(57)【要約】  本発明は、アミノ鎖との共有結合を少なくとも１個有する抗トロンビン活性を有する新規な合成十六糖、ならびにこの調製方法およびこの治療的使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の十六糖およびそれらの医薬的に許容される塩：
【化１】
2012500885.tif 000007
［式中、
Ｔは、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２基を表し、
Ｒは、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、特にメトキシ基または−ＯＳＯ３−基を表し、
Ｒ１は、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、特にメトキシ基または−ＯＳＯ３−基を表し、
Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基または−ＯＳＯ３−基を表し、
Ｒ３は、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、特にメトキシ基もしくは−ＯＳＯ３−基を表し、またはＲ３は、−Ｏ−ＣＨ２−架橋を構成し、−ＣＨ２−基は、同一環上のカルボキシル官能基を担持する炭素原子に結合しており、
Ｐｅは、以下の式の糖鎖：
【化２】
2012500885.tif 000008
を表す。］。
【請求項２】
Ｒが、メトキシ基または−ＯＳＯ３−基を表し、
Ｒ１が、メトキシ基を表し、
Ｒ２が、−ＯＳＯ３−基を表し、および
Ｒ３が、メトキシ基を表す、
請求項１に記載の十六糖。
【請求項３】
以下から選択される、請求項１または２に記載の十六糖：
メチル（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）］３−（２−［Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）］−２−デオキシ−３−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−３−Ｏ−メチル−２，６−ジ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドナトリウム塩、
メチル（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）］３−（２−［Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）］−２−デオキシ−３−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドナトリウム塩。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか一項に記載の十六糖を含むことを特徴とする医薬品。
【請求項５】
活性成分として、請求項１から３のいずれか一項に記載の十六糖を含有し、および１種以上の好適な不活性賦形剤をも含有する医薬組成物。
【請求項６】
心血管および脳血管系障害の間に生じる凝固系の恒常性の変化に続く病態、例えば、アテローム性動脈硬化症および糖尿病に伴う血栓塞栓障害、例えば、不安定狭心症、卒中、血管形成術後の再狭窄、動脈内膜摘除術、血管内プロテーゼ挿入；または血栓崩壊後の再血栓症、梗塞、虚血由来の認知症、末梢動脈障害、血液透析、心房細動に伴う血栓塞栓障害、血管プロテーゼを大動脈冠状動脈バイパス術に使用する間の血栓塞栓障害の治療および予防用の医薬品を調製するための、静脈由来の血栓塞栓病態、例えば、肺塞栓症および深部静脈血栓症の治療または予防における、外科的手術後に観察される血栓合併症、腫瘍の増殖または細菌性、ウイルス性もしくは酵素的活性化因子により誘発される凝固異常を予防または治療するための、請求項１から３のいずれか一項に記載の十六糖の使用。
【請求項７】
プロテーゼを被覆するための、請求項１から３のいずれか一項に記載の十六糖の使用。
【請求項８】
有孔バルーンを用いて実施される動脈内膜摘除術中の補助剤としての、請求項１から３のいずれか一項に記載の十六糖の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミノ鎖との共有結合を少なくとも１個有し、ヘパリンの抗凝固および抗トロンビン薬理活性を有する新規な合成十六糖に関する。
【背景技術】
【０００２】
特許出願ＷＯ２００６／０３０１０４は、ビオチン（ヘキサヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−ペンタン酸）またはビオチン誘導体との共有結合を有する合成十六糖を記載している。このような十六糖は抗トロンビン活性を有し、この活性によりこの十六糖が抗凝固剤として使用可能になり、さらに十六糖は、急を要する状況において特定の解毒薬により迅速に中和することができるという利点を有する。この特定の解毒薬は、アビジン（Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，Ｔｗｅｌｆｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９６，Ｍ．Ｎ．９２０，ｐａｇｅｓ１５１−１５２）またはストレプトアビジンであり、これらは、それぞれの質量が約６６０００および６００００Ｄａである２種の４量体タンパク質であり、ビオチンに対して極めて強力なアフィニティーを有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２００６／０３０１０４号
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，Ｔｗｅｌｆｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９６，Ｍ．Ｎ．９２０，ｐａｇｅｓ１５１−１５２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
特許出願ＷＯ２００６／０３０１０４に記載の構造と類似の構造を有するが、ビオチンとの共有結合に代えて、アミノ鎖を有する新規な十六糖化合物を目下同定した。この新規な糖は、有利には、上記特許出願に記載の糖と比肩する抗トロンビン特性を有する。
【０００６】
従って、一般に、本発明は、式−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２のアミノ鎖との共有結合を少なくとも１個有する、抗トロンビン活性を有する合成十六糖に関する。
【０００７】
特に、本発明の対象は、式（Ｉ）の十六糖およびそれらの医薬的に許容される塩：
【０００８】
【化１】
2012500885.tif 000002
［式中、
Ｔは、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２基を表し、
Ｒは、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、特にメトキシ基または−ＯＳＯ３−基を表し、
Ｒ１は、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、特にメトキシ基または−ＯＳＯ３−基を表し、
Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基または−ＯＳＯ３−基を表し、
Ｒ３は、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、特にメトキシ基もしくは−ＯＳＯ３−基を表し、またはＲ３は、−Ｏ−ＣＨ２−架橋を構成し、−ＣＨ２−基は、同一環上のカルボキシル官能基を担持する炭素原子に結合しており、
Ｐｅは、以下の式の糖鎖：
【０００９】
【化２】
2012500885.tif 000003
を表す。］である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
多糖部分は、非荷電および／または部分荷電および／または完全荷電のアルキル化単糖単位から構成される。荷電または非荷電の単位は、鎖にわたって分散していてよく、またはこれらの単位は、対照的に、荷電または非荷電の糖ドメイン中に集まっていてよい。
【００１１】
本明細書において、Ｌ−イズロン酸について１Ｃ４立体配座を、Ｄ−グルクロン酸について４Ｃ１立体配座を表すことが選択されているが、一般に、単糖単位の溶液中での立体配座が変動することは共通の認識である。従って、Ｌ−イズロン酸は、４Ｃ１２Ｓ０または４Ｃ１立体配座のものであり得る。
【００１２】
本発明は、酸形態の十六糖またはそれらの医薬的に許容される塩のいずれか１種の形態の十六糖を包含する。酸形態において、−ＣＯＯ−および−ＳＯ３−官能基は、それぞれ、−ＣＯＯＨおよび−ＳＯ３Ｈ形態である。
【００１３】
表現「本発明の多糖の医薬的に許容される塩」は、−ＣＯＯ−および／または−ＳＯ３−官能基の１種以上が医薬的に許容される陽イオンにイオン結合している多糖を意味するものとする。本発明による好ましい塩は、陽イオンがアルカリ金属陽イオンから選択される塩であり、よりいっそう好ましくは、陽イオンがＮａ＋またはＫ＋である塩である。
【００１４】
上記式（Ｉ）の化合物は、１個以上の水素または炭素原子がこれらの放射性同位体、例えば、トリチウムまたは炭素Ｃ１４により置き換えられた化合物も含む。このような標識化合物は、研究、代謝もしくは薬物動態実験、または生化学試験においてリガンドとして使用される。
【００１５】
本発明に関して、用語「（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基」は、−Ｏ−アルキル基を意味するものとし、アルキル基は、１から６個の炭素原子鎖を有する直鎖または分枝鎖の飽和脂肪族基である。アルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチル基を挙げることができる。（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基の例として、メトキシまたはエトキシ基を挙げることができる。
【００１６】
本発明の別の態様によれば、本発明は、
Ｒが、メトキシ基または−ＯＳＯ３−基を表し、
Ｒ１が、メトキシ基を表し、
Ｒ２が、−ＯＳＯ３−基を表し、および
Ｒ３が、メトキシ基を表す、
一般式（Ｉ）のビオチン化十六糖に関する。
【００１７】
本発明の別の態様によれば、本発明は、以下の十六糖に関する：
メチル（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）］３−（２−［Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）］−２−デオキシ−３−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−３−Ｏ−メチル−２，６−ジ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドナトリウム塩、
メチル（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）］３−（２−［Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）］−２−デオキシ−３−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドナトリウム塩。
【００１８】
原則として、本発明による化合物を調製する方法は、文献中で既に報告されている通り調製された二糖またはオリゴ糖ベースシントンを使用する。特に、特許または特許出願ＥＰ０３０００９９、ＥＰ０５２９７１５、ＥＰ０６２１２８２およびＥＰ０６４９８５４、ならびに文献Ｃ．ｖａｎ  Ｂｏｅｃｋｅｌ，Ｍ．Ｐｅｔｉｔｏｕ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，（１９９３），３２，ｐｐ．１６７１−１６９０も参照される。次いで、これらのシントンを互いにカップリングして本発明による十六糖の完全に保護されている等価物を提供する。次いで、この保護されている等価物を本発明による化合物に変換する。
【００１９】
上記ベースシントンの１種は、特に、−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２基の後続の導入（−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２鎖を十六糖上に形成するため）を可能にするよう保護されている特定の官能基、例えば、アジド基形態の、またはＮ−フタルイミド形態で保護されている潜在的なアミン官能基を含有する。
【００２０】
上記カップリング反応において、「供与体」の二糖またはオリゴ糖は、これらのアノマー炭素上で活性化されており、遊離ヒドロキシルを有する「受容体」の二糖またはオリゴ糖と反応する。
【００２１】
本発明は、式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、
第１の工程において、特に、−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２基の後続の導入のために好適に保護されているアミン官能基を担持する保護されている五糖前駆体を含有する、所望の式（Ｉ）の十六糖の完全に保護されている等価物を得（この保護されている五糖前駆体自体は、多糖ドメインＰｅの保護されている前駆体により伸長している。）；
第２の工程において、負に荷電している基を導入し、および／または脱マスク化し；
第３の工程において、十六糖上のアミン官能基を脱保護し、次いで保護されている−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２基を導入し；
第４の工程において、末端ＮＨ２基を脱マスク化する
ことを特徴とする方法に関する。
【００２２】
−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２基がグラフト化される五糖の合成は、特に、特許出願：ＷＯ９８／０３５５４およびＷＯ９９／３６４４３、ならびに多糖に関する文献に記載の方法によっても実施することができる。
【００２３】
Ｐｅの前駆体である多糖部分は、オリゴ糖合成法を使用して当業者に周知の反応により、合成する（Ｇ．Ｊ．Ｂｏｏｎｓ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，（１９９６），５２，ｐｐ．１０９５−１１２１、ＷＯ９８／０３５５４およびＷＯ９９／３６４４３）。典型的には、グリコシド連結供与体オリゴ糖は、グリコシド連結受容体オリゴ糖とカップリングし、サイズが２種の反応種のサイズの合計に等しい別のオリゴ糖を生成する。この順序は、所望の式（Ｉ）の化合物が得られるまで繰り返す。所望の最終化合物の性質および荷電プロファイルは、当業者に周知の規則に従って、合成の種々の工程において使用される化学成分の性質を決定する。例えば、Ｃ．ｖａｎ  Ｂｏｅｃｋｅｌ，Ｍ．Ｐｅｔｉｔｏｕ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，（１９９３），３２，ｐｐ．１６７１−１６９０、またはＨ．Ｐａｕｌｓｅｎ，「Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ」Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，（１９８２），２１，ｐｐ．１５５−１７３を参照することができる。
【００２４】
本発明の化合物は、以下の一連の反応を使用して、完全に保護されているこの多糖前駆体から得る：
Ｏ−スルホ基に変換しなければならないアルコール官能基およびカルボン酸を、骨格生成の間に使用される保護基を除去することにより脱保護し、
次いで、スルホ基を導入し、
−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２基の導入を可能にする十六糖のアミン官能基を脱保護し、
好適に保護されている−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２基を慣用のアミノ／酸カップリング反応により導入し、次いで、
末端−ＮＨ２基を脱マスク化する。
【００２５】
本発明の化合物は、オリゴ糖合成分野の当業者に公知の種々の方策を使用して、容易に調製することができる。
【００２６】
上記方法は、本発明の好ましい方法である。しかしながら、式（Ｉ）の化合物は、例えば、「Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，Ｔｈｅｉｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｏｌｅｓ  ｉｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ」，Ｐ．Ｍ．Ｃｏｌｌｉｎｓ  ａｎｄ  Ｒ．Ｊ．Ｆｅｒｒｉｅｒ，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，（１９９５）ａｎｄ  Ｇ．Ｊ．Ｂｏｏｎｓ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，（１９９６），５２，ｐ．１０９５−１１２１に記載の、糖化学において周知の他の方法により調製することができる。
【００２７】
従って、Ｐｅ五糖は、Ｃ．ｖａｎ  Ｂｏｅｃｋｅｌ，Ｍ．Ｐｅｔｉｔｏｕによる刊行物Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，（１９９３），３２，１６７１−１６９０に記載の様式において、二糖シントンから得ることができる。
【００２８】
一般に、式Ｉの化合物を調製する方法において使用される保護基は、例えば、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，（１９８１），ＴＷ  Ｇｒｅｅｎｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載の、糖化学において一般に使用される保護基である。保護基は、例えば、アセチル、ハロメチル、ベンゾイル、レブリニル  ベンジル、置換ベンジル、場合により置換されているトリチル、テトラヒドロピラニル、アリル、ペンタニル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ｔＢＤＭＳ）またはトリメチルシリルエチル基から選択することができる。
【００２９】
活性化基は、例えば、Ｇ．Ｊ．Ｂｏｏｎｓ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，（１９９６），５２，ｐｐ．１０９５−１１２１により、糖化学において慣用に使用される活性化基である。この活性基は、例えば、イミダート、チオグリコシド、ペンテニルグリコシド、キサンタート、ホスファイトまたはハロゲン化物から選択される。
【００３０】
特に、上記方法による十六糖の遊離アミン官能基上への−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２基の導入は、Ａｃｔ−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ−Ｐｇタイプ（「Ａｃｔ」は、酸官能基活性化基（例えば、イミド、例えば、スクシンイミド誘導体、もしくは混合酸無水物、またはアミノ／酸カップリング反応のためのペプチド化学において公知の任意の他の活性化剤）を表し、「Ｐｇ」は、アミン官能基保護基（例えば、ベンジルオキシカルボニル基）を表す。）の反応物質を使用して実施することができる。
【００３１】
上記の方法により、本発明の化合物を塩の形態で得ることができる。対応する酸を得るため、塩形態の本発明の化合物を酸形態の陽イオン交換樹脂に接触させる。次いで、酸形態の本発明の化合物を塩基により中和して所望の塩を得ることができる。式（Ｉ）の化合物の塩を調製するため、式（Ｉ）の化合物と医薬的に許容される塩を与える任意の無機または有機塩基を使用することができる。水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムまたは水酸化マグネシウムが、塩基として好ましく使用される。式（Ｉ）の化合物のナトリウムおよびカルシウム塩が、好ましい塩である。
【００３２】
本発明は、本発明による化合物の調製に関する以下の詳細な実施例によって、より明確に理解されたい。これらの実施例は、本発明を限定するものではなく、説明するものにすぎない。
【実施例１】
【００３３】
化合物１の調製
メチル（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）］３−（２−［Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）］−２−デオキシ−３−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−３−Ｏ−メチル−２，６−ジ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドナトリウム塩
【００３４】
１．１：スクシンイミジル６−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）ヘキサノアートの調製
トリエチルアミン（０．６３ｍｌ、４．５２ｍｍｏｌ）を、６−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）ヘキサン酸（１．００ｇ、３．７７ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２０ｍｌ）中溶液に添加し、混合物を周囲温度においてアルゴン下で３０分間撹拌しておく。溶液を０℃に冷却し、クロロギ酸エチル（０．４３ｍｌ、４．５２ｍｍｏｌ）を滴加する。周囲温度において２時間後、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．５２ｇ、４．５２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を周囲温度において一晩撹拌しておく。混合物を蒸発乾固させてから、残留物を水中に取り、この水に酢酸エチルを添加する。相を分離し、水相を酢酸エチルにより抽出する。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムにより脱水し、濾過し、蒸発乾固させてからシリカゲルカラム上で溶出剤としての酢酸エチル／ペンタン混合物（７５／２５ｖ／ｖ）により精製する。画分を１回蒸発させ、１．１３ｇのスクシンイミジル６（ベンジルオキシカルボニルアミノ）ヘキサノアートを油状物の形態で生じさせる。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２２、シリカゲルプレート上、溶出剤としてｎ−ヘプタン／酢酸エチル混合物（３０／７０ｖ／ｖ）。
【００３５】
１．２：化合物１’の調製
アミン鎖を、特許出願ＷＯ２００６／０３０１０４に調製が記載されている十六糖４３、またはメチル（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）］３−（２−アミノ−２−デオキシ−３−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドナトリウム塩上にグラフト化する。
【００３６】
化合物４３（２００ｍｇ、４０．６μｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）および水（０．５ｍｌ）の混合物中で溶解させる。スクシンイミジル６−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）ヘキサノアート（６６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．７ｍｌ）中溶液をこの混合物に滴加する。周囲温度において４８時間撹拌した後、反応容量を、真空下で蒸発することにより１ｍｌに減らし、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３０ｍｌ）に滴加する。懸濁液を１時間撹拌し、濾過して化合物１’に対応する固体生成物（１９０ｍｇ）を生じさせる。この生成物は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２基のアミン官能基がベンジルオキシカルボニル基により保護されている化合物１である。
【００３７】
重水素化水中での２００ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ：得られたスペクトルが特許出願ＷＯ２００６／０３０１０４の実施例２により合成された生成物のスペクトルと同一であり、ビオチン部分の原子に起因するシグナルは有さないが、ベンジルオキシ基に起因する５．２から５．３および７．４から７．５ｐｐｍのシグナルを有するという事実から、予期生成物の構造を確認する。
【００３８】
１．３：化合物１の調製
前工程の終了時に得られた生成物１’（１９０ｍｇ）を、重水素化水（６ｍｌ）中で溶解させる。３０％炭素上パラジウム（１９ｍｇ）を添加し、溶液を周囲温度において水素雰囲気下で３６時間撹拌しておく。濾過した後、溶液を３０ｍｌのｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルに滴加し、懸濁液を１時間撹拌し、濾過して１４０ｍｇの化合物１を生じさせる。
【００３９】
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８、シリカゲル上、ニトリル相がグラフト化しているＭｅｒｃｋ製ＨＰＴＬＣプレートを使用、アセトニトリル／水／エタノール溶出剤［５／４／１（ｖ／ｖ／ｖ）］。
【００４０】
全反射法による固体についての赤外線：９９８．２８；１０２６．３０；１２２７．３７；１６３０．２５；２９４２．２５；３４７２．２０ｃｍ−１。
【００４１】
重水素化水中での６００ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ：得られたスペクトルが特許出願ＷＯ２００６／０３０１０４の実施例２により合成された生成物のスペクトルと同一であり、ビオチン部分の原子に起因するシグナルは有さないという事実から、予期生成物の構造を確認する。
【実施例２】
【００４２】
化合物２の調製
メチル（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）］３−（２−［Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）］−２−デオキシ−３−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−３−Ｏ−メチル−２，６−ジ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドナトリウム塩
【００４３】
実施例１に記載の方法を、特許出願ＷＯ２００６／０３０１０４に調製が記載されている十六糖４２、またはメチル（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）］３−（２−アミノ−２−デオキシ−３−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラノシルウロン酸）−（１→４）−３−Ｏ−メチル−２，６−ジ−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドナトリウム塩から出発して実施した。１０９ｍｇの化合物２を得た。
【００４４】
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８、シリカゲル上、ニトリル相がグラフト化しているＭｅｒｃｋ製ＨＰＴＬＣプレートを使用、アセトニトリル／水／エタノール溶出剤［５／４／１（ｖ／ｖ／ｖ）］。
【００４５】
全反射法による固体についての赤外線：９９７．７９；１０２５．９９；１２２６．９７；１６３４．３７；２９３７．９４；３４６８．９２ｃｍ−１。
【００４６】
重水素化水中での６００ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ：得られたスペクトルが特許出願ＷＯ２００６／０３０１０４の実施例１により合成された生成物のスペクトルと同一であり、ビオチン部分の原子に起因するシグナルは有さないという事実から、予期生成物の構造を確認する。
【００４７】
【化３】
2012500885.tif 000004
【００４８】
【化４】
2012500885.tif 000005
【００４９】
【化５】
2012500885.tif 000006
【００５０】
本発明による化合物を、生化学的および薬理学的実験の対象とした。
【００５１】
これらの生成物の薬理学的活性を、特に、Ｊ．−Ｍ．Ｈｅｒｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１９９８，９１，４１９７−４２０５に記載の通り、アンチトロンビンの存在下でＸａ凝固因子の阻害のインビトロモデルにおいて実験した（アンチトロンビンの存在に依存する抗Ｘａ因子活性）。このモデルにおいて、本発明による化合物の抗トロンビン特性が確認される。
【００５２】
本発明のオリゴ糖の生化学的および医薬的活性により、本発明のオリゴ糖は、極めて有利な医薬品を構成する。本発明のオリゴ糖の毒性は、この使用と完全な適合性を示す。本発明のオリゴ糖はまた、極めて安定であり、従って、特許医薬の活性成分を構成するのに特に好適である。
【００５３】
本発明のオリゴ糖は、特に、心血管および脳血管系障害の間に生じる凝固系の恒常性の変化に続く種々の病態、例えば、アテローム性動脈硬化症および糖尿病に伴う血栓塞栓障害、例えば、不安定狭心症、卒中、血管形成術後の再狭窄、動脈内膜摘除術、血管内プロテーゼ挿入；または血栓溶解後の再血栓症（ｒｅｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）、梗塞、虚血由来の認知症、末梢動脈障害、血液透析、心房細動に伴う血栓塞栓障害、または血管プロテーゼを大動脈冠状動脈バイパス術に使用する間の血栓塞栓障害において使用することができる。本発明の生成物は、さらに、静脈由来の血栓塞栓病態、例えば、肺塞栓症および深部静脈血栓症の治療または予防に使用することができる。本発明の生成物は、例えば、外科的手術後に観察される血症合併症、腫瘍の増殖または細菌性、ウイルス性もしくは酵素的活性化因子により誘発される凝固異常を予防または治療するために使用することができる。本発明の化合物をプロテーゼの挿入の間に使用する場合、本発明の化合物はプロテーゼを被覆することができ、従って、プロテーゼを血液適合性にすることができる。特に、本発明の化合物は、血管内プロテーゼ（ステント）に付着させることができる。この場合、本発明の化合物は、ＥＰ６４９８５４に記載の通り、適切なアームを非還元または還元末端に導入することにより、場合により化学的に改変することができる。本発明の化合物は、有孔バルーンにより実施される動脈内膜摘除術中の補助剤として使用することもできる。
【００５４】
本発明による化合物は、上記疾患治療用の医薬品の調製において使用することができる。
【００５５】
従って、本発明の別の態様によれば、本発明の主題は、活性成分として、本発明による合成多糖またはそれらの医薬的に許容されるこの塩を、１種以上の好適な不活性賦形剤と場合により組み合わせて含有する医薬組成物である。
【００５６】
前記賦形剤は、所望の医薬形態および投与方式：経口、舌下、皮下、筋肉内、静脈内、経皮、経粘膜、局所または直腸に従って選択される。
【００５７】
活性成分はシクロデキストリン、例えば、α−、β−またはγ−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンまたはメチル−β−シクロデキストリンとの複合体の形態で提供することもできる。
【００５８】
活性成分は、活性成分を含有するバルーンにより、または血管中に挿入される血管内拡張器によっても放出させることができる。従って、活性成分の薬理学的効力は影響を受けない。
【００５９】
各投与単位において、活性成分は、所望の予防または治療効果を得るのに好適な量で存在する。各投与単位は、０．１から１００ｍｇの活性成分、好ましくは０．５から５０ｍｇの活性成分を含有することができる。
【００６０】
本発明による化合物は、所望の治療に使用される１種以上の他の活性成分、例えば、抗血栓薬、抗凝固薬、血小板凝集阻害剤など、例えば、ジピリダモール、アスピリン、チクロピジン、クロピドグレル、またはグリコプロテインＩＩｂ／ＩＩＩａ複合アンタゴニストと組み合わせて使用することもできる。
【国際調査報告】
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