(57)【要約】  本発明は、インスリン、インスリン類似体、又はインスリン誘導体を含んでなり、そのレディーメードの製剤がインスリン、インスリン類似体、又はインスリン誘導体を固形物として適した溶媒に溶解することによって直接生じる、水性医薬製剤の調製方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
インスリン、インスリン類似体若しくはインスリン誘導体、又はその薬理学的に許容しうる塩を含んでなり、その即時使用可能な製剤が、固体形態のインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を適した溶媒混合物で溶解することで直接達成される、水性医薬製剤の調製方法。
【請求項２】
適した溶媒混合物の組成が、
（ａ）ｐＨにおいて異なり、そしてインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を含んでなる製剤の最終的な賦形剤濃度に対応する賦形剤濃度を有する溶媒混合物を調製し、そして
（ｂ）所望のインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を溶解し、インスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体の固形物を溶解した後、即時使用可能な製剤の所望のｐＨを生じる溶媒混合物を決定すること
によって決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
インスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体が、結晶性固体又は非晶質固体の形態をとる、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
インスリンが、ヒトインスリン、ブタインスリン及びウシインスリンからなる群より選ばれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
インスリン類似体が、Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）ヒトインスリン、Ｌｙｓ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ２９）ヒトインスリン、Ａｓｐ（Ｂ２８）ヒトインスリン、Ｌｙｓ（Ｂ２８）Ｐｒｏ（Ｂ２９）ヒトインスリン、及びＤｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンを含む群から選ばれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
インスリン類似体が、式Ｉ
【化１】
2012532177.tif 000009
（式中、
Ａ０は、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ａ５は、Ａｓｐ、Ｇｌｎ又はＧｌｕであり；
Ａ１５は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ａ１８は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ｂ−１は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はアミノ基であり；
Ｂ０は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又は化学結合であり；
Ｂ１は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＰｈｅであり；
Ｂ２は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＶａｌであり；
Ｂ３は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ｂ４は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ｂ２９は、Ｌｙｓ又は化学結合であり；
Ｂ３０は、Ｔｈｒ又は化学結合であり；
Ｂ３１は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ又は化学結合であり；
Ｂ３２は、Ａｒｇ−アミド、Ｌｙｓ−アミド又はアミノ基であり、
ここで、Ａ５、Ａ１５、Ａ１８、Ｂ−１、Ｂ０、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、及びＢ４を含む群の２つのアミノ酸残基は、同時に互いに独立して、Ａｓｐ若しくはＧｌｕ、又はそれらの薬理学的に許容しうる塩である）
のインスリン類似体を含む群から選ばれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
インスリン類似体が、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３０），Ａｒｇ（Ｂ３１）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３０），Ｌｙｓ（Ｂ３１）−ＮＨ2ヒトインスリン
を含む群から選ばれる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
インスリン類似体が、式ＩＩ
【化２】
2012532177.tif 000010
（式中、
Ａ−１は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ又はアミノ基であり；
Ａ０は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ又は化学結合であり；
Ａ１は、Ａｒｇ又はＧｌｙであり；
Ａ５は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ａ１５は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ａ１８は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ａ２１は、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＧｌｙであり；
Ｂ−１は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はアミノ基であり；
Ｂ０は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又は化学結合であり；
Ｂ１は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ又は化学結合であり；
Ｂ３は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ｂ４は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ｂ２９は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ又はアミノ酸Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐを含む群から選ばれるアミノ酸、又は化学結合であり；
Ｂ３０は、Ｔｈｒ又は化学結合であり；
Ｂ３１は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ又は化学結合であり；
Ｂ３２は、Ａｒｇ−アミド又はＬｙｓ−アミドであり、
ここで、Ａ５、Ａ１５、Ａ１８、Ｂ−１、Ｂ０、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３及びＢ４を含む群からの１つを超えないアミノ酸残基は、同時に互いに独立して、Ａｓｐ又はＧｌｕである）のインスリン類似体を含む群から選ばれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
インスリン類似体が、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ａｒｇ（Ａ１），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ａｒｇ（Ａ１），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン
を含む群から選ばれる、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
インスリン誘導体が、Ｂ２９−Ｎ−ミリストイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−パルミトイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−ミリストイルヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−パルミトイルヒトインスリン、Ｂ２８−Ｎ−ミリストイルＬｙｓB28ＰｒｏB29ヒトインスリン、Ｂ２８−Ｎ−パルミトイル−ＬｙｓB28ＰｒｏB29ヒトインスリン、Ｂ３０−Ｎ−ミリストイル−ＴｈｒB29ＬｙｓB30ヒトインスリン、Ｂ３０−Ｎ−パルミトイル−ＴｈｒB29ＬｙｓB30ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（Ｎ−パルミトイル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３９）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（Ｎ−リトコリル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、及びＢ２９−Ｎ−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）ヒトインスリンを含む群から選ばれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
製剤が、フェノール、ｍ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、及びパラベンを含む群から選ばれる保存剤を含んでなる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
製剤が、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロース、トレハロース、塩化ナトリウム、及びグリセリンを含む群から選ばれる等張化剤を含んでなる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
インスリン、インスリン類似体及び／又はインスリン誘導体が２４０〜３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
製剤が、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ１）若しくはその類似体若しくは誘導体、又はエキセンジン−３及び／若しくは−４、若しくはそれらの類似体、若しくは誘導体をさらに含んでなる、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
エキセンジン−４の類似体が、
Ｈ−ｄｅｓＰｒｏ36−エキセンジン−４−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−ｄｅｓ（Ｐｒｏ36,37）−エキセンジン−４−Ｌｙｓ4−ＮＨ2及び
Ｈ−ｄｅｓ（Ｐｒｏ36,37）−エキセンジン−４−Ｌｙｓ5−ＮＨ2、
又はそれらの薬理学的に許容しうる塩
を含む群から選ばれる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
エキセンジン−４の類似体が、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−２（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−２（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）及び
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14Ｔｒｐ（Ｏ2）25，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
又はそれらの薬理学的に許容しうる塩を含む群から選ばれる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ペプチドＬｙｓ6−ＮＨ2が、エキセンジン−４の類似体のＣ末端に結合している、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
エキセンジン−４の類似体が、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2
ｄｅｓ Ａｓｐ28Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−ｄｅｓ Ａｓｐ28 Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25、Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ｍｅｔ（Ｏ）14Ａｓｐ28 Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5 −ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ａｓｐ28 Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
又はそれらの薬理学的に許容しうる塩
を含む群から選ばれる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
製剤が、Ａｒｇ34，Ｌｙｓ26（Ｎε（γ−グルタミル（Ｎα−ヘキサデカノイル）））ＧＬＰ−１（７−３７）［リラグルチド］又はその薬理学的に許容しうる塩をさらに含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
製剤が、亜鉛塩をさらに含んでなる、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
インスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体の工業的調製における請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法の使用。
【請求項２２】
インスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体の熱安定性及び振動安定性保存のため、請求項１〜２０のいずれか１項に記載されたように、固形物を溶媒混合物に溶解することによって即時使用可能な製剤を後で調製するための、一方の容器が固体形態のインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を含み、そしてもう一方の容器が所定のｐＨを有し、かつインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体の所望の処方物の最終的な賦形剤濃度を有する溶媒混合物を含む、２部セットの容器。
【請求項２３】
インスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体の熱安定性及び振動安定性保存のため、請求項１〜２０のいずれか１項に記載されたように、固形物を溶媒混合物に溶解することによって即時使用可能な製剤を後で調製するための、一方の室が固体形態のインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を含み、そしてもう一方の室が所定のｐＨを有し、かつインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体の所望の製剤の最終的な賦形剤濃度を有する溶媒混合物を含む、２室注射システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を含んでなり、その即時使用可能な製剤（ready-to-use formulation）が固体形態のインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を適した溶媒混合物に溶解することによって直接達成される、水性医薬製剤の調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病を患っている人の数は、世界中で増えている。それらの多くはＩ型糖尿病患者と称するものであって、患者にとっては、内分泌性インスリン分泌不全の代替が、今のところ唯一可能な治療である。罹患した患者は、通常１日数回、死ぬまでインスリン注射に依存する。ＩＩ型糖尿病は、インスリンの欠乏が、必ずしもあるわけではない点でＩ型糖尿病と対照的であるが、多くの場合、特に進行期には、必要に応じて、経口抗糖尿病薬と組み合わせたインスリンによる治療が、最も有益な治療形態と考えられる。
【０００３】
健常人では、膵臓によるインスリンの放出は、血糖濃度と厳密に結びついている。食後に生じるような高められた血糖レベルは、インスリン分泌の対応する上昇によって急速に補われる。絶食状態では、血漿インスリンレベルは、インスリン感受性器官及び組織へのグルコースの連続的供給を確保するため、そして夜間の肝臓グルコース産生を低く保つために十分なベースライン値（base line value）まで低下している。外因性、通常、インスリンの皮下投与による内因性インスリン分泌の代替は、上記の血糖の生理学的調節の質に近付いていない。血糖が上方又は下方へ逸脱する場合がしばしばあり、そしてその最もひどい形では、これらの場合は致命的となりうる。しかしながら、さらに、初期症状なしに数年にわたって上昇した血糖値は、相当な健康リスクとなる。米国における大規模なＤＣＣＴ研究（非特許文献１）は、慢性的に高い血糖値が後期糖尿病性合併症（late diabetic complications）を発症する原因となることを明白に示した。後期糖尿病性合併症は、網膜症、腎症又は神経障害として特定の状況で現れ、そして失明、腎不全、及び四肢の喪失に至り、そしてさらに心臓血管障害のリスク上昇に関連する微小血管及び大血管の損傷である。このことから推測することができるのは、糖尿病の改善された治療は、血糖をできるだけ生理学的範囲内の近くに保つことを主な目的にしなければならないということである。強化インスリン療法の概念によれば、これは、速効型及び遅効型インスリン製剤の１日数回の注射によって達成される。速効型製剤は、血糖の食後上昇を補うために食事時に与えられる。遅効型基礎インスリンは、低血糖にならないよう、特に夜間にインスリンの基礎供給を確保するためである。
【０００４】
インスリンは、２つのアミノ酸鎖：２１個のアミノ酸を有するＡ鎖及び３０個のアミノ酸を有するＢ鎖に分けられる５１個のアミノ酸からなるポリペプチドである。鎖は、２本のジスルフィド架橋によって結合している。インスリン製剤は、糖尿病治療において長年にわたって用いられてきた。このような製剤では、自然分泌インスリン（naturally occurring insulins）だけでなく、つい最近では、インスリン誘導体及びインスリン類似体も用いられている。
【０００５】
インスリン類似体は、自然分泌インスリン、すなわち、ヒトインスリン又は動物インスリンの類似体であり、これは、本来存在する少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸で置換されている及び／又は少なくとも１つのアミノ酸残基が付加／欠失していることで、その他の点では同一の対応する自然分泌インスリンとは異なる。また、当該アミノ酸は、天然に存在しないアミノ酸であってもよい。
【０００６】
インスリン誘導体は、化学修飾によって得られる、自然分泌インスリン又はインスリン類似体の誘導体である。化学修飾は、例えば、１つ又はそれ以上のアミノ酸への１つ又はそれ以上の定義された化学基の付加であってもよい。一般に、インスリン誘導体及びインスリン類似体の活性は、ヒトインスリンと比べていくらか変化している。
【０００７】
作用開始が早められたインスリン類似体は、特許文献１、特許文献２、及び特許文献３に記載されている。特許文献１は、中でも、Ｂ２７及びＢ２８の置換に関する。特許文献３は、Ｂ２９位においてグルタミン酸でなく異なるアミノ酸、好ましくはプロリンを有するインスリン類似体を記載している。特許文献２は、Ｂ２８にリシン又はアルギニンを有するインスリン類似体を包含し、それはまた、Ｂ３及び／又はＡ２１で場合により修飾されてもよい。
【０００８】
特許文献４は、Ｂ３におけるアスパラギンの修飾及びＡ５、Ａ１５、Ａ１８又はＡ２１位での少なくとも１つのさらなるアミノ酸の修飾によって化学修飾により保護されたインスリン類似体を記載している。
【０００９】
一般に、インスリン誘導体及びインスリン類似体は、ヒトインスリンと比べていくらか変化した作用を有する。
【００１０】
特許文献５は、Ｂ１〜Ｂ６位における少なくとも１つのアミノ酸がリシン又はアルギニンによって置換されたインスリン類似体を記載している。このようなインスリンは、特許文献５によれば、延長された効果を有する。また、遅延された効果は、特許文献６に記載されたインスリン類似体によって示されている。強化インスリン療法の概念は、基礎インスリンを早めに投与することで血糖値の安定な制御を目指すことによって健康に対するリスクを低下させることである。一般的な基礎インスリンの一例は、薬物ランタス（登録商標）（活性成分：インスリングラルギン＝Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）ヒトインスリン）である。一般に、新しい改善された基礎インスリンの開発における目的は、低血糖事象の数を最小限にすることである。理想的な基礎インスリンは、少なくとも２４時間、各患者において安全に作用する。理想的には、インスリン効果の開始が遅く、そしてかなり平らな時間／活性プロファイルを有し、それによって糖の短期的な供給不足のリスクを有意に最小限にし、そして食物が予め摂取されていなくても投与が可能である。基礎インスリンの供給は、インスリン活性ができるだけ長い間一貫して続く、すなわち、体に一定量のインスリンが供給されるときに有効である。その結果、低血糖事象のリスクは低くなり、そして患者に特有の及び日中に特有の（day-specific）変動性が最小限になる。そのため、理想的な基礎インスリンの薬物動態学的プロファイルは、遅延された作用開始及び遅延された作用、すなわち、長期持続性及び均一な作用を特徴としていなければならない。
【００１１】
市場にあるインスリン置換のための自然分泌インスリンの製剤は、インスリンの由来（例えば、ウシ、ブタ、ヒトインスリン）、そしてまたそれらの組成において異なるため、活性プロファイル（作用開始及び時間）は影響を受けることがある。異なるインスリン製品の組み合わせを通して任意の非常に広く多様な活性プロファイルを得、非常に広い生理学的血糖値を用いることができる。今日では、組換えＤＮＡ技術により、この種の改質インスリンの製造が可能である。それには、延長された作用時間を有するインスリングラルギン（Ｇｌｙ（Ａ２１）−Ａｒｇ（Ｂ３１）−Ａｒｇ（Ｂ３２）ヒトインスリン）が含まれる。インスリングラルギンは、透明な酸性溶液の形態で注射され、そしてその溶解性に基づいて、皮下組織の生理学的ｐＨ範囲では安定な六量体会合体として沈殿する。インスリングラルギンは、１日１回注射され、そしてその平らな血清プロファイル、及びそれに伴う夜間低血糖のリスク低下のため他の長時間活性なインスリンと比較して注目すべきである（非特許文献２）。これまで記載された製剤と対照的に、作用時間が持続するインスリングラルギンの特定製剤は、酸性ｐＨを有する透明溶液を特徴としている。しかしながら、インスリンは、特に酸性ｐＨで安定性の低下、そして熱的及び物理的機械的負荷下で凝集傾向の増加を示し、そしてそれは混濁及び沈殿の形態（粒子形成）を呈することがある（非特許文献３）。
【００１２】
２〜８℃での保存において、液体インスリン製剤は、約２年の保存期間（shelf life）を有する。使用における保存期間は、２５℃までで保存が可能であり、４週間であると示されており；機械的ストレス（振動）を回避しなければならない。例外的な場合、「フィブリル（fibrils）」と称するものが形成されることで部分的にインスリンが沈殿することがありうるため、一般に、患者にとってはインスリン製剤が透明な溶液のままであることが保証されていなければならない。この結果として、薬物の十分な用量が確保されないリスクがある。
【００１３】
従って、２型及び１型糖尿病を治療するため、熱安定性及び振動安定性の安定なインスリン、並びに熱安定性及び振動安定性の安定なインスリン製剤を開発する必要がある。これは、本明細書に記載された本発明の一部として達成された。本発明の２成分インスリン製剤は、その熱安定性及び機械的ストレスに対するその安定性においてその慣用の対応物とは異なる。市場で入手可能な液体インスリン製剤と対照的に、熱安定性及び振動安定性は、投与前の短時間までの固体形態におけるインスリンの保存に基づいている。固形インスリンが、溶解されたインスリンよりも熱ストレス下で分解（分子構造の変化）に対してより安定であることを示すことができた。さらに、溶解されたインスリンでは沈殿が起こり；これは、固体状態では起こりえない生物物理学的過程である。結果的に、相当する熱ストレスがあっても、溶解過程を熱ストレス後に行う場合、インスリン製剤からより生物学的に利用可能なインスリンが入手可能である。
【００１４】
さらに、水性インスリン製剤は、機械的ストレス（振動）下でインスリンを沈殿させる傾向を示す。そのため、振動ストレス後の生物学的に利用可能なインスリンの量は、不明であり、患者の安全性を損なうことになる。さらに、熱安定性インスリン製剤は別として、機械的ストレス（例えば、振動）に関しても安定であるそれらの製剤が必要とされている。固形インスリンは、溶解されたインスリンより振動に対して安定であることを示すことができた。振動ストレスにおける沈殿の生物物理学的過程は、溶解されたインスリン中でのみ生じる。結果的に、相当する振動ストレスがあっても、溶解過程を振動ストレス後に行う場合、影響を受けない量で生物学的に利用可能なインスリンが入手可能である。
【００１５】
インスリンは、例えば、抗殺細菌剤、等張化剤、緩衝物質及び／又は界面活性剤（＝下の「溶媒」）のような補助剤及びアジュバントを含む水性系で市場において典型的に入手可能である。薬理学的製剤を製造するためのインスリンの溶解は、一般に、最初にインスリンを酸性的に溶解した後、さらなる工程において所望の濃度及びｐＨの溶液に調整することによって確実に行われる（非特許文献４）。
【００１６】
別法として記載されるのは、アルカリ性範囲でインスリンを溶解した後にｐＨを調整することであり、それはインスリン製剤の一部においてわずかに高められた安定性を伴う（特許文献７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】ＥＰ ０ ２１４ ８２６
【特許文献２】ＥＰ ０ ３７５ ４３７
【特許文献３】ＥＰ ０ ６７８ ５２２
【特許文献４】ＥＰ ０ ４１９ ５０４
【特許文献５】ＷＯ ９２／００３２１
【特許文献６】ＥＰ−Ａ ０ ３６８ １８７
【特許文献７】ＷＯ ２００４／０９６２６６
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】The Diabetes Control and Complications Trial Research Group (1993), N. Engl. J. Med. 329, 977-986
【非特許文献２】Schubert-Zsilavecz et al., 2:125-130 (2001)
【非特許文献３】Brange et al., J. Ph. Sci 86:517-525 (1997)
【非特許文献４】The Wellcome Foundation Limited te London, Octrooiraad Nederland, Octrooiaanvrage No. 6506714, 26.05.1965 “Werkwijze voor het bereidenvan insulinepreparaten”
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１９】
従って、いずれの場合も、即時使用可能なインスリン製剤を調製するためには、多段階の操作が必要であり、他の段階にはｐＨの調整が包含される。
【００２０】
ここで驚くべきことに、インスリン（又はその類似体若しくは誘導体）を緩衝溶液と合わせ、そしてインスリン（又はその類似体若しくは誘導体）を溶解することで数分以内に即時使用可能なインスリン製剤が調製される、一段階法によって即時使用可能なインスリン製剤が調製可能であることが見出された。
【００２１】
その結果、固形インスリンを溶解する過程は、例えば、２室アンプル（two-chamber ampoule）又は他の適切なデバイスで患者又は患者の介護者によってその場で行うことができる。妥当な時間（約１０分）内に適切な溶媒及び濃度で完全にインスリンを溶解する対応する試みは、成功した。ここで達成された成功は、実質的に溶媒の適切なｐＨに左右される。溶媒（補助剤、添加剤、など）の基本的組成は、すでに市場にある製剤のものと全く異ならないか、又は必ずしも異ならない。
【００２２】
従って、熱及び機械的ストレスに対して安定なインスリンは、以下の利点を提供する：
・冷却系（cooling chain）の必要がない
・暑い国でストックを保有するのがより簡単になる
・患者にとって薬物安全性が改善される
・一般に薬物の保存期間が延長される
・沈殿したインスリンを含むアンプルの返品が減る。
【００２３】
本発明の２成分インスリン製剤は、上で定義された利点をもたらす。このように、適切な冷却装置を利用する手段がない又は不十分である患者が、インスリンのストックを保持することができる。気候の暑い国でのこのような製剤の使用は、同様に特に有益である。
【００２４】
本発明の２成分インスリン製剤という意味で適したアンプルサイズを用いて、使用に必要な保存期間を最小限に減らすことができるようなやり方で患者にとってインスリン溶液の量を減らすことも可能である。これにより、ｍ−クレゾール又は他のフェノールのような抗菌性アジュバントの添加を、例えば、減らすか又は完全に除くことが可能である。
【００２５】
製剤は、すべての既知のインスリン、インスリン類似体、及びインスリン誘導体について調製することができる。
【００２６】
これには、所望の基礎時間／活性プロファイルを有する製剤が含まれ、その際、インスリン類似体は、
・Ｂ鎖末端がリシン又はアルギニンアミドのようなアミド化された塩基性アミノ酸残基からなる、すなわち、Ｂ鎖末端のアミド化された塩基性アミノ酸残基において、末端アミノ酸のカルボキシル基がそのアミド化形態にあり、そして
・インスリンＡ鎖のＮ末端アミノ酸残基がリシン又はアルギニン残基であり、そして
・アミノ酸Ａ８位がヒスチジン残基によって占有されており、そして
・アミノ酸Ａ２１位がグリシン残基によって占有されており、そして
・Ａ５、Ａ１５、Ａ１８、Ｂ−１、Ｂ０、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、及びＢ４位のそれぞれにおいて、酸性アミノ酸による中性アミノ酸の２つの置換、負に荷電されたアミノ酸残基の２つの付加、又は１つのこのような置換及び１つのこのような付加がある
という特性を特徴とする。
【００２７】
従って、本発明は、即時使用可能な製剤が、固体形態のインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を適した溶媒混合物で溶解することで直接達成される、好ましくは、その際、適した溶媒混合物の組成が
（ａ）ｐＨにおいて異なり、そしてインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を含む製剤の最終的な賦形剤濃度に対応する賦形剤濃度を有する溶媒混合物を調製し、そして
（ｂ）所望のインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を溶解し、インスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体の固形物を溶解した後、即時使用可能な製剤の所望のｐＨを生じる溶媒混合物を決定すること
によって決定される、インスリン、インスリン類似体若しくはインスリン誘導体、又はそれらの薬理学的に許容しうる塩を含む水性医薬製剤の調製方法を提供する。
【００２８】
さらに、本発明は、インスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体が結晶性固体又は非晶質固体の形態をとる前記の方法を提供する。
【００２９】
本発明は、インスリンがヒトインスリン、ブタインスリン及びウシインスリンからなる群より選ばれる前記の方法を提供する。
【００３０】
さらに、本発明は、インスリン類似体が、Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）ヒトインスリン、Ｌｙｓ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ２９）ヒトインスリン、Ａｓｐ（Ｂ２８）ヒトインスリン、Ｌｙｓ（Ｂ２８）Ｐｒｏ（Ｂ２９）ヒトインスリン、及びＤｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンを含む群から選ばれる前記の方法を提供する。
【００３１】
さらに、本発明は、インスリン類似体が式Ｉのインスリン類似体を含む群から選ばれ、
【化１】
2012532177.tif 000002
ここで、
Ａ０は、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ａ５は、Ａｓｐ、Ｇｌｎ又はＧｌｕであり；
Ａ１５は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ａ１８は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ｂ−１は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はアミノ基であり；
Ｂ０は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又は化学結合であり；
Ｂ１は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＰｈｅであり；
Ｂ２は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＶａｌであり；
Ｂ３は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ｂ４は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ｂ２９は、Ｌｙｓ又は化学結合であり；
Ｂ３０は、Ｔｈｒ又は化学結合であり；
Ｂ３１は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ又は化学結合であり；
Ｂ３２は、Ａｒｇ−アミド、Ｌｙｓ−アミド又はアミノ基であり、
ここで、Ａ５、Ａ１５、Ａ１８、Ｂ−１、Ｂ０、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、及びＢ４を含む群の２つのアミノ酸残基は、同時に互いに独立して、Ａｓｐ若しくはＧｌｕ、又はそれらの薬理学的に許容しうる塩であり、好ましくは、ここにおいて、インスリン類似体は、
【００３２】
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３０），Ａｒｇ（Ｂ３１）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３０），Ｌｙｓ（Ｂ３１）−ＮＨ2ヒトインスリン
を含む群から選ばれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載された方法を提供する。
【００３３】
さらに、本発明は、インスリン類似体が式ＩＩのインスリン類似体を含むものから選ばれ、
【化２】
2012532177.tif 000003
ここで、
Ａ−１は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ又はアミノ基であり；
Ａ０は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ又は化学結合であり；
Ａ１は、Ａｒｇ又はＧｌｙであり；
Ａ５は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ａ１５は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ａ１８は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ａ２１は、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＧｌｙであり；
Ｂ−１は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はアミノ基であり；
Ｂ０は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又は化学結合であり；
Ｂ１は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ又は化学結合であり；
Ｂ３は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ｂ４は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ｂ２９は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ又はアミノ酸Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐを含む群から選ばれるアミノ酸、又は化学結合であり；
Ｂ３０は、Ｔｈｒ又は化学結合であり；
Ｂ３１は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ又は化学結合であり；
Ｂ３２は、Ａｒｇ−アミド又はＬｙｓ−アミドであり、
ここで、Ａ５、Ａ１５、Ａ１８、Ｂ−１、Ｂ０、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３及びＢ４を含む群からの１つを超えないアミノ酸残基は、同時に互いに独立して、Ａｓｐ又はＧｌｕであり、好ましくは、ここにおいて、インスリン類似体は、
【００３４】
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ−１），Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ａｒｇ（Ａ１），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ａｒｇ（Ａ１），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｌｙｓ（Ｂ３０）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン
を含む群から選ばれる、前記の方法を提供する。
【００３５】
さらに、本発明は、インスリン誘導体が、Ｂ２９−Ｎ−ミリストイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−パルミトイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−ミリストイルヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−パルミトイルヒトインスリン、Ｂ２８−Ｎ−ミリストイルＬｙｓB28ＰｒｏB29ヒトインスリン、Ｂ２８−Ｎ−パルミトイル−ＬｙｓB28ＰｒｏB29ヒトインスリン、Ｂ３０−Ｎ−ミリストイル−ＴｈｒB29ＬｙｓB30ヒトインスリン、Ｂ３０−Ｎ−パルミトイル−ＴｈｒB29ＬｙｓB30ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（Ｎ−パルミトイル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３９）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（Ｎ−リトコリル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、及びＢ２９−Ｎ−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）ヒトインスリンを含む群から選ばれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法を提供する。
【００３６】
さらに、本発明は、製剤が、フェノール、ｍ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、及びパラベンを含む群から選ばれる保存剤を含む前記の方法を提供する。
【００３７】
さらに、本発明は、製剤が、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロース、トレハロース、塩化ナトリウム、及びグリセリンを含む群から選ばれる等張化剤を含む前記の方法を提供する。
【００３８】
さらに、本発明は、インスリン、インスリン類似体及び／又はインスリン誘導体が２４０〜３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で存在する前記の方法を提供する。
【００３９】
さらに、本発明は、製剤が、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ１）若しくはその類似体若しくは誘導体、又はエキセンジン−３及び／若しくは−４、若しくはそれらの類似体、若しくは誘導体をさらに含み、好ましくは、その際、エキセンジン−４の類似体が、
Ｈ−ｄｅｓＰｒｏ36−エキセンジン−４−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−ｄｅｓ（Ｐｒｏ36,37）−エキセンジン−４−Ｌｙｓ4−ＮＨ2及び
Ｈ−ｄｅｓ（Ｐｒｏ36,37）−エキセンジン−４−Ｌｙｓ5−ＮＨ2、
又はそれらの薬理学的に許容しうる塩を含む群から選ばれる、
前記の方法を提供する。
【００４０】
さらに、本発明は、エキセンジン−４の類似体が、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−２（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−２（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）及び
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14Ｔｒｐ（Ｏ2）25，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
又はそれらの薬理学的に許容しうる塩を含む群から選ばれ、好ましくは、その際、ペプチドＬｙｓ6−ＮＨ2が、エキセンジン−４の類似体のＣ末端に結合している前記の方法を提供する。
【００４１】
さらに、本発明は、エキセンジン−４の類似体が
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2
ｄｅｓ Ａｓｐ28Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−ｄｅｓ Ａｓｐ28 Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25、Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ｍｅｔ（Ｏ）14Ａｓｐ28 Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5 −ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ａｓｐ28 Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
又はそれらの薬理学的に許容しうる塩
を含む群から選ばれる前記の医薬製剤を提供する。
【００４２】
さらに、本発明は、製剤が、Ａｒｇ34，Ｌｙｓ26（Ｎε（γ−グルタミル（Ｎα−ヘキサデカノイル）））ＧＬＰ−１（７−３７）［リラグルチド］又はその薬理学的に許容しうる塩をさらに含む前記の方法を提供する。
【００４３】
さらに、本発明は、製剤が亜鉛塩をさらに含む前記の方法を提供する。
【００４４】
さらに、本発明は、インスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体の工業的調製における前記の方法の使用を提供する。
【００４５】
本発明は、インスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体の熱安定性及び振動安定性保存のため、固形物を溶媒混合物中に溶解することによって即時使用可能な製剤を後で調製するための、一方の室が固体形態のインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を含み、そしてもう一方の室が所定のｐＨを有し、かつインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体の所望の製剤の最終的な賦形剤濃度を有する溶媒混合物を含む、２室注射システムをさらに提供する。
【００４６】
本説明において、用語「処方物」及び「製剤」は、同義的に用いられる。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】ラットにおける式Ｉの新たなインスリン類似体の血糖低下効果を示す図である。
【図２】イヌにおける式Ｉの新たなインスリン類似体の血糖低下効果を示す図である。
【図３】イヌにおけるＹＫＬ２０５の血糖低下効果を示す図である。
【図４】イヌにおけるＹＫＬ２０５の血糖低下効果の亜鉛依存性を示す図である。
【図５】ラットにおける本発明の式ＩＩのインスリン類似体の血糖低下効果を示す図である。
【図６】ラットにおけるインスリングラルギンの血糖低下効果を示す図である。
【実施例】
【００４８】
以下の実施例は、本発明の概念を説明することを意図しており、なんら効果を限定するものではない。
【００４９】
実施例１：一工程での簡略化されたインスリンの溶解（溶解試験）
インスリンは、市場では、例えば、抗殺細菌剤、等張化剤、緩衝物質及び／又は界面活性剤（＝下の「溶媒」）のような補助剤及びアジュバントを含む水性系において典型的に入手可能である。薬理学的製剤を製造するためのインスリンの溶解は、一般に、最初にインスリンを酸性的に溶解した後、さらなる工程において溶液の所望の濃度及びｐＨに調整することによって確実に行われる（The Wellcome Foundation Limited te London, Octrooiraad Nederland, Octrooiaanvrage No. 6506714, 26.05.1965 “Werkwijze voor het bereiden insulinepreparaten”）。
【００５０】
別法として、アルカリ性範囲でのインスリンの溶解が記載されており、インスリン製剤の一部においてわずかに高い安定性を伴う（WO 2004/096266 PCT/DK2004/000300, “Improved Physical Stability of Insulin Formulations”）。
【００５１】
溶解試験：
インスリン溶解の複雑な手順（上記参照）を回避するため、一工程で市場に存在するそれらの処方物を得るようなやり方で、固体形態のインスリンを溶解することができるかどうかを測定する試験を実施した。目的は、市場の処方物の組成を保持することであり、換言すれば、すべての補助剤及び添加剤の濃度及びｐＨが含まれる。以下を研究した：
ａ．ランタス（登録商標）（補助剤及び添加剤 塩化亜鉛、ｍ−メタクレゾール、グリセリン、ｐＨ４）
ｂ．インスマン（登録商標）（補助剤及び添加剤 リン酸水素ナトリウム、ｍ−メタクレゾール、グリセリン、ｐＨ７．３）
【００５２】
２種のインスリン、ランタス（登録商標）及びインスマン（登録商標）について最終的な賦形剤濃度に対応して異なる溶媒混合物を調製した。溶媒のｐＨを変化させた。
ａ．ランタス（登録商標）では、必要な最終ｐＨ値のｐＨ４で完全に溶解するために溶媒ｐＨ２．８５が必要であった。溶解速度（最終体積１ｍｌ）は、１０分未満であった。
ｂ．インスマン（登録商標）では、必要な最終ｐＨ値のｐＨ７．３で完全に溶解するために溶媒ｐＨ７．６が必要であった。溶解速度（最終体積１ｍｌ）は、１０分未満であった。
【００５３】
簡略化された溶解後のサンプルのＬＣ−ＵＶ／ＭＳ分析及びその後のＵＶクロマトグラムの評価から市場の処方物と同一のスペクトル（保持時間及びピーク面積に関するｍ−メタクレゾール及びそれぞれのインスリンのＵＶシグナル）を得た。
【００５４】
結論：一工程で、すなわち、酸性又はアルカリ性ｐＨで予め溶解することなくインスリンを溶解することは可能である。確認された重要な要因は、溶媒のｐＨを特定の目標濃度に適応させることであり、そして、また、完成製品のｐＨを溶解すべきインスリンの固有のｐＨ改変性（pH-modifying properties）の関数として適応させることである。これらの経験的に測定されたパラメーターを適応させると、適切な時間枠（＜１０分）内でインスリンの溶解手順を実施することが可能であった。
【００５５】
実施例２：固形物の熱安定性（熱ストレス試験、振動試験、非晶質固形物）
水性インスリン製剤の熱安定性は、多くの研究の主題となっている（参照：A. Krogh, A.M. Hemmingsen, Biochem. J. (1928) 22, 1231-1238 “The destructive action of heat on insulin solutions”）。
【００５６】
添加剤は、溶解されたインスリンの熱安定性にさまざまな影響を与えることが知られており、例は、亜鉛濃度又はｐＨである（N.R. Stephenson, R.G. Romans; Journal of Pharmacy and Pharmacology (1960), 12 372-376 “Thermal Stability of Insulin made from Zinc Insulin Crystals”）。
【００５７】
補助剤及び添加剤のすべてを含む、社内の、市場準備ができた（market-ready）液剤の熱安定性の研究においては、本発明者ら自身の研究でも同様に、生物学的に活性なインスリン物質の喪失の主な原因として沈殿及び分解産物の形成が確認された（B.V. Fisher, P.B. Porter; J. Pharm. Pharmacol. (1981), 33 203-206 “Stability of bovine Insulin”）。
【００５８】
これらの観察を基づいて、それぞれの固形インスリン（活性成分）についても使用された、即時使用可能な水性処方物に使用された商品名を用いて固形インスリンの熱安定性を試験した：
【００５９】
熱ストレス試験：
Ｉ）種々の固形インスリンを異なる温度（５０℃、６０℃及び８０℃）（明かりなし）で２週間保存した。
ａ．ランタス（登録商標）（結晶質）；ｂ．インスマン（登録商標）（結晶質）；ｃ．アピドラ（登録商標）（非晶質）
ＩＩ）種々の固形インスリンを６０℃で異なる時間（１４日、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月）保存した。
ａ．ランタス（登録商標）（結晶質）；ｂ．インスマン（登録商標）（結晶質）；ｃ．アピドラ（登録商標）（非晶質）
ＩＩＩ）Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）ヒトインスリンアミド
及びランタス（登録商標）のいずれも非晶質状態の固形物を６０℃で２週間保存した。
【００６０】
熱ストレス期が終了した後、固形物を溶解し、市場の処方物のものと同一濃度にした。
【００６１】
比較実施例として、同濃度のインスリン溶液を測定前に直接溶解した。
【００６２】
さらに、市場に出る準備ができた製剤／容器中ランタス（登録商標）、インスマン（登録商標）及びアピドラ（登録商標）（供給源：製品）に６０℃で１４日間ストレスをかけた。比較実施例として、同じ製品バッチからの容器を４℃で保存し、そしてストレスをかけたサンプルと共に分析した。
【００６３】
結論：１４日間の固体形態での保存におけるインスリンの熱安定性は、温度依存性であることが立証された。安定性の程度は、インスリンに左右された。固体形態での保存は、市場に出る準備ができた溶液としての保存よりもより熱安定であることが立証された。
【００６４】
（Ｉ）サンプルのＬＣ−ＵＶ／ＭＳ分析及びその後のＵＶクロマトグラムの評価から以下の結果を得た：
【００６５】
【表１】
2012532177.tif 000004
【００６６】
【表２】
2012532177.tif 000005
【００６７】
結論：１４日間の固体形態での保存におけるインスリンの熱安定性は、温度依存性であることが立証された。安定性の程度は、インスリンに左右された。固体形態での保存は、市場に出る準備ができた溶液としての保存よりもより熱安定であることが立証された。
【００６８】
（ＩＩ）サンプルのＬＣ−ＵＶ／ＭＳ分析及びその後のＵＶクロマトグラムの評価から以下の結果を得た：
【００６９】
【表３】
2012532177.tif 000006
【００７０】
結論：６０℃で固体形態での保存におけるインスリンの熱安定性は、時間依存性であることが立証された。安定性の程度は、インスリンに左右された。
【００７１】
（ＩＩＩ）サンプルのＬＣ−ＵＶ／ＭＳ分析及びその後のＵＶクロマトグラムの評価から以下の結果を得た：
【００７２】
【表４】
2012532177.tif 000007
【００７３】
結論：６０℃で固体形態での保存におけるインスリンの熱安定性は、時間依存性であることが立証された。安定性の程度は、インスリンに左右された。研究された長時間作用するインスリンは、いずれも非晶質状態で比較的熱安定性であることが同様に立証された。
振動試験：水性インスリン製剤は、振動に関して不安定であることが知られている（A. Oliva, J.B. Farina, M. Llabres; Int. J. Of Pharmaceutics (1996), 143 143-170 “Influence of temperature and shaking on stability of insulin preparations: degradation kinetics”）。
【００７４】
種々のインスリン処方物を室温（明かりなし）、１４００ｒｐｍで１００時間振動させた。
【００７５】
ａ）市場に出る準備ができた製剤／容器中のランタス（登録商標）、インスマン（登録商標）及びアピドラ（登録商標）（供給源：製品）
ランタス（ポリソルベート２０なしのカートリッジ、ポリソルベート２０なしのバイアル、ポリソルベート２０入りのバイアル）、インスマン（登録商標）（カートリッジ、バイアル）、アピドラ（登録商標）（カートリッジ、バイアル）
ｂ）固体形態のランタス（登録商標）、インスマン（登録商標）及びアピドラ（登録商標）（別々に振動させた：一工程で直接溶解するための溶媒；「固形インスリンの直接溶解」参照）。
【００７６】
振動期の終了後、固形物（サンプルｂ）を溶解し、市場処方物のものと同一濃度にした。
【００７７】
ｃ）比較サンプルとして、対応する市場処方物を、室温、明かりなしで１００時間保存した。
【００７８】
サンプルのＬＣ−ＵＶ／ＭＳ分析及びその後のＵＶクロマトグラムの評価から以下の結果を得た：（参照：サンプルｃ）：
【００７９】
【表５】
2012532177.tif 000008
【００８０】
結論：インスリン溶液における振動による機械的ストレスによりインスリンの沈殿が生じた。程度はインスリンに左右される：ここでは、インスマン（登録商標）が最も大きな不安定性を示した。機械的ストレスは、固形インスリンにおいてなんら有害な結果を示さなかった；同様に溶液を別々に振動したときでも固形物は、その後、１００％程度まで溶解することができた。
【００８１】
実施例３：可能な用途（インスリン製剤、二成分系の熱安定性及び振動安定性投与形態の工業用製造）
インスリン製剤の工業用製造：
一工程の溶解は、以下の利点を有する簡略化された方法である：工程がより少なく、実施すべき中間体分析（例えば、ｐＨ）がより少ない、すなわち、インスリン製剤の製造をより素早く行うことができる。さらに、製造があまり複雑でなく、被用者の訓練が簡略化される（あまり複雑でないＳＯＰ）。さらに、洗浄すべき容器がより少なく、さらに労働時間及び物質資源における節約が達成される。
【００８２】
二成分系の熱安定性及び振動安定性投与形態：
固形インスリンは、熱ストレス下では長期間にわたっても、溶解されたインスリンより安定であることが見出された。少ない範囲で分解事例はあるが、沈殿損失がなく、そして相当する熱ストレスについては、溶解手順を熱ストレス後に行ったときに、より生物学的に利用可能なインスリンが入手可能であった。強い振動により誘発された固形インスリンの沈殿及び分解は、観察されなかった。
【００８３】
従って、固体形態での投与は、一般により温度安定であり、そしてまた、振動に関してより強く、結果的により安全であると言うことができる。さらにまた、固体形態（粉末）のインスリンの投与では、患者による偶発的な凝固によりなんら合併症が起こることがなく；固形インスリンは、知られているように、凝固状態で保存されるというさらなる利点が得られる。
【００８４】
可能な用途：溶解されたインスリンの代わりのインスリン粉末は、二成分系で適切な溶媒と共に提供される（一般に水性系は、例えば、抗殺細菌剤、等張化剤、緩衝物質、及び／又は界面活性剤＝下の「溶媒」のような補助剤及び添加剤を含む）。２室系は、例えば、ＷＯ２００７／０３８７７３ Ａ１に記載されている。
【００８５】
これにより許容しうる温度範囲が広がる（より低い及びより高い温度の両方向で）。さらに、例えば強い振盪のような機械的ストレスに対する安定性が高まる。結果的に、より長い保存期間、保存及び輸送のコスト削減、そしてより安全な薬物使用が予想される。
【００８６】
一工程の簡略化された溶解では、患者によって使用される薬物について能力は確保される。
【００８７】
実施例４：アミド化インスリン誘導体の処方物
実施例４〜８は、式Ｉのインスリン類似体の生物学的、薬理学的、及び物理化学的性質の測定にのみ役立ち、最初にその処方物の供給（実施例４）、次いで対応する試験の実施（実施例５〜８）が含まれる。化合物を含む溶液は、以下のように調製した：本発明のインスリン類似体を８０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛として）入りの１ｍＭ塩酸中２４０±５Ｍの目標濃度で溶解した。
【００８８】
溶解媒体として用いた組成物は、以下の通りであった：
ａ）１ｍＭ塩酸
ｂ）１ｍＭ塩酸、５μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として加えた）
ｃ）１ｍＭ塩酸、１０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として加えた）
ｄ）１ｍＭ塩酸、１５μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として加えた）
ｅ）１ｍＭ塩酸、３０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として加えた）
ｆ）１ｍＭ塩酸、８０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として加えた）
ｇ）１ｍＭ塩酸、１２０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として加えた）
【００８９】
この目的のため、分子量及び目標濃度に基づいて必要な量より約３０％多い量の凍結乾燥物質を最初に計量した。その後、既存濃度を分析ＨＰＬＣによって測定し、次いで、８０μｇ／ｍｌ亜鉛入り５ｍＭ塩酸を用いて溶液を目標濃度の達成に必要な体積にした。必要に応じて、ｐＨを３．５±０．１に再調整した。ＨＰＬＣによる最終分析により２４０±５Ｍの目標濃度を確認した後、完成した溶液を、０．２μｍフィルターアタッチメントを有するシリンジを用いて滅菌バイアル中に移し、これを隔壁及びクリンプキャップで閉じた。本発明のインスリン誘導体の短期の単一試験では、例えば等張化剤、保存剤又は緩衝物質の添加に関して処方物の最適化を行わなかった。
【００９０】
実施例５：ラットにおける新たなインスリン類似体の血糖低下作用の評価
選ばれた新たなインスリン類似体の血糖低下効果を健康な雄血糖正常ウィスターラットにおいて試験した。雄ラットに用量９ｎｍｏｌ／ｋｇのインスリン類似体の皮下注射を行った。インスリン類似体の注射直前、そして注射後８時間までの間に一定間隔で血液サンプルを動物から採取し、そしてそれらの血糖含量を測定した。実験は、本発明のインスリン類似体が作用開始を有意に遅らせ、そして作用時間をより長く均一にすることを明らかに示している（図１参照）。
【００９１】
実施例６：イヌにおける新たなインスリン類似体の血糖低下作用の評価
選ばれた新たなインスリン類似体の血糖低下効果を健康な雄血糖正常ビーグルにおいて試験した。雄の動物に用量６ｎｍｏｌ／ｋｇのインスリン類似体の皮下注射を行った。インスリン類似体の注射直前、及び注射後４８時間までの間に一定間隔で、血液サンプルを動物から採取し、そしてそれらの血糖含量を測定した。実験は、使用した本発明のインスリン類似体が作用開始を有意に遅らせ、そして作用時間をより長く均一にすることを明らかに示している（図２参照）。
【００９２】
実施例７：２倍増加した用量でのイヌにおける血糖低下作用の評価
選ばれた新たなインスリン類似体の血糖低下効果を健康な雄血糖正常ビーグルにおいて試験した。雄の動物に用量６ｎｍｏｌ／ｋｇ及び１２ｎｍｏｌ／ｋｇのインスリン類似体の皮下注射を行った。インスリン類似体の注射直前、及び注射後４８時間までの間に一定間隔で、血液サンプルを動物から採取し、そしてそれらの血糖含量を測定した。実験は、使用した本発明のインスリン類似体が、用量依存的効果を有するが、用量を２倍増やしたにもかかわらず、効果プロファイルは平らであり、すなわち、顕著に低い点（最下点）が観察されなかったことを明らかに示している（図３参照）。このことから、本発明のインスリンは、知られているインスリンの遅延と比較して、低血糖事象が有意に少なくなることが推測されうる。
【００９３】
実施例８：処方物中の異なる亜鉛濃度でのイヌにおける血糖低下効果の評価
実施例３５に記載されたように実験を実施した。図４は結果を示す。それによれば、本発明のインスリン類似体の時間／活性曲線は、同濃度のインスリンを有する処方物において亜鉛イオンの量を通して影響を及ぼすことができ、このようなやり方では、０又は低い亜鉛含量では迅速な作用開始が観察され、そして作用が２４時間にわたって持続するのに対して、より高い亜鉛量では、平らな作用開始が観察され、そしてインスリン効果が２４時間よりかなり長く持続する。
【００９４】
実施例９：アミド化インスリン誘導体の処方物
実施例９〜１１は、式ＩＩのインスリン類似体の生物学的、薬理学的及び物理化学的性質の測定にのみ役立ち、最初にその処方物の供給（実施例９）、次いで対応する試験の実施（実施例１０及び１１）が含まれる。本発明のインスリン類似体を、８０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛として）入りの１ｍＭ塩酸中２４０±５Ｍの目標濃度で溶解した。この目的のため、分子量及び目標濃度に基づいて必要な量より約３０％多い量の凍結乾燥物質を最初に計量した。その後、既存濃度を分析ＨＰＬＣによって測定し、次いで、８０μｇ／ｍｌ亜鉛入りの５ｍＭ塩酸を用いて溶液を目標濃度の達成に必要な体積にした。必要に応じて、ｐＨを３．５±０．１に再調整した。ＨＰＬＣによる最終分析により２４０±５Ｍの目標濃度を確認した後、完成した溶液を、０．２μｍフィルターアタッチメントを有するシリンジを用いて滅菌バイアル中に移し、これを隔壁及びクリンプキャップで閉じた。本発明のインスリン誘導体の短期の単一試験では、例えば等張化剤、保存剤又は緩衝物質の添加に関して処方物の最適化を行わなかった。
【００９５】
実施例１０：ラットにおける新たなインスリン類似体の血糖低下作用の評価
選ばれた新たなインスリン類似体の血糖低下効果を、健康な雄血糖正常ウィスターラットにおいて試験した。雄ラットに用量９ｎｍｏｌ／ｋｇのインスリン類似体の皮下注射を行った。インスリン類似体の注射直前、そして注射後８時間までの間に一定間隔で血液サンプルを動物から採取し、そしてそれらの血糖含量を測定した。実験は、本発明のインスリン類似体が作用開始を有意に遅らせ、そして作用時間をより長く均一にすることを明らかに示している（図５参照）
【００９６】
実施例１１：イヌにおける新たなインスリン類似体の血糖低下作用の評価
選ばれた新たなインスリン類似体の血糖低下効果を、健康な雄血糖正常ビーグルにおいて試験した。雄の動物に用量６ｎｍｏｌ／ｋｇのインスリン類似体の皮下注射を行った。インスリン類似体の注射直前、及び注射後４８時間までの間に一定間隔で、血液サンプルを動物から採取し、そしてそれらの血糖含量を測定した。実験は、本発明のインスリン類似体が平らな作用開始を有意に遅らせ、そして作用時間をより長く均一にすることを明らかに示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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