(57)【要約】  本発明は、１つ以上の検体を検出するための方法及び装置を対象とする。検体は、病原性ウイルス等の感染因子の薬剤又は成分、並びに酵素、タンパク質、及びバイオマーカーを含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中の１つ以上の検体の存在、不在、又はレベルを検出するためのシステムであって、患者の試料を１つ以上の免疫試薬と混合して１つ以上の捕捉可能かつ検出可能な免疫複合体を形成するために構成された試料収集装置と、前記免疫複合体を捕捉するための側方流動膜を含む試験装置と、を含み、前記試料収集装置及び前記試験装置が、気密封止を形成するように及び／又は分割隔壁を介して前記試料を前記側方流動膜上に放出するように構成されている、システム。
【請求項２】
本体を含む試料収集装置であって、
（ａ）１つ以上の溶液を含む上部封止隔室及び少なくとも１つの破壊可能封止を含む上部チャンバと、
（ｂ）前記上部チャンバと流体連通の状態にある試料収集用具と、
（ｃ）前記上部チャンバと流体連通の状態にあり、剛性材料から成る試料受容管であって、前記上部チャンバ及び前記試料受容管が、結合された際に気密封止を形成するように構成されている、試料受容管と、
（ｄ）１つ以上の試薬を含む、前記試料受容管と流体連通の状態にある下部チャンバと、を含み、
（ｅ）前記試薬が複数の検体結合セットを含み、前記セットの各々が、
（ｉ）（１）標的検体と特異的に結合することができる結合部分と、（２）捕捉部分パートナーと、を含む捕捉プローブと、
（ｉｉ）（１）標的検体と特異的に結合することができる第２の結合部分と、（２）標識と、を含む検出プローブと、を含み、
（ｉｉｉ）前記複数の検体結合セットの各々が異なる標的検体と結合するように設計されている、試料収集装置。
【請求項３】
前記捕捉部分パートナーが、オリゴヌクレオチド、アビジン、ストレプトアビジン、ピラノシルＲＮＡ（ｐＲＮＡ）、アプタマー、又はそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項１に記載の試料収集装置。
【請求項４】
前記ｐＲＮＡが、配列番号１２０〜配列番号１２６から成る群から選択された配列を含む、請求項２に記載の試料収集装置。
【請求項５】
前記標的検体がインフルエンザウイルス又はその成分である、請求項１に記載の試料収集装置。
【請求項６】
前記抽出溶液又は前記試薬が抽出剤を含む、請求項１に記載の試料収集装置。
【請求項７】
前記下部チャンバ中の前記試薬を前記試料受容管の残り部分から分離させるメッシュ膜を更に含む、請求項１に記載の試料収集装置。
【請求項８】
前記試薬が、前記試料が前記試薬と充分に混合されたことを示すことができる染料を更に含む、請求項７に記載の試料収集装置。
【請求項９】
前記上部チャンバが少なくとも２つのサブチャンバを含む、請求項１に記載の試料収集器具。
【請求項１０】
前記サブチャンバの各々が溶液を含む、請求項９に記載の試料収集装置。
【請求項１１】
前記接触が、前記試料収集装置から溶液を放出することができる周囲圧力に対する正の差圧を形成することができる、請求項１に記載の試料収集装置。
【請求項１２】
前記下部チャンバが、穿孔されると溶液を放出することができる分割隔壁を更に含む、請求項１に記載の試料収集装置。
【請求項１３】
前記分割隔壁がネオプレンを含む、請求項１２に記載の試料収集装置。
【請求項１４】
前記試料受容管上に存在する第１及び第２のインジケータを更に含み、前記インジケータが前記上部チャンバと前記試料受容管との間の適正な接触の表示を与える、請求項１に記載の試料収集装置。
【請求項１５】
前記試料収集用具が前記上部チャンバに取り付けられている、請求項１に記載の試料収集装置。
【請求項１６】
本体を含む試験装置であって、
（ａ）前記本体における側方流動膜と、
（ｂ）チャンバであって、前記チャンバと前記側方流動膜との間に存在する間隙の上流に位置するチャンバと、
（ｃ）１つ以上の制御ラインと、
（ｄ）各々が捕捉部分パートナーを含む複数のアドレス指定可能ラインであって、前記捕捉部分パートナーが複数の分子カテゴリから選択され、任意の２つの隣接するアドレス指定可能ラインが異なるカテゴリの捕捉部分パートナーを含む、アドレス指定可能ラインと、
を含む、試験装置。
【請求項１７】
前記複数のアドレス指定可能ラインの少なくとも１つが、ｐＲＮＡを含む固定化捕捉部分パートナーを含む、請求項１５に記載の装置。
【請求項１８】
前記ｐＲＮＡが、配列番号１２０〜配列番号１２６から成る群から選択される配列を含む、請求項１６に記載の装置。
【請求項１９】
前記ｐＲＮＡがアンカータンパク質に結合されている、請求項１６に記載の装置。
【請求項２０】
前記アンカータンパク質が単クローン抗体又は牛血清アルブミンである、請求項１８に記載の装置。
【請求項２１】
１つ以上の標的検体を検出するための方法であって、
（ａ）被検体から試料を取得し、前記試料を試料収集装置内で混合する工程であって、前記試料収集装置が、
１．１つ以上の溶液を含む上部封止隔室及び少なくとも１つの破壊可能封止を含む上部チャンバと、
２．前記上部チャンバと流体連通の状態にある試料収集用具と、
３．前記上部チャンバと流体連通の状態にあり、剛性材料から成る試料受容管であって、前記上部チャンバ及び前記試料受容管が、結合された際に気密封止を形成するように構成されている、試料受容管と、
４．１つ以上の試薬を含む、前記試料受容管と流体連通の状態にある下部チャンバと、を含み、前記試薬が複数の検体結合セットを含み、前記セットの各々が、
（ａ）（１）標的検体と特異的に結合することができる結合部分と、（２）捕捉部分パートナーと、を含む捕捉プローブと、
（ｂ）（１）標的検体と特異的に結合することができる第２の結合部分と、（２）標識と、を含む検出プローブと、を含み、前記複数の検体結合セットの各々が異なる標的検体を結合するように設計されている、工程と、
（ｂ）前記上部チャンバの前記封止を破壊して１つ以上の溶液を前記試料受容管内に放出し、これによって前記試料を前記試料収集用具から放出し、前記試料を前記試薬と混合させる工程と、
（ｃ）（ｂ）において形成された前記混合物を、複数のアドレス指定可能ラインを含む試験ストリップに適用する工程であって、前記アドレス指定可能ラインの各々が、（ａ）（４）における異なる前記捕捉プローブと結合することができる固定化捕捉部分パートナーを含み、これによって各アドレス指定可能ラインが異なる標的検体と結合するように構成されている、工程と、
（ｄ）１つ以上のアドレス指定可能ラインに標識が存在するか否かを判定し、これによって前記試料が１つ以上の標的検体を含むか否かを検出する工程と、
を含む、方法。
【請求項２２】
前記標識がユーロピウムである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記１つ以上の標的検体がインフルエンザウイルス又はその成分である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記アドレス指定可能ラインの前記少なくとも１つが、配列番号１２０〜配列番号１２６から成る群から選択されるｐＲＮＡ配列を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記ｐＲＮＡがアンカータンパク質に結合している、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記アンカータンパク質が単クローン抗体又は牛血清アルブミンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
任意の２つの隣接した前記アドレス指定可能ラインに異なるカテゴリの固定化捕捉部分結合パートナーが取り付けられている、請求項２０に記載の方法。
【請求項２８】
前記異なるカテゴリの固定化捕捉部分パートナーが、オリゴヌクレオチド、アビジン、ストレプトアビジン、ｐＲＮＡ、及びアプタマーから成る群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
試料における１つ以上の標的検体を検出する方法であって、免疫複合体を含む試料を１つ以上のアドレス指定可能ラインを含む側方流動装置に適用する工程を含み、前記１つ以上のアドレス指定可能ラインの少なくとも１つがこれに結合されたｐＲＮＡ捕捉部分パートナーを含み、前記ｐＲＮＡが配列番号１２０〜配列番号１２６から成る群から選択される、方法。
【請求項３０】
（ａ）（ｉ）試料適用ゾーンと、（ｉｉ）２つ以上のアドレス指定可能ラインを含む多数の検出ゾーンと、を含む吸収片を含む側方流動装置であって、前記アドレス指定可能ラインの各々が固定化試薬を含み、前記アドレス指定可能ラインの隣接する少なくとも２つが、配列番号１２０〜配列番号１２６から成る群から選択された異なる固定化ｐＲＮＡを含む、側方流動装置と、
（ｂ）２つ以上の特異的結合対を含む複数の特異的結合試薬であって、前記対の各々が異なる標的検体と結合することができ、各対が、（１）（ｉ）検体と特異的に結合することができる結合因子及び（ｉｉ）前記アドレス指定可能ラインの１つに存在する固定化試薬と特異的に結合することができる捕捉試薬を含む、第１の結合体と、（２）（ｉ）（ｂ）（１）の前記検体を特異的に結合することができる結合因子及び（ｉｉ）検出可能標識を含む、第２の結合体と、を含む、試薬と、
を含むキット。
【請求項３１】
１つ以上の標的検体を検出するための方法であって、
（ａ）被検体から試料を取得し、前記試料を試料収集装置内に配置する工程と、
（ｂ）１つ以上の溶液を放出して前記試料と前記溶液を混合する工程と、
（ｃ）（ｂ）において形成された前記混合物を試験ストリップに適用する工程と、
（ｄ）標識が存在するか否かを判定する工程と、
を含み、前記１つ以上の標的検体を検出するための方法の感度が少なくとも７０％である、方法。
【請求項３２】
前記試料収集装置が、
１．１つ以上の溶液を含む上部封止隔室及び少なくとも１つの破壊可能封止を含む上部チャンバと、
２．前記上部チャンバと流体連通の状態にある試料収集用具と、
３．前記上部チャンバと流体連通の状態にあり、剛性材料から成る試料受容管であって、前記上部チャンバ及び前記試料受容管が、結合された際に気密封止を形成するように構成されている、試料受容管と、
４．１つ以上の試薬を含む、前記試料受容管と流体連通の状態にある下部チャンバと、を含み、前記試薬が複数の検体結合セットを含み、前記セットの各々が、
（ａ）（１）標的検体と特異的に結合することができる結合部分と、（２）捕捉部分パートナーと、を含む捕捉プローブと、
（ｂ）（１）標的検体と特異的に結合することができる第２の結合部分と、（２）標識と、を含む検出プローブと、を含み、前記複数の検体結合セットの各々が異なる標的検体と結合するように設計されている、下部チャンバと、
を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
（ａ）の後に、前記上部チャンバの前記封止を破壊して１つ以上の溶液を前記試料受容管内に放出し、これによって前記試料を前記試料収集用具から放出し、前記試料を前記試薬と混合させることを含む工程を更に含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記試験ストリップが複数のアドレス指定可能ラインを含み、前記アドレス指定可能ラインの各々が、（ａ）（４）の異なる前記捕捉プローブと結合することができる固定化捕捉部分パートナーを含み、これによって各アドレス指定可能ラインが異なる標的検体と結合するように構成されている、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記判定する工程が、１つ以上のアドレス指定可能ラインに標識が存在するか否かを判定することを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記感度が少なくとも９０％である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３７】
１つ以上の標的検体を検出するための方法であって、
（ａ）被検体から試料を取得し、前記試料を試料収集装置内に配置する工程と、
（ｂ）１つ以上の溶液を放出して前記試料と前記溶液を混合する工程と、
（ｃ）（ｂ）において形成された前記混合物を試験ストリップに適用する工程と、
（ｄ）標識が存在するか否かを判定する工程と、
を含み、前記１つ以上の標的検体を検出するための方法の感度が少なくとも７０％である、方法。
【請求項３８】
前記試料収集装置が、
１．１つ以上の溶液を含む上部封止隔室及び少なくとも１つの破壊可能封止を含む上部チャンバと、
２．前記上部チャンバと流体連通の状態にある試料収集用具と、
３．前記上部チャンバと流体連通の状態にあり、剛性材料から成る試料受容管であって、前記上部チャンバ及び前記試料受容管が、結合された際に気密封止を形成するように構成されている、試料受容管と、
４．１つ以上の試薬を含む、前記試料受容管と流体連通の状態にある下部チャンバと、を含み、前記試薬が複数の検体結合セットを含み、前記セットの各々が、
（ａ）（１）標的検体と特異的に結合することができる結合部分と、（２）捕捉部分パートナーと、を含む捕捉プローブと、
（ｂ）（１）標的検体と特異的に結合することができる第２の結合部分と、（２）標識と、を含む検出プローブと、を含み、前記複数の検体結合セットの各々が異なる標的検体と結合するように設計されている、下部チャンバと、
を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
（ａ）の後に、前記上部チャンバの前記封止を破壊して１つ以上の溶液を前記試料受容管内に放出し、これによって前記試料を前記試料収集用具から放出し、前記試料を前記試薬と混合させることを含む工程を更に含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記試験ストリップが複数のアドレス指定可能ラインを含み、前記アドレス指定可能ラインの各々が、（ａ）（４）の異なる前記捕捉プローブと結合することができる固定化捕捉部分パートナーを含み、これによって各アドレス指定可能ラインが異なる標的検体と結合するように構成されている、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記判定する工程が、１つ以上のアドレス指定可能ラインに標識が存在するか否かを判定することを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記感度が少なくとも９０％である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
前記１つ以上の標的検体を検出するための方法の感度が少なくとも７０％である、請求項３０に記載の方法。
【請求項４４】
前記感度が少なくとも９０％である、請求項４２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]  本出願は、２００９年５月１１日に出願された米国仮出願第６１／１７７，２７２号、及び２００９年７月２３日に出願された米国仮出願第６１／２２８，１３５号に対する優先権を主張する。これらの出願は各々、参照によりその全体が本願に含まれるものとする。
【０００２】
[0002]  本発明の部分は、疾病管理予防センター（Center for Disease Control）により認められた契約番号２００−２００７−１９３４５のもとに米国政府の支援を受けて行われた。米国政府は本発明の部分に対していくつかの権利を有する場合がある。
【０００３】
[0003]  本発明は、被検体から取得した生物試料等の試料における、例えば抗原のような検体（analytes）のためのアッセイに関する。具体的には、本発明は、選択した検体を特異的に標的とする結合部分を用いた１つ以上の検体の検出のための方法及び装置に関する。検体は、例えば１つ以上の感染因子（infectious agents）であってもよい。
【背景技術】
【０００４】
[0004]  身体試料において、多くの場合検体又はリガンドと一般的に呼ばれる様々な物質の存在を検出するために、多くのタイプのアッセイが用いられている。これらのアッセイは典型的に、抗原−抗体反応を伴い（例えばリガンド、アンチリガンド、リガンド−レセプタ）、放射性、蛍光性、又は視覚的に観察可能な金属溶性タグを含む合成結合体、及び結果を観察するために特別に設計した反応チャンバを利用することができる。今日の試験のほとんどは定量的な判定を行うように設計されているが、多くの環境において、必要なのは、例えば陽性／陰性の表示のような定量的な識別だけである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
[0005]  多くの場合、試験流体における対象の検体は低濃度であるので、定量的なアッセイは極めて高感度でなければならない。更に、特に凝集並びに計量棒（dipstick）及び色変化試験等の他の迅速な検出方法では、偽陽性が問題となり得る。サンドイッチ免疫アッセイ及び金属溶性タグ又は他のタイプの着色粒子を用いる他の検出方法が開発されている。かかる技法では依然として、複数の標的検体を検出するように設計された迅速検出方法で直面する問題がある。更に、インフルエンザウイルス等の高病原体の発生により、異なるタイプ又はサブタイプの感染因子を含む１つ以上の感染因子を効果的かつ正確に検出することができる有効な研究室又はポイントオブケア（point-of-care)システムを開発する必要がある。
【０００６】
[0006]  例えば、インフルエンザは、世界中で局所的な大発生又は流行が見られるのが一般的である。流行はいつでも起こり得るものであり、兆候がほとんど又は全く無いのに爆発的に発生する可能性がある。影響を受ける人の数は数百から何十万あるいは何百万まで変動し得る。流行は数日又は数週間という短期間である場合があるが、もっと大きい流行は数か月間にわたって継続することもある。インフルエンザは典型的にはほとんどの人で軽症であるが、高齢者、子供、又は衰弱した人にとっては命に関わる。しかしながら、Ｈ１Ｎ１型及びＨ５型等のいくつかの種類のインフルエンザは、健康で若い人であっても命取りになることが示されている。従って、感染が、典型的な又は予想されるサブタイプのインフルエンザ（季節性のインフルエンザ）によって起こったにしても、流行性又はパンデミックの作因となり得るサブタイプ（例えば鳥インフルエンザ又は豚インフルエンザ）によって起こったにしても、インフルエンザ等の病原体の１つ以上のタイプ及びサブタイプを効果的に検出するための装置及び方法を開発する必要がある。
【０００７】
[0007]  本発明の目的は、生物試料において検体を検出するための迅速かつ高感度の方法を提供することである。別の目的は、従来のアッセイよりも感度が高く偽陽性が少ないアッセイを提供することである。更に別の目的は、生物試料に存在する低レベルの検体を検出するための装置又はシステムを提供することである。別の目的は、最小限の数の手順工程を必要とし、特別な訓練を受けていない人が用いた場合であっても信頼性の高い結果を出すアッセイシステムを提供することである。
【０００８】
[0008]  本発明の１つの目的は、数分で１つ以上の感染因子を識別する結果を出す、感染因子を試験するためのシステムを提供することである。
【０００９】
[0009]  更に別の目的は、試験用具における結果が、結果を得るために必要な反応の完了の１時間から数時間後に読み取ることができるにもかかわらず、標的検体について等しく特異的かつ高感度であるシステムを提供することである。本発明のこれらの及び他の目的及び特徴は、以下の記載、図面、及び特許請求の範囲から明らかとなろう。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
[0010]  本発明の１つの態様において、溶液中での試料の混合を可能とするように構成された試料収集装置が提供される。溶液は、１つ以上の標的検体を検出するために必要な試薬を含む。試料収集装置は、この試料収集装置の試料受容管コンポーネントと上部封止チャンバコンポーネントとの間で気密封止を可能とするように構成することができ、これによって受容管及び上部封止チャンバが圧力嵌めされて正の背圧を生じるので、試料収集装置が試験装置に結合された場合に試料収集装置に含まれる流体の放出を促進することができる。
【００１１】
[0011]  別の態様において、本発明は、側方流動膜と、側方流動の方向の上流に流体を含むチャンバと、を含む試験装置を提供する。チャンバは流体を側方流動膜内へと制御しながら放出することができる。装置は、１つ以上の試験ゾーン及び１つ以上の制御領域を含む複数のアドレス指定可能ラインと、アドレス指定可能ラインの各々に配置された複数の捕捉部分パートナーと、を含む。一実施形態では、試験装置は試験ストリップを含む。試験ストリップは、異なるカテゴリの捕捉部分パートナーが固定化された少なくとも２つの隣接したアドレス指定可能ラインを含む。一実施形態では、各アドレス指定可能ラインは異なる標的検体を検出するように構成されている。
【００１２】
[0012]  別の態様において、試料収集装置において試料を試薬と混合して複合体を形成することを含む、１つ以上の標的検体を検出するための方法が提供される。複合体は、捕捉プローブ、標的検体、及び検出プローブを含む。複合体は、試料収集装置から、この試料収集装置の遠位端に存在する分割隔壁を介して、試験装置へと放出される。複合体は、複数のアドレス指定可能ラインを有する試験ストリップを含む試験装置を通過することができる。アドレス指定可能ラインの各々は異なる検体を検出するように構成されている。試験ストリップの各アドレス指定可能ラインは、試料収集装置に存在する捕捉部分に対して相補的である１つのタイプの固定化捕捉部分パートナーの集団を含む。更に別の実施形態では、試験装置は１つ以上の制御ラインを有する試験ストリップを含む。
【００１３】
[0013]  更に別の態様において、本発明は、試料収集装置及び試験装置を含む、検体を検出するためのシステムを提供する。
【００１４】
[0014]  更に別の態様において、本発明は、試験装置及び複数の特異的結合試薬を含むキットを提供する。
【００１５】
[0015]  本明細書において言及した全ての公開公報及び特許出願は、それらの各々が参照により含まれると具体的かつ個別に示されているのと同様に、参照により本願に含まれるものとする。
【００１６】
[0016]  本発明の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲において具体的に説明する。本発明の原理が用いられた例示的な実施形態を説明した以下の詳細な説明及び添付図面を参照することによって、それらの特徴及び利点がより良く理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】[0017]  試料収集装置を示す。
【図２】[0018]  試料収集装置を示す。図２Ａは上部チャンバ及び試料アセンブリの拡大図により試料収集装置を示し、図２Ｂはサンプリングアセンブリを示す。
【図３】[0019]  試料収集装置の一実施形態を分解して示す。
【図４】[0020]  試料収集装置の一実施形態を示す。
【図５】[0021]  図５Ａ〜図５Ｃは試料収集装置のアセンブリ指標を示す。
【図６】[0022]  試料収集装置上の分割隔壁を示す。
【図７】[0023]  試料収集装置の出口領域の概略を示す。
【図８】[0024]  試料収集装置の出口領域の分配先端部の概略を示す。
【図９】[0025]  試料収集装置の出口領域の概略を示す。
【図１０】[0026]  試料収集装置の出口領域と試験装置のポートとの間の界面の概略を示す。
【図１１】[0027]  試験装置に結合された試料収集装置の概略を示す。
【図１２】[0028]  試料収集装置及び試験装置を含む診断アッセイシステムの一実施形態を示す。
【図１３】[0029]  試験装置を示す。
【図１４】[0030]  試料収集装置の隔壁を受容するためのカニューレを含む試験装置の概略を示す。
【図１５】[0031]  試料収集装置の隔壁を受容するためのカニューレを有する試験装置の拡大図を示す。
【図１６】[0032]  試験装置を示す。
【図１７】[0033]  試験装置の概略を示す。
【図１８】[0034]  試験ストリップ上の多数の検体のｐＲＮＡ結合の概略を示す。
【図１９】[0035]  側方流動試験を示す。
【図２０】[0036]  １２個の炭素スペーサに結合したアンカー分子フェニルジイソチオシアネート（ＰＤＩＴＣ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
[0037]  本発明の様々な態様は、試料における選択された検体の定量的アッセイ及び／又は定性的アッセイのために特異的な結合部分及び捕捉部分を利用する装置及び結合対アッセイを対象とする。本発明は、試料に存在し得る１つ以上の感染因子を検出するための様々なアッセイにおいて有用である。本発明において有用なアッセイは、限定ではないが、競合免疫アッセイ、非競合免疫アッセイ、サンドイッチ免疫アッセイ、及びブロッキングアッセイを含む。
【００１９】
[0038]  一実施形態において、試料収集装置（ＳＣＤ）を用いて、試料の収集及び／又は試料の処理を行い、検出手段及び捕捉手段を提供する免疫反応性試薬を用いる。ＳＣＤにおいて１つ以上の検体を含む試料を混合して混合物を形成し、これをＳＣＤにおいて特異的な結合試薬と共に保存又は反応させ、次いで試験装置（ＴＤ）に放出し、固定化された試薬を与えて試料中の検体の複合体を捕捉する。ＳＣＤにおける特異的な結合試薬は、本明細書で更に記載するような、肉眼又は器具を用いて読み取ることができる検出可能な標識、信号、又は指標を含む。更に、試験装置は、多数の検体の検出を可能とするように構成することができる。かかる検体は、感染因子の異なる種類及び／又はサブタイプを含む１つ以上の感染因子からのものとすることができる。検出は、１つ以上の検体の定量的測定及び／又は定性的測定を含むことができる。
【００２０】
[0039]  様々な実施形態において、検体を検出するための複数の特異的な結合因子は複数の検体結合セットを含み、各セットは１つの標的検体（例えば抗原）と結合する特異的な結合因子を含む。いくつかの実施形態では、多数の検体結合セットが含まれ、これらは、第２、第３、第４、第５、又はそれ以上の異なる検体（例えば異なる感染因子又は感染因子サブタイプからの抗原）と特異的に結合する第２及びそれ以降の特異的な結合対群を与える。一実施形態では、ＳＣＤは、２つ、３つ、又は４つの異なる群の検体結合セットを含むことができ、各セットが異なるタイプ又はサブタイプのインフルエンザウイルス抗原を検出するように構成されている。
【００２１】
[0040]  様々な実施形態において、特定の検体結合セットは、この特定のセットが構成された特定の標的検体と結合するのに必要な試薬を含む。様々な実施形態では、各検体結合セットは、（１）捕捉プローブと、（２）標識プローブと、を含み、各検体結合セットは異なる検体と特異的に結合するように設計されている。
【００２２】
[0041]  捕捉プローブ（例えば図１８の１８０２）は、（ｉ）特異的な検体と（直接又は間接に）結合する特異的な結合因子と、（ｉｉ）捕捉部分パートナー（例えば１８０７）と、を含む。検出プローブ１８０１は、（ｉ）捕捉プローブと同じ特異的な検体と（直接又は間接に）結合する特異的な結合因子と、（ｉｉ）標識１８０９と、を含む。使用可能な標識は本明細書において開示され、例えばユーロピウム標識を含む。ＳＣＤにおいて、１つ以上の検体を含む試料を１つ以上の検体結合セットと反応させて、捕捉プローブ、検体、及び検出プローブの複合体を形成する。異なる標的検体のこれらの複合体が存在する場合は、異なるアドレス指定可能（addressable)ライン上で捕捉する（例えば固定化捕捉部分パートナー１８０３、１８１１による１８０５及び１８１２）。
【００２３】
[0042]  一実施形態において、捕捉プローブは、直接又は間接に捕捉部分パートナーに結合された標的抗原を含む。捕捉部分パートナーは、試験装置におけるアドレス指定可能ラインとして固体支持体（例えばニトロセルロース膜）上に配置された同種の固定化捕捉部分パートナーによって「捕捉される」。本明細書において、かかる捕捉部分を捕捉部分パートナー（ＣＭＰ）と称する。本明細書で用いる場合、ＣＭＰは第２の捕捉部分パートナーと特異的に結合する分子を意味する。例えばＣＭＰは、特定の配列の第１のｐＲＮＡ分子を含むことができ、これは第１の分子に対して相補的な第２のｐＲＮＡ分子（捕捉部分パートナー）と結合して、２つの分子が相互に接触した場合にそれらの特異的な結合を可能とする。
【００２４】
[0043]  様々な実施形態において、ＣＭＰは、限定ではないが、ｐＲＮＡ又はｐＤＮＡ分子、アプタマー（aptamer）及びその同種の標的、又はストレプトアビジン−ビオチン、又は他のリガンド／レセプタ対を含む分子を含む。所与のＣＭＰセットでは、２つの分子は、同様の特徴を有する他のアッセイ成分から結合パートナーを区別することができるように相互に結合するという意味で、関連している。
【００２５】
[0044]  様々な実施形態において、検出プローブ及び捕捉プローブは、限定ではないが抗原又はその機能的フラグメントを含む検体に特異的な結合因子を含む。
【００２６】
[0045]  一実施形態において、結合捕捉プローブに存在する各捕捉部分パートナーについて、同種の捕捉部分パートナーは、試験装置（例えば図１６）に示す試験膜上で見ることができる離散位置（アドレス指定可能ライン）において固定化されている（「ＩＣＭＰ」すなわち固定化捕捉部分パートナー）。本明細書で用いる場合、ＩＣＭＰの文脈における「固定化」という用語は、ＩＣＭＰを含む試験ストリップにより溶液を処理したか否かに関係なく、ＩＣＭＰが可動性（mobilizable）でないことを意味する。
【００２７】
[0046]  ＩＣＭＰは、ＴＤに存在する試験膜に位置付けられており、アドレス指定可能ライン上に固定化されたＩＣＭＰ（例えば１８０３、１８１１）は、それらの同種の捕捉部分パートナー（すなわち捕捉プローブに存在する）と特異的に結合することができる。例えばＩＣＭＰがｐＲＮＡ分子である場合、これは捕捉プローブ１８０１上に存在する同種の捕捉部分パートナー（すなわち同種の捕捉部分パートナーと結合した標的抗原に対して特異的な抗体）と特異的に結合するので、検体−捕捉プローブ複合体が形成された場合、かかる複合体は特定されたアドレス指定可能ライン上のＩＣＭＰによって「捕捉される」。本明細書において用いる場合、「アドレス指定可能ライン」という用語は、他の任意のアドレス指定可能ラインに比べて、別個であり、かつ、試験ストリップの異なる領域に位置付けられたライン、スポット、又は他の任意の領域を含み、異なるアドレス指定可能ラインは、検出プローブにおいて異なるＣＭＰ対を有することにより異なる検体を検出するように構成され、試験装置上で固定化されている。
【００２８】
[0047]  様々な実施形態において、１つの標的検体のために構成されたＣＭＰ及びＩＣＭＰは、相互に特異的に結合する任意の２つの分子から選択され、かかる分子は、限定ではないが、オリゴヌクレオチド、アビジン及びストレプトアビジン、ピラノシルＲＮＡ（ｐＲＮＡ）、ピラノシルＤＮＡ（ｐＤＮＡ）、アプタマー及びその結合パートナー、又は任意のリガンド及びその結合パートナーを含む。
【００２９】
[0048]  一実施形態において、試験装置は膜を含み、この膜は相互に隣接した少なくとも２つのアドレス指定可能ラインを含み、これらは異なるタイプの捕捉部分パートナーを有する。２つの隣接したアドレス指定可能ラインの文脈で用いる場合、「異なるタイプ」という用語は、異なる結合特異性を有する同じタイプの化学的又は物理的実体とは対照的に、異なるタイプ又はクラスの化学的又は物理的実体を意味することは理解されよう。一実施形態において、膜は、多数の異なる検体を検出するように構成された異なるアドレス指定可能ラインを有し、アドレス指定可能ラインは同じタイプ又はクラスの固定化捕捉部分パートナーを有することができ、あるいは別の実施形態において、アドレス指定可能ラインは異なるタイプの捕捉部分パートナーを有することができるが、双方の場合においてアドレス指定可能ラインは各々が異なる検体を検出するように構成されている。一実施形態において、２つの隣接したアドレス指定可能ラインの各々について異なるタイプ又はクラスの捕捉部分パートナーを選択することによって、本発明は、異なるアドレス指定可能ライン間の捕捉部分パートナー間の交差反応性（cross-reactivity）を除去するか又は著しく低減させるアッセイを提供する。従って、本発明の装置を用いた多数の検体のアッセイの全体的な性能は、特異性及び／又は感度を高めることによって向上する（例えば実施例１〜３）。
【００３０】
[0049]  いくつかの実施形態において、ＣＭＰは同じタイプ又はクラスの分子から選択される。例えば、ＣＭＰは捕捉プローブ及びＩＣＭＰの異なる対を有することができ、その各々はオリゴヌクレオチド（例えばｐＲＮＡ又はｐＤＮＡ）であるが、異なる結合対特異性を有するので、各対は異なる検体を識別するように構成されている。他の実施形態では、ＣＭＰ対は異なるタイプの分子から選択され、更に、異なる検体を識別するように構成されている。例えば、ある特異的な検体のためにＣＭＰ対にｐＲＮＡを用い、別の検体のために異なるタイプの捕捉部分パートナー（例えばストレプトアビジン）を用い、抗原及び抗体等の異なる特異的な結合パートナーを第３のＣＭＰ対として用いる。いくつかの実施形態では、本発明のＳＣＤ及びＴＤにおいて、２つ以上の異なるタイプ又はクラスの捕捉部分パートナーを用いる（例えば２つ、３つ、４つ又はそれ以上の異なるタイプ）。
【００３１】
[0050]  いくつかの実施形態において、検出された異なる検体は、ウイルス又はウイルスの成分（例えばポリペプチド）である。様々な実施形態において、異なる抗原はインフルエンザウイルス及び／又はインフルエンザウイルスのサブタイプ由来のものである。一実施形態では、検出することができるインフルエンザウイルスはインフルエンザＡ型ウイルス及び／又はインフルエンザＢ型ウイルス、並びにインフルエンザウイルスＡ型及び／又はＢ型のサブタイプである。一実施形態は、式ＨｘＮｙ（ここでｘは１〜１６、ｙは１〜９とすることができる）又はそのｘｙの任意の組み合わせのインフルエンザＡ型及びＢ型並びにサブタイプの検出を対象とする。
【００３２】
[0051]  更に別の実施形態において、検出された異なる検体は、１つ以上の異なる感染因子及び／又は感染因子の１つ以上の異なるサブタイプであり、限定ではないが、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、ＨＳＶ、バクテリア（例えば結核菌等のマイオバクテリウム）、又は真菌（例えば酵母）、又はそれらの組み合わせを含む。
【００３３】
[0052]  様々な実施形態において、ＳＣＤは、被検体から試料を収集するための手段を提供するサンプリング用具を含む。サンプリング用具は、サンプリング用具ホルダーを介して上部チャンバに（永久的に又は着脱可能に）結合することができる。サンプリング用具は、軸の遠位端に配置することができ、軸は固体で中空又は半透過性とすることができる。いくつかの実施形態では、サンプリング用具は綿、くし、ブラシ、スパチュラ、棒、発泡材、凝集基体、又は紡績基体である。
【００３４】
[0053]  様々な実施形態において、ＳＣＤは１つ以上の封止されたチャンバを含み、この封止はＳＣＤの第２のチャンバとの間の流体連通を防ぐように機能する。いくつかの実施形態では、封止は、分離バルブ、フラッパバルブ、ツイストバルブ、ねじバルブ、破断可能バルブ、破裂可能バルブ、又は破壊可能バルブを含む。
【００３５】
[0054]  更に別の実施形態において、封止を開放することによって、上部チャンバの内容物が試料受容管の下部チャンバへと流れることができる。他の実施形態では、上部チャンバは１つ以上のアンプルを含むことができ、圧力がかかってアンプルが破断、破裂、又は破壊して中の内容物が放出しない限り、それに含まれる溶液が下部チャンバに流れるのを防ぐ。
【００３６】
[0055]  別の実施形態において、１つ以上の検体を検出するためにＴＤが設けられ、この装置は本体において側方流動膜を含み、側方流動膜の上流のチャンバは流体又は溶液を含み、該チャンバと該側方流動膜との間にギャップが配され、これによってチャンバと側方流動膜との間の流体連通を防ぐ。一実施形態では、チャンバに加わった圧力がギャップを押してこれを閉じ、このためチャンバと側方流動膜との間に流体連通を形成する。一実施形態では、ギャップの下流であるが側方流動膜の上流に配置されたウィッキング（wicking）パッドの真上に、ＳＣＤの遠位端が嵌合する開口が配置されている。
【００３７】
[0056]  一実施形態において、試験装置チャンバは、同一の又は異なる溶液を含む１つ以上のサブチャンバを含む。他の実施形態では、チャンバ又はサブチャンバは、破壊可能、破裂可能、又は破断可能な１つ以上のアンプルを含む。このため、かかるアンプルに圧力がかかった場合、その内容物は制御されながら放出される。本明細書に記載するように、試験装置は、チャンバから側方流動膜への流体連通を中断させるためのギャップ手段を含む場合があり、又は含まない場合がある。試験装置ギャップは、ゼロから３．０、０．５から３．５、１．０から２．５、１．０から３．０、又は２．０から４．０ｍｍとすることができる。
【００３８】
[0057]  いくつかの実施形態において、試験装置は側方流動膜を収容する本体を含み、該本体は１つ又は複数のウィンドウ１６１０を提供し、該ウィンドウを通して側方流動膜を見ることができる。本明細書に記載する様々な実施形態では、ＴＤは側方流動膜を含み、これは、該側方流動膜上に配置された試験ゾーンの上流又は下流のウィッキング基体及び吸収基体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＣＤ又は試験装置において、保管用に少量の試料を収集するための基体を設ける。一実施形態では、かかる保管手段を提供する基体は、少量の試料を収集するフィルタ、膜、又は紙であり、この後、装置から該基体を取り除く。
【００３９】
[0058]  様々な実施形態において、ＳＣＤ及び／又はＴＤは１つ以上の同一の識別可能タグを含み、これらはある装置から取り除き、別の装置上に配置することができる。
【００４０】
[0059]  いくつかの実施形態では、試験装置は、上流のチャンバが押し込まれた場合に読み取り装置の受信ポート内に嵌合するような形状（専用のアダプタ形状）であり、これによって、それに含まれる洗浄緩衝液又は追跡緩衝液が側方流動膜を介して放出されたことを示す。かかる実施形態では、試験装置及び読み取り装置に存在する専用のアダプタが、試験装置の上流のチャンバにおける追跡緩衝液又は溶液が放出されたことを確認するための手段を提供し、このため側方流動膜の上流に存在するいかなる試料も側方流動膜を介して洗浄されることを示す。これによって、専用のアダプタは「安全手段」を提供して、未処理試料の読み取りを防ぐ。
【００４１】
[0060]  本発明の別の実施形態において、処理した試料に試験装置の側方流動膜を通過させるが、３０分から数時間まで置いておくことができる。様々な実施形態では、複数の試料に試験装置を通過させることができるが、約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２時間後に、一貫した正確な信号によって読み取る。
【００４２】
[0061]  本発明のいくつかの態様において、試料に存在し得る１つ以上の検体を検出するための方法で本明細書に開示する装置を利用する。いくつかの実施形態では、方法は、感染因子の１つ以上の種類を検出することを対象とする。一実施形態では、方法は、本発明の装置を用いて１つ以上のインフルエンザウイルス及び／又はそのサブタイプを検出することを対象とする。例えば、インフルエンザＡ型ウイルス及びインフルエンザＢ型ウイルス、並びに単一試料に存在し得るインフルエンザＡ型のサブタイプを検出するための方法を提供する。
【００４３】
[0062]  一実施形態において、パンデミックなインフルエンザウイルス株、非パンデミックなインフルエンザウイルス株、又はワクチンが利用可能であるインフルエンザウイルス株に被検体が感染しているか否かを判定するための方法を提供する。
【００４４】
[0063]  いくつかの実施形態において、試験装置は、標的の抗原自体と特異的に結合することができる任意の試薬又は結合因子を含まない。試験装置は、検体、捕捉プローブ、及び検出プローブの複合体において同種のＣＭＰに特異的に結合することによって間接的に標的検体を捕捉するように設計されたＣＭＰを含む。
【００４５】
[0064]  本発明の一態様において、検体の有無の表示として試験装置からの信号を検出するために、例えばＵＶ  ＬＥＤ読み取り装置等の読み取り装置を設ける。様々な実施形態では、検出された信号は標識分子からの蛍光信号である。更に別の実施形態では、標識分子はランタニドである。更に別の実施形態では、ランタニドはユーロピウムである。一実施形態では、読み取り装置はＵＶフォトダイオードを含む。別の実施形態では、読み取り装置はＵＶレーザダイオードを含む。
【００４６】
[0065]  いくつかの実施形態において、ＳＣＤに設けられた複数の検体結合セットのセットは、１つのカテゴリの標識を含むことができる（例えば、各検出プローブが同一のフルオロフォア又は異なる波長信号を有する異なるフルオロフォアを含む場合）。他の実施形態では、各検出プローブは、様々な異なるカテゴリの標識から選択した標識（例えば金属及びフルオロフォアの組み合わせ）を結合体（conjugate）に含むことができる。各検出プローブは、同一の又は異なる標識を有する場合があり、それらは同一の又は異なるカテゴリからのものである場合がある。一実施形態では、捕捉部分はｐＲＮＡ又はｐＤＮＡ等のオリゴヌクレオチドであり、標識はユーロピウムである。
【００４７】
[0066]  本発明の別の態様において、読み取り装置は、少なくとも１つのハードな又は永久的な標準を含むように構成されている。別の実施形態では、読み取り装置は、少なくとも２つ以上のハード標準を含むように構成されている。様々な実施形態では、ハード標準（hard standard）は、検出可能な信号を発する標識分子を含む。更に別の実施形態では、標識は蛍光標識である。別の実施形態では、蛍光標識はランタニドである。更に別の実施形態では、ランタニドはユーロピウムである。
【００４８】
[0067]  本発明の別の態様において、１つ以上の検体を検出するための方法において本発明のＳＣＤ及び試験装置を用いる。かかる検体は、疾病、病理学的又は生理学的な状態に関連付けられる。様々な実施形態では、かかる検体は、限定ではないが、心臓、肝臓、腎臓、腸、脳、胎児組織、又は膵臓を含む任意の身体組織に関する状況に関連付けられたバイオマーカーである。一実施形態では、かかる検体は心臓の状態（例えば心筋梗塞）に関連付けられている。
【００４９】
[0068]  様々な実施形態では、例えば被検体から取得した試料における抗原又はタンパク質のような検体を検出するための任意の方法において、本発明の装置を利用することができる。いくつかの例では、本発明の方法又は装置を用いて、所望の検体に特異的な免疫反応性又は特異的結合試薬の特定のパネルを用いることで、そのような検体をいずれも検出することができる。
【００５０】
[0069]  本発明のいくつかの実施形態において、試験装置は、洗浄／ランニング緩衝液又は液体を提供するための手段を含む上流チャンバを含む。様々な実施形態では、かかる緩衝液又は液体は、信号／検出器分子等の追加の薬剤（例えば検出基体）を含み、これは検出プローブにおける標識と相互作用し、光学読み取り装置によって又は直接に視覚化によって読み取ることができる。いくつかの実施形態では、緩衝液又は液体は、ガラスアンプル、膜パウチ、袋、又はフォーム充填パウチから成る隔室内にある。更に別の実施形態では、かかる隔室は、例えば該隔室に圧力をかけることによって破断、破壊、又は他の方法で引き裂かれて、その内容物を放出する。他の実施形態では、かかる隔室は付属物又は針によって破裂又は切開する。更に別の実施形態では、かかる隔室は、その内容物の偶発的又は意図しない放出を防ぐ安全措置手段によって保護されている。
【００５１】
[0070]  試料収集装置。  本発明の一態様は、生物試料を収集するために必要な手段、並びに試料内の検体を処理し反応させるために必要な試薬及び緩衝液を含んで、特異的な標的検体と共に特異的な結合試薬から成る複合体を形成する試料収集装置（「ＳＣＤ」）を対象とする（例えば、試料に存在する場合に多数の異なる標的検体と共に複合体を形成する検出プローブ及び捕捉プローブの多数群の検体結合セット）。
【００５２】
[0071]  一実施形態において、特定の検体が存在する場合には、検出プローブ及び捕捉プローブによってこれを結合させる（例えば検体はＳＣＤからの試料内で双方に結合している）。次いで、複合体の捕捉プローブは、（本明細書において記載したように）試験ストリップ上の規定のスポット又はアドレス指定可能ライン上で同種の固定化パートナー捕捉部分に結合する。
【００５３】
[0072]  図１に示す一実施形態において、ＳＣＤは上部チャンバコンポーネント１００を含む。上部チャンバコンポーネント１００は、１つ以上の隔室を含むことができる。いくつかの実施形態では、上部チャンバ１００は半剛性又は変形可能な材料から成る。他の実施形態では、上部チャンバ１００は硬い又は剛性の材料から成る。硬い又は剛性の上部チャンバ１００を生成するのに有用な材料は、例えば、ハードプラスチック又はガラスを含む。上部チャンバに存在する１つ以上の隔室は、例えば洗浄緩衝液、抽出緩衝液、試薬溶液、又はそれらの組み合わせのような溶液を含むことができる。
【００５４】
[0073]   一実施形態において、試料収集装置（例えば図１及び図２）は、共に嵌合して負の背圧を生成するコンポーネントを含み、これによって外圧又はＳＣＤの操作を必要とすることなくＳＣＤから溶液を均一に放出することが可能となる。一実施形態では、上部チャンバ及び試料受容管１０３、２１０の設置コンポーネントは硬い又は剛性の材料で形成されているので、２つのコンポーネントは力によって気密封止を形成することができる（例えば力嵌め）。更に別の実施形態では、力嵌めによる試料収集用具と試料受容管との結合は、試料受容管において背圧を生成し、ＳＣＤをＴＤに結合した場合にＳＣＤの遠位端１０６、２１１から溶液混合物を放出することができる。一実施形態では、ＳＣＤ及びＴＤはオリフィス（例えば分割隔壁）を介して結合される。
【００５５】
[0074]  一実施形態において、試料収集用具（例えばまとめて１００、１０１、１０２、１０７、及び１０８、又は図２Ａ）は、試料収集用具の近位端又は管もしくは軸部１０２、２０３の上流に位置付けられた少なくとも１つの隔室１０８、２０１を含む。
【００５６】
[0075]  更に別の実施形態において、隔室１０８は、上部チャンバの封止された隔室である。いくつかの実施形態では、上部封止隔室内の溶液は緩衝溶液である。様々な実施形態では、上部チャンバ内に存在するか又はこれに加えられた溶液の容量は、約１０〜５００μｌ、又は約１０μｌ、２０μｌ、３０μｌ、４０μｌ、５０μｌ、６０μｌ、７０μｌ、８０μｌ、９０μｌ、１００μｌ、１１０μｌ、１２０μｌ、１３０μｌ、１４０μｌ、１５０μｌ、１６０μｌ、１７０μｌ、１８０μｌ、１９０μｌ、２００μｌ、２１０μｌ、２２０μｌ、２３０μｌ、２４０μｌ、２５０μｌ、２６０μｌ、２７０μｌ、２８０μｌ、２９０μｌ、３００μｌ、３１０μｌ、３２０μｌ、３３０μｌ、３４０μｌ、３５０μｌ、３６０μｌ、３７０μｌ、３８０μｌ、３９０μｌ、４００μｌ、４１０μｌ、４２０μｌ、４３０μｌ、４４０μｌ、４５０μｌ、４６０μｌ、４７０μｌ、４８０μｌ、４９０μｌ、又は５００μｌである。一実施形態では、溶液の容量は１５０μｌまでである。別の実施形態では、溶液の容量は２００μｌまでである。いくつかの実施形態では、上部チャンバ１００内の溶液は封止された隔室内にある。封止は、バルブ構造によって破裂、破壊、又は開放して、サンプリングアセンブリ又は試料収集用具の上部チャンバ１００と軸部１０２との間の流体連通を与えることができる。
【００５７】
[0076]  一実施形態において、上部チャンバの封止されたチャンバは、圧縮することができる圧搾可能な球部（例えばユーザがこの球部に圧力を加える）とすることができ、これによってサンプリング用具に対する溶液（例えば緩衝液）の流量を制御する。いくつかの実施形態では、上部チャンバは、溶液を含む自立型の隔室である球部コンポーネントから成る。かかる溶液は、抽出、溶解、試薬、緩衝液、又は保存溶液を含む。一実施形態では、溶液は緩衝溶液であり、サンプリング用具から下部チャンバまで生物試料を移送するために用いられる。
【００５８】
[0077]  抽出溶液は、存在する任意の凍結乾燥アッセイ試薬（例えば凍結乾燥試薬ビーズ）の濡れを保証するため及び／又は試料収集装置から試料を抽出するために充分な容量でなければならない。例えば、試料綿として乾燥綿を用いる場合、試薬を濡らし試料を抽出又は放出するために充分な抽出溶液の容量は７０μｌである。一実施形態では、抽出溶液の容量は少なくとも３０μｌ、４０μｌ、５０μｌ、６０μｌ、７０μｌ、８０μｌ、９０μｌ、１００μｌ又はそれ以上である。典型的に検出プローブ及び捕捉プローブを含む下部チャンバに含まれる乾燥綿試料及び凍結乾燥試薬ビーズの濡れを保証するために充分な抽出溶液の容量は、当業者によって容易に決定することができる。
【００５９】
[0078]  上部チャンバは１つ以上の隔室を含むことができる。各隔室は、他の隔室内の溶液と同一の又は異なる溶液を含むことができる。かかる溶液は、限定ではないが、抽出緩衝液、還元剤、免疫反応性薬剤（検出標識（例えば検出プローブ）及び所望の場合には捕捉プローブも含む非検体特異的結合因子等）を含む所望の試薬を含むことができる。
【００６０】
[0079]  本発明のＳＣＤにおいて用いられる試薬は、１つ以上の塩、キレート化合物、抗凝固剤、溶剤、安定剤、希釈剤、緩衝剤、酵素、共因子、特異的結合要素、標識、ムコ多糖類加水分解酵素等を含むことができる。特定の試薬及び／又は試薬の組み合わせをアッセイの対象の特異的な検体に合わせて調製可能であることは、当業者には明らかであろう。１つ以上の試薬は、試料の分析を容易にする化合物とすることができる。更に、かかる試薬は本発明の試験装置において用いるために容易に適合させることができる。
【００６１】
[0080]  試料ホルダー１０１は、上部チャンバコンポーネント１００及びサンプリングアセンブリに接触状態にあることができる。サンプリングアセンブリは、試料受容管１０３を含むハウジング及び上部チャンバ１００から取り外すことができる。いくつかの実施形態では、サンプリングアセンブリは軸部１０２及び試料収集用具又は基体１０７を有し、試料収集を容易にするように機能することができる（例えば綿）。サンプリングアセンブリ軸部１０２の長さは試料収集のために最適化することができ、例えば、限定ではないが、のど、口、鼻、耳、尿道、肛門、膣を含む異なる解剖部位からの試料収集に対応するような長さに設計されている。例えば、装置（一体化構成）の長さは、約１から９インチ、又は約２、３、４、５、６、７、８、又は９インチとすることができる。サンプリングアセンブリを試料受容管１０３内に配置して、一体化構成を提供することができる。かかる構成において、サンプリング用具は、下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント１０４の上流にあり、軸部又は管１０２を介してこれと流体連通する。
【００６２】
[0081]  いくつかの実施形態において、試料収集用具は、中空の固体又は半多孔性の軸部又は管１０２を含む。サンプリングアセンブリの軸部又は管が多孔性又は吸収性であるいくつかの実施形態では、サンプリングアセンブリは実際、上部チャンバコンポーネント１００からサンプリング基体（例えば綿）１０７までの流体連通経路を提供する。試料収集用具（例えば１００、１０１、１０２、１０７、及び１０８）は、上部チャンバ１０の受容端に嵌合することができる試料ホルダー１０１によって保持することができる。
【００６３】
[0082]  いくつかの実施形態において、試料収集用具に存在する軸部又は管１０２は、上部チャンバ１００内に延出する部分であり、閉じた末端を有する。一実施形態では、軸部又は管１０２の末端の部分を折るか壊すことによって、上部チャンバコンポーネント１００からサンプリングアセンブリを介したサンプリング基体１０７（例えば綿）までの流体連通を開放する。
【００６４】
[0083]  別の実施形態において、試料収集装置は、上部チャンバとの間の流体連通を与える軸部又は管を含むが、試料を収集し保持するための別個のコンポーネントを用いて試料受容管に試料を配置する（例えば図４の４５７に示す）。
【００６５】
[0084]  下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント１０４は、１つ以上の標的検体と特異的に結合する試薬を含むことができる。下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント１０４は１つ以上の隔室を含むことができる。例えば、下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント１０４に２つの隔室を並べて配することができる。下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント１０４は、キャップ１０６と接触状態とすることができるルアー１０５と接触状態とすることができる。ＳＣＤの向きは、隔室１０８が近位端にありキャップ１０６が遠位端にあるようになっている。
【００６６】
[0085]  一実施形態において、試料収集装置は異なる下部チャンバ又は混合隔室を交換するように構成されており（例えばパチンと嵌めること、又はＳＣＤ及び下部チャンバ隔室にねじを通すことによって）、これによって下部チャンバ隔室は特異的なアッセイ（例えば特定の標的検体の検出）のために必要な試薬を含み、一方で上部チャンバは洗浄緩衝液及び／又は抽出試薬を含む。別の実施形態では、交換可能な下部チャンバ隔室は、本明細書において記載したような検体−試薬複合体を形成するために必要な試薬と共に抽出試薬を含む。
【００６７】
[0086]  別の実施形態において、ＳＣＤの遠位端は開いており、これによって上部封止チャンバから溶液を放出する前にＳＣＤをＴＤの受容ポートに係合させる（例えば摩擦嵌めによって）。かかる実施形態では、ＳＣＤの遠位端からＴＤ内への流体流をルアー又はバルブ構造によって規制する必要はなく、流体流は、例えばＴＤ内での負圧又はＳＣＤとＴＤとの間の差圧の生成、重力、又は毛管流によって得ることができる。
【００６８】
[0087]  別の実施形態において、ＳＣＤの遠位端はバルブを利用せず、開いている。上部チャンバから緩衝液を放出する前に、ＳＣＤを試験装置に取り付けることができる。上部チャンバから溶液を放出すると、試料は溶液によって収集用具から放出及び／又は抽出され、下部チャンバ内に収容された試薬と混合される。次いで混合物は、１つ以上の検体の存在を分析するための試験装置へと流れる。下部チャンバ内に水溶性膜を含んで、ＳＣＤから試験装置への混合物の流れを遅くすることができる。かかる膜は従来のものであり、試薬及び試料検体の混合及び反応を可能とするのに充分な異なる時間期間だけ混合物を保持するように設計することができる。例えば、かかる膜は、様々な既知のタンパク質、多糖、又は膜形成物のいずれかから調製することができる。
【００６９】
[0088]  一実施形態において、図２Ａに示すように、ＳＣＤは上部チャンバコンポーネント２０１を含む。これには、試料ホルダー２０２、サンプリングアセンブリ管又は軸部２０３、及び試料収集用具２０４が取り付けられている。
【００７０】
[0089]  いくつかの実施形態において、図２Ｂに示すように、試料受容管２１０による移送を介して上部チャンバコンポーネント２０５と液体連通している下部チャンバ２１２の試薬領域２０８に、必要な試薬（例えば検出／捕捉特異的結合因子等）を含む溶液を配置することができる。上部チャンバ２０５からの流体は、試料を抽出するための試料収集用具２１３まで流れることができる。抽出された試料は穴２０６を通ることができ、これによって上部チャンバ２０５から下部チャンバ２１２までの液体流を制約／制御することができる。これは、例えばサイズによって流れを制御するための穴（例えば穿孔のサイズ、基体のタイプ、又はフィルタ）を含む。下部チャンバ２１２は試薬領域２０８を含むことができる。一実施形態では、試薬領域２０８は固体試薬２０７を含み、これは、別個に配置した乾燥させた固体又は一体化させた固体として形成された必要な試薬（例えば検出及び捕捉プローブ等の免疫アッセイ試薬）を含む。また、下部チャンバはフィルタ２０９も含むことができ、遠位端においてルアー２１１を設けることができる。
【００７１】
[0090]  一実施形態において、上部チャンバ３３０はバルブ３２０を含み、これによって上部チャンバ内の溶液を制御可能に放出することができる。このバルブは、当技術分野において既知であり本明細書に記載したシステムに適合する任意のタイプのバルブとしてよい。利用可能な追加のバルブは、回転式、破壊可能、栓、ゲート、ボール、フラッパ、針、バタフライ、ピンチ、蛇腹、スライド、プラグ、分流、又はアクチュエータバルブを含む。例えば、バルブは、分離バルブ、スナップバルブ、フラッパバルブ、ツイスト、ねじ、破断可能、破裂可能、又は破壊可能バルブとすることができる。例えば、バルブがスナップバルブである場合、ユーザはバルブ軸部に力を加えて軸部を破壊し、このため分離特徴によって緩衝液は軸部を介して試料収集管内及び下部チャンバ内に流れることができる。一実施形態では、上部チャンバに正の圧力がかかっており、バルブの開放又は封止の破壊によって上部チャンバ内の溶液が流出するようになっている。一実施形態では、上部チャンバには充分な正の圧力がかかっており、上部チャンバ内の溶液が圧力下で流れて軸部を介して下部チャンバに流れ込むようになっている。例えば、バルブがスナップバルブである場合、ユーザは力を加えてスナップバルブ軸部を破壊し、上部チャンバ内の溶液がわずかな圧力下で流れて軸部を介して下部チャンバに流れ込む。上部チャンバは、例えば、１、１０、５０、１００、５００、１０００、５０００、１００００、２００００、３００００、４００００、５００００、又はそれ以上のパスカル（Ｐａ）の圧力下に置くことができる。一実施形態では、スナップバルブは１つの栓を有する。１つの栓の位置を有するスナップバルブの軸部は、不完全なスナップを防ぐために有用である。不完全なスナップは、上部チャンバ内に空気が漏れ、流体の不完全な送出につながる恐れがある。
【００７２】
[0091]  従って、上部チャンバ２０５に収容された溶液（例えば緩衝液又は洗浄溶液）によって試料が下流に洗浄される場合、溶液及び試料を含む混合物が生成され、これが下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント２１２に達する。下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント２１２は、固体試薬２０７を有する試薬領域２０８を含む。固体試薬２０７は緩衝液によって迅速に溶かすことができ、結果として得られる溶液は、対象の検体を含み得る試料及びアッセイ試薬（例えば特異的な結合因子、標識検出及び捕捉プローブ等）の混合物とすることができる。例えば、固体試薬２０７は、標的の検体と特異的に結合することができるアッセイで用いられる検出プローブ及び捕捉プローブの双方を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＳＣＤはルアーロック２１１も含むことができ、これは後の検出のために反応混合物を送出するために試験装置に留められる。
【００７３】
[0092]  様々な実施形態において、ＳＣＤは固体形状の必要な試薬を含む（例えば図７の７８０、７８１、７８２、図１５の１５３０、１５３１、１５３２）。固体試薬コンポーネントは、粉末、錠剤、ビード、凍結乾燥ペレット、押し固めた凍結乾燥粉末であって、固体支持体（例えばガラス／プラスチックビード）上で乾燥させたか、固体支持体上で又はこれと関連付けて凍結乾燥させたか、又は混合もしくは下部チャンバ内で直接乾燥させたものを含む。かかる試薬を固体形状に形成することは、CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY（Coligan, John E等、１９９９年）に開示されたもの等の当技術分野において既知の技法を用いて実行される。一実施形態では、固体試薬は液体試料に接触すると、水分により元の状態に戻る。
【００７４】
[0093]  別の実施形態において、図３に示すように、上部チャンバ３３０を有するＳＣＤを提供する。いくつかの実施形態では、上部チャンバ３３０は、少なくとも１つの破壊可能封止３２０と、例えばプレス嵌めによって試料受容管３１０と接触状態とすることができる縁部３３５と、を有することができる。更に別の実施形態では、プレス嵌め（力嵌めも）によって、上部チャンバ及び試料受容管は気密封止を形成し、ＳＣＤがＳＣＤの下部又は遠位端を介して試験装置に結合されると（図１５）、正の圧力又は背圧を形成して、ＳＣＤ内に存在する内容物（例えば試料混合物）を均一に放出させる。一実施形態では、ＳＣＤの下部又は遠位端は、試験装置に結合する分割隔壁を介してその内容物を放出する。更に別の実施形態では、ＳＣＤの分割隔壁はＴＤ上に存在するカニューレによってＴＤに結合する。
【００７５】
[0094]  更に別の実施形態において、背圧を形成することによって、ＴＤ及びＳＣＤを結合させて、ＳＣＤからＴＤへの試験膜を介した均一な試料流を可能とするので、形成された捕捉プローブ−標的検体−検出プローブ複合体は、均一な時間及び速度でＴＤを通過し、各アドレス指定可能ラインにおいて効率的な捕捉が可能となる。均一な流れによってアッセイの特異性及び／又は感度を上昇させることによりアッセイ性能を向上させることができる。これは、多数の異なる検体を標的にする場合には更に重要である。
【００７６】
[0095]  一実施形態において、ＳＣＤは、上部チャンバ３３０及びサンプリングアセンブリ３４０と接触状態とすることができる試料ホルダー３８０を有することができる。一実施形態では、試料ホルダー３８０は、ムコ多糖類加水分解酵素（例えば液体の形又は凍結乾燥されている）等の試薬を含むことができる。試料ホルダーは、上部チャンバ３３０の球部３２５内への進入を容易にするための管３８５を有することができる。更に、管３８５は上部チャンバ３３０におけるバルブを破壊することができる。サンプリングアセンブリ軸部３４０は、試料収集を容易にするための試料収集用具３４５を有することができる。サンプリングアセンブリ軸部３４０は、下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント３６０と接触状態とすることができる試料受容管３１０内に嵌合することができる。下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント３６０は、抽出緩衝液及び／又は試薬、メッシュ膜３５０、及び固体試薬（例えば抽出試薬、検出プローブ及び捕捉プローブ等の免疫アッセイ試薬）を含む少なくとも１つのビード３５５を有することができる。いくつかの実施形態では、下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント３６０は、２つ以上のビード３５５を有することができる。例えば、下部チャンバは多数のビードを有することができ、少なくとも１つのビードがムコ多糖類加水分解酵素剤を含み、１つのビードが捕捉プローブを含み、１つのビードが検出プローブを含む。他の実施形態では、単一のビードが２つ以上のコンポーネントを含むことができる（例えば抽出試薬、検出プローブ又は捕捉プローブの２つ以上）。更に別の実施形態では、ビードは染料を含み、これは、試料がＳＣＤに存在する試薬と充分に混合されていることの色による表示を与える。染料に関連した色の形成は、試料及び試薬の反応について適切な水和及び混合の表示を与える。
【００７７】
[0096]  下部チャンバ３６０は隔壁３７０を有することができ、これによって下部チャンバ３６０から試験装置までの流体の移動を可能とする。隔壁は、液体を収容するように、プラスチック又はネオプレンを含む異なる材料で形成することができる。ＳＣＤの向きは、上部チャンバコンポーネント３３０が近位端にあり隔壁３７０が遠位端にあるようになっている。
【００７８】
[0097]  いくつかの実施形態において、試料受容管３１０は柔らかい又は可撓性の材料で形成される。試料受容管３１０を生成するのに有用な材料は当技術分野では周知であり、ソフトプラスチックを含む。他の実施形態では、試料受容管３１０は硬い又は剛性の材料で形成することができる。硬い又は剛性の試料受容管３１０を生成するのに有用な材料は当技術分野では周知であり、例えばハードプラスチック又はガラスを含む。一実施形態では、試料受容管を上部チャンバ又は試料収集用具キャップに力嵌め（force-fit）するために、各コンポーネントはハードプラスチック又はガラスで形成して力嵌め及び気密封止を可能とする。これは背圧を与えるために必要である。先に示したように、背圧によってＳＣＤからＴＤまでの液体混合物の均一な流れが可能となる。更に別の実施形態では、ＳＣＤが分割隔壁穴１０９０、１５１７を介してＴＤに結合されている場合、ＴＤからのカニューレ又は突起１４２０、１５２５に結合されると、かかる均一な流れは追加の力も操作も無く達成される。
【００７９】
[0098]  別の実施形態において、通常動作の間に試料受容管３１０が操作され、使用中に柔らかい又は可撓性の材料が圧搾される可能性があるので、試料から分離する液体の逆流が起こり得る。この逆流は、試料と反応する流体の量を減らし、これによって分析の精度が低下する恐れがある。装置に硬い又は剛性の材料を用いることによって、オペレータは液体の逆流を軽減してＳＣＤを操作することができる。別の実施形態では、試料受容管３１０は２つ以上の管から成る。例えば、試料受容管３１０は硬い又は剛性の外側管３１５及び柔らかい又は可撓性の内側管３１７を有する。別の実施形態では、ＳＣＤにスリーブが設けられて、軸部に取り付けた綿に管／ケーシングの側面を近づけるための手段を提供するので、流体が綿の外に出ると綿に密接したままとなり、綿からの流体抽出の効率が向上するようになっている。一実施形態では、試料受容管３１０は上部チャンバコンポーネント３３０と密な嵌合を形成し、気密封止が形成されるようになっている。気密封止は、封止を形成する縁部３３５において形成することができる。更に別の実施形態では、縁部３３５は試料受容管３１０に硬い台座を有し、上部チャンバコンポーネント３３０が試料受容管３１０により封止されて閉鎖された際に、ＳＣＤ内に負の空気圧を生成する。
【００８０】
[0099]  別の実施形態において、上部チャンバ３３０は試料受容管３１０と密な封止を形成して、上部チャンバ流体の不完全な送出を招く恐れのある空気又は流体の漏れを防ぐ。いくつかの実施形態では、上部チャンバは、空気が上部チャンバ３３０に入ることを許して流体の完全な放出を妨げる通気穴を含まない。例えば、バルブがスナップバルブであり、上部チャンバ溶液が正の圧力下にある場合、いったんユーザがスナップバルブを壊すと、上部チャンバ３３０及び試料受容管３１０が形成する密な封止のために、正の圧力によって上部チャンバ溶液が上部チャンバ３３０から試料受容管３１０を介して、場合によってはサンプリングアセンブリ３４０を介して、下部チャンバ３６０まで到達する。このため、一実施形態では、上部チャンバ３３０を試料受容管３１０に結合すると、上部チャンバ溶液を上部チャンバ３３０から下部チャンバ３６０まで移動させる圧力（例えばユーザ生成する圧力）を生成する必要はない。従って、上部チャンバ溶液を下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント３６０まで移動させるためにユーザが力を加える必要をなくすことによって、このプロセスでは、ユーザが加える圧力の不一致、及び上部チャンバ溶液の下部チャンバ３６０までの移動が不完全である可能性、又は溶液の漏れもしくは装置の損傷を招く恐れのある力の加え過ぎが解消される。上部チャンバ３３０を正の圧力下に置くことによって、圧搾した球部の放出時に生じることがある逆流も防ぐ。
【００８１】
[00100]  いくつかの実施形態において、上部チャンバ３３０は試料受容管３１０に着脱可能に付けられるように構成することができる。いくつかの実施形態では、試料収集装置の上部チャンバ３３０及び試料受容管３１０は、上部チャンバ３３０を試料受容管３１０に関連付けて試料受容管３１０の管腔内に圧力が生成されるように構成することができる。いくつかの実施形態では、試料受容管３１０の近位端及び上部チャンバ３３０は圧力嵌めされるように構成され、組み立てられると加圧封止が生成されて試料受容管３１０の範囲内の圧力を高めるように機能する。試料受容管３１０及び上部チャンバ３３０は、この２つの要素が結合されると封止を形成することができる。この封止によって、試料受容管３１０内で例えば空気圧のような気体を蓄積することができ、この結果、周囲圧力及び／又は試験装置内の圧力と比べて正の圧力が生じる。いくつかの実施形態では、試料受容管３１０及び上部チャンバ３３０が封止を形成した後に、例えばシリンジ及び針によって気体を導入することによって試料受容管に気体を追加することができる。いくつかの実施形態では、試料受容管内に閉じ込められた空気圧は安定しており、周囲圧力又は試験装置内の圧力よりも高い空気圧は、少なくとも１分間、又は少なくとも２、３、４、５、１０、３０、６０、１２０、又は２４０分間、維持される。
【００８２】
[00101]  一実施形態において、図１１に示すように、ＳＣＤ１１３０は第２のコンポーネント（例えばＴＤ）に結合され、溶液は試料に試薬を混合したものを含み、ＳＣＤに存在する緩衝液はＳＣＤ１１３０から強制的に放出されて、試験装置１１３５がＳＣＤ１１３０に結合すると分配先端部１１７０を介して試験装置１１３５内へと分配される。先に注記したように、ＳＣＤから試験装置への流体流はＳＣＤ１１３０内に蓄積された圧力によって促進することができる。例えば、ＳＣＤ１１３０内の空気の閉じ込めによって、ＳＣＤ１１３０と試験装置１１３５との間に正の差圧を形成することができる。隔壁１１８５に形成されたスリット１１９０を介して等でカニューレ１１０５及び隔壁１１８５が結合すると、差圧によって流体は高圧のＳＣＤ１１３０から出て低圧の試験装置１１３５内へと移動する。蓄積された圧力は一定の時間期間だけ安定させることができ、ＳＣＤ１１３０の組み立ての直後にはＳＣＤ１１３０と試験装置１１３５との結合を行う必要がないようになっている。更に、隔壁は、カニューレ１１０５を除去すると隔壁１１８５が再び封止されることによって流体の喪失又は試料の滴下を防ぐように構成することができる。矢印によって示すように、流体は圧力勾配に沿って、ＳＣＤ１１３０内に蓄積された高圧領域から試験装置１１３５の比較的低圧まで流れて、そこに試料を送出する。ＳＣＤは膜１１７５を含み、これは下部チャンバに試薬ペレットを保持することができ、又は場合によっては保存試料を保持するように機能することができる。
【００８３】
[00102]  一実施形態において、サンプリングアセンブリは、試料受容管を収容するハウジングと一体化されていない。かかる構成においては、サンプリングアセンブリを用いて試料を収集してこれを試料受容管に送出する。試料受容管は開放又は閉鎖して、試料受容管内に試料を導入することを可能とする。本明細書に開示したあらゆる試料受容管は、所望の通りに、円筒形、四角形、三角形、又は任意の多角形を含む様々な幾何学的形状とすることが可能であることは理解されよう。いくつかの実施形態では、ハウジングは１つ以上の封止可能な穴を含むことができ、これを開放して１つ以上の選択された試薬、緩衝液、又は洗浄流体を追加することができる。
【００８４】
[00103]  例えば、一実施形態では、試料受容管に全血を引き込む。続いて、試料は膜（例えば血漿から血球を分離させて血漿の通過を可能とするための膜）を通過して、試料受容管の下部へと流れ込み、例えば免疫アッセイに必要な様々な試薬と混合される。標的の特異的検体に必要な免疫試薬は、予め選択し、ＳＣＤに固体の基体として配置するか、又は穴を通して追加するか、又は膜上に配置する。
【００８５】
[00104]  全血試料を放出する際、膜は血液成分の通過を妨げるためのフィルタとして作用することができるので、血漿のみが試料受容管の遠位端を通過することができる。この遠位端は試験装置に嵌合される。
【００８６】
[00105]  いくつかの実施形態において、溶液がサンプリング用具を通過する際、試料の抽出工程を行う（例えば溶液が抽出緩衝液を含む場合）。更に、下部チャンバは、抽出した試料を流すフィルタを含むことができる。例えば、下部チャンバの近位端にフィルタが配置されている場合、抽出された試料はフィルタを通って流れ、これによって抽出混合物のある特定の成分が１つ以上の固体試薬ビードを含む試薬領域隔室内に到達するのを防ぐ。更に、フィルタ手段は、ＳＣＤ輸送及び保存の間に試薬ビードを拘束し、使用及び水和の前に下部チャンバ内のビードを保管するように機能することができる。本明細書において注記したように、試薬ビードは検出及び捕捉プローブの双方を含むことができ、又は２つの別個のビードの各々が検出又は捕捉プローブを含むことができる。別の実施形態では、３つ以上のビードを用いることができ、少なくとも１つのビードがムコ多糖類加水分解酵素試薬を有し、１つのビードが１つ以上の捕捉プローブを有し、１つのビードが１つ以上の検出プローブを有する。別の実施形態では、上部チャンバからの溶液によって試料収集用具（綿）から試料を放出し、下部チャンバにおいて凍結乾燥させた抽出緩衝液ペレットを提供して、下部チャンバで抽出が行われるようにすることができる。あるいは、綿が水和されると抽出は上部チャンバからの流体によって行うことも可能であり、凍結乾燥させた試薬によって下部チャンバにおいて行うことも可能である。
【００８７】
[00106]  ろ過によって、対象の検体は制御された方法で装置内を移動することができ、妨害物質は存在するとしてもわずかである。処理する試料のタイプによるが、多くの場合はろ過を行うことによって成功の確率が高い試験を可能とする。これは当業者には明らかであろう（例えば全血試料対血漿）。別の実施形態では、ＳＣＤは、試料内に存在し得る標的でない検体との交差反応性を回避するため、及び／又は試料を調整するために有用な試薬を組み込むことができる。個別の実施形態によるが、これらの試薬は、限定ではないが、非ｈＣＧブロッカー、抗ＲＢＣ試薬、３塩基緩衝液、及びＥＤＴＡを含むことができる。全血の使用が企図される場合、抗ＲＢＣ試薬が利用されることが多い。更に別の実施形態では、ＳＣＤは、補助的な特異的結合要素、流体試料前処理試薬、及び信号生成試薬等の他の試薬を組み込むことも可能である（例えば標識結合体との反応に必要な物質）。
【００８８】
[00107]  いくつかの実施形態では、図４に示すように、試料受容管４５０は、上部チャンバ４１０から下部チャンバ４６０までの試薬送出のために別個のサンプリングアセンブリ４５７及び中空の軸４５５を含むことができる。上部チャンバ４１０は試料受容管４５０に取り付けることができる。試料ホルダー４００は管４３０と共に上部チャンバ４１０の内部に配することができる。上部チャンバ４１０は、上部チャンバ４１０と試料受容管４５０との間の気密封止を容易にするための縁部４２０を有することができる。この実施形態では、ここでは綿として示す試料収集用具は上部チャンバに取り付けられておらず、使用前の装置の一部として設けることができる。あるいは、綿等の任意の収集装置をＳＣＤとは別個に用いて試料を収集し、次いで収集した試料と共に試料収集装置をＳＣＤ内に配置することができ、上部チャンバからの流体及び下部チャンバからの試薬と混合する。
【００８９】
[00108]  図５Ａ〜図５Ｃに示す実施形態において、例えば印刷又は他の方法による形成によって指標ライン５０５、５１０を設け、それらがＳＣＤの外側で目に見えるようにして、上部チャンバ５２５と試料受容管５２０との適正な組み立てをユーザが視覚化できるようになっている。かかる指標ラインは、例えばＳＣＤの試料受容管と適正に組み立て（すなわち設置）が行われていない試料収集用具からの空気及び／又は液体の漏れを防ぐことによって、ユーザエラーの防止に役立てることができる。ＳＣＤの適正な設置及び組み立ては、試料をＴＤ内に効率的に送出することを可能とする圧力を生成するために必要である。さもなければ、適正な気密封止が形成されないか又は不充分となる恐れがある。また、ＳＣＤの組み立てが適正でないと、ＳＣＤからＴＤ内への流体試料の分配が不均一となり、この結果アッセイ性能が低くなる場合がある。ＳＣＤは１つ以上の指標ラインを有することができる。例えば、ＳＣＤは２つの指標ライン５０５、５１０を有し、これらは試料受容管５２０の外側に目に見えるように貼り付け、刻印、印刷、又は他の方法で形成することができる。一実施形態では、ＳＣＤは２つの指標ライン（図５Ａ）を有する。双方の指標ライン５０５、５１０が上部チャンバ５２５上で目に見える場合、ＳＣＤ上部チャンバ及び試料受容管が適正に組み立てられていないことがユーザに知らされる（図５Ｂ）。試料管の外側で下部指標ライン５１０が目に見える場合、上部チャンバ５２５が試料受容管５２０と適正に組み立てられていることがユーザに知らされる（図５Ｃ）。指標５０５、５１０は、ユーザによって容易に読み取られるように、視覚的に別個のものとすることができる。一実施形態では、指標５０５、５１０は異なる色として、緑色等の一方の色が目に見える場合は上部チャンバ５２５が適正に設置されたことがユーザに知らされるが、赤色及び緑色等の２つの色が目に見える場合は、上部チャンバ５２５が試料受容管５２０と適正に組み立てられていないことがユーザに通知される（図５Ｂ）。図５Ａ〜図５Ｃには、上部チャンバ５２５に取り付けられた収集綿５５０及び試験装置界面５７０の限定でない例を示す。
【００９０】
[00109]  一実施形態において、下部チャンバは小さい吸収紙要素を含み、この上に抽出した試料の所定の割合を保存のために保持する。抽出した試料は、収集装置を通過し、一部が保存のために保持された後、試薬の溶液又は固体（例えば結合体ビード）に接触する。次のアッセイ工程を行い、液体は迅速に結合体ビードを溶解させて試薬と試料を混合させ、アッセイが開始される。
【００９１】
[00110]  試験装置（ＴＤ）
【００９２】
[00111]  本開示は、流体試料における多数の検体の有無を判定するための試験装置、具体的には免疫アッセイ装置を提供する。一般に、本開示のＴＤは軸方向の流路を確定するマトリックスを含む。典型的に、このマトリックスは、試料受容ゾーン、１つ以上の試験ゾーン、及び１つ以上の制御ゾーンを更に含む。いくつかの実施形態では、試験領域は試験ゾーン及び制御ゾーンを含み、これらはまとめてアドレス指定可能ラインである。
【００９３】
[00112]  ＴＤの文脈において本明細書で用いる場合、「軸方向流膜」、「横方向流膜」、「試験膜」、「試験ストリップ」、又は「マトリックス」という用語は、交換可能に用いられ、毛管作用を利用する及び／又は試験流体を移動又は移送させるために圧力及び／又は重力による流体移動を可能とする、又は、例えば流体を気圧、水圧の蓄積によって注入する（アッセイ流体に対するピストン又はロータリー、蛇腹又は他のタイプのポンプを用いた直接注入、磁界、重力等による静電移動）ように、毛管作用とは別個の流体の移動を利用する特徴のことを示す。
【００９４】
[00113]  本発明の一実施形態において、図１３及び図１４に示すような試験装置１４１０は穴／ポート１３２０、１４３０で構成され、この中に、例えば摩擦嵌め、ルアーロック、アダプタ、又はバルブによって、本発明のＳＣＤの遠位端を係合することができる。穴／ポート１４３０が提供する開口を通じてＳＣＤからＴＤ内へ試料が流れる。例えば、穴／ポートはカニューレ１４２０を有することができ、いくつかの実施形態では、これがＳＣＤに存在する隔壁装置に嵌合する。分割隔壁装置によって、高い流量、低いプライミング量、及びルアースリップ又はルアーロック接続を用いるための柔軟性が可能となる。いくつかの実施形態では、ポートに血液分離膜を配置して、１方向の流れを規定することができる。別の実施形態では、かかる膜をＳＣＤにも配置することができる（例えば試料収集用具のすぐ遠位側）。一実施形態では、ＴＤ（図１３）は、ＳＣＤに結合するためのポートの上流にチャンバ１３１０を含み、このチャンバはハウジング又はカバーと共に洗浄緩衝液のパウチを含む。
【００９５】
[00114]  一実施形態において、図１７にＴＤの説明のための例を示す。ＴＤは、上部ハウジング１７０６及び下部ハウジング１７１２を有することができる。ＴＤは、変形可能なチャンバ１７０７の上に配置された着脱可能安全カバー１７０１を有することができる。穴／ポート１７０２が提供する開口を通じて、ＳＣＤからＴＤ内に試料が流れる。ＴＤは、患者ＩＤ１７０３及びロット番号１７０５等の情報を含むバーコードを有することができる。
【００９６】
[00115]  一実施形態において、ＴＤは２つのセクションを含み、その一方のセクションは、試料が適用される部分を含み、第２の上流セクションは洗浄又はランニング緩衝液を含む。別の実施形態では、上流セクションは、同一の又は異なる緩衝液を含む場合がある１つ以上の隔室を含むことができ、各隔室はその内容物を放出するために別個に又は同時に操作することができる。
【００９７】
[00116]  穴の上流は緩衝液隔室１７０８、１３１０であり、これは、複数のアドレス指定可能ラインを含む試験膜の上流にある穴１７０２、１３２０と流体連通の状態とすることができる。一実施形態では、ＴＤ穴１７０２、１３２０はウィッキング基体１７０９と流体連通の状態にある。
【００９８】
[00117]  更に別の実施形態において、緩衝液隔室は、１つ以上の溶液を含む１つ以上の小隔室を含むことができる。ＴＤの文脈における小隔室は、貫通可能、破裂可能、破壊可能（例えばアンプル又は複数のアンプル）、又は変形可能な袋状の材料（例えばパウチ又は複数のパウチ）で形成することができる。本明細書で示したように、かかる隔室は、その内容物を放出するように破裂、破壊、又は変形させるのに充分な圧力を加えることで操作することができる（例えばユーザが指でチャンバカバーを押す）。更に、かかる隔室は、ランス、突き刺し、又は付属物によって穴を開けることで、該隔室に力を加えて（例えば親指で押す）該隔室を破壊することができる。
【００９９】
[00118]  更に別の実施形態において、緩衝液隔室自体は半剛性、柔軟、変形可能、又は袋状であり、隔室の内容物を放出するためにこれを圧縮するための手段を提供する。従って、いくつかの実施形態では、ユーザは隔室１７０８、１３１０に圧力を加えることで、自立型であれ小隔室に収容されているものであれ、その内容物を放出させることができる。
【０１００】
[00119]  いくつかの実施形態において、隔室１７０８、１３１０は、限定ではないが緩衝液又は追跡緩衝液を含む容器を含み、これが処理した試料混合物を試験ストリップ１７１０へと流動させるか又はその流動を向上させる。一般に、隔室内のこれらの液体溶液は、洗浄緩衝液、生理的食塩水、又は他の任意の所望の溶液を含むことができる。更に、いくつかの実施形態では、かかる溶液は、試薬、酵素、標識、又は化学合成品を含むことができる。洗浄緩衝液は、任意の結合していない標識を流動させ、これを試験ストリップに沿って検出ゾーンを越えて移動させてバックグラウンドを低減させることができる。洗浄緩衝液は、静水圧によってアッセイ混合物を押すように、及び／又は、例えばユーロピウムバックグラウンド等のバックグラウンド信号を低減させるように最適化することができる。洗浄緩衝液は、約１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％又はそれ以上のスクロースを含むことができる。一実施形態では、洗浄緩衝液は２０％のスクロースを含む。
【０１０１】
[00120]  一実施形態において、試験ストリップ１７１０の下流に吸収基体１７１１が配置されている。別の実施形態では、ウィッキング基体及び吸収基体の一方又は双方に、試験膜が重なるか又は当接することができる。更に、いくつかの実施形態では、ＴＤ上部ハウジング１７０６又は下部ハウジング１７１２は識別標識１７０３及び１７０５を含むことができ、これらはＳＣＤ上の同一の識別標識を識別してこれに対応し、ＴＤのロット番号も識別することができる（例えば品質保証及び追跡の目的のため）。上部ハウジングの１つ以上のウィンドウ１７０４、１６１０は、結果の視覚化及び読み取りを可能とする（例えば図１６も参照のこと）。
【０１０２】
[00121]  別の実施形態において、試験膜は、アドレス指定可能ラインの最後の上流に配置された吸収ゾーンも含む。一実施形態では、横方向流１６２０膜の上流に隔室が配置されている。別の実施形態では、試料投入穴の直下にウィッキングパッドが配置されている。
【０１０３】
[00122]  吸収基体を製造するために適切な材料は、限定ではないが、親水性ポリエチレン材料又はパッド、アクリルファイバー、ガラスファイバー、フィルタ紙又はパッド、乾燥紙、紙パルプ、布地等を含む。例えば、横方向流膜吸収ゾーンは、不織スパンレースアクリルファイバー、すなわちNew Merge（DuPont社から入手可能）又はＨＤＫ材料（HDK Industries, Inc.から入手可能）、材料の疎水特性を改善する（例えば低減させる）ように処理した不織ポリエチレン等の材料で構成することができる。
【０１０４】
[00123]  ＴＤに対するＳＣＤの結合
【０１０５】
[00124]  いくつかの実施形態において、ＳＣＤは分割隔壁を含む。図６に、分割隔壁を有する狭い遠位端を持つＳＣＤの説明のための例を示す。ＳＣＤ６１０はＳＣＤ６３０の遠位端に分割隔壁６２０を有する。
【０１０６】
[00125]  図７に、下部チャンバの混合又は試薬コンポーネント７３０におけるＳＣＤ遠位端の説明のための例を示す。ＳＣＤの遠位端は、小径分配先端部７７０を有する出口領域７０３を含むことができる。下部チャンバ７３０には、上述のような試薬ビード７８０、７８１、７８２を配することができる。
【０１０７】
[00126]  いくつかの実施形態において、下部チャンバ７３０はメッシュ膜７７５（図３、図１０、及び図１５の３５０、１０７５、１５１０も参照のこと）を含み、これは下部チャンバ７３０内に１つ以上のビード７８０、７８１、７８２を含む。
【０１０８】
[00127]  図８及び図９に示すように、一実施形態において、下部チャンバ９３０の分配先端部８７０、９７０は隔壁８８５、９８５を含み、これはスリット８９０を含むことができる。更に別の実施形態では、下部チャンバは、免疫試薬（例えば本明細書に記載した捕捉プローブ及び検出プローブを含むビード）を位置付けて固定するメッシュ膜９７５も含む。いくつかの実施形態では、隔壁はゴム又はネオプレン等のエラストマー材料で形成される。
【０１０９】
[00128]  いくつかの実施形態において、隔壁はスリットを含む。例えば、スリットは、カニューレを挿入することができる手段を提供する。いくつかの実施形態では、スリットは試料受容管内に閉じ込められた空気を保持し、試料受容管及び上部チャンバ（また、「試料収集用具」）を接続することによって生成される正の圧力を保持する。
【０１１０】
[00129]  他の実施形態において、隔壁は破裂可能であり、破裂した場合にＳＣＤとＴＤとの間に流体経路が形成される。いくつかの実施形態では、隔壁は破裂後に再び封止することができる。再封止可能な隔壁によって、破裂後であっても、流体又は空気がＳＣＤから漏れること、又は試料の滴下もしくは喪失を防ぐ。一実施形態では、隔壁はゴム又はネオプレン等のエラストマー材料から構成され、スリット８９０を含む。いくつかの実施形態では、隔壁はＴＤのカニューレに結合されて流体チャネルを形成するまで、ＳＣＤ内の圧力及び流体を保持する。スリットによって、隔壁６２０、８８５、９８５のゴムのようなエラストマー材料の圧力によるしっかりした閉鎖が可能となるが、スリットを通してカニューレ１００５、１１０５、１２３５、１４２０を容易に挿入し貫通させることができ、流体経路が生成されて流体流はＴＤ内に到達することができる。
【０１１１】
[00130]  一実施形態において、図１０を参照すると、ＴＦ１０３５のカニューレ１００５、１１０５はスリット１０９０においてＳＣＤの隔壁１０８５、１１８５を破裂させる。ＳＣＤは、下部チャンバに試薬ビードを保持するためのメッシュ膜１０７５を含むことができる。いくつかの実施形態では、カニューレ１００５、１１０５、１２３５、１４２０は、当技術分野において既知の任意の適切な構成を有することができ、先端が尖っていないか又は尖らせることができ、中空又は固体とすることができる。
【０１１２】
[00131]  一実施形態において、図１５に示すように、ＳＣＤ１５１５は試験装置１５２０に結合されているものとして示す。図示のように、試験装置は、メッシュ膜１５１０と共に試薬ビード１５３０、１５３１、及び１５３２が適所に保持された下部チャンバを含み、試験装置のカニューレ１５２５はＳＣＤの分割隔壁１５１７を貫通して延出して、試料に存在する１つ以上の検体と反応するＳＣＤに含まれた試料及び特異的試薬、検出プローブ及び捕捉プローブの反応生成物を円滑に送出する。
【０１１３】
[00132]  試料の保存    一実施形態において、試料の一部を保存するための手段を提供する。いくつかの実施形態では、ＳＣＤもしくはＴＤ又はそれら双方は保存手段を含み、これは、吸収体又は吸収基体（例えば紙又は膜）、規定された長さの短い毛管、又は下部チャンバに試料の一部を保持するための小さい貯蔵室／隔室を含むことができる。
【０１１４】
[00133]  いくつかの実施形態において、試料が反応試薬と接触する前に、装置内のある位置に保存フィルタ又は膜を配置する（例えば２０６、３５０、７７５、９７５、１０７５、１１７５、１２７５、１５１０）。
【０１１５】
[00134]  別の実施形態において、ＳＣＤは保存試料を保持するための手段を含むことができる。例えば、ＳＣＤ下部隔室内に、保存の目的のために試料を保持するフィルタ紙及び／又は疎水性膜を配置することができる。保存のための手段として用いるには様々な材料の組み合わせが可能であり、１つ、２つ、３つ、又はそれ以上の材料を単独で又は組み合わせて用いるようにすることができる。一実施形態では、保存のための手段は３つのディスクを含み、これらは相互に接触する場合もあるし接触しない場合もある。ディスクは格子部分及びパッド部分を含み、パッド部分は保存試料を保持するように設計されている。パッド部分は、任意の吸収体／吸収材料から成ることができ、ディスクの表面積の５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０％を構成することができる。更に、格子部分は、ディスクの表面に対して隆起した３次元（「３Ｄ」）基体を含むことができる。かかる３Ｄ突起は、試薬ビードを配置可能である格子を提供することができる。かかるビードは、約０．５、１、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４、４．５、５．０、５．５から約６．０ｍｍまでのサイズを有することができる。
【０１１６】
[00135]  一実施形態において、ＴＤに試料を送出するためのポート／穴に隣接して、保存された試料のための小さい貯蔵室を提供することができる小さい隔室がＴＤに位置付けられている。かかる保存隔室は、着脱可能に構成するか、又は保存試料を配置する基体自体が該隔室から着脱可能であるように構成することができる。例えば、隔室に嵌合するようなサイズのフィルタ／膜材料が、所定容量の試料（例えば細胞、細胞成分、タンパク質、核酸等）を収集するように機能する。次いで、保存試料を含むフィルタ／膜を取り外し、例えば乾燥又は凍結によって適切に記憶する。一実施形態では、保存した材料は細胞又は細胞成分であり、限定ではないがタンパク質、ペプチド、タンパク質フラグメント、又は核酸分子を含む。従って、保存した分子のタイプ（例えばタンパク質対核酸）に応じて更に試験するために試料を保管することができる。更に、保存ディスクは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、２１から３０日又はそれよりも長期にわたって試料を貯蔵し該試料の安定性を維持するための手段を提供する。
【０１１７】
[00136]  別の実施形態において、保存ディスクを保存薬溶液中に配し、これによって該保存試料の貯蔵期間を約１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０週間、延長する。勿論、フィールド内設定に応じて、試料を（例えば、いったん凍結されたら）無期限に貯蔵することができる。別の実施形態では、下部チャンバにおける反応隔室を試料受容管から取り外して、ハウジング（例えばプラスチック管）内に配置することができる。一実施形態では、隔室は少量の試料混合物を保持し、これに対して貯蔵のために保存薬を追加することができる。別の実施形態では、上部チャンバに収容された溶液又は下部チャンバにおける反応溶液は、液体試料を保存するのに必要な保存薬も含むことができる。かかる保存薬は当技術分野において既知である。例えば、米国特許ＲＥ２９０６１、Buccholz等のTransfusion（１９９９年９月、３９（９）９９８〜１００４）、Quiagen製造試薬（Quiagen.comから入手可能）を参照のこと。一実施形態では、後の試験のために保存試料を保持する（例えばＲＴ−ＰＣＲによって）。
【０１１８】
[00137]  別の実施形態において、ＳＣＤは保存試料を保持するためのフリット又は手段を有しない。図３に、保存試料を保持するためのフリット又は手段を有しないＳＣＤの一例を示す。膜３５０は、試料受容管３１０の上部から免疫試薬（例えば３５５）を分離させる。
【０１１９】
[00138]  試料識別    一実施形態において、ＳＣＤは、試料収集用具又は試料受容管上のどこかに、１つ以上の識別標識（例えば少なくとも１０９の一意の値を可能とするバーコード）も含む。この中で又はこの上で、例えば患者識別番号のような情報を試料受容管に取り付けることができる。また、識別標識を用いて、ＴＤの方法、ロット、及び期限が切れる日付を記録することができる。標識は剥離することができ、接着剤付きとすることができる。一実施形態では、ＳＣＤ上に少なくとも１つの標識を保持し、ＴＤ上及び／又は任意の設備事務、又は保存貯蔵手段に剥離（peel-off）コピーを配置することができる。図１７に、患者ＩＤ１７０３及びロット番号１７０５を示すバーコードの説明のための一例を示す。バーコードのフォーマットは、コーダバー等の世界的標準とする。他の実施形態では、識別標識は、当技術分野において既知の信号発信トランスポンダーとすることができ、限定ではないが無線周波数発信器、光発信器、又は電磁波発信器を含む。
【０１２０】
[00139]  ＳＣＤ隔室    本発明のいくつかの実施形態において、ＳＣＤは下部チャンバにおいて、試薬、フィルタ、膜、及び貯蔵室を含むことができる１つ以上の隔室を含む。一実施形態では、ＳＣＤの上部チャンバは、１つ、２つ、又はそれ以上の隔室を含むことができ、その各々が溶液を含むことができる。いくつかの実施形態では、かかる隔室は同一の又は２つの異なる溶液、試薬、緩衝液、又はそれらの組み合わせを含むことができる。更に、下部チャンバに連続的に多数の隔室を（例えば連続的に多数のケージを）配置することができる。更に、本明細書の開示において、かかる隔室を「小隔室」又は「複数の小隔室」と称する場合がある。
【０１２１】
[00140]  一実施形態において、隔室はサンプリング用具に対して遠位にあり、１つ以上の特定の検体（又は検体タイプ）に対して特異的な結合因子を含む液体又は固体の試薬を収容する。例えば、液体又は固体の試薬成分は、試料に存在し得る検体と特異的に結合することができる特異的な結合因子（例えば抗体）を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＳＣＤにおいて、サンプリング用具に対して遠位であり流体連通の状態にある単一の反応又は混合隔室（下部チャンバ）を用いる。他の実施形態では、１つ以上の隔室を用いることができ、１つの隔室は溶解又は抽出チャンバとして機能し、第１の隔室に対して遠位の第２の隔室は試薬−試料混合チャンバとして機能する。更に別の実施形態では、１つ以上の隔室の近位端にフィルタ手段を配置することができ、この隔室はサンプリング用具に対して遠位に配置される。フィルタ手段を用いて、例えば抽出／溶解の前、試料−試薬混合の後、処理中、又はＳＣＤからの放出の前のように、試料の分析中の任意の時点で試料からいくつかの成分を除去することができる。更に、試料受容管に多数の隔室が存在する場合、これらの隔室上に同一の又は異なるフィルタ手段を配置することができる。
【０１２２】
[00141]  試薬の適正な反応及び分析の結果を保証するために、試料及び結合因子の混合を行わなければならず、試料は結合因子と接触し、適切に相互作用及び混合しなければならない。一実施形態では、試薬−試料混合チャンバは混合指標ビードを有する。ビードは、適正な混合が行われたことを示す材料によって被覆することができる。例えば、混合ビードは赤い染料で被覆され、ビードの存在下における試料及び結合因子の混合中に、溶液が赤い色に変わることによって適正な接触及び混合が実証される。一般に、染料は放出可能な水溶性染料であり、肉眼に放出された場合に目に見える。好ましくは、染料は試料検体と相互作用しない。当技術分野では、ブロムクレゾール緑、ブロムクレゾール青、フクシン、メチルグリーン、ｏ−クレゾール赤、オレンジＧ、及びサフラニンＯ等、様々な色の様々な適切な染料が既知である。この染料指標によって、未熟なユーザであっても、充分な試薬の混合が行われたことの表示として赤い色の発生を観察することによって、装置を利用し正確な再現可能結果を得ることができる。例えば、ビードは、混合の５〜１０秒後に赤い色が生成されるように設計することができる。試料及び結合因子の混合は、５、１０、１５、２０、２５、３０、６０秒又はそれ以上混合することができる。あるいは、試料及び結合因子の混合は、５〜１０、又は１０〜１５、又は１５〜２０、又は２０〜３０、又は３０〜６０秒又はそれ以上とすることができる。少なくとも５秒間混合することが、試料と結合因子との間の適正な相互作用に充分であることが示されている。混合の一例を図２２に示す。もっと長い時間（例えば３０秒）混合することでは、著しい反応結果の改善は見られなかった。混合は、ＳＣＤを振ること、ＳＣＤを手で振ること、及びＳＣＤをかき混ぜることを含むいくつかの方法で実行可能である。
【０１２３】
[00142]  試料    試料は、１つ以上の検体の存在及び／又は濃度について試験するための任意の材料である。一般に、生物試料は、例えばヒト以外の動物又はヒトのような被検体から取得されＴＤにおいて利用される任意の試料とすることができる。例えば、生物試料は、バイオプシーからの任意の体液、細胞、又は組織試料とすることができる。体液試料は、限定ではないが、血液、尿、たん、精液、糞便、唾液、胆汁、脳液、鼻スワブ、鼻咽頭スワブ、鼻咽頭吸引物、鼻洗浄剤、咽喉スワブ、泌尿生殖器スワブ、鼻吸引物、脊髄液等を含むことができる。例えば、鼻スワブを用いる場合、口蓋と同じラインに沿って鼻孔内に乾燥したポリエステル綿を入れて、数秒間にわたり適所に放置することができる。次いでこれを、回転させながら又は回転なしでゆっくりと除去する。双方の鼻孔を同じ綿で試験することができる。いくつかの実施形態では、試料を収集するために用いた綿は、試料収集装置（ＳＣＤ）の一部とすることができる。他の実施形態では、試料を収集するために用いた綿は、ＳＣＤとは別個とし、ＳＣＤに配置する前に試料収集のために用いることができる。別の例として、鼻咽頭スワブを用いる場合、可撓性で薄いポリエステルの綿を鼻孔内に入れて、鼻咽頭まで到達させ、数秒間にわたり適所に放置することができる。次いでこれを、回転させながら又は回転なしでゆっくりと除去する。他方の鼻孔には第２の綿を用いることができる。更に別の例として、鼻咽頭吸引物を用いる場合、例えば管を介した吸引によって、鼻咽頭流体を取ることができる。口蓋と同じラインに沿って鼻孔内に管を入れる。吸引を適用し、回転させながら又は回転なしで管をゆっくりと引き出す。他方の鼻孔からの試料は、同一の管又は異なる管を用いて同じ方法で収集することができる。更に別の実施形態では、鼻洗浄剤を用いる場合、患者を楽な位置に座らせて頭をわずかに後方に傾けさせる。いくつかの実施形態では、患者は鼻孔に洗浄液（例えば生理食塩水）を入れている間、「Ｋ」と言うことによって咽頭の後部を閉じたままとすることができる。移送ピペットを用いて、一度に１〜１．５ｍｌの流体を一方の鼻孔に入れることができる。次いで患者は頭を前方に傾けることによって流体を収集皿に流す。このプロセスは、合計で１０〜１５ｍｌの流体が用いられるまで鼻孔を換えながら前後に繰り返すことができる。更に別の実施形態では、咽喉スワブを用いる場合、圧力をかけて綿を用い、扁桃腺及び咽喉後部の双方を綿で拭き取る。次いで綿を、用意した容器に入れる。また、生物試料は、例えばヒトのような被検体から直接取得した試料から得た任意の試料を含むことができる。例えば、生物試料は、血液試料の血漿又は血清部分、収集した細胞又は組織のタンパク質又は核酸抽出物とすることができ、又は標本の検出性を向上させるような方法で処理した標本からのものとすることができる。例えば、標本の粘性を大幅に低下させる鼻の標本内のムチンを分解するムコ多糖類加水分解酵素剤を含む溶解緩衝液、及び、ウイルスを溶解させることによって抗原を放出しそれらをアッセイによる検出に利用可能とする溶剤である。試料は、限定ではないが、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、及び無脊椎動物を��む任意の被検動物からのものとすることができる。哺乳類の例は、限定ではないが、ヒト、豚、馬、牛、マウス、猫、犬、又は羊を含む。
【０１２４】
[00143]  試料は、任意の生物又は非生物源から収集することができる。例えば、試料は、血液、血清、血漿、唾液、口部流体、たん、接眼レンズ流体、鼻流体、鼻咽頭又は鼻咽スワブ又は吸引物、汗、尿、乳、腹水流体、粘液、滑液流体、腹膜流体、経皮滲出液、咽頭滲出液、気管支胞洗浄液、気管吸引物、脊髄液、精液、頸部粘液、膣又は尿道分泌液、羊膜流体等を含む生理学的流体等の任意の生物源から得ることができる。本明細書において、例えば髪、皮膚、及び爪の引っかき及び肉抽出物等の細胞組織の流体ホモジェネートも生物流体と見なされる。前処理には、血液からの血漿の調製、粘性流体の希釈又は処理等を含むことができる。処理の方法は、ろ過、蒸留、分離、濃縮、干渉成分の非活性化、及び試薬の追加を含むことができる。生理学的流体の他に、工業、環境、又は食物製造アッセイ、並びに診断アッセイの実行のために、水、食物製品、土壌抽出物等の他の試料を用いることができる。更に、検体を含むと思われる固体材料が、いったん変更されて液体の媒体を形成するか又は検体を放出したら、これを試験試料として用いることができる。生物、工業、及び環境試料の試験前の選択及び前処理は、当技術分野において周知であるので、これ以上詳細に説明する必要はない。
【０１２５】
[00144]  他の対象分野には、家畜疾病の診断、バクテリア汚染についての肉、家禽、魚の分析、食物工場、病院、及び他の公共施設の検査、海岸、海洋、湖、又は水泳プール用を含む水の汚染についての環境試料の分析が含まれる。これらの試験によって検出された検体は、ウイルス及びバクテリアの抗原を含み、並びに、例えば重金属（例えば鉛、水銀等）、殺虫剤、ホルモン、薬物及びその代謝産物、炭化水素及びあらゆる種類の有機又は無機化合物を含む化学物質を含む。
【０１２６】
[00145]  安全手段    いくつかの実施形態において、変形可能チャンバ１７０７の上に安全手段１７０１を配置して、側方流動膜と流体連通の状態にあるチャネル内にチャンバの内容物が偶発的に放出されないようにする。安全手段は、カバー又はフランジとして、持ち上げるか又は引っ張って変形可能チャンバ又はこの上に配置された押しボタンを露出させる。
【０１２７】
[00146]  更に、かかる安全手段は、ＳＣＤの遠位端上に存在する固有の同種のアダプタ、ルアー、又はバルブのためのアダプタとして機能することができる。このため、安全手段は、例えばＴＤ内に試料を放出する前にＳＣＤの遠位端が係合している穴を覆うことができる。追加の実施形態では、最初に安全カバーを外した後でのみＴＤを受容ポートに挿入可能であるように読み取り装置を設計する。例えば、安全カバーが外されているＴＤは、すでにＴＤ内に試料が導入されており、穴（アダプタ／安全カバー）の上流の隔室１７０８、１６２０からランニング緩衝液が放出されたことを示す。一実施形態では、穴はウィッキングパッド１７０８よりも上に配置されている。
【０１２８】
[00147]  間隙手段    いくつかの実施形態において、ＴＤは、側流膜（例えばウィッキングパッド）と、緩衝液貯蔵室と流体連通の状態にあるチャネルとの間に配された間隙を含む。この間隙は、アッセイ進展に従った適切な時点まで、押しボタン貯蔵室に含まれる溶液及びアッセイ試料を分離させたままとするように機能する。例えば、ユーザが試料穴の隔室上流１７０８、１６２０に圧力をかけると、間隙は強制的に閉じられ、隔室に収容された溶液はウィッキングパッドの方向にこれを通って流れ、試験ストリップを通って試料を流動させる。先に示したように、溶液は任意の所望の緩衝液、試薬、化学化合物、染料、標識、又はビードを含むことができる。本明細書に開示する間隙の実施形態は、本明細書に開示するＴＤ構成のいずれにも適合可能であることは理解されよう。いくつかの実施形態では、間隙は約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｍとすることができる。一実施形態では、間隙はゼロより大きく３ｍｍ未満である。
【０１２９】
[00148]  一実施形態では、ＳＣＤ処理した試料をＴＤ内に導入し、続いて追跡又はランニング緩衝液が放出されてウィッキングパッドを通って試験ストリップへと標本の後を流れ、ここで特定パターンの捕捉部分がそれらのパートナーの捕捉部分と結合する。
【０１３０】
[00149]  容器及び溶液放出    一実施形態において、ＴＤは側流試験ストリップであり、必須ではないが、読み取り装置によって読み取られるように設計されたハウジングに収容されていることが好ましい。一実施形態では、洗浄／ランニング緩衝液溶液は、ＴＤにおいて試料導入ポートの上流に配置されたフォイル、袋、又はブリスタータイプのパケット（例えばケチャップ／調味料パケット）に含まれている。袋又はパケットは、２本の直交軸に対して対称であるように設計して、容易にＴＤに装填可能とすることができる。従って、一実施形態では、パケットの上に配置されたＴＤのカバーを押すと、パケットが壊れて、その内容物を放出することができる。
【０１３１】
[00150]  一実施形態では、上流の洗浄／緩衝液隔室は、柔らかい膜（例えばフォーム充填封止パック）又はアンプルを含み、最小限の力をかけると（例えばユーザが指で押す）容易に破裂／破壊する。かかる極薄の隔室は、更に硬い着脱可能カバーで覆うことができ、極薄の偶発的な破壊を防ぐ。試料はポートを通ってＴＤ内に入り、装置は保存試料の回復のために狭いチャネルを有することができる。
【０１３２】
[00151]  別の実施形態において、ボタン部は貫通付属物を含むことができ、これはボタンが押されるとパケットを破裂させてその内容物を放出する。パケットとボタンとの間に板ばね又は片持ち梁ばねを配置することができ、これにより圧力がパケットにかかって、全ての内容物を放出することが確実となる。更に、ＴＤの幾何学的形状は、洗浄緩衝液が直接ウィッキングパッドに向かうように構成される。更に、ボタン、ばね、及びハウジングの幾何学的形状は、パケット領域における空気の隙間を軽減させて、洗浄緩衝液がいずれの方向にも、必要な場合は重力に逆らって（例えば上り方向に）流れるが、パケット貯蔵領域には戻らないようにすることができる。
【０１３３】
[00152]  パケットから所定の洗浄緩衝液流が流出することを可能とするために、生成する穴の数及び大きさ、並びに生成する穴の幾何学的形状を相互に調節することができる。一実施形態では、貫通付属物（例えば針）によって、パケットの上部に流体抵抗バリアを提供し、これによって流体はパケットの下部からウィッキングパッドの方向へと流出することができる。貫通針は、この機能を達成する又は強化するためにテーパー状とすることも可能である。一実施形態では、ばねは、ボタン、上部ハウジング、又は下部ハウジングの一体部分であり、又はこれは別個のコンポーネントとして、洗浄／ランニング緩衝液チャンバに容易に嵌合し封止するように構成することができる。一実施形態では、ボタンの側部は、ボタンを押している間のつまみ部分を最小限に抑えるように設計される。また、側部は、バッフルタイプの機能を提供するように設計し、ＴＤから流出する液体のリスクを最小限に抑えることができる。
【０１３４】
[00153]  別の実施形態において、ウィッキング片の端部を支持する機構の幾何学的形状は、貫通機構（例えば針）がパケットを通過することができるが、パケットがこのパケットと支持機構との間に封止を形成することができないように設計される。針の動作は、ウィッキングパッド及びパケットの双方を貫通する。別の実施形態では、貫通はパケットのみであり、ウィッキングパッドは貫通した穴のすぐ隣に位置する。
【０１３５】
[00154]  一実施形態において、ＴＤにおける洗浄／ランニング緩衝液は、破壊可能／破裂基体（例えばアンプル）に含まれる。封止膜又はボタンに圧力を加えるとアンプルが破壊し、これによってその内容物が放出される。一実施形態では、緩衝液をウィッキングパッドへと流出させるように、チャネル、溝、又は谷部を設計する。
【０１３６】
[00155]  一実施形態において、ＳＣＤ遠位端を受容するための穴は分離環（「ロック環（Lock Collar）」）を含み、これはＳＣＤアセンブリに取り付けられ、ＳＣＤが取り外されるとＴＤ本体から分離し、これによって該穴の上流又はすぐ上流の隔室／貯蔵室から洗浄又はランニング緩衝液を放出する。更に別の実施形態では、ロック環は、回してロック位置に置かれると、試料をＴＤ上に分配することができ、同時に緩衝液又は洗浄緩衝液を上流の隔室から放出する。例えば、ロック環は、チャネル、穴、又は開口の幾何学的形状を含み、これらはロック環がロック位置にある場合だけ洗浄／緩衝液隔室の開口、チャネル、又は穴と整合する。かかるロック環は、緩衝液／洗浄液又は他の任意の液体を送出するために使用可能な１つ以上の上流隔室のいずれかと共に用いることができる。代替的な実施形態では、ＳＣＤは、ＴＤ本体に嵌合し非ロック位置からロック位置へと回されるロック環を含むことができる。
【０１３７】
[00156]  遅延（time delay）手段    試料の上流のチャンバ（例えば試料導入ポート）からの洗浄／ランニング緩衝液放出を対象とする本明細書の実施形態のいずれかにおいて、ＴＤ内に遅延機構を構成することができ、これによって試料の導入と洗浄／ランニング緩衝液の放出との間にある時間期間が経過するようにする。例えば、乾燥ウィッキングパッド基体は、濡れると（例えば洗浄緩衝液の放出後に）膨張し、この膨張のために他の方法で分離されたウィッキング片につながる。例えば、試料を適用し、洗浄緩衝液を含むアンプル又は基体を破壊／破裂させて液体を乾燥ウィッキングパッド部内へと放出させると、これが膨張し、試料を含むウィッキングパッド部に対する液体連通が提供される。この時点で、試料／緩衝液はウィッキングパッドを介して試験ストリップを流れることができる。
【０１３８】
[00157]  別の実施形態では、洗浄緩衝液隔室とウィッキング膜との間に所定の長さ／密度の繊維膜が配置され、この繊維膜が洗浄緩衝液のウィッキング膜への接触を遅延させることによって遅延機構として機能することができる。緩衝液は繊維膜に吸い取られて、ウィッキング膜に達するまで膜繊維の端部に蓄積し、試料と共に流れてウィッキング膜上に配される。別の実施形態では、ウィッキング膜から繊維膜を分離させている間隙を埋めるのに充分な量となるまで、緩衝液は膜繊維の端部に蓄積する。
【０１３９】
[00158]  他の実施形態において、ＴＤ内にプランジャー又はばね機構が構成されており、これは隔室／アンプル容量を低減させることでその内容物がウィッキングパッド上に分散されることを保証するように機能する。プランジャーは、ユーザがボタンに圧力をかけることによって前方向に移動させることができ、又はばねを装填したプランジャーを、自動的に（例えば読み取り装置に配置された場合に）前方向に駆動させることができる。プランジャーは、前方向に駆動すると封止を形成するので、液体の流出手段はウィッキングパッドに向かう方向のみとなる。
【０１４０】
[00159]  試験ストリップ    一実施形態において、軸部及び綿を含むＳＣＤによって、試料が試験ストリップに送出される。試験ストリップの上流には洗浄緩衝液又は他の流体を有する隔室がある。試験ストリップは、試験ゾーンＡ、Ｂ、及びＣ、並びに制御ゾーンを含む。検出プローブは、結合標識によって検出可能信号を提供する。次いでＴＤを読み取り装置に挿入し、ここで標識からの信号を測定及び／又は検出する。別の実施形態では、極めて短い読み取り期間（２０秒まで）にわたって短いアッセイ処理期間が終了した後に、試験ストリップを読み取り装置の移動可能トレイに挿入することができ、これによって１つの読み取り装置を用いて試験のスループットを著しく高めることができる。更に、別の実施形態では、試料の追加前に試験ストリップを読み取り装置に挿入することができる。
【０１４１】
[00160]  一実施形態において、試験ストリップに沿った液体移送は毛管作用に基づいている。更に別の実施形態では、マトリックスに沿った液体移送は非吸収性側方流動に基づいており、液体試料の溶解又は分散した成分は全てマトリックスを通って側方に実質的に等しい速度で流れが比較的弱められずに運ばれる。これは、例えば１つ以上のコンポーネントと化学的に、物理的に、イオンにより、又は他の方法で相互作用する材料において１つ以上のコンポーネントの優先的な保持が生じるのとは対照的である。例えば、米国特許第４，９４３，５２２号を参照のこと。これは参照によりその全体が本願に含まれるものとする。
【０１４２】
[00161]  本明細書に開示した装置を生成するために、任意の適切な材料が使用可能である。かかる材料は、ガラス、セラミック、金属、プラスチック、ポリマー、又はコポリマー、又はそれらの任意の組み合わせ等の、剛性又は半剛性、非透水性材料を含む。いくつかの実施形態では、ＳＣＤ又はＴＤのいずれかは、ポリプロピレン、ポリアロマー、ポリカーボネート、又はシクロオレフィン、又はシクロオレフィンコポリマー等、破壊に耐性があるもの等のプラスチック、ポリマー、又はコポリマーを含む。更に、本発明の装置は、限定ではないが、射出成形、ブロー成形、機械加工、又はプレス成形等の適切な製造方法によって形成することができる。
【０１４３】
[00162]  本明細書において用いる場合、試験ストリップ基体は、当技術分野における従来の方法を用いてパートナー捕捉部分が結合される材料のことである。基板としては、対象の分子を付着させるための支持として作用することができる任意の材料を含む様々な材料が使用可能である。かかる材料は当業者には既知であり、限定ではないが、有機又は無機ポリマー、天然及び合成ポリマーを含み、限定ではないが、アガロース、セルロース、ニトロセルロース、セルロースアセテート、他のセルロース誘導体、デキストラン、デキストラン誘導体及びデキストランコポリマー、他の多糖、ガラス、シリカゲル、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、レーヨン、ナイロン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリブチレン、プリカーボネート、ポリエステル、ポリアミド、ビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリスチレン及びポリスチレンコポリマー、ジビニルベンゼン等と架橋したポリスチレン、アクリル樹脂、アクリル酸塩及びアクリル酸、アクリルアミド、ポリアクリルアミド、ポリアクリルアミド混合物、ビニル及びアクリルアミドのコポリマー、メタクリル酸塩、メタクリル酸塩誘導体及びコポリマー、様々な官能基を有する他のポリマー及びコポリマー、ラテックス、ブチルゴム及び他の合成ゴム、シリコン、ガラス、紙、天然海綿、不溶性タンパク質、表面活性剤、赤血球、金属、非金属、磁気材料、又は他の市販の媒体又は複合材料であって、例えばポリスチレン、マイラー、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリブチレン等、試験ストリップ基体の親水性を改善させる材料で被覆された固体又は半固体の基体から成るもの、アルミニウム、銅、すず等の金属、又は金属の混合物であって、デキストラン、溶剤、塩、ＰＶＰで被覆されたもの、及び／又は静電又はプラズマ放電によって処理されて表面に電荷を追加することで表面に親水性を与えたものを含む。
【０１４４】
[00163]  一実施形態において、側方流動膜は、Porex technologies Corp.（米国ジョージア州フェアバーン）が製造する高密度ポリエチレンシート材料等の多孔性材料から成る。シート材料は、開孔構造を有し、典型的な密度は４０％空隙体積において０．５７ｇｍ／ｃｃであり、平均孔直径は１から２５０マイクロメータであり、平均は概ね３から１００マイクロメータである。別の実施形態では、標識ゾーンは、不織スパンレースアクリル繊維等の多孔性材料であり（試料受容ゾーンと同様）、例えばNew Merge又はＨＤＫ材料である。多くの場合、多孔性材料は、例えばマイラーのような概ね不透水性の層によって裏打ちするか、又はその上に重ねることができる。裏打ちを用いる場合、これは接着剤（例えば３Ｍ４４４両面接着テープ）によってマトリックスに概ね固定する。典型的に、不透水性の裏打ちは厚さが薄い膜に用いられる。非特異的にアッセイ成分に結合せず、流体試料と干渉しないならば、多種多様なポリマーを用いることができる。説明のための例は、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン等を含む。時には、マトリックスは自立型とすることができる。塩化ポリビニル、ポリ酢酸ビニル、酢酸ビニル及び塩化ビニルのコポリマー、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリスチレン等、非吸収性の流れに動かされやすい他の膜も用いることができる。更に別の実施形態では、側流膜は、未処理の紙、セルロース混合物、ニトロセルロース、ポリエステル、アクリロニトリルコポリマー等の材料で形成される。標識ゾーンは、吸収性又は非吸収性の流れを提供するように構築することができ、多くの場合、流れのタイプは試料受容ゾーンの少なくとも一部に設けられたものと同様又は同一である。多くの実施形態において、標識ゾーンはレーヨン又はガラス繊維等の不織繊維で構成される。使用に適した他の標識ゾーン材料は、米国特許第５，０７５，０７８号に開示されたクロマトグラフィー材料を含む。この特許は参照により本願に含まれるものとする。
【０１４５】
[00164]  別の実施形態において、試験ストリップ基体を、材料ブロッキング剤及び標識安定剤を含む溶液によって処理する。ブロッキング剤は、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）、メチル化ＢＳＡ、カゼイン、酸又は塩基加水分解カゼイン、脱脂乾燥乳、魚膠、又は同様のものを含む。安定剤は、容易に入手可能であり、当技術分野において周知であり、例えば標識試薬を安定化させるために用いることができる。いくつかの実施形態では、溶液を含む上流隔室は多数のアンプルを含むことができ、これらを選択的に破裂又は破壊させてその内容物を放出することができる。従って、一実施形態では、ブロッキング剤を１つのアンプルに収容し、これを用いて試験ストリップ（すなわち側方流動膜）を前処理（例えば「ブロック」）し、追加のアンプルは試験ストリップを介して試料を洗浄するために取っておく。
【０１４６】
[00165]  ゾーン、標識、及び試薬    本明細書の様々な開示においては、試験ストリップ／側方流動膜は多数の試験ゾーンを含む。試験ゾーンは典型的に予め選択されたパートナー捕捉部分を含み、この場合、予め選択された領域が、単クローン抗体等の検体に特異的な結合因子（biding agents）に結合している捕捉部分のパートナーである捕捉部分を含む。いくつかの実施形態では、捕捉プローブは、１つ以上の検体を検出するため及び制御のための多数のタイプの標識を含むことができる。これらの多数のタイプの標識試薬は、蛍光標識から異なる波長を検出可能である読み取り装置等、様々な読み取り装置を用いて検出することができ、あるいは、視覚によって、又は異なる波長もしくは色を検出可能である読み取り装置によって検出することができる。あるいは、各検体について同一の標識を利用することができる。このため、同一の装置で利用され捕捉される場合、検出した標識を区別することによって１つの標識試薬を別の標識試薬から区別することができ、及び／又は、どのアドレス指定可能ラインが結果を与えたかを知ることによって検体を判定することができる。多くの場合、標識成分のみに基づいて異なる特性を有する標識試薬を区別して検出する能力は必要ない。これは、装置には定義された試験及び制御ゾーンが存在するからであり、これによって指定ゾーンに標識試薬を蓄積することができるからである。
【０１４７】
[00166]  いくつかの実施形態において、各検体結合セットが含む検出プローブでは、特異的結合因子は異なる波長を発する異なる蛍光標識に結合している。従って、ＳＣＤにおいて複数の検体結合セットが与えられた場合、各検体結合セットは他のいずれの検体結合セットとも異なる標識を用いる。例えば、インフルエンザＡ型と特異的に結合する第１の抗体群を１つのタイプの蛍光標識に結合することができ（すなわち検出プローブに特異的な結合因子が第１の蛍光標識に結合する）、例えばインフルエンザＢ型に対して特異的な第２及び以降の結合抗体（すなわち検出プローブに特異的な結合因子が第２及び以降の蛍光標識に結合する）は、各々、異なる蛍光標識に結合している区別可能な検出結合因子を含むことができる。勿論、検出プローブが同一の標識を利用可能であること、又は検体結合セットが、蛍光標識、金属、発色団、又は他の任意の適切な標識等の様々な異なる標識を使用可能であることは明らかである。一実施形態では、蛍光標識は充分に識別可能な波長を発するので、いくつかの試験ラインを区別することができる。
【０１４８】
[00167]  本記載では、単一の免疫アッセイ装置において個々の試験ゾーンに対して所定の方法で位置付けた単一又は多数の制御ゾーンの形成及び使用を規定しており、これによって装置において試験の対象である１つ以上の検体の各々を容易に識別可能とする。本記載は、更に、様々な形状、物理的又は化学的なアイデンティティ、及び色の制御ゾーンの生成について規定する。部分的に、かかる制御ゾーンの使用により、使用が簡単で、単一のアッセイ手順の間に多数の検体を識別できる免疫アッセイ装置が可能となる。
【０１４９】
[00168]  一実施形態において、ＴＤは、検体と特異的に結合することができる試薬（例えばＨ５Ｎ１型又はＨ１Ｎ１型に対して特異的な抗原）を全く含まない。かかる実施形態では、対象の検体と結合する試薬は通常、ＳＣＤに存在する。ＴＤは、捕捉プローブの同種捕捉部分パートナーと特異的に結合することができる捕捉部分パートナーを含み、これによって試験ゾーンアドレス指定可能ライン上で検体を捕捉することができる。
【０１５０】
[00169]  試験領域は一般に、試料流が予想通りであることを検証するのに有用な１つ以上の制御ゾーンを含む。通常、制御ゾーンの各々は空間的に別個の領域を含み、これは多くの場合、標識対照試薬と反応する特異的結合対の固定化要素を含む。いくつかの実施形態では、制御ゾーンは、対象の検体の確実な試料又はそのフラグメントを含む。かかる実施形態では、１つのタイプの標識試薬を利用することができ（例えば標識試薬は検体及び対照の双方に結合する）、標識試薬を含む流体試料が試験ゾーン及び制御ゾーンに流れる。そして、対象の検体に結合されていない標識試薬が、制御ゾーンに位置する対象となる検体の確実な試料に結合する。かかる実施形態では、典型的にアッセイは、過剰な標識試薬を含むように構成されている（例えば検体及び対照の双方に結合するために充分である）。別の実施形態では、制御ゾーンは、標識試薬に対して特異的であるか、又は他の方法で標識試薬の固定化を可能とする抗体を含む。動作において、対象の検体のいずれか又は全てが試験試料に存在しない場合であっても、標識試薬は１つ以上の制御ゾーンの各々に拘束される。
【０１５１】
[00170]  いくつかの実施形態において、ＳＣＤ又はＴＤのいずれかにおいて流体試料流に標識対照試薬を導入する。例えば、ＴＤにおいて、本明細書において記載した上流の溶液／緩衝液貯蔵室に対照試薬を含ませることができる。別の実施形態では、試料をＴＤに適用する前に、例えばＳＣＤにおける混合サブチャンバに存在する際に、流体試料に標識対照試薬を追加することができる。
【０１５２】
[00171]  標識対照試薬及びゾーンの例示的な機能は、例えば、試料の液体流によって、１つ以上の画定試験ゾーンに捕捉されたＳＣＤからの標識試薬を効果的に可溶化及び流動化させたことを確認することである。更に、充分な量のパートナー捕捉部分が、（すなわち抗原特異的結合因子を介して）特異的検体に複合体を形成する対応する特異的捕捉部分と反応するように、充分な量の液体が試験ストリップ試験及び制御ゾーンを正確に流れたことが制御によって確認できる。更に、対照試薬によって、免疫複合体（例えば検体−検体特異的結合因子）が、試験ゾーン及び制御ゾーンを含む試験領域上に移動し、試験ゾーンを通過することが確認できる。その量は、陽性の試験結果の場合に標識検体が蓄積することで試験ゾーンに目に見える又は他の読み取り可能信号を生成するようなものである。更に、制御ゾーンの追加機能は、基準ゾーンとして作用することによって、読み取り可能ゾーンとして表示される試験結果をユーザに識別可能とすることである。
【０１５３】
[00172]  ＴＤは１つ以上の制御ゾーンを組み込むことができるので、標識対照試薬及びそれらの対応する制御ゾーンは、対象の１つ以上の検体の有無には無関係に、流体試料が装置に接触した後に全ての制御ゾーンについて所望の強度で各制御ゾーンが目に見えるように生成されることが好ましい。
【０１５４】
[00173]  一実施形態において、単一の標識対照試薬が試験ストリップ上の各制御ゾーンによって捕捉される。多くの場合、かかる標識対照試薬は、多数の制御ゾーンが存在する場合、これらの制御ゾーンを結合した合計結合容量の容量を超える量でゾーン上又はゾーン内に堆積される。従って、対照標識に対して特異的な捕捉試薬の量は、１つ以上の制御ゾーンにおいて所望の信号強度を発生させることができる量で堆積することができ、各制御ゾーンは所望の量の標識対照試薬を拘束することができる。アッセイの完了時に、各制御ゾーンは（強度及び形態において）所望の及び／又は予め設計した信号を提供することが好ましい。企図される予め設計した信号の例は、各制御ゾーンで等しい強度の信号、又は制御ゾーンにおいて所望のパターンで上昇するか、下降するか、又は他の信号強度を含む。
【０１５５】
[00174]  別の実施形態において、各制御ゾーンは一意の(unique）対照試薬に対して特異的である。この実施形態では、標識ゾーンが多数の異なる標識対照試薬を含むことができ、これはアッセイ又は関連する変形における制御ゾーンの数と等しい。典型的に、標識対照試薬の各々は、１つ以上の所定の特異的な制御ゾーンに拘束することができる。これらの標識対照試薬は、制御ゾーンに蓄積されると、（例えば同一色の）同一の検出可能信号を提供するか、又は（例えば異なる色の標識又は他の検出システムを有する）区別可能な検出可能信号を提供することができる。
【０１５６】
[00175]  更に別の実施形態において、制御ゾーンは、前述の実施形態において記載した２つのタイプの制御ゾーンの組み合わせを含むことができる。例えば、１つ以上の制御ゾーンが、単一のタイプの標識対照試薬を拘束又は結合することができ、同一の試験ストリップ上の他の制御ゾーンが、１つ又はいくつかの他の特異的標識対照試薬と結合することができる。
【０１５７】
[00176]  一実施形態において、標識対照試薬は、多数の特異的結合対に結合された検出可能部を含む。典型的に、標識対照試薬は、試験ゾーンに対象の検体を拘束することができる手段によって認識される試薬とは異なるように選択される。更に、標識対照試薬は一般に検体について特異的でない。更に別の実施形態では、標識対照試薬は、制御ゾーン上又は制御ゾーン内で固定化した特異的結合対の対応する要素又は対照捕捉パートナーを結合することができる。このため、標識対照試薬は制御ゾーンにおいて直接拘束される。
【０１５８】
[00177]  別の実施形態において、標識対照試薬の標識成分を形成する検出可能部は、標識試験試薬の対象の検体の標識成分として用いたものと同一の検出可能部である。多くの実施形態では、標識対照試薬の標識成分は標識試験試薬の標識成分とは異なるので、アッセイの結果は容易に判定される。多く見られる別の実施形態では、対照標識及び試験標識は、例えば着色ラテックスのような着色ビードを含む。また、多くの場合、対照及び試験ラテックスビードは異なる色を有する。
【０１５９】
[00178]  更に別の実施形態において、標識対照試薬は、ストレプトアビジン、アビジン、又はビオチンを含み、対照捕捉パートナーは、かかる特異的結合対の対応する要素を含み、それらは相互に容易かつ特異的に結合する。一例では、標識対照試薬はビオチンを含み、対照捕捉パートナーはストレプトアビジンを含む。あるいは、例えば、検体に関連しない抗原／抗体反応を含む特異的結合対の他の要素を使用可能であることは、当業者には認められよう。更に別の実施形態では、捕捉パートナーは本明細書に開示した結合部分のいずれかを含むことができる。
【０１６０】
[00179]  制御ゾーンの使用は、制御ゾーンにおける信号の出現によって、陰性の結果であっても試験結果を読み取ることができる時間が示されるという点で有用である。このため、制御ラインに予想された信号が出現した場合、試験ゾーンにおける信号の有無を表すことができる。
【０１６１】
[00180]  更に別の実施形態において、試験領域が湿った状態である場合に試験領域で目に見えるようになるマークを含む制御ゾーンを利用する。このタイプの制御ゾーンは、２００１年９月１０日に出願された米国特許出願第０９／９５０，３６６号（現在は米国特許出願第２００３００４９１６７号として出願中であり公開されている）、及び、２００２年９月１０日に出願された第１０／２４１，８２２号（現在は米国特許出願第２００３０１５７６９９号として出願中であり公開されている）に記載されている。
【０１６２】
[00181]  いくつかの実施形態において、このタイプの１つ以上の制御ゾーンを利用する。別の実施形態では、標識対照試薬を用いるタイプの制御ゾーンと、湿った状態では制御ゾーンが表示されるタイプの制御ゾーンとの組み合わせを用いることができる。これによって、試薬ベースの制御ゾーンを用いながら複数の制御ゾーンを使用可能として、ＳＣＤ処理した試料における試薬の再可溶化及び流動化が有効であったことが確かめられる。また、かかる実施形態は、例えばＴＤ、ウィッキング、試験ストリップ、及び吸収パッドによって画定された経路に沿って予想通り特異的な反応が行われたと判定することができる。また、本開示は、アッセイの制御ゾーンの各々について、試験ストリップの遠位端又は下流端における制御ゾーンを除いて、試験領域が湿り状態である場合に目に見えるようになる１つ以上の制御ゾーンの使用を含む。
【０１６３】
[00182]  多検体アッセイ    本開示は、更に、環境モニタリング、医学の多くの分野、特に感染性の病気の分野において必要とされる迅速な多検体アッセイを構築するための手段を提供する。例えば、企図される装置は、インフルエンザＡ型又はインフルエンザＢ型、及びそのサブタイプ（例えばインフルエンザＡ型、Ｈ５Ｎ１型、又はＨ１Ｎ１型）の異なる診断に有用なものを含み、結果として、インフルエンザＡ型、インフルエンザＢ型、及び／又はＲＳＶの異なる処置又は異なる診断を１つの工程で行うことができる。かかる装置では、単一の試料を用いて一度に多数の検体のアッセイを行うことができ、一般に医師又はユーザのために手作業の時間及び診断プロセス時間を著しく短縮するという利益が得られる。このため、本発明のＳＣＤにおいて複数の免疫試薬を用いることができ、該複数は特異的プローブ集団を含み、標識部及び捕捉部分にそれぞれ結合する特異的結合因子を含む。典型的に、複数の免疫試薬は多数の集団を含み、各々は複数内の他の集団と比較して異なる検体に対して特異的である。例えば、複数の免疫試薬は、１つの病原体のいくつかのタイプ（例えばインフルエンザＡ型、Ｈ５Ｎ１型、及びＨ１Ｎ１型）又はいくつかの異なる病原体（例えばインフルエンザＡ型、インフルエンザＢ型、及びＲＳＶ）に対して特異的とすることができる。
【０１６４】
[00183]  本開示の装置及び方法を用いて様々な検体のアッセイを行うことができる。試料内の１つ以上の対象である検体のアッセイを行うために有用な特定の装置では、対象の検体の収集物をパネルと称することができる。例えば、パネルは、インフルエンザＡ型、インフルエンザＢ型、インフルエンザＡサブタイプ、ＲＳＶ（respiratory syncytial virus）、アデノウイルス、及び／又は異なるタイプのパラインフルエンザウイルス（例えばタイプ１、２、３等）の任意の組み合わせを含むことができる。別のパネルは、例えば、肺炎連鎖球菌、マイコプラズマ肺炎、及び／又はクラミジア肺炎を含む上部呼吸器感染の１つ以上の選択されたものを含むことができる。更に別のパネルは、例えばクラミジア、トリコモナス、及び／又は淋病によって生じる疾病を含む性行為で伝染する疾病の診断用に考案することができる。それぞれの場合において、本明細書に記載したように、特定の検体シリーズについてＴＤ上に信号を提供するように考案したＳＣＤに検出プローブ及び捕捉プローブの異なるセットを組み込むことによって、特定のパネルが容易に得られる。従って、特定のＳＣＤは、特定の検体パネルを検出するために必要な全ての試薬を提供する。いくつかの実施形態では、対象の検体に対しては特異的でないがＳＣＤから供給された検体−結合因子に対して特異的である結合パートナーを含む検出試薬を有する試験ストリップを採用するＴＤを用いて、検体を検出する。このため、異なる検体パネルのための免疫試薬を含むＳＣＤと共に単一のＴＤを用いることができ、効率の上昇及びコスト有効性を達成する。他の実施形態では、広範囲ＴＤは、例えばＨＩＶ及びＨＣＶ抗原の検出、ＨＩＶ及び結核、インフルエンザＡ型、Ｂ型、及びＡ型のサブタイプ、バクテリア及びウイルス感染のような、関連するか又は別個の病原体からのいくつかの検体シリーズに対する非特異的捕捉プローブを含むことができる。
【０１６５】
[00184]  例えばパネルは、ＳＡＲＳ関連のコロナウイルス、インフルエンザＡ型を含む様々な対象の検体を任意に含むことができる。肝炎パネルは、Ｂ型肝炎の表面Ａｇ又はＡｂ、Ｂ型肝炎コアＡｂ、Ａ型肝炎ウイルスＡｂ、及びＣ型肝炎ウイルスの選択を含む。リン脂質パネルは、抗カルジオリピンＡｂｓ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＭアイソタイプ）の選択を含む。関節炎パネルは、リューマチ要因、抗核抗体、及び尿酸の選択を含む。エプスタインバーパネルは、エプスタインバー核Ａｇ、エプスタインバーウイルスキャプシドＡｇ、及びエプスタインバーウイルス、初期抗体の選択を含む。他のパネルは、ＨＩＶパネル、尋常性狼瘡パネル、ヘリコバクターピロリパネル、トキソプラズマパネル、ヘルペスパネル、ボレリア菌パネル、風疹パネル、サイトメガロウイルスパネル、トロポニンのアイソタイプと共にミオグロビン及び／又はＣＫＭＢ及び多くの他のものを含む検体を用いた最近の心筋梗塞の試験パネルを含む。本明細書に開示した装置を用いた免疫アッセイによって様々なパネルのアッセイを実行可能であることは当業者には理解されよう。免疫アッセイ方法は当技術分野において既知である。例えば、CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY（Coligan, John E等、１９９９年）を参照のこと。
【０１６６】
[00185]  当業者に既知の多数の分析装置を、多数の検体を検出するように適合させることができる。一例として、計量棒、側方流動及びフロースルー装置、特に免疫アッセイであるものを、多数の検体を検出し区別するために、本発明に従って変更することができる。例示的な側方流動装置は、米国特許第４，８１８，６７７号、第４，９４３，５２２号、第５，０９６，８３７号（ＲＥ３５，３０６）、第５，０９６，８３７号、第５，１１８，４２８号、第５，１１８，６３０号、第５，２２１，６１６号、第５，２２３，２２０号、第５，２２５，３２８号、第５，４１５，９９４号、第５，４３４，０５７号、第５，５２１，１０２号、第５，５３６，６４６号、第５，５４１，０６９号、第５，６８６，３１５号、第５，７６３，２６２号、第５，７６６，９６１号、第５，７７０，４６０号、第５，７７３，２３４号、第５，７８６，２２０号、第５，８０４，４５２号、第５，８１４，４５５号、第５９３９，３３１号、第６，３０６，６４２号に記載されたものを含む。流体試料における多数の検体の区別可能な検出に用いるために変更可能である他の側方流動装置は、米国特許第４，７０３，０１７号、第６，１８７，５９８号、第６，３５２，８６２号、第６，４８５，９８２号、第６，５３４，３２０号、及び第６，７６７，７１４号を含む。例示的な計量棒装置は、米国特許第４，２３５，６０１号、第５，５５９，０４１号、第５，７１２，１７２号、及び第６，７９０，６１１号に記載されたものを含む。上述の特許は２つ以上のアッセイ構成を開示する場合があり、多くの場合はそうであり、かかる追加の開示についても同様に本明細書において引用されることは当業者には認められよう。好都合なことに、本明細書に記載した改良は、様々なアッセイ、特に免疫アッセイ構成に適用可能である。
【０１６７】
[00186]  本発明のＳＣＤ又はＴＤは、既存の検体検出システムと共に用いるように構成することができる。例えば、本発明のＳＣＤは、既存のＴＤと共に用いるように構成することができる。又は、既存のＴＤは、ＴＤについての本明細書における開示に従って構成／変更することができる。かかる方法で変更することができるいくつかの例示的な装置は、計量棒、側方流動、カートリッジ、多重化、マイクロタイタープレート、マイクロ流体、プレート又はアレイ又はハイスループットプラットフォームを含み、例えば、米国特許第４，２３５，６０１号、第４，６３２，９０１号、第５，５５９，０４１号、第５，７１２，１７２号、及び第６，７９０，６１１号、第６，４４８，００１号、第４，９４３，５２２号、第６，４８５，９８２号、第６，６５６，７４４号、第６，８１１，９７１号、第５，０７３，４８４号、第５，７１６，７７８号、第５，７９８，２７３号、第６，５６５，８０８号、第５，０７８，９６８号、第５，４１５，９９４号、第６，２３５，５３９号、第６，２６７，７２２号、第６，２９７，０６０号、第７，０９８，０４０号、第６，３７５，８９６号、第４，８１８，６７７号、第４，９４３，５２２号、第５，０９６，８３７号（ＲＥ３５，３０６）第５，０９６，８３７号、第５，１１８，４２８号、第５，１１８，６３０号、第５，２２１，６１６号、第５，２２３，２２０号、第５，２２５，３２８号、第５，４１５，９９４号、第５，４３４，０５７号、第５，５２１，１０２号、第５，５３６，６４６号、第５，５４１，０６９号、第５，６８６，３１５号、第５，７６３，２６２号、第５，７６６，９６１号、第５，７７０，４６０号、第５，７７３，２３４号、第５，７８６，２２０号、第５，８０４，４５２号、第５，８１４，４５５号、第５，９３９，３３１号、及び第６，３０６，６４２号に開示されたもの等である。流体試料における多数の検体の区別可能な検出に用いるために変更可能である他の側方流動装置は、米国特許第４，７０３，０１７号、第６，１８７，５９８号、第６，３５２，８６２号、第６，４８５，９８２号、第６，５３４，３２０号、及び第６，７６７，７１４号、第７，０８３，９１２号、第５，２２５，３２２号、第６，７８０，５８２号、第５，７６３，２６２号、第６，３０６，６４２号、第７，１０９，０４２号、第５，９５２，１７３号、及び第５，９１４，２４１号を含む。例示的なマイクロ流体装置は、米国特許第５，７０７，７９９号、第５，８３７，１１５号、及びＷＯ２００４／０２９２２１号に開示されたものを含む。前出の特許開示の各々は参照によりその全体が本願に含まれるものとする。
【０１６８】
[00187]  一実施形態において、図１２を参照すると、ユーザはサンプリングアセンブリ１２５０上で試料収集用具（例えば綿）を用いて標本を収集し、次いでこれを試料受容管１２２０に挿入する。次いで、試料受容管１２２０の開いた近位端に上部チャンバ１２２５をプレス嵌めする。ユーザは、試料収集管の外側で１つ以上の指標５０５、５１０の存在を目で見て調べることによって、上部チャンバ１２２５を試料受容管１２２０に適正に取り付けたことを確認する。一実施形態では、試料受容管１２２０の外側から指標５１０のみが見える場合には、上部チャンバ１２２５は適正に取り付けられ、加圧封止が形成されている。いったん試料収集装置１２１０の上部チャンバ１２２５を試料受容管１２２０の近位端にプレス嵌めして加圧封止ユニットを形成したら、抽出試薬１２６０を収容する抽出試薬チャンバ１２５５のバルブ１２６７を、例えば強く握って又はパチンと動かして開き、抽出試薬１２６０は上部チャンバ１２２５から出て試料管１２２０内へと移動する。上部チャンバは別の隔室又は球部１２５７を含むことができ、これは手作業で操作されることで上部チャンバの隔室のいずれかから内容物を放出することができる。一実施形態では、ＳＣＤにおける抽出試薬は、破壊可能／破裂可能基体（例えばアンプル）内に収容されている。封止膜又はボタンに圧力を加えるとアンプルが破壊され、その内容物が放出される。抽出試薬１２６０は、下部チャンバ１２３０に収容されメッシュ膜１２７５によって保持された凍結乾燥試薬ビード１２８０を元の状態に戻し、サンプリング用具１２５０を濡らし、該用具から試料を抽出する。これは、場合によっては、例えばユーザがＳＣＤ１２１０を迅速に振り動かすこと又は他の攪拌によって促進される。元の状態に戻った試薬ビード１２８０及び抽出された試料が反応し、抽出された試薬内の対象の検体が捕捉プローブと結合して免疫複合体を形成するようになっている。この複合体は、そのままＴＤによって検出することができる。
【０１６９】
[00188]  次いで、例えばＳＣＤ１２１０のアセンブリの間に閉じ込められたかもしくは蓄積された圧力又は重力流を用いることによって、免疫複合体を含む抽出試料をＳＣＤ１２１０からＴＤ１２１５内に分配する。ＳＣＤ１２１０の分配先端部１２７０をＴＤ１２１５のポート１２３５に挿入して、カニューレ１００５が、試料受容管１２２０の分配先端部１２７０に及ぶ隔壁８８５の分割部分８９０内に挿入されて流路を生成するようになっている。蓄積された圧力及び／又は重力により、流体試料は流路を通ってＴＤ１２１５内へと向かう。ポート１２３５は、ＴＤ１２１５における側方流動膜等の試験ストリップ１２６５と流体連通の状態にある。試験ストリップ１２６５の試験ゾーンは、試験装置のハウジング１２４０の上面に設けられた開口又はウィンドウ１２９０を通して目に見える。隔壁１０８５からカニューレ１００５が取り外された場合、分割部分１０９０によって、こぼれ、浮遊粒子、又は汚染が防止される。流体試料内の免疫複合体は、側方流動膜１２６５上の所定のライン又はスポットにおいて結合又はハイブリダイズする。検出プローブは（それに含まれる結合標識によって）、検出可能信号を提供し、後にこれを（スキャン装置又は読み取り装置によって等）読み取ることで、試料にどの検体が存在するかを判定する（例えば試験装置上の１つ以上の画定ラインにおける検出可能信号の存在を検出することによって）。
【０１７０】
[00189]  読み取り装置
【０１７１】
[00190]  本明細書に記載するシステム及び方法は、読み取り装置と組み合わせる免疫アッセイ装置を含むことができ、特にこれは、反射率及び／又は蛍光ベースの読み取り装置等の内臓コンピュータを有する読み取り装置である。また、かかる読み取り装置は、データ整理及び曲線当てはめアルゴリズムを用いたデータ処理ソフトウェアを含むことができ、任意に、生物試料における検体の存在及び／又は濃度を正確に判定するための学習後のニューラルネットワークと組み合わせる。本明細書において用いる場合、読み取り装置とは、ＴＤに含まれる試験ストリップ上にあるもの等のデータを検出及び／又は量子化するための機器のことである。データは肉眼で見ることができるが、目に見えることは必須ではない（例えば放射性、非可視の蛍光エミッタ）。これらの方法は、患者の試料に免疫アッセイを実行する工程と、反射率及び／又は蛍光ベースの読み取り装置を用いてデータを読み取る工程と、データ整理を利用するデータ処理ソフトウェアを用いて得られたデータを処理する工程と、を含むことができる。好適なソフトウェアは、曲線当てはめアルゴリズムを含み、任意に学習後のニューラルネットワークと組み合わせて、所与の試料における検体の存在又は量を求める。次いで、読み取り装置から取得されたデータを医療診断システムによって更に処理して、医療状況のリスク査定又は診断を出力として提供する。代替的な実施形態では、この出力を、かかるデータを評価するように学習されたニューラルネットワーク等の以降の決定支持システムに対する入力として用いることができる。
【０１７２】
[00191]  様々な実施形態において、読み取り装置は、ＴＤから検出される信号に応じて、反射率、伝送、蛍光、化学−生物発光、磁気、又は電流測定読み取り装置（又は２つ以上の組み合わせ）とすることができる。（例えばLRE Medical（米国））。一実施形態では、読み取り装置は、ＴＤを受容するように設計された受容ポートを含むが、試料導入穴の上流の変形可能な（例えば押しボタン）手段を押すことによって受容ポート内にＴＤを嵌合可能となった場合に、単に受容ポート内にＴＤを挿入することができる。このため、かかる実施形態において、溶液貯蔵室の内容物（例えば洗浄緩衝液）が放出された場合にのみＴＤは読み取り装置に配置されて、試料がＴＤに含まれる側方流動膜を「通って流れた」ことを確実とする。
【０１７３】
[00192]  一実施形態において、読み取り装置は、蛍光信号を検出するＵＶ  ＬＥＤ読み取り装置である。蛍光信号は、光学スペクトルのＵＶ領域において蛍光信号の吸収ピーク内で発光する（例えばランタニド標識）発光ダイオードによって励起される。発光された蛍光信号はフォトダイオードによって検出され、検出された信号の波長は、迷走（stray）発光を阻止して蛍光発光標識のピーク発光波長及びその周辺の波長の光を受容するロングパスフィルタを用いて制限することができる。他の実施形態では、ロングパスフィルタをバンドパスフィルタに換えることができる。更に、励起光はバンドパスフィルタによって制限することができる。別の実施形態では、ダイオードはＵＶレーザダイオードである。任意の従来のＵＶ、ＬＥＤ、又はフォトダイオードを用いることも可能である。
【０１７４】
[00193]  かかる実施形態のいずれにおいても、励起源及び検出器は単一の機械又は成形ブロックに搭載することができる。試験ストリップ上に発生された蛍光信号の読み取りを簡略化するためである。更に別の実施形態では、かかる機械はハード標準を含む。
【０１７５】
[00194]  一実施形態では、励起光の軸はＴＤ又はＴＤに含まれる試験ストリップに対して９０度である。更に、発光軸は試験ストリップに対して９０度以外の角度である。
【０１７６】
[00195]  一実施形態では、励起光の波長はショートパスフィルタによって制限される。更に別の実施形態では、励起光の波長はバンドパスフィルタ及びショートパスフィルタの組み合わせによって制限される。更に別の実施形態では、検出された光の波長はバンドパスフィルタ及びロングパスフィルタの組み合わせによって制限される。読み取り装置は、本明細書に記載した信号発信器及び／又は標識のいずれかを検出するように構成することができる。一実施形態では、標識は本明細書に記載したランタニドのいずれかである。更に別の実施形態では、用いるランタニドはユーロピウムである。
【０１７７】
[00196]  本明細書に示したように、一実施形態では、読み取り装置は１つ以上のハード標準を含むように構成される。このため、読み取り装置は、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、２．５、又は３ｍｍ規格を保持する用具（例えばジグ）を提供するように機械加工することができる（例えば本明細書に記載したようなアクリル樹脂に収容する）。この規格は、約３、４、５、又は６ｍｍセンターを中心に配置される（例えば図５を参照のこと）。
【０１７８】
[00197]  一実施形態において、読み取り装置はＴＤのための受容ポートを用いて改造され、これ自体は安全措置手段を用いて構成することができる。一実施形態では、押しボタンが押されていない場合、読み取り装置はＴＤを受容するが処理は行わない。又は、洗浄緩衝液対照によって正の信号が生じていない場合、読み取り装置はＴＤを受容しこれを読み取るがその結果を拒否する。この後者の実施形態では、試料の上流に配置された隔室／袋に収容された洗浄／ランニング緩衝液は、読み取り装置が検出するようにプログラムされた対照信号（例えば異なる波長で発信する標識）を含むことができる。
【０１７９】
[00198]  読み取り装置によって取得された信号は、データ整理及び曲線当てはめアルゴリズムを利用したデータ処理ソフトウェアを用いて処理され、任意に学習されたニューラルネットワークと組み合わせて、各試験ラインについて陽性の結果もしくは陰性の結果のいずれかを与えるか、又は試料内の各検体の定量的判定を与える。これは、疾病又は障害のリスク又は存在を示す結果と相関している。この結果は任意に、決定支持システムに入力し、処理を行って医療状況のリスクの高度な査定を出力として与えることができる。一実施形態では、手順の全体を自動化及び／又はコンピュータ制御とすることができる。
【０１８０】
[00199]  多検体ポイントオブケアシステム
【０１８１】
[00200]  迅速インフルエンザ試験は何年にもわたって販売されている。これらの試験のほとんどは、視覚化薬剤として金又はラテックスのいずれかを用いる側方流動免疫アッセイ試験である。新しい迅速免疫アッセイのほとんどはインフルエンザＡ型とインフルエンザＢ型とを区別することができるが、それらのうち、１つの試験ストリップ上にＡ型及びＢ型の双方の試験ラインを有するものはわずかしかない。しかしながら、これらの試験の中に、インフルエンザＡ型のサブタイプを区別するように設計されたものは無い。従って、これらの試験は鳥インフルエンザを検出することができるが、これらはどれも、季節性インフルエンザＡ型ウイルス又は鳥インフルエンザと呼ばれるＨ５Ｎ１型（又は現時点で潜在的なパンデミックのインフルエンザＡ型のサブタイプ）等のもっと重篤なＡ型サブタイプのいずれに患者が感染しているのかを明らかにすることができない。また、これらの試験は、Ｈ１Ｎ１型等の豚インフルエンザも検出することができる。本発明は、適用した場合に再現性が向上した高感度のアッセイを提供し、Ａ型、Ｂ型を検出すると共にサブタイプＨ５Ｎ１型又はＨ１Ｎ１型と季節性インフルエンザ（サブタイプＨ１及びＨ３）とを区別することができるという概念で設計され、使用が簡単である。本明細書において記載したように、試料を結合体と予め混合すること、バックグラウンドを軽減するために追跡又は洗浄緩衝液を用いること、高感度で多数の検体検出を可能とする固有の汎用捕捉試薬ｐＲＮＡ、高感度である蛍光標識を用いること等、新しい装置設計と共に多数の新しい技術を適用するための取り組みが行われている。これらの手法の組み合わせによって、新規で極めて効果的なインフルエンザ迅速試験が可能となる。この試験は、著しく高感度であり、低コスト生産が可能であり、動作が容易で、季節性インフルエンザとパンデミック鳥インフルエンザＨ５Ｎ１型又は豚インフルエンザＨ１Ｎ１型（例えば２００９Ｈ１Ｎ１型）とを区別することができる。
【０１８２】
[00201]  アッセイ方法
【０１８３】
[00202]  一実施形態において、アッセイ方法は、被検体又は被検体の生物試料にサンプリング用具を適用して試料を収集する工程（例えば鼻、口、のど、耳の内部のスワブ収集、被検体から取得した生物試料に対するサンプリング要素の適用）と、収集用具を試料収集装置収容チャンバに挿入する工程と、試料収集装置に溶液を塗布する工程（例えば上部チャンバを強く握ってスナップバルブを破壊し緩衝液がサンプリング用具に流れるようにし、そこに配置された生物試料を浸すことによって）と、緩衝液及び試料の混合物を混合又は試薬チャンバ（例えば下部チャンバ）に流し、ここで複数の捕捉プローブ及び検出プローブが特異的標的検体と結合する工程と、を含む。これに続いて又は同時に、混合物をＳＣＤの遠位端からＴＤ内に放出する。ＴＤは、捕捉プローブに結合された相補的捕捉部分を介して、検体及び検出／捕捉プローブの複合体を捕捉するように設計された１つ以上の固定化パートナー捕捉部分を含む。このため、１つの特定の検体のための特定の捕捉プローブは、固定化パートナー捕捉部分に対して相補的であるように設計されている。更に、本明細書において開示したように、パートナー捕捉部分は試験装置上で（例えば側方流動膜）別個の位置／パターン／ゾーンに配置され、ここで、信号ライン又はスポットが信号発信標識によって検出された場合、特定の検体の定性的及び／又は定量的検出が可能となる。従って、試験装置上に特定のパートナー捕捉プローブを倣うことによって、アッセイ方法は本明細書において開示したように、同一のもしくは関連する感染因子又は非関連の感染因子も検出することができる。
【０１８４】
[00203]  いくつかの実施形態において、サンドイッチ免疫アッセイフォーマットを利用するが、競合アッセイを含む任意の従来のフォーマットを用いることも可能である。試験ストリップに実行されるサンドイッチ免疫アッセイの例は、米国特許第４，１６８，１４６号及び第４，３６６，２４１号に記載されている。これらの各々は参照により本願に含まれるものとする。競合免疫アッセイ装置の例は、米国特許第４，２３５，６０１号、第４，４４２，２０４号、及び第５，２０８，５３５号によって開示されたものである。これらの各々は参照により本願に含まれるものとする。競合免疫アッセイに適合可能であるいくつかの追加の例示的な装置は、計量棒、側方流動、カートリッジ、多重化、マイクロタイタープレート、マイクロ流体、プレート又はアレイ又はハイスループットプラットフォームを含み、例えば、米国特許第６，４４８，００１号、第４，９４３，５２２号、第６，４８５，９８２号、第６，６５６，７４４号、第６，８１１，９７１号、第５，０７３，４８４号、第５，７１６，７７８号、第５，７９８，２７３号、第６，５６５，８０８号、第５，０７８，９６８号、第５，４１５，９９４号、第６，２３５，５３９号、第６，２６７，７２２号、第６，２９７，０６０号、第７，０９８，０４０号、第６，３７５，８９６号、第７，０８３，９１２号、第５，２２５，３２２号、第６，７８０，５８２号、第５，７６３，２６２号、第６，３０６，６４２号、第７，１０９，０４２号、第５，９５２，１７３号、及び第５，９１４，２４１号に記載されたもの等である。例示的なマイクロ流体装置は、米国特許第５，７０７，７９９号及びＷＯ２００４／０２９２２１号に開示されたものを含む。
【０１８５】
[00204]  一般に、かかるアッセイにおいて用いられるトレーサは、検体の尺度としてアッセイの結合部分分及び／又は自由部分におけるトレーサを確定するために、トレーサの器具及び／又は処置を必要とする。例えば、トレーサのための標識又はマーカーとして酵素を用いるアッセイでは、適切な現像剤を用いて酵素を現像しなければならない。標識又はマーカーが蛍光材料である場合、蛍光を確定するために適切な器具を用いることによって結合部分分及び／又は自由部分におけるトレーサを確定する。
【０１８６】
[00205]  あるいは、アッセイにおいて用いられるトレーサは、支持上の結合因子に結合された場合又は支持上の結合因子に結合された検体に結合された場合に目に見えるようになる特定の標識を付けられたリガンドであり、それ以上の処置は必要なく、この場合、リガンドは結合因子又は検体のいずれかによって結合される。また、米国特許第４，７０３，０１７号も参照されたい。この特許は参照により本願に含まれるものとする。
【０１８７】
[00206]  別の特定の態様においては、非核酸ベースのスクリーニング試験は、任意の固体相、側方流動、又はフロースルー試験を含む。一般に、固体相免疫アッセイ装置は固体支持を組み込んでおり、これに対して、リガンド−レセプタ対の一方の要素（通常は抗体、抗原、又はハプテン）が結合する。固体支持の一般的な初期の形態は、ポリスチレンのプレート、管、又はビードであり、これらは放射線免疫アッセイ及び酵素免疫アッセイの分野において既知であった。より最近では、ナイロン、ニトロセルロース、セルロースアセテート、ガラス繊維、及び他の多孔性ポリマー等の多数の多孔性材料が固体支持として用いられている。
【０１８８】
[00207]  一実施形態において、試料はサンプリング用具によって被検体から収集され、ＳＣＤ装置のシリンダハウジングに入れられる。ＳＣＤは最初にＴＤに挿入することができ、又は、ＴＤに挿入する前にＳＣＤの上部チャンバに収容した溶液を放出して試料及び溶液を混合又は試薬チャンバへと洗い流す。混合又は試薬チャンバには、本明細書に開示したような１つ以上の異なる検体を標的とする検出プローブ及び捕捉プローブを含む液体又は固体の試薬を配置することができる。混合されると、検体が存在する場合には、検出及び捕捉プローブに結合された検体の複合体が形成される。次いで試料は、ＳＣＤとＴＤとの間の接点を外側環境から封止する（例えば任意のこぼれ、浮遊粒子、又は汚染を防ぐ）穴を通ってＳＣＤからＴＤに放出される。試料混合物は、ＳＣＤにおける重力又は空気圧の力の結果として（例えば上部封止チャンバを圧搾する）、ＴＤ内へと流れることができる。試料は毛管力及び／又はＴＤに存在する緩衝液によって動かされて、検体−プローブ複合体が、ＴＤに含まれる（例えば側方流動膜の上の）検出ゾーンを通過できるようになっている。捕捉プローブ及び相補的な固定化捕捉部分は、（例えば側方流動膜上の所定のライン又はスポットにおいて）相互に結合又はハイブリダイズされ、これによって検出プローブは（その上に含まれる結合標識によって）検出可能な信号を提供する。この信号を後に読み取って、処理した試料にどの検体が存在したかを判定することができる。
【０１８９】
[00208]  一実施形態において、処理した試料が配されたＴＤは、結果を読み取る前に約１、２、３、４、５、６、又は８時間にわたって放置することができ、それにもかかわらず、処理の１５又は２０分後に読み取ったように正確に結果を与える。このように、生成された信号は長時間にわたって安定しているので、結果の読み取りは試験が実際に行われてから相当に後の時点で行われる場合がある。これはポイントオブケア診断にとって大きな改善である。この分野では、多くの場合に存在する条件によって労働力及び時間におけるリソースが限定され、試験のセッティングは、容易又は迅速にアクセスされない遠隔領域にある場合がある。
【０１９０】
[00209]  結合試薬
【０１９１】
[00210]  本発明の１つの態様は、複数の異なる検体結合セットを含む本発明のＳＣＤを対象とする。特定の各検体結合セットは同一の標的検体に結合するように構成され、異なる検体結合セットは異なる標的検体に結合してこれを検出するように設けられている。例えば、ＳＣＤは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の検体結合セットを含むことができ、各セットは、ＳＣＤに存在する任意の他のセットに比べ、異なる標的検体に対して特異的である。従って、同一の標的検体を標的とする検体結合セットは、（１）捕捉プローブであって、（ｉ）標的検体と結合する特異的な結合因子及び（ｉｉ）捕捉部分パートナー（例えばｐＲＮＡ）を含む捕捉プローブと、（２）検出プローブと、を含む。また、「検出プローブ」（「標識プローブ」と称する場合もある）は、同一の標的検体と結合することができ、検出可能標識に結合されている。
【０１９２】
[00211]  一実施形態において、捕捉プローブ標的結合体の捕捉部分パートナーは、例えば試験装置において側方流動膜上に存在する結合パートナーのような固定化結合パートナーと結合することができる。
【０１９３】
[00212]  一実施形態において、検出プローブは、検出可能標識に（直接又は間接に）結合された検体特異的結合因子を含み、標的を含む試料に接触すると、標的検体と共に複合体を形成する。更に、捕捉プローブは、同様に同一の標的検体と結合し、これによって検出プローブ−標的検体−捕捉プローブ複合体を形成する。次いで、かかる複合体は、捕捉プローブ上に存在するＣＭＰに特異的に結合することができる固定化捕捉部分パートナーによって固体支持上で固定化（「捕捉」）することができる。結果として得られた複合体は、固体支持上で固定化され、検出可能標識によって検出される。
【０１９４】
[00213]  一実施形態において、ＳＣＤは複数の異なる検体結合セットを含み、各セットは、標的検体と結合することができる検出プローブ及び捕捉プローブを含む。標的検体は、感染因子、疾病を引き起こす微生物、又はその成分（例えば抗原、ポリペプチド、核酸）を含む。
【０１９５】
[00214]  様々な実施形態において、ＴＤは、試験基体上に個別に位置付けられた１つ以上のアドレス指定可能ライン（又は試験ゾーン）を含み、各試験ゾーンは、異なるタイプの感染因子又は疾病を引き起こす微生物、又はその成分を検出するように構成されている。
【０１９６】
[00215]  別の実施形態では、１つ以上の試験ゾーンは、同一の感染因子の１つ以上の異なるタイプ又はサブタイプを検出するように構成されている。本明細書において用いる場合、試験ゾーンの文脈において、「構成されている」という用語は、任意の１つのアドレス指定可能ラインにおけるＩＣＭＰが、試験ゾーンの標的検体と結合するように設計された検体結合セットの検出プローブに存在する同種のＣＭＰと特異的に結合可能であることを意味する。
【０１９７】
[00216]  一実施形態において、ＴＤは複数のアドレス指定可能ラインを含み、少なくとも２つの隣接したアドレス指定可能ラインは異なるカテゴリのＣＭＰを含む。別の実施形態では、ＴＤは複数のアドレス指定可能ラインを含み、少なくとも２つのアドレス指定可能ラインはｐＲＮＡであるＣＭＰを含み、少なくとも１つのアドレス指定可能ラインはアビジン又はストレプトアビジンを含む。例えば、ｐＲＮＡはＣＭＰの同一のタイプ又はカテゴリであり、ｐＲＮＡ及びアビジン／ビオチンは異なるカテゴリのＣＭＰを表す。抗原／抗体対等の他の特異的結合パートナーを含む他のカテゴリのＣＭＰを利用することも可能であり、この場合、抗原は対象の検体とは異なる。
【０１９８】
[00217]  一実施形態において、試験ストリップは１つ以上のアドレス指定可能ラインも含み、これはアッセイが適正に機能していることを判定するための制御ラインとして機能する。一実施形態では、制御ラインには、捕捉プローブに含まれる検体特異的結合因子と特異的に結合する抗体が配置されている。一例では、制御ライン上に配置された抗体はウサギ抗マウス抗体であり、捕捉プローブにおける抗体は対象の検体に対して調製されたマウス抗体である。
【０１９９】
[00218]  いくつかの実施形態において、検体結合セットは抗体対を含み、この対の各抗体要素は同一の標的検体と特異的に結合することができる。一方の抗体は捕捉プローブにおける標的抗体であり、他方は検出プローブにおける検出抗体である。各抗体は抗原の異なるエピトープと結合するので、各々は同時に同一の検体／抗原と結合して「サンドイッチ」を形成することができる。
【０２００】
[00219]  抗原及び抗体特異的結合対要素に加えて、他の特異的結合対は、限定でない例として、ビオチン及びアビジン、炭水化物及びレシチン、相補的ヌクレオチド配列、相補的ペプチド配列、エフェクタ及びレセプタ分子、酵素共因子及び酵素、酵素阻害物質及び酵素、ペプチド配列又は化学部分（chemical moiety)（ジゴキシン／抗ジゴキシン）及びこの配列、化学部分、又は全タンパクに特異的な抗体、ポリマー酸及び塩基、染料及びタンパク結合因子、ペプチド及び特異的タンパク結合因子（例えばリボヌクレアーゼ、Ｓ−ペプチド、及びリボヌクレアーゼＳ−タンパク）、金属及びそれらのキレート化合物等を含む。更に、特異的結合対は、元の特異的結合要素の類似体である要素を含むことができる。例えば、組み換え技術又は分子工学によって生成された検体類似体又は特異的結合要素である。
【０２０１】
[00220]  抗体
【０２０２】
[00221]  様々な実施形態において、本発明の捕捉プローブ及び検出プローブの特異的結合因子は、抗体又はその機能的フラグメントとすることができる標的検体特異的結合部分を含む。
【０２０３】
[00222]  他の実施形態では、ＩＣＭＰは、捕捉プローブの成分として用いられる抗原に対して特異的な抗体であり、抗原は固定化抗体のための同種ＣＭＰとして機能する。
【０２０４】
[00223]  抗体を用いた場合、これは、単クローン又は多クローンの抗体、組み換えタンパク質又は抗体、キメラ抗体、それらの混合物又はフラグメント、並びに抗体及び他の特異的結合要素の混合物とすることができる。検出分子内に組み込むことができる結合対の他の例は、例えば米国特許第６，９４６，５４６号、第６，９６７，２５０号、第６，９８４，４９１号、第７，０２２，４９２号、第７，０２６，１２０号、第７，０２２，５２９号、第７，０２６，１３５号、第７，０３３，７８１号、第７，０５２，８５４号、第７，０５２，９１６号、及び第７，０５６，６７９号に開示されている。
【０２０５】
[00224]  「抗体」とは、免疫グロブリン遺伝子又は複数の免疫グロブリン遺伝子、又はそのフラグメントによって実質的にコードされたポリペプチドのことであり、特異的な抗原と結合する単クローン抗体、多クローン抗体、多重特異性又は二重特異性抗体を含む任意の免疫グロブリンを含む。完全な抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。各重鎖は１つの可変領域及び第１、第２、及び第３の定常領域から成り、各軽鎖は１つの可変領域及び１つの定常領域から成る。抗体は「Ｙ」形状を有し、Ｙの幹部は、ジスルフィド結合によって結合された２つの重鎖の第２及び第３の定常領域から成る。Ｙの各腕部は、単一の軽鎖可変領域及び定常領域に結合された単一の重鎖可変領域及び第１の定常領域から成る。軽鎖及び重鎖可変領域は抗原結合を担う。双方の鎖の可変領域は一般に３つの高度に可変のループを含み、これらは相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる（軽い（Ｌ）鎖のＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、重い（Ｈ）鎖のＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む）（Kabat等の「Sequences of Proteins of Immunological Interest」、第５版（１９９１年）、第１〜３巻（NIH Publication９１〜３２４２、メリーランド州ベセスダ）によって定義された）。３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られる側面間に挿入されている。ＦＲはＣＤＲよりいっそう保護され、非常に変わりやすいループを支持するための足場を形成する。重鎖及び軽鎖の定常領域は抗原結合には関与しないが、様々なエフェクタ機能を示す。認識されている免疫グロブリン遺伝子は、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、及びミュー定常領域、並びに多数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。軽鎖はカッパ又はラムダのいずれかに分類される。重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、又はイプシロンとして分類され、これらは免疫グロブリンクラスを定義し、サブクラスはＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＡ１、又はＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥを含む。典型的に、抗体は、表面上又は空洞内に、別の分子の特定の空間的な極性の組織と特異的に結合する領域を有し、このためそれと相補的であると定義される免疫グロブリンである。抗体は、多クローン又は単クローンとすることができる。抗体は、完全な免疫グロブリン又はそのフラグメントを含む場合がある。そのフラグメントは、Ｆａｂ、Ｆｖ、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’等を含むことができる。また、抗体は、組み換え方法によって生成されたキメラ抗体又はそのフラグメントを含むことができる。抗体は、重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の主なクラスは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭであり、これらのクラスのいくつかはサブクラスに分割される。
【０２０６】
[00225]  無損傷の免疫グロブリンに加えて、本明細書で用いる「抗体」という用語は更に、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、単鎖抗体分子、１つ以上のＣＤＲを含む免疫グロブリン分子のフラグメントから形成された多重特異性抗体等、免疫グロブリンのフラグメントのことを指す（すなわち免疫グロブリンの少なくとも１つの免疫学的にアクティブな部分）。更に、本明細書で用いる場合、抗体は、１つ以上の異なるヒト免疫グロブリンからのフレームワーク領域にグラフトした特定のヒト免疫グロブリンからの１つ以上のＣＤＲを含むことができる。
【０２０７】
[00226]  抗体に関して「Ｆａｂ」は、ジスルフィド結合によって単一の重鎖可変領域及び第１の定常領域に結合された単一の軽鎖（可変領域及び定常領域の双方）から成る抗体の部分のことである。
【０２０８】
[00227]  「Ｆａｂ’」は、ヒンジ領域の部分を含むＦａｂフラグメントのことである。
【０２０９】
[00228]  抗体に関して「Ｆｃ」は、ジスルフィド結合によって第２の重鎖の第２及び第３の定常領域に結合された第１の重鎖の第２及び第３の定常領域から成る抗体の部分のことである。抗体のＦｃ部分は、様々なエフェクタ機能を担うが、抗原結合においては機能しない。
【０２１０】
[00229]  抗体に関して「Ｆｖ」は、完全な抗原結合部分位を生じるための抗体の最小フラグメントのことである。Ｆｖフラグメントは、単一の重鎖可変領域に結合された単一の軽鎖可変領域から成る。
【０２１１】
[00230]  「単鎖Ｆｖ抗体」又は「ｓｃＦｖ」は、直接又はペプチドリンカー配列（Houston、１９８８年）によって相互に接続した軽鎖可変領域及び重鎖可変領域から成る遺伝子工学で生成された抗体のことである。
【０２１２】
[00231]  「単鎖Ｆｖ−Ｆｃ抗体」又は「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」は、抗体のＦｃ領域に接続されたｓｃＦｖから成る遺伝子工学で生成された抗体のことである。
【０２１３】
[00232]  本明細書で用いる場合、「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の原子及び／又はアミノ酸の群のことである。
【０２１４】
[00233]  本明細書で用いる場合、「単クローン抗体」という用語は、実質的に同種な抗体集団から取得された抗体又はそのフラグメントのことである。すなわち、その集団を含む個々の抗体は、少量だけ存在し得る天然の突然変異体を除いて同一である。単クローン抗体は、高度に特異的であり、抗原上の単一のエピトープに対するものである。単クローン抗体は、典型的に抗原上の異なるエピトープに対する異なる抗体を含む多クローン抗体とは対照的である。単クローン抗体は従来ハイブリドーマに由来するが、単クローン抗体はそれらの生成方法によって限定されない。例えば、単クローン抗体は、最初にKohler等によって記載されたハイブリドーマ方法（Nature、２５６：４９５、１９７５年）によって生成することができ、又は、組み換えＤＮＡ方法によって生成することも可能である（例えば米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）。
【０２１５】
[00234]  本明細書で用いる場合、「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同であり、重鎖及び／又は軽鎖の残りが、別の種に由来するか又は別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同である抗体、並びにかかる抗体のフラグメントのことである。ただしこれは、かかるフラグメントが所望の抗原結合作用を示す場合である（Cabilly等に対する米国特許第４，８１６，５６７号、Morrison等、Proc. Natl. Acad. Sci、米国、８１：６８５１  ６８５５、１９８４年）。
【０２１６】
[00235]  本明細書で用いる場合、「ヒト化抗体」という用語は、受容体のＣＤＲの一部又は全てからの残留物（residues）が、所望の特異性、親和力、及び能力（capacity）を有するマウス、ラット、又はウサギ等のヒトでない種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残留物によって置換されたヒト免疫グロブリン（受容体抗体）である抗体又はそのフラグメントのことである。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残留物を対応するヒトでない残留物によって置換する。更に、ヒト化抗体は、受容体の抗体にも、インポートされたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されない残留物を含むことがある。これらの変形は、抗体の性能を更に改良し最適化するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てはヒトでない免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のものである。また、ヒト化抗体は、免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含むと最適である。これ以上の詳細については、Jones等のNature、３２１：５２２  ５２５（１９８６年）、Reichmann等のNature、３３２：３２３  ３２９（１９８８年）、Presta, Curr. Op. Struct. Biol、２：５９３  ５９６（１９９２年）、及びClark、Immunol. Today２１：３９７  ４０２（２０００年）を参照のこと。
【０２１７】
[00236]  いくつかの実施形態において、抗Ｈ５単クローン抗体は、マウスハイブリドーマ細胞株８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２によって生成される。これらの単クローン抗体は、それらを生成するハイブリドーマ細胞株の名をとって命名されている。このため、マウスハイブリドーマ細胞株８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２によって生成された抗Ｈ５単クローン抗体は、それぞれ単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２と名付けられている。単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２は、サブタイプＨ５鳥インフルエンザウイルスのヘマグルチニンと特異的に結合する。マウスハイブリドーマ細胞株８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２は、２００６年１月１７日に、ＣＣＴＣＣ（中国典型培養物保蔵センター、ウーハン大学、中国）において受託された。受託番号は、ＣＣＴＣＣ−Ｃ２００６０７（ハイブリドーマ細胞株８Ｈ５）、ＣＣＴＣＣ−Ｃ２００６０５（ハイブリドーマ細胞株３Ｃ８）、ＣＣＴＣＣ−Ｃ２００６０８（ハイブリドーマ細胞株１０Ｆ７）、ＣＣＴＣＣ−Ｃ２００６０６（ハイブリドーマ細胞株４Ｄ１）、ＣＣＴＣＣ−Ｃ２００６０４（ハイブリドーマ細胞株３Ｇ４）、及びＣＣＴＣＣ−Ｃ２００４２４（ハイブリドーマ細胞株２Ｆ２）である。
【０２１８】
[00237]  様々な実施形態において、サブタイプＨ５鳥インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに対する単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、又は２Ｆ２の結合を阻止する単クローン抗体が提供される。かかる阻止単クローン抗体は、単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、又は２Ｆ２によって認識されるヘマグルチニン上の同一エピトープと結合することができる。あるいは、それらの阻止単クローン抗体は、単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、又は２Ｆ２によって認識されるエピトープと立体的に重複するエピトープと結合することができる。これらの阻止単クローン抗体は、サブタイプＨ５鳥インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに対する単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、又は２Ｆ２の結合を、少なくとも約５０％だけ低減させることができる。あるいは、それらは、少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約７５％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約８５％、更に好ましくは少なくとも約９０％、更に好ましくは少なくとも約９５％、最も好ましくは少なくとも約９９％、結合を低減させることができる。
【０２１９】
[00238]  Ｈ５ヘマグルチニンに対する既知の単クローン抗体の結合を低減させる試験単クローン抗体の能力は、ルーチンの競合アッセイによって測定することができる。例えば、Antibodies: A Laboratory Manual（Cold Spring Harbor Laboratory、Ed Harlow及び David Lane、１９８８年）に記載されたもの等である。例えば、かかるアッセイは、抗原によってマイクロタイタープレートを予め被覆し、予め被覆したプレートを選択した濃度の既知の標識抗体と混合した未標識試験抗体の段階希釈によって培養し、培養混合物を洗浄し、試験抗体の様々な希釈でプレートに結合した既知の抗体の量を検出し測定することによって実行可能である。抗原に結合するために既知の抗体と競合する試験抗体が強力になればなるほど、抗原に対する既知の抗体の結合が弱くなる。通常、抗原は９６ウエルプレート上で予め被覆され、標識抗体の結合を阻止する未標識抗体の能力は放射性又は酵素標識を用いて測定する。
【０２２０】
[00239]  単クローン抗体は、最初にKohler等（Nature、２５６：４９５、１９７５年）が記載したハイブリドーマ方法によって発生することができる。ハイブリドーマ方法では、免疫剤と、所望の場合にはアジュバントとの１回以上の注入によって、マウス又は他の適切な宿主動物を免疫化する。典型的に、免疫作用物質及び／又はアジュバントは、多数の皮下又は腹腔注入によって宿主動物に注入される。血清アルブミン、又はダイズトリプシン阻害物質等、免疫化される宿主動物において免疫性であることが既知であるタンパク質に免疫作用物質を結合することが有用であり得る。使用可能なアジュバントの例は、フロインドの完全なアジュバント及びＭＰＬ−ＴＤＭを含む。免疫化の後、宿主動物は、免疫化に用いた抗原に特異的に結合する抗体を生成するか又は生成することができるリンパ細胞を生じる。あるいは、in vitroでリンパ細胞を生成することができる。所望のリンパ細胞を収集し、ポリエチレングリコール等の適切な融合作用物質を用いて骨髄腫細胞を融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Goding、Monoclonal Antibodies: Principles and Practice、５９〜１０３ページ、Academic Press、１９９６年）。
【０２２１】
[00240]  このように調製されたハイブリドーマ細胞を、好ましくは融合していない親骨髄腫細胞の成長又は生存を阻害する１つ以上の物質を含む適切な培地において接種し成長させる。例えば、親骨髄腫細胞に酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）が欠失している場合、ハイブリドーマの培地は典型的にヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、これらの物質はＨＧＰＲＴが欠失している細胞の成長を妨げる。
【０２２２】
[00241]  好適な骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択した抗体生成細胞による抗体の安定した高レベルの生成を支持し、ＨＴＡ培地等の培地に対して高感度である。これらの中で、好適な骨髄腫細胞の系統は、Salk Institute Cell Distribution Center（米国カリフォルニア州サンディエゴ）から入手可能なＭＯＰ−２１及びＭＣ−１１マウス腫瘍、並びに、American Type Culture Collection（米国メリーランド州ロックビル）から入手可能なＳＰ−２又はＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞に由来するもの等のネズミの骨髄腫系統である。ヒトの骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系統は、ヒト単クローン抗体の生成について記載されている（Kozbor, J、Immunol.、１３３：３００１、１９８４年、Brodeur等、Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications、５１〜６３ページ、Marcel Dekker, Inc.ニューヨーク、１９８７年）。
【０２２３】
[00242]  ハイブリドーマ細胞が成長している培地は、抗原に対する単クローン抗体の生成についてアッセイを行う。好ましくは、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等、免疫沈降によって又はin vitro結合アッセイによって、ハイブリドーマ細胞によって生成された単クローン抗体の結合特異性を判定する。単クローン抗体の結合親和性は、例えばScatchard分析（Munson等、Anal, Biochem.１０７：２２０、１９８０年）によって判定することができる。
【０２２４】
[00243]  ハイブリドーマ細胞が、所望の特異性、親和性、及び／又は活性の抗体を生成すると識別された後、限定希釈手順によって細胞をサブクローン化させ、標準的な方法（Goding、Monoclonal Antibodies: Principles and Practice、５９〜１０３ページ、Academic Press、１９９６年）によって成長させることができる。この目的に適した培地は、例えばＤＭＥＭ又はＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。更に、ハイブリドーマ細胞は動物の腹水腫瘍においてin vivoで成長させることも可能である。
【０２２５】
[00244]  サブクローンによって分泌された単クローン抗体は、例えばタンパクＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動法、透析、又はアフィニティクロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製手順によって、培地、腹水流体、又は血清から適切に分離される。
【０２２６】
[00245]  また、本発明の単クローン抗体は、従来の遺伝子工学方法によって生成することも可能である。例えば単クローン抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いたＰＣＲによって、単クローン抗体の重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡ分子をハイブリドーマ細胞から分離することができる。次いで、ＤＮＡ分子を発現ベクターに挿入することができる。発現ベクターは、大腸菌細胞、類人猿のＣＯＳ細胞、ＣＨＯ（チャイニーズハムスターの卵巣）細胞、又は免疫グロブリンタンパク質を他の場合に生成しない骨髄腫細胞等の宿主細胞内にトランスフェクトされる。宿主細胞は、抗体の発現に適した条件下で培養される。
【０２２７】
[00246]  本発明の抗体は、高い特異性及び親和性でＨ５ヘマグルチニンと結合することができる。抗体は、他のサブタイプのヘマグルチニンに対して低い交差反応性を有し、好ましくは他のサブタイプのヘマグルチニンに対して交差反応性を全く持たないものとする。１つの態様においては、本発明は、ＫＤ値が１ｘ１０−５Ｍ未満でＨ５ヘマグルチニンと結合する抗体を提供する。好ましくは、ＫＤ値は１ｘ１０−６Ｍ未満である。更に好ましくは、ＫＤ値は１ｘ１０−７Ｍ未満である。最も好ましくは、ＫＤ値は１ｘ１０−８Ｍ未満である。
【０２２８】
[00247]  本発明の抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖から成る従来の「Ｙ」形状構造を含む場合がある。更に、抗体は、従来の「Ｙ」形状構造のＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント、又はＦｖフラグメント、又は別の部分として、ヘマグルチニンに対する結合親和性を維持することも可能である。ヘマグルチニンに対するフラグメントの結合親和性は、従来の「Ｙ」形状抗体のものよりも高い又は低い場合がある。
【０２２９】
[00248]  抗体フラグメントは、無損傷の抗体のタンパク質分解消化によって発生させることができる（例えば、Morimoto等のJ. Biochem. Biophys. Methods、２４：１０７〜１１７、１９９２年を参照のこと）。更に、これらのフラグメントは、組み換え宿主細胞によって直接生成することができる（Hudson、Curr. Opin. Immunol.１１：５４８〜５５７、１９９９年、Little等、Immunol. Today、２１：３６４〜３７０、２０００年において検討されている）。例えば、Ｆａｂ’フラグメントは、大腸菌から直接回収し、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントに化学的に結合させることができる（Carter等、Bio/Technology、１０：１６３  １６７、１９９２年）。別の実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、ロイシンジッパーＧＣＮ４を用いて形成して、Ｆ（ａｂ’）２分子のアセンブリを促進する。別の手法によれば、Ｆｖ、Ｆａｂ、又はＦ（ａｂ’）２フラグメントは、組み換え宿主細胞培養から直接分離することができる。抗体フラグメントを生成するための他の技法は、当業者には明らかであろう。
【０２３０】
[00249]  いくつかの実施形態において、抗体又はフラグメントをコードする分離された核酸分子は、Ｈ５ヘマグルチニンと特異的に結合する。抗体をコードする核酸分子は、ハイブリドーマ細胞から分離することができる。分子の核酸配列は、当業者に既知のルーチン技法を用いて求めることができる。また、本発明の核酸分子は、従来の遺伝子工学技法並びに化学合成を用いて調製することができる。一実施形態では、単離核酸分子は、抗Ｈ５（ＨＡ）抗体の重鎖可変領域又は核酸分子の一部をコードする。別の実施形態では、単離核酸分子は、抗Ｈ５（ＨＡ）抗体の軽鎖可変領域又は核酸分子の一部をコードする。別の態様では、単離核酸分子は、抗体の重鎖又は軽鎖可変領域のＣＤＲをコードする。
【０２３１】
[00250]  一実施形態において、単離核酸分子は、単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２の重鎖及び軽鎖可変領域をコードする。単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２の重鎖可変領域をコードする核酸配列は、配列番号１、配列番号５、配列番号：９、配列番号１６、配列番号２０、及び配列番号２４のそれぞれにおいて示されている。単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２の軽鎖可変領域をコードする核酸配列は、配列番号３、配列番号７、配列番号１１、配列番号１８、配列番号２６のそれぞれにおいて示されている。いくつかの実施形態では、核酸分子の変性類似体は、単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２の重鎖及び軽鎖可変領域をコードする。
【０２３２】
[00251]  別の実施形態において、単離核酸変異体は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２４、又は配列番号２６の核酸配列と配列同一性を有する。一実施形態では、核酸変異体は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２４、又は配列番号２６の配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは少なくとも７５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する。
【０２３３】
[00252]  いくつかの実施形態において、抗体フラグメントをコードする単離核酸分子は、鳥インフルエンザウイルスのサブタイプＨ５と特異的に結合することができる。
【０２３４】
[00253]  いくつかの実施形態において、抗体重鎖可変領域をコードする単離核酸分子は、配列番号２８〜３０、配列番号３４〜３６、配列番号４０〜４２、配列番号４６〜４８、配列番号５２〜５４、及び配列番号５８〜６０において示されたアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、配列番号３１〜３３、配列番号３７〜３９、配列番号４３〜４５、配列番号４９〜５１、配列番号５５〜５７、及び配列番号６１〜６３において示されたアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする。
【０２３５】
[00254]  いくつかの実施形態において、組み換え発現ベクターは、本発明の単離核酸分子を含む。また、これは、核酸分子によって形質転換された宿主細胞を提供する。本発明の１つの態様は本発明の抗体を生成する方法であり、これは、核酸分子が発現されて抗体を生成する条件下で宿主細胞を培養してこの宿主細胞から抗体を分離することを含む。
【０２３６】
[00255]  抗体ポリペプチド配列
【０２３７】
[00256]  単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、それらの各核酸配列から推測されたものである。単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号２、配列番号６、配列番号１０、配列番号１７、配列番号２１、及び配列番号２５のそれぞれにおいて示されている。単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、及び２Ｆ２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４、配列番号８、配列番号１２、配列番号１９、及び配列番号２７において示されている。１つの態様では、抗Ｈ５抗体は、配列番号２、配列番号６、配列番号１０、配列番号１７、配列番号２１、及び配列番号２５において示されたようなアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。別の態様では、抗Ｈ５抗体は、配列番号４、配列番号８、配列番号１２、配列番号１９、及び配列番号２７において示されたようなアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０２３８】
[00257]  別の態様においては、抗体重鎖は、配列番号２、配列番号６、配列番号１０、配列番号１７、配列番号２１、及び配列番号２５に示されたアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは少なくとも７５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する可変領域を含む。
【０２３９】
[00258]  別の態様においては、抗体軽鎖は、配列番号４、配列番号８、配列番号１２、配列番号１９、及び配列番号２７に示されたアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは少なくとも７５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する可変領域を含む。
【０２４０】
[00259]  また、単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、３Ｇ４、及び２Ｆ２の重鎖及び軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列は、以下のように求められている。
【０２４１】
[00260]  単クローン抗体８Ｈ５の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２８〜３０にそれぞれ示されている。単クローン抗体８Ｈ５の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号３１〜３３にそれぞれ示されている。
【０２４２】
[00261]  単クローン抗体３Ｃ８の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号３４〜３６にそれぞれ示されている。単クローン抗体３Ｃ８の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号３７〜３９にそれぞれ示されている。
【０２４３】
[00262]  単クローン抗体１０Ｆ７の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号４０〜４２にそれぞれ示されている。単クローン抗体１０Ｆ７の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号４３〜４５にそれぞれ示されている。
【０２４４】
[00263]  単クローン抗体４Ｄ１の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号４６〜４８にそれぞれ示されている。単クローン抗体４Ｄ１の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号４９〜５１にそれぞれ示されている。
【０２４５】
[00264]  単クローン抗体３Ｇ４の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号５２〜５４にそれぞれ示されている。単クローン抗体３Ｇ４の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号５５〜５７にそれぞれ示されている。
【０２４６】
[00265]  単クローン抗体２Ｆ２の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号５８〜６０にそれぞれ示されている。単クローン抗体２Ｆ２の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号６１〜６３にそれぞれ示されている。
表１  単クローンＣＤＲアミノ酸配列の６つの系統
【表１】
2012526990.tif 000003
【０２４７】
[00266]  別の態様においては、抗Ｈ５単クローン抗体重鎖又はそのフラグメントは以下のＣＤＲを含む。すなわち、（ｉ）配列番号２８〜３０から選択された１つ以上のＣＤＲ、（ｉｉ）配列番号３４〜３６から選択された１つ以上のＣＤＲ、（ｉｉｉ）配列番号４０〜４２から選択された１つ以上のＣＤＲ、（ｉｖ）配列番号４６〜４８から選択された１つ以上のＣＤＲ、（ｖ）配列番号５２〜５４から選択された１つ以上のＣＤＲ、又は（ｖｉ）配列番号５８〜６０から選択された１つ以上のＣＤＲである。一実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体重鎖又はそのフラグメントは、配列番号２８〜３０に示されたアミノ酸配列をそれぞれ有する３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体重鎖又はそのフラグメントは、配列番号３４〜３６に示されたアミノ酸配列をそれぞれ有する３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体重鎖又はそのフラグメントは、配列番号４０〜４２に示されたアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体重鎖又はそのフラグメントは、配列番号４６〜４８に示されたアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体重鎖又はそのフラグメントは、配列番号５２〜５４に示されたアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体重鎖又はそのフラグメントは、配列番号５８〜６０に示されたアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲを含む。
【０２４８】
[00267]  別の態様においては、抗Ｈ５単クローン抗体重鎖又はそのフラグメントに含まれるＣＤＲは、配列番号２８〜３０、３４〜３６、４０〜４２、４６〜４８、５２〜５４、及び５８〜６０に示されたアミノ酸配列からの１つ以上のアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失を含むことができる。好ましくは、アミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失は、２つ以下のアミノ酸位置で行われる。更に好適には、アミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失は、１つ以下のアミノ酸位置で行われる。
【０２４９】
[00268]  別の態様においては、抗Ｈ５単クローン抗体軽鎖又はそのフラグメントは以下のＣＤＲを含む。すなわち、（ｉ）配列番号３１〜３３から選択された１つ以上のＣＤＲ、（ｉｉ）配列番号３７〜３９から選択された１つ以上のＣＤＲ、（ｉｉｉ）配列番号４３〜４５から選択された１つ以上のＣＤＲ、（ｉｖ）配列番号４９〜５１から選択された１つ以上のＣＤＲ、（ｖ）配列番号５５〜５７から選択された１つ以上のＣＤＲ、又は（ｖｉ）配列番号６１〜６３から選択された１つ以上のＣＤＲである。一実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体軽鎖又はそのフラグメントは、配列番号３１〜３３に示されたアミノ酸配列をそれぞれ有する３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体軽鎖又はそのフラグメントは、配列番号３７〜３９に示されたアミノ酸配列をそれぞれ有する３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体軽鎖又はそのフラグメントは、配列番号４３〜４５に示されたアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体軽鎖又はそのフラグメントは、配列番号４９〜５１に示されたアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体軽鎖又はそのフラグメントは、配列番号５５〜５７に示されたアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗Ｈ５単クローン抗体軽鎖又はそのフラグメントは、配列番号６１〜６３に示されたアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲを含む。
【０２５０】
[00269]  別の態様においては、抗Ｈ５単クローン抗体軽鎖又はそのフラグメントに含まれるＣＤＲは、配列番号３１〜３３、３７〜３９、４３〜４５、４９〜５１、５５〜５７、及び６１〜６３に示されたアミノ酸配列からの１つ以上のアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失を含むことができる。好ましくは、アミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失は、３つ以下のアミノ酸位置で行われる。更に好適には、アミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失は、２つ以下のアミノ酸位置で行われる。最も好ましくは、アミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失は、１つ以下のアミノ酸位置で行われる。
【０２５１】
[00270]  表２  ８Ｈ５ｍＡｂ又は３Ｃ８ｍＡｂと結合する７ａａのアミノ酸配列
【表２】
2012526990.tif 000004
【０２５２】
[00271]  上述の抗体又は上述のＣＤＲの可変領域におけるアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失によって発生された変異体は、鳥インフルエンザウイルスのサブタイプＨ５と特異的に結合する能力を維持する。また、いくつかの実施形態は、かかる変異体の抗原結合フラグメントを含む。
【０２５３】
[00272]  本発明の単クローン抗体変異体は、従来の遺伝子工学方法によって生成することができる。当業者に既知の方法を用いて、ＤＮＡ分子に核酸突然変異体を導入することができる。あるいは、重鎖及び軽鎖の変異体をコードする核酸分子を化学合成によって生成することができる。
【０２５４】
[00273]  別の態様においては、本発明のスクリーニング方法は、（ｉ）ペプチド発現に適した条件下でペプチドディスプレイライブラリを培養する工程と、（ｉｉ）培養溶液を本発明の単クローン抗体と接触させる工程と、（ｉｉｉ）該単クローン抗体と特異的に結合するファージクローンを選択する工程と、を含む。スクリーニングに用いる単クローン抗体は、限定でないが、単クローン抗体８Ｈ５、３Ｃ８、１０Ｆ７、４Ｄ１、及び３Ｇ４を含むことができる。
表３    ８Ｈ５ｍＡｂに結合する１２ａａペプチドの配列
【表３】
2012526990.tif 000005
【０２５５】
[00274]  検体    様々な実施形態において、標的の検体は、試料溶液が得られる宿主の疾病、障害、又は異常の存在を示すマーカーである。
【０２５６】
[00275]  本明細書において用いる場合、「検体」とは、検出又は測定の対象であり、少なくとも１つのエピトープ又は結合部分位を有する化合物又は組成のことである。検体は、例えば炭水化物及びレクチン、ホルモン及びレセプタ、相補核酸等、天然の検体特異的結合要素が存在するか、又は検体特異的結合要素を調製することができる任意の物質とすることができる。更に、可能な検体には、実質的にあらゆる化合物、組成物、凝集物、又は免疫学的に検出可能である他の物質が含まれる。すなわち、検体又はその部分は、少なくとも１つの決定部位を有する抗原又はハプテンであるか、又は天然の結合対の要素である。
【０２５７】
[00276]  検体は、限定ではないが、毒素、有機化合物、タンパク質、ペプチド、微生物、バクテリア、ウイルス、アミノ酸、核酸、炭水化物、ホルモン、ステロイド、ビタミン、薬物（治療目的のために投与されたもの及び無許可の目的のために投与されたものを含む）、汚染物質、殺虫剤、及び上述の物質の任意の代謝産物又は抗体を含む。また、検体という用語は、抗原物質、ハプテン、抗体、高分子、及びそれらの組み合わせを含む。例示的な検体の網羅的でないリストが、米国特許第４，３６６，２４１号のコラム１９の７行目からコラム２６の４２行目に記載されている。この開示は参照により本願に含まれるものとする。代表的な検体の更に別の記述及びリストが、米国特許第４，２９９，９１６号、第４，２７５，１４９号、第４，８０６，３１１号に示されている。これらは全て参照により本願に含まれるものとする。いくつかの実施形態では、ＳＣＤ又はＴＤは複数の異なる検体を検出するように構成されている。
【０２５８】
[00277]  標識試薬    「標識試薬」という用語は、特異的な結合要素に結合された検出可能な標識を含む物質のことである（例えば検出プローブ）。この結合は共有結合又は非共有結合とすることができるが、結合方法は重要ではない。標識によって標識試薬は、流体試料における検体の存在に関連した検出可能信号を生成することができる。標識試薬の特異的結合要素成分は、後で更に詳細に説明する補助的な特異的結合要素によって、検体に直接に結合するか又は検体に間接的に結合するように選択される。標識試薬は、捕捉ゾーンの上流の部位でＴＤ内に組み込むことができるか、流体試料と組み合わされて流体溶液を形成することができるか、試験試料とは別個に試験装置に追加することができるか、又は捕捉ゾーンに予め堆積もしくは可逆的に固定化することができる。更に、特異的結合要素は、適切な付属方法によってアッセイの実行前又は実行中に標識化することができる。
【０２５９】
[00278]  「標識」とは、視覚的又は用具を用いた手段によって検出可能な信号を生成することができる任意の物質のことである。使用に適した様々な標識には、化学的又は物理的手段のいずれかによって信号を生成する標識が含まれる。かかる標識は、酵素及び基質、クロモゲン、触媒、蛍光又は蛍光のような化合物及び／又は粒子、磁気化合物及び／又は粒子、化学発光化合物及び／又は粒子、並びに放射性標識を含むことができる。他の適切な標識には、金等のコロイド金属粒子、セレン又はテルル等のコロイド非金属粒子、染めたプラスチック等の染めた又は着色した粒子、染色した微生物、有機ポリマーラテックス粒子及びリポソーム、着色ビード、ポリマーマイクロカプセル、袋（sac）、赤血球、血球影、又は直接目に見える物質を含む他の小胞等の微粒子標識が含まれる。典型的に、標識試薬の標識成分として視覚的に検出可能な標識が用いられ、これによって試験試料における検体の存在又は量を直接視覚的に又は用具の使用によって読み取ることができ、検出部位において追加の信号生成要素は必要ない。
【０２６０】
[00279]  本発明の実施において利用可能な追加の標識は、発色団、電気化学部分、酵素、放射性部分、燐光基、蛍光部分、化学発光部分、又は量子ドット、又は更に具体的には、放射標識、フルオロフォア標識、量子ドット標識、発色団標識、酵素標識、親和リガンド標識、電磁スピン標識、重原子標識、ナノ粒子光散乱標識又は他のナノ粒子で標識化されたプローブ、フルオレセインイソチオシアナート（ＦＩＴＣ）、ＴＲＩＴＣ、ローダミン、テトラメチルローダミン、Ｒ−フィコエリトリン、Ｃｙ−３、Ｃｙ−５、Ｃｙ−７、テキサスレッド、ファーレッド、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ＦＬＡＧ又はＨＡエピトープ等のエピトープタグ、及びアルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、Ｉ２ガラクトシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ、β−ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼ等の酵素タグ、及びジゴキシゲニン又はジニトロフェニル等のハプテン結合体、又は、ストレプトアビジン／ビオチン、アビジン／ビオチン等の複合体を形成することができる結合対の要素、又は、例えばウサギＩｇＧ及び抗ラビットＩｇＧを含む抗原／抗体複合体、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシナート、ローダミン、テトラメチルローダミン、エオシン、緑蛍光タンパク質、エリトロシン、クマリン、メチルクマリン、ピレン、マラカイトグリーン、スチルベン、ルシファーイエロー、カスケードブルー、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化亜ダンシル、フィコエリトリン、ユーロピウム及びテルビウムを含むもの等の蛍光ランタニド複合体、Ｃｙ３、Ｃｙ５、分子ビーコン、及びその蛍光誘導体、ルミノール等のルミネッセンス材料、金又は銀粒子又は量子ドット等の光分散又はプラズモン共振材料を含む。また、放射性材料は、１４Ｃ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、Ｔｃ９９ｍ、３５Ｓ、又は３Ｈを含み、又は、球状のシェル、及び当業者に既知の他の信号発生標識によって標識化されたプローブである。例えば、検出可能分子は、限定ではないが、フルオロフォア、並びに、例えばPrinciples of Fluorescence Spectroscopy（Joseph R. Lakowicz（編集）、Plenum Pub Corp、第２版、１９９９年７月）、及び、Molecular Probes Handbookの第６版（Richard P. Hoaglandによる）に記載されたような当技術分野において既知の他のものを含む。
【０２６１】
[00280]  本発明の目的を達成するために多数の信号生成システムを用いることができる。信号生成システムは、試料における検体（例えば標的分子）の存在に関連する信号を発生する。また、信号生成システムは、測定可能信号を生成するために必要な試薬を全て含むことができる。信号生成システムの他の成分は、現像溶液に含ませることができ、基体、エンハンサー、活性物質、化学発光化合物、共因子、阻害物質、スカベンジャー、金属イオン、信号発生物質の結合に必要な特異的結合物質等を含むことができる。信号生成システムの他の成分は、コエンザイム、酵素生成物と反応する物質、他の酵素及び触媒等とすることができる。いくつかの実施形態では、信号生成システムは、外部の手段によって、電磁放射の使用によって、望ましくは視覚的検査によって検出可能な信号を提供する。例示的な信号生成システムは、米国特許第５，５０８，１７８号に記載されている。
【０２６２】
[00281]  いくつかの実施形態では、核酸分子を検出プローブに結合し（例えば抗体結合オリゴヌクレオチド）、これによって核酸は核酸標識を利用することにより標識として機能する。例えば、ＳＣＤに含まれた試薬溶液又は基体は、検出可能信号を提供するように機能する複数のオリゴヌクレオチドを含む検出試薬を含むことができ、これによって、（特定の検体に対して特異的な）検体結合セットのために、結合したオリゴヌクレオチドを異なる染料によって予め染色する。これに対して、（異なる検体に対して特異的な）別の抗体の小集団は、配列に依存しない方法で核酸分子と結合する核酸染料である。例には、フェナントリジン及びアクリジン等のインターカレート染料（例えば臭化エチジウム、ヨウ化プロピジウム、ヨウ化ヘキシジウム、ジヒドロエチジウム、エチジウムホモ二量体−１及び−２、エチジウムモノアジド、及びＡＣＭＡ）、インドール及びイミダゾール等のいくつかの少数の溝結合因子（grove binders）（例えばヘキスト３３２５８、ヘキスト３３３４２、ヘキスト３４５８０、及びＤＡＰＩ）、並びにアクリジンオレンジ等の種々の核酸染料（インターカレートも可能である）、７−ＡＡＤ、アクチノマイシンＤ、ＬＤＳ７５１、及びヒドロキシスチルバミジンを含む。上述の核酸染料は全て、Molecular Probes, Inc.等の供給業者から市販されている。核酸染料の更に別の例は、Molecular Probesからの以下の染料を含む。すなわち、SYTOX Blue、SYTOX Green、SYTOX Orange、POPO-1、POPO-3、YOYO-1、YOYO-3、TOTO-1、TOTO-3、JOJO-1、LOLO-1、BOBO-1、BOBO-3、PO-PRO-1、PO-PRO-3、BO-PRO-1、BO-PRO-3、TO-PRO-1、TO-PRO-3、TO-PRO-5、JO-PRO-1、LO-PRO-1、YO-PRO-1、YO-PRO-3、PicoGreen、OliGreen、RiboGreen、SYBR Gold、SYBR Green I、SYBR Green II、SYBR DX、SYTO-40、-41、-42、-43、-44、-45（青）、SYTO-13、-16、-24、-21、-23、-12、-11、-20、-22、-15、-14、-25（緑）、SYTO-81、-80、-82、-83、-84、-85（オレンジ）、SYTO-64、-17、-59、-61、-62、-60、-63（赤）。他の検出可能マーカーは、化学発光及び発色性の分子、光学又は電子密度マーカー等を含む。
【０２６３】
[00282]  注記したように、いくつかの実施形態において、標識は、米国特許第６，２０７，３９２号に記載した量子ドット（すなわちＱドット）等の半導体ナノ結晶を含む。Ｑドットは、Quantum Dot Corporationから市販されている。本発明の実施において有用な半導体ナノ結晶は、ＭｇＳ、ＭｇＳｅ、ＭｇＴｅ、ＣａＳ、ＣａＳｅ、ＣａＴｅ、ＳｒＳ、ＳｒＳｅ、ＳｒＴｅ、ＢａＳ、ＢａＳｅ、ＢａＴｅ、ＺｎＳ、ＺｎＳｅ、ＺｎＴｅ、ＣｄＳ、ＣｄＳｅ、ＣｄＴｅ、ＨｇＳ、ＨｇＳｅ、及びＨｇＴｅ、並びにそれらの混合物、並びにＧａＡｓ、ＩｎＧａＡｓ、ＩｎＰ、及びＩｎＡｓ等の第ＩＩＩ−Ｖ族半導体及びそれらの混合物を含む。また、ゲルマニウムもしくはシリコン等のＩＶ族半導体の使用、又は有機半導体の使用は、いくつかの条件下で実行可能である。また、半導体ナノ結晶は、上述のＩＩＩ−Ｖ族化合物、ＩＩ−ＶＩ族化合物、ＩＶ族元素、及びこれの組み合わせから選択した２つ以上の半導体を含む合金を含むことができる。
【０２６４】
[00283]  いくつかの実施形態において、蛍光エネルギアクセプタを標識として検出プローブに結合させる（すなわち検出分子と結合した結合部分）。一実施形態では、蛍光エネルギアクセプタは、化合物がシングレット酸素と反応して蛍光化合物又は補助化合物と反応することができる化合物を形成し、これが蛍光化合物に変換される結果として形成することができる。かかる補助化合物は、ＳＣＤ及び／又はＴＤに含まれる緩衝液に含ませることができる。他の実施形態では、蛍光エネルギアクセプタは、化学発光作用因子を含む化合物の一部として組み込むことができる。例えば、蛍光エネルギアクセプタは、例えばユーロピウム、サマリウム、テルル等の希土類金属の金属キレート化合物を含むことができる。これらの材料は、ルミネッセンスの鮮明な帯域のために特に魅力的である。更に、ユーロピウム等の蛍光方式は、蛍光読み取り装置を用いて検出した場合に、金粒子に比べて少なくとも２から３対数増大した信号を提供する。更に、ユーロピウム（ＩＩＩ）等のランタニド標識は、効果的かつ長い信号発信を可能とし、光退色に耐性があるので、処理された／反応した試料を含むＴＤは、必要な場合には長期間にわたり放置しておくことができる。
【０２６５】
[00284]  寿命の長い蛍光ユーロピウム（ＩＩＩ）キレート化合物ナノ粒子は、様々な異種及び同種免疫アッセイにおいて標識として適用可能であることが示されている。例えば、Huhtinen等のClin. Chem.２００４年１０月、５０（１０）、１９３５〜６を参照のこと。これらの本質的に標識されたナノ粒子を、時間をかけて分解する蛍光検出と組み合わせた場合に、アッセイ性能を向上させることができる。異種アッセイでは、低濃度におけるアッセイのダイナミックレンジを拡大することができる。更に、従来の標識検出抗体の代わりに検出抗体によって被覆された高特異活性ナノ粒子標識を用いることによって、アッセイの運動特性を向上させることができる。同種アッセイでは、ユーロピウム（ＩＩＩ）ナノ粒子が、蛍光共振エネルギー伝達において効率的なドナーであることが示されており、簡単かつ迅速なハイスループットのスクリーニングが可能となる。異種及び同種ナノ粒子標識ベースのアッセイは、例えば血清、ヘパリン血漿、及び粘液のような様々な試料マトリックスを用いて実行することができる。
【０２６６】
[00285]  いくつかの実施形態において、本明細書に開示した標識（例えば蛍光標識）は、生体分子と結合したナノ粒子標識として含まれる。換言すると、ナノ粒子は、検出又は捕捉プローブを用いて利用することができる。例えば、試料における特定の検体を検出するために単クローン抗体又はストレプトアビジン（ＳＡ）に結合されたユーロピウム（ＩＩＩ）標識ナノ粒子を用いることができる（例えばナノ粒子ベースの免疫アッセイ）。ナノ粒子は、検体及び検出部（すなわち標識）又は捕捉部分に対する特異的結合因子が結合された基質として機能する。
【０２６７】
[00286]  本発明の様々な実施形態において、用いる標識はランタニド金属である。ランタニドは、限定ではないが、ユーロピウム、サマリウム、テルビウム、又はジスプロシウムを含む。非特異的バックグラウンド蛍光は、減衰時間がわずか約１０ナノ秒であるので、かかるバックグラウンドは試料蛍光を測定する前に消滅する。更に、ランタニド−キレート化合物は大きなストークスシフトを有する。例えば、ユーロピウムのストークスシフトはほぼ３００ｎｍである。励起と発光ピークとの間のこの大きな差は、バックグラウンドの影響が最小である波長で蛍光測定が行われるということを意味する。更に、発光ピークは極めて鋭く、これが意味するのは、検出器を極めて細かい限度に設定可能であるということ、及び、異なるランタニドキレート化合物からの発信信号は相互に容易に区別可能であるということである。従って、一実施形態では、同一アッセイにおいて１つ以上の異なるランタニドを用いることができる。
【０２６８】
[00287]  ハード標準    一実施形態において、蛍光読み取り装置は、統合されたか又は永久的な標準（「ハード標準」）を含むように構成されている。本明細書で言及する場合、「ハード標準」という用語は、１つ以上の検体を検出／定量化する方法において試験試料を読み取るための装置が、内部の一体化した又は永久的な標準を含むことを意味し、これに対して、ハード標準で用いるものと同一の標識によって標識化された試料を読み取る。一実施形態では、ハード標準及び試験標識はランタニドを含む（例えばユーロピウムＩＩＩ）。
【０２６９】
[00288]  一実施形態において、読み取り装置はＬＥＤであり、スペクトルのＵＶ  Ａ（４００から３１５ｎｍ）部分を発光するランプを含む。発光はスペクトルの可視部分である。いくつかの例示的又は従来のＬＥＤ又はフォトダイオードが、米国特許第７，１７５，０８６号、第７，１３５，３４２号、及び第７，１０６，４４２号に開示されている。それらの各々の開示は参照により全体が本願に含まれるものとする。
【０２７０】
[00289]  別の実施形態において、読み取り装置は、異なる量の少なくとも２つのハード標準を含み（例えば標識の低濃度及び高濃度）、このため読み取り装置に２箇所のチェックを設ける。例えば、２つのランタニドハード標準（例えばユーロピウム）を読み取り装置のスライドに永久的に搭載し、各試験読み取りの間に読み取ることができる。このため、２つのハード標準を用いて、より低い検出限度を求めることができる（すなわち検体定量化アッセイにおいて又は定性的アッセイにおいて最低検出閾値を求めるため）。ここで、蛍光は、濃度（ｘ軸）に対する蛍光の百分率（ｙ軸）として読み取り図表化する。かかる図表におけるハード標準の各々の２つの読み取り値間の直線によって、ノイズの切片（標識なし）の測定が可能となり、最低検出限度の測定値が与えられる。
【０２７１】
[00290]  いくつかの実施形態において、ＴＤは、洗浄又はランニング緩衝液を含むチャンバ（隔室又は液体袋）を含み、これは未結合標識を除去するように機能して、バックグラウンドノイズを軽減又は排除する。様々な実施形態では、ハード標準を含む装置によって、試料に存在し、ハード標準において用いるものと同じ標識で標識化された検体の正確な定性的及び定量的測定を行う。
【０２７２】
[00291]  いくつかの実施形態において、ハード標準は、ガラス、プラスチック、ビニル、又はアクリルを含むポリマー材料に埋め込まれるか又は成型されている。かかる埋め込み標識は、適切な形状／サイズに成型することができる。あるいは、かかるハード標準は、適切なサイズに切断して読み取り装置に一体化することができる。一実施形態では、ハード標準は、矩形、方形、長方形、円形、又は任意の多角形に切断される。一実施形態では、ハード標準は矩形に切断され、高さの寸法は約０．０４、０．０４５、０．０５、０．０５５、０．０６、０．０６５、０．０７、０．０７５、０．０８、０．８５、０．０９、０．０９５、０．１０、０．１１、０．１２、０．１２５、０．１２６、０．１２７、０．１２８、０．１２９、０．１３０、０．１３５、０．１４０、０．１５０インチであり、幅は約０．０１、０．０２、０．０３、０．０３５、０．０３９、０．０４、０．０５．０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、又は１．０インチであり、長さは約０．０１、０．０２、０．０３、０．０３５、０．０３９、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、又は１．０インチである。
【０２７３】
[00292]  集団を通じて読み取り装置を標準化するために、一実施形態において、基準としてハード標準を用いた読み取り装置を利用する。例えば、以下の表に示すように、所定の「最も信頼できる基準」読み取り装置に対して以降の読み取り装置の性能を図表化する。
【０２７４】
[00293]  表４
【表４】
2012526990.tif 000006
【０２７５】
[00294]  従って、ｙ軸及びｘ軸がそれぞれ試験読み取り装置及び最も信頼できる基準の測定値である場合、検出の下限はノイズレベルを通る作図ラインの切片（標識なしの読み取り）である。
【０２７６】
[00295]  一実施形態において、ＴＤは、特異的検体に基づいて各々がパターン化された異なるｐＲＮＡを含み、相補的ＳＣＤは、ＴＤ上で固定化されたものと同種のｐＲＮＡに結合された複数の捕捉抗体を含み、該複数は異なる検体に対して特異的である異なる抗体の小集団を含む。更に、ＳＣＤ試薬溶液又は基体（例えば凍結乾燥された固体基体）は、検出プローブ、又は複数のユーロピウム（ＩＩＩ）標識抗体を含み、これは異なる検体に対して特異的である同一の抗体の小集団から成る。米国特許第７，１０１，６６７号に開示されたもの等、当技術分野において更に別のランタニド標識が既知である。また、例えばRichardson F.S.「Terbium (III) and Europium (III) Ions as Luminescent probes and Stains for Biomolecular Systems」、Chem. Rev、８２：５４１〜５５２、１９８２年も参照のこと。
【０２７７】
[00296]  読み取り装置は、時間設定したか又は即時読み取り設定において結果を報告することができる。時間設定モードでは、試験装置が読み取り装置に挿入されると、読み取り装置はオペレータとは無関係に完了し結果を報告する。これによってオペレータには、機械から独立して作業する自由が増す。即時読み取りモードは、リアルタイムの結果を提供し、バッチ試験を可能とする。
【０２７８】
[00297]  ｐＲＮＡ    本発明の１つの態様においては、本発明のＳＣＤ／試験装置に、相補的ピラノシルＲＮＡ（ｐＲＮＡ）配列の組み合わせをＣＭＰとして組み込んで、多数の異なる標的検体の同時特異的検出を可能とする。ピラノシルＲＮＡは、天然ＲＮＡよりも強力かつ選択性の強い結合を有することがわかっている。更に、ピラノシルＲＮＡは、らせん状でなくはしご状にスタックを配置し、スタックの相互作用を良好とし、結合親和性を高める。更に、ｐＲＮＡは内生のＲＮＡ又はＤＮＡとは相互作用せず、リボヌクレアーゼによって分解しないので、ｐＲＮＡは試料検出に用いるためには理想的に適したものである。一実施形態では、ｐＲＮＡにおいてインドールを用いる。インドールは中性のベースとして機能する。様々な実施形態では、相同のｐＲＮＡ配列の対の一方がＴＤにおける特異的ストライプ又は試験ゾーンで固定化され、相同のｐＲＮＡ配列の対の他方が捕捉プローブにおいて検体特異的抗体に結合され、これによって指定された標的検体に対する結合が可能となる。
【０２７９】
[00298]  多数の検体を研究する場合に結合対ｐＲＮＡ分子間の交差反応を最小限に抑えるため、結合対ｐＲＮＡ分子は交差反応を最小限に抑えるように設計することができる。結合パートナー間の結合エネルギを求めるためのアルゴリズムを用いることができる。例えば、結合プログラムＭＦＯＬＤ（http://mfold.bioinfo.rpi.edu/を参照）及びＢＩＮＤＩＧＯ（http://ma/williams.edu/を参照）は、核酸構造の自由エネルギを測定するために生成されたものであり、スミス−ウォーターマンアルゴリズムのスケーリング特性を利用している（Hodas and Aalberts（２００４年）、Nucleic Acids Research３２：６６３２〜４２）。ｐＲＮＡ  ＣＭＰ間の結合を最大限にするためのアルゴリズムの使用は、特異性及び選択性の双方を増大させるように機能する。この手法を用いることによって、多数のｐＲＮＡ配列をスキャンすることができ、パートナー配列に対して低い結合エネルギを有し（強い結合）、非パートナー配列に対して高い結合エネルギを有する（弱い結合）配列を、理想的なｐＲＮＡ配列として選択する。
【０２８０】
[00299]  一実施形態において、専門家ルールベースのシステムを用いて、交差反応を最小限に抑えるためにｐＲＮＡ結合対を発生させながら、ｐＲＮＡ対の高い特異性及び選択性の結合を維持する。専門家ルールベースのシステムは、学習コンポーネントを有することができる知識ベースを利用する。更に、専門家ルールベースのシステムは、実験からの又は上述のようなＭＦＯＬＤ及びＢＩＮＤＩＧＯ等のアルゴリズムからの情報を利用する。一実施形態では、結果として得られたｐＲＮＡは、相互に高い親和性を有し、相同でない対にほとんどか全く親和性を持たないと識別されている。
【０２８１】
[00300]  いくつかの実施形態において、ｐＲＮＡ  ＣＭＰは、限定ではないが、表５に示すｐＲＮＡから選択される。
【０２８２】
[00301]  表５：
【表５】
2012526990.tif 000007
全てのオリゴヌクレオチドは４’−Ｃ１２アミノ及び２’−ヘキサノール基を有する
【０２８３】
[00302]  一実施形態において、多数のｐＲＮＡ配列を用いて多数の検体を検出する場合、ｐＲＮＡ対は他のｐＲＮＡとの交差反応を最小限に抑えるように選択される。交差反応を最小限に抑えることによって、良好な信号を発生させることができ、誤った陽性の結果を生じることがある疑似的な結合を低減させる。表５におけるいくつかのｐＲＮＡ配列は、ｐＲＮＡパートナー間の結合を最大にしながら他の結合対との結合を最小限に抑えるために選択された。例えば、配列番号１２０〜１２６のｐＲＮＡ結合は、相互の交差反応結合を最小限に抑えるように設計された。交差反応を最小限に抑えるように特に選択されたｐＲＮＡ（例えば配列番号１２０〜１２６）は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上、他のｐＲＮＡ結合対との交差結合を低減させる。交差結合を判定するためのアッセイは当技術分野では既知であり、例えば競合アッセイ又はＥＬＩＳＡを含む。別の実施形態では、交差反応を最小限に抑えるように特に選択されたｐＲＮＡ  ＣＭＰ（例えば配列番号１２０〜１２６）は、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ又はそれ以上であるＥＣ５０濃度で他のｐＲＮＡとの交差結合を低減させる。別の実施形態では、交差反応を最小限に抑えるように特に選択されたｐＲＮＡ  ＣＭＰ（例えば配列番号１２０〜１２６）は、非パートナー配列の結合と比べて、１Ｘ、２Ｘ、３Ｘ、４Ｘ、５Ｘ、６Ｘ、７Ｘ、８Ｘ、９Ｘ、１０Ｘ又はそれ以上の倍数に低減されたＥＣ５０濃度で他のｐＲＮＡとの交差結合を低減させる。
【０２８４】
[00303]  様々な実施形態において、アドレス指定可能ラインにおいて試験ストリップ上で固定化されたｐＲＮＡ分子は、抗検体結合因子と結合した相補的ｐＲＮＡに対して特異的に結合する（例えば抗ウイルス抗体）。
【０２８５】
[00304]  いくつかの実施形態において、１つ以上の固定化ｐＲＮＡを組み込んだＴＤは、標的検体の検出について、約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１５、２０、３０、４０、又は５０ｎｇ／ｍＬの感度を提供することができる。この文脈において「約」という用語は、所与の測定値の＋／−５％のことである。
【０２８６】
[00305]  いくつかの実施形態において、１つ以上の固定化ｐＲＮＡを組み込んだＴＤは、実施例１に示すような成長培地又はリアルタイムＰＣＲ試験等の対照アッセイに対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の感度を提供することができる。感度は、試験アッセイによって発生した正のレートを示すことが意図されている。
【０２８７】
[00306]  いくつかの実施形態において、１つ以上の固定化ｐＲＮＡを組み込んだＴＤは、標的検体の検出について、約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１５、２０、３０、４０、又は５０ｎｇ／ｍＬの特異性を提供することができる。
【０２８８】
[00307]  いくつかの実施形態において、１つ以上の固定化ｐＲＮＡを組み込んだＴＤは、実施例１に示すような成長培地又はリアルタイムＰＣＲ試験等の対照アッセイに対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の特異性を提供することができる。特異性は、試験アッセイによって発生した負のレートを示すことが意図されている。
【０２８９】
[00308]  いくつかの実施形態において、ｐＲＮＡは、例えばタンパク質リンカー等のリンカーを用いて膜（すなわち試験ストリップ）に結合される。例えば、ｐＲＮＡは親水性タンパク質に結合とすることができる。一実施形態では、リンカータンパク質は、少なくとも約５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、９０００、１００００、２００００、３００００、４００００、５００００、６００００、７００００、８００００、９００００、１０００００、１１００００、１２００００、１３００００、１４００００、１５００００、１６００００、１７００００、１８００００、１９００００、２０００００、２２５０００、２５００００、３０００００、３５００００から約４５００００の分子量を有する。かかるリンカーは、約５から１０、６から１１、７から１２、８から１３、９から１４、１０から１５、１１から１６、１２から１７、１３から１８、１４から１９、１５から２０、１６から２１、１７から２２、１８から２３、１９から２４、２０から２５、２１から２６、２２から２７、２３から２８、２４から２９、２５から３０、３５、４０、４５、又は５０ＡＡ長のサイズの範囲を有することができる。リンカーはペプチド又はポリペプチドとすることができる。一実施形態では、リンカーはＢＳＡ又はＩｇＧである。
【０２９０】
[00309]  別の実施形態において、リンカーは単クローン抗体である。リンカーは、ｐＲＮＡを試験装置に結合させるためのアンカータンパク質として機能することができる。例えばセファクリル−３００カラム上での精製のような当技術分野において既知の標準的な方法を用いて、アンカータンパク質を精製することができる。一実施形態では、アンカータンパク質は、リンカーＩｇＧ  ＭＡｂ２−１９９−Ｃ（Abcam、マサチューセッツ州ケンブリッジ）であり、げっ歯目シトクロム−Ｃに特異的な単クローン抗体である。ＭＡｂ２−１９９−Ｃ結合ｐＲＮＡの結果として、ｐＲＮＡのみと比べて信号対雑音比が上昇する。別の実施形態では、アンカータンパク質は牛血清アルブミン（ＢＳＡ）である。特定の実施形態では、用いるＢＳＡは単鎖ＢＳＡである。アンカータンパク質及び／又はスペーサアームの使用によって、ＩＣＭＰの濃度を上げてストライプ形成を可能とし、従って本発明のアッセイの感度及び／又は特異性を向上させる。
【０２９１】
[00310]  更に別の実施形態において、炭素スペーサ等の別個のリンカーによって、抗体をｐＲＮＡ分子に結合することができる。一実施形態では、炭素スペーサは一端においてリン酸基を有する。炭素スペーサは任意の数の炭素原子を有することができ、例えば炭素スペーサには、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０又はそれ以上の炭素原子がある。リンカー分子の例を図２０に示す（上部構造）。リン酸基は、例えばヌクレオチドの４’端部においてヌクレオチドに付くことができる。いくつかの例では、活性化化学作用は、１，４−フェニレンジイソチオシアネート（ＰＤＩＴＣ）によるアミノ基の修飾に基づいている。ＰＤＩＴＣは、フェニル環上に２つのアミン反応イソチオシアネート基を含むホモ二感応性架橋剤である。アミン修飾ｐＲＮＡオリゴマーによる過度な反応により、結果としてチオ尿素結合が形成され、第２のイソチオシアネート基はタンパク質等のアミン含有分子と自由に結合するままとする。ＰＤＩＴＣ化学作用が有利である理由は、中性ｐＨで乾燥状態において充分に安定しているので、逆相ＨＰＬＣによって精製することができ、何か月間も著しく分解することなく保存することができる。また、わずかに塩基性のｐＨにおいてタンパク質と接触した場合、ＰＤＩＴＣ活性化ｐＲＮＡはリシンの第１のアミノ基と効率的かつ選択的に反応し、安定したｐＲＮＡ−タンパク質結合を生じる。例えば、図２０は１２炭素スペーサに結合されたＰＤＩＴＣの構造を示す。オリゴヌクレオチドの４’端部における新しいヌクレオチド又はｐＲＮＡ分子の代わりにリン酸塩を介して、オリゴヌクレオチド又はｐＲＮＡ分子等の結合パートナーにＰＤＩＴＣ−リンカー−リン酸塩を追加することができる。いくつかの実施形態では、ｐＲＮＡは、リンカー又はタンパク質との結合の前に、例えばｐＨ５、４、３、又は２のような酸性ｐＨに維持される。例えば、ｐＲＮＡは、結合の前にｐＨ２．２において安定に維持することができる。結合反応の前にｐＲＮＡのｐＨを上げることができる。例えば、結合反応の前にｐＲＮＡのｐＨをｐＨ８．５とすることができる。他の実施形態では、リンカー又はタンパク質との結合の前にｐＲＮＡを乾燥させて保存することができる。
【０２９２】
[00311]  一実施形態において、ＴＤは、アンカータンパク質によって試験ストリップに結合されたＩＣＭＰを含む。一実施形態では、アンカータンパク質に結合されたＩＣＭＰはｐＲＮＡである。
【０２９３】
[00312]  一実施形態において、ｐＲＮＡは、ｐＲＮＡ分子と親水性タンパク質との間の共有結合によって親水性タンパク質／ペプチドに結合されている。ｐＲＮＡ−タンパク質複合体を含む溶液を、試験膜（例えばニトロセルロース）上の画定領域に適用し、これによってタンパク質アンカーは不可逆的に膜と結合する。その後、ｐＲＮＡはアッセイにおける使用に利用可能となる。一実施形態では、アンカー／リンカータンパク質は親水性タンパク質であり、試験膜はニトロセルロースである。
【０２９４】
[00313]  別の実施形態において、ｐＲＮＡはリンカーを介して固定化分子に結合させる。リンカーは炭素リンカーとすることができ、リンカー内に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又はそれ以上の炭素を有する場合がある。固定化分子は、例えば１，４−フェニレンジイソチオシアネート等のジイソチオシアネートとすることができる。固定化分子と結合させるオリゴマーに合成後精製を行う。例えば、オリゴマーは、セファクリ−３００カラムのようなゲルろ過カラムにより精製して、サイズに基づいて生成物を分離する（GE Healthcare Life Sciences、ペンシルバニア州ピッツバーグ）。更に、試薬の純度についてオリゴマーを分析することができる。例えば、マトリックス支援レーザ脱着／イオン化、飛行時間型質量分光計を用いて結合させたオリゴヌクレオチド生成物のアイデンティティ及び純度を求めることができる。反応混合物における濃度と同様に、アンカータンパク質及び／又は抗体（まとめて「ＣＭＰ結合タンパク質」と称する）に対するｐＲＮＡ分子の割合は混合物において変動して、ｐＲＮＡ−ＣＭＰ結合タンパク質結合体を生成することができる。一般に、ｐＲＮＡ−ＣＭＰ結合タンパク質結合体の特異的活性が高ければ高いほど（モルＣＭＰ結合タンパク質当たりのモルｐＲＮＡ）、アッセイ性能は向上する。ＣＭＰ結合タンパク質に対するｐＲＮＡの最適な比は、ｐＲＮＡ＋ＣＭＰ結合タンパク質の各組み合わせについて決定することができる。ある比を超えると、ＣＭＰ結合タンパク質に更にｐＲＮＡを追加するとＣＭＰ結合タンパク質開始物質において観察されなかった高分子量（ＨＭＷ）集合体が発生し始める可能性がある。これらのＨＭＷ集合体は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって見ることができる。理論に縛られることなく、ＨＭＷ集合体の形成の原因として最も可能性が高いのは、結合反応の間のタンパク質−タンパク質架橋ではなく、非特異的静電相互作用である。ｐＲＮＡは、品質管理試験分析によって確認されたように、ｐＲＮＡオリゴマー当たり１つだけの反応部を含むからである。この理論を裏付けることとして、ＳＣＤ毛管電気泳動を変性させることによってｐＲＮＡ−ＣＭＰ結合タンパク質結合体をクロマトグラフィーで分離させた場合、タンパク質−タンパク質架橋は観察されない。結合したＣＭＰ結合タンパク質の移動度の観察されたシフトはＣＭＰ結合タンパク質当たり１、２、３、又は４ｐＲＮＡ分子の追加に相当し、ｐＲＮＡ組み込みレベルが高くなると別個に分解した種に分解されなかった。しかしながら、結合体サイズのシフトは共有結合タンパク質−タンパク質二量体及び三量体に対応しない。汚染しているＨＭＷ材料の発生は、結合反応における反応物の比を反映するｐＲＮＡ−ＣＭＰ結合タンパク質結合体のｐＲＮＡ特異的活性（モルＣＭＰ結合タンパク質あたりのモルｐＲＮＡ）に正比例する。ＨＭＷ集合体は、ニトロセルロース上でストライプに形成したｐＲＮＡ試験ラインに対する非特異的結合を生成することができる。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ材料を除去して、アッセイにおける特異的ｐＲＮＡ／ｐＲＮＡ相互作用を維持することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を含む当技術分野において既知の様々な技法を用いて、単量体ｐＲＮＡ−ＣＭＰ結合タンパク質結合体からＨＭＷ集合体を除去することができる。ＨＭＷ集合体のＳＥＣによる除去は、他のｐＲＮＡ試験系に対する非特異的結合を生成する材料を導入することなく、ｐＲＮＡ−ＣＭＰ結合タンパク質結合体のｐＲＮＡ特異的活性を増大させることによってアッセイ感度を上昇させるための機構を提供する。一例として、抗体−ｐＲＮＡ結合体からＨＭＷ材料をＳＥＣにより分離させることは、セファクリル３００ＨＲクロマトグラフにおいて実行し示すことができる。ＨＭＷ材料は最初にカラムから溶出し（８７〜１０８分）、その後で抗体−ｐＲＮＡ結合体から溶出する（１０８〜１２５分）。１６５〜１９５分において材料の２つの他のピークが溶出し、組み入れられていないｐＲＮＡを表す。結合特異性及び感度について良好なアッセイ性能を維持するために、ＨＭＷの一部を除去することによって高特異的活性ｐＲＮＡ結合体の生成を向上させることができる。どのくらいｐＲＮＡ特異的活性を上昇させることが可能であるかに関する限度は、ＳＥＣクロマトグラフィーから得られる単量体未集合ｐＲＮＡ−ＣＭＰ結合タンパク質結合体の歩留まりによって設定される。
【０２９５】
[00314]  いくつかの実施形態において、ｐＲＮＡは、ＨＭＷの部分を除去していないｐＲＮＡのものの少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の特異的活性を有する。酵素活性及び基体特異性の尺度のアッセイ及び定量化の方法は当業者には周知である。
【０２９６】
[00315]  別の実施形態において、（例えば図１８）ＴＤ１８０７は、異なるＣＭＰカテゴリを用いた（例えば抗体、核酸、ｐＲＮＡ、アビジン／ストレプトアビジン／ビオチンの組み合わせ）複数のアドレス指定可能試験ラインを含む。
【０２９７】
[00316]  図１８に示す一実施形態では、少なくとも１つのアドレス指定可能ライン又は特異的捕捉ゾーン１８０５、１８１２は、ｐＲＮＡ  ＩＣＭＰ１８０４、１８１１を含み、これが有するｐＲＮＡ１８０３は、固体支持体１８０８（例えばニトロセルソース、ポリスチレン、ガラス、プラスチック、金属等）に結合し、抗体に結合した（１８０７）同種又は相補的ｐＲＮＡ配列に対する結合が特異的であり、特定の標的検体１８０６に特異的な捕捉プローブ１８０２、１８１０を形成する。検出プローブ１８０１は、標識１８０９に結合した検体と特異的に結合することができる抗体を含む。
【０２９８】
[00317]  検出プローブ−標的検体−捕捉プローブで形成された免疫複合体は、効果的に固定化することができ、該捕捉プローブに含まれるＣＭＰに特異的なＩＣＭＰ（例えば相補的又は同種のｐＲＮＡ対）を含むアドレス指定可能ラインと特異的に結合することができる。
【０２９９】
[00318]  一実施形態において、ｐＲＮＡ分子はＣＭＰとして捕捉プローブに含まれ、捕捉プローブで用いられる各ｐＲＮＡについて、１つのアドレス指定可能ライン上に相補的な固定化ｐＲＮＡ（すなわちＩＣＭＰ）がある。一実施形態では、試験ストリップは、試験ストリップ上の１、２、３、４、５、６、又は７つの別個のアドレス指定可能ライン上等にｐＲＮＡを含む複数のアドレス指定可能ラインを含む。
【０３００】
[00319]  一実施形態において、ＴＤは複数の試験ゾーンを有する試験ストリップを含み、各試験ゾーンは別個の検体（例えばインフルエンザＡ又はＢ型）及び／又はサブタイプ（例えばインフルエンザＡ型パンデミック及び非パンデミックサブタイプ）に対して特異的である。一実施形態（例えば図１９）では、ＴＤは少なくとも４つの試験ゾーンを有する試験ストリップを含み、１つの試験ゾーンはインフルエンザＡ型ウイルス又はその成分を検出するように構成され、第２の試験ゾーンはインフルエンザＡ型のサブタイプ、例えばＨ１型を検出するように構成され、第３の試験ゾーンはインフルエンザＡ型のサブタイプ、例えばＨ３型を検出するように構成され、第４の試験ゾーンはインフルエンザＢ型を検出するように構成されている。更に別の実施形態では、各試験ゾーンは異なるＩＣＭＰを含み、各々が配列番号１２０〜配列番号１２６から成る群から選択されたｐＲＮＡ配列を含むようになっている。
【０３０１】
[00320]  試験装置は、捕捉部分の様々な種又はカテゴリ（例えばｐＲＮＡ及びアビジン／ストレプトアビジン）を組み合わせて用いることができる。このため、例えば、２つの試験ゾーンはパートナー捕捉部分としてｐＲＮＡを用いることができ、他の試験ゾーンはストレプトアビジン／アビジン−ビオチン、固定した抗体、又はＤＮＡ／ＲＮＡを用いることができる。明確さのため、１つの試験ゾーンに配された捕捉プローブ及びＩＣＭＰの文脈において、ＣＭＰ及びＩＣＭＰは、相互に対する特異的結合に基づいて、本発明の様々な実施形態において選択され用いられる（例えばｐＲＮＡはその相補的ｐＲＮＡに結合し、抗体はその標的抗原に結合し、アビジンはビオチンに結合する等）。
【０３０２】
[00321]  ＩＣＭＰ及び／又はＣＭＰ間の交差反応を最小限に抑えるため、１つのタイプ又はカテゴリのＩＣＭＰが同じカテゴリのＩＣＭＰを有する隣接アドレス指定可能ラインの隣に配置されないように、アドレス指定可能ラインを構成することができる。例えば、抗体ＩＣＭＰはアドレス指定可能ライン１、３、及び５に配置するが、異なるＩＣＭＰ（例えばｐＲＮＡ又はアビジン／ストレプトアビジン／ビオチン）はアドレス指定可能ライン２及び４に配置する。
【０３０３】
[00322]  別の実施形態において、同じタイプのＩＣＭＰを用いることができ、例えば全ての試験ゾーンがｐＲＮＡを含むが、任意の２つの隣接したライン上のｐＲＮＡは低減した交差反応を示すことに基づいて選択される。一実施形態では、１、２、３、又は４つの試験ゾーンの各々は異なるｐＲＮＡ配列を含み、少なくとも１つのｐＲＮＡは配列番号１２０〜配列番号１２６から選択される。
【０３０４】
[00323]  一実施形態において、ｐＲＮＡを含む各アドレス指定可能ラインをスペーサラインが分離するようにｐＲＮＡを離間させ、ｐＲＮＡアドレス指定可能ラインは別のｐＲＮＡアドレス指定可能ラインに直接隣接しないようになっている。
【０３０５】
[00324]  更に別の実施形態において、異なる多数のアドレス指定可能試験／捕捉ゾーン上で、異なるタイプの捕捉部分パートナーの組み合わせ（例えば抗体、核酸、ｐＲＮＡ、アビジン／ストレプトアビジン／ビオチンの組み合わせ）を用いて、特定のカテゴリのパートナー捕捉部分が、同じカテゴリのパートナー捕捉部分に隣接したアドレス指定可能試験／捕捉ゾーン上に位置しないようになっている。例えば、アドレス指定試験／捕捉ゾーン２において抗体パートナー捕捉部分を用いた場合、アドレス指定可能試験／捕捉ゾーン１及び３は抗体パートナー捕捉部分を含まないが、その代わりに、ｐＲＮＡ、核酸、アビジン／ストレプトアビジン／ビオチンパートナー捕捉部分又は対照又は空白ラインを含むことができる。各カテゴリのパートナー捕捉部分の間に異なるカテゴリのパートナー捕捉部分を置くことによって、アドレス指定可能試験／捕捉ゾーン間に存在する交差反応の量を軽減することができる。
【０３０６】
[00325]  一実施形態において、各カテゴリのパートナー捕捉部分の間に異なるカテゴリのパートナー捕捉部分を置くことによって、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上、交差反応の量を軽減させて、いっそう特異的なアッセイを行う。捕捉部分パートナーのタイプを交互に配置した試験装置の交差反応軽減についての測定は、捕捉部分パートナーのタイプを交互に配置していない同様の装置（例えば隣接したアドレス指定可能試験／捕捉ゾーン上に抗体パートナー捕捉部分が配置されている）に対する結合と比較することによって実行可能である。
【０３０７】
[00326]  アドレス指定可能ラインに、様々な濃度のｐＲＮＡを結合することができる。いくつかの実施形態では、試験ライン上のｐＲＮＡの濃度は１．０ｐｇ／ｍｍ（ストリップ幅）から１０００ｎｇ／ｍｍ（ストリップ幅）まで、又は２．０ｐｇ／ｍｍ（ストリップ幅）から５００ｎｇ／ｍｍ（ストリップ幅）まで、又は２．５ｐｇ／ｍｍ（ストリップ幅）から２００ｎｇ／ｍｍ（ストリップ幅）までとすることができる。いくつかの実施形態では、約５ｍｍ幅の試験ストリップについて、この試験ストリップに結合されるｐＲＮＡの濃度は１０ｎｇ／ストリップから１００００ｎｇ／ストリップまで、又は２０ｎｇ／ストリップから５０００ｎｇ／ストリップまで、又は３０ｎｇ／ストリップから４０００ｎｇ／ストリップまでである。
【０３０８】
[00327]  このため、本発明のＳＣＤ／ＴＤの中心的な態様では、それらは、限定ではないが細胞、細胞成分（例えば細胞マーカー、細胞表面マーカー）、及びタンパク質（例えば酵素）を含む多数の検体を検出するように構成することができる。
【０３０９】
[00328]  一実施形態において、本発明のＳＣＤ／ＴＤは、特定の対応する検体が既知であるか又は将来識別される病原性の状態についてアッセイを行うための方法において用いられる。ＳＣＤ及びＴＤは、本明細書に開示した捕捉プローブ及び検出プローブの任意の組み合わせを提供するように構成することができる。例えば、心筋梗塞（ＭＩ）に対応する多数の検体をＭＩの検出／診断において識別することができる。当技術分野において、米国特許第５，６０４，１０５号、第５，７１０，００８号、第５，７４７，２７４号、第５，７４４，３５８号、及び第５，２９０，６７８号に開示された心臓マーカーのためのもの等、様々な状態についてのマーカーが既知である。これらの特許の各々の開示は参照によりその全体が本願に含まれるものとする。
【０３１０】
[00329]  一実施形態において、試料及びＳＣＤ緩衝液及び／又は試薬の混合物がＳＣＤにおいて形成され、ＳＣＤからＴＤを通って、毛管作用、静水圧、又は他の非毛管作用を含むいくつかの機構のいずれかにより、固体材料／基体（例えば試験ストリップ）のマトリックスの表面に沿って又はその内部を流れる。標的の検体が存在する場合は、捕捉プローブ−検体−検出プローブを含む複合体が形成され、かかる複合体は、試験ストリップを通過すると指定された試験ゾーンに蓄積して信号を発生させ、これを肉眼によって又は読み取り装置を用いて解釈することができる。
【０３１１】
[00330]  アプタマー    いくつかの実施形態において、捕捉部分パートナー又は検体特異的結合因子のいずれかとして、又は本発明のＳＣＤ及びＴＤの双方において、アプタマーを用いる。アプタマーは、核酸の候補混合物から識別される核酸を含む。一実施形態では、アプタマーを用いて標的検体と結合し、これによって検体は、捕捉プローブ、検出プローブ、又は捕捉プローブ及び検出プローブ双方において検体特異的結合因子となる。
【０３１２】
[00331]  様々な実施形態において、アプタマーは、標的検体（例えば本明細書で開示した感染因子）に対する結合特異性に基づいて、ＳＥＬＥＸ方法によって分離された核酸リガンドと実質的に相同の核酸配列を含む。実質的に相同であるとは、７０％を超える、もっとも好ましくは８０％を超える主な配列の相同の程度を意味する。本明細書で用いる場合、「ＳＥＬＥＸ」方法は、例えばタンパク質との結合のような所望の作用において標的検体と相互作用する核酸リガンドの選択と、選択された核酸の増幅との組み合わせを含む。選択／増幅工程の任意の繰り返しサイクルによって、極めて多数の核酸を含むプールからの標的抗原／バイオマーカーと最も強く相互作用する核酸の１つ又は少数の選択が可能となる。選択／増幅手順のサイクルは、選択した目標を達成するまで継続される。ＳＥＬＥＸ方法は、米国特許出願第０７／５３６，４２８号及び米国特許第５，４７５，０９６号及び第５，２７０，１６３号に記載されている。
【０３１３】
[00332]  感染因子    本組成及び方法の様々な実施形態において、感染因子は、限定なく、バクテリア、酵母、真菌、ウイルス、真核生物寄生動物等を含む任意の病原体とすることができる。いくつかの実施形態では、感染因子は、インフルエンザイウイルス、パラインフルエンザウイルス、アデノウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、肝炎ウイルスＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型等、ＨＩＶ、エントロウイルス、乳頭腫ウイルス、コクサーキーウイルス、単純疱疹ウイルス、又はエプスタインバーウイルスである。他の実施形態では、感染因子は、ミコバクテリウム、連鎖球菌、サルモネラ菌、シゲラ菌、ブドウ球菌、ナイセリア、クロストリジウム、又は大腸菌である。感染因子のタイプ又はサブタイプに特異的である結合因子（例えば抗体）の異なるパネルを用いることによって、本発明の組成及び方法を異なる感染因子に容易に適合可能であることは、当業者には明らかであろう。
【０３１４】
[00333]  通常、感染因子の一般的なタイプは、感染因子の属の種類又は感染因子の任意の主要なもしくは第１の例のタイプ判別又は識別とすることができる。感染因子のサブタイプは、感染因子の種もしくは系統タイプ又は感染因子の任意の第２のもしくは次のタイプ判別とすることができる。感染因子の一般的なタイプ又はサブタイプの識別は、様々な適切な試験セットアップによって実行することができる。例えば、感染因子の一般的なタイプの識別は、（１）感染因子の特異的な一般的タイプ、（２）感染因子のある所望のもしくは選択された一般的タイプ、又は（３）感染因子の全てもしくは実質的に全ての関連する一般的タイプ、又はそれらの組み合わせのための１つ以上のスクリーニング試験を含むことができる。同様に、感染因子のサブタイプの識別は、（１）感染因子の１つ以上の特異的サブタイプ、（２）感染因子の特定の一般的タイプの１つ以上の特異的サブタイプ、（３）試験対象の被検体に関連した追加情報に基づいて選択した感染因子の１つ以上の特異的サブタイプ、例えば特定の集団又は地理的位置について疑われるかもしくは予想される１つ以上、又は（４）一般的タイプについて試験した関連因子と同一であるかもしくはそれに関連付けられた感染因子の１つ以上の潜在的にパンデミックなもしくは流行性のサブタイプ、又はそれらの組み合わせのための１つ以上のスクリーニング試験を含むことができる。
【０３１５】
[00334]  別の態様によれば、この方法は、第１の感染因子に密接に関連した第２の感染因子の一般的タイプ及び／又はサブタイプの識別を任意に又は更に含むことができ、あるいは、第２の感染因子の感染は第１の感染因子の感染に関連付けられるか又は結合される可能性がある。例えば、ＨＩＶ感染はいくつかのバクテリア感染に関連付けることができ、従って、ＨＩＶ並びにミコバクテリウム及び／又はニューモシスティスカリニの一般的タイプ及びサブタイプを識別することが有用である。従って、一実施形態では、この方法は、ウイルス並びにバテクリアの一般的タイプ及びサブタイプの識別を含む。別の実施形態では、本発明の様々な実施形態によって与えられたこの方法は、第１のウイルス並びに第２のウイルスの一般的タイプ及びサブタイプの識別を含む。例えば、ＨＩＶ並びに肝炎ウイルスの一般的タイプ及びサブタイプを識別するための方法が提供される。別の例は、インフルエンザ感染についての患者の試験におけるものであり、ここでサブタイプ内の系統の突然変異又は変形が起こることが知られ、いくつかのインフルエンザ形態が他のものよりも病原性がはるかに高い。更に別の例は、例えばＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２のような異なるタイプのＨＩＶの検出である。１つの態様では、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の一般的タイプの識別がＨＩＶの存在のためのスクリーニングを含むのに対し、ＨＩＶのサブタイプの識別は、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、及び／又はＨＩＶの他のサブタイプのためのスクリーニングを含むことができる。同様に、単式ウイルス（ＨＳＶ）等のヘルペスウイルスの一般的タイプの識別はＨＳＶの存在のためのスクリーニングを含むことができるのに対し、ＨＳＶのサブタイプの識別は、ＨＳＶタイプ１及び／又はＨＳＶタイプ２又はエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）又はＥＢＶのサブタイプのためのスクリーニングを含むことができる。
【０３１６】
[00335]  更に別の特定の態様においては、エンテロウイルスの一般的タイプの識別は、例えばポリオウイルス、コクサーキーウイルス、エコーウイルス、指定エンテロウイルス等の１つ以上のエンテロウイルスの存在のためのスクリーニングを含むことができるのに対し、エンテロウイルスのサブタイプの識別は、例えばセロタイプ１〜３のようなポリオウイルス、例えばセロタイプ１〜２２及び２４のようなコクサーキーウイルスＡ型、例えばセロタイプ１〜６のようなコクサーキーウイルスＢ型、例えばセロタイプ１〜９、１１〜２７、２９〜３１のようなエコーウイルス、及び、例えばセロタイプ６８〜７１のような指定エンテロウイルス等のためのスクリーニングを含むことができる。
【０３１７】
[00336]  一実施形態において、本発明の方法及び装置を用いて、インフルエンザＡ型サブタイプ及び／又はインフルエンザＢ型及び／又はインフルエンザＣ型を検出又は識別する。インフルエンザウイルスは、オルソミクソウイルス科オルトミクソウイルス属に属する。らせん対称でｓｓＲＮＡに覆われたウイルス。覆われた粒子の直径は８０〜１２０ｍｍ。ＲＮＡは核タンパク質（ＮＰ）と密接に結合してらせん構造を形成する。ゲノムはセグメント化され、８つのＲＮＡフラグメントを有する（７つはインフルエンザＣ型のため）。４つの主な抗原が存在する。すなわち、ヘマグルチニン（Ｈ）、ノイラミニダーゼ（Ｎ）、核タンパク質（ＮＰ）、及びマトリックス（Ｍ）タンパク質である。ＮＰは型に特異的な抗原であり、３つの形態すなわちＡ、Ｂ、及びＣで発生し、ヒト及びヒト以外のインフルエンザウイルスの分類のための基礎となる。マトリックスタンパク質（Ｍタンパク質）は、ヌクレオカプシドを囲み、粒子質量の３５〜４５％を占める。ヘマグルチニン（Ｈ）は２つのサブユニットすなわちＨ１及びＨ２から成る。ヘマグルチニンは細胞レセプタに対するウイルスの結合を実現する。ノイラミニダーゼ分子は、被覆において少量存在する。インフルエンザＡ型ウイルスのヘマグルチニン及びノイラミニダーゼ抗原の抗原差は、サブタイプへの分類の基礎となる。例えば、Ａ／ホンコン／１／６８（Ｈ３Ｎ２）は、１９６８年に患者から分離された、サブタイプＨ３Ｎ２のインフルエンザＡ型ウイルスを示す。
【０３１８】
[00337]  様々な実施形態において、本発明の方法及び装置は、ＨｘＮｙ（ここでｘは１〜１６、ｙは１〜９である）、又はそのｘｙの任意の組み合わせによって識別されるインフルエンザウイルスＡ型の検出又は識別を対象とする。例えば、一実施形態では、本発明の方法及び装置を用いてインフルエンザＡ型のサブタイプＨ１Ｎ５を検出する。このため、本発明のＳＣＤに、異なるサブタイプのインフルエンザウイルスを標的とする複数の検出プローブ及び捕捉プローブを配置する。いくつかの実施形態では、アッセイは様々な組み合わせの検出プローブを用いてインフルエンザＡ型（サブタイプＨ１／Ｈ３、及びパンデミックサブタイプＨ５）並びにインフルエンザＢ型を検出することができる。
【０３１９】
[00338]  特に、インフルエンザウイルスの一般的タイプは、例えばＡ型、Ｂ型、又はＣ型インフルエンザウイルス等、核タンパク質及びマトリックスタンパク質抗原の抗原特性に基づいて指定された任意のタイプとすることができる。一方、サブタイプは、例えばヘマグルチニン（Ｈ）又はノイラミニダーゼ（Ｎ）等の表面抗原によって特徴付けられるインフルエンザＡ型又はＢ型ウイルスの１つ以上のサブタイプ等、抗原に基づいてインフルエンザウイルスの１つ以上の更に分割されたタイプとすることができる。
【０３２０】
[00339]  一実施形態において、インフルエンザウイルスの一般的タイプの識別は、Ａ型、Ｂ型、及び／又はＣ型インフルエンザウイルスのためのスクリーニングを含むのに対し、例えばＡ型のようなインフルエンザウイルスのサブタイプの識別は、例えば試験時に集団内に存在することが予想されるサブタイプのようなＡ型の１つ以上の予想されるサブタイプ、及び任意に、例えば流行性又はパンデミックな発生等の発生について監視下にあるサブタイプのような１つ以上の疑われるサブタイプのためのスクリーニングを含む。別の実施形態では、インフルエンザウイルスの一般的タイプの識別は、Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルスのためのスクリーニングを含むのに対し、例えばＡ型ウイルスのようなインフルエンザウイルスのサブタイプの識別は、例えば次のインフルエンザの季節に流行すると予想されるサブタイプ及び／又は系統を含む試験季節の現在のワクチンサブタイプ又は系統のような、インフルエンザワクチンの生成に用いられる１つ以上のサブタイプのためのスクリーニングを含む。更に別の実施形態では、インフルエンザウイルスの一般的タイプの識別は、Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルスのためのスクリーニングを含むのに対し、例えばＡ型のようなインフルエンザウイルスのサブタイプの識別は、インフルエンザワクチンの生成に用いられる１つ以上のサブタイプ又は系統、及び、例えばＨ５Ｎ１又はその誘導体等の１つ以上の鳥サブタイプもしくは系統又はＨ１Ｎ１等の１つ以上の豚サブタイプもしくは系統のような、パンデミック発生の原因について疑われる１つ以上のサブタイプ又は系統のためのスクリーニングを含む。
【０３２１】
[00340]  更に別の実施形態において、インフルエンザウイルスの一般的タイプの識別は、Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルスのためのスクリーニングを含むのに対し、例えばＡ型のようなインフルエンザウイルスのサブタイプの識別は、限定でないが、（ａ）Ｈ１及びＨ３、（ｂ）Ｈ１、Ｈ３、及びＨ２、（ｃ）Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、及びＨ９、（ｄ）Ｈ１、Ｈ３、及びＮ１、（ｅ）Ｈ１、Ｈ３、Ｎ１、及びＮ２、（ｆ）Ｈ１、Ｈ３、及びＮ２、（ｇ）Ｎ２、及び（ｈ）Ｎ１及びＮ２を含む流行において１つ以上の共通の又は予想されるサブタイプのためのスクリーニングを含む。例えば、Ａ型インフルエンザウイルスのサブタイプ識別のためのスクリーニング試験は、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、又は（ｈ）のサブタイプグループに列挙したサブタイプのいずれか１つの存在の識別を対象とすることができ、１つのサブタイプグループにおける特定のサブタイプの存在を必ずしも識別しない。あるいは、Ａ型インフルエンザウイルスのサブタイプ識別のためのスクリーニング試験は、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、又は（ｈ）に列挙したサブタイプの各々及び全ての有無の識別を対象とすることができ、１つのサブタイプグループにおける特定のサブタイプの存在を識別する。
【０３２２】
[00341]  更に別の実施形態において、インフルエンザウイルスの一般的タイプの識別は、Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルスのためのスクリーニングを含むのに対し、例えばＡ型のようなインフルエンザウイルスのサブタイプの識別は、限定でないが、（ａ）Ｈ５、（ｂ）Ｈ５及びＨ７、（ｃ）Ｈ５、Ｈ７、及びＨ９、（ｄ）Ｎ２、Ｎ７、及びＮ８、（ｅ）Ｈ５及びＮ２、（ｆ）Ｈ５及びＮ１、（ｇ）Ｈ５及びＮ８、（ｈ）Ｈ５、Ｎ８、Ｈ７、及びＮ７、（ｉ）Ｈ５、Ｈ７、Ｈ９、Ｎ７、及びＮ８を含む流行において１つ以上のパンデミック又は予想されないサブタイプのためのスクリーニングを含む。例えば、Ａ型インフルエンザウイルスのサブタイプ識別のためのスクリーニング試験は、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）又は（ｉ）のサブタイプグループに列挙したサブタイプのいずれか１つの存在の識別を対象とすることができ、１つのサブタイプグループにおける特定のサブタイプの存在を必ずしも識別しない。あるいは、Ａ型インフルエンザウイルスのサブタイプ識別のためのスクリーニング試験は、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、又は（ｉ）に列挙したサブタイプの各々及び全ての有無の識別を対象とすることができ、１つのサブタイプグループにおける特定のサブタイプの存在を識別する。
【０３２３】
[00342]  別の特定の態様においては、肝炎ウイルスの一般的タイプはＡ型、Ｂ型、及びＣ型ウイルスとすることができ、各ウイルスは突然変異種を含むいくつかのサブタイプを有する可能性がある。一実施形態では、肝炎ウイルスの一般的タイプの識別は、Ａ型、Ｂ型、及び／又はＣ型肝炎ウイルスのためのスクリーニングを含むのに対し、肝炎ウイルスのサブタイプの識別は、Ａ型、Ｂ型、及びＣ型肝炎ウイルスのサブタイプ又は突然変異種のためのスクリーニングをそれぞれ含む。別の実施形態では、肝炎ウイルスの一般的タイプの識別は肝炎Ｂ型ウイルスのためのスクリーニングを含むのに対し、肝炎ウイルスのサブタイプの識別は、肝炎Ｂ型ウイルスの１つ以上のサブタイプ及び／又は突然変異種のためのスクリーニングを含む。更に別の実施形態では、肝炎ウイルスの一般的タイプの識別は肝炎Ｃ型ウイルスのためのスクリーニングを含むのに対し、肝炎ウイルスのサブタイプの識別は、Ｃ型肝炎ウイルスのサブタイプ１〜９の１つ以上のためのスクリーニングを含む。
【０３２４】
[00343]  一般的に、バクテリア感染因子について、バクテリア感染因子の一般的タイプ及びサブタイプの識別は、感染及び／又は因子の殺菌性抵抗に関連したバクテリア感染因子の属及び１つ以上の種もしくは系統のためのスクリーニングを含む。一実施形態では、バクテリア感染因子の一般的タイプ及びサブタイプの識別は、限定でないが、結核菌、M. avium、ウシ型結核菌、M. chelonei、M. fortuitum、M. intracellulare、M. Kansasii、ライ菌等を含むミコバクテリウム及びミコバクテリウムの１つ以上の種のためのスクリーニングを含む。別の実施形態では、バクテリア感染因子の一般的タイプ及びサブタイプの識別は、限定でないが、S. Typhi、S. enteritidis等を含むサルモネラ菌及びサルモネラ菌の１つ以上の種のためのスクリーニングを含む。更に別の実施形態では、バクテリア感染因子の一般的タイプ及びサブタイプの識別は、限定でないが赤痢菌を含むシゲラ菌及びシゲラ菌の１つ以上の種のためのスクリーニングを含む。更に別の実施形態では、バクテリア感染因子の一般的タイプ及びサブタイプの識別は、限定でないが肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌（グループＡ）等を含む連鎖球菌及び連鎖球菌の１つ以上の種のためのスクリーニングを含む。更に別の実施形態では、バクテリア感染因子の一般的タイプ及びサブタイプの識別は、限定でないが腸毒素産生性系統を含む大腸菌及び大腸菌の１つ以上の種のためのスクリーニングを含む。
【０３２５】
[00344]  本発明の様々な実施形態によれば、感染因子の一般的タイプ及びサブタイプの識別に用いるスクリーニング試験は、当分野において既知の又は今後明らかになる任意の適切な試験とすることができる。例えば、スクリーニング試験は、非核酸ベースの試験とすることができ、限定でないが、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、リガンド、又は化学作用ベースの試験を含む。一実施形態では、例えば糖タンパク質、被覆タンパク質、多糖等、感染因子の１つ以上の構造タンパク質の有無に基づいて検出を行うための方法が提供される。別の実施形態では、試験は、１つ以上の抗原又はエピトープ、又は感染因子に対する抗体の有無に基づいている。更に別の実施形態では、試験は、感染因子によって放出又は代謝された１つ以上の物質の有無に基づいている。更に別の実施形態では、試験は、感染因子の感染に関連付けられるか又はそれによって発生される宿主細胞に由来する１つ以上の物質の有無に基づいている。
【０３２６】
[00345]  様々な実施形態において、本発明の方法及び装置は、１つ以上の異なる感染因子を検出することができる。例えば、サンプリング用具は複数の異なる抗体を含むことができ、ここで多数の抗体サブグループが存在し、これによって各抗体サブグループは異なる感染因子と特異的に結合する。例えば、複数の抗体は２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のサブグループを含むことができ、複数の抗体における各抗体サブグループは異なる感染因子と特異的に結合する。いくつかの実施形態は、本発明の方法及び装置はパンデミック及び非パンデミック感染因子を検出する。一実施形態では、パンデミック及び非パンデミック感染因子はインフルエンザウイルスである。環境によっては、かかる試料収集及び処理は必然的にポイントオブケア設定で行われる（例えば現場で、サンプリング及び処理を行う多数の被検体なしに、かかるサンプリングを行う限られた労働力で）。
【０３２７】
[00346]  このため、一実施形態において、本発明の方法及び装置は、多数の試料を処理する際に、ポイントオブケア設定で利用され、試験が完了してからある時間期間が経った後で試験結果を視覚化する（すなわち読み取る）ことができる。例えば、時間期間は３０分、１時間、１．５時間、２時間、２．５時間、３時間、４時間、又は５時間とすることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示した試薬と関連付けた方法及び装置は、高い感度及び特異性を提供し、長期間にわたって蛍光結果を極めて類似の結果によって読み取ることができる。このため、いくつかの実施形態では、生物試料を収集及び処理することができるが、長い時間の後に読み取るために放置しておくことができる。これは、ポイントオブケア設定において、又は多数の試料を限られた労働力又は時間で収集して更に試料を処理する場合には、極めて有利である。
【０３２８】
[00347]  本発明の更に別の態様においては、本発明の組成及び方法は、試料に存在する１つ以上の検体の検出を対象とする。上述のように、例えば、ある条件に関連付けたマーカーと特異的に結合する異なる結合因子を用いることによって、ＭＩに関連した１つ以上の検体を検出することができる。従って、ＳＣＤ及びＴＤは、感染性疾病以外の疾病又は病理的条件を診断するために必要な試薬を含むことができる。
【０３２９】
[00348]  いくつかの実施形態において、１つ以上の検体は、病理的条件又は疾病に関連付けられたマーカーである。別の実施形態では、１つ以上の検体は、栄養状態又は条件に関連付けたポリペプチドである。更に別の実施形態では、１つ以上の検体は、細胞のサイクル及び成長に関連付けられた塞翁マーカーである。別の実施形態では、１つ以上の検体は、細胞の増殖及び分化に関連付けられている。一実施形態では、細胞マーカーは癌と関連付けられている。
【０３３０】
実施例
[00349]  実施例１    ２００７年オーストラリアのインフルエンザシーズン中のインフルエンザ検出
【０３３１】
[00350]  ２００７年オーストラリアのインフルエンザシーズン中に、１２１の鼻咽頭スワブ試料セットを収集した。鼻試料を収集した後、スワブを１ｍＬのウイルス移送媒体中に配し、標準的なプロトコルに従って１分間強く混合し、アリコートを培養のため取り出し、残りの試料を凝固させた。この試験のため、残りの試料に綿を浸し、インフルエンザＩＤ試験を用いてアッセイを行った。各試料から追加で１００μＬのアリコートを取り出し、核酸を精製し、インフルエンザＡ型ウイルス検出のためにリアルタイムＰＣＲアッセイを行った。
【０３３２】
[00351]  表６    インフルエンザＡ型検出のための４ラインｐＲＮＡ捕捉システムを用いた研究結果
【表６】
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【０３３３】
[00352]  ５つの培養−／インフルエンザＩＤ＋試料のうち、リアルタイム結果に基づいて３つが陽性と確認された。これらの結果を計算に含めると、感度、特異性、正の予測値（ＰＰＶ）、負の予測値（ＮＰＶ）は、それぞれ９２．６％、９６．８％、８９．３％、及び９７．８％であった。ＰＰＶは、正の合計（ＴＰ）をＴＰ及び誤った負（ＦＮ）の和で除算することで算出される。ＮＰＶは、負の合計（ＴＮ）をＴＮ及び誤った負（ＦＮ）の和で除算することで算出される。２つのデータセットに見られるように、識別された結合ｐＲＮＡ：タンパク質の比はアッセイ性能を改善した。
【０３３４】
[00353]  また、バクテリア（ｎ＝１０）、ウイルス（ｎ＝１０）、及び潜在的な阻害物質（ｎ＝１５）によって、干渉及び特異性の研究を行った。この試験中、交差反応も著しい干渉も検出されなかった。これらの結果によって、インフルエンザＩＤ迅速インフルエンザ試験がインフルエンザウイルスの検出及び区別のための高感度かつ高特異性のアッセイであることが実証される。
【０３３５】
[00354]  実施例２    タイター培養ウイルスを用いた季節性アッセイ
【０３３６】
[00355]  この研究では、タイター培養ウイルスを用いた季節性アッセイにおいてＡ型及びＢ型の双方の検体の分析性能を調べる。各ウイルス系統はＴＣＩＤ５０タイターを有し、アッセイにおいて信号が発生しなくなるまで各々を希釈した。市販のポイントオブケアＡ型及びＢ型インフルエンザアッセイキットを用いて、各希釈物の試験を行うと共に、ＰＣＲ試験を行った。一実施形態では、希釈物感度結果によって、Ａ型及びＢ型の検体は市販のインフルエンザＡ型及びＢ型ポイントオブケアアッセイに比べて２から３対数感度が高いが、ＰＣＲに比べると１から２対数感度が低いことが示された。
【０３３７】
[00356]  実施例３    感染した患者におけるウイルスタイターレベルの調査
【０３３８】
[00357]  この研究では、Quidel QuickVue（Ｒ）システムと比較して、本発明のシステムを用いて迅速インフルエンザ試験並びにＰＣＲ分析の分析性能を調べた。異なる地理的位置からＡ型及びＢ型の双方の検体のアッセイを行った。各ウイルス系統はＴＣＩＤ５０タイターを有し、アッセイにおいて信号が発生しなくなるまで各々を希釈した。市販のQuidel QuickVue（Ｒ）キットを用いて、各希釈物の試験を行うと共に、ＰＣＲ試験を行った。希釈物感度結果によって、本発明のシステムはＡ型及びＢ型インフルエンザ標的検体の検出において市販のインフルエンザアッセイよりも感度が高いが、ＰＣＲに比べると１から２対数感度が低いことが示された。
【０３３９】
[00358]  実施例４    鼻試料における臨床的に適切な濃度でのＨ５検出の調査
【０３４０】
[00359]  この研究は、鼻試料における臨床的に適切な濃度でのＨ５検体を標的とする迅速インフルエンザの分析性能を調べた。Ｈ１及びＨ３試料も試験を行った。各ウイルス系統はＴＣＩＤ５０タイターを有し、アッセイにおいて信号が発生しなくなるまで各々を希釈した。１０２までのタイターで試料が検出された。
【０３４１】
[00360]  実施例５    鼻試料によるＰＣＲとの比較
【０３４２】
[00361]  この研究は、ＰＣＲと比較して、鼻咽喉試料に対する本発明の装置を用いた迅速インフルエンザ試験の分析性能を調べた。インフルエンザの季節中に１６４の試料の試験を行った。ＰＣＲによって陽性であると分かった３４のＡ＋インフルエンザ試料のうち、１００％の試料が本発明の装置を用いて検出された。ＰＣＲによって陽性であると分かった６のＢ＋インフルエンザ試料のうち、１００％の試料が本発明の装置を用いて検出された。ＰＣＲによって陰性であると分かった１２３のインフルエンザ試料のうち、本発明の装置では試料の９９．２％が陰性であると検出された。試料のうち、ＰＣＲによって確定されない試料は１つであった。
【０３４３】
[00362]    実施例６    レトロスペクティブ鼻試料検出
【０３４４】
[00363]  １００のレトロスペクティブに収集した鼻吸引試料の試験を行い、培養によって確認した。本発明の装置を市販のシステムと比較した。本発明の装置は陽性の試料の８６〜８７％を検出し、他の市販のシステムは６９〜８０％を検出した。
【０３４５】
[00364]  本発明の様々な実施形態について本明細書において図示し説明したが、かかる実施形態は単なる例示に過ぎないことは当業者には明らかであろう。本発明から逸脱することなく、当技術分野において多数の変形、変更、及び置換を行うことができる。本発明を実施する際に、本明細書に記載した本発明の実施形態に対する様々な代案を使用可能であることは理解されよう。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を規定し、これらの特許請求の範囲及びその均等物の範囲内にある方法及び構造がそれによって包含されることが意図される。
【０３４６】
[00365]  実施例７    多数のインフルエンザ検体を用いたウイルスタイターレベルの調査
【０３４７】
[00366]  この実施例では、試験装置を用いてインフルエンザウイルスの異なるサブタイプについてアッセイを行う。試験装置は、Ａ型、Ｈ１型、Ｈ３型、及びＢ型の検体のアッセイのために別個のアドレス指定可能ライン１９８０を有する試験ストリップを含むように設計されている。図１９に試験装置の図を示す。ｐＲＮＡ捕捉部分パートナー１９６０（例えばｐＲＮＡｂ、ｐＲＮＡｄ、ｐＲＮＡｆ、及びｐＲＮＡｈ、すなわち４つの異なるｐＲＮＡ配列）を、異なるアドレス指定可能ライン１９８０において試験ストリップに固定化する（図１９で左から右へ）。試料を捕捉プローブ１９３０及び検出プローブ１９１０と混合した試料収集装置からの試料を、１９４０において試験装置に挿入する。捕捉プローブはｐＲＮＡ分子１９５０を有し、これらは各々、ウイルス抗原１９２０に特異的である抗体に結合されている。異なる形状のウイルス抗原１９２０を図によって示し、異なるウイルス及び同一のウイルスの異なる系統からの抗原の存在を示す。検出プローブ１９１０は、ユーロピウム標識１９７０に結合されたウイルス抗原に特異的である抗体を有する。試料は、毛管流１９９０の方向に洗浄緩衝液によって運ばれる。一実施形態では、試験性能を査定するために制御ライン１９８５が設けられている。制御ラインには、インフルエンザＡ型、Ｈ１型、Ｈ３型、及びインフルエンザＢ型に対して発生するマウス抗体に結合するウサギ抗マウス抗体が固定化されている。
【０３４８】
[00367]  捕捉部分１９３０に含まれるｐＲＮＡ分子１９５０（ｐＲＮＡａ、ｐＲＮＡｃ、ｐＲＮＡｅ、及びｐＲＮＡｇ）は、各ｐＲＮＡ捕捉部分パートナー１９６０（ｐＲＮＡｂ、ｐＲＮＡｄ、ｐＲＮＡｆ、及びｐＲＮＡｈ）と結合し、これによってウイルス抗原１９２０及び検出部１９１０との複合体を捕捉する。各検体結合セット（ＡＢＳ）は、各検体ごとに（すなわちインフルエンザＡ型、Ｈ１型、Ｈ３型、及びＢ型）設計され、４つの異なるＡＢＳの各々は、順番に、第１の試験ゾーン上の固定化ｐＲＮＡに相補的なｐＲＮＡに結合されたマウス抗Ａ抗体を有する捕捉プローブ及びユーロピウム標識に結合したマウス抗インフルエンザＡ抗体の検出プローブ、第２の試験ゾーン上の固定化ｐＲＮＡに相補的なｐＲＮＡに結合されたマウス抗Ｈ１抗体を有する捕捉プローブ及びユーロピウム標識に結合したマウス抗インフルエンザＨ１抗体の検出プローブ、第３の試験ゾーン上の固定化ｐＲＮＡに相補的な第３のｐＲＮＡに結合されたマウス抗Ｈ３抗体を有する捕捉プローブ及びユーロピウム標識結合したマウス抗インフルエンザＨ３抗体の検出プローブ、第４の試験ゾーン上で固定化ｐＲＮＡに相補的なｐＲＮＡに結合されたマウス抗Ｂ抗体を有する第４の捕捉プローブ及びユーロピウム標識結合したマウス抗インフルエンザＢ抗体の検出プローブを含む。
【０３４９】
[00368]  毛管流の後、異なるインフルエンザサブタイプを検出するため、異なるアドレス指定可能ライン１９８０上でユーロピウム結合について試験装置の試験を行う。
【０３５０】
[00369]  実施例８    多数のインフルエンザ検体を用いたウイルスタイターレベルの調査
【０３５１】
[00370]  この実施例では、試験装置を用いてインフルエンザウイルスの異なるサブタイプについてアッセイを行う。試験装置は、Ａ型、Ｈ１型、Ｈ３型、及びＢ型の検体のアッセイのために別個のアドレス指定可能ラインを有する試験ストリップを含むように設計されている。試験装置に適用する前に、装置は、試料収集装置において試料と反応させるためにプローブ結合体及び検出プローブの５つの検体結合セットを用いる。検体結合セット１は、ｐＲＮＡに結合したインフルエンザＡ型に対する抗体の捕捉プローブと、ユーロピウム標識に結合されたインフルエンザＡ型に対する第２の抗体を含む検出プローブと、を含む。セット２は、ビオチンに結合したＨ１型に対する抗体を含む捕捉プローブと、ユーロピウム標識に結合されたＨ１型に対する第２の抗体を含む検出プローブと、を含む。検体結合セット３は、ｐＲＮＡに結合したＨ３型に対する抗体の捕捉プローブと、ユーロピウム標識に結合されたＨ３型に対する第２の抗体を含む検出プローブと、を含む。
【０３５２】
[00371]  検体セット４は、ストレプトアビジンに結合したＨ５型に対する抗体の捕捉プローブと、ユーロピウム標識に結合されたＨ５型に対する第２の抗体を含む検出プローブと、を含む。検体結合セット５は、ｐＲＮＡに結合したインフルエンザＢ型に対する抗体の捕捉プローブと、ユーロピウム標識に結合されたインフルエンザＢ型に対する第２の抗体を含む検出プローブと、を含む。アドレス指定可能ライン１、３、及び５の各々において、異なるｐＲＮＡを固定化する。ライン１におけるｐＲＮＡはインフルエンザＡ型のための免疫複合体を捕捉することができる。ライン３は、Ｈ３型のための免疫複合体を捕捉することができる固定化ｐＲＮＡを有する。ライン５は、インフルエンザＢ型のための免疫複合体を捕捉することができる固定化ｐＲＮＡを有する。アドレス指定可能ライン２には、Ｈ１型に対する免疫複合体を捕捉することができるストレプトアビジンが固定化されている。アドレス指定可能ライン４には、Ｈ５型の免疫複合体を捕捉することができるビオチンが固定化されている。
【０３５３】
[00372]  装置では、隣接するアドレス指定可能ラインには、同一カテゴリの捕捉部分パートナーを有しない（例えばｐＲＮＡ又はアビジン／ストレプトアビジン）。患者の試料を試料収集用具で収集し、試料収集装置に挿入し、上部チャンバを試料収集管に配置して装置を封止する。上部チャンバ内の流体を放出し、液体は綿又は収集用具を流れてこれを洗い、収集用具から液体へと試料を放出して、試料収集管の下部チャンバへと流れる。患者の試料を含む流体は、試料収集装置の下部チャンバにおいて５つの検体結合セットと混合する。対象の検体が存在する場合、試料は反応して免疫複合体を形成する。
【０３５４】
[00373]  試料収集装置の分配先端部を試験装置のポートに挿入し、任意の免疫複合体を含む試料混合物を試験装置に送出する。試料混合物の送出後、試験装置の洗浄緩衝液を放出する。
【０３５５】
[00374]  試料混合物は洗浄緩衝液によって毛管流の方向に運ばれる。毛管流の後、異なるインフルエンザサブタイプを検出するため、異なるアドレス指定可能ライン上でユーロピウム結合について試験装置の試験を行う。
【０３５６】
[00375]  実施例９    試験装置上のｐＲＮＡ結合体のストライプ形成
【０３５７】
[00376]  この実施例では、本発明の試験装置において用いるために、ｐＲＮＡ結合体を調製し、ニトロセルロース片上にストライプ形成する。
【０３５８】
[00377]  材料及び方法
【０３５９】
[00378]  化学物質  ＥＺ−結合ＮＨＳ−発色性ビオチンはPierce Chemical Co.（イリノイ州ロックフォード）から購入される。ニトロセルロース膜（ＳＡ３Ｊ１０７１０７）はMilliporeから購入される。ストレプトアビジンユーロピウム（ＳＡＥＵ）ラテックス粒子（カタログ番号２９４７−０７０１）はThermofisher Scientific（Seradyne）から購入される。
【０３６０】
[00379]  以下のｐＲＮＡオリゴマーは合成される。４ａ９−インドール、ＡＴＧＣＤＣＴＴＣ（ここでＤは配列中のインドール基を表す）。４ｂ８−インドール、ＧＡＡＤＧＣＡＴ。５ａ８、ＴＧＡＴＧＧＡＣ。５ｂ９−インドール、ＧＴＣＤＣＡＴＣＡ。６ａ６、ＣＡＧＴＡＧ。６ｂ６、ＣＴＡＣＴＧ。８ａ６、ＧＡＣＴＣＴ。８ｂ６、ＡＧＡＧＴＣ。
【０３６１】
[00380]  抽出試薬    ５０ｍＭトリス、ｐＨ８．５。０．７５Ｍ  ＮａＣｌ。１．５％牛血清アルブミン。０．７５％温浸カゼイン。２５μｇ／ｍＬマウスＩｇＧ。１．５％サポニン。０．３７％ラウリルスルホベタイン３−１２。５０μｌ／ｍＬゲンタマイシン。０．０９５％アジ化ナトリウム。０．００４５％シリコン消泡剤。抽出試薬球部は１９５μｌの抽出試薬を充填する。
【０３６２】
[00381]  洗浄緩衝液    ２０％ｗ／ｖスクロース、５０ｍＭトリス、ｐＨ８．５。０．７５Ｍ  ＮａＣｌ。１．５％牛血清アルブミン。０．７５％温浸カゼイン。１．５％サポニン。０．３７％ラウリルスルホベタイン３−１２。５０μｌ／ｍＬゲンタマイシン。０．０９５％アジ化ナトリウム。０．００４５％シリコン消泡剤。洗浄緩衝液パケットは１１０μｌの洗浄緩衝液を充填する。
【０３６３】
[00382]  抗体    ＡＡＨ５抗インフルエンザＡ型核タンパク質単クローン抗体はMeridian（オハイオ州シンシナティ）から購入される。Ｍ４０９０９１３抗インフルエンザＡ核タンパク質及びＭ２１１０１７１抗インフルエンザＢ核タンパク質単クローン抗体はHyTest Ltd.（フィンランドのトゥルク）から購入される。９Ｄ５及び４Ｃ１０抗Ｈ１ヘマグルチニン及び４Ｄ１、８Ｈ５、及び２Ｆ１０抗Ｈ５ヘマグルチニン単クローン抗体はHX Diagnostics（カリフォルニア州エメリーベル）から購入される。２Ｈ１１及び１Ｆ４抗Ｈ３ヘマグルチニン及び２−１９９Ｃ抗シトクロムＣ単クローン抗体はBioProcessing Inc.（メーン州ポートランド）によって購入される。対照ライン抗体ウサギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃフラグメント特異性はJackson ImmunoResearch Laboratories（ペンシルバニア州ウエストグローブ）からである。
【０３６４】
[00383]  結合体
【０３６５】
[00384]  ビオチン結合体は、７５ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．０）において、ビオチン：抗体比２：１で室温にて２時間行う。ビオチン結合体を精製し、セファクリルＳ３００を用いてサイズ排除クロマトグラフィーにより高分子量汚染物質を除去する。７５ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．０）において室温で１４〜１８時間、抗体又は他のタンパク質に対するｐＲＮＡ結合体を実行し、活性化ｐＲＮＡを抗体と反応させる。ｐＲＮＡ結合体を精製し、セファクリルＳ３００を用いてサイズ排除クロマトグラフィーにより高分子量汚染物質を除去する。０．１５ｍｇ／ｍｌで２ボリュームのビオチン化抗体を１ボリュームの０．２％ＳＡＥＵ粒子と攪拌して室温で２時間培養することによって、ＳＡＥＵ粒子にビオチン化抗体を結合させる。更に２時間、１ボリュームの１０μＭビオチンにより未結合ストレプトアビジンをブロックする。結合した粒子を中空繊維膜分離法によって洗浄する。洗浄したビードの濃度は、０．２％ＳＡＥＵ粒子規格を用いて蛍光によって求められる。
【０３６６】
[00385]  凍結乾燥試薬ペレット
【０３６７】
[00386]  ２０μｌの試薬調合物を液体窒素に分配することによって、試薬を２０μｌペレットとして凍結乾燥する。次いで、凍結した試薬ペレットを凍結乾燥させて、使用するまで乾燥状態で維持する。試薬調合物は以下の通りである。
【０３６８】
[00387]  ｐＲＮＡペレット  ｐＲＮＡ−抗体結合体。Ａ型、Ｂ型、Ｈ１型、Ｈ３型、Ｈ５型  ２０μｌ試薬ペレット当たり各々０．０５〜０．５ｕｇ。１０ｍＭトリス、ｐＨ８．０。１％ＢＳＡ。０．３Ｍトレハロース。
【０３６９】
[00388]  ユーロピウムペレット    ユーロピウム結合体。Ａ型、Ｂ型、Ｈ１型、Ｈ３型、Ｈ５型  ２０μｌ試薬ペレット当たり１．０〜１０ｕｇユーロピウム−抗体ビード。１０ｍＬトリス、ｐＨ８．０。１％ＢＳＡ。０．３Ｍトレハロース。
【０３７０】
[00389]  トリス（２−カルボキシエチルホスフィンＨＣｌ（ＴＣＥＰ）２０μｌペレット。１７ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０ｍＬトリス、ｐＨ８．０。１％ＢＳＡ。０．３Ｍトレハロース。
【０３７１】
[00390]  ニトロセルロースに対する試験ラインｐＲＮＡ結合体の適用
【０３７２】
[00391]  試験ラインｐＲＮＡは、２−１９９Ｃ単クローン抗体に結合し、３％メタノールを含むＰＢＳ緩衝液において１．５ｍｇ／ｍｌに調節される。Imagene Technology IsoFlow（ＴＭ）ディスペンサーを用いて、０．０７５μｌ／ｍｍのレートでニトロセルロース上に試験ライン結合体を分配する。メタノールなしで１．２ｍｇ／ｍｌの濃度で対照ラインラビット抗マウス抗体を適用する。適用オーダーは４ｂ９−Ｉｎ結合体、８ａ６結合体、６ｂ６結合体、５ｂ９−Ｉｎ結合体、及び制御ラインである。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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