(57)【要約】  本発明は、高コレステロール血症および／または高脂血症および／またはそれらに関連のある疾患を予防または処置するためのＴＬＲ阻害剤または医薬上許容し得るその誘導体の使用、所望により１以上の脂質低下組成物、コレステロール低下組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物と組み合わせての使用を提供するものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
コレステロール、脂質および／または低比重リポ蛋白の上昇した濃度を有する哺乳類におけるコレステロール、脂質および／または低比重リポ蛋白の血液濃度を低下させる方法であって、哺乳類におけるＴＬＲシグナル伝達を阻害することを含む、方法。
【請求項２】
１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質の活性の阻害剤を哺乳類に投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
該ＴＬＲが、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９からなる群から選択される、請求項２記載の方法。
【請求項４】
ＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質が、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＩＲＦ、ＴＲＡＦ、ＴＧＦβ、ＩκＢ キナーゼ、ＩκＢおよびＮＦκＢからなる群から選択される、請求項２記載の方法。
【請求項５】
該阻害剤が、低分子；抗体；シクロヘキセン誘導体；脂質誘導体；”ＣＣＴ”トリプレットおよび”ＧＧＧ”トリプレットを含む合成オリゴヌクレオチド；”ＧＧＧ”および／または”ＧＧＧＧ”および／または”ＧＣ”配列を含有する領域を含む合成オリゴヌクレオチド；メチル化された合成オリゴヌクレオチド；該修飾がなければ免疫刺激性である免疫刺激モチーフを隣接する配列中に１以上の化学修飾を有する合成の免疫阻害性オリゴヌクレオチド；および１以上の修飾した免疫刺激モチーフを含む修飾された免疫刺激モチーフを含有する合成免疫阻害性オリゴヌクレオチド、ここで該修飾された免疫刺激モチーフは該修飾がなければ免疫刺激性である；
からなる群から選択される化合物である、請求項２記載の方法。
【請求項６】
低分子がクロロキンまたはヒドロキシクロロキンである、請求項５記載の方法。
【請求項７】
該阻害剤が下記構造；
５’−Ｎｍ−Ｎ３Ｎ２Ｎ１ＣＧＮ１Ｎ２Ｎ３−Ｎｍ−３’：
式中：
ＣＧは、オリゴヌクレオチドモチーフであり、Ｃはシトシンまたはピリミジンヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結であり、Ｇはグアノシン、プリンヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である;
Ｎ1-Ｎ3およびＮ1-Ｎ3は、各存在にて独立してヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結であり;
ＮmおよびＮmは、各存在にて独立してヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である；
但し、少なくとも一つのＮ1-Ｎ3および／または Ｎ1-Ｎ3 および／またはＣおよび／またはＧは、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である；ここで該オリゴヌクレオチドモチーフは、該ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結がなければ免疫刺激性である；ならびに、
ｍは、０〜約３０の整数である、
を有するＴＬＲアンタゴニスト化合物である、請求項２記載の方法。
【請求項８】
阻害剤が、１以上の修飾した免疫刺激モチーフを含む修飾された免疫刺激モチーフを含有するＴＬＲアンタゴニスト化合物であり、ここでＣＧは、修飾された免疫刺激モチーフであり、Ｃはシトシンであるか、または５-メチル-ｄＣ、２'-Ｏ−置換-Ｃ、２’−Ｏ−メチル-Ｃ、２’−Ｏ−メトキシエトキシ-Ｃ、２’−Ｏ−メトキシエチル-５-メチル-Ｃおよび２’−Ｏ−メチル−５−メチル-Ｃから選択されるピリミジンヌクレオチド誘導体であり、Ｇはグアノシンであるか、または２’−Ｏ−置換-Ｇ、２’−Ｏ−メチル−Ｇ、および２’−Ｏ−メトキシエトキシ−Ｇから選択されるプリンヌクレオチド誘導体である；
但し、修飾された免疫刺激モチーフの少なくとも一つのＣおよび／またはＧは、特定されたヌクレオチド誘導体であり、所望により３未満の連続したグアノシンヌクレオチドを含有していてもよい；ここで該修飾された免疫刺激モチーフは、該ヌクレオチド誘導体がなければ免疫刺激性である、請求項２記載の方法。
【請求項９】
該投与経路が、非経口、粘膜、経口、舌下、経皮、局所、吸入、経鼻、エアロゾル、眼球内、気管内、直腸内、膣内、遺伝子銃により、皮膚パッチまたは点眼薬または洗口薬の形態である、請求項２記載の方法。
【請求項１０】
１以上の脂質低下化合物または組成物、コレステロール低下化合物または組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物を、哺乳類に投与することをさらに含む、請求項２記載の方法。
【請求項１１】
コレステロール低下組成物がスタチンである、請求項１０の方法。
【請求項１２】
１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質の発現の阻害剤を哺乳類に投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
ＴＬＲが、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９からなる群から選択される、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
ＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質が、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＩＲＦ、ＴＲＡＦ、ＴＧＦβ、ＩκＢ キナーゼ、ＩκＢおよびＮＦ−κＢからなる群から選択される、請求項１２記載の方法
【請求項１５】
投与経路が、非経口、粘膜、経口、舌下、経皮、局所、吸入、経鼻、エアロゾル、眼球内、気管内、直腸内、膣内、遺伝子銃により、皮膚パッチまたは点眼薬または洗口薬の形態である、請求項１２記載の方法。
【請求項１６】
１以上の脂質低下化合物または組成物、コレステロール低下化合物または組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物を、哺乳類に投与することをさらに含む、請求項１２記載の方法。
【請求項１７】
コレステロール低下組成物がスタチンである、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
冠状動脈性心臓病、動脈硬化、アテロ−ム性動脈硬化症、卒中、末梢血管疾患、糖尿および高血圧から選択される疾患を有する哺乳類を治療的に処置する方法であって、該哺乳類におけるＴＬＲシグナル伝達を阻害することを含む、方法。
【請求項１９】
１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質の活性の阻害剤を哺乳類に投与することを含む、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
ＴＬＲが、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９からなる群から選択される、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
ＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質が、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＩＲＦ、ＴＲＡＦ、ＴＧＦβ、ＩκＢ キナーゼ、ＩκＢおよびＮＦ−κＢからなる群から選択される、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
阻害剤が、低分子；抗体；シクロヘキセン誘導体；脂質誘導体；”ＣＣＴ”トリプレットおよび”ＧＧＧ”トリプレットを含む合成オリゴヌクレオチド；”ＧＧＧ”および／または”ＧＧＧＧ”および／または”ＧＣ”配列を含有する領域を含む合成オリゴヌクレオチド；メチル化される合成オリゴヌクレオチド；修飾がなければ免疫刺激性である免疫刺激モチーフに隣接する配列中に１以上の化学修飾を有する合成の免疫阻害性オリゴヌクレオチド；および１以上の修飾された免疫刺激モチーフを含む修飾された免疫刺激モチーフを含有する合成免疫阻害性オリゴヌクレオチド（ここで、該修飾された免疫刺激モチーフは該修飾がなければ免疫刺激性である）、からなる群から選択される化合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
該低分子はクロロキンまたはヒドロキシクロロキンである、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
該阻害剤が下記構造；
５’−Ｎｍ−Ｎ3Ｎ2Ｎ1ＣＧＮ1Ｎ2Ｎ3−Ｎｍ−３':
式中：
ＣＧは、オリゴヌクレオチドモチーフであり、Ｃはシトシンまたはピリミジンヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結であり、Ｇはグアノシンまたはプリンヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である;
Ｎ1-Ｎ3およびＮ1-Ｎ3は、各存在にて独立してヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結であり;
ＮmおよびＮmは、各存在にて独立してヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である；
但し、少なくとも一つのＮ1-Ｎ3および／または Ｎ1-Ｎ3 および／またはＣおよび／またはＧは、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である；ここで該オリゴヌクレオチドモチーフは、該ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結がなければ免疫刺激性である；ならびに、
ｍは、０〜約３０の整数である、
を有するＴＬＲアンタゴニスト化合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
阻害剤が、１以上の修飾した免疫刺激モチーフを含む修飾された免疫刺激モチーフを含有するＴＬＲアンタゴニスト化合物であり、ここでＣＧは修飾された免疫刺激モチーフであり、Ｃはシトシンであるか、または５-メチル-ｄＣ、２'-Ｏ−置換-Ｃ、２'-Ｏ−メチル-Ｃ、２'-Ｏ−メトキシエトキシ-Ｃ、２'-Ｏ−メトキシエチル-５-メチル-Ｃ、および２’−Ｏ−メチル-５-メチル-Ｃから選択されたピリミジンヌクレオチド誘導体であり、Ｇは、グアノシンであるか、または２'-Ｏ−置換-Ｇ、２'-Ｏ−メチル-Ｇおよび２'-Ｏ−メトキシエトキシ-Ｇから選択されるプリンヌクレオチド誘導体である；但し、修飾された免疫刺激モチーフの少なくとも一つのＣおよび／またはＧは、特定されたヌクレオチド誘導体であり、所望により３未満の連続したグアノシンヌクレオチドを含有していてもよい；ここで該修飾された免疫刺激モチーフは、該ヌクレオチド誘導体がなければ免疫刺激性である、請求項１９記載の方法。
【請求項２６】
投与経路は、非経口、粘膜、経口、舌下、経皮、局所、吸入、経鼻、エアロゾル、眼球内、気管内、直腸内、膣内、遺伝子銃により、皮膚パッチまたは点眼薬または洗口薬の形態である、請求項１９記載の方法。
【請求項２７】
１以上の脂質低下化合物または組成物、コレステロール低下化合物または組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物を、哺乳類に投与することをさらに含む、請求項１９記載の方法。
【請求項２８】
コレステロール低下組成物がスタチンである、請求項２７の方法。
【請求項２９】
１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質の発現の阻害剤を哺乳類に投与することを含む、請求項１８の方法。
【請求項３０】
ＴＬＲが、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９からなる群から選択される、請求項２９の方法。
【請求項３１】
ＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質が、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＩＲＦ、ＴＲＡＦ、ＴＧＦβ、ＩκＢ キナーゼ、ＩκＢおよびＮＦκＢからなる群から選択される、請求項２９記載の方法。
【請求項３２】
投与経路が、非経口、粘膜、経口、舌下、経皮、局所、吸入、経鼻、エアロゾル、眼球内、気管内、直腸内、膣内、遺伝子銃により、皮膚パッチまたは点眼薬または洗口薬の形態である、請求項２９記載の方法。
【請求項３３】
１以上の脂質低下化合物または組成物、コレステロール低下化合物または組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物を、哺乳類に投与することをさらに含む、請求項２９記載の方法。
【請求項３４】
コレステロール低下組成物がスタチンである、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
哺乳類における疾患を予防する方法であって、該疾患が、冠状動脈性心臓病、動脈硬化、アテロ−ム性動脈硬化症、卒中、末梢血管疾患、糖尿および高血圧から選択され、該哺乳類におけるＴＬＲシグナル伝達を阻害することを含む、方法。
【請求項３６】
１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質の活性の阻害剤を哺乳類に投与することを含む、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
ＴＬＲが、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９からなる群から選択される、請求項３５の方法。
【請求項３８】
ＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質は、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＩＲＦ、ＴＲＡＦ、ＴＧＦβ、ＩκＢ キナーゼ、ＩκＢおよびＮＦκＢからなる群から選択される、請求項３６記載の方法。
【請求項３９】
阻害剤が、小分子；抗体；シクロヘキセン誘導体；脂質誘導体；”ＣＣＴ”トリプレットおよび”ＧＧＧ”トリプレットを含む合成オリゴヌクレオチド；”ＧＧＧ”および／または”ＧＧＧＧ”および／または”ＧＣ”配列を含有する領域を含む合成オリゴヌクレオチド；メチル化された合成オリゴヌクレオチドまたは修飾がなければ免疫刺激性である免疫刺激モチーフに隣接する配列中に１以上の化学修飾を有する合成の免疫阻害性オリゴヌクレオチド;および１以上の修飾した免疫刺激モチーフを含む修飾された免疫刺激モチーフを含有する合成免疫阻害性オリゴヌクレオチド（ここで、該修飾された免疫刺激モチーフは、該修飾がなければ免疫刺激性である）、からなる群から選択される化合物である、請求項３６記載の方法。
【請求項４０】
低分子はクロロキンまたはヒドロキシクロロキンである、請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
阻害剤が下記構造；
５'-Ｎｍ−Ｎ3Ｎ2Ｎ1ＣＧＮ1Ｎ2Ｎ3−Ｎｍ−３':
式中：
ＣＧはオリゴヌクレオチドモチーフであり、Ｃはシトシンまたはピリミジンヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結であり、Ｇはグアノシン、プリンヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結であり;
Ｎ1-Ｎ3およびＮ1-Ｎ3は、各存在にて独立してヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結であり;
ＮmおよびＮmは、各存在にて独立してヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である；
但し、少なくとも一つのＮ1-Ｎ3および／またはＮ1-Ｎ3 および／またはＣおよび／またはＧは、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結であり；ここで該オリゴヌクレオチドモチーフは、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結がなければ免疫刺激性である；ならびに、
ｍは、０〜約３０の整数である、
を有するＴＬＲアンタゴニスト化合物である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
阻害剤が、１以上の修飾した免疫刺激モチーフを含む修飾された免疫刺激モチーフを含有するＴＬＲアンタゴニスト化合物であり、ここでＣＧは修飾された免疫刺激モチーフであり、Ｃはシトシンであるか、または５-メチル-ｄＣ、２'-Ｏ−置換-Ｃ、２'-Ｏ−メチル-Ｃ、２'-Ｏ−メトキシエトキシ-Ｃ、２'-Ｏ−メトキシエチル-５-メチル-Ｃおよび２’−Ｏ−メチル-５-メチル-Ｃから選択されたピリミジンヌクレオチド誘導体であり、Ｇはグアノシンであるか、または２'-Ｏ−置換-Ｇ、２'-Ｏ−メチル-Ｇおよび２'-Ｏ−メトキシエトキシ-Ｇから選択されるプリンヌクレオチド誘導体である；但し、修飾された免疫刺激モチーフの少なくとも一つのＣおよび／またはＧは、特定されたヌクレオチド誘導体であり、所望により３未満の連続したグアノシンヌクレオチドを含有していてもよい；ここで該修飾された免疫刺激モチーフは、該ヌクレオチド誘導体がなければ免疫刺激性である、請求項３６記載の方法。
【請求項４３】
投与経路は、非経口、粘膜、経口、舌下、経皮、局所、吸入、経鼻、エアロゾル、眼球内、気管内、直腸内、膣内、遺伝子銃により、皮膚パッチまたは点眼薬または洗口薬の形態である、請求項３６記載の方法。
【請求項４４】
１以上の脂質低下化合物または組成物、コレステロール低下化合物または組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物を、哺乳類に投与することをさらに含む、請求項３６記載の方法。
【請求項４５】
コレステロール低下組成物がスタチンである、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質の発現の阻害剤を哺乳類に投与することを含む、請求項３５記載の方法。
【請求項４７】
ＴＬＲが、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９からなる群から選択される、請求項４６の方法。
【請求項４８】
ＴＬＲシグナル伝達に関与するタンパク質が、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＩＲＦ、ＴＲＡＦ、ＴＧＦβ、ＩκＢ キナーゼ、ＩκＢおよびＮＦκＢからなる群から選択される、請求項４６記載の方法。
【請求項４９】
投与経路は、非経口、粘膜、経口、舌下、経皮、局所、吸入、経鼻、エアロゾル、眼球内、気管内、直腸内、膣内、遺伝子銃により、皮膚パッチまたは点眼薬または洗口薬の形態である、請求項４６記載の方法。
【請求項５０】
１以上の脂質低下化合物または組成物、コレステロール低下化合物または組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物を、哺乳類に投与することをさらに含む、請求項４６記載の方法。
【請求項５１】
コレステロール低下組成物がスタチンである、請求項５０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００８年１０月６日に提出された米国仮出願番号第６１／１０２９７４号からの優先権主張の利益を主張するもので、この開示内容は本明細書に出典明示により組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
本発明は、疾患または障害を予防または処置するためのトル様受容体シグナル伝達経路を阻害する化合物および医薬組成物の使用に関する。本発明は、さらに高コレステロール血症および高脂血症ならびにそれらに関連する疾患の処置にも関する。
【０００３】
関連技術の要約
血中のその不溶性から、コレステロールおよび脂質は、リポ蛋白質において、循環系にて輸送される。リポ蛋白質中のコレステロールおよび脂質は、循環系を通じて組織内に蓄積され得る。循環系における高濃度のコレステロール(高コレステロール血症)および／または脂質(高脂血症)は、多くの疾患と関連することが知られる症状であり、該疾患には冠状動脈性心臓病、動脈硬化、アテロ−ム性動脈硬化症、卒中、末梢血管疾患、糖尿および高血圧が挙げられるが、これらに限定するものではない。血中の低比重リポ蛋白脂質および／または低比重リポ蛋白コレステロール濃度を低下させることは、高いコレステロールおよび／または脂質の血液濃度と関連がある疾患を防止するために有効であると確立されてきた。さらに、血中の低比重リポ蛋白脂質濃度および／または低比重リポ蛋白コレステロール濃度と関連して、高比重リポ蛋白脂質および／または高比重リポ蛋白コレステロール濃度の濃度を増加させることは、コレステロールおよび／または脂質の高い血液濃度に関連のある疾患を防止するために有効であることも確立されている。
【０００４】
トル様受容体（ＴＬＲ）は免疫系の多くの細胞に存在し、先天性免疫応答に関与することが判っている(Hornung, V. et al., (2002) J. Immunol. 168:4531-4537)。ＴＬＲは、哺乳類が外来分子に対する免疫応答を認識かつ開始させる重要な手段であって、先天的および受動免疫応答を関連づける手段もまた提供する(Akira, S. et al. (2001) Nature Immunol. 2:675-680; Medzhitov, R. (2001) Nature Rev. Immunol. 1:135-145)。哺乳類において、このファミリーは、ＴＬＲ１からＴＬＲ１１と呼ばれる１１種のタンパク質から構成され、それらは、細菌、真菌類、寄生虫、およびウイルスからの病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、また多くの転写因子により媒介される免疫応答を誘導することが知られている(Poltorak, A. et al. (1998) Science 282:2085-2088; Underhill, D.M., et al. (1999) Nature 401:811-815; Hayashi, F. et al. (2001) Nature 410:1099-1103; Zhang, D. et al. (2004) Science 303:1522-1526; Meier, A. et al. (2003) Cell. Microbiol. 5:561-570; Campos, M.A. et al. (2001) J. Immunol. 167: 416-423; Hoebe, K. et al. (2003) Nature 424: 743-748; Lund, J. (2003) J. Exp. Med. 198:513-520; Heil, F. et al. (2004) Science 303:1526-1529; Diebold, S.S., et al. (2004) Science 303:1529-1531; Hornung, V. et al. (2004) J. Immunol. 173:5935-5943)。ＴＬＲは、重要な手段であることが知られており、これにより哺乳類は、外来分子に対する免疫応答を認識かつ開始し、また先天的および受動免疫応答を関連づける手段を提供する(Akira, S. et al. (2001) Nature Immunol. 2:675-680; Medzhitov, R. (2001) Nature Rev. Immunol. 1:135-145)。ＴＬＲは、哺乳類が外来分子に対する免疫応答を認識かつ開始させる重要な手段であることが知られており、先天的および受動免疫応答を関連づける手段もまた提供すると認識されている。
【０００５】
いくつかのＴＬＲは細胞の表面上にあり、細胞外病原体に対する応答を検出および開始する、その他のＴＬＲは細胞の内側にあり、細胞内病原体に対する応答を検出および開始する。表１は、代表的なＴＬＲ、既知のアゴニスト、およびＴＬＲを含有することが知られる細胞型を提供する(Diebold, S.S. et al. (2004) Science 303:1529-1531; Liew, F. et al. (2005) Nature 5:446-458; Hemmi H et al. (2002) Nat. Immunol. 3:196-200; Jurk M et al. (2002) Nat. Immunol. 3:499; Lee J et al. (2003) Proc. Ｎatl. Acad. Sci. USA 100:6646-6651); (Alexopoulou, L. (2001) Nature 413:732-738)。
【０００６】
表１：
【表１】
2012505221.tif 000002
【０００７】
ＴＬＲの選択的局在化およびそこから生じるシグナル伝達により、免疫反応へのそれらの役割へのいくつかの洞察が提供される。この免疫反応は、応答に関与する細胞のサブセットに基づく先天的応答および獲得応答の双方に関連する。例えば、遅延型過敏症および細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化などの古典的細胞媒介機能に関与するＴヘルパー（Ｔｈ）細胞は、Ｔｈ１細胞である。この応答は、抗原に対する身体の先天的反応であり（例えば、ウイルス感染、細胞内病原体、および腫瘍細胞）、そしてＩＦＮ−γの分泌およびＣＴＬの同時活性化をもたらす。
【０００８】
炎症性応答を制御する際に、それらの関与の結果として、ＴＬＲの活性化は、自己免疫性、感染疾患および炎症を含む多くの疾患の病原論において影響を及ぼすことが知られている(Papadimitraki et al. (2007) J. Autoimmun. 29: 310-318; Sun et al. (2007) Inflam. Allergy Drug Targets 6:223-235; Diebold (2008) Adv. Drug Deliv. Rev. 60:813-823; Cook, D.N. et al. (2004) Nature Immunol. 5:975-979; Tse and Horner (2008) Semin. Immunopathol. 30:53-62; Tobias & Curtiss (2008) Semin. Immunopathol. 30:23-27; Ropert et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:41-51; Lee et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:3-9; Gao et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:29-40; Vijay-Kumar et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:11-21)。炎症におけるその役割の結果として、ＴＬＲ発現および／または活性の下流調節が、疾患介入のための有用な手段を提供できると認識される。
【０００９】
現在まで、ＴＬＲ活性を選択的に阻害することを目的とする研究方法には、低分子(例えば、クロロキンおよびヒドロキシクロロキン)(例えば、WO 2005/007672およびKrieg, A. M. (2002) Annu. Rev. Immunol. 20:709を参照されたい)、抗体(例えば、Duffy, K. et al. (2007) Cell Immunol. 248:103-114)、触媒性ＲＮＡｉ技術(例えば、低分子の阻害性ＲＮＡ)、シクロヘキセン誘導体(Il et al. (2006) Mol. Pharmcol. 69:1288-1295)、脂質誘導体(Akira et al. (2005) Circulation 114:270-274, oligonucleotides containing poly-G sequences(Pawar et al. (2007) J. Am. Soc. Nephrol. 18:1721-1731)およびメチル化または修飾されたオリゴヌクレオチドによる競合阻害(例えば、Barrat and Coffman (2008) Immunol. Rev. 223:271-283を参照されたい) が挙げられる。ＴＬＲ阻害剤を開示するこれらの文献の一説は参照により具体的に組み込まれる。
【００１０】
ＴＬＲ媒介性の炎症応答を阻害するその能力の結果として、ＴＬＲアンタゴニストは、特定疾患の処置および／または予防のための有力な治療方法として現在研究されている。しかし、血液コレステロール濃度および／または血液脂質濃度および／またはそれらの関連疾患を制御する際のＴＬＲの役割は、これまでに知られていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の概要
驚くべきことに、本出願人は、ＴＬＲシグナル伝達経路の阻害により、上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類における血液のコレステロール濃度および／または血液の脂質濃度を低下できること、ならびに／またはＨＤＬ−ＣとＬＤＬ−Ｃとの比率を増加できることを発見した。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
即ち、第一の局面において、本発明は、ＴＬＲシグナル伝達を阻害することにより上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類における血液コレステロール濃度および／または血液脂質濃度を低下するための方法を提供する。特定の好ましい実施形態において、ＴＬＲシグナル伝達は、１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達経路における下流タンパク質、例えば骨髄分化マーカー８８(ＭｙＤ８８)、ＩＬ−１Ｒ−関連キナーゼ(ＩＲＡＫ)、インターフェロン制御因子(ＩＲＦ)、ＴＮＦ−受容体関連因子(ＴＲＡＦ)、トランスフォーミング増殖因子β(ＴＧＦβ)-活性化キナーゼ１、ＩκＢキナーゼ、ＩκＢ、およびＮＦ-κＢを発現または活性を阻害することにより、阻害される。即ち、ある実施態様において、ＴＬＲシグナル伝達阻害は、上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類に、ＴＬＲアンタゴニスト化合物を投与することにより達成される。これらのＴＬＲアンタゴニスト化合物または組成物のいくつかは次のものである：低分子物質、例えばクロロキンまたはヒドロキシクロロキン；抗体；シクロヘキセン誘導体；脂質誘導体；２つのトリプレット配列、”ＣＣＴ”トリプレットおよび”ＧＧＧ”トリプレットを含む合成オリゴヌクレオチド（ここで、該”ＣＣＴ”トリプレットは近接であると考えられ、該”ＧＧＧ”トリプレットは遠位であると考られる）；”ＧＧＧ”および／または”ＧＧＧＧ”および／または”ＧＣ”配列を含有する領域を含む合成オリゴヌクレオチド（ここで複数のかかる配列が存在してもよい）；メチル化された合成オリゴヌクレオチド；または免疫刺激モチーフに隣接する配列および／または修飾がなければ免疫刺激性であるオリゴヌクレオチドモチーフにおいて１以上の化学的修飾を有し得る合成の免疫阻害性オリゴヌクレオチド。ある実施形態において、ＴＬＲシグナル伝達は、遺伝子発現ブロッキング技術、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド、デコイＲＮＡ、リボゾーム、触媒性ＲＮＡｉ技術、ｓｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡを用いて、１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達経路における下流タンパク質、例えばＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＩＲＦ、ＴＲＡＦ、ＴＧＦβ、ＩκＢキナーゼ、ＩκＢおよびＮＦ−κＢの発現を阻害することにより阻害される。
【００１３】
ある好ましい実施形態において、上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類における血液コレステロール濃度および／または血液脂質濃度を低下させる方法は、構造５'-Ｎｍ-Ｎ3Ｎ2Ｎ1ＣＧＮ1Ｎ2Ｎ3-Ｎｍ-３’（式中、ＣＧはオリゴヌクレオチドモチーフであり、Ｃはシトシンまたはピリミジンヌクレオチド誘導体であり、およびＧはグアノシンまたはプリンヌクレオチド誘導体である；Ｎ１-Ｎ3およびＮ1-Ｎ3は、各存在にて独立してヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体である；ＮｍおよびＮｍは、各存在にて独立してヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である；但し、少なくとも一つのＮ1-Ｎ３および／またはＮ１-Ｎ３および／またはＣおよび／またはＧはヌクレオチド誘導体であって、ここで該オリゴヌクレオチドモチーフは該ヌクレオチド誘導体がなければ免疫刺激性である；およびｍは、０〜約３０の整数である）を有するＴＬＲアンタゴニスト組成物を、哺乳類に投与することを含む。
【００１４】
さらなる実施形態において、本発明は、構造５'-Ｎｍ-Ｎ3Ｎ2Ｎ1ＣＧＮ1Ｎ2Ｎ3−Ｎｍ-３'（式中、ＣＧはオリゴヌクレオチドモチーフであり、Ｃはシトシンまたはピリミジンヌクレオチド誘導体であり、Ｇはグアノシンまたはプリンヌクレオチド誘導体であり；Ｎ1−Ｎ3およびＮ１-Ｎ３は、各存在にて独立してヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体である；ＮｍおよびＮｍは各存在にて独立してヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である；但し、少なくとも一つのＮ1−Ｎ3および／またはＮ1-Ｎ3および／またはＣおよび／またはＧは、ヌクレオチド誘導体であって、さらに該化合物は３つ未満の連続したグアノシンヌクレオチドを含み得る、ここで該オリゴヌクレオチドモチーフは、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結がなければ免疫刺激性である；ならびにｍは０〜約３０の整数である）を有するＴＬＲアンタゴニスト組成物を哺乳類に投与することを含む、上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類において血液コレステロール濃度および／または血液脂質濃度を低下させる方法を提供する。
【００１５】
別の実施形態において、本発明は、１以上のＴＬＲアンタゴニスト化合物または組成物および医薬上許容し得る担体を含む医薬組成物の投与により、上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類において血液コレステロール濃度および／または血液脂質濃度を低下させる方法を提供する。 
【００１６】
ある好ましい実施形態において、上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類における血液コレステロール濃度および／または血液脂質濃度を低下することは、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９から選択される１以上のＴＬＲアンタゴニスト化合物を投与することを含む。
【００１７】
第二の態様において、本発明は、哺乳類において高い血液脂質濃度および／または高い血液コレステロール濃度と関連のある疾患を治療的に処置する方法を提供するものであり、かかる方法は哺乳類におけるＴＬＲシグナル伝達を阻害することを含む。ある実施形態において、ＴＬＲシグナル伝達は、医薬上有効量で本発明の１以上のＴＬＲアンタゴニスト化合物を哺乳類に投与することにより阻害される。ある実施態様において、ＴＬＲシグナル伝達は、医薬上有効量にて１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達経路における別のタンパク質の発現を阻害することにより阻害される。本発明のこの態様に関する特定の好ましい実施形態において、該疾患は、高コレステロール血症、高脂血症、冠状動脈性心臓病、動脈硬化、アテロ−ム性動脈硬化症、卒中、末梢血管疾患、糖尿または高血圧である。
【００１８】
第三の態様において、本発明は、上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類における高い血液脂質濃度および／または血液コレステロール濃度に関連する疾患を予防するための方法を提供するものであって、かかる方法は、哺乳類におけるＴＬＲシグナル伝達を阻害することを含む。ある実施形態において、ＴＬＲシグナル伝達は、医薬上有効量にて本発明の１以上のＴＬＲアンタゴニスト化合物を哺乳類に投与することにより阻害される。ある実施態様において、ＴＬＲシグナル伝達は、１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達経路における別のタンパク質の発現を阻害することによって阻害される。特定の好ましい実施態様において、該疾患は、高コレステロール血症、高脂血症、冠状動脈性心臓病、動脈硬化、アテロ−ム性動脈硬化症、卒中、末梢血管疾患、糖尿または高血圧である。
【００１９】
ある実施形態において、本発明の方法は、１以上のコレステロール低下組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物を哺乳類に投与することをさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１ａ】図１aは、実施例２に従って処置した動物における血清総コレステロールを示す。要するに、動物を西洋食で飼育し、ＴＬＲアンタゴニスト(５mg/kgまたは２０mg/kg)、ＰＢＳまたはLipitor（登録商標）(２０mg/kg)を１２週間投与した。血液サンプルを、１２週の試験期間にわたって採取し、血清総コレステロールを決定するために使用した。これらのデータは、ＴＬＲアンタゴニストの投与により、インビボでの投与後の血清総コレステロールの上昇を阻害できることを示す。
【図１ｂ】図１bは、実施例２に従って処置した動物における経時的な血清総コレステロールのパーセント変化を示したものである。要するに、動物を西洋食で飼育し、ＴＬＲアンタゴニスト(５mg/kgまたは20 mg/kg)、ＰＢＳまたはLipitor（登録商標）(２０mg/kg)を１２週間投与した。血液サンプルを、１２週の試験期間にわたって採取し、血清総コレステロールを決定するために使用した。これらのデータは、ＴＬＲアンタゴニストが、インビボでの投与後の血清総コレステロールの上昇を阻害できることを示す。
【図２ａ】図２aは、実施例３に従って処置した動物における、血清総コレステロール、高比重リポ蛋白(ＨＤＬ)、低比重リポ蛋白(ＬＤＬ)、トリグリセリド(ＴＧ)、グルコースおよびＨＤＬ−コレステロールとＬＤＬ−コレステロール(ＨＤＬ−Ｃ／ＬＤＬ−Ｃ)との比率を示す。要するに、Ｃ５７／ＢＬ／６匹のマウスを西洋食で飼育し、ＴＬＲアンタゴニスト(５mg/kgまたは２０mg/kg)またはＰＢＳを１２週間投与した。血液サンプルを、１２週間の試験期間にわたって採取し、血清総コレステロール、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＴＧおよびグルコース濃度を決定するために使用した。これらのデータは、ＴＬＲアンタゴニストが、血清総コレステロール、ＬＤＬおよびＴＧにおける上昇を阻害し、インビボでの投与後の血液グルコース濃度を低下または維持できることを示す。
【図２ｂ】図２ｂは、実施例３に従って処置した動物における、血清総コレステロール、高比重リポ蛋白(ＨＤＬ)、低比重リポ蛋白(ＬＤＬ)、トリグリセリド（ＴＧ)およびグルコースのパーセント変化を示す。
【図２ｃ】図２cは、実施例３に従って処置した動物における、血清総コレステロール、高比重リポ蛋白(ＨＤＬ)、低比重リポ蛋白(ＬＤＬ)、トリグリセリド(ＴＧ)、グルコースおよびＨＤＬ−コレステロールとＬＤＬ−コレステロール(ＨＤＬ−Ｃ／ＬＤＬ−Ｃ）との比率を示す。要するに、ＡｐｏＥ欠損マウスを西洋食で飼育し、ＴＬＲアンタゴニスト(５mg/kgまたは２０mg/kg)またはＰＢＳを１２週間投与した。血液サンプルを、１２週間の試験期間にわたって採取し、血清総コレステロール、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＴＧおよびグルコース濃度を決定するために使用した。これらのデータは、ＴＬＲアンタゴニストが、高コレステロール血症および／または高脂血症を発症させる素因を持つ哺乳類へのインビボ投与後に、血清総コレステロール、ＬＤＬ、ＴＧの上昇を阻害できるか、または血液グルコース濃度を維持または低下できることを示している。
【図２ｄ】図２ｄは、実施例３に従って処置した動物における血清総コレステロール、高比重リポ蛋白質(ＨＤＬ)、低比重リポ蛋白質(ＬＤＬ)、トリグリセリド（ＴＧ）およびグルコースのパーセント変化を示す。
【図３ａ】図３aは、実施例３に従って処置された動物の総体重を示す。要するに、Ｃ５７／ＢＬ／６のマウスを西洋食で飼育し、ＴＬＲアンタゴニスト(５mg/kgまたは２０mg/kg)またはＰＢＳを１２週間投与した。体重を、１２週間の試験期間にわたり測定した。これらのデータは、ＴＬＲアンタゴニストが、高脂肪食で飼育された哺乳類へのインビボ投与後の総体重の上昇を阻害できることを示す。
【図３ｂ】図３ｂは、実施例３に従って処置した動物の総体重を示す。要するに、ＡｐｏＥ欠損マウスを西洋食で飼育し、ＴＬＲアンタゴニスト(５mg/kgまたは２０mg/kg)またはＰＢＳを１２週間投与した。体重を、１２週間の試験期間にわたり測定した。これらのデータは、ＴＬＲアンタゴニストが、高コレステロール血症および／または高リポ蛋白血症を発症させる素因を持つ高脂肪食で飼育された哺乳類へのインビボ投与後の総体重中の上昇を阻害できることを示す。
【００２１】
好ましい実施形態の詳細な説明
本発明は、高コレステロール血症および／または高脂血症ならびに／またはそれらと関連する疾患を阻害および／または抑制するためのＴＬＲアンタゴニストの治療用途に関する。本出願人は、驚くべきことに、ＴＬＲシグナル伝達経路の阻害上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類における血液コレステロール濃度および／または血液脂質濃度を低下することができることを発見した。
【００２２】
従って、第一の態様において、本発明は、ＴＬＲシグナル伝達を阻害することにより、上昇した血液コレステロール濃度および／または血液脂質濃度を有する哺乳類において、血液コレステロール濃度および／または血液脂質濃度を低下するための方法を提供する。特定の好ましい実施形態において、ＴＬＲシグナル伝達は、１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達経路における下流タンパク質、例えばＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＩＲＦ、ＴＲＡＦ、ＴＧＦβ、ＩκＢキナーゼ、ＩκＢおよびＮＦ−κＢを発現または活性を阻害することにより阻害される。従って、ある実施態様において、ＴＬＲシグナル伝達の阻害は、上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類に、ＴＬＲアンタゴニスト化合物を投与することにより達成される。いくつかのこれらのＴＬＲアンタゴニスト化合物または組成物とは、エンドソームの成熟を下流調節する低分子であって、例えばクロロキンまたはヒドロキシクロロキン；抗体；シクロヘキセン誘導体；脂質誘導体；２つのトリプレット配列”ＣＣＴ”トリプレットおよび”ＧＧＧ”トリプレットを含む合成オリゴヌクレオチド、ここで”ＣＣＴ”トリプレットは近位と考えられ、”ＧＧＧ”トリプレットは遠位と考えられる；”ＧＧＧ”および／または”ＧＧＧＧ”および／または”ＧＣ”配列を含有する領域を含む合成オリゴヌクレオチド（ここで、複数のかかる配列が存在してもよい）；メチル化された合成オリゴヌクレオチド；または免疫刺激モチーフに近接する配列および／または修飾がなければ免疫刺激性であるオリゴヌクレオチドモチーフ中に１以上の化学修飾を有し得る合成の免疫阻害性オリゴヌクレオチドであるが、これらに限定するものではない。ある実施形態において、ＴＬＲシグナル伝達は、遺伝子発現ブロッキング技術、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド、デコイＲＮＡ、リボゾーム、触媒性ＲＮＡｉ技術、ｓｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡを用いて、１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達経路における下流タンパク質、例えばＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＩＲＦ、ＴＲＡＦ、ＴＧＦβ、ＩκＢキナーゼ、ＩκＢ、および／またはＮＦ−κＢの発現を阻害することによって阻害される。ＴＬＲ活性または発現が阻害される特定の実施形態において、該ＴＬＲはＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９から選択される。
【００２３】
さらに、本発明は、血液コレステロール濃度および／または血液脂質濃度の至適レベルを低下する活性を有するＴＬＲアンタゴニスト化合物ならびにかかる化合物を製造および使用する方法を提供する。
【００２４】
加えて、本発明のＴＬＲシグナル伝達の阻害は、疾患を予防および／または処置するために、１以上の、脂質を低下する化合物または組成物、コレステロールを低下する化合物または組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物との組合せにおいて有用である。
【００２５】
血液コレステロールおよび／または脂質濃度の増加の予防ならびに／または高い血液コレステロール濃度および／または高い血液脂質濃度の処置が必要である患者には、例えば心臓脈管事象を有するリスクのある患者が含まれる。
【００２６】
「オリゴヌクレオチド」の用語は、一般的に、複数の結合したヌクレオシド単位を含むポリヌクレオシドを指す。そのようなオリゴヌクレオチドは、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを含めた現存する核酸源から得ることができるが、好ましくは合成方法により作成される。例示的態様において、ヌクレオシド単位の各々は、野生型オリゴヌクレオチドと比較してさまざまな化学修飾および置換基を包含してもよく、例えば修飾したヌクレオシド塩基および／または修飾した糖単位を含みうるが、これらに限定するものではない。化学修飾の例は当業者に公知であり、例えば、Uhlmann E et al. (1990) Chem. Rev. 90:543; "Protocols for Oligonucleotides and Analogs" Synthesis and Properties & Synthesis and Analytical Techniques, S. Agrawal, ed, Humana Press, Totowa, USA 1993; およびHunziker, J. et al. (1995) Mod. Syn. Methods 7:331-417; およびCrooke, S. et al. (1996) Ann.Rev. Pharm. Tox. 36:107-129に記載される。該ヌクレオシド残基は、公知の様々なヌクレオシド内結合のいずれかにより互いに連結できる。かかるヌクレオシド内結合は、限定しないが、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホネート、アルキルホスホノチオエート、ホスホトリエステル、ホスホロアミダート、シロキサン、カルボネート、カルボアルコキシ、アセトアミデート、カルバメート、モルホリノ、ボラノ、チオエーテル、架橋ホスホロアミダート、架橋メチレンホスホネート、架橋ホスホロチオエート、およびスルホン ヌクレオシド内結合を含む。「オリゴヌクレオチド」の用語は、また、１つ以上の立体特異的なヌクレオシド内結合（例えば（ＲＰ）−または（ＳＰ）−ホスホロチオエート、アルキルホスホネート、またはホスホトリエステル結合）を有するポリヌクレオシドを包含する。明細書中で用いる「オリゴヌクレオチド」および「ジヌクレオチド」の用語は、かかる結合がリン酸基を含むかどうかいずれにせよ、各々任意のそのようなヌクレオシド内結合を有するポリヌクレオシドおよびジヌクレオシドを含むことを明確に意図する。ある好ましい実施態様において、これらのヌクレオシド内結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエート結合、あるいはその組み合わせであってもよい。
【００２７】
「２’−置換」という用語は、一般的に、２’−置換または２’−Ｏ−置換ヌクレオシドを作成するために、ヌクレオシド中のペントース部分の２’位の水酸基が置換されたヌクレオシドを含む。特定の実施形態において、かかる置換は、１−６個の飽和または不飽和炭素原子を含有する低級ヒドロカルビル基、ハロゲン原子または６−１０個の炭素原子を有するアリール基によりなされ、かかるヒドロカルビルまたはアリール基は非置換であってもまたは置換されていてもよく、例えばハロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、アシル、アシルオキシ、アルコキシ、カルボキシル、カルボアルコキシまたはアミノ基により置換されていてもよいが、これに限定されるものではない。２'-Ｏ−置換ヌクレオシドの例には、２'-アミノ、２'-フルオロ、２'-アリル、２'-Ｏ−アルキルおよび２’−プロパルギルリボヌクレオシドまたはアラビノシド、２'-Ｏ−メチルリボヌクレオシドまたは２’−Ｏ−メチルアラビノシドおよび２'-Ｏ−メトキシエトキシリボヌクレオシドまたは２'-Ｏ−メトキシエトキシアラビノシドが含まれるが、これらに限定しない。
【００２８】
用語「３’」という用語は、方向に於いて使用される場合、一般的に、同一のポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドにおけるもう一方の領域または位置からのポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド３'(下流)の領域または位置を示す。
【００２９】
用語「５’」という用語は、方向に於いて使用される場合、一般的に、同一のポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドにおけるもう一方の領域または位置からのポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド５'(上流)の領域または位置を示す。
【００３０】
用語「約」という用語は、正確な数が重大でないということを意味する。そのため、オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオシド残基の数は重大でなく、１つまたは２つより少ないヌクレオシド残基、または１〜数個の追加のヌクレオシド残基を有するオリゴヌクレオチドは、上記の実施形態のそれぞれの同等物と考えられる。
【００３１】
用語「アゴニスト」という用語は、一般的に、受容体へ結合し、反応を誘発し得る物質を指す。かかる応答は、該受容体により媒介される活性の増加でありうる。アゴニストは、しばしば天然発生の物質、例えばリガンドの作用を模倣する。
【００３２】
用語「アンタゴニスト」という用語は、一般的に、受容体へ結合し得る物質を指すが、結合に対する生物学的応答を生じさせない。該アンタゴニストは、アゴニストにより媒介される応答を、遮断、阻害または減衰させることができ、かつ受容体への結合に対してアゴニストと競合し得る。かかるアンタゴニスト活性は、可逆的または不可逆的であってもよい。
【００３３】
用語「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、一般的に、選択された核酸配列に相補的であるＤＮＡまたはＲＮＡまたはその組合せの鎖を指す。かかる核酸配列は、メッセンジャーＲＮＡ(ｍＲＮＡ)の形態で存在し得る。動物または細胞中に導入された場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、それが相補的であるものに結合し、ＲＮＡの翻訳を低下させ得る。結合がおきれば、この核酸複合体は内生酵素により分解され得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、伝統的なアンチセンスオリゴヌクレオチド、短い干渉ＲＮＡ(ｓｉＲＮＡ)、ミクロＲＮＡ(ｍｉＲＮＡ)およびリボザイムを包含するが、これに限定するものではない。本発明に従って有用であるアンチセンスオリゴヌクレオチドには、Kandimallaらの文献 (米国特許出願番号第12/510,469; 12/534,462; 12/534,476; 12/534,911;および12/537,354号;および米国仮出願第61/111,143; 61/111,148;および61/111,160号)が包含されるが、これに限定するものではない。
【００３４】
用語「低分子」という用語は、一般的に、生物学的に活性であるが、ポリマーではない小さな有機化合物を指す。低分子は、天然に存在してもよく、または合成的に作成されてもよい。一般的には、低分子とは、タンパク質またはオリゴヌクレオチドを包含しない。低分子は、エンドソームの成熟を下流調節する化合物、例えばクロロキンおよびヒドロキシクロロキンを包含し得るが、これに限定するものではない。
【００３５】
用語「生理学的に許容し得る」とは、一般的に、ＴＬＲアンタゴニスト化合物の有効性に干渉せず、細胞、細胞培養、組織、または有機体などの生物系に適合する原料を指す。好ましくは、かかる生物系は、哺乳類などの生きている有機体である。
【００３６】
用語「医薬上許容し得る」とは、一般的に、不当な毒性がないヒトおよび動物における使用のために好適である組成物を指す。
【００３７】
用語「担体」とは、一般的に、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有ベシクル、ミクロスフェア、リポソームカプセル化、または製剤処方における使用のために当分野で周知の他の原料を包含する。担体、賦形剤、または希釈剤の特徴は、特定用途に対する投与経路に依存することは理解されよう。これらの原料を含有する医薬上許容し得る製剤の調製は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990に記載される。
【００３８】
用語「共投与」とは、一般的に、免疫反応を調節するために、少なくとも２つの異なる物質の十分に近接した時間での投与を指す。共投与とは、少なくとも２つの異なる物質を、任意の順序で、単回投与または個別の投与のいずれかでの、同時投与、ならびに７日までの時間的に隔てた順序を指す。
【００３９】
用語「有効量」、「医薬上有効量」または「治療上有効量」とは、一般的に、所望の生物学的効果、例えば有益な結果に影響を及ぼすに十分な量を指す。従って、「有効量」または「十分量」または「医薬上有効量」または「治療上有効量」とは、それが投与される状況に依存するであろう。共投与される抗原に対する免疫応答を調節する組成物を投与するという状況において、有効量のＴＬＲアンタゴニスト化合物および抗原とは、抗原が単独で投与されるとき得られる免疫応答と比較して、所望の調節を達成するに十分な量である。有効量を１以上の投与にて投与してもよい。
【００４０】
用語「組み合わせ」とは、一般的に、患者における疾患または障害を処置する過程で、ＴＬＲアンタゴニスト化合物と、ＴＬＲアンタゴニスト化合物の免疫調節効果を減縮しない疾患または障害を処置するに有用な薬剤とを投与することを意味する。かかる組み合わせ処置はまた、ＴＬＲアンタゴニスト化合物および／または独立した薬剤の単回以上の投与を含んでもよい。ＴＬＲアンタゴニスト化合物および／または薬剤の投与は、同一または異なる経路をとることもできる。
【００４１】
用語「個体」、「患者」、「対象」または「哺乳類」には、ヒトが含まれる。哺乳類は、一般的に、ヒト、非ヒト霊長類、ラット、マウス、ネコ、イヌ、ウマ、畜牛(cattle)、乳牛(cows)、ブタ、ヒツジ、およびウサギを含むが、これに限定しない。
【００４２】
用語「ヌクレオシド」とは、一般的に、糖、通常はリボースまたはデオキシリボース、およびプリンまたはピリミジン塩基からなる化合物を指す。
【００４３】
用語「ヌクレオチド」とは、一般的に、糖に付着するリン酸基を含むヌクレオシドを指す。
【００４４】
明細書中で用いる、用語「ピリミジンヌクレオシド」とは、 ヌクレオシドの塩基構成要素がピリミジン塩基（例えば、シトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ）など）である、ヌクレオシドを指す。同様に、用語「プリンヌクレオシド」とは、ヌクレオシドの塩基構成要素がプリン塩基（例えば、アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ））であるヌクレオシドを指す。
【００４５】
用語「アナログ」または「誘導体」とは、互換的に用いることができ、一般的には修飾された塩基および／または糖を有する任意のプリンおよび／またはピリミジンヌクレオチドまたはヌクレオシドを指す。修飾された塩基は、グアニン、シトシン、アデニン、チミンまたはウラシルでない塩基である。修飾された糖は、オリゴヌクレオチドとして骨格に用いることができるリボースまたは２’デオキシリボースでない任意の糖である。
【００４６】
用語「阻害する」または「抑制する」とは、一般的に、そうがなければ応答の誘起および／または刺激が起こるであろう応答における応答または質的差違の減少を指す。
【００４７】
用語「非ヌクレオチドリンカー」とは、一般的に、リン含有結合を介する以外でオリゴヌクレオチドを結合するまたはオリゴヌクレオチドに結合されることができる任意の結合または部分を指す。好ましくは、かかるリンカーは、約２オングストローム〜約２００オングストロームの長さである。
【００４８】
用語「ヌクレオチド結合」とは、一般的に、リン含有結合を介して２つのヌクレオシドの３’および５’水酸基に直接接続する、直接の３’−５’結合を指す。
【００４９】
用語「オリゴヌクレオチドモチーフ」とは、ジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を意味する。「１以上の修飾（または具体的に引用された修飾）がなければ免疫刺激性であるオリゴヌクレオチドモチーフ」は、親オリゴヌクレオチドにおいて免疫刺激性であるが、誘導体オリゴヌクレオチドにおいて免疫促進性ではないオリゴヌクレオチドモチーフを意味しており、ここで該誘導体オリゴヌクレオチドとは該親オリゴヌクレオチドの１つまたは２つ以上の修飾により該親オリゴヌクレオチドから得られるものである。
【００５０】
ＣｐＧ、Ｃ＊ｐＧ、Ｃ＊ｐＧ＊およびＣｐＧ＊という用語は、免疫促進性であって、かつシトシンまたはシトシンアナログおよびグアニンまたはグアニンアナログを含む、オリゴヌクレオチドモチーフを指す。
【００５１】
用語「高コレステロール血症」とは、一般的に、高レベルの血中コレステロールの存在を指す。高コレステロール血症は、多くの疾患に対して続発性であって、例えば心臓脈管の疾患、アテロ−ム性動脈硬化症および膵炎を含むがこれらに限定しない多くの他の疾患に関与する可能性がある。上昇した血液コレステロールは、血流中のコレステロールおよび脂質(例えば、トリグリセリド)を運搬する粒子であるリポ蛋白質の上昇したレベルに起因する可能性がある。リポ蛋白質には、例えば、高比重リポ蛋白質(ＨＤＬ)、低比重リポ蛋白質(ＬＤＬ)および超低比重リポ蛋白質(ＶＬＤＬ)が包含されるが、これに限定するものではない。
【００５２】
用語「高脂血症」とは、一般的に、血中のトリグリセリド(ＴＧ)、脂質またはリポ蛋白質の上昇したレベルまたは異常なレベルの存在を指す。トリグリセリド、脂質およびリポ蛋白質の上昇したレベルまたは異常なレベルは、一般集団において共通している。相当な尽力(substantial effort)が、心臓脈管および他の疾患に対する脂質およびコレステロールの影響によって、患者におけるトリグリセリド、脂質およびリポ蛋白質のレベルを正常化するようはらわれる。
【００５３】
用語「スタチン」とは、一般的に、心臓脈管疾患患者または心臓脈管疾患を発症するリスクのある人におけるコレステロールレベルを下げるために使用される薬物の分類を指す。これらの化合物は、コレステロール合成経路において律速酵素である酵素ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼを阻害することによりコレステロールを下げる。多くのスタチン類には、当分野では周知であり、これにはアトルバスタチン、セリバスタチン(リバスタチン)、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンが挙げられるが、これに限定するものではない。
【００５４】
用語「処置」とは、一般的には、有益なまたは所望の結果を獲得することを目的とするアプローチを指し、これには徴候の緩和、または疾患進行の遅延または改善が含まれる。それ自体および制限しないで、「処置」には、一時的な(即ち、永久ではない）緩和的処置および有益な結果が含まれる。例えば、コレステロールレベルは、本発明の処置中に低下させることができるが、一旦処置が終了すれば最終的に増加する。
【００５５】
ある好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドモチーフおよび少なくとも一つの修飾を含んでおり、ここで該オリゴヌクレオチドモチーフは、オリゴヌクレオチドモチーフの活性を抑制する１以上の修飾がなければ、免疫刺激性である(例えば、非メチル化ＣｐＧ)、但し、化合物は４未満の連続したグアノシンヌクレオチド、好ましくは３未満の連続したグアノシンヌクレオチドを含むことができる。かかる修飾は、オリゴヌクレオチド５’末端内、オリゴヌクレオチドモチーフに隣接する配列内、および／またはオリゴヌクレオチドモチーフ内であってもよい。これらの修飾の結果、ＴＬＲ調節性免疫刺激を抑制するＴＬＲアンタゴニスト化合物となる。かかる修飾は、オリゴヌクレオチドモチーフに隣接するヌクレオチド／ヌクレオシド内、またはオリゴヌクレオチドモチーフ内の塩基、糖残基および／またはリン酸骨格であることが可能である。
ある実施形態において、該修飾は２’置換である。
【００５６】
ある実施形態において、修飾が２’アルキル化またはアルコキシル化である場合に、該修飾は、オリゴヌクレオチドモチーフに対して５'側の隣接ではない；該修飾が非帯電のヌクレオシド内結合である場合に、該修飾はオリゴヌクレオチドモチーフに対して５'側の隣接ではない；ならびに、該修飾が３'アルキル化またはアルコキシル化である場合に、該修飾はオリゴヌクレオチドモチーフに対して５'または３'側の隣接ではない。
【００５７】
本発明の他の実施形態において、該ＴＬＲアンタゴニスト化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【００５８】
ある好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドを基にしたＴＬＲアンタゴニストの一般構造は、５’−Ｎｍ−Ｎ３Ｎ２Ｎ１ＣＧＮ１Ｎ２Ｎ３−Ｎｍ−３’（式中、ＣＧは、免疫刺激モチーフであり、Ｃはシトシンまたはピリミジンヌクレオチド誘導体であり、そしてＧは、グアノシンまたはプリンヌクレオチド誘導体である；Ｎ1-Ｎ3およびＮ1-Ｎ3は、各存在にて、独立してヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体であり；ＮｍおよびＮｍは、各存在にて、独立してヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチドリンカーである；但し、少なくとも一つのＮ1-Ｎ3および／またはＮ1−Ｎ3および／またはＣおよび／またはＧはヌクレオチド誘導体であって、またこの化合物は４未満の連続したグアノシンヌクレオチド、好ましくは３未満の連続したグアノシンヌクレオチドを含むことができ、ここでＣＧの免疫促進性活性は、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチドリンカーにより抑制される;ならびに、式中ｍは０〜約３０の整数である）として表すことができるが、これに限定するものではない。かかるオリゴヌクレオチドを基にしたＴＬＲアンタゴニストは、米国出願番号第11/549,048号(米国特許公開番号2009/0060898)に開示されており、この開示内容は、出典明示により本明細書に組み入れられる(本願および米国出願番号11/549,048号との間において何らかの不一致がある範囲については、かかる不一致は本願に従って解消される)。
【００５９】
さらなる好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドを基にしたＴＬＲアンタゴニストは、修飾された免疫刺激モチーフを含むことが可能であり、５’−Ｎｍ−Ｎ３Ｎ２Ｎ１ＣＧＮ１Ｎ２Ｎ３−Ｎｍ−３’（式中、ＣＧは、修飾された免疫刺激モチーフであり、Ｃはシトシンであるか、または５-メチル-ｄＣ、２'−Ｏ−置換-Ｃ、２’−Ｏ−メチル-Ｃ、２'-Ｏ−メトキシエチル-Ｃ、２’−Ｏ−メトキシエチル-５-メチル-Ｃおよび２'-Ｏ−メチル-５-メチル-Ｃから選択されるピリミジンヌクレオチド誘導体であり、Ｇはグアノシンであるか、または２'-Ｏ−置換-Ｇ、２'-Ｏ−メチル-Ｇ、および２'-Ｏ−メトキシエチル-Ｇから選択されるプリンヌクレオチド誘導体である；Ｎ1-Ｎ3およびＮ1-Ｎ3は、各存在にて、独立してヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である；ＮｍおよびＮｍは、各存在にて、独立してヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体または非ヌクレオチド連結である；但し、修飾された免疫刺激モチーフの少なくとも一つのＣおよび／またはＧは、上記に特定したヌクレオチド誘導体であり、所望により３未満の連続したグアノシンヌクレオチドを含有してもよい；ここで、修飾された免疫刺激モチーフは、該ヌクレオチド誘導体がなければ免疫刺激性である；ならびに式中ｍは０〜約３０の整数である）として表すことができるが、これに限定するものではない。かかるオリゴヌクレオチドを基にしたＴＬＲアンタゴニストは、米国仮出願番号第61/182,928に開示されており、この開示内容は、出典明示により本明細書に組み入れられる(本願および米国仮出願番号第61/182,928号との間において何らかの不一致がある範囲については、かかる不一致は、本願に従って解消される)。
【００６０】
本発明のこの局面のさらなる実施形態において、修飾された免疫刺激モチーフを含有するオリゴヌクレオチドを基にしたＴＬＲアンタゴニストは、１以上の修飾した免疫刺激モチーフを含んでおり、ここでＣＧは修飾された免疫刺激モチーフであり、Ｃはシトシンであるか、または５-メチル-ｄＣ、２'-Ｏ−置換-Ｃ、２'-Ｏ−メチル-Ｃ、２'-Ｏ−メトキシエトキシ-Ｃ、２'-Ｏ−メトキシエチル-５-メチル-Ｃ、２'-Ｏ−メチル-５-メチル-Ｃから選択されたピリミジンヌクレオチド誘導体であり、Ｇは、グアノシンであるか、または２'-Ｏ−置換-Ｇ、２'-Ｏ−メチル-Ｇ、および２'-Ｏ−メトキシエトキシ-Ｇから選択されるプリンヌクレオチド誘導体である；但し、修飾された免疫刺激モチーフの少なくとも一つのＣおよび／またはＧは上記に特定されたヌクレオチド誘導体であり、所望により３未満の連続したグアノシンヌクレオチドを含有していてもよい；ここで、修飾された免疫刺激モチーフはヌクレオチド誘導体がなければ免疫刺激性である。
【００６１】
本発明の特定の実施形態において、ＴＬＲアンタゴニスト化合物は、その５'-、３'-または２'-末端にて、ヌクレオチド連結または非ヌクレオチドリンカーによるか、または非ヌクレオチドリンカーまたはヌクレオチド連結を介して官能化された糖または官能化された核酸塩基により、共有結合した少なくとも２つのオリゴヌクレオチドを含み得る。かかるＴＬＲアンタゴニスト化合物は、直鎖状であっても分枝状であってもよい。非限定的な例として、かかるリンカーは３’−水酸基と連結されてもよい。かかる実施態様において、該リンカーは、例えばホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネートなどのリン酸塩に基づく結合により、または非リン酸塩に基づく結合により３’−水酸基と連結する官能基を含む。該ヌクレオチドの連結が可能な部位は、以下の式Ｉに示され、式中のＢは複素環式塩基を表し、Ｐを指す矢印はリンへの任意の連結を示す。
【化１】
2012505221.tif 000003
式Ｉ
【００６２】
ある実施形態において、非ヌクレオチドリンカーは、低分子リンカー、マクロ分子または生体分子であり、これにはポリペプチド、抗体、脂質、抗原、アレルゲンおよびオリゴサッカリドを含むが、これに限定するものではない。他のある実施形態において、非ヌクレオチドリンカーは、低分子リンカーである。本発明の目的のために、低分子リンカーは、１，０００Ｄａ未満の分子量を有する有機質部分である。ある実施形態において、該低分子は７５０Ｄａ未満の分子量を有する。
【００６３】
ある実施形態において、該低分子リンカーは、脂肪族または芳香族炭化水素であり、そのいずれかは、オリゴリボヌクレオチドに接続するかまたはそこへと付加される直鎖中に１以上の官能基を含むことができ、この官能基には、例えば水酸基、アミノ基、チオール基、チオエーテル基、エーテル基、アミド基、チオアミド基、エステル基、尿素基、またはチオ尿素基が挙げられるが、これに限定するものではない。該低分子リンカーは、環式または非環式であり得る。低分子リンカーの例は、アミノ酸、炭水化物、シクロデキストリン、アダマンタン、コレステロール、ハプテンおよび抗生物質を含むが、これに限定しない。しかし、非ヌクレオチドリンカーを記載する目的に対して、用語「低分子リンカー」は、ヌクレオシドを含むことを意図しない。
【００６４】
ある実施形態において、非ヌクレオチドリンカーは、アルキルリンカーまたはアミノリンカーである。該アルキルリンカーは、分枝鎖または非分枝鎖、環状または非環状、置換または非置換、飽和または不飽和、キラル、アキラルまたはラセミ混合物であってよい。該アルキルリンカーは、約２〜約１８個の炭素原子を有することができる。ある実施態様において、かかるアルキルリンカーは、約３〜約９の炭素原子を有する。いくつかのアルキルリンカーは１以上の官能基を含んでおり、これは水酸基、アミノ基、チオール基、チオエーテル基、エーテル基、アミド基、チオアミド基、エステル基、尿素基、およびチオエーテル基を含むが、これに限定するものではない。かかるアルキルリンカーは、１，２プロパンジオール、１，２，３プロパントリオール、１，３プロパンジオール、トリエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、ポリエチレングリコールリンカー（例えば［−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−］ｎ（ｎ＝１−９））、メチルリンカー、エチルリンカー、プロピルリンカー、ブチルリンカー、またはヘキシルリンカーを含み得るが、これらに限定するものではない。ある実施形態において、かかるアルキルリンカーはペプチドまたはアミノ酸を含んでもよい。
【００６５】
ある実施形態において、非ヌクレオチドリンカーは、表２に挙げたものを包含し得るが、これらに限定するものではない。ここで、該オリゴヌクレオチドを基にしたＴＬＲアンタゴニストは、非ヌクレオチドリンカー上に存在するヒドロキシル基を介して連結される。
【００６６】
表２：代表的な非ヌクレオチドリンカー
【表２−１】
2012505221.tif 000004
【表２−２】
2012505221.tif 000005
【表２−３】
2012505221.tif 000006
【表２−４】
2012505221.tif 000007
【表２−５】
2012505221.tif 000008
【表２−６】
2012505221.tif 000009
【表２−７】
2012505221.tif 000010
【００６７】
ある実施形態において、低分子リンカーは、グリセロールまたは式ＨＯ−（ＣＨ２）ｏ−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ２）ｐ−ＯＨで表されるグリセロールホモログであって、式中ｏおよびｐは、独立して１〜約６、１〜約４、または１〜約３の整数である。いくつかの他の態様において、該低分子リンカーは、１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパンの誘導体である。いくつかのかかる誘導体は、式ＨＯ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨを有し、式中ｍは０〜約１０、０〜約６、２〜約６、２〜約４の整数である。
【００６８】
本発明のいくつかの非ヌクレオチドリンカーは、２より多いオリゴヌクレオチドの連結を許容する。例えば、該低分子リンカーのグリセロールは、オリゴヌクレオチドが共有結合的に連結してもよい３つの水酸基を有する。本発明のいくつかのＴＬＲアンタゴニストは、ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカーと結合する２つまたは３つ以上のオリゴヌクレオチドを含む。このようなＴＬＲアンタゴニストは、「分枝鎖」であると呼ばれる。
【００６９】
ＴＬＲアンタゴニスト化合物は、例えば静電相互作用、疎水的相互作用、π−スタッキング相互作用、水素結合およびその組み合わせなどの非共有結合的に結合した少なくとも２つのオリゴヌクレオチドを含んでもよい。かかる非共有結合性結合の非限定の例は、ワトソン−クリック塩基対合、フーグスティン塩基対合および塩基のスタッキングを含む。  
【００７０】
特定の実施形態において、本発明の組成物および方法において用いられる免疫調節オリゴヌクレオチドにおけるピリミジンヌクレオシドは、構造（ＩＩ）を有する：
【化２】
2012505221.tif 000011
(ＩＩ)
式中：
Ｄは水素結合供与体であり；
Ｄ’は水素、水素結合供与体、水素結合アクセプター、親水基、疎水基、電子求引基および電子供与基からなる群から選択され；
Ａは水素結合アクセプターまたは親水基であり；
Ａ’は水素結合アクセプター、親水基、疎水基、電子求引基および電子供与基からなる群から選択され；
Ｘは炭素または窒素であり；および、
Ｓ’はペントースまたはヘキソースの糖環、または糖アナログである。
【００７１】
特定の実施形態において、該糖環は、リン酸塩部分、修飾したリン酸塩部分、または該ピリミジンヌクレオチドを別のヌクレオシドまたはヌクレオチドアナログに結合するための好適な他のリンカー部分を用いて得られる。
【００７２】
ある実施態様において、水素結合供与体には、ＮＨ、ＮＨ２、−ＳＨおよびＯＨが含まれるが、これに限定するものではない。好ましい水素結合アクセプターには、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、および芳香族複素環の環窒素原子、例えばシトシンのＮ３などが含まれるが、これに限定するものではない。
【００７３】
ある実施形態において、（ＩＩ）はピリミジンヌクレオシド誘導体である。ピリミジンヌクレオシド誘導体の例は、５−ヒドロキシシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−アルキルシトシン、またはＮ４−エチルシトシン、アラＣ、 ５−ＯＨ−ｄＣ、Ｎ３−Ｍｅ−ｄＣ、および４−チオウラシルを包含するが、これに限定するものではない。化学修飾した誘導体は、チミンまたはウラシルアナログもまた包含するが、これに限定するものではない。ある実施形態において、該糖部分である（ＩＩ）中のＳ’は、糖誘導体である。好適な糖誘導体には、トレハロースまたはトレハロース誘導体、ヘキソースまたはヘキソース誘導体、アラビノースまたはアラビノース誘導体を包含するが、これに限定するものではない。
【００７４】
ある実施形態において、本発明による組成物および方法において用いられるＴＬＲアンタゴニストにおける該プリンヌクレオシドは構造（ＩＩＩ）を有する：
【化３】
2012505221.tif 000012
(ＩＩＩ)
式中：
Ｄは水素結合供与体であり；
Ｄ’は水素、水素結合供与体、および親水基からなる群から選択され；
Ａは水素結合アクセプターまたは親水基であり；
Ｘは炭素または窒素であり；
ＬのそれぞれはＣ、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立して選択され；および、
Ｓ’はペントースまたはヘキソースの糖環、あるいは糖アナログである。
【００７５】
特定の実施形態において、糖環は、リン酸塩部分、修飾したリン酸塩部分、または他ピリミジンヌクレオチドを別のヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログに結合させるのに好適なリンカー部分を用いて得られる。
【００７６】
特定の実施形態において、水素結合供与体には、−ＮＨ−、−ＮＨ２、−ＳＨおよび−ＯＨが含まれるが、これに限定するものではない。特定の実施形態において、水素結合アクセプターには、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、−ＮＯ２および芳香族複素環の環窒素原子、例えばグアニンのＮ１が含まれるが、これに限定するものではない。
【００７７】
ある実施形態において、(ＩＩＩ)は、プリンヌクレオシド誘導体である。プリンヌクレオチド誘導体の例示として、グアニンアナログ、例えば、７−デアザ-Ｇ、７-デアザ-ｄＧ、アラ−Ｇ、６−チオ−Ｇ、イノシン、Ｉｓｏ−Ｇ、ロキソリビン、ＴＯＧ(７-チオ-８-オキソ)-Ｇ、８-ブロモ-Ｇ、８-ヒドロキシ-Ｇ、５-アミノホルマイシンＢ、オキソホルマイシン、７-メチル-Ｇ、９-p-クロロフェニル−８−アザ−Ｇ、９-フェニル−Ｇ、９−ヘキシル-グアニン、７-デアザ-９-ベンジル-Ｇ、６-クロロ-７-デアザグアニン、６-メトキシ-７-デアザグアニン、８-アザ−７-デアザ−Ｇ（ＰＰＧ）、２-(ジメチルアミノ) グアノシン、７-メチル-６-チオグアノシン、８-ベンジルオキシグアノシン、９-デアザグアノシン、１-(Ｂ−Ｄ−リボフラノシル)-２-オキソ-７-デアザ−８−メチル-プリン、１−（２’−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル)−２-オキソ-７-デアザ-８-メチル-プリンなどが挙げられるが、これに限定するものではない。化学的に修飾した誘導体には、アデニンアナログ、例えば９-ベンジル-８-ヒドロキシ-２-(２-メトキシエトキシ)アデニン、２-アミノ-Ｎ２-Ｏ−、メチルアデノシン、８-アザ-７-デアザ-Ａ、７-デアザ-Ａ、ビダラビン、２-アミノアデノシン、Ｎ１−メチルアデノシン、８-アザアデノシン、５−ヨードツベルシジンおよびＮ１−Ｍｅ−ｄＧなどが挙げられるが、これに限定するものではない。ある実施形態において、該糖部分である（ＩＩＩ）のＳ’は、式ＩＩで定義される糖誘導体である。
【００７８】
本発明の特定の実施形態において、該ＴＬＲアンタゴニストは、少なくとも一つのＢ−Ｌ−デオキシヌクレオチドまたは３'-デオキシヌクレオシドを含有する核酸配列を含む。
【００７９】
本発明の特定の実施形態において、該ＴＬＲアンタゴニストは、ＣｐＧ、Ｃ＊ｐＧ、Ｃ＊ｐＧ＊およびＣｐＧ＊から選択された少なくとも１つのジヌクレオチドを含有する核酸配列を含み、式中Ｃはシトシンまたは２'-デオキシシチジンであり、Ｇはグアノシンまたは２’−デオキシグアノシンであり、Ｃ＊は２’−デオキシチミジン、１-(２'-デオキシ-β-Ｄ−リボフラノシル)-２-オキソ-７-デアザ-８-メチル-プリン、２'-ジデオキシ-５-ハロシトシン、２'-ジデオキシ-５-ニトロシトシン、アラビノシチジン、２'-デオキシ-２'-置換アラビノシチジン、２'-Ｏ−置換アラビノシチジン、２'-デオキシ-５-ヒドロキシシチジン、２'-デオキシ-Ｎ４-アルキル-シチジン、２'-デオキシ-４-チオウリジン、または他のピリミジンヌクレオチドアナログであり、Ｇ＊は２'-デオキシ-７-デアザグアノシン、２'-デオキシ-６-チオグアノシン、アラビノグアノシン、２'-デオキシ-２'置換-アラビノグアノシン、２'-Ｏ−置換-アラビノグアノシン、２'-デオキシイノシンまたは他のプリンヌクレオチドアナログであり、およびｐはホスホジエステル、ホスホロチオエート、およびホスホロジチオエートからなる群から選択されたヌクレオチド内連結であって、ここで少なくとも一つのジヌクレオチドの活性はこの隣接する配列により制御される。
【００８０】
本研究において有用であるこれらの一般構造式のなかで、選択されたＴＬＲアンタゴニストの配列は、表３に示されたものを包含するが、これに限定するものではない。
【００８１】
【表３−１】
2012505221.tif 000013
【表３−２】
2012505221.tif 000014
【表３−３】
2012505221.tif 000015
【００８２】
下線をひいたＧ、ＡまたはＵ＝２’−ＯＭｅ；下線をひいたＴ＝３’−ＯＭｅ；Ａ1＝３’−ＯＭｅ；Ｇ1＝７-デアザ-ｄＧ；ｍ＝Ｐ−Ｍｅ；Ａ2、Ｔ２、Ｃ2、およびＧ2＝Ｂ−Ｌ−デオキシヌクレオシド；Ｘ1＝脱塩基；Ｘ2＝グリセロールリンカー、Ｘ3＝Ｃ３-リンカー；Ｃ3およびＧ3＝３'-デオキシ-ヌクレオシド；Ｇ4＝アラＧ；Ｃ4＝アラＣ；Ｃ５＝５−ＯＨ−ｄＣ；Ｃ6＝１-（２’−デオキシ-β−Ｄ−リボフラノシル)-２-オキソ-７-デアザ-８-メチル-プリン；Ｇ5＝Ｎ１−Ｍｅ−ｄＧ；Ｃ7＝Ｎ３−Ｍｅ−ｄＣ；Ｕ1＝３’−ＯＭｅ；Ｕ2=ｄＵ；Ｃ1＝２’−Ｏ−メチル-Ｃ；Ｃ2＝５-メチル−ｄＣ；Ｃ3＝２’−Ｏ−メチル-５-メチル-Ｃ；Ｇ1＝２’−Ｏ−メチル-Ｇ
【００８３】
ある実施形態において、各ＴＬＲアンタゴニストはそれぞれ、約６〜約３５のヌクレオシド残基、好ましくは約９〜約３０のヌクレオシド残基、より好ましくは約１１〜約２３のヌクレオシド残基を有する。ある実施形態において、該ＴＬＲアンタゴニストは約６〜約１８のヌクレオシド残基を有する。
【００８４】
第二の態様において、本発明は、哺乳類における高い血液脂質濃度および／または高い血液コレステロール濃度と関連のある疾患を治療的処置するための方法を提供するもので、かかる方法には、発明の第一態様に記載した通り、哺乳類におけるＴＬＲシグナル伝達を阻害することを含んでいる。ある実施形態において、ＴＬＲシグナル伝達は、１以上の本発明のＴＬＲアンタゴニスト化合物を医薬上有効量で哺乳類に投与することにより阻害される。ある実施態様において、ＴＬＲシグナル伝達は、１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達経路における別のタンパク質の発現を阻害することによって阻害される。本発明のこの局面に関する特定の好ましい実施形態において、該疾患は、高コレステロール血症、高脂血症、冠状動脈性心臓病、動脈硬化、アテロ−ム性動脈硬化症、卒中、末梢血管疾患、糖尿または高血圧である。
【００８５】
第三の態様において、本発明は、上昇した血液コレステロールおよび／または血液脂質を有する哺乳類において高い血液脂質濃度および／または血液コレステロール濃度に関連のある疾患を予防するための方法を提供するものであって、かかる方法は、発明の第一態様に記載したとおり、哺乳類におけるＴＬＲシグナル伝達を阻害することを含んでいる。ある実施形態において、ＴＬＲシグナル伝達は、１以上の本発明のＴＬＲアンタゴニスト化合物を医薬上有効量で哺乳類に投与することにより阻害される。ある実施態様において、ＴＬＲシグナル伝達は、１以上のＴＬＲまたはＴＬＲシグナル伝達経路における別のタンパク質の発現を阻害することによって阻害される。特定の好ましい実施形態において、該疾患は、高コレステロール血症、高脂血症、冠状動脈性心臓病、動脈硬化、アテロ−ム性動脈硬化症、卒中、末梢血管疾患、糖尿または高血圧である。
【００８６】
ある実施形態において、本発明の方法は、さらに、１以上のコレステロール低下組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物を哺乳類に投与することを含む。
【００８７】
本発明の方法において、ＴＬＲアンタゴニスト化合物の投与は、任意の好適な経路により投与することが可能であり、これには非経口、粘膜、経口、舌下、経皮、局所、吸入、経鼻、エアロゾル、眼球内、気管内、直腸内、膣内、遺伝子銃により、皮膚パッチまたは点眼薬または洗口薬の形態を包含するが、これらに限定するものではない。ＴＬＲアンタゴニスト化合物の治療組成物の投与を、疾患の徴候または代理マーカーを低下させるのに有効な用量および期間にて、公知の手順を用いて実行することができる。全身投与する場合、該治療組成物は、好ましくは約０．０００１μＭ〜約１０μＭのＴＬＲアンタゴニスト化合物の血中レベルを達成するに十分な用量で投与される。局所投与する場合、これよりもさらに低濃度が有効であり得て、そしてより高濃度を耐容し得る。ある好ましい実施形態において、ＴＬＲアンタゴニスト化合物の総投与量は、約０．００１ｍｇ／患者／日〜約２００ｍｇ／ｋｇ体重／１日の範囲である。治療的有効量の１以上のＴＬＲアンタゴニストを、単一の処置エピソードとして個体に、同時または順に投与することが望ましいだろう。
【００８８】
該ＴＬＲアンタゴニスト化合物は、他の化合物、例えばこれに限定しないが１以上の脂質低下化合物または組成物、コレステロール低下化合物または組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せ物などを組合せて、投与または使用され得る。
【００８９】
本発明の方法は、ヒトおよび／または動物の疾患の予防的処置または治療的処置に有用である。例えば、該方法は、成人、小児および獣医学的用途に有用であり得る。
【００９０】
本発明に関する何れかの方法において、該ＴＬＲアンタゴニスト化合物は、疾患または症状を処置するのに有用な、ＴＬＲアンタゴニスト化合物のアンタゴニスト活性を減衰させないその他の薬剤と組み合わせて投与され得る。本発明に関する何れかの方法において、該疾患または該症状を処置するのに有用な薬剤には、次のものに限定しないが１以上の脂質低下化合物または組成物、コレステロール低下化合物または組成物、利尿薬、非ステロイド様抗炎症性化合物(ＮＳＡＩＤ)、スタチン、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、ペプチド、タンパク質または遺伝子治療ベクターまたはその組合せが挙げられ、これらはＴＬＲアンタゴニストに対する応答の特異性および大きさを増強できる。例えば、高脂血症および／または高コレステロール血症の処置において、ＴＬＲアンタゴニスト化合物を、１以上の脂質および／またはコレステロール低下化合物と、例えば、これに限定しないがスタチン、標的化治療剤および／またはモノクローナル抗体などと組み合わせて投与することができると考えられる。
【００９１】
以下の実施例は、本発明の特定の例示的な実施形態を説明することを意図するものであって、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。例えば、代表的なＴＬＲアンタゴニストを、以下の実施例に示すが、適用可能な本発明のＴＬＲアンタゴニストの範囲を限定するものではない。
【００９２】
本明細書に引用した特許および出版物は、この分野における共通する技術常識を表し、その全てを参照して本明細書に組み込まれる。引用文献に関する教示および本明細書との何らかの不一致は後者を支持して解決されるものとする。
【００９３】
実施例１
免疫調節部分を含有するオリゴヌクレオチドの合成
【００９４】
全ての合成オリゴヌクレオチドは、標準的な手順に従って合成された（例えば、米国特許公報第2004/0097719号を参照のこと）。
【００９５】
オリゴヌクレオチドは、標準的な線形合成または平行合成方法(例えば、米国特許公報番号第2004/0097719号の図５および６を参照のこと)に従って、自動化ＤＮＡ合成器(Expedite 8909; PerSeptive Biosystems, Framingham, Mass.)を用いて、１μＭスケールで合成された。
【００９６】
デオキシリボヌクレオチドホスホラミダイト（phosphoramidite）は、(Aldrich-Sigma, St Louis, Mo)より得た。１’，２’−ジデオキシリボースホスホラミダイト、プロピル−１−ホスホラミダイト、２−デオキシウリジンホスホラミダイト、１，３−ビス−［５−（４，４’−ジメトキシトリチル）ペンチルアミジル］−２−プロパノールホスホラミダイトおよびメチルホスホンアミダイトは、Glen Research (Sterling, Va.)より得た。β−Ｌ−２’−デオキシリボヌクレオシドホスホラミダイト、アルファ−２’−デオキシリボヌクレオシドホスホラミダイト、モノ−ＤＭＴ−グリセロールホスホラミダイトおよびジ−ＤＭＴ−グリセロールホスホラミダイトは、ChemGenes (Willmington, Mass.)より得た。（４−アミノブチル）−１，３−プロパンジオールホスホラミダイトはClontech (Palo Alto, Calif.)より得た。アラビノシチジンホスホラミダイト、アラビノグアノシン、アラビノチミジンおよびアラビノウリジンは、Reliable Pharmaceutical (St. Louis, Mo.)より得た。アラビノグアノシンホスホラミダイト、アラビノチミジンホスホラミダイトおよびアラビノウリジンホスホラミダイトは、Idera Pharmaceuticals, Inc. (Cambridge, Mass.)において合成した(Noronha et al. (2000) Biochem., 39:7050-7062)。
【００９７】
全てのヌクレオシドホスホラミダイトは、３１Ｐおよび１Ｈ ＮＭＲスペクトルにより特徴付けた。修飾ヌクレオシドは、特定の部位に、通常のカップリングサイクルを用いて導入された。合成後、オリゴヌクレオチドを、濃縮水酸化アンモニウムを用いて脱保護し、、そして逆相ＨＰＬＣを用いて精製し、次いで透析した。ナトリウム塩の形態として精製されたオリゴヌクレオチドを、使用前に凍結乾燥した。純度をＣＧＥおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳにより試験した。
【００９８】
実施例２
インビボでのＴＬＲアンタゴニストのコレステロールおよび脂質低下活性
５週齢のメスＣ５７ＢＬ／６のマウスをThe Jackson Laboratoryから得た。全ての動物実験をIdera PharmaceuticalsのICAUC承認プロトコールのガイドラインのとおりに行った。マウスには６０％のラードから構成される西洋食(Research Diets, New Brunswick, NJ)を給餌した。ＴＬＲアンタゴニストを、６週目に開始して１０週目までの５週間の間、皮下注射で１週間に２回、５〜２０mg/kgの投与量にてマウスに投与した。Lipitor（登録商標）を、５週間の間、胃内投与（i.g）で１週間に５回、２０mg/kgの投与量にてマウスに投与した。コントロール群のマウスをＰＢＳにより注射した。各群は５匹のマウスとした。血液を、試験期間中およびこの試験を停止した１２週時に採取した。血清コレステロールのレベルを、BioAssay Systemから"EnzyChromＴＭ Cholesterol Assay Kit"により各サンプルにおいて決定した。
【００９９】
実施例３
インビボでのＴＬＲアンタゴニストのコレステロール、リポ蛋白質、脂質およびグルコース低下活性
５週齢のメスＣ５７ＢＬ／６またはＡｐｏＥ欠損マウスを、The Jackson Laboratoryから得た。全ての動物実験を、Idera PharmaceuticalsのICAUC承認プロトコールのガイドラインのとおりに行った。マウスには、６０％のラードから構成される西洋食(Research Diets, Ｎew Brunswick, NJ)を給餌した。アンタゴニストを、６週目に開始して１０週目までの５週間の間、皮下注射にて１週間に２回、１５mg/kgの投与量にてマウスに投与した。コントロール群のマウスをＰＢＳにより注射した。各群は１５匹のマウスとした。血液を、実験を停止した１２週間までマウスの夜間絶食後に毎週採取し、コレステロール、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、トリグリセリドおよびグルコースの血清レベルをQuest Laboratoriesにて決定した。
【０１００】
実施例４
インビボでのＴＬＲアンタゴニストの体重低下活性
５週齢のメスＣ５７ＢＬ／６またはＡｐｏＥ欠損マウスを、The Jackson Laboratoryから得た。全ての動物実験を、Idera PharmaceuticalsのICAUC承認プロトコールのガイドラインのとおりに行った。マウスには、６０％のラードから構成される西洋食を給餌した(Research Diets, Ｎew Brunswick, NJ)。アンタゴニストを、６週目に開始して１０週目までの５週間の間、皮下注射にて１週間に２回、１５ mg/kgの投与量でマウスに投与した。コントロール群のマウスをＰＢＳにより注射した。各群は１５匹マウスとした。体重を測定した。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図２ｄ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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