアミノ酸配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列、（３）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−１Ｒｒｐ２ヌクレオチド配列またはその断片（たとえば配列番号１１またはその断片）によってコードされているアミノ酸配列、（４）配列番号１１またはその断片として示すヌクレオチド配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、（５）天然に存在するＩＬ−１Ｒｒｐ２ヌクレオチド配列またはその断片、たとえば配列番号１１またはその断片の縮重であるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、あるいは（６）ストリンジェントな条件、たとえば高度にストリンジェントな条件下で配列番号１１とハイブリダイズするヌクレオチド配列。
【００３７】
本出願は、少なくとも部分的に、高い親和性および特異性でＩＬ−１７Ａ、特にヒトＩＬ−１７Ａと結合する抗体およびその抗原結合断片を規定する。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１７Ａ抗体またはその断片は、ＩＬ−１７Ａ関連障害および／または炎症性障害、たとえば、自己免疫障害、たとえば、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、ループス関連関節炎または強直性脊椎炎が含まれる）、強皮症、全身性エリテマトーデス、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、血管炎、多発性硬化症、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎が含まれる）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、真性糖尿病（Ｉ型）；たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）および膵臓（たとえば膵炎）の炎症状態；心血管障害、たとえば、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカル傷害、虚血；創傷治癒に関連する障害；呼吸障害、たとえば、喘息およびＣＯＰＤ（たとえば嚢胞性線維症）；急性炎症状態（たとえば、内毒血症、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ）、毒素ショック症候群および感染症）；移植片拒絶およびアレルギーを診断、処置または予防するために使用することができる。一実施形態では、ＩＬ−１７Ａ害は、関節障害、たとえば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、もしくは強直性脊椎炎のうちの１つまたは複数から選択される障害；呼吸障害（たとえば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；または、たとえば、皮膚（たとえば乾癬）、心血管系（たとえばアテローム性動脈硬化症）、神経系（たとえばアルツハイマー病）、肝臓（たとえば肝炎）、腎臓（たとえば腎炎）、膵臓（たとえば膵炎）、ならびに胃腸器官、たとえば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤの炎症状態である。
【００３８】
用語「ＩＬ−１７Ａ」とはＩＬ−１７サイトカインをいい、以下の特長のうちの少なくとも１つを有する：（１）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−１７Ａポリペプチド（完全長もしくは成熟形態）またはその断片のアミノ酸配列、たとえば配列番号１４またはその断片として示すアミノ酸配列、（２）配列番号１４またはその断片として示すアミノ酸配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列、（３）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−１７Ａヌクレオチド配列またはその断片（たとえば配列番号１３またはその断片）によってコードされているアミノ酸配列、（４）配列番号１３またはその断片として示すヌクレオチド配列と実質的に同一、たとえば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、（５）天然に存在するＩＬ−１７Ａヌクレオチド配列またはその断片、たとえば配列番号１３またはその断片の縮重であるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、あるいは（６）ストリンジェントな条件、たとえば高度にストリンジェントな条件下で配列番号１３とハイブリダイズするヌクレオチド配列。
【００３９】
用語「サイトカイン活性」とは、一般的に使用するか、または、それだけには限定されないがＩＬ−２２、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、もしくはＩＬ−１Ｆ９などの特定のサイトカインに適用するかに関わらず、そのサイトカインが細胞上のその受容体（複数可）と結合した結果として開始または中断される、少なくとも１つの細胞プロセスをいう。ＩＬ−２２のサイトカイン活性には、それだけには限定されないが、以下のうちの少なくとも１つが含まれる：（１）細胞受容体サブユニットまたは複合体、たとえばＩＬ−２２Ｒ１、ＩＬ−１０Ｒ２、またはＩＬ−２２Ｒ１／ＩＬ−１０Ｒ２と結合すること、（２）シグナル伝達分子（たとえばＪＡＫ−１）と会合すること、（３）ＳＴＡＴタンパク質（たとえば、ＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ３、またはその組合せ）のリン酸化を刺激すること、（４）ＳＴＡＴタンパク質を活性化すること、（５）急性期反応物質（たとえば、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ハプトグロビン、または血清アルブミン）および細胞（たとえば、好中球、血小板、または赤血球の変調を含めた、急性期反応の指標であるパラメータを誘導すること、ならびに（６）上皮細胞、線維芽細胞、または免疫細胞の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、生存、またはその組合せを変調する（たとえば増加または減少させる）こと。上皮細胞には、それだけには限定されないが、皮膚、腸、肝臓、および腎臓の細胞、ならびに内皮細胞が含まれる。線維芽細胞には、それだけには限定されないが滑膜線維芽細胞が含まれる。免疫細胞には、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、巨核球、ならびに特殊分化または組織免疫細胞、たとえば炎症組織中に見つかるものまたはＩＬ−２２受容体を発現するものが含まれ得る。
【００４０】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのサイトカイン活性には、それだけには限定されないが、以下のうちの少なくとも１つが含まれる：（１）ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７ＲＣ、ＩＬ−１７ＲＨ１、ＩＬ−１７ＲＬ、ＩＬ−１７ＲＤ、またはＩＬ−１７ＲＥなどの細胞受容体と結合すること、（２）血管形成を阻害すること、（３）造血細胞または軟骨、骨、半月板、脳、腎臓、肺、皮膚および腸管中に存在する細胞の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、生存、またはその組合せを変調する（たとえば増加または減少させる）こと、（４）ＩＬ−６および／またはＩＬ−８の産生を誘導すること、ならびに（５）一酸化窒素の産生を刺激すること。
【００４１】
２つの状態間の定量的な差異を表す、たとえば用語「誘導する」、「低下させる」、「阻害する」、「増強する」、「上昇させる」、「増加させる」、「減少させる」等とは、２つの状態間の少なくとも統計的に有意な差異をいう。
【００４２】
用語「特異的結合」または「特異的に結合する」とは、生理条件下で比較的安定な複合体を形成する２つの分子をいう。特異的結合は高い親和性および低い〜中等度の能力によって特徴づけられ、通常低い親和性および中等度〜高い能力を有する非特異的結合とは区別される。典型的には、会合定数ＫＡが１０６Ｍ−１よりも高い場合に結合は特異的であるとみなされる。必要な場合は、結合条件を変動することによって、特異的結合に実質的な影響を与えずに非特異的結合を低下させることができる。抗体の濃度、溶液のイオン強度、温度、結合させる時間、遮断剤（たとえば、血清アルブミン、乳カゼイン）の濃度等の適切な結合条件を、当業者がルーチン的な技術を用いて最適化し得る。
【００４３】
用語「特異的結合剤」とは、標的と特異的に結合する天然または非天然の分子をいう。特異的結合剤の例には、それだけには限定されないが、タンパク質、ペプチド、核酸、炭水化物、脂質、および小分子化合物が含まれる。特定の実施形態では、特異的結合剤は抗体である。特定の実施形態では、特異的結合剤は抗原結合領域である。
【００４４】
用語「構造」には、生物製剤（たとえば、それだけには限定されないが、抗体およびその断片）ならびに小分子のどちらの構造も包含される。
【００４５】
用語「抗体」とは、全抗体の修飾によって生成し得る、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、単鎖抗体（たとえばｓｃＦｖ）、単一可変ドメイン抗体（Ｄａｂ）、ダイアボディー（二価および二重特異性）、ならびにキメラ（たとえばヒト化）抗体などの免疫グロブリンもしくはその断片、または組換えＤＮＡ技術を用いて新規合成したものをいう。これらの機能的抗体断片は、そのそれぞれの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持している。抗体および抗体断片は、それだけには限定されないが、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含めた任意の抗体クラス、ならびに任意の抗体サブクラス（たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）からのものであることができる。本発明の抗体はモノクローナルまたはポリクローナルであることができる。また、抗体は、単一特異性、多特異性、非特異的、ヒト化、ヒト、単鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、突然変異した、ＣＤＲ移植、および／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで作製した抗体であることもできる。抗体は、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を有することができる。また、抗体は、たとえばカッパまたはラムダから選択される軽鎖を有することもできる。抗体の定常領域は、抗体の特性を改変する（たとえば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つまたは複数を増加または減少させる）ために、変更、たとえば突然変異させることができる。典型的には、抗体は、所定の抗原、たとえば障害、たとえば神経変性、代謝性、炎症性、自己免疫性および／または悪性の障害に関連する抗原と特異的に結合する。「インタクト」という言葉が先行しない限りは、用語「抗体」には、完全な抗体分子に加えて、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、および抗原結合機能を保持する他の抗体断片などの抗体断片が含まれる。典型的には、そのような断片は抗原結合ドメインを含む。
【００４６】
抗体には、重鎖および軽鎖の定常領域がさらに含まれ、それによりそれぞれ免疫グロブリンの重鎖および軽鎖が形成され得る。特定の実施形態では、抗体は２本の免疫グロブリン重鎖および２本の免疫グロブリン軽鎖の四量体であり、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖は、たとえばジスルフィド結合によって相互接続されている。重鎖定常領域は３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。軽鎖定常領域は１つのドメイン、ＣＬからなる。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。典型的には、抗体の定常領域は、抗体と免疫系の様々な細胞（たとえばエフェクター細胞）および古典的な補体系の第１構成要素（Ｃ１ｑ）を含めた宿主の組織または因子との結合を媒介する。
【００４７】
用語「抗原結合ドメイン」および「抗原結合断片」とは、抗体と抗原との間の特異的結合を担っているアミノ酸を含む、抗体分子の部分をいう。抗体によって特異的認識および結合される抗原の部分は、「エピトープ」という。抗原結合ドメインは抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含み得るが、必ず両方を含む必要はない。たとえば、Ｆｄ断片は２つのＶＨ領域を有しており、多くの場合インタクトな抗原結合ドメインの一部の抗原結合機能を保持している。抗体の抗原結合断片の例には、（１）Ｆａｂ断片、すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインを有する一価断片、（２）Ｆ（ａｂ’）２断片、すなわち、ヒンジ領域でジスルフィド橋によって連結された２つのＦａｂ断片を有する二価断片、（３）２つのＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦｄ断片、（４）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有するＦｖ断片、（５）１つのＶＨドメインを有するｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ、３４１：５４４〜５４６）、（６）単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（７）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）が含まれる。Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によってコードされているが、これらは、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる、たとえば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：５８７９〜５８８３を参照）として作製することが可能になる合成リンカーによって、組換え方法を用いて、一緒にすることができる。これらの抗体断片は当業者に知られている慣用技術を用いて得られ、インタクトな抗体と同じ様式で断片を機能について評価する。
【００４８】
本明細書中で使用する用語「免疫グロブリン」とは、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされている１つまたは複数のポリペプチドからなるタンパク質をいう。認められているヒト免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、イプシロン、ミュー定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５Ｋｄまたは２１４個のアミノ酸）は、ＮＨ２末端（約１１０個のアミノ酸）の可変領域遺伝子およびＣＯＯＨ末端のカッパまたはラムダ定常領域遺伝子によってコードされている。同様に、完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０Ｋｄまたは４４６個のアミノ酸）は、可変領域遺伝子（約１１６個のアミノ酸）および他の前述の定常領域遺伝子のうちの１つ、たとえばガンマ（約３３０個のアミノ酸をコードしている）によってコードされている。
【００４９】
本明細書中で使用する「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされている抗体クラス（たとえばＩｇＭまたはＩｇＧＩ）をいう。
【００５０】
用語「ヒト抗体」には、たとえばＫａｂａｔら（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ第９１−３２４２号を参照）によって記載されているものを含めた、当分野で知られているヒト生殖系列免疫グロブリン配列に実質的に対応している可変および定常領域を有する抗体が含まれる。特定の実施形態では、ヒト抗体には、たとえばＣＤＲ中、特にＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（たとえば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発またはｉｎ  ｖｉｖｏの体細胞突然変異によって導入された突然変異）が含まれ得る。ヒト抗体は、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、またはそれより多くの位置がヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基で置き換えられている場合がある。
【００５１】
用語「単離した」とは、その天然環境を実質的に含まない分子をいう。たとえば、単離したタンパク質は、それが由来した細胞または組織源からの細胞物質または他のタンパク質を実質的に含まない。また、この用語は、単離したタンパク質が医薬組成物用に十分に純粋である、または少なくとも７０〜８０％（ｗ／ｗ）純粋である、または少なくとも８０〜９０％（ｗ／ｗ）純粋である、または少なくとも９０〜９５％純粋である、または少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％（ｗ／ｗ）純粋である調製物もいう。
【００５２】
用語「治療剤」とは、医学的障害を処置するまたはその処置を補助する物質である。治療剤には、それだけには限定されないが、抗ＩＬ−２２抗体のＩＬ−２２活性を補足する様式で免疫細胞または免疫応答を変調する物質が含まれ得る。治療剤の非限定的な例および使用を本明細書中に記載する。
【００５３】
用語「処置」とは、治療的または予防的な手段をいう。処置は、医学的障害を有している対象または最終的に障害を有する可能性のある対象に、障害もしくは再発性障害の１つもしくは複数の症状を予防する、治癒する、遅延させる、その重篤度を低下させる、および／もしくは寛解させるため、または、そのような処置の非存在下で予測されるよりも長く対象の生存を延長させるために施し得る。
【００５４】
用語「有効量」とは、臨床症状を寛解させるまたは所望の生物学的結果を達成する、たとえば、Ｔ細胞および／もしくはＢ細胞の活性の減少、自己免疫の抑制、移植片拒絶の抑制等のために、活性を調節するために十分な用量または量をいう。
【００５５】
２つの薬剤を用いた処置のコンテキストにおける用語「組み合わせて」とは、薬剤を実質的に同時存在するように、すなわち、同時にまたは連続的に与えることを意味する。連続的に与える場合は、第２の化合物の投与開始時に、２つの化合物のうちの最初のものが処置部位で有効な濃度で検出可能なままであることが好ましい。
【００５６】
語句「パーセント同一」または「％同一性」とは、少なくとも２つの異なる配列間の類似度をいう。この％同一性は、標準のアラインメントアルゴリズム、たとえば、Ａｌｔｓｈｕｌら（（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５：４０３〜４１０）によって記載されているＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４８：４４４〜４５３）のアルゴリズム、またはＭｅｙｅｒｓら（（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．、４：１１〜１７）のアルゴリズムによって決定することができる。一組のパラメータは、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を有するＢｌｏｓｕｍ６２スコア付けマトリックスであり得る。また、２つのアミノ酸またはヌクレオチドの配列間の％同一性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ、４：１１〜１７）のアルゴリズムを用いて、ＰＡＭ１２０ウェイト残基表、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用して決定することもできる。％同一性は、通常は同様の長さの配列を比較することによって計算する。
【００５７】
特定の実施形態では、開示した配列と同様または相同的な（たとえば少なくとも約８５％の配列同一性の）配列を提供する。特定の実施形態では、配列同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高い場合がある。あるいは、核酸セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件（たとえば高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下で鎖の補体とハイブリダイズする場合は、実質的な同一性が存在する。核酸は全細胞中、細胞溶解液中、または部分精製したもしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。
【００５８】
単離したポリヌクレオチドは、開示したポリヌクレオチドをコードしているものと同一または同様の配列を有する核酸を同定および単離するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとして使用し得る。この様式で単離したポリヌクレオチドは、たとえば、それだけには限定されないが、ＩＬ−２２もしくは他のＩＬ−１０様サイトカインに対する抗体を産生するため、またはそのような抗体を発現する細胞を同定するために使用し得る。核酸を同定および単離するためのハイブリダイゼーション方法には、サザンハイブリダイゼーション、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションおよびノーザンハイブリダイゼーションが含まれ、当業者に周知である。
【００５９】
ハイブリダイゼーション反応は様々なストリンジェンシーの条件下で行うことができる。好ましくは、ハイブリダイズさせるそれぞれのポリヌクレオチドは、低いストリンジェンシー条件、より好ましくはストリンジェントな条件、最も好ましくは高度にストリンジェントな条件下でその対応するポリヌクレオチドとハイブリダイズする。ストリンジェンシー条件の例を以下の表１に示す。高度にストリンジェントな条件とは、少なくともたとえば条件Ａ〜Ｆと同等にストリンジェントなものであり、ストリンジェントな条件とは、少なくともたとえば条件Ｇ〜Ｌと同等にストリンジェントであり、低いストリンジェンシー条件とは、少なくともたとえば条件Ｍ〜Ｒと同等にストリンジェントである。
【００６０】
【表１−１】
2012501184.tif 000003
【００６１】
【表１−２】
2012501184.tif 000004
【００６２】
ポリヌクレオチドハイブリダイゼーションのストリンジェンシー条件のさらなる例は、本明細書中に参考として組み込まれているＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第９および１１章、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、セクション２．１０および６．３〜６．４、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９５）に提供されている。
【００６３】
単離したポリヌクレオチドは、開示したポリヌクレオチドの対立遺伝子変異体をコードしている配列を有するＤＮＡを同定および単離するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとして使用し得る。対立遺伝子変異体は、開示したポリヌクレオチドによってコードされているポリペプチドに同一であるまたは有意な類似度を有するポリペプチドをコードしている、開示したポリヌクレオチドの天然に存在する代替形態である。好ましくは、対立遺伝子変異体は、開示したポリヌクレオチドと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。
【００６４】
また、単離したポリヌクレオチドは、開示したポリヌクレオチドに相同的なポリペプチドをコードしている配列を有するＤＮＡを同定および単離するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとしても使用し得る。これらの相同体は、開示したポリペプチドおよびポリヌクレオチドとは異なる種から単離したか、または同じ種内から単離したが、開示したポリヌクレオチドおよびポリペプチドと有意な配列類似度を有するポリヌクレオチドおよびポリペプチドである。特定の実施形態では、ポリヌクレオチド相同体は、開示したポリヌクレオチドと少なくとも５０％、７５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する一方で、ポリペプチド相同体は、開示した抗体／ポリペプチドと少なくとも３０％、４５％、または６０％の同一性を有する。特定の実施形態では、開示したポリヌクレオチドおよびポリペプチドの相同体とは、哺乳動物種から単離したものである。
【００６５】
また、単離したポリヌクレオチドは、抗体を含めたタンパク質を発現する細胞および組織、ならびにそれらが発現される条件を同定するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとしても使用し得る。
【００６６】
ポリペプチドおよび拮抗剤、たとえば抗体は、その機能に実質的な効果を有さない追加の保存的または非必須のアミノ酸置換を有し得ることが理解されよう。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（たとえば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（たとえば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（たとえば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、無極性側鎖（たとえば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ−分枝状側鎖（たとえば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（たとえば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。
【００６７】
ＩＬ−２２のヌクレオチドおよびアミノ酸の配列は米国特許第７，３０７，１６１号に記載されており、以下に提供する。また、それぞれのクローンのヌクレオチド配列は、寄託されたクローンを既知の方法に従って配列決定することによっても決定することができる。本明細書中で使用する「分泌された」タンパク質とは、適切な宿主細胞中で発現された場合に、そのアミノ酸配列中のシグナル配列の結果としての輸送を含めて、膜を横切ってまたは通って輸送されるものである。「分泌された」タンパク質には、それだけには限定されないが、それらが発現される細胞から全体的（たとえば可溶性タンパク質）または部分的に（たとえば受容体）分泌されたタンパク質が含まれる。また、「分泌された」タンパク質には、それだけには限定されないが、小胞体の膜を横切って輸送されるタンパク質が含まれる。
【００６８】
完全長未満のＩＬ−２２タンパク質の任意の形態を本特許請求の範囲の方法および組成物中で使用することができる。ＩＬ−２２断片、たとえば完全長未満のＩＬ−２２タンパク質は、完全長ＩＬ−２２タンパク質をコードしているポリヌクレオチドの対応する断片を宿主細胞中で発現させることによって産生させることができる。上述の改変したポリヌクレオチドは、適切な所望の欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異誘発方法を含めた標準の分子生物学技術によって、または適切なオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって作製し得る。
【００６９】
完全長未満のＩＬ−１Ｆ６タンパク質の任意の形態を本特許請求の範囲の方法および組成物中で使用することができる。ＩＬ−１Ｆ６断片、たとえば完全長未満のＩＬ−１Ｆ６タンパク質は、完全長ＩＬ−Ｆ６タンパク質をコードしているポリヌクレオチドの対応する断片を宿主細胞中で発現させることによって産生させることができる。上述の改変したポリヌクレオチドは、適切な所望の欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異誘発方法を含めた標準の分子生物学技術によって、または適切なオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって作製し得る。
【００７０】
完全長未満のＩＬ−１Ｆ８タンパク質の任意の形態を本特許請求の範囲の方法および組成物中で使用することができる。ＩＬ−１Ｆ８断片、たとえば完全長未満のＩＬ−１Ｆ８タンパク質は、完全長ＩＬ−１Ｆ８タンパク質をコードしているポリヌクレオチドの対応する断片を宿主細胞中で発現させることによって産生させることができる。上述の改変したポリヌクレオチドは、適切な所望の欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異誘発方法を含めた標準の分子生物学技術によって、または適切なオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって作製し得る。
【００７１】
完全長未満のＩＬ−１Ｆ９タンパク質の任意の形態を本特許請求の範囲の方法および組成物中で使用することができる。ＩＬ−１Ｆ９断片、たとえば完全長未満のＩＬ−１Ｆ９タンパク質は、完全長ＩＬ−１Ｆ９タンパク質をコードしているポリヌクレオチドの対応する断片を宿主細胞中で発現させることによって産生させることができる。上述の改変したポリヌクレオチドは、適切な所望の欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異誘発方法を含めた標準の分子生物学技術によって、または適切なオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって作製し得る。
【００７２】
完全長未満のＩＬ−１Ｒｒｐ２タンパク質の任意の形態を本特許請求の範囲の方法および組成物中で使用することができる。ＩＬ−１Ｒｒｐ２断片、たとえば完全長未満のＩＬ−１Ｒｒｐ２タンパク質は、完全長ＩＬ−１Ｒｒｐ２タンパク質をコードしているポリヌクレオチドの対応する断片を宿主細胞中で発現させることによって産生させることができる。上述の改変したポリヌクレオチドは、適切な所望の欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異誘発方法を含めた標準の分子生物学技術によって、または適切なオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって作製し得る。
【００７３】
完全長未満のＩＬ−１７Ａタンパク質の任意の形態を本特許請求の範囲の方法および組成物中で使用することができる。ＩＬ−１７Ａ断片、たとえば完全長未満のＩＬ−１７Ａタンパク質は、完全長ＩＬ−１７Ａタンパク質をコードしているポリヌクレオチドの対応する断片を宿主細胞中で発現させることによって産生させることができる。上述の改変したポリヌクレオチドは、適切な所望の欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異誘発方法を含めた標準の分子生物学技術によって、または適切なオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって作製し得る。
【００７４】
タンパク質の断片は直鎖状であることができ、または、これらは既知の方法を用いて、たとえば、どちらも本明細書中に参考として組み込まれているＨ．Ｕ．Ｓａｒａｇｏｖｉら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０、７７３〜７７８（１９９２）およびＲ．Ｓ．ＭｃＤｏｗｅｌｌら、Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１１４、９２４５〜９２５３（１９９２）に記載のように、環化することができる。そのような断片は、タンパク質結合部位の結合価の増加を含めた多くの目的のために、免疫グロブリンなどの担体分子と融合させることができる。たとえば、タンパク質の断片は、「リンカー」配列を介して免疫グロブリンのＦｃ部分と融合させることができる。タンパク質の二価形態には、融合はＩｇＧ分子のＦｃ部分とであることができる。他の免疫グロブリンアイソタイプを用いてそのような融合体を作製し得る。たとえば、タンパク質−１ｇＭ融合を用いて、タンパク質の１０価形態を作製することができる。
【００７５】
ＩＬ−２２タンパク質およびその断片には、開示したタンパク質の長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％）であり、その開示したタンパク質と少なくとも６０％の配列同一性（断片の長さに沿って、より好ましくは少なくとも７５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を有するアミノ酸の配列長のタンパク質が含まれ、配列同一性は、重複および同一性を最大限にする一方で配列ギャップを最小限にするようにアラインメントした際のタンパク質のアミノ酸配列を比較することによって決定する。特定の実施形態では、タンパク質およびタンパク質断片は、８個以上（より好ましくは２０個以上、最も好ましくは３０個以上）の連続的なアミノ酸を含むセグメントであって、開示したタンパク質のうちの任意のものの任意のそのようなセグメントと少なくとも７５％の配列同一性（より好ましくは少なくとも８５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を共有するセグメントを含有する。
【００７６】
ＩＬ−１Ｆ６タンパク質およびその断片には、開示したタンパク質の長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％）であり、その開示したタンパク質と少なくとも６０％の配列同一性（断片の長さに沿って、より好ましくは少なくとも７５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を有するアミノ酸の配列長のタンパク質が含まれ、配列同一性は、重複および同一性を最大限にする一方で配列ギャップを最小限にするようにアラインメントした際のタンパク質のアミノ酸配列を比較することによって決定する。特定の実施形態では、タンパク質およびタンパク質断片は、８個以上（より好ましくは２０個以上、最も好ましくは３０個以上）の連続的なアミノ酸を含むセグメントであって、開示したタンパク質のうちの任意のものの任意のそのようなセグメントと少なくとも７５％の配列同一性（より好ましくは少なくとも８５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を共有するセグメントを含有する。
【００７７】
ＩＬ−１Ｆ８タンパク質およびその断片には、開示したタンパク質の長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％）であり、その開示したタンパク質と少なくとも６０％の配列同一性（断片の長さに沿って、より好ましくは少なくとも７５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を有するアミノ酸の配列長のタンパク質が含まれ、配列同一性は、重複および同一性を最大限にする一方で配列ギャップを最小限にするようにアラインメントした際のタンパク質のアミノ酸配列を比較することによって決定する。特定の実施形態では、タンパク質およびタンパク質断片は、８個以上（より好ましくは２０個以上、最も好ましくは３０個以上）の連続的なアミノ酸を含むセグメントであって、開示したタンパク質のうちの任意のものの任意のそのようなセグメントと少なくとも７５％の配列同一性（より好ましくは少なくとも８５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を共有するセグメントを含有する。
【００７８】
ＩＬ−１Ｆ９タンパク質およびその断片には、開示したタンパク質の長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％）であり、その開示したタンパク質と少なくとも６０％の配列同一性（断片の長さに沿って、より好ましくは少なくとも７５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を有するアミノ酸の配列長のタンパク質が含まれ、配列同一性は、重複および同一性を最大限にする一方で配列ギャップを最小限にするようにアラインメントした際のタンパク質のアミノ酸配列を比較することによって決定する。特定の実施形態では、タンパク質およびタンパク質断片は、８個以上（より好ましくは２０個以上、最も好ましくは３０個以上）の連続的なアミノ酸を含むセグメントであって、開示したタンパク質のうちの任意のものの任意のそのようなセグメントと少なくとも７５％の配列同一性（より好ましくは少なくとも８５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を共有するセグメントを含有する。
【００７９】
ＩＬ−１Ｒｒｐ２タンパク質およびその断片には、開示したタンパク質の長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％）であり、その開示したタンパク質と少なくとも６０％の配列同一性（断片の長さに沿って、より好ましくは少なくとも７５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を有するアミノ酸の配列長のタンパク質が含まれ、配列同一性は、重複および同一性を最大限にする一方で配列ギャップを最小限にするようにアラインメントした際のタンパク質のアミノ酸配列を比較することによって決定する。特定の実施形態では、タンパク質およびタンパク質断片は、８個以上（より好ましくは２０個以上、最も好ましくは３０個以上）の連続的なアミノ酸を含むセグメントであって、開示したタンパク質のうちの任意のものの任意のそのようなセグメントと少なくとも７５％の配列同一性（より好ましくは少なくとも８５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を共有するセグメントを含有する。
【００８０】
ＩＬ−１７Ａタンパク質およびその断片には、開示したタンパク質の長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％）であり、その開示したタンパク質と少なくとも６０％の配列同一性（断片の長さに沿って、より好ましくは少なくとも７５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を有するアミノ酸の配列長のタンパク質が含まれ、配列同一性は、重複および同一性を最大限にする一方で配列ギャップを最小限にするようにアラインメントした際のタンパク質のアミノ酸配列を比較することによって決定する。特定の実施形態では、タンパク質およびタンパク質断片は、８個以上（より好ましくは２０個以上、最も好ましくは３０個以上）の連続的なアミノ酸を含むセグメントであって、開示したタンパク質のうちの任意のものの任意のそのようなセグメントと少なくとも７５％の配列同一性（より好ましくは少なくとも８５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を共有するセグメントを含有する。
【００８１】
組換えポリヌクレオチドは、タンパク質を組換えによって産生させるために、たとえば、それだけには限定されないがＫａｕｆｍａｎら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９、４４８５〜４４９０（１９９１）に開示されているｐＭＴ２またはｐＥＤ発現ベクターなどの発現制御配列と作動可能に連結させることができる。多くの適切な発現制御配列が当分野で知られている。組換えタンパク質を発現させる一般方法も知られており、Ｒ．Ｋａｕｆｍａｎ（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８５、５３７〜５６６に例示されている。本明細書中で定義する「作動可能に連結」とは、ライゲーションしたポリヌクレオチド／発現制御配列で形質転換させた（形質移入した）宿主細胞によってタンパク質が発現されるように、単離したポリヌクレオチドおよび発現制御配列がベクターまたは細胞内に位置していることを意味する。
【００８２】
本明細書中で使用する用語「ベクター」とは、それが連結している別の核酸を輸送することができる核酸分子をいうことを意図する。ベクターの一種は「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントをその中にライゲーションし得る環状の二本鎖ＤＮＡループをいう。別の種のベクターはウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノム内にライゲーションし得る。特定のベクターは、それらを導入する宿主細胞中で自律複製が可能である（たとえば、細菌複製起点およびエピソーム哺乳動物ベクターを有する細菌ベクター）。他のベクター（たとえば非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞内に導入された際に宿主細胞のゲノム内に組み込まれることができ、それにより宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結している遺伝子の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書中で「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と呼ぶ。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、多くの場合プラスミドの形態である。
【００８３】
本明細書中で使用する用語「調節配列」には、プロモーター、エンハンサーおよび抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を調節する他の発現制御要素（たとえばポリアデニル化シグナル）が含まれる。そのような調節配列は、たとえばＧｏｅｄｄｅｌ、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）に記載されている。当業者には、調節配列の選択を含めた発現ベクターの設計が、形質転換させる宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベル等の要因に依存し得ることを理解されたい。哺乳動物宿主細胞発現の調節配列には、それだけには限定されないが、哺乳動物細胞において高レベルのタンパク質発現を指示するウイルス要素、たとえば、ＦＦ−１ａプロモーターおよびＢＧＨポリＡ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（ＣＭＶプロモーター／エンハンサーなど）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（ＳＶ４０プロモーター／エンハンサーなど）、アデノウイルス（たとえばアデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））ならびにポリオーマに由来するプロモーターおよび／またはエンハンサーが含まれる。ウイルス調節要素のさらなる説明およびその配列については、たとえば、Ｓｔｉｎｓｋｉの米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌらの米国特許第４，５１０，２４５号およびＳｃｈａｆｆｎｅｒらの米国特許第４，９６８，６１５号を参照されたい。
【００８４】
特定の実施形態では、組換え発現ベクターは、宿主細胞中でのベクターの複製を調節する配列（たとえば複製起点）および選択マーカー遺伝子などの付加配列を保有し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが内部に導入された宿主細胞の選択を容易にする（たとえば、すべてＡｘｅｌらの米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号および第５，１７９，０１７号を参照）。たとえば、典型的には、選択マーカー遺伝子は、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を、ベクターが導入された宿主細胞に与える。選択マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅を有するｄｈｆｒ宿主細胞で使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択用）が含まれる。
【００８５】
いくつかの種類の細胞がタンパク質（または融合タンパク質）の発現に適した宿主細胞として作用し得る。機能的ＩＬ−２２タンパク質を発現することができる任意の細胞種を使用し得る。適切な哺乳動物宿主細胞には、たとえば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト腎臓２９３細胞、ヒト表皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の形質転換させた霊長類細胞系、正常な二倍体細胞、一次組織のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養物に由来する細胞株、初代外移植片、ＨｅＬａ細胞、マウスＬ細胞、ＢＨＫ、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫ、Ｒａｔ２、ＢａＦ３、３２Ｄ、ＦＤＣＰ−１、ＰＣ１２、Ｍ１ｘまたはＣ２Ｃ１２細胞が含まれる。
【００８６】
また、特定の実施形態では、タンパク質または融合タンパク質は、単離したポリヌクレオチドを適切な制御配列と、１つまたは複数の昆虫発現ベクター中で作動可能に連結させ、昆虫発現系を用いることによっても産生させ得る。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系の材料および方法は、キット形態で、たとえばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．、米国から市販されており（ＭａｘＢａｃ（登録商標）キット）、そのような方法は、本明細書中に参考として組み込まれているＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ、Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  Ｎｏ．１５５５（１９８７）に記載のように、当分野で周知である。また、ＩＬ−２２タンパク質の可溶形態も、上述の適切な単離したポリヌクレオチドを用いて昆虫細胞中で産生させ得る。
【００８７】
あるいは、タンパク質または融合タンパク質は、酵母などの下等真核生物または細菌などの原核生物中で産生させ得る。適切な酵母株には、出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、分裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、クリベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）株、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、または異種タンパク質を発現することができる任意の酵母株が含まれる。適切な細菌株には、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、または異種タンパク質を発現することができる任意の細菌株が含まれる。
【００８８】
細菌中の発現は組換えタンパク質を取り込んだ封入体の形成をもたらし得る。したがって、活性のあるまたはより活性のある物質を生じるために組換えタンパク質の再折り畳みが必要であり得る。細菌封入体から正しく折り畳まれた異種タンパク質を得るためのいくつかの方法が当分野で知られている。一般に、これらの方法は、タンパク質を封入体から可溶化し、その後、カオトロピック剤を用いてタンパク質を完全に変性させることを含む。システイン残基がタンパク質の一次アミノ酸配列中に存在する場合は、多くの場合、ジスルフィド結合の正しい形成を可能にする環境（酸化還元系）中で再折り畳みを達成することが必要である。再折り畳みの一般方法はＫｏｈｎｏ、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．、１８５：１８７〜１９５（１９９０）に開示されている。ＥＰ０４３３２２５号および同時係属出願の米国特許仮出願第０８／１６３，８７７号は他の適切な方法を記載している。
【００８９】
また、タンパク質または融合タンパク質は、タンパク質または融合タンパク質をコードしているポリヌクレオチド配列を含有する体細胞または生殖細胞によって特徴づけられているトランスジェニック動物の産物、たとえば、トランスジェニックウシ、ヤギ、ブタ、またはヒツジの乳の構成要素として発現させてもよい。
【００９０】
タンパク質または融合タンパク質は、所望のタンパク質を発現させるために必要な培養条件下で、形質転換させた宿主細胞の培養物を成長させることによって調製し得る。その後、生じる発現されたタンパク質を培地または細胞抽出物から精製し得る。タンパク質または融合タンパク質の可溶形態を馴化培地から精製することができる。特定の実施形態では、タンパク質の膜結合形態は、全膜画分を発現細胞から調製し、膜をＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００などの非イオン性洗剤で抽出することによって精製することができる。
【００９１】
特定の実施形態では、タンパク質は当業者に知られている方法を用いて精製することができる。たとえば、それだけには限定されないが、タンパク質は、それだけには限定されないがＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを含めた市販のタンパク質濃縮フィルターを用いて濃縮することができる。濃縮ステップ後、濃縮物をゲル濾過媒体などの精製マトリックスに施用することができる。あるいは、陰イオン交換樹脂、たとえば、ペンダントのジエチルアミノエチル（ＤＥＡＢ）またはポリエテイレンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｅｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ）（ＰＥＩ）基を有するマトリックスまたは基質を用いることができる。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロースまたはタンパク質精製で一般的に用いられる他の種類であることができる。あるいは、陽イオン交換ステップを用いることができる。適切な陽イオン交換剤には、スルホプロピルまたはカルボキシメチル基を含む様々な不溶性マトリックスが含まれる。特定の実施形態では、スルホプロピル基が好ましい（たとえばＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラム）。また、培養上清からのタンパク質または融合タンパク質の精製には、コンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）もしくはＣｉｂａｃｒｏｍ  ｂｌｕｅ  ３ＧＡ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）などの親和性樹脂上の１つもしくは複数のカラムステップ、またはフェニルエーテル、ブチルエーテル、もしくはプロピルエーテルなどの樹脂を用いた疎水性相互作用クロマトグラフィー、またはイムノアフィニティークロマトグラフィーも含まれ得る。最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体、たとえばペンダントのメチルまたは他の脂肪族基を有するシリカゲルを使用した１つまたは複数の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）ステップを用いて、タンパク質をさらに精製することができる。また、タンパク質に対する抗体を含めた親和性カラムも、既知の方法に従った精製に使用することができる。また、前述の精製ステップのうちの一部またはすべてを、様々な組合せでまたは他の既知の方法と共に用いても、実質的に精製された単離した組換えタンパク質を提供することができる。好ましくは、単離したタンパク質は、他の哺乳動物タンパク質を実質的に含まないように精製されている。
【００９２】
また、ポリペプチドは既知の慣用の化学合成によっても生成し得る。合成手段によってタンパク質を構築する方法は当業者に知られている。合成によって構築したタンパク質配列は、一次、二次または三次の構造および／またはコンホメーションの特徴をタンパク質と共有するおかげで、それと共通のタンパク質活性を含めた生物学的特性を保有し得る。したがって、これらは、治療的化合物のスクリーニングおよび抗体の開発における免疫学的プロセスにおいて、天然の精製したタンパク質の生物活性のあるまたは免疫学的な置換物として用いることができる。
【００９３】
抗体は免疫グロブリンとしても知られ、典型的には、それぞれ約２５ｋＤａの２本の軽（Ｌ）鎖およびそれぞれ約５０ｋＤａの２本の重（Ｈ）鎖からなる四量体のグリコシル化されたタンパク質である。ラムダおよびカッパと呼ばれる２種類の軽鎖が抗体中に見つかり得る。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは５個の主要なクラス、すなわちＡ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、およびＭに割り当てることができ、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２へとさらに分類し得る。それぞれの軽鎖にはＮ末端可変（Ｖ）ドメイン（ＶＬ）および定常（Ｃ）ドメイン（ＣＬ）が含まれる。それぞれの重鎖には、Ｎ末端Ｖドメイン（ＶＨ）、３個または４個のＣドメイン（ＣＨ）、および１個のヒンジ領域が含まれる。ＶＨに最も近位のＣＨドメインをＣＨ１と指定する。ＶＨおよびＶＬドメインは、フレームワーク領域と呼ばれる比較的保存された配列の４つの領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）からなり、これらは３つの超可変配列の領域（相補性決定領域、ＣＤＲ）の足場を形成する。ＣＤＲは、抗原との抗体の特異的相互作用を担っている残基のほとんどを含有する。ＣＤＲはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれる。したがって、重鎖上のＣＤＲ構成要素はＨ１、Ｈ２、およびＨ３と呼ばれる一方で、軽鎖上のＣＤＲ構成要素はＬ１、Ｌ２、およびＬ３と呼ばれる。
【００９４】
ＣＤＲ３は、典型的には抗体結合部位内で最大の分子多様性源である。たとえば、Ｈ３は２個のアミノ酸残基と短いか、または２６個のアミノ酸よりも長い場合がある。様々な免疫グロブリンクラスのサブユニット構造および三次元立体配置は当分野で周知である。抗体構造の総説には、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｈａｒｌｏｗら編、１９８８を参照されたい。当業者は、それぞれのサブユニット構造、たとえば、ＣＨ、ＶＨ、ＣＬ、ＶＬ、ＣＤＲ、ＦＲ構造が、活性断片、たとえば、抗原と結合するＶＨ、ＶＬ、またはＣＤＲサブユニットの一部分、すなわち抗原結合断片、または、たとえば、たとえばＦｃ受容体および／もしくは補体と結合するおよび／もしくはそれを活性化するＣＨサブユニットの一部分を含むことを理解されよう。典型的には、ＣＤＲとはＳｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）、Ｋａｂａｔら編に記載のＫａｂａｔ  ＣＤＲをいう。抗原結合部位を特徴づけるための別の標準は、Ｃｈｏｔｈｉａによって記載されているように超可変ループを参照することである。たとえば、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｄ．ら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：７９９〜８１７およびＴｏｍｌｉｎｓｏｎら（１９９５）ＥＭＢＯ  Ｊ．、１４：４６２８〜４６３８を参照されたい。さらに別の標準はＯｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されているＡｂＭ定義である。一般に、たとえば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ．、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ（Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．およびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照されたい。代替方法では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲに関して記載した実施形態は、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループまたはＡｂＭで定義したループに関して同様の記載した関係性を用いて実施することができる。
【００９５】
Ｆａｂ断片（断片抗原結合）は、定常領域間がジスルフィド結合によって共有結合されたＶＨ−ＣＨ１およびＶＬ−ＣＬドメインからなる。Ｆｖ断片はより小さく、非共有結合されたＶＨおよびＶＬドメインからなる。非共有結合したドメインが解離する傾向に打ち勝つために、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を構築することができる。ｓｃＦｖは、（１）ＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端と、または（２）ＶＬのＣ末端をＶＨのＮ末端と連結させる柔軟なポリペプチドを含有する。１５量体（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ペプチドをリンカーとして使用し得るが、他のリンカーが当分野で知られている。
【００９６】
アセンブリおよび体細胞突然変異の後の抗体遺伝子の配列は非常に多様であり、これらの多様な遺伝子は１０１０個の異なる抗体分子をコードしていると推定される（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇｅｎｅｓ、第２版、Ｊｏｎｉｏら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ、１９９５）。
【００９７】
当業者に知られている数々の方法が抗体またはその抗原結合断片を得るために利用可能である。たとえば、抗体は、組換えＤＮＡ方法を用いて産生することができる（米国特許第４，８１６，５６７号）。また、モノクローナル抗体は、既知の方法に従ったハイブリドーマの作製によっても産生し得る（たとえばＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９９参照）。その後、この様式で形成したハイブリドーマを、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および表面プラズモン共鳴（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標））分析などの標準方法を用いてスクリーニングして、指定した抗原と特異的に結合する抗体を産生する１つまたは複数のハイブリドーマを同定する。指定した抗原の任意の形態、たとえば、組換え抗原、天然に存在する形態、任意の変異体またはその断片、およびその抗原ペプチドを、免疫原として使用し得る。
【００９８】
抗体を作製する１つの例示的な方法には、タンパク質発現ライブラリ、たとえばファージまたはリボソームディスプレイライブラリのスクリーニングが含まれる。ファージディスプレイは、たとえば、Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号、Ｓｍｉｔｈ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２８：１３１５〜１３１７、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４〜６２８、Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１〜５９７、ＷＯ９２／１８６１９号、ＷＯ９１／１７２７１号、ＷＯ９２／２０７９１号、ＷＯ９２／１５６７９号、ＷＯ９３／０１２８８号、ＷＯ９２／０１０４７号、ＷＯ９２／０９６９０号、およびＷＯ９０／０２８０９号に記載されている。
【００９９】
ディスプレイライブラリの使用に加えて、指定した抗原を使用して、たとえば、それだけには限定されないが、マウス、ハムスター、ラット、サル、ラクダ、ラマ、サカナ、サメ、ヤギ、ウサギ、およびウシを含めた非ヒト動物を免疫化することができる。特定の実施形態では、非ヒト動物にはヒト免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部が含まれる。たとえば、ヒトＩｇ座位の大きな断片を用いてマウス抗体産生を欠くマウス株を操作することが可能である。ハイブリドーマ技術を用いて、所望の特異性を有する遺伝子に由来する抗原に特異的なモノクローナル抗体を産生および選択し得る。たとえば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）、Ｇｒｅｅｎら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、７：１３〜２１、ＵＳ２００３−００７０１８５号、１９９６年１０月３１日公開のＷＯ９６／３４０９６号、および１９９６年４月２９日出願のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９２８号を参照されたい。
【０１００】
特定の実施形態では、モノクローナル抗体を、たとえば、それだけには限定されないが、マウス、ハムスター、ラット、サル、ラクダ、ラマ、サカナ、サメ、ヤギ、ウサギ、およびウシを含めた非ヒト動物から得て、その後、修飾する、たとえばヒト化または脱免疫化する。特定の実施形態では、キメラ抗体は当分野で知られている組換えＤＮＡ技術を用いて産生し得る。キメラ抗体を作製する様々な手法が記載されている。たとえば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８１：６８５１、１９８５、Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ、３１４：４５２、１９８５、Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号、Ｂｏｓｓら、米国特許第４，８１６，３９７号、Ｔａｎａｇｕｃｈｉら、欧州特許公開ＥＰ１７１４９６号、欧州特許公開第０１７３４９４号、英国特許ＧＢ２１７７０９６Ｂ号を参照されたい。また、ヒト化抗体は、たとえば、ヒトの重鎖および軽鎖遺伝子を発現するが、内在性マウス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができないトランスジェニックマウスを用いても産生し得る。Ｗｉｎｔｅｒは、本明細書中に記載のヒト化抗体を調製するために使用し得る例示的なＣＤＲ移植方法を記載している（米国特許第５，２２５，５３９号）。特定のヒト抗体のＣＤＲのすべてを非ヒトＣＤＲの少なくとも一部分で置き換えてもよく、またはＣＤＲの一部のみを非ヒトＣＤＲで置き換えてもよい。ヒト化抗体と所定の抗原との結合に必要な数のＣＤＲだけしか置き換える必要はない。
【０１０１】
ヒト化抗体またはその断片は、抗原結合に直接関与していないＦｖ可変ドメインの配列をヒトＦｖ可変ドメインからの均等配列で置き換えることによって作製することができる。ヒト化抗体またはその断片を作製するための例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）
Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：１２０２〜１２０７、Ｏｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、４：２１４、ならびにＵＳ５，５８５，０８９号、ＵＳ５，６９３，７６１号、ＵＳ５，６９３，７６２号、ＵＳ５，８５９，２０５号、およびＵＳ６，４０７，２１３号によって提供されている。これらの方法には、重鎖または軽鎖のうちの少なくとも１つからの免疫グロブリンＦｖ可変ドメインのすべてまたは一部をコードしている核酸配列の単離、操作、および発現が含まれる。そのような核酸は、上述のように所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマ、および他の供給源から得られ得る。その後、ヒト化抗体分子をコードしている組換えＤＮＡを適切な発現ベクター内にクローニングすることができる。
【０１０２】
特定の実施形態では、ヒト化抗体は、保存的置換、コンセンサス配列の置換、生殖系列の置換および／または復帰突然変異の導入によって最適化する。そのような変更された免疫グロブリン分子は、当分野で知られているいくつかの技術のうちの任意のものによって作製することができ（たとえば、Ｔｅｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８０：７３０８〜７３１２、１９８３、Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ、４：７２７９、１９８３、Ｏｌｓｓｏｎら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．、９２：３〜１６、１９８２）、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０６１９３号またはＥＰ０２３９４００号の教示）に従って作製し得る。
【０１０３】
また、抗体またはその断片は、ＷＯ９８／５２９７６号およびＷＯ００／３４３１７号に開示されている方法によるヒトＴ細胞エピトープの特異的欠失または「脱免疫化」によっても改変し得る。手短に述べると、抗体の重鎖および軽鎖可変ドメインを、ＭＨＣクラスＩＩと結合するペプチドについて分析することができ、これらのペプチドは潜在的なＴ細胞エピトープを表す（ＷＯ９８／５２９７６号およびＷＯ００／３４３１７号に定義）。ＷＯ９８／５２９７６号およびＷＯ００／３４３１７号に記載されているように、潜在的なＴ細胞エピトープを検出するためには、「ペプチドスレッディング」と呼ばれるコンピュータモデリング手法を適用することができ、さらに、ヒトＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドのデータベースを、ＶＨおよびＶＬ配列中に存在するモチーフについて検索することができる。これらのモチーフは１８種の主要なＭＨＣクラスＩＩ  ＤＲアロタイプのうちの任意のものと結合し、したがって潜在的なＴ細胞エピトープを構成する。検出された潜在的なＴ細胞エピトープは、可変ドメイン中の少数のアミノ酸残基を置換することによって、または、好ましくは単一のアミノ酸置換によって排除することができる。典型的には、保存的置換を行う。多くの場合、排他的ではないが、ヒト生殖系列抗体配列中の位置に共通するアミノ酸を使用し得る。たとえば、ヒト生殖系列配列は、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：７７６〜７９８、Ｃｏｏｋ，Ｇ．Ｐ．ら（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、第１６巻（５）：２３７〜２４２、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｄ．ら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：７９９〜８１７、およびＴｏｍｌｉｎｓｏｎら（１９９５）ＥＭＢＯ  Ｊ．、１４：４６２８〜４６３８に開示されている。Ｖ  ＢＡＳＥディレクトリはヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的なディレクトリを提供する（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ら、ＭＲＣ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫによってコンパイルされている）。これらの配列は、たとえばフレームワーク領域およびＣＤＲのヒト配列源として使用することができる。たとえば米国特許第６，３００，０６４号に記載されているように、コンセンサスヒトフレームワーク領域を使用することもできる。
【０１０４】
特定の実施形態では、抗体は変更された免疫グロブリン定常またはＦｃ領域を含有することができる。たとえば、本明細書中の教示に従って産生した抗体は、エフェクター細胞活性、溶解、補体媒介活性、抗体クリアランス、および抗体半減期などの抗体のいくつかの免疫機能を制御することができる、補体および／またはＦｃ受容体などのエフェクター分子と、より強力にまたはより高い特異性で結合し得る。抗体（たとえばＩｇＧ抗体）のＦｃ領域と結合する典型的なＦｃ受容体には、それだけには限定されないが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩならびにＦｃＲｎサブクラスの受容体が含まれ、これにはこれらの受容体の対立遺伝子変異体および選択的スプライシングされた形態が含まれる。Ｆｃ受容体は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、９：４５７〜９２、１９９１、Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４：２５〜３４、１９９４、およびｄｅ  Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．、１２６：３３０〜４１、１９９５）に総説されている。
【０１０５】
さらなる抗体産生技術については、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｈａｒｌｏｗら編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８を参照されたい。
【０１０６】
二重特異性または二官能性抗体とは、２つの異なる重鎖／軽鎖の対および２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の連結を含めた様々な方法によって産生することができる。たとえば、ＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉおよびＬａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７９：３１５〜３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８、１５４７〜１５５３（１９９２）を参照されたい。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、免疫グロブリン定常領域を介して第２の結合ドメインポリペプチドと連結したＦａｂ’断片などの第１の結合ドメインポリペプチドを含む。
【０１０７】
また、本発明の抗体は単一ドメイン抗体であることもできる。単一ドメイン抗体は、その相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である抗体を含むことができる。例には、それだけには限定されないが、重鎖抗体、天然に軽鎖を欠く抗体、慣用の４本鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作した抗体および抗体に由来するもの以外の単一ドメイン足場が含まれる。単一ドメイン抗体は、当分野の任意のもの、または任意の将来の単一ドメイン抗体であり得る。単一ドメイン抗体は、それだけには限定されないが、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、サカナ、サメ、ヤギ、ウサギ、およびウシを含めた任意の種に由来し得る。本発明の一態様では、単一ドメイン抗体は、たとえば、サメの血清中に見つかる新規抗原受容体（ＮＡＲ）として知られる免疫グロブリンアイソタイプに由来するものなど、サカナ中に見つかる免疫グロブリンの可変領域に由来することができる。ＮＡＲの可変領域に由来する単一ドメイン抗体（「ＩｇＮＡＲ」）を産生する方法は、ＷＯ０３／０１４１６１号およびＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．、１４：２９０１〜２９０９に記載されている。
【０１０８】
本発明の別の態様によれば、単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠く重鎖抗体として知られる天然に存在する単一ドメイン抗体である。そのような単一ドメイン抗体は、たとえばＷＯ９４０４６７８号に開示されている。明確にするために、天然に軽鎖を欠く重鎖抗体に由来するこの可変ドメインは、４本鎖の免疫グロブリンの慣用のＶＨと区別するために本明細書中ではＶＨＨまたはナノボディーとして知られている。そのようなＶＨＨ分子は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）の種、たとえば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカおよびグアナコ中で産生させた抗体に由来することができる。ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）以外の他の種に天然に軽鎖を欠く重鎖抗体を産生させてもよく、そのようなＶＨＨは本発明の範囲内にある。
【０１０９】
また、本発明は、免疫グロブリンヒンジまたはヒンジに作用する領域のポリペプチドと融合または他の様式で接続している結合ドメインポリペプチドが含まれており、これがＣＨ１以外の免疫グロブリン重鎖、たとえばＩｇＧおよびＩｇＡのＣＨ２およびＣＨ３領域、またはＩｇＥのＣＨ３およびＣＨ４領域からの１つまたは複数のネイティブまたは操作した定常領域を含む領域と融合または他の様式で接続している、結合ドメイン−免疫グロブリンの融合タンパク質の使用も企図する（より完全な説明には、たとえば、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ，Ｊ．らのＵ．Ｓ．２００５／０１３６０４９号を参照）。さらに、結合ドメイン−免疫グロブリンの融合タンパク質には、ヒンジ領域ポリペプチドと融合または他の様式で接続している、ネイティブもしくは操作した免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域ポリペプチド（またはＩｇＥから全体的もしくは部分的に由来する構築体の場合はＣＨ３）、およびＣＨ２定常領域ポリペプチド（またはＩｇＥから全体的もしくは部分的に由来する構築体の場合はＣＨ３）と融合または他の様式で接続している、ネイティブもしくは操作した免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域ポリペプチド（またはＩｇＥから全体的もしくは部分的に由来する構築体の場合はＣＨ４）を含む領域が含まれ得る。典型的には、そのような結合ドメイン−免疫グロブリンの融合タンパク質は、抗体依存性細胞性細胞傷害、補体の固定、および／または標的、たとえば標的抗原との結合からなる群から選択される少なくとも１つの免疫学的活性が可能である。
【０１１０】
特定の実施形態では、治療的タンパク質、すなわち、それが作用する身体中の領域またはそれが中間体を介して遠隔作用する身体の領域に対して生物学的効果を有するタンパク質またはペプチド、ならびに、これらの治療的タンパク質を設計および作製する方法を提供する。本発明の治療的タンパク質にはペプチド模倣体が含まれ得る。模倣体とは、タンパク質二次構造の要素を模倣するペプチド含有分子である。たとえば、本明細書中に参考として組み込まれているＪｏｈｎｓｏｎら、「Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｕｒｎ  Ｍｉｍｅｔｉｃｓ」、ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ  ＡＮＤ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ、Ｐｅｚｚｕｔｏら編、Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）を参照されたい。ペプチド模倣体の使用の裏にある根本の原理は、タンパク質のペプチド主鎖が、抗体と抗原のものなどの分子相互作用を促進するような様式でアミノ酸側鎖を配向するために主に存在することである。ペプチド模倣体は天然分子に類似の分子相互作用を可能にすると予測される。本発明によって提供される情報と併せて、これらの原理を用いて本明細書中に開示した標的化ペプチドの天然特性の多くを有する第二世代分子を工作し得る。また、これらの第二世代分子を変更して、潜在的に改良された特徴を提供することができる。本発明を用いて、タンパク質および小分子治療剤はどちらも、たとえば、所望の位置、すなわち、結合複合体に重要であることが実証されているアミノ酸位置で結合するように具体的に設計し、したがってサイトカインおよびその受容体または受容体複合体に関連する活性を有効に低下または阻害することによって、所望のサイトカイン活性を中断するように設計することができる。
【０１１１】
治療的タンパク質の他の実施形態には融合タンパク質が含まれる。これらの分子は、一般に、標的化ペプチド、たとえばＩＬ−２２または抗ＩＬ−２２抗体の全体または実質的な一部分が、ＮまたはＣ末端で、第２のポリペプチドまたはタンパク質の全体または一部分と連結している。たとえば、融合には、異種宿主中でのタンパク質の組換え発現を可能にするために他の種からのリーダー配列を用い得る。別の有用な融合には、融合タンパク質の精製を容易にするために、抗体エピトープなどの免疫学的に活性のあるドメインを付加することが含まれる。融合接合部またはその付近に切断部位を含めることで、精製後の外来ポリペプチドの除去が容易となる。他の有用な融合には、酵素の活性部位、グリコシル化ドメイン、細胞標的化シグナルまたは膜貫通領域などの機能的ドメインの連結が含まれる。融合タンパク質内に取り込ませ得るタンパク質またはペプチドの例には、細胞分裂抑制タンパク質、細胞破壊タンパク質、アポトーシス促進剤、抗血管形成剤、ホルモン、サイトカイン、成長因子、ペプチド薬、抗体、抗体のＦａｂ断片、抗原、受容体タンパク質、酵素、レクチン、ＭＨＣタンパク質、細胞接着タンパク質および結合タンパク質が含まれる。融合タンパク質を作製する方法は当業者に周知である。そのようなタンパク質は、たとえば、二官能性架橋結合試薬を用いた化学付着によって、完全融合タンパク質の新規合成によって、または標的化ペプチドをコードしているＤＮＡ配列を第２のペプチドもしくはタンパク質をコードしているＤＮＡ配列と付着させ、次いでインタクトな融合タンパク質を発現させることによって、産生することができる。
【０１１２】
特定の実施形態では、標的化ペプチド、たとえばＩＬ−２２または抗ＩＬ−２２抗体を、２つの定常領域ドメインおよびヒンジ領域を含有するが可変領域を欠くＦｃ断片などの免疫グロブリン重鎖定常領域と融合させる（本明細書中に参考として組み込まれている米国特許第６，０１８，０２６号および第５，７５０，３７５号参照）。Ｆｃ領域は天然に存在するＦｃ領域であってよく、または治療の質、循環時間、低下した凝集等の特定の性質を改良するために変更してもよい。Ｆｃ領域と融合したペプチドおよびタンパク質は、典型的には、融合していない対応物よりも長いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を示す。また、Ｆｃ領域との融合により融合ポリペプチドの二量体化／多量体化が可能となる。
【０１１３】
特定の実施形態では、突然変異誘発を用いて、１つまたは複数の生殖系列配列により類似した抗体を作製する。これは、体性突然変異誘発または誤りがちなＰＣＲによって突然変異を抗体のフレームワーク領域内に導入する場合に望ましい場合がある。ＶＨおよびＶＬドメインの生殖系列配列は、ＶＢＡＳＥデータベース（ＭＲＣ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、英国）に対してアミノ酸および核酸配列アラインメントを行うことによって同定することができる。ＶＢＡＳＥとは、ＧｅｎｂａｎｋおよびＥＭＢＬデータライブラリの最新リリースのものを含めた、１，０００個を超える公開された配列からコンパイルされたすべてのヒト生殖系列可変領域配列の包括的なディレクトリである。一部の実施形態では、ｓｃＦｖのＦＲ領域をＶＢＡＳＥデータベース中の最も近い一致に従って突然変異し、ＣＤＲ部分は未変化のまま保たれる。
【０１１４】
組換えＤＮＡ方法を用いて、開示したＣＤＲ配列を、それぞれのＣＤＲを欠くＶＨまたはＶＬドメインのレパートリー内に導入し得る（Ｍａｒｋｓら（ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９２）１０：７７９〜７８３）。たとえば、可変ドメインの５’末端に隣接するプライマーおよび第３のＦＲに対するプライマーを用いて、ＣＤＲ３を欠く可変ドメイン配列のレパートリーを作製することができる。このレパートリーは開示した抗体のＣＤＲ３と組み合わせることができる。類似の技術を用いて、開示したＣＤＲ配列の一部分を他の抗体からのＣＤＲ配列の一部分とシャフリングして、ＩＬ−２２と結合する抗原結合断片のレパートリーを提供し得る。いずれのレパートリーも、ＩＬ−２２と結合する適切な抗原結合断片が選択できるように、ファージディスプレイなどの宿主系中で発現させることができる（ＷＯ９２／０１０４７号およびその対応する米国特許第５，９６９，１０８号に記載）。
【０１１５】
さらなる代替方法では、開示したＶＨまたはＶＬ配列のランダム突然変異誘発を使用して、依然としてＩＬ−２２と結合することができる変異体ＶＨまたはＶＬドメインを作製する。誤りがちなＰＣＲを用いた技術はＧｒａｍら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９２）８９：３５７６〜３５８０）によって記載されている。
【０１１６】
別の方法では、開示したＶＨまたはＶＬ配列の直接突然変異誘発を使用する。そのような技術はＢａｒｂａｓら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９４）９１：３８０９〜３８１３）およびＳｃｈｉｅｒら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９６）２６３：５５１〜５６７）によって開示されている。
【０１１７】
可変ドメインの一部分は、実質的に本明細書中に記載の少なくとも１つのＣＤＲ領域、および、場合により、本明細書中に記載のＶＨまたはＶＬドメインからの介在フレームワーク領域を含む。この部分には、ＦＲ１のＣ末端の半分および／またはＦＲ４のＮ末端の半分が含まれ得る。可変ドメインのＮ末端またはＣ末端での追加の残基は、天然に存在する抗体中で見つかるものと同じ残基でない可能性がある。たとえば、多くの場合、組換えＤＮＡ技術による抗体の構築では、ＮまたはＣ末端残基をそのリンカーの使用から導入する。一部のリンカーは、可変ドメインを他の可変ドメイン（たとえばダイアボディー）、定常ドメイン、またはタンパク質標識と結合するために使用し得る。
【０１１８】
抗体は、そのグリコシル化を変更するように改変することができる。すなわち、少なくとも１つの炭水化物部分を抗体から欠失させるまたはそれに付加することができる。グリコシル化部位の欠失または付加は、当分野で周知のグリコシル化コンセンサス部位を欠失させるまたはそれを生じるようにアミノ酸配列を変化させることによって実施することができる。炭水化物部分を付加する別の手段は、グリコシドの、抗体のアミノ酸残基への化学的または酵素的カップリングである（ＷＯ８７／０５３３０号およびＡｐｌｉｎら（１９８１）ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２２：２５９〜３０６参照）。また、炭水化物部分の除去は化学的または酵素的に実施することもできる（Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎら（１９８７）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、２５９：５２、Ｅｄｇｅら（１９８１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１１８：１３１、Ｔｈｏｔａｋｕｒａら（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１３８：３５０参照）。
【０１１９】
抗体定常領域を変更する方法は当分野で知られている。変更された機能（たとえば、細胞上のＦｃＲまたは補体のＣ１構成要素などのエフェクターリガンドに対する変更された親和性）を有する抗体は、抗体の定常部分中の少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基で置き換えることによって産生することができる（たとえば、ＥＰ３８８，１５１  Ａ１号、ＵＳ５，６２４，８２１号およびＵＳ５，６４８，２６０号参照）。同様の種類の変更を記載することができ、マウスまたは他の種に適用した場合、抗体は同様の機能が低下または排除される。
【０１２０】
たとえば、ＦｃＲ（たとえばＦｃガンマＲ１）またはＣ１ｑに対する抗体（たとえばヒトＩｇＧなどのＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性を変更することが可能である。親和性は、少なくとも１つの指定した残基を、その側鎖上に適切な機能性を有する少なくとも１つの残基で置き換えることによって、あるいは、グルタミン酸もしくはアスパラギン酸などの荷電官能基、または場合によってはフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンもしくはアラニンなどの芳香族非極性残基を導入することによって、変更し得る（たとえばＵＳ５，６２４，８２１号参照）。
【０１２１】
別の例では、ＩｇＧ定常領域中の残基２９７（アスパラギン）をアラニンで置き換えることによりエフェクター細胞の動員が有意に阻害される一方で、Ｃ１ｑに対する親和性はわずかにしか低下しない（約３倍弱い）（たとえばＵＳ５，６２４，８２１号参照）。重鎖中の残基の番号付けはＥＵインデックスのものである（Ｋａｂａｔら、１９９１、上記を参照）。この変更はグリコシル化部位を破壊し、炭水化物の存在がＦｃ受容体結合に必要であると考えられている。グリコシル化部位を破壊する、この部位での任意の他の置換が、溶解活性の同様の減少を引き起こすと考えられている。他のアミノ酸置換、たとえば、残基３１８（Ｇｌｕ）、３２０（Ｌｙｓ）および３２２（Ｌｙｓ）のうちの任意のものをＡｌａに変化させることも、Ｃ１ｑとＩｇＧ抗体のＦｃ領域との結合を消滅させることが知られている（たとえばＵＳ５，６２４，８２１号参照）。
【０１２２】
Ｆｃ受容体との相互作用が低下した、改変した抗体を産生することが可能である。たとえば、ヒトＦｃガンマＲ１受容体と結合するヒトＩｇＧ３では、Ｌｅｕ２３５をＧｌｕに変化させることにより、受容体とのその相互作用が破壊されることが示された。また、抗体のヒンジ連結領域中に隣接するまたは近い部位の突然変異（たとえば、残基２３４、２３６または２３７をＡｌａで置き換えること）を用いても、ＦｃガンマＲ１受容体に対する抗体親和性に影響を与えることができる。重鎖中の残基の番号付けはＥＵインデックスに基づく（Ｋａｂａｔら、１９９１、上記を参照）。
【０１２３】
たとえばＣＨ２ドメインのＮ末端領域中の少なくとも１つのアミノ酸を変更することによって、抗体の溶解活性を変更するためのさらなる方法は、ＭｏｒｇａｎらのＷＯ９４／２９３５１号およびＵＳ５，６２４，８２１号に記載されている。
【０１２４】
特定の実施形態では、抗体を検出可能または機能的な標識でタグ付けし得る。これらの標識には、放射標識（たとえば１３１Ｉまたは９９Ｔｃ）、酵素標識（たとえばセイヨウワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）、および他の化学部分（たとえばビオチン）が含まれる。
【０１２５】
特定の実施形態では、ＩＬ−２２拮抗剤は、哺乳動物（たとえばヒトまたはマウス）ＩＬ−２２と結合する抗体またはその断片（たとえばその抗原結合断片）である。特定の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはその断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片）は、モノクローナルまたは単一特異性の抗体である。また、抗体またはその断片は、ヒトＩＬ−２２に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体であることもできる。
【０１２６】
特定の実施形態では、ＩＬ−１Ｆ６拮抗剤は、哺乳動物（たとえばヒトまたはマウス）ＩＬ−１Ｆ６と結合する抗体またはその断片（たとえばその抗原結合断片）である。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１Ｆ６抗体またはその断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片）は、モノクローナルまたは単一特異性の抗体である。また、抗体またはその断片は、ヒトＩＬ−１Ｆ６に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体であることもできる。
【０１２７】
特定の実施形態では、ＩＬ−１Ｆ８拮抗剤は、哺乳動物（たとえばヒトまたはマウス）ＩＬ−１Ｆ８と結合する抗体またはその断片（たとえばその抗原結合断片）である。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１Ｆ８抗体またはその断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片）は、モノクローナルまたは単一特異性の抗体である。また、抗体またはその断片は、ヒトＩＬ−１Ｆ８に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体であることもできる。
【０１２８】
特定の実施形態では、ＩＬ−１Ｆ９拮抗剤は、哺乳動物（たとえばヒトまたはマウス）ＩＬ−１Ｆ９と結合する抗体またはその断片（たとえばその抗原結合断片）である。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１Ｆ９抗体またはその断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片）は、モノクローナルまたは単一特異性の抗体である。また、抗体またはその断片は、ヒトＩＬ−１Ｆ９に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体であることもできる。
【０１２９】
特定の実施形態では、ＩＬ−１Ｒｒｐ２拮抗剤は、哺乳動物（たとえばヒトまたはマウス）ＩＬ−１Ｒｒｐ２と結合する抗体またはその断片（たとえばその抗原結合断片）である。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１Ｒｒｐ２抗体またはその断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片）は、モノクローナルまたは単一特異性の抗体である。また、抗体またはその断片は、ヒトＩＬ−１Ｒｒｐ２に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体であることもできる。
【０１３０】
特定の実施形態では、ＩＬ−１７Ａ拮抗剤は、哺乳動物（たとえばヒトまたはマウス）ＩＬ−１７Ａと結合する抗体またはその断片（たとえばその抗原結合断片）である。特定の実施形態では、抗ＩＬ−１７Ａ抗体またはその断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片）は、モノクローナルまたは単一特異性の抗体である。また、抗体またはその断片は、ヒトＩＬ−１７Ａに対するヒト、ヒト化、キメラ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体であることもできる。
【０１３１】
特定の実施形態では、ＴＮＦα拮抗剤は、哺乳動物（たとえばヒトまたはマウス）ＴＮＦαと結合する抗体またはその断片（たとえばその抗原結合断片）である。特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗体またはその断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片）は、モノクローナルまたは単一特異性の抗体である。また、抗体またはその断片は、ヒトＴＮＦαに対するヒト、ヒト化、キメラ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体であることもできる。
【０１３２】
ＴＮＦα拮抗剤の例には、ＴＮＦ（たとえばヒトＴＮＦα）に対する抗体、たとえば、Ｄ２Ｅ７（ヒト抗ＴＮＦα抗体、Ｕ．Ｓ．６，２５８，５６２号、Ｈｕｍｉｒａ（商標）、ＢＡＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、および抗ＴＮＦ抗体断片（たとえばＣＰＤ８７０）が含まれる。他の例には、可溶性ＴＮＦ受容体（たとえばヒトｐ５５またはｐ７５）断片および誘導体、たとえば、ｐ５５ｋｄのＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧの融合タンパク質、Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ（商標））および７５ｋｄのＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧの融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）、Ｉｍｍｕｎｅｘ、たとえば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）第３７巻、Ｓ２９５、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）第４４巻、２３５Ａを参照）が含まれる。さらなる例には、酵素拮抗剤（たとえば、ＴＮＦα変換酵素阻害剤（ＴＡＣＥ）、たとえばアルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体（ＷＯ０１／５５１１２号）またはＮ−ヒドロキシホルムアルデヒド阻害剤（ＧＷ３３３３、−００５、もしくは−０２２））およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質、たとえば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）第３９巻、第９号（補遺）、Ｓ２８４、およびＡｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９５）第２６８巻、ページ３７〜４２を参照）が含まれる。ＴＮＦ拮抗剤は、可溶性ＴＮＦ受容体（たとえばヒトｐ５５またはｐ７５）断片および誘導体、たとえば７５ｋｄのＴＮＦＲ−ＩｇＧ、およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤であり得る。
【０１３３】
抗ＩＬ−２２抗体の産生は、米国公開特許出願第２００５−００４２２２０号および第２００７−０２４３５８９号に、より詳細に記載されている。ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの結合を妨害する抗ＩＬ２２抗体の１つの非限定的な例は、米国公開特許出願第２００５−００４２２２０号中で「Ａｂ−０４」または「ＩＬ２２−０４」と呼ばれる。Ａｂ−０４（本明細書中でラットモノクローナル抗体「Ｐ３／２」とも呼ぶ）は、ヒトＩＬ−２２と結合してヒトＩＬ−２２活性を中和する。Ａｂ−０４を産生するハイブリドーマ細胞系は２００３年６月５日にＡＴＣＣに寄託されており、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５２５５が割り当てられている。ＩＬ−２２とＩＬ−１０Ｒ２との結合を妨害する抗ＩＬ２２抗体の別の非限定的な例は「Ａｂ−０２」または「ＩＬ２２−０２」である。Ａｂ−０２（本明細書中でラットモノクローナル抗体「Ｐ３／３」とも呼ぶ）は、マウスおよびヒトのＩＬ−２２と結合してマウスおよびヒトのＩＬ−２２活性を中和する。Ａｂ−０２を産生するハイブリドーマ細胞系は２００３年６月５日にＡＴＣＣに寄託されており、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５２５４が割り当てられている。ＩＬ−２２活性を低下、阻害または拮抗するＩＬ−２２抗体のさらなる例は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１、および３６８Ｄ０４として同定された生殖系列抗体を記載している米国公開特許出願第２００７−０２４３５８９号中に見つかる。
【０１３４】
また、抗体は、生体試料中の、それだけには限定されないが、ＩＬ−２２、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９、およびＩＬ−１７Ａなどの１つまたは複数の分子の存在を検出するためにも使用し得る。これらのタンパク質の存在またはレベルを医学的状態と相関させることによって、当業者は関連する病状を診断することができる。たとえば、ＩＬ−２２は炎症性サイトカイン（ＩＬ−１およびＴＮＦαなど）によって引き起こされたものに関連する変化を誘導し、ＩＬ−２２の阻害剤は関節リウマチの症状を寛解させる（ＷＯ２００５／０００８９７  Ａ２号）。抗体によって診断し得る例示的な病状には、それだけには限定されないが、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、ループス、炎症性腸疾患、膵炎、および移植片拒絶が含まれる。
【０１３５】
本出願中に記載されている特定の方法では、薬学的使用および患者への投与に適した組成物を利用する。これらの組成物は、薬学的賦形剤と、１つもしくは複数の抗体、１つもしくは複数の可溶性受容体、１つもしくは複数の結合タンパク質、またはこれらの抗体、可溶性受容体、および／もしくは結合タンパク質の組合せとを含む。本明細書中で使用する「薬学的賦形剤」には、薬学的投与に適合性のある溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等が含まれる。薬学的に活性のある物質のためのこれらの薬剤の使用は当分野で周知である。また、組成物は、補足的、追加的、または増強的な治療的機能を提供する他の活性化合物も含有し得る。また、医薬組成物は、投与の指示書と共に容器、パック、または分注器に含め得る。
【０１３６】
医薬組成物は、その意図する投与経路と適合性があるように配合することができる。投与を達成する方法は当業者に知られている。局所もしくは経口投与し得る、または粘膜を横切った透過が可能であり得る組成物を作製することも可能であり得る。たとえば、投与は静脈内、腹膜内、筋肉内、腔内、皮下、皮膚、または経皮であり得る。
【０１３７】
皮内または皮下の施用に使用する液剤または懸濁液には、典型的には以下の構成要素のうちの少なくとも１つが含まれる：水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの無菌的希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗細菌剤、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート化剤、アセテート、シトレート、またはホスフェートなどの緩衝液、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性剤。ｐＨは酸または塩基で調節することができる。そのような調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、または複数用量バイアル中に封入し得る。
【０１３８】
静脈内投与に使用する液剤または懸濁液には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）、エタノール、またはポリオールなどの担体が含まれる。すべての場合で、組成物は無菌的かつシリンジ通過容易性のために流体でなければならない。多くの場合、適切な流動性はレシチンまたは界面活性剤を用いて得ることができる。また、組成物は製造および保管の条件下で安定でなければならない。微生物の防止は、抗細菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等を用いて達成することができる。多くの場合、等張化剤（糖）、ポリアルコール（マンニトールおよびソルビトール）、または塩化ナトリウムを組成物中に含め得る。組成物の持続吸収は、吸収を遅延させる薬剤、たとえばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを加えることによって実施することができる。
【０１３９】
経口組成物には不活性希釈剤または食用担体が含まれる。組成物はゼラチン中に封入するか、または錠剤へと圧縮することができる。経口投与目的のためには、抗体を賦形剤と共に取り込み、錠剤、トローチ、またはカプセル中に入れることができる。薬学的に適合性のある結合剤またはアジュバント物質を組成物中に含めることができる。錠剤、トローチ、およびカプセルは、（１）微結晶セルロース、トラガカントガムもしくはゼラチンなどの結合剤、（２）デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、（３）アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、もしくはコーンスターチなどの崩壊剤、（４）ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、（５）コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤、または（６）甘味剤もしくは香味料を含有し得る。
【０１４０】
また、医薬組成物は、経粘膜または経皮の経路によって投与してもよい。たとえば、Ｆｃ部分を含む抗体は、腸管、口、または肺の粘膜を横切ることができ得る（Ｆｃ受容体を介して）。経粘膜投与は、ロゼンジ、鼻腔スプレー、吸入器、または坐薬を使用することによって実施することができる。また、経皮投与は、当分野で知られている軟膏、膏薬、ゲル、またはクリームを含有する組成物を使用することによっても実施することができる。経粘膜または経皮投与には、浸透する障壁に適した浸透剤を使用する。吸入による投与には、抗体は、噴霧剤（たとえば液体もしくは気体）を含有する加圧した容器もしくは分注器または噴霧器からのエアロゾルスプレー中で送達する。
【０１４１】
特定の実施形態では、医薬組成物は、身体からの迅速な排除に対して活性構成要素を保護する担体を用いて調製する。多くの場合は生分解性ポリマー（たとえば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸）を使用する。そのような配合物を調製する方法は当業者に知られている。リポソーム懸濁液も薬学的に許容できる担体として使用することができる。リポソームは当分野で知られている確立された方法に従って調製することができる（米国特許第４，５２２，８１１号）。
【０１４２】
医薬組成物は記載した治療上有効な量で投与する。治療上有効な量は対象の年齢、状態、性別、および病状の重篤度に応じて変動し得る。適切な用量は臨床徴候に基づいて医師が決定し得る。組成物は、組成物の活性構成要素の循環レベルを最も長い時間の間最大限にするために、ボーラス用量で与え得る。また、持続注入をボーラス用量の後に使用してもよい。
【０１４３】
本明細書中で使用する用語「対象」には、ヒトおよび非ヒト動物が含まれることを意図する。本発明の用語「非ヒト動物」には、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類等のすべての脊椎動物が含まれる。
【０１４４】
対象に投与することができる用量範囲の例は、１μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、および２０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ（またはそれより高い）から選択される。これらの用量は、用量、投与方法、処置する障害または症状（複数可）、および個々の対象の特徴に応じて、１日１回、週に１回、週に２回、月に１回、またはより低い頻度、たとえば年に２回投与し得る。また、用量は持続注入を介して（ポンプによってなど）投与することもできる。また、投与用量は投与経路にも依存し得る。たとえば、皮下投与は静脈内投与よりも高い用量を必要とし得る。
【０１４５】
特定の状況では、投与の容易性および用量の均一性のために組成物を単位剤形で配合することが有利であり得る。本明細書中で使用する単位剤形とは、患者に適した物理的に別々の単位をいう。それぞれの単位用量は、担体と共に、治療効果が生じるように計算された所定の量の抗体を含有する。単位用量は抗体の特徴および達成する特定の治療効果に依存する。
【０１４６】
医薬組成物の毒性および治療上の有効性は、細胞培養物または実験動物における標準の薬学的手順、たとえば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）を決定することによって、決定することができる。毒性および治療効果の間の用量比は治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表現することができる。
【０１４７】
細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータを用いてヒトにおける用量範囲を処方することができる。これらの化合物の用量は、毒性がわずかまたはまったくないＥＤ５０を含めた、血液中の循環抗体濃度の範囲内にあり得る。用量は、用いる用量組成物形態および投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。治療上有効な用量は、細胞培養アッセイを用いて最初に推定することができる。用量は動物モデルにおいてＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量阻害をもたらす薬剤濃度）を含めた循環血漿濃度範囲が達成されるように処方し得る。任意の特定の用量の効果は適切なバイオアッセイによって監視することができる。適切なバイオアッセイの例には、ＤＮＡ複製アッセイ、転写に基づいたアッセイ、受容体結合アッセイ、および他の免疫学的アッセイが含まれる。
【０１４８】
また、上述の拮抗剤、抗体および結合断片は、生体試料中のＩＬ−２２、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９、およびＩＬ−１Ｒｒｐ２のうちの少なくとも１つの存在を検出するためにも使用し得る。これらのサイトカインおよび受容体は、細胞外または細胞内のどちらかで、本出願中に開示した方法を含めた当分野で知られている方法を用いて検出することができる。これらのタンパク質の存在またはレベルを病状と相関させることによって、当業者は関連する病状を診断することができる。たとえば、ＩＬ−２２は炎症性サイトカイン（ＩＬ−１およびＴＮＦαなど）によって引き起こされるものに関連する変化を誘導し、ＩＬ−２２の阻害剤は関節リウマチの動物モデルの症状を寛解させる（ＷＯ０２／０６８４７６  Ａ２号）。
【０１４９】
抗体に基づいた検出方法は当分野で周知であり、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、免疫ブロット、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫蛍光、免疫沈降、および他の関連技術が含まれる。抗体を診断キット中で提供し得る。キットは、他の構成要素、パッケージング、指示書、またはタンパク質の検出およびキットの使用を支援する他の物質を含有し得る。
【０１５０】
抗体は、リガンド基（たとえばビオチン）、フルオロフォアおよび発色団、放射性同位元素、高電子密度試薬、または酵素を含めた検出可能なマーカーで修飾し得る。酵素はその活性によって検出する。たとえば、セイヨウワサビペルオキシダーゼは、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を分光光度計で定量可能な青色色素へと変換するその能力によって検出する。他の適切な結合パートナーには、ビオチンとアビジン、ＩｇＧとタンパク質Ａ、および当分野で知られている他の受容体−リガンドの対が含まれる。
【０１５１】
また、抗体は、とりわけ、別の抗体（たとえば二重特異性もしくは多特異性抗体）、毒素、放射性同位元素、細胞毒性剤または細胞分裂抑制剤などの少なくとも１つの他の分子実体と、機能的に連結させることもできる（たとえば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有会合または他の方法によって）。他の置換および可能性は当業者に明らかであり、それらは本発明の範囲内にある均等物であるとみなされる。
【０１５２】
特定の実施形態では、検出方法がｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法である場合、これには、（１）試料または対照試料を、第１の標的（たとえばそれだけには限定されないがＩＬ−１Ｆ６）と結合する第１の試薬、および第２の標的（たとえばそれだけには限定されないがＩＬ−１Ｆ８）と結合する第２の試薬と接触させることと、（２）第１および第２の試薬と試料または対照試料との間の複合体の形成を検出することであって、対照試料と比較した試料中の複合体の形成の統計的に有意な変化が、試料中のサイトカインの存在の指標であることとが含まれる。一実施形態では、この方法には、細胞を含む試料を、細胞内でＩＬ−２２、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９、ＩＬ−１Ｒｒｐ２、またはＩＬ−１７Ａのうちの１つから選択される標的と結合する、蛍光抗体などの標識した試薬と接触させることが含まれる。細胞内で検出された試薬の量は、細胞内で発現された細胞内標的の量に正比例する。特定の実施形態では、試料は患者の血液試料である。発現レベルを測定することができるさらなる試料には、それだけには限定されないが、滑液、口腔スワブ、皮膚、生検用に取り出された物質、たとえば、それだけには限定されないが、生検用に取り出された乾癬患者の皮膚、精液、毛髪、骨、尿、鼻水、および痰が含まれ、これには、それだけには限定されないが、気管支鏡検査中に気管支洗浄液から得られた体液が含まれる。
【０１５３】
また、検出方法はｉｎ  ｖｉｖｏ検出方法（たとえば対象におけるｉｎ  ｖｉｖｏイメージング）であることもできる。この方法は、障害、たとえば本明細書中に記載の障害を診断するために使用することができる。この方法には、（１）第１の標的（たとえばそれだけには限定されないがＩＬ−１Ｆ６）と結合する第１の試薬および第２の標的（たとえばそれだけには限定されないがＩＬ−１Ｆ８）と結合する第２の試薬を、対象または対照対象に、第１および第２の試薬とその標的との結合を可能にする条件下で投与することと、（２）第１および第２の試薬とその標的との間の複合体の形成を検出することであって、対照、たとえば対照対象と比較した対象中の複合体の形成の統計的に有意な変化が、サイトカインの存在の指標であることとが含まれる。
【０１５４】
特定の実施形態では、検出方法は、ｍＲＮＡレベルを測定するｉｎ  ｖｉｔｒｏ検出方法であることもできる。この方法は、障害、たとえば本明細書中に記載の障害を診断するために使用することができる。特定の実施形態では、この方法には、（１）患者から試料を収集することと、（２）試料中の標的ｍＲＮＡのレベルを検出することとが含まれる。特定の実施形態では、標的ｍＲＮＡには、ＩＬ−２２のｍＲＮＡ、ＩＬ−１Ｆ６のｍＲＮＡ、ＩＬ−１Ｆ８のｍＲＮＡ、ＩＬ−１Ｆ９のｍＲＮＡ、ＩＬ−１Ｒｒｐ２のｍＲＮＡおよびＩＬ−１７ＡのｍＲＮＡのうちの少なくとも１つが含まれる。ｍＲＮＡを検出および定量する方法は当分野で知られている。特定の実施形態では、この方法は定量的ＲＴ−ＰＣＲを含む。特定の実施形態では、試料は患者の血液試料である。発現レベルを測定することができるさらなる試料には、それだけには限定されないが、滑液、口腔スワブ、皮膚、生検用に取り出された物質、たとえば、それだけには限定されないが、生検用に取り出された乾癬患者の皮膚、精液、毛髪、骨、尿、鼻水、および痰が含まれ、これには、それだけには限定されないが、気管支鏡検査中に気管支洗浄液から得られた体液が含まれる。
【実施例】
【０１５５】
（実施例１）
乾癬様マウスモデルにおけるＩＬ−１サイトカインの増加した遺伝子およびタンパク質発現
尋常性乾癬とは、過剰増殖表皮および混合皮膚リンパ浸潤によって特徴づけられる慢性の炎症性皮膚疾患である。当初はケラチノサイト変更の原疾患とみなされていたが、有効な免疫変調治療により、これらが乾癬疾患の病因において産生する免疫細胞およびサイトカインによって果たされる役割が実証されている。
【０１５６】
４×１０５個のＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉＣＤ２５−細胞を、病原体を含有しないＣＢ１７  ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ内に移入して、ヒト乾癬に似た特定の特徴を有する鱗状かつ盛り上がった皮膚の溶菌斑を誘導した。移入後６０日目に、マウスの大多数が、ケラチノサイトの増殖の増加（不全角化）が原因の表皮の肥厚（棘細胞増殖）、表皮の下向きの乳頭状突起（乳頭基部）、ならびに表皮および真皮の炎症細胞浸潤などの乾癬様皮膚炎症を発生した。
【０１５７】
皮膚病変のサイトカイン構成要素を試験するために、適応移入後の７０日目にマウス耳を収集し、定量的ＲＴ−ＰＣＲに供してＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９およびその特異的受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の遺伝子発現を評価した。ＱＩＡＧＥＮ  ＲＮｅａｓｙ（登録商標）キット（ＱＩＡＧＥＮ）を用いてＲＮＡを凍結したマウス耳生検から単離した。サイトカイン遺伝子の発現は、以下の表に従った事前に定性したプライマーおよびプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いたＴａｑｍａｎ（登録商標）ＲＴ−ＰＣＲキットを使用して検査した。
【０１５８】
【表２】
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【０１５９】
遺伝子発現は、推定１，０００コピー数のＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡ／細胞を有するハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨの発現に対して正規化した。
【０１６０】
生理食塩水の注射を与えた対照マウスと比較して、乾癬様形成を発生したマウスは、耳試料中でＩＬ−１サイトカイン、ＩＬ−１Ｆ６（約５００倍）、ＩＬ−１Ｆ８（約６０倍）、およびＩＬ−１Ｆ９（約５０倍）の発現が有意に上昇していた（図１ａおよび１ｃ）。その受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の転写物も約３〜５倍増加したが、増加は統計的有意性に達しなかった。さらに、ＩＬ−１Ｆ６の発現の３倍の増加およびＩＬ−１Ｆ９の発現の５倍の増加が乾癬に罹患しているマウスの白血球中で検出された。
【０１６１】
遺伝子発現の増加が細胞中のタンパク質産生の増加に相関していることを確認するために、３つのサイトカインのうちの１つであるＩＬ−１Ｆ６のタンパク質レベルをウエスタンブロットによって耳溶解物において調べた。対照耳試料と比較して、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉＣＤ２５−細胞のレシピエントからの耳生検において３〜４倍多いＩＬ−１Ｆ６タンパク質がウエスタンブロットによって検出され（図１ｂ）、これは、観察された遺伝子発現の増加に一致したタンパク質産生の増加を示していた。
【０１６２】
（実施例２）
ＩＬ−２２はマウス皮膚におけるＩＬ−１サイトカインの発現を調節する
ＩＬ−２２は乾癬におけるＴｈ１７細胞に媒介される病理に必要であり、ＩＬ−２２の中和単独が乾癬の進行を予防するために十分である。実施例１に記載のように、４×１０５個のＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉＣＤ２５−細胞を、病原体を含有しないＣＢ１７  ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウス内に移入した。ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉＣＤ２５−Ｔ細胞を適応移入した日から開始して、ＩＬ−２２を中和する抗体を週に１回、病原体を含有しないＣＢ１７  ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウス内に静脈内注射した。ＩＬ−２２を中和する抗体の静脈内注射により、レシピエントマウスにおける乾癬様病変の発生が予防された。移入後７０日目における症状の減少と相関して、耳中のＩＬ−１サイトカインの転写レベルも低下した：ＩＬ−１Ｆ６の発現レベルの約９倍の低下、ＩＬ−１Ｆ８の発現レベルの約２．２５倍の低下およびＩＬ−１Ｆ９の発現レベルの約２．２倍の低下（図２）。しかし、ＩＬ−２２の中和は受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２遺伝子の発現レベルの上昇に影響を与えなかった。転写レベルを実施例１に記載のようにＲＴ−ＰＣＲによって測定した。
【０１６３】
局所的レベルでＩＬ−１サイトカインの発現がＩＬ−２２の濃度に関連していたことを実証するために、野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスの耳内に５００ｎｇの組換えマウスＩＬ−２２を隔日で２週間を直接注射した。最後の処置の６時間後、実施例１に記載のようにマウス耳を収集し、転写レベルをＲＴ−ＰＣＲによって測定した。ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９の転写レベルはすべて、対照として生理食塩水を与えた同じマウスの左耳と比較してＩＬ−２２を与えた右耳で約６倍増加していた（図３）。また、受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２のｍＲＮＡも、ＩＬ−２２で処置した耳においてアップレギュレーションの傾向があった。これらのデータは、Ｔｈ１７サイトカインであるＩＬ−２２が炎症部位でＩＬ−１サイトカインの遺伝子発現を直接調節できることを示唆している。
【０１６４】
（実施例３）
ヒトケラチノサイトにおけるＩＬ−１サイトカインの産生に対するサイトカインの効果
ＩＬ−２２、ＩＬ−１７Ａ、およびＩＬ−１７Ｆ
ＩＬ−２２によるＩＬ−１アイソフォームの直接誘導をさらに確認するために、初代ヒト上皮ケラチノサイトをＩＬ−２２で２日間処置した後、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって遺伝子発現を検査した。ヒトケラチノサイトを解凍後にｐ１〜ｐ３継代として使用し、図４ａまたは４ｂに示す０ｎｇ／ｍｌ〜２００ｎｇ／ｍｌの様々な濃度のＩＬ−２２で処置した。転写レベルを実施例１に記載のようにＲＴ−ＰＣＲによって測定した。第１の実験組では、２００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２で処置したケラチノサイトでは、ＩＬ−１Ｆ９の転写レベルが非処置細胞と比較して４倍増加していた。ＩＬ−１Ｆ８転写物は非検出可能なレベルから検出可能なレベルまでアップレギュレーションされていた。ＩＬ−１Ｆ６転写物は検出可能なレベルより低く、ＩＬ−１Ｒｒｐ２発現は変化がなかった。第２の実験組では、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９転写物の用量依存的な増加が観察された。転写物コピー数の非常に大きな差異にも関わらず（ｇａｐｄｈと比較して、ｉｌ１ｆ６の転写物ではＥ−６、ｉｌ１ｆ８ではＥ−５、ｉｌ１ｆ９ではＥ−３）、培地単独で培養したものと比較して、２００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２と共に培養したケラチノサイト中では一般にｉｌ１ｆ６、ｉｌ１ｆ８およびｉｌ１ｆ９の転写レベルの２〜４倍の増加が検出された。（図４ｂ）しかし、ＩＬ−２２は受容体Ｉｌ１ｒｌ２発現に影響を与えなかった（データ示さず）。
【０１６５】
ＩＬ−２２およびＩＬ−１７ＡはＴｈ１７細胞によって同時発現される。ＩＬ−２２およびＩＬ−１７Ａは、いくつかの抗細菌ペプチド、たとえば、β−デフェンシン２、Ｓ１００Ａ７、Ｓ１００Ａ８およびＳ１００Ａ９の発現を増強するように相乗的に作用する。これらのＴｈ１７サイトカインの関数関係をさらに調査するために、ＩＬ−１アイソフォームおよびその受容体の発現を、ＩＬ−２２、ＩＬ−１７Ａ、およびＩＬ−１７Ｆの組合せで処置した初代ケラチノサイトで検査した。図５ａに示すように、初代ケラチノサイトを、ＩＬ−２２（２００ｎｇ／ｍｌ）もしくはＩＬ−１７Ａ（２０ｎｇ／ｍｌ）単独、またはＩＬ−２２（２００ｎｇ／ｍｌ）およびＩＬ−１７Ａ（２０ｎｇ／ｍｌ）との組合せで、遺伝子発現の検査前の２日間処置した。転写レベルを実施例１に記載のようにＲＴ−ＰＣＲによって測定した。ＩＬ−１７Ａは単独でＩＬ−１Ｆ６（約２０倍）、ＩＬ−１Ｆ８（約１倍）、およびＩＬ−１Ｆ９（約７倍）の発現を誘導することができるが、ＩＬ−２２の存在はＩＬ−１Ｆ６（約８０倍）およびＩＬ−１Ｆ９（約１５倍）の発現を相乗的に誘導し、ＩＬ−１Ｆ８（約２倍）の発現を相加的に増強させた（図５ａおよび５ｃ）。しかし、ＩＬ−１７Ｆ単独の処置ではこれらのＩＬ−１サイトカインおよびその受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の遺伝子発現が誘導されず、ＩＬ−２２およびＩＬ−１７Ｆの組合せでは、ＩＬ−１サイトカインおよびＩＬ−１Ｒｒｐ２の遺伝子発現はＩｌ−２２単独で観察されたものより高くは誘導されなかった。ＩＬ−２２＋ＩＬ−１７Ａで処置したケラチノサイトのＩＬ−１Ｆ９タンパク質の量をウエスタンブロットによって検査し（図５ｂ）、転写レベルの増加がタンパク質産生の増加と相関していたことが確認された。非処置のものと比較して、ＩＬ−２２＋ＩＬ−１７Ａで処置したケラチノサイトにおいて、シグナルの少なくとも２倍の増加がウエスタンブロットによって検出された。
【０１６６】
ＴＮＦ−α
ＴＮＦ−αは、皮膚における炎症反応を開始して維持する別の重要な炎症誘発性サイトカインである。臨床研究により、ＴＮＦ経路の遮断が乾癬患者における有効な処置であることが実証されている。Ｇｏｔｔｌｉｅｂ  Ａ．Ｂ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７５、２７２１〜２９（２００５）。ＴＮＦ遮断の臨床有効性に鑑みて、ＴＮＦ−αによるＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９の調節の可能性を本発明者らのｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトケラチノサイト培養系で検査した。図１９に示すように、ＴＮＦ−αで刺激したケラチノサイトは、培地単独で培養した細胞と比較して、ｉｌ１ｆ６、ｉｌ１ｆ８、およびｉｌ１ｆ９の遺伝子転写物が１０〜２０倍増加していた。ＩＬ−１遺伝子発現の増加は、培養中にＩＬ−２２を添加することでさらに増強することができる。一緒にすると、これらのデータは、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９が、皮膚中のＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２２およびＴＮＦ−αによるその誘導の下流にあるエフェクターサイトカインであることを示唆している。
【０１６７】
ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２
乾癬における組織損傷の誘導および進行は、伝統的に、Ｔｈ１  Ｔ細胞ならびにそのシグネチャーサイトカインであるＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２に関連づけられている。ｉｌ１ｆ６、ｉｌ１ｆ８、およびｉｌ１ｆ９遺伝子の発現に対するこれらのＴｈ１サイトカインの効果を初代ケラチノサイトで検査した。図２０に示すように、ｉｌ１ｆ８の発現は２００ｎｇ／ｍｌの濃度のＩＬ−１２によって２倍誘導され、ｉｌ１ｆ９の転写レベルは変化を示さなかった。ＩＦＮ−γ単独を用いた処置ではｉｌ１ｆ８転写物の約１０倍の増加が誘導された一方で、ｉｌ１ｆ９遺伝子発現には最小限の効果しかなかった。ＩＬ−１２をＩＦＮ−γケラチノサイト培養物に添加することでは、ＩＦＮ−γ単独によって誘導されたｉｌ１ｆ８またはｉｌ１ｆ９の転写物が実質的に増強されなかった。注目すべきは、Ｔｈ１７サイトカインまたはＴＮＦ−αに応答したケラチノサイトにおけるｉｌ１ｆ６転写レベルの有意な増加とは対照的に、Ｔｈ１サイトカインはｉｌ１ｆ６の発現に効果を有さなかった。これらのデータは、本発明者らのｉｎ  ｖｉｔｒｏケラチノサイト系では、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９の発現はＴｈ１７サイトカインによって主に調節されるがＴｈ１サイトカインによっては調節されないことを実証している。
【０１６８】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＦＮ−γ
Ｔｈ１細胞およびＴｈ１７細胞は多くの場合ヒト乾癬溶菌斑中で共存しているため、ヒトケラチノサイトによるＩＬ−１アイソフォームの発現に対するＩＬ−１７ＡとＩＦＮ−γの組み合わせた効果を検査した。図２１に示すように、ＩＬ−１７Ａは、ＩＦＮ−γによるｉｌ１ｆ８転写物の誘導をさらに３倍増強させた。しかし、このサイトカインの組合せはＩＬ−１７Ａによるｉｌ１ｆ６またはｉｌ１ｆ９転写物の増加を増強させない（データ示さず）。
【０１６９】
（実施例４）
ヒト乾癬皮膚病変における、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２２、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γと相関したＩＬ−１サイトカイン遺伝子発現の増加
乾癬のマウスモデルでの観察を確認するために、乾癬患者から得たヒトの対となる非損傷性および損傷性の皮膚試料を検査した。１１個の対となる皮膚試料における炎症誘発性サイトカインのパネルの発現レベルを、定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いて検査した。転写レベルを実施例１に記載のようにＲＴ−ＰＣＲによって測定した。すべての患者は、群として（図６ａ）または個々に（図６ｂおよび６ｃ）、乾癬病変においてＩＬ−１Ｆ６（平均して約２０倍高い）、ＩＬ−１Ｆ８（平均して１００倍高い）、およびＩＬ−１Ｆ９（平均して４倍高い）の発現が増加していた。ＩＬ−１Ｆ９のｍＲＮＡは最高のコピー数／細胞：４４％のＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡコピー数に達し（図６ａ）、これは、皮膚炎症における強力な生物学的機能を示していた。乾癬病変におけるＩＬ−１Ｒｒｐ２転写物の上昇は検出されなかった。ＩＬ−１Ｒｒｐ２の発現レベルは、正常な皮膚組織中のｍＲＮＡコピー数と比較して病変中でダウンレギュレーションされていた。
【０１７０】
予測どおり、ヒト皮膚病変における３つのＩＬ−１アイソフォームすべての発現はＴｈ１７サイトカインであるＩＬ−２２、ＩＬ−２１、およびＩＬ−１７Ａの発現と強く相関していたが（表３、図７ａ、および図８）、それでも受容体ＩＬ１ＲＬ２の発現はＴｈ１７サイトカインと相関がなかった（表３および図７ｂ）。また、ＩＬ−２１Ｒの発現もＩＬ−１アイソフォームと相関しているが、ＩＬ−２２ＲまたはＩＬ−２２ＢＰとは相関していない。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのケラチノサイトに対するＩＬ−１７Ｆの効果の上記観察と一致して、ＩＬ−１アイソフォームの発現とＩＬ−１７Ｆの発現との間には相関がなかった（図８）。さらに、３つのＩＬ−１アイソフォームの発現をＩＬ−２２Ｒ、ＩＬ−２２ＢＰ、ＩＬ−２１、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＬ−２３、およびＴＧＦαの発現と比較した。また、ＩＬ−１Ｆ６およびＩＬ−１Ｆ８の発現も他のＴｈ１７サイトカイン、ＩＬ−２１、およびその受容体と相関していた。また、ＩＬ−１Ｆ９の発現もＩＬ−２３の発現と相関しており、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９の発現はＴＧＦαの発現と相関していた。
【０１７１】
表３：ヒト乾癬病変におけるサイトカイン発現プロフィールの相関。表３では、統計的相関はピアソン相関検定によって決定し、ｐ値は両側スチューデントｔ検定によって決定した。
【０１７２】
【表３】
2012501184.tif 000006
【０１７３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏのＴＮＦ−α刺激に際するＩＬ−１アイソフォームのケラチノサイト発現を裏付けて、乾癬病変におけるＴＮＦの発現はＩＬ−１サイトカインの発現と相関していた。さらに、ＩＦＮ−γの発現の上昇も病変中で検出され、ＩＬ−１２ｐ３５では検出されず、これは、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９の発現と良好に相関し、乾癬におけるＴｈ１およびＴｈ１７細胞の両方の協同的な関与を示していた。
【０１７４】
（実施例５）
自己免疫疾患の動物モデルにおけるバイオマーカーとしてのＩＬ−１サイトカインの示差的発現
自己免疫疾患のバイオマーカーとしてのＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、ＩＬ−１Ｆ９およびその受容体の潜在性を評価するために、これらの遺伝子の発現を、３匹の別々の自己免疫マウスモデルから得た血液で検査した。
【０１７５】
ＩＬ−１アイソフォームＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９を、コラーゲンおよびアジュバントを用いた免疫化によって炎症を誘導したコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）マウスモデルで検査した。疾患を誘導するために、ＤＢＡ１マウスを、ＣＦＡで乳化した２００ｎｇのウシＩＩ型コラーゲン（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ）を用いて皮内で免疫化した。２１日目に、すべてのマウスにＩＦＡ中の２００ｎｇのコラーゲンの追加免疫を与えた。３５日目に血液を採取し、すぐにＱＩＡＧＥＮ  ＲＮｅａｓｙ（登録商標）血液ミニキットを用いたＲＮＡ抽出に供した。白血球を、定量的ＲＴ−ＰＣＲを介した遺伝子発現の分析に使用した。転写レベルを実施例１に記載のようにＲＴ−ＰＣＲによって測定した。ナイーブ対照マウスと比較して、ＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９のｍＲＮＡは罹患したマウスの血液中でそれぞれ約１０倍および約４．３倍増加していた一方で、ＩＬ−１Ｆ６のメッセージは罹患したマウスおよび対照マウスのどちらでも検出不可能であった（図９）。
【０１７６】
また、ＩＬ−１アイソフォームＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９を、ナイーブ野生型Ｂａｌｂ／ｃマウス由来のエフェクター（ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉＣＤ２５−）Ｔ細胞を静脈内移入することによってｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウスで誘導した、乾癬様皮膚炎症マウスモデルにおいても検査した。疾患誘導の７０日目にマウス血液を採取し、白血球中の遺伝子発現を分析した。転写レベルを実施例１に記載のようにＲＴ−ＰＣＲによって測定した。ＩＬ−１Ｆ６およびＩＬ−１Ｆ９の転写レベルは、生理食塩水の注射を与えた対照マウスと比較して、乾癬を発生したレシピエントマウスにおいて３〜６倍増加していた。血液中のＩＬ−１Ｆ８の転写レベルは検出レベルより低かった。受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の発現も非常に低く、乾癬様マウスの血液中でダウンレギュレーションされているように見えた（図１０）。
【０１７７】
また、ＩＬ−１アイソフォームＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９を、自発性ループスマウスモデルにおいても検査した。マウスのＮＺＢＷＦ／１株はループスの自発的発生を遺伝的に起こしやすい。使用したコロニーは、典型的には、約２０週間にタンパク尿または抗ｄｓＤＮＡ抗体などの検出可能なループス症状を表す。これらのマウスの血液試料を疾患の発症の１０週間前および７カ月後に採取し、遺伝子発現を検査し、自発性ループスを発生しない株である１０週齢の健康なＣ５７ＢＬ／６マウスと比較した。転写レベルを実施例１に記載のようにＲＴ−ＰＣＲによって測定した。１０週間の疾患の初期時点では、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ９、およびＩＬ−１Ｒｒｐ２の遺伝子発現が増加しており（図１１）、これは、これらの遺伝子がループスの初期バイオマーカーであり得ることを示していた。ＩＬ−１Ｆ６の転写物は、タンパク尿および抗ｄｓＤＮＡ抗体の増加というループス症状を発生した７カ月齢のマウスでさらに上昇していた。しかし、ＩＬ−１Ｆ９および受容体ＩＬ−１Ｒｒｐ２の転写物はこの時点でダウンレギュレーションされていたが、それでも対照Ｃ５７ＢＬ／６マウスよりもはるかに高かった。ＩＬ−１Ｆ８の転写物は、ＮＺＢＷＦ１／Ｊループスマウスの血液中で検出されるには低すぎた。
【０１７８】
これらの結果により、アップレギュレーションされたＩＬ−１アイソフォームのｍＲＮＡ発現は炎症性疾患と関連しており、罹患した動物の血液試料から検出することができることが実証された。以前は、これらのアイソフォームは皮膚組織試料およびケラチノサイト中でのみ検出されていた。様々な疾患モデルにおけるＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９ならびにその特異的受容体の様々な誘導および発現のレベルは、これらの遺伝子が様々な自己免疫疾患において異常発現されていることを示し、ヒトの炎症性および自己免疫疾患を診断するためのバイオマーカーとしての、ＩＬ−１アイソフォーム発現（たとえばｍＲＮＡまたはタンパク質）の潜在的な使用を示唆している。
【０１７９】
（実施例６）
ＩＬ−１アイソフォームはｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２１によって調節されない
図２２に示すように、ＩＬ−２１はドナー１においてｉｌ１ｆ８およびｉｌ１ｆ９の転写物をダウンレギュレーションするが、ドナー２におけるその発現をわずかに増加させ、これは、ＩＬ−２１がケラチノサイト中でＩＬ−１アイソフォームを直接調節しないことを示す。さらに、ＩＬ−２２を培養物に加えることは、ＩＬ−１アイソフォームの発現に有意な影響を与えない。ＩＬ−２１と同時培養したケラチノサイト中のｉｌ１ｆ６の転写レベルは検出限界未満であった。
【０１８０】
（実施例７）
ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの発現はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴｈ１７またはＴｈ１サイトカインによって調節されない
最近の臨床治験により、ＩＬ−１２／２３ｐ４０経路を遮断する生物剤が乾癬に有効であることが実証された。Ｋｒｕｅｇｅｒ，Ｇ．ら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ、３５６、５８０〜５９２（２００７）。さらに、予備臨床の証拠は、ＩＬ−１７Ａの遮断も有益な効果を有することを示している。Ｐａｔｅｌ，Ｄ．、ＡＣＲ／ＡＲＨＰ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（２００８）。対照的に、組換えＩＬ−１Ｒ拮抗剤を用いたＩＬ−１αおよびＩＬ−１β経路の遮断が乾癬のパイロット研究において中程度に有益であることが示された。Ｇｉｂｂｓ，Ａ．Ｇ．ら、２５ｔｈ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  ｆｏｒ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ．６８（２００５）。Ｔ細胞由来のサイトカインによるｉｌ１ａおよびｉｌ１ｂの調節を本発明者らのｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養系で検査した。ケラチノサイトにおいてｉｌ１ａおよびｉｌ１ｂの発現のわずかな増加（約１．５〜２倍）がＩＬ−１７ＡまたはＩＦＮ−γによって誘導された（図２３）。しかし、ＩＬ−２２またはＩＬ−１２はどちらも、単独でまたはそれぞれＩＬ−１７ＡもしくはＩＦＮ−γと組み合わせても効果がなかった。これらのデータは、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βが乾癬の病因に重要な主要な局所的免疫媒介物質でない可能性があることを示唆している。しかし、Ｔｈ１７サイトカインによるＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９の強力な誘導は、これらのＩＬ−１アイソフォームが疾患の主要な局所的媒介物質を表している可能性があることを示唆している。
【０１８１】
（実施例８）
ＩＬ−１α、ＩＬ−１Ｆ６、およびＩＬ−１Ｆ９の発現はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−１アイソフォームによって調節される
乾癬における上昇したＩＬ−１アイソフォームの下流効果を調査するために、本発明者らは、本発明者らのｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養系においてＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１Ｆ６、およびＩＬ−１Ｆ９の発現を調節するＩＬ−１６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９の能力を検査した（図２４）。ｉｌ１ａの発現のわずかな増加（約２〜６倍）がＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、またはＩＬ−１Ｆ９単独によって誘導された。ＩＬ−１７Ａの添加により、ＩＬ−１アイソフォームによる誘導がさらに増加した。しかし、ＩＦＮ−γまたはＴＮＦ−αの添加はＩＬ−１α発現にさらなる効果を有さなかった。３つのＩＬ−１アイソフォームは、単独で、またはＴｈ１もしくはＴｈ１７サイトカインと組み合わせて、ＩＬ−１βの発現においてわずかな調節しか示さなかった。３つのＩＬ−１アイソフォームはすべてＩＬ−１Ｆ６の発現を誘導し、この増加は、同時培養後の早くも６時間で検出された（データ示さず）。ＩＬ−１７Ａは３つのアイソフォームすべてと相乗作用し、ｉｌ１ｆ６のｍＲＮＡの誘導を強力に増強させた。また、ＴＮＦ−αの添加も、より弱い強度にではあるが、この増加を増強させた。ＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９は、ＩＬ−１Ｆ９の発現を１０倍まで強力に誘導した。ここでも、ＩＬ−１７ＡはＩＬ−１Ｆ８およびＩＬ−１Ｆ９と相乗作用して、ｉｌ１ｆ９の転写レベルを約８０倍まで増加させた。ＴＮＦ−αの添加はわずかに相加的な効果を有しており、一方で、ＩＦＮ−γの添加は効果がなかった。これらのデータは、新規ＩＬ−１アイソフォームがそれ自体の遺伝子発現を誘導するのみでなく、Ｔｈ１７サイトカインと協同してこの自己調節をさらに増強させることを示唆している。ＩＦＮ−γはＩＬ−１アイソフォームの自己増強に中程度の効果を有し、これは、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９の遺伝子発現の誘導に対するその中程度の効果と一致している。
【０１８２】
（実施例９）
急性期反応物質の誘導におけるＩＬ−１アイソフォームの相乗効果
ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、またはＩＬ−１Ｆ９は、単独で、ｓａａ１／２（血清アミロイドＡ１／２）、セルピン１（プラスミノーゲン活性化阻害因子−１、ＰＡＩ−１、セルピンＥ１としても知られる）、ｐｌａｕ（ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子、ｕ−ＰＡとしても知られる）、ｐｌａｔ（組織プラスミノーゲン活性化因子、ｔ−ＰＡとしても知られる）、ｔｎｆａおよびｉｌ６を含めた様々な急性期反応物質の遺伝子発現においてわずかな増加（約１〜３倍）を誘導した（図２５）。
【０１８３】
ＴＮＦ−αの添加は３つのＩＬ−１アイソフォームすべてで相乗効果を有しており、ＩＬ−１アイソフォームによって誘導されたｓａａ１／２転写物の発現を強力に増強させた。ＩＬ−１７ＡまたはＩＦＮ−γの添加はｓａａ１／２遺伝子の発現に相加効果を有していた。また、ＴＮＦ−αの添加は、ＩＬ−１Ｆ６およびＩＬ−１Ｆ８でも相乗効果を有しており、ＩＬ−１アイソフォームのそれぞれによって誘導されたｐｌａｕおよびｐｌａｔ転写物の発現を強力に増強させた。ＩＬ−１７ＡまたはＩＦＮ−ｇの添加はｐｌａｕおよびｐｌａｔ遺伝子の発現にさらなる効果を有さなかった（図２５）。
【０１８４】
ＩＬ−１７ＡはＩＬ−１Ｆ９と相乗作用した一方で、ＩＦＮ−γはＩＬ−１Ｆ６およびＩＬ−１Ｆ８と相乗作用してＩＬ−１アイソフォームによって誘導されたｔｎｆａ転写物の発現を約４０〜６０倍増加させた。ＴＮＦ−αはそれ自体の発現を約１０倍誘導したが、ＩＬ−１アイソフォームと組み合わせた際に相乗効果は観察されなかった（図２５）。
【０１８５】
ＩＦＮ−γはＩＬ−１Ｆ６およびＩＬ−１Ｆ８と相乗作用して、同時培養の６時間後にｉｌ６転写物の発現を約２３０〜４０００倍増加させた。ｉｌ６遺伝子のこの強力な誘導は、同時培養の７２時間後でも依然として観察された。また、ＩＦＮ−γはＩＬ−１Ｆ９とも相乗効果を有しており、ｉｌ６転写物の発現を約２０倍増加させた。また、ＩＬ−１７Ａはｉｌ６発現に対してＩＬ−１Ｆ６およびＩＬ−１Ｆ９とも相乗効果を示したが、相乗的応答はＩＦＮ−γほど強力ではなかった。ＴＮＦ−αを３つのＩＬ−１アイソフォームと組み合わせることは、ｉｌ６発現に対して相乗効果を有していなかった（図２５）。
【０１８６】
（実施例１０）
ＩＬ−１アイソフォームはＩＬ−１７Ａと協同して抗細菌ペプチドを誘導する
ＩＬ−１７Ａは、β−デフェンシン２（遺伝子記号：ｄｅｆ４）およびＳ１００Ａ７（遺伝子記号：ｓ１００ａ７）を含めた宿主の防御に関連している抗細菌ペプチドの発現を誘導することが知られている。ＩＬ−１アイソフォームがそれ自体でまたはＴｈ１７もしくはＴｈ１サイトカインと組み合わせて同じ遺伝子を誘導できるかどうかを検査するために、ケラチノサイトを、個々のＩＬ−１サイトカインまたはこれらのサイトカインの対の組合せと共にインキュベーションした。ＩＬ−１アイソフォームは、単独ではβ−デフェンシン２またはＳ１００Ａ７遺伝子発現を強力には誘導しなかったが、ＩＬ−１７Ａと組み合わせて、ＩＬ−１Ｆ８はｓ１００ａ７転写物の約１６倍の増加を誘導した。一方で、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９は、ＩＬ−１７Ａと組み合わせて、ｄｅｆ４転写のレベルを約６００〜８００倍増加させた。図２６。ＴＮＦ−αはｓ１００ａ７発現の誘導においてＩＬ−１Ｆ８と相加効果を有し、ＩＦＮ−γはｄｅｆ４の遺伝子発現において３つのＩＬ−１アイソフォームすべてと相加効果を有する（図２６）。
【０１８７】
以下の文書は、ＩＬ−１サイトカインおよびＩＬ−１Ｒｒｐ２受容体に関するさらなる情報を提供し、任意の目的のために本明細書中に参考として組み込まれている。
Berglof, E., R. Andre, B. R. Renshaw, S.
M. Allan, C. B. Lawrence, N. J. RothwellおよびE. Pinteaux.
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cells, but fails to induce IL-1beta signalling responses）」. Cytokine 29:245-250.
【０１８８】
当業者は、日常的な実験のみを用いて、本明細書中に記載の具体的な実施形態の多くの均等物を理解する、または確認することができるであろう。そのような均等物は以下の特許請求の範囲によって包含される。
【図１−１】
2012501184.tif 000008
【図１−２】
2012501184.tif 000009
【図２】
2012501184.tif 000010
【図３】
2012501184.tif 000011
【図４−１】
2012501184.tif 000012
【図４−２】
2012501184.tif 000013
【図５−１】
2012501184.tif 000014
【図５−２】
2012501184.tif 000015
【図６−１】
2012501184.tif 000016
【図６−２】
2012501184.tif 000017
【図７−１】
2012501184.tif 000018
【図７−２】
2012501184.tif 000019
【図８】
2012501184.tif 000020
【図９】
2012501184.tif 000021
【図１０】
2012501184.tif 000022
【図１１】
2012501184.tif 000023
【図１２】
2012501184.tif 000024
【図１３】
2012501184.tif 000025
【図１４】
2012501184.tif 000026
【図１５】
2012501184.tif 000027
【図１６】
2012501184.tif 000028
【図１７】
2012501184.tif 000029
【図１８】
2012501184.tif 000030
【図１９】
2012501184.tif 000031
【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
2012501184.tif 000035
【図２４−１】
2012501184.tif 000036
【図２４−２】
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【図２５−１】
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【図２５−２】
2012501184.tif 000039
【図２５−３】
2012501184.tif 000040
【図２５−４】
2012501184.tif 000041
【図２６−１】
2012501184.tif 000042
【図２６−２】
2012501184.tif 000043
【配列表】
2012501184000001.app
【国際調査報告】
2012501184.tif 000044
2012501184.tif 000045
2012501184.tif 000046
2012501184.tif 000047
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2012501184.tif 000049