(57)【要約】  セイタカナミキソウから単離された単離化合物および単離化合物の組合せは、癌細胞における反応性酸素種の生成、ＤＮＡ損傷の誘導およびアポトーシスの誘導に有効である。化合物および組合せは、上皮癌などの充実性癌の処置のためにヒトなどの哺乳動物に対して投与するための医薬組成物として調製され得る。かかる上皮癌としては、乳癌および卵巣癌が挙げられる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を少なくとも約２０ｇ含む投薬単位。
【請求項２】
さらに、少なくとも１種類の賦形剤を含む、請求項１に記載の投薬単位。
【請求項３】
少なくとも１種類の矯味剤、少なくとも１種類の甘味料、または両方を含む、請求項２に記載の投薬単位。
【請求項４】
経口投与に適した形態の、請求項１〜３のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項５】
さらに水を含む、請求項４に記載の投薬単位。
【請求項６】
癌患者に対する投与のための請求項１〜５のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項７】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０ｇ〜約２００ｇ含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項８】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０〜約１００ｇ含む、請求項７に記載の投薬単位。
【請求項９】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０〜約６０ｇ含む、請求項８に記載の投薬単位。
【請求項１０】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０〜約５０ｇ含む、請求項９に記載の投薬単位。
【請求項１１】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０〜約４０ｇ含む、請求項１０に記載の投薬単位。
【請求項１２】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２５ｇ含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項１３】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２７ｇ含む、請求項１２に記載の投薬単位。
【請求項１４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．３５ｇ含む、請求項１２に記載の投薬単位。
【請求項１５】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約４ｇ含む、請求項１２に記載の投薬単位。
【請求項１６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約２ｇ含む、請求項１２に記載の投薬単位。
【請求項１７】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約１．１ｇ含む、請求項１２に記載の投薬単位。
【請求項１８】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約１ｇ含む、請求項１２に記載の投薬単位。
【請求項１９】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約０．８ｇ含む、請求項１２に記載の投薬単位。
【請求項２０】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を少なくとも約２０ｇ／日で癌患者に投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項２１】
前記癌が乳癌および１種類以上の婦人科癌から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記癌が乳癌である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記乳癌が、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０ｇ／日〜約２００ｇ／日で患者に投与することを含む、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０ｇ／日〜約１００ｇ／日で患者に投与することを含む、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０ｇ／日〜約６０ｇ／日で患者に投与することを含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０ｇ／日〜約５０ｇ／日で患者に投与することを含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０ｇ／日〜約４０ｇ／日で患者に投与することを含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２５ｇ含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２７ｇ含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．３５ｇ含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約４ｇ含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約２ｇ含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約１．１ｇ含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約１ｇ含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
セイタカナミキソウから抽出された可溶分が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約０．８ｇ含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
水以外の少なくとも１種類の賦形剤と、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの１つ以上とを含む医薬組成物。
【請求項３８】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの各々を含み、水以外の少なくとも１種類の賦形剤が矯味剤および甘味料から選択される、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
高分子量化合物を実質的に含まない、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを含み、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含む、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリンを含む、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリンを含む、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、可溶分のうち約１％〜約９９％が活性可溶分であり、活性可溶分のうち約１．７％〜約３．２％がルテオリンであり、約２％〜約３．４％がアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％がスクテラレインであり、約４９％から活性可溶分の残部までがスクテラリンである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、可溶分のうち約１％〜約３％が活性可溶分であり、活性可溶分のうち約１．７％〜約３．２％がルテオリンであり、約２％〜約３．４％がアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％がスクテラレインであり、約４９％から活性可溶分の残部までがスクテラリンである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、可溶分のうち約１．５％〜約２．１％が活性可溶分であり、活性可溶分のうち約１．７％〜約３．２％がルテオリンであり、約２％〜約３．４％がアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％がスクテラレインであり、約４９％から活性可溶分の残部までがスクテラリンである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、可溶分のうち約１％〜約９９％が活性可溶分であり、活性可溶分のうち約１．９％〜約３％がルテオリンであり、約２．２％〜約３．２％がアピゲニンであり、約９．２％〜約１４．５％がスクテラレインであり、約６０％から活性可溶分の残部までがスクテラリンである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、可溶分のうち約１％〜約３％が活性可溶分であり、活性可溶分のうち約１．９％〜約３％がルテオリンであり、約２．２％〜約３．２％がアピゲニンであり、約９．２％〜約１４．５％がスクテラレインであり、約６０％から活性可溶分の残部までがスクテラリンである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、可溶分のうち約１．５％〜約２．１％が活性可溶分であり、活性可溶分のうち約１．９％〜約３％がルテオリンであり、約２．２％〜約３．２％がアピゲニンであり、約９．２％〜約１４．５％がスクテラレインであり、約６０％から活性可溶分の残部までがスクテラリンである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、可溶分のうち約１％〜約５０％が活性可溶分であり、活性可溶分のうち約２．２％〜約２．７％がルテオリンであり、約２．４％〜約２．９％がアピゲニンであり、約１０．５％〜約１３．２％がスクテラレインであり、約７２％から活性可溶分の残部までがスクテラリンである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、可溶分のうち約１％〜約３％が活性可溶分であり、活性可溶分のうち約２．２％〜約２．７％がルテオリンであり、約２．４％〜約２．９％がアピゲニンであり、約１０．５％〜約１３．２％がスクテラレインであり、約７２％から活性可溶分の残部までがスクテラリンである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、可溶分のうち約１．５％〜約２．１％が活性可溶分であり、活性可溶分のうち約２．２％〜約２．７％がルテオリンであり、約２．４％〜約２．９％がアピゲニンであり、約１０．５％〜約１３．２％がスクテラレインであり、約７２％から活性可溶分の残部までがスクテラリンである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
有効量の請求項３７〜５２のいずれか一項に記載の組成物を癌患者に投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項５４】
前記癌が乳癌および１種類以上の婦人科癌から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記癌が乳癌である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
乳癌が、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
組成物の有効量が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも０．２７ｇ含む、請求項５３〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
組成物の有効量が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．２７ｇ〜約４ｇ含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
組成物の有効量が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約４ｇ含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
組成物の有効量が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約２ｇ含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６１】
組成物の有効量が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約１．１ｇ含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
組成物の有効量が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約１ｇ含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６３】
組成物の有効量が、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約０．８ｇ含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含む、請求項５７〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリンを含む、請求項５７〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリンを含む、請求項５７〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む、請求項５７〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約６．７ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約５０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約３０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約２５ｍｇのルテオリン、または約８．９ｍｇ〜約２０ｍｇのルテオリンを含む、請求項５７〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約７．３ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約５０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約３０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約２５ｍｇのアピゲニン、または約９．７ｍｇ〜約２０ｍｇのアピゲニンを含む、請求項５７〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約３０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約２２０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１３０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１１０ｍｇのスクテラレイン、または約４０ｍｇ〜約９０ｍｇのスクテラレインを含む、請求項５７〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約０．２５ｇ〜約３ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約３ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約１．５ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約０．９ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約０．８ｇのスクテラリン、または約０．３ｇ〜約０．６５ｇのスクテラリンを含む、請求項５７〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２５ｇ含む投薬単位。
【請求項７３】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．３５ｇ含む、請求項７２に記載の投薬単位。
【請求項７４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約４ｇ含む、請求項７３に記載の投薬単位。
【請求項７５】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約２ｇ含む、請求項７４に記載の投薬単位。
【請求項７６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約１．１ｇ含む、請求項７５に記載の投薬単位。
【請求項７７】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約１ｇ含む、請求項７６に記載の投薬単位。
【請求項７８】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約０．８ｇ含む、請求項７７に記載の投薬単位。
【請求項７９】
さらに、水以外の少なくとも１種類の賦形剤を含む、請求項７２〜７８のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項８０】
水以外の少なくとも１種類の賦形剤が矯味剤、甘味料または両方である、請求項７９に記載の投薬単位。
【請求項８１】
セイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物を実質的に含まない、請求項７２〜８０のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項８２】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含む、請求項７２〜８１のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項８３】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリンを含む、請求項７２〜８１のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項８４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリンを含む、請求項７２〜８１のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項８５】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む、請求項７２〜８１のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項８６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約６．７ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約５０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約３０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約２５ｍｇのルテオリン、または約８．９ｍｇ〜約２０ｍｇのルテオリンを含む、請求項７２〜８１のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項８７】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約７．３ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約５０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約３０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約２５ｍｇのアピゲニン、または約９．７ｍｇ〜約２０ｍｇのアピゲニンを含む、請求項７２〜８１のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項８８】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約３０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約２２０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１３０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１１０ｍｇのスクテラレイン、または約４０ｍｇ〜約９０ｍｇのスクテラレインを含む、請求項７２〜８１のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項８９】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約０．２５ｇ〜約３ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約３ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約１．５ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約０．９ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約０．８ｇのスクテラリン、または約０．３ｇ〜約０．６５ｇのスクテラリンを含む、請求項７２〜８１のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項９０】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２５ｇ／日で、癌患者に投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項９１】
前記癌が乳癌および１種類以上の婦人科癌から選択される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記癌が乳癌である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記乳癌が、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．３５ｇ／日で患者に投与することを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約４ｇ／日で患者に投与することを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約２ｇ／日で患者に投与することを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約１．１ｇ／日で患者に投与することを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約１ｇ／日で患者に投与することを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約０．８ｇで患者に投与することを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約６．７ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約８．９ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリンを含む  、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約８．９ｍｇ〜約５０ｍｇのルテオリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約８．９ｍｇ〜約３０ｍｇのルテオリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約８．９ｍｇ〜約２５ｍｇのルテオリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約８．９ｍｇ〜約２０ｍｇのルテオリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約７．３ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約９．７ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニンを含む  、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約９．７ｍｇ〜約５０ｍｇのアピゲニンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約９．７ｍｇ〜約３０ｍｇのアピゲニンを含む  、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約９．７ｍｇ〜約２５ｍｇのアピゲニンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約９．７ｍｇ〜約２０ｍｇのアピゲニンを含む  、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約３０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレインを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約４０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレインを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約４０ｍｇ〜約２２０ｍｇのスクテラレインを含む  、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約４０ｍｇ〜約１３０ｍｇのスクテラレインを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約４０ｍｇ〜約１１０ｍｇのスクテラレインを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約４０ｍｇ〜約９０ｍｇのスクテラレインを含む  、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約０．２５ｇ〜約３ｇのスクテラリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約０．３ｇ〜約３ｇのスクテラリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約０．３ｇ〜約１．５ｇのスクテラリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約０．３ｇ〜約０．９ｇのスクテラリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約０．３ｇ〜約０．８ｇのスクテラリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２７】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約０．３ｇ〜約０．６５ｇのスクテラリンを含む、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、並びに所定の分画より大きい分子量を有する高分子量化合物を約５０部未満含む医薬組成物であって、所定の分画が１，０００グラム／モル〜約２０，０００グラム／モルである医薬組成物。
【請求項１２９】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、並びに約４０部未満の高分子量化合物を含む、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３０】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、並びに約３０部未満の高分子量化合物を含む、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３１】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、および約２０部未満の高分子量化合物を含む、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３２】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、および約１０部未満の高分子量化合物を含む、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３３】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、および約５部未満の高分子量化合物を含む、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、および約２部未満の高分子量化合物を含む、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３５】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、および約１部未満の高分子量化合物を含む、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、および約０．５部未満の高分子量化合物を含む、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３７】
高分子量化合物に対する前記分画が１０，０００グラム／モルである、請求項１２８〜１３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３８】
高分子量化合物に対する前記分画が５，０００グラム／モルである、請求項１２８〜１３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３９】
高分子量化合物に対する前記分画が２，０００グラム／モルである、請求項１２８〜１３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４０】
高分子量化合物に対する前記分画が１，０００グラム／モルである、請求項１２８〜１３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４１】
さらに、水以外の少なくとも１種類の賦形剤を含む、請求項１２８〜１４０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４２】
水以外の少なくとも１種類の賦形剤が矯味剤、甘味料または両方である、請求項１４１に記載の医薬組成物。
【請求項１４３】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約１８ｍｇ含む、請求項１２８〜１４２のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む投薬単位。
【請求項１４４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．２５ｇ〜約４ｇ含む、請求項１４３に記載の投薬単位。
【請求項１４５】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．２７ｇ〜約４ｇ含む、請求項１４３に記載の投薬単位。
【請求項１４６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５〜約４ｇ含む、請求項１４３に記載の投薬単位。
【請求項１４７】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５〜約２ｇ含む、請求項１４３に記載の投薬単位。
【請求項１４８】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５〜約１．１ｇ含む、請求項１４３に記載の投薬単位。
【請求項１４９】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５〜約１ｇ含む、請求項１４３に記載の投薬単位。
【請求項１５０】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５〜約０．８ｇ含む、請求項１４３に記載の投薬単位。
【請求項１５１】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．７〜約２ｇ含む、請求項１４３に記載の投薬単位。
【請求項１５２】
さらに、水以外の少なくとも１種類の賦形剤を含む、請求項１４２〜１５１のいずれか一項に記載の投薬単位。
【請求項１５３】
水以外の少なくとも１種類の賦形剤が矯味剤、甘味料または両方から選択される、請求項１５２に記載の投薬単位。
【請求項１５４】
有効量の請求項１２８〜１４２のいずれか一項に記載の医薬組成物を癌患者に投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項１５５】
癌が、１種類以上の乳癌および／または婦人科癌である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
癌が乳癌である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
乳癌が、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌である、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５８】
有効量の請求項１４３〜１５３のいずれか一項に記載の投薬単位を癌患者に投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項１５９】
癌が、１種類以上の乳癌および／または婦人科癌である、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１６０】
癌が乳癌である、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１６１】
乳癌が、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌の１種類以上である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６２】
（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成する工程、
（ｂ）セイタカナミキソウの着生部分を混合物から分離し、粗製抽出物を得る工程、
（ｃ）粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成する工程、
（ｄ）任意選択で、精製エキス由来の水分の一部、実質的に全部もしくは全部を蒸発させる工程、または精製エキスにさらなる水を添加する工程、および
（ｅ）精製エキスを、水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤と合わせ、医薬組成物を形成する工程
を含む、医薬組成物の作製方法。
【請求項１６３】
精製エキスが、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンを含む、請求項１６２に記載の方法。
【請求項１６４】
水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤が矯味剤および甘味料から選択される、請求項１６２に記載の方法。
【請求項１６５】
（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成する工程、
（ｂ）セイタカナミキソウの着生部分を混合物から分離し、粗製抽出物を得る工程、
（ｃ）粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成する工程、
（ｄ）任意選択で、精製エキス由来の水分の一部、実質的に全部もしくは全部を蒸発させる工程、または精製エキスにさらなる水を添加する工程、および
（ｅ）精製エキスを薬学的に許容され得る賦形剤と合わせ、医薬組成物を形成する工程
を含む、医薬組成物の作製方法。
【請求項１６６】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが、約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む、請求項１６４に記載の方法。
【請求項１６７】
（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成する工程、
（ｂ）セイタカナミキソウの着生部分を混合物から分離し、粗製抽出物を得る工程、および
（ｃ）粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、セイタカナミキソウの精製エキスを形成する工程
を含む、セイタカナミキソウの精製エキスの作製方法。
【請求項１６８】
水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤を、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの１つ以上と合わせ、医薬組成物を形成することを含む、医薬組成物の作製方法。
【請求項１６９】
水以外の少なくとも１種類の医薬用賦形剤が矯味剤および甘味料から選択される、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７０】
（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成する工程、
（ｂ）セイタカナミキソウの着生部分を混合物から分離し、粗製抽出物を得る工程、および
（ｃ）粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成する工程、および
（ｄ）精製エキスを、水以外の少なくとも１種類の賦形剤と合わせ、医薬投薬単位を形成する工程
を含む、医薬投薬単位の作製方法。
【請求項１７１】
水以外の少なくとも１種類の賦形剤が矯味剤および甘味料から選択される、請求項１７０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
【背景技術】
【０００２】
関連出願の参照
本出願は、２００８年９月３日に出願された米国特許仮出願第６１／０９４，０１２号、２００９年３月２４日に出願された同第６１／１６２，９８８号、および２００９年４月２４日に出願された同第６１／１７２，６３９号の利益を主張する。これらは、各々、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０００３】
乳癌の早期検出および補助的療法の進歩により、一般的には、患者の生存に対して良好な影響がもたらされているが、進行型の転移性乳癌を発症している患者は、一般的に、あまり好ましくない予後に向かう可能性が高い。一般的に使用されているホルモン療法剤および化学療法剤では、一過性の腫瘍退縮がもたらされ得、また、癌に関連する症状も軽減され得る。しかしながら、これらの処置は、多くの場合、毒性および耐え難い副作用を伴い、最終的に、進行段階の乳癌およびその症状の制御が無効となる。乳癌の生存率の改善は、より新規な標的化型の生物学的薬剤であっても穏やかである。さらに、ほとんどの転移性の癌では、利用可能な従来の処置剤に対して、最終的に抵抗性が発現されるか、または患者に過度の副作用が起こる。
【０００４】
乳癌処置に使用されている全化学療法剤の６０％より多くが天然物質に由来していることに注目することは興味深い（Ｎｅｗｍａｎ  ２００３）。かなり最近の例は、太平洋イチイ（Ｐａｃｉｆｉｃ  ｙｅｗ  ｔｒｅｅ、Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）からのタキサン類の開発である。世界中で、世界人口のほぼ８０％がなお、一次治療剤源として野生植物系医薬に依存していると推定される。西洋では、野生植物系医薬は、癌と診断された患者の間では、相補医療および代替医療の一般的形態と考えられている。しかしながら、処置を野生植物系医薬のみに依存した女性における治療および臨床的有効性の事例報告にもかかわらず、乳癌の処置のための野生植物系薬剤の安全性と有効性をしっかり評価するための臨床試験はほとんど行なわれていない。以前に、半枝蓮（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ）の水性抽出物によって、インビトロで乳癌細胞株の増殖阻害がもたらされ得ることが示された（“Ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｈｅｒｂｓ  ｏｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，”Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２２（６Ｃ）：３８４３−５２（２００２））。半枝蓮の水性濃縮抽出物であるＢＺＬ１０１が、抗増殖活性について５種類の乳癌細胞株（ＳＫ−ＢＲ−３、ＭＣＦ７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＢＴ−４７４およびＭＣＮｅｕＡ）において評価された。これらの細胞株は、ある範囲のエストロゲンおよびＨＥＲ２受容体を発現している乳癌の重要な予後表現型を表す。ＢＺＬ１０１（１：１０希釈物（１５μｇ／ｍｌ）で試験）は、この５種類の細胞株のうち４種類において５０％より高い増殖阻害を示した（Ｃａｍｐｂｅｌｌ、２００２）。ＢＺＬ１０１は、肺、前立腺および膵癌細胞株の一群において５０％より高い増殖阻害を示した。同じ用量のＢＺＬ１０１で、正常ヒト乳房細胞（ＨｕＭＥＣ）に対しては２５％より高い増殖阻害は引き起こされず、癌細胞に対する選択性が示された（表１）。さらにそうであることは、ＢＺＬ１０１が有する正常ヒトリンパ球に対するマイトジェン効果は軽度であった。細胞周期の解析では、ＢＺＬ１０１により、Ｓ期バーストおよびＧ１停止が引き起こされた。また、ＢＺＬ１０１により、ミトコンドリア膜電位が減衰され、カスパーゼ非依存性高分子グレード（ＨＭＧ）アポトーシスが引き起こされた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｎｅｗｍａｎ  ２００３
【非特許文献２】“Ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｈｅｒｂｓ  ｏｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，”Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２２（６Ｃ）：３８４３−５２（２００２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
転移性の癌を有する患者の処置のための治療剤の必要性が存在している。また、転移性の癌を有する患者に対する毒性が低減された、より明確に最小限である治療剤の必要性が存在している。特に、比較的毒性が低い、転移性充実性腫瘍（上皮腫瘍など）、より具体的には乳癌および卵巣癌の処置のための新規な治療剤の必要性が存在している。
【０００７】
これらおよび他の必要性は、本発明の実施形態によって満たされる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、セイタカナミキソウ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ  Ｄ．Ｄｏｎ）エキスが、既報のものよりずっと高い用量で耐容性が良好であることを見い出した。セイタカナミキソウエキスは、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を少なくとも約２０ｇの用量で耐容性が良好である。さらに、本発明者は、セイタカナミキソウエキスが、患者に対する投与に適した投薬単位にて簡便に提供され得ることを見い出した。したがって、一部の実施形態において、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を少なくとも約２０ｇ含む投薬単位を提供する。一部の実施形態において、該単位用量形態は、さらに、少なくとも１種類の賦形剤、特に、水以外の少なくとも１種類の賦形剤、特に、少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方を含む。特定の実施形態において、投薬単位は、経口投与に適した形態、例えば、水性（水系）組成物または水での再構成に適した乾燥粉末である。本発明者は、該投薬単位が、癌患者、特に、乳癌または婦人科癌（子宮癌など）に苦しんでいる癌患者に対する投与に適していることを見い出した。
【０００９】
本発明者は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分少なくとも約２０ｇ／日の用量は、耐容性が良好であり、癌、特に乳癌の処置に有効であると判定した。したがって、本発明は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を少なくとも約２０ｇ／日で癌患者に投与することを含む、癌の処置方法を提供する。一部の実施形態において、癌は、乳癌および１種類以上の婦人科癌から選択される。一部の実施形態において、方法は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０ｇ／日〜約２００ｇ／日で患者に投与することを含む。
【００１０】
また、本発明者は、矯味剤などの賦形剤を、高用量のセイタカナミキソウエキス含有医薬組成物に添加すると、該エキスの苦味が減弱されると判定した。本発明者は、高用量のセイタカナミキソウ（例えば、少なくとも約２０ｇの可溶分／用量または／日）は耐容性が良好であるが、比較的口当たりがよくないことを見い出したため、本発明者は、癌の処置などのためのセイタカナミキソウエキスを高用量で摂取するための口当たりのよい組成物の作製には、矯味剤または他の薬剤の添加が望ましいことを見い出した。したがって、本明細書に記載の実施形態は、水以外の少なくとも１種類の賦形剤（少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方など）と、本発明者がセイタカナミキソウエキスの抗癌活性に必要であると特定した抗癌活性分であるルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうち１つ以上を含む医薬組成物（例えば、癌、特に、乳癌または婦人科癌の処置のための）を提供する。また、本発明者は、高分子量化合物、例えば、高分子量（例えば、１，０００〜１０，０００グラム／モルより大きい分子量）を有する化合物は、なんら実質的な活性を付与することなく該組成物の嵩を増し、胃の不調、ガス、鼓脹および／または下痢を引き起こす傾向にあることを見い出した。したがって、一部の実施形態において、医薬組成物は、高分子量化合物を枯渇させたものであり、一部の実施形態では、高分子量化合物を実質的に含まない。一部の実施形態において、該組成物は、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリン（「部」はすべて、重量基準で測定）を含むルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを含む。一部の実施形態において、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む。一部の実施形態において、該組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、該可溶分のうち約１％〜約９９％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約１．７％〜約３．２％がルテオリンであり、約２％〜約３．４％がアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％がスクテラレインであり、活性可溶分の約４９％から残部までがスクテラリンである。一部の実施形態において、該組成物は、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌の１種類以上から選択される乳癌を処置するために使用される。
【００１１】
本明細書に記載の一部の実施形態は、水以外の少なくとも１種類の賦形剤（少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方など）と、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうち１つ以上を含む組成物の有効量を患者に投与することを含む、癌、特に、１種類以上の乳癌および／または婦人科癌の処置方法を提供する。一部の実施形態において、該組成物は、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌の１種類以上から選択される乳癌を処置するために使用される。一部の実施形態において、該組成物の有効量は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも０．２５ｇ含む。一部の実施形態では、該組成物の有効量は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも０．２７ｇ含む。一部の実施形態では、該組成物は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．３５ｇ含む。一部の実施形態において、該組成物の有効量は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜２ｇ、約０．３５ｇ〜１．１ｇ、約０．３５〜１ｇ、約０．３５ｇ〜約０．８ｇ含む。
【００１２】
本発明者は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが癌、特に乳癌の処置剤として有効であることを見い出した。したがって、一部の実施形態では、本発明は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを含む投薬単位を提供する。一部の実施形態において、投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２５ｇ、少なくとも約０．２７ｇ、または少なくとも約０．３５ｇ含む。一部の実施形態において、投薬単位は、さらに、矯味剤、甘味料または両方などの水以外の少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態において、投薬単位は、セイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物を実質的に含まない。一部の実施形態において、該組成物は、乳癌および／または１種類以上の婦人科癌などの癌の処置方法において使用される。一部の実施形態において、癌は、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌などの乳癌である。
【００１３】
さらに、本発明者は、セイタカナミキソウの着生部分を出発材料として用いた医薬組成物の作製方法を見い出した。かかる方法は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンを含む組成物の作製に特に有用である。したがって、一部の実施形態において、本発明者は、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成すること、（ｄ）任意選択で、該精製エキス由来の水分の一部、実質的に全部もしくは全部を蒸発させること、または該精製エキスにさらなる水を添加すること、および（ｅ）該精製エキスを、水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤と合わせ、医薬組成物を形成することを含む、医薬組成物の作製方法を記載する。一部の実施形態において、該精製エキスは、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンを含む。一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００１４】
本発明者は、セイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物の少なくとも一部を除去することにより、該医薬組成物の臨床的特性が改善されることを見い出した。セイタカナミキソウから抽出された可溶分量の多くは不活性であるため、所定の分画より上の分子量を有する分子の除去によって可溶分量を低減させることにより、セイタカナミキソウエキス由来の医薬組成物の嵩が大きく低減される。また、セイタカナミキソウから水中に抽出された可溶分の大部分は可溶性繊維であり、これは腸に吸収されず、胃腸の不快感、鼓脹、ガスおよび下痢を促す傾向にある。したがって、該組成物中のルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの混合物を維持したまま、セイタカナミキソウから抽出された可溶分の負荷量を低減させることにより、可溶性繊維の少なくとも一部を除去することによって、改善された抗癌薬がもたらされる。したがって、一部の実施形態において、本発明は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、および所定の分画より大きい分子量を有する高分子量化合物を約５０部未満含む医薬組成物であって、該所定の分画が１，０００グラム／モル〜約２０，０００グラム／モルである医薬組成物を提供する。
【００１５】
また、本発明者は、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成すること、（ｄ）任意選択で、該精製エキス由来の水分の一部、実質的に全部もしくは全部を蒸発させること、または該精製エキスにさらなる水を添加すること、および（ｅ）該精製エキスを薬学的に許容され得る賦形剤と合わせ、医薬組成物を形成することを含む、医薬組成物の作製方法を見い出した。１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン。
【００１６】
また、一部の実施形態は、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、および（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、セイタカナミキソウの精製エキスを形成することを含む、セイタカナミキソウの精製エキスの作製方法を提供する。
【００１７】
一部の実施形態は、さらに、水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤を、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの１つ以上と合わせ、医薬組成物を形成することを含む、医薬組成物の作製方法を提供する。一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の医薬用賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００１８】
一部の実施形態は、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、および（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成すること、および（ｄ）該精製エキスを、水以外の少なくとも１種類の賦形剤と合わせ、医薬投薬単位を形成することを含む、医薬投薬単位の作製方法を提供する。一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の賦形剤は、矯味剤および甘味料から選択される。
【００１９】
本発明の他の用途および利点は、図面および特許請求の範囲を含む本明細書における説明を考慮すると、当業者に自明となろう。
参照による組み込み
本明細書において挙げた刊行物および特許出願はすべて、参照により、個々の各刊行物および特許出願が、参照により組み込まれて、あたかも具体的に個々に示されているのと同程度に本明細書に組み込まれる。
【００２０】
本発明の新規な特徴は、特に、添付の特許請求の範囲に示したものである。本発明の原理を用いた実例としての実施形態を示した以下の詳細な説明、および添付の図面を参照することにより、本発明の特徴および利点のより良好な理解が得られよう。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】ＤＣＦＤＡ蛍光によって測定したときの、反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成に対するセイタカナミキソウから抽出した種々の活性化合物の効果を示す。
【図２】ジヒドロエチジウム（ＨＥ）蛍光によって測定したときの、反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成に対するセイタカナミキソウから抽出した種々の活性化合物の効果を示す。
【図３】ＭｉｔｏＳＯＸ蛍光によって測定したミトコンドリアでの反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成に対するセイタカナミキソウから抽出した種々の活性化合物の効果を示す。
【図４】処理細胞におけるコメットの生成に対するセイタカナミキソウから抽出した種々の活性化合物の効果を示す。
【図５】処理細胞におけるＡＴＰ生成に対するセイタカナミキソウから抽出した種々の活性化合物の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、半枝蓮エキスから単離された活性薬剤を含む医薬組成物および単位投薬形態、ならびに癌の処置のための該エキスの使用方法に関する。具体的な実施形態において、該活性化合物を単離させるハーブは、シソ科のセイタカナミキソウ種から選択される。
【００２３】
また、本発明は、セイタカナミキソウエキスを患者に、これまで特性評価されていない投薬量で投与する、セイタカナミキソウエキスの使用方法に関する。
【００２４】
さらに、本発明は、セイタカナミキソウエキス、活性薬剤およびセイタカナミキソウエキス由来、特に、セイタカナミキソウの水抽出物由来の活性薬剤の組合せの投与に関する。
【００２５】
本発明者は、セイタカナミキソウエキスが、既報のものよりずっと高い用量で耐容性が良好であることを見い出し、例えば、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は、少なくとも約２０ｇ／日が患者に、なんら用量制限毒性を誘発することなく投与され得る。本発明者は乳癌患者に、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を２０ｇ／日、３０ｇ／日および４０ｇ／日で投与したが、最大耐用量に達しなかった。したがって、本発明者は、少なくとも約２０ｇ／日の用量、特に、約２０ｇ／日〜約２００ｇ／日が本発明の範囲に含まれると特定した。さらに、本発明者は、セイタカナミキソウエキスは、患者に対する投与に適した投薬単位にて簡便に提供され得ることを見い出した。したがって、一部の実施形態において、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を少なくとも約２０ｇ含む投薬単位を提供する。一部の実施形態において、単位用量形態は、さらに、少なくとも１種類の賦形剤、特に、水以外の少なくとも１種類の賦形剤、特に、少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方を含む。特定の実施形態において、投薬単位は、経口投与に適した形態、例えば、水性（水系）組成物または水での再構成に適した乾燥粉末である。本発明者は、該投薬単位が、癌患者、特に、乳癌または婦人科癌（子宮癌など）に苦しんでいる癌患者に対する投与に適していることを見い出した。特定の実施形態において、投薬単位は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０ｇ〜約２００ｇ含む。一部の実施形態において、投薬単位は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０ｇ〜１００ｇ、約２０ｇ〜６０ｇ、約２０ｇ〜５０ｇ、約２０ｇ〜４０ｇ、約２０ｇ、約３０ｇ、約４０ｇ、約５０ｇ、約６０ｇ、または約４０ｇ〜約１００ｇ含む。また、本発明者は、セイタカナミキソウの抗癌活性化合物（すなわち、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリン）、ならびにセイタカナミキソウから抽出された可溶分中のそれらの濃度を特定し、本発明はまた、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが少なくとも約０．２５ｇである投薬単位を提供する。一部の実施形態は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが少なくとも約０．２７ｇ、少なくとも約０．３５ｇ、約０．３５ｇ〜４ｇ、約０．３５ｇ〜２ｇ、約０．３５ｇ〜１．１ｇ、約０．３５ｇ〜約１ｇ、または約０．３５ｇ〜約０．８ｇである投薬単位を提供する。
【００２６】
本発明者は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分少なくとも約２０ｇ／日の用量は耐容性が良好であり、癌の処置に有効であると判定し、本発明は、さらに、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を少なくとも約２０ｇ／日で癌患者に投与することを含む、癌の処置方法を提供する。一部の実施形態において、癌は、乳癌および１種類以上の婦人科癌から選択される。一部の実施形態では、上記癌が乳癌である。一部の実施形態では、乳癌が、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌である。一部の実施形態において、該方法は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を約２０ｇ／日〜約２００ｇ／日で患者に投与することを含む。一部の実施形態では、患者に、セイタカナミキソウから抽出された可溶分が、約２０ｇ／日〜１００ｇ／日、約２０ｇ／日〜６０ｇ／日、約２０ｇ／日〜５０ｇ／日、約２０ｇ／日〜４０ｇ／日、または約４０ｇ／日〜１００ｇ／日で投与される。一部の実施形態において、セイタカナミキソウから抽出された可溶分は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２５ｇ含む。一部の実施形態では、セイタカナミキソウから抽出された可溶分は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２７ｇ含む。一部の実施形態では、セイタカナミキソウから抽出された可溶分は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．３５ｇ含む。一部の実施形態では、セイタカナミキソウから抽出された可溶分は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを、約０．３５ｇ〜４ｇ、約０．３５ｇ〜２ｇ、約０．３５ｇ〜１．１ｇ、約０．３５ｇ〜１ｇ、約０．３５ｇ〜０．８ｇ、約０．３５〜０．７５ｇ、または約０．７ｇ〜２ｇ含む。
【００２７】
また、本発明者は、矯味剤などの賦形剤を、高用量のセイタカナミキソウエキス含有医薬組成物に添加すると、該エキスの苦味が減弱されると判定した。本発明者は、高用量のセイタカナミキソウ（例えば、少なくとも約１ｇの可溶分／用量または／日）は耐容性が良好であるが、比較的口当たりがよくないことを見い出したため、本発明者は、癌の処置などのために高用量のセイタカナミキソウエキスを摂取するための口当たりのよい組成物の作製には、矯味剤または他の薬剤の添加が望ましいことを見い出した。したがって、本明細書に記載の実施形態は、水以外の少なくとも１種類の賦形剤（少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方など）と、本発明者がセイタカナミキソウエキスの抗癌活性に必要であると特定した抗癌活性分であるルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの１つ以上を含む医薬組成物（例えば、癌、特に、乳癌または婦人科癌の処置のための）を提供する。また、本発明者は、高分子量化合物、例えば、１０００ｇ／ｍｏｌより大きい分子量（であるが、１，０００〜１０，０００ｇ／ｍｏｌなどの他の分画も使用され得る）を有する化合物は、なんら実質的な活性を付与することなく該組成物の嵩を増し、胃の不調、鼓脹および／または下痢を引き起こす傾向にあることを見い出した。したがって、一部の実施形態において、医薬組成物は高分子量化合物を枯渇させたものであり、一部の実施形態では、高分子量化合物を実質的に含まない。一部の実施形態では、該組成物は、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含むルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを含む（「部」はすべて、重量基準で測定）。一部の実施形態では、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリンを含む。一部の実施形態では、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリンを含む。一部の実施形態において、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む。一部の実施形態において、該組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、該可溶分のうち約１％〜約９９％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約１．７％〜約３．２％がルテオリンであり、約２％〜約３．４％がアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％がスクテラレインであり、約４９％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。一部の実施形態において、該組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、該可溶分のうち約１％〜約３％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約１．７％〜約３．２％がルテオリンであり、約２％〜約３．４％がアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％がスクテラレインであり、約４９％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。一部の実施形態において、該組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、該可溶分のうち約１．５％〜約２．１％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約１．７％〜約３．２％がルテオリンであり、約２％〜約３．４％がアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％がスクテラレインであり、約４９％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。一部の実施形態において、該組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、該可溶分のうち約１％〜約９９％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約１．９％〜約３％がルテオリンであり、約２．２％〜約３．２％がアピゲニンであり、約９．２％〜約１４．５％がスクテラレインであり、約６０％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。一部の実施形態において、該組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、該可溶分のうち約１％〜約３％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約１．９％〜約３％がルテオリンであり、約２．２％〜約３．２％がアピゲニンであり、約９．２％〜約１４．５％がスクテラレインであり、約６０％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。一部の実施形態において、該組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、該可溶分のうち約１．５％〜約２．１％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約１．９％〜約３％がルテオリンであり、約２．２％〜約３．２％がアピゲニンであり、約９．２％〜約１４．５％がスクテラレインであり、約６０％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。一部の実施形態において、該組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、該可溶分のうち約１％〜約５０％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約２．２％〜約２．７％がルテオリンであり、約２．４％〜約２．９％がアピゲニンであり、約１０．５％〜約１３．２％がスクテラレインであり、約７２％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。一部の実施形態において、該組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、該可溶分のうち約１％〜約３％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約２．２％〜約２．７％がルテオリンであり、約２．４％〜約２．９％がアピゲニンであり、約１０．５％〜約１３．２％がスクテラレインであり、約７２％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。一部の実施形態において、該組成物は約１ｇ〜約２００ｇの可溶分を含み、該可溶分のうち約１．５％〜約２．１％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約２．２％〜約２．７％がルテオリンであり、約２．４％〜約２．９％がアピゲニンであり、約１０．５％〜約１３．２％がスクテラレインであり、約７２％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。一部の実施形態において、該組成物は、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌の１種類以上から選択される乳癌を処置するために使用される。
【００２８】
本明細書に記載の一部の実施形態は、水以外の少なくとも１種類の賦形剤（少なくとも１種類の矯味剤、甘味料または両方など）と、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの１つ以上を含む組成物の有効量を患者に投与することを含む、癌、特に、１種類以上の乳癌および／または婦人科癌の処置方法を提供する。一部の実施形態において、該組成物は、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌の１種類以上から選択される乳癌を処置するために使用される。一部の実施形態において、該組成物の有効量は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも０．２５ｇ含む。一部の実施形態では、該組成物の有効量は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも０．２７ｇ含む。一部の実施形態では、該組成物は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．３５ｇ含む。一部の実施形態では、該組成物の有効量は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．２７ｇ〜約４ｇ含む。一部の実施形態では、該組成物の有効量は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約４ｇ含む。一部の実施形態において、該組成物の有効量は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜２ｇ、約０．３５ｇ〜１．１ｇ、約０．３５〜１ｇ、約０．３５ｇ〜約０．８ｇ含む。一部の実施形態において、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン；約６．７ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約５０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約３０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約２５ｍｇのルテオリン、または約８．９ｍｇ〜約２０ｍｇのルテオリン、約７．３ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約５０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約３０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約２５ｍｇのアピゲニン、または約９．７ｍｇ〜約２０ｍｇのアピゲニン；約３０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約２２０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１３０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１１０ｍｇのスクテラレイン、または約４０ｍｇ〜約９０ｍｇのスクテラレイン；約０．２５ｇ〜約３ｇのスクテラリン；約０．３ｇ〜約３ｇのスクテラリン；約０．３ｇ〜約１．５ｇのスクテラリン；約０．３ｇ〜約０．９ｇのスクテラリン；約０．３ｇ〜約０．８ｇのスクテラリン、または約０．３ｇ〜約０．６５ｇのスクテラリンを含む。
【００２９】
本発明者は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せが癌、特に乳癌の処置剤として有効であることを見い出した。したがって、一部の実施形態では、本発明は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを含む投薬単位を提供する。一部の実施形態において、投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２５ｇ含む。一部の実施形態では、該投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２７ｇ、または少なくとも約０．３５ｇ含む。一部の実施形態では、該投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５ｇ〜約４ｇ、約０．３５ｇ〜約２ｇ、約０．３５ｇ〜約１．１ｇ、約０．３５ｇ〜約１ｇ、約０．３５ｇ〜約０．８ｇ、または約０．７ｇ〜約２ｇ含む。一部の実施形態において、投薬単位は、さらに、矯味剤、甘味料または両方などの水以外の少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態において、投薬単位は、セイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物を実質的に含まない。一部の実施形態において、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン；約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン；約６．７ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約９０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約５０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約３０ｍｇのルテオリン、約８．９ｍｇ〜約２５ｍｇのルテオリン、または約８．９ｍｇ〜約２０ｍｇのルテオリン；約７．３ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約１００ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約５０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約３０ｍｇのアピゲニン、約９．７ｍｇ〜約２５ｍｇのアピゲニン、または約９．７ｍｇ〜約２０ｍｇのアピゲニン；約３０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約５００ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約２２０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１３０ｍｇのスクテラレイン、約４０ｍｇ〜約１１０ｍｇのスクテラレイン、または約４０ｍｇ〜約９０ｍｇのスクテラレイン；約０．２５ｇ〜約３ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約３ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約１．５ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約０．９ｇのスクテラリン、約０．３ｇ〜約０．８ｇのスクテラリン、または約０．３ｇ〜約０．６５ｇのスクテラリンを含む。一部の実施形態において、該組成物は、乳癌および／または１種類以上の婦人科癌などの癌の処置において使用される。一部の実施形態において、癌は、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌などの乳癌である。
【００３０】
さらに、本発明者は、セイタカナミキソウの着生部分を出発材料として用いた医薬組成物の作製方法を見い出した。かかる方法は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンを含む組成物の作製に特に有用である。したがって、一部の実施形態において、本発明者は、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成すること、（ｄ）任意選択で、該精製エキス由来の水分の一部、実質的に全部もしくは全部を蒸発させること、または該精製エキスにさらなる水を添加すること、および（ｅ）該精製エキスを、水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤と合わせ、医薬組成物を形成することを含む、医薬組成物の作製方法を記載する。一部の実施形態において、該精製エキスは、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンを含む。一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００３１】
本発明者は、セイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物の少なくとも一部を除去することにより、該医薬組成物の臨床的特性が改善されることを見い出した。セイタカナミキソウから抽出された可溶分量の多くは不活性であるため、所定の分画より上の分子量を有する分子の除去によって可溶分量を低減させることにより、セイタカナミキソウエキス由来の医薬組成物の嵩が大きく低減される。また、セイタカナミキソウから水中に抽出された可溶分の大部分は可溶性繊維であり、これは腸に吸収されず、胃腸の不快感、鼓脹、ガスおよび下痢を促す傾向にある。したがって、該組成物中のルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの混合物を維持したまま、セイタカナミキソウから抽出された可溶分の負荷量を低減させることにより、可溶性繊維の少なくとも一部を除去することによって、改善された抗癌薬がもたらされる。したがって、一部の実施形態において、本発明は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを１部、および所定の分画より大きい分子量を有する高分子量化合物を約５０部未満含む医薬組成物であって、該所定の分画が１，０００グラム／モル〜約２０，０００グラム／モルである医薬組成物を提供する。一部の実施形態において、医薬組成物は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約１部、および該高分子量化合物を約４０部未満、約３０部未満、約２０部未満、約１０部未満、約５部未満、約２部未満、約１部未満、約０．５部未満、約０．０１〜約４０部、約０．０１〜約２０部、または約０．０１〜約１０部未満含む。一部の実施形態において、該高分子量化合物に対する分画は、１０，０００グラム／モル；５，０００グラム／モル；２，０００グラム／モル；１，０００グラム／モル；または約１，０００グラム／モル〜約１０，０００グラム／モル；約１，０００グラム／モル〜約５，０００グラム／モル；もしくは約１，０００グラム／モル〜約２，０００グラム／モルの範囲である。一部の実施形態において、医薬組成物は水以外の少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の賦形剤は矯味剤、甘味料または両方である。本発明者は、本明細書に記載の医薬組成物が、本明細書に記載の医薬組成物を含む投薬単位として簡便に調製されることを見い出した。一部の実施形態において、投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約１８ｍｇ含む。一部の実施形態において、投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．２５ｇ〜約４ｇ；ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．２７ｇ〜約４ｇ；ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５〜約４ｇ；ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５〜約２ｇ；ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５〜約１．１ｇ；ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５〜約１ｇ；ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．３５〜約０．８ｇ；またはルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約０．７〜約２ｇ含む。一部の実施形態において、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せに加え、該組成物は、さらに、水以外の少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の賦形剤は矯味剤、甘味料または両方から選択される。一部の実施形態において、本発明は、有効量の本明細書に記載の医薬組成物または投薬形態を癌患者に投与することを含む、癌の処置方法を提供する。一部の実施形態において、癌は、１種類以上の乳癌および／または婦人科癌（乳癌または子宮癌など）である。一部の実施形態では、進行乳癌、転移性乳癌、処置抗療性の乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌および／または三重陰性乳癌などの乳癌である。
【００３２】
また、本発明者は、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成すること、（ｄ）任意選択で、該精製エキス由来の水分の一部、実質的に全部もしくは全部を蒸発させること、または該精製エキスにさらなる水を添加すること、および（ｅ）該精製エキスを薬学的に許容され得る賦形剤と合わせ、医薬組成物を形成することを含む、医薬組成物の作製方法を見い出した。１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン。
【００３３】
また、一部の実施形態は、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、および（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、セイタカナミキソウの精製エキスを形成することを含む、セイタカナミキソウの精製エキスの作製方法を提供する。
【００３４】
一部の実施形態は、さらに、水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤を、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの１つ以上と合わせ、医薬組成物を形成することを含む、医薬組成物の作製方法を提供する。一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の医薬用賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００３５】
一部の実施形態は、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、および（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成すること、および（ｄ）該精製エキスを、水以外の少なくとも１種類の賦形剤と合わせ、医薬投薬単位を形成することを含む、医薬投薬単位の作製方法を提供する。一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の賦形剤は、矯味剤および甘味料から選択される。
【００３６】
記載した値の前に用語「約」を伴うことは、該記載した値の実験誤差の範囲内（一般的には、１標準偏差以内）の値を示すことを意図する。実験誤差が特に測定されていない限り、記載した値「Ｘ」の前に用語「約」を伴うことは、Ｘ±０．１Ｘを意味すると解釈され得る。
【００３７】
半枝蓮エキスを含む医薬組成物および単位投薬形態の製造プロセス
本明細書に記載の医薬組成物および単位投薬形態は、半枝蓮、特に、セイタカナミキソウの着生部分から抽出された可溶分（すなわち、水に溶解性である物質）を含む。シソ科のハーブであるセイタカナミキソウ（シソ科）−ハンシレン（Ｂａｎ  Ｚｈｉ  Ｌｉａｎ）（ＢＺＬ）は、主に（排他的ではないが）、黄河（Ｈｕａｎｇ  Ｐｏ）の南東地域の四川省、江蘇省、江西省、福建省、広東省、広西自治区および陜西省に生育している。この植物は、開花（５月〜６月）後、晩夏から初秋に収穫される。着生部分が根から切り離される。着生部分（葉および茎）のみが、本明細書に記載の組成物および投薬単位の調製に使用される。
【００３８】
表１に、本発明のエキスを採取した本発明のハーブであるセイタカナミキソウの学名を、科、属、種および伝統的な中国名を一覧にして示す。
【００３９】
【表１】
2012501974.tif 000003
【００４０】
医薬組成物
本明細書に記載の一部の実施形態は、医薬組成物、特に、癌の処置のための医薬組成物を提供する。特に、本発明は、婦人科癌および乳癌の処置のための医薬組成物（「組成物」）を提供する。一部の好ましい実施形態において、該組成物は、乳癌の処置のため、特に、癌専門医によって処置が特に困難であるとみなされた乳癌（以下により詳細に記載するもの、進行乳癌、転移性乳癌、１種類以上のホルモン受容体について陰性である乳癌（例えば、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性および／またはＨＥＲ２陰性乳癌）が挙げられる）の処置のため、ならびに１種類以上の癌治療（放射線療法、陽子線治療および／または化学療法など）での先の処置の成績が不良であった乳癌の処置のためのものである。本発明者は、このような型の癌の１種類以上を有する患者を、セイタカナミキソウから抽出された可溶分少なくとも約２０ｇで処置することが、耐容性が良好であり、このような癌の処置に有効であることを見い出した。
【００４１】
一部の実施形態において、本発明は、水以外の少なくとも１種類の賦形剤と、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの１つ以上とを含む医薬組成物を提供する。ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンは各々、活性を有し、分子レベルで抗癌活性を示すが、これらの全４種類の化合物の組合せは、特に、癌に対して、特に乳癌、さらには、これまでの処置に対して抗療性であることが示された乳癌に対しても効力があることがわかった。したがって、一部の好ましい実施形態において、該組成物は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの各々を含む。
【００４２】
また、特に、本明細書に記載の癌の処置方法において使用される高用量では、セイタカナミキソウエキスは、患者のコンプライアンスを低下させる程度にまで口当たりがよくないことがあり得ることがわかった。したがって、該組成物の口当たりをよりよくし、それにより、処置による患者の快適性を向上させるため、および場合によっては、患者のコンプライアンスを向上させるために、矯味剤（フレーバー剤もしくは他の矯味剤など）、甘味料または両方を使用することが望ましい。したがって、一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。本明細書で用いる場合、医薬組成物が「水以外の賦形剤」を含む（“ｃｏｎｔａｉｎ“、“ｃｏｍｐｒｉｓｅ”あるいは“ｉｎｃｌｕｄｅ”）というのは、水が、医薬組成物を存在させる投薬単位の具体的な形態に適切な賦形剤である場合、該組成物が、水とは別のいくらかの賦形剤（これに、水分が含有されていてもよい）を含んでいなければならないことを意味する。一部の実施形態は、例えば、セイタカナミキソウから抽出された可溶分、矯味剤、および水を含むものである。他の実施形態は、矯味剤に加えて、さらに甘味料を含むものであり得るか、または矯味剤の代わりに甘味料が使用されたものであり得る。
【００４３】
また、本発明者は、高用量のセイタカナミキソウエキス（例えば、セイタカナミキソウから抽出された可溶分少なくとも２０ｇまたはそれ以上）が、少なくとも一部の患者において胃の不調、鼓脹、ガスおよび／または下痢を引き起こすことを見い出した。本発明者は、セイタカナミキソウから抽出された高分子量化合物は、乳癌および／または婦人科癌に対して不活性であり、特に、２０ｇ／日の用量またはこれを超える用量では、胃腸障害を誘発する傾向にあると判定した。本明細書に記載の用量では、かかる胃の不快感により、少なくとも一部の患者に対して、不良な患者のコンプライアンス、あるいは治療の中止すらもたらされることがあり得る。セイタカナミキソウから抽出された可溶分由来の高分子量化合物の少なくとも一部を除去することにより（例えば、ナノフィルトレーションにより）、患者に投与されるべき可溶分のバルク量が低減され、セイタカナミキソウから抽出された可溶分の高濃度に関連する胃腸の不快感が低減されることが想定される。したがって、本発明者は、本明細書において、高分子量化合物を枯渇させた、一部の場合では実質的に含まない組成物の教示を提供する。
【００４４】
ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、本明細書において、他の箇所において「活性可溶分」と称していることもあり得、これは、「高分子量化合物」ならびに高分子量化合物ではないが、乳癌および／または婦人科癌の処置において活性ではない化合物を包含する「不活性可溶分」とは反対である。したがって、可溶分の質量は、活性可溶分（ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリン）と不活性可溶分の質量の和に等しい。不活性可溶分の質量は、高分子量化合物と他の不活性化合物の質量の和である。
【００４５】
本明細書で用いる場合、「高分子量化合物」は、セイタカナミキソウの水抽出プロセス中に、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンとともに共抽出される化合物であって、所定の分画以上の分子量を有するものをいう。一部の実施形態において、分画は、１，０００ｇ／ｍｏｌから約１０，０００ｇ／ｍｏｌまでのいずれかであり得る。一部の実施形態では、１０，０００グラム／モルの分画で、可溶性セイタカナミキソウエキスから可溶性繊維が高率で充分除去される。しかしながら、より低い分画も想定され、一部の場合では、医薬組成物および投薬単位中の、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの濃度をより高くすることが可能であり、治療効果を得るために患者に投与されるべき可溶分の嵩が低減されるため、低分画が好ましい。一部の実施形態において、分画は、７５０〜２０，０００ｇ／ｍｏｌの範囲、好ましくは、７５０〜１０，０００ｇ／ｍｏｌの範囲、より特別には７５０〜５，０００ｇ／ｍｏｌである。具体的な分画としては、７５０ｇ／ｍｏｌ、１，０００ｇ／ｍｏｌ、２，０００ｇ／ｍｏｌ、５，０００ｇ／ｍｏｌ、および１０，０００ｇ／ｍｏｌが挙げられる。
【００４６】
したがって、本明細書において提供する組成物および投薬単位の一部の実施形態は、高分子量化合物を実質的に含まない。用語「実質的に含まない」は、本明細書で用いる場合、該組成物または投薬単位に含まれる高分子量化合物が、「粗製抽出物」中に含有されている場合よりも、いくらかの所定の割合少ないことを意味し、粗製抽出物とは、不溶分（例えば、茎、葉およびその不溶性部分）を除去するための処理はなされたが（例えば、濾過またはデカンテーション）、別の方法での高分子量化合物を除去するための処理はなされていないセイタカナミキソウの着生部分の水抽出物である。一部の実施形態において、該所定の割合は、１／１０（０．１）、１／２０（０．０５）、１／５０（０．０２）、１／１００（０．０１）、１／２００（０．００５）、１／５００（０．００２）または１／１０００（０．００１）である。また、「高分子量化合物を実質的に含まない」に対する具体的な値は、医薬組成物に含まれたセイタカナミキソウから抽出された可溶分の総質量に対して相対的に表示され得る。一部の実施形態において、高分子量化合物を実質的に含まない組成物に含まれる高分子量化合物は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分の総量に対して約１０ｗｔ％未満、約５ｗｔ％未満、約１ｗｔ％未満、約０．５ｗｔ％未満または約０．ｌｗｔ％未満である。さらに、「高分子量化合物を実質的に含まない」に対する具体的な値は、該組成物中に含まれるルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの量に対する質量割合で表示される。一部の実施形態では、医薬組成物中のセイタカナミキソウから抽出された可溶分の約１％〜約９９％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約１．７％〜約３．２％がルテオリンであり、約２％〜約３．４％がアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％がスクテラレインであり、約４９％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。
【００４７】
一部の場合では、セイタカナミキソウから抽出された可溶分由来の高分子量化合物の一部を除去するだけで充分であり得る。したがって、本明細書において提供する組成物および投薬単位の一部の実施形態では、高分子量化合物を枯渇させたものである。用語「枯渇させた」は、本明細書で用いる場合、該組成物または投薬単位に含まれる高分子量化合物が、「粗製抽出物」（先の段落で説明）中に含有されている場合よりも、いくらか所定の割合少ないことを意味する。一部の実施形態において、該所定の割合は、９／１０（０．９）、８／１０（０．８）、７／１０（０．７）、６／１０（０．６）、１／２（０．５）、１／３（０．３３３）または１／４（０．２５）である。また、「高分子量化合物を枯渇させた」に対する具体的な値は、医薬組成物に含まれたセイタカナミキソウから抽出された可溶分の総質量に対して相対的に表示され得る。一部の実施形態において、高分子量化合物を枯渇させた組成物に含まれる高分子量化合物は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分の総量に対して約９０ｗｔ％未満、約８０ｗｔ％未満、約７０ｗｔ％未満、約６０ｗｔ％未満または約５０ｗｔ％未満である。さらに、「高分子量化合物を枯渇させた」に対する具体的な値は、該組成物中に含まれるアピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの量に対する質量割合で表示される。一部の実施形態では、医薬組成物中のセイタカナミキソウから抽出された可溶分の約１％〜約９９％が活性可溶分であり、該活性可溶分のうち約１．７％〜約３．２％がルテオリンであり、約２％〜約３．４％がアピゲニンであり、約７．９％〜約１５．８％がスクテラレインであり、約４９％から該活性可溶分の残部までがスクテラリンである。
【００４８】
セイタカナミキソウから抽出された活性化合物（ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリン）は、セイタカナミキソウの着生部分の水抽出物にて、これらの複合活性に不可欠であると思われる特定の特性割合で提示される傾向にあることがわかった。一部の実施形態において、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む。一部の実施形態では、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリンを含む。一部の実施形態では、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリンを含む。一部の実施形態では、該組成物は、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含むルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを含む。
【００４９】
医薬組成物の作製方法
本明細書において提供する医薬組成物は、セイタカナミキソウの着生部分（茎および／または葉）から活性化合物を、例えば、水で抽出することを含む方法によって作製され得る。抽出に関して本明細書に記載する場合、「水」は、純水（例えば、注射用水、蒸留水、二重脱イオン水、濾過蒸留水など）ならびに水と１種類以上の微量固形物または液状溶質からなる水溶液（抽出媒体の大部分が水であり、溶質（１種類または複数種）は水の抽出特性に実質的に影響しないものに限る）を包含する。また、一部の好ましい実施形態において、該方法は、セイタカナミキソウエキス由来の高分子量化合物の一部を除去することも含む（上記においてより詳細に記載）。
【００５０】
したがって、一部の実施形態において、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成すること、および（ｅ）該精製エキスを、水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤と合わせ、医薬組成物を形成することを含む、医薬組成物の作製方法を提供する。また、一部の実施形態において、該方法は、（ｄ）任意選択で、該精製エキス由来の水分の一部、実質的に全部もしくは全部を蒸発させること、または該精製エキスにさらなる水を添加することも含む。一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。一部の実施形態では、医薬組成物を、さらに、適当なパッケージと合わせ、適当な投薬単位を形成してもよい。
【００５１】
セイタカナミキソウの着生部分（葉および／または茎）を水と合わせ、室温より上の適当な温度、特に約４０℃、より好ましくは約５０℃〜約８０℃まで、任意選択で高圧下で加熱する。この混合物の熱処理は、活性化合物が該混合物の水相中に抽出されるのに充分長時間であるが、エネルギーが不必要に消耗される、または活性化合物の分解が引き起こされるほど長時間であるべきではない。約１０分間より長いが、約２日未満のある程度の期間が適当であるが、３０分〜６時間の期間が、一般的に適当であると考えられる。より具体的な値は、本明細書の実施例に記載している。
【００５２】
熱処理したら、セイタカナミキソウの着生部分を水相から、なんらかの適当な方法によって分離する。大きい部分は、該混合物を篩に通して漉すことにより除去され得、一方、小さい部分は濾過によって除去され得る。濾過は、段階的に行なわれ得、漸減孔径の１つ以上のフィルターに各段階で通過させることを伴う。
【００５３】
高分子量化合物は、ナノフィルトレーションまたはサイズ排除クロマトグラフィーなどの適当な方法によって除去され得る。
【００５４】
任意選択で、該溶液の容量を、例えば、水分の一部を蒸発除去することにより低減させてもよい。また、該溶液を凍結乾燥させてもよく、あるいは、デシケータに入れて乾燥残留物を形成させてもよく、これを粉砕して粉末を形成してもよい。いずれの場合も、得られた精製エキスは、次いで、少なくとも１種類の賦形剤、特に、水以外の賦形剤と合わされ、医薬組成物が形成され得る。一部の実施形態において、水以外の賦形剤は矯味剤または甘味料である。一部の好ましい実施形態では、水以外の賦形剤には矯味剤が含有される。
【００５５】
他の実施形態は、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成すること、および（ｅ）該精製エキスを薬学的に許容され得る賦形剤と合わせ、医薬組成物を形成することを含む、医薬組成物の作製方法を提供する。また、一部の実施形態は、（ｄ）任意選択で、該精製エキス由来の水分の一部、実質的に全部もしくは全部を蒸発させること、または該精製エキスにさらなる水を添加することも含む。一部の実施形態において、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリンを含む。一部の実施形態では、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリンを含む。一部の実施形態では、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せは、約１部のルテオリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリンを含む。一部の実施形態では、該組成物は、約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンを含むルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを含む。
【００５６】
一部の実施形態において、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、および（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成することを含む、組成物の作製方法を提供する。精製エキスを、さらに処理し、本明細書に記載の投薬単位を作製してもよい。一部の実施形態において、精製エキスは高分子量化合物を枯渇させたものである。一部の実施形態では、精製エキスは高分子量化合物を実質的に含まない。
【００５７】
上記のように、一部の特定の状況では、特に、投薬量が少なくとも約２０ｇ／日である場合、セイタカナミキソウエキスに含まれる活性化合物の味をマスキングすることが望ましいと考えられる。したがって、一部の実施形態では、医薬組成物の作製方法は、水以外の少なくとも１種類の薬学的に許容され得る賦形剤（例えば、矯味剤および／または甘味料）を、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの１つ以上と合わせ、医薬組成物を形成することを含む。
【００５８】
一部のかかる実施形態において、水以外の少なくとも１種類の医薬用賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。
【００５９】
投薬単位
本発明者は、本明細書に記載の医薬組成物が、簡便な分布、保存および投与のための投薬単位に簡便に調製されると考える。本明細書に記載の「用量」と「投薬単位」は区別される。本明細書で用いる場合、用語「用量」は、１回に投与される医薬組成物の量をいう。日用量は、１日に投与される医薬組成物の量である。用量は、１日１回（Ｑ．Ｄ．）、１日２回（ｂ．ｉ．ｄ．）、１日３回（ｔ．ｉ．ｄ．）、１日４回（ｑ．ｉ．ｄ．）などで投与され得る。
【００６０】
本明細書で用いる場合、用語「投薬単位」は、１回以上の用量の医薬組成物、または他の投薬単位と合わせて単回用量が形成され得る一部の用量の医薬組成物からなる医薬組成物の単一の製造前形態である。一部の実施形態において、投薬単位は、１日分の用量の医薬組成物からなる。投薬単位は、単回日用量（Ｑ．Ｄ．）としての投与に適合させたものであってもよく、１日のうちの異なる時点で投与される２回、３回、４回またはそれ以上の用量（それぞれ、ｂ．ｉ．ｄ．、ｔ．ｉ．ｄ．、またはｑ．ｉ．ｄ．）に分けてもよく、単回用量（これは、特に、エリキシル剤（投薬単位を２回以上の用量に分けてもよい）、ならびに錠剤（１日のうちの異なる時点での投与のために２つ以上の投薬単位に分けてもよい）の場合、そうである）として投与してもよい。他の一部の実施形態では、投薬単位は、単回用量の一部の割合（例えば、半分、３分の１、４分の１、５分の１）を含むものであり得る。また、投薬単位は、点滴用ラインもしくは同様の静脈内投与方法による、またはさらには、経鼻咽道チューブによる投与のための、特定の用量（例えば、２０ｍＬ〜１０００ｍＬ）の注射用液剤であってもよい。
【００６１】
投薬単位の一部の好ましい実施形態としては、錠剤、カプセル剤、粉剤および液剤（エリキシル剤）が挙げられる。
【００６２】
錠剤としては、飲み込む錠剤、噛んで飲み込む錠剤、および舌の上で溶解させ、液状嚥下補助物（水など）とともに、またはなしで飲み込むように適合させた錠剤が挙げられる。錠剤用の好適な賦形剤としては、結合剤、増量剤、崩壊剤、分散剤、滑沢剤、固着防止剤および固結防止剤、ならびに矯味剤および甘味料が挙げられる。
【００６３】
カプセル剤としては、そのまま飲み込むカプセル剤、ならびに液状賦形剤（水など）に溶解させるように適合させたカプセル剤が挙げられる。また、カプセル剤は、開封してその内容物を適当な賦形剤（水など）に溶解させるカプセル剤も包含する。カプセル剤用の好適な賦形剤としては、分散剤、増量剤、矯味剤および甘味料が挙げられる。
【００６４】
粉剤としては、輸送および保存に適当な容器内（例えば、ホイルパウチ、密閉バイアルなど）にパッケージングされた粉剤が挙げられる。粉剤用の好適な賦形剤としては、分散剤、増量剤、矯味剤および甘味料が挙げられる。
【００６５】
液剤としては、水、水以外の賦形剤ならびにセイタカナミキソウから抽出された活性可溶分（ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリン）を含有する水系液剤が挙げられる。好ましい実施形態において、液剤は、適当な密閉容器内にパッケージングされ、該液剤を患者に投与するための使用説明書とともにパッケージングされる。静脈内投与用では、水系液剤に水以外の賦形剤が含まれていてもよく、含まれていなくてもよい。
【００６６】
本発明者は、本明細書に記載の組成物を、これまでは想定されなかったレベルで患者に投与できるはずであり、重要なことに、患者に耐容性であり得ることを見い出した。驚くべきことに、例えば、本明細書に記載の組成物は、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を、患者に高用量で、すなわち、１０または１２グラム／日より高い用量で投与できることがわかった。驚くべきことに、この投与では、高用量において、特に、２０グラム／日〜約４０グラム／日（特に、２０、３０および４０グラム／日）の用量において、用量制限毒性が引き起こされない。このような臨床データに基づき、本発明者は、最大耐用量が４０グラム／日より高く、実際には、１日あたり約２００グラムまで、より確実には１日あたり約１００グラムまでであり得ると推測する。したがって、本明細書に記載の一部の実施形態は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの少なくとも１つを含む医薬活性成分を少なくとも約２０グラム含む医薬投薬単位を提供する。一部の実施形態において、医薬活性成分は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの各々を含む。一部の好ましい実施形態において、投薬単位は経口投薬単位である。一部の好ましい実施形態において、投薬単位は、さらに、水以外の少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の好ましい実施形態において、投薬単位は、矯味剤および甘味料から選択される少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態において、投薬単位は、少なくとも約２０グラムの医薬活性成分を含む。一部の実施形態において、投薬単位は、１日のうちの投与に対して２回以上の用量に分割され得るものである。
【００６７】
一部の実施形態において、医薬投薬単位は、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を少なくとも約２０グラム含む医薬活性成分を含む。セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの１種類以上を含み、好ましくは、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの４種類全部を含む。特に好ましい実施形態において、該可溶性物質は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの各々を、約：約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリン、または約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンの割合で含む。一部の実施形態において、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は、高分子量化合物を枯渇させたもの、または実質的に含まないものである。一部の実施形態において、投薬単位は、経口投薬単位（例えば、そのまま飲み込む、噛んで飲み込む、または舌の上で溶解させて飲み込む錠剤、そのまま飲み込むカプセル剤、開封してその内容物を適当な液状賦形剤に溶解させて飲み込むカプセル剤、全体を適当な賦形剤に溶解させるカプセル剤、適当な賦形剤に溶解させる粉剤、該賦形剤としては、矯味剤、甘味料など、および／または水が挙げられ得る）である。したがって、一部の実施形態において、投薬単位は、さらに、水以外の（例えば、水に加えて）少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態において、投薬単位は、矯味剤および甘味料から選択される少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態において、投薬単位は、医薬活性成分を少なくとも約２０グラム（例えば、２０〜２００グラム／投薬単位、２０〜１００グラム／投薬単位または２０〜６０グラム／投薬単位）を含む。
【００６８】
一部の実施形態において、医薬投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２５ｇ含む医薬活性成分を含む。一部の実施形態において、医薬投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンを少なくとも約０．２７ｇ、またはルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンを少なくとも約０．３５ｇ含む。一部の実施形態において、医薬投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンを約０３５ｇ〜４ｇ、０．３５ｇ〜２ｇ、０．３５ｇ〜１．１ｇ、０．３５ｇ〜１ｇ、または０．３５ｇ〜０．８ｇ含む。一部の実施形態において、医薬投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンを、約０．２５ｇ、約０．２７ｇ、約０．３ｇ、約０．３５ｇ、約０．４ｇ、約０．４５ｇ、約０．５ｇ、約０．６ｇ、約０．７ｇ、約０．８ｇ、約０．９ｇ、約１ｇ、約１．１ｇ、約１．２ｇ、約１．３ｇ、約１．４ｇ、約１．５ｇ、約１．６ｇ、約１．７ｇ、約１．８ｇ、約１．９ｇ、約２ｇ、約２．１ｇ、約２．２ｇ、約２．３ｇ、約２．４ｇ、約２．５ｇ、約２．６ｇ、約２．７ｇ、約２．８ｇ、約２．９ｇ、約３ｇ、約３．１ｇ、約３．２ｇ、約３．３ｇ、約３．４ｇ、約３．５ｇ、約３．６ｇ、約３．７ｇ、約３．８ｇ、約３．９ｇ、または約４ｇ含む。セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの１種類以上を含み、好ましくは、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの４種類全部を含む。特に好ましい実施形態において、該可溶性物質は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの各々を、約：約１部のルテオリン、約０．６１〜約２部のアピゲニン、約２．５〜約９．４部のスクテラレイン、および約１５〜約７０部のスクテラリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン、約０．７５〜約１．６４部のアピゲニン、約３．１〜約７．５部のスクテラレイン、および約２０．４〜約５４．７部のスクテラリン、約０．９〜約１．３部のアピゲニン、約３．９〜約６部のスクテラレイン、および約３７〜約４３部のスクテラリン、または約１部のルテオリン、約１．１部のアピゲニン、約４．８部のスクテラレインおよび約３４部のスクテラリンの割合で含む。一部の実施形態において、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質は、高分子量化合物を枯渇させたもの、または実質的に含まないものである。一部の実施形態において、投薬単位は、経口投薬単位（例えば、そのまま飲み込む、噛んで飲み込む、または舌の上で溶解させて飲み込む錠剤、そのまま飲み込むカプセル剤、開封してその内容物を適当な液状賦形剤に溶解させて飲み込むカプセル剤、全体を適当な賦形剤に溶解させるカプセル剤、適当な賦形剤に溶解させる粉剤、該賦形剤としては、矯味剤、甘味料など、および／または水が挙げられ得る）である。したがって、一部の実施形態において、投薬単位は、さらに、水以外の（例えば、水に加えて）少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態において、投薬単位は、矯味剤および甘味料から選択される少なくとも１種類の賦形剤を含む。
【００６９】
本明細書に記載の投薬単位は、本発明による方法によって作製され得る。一部の実施形態において、（ａ）セイタカナミキソウの着生部分を、４０℃より高い温度まで加熱した水と、少なくとも約１０分間接触させて混合物を形成すること、（ｂ）該セイタカナミキソウの着生部分を該混合物から分離し、粗製抽出物を得ること、および（ｃ）該粗製抽出物から高分子量化合物を分離し、精製エキスを形成すること、および（ｄ）該精製エキスを、水以外の少なくとも１種類の賦形剤と合わせ、医薬投薬単位を形成することを含む、医薬投薬単位の作製方法を提供する。一部の実施形態において、水以外の少なくとも１種類の賦形剤は、矯味剤および甘味料から選択される。かかる投薬単位は、癌、特に乳癌を処置するのに適当な量の精製エキスを含む。一部の実施形態において、投薬単位は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを、少なくとも０．２５ｇ、少なくとも０．２７ｇ、少なくとも０．３ｇ、少なくとも０．３５ｇ、または０．３５ｇ〜４ｇ含む。一部の実施形態において、投薬単位は、さらに、ホイル製パック、ボトル、サシェ、ブリスターパックなどのパッケージ、または他の密封パッケージを含む。したがって、一部の実施形態において、投薬単位の作製方法は、投薬単位をパッケージ内にパッケージングする工程を含む。
【００７０】
本発明による各投薬単位または各用量における活性可溶分（ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリン）の実例としての量を以下の表２に示す。
【００７１】
【表２】
2012501974.tif 000004
【００７２】
使用方法
本明細書に記載の医薬組成物および投薬単位は、癌、特に、乳癌および婦人科癌を治療するために使用され得る。本発明者は、ヒトにおいて本発明による組成物の臨床試験を実施し、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の２０グラム／日、３０グラム／日または４０グラム／日での投与が、耐容性が良好であり、以前に少なくとも１回の癌治療、少なくとも１回の化学療法を受けた乳癌、特に、進行乳癌を伴う乳癌に対して有効性を示すことを見い出した。処置抗療性の乳癌は特に処置が困難であるため、本発明者は、ヒトの癌の治療方法を提供する。特に、本発明者は、１種類以上の亜型の癌（例えば、転移性乳癌）の治療方法を提供することに加え、ヒトの乳癌の治療方法を提供する。治療され得る他の癌としては、エストロゲン受容体を発現しない癌（ＥＲ陰性乳癌）、プロゲステロンを発現しない癌（ＰＲ陰性乳癌）、ヒト上皮増殖ホルモン受容体２を発現しない癌（ＨＥＲ２陰性乳癌）が挙げられる。これに関連して、これらの乳癌の分類は互いに排他的でないことに注意されたい。例えば、乳癌は、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性（いわゆる二重陰性乳癌）であってもよく、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性（三重陰性乳癌）であってもよい。三重陰性乳癌は、進行型および／または転移性であり得る。転移性乳癌は、１種類以上のこれまでの治療アプローチに対して抗療性であることが示された癌であり得、多くの場合、そうである。したがって、本明細書で用いる場合、乳癌の特徴（例えば、ＥＲ陰性）の記載は、明記していない限り、他の特徴（例えば、ＰＲ陰性）を除外することを意図しない。
【００７３】
したがって、本発明の一部の実施形態は、水以外の少なくとも１種類の賦形剤と、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの少なくとも１つとを含む医薬組成物の有効量を癌患者に投与することを含む、癌の治療方法を提供する。一部の実施形態において、該組成物は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレイン、スクテラリンの各々を含み、水以外の少なくとも１種類の賦形剤は矯味剤および甘味料から選択される。一部の実施形態において、該組成物高分子量化合物を実質的に含まない。一部の実施形態において、癌は乳癌または婦人科癌である。一部の実施形態において、癌は、以下：進行乳癌、転移性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性乳癌、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌の少なくとも１種類である乳癌、またはこれまでの少なくとも１回の癌処置クールに応答しなかった乳癌である。
【００７４】
さらに、本発明の一部の実施形態は、癌に苦しんでいる患者に、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを少なくとも約０．２５ｇ、少なくとも約０．２７ｇ、少なくとも約０．３ｇ、少なくとも約０．３５ｇ、または約０．３５ｇ〜約４ｇ含む医薬組成物を投与することによる癌、例えば、乳癌または婦人科癌の治療方法を提供する。一部の実施形態において、該方法は、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを、約０．２５ｇ、約０．２７ｇ、約０．３ｇ、約０．３５ｇ、約０．４ｇ、約０．４５ｇ、約０．５ｇ、約０．６ｇ、約０．７ｇ、約０．８ｇ、約０．９ｇ、約１ｇ、約１．１ｇ、約１．２ｇ、約１．３ｇ、約１．４ｇ、約１．５ｇ、約１．６ｇ、約１．７ｇ、約１．８ｇ、約１．９ｇ、約２ｇ、約２．１ｇ、約２．２ｇ、約２．３ｇ、約２．４ｇ、約２．５ｇ、約２．６ｇ、約２．７ｇ、約２．８ｇ、約２．９ｇ、約３ｇ、約３．１ｇ、約３．２ｇ、約３．３ｇ、約３．４ｇ、約３．５ｇ、約３．６ｇ、約３．７ｇ、約３．８ｇ、約３．９ｇ、または約４ｇの日用量で患者に投与することを含む。一部の実施形態において、癌は乳癌または婦人科癌である。一部の実施形態において、癌は、以下：進行乳癌、転移性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性乳癌、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌の少なくとも１種類である乳癌、またはこれまでの少なくとも１回の癌処置クールに応答しなかった乳癌である。
【００７５】
上記のように、本発明者は臨床試験を実施し、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質の１日あたり２０グラムを超える投薬量は耐容性が良好であり、特に治療が困難な癌患者群に有効であることを見い出した。また、本発明者は、セイタカナミキソウエキスの可溶性物質中の活性化合物は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの１種類以上（好ましくは、４種類全部）ことを見い出した。したがって、一部の実施形態は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの少なくとも１つを含む医薬活性成分を少なくとも２０グラム含む医薬投薬単位を、患者に投与することを含む、癌の治療方法を提供する。一部の実施形態において、医薬活性成分は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンの各々を含む。一部の実施形態において、該投薬単位は経口投薬単位である。一部の実施形態において、投薬単位は、さらに、水以外の少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態では、該投薬単位は、矯味剤および甘味料から選択される少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態において、該方法は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を、少なくとも約０．２５ｇ、約０．２７ｇ、約０．３ｇ、約０．３５ｇ、約０．４ｇ、約０．４５ｇ、約０．５ｇ、約０．６ｇ、約０．７ｇ、約０．８ｇ、約０．９ｇ、約１ｇ、約１．１ｇ、約１．２ｇ、約１．３ｇ、約１．４ｇ、約１．５ｇ、約１．６ｇ、約１．７ｇ、約１．８ｇ、約１．９ｇ、約２ｇ、約２．１ｇ、約２．２ｇ、約２．３ｇ、約２．４ｇ、約２．５ｇ、約２．６ｇ、約２．７ｇ、約２．８ｇ、約２．９ｇ、約３ｇ、約３．１ｇ、約３．２ｇ、約３．３ｇ、約３．４ｇ、約３．５ｇ、約３．６ｇ、約３．７ｇ、約３．８ｇ、約３．９ｇ、または約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを含む日用量で患者に投与することを含む。一部の実施形態において、癌は、以下：進行乳癌、転移性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性乳癌、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌の少なくとも１種類である乳癌、またはこれまでの少なくとも１回の癌処置クールに応答しなかった乳癌である。
【００７６】
本明細書に記載の一部の実施形態は、アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの少なくとも１つを含む医薬活性成分を、少なくとも２０グラム／日で患者に投与することを含む、癌の治療方法を提供する。一部の実施形態において、医薬活性成分は１日１〜４回の用量で投与される。一部の実施形態において、癌は乳癌または婦人科癌である。一部の実施形態において、癌は、以下：進行乳癌、転移性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性乳癌、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌の少なくとも１種類である乳癌、またはこれまでの少なくとも１回の癌処置クールに応答しなかった乳癌である。一部の実施形態において、該方法は、セイタカナミキソウから抽出された可溶分を、少なくとも約０．２５ｇ、約０．２７ｇ、約０．３ｇ、約０．３５ｇ、約０．４ｇ、約０．４５ｇ、約０．５ｇ、約０．６ｇ、約０．７ｇ、約０．８ｇ、約０．９ｇ、約１ｇ、約１．１ｇ、約１．２ｇ、約１．３ｇ、約１．４ｇ、約１．５ｇ、約１．６ｇ、約１．７ｇ、約１．８ｇ、約１．９ｇ、約２ｇ、約２．１ｇ、約２．２ｇ、約２．３ｇ、約２．４ｇ、約２．５ｇ、約２．６ｇ、約２．７ｇ、約２．８ｇ、約２．９ｇ、約３ｇ、約３．１ｇ、約３．２ｇ、約３．３ｇ、約３．４ｇ、約３．５ｇ、約３．６ｇ、約３．７ｇ、約３．８ｇ、約３．９ｇ、または約４ｇのルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを含む日用量で患者に投与することを含む。
【００７７】
本明細書に記載の一部の実施形態は、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を少なくとも２０ｇ含む医薬活性成分を含む医薬投薬単位を患者に投与することを含む、癌の治療方法を提供する。一部の実施形態において、該投薬単位は経口投薬単位である。一部の実施形態において、投薬単位は、さらに、水以外の少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態では、該投薬単位は、矯味剤および甘味料から選択される少なくとも１種類の賦形剤を含む。一部の実施形態において、投薬単位は、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を少なくとも約２０グラム含む。  
【００７８】
一部の実施形態は、さらに、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を少なくとも１５グラム含む医薬活性成分を患者に毎日投与することを含む、癌の治療方法を提供する。一部の実施形態において、医薬活性成分は１日１〜４回の用量で投与される。一部の実施形態において、癌は乳癌または婦人科癌である。一部の実施形態において、癌は、以下：進行乳癌、転移性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性乳癌、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌の少なくとも１種類である乳癌、またはこれまでの少なくとも１回の癌処置クールに応答しなかった乳癌である。
【００７９】
本発明者は、一部の実施形態において、患者の治療に使用される具体的な投薬量が好結果の臨床転帰に重要であることを見い出した。したがって、一部の実施形態では、患者には、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質が少なくとも２０ｇ／日で投与されなければならない。一部の実施形態において、投薬単位は、少なくとも約２０グラムの医薬活性成分を含む。一部の実施形態において、投薬単位は、約２０グラム〜約２００グラム、約２０グラム〜約１００グラム、約２０グラム〜約６０グラム、約２０グラム、約３０グラム、約４０グラム、約５０グラム、約６０グラム、約７０グラム、約８０グラム、約９０グラムまたは約１００グラムの医薬活性成分を含む。好ましい投与様式は経口投与であり、この場合、好ましくは、セイタカナミキソウから抽出された可溶性物質を矯味剤、甘味料または両方などの水以外の少なくとも１種類の賦形剤と合わせる。
セイタカナミキソウエキスのインビトロでの活性
【００８０】
表３は、本発明のエキスによる、いくつかのインビトロ充実性乳癌腫瘍細胞株の活性の阻害の程度を示す。
【００８１】
【表３】
2012501974.tif 000005
【００８２】
表４は、本発明のエキスによる、いくつかのインビトロ充実性癌腫瘍細胞株の活性の阻害の程度を示す。
【００８３】
【表４】
2012501974.tif 000006
【００８４】
セイタカナミキソウ（「ＢＺＬ」）のエキス中の活性化合物を単離し、特性評価することは本発明の一態様である。乾燥後にもどした場合、ならびに該エキスを物理的および化学的手段によって分離した場合、該エキスの活性は低下する。
【００８５】
本明細書で用いる場合、用語「治療する」、「治療すること」および「治療」は、疾患状態の１つ以上の症状が改善されることをいう。治療の好成績は、疾患安定状態、一部もしくは完全寛解、または疾患進行の一部もしくは完全遅滞の達成によって判断され得る。治療の好成績に対する適当なエンドポイントの一例は、平均余命の長期化である。
【００８６】
本明細書で用いる場合、「投与する」、「投与すること」または「投与」は、対処すべき具体的な癌の治療に適した様式での患者への本発明のエキス（１種類もしくは複数種）、または本発明のエキス（１種類もしくは複数種）を含む医薬組成物の送達をいう。
【００８７】
「患者」は、腫瘍を有する哺乳動物、特に、ヒト、より特別には、１種類以上の婦人科癌または乳癌に苦しんでいるヒト女性をいう。
【００８８】
本明細書で用いる場合、用語「有効量」および「治療有効量」は、同義的に、患者集団が、（１）腫瘍サイズが縮小する、（２）腫瘍の転移が抑止される（すなわち、ある程度遅くなる、好ましくは止まる）、（３）腫瘍の増殖がある程度抑止される（すなわち、ある程度遅くなる、好ましくは止まる）、および／または、（４）癌に関連する１つ以上の症状が、ある程度軽減（もしくは好ましくは解消）する、（５）腫瘍の増殖が安定化する、（６）疾患進行までの期間が延びる、（７）全生存率が改善されるという効果を有する組成物または投薬単位の量をいう。
【００８９】
本明細書で用いる場合、「医薬組成物」は、本明細書に記載の１種類以上の化合物または組合せと、生理学的に許容され得る担体および賦形剤などの他の化学成分との混合物をいう。薬理学的組成物の目的は、患者への本発明のエキス（１種類または複数種）の投与を容易にすることである。
【００９０】
本明細書で用いる場合、用語「薬学的に許容され得る」は、薬剤または賦形剤が、医薬組成物における使用に、概ね許容され得るとみなされることを意味する。
【００９１】
本明細書で用いる場合、「生理学的に許容され得る担体」は、生物体に対して有意な刺激を引き起こさず、投与された組成物の生物学的活性および諸特性を消去しない担体または希釈剤をいう。例示的な薬学的に許容され得る担体としては、固形および液状の希釈剤が挙げられる。水、エタノール、プロピレングリコール、およびグリセロールが薬学的に許容され得る液状希釈剤の実例であり、これらのうち、一部の実施形態では水が好ましい。
【００９２】
本明細書で用いる場合、「賦形剤」は、本発明の医薬組成物の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される薬学的に不活性な物質をいう。賦形剤の例としては、限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類およびデンプン類、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油ならびにポリエチレングリコールが挙げられる。賦形剤の群と医薬活性成分の群は、製薬技術分野において互いに排他的とみなされる。一部の好ましい実施形態では、賦形剤は矯味剤、甘味料または両方である。
【００９３】
用語「水以外の賦形剤」は、賦形剤が、矯味剤または甘味料などの水以外のなんらかの賦形剤であるか、または該なんらかの賦形剤を含むものであることを意味する。したがって、用語「水以外の賦形剤」には、水と甘味料または水と矯味剤を含む賦形剤は包含され得るが、水のみを含む賦形剤は除外され得る。水以外の賦形剤と医薬活性成分を含む医薬組成物は、例えば、医薬活性成分と、水と、矯味剤および／または甘味料などのなんらかの他の賦形剤とを含むものであり得る。
【００９４】
本明細書で用いる場合、用語「含む（“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”、“ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ”、“ｃｏｍｐｒｉｓｅ”）」およびその文法的語尾変化形は、包含的またはオープンエンドであり、記載していないさらなる要素または方法工程を排除しない。用語「含む（“ｉｎｃｌｕｄｅ”、“ｉｎｃｌｕｄｅｓ”、“ｃｏｎｔａｉｎ”、“ｃｏｎｔａｉｎｓ”、“ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ”）およびその文法的語尾変化形も、同様に包含的である。
【００９５】
本明細書で用いる場合、語句「〜からなる」は、その文中に記載していない要素、工程または成分をいずれも排除する。
【００９６】
本明細書で用いる場合、語句「本質的に、〜からなる」は、文中に記載した範囲を、指定の材料または工程および特許請求の範囲に記載の発明の基本的かつ新規な特徴に実質的な影響を及ぼさないものに限定する。
【００９７】
本明細書で用いる場合、「ＢＺＬ」は「セイタカナミキソウ」と同義的である。用語「ＢＺＬ１０１」は、癌細胞に対する活性が示されたＢＺＬ特定の抽出物をいう。特に、セイタカナミキソウの着生部分を意図する。
【００９８】
実施例
本発明のエキスを得るハーブは、Ｓｈｅｎ  Ｎｏｎｇ  Ｈｅｒｂｓ、Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから購入した。その実体は、従来の医薬文献を参照することにより確認した。
【００９９】
調製例１
調製例１−半枝蓮（ＢＺＬ）からの活性化合物の単離
乾燥半枝蓮を、８：２のＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏで、６時間および１２時間抽出した。合わせた  抽出物を濾過し、真空濃縮し、続いて、ヘキサンと酢酸エチル（等容量、１回反復）に分配した。合わせた酢酸エチル分配液を真空濃縮し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ親油性ＬＨ−２０媒体（〜１６０ｇ、カラム内径１８００×２５ｍｍ）でクロマトグラフィー処理した（重力下での流下、ＭｅＯＨ−アセトン−Ｈ２Ｏまたは１００％ＭｅＯＨの定組成９：０．５：０．５を使用）。画分（４０ｍｌ）を収集し、分析用ＨＰＬＣ（表３、４）および／またはＲＦ−ＴＬＣ（１：１の１０ｍＭの酢酸アンモニウム−ＭｅＣＮ）解析に基づいて合わせた。
【０１００】
スクテラレイン（１）、イソスクテラレイン（２）、ルテオリン（３）、およびアピゲニン（４）を、一部重複する画分にてＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムから溶出した。分取用ＨＰＬＣ法Ａ（表３、４）を使用し、個々の化合物を精製した。
【０１０１】
フラバノンであるカルタミジン（５）およびイソカルタミジン（６）を一緒に、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムから種々の画分で、上記のフラボンから溶出した。分取用ＨＰＬＣ法Ｂ（表３、４）を使用し、カルタミジン（５）およびイソカルタミジン（６）を精製した。
【０１０２】
イソスクテラレインは、ＬＣ／ＭＳならびに１Ｄおよび２Ｄ  ＮＭＲ解析に基づいて確認した。他の化合物（１，３〜６）はすべて、市販の参照標準または合成した認証済標準とのＬＣ／ＭＳおよびＮＭＲによる比較に基づいて確認した。ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｐｌｕｓ  ４００ＭＨｚを用いて記録した。ＨＰＬＣおよびＵＶスペクトルは、ＤＡＤ検出器を取り付け、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（１５０×２．１ｍｍ、３μｍ）カラムを使用したＡｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １２００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣシステムを用いて記録した。分子量は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ６２１０  ＴＯＦ  ＬＣ／ＭＳをネガティブモードで用いて測定した。使用した機器の諸特性のまとめを表５に示す。
【０１０３】
【表５】
2012501974.tif 000007
【０１０４】
表５  ＨＰＬＣ法。以下に示すカラムを化合物１〜６の単離に使用した。ＨＰＬＣ操作ではすべて、クロマトグラフィーに対して同じ溶媒勾配を使用したが、流速のみ、表示のとおりに変えた。勾配：溶媒Ａ  ０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ  ＭｅＣＮ；１０％Ｂから６０％Ｂまで３０分での線形勾配、最上部保持なし
化合物１〜６の確認に使用したＮＭＲデータを以下に示す。
【０１０５】
スクテラレイン（１）ＣＡＳ＃５２９−５３−３；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ  ２８５．０４２５。式１は、化合物（１）の重要なＨＭＢＣ相関を示す。化合物１のＮＭＲデータを表６に示す。
【０１０６】
【化１】
2012501974.tif 000008
【０１０７】
【表６】
2012501974.tif 000009
【０１０８】
イソスクテラレイン（２）：ＣＡＳ＃４１４４０−０５−５；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ  ２８５。式（２）は、化合物（２）の重要なＨＭＢＣ相関を示す。化合物２のＮＭＲデータを表７に示す。
【０１０９】
【化２】
2012501974.tif 000010
【０１１０】
【表７】
2012501974.tif 000011
【０１１１】
ルテオリン（３）：ＣＡＳ＃４９１−７０−３；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ  ２８５．０４０３。式３は、化合物（３）の重要なＨＭＢＣ相関を示す。化合物３のＮＭＲデータを表８に示す。
【０１１２】
【化３】
2012501974.tif 000012
【０１１３】
【表８】
2012501974.tif 000013
【０１１４】
アピゲニン（４）：ＣＡＳ＃５２０−３６−５；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ  ２６９．０４４７９。式（４）は、アピゲニン（４）の構造を示す。
【０１１５】
【化４】
2012501974.tif 000014
【０１１６】
カルタミジン（５）：ＣＡＳ＃４７９−５４−９；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ  ２８７。式（５）は、化合物（５）の重要なＨＭＢＣ相関を示す。化合物５のＮＭＲデータを表９に示す。
【０１１７】
【化５】
2012501974.tif 000015
【０１１８】
【表９】
2012501974.tif 000016
【０１１９】
イソカルタミジン（６）：ＣＡＳ＃２５６９−７６−８；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ  ２８７。式（６）は、化合物（６）の重要なＨＭＢＣ相関を示す。化合物６のＮＭＲデータを表１０に示す。
【０１２０】
【化６】
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【０１２１】
【表１０】
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【０１２２】
調製例２
調製例２−ヒトでのインビボ実験用のＢＺＬ１０１の調製
ＢＺＬ１０１は、シソ科のセイタカナミキソウの着生部分の水性抽出物である。ハーブセイタカナミキソウ（中国語ピンイン翻字（Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｐｉｎ  ｙｉｎ  ｔｒａｎｓｌｉｔｅｒａｔｉｏｎ）−ハンシレン（ＢＺＬ））は、主に、黄河（Ｈｕａｎｇ  Ｐｏ）の南東地域の四川省、江蘇省、江西省、福建省、広東省、広西自治区および陜西省に生育している。この植物は、開花後、晩夏から初秋に収穫される。着生部分（葉および茎）が根から切り離され、出発材料として（ＢＺＬ）使用される。このハーブの着生部分は天日干され、植物全体がパッケージングされる。このハーブを植物学的、形態学的および化学的特性によって確認および実証し、純度を確かめる。
【０１２３】
単回用量のＢＺＬ１０１を以下の手順によって作製し、ＢＺＬ１０１（Ｂｉｏｎｏｖｏ、Ｉｎｃ．、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）と称する。
・  １８０グラムの生ハーブを摩砕して微粉末にする（２５メッシュ）
・  この粉末を１８００ｍｌの蒸留水と混合し、スラリーを形成する
・  次いで、スラリーを７０〜７２℃で６０分間煮沸する。
・  抽出物をデカンテーションし、２２μｍフィルターに通して濾過する
・  抽出後の上清みの重量は１６８ｇである
・  この溶液の容量は１７５０ｍｌである
・  抽出物を真空エバポレータで濃縮し、水分容量を３５０ｍｌ（これは、元の溶液の５：１濃度で構成）に減少させる
・  抽出物中の可溶性物質の乾燥重量は１２ｇである
・  これを、滅菌真空密閉容器内にパッケージングする
・  細菌、酵母および重金属に関する試験を認定研究所で行なう
【０１２４】
高用量（例えば、２０、３０および４０グラム／日）では、生ハーブ（セイタカナミキソウの着生部分と水の量を比例したスケールとし、可溶性物質の乾燥重量は比例した量となる。
【０１２５】
実施例１
実施例１−セイタカナミキソウ由来の活性分の特性評価
【０１２６】
理論的説明
ＢＺＬ１０１は、乳癌細胞において細胞死を誘発するが、非形質転換乳腺上皮細胞では誘発しない。この選択的細胞傷害性は、腫瘍細胞において、ＢＺＬ１０１により反応性酸素種（ＲＯＳ）が強く誘導されることに基づく。その結果、ＢＺＬ１０１処理癌細胞では、広範な酸化的ＤＮＡ損傷が生じ、壊死性の死より多くなる。ＢＺＬ１０１で処理した細胞の発現プロファイリングのデータは、酸化的ストレス、ＤＮＡ損傷および死滅促進遺伝子の活性化を伴う死滅経路を強く裏付ける。乳癌細胞では、ＢＺＬ１０１によって誘発される酸化的損傷により、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の過剰活性化、続いて、ＮＡＤレベルの持続的減少およびＡＴＰの枯渇（非形質転換細胞ではいずれも観察されない）がもたらされる。ＰＡＲＰの阻害によって壊死の抑制およびアポトーシス死プログラムの活性化がもたらされるため、ＰＡＲＰの過剰活性化は、ＢＺＬ１０１によって誘発される壊死性の死のプログラムのきっかけである。ＢＺＬ１０１処理により、腫瘍細胞において解糖の選択的阻害がもたらされるが、これは、解糖経路における酵素活性の低下および乳酸塩生成の阻害から明白である。腫瘍細胞は、多くの場合、エネルギー生成を解糖に依存しているため、観察された解糖の阻害は、エネルギー崩壊および乳癌細胞において選択的に起こる壊死性の死の重要な因子である可能性がある。癌細胞に対するＢＺＬ１０１のこの有望な選択性は、解糖が高度である腫瘍細胞と正常細胞間の代謝の違いに基づく。
【０１２７】
いくつかの型の実験を、ＢＺＬ１０１から単離した個々の化合物を用いて行なった。
【０１２８】
合計７種類のＢＺＬ１０１由来精製化合物を、水性ＢＺＬ１０１抽出物全体に存在するいくつかの生物学的活性：ＲＯＳ、ＤＮＡ損傷および細胞死の誘導について試験した。以下のパラメータを調べた。
１．ミトコンドリア膜内外電位差（ＭＴＰ）の減少の誘導。試験したすべての化合物で、ＭＴＰの低下が誘導された。
２．反応性酸素種（ＲＯＳ）の誘導。ＲＯＳの細胞透過性インジケータ、例えば、ジヒドロエチジウム（スーパーオキシドに特異的）（図２）、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ（ほとんどの型のＲＯＳ）（図１）およびＭｉｔｏＳＯＸ（ミトコンドリア由来スーパーオキシド）（図３）からの誘導蛍光を、蛍光プレートリーダーおよびＦＡＣＳを用いて試験した。
３．また、化合物を、ミトコンドリア起源のＲＯＳの特異的インジケータ、および／または既知起源（ミトコンドリア、ユビキノンオキシドレダクターゼＮＱＯ（ミトコンドリア複合体Ｉ）およびＮＡＤＰＨオキシダーゼなど）によるＲＯＳ生成の特異的インヒビタのいずれかを用いて誘導されたＲＯＳの潜在的細胞源について試験した。
４．化合物を、ＤＮＡ損傷の誘導について、コメットアッセイ（個々の細胞におけるＤＮＡ損傷検出を可能にする）として知られる試験を用いて試験した（図４）
５．該化合物で処理した細胞の死滅の誘導を、細胞透過性に関するヨウ化プロピジウム試験、続いてＦＡＣＳでの解析を用いて調べた。
６．細胞死の様式（すなわち、アポトーシスと壊死）を、いくつかの基準：アネキシンＶ結合陽性への細胞の変換；ＤＮＡ断片化（アポトーシス死に特徴的）および細胞内ＡＴＰレベルの低下（壊死性の死の際に一般的に観察される）を用いて試験した（図５）。
１．ミトコンドリア膜内外電位差（ＭＴＰ）の減少の誘導。試験したすべての化合物で、ＭＴＰの低下が誘導された。
２．反応性酸素種（ＲＯＳ）の誘導。ＲＯＳの細胞透過性インジケータ、例えば、ジヒドロエチジウム（スーパーオキシドに特異的）（図２）、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ（ほとんどの型のＲＯＳ）（図１）およびＭｉｔｏＳＯＸ（ミトコンドリア由来スーパーオキシド）（図３）からの誘導蛍光を、蛍光プレートリーダーおよびＦＡＣＳを用いて試験した。
３．また、化合物を、ミトコンドリア起源のＲＯＳの特異的インジケータ、および／または既知起源（ミトコンドリア、ユビキノンオキシドレダクターゼＮＱＯ（ミトコンドリア複合体Ｉ）およびＮＡＤＰＨオキシダーゼなど）によるＲＯＳ生成の特異的インヒビタのいずれかを用いて誘導されたＲＯＳの潜在的細胞源について試験した。
４．化合物を、ＤＮＡ損傷の誘導について、コメットアッセイ（個々の細胞におけるＤＮＡ損傷検出を可能にする）として知られる試験を用いて試験した（図４）
５．該化合物で処理した細胞の死滅の誘導を、細胞透過性に関するヨウ化プロピジウム試験、続いてＦＡＣＳでの解析を用いて調べた。
６．細胞死の様式（すなわち、アポトーシスと壊死）を、いくつかの基準：アネキシンＶ結合陽性への細胞の変換；ＤＮＡ断片化（アポトーシス死に特徴的）および細胞内ＡＴＰレベルの低下（壊死性の死の際に一般的に観察される）を用いて試験した（図５）。
【０１２９】
図１〜図５に示したデータを、以下の表１１にまとめる。
【０１３０】
【表１１】
2012501974.tif 000019
【０１３１】
表１１にまとめた実験では、２種類の乳癌細胞株ＭＤＡ  ＭＢ  ２３１およびＳＫＢｒ３を使用し、同様の結果であった。
【０１３２】
結果
すべての試験化合物で、ミトコンドリア膜内外電位差の減少が誘導された（モック処理細胞（表示せず）と比べて２５〜９０％の範囲のＭＴＰ低下）。
【０１３３】
ほとんどの化合物は細胞傷害活性を有するが、各々の細胞傷害性の程度は異なる（表１１）。これらの化合物は、反応性酸素種（ＲＯＳ）、ＤＮＡ損傷および細胞エネルギー状態の誘導に対して識別的効果を有する（図１〜５）。したがって、ＢＺＬ１０１抽出物は、いくつかの化合物を含み、場合によっては、異なる細胞死誘導様式を有する。
【０１３４】
種々の化合物による死滅誘導機構の解析により、少なくとも２つの異なる細胞傷害性様式が明らかである。
【０１３５】
試験した化合物ではすべて、細胞に、酸化体感受性蛍光プローブ５−（および−６）−クロロメチル−２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテートアセチルエステル（ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡまたはＤＣＦＤＡ）を負荷することにより測定した場合、処理の数分以内に細胞内ＲＯＳが誘導される。ＤＣＦＤＡは、環元形態では非蛍光性であり、易膜透過性である。その酢酸基が、細胞内エステラーゼにより切断される。次いで、チオール反応性クロロメチル基が細胞内チオールに結合し、該色素を細胞内部に取り込み、そこで、酸化によって蛍光性形態に変換される。ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡは、細胞内過酸化水素、ヒドロキシルラジカル、および過酸化水素の下流に存在する種々のフリーラジカル生成物によって酸化される。これは、スーパーオキシドによる酸化に対して比較的非感受性である。しかしながら、過酸化水素は、スーパーオキシドの不均化によって生成されるため、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡは、スーパーオキシド生成の間接的インジケータとしての機能を果たす。図１からわかるように、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡは、細胞内で、試験したすべてのＢＺＬ１０１化合物によって酸化されるが、誘導されたＲＯＳの総レベルは異なる。
【０１３６】
また、スーパーオキシドによって選択的に酸化される細胞透過性インジケータであるジヒドロエチジウムでの細胞の染色によって測定したとき、すべての試験化合物で、スーパーオキシドが誘導された。サイトゾル内でのジヒドロエチジウムは青色蛍光を示すが、このプローブは、スーパーオキシドによってエチジウムに酸化されると、細胞のＤＮＡ内にインターカレートされ、核を明るい蛍光性の赤色に染色し、これは、フローサイトメトリー法によって容易に検出される（図２）。
【０１３７】
２つのフラボノイド、アピゲニンとルテオリンは、起源がミトコンドリアであると特定されたスーパーオキシドの生成を誘導する。ミトコンドリア由来スーパーオキシドＭｉｔｏＳＯＸの特異的検出体は、アピゲニンおよびルテオリンによって蛍光性形態に変換されたが、他の化合物では変換されなかった。また、ミトコンドリア呼吸インヒビタ（アジ化ナトリウム，ＮａＮ３）およびミトコンドリア複合体Ｉインヒビタ（ジクマロール、表示せず）により、アピゲニンおよびルテオリンによるスーパーオキシドの生成が抑制された（図３）。
【０１３８】
アピゲニンおよびルテオリンは他の化合物と、ＤＮＡ損傷を誘発しないという点で相違する（図４）。しかしながら、両者は細胞傷害性であり、処理の最初の時間中に観察されるアネキシンＶ結合、ＤＮＡ断片化、およびわずかであるが一貫性のＡＴＰレベルの上昇に基づいてアポトーシス性であると特性評価される有意な細胞死を誘発する（図５）。このような特徴はすべて、アポトーシス死の証明である。
【０１３９】
テトラヒドロキシフラボン（スクテラレイン、イソスクテラレイン、カルタミジンおよびイソカルタミジン）またはペンタヒドロキシフラボン（名称なし）のいずれかであると特定された５種類の化合物は、相違する機構によって細胞死を誘発する。これらはＲＯＳを誘導するが、ミトコンドリア外起源のものではない（その起源は測定の余地がある）。また、これらの化合物はＤＮＡ損傷を誘発し、その程度は、ＲＯＳの誘導レベルと相関しているようである。スクテラレインなどの化合物によって誘導されるＲＯＳの型は、ＤＮＡ損傷の誘導において特に活性であることが考えられ得る（一重項酸素など）。スーパーオキシドは膜透過性でなく、直接的な酸化的ＤＮＡ損傷を誘発することができないため、これらの化合物によって誘導されるＲＯＳのほとんどはスーパーオキシドではないと仮定することが妥当である。しかしながら、スーパーオキシドが細胞内で速やかに過酸化物に変換され、直接ＤＮＡを損傷させることがあり得る。
【０１４０】
全ＢＺＬ１０１抽出物と同様、上記の５種類の化合物は、細胞内ＡＴＰレベルの低下を誘導する。ＡＴＰの低下は、アネキシンＶに対する染色欠如または低染色とともに、さらに壊死性様式の細胞死と整合する。
【０１４１】
図の説明
図１  ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡでの染色によって調べたときのＳＫＢｒ３細胞におけるＲＯＳの誘導。表示した化合物を、細胞に２０μｇ／ｍｌ増殖培地で添加した後、１０μＭのＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡを添加した。ミトコンドリア呼吸インヒビタＮａＮ３を１０ｍＭで添加した。３０分間のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、ＦＡＣＳｃａｎで蛍光について解析した。化合物名は、この図および他の図において、以下のとおり、Ａ−アピゲニン、Ｃ−カルタミジン、Ｌ−ルテオリン、Ｓ−スクテラレイン、ＩＣ−イソカルタミジン、ＩＳ−イソスクテラレイン、Ｐ−分子量３２０を有する種（ペンタヒドロキシルフラボンと思われる）と略記する。
【０１４２】
図２  ジヒドロエチジウムでの染色によって調べたときのＳＫＢｒ３細胞におけるスーパーオキシドの誘導。表示した化合物を細胞に添加した後、５μＭのジヒドロエチジウムを添加した。２０分間のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、ＦＡＣＳｃａｎで蛍光について解析した。
【０１４３】
図３  細胞を、ミトコンドリア由来スーパーオキシドのインジケータであるＭｉｔｏＳＯＸで染色した。処理は、図２の説明に記載のとおりとした。
【０１４４】
図４  ＢＺＬ１０１から単離した化合物によるＳＫＢｒ３細胞におけるＤＮＡ損傷の誘導を、コメットアッセイを用いて解析した。細胞を、２０μｇ／ｍｌの表示した化合物で１５分間処理し、ＤＮＡ損傷について、Ｃｏｍｅｔアッセイキット（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ製）を製造業者の使用説明書に従って解析した。簡単には、細胞を収集し、洗浄し、ＰＢＳで再懸濁させた。この細胞を、３７℃の融解低融点アガロースと合わせ、コメットスライド上にピペッティングした。アガロースを４℃で３０〜４０分間固化させ、冷溶解溶液（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ，Ｉｎｃ．）中に４℃で３０分間浸漬させた。このスライドを、新たに調製したアルカリ溶液（３００ｍＭ  ＮａＣｌおよび１ｍＭ  ＥＤＴＡ）中に２０分間浸漬させ、同じアルカリ性バッファー中、３００ｍＡでの電気泳動に３０〜４０分間供した。スライドを水中ですすぎ処理し、次いで、７０％エタノール中で５分間固定した。風乾後、核をＳｙｂｒ  ｇｒｅｅｎ（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ，Ｉｎｃ．）で染色し、蛍光顕微鏡下で観察した。コメットを有する細胞の割合を、スライドの実体について知らされていない観察者が定量した。
【０１４５】
図５  ＳＫＢｒ３細胞を９６ウェルプレート上で平板培養し、表示した化合物で４時間処理した。細胞をインサイチュで溶解させ、ＡＴＰ含有量を、ＡＴＰ  Ｂｉｏｌｕｍｉｅｓｃｅｎｃｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  ＨＳＩＩ（Ｒｏｃｈｅ製）を使用し、９６ウェルプレートに対する照度計にて解析した。
結論
ＢＺＬ１０１抽出物は、細胞傷害活性を有する化合物を含有する。このような化合物は、ミトコンドリアおよび細胞ＤＮＡに対して異なる効果を示すが、すべて、ヒト癌細胞に対して細胞傷害活性を有する。特定された２種類の化合物アピゲニンおよびルテオリンは、ミトコンドリアスーパーオキシド、およびミトコンドリア経路または固有の経路によって実行されるアポトーシス死を誘導する。
【０１４６】
その他の５種類の化合物、特に、スクテラレインとイソスクテラレインは、ＲＯＳを誘導した後、ＤＮＡ損傷、およびプログラムされた壊死の証明を有する細胞死を誘導する。
実施例２−セイタカナミキソウから抽出された活性分の分離および相乗活性
実施例２に示したように、セイタカナミキソウから抽出されたいくつかの化合物は、反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成、ＤＮＡ損傷および細胞死を誘導することが示された。単離された種の複合活性を、より良好に理解するため、半枝蓮から単離されたいくつかのフラバノンおよびフラボンを、個々に、および組合せで試験した。試験したフラバノンおよびフラボンを図８に示す。これらの化合物１〜８を、ＲＯＳの誘導、ＤＮＡ損傷および細胞死について、実施例２に記載のようにして試験した。この試験の結果を、以下の表１２および１３に示す。
【０１４７】
【表１２】
2012501974.tif 000020
【０１４８】
【表１３】
2012501974.tif 000021
【０１４９】
表１２および表１３においてわかるように、ルテオリンとイソスクテラレインの組合せは、反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において、同じ濃度のルテオリン単独よりもはるかに有効である。同様に、このルテオリンとイソスクテラレインの組合せは、反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において、同じ濃度のイソスクテラレイン単独よりもはるかに有効である。この意味において、イソスクテラレインとルテオリンの組合せは、ＲＯＳの誘導生成および細胞死に対して相乗効果を有すると考えられる。
【０１５０】
また、表１２および１３から自明のことは、ルテオリンとアピゲニンの組合せは、反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において、同じ濃度のルテオリン単独よりもはるかに有効であるということである。同様に、ルテオリンとアピゲニンの組合せは、反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において、同じ濃度のアピゲニン単独よりもはるかに有効である。この意味において、アピゲニンとルテオリンの組合せは、ＲＯＳの誘導生成および細胞死に対して相乗効果を有すると考えられる。
【０１５１】
表１２および１３においてわかるように、アピゲニンとイソスクテラレインの組合せは、反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において、同じ濃度のアピゲニン単独よりもはるかに有効である。同様に、このアピゲニンとイソスクテラレインの組合せは、反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成および細胞死の誘導において、同じ濃度のイソスクテラレイン単独よりもはるかに有効である。この意味において、イソスクテラレインとアピゲニンの組合せは、ＲＯＳの誘導生成および細胞死に対して相乗効果を有すると考えられる。
【０１５２】
表１２および１３に示した結果を、２種類の異なる乳癌細胞株で実験を行なうことによって確認した。
【０１５３】
実施例４−ヒトにおけるＢＺＬ１０１由来活性分のインビボ有効性
経口ＢＺＬ１０１の安全性と臨床的活性を示すため、セイタカナミキソウから単離された活性化合物の組合せを、進行乳癌を患うヒト患者において試験する。
【０１５４】
適格患者は、組織学的に確認された転移性乳癌および測定可能な疾患を有する。患者は、治験中、なんら他の化学療法、ホルモン療法または漢方薬を受けない。患者は、３５０ｍｌ（アピゲニン、ルテオリン、スクテラレインおよびスクテラリンからなる群のうちの１、２、３、４、５または全種類の０．００００１〜１グラムに相当）の薬物／日を、疾患進行、毒性または個人の選択によって中止されるまで受ける。主要エンドポイントは、安全性、毒性および腫瘍の応答である。
【０１５５】
患者は、登録を行ない、薬物を受ける。平均年齢およびこれまでの平均処置回数を記録する。血液学的およびグレードＩＩＩまたはＩＶの非血液学的有害事象（ＡＥ）を、あれば追跡し、記録する。悪心、下痢、頭痛、膨満感、嘔吐、便秘および疲労感などのグレードＩおよびＩＩの有害事象を報告する患者がいれば、留意し、記録する。応答について評価可能な患者を評価し、また、疾患安定状態（ＳＤ）を９０日間より長く有する患者、およびＳＤを１８０日間より長く有する患者に留意し、記録する。また、軽微な客観的腫瘍退縮を有する患者にも留意し、記録する。
【０１５６】
患者を１ヶ所以上の適当な研究センターに登録させ、治験審査委員会によって承認されたインフォームドコンセントの同意を得る。以下の場合：広範な肝臓浸潤（肝臓実質の５０％より多い）、治療によって３ヶ月より長い間安定しないリンパ管炎性肺浸潤、中枢神経系浸潤または脊髄圧迫、多数回または重度の食物または薬アレルギー歴および器官または骨髄機能不全（クレアチニン２．０ｇ／ｄｌを超える、総ビリルビン１．７ｇ／ｄｌを超える、白血球数２，５００細胞／μＬ未満、および血小板数７５，０００ｍｍ３未満（「ｄｌ」＝デシリットル）によって規定）患者を試験から除外する。
【０１５７】
安全性のモニタリングを継続的に行ない、医師が患者をベースライン検査についてＹ週毎に診察する。有害事象を、Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａバージョン２を用いて等級分類し、器官系によって分類し、試験薬物に関して関連性が薄い、関連している可能性あり、おそらく関連している、または明白に関連しているとコード化する。ベースライン腫瘍評価は、試験薬物開始の１４日以内および３ヶ月毎に行なう。応答はＲＥＣＩＳＴ基準を用いて評価する。試験薬物は来院のたびに投与し、この来院時に、コンプライアンスと摂取投薬量の検討を行なった。試験薬物は、液状物として、１日２回の分割用量で投与する全日用量を入れたラベル表示密封アルミニウムパックにて提供する。１日分の試験薬物は、腫瘍進行または用量制限毒性の判定が見られるまで、あるいは、被検体が自主的に中止を決定するまで（この場合、中止の理由を得る）投与する。
【０１５８】
結果
上記の試験の結果に留意し、試験のエンドポイントの達成に基づいて評価する。
実施例４−セイタカナミキソウから抽出された可溶分中の活性分の濃度
ＢＺＬ１０１は、本明細書に記載のようにして調製する。活性化合物ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンを特定し、１ｍｇのＢＺＬ１０１に対して定量する。ＢＺＬ１０１の１ｍｇの可溶分中のルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの各々の質量を表１４に示す。
【０１５９】
【表１４】
2012501974.tif 000022
【０１６０】
表１４においてわかるように、この実例としての非限定的な実施例では、セイタカナミキソウから抽出された可溶分は１ｍｇ中、約０．４４μｇ±０．０５μｇのルテオリン、０．４９μｇ±０．０４μｇのアピゲニン、２．１μｇ±０．２μｇのスクテラレインおよび１５μｇ±２μｇのスクテラリンを含む。したがって、セイタカナミキソウから抽出された乾燥可溶分は１ｍｇあたり、ルテオリン、アピゲニン、スクテラレインおよびスクテラリンの組合せを約１８μｇ±５μｇ、約１：１．１：４．８：３４の割合で含む。
【０１６１】
実施例５
実施例５−処置抗療性の転移性乳癌の処置におけるセイタカナミキソウエキス
転移性乳癌患者での処置を、セイタカナミキソウエキス（「ＢＺＬ１０１」）を用いて行なった。抽出物ＢＺＬ１０１は、本質的に本明細書において上記のようにして調製し、１回以上の転移性乳癌処置クールを受けた患者に投与した。ＢＺＬ１０１は、１日１回（ｑ．ｄ．）または１日２回（ｂ．ｉ．ｄ．）のいずれかで、後述するとおりに投与した。投与した２０グラム、３０グラムおよび４０グラムの用量は、半枝蓮に関する文献でこれまでに報告された用量よりもずっと高いにもかかわらず、耐容性が良好であった。また、数名の患者では、後述するように有効性が示された。
【０１６２】
ＢＺＬ１０１は、新規な作用機序を示す半枝蓮エキスである。正常細胞は、エネルギー生成をクエン酸回路（＞８５％）と解糖（＜７％）に依存する。癌細胞は、エネルギー生成を解糖（＞８５％）に依存する。ＢＺＬ１０１は、解糖を阻害することによりエネルギー生成を抑止する。ＢＺＬ１０１はＤＮＡ損傷および癌細胞死を引き起こす。ＢＺＬ１０１正常細胞では細胞死を引き起こさない。
【０１６３】
癌細胞におけるＢＺＬ１０１の選択的細胞傷害活性に対して、以下の根拠が提唱されている。腫瘍細胞は、エネルギー生成を解糖に依存する。これは、反応性酸素種（ＲＯＳ）の内因性レベルの上昇と関連している。正常細胞は、エネルギー需要を酸化的リン酸化に依存する。さらに、ＢＺＬ１０１処理により、腫瘍細胞内のＲＯＳレベルが増大し、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の過剰活性化および大量の酸化的ＤＮＡ損傷がもたらされる。正常細胞では、ＢＺＬ１０１処理により、軽度のＲＯＳレベルの増大および中等度のＤＮＡ損傷がもたらされるにすぎず、ＰＡＲＰ活性化はない。
【０１６４】
ＰＡＲＰの活性化により、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ（ポリＡＤＰ−リボース合成の基質）が枯渇し、ＡＴＰが貯蔵される。解糖は、サイトゾル内ＮＡＤ＋がＡＴＰ生成のための基質として使用され、ＮＡＤ＋の減少によって抑止される（酸化的リン酸化では、ミトコンドリアＮＡＤ＋がＡＴＰの生成に使用されるが、一般的に、ＰＡＲＰ活性化によって影響されない）。ＢＺＬ１０１誘導性ＰＡＲＰ活性化によるＮＡＤ＋およびＡＴＰの枯渇によって解糖の阻害がもたらされ、さらに、ＡＴＰレベルの低下および細胞死がもたらされる。Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ  ２００７  Ｓｅｐ、１０５（ｌ）１７−２８。電子公開２００６年１１月ｌ７日。ＰＭＩＤ：１７１１１２０７；Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２００８年１月７日；７（４）［出版前に電子公開］ＰＭＩＤ  １８３０５４１０。
【０１６５】
実施例３に概要を示した治験およびこのフェーズ１Ｂ治験（実施例５）の主な特徴を、以下の表１５において比較する。
【０１６６】
【表１５】
2012501974.tif 000023
ＢＺＬ１０１フェーズ１Ｂ癌治験の主な特徴は、以下のとおりにまとめられる。
ＢＺＬ１０１フェーズ１Ｂの設計
【０１６７】
一次
・  ＢＺＬ１０１の最大耐用量を調べるため
・  ＢＺＬ１０１の安全性と有効性に関する予備データを得るため
二次
・  ＲＥＣＩＳＴ（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  Ｉｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ）によって規定される腫瘍の応答
・  進行なしの全生存率
・  応答持続期間
・  参加者によって報告されたＱＯＬ（ＥＯＲＴＣ  ＱＬＱ−Ｃ３０）の変化
【０１６８】
主な適格性基準
・  組織学的に確認された乳癌を有していなければならない
・  測定可能な病期ＩＶの疾患を有していなければならない
・  転移性疾患に対するこれまでの化学療法は３回以下である（最初は制限なしの回数、試験途中で最大３回に補正した）
【０１６９】
用量漸増の要旨を以下の表１６に示す。
【０１７０】
【表１６】
2012501974.tif 000024
【０１７１】
試験にエントリーした患者のベースライン特徴は、以下の表１７に示すとおりである。
【０１７２】
【表１７】
2012501974.tif 000025
【０１７３】
試験参加者の個体群統計の内訳を以下の表１８にまとめる。
【０１７４】
【表１８】
2012501974.tif 000026
【０１７５】
試験参加者に起こった有害事象の数および型を以下の表１９に示す。
【０１７６】
【表１９】
2012501974.tif 000027
【０１７７】
フェーズ１Ｂ  用量制限毒性の定義
（ａ）試験薬物投与に関連している可能性あり、おそらく関連している、または明白に関連しているＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ  Ｖ  ３．０に基づくグレード３、４または５の毒性
（ｂ）試験薬物投与に関連している可能性あり、おそらく関連している、または明白に関連している３週間より長く持続しているグレード２の胃腸への毒性
（ｃ）試験薬物投与に関連している可能性あり、おそらく関連している、または明白に関連しているグレード３以上に悪化するベースライン検査値状態または病状
試験参加者に起こった用量制限毒性（ＤＬＴ）を以下の表２０に示す。
【０１７８】
【表２０】
2012501974.tif 000028
【０１７９】
フェーズ１Ｂ  有害事象のまとめ
ａ）ＢＺＬ１０１は耐容性が良好である。最もよく見られる関連有害事象は下痢（４８％）、悪心（４０％）、嘔吐（２６％）および疲労感（２２％）である。
ｂ）この試験では１２例の重篤な有害事象がみとめられ、１例のみが試験薬物投与に関連していると思われた。４０ｇ／日の用量で嘔吐によるグレード３の肋骨痛で入院
ｃ）ＤＬＴを伴う患者が３例みられた。
（ｉ）グレード４のＡＳＴ上昇、
（ｉｉ）同じ患者でのグレード３の下痢およびグレード３の疲労感、および
（ｉｉｉ）嘔吐によるグレード３の肋骨痛  
【０１８０】
試験薬物投与のコンプライアンスを以下の表２１に示す。
【０１８１】
【表２１】
2012501974.tif 000029
【０１８２】
フェーズ１Ｂ  予備有効性
ａ）２７名中２１名は２８日間以上の治験を受けた
ｂ）８／２１（３８％）は９０日間より長く安定
ｃ）４／２１（１９％）は１８０日間より長く安定
ｄ）２７名中１８名は、ＲＥＣＩＳＴによって評価可能である（少なくとも１つの測定可能な病変および追跡スキャンを終了または保留中）
ｅ）６／１８（３３％）は９０日間より長く安定
ｆ）３／１８（１７％）は１８０日間より長く安定
これらの結果を以下の表２２にまとめる。
【０１８３】
【表２２】
2012501974.tif 000030
【０１８４】
フェーズ２  転帰の測定
主要転帰
【０１８５】
ＲＥＣＩＳＴ基準を使用し、腫瘍の応答速度に基づいた有効性の予備推定値を得る
【０１８６】
有害事象を、クリニックへの来院のたびに、自己報告、身体検査および検査結果によって評価する
【０１８７】
副次的転帰
ａ．腫瘍の応答：臨床的有益性の割合、完全応答、一部応答、疾患の進行
ｂ．応答持続期間および生存期間：全応答、完全応答および一部応答の持続期間、全生存率、ならびに進行なしの生存
ｃ．ＥＯＲＴＣ  ＱＬＱ−Ｃ３０を用いた生活の質の変化
まとめ
得られたＭＦＤは４０ｇ／日であった。フェーズ２は、２０ｇ／日で進め、８０名の患者（４０名のＨＲ＋および４０名のＨＲ−）を登録する。
【０１８８】
半枝蓮エキスは、乳癌細胞の増殖をインビトロで抑止する。
【０１８９】
ＢＺＬ１０１処理により、解糖経路における酵素活性の低下および乳酸塩生成の阻害から明白なように、解糖の阻害がもたらされる
【０１９０】
ＢＺＬ１０１は、癌細胞において選択的細胞死を誘起するが、健常細胞では誘起しない
【０１９１】
ＢＺＬ１０１の経口投与は耐容性が良好である。最もよく見られる有害事象は下痢（４８％）、悪心（４０％）、嘔吐（２６％）および疲労感（２２％）である
【０１９２】
ＤＬＴを伴う患者が３例みられた。グレード４のＡＳＴ上昇、同じ患者でのグレード３の下痢およびグレード３の疲労感、ならびに嘔吐によるグレード３の肋骨痛
【０１９３】
１例のＳＡＥはＢＺＬ１０１に起因するものであった。４０ｇ／日で嘔吐によるグレード３の肋骨痛で入院
【０１９４】
平均すると、試験薬物投与のコンプライアンスは、服用した処方用量の９０％であった
この重度前処置集団では、７／１８（３９％）が９０日間より長く安定しており、４／１８（２２％）が１８０日間より長く安定していた。
【０１９５】
登録された２７名の女性のうち、１８名は進行のため、３名は患者による選択のため、２名はＡＥのため、２名はＳＡＥのため、および１名は試験手順不適合のため中止した。
【０１９６】
前述のことから、２０グラム、３０グラムまたは４０グラム（乾燥重量）の用量で投与されたセイタカナミキソウエキスは、転移性乳癌、特に、処置に対して抗療性であることが示された転移性乳癌の処置に有効であり、耐容性が良好であるであることがわかる。
【０１９７】
前述のことから、１５グラム（乾燥重量）〜６０グラム（乾燥重量）の日用量のセイタカナミキソウエキスが、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ陰性乳癌および／または三重陰性乳癌（他の組織に転移したものを含む）の治療に有効であると考えられる。また、このような用量は、他のＥＲ陰性、ＰＲ陰性、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ陰性および三重陰性癌の治療にも有用であると考えられる。２０、３０および４０グラム（乾燥重量）／日の用量は、前述の癌、特に、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ陰性乳癌および／または三重陰性乳癌（他の組織に転移した乳癌を含む）の治療に特に有用であると考えられる。
【０１９８】
ＢＺＬ１０１のさらなる臨床試験は、実施例４に示した方法論に従って行なわれ得る。癌と診断された患者を、２０グラム（乾燥重量）、３０グラム（乾燥重量）または４０グラム（乾燥重量）（あるいは、一例として１５グラム（乾燥重量）より多くの他の量、例えば、約１５〜６０グラム（乾燥重量））のＢＺＬ１０１で処置し、実施例４に示したようにして評価する（処置対象の病状に応じた適切な修正を伴う）。処置対象の例示的な癌としては、副腎皮質細胞癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨の癌、骨転移、成人ＣＮＳ脳腫瘍、小児ＣＮＳ脳腫瘍、乳癌、キャッスルマン病、頚部癌、小児非ホジキンリンパ腫、結腸および直腸の（結腸直腸）癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング家族性腫瘍、目の癌、胆嚢癌、胃腸の類癌腫、胃腸の間質腫瘍、妊娠性絨毛疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭および下咽頭の癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、小児白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、肝臓癌、肺癌、肺カルチノイド腫、非ホジキンリンパ腫、男性の乳癌、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔および鼻傍の癌、鼻咽頭癌、神経芽腫、口腔および口腔咽頭の癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫（成人の柔軟性組織の癌）、黒色腫皮膚癌、非黒色腫皮膚癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストローム型マクログロブリン血症、ウイルス起源の癌およびウイルス関連の癌が挙げられる。
【０１９９】
全体の結び
本明細書において、本発明の好ましい実施形態を図示および記載したが、かかる実施形態は例示の目的で示したにすぎないことは当業者に自明であろう。本明細書において、数多くの変形、変更および置き換えが、当業者に、本発明から逸脱することなく想起されよう。本明細書に記載した本発明の実施形態に対する種々の択一例が、本発明の実施において使用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲によって本発明の範囲が規定されること、ならびにこの特許請求の範囲およびその均等の範囲に含まれる方法および構造が当該特許請求の範囲に包含されることを意図する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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2012501974.tif 000037
2012501974.tif 000038
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