(57)【要約】本発明は、自己反応性Ｔ細胞によって媒介される多発性硬化症などの自己免疫疾患の処置および予防のための方法および組成物を提供する。ＮＯＤ−１作動薬の投与は抗炎症性の免疫応答を媒介するということが示される。本発明の方法および組成物における使用に適したＮＯＤ−１作動薬としては、Ｔｒｉ−ＤＡＰおよびＭ−ＴｒｉＤＡＰなどのジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物が挙げられる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
自己反応性のＴｈ１および／またはＴｈ１７  Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患または慢性炎症性疾患を処置および／または予防するための方法であって、
−  ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物を含む組成物の治療上有効量を準備する工程と、
−  このような処置を必要とする対象に、ヘルパーＴ１７型リンパ球（Ｔｈ１７  Ｔ細胞）および／またはヘルパーＴ１型リンパ球（Ｔｈ１  Ｔ細胞）の活性化を抑制するのに十分な量で前記組成物を投与する工程と、
を含む方法。
【請求項２】
前記ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドはＴｒｉＤＡＰである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記自己免疫疾患は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、および１型糖尿病から選択され、または前記慢性炎症性疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎および乾癬から選択される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記方法は、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬は、Ｔｏｌｌ様受容体２、Ｔｏｌｌ様受容体４またはＴｏｌｌ様受容体９のうちの少なくとも１つについての作動薬である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｔｏｌｌ様受容体作動薬は、ＬＰＳ（リポ多糖）、ＣｐＧモチーフ、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、ｄｓＲＮＡ、ポリ（Ｉ：Ｃ）およびＰａｍ−３Ｃｙｓからなる群から選択される、請求項４または請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記方法は、少なくとも１つのＥＲＫタンパク質キナーゼ阻害剤を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＥＲＫタンパク質キナーゼ阻害剤はＰＤ９８０５９またはＵ０１２６である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
自己反応性のＴｈ１および／またはＴｈ１７  Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患もしくは慢性炎症状態の処置および／または予防における使用のための医薬組成物であって、ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物を、意図された投与経路に応じて選択することができる少なくとも１つの薬学的賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物。
【請求項１０】
前記ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドはＴｒｉＤＡＰである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記自己免疫疾患は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、および１型糖尿病から選択され、または前記慢性炎症性疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎および乾癬から選択される、請求項９または請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記方法は、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項９から請求項１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬は、Ｔｏｌｌ様受容体２、Ｔｏｌｌ様受容体４またはＴｏｌｌ様受容体９のうちの少なくとも１つについての作動薬である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記Ｔｏｌｌ様受容体作動薬は、ＬＰＳ（リポ多糖）、ＣｐＧモチーフ、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、ｄｓＲＮＡ、ポリ（Ｉ：Ｃ）およびＰａｍ−３Ｃｙｓからなる群から選択される、請求項１２または請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記方法は、少なくとも１つのＥＲＫタンパク質キナーゼ阻害剤を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項９から請求項１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記ＥＲＫタンパク質キナーゼ阻害剤はＰＤ９８０５９またはＵ０１２６である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
自己反応性のＴｈ１および／またはＴｈ１７  Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の処置または予防における使用のためのジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド。
【請求項１８】
前記ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドはＴｒｉＤＡＰである、請求項１７に記載の組成物の使用。
【請求項１９】
前記自己免疫疾患は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）および１型糖尿病から選択され、前記慢性炎症性疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎および乾癬から選択される、請求項１７または請求項１８に記載の組成物の使用。
【請求項２０】
少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬をさらに含む、請求項１７から請求項１９のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項２１】
前記少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬は、Ｔｏｌｌ様受容体２、Ｔｏｌｌ様受容体４またはＴｏｌｌ様受容体９のうちの少なくとも１つについての作動薬である、請求項２０に記載の組成物の使用。
【請求項２２】
前記Ｔｏｌｌ様受容体作動薬は、ＬＰＳ（リポ多糖）、ＣｐＧモチーフ、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、ｄｓＲＮＡ、ポリ（Ｉ：Ｃ）およびＰａｍ−３Ｃｙｓからなる群から選択される、請求項２０または請求項２１に記載の組成物の使用。
【請求項２３】
少なくとも１つのＥＲＫタンパク質キナーゼ阻害剤をさらに含む、請求項１７から請求項２２のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項２４】
前記ＥＲＫタンパク質キナーゼ阻害剤はＰＤ９８０５９またはＵ０１２６である、請求項２３に記載の組成物の使用。
【請求項２５】
自己反応性のＴｈ１および／またはＴｈ１７  Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の処置のための医薬の調製におけるジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドの使用。
【請求項２６】
前記ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドはＴｒｉＤＡＰである、請求項２５に記載の組成物の使用。
【請求項２７】
前記自己免疫疾患は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）および１型糖尿病から選択され、または前記慢性炎症性疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎および乾癬から選択される、請求項２５または請求項２６に記載の組成物の使用。
【請求項２８】
少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬をさらに含む、請求項２５または請求項２６に記載の組成物の使用。
【請求項２９】
前記少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬は、Ｔｏｌｌ様受容体２、Ｔｏｌｌ様受容体４またはＴｏｌｌ様受容体９のうちの少なくとも１つについての作動薬である、請求項２８に記載の組成物の使用。
【請求項３０】
前記Ｔｏｌｌ様受容体作動薬は、ＬＰＳ（リポ多糖）、ＣｐＧモチーフ、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、ｄｓＲＮＡ、ポリ（Ｉ：Ｃ）およびＰａｍ−３Ｃｙｓからなる群から選択される、請求項２８または請求項２９に記載の組成物の使用。
【請求項３１】
少なくとも１つのＥＲＫタンパク質キナーゼ阻害剤をさらに含む、請求項２５から請求項３０のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項３２】
前記ＥＲＫタンパク質キナーゼ阻害剤はＰＤ９８０５９またはＵ０１２６である、請求項３１に記載の組成物の使用。
【請求項３３】
多発性硬化症の処置のための医薬の調製における、ヘルパーＴ１７型リンパ球（Ｔｈ１７）媒介性免疫応答および／またはヘルパーＴ１型リンパ球（Ｔｈ１）媒介性免疫応答の両方を抑制し、サイトカインＩＬ−２７の産生を上方制御しかつサイトカインＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７およびＩＬ−２３の産生を下方制御するＮＯＤ−１作動薬の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘルパーＴ１７型（Ｔｈ１７）および／またはヘルパーＴ１型（Ｔｈ１）Ｔリンパ球（Ｔ細胞）によって媒介される病状の処置および予防のための組成物および方法に関する。特に、本発明は、自己反応性のＴｈ１７およびＴｈ１  Ｔリンパ球によって媒介される病状の処置のための、ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物の使用に関する。本発明の化合物および方法は、さらに、ＩＬ−２７、ＩＬ−１０およびＩＬ−３５の発現を増強しつつ、サイトカイン  インターロイキン１７（ＩＬ−１７）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）の産生を抑制することにより免疫応答を調節するための方法において、有用性を有する。
【背景技術】
【０００２】
特定の疾患に対する防御免疫は、自然免疫系の抗原提示細胞（ＡＰＣ）（樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージなど）による、特異的な炎症促進性Ｔ細胞（Ｔリンパ球）集団の特異誘導に依存する。広い範囲の病原体に対する細胞性免疫を媒介することに関与する２つのこのようなＴ細胞集団は、Ｔｈ１およびＴｈ１７細胞である。Ｔｈ１、およびより最近のＴｈ１７の両方のＴ細胞集団は、自己免疫疾患および慢性炎症性疾患のメディエーターとして関与しているとされており、従って免疫抑制薬のための関連する細胞標的として働く。さらには、それゆえＴ細胞反応のイニシエーターとしてのＤＣは、炎症性疾患と闘うために設計される治療のための第２の細胞標的である。
【０００３】
多発性硬化症は、中枢神経系（ＣＮＳ）内のＴ細胞、Ｂ細胞、マクロファージの炎症性浸潤および限局性脱髄斑を特徴とする、ＣＮＳの炎症性自己免疫疾患である。Ｔｈ１細胞媒介性反応およびＴｈ１７細胞媒介性反応はともに、炎症性脱髄の発生で一定の役割を果たすことが示されている。ＭＳ患者由来のミエリン反応性Ｔ細胞は、Ｔｈ１媒介性の反応と整合してサイトカインを産生し、一方で、患者由来のＭＳ病変のマイクロアレイ研究は、ＩＬの発現の増加を実証する。
【０００４】
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症（ＭＳ）と臨床的および神経病理学的な変化を共有する炎症性脱髄性疾患の動物モデルである。従って、ＥＡＥは、自己免疫性炎症反応、特にＭＳの機序を細かく調べるための関連する有用なモデルである。ＥＡＥがだいたいはＣＤ４＋  Ｔｈ１媒介性の疾患であるということは長年受け容れられてきたが、ＥＡＥの誘導におけるＣＤ８＋  Ｔ細胞についての病因的役割も実証されてきた。しかしながら、より最近になって、ＩＬ−１７を産生するＴ細胞サブセットがＥＡＥの病変形成において非常に重要な役割を果たすということが実証された。文献においていまだいくらかの議論はあるものの、Ｔｈ１細胞およびＴｈ１７細胞は協働して器官特異的な自己免疫の発生を誘導する可能性が高い。
【０００５】
未熟な樹状細胞は末梢組織の中で抗原（Ａｇ）を取り込み（ｓａｍｐｌｅ）、抗原捕捉後に、成熟し、そして局所リンパ節（ＬＮ）へと移動し、そこで樹状細胞はナイーブなＣＤ４＋  Ｔ細胞に対して抗原を提示する。次いでナイーブなＴ細胞は分化し、特異的なＣＤ４＋  エフェクターＴ細胞集団へと増殖する。ナイーブなＣＤ４＋  Ｔ細胞の運命は、サイトカイン産生から生じるサイトカイン環境によって、およびＡｇ−ＭＨＣ複合体によるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）結合の部位に存在する成熟した樹状細胞からのアウトプットによって、一部は決定される。従って、ＤＣは、病原体に反応して誘導されるＴ細胞反応の種類に対する制御を呈することができる。
【０００６】
樹状細胞などの自然免疫系の細胞は、微生物分子構造を認識して、このような構造の認識後に、炎症促進性のシグナル伝達経路を活性化する病原体認識受容体（ＰＲＲ）を発現し、次にこの炎症促進性のシグナル伝達経路が様々な免疫応答遺伝子の発現を制御する。ＰＲＲは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）などのように膜結合型であってもよいし、またはヌクレオチド結合オリゴマー化領域（ＮＯＤ）タンパク質などのように細胞膜に存在してもよい。
【０００７】
ＮＯＤタンパク質ＮＯＤ１およびＮＯＤ２は、ペプチドグリカン由来の微生物成分の細胞内センサーとして、自然免疫において重要な役割を有する。ＮＯＤ１はペプチドγ−Ｄ−グルタミル−メソ−ジアミノピメリン酸（ｉＥ−ＤＡＰ）を認識し、主にグラム陰性菌についてのセンサーとして働き、一方で、ＮＯＤ−２はほとんどの細菌の中で見出されるムラミルジペプチド（ＭＤＰ）を検出する。ｉＥ−ＤＡＰは、ＮＯＤ１によって認識される最小モチーフである。Ｌ−Ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ（Ｔｒｉ−ＤＡＰ）はこのｉＥ−ＤＡＰジペプチドおよびＬ−Ａｌａ残基を含む。ｉＥ−ＤＡＰと同様に、Ｔｒｉ−ＤＡＰはＮＯＤ１によって特異的に認識される。
【０００８】
ＰＲＲとしての役割と整合して、ＮＯＤリガンド結合は、転写因子、核性因子κＢ（ＮＦ−κＢ）および分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ファミリーのメンバーの活性化を通して炎症促進性反応の開始を生じる。Ｔｒｉ−ＤＡＰが呈するＮＦ−κＢを活性化する能力は、ｉＥ−ＤＡＰが呈する能力よりも３倍高いということがこれまでに示されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明につながる研究の中で、本発明者らは、ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰは免疫抑制活性を有し、そしてＴｈ１およびＴｈ１７（ＩＬ−１７産生Ｔ細胞）Ｔ細胞媒介性の炎症性自己免疫疾患を選択的に抑制するように働くという驚くべき発見をした。これまでにＴｒｉＤＡＰのインビトロ投与によって炎症性サイトカインの産生が増強されるということが示されていたため、この観察は、まったく予想外のものである。本発明者らは、本発明で、驚くべきことに、ＴｒｉＤＡＰのインビボ投与が抗炎症性効果を媒介するということを特定した。特に、サイトカインＩＬ−２７の発現が観察される。理論に結び付けられることは望まないが、本発明者らは、ＩＬ−２７は樹状細胞およびマクロファージなどの抗原提示細胞によって発現されると推測する。抗原提示細胞によるＩＬ−２７の発現は、得られるＴ細胞反応を、ある場合には、自己免疫性炎症状態および慢性炎症状態を媒介する自己反応性Ｔ細胞となることができるＴｈ１およびＴｈ１７表現型を有するＴ細胞の増加から逸らせる。
【００１０】
さらには、本発明者らは、Ｔｒｉ−ＤＡＰは、生産の容易さのため、治療薬として興味深いということを特定した。さらに、その低分子量のため、本発明者らは、ＴｒｉＤＡＰは、ヒトに投与されたとき著しく免疫原性となる可能性は低いということを特定した。多発性硬化症などの自己免疫疾患および慢性炎症性疾患の処置のための現在の治療法は、ステロイドおよび他のＮＳＡＩＤの使用に主に焦点が当てられているが、このステロイドおよび他のＮＳＡＩＤは、非特異的であり重篤な副作用を有する。特に、あるそのような処置は、主としてＴＮＦ−アルファの発現または機能活性を抑制するように作用する。例えば、モノクローナル抗体インフリキシマブ（レミケード）はＴＮＦ−アルファの機能を標的にする。ある患者においては有効であるが、このような抗ＴＮＦ−アルファ処置は、ある患者、またはある自己免疫状態を処置する場合には有効でない可能性があり、またはさらに、望ましくない副作用の発生を生じる可能性もあると考えられる。それゆえ本発明者らは、Ｔｈ１および／またはＴｈ１７媒介性の疾患および状態、特に、自己反応性のＴｈ１および／またはＴｈ１７  Ｔ細胞の出現に起因して異常なＴｈ１および／またはＴｈ１７反応が起こる場合に起こる自己免疫状態または免疫媒介性の状態の処置における本発明の有用性を特定した。
【００１１】
本発明の第１の態様によれば、自己反応性のＴｈ１および／またはＴｈ１７  Ｔ細胞によって引き起こされる自己免疫疾患を処置または予防する方法であって、
−  ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物を含む組成物の治療上有効量を準備する工程と、
−  このような処置を必要とする対象に、ヘルパーＴ１７型リンパ球（Ｔｈ１７  Ｔ細胞）および／またはヘルパーＴ１型リンパ球（Ｔｈ１  Ｔ細胞）の活性化を抑制するのに十分な量で当該組成物を投与する工程と、
を含む方法が提供される。
【００１２】
ある実施形態では、この組成物は、ヘルパーＴ１７型リンパ球（Ｔｈ１７）媒介性免疫応答およびヘルパーＴ１型リンパ球（Ｔｈ１）媒介性免疫応答の両方を抑制する。
【００１３】
ある実施形態では、この自己反応性Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患は、自己免疫疾患または慢性炎症性疾患である。「自己反応性Ｔ細胞」は、特に自己抗原に特異的である細胞系譜Ｔｈ１（ＣＤ４＋  Ｔｈ１  ヘルパーＴ細胞）、またはＴｈ１７（ＣＤ４＋  ヘルパーＴ細胞）のＴ細胞（Ｔリンパ球）を意味し、「自己抗原」は宿主によって発現される抗原であり、その宿主のＴ細胞集団は、通常の恒常性の状態の下では、通常はその抗原に対して耐容性がある（すなわち、免疫応答を導かない）はずである。
【００１４】
ある実施形態では、この自己免疫疾患は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、１型糖尿病および乾癬からなる群から選択されうるが、これらに限定されない。
【００１５】
ある実施形態では、当該ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物はＴｒｉ−ＤＡＰである。Ｔｒｉ−ＤＡＰは、ＴｒｉＤＡＰ、ＴｒｉＤＡＰ、Ｌ−Ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰまたはＬ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍｅｓｏＤＡＰ）とも表されてもよい。またＴｒｉＤＡＰは、Ｌ−アラニル−γ−Ｄ−グルタミル−メソ−ジアミノピメリン酸と呼ばれてもよい。ＴｒｉＤＡＰは、ｉＥ−ＤＡＰジペプチド（γ−Ｄ−グルタミル−メソ−ジアミノピメリン酸）およびＬ−Ａｌａ（アラニン）残基を含むトリペプチドである。Ｔｒｉ−ＤＡＰは化学式Ｃ１６Ｈ２６Ｎ４Ｏ８を有する。Ｔｒｉ−ＤＡＰはおよそ３９０．３９ｋＤａの分子量を有する。本願明細書で定義される「ｍｅｓｏＤＡＰ」はメソ−ジアミノピメレートに関する。用語「ジアミノピメリル」は、ペプチド鎖へのｍｅｓｏＤＡＰの組み込みを指す。
【００１６】
Ｔｒｉ−ＤＡＰは、下記の式１ａに示される分子構造を有する。
【化１】
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【００１７】
Ｔｒｉ−ＤＡＰは、下記の式１ｂに示される化学構造を有する。
【化２】
2012513448.tif 000004
【００１８】
あるさらなる実施形態では、当該ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物は、Ｍ−ＴｒｉＤＡＰ（ＭｕｒＮＡｃ−Ｌ−Ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ）であることができ、この化合物はＤＡＰ含有ムラミルトリペプチド（ムラトリペプチド（ｍｕｒａｔｒｉｐｅｐｔｉｄｅ））とも呼ばれ、これは、グラム陰性菌の中で見出すことができる、ペプチドグリカン（ＰＧＮ）分解生成物である。
【００１９】
Ｍ−ＴｒｉＤＡＰは下記の式ＩＩに示される分子構造を有する。
【化３】
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【００２０】
当該ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物がムロペプチドを含むあるさらなる実施形態では、このムロペプチドは、ムロテトラペプチド（ｍｕｒｏｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ）、例えばＧＭ−ＴＲＩＤＡＰ（ＧｌｃＮＡｃ−ＭｕｒＮＡｃトリペプチドムロペプチド）であってもよい。
【００２１】
あるさらなる実施形態では、このムロテトラペプチドは、式ＩＩＩのＭ−ＴｅｔｒａＤＡＰであってもよい。
【化４】
2012513448.tif 000006
【００２２】
ある実施形態では、本発明のジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物に基づいて合成類似体が与えられてもよい。さらには、ある実施形態では、本願明細書中で以降に記載されるように、本発明で使用するためのこの化合物のペプチド模倣薬が、適切な場合には、調製されてもよい。
【００２３】
ある実施形態では、本発明のこの態様の方法は、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬を当該対象に投与する工程をさらに含むことができる。このＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）作動薬は、本発明のこの態様の組成物の投与の前に、投与とともに（同時に）、または投与後に（連続的に）投与されてもよい。
【００２４】
ある実施形態では、このＴＬＲ作動薬は、薬学的に許容できるＴＬＲ作動薬である。このＴＬＲ作動薬は、いずれかの明確なヒトＴｏｌｌ様受容体に特異的であってもよい。特定の実施形態では、このＴＬＲ作動薬は、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４またはＴＬＲ９のうちの少なくとも１つについてのリガンドである。ある実施形態では、このＴＬＲ作動薬は、樹状細胞によるＩＬ−２７産生を誘導することができるものであることができる。さらなる実施形態では、このＴＬＲ作動薬は、ＬＰＳ（リポ多糖）、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）を含めたＣｐＧモチーフ、ｄｓＲＮＡ、ポリ（Ｉ：Ｃ）およびＰａｍ−３Ｃｙｓのうちのいずれか１以上から選択されてもよい。
【００２５】
本発明のさらなる態様は、自己反応性のＴｈ１および／またはＴｈ１７  Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患の処置および／または予防における使用のための医薬組成物であって、ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物を、意図された投与経路に応じて選択することができる少なくとも１つの薬学的賦形剤、希釈剤または担体とともに含む組成物を提供する。
【００２６】
本発明の種々のさらなる態様では、本発明の組成物および方法は、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）を含む群から選択されるサイトカインのうちの少なくとも１つの産生を抑制または阻害するために使用することができる。ある実施形態では、本発明の組成物および方法は、ＩＬ−２７、ＩＬ−１０およびＩＬ−３５から選択される少なくとも１つのサイトカインの産生をさらに増強する可能性がある。
【００２７】
インターロイキン１７、インターフェロンガンマまたは腫瘍壊死因子などのサイトカインは、いくつかの病状および特に自己免疫状態の発生において明確な役割を有する。従って、種々のさらなる態様では、本発明は、上記病状を処置、予防または改善するために、ＴｒｉＤＡＰまたは関連する化合物を、対象に、治療上有効量で投与することに及ぶ。
【００２８】
本発明のなおさらなる態様は、自己反応性のＴｈ１および／またはＴｈ１７  Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の処置または予防における使用のためのジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドを提供する。
【００２９】
ある実施形態では、このジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドはＴｒｉＤＡＰである。ある実施形態では、上記自己免疫疾患は多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）および１型糖尿病から選択され、上記慢性炎症性疾患は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎および乾癬から選択される。
【００３０】
ある実施形態では、この使用は、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬を当該対象に投与することをさらに含む。この少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬は、Ｔｏｌｌ様受容体２、Ｔｏｌｌ様受容体４またはＴｏｌｌ様受容体９のうちの少なくとも１つについての作動薬であることができる。このＴｏｌｌ様受容体作動薬は、ＬＰＳ（リポ多糖）、ＣｐＧモチーフ、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＭ）、ｄｓＲＮＡ、ポリ（Ｉ：Ｃ）およびＰａｍ−３Ｃｙｓからなる群から選択することができる。
【００３１】
当該組成物は、少なくとも１つのＥＲＫタンパク質キナーゼ阻害剤をさらに含んでもよく、このＥＲＫタンパク質キナーゼ阻害剤はＰＤ９８０５９またはＵ０１２６であってもよい。
【００３２】
本発明のなおさらなる態様は、自己反応性のＴｈ１および／またはＴｈ１７  Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の処置のための医薬の調製におけるジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドの使用を提供する。
【００３３】
ある実施形態では、この医薬は、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬（ＴＬＲ作動薬）をさらに含んでもよいし、または少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬（ＴＬＲ作動薬）とともに投与されてもよい。このＴＬＲ作動薬は、いずれの明確なヒトＴｏｌｌ様受容体に特異的であってもよい。特定の実施形態では、このＴＬＲ作動薬は、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４またはＴＬＲ９についての特異性を有する。ある実施形態では、このＴＬＲ作動薬は、ＤＣによるＩＬ−２７産生を誘導することができるものであることができる。さらなる実施形態では、このＴＬＲ作動薬は、ＬＰＳ（リポ多糖）、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）を含めたＣｐＧモチーフ、ｄｓＲＮＡ、ポリ（Ｉ：Ｃ）およびＰａｍ−３Ｃｙｓのうちのいずれか１以上から選択されてもよい。理論に結び付けられることは望まないが、本発明者らは、本願明細書に記載される実験法に基づいて、ＴｒｉＤＡＰの投与によって樹状細胞からのＩＬ−２７産生を引き起こすことができるということを観察した。しかしながら、ＩＬ−２７および少なくとも１つのＴＬＲ作動薬の両方の同時投与は、相乗的に作用して、樹状細胞などの抗原提示細胞によるＩＬ−１７の産生を実質的に増強するということが観察される。
【００３４】
ある実施形態では、この医薬は、少なくとも１つのＥＲＫ（細胞外シグナル制御キナーゼ）阻害剤をさらに含んでもよいし、または少なくとも１つのＥＲＫ阻害剤とともに投与されてもよい。理論に結び付けられることは望まないが、本発明者らは、本願明細書中上記の本発明の組成物の一部として、またはその組成物と同時に少なくとも１つのＥＲＫ阻害剤をさらに投与することで、ＩＬ−２７サイトカイン産生を上方制御することができるということを推測する。ＥＲＫ阻害剤の投与は、樹状細胞によるＩＬ−２３およびＩＬ−１サイトカインの産生を抑制することにより、ＥＡＥを軽減することができるということがさらに観察された。少なくとも１つのＥＲＫ阻害剤の投与は、本発明の組成物が本願明細書中上記のＴＬＲ作動薬とともに投与されるかどうかにかかわらず、ＩＬ−２７の上方制御をもたらした。ある実施形態では、このＥＲＫ阻害剤は、ＥＲＫタンパク質キナーゼの阻害剤であり、ＰＤ９８０５９またはＵ０１２６を含む群から選択されうるが、これらに限定されない。
【００３５】
本発明のなおさらなる態様は、自己免疫疾患または慢性炎症性疾患を処置または予防することにおける使用のためのジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドを含む組成物を提供する。
【００３６】
ある実施形態では、この組成物は、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬をさらに含んでもよい。このＴＬＲ作動薬は、いずれかの明確なヒトＴｏｌｌ様受容体に特異的であってもよい。特定の実施形態では、このＴＬＲ作動薬はＴＬＲ２、ＴＬＲ４またはＴＬＲ９についての特異性を有する。ある実施形態では、このＴＬＲ作動薬は、ＤＣによるＩＬ−２７産生を誘導することができるものであることができる。さらなる実施形態では、このＴＬＲ作動薬は、ＬＰＳ（リポ多糖）、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）を含めたＣｐＧモチーフ、ｄｓＲＮＡ、ポリ（Ｉ：Ｃ）およびＰａｍ−３Ｃｙｓのうちのいずれか１以上から選択されてもよい。
【００３７】
本発明の種々のさらなる態様では、本発明の化合物を、ステロイド、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）またはサイトカイン阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの化合物とともに含む組み合わせ医薬（ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ）が提供される。このような組み合わせ医薬は、自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の処置のための本発明の方法で使用されてもよい。
【００３８】
本発明のなおさらなる態様では、自己免疫疾患を処置する方法であって、ＮＯＤ−１発現性または応答性の細胞および／または組織（例えば、抗原提示細胞、特に樹状細胞）において機能を調節する（例えば、ＮＯＤ−１の１以上の生物活性を調節する）ことを含む方法が提供される。この方法は、Ｔｈ１および／またはＴｈ１７媒介性免疫応答が抑制されるように、つまりＴｈ１もしくはＴｈ１７表現型を有するＴ細胞の活性化またはＴｈ１もしくはＴｈ１７  Ｔ細胞へのナイーブなＣＤ４＋  Ｔ細胞の分化が低下または阻害されるように、ＮＯＤ−１応答性細胞または組織の機能（または、その細胞もしくは組織におけるＮＯＤ−１の生物活性）を調節するのに十分な量のＮＯＤ−１調節因子、例えばＮＯＤ−１結合剤（例えばジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドを含む組成物）に、このＮＯＤ−１応答性細胞および／またはＮＯＤ−１応答性組織を接触させることを含む。１つの実施形態では、この接触させる工程は、インビトロで、例えば細胞ライゼートの中または再構成された系の中で行うことができる。あるいは、当該方法は、培養中の細胞に対して、例えば、インビトロまたはエキソビボで行うことができる。例えば、細胞（例えば、精製された細胞または組み換え細胞）はインビトロで培養することができ、上記接触させる工程は、当該ＮＯＤ−１調節因子をその培地に加えることによって行うことができる。典型的には、このＮＯＤ−１応答性細胞は哺乳類の細胞、例えばヒトの細胞である。いくつかの実施形態では、このＮＯＤ−１応答性細胞は、樹状細胞などの抗原提示細胞、またはそれに関連する細胞集団（前駆体細胞など）である。他の実施形態では、当該方法は、例えばインビボプロトコルの一部として、対象の中に存在する細胞に対して、すなわち動物対象（例えば、ヒト対象、またはインビボ動物モデルを含む）の中で実施することができる。このインビボプロトコルは、治療的であってもよいしまたは予防的であってもよく、この炎症モデルは、例えばＥＡＥモデル、または遺伝子組み換えモデル（例えば、過剰発現されたＮＯＤ−１、またはＮＯＤ−１の変異もしくは欠失を有する動物モデル）であることができる。インビボ方法について、当該ＮＯＤ−１調節因子は、単独でまたは別の薬剤と組み合わせて、多発性硬化症、関節リウマチ、または乾癬などの自己免疫疾患に罹患している対象に、当該対象において１以上のＮＯＤ−１によって媒介される活性または機能、典型的には炎症促進性の免疫応答、もっと具体的に言えば、慢性炎症性疾患または多発性硬化症などの自己免疫疾患の発症および進行を生じる可能性があるＴｈ１細胞（Ｔｈ１  Ｔリンパ球としても知られる）および／またはＴｈ１７  Ｔリンパ球によって媒介される炎症促進性の（ｐｒｅ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）免疫応答を調節するのに十分な量で、投与することができる。いくつかの実施形態では、投与されるＮＯＤ−１調節因子の量または投薬量は、ＮＯＤ−１活性（例えば、本願明細書に記載される１以上のＮＯＤ−１生物活性）のうちの１以上を変える、例えば減少または阻害するのに必要とされるＮＯＤ−１調節因子の量をインビトロまたはエキソビボで試験することにより、投与に先立って���定することができる。任意に、インビボ方法は、自己免疫障害または自己免疫の状態に関連する１以上の症候を有するか、または有するリスクにある対象を同定する（例えば、評価する、診断する、スクリーニングする、および／または選択する）工程を含むことができる。
【００３９】
本発明のあるさらなる態様では、ＮＯＤ−１調節因子、特に、Ｔｈ１  Ｔリンパ球細胞および／またはＴｈ１７  Ｔリンパ球細胞によって媒介される炎症促進性の免疫応答を抑制するＮＯＤ−１作動薬化合物の、自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の処置のための医薬の調製における使用が提供される。
【００４０】
本発明のなおさらなる態様は、自己反応性のＴｈ１またはＴｈ１７  Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患または慢性炎症性疾患を処置することにおける使用のための、Ｔｈ１  Ｔリンパ球細胞および／またはＴｈ１７  Ｔリンパ球細胞によって媒介される炎症促進性の免疫応答を抑制するＮＯＤ−１調節因子化合物を提供する。
【００４１】
ある実施形態では、このＮＯＤ−１調節因子は、ペプチドγ−Ｄ−グルタミル−メソ−ジアミノピメリン酸（ｉＥ−ＤＡＰ）、またはＴｒｉ−ＤＡＰ、またはＭ−ＴｒｉＤＡＰまたはその類似体、誘導体もしくはペプチド模倣薬を含む。
【００４２】
本発明のなおさらなる態様は、ＩＬ−２３およびＩＬ−１７サイトカインのレベルおよび／または産生を阻害することによる自己免疫疾患の処置のための医薬の調製における、ＩＬ−２７産生を増強するためのＮＯＤ−１調節因子の使用を提供する。特に、樹状細胞などの抗原提示細胞、またはＴ細胞によるＩＬ−２３および／またはＩＬ−１７の産生が抑制される。
【００４３】
本発明のなおさらなる態様は、Ｔｈ１およびＴｈ１７に関連するサイトカインＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−１７のうちの少なくとも１つの産生を阻害または下方制御するために、表現型Ｔｈ１またはＴｈ１７の自己反応性Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患を有する対象に投与することにおける使用のための、ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチドを含む組成物を提供する。
【００４４】
種々のさらなる態様では、本発明は、本発明の治療方法を実施するためのキットを提供する。このようなキットは、１以上の容器の中に、薬学的に許容できる形態の治療上または予防上有効量の本発明の組成物を含んでもよい。このようなキットは、本発明の組成物の使用についてまたは本発明の方法の実施についての説明書をさらに含んでもよいし、または慢性炎症性疾患または自己免疫疾患を処置することにとって適切な情報を医師に提供するためのさらなる情報を提供してもよい。
【００４５】
本発明のなおさらなる態様は、自己免疫疾患または慢性炎症状態の処置のためにＩＬ−１７の産生を低下させるための、ＴｒｉＤＡＰもしくはその類似体を含むかまたはＴｒｉＤＡＰもしくはその類似体からなる組成物の使用を提供する。ある実施形態では、この組成物は、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬をさらに含む。この組成物は、ＩＬ−２７サイトカインのレベルをさらに増強する可能性があり、またＴＮＦ−アルファおよびＩＦＮ−ガンマのレベルのうちの少なくとも１つを低下させる可能性があり、ＩＬ−１０レベルをさらに増強する可能性がある。サイトカインレベルの調節は、試料（細胞上清など）の中のサイトカインの存在および量を定量するためのＥＬＩＳＡ検定など、当業者にとっては周知である技術を使用して、当業者が測定することができる。
【００４６】
種々のさらなる態様では、本発明は、患者がヒトである上記の態様または実施形態のいずれかに係る、方法、組み合わせ、薬剤、使用、パーツのキットのシステムに及ぶ。
【００４７】
なおさらなる態様では、本発明は、本願明細書に記載される、患者における、自己反応性のＴｈ１および／もしくはＴｈ１７細胞によって引き起こされるか、またはＩＬ−１７によって媒介される免疫反応から引き起こされる自己免疫状態または慢性炎症性疾患を処置するいずれの新規な方法にも及ぶ。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰのインビボ投与が、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を軽減するということを示す。
【図２】ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰが実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を軽減するということを示す。
【図３】ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰが、ＭＯＧおよびＣＦＡを用いた免疫化によって誘導されるＥＡＥの間、ＭＯＧ特異的炎症性サイトカインを抑制するということを示す。
【図４】ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置が、ＥＡＥを有するマウスの脳において、ＩＬ−１７を発現するおよびＩＦＮ−γを発現するＣＤ３＋  Ｔ細胞を抑制するということを示す。
【図５】ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置が、ＥＡＥを有するマウスの脳において、ＩＬ−１７を発現するおよびＩＦＮγを発現するＣＤ３＋  ＣＤ４＋  Ｔ細胞を抑制するということを示す。
【図６】ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置が、ＥＡＥを有するマウスの脳において、ＩＬ−１７を発現するおよびＩＦＮ−γを発現するＣＤ３＋  ＣＤ４＋  Ｔ細胞を抑制するということを示す。
【図７】ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置が、ＥＡＥ誘導の７２時間後に、マウスの鼠径リンパ節におけるＥＢＩ３  ｍＲＮＡ発現を増強するということを示す。
【図８ａ】ＮＯＤ−１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置が、ＤＣにおける、ＬＰＳによって誘導されるＥＢＩ３の遺伝子発現を増強するということを示す。
【図８ｂ】ＮＯＤ−１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置が、ＤＣにおける、ＬＰＳによって誘導されるＩＬ−２７ｐ２８の遺伝子発現を増強するということを示す。
【図９ａ】ＥＲＫの阻害が、ＤＣにおけるＥＢＩ３の遺伝子発現について、Ｔｒｉ−ＤＡＰとＬＰＳとの相乗効果を増強するということを示す。
【図９ｂ】ＥＲＫの阻害が、ＤＣにおけるＩＬ−２７ｐ２８の遺伝子発現について、Ｔｒｉ−ＤＡＰとＬＰＳとの相乗効果を増強するということを示す。
【図１０ａ】Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置後の増強された、ＬＰＳによって誘導される、ＤＣによるＩＬ−１２ｐ４０およびＩＬ−１２ｐ７０産生はｐ３８活性化に依存するということを示す。
【図１０ｂ】Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置後の増強された、ＬＰＳによって誘導される、ＤＣによるＩＬ−２３およびＩＬ−１０産生はｐ３８活性化に依存するということを示す。
【図１１ａ】Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置後の増強された、ＣｐＧによって誘導されるＤＣによるＩＬ−１２ｐ４０およびＩＬ−１２ｐ７０の産生はｐ３８活性化に依存するということを示す。
【図１１ｂ】Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置後の増強された、ＣｐＧによって誘導される、ＤＣによるＩＬ−２３およびＩＬ−１０の産生はｐ３８活性化に依存するということを示す。
【図１２ａ】Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置後の増強された、ＬＰＳによって誘導される、ＤＣによるＩＬ−１２ｐ４０およびＩＬ−１２ｐ７０の産生はＥＲＫ活性化に部分的に依存するということを示す。
【図１２ｂ】Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置後の増強された、ＬＰＳによって誘導される、ＤＣによるＩＬ−２３およびＩＬ−１０の産生はＥＲＫ活性化に部分的に依存するということを示す。
【図１３ａ】Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置後の増強された、ＣｐＧによって誘導される、ＤＣによるＩＬ−１２ｐ４０およびＩＬ−１２ｐ７０の産生はＥＲＫ活性化に部分的に依存するということを示す。
【図１３ｂ】Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置後の増強された、ＣｐＧによって誘導される、ＤＣによるＩＬ−２３およびＩＬ−１０の産生はＥＲＫ活性化に部分的に依存するということを示す。
【図１４】Ｎｏｄ−１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰによって処置されたＳＪＬマウスの臨床スコアを示す。
【図１５】図１５Ａは、脾臓細胞におけるＩＦＮ−ガンマおよびＩＬ−１７発現を示す。図１５Ｂは、リンパ節におけるＩＬ−１７の産生を示す。
【図１６】図１６ＡはＴｒｉＤＡＰを用いて処置されたマウスおよびＴｒｉＤＡＰを用いずに処置されたマウス由来の腹腔滲出細胞の上清におけるＩＬ−１０発現を示し、一方、図１６ＢはＴＧＦ−ベータの発現を示す。
【図１７】ＰＢＳまたはＴｒｉＤＡＰによって処置されたマウス由来の、ＴＬＲ作動薬によって活性化された脾臓細胞の上清におけるサイトカインＩＬ−１０、ＩＬ−２７およびＴＧＦ−βの発現レベルおよびケモカインＭＩＰ−１αの発現レベルを表す４つのグラフを示す。ＩＬ−１０およびＩＬ−２７の発現レベルは、ＴＬＲ作動薬を用いたインビトロ刺激後に、ＴｒｉＤＡＰで処置されたマウス由来の脾臓細胞で増強されることがわかる。
【図１８】Ｔ細胞によるインターフェロンガンマの産生は、ＴｒｉＤＡＰ処置されたマウスから得られた抗原提示細胞を用いて刺激されたときは、対照マウスから得られ抗原提示細胞と比べて低いということを示す。
【図１９】ＴｒｉＤＡＰとともにおよびＴｒｉＤＡＰを伴わずに抗原およびＬＰＳをパルスされた樹状細胞によって刺激された抗原特異的Ｔ細胞によるＩＬ−１７発現レベルを示すグラフを示す。
【図２０】図２０Ａは、ＬＰＳとともにおよびＬＰＳを伴わずにＴｒｉＤＡＰを用いて刺激されたヒト由来の樹状細胞におけるＩＬ−２７発現レベルを示し、一方、図２０Ｂは同じ細胞集団におけるＩＬ−１０発現レベルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明者らは、驚くべきことに、ＮＯＤ１作動薬、Ｔｒｉ−ＤＡＰの投与後の、誘導された自己免疫疾患ＥＡＥの重症度の低下、およびＥＡＥの発症の遅れを特定した。ＥＡＥの重症度の低下は、Ｔｈ１およびＴｈ１７細胞媒介性反応の低下と相関していた。ＥＡＥはＣＮＳの自己免疫疾患であり、ＭＳの動物モデルである。従って、ＥＡＥ動物モデルにおける実験から得られる結果は、ヒト対象における多発性硬化症の処置の推定へとつなげることができる。Ｔｒｉ−ＤＡＰ含有化合物は、Ｔ細胞のサブセット自体、またはこのようなＴ細胞の分化および活性化を引き起こすサイトカインによって推進される免疫応答のいずれかによって引き起こされる病理に起因して、異常なＴｈ１およびＴｈ１７  Ｔ細胞反応によって媒介される自己免疫疾患および慢性炎症性疾患（多発性硬化症など）などの状態の寛解において有用性を有するということを、本発明者らは特定した。
【００５０】
理論に結び付けられることは望まないが、本発明者らは、自己免疫疾患発症の時および／または自己免疫疾患発症後のＴｒｉ−ＤＡＰの投与ののちに生じる、マウスにおけるＥＡＥおよびヒトにおけるＥＡＥなどの自己免疫状態の原因となるＴｈ１およびＴｈ１７媒介性炎症促進性の免疫応答の下方制御は、Ｔ細胞媒介性免疫応答を誘導する上での抗原提示細胞、特に樹状細胞（ＤＣ）の活性の調節によって媒介されると推測する。特に、ＴｒｉＤＡＰの投与は、抗原提示細胞の機能が、抗原提示細胞の表面上でのＭＨＣクラスＩＩ発現の低下、およびそれゆえＴ細胞への抗原の提示の低下が原因で改変されるということを引き起こす。さらには、サイトカインＩＬ−２７の発現が増大する。ＴｒｉＤＡＰとともに少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬を同時投与すること（つまり、ＴｒｉＤＡＰの投与に連続して、またはＴｒｉＤＡＰの投与の後で）により、樹状細胞によるＩＬ−２７の発現は相乗的にさらに増強される。それゆえＴｒｉＤＡＰへの曝露後の抗原提示細胞の挙動の調節によって、抗原提示細胞がメモリーＴ細胞を活性化する能力、またはナイーブなＣＤ４＋  Ｔ細胞の、Ｔｈ１またはＴｈ１７表現型を有するＴ細胞への分化を引き起こす能力の低下を生じる。
【００５１】
本発明者らは、驚くべきことに、Ｔｒｉ−ＤＡＰまたは関連するジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）含有ムロペプチド化合物などのＮＯＤ−１作動薬がＮＯＤ−１に結合した後にＮＯＤ−１によって媒介されるシグナル伝達は、抗炎症性の免疫応答を媒介するサイトカインプロファイルの産生を生じるということを特定した。本発明者らによるこの観察は、まったく予想されていなかった。というのも、ＮＯＤ−１作動薬によるＮＯＤ−１の刺激は、炎症促進性の免疫応答を媒介するであろう、ＮＯＤ−１発現細胞によるサイトカインプロファイルの発現をもたらすであろうというのが、当該分野で受け容れられた定説であるからである。
【００５２】
さらに、本発明者らは、少なくとも１つのＴＬＲ作動薬の存在下でのＴｒｉ−ＤＡＰと抗原提示細胞（樹状細胞など）との相互作用は、抑制性（つまり、抗炎症性）のサイトカインＩＬ−１０およびＩＬ−２７の産生を増強するということを特定した。本発明者らはさらに、ＴｒｉＤＡＰ投与後の樹状細胞によるＩＬ−１０および／またはＩＬ−２７の産生の増強は、Ｔｈ１およびＴｈ１７媒介性Ｔ細胞反応の抑制、ならびに処置後のＣＮＳへのＴｈ１およびＴｈ１７の細胞浸潤の低下を生じると推測する。それゆえ疾患の進行および病理は低減する。
【００５３】
ＡＰＣに対するＴｒｉ−ＤＡＰのこの観察された活性を、本発明者らは、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患（クローン病および／または潰瘍性大腸炎を含む）ならびに１型糖尿病などの（これらに限定されない）自己免疫疾患および慢性炎症性疾患の処置および／または予防における有用性を有すると特定した。ＩＬ−１０およびＩＬ−２７の両方の発現は、１型糖尿病の発症と関連しているということが公知である（ＢｅｔｔｉｎｉおよびＶｉｇｎａｌｉ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  ２００９．２１．６１２−６１８）。関節リウマチは、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−６およびＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインが支配的な病理学的役割を果たす慢性の自己免疫疾患である。さらに最近では、ＩＬ−１７は、ＲＡの誘導および維持において重要なさらなる役割を果たすということが示唆されている。ＩＬ−１７はヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１７細胞）によって主に産生される。ＴＮＦ−αは、Ｔ細胞をＴｈ１７表現型に向けて分化させる能力をＤＣに授けることにより、ＩＬ−１７の産生を推進するということがインビトロで示されている。驚くべきことに、本発明者らは、ＴｒｉＤＡＰは抗原をＴ細胞に提示するという樹状細胞の能力を低下させるということを示した。さらには、ＴｒｉＤＡＰは、Ｔｈ１７表現型に向かうナイーブＴ細胞の分化を防止するＩＬ−２７の産生を誘導する。従って、ＩＬ−１０およびＩＬ−２７などのサイトカインの産生を刺激する上で、ＴｒｉＤＡＰは、Ｔ細胞によるＩＬ−１７およびＩＦＮ−γの産生の重要な負の制御因子であるということが示されており、それゆえ本発明者らは、これは、Ｔｈ１７およびＴｈ１の反応の強度および／または継続期間を限定する負のフィードバックループの一部を形成し、それゆえ関節リウマチの処置のための新規な治療アプローチを提供するということを提案する。
【００５４】
Ｌ−ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ（Ｔｒｉ−ＤＡＰ）は、ＮＯＤ１（ＮＯＤ−１）によって特異的に認識されるグラム陰性菌のペプチドグリカンの中に存在するジアミノピメリン酸含有トリペプチドである。これまでに触れたように、ＮＯＤ１は、ＤＣなどのＡＰＣの細胞質に位置するＰＲＲであり、これは、リガンド結合の際に、微生物の病原体関連分子構造（ＰＡＭＰ）に対する免疫応答を開始する上で主に機能を果たす。ＰＲＲリガンド結合に反応してＡＰＣによって開始される免疫応答の種類は、動員されるＡｇ特異的Ｔ細胞集団のその後の種類を決定する上で、鍵となる役割を果たす。ＮＯＤ１リガンド結合は、通常、ＭＡＰＫファミリーおよび転写因子ＮＦ−κＢのメンバーの活性化と関連している。
【００５５】
本発明者らは、Ｔｒｉ−ＤＡＰを含む組成物の投与は、自己免疫疾患、特に、マウスにおけるＥＡＥ疾患モデルによって例示されるとおりの、自己反応性Ｔ細胞によって媒介される自己免疫状態の疾患の重症度および進行の低下をもたらすという驚くべき観察を行った。従って、ある実施形態では、本発明は、自己免疫疾患および慢性炎症性疾患の処置および／または予防を必要とする対象における、自己免疫疾患および慢性炎症性疾患の処置および／または予防のための、Ｔｒｉ−ＤＡＰ、またはその合成もしくは非合成の類似体を含有する組成物の治療上有効量の投与に及ぶ。さらなる実施形態では、Ｔｈ１およびＴｈ１７媒介性免疫応答の阻害または下方制御から生じた、臨床疾患スコア（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｓｃｏｒｅ）および疾患の重症度の低下が、ＥＡＥ疾患モデルを提示するマウスで見られる。
【００５６】
ＩＬ−２７は、インビボでＥＡＥのエフェクター相を強力に抑制することができるｐ２８およびＥＢＩ３から構成される抑制性サイトカインであり、従って、ＭＳなどの自己免疫疾患に関する治療上の潜在性を有するとして同定されてきた（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄら、２００７）。ＩＬ−２７は、抗原提示細胞によって産生され、そして単球／マクロファージ、樹状細胞、ＴおよびＢ細胞、ナチュラルキラー細胞、マスト細胞、および内皮細胞によって発現されるその受容体、ＩＬ−２７Ｒを介してシグナル伝達する。ＩＬ−２７Ｒ欠損マウスにおけるより重篤な疾患によって実証されるように、ＩＬ−２７は、ＥＡＥにおいて抑制的な役割を果たすということが示されている。外因性のＩＬ−２７は、脳炎惹起性のリンパ節脾臓細胞がＥＡＥを移植する能力を強力に抑制した。ＩＬ−２７は、ＩＬ−２３によって推進されるミエリン反応性Ｔ細胞によるＩＬ−１７産生を著しく阻害し、これにより養子移植ＥＡＥにおけるこのＴ細胞の脳炎惹起性を抑制した。さらには、皮下の浸透圧ポンプによって送達されるとき、インビボでの活性なＥＡＥに対するＩＬ−２７の強い抑制効果が実証された。ＩＬ−２７で処置されたマウスは、ＣＮＳの炎症性浸潤および、注目すべきことに、より低い割合のＴｈ１７細胞を減少させた。
【００５７】
本発明において、本発明者らは、驚くべきことに、インビトロでのＴＬＲ作動薬、またはインビボでの適切なアジュバントと併用したＴｒｉ−ＤＡＰを含有する化合物の投与が、ＢＭＤＣによるＩＬ−１７の産生の増強をもたらすということを観察した。従って、本発明のある実施形態では、Ｔｒｉ−ＤＡＰを含有する組成物は、薬学的に許容できるＴＬＲ作動薬と併用して投与されてもよい。
【００５８】
ある実施形態では、このＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）作動薬は、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４またはＴＬＲ９に特異的である。ＴＬＲ２受容体は、Ｔｏｌｌ様受容体１またはＴｏｌｌ様受容体６と結合して見出されるヘテロ二量体である。細菌性リポペプチドは、ＴＬＲ２含有受容体についての主要な作動薬である。ＴＬＲ２作動薬の例としては、マイコプラズママクロファージ活性化リポタンパク質２、高純度の可溶性ペプチドグリカン、リポテイコ酸、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ボレリア・ブルグドルフェリ）由来の外膜プロテインＡ、トリパルミトイル−システイニル−セリル−（リジル）３−リジン（Ｐａｍ３ＣＳＫ４、Ｐ３ＣＳＫ４）、ジパルミトイル−ＣＳＫ４（Ｐａｍ２ＣＳＫ４、Ｐ２−ＣＳＫ４）、およびモノパルミトイル−ＣＳＫ４（ＰＣＳＫ４）ならびにリポ多糖および不活化細菌が挙げられるが、これらに限定されない。ＴＬＲ４についての古典的な作動薬は、細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）であり、これはリピドＡなどを含有する物質のファミリーを指す。ＬＰＳの例示的な形態は、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｂ：Ｏ１１１（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）である。より毒性が低いＴＬＲ４作動薬は、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）化合物である。合成のアジュバントＡＳＯ２（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、英国）はＭＰＬを構成要素として含有する。
【００５９】
ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）などの免疫促進性オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、ＴＬＲ９についての典型的な作動薬である。より一般的に言えば、それらはオリゴデオキシヌクレオチドの免疫促進性配列（ＩＳＳ−ＯＤＮ）と呼ばれる。なぜなら、多くの免疫促進性オリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）はＣｐＧモチーフを含有しないからである。典型的には、このＯＤＮは、合成のチオホスホリレート（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅ）に連鎖した化合物である。しかしながら、細菌のＤＮＡ、リポソーム性の脊椎動物のＤＮＡ、昆虫のＤＮＡ、クラミジアポリヌクレオチドなどを含めた多くの種類のＤＮＡおよびＲＮＡは、ＴＬＲ９を活性化することができる。
【００６０】
典型的には、このＴＬＲ作動薬は、樹状細胞によるＩＬ−２７産生を誘導することができるＴＬＲ２、ＴＬＲ４またはＴＬＲ９の作動薬である。ある実施形態では、このＴＬＲ作動薬は、ＬＰＳ（リポ多糖）、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）を含めたＣｐＧモチーフ、ｄｓＲＮＡ、ポリ（Ｉ：Ｃ）およびＰａｍ−３Ｃｙｓのうちのいずれか１以上から選択されてもよい。
【００６１】
あるさらなる実施形態では、Ｔｒｉ−ＤＡＰ含有化合物の投与は、少なくとも１つのＥＲＫ阻害剤の投与を伴ってもよい。このＥＲＫ阻害剤は、Ｔｒｉ−ＤＡＰ含有化合物の投与と同時にまたはその投与に連続して与えられてもよい。本願明細書中上記の少なくとも１つのＴＬＲ作動薬は、Ｔｒｉ−ＤＡＰ含有化合物およびＥＲＫ阻害剤とともに投与されてもよい。
【００６２】
Ｔｈ１細胞は、マクロファージの殺菌活性を活性化し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞の増殖を推進することによって細胞内感染に対する防御をもたらすが、炎症反応および自己免疫障害とも関連する。炎症促進性のメディエーターとして、過剰なＴｈ１細胞反応はその宿主にとって有害である可能性がある。Ｔｈ１分極因子としてはＩＬ−１２、ＩＬ−１８、Ｉ型インターフェロンおよび細胞表面に発現された細胞接着分子１（ＩＣＡＭ１）が挙げられる。Ｔｈ１細胞はサイトカイン、特にＩＦＮ−γを産生する。Ｔｈ１７細胞は、早期の組織特異的炎症反応に関与して、好中球の動員および活性化をもたらすと考えられる。加えて、Ｔｈ１７細胞は、自己免疫の特定の強力な誘導因子として最近同定された。これまで関係があるとされたＴｈ１７分極因子としては、ＩＬ−２３、ＩＬ−６、ＩＬ−１、ＩＬ−２１およびＴＧＦ−βが挙げられる。Ｔｈ１７細胞は、サイトカイン、特にＩＬ−１７だけでなくＩＬ−２２およびＴＮＦ−αも産生する。
【００６３】
本発明の本発明者らは、驚くべきことに、Ｔｒｉ−ＤＡＰを含有する化合物を自己免疫疾患に罹患している動物に投与することで、Ｔｈ１およびＴｈ１７に関連するサイトカイン、それぞれＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α、ならびにＩＬ−１７の産生の阻害または下方制御がもたらされるということを観察した。従って、ある実施形態では、本発明におけるＴｒｉ−ＤＡＰ処置後のＴｈ１およびＴｈ１７媒介性免疫応答の抑制は、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＩＬ−１７を含む群からの少なくとも１つのサイトカインの阻害または下方制御をもたらす。あるさらなる実施形態では、本発明におけるＴｒｉ−ＤＡＰ処置後のＴｈ１およびＴｈ１７媒介性免疫応答の抑制は、自己免疫疾患および慢性炎症性疾患の間にＣＮＳに浸潤する、ＩＦＮγおよびＩＬ−１７を産生するＴ細胞の数の減少をもたらす。
【００６４】
（ペプチド模倣薬および合成の類似体）
ペプチド模倣薬またはペプチド模倣体などのペプチド類似体は、鋳型ペプチドを表す特性を有する非ペプチド化合物である。このようなペプチド類似体は、典型的にはコンピューターによる分子モデリングを使用して開発される。ＮＯＤ１への親和性および結合特異性を有するペプチド（ＴｒｉＤＡＰなど）に構造的に類似するペプチド模倣薬が、このようなＴｈ１およびＴｈ１７阻害機能を有すると判定されるポリペプチドおよびタンパク質に類似の予防的および治療的効果を媒介するために使用されてもよい。
【００６５】
ペプチド模倣薬は、典型的には、鋳型ペプチドに構造的に類似しているが、１以上のペプチド結合が当該技術分野で周知の方法によって別の結合に置き換えられている。例えば、ＮＯＤ１エピトープ（ＴｒｉＤＡＰなど）への結合特異性を有するペプチドは、それがアミド結合の置換、非ペプチド部分の組み込み、または骨格環化を含むように改変されてもよい。適切には、システインが存在する場合には、この残基のチオールは、遊離の硫酸基の損傷を防止するためにキャップ（保護）されてもよい。ペプチドは、さらに、プロテアーゼの攻撃から当該ペプチドを保護するように、天然の配列から改変されてもよい。
【００６６】
従って、本発明でＮＯＤ１作動薬として使用されるペプチド化合物は、Ｃ末端および／もしくはＮ末端のキャッピング、ならびに／またはシステイン残基のキャッピングのうちの少なくとも１つを使用してさらに改変されてもよい。さらには、本発明で使用するためのペプチドは、Ｎ末端残基で、アセチル基を用いてキャッピングされてもよい。適切には、本発明のおよび本発明で使用するためのペプチドは、Ｃ末端で、アミド基を用いてキャッピングされてもよい。適切には、システインのチオール基は、アセトアミドメチル基を用いてキャッピングされる。
【００６７】
（Ｔｒｉ−ＤＡＰの類似体、誘導体、模倣体、およびバリアント）
本発明は、本発明で使用するためのＴｒｉ−ＤＡＰ含有組成物の類似体、誘導体、断片、およびバリアントに及ぶ。本願明細書で定義される場合のＴｒｉ−ＤＡＰの誘導体、断片またはバリアントは、Ｔｒｉ−ＤＡＰの観察される免疫抑制性を呈する、部分Ｔｒｉ−ＤＡＰからなるいずれの化合物、分子または高分子をも意味すると理解される。このような誘導体、断片またはバリアントは、当業者に公知のいくつかの技術のうちのいずれか１つを使用して、当業者が調製してよい。このような断片、バリアント、類似体または誘導体は、自然免疫系の細胞に対して作用するときに、Ｔｒｉ−ＤＡＰ含有組成物と同一または実質的に類似の生物学的機能を媒介する。従って、本発明はさらに、Ｔｒｉ−ＤＡＰおよびＭ−ＴｒｉＤＡＰ含有組成物の使用に加えて、このような化合物の相同体および類似体の使用を包含することが意図される。これに関して、相同体は、上記の化合物に対する実質的な構造上の類似性を有する分子であり、類似体は、構造上の類似性にかかわらず実質的な生物学的類似性を有する分子である。
【００６８】
あるさらなる実施形態では、本発明の化合物は、特定のアミノ酸残基の交換または置換によって調節されてもよい。よく理解されているとおり、アミノ酸レベルの相同性は、一般に、アミノ酸の類似性または同一性の観点による。類似性は、１つの疎水性残基を別の疎水性残基で置換すること、または１つの極性残基を別の極性残基で置換することなどの「保存的変異（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ）」を許容する。
【００６９】
非ペプチド模倣体は、本発明の範囲内で提供される。ある実施形態では、本発明の化合物は、アラニン（ａｌａ、Ａ）残基をセリン（ｓｅｒ、Ｓ）残基またはバリン（ｖａｌ、Ｖ）残基で置き換えることによって改変することができる。あるさらなる実施形態では、グルタミン酸（ｇｌｕ、Ｅ）残基は、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）残基で置き換えられてもよい。
【００７０】
（組み合わせ医薬）
本願明細書中で上に記載したとおり、ある態様では、本発明は、本発明の組成物または方法が、抗原提示細胞、特に樹状細胞の活性を調節するさらなる化合物の投与に及ぶ併用療法に及び、このさらなる化合物は、少なくとも１つのＴＬＲ作動薬および／または少なくとも１つのＥＲＫ  ＭＡＰＫの阻害剤と組み合わせて投与される。
【００７１】
典型的には、一次治療用および二次治療用組成物は、同時に与えられる。ある実施形態では、一次治療用組成物（すなわち、ＡＰＣの機能活性を調節する化合物）および二次治療用組成物（これは、例えばＴＬＲ作動薬であってよいであろう）は同時に投与される。あるさらなる実施形態では、それらは連続的に投与される。
【００７２】
ある実施形態では、この併用療法は、Ｔｒｉ−ＤＡＰ、またはその合成もしくは非合成の類似体またはペプチド模倣薬を含有する組成物を含んでもよく、これは、下記のもののうちの少なくとも１つとともに、対象に同時投与される：ＴＬＲ作動薬（ＴＬＲ２、ＴＬＲ４もしくはＴＬＲ９に特異的な作動薬など）、サイトカイン阻害剤（例えば、ＩＬ−１、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２３、ＩＬ−６、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−１２の阻害剤であるが、これらに限定されない）、ＥＲＫ阻害剤（ＰＤ９８０５９またはＵ０１２６など）、成長因子阻害剤、免疫抑制薬（抗体など）、抗炎症薬、酵素阻害剤、ステロイド、非ステロイド系抗炎症薬、代謝阻害剤、細胞傷害性薬物または細胞分裂抑制剤。
【００７３】
併用療法の投与は、関連する治療上有効な効果を成し遂げるために、対象に、より少ない治療用量を投与することを可能にするという点で、対象への併用療法の投与は有利である可能性があるということを、当業者は認識しているはずである。より少ない併用用量の投与は、その対象が、投与された化合物に由来するより低い毒性レベルにしか曝露されないということをもたらす。さらには、本発明によって提供される併用療法の一部として投与される二次治療用化合物は異なる経路を標的とするため、その治療の全体的な有効性が相乗的に改善される可能性が高い。有効性の改善は、より低い用量しか投与される必要がないということをもたらし、従って関連する毒性の低下をもたらすであろう。
【００７４】
（医薬組成物）
本発明は、ＡＰＣ活性の調節を通して自己免疫疾患または慢性炎症性疾患におけるＴｈ１およびＴｈ１７細胞媒介性反応を阻害または下方制御する化合物を含む医薬組成物に及ぶ。本発明に係る、および本発明に係る使用のための医薬組成物は、活性成分（すなわち、Ｔｈ１およびＴｈ１７細胞の阻害剤）に加えて、当業者にとっては周知である薬学的に許容できる賦形剤、担体、緩衝液  安定剤または他の物質を含んでもよい。適切な医薬担体の例としては、水、グリセロール、エタノールなどが挙げられる。
【００７５】
本発明の組成物は、いずれの適切な経路を介して、処置を必要とする患者に投与されてもよい。本願明細書に詳述するとおり、当該組成物が非経口投与されることが好ましい。非経口投与用の好ましい経路の例は、静脈内、心臓内、動脈内、腹腔内、筋肉内、腔内、皮下、経粘膜、吸入または経皮が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７６】
投与経路としては、局所的および経腸的、例えば、経粘膜（肺を含む）、経口、鼻内、経直腸をさらに挙げてもよい。製剤は、液体、例えば、ｐＨ  ６．８〜７．６の非リン酸緩衝液を含有する生理食塩水、または凍結乾燥された粉末もしくはフリーズドライの粉末であってもよい。
【００７７】
ある実施形態では、この組成物は、注射用組成物として送達可能である。静脈内注射については、当該活性成分は、発熱物質を含まずかつ適切なｐＨ、等張性および安定性を有する非経口的に許容できる水溶液の形態にあることになろう。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液または、乳酸加リンゲル液などの等張性媒体を使用して適切な溶液を調製することが十分にできる。防腐剤、安定剤、緩衝液、抗酸化剤および／または他の添加剤を、必要に応じて含めてよい。
【００７８】
経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、粉末または液体の形態にあってもよい。錠剤は、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体担体を含んでもよい。液体の医薬組成物は、一般に、水、石油、動物油または植物油、鉱油または合成油などの液体担体を含む。生理食塩水溶液、デキストロースもしくは他の糖溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールなどのグルコールを含めてもよい。
【００７９】
上で触れた技術およびプロトコルならびに本発明に従って使用されてもよい他の技術およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；第２０版  ＩＳＢＮ  ０−９１２７３４−０４−３およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ａｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．ら、第７版  ＩＳＢＮ  ０−６８３３０５−７２−７に見出すことができ、これらの文献の開示全体は、参照により本願明細書に援用したものとする。
【００８０】
当該組成物は、特定の組織（血液を含む）に置かれたミクロスフェア、リポソーム、他の微粒子送達システムまたは徐放性製剤を介して投与されてもよい。
【００８１】
投薬治療方式としては、本発明の組成物の単回投与、または当該組成物の複数回投与用量を挙げることができる。この組成物は、処置するために本発明の組成物が投与される状態の処置のために使用される他の治療薬および医薬と連続的にまたはそれらとは別個に、さらに投与することができる。
【００８２】
投与される現実の量、ならびに投与の速度および時間的経過は、処置しようとするものの性質および重症度によることになろう。処置の処方、例えば投薬量の決定などは、最終的には、一般開業医および他の医師の職責の範囲内であって一般開業医および他の医師の判断によるが、典型的には、処置されるべき障害、個々の患者の状態、送達部位、投与方法および医師にとって公知の他の要因が考慮される。
【００８３】
（定義）
特に定義されない限り、本願明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明の分野の当業者が通常理解する意味を有する。
【００８４】
本願明細書全体を通して、文脈上、明らかに別様の解釈が必要になる場合を除き、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」もしくは「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む、含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」もしくは「含む、含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などの派生語は、明記された整数または整数群を包含することを意味するが、いずれの他の整数または整数群の排除も意味しないということを理解されたい。
【００８５】
本願明細書で使用する場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その、当該、前記（ｔｈｅ）」などの用語は、文脈から明らかにそうではないとわかる場合を除き、単数および複数の指示対象を包含する。つまり、例えば「１つの活性薬剤」または「１つの薬理学的に活性薬剤」との表現は、単独の活性薬剤および組み合わせられた２以上の異なる活性薬剤を包含し、他方、「１つの担体」との表現は２以上の担体の混合物および１つの単独の担体を包含する、などである。
【００８６】
本願明細書で使用する場合の用語「抗原」は、免疫応答を刺激することができるいずれかの有機または無機の分子である。本願明細書で使用する場合の用語「抗原」は、免疫応答を刺激することができるいずれのペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸分子、炭水化物分子、有機または無機の分子に及ぶ。
【００８７】
本願明細書で使用する場合、用語「治療上有効量」は、Ｔｈ１および／またはＴｈ１７媒介性の炎症状態または自己免疫疾患を抑制するために必要とされる、本発明の薬剤、結合化合物、小分子、融合タンパク質またはペプチド模倣薬の量を意味する。
【００８８】
本願明細書で使用する場合、用語「予防上有効量」は、Ｔｈ１および／またはＴｈ１７媒介性炎症状態、例えば自己免疫疾患（多発性硬化症など）の最初の発症、進行または再発を防止するために必要とされる組成物の量に関する。
【００８９】
本願明細書で定義される場合の「Ｔｈ１および／またはＴｈ１７媒介性炎症状態」は、自己抗原に特異的である自己反応性のＴｈ１および／またはＴｈ１７  Ｔ細胞によって全体としてまたは一部が媒介される、慢性炎症状態または自己免疫疾患を意味する。Ｔｈ１および／またはＴｈ１７媒介性炎症状態の例は、本願明細書上記で提示されており、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患、１型糖尿病および乾癬が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９０】
本願明細書で使用する場合、用語「処置」ならびに「処置する」および「処置すること」などの関連する用語は、Ｔｈ１および／またはＴｈ１７媒介性自己免疫疾患もしくは慢性炎症状態またはそれらの少なくとも１つの症候の進行、重症度および／または継続期間の低下（減少）を意味し、ここでは、この低下（減少）または寛解は、抑制性サイトカイン、ＩＬ−２７、の産生、特に抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）またはマクロファージによる産生を誘導する化合物の投与から生じるものである。このＩＬ−２７産生は、ナイーブＴ細胞の、Ｔｈ１またはＴｈ１７表現型への成熟を防止してもよいし、またはＴｈ１またはＴｈ１７  Ｔ細胞の活性化を防止してもよい。
【００９１】
それゆえ用語「処置」は、対象に恩恵をもたらすことができるいずれのレジメン（療法）も指す。この処置は、既存の状態に関するものでもよいし、または予防的（防止のための処置）であってもよい。処置には、治癒的効果、緩和効果または予防的効果を含めてよい。本願明細書での「治療的」および「予防的」処置という表現は、最も広義に考慮されるべきである。用語「治療用、治療的」は、対象が完全回復まで処置されるということを必ずしも意味しない。同様に、「予防的」は、対象は最後まで病状に罹ることはないであろういうことを必ずしも意味しない。
【００９２】
本願明細書で使用する場合、用語「免疫細胞」は、造血系由来でかつ免疫応答において役割を果たす細胞を包含する。免疫細胞としては、リンパ球（Ｂ細胞およびＴ細胞など）；ナチュラルキラー細胞；骨髄系細胞（単球、マクロファージ、樹状細胞、好酸球、マスト細胞、好塩基球、および顆粒球など）が挙げられる。
【００９３】
本願明細書で使用する場合、用語「Ｔ細胞」は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、γδ（ガンマデルタ）Ｔ細胞およびＮＫ（ナチュラルキラー）Ｔ細胞に及ぶ。用語「Ｔ細胞」は、ヘルパーＴ１型Ｔ細胞およびヘルパーＴ２型Ｔ細胞の両方ならびにＴｈ−ＩＬ１７細胞も包含する。
【００９４】
本願明細書で使用する場合、用語「抗原提示細胞」またはその略語「ＡＰＣ」は、抗原のエンドサイトーシス吸着、プロセシングおよび提示ができる細胞を指す。この用語は、プロフェッショナル抗原提示細胞、例えば；Ｂリンパ球、単球、樹状細胞（ＤＣ）およびランゲルハンス細胞、ならびに角化細胞、内皮細胞、グリア細胞、線維芽細胞およびオリゴデンドロサイトなどの他の抗原提示細胞を包含する。用語「抗原提示」は、抗原を、ＭＨＣ分子に結合したペプチド断片として、細胞表面上にディスプレイすることを意味する。例えば、マクロファージ、Ｂ細胞、濾胞樹状細胞および樹状細胞などの多くの異なる種類の細胞は、ＡＰＣとして機能しうる。
【００９５】
本願明細書で使用する場合、用語「免疫応答」は、Ｔ細胞の同時刺激の調節によって影響を受けるＴ細胞媒介性および／またはＢ細胞媒介性免疫応答を包含する。用語「免疫応答」は、Ｔ細胞活性化（抗体産生など）（体液反応）およびマクロファージなどのサイトカイン応答性細胞の活性化によって間接的にもたらされる免疫応答をさらに包含する。
【００９６】
本願明細書で使用する場合、用語「樹状細胞」または「樹状細胞」（ＤＣ）は最も広義の樹状細胞を指し、そして抗原提示することができるいずれのＤＣをも包含する。この用語は、免疫応答を開始し、かつ／または抗原をＴリンパ球に提示し、かつ／または免疫応答の刺激のために必要とされるいずれかの他の活性化シグナルをＴ細胞に与えるすべてのＤＣを包含する。本願明細書中での「ＤＣ」という表現は、樹状細胞の形態、表現型または機能活性を提示する細胞、およびその変異体またはバリアントという表現を包含するとして読まれるべきである。樹状細胞の形態学的な特徴としては、長い細胞質の突起、または複数の微細な樹状突起を有する大きい細胞が挙げられうるが、これらに限定されない。表現型の特徴としては、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子、ＣＤ１１ｃ、Ｂ２２０、ＣＤ８−アルファ，ＣＤ１、ＣＤ４のうちの１以上の発現を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００９７】
本願明細書で定義される場合、語句「サイトカイン産生を上方制御する」またはその派生的表現は、サイトカインの産生のレベルが、これまでに公知の値と比べて増加しているということを意味する。さらに、本願明細書で定義される場合、語句「サイトカイン産生を下方制御する」は、ある薬剤が、これまでに公知の値と比べてサイトカインの産生の低下を引き起こすということを意味する。
【００９８】
本発明に関する「対象」は、哺乳動物（ヒト、霊長類および家畜（例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ロバ）など）；実験室試験動物（マウス、ウサギ、ラットおよびモルモットなど）；およびコンパニオンアニマル（イヌおよびネコなど）を含み、かつこれらを包含する。この哺乳動物がヒトであることが、本発明の目的にとって好ましい。用語「対象」は、本願明細書で使用する場合の用語「患者」と置き換えることができる。
【実施例】
【００９９】
本発明は、これより、以下の実施例を参照して説明される。実施例は、例証の目的で提供されており、本発明に対して限定を加えるものであると解釈されることは意図されていない。
【０１００】
（実施例１  −  ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置は実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を軽減する）
この実験は、Ｔｒｉ−ＤＡＰ処置が、マウスにおいてＥＡＥの誘導後に疾患の重症度の臨床スコアを低下させることができるかどうかを特定するために設計した。
【０１０１】
物質および方法：
ＥＡＥは、０日目に、４ｍｇ／ｍｌ  Ｈ３７  Ｒａ結核菌を補ったＣＦＡ中の１５０μｇのＭＯＧ３５−５５を用いて、皮下（ｓ．ｃ）注射によってＣ５７ＢＬ／６マウスで誘導した。０日目および２日目に、すべてのマウスに、腹腔内に（ｉ．ｐ）百日咳毒素（ＰＴ）を注射した。１つの群のマウスは処置せず、第２の群には０日目にＭＯＧ／ＣＦＡエマルション中のＴｒｉ−ＤＡＰ（１００μｇ／マウス）を与え、そして再度１日目、２日目に、およびそのあとは２日に１回与えた。臨床スコアを毎日評価し、体重を記録した。疾患の重症度は、以下のとおり等級付けした：等級０：正常（健康）、等級１：だらりとした尾部、等級２：ふらふらした歩き方；等級３：後肢の脱力；等級４：後肢麻痺；等級５：四肢麻痺／死。†は、ＥＡＥ疾患の重症度に起因して対照マウスが犠牲になったことを示す。
【０１０２】
結果：
処置しなかったマウスは、５〜６日後にＥＡＥの臨床徴候を発症し、疾患の重症度は、１２日目までに３．５〜４の臨床スコアへと急速にピークに達した（図１および図２）。対照的に、Ｔｒｉ−ＤＡＰ処置したマウスは、誘導後１１日目まで疾患の臨床徴候をまったく示さず（図１）、疾患の重症度は、処置しなかった対照マウスで観察したものよりも低かった（図１および図２）。対照マウスにおけるＥＡＥの憎悪は、Ｔｒｉ−ＤＡＰ処置したマウスと比べた、対照マウスの大きな体重減少によっても明らかであった（図１および図２）。
【０１０３】
これらの結果は、ＥＡＥ誘導時およびＥＡＥ誘導後のＴｒｉ−ＤＡＰ処置がＥＡＥ疾患の発症を軽減するということを実証する。
【０１０４】
（実施例２  −  ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置は、ＥＡＥ誘導後のＭＯＧ特異的炎症性サイトカインを抑制する）
この実験は、ＥＡＥ誘導後のＴｈ１およびＴｈ１７特異的炎症性サイトカインの産生に対するＴｒｉ−ＤＡＰ処置の効果を判定するために設計した。
【０１０５】
物質および方法：
ＥＡＥは、０日目に、４ｍｇ／ｍｌ  Ｈ３７  Ｒａ結核菌を補ったＣＦＡ中の１５０μｇのＭＯＧ３５−５５を用いて、ｓ．ｃ注射によってＣ５７ＢＬ／６マウスで誘導した。０日目および２日目に、すべてのマウスに、ｉ．ｐでＰＴを注射した。１つの群のマウスは処置せず、第２の群には免疫化の６時間前に１００μｇのＴｒｉ−ＤＡＰを与え、第３の群には、０日目にＭＯＧ／ＣＦＡエマルション中のＴｒｉ−ＤＡＰ（１００μｇ／マウス）を与え、再び１日目、２日目および４日目に与えた。５日目にマウスを犠牲にし、リンパ節細胞を、ＭＯＧペプチド（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質）（２０〜１００μｇ／ｍｌ）、または陰性対照および陽性対照として、それぞれ培地のみまたはＰＭＡおよび抗ＣＤ３を用いて刺激した。７２時間後、上清を取り除き、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−α（ＴＮＦ−アルファ）およびＩＦＮ−γ（インターフェロンガンマ）についてＥＬＩＳＡによって分析した。
【０１０６】
結果：
頑強なＭＯＧ特異的ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α反応を、ＥＡＥ誘導の５日後に対照ＥＡＥマウスの鼠径リンパ節で検出した（図３）。対照的に、ＥＡＥ誘導の６時間前にＴｒｉ−ＤＡＰで処置したマウスは、対照ＥＡＥマウスと比べて、有意に低下した抗原特異的Ｔ細胞反応を有していた。０日目、１日目、２日目および４日目のＴｒｉ−ＤＡＰ処置は、検出可能なＭＯＧ特異的Ｔ細胞反応を有しなかった（図３）。
【０１０７】
これらの結果は、Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置は、ＥＡＥ誘導後のマウスのリンパ節における炎症促進性サイトカインＩＬ−１７、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの産生を抑制するということを実証する。
【０１０８】
（実施例３  −  ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置は、ＥＡＥを有するマウスの脳における、ＩＬ−１７を発現するおよびＩＦＮγを発現するＴ細胞を抑制する）
この実験は、ＥＡＥ誘導後のマウスの脳における種々のＩＦＮ−γおよびＩＬ−１７を産生するＴ細胞集団に対するＴｒｉ−ＤＡＰ処置の効果を判定するために設計した。
【０１０９】
物質および方法：
ＥＡＥ誘導の１２日後に、単核細胞を、対照ＥＡＥまたはＴｒｉ−ＤＡＰ処置したＥＡＥマウスの脳から単離した。細胞を、ＰＭＡ／イオノマイシンで一晩、再度刺激し、ブレフェルジンＡとともにインキュベーションした。細胞を抗ＣＤ３（図４）、または抗ＣＤ３および抗ＣＤ４（図５および図６）で染色した。次いで細胞を固定し、透過処理し、抗ＩＦＮ−γおよび抗ＩＬ−１７を用いて細胞内部で染色し、フローサイトメトリによって分析した。
【０１１０】
結果：
検討したすべてのＴ細胞集団（図４におけるＣＤ３＋細胞、図５におけるＣＤ３＋  ＣＤ４＋細胞、および図６におけるＣＤ３＋  ＣＤ４−細胞）において、Ｔｒｉ−ＤＡＰ処置はＩＦＮ−γおよびＩＬ−１７の産生を抑制した（図４〜図６）。
【０１１１】
これらの結果は、Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置は、ＥＡＥ誘導後のマウスのＣＮＳにおいてＩＦＮ−γおよびＩＬ−１７を産生するＴ細胞集団の浸潤を抑制するということを実証する。
【０１１２】
（実施例４  −  ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置は、ＥＡＥ誘導の７２時間後に、マウスの鼠径リンパ節におけるＥＢＩ３  ｍＲＮＡ発現を増強する）
この実験は、ＥＡＥ誘導後のマウスの鼠径リンパ節におけるＥＢＩ３遺伝子発現に対する、Ｔｒｉ−ＤＡＰ処置の効果を評価するために設計した。
【０１１３】
物質および方法：
ＥＡＥは、０日目に、４ｍｇ／ｍｌ  Ｈ３７  Ｒａ結核菌を補ったＣＦＡ中の１５０μｇのＭＯＧ３５−５５を用いて、皮下注射によってＣ５７ＢＬ／６マウスで誘導した。０日目および２日目に、すべてのマウスに、ｉ．ｐにＰＴを注射した。１つの群のマウスは処置せず、第２の群には０日目にＭＯＧ／ＣＦＡエマルション中のＴｒｉ−ＤＡＰ（１００μｇ／マウス）を与え、そして再度１日目、２日目に与えた。ＥＡＥ誘導の７２時間後に、各群からの３匹のマウスを犠牲にした。鼠径リンパ節を取り出し、トリゾールの中に採取した。ＥＢＩ３  ｍＲＮＡを、１８Ｓ  ｒＲＮＡに対して正規化したリアルタイムＰＣＲによって評価した。ナイーブなＣ５７ＢＬ／６鼠径リンパ節に対する誘導倍率としてデータを示す（図７）。
【０１１４】
結果：
対照およびＴｒｉ−ＤＡＰ処置したマウスの鼠径リンパ節においてＥＢＩ３遺伝子発現を検討すると、対照マウスと比べて、Ｔｒｉ−ＤＡＰ処置したマウスのリンパ節におけるＥＢＩ３遺伝子発現のかなりの倍率の増加があった（図７）。
【０１１５】
これらの結果は、Ｔｒｉ−ＤＡＰがＥＡＥを軽減することができる能力は、抑制性サイトカインＩＬ−２７の産生に依存する可能性があるということの証拠を与える。
【０１１６】
（実施例５  −  ＮＯＤ１作動薬Ｔｒｉ−ＤＡＰを用いた処置は、樹状細胞における、ＬＰＳによって誘導されるＥＢＩ３およびＩＬ−２７ｐ２８の発現を増強する）
この実験は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）作動薬で刺激されたＢＭＤＣにおけるＥＢＩ３およびＩＬ−２７ｐ２８遺伝子発現に対するＴｒｉ−ＤＡＰ処置の効果を評価するために設計した。
【０１１７】
物質および方法：
骨髄由来のＤＣ（１×１０６細胞／ｍｌ）をＴｒｉ−ＤＡＰ（１００μｇ／ｍｌ）で２４時間前処置し、その後、ＴＬＲ作動薬ＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）およびＣｐＧ（５μｇ／ｍｌ）、およびＭＯＧ３５−５５ペプチド（２０μｇ／ｍｌ）または培地のみ（対照）で６時間刺激した。ＥＢＩ３（図８（ａ））およびＩＬ−２７ｐ２８（図８（ｂ））ｍＲＮＡを、１８Ｓ  ｒＲＮＡに対して正規化したリアルタイムＰＣＲによって評価した。培地のみの中で培養したＤＣに対する誘導倍率としてデータを示す。
【０１１８】
結果：
ＬＰＳによって誘導されるＥＢＩ３（図８（ａ））およびＩＬ−２７ｐ２８（図８（ｂ））遺伝子発現の増強を、Ｔｒｉ−ＤＡＰ処置後のＢＭＤＣにおいて観察した。これらの結果は、ＤＣのＴｒｉ−ＤＡＰ処置が炎症促進性の抑制性サイトカインＩＬ−２７の産生を誘導するということのさらなる証拠を与える。
【０１１９】
（実施例６  −  ＥＲＫの阻害は、ＤＣにおけるＥＢＩ３およびＩＬ−２７ｐ２８遺伝子発現の誘導について、Ｔｒｉ−ＤＡＰとＬＰＳとの相乗効果を増強する）
この実験は、ＢＭＤＣにおけるＬＰＳによって誘導されるＥＢＩ３およびＩＬ−２７ｐ２８遺伝子発現の、Ｔｒｉ−ＤＡＰによる増強におけるＥＲＫ活性化の役割を評価するために設計した。
【０１２０】
物質および方法：
ＢＭＤＣ（１×１０６）を、ＭＡＰＫ阻害剤、ＳＢ２０３５８０（５ｍＭ）、またはＭＥＫ１／２阻害剤、Ｕ０１２６（５ｍＭ）のいずれかで３０分間前処置し、その後、ＴｒｉＤＡＰ（１００ｍｇ／ｍｌ）または培地のみで刺激した。２４時間後、この細胞をＬＰＳ（リポ多糖）（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＣｐＧ（５ｍｇ／ｍｌ）または培地のみで刺激した。ＥＢＩ３およびＩＬ−２７ｐ２８  ｍＲＮＡを、１８Ｓ  ｒＲＮＡに対して正規化したリアルタイムＰＣＲによって評価した。培地のみの中で培養したＤＣに対する誘導倍率としてデータを示す（図９（ａ）および図９（ｂ））。
【０１２１】
結果：
ＥＲＫの阻害は、ＤＣにおけるＥＢＩ３およびＩＬ−２７ｐ２８の両方の遺伝子発現について、Ｔｒｉ−ＤＡＰとＬＰＳとの相乗効果を大きく増強する（図９（ａ）および図９（ｂ））。さらには、これらのデータは、ＥＲＫ阻害剤の添加は、Ｔｒｉ−ＤＡＰによって誘導されるか、またはＴｒｉ−ＤＡＰおよびＴＬＲ作動薬によって誘導される樹状細胞（ＤＣ）によるＩＬ−２７の産生を有意に増強するということを示した。
【０１２２】
（実施例７  −  ＢＭＤＣにおけるＴＬＲ作動薬によって誘導されるサイトカイン産生の、Ｔｒｉ−ＤＡＰによる増強はｐ３８に依存し、かつ部分的にＥＲＫに依存する）
この実験は、ＬＰＳによって誘導される、ＢＭＤＣによるＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−２３およびＩＬ−１０の産生の、Ｔｒｉ−ＤＡＰによって媒介される増強におけるＭＡＰＫ  ｐ３８およびＥＲＫの役割を評価するために設計した。
【０１２３】
物質および方法：
ＢＭＤＣ（１×１０６）をｐ３８阻害剤、ＳＢ２０３５８０（５μＭ  −  図１０〜図１１）、またはＥＲＫ阻害剤Ｕ０１２６（５μＭ  −  図１２〜図１３）で３０分間前処置し、その後、Ｔｒｉ−ＤＡＰ（１００μｇ／ｍｌ）または培地のみで刺激した。２時間後、これらの細胞をＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ  −  図１０および図１２）で、ＴＬＲ作動薬ＣｐＧで（５μｇ／ｍｌ  −  図１１および図１３）または培地のみで刺激した。２４時間後に上清を集め、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２ｐ７０およびＩＬ−１０濃度をＥＬＩＳＡによって定量した。
【０１２４】
結果：
Ｔｒｉ−ＤＡＰによるＢＭＤＣの前処置は、ＩＬ−１２ファミリーのメンバー、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０およびＩＬ−２３のＬＰＳおよびＣｐＧ産生の両方を増強する（図１０〜図１３）。Ｔｒｉ−ＤＡＰとＬＰＳまたはＣｐＧのいずれかとについて観察された相乗効果は、部分的にｐ３８に依存する（図１０〜図１１）。Ｔｒｉ−ＤＡＰによる、ＬＰＳによって誘導されるＩＬ−２３産生の増強は、ＥＲＫ阻害剤、Ｕ０１２６の添加によって抑制される（図１２（ｂ））。対照的に、ＬＰＳによって誘導されるＩＬ−１２ｐ７０の増強は、ＥＲＫ阻害剤の存在下でほんのわずかしか影響を受けない（図１２（ａ））。ＬＰＳによって誘導される、およびＣｐＧによって誘導される、ＤＣによるＩＬ−１０産生はともに、Ｔｒｉ−ＤＡＰによって増強され、この増強は、ｐ３８が阻害されると完全になくなった（図１０〜図１１）。ＥＲＫについての同様の役割は、ＤＣをＴｒｉ−ＤＡＰおよびＬＰＳまたはＣｐＧで同時刺激したときの、ＩＬ−１０産生について観察された相乗効果で明らかである。ＬＰＳまたはＣｐＧを伴うＴｒｉ−ＤＡＰによるＩＬ−１０産生は、ＥＲＫ阻害剤の存在下で抑制される（図１２〜１３）。
【０１２５】
これらの結果は、Ｔｒｉ−ＤＡＰが、ＴＬＲ作動薬によって誘導される炎症促進性サイトカインをＭＡＰＫ依存的に増強することができるということを実証するが、ＥＲＫ  ＭＡＰＫは、Ｔｒｉ−ＤＡＰによって誘導されるＩＬ−２７産生に対して負の影響を有しうるということを実証する。
【０１２６】
（実施例８  −  ＴｒｉＤＡＰを用いた処置は、ＳＪＬマウスの再発寛解型ＥＡＥモデルにおいてＥＡＥを軽減する）
この実験は、Ｎｏｄ−１作動薬ＴｒｉＤＡＰを用いた処置がＳＪＬマウスの再発寛解型ＥＡＥモデルにおいてＥＡＥを軽減するかどうかを考察した。
【０１２７】
物質および方法：
ＥＡＥ（実験的自己免疫性脳脊髄炎）を、ＳＪＬマウスにおいて、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中のプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、次いで百日咳菌毒素（ＰＴ）を用いた免疫化によって誘導した。ＳＪＬマウスは、Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｓｔｅｒマウスの３つの異なる源から、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｙのＪａｍｅｓ  Ｌａｍｂｅｒｔによって１９５５年に開発された。この系統は、多発性硬化症研究のための実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に対するその感受性を特徴とし、それゆえ、化合物の治療上の潜在性を評価するための（ＭＯＧ（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質）モデルに勝って）改善されたモデルを提供する。マウスを、１２日目から２日に１回、ＰＢＳ（対照）またはＴｒｉＤＡＰ（１００μｇ／マウス）で処置した。臨床スコアを毎日評価し、体重を記録した。疾患の重症度は、以下のとおり等級付けした：等級０：正常（健康）、等級１：だらりとした尾部、等級２：ふらふらした歩き方；等級３：後肢の脱力；等級４：後肢麻痺；等級５：四肢麻痺／死。†は、ＥＡＥ疾患の重症度に起因して対照マウスが犠牲になったことを示す。
【０１２８】
結果を図１４に示す。この結果は、１群あたり５〜６匹のマウスについての平均臨床スコアである。この結果は、ＴｒｉＤＡＰ処置した動物についての臨床スコアの低下を示す。
【０１２９】
（実施例９  −  再発寛解型ＥＡＥモデルにおけるＰＬＰ特異的ＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対するＴｒｉＤＡＰ処置の効果）
この実験は、再発寛解型ＥＡＥモデルにおけるＰＬＰ特異的ＩＬ−１７およびＩＦＮ−γの発現に対するＮｏｄ−１作動薬、ＴｒｉＤＡＰを用いた処置の効果を考察する。
【０１３０】
物質および方法
ＥＡＥを、ＳＪＬマウスにおいて、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中のプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、次いで百日咳菌毒素（ＰＴ）を用いた免疫化によって誘導した。マウスを、１２日目から２日に１回、ＰＢＳ（対照）またはＴｒｉＤＡＰ（１００μｇ／マウス）で処置した。２６日目にマウスを犠牲にし、リンパ節または脾臓細胞を、インビトロで、ＰＬＰ（１〜２５μｇ／ｍｌ）を用いて再刺激した。３日後、上清の中でのＩＬ−１７およびＩＦＮγ産生をＥＬＩＳＡによって定量した。
【０１３１】
結果を図１５に示す。図１５Ａは、脾臓細胞の中でのＩＦＮ−ガンマおよびＩＬ−１７発現を示す。図１５Ｂは、リンパ節の中でのＩＬ−１７産生を示す。
【０１３２】
これらの結果は、Ｔｒｉ−ＤＡＰ処置後に、ＩＦＮ−ガンマおよびＩＬ−１７レベルの継続的な低下があるということを示す。
【０１３３】
（実施例１０  −  ＴｒｉＤＡＰによって処置したマウスにおけるＴＬＲ作動薬によって誘導されるＩＬ−２７、ＩＬ−１０およびＴＧＦ−ベータの発現）
この実験は、ＴＬＲ−作動薬によって誘導されるＩＬ−２７、ＩＬ−１０  ＴＧＦ−βレベルのレベルがＴｒｉＤＡＰによって処置されたマウス由来の腹腔滲出細胞によって増強されるということを示す。
【０１３４】
物質および方法
マウスを、ＰＢＳまたはＴｒｉＤＡＰ（１００μｇ／マウス／日  ｉ．ｐ．）のいずれかで５日間処置した。腹腔滲出細胞（ＰＥＣ；１×１０６／ｍｌ）を、培地のみで（対照）、または以下の、ＴＬＲ４作動薬ＬＰＳ（リポ多糖）（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＴＬＲ９作動薬ＣｐＧ（５μｇ／ｍｌ）、もしくはＴＬ２作動薬Ｐａｍ３Ｃｓｋ（５００ｎｇ／ｍｌ）から選択されるＴｏｌｌ様受容体作動薬を用いて刺激した。２４時間後に上清を集め、サイトカイン濃度をＥＬＩＳＡによって定量した。
【０１３５】
結果を図１６に示す。図１６Ａは、ＴｒｉＤＡＰを用いておよびＴｒｉＤＡＰを用いずに処置したマウスの上清の中でのＩＬ−１０発現を示し、他方、図１６ＢはＴＧＦ−ベータ発現を示す。これらの結果は、インビボでＴｒｉＤＡＰを用いて処置したマウス由来のＰＥＣは、ＴＬＲ作動薬を用いたインビトロでの再刺激後に、より高い濃度の免疫抑制性サイトカイン、ＩＬ−１０およびＴＧＦ−ベータを分泌するということを示す。
【０１３６】
（実施例１１  −  ＴｒｉＤＡＰによって処置したマウス由来の脾臓細胞による、ＴＬＲによって誘導されるＩＬ−１０およびＴＧＦ−β）
この実験は、ＴｒｉＤＡＰ処置したマウス由来の脾臓細胞によって発現されたＩＬ−１０およびＴＧＦ−βを測定した。
【０１３７】
マウスを、ＰＢＳまたはＴｒｉＤＡＰ（１００μｇ／マウス／日  ｉ．ｐ．）のいずれかによって５日間処置した。脾臓細胞（ＰＥＣ；１×１０６／ｍｌ）を、培地のみで（対照）、または以下の、ＴＬＲ４作動薬ＬＰＳ（リポ多糖）（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＴＬＲ９作動薬ＣｐＧ（５μｇ／ｍｌ）、もしくはＴＬ２作動薬Ｐａｍ３Ｃｓｋ（５００ｎｇ／ｍｌ）から選択されるＴｏｌｌ様受容体作動薬を用いて刺激した。２４時間後に上清を集め、サイトカイン濃度をＥＬＩＳＡによって定量した。
【０１３８】
結果を図１７に示す。図１７は、ＴＬＲ作動薬とともにＰＢＳまたはＴｒｉＤＡＰを用いて処置したマウスの上清におけるサイトカインＩＬ−１０、ＩＬ−２７およびＴＧＦ−βならびにケモカインＭＩＰ−１αの発現レベルを表す４つのグラフを示す。ＩＬ−１０およびＩＬ−２７の発現レベルは、脾臓細胞をＴＬＲ作動薬で刺激した場合に増強されるということが見て取れる。これらの結果は、インビボでＴｒｉＤＡＰを用いて処置したマウス由来の脾臓細胞は、ＴＬＲ作動薬を用いたインビトロでの再刺激後に、より高い濃度の免疫抑制性サイトカイン、ＩＬ−１０、ＩＬ−２７およびＴＧＦ−ベータを分泌するということを示す。
【０１３９】
（実施例１２  −  抗原提示細胞に対するＴｒｉＤＡＰの効果）
この実験では、抗原提示細胞（ＡＰＣ）が、ＴｒｉＤＡＰによって処置されたマウスにおいてメモリーＴ細胞を活性化することができる能力を評価する。
【０１４０】
物質および方法
マウスを、ＰＢＳまたはＴｒｉＤＡＰ（１００μｇ／マウス／日  ｉ．ｐ．）のいずれかを用いて５日間処置した。腹腔滲出刺激細胞（ＰＥＣ）を照射し、ＭＯＧ特異的Ｔ細胞についての抗原提示細胞（ＡＰＣ）として使用した。ＭＯＧ（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質）およびＣＦＡ（１×１０６／ｍｌ）で免疫したマウス由来のＴ細胞を、ＰＥＣ（１×１０６／ｍｌ）およびＭＯＧ（２０μｇ／ｍｌ）とともに培養した。７２時間後に上清を集め、ＩＦＮ−γ濃度をＥＬＩＳＡによって定量した。
【０１４１】
結果を図１８に示す。図１８で、抗原特異的Ｔ細胞は、ＴｒｉＤＡＰ処置したマウスから入手した抗原提示細胞で刺激したとき、対照（ＰＢＳ）で処置したマウスと比べて、より少ないＩＦＮ−ガンマを分泌するということがわかる。これは、ＴｒｉＤＡＰ処置したマウスから単離した抗原提示細胞は、Ｔ細胞活性化を誘導する上では効果性が低いということを示す。
【０１４２】
（実施例１３  −  ＴｒｉＤＡＰは、ＴＬＲ作動薬によって活性化される樹状細胞が、インビトロでＴｈ１７細胞を活性化することができる能力を抑制する）
ＭＯＧおよびＬＰＳで免疫したマウス由来のＣＤ４  Ｔ細胞を、ＫＬＨ（２０μｇ／ｍｌ）の存在下で、ＴｒｉＤＡＰ（１００μｇ／ｍｌ）を用いてまたは用いずに、ＬＰＳ（１０または１００ｎｇ／ｍｌ）で刺激した樹状細胞とともにインビトロで培養した。７２時間後に上清を集め、ＩＬ−１７濃度をＥＬＩＳＡによって定量した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊Ｐ＜０．００１、ＴｒｉＤＡＰ使用  対  ＴｒｉＤＡＰ不使用。
【０１４３】
結果を図１９に示す。この図１９は、ＴｒｉＤＡＰを用いてまたは用いずに、抗原およびＬＰＳを用いてパルスした樹状細胞で刺激した抗原特異的Ｔ細胞によるＩＬ−１７発現レベルを示すグラフを示す。この結果は、ＴｒｉＤＡＰを用いた樹状細胞の処置が、樹状細胞がＣＤ４  Ｔ細胞によるＩＬ−１７産生を活性化することができる能力の、有意な低下を生じるということを示す。
【０１４４】
（実施例１４  −  ＴｒｉＤａｐはＩＬ−１０およびＩＬ−２７を誘導して、およびＴＬＲによって誘導されるヒト樹状細胞によるＩＬ−１０およびＩＬ−２７の産生を増強する）
ヒトＰＢＭＣからＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦとともに培養した樹状細胞を、ＴｒｉＤａｐ（１００μｇ／ｍｌ）、ＬＰＳ（１０もしくは１００ｎｇ／ｍｌ）、ＬＰＳおよびＴｒｉＤＡＰまたは培地のみを用いて刺激した。２４時間後に上清を集め、ＩＬ−２７およびＩＬ−１０濃度をＥＬＩＳＡによって定量した。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、ＴｒｉＤＡＰ使用  対  ＴｒｉＤＡＰ不使用。
【０１４５】
結果を図２０に示す。図２０Ａは、ＴｒｉＤＡＰで刺激したヒト由来の樹状細胞におけるＩＬ−２７発現レベルを示し、他方で、図２０Ｂは、同じ細胞集団におけるＩＬ−１０発現レベルを示す。これらの結果は、ヒト由来の樹状細胞は、インビトロでのＴｒｉＤＡＰを用いた刺激後にＩＬ−２７を発現することを示す。この発現は、ＩＬ−２７タンパク質レベルの測定によって示される。さらには、ヒト樹状細胞によるＩＬ−２７発現が示されており、これは、これまでの実施例によって示されるマウス由来の樹状細胞によるＩＬ−２７の発現と整合している。最後に、これらの結果は、ＩＬ−２７は、Ｔｏｌｌ様受容体作動薬を用いた同時刺激の必要なしにヒト樹状細胞によって発現されうるということを示す。しかしながら、ＩＬ−２７の発現は、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体作動薬化合物（リポ多糖など）を用いた抗原提示細胞の同時刺激によって有意に増強することができる。従って、ＴｒｉＤＡＰは、樹状細胞によるＩＬ−２７産生を独立に誘導するように働き、ただ単に、樹状細胞におけるＴＬＲ−作動薬によって推進されるＩＬ−２７産生を調節するように機能するだけではないということを示す。
【０１４６】
本願明細書で参照されるすべての文献は、参照により本願明細書に援用したものとする。本発明の記載された実施形態に対する種々の改変および変更は、本発明の範囲から逸脱せずに、当業者には明らかであろう。本発明は特定の好ましい実施形態に関連して記載されてきたが、請求項に係る発明は、そのような特定の実施形態に不当に限定されるものではないということを理解されたい。実際には、当業者には自明である本発明を実施する記載された態様の種々の改変は、本発明によって包含されるということが意図されている。本願明細書中のいずれの先行技術への参照も、この先行技術がいずれかの国のありふれた一般的な知識の一部を形成するということの承認ではなく、またいずれかの形の示唆でもなく、またそのように解釈されるべきでもない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８ａ】
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【図８ｂ】
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【図９ａ】
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【図９ｂ】
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【図１０ａ】
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【図１０ｂ】
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【図１１ａ】
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【図１１ｂ】
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【図１２ａ】
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【図１２ｂ】
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【図１３ａ】
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【図１３ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【国際調査報告】
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