(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）の含窒素複素環抗菌化合物と他の抗菌化合物との配合物、及び該配合物の薬物としての使用に関する。  含窒素複素環は、一般式（Ｉ）：【化１】2012505196.tif 000024の化合物であり、  式中、Ｒ１は（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２又は（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＲラジカルを表し、ここでＲは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、又ｎは１または２に等しく;  Ｒ２は水素原子を表し;  Ｒ３及びＲ４は、１又は数個のＲ'基によって任意に置換され、かつ該Ｒ'が水素原子と１乃至６個の炭素原子を有するアルキルラジカルとからなる群から選択される１、２、又は３個の窒素原子を含む５個の頂点を持つ芳香族含窒素複素環を、一緒に形成するもので；  遊離型で、双性イオンとして、さらに薬学的に許容される無機または有機の塩基および酸を持つ塩類の形である、抗菌化合物と、  別の抗菌化合物との配合物である。
2012505196.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
相乗効果を有する配合物であって、
一般式（Ｉ）：
【化１】
2012505196.tif 000023
式中、Ｒ１は（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２または（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＲラジカルを表し、ここでＲは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、またｎは１または２に等しく;
Ｒ２は水素原子を表し;
Ｒ３およびＲ４は、１または数個のＲ'基によって任意に置換され、かつ該Ｒ'が水素原子と１ないし６個の炭素原子を有するアルキルラジカルとからなる群から選択される１、２、または３個の窒素原子を含む５個の頂点を持つ芳香族含窒素複素環を、一緒に形成するもので；
遊離型で、双性イオンとして、さらに薬学的に許容される無機または有機の塩基および酸を持つ塩類の形である、抗菌化合物と、
別の抗菌化合物との、配合物。
【請求項２】
請求項１にもとづく配合物であって、
別の抗菌化合物が、アミノグリコシド、ベータラクタム、モノバクタム、ペニシリンから構成される群から選択され、必要に応じてベータラクタマーゼ抑制薬、グリシルサイクリン、テトラサイクリン、キノロン、グリコペプチド、リポペプチド、マクロライド、ケトリド、リンコサミド、ストレプトグラミン、オキサゾリジノン、ポリミキシン、ならびに緑膿菌および腸内細菌に対して治療活性を有する他の化合物と配合される、ことを特徴とする配合物。
【請求項３】
請求項１または２にもとづく配合物であって、
一般式（Ｉ）の化合物のＲ３およびＲ４が、任意に置換されるピラゾリル複素環またはトリアゾリル複素環を一緒に形成することを特徴とする配合物。
【請求項４】
請求項１ないし３のいずれかにもとづく配合物であって、
一般式（Ｉ）の化合物で、Ｒ１が（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２および（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＣＨ３からなる群から選択され、ｎが請求項１に定義されたとおりであり、Ｒ３およびＲ４によって形成される複素環は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルラジカルによって置換される、配合物。
【請求項５】
請求項１ないし４のいずれかにもとづく配合物であって、
一般式（Ｉ）の化合物で、Ｒ１が（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２または（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＣＨ３ラジカルであり、ｎが請求項１に定義されたとおりであり、Ｒ３およびＲ４が一緒に、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルラジカルによって置換されたピラゾリル環を形成する、配合物。
【請求項６】
請求項１ないし３のいずれかにもとづく配合物であって、
一般式（Ｉ）の化合物が、
−  トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−１−メチル−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン、
−  トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン、
−  トランス８−（メチルアミノメチル）−４，８−ジヒドロ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン、
の１つを、遊離型、双性イオンとして、さらに薬学的に許容される無機または有機の塩基および酸を持つ塩類として、
含む、配合物。
【請求項７】
請求項１ないし６のいずれか一項にもとづく配合物であって、
前記他の抗菌化合物が、ベータラクタムまたはペニシリンから構成される群から選択されるもので、必要に応じて、ベータ−ラクタマーゼ抑制薬、アミノグリコシド、およびポリミキシンと併用される、配合物。
【請求項８】
請求項１ないし７のいずれかにもとづく配合物であって、
前記抗菌化合物が、トブラマイシン、メロペネム、アズトレオナム、セファピム、セフタジム、ピエラシリンから構成される群から選択されるもので、必要に応じて、タゾバクタム、コリスチン、およびポリミキシンＢと併用される、配合物。
【請求項９】
請求項１にもとづく配合物であって、
一般式（Ｉ）の化合物が、
−  トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−１−メチル−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン、
−  トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン、
−  トランス８−（メチルアミノメチル）−４，８−ジヒドロ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン、
の１つを、遊離型、双性イオンとして、さらに薬学的に許容される無機または有機の塩基および酸を持つ塩類として、含み；ならびに
前記抗菌化合物が、トブラマイシン、メロペネム、セファピム、セフタジム、アズトレオナム、レボフロキサシン、ピエラシリンから構成される群から選択されるもので、必要に応じて、タゾバクタム、コリスチン、およびポリミキシンＢと併用される、配合物。
【請求項１０】
請求項１ないし８のいずれかに定義されたとおりの前記配合物の薬物としての使用。
【請求項１１】
請求項９に定義されたとおりの前記配合物の薬物としての使用。
【請求項１２】
請求項１１にもとづく少なくとも１つの薬物を活性成分として含む、医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１２にもとづく少なくとも１つの薬物を活性成分として含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、含窒素複素環抗菌化合物と他の抗菌化合物との配合物と、該配合物の薬物としての使用とに関する。
【背景技術】
【０００２】
出願人は、仏国特許出願第０７０２６６３号に記述かつクレームされた式（Ｉ）の化合物と他の抗菌化合物との新規な配合物（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）が、予想外にも顕著な相乗効果によって発現されるたいへん興味深い抗菌特性を有するということを発見した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】仏国特許出願第０７０２６６３号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、含窒素複素環抗菌化合物と他の抗菌化合物との配合物と、該配合物の薬物としての使用とを実現することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、相乗効果を有する配合物であって、
一般式（Ｉ）：
【０００６】
【化１】
2012505196.tif 000003
【０００７】
式中、Ｒ１は（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２または（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＲラジカルを表し、ここでＲは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、またｎは１または２に等しく;
Ｒ２は水素原子を表し;
Ｒ３およびＲ４は、１または数個のＲ'基によって任意に置換され、かつ該Ｒ'が水素原子と１ないし６個の炭素原子を有するアルキルラジカルとからなる群から選択される１、２、または３個の窒素原子を含む５個の頂点を持つ芳香族含窒素複素環を、一緒に形成するもので；
遊離型で、双性イオンとして、さらに薬学的に許容される無機または有機の塩基および酸を持つ塩類の形である、抗菌化合物と、
別の抗菌化合物との、配合物である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明は、遊離型で、双性イオンとして、さらに薬学的に許容される無機または有機の塩基および酸を持つ塩類の形態で、上記に定義されている一般式（Ｉ）の化合物と、別の抗菌化合物との配合物である。
本出願人は、一般式（Ｉ）の化合物が既存の抗菌化合物の活性、特に緑膿菌および腸内細菌に対する活性を高めることができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の相乗的作用のある配合物に固有の特徴は、特に、嚢胞性線維症の患者のみならず院内感染でしばしば遭遇する菌種である緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及び腸内細菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）に対して優れた活性を示すという事実にある。
【００１０】
この特に興味深いおよび予想外の活性は、先行技術の化合物では見られないものであり、該化合物で最も留意すべきものは、以下に定義される式（Ｉ）の含窒素複素環化合物以外のＲ１基を有する化合物が記述されている特許出願ＷＯ０２／１００８６０号の化合物である。
【００１１】
式（Ｉ）のこれらの化合物は、動物感染モデルに対する活性、例えば、一般に用いられる抗生物質に対して、通常、耐性がある株に対する活性を有することが示されている。これらの化合物は、ベータ−ラクタマーゼ、排出ポンプ、およびポリンの変異である菌耐性の主なメカニズムを妨げることができる。
【００１２】
これらの化合物は、以下の式を有する。
【００１３】
【化２】
2012505196.tif 000004
【００１４】
式中、Ｒ１は（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２または（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＲラジカルを表し、ここでＲは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、またｎは１または２に等しく；
Ｒ２は水素原子を表し；
Ｒ３およびＲ４は、１または数個のＲ'基によって任意に置換され、かつ該Ｒ'が水素原子と１ないし６個の炭素原子を有するアルキルラジカルとからなる群から選択される１、２、または３個の窒素原子を含む５個の頂点を持つ芳香族含窒素複素環を、一緒に形成するもので；
該化合物は、遊離型で、双性イオンとして、さらに薬学的に許容される無機または有機の塩基および酸を持つ塩類の形態である。
【００１５】
本出願人は、一般式（Ｉ）の化合物が既存の抗菌化合物の活性、特に緑膿菌および腸内細菌に対する活性を高めることを発見した。
【００１６】
したがって、本発明は、遊離型で、双性イオンとして、さらに薬学的に許容される無機または有機の塩基および酸を持つ塩類の形態で、上記に定義されている一般式（Ｉ）の化合物と、別の抗菌化合物との配合物である。
【００１７】
本明細書中で使用されるように「別の抗菌化合物」という表現は、特に、ベータラクタム、モノバクタム、またはペニシリンであり、必要に応じてベータラクタマーゼ抑制薬、アミノグリコシド、グリシルサイクリン、テトラサイクリン、キノロン、グリコペプチド、リポペプチド、マクロライド、ケトリド、リンコサミド、ストレプトグラミン、オキサゾリジノン、ポリミキシン、ならびに緑膿菌および腸内細菌に対して治療活性を有する他の化合物と併用されるものと考えられる。
【００１８】
アミノグリコシドの例として、アミカシン、ゲンタマイシン、およびトブラマイシンが挙げられる。
【００１９】
ベータラクタムの例として、カルバペネム、例えばイミペネム、メロペネム、エルタペネム、およびＰＺ−６０１として知られている化合物；セファロスポリン、例えばセファゾリン、セフェピム、セホタキシム、セホキシチン、セフタロリン、セフタジジム、セフトビプロール、セフトリアキソン、セフロキシム、およびセファレキシン；モノバクタム、例えばアズトレオナム、ペニシリン、およびベータラクタマーゼの抑制薬（例えばアモキシシリン、アモキシシリン／クラブラン酸塩、アンピシリン、アンピシリン／スルバクタム、オキサシリン、ピペラシリン、ピペラシリン／タゾバクタム、チカルシリン、チカルシリン／クラブラン酸塩、およびペニシリンが挙げられる。
【００２０】
グリシルサイクリンおよびテトラサイクリンの例として、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、テトラサイクリン、およびチゲサイクリンが挙げられる。
【００２１】
キノロン類の例として、シプロフロキサシン、ガチフロキサシン、グレパフロキサシン、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、およびオフロキサシンが挙げられる。
【００２２】
マクロリド類およびケトリド類の例として、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ロキシスロマイシン、およびテリスロマイシンが挙げられる。
【００２３】
ポリミキシンの例として、コリスチンおよびポリミキシンＢが挙げられる。
【００２４】
抗菌化合物の他の例として、ホスホマイシンおよび配合物トリメトプリム/スルファメトキサゾールが挙げられる。
【００２５】
一般式（Ｉ）の化合物において、本明細書中で用いられる「１ないし６個の炭素原子を有するアルキルラジカル」という表現は、特に、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルラジカル、および直鎖状または分岐状のペンチルまたはへキシルラジカルを意味するものと理解される。
【００２６】
本明細書で用いられるように「２ないし６個の炭素原子を有するアルケニルラジカル」という表現は、特に、アリルラジカルおよび直鎖状または分岐状のブテニル、ペンテニル、およびヘキセニルラジカルを意味するものと理解される。
【００２７】
本明細書で用いられるように、「芳香族複素環」という用語は、特に、以下のリストから選択されるもので、窒素含有環（Ｒ３Ｒ４）との結合部を２つの結合によって表している。
【００２８】
【化３】
2012505196.tif 000005
【００２９】
他のものの中で、式（Ｉ）の生成物の酸性塩のなかでも、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、またはリン酸により形成されたもの、あるいは有機酸、例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、シュウ酸、グリオキシル酸、アスパラギン酸、アルカンスルホン酸（例えば、メタンおよびエタンスルホン酸）、アリールスルホン酸（例えば、ベンゼンおよびパラトルエンスルホン酸）により形成されたものに、言及することができる。
【００３０】
他のものの中で、式（Ｉ）の生成物の酸性塩のなかでも、無機酸、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウムまたは水酸化アンモニウムにより形成されたもの、あるいは有機塩基（例えば、メチルアミン、プロピルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル・エタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミンメタン、エタノールアミン、ピリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、モルホリン、ベンジルアミン、プロカイン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、Ｎ−メチルグルカミン、あるいはホスホニウム塩類（例えば、アルキル−ホスホニウム、アリール−ホスホニウム、アルキル−アリール−ホスホニウム、アルケニル−アリール−ホスホニウム）、あるいは第四アンモニウム塩類（例えば、テトラ−ｎ−ブチル−アンモニウム塩）により形成されたものに、言及することができる。
【００３１】
上記に定義される相乗的作用のある配合物のなかでも、本発明は、特に、式（Ｉ）（式中、Ｒ３およびＲ４は、任意に置換されるピラゾリル複素環またはトリアゾリル複素環を一緒に形成する）の化合物を含むものに関する。
【００３２】
これらの配合物のなかでも、本発明は、特に、Ｒ１が（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２基および（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＣＨ３基（ｎは上記に定義したとおり、Ｒ３およびＲ４は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルラジカルによって置換され、Ｒ３およびＲ４によって形成される複素環は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルラジカルによって置換される）から構成される群の中で選択される化合物を含むものに関する。
【００３３】
これらの配合物の中でも、本発明は、特に、Ｒ１が（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２または（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＣＨ３ラジカル（ｎは上記に定義したとおりであり、またＲ３およびＲ４は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルラジカルによって置換されたピラゾリル環を一緒に形成する）を表す化合物に関する。
【００３４】
配合物の中でも、本発明は、特に、式（Ｉ）の化合物を含むものに関し、該化合物は、以下のものから選択される。すなわち、
−  トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−１−メチル−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン、
−  トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン、
−  トランス８−（メチルアミノメチル）−４，８−ジヒドロ−５ｖ（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オンであり、
該化合物は、遊離型で、双性イオンとして、さらに薬学的に許容される無機または有機の塩基および酸を持つ塩類としてある。
【００３５】
上記に定義される配合物の中でも、本発明は、特に、ベータラクタム類またはペニシリン類の中で選択され、必要に応じてベータラクタマーゼ抑制薬、アミノグリコシド、およびポリミキシンと配合される抗菌化合物を含むものに関する。
【００３６】
これらの配合物の中でも、本発明は、特に、トブラマイシン、メロペネム、アズトレオナム、セフェピム、セフタジジム、ピペラシリンの中から選択され、必要に応じてタゾバクタム、コリスチン、およびポリミキシンＢと配合される抗菌化合物を含むものに関する。
【００３７】
式（Ｉ）の化合物は、以下のステップを含む方法によって調製することができる。すなわち、該方法は、
（ａ）式（ＩＩ）の化合物：
【００３８】
【化４】
2012505196.tif 000006
【００３９】
（式中、Ｒ'１は保護ＣＯＯＨ，ＣＯＯＲ、または（ＣＨ２）ｎＲ'５ラジカルを示し、
Ｒ'５は、保護ＯＨ、ＣＮＮＨ２または保護ＮＨＲ、保護ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２Ｒラジカルであり、
ｎ、Ｒ、Ｒ３、およびＲ４は、上記に定義したように、Ｒ３およびＲ４によって形成される複素環上に任意に存在し、必要に応じて保護されるアミノアルキル置換基であり、
ＺＨは、保護ＮＨＯＨ基を示す）を、必要に応じて塩基の存在下、カルボニル化剤と反応させ、
中間体化合物を得る最後に、式（ＩＩＩ）：
【００４０】
【化５】
2012505196.tif 000007
【００４１】
（式中、Ｒ'１、Ｒ３、Ｒ４は上記と同様の意味を有し、Ｘ１は水素原子または保護基のいずれか一方、およびＸ２はＺ−ＣＯ−Ｘ３基であり、ここでＸ３はカルボニル化剤の残りの部分を示す）と反応させるステップと、
（ｂ）上記で得られた中間体を、塩基の存在下、環化するステップと、
必要に応じて、
（ｃ）ステップ（ａ）に先だって、および／またはステップ（ｂ）の後に、以下の反応、すなわち、
−  反応性官能基の保護、
−  反応性官能基の脱保護、
−  エステル化
−  鹸化、
−  硫酸化、
−  エステル化還元、
−  アルキル化、
−  カルバモイル化、
−  アジド基の形成、
−  アミンへのアジドの還元、
−  塩化、
−  イオン交換、
−  ジアステレオ異性体の分割または分離
を適当な順番でおこなうステップと、を含む。
【００４２】
カルボニル化剤として、試薬（例えばホスゲン、ジホスゲン、トリホスゲン）、クロロギ酸アリール（例えばクロロギ酸フェニルまたはクロロギ酸ｐ−ニトロフェニル）、クロロギ酸アラルキル（例えば、クロロギ酸ベンジル）、クロロギ酸アルキルまたはクロロギ酸アルケニル（例えば、クロロギ酸メチルまたはクロロギ酸アリル）、アルキルジカルボン酸塩（例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジカルボン酸塩）、カルボニル−ジイミダゾール、およびそれらの混合物を使用することができ、好ましくはジホスゲンである。
【００４３】
反応は、好ましくは、形成された酸を中和する塩基または複数の塩基の混合物の存在下で、おこなわれる。塩基は、特に、アミン（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、ジメチルアミノピリジン）である。しかし、式ＩＩの出発物質を塩基として用いて操作することも可能である。その場合、過剰に用いられる。
【００４４】
必要に応じて、式ＩＩの生成物を、酸塩、例えば塩酸塩またはトリフルオロ酢酸塩の形態で用いる。
【００４５】
ステップ（ｂ）の塩基として、アミン類、アルカリ金属またはアルカリ土金属の水素化物、アルコラート類、アミド類、または炭酸塩類を用いることも可能である。
【００４６】
例えば、上記のリストからアミン類を選択することができる。
【００４７】
水素化物として、水素化ナトリウムまたは水素化カリウムを使用することができる。
【００４８】
アルカリ金属アルコラートとして、好ましくは、ｔｅｒｔ−ブチル化カリウムを用いる。
【００４９】
アルカリ金属アミドとして、特に、リチウムビス（トリメチルシリル）アミドを用いることができる。
【００５０】
炭酸塩として、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムあるいは重炭酸ナトリウムまたは重炭酸カリウムを用いることができる。
【００５１】
必要に応じて、式ＩＩＩを有する中間体を、カルボニル化反応中に生ずる酸塩、特に塩酸塩の形態で、得ることができる。次に、この形態で、環化反応で用いる。
【００５２】
好ましくは、式ＩＩＩを有する中間体を単離することなしに、環化をおこなう。
【００５３】
ステップ（ｃ）で言及した反応は、一般に、従来の反応であり、当業者に周知のものである。使用した条件の例は、特許出願ＷＯ０２／１００８６０に記載されており、また特許出願第０４／０５２８９１号にも記載されている。
【００５４】
保護を必要とする反応性官能基は、必要に応じて、カルボン酸、アミン、アミド、ヒドロキシおよびヒドロキシルアミン官能基である。
【００５５】
酸官能基の保護は、特に、アルキルエステル類、アリル、ベンジル、ベンズヒドリルまたはｐ−ニトロベンジルエステル類の形で提供される。
【００５６】
脱保護は、鹸化、酸加水分解、水素添加分解、または可溶性パラジウムＯ錯体を用いた開裂によって、おこなわれる。
【００５７】
これらの保護および脱保護の例は、特許出願ＷＯ０２／１００８６０で補足される。
【００５８】
アミン類、複素環窒素およびアミド類の保護は、特に、場合に応じて、ベンジルまたはトリチル化誘導体の形態で、カルバメート類、特にアリル、ベンジル、フェニルもしくはｔｅｒｔ−ブチルカーバメート類の形態で、あるいはシリル化誘導体（例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチル、トリメチル、トリフェニルまたはジフェニルｔｅｒｔ−シリル誘導体、あるいはフェニルスルホニルアルキルまたはシアノアルキル誘導体の形態で、提供される。
【００５９】
脱保護は、保護基の性質に応じて、液体アンモニア中のナトリウムまたはリチウムによって、水素添加分解もしくはパラジウムＯ錯体の使用によって、酸の作用またはフッ化テトラブチルアンモニウムもしくは強塩基（例えば、水素化ナトリウムもしくはｔｅｒｔ−ブチル化カリウム）の作用によって、なされる。
【００６０】
ヒドロキシルアミン類の保護は、特に、ベンジルまたはアリルエーテルの形態で、おこなわれる。
【００６１】
エーテルの開裂は、可溶性パラジウムＯ錯体を用いておこなう。
【００６２】
アルコールおよびフェノールの保護は、エーテル、エステルまたは炭酸塩類の形態で、従来の方法でおこなう。エーテルはアルキルまたはアルコキシアルキルエーテルであり、好ましくはメチルまたはメトキシエトキシメチルエーテル、アリールエーテル、あるいは好ましくはアラルアルキルエーテル（例えば、ベンジルエーテル）、あるいはシリル化エーテル（例えば、上記に言及したシリル化誘導体）である。エステルは、当業者に公知の開裂可能な任意のエステルであり、好ましくは酢酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸エステルまたはｐ−ニトロ安息香酸エステルである。炭酸塩類は、例えば、メチル、ｔｅｒｔ−ブチル、アリル、ベンジルまたはｐ−ニトロベンジル炭酸塩類である。
【００６３】
脱保護は、当業者に公知の手段によってなされるもので、特に、鹸化、水素添加分解、可溶性パラジウムＯ錯体による開裂、酸性媒体での加水分解、あるいはシリル化誘導体に対しては、フッ化テトラブチルアンモニウムによる処理によって、おこなわれる。
【００６４】
実施例を、実験を説明する部分に示す。
【００６５】
硫酸化反応は、ＳＯ３−アミン類、例えばＳＯ３−ピリジンまたはＳＯ３−ジメチルホルムアミド（ピリジンで働く）の作用によっておこなわれ、形成された塩（例えば、ピリジン塩）は、次に、例えば別のアミン、四級アンモニウムまたはアルカリ金属の塩と交換される。一例を、実験を説明する部分に示す。
【００６６】
アルキル化反応は、ヒドロキシル化誘導体、エステルまたはケトンエノラート、複素環アミン類または窒素上での作用によっておこなわれ、アルキル硫酸塩またはハロゲン化アルキルまたは置換されたアルキルの場合、特に、遊離またはエステル化カルボキシラジカルによって、おこなわれる。アルキル化反応はまた、アミノ化を減らすことによっても、おこなえる。
【００６７】
酸による塩化は、必要に応じて、化合物の可溶相に対して酸を添加することによって、おこなわれる。スルホキシ官能基の塩基による塩化は、ＳＯ３−ピリジン錯体が作用している間に得られるピリジニウム塩を用いて、おこなわれ、他の塩類はピリジニウム塩から得られる。樹脂上でのイオン交換もおこなわれる。
【００６８】
カルバモイル化反応は、クロロギ酸エステルまたはＢｏｃ−ＯＮ型の反応性を用い、次に、アミンまたは必要に応じてアンモニアを用いて、おこなわれる。
【００６９】
アジド基の導入は、例えば、メシラート型中間体に対するアゾ化ナトリウムの作用またはミツノブ型の反応によって、おこなわれる。
【００７０】
アジド基の還元は、トリアルキルまたはトリアリールホスフィンの作用によって、おこなわれる。
【００７１】
光学異性体およびジアステレオ異性体の分離は、当業者に公知の技術、特に、クロマトグラフィにもとづいて、おこなわれる。
【００７２】
上記した方法とは別に、式（Ｉ）の化合物は、最初に式（ＩＩ）の化合物を用いる方法によって得られるもので、該式（ＩＩ）中、Ｒ'１、Ｒ３、Ｒ４およびＨＺは、合成が望まれる化合物のものに直接至る（転換無しに）値を有する。必要に応じて、上記で言及したような反応性官能基を含むと思われるこれらの基の化合物は、保護されており、また脱保護が環化のステップ（ｂ）の後に、または合成中の任意の他の適当な時間におこなわれる。したがって、保護および脱保護は、上記のようにして、おこなわれる。
【００７３】
式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＶ）の化合物が処理される方法によって、得られる。
【００７４】
【化６】
2012505196.tif 000008
【００７５】
この式中、Ｒ'１、Ｒ３、およびＲ４は上記に定義したとおり、Ａは水素原子または、還元剤によって式（Ｖ）の化合物を得るために、窒素を保護する基である。
【００７６】
【化７】
2012505196.tif 000009
【００７７】
式中、Ａ、Ｒ'１、Ｒ３、およびＲ４は、上記に指摘した意味を保持しており、ここで、必要に応じて、ＯＨ基が離脱基によって置換されることで、式（ＶＩ）の化合物を得る。
【００７８】
【化８】
2012505196.tif 000010
【００７９】
式中、Ａ、Ｒ'１、Ｒ３、およびＲ４は、上記に指摘した意味を保持しており、Ｒ９が離脱基を表し、それが式Ｚ１Ｈ２（Ｚ１は保護−ＨＮ−ＯＨ基を表す）によって処理され、また必要に応じて、適当な窒素原子の脱保護剤によって処理される。
【００８０】
式（ＩＩ）の化合物は、さらに、ヒドロキシル基のところで保護されたヒドロキシルアミンによって、式（ＩＶ）の化合物が上記に定義したように処理され、式（ＶＩＩ）の化合物を得る。
【００８１】
【化９】
2012505196.tif 000011
【００８２】
式中、Ａ、Ｒ'１、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'４、ｎおよびＲ'８は、上記のように定義され、式（ＶＩＩＩ）の化合物を得るために、還元剤と反応させられる。
【００８３】
【化１０】
2012505196.tif 000012
【００８４】
式中、Ａ、Ｒ'１、Ｒ３、Ｒ４、ｎ”およびＺＨは、上記のように定義され、それが必要に応じて、適当な窒素源の脱保護によって処理される。
【００８５】
窒素保護剤は、特に、上記した窒素保護剤のうちの１つである。
【００８６】
還元剤は、特に、アルカリ水素化ホウ素である。
【００８７】
離脱基は、スルホン酸塩（例えばメシレートまたはトシレート）であり、該スルホン酸塩は、特に、塩基、またはハロゲン、より詳しくは、塩素、臭素またはヨウ素の存在下、対応する塩化スルホニルの作用によって、例えば塩化チオニルまたはＰ（Ｃ６Ｈ５）３ＣＢｒ４もしくはＰＢｒ３の作用によって、あるいは、ヨウ素原子の存在下、スルホン酸塩に対するアルカリ性ヨウ化物の作用によって、得られる。
【００８８】
脱保護剤は、特に、上記した脱保護剤のうちの１つである。
【００８９】
式（ＶＩＩ）の化合物上で使用される還元剤は、特に、シアノナトリウムまたはアセトキシホウ化水素である。
【００９０】
上に示したように、一般式（Ｉ）の化合物は、既存の抗菌化合物の活性、特に、一般に使用される抗菌剤に対する耐性を持つ株による動物感染モデルと同様に、緑膿菌および腸内細菌に対する活性を増強する。そのような驚くべき予想外の抗生物質活性が従来の化合物に関しては観察されなかった。
【００９１】
これらの特性によって、本発明の相乗的作用のある配合物が、薬物としての使用に適した、特に緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）および腸内細菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）による重症感染症、特に院内感染、一般に、発症の危険性がある被験体での主な感染症の治療に適したものになる。特に、これらの感染症として、呼吸器感染症（例えば急性肺炎もしくは下気道の慢性疾患）、血液感染症（例えば、敗血症、尿試験管の急性もしくは慢性感染症）、聴覚系の感染症（例えば、悪性外耳炎、もしくは化膿性皮膚洞）、皮膚および柔組織の感染症（例えば、皮膚炎、感染創、毛嚢炎、膿皮症、頑丈な座瘡）、眼感染症（例えば、角膜潰瘍）、神経系の感染症（とりわけ脳膜炎および脳膿瘍）、心感染症（例えば、心内膜炎）、骨および関節の感染症（例えば、骨関節感染症、化膿性脊椎炎、恥骨結合炎）、消化器官の感染症（例えば、壊死全腸炎および直腸周囲感染症）が挙げられる。
【００９２】
したがって、本発明はさらに、薬物として、特に抗生物質として、上記に定義されるような相乗的作用のある配合物に関する。
【００９３】
これらの配合物の中でも、本発明は特に、式（Ｉ）（式中、Ｒ３およびＲ４は、任意に置換されるピラゾリル複素環またはトリアゾリル複素環を一緒に形成する）の化合物を含むものからなる薬物としての使用に関する。またこれらの中でも、Ｒ１が（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２基および（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＣＨ３，基（ｎは上記に定義したとおり、Ｒ３およびＲ４は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルラジカルによって置換され、Ｒ３およびＲ４によって形成される複素環は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルラジカルによって置換される）から構成される群から選択され、Ｒ３およびＲ４によって形成される複素環は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルラジカルによって置換される。
【００９４】
これらの配合物の中でも、より詳しくは、本発明は、Ｒ１が（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２または（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＣＨ３ラジカル（ｎは上記に定義したとおりであり、またＲ３およびＲ４は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルラジカルによって置換されたピラゾリル環を一緒に形成する）を表す化合物を含むものの薬物の使用に関する。
【００９５】
これらの配合物の中でも、よりいっそう詳しくは、本発明は、以下の化合物の少なくとも１つを含むものの薬物としての使用に関する。すなわち、該化合物は、
−  トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−１−メチル−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン、
−  トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン、
−  トランス８−（メチルアミノメチル）−４，８−ジヒドロ−５−（スルホオキシ） ４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オンであり、
該化合物は、遊離型で、双性イオンとして、さらに薬学的に許容される無機または有機の塩基および酸を持つ塩類としてある。
【００９６】
これらの配合物の中でも、本発明は、特に、アミノグリコシド、ベータラクタム、ペニシリン（必要に応じてベータ−ラクタマーゼ抑制薬およびポリミキシンと配合）から選択される抗菌化合物（必要に応じてベータ−ラクタマーゼ抑制薬およびポリミキシンと配合）を含むものの薬物としての使用に関する。
【００９７】
これらの配合物の中でも、本発明は、特に、トブラマイシン、メロペネム、セフェピム、セフタジジム、アズトレオナム、レボフロキサシン、ピペラシリンから選択される抗菌化合物（必要に応じて、タゾバクタム、コリスチンおよびポリミキシンＢと配合）を含むものの薬物としての使用に関する。
【００９８】
本発明はまた、上記に定義したとおりの相乗的作用のある配合物を活性成分として含む医薬組成物に関する。
【００９９】
これらの組成物の投与は、経口投与、直腸投与、非経口投与、特に筋注、または皮膚および粘膜に対する局所適用による投与によって、おこなわれる。
【０１００】
発明にもとづく組成物は、固形または液体であり、ヒトの医薬で現在使用されている剤形（例えば単純もしくは被覆錠剤、カプセル、顆粒、坐薬、注射可能な製剤、軟膏、クリーム、ゲル類）の状態で、存在しており、それらは通常の方法にもとづいて調製される。一種類の有効成分または複数の有効成分を、それらの医薬組成物で通常使用される賦形剤に取り込ませることが可能であり、該賦形剤としては、例えば、タルク、アラビアゴム、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、カカオバター、水性または他の培地（ｍｅｄｉｕｍ）、動物または植物由来の脂肪体、パラフィン誘導体、グリコール、異なる湿潤剤、分散剤、または乳化剤、防腐剤である。
【０１０１】
これらの組成物は、適当な溶媒（例えば発熱因子のない滅菌水）で必要に応じて溶けるように設計された凍結乾燥品の形態を取ることができる。
【０１０２】
したがって、本発明にもとづく組成物は、このように別に、少なくとも２種類の有効成分を含むもので、該成分を同時に投与、別々に投与、または時間とともに分散する投与することができる。それらは、例えば、キットの形態で提供し得るものであり、一般式（Ｉ）の化合物の投与と、別の抗菌化合物の投与とを、別々におこなうことを可能にする。
【０１０３】
投与される式（Ｉ）の化合物の投与量を、治療を受けている症状の重症度および性質、特定の患者、投与経路、及び併用する他の抗菌製品に応じて、変えることができる。例えば、ヒトの場合、実施例１に記載する生成物を用いて、経口経由で１日あたり０．２５０ｇから１０ｇの範囲、または筋肉内もしくは静脈内経路によって、１日あたり０．２５ｇから１０ｇの範囲とすることができる。
【０１０４】
他の抗菌化合物の投与量もまた、治療を受けている症状、特定の患者、投与経路、および併用する生成物に応じて、変えることができるが、一般には、例えば、フランスの医薬品情報集（Ｆｒｅｎｃｈ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｖｉｄａｌ）に記載されているような、開業医に処方される典型的な服用量に従う。この服用量を、1日あたり最大で１０ｇまで、またはそれ以上にすることができる。それにもかかわらず、一般式（Ｉ）の化合物の他の抗菌化合物に対する相乗作用によって提供される相乗作用の結果として、配合物の一部としての後者の服用量を、標準的な服用量と比較して、減少させることができる。
【０１０５】
本発明の配合物を、外科用器具のための消毒薬として、使用することもできる。
【０１０６】
以下の実施例は、式（Ｉ）の化合物の調製を説明するものである。他の抗菌化合物は、周知であり、かつ市販されている。
【実施例】
【０１０７】
実施例
実施例１：トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−１−メチル−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オンのナトリウムおよびトリフルオロ酢酸塩
【０１０８】
ステージＡ：
６−（１，１−ジメチル−エチル）および７−メチル（Ｂ）の４，７−ジヒドロ−１−メチル−４−（（フェニルメトキシ）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン−６（５Ｈ），７−ジカルボン酸塩
【０１０９】
誘導体Ａ  特許出願ＷＯ０２１００８６０に記載された６−（１，１−ジメチルエチル）および７−メチルの（４，７−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン−６（５Ｈ），７−ジカルボン酸塩（１０ｇ、３２．１２ｍｍｏｌ）を、窒素下、周囲温度で撹拌しながら、ジクロロメタン（１００ｍｌ）中に懸濁させる。トリエチルアミンを添加した後、この懸濁液を溶解する（１４．３０ｍｌ、１０．２８ｍｍｏｌ、３．２当量）。メタンスルホニルクロリド（１１．４ｍｌ、９６．３６ｍｍｏｌ、３当量）のジクロロメタン（１２ｍｍｌ、１容量）溶液を、−７８℃に冷やした反応培地に滴加する。３０分接触の後、アルコールＡをメシレートへ完全に転化させる。
【０１１０】
Ｏ−ベンジル−ヒドロキシアミンのジクロロメタン溶液を、Ｏ−ベンジルヒドロキシアミン塩酸塩（２５．４ｇ、１６０．６ｍｍｏｌ、５当量）から新たに調製する。このＯ−ベンジルヒドロキシアミン塩酸塩を、Ｏ−ベンジルヒドロキシアミン塩酸塩（１００ｍｌ）と水（５０ｍｌ）との混合液に溶解する。２Ｎ水酸化ナトリウム溶液（８５ｍｌ、１７６．６６ｍｍｏｌ）を０℃で添加する。１０分間接触させてデカントした後、有機相を４５分間にわたりリン酸マグネシウム上で乾燥させて、容量が半分になるまで濃縮する。この溶液の添加を、上記のように調製したメシラートに対して、１時間わたり−７８℃で滴加する。反応混合物を撹拌し、温度を徐々に周囲温度にまで高める。水（２００ｍｌ）を加え、それをジクロロメタン（１００ｍｌ）で希釈し、撹拌し、デカントした後、水相をジクロロメタンで再抽出する。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液（２００ｍｌ）で洗い、乾燥させた後、乾燥させて濃縮する。白色の非結晶質粉末を回収する。クロマトグラフィにかけた後、この粉末から、期待されるＢ誘導体が得られる（８．２５ｇ、６６％）。
【０１１１】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋］＝４１７．２
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：１ジアステレオ異性体（２ロタマー）σ（ｐｐｍ）＝１．４３（ｓ、９Ｈ、ｔＢｕ）、３．１５（ｄｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．６８／３．７０（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．８４（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．９８（ｍ、２Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．６−４．８（マッシブ、３Ｈ、ＮＨ−Ｏ−ＣＨ２−ＰｈおよびＮ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、５．４０／５．８（ｓ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＯ２Ｍｅ）、７．２２−７．３１（マッシブ、５Ｈ、Ｐｈ）、７．４０（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）
【０１１２】
ステージＢ：
トランス１−メチル−６−オクソ−５−（フェニルメトキシ）−４，５，６，８−テトラヒドロ−４，７−メタノ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８（７Ｈ）メチルカルボン酸塩（Ｃ）
【０１１３】
ＨＣｌ／ジオキサンの４Ｎ溶液（４００ｍｌ、５当量）を、周囲温度でジオキサン（５０ｍｌ）に溶解したＢの溶液（２１ｇ、５０．４２ｍｍｏｌ）に注ぐ。反応混合物を３０分間撹拌し、次にジオキサンを蒸発させる。撹拌しながら、残滓を水（１００ｍｌ）と酢酸エチル（５００ｍｌ）との混合物に取り入れる。２０％（４２ｍｌ）に濃縮したアンモニア溶液を０℃で添加する。撹拌を３０分間続ける。デカントした後、水相を酢酸エチル（２＊３００ｍｌ）で再抽出し、最終抽出を、ＮａＣｌによる水相の飽和後におこなう。有機相を乾燥させた後、濃縮する。中間体脱保護ピペリジンが黄色の油の形態（ｍ＝１５．７ｇ、９８％）で得られ、これをアセトニトリル（４００ｍｌ）に取り入れる。０℃に冷やしたこの混合物に対して、トリエチルアミン（２１ｍｌ、１５１．２ｍｍｏｌ、３当量）を添加し、次にジホスゲン（３．０４ｍｌ、２５．２ｍｍｏｌ、０．５当量）を３０分にわたり滴加する。周囲温度で一晩接触させた後、培地を濃縮し、酢酸エチル（５００ｍｌ）に取り入れ、酒石酸の１０％溶液（２００ｍｌ）で処理する。混合物を撹拌してデカントする。有機相を１０％酒石酸溶液（２＊２００ｍｌ）で洗い、次に飽和ＮａＣｌ溶液で洗った後、乾燥させ、さらに減圧下で濃縮する。得られた白色の生成物（ｍ＝１５．３ｇ、８９％）をジクロロメタン（１５０ｍｌ）に取り入れる。１−８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス−７−エン（７．５３ｍｌ、５０．０４ｍｍｏｌ）を滴加する。混合物を２時間撹拌し、水（２００ｍｌ）で処理し、撹拌し、デカントする。有機相を水（２＊２００ｍｌ）で洗い、次に飽和ＮａＣｌ溶液（１＊２００ｍｌ）で洗い、さらにＭｇＳＯ４上で乾燥させることで、乾燥するまで濃縮させる。
【０１１４】
期待される誘導体Ｃが白色の固体として回収される（ｍ＝１４．７２ｇ、８５％）。
【０１１５】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋］＝３４３
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝３．２５（ｄ，１Ｈ，Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ），３．４５（ｄ，１Ｈ，Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ），３．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），３．８８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），３．９（ｓ，１Ｈ，Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ），４．７（ｄ，１Ｈ，Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ），５．０２（ｄ，１Ｈ，Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ），５．２２（ｓ，１Ｈ，ＣＨ−ＣＯ２Ｍｅ），７．３９−７．４３（マッシブ，６Ｈ，Ｈピラゾール＋Ｐｈ）
【０１１６】
ステージＣ：
４，８−ジヒドロ−８−（ヒドロキシメチル）−１−メチル−５−（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン（Ｄ）
【０１１７】
Ｃ（５ｇ、１４．６０ｍｍｏｌ）を含むテトラヒドロフラン（１５０ｍｌ）／メタノール（５０ｍｌ）からなる溶液を、窒素下かつ撹拌しながら、−１０℃に冷やす。ホウ化水素リチウム（６６８ｍｇ、３０．６７ｍｍｏｌ、１．２当量）を反応培地に添加する。−１０℃で２時間撹拌後、ＬｉＢＨ４をさらに１．２当量添加する。反応混合物を２時間冷やした後に、１０％ＮａＨ２ＰＯ４の溶液で処理する。テトラヒドロフランおよびメタノールを減圧下で蒸発させる（２００ｍｂａｒ、４０℃）。残りの混合物を酢酸エチル（２００ｍｌ）に取り入れ、撹拌し、さらにデカントする。水相を１００ｍｌ酢酸エチルによって再抽出する。硫酸マグネシウム上で有機相を乾燥させて濃縮することで、乾燥させる。得られた淡黄色の粉末（６．６ｇ）を二酸化ケイ素上でクロマトグラフィ（溶離液：酢酸エチル）にかけることで、誘導体いなＤ（３．２ｇ、１０．１８ｍｍｏｌ、６４％）が得られる。
【０１１８】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋］＝３１５
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝３．１６（ｄｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．４８（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．７１（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．８１−３．９１（マッシブ、２Ｈ、ＣＨ２ＯＨ）、４．４４（ｍ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．４８（ｍ、１Ｈ、ＣＨＣＨ２ＯＨ）、４．８８（ｍ、２Ｈ、Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、５．２０（ｍ、１Ｈ、ＯＨ）、７．３５−７．４０（マッシブ、６Ｈ、Ｈピラゾール＋Ｐｈ）。
【０１１９】
ステージＤ：
トランス４，８−ジヒドロ−１−メチル−８−［（メチルスルホニル）オキシメチル）］−５−（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン（Ｅ）
【０１２０】
誘導体Ｄ（２．７６ｇ、８．７８ｍｍｏｌ）を、窒素下、周囲温度で撹拌しながら、ジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解する。０℃に冷やした後、トリエチルアミン（１．８３ｍｌ、１３．１７ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、さらに塩化メシル（１．６１ｇ、１４．０５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍｌ）溶液を滴加する。添加の終わりに、氷浴を取り除く。周囲温度で１時間の接触後、反応物を撹拌しながらＮａＨ２ＰＯ４の１０％溶液（８０ｍｌ）で処理する。撹拌およびデカントの後、水相をジジクロロメタン（５０ｍｌ）で再抽出する。有機相を乾燥させた後、減圧下で濃縮して、期待される誘導体（３．４４ｇ、定量的収量）が得られる。
【０１２１】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋］＝３９３
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝３．２３（ｄｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．２６（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．４５（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．７６（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、４．５２（ｍ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．５８（ｄｄ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−ＯＭｓ）、４．６６（ｄｄ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−ＯＭｓ）、４．８８（ｍ、３Ｈ、ＣＨＣＨ２ＯＭｓおよびＮ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、７．３５−７．４５（マッシブ、６Ｈ、Ｈピラゾール＋Ｐｈ）。
【０１２２】
ステージＥ：
トランス８−（アジドメチル）−４，８−ジヒドロ−１−メチル−５−（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン（Ｆ）
【０１２３】
窒素下、周囲温度で撹拌しながら、アジ化ナトリウムを全て一度に、Ｅ（３．４４ｇ、８．７８ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（７０ｍｌ）溶液に添加する（１７１ｇ、２６３ｍｍｏｌ）。反応培地を一晩、６５℃に加熱した後、１０％ＮａＨ２ＰＯ４の水溶液（５０ｍｌ）で処理する。撹拌およびデカントをおこなった後、水相をジクロロメタン（２＊５０ｍｌ）で再抽出し、有機相を乾燥させた後、減圧下で濃縮することで、期待される誘導体Ｆ（３ｇ、８．７８ｍｍｏｌ）が３．９６ｇ得られる。
【０１２４】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋］＝３４０
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝３．２０（ｄｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．４８（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．６６（ｄｄ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ３）、３．７２（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．９２（ｄｄ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ３）、４．５０（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．７６（ｄｄ、１Ｈ、ＣＨＣＨ２ＯＮ３）、４．８９（ｍ、２Ｈ、Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、７．３５−７．４５（マッシブ、６Ｈ、Ｈピラゾール＋Ｐｈ）。
【０１２５】
ステージＦ：
１，１−ジメチルエチル（Ｇ）のトランス［［４，５，６，８−テトラヒドロ−１−メチル−６−オクソ−５−（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−イル］メチル］−カルバメート
【０１２６】
トリメチルホスフィンのモル液（３．４ｍｌ、３．４ｍｍｏｌ）を、トルエン（５ｍｌ）とテトラヒドロフラン（５ｍｌ）との混合液中にＦ（１．１５ｇ、３．３９ｍｍｏｌ）を含んでなる溶液に、窒素下、周囲温度で撹拌しながら、滴加する。３時間接触後、０℃に冷やしたこの反応培地に対して、ＢＯＣ−ＯＮ（０．９２ｇ、３．６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液を滴加する。撹拌を周囲温度で３時間続ける。反応培地を１０％ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍｌ）で処理する。撹拌およびデカントをおこなった後、水溶液を酢酸エチル（５０ｍｌ）により再抽出する。有機相を乾燥させた後、減圧下で濃縮することで、２．２ｇの油が得られる。未精製の生成物を二酸化ケイ素カラム（溶離液シクロヘキサン／酢酸エチル５／５）上でクロマトグラフィにかける。期待される生成物が得られる（０．６２ｇ、１．４９ｍｍｏｌ、７０％）。
【０１２７】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋］＝４１４
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１．３９（ｓ、９Ｈ、ｔＢｕ）、３．０５（ｄｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．１９（ｄｄ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−ＮＨＢＯＣ）、３．２７（ｄｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．７２（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．７８（ｍ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−ＮＨＢＯＣ）、３．８８（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．４８（ｄｄ、１Ｈ、ＣＨＣＨ２ＮＨＢＯＣ）、４．７９（ｄ、１Ｈ、Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、４．９２（ｄ、１Ｈ、Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、５．１８（ｍ、１Ｈ、Ｈモバイル）、７．３５（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）、７．３７−７．４８（マッシブ、５Ｈ、Ｐｈ）
【０１２８】
ステージＧ：
１，１−ジメチルエチル（Ｈ）のトランス［［４，５，６，８−テトラヒドロ−１−メチル−６−オクソ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−イル］メチル］−カルバメートのピリジニウム塩
【０１２９】
活性炭担持１０％パラジウム（１４０ｍｇ）をＧ（０．６ｇ、１４５ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）溶液に添加する。反応培地を３時間、水素添加する。次に、エタノールを減圧下で蒸発させて、脱ベンジル化誘導体が得られる。
【０１３０】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋］＝３２４
【０１３１】
ピリジン／無水硫酸錯体（４６２ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）の存在下、脱ベンジル化中間体をピリジン（３ｍｌ）に取り入れる。この反応を一晩、周囲温度で撹拌しながら維持する。次に、減圧下で、培地を濃縮する。未精製反応生成物を、二酸化ケイ素カラム（溶離液100%ジクロロメタン、次にメタノール５％から２０％までの勾配）上でクロマトグラフィにかけることで、誘導体Ｈ（０．４９ｇ、１２５ｍｍｏｌ、８４％）が得られる。
【０１３２】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ−］＝４０２
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝１．４１（ｓ、９Ｈ、ｔＢｕ）、３．３０−３．８０（マッシブ、４Ｈ、２ＣＨ２）、３．７２（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、４．４２（ｄｄ、１Ｈ、ＣＨＣＨ２ＯＮＨＢＯＣ）、４．６４（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、７．２１（ｍ、１Ｈ、Ｈモバイル）、７．３５（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）、８．０２（ｄｄ、２Ｈ、ピリジン）、８．５４（ｍ、１Ｈ、ピリジン）、８．９１（ｍ、２Ｈ、ピリジン）
【０１３３】
ステージＨ：
１，１−ジメチルエチル（Ｉ）のトランス［［４，５，６，８−テトラヒドロ−１−メチル−６−オクソ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−イル］メチル］−カルバメートのナトリウム塩
【０１３４】
６０ｇのＤＯＷＥＸ５０ＷＸ８樹脂を２Ｎ水酸化ナトリウム（３００ｍｌ）溶液に加えてなる懸濁液を１時間撹拌し、その後クロマトグラフィカラムに注ぐ。ｐＨが中性になるまで、脱塩水で溶出をおこない、続いて水／ＴＨＦの９０／１０混合物でコンディショニングする。誘導体Ｈ（０．４９ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を最小量の水に溶解し、カラムに載せ、水／ＴＨＦの９０／１０混合物で溶出する。基質を含む分画をプールして凍結する。凍結溶液を解凍することで、期待される生成物Ｉ（０．４４ｇ、１．０３ｍｍｏｌ、１００％）を得る。
【０１３５】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ−］＝４０２
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝１．３９（ｓ、９Ｈ、ｔＢｕ）、３．３０−３．７２（ｍ、７Ｈ、２ＣＨ２、ＣＨ３）、４．４２（ｍ、１Ｈ、ＣＨＣＨ２ＯＮＨＢＯＣ）、４．６４（ｓ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、７．１６（ｍ、１Ｈ、Ｈモバイル）、７．３５（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）。
【０１３６】
ステージＩ：
トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−１−メチル−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン（Ｊ）のナトリウムおよびトリフルオロ酢酸塩
【０１３７】
トリフルオロ酢のジクロロメタン（１０ｍｌ）溶液をＩ（０．１５ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍｌ）溶液に、窒素下で滴加し、０℃に冷やす。窒素下、周囲温度で１時間撹拌しながら、反応を保つ。混合物を蒸発乾固させ、最小量の水に取り入れる。溶液を凍結し、凍結乾燥することで、期待される誘導体Ｊ（１９３ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、１００％）を得る。
【０１３８】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ−］＝３０１
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝３．３２（ｄｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．３３−３．３７（ｍ、２Ｈ、２ＣＨ）、３．４３（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．７４（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、４．７３（ｍ、２Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−ＮＨ３＋）、７．４１（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）、８．１０（ｍ、３Ｈ、ＮＨ３＋）
【０１３９】
実施例２：トランス８−（アミノ−メチル）−４，８−ジヒドロ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オンのナトリウムおよびトリフルオロ酢酸塩
【０１４０】
ステージＡ：
トランス４，８−ジヒドロ−８−（ヒドロキシメチル）−５−（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン
【０１４１】
特許ＷＯ２００４／０５２８９１（実施例１、ステージＫ）に記載されるトランス−４，５，６，８−テトラヒドロ−６−オクソ−５−（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−カルボン酸塩のメチルエステル（５ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）を、窒素下、無水メタノール／テトラヒドロフラン（１００ｍｌ）の１／１混合液に溶解する。次に、ＮａＢＨ４（２．３ｇ、６０．９ｍｍｏｌ）を少しずつ添加する。反応培地を一晩、周囲温度で撹拌した後、１０％ＮａＨ２ＰＯ４水溶液（１００ｍｌ）で処理する。蒸発乾固させた後、反応混合物を水に取り入れる。形成された沈殿物を氷中で一晩撹拌した後にろ過し、Ｐ２Ｏ５存在下で少なくとも２４時間真空乾燥させることで、白色の粉末として、期待される化合物（３．３ｇ、１１．０ｍｍｏｌ、７２％）を得る。
【０１４２】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋］＝３０１
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝３．１８−３．５０（ＡＢＸ、２Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．６５−３．７６（ＡＢＸ、２Ｈ、Ｎ−ＣＨ−ＣＨ２−ＯＨ）、４．３４（ｔ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ−ＣＨ２−ＯＨ）、４．４６（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．８８（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２−Ｐｈ）、７．２９−７．４３（ｍ、５Ｈ、Ｐｈ）、７．６６（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）、１２．７２（ブロード、１Ｈ、ＯＨ）。
【０１４３】
ステージＢ：
１，１−ジメチルのトランス［［４，５，６，８−テトラヒドロ−６−オクソ−５−（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−イル］メチル］−カルバメート
【０１４４】
実施例２のステージＡで得られたアルコール（１．７３ｇ、５．７６ｍｍｏｌ）を、窒素下、０℃で無水ピリジン（３５ｍｌ）に溶かす。メタンスルホニルクロリド（１．７８ｍｌ、２３ｍｍｏｌ）を滴加する。周囲温度で２時間３０分撹拌した後、反応培地を塩化アンモニウムの飽和水溶液（１００ｍｌ）で処理し、続いて酢酸エチルで抽出する。次に、有機層をひとまとめにして塩化アンモニウムの飽和水溶液で５回洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、次に真空中でろ過することで、黄色の油の形態で、期待されるジメシラート化誘導体が得られる。
【０１４５】
窒素下、アジ化ナトリウム（１．１２ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）の存在下、ジメシラート化中間体を無水ジメチルホルムアミド（４５ｍｌ）に溶解する。反応混合物を７０℃で２４時間加熱する。必要に応じて、１当量のアジドを添加することで、転化が完了する。反応が完了したら、混合物を１０％ＮａＨ２ＰＯ４水溶液（１００ｍｌ）で処理し、続いてジクロロメタンで抽出する。有機層をひとまとめにして硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、続いて真空中で濃縮させることで、黄色の油の形態で、期待されるアジドが得られる。
【０１４６】
窒素下、無水エタノール（１７．５ｍｌ）中で、中間体を反応させる。次に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１．３８ｇ、６．３４ｍｍｏｌ）、トリエチルシラン（１．３８ｍｌ、８．６４ｍｍｏｌ）、および活性炭担持のデグサ（Ｄｅｇｕｓｓａ）１０％水酸化パラジウム（５２ｍｇ）を連続して添加する。周囲温度で一晩置いた後、反応混合物をろ過し、濃縮することで、黄色の粗油が得られる。この粗油を二酸化ケイ素カラム（溶離液勾配１％あたりＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨを１００／０から９５／５まで）上でクロマトグラフィにかけることで、白色の固体として、期待される化合物（１．３６ｇ、３．４０ｍｍｏｌ、３４％）が得られる。
【０１４７】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋］＝４０１
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）：δ（ｐｐｍ）＝１．５１（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）、３．２１−３．５９（ｍ、４Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−ＮｅｔＮ−ＣＨ−ＣＨ２−ＮＨＢｏｃ）、４．３６（ｍ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ−ＣＨ２−ＯＨ）、４．４６（ｍ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．９９（ＡＢ、２Ｈ、ＣＨ２−Ｐｈ）、７．４１−７．５２（ｍ、５Ｈ、Ｐｈ）、７．６３（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）。
【０１４８】
ステージＣ：
１，１−ジメチルのトランス［［４，５，６，８−テトラヒドロ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルバメート−６−オクソ−５−（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−イル］メチル］−カルバメ−ト
【０１４９】
実施例２のステージＢで得られた化合物（１０４ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（２．５ｍｌ）に溶解し、続いてこの混合物に二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１１４ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）およびジメチルアミノピリジン（３２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加する。周囲温度で一晩撹拌した後、反応培地を水で処理する。相を分離し、次に有機相を塩化ナトリウムの飽和水溶液で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、続いて真空中で濃縮する。したがって、得られた粗生成物を二酸化ケイ素（溶離液：ＣＨ２Ｃｌ２／ＡｃＯＥｔ９０／１０）上でクロマトグラフィにかけて精製することにより、期待される生成物（７６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、５９％）が得られる。
【０１５０】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋］＝５００
【０１５１】
ステージＤ：
１，１−ジメチルのトランス［［１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルバメート−４，５，６，８−テトラヒドロ−６−オクソ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−イル］メチル］−カルバメ−トのピリジニウム塩
【０１５２】
実施例２のステージＣで得られた化合物（７６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、窒素下、ジメチルホルムアミド／ＣＨ２Ｃｌ２１／３（０．８７ｍｌ）の無水混合物に溶解する。活性炭担持１０％パラジウムを５０％含む水（４９ｍｇ）を添加する。真空／窒素パージを３回おこなった後、ＨＰＬＣで開始生成物が消えるまで、反応混合物を水素雰囲気に置く。次に、混合物を真空中で濃縮し、続いて無水ジクロロメタンを用いて共沸を３回おこなった後、真空中、ドーム内で、Ｐ２Ｏ５の存在下、２時間乾燥させる。
【０１５３】
窒素中、ピリジン／無水硫酸錯体（４８ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の存在下、脱ベンジル化誘導体を無水ピリジン（０．４３ｍｌ）に取り入れる。反応混合物を、ＨＰＬＣで完全に転化するまで、周囲温度で撹拌し、続いて水を添加して処理した後に蒸発乾固する。したがって、粗生成物を二酸化ケイ素（溶離液：ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９０／１０）上でクロマトグラフィにかけることで精製し、期待される生成物（４７ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ、５５％）が得られる。
【０１５４】
ＭＳ（ＥＳ（−））：ｍ／ｚ［Ｍ−２＊ＢＯＣ］＝３８８
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）：δ（ｐｐｍ）＝１．５２（ｓ、１８Ｈ、２ｘＣ（ＣＨ３）３）、３．５０（ｍ、４Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−ＮおよびＣＨ２−ＮＨＢｏｃ）、４．６２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−ＮＨＢｏｃ）、４．８５（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、７．７２（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）。
【０１５５】
ステージＥ：
トランス８−（アミノメチル）−４，８−ジヒドロ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オンのナトリウムおよびトリフルオロ酢酸塩
【０１５６】
６ｇのＤＯＷＥＸ５０ＷＸ８樹脂を２Ｎ水酸化ナトリウム（３０ｍｌ）溶液に加えてなる懸濁液を１時間撹拌し、その後クロマトグラフィカラムに注ぐ。ｐＨが中性になるまで、Ｈ２Ｏで洗い、続いてＴＨＦ／Ｈ２Ｏの１０／９０混合物でコンディショニングする。実施例２のステージＤで得られた化合物（４７ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を最小量のメタノールに溶解し、続いてカラムに載せる。ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ１０／９０混合物による溶出後、期待される生成物を含む分画をプールし、凍結し、続いて凍結乾燥することで、期待されるナトリウム塩が得られる。
【０１５７】
ナトリウム塩を窒素中、無水ジクロロメタン（１．０４ｍｌ）に取り込み、続いて０℃に冷やす。トリフルオロ酢酸／無水ジクロロメタン１／１（２．０４ｍｌ）の溶液を滴加する。次に、反応混合物を周囲温度で４５分間撹拌する。次に、蒸発乾固後、無水ジクロロメタンで共沸し、化合物を水（〜２ｍｌ）に取り入れ、続いて凍結および凍結乾燥することで、淡色の粉末の形態で、期待される塩（１６ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ、３６％）が得られる。
【０１５８】
ＭＳ（ＥＳ（−））：ｍ／ｚ［Ｍ−］＝２８８
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）：δ（ｐｐｍ）＝３．３７−３．６９（ｍ、４Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−ＮｅｔＣＨ−ＣＨ２−ＮＨ２）、４．８１（ｄｄ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−ＮＨ２）、４．９８（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、７．７９（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）。
【０１５９】
実施例３：トランス８−（メチルアミノメチル）−４，８−ジヒドロ−１−メチル−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オンのナトリウムおよびトリフルオロ酢酸塩
【０１６０】
ステージＡ：
トランス［［［４，５，６，８−テトラヒドロ−１−メチル−６−オクソ−５（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−イル］メチル］−メチルアミノ］トリメチルホスホニウムイオジド
【０１６１】
トリメチルホスフィンのモル液（１．５ｍｌ、１．５ｍｍｏｌ）を、窒素下、周囲温度で、テトラヒドロフラン（１５ｍｌ）に溶かした実施例１のステージＥで得られた誘導体（０．５ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）の溶液に滴加し、撹拌する。２時間の撹拌後、ヨウ化メタン（０．２１ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を反応培地に添加する。淡黄色が沈殿物がすぐに形成される。周囲温度で一晩撹拌した後、反応培地を減圧下で濃縮する。粗生成物をジクロロメタン中で粉砕する。沈殿物をろ過して、黄色のヨウ素塩の形態で、期待される生成物（０．４２ｇ、１０４ｍｍｏｌ）が得られる。
【０１６２】
２つの配座異性体の形態で１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝２．０４（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３Ｐ）、２．３２（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３Ｐ）、２．３５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３Ｐ）、３．０３（ｓ、３Ｈ、Ｐ−ＮＣＨ３（Ａ）−ＣＨ２）、３．０５（ｓ、３Ｈ、Ｐ−ＮＣＨ３（Ｂ）−ＣＨ２）、３．３７（ｍ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−ＮまたはＣＨ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）Ｐ）、３．４４（ｍ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−ＮまたはＣＨ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）Ｐ）、３．６９（ｍ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−ＮまたはＣＨ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）Ｐ）、３．８２（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．８８（ｍ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−ＮまたはＣＨ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）Ｐ）、４．０５（ｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．５９（ｄ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）Ｐ）、４．８８（ｄ、１Ｈ、Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、５．００（ｄ、１Ｈ、Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、７．３５（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）、７．３７−７．４５（マッシブ、５Ｈ、Ｐｈ）
【０１６３】
ステージＢ：
トランス８−（メチルアミノメチル）−４，８−ジヒドロ−１−メチル−５−（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オン
【０１６４】
炭酸ナトリウム水溶液（２．５Ｎ、９ｍｌ）に対して、実施例３のステージＡで得られた誘導体（０．４２ｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を添加する。
反応培地を５５℃で３時間３０分撹拌する。周囲温度で冷した後、酢酸エチル（２５ｍｌ）の存在下、反応培地を塩化ナトリウムで飽和する。水相を酢酸エチル（３ｘ２５ｍｌ）で抽出する。次に、減圧下で、有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させることで、黄色の油（０．２６ｇ）が得られる。粗反応生成物をシリカカラム（溶離液：ジクロロメタン１００％、次にメタノ−ル勾配２％から１０％まで）でクロマトグラフィにかけることで精製することで、期待される誘導体（０．０８４ｇ、０．２５６ｍｍｏｌ、２６％）が得られる。
【０１６５】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２８
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝２．９７−３．００（ｄｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．００（ＣＨ−ＣＨ２−ＮＣＨ３）、３．１５（ｄｄ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−ＮＣＨ３）、３．９（ｄｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．７５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．９８（ｄ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）Ｂｏｃ）、４．７２（ｄｄ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．９０（ｄ、１Ｈ、Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、５．０３（ｄ、１Ｈ、Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、７．３０（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）、７．３４−７．４４（マッシブ、５Ｈ、Ｐｈ）
【０１６６】
ステージＣ：
１，１−ジメチルエチルのトランス［［４，５，６，８−テトラヒドロ−１−メチル−６−オクソ−５−（フェニルメトキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−イル］メチル］−メチル−カルバメ−ト
【０１６７】
実施例３のステージＢで得られた誘導体（８０ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍｌ）に溶かして溶液にし、次に周囲温度でトリメチルアミン（６０μＬ、０．４８８ｍｍｏｌ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１０６ｍｇ、０．４８８ｍｍｏｌ）を続けて添加する。周囲温度で撹拌を４時間おこなった後、塩化ナトリウム（５ｍｌ）で飽和した溶液を反応培地に添加する。水相をジクロロメタン（３ｘ２０ｍｌ）で抽出する。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させた後、減圧下で濃縮することで、非晶質の白色粉末（１５７ｍｇ）が得られる。粗反応生成物をシリカカラム（溶離液：ジクロロメタン１００％、次に酢酸エチル勾配２０％から３０％まで）上でクロマトグラフィにかけることで、期待される誘導体（０．０６８ｇ、０．１５９ｍｍｏｌ、６０％）が得られる。
【０１６８】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４２８
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１．５９（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）、３．０５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３ＮＢｏｃ−ＣＨ２）、３．１０（ｍ、３Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ、ＣＨ−ＣＨ２−ＮＢｏｃ）、３．７５（ｍ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．８５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．９９（ｓ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．７５（ｍ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）Ｂｏｃ）、４．９０（ｄ、１Ｈ、Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、５．０２（ｄ、１Ｈ、Ｎ−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、７．３７（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）、７．４０−７．４６（マッシブ、５Ｈ、Ｐｈ）
【０１６９】
ステージＤ：
１，１−ジメチルエチルのトランス［［４，５，６，８−テトラヒドロ−１−メチル−６−オクソ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−イル］メチル］−メチル−カルバメ−トのピリジニウム塩
【０１７０】
実施例１のステージＧで示される手順の一方で、炭素担持１０％パラジウム（２５ｍｇ）の存在下、実施例３のステージＣで得られた化合物（０．０６８ｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）を含むメタノール（５ｍｌ）によって、脱ベンジル化生成物が得られる。
【０１７１】
ＭＳ（ＥＳ（＋））：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３７
【０１７２】
脱ベンジル化中間体、ピリジン（１ｍｌ）、ピリジン／無水硫酸錯体（５０ｍｇ、０．３１８ｍｍｏｌ）によって、期待される塩（０．０４５ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ，１００％）が得られる。
【０１７３】
ＭＳ（ＥＳ（−））：ｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］−＝４１６
２つの配座異性体の形態で１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）：δ（ｐｐｍ）＝１．５３（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３、３．０９（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３（Ａ）ＮＨＢｏｃ）、３．１０（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３（Ｂ）ＮＨＢｏｃ）、３．３７（ｍ、１Ｈ、ＢｏｃＮ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨまたはＮ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．５８（ｍ、１Ｈ、ＢｏｃＮ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨまたはＮ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．７５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．８４（ｍ、１Ｈ、ＢｏｃＮ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨまたはＮ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．９０（ｍ、１Ｈ、ＢｏｃＮ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨまたはＮ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．９０（ｍ、２Ｈ、Ｎ−ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ＋シグナルＨ２Ｏ）、７．５４（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）、８．１６（ｄｄ、２Ｈ、ピリジン）、８．７０（ｄｄ、２Ｈ、ピリジン）、８．９４（ｄ、１Ｈ、ピリジン）
【０１７４】
ステージＥ：
１，１−ジメチルエチルのトランス［［４，５，６，８−テトラヒドロ−１−メチル−６−オクソ−５−（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−８−イル］メチル］−メチル−カルバメ−トのナトリウム塩
【０１７５】
実施例１のステージＨに示される手順の一方で、実施例３のステージＤで得られる塩（０．０４５ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）、ＤＯＷＥＸ５０ＷＸ８樹脂（３０ｇ）および２Ｎソーダ（１５０ｍｌ）によって、期待されるナトリウム塩（０．０３９ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ、１００％）が得られる。
【０１７６】
ＭＳ（ＥＳ（−））：ｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］−＝４１６
２つの配座異性体の形態で１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）：δ（ｐｐｍ）＝１．５６（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）、３．０９（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３（Ａ）ＮＨＢｏｃ）、３．１０（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３（Ｂ）ＮＨＢｏｃ）、３．３７（ｍ、１Ｈ、ＢｏｃＮ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨまたはＮ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．６４（ｍ、１Ｈ、ＢｏｃＮ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨまたはＮ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．７５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．８４（ｍ、１Ｈ、ＢｏｃＮ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨまたはＮ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、３．９３（ｍ、１Ｈ、ＢｏｃＮ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨまたはＮ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．９０（ｍ、２Ｈ、Ｎ−ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ＋シグナルＨ２Ｏ）、７．５５（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）。
【０１７７】
ステージＦ：
トランス８−（メチルアミノメチル）−４，８−ジヒドロ−１−メチル−５（スルホオキシ）−４，７−メタノ−７Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｅ］［１，３］ジアゼピン−６（５Ｈ）−オンのナトリウムおよびトリフルオロ酢酸塩
【０１７８】
実施例１のステージＩに示される手順の一方で、実施例３のステージＥで得られるナトリウム塩（０．０３９ｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（５ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸／無水ジクロロメタン１／１（４ｍｌ）の混合物によって、期待される生成物（３９ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、１００％）が得られる。
【０１７９】
ＭＳ（ＥＳ（−））：ｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］−＝３１５
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝２．７６（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３ＮＨ＋２−ＣＨ２）、３．３０−３．５０（ｍ、４Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ、ＮＨ＋２−ＣＨ２−ＣＨ）、３．７５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、４．７４（ｍ、１Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ−Ｎ）、４．８２（ｄ、１Ｈ、ＣＨ−ＣＨ２−ＮＨ＋２ＣＨ３）、７．４３（ｓ、１Ｈ、Ｈピラゾール）、８．６７（ｍ、２Ｈ、ＮＨ３＋）
【０１８０】
実施例４：医薬組成物
以下のものを含む注射用組成物を調製した。すなわち、
−  実施例１の化合物：３００ｍｇ
−  トブラミシン：５００ｍｇ
−  滅菌水性賦形剤：ｑ．ｓ．ｐ．５ｃｍ３
【０１８１】
以下のものを含む注射用組成物を調製した。すなわち、
−  実施例１の化合物：２００ｍｇ
−  セフタジジム：５００ｍｇ
−  滅菌水性賦形剤：ｑ．ｓ．ｐ．５ｃｍ３
【０１８２】
殺菌作用の測定
目的：
抗生物質の生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）殺菌作用の測定は、一所定時間後及び長時間後の細菌の生存率が０．００１％となる最も低い濃度を示すことでおこなう。
【０１８３】
生成物
試験すべき生成物を秤量および可溶化し、次に得られたストック溶液を、試験すべき濃度にもつづいて培地中に希釈し、各々の希釈の最終希釈が１／４０（全量２０ｍｌに０．５ｍｌ）となるように希釈する。
【０１８４】
方法
試験すべき生成物（生成物単独および配合物）の最小阻止濃度（ＭＩＣ）を事前に測定する。
【０１８５】
・試験すべき生成物および対照ストックの各々の濃度について、１８．５ｍｌミュラーヒントン培地（Ｃａ２＋＋）を含むエレンマイヤーフラスコを準備する。
・一晩ブロス培養または菌懸濁液のＯＤ（光学密度）＝１、１／１００希釈を調製する。
・試料を撹拌しながら３７℃で２時間培養する。
・ＯＤを測定する。もし、＞０．５ならば、試料を１／１０に希釈する。
・各エレンマイヤーフラスコに１ｍｌの撹拌培養液またはその希釈物を播種する。初期接種材料を１ｘ１０６ＣＦＵ／ｍｌとする。
・対照エレンマイヤーフラスコに、種々の抗生物質溶液を容量０．５ｍｌ、培地を０．５ｍｌ添加する。
・０．１ｍｌの容量で、対照エレンマイヤーフラスコを番号付けする（＝ＴＯ）。
・試料を２時間、３７℃で撹拌しながら培養する。
・各試料点（２、４、６、２４、４８時間）で、０．１ｍｌの容量を各エレンマイヤーフラスコから採取し、番号付けする。
・番号付けされた試料全てのプレートを３７℃でインキュベート（２４時間〜４８時間）する。
【０１８６】
パラメータの測定
・コロニーをカウントする。
・ＣＦＵ／ｍｌを時間の関数として、曲線をプロットする。
・殺菌効果＝初期接種材料と比較した３ｌｏｇ減少。
【０１８７】
参考文献
PETERSON L.R., SHANHOLTZER C.J.
Tests for bactericidal effects of antimicrobial agents: technical performance
and clinical relevance.
Clin. Microb. Rev., 1992, 5, 420−432
COURVALIN P., DRUGEON H., FLAND ROIS J.P., GOLDSTEIN
F.
Bactericidie. Aspects theoriques et therapeutiques.
Ed. Maloine, Paris, 1991.
【０１８８】
殺菌作用は、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の感受性株（３９１ＨＴ２）で評価した。
【０１８９】
ＭＩＣをマイクロプレート上で測定する。
−  セフタジジム／ＣＡＺ：２μｇ／ｍｌ
−  シプロフロキサシン／ＣＩＰＲＯ：１μｇ／ｍｌ
−  トブラマイシン／ＴＯＢＲＡ：１μｇ／ｍｌ
−  実施例１の生成物（ＮＸＬ１０５）：０．２５μｇ／ｍｌ
【０１９０】
殺菌試験に関して、ＭＩＣの測定を容量１０ｍｌでおこなう。殺菌条件（細菌の指数増殖））：
−  ＣＡＺ：８μｇ／ｍｌ
−  ＣＩＰＲＯ：２μｇ／ｍｌ
−  ＴＯＢＲＡ：１μｇ／ｍｌ
−  実施例１の生成物：０．２５μｇ／ｍｌ
【０１９１】
別紙中、プレート１ないし３上に示される殺菌作用は、４８時間後に、実施例１の生成物単独または配合物を評価したものである。これらは、配合物に関して、４８時間の細菌再増殖がまったく欠如していることを示している。
【０１９２】
相乗活性の測定−ＭＩＣの測定：
生体外活性、液体培地への希釈方法：
【０１９３】
等量の滅菌栄養培地が分注された一連の９６ウエルマイクロタイタープレートを用意する。量を増加させた被試験化合物（すなわち、抗菌化合物単独と、実施例１の式（Ｉ）の化合物を含む本発明の配合物）を、各々の比率２：１および４：１で、各プレートに分注し、次に、各プレートに緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ  ｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）または腸内細菌株（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）の菌種を播種する。３７°Ｃオーブンで２４時間のインキュベートした後、増殖阻害を透光により評価する。これによって、μｇ／ｍｌで表される最小阻害濃度（ＭＩＣ）を測定することが可能である。
【０１９４】
以下の試験（ＭＩＣおよびＦＩＣ）すべてにおいて：
−  セフタジム＝ＣＡＺ
−  メロペネム＝ＭＲＰ
−  アズトレオナム＝ＡＺＴ
−  レボフロクサシン＝ＬＶＸ
−  実施例１の化合物＝化合物Ａ
【０１９５】
【表１】
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2012505196.tif 000015
【０１９６】
【表２】
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【０１９７】
相乗活性の実証−フラクション阻害濃度（Ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）（ＦＩＣ）
【０１９８】
抗菌相乗作用を測定するための交差力価測定法：
【０１９９】
目的：本研究の目的は、化合物Ｂに対する腸内細菌および非腸内細菌の株が有する耐性に対して、化合物ＢのＭＩＣを半分、４分の１、８分の１、１６分の１、および１／３２減少させるのに必要な化合物Ａの濃度を測定することである。
【０２００】
上記の目的を、交差力価測定法（ｃｈｅｃｋｅｒｂｏａｒｄ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）によって達成した。この手法は、抗菌配合物を評価するのに用いられる。
【０２０１】
この技術は、マイクロタイタープレート全体で系列希釈した状態で、化合物Ａ（抑制薬）の滴定をおこなう一方で、同時に、系列希釈した化合物Ｂの滴定をマイクロタイタープレートでおこなうことからなる。次に、プレートを問題の菌種とともにインキュベートし、一晩細菌を増殖させる。このマイクロタイター交差力価測定板の各々のウェルには、抑制薬および抗菌化合物の濃度の異なる配合物を含むもので、２つの間のいかなる相乗効果も完全に測定することが可能である。
【０２０２】
プレートの読み取り：
各々のウェルでの増殖について、プレートのスコアリングをおこなった。各列で増殖が認められなかった各々のポイント（ＭＩＣ）を測定し、これら増殖が認められないウェルの各々での化合物Ａおよび化合物Ｂの濃度を用いて、相乗効果の度合いを判断した。
【０２０３】
相乗効果は、配合薬のフラクション阻害濃度であるＦＩＣ指標として表す。
【０２０４】
２種類の抗菌薬の配合物に関するフラクション阻害濃度（ＦＩＣ）指標の計算：
【０２０５】
（Ａ）／（ＭＩＣＡ）＋（Ｂ）／（ＭＩＣＢ）＝ＦＩＣＡ＋ＦＩＣＢ＝ＦＩＣ指標
【０２０６】
（Ａ）は一ウェル内の化合物の濃度であり、該濃度は、アッセイウェルに化合物Ｂも含む場合に、列での増殖を阻害する抗生物質Ａの最小濃度である。（ＭＩＣＡ）は、増殖を阻害する化合物Ａ単独での最小濃度である。ＦＩＣＡは、薬物Ａのフラクション阻害濃度である。（Ｂ）、（ＭＩＣＢ）、およびＦＩＣＢは、化合物Ｂに関して同一の方法で定義される。
【０２０７】
ＦＩＣ指標値が＜＝０．５であるならば、それは相乗効果として考えられる。
【０２０８】
【表３】
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【０２０９】
【表４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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