(57)【要約】乳オリゴ糖または乳オリゴ糖を含む複合糖質の投与を含む、被験体において炎症を阻害する方法が開示される。本発明の１つの局面は、その必要のある被験体に、１つまたはそれ以上の乳由来オリゴ糖またはそのオリゴ糖を含む１つまたはそれ以上の複合糖質を含む、有効な量の組成物を投与することによって炎症を阻害する方法を特徴とする。乳由来のオリゴ糖は、オリゴ糖の非還元末端に位置する第１の糖単位（すなわち、フコース、ガラクトース、マンノース、またはシアル酸）、および第１の糖単位に直接連結した第２の糖単位（すなわち、ガラクトース、グルコース、マンノース、またはＮ−アセチルグルコサミン）を含む。
2012532195.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症を阻害する方法であって、該方法は、炎症の阻害を必要とする被験体に、少なくとも１つの乳由来のオリゴ糖、または該オリゴ糖を含む複合糖質を含む、有効量の組成物を投与する工程を包含し、該オリゴ糖は、第１の糖単位および第２の糖単位を含み、ここで、第１の非還元末端に位置する該第１の糖単位は、フコース、ガラクトース、マンノースまたはシアル酸であり、かつ該第１の糖単位に連結した該第２の糖単位はガラクトース、グルコース、マンノースまたはＮ−アセチルグルコサミンである、方法。
【請求項２】
前記第１の糖単位がフコースである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記オリゴ糖が、２’−フコシルラクトース、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩ、または前記還元末端がグルコースの代わりにＮ−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記オリゴ糖が、第２の非還元末端を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記第２の非還元末端における前記糖単位がフコースである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記オリゴ糖が、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩ、ラクトジフコテトラオース、または前記還元末端がグルコースの代わりにＮ−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記第２の非還元末端における前記糖単位がガラクトースである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記オリゴ糖が、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩＩ、３’−フコシルラクトース、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩＩＩ、または前記還元末端がグルコースの代わりにＮ−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第２の非還元末端における前記糖単位がシアル酸である、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
前記オリゴ糖が、３’−シアリル−３−フコシルラクトース、ジシアロモノフコシルラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、モノフコシルモノシアリルラクト−Ｎ−オクタオース、シアリルラクト−Ｎ−フコヘキサオースＩＩ、ジシアリルラクト−Ｎ−フコペントースＩＩ、モノフコシルジシアリルラクト−Ｎ−テトラオース、または前記還元末端がグルコースの代わりにＮ−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１の糖単位がシアル酸である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記オリゴ糖が、３’−シアリルラクトース、６’−シアリルラクトース、シアリルラクト−Ｎ−ネオテトラオースｃ、シアリルラクト−Ｎ−テトラオースａ、または前記還元末端がグルコースの代わりにＮ−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記オリゴ糖が第２の非還元末端を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記第２の非還元末端における前記糖単位がガラクトースである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記オリゴ糖が、モノシアリルラクト−Ｎ−ヘキサオース、モノシアリルラクト−Ｎ−ネオヘキサオースＩ、モノシアリルラクト−Ｎ−ネオヘキサオースＩＩ、シアリルラクト−Ｎ−テトラオースｂ、または前記還元末端がグルコースの代わりにＮ−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記第２の非還元末端における前記糖単位がシアル酸である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記オリゴ糖が、ジシアリルラクト−Ｎ−ヘキサオースＩ、ジシアリルラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ジシアリルラクト−Ｎ−テトラオース、ジシアリルラクト−Ｎ−ヘキサオースＩＩ、ジシアリルラクト−Ｎ−ヘキサオースＩ、または前記還元末端がグルコースの代わりにＮ−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記複合糖質において、前記オリゴ糖が、炭水化物、脂質またはペプチドと結合体化している、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記被験体が、消化管の炎症性疾患に罹患しているか、またはそのリスクを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記消化管の炎症性疾患が、食道炎、胃腸炎、大腸炎、胆管炎および虫垂炎からなる群より選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記消化管の炎症性疾患が、潰瘍性大腸炎、クローン病または過敏性腸症候群である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記被験体がヒト乳児である、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
炎症を阻害する方法であって、該方法は、炎症の阻害を必要とする被験体に、乳から単離されたオリゴ糖を含む、有効量の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２４】
前記乳が人乳である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記乳が、ウシ科の動物の乳、ウマの乳またはラクダの乳である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記ウシ科の動物の乳が、ウシの乳、ヤギの乳またはヒツジの乳である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記オリゴ糖が、以下：
乳を提供する工程、
前記乳から脂肪およびタンパク質を除去する工程、ならびに
該脂肪および該タンパク質を除去した後に、該乳からオリゴ糖を単離する工程
を含むプロセスによって調製される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
前記単離する工程が、前記乳をカーボンカラムに入れ、アルコール溶液で該カラムから前記オリゴ糖を溶出することによって実行される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記乳が人乳である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記乳が、ウシ科の動物の乳、ウマの乳またはラクダの乳である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
前記ウシ科の動物の乳が、ウシの乳、ヤギの乳またはヒツジの乳である、請求項３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２００９年６月６日に出願された、米国仮出願第６１／２２３，１４５号（この内容は、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
人乳中の様々な成分、例えば乳免疫グロブリン、白血球、オリゴ糖、および複合糖質は、乳児を感染性疾患から保護する。従って人乳は、天然の有効な「栄養補助食品（ｎｅｕｔｒｉｃｅｕｔｉｃａｌ）」、すなわち免疫学的利点を伝えるモデル食品であると考えられる。
【０００３】
人乳はまた、乳児において炎症性腸疾患を発症するリスクを低減することが見出された。この抗炎症活性は、人乳中の白血球、サイトカイン、および抗酸化剤に起因していた。非特許文献１を参照のこと。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｂｕｅｓｃｈｅｒ、Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．（２００１）５０１：２０７−２２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、人乳中のオリゴ糖が炎症を阻害するという予期せぬ発見に基づく。
【０００６】
よって、本発明の１つの局面は、その必要のある被験体に、１つまたはそれ以上の乳由来オリゴ糖またはそのオリゴ糖を含む１つまたはそれ以上の複合糖質を含む、有効な量の組成物を投与することによって炎症を阻害する方法を特徴とする。乳由来のオリゴ糖は、オリゴ糖の非還元末端に位置する第１の糖単位（すなわち、フコース、ガラクトース、マンノース、またはシアル酸）、および第１の糖単位に直接連結した第２の糖単位（すなわち、ガラクトース、グルコース、マンノース、またはＮ−アセチルグルコサミン）を含む。１つの例において、そのオリゴ糖は、１つの非還元末端および１つの還元末端を有する直鎖状分子である。別の例において、それは複数の非還元末端および１つの還元末端を有する分岐分子である。そのオリゴ糖が２つの非還元末端を有する場合、１つの非還元末端の糖単位はフコースであり得、そして他方の非還元末端においてそれはフコース、ガラクトース、またはシアル酸であり得る、またはあるいは、１つの非還元末端の糖単位はシアル酸であり、そして他方の非還元末端においてそれはガラクトースまたはシアル酸である。還元末端の糖単位は、グルコースまたはＮ−アセチルグルコサミンであり得る。
【０００７】
上記で記載した方法において使用される複合糖質は、脂質、ペプチド、ポリペプチド、または炭水化物に結合体化した、１つまたはそれ以上の同様に上記で記載した乳由来オリゴ糖を含み得る。
【０００８】
本発明の別の局面は、乳から単離されたオリゴ糖で炎症を阻害する方法を特徴とし、それはヒト、ウシ科の動物（例えばウシ、ヤギ、またはヒツジ）、または別の哺乳類（例えばウマまたはラクダ）由来であり得る。そのオリゴ糖を、従来の方法による単離の前に、まず乳から脂肪およびタンパク質を除去することによって調製し得る。１つの例において、脂肪およびタンパク質の除去後、その乳をカーボンカラム（ｃａｒｂｏｎ  ｃｏｌｕｍｎ）に入れ、そしてカラムに吸着したオリゴ糖をアルコール溶液（例えば５０％エタノール水溶液）で溶出する。
【０００９】
本発明の方法を、消化管の疾患のような、炎症性疾患に罹患する、またはそれを発症するリスクのある被験体、例えばヒト、または非ヒト哺乳類に適用し得る。例は、食道炎、胃腸炎、大腸炎、胆管炎、虫垂炎、炎症性腸疾患（すなわち、潰瘍性大腸炎、壊死性腸炎、およびクローン病）、または過敏性腸症候群を含む。
【００１０】
炎症を阻害するために、および炎症性疾患を治療するための医薬を製造するために、１つまたはそれ以上の乳由来オリゴ糖、またはそのオリゴ糖を含む１つまたはそれ以上の複合糖質を使用することも、本発明の範囲内である。
【００１１】
本発明の１つまたはそれ以上の実施態様の詳細を、下記の説明において述べる。本発明の他の特徴または利点が、以下の図面および実施例の詳細な説明から、およびまた添付の請求から明らかである。
【００１２】
まず図面を説明する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、人乳オリゴ糖が、Ｔ８４腸細胞によるＴＮＦ−α誘導ＩＬ−８産生を阻害することを示す図である。
【図２】図２は、人乳オリゴ糖が、ヒト腸管粘膜によるＴＮＦ−α誘導単球走化性タンパク質−１産生を阻害することを示す図である。
【図３】図３は、フラジェリン（ｆｌａｇｅｌｉｎ）、ポリイノシン−ポリシチジン酸二本鎖ＲＮＡ、またはＩＬ−１βが、未熟なヒト腸管粘膜の器官培養におけるＩＬ−８産生を誘導し、そして人乳オリゴ糖がこの誘導ＩＬ−８産生を阻害することを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
１つまたはそれ以上の乳由来オリゴ糖、またはそのオリゴ糖を含む１つまたはそれ以上の複合糖質で炎症を阻害する方法が、本明細書中で開示される。
【００１５】
乳由来オリゴ糖、すなわち少なくとも３つの糖単位を有するものは、乳で見出される天然に存在するオリゴ糖、その天然に存在するオリゴ糖の断片、またはその天然の対応物と比較して修飾された（例えば硫酸化、アセチル化、またはリン酸化）糖単位を含むその改変体のいずれかである。このオリゴ糖は、非還元末端モチーフＳ１Ｓ２を含み、ここでＳ１はフコース、ガラクトース、マンノース、またはシアル酸（Ｎ−アセチルまたはＮ−グリコリル）であり、そしてＳ２はガラクトース、グルコース、マンノース、またはＮ−アセチルグルコサミンである。Ｓ１はαまたはβグリコシド結合によってＳ２に連結する。Ｓ１がフコースである場合、Ｓ１およびＳ２の間のグリコシド結合は、好ましくはα１，２、α１，３、またはα１，４結合である。それがシアル酸である場合、そのグリコシド結合は、好ましくはα２，３またはα２，６結合である。
【００１６】
乳由来オリゴ糖およびそのようなオリゴ糖を含む複合糖質（ｇｌｙｃｏｌｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）は、当該分野で周知である。例えば、米国特許出願第６１／１６８，６７４およびＷＯ２００５／０５５９４４を参照のこと。以下の表は、人乳に天然に存在する代表的なオリゴ糖を列挙する：
【００１７】
【表１】
2012532195.tif 000003
【００１８】
【表２】
2012532195.tif 000004
【００１９】
【表３】
2012532195.tif 000005
【００２０】
【表４】
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本明細書中で記載された乳由来オリゴ糖を、従来の方法によって調製し得る、例えば化学的に合成、乳から精製、または微生物において産生し得る。ＷＯ２００５／０５５９４４を参照のこと。下記は、乳からオリゴ糖を単離する例である。まず乳を遠心分離によって脱脂して脱脂乳を産生する。次いでその脱脂乳をアセトン（例えば５０％水性アセトン）およびエタノール（例えば６７％水性エタノール）のような有機溶媒と混合して、乳タンパク質を沈殿させる。遠心分離して、上清を回収し、そしてクロマトグラフィーにかける。オリゴ糖を含む画分を回収およびプールする。もし必要なら、そのように調製したオリゴ糖を、従来の方法、例えば透析または凍結乾燥によって濃縮し得る。
【００２１】
乳オリゴ糖をまた、脱脂乳を３０，０００ＭＷＣＯ限外ろ過膜に通し、透析物を回収し、その透析物を５００ＭＷＣＯ限外ろ過膜に通し、そして乳オリゴ糖を含む残余分を回収することによって、脱脂乳から単離し得る。
【００２２】
１つまたはそれ以上の乳由来オリゴ糖を含む、本明細書中で記載された複合糖質を、オリゴ糖をバックボーン分子（例えば炭水化物、脂質、核酸、またはペプチド）に直接、またはリンカーによって結合体化することによって、化学的に合成し得る。本明細書中で使用される場合、「複合糖質」は、バックボーン部分に結合した糖部分を含む複合体を指す。その糖およびバックボーン部分は、共有結合または非共有結合によって、または封入（ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ）（例えば、他方における１つの部分、もしくは他方の中の１つの部分に、または第３の部分における実体、もしくは第３の部分の中の実体のいずれかまたは両方に）のような他の形式の結合によって結合し得る。本明細書中で記載される複合糖質は、１つの型の乳由来オリゴ糖（すなわち、１つのバックボーン分子に結合した、１つまたはそれ以上のコピーの乳由来オリゴ糖）を含み得る。あるいは、その複合糖質は、複数の型の乳由来オリゴ糖を含む。１つの例において、その乳由来オリゴ糖（例えばラクト−Ｎ−フコペンタオースＩ、２−フコシルラクトース、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩ、ラクトジフコテトラオース、またはそのアセチル化改変体）は、その還元末端糖単位によって、脂質、タンパク質、核酸、または多糖類に共有結合している。好ましくは、その還元末端糖単位は、Ｎ−アセチルグルコサミンである。
【００２３】
上記で記載された複合糖質を作成するために適当なペプチドバックボーンは、複数のグリコシル化部位（例えばアスパラギン、リシン、セリン、またはスレオニン残基）および低いアレルゲン性の可能性を有するものを含む。例は、アミラーゼ、胆汁酸塩−刺激リパーゼ、カゼイン、葉酸結合タンパク質、グロブリン、グルテン、ハプトコリン、ラクトアルブミン、ラクトフェリン、ラクトペルオキシダーゼ、リポプロテイン、リパーゼ、リゾチーム、ムチン、卵白アルブミン、および血清アルブミンを含むがこれに限らない。
【００２４】
典型的には、乳由来オリゴ糖を、Ｏ−結合によってセリンまたはスレオニン残基に、またはＮ−結合によってアスパラギン残基に共有結合し得る。これらの結合を形成するために、そのオリゴ糖の還元末端の糖単位は、好ましくはアセチル化糖単位、例えばＮ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、およびＮ−アセチルマンノサミンである。オリゴ糖を、標準的な方法を用いてペプチド（例えばタンパク質）に結合し得る。例えば、ＭｃＢｒｏｏｍら、Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ、ＰａｒｔＢ、２８：２１２−２１９、１９７２；Ｙａｒｉｖら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．８５：３８３−３８８、１９６２；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．４６：１５５−１５８、１９７６；およびＰａｚｕｒ、Ａｄｖ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９：４０５−４４７、１９８１を参照のこと。
【００２５】
１つの例において、乳由来オリゴ糖を、リンカーによってバックボーン分子に結合する。代表的なリンカーが、ＷＯ２００５／０５５９４４において記載される。そのオリゴ糖を、酵素的反応、例えば糖転移酵素反応によってリンカーに結合し得る。フコシル基転移酵素、ガラクトース転移酵素、グルコース転移酵素、マンノース転移酵素、ガラクトサミン転移酵素、シアル酸転移酵素、およびＮ−アセチルグルコサミン転移酵素を含む多くの糖転移酵素を使用して、本明細書中で記載された複合糖質を作成し得る。これらの糖転移酵素についてのさらなる詳細は、米国特許第６，２９１，２１９；６，２７０，９８７；６，２３８，８９４；６，２０４，４３１；６，１４３，８６８；６，０８７，１４３；６，０５４，３０９；６，０２７，９２８；６，０２５，１７４；６，０２５，１７３；５，９５５，２８２；５，９４５，３２２；５，９２２，５４０；５，８９２，０７０；５，８７６，７１４；５，８７４，２６１；５，８７１，９８３；５，８６１，２９３；５，８５９，３３４；５，８５８，７５２；５，８５６，１５９；および５，５４５，５５３号において見出し得る。
【００２６】
あるいは、本明細書中で記載された複合糖質を、従来の方法によって、例えば限外ろ過膜を通すことによって、非極性溶媒における沈殿によって、または混合できない溶媒の間の分割によって、乳から精製し得る。
【００２７】
１つまたはそれ以上の上記で記載された乳オリゴ糖または複合糖質を、薬学的に受容可能な担体と混合して薬学的組成物を形成し得る。薬学的組成物中の担体は、処方の活性成分と適合性である（および好ましくはそれを安定化し得る）、および治療する被験体にとって有害ではないという意味において、「受容可能」でなければならない。例えば、オリゴ糖／複合糖質とより溶解性の複合体を形成するシクロデキストリンのような可溶化剤、またはさらなる可溶化剤を、オリゴ糖／複合糖質の送達のために医薬品担体として利用し得る。他の担体の例は、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ＃１０を含む。
【００２８】
あるいは、そのオリゴ糖／複合糖質をまた、食品業界において周知の方法に従って、食品産物または栄養補助食品として処方し得る。１つの例において、それらは人工栄養乳の成分である。
【００２９】
そのオリゴ糖および複合糖質は、炎症の阻害および炎症関連疾患（すなわち炎症性疾患）の治療において有効である。炎症は、傷害または感染に反応した、生きた組織の反応（例えば、熱、発赤、腫脹、または疼痛）である。局所または全身性の、急性または慢性炎症によって特徴付けられる、代表的な炎症関連疾患は、炎症性網膜症（例えば糖尿病性網膜症）、皮膚病（例えば皮膚炎、湿疹、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、蕁麻疹、壊死性血管炎、皮膚血管炎、過敏性血管炎、好酸球性筋炎、多発性筋炎、皮膚筋炎、および好酸球性筋膜炎）、過敏性肺疾患（例えば過敏性間質性肺炎、好酸球性肺炎、遅延型過敏症、間質性肺疾患またはＩＬＤ、特発性肺線維症、および関節リウマチに関連するＩＬＤ）、喘息、およびアレルギー性鼻炎を含む。上記で列挙した炎症性疾患を治療することに加えて、本発明の方法は、食道炎（すなわち食道潰瘍のような食道の炎症）、胃腸炎（すなわち胃炎、十二指腸潰瘍、回腸炎、または腸炎のような、胃および腸管の粘膜の炎症）、大腸炎（すなわち、憩室炎のような大腸の炎症）、胆管炎（すなわち胆管の炎症）、および虫垂炎（すなわち虫垂の炎症）を含む消化管の炎症性疾患の治療において特に有効である。消化管の炎症性疾患はまた、炎症性腸疾患（例えばクローン病および潰瘍性大腸炎）および過敏性腸症候群を含む。
【００３０】
本明細書中で使用される「治療する」と言う用語は、炎症性疾患、炎症性疾患の症状、または炎症性疾患の素因を有する被験体に、その疾患、疾患の症状、または疾患の素因を治療する（ｃｕｒｅ）、治癒する、軽減する、やわらげる、変化させる、治療する（ｒｅｍｅｄｙ）、寛解させる、改善する、または影響を与える目的で、１つまたはそれ以上の活性薬剤を含む組成物を適用または投与することを指す。
【００３１】
本発明の方法を実施するために、有効な量の上記で記載した薬学的組成物を、経口で、非経口で、吸入スプレーによって、局所的に、直腸内に、鼻腔内に、頬側に、膣内に、または埋め込んだリザーバーによって、被験体（例えばヒト乳児または高齢者）に投与し得る。本明細書中で使用される「非経口」という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、および頭蓋内注射または注入技術を含む。本明細書中で使用される「有効な量」は、単独で、または１つまたはそれ以上の他の活性薬剤と組み合わせて、被験体に治療的効果を与えるために必要な各活性薬剤の量を指す。当業者によって認識されるように、投与経路、賦形剤の使用、および他の活性薬剤との同時使用に依存して、有効な量は変動する。
【００３２】
滅菌注射用組成物、例えば滅菌注射用水性または油性懸濁液を、適当な分散剤または湿潤剤（Ｔｗｅｅｎ８０のような）および懸濁剤を用いて、当該分野で公知の技術に従って処方し得る。滅菌注射用調製物はまた、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液のような、無毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液であり得る。採用し得る受容可能なビヒクルおよび溶媒は、マンニトール、水、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液を含む。それに加えて、滅菌固定油を、溶媒または懸濁媒体として従来法で採用する（例えば合成モノ−またはジグリセリド）。オレイン酸のような脂肪酸およびそのグリセリド誘導体が、特にそのポリオキシエチル化バージョンにおいて、オリーブ油またはヒマシ油のような、天然の薬学的に受容可能な油と同様、注射溶液の調製において有用である。これらの油性溶液または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤または分散剤、またはカルボキシメチルセルロースまたは同様の分散剤を含み得る。ＴｗｅｅｎまたはＳｐａｎのような他の通常使用される界面活性剤、あるいは薬学的に受容可能な固体、液体、または他の剤形の製造において通常使用される他の同様な乳化剤、または生物学的利用能増強剤（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）も、処方の目的のために使用し得る。
【００３３】
経口投与のための組成物は、カプセル、錠剤、エマルション、および水性懸濁液、分散、および溶液を含むがこれに限らない、あらゆる経口で受容可能な剤形であり得る。経口使用のための錠剤の場合、通常使用される担体は、ラクトースおよびコーンスターチを含む。ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤も典型的に加えられる。カプセル形式における経口投与のために有用な希釈剤は、ラクトースおよび乾燥コーンスターチを含む。水性懸濁液またはエマルションを経口で投与する場合、活性成分を、乳化剤または懸濁剤と組み合わせて油相に懸濁または溶解し得る。もし望ましいなら、一定の甘味料、香料、または着色剤を加え得る。鼻腔内エアロゾルまたは吸入組成物を、医薬品処方の分野において周知である技術に従って調製し得る。
【００３４】
適当なインビトロおよびインビボアッセイを使用して、特定の乳オリゴ糖または様々な乳オリゴ糖の組み合わせの抗炎症活性を予備的に評価し得る。例えば、そのオリゴ糖を、炎症促進性サイトカイン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−アルファ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−８、およびＩＬ−１２）の分泌を阻害する能力に関して、インビトロで試験し得る。抗炎症活性を、動物モデル（例えばマウスモデル）においてさらに確認し得る。その結果に基づいて、適当な投与量範囲および投与経路も決定し得る。
【００３５】
さらなる精緻化無しに、当業者は、上記の記載に基づいて、本発明を最も完全な程度まで利用し得ると考えられる。従って、以下の特定の実施例は、いかなる方法においても全く開示の残りの制限としてではなく、単なる説明として解釈される。本明細書中で引用される全ての出版物は、参考文献に組み込まれる。
【実施例】
【００３６】
腸管の炎症を阻害するための人乳オリゴ糖の使用
人乳オリゴ糖の調製
Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２５１（１）：８９−９７、１９９７において記載された方法に従って、人乳からオリゴ糖画分を単離した。簡単には、プールした人乳をまず脱脂し、そして次いでエタノールを加えてタンパク質を沈殿させた。できた溶液を、オリゴ糖を吸着するカーボンカラムにかけた。そのカラムを５％エタノールで洗浄し、そして吸着したオリゴ糖を、６０％エタノールで溶出して、人乳オリゴ糖（「ＨＭＯＳ」）を含む画分を産生した。
【００３７】
ＨＭＯＳはＴＮＦ−処理Ｔ８４細胞において、ＩＬ−８の分泌を阻害する
新生児の上皮の炎症を研究するために日常的に使用されるＴ８４細胞を、２４穴Ｆａｌｃｏｎ器官培養皿において、３７℃において９５％Ｏ２および５％ＣＯ２で、ＦＢＳ（５％）、Ｈｅｐｅｓ緩衝剤、ＮａＯＨ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ／Ｆ１２培地中で培養した。これらの細胞を、（ｉ）ネガティブコントロールとして生理食塩水、（ｉｉ）ポジティブコントロールとしてＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍＬ）、（ｉｉｉ）ＨＭＯＳ（５ｇ／Ｌ）、および（ｉｖ）ＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍＬ）およびＨＭＯＳ（５ｇ／Ｌ）で処理した。１６時間後、各培養上清中のＩＬ−８の濃度を、ＥＬＩＳＡによって測定した。そうして得られた結果を、細胞数に対して標準化した（すなわち、対応する細胞培養の全細胞タンパク質含有量によって割る）。
【００３８】
図１に示すように、ＴＮＦ誘導ＩＬ−８産生は、ＨＭＯＳ処理Ｔ８４細胞において有意に低減され、ＨＭＯＳが抗炎症活性を示したことを示す。
【００３９】
ＨＭＯＳはヒト腸管粘膜において、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）の分泌を阻害する
１４週流産児からのヒト小腸腸管粘膜サンプルを、２４穴Ｆａｌｃｏｎ器官培養皿において、ＦＢＳ（５％）、グルコース（５ｇ／Ｌ）、トリシン緩衝剤（２０ｍＭ、ｐＨ７．４）、ヘミコハク酸ヒドロコルチゾン（０．５μｇ／Ｌ）、酢酸β−レチニル（１ｍｇ／Ｌ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを補充したＣＭＲＬ１０６６培地と、５％ＣＯ２中で、３７℃でインキュベートした。その粘膜サンプルを、（ｉ）ネガティブコントロールとして生理食塩水、（ｉｉ）ポジティブコントロールとしてＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍＬ）、（ｉｉｉ）ＨＭＯＳ（５ｇ／Ｌ）、および（ｉｖ）ＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍＬ）およびＨＭＯＳ（５ｇ／Ｌ）で処理した。１６時間後、炎症促進性ケモカインであるＭＣＰ−１の濃度を、各培養上清においてＥＬＩＳＡによって測定した。そのように得た結果を、上記で記載したように細胞数に対して正規化した。
【００４０】
示した、この研究から得られたデータは、ＴＮＦ−αの存在下で、ヒト腸管粘膜は、炎症の尺度である高レベルのＭＣＰ−１を分泌し、およびこのＴＮＦ−α誘導ＭＣＰ−１産生は、ＨＭＯＳによって減弱したことを示す。図２を参照のこと。
【００４１】
未熟ヒト腸管粘膜の器官培養におけるＩＬ−８分泌の阻害
２２週流産児からのヒト小腸腸管サンプルを、２４穴プレートで、上記で記載した修飾ＣＭＲＬ培地と、５％ＣＯ２において３７℃でインキュベートした。そのサンプルを、５ｍｇ／ｍＬのＨＭＯＳの非存在下または存在下で１８時間、ＩＬ−１β（１０ｎｇ／ｍＬ）、フラジェリン（１ｍｇ／ｍＬ）、ポリイノシン−ポリシチジン酸２本鎖ＲＮＡ（ＰＩＣ；１０ｎｇ／ｍＬ）、またはＰＢＳ（ネガティブ（ｎｅｔａｔｉｖｅ）コントロールとして）で処理した。培養上清中のＩＬ−８分泌のレベルを、ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて二連で測定し、ｖｅｒｓａ  ｍａｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）で４５０ｎｍにおいて検出した。各ＯＤ４５０の値を、対応する器官培養の全タンパク質量に対して標準化した。
【００４２】
フラジェリン（Ｆｌａｇｅｌｉｎ）、ポリイノシン−ポリシチジン酸２本鎖ＲＮＡ、およびＩＬ−１βは全て、ＩＬ−８の分泌によって明らかであるように、炎症促進性の反応を誘導した。図３を参照のこと。この炎症促進性の反応は、ＨＭＯＳによって有意に減弱された。
【００４３】
合わせると、上記で示した結果は、乳オリゴ糖は炎症の阻害に有効であることを示す。
【００４４】
他の実施態様
本明細書中で開示された全ての特徴を、あらゆる組み合わせで組み合わせ得る。本明細書中で開示された各特徴を、同じ、等価の、または同様の目的のための代替の特徴によって置換し得る。従って、他に明確に述べなければ、開示された各特徴は、一般的な一連の等価または同様の特徴の単なる例である。
【００４５】
上記の説明から、当業者は本発明の本質的な特徴を容易に確認し得る、そしてその意図および範囲から離れることなく、様々な使用および条件にそれを適合させるために、本発明の様々な変化および修飾を行い得る。従って、他の実施態様も請求の範囲内である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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