(57)【要約】  本発明は、コラーゲン生成を促進するドリコス  ビフロルス抽出物およびこの抽出物を含有する化粧品組成物に関する。さらに、この抽出物および組成物の美容目的の使用、特にコラーゲン生成の促進における使用に関する。最後に、この抽出物の調製方法およびその美容的使用を記載する。ドリコス  ビフロルス抽出物は、好ましくはアルコール抽出または水アルコール抽出により種子から作られる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚用抗老化剤としてのドリコス  ビフロルス抽出物の美容的使用。
【請求項２】
皮膚においてドリコス  ビフロルス抽出物がコラーゲン生成を促進して作用する請求項１に記載の美容的使用。
【請求項３】
コラーゲンがコラーゲンI、III、IV、V、VI、VII、XII、XIV、XVI、XVIII、XIXおよびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるコラーゲンである、請求項２に記載の美容的使用。
【請求項４】
コラーゲンがコラーゲンIおよび／またはVである、請求項２または３に記載の美容的使用。
【請求項５】
ドリコス  ビフロルス抽出物が、ＵＶ−保護因子、酸化防止剤および／または代謝促進剤として作用する、請求項１〜４のいずれかに記載の美容的使用。
【請求項６】
ドリコス  ビフロルス抽出物が、
（i）種子または種子含有植物部位の抽出物である、および／または
（ii）アルコール抽出物または水アルコール抽出物である
請求項１〜５のいずれかに記載の美容的使用。
【請求項７】
（i）種子または種子含有植物部位の抽出物である、および／または
（ii）アルコール抽出物または水アルコール抽出物である、および／または
（iii）請求項１〜５のいずれかに記載されるように作用する
ドリコス  ビフロルス抽出物。
【請求項８】
請求項７に記載のドリコス  ビフロルス抽出物を含有する化粧品組成物。
【請求項９】
請求項７に記載のドリコス  ビフロルス抽出物の製造方法であって、
完全なまたは部分的な植物ドリコス  ビフロルスを抽出する工程、好ましくはアルコール抽出または水アルコール抽出により抽出する工程を含んでなる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コラーゲン生成を促進するドリコス  ビフロルス抽出物およびこの抽出物を含有する化粧品組成物に関する。さらに、本発明はドリコス  ビフロルス抽出物の美容的目的の使用、特にコラーゲン生成促進におけるそれらの使用に関する。最後に、この抽出物の製造方法およびその美容的使用方法を記載する。ドリコス  ビフロルス抽出物は、好ましくは種子からアルコール抽出または水アルコール抽出により作られる。
【背景技術】
【０００２】
消費者が使用し得る皮膚の外観を改善するための多くの化粧品組成物が存在する。特にこれらの化粧品は、例えば皮膚の張りの減少、皮膚の厚みの減少、小皺、しわ、弾力性低下、たるみ、ターンオーバー速度の低下および異常な落屑のような皮膚老化の兆候を防止するためまたはそれに対抗するために使用される。これらの作用は、紫外線に暴露された年月、刺激物、アレルゲンおよび種々の環境有害物質により増強する。そのような化粧品組成物は、一般的に抗老化組成物といわれる。
【０００３】
皮膚は、表皮、真皮および皮下組織の三層からなる。皮膚の細胞外基質は、例えばコラーゲンまたは弾性繊維、糖タンパク質、グリコサミノグリカンおよびプロテオグリカンのような高分子の複雑な網状組織である。これらは、機械的強度を担い、細胞代謝調節に関与するための物理的骨格をもたらす。
【０００４】
真皮は、真皮乳頭層および真皮網状層の２つの異なる層からなる。真皮中の７０％を越えるタンパク質がコラーゲンである。コラーゲンは皮膚強度に関与する。コラーゲンは、真皮中に点在している繊維芽細胞と呼ばれる細胞により生成される。
【０００５】
ヒト皮膚真皮中の１つの主要なタイプのコラーゲンはI型コラーゲンであり繊維の網状組織を形成する。
【０００６】
真皮は、V型コラーゲンを含む量的には少ないコラーゲンも含む。このコラーゲンはI型コラーゲン繊維の開始およびサイズ調節において重要な役割を果たす。V型コラーゲンは、繊維形成を助けるために成長するコラーゲンI繊維の核と相互作用する。さらに、V型コラーゲンは、コラーゲン繊維の成長を制限する立体障害を誘発し、その直径を調節する。
【０００７】
いくつかの化粧成分は、V型コラーゲンにいかなる影響もなしにコラーゲンIの合成刺激を要求する。これは低品質コラーゲン繊維網状組織の形成を誘発し得る。
【０００８】
例えばIII、VI、VII、XII、XIV、XVI、XVIIIおよびXIX型コラーゲンのような他の微量コラーゲンが真皮中に存在する。全てのこれらのコラーゲンは機能的な真皮を形成するのに関与する。
【０００９】
IV型コラーゲンは、基底膜域で存在する。特に皮膚においては、真皮−表皮接合部で現れる。化粧成分によるコラーゲンIVの増加は、真皮−表皮接合部の質を効果的に改善し得る。
【００１０】
ドリコス  ビフロルス（Dolichos biflorus）はササゲ（cowpea）科に属する１種であり、Southern peaまたはItalian cowpeaとも称される。その植物学名はVigna unguiculata subsp. unguiculata cv-gr Biflora Westphalである。
【００１１】
ドリコス  ビフロルスは、薬草であり、ほふく性、つる性、または半直生から直生の一年生植物であり、長さ０．３〜４ｍに生長する。葉は、長さ５〜２５ｃｍの葉柄の、互生の三小葉である。側小葉は対生葉で非対称である一方、天葉は対称である。鞘は拡散するために垂れ下がりまたは直生であり、線形である。種子は大きさと形状において変化し、四角いものから楕円形のものがあり、様々な色を持つ（白色、茶色、栗色、クリーム色および緑色）。ドリコス  ビフロルスは、種子用および野菜としてインドおよびスリランカで栽培されている。乾燥種子は全体をまたは分割して使用する。それは優れた飼料となる。さらに、ドリコス  ビフロルスは伝統的なアユルベーダ医療において、例えば抗結石薬として用いられる。
【００１２】
ササゲ（Vigna unguiculata）は、マメ科に属するササゲ属の１種である。文献において、ササゲ種を用いるいくつかの抗老化剤が記載されているが、ドリコス  ビフロルスを使用するものはない。
【００１３】
ＷＯ２００６／０５３４１５号（Biopharmacopae）は、マトリクスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害活性を有する植物抽出物、とりわけササゲ抽出物およびその皮膚科学的使用を開示する。ＷＯ２００６／０５３４１５号において示されるＭＭＰ阻害は、皮膚の細胞外基質成分の分解の低減を導き得る。ＷＯ２００６／０５３４１５号に記載されるササゲ種は、低い、穏やかなＭＭＰ阻害しか示していない；このため、ＷＯ２００６／０５３４１５号においてササゲは、皮膚トリートメントに使用する好ましい抽出物には属していない。ＷＯ２００６／０５３４１５号に記載される好ましい抽出物は、例えば皮膚のしわおよびたるみ、照射誘導皮膚損傷のような特定の皮膚状態を治療または予防するために、あるいは日常の皮膚ケアのために用いられる。
【００１４】
ＷＯ２００５／０５８４７６号（GAT Formulation GmbH）は、化粧成分のカプセル化のためのマイクロカプセル化方法を記載する。これらの成分の１つがドリコス  ビフロルス抽出物であり得る。
【００１５】
ＷＯ０２／０５５０４９号（Cognis France & YSL Beaute）は、脱水症に対する皮膚保護のための化粧品および医薬品調製物を記載する。この調製物は、ＬＥＡタンパク質（Late Embryogenesis Abundant protein）を含む。ササゲ抽出物は、ＬＥＡタンパク質の１つの供給源として言及されている。
これらの国際特許出願は、抗老化皮膚トリートメントはもちろんのこと、皮膚トリートメント用の化粧品組成物に適する抽出物の供給源としてもドリコス  ビフロルスの種子に言及していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】国際特許出願公開第２００６／０５３４１５号明細書
【特許文献２】国際特許出願公開第２００５／０５８４７６号明細書
【特許文献３】国際特許出願公開第０２／０５５０４９号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、美容的な抗老化皮膚トリートメント用の安全な生成物（すなわち、皮膚に対して抗老化作用を有する生成物）を提供することであった。特定の目的は、皮膚における高品質コラーゲン網状組織のデノボ合成を達成するために、コラーゲン生成を促進する生成物、好ましくはコラーゲンI、コラーゲンIII、コラーゲンIV、コラーゲンV、コラーゲンVI、コラーゲンVII、コラーゲンXII、コラーゲンXIV、コラーゲンXVI、コラーゲンXVIII、コラーゲンXIX生成を促進する生成物、より好ましくはコラーゲンI生成および／またはコラーゲンV生成を促進する生成物を提供することであった。特に、例えば皮膚外観を改善するために、また、しわ、小皺、張りの減少のような皮膚の老化兆候を予防または改善するために老化した皮膚におけるコラーゲン生成促進の美容的効果が望まれている。
【００１８】
本発明の別の特定の目的は、（i）皮膚保護特性、例えば皮膚にＵＶ保護を与えるような特性、および／または（ii）エネルギー代謝を含む皮膚細胞の代謝を改善する、抗老化生成物を提供することである。本発明の以下の記載から明らかになるこれらの課題および他の課題は従属請求項に記載されるような本発明により解決される。独立請求項の発明は、好ましい実施態様に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、ドリコス  ビフロルス抽出物およびその使用、特に美容的皮膚トリートメントにおける使用に関する。
上記美容的トリートメントにおいて、ドリコス  ビフロルス抽出物は特に、皮膚ケア、皮膚保護および／または皮膚再生のために使用され、典型的には皮膚老化の兆候を予防および／または低減するために、例えば皮膚外観および／または皮膚の色合い、皮膚の張り、および／または皮膚の滑らかさを改善するため、および／または皮膚の老化兆候（例えば小皺やしわ）を改善または予防するために使用される。
【００２０】
驚くべきことに、ドリコス  ビフロルス抽出物が皮膚および皮膚細胞においてコラーゲンレベルを、特にヒト真皮繊維芽細胞により生成されるコラーゲンレベルを、特にコラーゲンIおよび／またはVのレベルを促進し得ることがわかった。これは、皮膚コラーゲン基質網状組織における有益な効果を有し得るものであり、皮膚外観、皮膚の色合い、皮膚の張り、（例えば皮膚のしわや小皺を減少させることによる）皮膚の滑らかさのような皮膚特性における有益な効果を有し得る。
【００２１】
したがって、本発明はドリコス  ビフロルス抽出物の能力に基づく１つの態様において、良好に組織された皮膚コラーゲン基質網状組織を達成するためにコラーゲン生成、好ましくはコラーゲンI、III、IV、V、VI、VII、XII、XIV、XVI、XVIIIおよび／またはXIX生成、より好ましくはコラーゲンIおよび／またはV生成、さらに好ましくはコラーゲンIとVの生成を改善することである。美容的使用において、この能力は、例えば皮膚外観を改善し、皮膚の色合いを改善し、皮膚の張りを改善し、皮膚の老化兆候に対抗し、皮膚の老化兆候を低減しまたは予防するために皮膚ケア、皮膚保護および／または皮膚再生において活用し得るものである。
【００２２】
さらに、ドリコス  ビフロルス抽出物が皮膚細胞（特に繊維芽細胞）の細胞代謝を、とりわけ（特にそのＡＴＰ合成経路を増加させることにより）そのエネルギー代謝を向上し得ることがわかった。この能力は、美容的皮膚再生、特に皮膚の再活性化においても活用し得る。
【００２３】
最後に、ドリコス  ビフロルス抽出物がＵＶ照射による損傷から皮膚細胞を保護し得ることがわかった。この能力は、美容的ＵＶ保護および光老化の兆候の予防または低減に活用し得る。
【００２４】
特に、本発明は以下の実施態様を提供する：
（１）皮膚用抗老化剤としてのドリコス  ビフロルス抽出物の美容的使用；
（２）ドリコス  ビフロルス抽出物が皮膚においてコラーゲン生成（特にコラーゲンIおよび／またはV生成）を促進して作用する（１）に記載の美容的使用；
（３）（i）種子または種子含有植物部位の抽出物である、および／または
（ii）アルコール抽出物または水アルコール抽出物である、および／または
（iii）上記（１）または（２）に記載されるように作用する
ドリコス  ビフロルス抽出物；
（４）上記（３）に記載のドリコス  ビフロルス抽出物を含む化粧品組成物；
（５）上記（３）に記載のドリコス  ビフロルス抽出物の製造方法であって、
完全なまたは部分的な植物ドリコス  ビフロルスを抽出する工程、好ましくはアルコール抽出または水アルコール抽出により抽出する工程（抽出工程）を含む方法；および
（６）上記（３）に記載のドリコス  ビフロルス抽出物または上記（４）に記載の化粧品組成物を皮膚に塗布することを含んでなる皮膚の老化兆候を改善する方法。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明は、抗老化特性、特にコラーゲン生成を促進し、ＵＶ保護を付与し、酸化防止剤として作用し、および／または皮膚または皮膚細胞の細胞代謝を促進する能力を有するドリコス  ビフロルス抽出物に関する。さらに本発明は、上記抽出物を含有する化粧品組成物に関する。上記抽出物は、好ましくは未加工のドリコス  ビフロルス植物原料、特にドリコス  ビフロルスの種子を含有する植物原料から作られる。さらに、本発明は上記ドリコス  ビフロルス抽出物または化粧用組成物の美容目的の使用、特に皮膚および／または皮膚細胞におけるコラーゲン生成の促進におけるそれらの使用に関する。
【００２６】
ドリコス  ビフロルス抽出物は、少なくとも１つの抽出工程を含む方法により調製される。好ましくは、植物原料ドリコス  ビフロルスを水抽出、アルコール抽出または水アルコール抽出により抽出し、この結果コラーゲン生成を促進し得る、および／または他の抗老化特性、例えばＵＶ−保護因子、酸化防止剤および／または代謝促進剤としての作用を有する抽出物がもたらされる。
【００２７】
〔用語および定義〕
本発明の明細書において用いるように、単数形「ａ」および「ａｎ」は、他に明確な規定がない限りそれぞれ複数形も含む。すなわち、用語「ａ」および「ａｎ」は、他に指示がない限り「１つ以上の」または「少なくとも１つの」を意味することを意図する。
【００２８】
数値またはパラメーター範囲における用語「約」は、本発明の特徴の技術的効果をなお確保すると当業者が理解できる精度の区間を意味する。この用語は、一般的には示された数値の＋／−１０％、好ましくは＋／−５％の偏差を意味する。
【００２９】
本発明において「含む（Comprising）」は、この用語「含む（Comprising）」の後に記載される成分が組成物を形成する唯一の成分（すなわち、前記成分からなる）であることを意味するか、前記成分に加えて少なくとも１つのさらなる成分が存在することを意味する。好ましい意味において、これは「実質的に〜からなる（consisting essentially of）」を意味し、その狭義の意味においては「〜からなる（consisting of）」を意味する。
【００３０】
用語「抗老化」は化粧品業界において広く用いられており、一般的には皮膚における老化作用（例えば、経時老化、光老化またはＵＶ照射とは別の他の悪環境による老化）を遅延させまたは緩和させることを意味する。年齢および悪環境因子への暴露により、皮膚の外観、物理的性質および生理的機能は美容上望ましくないと考えられるような変化をする。最も顕著で明らかな変化としては、小皺およびしわの形成、弾力性の低下、たるみの増加、張りの低下、色の均一性（色合い）の低下、粗い表面質感および斑状色素沈着が挙げられる。皮膚の老化としてまたは長期の環境障害に耐えることで生じる明らかではないが無視できない程度の変化としては、細胞活力および組織活力の一般的な減少、細胞複製率の低下、および皮膚自身の修復および修繕能力の低下が挙げられる。抗老化化合物および組成物は、これらの変化を防止し、遅延させ、（少なくとも部分的に）再生し、減少または低減することを目的とする。これらの化合物および組成物の抗老化作用は、化粧品業界における標準的技法である一般的なパネル試験により評価し得る。
【００３１】
用語「抽出物」は、本発明の抽出工程により得られる液体と、本発明のドリコス  ビフロルス抽出物の製造方法による中間体および最終生成物（一般的には乾燥生成物）のいずれにも関連することを意図する。適切な意味は、通常その文脈から明らかである。液体抽出物、中間体および最終生成物をそれぞれ、例えば、本発明の組成物または本発明の使用において使用し得る。しかし最終生成物、特に乾燥最終生成物またはその最終生成物が好ましい。
【００３２】
用語「植物部分」は個々にまたは群で取得される植物の全ての部位を意味する。例えば、葉、花、根、種子、鞘、茎、果実、種皮、芽および植物の他の部位が含まれる。本明細書において、種子および種子含有植物部位が好ましい。
【００３３】
用語「皮膚」は動物または人の皮膚、好ましくは哺乳類の皮膚、より好ましくは人の皮膚を意味する。「皮膚」には表皮、真皮および皮下組織が包含される。用語「皮膚細胞」は一般的に皮膚に存在する全ての細胞、例えば角化細胞、繊維芽細胞、内皮細胞、基底細胞、顆粒細胞、メルケル細胞、メラニン細胞、ランゲルハンス細胞、白血球、マスト細胞、神経細胞、脂肪細胞およびマクロファージを意味する。本明細書において、繊維芽細胞および／または角化細胞が好ましく、繊維芽細胞が特に好ましい。さらに人の皮膚細胞、特に人の繊維芽細胞および／または角化細胞が好ましい。
【００３４】
用語「改善する」または「改善」は、示される状態の１つ以上の兆候、特徴または症状における阻止、防止、低減または改善を含み、それは一時的または長期的であり得る。
【００３５】
本明細書における「コラーゲン生成を促進する」または「コラーゲン生成の促進」は、生体試料あるいは被験者または被験動物にドリコス  ビフロルス抽出物を塗布または投与することによる、未処理コントロールと比較したコラーゲン生成の促進、特に細胞または組織（特に皮膚細胞または皮膚）におけるコラーゲン生成速度の増加、またはコラーゲン量もしくは濃度の増加に関する。未処理コントロールと比較した場合、処理組織または処理細胞におけるコラーゲン生成量は、一般的に、未処理コントロールにおけるコラーゲン生成量の１００％以上であり、好ましくは少なくとも１１０％、少なくとも１３０％、少なくとも１５０％または少なくとも１７０％である。好ましい態様において、「コラーゲン生成を促進する」は「コラーゲン合成を促進する」を包含し、より好ましくは「コラーゲン合成を促進する」を意味する。コラーゲン生成の促進は、細胞のコラーゲン放出および／または生成速度を増加させることにより、時間当たりのコラーゲン生成量（コラーゲン生成速度）を増加させることにより、コラーゲン合成酵素の濃度を増加させることにより、および／またはコラーゲン合成酵素をコードする遺伝子の翻訳および／または転写を増加させることにより、細胞内のコラーゲン量または濃度を増加させることで達成される。コラーゲン生成促進は全ての組織または細胞型で行われ得るが、皮膚および皮膚細胞が好ましい。特定の実施態様においてコラーゲン生成は、繊維芽細胞または角化細胞、好ましくは皮膚繊維芽細胞または表皮角化細胞において促進される。コラーゲン生成の促進、特にコラーゲン合成の促進は、コラーゲンの定量方法またはコラーゲン合成の定量方法、特に実施例に記載される方法の１つにより検証できる。
【００３６】
用語「水アルコール」は「水／アルコール」と同義である。
【００３７】
「低分子量アルコール」は１〜５個の炭素原子を有するアルコールであって、第１級、第２級または第３級アルコールであり得る。これはモノアルコールまたはポリアルコールであってよく、モノ−、ジ−およびトリアルコールが好ましく、モノアルコール、グリコールおよびグリセリンであることが特に好ましい。したがって、低分子量アルコールは、好ましくはメタノール、エタノール、１−プロパノール、１−ブタノール、２−プロパノール、２−ブタノール、２−メチル−１−プロパノール、２−メチル−２−プロパノール、ペンタノール、グリセリン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ペンチレングリコール、およびそれらの混合物からなる群から選択され得る。本発明においては、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコールおよびペンチレングリコールが特に好ましい。
【００３８】
〔ドリコス  ビフロルス抽出物〕
本発明は、ドリコス  ビフロルス抽出物およびその使用に関する。
一般的に、植物ドリコス  ビフロルスの任意の全ての部位を本発明の抽出物を調製するための原料として使用し得る。完全な植物または植物部位（種子など）、未乾燥または乾燥したものを出発原料として使用してよく、抽出の前にサイズを機械的に小さくしてもよい。好ましい実施態様においては、種子または種子含有植物部位を、より好ましくは種子を出発原料として用いる。特に好ましくは、乾燥した種子を用いる。１つの好ましい実施態様においては、抽出前に、例えば割ることにより、すりつぶすことにより、または砕くことにより機械的に種子のサイズを小さくする。このサイズ減少した生成物も、本発明のドリコスビフロルス抽出物を調製するための原料として好ましい。
【００３９】
植物ドリコス  ビフロルスまたはその植物部位は未乾燥であってもよいし、抽出前に前処理されていてもよい。前処理方法は、好ましくは乾燥、凍結乾燥、凍結、機械的サイズ減少およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。抽出用の原料として用いられる植物原料は未乾燥、乾燥または凍結され得る。機械的サイズ減少に加えて、乾燥および凍結乾燥が最も好ましい前処理方法である。
【００４０】
植物原料は、収穫後すぐに用いてもよいし、また抽出工程を施すまでの期間貯蔵していてもよく、収穫後使用する直前まで貯蔵することが好ましい。通常は、乾燥した植物および／または植物部位（抽出前に機械的にサイズ減少されていてよい）を用いるが、未乾燥の植物または植物部位を出発原料として用いることができる。
したがって、ドリコス  ビフロルス抽出物は、好ましくは乾燥した植物部位から調製され、より好ましくは乾燥種子または種子を含む乾燥した植物部位から調製される。さらに好ましくは、粉砕した乾燥種子を用いる。
【００４１】
ドリコス  ビフロルス抽出物は低ＬＥＡ含量（例えば、原料における全ＬＥＡ含量と比べて低い）である、またはＬＥＡ非含有であることが好ましい。抽出物のＬＥＡ含量は、ＷＯ０２／０５５０４９に記載されるようにして測定し得る。
【００４２】
ドリコス  ビフロルス抽出物は、通常、水抽出物、アルコール抽出物または水アルコール抽出物であり、好ましくはアルコール抽出物または水アルコール抽出物である。
【００４３】
（i）種子または種子含有植物部位の抽出物である、および／または（ii）アルコール抽出物または水アルコール抽出物であるドリコス  ビフロルス抽出物が、本発明の特に好ましい抽出物であり、（i）種子または種子含有植物部位の抽出物であり、かつ（ii）アルコール抽出物または水アルコール抽出物であるドリコス  ビフロルス抽出物がより好ましい。特定の実施態様において、本発明のドリコス  ビフロルス抽出物は水アルコール（例えば、水／エタノール）種子抽出物である。本発明のドリコス  ビフロルス抽出物は、１つの実施態様においてコラーゲン生成を促進する抽出物である。すなわち、コラーゲン生成促進剤として作用する。好ましくは、コラーゲンI、III、IV、V、VI、VII、XII、XIV、XVI、XVIIIおよびXIXからなる群から選択される１種以上のコラーゲンの生成を促進し、より好ましくはコラーゲンIおよび／またはVの生成、特にコラーゲンIおよびVの生成を促進する。
【００４４】
本発明のドリコス  ビフロルス抽出物は、別の実施態様においてＵＶ保護因子である。すなわち、ＵＶ保護因子として作用する。また皮膚および皮膚細胞、特に角化細胞および繊維芽細胞に対してＵＶ保護を付与することができる（実施例）。
【００４５】
本発明のドリコス  ビフロルス抽出物は、さらに別の実施態様において酸化防止剤である。すなわち、酸化防止剤として作用する。また皮膚および皮膚細胞、特に角化細胞および繊維芽細胞に対して、酸化的ストレスに対する保護を付与し得る（実施例）。
【００４６】
本発明のドリコス  ビフロルス抽出物は、さらに別の実施態様において代謝促進剤である。すなわち、代謝促進剤として作用する。また皮膚および皮膚細胞、特に角化細胞および繊維芽細胞において、ＡＴＰ合成速度を増加することができる（実施例）。
【００４７】
本発明のドリコス  ビフロルス抽出物は、さらに別の実施態様において、抗老化特性の組み合わせ、特に、（i）コラーゲン生成促進剤、（ii）ＵＶ保護因子、（iii）酸化防止剤および（iv）代謝促進剤、の作用からなる群に示される抗老化特性の組み合わせを有する。
【００４８】
一般的に、本発明のドリコス  ビフロルス抽出物は、コラーゲン生成を促進する一方で、ＵＶ保護因子、代謝促進剤および／または酸化防止剤あるいはこれらの任意の組み合わせでもある。
【００４９】
本発明のドリコス  ビフロルス抽出物またはこの抽出物を含んでなる化粧品組成物を、好ましくは美容的皮膚トリートメント、特に抗老化皮膚トリートメントにおいて使用する。１つの好ましい使用は、コラーゲン生成の促進のための使用であり、好ましくはコラーゲンI、III、IV、V、VI、VII、XII、XIV、XVI、XVIIIおよびXIXからなる群から選択される１種以上のコラーゲンの生成、より好ましくはコラーゲンIおよび／またはVの生成の促進のための使用である。他の好ましい使用は、ドリコス  ビフロルス抽出物が（i）コラーゲン生成促進剤、（ii）ＵＶ保護因子、（iii）酸化防止剤および（iv）代謝促進剤として作用する１つ以上の使用である。
【００５０】
好ましい美容的使用は、皮膚ケア、皮膚保護、および／または皮膚再生のための使用である。皮膚および皮膚細胞におけるドリコス  ビフロルス抽出物のこの作用、特に抗老化作用は、皮膚外観の改善、皮膚の張りの改善、皮膚の老化兆候の予防および／または低減を包含する。そのような皮膚の老化兆候は、例えば皮膚の厚み、小皺、しわ、弾力性の低下、たるみ、ターンオーバー速度の低下、および異常な落屑からなる群から選択される。ＵＶ保護および／または光老化兆候の予防および／または低減も包含される。ドリコス  ビフロルス抽出物の皮膚抗老化作用には、皮膚の再生および若返り過程を増加させること、老化した皮膚またはストレスを加えられた人の皮膚を再活性化すること、老化に関連したターンオーバーの低下を改善すること、および／または皮膚細胞外基質網状組織を強化することが包含される。より一般的には、皮膚の張りを改善すること、内因性および／または外因性皮膚老化を防止および／または低減すること、しわの出現を遅らせること、組み込まれたしわの深さを低減すること、小皺の出現を低減すること、および／または皮膚外観および／または皮膚色合いを改善することを含む。有利には、皮膚抗老化作用は１つ以上の組み合わせであり、またはこれら作用の全ての組み合わせである。
さらに好ましいドリコス  ビフロルス抽出物の特性は、後述する〔ドリコス  ビフロルス抽出物の調製〕に記載する。
【００５１】
〔ドリコス  ビフロルス抽出物の調製〕
本発明のドリコス  ビフロルス抽出物は、植物またはその一部を抽出する既知の方法により調製することができる。適当な抽出工程、例えば浸軟、再浸軟、撹拌浸軟、温浸、ボルテックス抽出、超音波抽出、向流抽出、パーコレーション、再パーコレーション、エバコレーション（減圧下での抽出）、ジアコレーション、および連続的な固液抽出などは、例えば「Ｈａｇｅｒｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅｎ  Ｐｒａｘｉｓ」（第５版、第２巻、１０２６−１０３０頁、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、ベルリン−ハイデルベルク−ニューヨーク、１９９１）などに見いだすことができる。抽出は亜臨界状態または超臨界状態で、溶媒（例えば二酸化炭素、アルコールまたはグリコール含有または非含有の水）を用いて行うことができる。
【００５２】
一般的に、抽出工程は抽出段階を伴う。すなわち、固体植物原料を溶媒と、溶媒に対する固体植物原料の適切な暴露を確保するのに十分な時間、適当な混合により接触させる。好ましくは、前記時間は、植物材料中の所望の特性（例えば、（i）コラーゲン生成促進剤、（ii）ＵＶ保護因子、（iii）酸化防止剤、（iv）代謝促進剤としての特性）を付与する化合物、特にコラーゲン生成促進化合物を溶媒により取り出すのに十分な時間である。
【００５３】
植物ドリコス  ビフロルスまたはその植物部位の抽出用溶媒は、植物または植物部位の抽出用に適した全ての溶媒であってよく、好ましくは、水性溶媒（例えば水または水性緩衝液）および有機非極性溶媒または極性溶媒、例えばメタノール、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、アセトン、エチルメチルケトン、エチルアセトンおよびそれらの混合物ならびにそれらの水含有混合物からなる群からの低分子量アルコールからなる群から選択され、より好ましくは水および、メタノール、エタノール、ブチレングリコールおよびそれらの混合物ならびにそれらの水含有混合物のような有機極性溶媒からなる群から選択される。より好ましくは、溶媒は、水性溶媒（特に水）と、１種以上の極性有機溶媒、好ましくは水混和性有機溶媒、より好ましくは低分子量アルコールとの混合物からなる群から選択される。水と、１，３−ブチレングリコール、メタノール、エタノールおよびそれらの混合物からなる群から選択される有機溶媒との混合物、特に実施例で記載する混合物が特に好ましい。
【００５４】
好ましい実施態様において、抽出物はアルコール抽出または水アルコール抽出により得られ、好ましくは水、メタノール、エタノールおよびそれらの水含有混合物（特に水／エタノールおよび水／メタノール混合物、とりわけ水／エタノール混合物）からなる群から選択される溶媒により得られる。抽出工程が水含有混合物を用いて行われる場合、すなわち、水性溶媒と有機溶媒の混合物を用いて行われる場合、混合物中の有機溶媒含量は５〜９５体積％、好ましくは４０〜９０体積％である。６０〜８０体積％、特に７０体積％の有機溶媒含量が特に好ましい。
【００５５】
抽出物を皮膚に塗布するために処方する用途に対しては、皮膚適合性の溶媒を選択し得る。そのような溶媒としては、水、水性緩衝液、低分子量アルコール、および水性溶媒と低分子量アルコールの混合物が挙げられる。
【００５６】
抽出工程は、通常４〜１８０℃、好ましくは２０〜１５０℃、より好ましくは２０〜８０℃の温度で行われる。室温または還流下、すなわち溶媒の沸騰する温度で抽出することが特に好ましい。
【００５７】
抽出工程は、抽出物の有効成分の酸化を避けるために不活性ガス雰囲気下で行なわれ得る。
【００５８】
抽出工程は、一般的にｐＨ２．５〜１１、好ましくはｐＨ４〜９、より好ましくは弱酸性または中性のｐＨ、さらに好ましくは実施例に記載される程度のｐＨ値で行うことが好ましい。特定の好ましい実施態様において、溶媒は水であり、ｐＨは好ましくは酸性または中性ｐＨに調整され、より好ましくはｐＨ４〜８に調整され、さらに好ましくはｐＨ４．５〜７．５に調整される。ｐＨ調整は所望のｐＨにするのに適した任意の酸または塩基を添加することにより行うことができるが、化粧品に適合する成分であるｐＨ調整剤を添加することにより行うことが好ましい。１つの実施態様においては、ｐＨを硫酸の添加により低くする。
【００５９】
抽出工程を容易にするために植物原料を抽出工程の前に前処理してもよい。一般的に、溶媒に対する大きな表面積を存在させるために、この前処理により植物原料を粉砕する。例えば、グラインダーまたは他の粉砕装置を使って植物原料を機械的に粉砕またはスライスする。
【００６０】
原料の粒子径および抽出時間は、抽出工程、溶媒、温度およびｐＨ条件ならびに溶媒と原料の比率等に応じて、通常当業者により選択される。一般的に、４０分〜２０時間、好ましくは約１〜２時間の抽出時間で十分である。抽出工程は任意の程度まで行い得るが、通常完全に抽出されるまで続けられる。
【００６１】
抽出工程中または抽出工程後、粗抽出物に他の一般的な精製工程、例えば精製、結晶化、濃縮、脱色および／または酵素加水分解を施してもよい。好ましくは、このような工程を抽出工程後に行う。
【００６２】
１つの好ましい態様においては、酵素加水分解を抽出工程中または抽出工程後に行う。上記実施態様においては、加水分解酵素を抽出混合物中へ加える。上記酵素は、好ましくはプロテアーゼ、より好ましくは食品または飼料業界において用いられる酵素、最も好ましくはalcalase（登録商標）または同様の酵素特性を有するプロテアーゼである。酵素を添加する場合、好ましい溶媒は水または水性混合物である。ｐＨは、好ましくはプロテアーゼの最適ｐＨである。一般的に４〜９のｐＨであり、好ましくは６〜８．５のｐＨであり、最も好ましくは約７．５のｐＨである。
【００６３】
必要に応じて、このようにして調製された抽出物に、例えばナノ濾過、限外濾過、沈殿技術、樹脂の吸着／脱着技術、および／またはクロマトグラフィー技術のような膜分離技術を用いた他の精製工程を施してもよい。
【００６４】
必要に応じて、抽出物に、例えば個々の望ましくない成分の選択的除去を施してもよい。また、抽出方法は、少しだけの減量または全く減量することなく、例えば水アルコールまたはアルコール抽出溶媒を用いて、望ましくない成分が植物原料から抽出されるように選択される。好ましい実施態様において、植物原料からのＬＥＡタンパク質の抽出は、例えば適切な抽出方法、抽出溶媒（例えば、アルコールまたは水アルコール）および／または原料（例えばドリコス  ビフロルス種子）の選択により減少または回避され、あるいはＬＥＡは１つ以上の他の方法段階により粗抽出物から除去される。得られる抽出物が実質的にＬＥＡ非含有であることが最も好ましい。
【００６５】
必要に応じて、抽出物に、例えば噴霧乾燥または凍結乾燥などの乾燥工程を施してもよい。本発明において、好ましくはドリコス  ビフロルス抽出物を皮膚トリートメントにおけるその使用の前に乾燥させる。
【００６６】
使用する原料の量に基づく原料植物からの乾燥抽出物の一般的な収率は、０．５〜４０重量％の範囲、より好ましくは２〜２０重量％の範囲である。抽出条件および最終抽出物の収率は、所望する用途にしたがって当業者により選択され得る。
【００６７】
抽出物を、１種以上の助剤、例えばマンニトール、ソルビトール、マルトデキストリン、シクロデキストリン、グリセリン、スクロース、フルクトース、グルコースおよびトレハロースのような糖と混合してもよい。
【００６８】
本発明の方法により調製されるいくつかのドリコス  ビフロルス抽出物は新規である。本発明の１つの実施態様は、これらの新規抽出物に関する。前記の１つの態様において、抽出物はアルコール抽出物または水アルコール抽出物であり、好ましくは水アルコール抽出物である。別の態様において、抽出物はドリコス  ビフロルスの種子、好ましくは乾燥したドリコス  ビフロルスの種子から作られる。特に好ましくは乾燥種子の水アルコール抽出物であり、とりわけ、上記で説明した好ましい溶媒の１つにより調製された水アルコール抽出物であることが好ましい。
【００６９】
〔ドリコス  ビフロルス抽出物を含有する化粧品組成物〕
さらに、本発明はドリコス  ビフロルス抽出物、特に上述したドリコス  ビフロルス抽出物を含有する化粧品組成物に関する。
【００７０】
化粧品組成物は、効果的な量の、すなわち、所望する効果を得ることができる量のドリコス  ビフロルス抽出物を含有する。
前記組成物は、好ましくは組成物の総重量に基づいて約０．０００１〜約１０重量％、より好ましくは約０．００１〜約５重量％、より好ましくは約０．０１〜約２重量％の濃度のドリコス  ビフロルス抽出物を含有する。所望する効果がＵＶ保護、特にＵＶＡ保護である場合、好ましい濃度範囲は１０の倍数で低下する場合さえある。
【００７１】
１つの実施態様において、前記組成物はドリコス  ビフロルス抽出物の他に１種以上のさらなる美容有効成分を含む。
１つの別の実施態様において、唯一の抗老化剤として、好ましくは唯一の美容有効成分として前記ドリコス  ビフロルス抽出物を含有する。
別の実施態様において、前記組成物は１種以上のさらなるコラーゲン生成促進成分を含有する。
【００７２】
好ましい実施態様において、前記組成物は、唯一のコラーゲンI、III、IV、V、VI、VII、XII、XIV、XVI、XVIIIおよびXIX生成促進成分として、より好ましくは唯一のコラーゲンIおよび／またはV生成促進成分として、より好ましくはコラーゲンI生成促進成分として、ドリコス  ビフロルス抽出物を含有する。別の好ましい実施態様において、前記組成物は唯一のＵＶ保護因子、酸化防止剤および／または代謝促進剤としてドリコス  ビフロルス抽出物を含有する。
【００７３】
本発明の組成物は、化粧皮膚トリートメントにおいて、特に抗老化皮膚トリートメントにおいて好ましくは使用される。この組成物の１つの好ましい使用は、コラーゲン生成の促進のための使用であり、特にコラーゲンI、III、IV、V、VI、VII、XII、XIV、XVI、XVIIIおよびXIX生成、特にコラーゲンIおよび／またはV生成の促進のための使用である。他の好ましい使用は、（I）ＵＶ保護因子、（ii）酸化防止および（iii）代謝促進のための１つ以上の使用である。
本発明の組成物は化粧品組成物である。化粧品組成物および医薬品組成物ならびにそれらの対応する使用における違いについては、ドイツ連邦共和国の法規定（例えば、Kosmetikverordnung、Lebensmittel- und Arzneimittelgesetz）を参照する。
【００７４】
「化粧品組成物」は、人体の種々の外側器官（例えば皮膚（特に表皮）、毛髪、爪、唇）または歯および口腔粘膜と、専らまたは主に、これらの器官を洗浄し、香り付けし、外観を変えおよび／または体臭を改善し、および／またはこれらの器官を保護し、または良好な状態に保つことを目的として接触させることを意図する任意の調製物を意味する。
【００７５】
本発明における好ましい化粧品組成物は、皮膚ケア組成物、すなわち皮膚と接触させることを意図する組成物である。前記組成物は、皮膚ケア、皮膚保護、および／または皮膚再生のために使用し得る。化粧品組成物の作用、特に抗老化作用は、好ましくは皮膚外観の改善、皮膚の張りの改善、皮膚の老化兆候の防止および／または低減の１つ以上を包含する。そのような皮膚の老化兆候は、例えば皮膚の厚み、小皺、しわ、弾力性の低下、たるみ、ターンオーバー速度の低下、異常な落屑からなる群から選択される。ＵＶ保護および／または光老化兆候の防止および／または低減も包含される。化粧品組成物の皮膚抗老化作用には、皮膚の再生および若返り過程を増加させること、老化した皮膚またはストレスを加えられた人の皮膚を再活性化すること、老化に関連したターンオーバーの低下を改善すること、および／または皮膚細胞外基質網状組織を強化することが包含される。より一般的には、皮膚の張りを改善すること、内因性および／または外因性皮膚老化を防止および／または低減すること、しわの出現を遅らせること、組み込まれたしわの深さを低減すること、小皺の出現を低減すること、および／または皮膚外観および／または皮膚色合いを改善することを含む。有利には、皮膚抗老化作用は１つ以上の組み合わせであり、またはこれら作用の全ての組み合わせである。
【００７６】
本発明の組成物は、クリーム、ゲル、ローション、ペースト、フォーム、水溶液、アルコール液または水／アルコール溶液、懸濁液、エマルション、乳液、ワックス／油脂組成物、スティック調製物、粉末または軟膏であってよく、例えばボディーミルク、スキンケア化粧品、毛髪シャンプー、ヘアローション、フォームバスまたはシャワーバスを含む。特に好ましい組成物は、皮膚クリーム、日常ケア製品、オーバーナイトケア製品、眼軟膏剤、フェイスクリーム、抗しわ組成物、日焼け止め製品、保湿剤、漂白クリーム、セルフタンニング剤、ビタミンクリーム、および対応するローションからなる群から選択される。Ph. Eur.、第６版に規定されるような液体調製物（溶液など）および半固形調製物（クリームなど）が好ましい。
【００７７】
組成物は、さらに、例えば、媒体、賦形剤、助剤および／または添加剤、例えば穏やかな界面活性剤、オイル成分、乳化剤、パール化ワックス、粘稠調整剤、増粘剤、過脂肪剤、安定剤、ポリマー、シリコーン化合物、脂肪、ワックス、レシチン、リン脂質、ＵＶ光保護因子、生物活性成分、酸化防止剤、脱臭剤、制汗剤、抗フケ剤、膜形成剤、膨潤剤、駆虫剤、セルフタンニング剤、ヒドロトロープ、可溶化剤、保存料、香油、染料など、化粧品に適用可能な１つ以上のさらなる成分を含有し得る。
一般的に、組成物はドリコス  ビフロルス抽出物および化粧品に適用可能な媒体を含む。
【００７８】
特定の態様において、組成物はドリコス  ビフロルス抽出物に加えて化粧品に適用可能な１つ以上のさらなる成分、好ましくは皮膚コンディショニング、皮膚保護および／または皮膚平滑化化合物を含有し得る。
【００７９】
さらに、本発明の組成物中に存在し得る化粧品に適用可能な成分および有効成分は、例えば欧州連合により編集された「化粧品成分目録」を包含する、欧州連合のオンラインデータベース「Ｃｏｓｌｎｇ」（http://ec.europa.eu/enterprise/cosmetics/cosing）、特に「皮膚コンディショニング」、「皮膚保護」および／または「平滑化」化合物に関するセクションに記載されている。
【００８０】
したがって、化粧品組成物に対する基本的な賦形剤および媒体ならびに適当な成分は、例えば、Schrader、Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika、Huethig Verlag、ハイデルベルグ、1989、またはUmbach、Kosmetik: Entwicklung、Herstellung und Anwendung kosmetischer Mittel、2. erweiterte Auflage、1995、Georg Thieme Verlag等のいくつかの概説文献において既知であり、実証されている。
【００８１】
本発明の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種の界面活性剤を含有する。
【００８２】
存在し得る界面活性物質は、陰イオン性、非イオン性、陽イオン性および／または両性または双性イオン性界面活性剤であり、組成物中の含量は、通常約１〜７０重量％、好ましくは５〜５０重量％、特に１０〜３０重量％である。陰イオン性界面活性剤の代表例は、石鹸、アルキルベンゼンスルホネート、アルカンスルホネート、オレフィンスルホネート、アルキルエーテルスルホネート、グリセロールエーテルスルホネート、α−メチルエステルスルホネート、スルホ脂肪酸、アルキルスルフェート、アルキルエーテルスルフェート、グリセロールエーテルスルフェート、脂肪酸エーテルスルフェート、ヒドロキシ混合エーテルスルフェート、モノグリセリド（エーテル）スルフェート、脂肪酸アミド（エーテル）スルフェート、モノおよびジアルキルスルホスクシネート、モノおよびジアルキルスルホスクシナメート、スルホトリグリセリド、アミド石鹸、エーテルカルボン酸およびその塩、脂肪酸イセチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、Ｎ−アシルアミノ酸（例えば、アシルラクチレート、アシルタルトレート、アシルグルタメートおよびアシルアスパルテート）、アルキルオリゴグルコシドスルフェート、タンパク質脂肪酸縮合物（特に、コムギに基づく植物生成物）、および、アルキル（エーテル）ホスフェートである。陰イオン性界面活性剤がポリグリコールエーテル鎖を含有しているときには、これらは通常の同族体分布を有していてよいが、好ましくは狭い同族体分布を有する。
非イオン性界面活性剤の代表例は、脂肪アルコールポリグリコールエーテル、アルキルフェノールポリグリコールエーテル、脂肪酸ポリグリコールエーテル、脂肪酸アミドポリグリコールエーテル、脂肪アミンポリグリコールエーテル、アルコキシル化トリグリセリド、混合エーテルおよび混合ホルマール、所望により部分的に酸化したアルキル（アルケニル）オリゴグリコシドまたはグルクロン酸誘導体、脂肪酸Ｎ−アルキルグルカミド、タンパク質加水分解物（特に、コムギに基づく植物生成物）、ポリオール脂肪酸エステル、糖エステル、ソルビタンエステル、ポリソルベートおよびアミンオキシドである。非イオン性界面活性剤がポリグリコールエーテル鎖を含有しているときには、これらは通常の同族体分布を有していてよいが、好ましくは狭い同族体分布を有する。
陽イオン性界面活性剤の代表例は、第四アンモニウム化合物、例えばジメチルジステアリルアンモニウムクロリド、およびエステルクォート、特に四級化した脂肪酸トリアルカノールアミンエステル塩である。
両性または双性イオン性界面活性剤の代表例は、アルキルベタイン、アルキルアミドベタイン、アミノプロピオネート、アミノグリシネート、イミダゾリニウムベタインおよびスルホベタインである。上記した界面活性剤は既知化合物であり、これら物質の製造および構造については、例えば、J. Falbe (ed.)、「Surfactants in Consumer Products」、Springer Verlag Berlin、1987、第54-124頁、またはJ. Falbe (ed.)、「Katalysatoren, Tenside und Mineraloeladditive」、Thieme Verlag Stuttgart、1978、第123-217頁のような関連の概説文献から既知である。
特に適する穏やかな（すなわち、特に皮膚に適合する）界面活性剤の代表例は、脂肪アルコールポリグリコールエーテルスルフェート、モノグリセリドスルフェート、モノおよび／またはジアルキルスルホスクシネート、脂肪酸イセチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、脂肪酸グルタメート、α−オレフィンスルホネート、エーテルカルボン酸、アルキルオリゴグルコシド、脂肪酸グルカミド、アルキルアミドベタイン、アンホアセタールおよび／または（好ましくは、コムギタンパク質に基づく）タンパク質脂肪酸縮合物である。
【００８３】
本発明の別の好ましい実施態様において、組成物はさらに少なくとも１種の油体を含有する。
【００８４】
適当な油体は、例えば、６〜１８個、好ましくは８〜１０個の炭素原子を含む脂肪アルコールに基づくゲルベアルコール、直鎖Ｃ６-２２脂肪酸と直鎖または分枝Ｃ６-２２脂肪アルコールとのエステル、および／または分枝Ｃ６-１３カルボン酸と直鎖または分枝Ｃ６-２２脂肪アルコールとのエステル、例えば、ミリスチルミリステート、ミリスチルパルミテート、ミリスチルステアレート、ミリスチルイソステアレート、ミリスチルオレエート、ミリスチルベヘネート、ミリスチルエルケート、セチルミリステート、セチルパルミテート、セチルステアレート、セチルイソステアレート、セチルオレエート、セチルベヘネート、セチルエルケート、ステアリルミリステート、ステアリルパルミテート、ステアリルステアレート、ステアリルイソステアレート、ステアリルオレエート、ステアリルベヘネート、ステアリルエルケート、イソステアリルミリステート、イソステアリルパルミテート、イソステアリルステアレート、イソステアリルイソステアレート、イソステアリルオレエート、イソステアリルベヘネート、イソステアリルオレエート、オレイルミリステート、オレイルパルミテート、オレイルステアレート、オレイルイソステアレート、オレイルオレエート、オレイルベヘネート、オレイルエルケート、ベヘニルミリステート、ベヘニルパルミテート、ベヘニルステアレート、ベヘニルイソステアレート、ベヘニルオレエート、ベヘニルベヘネート、ベヘニルエルケート、エルシルミリステート、エルシルパルミテート、エルシルステアレート、エルシルイソステアレート、エルシルオレエート、エルシルベヘネートおよびエルシルエルケートなどである。
また適するのは、直鎖Ｃ６-２２脂肪酸と分枝アルコール（特に２−エチルヘキサノール）とのエステル、Ｃ１８-３８アルキルヒドロキシカルボン酸と直鎖または分枝Ｃ６-２２脂肪アルコールとのエステル（例えばＤＥ１９７５６３７７Ａ１に記載されているようなもの）、特にジオクチルマレエート、直鎖および／または分枝脂肪酸と多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ダイマージオールまたはトリマートリオール）および／またはゲルベアルコールとのエステル、Ｃ６-１０脂肪酸に基づくトリグリセリド、Ｃ６-１８脂肪酸に基づく液体のモノ／ジ／トリグリセリド混合物、Ｃ６-２２脂肪アルコールおよび／またはゲルベアルコールと芳香族カルボン酸（特に安息香酸）とのエステル、Ｃ２-１２ジカルボン酸と１〜２２個の炭素原子を含む直鎖または分枝アルコールまたは２〜１０個の炭素原子および２〜６個のヒドロキシ基を含むポリオールとのエステル、植物油、分枝の第一アルコール、置換シクロヘキサン、直鎖および分枝のＣ６-２２脂肪アルコールカーボネート（例えば、ジカプリリルカーボネート（Cetiol（登録商標）CC））、６〜１８個、好ましくは８〜１０個の炭素原子を含む脂肪アルコールに基づくゲルベカーボネート、安息香酸と直鎖および／または分枝Ｃ６-２２アルコールとのエステル（例えば、Finsolv（登録商標）TN）、アルキル基あたりに６〜２２個の炭素原子を含む直鎖または分枝の対称または非対称のジアルキルエーテル（例えば、ジカプリリルエーテル（Cetiol（登録商標）OE））、エポキシ化脂肪酸エステルのポリオールによる開環生成物、シリコーン油（とりわけ、シクロメチコーン、ケイ素メチコーン型)および／または脂肪族またはナフテン系炭化水素（例えば、スクアラン、スクアレンまたはジアルキルシクロヘキサン）である。
【００８５】
本発明の別の好ましい実施態様において、組成物はさらに少なくとも１種の乳化剤を含有する。
【００８６】
適当な乳化剤は、例えば、下記の群の少なくとも１種に由来する非イオン性界面活性剤である：
・８〜２２個の炭素原子を含む直鎖脂肪アルコールへの、１２〜２２個の炭素原子を含む脂肪酸への、アルキル基に８〜１５個の炭素原子を含むアルキルフェノールへの、および、アルキル基に８〜２２個の炭素原子を含むアルキルアミンへの、エチレンオキシド２〜３０モルおよび／またはプロピレンオキシド０〜５モルの付加生成物；
・アルキル（アルケニル）基に８〜２２個の炭素原子を含むアルキルおよび／またはアルケニルオリゴグリコシド、ならびに、そのエトキシル化類似体；
・ヒマシ油および／または水素化ヒマシ油へのエチレンオキシド１〜１５モルの付加生成物；
・ヒマシ油および／または水素化ヒマシ油へのエチレンオキシド１５〜６０モルの付加生成物；
・グリセロールおよび／またはソルビタンと、１２〜２２個の炭素原子を含む不飽和、直鎖または飽和、分枝の脂肪酸および／または３〜１８個の炭素原子を含むヒドロキシカルボン酸との部分エステル、ならびに、エチレンオキシド１〜３０モルを含むその付加生成物；
・ポリグリセロール（平均自己縮合度２〜８）、ポリエチレングリコール（分子量４００〜５０００）、トリメチロールプロパン、ペンタエリトリトール、糖アルコール（例えばソルビトール）、アルキルグルコシド（例えば、メチルグルコシド、ブチルグルコシド、ラウリルグルコシド）およびポリグルコシド（例えばセルロース）と、１２〜２２個の炭素原子を含む飽和および／または不飽和の直鎖もしくは分枝の脂肪酸および／または３〜１８個の炭素原子を含むヒドロキシカルボン酸との部分エステル、ならびに、エチレンオキシド１〜３０モルを含むその付加生成物；
・ペンタエリトリトール、脂肪酸、クエン酸および脂肪アルコールの混合エステル（例えばＤＥ１１６５５７４に記載されるようなもの）および／または６〜２２個の炭素原子を含む脂肪酸、メチルグルコースおよびポリオール（好ましくは、グリセロールまたはポリグリセロール）の混合エステル；
・モノ、ジおよびトリアルキルホスフェートならびにモノ、ジおよび／またはトリ−ＰＥＧ−アルキルホスフェートおよびその塩；
・羊毛ワックスアルコール；
・ポリシロキサン／ポリアルキル／ポリエーテルコポリマーおよび対応する誘導体；
・ブロックコポリマー、例えば、ポリエチレングリコール−３０ ジポリヒドロキシステアレート；
・ポリマー乳化剤、例えば、GoodrichのPemulenグレード（TR-1、TR-2）；
・ポリアルキレングリコール；および
・グリセロールカーボネート。
【００８７】
これらの群のいくつかは、さらに以下のように規定される。
【００８８】
〔エチレンオキサイド付加生成物〕
脂肪アルコール、脂肪酸、アルキルフェノールへの、またはヒマシ油への、エチレンオキシドおよび／またはプロピレンオキシドの付加生成物は、既知の市販生成物である。これらは同族体混合物であり、その平均のアルコキシル化度は、付加反応を行う基質とエチレンオキシドおよび／またはプロピレンオキシドとの量比に対応する。グリセロールへのエチレンオキシドの付加生成物のＣ１２/１８脂肪酸モノエステルおよびジエステルは、化粧品調製物のための再脂肪化剤として知られている（例えばＤＥ２０２４０５１）。
【００８９】
〔アルキルおよび／またはアルケニルオリゴグリコシド〕
アルキルおよび／またはアルケニルオリゴグリコシド、その製造およびその使用は、従来技術から既知である。これらは、グルコースまたはオリゴ糖と８〜１８個の炭素原子を含む第一アルコールとを反応させることによって製造することができる。グリコシド基に関する限り、モノグリコシド（環状糖基がグリコシド結合によって脂肪アルコールに結合している）ならびにオリゴマーグリコシド（好ましくは約８までのオリゴマー化度を有する）の両方が適している。このオリゴマー化度は、統計学的平均値であり、この値は、上記のような工業用グレード製品に一般的な同族体分布に基づいている。
【００９０】
〔部分グリセリド〕
適当な部分グリセリドの代表例は、ヒドロキシステアリン酸モノグリセリド、ヒドロキシステアリン酸ジグリセリド、イソステアリン酸モノグリセリド、イソステアリン酸ジグリセリド、オレイン酸モノグリセリド、オレイン酸ジグリセリド、リシノール酸モノグリセリド、リシノール酸ジグリセリド、リノール酸モノグリセリド、リノール酸ジグリセリド、リノレン酸モノグリセリド、リノレン酸ジグリセリド、エルカ酸モノグリセリド、エルカ酸ジグリセリド、酒石酸モノグリセリド、酒石酸ジグリセリド、クエン酸モノグリセリド、クエン酸ジグリセリド、リンゴ酸モノグリセリド、リンゴ酸ジグリセリド、ならびに、これらの工業用グレード混合物（これらは、製造方法に由来する副生成物として少量のトリグリセリドを含んでいることもある）である。また同様に適するのは、これらの部分グリセリドへのエチレンオキシド１〜３０モル、好ましくは５〜１０モルの付加生成物である。
【００９１】
〔ソルビタンエステル〕
適当なソルビタンエステルは、ソルビタンモノイソステアレート、ソルビタンセスキイソステアレート、ソルビタンジイソステアレート、ソルビタントリイソステアレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンセスキオレエート、ソルビタンジオレエート、ソルビタントリオレエート、ソルビタンモノエルケート、ソルビタンセスキエルケート、ソルビタンジエルケート、ソルビタントリエルケート、ソルビタンモノリシノレエート、ソルビタンセスキリシノレエート、ソルビタンジリシノレエート、ソルビタントリリシノレエート、ソルビタンモノヒドロキシステアレート、ソルビタンセスキヒドロキシステアレート、ソルビタンジヒドロキシステアレート、ソルビタントリヒドロキシステアレート、ソルビタンモノタルトレート、ソルビタンセスキタルトレート、ソルビタンジタルトレート、ソルビタントリタルトレート、ソルビタンモノシトレート、ソルビタンセスキシトレート、ソルビタンジシトレート、ソルビタントリシトレート、ソルビタンモノマレエート、ソルビタンセスキマレエート、ソルビタンジマレエート、ソルビタントリマレエートならびにこれらの工業用グレード混合物である。また同様に適するのは、これらのソルビタンエステルへのエチレンオキシド１〜３０モル、好ましくは５〜１０モルの付加生成物である。
【００９２】
〔ポリグリセロールエステル〕
適当なポリグリセロールエステルの代表例は、ポリグリセリル−２ジポリヒドロキシステアレート（Dehymuls（登録商標）PGPH）、ポリグリセロール−３ジイソステアレート（Lameform（登録商標）TGI）、ポリグリセリル−４イソステアレート（Isolan（登録商標）GI 34）、ポリグリセリル−３オレエート、ジイソステアロイルポリグリセリル−３ジイソステアレート（Isolan（登録商標）PDI）、ポリグリセリル−３メチルグルコースジステアレート（Tego Care（登録商標）450）、ポリグリセリル−３蜜蝋（Cera Bellina（登録商標））、ポリグリセリル−４カプレート（Polyglycerol Caprate T2010/90）、ポリグリセリル−３セチルエーテル（Chimexane（登録商標）NL）、ポリグリセリル−３ジステアレート（Cremophor（登録商標）GS 32)、ポリグリセリルポリリシノレエート（Admul（登録商標）WOL 1403）、ポリグリセリルジメレートイソステアレートおよびこれらの混合物である。他の適するポリオールエステルの例は、トリメチロールプロパンまたはペンタエリトリトールと、ラウリン酸、ヤシ油脂肪酸、獣脂脂肪酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、ベヘン酸などとの、モノ、ジおよびトリエステルである（これらを、所望によりエチレンオキシド１〜３０モルと反応させてもよい）。
【００９３】
さらに、適当な乳化剤は、例えば、少なくとも１つの下記群から選択される陰イオン性、両性または陽イオン性乳化剤である。
【００９４】
〔陰イオン性乳化剤〕
陰イオン性乳化剤の典型例は、１２〜２２個の炭素原子を有する脂肪族脂肪酸、例えば、パルミチン酸、ステアリン酸またはベヘン酸、および１２〜２２個の炭素原子を有するジカルボン酸、例えばアゼライン酸またはセバシン酸である。
【００９５】
〔両性および陽イオン性乳化剤〕
さらに、双性イオン性界面活性剤を、乳化剤として使用することができる。用語「双性イオン性界面活性剤」は、分子中に少なくとも１つの第四アンモニウム基および少なくとも１つのカルボキシレート基および１つのスルホネート基を含む界面活性化合物を指す。特に適する双性イオン性界面活性剤は、いわゆるベタインであり、例えばＮ−アルキル−Ｎ,Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばヤシ油アルキルジメチルアンモニウムグリシネート、Ｎ−アシルアミノプロピル−Ｎ,Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばヤシ油アシルアミノプロピルジメチルアンモニウムグリシネート、および２−アルキル−３−カルボキシメチル−３−ヒドロキシエチルイミダゾリン（アルキル基またはアシル基にそれぞれ８〜１８個の炭素原子を含む）、およびヤシ油アシルアミノエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルグリシネートである。特に好ましいのは、コカミドプロピルベタインのＣＴＦＡ名称のもと既知である脂肪酸アミド誘導体である。
同様に適する乳化剤は、両性界面活性剤である。用語「両性界面活性剤」は、分子中にＣ８/１８アルキル基またはアシル基に加えて、少なくとも１つの遊離アミノ基および少なくとも１つの−ＣＯＯＨ基または−ＳＯ３Ｈ基を含有し、内部塩を形成することができる界面活性化合物を指す。適する両性界面活性剤の例は、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルアミノプロピオン酸、Ｎ−アルキルアミノ酪酸、Ｎ−アルキルイミノジプロピオン酸、Ｎ−ヒドロキシエチル−Ｎ−アルキルアミドプロピルグリシン、Ｎ−アルキルタウリン、Ｎ−アルキルサルコシン、２−アルキルアミノプロピオン酸およびアルキルアミノ酢酸（アルキル基にそれぞれ約８〜１８個の炭素原子を含む）である。特に好ましい両性界面活性剤は、Ｎ−ヤシ油アルキルアミノプロピオネート、ヤシ油アシルアミノエチルアミノプロピオネートおよびＣ１２/１８アシルサルコシンである。
最後に、陽イオン性界面活性剤も適する乳化剤であり、エステルクォート型の乳化剤、好ましくはメチルで第四級化したジ脂肪酸トリエタノールアミンエステル塩が特に好ましい。
【００９６】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種の油脂またはワックスを含有する。
【００９７】
油脂の代表例は、グリセリド、すなわち、高級脂肪酸の混合グリセロールエステルから本質的になる固体または液体の植物または動物産物であり、適当なワックスは、特に天然ワックス、例えばキャンデリラワックス、カルナバワックス、木蝋、アフリカハネガヤワックス、コルクワックス、グアルマ（guaruma）ワックス、コメ胚油ワックス、サトウキビワックス、オウリキュリー（ouricury）ワックス、モンタンワックス、蜜蝋、セラックワックス、鯨蝋、ラノリン（羊毛ワックス）、尾羽脂、セレシン、オゾケライト（地蝋）、ペトロラタム、パラフィンワックス、微結晶ワックス；化学修飾したワックス（硬ワックス）、例えばモンタンエステルワックス、サゾール（sasol）ワックス、水素化ホホバワックス、ならびに、合成ワックス、例えばポリアルキレンワックスおよびポリエチレングリコールワックスである。
油脂に加えて、適当な添加剤は、脂肪様物質、例えばレシチンおよびリン脂質である。用語「レシチン」は、脂肪酸、グリセロール、リン酸およびコリンからエステル化によって生成するグリセロリン脂質を意味するものと当業者に理解されている。従って、レシチンは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）と称されることも多い。挙げることができる天然レシチンの例はケファリンである。これは、ホスファチジン酸とも称され、１,２−ジアシル−ｓｎ−グリセロール−３−リン酸の誘導体である。対照的に、リン脂質は、リン酸とグリセロールとのモノエステル、好ましくはジエステル（グリセロホスフェート）を意味するものと通常は理解されており、これは一般に油脂と考えられている。さらに、スフィンゴシンおよびスフィンゴ脂質も適している。
【００９８】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種の真珠光沢ワックスを含有する。
【００９９】
適当な真珠色化ワックスの例は、アルキレングリコールエステル、特にエチレングリコールジステアレート；脂肪酸アルカノールアミド、特にヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド；部分グリセリド、特にステアリン酸モノグリセリド；多塩基性の所望によりヒドロキシ置換されたカルボン酸と、６〜２２個の炭素原子を含む脂肪アルコールとのエステル、特に酒石酸の長鎖エステル；合計して少なくとも２４個の炭素原子を含む脂肪化合物、例えば、脂肪アルコール、脂肪ケトン、脂肪アルデヒド、脂肪エーテルおよび脂肪カーボネート、特にラウロンおよびジステアリルエーテル；脂肪酸、例えばステアリン酸、ヒドロキシステアリン酸またはベヘン酸；１２〜２２個の炭素原子を含むオレフィンエポキシドの、１２〜２２個の炭素原子を含む脂肪アルコールおよび／または２〜１５個の炭素原子および２〜１０個のヒドロキシ基を含むポリオールによる開環生成物；およびこれらの混合物である。
【０１００】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種の粘稠調整剤および／または増粘剤を含有する。
【０１０１】
適当な増粘剤は、主に１２〜２２個、好ましくは１６〜１８個の炭素原子を含む脂肪アルコールまたはヒドロキシ脂肪アルコール、さらに部分グリセリド、脂肪酸またはヒドロキシ脂肪酸である。これらの物質と、アルキルオリゴグルコシドおよび／または同じ鎖長の脂肪酸Ｎ−メチルグルカミドおよび／またはポリグリセロールポリ−１２−ヒドロキシステアレートとの組合せが好ましい。
適当な増粘剤は、例えば、アエロジルグレード（親水性シリカ）、多糖、特にキサンタンガム、グアー、寒天、アルギン酸塩およびチロース、カルボキシメチルセルロースおよびヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロース、さらに比較的高分子量の脂肪酸ポリエチレングリコールモノエステルおよびジエステル、ポリアクリレート（例えば、Carbopol（登録商標）およびペムレングレード（Goodrich）；Synthalen（登録商標（Sigma）；ケルトロールグレード（Kelco）；セピゲルグレード（Seppic）；サルケアグレード（Allied Colloids））、ポリアクリルアミド、ポリマー、ポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンである。シクロペンタシロキサン、ジステアルジモニウムヘクトライトおよびプロピレンカーボネートの混合物であるベントナイト、例えばBentone（登録商標）Gel VS 5PC（Rheox）も特定の作用を有することが判明している。さらに適するのは、界面活性剤（例えば、エトキシル化脂肪酸グリセリド）、脂肪酸とポリオール（例えば、ペンタエリトリトールまたはトリメチロールプロパン）とのエステル、狭い同族体分布を有する脂肪アルコールエトキシレートまたはアルキルオリゴグルコシド、ならびに、電解質（例えば、塩化ナトリウムおよび塩化アンモニウム）である。
【０１０２】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種の過脂肪剤を含有する。
【０１０３】
使用しうる過脂肪剤は、例えば、ラノリンおよびレシチン、さらにポリエトキシル化またはアシル化したラノリンおよびレシチン誘導体、ポリオール脂肪酸エステル、モノグリセリドおよび脂肪酸アルカノールアミドである（後者は、発泡安定剤としても働く）。
【０１０４】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種の安定化剤を含有する。
【０１０５】
使用しうる安定剤は、脂肪酸の金属塩、例えばステアリン酸またはリシノール酸のマグネシウム、アルミニウムおよび／または亜鉛塩である。
【０１０６】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種のポリマーを含有する。
【０１０７】
適当な陽イオン性ポリマーは、例えば、陽イオン性セルロース誘導体、例えば第四級化したヒドロキシエチルセルロース（AmercholからPolymer JR 400（登録商標）の名称で入手できる）、陽イオン性デンプン、ジアリルアンモニウム塩とアクリルアミドのコポリマー、第四級化したビニルピロリドン／ビニルイミダゾールポリマー、例えばLuviquat（登録商標）（BASF）、ポリグリコールとアミンの縮合生成物、第四級化したコラーゲンポリペプチド、例えばラウリルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解コラーゲン（Lamequat（登録商標）L、Gruenau）、第四級化したコムギポリペプチド、ポリエチレンイミン、陽イオン性シリコーンポリマー、例えばアミドメチコーン、アジピン酸とジメチルアミノヒドロキシプロピルジエチレントリアミンのコポリマー（Cartaretin（登録商標）、Sandoz）、アクリル酸とジメチルジアリルアンモニウムクロリドのコポリマー（Merquat（登録商標）550、Chemviron）、ポリアミノポリアミド（例えばＦＲ２２５２８４０に記載されるようなもの）およびその架橋した水溶性ポリマー、陽イオン性キチン誘導体、例えば第四級化したキトサン（所望により微結晶分散している）、ジハロアルキル（例えばジブロモブタン）とビスジアルキルアミン（例えばビス−ジメチルアミノ−１,３−プロパン）との縮合生成物、陽イオン性グアーガム（例えば、CelaneseからのJaguar（登録商標） CBS、Jaguar（登録商標）C-17、Jaguar（登録商標）C-16)、第四級化したアンモニウム塩ポリマー（例えば、MiranolからのMirapol（登録商標）A-15、Mirapol（登録商標）AD-1、Mirapol（登録商標）AZ-1）である。
【０１０８】
適する陰イオン性、双性イオン性、両性および非イオン性ポリマーは、例えば、酢酸ビニル／クロトン酸コポリマー、ビニルピロリドン／アクリル酸ビニルコポリマー、酢酸ビニル／マレイン酸ブチル／アクリル酸イソボルニルコポリマー、メチルビニルエーテル／無水マレイン酸コポリマーおよびそのエステル、未架橋のポリアクリル酸およびポリオール架橋したポリアクリル酸、アクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド／アクリレートコポリマー、オクチルアクリルアミド／メタクリル酸メチル／tert-ブチルアミノエチルメタクリレート／２-ヒドロキシプロピルメタクリレートコポリマー、ポリビニルピロリドン、ビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー、ビニルピロリドン／ジメチルアミノエチルメタクリレート／ビニルカプロラクタムターポリマーおよび所望により誘導体化したセルロースエーテルおよびシリコーンである。別の適当なポリマーおよび増粘剤はCosm. Toil.（1993）108:95に記載されている。
【０１０９】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種のシリコーン化合物を含有する。
【０１１０】
適当なシリコーン化合物は、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、環式シリコーン、ならびに、アミノ−、脂肪酸−、アルコール−、ポリエーテル−、エポキシ−、フッ素−、グリコシド−および／またはアルキル−修飾したシリコーン化合物である（これらは、室温で液体または樹脂形態のいずれかであることができる）。また適するのは、２００〜３００のジメチルシロキサン単位の平均鎖長を有するジメチコーンと水素化シリケートの混合物であるシメチコーンである。適当な揮発性シリコーンの詳細な概説は、Todd等、（1976）Cosm. Toil. 91:27により提供される。
【０１１１】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種のＵＶ光保護因子を含有する。
【０１１２】
適当なＵＶ光保護因子は、例えば、室温で液体または結晶性であり、かつ、紫外線放射を吸収することができ、吸収したエネルギーを長波長放射（例えば、熱）の形態で放出することができる有機物質（光フィルター）である。ＵＶ−Ｂフィルターは、油溶性または水溶性であることができる。油溶性ＵＶ−Ｂフィルターの例は以下の通りである：
・３−ベンジリデンカンファーまたは３−ベンジリデンノルカンファーおよびその誘導体、例えば３−（４−メチルベンジリデン）カンファー（ＥＰ０６９３４７１Ｂ１に記載)；
・４−アミノ安息香酸誘導体、好ましくは４−（ジメチルアミノ）安息香酸２−エチルヘキシルエステル、４−（ジメチルアミノ）安息香酸２−オクチルエステルおよび４−（ジメチルアミノ）安息香酸アミルエステル；
・ケイ皮酸エステル、好ましくは４−メトキシケイ皮酸２−エチルヘキシルエステル、４−メトキシケイ皮酸プロピルエステル、４−メトキシケイ皮酸イソアミルエステル、２−シアノ−３,３−フェニルケイ皮酸２−エチルヘキシルエステル（オクトクリレン）；
・サリチル酸エステル、好ましくはサリチル酸２−エチルヘキシルエステル、サリチル酸４−イソプロピルベンジルエステル、サリチル酸ホモメンチルエステル；
・ベンゾフェノン誘導体、好ましくは２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４'−メチルベンゾフェノン、２,２'−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン；
・ベンザルマロン酸エステル、好ましくは４−メトキシベンザルマロン酸ジ−２−エチルヘキシルエステル；
・トリアジン誘導体、例えば２,４,６−トリアニリノ（ｐ−カルボ−２'−エチル−１'−ヘキシルオキシ）−１,３,５−トリアジンおよびオクチルトリアゾン（ＥＰ０８１８４５０Ａ１に記載）またはジオクチルブタアミドトリアゾン（Uvasorb（登録商標）HEB）；
・プロパン−１,３−ジオン、例えば１−（４−tert−ブチルフェニル）−３−（４'−メトキシフェニル）−プロパン−１,３-ジオン；
・ケトトリシクロ（５.２.１.０）デカン誘導体（例えばＥＰ０６９４５２１Ｂ１に記載）。
【０１１３】
適当な水溶性ＵＶ−Ｂフィルターは以下の通りである：
・２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸、ならびに、そのアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、アルキルアンモニウム、アルカノールアンモニウムおよびグルクアンモニウム塩；
・ベンゾフェノンのスルホン酸誘導体、好ましくは２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸およびその塩；
・３−ベンジリデンカンファーのスルホン酸誘導体、例えば４−（２−オキソ−３−ボルニリデンメチル）−ベンゼンスルホン酸および２−メチル−５−（２−オキソ−３−ボルニリデン）スルホン酸およびその塩。
【０１１４】
適当なＵＶ−Ａフィルターは、特に、ベンゾイルメタンの誘導体、例えば１−（４'−tert−ブチルフェニル）−３−（４'−メトキシフェニル）プロパン−１,３−ジオン、４−tert−ブチル−４'−メトキシジベンゾイルメタン（Parsol（登録商標）1789）、１−フェニル−３−（４'−イソプロピルフェニル）プロパン−１,３−ジオン、およびエナミン化合物（ＤＥ１９７１２０３３Ａ１に記載）（BASF）などである。当然、これらＵＶ−ＡおよびＵＶ−Ｂフィルターを、混合物の形態で使用することもできる。特に好ましい組み合わせは、ケイ皮酸、好ましくは４−メトキシケイ皮酸２−エチルヘキシルエステルおよび／または４−メトキシケイ皮酸プロピルエステルおよび／または４−メトキシケイ皮酸イソアミルエステルのエステルとの組み合わせにおける、ベンゾイルメタンの誘導体、例えば４−tert−ブチル−４'−メトキシジベンゾイルメタン（Parsol（登録商標）1789）および２−シアノ−３,３−フェニルケイ皮酸２−エチルヘキシルエステル（オクトクリレン）からなる。有利には、そのような組み合わせは、水溶性フィルター、例えば２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸およびそのアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、アルキルアンモニウム、アルカノールアンモニウムおよびグルクアンモニウム塩と併用される。
【０１１５】
上記の可溶性ＵＶ保護因子に加えて、不溶性の光保護顔料（すなわち、微細に分散させた金属酸化物または塩）も、この目的に適する。適当な金属酸化物の例は、特に、酸化亜鉛および二酸化チタン、さらに、鉄、ジルコニウム、ケイ素、マンガン、アルミニウムおよびセリウムの酸化物、ならびにこれらの混合物である。ケイ酸塩（タルク）、硫酸バリウムまたはステアリン酸亜鉛を塩として使用することができる。これらの酸化物および塩を、皮膚ケアおよび皮膚保護エマルションのための顔料の形態で使用する。これら粒子は、１００ｎｍ未満、好ましくは５〜５０ｎｍ、より好ましくは１５〜３０ｎｍの平均直径を有しているべきである。これらは球の形状であってよいが、楕円形の粒子または他の非球形の粒子を使用することもできる。また、顔料を、表面処理すること、すなわち親水性化または疎水性化することもできる。その代表例は、被覆した二酸化チタン、例えば、Titandioxid T 805（Degussa）およびEusolex（登録商標）T2000（Merck）である。適当な疎水性被覆材料は、主にシリコーンであり、とりわけトリアルコキシオクチルシランまたはジメチコーンである。いわゆるミクロまたはナノ顔料を、日焼け止め製品において使用するのが好ましい。ミクロ化した酸化亜鉛を使用するのが好ましい。他の適当なＵＶフィルターは、P.Finkelの概説SOEFW-Journal 122：543（1996）およびParfuemerie und Kosmetik. 3：11（1999）中に見ることができる。
【０１１６】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種の生体活性物質および／または酸化防止剤を含有する。
【０１１７】
本発明における生体活性成分は、例えば、トコフェロール、トコフェロールアセテート、トコフェロールパルミテート、アスコルビン酸、（デオキシ）リボ核酸およびその断片化生成物、レチノール、ビサボロール、アラントイン、ピタントリオール、パンテノール、ＡＨＡ酸、アミノ酸、セラミド、偽セラミド、精油、さらなる植物抽出物、例えばプルーン抽出物、バンバラナッツ抽出物ならびにビタミン複合体などを意味するものと解される。
【０１１８】
酸化防止剤は、ＵＶ線が皮膚を貫通したときに開始される光化学反応連鎖を遮断する。それらの代表的な例は、アミノ酸（例えば、グリシン、ヒスチジン、チロシン、トリプトファン）およびその誘導体、イミダゾール（例えば、ウロカニン酸）およびその誘導体、ペプチド、例えばＤ,Ｌ−カルノシン、Ｄ−カルノシン、Ｌ−カルノシンおよびその誘導体（例えば、アンセリン）、カロチノイド、カロテン（例えば、α−カロテン、β−カロテン、リコペン、ルテイン）およびその誘導体、クロロゲニン酸およびその誘導体、リポン酸およびその誘導体（例えば、ジヒドロリポン酸）、オーロチオグルコース、プロピルチオウラシルおよび他のチオール（例えば、チオレドキシン、グルタチオン、システイン、シスチン、シスタミン、ならびに、そのグリコシル、Ｎ−アセチル、メチル、エチル、プロピル、アミル、ブチル、およびラウリル、パルミトイル、オレイル、γ−リノレイル、コレステリルおよびグリセリルエステル）およびその塩、ジラウリルチオジプロピオネート、ジステアリルチオジプロピオネート、チオジプロピオン酸およびその誘導体（エステル、エーテル、ペプチド、脂質、ヌクレオチド、ヌクレオシドおよび塩）、ならびに、スルホキシイミン化合物（例えば、ブチオニンスルホキシイミン、ホモシステインスルホキシイミン、ブチオニンスルホン、ペンタ−、ヘキサ−およびヘプタ−チオニンスルホキシイミン)（これらは、極めて少ない許容用量（例えば、ピコモル〜マイクロモル／ｋｇ）で用いる）、さらに、（金属）キレート化剤（例えば、α−ヒドロキシ脂肪酸、パルミチン酸、フィチン酸、ラクトフェリン）、α−ヒドロキシ酸（例えば、クエン酸、乳酸、リンゴ酸）、フミン酸、胆汁酸、胆汁抽出物、ビリルビン、ビリベルジン、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡおよびその誘導体、不飽和脂肪酸およびその誘導体（例えば、γ-リノレン酸、リノール酸、オレイン酸）、葉酸およびその誘導体、ユビキノンおよびユビキノールおよびその誘導体、ビタミンＣおよびその誘導体（例えば、アスコルビルパルミテート、Ｍｇアスコルビルホスフェート、アスコルビルアセテート）、トコフェロールおよび誘導体（例えば、ビタミンＥアセテート）、ビタミンＡおよび誘導体（ビタミンＡパルミテート）およびベンゾイン樹脂のコニフェリルベンゾエート、ルチン酸およびその誘導体、α−グリコシルルチン、フェルラ酸、フルフリリデングルシトール、カルノシン、ブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、ノルジヒドログアヤク樹脂酸、ノルジヒドログアイアレチン酸、トリヒドロキシブチロフェノン、尿酸およびその誘導体、マンノースおよびその誘導体、スーパーオキシドジスムターゼ、亜鉛およびその誘導体（例えば、ＺnＯ、ＺnＳＯ4）、セレンおよびその誘導体（例えば、セレンメチオニン）、スチルベンおよびその誘導体（例えば、スチルベンオキシド、トランス−スチルベンオキシド）、ならびに、本発明に適するこれら活性物質の誘導体（塩、エステル、エーテル、糖、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ペプチドおよび脂質）である。
【０１１９】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種の抗微生物剤および／または防腐剤を含有する。
【０１２０】
適当な抗微生物剤は、基本的に、グラム陽性細菌に対して効果的な全ての物質であり、例えば、４−ヒドロキシ安息香酸およびその塩およびエステル、Ｎ−（４−クロロフェニル）−Ｎ'−（３,４−ジクロロフェニル）尿素、２,４,４'−トリクロロ−２'−ヒドロキシジフェニルエーテル（トリクロサン）、４−クロロ−３,５−ジメチルフェノール、２,２'−メチレンビス（６−ブロモ−４−クロロフェノール）、３−メチル−４−（１−メチルエチル）フェノール、２−ベンジル−４−クロロフェノール、３−（４−クロロフェノキシ）−１,２−プロパンジオール、３−ヨード−２−プロピニルブチルカルバメート、クロロヘキシジン、３,４,４'−トリクロロカルバニリド（ＴＴＣ）、抗細菌芳香物質、チモール、タイム油、オイゲノール、チョウジ油、メントール、ミント油、ファルネソール、フェノキシエタノール、グリセロールモノカプレート、グリセロールモノカプリレート、グリセロールモノラウレート（ＧＭＬ）、ジグリセロールモノカプレート（ＤＭＣ）、サリチル酸Ｎ−アルキルアミド（例えば、Ｎ−オクチルサリチルアミドまたはＮ−デシルサリチルアミド）などである。
【０１２１】
適当な防腐剤は、例えば、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド溶液、パラベン、ペンタンジオールまたはソルビン酸および、Surfacins（登録商標）の名称のもと既知の銀錯体、ならびに化粧品指針の付属書６のパートＡおよびＢに挙げられている他の群の化合物である。
【０１２２】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種の被膜形成剤を含有する。
【０１２３】
通常の皮膜形成剤は、例えば、キトサン、微結晶キトサン、第四級化キトサン、ポリビニルピロリドン、ビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー、アクリル酸系列のポリマー、第四セルロース誘導体、コラーゲン、ヒアルロン酸およびその塩および同様の化合物である。
【０１２４】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種の膨潤剤を含有する。
【０１２５】
水相のための適当な膨潤剤は、モンモリロナイト、粘土無機物質、ペムレンおよびアルキル修飾したカーボポール型（Goodrich）である。他の適当なポリマーおよび膨潤剤は、R.Lochheadの概説Cosm.Toil.（1993）、108：95中に見ることができる。
【０１２６】
本発明の別の好ましい態様において、組成物はさらに少なくとも１種のヒドロトロープ剤を含有する。
【０１２７】
流動挙動を改善するために、ヒドロトロープ剤、例えばエタノール、イソプロピルアルコールまたはポリオールを使用することができる。適当なポリオールは、好ましくは２〜１５個の炭素原子および少なくとも２個のヒドロキシ基を含有する。これらポリオールは、他の官能基、特にアミノ基を含有することができ、また、窒素で修飾することもできる。その代表例は、次の通りである：
・グリセロール；
・アルキレングリコール、例えばエチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ヘキシレングリコール、および、ポリエチレングリコール（１００〜１０００ダルトンの平均分子量を有する）；
・１.５〜１０の自己縮合度を有する工業用オリゴグリセロール混合物、例えば４０〜５０重量％のジグリセロール含量を有する工業用ジグリセロール混合物；
・メチロール化合物、例えば特にトリメチロールエタン、トリメチロールプロパン、トリメチロールブタン、ペンタエリスリトールおよびジペンタエリスリトール；
・低級アルキルグルコシド、特にアルキル基に１〜８個の炭素原子を含むもの、例えばメチルおよびブチルグルコシド；
・５〜１２個の炭素原子を含む糖アルコール、例えばソルビトールまたはマンニトール；
・５〜１２個の炭素原子を含む糖、例えばグルコースまたはスクロース；
・アミノ糖、例えばグルカミン；
・ジアルコールアミン、例えばジエタノールアミンまたは２−アミノ−１,３−プロパンジオール。
【０１２８】
脱臭剤、抗フケ剤、防虫剤、セルフタンニング剤および脱色剤、染料、香油および芳香剤を含む別の任意の付加成分は、ＷＯ０２／０５５０４９に記載されている。
【０１２９】
組成物の別の好ましい成分は、皮膚ケアまたは皮膚保護成分であり、特にＵＶフィルター、ヒドロトロープ剤（特にグリセリン）、生物起源成分および酸化防止剤からなる群から選択される成分である。
【０１３０】
組成物中のドリコス  ビフロルス抽出物以外の他の成分および任意の媒体または賦形剤の総量は、組成物の総重量に基づいて０〜９０重量％であってよく、一般的には１〜５０重量％、時に５〜４０重量％であってよい。組成物は通常の冷温工程または温工程で調製し得るが、位相反転温度法を用いて調製することが好ましい。
【０１３１】
〔ドリコス  ビフロルス抽出物および組成物の使用ならびに抗老化美容的皮膚トリートメントの方法〕
本発明は、ドリコス  ビフロルス抽出物およびこの抽出物を含有する組成物の美容的皮膚トリートメントにおける使用に関する。美容的および医薬品的使用における違いについては、ドイツ連邦共和国の法規定（例えば、Kosmetikverordnung、Lebensmittel- und Arzneimittelgesetz）を参照する。
ここに記載する用途のドリコス  ビフロルス抽出物およびドリコス  ビフロルス抽出物を含有する組成物も本発明の実施態様である。
【０１３２】
先の段落で記載した本発明のドリコス  ビフロルス抽出物および本発明のドリコス  ビフロルス抽出物を含有する組成物の特性および好ましい特徴は、下記の美容的使用および方法において用いられるドリコス  ビフロルス抽出物および組成物の特性および好ましい特徴を特定する。
【０１３３】
本発明のドリコス  ビフロルス抽出物および本発明のドリコス  ビフロルス抽出物を含有する組成物の好ましい使用は、先の段落および以下に記載される。
【０１３４】
特定の実施態様において、本発明は、ドリコス  ビフロルス抽出物またはコラーゲン生成を促進する、特に皮膚および／または皮膚細胞におけるコラーゲン生成を促進する抽出物を含有する組成物の使用に関する。好ましくはコラーゲンI、III、IV、V、VI、VII、XII、XIV、XVI、XVIIIおよびXIX生成、より好ましくはコラーゲンIおよび／またはV、さらに好ましくはコラーゲンIおよびV生成を促進する。
【０１３５】
別の態様において、本発明は、ドリコス  ビフロルス抽出物または、皮膚および／または皮膚細胞のＵＶ保護の抽出物を含有する組成物の使用に関する。有利には、ドリコス  ビフロルス抽出物をコラーゲン生成促進およびＵＶ保護の両方のために使用する。ＵＶ保護には、ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂまたはその両方に対する保護が包含される。ドリコス  ビフロルス抽出物は特にＵＶ−Ａ保護を付与するのに効果的である。
【０１３６】
ドリコス  ビフロルス抽出物は、培養したヒト繊維芽細胞のｍＲＮＡ生成およびコラーゲンタンパク質コラーゲンIおよびVの生成を促進する（実施例９および１０）。また、培養したヒト繊維芽細胞の代謝、特にエネルギー代謝（例えばＡＴＰ合成率）を促進する（実施例８）。
【０１３７】
繊維芽細胞の代謝およびコラーゲンIおよびVの生成におけるその効果に加えて、ドリコス  ビフロルス抽出物は、培養した繊維芽細胞および角化細胞におけるＵＶ−ＡおよびＵＶ−Ｂ損傷に対する保護効果が実証された（実施例１１および１２）。
【０１３８】
本発明によれば、ドリコス  ビフロルス抽出物およびこの抽出物を含有する組成物を、皮膚の再生および若返り過程を強化するため、老化した皮膚またはストレスを加えられた人の皮膚を再活性化するため、老化に関連したターンオーバーの低下を改善するため、および／または皮膚細胞外基質網状組織を強化するために使用し得る。より一般的には、ドリコス  ビフロルス抽出物は、皮膚の張りを改善し、内因性および／または外因性皮膚老化を防止および／または低減し、しわの出現を遅らせ、組み込まれたしわの深さを低減し、小皺の出現を低減し、皮膚外観および／または皮膚色合いを改善することができる。有利には、本発明のドリコス  ビフロルス抽出物またはこの抽出物を含有する組成物の抗老化作用は、これらの作用の１つ以上、または全ての組み合わせである。
【０１３９】
さらに、ドリコス  ビフロルス抽出物およびこの抽出物を含有する組成物を、皮膚のコラーゲン組成を改善するため、およびコラーゲン生成、特にコラーゲンI、III、IV、V、VI、VII、XII、XIV、XVI、XVIIIおよびXIX生成、特にコラーゲンIおよび／またはVの生成を促進するために使用し得る。
【０１４０】
さらに、ドリコス  ビフロルス抽出物およびこの抽出物を含有する組成物を、紫外線損傷から皮膚または皮膚細胞を保護するため、および皮膚細胞の増殖および／または代謝を刺激するために使用し得る。前記態様において、ドリコス  ビフロルス抽出物およびこの抽出物を含有する組成物を、皮膚および／または皮膚細胞にＵＶ保護を付与するため、および／または光老化の兆候を予防しおよび／または低減するために、および／または皮膚再生化および／または再活性化を促進するために使用し得る。
【０１４１】
第１の好ましい実施態様において、本発明はドリコス  ビフロルス抽出物の美容的使用、特に皮膚ケア、皮膚保護、および／または皮膚再生化における使用ならびにそれに対応する化粧品組成物に関する。
【０１４２】
第１の好ましい態様において、前記美容的使用は、コラーゲン生成、特にコラーゲンI、III、IV、V、VI、VII、XII、XIV、XVI、XVIIIおよびXIX生成、特にコラーゲンIおよび／またはVの生成、とりわけコラーゲンIおよびVの生成を促進するための使用である。第２の好ましい態様において、前記美容的使用は、紫外線損傷から皮膚および／または皮膚細胞（特に角化細胞または繊維芽細胞）を保護するための使用であり、および／または皮膚細胞（特に繊維芽細胞）の増殖および／または代謝を刺激するための使用である。第３の好ましい態様において、前記美容的使用は、皮膚外観の改善のため、皮膚の張りの改善のため、皮膚老化兆候の予防および／または低減のための使用である。そのような皮膚老化兆候は、例えば、皮膚の厚みの減少、小皺、しわ、弾力性の低下、ターンオーバー速度の低下、および異常な落屑からなる群から選択される。美容的使用には、皮膚老化、光老化の出現の予防、および／または生物学的により若い皮膚の回復が包含され得る。本発明の美容的使用は、ここに記載したこれらの好ましい態様および特徴の任意の組み合わせを包含する。
【０１４３】
皮膚抗老化剤としてのドリコス  ビフロルス抽出物の美容的使用は特に好ましい。これには１つ以上の以下の作用が包含される：皮膚の再生および若返り過程の強化するための作用、老化した皮膚またはストレスを加えられた人の皮膚を再活性化するための作用、老化に関連したターンオーバーの低下を改善するための作用、および／または皮膚細胞外基質網状組織を強化するための作用。より一般的には、皮膚の張りを改善し、内因性および／または外因性皮膚老化を防止および／または低減し、しわの出現を遅らせ、組み込まれたしわの深さを低減し、小皺の出現を低減し、皮膚外観および／または皮膚色合いを改善することが包含される。有利には、皮膚老化防止効果は、これらの作用の１つ以上、または全ての組み合わせである。
【０１４４】
特定の態様において、本発明の皮膚トリートメントにおけるドリコス  ビフロルス抽出物の美容的使用は、コラーゲンIおよびVの両方の生成を促進する前記抽出物の能力に基づく。これは、老化した皮膚において高品質コラーゲン網状組織のデノボ合成をもたらす。それらの結果には、皮膚外観を改善、皮膚の張りの改善、皮膚老化兆候の予防および／または低減が包含される。そのような皮膚老化兆候は、例えば、皮膚の厚みの減少、小皺、しわ、弾力性の低下、たるみ、ターンオーバー速度の低下からなる群から選択される。
【０１４５】
第２の好ましい実施態様において、本発明はドリコス  ビフロルス抽出物および／または、皮膚または皮膚細胞におけるコラーゲン生成、特にコラーゲンIおよび／またはVの生成を促進するために前記抽出物を含有する組成物、およびそれに対応する美容的使用に関する。この態様において、ドリコス  ビフロルス抽出物および／またはこの抽出物を含有する組成物を、皮膚または分離した皮膚細胞へ、インビボまたはインビトロで適用してよい。前記実施態様の第１の態様は、ドリコス  ビフロルス抽出物および／または組成物のコラーゲン生成のための美容的使用である。
【０１４６】
前記第２の実施態様は、ドリコス  ビフロルス抽出物および／または組成物の、皮膚細胞または皮膚におけるインビトロでのコラーゲン生成を促進するための使用である。前記態様において、皮膚細胞は好ましくは繊維芽細胞であり、より好ましくはヒト繊維芽細胞である。全ての態様において、ドリコス  ビフロルス抽出物を純粋形態で用いてもよく、または別の成分を含有する組成物の一部として用いてもよい。組成物における使用、特に組成物の総重量に基づき約０．０００１〜約１０重量％、より好ましくは約０．００１〜約５重量％、さらに好ましくは約０．０１〜約２重量％における使用が好ましい。
【０１４７】
本発明は、この段落および先の段落に記載した細胞に対するドリコス  ビフロルス抽出物の作用を細胞、特に皮膚細胞中で引き起こすための方法に関する。該方法は、効果的な量のドリコス  ビフロルス抽出物を細胞に接触させる段階を含む。この方法は、インビトロで使用し得るが、特にインビボの細胞によりコラーゲン生成を促進するために有益である。この方法は、効果的な量のドリコス  ビフロルス抽出物を細胞に接触させることにより行われる。好ましくはこの方法を、細胞によりコラーゲン生成を促進するために使用する。
【０１４８】
インビトロでドリコス  ビフロルス抽出物を細胞に接触させる場合、ドリコス  ビフロルス抽出物の量は、一般的に約０．００００１〜約１０％（w/v）、好ましくは約０．０００１〜約１％（w/v）、より好ましくは約０．００１〜約０．５％（w/v）、さらに好ましくは約０．００３〜０．１％（w/v）の範囲である（溶液または懸濁液中に約０．００３〜約０．０１％（w/v）、および約０．０３〜約０．１％（w/v）の範囲の抽出物の乾燥物質を含む）。
【０１４９】
ここに記載される使用に適した本発明の抽出物およびこの抽出物を含有する組成物のさらなる特徴は、これより前の段落に記載されている。
本発明は、皮膚の老化の兆候を改善する方法、すなわち抗老化方法にも関する。この方法は、本発明のドリコス  ビフロルス抽出物または本発明の化粧品組成物を皮膚へ塗布する工程を含む。この塗布は、一般的には局所適用である。抽出物または化粧品組成物を効果的な量で、および／または、本発明の美容的使用の基本的な効果を達成するために十分な時間適用する。
【０１５０】
本発明の抗老化方法は、本発明の美容的使用における効果と同様の効果を有する。したがって、上述したような美容的使用の特徴は、抗老化方法と同様の特徴である。
【０１５１】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は例示目的であり、本発明を限定するものとして解釈されるべきでないことを理解されたい。
【０１５２】
以下の実施例において、分子生物学および細胞培養の標準技術は、種々の公知文献、例えばSambrook等、（2001）、Molecular Cloning: A Laboratory Manual、第３版、Cold Spring Harbor Laboratory Press、またはAusubel等、（1987）、Current Protocols in Cell Biology、2002、Wiley Interscience等に記載される技術を使用した。他に記載がない限り、酵素、細胞、試薬、装置およびキットは、製造業者の説明書にしたがって使用し、化学物質は使用し得る最も純度の高いものを使用した。
【０１５３】
〔実施例１：ドリコス  ビフロルス種子の水／グリコール抽出〕
１００ｇのドリコス  ビフロルス乾燥種子を粉砕した。得られた粉末に、７００ｍｌの１，３−ブチレングリコールおよび３００ｍｌの蒸留水を加え、攪拌しながら１時間、８０℃で抽出を行った。懸濁液を室温まで冷却し、遠心分離して上清を得た。それを濾紙で濾過し、水／グリコール抽出物中に０．７５重量％の乾燥物質を含む（ハロゲン水分計（Mettler Toledo）により測定）８２８ｍｌの黄色みがかった透明な液体を得た。
【０１５４】
〔実施例２：ドリコス  ビフロルス種子の水／メタノール抽出〕
５０ｇのドリコス  ビフロルス乾燥種子を粉砕した。得られた粉末に、８００ｍｌのメタノールおよび２００ｍｌの蒸留水を加え、攪拌しながら２０時間、室温で抽出を行った。１時間のデカンテーションの後、懸濁液を濾紙で濾過し、黄色みがかった透明な液体を得た。真空下でメタノールを除去した後、液体抽出物を凍結乾燥し、３．８ｇの茶色がかった粉末を得た。
【０１５５】
〔実施例３：ドリコス  ビフロルス種子の水／エタノール抽出（２０時間）〕
５０ｇのドリコス  ビフロルス乾燥種子を粉砕した。得られた粉末に、７００ｍｌのエタノールおよび３００ｍｌの蒸留水を加え、攪拌しながら２０時間、室温で抽出を行った。１時間のデカンテーションの後、懸濁液を濾紙で濾過し、黄色みがかった透明な液体を得た。真空下でエタノールを除去した後、液体抽出物を凍結乾燥し、４．８ｇの茶色がかった粉末を得た。
【０１５６】
〔実施例４：ドリコス  ビフロルス種子の水／エタノール抽出（１時間）〕
１００ｇのドリコス  ビフロルス乾燥種子を粉砕した。得られた粉末に、７００ｍｌのエタノールおよび３００ｍｌの蒸留水を加え、攪拌しながら１時間、室温で抽出を行った。１時間のデカンテーションの後、懸濁液を濾紙で濾過し、黄色みがかった透明な液体を得た。真空下でエタノールを除去した後、液体抽出物を凍結乾燥し、７．９ｇの茶色がかった粉末を得た。
【０１５７】
〔実施例５：ドリコス  ビフロルス種子の水／エタノール抽出（還流下）〕
１００ｇのドリコス  ビフロルス乾燥種子を粉砕した。得られた粉末に、６３０ｍｌのエタノールおよび２７０ｍｌの蒸留水を加え、懸濁液を７０℃に加熱し、攪拌しながら１時間、還流下で抽出を行った。懸濁液を室温まで冷却後濾紙で濾過し、黄色みがかった透明な液体を得た。真空下でエタノールを除去した後、液体抽出物を凍結乾燥し、９ｇの茶色がかった粉末を得た。
【０１５８】
〔実施例６：ドリコス  ビフロルス種子の水抽出〕
１５０ｇのドリコス  ビフロルス乾燥種子を粉砕した。得られた粉末に、８５０ｍｌの蒸留水を加え、ｐＨを４Ｎの硫酸で４．５に調整し、攪拌しながら１時間、室温で抽出を行った。懸濁液を遠心分離し、それを濾紙で濾過し、水性抽出物中に２．６重量％の乾燥物質を含む（ハロゲン水分計（Mettler Toledo）により測定）透明な液体を得た。２．６重量％のマルトデキストリンを加えた後、溶液を噴霧乾燥し、１５．４ｇのベージュ粉末を得た。
【０１５９】
〔実施例７：ドリコス  ビフロルス種子の水性抽出物の酵素加水分解〕
１５０ｇのドリコス  ビフロルス乾燥種子を粉砕した。得られた粉末に、８５０ｍｌの蒸留水を加え、ｐＨを４Ｎの水酸化ナトリウムで７．５に調整し、攪拌しながら室温で抽出を行った。１時間後、２ｇのalcalase（登録商標）2.4 L FG（Novozymes）を添加し、抽出物を２時間３０分、５０℃で加水分解した。１５分間、８５℃で懸濁液を加熱することにより酵素を不活性化した。室温まで冷却後、懸濁液を遠心分離し、それを濾紙で濾過し透明な液体を得た。液体加水分解抽出物を凍結乾燥し、４７．２ｇのベージュ粉末を得た。
【０１６０】
〔実施例８：培養ヒト繊維芽細胞における再生作用および再活性化作用〕
この試験の目的は、インビトロにおいて培養されたヒト線維芽細胞に対する前記実施例により調製した抽出物の再活性化および再生活性を評価することである。
ヒト線維芽細胞の増殖有効性試験（増殖試験）を、再生および増殖因子様活性を評価するために行った。この試験において、ヒト線維芽細胞（細胞系ＭＲＣ５）を細胞培養用の標準培地（ＤＭＥＭ＝ダルベッコ最少必須培地、Invitrogen N゜41965-039、１０重量％ウシ胎仔血清（FCS）含有）中で培養した。５％ＣＯ2雰囲気中、３７℃で１日培養し、栄養培地を、異なる濃度のドリコス  ビフロルス抽出物を含む標準培地（ウシ胎仔血清を含まないＤＭＥＭ）によって置換した。３日間培養した後、Bradford法（Bradford等、1976、Anal. Biochem. 72:248-254）にしたがってタンパク質含量を測定することにより、細胞ホモジネート（０．１ＮのＮａＯＨ溶液）における生存細胞の数を測定した。
【０１６１】
ドリコス  ビフロルス抽出物の存在下で培養したヒト繊維芽細胞の生存率を測定することにより、再生および再活性化活性を評価するため、生存有効性試験（生存試験）をヒト繊維芽細胞において行った。
ヒト線維芽細胞（細胞系ＭＲＣ５）を上記のＦＣＳ含有細胞培養用標準培地中で培養した。３日間の培養後に細胞が休眠し、栄養培地を、試験する各基質に対する濃度範囲を有する標準培地（ウシ胎仔血清を含まないＤＭＥＭ）によって置換した。その後３７℃で３日培養し、細胞ホモジネート（０．１ＮのＮａＯＨ溶液）において、Bradford法（Bradford等、1976、Anal. Biochem. 72:248-254）にしたがってタンパク質含量、細胞内ＡＴＰ含量（Vasseur、1981、Journal Francais Hydrologie、9：149-156による酵素法）および細胞内ＤＮＡ〔Rao, J.およびOtto, W.R. 細胞増殖評価のための蛍光ＤＮＡ分析（Fluorimetric DNA assay for cell growth estimation）、 Anal. Biochem. 207:186-192; 1992にしたがって、Hoechst 33258試薬を用いてＤＮＡを染色し、４５５ｎｍでの蛍光（励起３６５ｎｍ）を記録することにより測定〕を測定することにより培養細胞の代謝効果を測定した。
【０１６２】
分析は３重で行い、３回または４回繰り返した。結果は、タンパク質、ＡＴＰおよびＤＮＡに対して標準範囲を参照して算出し、コントロール（無添加の標準培地）に対して％で示す。
【０１６３】
【表１】
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【０１６４】
これらの結果は、ドリコス  ビフロルス種子の抽出物が細胞増殖および細胞代謝を改善し、これにより皮膚の再生を刺激し、皮膚の老化を遅らせることにつながる優れた能力を有していることを示す。
【０１６５】
〔実施例９：コラーゲンI生成の刺激〕
この試験の目的は、ドリコス  ビフロルス種子の抽出物のコラーゲンI含量の増加に対する能力を評価することである。ヒト真皮繊維芽細胞（美顔整形手術の皮膚に由来）を細胞培養用の標準培地（ＤＭＥＭ、Invitrogen N゜41965-039、１０体積％ウシ胎仔血清含有）中で２４時間、３７℃で培養した。その後、培地を、試験する生成物を含有する標準培地（ＤＭＥＭ、Invitrogen N゜41965-039、１体積％ウシ胎仔血清含有）により置換し、７２時間３７℃で培養した。細胞タンパク質の量を、Bradford法により細胞ホモジネート（０．１ＮのＮａＯＨ溶液）において測定した。I型コラーゲンの合成量は、細胞培養培地中に放出されたコラーゲンペプチドの量を、ELISA法（Osteomedical製kit Metra N゜）により測定することにより測定した。
【０１６６】
結果を表２に示す。これらはコントロールに対するタンパク質の割合（％）で示される。
【０１６７】
【表２】
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【０１６８】
これらの結果は、ドリコス  ビフロルス種子の抽出物が、ビタミンＣと同様に真皮ヒト繊維芽細胞による放出コラーゲンI量を明らかに促進することを示す。
【０１６９】
〔実施例１０：ヒト培養繊維芽細胞におけるコラーゲンVコード遺伝子の発現の刺激〕
この試験の目的は、実施例３のドリコス  ビフロルス種子の抽出物のヒト培養繊維芽細胞におけるコラーゲンVコード遺伝子の発現の刺激有効性を評価することである。
ヒト真皮繊維芽細胞（美容整形手術に由来）を細胞培養用の１０体積％ウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭ標準培地（Invitrogen）中で培養した。細胞が重なり始めたら、試験する基質をＦＣＳ非含有の新しいＤＭＥＭ培地に投下した。繊維芽細胞を２４時間試験基質とともに培養した後、市販の抽出キット（Nucleospin（商標）RNA II、Macherey-Nagel（商標）、フランス）を用いて全ＲＮＡを抽出した。全ＲＮＡの定量化および品質の照合は、２６０ｎｍおよび２８０ｎｍにおける蛍光を測定することにより実施した。
【０１７０】
特定ｑＲＴ−ＰＣＲ法を実施し、ＣＯＬ５Ａ１またはＣＯＬ５Ａ２のいずれかの遺伝子発現を分析した。いずれの場合においても、標的ｍＲＮＡレベルをハウスキーピング遺伝子ｍＲＮＡ（処理によりその発現が大きく変化しない：翻訳延長因子１−α（ＥＦ１α））の割合と比較した。
【０１７１】
逆転写段階は逆転写（ＲＴ）キット（ThermoScript（商標）RT-PCR System、Invitrogen、フランス）により、２０μｌ最終体積中全０．１μｇのＲＮＡを用いて実施した。定量的ＰＣＲは、製造業者の説明書（LightCycler（登録商標）480 SYBR Green I Master、Roche、フランス）に従い、２０μｌ最終体積中、２μｌの特異的プライマー混合ＲＴにおいて実施した。各分析を２回繰り返した。コントロールに対するＲＮＡの割合として示された結果は、３回の独立した分析の平均である（表３）。
【０１７２】
ＴＧＦ−β１を陽性の対照として使用した。この増殖因子は真皮の主要なコラーゲンIおよびIIIをコードする遺伝子の強力な転写活性因子である。ＴＧＦ−β１もＣＯＬ５Ａ１およびＣＯＬ５Ａ２ｍＲＮＡのレベルを増加することが確認されている。この増殖因子は非常に不安定であるため、その安定性を強化するため担体タンパク質をＴＧＦ−β１とともに加える。担体タンパク質のみを含むコントロール処理を行った。このタンパク質は、コラーゲンVｍＲＮＡのレベルに非常に弱い作用しか有しない。
【０１７３】
【表３】
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【０１７４】
これらの結果は、ドリコス  ビフロルス種子の抽出物による処理が、ヒト真皮繊維芽細胞中のV型コラーゲンをコードする両ｍＲＮＡのレベルを増加することを明確に示す。この作用はコラーゲンVの合成の増加を生じる。コラーゲンVは、老化過程において変化するコラーゲンIの正しい形成および構造に関与する。このため、コラーゲンIの生成速度におけるその作用に加えて、ドリコス  ビフロルス種子の抽出物は、これらの新たに合成されるコラーゲンI繊維の構造に良好な影響を及ぼし、皮膚の老化過程を制限する。
【０１７５】
〔実施例１１：ＵＶＡ光細胞保護作用、抗酸化作用〕
ＵＶ-Ａ線は真皮に浸透し、そこで、アニオン超酸化物、過酸化水素および一重項酸素などの反応性酸素種の生成、および細胞膜の脂質過酸化を触媒する主に感光性生物成分の活性により、酸化ストレスを導く（Dalle Carbonare M、Pathak MA（1992）J Photochem & Photobiol 14:1-2、105-124）。ＵＶＡ照射後に形成される脂質過酸化物は、タンパク質のような多くの生物学的分子間の架橋を形成することができ、酵素の阻害および突然変異誘発のリスクを伴う核酸の損傷をもたらすマロンジアルデヒドに分解される。そこで、インビトロで遊離マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）のレベルを測定することにより酸化的ストレスを評価した。
【０１７６】
ヒト線維芽細胞（細胞系ＭＲＣ５）を上述した栄養培地（ＤＭＥＭ（Invitrogen N°41965-039）＋ＦＣＳ）中に植菌し、３日間、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。その後、培地を、試験基質を含有する培地により置換し、２日間、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。培地を均衡塩溶液（Hank’s BSS SIGMA H1387）により置換した後、培養細胞をＵＶＡ  ２０Ｊ／ｃｍ２で照射した。細胞タンパク質およびＧＳＨ（グルタチオン）をそれぞれBradford試薬（MM. Bradfordによる：タンパク質−染料結合の原理を利用したマイクログラム量のタンパク質の急速および高感度の定量方法、Anal. Biochem 72:248-254（1976））を用いて、ＯＰＴ（オルトフタルアルデヒド）法（Hissin PJ, Hilf R.:組織における酸化還元グルタチオンの測定のための蛍光法、ANALYTICAL BIOCHEMISTRY 74:214-26（1976））により測定し、上清中に放出されたＭＤＡをＴＢＡ（チオバルビツール酸）試薬を用いて分光光度的に測定した（Morliere P等による、培養ヒト線維芽細胞におけるＵＶ−Ａ誘導脂質過酸化、Biochim. Biophys. Acta、1084、3:261-269（1991））。
【０１７７】
【表４】
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【０１７８】
０．０３および０．１％（w/v）の高濃度の実施例２の抽出物も３重、１回試験し、高い効果であった。
【０１７９】
ＵＶＡ照射はコントロールでＭＤＡの放出を引き起こした。ドリコス  ビフロルス抽出物による線維芽細胞の培養後、ＭＤＡ放出は未処理コントロールと比較して低下した。したがって、ＵＶ−Ａ誘導酸化的損傷に対する細胞保護が、ドリコス  ビフロルス処理により得られうる。
【０１８０】
〔実施例１２：ＵＶ−Ｂ光細胞保護作用〕
アラキドン酸カスケードは皮膚炎症の重要なメカニズムである。このカスケードは特定の因子、特にＵＶＢ照射により引き起こされる。ＵＶＢは、細胞膜からアラキドン酸を放出するホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）の活性化により炎症反応を引き起こす（De Leo VA等、Photochemistry and Photobiology（1985）41:51-56）。その後、シクロオキシゲナーゼはアラキドン酸をプロスタグランジン（ＰＧ）に転換し、細胞外へ放出される。特定のプロスタグランジン（ＰＧＥ２）の特定の皮膚レセプターへの結合は、ヒト皮膚の紅斑点、水腫を引き起こす。培養ヒト細胞において、細胞膜へのＵＶＢ作用は、細胞質酵素、ラクテートデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の上清培地への放出を伴う（Bonnekoh B等（1990）Dermatological Research 282:325-331）。
【０１８１】
ヒト角化細胞（細胞系Ａ４３１）を栄養培地（ＤＭＥＭ＋ＦＣＳ）に植菌し（１２ウェルプレートの１ウェルにつき１ｍｌ）、３日間、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。その後、培地を、試験する基質を含有する均衡塩溶液により置換した後、培養細胞をＵＶＢ  ５０Ｊ／ｃｍ２（DUKE GL40Eランプ）で照射した。１日間、３７℃、５％ＣＯ２で培養後、培地中に放出されたＬＤＨ（キットRoche N゜ 1644793）およびＰＧＥ２（キットOxford Biomedical N゜EA02 via Euromedex）を測定し、細胞生存率を測定するため細胞内ＤＮＡを蛍光プローブHoechst 33258試薬を用いて測定した（Rao, J.、およびOtto, W.R. 細胞増殖評価のための蛍光測定ＤＮＡ分析、Anal. Biochem. 207:186-192（1992））。
【０１８２】
【表５】
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【０１８３】
コントロールのＵＶＢ照射は、培地中のＬＤＨ活性の放出により実証されるようにＰＧＥ２の放出および細胞膜損傷を伴う炎症を引き起こし、また角化細胞数の減少（細胞ＤＮＡの約７７％の減少）を引き起こした。ＵＶＢ照射し、ドリコス  ビフロルス抽出物と培養後の角化細胞では、ＵＶＢ照射コントロールに比べて生存細胞の増加、ＬＤＨおよびＰＧＥ２の放出の減少が見られた。これらの結果は、ドリコス  ビフロルス抽出物のＵＶＢ照射により引き起こる損傷から皮膚細胞を保護する能力を実証している。
【国際調査報告】
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