(57)【要約】本発明は、特定の新規化合物、それらを製造するための方法、およびキナーゼ媒介障害を治療または改善するための方法に関する。より具体的には、本発明は、選択的キナーゼ阻害薬として有用な置換キナゾリン化合物、それらの化合物を製造するための方法、およびキナーゼ媒介障害を治療または改善するための方法に関する。特に本方法は、心血管疾患、糖尿病、糖尿病関連障害、炎症性疾患、免疫障害、癌、および眼疾患、たとえば網膜障害または黄斑変性症または他の硝子体網膜疾患などを含めたキナーゼ媒介障害を治療または改善することに関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造（Ｉ）を有する化合物およびその医薬的に許容できる塩、水和物または溶媒和物：
【化１】
2012514020.tif 000013
［式中：
Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アリール、ヘテロアリール、−ＣＮ、−ハロゲン、−ＣＦ３、−ＯＲ４であり、
Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＲ４，−ＯＣＯＲ４、−ＣＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ４ＣＯＲ５、−ＮＲ４ＣＯＯＲ５、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＯＲ４、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＣＯＲ４、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＮＲ４Ｒ５、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＮＲ４ＣＯＲ５、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＮＲ４ＣＯＯＲ５であり、
Ｘは、結合、または（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂ、（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂＹ（ＣＨ２）ｃもしくは−［（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂ］ｍ−（Ｚ）ｅ−［（ＣＨ２）ｃＹ（ＣＨ２）ｄ］ｎであり、これらにおいて：
ａ、ｂ、ｃおよびｄは、独立して０、１、２または３であり、
ｅは、０、１または２であり、
ｎおよびｍは、独立して０または１であり、
Ｗは、−ＣＯ−、−Ｏ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−、−ＣＨＯＨ−、−ＮＲ６−、ＮＲ７ＣＯＮＲ８またはＮＲ７ＳＯ２ＮＲ８であり、
Ｙは、−ＣＯ−、−Ｏ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−、−ＣＨＯＨ−または−ＮＲ６−、ＮＲ７ＣＯＮＲ８またはＮＲ７ＳＯ２ＮＲ８であり、
Ｚは、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ｅが２である場合、各Ｚ部分は互いに独立して選択され；
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、その際、Ｒ４とＲ５は一緒に５〜７員環を形成することができ、
Ｒ７およびＲ８は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、その際、Ｒ７とＲ８は一緒に５〜７員環を形成することができる］。
【請求項２】
Ｒ１はアリール、より好ましくはフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１はＲ９およびＲ１０で置換されており、ここでＲ９／Ｒ１０はＣ１−Ｃ４アルキル、ハロゲンまたは−ＯＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１はフェニルであり、２、５または６位においてＲ９およびＲ１０で置換されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２は水素またはメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘは結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘは（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂであり、ここでａは０であり、ｂは２であり、Ｗは−Ｏ−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘは（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂＹ（ＣＨ２）ｃであり、ここでａは０であり、ｂは１であり、ｃは０であり、Ｗは−Ｏ−であり、Ｙは−ＣＯ−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｘは−［（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂ］ｍ−Ｚ−［（ＣＨ２）ｃＹ（ＣＨ２）ｄ］ｎであり、ここでｍは０であり、ｎは１であり、ｃは０であり、ｄは０または２であり、Ｙは−ＣＯであるかまたは存在せず、Ｚはイミダゾリン−２−オンまたはピペラジンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３はＣ１−Ｃ４アルキル、より好ましくはＣＨ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ３はＣ１−Ｃ４アルキル基、好ましくはメチル基であり、Ｒ９で置換されており、ここでＲ９は好ましくはＯＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ３はヘテロアリール基、好ましくはピリジンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３はヘテロシクロアルキル、好ましくはピロリジン、ピペリジン、アゼピン、ピペラジンまたはモルホリン、より好ましくはピロリジンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３はＲ９で置換されたヘテロシクロアルキルであり、ここでＲ９は好ましくは−ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ４、−Ｎ［ＣＨ３］２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イル］−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］−アミン；
４−クロロ−３−｛２−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−キナゾリン−６−イル｝−フェノール；
（Ｒ）−１−（２−｛４−［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−エチル）−ピロリジン−２−カルボン酸；
１−｛４−［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−３−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−イミダゾリジン−２−オン；
１−（４−｛４−［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−エタノン；
（４−｛４−［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−４−イル−メタノン；
１−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−３−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−イミダゾリジン−２−オン；
２−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−１−（（Ｒ）−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル）−エタノン；
１−（（Ｒ）−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル）−２−｛４−［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−エタノン；
１−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−３−（２−メトキシ−エチル）−イミダゾリジン−２−オン；
３−｛２−［４−（２−アゼパン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−キナゾリン−６−イル｝−４−クロロ−フェノール；
［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イル］−（４−ピペラジン−１−イル−フェニル）−アミン；
４−クロロ−３−｛８−メチル−２−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−キナゾリン−６−イル｝−フェノール；
［（Ｒ）−１−（２−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−アセチル）−ピロリジン−３−イル］−ジメチル−アンモニウム；
［（Ｒ）−１−（２−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−アセチル）−ピロリジン−３−イル］−ジメチル−アンモニウム；
４−クロロ−３−［２−（３−ヒドロキシメチル−フェニルアミノ）−８−メチル−キナゾリン−６−イル］−フェノール；
（Ｒ）−１−（２−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−エチル）−ピロリジン−２−カルボン酸；
１−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−３−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−イミダゾリジン−２−オン；
（Ｒ）−１−［２−（３−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−２−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−エチル］−ピロリジン−２−カルボン酸；
１−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−３−［２−（（Ｒ）−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル）−エチル］−イミダゾリジン−２−オン；
１−（４−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−エタノン；
（４−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−４−イル−メタノン；
（４−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イル−メタノン；
（４−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−２−イル−メタノン；
２−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−１−（（Ｒ）−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル）−エタノン；
およびその塩、水和物、溶媒和物からなる群から選択される、前記請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定の新規化合物、それらを製造するための方法、およびチロシンキナーゼ調節異常を伴う障害、たとえば血管透過性亢進または血管新生に関連する障害を治療または改善するための方法に関する。より具体的には、本発明は、選択的キナーゼ阻害薬として有用な置換キナゾリン化合物、それらの化合物を製造するための方法、およびキナーゼ媒介障害を治療または改善するための方法に関する。特に本方法は、心血管疾患、糖尿病、糖尿病関連障害、炎症性疾患、免疫障害、癌、および眼疾患、たとえば網膜障害または黄斑変性症または他の硝子体網膜疾患などを含めた、チロシンキナーゼ調節異常を伴う障害を治療または改善することに関する。
【背景技術】
【０００２】
血管外への体液および細胞の通過は、さまざまな状況で炎症、組織傷害、浮腫および死に関与する重大な要因である。これらには、虚血性傷害、毒素ショック、火傷、外傷、アレルギー反応および免疫反応が含まれる。血管透過性は、一部は内皮細胞間の細胞−細胞接着により調節されている。血管を内張りする内皮細胞単層は、血液流体コンパートメントの統合性を維持するバリヤーを形成するが、調節された様式での可溶性因子および白血球の通過は許容する。このプロセスの調節異常により周囲組織内への血管漏出が生じ、これに伴って病的浮腫性状態に関連した炎症が起きる。血管透過性は精密に調整された機能であり、防御免疫応答および創傷治癒にプラスに寄与することができる；しかし多数の病的状況では、大量および／または慢性的な体液漏出、ならびに組織内への免疫細胞の移動が、重大な、時には生命を脅かす結果をもたらす可能性がある。
【０００３】
黄斑領域の浮腫をもたらす異常な網膜血管透過性は、糖尿病性網膜障害、滲出性黄斑変性症、網膜血管閉塞、ならびに炎症および新生状態などの疾患における失明の主因である。さまざまな疾患プロセスが種々の機序で血管透過性亢進をもたらす可能性があるが、サイトカインＶＥＧＦは血管漏出の誘導物質として主要な役割を果たすことが知られている。ＶＥＧＦは最初は、腫瘍細胞が分泌する急速かつ可逆的な微小血管透過性亢進を刺激する効力をもつ血管透過因子（ＶＰＦ）として記載された(Senger et al., 1983, Science., 25, 219, 983-5)。たとえば虚血性網膜障害ならびにおそらく滲出性黄斑変性症およびブドウ膜炎における血管透過性亢進もＶＥＧＦレベルと相関しており(Fine et al., 2001, Am. J. Ophthalmol., 132, 794-796 ; Boyd et al., 2002, Arch Ophthalmol., 120, 1644-1650)、ＶＥＧＦアンタゴニストを用いて、一連の罹病患者において血管新生性の眼疾患、たとえば加齢性黄斑変性症における網膜／黄斑浮腫を軽減して、視力の安定化、または改善にすら成功した。ＶＥＧＦが血管透過性を誘導する様式が最近解明され(Gavard and Gutkind, 2006, Nat Cell Biol., 8, 1223-1234)、ＶＥＧＦ誘導血管漏出がＳｒｃ癌原遺伝子ファミリーの細胞質プロテインキナーゼメンバーにより媒介されることが示された。
【０００４】
プロテインキナーゼは、広範な細胞プロセスおよび細胞機能の調節および維持において中心的な役割を果たす。たとえば、キナーゼ活性は細胞の増殖、活性化および／または分化を調節する分子スイッチとして作用する。多数の疾患が過剰反応性のプロテインキナーゼ媒介経路により誘発される異常な細胞応答から生じるということは、現在では広く受け入れられている。
【０００５】
Ｓｒｃキナーゼは、哺乳動物において８つのメンバーを含む膜結合した非受容体型チロシンキナーゼのファミリーを形成する：Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｆｇｒ、Ｌｙｎ、Ｈｃｋ、ＬｃｋおよびＢｌｋ(Bolen et al., 1997, Annu. Rev. Immunol., 15, 371)；これらは受容体シグナル伝達および細胞連絡において重要な役割をもつ(Thomas and Brugge, 1997, Annu Rev Cell Dev Biol., 13, 513-609)。大部分のＳｒｃキナーゼは広範に発現する（すなわち、Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ）が、このファミリーのあるメンバー、たとえばＨｃｋ、ＢｌｋまたはＬｃｋは限定された発現を示す。Ｓｒｃキナーゼは、多様な細胞外合図を細胞内シグナル伝達経路へ連結する膜結合型分子スイッチとして中枢的役割を果たす。これは、細胞の増殖および分化ならびに細胞の接着および移動におけるＳｒｃキナーゼ関与の基本である(Thomas SM and JS Brugge, 1997,前掲)。
【０００６】
乳癌、大腸癌、膵臓癌、特定のＢ細胞性白血病およびリンパ腫、消化器癌、非小細胞性肺癌、膀胱癌、前立腺癌および卵巣癌、黒色腫ならびに肉腫を含めたヒト癌においてＳｒｃタンパク質レベルおよびＳｒｃキナーゼ活性が有意に上昇することについては十分な文献がある(Summy and Gallick, 2003, Cancer Metastasis Rev, 22, 337-58)。したがって、Ｓｒｃのキナーゼ活性を阻害することによるシグナル伝達遮断は、細胞の癌性トランスフォーメーションを駆動する異常な経路を調節する有効な手段であろうと予想された(Abram et al., 2000, Exp. Cell Res., 254, 1; Russi et al, 2006, JPET, 318, 161-172; Jallal et al., 2007, Cancer Research, 67, 1580-1588)。
【０００７】
同様に、Ｓｒｃファミリーのキナーゼが免疫細胞受容体の下流のシグナル伝達にとって重要であることについても十分な文献がある。Ｆｙｎは、Ｌｃｋと同様にＴ細胞におけるＴＣＲシグナル伝達に関与している(Appleby et al., 1992, Cell, 70, 751)。ＨｃｋおよびＦｇｒは、Ｆｃｙ受容体シグナル伝達に関与して好中球の活性化をもたらす(Vicentini et al., 2002, J. Immunol., 168, 6446)。ＬｙｎおよびＳｒｃもＦｃｙ受容体シグナル伝達に関与してヒスタミンその他のアレルギー媒介物質の放出をもたらす(Turner and Kinet, 1999, Nature, 402, B24)。これらの所見は、Ｓｒｃファミリーキナーゼ阻害薬がアレルギー性疾患および喘息の処置に有用な可能性があることを示唆する。
【０００８】
ＶＥＧＦが血管透過性に及ぼす作用に基づき、幾つかのレポートが浮腫の発症におけるＳｒｃキナーゼの役割を支持している。たとえば、ＦｙｎではなくＳｒｃの欠乏、またはＳｒｃの遮断は、マウスにおいて永久脳虚血に伴う脳浮腫を約５５％減少させた(Paul et al., 2001, Nat Med., 7(2): 222-7)。最近、Ｓｒｃチロシンキナーゼ阻害薬であるＰＰ１が浮腫を軽減し、脳−血液関門（ＢＢＢ）の破壊を軽減し、ＶＥＧＦの発現を低下させることが見出された(Jadhav et al., 2007, J Neurosurg., 106, 680-686)。同様にScheppke et al (2008, J Clin Invest., 118, 2337-2346)は、ＳｒｃキナーゼがＶＥＧＦおよび虚血により誘導される網膜血管漏出の重要な媒介物質であることを示した。
【０００９】
さらに、Ｓｒｃチロシンキナーゼは血管内皮細胞においてＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を完全に媒介する。したがって、内皮細胞または前駆細胞にあるＶＥＧＦ受容体または他の増殖因子の刺激から生じるＳｒｃキナーゼの活性化は、血管新生を誘発する；これは、網膜および角膜の疾患において有害となる可能性のある、腫瘍の発現および転移（metastasis migration）に顕著に関与する応答である。
【００１０】
キナーゼ活性を調節し、またはより具体的には阻害する幾つかのクラスの化合物が、キナーゼ媒介障害、特に癌の有望な処置として開示されている。
たとえばＷＯ２００１０３８３１５には、サイクリン依存性キナーゼの阻害薬としてのアミノキナゾリン類が記載されている。
【００１１】
ＷＯ２００８０６８５０７には、癌を処置するためのＲａｆセリン／トレオニンキナーゼ阻害薬としてのピリジニルキナゾリン類が記載されている。
ＷＯ２００８０７９９８８には、癌などの増殖性疾患を処置するためのＰＤＫ１キナーゼ阻害薬としてのキナゾリン類が記載されている。
【００１２】
ＷＯ２００６１１８２５６には、吸入用の、種々の炎症性疾患および癌を処置するためのｐ３８ＭＡＰＫ阻害薬としてのキナゾリン誘導体が記載されている。
ＷＯ２００６０３９７１８には、炎症、癌および関連状態を含めたプロテインキナーゼ媒介疾患の処置に使用するためのアリール窒素含有二環式化合物が記載されている。
【００１３】
ＷＯ２００５０３７２８５には、癌などの障害を処置するためのＲａｆセリン／トレオニンキナーゼ阻害薬としての２，６−ジ置換二環式複素環化合物が記載されている。
ＷＯ２００４０６５３７８には、癌、アテローム硬化症および再狭窄などの細胞増殖性障害を処置するためのｃｄｋ４阻害薬としての２−アミノピリジン類が記載されている。
【００１４】
興味深いことに、ＷＯ２００６０２４０３４に、ベンゾトリアジン、トリアジン類、トリアゾール類およびオキサジアゾール類から誘導された複素環化合物が記載されている：たとえばベンゾトリアジン化合物（ＷＯ２００５０９６７８４）またはピリミジン化合物（ＷＯ２００６１０１９７７）；これらはキナーゼ、たとえばＳｒｃキナーゼファミリーのメンバーを阻害することができる。これらの薬物は種々の眼疾患（たとえば、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜障害、糖尿病性黄斑浮腫、癌、および緑内障）の処置に有用な可能性があると主張されてはいるが、それにもかかわらず親油性であって水不溶性である（参照：ＷＯ２００６１３３４１１）。ＷＯ２００６１３３４１１の発明者らによれば、これらの薬物は水に不溶性であり（ｐＨ範囲４〜８における水溶性が約０．１ｍｇ／ｍＬ未満）、それらを送達するために使用するリポソーム内への薬物の分配率が水と比較して高いため高い装填効率をもち、漏出を無視できるので、これらの特異的な特性は特に眼科用として特に有利である。
【００１５】
前記および本明細書全体における特許および刊行物を全体として本明細書に援用する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】ＷＯ２００１０３８３１５
【特許文献２】ＷＯ２００８０６８５０７
【特許文献３】ＷＯ２００８０７９９８８
【特許文献４】ＷＯ２００６１１８２５６
【特許文献５】ＷＯ２００６０３９７１８
【特許文献６】ＷＯ２００５０３７２８５
【特許文献７】ＷＯ２００４０６５３７８
【特許文献８】ＷＯ２００６０２４０３４
【特許文献９】ＷＯ２００５０９６７８４
【特許文献１０】ＷＯ２００６１０１９７７
【特許文献１１】ＷＯ２００６１３３４１１
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Senger et al., 1983, Science., 25, 219, 983-5
【非特許文献２】Fine et al., 2001, Am. J. Ophthalmol., 132, 794-796
【非特許文献３】Boyd et al., 2002, Arch Ophthalmol., 120, 1644-1650
【非特許文献４】Gavard and Gutkind, 2006, Nat Cell Biol., 8, 1223-1234
【非特許文献５】Bolen et al., 1997, Annu. Rev. Immunol., 15, 371
【非特許文献６】Thomas and Brugge, 1997, Annu Rev Cell Dev Biol., 13, 513-609
【非特許文献７】Summy and Gallick, 2003, Cancer Metastasis Rev, 22, 337-58
【非特許文献８】Abram et al., 2000, Exp. Cell Res., 254, 1
【非特許文献９】Russi et al, 2006, JPET, 318, 161-172
【非特許文献１０】Jallal et al., 2007, Cancer Research, 67, 1580-1588
【非特許文献１１】Appleby et al., 1992, Cell, 70, 751
【非特許文献１２】Vicentini et al., 2002, J. Immunol., 168, 6446
【非特許文献１３】Turner and Kinet, 1999, Nature, 402, B24
【非特許文献１４】Paul et al., 2001, Nat Med., 7(2): 222-7
【非特許文献１５】Jadhav et al., 2007, J Neurosurg., 106, 680-686
【非特許文献１６】Scheppke et al (2008, J Clin Invest., 118, 2337-2346)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
眼は堅固に保護された臓器である。これに関して、眼底の疾患を処置する方法は、療法選択肢の少なさにより証明されるように、おそらく最も困難かつ挑戦的な薬物探索課題であろう。最も簡便で最も安全な形態の眼への薬物送達のひとつは、点眼剤である；これは非侵襲性であり、医療介助を必要とせず、必要とされるのは少量の薬液だからである。しかし、局所点眼に適切であるためには、分子がそれらの分子標的に対して十分に有効であり、細胞膜を通過できる物理化学的特性を備え、かつ溶液として角膜に適用するための水性媒体に十分に可溶性でなければならない。さらに、そのような薬物分子は、最終的に視覚を妨げる可能性のある眼組織着色を阻止するために可能な限り無色であることがきわめて重要である。さらに、臨床試験に参加する患者が自身の処置の性質に気付いてはならない；有効成分の製剤が“著しく”着色していれば明らかに先入観を持つ。さらに、キナーゼ間には多重交差反応性があるため、それらの薬物分子は高い選択度で標的キナーゼを阻害することがきわめて望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明の特徴は、競合物質と比較して高い水溶性をもつ新規化合物を提供することである。
本発明の他の特徴は、特にｓｒｃおよびｌｙｎキナーゼに対して有効性の高い阻害薬である化合物を提供することである。
【００２０】
本発明の他の特徴は、眼障害を含めた、チロシンキナーゼ調節異常を伴う障害、たとえば血管透過性亢進または血管新生に関連する障害を処置するために有用な化合物を提供することである。
【００２１】
本発明の他の特徴は、特に溶液状で無色またはほとんど無色である化合物を提供することである。
本発明の他の特徴および利点は一部は以下の記述に述べられ、一部はその記述から明らかになり、あるいは本発明の実施により分かるであろう。本発明の目的および他の利点は本明細書および特許請求の範囲に特に指摘する要素および組合わせにより実現および達成されるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
１態様によれば、本発明は構造（Ｉ）を有する化合物およびその医薬的に許容できる塩、水和物または溶媒和物に関する：
【００２３】
【化１】
2012514020.tif 000002
【００２４】
式中：
Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アリール、ヘテロアリール、−ＣＮ、−ハロゲン、−ＣＦ３、−ＯＲ４であり、
Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＲ４，−ＯＣＯＲ４、−ＣＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ４ＣＯＲ５、−ＮＲ４ＣＯＯＲ５、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＯＲ４、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＣＯＲ４、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＮＲ４Ｒ５、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＮＲ４ＣＯＲ５、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＮＲ４ＣＯＯＲ５であり、
Ｘは、結合、または（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂ、（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂＹ（ＣＨ２）ｃもしくは−［（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂ］ｍ−（Ｚ）ｅ−［（ＣＨ２）ｃＹ（ＣＨ２）ｄ］ｎであり、これらにおいて：
ａ、ｂ、ｃおよびｄは、独立して０、１、２または３であり、
ｅは、０、１または２であり、
ｎおよびｍは、独立して０または１であり、
Ｗは、−ＣＯ−、−Ｏ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−、−ＣＨＯＨ−、−ＮＲ６−、ＮＲ７ＣＯＮＲ８またはＮＲ７ＳＯ２ＮＲ８であり、
Ｙは、−ＣＯ−、−Ｏ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−、−ＣＨＯＨ−または−ＮＲ６−、ＮＲ７ＣＯＮＲ８またはＮＲ７ＳＯ２ＮＲ８であり、
Ｚは、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ｅが２である場合、各Ｚ部分は互いに独立して選択され；
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、その際、Ｒ４とＲ５は一緒に５〜７員環を形成することができ、
Ｒ７およびＲ８は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、その際、Ｒ７とＲ８は一緒に５〜７員環を形成することができる。
【００２５】
本明細書全体で用いる用語“ａ”および“ａｎ”（単数形）は、状況から別の指示がなされない限り、それらは“少なくとも１つ”、“少なくとも第１”、“１以上”、または“複数”の言及された化合物または工程を意味するという意味で用いられる。より具体的には、“少なくとも１つ”および“１以上”は、１または１より多い数値を意味し、１、２または３が特に好ましい。
【００２６】
用語“および／または”は、本明細書中で用いる場合は常に、“および”、“または”および“その用語で連結された構成要素のすべてまたは他のいずれかの組合わせ”を含む。
【００２７】
本明細書中で用いる用語“約”または“ほぼ”は、示した数値または範囲の２０％以内、好ましくは１０％以内、より好ましくは５％以内を意味する。
本明細書中で用いる用語“含む”、“含有する”は、生成物、組成物および方法を規定するために用いる場合、その生成物、組成物および方法が言及された化合物または工程を含むけれども他を排除しないことを意味するものとする。
【００２８】
本明細書中で用いる、基としてまたは基の部分としての用語“ハロゲン”は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードの総称である。
用語“シクロアルキル”は、３個から７個までの炭素原子、より好ましくは個から５個までの炭素原子を含む飽和単環式炭素環を意味する。単環式シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルなどが含まれる。
【００２９】
用語“ヘテロシクロアルキル”は、３個から１４個までの環員子、好ましくは５個から１０個までの環員子、より好ましくは５個から６個までの環員子をもち、窒素、酸素および硫黄から選択される１個以上のヘテロ原子環員子を含み、Ｒ９および／またはＲ１０部分で置換されていてもよい、飽和単環式または二環式複素環を意味する。ヘテロシクロアルキルの例は、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンなどである。
【００３０】
用語“アリール”は、Ｒ９および／またはＲ１０部分で置換されていてもよい、単環式および二環式芳香族炭素環を含む。アリールの例には、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチルが含まれる。
【００３１】
用語“ヘテロアリール”は、５個から１０個までの環員子、好ましくは５個から６個までの環員子をもち、窒素、酸素および硫黄から選択される１個以上のヘテロ原子環員子を含み、Ｒ９および／またはＲ１０部分で置換されていてもよい、芳香族単環式または二環式複素環を意味する。ヘテロアリールの例は、ピリジン、インドール、ベンゾフラン、オキサゾール、トリアゾール、ピリミジンなどである。
【００３２】
Ｒ９／Ｒ１０は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、−ＣＮ、−ハロゲン、−ＣＦ３、＝Ｏ、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ４ＣＯＲ５、−ＮＲ４ＣＯＯＲ５、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＯＲ４、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＮＲ４Ｒ５、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＮＲ４ＣＯＲ５、−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）ＮＲ４ＣＯＯＲ５、−ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ４から選択され、Ｒ４およびＲ５は前記に定めたものである。
【００３３】
本発明の化合物は、不斉炭素原子の存在のため１以上のキラル中心をもつ場合があり、したがってそれらは各キラル中心においてＲまたはＳ立体化学的性質をもつ多数のジアステレオ異性体として存在する場合がある。本発明にはそのようなジアステレオ異性体およびその混合物がすべて含まれる。
【００３４】
プロドラッグ形の式Ｉの化合物も本発明の一部である。プロドラッグは生物活性物質（“親薬物”または“親分子”）の誘導体であることができ、それは活性薬物を放出するために体内で変換される必要があり、親薬物分子より改良された送達特性をもつ。インビボでの変換は、たとえば、カルボン酸エステル、リン酸エステルもしくは硫酸エステルの化学的もしくは酵素による加水分解、または影響を受けやすい官能基の還元もしくは酸化などのプロセスの結果であってよい。
【００３５】
本明細書中の用語“化合物”は、一般に式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容できる塩、水和物、溶媒和物、結晶形態、個々のジアステレオマーもしくはプロドラッグを表わす。
【００３６】
本発明に従って使用するためには、化合物（Ｉ）においていずれか適合する組合わせの下記の構造特性が現時点で好ましい：
Ｒ１は、好ましくはアリール、より好ましくはフェニルである。
【００３７】
Ｒ１は、好ましくはＲ９およびＲ１０で置換されており、ここでＲ９／Ｒ１０はＣ１−Ｃ４アルキル（好ましくはＣＨ３）、ハロゲン（好ましくは−Ｃｌ）または−ＯＨである。
【００３８】
Ｒ１は、好ましくはフェニルであり、２、５または６位においてＲ９およびＲ１０で置換されている。
Ｒ２は、好ましくは水素またはメチルである。
【００３９】
Ｘは、好ましくは結合である。
あるいは、Ｘは好ましくは（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂであり、ここでａは０であり、ｂは２であり、Ｗは−Ｏ−である。
【００４０】
あるいは、Ｘは好ましくは（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂＹ（ＣＨ２）ｃであり、ここでａは０であり、ｂは１であり、ｃは０であり、Ｗは−Ｏ−であり、Ｙは−ＣＯ−である。
あるいは、Ｘは好ましくは−［（ＣＨ２）ａＷ（ＣＨ２）ｂ］ｍ−Ｚ−［（ＣＨ２）ｃＹ（ＣＨ２）ｄ］ｎであり、ここでｍは０であり、ｎは１であり、ｃは０であり、ｄは０または２であり、Ｙは−ＣＯであるかまたは存在せず、Ｚはイミダゾリン−２−オンまたはピペラジンである。
【００４１】
１態様によれば、Ｘはフェニル部分の３または４位において分岐している。
Ｒ３は、好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル、より好ましくはＣＨ３である。
あるいは、Ｒ３はＣ１−Ｃ４アルキル基、好ましくはメチル基であり、Ｒ９で置換されており、ここでＲ９は好ましくはＯＨである。
【００４２】
あるいは、Ｒ３は好ましくはヘテロアリール基、好ましくはピリジンである。
あるいは、Ｒ３は好ましくはヘテロシクロアルキル、好ましくはピロリジン、ピペリジン、アゼピン、ピペラジンまたはモルホリン、より好ましくはピロリジンである。
【００４３】
あるいは、Ｒ３は好ましくはＲ９で置換されたヘテロシクロアルキルであり、ここでＲ９は好ましくは−ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ４、−Ｎ［ＣＨ３］２である。
本発明の化合物には、本明細書中の実施例のもの、特に下記のもの、およびそれらの塩、水和物、溶媒和物が含まれる：
［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イル］−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］−アミン；
４−クロロ−３−｛２−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−キナゾリン−６−イル｝−フェノール；
（Ｒ）−１−（２−｛４−［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−エチル）−ピロリジン−２−カルボン酸；
１−｛４−［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−３−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−イミダゾリジン−２−オン；
１−（４−｛４−［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−エタノン；
（４−｛４−［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−４−イル−メタノン；
１−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−３−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−イミダゾリジン−２−オン；
２−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−１−（（Ｒ）−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル）−エタノン；
１−（（Ｒ）−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル）−２−｛４−［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−エタノン；
１−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−３−（２−メトキシ−エチル）−イミダゾリジン−２−オン；
３−｛２−［４−（２−アゼパン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−キナゾリン−６−イル｝−４−クロロ−フェノール；
［６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イル］−（４−ピペラジン−１−イル−フェニル）−アミン；
４−クロロ−３−｛８−メチル−２−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−キナゾリン−６−イル｝−フェノール；
［（Ｒ）−１−（２−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−アセチル）−ピロリジン−３−イル］−ジメチル−アンモニウム；
［（Ｒ）−１−（２−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−アセチル）−ピロリジン−３−イル］−ジメチル−アンモニウム；
４−クロロ−３−［２−（３−ヒドロキシメチル−フェニルアミノ）−８−メチル−キナゾリン−６−イル］−フェノール；
（Ｒ）−１−（２−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−エチル）−ピロリジン−２−カルボン酸；
１−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−３−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−イミダゾリジン−２−オン；
（Ｒ）−１−［２−（３−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−２−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−エチル］−ピロリジン−２−カルボン酸；
１−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−３−［２−（（Ｒ）−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル）−エチル］−イミダゾリジン−２−オン；
１−（４−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−エタノン；
（４−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−４−イル−メタノン；
（４−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イル−メタノン；
（４−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−２−イル−メタノン；
２−｛４−［６−（２−クロロ−５−ヒドロキシ−フェニル）−８−メチル−キナゾリン−２−イルアミノ］−フェノキシ｝−１−（（Ｒ）−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル）−エタノン。
【００４４】
１態様によれば、本発明の化合物は式Ｉの化合物の塩である。特に好ましい態様において、その塩は塩酸塩である。
好ましい１態様によれば、本発明の化合物は、ｐＨ範囲４〜８、好ましくはｐＨ範囲５〜７において０．１ｍｇ／ｍｌを超える、たとえばｐＨ範囲５〜７において約０．５ｍｇ／ｍｌを超える、たとえばｐＨ範囲５〜７において約１ｍｇ／ｍｌを超える水溶性をもつ。
【００４５】
１態様によれば、本発明の化合物はわずかな色をもち、好ましくはそれらは無色または淡黄色である。
本発明の好ましい化合物は、主にｓｒｃおよび／またはｌｙｎキナーゼに作用する。
【００４６】
１態様によれば、本発明の化合物はｓｒｃおよび／またはｌｙｎキナーゼ阻害薬である。
１態様によれば、本発明の化合物はＳｒｃに１μＭ未満、有利には１００ｎＭ未満、よりさらに有利には１０ｎＭ未満、好ましくは１ｎＭ未満のＩＣ５０で結合する。
【００４７】
１態様によれば、本発明の化合物はＬｙｎに１μＭ未満、有利には１００ｎＭ未満、よりさらに有利には１０ｎＭ未満、好ましくは１ｎＭ未満のＩＣ５０で結合する。
１態様によれば、１種類以上の本発明化合物および医薬的に許容できるキャリヤーまたは水性媒体を含有する組成物が提供される。
【００４８】
本明細書中で用いる用語“医薬的に許容できる”は、適宜、動物またはヒトに投与した際に有害反応、アレルギー反応その他の不都合な反応を生じないキャリヤーを表わす。本明細書中で用いる“医薬的に許容できるキャリヤー”には、溶剤、分散媒体、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤などのいずれかまたはすべてが含まれる。医薬有効物質のためのそのようなキャリヤーの使用は当技術分野で周知である。適切な医薬用キャリヤーの例は、“Remington's Pharmaceutical Sciences”, E. W. Martin著に記載されている。好ましい態様において、本発明の化合物はルーティンな操作に従って眼に投与するために適合させた医薬組成物として配合される。補助的な有効成分、たとえば抗炎症剤、化学療法剤、抗癌剤、免疫調節剤、遺伝子系の療法ワクチン、免疫療法製剤、療法用抗体および／またはプロテインキナーゼ阻害薬も組成物中に取り込ませることができる。
【００４９】
１態様によれば、本発明の化合物は非経口投与用として配合でき、たとえば静脈内、筋肉内、皮下、またはさらに腹腔内経路による注射用として配合できるであろう。本発明の化合物または化合物類を含有する水性組成物の調製は、本発明の開示を考慮して当業者がなしうる範囲のものであろう。
【００５０】
一般に、そのような組成物は注射用として、液剤または懸濁剤として調製できる；注射の前に液体を添加して液剤または懸濁剤を調製するために用いるのに適した固体剤形も調製できる；製剤を乳化することもできる。
【００５１】
他の態様によれば、本発明の化合物は本発明の化合物を局所投与するために、特に眼障害の処置のために配合されるであろう。本発明の化合物または化合物類を含有する組成物の調製は、本発明の開示を考慮して当業者がなしうる範囲のものであろう。一般に、局所投与のためのそのような組成物は、軟膏剤、ゲル剤または点眼剤として調製できる。眼科用局所組成物は、さらにインサイチュゲル化性の水性配合物であってもよい。そのような配合物は、眼と接触した際または眼の外側で涙液と接触した際にゲル化を促進するのに有効な濃度のゲル化剤を含む。適切なゲル化剤には、熱硬化性ポリマー、たとえばエチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのテトラ置換エチレンジアミンブロックコポリマー(たとえばポロキサミン）；ポリカルボフィル；ならびに多糖類、たとえばジェラン、カラゲナン（たとえば、カッパ−カラゲナンおよびイオタ−カラゲナン）、キトサンおよびアルギナートガムが含まれるが、これらに限定されない。本明細書中で用いる“インサイチュゲル化性”という句は、眼と接触した際または眼の外側で涙液と接触した際にゲルを形成する低粘度の液体だけでなく、より粘稠な液体、たとえば眼に投与した際に実質的に増大した粘度またはゲル硬さを示す半流体およびチキソトロピーゲルをも含む。
【００５２】
他の態様によれば、本発明の化合物は本発明の化合物を経口投与するために配合されるであろう。本発明の化合物または化合物類を含有する組成物の調製は、本発明の開示を考慮して当業者がなしうる範囲のものであろう。一般に、経口投与用のそのような組成物は、経口投与用の液剤または懸濁剤、錠剤、持効性カプセル剤および他の固形剤として調製できる。
【００５３】
他の態様によれば、本発明の化合物は本発明の化合物を腫瘍内投与するために配合されるであろう。本発明の化合物または化合物類を含有する組成物の調製は、本発明の開示を考慮して当業者がなしうる範囲のものであろう。一般に、腫瘍内投与用のそのような組成物は、他の投与経路に関する前記の開示と同様に調製できる。
【００５４】
他の態様によれば、本発明の化合物を眼科用として許容できる保存剤、増粘剤、透過増強剤、緩衝剤、塩化ナトリウムおよび水と組み合わせて、水性、無菌の眼科用懸濁剤または液剤が形成されるであろう。眼科用液剤配合物は、化合物を生理的に許容できる等張水性緩衝液に溶解することにより調製できる。さらに、眼科用液剤は化合物の溶解を補助するために眼科用として許容できる界面活性剤を含有することができる。さらに、眼科用液剤は粘度を高めるための作用物、たとえばヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどを含有して、結膜嚢における配合物の保持を改善することができる。ゲル化剤も使用でき、これにはジェランおよびキサンタンガムが含まれるが、これらに限定されない。無菌の眼科用軟膏配合物を調製するために、有効成分を適切なビヒクル、たとえば鉱油、液体ラノリンまたは白色ワセリン中で保存剤と組み合わせる。化合物を、好ましくはｐＨ約５〜８、より好ましくは約６．５〜約７．５の眼科用局所懸濁剤または液剤として配合する。化合物は普通はこれらの配合物中に０．００１重量％〜５重量％の量、ただし好ましくは０．０２５重量％〜２重量％の量で含有されるであろう。したがって、局所適用のためには専門医の自由裁量に従ってこれらの配合物１〜２滴を眼の表面に１日１〜４回送達する。
【００５５】
他の態様において、チロシンキナーゼ調節異常を伴う障害、たとえば血管透過性亢進または血管新生に関連する障害の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物をその処置が必要な対象に投与することを含む方法が提供される。
【００５６】
本明細書中で用いる用語“処置”または“処置すること”には、予防および／または治療が含まれる。したがって、本発明の組成物および方法は治療適用に限定されず、予防適用にも使用できる。したがって、ある状態、障害または病状を“処置すること”または“処置”には下記が含まれる：（ｉ）その状態、障害または病状に罹患しているかまたはその素因をもつ可能性があるけれどもまだその状態、障害または病状の臨床症状または準臨床症状を経験または呈示していない対象において、発症しつつあるその状態、障害または病状の臨床症状の発現を阻止または遅延させること、（ｉｉ）その状態、障害または病状を阻害すること、すなわちその疾患またはその少なくとも１つの臨床症状もしくは準臨床症状の発症を制止または低下させること、あるいは（ｉｉｉ）その疾患を軽減すること、すなわちその状態、障害もしくは病状またはその少なくとも１つの臨床症状もしくは準臨床症状を退行させること。
【００５７】
本明細書中で用いる用語“患者”または“それが必要な対象”は、いずれかの動物を意味する；好ましくは、動物は脊椎動物；より具体的には哺乳動物種のメンバーであり、家畜（たとえば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、イヌおよびネコ）、ヒトを含めた霊長類を含むが、これらに限定されない。用語“患者”または“それが必要な対象”は、決して特定の疾病状態に限定されず、既に当該疾患を発症している患者および病気ではない患者の両方を含む。
【００５８】
本明細書中で用いる用語“療法有効量”は、組織、動物またはヒト、細胞、臓器の生物学的応答を誘発するいずれかの化合物または組成物の量を意味する。
１態様によれば、チロシンキナーゼ調節異常を伴う障害は血管透過性亢進に関連する障害である。
【００５９】
他の態様によれば、チロシンキナーゼ調節異常を伴う障害は血管新生に関連する障害である。
好ましい態様において、チロシンキナーゼ調節異常を伴う障害はｓｒｃおよび／またはｌｙｎキナーゼ調節異常を伴う障害である。
【００６０】
１態様によれば、チロシンキナーゼ調節異常を伴う障害は下記のものからなる群から選択される：心筋梗塞、卒中、うっ血性心不全、虚血もしくは再潅流傷害、外傷、癌、浮腫、関節炎もしくは他の関節障害、網膜障害もしくは硝子体網膜疾患、糖尿病性網膜障害、黄斑浮腫：糖尿病性黄斑浮腫を含む、黄斑変性症、緑内障、自己免疫疾患、血管漏出症候群、炎症性疾患、浮腫、移植片拒絶、火傷、または急性もしくは成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）。
【００６１】
他の態様において、血管透過性亢進に関連する眼障害の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物をその処置が必要な対象に投与することを含む方法が提供される。
【００６２】
他の態様において、癌を伴うかまたはそのリスクをもつ対象の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を対象に投与し、これにより対象を処置することを含む方法が提供される。
【００６３】
他の態様において、浮腫および／または血管新生を伴うかまたはそのリスクをもつ対象の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を対象に投与し、これにより対象を処置することを含む方法が提供される。
【００６４】
他の態様において、黄斑変性症を伴うかまたはそのリスクをもつ対象の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を対象に投与し、これにより対象を処置することを含む方法が提供される。
【００６５】
他の態様において、糖尿病性網膜障害を伴うかまたはそのリスクをもつ対象の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を対象に投与し、これにより対象を処置することを含む方法が提供される。
【００６６】
他の態様において、糖尿病性黄斑浮腫を含めた黄斑浮腫を伴うかまたはそのリスクをもつ対象の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を対象に投与し、これにより対象を処置することを含む方法が提供される。
【００６７】
他の態様において、緑内障を伴うかまたはそのリスクをもつ対象の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を対象に投与し、これにより対象を処置することを含む方法が提供される。
【００６８】
他の態様において、網膜障害を伴うかまたはそのリスクをもつ対象の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を対象に投与し、これにより対象を処置することを含む方法が提供される。
【００６９】
他の態様において、硝子体網膜疾患を伴うかまたはそのリスクをもつ対象の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を対象に投与し、これにより対象を処置することを含む方法が提供される。
【００７０】
他の態様において、炎症性疾患を伴うかまたはそのリスクをもつ対象の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を対象に投与し、これにより対象を処置することを含む方法が提供される。
【００７１】
さらに他の態様において、血管透過性の欠陥（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ）に関連する眼障害および癌の処置方法であって、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を、抗炎症剤、化学療法剤、抗腫瘍剤、免疫調節剤、遺伝子系の療法ワクチン、免疫療法製剤、療法用抗体および／またはキナーゼ阻害薬と組み合わせて、その処置が必要な対象に投与することを含む方法が提供される。
【００７２】
特に眼適用のための本発明化合物の投与は、好ましくは局所投与による。しかし、本発明はたとえば眼内および眼周囲への注射、全身送達（たとえば、経口または他の非経口経路、たとえば皮下、筋肉内、静脈内への投与）または腫瘍内送達をも含むので、本発明は局所送達に限定されない。
【００７３】
さらに他の態様において、本発明の化合物を眼底に送達する方法であって、医薬として有効な量の少なくとも１種類の本発明化合物を含有する組成物を調製し、この組成物をその送達が必要な対象の眼に送達することを含む方法が提供される。
【００７４】
さらに他の態様において、本発明の化合物を腫瘍内に送達する方法であって、医薬として有効な量の少なくとも１種類の本発明化合物を含有する組成物を調製し、この組成物をその送達が必要な対象の腫瘍に送達することを含む方法が提供される。
【００７５】
本発明の組成物、より具体的には眼科用組成物または抗腫瘍組成物を調製するためには、療法有効量の１種類以上の本発明化合物を当技術分野で既知のビヒクルに装入する。たとえば、ステロイドを含有する眼科用局所配合物がＵＳ  ５，０４１，４３４に開示され、一方、眼科用薬物および高粘度ゲルを形成するための高分子量ポリマーの持続放出型眼科用配合物がＵＳ  ４，２７１，１４３およびＵＳ  ４，４０７，７９２に記載されている。さらにＧＢ  ２００７０９１には、カルボキシビニルポリマー、水溶性塩基性物質および眼科用薬物の水溶液を含むゲルの形態の眼科用組成物が記載されている。あるいはＵＳ  ４，６１５，６９７には、生体接着剤および治療剤、たとえば抗炎症剤を基礎とする制御放出組成物および使用方法が開示されている。
【００７６】
本発明化合物の投与量および本発明方法に使用する組成物中におけるそれの濃度は、選択した溶解剤、送達システムまたはデバイス、患者の臨床状態、副作用、および組成物中における化合物の安定性に依存する。したがって、医師は適切な濃度の本発明化合物を含有する適切な製剤を使用し、その患者または類似タイプの患者についての臨床経験によって配合物の投与量を選択する。
【００７７】
他の態様において、１種類以上の本発明化合物、またはその医薬的に許容できる塩、水和物、溶媒和物、結晶形態の塩、および個々のジアステレオマーを製造するための方法が提供される。
【００７８】
本発明化合物を製造するための多数の合成経路があるが、すべて有機合成化学者に既知の化学に依存する。したがって、式Ｉにより表わされる化合物は文献に記載された当業者に周知の方法に従って合成できる。一般的な文献源は、“Advanced organic chemistry”, 4th Edition (Wiley) ,J March、“Comprehensive Organic Transformation”, 2nd Edition (Wiley) ,R. C. Larock、“Handbook of Heterocyclic Chemistry”, 2nd Edition (Pergamon), A. R. Katritzky、総説、たとえば“Synthesis”、“Acc. Chem. Res.”、“Chem. Rev”にみられるもの、あるいは一般的な文献源検索オンラインまたは“Chemical Abstracts”もしくは“Beilstein”などの二次文献源から確認される原文献源である。本発明化合物は特定の代表的化合物に関して本明細書中の実施例に例示したものと同様な方法により合成できる。実施例のセクションに記載した方法および周知の方法を用いて、当業者は本明細書に開示する化合物を製造できる。
【００７９】
他の態様において、包装材料および包装材料内に収容した組成物を含むキットが提供され、その際、包装材料はその組成物を血管透過性の欠陥に関連する障害の処置に使用できることを指示したラベルを含み、組成物は１種類以上の本発明化合物を含有する。
【００８０】
他の態様において、包装材料および包装材料内に収容した組成物を含むキットが提供され、その際、包装材料はその組成物を、血管透過性の欠陥に関連する障害であって心筋梗塞、卒中、うっ血性心不全、虚血もしくは再潅流傷害、癌、関節炎もしくは他の関節障害、網膜障害もしくは硝子体網膜疾患、黄斑変性症、自己免疫疾患、血管漏出症候群、炎症性疾患、浮腫、移植片拒絶、火傷、または急性もしくは成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）から選択されるものの処置に使用できることを指示したラベルを含み、組成物は１種類以上の本発明化合物を含有する。
【００８１】
好ましい１態様において、包装材料および包装材料内に収容した組成物を含むキットが提供され、その際、包装材料はその組成物を血管透過性の欠陥に関連する眼障害の処置に使用できることを指示したラベルを含み、組成物は１種類以上の本発明化合物、またはその医薬的に許容できる塩、水和物、溶媒和物、結晶形態の塩、および個々のジアステレオマーを含有する。
【００８２】
本明細書に記載する本発明は具体的に記載したもの以外の変更および改変が可能であることを当業者は認識するであろう。本発明にはそのような変更および改変がすべて含まれる。本発明には、本明細書中で言及または指示したすべての工程、特徴、配合物および化合物が、個別に、またはまとめて、ならびにいずれか２以上の工程もしくは特徴のいずれかおよびすべての組合わせが、同様に含まれる。
【００８３】
本明細書に引用したそれぞれの文書、参考文献、特許出願または特許を全体として特に本明細書に援用する；これは、読者がそれを本明細書の一部として読み、かつそのように解釈すべきであることを意味する。本明細書に引用したそれぞれの文書、参考文献、特許出願または特許を本明細書中で繰り返さないのは、簡略化のためにすぎない。
【００８４】
本発明の範囲は本明細書に記載した特定の態様によって限定されず、それらは例示のためのものにすぎない。機能的に均等な製品、配合物および方法は本明細書に記載した本発明の範囲に明らかに含まれる。
【００８５】
本明細書に記載した発明は、１以上の範囲の数値（たとえば、量、濃度など）を含むことができる。ある範囲の数値が、その範囲を規定している数値を含めてその範囲のすべての数値、およびその範囲に隣接する数値であってその範囲の境界を規定する数値に隣接する数値と同一または実質的に同一の結果をもたらす数値を含むことは理解されるであろう。
【００８６】
以下の実施例は、本発明の対象である本発明化合物の製造方法を説明するために示され、特許請求の範囲の何らかの限定を示すものと解釈すべきではない。実施例の各化合物のプロトン核磁気共鳴スペクトルは指定した構造と一致した。
【実施例】
【００８７】
１．一般式（Ｉ）の化合物の合成
１．１．一般法
工程Ａ−極性溶媒中で、−１００〜３００℃、最も好ましくは５０〜１５０℃における、１当量の置換されていてもよいＢ１，Ｂ２−フェニルボロン酸への６−ブロモ−キナゾリン−２−イルアミンのカップリング：
【００８８】
【化２】
2012514020.tif 000003
【００８９】
工程Ｂ−極性溶媒中で、−１００〜３００℃、最も好ましくは５０〜１５０℃における、１当量の置換されていてもよいＢ１，Ｂ２−フェニル−キナゾリン−２−イルアミンへの３または４−置換ブロモ−フェニルのカップリング：
【００９０】
【化３】
2012514020.tif 000004
【００９１】
式Ｉの化合物は、およびそれらを製造するための出発物質も、実施例に記載した方法により、またはそれ自体既知の文献記載の方法により(たとえば一般的な研究、たとえばHouben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg Thieme Verlag,シュツットガルト; Organic Reactions, John Wiley & Sons, Inc.,ニューヨーク)、厳密にその反応について既知の適切な反応条件下で製造される。本発明においてはそれ自体既知の変法も使用できるが、ここではさらに詳述しない。
【００９２】
本発明方法のための出発物質は、所望によりその場で形成して、反応混合物からそれらを分離するのではなくそれらを直ちにさらに式Ｉの化合物に変換することもできる。これに対し、反応を段階的に実施することが可能である。
【００９３】
好ましくは、適切な溶媒の存在下で化合物の反応を実施し、それは好ましくは各反応条件下で不活性である。適切な溶媒の例は、炭化水素、たとえばヘキサン、石油エーテル、ベンゼン、トルエンまたはキシレン；塩素化炭化水素、たとえばトリクロロエチレン、１，２−ジクロロエタン、テトラクロロメタン、クロロホルムまたはジクロロメタン；アルコール類、たとえばメタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノール；エーテル類、たとえばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）またはジオキサン；グリコールエーテル類、たとえばエチレングリコールモノメチルもしくはモノエチルエーテル、またはエチレングリコールジメチルエーテル（ジグリム）；ケトン類、たとえばアセトンまたはブタノン；アミド類、たとえばアセトアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）；ニトリル類、たとえばアセトニトリル；スルホキシド類、たとえばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；ニトロ化合物、たとえばニトロメタンまたはニトロベンゼン；エステル類、たとえば酢酸エチル、あるいは前記溶媒の混合物または水との混合物である。極性溶媒が一般に好ましい。適切な極性溶媒の例は、塩素化炭化水素、アルコール類、グリコールエーテル類、ニトリル類、アミド類およびスルホキシド類、またはその混合物である。より好ましいものは、アミド類、特にジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）である。
【００９４】
前記のように、反応温度は用いる反応工程および条件に応じて約−１００℃〜３００℃である。
反応時間は、各化合物の反応性および各反応条件に応じて一般に数分ないし数日の範囲である。適切な反応時間は、当技術分野で既知の方法、たとえば反応モニタリングによって容易に判定できる。前記の反応温度に基づいて、適切な反応時間は一般に１０分ないし４８時間の範囲にある。
【００９５】
本明細書に記載した各反応工程に続いて、場合により１以上の仕上げ操作および／または分離操作を行なうことができる。適切なそのような操作は、たとえば一般的な研究、たとえばHouben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg-Thieme-Verlag, シュツットガルト)から既知である。そのような操作の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：溶媒の蒸発、蒸留、結晶化、分別結晶化、抽出操作、洗浄操作、消化操作、濾過操作、クロマトグラフィー、ＨＰＬＣによるクロマトグラフィー、および乾燥操作、特に真空および／または高められた温度での乾燥操作。
【００９６】
略号および頭辞語のリスト：
ＡｃＯＨ：酢酸、ａｎｈ：無水、ａｔｍ：気圧（単数または複数）、ＢＯＣ：ｔｅｒｔブトキシカルボニル、ＣＤＩ：１，１’−カルボニルジイミダゾール、ｃｏｎｃ：濃厚、ｄ：日（単数または複数）、ｄｅｃ：分解、ＤＭＡＣ：ＮＮ−ジメチルアセトアミド、ＤＭＰＵ：１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミジノン、ＤＭＦ：ＮＮ−ジメチルホルムアミド、ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、ＤＰＰＡ：ジフェニルホスホリルアジド、ＥＤＣＩ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド、ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル、ＥｔＯＨ：エタノール（１００％）、Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル、Ｅｔ３Ｎ：トリエチルアミン、ｈ：時間（単数または複数）、ＭｅＯＨ：メタノール、ｐｅｔ．エーテル：石油エーテル（沸騰範囲３０〜６０℃）、ｔｅｍｐ：温度、ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、Ｔｆ：トリフルオロメタンスルホニル。
【００９７】
本発明の一般式Ｉの化合物は、前記の工程ＡおよびＢならびに実施例の操作に従って製造できる。すべての製造法において、すべての出発物質は既知であるか、あるいは既知の出発物質から容易に製造できる。
【００９８】
１．２．中間体
すべての製造法において、すべての出発物質は既知であるか、あるいは既知の出発物質から下記の一般法によって容易に製造できる;
【００９９】
【化４】
2012514020.tif 000005
【０１００】
これらの化合物は、J. Heterocyclic Chem.34, 385 (1997)に示された操作に従って一般法により製造できる。
中間体２の合成：６−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミン
２−クロロ−５−メトキシボロン酸（１４．４２ｇ，７７．３４ｍｍｏｌ，１．５当量）、６−ブロモ−キナゾリン−２−イルアミン（１１．５５ｇ，５１．５６ｍｍｏｌ，１当量）およびＮａ２ＣＯ３（２１．８６ｇ，２０６．２３ｍｍｏｌ，４当量）の、ＤＭＦ（１２０ｍｌ）／ＥｔＯＨ（３０ｍｌ）／Ｈ２Ｏ（３０ｍｌ）の混合物中における溶液に、２．３１１ｇ（５．１６ｍｍｏｌ，０．１当量）のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムを添加した。反応物をアルゴン下で２時間還流した（１００℃）。次いでそれを室温に冷却し、生成物をＤＣＭおよび食塩水で抽出した。次いで生成物を水およびエーテルで洗浄し、次いで乾燥させて、９．０１０ｇ（３２ｍｍｏｌ，６１％）の淡黄色粉末を得た。
【０１０１】
【化５】
2012514020.tif 000006
【０１０２】
中間体１：（６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミン）を中間体１について開示した方法に従って合成した。
中間体３の合成：３−（２−アミノ−キナゾリン−６−イル）−４−クロロフェノール
９．０１０ｇ（３１．５３ｍｍｏｌ，１当量）の６−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミンの、ジクロロメタン３００ｍｌ中における０℃に冷却した懸濁液に、９５ｍｌの１Ｍ  ＢＢｒ３（１Ｍ溶液）を慎重に添加した。溶液を１６時間撹拌した。次いでｐＨを飽和ＮａＨＣＯ３溶液の添加によりｐＨ８に調整する。沈殿した生成物を濾過し、エーテルで洗浄し、乾燥させて、７．５９６ｇ（２７．９６ｍｍｏｌ，８９％）の淡黄色粉末を得た。
【０１０３】
【表１】
2012514020.tif 000007
【０１０４】
１．３．本発明の化合物
本発明のＮｏ．６の化合物の合成
５２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ，０．０３当量）のＰｄ２（ｄｂａ）３、１７ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ，０．０２当量）の５−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ホスファニル）−１’，３’，５’−トリフェニル−１’Ｈ−［１，４’］ビピラゾリルおよび２５３ｍｇ（４．５２ｍｍｏｌ，２．１５当量）のＫＯＨならびに３ｍｌのｔｅｒｔ−アミルアルコールに、４００μｌの水を添加し、この懸濁液を１０分間撹拌した。５２４ｍｇ（２．１０ｍｍｏｌ，１当量）の６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミンおよび６８１ｍｇ（２．５２ｍｍｏｌ，１．２当量）の１−［２−（４−ブロモ−フェノキシ）−エチル］−ピロリジンを次いで添加し、続いてさらに３ｍｌのｔｅｒｔ−アミルアルコールおよび４００μｌの水を添加し、混合物を８０℃でアルゴン下に５時間撹拌する。溶液を蒸発させ、次いで生成物をフラッシュクロマトグラフィー（勾配ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）により精製して、１１０ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ，１２％）の黄色固体を得る。
【０１０５】
下記の本発明化合物を前記と同様な方法で製造した。
【０１０６】
【表２−１】
2012514020.tif 000008
【０１０７】
【表２−２】
2012514020.tif 000009
【０１０８】
【表２−３】
2012514020.tif 000010
【０１０９】
【表２−４】
2012514020.tif 000011
【０１１０】
２−本発明化合物の溶解度分析
化合物の溶解度を水性媒体中で下記の方法を用いて測定した。
２ｍｇの化合物を２００μｌの緩衝液（酢酸／ＫＯＨ）ｐＨ５に添加した。次いで溶液を室温で２４時間撹拌し、次いで１６，０００ｒｐｍで１０分間遠心した。対応する上清をＨＰＬＣおよびＵＶ検出により分析した。ＤＭＳＯ溶解した種々の濃度の化合物を用いて個別に得られた検量曲線に実験曲線下面積をレポートすることにより、その化合物の濃度の計算を行なった。
【０１１１】
試験した化合物は下記のものであった：
下記の参照化合物はＷＯ２００５０９６７８４に開示されたものである（化合物ＣＬ）。
【０１１２】
【表３】
2012514020.tif 000012
【０１１３】
３−本発明化合物の阻害定数の測定
本明細書に記載するスクリーニングおよびプロファイリング実験は、Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの占有ＬａｂＣｈｉｐ（商標）法を用いて実施された。Ｃａｌｉｐｅｒ  ＬＣ３０００およびＥＺ  Ｒｅａｄｅｒ  ＩＩ機器は薬物探索法においてアッセイ法開発、初期スクリーニング、選択性スクリーニング、構造活性相関（ＳＡＲ）の構築、および作用機序（ＭＯＡ）研究のために広く用いられている。ＬａｂＣｈｉｐ（商標）法は、キナーゼ、プロテアーゼ、ホスファターゼ、ヒストンデアシラーゼ（ＨＤＡＣ）、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）およびアシルトランスフェラーゼなどの酵素‘標的’に特に好適である。この方法の重要な利点は、基質および生成物の分離および直接測定であり、これによってより高い信号−ノイズ比を得ることができ、偽陽性／陰性結果がより少なくなる。この直接測定により、当該キナーゼ反応に関係ない酵素活性の同定および除外も可能になる。
【０１１４】
全般：
オフ−チップインキュベーション移動度−シフトキナーゼアッセイ（ｏｆｆ−ｃｈｉｐ  ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ−ｓｈｉｆｔ  ｋｉｎａｓｅ  ａｓｓａｙ）は、蛍光ペプチド基質からリン酸化生成物への転化を測定するためにマイクロフルイドチップを用いる。マイクロタイタープレートウェルからの反応混合物をキャピラリーシッパー（ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｓｉｐｐｅｒ）によりチップに導入し、そこでリン酸化されていない基質とリン酸化された生成物を電気泳動により分離し、レーザー誘導蛍光により検出する。経時的な蛍光信号のシグネチャーにより反応の程度が分かる。リン酸化された生成物はリン酸化されていない基質より速やかにチップ内を移動し、これら２形態のペプチドからの信号は別個のピークとして現われる。Ｃａｌｉｐｅｒのデータ分析ソフトウェア（ＨＴＳＷＡ）はピーク高さを測定し、それから生成物とピーク和との比Ｐ／（Ｐ＋Ｓ）および転化率パーセント（％）を計算する。この数値を用いて、プレートに存在する化合物ウェルと対照ウェルを比較し、これによりその化合物の阻害率％値を決定する。阻害率％を計算するために用いた式は下記のとおりである；式中のＣ１００％は１００％活性ウェルの平均転化率％であり、Ｃ０％は０％活性ウェルの平均転化率％である。
【０１１５】
（１−（試料の転化率％−Ｃ０％）／（Ｃ１００％−Ｃ０％））＊１００
個別：
ＬＣ３０００  ＳｒｃおよびＬｙｎアッセイ
化合物を１００％  ＤＭＳＯに溶解し、目的とする最終スクリーニング濃度の２５×に希釈した。系列希釈を行なって、個々の試験に特定した濃度を得た。各濃度のもの１μＬを二組ずつ３８４ウェルＧｒｅｉｎｅｒマイクロタイタープレートへ移した。一般に、精製キナーゼ（種々の業者）、１００ｍＭのＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、１ｍＭのＤＴＴ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，２３３３１５３）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２（Ｓｉｇｍａ，Ｍ−１０２８）または１０ｍＭのＭｎＣｌ２（Ｓｉｇｍａ，Ｍ−１７８７）（アッセイに固有）、および０．００２％のＢｒｉｊ−３５（Ｓｉｇｍａ，Ｂ４１８４）を含有する１２μＬの酵素緩衝液を、各ウェルに添加した。化合物および酵素を１５分間プレインキュベートした。１００ｍＭのＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、１．５μＭのフルオレセイン標識ペプチド（当該キナーゼに固有）、ＡＴＰ（見掛けＫＭで，Ｓｉｇｍａ，Ａ９１８７）、および０．００２％のＢｒｉｊ−３５を含有する１２μｌのペプチド／ＡＴＰ緩衝液を、次いで各ウェルに添加して反応を開始した。一般に、反応の直線範囲でペプチドからリン酸化生成物への適切な（１５〜４０％）転化率を得るために、反応物を室温で１〜１．５時間インキュベートした。４５μＬの停止用緩衝液（２０ｍＭのＥＤＴＡを含有）の添加により反応を停止した。次いでＬａｂＣｈｉｐ  ３０００で１２シッパーＬａｂＣｈｉｐを用いてプレートを読み取った。転化率％値および阻害率％値を前記に従って求め、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ４または５．０１を用いて化合物のＩＣ５０曲線を作成した。Ｓ字状用量応答−可変勾配当てはめを用いる非線形曲線当てはめを用いてＩＣ５０曲線を作成し、ＩＣ５０値および勾配を判定した。
【０１１６】
本発明の化合物はＳｒｃおよびＬｙｎキナーゼに対して＜１０ｎＭのＩＣ５０をもつことが示された。
４−本発明化合物の細胞ベースのアッセイ
４．１−ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（ＡＴＰ）生存／増殖アッセイ
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１は、生存および増殖についてＳｒｃキナーゼ経路に高度に依存するヒト乳癌細胞系である。したがって、本発明化合物をそれらがＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の生存／増殖を低下させる能力について、両方とも細胞の代謝活性に向けた２つの異なる方法を用いて評価した。さらに、若干の本発明化合物を、ヒト血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）のＶＥＧＦ誘導増殖に対するそれらの阻害について試験した。
【０１１７】
アッセイの特徴：
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、１８５ｃｍ２の通気培養フラスコ内で１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充した細胞系特化培地中において３７℃、５％  ＣＯ２で、集密度８０％を超えない接着培養として維持する。増殖アッセイのために、接着した細胞を培養フラスコからトリプシン−ＥＤＴＡで採集し、０．１％〜５％のＦＢＳを含有するアッセイ用の各培地に再懸濁する。
【０１１８】
細胞のＡＴＰ含量（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬，Ｐｒｏｍｅｇａから）を下記の原理に基づいて蛍光発光により測定する：
ＡＴＰ（細胞により供給されるもの）の存在下でルシフェリンがオキシルシフェリンに転化されて発光する。細胞内のＡＴＰ含量は、生成するオキシルシフェリンおよび発光の量に比例する。
【０１１９】
インキュベーション条件：
０．１ｍｌ当たり１，０００個で懸濁した細胞０．１ｍｌを白色平底９６ウェルプレートに播種する。細胞を２〜４時間プレートに接着させた後、被験化合物を添加する。
【０１２０】
培地に懸濁した被験化合物０．０５ｍｌをウェルに添加して、最終体積０．１５ｍｌにする。培養物を被験化合物と共に３〜４日間インキュベートした後、培養物を細胞生存性についてアッセイする。インキュベーション期間が４日より長い場合、培養最終体積を０．２ｍｌに増加させるべきである。
【０１２１】
処理が終了した時点で、０．０５ｍｌの培養培地を各ウェルからマルチチャンネルピペッターで、ウェルの表面からのピペッティングにより取り出す。
少ない光のもとで、０．１ｍｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を各ウェルに添加し、各ウェルの内容物を穏やかに上下ピペッティングにより混合する（各プレートをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで読み取るまでプレートをホイルで覆っておく）。
【０１２２】
読取り：
発光をＥｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０３  Ｍｕｌｔｉ−ｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒ（ＰｅｒｋｍＥｌｍｅｒ）で読み取る。
【０１２３】
データの計算：
細胞増殖を対照ウェル（非処理）に対するパーセントとして表わす。
本発明化合物は細胞増殖をＩＣ５０＜５００ｎＭで阻害することが示された。
【０１２４】
４．２−ＷＳＴ−１（ミトコンドリア代謝）生存／増殖アッセイ
アッセイの特徴：
培養細胞のミトコンドリア代謝活性のアッセイ尺度は、ＷＳＴ−１基質から４４０ｎｍで測定される光学濃度をもつ生成物への転化率に基づく。
【０１２５】
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１を、１８５ｃｍ２の通気培養フラスコ内で１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充した細胞系特化培地中において３７℃、５％  ＣＯ２で、集密度８０％を超えない接着培養として維持する。増殖アッセイのために、接着した細胞を培養フラスコからトリプシン−ＥＤＴＡで採集し、０．１％〜５％のＦＢＳを含有するアッセイ用の各培地に再懸濁する。
【０１２６】
ＷＳＴ−１アッセイ（ＷＳＴ−１試薬，Ｒｏｃｈｅから）は、基質（４−［３−（４−ヨードフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−２Ｈ−５−テトラゾリオ］−１，３−ベンゼンジスルホネート）からホルマザンへのミトコンドリア代謝、および４４０ｎｍにおけるそれの吸光の測定に基づく。
【０１２７】
インキュベーション条件：
細胞０．１ｍｌの部分標本をウェルに播種する。細胞を０．１ｍｌ当たり５００〜１，０００個の密度で透明な平底９６ウェルプレートに播種する。細胞を２〜４時間プレートに接着させた後、被験化合物を添加する。
【０１２８】
培地に懸濁した被験化合物０．０５ｍｌをウェルに添加して、最終体積０．１５ｍｌにする。培養物を被験化合物と共に３〜４日間インキュベートした後、培養物を細胞生存性についてアッセイする。インキュベーション期間が４日より長い場合、培養最終体積を０．２ｍｌに増加させるべきである。
【０１２９】
処理が終了した時点で、０．０１５ｍｌのＷＳＴ−１溶液を各ウェルに添加する。プレートをＣＯ２インキュベーターに戻し、３７℃で１〜３時間インキュベートする。インキュベーション後、プレートをインキュベーターから取り出し、マイクロタイタープレート振とう器に乗せ、２分間穏やかに振とうする。
【０１３０】
読取り：
各ウェルの４４０ｎｍにおける光学濃度をＳｐｅｃｔｒａ−ｍａｘ  ｐｌｕｓ  ３８４プレートリーダーにより測定する。
【０１３１】
データの計算：
細胞増殖を対照ウェル（非処理）に対するパーセントとして表わす。
本発明化合物は細胞増殖をＩＣ５０＜５００ｎＭで阻害することが示された。
【０１３２】
５．インビボデータ
血液−網膜関門破壊ウサギモデルにおける血管漏出の阻害
ウサギの眼にＶＥＧＦを硝子体内注射すると、大量の網膜血管漏出を生じる(Edelman and Lutz, 2003, Invest. Ophthalmol. Vis. Sa. 2003; 44: ARVO e-abstract No. 328)。その動物モデルに基づいて、ウサギのＶＥＧＦ誘導性血液−網膜関門破壊に際しての網膜漏出の低下における本発明化合物７の局所投与の有効性を調べた。
【０１３３】
４日間、３％の被験化合物７（３０ｍｇ／ｍｌ，１０％のＰＥＧ  ４００，８７％のラブラフィル（ｌａｂｒａｆｉｌ））、または本発明化合物を含まない対照品を、５匹のウサギの右眼に１日４回、局所投与（５０μｌ）により投与した。
【０１３４】
２日目に、５０μｌ（５００ｎｇ）の組換えヒトＶＥＧＦ  １６５（ＲＤ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を動物の右眼に１回、硝子体内注射した。
ＶＥＧＦ攻撃の４７時間後（４日目）、フルオレセインを耳周囲静脈から注射し、１時間循環させた。
【０１３５】
ＶＥＧＦ攻撃の４８時間後に、硝子体網膜コンパートメント中のフルオレセイン含量を非侵襲性の走査眼蛍光分析で測定することにより、血液−網膜関門破壊を評価した。
結果
本発明者らは、本発明化合物が対照と比較して血管漏出を４１％低下させることを見出し、本発明による化合物が血管透過性、より具体的には硝子体／網膜疾患、たとえば糖尿病性網膜障害、網膜静脈閉塞または湿性加齢性黄斑変性症に関連する血管透過性を低下させるのに有用であるという証拠を得た。
【０１３６】
血液−網膜関門破壊ラットモデルにおける血管漏出の阻害
ラットのＶＥＧＦ誘導性血液−網膜関門破壊に際しての網膜漏出の低下における本発明化合物１１の局所投与の有効性を調べた。
【０１３７】
５μｌ（１００ｎｇ）の組換えヒトＶＥＧＦ  １６４（ＲＤ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を両眼に１回、硝子体内注射することによりラットを処理した。
ＶＥＧＦ注射後２７時間の間、０．５１％の被験本発明化合物１１（５．１ｍｇ／ｍｌ緩衝液ｐＨ５，３０％のシクロデキストリンを含む）、および本発明化合物を含まない対照を、６回、１６匹のラットの両眼への局所投与（１０μｌ）により投与した。
【０１３８】
ＶＥＧＦ攻撃後２７時間目に、エバンスブルー色素（４５ｍｇ／ｋｇ）を静脈内注射し、２時間、色素を循環させた。
次いで、各ラットに０．０５Ｍクエン酸緩衝液ｐＨ３．５（３７℃）を２分間注入して、色素を排出させた。この潅流の直後、両眼を眼球摘出し、各網膜をホルムアミド中でインキュベートすることによりエバンスブルー色素を抽出した(Qaum et al Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.2001, Vol 42, No 10)。その後、分光光度計を用いて６２０ｎｍで吸光を測定した。
【０１３９】
血液−網膜関門破壊は、血漿のエバンスブルー濃度で正規化した網膜のエバンスブルー濃度に比例していた。
結果
本発明者らは、本発明化合物が対照と比較して血管漏出を５６％低下させることを見出し、本発明による化合物が血管透過性、より具体的には硝子体／網膜疾患、たとえば糖尿病性網膜障害に関連する血管透過性を低下させるのに有用であるという証拠を得た。
【手続補正書】
【提出日】平成23年10月18日(2011.10.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０２】
中間体１：（６−（２，６−ジメチル−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミン）を中間体２について開示した方法に従って合成した。
中間体３の合成：３−（２−アミノ−キナゾリン−６−イル）−４−クロロフェノール
９．０１０ｇ（３１．５３ｍｍｏｌ，１当量）の６−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）−キナゾリン−２−イルアミンの、ジクロロメタン３００ｍｌ中における０℃に冷却した懸濁液に、９５ｍｌの１Ｍ  ＢＢｒ３（１Ｍ溶液）を慎重に添加した。溶液を１６時間撹拌した。次いでｐＨを飽和ＮａＨＣＯ３溶液の添加によりｐＨ８に調整する。沈殿した生成物を濾過し、エーテルで洗浄し、乾燥させて、７．５９６ｇ（２７．９６ｍｍｏｌ，８９％）の淡黄色粉末を得た。
【国際調査報告】
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