(57)【要約】  少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤および少なくとも１種の他の抗微生物剤を含む組成物、ならびに、これらの組成物を製造および使用する方法を提供する。脂環式ジオール抗微生物剤は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオール、またはこれらの混合物を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性組成物における微生物生育の低減または阻害における少なくとも１種の抗微生物剤の有効性を向上させる方法であって：
１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤ならびに該抗微生物剤を該水性組成物に添加することを含む、方法。
【請求項２】
該脂環式ジオール抗微生物剤を、該水性組成物の総質量基準で約０．２〜約５質量％の量で添加する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該水性組成物を、水とは非混和性でかつ該抗微生物剤を含む溶媒と接触させることによって、該脂環式ジオール抗微生物剤を該水性組成物に添加する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該水性組成物が、炭化水素、トリグリセリド、脂肪酸、脂肪酸アルキルエステル、脂肪族アルコール、ポリグリコールエーテル、アルキルグリコールエーテル、アルキルグリコールエステル、アルキルグリコールエーテルエステル、アルキルアミン、アルキルアミド、またはこれらの混合物から選択される有機化合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
該有機化合物が、ディーゼル、バイオディーゼル、ディーゼルおよびバイオディーゼルの混合物、航空燃料、油圧オイル、潤滑油、植物油、原油、トランスミッション流体、灯油、またはケロセンである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）ディーゼル、バイオディーゼル、ディーゼルおよびバイオディーゼルの混合物、航空燃料、油圧オイル、潤滑油、植物油、原油、トランスミッション流体、灯油、またはケロセンから選択される少なくとも１種の燃料または油、
（ｂ）１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤、ならびに
（ｃ）少なくとも１種の他の抗微生物剤、
を含む、組成物。
【請求項７】
１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤、および少なくとも１種の他の抗微生物剤を含む、パーソナルケア製品。
【請求項８】
該脂環式ジオール抗微生物剤が約１〜約５質量％の量で添加された、請求項７に記載のパーソナルケア製品。
【請求項９】
少なくとも１種の薬剤；
１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤；ならびに
少なくとも１種の他の抗微生物剤；
を含む、薬用製品。
【請求項１０】
該脂環式ジオール抗微生物剤が、約１質量％〜約５質量％の量で存在する、請求項９に記載の薬用製品。
【請求項１１】
１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤；ならびに
少なくとも１種の他の抗微生物剤；
を含む、動物ケア製品。
【請求項１２】
該脂環式ジオール抗微生物剤の量が約１〜約５質量％である、請求項１１に記載の動物ケア製品。
【請求項１３】
１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤；ならびに
少なくとも１種の他の抗微生物剤；
を含む、家庭用ケア製品。
【請求項１４】
約１〜約５質量％の該脂環式ジオール抗微生物剤を含む、請求項１３に記載の家庭用ケア製品。
【請求項１５】
残留性の抗微生物活性を表面に付与する方法であって：
請求項７、９、１１または１３に記載の製品を表面に局所適用すること；および
任意に、任意の過剰量の該製品を該表面から除去すること；
を含む、方法。
【請求項１６】
哺乳動物の表面の上でのバクテリアまたは菌類の感染を予防または処置する方法であって：
請求項７、９または１１に記載の製品を該哺乳動物の表面に局所適用すること；および
任意に、任意の過剰量の該製品を該哺乳動物の表面から除去すること；
を含む、方法。
【請求項１７】
哺乳動物の表面の上でのバクテリアまたは菌類の存在による臭気を防止または低減する方法であって：
請求項７、９または１１に記載の製品を該哺乳動物の表面に局所適用すること；および
任意に、任意の過剰量の該製品を該哺乳動物の表面から除去すること；
を含む、方法。
【請求項１８】
抗微生物活性をフィルム、繊維、成形品もしくは押出品、または繊維、ポリマー、接着剤、および／もしくは石膏から形成されたコンポジット材料に付与する方法であって：
１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される抗微生物剤、ならびに少なくとも１種の他の抗微生物剤を、該フィルム、繊維、成形品もしくは押出品、またはコンポジット材料に、その製造プロセスの間に組み込むこと；
を含む、方法。
【請求項１９】
該フィルム、繊維、成形品もしくは押出品、またはコンポジット材料の表面の上にバイオフィルムが形成されることを防止する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
該抗微生物剤を、該フィルム、繊維、成形品もしくは押出品、またはコンポジット材料の総質量基準で約１〜約５質量％の量で組み込む、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、概略的には、抗微生物剤、該剤を組み込んだ組成物および製品、ならびに該組成物および製品の使用方法に関する。抗微生物剤は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオール、およびこれらの混合物である。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
多くの組成物および製品，例えばパーソナルケア製品、薬剤、動物ケア品、家庭用ケア品、燃料、および油は、しばしば水を含有するか、環境からの水を蓄積させる可能性がある。水は、組成物および製品を微生物生育に対して感染させやすくさせる。
【０００３】
抗微生物剤は、典型的にはこれらの製品に添加して、任意のバクテリア、酵母またはカビの生育を制限する。多くの種々の種類の抗微生物剤がこの目的のために入手可能である。抗微生物剤の種類およびその濃度は、多くの要因，例えば防腐される製品の種類、抗微生物剤の有効性、および製品を汚染させやすい生物の種類に基づいて選択される。製品が人間または動物に接触しやすい場合、抗微生物剤は刺激、乾燥、アレルギー、および有毒性の原因となる可能性について考慮しなければならない。これらのおよび他の懸案事項に起因し、政府機関は抗微生物剤の使用を規制する場合がある。
【０００４】
多くのグリコールは抗微生物剤効果を有し、従来の抗微生物剤を製品から排除でき、またはこれらの濃度を低減できるとされてきた。このようなグリコールとしては、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール、１，５−ペンタンジオール、メチルプロパンジオール、および１，３−アルカンジオール（炭素原子５〜１５個を有するもの）が挙げられる。１，２−ヘキサンジオールおよび１，２−オクタンジオールは、抗微生物剤として特に有効であることが見出されており、そして１，２−アルカンジオールの抗微生物活性は、アルキル鎖長が増大するに従って増大すると考えられている。より長い炭化水素鎖の微生物との疎水性相互作用は、これらの抗微生物活性に寄与すると考えられる。しかし、アルキル鎖長が増大するに従い、これらの化合物の水溶性は低下する。非混和性の有機相を含有する特定の製品（例えばパーソナルケアエマルション）、低い水溶性を有する化合物は、油相中にマイグレートしやすいため、これらの有効性はより小さい。
【０００５】
規制は、環境または健康上の安全性を脅かすと考えられる抗微生物剤の使用の低減を強いてきた。従って、このような抗微生物剤の有効性を向上させて、所望の阻害効果を維持しつつ、適用において、より低量を使用できるようにすることは有利である。脂環式ジオール抗微生物剤は、抗微生物剤、ならびに種々の用途，例えば化粧品、パーソナルケア品および家庭用ケア品およびコーティングで用いられる他の抗微生物剤の有効性を向上させることが見出されている。
【０００６】
よって、当該分野では、好ましくはより低濃度で有効であり；安全であり；有効濃度でアレルギー反応、刺激、および乾燥の原因となるのが最小限であり；そして環境条件または環境条件近傍にて水中で高程度の溶解性を有する、抗微生物剤に対する継続した要求が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
驚くべきことに、脂環式ジオール抗微生物剤が、種々の用途，例えば、これらに限定するものではないが、化粧品、パーソナルケア品、家庭用ケア品、および他のコーティングで使用される抗微生物剤の有効性を向上させることを見出した。脂環式ジオール抗微生物剤単独での使用は、米国特許出願整理番号第１２／３４１，４６２号、発明の名称  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ，Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｓａｍｅ，ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｕｓｉｎｇ  Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（本開示と矛盾しない限りにおいて参照により本明細書に組入れる）に記載されている。
【０００８】
第１の側面において、本発明は、水性組成物における微生物生育の低減または阻害における、少なくとも１種の抗微生物剤の有効性を向上させる方法を提供する。該方法は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される脂環式抗微生物剤を組成物に、そして少なくとも１種の他の抗微生物剤を水性組成物に添加することを含む。
【０００９】
第２の側面において、本発明は、（ａ）ディーゼル、バイオディーゼル、ディーゼルおよびバイオディーゼルの混合物、航空燃料、油圧オイル、潤滑油、植物油、原油、トランスミッション流体、灯油、またはケロセンから選択される燃料または油、（ｂ）１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤、ならびに（ｃ）少なくとも１種の他の抗微生物剤、を含む、組成物を提供する。
【００１０】
第３の側面において、本発明は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤、ならびに少なくとも１種の他の抗微生物剤を含む、パーソナルケア製品を提供する。
【００１１】
第４の側面において、本発明は、薬剤；１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤；ならびに少なくとも１種の他の抗微生物剤；を含む、薬用製品を提供する。
【００１２】
第５の側面において、本発明は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤；ならびに少なくとも１種の他の抗微生物剤；を含む、動物ケア製品を提供する。
【００１３】
第６の側面において、本発明は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤；ならびに少なくとも１種の他の抗微生物剤；を含む、家庭用ケア製品を提供する。
【００１４】
第７の側面において、本発明は、残留性の抗微生物活性を表面に付与する方法を提供する。該方法は、上記のパーソナルケア製品、薬用製品、動物ケア製品、または家庭用ケア製品を表面に局所適用すること；および任意に、任意の過剰量の該製品を該表面から除去すること；を含む。
【００１５】
第８の側面において、本発明は、哺乳動物の表面の上でのバクテリアまたは菌類の存在による臭気を防止または低減する方法を提供する。該方法は、上記のパーソナルケア製品、薬用製品、または動物ケア製品を該哺乳動物の表面に局所適用すること；および任意に、任意の過剰量の該製品を該哺乳動物の表面から除去すること；を含む。
【００１６】
第９の側面において、本発明は、抗微生物活性をフィルム、繊維、成形品もしくは押出品、または繊維、ポリマー、接着剤、および／もしくは石膏から形成されたコンポジット材料に付与する方法を提供する。該方法は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される抗微生物剤、ならびに少なくとも１種の他の抗微生物剤を、該フィルム、繊維、成形品もしくは押出品、またはコンポジット材料に、その製造プロセスの間に組み込むことを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
発明の詳細な説明
第１の側面に従い、本発明は、水性組成物における微生物生育の低減または阻害における少なくとも１種の抗微生物剤の有効性を向上させる方法を提供する。該方法は、１，１−シクロヘキサンジメタノール（１，１−ＣＨＤＭ）、１，２−シクロヘキサンジメタノール（１，２−ＣＨＤＭ）、１，４−シクロヘキサンジメタノール（１，４−ＣＨＤＭ）、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオール（ＴＭＣＢＤ）からなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤、ならびに少なくとも１種の第２の抗微生物剤を、水性組成物に添加することを含む。
【００１８】
水性組成物は、水を含有し、そして微生物生育をさせやすい任意の組成物であることができる。このような組成物の例としては、燃料または油の組成物、パーソナルケア製品、薬用製品、動物ケア製品、および家庭用ケア製品が挙げられる。よって、水に加え、水性組成物は、例えば、有機化合物，例えば炭化水素、トリグリセリド、脂肪酸、脂肪酸アルキルエステル、脂肪族アルコール、ポリグリコールエーテル、アルキルグリコールエーテル、アルキルグリコールエステル、アルキルグリコールエーテルエステル、アルキルアミン、アルキルアミド、およびこれらの混合物を含有できる。有機化合物の他の例としては、ディーゼル、バイオディーゼル、ディーゼルおよびバイオディーゼルの混合物、航空燃料、油圧オイル、潤滑油、植物油、原油、トランスミッション流体、灯油、またはケロセンが挙げられる。
【００１９】
一態様において、水性組成物中の有機化合物および水は混和性である。別の態様において、水性組成物中の有機化合物および水は、別個の液体相にある。この後者の場合、抗微生物剤は、好ましくは、水性組成物中の有機相と水性相との界面での微生物生育を低減または阻害する。
【００２０】
水性組成物中に存在する脂環式ジオール抗微生物剤および他の抗微生物剤の量は、種々の要因，例えば水性組成物の用途および所望される微生物保護の程度に応じて変動できる。典型的には、コーティング組成物中に存在する脂環式ジオール抗微生物剤の量は、水性組成物の質量基準で約０．１〜約５質量％となる。好ましくは、脂環式ジオール抗微生物剤は、水性組成物の質量基準で約０．３〜約４質量％で存在する。他の範囲は、水性組成物の質量基準で約０．１〜約３質量％、約０．５〜約４質量％、および約１〜約３．５質量％である。
【００２１】
当該分野で公知の任意の第２の抗微生物剤を、本発明において利用できる。表１は、化粧品／パーソナルケアおよびコーティング等の用途において用いる具体的な抗微生物剤の例、ならびに各々が代表する抗微生物の分類を与える。
【００２２】
【表１】
2012526809.tif 000002
【００２３】
第２の抗微生物剤の量は、種々の要因，例えば水性組成物の用途および所望の微生物保護の程度に応じて変動できる。本発明の一態様において、第２の抗微生物剤の量は、下記表２に示すように変動できる。
【００２４】
【表２】
2012526809.tif 000003
【００２５】
脂環式ジオール抗微生物剤および他の抗微生物剤を水性組成物に添加する方法は特に限定されない。例えば、脂環式ジオール抗微生物剤および他の抗微生物剤は、水性組成物に、該剤を水性組成物と単純に組合せること、および含有成分を混合することによって、添加できる。これに代えて、脂環式ジオール抗微生物剤は、その高い可溶化力に起因して、水性組成物の含有成分の１種以上の溶媒として、これを残りの組成物含有成分と混合する前に、使用できる。
【００２６】
別の態様において、まず脂環式ジオール剤を、水とは非混和性である溶媒と混合し、次いで剤−溶媒の混合物を水性組成物と組合せることによって、脂環式ジオール抗微生物剤を水性組成物に添加できる。
【００２７】
脂環式ジオール抗微生物剤自体は室温では柔らかい固体であることができる。従って、混合および／または取り扱いを容易にするためには、脂環式ジオール剤をまず最大１０質量％以上の水で希釈した後、これを水性組成物またはその含有成分と組合せることができる。
【００２８】
本発明の方法は、抗微生物剤の有効性を向上させて、種々の種類，例えばバイオフィルム、の微生物生育を低減または阻害する。
【００２９】
第２の側面に従い、本発明は、（ａ）ディーゼル、バイオディーゼル、ディーゼルおよびバイオディーゼルの混合物、航空燃料、油圧オイル、潤滑油、植物油、原油、トランスミッション流体、灯油、またはケロセンから選択される燃料または油；ならびに（ｂ）１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される抗微生物剤；ならびに（ｃ）少なくとも１種の他の抗微生物剤、を含む、組成物を提供する。
【００３０】
燃料または油の組成物中に存在する脂環式ジオール抗微生物剤および他の抗微生物剤の量は、種々の要因，例えば所望される微生物保護の程度に応じて変動できる。一般的には、脂環式ジオール抗微生物剤は、燃料または油の組成物の総質量基準で約０．０１〜１質量％の量で存在できる。脂環式ジオール抗微生物剤はまた、燃料または油の組成物の総質量基準で約０．０２〜０．５質量％の量、または更に、燃料または油の組成物の総質量基準で約０．０５〜０．２質量％の量で存在できる。燃料中または油中の脂環式ジオール抗微生物剤の濃度範囲もまた、当業者によって、燃料または油および水の混合物について脂環式ジオール抗微生物剤の分配計数を評価し、次いで、油または燃料を汚染させる可能性がある水中で抗微生物剤１〜５質量％を実現するように、燃料または油に添加する量を計算することによって、決定できる。
【００３１】
燃料または油の組成物は、典型的な添加剤，例えば洗浄剤、オクタン価向上剤、酸素化剤、腐食防止剤、潤滑剤、金属不活性化剤、酸化防止剤、アンチノック剤、染料、燃焼触媒、燃焼速度調整剤、沈着制御添加剤、摩擦調整剤、粘度調整剤、耐摩耗添加剤、流動点降下剤、泡止め剤、シールコンディショナー、極圧剤、分散剤、およびワックス結晶調整剤を含有できる。
【００３２】
第３の側面に従い、本発明は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤、および少なくとも１種の他の抗微生物剤を含む、パーソナルケア製品を提供する。脂環式ジオール抗微生物剤はまた、パーソナルケア製品の総質量基準で約１〜３質量％の量で存在できる。
【００３３】
一態様において、パーソナルケア製品は水を含有し、そして抗微生物剤の質量％は製品中の水の量基準である。
【００３４】
別の態様において、パーソナルケア製品は無水であり、そして抗微生物剤の質量％は製品の総質量基準である。
【００３５】
本発明に係るパーソナルケア製品の例としては、ハンドソープ、手用除菌剤、ボディウォッシュ、シャワージェル、シャンプー、コンディショナー、フェイスクリーム、ボディローション、脇用デオドラント、マウスウォッシュ、歯磨きペースト、化粧品、コンタクトレンズ溶液、ヘアスタイリング製品、ニキビトリートメント製品、フレグランス、および足、靴下または靴の消臭組成物が挙げられる。
【００３６】
第４の側面に従い、本発明は、薬剤；１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤；ならびに少なくとも１種の他の抗微生物剤；を含む、薬用製品を提供する。脂環式ジオール抗微生物剤はまた、薬用製品の総質量基準で約１〜約３質量％の量で存在できる。
【００３７】
一態様において、薬用製品は水を含有し、そして抗微生物剤の質量％は製品中の水の量基準である。
【００３８】
別の態様において、薬用製品は無水であり、そして抗微生物剤の質量％は製品の総質量基準である。
【００３９】
本発明に係る薬用製品の例としては、ニキビトリートメント製品、創部ケア製品、および経皮パッチが挙げられる。
【００４０】
本発明の薬用製品中に含ませることができる薬剤の例としては、皮膚を若返らせる製品，例えばサリチル酸、グリコール酸、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ヒアルロン酸、カフェイン、アロエベラ、コエンザイムＱ１０、コラーゲン、およびこれらの誘導体；麻酔剤，例えばベンゾカインまたはリドカイン；抗菌剤製品，例えばケトコナゾールまたはフルコノゾール等；抗炎症剤またはかゆみ止め剤，例えばヒドロコルチゾン、ベナドリル等、鎮痛剤，例えば硫酸モルヒネ；等、抗生剤，例えばアモキシシリン、ペニシリン、トリメトプリム、バクトリム、スルファメチゾール、エリスロマイシン、硫酸ポリミキシンＢ等；ホルモン，例えばエストラジオール、プロゲスチン、プロゲステロン、テストステロン等；抗不安薬；抗うつ剤、または抗パーキンソン薬，例えばセレゲリン等；抗痙攣薬，例えばオキシブチニン；抗痙攣薬，例えばカルバマゼピン、酔い止め剤，例えばスコポロアミン；禁煙薬，例えばニコチン；抗がん剤，例えばタモキシフェンまたは５−フルオロウラシル、フケ防止剤、制汗剤および活性物質、ならびに抗ウイルス薬，例えばワクチン含有成分が挙げられる。
【００４１】
第５の側面に従い、本発明は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される脂環式ジオール抗微生物剤；ならびに少なくとも１種の他の抗微生物剤；を含む、動物ケア製品を提供する。脂環式ジオール抗微生物剤はまた、動物ケア製品の総質量基準で約１〜３質量％の量で存在できる。
【００４２】
一態様において、動物ケア製品は水を含有し、そして抗微生物剤の質量％は製品中の水の量基準である。
【００４３】
別の態様において、動物ケア製品は無水であり、そして抗微生物剤の質量％は製品の総質量基準である。
【００４４】
本発明に係る動物ケア製品の例としては、シャンプー、コンディショナー、およびフレグランスが挙げられる。
【００４５】
第６の側面において、本発明は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される少なくとも１種の脂環式ジオール抗微生物剤；ならびに少なくとも１種の他の抗微生物剤；を含む、家庭用ケア製品を提供する。脂環式ジオール抗微生物剤はまた、家庭用ケア製品の総質量基準で約１〜３質量％の量で存在できる。
【００４６】
一態様において、家庭用ケア製品は水を含有し、そして抗微生物剤の質量％は製品中の水の量基準である。
【００４７】
別の態様において、家庭用ケア製品は無水であり、そして抗微生物剤の質量％は製品の総質量基準である。
【００４８】
本発明に係る家庭用ケア製品の例としては、表面クリーナー、空気または表面の消臭剤、ランドリーケア製品、食器用洗剤、およびリンス助剤が挙げられる。
【００４９】
第７の側面に従い、本発明は、残留性の抗微生物活性を表面に付与する方法を提供する。該方法は、本発明のパーソナルケア製品、薬用製品、動物ケア製品、または家庭用ケア製品を表面に局所適用すること；および任意に、任意の過剰量の該製品を該表面から除去すること；を含む。
【００５０】
処理される表面は、人間もしくは動物の皮膚もしくはヘア、または無生物の対象物，例えばドアハンドル、床、カウンタートップ、卓上および家具であることができる。
【００５１】
これらのステップは所望の頻度，たとえば毎日２〜６回、繰り返すことができる。
【００５２】
一態様において、該表面は、製品が適用される前にその上にバイオフィルムを有する。
【００５３】
第８の側面に従い、本発明は、哺乳動物の表面の上でのバクテリアまたは菌類の存在による臭気を防止または低減する方法を提供する。該方法は、本発明のパーソナルケア製品、薬用製品、または動物ケア製品を該哺乳動物の表面に局所適用すること；および任意に、任意の過剰量の該製品を該哺乳動物の表面から除去すること；を含む。
【００５４】
哺乳動物の表面は、哺乳動物の露出された表面のあらゆる場所であることができ、手、足、脇、鼠径部および歯が挙げられる。
【００５５】
これらのステップは所望の頻度，たとえば毎日２〜６回、繰り返すことができる。
【００５６】
第９の側面に従い、本発明は、抗微生物活性をフィルム、繊維、成形品もしくは押出品、または繊維、ポリマー、接着剤、および／もしくは石膏から形成されたコンポジット材料に付与する方法を提供する。該方法は、１，１−シクロヘキサンジメタノール、１，２−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、および２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオールからなる群から選択される抗微生物剤、ならびに少なくとも１種の他の抗微生物剤を、該フィルム、繊維、成形品もしくは押出品、またはコンポジット材料に、その製造プロセスの間に組み込むことを含む。
【００５７】
脂環式ジオール抗微生物剤および／または他の抗微生物剤は、適用の間、可塑剤中，例えばジエチルフタレート（ＤＥＰ）中に溶解でき、そして粉末化プラスチック材料中に直接混合して押出しまたは熱形成できる。これに代えて、脂環式ジオール抗微生物剤および／または他の抗微生物剤は、一般的な溶媒中または共溶媒中にポリマー（例えばセルロースアセテート）とともに溶解でき、そして薄いフィルムとしてキャストして乾燥させることができる。次いで粉末を凍結粉砕して、適正寸法の粒子を形成できる。
【００５８】
フィルム、繊維、成形品もしくは押出品、またはコンポジット材料の中に存在する脂環式ジオール抗微生物剤および他の抗微生物剤の量は、種々の要因，例えば所望される微生物保護の程度に応じて変動できる。一般的に、脂環式ジオール抗微生物剤は、組成物の総質量基準で約１〜約５質量％の量で存在できる。脂環式ジオール抗微生物剤はまた、組成物の総質量基準で約１〜約３質量％の量で存在できる。
【００５９】
別の態様において、本発明の方法は、フィルム、繊維、成形品もしくは押出品、またはコンポジット材料の表面上でのバイオフィルムの形成を防止するのに有効である。
【００６０】
本発明をその好ましい態様の以下の例によって更に説明できるが、これらの例は例示の目的のみで含まれ、本発明の範囲の限定を意図しないことが理解されよう。以下の例において、特記がない限り、全てのパーセントは質量基準である。加えて、ＣＨＤＭ−Ｄは無水１，４−シクロヘキサンジメタノールを意味し、ＣＨＤＭ−Ｄ９０は９０質量％の１，４−ＣＨＤＭと１０質量％の水との混合物を意味する。
【００６１】
本発明をその好ましい態様を特に参照して詳述してきたが、本発明の精神および範囲の中での変更および改変が可能であることが理解されよう。
【００６２】
例
以下は例の結果のまとめである。これらの実験において、１，４−ＣＨＤＭは単独、ならびに、金属キレート剤ＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラ酢酸二ナトリウム塩）ならびに一般的に用いられる殺生剤、ＰＥおよびＣＧとの組合せで試験した。また、１，４−ＣＨＤＭおよびその構造異性体、ＴＭＣＤ（２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオール）ならびに１，３−ＣＨＤＭは、単独および各々ＢＩＴとの組合せで試験した。１，１−ＣＨＤＭもまた試験し、１，４−ＣＨＤＭに対して改善された有効性を示した。
【００６３】
１，４−ＣＨＤＭの、ＥＤＴＡ、ＰＥおよびＣＧとの組合せでの試験は、相乗的な抗微生物効果を示した（表５参照のこと）。具体的な知見は以下の通りである：
−０．２質量％のＥＤＴＡと１，４−ＣＨＤＭとの組合せは、殆どの生物に対して相乗効果を与えた。効果は、１．２５質量％の１，４−ＣＨＤＭで最も明白であった。
−完全な殺生物が、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに対して、１，４−ＣＨＤＭ（ＰＥおよびＣＧの両者とともに）について実現された。
−相乗効果は、Ｅ．ｃｏｌｉに対して１，４−ＣＨＤＭについて１．２５質量％および２．５質量％にて（ＰＥを伴うもの）および１．２５質量％にて（ＣＧを伴うもの）見られる。
−１．２５質量％の１，４−ＣＨＤＭと、フェノキシエタノール（ＰＥ）およびカプリリルグリコール（ＣＧ）との組合せは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓおよびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓに対する相乗効果を、３日培養にて示した；よって、ＰＥおよびＣＧ単独と比べて、より速い応答を与える。この速い応答はまた、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓおよびＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ（ＰＥを伴うもの）ならびにＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ（ＣＧを伴うもの）に対して見られた。
−２．５質量％の１，４−ＣＨＤＭと、ＰＥおよびＣＧとの組合せは、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐに対する相乗効果を示した。
−１．２５質量％および２．５質量％の１，４−ＣＨＤＭと、０．２５質量％のＰＥとの組合せは、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｃａｎｉｓに対して相乗的な応答を示した。
【００６４】
１，４−ＣＨＤＭ，ＴＭＣＤ，および１，３−ＣＨＤＭでの実験（各々ＢＩＴとの組合せ）もまた、相乗的な抗微生物効果を示した（表６参照のこと）。具体的な知見は以下の通りである：
−一般的に、各脂環式ジオール抗微生物剤とＢＩＴとの組合せは殆どの生物に対して相乗性を示した。
−１，４−ＣＨＤＭ（０．５質量％〜２．５質量％にて）は、０．０５質量％および０．２質量％のＢＩＴで、菌類およびグラム陰性バクテリアに対して、相乗性を示した。
−驚くべきことに、ＢＩＴを伴う１，４−ＣＨＤＭはＣ．ａｌｂｉｃａｎｓに対して相乗性を示したが、ＴＭＣＤおよび１，３−ＣＨＤＭは示さなかった。
−０．０５％ＢＩＴを伴うＴＭＣＤ（０．５％〜２．５％にて）は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓに対して相乗性を示したが、一方、１，４−および１，３−ＣＨＤＭは示さなかった。
−Ｓ．ｍｕｔａｎｓに対する相乗性はあまり明白でなかった。ＢＩＴ単独で高度に有効であったためである。
−１，４−ＣＨＤＭおよびＴＭＣＤ（ＢＩＴとともに）は、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓに対して相乗性を示した一方、１，３−ＣＨＤＭは示さなかった。
【００６５】
ＥＤＴＡについての結果から、１，４−ＣＨＤＭとともに相乗性を示すことができるＥＤＴＡ二ナトリウムの濃度範囲は、総配合物基準で約０．１〜０．３％であることができる。
【００６６】
１，４−ＣＨＤＭと９つの一般的な抗微生物剤（表１中の１〜９）との組合せの培地培養物相乗性実験は、予期しない相乗的な活性を、微生物のある範囲について示した。１，４−ＣＨＤＭの好ましい濃度範囲は０．１〜５質量％、より好ましくは０．３〜３．３質量％である。
【００６７】
予期しない結果は以下の通り纏められる：
−幅広い相乗性を、バクテリア、酵母およびカビに対し、フェノキシエタノールについて１，４−ＣＨＤＭとの組合せで示した。好ましい組成物は、フェノキシエタノールおよび１，４−ＣＨＤＭを、質量比１：１〜１：１００、より好ましくは１：３〜１：３３で含む。
−幅広い相乗性を、バクテリア、酵母およびカビに対し、ベンジルアルコール：デヒドロ酢酸について１，４−ＣＨＤＭとの組合せで示した。好ましい組成物は、ベンジルアルコール：デヒドロ酢酸および１，４−ＣＨＤＭを、質量比１:１〜１:５００、より好ましくは１:４〜１:５０で、含む。
−ＩＰＢＣと１，４−ＣＨＤＭとの組合せは、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに対して強い相乗性を示した。好ましい組成物は、ＩＰＢＣおよび１，４−ＣＨＤＭを、質量比１:２〜１:１０００、より好ましくは１:７〜１:２２０で含む。
−ＭＩＴと１，４−ＣＨＤＭとの組合せは、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに対して強い相乗性を示した。好ましい組成物は、ＭＩＴおよび１，４−ＣＨＤＭを、質量比１：１００〜１：１０，０００、より好ましくは１：１５８７〜１：３３３３で含む。
−ＢＩＴと１，４−ＣＨＤＭとの組合せはＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａについて強い相乗性を示した。好ましい組成物は、ＢＩＴおよび１，４−ＣＨＤＭを、質量比１：５〜１：１０００、より好ましくは１：２７〜１：２５０で含む。
−１，４−ＣＨＤＭとの組合せでのＭＩＴ：ＢＩＴ混合物はＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａについて強い相乗性を示した。好ましい組成物は、ＢＩＴ：ＭＩＴおよび１，４−ＣＨＤＭを、質量比１：１００〜１：１０，０００、より好ましくは１：６１３〜１：１９６１で含む。
−カプリリルグリコールと１，４−ＣＨＤＭとの組合せは、試験した菌類Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓおよびＡ．ｎｉｇｅｒの両者で相乗的であった。好ましい組成物は、カプリリルグリコールおよび１，４−ＣＨＤＭを、質量比１：１〜１：５００、より好ましくは１：２０〜１：５０で含む。
−クロルフェネシンと１，４−ＣＨＤＭとの組合せはＣ．ａｌｂｉｃａｎｓについて相乗的であった。好ましい組成物は、クロルフェネシンおよび１，４−ＣＨＤＭを、質量比１：１〜１：１００、より好ましくは１：１０〜１：１６で含む。
−ＤＭＤＭヒダントインと１，４−ＣＨＤＭとの組合せはＣ．ａｌｂｉｃａｎｓについて相乗的であった。好ましい組成物は、ＤＭＤＭヒダントインおよび１，４−ＣＨＤＭを、質量比１：１〜１：５００、より好ましくは１：７〜１：５０で含む。
【００６８】
例１：ＣＨＤＭと他の抗微生物剤との組合せの抗微生物活性
手順：ＢＰＷでの微生物接種試験
接種試験において用いた微生物を表３に示す。ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）または野生種のいずれかと指定される。これらの野生種生物は化学製品から予め単離した問題の生物であった。各生物についての説明において、バクテリアはＧＮ（グラム陰性）またはＧＰ（グラム陽性）のいずれかで示される。
【００６９】
【表３】
2012526809.tif 000004
【００７０】
全ての微生物をトリプトースソイ培地（ＴＳＢ）、ＤＩＦＣＯTM（Ｂｅｃｔｏｎ，  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能）（１％デキストロースを含有する）中で生育させた。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒおよびＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓは、２２℃±２℃にて少なくとも９６時間培養した。全てのバクテリアを３５℃±２℃にて加湿培養器内で少なくとも９６時間培養した。
【００７１】
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒおよびＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓもまたサブローデキストロース寒天（ＳＤＡ）上で２２℃±２℃にて７〜１４日間、または完全な胞子形成が実現されるまで、培養した。
【００７２】
接種材料の量の評価
以下の手順に従って、１０8ｃｆｕ／ｍＬ接種（これは最終試験サンプル微生物濃度１０5〜１０6ｃｆｕ（コロニー形成単位）／ｍＬと等価である）を生成するのに必要な各接種材料（接種材料培地）の量を評価した。
【００７３】
滅菌血清用ピペットを用い、各ＴＳＢ培養物からの１ｍＬの生育物を、９ｍＬのリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を収容するチューブ内に移し、完全に混合した。このプロセスを繰り返して、連続の１：１０希釈を行った。次いで、０．１ｍＬの各サンプルおよび希釈物を寒天プレート上に接種して、更に１：１０希釈の等価物を生成した。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓおよびＡ．ｎｉｇｅｒをＳＤＡ上に接種し、バクテリアをプレートカウント寒天（ＰＣＡ）、ＤＩＦＣＯTM（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能）上に接種した。スプレッドプレート法を用いて０．１ｍＬアリコートをプレート上に一様に分配した。スプレッドプレート法は、回転オートプレーターでプレートを回転させながら滅菌スプレッド棒を用いてプレート表面全体に亘ってアリコートを広げることによって行う。接種材料が完全に吸収された後、各プレートを反転させて培養した（菌類を２２℃±２℃にて、そしてバクテリアを３５℃±２℃にて）。
【００７４】
少なくとも４８時間の培養後、寒天プレート上に生育したコロニーをカウントし、対応する希釈とともに記録した。カウントを一時的に遅らせなければならない場合は、プレートを、好ましくは２４時間以内で、これらがカウントできるまで冷蔵した。ｃｆｕ／ｍＬの数は、その特定のプレートについてカウントに希釈係数を乗じることによって評価した。
【００７５】
Ｎｅｐｈｏｌｅｍｅｔｒｉｃ  Ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ  Ｕｎｉｔｓ（ＮＴＵ）単位での濁度は、各連続希釈について、ＨＦ−Ｍｉｃｒｏ  １００  Ｍｏｄｅｌ  Ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｅｒを用いて測定した。各微生物について、プレートカウントを濁度の読み値と比較した。Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓおよび全てのバクテリアについて、濁度読み値３４〜３８ＮＴＵを有する１:１０希釈を最終試験サンプル濃度１０5〜１０6ｃｆｕ／ｍＬと等価とみなした。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒについて、濁度読み値２５〜２９ＮＴＵを有する１：１０希釈は、試験サンプル濃度１０5〜１０6ｃｆｕ／ｍＬを実現した。
【００７６】
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ培養物の集菌および胞子の採取
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ培養物を集菌し、そしてＳＤＡから胞子（この上でこれらが生育した）を採取した（滅菌接種ループで生育物を優しく擦ることによって行った）。次いで胞子を、培養された培地培養物中に、滅菌磁気撹拌棒で混合して、ペリクル形成を低減した。胞子−培養物混合物を、滅菌、非吸収性綿で繰り返し濾過し、繰り返し集菌し、増殖性の細胞および胞子をレベル１．０×１０8に調整した。血球計を用いて最終接種濃度を評価した。
【００７７】
Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ培養物の集菌
接種日に、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ接種材料培地を、非吸収性滅菌ガーゼに注ぎ、遠心分離した。次いでペリクルを、所望の濁度に到達するまでリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈した。血球計を用い、接種物が所望の濃度を含有するかを評価した。希釈を１．０×１０8で行い、そして３つのＳＤＡスプレッドプレートを０．１ｍＬの各希釈で接種した。プレートを少なくとも４８時間培養し、接種カウントを確認した（すなわち、１０5〜１０6ｃｆｕ／ｍＬ）。
【００７８】
試験基質の準備
対照基質（「培地のみ」）を、１％（ｗ／ｖ）デキストロースを含有する１３．５ｍＬのＢＰＷ（ｐＨ７．０）を各々２０ｍＬガラスチューブに添加し；次いで１．５ｍＬの接種材料を添加して、時間ゼロでの最終濃度１０5〜１０6ｃｆｕ／ｍＬおよび総体積１５ｍＬを生成することによって、各微生物について３重に別個に準備した。
【００７９】
試験サンプル基質は、各試験材料（１，４−ＣＨＤＭ等）または試験材料の組合せを表５および６に示す濃度で含むものとして準備した。サンプル基質はＰＥまたはＣＧを含有する（これらは２重に準備した）基質を除いて、３重に準備した。基質は、１％（ｗ／ｖ）デキストロースを含有するＢＰＷ（ｐＨ７．０）を各々２０ｍＬガラスチューブに添加し、次いで所望の質量／体積％（ｇ／１００ｍＬ）を実現するために適切な量で試験材料を添加して、デキストロースおよび試験材料を有するＢＰＷの総体積１３．５ｍＬを得ることによって準備した。次いで、１．５ｍＬの接種材料を添加して、それぞれの生物の時間ゼロでの最終濃度１０5〜１０6ｃｆｕ／ｍＬ、および総試験サンプル基質体積１５ｍＬを生成した。
【００８０】
培養および継代培養
混合後、全ての接種基質を、３５℃±２℃で１４日間、次いで室温で培養した。
【００８１】
継代培養を、３、１３、１４および３０日間以下のように実施した：
０．１ｍＬアリコートを各々の接種された基質から取り出した。サンプルの濁度を評価し、必要な場合には、サンプルをリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して、読み取り可能なプレートカウントを得た（下記「プレートカウント」参照のこと）。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒおよびＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓをＳＤＡ上へ継代培養し、２２℃±２℃で生育させた。バクテリアをＰＣＡ上に継代培養し、３５℃±２℃にて加湿培養器内で培養した。悪い結果は、９６時間培養よりも前には報告されず、カウントは最低４８時間の培養の後に行った。
【００８２】
微生物の属性はグラム染色（バクテリアについて）またはラクトフェノールコットンブルー染色（菌類について）により、汚染が疑われたときに確認した。ＩＮＴ染料（すなわち、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロリド）還元、グラム染色、およびＡＴＰ（アデノシン三リン酸）分析を、悪い結果が疑われたとき（例えば、チューブ内の曇り）に用いた。
【００８３】
プレートカウント
希釈したサンプルについて、プレート当たり２２〜２２０コロニーを生成するプレートをカウントし、そしてカウントに希釈係数を乗じた。プレートカウントおよび希釈係数に基づき、等級コードを割り当てた。Aspergillus nigerのコロニーは共にクランプするため、正確なカウントは希釈によっては容易に実現できなかった。
【００８４】
等級コード割り当て
Ａ．ｎｉｇｅｒについて（０．１ｍＬアリコートのプレーティングされた体積基準）：
【００８５】
【表４】
2012526809.tif 000005
【００８６】
Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓおよび全てのバクテリアについて（０．１ｍＬのプレーティングされた体積基準）：
【００８７】
【表５】
2012526809.tif 000006
【００８８】
手順：ＳＤＢにおける病原性真菌での接種試験
接種試験において用いた病原性真菌を表４に与える。Ｍ．ｃａｎｉｓおよび紅色白癬菌の両者をサブローデキストロース培地（ＳＤＢ）（ｐＨ５．６）で生育させ、一方、癜風菌を、２％（ｖ／ｖ）のオリーブ油および０．２％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎTM８０を加えたＳＤＢ中で生育させ；培養は２２℃±２℃にて連続撹拌下、１０日間の撹拌によって行った。生物を細胞濃度１０3〜１０4ｃｆｕ／ｍＬで生育させた。これらの接種の実際の接種細胞濃度は、滅菌緩衝液水中の希釈および（スプレッドプレート法）プレーティング（計数のために）によって評価した。接種生物についてのこれらのカウントの結果を表４に与える。
【００８９】
【表６】
2012526809.tif 000007
【００９０】
接種生物を用いて、各試験材料（ＣＨＤＭ等）または試験材料の組合せを含有するチューブを、表５に与える濃度で、ＳＤＢ中（または、癜風菌については、オリーブ油およびＴｗｅｅｎTM８０を加えたＳＤＢ中）で接種した。接種は、各培養物の１．５mＬアリコートの量で、２２℃±２℃での静置培養であった。継代培養は、３−、１４−、および３０日の培養後に行った。全ての接種は３重で行った。Ｍ．ｃａｎｉｓの場合、生育応答は、チューブ内の生育の目視での存在または不存在によって調べた：Ｔ．ｒｕｂｒｕｍの場合、呼吸器官染料（０．２％ｗ／ｖ水性ＩＮＴ溶液：２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロリド）をチューブに添加し、生物が生存している場合には赤変した；そして最後に、Ｍ．ｆｕｒｆｕｒの場合、生育応答はチューブ内のメニスカスでの生存ペリクル形成に基づいて調べた。各チューブ内の菌類の生育は、等級コードを以下のように調べた：
【００９１】
等級コード定義
０：視認できる生育なし
１：チューブ内に幾らかかの生育
２：チューブ内に中程度の生育
３：チューブ内にかなりの生育
４：チューブ内に顕著な生育
【００９２】
結果
ＥＤＴＡ、ＰＥ、およびＣＧを伴うＣＨＤＭの接種試験の実験結果を表５に与える。１，４−ＣＨＤＭ、ＴＭＣＤおよび１，３−ＣＨＤＭ（ＢＩＴを伴う）の結果を表６に与える。全ての試験材料濃度をｗ／ｖ％で与える。与えられる等級コードは、２重または３重のサンプルについての等級コードの平均である。殆どの場合、再現実験は同じ等級コード値を有した。表５は、ＢＰＷおよびＳＤＢ（病原性真菌）の両者における微生物接種についての結果を与えること；一方、表６は、ＢＰＷのみについての結果を与えることに留意されたい。ＢＩＴは病原性真菌では試験しなかったからである。表５および６において多くのデータ列を繰り返して、成分の組合せについての結果を、個別の成分についての結果と比較しやすくしていることにも留意されたい。
【００９３】
表５は、１，４−ＣＨＤＭ（ＡＢ）単独の抗微生物活性を、１，４−ＣＨＤＭとＥＤＴＡ、フェノキシエタノール（ＰＥ）、およびカプリリルグリコール（ＣＧ）との組合せと比較する。０．５％にて、ＣＨＤＭをＥＤＴＡとともに試験し、１．２５および２．５％でＥＤＴＡ、ＰＥおよびＣＧとともに試験した（ＣＨＤＭとＥＤＴＡのみとの組合せは病原性真菌に対しては試験しなかったことに留意されたい）。結果はまた、ＥＤＴＡ、ＰＥおよびＣＧ単独についても与えられ、よって各混合物についての結果はその成分の各々についての抗微生物活性と比較できる。この比較は、相乗効果を与えることができる組合せの表示を示す。可能な相乗性は、等級コードを微生物カウントの対数（ｃｆｕ／ｍＬの対数）の見積もりとして処理することによって評価した。次いで、Ｌｏｇの低下は、各等級コードを培地単独の等級コードから減じることによって見積もることができる（等級コード５、病原性真菌を除き）。成分の組合せについてのＬｏｇの低下が、一緒に添加する個別の成分についてのＬｏｇ低下よりも大きい場合には、その組合せは相乗効果を示した。結果は、その生物についての成分単独および培養日数を考慮して相乗的と考える。
【００９４】
表６は、グリコール：１，４−ＣＨＤＭ、ＴＭＣＤ、および１，３−ＣＨＤＭ単独、ならびに、各々の、１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン（ＢＩＴ）との組合せの抗微生物活性を比較する。グリコールは、０．５、１．２５および２．５％にて試験した（各々０．０５および０．２％のＢＩＴを有する）。結果はまた、ＢＩＴ単独について与え、よって各混合物についての結果は、その成分の個別の各々についての抗微生物活性と比較できる。この比較は、相乗性を示すことができる組合せの表示を与える。相乗性は、表５について上記したのと同じ方法で評価した。ＢＩＴ単独もＢＩＴとの組合せも、病原性真菌に対して試験しなかったことに留意されたい。
【００９５】
この検討の結果は、１，４−ＣＨＤＭの抗微生物活性は、これを少量（０．２％）の金属キレート剤、ＥＤＴＡ（二ナトリウム塩）との組合せで用いることにより向上できることを示す。逆に、１，４−ＣＨＤＭは、一般的な化粧品殺生剤、フェノキシエタノールおよびカプリリルグリコールとともに使用して、これらのより一般的なまたは問題となる微生物に対する抗微生物活性を向上できる。
【００９６】
１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン（ＢＩＴ）は、皮膚に対して中程度に刺激を与える可能性があり、そして皮膚感作物質である可能性があり、従って、化粧品において極めて制限された量で使用される。しかし、これは家庭用クリーニングおよびランドリー製品において使用される。この検討の結果は、１，４−ＣＨＤＭおよびＴＭＣＤの両者は、ＢＩＴの抗微生物活性の顕著な向上を付与できることを示す。
【００９７】
前記したように、相乗性（表５および６に示すように）は、等級コードを生物カウント（ｃｆｕ／ｍＬ）の対数（ｌｏｇ）として処理し、次いで個別の成分についてｌｏｇ低下を加え、そして混合物のｌｏｇ低下と比較することにより評価した。この相乗性の評価方法は、他者によって用いられてきた。例えば米国特許第５，０１９，０９６号；第５，０４３，１７６号；および第６，８４６，８４６号（これらが本明細書の記載と矛盾しない限りにおいて参照により本明細書に組入れる）に記載される。しかし、Ｆ．Ｃ．Ｋｕｌｌらによって、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．９，第５３８−５４１頁（１９６１）（本明細書の記載と矛盾しない限りにおいて参照により本明細書に組入れる）に記載される方法は、より広く受入れられ、より正確であると考えられている。Ｋｕｌｌ法は、米国特許第６，４３２，４３３号；第７，１１５，６４１号；第７，３４２，０４４号；および第７，４６８，３８４号に引用されており、本明細書の記載と矛盾しない限りにおいて参照により本明細書に組入れる。従って、更なる検討を行い、その最小阻害濃度（ＭＩＣ）を単独および混合物中で、Ｋｕｌｌに記載されるように評価および比較することにより、１，４−ＣＨＤＭと殺生剤との相乗効果を評価した（例２参照のこと）。
【００９８】
【表７】
2012526809.tif 000008
【００９９】
【表８】
2012526809.tif 000009
【０１００】
【表９】
2012526809.tif 000010
【０１０１】
【表１０】
2012526809.tif 000011
【０１０２】
例２：  相乗活性評価
接種材料の準備
試験培養物を表７に、生育および最小阻害濃度（ＭＩＣ）試験に用いた培養温度とともに列挙する。Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａをトリプチケースソイ培地（ＴＳＢ）中で２０〜２８時間、接種材料の準備のために培養した。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓをサブローデキストロース培地（ＳＤＢ）中で約４４〜５２時間、接種材料の準備のために培養した。Ａ．ｎｉｇｅｒをサブローデキストロース寒天（ＳＤＡ）上で、密集生育および視認できる胞子形成があるまで３〜４日間培養した。プレートの表面を５〜１０ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に浸し、滅菌Ｔ形プラスチックスプレッダー（Ｃｏｐａｎ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）で、良く混合された胞子の懸濁物ができるまでプレート表面に亘って液体を優しく塗り広げることにより、ＳＤＡプレートから胞子を採取した。得られる胞子懸濁物は、血清用ピペットを用いて収集し、そして２〜８℃にて使用まで貯蔵した。
【０１０３】
接種材料濃度は、培養物または胞子懸濁物の希釈プレーティングによって評価した。ＰＢＳ中での連続希釈を、バクテリア培養物について１０6まで、または菌類培養物について１０5まで行った。５０μＬまたは１００μＬの最終希釈物を、２つのトリプチケースソイ寒天（ＴＳＡ）プレート上（バクテリアについて）または２つのＳＤＡプレート上（菌類について）に塗り広げた。プレートを、それぞれの生物について表７に列挙される温度にて培養した。２４〜４８時間後、プレートをカウントし、各実験で用いる濃度を計算した。
【０１０４】
Ａ．ｎｉｇｅｒ胞子懸濁物を、遠心分離および得られる上澄みの一部の再懸濁によって、レベル１〜２×１０8胞子／ｍＬに濃縮した。
【０１０５】
【表１１】
2012526809.tif 000012
【０１０６】
ＣＨＤＭおよび抗微生物剤の準備
相乗性を試験した抗微生物剤、ならびにそれぞれの希釈剤および試験原液濃度を以下に示す。ＭＩＣ範囲の評価のために、個別の抗微生物剤原液を滅菌培地に添加して最高レベルの試験濃度を得た。次いで培地中で連続希釈して試験濃度の範囲を準備した。相乗性試験のために、それぞれの試験濃度を滅菌培地中で準備し、次いでブレンドして所望の組合せを形成した。
【０１０７】
【表１２】
2012526809.tif 000013
【０１０８】
個別の抗微生物剤についてのＭＩＣ評価
ＭＩＣは、高スループットマイクロプレート法を用いて評価した。それぞれの抗微生物剤をＴＳＢ（ｐＨ７．３）（バクテリア試験について）またはＳＤＢ（ｐＨ５．６）（菌類試験について）に、試験される最高濃度で添加した。連続希釈のシリーズは、希釈比１：１．３３３３で準備して、１ｌｏｇ範囲が９希釈でカバーされるようにした。２００μＬの希釈された抗微生物剤を、滅菌、９６ウエル、平底マイクロプレート（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）の各々４ウエルに分配した。最高濃度の更に４ウエルを、接種していない高レベル対照として分配した。培地培地のみを収容する更なる８ウエルもまた準備した。４つは陰性対照として働き、４つは陽性対照として働く。各抗微生物剤希釈物のうち３ウエルに、表７中の試験菌株の１つを接種した。各抗微生物剤希釈物の最後のウエルは接種せずに残して、試験化合物による任意の吸収／濁度のための対照（および補償の手段）とした。
【０１０９】
マイクロプレートは、上記のように準備した培養物または胞子懸濁物を用いて接種した。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ培養物を非希釈で用い、一方、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの培養物を非希釈または滅菌ＴＳＢ中での１:２希釈の後に用いた。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ培養物を用い、非希釈、または遠心分離によって２倍濃度にするかのいずれかとした。接種の２つの手段の１つを用いて、最終濃度約１０5コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬのＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ、１０5胞子／ｍＬのＡ．ｎｉｇｅｒ、または１０6ＣＦＵ／ｍＬのバクテリアを送達した。第１の方法は、特注マイクロプレートホルダーを備える手動卓上プレス（Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）上に搭載されたステンレススチールピンレプリケーター（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を用いて、１μＬの各接種材料を、５０〜１００μＬの培養物を収容する「マスター」プレートから試験プレートのウエル内に分配した。ピンレプリケーターは、接種の前および間に、エタノール中に浸漬し、炎にあてることにより滅菌した。接種の代替の方法は、各培養物または胞子懸濁物の１：２０希釈物の２０μＬを試験プレートの適切なウエルに直接ピペットで入れることによるものであった。この方法は、特に、マスタープレート中で急速に沈降してピン上に収集された細胞／胞子の数の変動の原因となる可能性がある菌類培養物で行う場合に、より着実であることが見出された。
【０１１０】
接種された試験プレートを、滅菌プレート蓋（Ｎｕｎｃ，Ｉｎｃ．）でカバーし、表７中に列挙した温度で培養した。プレート内での生物の生育は、６５０ｎｍにて１〜４日の培養後に培養物（１および２日をバクテリアについて、２および３日をＡ．ｎｉｇｅｒについて、そして２、３、４日をＣ．ａｌｂｉｃａｎｓについて）の光度として、マイクロプレート分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて測定した。
【０１１１】
各試験ウエルの光学強度は、まず、各接種していないウエルの平均読み値を減じ、次いで正の閾値と比較して「正」または「負」の状態を評価することによって行った。接種されていなかった各抗微生物剤希釈物を収容する４つめのウエルを幾つかの場合で用い、試験ウエルの光学強度に対する抗微生物剤のあらゆる寄与を差し引いた。正の閾値は２つの方法のうち１つを用いて算出した。第１の方法では、各プレートにおける陰性対照ウエルの標準偏差に１０を乗じた。代替の方法では、各プレートについて平均陽性対照光学強度の５％を用いた。この代替の方法では、目視評価の感度を近似し、一方第１の方法は、目視評価よりも典型的にはより敏感であった。
【０１１２】
抗微生物剤の組合せの相乗性試験
表８に列挙する個別の抗微生物剤とＣＨＤＭとの組合せを試験した。上記の個別抗微生物剤試験において評価したＭＩＣ値を用いて、目的ＭＩＣを定めた。各実験において、個別抗微生物剤およびＣＨＤＭについてのＭＩＣ値は、異なる日のデータの比較に起因するあらゆる変動性を見積もるために評価した。試験は、上記のように、係数１．３３３３で分けた４つの濃度の範囲に亘って行った。４つの濃度は目的ＭＩＣに、目的よりも高い１つの希釈レベルと目的よりも低い２つの希釈レベルを加えたものであった。抗微生物剤とＣＨＤＭとの組合せは、目的ＭＩＣ値の５０％、ならびに、より高いおよびより低いそれぞれのレベルで行った。加えて、５０％レベルシリーズもまた、抗微生物剤またはＣＨＤＭについて、目的レベルよりも低い１つの希釈レベルにて試験した。
【０１１３】
Ｋｕｌｌらの方法（Ｆ．Ｃ．Ｋｕｌｌら，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，９，ｐ５３８−５４１（１９６１））を用いて、５つの微生物の各々の阻害についてＣＨＤＭと各抗微生物剤との間に相乗活性が存在したか否かを評価した。個別に試験したＣＨＤＭおよび抗微生物剤についてのＭＩＣ、更に、組合せＭＩＣ中でのＣＨＤＭおよび抗微生物剤の濃度を用いて、以下の等式に従って相乗性指数（ＳＩ）を算出した：
ＳＩ＝ＱA／Ｑa＋ＱB／Ｂb
式中、ＱaおよびＱbは、それぞれ、独立に試験したときのＣＨＤＭおよび抗微生物剤についての最小阻害濃度であり、そしてＱAおよびＱBは、それぞれ、阻害濃度での組合せでのＣＨＤＭおよび抗微生物剤の濃度である。従って、相乗性は１未満のＳＩとして規定される。
【０１１４】
結果
表９〜４９は、相乗活性についての、ＣＨＤＭ／抗微生物剤の組合せの試験についての結果を与える。少なくとも２つの結果がＳＩ＜１を与えた場合に、組合せは相乗的であると認めた。
【０１１５】
表９〜４９には、試験した生物、具体的なデータ源についてのプレート番号、プレートの分析前の培養日数、各分析におけるＣＨＤＭの質量％単位での濃度（ＱAa）、各分析における抗微生物剤の質量％単位での濃度（ＱBb）、相乗性指数（ＳＩ）、抗微生物剤とＣＨＤＭとの質量比（Ｂ／Ａ）、ＣＨＤＭ−単独ＭＩＣの％としての、混合物中のＣＨＤＭの濃度、そして抗微生物剤−単独ＭＩＣのパーセントとしての、混合物中の抗微生物剤の濃度、を報告する。
【０１１６】
幾つかの場合において、相乗性が極めて強かったため、実験の設計の範囲内では、目的生物を阻害するのに十分な組合せの最小濃度をとらえることはできなかったが、一方、混合物中の個別の成分についてＭＩＣはなお評価した。このような場合で最大ＳＩを定めるために、試験した最小濃度混合物をＱA源およびＱB源として用いた。実際のＭＩＣは用いた値よりも低かったはずであるため、実際のＳＩもまた、更に低かったはずである。同様に、混合物ＭＩＣを評価した場合があったが、個別成分の結果の１つまたは両者は、試験した最高個別濃度であっても生育について正（阻害なし）であった。よって、個別成分について試験した最大濃度をＳＩ算出におけるＭＩＣ値として用い、そして繰り返すが、実際のＳＩは報告されるものよりも低かったはずである。
【０１１７】
抗微生物剤と特定の生物との８つの組合せが存在し、ここではＳＩは評価しなかった。それらの場合では、個別ＭＩＣを評価したが、組合せについて試験した濃度は、試験生物を阻害するのに必要なものを全て下回った。各々の場合において、評価した場合のＳＩは、１．０超であったはずである。特定の組合せおよび生物を以下に列挙する：
【０１１８】
【表１３】
2012526809.tif 000014
【０１１９】
以下の抗微生物剤は、示される生物について相乗性を示した。各生物は、それぞれの表番号に続く。
【０１２０】
【表１４】
2012526809.tif 000015
【０１２１】
【表１５】
2012526809.tif 000016
【０１２２】
【表１６】
2012526809.tif 000017
【０１２３】
【表１７】
2012526809.tif 000018
【０１２４】
【表１８】
2012526809.tif 000019
【０１２５】
【表１９】
2012526809.tif 000020
【０１２６】
【表２０】
2012526809.tif 000021
【０１２７】
【表２１】
2012526809.tif 000022
【０１２８】
【表２２】
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【０１２９】
【表２３】
2012526809.tif 000024
【０１３０】
【表２４】
2012526809.tif 000025
【０１３１】
【表２５】
2012526809.tif 000026
【０１３２】
【表２６】
2012526809.tif 000027
【０１３３】
【表２７】
2012526809.tif 000028
【０１３４】
【表２８】
2012526809.tif 000029
【０１３５】
【表２９】
2012526809.tif 000030
【０１３６】
【表３０】
2012526809.tif 000031
【０１３７】
【表３１】
2012526809.tif 000032
【０１３８】
【表３２】
2012526809.tif 000033
【０１３９】
【表３３】
2012526809.tif 000034
【０１４０】
【表３４】
2012526809.tif 000035
【０１４１】
【表３５】
2012526809.tif 000036
【０１４２】
【表３６】
2012526809.tif 000037
【０１４３】
【表３７】
2012526809.tif 000038
【０１４４】
【表３８】
2012526809.tif 000039
【０１４５】
【表３９】
2012526809.tif 000040
【０１４６】
【表４０】
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【０１４７】
【表４１】
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【０１４８】
【表４２】
2012526809.tif 000043
【０１４９】
【表４３】
2012526809.tif 000044
【０１５０】
【表４４】
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【０１５１】
【表４５】
2012526809.tif 000046
【０１５２】
【表４６】
2012526809.tif 000047
【０１５３】
【表４７】
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【０１５４】
【表４８】
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【０１５５】
【表４９】
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【０１５６】
【表５０】
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【０１５７】
【表５１】
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【０１５８】
【表５２】
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【０１５９】
【表５３】
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【０１６０】
【表５４】
2012526809.tif 000055
【０１６１】
【表５５】
2012526809.tif 000056
【０１６２】
【表５６】
2012526809.tif 000057
【０１６３】
例３
例３．１−３．１２：クリーム配合物における混合物の適切な防腐のための試験
配合
適切な防腐のための試験を、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅａ（６．０）およびＵｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅａ（５．１）に従って実施した。試験は、エマルション基質としてのスキンクリーム配合物の接種からなった。ｐＨ６．７５を有するスキンクリーム配合物は以下の通りであった：
【０１６４】
【表５７】
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【０１６５】
このスキンクリームはエマルション基質であり、全ての更なる実験のベースを形成した。サンプルは、ＣＨＤＭ、防腐剤、および／または１，２−オクタンジオールを、表５０に示す濃度で添加することによって準備した。
【０１６６】
【表５８】
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【０１６７】
例３．１〜３．１０について、３９０．０ｇのクリームを６００ｍｌビーカーに量り入れた。クリームを室温で撹拌する一方、表５１で特定された含有成分を添加した。各サンプルを２時間撹拌し、次いで接種まで冷蔵庫内に置いた。
【０１６８】
【表５９】
2012526809.tif 000060
【０１６９】
例３．１１および３．１２について、１７９．４ｇのクリームを４００ｍｌビーカーに量り入れた。クリームを室温で撹拌する一方、特定された含有成分を添加した。
【０１７０】
例３．１〜３．１０のサンプルに、特定の生物（表５１を参照のこと）を接種して、１．０×１０5ｃｆｕ／ｇ〜１．０×１０6ｃｆｕ／ｇの汚染を与えた。これらの接種に起因する実際の接種カウントは、滅菌緩衝水中で希釈し、そして（スプレッドプレート法）計数のためにプレーティングすることによって、直ちに評価した。接種生物についてのこれらのカウントの結果を表５２に示す。
【０１７１】
【表６０】
2012526809.tif 000061
【０１７２】
接種生物は、Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ培地中で準備し、７２時間、３５℃±２℃で生育させ、２５００ｒｐｍにて５分間遠心分離し、そして上澄み培地を取り出した。次いで微生物ペレットを滅菌緩衝水で、その生物の特定の生育カーブの先の１．０×１０8ｃｆｕ／ｇ濃度に合致する濁度まで再希釈した。
【０１７３】
例３．１１および３．１２のサンプルには、試験材料の制限に起因しＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａを接種しなかった。他は、これらは例３．１〜３．１０の試験サンプルと全く同じに処理した。
【０１７４】
試験エマルションは、生物にとって最適な特定温度範囲内；３５℃±２℃（バクテリアについて）および２２℃±２℃（菌類について）にて、始めの３日間維持した。これらは続いての時間室温に保った。
【０１７５】
約１ｇの継代培養サンプルを、７、１４、および３０日でのカウントのために採取し、そして最適な条件および栄養の下で５日間以上培養した。継代培養物を１:２、１:１０、１:１００、・・・１：１０，０００に希釈し、スプレッドプレート法を用いてプレートカウント寒天上およびＳＡＢデキストロース寒天上にプレーティングした（カンジダおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種について）；そして以下のように培養した：３５℃±２℃（プレートカウント寒天について）および２２℃±２℃（ＳＡＢデキストロースプレートについて）（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒのもの）。陰性の結果は７日間の培養よりも前では報告されなかった。そしてカウントは５日間以上の培養後に行った。試験エマルションの高粘度に起因し、スプレッドプレート継代培養のために少なくとも１:２希釈が必要であった。０〜３０カウントは、１対２希釈を表し、１〜２００は１：１０希釈を表し；そして残りは１：１００、１：１０００、または１：１０，０００の希釈を表す。カンジダおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種のカウントは、最高カウントの観測を示す（通常はＳＡＢデキストロースである）寒天上で行った。
【０１７６】
カウントは、継代培養サンプルの質量に従って適合させた。結果を表５３に示す。
【０１７７】
【表６１】
2012526809.tif 000062
【０１７８】
【表６２】
2012526809.tif 000063
【０１７９】
これらの実験において、以下の結果は予期しないものであった：
−１．５％ＣＨＤＭ−Ｄ９０と０．３％ＰＥとの組合せの、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒに対する実験について、０．３％ＰＥおよび１．５％ＣＨＤＭ−Ｄ９０の個別の結果を考慮し、ＰＥは０．３％にて極めて小さい抗微生物活性を与え；１．５％ＣＨＤＭ単独では顕著な活性を与え；しかし組合せは、７日以内にＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａコロニーカウントをゼロまで低下させ、そして３０日以内にＡ．ｎｉｇｅｒコロニーカウントをゼロまで低下させた。
−１．５％ＣＨＤＭ−Ｄ９０と０．０５％メチルパラベン（ＭＰ）との組合せの、菌類、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒに対する実験について、ＭＰは菌類に対して有効であることが知られているが、この低濃度（０．０５％）では０．０５％ＭＰ単独の結果から分かるように、有効ではなかった（特にＡ．ｎｉｇｅｒに対して）。
【０１８０】
例４
抗微生物効果データ（表５４および表５５）は、１，４−ＣＨＤＭ（殺生剤ありおよびなしで）について、２２℃での１５日間の曝露後に、バイオディーゼル順化バイオスライムまたは３つのバクテリア−菌類接種材料のいずれかに由来する微生物生育からのＢ−１００バイオディーゼルの保護において得た。この試験は、目視濁度の方法で行った。マイクロリットルプレートまたは自動プレートリーダーのいずれも、系の固有の二相性の特徴に起因して、この実験には使用できなかった。Ｂ−１００バイオディーゼル：ブッシュネル・ハース培地を用いた。これは最小限の塩の培地であり、炭化水素上の微生物の生育を評価するために特別に設計したものである。サンプルを目視で評価した（すなわち、より濁度が高いと、生育がより多く、より濁度が低いと、生育がより少なく、そして濁度なしは生育なしを意味する）。特記すべきは、１，４−ＣＨＤＭが０．２〜０．５質量％濃度である場合に、１，４−ＣＨＤＭがＫｉｌｌｅｍ殺生剤（ＦＰＰＦ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｂｕｆｆａｌｏ，ＮＹから得たもの）の防腐（阻害）作用を、２００ｐｐｍ用量で向上させたことである。より低用量の殺生剤（５０ｐｐｍまたは１００ｐｐｍ）またはより低い濃度の１，４−ＣＨＤＭ（０．１質量％）のいずれでも向上が見られない。
【０１８１】
【表６３】
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【０１８２】
【表６４】
2012526809.tif 000065
【０１８３】
例５
実験はまた、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｘｅｒｏｓｉｓを用いて行った。これは体臭の原因となることが知られているバクテリアである。ＣＨＤＭとエチルヘキシルグリセリン（ＥＨＧ）またはトリクロサン（ＴＲＩ）との組合せを用いた。この例で用いたＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｘｅｒｏｓｉｓバクテリアはＡＴＣＣ＃３７３であった。種培養物をブレインハートインヒュージョン培地中で生育させた。ブレインハートインヒュージョン培地において、例２に記載したような９６ウエルプレートにてアッセイを実施した。ブレインハートインヒュージョン培地はｐＨ約７．４であった。全ての生育は３７℃で実施した。
【０１８４】
【表６５】
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【０１８５】
【表６６】
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【０１８６】
このデータから相乗効果は観測されなかったが、例１〜４で示される多量のデータは、ＣＨＤＭを他の抗微生物剤とともに用いる場合に、相乗効果が存在することを明白に示す。この例で見られる相乗性の欠如の理由は明らかではないが、生物系の実験のばらつきに起因する可能性がある。
【０１８７】
例６−１，１および１，４−シクロヘキサンジメタノールの抗微生物活性比較
1，４−シクロヘキサンジメタノール（１，４−ＣＨＤＭ）および１，１−シクロヘキサンジメタノール（１，１−ＣＨＤＭ）の抗微生物活性を評価した。各活性は、最小阻害濃度（ＭＩＣ）で算出し、視認できる生育を阻害するのに必要な最低濃度を明らかにした。ＭＩＣは３連続日について個別に、１，１−シクロヘキサンジメタノール、および、１，４−シクロヘキサンジメタノールの３１％シス：６９％トランス混合物の両者で、算出した。両化合物は、微生物の５つの株のパネルに対して評価した。１，１−ＣＨＤＭは、種々の生物の間で相関して、１，４−ＣＨＤＭの効果に対しての顕著な改善を与えた。
【０１８８】
より高い抗微生物活性は、配合の間、ＣＨＤＭの濃度および体積の低減を可能にする。ＣＨＤＭの量の低減は、活性を同等に維持し、また同じ正味の活性を有するより少ない物質を製造することによってコストを低減できる一方、配合された生成物または仕上げされた物品の特性に対する影響を最小限にすることができる。
【０１８９】
例６についての材料および方法
Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ａ．ｎｉｇｅｒおよびＳ．ａｕｒｅｕｓの株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入した。ＮＵＮＣ平底ポリスチレン９６ウエルのマイクロタイタープレート（ＮＵＮＣ  Ｃａｔ＃２６９７８７）、および１７×１００ｍｍの培養チューブ（ＶＷＲ  Ｃａｔ＃  ６０８１８−７０３）は、ＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＬＬＣ（Ｗｅｓｔ  Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ）から購入した。Ｅａｓｔｍａｎ  ＣＨＤＭ−Ｄ９０および１，１−ＣＨＤＭ（＞９９．７％，ＧＣにより、およびＮＭＲにより評価）は、Ｅａｓｔｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｋｉｎｇｓｐｏｒｔ，ＴＮ）により準備した。全てのバクテリア培養物は、ＢＤ  ＢＢＬトリプチケースソイ培地中で生育させ、そして全ての菌類培養物はサブローデキストロース培地（ＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＬＬＣ（Ｗｅｓｔ  Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ）から購入）中で生育させた。吸収測定は、ＴＥＣＡＮ  ＧＥＮｉｏｓ  Ｐｒｏマイクロプレートリーダーで行った。
【０１９０】
接種材料の準備
小白金耳量の接種材料を、各菌株の新しく画線を付けた寒天プレートから、１７×１００ｍｍ培養チューブ内の５ｍＬの滅菌培地に移した。チューブを振とうせずに、表５８に列挙するように適切な温度にて適切な培地中で培養した。バクテリアは２０〜２８時間培養し、そしてＣ．ａｌｂｉｃａｎｓは４４〜５２時間培養した。
【０１９１】
Ａ．ｎｉｇｅｒについての手順は大きく異なった。Ａ．  ｎｉｇｅｒをサブローデキストロース寒天プレート上で、黒色胞子の重度の集中が目視で明らかになるまで培養した。胞子をプレートから、３ｍｌのサブローデキストロース培地中で滅菌プラスチックスプレッダーおよび滅菌注入ピペットを用いて懸濁させることによって集菌した。
【０１９２】
【表６７】
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【０１９３】
ＣＨＤＭ異性体の希釈
原液溶液を、各異性体について、対応する生育培地中で濃度５％ｗ／ｖ（１，４−ＣＨＤＭ）または２．２５％ｗ／ｖ（１，１−ＣＨＤＭ）にて準備した。連続希釈を、希釈比１:１．３３３３で行い、１のｌｏｇ範囲が９希釈でカバーされるようにした。
【０１９４】
９６ウエルプレートの準備
２００マイクロリットルの各ＣＨＤＭ濃度のものを滅菌９６ウエルプレートの４ウエル内に移した。最高濃度の更に４ウエルを、接種していない高レベル対照として入れた。更に８ウエルに滅菌培地のみを入れ、陰性および陽性の対照とした。各ＣＨＤＭ濃度の４ウエルのうち３つに試験菌株の１つを接種した（表５８中に列挙する通り）。各ＣＨＤＭ異性体希釈物の最後のウエルは接種せずに残して、試験化合物に関するバックグラウンド濁度用の対照とした。バクテリアまたはＣ．ａｌｂｉｃａｎｓを有するプレートに２μｌの種培養物を接種して最終濃度約１０6ＣＦＵ／ｍｌ（バクテリアについて）および１０5ＣＦＵ／ｍｌ（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓについて）とした。Ａ．ｎｉｇｅｒを有するプレートに、上記で準備した２μｌの胞子懸濁物を接種した。
【０１９５】
最小阻害濃度（ＭＩＣ）の評価
各プレートをカバーし、適切な温度で培養し、細胞密度の指標としての濁度を、６１２ｎｍでの吸収測定にて、マイクロプレートリーダーを用いて評価した。測定は、各プレートについて２４、４８および７２時間で行った。生データをエクセルスプレッドシートにエクスポートし、ＭＩＣ値を評価してｗｔ％として表した。各々の接種されたＣＨＤＭウエルの吸収を、まず各々の接種されていないウエルの平均読みを差し引き、次いで正の閾値と比較することによって読み出して、生育の陽性または陰性の状態を評価した。正の閾値は、接種した培地−のみのウエルの平均吸収に０．０５を乗じることによって算出した。ＭＩＣは、正の閾値未満の値を示す全３つの再現ウエルをもたらす最低試験濃度として評価した。
【０１９６】
結果
１，１−シクロヘキサンジメタノールは、１，４−シクロヘキサンジメタノールのものに対する抗微生物効果の測定可能な増大を示した。抗微生物効果は、これらの実験における５つの試験生物の４つに対して増大した。１，１−ＣＨＤＭの溶解性は、水性生育培地中２．２５％（ｗ／ｖ）に限られ、従って包括的なＭＩＣ結果は、０〜２．２５％の範囲に限られた。最終結果を以下の表５９に纏める。
【０１９７】
【表６８】
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【０１９８】
これらの結果は、１，１−ＣＨＤＭは、その構造異性体１，４−ＣＨＤＭよりも有効な抗微生物剤であることができる（より低いＭＩＣ値によって示されるように）ことを示す。
【０１９９】
本発明をその好ましい態様を特に参照して詳述してきたが、本発明の精神および範囲の中での変更および改変が可能であることが理解されよう。
【国際調査報告】
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