(57)【要約】  本発明は、医薬物質ボセンタンおよび関連物質の新規なＨＰＬＣ分析方法に関し、ならびに参照スタンダードまたはマーカーとしての当該物質の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学名Ｎ−［６−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）−５−ヒドロキシ−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミドと構造：
【化１】
2012507497.tif 000013
を有する化合物Ａ。
【請求項２】
化学名Ｎ−［６−（エテン−１−オキシ）−５−ヒドロキシ−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミドと構造：
【化２】
2012507497.tif 000014
を有する化合物Ｂ。
【請求項３】
化学名Ｎ−［６−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミドと構造：
【化３】
2012507497.tif 000015
を有する化合物Ｃ。
【請求項４】
化学名Ｎ−［６−ヒドロキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミドと構造：
【化４】
2012507497.tif 000016
を有する化合物Ｄ。
【請求項５】
化学名Ｎ−［６−（エテン−１−オキシ）−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミドと構造：
【化５】
2012507497.tif 000017
を有する化合物Ｅ。
【請求項６】
単離された形態の、請求項１〜５のいずれか記載の化合物。
【請求項７】
実質的に純粋な形態である、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
約９０％を超える純度を有する、請求項６または７記載の化合物。
【請求項９】
ボセンタンのサンプルまたはボセンタンを含有する医薬投与形態の純度の試験における、参照マーカーまたは参照スタンダードとしての使用のための、請求項１〜８のいずれか記載の化合物。
【請求項１０】
ボセンタンのサンプルまたはボセンタンを含有する医薬投与形態の純度の試験における、参照マーカーまたは参照スタンダードとしての、請求項１〜９のいずれか記載の化合物の使用。
【請求項１１】
請求項９もしくは１０記載の参照マーカーまたは参照スタンダードを用いて、サンプル中の化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上の存在を測定することを含む、ボセンタンのサンプルの純度のクロマトグラフィー試験方法。
【請求項１２】
以下の工程：
（ａ）ボセンタンのサンプルまたはボセンタンを含有する投与形態を溶媒に溶解して、サンプル溶液を作成する工程；
（ｂ）請求項１〜９のいずれか記載の化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上のサンプルを溶媒に溶解して、参照マーカー溶液を作成する工程；
（ｃ）サンプル溶液および参照溶液をクロマトグラフィー技術にかける工程；ならびに
（ｄ）参照溶液に存在する既知化合物の存在を参考にして、化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上の存在を測定する工程を含む、
ボセンタンを含むサンプルの中の化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上の存在を測定することによる、移動相と固定相を含む、ボセンタンのサンプルの純度のクロマトグラフィー試験方法。
【請求項１３】
方法が、ＨＰＬＣ方法またはグラジエントＨＰＬＣ方法である、請求項１１または１２記載の方法。
【請求項１４】
用いられる固定相が、
（ａ）逆相；および／または
（ｂ）オクタデシルシリルシリカゲルまたはオクチルシリルシリカゲルである、
請求項１１〜１３のいずれか記載の方法。
【請求項１５】
移動相が、緩衝液（Ａ）と有機溶媒（Ｂ）との混合物を含む、請求項１１〜１４のいずれか記載の方法。
【請求項１６】
緩衝液（Ａ）が、
（ａ）水性緩衝液である；および／または
（ｂ）リン酸塩、酢酸塩、ギ酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩またはこれらの混合物の水溶液である；および／または
（ｃ）酢酸塩の水溶液である；および／または
（ｄ）酢酸アンモニウムの水溶液である；および／または
（ｅ）酢酸アンモニウムの濃度が０．０１Ｍ〜１．０Ｍの間である酢酸アンモニウムの水溶液である、
請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
有機溶媒（Ｂ）が、
（ａ）極性プロトン性溶媒または二極性非プロトン性溶媒である；および／または
（ｂ）メタノール、アセトニトリル、プロパノールもしくはイソプロパノールまたはこれらの混合物を含む群から選択される；および／または
（ｃ）アセトニトリルもしくはメタノールまたはこれらの混合物を含む、
請求項１５または１６記載の方法。
【請求項１８】
移動相が、酢酸アンモニウム（Ａ）とアセトニトリル（Ｂ）との混合物を含む、請求項１５〜１７のいずれか記載の方法。
【請求項１９】
移動相が、以下のグラジエントプログラム
【表１】
2012507497.tif 000018
を含む、請求項１５〜１８のいずれか記載の方法。
【請求項２０】
移動相が、
（ａ）酢酸アンモニウムを緩衝液（Ａ）として含む；および／または
（ｂ）アセトニトリルを有機溶媒（Ｂ）として含む、
請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
緩衝液（Ａ）のｐＨが約２〜６である、請求項１５〜２０のいずれか記載の方法。
【請求項２２】
クロマトグラフィーが約１５〜４０℃の間の温度で実施される、請求項１１〜２１のいずれか記載の方法。
【請求項２３】
（ａ）化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上を測定する；および／または
（ｂ）化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上を測定し、定量する；および／または
（ｃ）一回流して、化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上を測定し、定量する、
ための、請求項１１〜２２のいずれか記載の方法。
【請求項２４】
試験されるべきボセンタンのサンプルが、
（ａ）ボセンタンＡＰＩ；または
（ｂ）ボセンタンを含有する投与形態；または
（ｃ）ボセンタンの塩および／または溶媒和物；または
（ｄ）ボセンタンの塩および／または溶媒和物を含有する投与形態である、
請求項１１〜２３のいずれか記載の方法。
【請求項２５】
試験されたボセンタンが、医薬組成物への使用のためのものである、請求項１１〜２４のいずれか記載の方法。
【請求項２６】
請求項１１〜２５のいずれか記載の方法にかけられたボセンタン。
【請求項２７】
請求項１〜５に記載の化合物Ａ〜Ｅの１つ、２つ、３つ、４つまたは５つすべてを実質的に含まない、請求項２６記載のボセンタン。
【請求項２８】
請求項１〜５に記載の化合物Ａ〜Ｅの１つ、２つ、３つ、４つまたは５つすべてを実質的に含まない、ボセンタン。
【請求項２９】
請求項２６〜２８のいずれか記載のボセンタンを含有する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬物質ボセンタンおよび関連物質の新規なＨＰＬＣ分析方法に関し、ならびに参照スタンダードまたはマーカーとしての当該物質の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬製品の販売承認を確保するために、製造者は適正な規制当局に対して、その製品が市場に販売されるに相応しいことを証明するための詳細な証拠を提出しなければならない。従って、その製品がヒトへの投与に許容できること、販売されることになる特定の医薬組成物が医薬を放出する時点で不純物を含まないこと、およびその製品が許容できる保存安定性を有することを、規制当局に満足させることが、必要である。
【０００３】
規制当局への提出には、製造の時点で活性医薬成分（ＡＰＩ）に不純物が存在しないか、または許容できるレベルであること、および医薬組成物の保存安定性が許容できることを証明する、分析データを含めなければならない。
【０００４】
ＡＰＩおよび医薬組成物の中にありそうな不純物としては、残存量の合成前駆体（中間体）、ＡＰＩの合成中で生じる副生成物、残存溶媒、ＡＰＩの異性体（例えば、幾何異性体、ジアステレオマーまたは鏡像異性体）、ＡＰＩの合成もしくは医薬組成物の調製で用いる材料に含まれる混入物、および不明な偶発的な物質が含まれる。保存中の生じうる他の不純物としては、加水分解または酸化で生成される物等のＡＰＩの分解物が含まれる。
【０００５】
厚生当局は厳格なスタンダードを有しており、製造者は、その製品が相対的に不純物を含まない、または許容される限度以下であること、および製造される医薬組成物の各々のバッチでこれらのスタンダードが再現できることを、証明しなければならない。
【０００６】
ＡＰＩまたは医薬組成物が安全および有効であることを聡明するのに必要な試験には、純度測定試験、関連物質試験、含量均一性試験、および溶解試験が含まれる。純度測定試験は、純度が知られたスタンダードと比較して試験製品の純度を測定し、また関連物質試験は、製品に存在するすべての不純物を定量するのに用いられる。含量均一性試験は、錠剤のような製品のバッチが、ＡＰＩを均一の量を含んでいることを確認し、また溶解試験は、製品の各々のバッチがＡＰＩの一貫性のある溶解性と放出性を有することを確認する。
【０００７】
ＡＰＩまたは医薬組成物（例えば、錠剤およびカプセル剤）の分析のための選択される技術は、通常、検出器を伴った高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である。検出器には、紫外・可視吸光光度検出器または質量分析（ＭＳ）検出器が含まれる。ＡＰＩおよび存在する不純物（もし、あれば）はＨＰＬＣの固定相上で分離されて、それらは該検出器で検出され、定量することができる。
【０００８】
ＨＰＬＣはクロマトグラフィー分離技術であり、本技術では、高圧ポンプが分析される物質または混合物を液体溶媒−溶出液とも呼ばれる移動相−と共に、固定相を含む分離カラムを通して流しだす。
【０００９】
ＨＰＬＣ分析は、均一系またはグラジエント系で行うことができる。均一系の場合、移動相の組成は一貫して一定である。グラジエントＨＰＬＣ分離は、移動相を形成する２またはそれ以上の溶媒のパーセンテージを一定時間に亘って徐々に変化させることで実施される。溶媒の変化は、カラム通過の前に溶媒を混合して移動相を作る混合器で制御される。
【００１０】
物質が固定相と強く相互作用すれば、相対的に長時間、カラム中に留まり、他方、強くは固定相に相互作用しない物質は、より早くカラムから流出する。被検物の様々な成分は、相互作用の強さに応じて異なった時間に分離カラムの末端に現れ、それらは紫外検出器等の適した検出器の手段で検出し、定量することができる。
【００１１】
ボセンタンは高度に置換されたピリミジンの種類に属し、エンドセリンの活動を遮断することで、肺動脈高血圧の治療に用いられる。
【００１２】
ボセンタンは、構造式（Ｉ）で示される化学構造式を有し、分子量が５５１．６１５であり、その分子式はＣ２７Ｈ２９Ｎ５Ｏ６Ｓである。ボセンタンは白色〜やや黄色がかった白色の粉末であり、アセトニトリルに自由に溶解する。
【００１３】
【化１】
2012507497.tif 000002
【００１４】
先行技術は、ボセンタンの合成の間に得られる、３つの製法不純物Ｒｏ ４７−０００５、Ｒｏ ４７−４０５６およびＲｏ ４７−９９３１を開示する（ＥＭＥＡ２００５）。しかし、３つの不純物の構造は記載されていなかった。さらに、同報告書は、３つの代謝体：Ｒｏ ４８−５０３３（tert−ブチル基の水酸化物）、Ｒｏ ４７−８６３４（フェノールフリーの代謝体）およびＲｏ ６４−１０５６（フェノールフリーであり、tert−ブチル基が水酸化された２次代謝体）をも記載する。
【００１５】
これら不純物を測定するいくつかのＨＰＬＣ方法が、文献、例えば：（１）「心血管薬ボセンタンの生分析方法の発展」 Chromatographia, vol. 55, pages S115-S119, 2002；および（２）「狭口径液体クロマトグラフィーとイオンスプレータンデム質量分析による、エンドセリン受容体拮抗薬のヒト血漿中の測定」 J. Chromatography A, vol. 712, pages 75-83, 1995に、報告されている。これらの刊行物は、酢酸アンモニウムおよびアセトニトリルの混合物と逆相クロマトグラフィー（ＲＰ−１８またはＲＰ−８）を用いる、均一系のＨＰＬＣ方法を記載する。
【００１６】
しかし、現在のＨＰＬＣ方法はいずれも、ボセンタンサンプル、特にＷＯ２００９／００４３７４およびその優先権出願ＩＮ１２４５／ＭＵＭ／２００７に記載のルート等の代替的な新規ルートで合成されたサンプルに存在する、すべての合成中間体およびその他の関連物質を測定し、定量するには、適していない。現在の方法は、ボセンタンおよびその塩の中のすべての不純物を推定するにも不十分である。
【００１７】
従って、先行文献で報告されたＨＰＬＣ方法は、ＡＰＩとしてのボセンタンおよびその塩を分析するには、特にＷＯ２００９／００４３７４およびその優先権出願ＩＮ１２４５／ＭＵＭ／２００７に記載のルートで合成されたサンプルに存在する関連物質に関して、都合が悪く、適していない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
結果として、ボセンタンおよび／またはその塩およびその不純物を分析するためのＨＰＬＣ方法がいくつか文献に報告されているが、上記の既知の方法に伴う問題点を回避する、代替方法が、依然として必要とされている。
【００１９】
本発明者らの研究によって、特に合成中に生成される関連物質に関して、新規で効率的で再現性があり単純なボセンタンのＨＰＬＣ分析方法の開発および検証が導かれた。
【００２０】
従って、本発明の目的は、先行技術の方法に伴われていた典型的な問題点を回避した、ボセンタン、その不純物および関連物質の新規で代替的な分析方法を提供することである。
【００２１】
本発明の特別の目的は、ＷＯ２００９／００４３７４およびその優先権出願ＩＮ１２４５／ＭＵＭ／２００７に開示されたルートで合成されたボセンタンおよび／またはその塩のバッチで生成され、残存している中間体および関連物質を測定および定量するための、新規で正確で高感度のＨＰＬＣ方法を提供することである。
【００２２】
さらなる目的は、ボセンタンの調製方法、特にＷＯ２００９／００４３７４およびその優先権出願ＩＮ１２４５／ＭＵＭ／２００７に開示されたルートで生成される、Ａ〜Ｅと呼ばれる不純物の測定に使用するための、参照マーカーおよび参照スタンダードを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明によって、移動相が２またはそれ以上の液体を含み、液体の相対濃度が前もって決められたグラジエントに従って変化する、ボセンタンのＨＰＬＣ分析方法が提供される。
【００２４】
本発明者らは、化合物Ａ〜Ｅと呼ばれる５つの不純物が、ボセンタンまたはボセンタンを含有する医薬投与形態の分析をするための、参照マーカーまたは参照スタンダードとして利用できることも、認識した。不純物Ａ〜Ｅは以前、先行文献には開示されたことがない。
【００２５】
従って、本発明の第一の側面によって、化学名Ｎ−［６−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）−５−ヒドロキシ−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミドと構造：
【００２６】
【化２】
2012507497.tif 000003
【００２７】
を有する化合物Ａが提供される。
第二の側面によって、化学名Ｎ−［６−（エテン−１−オキシ）−５−ヒドロキシ−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミドと構造：
【００２８】
【化３】
2012507497.tif 000004
【００２９】
を有する化合物Ｂが提供される。
第三の側面によって、化学名Ｎ−［６−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミドと構造：
【００３０】
【化４】
2012507497.tif 000005
【００３１】
を有する化合物Ｃが提供される。
第四の側面によって、化学名Ｎ−［６−ヒドロキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミドと構造：
【００３２】
【化５】
2012507497.tif 000006
【００３３】
を有する化合物Ｄが提供される。
第五の側面によって、化学名Ｎ−［６−（エテン−１−オキシ）−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミドと構造：
【００３４】
【化６】
2012507497.tif 000007
【００３５】
を有する化合物Ｅが提供される。
参照マーカーまたは参照スタンダードとしての使用に適している化合物Ａ〜Ｅは、ボセンタンの合成の間で生成される副生成物である。特に好ましい態様において、本発明の化合物Ａ〜Ｅは単離された形態である。最も好ましくは、単離された形態は、好ましくはＨＰＬＣの測定によって、好ましくは約９０％を超え、好ましくは約９５％を超え、好ましくは約９８％を超え、最も好ましくは約９９％を超える純度を有し、実質的に純粋な形態である。
【００３６】
本発明の第六の側面によって、本発明の化合物Ａ〜Ｅの１またはそれ以上の存在に対して、サンプルを測定することを含む、ボセンタンのサンプルまたはボセンタンを含有する医薬投与形態の純度の試験方法が提供される。
【００３７】
本発明の第七の側面によって、ボセンタンの当該製法不純物Ａ〜ＥのＨＰＬＣ分析方法を用いて、化合物Ａ〜Ｅを特徴付けるための方法が提供される。好ましくは、ＨＰＬＣ方法はＬＣ−ＭＳに適合する方法である。
【００３８】
従って、ボセンタンのサンプルまたはボセンタンを含有する医薬投与形態の純度の試験において、参照マーカーとしてのまたは代替的に参照スタンダードとしての、本発明の化合物Ａ〜Ｅの使用が提供される。
【００３９】
さらなる側面によって、本発明の参照マーカーまたは代替的態様において参照スタンダードを利用することによって、ボセンタンのサンプルの中の化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上の存在を測定することを含む、ボセンタンのサンプルの純度のクロマトグラフィー試験方法が提供される。
【００４０】
さらなる側面によって、以下の工程：
（ａ）ボセンタンのサンプルまたはボセンタンを含有する投与形態を溶媒に溶解して、サンプル溶液を作成する工程；
（ｂ）化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上のサンプルを溶媒に溶解して、参照マーカー溶液を作成する工程；
（ｃ）サンプル溶液および参照溶液をクロマトグラフィー技術にかける工程；ならびに
（ｄ）参照溶液に存在する既知化合物の存在を参考にして、化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上の存在を測定する工程を含む、
ボセンタンを含むサンプルの中の化合物Ａ〜Ｅのいずれか１またはそれ以上の存在を測定することによる、ボセンタンのサンプルの純度のクロマトグラフィー試験方法が提供される。
【００４１】
１つの態様において、クロマトグラフィー方法は、ＨＰＬＣ、ＬＣ−ＭＳまたはＬＣ−ＭＳ／ＭＳ等の液体クロマトグラフィー方法であり、好ましくはクロマトグラフィー方法は、ＨＰＬＣ方法、好ましくはグラジエントＨＰＬＣ方法である。代替的には、クロマトグラフィー方法は、ＧＣ−ＭＳ等のガスクロマトグラフィーであってもよい。
【００４２】
好ましくは、本発明に用いられる固定相は、逆相である。適した固定相には、オクタデシルシリルシリカゲルまたはオクチルシリルシリカゲルが含まれる。
【００４３】
本発明の好ましい態様において、移動相が緩衝液（Ａ）と有機溶媒（Ｂ）との混合物を含むグラジエントＨＰＬＣ方法が提供される。好ましくは、緩衝液（Ａ）は、水性緩衝液、好ましくはリン酸塩、酢酸塩、ギ酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩またはこれらの混合物の水溶液である。
【００４４】
より好ましくは、緩衝液（Ａ）は酢酸塩、最も好ましくは酢酸アンモニウムまたは代替的にギ酸アンモニウムの水溶液であり、特に好ましい態様において、これら酢酸塩は約０．０１Ｍ〜１．０Ｍの間の濃度で存在する。
【００４５】
本発明のさらに好ましい態様によって、有機溶媒（Ｂ）がメタノール、プロパノールもしくはイソプロパノール等の極性プロトン性溶媒、またはアセトニトリル等の二極性非プロトン性溶媒である、移動相が提供される。好ましくは、有機溶媒（Ｂ）はメタノール、アセトニトリル、プロパノールもしくはイソプロパノールまたはこれらの混合物を含む群から選択され、最も好ましくはアセトニトリルもしくは代替的にメタノールまたはこれらの混合物である。
【００４６】
特に好ましい移動相には、酢酸アンモニウム（Ａ）とアセトニトリル（Ｂ）との混合物が含まれる。
【００４７】
さらに、移動相が以下のグラジエントプログラムを含んでいる、本発明のグラジエントＨＰＬＣ方法が提供される。
【００４８】
【表１】
2012507497.tif 000008
【００４９】
移動相が酢酸アンモニウムを緩衝液（Ａ）として含む、特に好ましいグラジエントＨＰＬＣ方法も提供される。他の特に好ましい態様において、移動相は、アセトニトリルを有機溶媒（Ｂ）として含む。
【００５０】
さらに好ましい態様には、緩衝液（Ａ）のｐＨが約２〜７、好ましくは約２〜６である、ＨＰＬＣ方法が含まれる。
【００５１】
他の態様において、クロマトグラフィーは約１５〜４０℃の間の温度で実施される。
本発明のＨＰＬＣ方法は、一回流して、以下の化合物から選択される化合物を含む、すべての不純物を効率的に測定し、定量する。
【００５２】
化合物Ａ：Ｎ−［６−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）−５−ヒドロキシ−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミド。
【００５３】
化合物Ｂ：Ｎ−［６−（エテン−１−オキシ）−５−ヒドロキシ−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミド。
【００５４】
化合物Ｃ：Ｎ−［６−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミド。
【００５５】
化合物Ｄ：Ｎ−［６−ヒドロキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミド。
【００５６】
化合物Ｅ：Ｎ−［６−（エテン−１−オキシ）−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミド。
【００５７】
本発明のボセンタンの純度の試験方法で試験されるべき、ボセンタンのサンプルは、
（ａ）ボセンタンＡＰＩ；または
（ｂ）ボセンタンを含有する投与形態；または
（ｃ）ボセンタンの塩および／または溶媒和物（水和物等）；または
（ｄ）ボセンタンの塩および／または溶媒和物（水和物等）を含有する投与形態
でありうる。
【００５８】
好ましくは、本発明のボセンタンの純度の試験方法で試験されたボセンタンは、医薬組成物への使用に適している。
【００５９】
本発明のさらなる側面によって、本発明のボセンタンの純度の試験方法にかけられたボセンタンが提供される。好ましくは、ボセンタンは、化合物Ａ〜Ｅの１つ、２つ、３つ、４つまたは５つすべてを実質的に含まない。
【００６０】
本発明のさらなる側面によって、化合物Ａ〜Ｅの１つ、２つ、３つ、４つまたは５つすべてを実質的に含まないボセンタンが提供される。
【００６１】
もし、ボセンタンが化合物を、好ましくはＨＰＬＣの測定によって、約５％未満、好ましくは約３％未満、好ましくは約２％未満、好ましくは約１％未満、好ましくは約０．５％未満、好ましくは約０．１％未満、好ましくは約０．０５％未満しか含まなければ、ボセンタンはその化合物を“実質的に含まない”。
【００６２】
本発明のなおさらなる側面によって、本発明のボセンタンを含有する医薬組成物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】ウォーターズ装置で分析し、吸光度（吸光度単位（absorbance units））対時間（分）で示された、サンプルＡの分析的ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２】メルク・日立装置で分析し、電圧（ボルト）対時間（分）で示された、サンプルＢの分析的ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図３】不純物Ａ〜Ｅの構造を示す。
【図４】不純物ＡのＭＳ／ＭＳフラグメンテーションを示す。
【図５】不純物ＢのＭＳ／ＭＳフラグメンテーションを示す。
【図６】不純物ＤのＭＳ／ＭＳフラグメンテーションを示す。
【図７】不純物ＥのＭＳ／ＭＳフラグメンテーションを示す。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
ＡＰＩとしてボセンタンおよび／もしくはその塩を分析するために、または医薬組成物に製剤化されたボセンタンおよび／もしくはその塩を分析するために、本発明が用いられる。
【００６５】
本発明で分析することができる医薬組成物には、固形および液体組成物が含まれ、オプションとして、当該医薬組成物は１またはそれ以上の薬学上許容される担体または賦形剤を含有する。固形組成物には、粉剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤および分散顆粒剤が含まれる。液体組成物には、経口、注射または点滴のルートで投与されうる、液剤または懸濁剤が含まれる。
【００６６】
明細書および請求の範囲を通してここで用いられる用語“ボセンタン”は、ボセンタンおよび／またはそのいかなる塩もしくは溶媒和物（水和物を含む）を表す。本発明はボセンタン遊離塩基の分析のために特に有用である。
【００６７】
明細書を通してここで用いられる用語“不純物”または“関連物質”は、ＡＰＩもしくは医薬組成物の製造において、および／またはＡＰＩの分解によって、もしくは医薬組成物中での保存で、生成された不純物を意味しうる。
【００６８】
上述の通り、先行技術で報告のＨＰＬＣ方法は、ボセンタンの分析には、特にＷＯ２００９／００４３７４およびその優先権出願ＩＮ１２４５／ＭＵＭ／２００７（この両出願は、参照としてそれらの全体が本明細書に組み入れられる）に開示された方法で調製されたボセンタンおよび／またはその塩の合成で生成される関連化合物に関して、適していない。
【００６９】
しかし、本発明の特に好ましい態様によって、本課題が解決され、一回流して、この特別な合成方法で生成されるすべての不純物および中間体が効率的に測定され、定量される。グラジエント方法によって、すべての極性不純物から非極性不純物までが溶出されるため、本発明は有利である。
【００７０】
サンプル中の化合物または不純物Ａ〜Ｅの１またはそれ以上の存在を測定し、分析するために、本発明は特に適している。用語“不純物”および“化合物”は、それらが化合物Ａ〜Ｅに関する限り、それに相違して記載されていなければ、本明細書では互換的に使用されている。
【００７１】
本方法がボセンタンおよび／またはその塩の中の関連物質の分析のために、選択的で、高感度で、直線的で、正確で、精密で、堅牢であるため、本発明はまた有利である。加えて、本発明は、高度に高感度であり、厚生当局によっておよびＩＣＨガイドラインに規定された許容される限度よりさらに低いレベルで、ボセンタンおよび／またはその塩の中の関連物質を分析および定量する。
【００７２】
加えて、本発明の方法は、ボセンタンのサンプルの保存で生成されるすべての分解不純物を簡単に測定および定量するのに用いることができる。この方法は、ＩＣＨのＱ１Ａガイドラインによる強制分解実験の実施で立証され、特異性、直線性および範囲、精度（並行精度、再現精度および室内再現精度）、真度、検出限界（ＬＯＤ）、定量限界（ＬＯＱ）、堅牢性（Robustness）および装置適合性（System Suitability）のパラメーターをカバーするＩＣＨのＱ２Ａガイドラインによって検証された。
【００７３】
本発明者らは、ＬＣ−ＭＳおよびＬＣ−ＭＳ／ＭＳで５つの製法不純物Ａ〜Ｅを特徴付けする、新規なグラジエントＨＰＬＣ方法を開発した。当該方法は、ボセンタン合成の前駆物質、特にＷＯ２００９／００４３７４およびその優先権出願ＩＮ１２４５／ＭＵＭ／２００７に開示されたルートで合成されたボセンタンの前駆物質等の他の既存の関連化合物の存在の分析に使用するのに十分に堅牢である。不純物、前駆物質およびボセンタンの間の大きな極性の相違のために、本発明者らはグラジエントプログラムが最も適していると考えた。
【００７４】
本発明の発明者らは、新規な製法不純物Ａ〜Ｅの構造を特徴付けするために、ＬＣ−ＭＳおよびＬＣ−ＭＳ／ＭＳの技術をさらに用いた。
【００７５】
発明の実施において、本発明の発明者らは、オクタデシルシリルシリカゲル（ＲＰ−１８）またはオクチルシリルシリカゲル（ＲＰ−８）を含む固定相が、最も有利であることを見出した。特に好ましい固定相には、ウォーターズ（Waters）XTerra ＲＰ−１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ），５μ，カラムが含まれる。
【００７６】
本発明の方法は、液体ＡとＢの相対濃度が、典型的には１０〜１８０分の時間をかけて１００％Ａ：０％Ｂから０％Ａ：１００％Ｂの間でグラジエントに変化するようなグラジエントプログラムを含む。好ましくは、グラジエントは２５〜１２０分の時間をかけて１００％Ａ：０％Ｂから０％Ａ：１００％Ｂの間であり、より好ましくはグラジエントは２５〜６０分の時間をかけて１００％Ａ：０％Ｂから０％Ａ：１００％Ｂの間であり、最も好ましくはグラジエントは約４０分の時間をかけて９０％Ａ：１０％Ｂから１０％Ａ：９０％Ｂの間である。そのようなグラジエント方法の利点は、すべての極性不純物から非極性不純物までが溶出されることである。
【００７７】
用いられる移動相は、好ましくは、１またはそれ以上の緩衝液（Ａ）と、１またはそれ以上の有機溶媒（Ｂ）との混合物から選択される。
【００７８】
緩衝液は、好ましくはリン酸塩、酢酸塩、ギ酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩またはこれらの混合物の水溶液を含む群から選択される。
【００７９】
緩衝液は、０．００１〜０．１Ｍの濃度で、好ましくは０．００１〜０．０５Ｍの濃度で、より好ましくは０．００５〜０．０５Ｍの濃度で存在できる。
【００８０】
特に好ましい移動相には、酢酸アンモニウム（Ａ）とアセトニトリル（Ｂ）との混合物が含まれる。
【００８１】
本発明の特に好ましい態様において、移動相が以下のグラジエントプログラムを含んでいる、グラジエントＨＰＬＣ方法がさらに提供される。
【００８２】
【表２】
2012507497.tif 000009
【００８３】
移動相が酢酸アンモニウムを緩衝液（Ａ）として含む、特に好ましいグラジエントＨＰＬＣ方法も提供される。他の特に好ましい態様において、移動相は、アセトニトリルを有機溶媒（Ｂ）として含む。移動相が酢酸アンモニウム（Ａ）およびアセトニトリル（Ｂ）を含むとき、グラジエントプログラムが特に効率的であることを、本発明者らは見出した。
【００８４】
緩衝液（Ａ）は、メタノール、アセトニトリル、プロパノールもしくはイソプロパノールまたはそれらの混合物から選択される、１またはそれ以上の追加的な溶媒を含んでもよい。緩衝液（Ａ）における追加的な溶媒は、有機溶媒（Ｂ）と同じ溶媒であっても、なくても良い。
【００８５】
緩衝液（Ａ）のｐＨは約２〜７の間で選択される。
典型的には、本発明の方法は、約１５〜４０℃の間のカラム温度で実施される。
【００８６】
本発明のさらなる側面によって、内部参照溶液が提供される。当該参照溶液は適切な溶液に溶解した１またはそれ以上の化合物Ａ〜Ｅを含む。本発明のクロマトグラフィー技術を用いて分析されるサンプルの中に、不純物として化合物Ａ〜Ｅのいずれかの存在を測定する際に、当該参照溶液が用いられる。当該分析の方法は、当業者には明らかであろう。
【００８７】
本発明のさらなる側面によって、既知の量の１またはそれ以上の化合物Ａ〜Ｅが適切な溶液に溶解している、参照スタンダード溶液が提供される。本発明のクロマトグラフィー技術を用いて分析されるサンプルの中に、不純物として化合物Ａ〜Ｅのいずれかの存在および量を測定する際に、当該参照溶液が用いられる。当該分析の方法は、当業者には明らかであろう。
【００８８】
本発明者らは、本発明の方法を広範に試験を行い、その方法が再現性があって、正確で精密であり、濃度および堅牢さに関して直線性であることを示した。
【００８９】
本発明をその特定の態様に関して記載したが、一定の変更物および均等物は当業者に明らかであり、これらは本発明の範囲に含まれることが意図されている。
【００９０】
本発明を以下の実施例で説明するが、これらによって本発明は限定されない。
【実施例】
【００９１】
ＨＰＬＣ方法および分析：
ＨＰＬＣ分析で観察される５つの製法不純物Ａ〜Ｅが、面積標準化によって０．１％以上で見出され、ＩＣＨのＱ３Ａガイドラインにより、その確認が必要とされる。当該分析に用いられる方法は、本発明のグラジエントＨＰＬＣ方法である。用いた実験条件は以下の通りである。
【００９２】
実験条件：
カラム：ウォーターズ XTerra ＲＰ−１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ），５μ；
流速：１ｍｌ／分；
検出：２２５ｎｍ；
サンプル濃度：１０００ｐｐｍ；
希釈液：アセトニトリル；
移動相：０．０３Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（Ａ）−アセトニトリル（Ｂ）グラジエント；
グラジエントプログラムを以下に記載する。
【００９３】
【表３】
2012507497.tif 000010
【００９４】
ＭＳ：ＡＰＩ２０００トリプル四重極（Triple Quadraple）
イオン化モード：陽イオンモードおよび陰イオンモード（Positive and Negaive modes）
ボセンタンのサンプルＡおよびＢを、上記ＨＰＬＣ方法を用いたＬＣ−ＭＳで製法不純物を分析した。図１および２は、当該サンプルの分析的ＨＰＬＣクロマトグラムをそれぞれ示す。
【００９５】
面積標準化法による、各々の不純物の保持時間（ＲＴ）、相対保持時間（ＲＲＴ）および％面積、ならびに各々の不純物に対する、対応マススペクトル（ＭＳ）から測定された分子イオンおよび第２のマススペクトル（ＭＳ／ＭＳ）によるフラグメントを、表１および２に要約する。
【００９６】
【表４】
2012507497.tif 000011
【００９７】
【表５】
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【００９８】
特徴付け：
不純物Ａ〜Ｅで示されるサンプルのＨＰＬＣ分析を、マス分析を通して測定することができた。不純物および製法条件のマススペクトルで得られた分子イオンに基づいて、不純物Ａ〜Ｅの構造は、図３に示されたように確認された。
【００９９】
さらに、ボセンタンの文献（J. Am. Soc. Mass Spectrom., vol. 10(12), pages 1305-1314, 1999)）に報告されたフラグメンテーションパターンに基づいて、不純物Ａ、Ｂ、ＤおよびＥの構造が、ＭＳ／ＭＳスペクトルで観察されたフラグメントイオンを解釈することで、確認された。不純物Ａ、Ｂ、ＤおよびＥのフラグメンテーションパターンをそれぞれ図４〜７に示す。不純物Ｃの場合、ＭＳによるｍ／ｚ５９４．３（Ｍ−Ｈ）＋に観測される分子イオンピークは非常にフラグメント化したため、不純物Ｃの本来の性質によって、ＭＳ／ＭＳ実験の間のいずれのピークも情報価値がなかった。従って、不純物ＣのＭＳ／ＭＳスペクトルにおける分析フラグメントがないために、その構造を確認することができなかった。
【０１００】
不純物Ａ〜Ｅの化学名は、以下の通りである。
不純物Ａ：Ｎ−［６−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）−５−ヒドロキシ−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミド。
【０１０１】
不純物Ｂ：Ｎ−［６−（エテン−１−オキシ）−５−ヒドロキシ−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミド。
【０１０２】
不純物Ｃ：Ｎ−［６−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミド。
【０１０３】
不純物Ｄ：Ｎ−［６−ヒドロキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミド。
【０１０４】
不純物Ｅ：Ｎ−［６−（エテン−１−オキシ）−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）−ピリミジン−４−イル］−４−tert−ブチル−ベンゼンスルホンアミド。
【０１０５】
以上、本発明について説明してきたが、これは例示でしかないことが理解されるであろう。実施例は本発明の範囲を限定することを意図したものではない。さまざまな改変および態様は、以下の請求項のみによって規定される本発明の範囲および精神から逸脱せずに実現できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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