(57)【要約】  本発明は、化粧上有益な作用剤のヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪への送達のためのペプチドに基づく試薬を含んでなる組成物および系に関する。
2012522057.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１０−５モル濃度若しくはそれ未満のＫｄまたはＭＢ５０値でヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪の最低１種に結合しかつ親和性対の第一の部分をさらに含んでなる最低１個の結合ドメインを含んでなるペプチド成分；ならびに
約０．０１ミクロンと約７５ミクロンの間の平均粒子径および親和性対の第二の部分を有する微粒子の有益な作用剤の安定な分散系
を含んでなり；
該最低１個の結合ドメインが、分散系の粒子に対してそれが有するよりも大きいヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対する結合親和性を有する、
化粧用系。
【請求項２】
約０．０１ミクロンと約７５ミクロンの間の平均粒子径が動的光散乱およびレーザー回折よりなる群から選択される方法により測定される、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項３】
結合ドメインが複数のサブドメインを含んでなる、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項４】
有益な作用剤と親和性対の第二の部分の間の会合が非共有結合である、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項５】
結合ドメインが、ウール、カシミヤ若しくはヤク毛より、ヒト毛髪、皮膚若しくは爪にさらに優先的に結合する、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項６】
結合ドメインが、綿若しくは変性セルロース繊維より、ヒト毛髪、皮膚若しくは爪にさらに優先的に結合する、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項７】
結合ドメインが、金属、セラミック、磁器、ガラス、絹、木、ポリエステル若しくはポリ塩化ビニルより、ヒト毛髪、皮膚若しくは爪にさらに優先的に結合する、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項８】
微粒子がナノ粒子である、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項９】
親和性対が、イオン結合に基づく、水素結合に基づく、疎水性結合に基づく、キレート化に基づく、生物学的親和性に基づく、若しくは親和性対がそれらの組合せに基づく、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項１０】
親和性対が、アビジンに対するビオチン、ストレプトアビジンに対するビオチン、ストレプトアビジンに対するストレプトアビジン標識、マルトースに対するマルトース結合タンパク質、アミラーゼに対するマルトース結合タンパク質、金属に対するポリヒスチジン標識、グルタチオンに対するグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、抗体に対するエピトープ標識、若しくはそれらの組合せに基づく、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項１１】
金属が二価金属である、請求項１０に記載の化粧用系。
【請求項１２】
金属がコバルト、銅、ニッケル、亜鉛若しくはそれらの組合せである、請求項１１に記載の化粧用系。
【請求項１３】
エピトープ標識がＨＡ標識、ＦＬＡＧ標識、Ｅ標識、Ｓ標識若しくはｍｙｃ標識である、請求項１０に記載の化粧用系。
【請求項１４】
有益な作用剤が、日焼け止め剤、調整剤、被包された香料、抗菌剤、ふけ防止剤、抗真菌剤、賦香剤、被包された生理活性剤、毛髪除去剤、抗ざ瘡剤若しくは着色剤である、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項１５】
着色剤が、着色された色素、着色された粒子若しくはそれらの組合せである、請求項１４の化粧用系。
【請求項１６】
結合ドメインが、それが分散系の粒子に対して有するより２倍大きいヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対する結合親和性を有する、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項１７】
安定な分散系が電荷が安定化されている、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項１８】
微粒子の有益な作用剤のゼータ電位の絶対値が最低２５ｍＶである、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項１９】
安定な分散系が立体的に安定化されている、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項２０】
安定な分散系が分散剤を含んでなる、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項２１】
分散剤がイオン性分散剤若しくは非イオン性分散剤である、請求項２０に記載の化粧用系。
【請求項２２】
第一の結合ドメインがバイオパニングを使用して同定される、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項２３】
第一の結合ドメインが、ファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母ディスプレイ、リボソームディスプレイ、ｍＲＮＡディスプレイ若しくはそれらの組合せを使用して同定される、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項２４】
結合ドメインが、約１０−５モル濃度ないし約１０−１０モル濃度のＫｄ若しくはＭＢ５０値により測定されるところのヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪に対する結合親和性を有する、請求項１に記載の化粧用系。
【請求項２５】
ヒト毛髪、皮膚若しくは爪を、１０−５モル濃度若しくはそれ未満のＫｄまたはＭＢ５０値でヒト毛髪、皮膚若しくは爪の最低１種に結合しかつ親和性対の第一の部分をさらに含んでなる最低１個の結合ドメインを有するペプチド成分を含んでなる組成物と、該結合ドメインがヒト毛髪、皮膚若しくは爪に結合するのに十分な時間接触させること；およびその後、約０．０１ミクロンと約７５ミクロンの間の平均粒子径および親和性対の第二の部分を有する微粒子の有益な作用剤の安定な分散系をヒト毛髪、皮膚若しくは爪に適用すること
を含んでなり；
該最低１個の結合ドメインが、それが該分散系の粒子に対して有するより大きいヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対する結合親和性を有する、
ヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪の最低１種への有益な作用剤の適用方法。
【請求項２６】
ヒト毛髪、皮膚若しくは爪を安定な微粒子分散系とその後接触させる前に、ヒト毛髪、皮膚若しくは爪を水性溶液と接触させることをさらに含んでなる、請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の交差引用
本出願は、２００９年３月３０日に出願された米国仮出願第６１／１６４，５３３号明細書（その全体は本明細書に組み込まれる）の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、ヒト毛髪、ヒト皮膚および／若しくはヒト爪への化粧用の有益な作用剤の送達のためのペプチドに基づく試薬を含んでなる組成物および系に関する。
【背景技術】
【０００３】
多くの化粧用保護製品は、１種若しくはそれ以上の微粒子の有益な作用剤（ａｇｅｎｔｓ）、例えば、毛髪、皮膚および爪のようなケラチンを含有する体表面の化粧特性を改良する着色剤および調整剤から構成される。これらの微粒子の有益な作用剤はこれらの体表面に耐久性に結合しない。結果として、これらの製品は所望の効果を維持するために体表面に頻繁に再適用される必要がある。
【０００４】
多様なタンパク質に基づく試薬が、標的表面に対する若しくは標的表面への有益な作用剤の標的化送達のための有益な作用剤の結合耐久性を改良するための試みにおいて開発された。全体として、これらは非実用的であり、およびこれらの「結合」タンパク質の多くは高価かつ調製するのが困難であり、そして効果的な結合のための複雑な支持足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）構造を必要とする例えば免疫グロブリン、免疫グロブリン由来タンパク質および免疫グロブリン以外の結合タンパク質を包含する（多様な足場構造に補助されるアプローチの総説については非特許文献１を参照されたい）。
【０００５】
一本鎖ペプチドおよびペプチドに基づく試薬が、化粧的応用、例えば毛髪、皮膚および爪のための伝統的着色剤および調整剤（特許文献１および特許文献２、特許文献３ならびに特許文献４；特許文献５および特許文献６；特許文献７、特許文献８および特許文献９；特許文献１０；特許文献１１；ならびに特許文献１２および特許文献１３）、カーボンナノチューブに基づく毛髪着色剤（特許文献１４）、皮膚日焼け止め剤（特許文献１５および特許献１６）、毛髪日焼け止め剤（特許文献１７）、ふけ防止剤（特許文献１８）、および抗ざ瘡剤（特許文献１９）での使用について報告されている。
【０００６】
毛髪、皮膚および／若しくは爪に対する強い親和性をもつある種の一本鎖結合ペプチドが、ファージディスプレイを使用して同定されている（特許文献１および特許文献２、特許文献３ならびに特許文献４；特許文献２０；特許文献２１；特許文献２２；ならびに特許文献２３）。加えて、正に荷電したアミノ酸に基づく経験的に生成される毛髪および皮膚結合ペプチドが報告されている（特許文献２４）。これらのアプローチは、複雑な足場構造および／若しくは免疫グロブリン様構造を欠く短い直鎖状ペプチドが、毛髪、皮膚および／若しくは爪の表面に対する強い親和性（すなわちＫｄ＜１０−５Ｍ）を有し得ることを具体的に説明する。
【０００７】
しかしながら、単一の短いペプチドの結合強さはほとんどの化粧的応用に必要とされる耐久性に合致するのに十分でないかもしれない。それらの応用において、同定された表面結合ペプチドの２種若しくはそれ以上を一緒に連結して、標的とされる表面（すなわち皮膚、毛髪若しくは爪）に対する増大された親和性を有する直鎖状結合ドメイン（本明細書で「手（ｈａｎｄｓ）」ともまた称される）を製造し得る。しばしば、２種若しくはそれ以上の結合ドメインを、個々の標的表面結合ペプチドを分離する短いペプチドスペーサーを介して連結しうる。
【０００８】
各ドメインが最低２種の基質を一緒に結合するよう設計され、該結合ドメインの最低１個が最低１種のケラチンを含有する身体基質（例えば毛髪、皮膚および／若しくは爪）に対する親和性を有するよう設計された一方で第二の結合ドメインが有益な作用剤に対する親和性を有するよう設計された、複数の合理的に設計された結合ドメインを有するペプチドが報告されている（特許文献１０および特許文献８；ならびに特許文献２５）。これらのペプチドに基づく試薬は最低２個の結合ドメインを含んでなり（本明細書で「両手ペプチド（ｔｗｏ−ｈａｎｄｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ）」若しくは「両手ペプチドに基づく試薬」と称される）、ここで各結合ドメインはそれらのそれぞれの基質に対する親和性を有するよう設計されている。
【０００９】
有益な作用剤をヒト毛髪、皮膚および／若しくは爪に効果的に結合し得かつ「両手（ｔｗｏ−ｈａｎｄｅｄ）」でない、選択的直鎖状ペプチドおよび化粧用系に対する必要性が存続している。温和な条件を使用して有益な作用剤がペプチドから解放され得る選択的ペプチドに対する必要性もまた存続している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第７，２２０，４０５号明細書におけるＨｕａｎｇら
【特許文献２】米国特許出願公開第ＵＳ２００５／０２２６８３９号明細書におけるＨｕａｎｇら
【特許文献３】米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００５３８３７号明細書におけるＨｕａｎｇら
【特許文献４】米国特許出願公開第ＵＳ２００８／０１５２６００号明細書におけるＨｕａｎｇら
【特許文献５】米国特許出願公開第ＵＳ２００７／０１９６３９５号明細書におけるＷａｎｇら
【特許文献６】米国特許出願公開第ＵＳ２００６／０１９９２０６号明細書におけるＷａｎｇら
【特許文献７】米国特許出願公開第ＵＳ２００６／００７３１１１号明細書におけるＯ’Ｂｒｉｅｎら
【特許文献８】米国特許第７，２８５２６４号明細書におけるＯ’Ｂｒｉｅｎら
【特許文献９】公開ＰＣＴ出願第ＷＯ２００８／０５４７４６号明細書におけるＯ’Ｂｒｉｅｎら
【特許文献１０】米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６５３８７号明細書におけるＢｅｃｋら
【特許文献１１】米国特許出願公開第ＵＳ２００８／０１０７６１４号明細書におけるＦａｈｎｅｓｔｏｃｋら
【特許文献１２】米国特許出願第１２／１９８３５８号明細書におけるＢｅｎｓｏｎら
【特許文献１３】米国特許出願第１２／１９８３８２号明細書におけるＢｅｎｓｏｎら
【特許文献１４】米国特許出願公開第ＵＳ２００５／０２２９３３５号明細書におけるＨｕａｎｇら
【特許文献１５】米国特許第７，３０９，４８２号明細書におけるＢｕｓｅｍａｎ−Ｗｉｌｌｉａｍｓら
【特許文献１６】米国特許出願公開第ＵＳ２００７／０１１０６８６号明細書におけるＬｏｗｅら
【特許文献１７】米国特許出願公開第２００８／０１７５７９８号明細書におけるＢｅｃｋら
【特許文献１８】米国特許出願第１２／２７３，７５３号明細書におけるＯ’Ｂｒｉｅｎら
【特許文献１９】米国特許出願第１２／２７３，７７８号明細書におけるＯ’Ｂｒｉｅｎら
【特許文献２０】公開ＰＣＴ出願第ＷＯ０１／７９４７９号明細書におけるＥｓｔｅｌｌら
【特許文献２１】米国特許出願公開第２００２／００９８５２４号明細書におけるＭｕｒｒａｙら
【特許文献２２】米国特許出願公開第２００３／０１５２９７６号明細書におけるＪａｎｓｓｅｎら
【特許文献２３】公開ＰＣＴ出願第ＷＯ０４／０４８３９９号明細書におけるＪａｎｓｓｅｎら
【特許文献２４】Ｒｏｔｈｅらへの第ＷＯ２００４／０００２５７号明細書
【特許文献２５】Ｇｒｉｎｓｔａｆｆらへの米国特許出願公開第２００３／０１８５８７０号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｂｉｎｚ，Ｈ．ら（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３、１２５７−１２６８
【発明の概要】
【００１２】
［発明の要約］
本発明は、１０−５モル濃度若しくはそれ未満のＫｄ若しくはＭＢ５０でヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪の最低１種に結合し、かつ、親和性対（ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｐａｉｒ）の第一の部分をさらに含んでなる最低１個の結合ドメインを含んでなるペプチド成分；ならびに約０．０１ミクロンと約７５ミクロンの間の平均粒子径および該親和性対の第二の部分を有する微粒子の有益な作用剤の安定な分散系を含んでなる化粧用系に向けられ；該最低１個の結合ドメインは、それが該分散系の粒子に対して有するより大きいヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対する結合親和性を有する。有益な作用剤の適用およびヒト毛髪、皮膚若しくは爪の最低１種からの該有益な作用剤の除去を包含する、本発明の化粧用系の使用方法もまた記述される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の一態様すなわち毛髪に粒子を結合されたビオチニル化ＨＣＰ５二量体ペプチドの蛍光を描く。
【図２】シリカ被覆された酸化鉄色素を使用する本発明のある態様の毛髪着色能力を示すヒストグラムである。
【図３Ａ】被覆された酸化鉄粒子への初期曝露後に実施例７に示される手順に従って処理された毛髪房（ｔｒｅｓｓ）を描く。
【図３Ｂ】実施例７に示される手順に従って処理され次いで水で洗浄された毛髪房を描く。
【図３Ｃ】実施例７に示される手順に従って処理され次いで０．２５％ＳＬＥＳ洗浄液（Ｗａｓｈ）で洗浄された毛髪房を描く。
【図４Ａ】（ＨＣＰ５）２−ビオチンおよび５００ｎｍストレプトアビジン被覆酸化鉄粒子で処理された毛髪の電子顕微鏡写真である。
【図４Ｂ】（ＨＣＰ５）２−ビオチンおよび２００ｎｍストレプトアビジン被覆酸化鉄粒子で処理された毛髪の電子顕微鏡写真である。
【配列の説明】
【００１４】
以下の配列は３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８２１−１．８２５（「ヌクレオチド配列および／若しくはアミノ酸配列の開示を含有する特許出願に対する要件−配列表の規則（Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ａｎｄ／ｏｒ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅｓ−ｔｈｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｒｕｌｅｓ）」）に準拠し、また、世界知的所有権機関（ＷＩＰＯ）標準ＳＴ．２５（１９９８）ならびにＥＰＯおよびＰＣＴの配列表の要件（実施細則の規則５．２および４９．５（ａ−２）、ならびに２０８節および附属書Ｃ）に一致する。ヌクレオチドおよびアミノ酸配列に使用される記号および形式は３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２２に示される規則に準拠する。
配列番号１−１８４および１８６−１８９は、ケラチンを含有する体表面に結合するペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１−１３４および１８４は毛髪結合ペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１３０−１３４は毛髪および皮膚に結合する経験的に生成される配列である。配列番号１３５−１８２は皮膚結合ペプチドのアミノ酸配列である。配列番号１８３−１８４は爪結合ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号１８５は金属イオンに結合するペプチド（「ＨＡＴ」）標識のアミノ酸配列である。
配列番号１８６はＣ末端リシン残基をもつ配列番号７６のアミノ酸配列である。
配列番号１８７はＣ末端リシン残基をもつ配列番号８２のアミノ酸配列である。
配列番号１８８はＣ末端リシン残基をもつ配列番号８６のアミノ酸配列である。
配列番号１８９はＣ末端リシン残基をもつ配列番号１１０のアミノ酸配列である。
配列番号１９０は、配列番号８２のランダム化バージョンを含んでなるペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号１９１は、配列番号１２０のランダム化バージョンを含んでなるペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号１９２は、配列番号３０のランダム化バージョンを含んでなるペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号１９３は色素結合ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号１９４はセルロースアセテート結合ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号１９５はセルロースアセテート結合ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号１９６はペプチドＨＣ２６３のアミノ酸配列である。
配列番号１９７はペプチドＨＣ２６４のアミノ酸配列である。
配列番号１９８はペプチドＨＣ２１４のアミノ酸配列である。
配列番号１９９はペプチドＨＣ２０４のアミノ酸配列である。
配列番号２００はペプチドＨＣ２０５のアミノ酸配列である。
配列番号２０１はペプチドＨＣ３５２のアミノ酸配列である。
配列番号２０２はペプチドＨＣ４２３のアミノ酸配列である。
配列番号２０３はペプチドＨＣ４２４のアミノ酸配列である。
配列番号２０４は、本明細書で「ＨＣＰ５二量体」ともまた称されるペプチド（ＨＣＰ５）２のアミノ酸配列である。
配列番号２０５は、Ｃ末端リシン残基をもつ配列番号２０４のペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号２０６はストレプトアビジン結合ペプチド標識のアミノ酸配列である。
配列番号２０７はペプチドＨＣ２６０のアミノ酸配列である。
配列番号２０８はペプチドリンカー「ｔｏｎＢ」のアミノ酸配列である。
配列番号２０９はペプチド架橋のアミノ酸配列である。
配列番号２１０はペプチドＨＣ３５３のアミノ酸配列である。
配列番号２１１はペプチドＨＣ６３４のアミノ酸配列である。
配列番号２１２はペプチドＨＣ６３５のアミノ酸配列である。
配列番号２１３はペプチドＨＣ６３６のアミノ酸配列である。
配列番号２１４はペプチドＨＣ６３７のアミノ酸配列である。
配列番号２１５はペプチドＨＣ６３８のアミノ酸配列である。
配列番号２１６はペプチドＨＣ６３９のアミノ酸配列である。
配列番号２１７はペプチドＨＣ６４０のアミノ酸配列である。
配列番号２１８はペプチドＨＣ６４１のアミノ酸配列である。
配列番号２１９はペプチドＨＣ６４２のアミノ酸配列である。
配列番号２２０はペプチドＨＣ６４３のアミノ酸配列である。
配列番号２２１はペプチドＨＣ６４４のアミノ酸配列である。
配列番号２２２はペプチドＨＣ６４５のアミノ酸配列である。
配列番号２２３−２３４は、色素表面と静電的に会合するように設計されたペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号２３５はペプチドＨＨＨＨＨＨのアミノ酸配列である。
配列番号２２５はＣ末端ポリリシンブロックをもつ配列番号２１２のアミノ酸配列である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
［発明の詳細な記述］
ヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪の最低１種への有益な作用剤の適用のための改良された化粧用系が開発され、そして本明細書に記述される。これらの系の製造および使用方法もまた記述される。本発明の化粧用系は、安定な微粒子の分散系で提供されるペプチド成分および微粒子の有益な作用剤を含んでなる。
【００１６】
ペプチド成分
ペプチド成分は、ヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪である最低１種のヒト体表面に結合する最低１個のペプチド結合ドメインを含んでなる。本発明のある種のペプチド成分は長さが約５００アミノ酸若しくはそれ未満であることができる。該ペプチド成分は例えば水性溶液、粉末、乳液、懸濁液、分散系、ゲル、クリーム若しくはエアゾル（ａｅｒｏｓｏｌ）として提供し得る。該ペプチド成分は、総組成物の約０．０１％ないし約１０％、いくつかの態様においては約０．０１％ないし約５重量％の濃度でヒト毛髪、皮膚若しくは爪の最低１種に適用しうる。
【００１７】
本発明の範囲内で、「ペプチド」、「ペプチド性物質（ｐｅｐｔｉｄｉｃ）」および「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合により一緒に結合された２個若しくはそれ以上のアミノ酸のポリマーを指すのに本明細書で互換性に使用することができ、ここでペプチドは指定されない長さのものである。ペプチド、オリゴペプチドおよびポリペプチドは本定義内に包含される。一局面において、本用語はペプチドの発現後修飾、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化などもまた包含する。例えば１種のアミノ酸の１種若しくはそれ以上のアナログまたは標識アミノ酸を含有するペプチドおよびペプチド模倣薬もまた該定義内に包含される。例示的態様において、ペプチド成分は１５ないし５００、１５ないし２５０若しくは１５ないし１００アミノ酸を含むことができる。特定のアミノ酸を同定するのに以下の略語を使用することができる。
【００１８】
アミノ酸                          ３文字略語                １文字略語
アラニン                          Ａｌａ                    Ａ
アルギニン                        Ａｒｇ                    Ｒ
アスパラギン                      Ａｓｎ                    Ｎ
アスパラギン酸                    Ａｓｐ                    Ｄ
システイン                        Ｃｙｓ                    Ｃ
グルタミン                        Ｇｌｎ                    Ｑ
グルタミン酸                      Ｇｌｕ                    Ｅ
グリシン                          Ｇｌｙ                    Ｇ
ヒスチジン                        Ｈｉｓ                    Ｈ
イソロイシン                      Ｉｌｅ                    Ｉ
ロイシン                          Ｌｅｕ                    Ｌ
リシン                            Ｌｙｓ                    Ｋ
メチオニン                        Ｍｅｔ                    Ｍ
フェニルアラニン                  Ｐｈｅ                    Ｆ
プロリン                          Ｐｒｏ                    Ｐ
セリン                            Ｓｅｒ                    Ｓ
トレオニン                        Ｔｈｒ                    Ｔ
トリプトファン                    Ｔｒｐ                    Ｗ
チロシン                          Ｔｙｒ                    Ｙ
バリン                            Ｖａｌ                    Ｖ
いずれかのアミノ酸（若しくは本明細書に定義されるところの）
Ｘａａ                    Ｘ
【００１９】
本明細書で使用されるところの「結合ドメイン」は、特定の表面（１種若しくは複数）例えばヒト毛髪、皮膚および／若しくは爪に対する親和性を有すると同定された１種、理想的には２種若しくはそれ以上のより短いペプチド（「サブドメイン」）を含んでなるペプチドを指す。ある態様において、結合ドメインは該より短いペプチドの２から約５０種まで若しくは２ないし約２５種を包含しうる。他の態様は２ないし約１０種のより短いペプチドを包含する結合ドメインを有するものを包含する。他の態様は２、３、４若しくは５種のより短いペプチドを包含する結合ドメインである。
【００２０】
これらのより短いペプチドは、相互に直接連結されて結合ドメインを形成しうるか、または１種若しくはそれ以上の短いペプチドスペーサーを介して連結されて結合ドメインを形成しうる。いくつかの態様において、ペプチドスペーサーは長さが１から１００まで若しくは１ないし５０アミノ酸である。他の態様において、ペプチドスペーサーは長さが約１ないし約２５、３ないし約４０若しくは３ないし約３０アミノ酸である。長さが約５ないし約２０アミノ酸であるスペーサーがなお他の態様にある。
【００２１】
ある態様において、本発明の結合ドメインは１０−５モル濃度（Ｍ）若しくはそれ未満の結合親和性値でヒト毛髪、皮膚および爪の最低１種に結合する。いくつかの態様において、ペプチド結合ドメインは、最低約５０〜５００ｍＭの塩の存在下で１０−５若しくはそれ未満の結合親和性値を有することができる。「結合親和性」という用語は、そのそれぞれの基質、この場合はヒト毛髪、皮膚若しくは爪との結合ペプチドの相互作用の強さを指す。結合親和性は、結合ペプチドの解離定数（「Ｋｄ」）若しくは「ＭＢ５０」に関して定義若しくは測定し得る。
【００２２】
「Ｋｄ」は、標的上の結合部位が半分占有される、すなわちペプチドが結合された標的（結合された標的物質）の濃度がペプチドが結合されていない標的の濃度に等しい場合のペプチドの濃度に対応する。解離定数が小さくなるほどペプチドがより強固に結合される。例えば、ナノモル濃度（ｎＭ）の解離定数をもつペプチドはマイクロモル濃度（μＭ）の解離定数をもつペプチドより強固に結合する。本発明のある態様は１０−５若しくはそれ未満のＫｄ値を有することができる。
【００２３】
「ＭＢ５０」は、ＥＬＩＳＡに基づく結合アッセイで得られる最大シグナルの５０％であるシグナルを生じる結合ペプチドの濃度を指す。例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２６８３号明細書（ここに引用することにより組み込まれる）の実施例３を参照されたい。ＭＢ５０は、複合体の成分の結合相互作用すなわち親和性の強さの指標を提供する。ＭＢ５０の値が小さくなるほど、該ペプチドのその対応する基質との相互作用が強くすなわち「より良好に」なる。例えば、ナノモル濃度（ｎＭ）のＭＢ５０をもつペプチドはマイクロモル濃度（μＭ）のＭＢ５０をもつペプチドより強固に結合する。本発明のある態様は１０−５若しくはそれ未満のＭＢ５０値を有することができる。
【００２４】
いくつかの態様において、ペプチド結合ドメインは、約１０−５Ｍ未満若しくはこれに等しい、約１０−６Ｍ未満若しくはこれに等しい、約１０−７Ｍ未満若しくはこれに等しい、約１０−８Ｍ未満若しくはこれに等しい、約１０−９Ｍ未満若しくはこれに等しい、または約１０−１０Ｍ未満若しくはこれに等しいＫｄ若しくはＭＢ５０値により測定されるところの結合親和性を有する。少なくともヒト毛髪に結合することが同定されたペプチドは「毛髪結合ペプチド（ＨＢＰ）」ともまた称される。少なくともヒト皮膚に結合することが同定されたペプチドは「皮膚結合ペプチド（ＳＢＰ）」ともまた称される。少なくともヒト爪に結合することが同定されたペプチドは「爪結合ペプチド（ＮＢＰ）」ともまた称される。
【００２５】
いくつかの態様において、ペプチド結合ドメインは長さが約６０アミノ酸までであるペプチド結合サブドメインから構成される。ある態様は、長さが７ないし約６０アミノ酸であるペプチド結合サブドメインを有することができる。長さが７ないし５０若しくは７ないし３０アミノ酸であるペプチド結合サブドメインが他の態様にある。長さが７ないし２７アミノ酸であるペプチド結合サブドメインがなお他の態様にある。
【００２６】
単一の毛髪、皮膚および／若しくは爪結合ドメインを含んでなるペプチド成分が本発明のある態様である一方、本発明の他の態様において、ペプチド成分がヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪の最低１種に結合する１個超の結合ドメインを含んでなることが有利でありうる。複数のすなわち２個若しくはそれ以上の結合ドメインの包含は、例えば、単一結合ドメインを包含するペプチド成分よりなおより化粧上耐久性であるペプチド成分を提供し得る。いくつかの態様において、ペプチド成分は２から約５０若しくは２ないし約２５個のペプチド結合ドメインを包含する。他の態様は、２ないし約１０若しくは２ないし５個のペプチド結合ドメインを包含するペプチド成分を包含する。
【００２７】
複数の結合ドメインは直接一緒に連結し得るか、若しくはそれらはペプチドスペーサーを使用して一緒に連結し得る。ある種のペプチドスペーサーは長さが１から１００まで若しくは１ないし５０アミノ酸である。いくつかの態様において、ペプチドスペーサーは長さが約１ないし約２５、３ないし約４０若しくは３ないし約３０アミノ酸である。長さが約５ないし約２０アミノ酸であるスペーサーが他の態様にある。
【００２８】
本発明の結合ドメインは、それらが分散系の粒子に対して有するより大きいヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対する結合親和性もまた有することができる。分散系の粒子を上回るヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対する結合ドメインのこの優先的な親和性は、結合ドメインが分散系の粒子を上回るヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対するより大きい結合親和性を有しない系と比較して、より大きなパーセンテージの結合ドメインがヒト毛髪皮膚若しくは爪の最低１種への結合に利用可能である化粧用系をもたらす。いくつかの態様において、結合ドメインは、それらが分散系の粒子に対して有するより最低約２倍（２−ｆｏｌｄ）より大きい（すなわち約２倍（２  ｔｉｍｅｓ）より大きい）ヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対する結合親和性を有する。他の態様において、結合ドメインは、分散系の粒子に対してそ
れらが有するより最低５倍（５−ｆｏｌｄ）より大きい（すなわち約５倍（５−ｔｉｍｅｓ）より大きい）ヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対する結合親和性を有する。なお他の態様において、該結合ドメインは、分散系の粒子に対してそれらが有するより最低１０倍（１０−ｆｏｌｄ）より大きい（すなわち約１０倍（１０−ｔｉｍｅｓ）より大きい）ヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対する結合親和性を有する。
【００２９】
ペプチド結合ドメイン、およびそれらが構成されるそのより短いペプチドは、例えば、ファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母ディスプレイ、リボソームディスプレイ、ｍＲＮＡディスプレイのようないずれかの既知のバイオパニング（ｂｉｏｐａｎｎｉｎｇ）技術およびそれらの組合せを包含する当業者に既知のいずれかの数の方法を使用して同定し得る。
【００３０】
ペプチドのランダムライブラリーの生成は公知であり、そして、細菌ディスプレイ（Ｋｅｍｐ，Ｄ．Ｊ．；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８（７）：４５２０−４５２４（１９８１）およびＨｅｌｆｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０（１）：３１−３５、（１９８３））、酵母ディスプレイ（Ｃｈｉｅｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８（２１）：９５７８−８２（１９９１））、コンビナトリアル固相ペプチド合成（米国特許第５，４４９，７５４号明細書、米国特許第５，４８０，９７１号明細書、米国特許第５，５８５，２７５号明細書、米国特許第５，６３９，６０３号明細書）およびファージディスプレイ技術（米国特許第５，２２３，４０９号明細書、米国特許第５，４０３，４８４号明細書、米国特許第５，５７１，６９８号明細書、米国特許第５，８３７，５００号明細書）；リボソームディスプレイ（米国特許第５，６４３，７６８号明細書；米国特許第５，６５８，７５４号明細書；および米国特許第７，０７４，５５７号明細書）ならびにｍＲＮＡディスプレイ技術（ＰＲＯＦＵＳＩＯＮＴＭ；米国特許第６，２５８，５５８号明細書；米国特許第６，５１８，０１８号明細書；米国特許第６，２８１，３４４号明細書；米国特許第６，２１４，５５３号明細書；米国特許第６，２６１，８０４号明細書；米国特許第６，２０７，４４６号明細書；米国特許第６，８４６，６５５号明細書；米国特許第６，３１２，９２７号明細書；米国特許第６，６０２，６８５号明細書；米国特許第６，４１６，９５０号明細書；米国特許第６，４２９，３００号明細書；米国特許第７，０７８，１９７号明細書；および米国特許第６，４３６，６６５号明細書）を包含する多様な技術により成し遂げうる。こうした生物学的ペプチドライブラリーを生成するための技術はＤａｎｉ，Ｍ．、Ｊ．ｏｆ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＆  Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｒｅｓ．、２１（４）：４４７−４６８（２００１）に記述される。
【００３１】
ペプチドの一ランダム生成方法はファージディスプレイによる。１９８５年のその導入以来、ファージディスプレイは、薬物標的のためのペプチド、タンパク質および小分子を包含する多様なリガンドを発見するため広範に使用されている（Ｄｉｘｉｔ、Ｊ．ｏｆ  Ｓｃｉ．＆  Ｉｎｄ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５７：１７３−１８３（１９９８））。該応用は、タンパク質フォールディング（ｆｏｌｄｉｎｇ）、新規触媒活性、新規特異性をもつＤＮＡ結合タンパク質、および組織工学のための新規のペプチドに基づく生体材料足場構造を研究することのような他の領域に広がった（Ｈｏｅｓｓ、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０１：３２０５−３２１８（２００１）およびＨｏｌｍｅｓ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：１６−２１（２００２））。Ｗｈａｌｅｙら（Ｎａｔｕｒｅ  ４０５：６６５−６６８（２０００））は、多様な結晶学的形態の無機半導体基質に特異的に結合し得るペプチド配列を同定するためのファージディスプレイスクリーニングの使用を開示している。
【００３２】
ペプチドライブラリーを抗標的（ａｎｔｉ−ｔａｒｇｅｔ）と接触させて該抗標的に結合するペプチドを除去すること、その後結合しないペプチドを該標的と接触させることを
含んでなる改変スクリーニング法が記述されている（Ｅｓｔｅｌｌら  第ＷＯ  ０１／０７９４７９号明細書、Ｍｕｒｒａｙら  米国特許出願公開第２００２／００９８５２４号明細書、およびＪａｎｓｓｅｎら  米国特許出願公開第２００３／０１５２９７６号明細書）。標的／抗標的方法を使用して、毛髪に優先的に結合しかつ皮膚に結合しないペプチド配列、および皮膚に優先的に結合しかつ毛髪に結合しないペプチド配列を同定し得る。同一の方法を使用して、Ｊａｎｓｓｅｎら（第ＷＯ  ０４／０４８３９９号明細書）は、他のケラチンを含有する体表面に結合するペプチド（すなわち皮膚結合および毛髪結合ペプチド）ならびに数種の他の結合モチーフを同定した。
【００３３】
ファージディスプレイは、ペプチド若しくはタンパク質をバクテリオファージのコートタンパク質に遺伝子的に融合してファージビリオンの外側での融合ペプチドの表示をもたらす一方で、該融合をコードするＤＮＡはビリオン内に存する選択技術である。表示されるペプチドとそれをコードするＤＮＡの間のこの物理的連結が、「バイオパニング」と呼ばれる単純なｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択手順によるそれぞれ対応するＤＮＡ配列に連結されたペプチドの多数のバリアントのスクリーニングを可能にする。本明細書で使用されるところの「バイオパニング」は、表示されるペプチドのライブラリーが指定される標的物質（例えば毛髪）に対してパニングされる（ｐａｎｎｅｄ；選り分けられる）いかなる選択手順（ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ、ｍＲＮＡディスプレイなど）を記述するのにも使用しうる。その最も単純な形態において、ファージディスプレイバイオパニングは、プレート若しくはビーズ上に固定された目的の標的とファージで表示されたバリアントのプールをインキュベートすること、未結合のファージを洗い流すこと、およびファージと標的の間の結合相互作用を破壊することにより特異的に結合されたファージを溶出することにより実施する。溶出されたファージをその後ｉｎ  ｖｉｖｏで増幅し、そして該過程を反復して、最も強固な結合配列に好都合にファージプールの段階的濃縮をもたらす。３回若しくはそれ以上の選択／増幅後に、個々のクローンをＤＮＡ配列決定により特徴付ける。
【００３４】
ペプチド結合ドメインは、ヒト毛髪、皮膚若しくは爪の最低１種に対する親和性を有することが報告された配列から経験的にもまた生成し得る。例えば、ヒト体表面に対する親和性を有するペプチドは、米国特許第７，２２０，４０５号および同第７，２８５，２６４号明細書；米国特許出願公開第ＵＳ  ２００５−０２２６８３９号、同第ＵＳ  ２００５−０２４９６８２号、同第ＵＳ  ２００７−００６５３８７号、同第ＵＳ  ２００７−００６７９２４号、同第ＵＳ  ２００７−０１９６３０５号、同第ＵＳ  ２００７−０１１０６８６号、同第ＵＳ  ２００６−００７３１１１号および同第ＵＳ  ２００６−０１９９２０６号明細書；米国特許出願第１１／８７７，６９２号明細書；米国特許出願公開第２００８−０１７５７９８号明細書；ならびにＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００４０４８３９９号明細書に記述されている。ヒト体表面ペプチドは表１Ａ−１Ｆにもまた示す。
【００３５】
【表１Ａ−１】
2012522057.tif 000003
【００３６】
【表１Ａ−２】
2012522057.tif 000004
【００３７】
【表１Ａ−３】
2012522057.tif 000005
【００３８】
【表１Ａ−４】
2012522057.tif 000006
【００３９】
【表１Ａ−５】
2012522057.tif 000007
【００４０】
【表１Ａ−６】
2012522057.tif 000008
【００４１】
【表１Ａ−７】
2012522057.tif 000009
【００４２】
【表１Ａ−８】
2012522057.tif 000010
【００４３】
【表１Ａ−９】
2012522057.tif 000011
【００４４】
【表１Ａ−１０】
2012522057.tif 000012
【００４５】
【表１Ｂ】
2012522057.tif 000013
【００４６】
【表１Ｃ】
2012522057.tif 000014
【００４７】
【表１Ｄ】
2012522057.tif 000015
【００４８】
【表１Ｅ】
2012522057.tif 000016
【００４９】
【表１Ｆ】
2012522057.tif 000017
【００５０】
一態様において、ペプチド結合ドメインは、配列番号１−１８４、１８６−１８９、１９６−２００、２０４−２０５および２１１−２２２よりなる群に示される最低１種のペプチドを含んでなる。別の態様において、ペプチド結合ドメインは、配列番号１−１３４、１８４、１８６−１８９、１９６−２００および２１１−２２２よりなる群から選択さ
れる毛髪結合ペプチドを包含する。なお別の態様において、ペプチド結合ドメインは配列番号１３０−１８２よりなる群から選択される皮膚結合である。他の態様において、ペプチド結合ドメインは配列番号１９６−２００若しくは配列番号２１０−２２２の最低１種を含んでなる。
【００５１】
なお別の態様において、ペプチド結合ドメインは配列番号１３０−１８２よりなる群から選択される最低１種の皮膚結合ペプチドを含んでなる。なお別の態様において、ペプチド結合ドメインは配列番号１８３−１８４よりなる群から選択される爪結合である。
【００５２】
ヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪の最低１種に結合する最低１種の結合ドメインを含んでなることに加え、本発明のペプチド成分は親和性対の第一の部分をさらに含んでなる。本明細書で使用されるところの「親和性対」は、相互に対する既知の親和性を有する作用剤の対を指し、該親和性対の該第一の部分はバイオパニングに由来しなかった。親和性対は、共有結合に基づかず、例えばイオン結合（静電的相互作用）、水素結合、疎水性結合、キレート化、生物学的親和性を包含する結合会合（ｂｏｎｄｉｎｇ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）に基づくことができるか、若しくは親和性対はそれらの組合せに基づく。
【００５３】
例えば、本発明の親和性対はイオン結合対を包含しうる。「イオン結合」対は、一方が正味の正の荷電を有しかつ他方が正味の負の荷電を有する２部分の会合複合体を指す。静電的相互作用ともまた称されるイオン結合は、最も強い結合の中でも共有結合に強さが匹敵し、そして約５０ｎｍの長距離のものである。（Ｉｓｒｅａｌａｃｈｖｉｌｉ，Ｊ．Ｎ．、Ｉｎｔｅｒｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｆｏｒｃｅｓ、第２版；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：ニューヨーク州ニューヨーク（１９９２）ｐｐ．３２−３４）。
【００５４】
ある種のアミノ酸はイオン化可能な側鎖、例えばアスパラギン酸およびグルタミン酸の側鎖中のカルボキシル基ならびにリシン、アルギニンおよびヒスチジン残基に配置されるアミノ基を含有する。数種のペプチドは、しばしば、荷電されたアミノ酸のいずれかが該ペプチド配列中にある場合に正味の電荷（正若しくは負）およびある種の電荷分布を含有する。ペプチド分子の全体若しくは部分の正味の電荷は、有益な作用剤の親和性対の反対に荷電した第二の部分との静電引力を誘導し得るか、若しくは該有益な作用剤の親和性対の同様に荷電した第二の部分との静電反発を誘導し得る。
【００５５】
イオン（静電）結合対の例は、限定されるものでないが、正に荷電した微粒子の有益な作用剤に結合された負に荷電したペプチド、正に荷電したコーティング（例えば陰イオン交換樹脂）から構成されるかもしくはそれで被覆された微粒子の有益な作用剤に結合された負に荷電したペプチド、負に荷電した微粒子の有益な作用剤（例えば雲母、シリカ）に結合された正に荷電したペプチド、負の電荷を提供するコーティング（例えばＳＯ４−２のような基を有する陽イオン交換樹脂）を含んでなる微粒子の有益な作用剤に結合された正に荷電したペプチドを挙げることができる。
【００５６】
微粒子の有益な作用剤の親和性対の第二の部分の電荷および電荷密度を得ることができ、そして適正な表面処理およびｐＨ条件で調節し得る。電荷は：１）アミノ、カルボキシル、スルホンおよびヒドロキシル基などのような表面官能基のイオン化；２）溶液からのイオンの特異的吸着（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ）から発し得る。この文脈において、「特異的吸着」は、吸着されたイオンが正味の表面電荷を創製し得るように吸着が部分的に電気以外の性質のものであることを意味している。不活性の有益な作用剤については、当該技術分野における複数の表面処理アプローチを使用して、１）表面を酸化するための酸素プラズマ若しくは表面のヒドロキシルおよび他の基を創製するための特殊ガスのプラズマ重合を使用して（Ｃ．Ｌ．Ｒｉｎｓｃｈら、Ｌａｎｇｍｕｉｒ（１９９
６）、１２（２９９５−３００２）；２）金属酸化物表面上でシロキサン単層を形成するアミノプロピルシランのような末端官能基をもつ自己集成性単層を形成して（Ｘｉａ、Ｙ．Ｎ．とＷｈｉｔｅｓｉｄｅｓ，Ｇ．Ｍ．、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．（１９９８）、３７：５５１−５７５）；３）多価電解質マルチプレイヤー（ｍｕｌｔｉｐｌａｙｅｒ）をいずれかの表面に吸着して所望の電荷記号および電荷密度をもつ荷電した表面を生じさせるために多層集成方法を使用して（Ｄｅｃｈｅｒ，Ｇ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７）、２７７：１２３２−１２３７）；ならびに４）荷電したポリマー若しくはゾル−ゲルの沈殿コーティング（ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ−ｃｏａｔｉｎｇ）、イオン化可能な官能基を創製し得る。有益な作用剤の表面電荷は、その表面等電点（ＩＥＰ）すなわち正味の表面電荷がゼロであるｐＨ値を特徴とし得る。従って、ＩＥＰより低いｐＨでは、有益な作用剤とりわけ微粒子の有益な作用剤の親和性対の第二の部分は正の電荷を有し；一方、そのＩＥＰより大きいｐＨでは有益な作用剤は負の電荷を有する。
【００５７】
静電的相互作用の範囲をイオン強度でさらに調節し得る。すなわち、より低いイオン強度はより長い相互作用範囲を提供する一方、より高いイオン強度はより短い相互作用範囲を提供する。相互作用範囲の調節は、低イオン強度で安定なペプチドと有益な作用剤の付加物を得るがしかしより高いイオン強度で体表面への有益な作用剤の送達を高めることに適用し得る。
【００５８】
親和性対の第一の部分の正味の電荷は系のｐＨに依存して正でも若しくは負でもよい。一態様において、親和性対の第一の部分の正味の荷電は指定されるｐＨで正であり、ここでｐＨは３．０から約１０までの範囲にわたることができる。別の態様において、親和性対の第一の部分の正味の電荷は指定されるｐＨで負であり、ここでｐＨは３．０から約１０までの範囲にわたることができる。
【００５９】
本発明の親和性対は水素結合に基づく対もまた包含しうる。「水素結合」対は、一方の部分の相対的に電気陰性の原子の水素原子の他の部分の電気陰性の原子との会合複合体を指す。
【００６０】
「疎水性結合」対は、それらが会合複合体を形成することを可能にする疎水性ドメイン若しくは特徴を双方の部分が有する２部分の会合複合体を指す。微粒子の有益な作用剤の表面は疎水性でありうる。であるから、有効な数の疎水性アミノ酸残基を含んでなる親和性対の第一の部分をペプチド成分に組み込みうる。微粒子の有益な作用剤の表面は本質的に疎水性でありうるか、若しくは別の疎水性部分と会合することが可能な疎水性表面を有するよう改変しうる。例えば、微粒子の有益な作用剤はいずれかの数の公知のコーティング技術を使用して疎水性ポリマーで被覆しうる。疎水性ペプチドを包含する親和性対の第一の部分は、典型的に、最低１．５のヒドロパシー（ｈｙｄｏｒｏｐａｔｈｙ）指数を有する疎水性アミノ酸から構成されることができる（ＫｙｔｅとＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９８２）１５７（１５７）：１０５−１３２）。一態様において、疎水性アミノ酸はイソロイシン、バリン、ロイシン、フェニルアラニン、システイン、メチオニンおよびアラニンよりなる群から選択される。
【００６１】
「キレート化に基づく」対は、ルイス塩基がルイス酸に２個若しくはそれ以上の孤立電子対を供与するルイス酸およびルイス塩基の配位共有結合複合体を指す。キレート化に基づく対の一例は多様なアミノ酸側鎖および金属イオンの相互作用である。キレート化に基づく対での使用のための例示的金属は、二価金属例えばニッケル、銅、コバルトおよび亜鉛を包含する。
【００６２】
「ポリヒスチジン標識」は、ニッケル、銅、コバルト若しくは亜鉛のような固定された金属イオンに結合するのにしばしば使用される。該金属イオンは、典型的に、ニトリロ酢
酸（ＮＴＡ）−アガロース、ＨｉｓＰｕｒコバルト樹脂、イミノジ酢酸（ＩＤＡ）樹脂、カルボキシメチルアスパラギン酸（ＣＭＡ）樹脂、ＴＡＬＯＮ（登録商標）（若しくはいずれかの他の固定された金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）樹脂ＩＭＡＣ）のような媒体に組み込まれる。金属親和性樹脂は、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（イリノイ州ロックフォード）、ＥＭＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ（ウィスコンシン州マディソン）およびＣｌｏｎｔｅｃｈ（カリフォルニア州パロアルト）のような多様な供給元から商業的に入手可能である。ポリヒスチジン標識は、合成でも、若しくは「ＨＡＴ」（ＫＤＨＬＩＨＮＶＨＫＥＦＨＡＨＡＨＮＫ（配列番号１８５））のような天然に存在するヒスチジン親和性標識であってもよい。一態様において、ポリヒスチジン標識は長さが６から約１０まで、６約８若しくは約６個の連続する（「ＨＨＨＨＨＨ」）ヒスチジン残基の範囲にわたる。
【００６３】
一態様において、ペプチド成分は、微粒子の有益な作用剤の表面の固定された金属イオンに結合することが可能な最低１個のポリヒスチジン標識を含んでなる。別の態様において、微粒子の有益な作用剤は粒子の表面に有効量の適切な媒体を含んでなる。金属キレート樹脂を、微粒子の有益な作用剤の表面に部分的若しくは完全なコーティングとして塗布しうる。別の態様において、微粒子の有益な作用剤の表面に塗布される樹脂は四配座金属配位子（米国特許第５，９６２，６４１号明細書；引用することにより本明細書に組み込まれる）を含んでなる。別の態様において、親和性対は、ペプチド成分に組み込まれたポリヒスチジン標識、すなわち樹脂固定された金属イオンにマイクロモル濃度の親和性で結合することが可能な有効数のヒスチジン残基よりなる組み込まれたアミノ酸モチーフ、および微粒子の有益な作用剤に組み込まれた金属イオンを包含するキレート化対であり、ここで該金属イオンはニッケル、銅、コバルト、亜鉛およびそれらの混合物よりなる群から選択される。
【００６４】
本発明の親和性対の他の例は、限定されるものでないがビオチン：アビジン、ビオチン：ストレプトアビジン、ストレプトアビジン標識：ストレプトアビジン、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）：マルトース若しくはアミラーゼ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）：グルタチオンを挙げることができる。
【００６５】
親和性対は生物学的親和性にもまた基づくことができる。本明細書で使用されるところの生物学的親和性は抗体−抗原親和性を包含しない。抗体−抗原親和性は本発明の範囲からとりわけ除外される。一態様において、親和性対は、ペプチドに基づく試薬がエピトープ配列を含んでなりかつ微粒子の有益な作用剤が対応する抗体を含んでなるエピトープ標識：抗体対を包含しうる。商業的にエピトープの標識の例は、限定されるものでないがＨＡ標識、ＦＬＡＧ標識、Ｅ標識、Ｓ標識およびｍｙｃ標識を挙げることができる。
【００６６】
本発明のある態様において、親和性対の第一の部分は、ポリヒスチジン標識、ビオチン、ストレプトアビジン標識、マルトース結合タンパク質、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、エピトープ標識、ＨＡ標識、ＦＬＡＧ標識、Ｅ標識、Ｓ標識、ｍｙｃ標識、ならびに配列番号１８５、２０６および２２３−２３４よりなる群から選択される。別の態様において、親和性対の第一の部分は、ポリヒスチジン標識、ビオチン、ならびに配列番号１８５、２０６および２２３−２３４よりなる群から選択される。
【００６７】
場合によっては、本発明の結合ドメインは、他の物質を上回るヒト毛髪、皮膚若しくは爪の最低１種に対する優先的結合を表し得る。例えば、本発明の結合ドメインは、ウール、カシミア若しくはヤク毛よりヒト毛髪、皮膚若しくは爪にさらに優先的に結合しうる。別の態様において、本発明の結合ドメインは、綿若しくは変性セルロース繊維よりヒト毛髪、皮膚若しくは爪にさらに優先的に結合する。なお別の態様において、本発明の結合ドメインは、金属、セラミック、磁器、ガラス、絹、木材、ポリエステル若しくはポリ塩化
ビニルよりヒト毛髪、皮膚若しくは爪にさらに優先的に結合する。
【００６８】
有益な作用剤
その用語が本発明で使用されるところの「有益な作用剤」は、それらに沈着される場合にヒト毛髪、皮膚および／若しくは爪に利益を賦与する特性をもつ組成物若しくは作用剤を含有する化粧用組成物に向けられる。本発明の有益な作用剤は微粒子の形態にある。すなわち、該有益な作用剤は小型の別個の粒子として提供される。本発明の微粒子の有益な作用剤は親和性対の第二の部分を有し、そして約０．０１ミクロン（１０ｎｍ）と約７５ミクロン（７５，０００ｎｍ）の間の平均粒子径を有する安定な微粒子分散系に組み込まれる。一態様において、平均粒子径は、レーザー回折および／若しくは動的光散乱のような光散乱法により測定されるところの０．０１ミクロンないし７５ミクロンである。いくつかの態様において、平均粒子径は約６０ミクロン未満、約４０ミクロン未満若しくは約１０ミクロン未満である。他の態様において、平均粒子径は約０．２ミクロン（２００ｎｍ）と０．４ミクロン（４００ｎｍ）の間である。他の態様において、該分散系の粒子はナノ粒子であることができる、すなわち約１０ｎｍと約１００ｎｍの間の平均粒子系を有することができる。
【００６９】
本明細書で言及される「粒子径（ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｉｚｅ）」が、その双方が当該技術分野で既知であるレーザー回折（ＩＳＯ  １３３２０−１：１９９６を参照されたい；国際標準機構、スイス・ジュネーブ）および／若しくは動的光散乱（ＩＳＯ  １３３２１：１９９６を参照されたい）の方法論のような光散乱法を使用して得られる粒子径測定値を指すことができることが、当業者により理解されるであろう。例示的装置はＭａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ．英国ウスターシャーから入手可能である。
【００７０】
約０．０１ミクロンと約７５ミクロンの間の平均粒子径を有する安定な微粒子分散系中で微粒子の有益な作用剤を提供することが、本発明の化粧用系のペプチド成分への有益な作用剤の結合を容易にすることが発見された。
【００７１】
本発明の「微粒子の有益な作用剤の安定な分散系」は、長時間にわたり安定であるサンプルマトリックス内に分散された微粒子の有益な作用剤の粒子を指す。
【００７２】
本明細書で使用されるところの「安定な」という用語は、サンプルマトリックス内に分散された粒子が長時間にわたり安定である分散系を指すことができる。粒子は、サンプルの平均粒子径が時間とともにかなり一定のまま留まる場合に安定に分散されたとみなすことができる。一態様において、サンプルは、該サンプルの平均粒子径が分散系形成後２４時間以内に微粒子の有益な作用剤の初期粒子径を１００％以上超えて増加しない場合に安定に分散されている。別の態様において、サンプルは、該サンプルの平均粒子径が分散系形成後２日以内に微粒子の有益な作用剤の初期粒子径を５０％以上超えて増加しない場合に安定に分散されていることができる。ある態様において、分散系形成後３日以内に平均粒子径の５０％以上の増加が存在しない。他の態様において、分散系形成の最低５日以内に平均粒子径の５０％以上の増加が存在しない。なお他の態様において、分散系形成の７日以内に平均粒子径の５０％以上の増加が存在しない。一態様において、微粒子分散系は、５０個の一次粒子より大きいいかなる凝集物の検出も伴わずに平均粒子径が最低７日にわたり５０％以上増加しない場合に安定である。当業者は、最小量のエネルギー（例えば、化粧用組成物若しくは化粧用系内の粒子の均一な分散を再形成するための人的混合／振とうを典型的に伴う穏やかな人的振とう／攪拌）で粒子を容易に再分散し得る限りは、安定な粒子分散系が時間がたつにつれて若干の沈殿を有してもよいことを認識するであろう。
【００７３】
限定されるものでないが、いくつかを挙げれば立体的に安定化された分散系、分散剤、
イオン性分散剤、非イオン性分散剤およびポリマー性分散剤の使用を挙げることができる、安定な粒子分散系を形成するための手段が当該技術分野で報告されている。
【００７４】
ポリマー性分散剤は、塗料および仕上げ剤のようなコーティング系ならびにインクジェット印刷インク中の色素を安定化するために広範に使用されている（Ｒｅｕｔｅｒら、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  ３７：１６１  １６７（１９９９）、Ｓｃｈｍｉｔｚら、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  ３５：１９１  １９６（１９９９）およびＳｐｉｎｅｌｌｉ、Ａｄｖ．Ｍａｔｅｒ．１０：１２１５  １２１８（１９９８））。該分散剤は、色素粒子すなわち微粒子の有益な作用剤の周囲に殻を形成して凝結および凝析を予防するようはたらく。水系中では、色素分散系は一般に非イオン性若しくはイオン性技術いずれによっても安定化される。非イオン性技術において、色素粒子は、水中に拡がりかつエントロピー的若しくは立体的安定化を提供する水溶解性の親水性区分を有するポリマーにより安定化される。この目的上有用な代表的ポリマーは、ポリビニルアルコール、セルロース由来物（ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｃｓ）およびエチレンオキシド修飾フェノールを包含する。非イオン性技術はｐＨ変化若しくはイオン汚染に感受性でない一方、それは、最終生成物が水感受性であるために多くの応用に対する大きな欠点を有する。従って、インクの応用などで使用される場合、該色素は水分への曝露に際してにじむ傾向があることができる。
【００７５】
イオン性技術において、色素粒子は、中和されたアクリル酸、マレイン酸若しくはビニルスルホン酸のようなイオン含有単量体のポリマーにより安定化される。該ポリマーは荷電した二層機構により安定化を提供してそれによりイオン性反発が粒子の凝結を妨害する。中和する成分は適用後に蒸発する傾向があるため、ポリマーはその後低下された水溶解性を有しかつ最終生成物は水感受性でない。立体的およびイオン性双方の安定化を提供するブロックおよびグラフトポリマーのようなポリマー分散剤は最も堅牢な色素分散系を作成する（Ｓｐｉｎｅｌｌｉ、上記）。
【００７６】
ランダムおよびブロック双方の構造を有するポリマー分散剤が開示されている。例えば、米国特許第４，５９７，７９４号明細書におけるＯｈｔａらは、イオン性の親水性セグメントおよび色素表面に付着する芳香族疎水性セグメントを有するランダムポリマー分散剤を開示する。米国特許第５，０８５，６９８号明細書におけるＭａらは、水性インクジェットインクの分散剤としてのＡＢ若しくはＢＡＢブロックコポリマーの使用を開示する。Ａセグメントは色素粒子に結合するようはたらく疎水性ホモポリマー若しくはコポリマーであり、そしてＢセグメントは水性媒体中に色素を分散するようはたらく親水性ポリマー若しくはその塩である。米国特許第５，５１９，０８５号明細書におけるＭａらはＡＢＣトリブロックポリマー分散剤を開示し、ここでＡセグメントは水中の色素の分散を助長するようはたらく親水性ポリマーであり、Ｂセグメントは色素に結合することが可能なポリマーであり、そしてＣセグメントは分散系を安定化するようはたらく親水性若しくは疎水性ポリマーである。第ＧＢ  ２３４９１５３号明細書にＲｏｓｅらにより記述されるところのポリマー分散剤の組合せもまた使用しうる。これらのランダムおよびブロックポリマー分散剤は分散された色素に良好な安定性を提供する一方、さらなる改良がより高品質のコーティングの応用に望ましい。例えば、色素とのより強い相互作用を有する分散剤が分散系の安定化を改良することができる。さらに、コーティング支持体とのより強い相互作用をもつ分散剤はより耐久性のコーティングをもたらすことができる。これは、高められた耐久性が必要とされる織物印刷にとりわけ重要である。
【００７７】
自己分散する色素は、別個の分散剤を伴わずに安定な分散系を可能にするために化学結合された分散可能性を賦与する基で表面修飾された色素である。水性担体媒体中の分散系について、表面修飾は親水性基および最も典型的にはイオン化可能な親水性基の付加を必要とする。自己分散する色素は、官能基若しくは官能基を含有する分子を物理的処理（真
空プラズマのような）によるか若しくは化学的処理（例えばオゾン、次亜塩素酸などでの酸化）により色素の表面上にグラフトすることにより、製造しうる。単一の型若しくは複数の型の親水性官能基を１個の色素粒子に結合しうる。自己分散する色素は、例えば米国特許第５，５７１，３１１号明細書、米国特許第５，６０９，６７１号明細書、米国特許第５，９６８，２４３号明細書、米国特許第５，９２８，４１９号明細書、米国特許第６，３２３，２５７号明細書、米国特許第５，５５４，７３９号明細書、米国特許第５，６７２，１９８号明細書、米国特許第５，６９，８０１６号明細書、米国特許第５，７１８，７４６号明細書、米国特許第５，７４９，９５０号明細書、米国特許第５，８０３，９５９号明細書、米国特許第５，８３７，０４５号明細書、米国特許第５，８４６，３０７号明細書、米国特許第５，８９５，５２２号明細書、米国特許第５，９２２，１１８号明細書、米国特許第６，１２３，７５９号明細書、米国特許第６，２２１，１４２号明細書、米国特許第６，２２１，１４３号明細書、米国特許第６，２８１，２６７号明細書、米国特許第６，３２９，４４６号明細書、米国特許第６，３３２，９１９号明細書、米国特許第６，３７５，３１７号明細書、米国特許第６，２８７，３７４号明細書、米国特許第６，３９８，８５８号明細書、米国特許第６，４０２，８２５号明細書、米国特許第６，４６８，３４２号明細書、米国特許第６，５０３，３１１号明細書、米国特許第６，５０６，２４５号明細書および米国特許第６，８５２，１５６号明細書に記述されている。先行する参考文献の開示は引用することにより本明細書により組み込まれる。
【００７８】
ゼータ電位は分散系中の隣接する同様に荷電した粒子間の反発の程度を示す。高いゼータ電位（負若しくは正）をもつコロイドは電気的に安定化される一方、低いゼータ電位をもつコロイドは凝析若しくは凝結する傾向がある（“Ｚｅｔａ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  ｉｎ  Ｗａｔｅｒ  ａｎｄ  Ｗａｓｔｅ  Ｗａｔｅｒ”、ＡＳＴＭ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｄ  ４１８７−８２、米国材料試験協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）、１９８５）。一態様において、微粒子の有益な作用剤のゼータ電位の絶対値は最低２５ｍＶである。別の態様において、ペプチド試薬−微粒子の有益な作用剤の複合体のゼータ電位の絶対値は最低２５ｍＶである。
【００７９】
親和性部分の第二の部分はいずれかの数の方法で有益な作用剤に組み込みうる。例えば、有益な作用剤の物理特性は親和性対の第二の部分を包含しうる。親和性対の第二の部分は有益な作用剤に本質的に存在しうるか、若しくは有益な作用剤は親和性対の第二の部分を包含するよう改変し得る。例えば、いくつかの態様において、有益な作用剤は荷電した着色した色素（ｐｉｇｍｅｎｔ）若しくは色素（ｄｙｅ）であることができ、該電荷がイオン性の親和性対の第二の部分を形成する。親和性対の第二の部分は、親和性対の第一のメンバー（例えばポリヒスチジン標識）に対する親和性を有する塗布された物質若しくはコーティング（例えば金属キレート樹脂）でありうる。他の態様において、親和性対の第二の部分は有益な作用剤に共有結合しうる。
【００８０】
本発明で有用な微粒子の有益な作用剤の制限しない例は、日焼け止め剤、抗菌剤、発泡（ｓｐａｒｋｌｉｎｇ）粒子、賦香剤、調整剤、抗真菌剤、香料、抗溶解剤、アロマセラピー剤、昆虫忌避剤などを包含する。
【００８１】
日焼け止め剤の制限しない例は、酸化亜鉛および二酸化チタンのような無機微粒子；ならびにメチレンビスベンゾトリアゾリルテトラメチルブチルフェノール（スイス・バーゼルのＣｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  ＣｈｅｍｉｃａｌｓからＢｉｓｏｃｔｒｉｚｏｌｅとして入手可能）のような有機微粒子を包含する。微粒子の抗菌剤の制限しない例は、銀に基づく粒子および活性炭に基づく粒子を包含する。微粒子の有益な作用剤を含有するミクロスフェアの例は、適用の間に被包（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）内に有益な作用剤を保持しかつケラチンを含有する表面上への沈着後のある所望の時点で該有益な作用剤を
被包から放出させる、被包化（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ）若しくは微小被包化された（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ）有益な作用剤を包含しうる。賦香剤の例は活性炭粒子およびゼオライトを包含する。
【００８２】
本発明の有益な作用剤は、着色された色素、微小粒子若しくはナノ粒子のような着色された粒子、またはそれらの組合せを包含する着色された微粒子であってもまたよい。
【００８３】
色素、とりわけ金属化合物若しくは半金属化合物を、イオン、イオン以外若しくは酸化された形態で本発明の組成物および方法で使用しうる。該色素は、この形態で個別に若しくは混合物中で、または個別の混合酸化物あるいは混合酸化物および純粋な酸化物の混合物を包含するそれらの混合物としてのいずれであってもよい。例は、チタン酸化物（例えばＴｉＯ２）、亜鉛酸化物（例えばＺｎＯ）、アルミニウム酸化物（例えばＡｌ２Ｏ３）、鉄酸化物（例えばＦｅ２Ｏ３）、マンガン酸化物（例えばＭｎＯ）、ケイ素酸化物（例えばＳｉＯ２）、ケイ酸塩、セリウム酸化物、ジルコニウム酸化物（例えばＺｒＯ２）、硫酸バリウム（ＢａＳＯ４）若しくはそれらの混合物などである。適する色素は商業的に入手可能である。一例はＭｅｒｃｋにより供給されるＨｏｍｂｉｔｅｃ（登録商標）Ｌ５（ＩＮＣＩ名：チタン二酸化物）である。
【００８４】
色素の他の例は以下、すなわちＤ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３６、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３０、Ｄ＆Ｃ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｎｏ．１７、Ｇｒｅｅｎ  ３レーキ、Ｅｘｔ．Ｙｅｌｌｏｗ  ７レーキ、Ｏｒａｎｇｅ  ４レーキ、Ｒｅｄ  ２８レーキ、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．７、１１、３１および３４のカルシウムレーキ、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．１２のバリウムレーキ、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．１３のストロンチウムレーキ、ＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ
Ｎｏ．５および６のアルミニウムレーキ、ＦＤ＆Ｃ  Ｎｏ．４０のアルミニウムレーキ、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．２１、２２、２７および２８のアルミニウムレーキ、ＦＤ＆Ｃ
Ｂｌｕｅ  Ｎｏ．１のアルミニウムレーキ、Ｄ＆Ｃ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｎｏ．５のアルミニウムレーキ、Ｄ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．１０のアルミニウムレーキ、Ｄ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３３のジルコニウムレーキ、ＣＲＯＭＯＰＨＴＨＡＬ（登録商標）Ｙｅｌｌｏｗ、ＳＵＮＦＡＳＴ（登録商標）Ｍａｇｅｎｔａ、ＳＵＮＦＡＳＴ（登録商標）Ｂｌｕｅ、鉄酸化物、炭酸カルシウム、水酸化アルミニウム、硫酸カルシウム、カオリン、フェロシアン化鉄アンモニウム、炭酸マグネシウム、カルミン、硫酸バリウム、雲母、オキシ塩化ビスマス、ステアリン酸亜鉛、マンガンバイオレット、酸化クロム、二酸化チタン、二酸化チタンナノ粒子、酸化亜鉛、酸化バリウム、ウルトラマリンブルー、クエン酸ビスマス、ヒドロキシアパタイト、ケイ酸ジルコニウム、カーボンブラック粒子などを包含する。
【００８５】
本発明の色素若しくは粒子は被覆され得るか若しくは被覆されないことができ、そして、被覆される粒子は陰イオン性、親水性若しくは疎水性であり得る。適する陰イオン性コーティングは、例えばシリカ、アルミノケイ酸塩、Ｃ１４−１６オレフィンスルホン酸ナトリウム、ステアロイルグルタミン酸ナトリウム、ステアロイルグルタミン酸ナトリウム／トリデセス（ｔｒｉｄｅｃｅｔｈ）−６カルボン酸ナトリウムおよびポリアクリル酸ナトリウム／水素化レシチン／水酸化アルミニウムを包含する。本発明での使用に適する被覆されない色素の例を表２に示す。
【００８６】
【表２】
2012522057.tif 000018
【００８７】
陰イオン性の被覆された色素の例を表３に示す。
【００８８】
【表３】
2012522057.tif 000019
【００８９】
親水性の被覆された色素の例を表４に示す。
【００９０】
【表４】
2012522057.tif 000020
【００９１】
疎水性の被覆された色素の例を表５に示す。
【００９２】
【表５】
2012522057.tif 000021
【００９３】
化粧用系
本発明の化粧用系の例示的一使用方法は、ヒト毛髪、皮膚若しくは爪の最低１種へのペプチド成分の適用を含んでなる。ペプチド成分が毛髪、皮膚若しくは爪に結合するのに十分な時間の後に、微粒子の有益な作用剤の安定な分散系を毛髪、皮膚若しくは爪に結合さ
れたペプチド成分に適用する。該安定な分散系は、ペプチド成分の親和性対の第一の部分が有益な作用剤の親和性対の第二の部分に結合するのに十分な時間適用されるべきである。
【００９４】
有益な作用剤およびペプチド成分が一旦結合されれば、親和性対を破壊してペプチド成分および有益な作用剤の解離（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ）をもたらし得る。親和性対を破壊することが可能な試薬は化粧用系で使用される親和性対の型に基づくことができる。こうした試薬の典型的なものは、必要とされるところの高い若しくは低いｐＨまたは高い若しくは低いイオン強度を有する緩衝液を包含する水性溶液である。
【００９５】
ヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪の最低１種への有益な作用剤のある適用方法は、１０−５モル濃度若しくはそれ未満のＫｄ若しくはＭＢ５０値でヒト毛髪、皮膚若しくは爪の最低１種に結合しかつ親和性対の第一の部分をさらに含んでなる最低１個の結合ドメインを有するペプチド成分を含んでなる組成物とヒト毛髪、皮膚若しくは爪を、ヒト毛髪、皮膚若しくは爪に結合ドメインを結合させるのに十分な時間接触させること；ならびにその後、約０．０１ミクロンないし約７５ミクロンの間の平均粒子径および親和性対の第二の部分を有する微粒子の有益な作用剤の安定な分散系と該ヒト毛髪、皮膚若しくは爪を接触させることを含んでなり；該結合ドメインは分散系の微粒子に対してそれが有するより大きいヒト毛髪、皮膚若しくは爪に対する結合親和性を有する。
【００９６】
他の方法は、ヒト毛髪、ヒト皮膚若しくはヒト爪の最低１種から親和性対の第二の部分と会合された有益な作用剤を除去することを包含し、親和性対を破壊することが可能である水性溶液を提供すること；および、該親和性対を破壊するのに十分な時間、該水性溶液とヒト毛髪、皮膚若しくは爪を接触させることを含んでなり、ここで、ヒト毛髪、皮膚若しくは爪は、１０−５モル濃度若しくはそれ未満のＭＢ５０値のＫｄでヒト毛髪、皮膚若しくは爪に結合しかつ親和性対の第一の部分をさらに含んでなる最低１個の結合ドメインを有するペプチド成分を含んでなる組成物と、該結合ドメインがヒト毛髪、皮膚若しくは爪に結合するのに十分な時間、以前に接触されており；該ヒト毛髪、皮膚若しくは爪はその後、０．０１ミクロン若しくはそれ未満ないし約７５ミクロンの間の平均粒子径および親和性対の第二の部分を有する微粒子の有益な作用剤の安定な分散系と接触されている。
【実施例】
【００９７】
本発明は以下の実施例にさらに定義される。これらの実施例は本発明の好ましい態様を示す一方で具体的説明としてのみ示されることが理解されるべきである。上の論考およびこれらの実施例から、当業者は本発明の必須の特徴を確かめることができ、かつ、その技術思想および範囲から離れることなく、それを多様な用途および条件に適合させるように本発明の多様な変更および改変を行い得る。
【００９８】
使用される略語の意味するところは後に続くとおりである。すなわち、「ｍｉｎ」は分（１若しくは複数）を意味しており、「ｈ」は時間（１若しくは複数）を意味しており、「μＬ」はマイクロリットル（１若しくは複数）を意味しており、「ｍＬ」はミリリットル（１若しくは複数）を意味しており、「Ｌ」はリットル（１若しくは複数）を意味しており、「ｎｍ」はナノメートル（１若しくは複数）を意味しており、「ｍｍ」はミリメートル（１若しくは複数）を意味しており、「ｃｍ」はセンチメートル（１若しくは複数）を意味しており、「μｍ」はマイクロメートル（１若しくは複数）を意味しており、「ｍＭ」はミリモル濃度を意味しており、「Ｍ」はモル濃度を意味しており、「ｍｍｏｌ」はミリモル（１若しくは複数）を意味しており、「μモル」はマイクロモル（１若しくは複数）を意味しており、「ｇ」はグラム（１若しくは複数）を意味しており、「μｇ」はマイクログラム（１若しくは複数）を意味しており、「ｍｇ」はミリグラム（１若しくは複数）を意味しており、「ｇ」は重力定数を意味しており、「ｒｐｍ」は１分間あたり回転
を意味している。
【００９９】
一般的方法
本明細書で使用される標準的組換えＤＮＡおよび分子クローニング技術は当該技術分野で公知であり、そして、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．とＲｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（２００１）；およびＳｉｌｈａｖｙ，Ｔ．Ｊ．、Ｂｅｎｎａｎ，Ｍ．Ｌ．とＥｎｑｕｉｓｔ，Ｌ．Ｗ．、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｓｉｏｎｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｌｄ  Ｐｒｅｓｓ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８４）；ならびにＡｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ、第５版  ＣｕｒｒｅｎｔｏＰｒｏｔｏｃｌｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク、２００２により記述されている。
【０１００】
細菌培養物の維持および増殖に適する材料および方法もまた当該技術分野で公知である。以下の実施例での使用に適する技術は、Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ
Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、Ｐｈｉｌｌｉｐｐ  Ｇｅｒｈａｒｄｔ、Ｒ．Ｇ．Ｅ．Ｍｕｒｒａｙ、Ｒａｌｐｈ  Ｎ．Ｃｏｓｔｉｌｏｗ、Ｅｕｇｉｎｅ  Ｗ．Ｎｅｓｔｅｒ、Ｗｉｌｌｉｓ  Ａ．Ｗｏｏｄ、Ｎｏｅｌ  Ｒ．ＫｒｉｅｇとＧ．Ｂｒｉｇｇｓ  Ｐｈｉｌｌｉｐｓ編、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、ワシントンＤＣ、１９９４、若しくはＴｈｏｍａｓ  Ｄ．ＢｒｏｃｋによりＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第２版、Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州サンダーランド、１９８９に見出しうる。細菌細胞の増殖および維持に使用された全部の試薬、制限酵素および材料は、別の方法で明記されない限り、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ウィスコンシン州ミルウォーキー）、ＢＤ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（メリーランド州スパークス）、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（メリーランド州ロックビル）若しくはＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（ミズーリ州セントルイス）から得た。
【実施例１】
【０１０１】
ペプチド結合ドメインの例示的選択方法
ファージ−ペプチドの適するライブラリーを、上述された方法を使用して生成するか、若しくは該ライブラリーを商業的供給元から購入する。ファージ−ペプチドのライブラリーを生成した後に、それらをその後適切な量の基質と接触させる。ファージ−ペプチドのライブラリーは基質と接触させるために適する溶液に溶解する。試験基質は溶液中に懸濁しうるか、またはプレート若しくはビーズ上に固定しうる。例示的一溶液は界面活性剤を含有する緩衝水性生理的食塩水溶液である。適する溶液は、０．０５ないし０．５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０を含むトリス緩衝生理的食塩水（ＴＢＳ）であり得る。該溶液を、基質へのペプチドの物質輸送速度を増大させるためにいずれかの手段により付加的に攪拌して、それにより最大結合を達成するのに必要とされる時間を短縮しうる。
【０１０２】
接触に際して、多数のランダムに生成されたファージ−ペプチドが基質に結合してファージペプチド−基質複合体を形成することができる。未結合のファージ−ペプチドは洗浄することにより除去しうる。全部の未結合物質を除去した後に、基質に対する変動する程度の結合親和性を有するファージ−ペプチドを、変動する緊縮性を有する緩衝液中での選択された洗浄により分画しうる。使用される緩衝液の緊縮性を増大させることはファージ−ペプチド−基質複合体中のファージ−ペプチドと基質の間の結合の必要とされる強さを
増大させる。
【０１０３】
限定されるものでないが、酸性ｐＨ（１．５〜３．０）；塩基性ｐＨ（１０〜１２．５）；ＭｇＣｌ２（３〜５Ｍ）およびＬｉＣｌ（５〜１０Ｍ）のような高塩濃度；水；エチレングリコール（２５〜５０％）；ジオキサン（５〜２０％）；チオシアン酸塩（１〜５Ｍ）；グアニジン（２〜５Ｍ）；尿素（２〜８Ｍ）；ならびに多様な濃度のＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、ＤＯＣ（デオキシコール酸ナトリウム）、Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０のような多様な界面活性剤を挙げることができる多数の物質を使用して、ペプチド選択における緩衝溶液の緊縮性を変動させることができ、ここでＴＷＥＥＮ（登録商標）２０が例示的である。これらの物質は、限定されるものでないがトリス−ＨＣｌ、トリス緩衝生理的食塩水、トリス−ホウ酸、トリス−酢酸、トリエチルアミン、リン酸緩衝液およびグリシン−ＨＣｌを挙げることができる緩衝溶液中で調製することができ、ここでトリス緩衝生理的食塩水が例示的である。
【０１０４】
基質に対する増大する結合親和性を有するファージペプチドが、増大する緊縮性をもつ緩衝液を使用して選択過程を反復することにより溶出されうることが認識されるであろう。溶出されたファージ−ペプチドは、当該技術分野で既知のいずれかの手段により同定かつ配列決定し得る。
【０１０５】
一態様において、ケラチンを含有する体表面に結合するペプチドの以下の生成方法を使用しうる。コンビナトリアルに生成したファージ−ペプチドのライブラリーを基質（例えばヒト毛髪、皮膚若しくは爪）と接触させてファージペプチド−基質複合体を形成する。該ファージ−ペプチド−基質複合体を複合体形成されないペプチドおよび未結合の基質から分離し、そしてファージ−ペプチド−基質複合体からの結合されたファージ−ペプチドを例えば酸処理により該複合体から溶出する。その後、溶出されたファージ−ペプチドを同定かつ配列決定する。標的基質に結合するがしかし他の基質（例えばケラチンを含有しない基質）に結合しないペプチド配列を同定するために、差引きパニング段階を付加しうる。とりわけ、コンビナトリアルに生成したファージ−ペプチドのライブラリーを最初に標的以外と接触させてそれに結合するファージ−ペプチドを除去する。その後、結合しないファージ−ペプチドを標的基質と接触させ、そして上の過程が後に続く。あるいは、コンビナトリアルに生成したファージ−ペプチドのライブラリーを標的以外および標的と同時に接触させうる。その後ファージ−ペプチド−基質複合体をファージ−ペプチド−標的以外複合体から分離し、そして所望のファージ−基質複合体について上述された方法が後に続く。
【０１０６】
あるいは、１種のケラチンを含有する体表面（毛髪のような）に対する別のケラチンを含有する表面（皮膚のような）を上回るより高い親和性をもつペプチドを単離するための改変ファージディスプレイスクリーニング法を使用しうる。該変法において、ファージ−ペプチド−基質複合体を上述されたとおり形成する。その後、これらの複合体を溶出緩衝液で処理する。上述された溶出緩衝液のいずれも使用しうる。いくつかの態様において、溶出緩衝液は酸性溶液である。その後、残存する、溶出抵抗性のファージ−ペプチド−基質複合体を使用して、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＥＲ２７３８のような細菌宿主細胞を直接感染／トランスフェクトする。感染した宿主細胞を、ＬＢ（ルリア−ベルタニ）培地のような適切な増殖培地中で増殖させ、そして、この培養物を、ＩＰＴＧ（イソプロピルβ−Ｄ−チオガラクトピラノシド）およびＳ−ＧａｌＴＭを含むＬＢ培地のような適する増殖培地を含有する寒天上に広げる。増殖後に、プラークをＤＮＡ単離および配列決定のため選択して、目的の基質に対する高結合親和性をもつペプチド配列を同定する。あるいは、ＰＣＲを使用して、米国特許出願公開第２００３／０１５２９７６号明細書にＪａｎｓｓｅｎらにより記述されたところの適切なプライマーを使用してファージ−ペプチド−基質
複合体でＰＣＲを直接実施することにより、上述された改変ファージディスプレイスクリーニング法からの溶出抵抗性のファージペプチドを同定しうる。
【実施例２】
【０１０７】
ペプチドの結合親和性および特異性の決定
本実施例の目的は、ＥＬＩＳＡアッセイを使用してＭＢ５０値として測定される毛髪および色素表面に対する多様な毛髪結合ペプチドの親和性および特異性を決定することであった。短い直鎖状ペプチドのそれぞれをファージディスプレイを使用して最初に同定した。別の方法で示されない限り、実施例２に提供される配列は、検出の目的上ビオチニル化されたＣ末端リシン残基を包含する。多様なケラチンを含有する物質（例えば毛髪、皮膚および爪）に対する親和性を有する体表面に結合するペプチドの例を上の表１に提供する。
【０１０８】
毛髪結合ペプチドの合成
毛髪結合ペプチドを、標準的固相合成法を使用して合成し、そして検出の目的上結合配列のＣ末端リシン残基でビオチニル化した。試験されたペプチドのアミノ酸配列を表６に提供する。
【０１０９】
【表６】
2012522057.tif 000022
【０１１０】
毛髪および赤色酸化鉄粒子（Ｓｅｎｓｉｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ウィスコンシン州ミルウォーキーからのＵｎｉｐｕｒｅ  Ｒｅｄ）に結合するビオチニル化ペプチドのＭＢ５０測定を、毛髪束を使用して行った。毛髪サンプルを、一端で幅の狭いテープを使用して一緒に束ねた約１ｃｍ長の１００本の毛髪よりなる束に集成した。該毛髪束をＳＵＰＥＲＢＬＯＣＫ（登録商標）ブロッキング緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、イリノイ州ロックフォード）中室温（約２２℃）で１時間インキュベートし、次いでＴＢＳＴ（０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０中ＴＢＳ）で３回洗浄した。ＴＢＳＴ中の多様な濃度のビオチニル化ペプチドおよび１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡよりなるペプチド結合緩衝液を該毛髪束に添加し、そして室温で１時間インキュベートし、次いでＴＢＳＴで６回洗浄した。その後、ストレプトアビジン−ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合物（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、イリノイ州ロックフォード）を各ウェルに添加し（ウェルあたり１．０μｇ）そして室温で１ｈインキュベートし、次いでＴＢＳＴで６回洗浄した。全部の毛髪束を新たなチューブに移し、そしてその後、発色および吸光度測定を標準的プロトコルに従って実施した。結果はＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用してＡ４５０としてペプチドの濃度に対しプロットした。ＭＢ５０値をスキャッチャードプロットから計算しかつ表７に示す。
【０１１１】
表７に示される結果は、毛髪結合ペプチドが、例示される粒子表面（赤色酸化鉄色素粒子）に対してより毛髪に対するより良好な結合親和性を有したことを示した。
【０１１２】
【表７】
2012522057.tif 000023
【実施例３】
【０１１３】
毛髪保護ペプチド２６３（ＨＣ２６３）は白髪へのＣｏ−ＮＴＡ磁性ビーズの結合を媒介する
およそ５ｍｇの５ｍｍ長の毛髪房（ｓｔｒａｎｄ）（９０％白髪、ヒト）を２ｍＬ微小遠心管に移した。およそ１ｍＬのＴＢＳＴ０．１緩衝液（０．１％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０を含む２５ｍＭトリス、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．２）若しくは変動する濃度のＨＣ２６３ペプチドを包含する同一緩衝液を毛髪に添加した。
【０１１４】
該ペプチド試薬の毛髪結合ドメイン部分の全般的設計は、一般に、短いＮ末端、次いでペプチドリンカーにより分離される最低２個の毛髪結合ペプチドから構成された。該毛髪結合ドメインをその後、ペプチドスペーサー（場合によっては「ペプチド架橋」と本明細書で称される）を介して、金属キレート樹脂（例えばコバルト−ＮＴＡ樹脂）に対する会合親和性を有するＣ末端ポリヒスチジン領域（「ｈｉｓ標識」）に結合した。ペプチドに基づく試薬を集成するのに使用されたペプチドの配列を表８に示す。
【０１１５】
【表８】
2012522057.tif 000024
【０１１６】
混合物をＮｕｔａｔｏｒ上室温（約２２℃）で１時間振とうした。毛髪をＴＢＳＴ０．５緩衝液（０．５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０を含む２５ｍＭトリス、１５０ｍＭ  
ＮａＣｌ、ｐＨ７．２）で３回洗浄した。洗浄した後に毛髪を９００μＬのＴａｌｏｎ緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ８．０、３００ｍＭ塩化ナトリウム、０．０１％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０）に再懸濁した。毛髪／ペプチド複合物の１サブセットを１ｍＬの０．２５％ＳＬＥＳ（ナトリウムラウリルエーテルサルフェート）でＮｕｔａｔｏｒ上室温で５ｍｉｎ付加的に１回洗浄し、その後１ｍＬのＴＢＳＴ０．１緩衝液で２回洗浄した。およそ０．２ｍｇのＴＡＬＯＮＴＭビーズ（ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）ＴＡＬＯＮＴＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１０１．０１Ｄ）をＤＹＮＡＬ（登録商標）ＭＰＣＴＭ磁石上でＴＡＬＯＮＴＭ緩衝液で２回洗浄し、そして１００μＬのＴＡＬＯＮＴＭ緩衝液中の各反応に添加した。該磁性ビーズを、ペプチドに組み込まれた６個のヒスチジン残基（Ｃ末端ｈｉｓ標識）に特異的に結合するＣｏ−ＮＴＡで被覆した。毛髪およびビーズを、チューブを磁石上に置く前に穏やかに振とうしながら１０分間インキュベートした。
【０１１７】
毛髪に結合するビーズは、一旦磁石に適用されればチューブの側に共移動すると期待された。結合の強さを視覚的に評価し、そして０（結合がほとんど若しくは全く観察されない）ないし５（最高量の観察される結合）の尺度で等級付けした。表９は、０．２μＭおよび０．０２μＭのＨＣ２６３（配列番号１９６）の濃度での最適結合を示す結果を要約する。０．００７μＭで結合の減少が観察された。０．２μＭのペプチドでの結合はＳＬＥＳで毛髪を洗浄することにより損なわれなかった。
【０１１８】
【表９】
2012522057.tif 000025
【実施例４】
【０１１９】
Ｃｏ−ＮＴＡ磁性ビーズの白髪へのペプチドに媒介される結合
実施例３で観察された影響を達成するためのペプチドの要件を決定するため、付加的なペプチドを試験した（表１０）。それぞれ本発明の例示的一態様である工作されたペプチドＨＣ２６３、ＨＣ２６４、ＨＣ２０４、ＨＣ２０５およびＨＣ２１４はそれぞれ、Ｃｏ−ＮＴＡ被覆された磁性ビーズへの結合を可能にするポリヒスチジン標識を有する。ＨＣ３５２、ＨＣ４２３およびＨＣ２４２はＨＣ２６３のような２個若しくはそれ以上の毛髪結合ドメインを有するが、しかしポリヒスチジン標識を有さず、そして対照として使用した。ＨＣ２６４はランダム化した毛髪結合配列を除きＨＣ２６３と同一の配列組成を有する。
【０１２０】
【表１０】
2012522057.tif 000026
【０１２１】
実施例３の毛髪結合アッセイを使用して、表１０の試験ペプチドの結合の強さを評価した。結果を表１１に要約する。
【０１２２】
【表１１】
2012522057.tif 000027
【実施例５】
【０１２３】
毛髪への磁性ビーズのＨＣ２６３に媒介される結合
ペプチドＨＣ２６３（配列番号１９６）を、多様な表面すなわちヒト毛髪、ヤク毛、ウール、綿、ＳＯＮＴＡＲＡ（登録商標）（不織スパンレース織物シート布地、Ｅ．Ｉ．ｄｕＰｏｎｔ  ｄｅ  Ｎｅｍｏｕｒｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．、デラウェア州ウェルミントン）およびセルロース（濾紙）への磁性ビーズのペプチドに媒介される結合について試験した。およそ５ｍｇのヒト毛髪（９０％白髪）、ヤク毛、ウール、綿、ＳＯＮＴＡＲＡ（登録商標）若しくは濾紙を２ｍＬ微小遠心管に添加した。０．２μＭのＨＣ２６３を含有するおよそ１ｍＬのＴＢＳＴ０．１緩衝液（０．１％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０を含む２５ｍＭトリス、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．２）を添加した。該混合物をＮｕｔａｔｏｒ（ＢＤ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ニュージャージー州フランクリンレイクス）上室温（約２２℃）で３０分間振とうした。サンプルをＴＢＳＴ０．５緩衝液（０．５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０を含む２５ｍＭトリス、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．２）で３回洗浄した。洗浄した後にサンプルを９００μＬのＴＡＬＯＮＴＭ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カリフォルニア州マウンテンビュー）緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ８．０、３００ｍＭ塩化ナトリウム、０．０１％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０）に再懸濁した。およそ０．２ｍｇのＴＡＬＯＮＴＭビーズ（ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）ＴＡＬＯＮＴＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド；カタログ番号１０１．０１Ｄ）をＤＹＮＡＬ（登録商標）ＭＰＣＴＭ磁石上（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にてＴＡＬＯＮＴＭ緩衝液で２回洗浄し、そして１００μＬのＴＡＬＯＮＴＭ緩衝液中の各反応に添加した。
【０１２４】
多様な表面への該磁性ビーズの結合の強さを、１０００倍の倍率で撮影された走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）画像の可視化により評価した。相対的採点システムを使用して、多様な表面へのビーズの結合の強さをＳＥＭ画像に基づき等級付けした（０＝ほとんど若しくは全く結合なし、５＝強い結合）。表１２は、ペプチドＨＣ２６３により媒介される磁性ビーズの強い結合がヒト毛髪でのみ起こることを示す。
【０１２５】
【表１２】
2012522057.tif 000028
【実施例６】
【０１２６】
ビオチン−ペプチドおよびストレプトアビジン−ポリスチレン粒子を利用する沈着
ビオチニル化ペプチドおよびストレプトアビジン被覆ビーズ系を使用して、本発明の方法および組成物の毛髪へのビーズの結合を具体的に説明した。逐次沈着を以下の方法により達成した。すなわち、
ヒト毛髪サンプルを、本明細書に示される方法に従って得られた２０ｍＭのＨＣＰ５二量体ペプチド（配列番号２０４）を含有する水性溶液に入れた。ＨＣＰ５二量体は、短いスペーサー（ＨＣＰ５−ＧＧＳＧＰＧＳＧＧ−ＨＣＰ５）を使用して一緒に結合されたファージディスプレイライブラリーに元は由来する２個のＨＣＰ５毛髪結合ペプチド（配列番号１１２）を含んでなる。ＨＣＰ５二量体は、ビオチニル化（配列番号２０５）およびビオチニル化されない（配列番号２０４）双方のバージョン（ビオチン結合を容易にするため単一リシン残基がビオチニル化バージョンのＣ末端に付加された）でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州サニーベール）から購入した。
【０１２７】
毛髪サンプルはビオチニル化若しくはビオチニル化されていないペプチドいずれかに該毛髪サンプルを曝露することにより前処理した。３インチ長の天然の暗褐色毛髪（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈａｉｒ  Ｉｍｐｏｒｔｅｒｓ）の房（ｓｔｒａｎｄ）を２％ＳＬＥＳで３０秒間前洗浄し、その後ＤＩ水で徹底的にすすいだ。毛髪房をその後ペプチドの５〜２０マイクロモル濃度溶液１０ｍＬに１時間まで浸漬した。１０種の毛髪サンプルをビオチニル化ペプチドに曝露し、そして１０種の毛髪サンプルをビオチニル化されていないペプチドに曝露した。ペプチド溶液はＤＩ水若しくはｐＨ７．２のトリス−ＨＣｌ緩衝液（５ｍＭ〜１５０ｍＭからの範囲にわたるイオン強度）いずれか中で１時間まで調製した。該ペプチド処理段階は、毛髪サンプルへのペプチドの沈着をもたらすと期待される。ペプチドで処理した毛髪サンプルをその後、ペプチド処理緩衝液の溶液への３０秒間の浸漬によりすすいで過剰のペプチドを除去した。次に、ペプチドで処理した毛髪サンプルを、ビオチンとストレプトアビジンの間の結合を可能にするため、４０ｎｍの蛍光標識したストレプトアビジン被覆ポリスチレン粒子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）とともにインキュベートした。粒子分散系は、ＤＩ水および０．１％までのＴＷＥＥＮを含有するｐＨ７．２のトリス緩衝生理的食塩水（５ｍＭ〜１５０ｍＭからの範囲にわたるイオン強度）を包含する多様な媒体で創製した。結合は暗所で室温（約２２℃）での２４時間までのインキュベーション時間の間に起こることを可能にされた。サンプルはインキュベーション時間の間に継続的に回転して反転した。
【０１２８】
インキュベーション時間が終了した後、蛍光顕微鏡検査を使用して、４０ｎｍの蛍光標識したストレプトアビジン被覆ポリスチレン粒子の毛髪への結合を見た。図１は、ビオチ
ニル化ＨＣＰ５二量体ペプチドが、観察された蛍光により明示されるとおり毛髪に粒子を結合したことを具体的に説明する。
【実施例７】
【０１２９】
ビオチン−ペプチドおよびストレプトアビジン−酸化鉄を利用する沈着
ビオチニル化ペプチドおよびストレプトアビジンビーズ系を使用して毛髪を着色した。逐次沈着を以下の方法により達成した。
【０１３０】
１００％着色されていない毛髪を含有するおよそ１インチ長の小さい毛髪房（ｔｒｅｓｓ）を、本明細書に示される方法に従って得られた２０ｍＭのペプチド（ＤＩ水若しくはトリス緩衝生理的食塩水、ｐＨ７．２、５〜１５０ｍＭイオン強度中）を含む水性溶液に室温で１時間まで入れた。ペプチドＨＣ２６０は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で組換え的に製造した。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）産生宿主を使用するペプチド試薬の組換え的製造および単離方法は当該技術分野で公知である（例えば米国特許第７，２８５，２６４号明細書（引用することにより本明細書に組み込まれる）の実施例１７〜２０）。機能的ペプチド単位の配列を使用してＨＣＰ５二量体（「（ＨＣＰ５）２」）ＨＣ２６０を創製するを表１３に提供する。ペプチド試薬（すなわち工作されたペプチド）の式を表１４に提供する。ＨＣ２６０はストレプトアビジンに結合するペプチド標識（ＳＢ３３Ｎ）を含有するよう工作した。
【０１３１】
【表１３】
2012522057.tif 000029
【０１３２】
【表１４】
2012522057.tif 000030
【０１３３】
毛髪サンプルは多様なペプチドに毛髪を曝露することにより前処理した。ペプチドが毛髪に層を創製した。ペプチド層を伴う毛髪サンプルをＳＬＥＳ溶液ですすいで過剰のペプチドを除去した。次に、ペプチドで処理した毛髪サンプルをストレプトアビジン標識酸化
鉄粒子（Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、インジアナ州フィッシャーズ；Ａｄｅｍｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、仏国・Ｐｅｓｓａｓ）とインキュベートして、ビオチンとストレプトアビジン若しくはＨＣ２６０中のストレプトアビジン結合ドメインとストレプトアビジンの間の結合を可能にした。粒子は分散された形態で購入し、そして指定される量のＤＩ水若しくはＡｄｅｍｔｅｃｈからのカップリング緩衝液いずれかを添加することにより０．０２５〜１重量％に希釈した。結合は、暗所で室温（約２２℃）で２４時間までのインキュベーション時間の間に起こることを可能にされた。サンプルは結合持続期間のインキュベーション時間（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｕｒａｔｉｏｎ  ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ  ｐｅｒｉｏｄ）の間、継続的に回転して反転した。
【０１３４】
表１５は、着色されたストレプトアビジン被覆酸化鉄ビーズ（５００ｎｍ）がビオチニル化ペプチド（ＨＣＰ５）２とともに毛髪サンプルに沈着した一方、着色されたストレプトアビジン被覆酸化鉄ビーズ（５００ｍｍ）はビオチニル化されていないペプチド（ＨＣＰ５）２とともに毛髪サンプルに同様には沈着しなかったことを示す。毛髪サンプル＃３はビオチニル化されていない（ＨＣＰ５）２ペプチドで被覆し、また、毛髪サンプル＃４はビオチニル化された（ＨＣＰ５）２ペプチドで被覆した。酸化鉄処理された毛髪の関連する色強度の色尺度を（０〜５）と定義し、ここで０は色沈着なしでありかつ５は最も濃い色である。表１５で、毛髪サンプル＃３は０という関連する色強度値を有する一方、毛髪サンプル＃４は４という関連する色強度値を有する。
【０１３５】
【表１５】
2012522057.tif 000031
【０１３６】
表１６は連続処理法を使用して多様なペプチド構築物およびストレプトアビジン被覆酸化鉄ビーズで処理した毛髪サンプルの視覚的色評価を示す。ストレプトアビジン結合パートナー（すなわちビオチン若しくはストレプトアビジン結合ペプチドモチーフいずれか）を含有するペプチド構築物で処理された毛髪サンプルは、着色したストレプトアビジン被覆酸化鉄ビーズで処理された場合に毛髪着色を高めた。
【０１３７】
ストレプトアビジン結合ドメインはＨＣ２６０であるは１０−４Ｍという推定ストレプトアビジン結合Ｋｄ値を有するＳＢ３３Ｎであった。表１６は毛髪の処理された房を示す。色尺度で、ペプチドは後に続くとおり評価された。すなわち（ＨＣＰ５）２＝０、（ＨＣＰ５）２−ビオチン＝４、ＨＣ２６０＝２。
【０１３８】
【表１６】
2012522057.tif 000032
【０１３９】
表１７〜１９はストレプトアビジン被覆酸化鉄粒子を使用する毛髪着色の視覚的色評価を示す。サンプル＃３および＃４は５００ｎｍ粒子を用いるＨＣＰ５二量体［（ＨＣＰ５）２］のそれぞれビオチニル化されていないおよびビオチニル化バージョンに対応し、また、サンプル＃１および＃２はそれぞれ２００ｎｍ粒子を用いるそれぞれペプチド（ＨＣＰ５）２および（ＨＣＰ５）２−ビオチンに対応する。さらに、水洗および０．２５％ＳＬＥＳ洗浄段階を示す。初期データに前述された色尺度を使用して、被覆されたペプチドへの曝露後しかし水で洗浄する前の色評価は後に続くとおりであった。すなわち、サンプル１＝０、サンプル２＝０、サンプル３＝０およびサンプル４＝４（表１７；図３Ａ）。水での洗浄後の色評価は後に続くとおりであった。すなわち、サンプル１＝０、サンプル２＝０、サンプル３＝０およびサンプル４＝３（表１８；図３Ｂ）。０．２５％ＳＬＥＳ（ナトリウムラウリルエーテルサルフェート）洗浄データにおいて：サンプル１＝０、サンプル２＝０、サンプル３＝０およびサンプル４＝２（表１９；図３Ｃ）。
【０１４０】
【表１７】
2012522057.tif 000033
【０１４１】
【表１８】
2012522057.tif 000034
【０１４２】
【表１９】
2012522057.tif 000035
【０１４３】
実施例７は、色のヒト認識に対する粒子径の影響を示す。ヒトは約４００ｎｍないし７００ｎｍ範囲にある色を認識し得る。紫外光すなわち２００〜４００ｎｍはヒトに可視性でない。表１７〜１９に示されるとおり、５００ｎｍビーズで処理された（ＨＣＰ５）２−ビオチン処理した毛髪のみが認識可能な色を表した。２００ｎｍビーズで処理された（ＨＣＰ５）２−ビオチン処理した毛髪は、２００ｎｍビーズが毛髪に沈着された場合であっても認識可能な色を表さなかった。図４Ａおよび４Ｂを参照されたい。
【実施例８】
【０１４４】
連続適用されるペプチドおよび色素での毛髪着色
天然の白髪の小房（ｍｉｎｉｔｒｅｓｓ）（０．５〜１ｃｍ幅、１インチ長）をＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈａｉｒ  Ｉｎｃ．、サウスカロライナ州フローレンスから得た。該毛髪房を２％ナトリウムラウリルエーテルサルフェート（ＳＬＥＳ、Ｒｈｏｄａｐｅｘ  ＥＳ−２Ｋ）溶液で手洗浄し、次いでＤＩ水ですすぎかつ試験前に風乾した。ペプチドＨＣ６３４、ＨＣ６３５、ＨＣ６３６、ＨＣ６３７、ＨＣ６３８、ＨＣ６３９、ＨＣ６４０、ＨＣ６４１、ＨＣ６４２、ＨＣ６４３、ＨＣ６４４およびＨＣ６４５をそれぞれ秤量しかつ濃度０．７ｍｇ／ｍＬでｐＨ７．５、２５ｍＭトリス緩衝液に溶解した。毛髪結合ドメインは、ｔｏｎＢリンカー（配列番号２０８）により結合される毛髪結合ペプチドＨＰ２Ｅ（配列番号８４）およびＧｒａｙ３Ａ（配列番号７７）を含んでなる。該結合ドメインを、色素（すなわちシリカ被覆赤色酸化鉄）に対する親和性を有する多様なペプチド（すなわち親和性対の第一の部分）に架橋ペプチド（配列番号２０９）を介して結合した。
【０１４５】
【表２０】
2012522057.tif 000036
【０１４６】
各毛髪房を回転装置上１．７ｍＬ微小遠心バイアル中で０．６ｍＬのペプチド溶液と１５分間インキュベートした。毛髪房の複製物を各ペプチド溶液について運転した（ｒｕｎ）。その後、房をバイアルから取り出しかつＤＩ水ですすぎ、ペーパータオルで水気を取り、そして色素の応用のため新しいラベルをつけたバイアルに入れた。シリカ被覆酸化鉄粒子を、米国特許第２，８８５，３６６号明細書（本明細書に組み込まれる）に開示される方法に従って作成した。シリカ被覆赤色酸化鉄分散系を２（ＩＥＰ２）および５（ＩＥＰ５）の等電点で調製した。およそ０．６ｍＬのｐＨ７．５、２５ｍＭトリス緩衝液中１％色素分散系を各バイアルに添加し、そしてペプチド処理された毛髪房と回転装置上で１０分間インキュベートした。その後、毛髪房を取り出しかつ水道水ですすぎ、ペーパータオルで水気を取りかつ空気で乾燥した。Ｌ*ａ*ｂスコアを、毛髪サンプルの両側の４個の異なる点でＸ−Ｒｉｔｅ分光光度計（Ｘ−Ｒｉｔｅ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、ミネソタ州グランドラピッズ）を使用して各毛髪房について測定し、そしてＬ*ａ*ｂスコアの平均を色取り込みΔＥ計算（ΔＥ）に使用した。このために参照として未処理の天然の白髪を使用した。いずれのペプチド対照も、同一手順を用いて毛髪房を直接色素分散系に適用することにより試験しなかった。
【０１４７】
ΔＥ値は、下の等式（１）すなわち
ΔＥ＝（（Ｌ*1−Ｌ*2)2 ＋（ａ*1−ａ*2)2 ＋（ｂ*1−ｂ*2)2)1/2    （１）
ここで、Ｌ*は軽さ変数でありかつａ*およびｂ*は国際照明委員会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｌｌｕｍｉｎａｔｉｏｎ）（ＣＩＥ）により定義されるところの（Ｍｉｎｏｌｔａ、Ｐｒｅｃｉｓｅ  Ｃｏｌｏｒ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ−Ｃｏｌｏｒ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｆｒｏｍ  Ｆｅｅｌｉｎｇ  ｔｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ、Ｍｉｎｏｌｔａ  Ｃａｍｅｒａ  Ｃｏ．、１９９６）ＣＩＥＬＡＢ色空間の色度座標である、
を使用して計算し得る。
【０１４８】
ペプチドに媒介される毛髪着色の結果を図２に要約する。ペプチドを伴わずに、ＩＥＰ２およびＩＥＰ５双方のシリカ被覆酸化鉄色素は約５〜８ΔＥ単位のバックグラウンド色取り込みを生じた一方、ペプチドに媒介される色素沈着はＩＥＰ２色素で２ないし４３ΔＥ単位の色取り込みおよびＩＥＰ５色素で３７〜４２ΔＥ単位の色取り込みを生じた。該ペプチド−色素系は毛髪を効果的に着色することが示された。
【実施例９】
【０１４９】
ペプチド成分からの有益な作用剤の除去
段階１：毛髪房を、本発明のペプチド成分例えば（ＨＣＰ５）２−ビオチンを含有するペプチド溶液と約１５ｍｉｎインキュベートすることができ、そして水ですすぎかつ水気を取ることができる。インキュベートした毛髪房をその後、本発明の微粒子の有益な作用剤の安定な分散系で約１０ｍｉｎ処理することができる。例えば、インキュベートされた毛髪房を、ストレプトアビジン被覆酸化鉄ビーズを含んでなる安定な分散系で処理することができ、その後水ですすぎかつ水気を取ることができる。
【０１５０】
段階２：本発明の方法により着色される毛髪房を処理して本発明の微粒子の有益な作用剤を除去し得る。例えば、有益な作用剤が着色剤である場合、該着色剤を除去し得る。毛髪房を段階１に従って調製し得る。毛髪房を水性溶液例えば０．２５％ＳＬＥＳ洗浄液で１回若しくはそれ以上処理して、ビオチンおよびストレプトアビジンの親和性を破壊しかつストレプトアビジン被覆酸化鉄ビーズを毛髪房から放出させることができる。
【図２】
2012522057.tif 000037
【図１】
2012522057.tif 000038
【図３】
2012522057.tif 000039
【図４Ａ】
2012522057.tif 000040
【図４Ｂ】
2012522057.tif 000041
【配列表】
2012522057000001.app
【国際調査報告】
2012522057.tif 000042
2012522057.tif 000043
2012522057.tif 000044
2012522057.tif 000045