(57)【要約】  本出願の発明は、スウィングレア・グルティノーサの葉から抽出物（ａｎ  ｅｘｔｒａｃｔ）および抽出物（ｔｈｅ  ｅｘｔｒａｃｔ）を得るための標準化された方法を提供するものであり、ここで、この方法によって、スウィングレア・グルティノーサの葉の重量の約６０％となる量の抽出物が産出される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スウィングレア・グルティノーサ（Ｓｗｉｎｇｌｅａ  ｇｌｕｔｉｎｏｓａ）葉から単離された抽出物であって、前記抽出物が、
Ａ．明るい深緑色のスウィングレア・グルティノーサの葉を乾燥した環境下に曝すこと、ここで、前記葉は直射日光から保護され、ここで、前記葉は空気流に曝される、と、
Ｂ．前記葉が不透明な緑色に変り、かつ前記葉が脆くなるまで、前記葉をＡに記載の環境下に置くことと、
Ｃ．前記葉を細かい断片に砕くことと、
Ｄ．スウィングレア・グルティノーサの葉断片を溶媒と少なくとも１回接触させることと、
Ｅ．前記溶媒が前記葉断片に由来する物質で濃縮されるまで、工程Ｄを繰り返すことと、
Ｆ．前記溶媒を廃棄して、抽出物を放出させることと、
を含む方法によって得られる、抽出物。
【請求項２】
前記抽出物を用いて真菌を死滅させる、請求項１に記載の抽出物。
【請求項３】
前記抽出物を用いて昆虫およびダニを死滅させる、請求項１に記載の抽出物。
【請求項４】
前記抽出物を用いて昆虫およびダニを撃退する、請求項１に記載の抽出物。
【請求項５】
スウィングレア・グルティノーサ植物に由来する抽出物の生成方法であって、前記方法が、
Ａ．明るい深緑色のスウィングレア・グルティノーサの葉を乾燥した環境下に曝すこと、ここで、前記葉は直射日光から保護され、ここで、前記葉は空気流に曝される、と、
Ｂ．前記葉が不透明な緑色に変り、かつ前記葉が脆くなるまで、前記葉をＡに記載の環境下に置くことと、
Ｃ．前記葉を細かい断片に砕くことと、
Ｄ．スウィングレア・グルティノーサの葉断片を溶媒と少なくとも１回接触させることと、
Ｅ．前記溶媒が前記葉断片に由来する物質で濃縮されるまで、工程Ｄを繰り返すことと、
Ｆ．前記溶媒を廃棄して、抽出物を放出させることと、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スウィングレア・グルティノーサ（Ｓｗｉｎｇｌｅａ  ｇｌｕｔｉｎｏｓａ）の葉から抽出物を得る方法、およびこの抽出物の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
スウィングレア・グルティノーサ由来の化合物には、複数の有益な用途があると記載されている。
【０００３】
Ｗｅｎｉｇｅｒ  Ｂ．らは、マラリア疾患の主な原因となる原生動物である熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）に対するスウィングレア・グルティノーサ由来のアクリドンアルカロイド類の使用の可能性を開示している（Ｗｅｎｉｇｅｒ  Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｒｅａｃｔｉｖｅ  Ａｃｒｉｄｏｎｅ  Ａｌｋａｌｏｉｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｓｗｉｎｇｌｅａ  ｇｌｕｔｉｎｏｓａ，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，２００１，６４（９）：１２２１−３を参照されたい）。
【０００４】
Ｂｒａｇａ  Ｐ．Ａ．Ｃ．らは、癌細胞株に対するスウィングレア・グルティノーサの派生物の細胞毒性活性を教示している（Ｂｒａｇａ  Ｐ．Ａ．  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｉｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｎ  Ｓｅｖｅｒａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓ  ｏｆ  Ａｃｒｉｄｏｎｅ  Ａｌｋａｌｏｉｄｓ  ａｎｄ  Ｎ−Ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌ−Ｂｅｎｚａｍｉｄｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｓｗｉｎｇｌｅａ  ｇｌｕｔｉｎｏｓａ，Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００７，２１（１）：４７−５５）を参照されたい）。
【０００５】
Ｂｕｅｎｏ−Ｓａｎｃｈｅｚ  Ｊ．Ｇ．らは、結核を引き起こす病原体である結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に対するスウィングレア・グルティノーサ由来の精油の潜在能力を記載している（Ｂｕｅｎｏ−Ｓａｎｃｈｅｚ  Ｊ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｎｔｉｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｅｖｅｒａｌ  Ａｒｏｍａｔｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｌａｎｔｓ  ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  ｉｎ  Ｃｏｌｏｍｂｉａ，Ｍｅｍｏｉｒｓ  ｏｆ  ＶＩ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｎｃｏｕｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｃｏｌｏｍｂｉａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｏｌｏｇｙ，２００８，９６ページを参照されたい）。
【０００６】
残念なことに、従来技術には、単独で使用することができるかまたはそれからさらに有益な誘導体化合物を入手することができる高収率のスウィングレア・グルティノーサ抽出物を得るための標準化された方法についての記載がない。本出願の発明は、これらの従来技術の限界を克服するものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本出願の発明は、スウィングレア・グルティノーサの葉から抽出物（ａｎ  ｅｘｔｒａｃｔ）および抽出物（ｔｈｅ  ｅｘｔｒａｃｔ）を得るための標準化された方法を提供するものであり、この方法によって、スウィングレア・グルティノーサの葉の重量の約６０％となる量の抽出物が産出される。
【０００８】
より具体的には、本出願の発明は、スウィングレア・グルティノーサの葉から単離された抽出物を提供するものであり、ここで、該抽出物は、
Ａ．明るい深緑色のスウィングレア・グルティノーサの葉を乾燥した環境下に曝すこと、ここで、該葉は直射日光から保護され、ここで、葉は空気流に曝される、と、
Ｂ．葉が不透明な緑色に変り、かつ葉が脆くなるまで、葉をＡに記載の環境下に置くことと、
Ｃ．葉を細かい断片に砕くことと、
Ｄ．スウィングレア・グルティノーサの葉断片を溶媒と少なくとも１回接触させることと、
Ｅ．溶媒が葉断片に由来する物質で濃縮されるまで、工程Ｄを繰り返すことと、
Ｆ．溶媒を廃棄して、抽出物を放出させることと、
を含む方法によって得られる。
【０００９】
一態様では、本出願の発明の方法によって得られる抽出物を用いて、真菌を死滅させる。
【００１０】
別の態様では、本出願の発明の方法によって得られる抽出物を用いて、昆虫およびダニを死滅させる。
【００１１】
もう１つの態様では、本出願の発明の方法によって得られる抽出物を用いて、昆虫およびダニを撃退する。
【００１２】
さらに、本出願の発明は、スウィングレア・グルティノーサ植物に由来する抽出物の生成方法を提供するものであり、ここで、該方法は、
Ａ．明るい深緑色のスウィングレア・グルティノーサの葉を乾燥した環境下に曝すこと、ここで、該葉は直射日光から保護され、ここで、葉は空気流に曝される、と、
Ｂ．葉が不透明な緑色に変り、かつ葉が脆くなるまで、葉をＡに記載の環境下に置くことと、
Ｃ．葉を細かい断片に砕くことと、
Ｄ．スウィングレア・グルティノーサの葉断片を溶媒と少なくとも１回接触させることと、
Ｅ．溶媒が葉断片に由来する物質で濃縮されるまで、工程Ｄを繰り返すことと、
Ｆ．溶媒を廃棄して、抽出物を放出させることと、
を含む。
【００１３】
本出願の発明の目的および利点は、本発明の詳細な説明および特許請求の範囲においてより明白になるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、スウィングレア・グルティノーサの葉から単離された抽出物を提供するものであり、ここで、該抽出物は、
Ａ．明るい深緑色のスウィングレア・グルティノーサの葉を乾燥した環境下に曝すこと、ここで、該葉は直射日光から保護され、ここで、葉は空気流に曝される、と、
Ｂ．葉が不透明な緑色に変り、かつ葉が脆くなるまで、葉をＡに記載の環境下に置くことと、
Ｃ．葉を細かい断片に砕くことと、
Ｄ．スウィングレア・グルティノーサの葉断片を溶媒と少なくとも１回接触させることと、
Ｅ．溶媒が葉断片に由来する物質で濃縮されるまで、工程Ｄを繰り返すことと、
Ｆ．溶媒を廃棄して、抽出物を放出させることと、
を含む方法によって得られる。
【００１５】
本発明の方法の１つの追加の態様では、葉を可能な限りの方法で日光への直接的な曝露から保護する。
【００１６】
本発明の方法の他の態様では、不透明な緑色ではなく黄色になった葉を捨てる。葉が脆い葉になり、若草色の葉から不透明な緑色の葉になるのにかかる期間は、空気流への最適な曝露（曝気）によって決まる。好ましくは、曝気は２５℃で行なわれるが、温度の変化によって、曝気期間が変わることがあり、例えば、わずかな温度上昇によって、曝気期間が短くなることがある。
【００１７】
本発明の方法のもう１つの態様では、より小さい断片は１つの塊になり易く、この塊は、溶媒を用いた最適抽出を制限するものとなるので、葉を０．０５ｍｍ未満の葉断片にまで砕いてはいけない。
【００１８】
葉断片がある床の全体に溶媒を再循環させることにより、葉断片を溶媒への接触にさらす。しかしながら、葉断片は、溶媒を含む容器の全体を移動するものである可能性がある。前者の場合、毎回溶媒が葉断片と接触した後、溶媒を蒸発させて離れた場所に移すために、得られた抽出物を保持した後、蒸発した溶媒を再び液化させて、新しいサイクルに再利用する必要がある。保持すべき抽出物がそれ以上得られなくなるまで、多くのサイクルが必要である。本発明の方法によれば、残った断片葉塊の残存重量が、溶媒に最初に曝露される前の葉断片の重量に対して約４０％である場合に、これが達成される。すなわち、得られた抽出物は、最初の葉断片重量の約６０％を占める。
【００１９】
本発明の一態様では、使用することができる溶媒は、エタノール、メタノール、ヘキサン、プロパノール、イソプロパノール、ＣＯ２、アセトン、水、酢酸エチル、酢酸ニトリル、トルエン、テトラヒドロフラン、クロロホルム、ジクロロメタンなどを含む。
【００２０】
もう１つの態様では、本出願の発明の方法によって得られる抽出物を用いて、真菌を死滅させる。
【００２１】
別の態様では、本出願の発明の方法によって得られる抽出物を用いて、昆虫およびダニを死滅させる。
【００２２】
もう１つの態様では、本出願の発明の方法によって得られる抽出物を用いて、昆虫およびダニを撃退する。
【００２３】
さらに、本出願の発明は、スウィングレア・グルティノーサ植物に由来する抽出物の生成方法を提供するものであり、ここで、該方法は、
Ａ．明るい深緑色のスウィングレア・グルティノーサの葉を乾燥した環境下に曝すこと、ここで、該葉は直射日光から保護され、ここで、葉は空気流に曝される、と、
Ｂ．葉が不透明な緑色に変り、かつ葉が脆くなるまで、葉をＡに記載の環境下に置くことと、
Ｃ．葉を細かい断片に砕くことと、
Ｄ．スウィングレア・グルティノーサの葉断片を溶媒と少なくとも１回接触させることと、
Ｅ．溶媒が葉断片に由来する物質で濃縮されるまで、工程Ｄを繰り返すことと、
Ｆ．溶媒を廃棄して、抽出物を放出させることと、
を含む。
【００２４】
本発明の一態様では、抽出物を用いて、真菌を死滅させることができ、ここで、影響を受けやすい真菌は、
スファエロテカ・パンノーサ（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ  ｐａｎｎｏｓａ）
ボトリティス属の種（Ｂｏｔｒｉｔｙｓ  ｓｐ．）
フサリウム属の種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）
コルレトトリクム属の種（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐ．）
ウンキノーラ・ネカトール（Ｕｎｃｉｎｏｌａ  ｎｅｃａｔｏｒ）
ウァリオラ属の種（Ｖａｒｉｏｌａ  ｓｐ．）
ペロノスポラ属の種（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｓｐ．）
プッキニア属の種（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｐ．）
クラドスポリウム属の種（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｓｐ．）／ヘテスロポリウム属の種（Ｈｅｔｅｓｒｏｐｏｒｉｕｍ  ｓｐ．）
などを含む。
【００２５】
本発明の別の態様では、抽出物を用いて、昆虫およびダニを死滅させることができ、ここで、影響を受けやすい昆虫およびダニは、
リリオミザ属の種（Ｌｉｒｉｏｍｙｚａ  ｓｐ．）
テトラニクス属の種（Ｔｅｔｒａｎｉｃｈｕｓ  ｓｐ．）
オウシマダニ（Ｂｏｏｐｈｉｌｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｌｕｓ）
などを含む。
【００２６】
本発明の１つの追加の態様では、抽出物を用いて、昆虫およびダニを撃退することができ、ここで、影響を受けやすい昆虫およびダニは、
リリオミザ属の種
テトラニクス属の種
オウシマダニ
などを含む。
【００２７】
本発明の抽出物は、真菌を死滅させ、昆虫およびダニを死滅させかつ／または撃退すると記載されているショウノウおよび油と組み合わせることができ、ここで、この油は、真菌、昆虫、およびダニに対するスウィングレア・グルティノーサ抽出物の効果を増強し、かつこの油は、ニンニク、オレンジ、レモン、ライム、オガルカヤ属の種（Ｃｙｍｂｏｐｏｇｏｎ  ｓｐ．）、チョウジ（Ｅｕｇｅｎｉａ  ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｔａ）、ユーカリ属の種（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ  ｓｐ．）、ティーツリー（Ｍｅｌａｌｅｕｃａ  ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ）、スイートオレンジ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｓｉｍｅｎｓｉｓ）、他のカンキツ属の種（ｃｉｔｒｕｓ  ｓｐ．）、ニッケイなどから得ることができる。
【００２８】
本出願の発明の目的および利点は、本発明の詳細な説明および特許請求の範囲においてより明白になるであろう。
【実施例】
【００２９】
スウィングレア・グルティノーサの木の濃い若草色の葉の付いた枝を採取し、屋根の下、約２５℃で、自然な空気流がある場所に置いた。全ての葉が空気流に曝露されるのを保証するために、葉の付いた枝を定期的に動かした。約３日後、乾燥して、不透明な緑色になった葉を枝から採取し、該乾燥した不透明な緑色の葉をブレードミルで０．０５ｍｍ以下の断片に砕いた。約３０キログラムの葉断片を０．０５ｍｍの網目（ｎｅｔ−ａｐｅｒｔｕｒｅ）のスチール製のふるいに入れた。葉断片を入れたスチール製のふるいを収容する容器を、エタノール３２０リットルと水７０リットルの混合物で約４５分間満たした。エタノール−水混合物を吸引し、加熱してエタノール−水を蒸発させた。残った抽出物を保持し、蒸発したエタノール−水を離れた閉鎖的な場所で液化装置を用いて再び液体にした。エタノール−水混合物を再利用して、葉断片を含むスチール製のふるいを収容する容器を、さらに６回、各々２５分間〜３５分間満たした。得られた抽出物の最終的な量は、約１８リットルであり、該抽出物は深緑色の粘性のある物質であった。
【００３０】
水１リットル当たり抽出物２ｍｌの溶液を調製し、以下の実験に用いた。
【００３１】
病原性真菌の分離株をその株にとっての適切な培養培地中で繁殖させた。その後、１×１０６胞子／ｍｌの濃度で水懸濁液（ｓｕｓｐｅｎｔｉｏｎ  ｏｎ  ｗａｔｅｒ）を調製した。培養培地のみを含むプレートと、水１リットル当たり抽出物２ｍｌの溶液を用いて調製した培養培地を含むプレートとを用意した。両方のプレートに胞子を含む懸濁液２０μｌを注いだ。
【００３２】
プレートを室温で１２日間インキュベートした後、各真菌についての阻害パーセントを測定し、以下の結果を得た。
フサリウム・オキシスポルム(Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ)  ７２．２０％
ボトリティス・シネレア(Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ)          ８０．７０％
ミコスファエレルラ・フィジエンシス(Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ  ｆｉｊｉｅｎｓｉｓ)                                                            ６８．４０％
コルレトトリクム属の種                                            ９０．４４％
【００３３】
スファエロテカ・パンノーサについては、胞子懸濁液を、水１リットル当たり抽出物２ｍｌの溶液で湿らせた健康なバラ植物の葉、および湿らせていない健康なバラ植物の葉に適用した。その後、両方のバラ植物の葉を１５日後の真菌膿疱の形成について観察した。水１リットル当たり抽出物２ｍｌの溶液で湿らせたバラ植物の葉では、膿疱の形成が６５．７％少なかった。
【００３４】
リリオミザ属の種について、水１リットル当たり抽出物２ｍｌの溶液で湿らせたマメ植物の葉と湿らせていないマメ植物の葉を比較することにより、忌避試験（ｒｅｐｅｌｌｅｎｃｅ  ｔｅｓｔ）を行なった。湿らせた葉および湿らせていない葉を有する植物をリリオミザ属の種とともにケージの中に置いた。２４時間後、両方の植物の葉におけるリリオミザ属の種によって引き起こされた疾患部分を比較した。水１リットル当たり抽出物２ｍｌの溶液で湿らせた葉を有する植物は、湿らせていない葉を有する植物よりも７５．３％少ない疾患部分を示した。
【００３５】
テトラニクス属の種について、マメ植物の葉から切り取った５ｍｍの円板を比較することにより、忌避試験を行ない、その場合、水１リットル当たり抽出物２ｍｌの溶液で湿らせた５ｍｍの葉円板を湿らせていない５ｍｍの葉円板と比較し、かつテトラニクス属の種のダニが付いた２ｍｍの湿らせていない葉円板を両方の５ｍｍの葉円板の上に置いた。２４時間後、水１リットル当たり抽出物２ｍｌの溶液で湿らせた５ｍｍの葉円板の上にいるテトラニクス属の種のダニの方が湿らせていない５ｍｍの葉円板にいるダニよりも７８．４％少なかった。
【００３６】
オウシマダニ（ダニ）について、水１リットル当たり抽出物５ｍｌの溶液を死亡実験において用い、その場合、水１リットル当たり抽出物５ｍｌの溶液で湿らせた、血液を吐き出させた（ｒｅｇｕｒｇｉｔａｔｅｄ）成虫ダニを、湿らせていないダニと比較した。湿らせたダニと湿らせていないダニの両方をペトリ皿に入れ、観察した。３日後、水１リットル当たり抽出物５ｍｌの溶液で湿らせたダニの死亡の方が湿らせていないダニの死亡よりも７５％多かった。
【国際調査報告】
2012526794.tif 000002