(57)【要約】  タンパク質ミセル塊を、カルシウム塩溶液、好ましくは塩化カルシウム溶液中に可溶化させ、次に得られたキャノーラタンパク質溶液を希釈することによって、可溶性キャノーラタンパク質単離物をキャノーラタンパク質ミセル塊から調製する。沈殿したフィチン酸を除去した後、キャノーラタンパク質水溶液を濃縮し、任意選択で、透析濾過し、約２．５〜４．０のｐＨに酸性化して、酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を得て、これを濃縮し、色除去ステップに供し、乾燥させることができる。このようにして形成したキャノーラタンパク質単離物は、タンパク質を沈殿することなく、酸性水性環境において可溶性、透明で熱安定性であり、自然のｐＨでも可溶性である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）約１．５〜約１５ｗｔ％（タンパク質基準当たり）の濃度のカルシウム塩水溶液を使用してキャノーラタンパク質ミセル塊を可溶化させて、約５〜約５０ｗｔ％（タンパク質基準当たり）のタンパク質濃度を有するキャノーラタンパク質溶液を形成するステップと、
（ｂ）キャノーラタンパク質単離物を、約１〜約２０倍に希釈するステップと
を含む、キャノーラタンパク質単離物の形成方法。
【請求項２】
前記カルシウム塩は塩化カルシウムであり、前記カルシウム塩は約２〜約３ｗｔ％（タンパク質基準当たり）の濃度で使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記キャノーラタンパク質溶液が、約１５〜約２５ｗｔ％のタンパク質濃度を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記キャノーラタンパク質溶液を、約１〜約３倍に希釈する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記希釈ステップの後、析出したフィチン酸を除去して、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得る、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を乾燥させて、少なくとも約９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するキャノーラタンパク質単離物を製造する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を、選択的膜技術を使用して、約５０〜約２００ｇ／Ｌの濃度に濃縮し、濃縮された透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得る、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を、約８０〜１５０ｇ／Ｌの濃度に濃縮する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記濃縮された透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を、約２〜約２０倍容の透析濾過溶液を使用して透析濾過に供し、濃縮され、透析濾過された、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得る、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記濃縮された透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を、約５〜約１０倍容の透析濾過溶液を使用して透析濾過に供する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記透析濾過ステップの少なくとも一部の間に、酸化防止剤が前記透析濾過溶液中に存在する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記濃縮され、透析濾過された、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を、色除去ステップに供する、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記色除去ステップの生成物を乾燥させて、少なくとも約９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するキャノーラタンパク質単離物を製造する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液のｐＨを、約２．０〜約４．０の値に調整して、酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を得る、請求項５に記載の方法。
【請求項１５】
前記透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液のｐＨを、約２．９〜約３．２の値に調整する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を乾燥させて、少なくとも約９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するキャノーラタンパク質単離物を製造する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を、選択的膜技術を使用して、約５０〜約２００ｇ／Ｌの濃度に濃縮し、濃縮された透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得る、請求項５に記載の方法。
【請求項１８】
前記酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を、約８０〜１５０ｇ／Ｌの濃度に濃縮する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を、約２〜約２０倍容の透析濾過溶液を使用して透析濾過に供し、濃縮され、透析濾過された、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得る、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を、約５〜約１０倍容の透析濾過溶液を使用して透析濾過に供する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記透析濾過ステップの少なくとも一部の間に、酸化防止剤が前記透析濾過溶液中に存在する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記濃縮され、透析濾過された、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を、色除去ステップに供する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記色除去ステップの生成物を乾燥させて、少なくとも約９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するキャノーラタンパク質単離物を製造する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
少なくとも約９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、かつ主として７Ｓキャノーラタンパク質からなり、かつ酸性水性環境において可溶性で熱安定性であるキャノーラタンパク質単離物。
【請求項２５】
前記酸性水性環境が、約２．５〜約５のｐＨを有する飲料である、請求項２４に記載のキャノーラタンパク質単離物。
【請求項２６】
少なくとも約１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する、請求項２４に記載のキャノーラタンパク質単離物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の参照
本出願は、２００８年８月１９日出願の米国仮特許出願第６１／１３６，２０８号からの米国特許法第１１９（ｅ）条の下での優先権を主張する。
発明の分野
本発明は、可溶性キャノーラタンパク質単離物の製造に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
少なくとも１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）のタンパク質含量を有するキャノーラ油糧種子タンパク質単離物は、本譲受人に譲渡され、その開示が参照により本明細書に組み込まれた、同時係属の２００２年５月３日出願の米国特許出願第１０／１３７，３９１号（米国特許出願公開第２００３−０１２５５２６Ａ１号およびＷＯ０２／０８９５９７）および２００４年６月９日出願の米国特許出願第１０／４７６，２３０号（米国特許出願公開第２００４−０２５４３５３Ａ１号）に記載の方法によって油糧種子粗粉から形成することができる。この手順は、塩水溶液を用いてキャノーラ油糧種子粗粉を抽出するステップと、得られたタンパク質水溶液を残留油糧種子粗粉から分離するステップと、選択的膜技術を用いてイオン強度を実質的に一定に維持しながら、水溶液のタンパク質濃度を少なくとも約２００ｇ／Ｌに増加させるステップと、得られた濃縮タンパク質溶液を冷水中に希釈し、タンパク質のミセルの形成をもたらすステップと、タンパク質のミセルを沈降させて非晶質、粘着性で、ゼラチン状のグルテン様タンパク質ミセル塊（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｉｃｅｌｌａｒ  ｍａｓｓ）（ＰＭＭ）を形成するステップと、タンパク質ミセル塊を、少なくとも約１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）のタンパク質含量を有する上澄み液から回収するステップとを含む多数のステップのプロセスを含む。本明細書で用いる場合、タンパク質含量は、乾燥重量基準で測定される。回収したＰＭＭは乾燥することができる。
【０００３】
本方法の一実施形態では、ＰＭＭ沈降ステップからの上澄み液を処理して、キャノーラタンパク質単離物を上澄み液から回収する。この手順は、最初に限外濾過膜を使用して上澄み液を濃縮し、濃縮物を乾燥させることによって行うことができる。得られるキャノーラタンパク質単離物は、少なくとも約９０ｗｔ％、好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）のタンパク質含量を有する。
【０００４】
米国特許出願第１０／１３７，３９１号に記載の手順は、基本的に回分式手順である。本譲受人に譲渡され、その開示が参照により本明細書に組み込まれた、同時係属の２００２年１１月１９日出願の米国特許出願第１０／２９８，６７８号（米国特許出願公開第２００４−００３９１７４Ａ１号およびＷＯ０３／０４３４３９）および２００５年３月５日出願の米国特許出願第１０／４９６，０７１号（米国特許出願公開第２００３−００１５９１０Ａ１号）では、キャノーラタンパク質単離物を作るための連続プロセスが記載されている。それによると、キャノーラ油糧種子粗粉を塩水溶液と連続的に混合し、その混合物をパイプを通して輸送し、同時にキャノーラ油糧種子粗粉からタンパク質を抽出してタンパク質水溶液を形成し、そのタンパク質水溶液を選択的膜操作によって連続的に輸送して、イオン強度を実質的に一定に維持しながらタンパク質水溶液のタンパク質含量を少なくとも約５０ｇ／Ｌに増加させ、得られた濃縮タンパク質溶液を冷水と連続的に混合してタンパク質のミセルの形成をもたらし、そのタンパク質のミセルを連続的に沈降させ、同時に所望の量のＰＭＭが沈降容器に蓄積するまで上澄み液を連続的にあふれさせる。ＰＭＭを沈降容器から回収し、乾燥させることができる。ＰＭＭは、少なくとも約９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）、好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％のタンパク質含量を有する。上記のように、あふれた上澄み液を処理してそこからキャノーラタンパク質単離物を回収することができる。
【０００５】
キャノーラ種子は、約１０〜約３０ｗｔ％のタンパク質を含むことが知られており、いくつかの異なるタンパク質成分が同定されている。これらのタンパク質には、クルシフェリン（ｃｒｕｃｉｆｅｒｉｎ）として知られている１２Ｓグロブリン、７Ｓタンパク質およびナピン（ｎａｐｉｎ）として知られている２Ｓ貯蔵タンパク質が含まれる。本譲受人に譲渡され、その開示が参照により本明細書に組み込まれた、同時係属の２００３年４月１５日出願の米国特許出願第１０／４１３，３７１号（米国特許出願公開第２００４−００３４２００Ａ１号およびＷＯ０３／０８８７６０）および２００５年４月２９日出願の米国特許出願第１０／５１０，７６６号（米国特許出願公開第２００５−０２４９８２８Ａ１号）に記載のように、濃縮タンパク質水溶液を希釈してＰＭＭを形成し、上澄み液を処理して追加のタンパク質を回収することを含む上記手順によって、異なるタンパク質プロファイルの単離物の回収がもたらされる。
【０００６】
この点について、ＰＭＭ由来のキャノーラタンパク質単離物は、約６０〜約９８ｗｔ％の７Ｓタンパク質、約１〜約１５ｗｔ％の１２Ｓタンパク質および０〜約２５ｗｔ％の２Ｓタンパク質のタンパク質成分組成を有する。上澄み液由来のキャノーラタンパク質単離物は、約６０〜約９５ｗｔ％の２Ｓタンパク質、約５〜約４０ｗｔ％の７Ｓタンパク質および０〜約５ｗｔ％の１２Ｓタンパク質のタンパク質成分組成を有する。したがって、ＰＭＭ由来のキャノーラタンパク質単離物は、主として７Ｓタンパク質であり、上澄み液由来のキャノーラタンパク質単離物は、主として２Ｓタンパク質である。上記米国特許出願第１０／４１３，３７１号に記載のように、２Ｓタンパク質は、約１４０００ダルトンの分子量を有し、７Ｓタンパク質は約１４５０００ダルトンの分子量を有し、１２Ｓタンパク質は約２９００００ダルトンの分子サイズを有する。
【０００７】
ＰＭＭ由来のキャノーラタンパク質単離物は、自然のｐＨで大部分は水に不溶性であり、ソフトドリンクおよびスポーツドリンクを含む非炭酸および炭酸飲料などの酸性水性媒体にはより可溶性であるが、透明度が低い溶液を生じる。そのため、ＰＭＭ由来のキャノーラタンパク質単離物は、このような飲料のタンパク質強化には一般的に適さないと考えられている。
【０００８】
キャノーラは、菜種（ｒａｐｅｓｅｅｄ）またはアブラナ（ｏｉｌ  ｓｅｅｄ  ｒａｐｅ）としても知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００３−０１２５５２６号
【特許文献２】米国特許出願公開第２００４−０２５４３５３号
【特許文献３】米国特許出願公開第２００４−００３９１７４号
【特許文献４】米国特許出願公開第２００３−００１５９１０号
【特許文献５】米国特許出願公開第２００４−００３４２００号
【特許文献６】米国特許出願公開第２００５−０２４９８２８号
【発明の概要】
【００１０】
我々は今回、ＰＭＭを、酸性水性環境において可溶性で、透明で、熱安定性であり、自然のｐＨでも水に可溶性である形態に転換する方法を発見した。得られたキャノーラタンパク質単離物はまた、フィチン酸が低い。低ｐＨでの溶液中の熱安定性により、熱間充填適用（ｈｏｔ  ｆｉｌｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）などの熱処理が可能となる。キャノーラタンパク質単離物は、タンパク質を沈殿することなく、特にソフトドリンクおよびスポーツドリンク、ならびに他の水系のタンパク質強化など、ヒト用飲食品に有用である。キャノーラタンパク質単離物は、ペットフードおよび水産養殖（ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ）などのヒト以外の食品用途にも有用である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の一態様によると、
（ａ）タンパク質基準当たり約１．５〜約１５ｗｔ％、好ましくは約２〜約３ｗｔ％の塩化カルシウム（ＣａＣｌ2）および約５〜約５０ｗｔ％、好ましくは約１５〜約２５ｗｔ％の全体のタンパク質濃度に十分な逆浸透ＲＯ精製水を使用して、乾燥した形態または湿った形態でありうるキャノーラタンパク質ミセル塊（ｃａｎｏｌａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｉｃｅｌｌａｒ  ｍａｓｓ）を可溶化するステップと、
（ｂ）再可溶化されたＣａＣｌ2処理タンパク質ミセル塊を、約２０倍容以上までの、好ましくは約１〜約３倍容のＲＯ水で希釈するステップと、
（ｃ）任意選択で、存在する沈殿を除去するステップと、
（ｄ）任意選択で、得られた溶液を約２．５〜約４、好ましくは約２．９〜約３．２のｐＨに酸性化して、酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を製造するステップと、
（ｅ）任意選択で、タンパク質溶液を約５〜約２００ｇ／Ｌ、好ましくは約８０〜約１５０ｇ／Ｌに濃縮し、任意選択で、ＲＯ水またはタンパク質溶液とほぼ等しいｐＨおよび導電率の食塩水で透析濾過するステップと、
（ｆ）任意選択で、透明な濃縮されたキャノーラタンパク質溶液を色除去ステップに供するステップと、
（ｇ）任意選択で、濃縮されたキャノーラタンパク質溶液を乾燥させるステップと
を含む、キャノーラタンパク質単離物を形成する方法が提供される。
【００１２】
本明細書で提供するキャノーラタンパク質単離物は、酸性水性環境において可溶性であり、新規な生成物である。したがって、本発明の別の態様では、少なくとも約９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、かつ主として７Ｓキャノーラタンパク質からなり、かつ酸性水性環境において可溶性で熱安定性であるキャノーラタンパク質単離物が提供される。酸性水性環境は、約２．５〜約５のｐＨを有する飲料とすることができる。キャノーラタンパク質単離物は、少なくとも約１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することができる。
【００１３】
本明細書の方法により製造するキャノーラタンパク質単離物は、加工食品および飲料のタンパク質強化、油の乳化、焼き物における素地形成剤（ｂｏｄｙ  ｆｏｒｍｅｒｓ）、ならびに気体を捕捉する製品中の発泡剤などの、タンパク質単離物の従来の用途に使用することができる。さらに、キャノーラタンパク質単離物は、肉類似物（ｍｅａｔ  ａｎａｌｏｇｓ）において有用なタンパク質繊維を形成することができ、卵白をつなぎとして使用する場合に、食品中の卵白代用品または増量剤として使用することができる。キャノーラタンパク質単離物は、栄養補助剤として使用することができる。キャノーラタンパク質単離物の他の用途は、ペットフード、動物飼料、工業および化粧用途、ならびにパーソナルケア製品にある。
【００１４】
キャノーラタンパク質ミセル塊は、上記米国特許出願第１０／１３７，３７１号、第１０／４７６，２３０号、第１０／２９８，６７８号および第１０／４９６，０７１号に記載の手順によって調製することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
発明の概略説明
キャノーラタンパク質ミセル塊を提供するプロセスの最初のステップは、キャノーラ油糧種子粗粉からタンパク質性物質（ｐｒｏｔｅｉｎａｃｅｏｕｓ  ｍａｔｅｒｉａｌ）を可溶化させることを含む。キャノーラ種子粗粉から回収したタンパク質性物質（ｐｒｏｔｅｉｎａｃｅｏｕｓ  ｍａｔｅｒｉａｌ）は、キャノーラ種子中に天然に存在するタンパク質であってよく、またはそのタンパク質性物質（ｐｒｏｔｅｉｎａｃｅｏｕｓ  ｍａｔｅｒｉａｌ）は、遺伝子操作によって改変されているが、天然のタンパク質の特徴的な疎水性および極性の特性を有しているタンパク質であってよい。キャノーラ粗粉は、例えば高温ヘキサン抽出法または冷オイル押出法によって得られる、異なるレベルの非変性タンパク質を有するキャノーラ油糧種子から、キャノーラ油を除去することによって得られる任意のキャノーラ粗粉であってよい。キャノーラ油糧種子からのキャノーラ油の除去は、通常、本明細書に記載のタンパク質単離物の回収手順とは別の操作として行われる。
【００１６】
塩の存在が、油糧種子粗粉からの可溶性タンパク質の除去を増大させるので、タンパク質可溶化は食品グレードの塩溶液を使用することによって最も効率的に行われる。キャノーラタンパク質単離物を食品以外へ使用するつもりである場合、非食品グレードの化学製品を使用することができる。塩化カリウムなどの他の塩を使用することができるが、塩は通常塩化ナトリウムである。塩溶液は、かなりの量のタンパク質の可溶化が行われるのを可能にするため、少なくとも約０．０５、好ましくは少なくとも約０．１０のイオン強度を有する。塩溶液のイオン強度が増加するにつれて、油糧種子粗粉中のタンパク質の可溶化の程度は、最大値に達するまで最初は増加する。その後のイオン強度の増加は、可溶化される全体のタンパク質を増加させない。最大のタンパク質可溶化をもたらす食品グレードの塩溶液のイオン強度は、当該塩および選択した油糧種子粗粉に応じて変わる。
【００１７】
イオン強度の増加に伴ってタンパク質の沈殿に要する希釈度がより大きくなることを考慮して、約０．８未満のイオン強度値、より好ましくは約０．１〜約０．１５の値を用いることが通常好ましい。
【００１８】
回分プロセスでは、タンパク質の塩可溶化を、約５℃〜約７５℃の温度で、通常約１０〜約６０分である可溶化時間を短縮するために、好ましくは攪拌を伴って行う。全体として高い製品収率を得るために、油糧種子粗粉から実質的に可能な限り多くのタンパク質を抽出するように可溶化を行うことが好ましい。
【００１９】
この温度より低いと可溶化が実際的でないくらい遅くなるので、約５℃の下限温度を選択し、一方で存在するタンパク質のいくらかの変性温度のため約７５℃の好ましい上限温度を選択する。
【００２０】
連続プロセスでは、キャノーラ油糧種子粗粉からのタンパク質の抽出を、キャノーラ油糧種子粗粉からのタンパク質の連続的抽出を行うのに調和した任意の方法で行う。一実施形態では、キャノーラ油糧種子粗粉を食品グレードの塩溶液と連続的に混合し、その混合物を、ある長さを有するパイプまたは導管を通して、本明細書に記載のパラメータによる所望の抽出を行うのに十分な滞留時間をもたらす流速で輸送する。このような連続的手順では、塩可溶化ステップは、好ましくはキャノーラ油糧種子粗粉から実質的に可能な限り多くのタンパク質を抽出するように可溶化を行うために、迅速に、約１０分までの時間で行う。連続的手順での可溶化は、約１０℃と約７５℃との間、好ましくは約１５℃と約３５℃との間の温度で行う。
【００２１】
食品グレードの塩水溶液は、一般的に約５〜約６．８、好ましくは約５．３〜約６．２のｐＨを有し、この塩溶液のｐＨは、抽出ステップで使用するために、必要に応じて、任意の好都合な酸、通常は塩酸、またはアルカリ、通常は水酸化ナトリウムを使用することによって、約５〜約６．８の範囲内の任意の所望の値に調整することができる。
【００２２】
可溶化ステップ中の食品グレードの塩溶液中の油糧種子粗粉の濃度は、広範囲で変えられる。典型的な濃度値は、約５〜約１５％ｗ／ｖである。
【００２３】
塩水溶液によるタンパク質抽出ステップは、キャノーラ粗粉中に存在しうる脂肪を可溶化する追加的な効果を有し、それによって脂肪が水相中に存在するという結果になる。
【００２４】
抽出ステップから得られたタンパク質溶液は、一般的に約５〜約４０ｇ／Ｌ、好ましくは約１０〜約３０ｇ／Ｌのタンパク質濃度を有する。
【００２５】
塩水溶液は、酸化防止剤を含むことができる。酸化防止剤は、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸などの任意の好都合な酸化防止剤とすることができる。使用する酸化防止剤の量は、溶液の約０．０１〜約１ｗｔ％で変えることができ、好ましくは約０．０５ｗｔ％である。酸化防止剤は、タンパク質溶液中のフェノール類の酸化を抑制するのに役立つ。
【００２６】
次いで、抽出ステップから得られた水相を、デカンター型遠心分離機の使用に続いて、ディスク型遠心分離および／または濾過によって残留する粗粉を除去することによるなどの任意の好都合な方法で、残留するキャノーラ粗粉から分離することができる。分離した残留粗粉は処分するために乾燥することができる。
【００２７】
キャノーラタンパク質の最終単離物の色は、分離したタンパク質水溶液と、粉末活性炭または他の色素吸着剤を混合し、引き続いて濾過により好都合に吸着剤を除去してタンパク質溶液を得ることによって、明色およびより弱い黄色の観点から、改善することができる。色素の除去に透析濾過を使用することもできる。
【００２８】
このような色素除去ステップは、任意の適当な色素吸着剤を使用して、一般的に分離したタンパク質水溶液の周囲温度で、任意の好都合な条件下で行うことができる。粉末活性炭は、約０．０２５％〜約５％ｗ／ｖ、好ましくは約０．０５％〜約２％ｗ／ｖの量を使用する。
【００２９】
本譲受人に譲渡され、その開示が参照により本明細書に組み込まれた、米国特許第５，８４４，０８６号および第６，００５，０７６号に記載のように、キャノーラ種子粗粉がかなりの量の脂肪を含んでいる場合、分離したタンパク質水溶液および以下に述べる濃縮タンパク質水溶液に、上記特許に記載の脱脂ステップを行うことができる。色改善ステップを行う場合、このステップは第１脱脂ステップの後に行うことができる。
【００３０】
水のみの使用では、塩水溶液よりも油糧種子粗粉からのタンパク質の抽出が少ない傾向があるが、塩水溶液による油糧種子粗粉の抽出の代替法として水のみを使用して抽出を行うことができる。このような代替法を使用する場合、以下で説明する濃縮ステップ中にタンパク質を溶液中に維持するために、残留油糧種子粗粉からの分離後に、上記の濃度で塩をタンパク質溶液に添加することができる。第１脂肪除去ステップを行う場合、塩は一般的にこのような操作の完了後に添加する。
【００３１】
別の代替手順は、一般的に約９．９までの、約６．８を超える比較的高いｐＨ値で、食品グレードの塩溶液により油糧種子粗粉を抽出するというものである。食品グレードの塩溶液のｐＨは、水酸化ナトリウム水溶液などの任意の好都合な食品グレードのアルカリを使用することによって、所望のアルカリ性値に調整することができる。あるいは、油糧種子粗粉は、一般的に約ｐＨ３までの、約ｐＨ５未満の比較的低いｐＨで、塩溶液により抽出することができる。このような代替法を使用する場合、油糧種子粗粉の抽出ステップから得られた水相は、デカンター型遠心分離に続いて、ディスク型遠心分離および／または濾過を使用して残留する粗粉を除去することによるなどの任意の好都合な方法で、残留するキャノーラ粗粉から分離する。分離した残留粗粉は処分するために乾燥することができる。
【００３２】
次いで、高ｐＨまたは低ｐＨ抽出ステップから得られたタンパク質水溶液を、以下に述べるさらなる処理の前に、上記のように、約５〜約６．８、好ましくは約５．３〜約６．２の範囲にｐＨ調整する。このようなｐＨ調整は、必要に応じて、任意の好都合な塩酸などの酸または水酸化ナトリウムなどのアルカリを使用して行うことができる。
【００３３】
タンパク質水溶液を濃縮してそのタンパク質濃度を増加させると同時に、そのイオン強度を実質的に一定に維持する。このような濃縮は、一般的に少なくとも約５０ｇ／Ｌ、好ましくは少なくとも約２００ｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも約２５０ｇ／Ｌのタンパク質濃度を有する濃縮タンパク質溶液を得るように行う。
【００３４】
濃縮ステップは、異なる膜材料および構造を考慮して、約３０００〜約１０００００ダルトン、好ましくは約５０００〜約１００００ダルトンなどの適当な分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｕｔ−ｏｆｆ）を有し、連続操作の場合には、タンパク質水溶液が膜を通過する際に所望の濃縮度が可能になるような寸法にする、中空繊維膜またはスパイラル膜（ｓｐｉｒａｌ−ｗｏｕｎｄ  ｍｅｍｂｒａｎｅｓ）などの膜を使用した、限外濾過または透析濾過などの任意の好都合な選択的膜技術を使用するなど、回分操作または連続操作に調和した任意の好都合な方法で行うことができる。
【００３５】
周知のように、限外濾過および同様の選択的膜技術は、低分子量の種が膜を通過するのを許すと同時に、高分子量の種が膜を通過するのを阻止する。低分子量の種には、食品グレードの塩のイオン種だけでなく、炭水化物、色素および抗栄養因子（ａｎｔｉ−ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｆａｃｔｏｒｓ）などの供給源材料から抽出された低分子量物質、ならびに任意の低分子量形タンパク質も含まれる。膜の分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｕｔ−ｏｆｆ）は、通常、異なる膜材料および構造を考慮して、かなりの割合のタンパク質を溶液中に確実に保持すると同時に、汚染物質が通過するのを許すよう選択する。
【００３６】
次いで、濃縮タンパク質溶液を、抽出溶液と同じモル濃度（ｍｏｌａｒｉｔｙ）およびｐＨの塩水溶液を使用して、透析濾過ステップに供することができる。このような透析濾過は、約２〜約２０倍容（ｖｏｌｕｍｅｓ）の透析濾過溶液、好ましくは約５〜約１０倍容（ｖｏｌｕｍｅｓ）の透析濾過溶液を使用して行うことができる。透析濾過操作では、膜を通して透過液（ｐｅｒｍｅａｔｅ）を通過させることにより、タンパク質水溶液からさらなる量の汚染物質を除去する。透析濾過操作は、さらなる有意の量の汚染物質および目に見える色が透過液（ｐｅｒｍｅａｔｅ）中に存在しなくなるまで行うことができる。このような透析濾過は、濃縮ステップ用のものと同じ膜を使用して行うことができる。しかしながら、所望であれば、透析濾過ステップは、異なる膜材料および構造を考慮して、約３０００〜約１０００００ダルトン、好ましくは約５０００〜約１００００ダルトンの範囲の分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｕｔ−ｏｆｆ）を有する膜などの、異なる分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｕｔ−ｏｆｆ）を有する分離膜を使用して行うことができる。
【００３７】
透析濾過ステップの少なくとも一部の間で、酸化防止剤を透析濾過媒体中に存在させることができる。酸化防止剤は、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸などの任意の好都合な酸化防止剤であってよい。透析濾過媒体中で使用する酸化防止剤の量は、使用する物質に依存し、約０．０１〜約１ｗｔ％で変えることができ、好ましくは約０．０５ｗｔ％である。酸化防止剤は、キャノーラタンパク質単離物の濃縮溶液中に存在するフェノール類の酸化を抑制するのに役立つ。
【００３８】
濃縮ステップおよび透析濾過ステップは、任意の好都合な温度、一般的には約２０°〜約６０℃、好ましくは約２０〜約３０℃で、所望の程度の濃縮を行うための時間、行うことができる。使用する温度および他の条件は、ある程度、濃縮を行うために使用する膜装置および溶液の所望のタンパク質濃度に依存する。
【００３９】
濃縮され、場合により透析濾過されたタンパク質溶液は、必要に応じて、米国特許第５，８４４，０８６号および第６，００５，０７６号に記載のようにさらなる脱脂操作に供することができる。
【００４０】
濃縮され、場合により透析濾過されたタンパク質溶液は、上記色除去操作の代替として、ある色除去操作に供することができる。本明細書では、粒状活性炭（ＧＡＣ）と同様に粉末活性炭も使用することができる。色吸着剤として使用することができる他の物質は、ポリビニルピロリドンである。
【００４１】
色吸着剤処理ステップは、任意の好都合な条件下、一般的にはキャノーラタンパク質溶液の周囲温度で行うことができる。粉末活性炭は、約０．０２５％〜約５％ｗ／ｖ、好ましくは約０．０５％〜約２％ｗ／ｖの量を使用することができる。ポリビニルピロリドンを色吸着剤として使用する場合、約０．５％〜約５％ｗ／ｖ、好ましくは約２％〜約３％ｗ／ｖの量を使用することができる。色吸着剤は、濾過などの任意の好都合な手段によって、キャノーラタンパク質溶液から除去することができる。
【００４２】
任意選択の色除去ステップから得られた、濃縮され、場合により透析濾過されたタンパク質溶液は、微生物量（ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｌｏａｄ）を減らすために、低温殺菌に供することができる。このような低温殺菌は、任意の所望の低温殺菌条件下で行うことができる。一般に、濃縮され、場合により透析濾過されたタンパク質溶液を、約５５°〜約７０℃、好ましくは約６０°〜約６５℃の温度で、約１０〜約１５分間、好ましくは約１０分間加熱する。次いで、低温殺菌した濃縮タンパク質溶液を、以下に説明するさらなる処理のために、好ましくは約２５°〜約４０℃の温度に冷却することができる。
【００４３】
濃縮ステップおよび任意選択の透析濾過ステップで使用する温度、ならびに低温殺菌ステップを行うかどうかに応じて、濃縮タンパク質溶液を、少なくとも約２０°で約６０℃まで、好ましくは約２５°〜約４０℃の温度に加温し、濃縮タンパク質溶液の粘度を減少させ、引き続く希釈ステップおよびミセル形成の実行を容易にすることができる。濃縮タンパク質溶液は、それを超えると冷水による希釈時にミセル形成が起こらない温度を超えて加熱すべきではない。
【００４４】
次いで、濃縮ステップ、ならびに任意選択の透析濾過ステップ、任意選択の色除去ステップ、任意選択の低温殺菌ステップおよび任意選択の脱脂ステップから得られた濃縮タンパク質溶液を、その濃縮タンパク質溶液を所望の希釈度を得るのに必要な容積を有する冷水と混合することによって希釈してミセル形成を行う。ミセル経路によって得ようとするキャノーラタンパク質の割合および上澄み液からの割合に応じて、濃縮タンパク質溶液の希釈度を変えることができる。一般に、より低い希釈レベルでは、より高い割合のキャノーラタンパク質が水相中に残留する。
【００４５】
ミセル経路によって最も高い割合のタンパク質を得ることが望まれる場合、濃縮タンパク質溶液を約５倍〜約２５倍、好ましくは約１０倍〜約２０倍で希釈する。
【００４６】
濃縮タンパク質溶液と混合する冷水は、約１５℃未満、一般的に約１°〜約１５℃、好ましくは約１０℃未満の温度を有するが、その理由は、使用する希釈倍率（ｄｉｌｕｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ）でこれらのより冷たい温度で改善された収率のタンパク質ミセル塊形状のタンパク質単離物が得られるからである。
【００４７】
回分操作では、濃縮タンパク質溶液のバッチを、上記のように所望の容積を有する冷水の静止体（ｓｔａｔｉｃ  ｂｏｄｙ）に添加する。濃縮タンパク質溶液の希釈および結果として生じるイオン強度の減少は、ミセル形状の離散したタンパク質小滴の形態を取る高度に会合したタンパク質分子の雲様塊の形成を引き起こす。回分式手順では、タンパク質のミセルは、冷水体中に沈降させることにより、凝集、合体して濃密な、非晶質で粘着性のグルテン様タンパク質ミセル塊（ＰＭＭ）を形成する。沈降は、遠心分離などによって促進することができる。このように誘導された沈降により、タンパク質ミセル塊の液体含量が減少し、それにより、水分含量は一般的に全ミセル塊の約７０重量％〜約９５重量％から、一般的に約５０重量％〜約８０重量％の値に減少する。このようにしてミセル塊の水分含量が減少すると、ミセル塊の吸蔵塩含量も減少し、結果として乾燥単離物の塩含量も減少する。
【００４８】
あるいは、濃縮タンパク質溶液をＴ字型パイプの一方の入口に連続的に通すと同時に、希釈水をＴ字型パイプの他方の入口に供給して、パイプ中で混合させることによって、希釈操作を連続的に行うことができる。希釈水は、濃縮タンパク質溶液の所望の希釈度を達成するのに十分な速度で、Ｔ字型パイプ中に供給する。
【００４９】
濃縮タンパク質溶液および希釈水のパイプ中での混合により、タンパク質のミセルの形成が開始され、混合物はＴ字型パイプの出口から沈降容器中へ連続的に供給され、満杯になったときに、この沈降容器から上澄み液をあふれさせる。混合物は、好ましくは、液体内の乱流を最小化するように、沈降容器中の液体中に供給する。
【００５０】
連続手順では、タンパク質のミセルは、沈降容器中に沈降させることにより、凝集、合体して濃密な、非晶質で粘着性のグルテン様タンパク質ミセル塊（ＰＭＭ）を形成し、所望の量のＰＭＭが沈降容器の底に蓄積するまでこの手順を続け、その後すぐに（ｗｈｅｒｅｕｐｏｎ）蓄積したＰＭＭを沈降容器から取り出す。沈殿による沈降の代わりに、遠心分離によってＰＭＭを連続的に分離することができる。
【００５１】
少なくとも約２００ｇ／Ｌの好ましいタンパク質含量へのタンパク質溶液の濃縮に関するプロセスのパラメータの組み合わせ、および約１０〜約２０の希釈倍率（ｄｉｌｕｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）の使用により、上記米国特許で論じた既知の従来技術のタンパク質単離物形成手順のいずれを使用して達成されるよりも、元の粗粉抽出物からのタンパク質ミセル塊形状のタンパク質回収に関して、より高い収率、多くの場合、著しく高い収率が得られ、しかもタンパク質含量に関してずっと高い純度の単離物が得られる。
【００５２】
回分プロセスと比較して、キャノーラタンパク質単離物の回収のための連続プロセスを利用することにより、同じレベルのタンパク質抽出に関して、最初のタンパク質抽出ステップの時間が著しく短縮され、かつ抽出ステップにおいて、著しく高い温度を使用することができる。さらに、連続操作では、回分手順よりも汚染の機会が少なく、より高い製品品質が得られ、より小型の装置でプロセスを行うことができる。
【００５３】
沈降したＰＭＭは、沈降した塊からの残留水相のデカンテーションまたは遠心分離などによって、残留水相または上澄み液から分離する。ＰＭＭは、湿った形態で使用することも、または噴霧乾燥もしくは凍結乾燥などの任意の好都合な技術により乾燥させて乾燥形態にすることもできる。乾燥ＰＭＭは、約９０ｗｔ％を超えるタンパク質、好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％タンパク質（Ｎ×６．２５として計算）の高いタンパク質含量を有し、実質的に変性していない（示差走査熱量測定により測定）。必要に応じて米国特許第５，８４４，０８６号および第６，００５，０７６号の手順を使用した場合、脂肪性油糧種子粗粉から単離した乾燥ＰＭＭも残留脂肪含量が低く、それは約１ｗｔ％未満になり得る。
【００５４】
上記米国特許出願第１０／４１３，３７１号に記載のように、ＰＭＭは、主として、約６０〜９８ｗｔ％の７Ｓタンパク質、約１〜約１５ｗｔ％の１２Ｓタンパク質および０〜約２５ｗｔ％の２Ｓタンパク質のタンパク質成分組成を有する７Ｓキャノーラタンパク質からなる。
【００５５】
本発明によると、ＰＭＭを湿った形態または乾燥した形態で処理して、酸性または自然のｐＨのいずれかである透明な溶液を得る。自然のｐＨの溶液は、乾燥させると、自然のｐＨで水に溶解することができるか、または、所期の用途のため再構成するときに後に酸性化して透明な酸性溶液を提供することができる生成物を生じる。
【００５６】
タンパク質基準当たり約１．５〜約１５ｗｔ％、好ましくは約２〜約３ｗｔ％のカルシウム塩および約５〜約５０ｗｔ％、好ましくは約１５〜約２５ｗｔ％の全体のタンパク質濃度に十分な水を使用して、ＰＭＭを最初に可溶化する。キャノーラタンパク質水溶液に添加するカルシウム塩は、乾燥粉末／フレークまたはその濃縮水溶液などの任意の所望の形態であってよい。他のカルシウム塩を使用することもできるが、カルシウム塩は、好都合には、塩化カルシウムである。
【００５７】
塩化カルシウムを添加した後、キャノーラタンパク質水溶液を、約１〜約２０倍（ｆｏｌｄ）、好ましくは約１〜約３倍（ｆｏｌｄ）に希釈して、試料の粘度を減少させる。試料中に存在する析出した（ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ）フィチン酸カルシウムを、遠心分離および／または濾過などにより希釈キャノーラタンパク質水溶液から除去し、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得て、これを噴霧乾燥などの任意の好都合な手段により乾燥させて、キャノーラタンパク質単離物を得ることができる。
【００５８】
次いで、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液のｐＨを、任意選択で、約２．０〜約４．０、好ましくは約２．９〜約３．２の値に調整する。ｐＨ調整は、塩酸を添加するなどの任意の好都合な方法で行うことができる。透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液は、透明なままで酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を生じ、これを噴霧乾燥などの任意の好都合な手順によって乾燥させて、キャノーラタンパク質単離物を得ることができる。
【００５９】
酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液または、任意選択で、自然のｐＨの溶液を、任意選択で、ＰＭＭ形成中の濃縮ステップに関する上記のような選択的膜技術を使用することによって、約５０〜約２００ｇ／Ｌ、好ましくは約８０〜約１５０ｇ／Ｌの濃度に濃縮する。
【００６０】
次いで、濃縮された透明なキャノーラタンパク質溶液を、水、酸性化水、またはタンパク質溶液と等しいｐＨおよびタンパク質溶液以下の導電率の食塩水を使用して透析濾過ステップに供することができる。このような透析濾過は、約２〜約２０倍容（ｖｏｌｕｍｅｓ）の透析濾過溶液、好ましくは約５〜約１０倍容（ｖｏｌｕｍｅｓ）の透析濾過溶液を使用して行うことができる。透析濾過操作では、膜を通して透過液（ｐｅｒｍｅａｔｅ）を通過させることにより、水溶液からさらなる量の汚染物質を除去する。透析濾過操作は、さらなる有意の量の汚染物質および目に見える色が透過液（ｐｅｒｍｅａｔｅ）中に存在しなくなるまで行うことができる。このような透析濾過は、濃縮ステップ用のものと同じ膜を使用して行うことができる。しかし、所望であれば、透析濾過は、異なる膜材料および構造を考慮して、約３０００〜約１０００００ダルトン、好ましくは約５０００〜約１００００ダルトンの範囲の分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｕｔ−ｏｆｆ）を有する膜などの分離膜を使用して行うことができる。
【００６１】
透析濾過ステップの少なくとも一部の間で、酸化防止剤を透析濾過媒体中に存在させることができる。酸化防止剤は、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸などの任意の好都合な酸化防止剤であってよい。透析濾過媒体中で使用する酸化防止剤の量は、使用する物質に依存し、約０．０１〜約１ｗｔ％で変えることができ、好ましくは約０．０５ｗｔ％である。酸化防止剤は、キャノーラタンパク質単離物の濃縮溶液中に存在するフェノール類の酸化を抑制するのに役立つ。
【００６２】
得られた透明な濃縮されたキャノーラタンパク質溶液を、粒状活性炭を使用して、ＰＭＭ形成操作で濃縮されたキャノーラタンパク質溶液に対して行うなどのように、任意の色除去ステップに供することができる。
【００６３】
濃縮され、任意選択で脱色されたキャノーラタンパク質溶液を、噴霧乾燥などの任意の好都合な手順によって乾燥させることができる。乾燥キャノーラタンパク質単離物は、約９０ｗｔ％を超えるタンパク質、好ましくは少なくとも約１００ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．の高いタンパク質含量を有する。
【００６４】
本明細書で製造するキャノーラタンパク質単離物は、アルブミン画分およびグロブリン画分の両方を含み、酸性水性環境において可溶性であり、炭酸および非炭酸両方の飲料に組み込むのに理想的な単離物を作り、これら飲料にタンパク質強化をもたらす。このような飲料は、約２．５〜約５にわたる広範囲の酸性ｐＨ値を有する。本明細書で提供するキャノーラタンパク質単離物は、例えば１２液量オンスの量当たり少なくとも約５ｇのキャノーラタンパク質単離物など、任意の好都合な量でこのような飲料に添加して、このような飲料にタンパク質強化をもたらすことができる。添加されたキャノーラタンパク質単離物は、熱処理の後ですら飲料に十分溶解し、飲料の透明度を損なわない。キャノーラタンパク質単離物は、水への溶解による飲料の再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）より前に、乾燥した飲料と混ぜることができる。
【実施例】
【００６５】
例１：
この例は、キャノーラ油糧種子粗粉からのキャノーラタンパク質ミセル塊の調製を説明する。
【００６６】
キャノーラ粗粉「ａ」ｋｇを、周囲温度で「ｃ」Ｍ  ＮａＣｌ溶液「ｂ」Ｌに添加し、３０分間攪拌してタンパク質水溶液を得た。残留するキャノーラ粗粉を除去し、得られたタンパク質溶液を遠心分離により部分的に清澄化して、「ｅ」重量％のタンパク質含量を有する部分的に清澄化されたタンパク質溶液「ｄ」Ｌを製造した。次いで、部分的に清澄化されたタンパク質溶液を、濾過してさらに清澄化して、「ｇ」重量のタンパク質含量を有する容積「ｆ」の溶液を得た。
【００６７】
一定分量「ｈ」Ｌのタンパク質抽出物溶液を、「ｊ」ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｕｔ−ｏｆｆ）を有するポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）膜で濃縮して「ｉ」ｋｇに減少させた。得られた濃縮タンパク質溶液は、「ｋ」重量％のタンパク質含量を有していた。
【００６８】
「ｌ」℃の濃縮された溶液を、「ｎ」℃の温度の冷ＲＯ水中に入れて「ｍ」倍（ｆｏｌｄ）に希釈した。直ちに白色の雲状物が形成し、これを沈降させた。上部の希釈水を除去し、沈殿した、粘性の、粘着性塊（ＰＭＭ）を、遠心分離により、濾過したタンパク質溶液の「ｏ」ｗｔ％の収率で回収した。パラメータ「ａ」〜「ｏ」を以下の表Ｉに示す。
【００６９】
【表１】
2012500228.tif 000002
【００７０】
例２：
この例は、例１からの生成物の、酸性水性媒体に可溶性のキャノーラタンパク質単離物への処理を説明する。
【００７１】
約「ｃ」ｗｔ％のタンパク質含量を有するバッチ「ｂ」からのＰＭＭ「ａ」ｋｇを、「ｅ」Ｍ食塩水「ｄ」Ｌに溶解させ、「ｆ」％のタンパク質含量を有する溶液を得た。
【００７２】
次いで、この溶液の導電率を、ＲＯ水に７７ｗｔ％のフレークＣａＣｌ2を溶解させることにより調製した濃縮溶液からのＣａＣｌ2の添加によって、「ｇ」ｍＳに上げた。
【００７３】
次いで、この溶液「ｈ」Ｌを、室温のＲＯ水「ｊ」Ｌ中に入れて「ｉ」に希釈した。希釈の際、ペレットは形成されなかったが、溶液はかなり濁っていた。緑がかった色の沈殿を遠心分離および濾過により除去し、「ｌ」ｗｔ％のタンパク質含量を有する透明な溶液「ｋ」Ｌを得た。
【００７４】
次いで、清澄化されたタンパク質溶液を、ＨＣｌでｐＨ「ｍ」に調整した。１０，０００ダルトンの分画分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｕｔ−ｏｆｆ）を有するＰＥＳ膜を使用して、ｐＨ３に調整された濾液を、「ｏ」Ｌの容積の約「ｎ」ｗｔ％のタンパク質に濃縮した。
【００７５】
一定分量「ｐ」Ｌの保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）を、３００ｍｌＧＡＣカラムに通し、ＧＡＣが任意の色または味の向上をもたらすかどうかを決定した。次いで、ＧＡＣ処理した物質を噴霧乾燥して、「ｑ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する乾燥生成物を得た。この生成物に「ｂ」Ｃ３０７Ｃという名称（ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ）を与えた。
【００７６】
残りの保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）「ｒ」Ｌを噴霧乾燥して、「ｓ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する乾燥生成物を得た。この生成物に「ｂ」Ｃ３０７という名称（ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ）を与えた。パラメータ「ａ」〜「ｓ」を以下の表ＩＩに示す。
【００７７】
【表２】
2012500228.tif 000003
【００７８】
例３：
この例は、例１からの生成物の、酸性水性媒体に可溶性のキャノーラタンパク質単離物への処理の代替方法を説明する。
【００７９】
バッチ「ｂ」からのＰＭＭ「ａ」ｋｇを、「ｃ」ｗｔ％（タンパク質基準当たり）ＣａＣｌ2およびＲＯ水「ｄ」Ｌで溶解させ、「ｆ」ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液「ｅ」ｋｇを作った。溶解したＰＭＭを、「ｇ」倍容（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の室温のＲＯ水で希釈した。緑がかった色の沈殿を遠心分離により除去した。次いで、得られた、「ｉ」ｗｔ％のタンパク質含量を有する集中物（ｃｅｎｔｒａｔｅ）「ｈ」ｋｇを、ＨＣＬで「ｊ」のｐＨに調整した。次いで、酸性化され清澄化されたタンパク質溶液を、「ｌ」ＢＶ／ｈｒの速度で、タンパク質溶液と等しいｐＨおよび導電率を有する粒状活性炭「ｋ」Ｌに通した。
【００８０】
次いで、「ｍ」のタンパク質含量および「ｎ」ｋｇの質量を有するＧＡＣ処理した溶液を噴霧乾燥し、「ｏ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する乾燥生成物を得た。この生成物に「ｂ」Ｃ３０７Ｃという名称（ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ）を与えた。パラメータ「ａ」〜「ｏ」を以下の表ＩＩＩに示す。
【００８１】
【表３】
2012500228.tif 000004
【００８２】
例４：
この例は、透明な溶液を製造するためにそのまま、または適用する前に酸性化して使用することができる、例１からの生成物の、自然のｐＨのキャノーラタンパク質単離物への処理の方法を説明する。
【００８３】
バッチ「ｂ」からのＰＭＭ「ａ」ｋｇを、「ｃ」ｗｔ％（タンパク質基準当たり）ＣａＣｌ2およびＲＯ水「ｄ」Ｌで溶解させ、「ｆ」ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液「ｅ」ｋｇを作った。溶解したＰＭＭを、「ｇ」倍容（ｖｏｌｕｍｅ（ｓ））の室温のＲＯ水で希釈した。緑がかった色の沈殿が形成され、これを遠心分離により除去した。次いで、得られた、「ｉ」ｗｔ％のタンパク質含量を有する集中物（ｃｅｎｔｒａｔｅ）「ｈ」ｋｇを、「ｋ」ＢＶ／ｈｒの速度で、タンパク質溶液と等しいｐＨおよび導電率を有する粒状活性炭「ｊ」Ｌに通した。
【００８４】
次いで、「ｌ」のタンパク質含量および「ｍ」ｋｇの質量を有するＧＡＣ処理した溶液を噴霧乾燥し、「ｎ」％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する乾燥生成物を得た。この生成物に「ｂ」Ｃ３０７Ｃという名称（ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ）を与えた。パラメータ「ａ」〜「ｎ」を以下の表ＩＶに示す。
【００８５】
【表４】
2012500228.tif 000005
【００８６】
開示の概要
本開示を要約すると、本発明は、キャノーラタンパク質ミセル塊から、酸性水性環境において可溶性、透明で熱安定性であり、自然のｐＨの水性環境において可溶性であるキャノーラタンパク質単離物を形成する新規な方法を提供する。本発明の範囲内で、改変が可能である。
【手続補正書】
【提出日】平成23年3月30日(2011.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）１．５〜１５ｗｔ％（タンパク質基準当たり）の濃度のカルシウム塩水溶液を使用してキャノーラタンパク質ミセル塊を可溶化させて、５〜５０ｗｔ％（タンパク質基準当たり）のタンパク質濃度を有するキャノーラタンパク質溶液を形成するステップと、
（ｂ）キャノーラタンパク質単離物を、１〜２０倍に希釈するステップと
を含むことを特徴とする、キャノーラタンパク質単離物の形成方法。
【請求項２】
前記カルシウム塩は塩化カルシウムであり、前記カルシウム塩は２〜３ｗｔ％（タンパク質基準当たり）の濃度で使用されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記キャノーラタンパク質溶液が、１５〜２５ｗｔ％のタンパク質濃度を有することを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記キャノーラタンパク質溶液を、１〜３倍に希釈することを特徴とする、請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記希釈ステップの後、析出したフィチン酸を除去して、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得ることを特徴とする、請求項１〜４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を乾燥させて、少なくとも９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも１００ｗｔ％のタンパク質含量を有するキャノーラタンパク質単離物を製造することを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を、選択的膜技術を使用して、５０〜２００ｇ／Ｌ、好ましくは８０〜１５０ｇ／Ｌの濃度に濃縮し、濃縮された透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得ることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記濃縮された透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を、２〜２０倍容、好ましくは５〜１０倍容の透析濾過溶液を使用して透析濾過に供し、濃縮され、透析濾過された、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得ることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記透析濾過ステップの少なくとも一部の間に、酸化防止剤が前記透析濾過溶液中に存在することを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記濃縮され、透析濾過された、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を、色除去ステップに供することを特徴とする、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
前記色除去ステップの生成物を乾燥させて、少なくとも９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも１００ｗｔ％のタンパク質含量を有するキャノーラタンパク質単離物を製造することを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液のｐＨを、２．０〜４．０、好ましくは２．９〜３．２の値に調整して、酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を得ることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項１３】
前記酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を乾燥させて、少なくとも９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも１００ｗｔ％のタンパク質含量を有するキャノーラタンパク質単離物を製造することを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を、選択的膜技術を使用して、５０〜２００ｇ／Ｌ、好ましくは８０〜１５０ｇ／Ｌの濃度に濃縮し、濃縮された透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得ることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記酸性化された透明なキャノーラタンパク質溶液を、２〜２０倍容、好ましくは５〜１０倍容の透析濾過溶液を使用して透析濾過に供し、濃縮され、透析濾過された、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を得ることを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記透析濾過ステップの少なくとも一部の間に、酸化防止剤が前記透析濾過溶液中に存在することを特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記濃縮され、透析濾過された、透明な希釈キャノーラタンパク質水溶液を、色除去ステップに供することを特徴とする、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記色除去ステップの生成物を乾燥させて、少なくとも９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも１００ｗｔ％のタンパク質含量を有するキャノーラタンパク質単離物を製造することを特徴とする、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
少なくとも９０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．、好ましくは少なくとも１００ｗｔ％のタンパク質含量を有し、かつ主として７Ｓキャノーラタンパク質からなり、かつ酸性水性環境において可溶性で熱安定性であるキャノーラタンパク質単離物。
【請求項２０】
前記酸性水性環境が、２．５〜５のｐＨを有する飲料であることを特徴とする、請求項１９に記載のキャノーラタンパク質単離物。
【国際調査報告】
2012500228.tif 000006
2012500228.tif 000007
2012500228.tif 000008
2012500228.tif 000009