(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−１α結合タンパク質を包含する。具体的には、本発明は、キメラ、ＣＤＲグラフトおよびヒト化抗体である抗体に関する。本発明の抗体は、ＩＬ−１αについて高い親和性を有し、ＩＬ−１α活性を中和する。本発明の抗体は、完全長抗体またはこの抗原結合部分であり得る。本発明の抗体を作製する方法および本発明の抗体を使用する方法も提供する。本発明の抗体、または抗体部分は、例えばＩＬ−１α活性が有害である障害を罹患するヒト対象におけるＩＬ−１αの検出およびＩＬ−１α活性の阻害に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する含む可変重鎖ポリペプチド；ならびに配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、および配列番号５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ポリペプチドを含み；ヒトＩＬ−１αに結合することができる結合タンパク質。
【請求項２】
配列番号３８および配列番号４４、配列番号４０および配列番号４４、配列番号４８および配列番号４９、配列番号５０および配列番号５１、配列番号５２および配列番号５３、ならびに配列番号５４および配列番号５５からなる群から選択される可変重鎖ポリペプチドおよび可変軽鎖ポリペプチドを含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項３】
免疫グロブリン分子、ジスルフィド連結Ｆｖ、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、ＣＤＲ−グラフト抗体、ダイアボディ、ヒト化抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、ＤＶＤ、Ｆａｂ’、双特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖからなる群から選択される、請求項１の結合タンパク質。
【請求項４】
ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、およびヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項１の結合タンパク質。
【請求項５】
配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖定常領域をさらに含む、請求項１の結合タンパク質。
【請求項６】
配列番号４および配列番号５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１の結合タンパク質。
【請求項７】
ヒトＩＬ−１αの生物学的機能をモジュレートすることできる、請求項１の結合タンパク質。
【請求項８】
ヒトＩＬ−１αを中和することができる、請求項１の結合タンパク質。
【請求項９】
表面プラズモン共鳴により計測された、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；および少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択される前記標的に対するオン速度定数（Ｋｏｎ）を有する、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１０】
表面プラズモン共鳴により計測された、多くとも約１０−３ｓ−１；多くとも約１０−４ｓ−１；多くとも約１０−５ｓ−１；および多くとも約１０−６ｓ−１からなる群から選択される前記標的に対するオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１１】
多くとも約１０−７Ｍ；多くとも約１０−８Ｍ；多くとも約１０−９Ｍ；多くとも約１０−１０Ｍ；多くとも約１０−１１Ｍ；多くとも約１０−１２Ｍ；および多くとも１０−１３Ｍからなる群からなる群から選択される前記標的に対する解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１２】
１．３４×１０−９Ｍ；１．３５×１０−９Ｍ；２．０９×１０−９Ｍ；２．８×１０−１１Ｍ；１×１０−１１Ｍ；３．１×１０−１１Ｍ；３．２×１０−１１Ｍ；および３．３×１０−１１Ｍからなる群から選択されるＩＬ−１αに対する解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１１に記載の結合タンパク質。
【請求項１３】
免疫接着分子、造影剤、治療剤、および細胞毒性剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１４】
前記薬剤が、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、およびビオチンからなる群から選択される造影剤である、請求項１３に記載の結合タンパク質。
【請求項１５】
前記造影剤が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、および１５３Ｓｍからなる群から選択される放射性標識である、請求項１３に記載の結合タンパク質。
【請求項１６】
前記薬剤が、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素、およびアポトーシス誘導剤からなる群から選択される治療剤または細胞毒性剤である、請求項１３に記載の結合タンパク質。
【請求項１７】
ヒトグリコシル化パターンを有する、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１８】
結晶化結合タンパク質である、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１９】
前記結晶化結合タンパク質は担体不含の医薬制御放出結晶結合タンパク質である、請求項１８に記載の結合タンパク質。
【請求項２０】
前記抗体構築物の可溶性相当物よりも長いインビボ半減期を有する、請求項１９に記載の結合タンパク質。
【請求項２１】
生物学的活性を保持する、請求項１９に記載の結合タンパク質。
【請求項２２】
請求項１に記載の結合タンパク質アミノ酸配列をコードする単離核酸。
【請求項２３】
請求項１に記載の結合タンパク質アミノ酸配列をコードする単離核酸を含むベクター。
【請求項２４】
ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、およびｐＢＪからなる群から選択される、請求項２３のベクター。
【請求項２５】
請求項２３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２６】
原核細胞である、請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２７】
Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）である、請求項２６に記載の宿主細胞。
【請求項２８】
真核細胞である、請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２９】
前記真核細胞は原生生物細胞、動物細胞、植物細胞および真菌細胞からなる群から選択される、請求項２８に記載の宿主細胞。
【請求項３０】
前記真核細胞は哺乳動物細胞、鳥類細胞、および昆虫細胞からなる群から選択される動物細胞である、請求項２８に記載の宿主細胞。
【請求項３１】
ＣＨＯ細胞である、請求項２８に記載の宿主細胞。
【請求項３２】
ＣＯＳである、請求項２８に記載の宿主細胞。
【請求項３３】
酵母細胞である、請求項２８に記載の宿主細胞。
【請求項３４】
前記酵母細胞はサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である、請求項３３に記載の宿主細胞。
【請求項３５】
昆虫Ｓｆ９細胞である、請求項２８に記載の宿主細胞。
【請求項３６】
請求項２５に記載の宿主細胞を、ＩＬ−１αに結合することができる結合タンパク質を産生させるのに十分な条件下で培養培地中で培養することを含む、ＩＬ−１αに結合することができるタンパク質を産生させる方法。
【請求項３７】
請求項３６の方法により産生されるタンパク質。
【請求項３８】
（ａ）請求項１６に記載の結晶化結合タンパク質、および成分を含む配合物；ならびに
（ｂ）少なくとも１種のポリマー担体
を含む、結合タンパク質の放出用組成物。
【請求項３９】
前記ポリマー担体が、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリラート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチラート（ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｒｙａｔｅ））、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、ｐｌｕｒｏｎｉｃポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン（ｇｌｙｃａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）、硫酸化多糖（ｐｏｌｙｅａｃｃｈａｒｉｄｅ）、これらのブレンドおよびコポリマーからなる群の１種以上から選択されるポリマーである、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記成分が、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４１】
請求項３８に記載の組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物を治療する方法。
【請求項４２】
請求項１の結合タンパク質、および医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項４３】
前記医薬的に許容される担体が、前記結合タンパク質の吸収または分散を増加させるのに有用であるアジュバントとして機能する、請求項４２の医薬組成物。
【請求項４４】
前記アジュバントがヒアルロニダーゼである、請求項４３の医薬組成物。
【請求項４５】
ＩＬ−１α活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種の追加の治療剤をさらに含む、請求項４２の医薬組成物。
【請求項４６】
前記追加の薬剤が、治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤；キナーゼ阻害剤；共刺激分子遮断薬；接着分子遮断薬；抗サイトカイン抗体またはこの機能的断片；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗鬱薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息治療薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、経口ステロイド、エピネフリンまたは類縁体、サイトカイン、およびサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される、請求項４５の医薬組成物。
【請求項４７】
ヒトＩＬ−１α活性が低減されるように、ヒトＩＬ−１αを請求項１の結合タンパク質と接触させることを含む、ヒトＩＬ−１α活性を低減させる方法。
【請求項４８】
ヒト対象におけるヒトＩＬ−１α活性が低減されるように、請求項１の結合タンパク質をヒト対象に投与することを含む、ＩＬ−１α活性が有害である障害を罹患するヒト対象におけるヒトＩＬ−１α活性を低減させる方法。
【請求項４９】
治療が達成されるように、請求項１の結合タンパク質を対象に投与することにより、ＩＬ−１α活性が有害である疾患または障害について対象を治療する方法。
【請求項５０】
前記障害が、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性真性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に伴う急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性多内分泌腺機能低下Ｉ型および多内分泌腺機能低下ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性結腸炎性関節症、腸疾患性滑膜炎、クラミジア感染症、エルシニアおよびサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣不全、早期卵巣不全、線維性肺疾患、原因不明性線維化肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ性浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、骨関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、ＮＯＳ腎疾患、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性またはＮＯＳ男性不妊症、精子自己免疫疾患、多発性硬化症（全サブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体原性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑、急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝傷害、胆汁鬱滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群ストレプトコッカス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）（ＧＢＳ）感染症、精神障害（例えば、鬱病および統合失調症）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型媒介性疾患、急性および慢性疼痛（疼痛の異なる形態）、ならびに癌、例えば、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および直腸癌ならびに造血器悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫）、無ベータリポタンパク質血症（ａｂｅｔａｌｉｐｏｐｒｏｔｅｍｉａ）、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性過程、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、空気異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶、アルファ−１−抗トリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３療法、抗リン脂質抗体症候群、抗受容体過敏反応、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）および末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、（持続性または発作性）心房細動、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓不整脈、気絶心筋症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症応答、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性症、小脳障害、無秩序型または多源性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性（ｃｈｒｏｍｉｃ）骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール依存症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、ボクサー認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的病態、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化症、びまん性レビー小体病、拡張型鬱血性心筋症、大脳基底核の障害、中年のダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物により誘発される薬物誘発性運動障害、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン・バールウイルス感染症、紅痛症、錐体外路障害および小脳障害、家族性食血細胞リンパ組織球増多症、胎児胸腺移植片拒絶、フリードライヒ失調症、末梢動脈機能障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意の器官または組織の移植片拒絶、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハレルフォルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、花粉症、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰症、過敏（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｔｙ）反応、過敏性肺炎、高血圧症、運動低下性運動障害、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再潅流傷害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ感染症、リーシュマニア症、らい病、皮質脊髄系の病変、脂肪性浮腫、肝移植拒絶、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性片頭痛、ミトコンドリア多系統障害、混合性結合組織病、モノクローナル免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性症（メンセル  デジュリーヌ・トーマス  シャイ・ドレーガーおよびマシャド・ジョセフ）、重症筋無力症、マイコバクテリウムアビウム・イントラセルラー（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血性障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびこの枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ｏｋｔ３療法、睾丸炎／精巣上体炎、睾丸炎／精管復元術、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢動脈硬化性疾患、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器肥大、内分泌疾患、モノクローナル免疫グロブリン血症および皮膚変化症候群）、潅流後症候群、ポストポンプ症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ＭＩ後の開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象およびレイノー病、レイノー病、レフサム病、規則正しい幅の狭いＱＲＳ頻拍、腎血管性高血圧、再潅流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レビー小体型老年認知症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性症、ストレプトコッカス性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症型若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、末梢血管拡張、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植片、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性（ｖｉｔａｌ）脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス（ｖｉｔａｌ）関連血球貪食症候群、ウェルニ��ケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意の器官または組織の異種移植片拒絶、急性冠動脈症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根症、急性虚血、成人スティル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、ストレプトコッカス感染に伴う自己免疫性障害、自己免疫性腸疾患、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質抗体症候群、セリアック病、頚椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する最初のエピソードからなる症候群（ＣＩＳ）、結膜炎、小児期発症型精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発性免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、花粉症、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼球炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（Ｋｅｒａｔｏｊｕｎｔｉｖｉｔｉｓ  ｓｉｃｃａ）、クスマウル病またはクスマウル・マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、網状皮斑、黄斑変性症、顕微鏡的多発性血管炎、ベヒテレフ病、運動ニューロン障害、粘膜類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ型非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解症、少関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分泌腺機能低下症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛（ＰＭＲ）、ポストポンプ症候群、原発性パーキンソン症、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、座瘡、膿疱症、骨増殖症および骨炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経症、続発性副腎不全
、シリコーン関連結合組織病、スネドン・ウィルキンソン皮膚病、強直性脊椎炎（ｓｐｏｎｄｉｌｉｔｉｓ  ａｎｋｙｌｏｓａｎｓ）、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラズマ性網膜炎、中毒性表皮壊死症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、蕁麻疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性症、ならびに創傷治癒からなる群から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
第２の薬剤の投与前、投与と同時、または投与後に請求項１の結合タンパク質を投与する工程を含み、第２の薬剤が、ＴＮＦアンタゴニスト；ＴＮＦ受容体の可溶性断片；ＥＮＢＲＥＬ；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト；ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン受容体アンタゴニスト；ＴＧＦベータアンタゴニスト；インターフェロンガンマ；ペルフェニドン（ｐｅｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）；化学療法剤、メトトレキサート；レフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）またはこの類縁体、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２またはｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫モジュレーター；ｐ３８阻害剤；ＴＰＬ−２、ＭＫ−２およびＮＦκＢ阻害剤；ブデノシド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；酸化防止剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１β抗体；抗ＩＬ−６抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、またはＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはこれらのリガンドの抗体；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；イブプロフェン；プレドニゾロン；ホスホジエステラーゼ阻害剤；アデンソシン（ａｄｅｎｓｏｓｉｎｅ）アゴニスト；抗血栓剤；補体阻害剤；アドレナリン作動剤；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、またはＭＡＰキナーゼ阻害剤；ＩＬ−１β変換酵素阻害剤；ＴＮＦα変換酵素阻害剤；Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤；メタロプロテイナーゼ阻害剤；６−メルカプトプリン；アンジオテンシン変換酵素阻害剤；可溶性サイトカイン受容体；可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体；可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体；ｓＩＬ−１ＲＩ；ｓＩＬ−１ＲＩＩ；ｓＩＬ−６Ｒ；抗炎症性サイトカイン；ＩＬ−４；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ならびにＴＧＦβからなる群から選択される、ＩＬ−１αが有害である障害を罹患する患者を治療する方法。
【請求項５２】
前記対象への投与が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頚管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液嚢内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、経膣、経直腸、バッカル、舌下、鼻腔内および経皮から選択される少なくとも１種の方式による、請求項４９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００９年１月２９日に出願された米国仮出願第６１／２０６，２５０号の優先権の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、ＩＬ−１結合タンパク質、特にＩＬ−１媒介疾患の予防および／または治療におけるこの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
サイトカイン、例えばインターロイキン−１（ＩＬ−１）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）は、種々の細胞、例えば単球およびマクロファージにより産生される分子であり、炎症過程の媒介物質として同定されている。インターロイキン−１は、発熱、プロスタグランジン合成（例えば、繊維芽細胞、筋および内皮細胞内）、Ｔリンパ球活性化、およびインターロイキン２産生を含む広範な生物学的および生理学的効果を有するサイトカインである。インターロイキン−１スーパーファミリー：ＩＬ−１スーパーファミリーの元のメンバーは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、およびＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）である。ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βは、感染に対する免疫防御に関与する炎症誘発性サイトカインである。ＩＬ−１Ｒαは、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βとの受容体結合について競合する分子であり、免疫活性化におけるこれらの役割を遮断する。近年、ＩＬ−１８（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  ＣＡ（１９９４）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．８（１５）：１３１４−２５；Ｈｕｉｓｉｎｇ，ＭＯ，ｅｔ．ａｌ．，（２００４）Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（５）：３９５−４１３を参照のこと）およびＩＬ−１α、ＩＬ−１βまたはＩＬ−１ＲＡと構造的相同性を有するさらに６種の遺伝子を含む他の分子がＩＬ−１スーパーファミリーに追加されている。これらの後者の６種のメンバーは、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９、およびＩＬ１Ｆ１０と称される。従って、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、およびＩＬ−１ＲＡは、それぞれ、ＩＬ−１Ｆ１、ＩＬ−１Ｆ２、およびＩＬ−１Ｆ３と改称された。（Ｓｉｍｓ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１０）：５３６−７；Ｄｕｎｎ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１０）：５３３−６を参照のこと）。ＩＬ−３３またはＩＬ−１Ｆ１１と呼ばれる、さらに推定されるＩＬ−１ファミリーのメンバーが近年記載されているが、この名称はＨＧＮＣ遺伝子ファミリー命名データベースにおいて公式に採用されていない。
【０００４】
ＩＬ−１αおよびＩＬ−１β：ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βは両方とも、マクロファージ、単球および樹状細胞により産生される。これらのＩＬ−１は、感染に対する体内炎症反応の重要な部分を形成する。これらのサイトカインは、内皮細胞上の接着因子の発現を増加させ、病原体と闘う細胞である白血球が感染部位に移行することを可能とし、視床下部体温調節中枢をリセットし、これ自体発熱として発現される体温増加をもたらす。従って、ＩＬ−１は、内因性発熱物質と呼ばれる。体温増加は、体内の免疫系が感染と闘うことを支援する。ＩＬ−１は、造血の調節においても重要である。末梢組織におけるＩＬ−１β産生は、発熱に伴う痛覚過敏（疼痛に対する感受性の増加）にも関連している（Ｍｏｒｇａｎ  ＭＭ，ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１０２２（１−２）：９６−１００）。大抵は、ＩＬ−１のこれら２種の形態は、同一の細胞受容体に結合する。この受容体は、主としてある種の他の受容体と共有される経路を介して細胞内シグナルを伝達する、関連するが同一でない２種のサブユニットから構成される。これらのサブユニットは、先天的免疫受容体のＴｏｌｌファミリーおよびＩＬ−１８についての受容体を含む。ＩＬ−１の２種の形態は、発熱の誘導、徐波睡眠、ならびに好中球増加、ＴおよびＢリンパ球活性化、繊維芽細胞増殖、ある種の細胞についての細胞毒性、コラゲナーゼの誘導、肝臓急性期タンパク質の合成、ならびにコロニー刺激因子およびコラーゲンの産生増加を含む同様の生物学的特性も有する。
【０００５】
ＩＬ−１の２種の別個の形態をコードするｃＤＮＡは単離および発現されており；これらのｃＤＮＡは、ＩＬ−１β（Ａｕｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：７９０９）およびＩＬ−１α（Ｌｏｍｅｄｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：４５８）と命名された２種の異なる遺伝子産物を表す。ＩＬ−１βは、ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルの両方においてヒト単球により産生される主要な形態である。ヒトＩＬ−１の２種の形態は、２６％のアミノ酸相同性を共有するにすぎない。これらの別個のポリペプチド配列にかかわらず、ＩＬ−１の２種の形態は、アミノ酸相同性がＩＬ−１分子の不連続領域に限定されるという点で構造的類似性を有する（Ａｕｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１６９）。
【０００６】
ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βは、前駆体ペプチドとして産生される。換言すると、これらのＩＬ−１は、長いタンパク質として作製され、次いでプロセッシングされ、成熟タンパク質と呼ばれるより短い活性分子が放出される。例えば、成熟ＩＬ−１βは、カスパーゼ−１と呼ばれるタンパク質のカスパーゼファミリーのある種のメンバーまたはインターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）による開裂後にプロＩＬ−１βから放出される。ヒトＩＬ−１スーパーファミリーの各メンバーの成熟形態の３次元構造は、バレル形タンパク質を産生する１２−１４本のβストランドから構成される。
【０００７】
ＩＬ−１αは、種々の免疫応答、炎症過程、および造血に関与する多面発現性サイトカインである。ＩＬ−１αは、活性化マクロファージにより産生され、ＩＬ−２の放出、Ｂ細胞成熟および増殖、ならびに繊維芽細胞成長因子活性を誘導することにより胸腺細胞増殖を刺激する。ＩＬ−１αタンパク質は、炎症応答に関与し、内因性発熱物質と同定されており、滑膜細胞からのプロスタグランジンおよびコラゲナーゼの放出を刺激すると報告されている。ＩＬ−１αタンパク質は、カルパインによりタンパク質分解的にプロセッシングされ、依然として十分研究されていない機序において放出されるプロタンパク質として産生される。この遺伝子および８種の他のインターロイキン１ファミリー遺伝子は、第２染色体上でサイトカイン遺伝子クラスターを形成する。ＩＬ−１αおよびこの病因性効果は、Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ，Ｌｅｘｉｋｏｎ  Ｚｙｔｏｋｉｎｅ（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ），Ｍｅｄｉｋｏｎ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｍｕｎｉｃｈ  １９９２、および該文献に引用されている文献に詳述されている。例えば、Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ７（１９８６）４５−５６、Ｄｕｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３（１９８５）２６３−２８７およびＳｙｎｎｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ８（１９８９）３６５−３７２においては、ＩＬ１αの望ましくない効果も参照される。ＩＬ１αは、元々は、軟骨吸収を増加させるこの効果のため「カタボリン」と命名されただけでなく、滑膜細胞内でのコラゲナーゼおよびプロスタグランジンに対するこの刺激効果のため「単球細胞因子」（ＭＣＦ）、および急性期反応に対する刺激効果を有する「白血球内因性因子」（ＬＥＭ）とも命名された。さらに、ＩＬ１αは生物学的活性の幅広のスペクトルを有する。それというのも、ＩＬ１αは、多くの異なる細胞、例えば、単球、マクロファージ、繊維芽細胞、内皮細胞およびリンパ球内で合成され得、さらに、多くの細胞がＩＬ１αについての特異的な受容体を有するからである。従って、ＩＬ１αは、特に、種々の障害および障害の症候についてのトリガーとしての中心的位置を占めることが理解可能である。これらの障害は、現在全く治療することができず、または不十分にしか治療することができない主に重篤な障害であることが多い。これらの遺伝子の多型は、関節リウマチおよびアルツハイマー病に関連することが示唆されている。ＩＬ−１は、一般に、関節炎、肺線維症、中枢神経系の疾患、糖尿病、およびある種の心血管疾患を含む多くのヒト疾患に関係している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  ＣＡ（１９９４）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．８（１５）：１３１４−２５
【非特許文献２】Ｈｕｉｓｉｎｇ，ＭＯ，ｅｔ．ａｌ．，（２００４）Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（５）：３９５−４１３
【非特許文献３】Ｓｉｍｓ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１０）：５３６−７
【非特許文献４】Ｄｕｎｎ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１０）：５３３−６
【非特許文献５】Ｍｏｒｇａｎ  ＭＭ，ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１０２２（１−２）：９６−１００
【非特許文献６】Ａｕｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：７９０９
【非特許文献７】Ｌｏｍｅｄｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：４５８
【非特許文献８】Ａｕｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１６９
【非特許文献９】Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ，Ｌｅｘｉｋｏｎ  Ｚｙｔｏｋｉｎｅ（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ），Ｍｅｄｉｋｏｎ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｍｕｎｉｃｈ  １９９２
【非特許文献１０】Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ７（１９８６）４５−５６
【非特許文献１１】Ｄｕｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３（１９８５）２６３−２８７
【非特許文献１２】Ｓｙｎｎｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ８（１９８９）３６５−３７２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ＩＬ−１αに結合することができる抗体の改善が当分野において必要とされている。好ましくは、抗体はＩＬ−１αに結合する。好ましくは、抗体はＩＬ−１αを中和することができる。
【００１０】
本発明は、ＩＬ−１αに結合することができ、高親和性で結合することができ、およびＩＬ−１αに結合し、ＩＬ−１αを中和することができる、結合タンパク質の新規ファミリーのＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、およびこれらの断片を提供する。本発明は、ＩＬ−１αを阻害する治療手段を提供し、ＩＬ−１αレベルの増加に伴う疾患、特に炎症障害を治療するための組成物および方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発明の要旨
本発明は、ＩＬ−１αに結合することができ、高親和性で結合することができ、およびＩＬ−１αに結合し、ＩＬ−１αを中和することができる、結合タンパク質の新規ファミリーのＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、およびこれらの断片を提供する。本発明は、ＩＬ−１αを阻害する治療手段を提供し、ＩＬ−１αレベルの増加に伴う疾患、特に炎症障害を治療するための組成物および方法を提供する。一態様において、本発明は、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖ポリペプチドを含み；ヒトＩＬ−１αに結合することができる結合タンパク質を提供する。別の態様において、本発明は、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、および配列番号５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ポリペプチドを含み；ヒトＩＬ−１αに結合することができる結合タンパク質を提供する。
【００１２】
一態様において、本発明は、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖ポリペプチド；ならびに配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、および配列番号５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ポリペプチドを含み；ヒトＩＬ−１αに結合することができる結合タンパク質を提供する。別の態様において、結合タンパク質は、配列番号３８および配列番号４４、配列番号４０および配列番号４４、配列番号４８および配列番号４９、配列番号５０および配列番号５１、配列番号５２および配列番号５３、ならびに配列番号５４および配列番号５５からなる群から選択される可変重鎖ポリペプチドおよび可変軽鎖ポリペプチドを含む。上記結合タンパク質において、前記結合タンパク質は、免疫グロブリン分子、ジスルフィド連結Ｆｖ、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、ＣＤＲ−グラフト抗体、ダイアボディ、ヒト化抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、ＤＶＤ、Ｆａｂ’、双特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２、またはＦｖである。別の態様において、上記結合タンパク質は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、およびヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。別の態様において、本発明の結合タンパク質は、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖定常領域、ならびに追加的に、配列番号４および配列番号５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域をさらに含む。
【００１３】
本発明の結合タンパク質は、ヒトＩＬ−１αの生物学的機能をモジュレートすることができ、追加的にヒトＩＬ−１αを中和することができる。一態様において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴により計測された、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；および少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択される前記標的に対するオン速度定数（Ｋｏｎ）を有する。別の態様において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴により計測された、多くとも約１０−３ｓ−１；多くとも約１０−４ｓ−１；多くとも約１０−５ｓ−１；および多くとも約１０−６ｓ−１からなる群から選択される前記標的に対するオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。別の態様において、結合タンパク質は、多くとも約１０−７Ｍ；多くとも約１０−８Ｍ；多くとも約１０−９Ｍ；多くとも約１０−１０Ｍ；多くとも約１０−１１Ｍ；多くとも約１０−１２Ｍ；および多くとも１０−１３Ｍからなる群からなる群から選択される前記標的に対する解離定数（ＫＤ）を有する。さらに、結合タンパク質は、１．３４×１０−９Ｍ；１．３５×１０−９Ｍ；２．０９×１０−９Ｍ；２．８×１０−１１Ｍ；１×１０−１１Ｍ；３．１×１０−１１Ｍ；３．２×１０−１１Ｍ；および３．３×１０−１１Ｍからなる群から選択されるＩＬ−１αに対する解離定数（ＫＤ）を有する。
【００１４】
本発明の結合タンパク質は、免疫接着分子、造影剤、治療剤、および細胞毒性剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む。造影剤は、限定されるものではないが、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、および１５３Ｓｍを含む放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、またはビオチンであり得る。治療剤または細胞毒性剤は、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素、およびアポトーシス誘導剤であり得る。
【００１５】
別の実施形態において、抗体構築物はグリコシル化されている。好ましくは、グリコシル化は、ヒトグリコシル化パターンである。
【００１６】
別の実施形態において、上記結合タンパク質は結晶として存在する。好ましくは、結晶は、担体不含の医薬制御放出結晶である。一実施形態において、結晶化結合タンパク質は、この可溶性相当物よりも長いインビボ半減期を有する。別の実施形態において、結晶化結合タンパク質は、結晶化後に生物学的活性を保持する。
【００１７】
本発明の一態様は、上記結合タンパク質のいずれか１種をコードする単離核酸に関する。さらなる実施形態は、上記単離核酸を含むベクターを提供し、前記ベクターは、ｐｃＤＮＡ；ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００２，Ｖｏｌ３０，Ｎｏ．２）；ｐＴＴ３（追加のマルチプルクローニングサイトを有するｐＴＴ；ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ．ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ  Ｓ．，（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ  １８，Ｎｏ．１７）；ｐＢＶ；ｐＪＶ；およびｐＢＪからなる群から選択される。
【００１８】
別の態様において、宿主細胞は、上記ベクターにより形質転換されている。一態様において、宿主細胞は、限定されるものではないが、Ｅ．コリ（Ｅ．Ｃｏｌｉ）を含む原核細胞である。関連する実施形態において、宿主細胞は、限定されるものではないが、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞および真菌細胞を含む真核細胞である。一態様において、宿主細胞は、限定されるものではないが、ＣＨＯおよびＣＯＳ；または真菌細胞、例えばサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）；または昆虫細胞、例えばＳｆ９を含む哺乳動物細胞である。
【００１９】
本発明の別の態様は、上記宿主細胞のいずれか１種を、ＩＬ−１αに結合する結合タンパク質を産生させるのに十分な条件下で培養培地中で培養することを含む、ＩＬ−１αに結合する結合タンパク質を産生させる方法を提供する。別の実施形態は、上記方法により産生される結合タンパク質を提供する。
【００２０】
一実施形態は、上記の結晶化結合タンパク質、結晶化抗体構築物または結晶化抗体コンジュゲートおよび成分を順に含む配合物；ならびに少なくとも１種のポリマー担体を含む、結合タンパク質を放出させるための組成物を提供する。一態様において、ポリマー担体は、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリラート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチラート（ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｒｙａｔｅ））、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、ｐｌｕｒｏｎｉｃポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン（ｇｌｙｃａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）、硫酸化多糖（ｐｏｌｙｅａｃｃｈａｒｉｄｅ）、これらのブレンドおよびコポリマーからなる群の１種以上から選択されるポリマーである。別の態様において、成分は、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。別の実施形態は、上記組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物を治療する方法を提供する。
【００２１】
本発明はまた、上記結合タンパク質および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。さらなる実施形態において、医薬組成物は、ＩＬ−１α活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種の追加の治療剤を含む。一態様において、追加の薬剤は、治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤；キナーゼ阻害剤；共刺激分子遮断薬；接着分子遮断薬；抗サイトカイン抗体またはこの機能的断片；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗鬱薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息治療薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、経口ステロイド、エピネフリンまたは類縁体、サイトカイン、およびサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される。
【００２２】
別の態様において、本発明は、ヒトＩＬ−１α活性が阻害されるようにヒトＩＬ−１αを上記結合タンパク質と接触させることを含む、ヒトＩＬ−１α活性を阻害する方法を提供する。関連態様において、本発明は、ヒト対象におけるヒトＩＬ−１α活性が阻害され、治療が達成されるように、上記結合タンパク質をヒト対象に投与することを含む、ＩＬ−１α活性が有害である障害を罹患するヒト対象において、ヒトＩＬ−１α活性を阻害する方法を提供する。
【００２３】
別の態様において、本発明は、対象におけるＩＬ−１α関連障害を治療（例えば、治癒、抑制、改善、発症の遅延もしくは予防、または回帰もしくは再発の予防）または予防する方法を提供する。本方法は、ＩＬ−１α関連障害を治療または予防するのに十分な量のＩＬ−１α結合剤（特に、アンタゴニスト）、例えば、本明細書に記載の抗ＩＬ−１α抗体またはこの断片を対象に投与することを含む。ＩＬ−１αアンタゴニスト、例えば抗ＩＬ−１α抗体またはこの断片は、単独で、または本明細書に記載の他の治療様式と組み合わせて対象に投与することができる。
【００２４】
別の態様において、本出願は、試料（例えば、生物試料、例えば、血清、血漿、組織、生検）中のＩＬ−１αの存在をインビトロで検出する方法を提供する。主題の方法は、障害、例えば免疫細胞関連障害を診断するために使用することができる。本方法は、（ｉ）試料または対照試料を本明細書に記載の抗ＩＬ−１α抗体またはこの断片と接触させること；および（ｉｉ）抗ＩＬ−１α抗体またはこの断片と、試料または対照試料との複合体の形成を検出することを含み、対照試料と比較して、試料中の複合体形成の統計的に有意な変化により、試料中のＩＬ−１αの存在が示される。
【００２５】
さらに別の態様において、本出願は、ＩＬ−１αの存在をインビボで検出する方法（例えば、対象におけるインビボ（ｉｎ  ｖｉｖａ）イメージング）を提供する。主題の方法は、障害、例えばＩＬ−１α関連障害を診断するために使用することができる。本方法は、（ｉ）本明細書に記載の抗ＩＬ−１α抗体またはこの断片を、抗体または断片のＩＬ−１αとの結合を可能とする条件下で、対象または対照対象に投与すること；および（ｉｉ）抗体または断片とＩＬ−１αとの複合体の形成を検出することを含み、対照対象と比較して、対象における複合体形成の統計的に有意な変化により、ＩＬ−１αの存在が示される。
【００２６】
別の一態様において、本発明の結合タンパク質は、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性真性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に伴う急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性多内分泌腺機能低下Ｉ型および多内分泌腺機能低下ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性結腸炎性関節症、腸疾患性滑膜炎、クラミジア感染症、エルシニアおよびサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣不全、早期卵巣不全、線維性肺疾患、原因不明性線維化肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ性浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、骨関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、ＮＯＳ腎疾患、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性またはＮＯＳ男性不妊症、精子自己免疫疾患、多発性硬化症（全サブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体原性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑、急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝傷害、胆汁鬱滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群ストレプトコッカス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）（ＧＢＳ）感染症、精神障害（例えば、鬱病および統合失調症）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型媒介性疾患、急性および慢性疼痛（疼痛の異なる形態）、ならびに癌、例えば、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および直腸癌ならびに造血器悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫）、無ベータリポタンパク質血症（ａｂｅｔａｌｉｐｏｐｒｏｔｅｍｉａ）、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性過程、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、空気異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶、アルファ−１−抗トリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３療法、抗リン脂質抗体症候群、抗受容体過敏反応、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）および末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、（持続性または発作性）心房細動、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓不整脈、気絶心筋症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症応答、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性症、小脳障害、無秩序型または多源性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性（ｃｈｒｏｍｉｃ）骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール依存症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、ボクサー認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的病態、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化症、びまん性レビー小体病、拡張型鬱血性心筋症、大脳基底核の障害、中年のダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物により誘発される薬物誘発性運動障害、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン・バールウイルス感染症、紅痛症、錐体外路障害および小脳障害、家族性食血細胞リンパ組織球増多症、胎児胸腺移植片拒絶、フリードライヒ失調症、末梢動脈機能障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意の器官または組織の移植片拒絶、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハレルフォルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、花粉症、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰症、過敏（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｔｙ）反応、過敏性肺炎、高血圧症、運動低下性運動障害、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再潅流傷害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ感染症、リーシュマニア症、らい病、皮質脊髄系の病変、脂肪性浮腫、肝移植拒絶、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性片頭痛、ミトコンドリア多系統障害、混合性結合組織病、モノクローナル免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性症（メンセル  デジュリーヌ・トーマス  シャイ・ドレーガーおよびマシャド・ジョセフ）、重症筋無力症、マイコバクテリウムアビウム・イントラセルラー（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血性障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびこの枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ｏｋｔ３療法、睾丸炎／精巣上体炎、睾丸炎／精管復元術、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢動脈硬化性疾患、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器肥大、内分泌疾患、モノクローナル免疫グロブリン血症および皮膚変化症候群）、潅流後症候群、ポストポンプ症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ＭＩ後の開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象およびレイノー病、レイノー病、レフサム病、規則正しい幅の狭いＱＲＳ頻拍、腎血管性高血圧、再潅流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レビー小体型老年認知症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性症、ストレプトコッカス性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症型若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、末梢血管拡張、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植片、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性（ｖｉｔａｌ）脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス（ｖｉｔ��ｌ）関連血球貪食症候群、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意の器官または組織の異種移植片拒絶、急性冠動脈症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根症、急性虚血、成人スティル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、ストレプトコッカス感染に伴う自己免疫性障害、自己免疫性腸疾患、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質抗体症候群、セリアック病、頚椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する、最初のエピソードからなる症候群（ＣＩＳ）、結膜炎、小児期発症型精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発性免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、花粉症、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼球炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（Ｋｅｒａｔｏｊｕｎｔｉｖｉｔｉｓ  ｓｉｃｃａ）、クスマウル病またはクスマウル・マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、網状皮斑、黄斑変性症、顕微鏡的多発性血管炎、ベヒテレフ病、運動ニューロン障害、粘膜類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ型非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解症、少関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分泌腺機能低下症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛（ＰＭＲ）、ポストポンプ症候群、原発性パーキンソン症、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、座瘡、膿疱症、骨増殖症および骨炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺
、強膜炎、坐骨神経症、続発性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン・ウィルキンソン皮膚病、強直性脊椎炎（ｓｐｏｎｄｉｌｉｔｉｓ  ａｎｋｙｌｏｓａｎｓ）、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラズマ性網膜炎、中毒性表皮壊死症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、蕁麻疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性症、ならびに創傷治癒からなる群から選択される障害の治療に有用である。
【００２７】
一態様において、本発明の結合タンパク質は、関節リウマチ、骨関節炎、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性真性糖尿病および乾癬を治療するために使用される。別の態様において、本発明の結合タンパク質は、自己免疫疾患、特に、強直性脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎を含む炎症を伴う疾患を罹患するヒトを治療するためにも使用される。
【００２８】
別の態様において、本発明は、上記第２の薬剤の投与前、投与と同時、または投与後に、下記結合タンパク質のいずれか１種を投与する工程を含む、ヒトＩＬ−１αが有害である障害を罹患する患者を治療する方法を提供する。別の実施形態において、１種以上のＩＬ−１αアンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−１α抗体またはこの断片）と同時投与および／または同時配合することができる治療剤の追加の例は、限定されるものではないが、ＴＮＦアンタゴニスト；ＴＮＦ受容体の可溶性断片；ＥＮＢＲＥＬ；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト；ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン受容体アンタゴニスト；ＴＧＦベータアンタゴニスト；インターフェロンガンマ；ペルフェニドン（ｐｅｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）；化学療法剤、メトトレキサート；レフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）またはこの類縁体、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２またはｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫モジュレーター；ｐ３８阻害剤；ＴＰＬ−２、ＭＫ−２およびＮＦκＢ阻害剤；ブデノシド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；酸化防止剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１β抗体；抗ＩＬ−６抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、またはＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはこれらのリガンドの抗体；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；イブプロフェン；プレドニゾロン；ホスホジエステラーゼ阻害剤；アデノシンアゴニスト；抗血栓剤；補体阻害剤；アドレナリン作動剤；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、またはＭＡＰキナーゼ阻害剤；ＩＬ−１β変換酵素阻害剤；ＴＮＦα変換酵素阻害剤；Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤；メタロプロテイナーゼ阻害剤；６−メルカプトプリン；アンジオテンシン変換酵素阻害剤；可溶性サイトカイン受容体；可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体；可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体；ｓＩＬ−１ＲＩ；ｓＩＬ−１ＲＩＩ；ｓＩＬ−６Ｒ；抗炎症性サイトカイン；ＩＬ−４；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ならびにＴＧＦβを含む。
【００２９】
一実施形態において、上記医薬組成物は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頚管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液嚢内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、経膣、経直腸、バッカル、舌下、鼻腔内および経皮から選択される少なくとも１種の方式により対象に投与される。
【００３０】
本発明の一態様は、本発明の少なくとも１種のＩＬ−１α結合タンパク質に対する少なくとも１種のＩＬ−１α抗イディオタイプ抗体を提供する。抗イディオタイプ抗体は、本発明の結合タンパク質中に取り込むことができる、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えば、限定されるものではないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはこのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはこれらの任意の部分を含む分子を含有する任意のタンパク質またはペプチドを含む。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
発明の詳細な記述
本発明は、ＩＬ−１αに結合するヒトＩＬ−１α結合タンパク質、特に抗ＩＬ−１α抗体、またはこの抗原結合部分に関する。本発明の種々の態様は、抗体および抗体断片、ならびにこの医薬組成物、ならびにかかる抗体および断片を作製するための核酸、組換え発現ベクターおよび宿主細胞に関する。本発明の抗体を使用してヒトＩＬ−１αを検出し、インビトロまたはインビボでヒトＩＬ−１α活性を阻害し；および遺伝子発現を調節する方法も本発明に包含される。
【００３２】
本明細書に別段の記載がない限り、本発明に関連して使用される科学および技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有する。用語の意味および範囲は明確であるはずであるが、潜在的な多義性がある場合においては、本明細書に提供される定義が辞書または外部の定義よりも優先する。さらに、状況が必要としない限り、単数の用語は複数を含み、複数の用語は単数を含むものとする。本出願においては、特段の記載がない限り、「または」の使用は「および／または」を意味する。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに他の形、例えば「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含まれる」の使用は、限定的なものではない。また、「要素」または「成分」などの用語は、特段の記載がない限り、１個の単位を含む要素および成分と、１個を超える下位単位を含む要素および成分の両方を包含する。
【００３３】
一般に、本明細書に記載の細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学ならびにハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法およびこの技術は、当分野において周知であり、一般に使用されるものである。本発明の方法および技術は、別段の記載がない限り、当分野において周知の慣用の方法により一般に実施され、本明細書を通して引用および考察される種々の一般的参考文献およびより具体的な参考文献に記載の通り実施される。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様書に従って、当分野において一般に実施される通り、または本明細書に記載の通り実施される。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品化学および製薬化学に関連して使用される命名法ならびにこの実験手順および技術は、当分野において周知であり、一般に使用されるものである。化学合成、化学分析、調剤、配合、および送達、ならびに患者の治療には、標準技術が使用される。
【００３４】
本発明をより容易に理解することができる、選択された用語を以下に定義する。
【００３５】
本明細書において使用される「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸の任意のポリマー鎖を指す。「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、ポリペプチドという用語と交換可能に使用され、アミノ酸のポリマー鎖も指す。「ポリペプチド」という用語は、天然または人工タンパク質、タンパク質断片、およびタンパク質配列のポリペプチド類縁体を包含する。ポリペプチドは、モノマーでもポリマーでもよい。
【００３６】
「単離タンパク質」または「単離ポリペプチド」という用語は、この由来の起源もしくは出所のため、この天然状態でこれに伴う天然会合成分に会合していないタンパク質もしくはポリペプチド；同一種からの他のタンパク質を実質的に含まないタンパク質もしくはポリペプチド；異なる種からの細胞により発現されるタンパク質もしくはポリペプチド；または天然に存在しないタンパク質もしくはポリペプチドである。従って、化学合成され、またはポリペプチドが天然に生ずる細胞とは異なる細胞系内で合成されたポリペプチドは、この天然会合成分から「単離」されていることになる。タンパク質は、当分野において周知のタンパク質精製技術を使用する単離により天然会合成分を実質的に含まなくすることもできる。
【００３７】
本明細書において使用される「回収」という用語は、ポリペプチドなどの化学種について、例えば、当分野において周知のタンパク質精製技術を使用する単離により天然会合成分を実質的に含まなくするプロセスを指す。
【００３８】
本明細書において使用される「ヒトＩＬ−１α」（本明細書においてｈＩＬ−１α、またはＩＬ−１αと略記される。）という用語は、種々の免疫応答、炎症過程、および造血に関与する多面発現性サイトカインを含む。例えば、ＩＬ−１αは、活性化マクロファージにより産生されるヒトサイトカインを含み、ＩＬ−２の放出、Ｂ細胞成熟および増殖、ならびに繊維芽細胞成長因子活性を誘導することにより胸腺細胞増殖を刺激する。ヒトＩＬ−１αという用語は、標準組換え発現方法により調製することができる組換えヒトＩＬ−１α（ｒｈＩＬ−１α）を含むものとする。
【００３９】
【表１】
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【００４０】
本明細書において使用される「生物学的活性」は、サイトカインの全ての固有の生物学的特性を指す。ＩＬ−１αの生物学的特性は、限定されるものではないが、ＩＬ−１α受容体に結合することを含む（他の例は、ＩＬ−２の放出、Ｂ細胞成熟および増殖、ならびに繊維芽細胞成長因子活性を誘導することによる胸腺細胞増殖の刺激を含む。）。
【００４１】
抗体、タンパク質、またはペプチドと第２の化学種との相互作用に関連して、本明細書において使用される「特異的結合」または「特異的に結合」という用語は、相互作用が、化学種上の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存すること；例えば、抗体が、タンパク質一般ではなく特異的なタンパク質構造を認識し、このタンパク質に結合することを意味する。抗体がエピトープ「Ａ」について特異的である場合、標識された「Ａ」および抗体を含有する反応物中に、エピトープＡを含有する分子（または遊離の未標識のＡ）が存在すると、抗体に結合する標識されたＡの量が低減する。
【００４２】
本明細書において使用される「抗体」という用語は、４本のポリペプチド鎖、即ち２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖から構成される任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、またはＩｇ分子の本質的なエピトープ結合特徴を保持するこの任意の機能的断片、変異体、変種もしくは誘導物を広く指す。かかる変異体、変種または誘導抗体の形式は、当分野において公知である。非限定的実施形態を以下に考察する。
【００４３】
完全長抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＨＣＶＲまたはＶＨと略記される。）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３種のドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＬＣＶＲまたはＶＬと略記する。）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１種のドメインＣＬから構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と命名されたより保存的な領域が散在している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名された超可変領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で整列する３種のＣＤＲおよび４種のＦＲから構成される。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。
【００４４】
本明細書において使用される、抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗体部分」）という用語は、抗原（例えば、ｈＩＬ−１α）に特異的に結合する能力を保持する１個以上の抗体断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片により実施され得ることが示されている。かかる抗体の実施形態は、２種以上の異なる抗原に特異的に結合する、双特異性、二重特異性、または多重特異性形式であってもよい。；抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例は、（ｉ）Ｆａｂ断片、即ちＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価の断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、即ちヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２個のＦａｂ断片を含む二価の断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片（参照により本明細書に組み込まれる、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０５１４４Ａ１）；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。さらに、Ｆｖ断片の２種のドメインＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によりコードされるが、ＶＬおよびＶＨは、ＶＬおよびＶＨ領域が一対になって一価の分子を形成する単一タンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照のこと）として作製することができる合成リンカーにより組換え方法を使用して接続することができる。かかる単鎖抗体も、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるものとする。単鎖抗体の他の形態、例えばダイアボディも包含される。ダイアボディは、ＶＨドメインおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上で発現されるが、短すぎるために同一鎖上の２種のドメインの対形成が不可能であるリンカーを使用することにより、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対形成させ、２種の抗原結合部位を作出させた、二価の双特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ  Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照のこと）。かかる抗体結合部分は、当分野において公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）。
【００４５】
本明細書において使用される「抗体構築物」という用語は、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインに連結している本発明の１種以上の抗原結合部分を含むポリペプチドを指す。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合により接続された２個以上のアミノ酸残基を含み、１種以上の抗原結合部分を連結するために使用される。かかるリンカーポリペプチドは、当分野において周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照のこと）。免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖定常ドメインのアミノ酸配列は、当分野において公知であり、表２に示す。
【００４６】
【表２】
2012516153.tif 000003
【００４７】
さらに、抗体またはこの抗原結合部分は、抗体または抗体部分と１種以上の他のタンパク質またはペプチドとの共有結合性または非共有結合性会合により形成される、より大きい免疫接着分子の一部であり得る。かかる免疫接着分子の例は、４量体ｓｃＦｖ分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ６：９３−１０１）、ならびに二価のビオチニル化ｓｃＦｖ分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１，１０４７−１０５８）を含む。抗体部分、例えばＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、慣用の技術、例えば抗体全体のそれぞれパパインまたはペプシン消化を使用して抗体全体から調製することができる。さらに、抗体、抗体部分および免疫接着分子は、本明細書に記載の標準組換えＤＮＡ技術を使用して得ることができる。
【００４８】
本明細書において使用される「単離抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すものとする（例えば、ｈＩＬ−１αに特異的に結合する単離抗体は、ｈＩＬ−１α以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。）。しかしながら、ｈＩＬ−１αに特異的に結合する単離抗体は、他の抗原、例えば他の種からのＩＬ−１α分子に対して交差反応性を有し得る。さらに、単離抗体は、他の細胞材料および／または化学物質を実質的に含まない場合もある。
【００４９】
本明細書において使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域および定常領域を有する抗体を含むものとする。本発明のヒト抗体は、例えばＣＤＲ中、特にＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでの無作為もしくは部位特異的変異誘発により、またはインビボでの体細胞変異により導入される変異）を含み得る。しかしながら、本明細書において使用される「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上にグラフトされた抗体を含まないものとする。
【００５０】
本明細書において使用される「組換えヒト抗体」という用語は、組換え手段により調製、発現、作出もしくは単離された全てのヒト抗体、例えば、（下記セクションＩＩＣにさらに記載される。）宿主細胞内に形質移入された組換え発現ベクターを使用して発現された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．Ｒ．，（１９９７）ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０；Ａｚｚａｚｙ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ  Ｗ．Ｅ．，（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４４５；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ  Ｊ．Ｖ．，ａｎｄ  Ｌａｒｒｉｃｋ  Ｊ．Ｗ．（２００２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１２８−１４５；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ  Ｐ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子トランスジェニック動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  Ｓ−Ａ．，ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ  Ｌ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：５９３−５９７；Ｌｉｔｔｌｅ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４−３７０を参照のこと）、または他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、作出もしくは単離された抗体を含むものとする。かかる組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域および定常領域を有する。しかしながら、ある実施形態において、かかる組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（またはヒトＩｇ配列トランスジェニック動物が使用される場合、インビボ体細胞変異誘発）に供され、従って組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連する一方、インビボでのヒト抗体生殖系列レパートリーに天然には存在し得ない配列である。
【００５１】
「キメラ抗体」という用語は、ある種からの重鎖および軽鎖可変領域配列、ならびに別の種からの定常領域配列を含む抗体、例えば、ヒト定常領域に連結しているネズミ重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を指す。
【００５２】
「ＣＤＲグラフト抗体」という用語は、ある種からの重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域の１個以上の配列が別の種のＣＤＲ配列により置き換えられている抗体、例えば、ネズミＣＤＲの１種以上（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列により置き換えられたネズミ重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を指す。
【００５３】
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト種（例えば、マウス）からの重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部がより「ヒト様」に変化した、即ち、ヒト生殖系列可変配列により類似する抗体を指す。ヒト化抗体の１つのタイプは、ヒトＣＤＲ配列が非ヒトＶＨおよびＶＬ配列中に導入されて対応する非ヒトＣＤＲ配列が置き換えられているＣＤＲグラフト抗体である。
【００５４】
「Ｋａｂａｔ付番」、「Ｋａｂａｔ定義および「Ｋａｂａｔ標識化」という用語は、本明細書において交換可能に使用される。当分野において認識されるこれらの用語は、抗体、またはこの抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基よりも可変（即ち超可変）であるアミノ酸残基に付番する体系を指す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１、およびＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ文献番号９１−３２４２）。重鎖可変領域について、超可変領域は、ＣＤＲ１についてはアミノ酸位置３１から３５、ＣＤＲ２についてはアミノ酸位置５０から６５、ＣＤＲ３についてはアミノ酸位置９５から１０２の範囲である。軽鎖可変領域について、超可変領域は、ＣＤＲ１についてはアミノ酸位置２４から３４、ＣＤＲ２についてはアミノ酸位置５０から５６、ＣＤＲ３についてはアミノ酸位置８９から９７の範囲である。
【００５５】
本明細書において使用される「受容体」および「受容体抗体」という用語は、１種以上のフレームワーク領域のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％を提供またはコードする抗体または核酸配列を指す。一部の実施形態において、「受容体」という用語は、（１種以上の）定常領域を提供またはコードする抗体アミノ酸または核酸配列を指す。さらに別の実施形態において、「受容体」という用語は、フレームワーク領域および（１種以上の）定常領域の１種以上を提供またはコードする抗体アミノ酸または核酸配列を指す。特定の実施形態において、「受容体」という用語は、フレームワーク領域の１個以上のアミノ酸配列の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％を提供またはコードするヒト抗体アミノ酸または核酸配列を指す。この実施形態に従って、受容体は、ヒト抗体の１つ以上の特定の位置に存在しない、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、または少なくとも１０個のアミノ酸残基を含有し得る。受容体フレームワーク領域および／または（１種以上の）受容体定常領域は、例えば、生殖系列抗体遺伝子、成熟抗体遺伝子、機能的抗体（例えば、当分野において周知の抗体、開発中の抗体、または市販の抗体）に由来してよく、またはこれらから得ることができる。
【００５６】
本明細書において使用される「ＣＤＲ」という用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれには、可変領域のそれぞれについてＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と命名された３種のＣＤＲが存在する。本明細書において使用される「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる単一の可変領域内に存在する３種のＣＤＲの一群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なる体系ごとに異なって定義される。Ｋａｂａｔにより記載された体系（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））は、抗体の任意の可変領域に適用可能である明確な残基付番体系を提供するだけでなく、３種のＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲはＫａｂａｔ  ＣＤＲと称される場合がある。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）およびＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９））は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内のある下位部分が、アミノ酸配列レベルにおける多様性が大きいにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格配座をとることを見出した。これらの下位部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と命名され、「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ軽鎖および重鎖領域を示す。これらの領域は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有するＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと称される場合がある。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９（１９９５））およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ  ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６２（５）：７３２−４５（１９９６））により記載されている。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記体系の１つに厳密に従わなくてもよいが、それでもＫａｂａｔ  ＣＤＲと重複し、ただし、これらの境界定義は、特定の残基もしくは残基群、またはさらにはＣＤＲ全体が抗原結合にそれほど影響を及ぼさないという予測または実験上の知見に照らして、短縮または延長され得る。本明細書において使用される方法は、これらの体系のいずれかにより定義されたＣＤＲを利用することができるが、好ましい実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａにより定義されたＣＤＲを使用する。
【００５７】
本明細書において使用される「カノニカル」残基という用語は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．により定義された特定のカノニカルＣＤＲ構造を定義する、ＣＤＲまたはフレームワーク中の残基を指す（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９０７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９（１９９２）、両方とも参照により本明細書に組み込まれる。）。Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．によれば、多くの抗体のＣＤＲの重要な部分は、アミノ酸配列レベルにおける大きい多様性にもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格配座（ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ）を有する。各カノニカル構造は、主として、ループを形成するアミノ酸残基の隣接セグメントについて一組のペプチド骨格ねじれ角を規定する。
【００５８】
本明細書において使用される「ドナー」および「ドナー抗体」という用語は、１種以上のＣＤＲを提供する抗体を指す。一実施形態において、ドナー抗体は、フレームワーク領域が得られ、または由来する抗体とは異なる種からの抗体である。ヒト化抗体に関連して、「ドナー抗体」という用語は、１種以上のＣＤＲを提供する非ヒト抗体を指す。
【００５９】
本明細書において使用される「フレームワーク」または「フレームワーク配列」という用語は、可変領域からＣＤＲを除いた残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、様々な体系により決定され得るので、フレームワーク配列の意味は、これに対応して解釈が異なる。６種のＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、−Ｌ２および−Ｌ３、ならびに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、−Ｈ２および−Ｈ３）も、軽鎖および重鎖上のフレームワーク領域を各鎖上の４種の下位領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）に分割し、ＣＤＲ１は、ＦＲ１とＦＲ２との間に位置され、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３との間に位置され、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４との間に位置される。ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として特定の下位領域を規定することなく、他のフレームワーク領域により参照されるフレームワーク領域は、単一の天然免疫グロブリン鎖の可変領域内の混合ＦＲを表す。本明細書において使用される１種のＦＲは、４種の下位領域の１種を表し、複数のＦＲは、フレームワーク領域を構成する４種の下位領域の２種以上を表す。
【００６０】
ヒト重鎖および軽鎖受容体配列は当分野において公知である。本発明の一実施形態において、ヒト重鎖および軽鎖受容体配列は、表３および表４に記載の配列から選択される。
【００６１】
【表３】
2012516153.tif 000004
【００６２】
【表４】
2012516153.tif 000005
【００６３】
本明細書において使用される「生殖系列抗体遺伝子」または「遺伝子断片」という用語は、特定の免疫グロブリンを発現するための遺伝子再構成および変異をもたらす成熟過程を受けなかった非リンパ球によりコードされる免疫グロブリン配列を指す。（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（３）：１８３−２００（２００２）；Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．４８４：１３−３０（２００１）を参照のこと）。本発明の種々の実施形態により提供される利点の１つは、生殖系列抗体遺伝子は、種の個体に特有である必須アミノ酸配列構造を保存する可能性が成熟抗体遺伝子よりも高く、従ってこの種において治療的に使用した場合に外来源由来と認識される可能性が低いという認識から生じる。
【００６４】
本明細書において使用される「キー」残基という用語は、抗体、特にヒト化抗体の結合特異性および／または親和性により大きな影響を及ぼす、可変領域内のある種の残基を指す。キー残基は、限定されるものではないが、以下のもの：ＣＤＲに隣接する残基、（Ｎ−またはＯ−グリコシル化部位であり得る）潜在的グリコシル化部位、希少残基、抗原と相互作用することができる残基、ＣＤＲと相互作用することができる残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との接触残基、バーニアゾーン内の残基、および可変重鎖ＣＤＲ１のＣｈｏｔｈｉａ定義と第１の重鎖フレームワークのＫａｂａｔ定義との間で重複する領域中の残基の１種以上を含む。
【００６５】
本明細書において使用される「ヒト化抗体」という用語は、目的抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域および非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体またはこの変種、誘導体、類縁体もしくは断片である。ＣＤＲに関連して、本明細書において使用される「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全部または実質的に全部が非ヒト免疫グロブリン（即ち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域の全部または実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である、少なくとも１種、典型的には２種の可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）を実質的に全部含む。好ましくは、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。抗体は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域も含み得る。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖および／またはヒト化重鎖のヒト化可変ドメインのみを含有する。
【００６６】
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、ならびに限定されることなくＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は、１種を超えるクラスまたはアイソタイプからの配列を含むことができ、特定の定常ドメインを選択し、当分野において周知の技術を使用して所望のエフェクター機能を最適化することができる。
【００６７】
ヒト化抗体のフレームワークおよびＣＤＲ領域は、親配列に正確に対応する必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークは、少なくとも１個のアミノ酸残基の置換、挿入および／または欠失により変異誘発され、この部位のＣＤＲまたはフレームワーク残基がドナー抗体にもコンセンサスフレームワークにも対応しない場合がある。しかしながら、一実施形態において、かかる変異は大規模ではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％は、親のＦＲおよびＣＤＲ配列の残基に対応する。本明細書において使用される「コンセンサスフレームワーク」という用語は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。本明細書において使用される「コンセンサス免疫グロブリン配列」という用語は、関連する免疫グロブリン配列のファミリーにおいて最も頻繁に出現するアミノ酸（またはヌクレオチド）で形成された配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ  １９８７）を参照のこと）。免疫グロブリンのファミリーにおいて、コンセンサス配列中の各位置は、ファミリー中のこの位置において最も頻繁に出現するアミノ酸により占有される。２個のアミノ酸が等しい頻度で出現する場合、いずれもコンセンサス配列中に含まれてよい。
【００６８】
本明細書において使用される「バーニア」ゾーンは、ＣＤＲ構造を調節することができ、ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（参照により本明細書に組み込まれる、１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９）により記載された抗原への対応性を微調整することができるフレームワーク残基のサブセットを指す。バーニアゾーン残基は、ＣＤＲの下層を形成し、ＣＤＲの構造および抗体の親和性に影響を及ぼし得る。
【００６９】
「多価結合タンパク質」という用語は、２種以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を示すために本明細書において使用される。多価結合タンパク質は、３種以上の抗原結合部位を有するように遺伝子操作され、一般に天然の抗体ではない。「多重特異性結合タンパク質」という用語は、２種以上の関連または無関連の標的に結合することができる結合タンパク質を指す。本明細書において使用される二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、２種以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質であり、四価または多価の結合タンパク質である。かかるＤＶＤは、単一特異的、即ち１種の抗原に結合可能であっても、多重特異的、即ち２種以上の抗原に結合可能であってもよい。２本の重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２本の軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤ  Ｉｇと称される。ＤＶＤ  Ｉｇの各半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチド、および軽鎖ＤＶＤポリペプチド、ならびに２種の抗原結合部位を含む。各結合部位は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含み、抗原結合部位１箇所当たり抗原結合に関与する合計６種のＣＤＲを有する。ＤＶＤ結合タンパク質およびＤＶＤ結合タンパク質を作製する方法は、米国出願第１１／５０７，０５０号に開示されており、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７０】
本発明の一態様は、ＩＬ−１αに結合することができる結合タンパク質を含むＤＶＤ結合タンパク質に関する。別の態様において、ＤＶＤ結合タンパク質は、ＩＬ−１αおよび第２の標的に結合することができる。一実施形態において、ＤＶＤタンパク質は、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βを認識することができる。
【００７１】
本明細書において使用される「中和」という用語は、結合タンパク質がサイトカインに特異的に結合した場合のサイトカインの生物学的活性の中和を指す。好ましくは、中和結合タンパク質は、ｈＩＬ−１αへの結合によりｈＩＬ−１αの生物学的活性の阻害をもたらす中和抗体である。好ましくは、中和結合タンパク質は、ｈＩＬ−１αに結合し、ｈＩＬ−１αの生物学的活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％以上低減させる。中和結合タンパク質によるｈＩＬ−１αの生物学的活性の阻害は、当分野において周知であるｈＩＬ−１α生物学的活性の１種以上の指標を計測することにより評価することができる。
【００７２】
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意のポリペプチド決定因子を含む。ある実施形態においては、エピトープ決定因子は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面基一式を含み、ある実施形態においては、特定の３次元構造特性および／または特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、抗体が結合する抗原の領域である。ある実施形態において、抗体は、タンパク質および／または巨大分子の複雑な混合物中のこの標的抗原を優先的に認識した場合、抗原に特異的に結合するとされる。
【００７３】
本明細書において使用される「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えばＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用してバイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変動を検出することにより、リアルタイムでの生物特異的相互作用の分析を可能とする光学現象を指す。さらに詳細な説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１．：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１、およびＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７を参照のこと。
【００７４】
本明細書において使用される「Ｋｏｎ」という用語は、当分野において公知の抗体／抗原複合体を形成するための、抗原への抗体の会合についてのオン速度定数を指すものとする。
【００７５】
本明細書において使用される「Ｋｏｆｆ」という用語は、当分野において公知の抗体／抗原複合体からの抗体の解離についてのオフ速度定数を指すものとする。
【００７６】
本明細書において使用される「Ｋｄ」という用語は、当分野において公知の特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を指すものとする。
【００７７】
本明細書において使用される「標識結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質の同定を提供する、標識が取り込まれているタンパク質を指す。一態様において、標識は、検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識アミノ酸の取り込み、または標識アビジン（例えば、光学的方法または比色定量法により検出することができる蛍光性マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）により検出することができるビオチニル部分のポリペプチドへの付加である。ポリペプチドについての標識の例は、限定されるものではないが、以下のもの：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍ）；蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；二次レポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体用結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）により認識される所定のポリペプチドエピトープ；および磁気剤、例えばガドリニウムキレートを含む。
【００７８】
「抗体コンジュゲート」という用語は、結合タンパク質、例えば、第２の化学部分、例えば、治療剤または細胞毒性剤に化学的に連結している抗体を指す。「薬剤」という用語は、化合物、化合物の混合物、生物学的巨大分子、または生物材料から作製される抽出物を表すために本明細書において使用される。一態様において、治療剤または細胞毒性剤は、限定されるものではないが、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンならびにこれらの類縁体または同族体を含む。
【００７９】
本明細書において使用される「結晶」および「結晶化」という用語は、結晶の形態で存在する抗体、またはこの抗原結合部分を指す。結晶は、他の形態、例えば、アモルファス固体状態または液晶状態とは区別される、物質の固体状態の一形態である。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、タンパク質、例えば、抗体）または分子アセンブリ（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な繰り返しの３次元配列から構成される。これらの３次元配列は、当分野において十分理解されている特定の数学的関係に従って配置される。結晶中で繰り返される基本単位またはビルディングブロックは、非対称単位と呼ばれる。所与の明確な結晶学的対称性に従う配置で非対称単位が繰り返されることにより、結晶の「単位格子」を提供する。全３次元の規則的並進により単位格子が繰り返されることにより、結晶を提供する。Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）」を参照のこと。
【００８０】
本明細書において称される「ポリヌクレオチド」という用語は、２個以上のヌクレオチド、リボヌクレオチドとデオキシヌクレオチドのいずれか、またはヌクレオチドのいずれかのタイプの改変形態のポリマー形態を意味する。この用語は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖体を含むが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【００８１】
本明細書において使用される「単離ポリヌクレオチド」という用語は、（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源、またはこれらのある組合せの）ポリヌクレオチドを意味するものとし、この起源によって、「単離ポリヌクレオチド」は、「単離ポリヌクレオチド」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全部もしくは一部と会合しておらず；天然には連結していないポリヌクレオチドに作動可能に連結しており；またはより大きい配列の一部として天然で存在しない。
【００８２】
本明細書において使用される「ベクター」という用語は、これが連結している別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すものとする。ベクターのあるタイプは「プラスミド」であり、プラスミドは、追加のＤＮＡセグメントをライゲートすることができる環状二重鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別のタイプはウイルスベクターであり、このベクターにおいて追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノム中にライゲートすることができる。ある種のベクターは、ベクターが導入されている宿主細胞内で自己複製することができる（例えば、細菌の複製開始点を有する細菌ベクター、およびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞内に導入すると宿主細胞のゲノム中に組み込むことができ、それにより宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、ある種のベクターは、これが作動可能に連結している遺伝子の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書において「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術に有用な発現ベクターはプラスミドの形態であることが多い。本明細書においては、プラスミドが最も一般的に使用されるベクター形態であるので、「プラスミド」および「ベクター」を交換可能に使用することができる。しかしながら、本発明は、等価な機能を果たす発現ベクターのかかる他の形態、例えば、ウイルスベクター（例えば、複製欠損のレトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）を含むものとする。
【００８３】
「作動可能に連結している」という用語は、記載成分が意図される様式で機能することを可能とする関係にある近位を指す。コード配列に「作動可能に連結している」制御配列は、制御配列に適合性を示す条件下でコード配列の発現が達成されるようにライゲートされている。「作動可能に連結している」配列は、目的遺伝子に隣接する発現制御配列と、トランスで、または目的遺伝子を制御する距離において作用する発現制御配列の両方を含む。本明細書において使用される「発現制御配列」という用語は、ライゲートされているコード配列の発現およびプロセシングを起こすのに必要であるポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列は、適切な転写開始、終結、プロモーターおよびエンハンサー配列；効率的ＲＮＡプロセシングシグナル、例えば、スプライシングおよびポリアデニル化シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を向上させる配列（即ち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を向上させる配列；ならびに所望により、タンパク質分泌を向上させる配列を含む。かかる制御配列の性質は宿主生物に応じて異なり；原核生物においては、かかる制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含み；真核生物においては、一般に、かかる制御配列はプロモーターおよび転写終結配列を含む。「制御配列」という用語は、この存在が発現およびプロセシングに必須である成分を含むものとし、この存在が有利である追加の成分、例えば、リーダー配列および融合パートナー配列も含み得る。
【００８４】
本明細書において定義される「形質転換」は、外因性ＤＮＡが宿主細胞に入る任意の過程を指す。形質転換は、当分野において周知の種々の方法を使用する天然または人工条件下で起こり得る。形質転換は、外来核酸配列を原核または真核宿主細胞内に挿入する任意の公知の方法に依拠し得る。この方法は、形質転換される宿主細胞に基づいて選択され、限定されるものではないが、ウイルス感染、電気穿孔法、リポフェクションおよび微粒子ボンバードメントを含み得る。かかる「形質転換される」細胞は、挿入されたＤＮＡが、自己複製プラスミドとして、または宿主染色体の一部として、複製することができる、安定に形質転換される細胞を含む。「形質転換される」細胞は、挿入されたＤＮＡまたはＲＮＡを有限の時間、一過的に発現する細胞も含む。
【００８５】
本明細書において使用される「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、外因性ＤＮＡが導入された細胞を指すものとする。かかる用語は、特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫も指すものであることを理解すべきである。変異と環境の影響のいずれかに起因してある種の改変が後継世代に起こり得るので、かかる子孫は、親細胞と実際には同一でない場合もあるが、本明細書において使用される「宿主細胞」という用語の範囲内に依然として含まれる。一態様において、宿主細胞は、生物界のいずれかから選択される原核および真核細胞を含む。真核細胞は、原生生物、真菌、植物および動物細胞を含む。別の態様において、宿主細胞は、限定されるものではないが、原核細胞系Ｅ．コリ；哺乳動物細胞系ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３およびＣＯＳ；昆虫細胞系Ｓｆ９；ならびに真菌細胞サッカロミセス・セレビシエを含む。
【００８６】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換（例えば、電気穿孔法、リポフェクション）には、標準技術を使用することができる。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様書に従って、または当分野において一般に実施される通り、または本明細書に記載の通り実施することができる。上記技術および手順は、一般に、当分野において周知の慣用の方法により実施することができ、本明細書を通して引用および考察される種々の一般的参考文献およびより具体的な参考文献に記載の通り実施することができる。例えば、任意の目的のため参照により本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。
【００８７】
当分野において公知であり、本明細書において使用される「トランスジェニック生物」は、導入遺伝子を含有する細胞を有する生物を指し、生物（または生物の祖先）内に導入されている導入遺伝子は、この生物内で天然には発現されないポリペプチドを発現する。「導入遺伝子」は、トランスジェニック生物が発生する細胞のゲノムに安定に作動可能に組み込まれているＤＮＡ構築物であり、トランスジェニック生物の１種以上の細胞タイプまたは組織内のコードされる遺伝子産物の発現を誘導する。
【００８８】
「調節する」および「モジュレートする」という用語は、交換可能に使用され、本明細書において使用されるこれらの用語は、目的分子の活性（例えば、ｈＩＬ−１Ａの生物学的活性）の変化または変動を指す。モジュレーションは、目的分子のある活性または機能の程度の増加または減少であり得る。分子の例示的活性および機能は、限定されるものではないが、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化およびシグナル伝達を含む。
【００８９】
これに対応して、本明細書において使用される「モジュレーター」という用語は、目的分子の活性または機能（例えば、ｈＩＬ−１αの生物学的活性）を変化または変動させることができる化合物である。例えば、モジュレーターは、モジュレーターの不存在下で観察される活性または機能の程度と比較して分子のある活性または機能の程度の増加または減少を引き起こすことができる。ある実施形態において、モジュレーターは、分子の少なくとも１種の活性または機能の程度を減少させる阻害剤である。例示的阻害剤は、限定されるものではないが、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディ、炭水化物または低分子有機分子を含む。ペプチボディは、例えば、ＷＯ０１／８３５２５に記載されている。
【００９０】
本明細書において使用される「アゴニスト」という用語は、目的分子と接触した場合、アゴニストの不存在下で観察される活性または機能の程度と比較して分子のある活性または機能の程度の増加を引き起こすモジュレーターを指す。対象となる特定のアゴニストは、限定されるものではないが、ＩＬ−１αポリペプチドもしくはＩＬ−１αに結合するポリペプチド、核酸、炭水化物、または任意の他の分子を含み得る。
【００９１】
本明細書において使用される「アンタゴニスト」または「阻害剤」という用語は、目的分子と接触した場合、アンタゴニストの不存在下で観察される活性または機能の程度と比較して分子のある活性または機能の程度の低下を引き起こすモジュレーターを指す。対象となる特定のアンタゴニストは、ＩＬ−１αの生物学的または免疫学的活性を遮断またはモジュレートするアンタゴニストを含む。ＩＬ−αのアンタゴニストおよび阻害剤は、限定されるものではないが、ＩＬ−１αに結合するタンパク質、核酸、炭水化物または任意の他の分子を含み得る。
【００９２】
本明細書において使用される「有効量」という用語は、障害もしくはこの１種以上の症候の重症度および／もしくは継続期間を低減もしくは改善し、障害の進行を予防し、障害の後退を引き起こし、障害に伴う１種以上の症候の再発、発生、発症もしくは進行を予防し、障害を検出し、または別の治療物（例えば、予防剤または治療剤）の（１種以上の）予防もしくは治療効果を向上もしくは改善するに十分な治療物の量を指す。
【００９３】
本明細書において使用される「試料」という用語は、この最も広い意味で使用される。本明細書において使用される「生物試料」は、限定されるものではないが、生物から、または生存していた生物からの任意の量の物質を含む。かかる生物は、限定されるものではないが、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギおよび他の動物を含む。かかる物質は、限定されるものではないが、血液、血清、尿、滑液、細胞、器官、組織、骨髄、リンパ節および脾臓を含む。
【００９４】
Ｉ．ヒトＩＬ−１αに結合する抗体
本発明の一態様は、高親和性、緩慢なオフ速度および高中和能でＩＬ−１αに結合する単離ネズミモノクローナル抗体、またはこの抗原結合部分を提供する。本発明の第２の態様は、ＩＬ−１αに結合するキメラ抗体を提供する。本発明の第３の態様は、ＩＬ−１αに結合するＣＤＲグラフト抗体、またはこの抗原結合部分を提供する。本発明の第４の態様は、ＩＬ−１αに結合するヒト化抗体、またはこの抗原結合部分を提供する。好ましくは、抗体またはこの一部は単離抗体である。好ましくは、本発明の抗体は、ヒト抗ＩＬ−１α抗体を中和している。
【００９５】
Ａ．抗ＩＬ−１α抗体の作製方法
本発明の抗体は、当分野において公知の多数の技術のいずれかにより作製することができる。
【００９６】
１．ハイブリドーマ技術を使用する抗ＩＬ−１αモノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換えおよびファージディスプレイ技術、またはこれらの組合せの使用を含む、当分野において公知の多種多様な技術を使用して調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、当分野において公知の技術、および、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｇｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に教示された技術を含むハイブリドーマ技術を使用して産生させることができる（前記参考文献は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。）。本明細書において使用される「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術により産生された抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核生物、原核生物またはファージクローンを含む、単一クローンに由来する抗体を指し、モノクローナル抗体が産生される方法ではない。
【００９７】
ハイブリドーマ技術を使用して特異性抗体を産生させ、およびスクリーニングする方法は、定型的であり、当分野において周知である。一実施形態において、本発明は、モノクローナル抗体の生成方法、および本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することを含む方法により産生される抗体を提供し、好ましくは、ハイブリドーマは、本発明の抗原により免疫化されたマウスから単離された脾細胞を骨髄腫細胞と融合させ、次いで融合から生じるハイブリドーマを、本発明のポリペプチドに結合することができる抗体を分泌するハイブリドーマクローンについてスクリーニングすることにより生成される。手短に述べると、マウスをＩＬ−１α抗原により免疫することができる。好ましい実施形態において、ＩＬ−１α抗原をアジュバントとともに投与して免疫応答を刺激する。かかるアジュバントは、完全または不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）またはＩＳＣＯＭ（免疫賦活複合体）を含む。かかるアジュバントは、ポリペプチドを局所的堆積物中に隔離することによりポリペプチドを急速な分散から保護することができ、または宿主を刺激してマクロファージおよび免疫系の他の成分について走化性を示す因子を分泌させる物質を含有し得る。好ましくは、ポリペプチドが投与されている場合、免疫化スケジュールは、数週間にわたるポリペプチドの２回以上の投与を含む。
【００９８】
動物をＩＬ−１α抗原により免疫化した後、抗体および／または抗体産生細胞を動物から得ることができる。抗ＩＬ−１α抗体含有血清を、動物から採血し、または動物を屠殺することにより動物から得る。血清を動物から得られたままで使用することができ、免疫グロブリン画分を血清から得ることができ、または抗ＩＬ−１α抗体を血清から精製することができる。このようにして得られた血清または免疫グロブリンはポリクローナルであり、従って不均一な諸性質を有する。
【００９９】
免疫応答を検出した後、例えば、抗原ＩＬ−１αについて特異的な抗体をマウス血清中で検出した後、マウス脾臓を収集し、脾細胞を単離する。次いで、脾細胞を周知技術により任意の好適な骨髄腫細胞、例えば、ＡＴＣＣから入手可能な細胞系ＳＰ２０からの細胞と融合させる。ハイブリドーマを選択し、限界希釈によりクローニングする。次いで、ハイブリドーマクローンを、当分野において公知の方法により、ＩＬ−１αに結合することができる抗体を分泌する細胞についてアッセイする。一般に高レベルの抗体を含有する腹水は、陽性ハイブリドーマクローンによりマウスを免疫化することにより生成させることができる。
【０１００】
別の実施形態において、抗体産生不死化ハイブリドーマを免疫化動物から調製することができる。免疫化後、動物を屠殺し、当分野において周知の通り、脾臓Ｂ細胞を不死化骨髄腫細胞と融合させる（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（前掲）を参照のこと）。好ましい実施形態において、骨髄腫細胞は、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌性細胞系）。融合および抗生物質選択後、ＩＬ−１αもしくはこの一部、またはＩＬ−１αを発現する細胞を使用してハイブリドーマをスクリーニングする。好ましい実施形態において、初期スクリーニングを酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）または放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、好ましくはＥＬＩＳＡを使用して実施する。ＥＬＩＳＡスクリーニングの例は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ００／３７５０４に提供されている。
【０１０１】
抗ＩＬ−１α抗体産生ハイブリドーマを選択し、クローニングし、以下にさらに考察する、堅牢なハイブリドーマ成長、高抗体産生および所望の抗体特性を含む所望の特性についてさらにスクリーニングする。ハイブリドーマは、同一遺伝子型動物、免疫系を欠く動物（例えば、ヌードマウス）においてインビボで、またはインビトロでの細胞培養において、培養し、拡大させることができる。ハイブリドーマを選択し、クローニングし、拡大させる方法は、当業者に周知である。
【０１０２】
好ましい実施形態において、ハイブリドーマは、上記の通りマウスハイブリドーマである。別の好ましい実施形態において、ハイブリドーマは、非ヒト非マウス種、例えば、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマにおいて産生される。別の実施形態において、ハイブリドーマは、ヒト非分泌性骨髄腫が抗ＩＬ−１α抗体を発現するヒト細胞と融合しているヒトハイブリドーマである。
【０１０３】
特異的エピトープを認識する抗体断片は、公知技術により生成させることができる。例えば、本発明のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、酵素、例えば、（Ｆａｂ断片を産生させるための）パパイン、（Ｆ（ａｂ’）２断片を産生させるための）ペプシンを使用する免疫グロブリン分子のタンパク質分解的開裂により産生させることができる。Ｆ（ａｂ’）２断片は、可変領域、軽鎖定常領域、および重鎖のＣＨＩドメインを含有する。
【０１０４】
２．ＳＬＡＭを使用する抗ＩＬ−１αモノクローナル抗体
本発明の別の態様において、組換え抗体は、米国特許５，６２７，０５２、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０２５５１およびＢａｂｃｏｃｋ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３−７８４８に記載の通り、当分野において選択リンパ球抗体法（ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｔｈｏｄ）（ＳＬＡＭ）と称される手順を使用して単一の単離リンパ球から生成される。この方法において、目的抗体を分泌する単細胞、例えば、セクション１に記載の免疫化動物のいずれか１種に由来するリンパ球を、抗原特異的溶血プラークアッセイを使用してスクリーニングし、このアッセイにおいて、抗原ＩＬ−１α、またはこの断片を、リンカー、例えばビオチンを使用してヒツジ赤血球にカップリングさせ、これを使用してＩＬ−１αについて特異性を有する抗体を分泌する単細胞を同定する。目的とする抗体分泌細胞を同定した後、重鎖および軽鎖可変領域ｃＤＮＡを逆転写酵素−ＰＣＲにより細胞からレスキューし、次いでこれらの可変領域を、適切な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）に関連して、哺乳動物宿主細胞、例えば、ＣＯＳまたはＣＨＯ細胞内で発現させることができる。次いで、インビボで選択されたリンパ球に由来する、増幅された免疫グロブリン配列を形質移入させた宿主細胞を、例えば、形質移入細胞をパニングしてＩＬ−１αに対する抗体を発現する細胞を単離することによりインビトロでさらなる分析および選択に供することができる。増幅された免疫グロブリン配列は、インビトロで、例えば、インビトロ親和性成熟方法、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１およびＰＣＴ公開ＷＯ００／５６７７２に記載の方法によりさらに操作することができる。
【０１０５】
３．トランスジェニック動物を使用する抗ＩＬ−１αモノクローナル抗体
本発明の別の実施形態において、抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部または全部を含む非ヒト動物をＩＬ−１α抗原により免疫化することにより産生される。好ましい実施形態において、非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の大きい断片を含み、マウス抗体産生が欠損している遺伝子操作されたマウス系統である、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスである。例えば、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１（１９９４）ならびに米国特許５，９１６，７７１、同５，９３９，５９８、同５，９８５，６１５、同５，９９８，２０９、同６，０７５，１８１、同６，０９１，００１、同６，１１４，５９８および同６，１３０，３６４を参照のこと。１９９１年７月２５日に公開されたＷＯ９１／１０７４１、１９９４年２月３日に公開されたＷＯ９４／０２６０２、両方とも１９９６年１０月３１日に公開されたＷＯ９６／３４０９６およびＷＯ９６／３３７３５、１９９８年４月２３日に公開されたＷＯ９８／１６６５４、１９９８年６月１１日に公開されたＷＯ９８／２４８９３、１９９８年１１月１２日に公開されたＷＯ９８／５０４３３、１９９９年９月１０日に公開されたＷＯ９９／４５０３１、１９９９年１０月２１日に公開されたＷＯ９９／５３０４９、２０００年２月２４日に公開されたＷＯ００  ０９５６０および２０００年６月２９日に公開されたＷＯ００／０３７５０４も参照のこと。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは、完全ヒト抗体の成体様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトＭａｂを生成する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座およびｘ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖系列コンフィギュレーションＹＡＣ断片の導入により、ヒト抗体レパートリーの約８０％を含有する。この開示が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７）、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−４９５（１９９８）を参照のこと。
【０１０６】
４．組換え抗体ライブラリーを使用する抗ＩＬ−１αモノクローナル抗体
抗体ライブラリーをスクリーニングして所望の結合特異性を有する抗体を同定するインビトロ方法を使用して本発明の抗体を作製することもできる。組換え抗体ライブラリーのかかるスクリーニング方法は、当分野において周知であり、例えば、このそれぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．米国特許５，２２３，４０９；Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０９６９０；Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７；ならびにＢａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２、米国特許出願公開２００３０１８６３７４、およびＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１に記載の方法を含む。
【０１０７】
組換え抗体ライブラリーは、ＩＬ−１α、またはＩＬ−１αの一部により免疫化された対象からのものであり得る。または、組換え抗体ライブラリーは、ナイーブな対象、即ち、ＩＬ−１αにより免疫化されていない対象、例えば、ヒトＩＬ−１αにより免疫化されていないヒト対象からのヒト抗体ライブラリーからのものであり得る。本発明の抗体は、ヒトＩＬ−１αを含むペプチドを用いて組換え抗体ライブラリーをスクリーニングし、それによりＩＬ−１αを認識する抗体を選択することにより選択される。かかるスクリーニングおよび選択を実施する方法は、当分野において周知であり、例えば前段落の参考文献に記載の方法である。ｈＩＬ−１αについて特定の結合親和性を有する本発明の抗体、例えば、ヒトＩＬ−１αから特定のｋｏｆｆ速度定数で解離する抗体を選択するため、当分野において公知の表面プラズモン共鳴法を使用して所望のｋｏｆｆ速度定数を有する抗体を選択することができる。ｈＩＬ−１αについて特定の中和活性を有する本発明の抗体、例えば、特定のＩＣ５０を有する抗体を選択するため、ｈＩＬ−１α活性の阻害を評価する当分野において公知の標準方法を使用することができる。
【０１０８】
一態様において、本発明は、ヒトＩＬ−１αに結合する単離抗体、またはこの抗原結合部分に関する。好ましくは、抗体は中和抗体である。種々の実施形態において、抗体は、組換え抗体またはモノクローナル抗体である。
【０１０９】
例えば、本発明の抗体は、当分野において公知である種々のファージディスプレイ法を使用して生成させることもできる。ファージディスプレイ法において、機能的抗体ドメインは、ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面上にディスプレイされる。特に、かかるファージを利用してレパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはネズミ）から発現される抗原結合ドメインをディスプレイすることができる。目的抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、例えば、標識抗原、または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉されている抗原を使用して選択または同定することができる。これらの方法に使用されるファージは、典型的には、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質に組換え融合されたＦａｂ、Ｆｖまたはジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインを有するファージから発現されるｆｄおよびＭ１３結合ドメインを含む繊維状ファージである。本発明の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例は、このそれぞれが参照により全体として本明細書に組み込まれる、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０（１９９５）；Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６（１９９５）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  １８７  ９−１８（１９９７）；Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７：１９１−２８０（１９９４）、ＰＣＴ公開ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；ならびに米国特許５，６９８，４２６；同５，２２３，４０９；同５，４０３，４８４；同５，５８０，７１７；同５，４２７，９０８；同５，７５０，７５３；同５，８２１，０４７；同５，５７１，６９８；同５，４２７，９０８；同５，５１６，６３７；同５，７８０，２２５；同５，６５８，７２７；同５，７３３，７４３および同５，９６９，１０８に開示されているファージディスプレイ法を含む。
【０１１０】
上記参考文献に記載の通り、ファージ選択後、ファージからの抗体コード領域を単離し、この領域を使用してヒト抗体を含む抗体全体、または任意の他の所望の抗原結合断片を生成させ、例えば、以下に詳述する通り、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌を含む任意の所望の宿主内で発現させることができる。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２断片を組換え産生させる技術は、当分野において公知の方法、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ｅｔ  ａｌ．，  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４−８６９（１９９２）；およびＳａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ＡＪＲＩ  ３４：２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３（１９８８）に開示されている方法を使用して用いることもできる（前記参考文献は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。）。単鎖Ｆｖおよび抗体を産生させるために使用することができる技術の例は、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．４，９４６，７７８および同５，２５８，４９８；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２０３：４６−８８（１９９１）；Ｓｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９０：７９９５−７９９９（１９９３）；ならびにＳｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に記載の技術を含む。
【０１１１】
ファージディスプレイによる組換え抗体ライブラリーのスクリーニングに代えて、大きいコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする当分野において公知の他の方法を、本発明の二重特異性抗体の同定に適用することができる。代替発現系の１つのタイプは、ＳｚｏｓｔａｋおよびＲｏｂｅｒｔｓによるＰＣＴ公開ＷＯ９８／３１７００、ならびにＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｗ．ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１２２９７−１２３０２に記載の通り、組換え抗体ライブラリーがＲＮＡ−タンパク質融合物として発現されるタイプである。この系において、共有結合性融合物は、ペプチジル受容体抗生物質であるピューロマイシンを３’末端に担持する合成ｍＲＮＡのインビトロでの翻訳によりコードする、ｍＲＮＡとペプチドまたはタンパク質との間で作出される。従って、特定のｍＲＮＡは、コードされるペプチドまたはタンパク質、例えば、抗体またはこの一部の性質、例えば、二重特異性抗原に対する抗体、またはこの一部の結合性に基づき、ｍＲＮＡの複雑な混合物（例えば、コンビナトリアルライブラリー）から濃縮することができる。かかるライブラリーのスクリーニングから回収される、抗体、またはこの一部をコードする核酸配列は、（例えば、哺乳動物宿主細胞内で）上記組換え手段により発現させることができ、さらに上記の通り、最初に選択された（１種以上の）配列に変異が導入されたｍＲＮＡ−ペプチド融合物の追加のラウンドのスクリーニングにより、または組換え抗体のインビトロでの他の親和性成熟方法により、さらなる親和性成熟に供することができる。
【０１１２】
別のアプローチにおいて、本発明の抗体は、当分野において公知である酵母ディスプレイ法を使用して生成させることもできる。酵母ディスプレイ法においては、遺伝学的方法を使用して抗体ドメインを酵母の細胞壁につなぎ、酵母表面上に抗体ドメインをディスプレイする。特に、かかる酵母を利用してレパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはネズミ）から発現される抗原結合ドメインをディスプレイすることができる。本発明の抗体を作製するために使用することができる酵母ディスプレイ法の例は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｉｔｔｒｕｐ，ｅｔ  ａｌ．米国特許６，６９９，６５８に開示されている方法を含む。
【０１１３】
Ｂ．組換えＩＬ−１α抗体の産生
本発明の抗体は、当分野において公知の多数の技術のいずれかにより産生させることができる。例えば、宿主細胞からの発現であり、この発現においては、重鎖および軽鎖をコードする（１種以上の）発現ベクターを宿主細胞内に標準技術により形質移入させる。「形質移入」という用語の種々の形態は、外因性ＤＮＡを原核生物または真核生物宿主細胞内に導入するために一般に使用される多種多様な技術、例えば、電気穿孔法、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラン形質移入などを包含するものとする。本発明の抗体は、原核生物宿主細胞内でも真核生物宿主細胞内でも発現させることが可能であるが、真核細胞内での抗体の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞内での抗体の発現が最も好ましい。それというのも、かかる真核細胞（特に哺乳動物細胞）は、適切に折りたたまれた免疫学的に活性な抗体を組み立て、分泌する可能性が原核細胞よりも高いからである。
【０１１４】
本発明の組換え抗体を発現させるために好ましい哺乳動物宿主細胞は、（例えばＲ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載のＤＨＦＲ選択マーカーとともに使用される、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞を含む。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞内に導入する場合、抗体は、宿主細胞中での抗体の発現を可能とするのに十分な期間、より好ましくは宿主細胞が成長する培養培地中への抗体分泌を可能とするのに十分な期間、宿主細胞を培養することにより産生される。抗体は、標準タンパク質精製法により培養培地から回収することができる。
【０１１５】
宿主細胞を使用して機能的抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子を産生させることもできる。上記手順の変形も本発明の範囲内であることを理解されたい。例えば、本発明の抗体の軽鎖および／または重鎖の機能的断片をコードするＤＮＡを宿主細胞に形質移入することが望ましい場合がある。組換えＤＮＡ技術を使用して目的抗原への結合に必要でない、軽鎖および重鎖の一方または両方をコードするＤＮＡの一部または全部を除去することもできる。かかるトランケートされたＤＮＡ分子から発現される分子も本発明の抗体に包含される。さらに、一方の重鎖および一方の軽鎖が本発明の抗体であり、他方の重鎖および軽鎖が目的抗原以外の抗原に特異的である二官能性抗体を、本発明の抗体を第２の抗体に標準化学架橋法により架橋することにより産生させることができる。
【０１１６】
本発明の抗体、またはこの抗原結合部分の組換え発現の好ましい系においては、抗体重鎖と抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを、リン酸カルシウムにより媒介される形質移入によりｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞内に導入する。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖および軽鎖遺伝子は、高レベルの遺伝子転写をもたらすＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントにそれぞれ作動可能に連結される。組換え発現ベクターは、ベクターが形質移入されたＣＨＯ細胞をメトトレキサート選択／増幅を使用して選択することを可能とするＤＨＦＲ遺伝子も担持する。選択された形質転換宿主細胞を培養して抗体重鎖および軽鎖の発現を可能とし、インタクト抗体を培養培地から回収する。標準分子生物学技術を使用して組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞に形質移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を培養培地から回収する。さらに、本発明は、本発明の宿主細胞を適切な培養培地中で本発明の組換え抗体が合成されるまで培養することにより、本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。方法は、組換え抗体を培養培地から単離することをさらに含み得る。
【０１１７】
１．抗ＩＬ−１α抗体
表５は、本発明の好ましい抗ｈＩＬ−１α抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列リストである。
【０１１８】
【表５】
2012516153.tif 000006
【０１１９】
２．抗ＩＬ−１αキメラ抗体
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子、例えば、ネズミモノクローナル抗体に由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体である。キメラ抗体を産生させる方法は、当分野において公知であり、実施例２．１で詳細に考察する。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２；米国特許５，８０７，７１５；同４，８１６，５６７；および同４，８１６，３９７を参照のこと。さらに、適切な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子を適切な生物学的活性のヒト抗体分子からの遺伝子と一緒にスプライシングすることにより「キメラ抗体」を産生させるために開発された技術（参照により全体として本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１−８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４）を使用することができる。
【０１２０】
３．抗ＩＬ−１αＣＤＲグラフト抗体
本発明のＣＤＲグラフト抗体は、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域の１個以上が本発明のネズミ抗体のＣＤＲ配列により置き換えられているヒト抗体からの重鎖および軽鎖可変領域配列を含む。任意のヒト抗体からのフレームワーク配列は、ＣＤＲグラフトのためのテンプレートとして機能することができる。しかしながら、かかるフレームワーク上への直鎖置き換えは、抗原に対する結合親和性のいくらかの損失をもたらすことが多い。元のネズミ抗体に対するヒト抗体の相同性が大きくなるほど、ネズミＣＤＲをヒトフレームワークと組み合わせる見込みが親和性を低減させ得るＣＤＲの歪みを導入する可能性が低くなる。従って、ネズミ可変フレームワークをＣＤＲから離して置き換えるために選択されるヒト可変フレームワークは、ネズミ抗体可変領域フレームワークとの少なくとも６５％の配列同一性を有することが好ましい。ＣＤＲから離れたヒトおよびネズミ可変領域は、少なくとも７０％の配列同一性を有することがより好ましい。ＣＤＲから離れたヒトおよびネズミ可変領域は少なくとも７５％の配列同一性を有することがよりいっそう好ましい。ＣＤＲから離れたヒトおよびネズミ可変領域は、少なくとも８０％の配列同一性を有することが最も好ましい。キメラ抗体を産生させる方法は、当分野において公知であり、実施例２．２において詳細に考察する。（ＥＰ２３９，４００；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７；米国特許５，２２５，５３９；同５，５３０，１０１；および同５，５８５，０８９）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ＥＰ５９２，１０６；ＥＰ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３（１９９４））、および鎖シャフリング（米国特許５，５６５，３５２）も参照のこと）。
【０１２１】
４．抗ＩＬ−１αヒト化抗体
ヒト化抗体は、非ヒト種からの１種以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合する、非ヒト種抗体からの抗体分子である。公知のヒトＩｇ配列は、例えば、参照によりこの全体が本明細書に組み込まれる、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ−／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ−０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｍ−ｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．−ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／；ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３／３４０９１３．ｈｔｍｌ−；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／；ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃｊｐ／．ａｂｏｕｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ−／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎ−ｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰ−Ｓｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ．ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ／；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕｂｌｉｃ／ＩＮＴＲＯ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ．ｆｒ：８１０４／；ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／；ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．ａｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇｇｅｒ／ＡＨＯｓｅｍｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏ−ｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂ−ｐａｇｅｓ／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒ  ｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｍ／ｉｂｍ．ｈｔｍｌ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）に開示されている。かかるインポートされた配列を使用して免疫原性を低減させることができ、または結合、親和性、オン速度、オフ速度、アビディティ、特異性、半減期、もしくは当分野において公知の任意の他の好適な特性を低減、向上もしくは改変することができる。
【０１２２】
ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基を、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基により置換して抗原結合性を変化させることができ、好ましくは改善することができる。これらのフレームワーク置換は、当分野において周知の方法、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定する、ＣＤＲとフレームワーク残基の相互作用のモデリング、および特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定する配列比較により同定される。（例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれる、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許５，５８５，０８９、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）を参照のこと）。３次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された免疫グロブリン配列候補の有望な３次元配座を図示および表示するコンピュータプログラムを利用することができる。これらの表示を詳しく調査することにより、免疫グロブリン配列候補の機能における残基の担うであろう役割を分析することができ、即ち、免疫グロブリン候補がこの抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基を分析することができる。このようにして、ＦＲ残基をコンセンサスから選択し、組み合わせ、所望の抗体特性、例えば、（１種以上の）標的抗原についての親和性の増加が達成されるように配列をインポートすることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接的に、最も実質的に関与する。抗体は、当分野において公知の種々の技術、例えば、限定されるものではないが、参照によりこの全体が本明細書に組み込まれ、引用されている参考文献が含まれる、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２（１９８６）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８））、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａ．  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３（１９９４）；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７、ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０、ＵＳ９６／１８９７８、ＵＳ９１／０９６３０、ＵＳ９１／０５９３９、ＵＳ９４／０１２３４、ＧＢ８９／０１３３４、ＧＢ９１／０１１３４、ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ９０／１４４４３、ＷＯ９０／１４４２４、ＷＯ９０／１４４３０、ＥＰ２２９２４６、ＥＰ５９２，１０６、ＥＰ５１９，５９６、ＥＰ２３９，４００、米国特許５，５６５，３３２、同５，７２３，３２３、同５，９７６，８６２、同５，８２４，５１４、同５，８１７，４８３、同５８１４４７６、同５７６３１９２、同５７２３３２３、同５，７６６８８６、同５���７１４，３５２、同６，２０４，０２３、同６，１８０，３７０、同５，６９３，７６２、同５，５３０，１０１、同５，５８５，０８９、同５，２２５，５３９、同４，８１６，５６７に記載の技術を使用してヒト化することができる。
【０１２３】
Ｃ．抗体および抗体産生細胞系の産生
好ましくは、本発明の抗ＩＬ−１α抗体は、例えば、当分野において公知の幾つかのインビトロおよびインビボアッセイのいずれか１種により評価された場合、ＩＬ−１α活性を低減させ、または中和する高い能力を示す。好ましくは、本発明の抗ＩＬ−１α抗体は、ＩＬ−α活性を低減させ、または中和する高い能力も示す。
【０１２４】
好ましい実施形態において、単離抗体、またはこの抗原結合部分は、ヒトＩＬ−１αに結合し、抗体、またはこの抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、ヒトＩＬ−１αから約０．１ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離し、またはヒトＩＬ−１α活性を約１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。または、抗体、またはこの抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、ヒトＩＬ−１αから約１×１０−２ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離することができ、またはヒトＩＬ−１α活性を約１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０で阻害することができる。または、抗体、またはこの抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、ヒトＩＬ−１αから約１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離することができ、またはヒトＩＬ−１αを約１×１０−８Ｍ以下のＩＣ５０で阻害することができる。または、抗体、またはこの抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、ヒトＩＬ−１αから約１×１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離することができ、またはＩＬ−１α活性を約１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害することができる。または、抗体、またはこの抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、ヒトＩＬ−１αから約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離することができ、またはＩＬ−１α活性を約１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で阻害することができる。または、抗体、またはこの抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、ヒトＩＬ−１αから約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離することができ、またはヒトＩＬ−１α活性を約１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０で阻害することができる。
【０１２５】
ある実施形態において、抗体は、重鎖定常領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域を含む。好ましくは、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。さらに、抗体は、カッパ軽鎖定常領域とラムダ軽鎖定常領域のいずれかの軽鎖定常領域を含み得る。好ましくは、抗体はカッパ軽鎖定常領域を含む。または、抗体部分は、例えば、Ｆａｂ断片または単鎖Ｆｖ断片であり得る。
【０１２６】
Ｆｃ部分中のアミノ酸残基を置き換えて抗体のエフェクター機能を変化させることは、当分野において公知である（Ｗｉｎｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．ＵＳ  ＰＡＴ  ＮＯＳ  ５，６４８，２６０、同５６２４８２１）。抗体のＦｃ部分は、幾つかの重要なエフェクター機能、例えば、抗体および抗原−抗体複合体のサイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および半減期／クリアランス速度を媒介する。これらのエフェクター機能は、治療抗体に望ましい場合もあるが、治療目的によっては不要であり、さらには有害な場合もある。ある種のヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、それぞれＦｃγＲｓおよび補体Ｃ１ｑへの結合を介して、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを媒介する。新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な成分である。さらに別の一実施形態において、少なくとも１個のアミノ酸残基が、抗体のエフェクター機能が変化するように、抗体の定常領域、例えば抗体のＦｃ領域において置き換えられる。
【０１２７】
一実施形態は、本発明の抗体または抗体部分が誘導体化され、または別の機能分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に結合している標識結合タンパク質を提供する。例えば、本発明の標識結合タンパク質は、本発明の抗体または抗体部分を１種以上の他の分子実体、例えば、別の抗体（例えば、双特異性抗体またはダイアボディ）、検出可能薬剤、細胞毒性剤、医薬剤および／または抗体もしくは抗体部分と別の分子（例えば、ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ）との会合を媒介することができるタンパク質またはペプチドに（化学カップリング、遺伝子融合、非共有結合性会合などにより）機能的に連結することにより誘導することができる。
【０１２８】
本発明の抗体または抗体部分を誘導体化することができる有用な検出可能な薬剤は、蛍光性化合物を含む。例示的な蛍光性検出可能薬剤は、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリトリンなどを含む。抗体は、検出可能な酵素、例えば、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどを使用して誘導体化することもできる。抗体を検出可能な酵素により誘導体化する場合、検出可能な反応生成物を産生するため酵素が使用する追加の試薬を添加することにより抗体を検出する。例えば、検出可能な薬剤のセイヨウワサビペルオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素およびジアミノベンジジンを添加することにより、検出可能な着色反応生成物がもたらされる。抗体は、ビオチンにより誘導体化し、アビジンまたはストレプトアビジン結合を間接的に計測することにより検出することもできる。
【０１２９】
本発明の別の実施形態は、結晶化結合タンパク質を提供する。好ましくは、本発明は、本明細書に開示の抗ＩＬ−１α抗体全体およびこの断片の結晶、ならびにかかる結晶を含む配合物および組成物に関する。一実施形態において、結晶化結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性対応物よりも長いインビボ半減期を有する。別の実施形態において、結合タンパク質は結晶化後に生物学的活性を保持する。
【０１３０】
本発明の結晶化結合タンパク質は、当分野において公知の方法、および参照により本明細書に組み込まれるＷＯ０２０７２６３６に開示の方法により産生させることができる。
【０１３１】
本発明の別の実施形態は、抗体またはこの抗原結合部分が１個以上の炭水化物残基を含むグリコシル化結合タンパク質を提供する。新生インビボタンパク質産生は、翻訳後修飾として知られるさらなるプロセシングを受け得る。特に、糖（グリコシル）残基が酵素的に付加され得る（グリコシル化として知られる過程）。共有結合しているオリゴ糖側鎖を担持する得られたタンパク質は、グリコシル化タンパク質または糖タンパク質として知られる。タンパク質のグリコシル化は、目的タンパク質のアミノ酸配列、およびタンパク質が発現される宿主細胞に依存する。異なる生物は、異なるグリコシル化酵素（例えば、グリコシルトランスフェラーゼおよびグリコシダーゼ）を産生することができ、利用可能な異なる基質（ヌクレオチド糖）を有する。かかる要因に起因して、タンパク質グリコシル化パターン、およびグリコシル残基の組成は、特定のタンパク質が発現される宿主系に応じて異なり得る。本発明において有用なグリコシル残基は、限定されるものではないが、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミンおよびシアル酸を含み得る。好ましくは、グリコシル化結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトであるようなグリコシル残基を含む。
【０１３２】
異なるタンパク質グリコシル化は、異なるタンパク質特性をもたらし得ることが当業者に知られている。例えば、微生物宿主、例えば酵母内で産生され、酵母の内在性経路を利用してグリコシル化された治療用タンパク質の有効性は、哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ細胞系内で発現される同一タンパク質の有効性と比較して低減し得る。かかる糖タンパク質は、ヒトにおいて免疫原性でもあり得、投与後にインビボ半減期の低減を示し得る。ヒトおよび他の動物における特異的受容体は、特異的なグリコシル残基を認識し、血流からのタンパク質の急速なクリアランスを促進し得る。他の有害作用は、タンパク質折りたたみ、溶解度、プロテアーゼに対する感受性、細胞内輸送、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質もしくは因子による認識、抗原性、またはアレルゲン性の変化を含み得る。従って、実務家は、グリコシル化の特異的な組成およびパターン、例えば、ヒト細胞において、または意図される対象動物の種特異的細胞において、産生されるものと同一であり、または少なくとも類似するグリコシル化組成およびパターンを有する治療用タンパク質を好み得る。
【０１３３】
宿主細胞のグリコシル化タンパク質とは異なるグリコシル化タンパク質の発現は、宿主細胞を遺伝子改変して異種グリコシル化酵素を発現させることにより達成することができる。当分野において公知の技術を使用して、実務家は、ヒトタンパク質グリコシル化を示す抗体またはこの抗原結合部分を生成させることができる。例えば、酵母系統は、これらの酵母系統内で産生されるグリコシル化タンパク質（糖タンパク質）が、動物細胞、特にヒト細胞のタンパク質グリコシル化と同一のタンパク質グリコシル化を示すように、遺伝子改変されて非天然グリコシル化酵素を発現する（米国特許出願２００４００１８５９０および同２００２０１３７１３４）。
【０１３４】
さらに、ライブラリーのメンバー宿主細胞が、変形グリコシル化パターンを有する目的タンパク質を産生するように、種々のグリコシル化酵素を発現するように遺伝子操作された宿主細胞のライブラリーを使用して目的タンパク質を発現させることができることが当業者により理解される。次いで、実務家は、特定の新規グリコシル化パターンを有する目的タンパク質を選択し、単離することができる。好ましくは、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、生物学的性質の改善または変化を示す。
【０１３５】
Ｄ．抗ＩＬ−１α抗体の使用
ヒトＩＬ−１αに結合するこの能力を考慮に入れると、本発明の抗ヒトＩＬ−１α抗体またはこの一部は、慣用の免疫測定法、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学を使用して（例えば、生物試料、例えば、血清または血漿中の）ヒトＩＬ−１αを検出するために使用することができる。本発明は、生物試料を本発明の抗体、または抗体部分と接触させること、およびヒトＩＬ−１αに結合している抗体（または抗体部分）または結合していない抗体（または抗体部分）を検出し、それにより生物試料中のヒトＩＬ−１αを検出することを含む、生物試料中のヒトＩＬ−１αを検出する方法を提供する。抗体を検出可能な物質により直接的または間接的に標識して結合している、または結合していない抗体の検出を容易にする。好適な検出可能物質は、種々の酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、放射性材料を含む。好適な酵素の例は、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼを含み；適切な補欠分子族複合体の例は、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンを含み；好適な蛍光材料の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンを含み；発光材料の例はルミノールを含み；好適な放射性材料の例は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍを含む。
【０１３６】
抗体の標識に代えて、検出可能物質により標識されているｒｈＩＬ−１スタンダードおよび非標識抗ヒトＩＬ−１α抗体を利用する競合免疫測定法により、体液中のヒトＩＬ−１αをアッセイすることができる。このアッセイにおいて、生物試料、標識ｒｈＩＬ−１αスタンダードおよび抗ヒトＩＬ−１α抗体を合わせ、非標識抗体に結合している標識ｒｈＩＬ−１αスタンダードの量を測定する。生物試料中のヒトＩＬ−１αの量は、抗ＩＬ−１α抗体に結合している標識ｒｈＩＬ−１αスタンダードの量に反比例する。同様に、検出可能物質により標識されているｒｈＩＬ−１αスタンダードおよび非標識抗ヒトＩＬ−１α抗体を利用する競合免疫測定法により、体液中のヒトＩＬ−１αをアッセイすることもできる。
【０１３７】
本発明の抗体および抗体部分は、好ましくは、インビトロとインビボの両方でヒトＩＬ−１α活性を中和することができる。従って、本発明のかかる抗体および抗体部分を使用し、例えば、ＩＬ−１αを含有する細胞培養物において、本発明の抗体が交差反応するＩＬ−１αを有するヒト対象においてまたは他の哺乳動物対象において、ＩＬ−１α活性を阻害することができる。一実施形態において、本発明は、ＩＬ−１α活性が阻害されるように、ＩＬ−１αを本発明の抗体または抗体部分と接触させることを含む、ＩＬ−１α活性を阻害する方法を提供する。例えば、ｈＩＬ−１αを含有し、または含有する疑いがある細胞培養物において、本発明の抗体または抗体部分を培養培地に添加して培養物中のＩＬ−１α活性を阻害することができる。
【０１３８】
別の実施形態において、本発明は、対象において、有利にはＩＬ−１α活性が有害である疾患または障害を罹患する対象から、ＩＬ−１α活性を低減させる方法を提供する。本発明は、対象におけるＩＬ−１α活性が低減されるように本発明の抗体または抗体部分を対象に投与することを含む、かかる疾患または障害を罹患する対象におけるＩＬ−１α活性を低減させる方法を提供する。好ましくは、ＩＬ−１αはヒトＩＬ−１αであり、対象はヒト対象である。または、対象は、本発明の抗体が結合することができるＩＬ−１αを発現する哺乳動物であり得る。さらに、対象は、（例えば、ＩＬ−１αの投与またはＩＬ−１α導入遺伝子の発現により）ＩＬ−１αが導入された哺乳動物であり得る。本発明の抗体は、ヒト対象に治療目的のために投与することができる。さらに、本発明の抗体は、抗体が結合することができるＩＬ−１αを発現する非ヒト哺乳動物に、獣医学目的のため、またはヒト疾患の動物モデルとして投与することができる。後者に関して、かかる動物モデルは、本発明の抗体の治療有効性を評価するのに有用であり得る（例えば、投与量および投与の時間経過の試験）。
【０１３９】
本明細書において使用される「ＩＬ−１α活性が有害である障害」という用語は、障害を罹患する対象におけるＩＬ−１αの存在が、障害の病態生理の原因または障害の悪化に寄与する要因であることが示され、またはこの疑いがある、疾患および他の障害を含むものとする。従って、ＩＬ−１α活性が有害である障害は、ＩＬ−１α活性の低減により障害の症候および／または進行が軽減されると予期される障害である。かかる障害は、例えば、障害を罹患する対象の体液のＩＬ−１α濃度の増加（例えば、対象の血清、血漿、滑液などのＩＬ−１α濃度の増加）により明らかになり得、この濃度の増加は、例えば、上記抗ＩＬ−１Ａ抗体を使用して検出することができる。本発明の抗体により治療することができる障害の非限定的例は、本発明の抗体の医薬組成物に関して下記セクションで考察する障害を含む。
【０１４０】
Ｄ．医薬組成物
本発明はまた、本発明の抗体、またはこの抗原結合部分および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本発明の抗体を含む医薬組成物は、限定されるものではないが、障害の診断、検出もしくは監視、障害もしくはこの１種以上の症候の予防、治療、管理もしくは改善、および／または研究に使用される。特定の実施形態において、組成物は、本発明の１種以上の抗体を含む。別の実施形態において、医薬組成物は、本発明の１種以上の抗体およびＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１α活性が有害である障害を治療するための本発明の抗体以外の１種以上の予防剤または治療剤を含む。好ましくは、予防剤または治療剤は、障害、またはこの１種以上の症候の予防、治療、管理、または改善に有用であることが知られており、または使用され、または現在使用されている。これらの実施形態によれば、組成物は、担体、希釈剤または賦形剤をさらに含み得る。
【０１４１】
本発明の抗体および抗体部分は、対象への投与に好適な医薬組成物中に取り込むことができる。典型的には、医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分および医薬的に許容される担体を含む。本明細書において使用される「医薬的に許容される担体」は、生理学的に適合性を示す、任意および全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤ならびに吸収遅延剤などを含む。医薬的に許容される担体の例は、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの１種以上、およびこれらの組合せを含む。等張化剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましい場合が多い。医薬的に許容される担体は、抗体または抗体部分の品質保持期間または有効性を向上させる少量の補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、防腐剤または緩衝剤をさらに含み得る。
【０１４２】
種々の送達系が公知であり、これらの系を使用して障害またはこの１種以上の症候の予防、管理、治療または改善に有用である、本発明の１種以上の抗体、または本発明の１種以上の抗体および予防薬もしくは治療薬の組合せを投与することができ、例えば、リポソーム封入、微粒子、マイクロカプセル、抗体または抗体断片を発現することができる組換え細胞、受容体により媒介されるエンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などである。本発明の予防剤または治療剤を投与する方法は、限定されるものではないが、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与、および粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口経路）を含む。さらに、例えば、吸入器またはネブライザーの使用、およびエアロゾル化剤による配合により経肺投与することもできる。例えば、このそれぞれが参照により全体として本明細書に組み込まれる、米国特許６，０１９，９６８、同５，９８５，３２０、同５，９８５，３０９、同５，９３４，２７２、同５，８７４，０６４、同５，８５５，９１３、同５，２９０，５４０および同４，８８０，０７８；ならびにＰＣＴ公開Ｎｏｓ．ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６、およびＷＯ９９／６６９０３を参照のこと。一実施形態において、本発明の抗体、組合せ治療物、または本発明の組成物をＡｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）経肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を使用して投与する。特定の実施形態においては、本発明の予防剤または治療剤を筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻腔内、経肺または皮下投与する。予防剤または治療剤は、任意の好都合な経路により、例えば、注入またはボーラス注射により上皮または粘膜皮膚内膜（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜、腸管粘膜など）を介する吸収により投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は、全身的でも局所的でもよい。
【０１４３】
特定の実施形態において、本発明の予防剤または治療剤を治療を必要とする箇所に局所的に投与することが望ましい場合があり；投与は、例えば、限定されるものではないが、局所注入、注射または埋入物により達成することができ、前記埋入物は、膜およびマトリックス、例えば、ｓｉａｌａｓｔｉｃ膜、ポリマー、繊維マトリックス（例えば、Ｔｉｓｓｕｅｌ（登録商標））、またはコラーゲンマトリックスを含む多孔質または非多孔質材料である。一実施形態においては、本発明のアンタゴニストの１種以上の抗体の有効量を対象の患部に局所的に投与して障害またはこの症候を予防、治療、管理および／または改善する。別の実施形態においては、本発明の１種以上の抗体の有効量を、本発明の抗体以外の１種以上の治療物（例えば、１種以上の予防剤または治療剤）の有効量と組み合わせて対象の患部に局所的に投与して障害またはこの１種以上の症候を予防、治療、管理および／または改善する。
【０１４４】
別の実施形態においては、本発明の予防剤または治療剤を制御放出系または徐放系で送達することができる。一実施形態においては、ポンプを使用して制御放出または徐放を達成することができる（Ｌａｎｇｅｒ、前掲；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照のこと）。別の実施形態においては、ポリマー材料を使用して本発明の治療物の制御放出または徐放を達成することができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照のこと；Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７  １：１０５も参照のこと）；米国特許５，６７９，３７７；米国特許５，９１６，５９７；米国特許５，９１２，０１５；米国特許５，９８９，４６３；米国特許５，１２８，３２６；ＰＣＴ公開ＷＯ９９／１５１５４およびＰＣＴ公開ＷＯ９９／２０２５３も参照のこと。徐放性配合物に使用されるポリマーの例は、限定されるものではないが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリラート）、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ酸無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）およびポリオルトエステルを含む。好ましい実施形態において、徐放性配合物に使用されるポリマーは、不活性であり、ろ過可能な不純物を含まず、貯蔵時に安定であり、無菌であり、生分解性である。さらに別の一実施形態において、制御放出系または徐放系は、予防または治療標的に近接して配置することができ、従って全身的用量の一部分のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，（前掲）ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照のこと）。
【０１４５】
制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒによる総説に考察されている（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３）。当業者に公知の任意の技術を使用して本発明の１種以上の治療剤を含む徐放性配合物を生産することができる。例えば、このそれぞれが参照により全体として本明細書に組み込まれる、米国特許４，５２６，９３８、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０５５４８、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２０６９８、Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，「Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ，」Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−１８９、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，」ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２−３９７、Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，「Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，」Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４、およびＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，「Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，」Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０を参照のこと。
【０１４６】
本発明の組成物が予防剤または治療剤をコードする核酸である特定の実施形態においては、核酸を適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、核酸が細胞内に存在するように核酸を投与することにより、例えば、レトロウイルスベクターの使用により（米国特許４，９８０，２８６を参照のこと）、または直接注射により、または微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくは形質移入剤によるコーティング、または核に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに連結している核酸を投与することにより（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８６４−１８６８を参照のこと））、核酸をインビボで投与し、このコードされた予防剤または治療剤の発現を促進することができる。または、核酸を細胞内に導入することができ、相同組換えによる発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に取り込むことができる。
【０１４７】
本発明の医薬組成物は、この意図された投与経路に適合性を示すように配合される。投与経路の例は、限定されるものではないが、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜および経直腸投与を含む。特定の実施形態においては、組成物を、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内または局所投与に適した医薬組成物として定型的手順に従って配合する。典型的には、静脈内投与用組成物は、無菌等張性水性緩衝液中の液剤である。必要に応じて、組成物は、可溶化剤および局所麻酔薬、例えば、注射部位の疼痛を緩和するリグノカイン（ｌｉｇｎｏｃａｍｎｅ）も含み得る。
【０１４８】
本発明の組成物を局所投与すべき場合、組成物は、軟膏剤、クリーム剤、皮膚貼付剤、ローション剤、ゲル剤、シャンプー剤、噴霧剤、エアロゾル剤、液剤、乳濁液剤の形態、または当業者に周知の他の形態で配合することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９５）を参照のこと。噴霧不可能な局所剤形の場合、局所適用に適合性を示し、好ましくは水よりも高い動的粘性を有する担体または１種以上の賦形剤を含む、粘稠性から半固体または固体の形態が典型的に用いられる。好適な配合物は、限定されるものではないが、液剤、懸濁液剤、乳濁液剤、クリーム剤、軟膏剤、散剤、リニメント剤、膏薬などを含み、これらの形態は、所望により、滅菌され、または種々の性質、例えば浸透圧などに影響を及ぼす助剤（例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、緩衝剤または塩）と混合される。他の好適な局所剤形は、活性成分が、好ましくは固体または液体不活性担体と組み合わされて、加圧された揮発性物質（例えば、ガス状噴射剤、例えば、フレオン）との混合物中に、または絞り出し型容器内にパッケージされた噴霧可能なエアロゾル製剤を含む。所望により、保湿剤または湿潤剤を医薬組成物および剤形に添加することもできる。かかる追加の成分の例は当分野において周知である。
【０１４９】
本発明の方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合、組成物は、エアロゾル形態、噴霧剤、ミスト剤またはドロップ剤の形態で配合することができる。特に、本発明により使用される予防剤または治療剤は、好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガス）を使用し、加圧パックまたはネブライザーからエアロゾル噴霧での提供の形態で好都合に送達することができる。加圧エアロゾルの場合において、投与量単位は、計量された量を送達する弁を提供することにより決定することができる。化合物および好適な粉末基剤、例えば、ラクトースまたはデンプンの粉末混合物を含有する、吸入器または散布器内で使用される（例えばゼラチンから構成される）カプセル剤およびカートリッジ剤を配合することができる。
【０１５０】
本発明の方法が経口投与を含む場合、組成物は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ジェルキャップ剤、液剤、懸濁液剤などの形態で経口用に配合することができる。錠剤またはカプセル剤は、医薬的に許容される賦形剤、例えば、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）を用いて慣用の手段により調製することができる。錠剤は、当分野において周知の方法によりコーティングすることができる。経口投与用液体製剤は、限定されるものではないが、液剤、シロップ剤または懸濁液剤の形態をとり得、または使用前に水もしくは他の好適なビヒクルにより構成するための乾燥製品として提供することができる。かかる液体製剤は、医薬的に許容される添加剤、例えば、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化食用脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）；非水系ビヒクル（例えば、アーモンド油、油状エステル、エチルアルコール、または分留された植物油）；および保存剤（例えば、メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾアートまたはソルビン酸）を用いて慣用の手段により調製することができる。製剤は、緩衝塩、香味剤、着色剤、および甘味剤も適宜含有し得る。経口投与用製剤は、（１種以上の）予防剤または治療剤の緩効性放出、制御放出、または徐放用に好適に配合することができる。
【０１５１】
本発明の方法は、エアロゾル化剤を用いて配合された組成物の、例えば吸入器またはネブライザーの使用による経肺投与を含み得る。例えば、このそれぞれが参照により全体として本明細書に組み込まれる、米国特許６，０１９，９６８、同５，９８５，３２０、同５，９８５，３０９、同５，９３４，２７２、同５，８７４，０６４、同５，８５５，９１３、同５，２９０，５４０、および同４，８８０，０７８；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６、およびＷＯ９９／６６９０３を参照のこと。特定の実施形態においては、本発明の抗体、組合せ治療物、および／または本発明の組成物をＡｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）経肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を使用して投与する。
【０１５２】
本発明の方法は、非経口投与用に配合された組成物の注射（例えば、ボーラス注射または連続注入）による投与を含み得る。注射用配合物は、添加された保存剤とともに、単位剤形（例えば、アンプルまたは複数回投与容器）中で提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液剤、液剤または乳濁液剤のような形態をとり得、配合用薬剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）、例えば、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤を含有し得る。または、活性成分は、使用前に好適なビヒクル（例えば、発熱物質を含まない滅菌水）から構成するための粉末形態であり得る。
【０１５３】
本発明の方法はさらに、デポ製剤として配合された組成物の投与からなっていてよい。かかる長時間作用性配合物は、移植（例えば、皮下または筋肉内）または筋肉内注射により投与することができる。従って、例えば、組成物は、好適なポリマーもしくは疎水性材料（例えば、許容される油中の乳濁液として）またはイオン交換樹脂を用いて、またはやや難溶性の誘導体（例えば、やや難溶性の塩）として配合することができる。
【０１５４】
本発明の方法は、中性または塩の形態として配合された組成物の投与を包含する。医薬的に許容される塩は、陰イオンを用いて形成される塩、例えば、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導される塩、および陽イオンを用いて形成される塩、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、水酸化鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導される塩を含む。
【０１５５】
一般に、組成物の成分は、例えば、密閉容器、例えば活性薬剤量を示すアンプルまたはサシェ中で凍結乾燥粉末または水不含濃縮物として、別々に、または単位剤形中に一緒に混合して、供給される。投与方式が注入である場合、組成物は、無菌医薬品等級の水または生理食塩水を含有する注入瓶を用いて調合することができる。投与方式が注射による場合、投与前に成分を混合することができるように、無菌注射用水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【０１５６】
特に、本発明はまた、本発明の予防剤、治療剤または医薬組成物の１種以上が、密閉容器、例えば、薬剤量を示すアンプルまたはサシェ中にパッケージされることを提供する。一実施形態において、本発明の予防剤もしくは治療剤、または医薬組成物の１種以上は、密閉容器中で無菌凍結乾燥粉末または水不含濃縮物として供給され、対象への投与に適切な濃度に（例えば、水または生理食塩水により）再構成することができる。好ましくは、本発明の予防剤もしくは治療剤または医薬組成物の１種以上は、密閉容器中で無菌凍結乾燥粉末として、少なくとも５ｍｇ、より好ましくは少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、または少なくとも１００ｍｇの単位投与量で供給される。本発明の凍結乾燥予防剤もしくは治療剤または医薬組成物は、この元の容器中で２℃から８℃において貯蔵すべきであり、本発明の凍結乾燥予防剤もしくは治療剤、または医薬組成物は、再構成された後、１週間以内、好ましくは５日以内、７２時間以内、４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内、または１時間以内に投与すべきである。代替的実施形態において、本発明の予防剤もしくは治療剤または医薬組成物の１種以上は、薬剤の量および濃度を示す密閉容器中で液体形態で供給される。好ましくは、投与される組成物の液体形態は、密閉容器中で少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌまたは少なくとも１００ｍｇ／ｍｌで供給される。液体形態は、この元の容器中で２℃から８℃において貯蔵すべきである。
【０１５７】
本発明の結合タンパク質は、非経口投与に好適な医薬組成物中に取り込むことができる。一態様において、結合タンパク質は、０．１−２５０ｍｇ／ｍｌの抗体を含有する注射液剤として調製される。注射液剤は、フリントまたは琥珀色のバイアル、アンプルまたはプレフィルドシリンジ中の液体または凍結乾燥剤形から構成され得る。緩衝剤は、ｐＨ５．０から７．０（最適にはｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１−５０ｍＭ）、最適には５−１０ｍＭであり得る。他の好適な緩衝剤は、限定されるものではないが、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムを含む。塩化ナトリウムを０−３００ｍＭ（液体剤形について最適には１５０ｍＭ）の濃度において使用して溶液の毒性を改変することができる。凍結保護物質、主に０−１０％のスクロース（最適には０．５−１．０％）を凍結乾燥剤形のために含めることができる。他の好適な凍結保護物質は、トレハロースおよびラクトースを含む。充填剤、主に１−１０％のマンニトール（最適には２−４％）を凍結乾燥剤形のために含めることができる。安定剤、主に１−５０ｍＭのＬ−メチオニン（最適には５−１０ｍＭ）を液体と凍結乾燥剤形の両方に使用することができる。他の好適な充填剤はグリシン、アルギニンを含み、０−０．０５％のポリソルベート−８０（最適には０．００５−０．０１％）として含めることができる。追加の界面活性剤は、限定されるものではないが、ポリソルベート２０、ＢＲＩＪ界面活性剤を含む。
【０１５８】
本発明の組成物は、種々の剤形であり得る。剤形は、例えば、液体、半固体および固体の剤形、例えば、液剤（例えば、注射液剤および注入液剤）、分散液剤または懸濁液剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム剤および坐剤を含む。好ましい形態は、意図される投与方式および治療用途に依存する。典型的な好ましい組成物は、注射液剤または注入液剤の形態、例えば、他の抗体とともにヒトの受動免疫化に使用される組成物に類似する組成物である。好ましい投与方式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。好ましい実施形態においては、抗体を静脈内注入または注射により投与する。別の好ましい実施形態においては、抗体を筋肉内または皮下注射により投与する。
【０１５９】
治療組成物は、典型的には、製造および貯蔵条件下で無菌および安定でなければならない。組成物は、液剤、マイクロエマルジョン、分散液剤、リポソーム剤、または高薬物濃度に好適な他の秩序構造物として配合することができる。無菌注射液剤は、要求される量の活性化合物（即ち、抗体または抗体部分）を適切な溶媒中で上記成分の１種または組合せと合わせ、必要に応じて、次いでろ過滅菌して調製することができる。一般に、分散液剤は、基礎分散媒および上記成分からの必要とされる他の成分を含有する無菌ビヒクル中に活性化合物を取り込むことにより調製される。無菌注射液剤を調製するための無菌凍結乾燥粉末の場合において、好ましい調製方法は、活性成分および任意の所望の追加成分の粉末を、事前に無菌ろ過したこの溶液から生じさせる真空乾燥および噴霧乾燥である。液剤の適切な流動性は、例えば、コーティング、例えば、レシチンの使用により、分散液剤の場合には要求される粒径を維持することにより、および界面活性剤を使用することにより維持することができる。注射用組成物の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物に含めることにより延長することができる。
【０１６０】
本発明の結合タンパク質は、当分野において公知である種々の方法により投与することができるが、多くの治療用途について、好ましい投与の経路／方式は皮下注射、静脈内注射または注入である。当業者には明らかである通り、投与の経路および／または方式は所望の結果に応じて変動する。ある実施形態において、活性化合物は、急速放出に対して化合物を保護する担体、例えば、埋入物、皮膚貼付剤およびマイクロカプセル封入送達系を含む、制御放出配合物を用いて調製することができる。生分解性生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸を使用することができる。かかる配合物を調製する多数の方法が特許化され、または当業者に一般に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこと。
【０１６１】
ある実施形態において、本発明の抗体または抗体部分は、例えば、不活性希釈剤、または同化可能な食用担体とともに経口投与することができる。化合物（および所望により他の成分）は、硬または軟シェルゼラチンカプセル中に封入することもでき、圧縮して錠剤とすることもでき、または対象の食事に直接取り込むこともできる。経口治療投与について、化合物は、賦形剤と合わせることができ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液剤、シロップ剤、オブラート剤などの形態で使用することができる。本発明の化合物を非経口投与以外により投与するため、この不活性化を防止する材料により化合物をコーティングすることが必要な場合もあり、またはこの不活性化を防止する材料と化合物を同時投与することが必要な場合もある。
【０１６２】
補充の活性化合物を組成物中に取り込むこともできる。ある実施形態において、本発明の抗体または抗体部分を、ＩＬ−１α活性が有害である障害の治療に有用である１種以上の追加の治療剤と同時配合および／または同時投与する。例えば、本発明の抗ｈＩＬ−１α抗体または抗体部分を、他の標的に結合する１種以上の追加の抗体（例えば、他のサイトカインに結合する抗体、または細胞表面分子に結合する抗体）と同時配合および／または同時投与することができる。さらに、本発明の１種以上の抗体を上記治療剤の２種以上と組み合わせて使用することもできる。かかる組合せ療法は、投与される治療剤のより少ない投与量を有利に利用することができ、従って種々の単独療法に伴って生じ得る毒性または合併症が回避される。
【０１６３】
ある実施形態において、ＩＬ−１αまたはこの断片に対する抗体は、当分野において公知の半減期延長ビヒクルと連結している。かかるビヒクルは、限定されるものではないが、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール、およびデキストランを含む。かかるビヒクルは、例えば、任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる、米国出願番号０９／４２８，０８２およびＰＣＴ出願ＷＯ９９／２５０４４に記載されている。
【０１６４】
特定の実施形態においては、本発明の抗体または本発明の別の予防剤もしくは治療剤をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を投与して遺伝子療法として障害またはこの１種以上の症候を治療、予防、管理または改善する。遺伝子療法は、発現され、または発現可能な核酸を対象に投与することにより実施される療法を指す。本発明のこの実施形態において、核酸は、核酸によりコードされる予防または治療効果を媒介する本発明の抗体または予防剤もしくは治療剤を産生する。
【０１６５】
当分野において利用可能な遺伝子療法のいずれも、本発明により使用することができる。遺伝子療法の一般的総説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２（１９９３）；およびＭｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；Ｍａｙ，１９９３  ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５を参照のこと。使用することができる組換えＤＮＡ技術の当分野において一般に公知の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載されている。種々の遺伝子療法の方法の詳細な説明は、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２００５００４２６６４Ａ１に開示されている。
【０１６６】
ＩＬ−１αは、免疫および炎症エレメントが関与する種々の疾患に伴う病変において重要な役割を担う。これらの疾患は、限定されるものではないが、後天性免疫不全症候群；後天性免疫不全関連疾患；後天性悪性貧血；急性冠動脈症候群；急性および慢性疼痛（疼痛の異なる形態）；急性特発性多発性神経炎；臓器移植に伴う急性免疫疾患；臓器移植に伴う急性または慢性免疫疾患；急性炎症性脱髄性多発神経根症；急性虚血；急性肝疾患；急性リウマチ熱；急性横断性脊髄炎；アジソン病；成人（急性）呼吸窮迫症候群；成人スティル病；アルコール性肝硬変；アルコール誘発性肝傷害；アレルギー疾患；アレルギー；脱毛症；円形脱毛症；アルツハイマー病；過敏症；強直性脊椎炎；強直性脊椎炎関連肺疾患；抗リン脂質抗体症候群；再生不良性貧血；動脈硬化症；関節症；喘息；アテローム性疾患／動脈硬化症；アテローム性動脈硬化症；アトピー性アレルギー；アトピー性湿疹；アトピー性皮膚炎；萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症；自己免疫性水疱症；自己免疫性皮膚炎；自己免疫性糖尿病；ストレプトコッカス感染に伴う自己免疫疾患；自己免疫性腸疾患；自己免疫性溶血性貧血；自己免疫性肝炎；自己免疫性難聴；自己免疫性リンパ球増殖症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫媒介性低血糖症；自己免疫性心筋炎；自己免疫性好中球減少症；自己免疫性早発卵巣不全；自己免疫性血小板減少症（ＡＩＴＰ）；自己免疫性甲状腺疾患；自己免疫性ブドウ膜炎；閉塞性細気管支炎、ベーチェット病；眼瞼炎；気管支拡張症；水疱性類点疱瘡；悪液質；心血管疾患；劇症型抗リン脂質抗体症候群；セリアック病；頸部脊椎症；クラミジア感染症；胆汁鬱滞；慢性活動性肝炎；慢性好酸球性肺炎；慢性疲労症候群；臓器移植に伴う慢性免疫疾患、慢性虚血；慢性肝疾患；慢性皮膚粘膜カンジダ症；瘢痕性類点疱瘡；多発性硬化症のリスクを有する最初のエピソードからなる症候群（ＣＩＳ）；分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）；結合組織病関連間質性肺疾患；結膜炎；クームス陽性溶血性貧血；小児期発症型精神障害；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；クローン病；原因不明性自己免疫性肝炎；原因不明性線維化性肺胞炎；涙嚢炎；鬱病；強皮症皮膚炎；皮膚筋炎；皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患；糖尿病網膜症；真性糖尿病；拡張型心筋症；円板状エリテマトーデス；椎間板ヘルニア；椎間板脱出；播種性血管内凝固症；薬物誘発性肝炎；薬物誘発性間質性肺疾患；薬物誘発性免疫性溶血性貧血；心内膜炎；子宮内膜炎；眼内炎；腸疾患性滑膜炎；上強膜炎；多形性紅斑；重症型多形性紅斑；女性不妊症；線維症；線維性肺疾患；妊娠性類天疱瘡；巨細胞動脈炎（ＧＣＡ）；糸球体腎炎；甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）；グッドパスチャー症候群；痛風性関節炎；移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）；グレーブス病；Ｂ型ストレプトコッカス（ＧＢＳ）感染症；ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）；ヘモジデリン沈着症関連肺疾患；花粉症；心不全；溶血性貧血；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；Ｂ型肝炎；Ｃ型肝炎；ヒューズ症候群；ハンチントン舞踏病；甲状腺機能亢進症；副甲状腺機能低下症；特発性白血球減少症；特発性血小板減少症；特発性パーキンソン病；特発性間質性���炎；特異体質性肝疾患；ＩｇＥ媒介型アレルギー；免疫性溶血性貧血；封入体筋炎；感染症；感染性眼炎症性疾患；炎症性腸疾患；炎症性脱髄疾患；炎症性心疾患；炎症性腎疾患；インスリン依存性真性糖尿病；間質性肺炎；ＩＰＦ／ＵＩＰ；虹彩炎；若年性慢性関節炎；若年性悪性貧血；若年性関節リウマチ；川崎病；角膜炎；乾性角結膜炎；クスマウル病またはクスマウル・マイヤー病；ランドリー麻痺；ランゲルハンス細胞組織球症；線状ＩｇＡ疾患；網状皮斑；ライム関節炎；リンパ球浸潤性肺疾患；黄斑変性症；特発性またはＮＯＳ男性不妊症；悪性腫瘍；腎臓の顕微鏡的血管炎；顕微鏡的多発血管炎；混合性結合組織病関連肺疾患；強直性脊椎炎；運動ニューロン疾患；粘膜類天疱瘡；多発性硬化症（全サブタイプ：一次進行型、二次進行型、再発寛解型など）；多臓器不全；筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病；重症筋無力症；骨髄異形成症候群；心筋梗塞；心筋炎；ネフローゼ症候群；神経根障害；神経障害；非アルコール性脂肪肝炎；非Ａ非Ｂ肝炎；視神経炎；臓器移植拒絶反応；骨関節炎；骨溶解症；卵巣癌；卵巣不全；膵炎；寄生虫症；パーキンソン病；少関節性ＪＲＡ；類天疱瘡；落葉状天疱瘡；尋常性天疱瘡；末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）；末梢血管疾患（ＰＶＤ）；末梢動脈疾患（ＰＡＤ）；水晶体原性ブドウ膜炎；静脈炎；結節性多発動脈炎（または結節性動脈周囲炎）；多発性軟骨炎；リウマチ性多発筋痛症；白毛症；多関節性ＪＲＡ；多腺性内分泌不全症候群；多発性筋炎；多腺性内分泌不全症Ｉ型および多腺性内分泌不全症ＩＩ型；リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）；感染後間質性肺疾患；炎症後間質性肺疾患；ポストポンプ症候群；早発卵巣不全；原発性胆汁性肝硬変；原発性粘液水腫；原発性パーキンソン病；原発性硬化症胆管炎；原発性硬化性肝炎；原発性血管炎；前立腺および直腸癌ならびに造血器悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫）；前立腺炎；乾癬；１型乾癬；２型乾癬；乾癬性関節炎；乾癬性関節症；結合組織病続発性肺高血圧；結節性多発動脈炎の肺症状；純赤血球形成不全症；原発性副腎不全；放射線線維症；反応性関節炎；ライター病；再発性視神経脊髄炎；ＮＯＳ腎疾患；再狭窄；関節リウマチ；関節リウマチ関連間質性肺疾患；リウマチ性心臓病；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨増殖症および骨炎）；サルコイドーシス；統合失調症；シュミット症候群；強皮症；続発性アミロイドーシス；ショック肺；胸膜炎；坐骨神経痛；続発性副腎不全；敗血症症候群；敗血症性関節炎；敗血症性ショック；血清反応陰性関節症；シリコーン関連結合組織病；シェーグレン病関連肺疾患；シェーグレン症候群；スネドン・ウィルキンソン皮膚病；精子自己免疫疾患；脊椎関節症；強直性脊椎炎；スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）；スティル病；脳卒中；交感性眼炎；全身免疫反応症候群；全身性エリテマトーデス；全身性エリテマトーデス関連肺疾患；全身性硬化症；全身性硬化症関連間質性肺疾患；高安病／動脈炎；側頭動脈炎；Ｔｈ２型およびＴｈ１型媒介性疾患；甲状腺炎；中毒性ショック症候群；トキソプラズマ性網膜炎；中毒性表皮壊死症；横断性脊髄炎；ＴＲＡＰＳ（１型腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）関連周期性症候群）；黒色表皮症���伴うＢ型インスリン抵抗性；１型アレルギー反応；１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）；２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）；ＩＩ型糖尿病；潰瘍性大腸炎性関節症；潰瘍性大腸炎；蕁麻疹；通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）；ブドウ膜炎；血管炎性びまん性肺疾患；血管炎；春季カタル；ウイルス性網膜炎；白斑；フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）；ウェゲナー肉芽腫症；滲出型黄斑変性症；創傷治癒；エルシニアおよびサルモネラ関連関節症を含む。
【０１６７】
一態様において、本発明の抗体またはこの抗原結合部分は、関節リウマチ、骨関節炎、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性真性糖尿病および乾癬を治療するために使用される。
【０１６８】
本発明の抗体およびこの抗原部分は、自己免疫性疾患、特に、強直性脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎を含む炎症を伴う疾患を罹患するヒトを治療するために使用することもできる。
【０１６９】
本発明の抗体、またはこの抗原部分は、自己免疫性および炎症性疾患の治療において有用な１種以上の追加の治療剤とともに投与することもできる。
【０１７０】
本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、かかる疾患を治療するために単独で、または組み合わせて使用することができる。本発明の抗体またはこの抗原結合部分は、単独で、または追加の薬剤、例えば治療剤と組み合わせて、使用できることを理解すべきであり、前記追加の薬剤は、この意図される目的に合わせて当業者により選択される。例えば、追加の薬剤は、本発明の抗体により治療される疾患または病態を治療するのに有用であると当分野において認識されている治療剤であり得る。追加の薬剤は、治療組成物に有益な特質を付与する薬剤、例えば、組成物の粘性をもたらす薬剤でもあり得る。
【０１７１】
さらに、本発明に含めるべき組合せは、この意図される目的に有用である組合せであることを理解すべきである。下記の薬剤は、説明のためのものであって、限定されるものではない。本発明の一部である組合せは、本発明の抗体および以下のリストから選択される少なくとも１種の追加の薬剤であり得る。組合せは、形成される組成物がこの意図される機能を果たすことができるような組合せである場合、１種を超える追加の薬剤、例えば、２または３種の追加の薬剤を含み得る。
【０１７２】
好ましい組合せは、イブプロフェンのような薬物を含むＮＳＡＩＤとも称される（１種以上の）非ステロイド抗炎症薬である。他の好ましい組合せは、プレドニゾロンを含むコルチコステロイドであり；本発明の抗ＩＬ−１α抗体との組合せにおいて患者を治療する場合に要求されるステロイド用量を漸減することにより、ステロイドの周知の副作用を低減させることができ、または排除することさえできる。本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる関節リウマチ用の治療剤の非限定的な例は、以下のもの：（１種以上の）サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；他のヒトサイトカインまたは成長因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストである。本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、細胞表面分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡ、またはＣＤ１５４（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）を含むこれらのリガンドに対する抗体と組み合わせることができる。
【０１７３】
治療剤の好ましい組合せは、自己免疫および後続の炎症カスケードの異なる箇所において干渉し得；好ましい例は、キメラ、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ５７１、および可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、この誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）のようなＴＮＦアンタゴニスト、さらにＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤を含み；同様に、他のＩＬ−１阻害剤（インターロイキン１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）も同一の理由のため有効であり得る。他の好ましい組合せは、インターロイキン１１を含む。さらに別の好ましい組合せは、ＩＬ−１α機能と並行し、ＩＬ−１α機能に依存し、またはＩＬ−１α機能と協調して作用し得る自己免疫応答の他のキープレーヤーであり；ＩＬ−１８抗体もしくは可溶性ＩＬ−１８受容体を含むＩＬ−１８アンタゴニスト、またはＩＬ−１８結合タンパク質が特に好ましい。さらに別の好ましい組合せは、非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤である。さらに他の好ましい組合せは、抗体、可溶性受容体またはアンタゴニスト性リガンドを含む共刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストを含む。
【０１７４】
本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、薬剤、例えば、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリン  スルファサラジン、メサラジン、オルサラジンクロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペンシラミン、アウロチオマラート（筋肉内および経口）、アザチオプリン、コヒチン（ｃｏｃｈｉｃｉｎｅ）、コルチコステロイド（経口、吸入および局所注射）、ベータ−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラル）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリカート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウムおよびオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデンソシン（ａｄｅｎｓｏｓｉｎｅ）アゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動剤、炎症誘発性サイトカイン、例えばＴＮＦαまたはＩＬ−１によるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、キナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびこの誘導体（例えば可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体および誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリアムシノロンアセトニド、プロポキシフェンナプシラート／ａｐａｐ、ホラート、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、オキシコドンｈｃｌ、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組換え物、トラマドールｈｃｌ、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロン酸ナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、グルコサミンｓｕｌｆ／コンドロイチン、アミトリプチリンｈｃｌ、スルファジアジン、オキシコドンｈｃｌ／アセトアミノフェン、オロパタジンｈｃｌ、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１  ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ−１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１、ならびにメソプラムと組み合わせることもできる。好ましい組合せは、メトトレキサートまたはレフルノミドおよび中等度または重度の関節リウマチの場合はシクロスポリンを含む。
【０１７５】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる炎症性腸疾患用治療剤の非限定例は、以下のもの：ブデノシド；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン、スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；酸化防止剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；他のヒトサイトカインまたは成長因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストを含む。本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、細胞表面分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはこれらのリガンドに対する抗体と組み合わせることができる。本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、薬剤、例えば、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動剤、炎症誘発性サイトカイン、例えばＴＮＦαまたはＩＬ−１によるシグナル伝達を妨害する薬剤、（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えばキナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびこの誘導体（例えば可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）および抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）と組み合わせることもできる。
【０１７６】
抗体または抗原結合部分を組み合わせることができるクローン病用治療剤の好ましい例は、以下のもの：ＴＮＦアンタゴニスト、例えば抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））阻害剤およびＰＤＥ４阻害剤を含む。本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えば、ブデノシドおよびデキサメタゾンと組み合わせることができる。本発明の抗体またはこの抗原結合部分は、薬剤、例えば、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸およびオルサラジン、ならびに炎症誘発性サイトカイン、例えばＩＬ−１の合成または作用を妨害する薬剤、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤およびＩＬ−１ｒａと組み合わせることもできる。本発明の抗体またはこの抗原結合部分は、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤６−メルカプトプリンとともに使用することもできる。本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、ＩＬ−１１と組み合わせることができる。本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウム、ジフェノキシラート／硫酸ａｔｒｏｐ、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、ホラート、シプロフロキサシン／デキストロース−水、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ、塩酸テトラサイクリン、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／ホウ酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、プロポキシフェンナプシラート、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド二ナトリウム、リン酸コデイン／ａｐａｐ、コレセベラムｈｃｌ、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニゾロン、ナタリズマブおよびインターフェロン−ガンマと組み合わせることができる。
【０１７７】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる多発性硬化症用治療剤の非限定例は、以下のもの：コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロン−β１ａ（ＡＶＯＮＥＸ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロン−β１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンα−ｎ３）（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロン−α（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロンβ１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ペグインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン（ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ）；他のヒトサイトカインまたは成長因子およびこれらの受容体、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−Ｉ、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１Ａ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストを含む。本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、細胞表面分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはこれらのリガンドに対する抗体と組み合わせることができる。本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、薬剤、例えば、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデンソシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動剤、炎症誘発性サイトカイン、例えばＴＮＦαまたはＩＬ−１によるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えばキナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびこの誘導体（例えば可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）および抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）と組み合わせることもできる。
【０１７８】
抗体またはこの抗原結合部分を組み合わせることができる多発性硬化症用治療剤の好ましい例は、インターフェロン−β、例えば、ＩＦＮβ１ａおよびＩＦＮβ１ｂ；コパクソン、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害剤、例えばカスパーゼ−１の阻害剤、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤およびＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体を含む。
【０１７９】
本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、薬剤、例えば、アレムツズマブ、ドロナビノール、ユニメド、ダクリズマブ、ミトキサントロン、塩酸キサリプロデン、ファムプリジン、酢酸グラチラマー、ナタリズマブ、シンナビドール、ａ−イムノカインＮＮＳＯ３、ＡＢＲ−２１５０６２、ＡｎｅｒｇｉＸ．ＭＳ、ケモカイン受容体アンタゴニスト、ＢＢＲ−２７７８、カラグアリン、ＣＰＩ−１１８９、ＬＥＭ（リポソーム封入ミトキサントロン）、ＴＨＣ．ＣＢＤ（カンナビノイドアゴニスト）ＭＢＰ−８２９８、メソプラム（ＰＤＥ４阻害剤）、ＭＮＡ−７１５、抗ＩＬ−６受容体抗体、ニューロバックス、ピルフェニドン  アロトラップ１２５８（ＲＤＰ−１２５８）、ｓＴＮＦ−Ｒ１、タランパネル、テリフルノミド、ＴＧＦ−ベータ２、チプリモチド、ＶＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、ＴＲ−１４０３５、ＶＬＡ４  Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ、Ａｎｔｅｇｒａｎ−ＥＬＡＮ／Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンガンマアンタゴニスト、ＩＬ−４アゴニストと組み合わせることもできる。
【０１８０】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができるアンギナ用治療剤の非限定例は、以下のもの：アスピリン、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド、コハク酸メトプロロール、アテノロール、酒石酸メトプロロール、ベシル酸アムロジピン、塩酸ジルチアゼム、二硝酸イソソルビド、重硫酸クロピドグレル、ニフェジピン、アトルバスタチンカルシウム、塩化カリウム、フロセミド、シンバスタチン、ベラパミルｈｃｌ、ジゴキシン、塩酸プロプラノロール、カルベジロール、リシノプリル、スピロノラクトン、ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル、ナドロール、ラミプリル、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン、塩酸ソタロール、フェノフィブラート、エゼチミブ、ブメタニド、ロサルタンカリウム、リシノプリル／ヒドロクロロチアジド、フェロジピン、カプトプリル、フマル酸ビソプロロールを含む。
【０１８１】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる強直性脊椎炎用治療剤の非限定例は、以下のもの：イブプロフェン、ジクロフェナクおよびミソプロストール、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、メトトレキサート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、エタネルセプト、インフリキシマブを含む。
【０１８２】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる喘息用治療剤の非限定例は、以下のもの：アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、レバルブテロールｈｃｌ、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、臭化イプラトロピウム、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸ホルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アモキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモグリク酸ナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラナート、レボフロキサシン、吸入器補助装置、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、モキシフロキサシンｈｃｌ、塩酸ドキシサイクリン、グアイフェネシン／ｄ−メトファン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フランカルボン酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナタート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニル、セチリジンｈｃｌ／ｐｓｅｕｄｏｅｐｈｅｄ、フェニレフリン／ｃｏｄ／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／シュードエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールを含む。
【０１８３】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができるＣＯＰＤ用治療剤の非限定例は、以下のもの：硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、臭化イプラトロピウム、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸ホルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、レバルブテロールｈｃｌ、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アモキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラナート、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フランカルボン酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒ、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、臭化チオトロピウム、（Ｒ，Ｒ）−ホルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラストを含む。
【０１８４】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができるＨＣＶ用治療剤の非限定例は、以下のもの：インターフェロン−アルファ−２ａ、インターフェロン−アルファ−２ｂ、インターフェロン−アルファｃｏｎ１、インターフェロン−アルファ−ｎ１、ペグ化インターフェロン−アルファ−２ａ、ペグ化インターフェロン−アルファ−２ｂ、リバビリン、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ＋リバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリチルリチン酸、サイマルファシン、マキサミン、ＶＸ−４９７および以下の標的：ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム進入部位）による介入によりＨＣＶを治療するために使用される任意の化合物を含む。
【０１８５】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる特発性肺線維症用治療剤の非限定例は、以下のもの：プレドニゾン、アザチオプリン、アルブテロール、コルヒチン、硫酸アルブテロール、ジゴキシン、ガンマインターフェロン、メチルプレドニゾロンｓｏｄ  ｓｕｃｃ、ロラゼパム、フロセミド、リシノプリル、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、臭化イプラトロピウム、アクチノマイシンｄ、アルテプラーゼ、プロピオン酸フルチカゾン、レボフロキサシン、硫酸メタプロテレノール、硫酸モルヒネ、オキシコドンｈｃｌ、塩化カリウム、トリアムシノロンアセトニド、タクロリムス無水物、カルシウム、インターフェロン−アルファ、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロン−ガンマ−１βを含む。
【０１８６】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる心筋梗塞用治療剤の非限定例は、以下のもの：アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、重硫酸クロピドグレル、カルベジロール、アテノロール、硫酸モルヒネ、コハク酸メトプロロール、ワルファリンナトリウム、リシノプリル、一硝酸イソソルビド、ジゴキシン、フロセミド、シンバスタチン、ラミプリル、テネクテプラーゼ、マレイン酸エナラプリル、トルセミド、レタバーゼ（ｒｅｔａｖａｓｅ）、ロサルタンカリウム、キナプリルｈｃｌ／ｍａｇ  ｃａｒｂ、ブメタニド、アルテプラーゼ、エナラプリラート、塩酸アミオダロン、チロフィバンｈｃｌ  ｍ−水和物、塩酸ジルチアゼム、カプトプリル、イルベサルタン、バルサルタン、塩酸プロプラノロール、フォシノプリルナトリウム、塩酸リドカイン、エプチフィバチド、セファゾリンナトリウム、硫酸アトロピン、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、塩酸ソタロール、塩化カリウム、ドキサートナトリウム、ドブタミンｈｃｌ、アルプラゾラム、プラバスタチンナトリウム、アトルバスタチンカルシウム、塩酸ミダゾラム、塩酸メペリジン、二硝酸イソソルビド、エピネフリン、塩酸ドーパミン、ビバリルジン、ロスバスタチン、エゼチミブ／シンバスタチン、アバシミブ、カリポリドを含む。
【０１８７】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる乾癬用治療剤の非限定例は、以下のもの：カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、増強ジプロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フランカルボン酸モメタゾン、ケトコナゾール、パラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／ｅｍｏｌｌ、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿剤、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、二酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、ｈｃ／次没食子酸ビスマス／ｚｎｏｘ／ｒｅｓｏｒ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、日焼け止め、ハルシノニド、サリチル酸、アントラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デスオキシメタゾン、ジアゼパム、エモリエント剤、フルオシノニド／エモリエント剤、鉱物油／ヒマシ油／ｎａ  ｌａｃｔ、鉱物油／ピーナッツ油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、ソラレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジンを含む。
【０１８８】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる乾癬性関節炎用治療剤の非限定例は、以下のもの：メトトレキサート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、酢酸メチルプレドニゾロン、インドメタシン、硫酸ヒドロキシクロロキン、プレドニゾン、スリンダク、増強ベタメタゾンｄｉｐｒｏｐ、インフリキシマブ、メトトレキサート、ホラート、トリアムシノロンアセトニド、ジクロフェナク、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フルオシノニド、硫酸グルコサミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ、イブプロフェン、リセドロン酸ナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、バルデコキシブ、アレファセプト、エファリズマブを含む。
【０１８９】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる再狭窄用治療剤の非限定例は、以下のもの：シロリムス、パクリタキセル、エベロリムス、タクロリムス、ＡＢＴ−５７８、アセトアミノフェンを含む。
【０１９０】
本発明の抗体、または抗体部分を組み合わせることができる坐骨神経痛用治療剤の非限定例は、以下のもの：重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ、ロフェコキシブ、シクロベンザプリンｈｃｌ、メチルプレドニゾロン、ナプロキセン、イブプロフェン、オキシコドンｈｃｌ／アセトアミノフェン、セレコキシブ、バルデコキシブ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、リン酸コデイン／ａｐａｐ、トラマドールｈｃｌ／アセトアミノフェン、メタキサロン、メロキシカム、メトカルバモール、塩酸リドカイン、ジクロフェナクナトリウム、ガバペンチン、デキサメタゾン、カリソプロドール、ケトロラクトロメタミン、インドメタシン、アセトアミノフェン、ジアゼパム、ナブメトン、オキシコドンｈｃｌ、チザニジンｈｃｌ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、プロポキシフェンナプシラート／ａｐａｐ、ａｓａ／ｏｘｙｃｏｄ／オキシコドンｔｅｒ、イブプロフェン／ヒドロコドンｂｉｔ、トラマドールｈｃｌ、エトドラク、プロポキシフェンｈｃｌ、アミトリプチリンｈｃｌ、カリソプロドール／コデインｐｈｏｓ／ａｓａ、硫酸モルヒネ、マルチビタミン、ナプロキセンナトリウム、クエン酸オルフェナドリン、テマゼパムを含む。
【０１９１】
本方法の抗体または抗原結合部分を組み合わせることができるＳＬＥ（狼瘡）用治療剤の好ましい例は、以下のもの：ＮＳＡＩＤ、例えば、ジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン；ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ；抗マラリア薬、例えば、ヒドロキシクロロキン；ステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン；細胞毒性薬、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサート；ＰＤＥ４の阻害剤またはプリン合成阻害剤、例えばＣｅｌｌｃｅｐｔを含む。本発明の抗体またはこの抗原結合部分は、薬剤、例えば、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランおよび炎症誘発性サイトカイン、例えばＩＬ−１の合成、産生または作用を妨害する薬剤、例えば、カスパーゼ阻害剤様ＩＬ−１β変換酵素阻害剤およびＩＬ−１ｒａと組み合わせることもできる。本発明の抗体またはこの抗原結合部分は、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えばチロシンキナーゼ阻害剤；またはＴ細胞活性化分子を標的とする分子、例えば、ＣＴＬＡ−４−ＩｇＧまたは抗Ｂ７ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体とともに使用することもできる。本発明の抗体、またはこの抗原結合部分は、ＩＬ−１１または抗サイトカイン抗体、例えば、フォノトリズマブ（ｆｏｎｏｔｏｌｉｚｕｍａｂ）（抗ＩＦＮｇ抗体）、または抗受容体受容体抗体、例えば、抗ＩＬ−６受容体抗体およびＢ細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本発明の抗体またはこの抗原結合部分はまた、ＬＪＰ３９４（アベチムス）、Ｂ細胞を枯渇させ、または不活性化させる薬剤、例えば、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンホスタット−Ｂ（抗ＢｌｙＳ抗体）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））とともに使用することもできる。
【０１９２】
本発明の医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分の「治療有効量」または「予防有効量」を含み得る。「治療有効量」は、必要な投与量および期間において所望の治療結果を達成するに有効な量を指す。抗体または抗体部分の治療有効量は、当業者が決定することができ、要因、例えば、個体の病態、年齢、性別および体重、ならびに抗体または抗体部分が個体内で所望の応答を誘発する能力に応じて変動し得る。治療有効量は、抗体、または抗体部分の任意の毒性または有害効果よりも治療上有益な効果が上回る量でもある。「予防有効量」は、必要な投与量および期間において所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。典型的には、予防用量は疾患前または初期に対象に使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少ない。
【０１９３】
投与計画は、所望の最適応答（例えば、治療または予防応答）を提供するように調整することができる。例えば、単一ボーラスを投与することができ、幾つかの分割用量を経時的に投与することができ、または用量を治療状況の緊急性に応じて増減することができる。投与を容易にし、投与量を均一にするために非経口組成物を単位剤形で配合することが特に有利である。本明細書において使用される単位剤形は、治療すべき哺乳動物対象についての単位投与量として好適化された物理的に別個の単位を指し；各単位は、要求される医薬担体を伴い、所望の治療効果を生むように計算された活性化合物の所定量を含有する。本発明の単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物特有の特性、および達成すべき特定の治療または予防効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の処置のためにかかる活性化合物を調剤する技術に固有の制約により決まり、直接依存する。
【０１９４】
本発明の抗体または抗体部分の治療または予防有効量の例示的な非限定的範囲は、０．１−２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１−１０ｍｇ／ｋｇである。投与量の値は、軽減すべき病態のタイプおよび重症度によって変動し得ることに留意されたい。さらに、任意の特定の対象について、具体的投与計画は、個々の必要性、および組成物の投与者または投与管理者の専門的判断に従って経時的に調整すべきであること、ならびに本明細書に記載の投与量範囲は単なる例示にすぎず、特許請求の範囲に記載の組成物の範囲または実施を限定するものではないことを理解されたい。
【０１９５】
本明細書に記載の本発明の方法の他の好適な改変および適合は、自明であり、本発明の範囲、または本明細書に開示の実施形態から逸脱することなく、好適な均等物を使用して実施することができることは、当業者に容易に理解される。本発明を詳述したが、本発明は、以下の実施例を参照することによってより明確に理解され、以下の実施例は、説明のために含まれるにすぎず、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０１９６】
（実施例１）
抗ヒトＩＬ１αモノクローナル抗体の生成および単離
（実施例１．１）
抗ヒトＩＬ１α抗体を同定するアッセイ
別段の記載がない限り、実施例１を通して、以下のアッセイを使用して抗ヒトＩＬ１α抗体を同定し、特性決定した。
【０１９７】
（実施例１．１．Ａ）
ＥＬＩＳＡ
ヒトＩＬ１αに結合する抗体をスクリーニングする酵素結合免疫吸着測定法を以下の通り実施した。
【０１９８】
ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ，Ａｃｔｏｎ，ＭＡ）を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の５μｇ／ｍｌのヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ特異的（Ｐｉｅｒｃｅ＃  ３１１７０，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．）５０μＬ／ウェルにより一晩摂氏４度においてコーティングした。０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳによりプレートを１回洗浄した。ＰＢＳ中で２％に希釈された２００μＬ／ウェルのブロッキング溶液（ＢｉｏＲａｄ＃１７０−６４０４，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ．）を室温において１時間添加することによりプレートをブロッキングした。ブロッキング後、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳによりプレートを１回洗浄した。
【０１９９】
０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳ中で希釈されたマウス血清またはハイブリドーマ上清（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）５０マイクロリットル／ウェルを、上記の通り調製したＥＬＩＳＡプレートに添加し、室温において１時間温置した。０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳによりウェルを３回洗浄した。０．１％のＢＳＡを含有するＰＢＳ中で１００ｎｇ／ｍＬに希釈されたビオチニル化組換え精製ヒトＩＬ１α変種（Ｒ１１０Ｑ）５０マイクロリットルを各ウェルに添加し、室温において１時間温置した。０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳによりプレートを３回洗浄した。ストレプトアビジンＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ＃２１１２６，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ．）を０．１％のＢＳＡを含有するＰＢＳ中で１：２００００に希釈し；５０μＬ／ウェルを添加し、プレートを室温において１時間温置した。０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳによりプレートを３回洗浄した。ＴＭＢ溶液（Ｓｉｇｍａ＃Ｔ０４４０，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）５０マイクロリットルを各ウェルに添加し、室温において１０分間温置した。１Ｎ硫酸を添加することにより反応を停止した。プレートを波長４５０ｎｍにおいて分光光度的に読み取った。
【０２００】
（実施例１．１．Ｂ）
ＢＩＡＣＯＲＥ技術を使用する親和性測定
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）は、オン、オフ速度定数の動態計測により抗体の親和性を測定する。抗体と組換え精製ヒトＩＬ１αまたは組換え精製ヒトＩＬ１α変種（Ｒ１１０Ｑ）との結合を、ランニングＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡおよび０．００５％の界面活性剤Ｐ２０）を使用するＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて、表面プラズモン共鳴に基づく計測により２５℃において測定した。全ての化学物質は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）から、そうでなければ本明細書に記載の異なる供給源から入手した。１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中で希釈されたヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃγ）断片特異的ポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）約５０００ＲＵを、標準アミンカップリングキットを製造業者の説明書および手順に従って使用して２５μｇ／ｍｌにおいてＣＭ５研究等級バイオセンサーチップ全体に直接固定化した。バイオセンサー表面上の未反応部分をエタノールアミンによりブロッキングした。フローセル２および４における改変カルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用した。フローセル１および３におけるヤギ抗マウスＩｇＧを有しない非改変カルボキシメチルデキストランを基準表面として使用した。動態分析のため、１：１ラングミュア結合モデルから誘導された速度式を、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．０．１ソフトウェアを使用して（グローバルフィット分析を使用して）全８回のインジェクションの会合および解離段階に同時にフィットさせた。ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的反応表面全体で捕捉するため、精製抗体をＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水中で希釈した。リガンドとして捕捉すべきマウス抗体（２５μｇ／ｍｌ）を反応マトリックス上に流量５μｌ／分においてインジェクトした。会合および解離速度定数ｋｏｎ（単位Ｍ−１ｓ−１）およびｋｏｆｆ（単位ｓ−１）を連続流量２５μｌ／分下で測定した。速度定数は、１０−２００ｎＭの範囲の１０種の異なる抗原濃度において動態結合計測により導いた。次いで、マウス抗体と組換え精製ヒトＩＬ１αまたは組換え精製ヒトＩＬ１αとの反応の平衡解離定数（単位Ｍ）を、動態速度定数から式ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎにより計算した。結合を時間の関数として記録し、動態速度定数を計算する。このアッセイにおいて、１０６Ｍ−１ｓ−１ほどの高いオン速度および１０−６ｓ−１ほどの低いオフ速度を計測することができる。
【０２０１】
（実施例１．１．Ｃ）
抗ヒトＩＬ１α抗体の機能活性
本発明の抗ヒトＩＬ１α抗体の機能活性を試験するため、抗体のＩＬ１α活性阻害能を計測する以下のアッセイに抗体を使用した。
【０２０２】
（実施例１．１．Ｃ１）
ＭＲＣ−５バイオアッセイ
ＭＲＣ−５細胞系は、ヒトＩＬ−１．アルファに用量依存的に応答してＩＬ−８を産生するヒト肺繊維芽細胞系である。ＭＲＣ−５細胞は、ＡＴＣＣから最初に入手し、１０％ＦＢＳ完全ＭＥＭ中で継代培養し、５％ＣＯ２温置器内で３７Ｃにおいて成長させた。ＩＬ−１．アルファに対する抗体の中和効力を測定するため、抗体（５０μＬ）を９６ウェルプレートに添加し（最終濃度１Ｅ−７から１Ｅ−１５Ｍ）、３７Ｃ、５％ＣＯ２において１時間、ＩＬ−１．アルファ５０μｌ（最終濃度５０ｐｇ／ｍＬ）とともに予備温置した。次いで、１Ｅ５／ｍｌの濃度のＭＲＣ−５細胞を全てのウェルに添加し（１００μｌ）、５％ＣＯ２の温置器中で３７℃においてプレートを一晩温置した。抗体効力は、抗体のＩＬ−８産生阻害能により測定した。ヒトＩＬ−８産生は、ＥＬＩＳＡにより計測した。
【０２０３】
（実施例１．２）
抗ヒトＩＬ１αモノクローナル抗体の生成
抗ヒトＩＬ１αマウスモノクローナル抗体を以下の通り得た：
【０２０４】
（実施例１．２．Ａ）
ヒトＩＬ１α抗原によるマウスの免疫化
１日目に、完全フロイントアジュバントまたはＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバント（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）と混合された組換え精製ヒトＩＬ１α（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）２０マイクログラムを５匹の６−８週齢Ｂａｌｂ／Ｃ、５匹のＣ５７Ｂ／６マウス、および５匹のＡＪマウスに皮下注射した。２４、３８および４９日目に、不完全フロイントアジュバントまたはＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバントと混合された組換え精製ヒトＩＬ１α変種２０マイクログラムを同一マウスに皮下注射した。８４または１１２または１４４日目に、マウスに１μｇの組換え精製ヒトＩＬ１α変種を静脈内注射した。
【０２０５】
（実施例１．２．Ｂ）
ハイブリドーマの生成
実施例１．２．Ａに記載の免疫化マウスから得られた脾細胞を、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  １９７５，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５に記載の確立された方法に従ってＳＰ２／Ｏ−Ａｇ−１４細胞と５：１の比において融合してハイブリドーマを生成させた。融合産物を、９６ウェルプレート中のアザセリンおよびヒポキサンチンを含有する選択培地に２．５×１０６個の脾細胞／ウェルの密度においてプレーティングした。融合から７から１０日後、巨視的なハイブリドーマコロニーが観察された。ハイブリドーマコロニーを含有する各ウェルからの上清を、（実施例１．１．Ａに記載の通り）ＩＬ１αに対する抗体の存在についてＥＬＩＳＡにより試験した。次いで、ＩＬ１α特異的活性を示す上清を、（実施例１．１．Ｃに記載の通り）ＩＬ−８についてのＭＲＣ−５バイオアッセイにおいてＩＬ１α中和能について試験した。
【０２０６】
（実施例１．２．Ｃ）
抗ヒトＩＬ１αモノクローナル抗体の同定および特性決定
実施例１．２．Ｂおよび１．２．Ｃに従って生成された、ＩＬ１αに結合し、ＩＬ１αに特異的に結合することができる抗体を産生するハイブリドーマ、特にＭＲＣ−５バイオアッセイにおいて５ｎＭまたは５ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する抗体を産生するハイブリドーマを限界希釈によりスケールアップし、クローニングした。
【０２０７】
ハイブリドーマ細胞を１０％の低ＩｇＧウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ＃ＳＨ３０１５１，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ．）を含有する培地中に拡大した。Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｄ．１９８８「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」に記載の通り、平均して、（クローン集団由来の）各ハイブリドーマ上清２５０ｍＬを収集し、濃縮し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。精製ｍＡｂのＩＬ１α活性阻害能を、実施例１．１．Ｃに記載の通りＭＲＣ−５バイオアッセイにより測定した。表７は、抗ＩＬ１α  ｍＡｂ  ３Ｄ１２についてのＭＲＣ−５バイオアッセイからのＩＣ５０値を示す。
【０２０８】
（実施例１．２．Ｄ）
各ネズミ抗ヒトＩＬ１α  ｍＡｂの可変領域のアミノ酸配列の決定
各アミノ酸配列決定のため、約１０×１０６個のハイブリドーマ細胞を遠心分離により単離し、処理してＴｒｉｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ．）を製造業者の説明書に従って用いてトータルＲＮＡを単離した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を製造業者の説明書に従って使用して、トータルＲＮＡを第１鎖ＤＮＡ合成に供した。オリゴ（ｄＴ）を使用して第１鎖合成をプライミングしてポリ（Ａ）＋ＲＮＡを選択した。次いで、ネズミ免疫グロブリン可変領域の増幅用に設計されたプライマー（Ｉｇ−Ｐｒｉｍｅｒ  Ｓｅｔｓ，Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いるＰＣＲにより、第１鎖ｃＤＮＡ産物を増幅した。ＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分離し、切り出し、精製し、次いでＴＯＰＯ  ＣｌｏｎｉｎｇキットによりｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中にサブクローニングし、ＴＯＰ１０ケミカルコンピテントＥ．コリ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中に形質転換した。コロニーＰＣＲを形質転換体について実施してインサートを含有するクローンを同定した。ＱＩＡｐｒｅｐ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を使用してインサートを含有するクローンからプラスミドＤＮＡを単離した。Ｍ１３フォワードプライマーおよびＭ１３リバースプライマー（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｏｖｅｒ  ＭＤ）を使用してプラスミド中のインサートを両方の鎖について配列決定し、可変重鎖または可変軽鎖ＤＮＡ配列を決定した。実施例１．２．Ｃに記載の抗ＩＬ−１αモノクローナル抗体の可変重鎖および可変軽鎖配列を表５に記載する。
【０２０９】
（実施例２）
組換え抗ヒトＩＬ１α抗体
（実施例２．１）
組換えキメラ抗ヒトＩＬ１α抗体の構築および発現
ネズミ抗ヒトＩＬ１αモノクローナル抗体３Ｄ１２の重鎖定常領域をコードするＤＮＡを、細菌内での相同組換えにより、２つのヒンジ領域アミノ酸変異を含有するヒトＩｇＧ１定常領域をコードするｃＤＮＡ断片により置き換えた。これらの変異は、２３４位（ＥＵ付番）におけるロイシンからアラニンへの変化、および２３５位におけるロイシンからアラニンへの変化である（Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２６５７）。これらの抗体のそれぞれの軽鎖定常領域を、ヒトカッパ定常領域により置き換えた。ｐＢＯＳ発現プラスミド中にライゲートされているキメラ重鎖および軽鎖ｃＤＮＡの同時形質移入により、完全長キメラ抗体をＣＯＳ細胞内で一過的に発現させた（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９０，Ｖｏｌ１８，ｐｇ５３２２）。組換えキメラ抗体を含有する細胞上清を、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅクロマトグラフィーにより精製し、結合した抗体を酸緩衝液の添加により溶出させた。抗体を中和し、ＰＢＳ中に透析した。
【０２１０】
（上記）キメラ３Ｄ１２をコードする重鎖ｃＤＮＡを、３Ｄ１２キメラ軽鎖ｃＤＮＡ（両方とも、ｐＢＯＳベクター中にライゲートされている）とともにＣＯＳ細胞内に同時形質移入した。組換えキメラ抗体を含有する細胞上清をＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅクロマトグラフィーにより精製し、結合した抗体を酸緩衝液の添加により溶出させた。抗体を中和し、ＰＢＳ中に透析した。次いで、精製キメラ抗ヒトＩＬ１αモノクローナル抗体を、実施例１．１．Ｃ２および１．１．Ｃ３に記載の通りＭＲＣ−５細胞によりＩＬ１αにより誘導されるＩＬ−８の産生のこの阻害能について試験した。
【０２１１】
（実施例２．２）
ヒト化抗ヒトＩＬ１α抗体の構築および発現
（実施例２．２．１）
ヒト抗体フレームワークの選択
（表５に記載の）各ネズミ可変重鎖および可変軽鎖遺伝子配列を、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩソフトウェアを使用して（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／ｒｅｔｒｉｅｖｅｉｇ．ｈｔｍｌのＮＣＢＩ  Ｉｇ  Ｂｌａｓｔウェブサイトに由来する）４４種のヒト免疫グロブリン生殖系列可変重鎖、または４６種の生殖系列可変軽鎖配列に対して別々に整列させた。
【０２１２】
ヒト化は、アミノ酸配列相同性、ＣＤＲクラスター分析、発現されるヒト抗体間の使用頻度、およびヒト抗体の結晶構造に関する利用可能な情報に基づくものであった。抗体結合、ＶＨ−ＶＬ対形成、および他の要因に対する可能な効果を考慮して、ネズミ残基をヒト残基に変異させ、ネズミおよびヒトのフレームワーク残基は異なるものであり、例外は少数であった。追加のヒト化戦略を、ネズミ抗体可変領域の実際のアミノ酸配列に高度の相同性、即ち、配列類似性を有するヒト生殖系列抗体配列またはこのサブグループの分析に基づいて設計した。
【０２１３】
相同性モデリングを使用して抗体結合部位（ＣＤＲ）の構造に重要であると予測される、ネズミ抗体配列に特有の残基を同定した。相同性モデリングは、近似の３次元座標がタンパク質について生成される計算方法である。最初の座標、およびこのさらなる改良のためのガイダンスの出所は、３次元座標が既知であり、この配列が第１のタンパク質の配列に関連する、基準タンパク質の第２のタンパク質である。２種のタンパク質の配列間の関係を使用して基準タンパク質と、座標が所望されるタンパク質、即ち標的タンパク質とを対応させる。基準および標的タンパク質の一次配列を、基準タンパク質から標的タンパク質に直接移行される２種のタンパク質の同一部分の座標と整列させる。例えば、残基の変異、挿入または欠失に起因する２種のタンパク質のミスマッチ部分の座標を、既に移行されたモデル座標との一貫性を確保するために改良された一般構造テンプレートおよびエネルギーから構築する。この計算によるタンパク質構造は、さらに改良することができ、またはモデリング研究に直接用いることができる。モデル構造の質が、基準および標的タンパク質が関連する競合の確度、ならびに配列アラインメントが構築される精度により決定されることは、この記載から明白であるはずである。
【０２１４】
ネズミ抗体配列３Ｄ１２について、ＢＬＡＳＴ検索および目視検査の組合せを使用して好適な基準構造を同定した。基準と標的アミノ酸配列との２５％の配列相同性は、相同性モデリング演習を試みるのに最低限必要であると考えられる。配列アラインメントを手作業で構築し、モデル座標をプログラムＪａｃｋａｌを用いて生成した（Ｐｅｔｒｅｙ，Ｄ．，Ｘｉａｎｇ，Ｚ．，Ｔａｎｇ，Ｃ．Ｌ．，Ｘｉｅ，Ｌ．，Ｇｉｍｐｅｌｅｖ，Ｍ．，Ｍｉｔｒｏｓ，Ｔ．，Ｓｏｔｏ，Ｃ．Ｓ．，Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ−Ｆｉｓｃｈｍａｎ，Ｓ．，Ｋｅｒｎｙｔｓｋｙ，Ａ．，Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．２００３．Ｕｓｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ，ｆａｓｔ  ｍｏｄｅｌ  ｂｕｉｌｄｉｎｇ，ａｎｄ  ｅｎｅｒｇｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｆｏｌｄ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ５３（Ｓｕｐｐｌ．６）：４３０−４３５を参照のこと）。
【０２１５】
選択された抗体のネズミおよびヒトフレームワーク領域の一次配列は、顕著な同一性を共有する。異なる残基位置は、ネズミ抗体の観察された結合効力を保持するため、ヒト化配列中にネズミ残基を含めるための候補である。ヒト配列とネズミ配列との間で異なるフレームワーク残基のリストを手作業で構築した。
【０２１６】
所与のフレームワーク残基が抗体の結合特性に影響を及ぼす可能性は、ＣＤＲ残基に対するこの近接に依存する。従って、モデル構造を使用して、ネズミ配列とヒト配列との間で異なる残基を、ＣＤＲ中の任意の原子からの距離に応じて順位付けした。任意のＣＤＲ原子の４．５Å以内に位置した残基を、最も重要と認識し、ヒト化抗体中でネズミ残基を保持するための候補であると推奨した（即ち復帰変異）。
【０２１７】
（実施例２．２．２）
抗ヒトＩＬ−１α  ｍＡｂ  ３Ｄ１２のヒト化
表５に記載の抗ＩＬ−１α抗体３Ｄ１２からの重鎖ＣＤＲ配列を、ヒトＶＨ７−４．１およびＪＨ６上にインシリコで以下の通りグラフトした：第１の位置におけるＱをＥに変異させてＮ−末端ピログルタマート形成を防止した。（２）Ｎ−連結グリコシル化パターン（Ｎ−｛Ｐ｝−Ｓ／Ｔ）はこれらの提案された構築物中に見出されなかった。（３）５種の復帰変異（Ｖ２Ｉ、Ｇ４４Ｄ、Ｗ４７Ｒ、Ｇ４９Ａ、およびＹ９１Ｆ）を最大ヒトｈ３Ｄ１２ＶＨ．１配列中に導入してｈ３Ｄ１２ＶＨ．１ａ配列を作製した。（４）上記復帰変異の１、２、３、４、または５種全てを、ｈ３Ｄ１２ＶＨ．１中に導入してヒト化後にヒトＩＬ１αに対する３Ｄ１２  ＭＡｂの親和性を維持することができた。（５）これら５種の復帰変異の一部は、ｈ３Ｄ１２ＶＨ．１ａからの後続の親和性成熟の間に除去することができる。
【０２１８】
または、表５に記載の抗ＩＬ−１ａ抗体３Ｄ１２からの重鎖ＣＤＲ配列を、ヒトＶＨ７−４．１およびＪＨ６上にインシリコで以下の通りグラフトした：（１）第１の位置におけるＱをＥに変異させてＮ−末端ピログルタマート形成を防止した。（２）３種のＶＨ１コンセンサス残基Ｉ７５Ｔ、Ｒ８２ｂＳ、およびＤ８５Ｅを導入した。３Ｄ１２ＶＨに対する同一性も、Ｄ８５Ｅ変化の結果として増加した。（３）ＶＨ１−２の多形位置６９および８８をＭおよびＳとしてそれぞれ保持し、ＶＨ１コンセンサス配列とともに保持した。（４）Ｎ−連結グリコシル化パターン（Ｎ−｛Ｐ｝−Ｓ／Ｔ）はこれらの提案された構築物中に見出されなかった。（５）８種の復帰変異（Ｖ２Ｉ、Ｇ４４Ｄ、Ｗ４７Ｒ、Ｇ４９Ａ、Ｖ６７Ｆ、Ｍ６９Ｆ、Ｒ７１Ｌ、およびＹ９１Ｆ）を最大ヒトｈ３Ｄ１２ＶＨ．２中に導入してｈ３Ｄ１２ＶＨ．２ａ配列を作製した。（６）これら８種全ての復帰変異は、ヒト化後にヒトＩＬ１αに対する３Ｄ１２  ＭＡｂの親和性を維持するのに必要でない場合がある。（７）これら８種の復帰変異の一部は、ｈ３Ｄ１２ＶＨ．２ａからの後続の親和性成熟の間に除去することができる。
【０２１９】
表５に記載の抗ＩＬ−１α抗体３Ｄ１２からの軽鎖ＣＤＲ配列を、追加のＦ７３Ｌ  Ｖｋ１コンセンサス変化を有するヒト１−３３／０１８およびＪｋ２またはヒト１−３３／０１８およびＪｋ４上にインシリコでグラフトした。Ｎ−連結グリコシル化パターン（Ｎ−｛Ｐ｝−Ｓ／Ｔ）はこれらの提案された構築物中に見出されなかった。３Ｄ１２軽鎖のＣＤＲ１中に共通しないシステインが存在する。このシステインは、ヒト化配列中に依然として存在した。ＣＤＲ中のこのシステインは、所望により、ｈ３Ｄ１２Ｖｋ．１、１ａ、１ｂ、２、２ａ、または２ｂからの後続の親和性成熟の間に除去することができる。最大ヒトｈ３Ｄ１２Ｖｋ．１配列中に導入することができる６種の復帰変異（Ｄ１Ｎ、Ｓ７Ｔ、Ａ４３Ｔ、Ｐ４４Ｖ、Ｆ７１Ｙ、およびＹ８７Ｆ）が存在した。従って、ｈ３Ｄ１２Ｖｋ．１ａおよび２ａは、最初の２種の復帰変異を有しなかった。しかしながら、ｈ３Ｄ１２Ｖｋ．１ｂおよび２ｂは、６種全ての復帰変異を有した。これらの復帰変異の一部は、ｈ３Ｄ１２ＶＨ．１ａ、１ｂ、２ａ、または２ｂからの後続の親和性成熟の間に除去することができる。
【０２２０】
表６は、本発明のヒト化抗ｈＩＬ１α抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列のリストである。
【０２２１】
【表６】
2012516153.tif 000007
【０２２２】
（実施例２．２．３）
ヒト化抗体の構築
インシリコで構築された上記ヒト化抗体を、オリゴヌクレオチドを使用してデノボ構築した。各可変領域ｃＤＮＡについて、各６０−８０ヌクレオチドの６個のオリゴヌクレオチドを、各オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端において互いに２０ヌクレオチドだけ重複するように設計した。アニーリング反応において、全６個のオリゴを組み合わせ、沸騰させ、ｄＮＴＰの存在下でアニーリングした。次いで、ＤＮＡポリメラーゼＩ、Ｌａｒｇｅ（クレノー）断片（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ＃Ｍ０２１０，Ｂｅｖｅｒｌｅｙ，ＭＡ．）を添加して重複オリゴヌクレオチド間の約４０ｂｐの間隙をフィルインした。次いで、改変ｐＢＯＳベクター中のマルチプルクローニングサイトに相補的である突出配列を含有する２個の最外側プライマーを使用してＰＣＲを実施して可変領域遺伝子全体を増幅した（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ．ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｓ．，（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ１８，Ｎｏ．１７））。各ｃＤＮＡアセンブリに由来するＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分離し、予測される可変領域ｃＤＮＡサイズに対応するバンドを切り出し、精製した。細菌中での相同組換えにより、２つのヒンジ領域アミノ酸変異を含有するヒトＩｇＧ１定常領域をコードするｃＤＮＡ断片上に、可変重鎖領域をインフレームで挿入した。これらの変異は、２３４位（ＥＵ付番）におけるロイシンからアラニンへの変化、および２３５位におけるロイシンからアラニンへの変化である（Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２６５７）。可変軽鎖領域を、相同組換えによりヒトカッパ定常領域とともにインフレームで挿入した。細菌コロニーを単離し、プラスミドＤＮＡを抽出し；ｃＤＮＡインサートを全体で配列決定した。各抗体に対応する正確なヒト化重鎖および軽鎖をＣＯＳ細胞内に同時形質移入して完全長ヒト化抗ヒトＩＬ１α抗体を一過的に産生させた。１３Ｃ５については、１３Ｃ５重鎖にグラフトしたｃＤＮＡおよび１３Ｃ５軽鎖にグラフトしたｃＤＮＡを含有するｐＢＯＳベクターをＣＯＳ細胞内に同時形質移入した。組換えキメラ抗体を含有する細胞上清を、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅクロマトグラフィーにより精製し、結合した抗体を、酸緩衝剤の添加により溶出させた。抗体を中和し、ＰＢＳ中に透析した。ヒト化抗体を表７に記載する。
【０２２３】
【表７】
2012516153.tif 000008
【０２２４】
（実施例２．２．３）
ヒト化ＩＬ−１α抗体の特性決定
精製ヒト化抗体のＩＬ１α活性の阻害能を、実施例１．１．Ｃに記載の通りＭＲＣ−５バイオアッセイを使用して測定した。組換えヒトＩＬ１αに対するヒト化抗体の結合親和性を、実施例１．１．Ｂに記載の通り表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））計測を使用して測定した。表８は、ＭＲＣ−５バイオアッセイからのＩＣ５０値およびヒトＩＬ１αについての表５に記載のヒト化抗体の親和性を示す。
【０２２５】
【表８】
2012516153.tif 000009
【０２２６】
本発明は、分子生物学の分野において周知の技術を参照により全体として取り込む。これらの技術は、限定されるものではないが、以下の刊行物に記載の技術を含む：
Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（４ｔｈ  Ｅｄ．１９９９）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ．（ＩＳＢＮ  ０−４７１−３２９３８−Ｘ）。
【０２２７】
Ｌｕ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ  ｅｄｓ．，Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００１）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｐｒｅｓｓ．Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ．２９８ｐｐ．（ＩＳＢＮ  １−８８１２９９−２１−Ｘ）。
【０２２８】
Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）。
【０２２９】
Ｏｌｄ，Ｒ．Ｗ．＆Ｓ．Ｂ．Ｐｒｉｍｒｏｓｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（３ｄ  Ｅｄ．１９８５）Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｏｓｔｏｎ．Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；Ｖ．２：４０９ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−６３２−０１３１８−４）。
【０２３０】
Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  Ｅｄ．１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ．Ｖｏｌｓ．１−３．（ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３０９−６）。
【０２３１】
Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｅ．Ｌ．Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８７）ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ（ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ  ｂｙ  Ｈｏｒｓｔ  Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ）．６３４ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−８９５７３−６１４−４）。
【０２３２】
多数の実施形態および特徴を上記したが、記載の実施形態および特徴の改変および変形を、本開示または添付の特許請求の範囲に定義の本発明から逸脱することなく行うことができることが当業者により理解される。
【配列表】
2012516153000001.app
【国際調査報告】
2012516153.tif 000010
2012516153.tif 000011