(57)【要約】治療上有効量のトレチノインおよびエチルセルロースを含んでなる実質的に多孔性のマイクロパーティクル。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効量のトレチノインおよびエチルセルロースを含有してなる実質的に多孔性のマイクロパーティクル。
【請求項２】
マイクロパーティクルが可塑剤を含まない、請求項１記載の実質的に多孔性のマイクロパーティクル。
【請求項３】
マイクロパーティクルの平均孔径が約２ミクロン〜２０ミクロンの範囲である、請求項１記載の実質的に多孔性のマイクロパーティクル。
【請求項４】
エチルセルロースとトレチノインの比が約９９．０：１．０〜約５０：５０の範囲である、請求項１記載の実質的に多孔性のマイクロパーティクル。
【請求項５】
トレチノインを約１重量％まで含有する、請求項１記載の実質的に多孔性のマイクロパーティクル。
【請求項６】
孔が、ジクロロメタン等の揮発性溶媒の使用により in situ で形成する、請求項１記載の実質的に多孔性のマイクロパーティクル。
【請求項７】
以下のステップを含んでなる、実質的に多孔性のマイクロパーティクルの製造方法：
ｉ）トレチノインおよびエチルセルロースをジクロロメタン等の有機溶媒に溶解する；
ｉｉ）懸濁剤を含んでなる水相を調製する；
ｉｉｉ）ステップｉ）の溶液をステップｉｉ）の溶液に、攪拌しながら、またはホモジナイザーを用いて加える；
ｉｖ）場合より減圧下で、所望の間隙率のマイクロパーティクルの形成に適当なスピードにてエマルジョンを攪拌することにより有機溶媒を留去する。
【請求項８】
可塑剤の使用と必要としない、請求項７記載の製造方法。
【請求項９】
懸濁剤の量が、マイクロパーティクルの約０．０１％ｗ／ｗ〜約０．５％ｗ／ｗである、請求項８記載の製造方法。
【請求項１０】
有機溶媒の１時間あたりの蒸発速度が、有機溶媒全量の７．５％〜４５％である、請求項７記載の製造方法。
【請求項１１】
有機溶媒の留去中の攪拌スピードが３５０ｒｐｍ〜１５００ｒｐｍの範囲である、請求項７記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トレチノインのマイクロパーティクルに関する。
【背景技術】
【０００２】
（オール−Ｅ）−３,７−ジメチル−９−（２,６,６−トリメチル−１−シクロヘキサン−１−イル）−２−４,６,８−ノナテトラエン酸としても知られるトレチノイン（化学名称：オールトランスレチノイン酸）は、尋常性座瘡治療の薬物として最も一般的に用いられている。米国では、局所投与用としてクリーム、ジェルおよび溶液の形態で商業的に入手可能である。これら組成物の多くは、活性成分が急速に放出されるため繰り返し適用する必要がある。この反復適用の必要の問題を解決するため、徐放性組成物が開発されている。そのような組成物の１つに、米国で承認された、トレチノインの制御されたデリバリーのためのレチン−Ａ−マイクロ（登録商標）局所ジェルがある。
【０００３】
商品名レチン−Ａ−マイクロ（登録商標）（トレチノインジェル）は、０．１重量％または０．０４重量％含有のマイクロスフェア製剤である。この製剤は、内部に活性成分を保持したポア（pores）のネットワークを有するポリマービーズからなるジェルベースのビークルであり、活性成分の放出時間がコントロールされている。このようなポリマービーズは、表面に適用できるジェル、クリーム、ローション、軟膏、液体等の媒体に入れられている。活性成分はその後、圧力、拡散または揮発によって放出される。この送達ビークルは、マイクロカプセル化されたまたはジェルの送達ビークルと比較して機械的安定性が向上している。ビーズのポアネットワークは、浸透圧のショックを受けず、製造時の取り扱いが容易である。いくつかのこのようなポリマービーズが従来技術として記載されている（例えば、米国特許第５,１４５,６７５号；同第４,６９０,８２５号および同第５,９５５,１０９号（「１０９特許」）。
【０００４】
米国特許第５，９５５，１０９号は、以下を含んでなる、レチノイン酸を皮膚に送達するための局所用組成物を開示する：
（ａ）反応性の官能基を含まず、架橋密度が２０％〜８０％である、モノエチレン性不飽和のモノマーおよびポリエチレン性不飽和のモノマーの架橋したコポリマーからなる固体粒子であって、該粒子が該粒子の外部に開口したポアの連続した折り畳みのネットワークを含み、形状が球形であって、平均粒径が１ミクロン〜約１００ミクロンであり、ポアの全容量が約０．００１ｃｃ／ｇ〜約４０ｃｃ／ｇであり、表面積が約１ｍ2／ｇ〜約５００ｍ2／ｇであり、平均孔径が約０．００１ミクロン〜約３．０ミクロンである、固体粒子、および
（ｂ）皮膚修復の促進に有効な量の、該ポア内部に保持されたトレチノイン酸を含んでなる含浸剤であって、該ポア内部の該レチノイン酸の保持が、フリーのレチノイン酸の同量の適用と比較して、皮膚修復促進活性を損失することなく組成物の刺激性を減少させる、含浸剤。
米国特許‘１０９に従って形成したポアは、相互に連結し粒子表面へ開いており、特定の条件下で保持されているレチノイン酸の外部への完全な拡散を可能にする。‘１０９特許は放出を徐放化するための有効な手段を開示しているけれども、マイクロパーティクルの製造プロセスは２段階で非常に煩雑である。‘１０９に開示の製造法は、モノマーのポリマー化とポアを形成するためのポロゲンの使用という別々のプロセスを必要とする。レチノイド含浸剤は予め乾燥した多孔質ポリマービーズのポア内部に存在させることができる。さらに、ポリマー形成における架橋は、ポアサイズ制御の主な手段である。該特許はスチレンおよびジビニルベンゼン、ステアリン酸ビニルおよびジビニルベンゼン、４−ビニルピリジンおよびジメタクリル酸エチレングリコール（これらはすべて合成ポリマーである）のコポリマー化の使用を教示する。そのようなポリマーは、自然界に存在するポリマー（例えばエチルセルロースのような半合成ポリマー）と比較して特に精選されたものというわけではない。合成ポリマーではなく、天然に存在するまたは化学的に修飾された天然のポリマー、例えばエチルセルロースのようなセルロース誘導体、を利用することは望ましい。
【０００５】
ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００６／１３３１３１（以下、「ＰＣＴ公報‘１３１」とする）において、エチルセルロースの使用が検討されている。この出願は、疎水性ポリマーと可塑剤、およびその中に含有される生物的に活性なまたは不活性な試薬を含んでなる、実質的に無孔性のポリマーマイクロパーティクルの使用を開示する。ＰＣＴ公報‘１３１は、マイクロパーティクルのためのポリマーとしてのエチルセルロースの使用を開示するけれども、このマイクロパーティクルは実質的に無孔性であって粒子の孔径は数ナノメーター〜約１ミクロンの大きさであり、全孔容積は約０．０００５５２ｃｍ3／ｇである。この‘１３１公報は、懸濁剤として約０．５％のポリビニルアルコールを開示する。本発明者により、このように高い量のポリビニルアルコールが、泡立ち、フィルターの目詰まり等の製法上のいくつかの問題につながることが見出された。また、‘１３１公報に開示されているような懸濁剤のより高い量での使用は、マイクロパーティクルの全製造プロセスの過度の遅れにつながる。さらに、‘１３１公報は、平均孔径約１ミクロン以下であるマイクロパーティクルの製造において可塑剤の使用を開示している。
【０００６】
米国特許第５,７２５,８６９号のクレームには、以下を含んでなる、直径約３〜約３００ミクロンの、スポンジに似た、でこぼこした多孔性の表面と多孔性の内部構造によって特徴付けられる多孔性スポンジ状マイクロスフェアの製造法が記載されている：
（ａ）ポリマーおよびフタル酸エステル、リン酸エステル、クエン酸塩、セバシン酸エステル、グリセリン、トリアセチンおよびアセチル化されたモノグリセリドからなる群から選択される可塑剤の溶液を含んでなる有機相を調製し；
（ｂ）１以上の乳化剤の水溶液を含んでなる水相を調製し；
（ｃ）該有機相と水相を乳化条件下で混合して、水相中の有機相のエマルジョンを形成し；および
（ｄ）溶媒を蒸発させて、該スポンジに似た、でこぼこした多孔性の表面と多孔性の内部構造を有する多孔性スポンジ状マイクロスフェアを形成する。
この特許は、マイクロパーティクルの製造中の可塑剤の使用を教示している。しかしながら、本発明者らは、可塑剤を使用したマイクロパーティクルの製造中に分散相に存在する水が高濃度であり、洗浄する間に可塑剤がマイクロパーティクルから流れ出るために、完成したマイクロパーティクルに可塑剤が保持される可能性が多少存在することを観察している。可塑剤を高い量で使用すると、完成したマイクロパーティクルは互いに接着して凝集し収量が低くなる。本発明者は、可塑剤を使用せずに製造した場合、実質的に多孔性のマイクロパーティクルを９０％に達する良好な収率で得られることを見出した。
【０００７】
天然に存在するポリマーを用いることにより環境にやさしいマイクロパーティクルを製造することを目的として、本発明者らは、トレチノインをエチルセルロースの使用によって形成したマイクロパーティクルに取り込ませて、該マイクロパーティクルがトレチノインを徐放的に放出させることができることを見出した。このような粒子を、例えばジェルなどの慣用のビークルに取り込ませたときに、その製剤はまた、皮膚に対する刺激がなく、商業的に入手可能なマイクロパーティクル調製物（即ち、レチンＡマイクロ（登録商標））による座瘡等の皮膚疾患を治療するのに有効であるという観点から適したものである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的
本発明の目的は、天然のまたは半合成由来のポリマーを含んでなるマイクロパーティクルを提供することである。
本発明のさらなる目的は、局所適用した場合に、トレチノイン酸の所望の持続性のまたは制御された放出を可能にするような孔サイズを有する実質的に多孔性のマイクロパーティクルを提供することである。
本発明の目的は、所要時間が非常に短く、約５〜１０ｋｇのバッチサイズまでスケールアップすることが可能な、実質的に多孔性のマイクロパーティクルを製造する方法を提供することである。
本発明のさらなる目的は、トレチノインを含有する、実質的に多孔性の、球形のマイクロパーティクルを再生可能な方法で製造するために使用することができる方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の要旨
本発明は、トレチノインおよびエチルセルロースの治療上有効量を含んでなる実質的に多孔性のマイクロパーティクルを提供する。
本発明は、好ましくは、実質的に多孔性のマイクロパーティクルであって、該マイクロパーティクルが可塑剤を含まないマイクロパーティクルを提供する。
本発明はさらに、実質的に多孔性のマイクロパーティクルであって、該マイクロパーティクルの平均孔径が、約２ミクロン〜２０ミクロンの範囲である、マイクロパーティクルを提供する。
本発明はまた、実質的に多孔性のマイクロパーティクルであって、エチルセルロースとトレチノインの比が約９９．０：１．０〜約５０：５０の範囲である、マイクロパーティクルを提供する。
本発明はさらに、実質的に多孔性のマイクロパーティクルであって、トレチノイン量が約１重量％である、マイクロパーティクルを提供する。
本発明は、実質的に多孔性のマイクロパーティクルであって、ジクロロメタン等の揮発性溶媒の使用によってポアが形成される、マイクロパーティクルを提供する。
本発明の別の態様では、本発明はさらに、以下のステップを含んでなる実質的に多孔性のマイクロパーティクルの製造法を提供する。
ｉ）トレチノイン およびエチルセルロースをジクロロメタン等の有機溶媒に溶解する
ｉｉ）懸濁剤を含んでなる水相を調製する
ｉｉｉ）ステップｉ）の溶液をステップｉｉ）の溶液に、攪拌しながら、またはホモジナイザーを用いて加える
ｉｖ）場合より減圧下で、所望の間隙率のマイクロパーティクルの形成に適当なスピードにてエマルジョンを攪拌することにより有機溶媒を留去する。
さらに、本発明は可塑剤の使用を必要としない製造法を提供する。
【００１０】
本発明は以下のように要約することができる：
Ａ．治療上有効量のトレチノインおよびエチルセルロースを含有してなる実質的に多孔性のマイクロパーティクル。
Ｂ．エチルセルロースとトレチノインの比率が約９９．０：１．０〜約５０：５０の範囲である、Ａに記載の実質的に多孔性のマイクロパーティクル。
Ｃ．トレチノイン量が約１重量％である、Ａに記載の実質的に多孔性のマイクロパーティクル。
Ｄ．孔が、ジクロロメタン等の揮発性溶媒の使用によってｉｎ  ｓｉｔｕで形成する、Ａに記載の実質的に多孔性のマイクロパーティクル。
Ｅ．以下のステップ：
ｉ）トレチノイン およびエチルセルロースをジクロロメタン等の有機溶媒に溶解すること；
ｉｉ）懸濁剤を含んでなる水相を調製すること；
ｉｉｉ）ステップｉ）の溶液をステップｉｉ）の溶液に、攪拌しながら、またはホモジナイザーを用いて加えること；
ｉｖ）場合より減圧下で、所望の間隙率のマイクロパーティクルの形成に適当なスピードにてエマルジョンを攪拌することにより有機溶媒を留去すること
を含んでなる実質的に多孔性のマイクロパーティクルの製造法。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は実施例１に従って製造したマイクロパーティクルの走査電子顕微鏡像である。
【図２】図２は実施例２に従って製造したマイクロパーティクルの走査電子顕微鏡像である。
【図３】図３は実施例３に従って製造したマイクロパーティクルの走査電子顕微鏡像である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の詳細な記載
本発明は、治療上有効量のトレチノインおよびエチルセルロースを含有してなる実質的に多孔性のマイクロパーティクルを提供する。
【００１３】
トレチノインは、レチノイン酸のすべてのトランス型に用いられる用語であるが、９，１０−シス型および１３−シス型等、このクラス内の他の酸も包含する。
【００１４】
「マイクロパーティクル」なる語は、「マイクロスフェア」なる語を包含し、本発明では同じ意味で用いられる。
【００１５】
本発明での一実施形態によれば、マイクロパーティクルは、トレチノインまたはその製薬的に許容し得る塩を含有する。マイクロパーティクルに存在するトレチノインの量は、約０．０１％ｗ／ｗ〜約１０．０％ｗ／ｗ、好ましくは、約０．０５％ｗ／ｗ〜約５％ｗ／ｗ、より好ましくは約０．１％ｗ／ｗ〜約２％ｗ／ｗの範囲である。
【００１６】
本発明は、実質的に多孔性の性質のマイクロパーティクルを提供する。本発明の一実施形態では、「実質的に多孔性の」マイクロパーティクルは、平均孔径が２ミクロン以上、好ましくは５ミクロン以上、そして最も好ましくは約１２ミクロン〜約２０ミクロンである。孔径と全空隙率は水銀膨張計により測定するが、他のいずれかの適当な方法を用いてもよい。
【００１７】
本発明によれば、マイクロパーティクルの平均粒子サイズは、約１５ミクロン〜約８０ミクロン、好ましくは２５ミクロン〜約７５ミクロンの範囲である。本明細書において用いられる「平均粒子サイズ」なる語は平均の粒子サイズを意味する。マイクロパーティクルのサイズは、Malvern粒径分析、篩過、光散乱光学顕微鏡法、画像解析、沈降法および当業者に知られている他の方法等、粒子サイズの測定および表現の慣用的方法を用いて測定することができる。粒子サイズ分布の情報は、Malvern粒度分布測定から作成することができるようなＤ10、Ｄ50およびＤ90等の値から得ることができる。本明細書において用いられるＤ90は、そのサイズよりも小さい粒子が粒子の９０％体積を占めるようなサイズとして定義され、本明細書において用いられるＤ50は、そのサイズよりも小さい粒子が粒子の５０％体積を占めるようなサイズとして定義される。本明細書において用いられるＤ10は、そのサイズよりも小さい粒子が粒子の１０％体積を占めるようなサイズとして定義される。マイクロパーティクルのＤ90は約３０ミクロン〜約７０ミクロンの範囲である。一実施形態では、本発明のマイクロパーティクルの粒子サイズは、Ｄ50＜２３．３５３およびＤ90＜５３．７９８であり、比表面積は約０．４２５ｍ2／ｇｍである。
【００１８】
本発明のマイクロパーティクルは、球形、縦長状、および楕円形等を含む任意の形状のものであってよい。本発明の一実施形態では、マイクロパーティクルは実質的に球形のものである。図１〜図３は、本発明の種々の実施形態に従って調製したマイクロパーティクルのＳＥＭ（走査電子顕微鏡）像を示す。ＳＥＭ像は球形および実質的に多孔性のマイクロパーティクルを示す。一実施形態では、いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、本発明者は、その粒子が、実質的に均一な多孔性の球形であることに起因して、適当なビークル中に取り込まれたマイクロパーティクルからの薬物の放出がより均一になると考えている。さらにそのような組成物からの薬物の放出は、マイクロパーティクルのサイズとその表面積を変更することによりコントロールすることができる。比表面積は、任意の適当な方法、例えば、Malvern 光散乱粒子サイズ測定、ＢＥＴ等により測定することができる。
【００１９】
本発明は、治療上有効量のトレチノインおよびエチルセルロースを含有してなる、実質的に多孔性のマイクロパーティクルを提供する。好ましくは、本発明は、マイクロパーティクルが可塑剤を含まない、実質的に多孔性のマイクロパーティクルを提供する。一般に、本発明のマイクロパーティクルの平均孔径は約２ミクロン〜２０ミクロンである。本発明は、孔がジクロロメタン等の揮発性溶媒の使用によって in situ で形成する、実質的に多孔性のマイクロパーティクルを提供する。
【００２０】
本発明によれば、エチルセルロースをマイクロパーティクルのためのポリマーとして使用する。エチルセルロースはセルロースのポリマー骨格を有し、天然に存在するポリマーである。この分子は無水グルコース単位の繰り返し構造を有する。エチルセルロースは数多くの粘度のものが製造され市販されている。エチルセルロースで最も一般的に用いられているグレードのものとして、ダウ・ケミカル社（米国）がETHOCEL（登録商標）の販売名で販売しているものがある。ETHOCELポリマーは、最も有用なエトキシ含量の範囲をカバーする２種類のタイプ（スタンダードおよびメディアム）が製造されている。「スタンダード」ポリマーは、４８．０〜４９．５％のエトキシ含量であり；「メディアム」ポリマーは４５．０〜４７．０％のエトキシル含量である。スタンダードおよびメディアムエトキシタイプは制御された適用に有用な特級グレードや工業グレードのものが入手可能である。特級グレードは製薬上の要求を満たすように設計されている。本発明のマイクロパーティクルに使用することができるエチルセルロースのグレードの例としては、約４ｃｐｓ〜約３５０ｃｐｓの粘度を有するエチルセルロースが挙げられる。好ましくは、約４ｃｐｓ〜約１００ｃｐｓの範囲の粘度を有するエチルセルロースを用いる。最も好ましくは、使用することができるグレードとして、ETHOCEL Std.4 PREMIUM、ETHOCEL Std.7 PREMIUM、ETHOCEL Std.10 PREMIUM、ETHOCEL Std.14 PREMIUM、ETHOCEL Std.20 PREMIUM、ETHOCEL Std.45、ETHOCEL Std. 100、ETHOCEL Std.200およびETHOCEL Std. 300が挙げられるがこれに限定されない。エチルセルロースポリマーは、単独で、または送達ビークルによって取り込まれたときにマイクロパーティクルからのトレチノインの放出を効果的に制御するため２種類以上のグレードを組み合わせて、使用することができる。好ましくは、本発明のマイクロパーティクルにおけるエチルセルロースは、約３０％ｗ／ｗ〜約９９％ｗ／ｗ、より好ましくは約５０％ｗ／ｗ〜約９８％ｗ／ｗ、最も好ましくは約７０％ｗ／ｗ〜約９７％ｗ／ｗの範囲で用いる。
【００２１】
本発明のマイクロパーティクルにおけるエチルセルロースとトレチノインの比を変更してトレチノインの制御された放出が達成させることができる。本発明の一実施形態では、エチルセルロースとトレチノインの比を約５０：１から約９９：１、好ましくは約７５：１から約９５：１の間で変更する。
【００２２】
本発明のマイクロパーティクルはさらに、当分野で公知の酸化防止剤、保存料等の適当な添加剤を含有することができる。好ましくは、ブチル化されたヒドロキシルトルエンを酸化防止剤として用い、マイクロパーティクルの約０．０１％ｗ／ｗから約５％ｗ／ｗの量で存在する。
【００２３】
本発明の一実施形態では、マイクロパーティクルは、トレチノイン、エチルセルロースおよびブチル化ヒドロキシルトルエンを含んでなる。より好ましくは、マイクロパーティクルは、マイクロパーティクルの重量パーセントで、約０．１％〜約２％のトレチノイン、約５０％〜約９８％のエチルセルロースおよび約０．０１％〜約５％のブチル化ヒドロキシルトルエンを含んでなる。
【００２４】
本発明者によって、マイクロパーティクルの製造中に可塑剤を用いれば、分散相に存在する水の濃度が高く、洗浄中に可塑剤がマイクロパーティクルから流れ出るので、完成したマイクロパーティクルの中に可塑剤が保持される可能性が多少存在することが観察されている。可塑剤の使用量が多いほど、完成するマイクロパーティクルが互いに粘着して凝集し収率が低下する。本発明者らは、可塑剤を使用せずにマイクロパーティクルを製造した場合に、実質的に多孔性のマイクロパーティクルが９０％に至る良好な収率で得られ、製造プロセスが工業的に実現可能である、即ちマイクロパーティクルが時間とエネルギーの最適な利用により約５〜１０ｋｇのバッチサイズで製造可能である、ことを見出した。
【００２５】
本発明によれば、トレチノインの新規のマイクロパーティクルは、送達ビークル中に入れることができる。局所投与のためにトレチノインのマイクロパーティクルを分散させるのに使用することができる送達ビークルは、生体適合性であり適用部位に対して炎症を起こさないものである。送達ビークルは、分散したマイクロパーティクルと混合せず伸展性に優れたものである。ビークルはジェル、軟膏、クリーム、ペースト等の形態であってよい。送達ビークル中のマイクロパーティクルの量は、全ビークル組成物の約１％ｗ／ｗ〜約２０％ｗ／ｗ、より好ましくは約５．０％ｗ／ｗ〜約１５．０％ｗ／ｗであってよい。
【００２６】
マイクロパーティクルからのトレチノインの所望のコントロールされた放出を達成する意味においても、また局所用ビークルに入れて皮膚に適用したときの分散性、付着性および感覚の観点からも、マイクロパーティクルの粒子サイズは重要であることは留意すべきである。本発明の一実施形態では、本発明者は、マイクロパーティクルのＤ90が約３０ミクロン〜約７０ミクロンの範囲の、本発明に従って製造したマイクロパーティクルは、トレチノイン放出のコントロールの達成とは別に、外見および局所適用後の感覚などの化粧品効果の観点から満足のいく結果を示したことを見出した。
【００２７】
本発明のマイクロパーティクルを入れることができる送達ビークルの例としては、カーボポール等のアクリル酸系ポリマー、カルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、キトサン、ポビドン、ポリエチレンオキシド、ポロクサマー、ベントナイト、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の単独またはその組み合わせが挙げられるがこれに限定されない。本発明の組成物において用いることができる好ましいゲル化剤としては、カルボマー等のアクリル酸系ポリマーが挙げられる。カルボマーは一般にカーボポールと呼ばれている。カルボマーは、ペンタエリトリトールのアリルスクロースまたはアリルエーテルのいずれかで架橋されたアクリル酸の合成高分子ポリマーである。乾燥体で計算して５６〜６８％のカルボン酸（−ＣＯＯＨ）基を含む。送達ビークル用に様々なグレードで商業的に入手可能であるカーボポールとしては、カルボマー９１０、カルボマー９３４、カルボマー９３４Ｐ、カルボマー９４０、カルボマー９４１、カルボマー９７４Ｐ、カルボマー９７１Ｐ、カルボマー９８１、カルボマー１３４２およびそれらの混合物が挙げられるがこれに限定されない。好ましくは、デリバリービークルを用いることができるカルボマーの量は、本発明のマイクロパーティクルを含んでなる送達ビークルの全重量の約０．０１％ｗ／ｗ〜約１０％ｗ／ｗ、より好ましくは約０．１％ｗ／ｗ〜約８％ｗ／ｗ、最も好ましくは０．５％ｗ／ｗ〜約５％ｗ／ｗの範囲である。一実施形態では、発明者は意外にも、マイクロパーティクルをアクリル酸ベースのジェルに入れた場合に、トレチノインの放出がｐＨ依存性であることを見出した。
【００２８】
送達ビークルには界面活性剤を添加してもよい。本発明の送達ビークルの組成物において使用することができる適当な界面活性剤としては、ジステアリン酸ＰＰＧ−２０メチルグルコースおよびシクロメチコンおよびジメチコンコポリオールが挙げられる。ジステアリン酸ＰＰＧ−２０メチルグルコースは、送達ビークル中で使用した場合に保湿剤または皮膚潤滑剤として作用し、送達ビークルの重量の約０．１％ｗ／ｗ〜約１０．０％ｗ／ｗ、より好ましくは約１．０％ｗ／ｗ〜約７．０％ｗ／ｗの範囲で存在する。本発明の一実施形態では、送達ビークルは、乳化剤としてシクロメチコンおよびジメチコンコポリオールを約０．１％ｗ／ｗ〜約１０．０％ｗ／ｗ、好ましくは約１．０％ｗ／ｗ〜約６．０％ｗ／ｗの範囲で含有する。
【００２９】
送達ビークルはさらに、保存剤、酸化防止剤、乳白剤、乳化剤、柔軟剤、保湿剤、透過促進剤、界面活性剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、親水性の液体およびその他局所適用に適当な組成物の製造について当分野で知られている適当な製薬的に許容し得る添加剤等の適当な添加剤を含有してもよい。
【００３０】
保存剤は所望により送達ビークル入れることができ、そのような保存剤の例としては、パラ−ヒドロキシ安息香酸のアルキルエステル（メチルパラベンおよびプロピルパラベン等）、ベンゾエート、ヒダントイン誘導体、プロピオン酸塩、ソルビン酸、ベンジルアルコール、イミダゾリジニル尿素、デヒドロ酢酸ナトリウムおよび様々な４級アンモニウム化合物が挙げられるがこれに限定されない。好ましくは、保存剤は、マイクロパーティクルの約０．０１％ｗ／ｗ〜約２％ｗ／ｗの範囲の量で使用することができる。
【００３１】
本発明のマイクロパーティクルを含有してなる送達ビークルに使用することができる酸化防止剤は、非反応性で局所適用に安全なものである。適当な酸化防止剤としては、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、没食子酸プロピルおよびアルファ−トコフェロール（ビタミンＥ）が挙げられるが、他の酸化防止剤も使用できる。好ましくはブチル化ヒドロキシトルエンを酸化防止剤として用い、送達ビークル組成物の約０．０１％ｗ／ｗ〜約５％ｗ／ｗの範囲の量で用いる。
【００３２】
送達ビークルに使用することができる親水性液としては、水、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトールおよび他の高級アルコールや種々の比率のそれらの混合物が挙げられる。
【００３３】
所望により架橋機能を有することができる、ｐＨ調整剤（一般に中和剤）、例えば第３級アミン（トリエタノールアミンまたはトロールアミン、トロメタミン、テトラヒドロキシプロピルエチレンジアミン等）；ＮａＯＨ溶液等を送達ビークルに添加することができる。好ましいｐＨ調整剤は、トロールアミンであり、約０．０５％ｗ／ｗ〜約２．０％ｗ／ｗの範囲の量で送達ビークルに存在する。送達ビークルのｐＨは、約４．０〜約６．０の範囲のｐＨに調整することができる。
【００３４】
一実施形態では、送達ビークルは、同じまたは異なる量のトレチノインを有するマイクロパーティクルを含有させて、適用部位に対する治療上有効量のトレチノインの放出を調整するようにする。
【００３５】
本発明の別の実施形態では、本発明はさらに、以下のステップ：
ｉ）トレチノインおよびエチルセルロースをジクロロメタン等の有機溶媒に溶解すること；
ｉｉ）懸濁剤を含んでなる水相を調製すること；
ｉｉｉ）ステップｉ）の溶液をステップｉｉ）の溶液に、攪拌しながら、またはホモジナイザーを用いて加えること；
ｉｖ）場合より減圧下で、所望の間隙率のマイクロパーティクルの形成に適当なスピードにてエマルジョンを攪拌することにより有機溶媒を留去すること
を含んでなる、実質的に多孔性のマイクロパーティクルの製造方法を提供する。
さらに、本発明は可塑剤の使用を必要としない製造法を提供する。
【００３６】
さらに、本発明は、以下のステップ：
ｉ）トレチノイン およびエチルセルロースを有機溶媒に溶解すること；
ｉｉ）懸濁剤を含んでなる水相を調製すること；
ｉｉｉ）ステップｉ）の溶液をステップｉｉ）の溶液に、攪拌しながら、またはホモジナイザーを用いて加えること；
ｉｖ）場合より減圧下で、所望の間隙率のマイクロパーティクルの形成に適当なスピードにてエマルジョンを攪拌することにより有機溶媒を留去すること
を含んでなる、実質的に多孔性のマイクロパーティクルの製造方法に関する。
本発明のマイクロパーティクルは、当分野で知られている任意の技術によって製造することができる。最も一般的に用いられている技術としては、溶媒留去、コアセルベーション相分離、スプレー乾燥、スプレー凝固、超臨界流体抽出等が挙げられる。
【００３７】
マイクロパーティクルの製造プロセス中に、様々な懸濁剤を溶液、懸濁液またはエマルジョンに添加することができる。懸濁剤として使用することができる、カチオン性、アニオン性および非イオン性の化合物としては、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリソルベート８０、ラウリル硫酸ナトリウム等が挙げられるがこれに限定されない。このような化合物の濃度は、エマルジョンを安定化するのに十分な濃度である。ポリビニルアルコールは、マイクロパーティクルの約０．００５％ｗ／ｗ〜約５．００％ｗ／ｗ、好ましくは約０．０５％ｗ／ｗ〜約１．５０％ｗ／ｗ、より好ましくは約０．０１％ｗ／ｗ〜約０．５％ｗ／ｗの範囲の量で存在し得る。
【００３８】
本発明のマイクロパーティクルの製造に使用することができる有機溶媒の例としては、塩化メチレン、アセトン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン等およびそれらの混合物が挙げられるがこれに限定されない。使用することができるエチルセルロースと溶媒の比率は約１：３〜約１：３０、好ましくは約１：７〜約１：２０、より好ましくは約１：５〜約１：１０である。
【００３９】
好ましい一実施形態では、マイクロパーティクルの製造に溶媒留去法を用いる。この実施形態では、懸濁剤を水溶液に溶解する。トレチノインおよびエチルセルロースをジクロロメタン等の有機溶媒に溶解する。トレチノインを含有する有機相を、約２００ｒｐｍ〜２５００ｒｐｍ、好ましくは３００ｒｐｍ〜２０００ｒｐｍ、より好ましくは３５０ｒｐｍ〜１５００ｒｐｍの範囲の速度で攪拌を続けながら水相に加える。減圧下または非減圧下でエマルジョンを攪拌することにより有機溶媒を蒸発させる。このエマルジョンの攪拌スピードは、約１０ｒｐｍ〜１０００ｒｐｍ、好ましくは約５０ｒｐｍ〜７５０ｒｐｍおよび最も好ましくは９０ｒｐｍ〜５００ｒｐｍである。
【００４０】
本発明者は、意外にも、有機溶媒の蒸発速度がマイクロパーティクルの間隙率に影響を及ぼすことを見出した。一実施形態において、１時間あたりの蒸発速度が、有機溶媒（例えば、ジクロロメタン）全量の７．５％〜４５％であるとき、形成した粒子は実質的に事実上多孔性であることを見出した。一般に、ジクロロメタン等の揮発性溶媒の蒸発速度は、ポリビニルアルコール等の懸濁剤の濃度によって影響を受ける。懸濁剤の濃度が高いほど粘度は高くなり、したがって、揮発性溶媒の蒸発速度は低くなり、間隙率の低いマイクロパーティクルの形成につながる。本発明のマイクロパーティクルの多孔性の性質は、非多孔質のマイクロパーティクルに比べて大きな表面積を可能にすることであることに注意すべきである。したがって、非多孔質のマイクロパーティクルのそれと比較して、薬物の高い量が作用部位での治療効果を発揮するのに利用可能であるので、必要とする薬物添加量が少なくて済む。粒子の多孔性の性質は、粒子のコアマトリックスからの薬物放出のコントロールにおいて役立つ。
【００４１】
乳化プロセスによるマイクロパーティクルの調製は、静的ミキサー、ブレンダー、マグネティック・バー攪拌、オーバー・ヘッド・スターラー、ホモジナイザー等が挙げられるがこれに限定されない当業者に知られた慣用の装置で実施される。製薬分野で慣用の他の装置もまた利用可能である。
【００４２】
このようにして形成したマイクロパーティクルは、標準的なメッシュシーブを用い、または遠心分離したのち、水性のまたは他の適当な媒質で洗浄し、空気乾燥することにより単離することができる。単離したマイクロパーティクルは、室温にて吸引乾燥するか、または凍結乾燥（フリーズドライイング）により乾燥することができる。製薬分野で慣用の他の濃縮および乾燥方法もまた使用することができる。
【００４３】
本発明のマイクロパーティクルの実質的に多孔性の性質は、本明細書に示すとおり、走査電子顕微鏡写真により画像化することができる。また、マイクロパーティクルは、マイクロパーティクル単独でのトレチノインの放出をチェックするためにin vitro溶解試験に付した。マイクロパーティクルは単独でトレチノインの放出を示すことが観察された。
出願人は、いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、これは、本発明のマイクロパーティクルの実質的な多孔性の性質によると考えており、さもなければトレチノインは水に不溶であるのでトレチノインは放出される。マイクロパーティクル単独での in vitro 放出について、以下の実施例５に記載する。一般的には、フランツ拡散セルを用いたが、マイクロパーティクルのインビトロ放出プロファイルを測定する他の任意の適当な方法も使用することができる。
【００４４】
本発明の水性ジェル基剤中のトレチノインマイクロスフェアジェルの生物学的同等性を現在ＦＤＡで承認されている製剤（レチンＡマイクロ（登録商標））と比較し、ＳＤラットモデルを使用した。即ち、局所的トレチノインは、Ｐアクネによる炎症耳の厚さを用量依存的に減少する。この実験では、ジェル製剤およびレチンＡマイクロ（登録商標）中の等価濃度のトレチノイン（０．１％ｗ／ｗ）を、１５〜１９日目まで動物の耳に適用した。別の日に炎症耳の厚さを測定し、１日目と比較した炎症の減少を測定してＰアクネによる炎症耳に対するトレチノインの効果を評価した。実施例７に記載するように、得られた炎症の減少は、製剤またはレチンＡマイクロ（登録商標）製剤のいずれかにおいてもトレチノインによる炎症におけるその等価な活性を示す。
【００４５】
in vitro 拡散セルの受容媒体は、普通であれば拡散試験が２４時間ではなく僅か数時間に制限されるような高い量の揮発性溶媒を含んでなる。しかし、インビボ効果の試験では、マイクロパーティクルがトレチノインを１日１回だけの適用で済むよう放出することがわかった。このことは、販売名レチンＡマイクロ（登録商標）で入手可能なＦＤＡで承認された市販の局所用ジェルでの生物学的等価性、以下の実施例７に記載した生物学的等価性の結果から明かである。
【００４６】
当業者は、本発明の精神から逸脱することなく、数多くの修飾が行うことが可能であることは理解できよう。したがって、以下の実施例は、単に説明のためのものであり、本発明の範囲の限定であると解釈されないことは明らかに理解される。
【００４７】
実施例１
【表１】
2012500843.tif 000002
特定量のトレチノインをジクロロメタンに溶解した。ブチル化ヒドロキシルトルエンをこの薬物溶液に加えた。エチルセルロースを上記溶液に加え、完全に溶解するまで振盪した。別の容器に、ポリビニルアルコールを特定量の精製水に加えた。薬物溶液を、ポリビニルアルコールを含有するこの水溶液に２００ｍＬ／分のデリバリー速度で加え、４８０ｒｐｍにてホモジナイズした。この混合物を４８０ｒｐｍ、−１００Ｍｍ Ｈｇの減圧下、３７℃にて８時間攪拌した。攪拌を終了した後、得られたスラリーを２〜２０μｍのガラスファイバー製濾紙で濾過し、減圧乾燥した。この粒子サイズおよびマイクロパーティクルの具体的な表面積をMalvern Mastersizer 2000を用いて決定した。マイクロパーティクルはＤ10＜８．４２６μｍ、Ｄ50＜２３．３５３μｍおよびＤ90＜５３．７９８μｍの粒子サイズ分布を有する。水銀膨張系を用いて測定したパーティクルの全空隙率は３５．５５％であった。平均孔径は１２．６０１μｍであった。非表面積は０．４２５ｍ2／ｇであった。実施例１に従って製造したマイクロパーティクルの多孔性の性状を図１（倍率３５８８倍の走査電子顕微鏡下の１個のパーティクルの画像を示す）に示す。
【００４８】
実施例２
【表２】
2012500843.tif 000003
特定量のトレチノインをジクロロメタンに溶解した。ブチル化ヒドロキシルトルエンをこの薬物溶液に加えた。エチルセルロースをこの薬物溶液に添加し、完全に溶解するまで振盪した。別の容器に、ポリビニルアルコールを特定量の精製水に溶解した。この薬物溶液を、ポリビニルアルコールを含有するこの水溶液に、２００ｍｌ／分の送達速度にて加え、１０００ｒｐｍでホモジナイズした。この混合物を、−１００Ｍｍ Ｈｇの減圧下、３７℃にて、１０００ｒｐｍで８時間攪拌した。攪拌が終了したら、得られたスラリーを２〜２０μｍのグラスファイバー濾紙で濾過し、真空乾燥した。
マイクロパーティクルの大きさをMalvern Mastersizer 2000で測定した。マイクロパーティクルの粒度分布は、Ｄ10＜４．１３３μｍ、Ｄ50＜１５．０２８μｍおよびＤ90＜３０．０４３μｍであった。パーティクルの全空隙率を水銀膨張計で測定した結果５２．１２％であった。平均孔径は３．５３μｍであった。比表面積は０．７２４ｍ2／ｇであった。実施例２に従って製造したマイクロパーティクルの多孔性の性状を図２（倍率３９４７倍の走査電子顕微鏡下の１個のパーティクルの画像を示す）に示す。
【００４９】
実施例３
【表３】
2012500843.tif 000004
特定量のトレチノインをジクロロメタンに溶解した。ブチル化ヒドロキシルトルエンをこの薬物溶液に加えた。エチルセルロースをこの薬物溶液に添加し、完全に溶解するまで振盪した。別の容器に、ポリビニルアルコールを特定量の精製水に溶解した。この薬物溶液を、ポリビニルアルコールを含有するこの水溶液に、３００ｍｌ／分の送達速度にて加え、４８０ｒｐｍでホモジナイズした。この混合物を、−１００Ｍｍ Ｈｇの減圧下、３７℃にて、４８０ｒｐｍで８時間攪拌した。攪拌が終了したら、得られたスラリーを２〜２０μｍのグラスファイバー濾紙で濾過し、真空乾燥した。
マイクロパーティクルの粒子サイズおよび比表面積をMalvern Mastersizer 2000を用いて測定した。マイクロパーティクルの粒度分布は、Ｄ10＜９．９１９μｍ、Ｄ50＜３４．３５μｍおよびＤ90＜７６．３５１μｍであった。比表面積は０．３３４ｍ2／ｇであった。実施例３に従って製造したマイクロパーティクルの多孔性の性状を図３（倍率３１４６倍の走査電子顕微鏡下の１個のパーティクルの写真画像を示す）に示す。水銀膨張計によって測定したパーティクルの全空隙率は４３．９３６６％であった。平均孔径は１５．９６５μｍであった。
【００５０】
実施例４
【表４】
2012500843.tif 000005
ＥＤＴＡ二ナトリウムおよびソルビン酸を精製水（予め６０±５℃に加熱した）に溶解した。溶液を室温に冷却した。トレチノインマイクロスフェアをステップ２の混合物に分散し、２時間攪拌した。カーボポール９７４Ｐを、攪拌しながらステップ３の混合物に分散し均一の分散液を得た。グリセリンをステップ４の混合物に加えた。ブチル化ヒドロキシトルエンをプロピレングリコール（予め６０±５℃に加熱した）に攪拌しながら溶解した。ジステアリン酸ＰＰＧ−２０メチルグルコースエーテルをステップ６の混合物に加えた。ステップ７の混合物をステップ５の分散液に攪拌しながら加えた。シクロメチコンおよびジメチコンコポリオールをステップ８の混合物に加えた。トロメタミンをステップ９の混合物に加えて中和した。最終重量を精製水で調整した。最終混合物のｐＨは５．５であった。
トレチノインマイクロスフェア１％ｗ／ｗおよびトレチノインマイクロスフェアジェル０．１％ｗ／ｗの両方について安定性を試験した。マイクロパーティクルおよびマイクロパーティクルで分散させたジェルは、保存時の良好な物理的および化学的安定性を示している。
【表５】
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【００５１】
実施例５
マイクロパーティクルを実施例２と同様の手順で製造した。製造したマイクロパーティクルの平均孔径は３．７１７４μｓであり、Ｄ10  ４．１３３μｓ、Ｄ50  １５．０２８μｓおよびＤ90  ３０．０４３μｓ、比表面積は０．７２４ｃｍ2／ｇであった。
このマイクロパーティクルを１％ポリビニルアルコールに分散し、インビトロ溶解試験に付した。インビトロ放出法では、一般に合成メンブレンを取り付けたフランツセルシステム等のオープンチャンバー拡散セルシステムを用いた。
懸濁したマイクロパーティクルサンプルを、拡散セルのオープンドナーチャンバーの上側に置き、サンプリング液をレセプターセルのメンブレンの反対側に置く。
局所的な物質からのおよびメンブレンを介した薬物の拡散を、順次回収したレセプター液のサンプルをアッセイすることによりモニターする。レセプター相から取り出したアリコートは、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または他の解析方法によって薬物含量について解析することができる。単位面積あたりの薬物放出量（ｍｃｇ／ｃｍ２）を時間の平方根に対してプロットすると直線が得られ、直線の傾きは放出速度を示す。
メンブレンシステムは、Supor 450、孔サイズ０．４５μ、直径４７ｍｍ、レセプター相：５０％イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）溶液＋１％ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）をレセプター相として用いた。
マイクロパーティクル単独およびマイクロパーティクルが懸濁したジェルからのトレチノインのin-vitro放出は以下のとおりである。
【表６】
2012500843.tif 000007
【００５２】
実施例６
本発明の水性ジェル基剤中のトレチノインマイクロスフェアジェルの、現在ＦＤＡで承認されている製剤（レチンＡマイクロ（登録商標））と比較した生物学的同等性を評価するために、ＳＤラットモデルを使用した。即ち、局所的トレチノインは、Ｐアクネによる炎症耳の厚さを用量依存的に減少する。この実験では、ジェル製剤およびレチンＡマイクロ（登録商標）中の等価濃度のトレチノイン（０．１％ｗ／ｗ）を、１５〜１９日目まで動物の耳に適用した。別の日に炎症耳の厚さを測定し、１日目と比較した炎症の減少を測定してＰアクネによる炎症耳に対するトレチノインの効果を評価した。得られた炎症の減少は、製剤またはレチンＡマイクロ（登録商標）製剤のいずれかにおいてもトレチノインによる炎症におけるその等価な活性を示す。
【表７】
2012500843.tif 000008
【００５３】
実施例７
トレチノインマイクロスフェアジェルおよびそのプラセボを１回用量をＮＺＷラビットに投与した後、皮膚刺激性について評価した。０．５ｍＬのトレチノインマイクロスフェアジェルおよびそのプラセボを、右脚および左脚の後外側の約６ｃｍ2の領域にそれぞれ適用し、ガーゼパッチと非刺激性のテープで覆った。投与から４時間後に、ガーゼを外し、残存する試験物質を生理食塩水で洗い流した。紅斑、痂皮／浮腫および応答の症状について、パッチを外してから１、２４、４８、７２時間後のスコアをすべての動物について記録した。
【表８】
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いずれのスコア区間でも、トレチノインマイクロスフェアジェルおよびそのプラセボにおいて、適用部位における紅斑、浮腫または壊死の形態での組織反応は観察されなかった。
【００５４】
眼投与による炎症を評価するために、トレチノインマイクロスフェアジェルおよびそのプラセボの１回用量をＮＺＷラビットに点眼した。０．１ｍＬのトレチノインマイクロスフェアジェルおよびそのプラセボを各ラビットの右目と左目に投与した。点眼に際し、下側の瞼を軽く数秒間持ってジェルがこぼれるのを防いだ。１時間後、残ったジェルを通常の生理食塩水で目から洗い流した。洗浄直後（投与後１時間）、投与後２４、４８および７２時間後に、眼炎症の症状がないかラビットを試験した。
【表９】
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１／３のラビットで、１時間後に右目の結膜に若干の充血が明かに認められたが、４８時間後には消失した。１／３のラビットで、１時間後に見た目には分からない程度の結膜血管が認められたが、４８時間後には消失した。プラセボを投与した左目からはどのラビットも異常は認められなかった。虹彩または角膜の障害は、いずれのラビットにおいても観察されなかった。
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【国際調査報告】
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