(57)【要約】【課題】水溶性カップリング剤を利用する、ポリマーコンジュゲートを合成するための方法を提供する。有機溶媒（例えば、塩素化溶媒など）を全く使用しないか、または、必要最低限量を使用する、ポリマーコンジュゲートを単離するための方法を提供する。【解決手段】式（Ｉ）および式（Ｉａ）の繰り返しユニットを含むポリマーコンジュゲートを調製および単離するための方法が本明細書中に記載される。ポリマーコンジュゲートは抗ガン薬物を含むことができる。【選択図】図１
2012505906.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の反応物および第２の反応物を水溶性カップリング剤の存在下で反応させて、反応混合物を形成すること
を含む、ポリマーコンジュゲートを調製する方法であって、
前記第１の反応物が、下記の式（Ｉ）の繰り返しユニット：
【化１】
2012505906.tif 000006
（式中、Ｒ１は、水素、アルカリ金属およびアンモニウムからなる群より選択される）
を含むポリマーであり、
前記第２の反応物が、第１の抗ガン薬物を含む化合物を含み、
前記反応混合物が、式（Ｉ）の繰り返しユニットと、下記の式（Ｉａ）の繰り返しユニット：
【化２】
2012505906.tif 000007
（式中、Ｒ２は前記第１の抗ガン薬物を含む）
とを含むポリマーコンジュゲートを含み、
ただし、
前記方法には、第２の抗ガン薬物、標的化剤、光学的画像化剤、磁気共鳴画像化剤および安定化剤からなる群より選択される薬剤を含む第３の反応物を前記第１の反応物と反応させることは含まれず、かつ、
前記ポリマーコンジュゲートは所定量の式（Ｉ）の前記繰り返しユニットおよび所定量の式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットを含み、この場合、式（Ｉ）の前記繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットの量の和がポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数の約５０モル％を越える、方法。
【請求項２】
前記第１の反応物および前記第２の反応物を触媒の存在下で反応させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の抗ガン薬物が、タキサン系薬物、カンプトテカ（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ）系薬物、アントラサイクリン系薬物、エトポシド、テニポシドおよびエポチロンからなる群より選択される、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の抗ガン薬物がタキサンである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記タキサンがパクリタキセルまたはドセタキセルである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記第１の抗ガン薬物がカンプトテカである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記カンプトテカがカンプトテシンである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記第１の抗ガン薬物がアントラサイクリンである、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記アントラサイクリンがドキソルビシンである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１の反応物および前記第２の反応物を溶媒中で混合することをさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記溶媒がジメチルホルムアミドである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
式（Ｉ）の前記繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットの量の和が約６０モル％を越える、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
式（Ｉ）の前記繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットの量の和が約７０モル％を越える、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
式（Ｉ）の前記繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットの量の和が約８０モル％を越える、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
式（Ｉ）の前記繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットの量の和が約９０モル％を越える、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
式（Ｉ）の前記繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットの量の和が約９５モル％を越える、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
式（Ｉ）の前記繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットの量の和が約９５モル％を越える、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ポリマーコンジュゲートが、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約５０モル％未満の、下記の式（ＩＩ）の繰り返しユニットおよび下記の式（ＩＩＩ）の繰り返しユニットからなる群より選択される繰り返しユニット：
【化３】
2012505906.tif 000008
（式中、
ｎおよびｍは独立して、１または２である；
Ａ１およびＡ２は酸素またはＮＲ７である；
Ａ３およびＡ４は酸素である；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれが独立して、必要に応じて置換されたＣ１〜１０アルキル、必要に応じて置換されたＣ６〜２０アリール、アンモニウム、アルカリ金属、多座配位子、保護された酸素原子を有する多座配位子前駆体、ならびに、標的化剤、光学的画像化剤、磁気共鳴画像化剤および安定化剤からなる群より選択される薬剤を含む化合物からなる群より選択される；および
Ｒ７は水素またはＣ１〜４アルキルである）
を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ポリマーコンジュゲートが、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約４０モル％未満の、式（ＩＩ）の前記繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の前記繰り返しユニットからなる群より選択される繰り返しユニットを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ポリマーコンジュゲートが、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約３０モル％未満の、式（ＩＩ）の前記繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の前記繰り返しユニットからなる群より選択される繰り返しユニットを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ポリマーコンジュゲートが、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約２０モル％未満の、式（ＩＩ）の前記繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の前記繰り返しユニットからなる群より選択される繰り返しユニットを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ポリマーコンジュゲートが、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約１０モル％未満の、式（ＩＩ）の前記繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の前記繰り返しユニットからなる群より選択される繰り返しユニットを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ポリマーコンジュゲートが、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約５モル％未満の、式（ＩＩ）の前記繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の前記繰り返しユニットからなる群より選択される繰り返しユニットを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ポリマーコンジュゲートが、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約１モル％未満の、式（ＩＩ）の前記繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の前記繰り返しユニットからなる群より選択される繰り返しユニットを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ポリマーがポリグルタミン酸またはポリグルタメートである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載されるポリマーコンジュゲートを単離する方法であって、酸性水溶液を前記反応混合物と混合すること、および、前記ポリマーコンジュゲートを回収することを含む、方法。
【請求項２７】
前記酸性水溶液が、約３未満であるｐＨを有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記酸性水溶液が、約４未満であるｐＨを有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記酸性水溶液が、約５未満であるｐＨを有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記酸性水溶液が、約６未満であるｐＨを有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記酸性水溶液が、約７未満であるｐＨを有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記酸性水溶液が少なくとも約０．５Ｍの鉱酸である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
前記酸性水溶液が少なくとも約０．３Ｍの鉱酸である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
前記酸性水溶液が少なくとも約０．２Ｍの鉱酸である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３５】
前記酸性水溶液が少なくとも約０．１Ｍの鉱酸である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３６】
前記酸性水溶液が少なくとも約０．０５Ｍの鉱酸である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３７】
前記酸性水溶液が少なくとも約０．０１Ｍの鉱酸である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３８】
前記鉱酸が塩酸である、請求項３２〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記酸性水溶液を前記反応混合物と混合することにより、前記ポリマーコンジュゲートの析出が誘導される、請求項２６〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ポリマーコンジュゲートがろ過によって回収される、請求項２６〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記ポリマーコンジュゲートが遠心分離によって回収される、請求項２６〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記酸性水溶液を前記反応混合物と混合することは、前記酸性水溶液の総体積に対して体積比で約５％を越えるさらなる量の有機溶媒を混合することを含まない、請求項２６〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記酸性水溶液を前記反応混合物と混合することは、前記酸性水溶液の総体積に対して体積比で約１％を越えるさらなる量の有機溶媒を混合することを含まない、請求項２６〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記酸性水溶液を前記反応混合物と混合することは、さらなる実質的な量の有機溶媒を混合することを含まない、請求項２６〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記有機溶媒が塩素化溶媒である、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記塩素化溶媒が、クロロホルムおよびジクロロメタンからなる群より選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記水溶性カップリング剤が１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）である、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮特許出願第６１／１０５，７６９号（発明の名称「ポリグルタメートコンジュゲートの調製方法」、２００８年１０月１５日出願）および同第６１／１０６，１００号（発明の名称「ポリグルタメートコンジュゲートの調製方法」、２００８年１０月１６日出願）の優先権を主張する（これらは、どのような図面も含めて、それらの全体において参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【０００２】
技術分野
本出願は一般には、ペンダント官能基を有する生体適合性の水溶性ポリマーを作製する方法に関する。具体的には、本出願は、様々な薬物送達用途のために有用であり得るポリグルタミン酸コンジュゲートおよびポリグルタメートコンジュゲートを作製する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
関連技術分野の説明
様々なシステムが、薬物、生体分子および画像化剤の送達のために使用されている。例えば、そのようなシステムには、カプセル、リポソーム、マイクロ粒子、ナノ粒子およびポリマーが含まれる。
【０００４】
ポリエステルに基づく様々な生分解性システムが特徴づけられており、また、研究されている。ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸、および、それらのコポリマーであるポリ乳酸グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）が、薬物送達用途のための設計および成績に関しての最もよく特徴づけられている生体分子のいくつかである。Ｕｈｒｉｃｈ，Ｋ．Ｅ．、Ｃａｎｎｉｚｚａｒｏ，Ｓ．Ｍ．、Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．Ｓ．およびＳｈａｋｅｓｈｅｌｆ，Ｋ．Ｍ．、「制御された薬物放出のためのポリマーシステム」、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．、１９９９、９９、３１８１〜３１９８；および、Ｐａｎｙａｍ  Ｊ、Ｌａｂｈａｓｅｔｗａｒ  Ｖ．、「細胞および組織への薬物送達および遺伝子送達のための生分解性ナノ粒子」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．、２００３、５５、３２９〜４７を参照のこと。同様にまた、２−ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）が、薬物送達用途のためのポリマーを作製するために広く使用されている。ポリオルトエステルに基づく生分解性システムもまた検討されている。Ｈｅｌｌｅｒ，Ｊ．、Ｂａｒｒ，Ｊ．、Ｎｇ，Ｓ．Ｙ．、Ａｂｄｅｌｌａｕｏｉ，Ｋ．Ｓ．およびＧｕｒｎｙ，Ｒ．、「ポリ（オルトエステル）：合成、特徴づけ、性質および使用」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．、２００２、５４、１０１５〜１０３９を参照のこと。ポリ無水物のシステムもまた検討されている。そのようなポリ無水物は典型的には生体適合性であり、代謝物として身体から排出される比較的非毒性の化合物に生体内で分解し得る。Ｋｕｍａｒ，Ｎ．、Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．Ｓ．およびＤｏｍｂ，Ａ．Ｊ．、「ポリ無水物：概観」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．、２００２、５４、８８９〜９１を参照のこと。
【０００５】
アミノ酸に基づくポリマーもまた、新しい生体材料の潜在的な供給源として見なされている。良好な生体適合性を有するポリアミノ酸が、低分子量の化合物を送達するために検討されている。比較的少数のポリグルタミン酸およびコポリマーが、薬物送達のための候補材料として特定されている。Ｂｏｕｒｋｅ，Ｓ．Ｌ．およびＫｏｈｎ，Ｊ．、「アミノ酸のＬ−チロシンに由来するポリマー：ポリカーボネート、ポリアリレート、および、ポリ（エチレングリコール）とのコポリマー」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．、２００３、５５、４４７〜４６６を参照のこと。
【０００６】
投与された疎水性の抗ガン薬物ならびに治療用のタンパク質およびポリペプチドは多くの場合、生物学的利用能が低いことに悩まされる。生物学的利用能がこのように低いのは、疎水性薬物および水溶液の二相溶液の不適合性、ならびに／または、酵素分解による血液循環からのこれらの分子の迅速な除去のためであり得る。投与されたタンパク質および他の小分子薬剤の効力を増大させるための１つの技術が、投与薬剤を、生体内での酵素分解により保護を提供し得るポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）分子など）によりコンジュゲート化することを伴う。そのような「ＰＥＧ化」は多くの場合、循環時間を改善し、したがって、投与された薬剤の生物学的利用能を改善する。
【０００７】
しかしながら、ＰＥＧはいくつかの点で欠点を有する。例えば、ＰＥＧは線状ポリマーであるので、分岐ポリマーと比較した場合、ＰＥＧによってもたらされる立体的保護は限定的である。ＰＥＧの別の欠点は、ＰＥＧは一般に、誘導体化をその２つの末端において受けやすいことである。このために、ＰＥＧにコンジュゲート化され得る他の機能的分子（例えば、特定の組織へのタンパク質送達または薬物送達のために役立つ分子）の数が制限される。
【０００８】
ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）が、疎水性の抗ガン薬物を可溶化するために一般に好まれる別のポリマーである。ＰＧＡにコンジュゲート化される多くの抗ガン薬物が報告されている。Ｃｈｕｎ  Ｌｉ、「ポリ（Ｌ−グルタミン酸）−抗ガン薬物コンジュゲート」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．、２００２、５４、６９５〜７１３を参照のこと。しかしながら、どれも現時点ではＦＤＡ承認されていない。
【０００９】
タイヘイヨウイチイの木の樹皮から抽出されるパクリタキセルが、卵巣ガンおよび乳ガンを処置するためのＦＤＡ承認薬物である。Ｗａｎｉ他、「植物系抗ガン薬物．ＶＩ．セイヨウイチイ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）由来の新規な抗白血病剤／抗腫瘍剤であるタキソールの単離および構造」、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９７１、９３、２３２５〜７。しかしながら、他の抗ガン薬物と同様に、パクリタキセルは、その疎水性および水溶液における不溶性のために、生物学的利用能が低いことに悩まされる。パクリタキセルを可溶化するための１つの方法が、パクリタキセルをＣｒｅｍｏｐｈｏｒ−ＥＬおよび脱水エタノールの混合物（１：１、ｖ／ｖ）において配合することである。Ｓｐａｒｒｅｂｏｏｍ他、「ヒト血液におけるパクリタキセル分布のＣｒｅｍｏｐｈｏｒ−ＥＬ媒介変化：臨床での薬物動態学的意味」、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９９、５９、１４５４〜１４５７。この配合物は現在、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）として商品化される。パクリタキセルを可溶化する別の方法が、高剪断均質化を使用する乳化によってである。Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｉｄｅｓ他、「パクリタキセルのフィルター滅菌可能なエマルションの配合物開発および抗腫瘍活性」、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０００、１７、１７５〜１８２。近年には、ポリマー−パクリタキセルのコンジュゲートがいくつかの臨床試験において進められている。Ｒｕｔｈ  Ｄｕｎｃａｎ、「ポリマー治療剤の新時代」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００３、２、３４７〜３６０。より近年には、パクリタキセルがヒトのアルブミンタンパク質と一緒にナノ粒子に配合され、臨床研究で使用されている。Ｄａｍａｓｃｅｌｌｉ他、「アルブミンナノ粒子に取り込まれたポリオキシエチル化ひまし油非含有パクリタキセル（ＡＢＩ−００７）を用いた動脈内化学療法：頭頸部および肛門管の扁平上皮細胞ガンの患者の第ＩＩ相研究：臨床活性の予備的証拠」、Ｃａｎｃｅｒ、２００１、９２、２５９２〜６０２；および、Ｉｂｒａｈｉｍ他、「ＡＢＩ−００７（パクリタキセルの、タンパク質で安定化されたＣｒｅｍｏｐｈｏｒ非含有ナノ粒子配合物）の第Ｉ相および薬物動態学的研究」、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００２、８、１０３８〜４４。この配合物は現在、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｉｎｃ．）として商品化されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｕｈｒｉｃｈ，Ｋ．Ｅ．、Ｃａｎｎｉｚｚａｒｏ，Ｓ．Ｍ．、Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．Ｓ．およびＳｈａｋｅｓｈｅｌｆ，Ｋ．Ｍ．、「制御された薬物放出のためのポリマーシステム」、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．、１９９９、９９、３１８１〜３１９８
【非特許文献２】Ｐａｎｙａｍ  Ｊ、Ｌａｂｈａｓｅｔｗａｒ  Ｖ．、「細胞および組織への薬物送達および遺伝子送達のための生分解性ナノ粒子」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．、２００３、５５、３２９〜４７
【非特許文献３】Ｈｅｌｌｅｒ，Ｊ．、Ｂａｒｒ，Ｊ．、Ｎｇ，Ｓ．Ｙ．、Ａｂｄｅｌｌａｕｏｉ，Ｋ．Ｓ．およびＧｕｒｎｙ，Ｒ．、「ポリ（オルトエステル）：合成、特徴づけ、性質および使用」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．、２００２、５４、１０１５〜１０３９
【非特許文献４】Ｋｕｍａｒ，Ｎ．、Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．Ｓ．およびＤｏｍｂ，Ａ．Ｊ．、「ポリ無水物：概観」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．、２００２、５４、８８９〜９１
【非特許文献５】Ｂｏｕｒｋｅ，Ｓ．Ｌ．およびＫｏｈｎ，Ｊ．、「アミノ酸のＬ−チロシンに由来するポリマー：ポリカーボネート、ポリアリレート、および、ポリ（エチレングリコール）とのコポリマー」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．、２００３、５５、４４７〜４６６
【非特許文献６】Ｃｈｕｎ  Ｌｉ、「ポリ（Ｌ−グルタミン酸）−抗ガン薬物コンジュゲート」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．、２００２、５４、６９５〜７１３
【非特許文献７】Ｗａｎｉ他、「植物系抗ガン薬物．ＶＩ．セイヨウイチイ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）由来の新規な抗白血病剤／抗腫瘍剤であるタキソールの単離および構造」、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９７１、９３、２３２５〜７
【非特許文献８】Ｓｐａｒｒｅｂｏｏｍ他、「ヒト血液におけるパクリタキセル分布のＣｒｅｍｏｐｈｏｒ−ＥＬ媒介変化：臨床での薬物動態学的意味」、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９９、５９、１４５４〜１４５７
【非特許文献９】Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｉｄｅｓ他、「パクリタキセルのフィルター滅菌可能なエマルションの配合物開発および抗腫瘍活性」、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０００、１７、１７５〜１８２
【非特許文献１０】Ｒｕｔｈ  Ｄｕｎｃａｎ、「ポリマー治療剤の新時代」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００３、２、３４７〜３６０
【非特許文献１１】Ｄａｍａｓｃｅｌｌｉ他、「アルブミンナノ粒子に取り込まれたポリオキシエチル化ひまし油非含有パクリタキセル（ＡＢＩ−００７）を用いた動脈内化学療法：頭頸部および肛門管の扁平上皮細胞ガンの患者の第ＩＩ相研究：臨床活性の予備的証拠」、Ｃａｎｃｅｒ、２００１、９２、２５９２〜６０２
【非特許文献１２】Ｉｂｒａｈｉｍ他、「ＡＢＩ−００７（パクリタキセルの、タンパク質で安定化されたＣｒｅｍｏｐｈｏｒ非含有ナノ粒子配合物）の第Ｉ相および薬物動態学的研究」、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００２、８、１０３８〜４４
【発明の概要】
【００１１】
本明細書中に開示されるのが、水溶性カップリング剤を利用する、ポリマーコンジュゲートを合成するための方法である。同様に本明細書中に開示されるのが、有機溶媒（例えば、塩素化溶媒など）を全く使用しないか、または、必要最低限量を使用する、ポリマーコンジュゲートを単離するための方法である。
【００１２】
本明細書中に記載される１つの実施形態が、第１の反応物および第２の反応物を水溶性カップリング剤の存在下で反応させて、反応混合物を形成することを含むことができる、ポリマーコンジュゲートを調製する方法に関する。
【００１３】
本明細書中に記載される別の実施形態が、水溶性カップリング剤を使用して合成されるポリマーコンジュゲートを単離するための方法であって、酸性水溶液を反応混合物と混合すること、および、ポリマーコンジュゲートを回収することを含むことができる方法に関する。
【００１４】
これらの実施形態および他の実施形態が下記においてより詳しく記載される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ポリグルタミン酸−パクリタキセルコンジュゲートを調製するための反応スキームの一例を例示する。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
別途定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての技術用語および科学用語は、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中で参照されるすべての特許、特許出願、公開された特許出願および他の刊行物は、別途言及されない限り、それらの全体において参照によって組み込まれる。複数の定義が本明細書中の用語について存在する場合には、別途言及されない限り、本節における定義が優先する。
【００１７】
「安定化剤」は、キャリア−薬物コンジュゲートを加水分解酵素に対してより抵抗性にし、また、キャリア−薬物コンジュゲートの免疫原性をより小さくすることによって、キャリア−薬物コンジュゲートの生物学的利用能を生体内で高め、かつ／または、キャリア−薬物コンジュゲートの半減期を生体内で延ばす置換基である。１つの例示的な安定化剤がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
【００１８】
本明細書中で使用される用語「水溶性（の）」はその通常の意味で使用され、７に等しいｐＨにおいて水１００ｍＬあたり少なくとも３グラムの濃度で水に完全に溶解させることができる化合物を記述する。Ｓｈｒｉｎｅｒ他、Ｔｈｅ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、§５．１．１（第６版、１９８０）を参照のこと。
【００１９】
用語「混合する」は、本明細書中で使用される場合、どのような方法であれ、化合物および／または反応物の一部またはすべてが一緒に混ぜ合わされることをもたらす方法を示す。混合することを、当業者に知られている様々な方法を使用して達成することができ、例えば、従来の混合、ブレンド混合、１つの化合物を別の化合物に懸濁すること、および、１つの化合物を別の化合物に溶解することなど、または、それらの任意の組み合わせなどを使用して達成することができる。
【００２０】
１つまたは複数のキラル中心を有する本明細書中に記載されるどのような化合物においても、絶対的立体化学が明示的に示されないならば、それぞれのキラル中心が独立して、Ｒ−立体配置またはＳ−立体配置またはそれらの混合であり得ることが理解される。したがって、本明細書中に記載される化合物は鏡像異性的に純粋であり得るか、または、立体異性混合物であり得る。加えて、ＥまたはＺとして定義され得る幾何異性体を生じさせる１つまたは複数の二重結合を有する本明細書中に記載されるどのような化合物においても、それぞれの二重結合は独立して、ＥまたはＺまたはそれらの混合であり得ることが理解される。同様に、すべての互変異性形態もまた、含まれることが意図される。
【００２１】
本明細書中に記載される１つの実施形態が、第１の反応物および第２の反応物を水溶性カップリング剤の存在下で反応させて、反応混合物を形成することを含むことができる、ポリマーコンジュゲートを調製する方法であって、前記第１の反応物が、下記の式（Ｉ）の繰り返しユニット：
【化１】
2012505906.tif 000003
（式中、Ｒ１は、水素、アルカリ金属およびアンモニウムから選択することができる）
を含むポリマーであり得る；前記第２の反応物が、第１の抗ガン薬物を含む化合物を含むことができる；前記反応混合物が、式（Ｉ）の繰り返しユニットと、下記の式（Ｉａ）の繰り返しユニット：
【化２】
2012505906.tif 000004
（式中、Ｒ２は前記第１の抗ガン薬物を含むことができる）
とを含むポリマーコンジュゲートを含むことができる；ただし、この方法には、第２の抗ガン薬物、標的化剤、光学的画像化剤、磁気共鳴画像化剤（例えば、常磁性金属キレート）および安定化剤から選択される薬剤を含む第３の反応物を前記第１の反応物と反応させることは含まれない；かつ、前記ポリマーコンジュゲートが所定量の式（Ｉ）の前記繰り返しユニットおよび所定量の式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットを含み、この場合、式（Ｉ）の前記繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットの量の和がポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数の約５０モル％を越える、方法に関連する。アルカリ金属の例には、リチウム（Ｌｉ）、ナトリウム（Ｎａ）、カリウム（Ｋ）、ルビジウム（Ｒｂ）およびセシウム（Ｃｓ）が含まれる。１つの実施形態において、アルカリ金属がナトリウムであり得る。
【００２２】
様々な抗ガン薬物を本明細書中に記載される方法において使用することができる。いくつかの実施形態において、第１の抗ガン薬物が、タキサン系薬物、カンプトテカ（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ）系薬物、アントラサイクリン系薬物、エトポシド、テニポシドおよびエポチロンであり得る。１つの実施形態において、抗ガン薬物はタキサン系薬物が可能であり、例えば、パクリタキセルまたはドセタキセルなどが可能である。いくつかの実施形態において、抗ガン薬物はカンプトテカ系薬物が可能であり、例えば、カンプトテシンが可能である。１つの実施形態において、抗ガン薬物はアントラサイクリン系薬物が可能であり、例えば、ドキソルビシンなどが可能である。
【００２３】
同様に、様々な水溶性カップリング剤を本明細書中に記載される方法において使用することができる。１つの実施形態において、水溶性カップリング剤は１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）であり得る。いくつかの実施形態において、ポリマーコンジュゲートを作製するための方法は、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を使用することを含まない。
【００２４】
所望されるならば、第１の反応物および第２の反応物は溶媒中で混合することができる。当業者に知られている様々な溶媒を使用することができる。いくつかの実施形態において、第１の反応物および／または第２の反応物の一部を混合前に溶媒に溶解することができる。他の実施形態において、第１の反応物および／または第２の反応物を混合前に溶媒に完全に溶解することができる。所望および／または必要ならば、さらなる量の溶媒を、少なくとも第１の反応物の一部および第２の反応物の一部が一緒に混合された後で反応液に加えることができる。同様に、水溶性カップリング剤もまた、一部またはすべてを溶媒に溶解することができる。１つの実施形態において、溶媒はジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）であり得る。
【００２５】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法はさらに、触媒を使用することを含むことができる。１つの実施形態において、第１の反応物および第２の反応物の反応は触媒の存在下において可能である。好適な触媒が当業者には知られている。好適な触媒の一例が４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）である。いくつかの実施形態において、触媒は、一部またはすべてを溶媒（例えば、ＤＭＦ）に溶解することができる。
【００２６】
式（Ｉ）の繰り返しユニットを含むポリマーはコポリマーまたはホモポリマーであり得る。１つの実施形態において、式（Ｉ）の繰り返しユニットを含むポリマーはポリグルタメートまたはポリグルタミン酸が可能である。式（Ｉ）の繰り返しユニットを含むポリマーがコポリマーであるならば、様々なさらなるユニットをポリマーにおいて含むことができる。
【００２７】
ポリマーコンジュゲートにおける式（Ｉ）の繰り返しユニットおよび式（Ｉａ）の繰り返しユニットの割合が広範囲にわたって変化し得る。１つの実施形態において、式（Ｉ）の繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の繰り返しユニットの量の和が、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて、式（Ｉ）の繰り返しユニットおよび式（Ｉａ）の繰り返しユニットの５０モル％を越える。別の実施形態において、式（Ｉ）の繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の繰り返しユニットの量の和が、式（Ｉ）の繰り返しユニットおよび式（Ｉａ）の繰り返しユニットの６０モル％を越える（同じ基準）。さらに別の実施形態において、式（Ｉ）の繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の繰り返しユニットの量の和が、式（Ｉ）の繰り返しユニットおよび式（Ｉａ）の繰り返しユニットの７０モル％を越える（同じ基準）。なおさらに別の実施形態において、式（Ｉ）の繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の繰り返しユニットの量の和が、式（Ｉ）の繰り返しユニットおよび式（Ｉａ）の繰り返しユニットの８０モル％を越える（同じ基準）。１つの実施形態において、式（Ｉ）の繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の繰り返しユニットの量の和が、式（Ｉ）の繰り返しユニットおよび式（Ｉａ）の繰り返しユニットの９０モル％を越える（同じ基準）。別の実施形態において、式（Ｉ）の繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の繰り返しユニットの量の和が、式（Ｉ）の繰り返しユニットおよび式（Ｉａ）の繰り返しユニットの９５モル％を越える（同じ基準）。さらに別の実施形態において、式（Ｉ）の繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の繰り返しユニットの量の和が、式（Ｉ）の繰り返しユニットおよび式（Ｉａ）の繰り返しユニットの９９モル％を越える（同じ基準）。
【００２８】
１つの実施形態において、ポリマーコンジュゲートは、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約５０モル％未満の、下記の式（ＩＩ）の繰り返しユニットおよび下記の式（ＩＩＩ）の繰り返しユニットからなる群より選択される繰り返しユニットを含む：
【化３】
2012505906.tif 000005
式中、ｎおよびｍは独立して、１または２であり得る；Ａ１およびＡ２は酸素またはＮＲ７であり得る；Ａ３およびＡ４は酸素であり得る；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれが独立して、必要に応じて置換されたＣ１〜１０アルキル、必要に応じて置換されたＣ６〜２０アリール、アンモニウム、アルカリ金属、多座配位子、保護された酸素原子を有する多座配位子前駆体、ならびに、標的化剤、光学的画像化剤、磁気共鳴画像化剤および安定化剤から選択される薬剤を含む化合物から選択され得る；および、Ｒ７は水素またはＣ１〜４アルキルであり得る。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ポリマーコンジュゲートは、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約４０モル％未満の、式（ＩＩ）の繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の繰り返しユニットから選択される繰り返しユニットを含む。別の実施形態において、ポリマーコンジュゲートは、約３０モル％未満の、式（ＩＩ）の繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の繰り返しユニットから選択される繰り返しユニットを含む（同じ基準）。別の実施形態において、ポリマーコンジュゲートは、約２０モル％未満の、式（ＩＩ）の繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の繰り返しユニットから選択される繰り返しユニットを含む（同じ基準）。別の実施形態において、ポリマーコンジュゲートは、約１０モル％未満の、式（ＩＩ）の繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の繰り返しユニットから選択される繰り返しユニットを含む（同じ基準）。別の実施形態において、ポリマーコンジュゲートは、約５モル％未満の、式（ＩＩ）の繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の繰り返しユニットから選択される繰り返しユニットを含む（同じ基準）。別の実施形態において、ポリマーコンジュゲートは、約１モル％未満の、式（ＩＩ）の繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の繰り返しユニットから選択される繰り返しユニットを含む（同じ基準）。
【００３０】
本明細書中に記載される別の実施形態が、酸性水溶液を反応混合物と混合すること、および、ポリマーコンジュゲートを回収することによって、ポリマーコンジュゲートを本明細書中に記載される反応混合物から単離する方法に関連する。１つの実施形態において、酸性水溶液を前記反応混合物と混合することにより、ポリマーコンジュゲートの析出を誘導することができる。
【００３１】
当業者に知られている様々な方法を、ポリマーコンジュゲートを回収するために使用することができる。例えば、ポリマーコンジュゲートをろ過および／または遠心分離によって回収することができる。
【００３２】
所望されるならば、ポリマーコンジュゲートはさらに、当業者に知られている様々な技術を使用して精製することができる。これらの技術は単独で使用することができ、または、他の精製技術との組み合わせで使用することができる。例えば、ポリマーコンジュゲートを水において透析することができる。
【００３３】
好適な酸を、酸性水溶液を作製するために使用することができる。いくつかの実施形態において、酸は鉱酸であり得る。好適な鉱酸の例には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、クロム酸またはそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。１つの実施形態において、酸性水溶液は塩酸水溶液であり得る。
【００３４】
同様に、酸性水溶液の濃度は変化し得る。１つの実施形態において、酸性水溶液は、少なくとも０．５Ｍのモル濃度を有することができる。別の実施形態において、酸性水溶液は、少なくとも０．１Ｍのモル濃度を有することができる。さらに別の実施形態において、酸性水溶液は、少なくとも０．４Ｍのモル濃度を有することができる。なおさらに別の実施形態において、酸性水溶液は、少なくとも０．３Ｍのモル濃度を有することができる。１つの実施形態において、酸性水溶液は、少なくとも０．２Ｍのモル濃度を有することができる。別の実施形態において、酸性水溶液は、少なくとも０．０５Ｍのモル濃度を有することができる。さらに別の実施形態において、酸性水溶液は、少なくとも０．０１Ｍのモル濃度を有することができる。
【００３５】
酸性水溶液のｐＨは、７未満であるｐＨを有する。いくつかの実施形態において、酸性水溶液は、約６未満であるｐＨを有することができる。他の実施形態において、酸性水溶液は、約５未満であるｐＨを有することができる。さらに他の実施形態において、酸性水溶液は、約４未満であるｐＨを有することができる。なおさらなる実施形態において、酸性水溶液は、約３未満であるｐＨを有することができる。
【００３６】
ポリマーコンジュゲートを単離するとき、酸性水溶液を反応混合物と混合することは、酸性水溶液の総体積に対して体積比で約５％を越えるさらなる量の有機溶媒を混合することを含まない。１つの実施形態において、上記方法は、酸性水溶液の総体積に対して体積比で５％未満の有機溶媒を利用することができる。別の実施形態において、酸性水溶液を反応混合物と混合することは、酸性水溶液の総体積に対して体積比で約１％を越えるさらなる量の有機溶媒を混合することを含まない。さらに別の実施形態において、酸性水溶液を反応混合物と混合することは、酸性水溶液の総体積に対して体積比で約０．５％を越えるさらなる量の有機溶媒を混合することを含まない。なおさらに別の実施形態において、酸性水溶液を反応混合物と混合することは、酸性水溶液の総体積に対して体積比で約０．１％を越えるさらなる量の有機溶媒を混合することを含まない。１つの実施形態において、酸性水溶液を反応混合物と混合することは、さらなる実質的な量の有機溶媒を混合することを含まない。
【００３７】
１つの実施形態において、有機溶媒が塩素化溶媒である。塩素化溶媒の例には、クロロホルムおよびジクロロメタンが含まれるが、これらに限定されない。
【００３８】
下記の実施例は、本明細書中に記載される実施形態をさらに記載するという目的のために提供されるものであり、請求項の範囲を限定するものではない。
【実施例１】
【００３９】
ナトリウム形態でのポリグルタミン酸−パクリタキセルコンジュゲートの合成
ポリグルタミン酸（０．６３ｇ）を５０ｍＬの無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に加え、３０分間撹拌した。１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（１９３ｍｇ）を加え、反応混合物をさらに２５分間撹拌した。その後、パクリタキセル（０．３７ｇ）および３０ｍｇの４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。その後、さらなるＥＤＣ（７０ｍｇ）を加え、反応混合物をさらに６時間撹拌した。反応は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）（グラジエントとして１００％酢酸エチル）によって求められるように、遊離パクリタキセルの非存在に基づいて完了していた。
【００４０】
希ＨＣｌ溶液（１７０ｍＬ、０．２Ｍ）を、析出を誘導するために加えた。沈殿物を遠心分離によって回収した。ポリマーコンジュゲートのナトリウム塩を、沈殿物を０．５ＭのＮａＨＣＯ３溶液により溶解することによって得た。溶液を、セルロースのセミメンブラン（ＭＷカットオフ、１０，０００）を２４時間使用して水において２４時間透析した（４Ｌ×４回）。得られた無色透明な溶液を０．４５μｍのフィルターでろ過し、凍結乾燥した。７８０ｍｇのポリグルタミン酸−パクリタキセルコンジュゲート（ＰＧＡ−ＰＴＸ）が得られた。ポリグルタミン酸−パクリタキセルコンジュゲート（ＰＧＡ−ＰＴＸ）が１Ｈ−ＮＭＲによって確認された。ＰＧＡ−ＰＴＸコンジュゲートはまた、多角度光散乱検出器によるゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって確認された。加えて、パクリタキセル含有量をＵＶ−Ｖｉｓ分光法によって求めた。
【実施例２】
【００４１】
酸形態でのポリグルタミン酸−パクリタキセルコンジュゲートの合成
ポリグルタミン酸（０．６３ｇ）を５０ｍＬの無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に加え、３０分間撹拌した。１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（１９３ｍｇ）を加え、反応混合物をさらに２５分間撹拌した。その後、パクリタキセル（０．３７ｇ）および３０ｍｇの４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。その後、さらなるＥＤＣ（７０ｍｇ）を加え、反応混合物をさらに６時間撹拌した。反応は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）（グラジエントとして１００％酢酸エチル）によって求められるように、遊離パクリタキセルの非存在に基づいて完了していた。
【００４２】
希ＨＣｌ溶液（１７０ｍＬ、０．２Ｍ）を、析出を誘導するために加えた。沈殿物を遠心分離によって回収した。ポリマーコンジュゲートのナトリウム塩を、沈殿物を０．５ＭのＮａＨＣＯ３溶液により溶解することによって得た。溶液を、セルロースのセミメンブラン（ＭＷカットオフ、１０，０００）を２４時間使用して水において２４時間透析した（４Ｌ×４回）。得られた無色透明な溶液を０．４５μｍのフィルターでろ過し、凍結乾燥した。
【００４３】
その後、溶液を０．５ＭのＨＣｌ溶液により処理した。形成された固体沈殿物を遠心分離によって単離した。その後、得られた粉末を水により２回洗浄し、凍結乾燥した。８００ｍｇのポリグルタミン酸−パクリタキセルコンジュゲート（ＰＧＡ−ＰＴＸ）が得られた。パクリタキセル含有量をＵＶ−Ｖｉｓ分光法によって求めた。
【００４４】
数多くの様々な改変が、本発明の精神から逸脱することなく行われ得ることが、当業者によって理解される。したがって、本発明の形態は例示にすぎず、本発明の範囲を限定することを意図したものではないことを明確に理解しなければならない。
【図１】
2012505906.tif 000009
【手続補正書】
【提出日】平成23年12月2日(2011.12.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の反応物および第２の反応物を水溶性カップリング剤の存在下で反応させて、反応混合物を形成すること
を含む、ポリマーコンジュゲートを調製する方法であって、
前記第１の反応物が、下記の式（Ｉ）の繰り返しユニット：
【化１】
2012505906.tif 000010
（式中、Ｒ１は、水素、アルカリ金属およびアンモニウムからなる群より選択される）
を含むポリマーであり、
前記第２の反応物が、第１の抗ガン薬物を含む化合物を含み、
前記反応混合物が、式（Ｉ）の繰り返しユニットと、下記の式（Ｉａ）の繰り返しユニット：
【化２】
2012505906.tif 000011
（式中、Ｒ２は前記第１の抗ガン薬物を含む）
とを含むポリマーコンジュゲートを含み、
ただし、
前記方法には、第２の抗ガン薬物、標的化剤、光学的画像化剤、磁気共鳴画像化剤および安定化剤からなる群より選択される薬剤を含む第３の反応物を前記第１の反応物と反応させることは含まれず、かつ、
前記ポリマーコンジュゲートは所定量の式（Ｉ）の前記繰り返しユニットおよび所定量の式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットを含み、この場合、式（Ｉ）の前記繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットの量の和がポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数の約５０モル％を越える、方法。
【請求項２】
前記第１の反応物および前記第２の反応物を触媒の存在下で反応させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の抗ガン薬物が、タキサン系薬物、カンプトテカ（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ）系薬物、アントラサイクリン系薬物、エトポシド、テニポシドおよびエポチロンからなる群より選択される、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の抗ガン薬物がタキサンである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記タキサンがパクリタキセルまたはドセタキセルである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記第１の抗ガン薬物がカンプトテカである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記カンプトテカがカンプトテシンである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記第１の抗ガン薬物がアントラサイクリンである、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記アントラサイクリンがドキソルビシンである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１の反応物および前記第２の反応物を溶媒中で混合することをさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記溶媒がジメチルホルムアミドである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
式（Ｉ）の前記繰り返しユニットの量および式（Ｉａ）の前記繰り返しユニットの量の和が約９５モル％を越える、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ポリマーコンジュゲートが、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約５０モル％未満の、下記の式（ＩＩ）の繰り返しユニットおよび下記の式（ＩＩＩ）の繰り返しユニットからなる群より選択される繰り返しユニット：
【化３】
2012505906.tif 000012
（式中、
ｎおよびｍは独立して、１または２である；
Ａ１およびＡ２は酸素またはＮＲ７である；
Ａ３およびＡ４は酸素である；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれが独立して、必要に応じて置換されたＣ１〜１０アルキル、必要に応じて置換されたＣ６〜２０アリール、アンモニウム、アルカリ金属、多座配位子、保護された酸素原子を有する多座配位子前駆体、ならびに、標的化剤、光学的画像化剤、磁気共鳴画像化剤および安定化剤からなる群より選択される薬剤を含む化合物からなる群より選択される；および
Ｒ７は水素またはＣ１〜４アルキルである）
を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリマーコンジュゲートが、ポリマーコンジュゲートにおける繰り返しユニットの総モル数に基づいて約５モル％未満の、式（ＩＩ）の前記繰り返しユニットおよび式（ＩＩＩ）の前記繰り返しユニットからなる群より選択される繰り返しユニットを含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ポリマーがポリグルタミン酸またはポリグルタメートである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載されるポリマーコンジュゲートを単離する方法であって、酸性水溶液を前記反応混合物と混合すること、および、前記ポリマーコンジュゲートを回収することを含む、方法。
【請求項１７】
前記酸性水溶液が少なくとも約０．２Ｍの鉱酸である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記酸性水溶液が少なくとも約０．０１Ｍの鉱酸である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記鉱酸が塩酸である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記酸性水溶液を前記反応混合物と混合することにより、前記ポリマーコンジュゲートの析出が誘導され、前記ポリマーコンジュゲートがろ過または遠心分離によって回収される、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記酸性水溶液を前記反応混合物と混合することは、前記酸性水溶液の総体積に対して体積比で約５％を越えるさらなる量の有機溶媒を混合することを含まない、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記酸性水溶液を前記反応混合物と混合することは、前記酸性水溶液の総体積に対して体積比で約１％を越えるさらなる量の有機溶媒を混合することを含まない、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記酸性水溶液を前記反応混合物と混合することは、さらなる実質的な量の有機溶媒を混合することを含まない、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記有機溶媒が塩素化溶媒であり、前記塩素化溶媒が、クロロホルムおよびジクロロメタンからなる群より選択される、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記水溶性カップリング剤が１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【国際調査報告】
2012505906.tif 000013
2012505906.tif 000014
2012505906.tif 000015