(57)【要約】本発明は、トランスレーショナル医療に使用できる、自発的に生じる疾患のためのプラットフォーム技術を提供する。イヌなどの非ヒトコンパニオンアニマルは、ヒト疾患に酷似している疾患を自発的に発生する。自発的に生じる疾患を発生するコンパニオンアニマルを使用することは、そうでなければ、ＦＤＡの規制下で認可されない、１種または複数のパラメータを試験することが可能となることによって、トランスレーショナル医療ための時間および費用の利益になり得る。さらに、コンパニオンアニマルもまた、その自発的に生じる疾患を治癒または治療できる可能性のある発見によって助けられる。
2012526997.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
相乗作用を有する抗癌剤の組合せを同定するための方法であって、（１）自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルに２種以上の抗癌剤を投与するステップと、（２）前記コンパニオンアニマルを生物学的および／または生理学的効果についてモニタリングするステップと、（３）前記生物学的および／または生理学的効果が相乗的である場合に、相乗作用を有する抗癌剤の組合せを同定するステップとを含む、方法。
【請求項２】
前記抗癌剤が、ビスホスホネート、白金ベースの化学療法薬、タンパク質ホスホリパーゼＤの阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ポドフィロトキシン、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤、ホルモン治療、可溶性受容体および抗悪性腫瘍薬からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗癌剤が、クロドロネートおよびカチオン性ＣｐＧである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ヒトにおける治療のための治療法を同定するための方法であって、自発的に生じる疾患を有するコンパニオンアニマルにおいて組成物の組合せを試験するステップと、自発的に生じる疾患を有する前記コンパニオンアニマルにおける前記試験の結果を、自発的に生じる疾患を有さない動物における前記試験の結果と比較することによって、ヒトにおける成功の可能性の高い組合せを同定するステップとを含む、方法。
【請求項５】
自己免疫疾患と関連している自己抗原を同定する方法であって、（ａ）自発的に生じる自己免疫疾患を有するコンパニオンアニマルにおいて１種または複数の抗原を決定するステップと、（ｂ）前記コンパニオンアニマルにおいて前記疾患の抗原プロファイルを得るステップと、（ｃ）前記プロファイルを、前記自発的に生じる疾患を有さない対照コンパニオンアニマルと比較するステップと、（ｄ）自己免疫疾患と関連している自己抗原を同定するステップとを含む、方法。
【請求項６】
ヒトにおいて癌と関連している、または関連している疑いのある複数の抗原を標的とする方法であって、（ａ）自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルに抗癌効果を有すると疑われる１種または複数の薬剤を投与するステップと、（ｂ）前記コンパニオンアニマルにおける前記薬剤の生物学的効果または生理学的効果をモニタリングするステップと、（ｃ）前記薬剤が生物学的効果または生理学的効果を有していた前記コンパニオンアニマルにおいて１種または複数の抗原を同定するステップと、（ｄ）前記薬剤が、前記コンパニオンアニマルにおいて抗癌効果を有する場合には、前記ヒトに同じ薬剤を投与するステップとを含む、方法。
【請求項７】
ヒトにおいて感染性疾患と関連している、または関連している疑いのある複数の抗原を標的とする方法であって、（ａ）自発的に生じる感染性疾患を有するコンパニオンアニマルに前記感染性疾患に対して効果を有すると疑われる１種または複数の薬剤を投与するステップと、（ｂ）前記コンパニオンアニマルにおける前記薬剤の生物学的効果または生理学的効果をモニタリングするステップと、（ｃ）前記薬剤が生物学的効果または生理学的効果を有していた前記コンパニオンアニマルにおいて１種または複数の抗原を同定するステップと、（ｄ）前記薬剤が前記コンパニオンアニマルにおいて有益な効果を有する場合には、前記ヒトに同じ薬剤を投与するステップとを含む、方法。
【請求項８】
前記感染性疾患が、インフルエンザ、敗血症（例えば、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ敗血症）、細菌感染症（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、その他のブドウ球菌感染症、Ｅ．ｃｏｌｉおよび腸球菌）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｉｎｆａｎｔｕｍ、ブルセラ症、コクシジウム症およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ血液型亜型Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記コンパニオンアニマルがイヌである、請求項１または４から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記コンパニオンアニマルが、純血種のイヌである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記コンパニオンアニマルが、雑種のイヌである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記イヌが、均一な遺伝的背景を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記イヌが、不均一な遺伝的背景を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記コンパニオンアニマルがネコである、請求項１または４から７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２００９年５月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／１７８，３９１号および２００９年６月１１日に出願された同第６１／１８６，３４２号に対する優先権を主張する。両方の仮出願の開示は、それらの全体が参考として本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの命を延ばすための試みは、新規生物学的経路および作用機序ならびに新規治療および診断法の発見を含む。癌などの種々の疾患と戦うための、新規薬物、化合物、方法または前述のもののいずれかの組合せの発見は、規制上の要請のために、ならびに時間および経費を考慮すると困難である。同じ理由で、複数の治療の包括的な研究は、ヒト臨床試験において達成するのは極めて難しい。これらの理由は、人命を救うための、および／または種々の疾患に苦しむ人の生活状況を改善するための企業、非営利団体および個人の努力を妨げる実際の障壁のように作用する。必要なものは、最適な生物学的および／または生理学的応答および結果を決定するために、因子の組合せを調べることができるような、種々の疾患を研究するための改善された系である。このような系は、宿主誘導性応答を含む自発的に生じる疾患（例えば、糖尿病、癌、自己免疫、神経学的、アレルギー性疾患）などの種々の疾患を有する個人を助けるための医学的および科学的取り組みの最大に効率的な使用を提供するための、新規の、または改善された薬物、化合物および治療プロトコールを作製するために情報をトランスレートするために利用できる。
【０００３】
自発的に生じる疾患、例えば、糖尿病は、イヌおよびネコなどのコンパニオンアニマル（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ａｎｉｍａｌ）において観察されている（非特許文献１）。例えば、Ｄａｖｉｓｏｎらは、自発的に生じる真性糖尿病においてＧＡＤ６５およびＩＡ−３に対する自己抗体で実施された研究を記載している（非特許文献２）。Ｈｏｅｎｉｇらは、非特許文献３において、糖尿病を有するイヌにおけるベータ細胞抗体の定性アッセイを記載した。イヌにおけるその他の天然に存在する疾患は、種々の参考文献、例えば、非特許文献４に記載されている。
【０００４】
糖尿病に加えて、癌および自己免疫疾患などの他の自発的に生じる疾患が観察されている。Ｐａｏｌｏｎｉらは、癌と関連する遺伝子を同定し、環境危険因子を研究し、腫瘍生物学および進行を理解し、新規癌治療薬を評価および開発するための、天然に存在する癌を有するイヌの研究のヒト癌生物学の研究との一体化を記載している。（Ｎａｔｕｒｅ、８：１４７〜１５６頁（２００８年））。Ｔｈｅ  Ｃａｎｉｎｅ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（ＣＣＯＧＣ）は、ヒトおよびイヌ両方をよくするために癌研究を調査するための、天然に存在する癌のモデルとしてイヌを使用するための多数の共同努力の結果である。Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２４巻（９号）：１０６５〜１０６６頁（２００６年）。イヌが天然に発生する癌の例として以下がある。非ホジキンリンパ腫、骨肉腫、黒色腫、前立腺癌腫、肺癌腫、頭頸部癌腫、乳癌および軟部組織癌。同書。ペットのイヌでの試験が報告され、新規抗癌剤の安全性および活性をより良好に規定するのに役立っており、これらの抗癌薬に対する反応または曝露と関連している関連バイオマーカーの同定を助けており、ヒト臨床試験におけるこれらの新規薬物の成功を向上させる組合せ戦略の合理的な開発を可能にし得る。同書。Ｃａｎｄｏｌｆｉらは、多形性膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｕｔｌｉｆｏｒｍｅ）（ＧＢＭ）を自発的に発生するイヌへのアデノウイルスによって媒介される遺伝子導入の使用を記載している（Ｃａｎｄｏｌｆｉ  Ｍら、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ６０巻：１６７〜１７８頁（２００７年））。Ｐａｏｌｉｎｉらは、ｔｈｅ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｔｒｉａｌｓ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（ＣＯＴＣ）が、腫瘍内皮上のαＶインテグリンへ腫瘍壊死因子を送達する標的とされるＡＡＶ−ファージベクター（ＲＧＤ−Ａ−ＴＮＦ）を評価したことを報告した。ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ４巻（３号）：ｅ４９７２（２００９年）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｈｏｅｎｉｇ  Ｍ、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．（２００２年）１９７巻：２２１〜２２９頁
【非特許文献２】Ｄａｖｉｓｏｎ  ＬＪら、Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ（２００８年）１２６巻：８３〜９０頁
【非特許文献３】Ｈｏｅｎｉｇら、Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、（１９９２年）３２巻：１９５〜２０３頁
【非特許文献４】Ｔｓａｉら、Ｍａｍｍ．  Ｇｅｎｏｍｅ、（２００７年）１８巻：４４４〜４５１頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本明細書に記載される本発明は、治療的処置および診断方法にトランスレートできる、自発的に生じる疾患を研究するためのプラットフォーム技術を提供する。
【０００７】
特許、特許出願および刊行物を含めた本明細書に引用されるすべての参考文献は、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる。
【０００８】
本発明は、生物学的経路、生物学的および／または生理学的経路に影響を及ぼす薬剤の種々の組合せの効果（例えば、相乗作用）、根底にある作用機序、複雑な生理学的状態の生物学的関与物ならびに種々の生理学的状態および／または疾患の治療、診断または予防のための薬剤を開発するのに有用であり得るその他のパラメータを調査するためのプラットフォーム技術を提供する。このような複雑な生理学的状態として、それだけには限らないが、癌、自己免疫疾患、アレルギー、過敏症、神経疾患、遺伝性遺伝子障害および感染性疾患を挙げることができる。
【０００９】
したがって、一態様では、本発明は、相乗作用を有する抗癌剤の組合せを同定するための方法であって、（１）自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルに２種以上の抗癌剤を投与するステップと、（２）コンパニオンアニマルを生物学的および／または生理学的効果についてモニタリングするステップと、（３）生物学的および／または生理学的効果が相乗的である場合に、相乗作用を有する抗癌剤の組合せを同定するステップとを含む方法を提供する。一実施形態では、抗癌剤は、ビスホスホネート、白金ベースの化学療法薬、タンパク質ホスホリパーゼＤの阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ポドフィロトキシン、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤、ホルモン治療、可溶性受容体および抗悪性腫瘍薬からなる群から選択される。別の実施形態では、抗癌剤は、クロドロネートおよびカチオン性ＣｐＧである。
【００１０】
別の態様では、本発明は、ヒトにおける治療のための治療法（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｍｏｄａｌｉｔｙ）を同定するための方法であって、自発的に生じる疾患を有するコンパニオンアニマルにおいて組成物の組合せを試験するステップと、自発的に生じる疾患を有するコンパニオンアニマルにおける試験の結果を、自発的に生じる疾患を有さない動物における試験の結果と比較することによって、ヒトにおける成功の可能性の高い組合せを同定するステップとを含む方法を提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、自己免疫疾患と関連している自己抗原を同定するための方法であって、（ａ）自発的に生じる自己免疫疾患を有するコンパニオンアニマルにおいて１種または複数の抗原を決定するステップと、（ｂ）コンパニオンアニマルにおいて疾患の抗原プロファイルを得るステップと、（ｃ）このプロファイルを、自発的に生じる疾患を有さない対照コンパニオンアニマルと比較するステップと、（ｄ）自己免疫疾患と関連している自己抗原を同定するステップとを含む方法を提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、ヒトにおいて癌と関連している、または関連している疑いのある複数の抗原を標的とする方法であって、（ａ）自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルに抗癌効果を有すると疑われる１種または複数の薬剤を投与するステップと、（ｂ）コンパニオンアニマルにおける薬剤の生物学的効果または生理学的効果をモニタリングするステップと、（ｃ）薬剤が生物学的効果または生理学的効果を有していたコンパニオンアニマルにおいて１種または複数の抗原を同定するステップと、（ｄ）薬剤が、コンパニオンアニマルにおいて抗癌効果を有する場合には、ヒトに同じ薬剤を投与するステップとを含む方法を提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、ヒトにおいて感染性疾患と関連している、または関連している疑いのある複数の抗原を標的とする方法であって、（ａ）自発的に生じる感染性疾患を有するコンパニオンアニマルに感染性疾患に対して効果を有すると疑われる１種または複数の薬剤を投与するステップと、（ｂ）コンパニオンアニマルにおける薬剤の生物学的効果または生理学的効果をモニタリングするステップと、（ｃ）薬剤が生物学的効果または生理学的効果を有していたコンパニオンアニマルにおいて１種または複数の抗原を同定するステップと、（ｄ）薬剤がコンパニオンアニマルにおいて有益な効果を有する場合には、ヒトに同じ薬剤を投与するステップとを含む方法を提供する。一実施形態では、感染性疾患は、インフルエンザ、敗血症（例えば、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ敗血症）、細菌感染症（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、その他のブドウ球菌感染症、Ｅ．ｃｏｌｉおよび腸球菌）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｉｎｆａｎｔｕｍ、ブルセラ症、コクシジウム症およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ血液型亜型Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍからなる群から選択される。
【００１４】
本発明の態様または実施形態のいずれかでは、コンパニオンアニマルは、イヌである。イヌは、純血種のイヌであっても、雑種のイヌであってもよい。イヌは、均一な遺伝的背景を有する場合も、不均一な遺伝的背景を有する場合もある。
【００１５】
本発明の態様または実施形態のいずれかでは、コンパニオンアニマルはネコである。ネコは、純血種であっても雑種であってもよい。ネコは、均一な遺伝的背景を有する場合も、不均一な遺伝的背景を有する場合もある。
【００１６】
したがって、別の態様では、本発明は、標準モデルより、治療法を同定するために成功する可能性の高い組成物の組合せを含む、ヒトにおける治療のための治療法を同定するためのコンパニオンアニマルモデル系を提供する。一実施形態では、組成物の組合せは、２種以上の抗原を含む。別の実施形態では、組成物の組合せは、少なくとも１種の抗原と、１種のアジュバントを含む。別の実施形態では、コンパニオンアニマルは、イヌまたはネコである。別の実施形態では、コンパニオンモデル系は、イヌ系であり、不均一な遺伝的背景を有する。別の実施形態では、コンパニオンアニマルは、純血種のイヌである。別の実施形態では、コンパニオンアニマルは、雑種のイヌである。
【００１７】
別の態様では、本発明は、抗癌剤を同定するための方法であって、（ａ）薬剤を試験するための、自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルモデル系を獲得するステップと、（ｂ）コンパニオンアニマルモデル系に薬剤を投与するステップと、（ｃ）コンパニオンアニマルモデル系において、生物学的および／または生理学的効果について２種以上の癌抗原をモニタリングするステップと、（ｄ）生物学的および生理学的効果に基づいて、抗癌として薬剤を同定するステップとを含む方法を提供する。一実施形態では、コンパニオンアニマルは、イヌまたはネコである。別の実施形態では、癌抗原は、多形性膠芽腫抗原ではない。
【００１８】
別の態様では、本発明は、自己免疫疾患と関連する自己抗原を同定するための方法であって、（ａ）自発的に生じる自己免疫疾患を有するコンパニオンアニマルモデル系を獲得するステップと、（ｂ）１種または複数の抗原を決定して、コンパニオンアニマルモデル系において疾患のプロファイルを得るステップと、（ｃ）このプロファイルを、自発的に生じる疾患を有していない対照コンパニオンアニマルモデル系と比較するステップと、（ｄ）自己免疫疾患と関連している自己抗原を同定するステップとを含む方法を提供する。一実施形態では、コンパニオンアニマルは、イヌまたはネコである。別の実施形態では、自己免疫疾患は、糖尿病、拡張型心筋症および円板状ループス（ｄｉｓｃｏｒｄ  ｌｕｐｕｓ）からなる群から選択される。別の実施形態では、自己抗原は、ＧＡＤ６５または全長ＩＡ−２、膜近傍ドメイン（ＩＡ２のアミノ酸６０５〜６８２）ではない。別の実施形態では、自己抗原は、ミオシン重鎖、アルファ心筋アクチン、ミトコンドリアのアコニット酸ヒドラターゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）または脳グリコーゲンホスホリラーゼ（ＧＰＢＢ）ではない。
【００１９】
別の態様では、本発明は、ヒトにおいて癌と関連している、または関連している疑いのある複数の抗原を標的とする方法であって、（ａ）薬剤を試験するための、自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルモデル系を獲得するステップと、（ｂ）コンパニオンアニマルモデル系に抗癌効果を有すると疑われる１種または複数の薬剤を投与するステップと、（ｃ）コンパニオンアニマルモデル系に対する薬剤の効果をモニタリングするステップと、（ｄ）薬剤がコンパニオンアニマルモデル系において抗癌効果を有する場合に、ヒトに同じ薬剤を投与するステップとを含む方法を提供する。一実施形態では、コンパニオンアニマルは、イヌまたはネコである。
【００２０】
別の態様では、本発明は、感染性疾患と関連している、または関連している疑いのある、１種または複数の抗原を標的とする方法であって、（ａ）薬剤を試験するための、自発的に生じる感染性疾患を有するコンパニオンアニマルモデル系を獲得するステップと、（ｂ）コンパニオンアニマルモデル系に、感染性疾患と戦うための効果を有すると疑われる１種または複数の薬剤を投与するステップと、（ｃ）コンパニオンアニマルモデル系に対する薬剤の効果をモニタリングするステップと、（ｄ）コンパニオンアニマルモデル系において薬剤が効果を有する場合に、ヒトに同じ薬剤を投与するステップとを含む方法を提供する。一実施形態では、コンパニオンアニマルは、イヌまたはネコである。別の実施形態では、感染性疾患は、インフルエンザ、敗血症（例えば、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ敗血症）、細菌感染症（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、その他のブドウ球菌感染症、Ｅ．ｃｏｌｉおよび腸球菌）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｉｎｆａｎｔｕｍ、ブルセラ症、コクシジウム症およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ血液型亜型Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍからなる群から選択される。
【００２１】
別の態様では、本発明は、疾患のための薬剤で規制認可を得るための時間および／または費用を改善する方法であって、（ａ）疾患のための、自発的に生じる型の疾患を有するコンパニオンアニマルモデル系を同定するステップと、（ｂ）コンパニオンアニマルモデル系に薬剤を投与するステップと、（ｃ）生物学的効果および生理学的効果について動物をモニタリングするステップと、（ｄ）疾患に対する薬剤の効果を決定するステップと、（ｅ）規制機関への提出に適している媒体で薬剤の効果を立証するステップとを含む方法を提供する。一実施形態では、コンパニオンアニマルは、イヌまたはネコである。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、ｓ．ｃ．ＭＣＡ−２０５（肉腫）腫瘍が確立したＣ５７Ｂ１／６マウスへの、１週間に１回の２００μｌのＬＣのｉ．ｖ．投与が、腫瘍増殖の大幅な阻害をもたらしたことを示す結果を表す。
【図２】図２は、ＬＣ単独を用いる一連の処理でＳＴＳ処理されたイヌが、第３のＬＣ投与後に開始した相当な自発的な腫瘍退縮を経験したことを示す結果を表す。
【図３】図３は、腫瘍保有マウスにおけるＬＣのｉ．ｖ．投与の２４時間後に、脾臓、血液および腫瘍組織においてＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋  ＭＳＣが数え上げられ、血液において相当なＭＳＣ枯渇が起こったことを示す結果を表す。
【図４】図４は、ＬＣの抗腫瘍活性が、ＣＤ８−／−マウスにおいてほとんど完全に排除されたのに対し、ＣＤ４−／−マウスでは、ＬＣの活性が部分的に阻害されただけであったことを示す結果を表す。対照はまた、ＰＢＳを含有するリポソームで処理されたマウス（ｌｉｐ対照）を含んでいた。
【図５】図５は、ＬＣを使用するＭＳＣ枯渇が、読み出し情報として体液性免疫応答を使用して、ワクチン反応を増強し得るかどうかを調べる実験から得られた結果を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
発明の詳細な説明
本発明は、自発的に生じる疾患などの種々の疾患の、生物学的経路、生理学的状態および／または応答ならびに根底にある作用機序の種々の局面を研究するためのプラットフォーム技術を提供する。このような知見を、それだけには限らないが、治療、診断方法またはキットを開発すること、新規経路を同定すること、治療もしくは予防目的で化合物もしくはまたは薬剤（およびそれらの組合せ）を同定することならびに／または新規疾患標的を同定することをはじめ、種々の目的で、トランスレーショナル医療にさらに使用できる。
【００２４】
一般に、自発的に生じる疾患を有するコンパニオンアニマルは、種々の治療法および組合せに関するデータを集めるために有用である。コンパニオンアニマルは、実験室条件下で維持されていないので（すなわち、日常の環境因子に対する曝露が制限され、管理された条件セットに曝露されている）、このような動物の使用は、実験室条件下で維持されたイヌを使用するその他の研究（例えば、ビーグル犬研究）から区別される１つの因子である。さらに、疾患は、実験室条件下で試薬によって誘導されていない、すなわち、疾患は自発的に発生する。したがって、このプラットフォームの利益は、特定の疾患または状態を発生するよう誘導された実験室動物よりも、ヒトに起こることに、より反映的であるということである。
【００２５】
イヌなどの非ヒトコンパニオンアニマルは、ヒト疾患に酷似している疾患を自発的に発生する。そのようなものとして、自発的に生じる疾患を発生するコンパニオンアニマルの使用は、規制認可のために科学的データを集めるのに必要な時間を低減することによって、さらなる利益を提供し、このようなデータ集めに伴われる費用を低減し、得ることができる科学的データの量を増大し得る。自発的に生じる疾患を有する動物モデルの使用によって、そうでなければ、ＦＤＡの規制下で認可されない、１種または複数のパラメータ（例えば、抗原（複数可）の種類、抗原の組合せ、薬剤の組合せ、送達位置など）を試験することが可能となる。さらに、コンパニオンアニマルもまた、その自発的に生じる疾患を治癒または治療できる発見の可能性によって助けられる。
【００２６】
したがって、一態様では、本発明は、標準モデルよりも治療法を同定するために成功する可能性の高い組成物の組合せを含む、ヒトにおける治療のための治療法を同定するためのプラットフォーム技術としてのコンパニオンアニマルモデル系を提供する。コンパニオンアニマルは、好ましくは、そのヒトと同じ環境因子（例えば、空気、水）に曝露されたヒトにとって仲間である任意の動物であり得る。一態様では、コンパニオンアニマルは、そのゲノムが、部分的または完全に決定されている動物である。ゲノム情報（例えば、核酸レベル、タンパク質または代謝レベルの）の使用は、これらのプラットフォーム技術において有用である。そのヒトと同様の環境因子を共有し、そのゲノム部分または完全配列を有するコンパニオンアニマルの限定されない例として、イヌおよびネコが挙げられる。
【００２７】
本明細書に記載されるプラットフォーム技術の使用によって、複数のプラットフォーム間ならびに複数の抗原間およびその任意の組合せの相乗効果を利用することによって、トランスレーショナル医療のための時間および／または費用において２０〜５０倍の低減を提供できる。本明細書により詳細に記載されるように、プラットフォーム技術は、費用、規制上の制約、時間、試験の大きさおよびその他の科学の進歩にとっての道を塞ぐものために、従来、ヒト治験において困難にぶつかってきた種々の対象に適用できる。この対象として、それだけには限らないが、ワクチン（例えば、寛容化ワクチン）、カチオン性脂質ＣｐＧ、クオラムセンシングおよび感染性疾患における自己誘導物質、生体試料（例えば、尿、唾液、血液または血漿）からの多重化病理学、迅速診断およびマーカー多重化技術のための診断技術が挙げられる。
【００２８】
一般技術
本発明の実施は、特に断りのない限り、当業者の技能の範囲内である分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来技術を採用する。このような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．  Ｇａｉｔ編、１９８４年）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）編、１９８７年）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．  Ｗｅｉｒ  ＆  Ｃ．Ｃ．  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．  Ｍｉｌｌｅｒ  ＆  Ｍ．Ｐ．  Ｃａｌｏｓ編、１９８７年）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７年）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４年）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．  Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１年）およびＳｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９年）などの文献において十分に説明されている。その他の有用な参考文献として、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ；  Ｊ．  Ｉｓｓｅｌｅａｃｈｅｒら編）、Ｄｕｂｏｉｓ’  Ｌｕｐｕｓ  Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ（第５版；Ｄ．Ｊ．  ＷａｌｌａｃｅおよびＢ．Ｈ．  Ｈａｈｎ編；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、１９９７年）、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ：  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｏｇ  ａｎｄ  Ｃａｔ（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｅｔｔｉｎｇｅｒ編、Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ；第５版（２０００年１月１５日））；およびＫｉｒｋ’ｓ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ＸＩＶ（Ｂｏｎａｇｕｒａら、Ｓａｕｎｄｅｒｓ；第１４版（２００８年７月１０日））が挙げられる。
【００２９】
定義
本明細書において、単数形「不定冠詞」および「定冠詞」は、特に断りのない限り、複数の言及を含む。例えば、抗原を不定冠詞を付していう場合、１種または複数の抗原を含む。
【００３０】
「個体」は、脊椎動物、好ましくは、哺乳類、より好ましくは、ヒトである。哺乳類として、それだけには限らないが、家畜、競技用動物、ペット、コンパニオンアニマル、霊長類、マウスおよびラットが挙げられる。一実施形態では、個体はヒトである。
【００３１】
「コンパニオンアニマル」とは、交流のための、そのヒト飼い主と同一家庭に居住する非ヒト動物である。コンパニオンアニマルは、通常、ヒトと同一の環境因子（例えば、水、空気、発癌物質、アレルゲンなど）に曝露されている。コンパニオンアニマルの限定されない例として、イヌおよびネコが挙げられる。一態様では、コンパニオンアニマルは、実験室条件には付されない（例えば、日常の環境因子に対する曝露が制限され、管理された条件セットに曝露されている）。
【００３２】
本明細書において、「自発的に生じる（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）」または「自発的に生じる（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）」（または天然に存在する）疾患とは、宿主によって誘導される病状を含む疾患である。宿主によって誘導される病状とは、特定の状況における宿主が開始する何らかの種類の生物学的または生理学的応答を指す。一実施形態では、宿主によって誘導される病状は、ウイルスが形質転換の原因物質である、ウイルスによって誘導される状態は含まない。別の実施形態では、「自発的に生じる」は、ウイルスによって引き起こされる生物学的および／または生理学的状態または応答を含む。例えば、マウスまたはラットは、マウスまたはラットに特定の化学物質を注入することによって癌を有するよう誘導され得る。癌にかかったマウスまたはラットは、「自発的に生じる癌」を有するとは考えられない。
【００３３】
薬剤または治療法の組合せの生物学的および／または生理学的効果を説明するために使用される「相乗効果」とは、各薬剤または治療法のそれ自体による付加よりも大きい１種または複数の効果を指す。例えば、１種の薬剤の投与が１０％の抗体増加をもたらし、別の薬剤が１５％の抗体増加をもたらす場合には、相乗作用は２５％を超える抗体応答となる。いくつかの実施形態では、相乗作用は、付加効果よりも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％多い。その他の実施形態では、相乗作用は、付加効果よりも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％多い。その他の実施形態では、相乗作用は、付加効果よりも１２５％、１５０％、２００％、３００％、４００％または５００％多い。その他の実施形態では、相乗作用は、付加効果の２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍の増大であり得る。
【００３４】
「相乗効果」を使用して、生物学的および／または生理学的効果（例えば、抗体産生）の増大に加えて、生物学的および／または生理学的効果（例えば、自己免疫応答）の低下を説明することができる。例えば、１種の薬剤の投与が、自己免疫応答（例えば、全身性紅斑性狼瘡の抗核抗体）の１０％低減をもたらし、別の薬剤の投与が１５％の低減をもたらす場合には、相乗作用は、２５％を超える自己免疫応答の低減となる。いくつかの実施形態では、相乗作用は、付加効果よりも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％少ない。その他の実施形態では、相乗作用は、付加効果よりも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％少ない。その他の実施形態では、相乗作用は、付加効果よりも１２５％、１５０％、２００％、３００％、４００％または５００％少ない。その他の実施形態では、相乗作用は、付加効果の２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍の低減であり得る。
【００３５】
「薬剤」とは、天然に存在するものであれ、合成のものであれ、任意の組成の物質を指し得る。薬剤の限定されない例として、小分子、抗体、天然に存在するタンパク質およびその断片（例えば、Ａｘｌ、ＥＧＦまたはＶＥＧＦのような可溶性受容体または増殖因子と関連しているその他のもの）、組換えタンパク質およびその断片、融合分子（例えば、融合タンパク質）、合成分子、脂質、核酸および炭水化物が挙げられる。
【００３６】
「生物学的および／または生理学的効果」とは、個体の生物学的パラメータまたは生理学的パラメータに対する薬剤の効果を指す。生物学的パラメータの限定されない例として、サイトカインプロファイルおよび／または産生、免疫応答、抗体応答などの免疫パラメータ、Ｔｈ１またはＴｈ２またはＴｈ１７応答、ゲノムプロファイルおよびその変化、抗原プロファイルおよびその変化、脂質プロファイル、脂肪酸およびコレステロールプロファイルならびに毒性プロファイルが挙げられる。生理学的パラメータの限定されない例として、系、例えば、心血管系と関連しているパラメータが挙げられる。このような心血管パラメータとして、それだけには限らないが、心臓の健康状態、肺動脈閉塞、冠動脈灌流圧力、心拍出量、肺の血管抵抗、全身の血管抵抗を挙げることができる。その他の実施形態では、生理学的パラメータとして、それだけには限らないが、血液ガスおよび飽和測定、酸素送達、酸素利用、腎能力ならびに臓器の処理および機能能力（例えば、毒物に対する肝臓、インスリン産生に対する膵臓など）を挙げることができる。
【００３７】
「疾患」とは、身体の機能を損ない得る個体の異常な状態を指し、特定の症状を伴うことが多い。侵入病原体などの外部因子によって引き起こされる場合があり、自己免疫疾患などの内部機能障害によって引き起こされる場合もある。「疾患」はまた、種々の状況および各疾患の程度を包含する。例えば、悪性増殖の発生は、癌の病状である。転移は、癌の別の病状である。任意の所与の疾患について、疾患の発生と関連していると報告されたすべての症状および／または兆候が、個体に存在することは必ずしも必要ではない。
【００３８】
本明細書において、「抗原」とは、生物の免疫系によって認識され得る任意の物質を広く指す。一態様では、抗原は、抗体の産生を誘導し得る。抗原は、通常、タンパク質または多糖である。抗原として、それだけには限らないが、細菌、ウイルスおよびその他の微生物の一部（コート、莢膜、細胞壁、鞭毛、線毛（ｆｉｍｂｒａｅ）および毒素）が挙げられる。抗原は、必ずしも、単独でそれ自体によって免疫応答を誘発する必要はない。抗原は、免疫応答（例えば、抗体応答）を誘発する免疫原を包含する。抗原の種類として、それだけには限らないが、外因性抗原（例えば、吸入、経口摂取または注射によって、外側から身体に入った抗原）、内因性抗原（例えば、正常な細胞代謝の結果として、またはウイルスもしくは細胞内細菌感染のために、細胞内で生じた抗原）、自己抗原、腫瘍抗原およびアレルギー抗原が挙げられる。
【００３９】
「自己抗原」は、通常、特定の自己免疫疾患を患っている患者の免疫系によって認識される、正常なタンパク質またはタンパク質の複合体（および時には、ＤＮＡまたはＲＮＡ）である。これらの抗原は、正常な状態下では、免疫系の標的ではないはずであるが、これらの患者では、主に、遺伝的因子および環境因子のために、このような抗原に対する正常な免疫寛容が失われている。
【００４０】
本明細書において、「治療」とは、好ましくは、臨床結果を含む、有益な結果または所望の結果を得るためのアプローチである。例えば、本発明に関連して、１つの所望の結果とは、癌細胞の増殖の停止であろう。治療は、疾患が根絶されることまたは疾患を有する個体が治癒されることを必ずしも必要としない。
【００４１】
「治療を受けること」とは、初期治療および／または継続治療を含む。
【００４２】
「療法」は、予防療法（すなわち、疾患発生前）および治療的処置（すなわち、疾患発生後）の療法を含む。
【００４３】
「有益な効果」とは、個体の健康を向上させる、個体（例えば、ヒトまたはコンパニオンアニマル）に対する生物学的効果または生理学的効果を指す。有益な効果の限定されない例として、癌性腫瘍または小結節の減少、悪性細胞数の減少、癌または病原体に対する抗体産生の増大、癌細胞および／または病原体の排除に役立つサイトカインの分泌、自己分子に対する免疫反応の量の低下、自己免疫応答の減少、疾患の症状の緩和、個体における望ましくない疼痛の緩和、個体の快適度の増大、個体の免疫系の頑強性の増大および個体の免疫系の再構築が挙げられる。
【００４４】
本明細書において、「組合せ」とは、任意の薬剤、抗原、組成物、化合物、アジュバントなどの互いとの組合せのすべてのあり得る変化を指す。これは、任意の１種の薬剤、抗原、組成物、アジュバントなどのうち２種以上の、それ自体の群内の（例えば、複数の薬剤）、またはその他の群との使用を含む。例えば、「組合せ」は、１種の薬剤の、１種のアジュバントとの使用または２種の組成物のいくつかのアジュバントとの使用を考慮する。
【００４５】
治療法の組成
本発明は、ヒト疾患の態様を調査するための、自発的に生じる疾患のコンパニオンアニマルモデル系を利用するプラットフォーム技術を提供する。使用してもよいコンパニオンアニマルモデルとして、ヒトとともに居住する任意の動物が挙げられる。このように、コンパニオンアニマルは、そのヒト同時居住者と類似の環境因子に曝露される。このような環境因子として、それだけには限らないが、同じ空気を吸うこと、同じ水を飲むこと、同じ家庭の内容物（例えば、カーペット、掃除機など）に曝露されることが挙げられる。実験に通常使用される実験室動物（例えば、マウスおよびラット）とは異なり、コンパニオンアニマルは、ヒトが曝露されるような因子に曝露され、そのようなものとして、ヒト疾患および／または生理学的状態の相関についてより正確な背景を提供する。ヒトにとって有益である任意の治療を使用して、コンパニオンアニマルを同様に助けることができ、これは、疾患および／または生理学的状態を治療するだけでなく、その生活の質を改善することも含む。
【００４６】
一態様では、イヌモデル系を使用して複数の様式の試験を実施した。一実施形態では、複数の様式とは、系において複数の抗原を使用することを指し得る。単一抗原の研究は、効率的な免疫応答の発生についての生物学的系の十分な洞察を提供しない場合がある。例えば、前立腺癌と関連している単一抗原、例えば、前立腺性酸性ホスファターゼの同定は、免疫応答を開始させ得るが、その他の抗原の同定は、前立腺癌と戦うためのさらなる、相乗的なものでさえの免疫応答を提供する。ヒト臨床試験における複数の抗原の研究は、規制上の制約（例えば、ＦＤＡ承認）、費用、時間および／またはその他の生物学的障壁のために実現可能なものではない。これに関連して、複数の抗原の試験にとっては、イヌモデル系の使用は、イヌが前立腺癌を自発的に発生するので有用である。当業者ならば、イヌモデル系を使用して、複数の抗原、例えば、癌抗原を調べて、新規抗原を同定でき、これを標的（例えば、抗原に対する抗体、小分子など）のために使用できる。さらに、イヌモデル系の使用は、抗原が関連している、さらなる療法の基礎として利用される新規経路および／または生物学的ニッチを同定するのに役立ち得る。
【００４７】
本発明の別の態様では、複数の様式とは、１種または複数の抗原および１種または複数のアジュバントの使用を指す場合がある。用語「アジュバント」は当技術分野で周知である。その他の薬剤（例えば、薬物またはワクチン）の効果を修飾し得るが、それ自体が与えられる場合には、直接的な効果は有するとしても、ほとんど有さない、薬理作用のある物質または免疫学的物質を指すことが多い。アジュバントは、免疫系がワクチンに対してより活発に応答するよう刺激し、したがって、特定の疾患に対する増大した免疫性を提供することによって、ワクチンの効果を修飾または増強し得る免疫学的アジュバントであり得る。免疫学的アジュバントの限定されない例として、ミョウバン、フロイントの完全アジュバント、フロイントの不完全アジュバント、Ｒｉｂｉアジュバント、アルミニウム塩および免疫調節性ポリヌクレオチド（例えば、ＣｐＧ含有ポリヌクレオチド）が挙げられる。アジュバントはまた、それ自体によっては薬理学的効果をほとんどまたは全く有さないが、同時に与えられると、その他の薬物の有効性または効力を高め得る製薬アジュバントでもあり得る。この限定されない例として、カフェインがあり、これはそれ自体では、最小の鎮痛作用しか有さないが、パラセタモール（アセトアミノフェン）とともに与えられるとアジュバント効果を有し得る。アジュバントはまた、癌療法に関連して、例えば、化学療法において、さらなる療法を指す場合もある。これに関連して、アジュバント療法とは、通常、すべての検出可能な疾患が除去されているが、肉眼で発見できない疾患による再発の統計的な危険が残っている術後に施されるさらなる治療を指す。限定されない例では、乳癌の術後にアジュバント治療として放射線療法または化学療法が与えられ得る。いくつかの実施形態では、１種のアジュバントが使用される。その他の実施形態では、２種以上のアジュバントが使用される。さらにその他の実施形態では、３、４、５、６、７、８、９または１０種のアジュバントが使用される。
【００４８】
本発明の範囲内で、「リバースアジュバント（ｒｅｖｅｒｓｅ  ａｄｊｕｖａｎｔ）」の使用も考慮され、用語「アジュバント」によって包含される。リバースアジュバントは、寛容化ワクチンとともに使用される場合に、寛容化効果を有し得る（例えば、Ｈｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７５巻：６２２６〜６２３４頁、２００５年参照）。リバースアジュバントの一例として、免疫賦活性を有する傾向があるＣｐＧオリゴヌクレオチドとは対照的に、抑制効果を有するＧｐＧオリゴヌクレオチドがある。（例えば、Ｈｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７１：４９２０〜４９２６頁、２００３年参照のこと）。
【００４９】
種々の抗原およびアジュバントの組合せならびに種々の自発的に生じる疾患に対するそれらの効果は、上に論じた理由のためにヒト臨床試験において研究することは困難であった。動物モデルとしてマウスまたはラットを使用することでは、ヒトへの遺伝子のトランスレーションおよび疾患進行が、ヒトに対するイヌほど密接に類似していないので、自発的に生じる疾患のイヌモデル系を使用するほどには正確な情報は提供されない。（Ｔｓａｉら、Ｍａｍｍ．Ｇｅｎｏｍｅ、１８：４４４〜４５１頁（２００７年）。そのようなものとして、自発的に生じる疾患を調べるためのプラットフォーム技術としてのイヌモデル系の使用によって、当業者が、疾患が誘導される標準マウスモデルを使用することよりも、大きな成功の可能性を有する治療法を同定することが可能となる。
【００５０】
本明細書に開示されるイヌモデル系を使用して、種々の種類のアジュバントを研究できる。一実施形態では、自発的に生じる疾患のイヌモデル系のプラットフォーム技術を使用して、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストを介して作用するアジュバントを研究できる。種々のＴＬＲとして、それだけには限らないが、ＴＬＲ１、２、３、４、５、６、７、８および９が挙げられる。一例として、ＴＬＲを介して作用するＣｐＧ含有化合物がある。このようなアジュバントは、Ｂ型肝炎の関連で試験されてきた。研究できるアジュバントのその他の限定されない例として、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）およびＭＦ５９が挙げられる。
【００５１】
別の態様では、本明細書に記載されるプラットフォーム技術によって、当業者が、不均一な遺伝的背景に対して複数の様式の使用を検討することが可能になる。当業者ならば、遺伝的背景に種々の程度の不均一性および均一性があることは理解されよう。範囲の一方の末端では、クローニングされた動物または多数の世代の間、その遺伝的背景が次のマウスと同じであるように交配されているマウスなどの動物において均一な遺伝的背景が見られることが多い。
【００５２】
範囲のさらに先は、純血種のイヌなどの不均一な動物（例えば、クローニングされた動物よりも低い程度の均一性しか有さない）である。それらは純血種であるもの、イヌは、互いにわずかに異なる遺伝暗号を有し、しかし、それらを特定の純血種であると特徴付ける同一の形態学的特徴を保有する。イヌは、形態学的特徴（高さ、体重、形状など）に相違を示し得るが、しかし、品種内で狭い範囲内で遺伝によって受け継がれる特徴を示す点で、哺乳類種の中で独特である。例えば、純血種のチワワのイヌは、一般に、肩で互いに＋／−６インチである。Ｏｓｔｒａｎｄｅｒら、Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ６１巻：４７５〜４８０頁（１９９７年）。範囲のなおさらに先は、純血種ではなく、雑種犬であるいっそうより不均一なイヌである。一実施形態では、不均一な動物は、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスを含まない。異なる治療法が検討されるのは、不均一な遺伝的背景というこの状況に対してである。イヌの不均一な性質は、当業者が、生物学的応答が何であるかを原因から結果へ予測することを必ずしも可能にせず、複数の治療法（例えば、複数の抗原）が利用される場合には、いっそうよりそのようである。前述のものは、ネコなどのその他のコンパニオンアニマルに同様に適用できる。
【００５３】
自発的に生じる疾患モデルを使用することの利点
自発的に生じる疾患モデルの使用は、種々の態様において有益である。一態様では、免疫系の疾患モデルは、動物が疾患を有するよう誘導された疾患の動物モデルと比較すると、相対的に無傷に維持される。後者の場合には、疾患の人工的な誘導によって免疫系のバランスを狂わせ、疾患の人工的な誘導によって、免疫系（Ｔ細胞、Ｂ細胞、好中球、マクロファージ、調節性Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞などの種々の免疫細胞を含む）および免疫細胞と免疫系の種々の部門間の相互作用がかき乱される。したがって、本発明は、疾患の人工的な誘導と関連する免疫調節不全を伴わない、種々の疾患／病状ならびに複雑な生理学的状態の研究を可能にするプラットフォーム技術を提供する。これは、これらの経路または機序における新規経路、作用機序、生物学的関与物（例えば、細胞受容体または細胞種）の発見および／または同定ならびに複雑な生理学的状態を裏打ちするさらなる理解を促進する、より有意義な知見を提供する。このような複雑な生理学的状態として、それだけには限らないが、癌、自己免疫疾患、アレルギー、過敏症、神経疾患、遺伝性遺伝子障害および感染性疾患を挙げることができる。
【００５４】
本発明はまた、種々の生理学的状況および疾患と関連している１種または複数のバイオマーカーの同定のためのプラットフォーム技術の使用を包含する。いくつかの例では、バイオマーカーは、１種または複数の遺伝子またはタンパク質の有無、遺伝子の種々のアイソフォームまたは遺伝子スプライシングおよびその生成物（複数可）、一塩基多型、遺伝子発現プロファイル、プロテオミクスプロファイルまたはメタボロミクスプロファイルを指し得る。いくつかの限定されない例では、スクリーニング、ステージ分類、画像処理、診断および／または種々の療法に対する反応のモニタリングに、多重化バイオマーカーが使用される。例えば、１種または複数の遺伝子の発現の変化、メタボロームおよびエピジェネティック変化が、本発明の範囲内で考慮される。限定されない一例では、遺伝子チップでのメチル化パターンを使用して、種々の疾患／病状の正常対異常メチル化パターンを研究できる。別の限定されない例として、複数のバイオマーカー（例えば、１５〜１８種のバイオマーカー）を保有でき、一実施形態では、少量（例えば、１ｐｇ／ｍｌ）で検出可能である磁性アレイの使用がある。別の限定されない例として、数百種のバイオマーカーを同時にまたはほぼ同時に評価できるアプタマーの使用がある。当業者ならば、スクリーニング、ステージ分類、画像処理、診断および／またはモニタリングを、治療プロトコールおよび考慮されている任意の療法の改良版と組み合わせて利用できる。当業者、例えば、医師は、症状の発生を最も効果的に防ぐ、遅延する、症状を寛解させる、または疾患もしくは生理学的状態を治療するよう療法を修飾できる。
【００５５】
癌
自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルの使用は、当業者が、コンパニオンアニマルの恒久的治癒を探索することだけでなく、コンパニオンアニマルを、ヒトにおける癌（自発的に生じる癌を含む）の科学的態様を研究するためのモデルとして使用することも可能にし、これは、人類の種々の種類の癌のための治療および療法の発見につながり得る。
【００５６】
ヒトおよびコンパニオンアニマルの癌の発症率は、相当に異なる。ヒト癌がペットではあまり見られない、また比較腫瘍学が実際的ではない場合もある。他の場合には、コンパニオンアニマルにおける腫瘍はそのヒト対応物によく似ており、また、より高頻度に生じ、これによって、ヒト癌患者では稀である疾患を研究する機会が得られる場合もある。
【００５７】
イヌなどのコンパニオンアニマルは、種々の種類の自発的に生じる癌を発症する。一般的な癌として、それだけには限らないが、骨癌（例えば、骨肉腫）、リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫）、血管肉腫、その他の肉腫、乳癌、精巣癌、肥満細胞癌、鼻副鼻腔癌、膀胱癌、頭頸部癌、前立腺癌、黒色腫、白血病、脳癌、肺癌腫および軟組織癌腫が挙げられる。一部の品種は、特定の癌を、その他の品種よりも多く発症する。例えば、血管肉腫、血管に起因する侵襲性癌は、その他の品種よりもジャーマンシェパード、ゴールデンレトリーバー、ボクサーおよびイングリッシュセッターにおいてより多く見られる。一態様では、当業者は、通常、コンパニオンアニマルに適用される種々の生物学的手順が実施された場合に、癌の進行の相違を観察できる。例えば、前立腺癌の進行を、去勢されているイヌにおいて観察し、その飼い主が去勢されないように選択したイヌの前立腺癌の進行と比較できる。
【００５８】
一態様では、純血種のイヌの使用によって、より均一な遺伝的背景の研究および不均一な遺伝的背景を有する雑種のイヌとの比較が可能となる。イヌなどのコンパニオンアニマルの種々の遺伝的背景の使用によって、癌と関連している種々の抗原またはバイオマーカーの同定が可能となる。このような研究から集められ得られた情報を、薬物発見または免疫療法の標的として抗原を使用することによって、および／または画像処理技術においてバイオマーカーを使用することによってヒトの診断または療法にトランスレートできる。
【００５９】
自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルを使用して、抗癌剤の組合せの効果を調べ、相乗作用を生じる組合せを同定することができる。薬剤の組合せは、２種以上の薬剤、例えば、３、４、５、６、７、８、９または１０種の薬剤であり得る。薬剤は、同時に与えてもよく、２以上の投与で与えてもよい。各薬剤の投与量は同一であってもよく、特に、自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルの群を使用する場合には変わっていてもよく、これでは、試験される薬剤の投与量の範囲は、どの組合せが最も有効な生物学的応答をもたらすかを示し得る。
【００６０】
種々のクラスの抗癌剤を使用してよい。限定されない例として、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ポドフィロトキシン、抗体（例えば、モノクローナルまたはポリクローナル）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）またはＧｌｉｖｅｃ（登録商標））、ホルモン治療、可溶性受容体およびその他の抗悪性腫瘍薬が挙げられる。
【００６１】
アルキル化剤は、細胞中に存在する条件下で多数の求核官能基をアルキル化し得る。シスプラチンおよびカルボプラチンおよびオキサリプラチンは、アルキル化剤である。それらは、生物学的に重要な分子中のアミノ、カルボキシル、スルフヒドリルおよびホスフェート基と共有結合を形成することによって細胞機能を損なう。
【００６２】
代謝拮抗剤は、プリン（（アザチオプリン、メルカプトプリン））またはピリミジンに似ており、これらの物質が、細胞周期の「Ｓ」相の間にＤＮＡに組み込まれるのを妨げ、正常な発達および分裂を停止する。それらはまた、ＲＮＡ合成にも影響を及ぼす。
【００６３】
植物アルカロイドおよびテルペノイドは、植物に由来し、微小管機能を妨げることによって細胞分裂を阻止する。微小管は、細胞分裂にとって極めて重要なものであるので、それなしには、細胞分裂は起こり得ない。いくつかの限定されない例として、ビンカアルカロイドおよびタキサンが挙げられる。
【００６４】
ビンカアルカロイドは、チュブリン上の特定の部位と結合し、チュブリンの微小管へのアセンブリー（細胞周期のＭ相）を阻害する。ビンカアルカロイドとして、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビンおよびビンデシンが挙げられる。
【００６５】
ポドフィロトキシンは、消化に役立つと報告されており、ならびに、２種の他の細胞分裂阻害剤、エトポシドおよびテニポシドを製造するために使用される、植物由来化合物である。それらは、細胞がＧ１相（ＤＮＡ複製の開始）に入ることおよびＤＮＡの複製（Ｓ相）を妨げる。
【００６６】
群としてのタキサンは、パクリタキセルおよびドセタキセルを含む。パクリタキセルは、最初は、タキソールとして知られていた天然物であり、セイヨウイチイ（Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｙｅｗ  ｔｒｅｅ）の樹皮に由来する。ドセタキセルは、パクリタキセルの半合成類似体である。タキサンは、微小管の安定性を増強し、分裂後期の間の染色体の分離を妨げる。
【００６７】
トポイソメラーゼ阻害剤はまた、使用できる別のクラスの抗癌剤である。トポイソメラーゼは、ＤＮＡのトポロジーを維持する絶対不可欠な酵素である。Ｉ型またはＩＩ型トポイソメラーゼの阻害は、適切なＤＮＡスーパーコイル形成を混乱させることによってＤＮＡの転写および複製の両方を干渉する。いくつかのＩ型トポイソメラーゼ阻害剤として、カンプトテシン：イリノテカンおよびトポテカンが挙げられる。ＩＩ型阻害剤の例として、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。これらは、エピポドフィロトキシンの半合成誘導体、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍａｙａｐｐｌｅ（ポドフィルム（Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｐｅｌｔａｔｕｍ））の根中に天然に存在するアルカロイドである。
【００６８】
抗悪性腫瘍薬として、免疫抑制剤ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イフォスファミドが挙げられる。抗悪性腫瘍薬化合物は、通常、細胞のＤＮＡを化学的に修飾することによって働く。
【００６９】
可溶性受容体は、増殖因子、特に、癌と関連している増殖因子と結合することが分かっている受容体の細胞外部分を含み得る。限定されない例として、Ａｘｌ、ＶＥＧＦおよびＥＧＦがある。可溶性受容体は、組換え／合成または天然に存在する受容体（例えば、精製されたまたは濃縮された調製物）であり得る。また、受容体の細胞外部分を、半減期およびその他の所望の薬物動態を促進するための部分と融合させ、融合タンパク質を作製できる。
【００７０】
抗原の場合には、本発明は、癌と関連している１種または複数の抗原の研究を考慮する。一実施形態では、プラットフォーム技術とは、複数の（すなわち、２種以上の）抗原を研究するための、自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルの使用を指す。その他の実施形態では、自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルにおいて、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９または１０種の抗原をモニタリングする。その他の実施形態では、自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルにおいて、少なくとも約１０種以上の抗原をモニタリングする。一実施形態では、癌抗原は、多形性膠芽腫抗原ではない。
【００７１】
骨肉腫
骨肉腫は、比較的稀な形態の癌であり、不均衡な百分率の小児を苦しめ、４００人の＜２０歳を含めて年に９００人の新規患者という年間発症率である。稀ではあるが、１５歳未満の小児では６番目の癌の形態であり、すべての小児癌の約３％である。治療の現在の標準は、化学療法（ロイコボリンレスキュー、動脈内シスプラチン、アドリアマイシン、イフォスファミド、エトポシドおよびムラミルトリペプチドを伴う高用量メトトレキサート）と組み合わせた、切断術または患肢温存整形外科手術である。生存率は、唯一の治療選択肢が切断術であり、診断された患者のうち５〜２０％しか２年を越えて生存しなかった１９６０年代から向上したが、化学療法による向上にも関わらず、骨肉腫の生存率はまだ、小児癌の中で最も低いもの中にある。非転移性骨肉腫患者の現在の５年生存率は、＞７０％であるが、転移のある患者については、５年生存率は、およそ３０％である。この若い集団のための治療選択肢の改善に向けた進歩は、その稀な発症率およびその結果として起こる臨床研究のための患者の自然増加における課題によって遅くなっている。
【００７２】
骨肉腫は、ヒト発症率とは対照的に、イヌの大型品種（＞６０ポンド）では、特に、グレートデーン、ウルフハウンドおよびロットワイラーでは比較的一般的な癌である。骨肉腫の発症率は、すべてのイヌの癌のうち３〜４％であり、北米では年に最大１０，０００頭のイヌを苦しめている。ヒトおよびイヌの骨肉腫は、解剖学的分布および転移の共通の特徴を共有する。両種において、症例の＞７５％が、長骨（遠位橈骨＞近位上腕骨；遠位大腿骨＞脛骨）において生じ、圧倒的に雄において（２：１）生じる。イヌにおける高い転移率（９０％）は、ヒトにおけるもの（８０％）と遜色なく、転移部位は、肺＞骨＞軟組織という同様の序列を有する。さらに、原発性骨肉腫および転移は、ヒトおよびイヌ患者の間で区別できない。ヒト同様、イヌも、切断術処置後のシスプラチン、ドキソルビシンまたはカルボプラチンを用いる化学療法治療に反応し、平均生存期間は９〜１１ヶ月であり、切断術単独後の３〜４ヶ月という生存期間の中央値が大幅に改善される。共有される組織学、転移パターンおよび化学療法反応性を考えると、イヌ骨肉腫は、代替療法を試験するための優れたモデルを提供する。発症率が高く、より迅速に進行するので、イヌにおける臨床試験が採用され、より迅速に完了され得、これは、ヒトおよびイヌ患者両方に新規治療戦略を伝える。
【００７３】
軟組織肉腫
軟組織肉腫は、間葉組織（例えば、結合組織、線維組織、筋肉）に由来する腫瘍の多様な群である。それらは、年間の新規癌症例の１％未満を占め、２００６年には、米国で、およそ９，５００の新規症例があり、高齢の患者（＞５０歳）においてより多く見られるが、一部のサブタイプ（例えば、横紋筋肉腫、骨格筋の肉腫）は、小児および若者に、より多く見られる。一クラスとしての軟組織肉腫は、コンパニオンアニマルにおいてより多く見られ、イヌではすべての皮下癌の１５％、ネコでは７％に相当する。血管肉腫を除いて、このクラスの腫瘍は、局所的に侵襲性であるが、稀にしか転移しない。それにも関わらず、ヒトおよびコンパニオンアニマル両方の軟組織肉腫は、化学療法に対して中程度にしか反応しない。
【００７４】
それらは、同一起源のヒト腫瘍と似ており、比較的遅く検出されるので、分析のために大きな腫瘍の大きさを提供する。イヌ軟組織肉腫は、治療戦略を最適化するためのモデルとして役立ってきた。局所制御を高めることを目的としたプロトコール、特に、低体温法と併用されることが多い補助放射線療法を使用するものが、ヒト患者のための新規治療プロトコールを導いてきた。熱が放射線療法または化学療法の有効性を高め得るという知見によって、限局化された温熱療法への興味が刺激された。局所および全身温熱療法研究によって、血管作用性薬などの温熱療法を誘導するための薬理学的アプローチが試験された。イヌにおける研究はまた、化学療法薬の薬物動態に対する温熱療法の効果のモデルも作り、低酸素症のバイオマーカーおよび予測的画像処理技術の開発を助けてきた。コンパニオンアニマルにおける軟組織肉腫はまた、新規化学療法製剤を試験するためのモデルとして役立ってきた。例えば、生分解性ポリマー中の持続放出性シスプラチンの有効性が、イヌ軟組織肉腫において試験され、リポソームにカプセル化されたドキソルビシン（ドキシル）の有効性が、ワクチン関連ネコ肉腫において試験された。
【００７５】
血管肉腫
血管肉腫（ＨＳＡ）は、迅速な、広範な転移によって特徴付けられる血管内皮細胞の腫瘍である。ヒトでは稀であり、すべての腫瘍の１％未満しか占めないが、すべてのイヌの悪性腫瘍の５〜７％を占める。イヌの生涯の癌のリスクを３０〜５０％の範囲に仮定すれば、この癌は、米国では、推定７２００万頭のペットのイヌのうち１５０〜２５０万頭に影響を及ぼし得る。ＨＳＡは、ほとんどの場合、脾臓で始まるが、肝臓、心臓の右心房および皮膚においても形成し得る。それらは、中年のイヌ（＞６歳）において生じる傾向があり、バーネーズマウンテンドッグ、ボクサー、フラットコテッドレトリーバー、ジャーマンシェパード、ゴールデンレトリーバー、ポヂュギースウォータードッグおよびスカイテリアにおいて高い有病率であり、１つの調査によれば、ゴールデンレトリーバーにおけるＨＳＡの発症率は、ほぼ５頭に１頭である。イヌＨＳＡは、ヒトにおける血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）に匹敵すると思われ、また、はるかに高い頻度で生じるので、臨床試験の重要な代替を提供し得る。化学療法は、通常、ドキソルビシンおよびシクロホスファミド＋／−ビンクリスチンの組合せは、ＨＳＡの最もよくある治療的アプローチであるが、生存期間中央値は、わずか１４５〜１８０日である。
【００７６】
乳癌
乳癌およびイヌ乳腺腫瘍は、いくつかの疫学的および生理学的類似性を有する。乳癌は、北米の女性における癌の主な原因であり、すべての癌の３０％近くを占め、米国女性の乳癌の生涯のリスクは、１２％である。乳腺腫瘍（ＭＧＴ）は、雌のイヌではすべての腫瘍の５２％を占め、すべての卵巣除去されていない（ｕｎｓｐｒａｙｅｄ）イヌの２６％で生じる。乳癌およびＭＧＴの間には、相当な遺伝的および組織学的類似性があるが、遺伝子発現および薬物反応においては重要な相違もあり、これが種間の治療戦略をトランスレートする取り組みを複雑にする。ＭＧＴは、ホルモン依存性であり、これらの腫瘍の５０〜６０％は、エストロゲン受容体またはプロゲステロン受容体を発現し、卵巣子宮摘出術（卵巣除去）は、ＭＧＴを発症するリスクを０．５％に低下させる。ヒト乳癌もまた、ホルモン依存性であり、エストロゲンまたはプロゲステロン受容体に影響を及ぼす薬物で治療されることが多いが、エストロゲン受容体アンタゴニストタモキシフェンは、イヌでは実証可能な抗腫瘍活性を有さない。遺伝子レベルでは類似性も相違もある。癌遺伝子ｃ−ｅｒｂＢ−２の発現は、ヒト乳癌では、より侵襲性の悪性の表現型と相関する。同様に、ｃ−ｅｒｂＢ−２は、悪性のイヌ乳房腫瘍の７４％で過剰発現されるのに、良性腫瘍では０％で過剰発現されている。腫瘍抑制遺伝子ＢＲＣＡ１／ＢＲＣＡ２の突然変異は、ヒト乳癌のリスクの増大と関連している。一部のＭＧＴにおける、ＢＲＣＡ１のスプライシング変異体の最近の報告はあるが、ＢＲＣＡ１の発現および変異体は、イヌ乳腺腫瘍では、あまり立証されておらず、ＭＧＴの転移におけるＢＲＣＡ２およびＲＡＤ５１（ＢＲＣＡ１およびＢＲＣＡ２と相互作用する）の上方制御は、これらのイヌ腫瘍における遺伝子発現のより詳しい分析の必要性を示す。ホルモン治療と同様に、ＭＧＴの治療への化学療法薬の適用は不確かである。いくつかの概説によれば、イヌＭＧＴでは、化学療法薬なしで、一貫した効果が提供されているが、ドキソルビシンに対するいくつかの部分的な反応が立証されており、シスプラチンが推奨されることもある。多数の類似性にも関わらず、イヌＭＧＴが、ヒト乳癌の関連治療モデルであるかどうかは不明確なままである。遺伝子発現のさらなる研究によって、ヒト乳癌およびＭＧＴの共通の標的が同定され、イヌ腫瘍の治療のためのヒト化学療法の適用が導かれ得る。
【００７７】
黒色腫
皮膚癌は、米国ではすべての癌のうち最もよく見られるものである。黒色腫は、比較的珍しい形態であるが、皮膚癌の症例の５％未満を占め、皮膚癌による死亡の７５％に相当する。新規症例の割合は、過去８年にわたって比較的安定しており、２００９年に６８，７２０人の新規症例があり、その結果として、８，６５０人の死亡があったと推定された。世界保健機構のレポートによれば、１年に世界中でおよそ４８，０００人の黒色腫に関連する死亡がある。黒色腫の全リスクは、民族性によって変わり、白色人種の２％からヒスパニック系アメリカ人の０．５％およびアフリカ系アメリカ人における０．１％の範囲である。現在の治療選択肢として、外科的切除および化学療法（ダカルバジン、カルムスチン、シスプラチン、タモキシフェン、ビンブラスチン、テモゾロミドおよびパクリタキセルを用いる単一または併用治療を含む）が挙げられる。黒色腫は、イヌにおいて４番目に最もよく見られる癌であり、口腔に生じることが多いが、指、皮膚および眼も起源とする。口腔黒色腫は、伝えられるところでは、ダックスフンド、ゴールデンレトリーバー、プードルおよびスコティッシュテリアにおいて最もよく観察される。ヒトにおける進行性黒色腫と同様に、イヌにおける黒色腫は、通常、化学療法および放射線療法に対して耐性であり、侵襲性転移が、治療失敗および死亡の根本原因である。
【００７８】
イヌおよびヒト黒色腫は、生理学および治療に対する反応の共通の特徴を共有するので、イヌにおける臨床試験は、ヒト黒色腫のための新規治療戦略への重要なトランスレーショナルな架け橋（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｂｒｉｄｇｅ）を提供し得る。免疫療法アプローチには、自己腫瘍細胞ワクチン（修飾されていない、または免疫賦活性サイトカインおよび／またはメラノソーム分化抗原をトランスフェクトされた）、免疫賦活性サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ）をトランスフェクトされた同種異系の腫瘍ワクチン、自然免疫刺激剤（例えば、Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥ）およびＤＮＡワクチン（例えば、Ｆａｓリガンド、ＩＬ−２またはＧＭ−ＣＳＦをコードするプラスミド）が含まれていた。イヌ黒色腫におけるＬ−ＭＴＰ−ＰＥの無作為化臨床試験によって、ステージＩ黒色腫において８０％長期生存の利益が示されたが、より進行した（ステージＩＩおよびＩＩＩ）黒色腫では利益はなかった。第Ｉ相臨床試験では、ＧＭ−ＣＳＦをトランスフェクトされた自己黒色腫細胞を用いるワクチン接種は限局性の炎症およびいくつかの腫瘍破壊の組織学的エビデンスを誘導した。その他のワクチンアプローチでは、プラスミドＤＮＡを黒色腫中に直接注入してきた。ステージＩＩ〜ＩＶの進行した悪性黒色腫を有する９頭のイヌの第Ｉ相臨床試験では、チロシナーゼを発現する腫瘍細胞に対する細胞性免疫を誘導しようとしてメラノソーム分化抗原チロシナーゼをコードするＤＮＡを注入した。この免疫療法は、処理されたイヌの３３％において抗体応答を誘導し、生存期間中央値を３８９日に延長し、従来の療法によってもたらされる生存を１〜５ヶ月、大幅に長期化した。
【００７９】
非ホジキンリンパ腫
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、癌による死亡の６番目の主な原因であり、米国では、３〜４％の発症率があり、２００９年には、米国で推定６６，０００人の新規症例をもたらし、化学療法で治療された患者の５年生存率は５０〜６０％である。新規症例の９５％を越えるものが成人で生じ、発症の平均年齢は６０歳である。ＮＨＬはまた、イヌにおいても比較的よく見られ、その発症率は、２５／１００，０００頭であり、すべての悪性腫瘍の５％、すべての造血悪性腫瘍の８３％を占める。イヌＮＨＬ症例のおよそ７０〜８０％は、Ｂリンパ球起源のものであるが、より稀なＴ細胞リンパ腫は、大きく不良な予後と関連している。ＮＨＬの最高の有病率は、ジャーマンシェパード、ボクサー、プードル、バセットハウンドおよびセントバーナードで生じる。ほとんどのイヌの症例は、ステージＩＩＩ〜ＩＶのヒトＮＨＬと似ており、治療を受けなければ、疾患進行は比較的迅速であり、その結果、診断後４〜６週以内に死亡する。組織学的類似性に加え、イヌおよびヒトＮＨＬは、ドキソルビシン、シクロホスファミドおよびビンカアルカロイドに対する反応性を含め、類似の化学療法薬感受性を共有する。ヒト臨床診療と同様に、イヌＮＨＬのほとんどの現在の治療プロトコールは、複数の、交互の組合せの薬物を使用し、その結果、報告される反応率は、８６〜９１％の範囲である。
【００８０】
ネコでは、ＮＨＩは、１２５／１００，０００の発症率を有し、最もよく見られる癌であり、すべてのネコ腫瘍の１／３近くを含む。イヌＮＨＬとは対照的に、ネコＮＨＬのかなりの割合が、Ｔリンパ球系のものであり、レトロウイルス、ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）による形質転換の結果である。イヌと同様に、ネコＮＨＬは、極めて化学物質反応性であり、連続併用化学療法は、６０〜７０％の緩解率に達する。ヒト腫瘍とのその類似性に基づいて、イヌおよびネコＮＨＬの両方が、治療アプローチを最適化するための代替としてとして役立っている  （実施例参照のこと）。
【００８１】
膀胱癌
膀胱癌は、米国では、男性では４番目の最もよく見られる癌であり、女性では９番目に最もよく見られる癌である。発症率の相違、年間５０，０００人の男性および１６，０００人の女性は、膀胱癌の発生におけるアンドロゲン受容体の主要な役割と関連している可能性がある。膀胱癌の大部分は、膀胱の内膜の細胞を起源とする移行性上皮癌（９０％）であり、残りの１０％は、扁平上皮癌、腺癌、肉腫および小細胞癌を含む。移行性上皮癌（ＴＣＣ）はまた、イヌの膀胱癌の最もよく見られる形態であり、組織学、生物学的挙動および療法に対する反応において浸潤性ヒトＴＣＣと酷似している。その他の癌と同様に、品種と関連して、感受性に変動があり、例えば、スコティッシュテリアは、１８倍高いＴＣＣを発症するリスクを有する。
【００８２】
膀胱癌患者のための現在の治療選択肢として、手術、放射線療法および化学療法が挙げられる。イヌＴＣＣは、これらのアプローチに対して同様に反応性であり、新規治療の開発および最適化のための有用なモデルであった。イヌＴＣＣは、白金およびアントラサイクリンベースのプロトコールに対して中程度の反応を示し、目的反応率は約３０％であり、ＭＳＴは４〜８ヶ月である。シクロオキシゲナーゼ（ｃｙｃｌｏｏｘｙｅｎａｓｅ）阻害薬ピロキシカムを用いる治療は、１８％の目的反応率もたらし、これは、容認できない腎毒性という代償を払って、シスプラチンの添加によってさらに向上させることはできる。イヌＴＣＣは、光線力学的治療の前臨床試験の有用なモデルとわかっている。
【００８３】
本発明はまた、癌と関連している、いくつかの場合には、癌の遺伝子発現プロファイル、プロテオミクスプロファイルまたはメタボロミクスプロファイルと関連している１種または複数のバイオマーカー、を同定するためのプラットフォーム技術の使用を包含する。本発明の一態様では、多重化バイオマーカーためにプラットフォーム技術を使用できる。限定されない一例では、遺伝子チップでのメチル化パターンを使用して、種々の癌の正常対異常メチル化パターンを研究できる。別の限定されない例として、複数のバイオマーカー（例えば、１５〜１８種のバイオマーカー）を保有でき、一実施形態では、少量（例えば、１ｐｇ／ｍｌ）で検出可能である磁性アレイの使用がある。別の限定されない例として、数百種のバイオマーカーを同時にまたはほぼ同時に評価できるアプタマーの使用がある。
【００８４】
いくつかの癌の症例では、腫瘍随伴症候群が観察される。一態様では、腫瘍随伴症候群は、身体における癌の存在の結果であるが、癌細胞の局所的な存在によるものではない疾患または症状である。これらの現象は、腫瘍細胞によって、または腫瘍に対する免疫応答によって排出された体液性因子によって（ホルモンまたはサイトカインによって）媒介され得る。腫瘍随伴症候群の症状は、悪性の診断のかなり前に示すことがある。腫瘍随伴症候群は、４つの主なカテゴリー：内分泌、神経学的、粘膜皮膚および血液学的腫瘍随伴症候群に分けることができる。別の態様では、腫瘍随伴症候群は、癌性腫瘍または「新生物」に対する異常な免疫系反応によって引き起こされる稀な障害の群であり得る。理論に束縛されるものではないが、一態様では、腫瘍随伴症候群は、抗癌抗体または白血球（例えば、Ｔ細胞）が、神経系中の正常な細胞を間違って攻撃する場合に起こり得る。したがって、一実施形態では、腫瘍随伴症候群をより効果的に研究できるよう、免疫系は無傷で残される。
【００８５】
本発明の別の態様では、自発的に生じる癌を有するコンパニオンアニマルの使用は、より重篤な状態へ進行するよう誘導されてない形態である癌の研究を可能にする。一実施形態では、研究されている癌は、前転移である。抗癌薬の使用は、炎症を引き起こす場合があり、炎症が、癌を、前転移癌から転移癌に進行させる場合がある。自発的に生じる疾患の動物モデルを使用することによって、このような癌、調べられている癌は、そうでなければ、化学療法的および／または放射線療法的介入がなければ進行していなかった形態に進行するように、さらに誘導されることはない。
【００８６】
このように、動物の免疫系は、自然の状態にできる限り近く維持される。これは、免疫系の生物学的または生理学的状況の正確な研究に役立ち、したがって、より有意義な科学的データの作成を可能にする。この科学的データは、次いで、抗癌治療薬の同定のために使用できる。
【００８７】
自己免疫および神経変性性疾患および／または障害
コンパニオンアニマルにおいて観察され、トランスレーショナル医療において使用するために活用することができる別のクラスの自発的に生じる疾患として、自己免疫疾患のクラスがある。コンパニオンアニマルにおいて観察され、ヒトにおいて使用するために活用することができる別のクラスの自発的に生じる疾患として、以下に詳述される神経変性性の（ｎｅｕｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ）および神経学的疾患および／または障害がある。自己免疫疾患として、それだけには限らないが、糖尿病（例えば、若年性糖尿病、尋常性天疱瘡、重症筋無力症、自己免疫性溶血性貧血、関節リウマチ、多発性関節炎、多発性筋炎、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、円板状紅斑性狼瘡、心筋症（例えば、拡張型心筋症）、ナルコレプシーおよび血小板減少症が挙げられる。
【００８８】
本明細書に記載されるプラットフォーム技術を使用して、種々の自己免疫疾患と関連している１種または複数の新規自己抗原を同定できる。本発明の一態様では、複数の抗原および／または自己免疫バイオマーカーは、自発的に生じる自己免疫疾患を有するコンパニオンアニマルを使用して評価される。これらの自己抗原および／または自己免疫バイオマーカーは、ヒトにおいて自己免疫疾患に対処するための療法およびその他の治療法の標的であり得る。
【００８９】
イヌおよびネコ主要組織適合複合体
ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体と呼ばれる、ヒト主要組織適合複合体（ＭＨＣ）は、３．６ＭｂストレッチのＤＮＡ中に、免疫機能分子の＞４０種のコーディングを含む＞２００種の遺伝子座を含有する。ＨＬＡクラスＩ分子（Ａ、Ｂ、Ｃ）は、内因性ペプチドと結合し、細胞内病原体およびその他の正常な細胞機能の混乱のサーベイランスのために、それらをＣＤ８Ｔ細胞に提示する。ＨＬＡクラスＩＩ分子（ＤＲ、ＤＰ、ＤＱ）は、特定の細胞（例えば、マクロファージ、樹状細胞）中で処理された外因性ペプチドと結合し、細胞外病原体のサーベイランスのためにそれらをＣＤ４Ｔ細胞に提示する。多数のＨＬＡ遺伝子が、高レベルの対立遺伝子多型を有し、これによってヒト集団が、潜在的病原体に由来する広範なペプチドと結合することが可能になる。ＨＬＡ分子はまた、自己タンパク質に由来するペプチドとも結合し、ＨＬＡ−自己ペプチドの組合せに対するこれらのＴ細胞反応性は、通常、初期発生の間に排除され、その結果、自己に対して耐性となる。耐性が機能停止すると、活性化されたＴ細胞および自己抗体が自己タンパク質およびそれを発現する組織を攻撃し、自己免疫疾患を引き起こす。より多くの疾患が、任意のその他のゲノム領域よりもＨＬＡと関連しており、特定の自己免疫疾患は、特定のＨＬＡ対立遺伝子と関連している。自己免疫疾患の病因論は未知であるが、ＨＬＡ遺伝子は、通常、最高の遺伝子リスク因子である。広範な自己免疫疾患に対する感受性および耐性は、特定のＨＬＡクラスＩおよびＩＩ対立遺伝子と相関しており、これらの関係は、自己免疫疾患間で異なる。ＨＬＡ対立遺伝子の研究は、自己免疫疾患の理解および治療戦略の開発を支援している。
【００９０】
イヌでは、ＨＬＡファミリーの遺伝子に対応するものは、イヌ白血球抗原（ＤＬＡ）領域と呼ばれる。血統の明らかなイヌ品種においてＤＬＡ遺伝子の特徴を分析することによって、特定のヒト民族および単離された遺伝的集団のように、特定の自己免疫障害と強い相関を示す明確な亜集団が提供される。イヌゲノムのマッピングは、ヒトおよびマウスゲノムに遅れを取っているが、過去１０年では精密な調査が漸増した。イヌ古典的および拡張ＭＨＣクラスＩＩ領域中の７１１，５２１ｂｐの分析によって、機能的に発現されると予測される２９種を含む４５種の遺伝子座が示された。２００５年には、２５種のＡＫＣ登録されたイヌ品種に相当する３６０頭のイヌを分類することによって、品種にわたる広範なＤＬＡクラスＩＩ対立遺伝子多様性を同定し、試験された２５品種間で、３１／６１種の公開されたＤＬＡ−ＤＲＢ１対立遺伝子、１１／１８種の公開されたＤＬＡ−ＤＱＡ１対立遺伝子および３１／４７種の公開されたＤＬＡ−ＤＱＢ１対立遺伝子が同定された。品種間の対立遺伝子の多様性とは対照的に、個々の品種内では、ＤＬＡクラスＩＩ遺伝子における対立遺伝子の多様性は非常に限られている。ＤＬＡ対立遺伝子は、多数の品種によって共有されるものもあれば、単一の品種または小さい関連セットの品種に特有であるものもある。例えば、同定された３１種のＤＲＢ１対立遺伝子のうち１７種は、単一の品種のみで見られ、ＤＬＡ−ＤＲＢ１＊００１０１（１６品種）およびＤＬＡ−ＤＲＢ１＊０１５０１（１９品種）を含めた７種の対立遺伝子のみが、＝７種の品種によって共有されていた。ＤＬＡ−ＤＱＡ１＊００１０１およびＤＬＡ−ＤＱＡ１＊００６０１対立遺伝子もまた、多数の品種によって共有されていた。同様に、ＤＬＡ−ＤＱＢ１＊００２０１およびＤＬＡ−ＤＱＢ１＊０２３０１も多数の品種で見られ、それぞれ、１７種および１８種の品種によって共有されていた。個々の血統の明らかなイヌでは、ＨＬＡ対立遺伝子でのホモ接合性は一般的であり、試験したイヌの４０％が、ＤＬＡ−ＤＲＢ１でホモ接合性であり、５２％がＤＬＡ−ＤＱＡ１でホモ接合性であり、４４％が、ＤＬＡ−ＤＱＢ１でホモ接合性であった。北米および欧州の純血種のイヌは、同様の頻度のＨＬＡ対立遺伝子を有しており、創始者効果と一致していたが、北米の品種は、北米で確立された時点でいくつかのＤＬＡクラスＩＩ多様性を失っていた場合もあった。その他のイヌ集団においてＨＬＡ遺伝子を配列決定することによって、ハイイロオオカミと共有される対立遺伝子を含むさらなる多様性が示された。遺伝子研究がより精緻になったので、以下に論じられるように、自己免疫疾患と関連している特定のＤＬＡ対立遺伝子のますます増える例が実証されてきた。
【００９１】
本発明の一態様では、自己抗原は、以下の糖尿病抗原：ＧＡＤ６５、全長ＩＡ−２、膜近傍ドメイン（ＩＡ２のアミノ酸６０５〜６８２）のうち１種または複数を含まない。本発明の別の態様では、自己抗原は、以下の拡張型心筋症自己抗原：ミオシン重鎖、アルファ心筋アクチン、ミトコンドリアのアコニット酸ヒドラターゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）および脳グリコーゲンホスホリラーゼ（ＧＰＢＢ）のうち１種または複数を含まない。
【００９２】
神経学的および神経筋障害
炎症性筋疾患（ＩＭ）
炎症性筋疾患は、慢性筋肉炎症によって特徴付けられる筋肉疾患の群であり、筋炎および筋力低下と呼ばれることもある。炎症性筋疾患の３種の主な種類として、多発性筋炎、皮膚筋炎および封入体筋炎がある。多発性筋炎は、骨格筋に影響を及ぼし、１８歳未満で発症することは稀であり、患者の症例の大部分は、３１〜６１歳の間である。進行性の筋力低下は、歩行困難、階段上り困難、嚥下困難、発話困難を引き起こす場合があり、頭上の対象に達する。皮膚筋炎（Ｄｅｒｍａｔｏｍｙｓｏｔｉｓ）は、進行性の筋力低下に先行するか、それを伴う皮膚の発疹である。多発性筋炎とは異なり、乳房、肺または腸の腫瘍を伴い得る。皮膚筋炎の一部の症例は、皮下または筋肉内にカルシウム沈着を含み、石灰沈着症と呼ばれる。封入体筋炎は多発性筋炎と似ているが、発症年齢はより早く、最初に、小児の年齢２〜１５歳で現れる。症状として、近位筋力低下および炎症、浮腫、筋肉痛および腹痛、発熱、拘縮（関節の周囲の短縮した筋肉または腱）および嚥下困難および呼吸困難が挙げられる。封入体筋炎は、多発性筋炎および皮膚筋炎とは異なり、男性においてより多く見られる。これらの状態の診断は、症状および病歴に基づき、特定の筋肉酵素（例えば、クレアチンキナーゼ）および自己抗体のレベルの上昇、筋電図検査、超音波、ＭＲＩおよび生検によって確認される。ＩＭの病因論は未知であるが、ＨＬＡの関連性および最近発見された自己抗体は、自己免疫起源を示す。弧発性封入体筋炎は、ＨＬＡ−ＤＲ３（具体的には、ＤＲＢ１＊０３０１）および先祖ハプロタイプＨＬＡ−Ａ１、Ｂ８、ＤＲ３のその他の成分と関連付けられている。最近のエビデンスによって、特発性ＩＭの症例の約半分における特定のタンパク質に対する自己抗体の検出が、患者のサブセットおよび臨床成績と相関することが示唆されている。例えば、若年性皮膚筋炎を有する患者の２３％が、検出可能な抗ｐ１４０自己抗体を有する。アミノアシル−トランスファーＲＮＡシンセターゼ、抗シグナル認識粒子およびＭｉ−２に対する自己抗体が、ＩＭ患者の他のサブセットにおいて検出されている。多発性筋炎および皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｔｉｔｉｓ）は、まず高用量プレドニゾンまたはその他の副腎皮質ステロイドを用いて治療され、プレドニゾンに無応答性の患者は、炎症を低減するためにアザチオプリンおよびメトトレキサートなどの一般的な免疫抑制薬を投与される。その他の治療として、静脈内免疫グロブリン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミドおよびタクロリムスを挙げることができる。封入体筋炎は、副腎皮質ステロイドおよび免疫抑制薬に対して、通常、無応答性であるので、それを治療するための標準レジメンはない。
【００９３】
イヌもまた、炎症性筋疾患を発症し、その病理および治療への調査は、ヒトにおける治療戦略を導いている。咀嚼筋筋炎（ＭＭＭ）、咀嚼を制御する筋肉に影響を及ぼす炎症性疾患は、イヌにおいて最もよく見られる炎症性筋疾患である。この疾患は、ジャーマンシェパードおよびキャバリアキングチャールズスパニエルをはじめとする大型品種のイヌを主に苦しめる。類似の疾患は、一部のゴールデンレトリーバーの眼の筋肉に影響を及ぼす。プレドニゾンなどの副腎皮質ステロイドが、ＭＭＭの主な治療であり、最大４〜６ヶ月、漸減する用量を用いる。多発性筋炎の症例はまた、抗炎症および免疫抑制戦略として副腎皮質ステロイドを用いて治療され、不応性の症例には、シトキサンおよびイムランへと拡大する。ＭＭＭは、顎の筋肉中の２Ｍの線維、細菌の表面で見られるタンパク質と似ているが、身体中のどこにもない線維の種類によって特徴付けられる。５３頭のＭＭＭを有するイヌ、多発性筋炎を有する３２頭および両方を有する４頭のイヌの研究によって、両方の炎症性筋疾患が、筋肉繊維破壊を開始し、ミオシンに対する自己抗体の産生につながるＣＤ８＋媒介性自己免疫疾患であることが示唆されている。イヌＭＭＭのその他の研究によって、咀嚼筋線維内でのみ発現され、ヒト筋肉においても発現される、咀嚼ミオシン結合タンパク質Ｃと名づけられたミオシン結合タンパク質Ｃファミリーの新規メンバーに対する自己抗体が同定された。イヌ炎症性筋疾患における筋肉特異的自己抗原の発見は、ヒトミオパチーにおける対応する標的の探索を導き得る。
【００９４】
重症筋無力症（ＭＧ）
重症筋無力症は、比較的稀であり、推定有病率は１００万人あたり２００〜４００人の症例であり、米国にはおよそ３６，０００〜６０，０００の症例がある（１４、１５）。ＭＧは、神経筋接合部（ＮＭＪ）の筋肉側の欠陥によって引き起こされ、最適以下のシグナル伝達および筋力低下をもたらす。正常な筋肉では、神経インパルスが、アセチルコリンを放出し、それがＮＭＪを超えて移動し、筋肉上のアセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）と結合し、ＡＣｈＲサブユニットによって形成されるイオンチャネルを開け、ナトリウムイオン流動、膜の脱分極および筋肉収縮を引き起こす。先天性ＭＧの極めて稀な症例は、ＡＣｈＲサブユニットの１つにおける機能的突然変異によって引き起こされる。後天性ＭＧは、ＮＭＪの筋肉側のタンパク質に対する免疫応答によって特徴付けられる、未知の病因論の自己免疫障害である。８０〜９０％の症例では、患者は、ＡＣｈＲに対する抗体を発生させ、これが、ＮＭＪで機能的受容体の密度を低下させ、シナプス後膜に補体媒介性損傷を引き起こし、１０〜２０％の自己免疫ＭＧ患者は、抗ＡＣｈＲ抗体について血清陰性であり、代わりに、筋肉特異的キナーゼ（ＭｕＳＫ）またはリアノジン受容体（ＲｙＲ）などのその他のＮＭＪ成分に対する抗体を有する。ＭＧは、眼瞼下垂（ｄｒｏｏｐｉｎｇ  ｅｙｅｌｉｄｓ）（眼瞼下垂（ｐｔｏｓｉｓ））および複視（ｄｏｕｂｌｅ  ｖｉｓｉｏｎ）（複視（ｄｉｐｌｏｐｉａ））をはじめとする症状を有し、眼の筋肉に限定されている場合もあり、または肢、横隔膜、中咽頭およびその他の筋肉群に拡張し、付随する歩行困難、嚥下困難および補助換気を必要とし得る呼吸困難を伴う場合もある。ＭＧは、一般に、ネオスチグミンまたはピリドスチグミン、ＮＭＪにおけるアセチルコリンの長期の存在を可能にし、ＮＭＪで、アセチルコリンが限定されたＡＣｈＲと結合できるアセチルコリンエステラーゼ（ａｃｅｔｙｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ）の阻害剤を用いて治療される。いくつかの場合には、自己免疫応答を制御するために、プレドニゾン、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチルまたはアザチオプリンなどの免疫抑制薬をアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に加える。胸腺摘除術、胸腺の外科的除去は、胸腺腫を有するＭＧ患者の１０〜１５％のでは症状を低減し、その他のＭＧ患者にも同様に利益になり得るが、利益は、術後２年〜５年までは生じない場合もある。
【００９５】
ＭＧは、最もよく見られるイヌの神経筋障害である可能性が高い。ヒト版と同様に、イヌのＭＧ症状として、顔面筋および外眼筋の脱力ならびに運動に伴い悪化する肢の脱力が挙げられる。その他の症状として、嚥下困難、拡張した食道（巨大食道）、緊張喪失および食物の胃への輸送困難および誤嚥性肺炎につながり得る逆流を挙げることができる。ヒト筋無力症と同様に、イヌにおいてＭＧを確認するために利用可能ないくつかの診断検査がある。診断は、血清におけるＡＣｈＲに対する血清抗体の検出に基づくことが多く、この検査はカリフォルニア大学サンディエゴ校のＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙを介して入手可能である。その他の診断検査として、筋肉生検におけるＡＣｈＲレベルの低下、筋電図検査、巨大食道について調べるためのＸ線および短時間作用型コリンエステラーゼ阻害薬、塩化エドロホニウム（テンシロン検査）の投与後の臨床症状の一時的改善が挙げられる。ＭＧと診断されたイヌの９０％を超えるものが、ＡＣｈＲ抗体について血清陽性であるヒトＭＧ患者の頻度に匹敵する、検出可能な抗ＡＣｈＲ血清力価を有する。これらのヒト患者では、また、精製ＡＣｈＲおよびアジュバントを用いる免疫化によって誘導されたＭＧの動物モデルでは、これらのＡＣｈＲ抗体の高い百分率が、ＡＣｈＲアルファサブユニットのアミノ酸残基６１〜７６によって形成されるコンホメーショナルエピトープ、主要免疫原性領域（ＭＩＲ）と呼ばれる領域と結合する。同様に、イヌのＭＧでは、抗ＡＣｈＲ抗体の６８％が、ＭＩＲと結合する。その他の類似性として、限局性ＭＧと呼ばれる、一部のヒトＭＧ患者における外眼筋への制限と似ている一部のイヌにおける限定されたセットの筋肉の脱力が挙げられる。ヒトＭＧと同様に、イヌの後天性ＭＧの症例のサブセットは、胸腺腫、胸腺の頭側縦隔の腫瘍を含む。胸腺摘除術は、胸腺腫を有するにしても有さないにしても、ヒトＭＧ患者のための一般的な治療であるが、筋無力症のイヌおよびネコの治療にとっては一般的な診療ではない。
【００９６】
イヌにおいて後天性ＭＧを発症する平均年齢は、５歳である。１９９１年〜１９９５年の間に記録されたイヌのＭＧの１，１５４の症例における、純血種のイヌおよび雑種のイヌにおける発症率の比較によって、アキタ、ジャーマンショートヘアードポインター、チワワ、スコティッシュテリアおよびテリアの群中のその他のもの、ロットワイラー、ドーベルマンピンシェル、ダルメシアンについて、後天性（自発的な自己免疫）ＭＧのリスクの上昇が実証され、ジャックラッセルテリアは、後天性ＭＧの低い相対リスクを有していた。その他の情報源は、大型の品種、特に、ジャーマンシェパード、ゴールデンレトリーバーおよびラブラドールレトリーバーにおいて後天性ＭＧのリスクの上昇を言及しているが、先天性ＭＧは、ジャックラッセルテリア、スプリンガースパニエルおよびスムースヘアフォックステリアにおいてより多く見られた。２つの別個の研究が、１７％の死亡率を報告している。ヒトと同様に、イヌのＭＧのための一般的な治療は、ピリドスチグミン（Ｍｅｓｔｉｎｏｎ）、神経筋接合部におけるアセチルコリンの存在を延長するアセチルコリンエステラーゼ阻害剤である。プレドニゾンなどの副腎皮質ステロイドは、抗コリンエステラーゼ療法が効果的ではない場合に投与される。副腎皮質ステロイドが、真性糖尿病、高血圧、同時感染のために禁忌となる場合またはＭＧの症例が標準治療に対して不応性である場合には、アザチオプリンなどの、より強力な免疫抑制剤が使用される。多くの症例で、治療的介入は不必要であり得る。ヒト患者とは異なり、筋無力症のイヌの９０％近くが、治療的処置がなくても疾患発症の１８ヶ月以内に自発的に緩解する。筋力低下および陽性ＡＣｈＲ抗体力価を有する５３頭のイヌの研究では、自発的な臨床的緩解および免疫学的緩解が、平均時間６．４ヶ月で、５３頭中４７頭のイヌ（８８．７％）で生じ、自発的に緩解しなかった６頭のイヌすべてで新生物が指摘された。自発的な緩解の際に、ＡＣｈＲ力価は、低下または上下する。しかし、感染性病原体に対するワクチン接種は、自発的な緩解にあったイヌにおいて、ＭＧの再発を誘導し得る。耐性の維持または再確立における調節性Ｔ細胞の役割は、最近、精力的な研究の領域となり、イヌにおけるＭＧ発症および自発的な緩解の際の、ＡＣｈＲに特異的なエフェクターおよび調節性Ｔ細胞間のバランスをモニタリングするのに有益であり得る。このような研究によって、ワクチン接種が、全般的なエフェクターＴ細胞増加を引き起こし、調節性Ｔ細胞を増加することによって駆動される緩解を覆すかどうかが示され得る。これが症例を証明する場合には、調節性Ｔ細胞を低減し得る広い免疫抑制を避けることが賢明であり得、代わりに、調節性Ｔ細胞の集団を増加させることに、将来の治療戦略を集中させる。
【００９７】
ナルコレプシー
ナルコレプシーは、睡眠覚醒周期の調節不全によって引き起こされる慢性神経疾患であり、日中の過剰な眠気および不適当な、多くの場合突然の睡眠の発生をもたらす。ナルコレプシーは、これらの不規則な睡眠エピソードに加えて、脱力発作、強い感情によって誘導されることもある随意筋緊張の突然の喪失、睡眠の開始または中断の際の鮮明な幻覚および睡眠周期の始まりまたは終わりでの完全麻痺の短いエピソードをはじめとする関連症状を示す場合がある。２４時間の期間の間の総睡眠の長さは、ナルコレプシーおよび正常な睡眠で同様であるが、睡眠期間の数およびノンレム対レム睡眠の割合が、大きく異なっている。通常の睡眠周期は、ノンレム睡眠で始まり、８０〜１００分後にレム睡眠に移行する１００〜１１０分である。対照的に、ナルコレプシーの患者は、入眠の数分内にレム睡眠に入り、１日を通して、より散発的にばら撒かれる多数の短い睡眠周期を有し得る。ナルコレプシー有病率は、集団間で変わり、米国では、２，０００人の個体に１人、イスラエルでは、５００，０００人に１人、日本では、６００人に１人を苦しめる。ナルコレプシーのほとんどの症例が、１０〜２５歳の間に最初に現れる。
【００９８】
理論に束縛されるものではないが、ナルコレプシーは、ヒポクレチン、覚醒を促進するホルモンのレベルの低下によって引き起こされる。これらの低いレベルは、脳においてヒポクレチンを分泌するニューロンの減少による。しかし、稀な症例を除いて、ヒポクレチン遺伝子は、ナルコレプシー患者で突然変異されていない。ナルコレプシーは、複数のファミリーメンバーで起こり得るが、これらの例は、症例の１０％未満を占めるにすぎず、双生児の研究によって、非遺伝的因子の強い影響が示されており、このことは、環境誘因を示唆する。最初に立証されたナルコレプシーとの関連は、ヒト組織適合ハプロタイプＨＬＡ−ＤＲ２にマッピングされ、その後、ＤＱＢ１＊０６０２対立遺伝子に局在化された。脱力発作を有するナルコレプシーの９０％超が、ＤＱＢ１＊０６０２対立遺伝子を有し、白色人種対照における２５％の頻度を上回って大幅に増大している。ナルコレプシーはまた、アジア人およびアフリカ系アメリカ人では、ＤＱＢ１＊０６０２と強力に関連している、異常に強いＨＬＡ対立遺伝子関連。このＨＬＡ関連に基づいて、ナルコレプシーは、環境誘因に対する自己免疫反応であると示唆されている。ナルコレプシーにおける自己免疫病理を確認するための試みは、困難であり、賛否両論がある。自己免疫仮説の支持は、ナルコレプシーのヒトから得た抗体を注射したマウスにおけるナルコレプシー様症状の誘導から来ている。しかし、ヒポクレチン、ｈｃｒｔ−１およびｈｃｒｔ−２に対する自己抗体の放射リガンド結合実験スクリーニングでは、脱力発作を有するナルコレプシー（５％）および健常な対照（３％）の血清において同等に低い頻度を検出した。対照的に、最近の研究は、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ相同体２（Ｔｒｉｂ２）、ヒポクレチン産生ニューロンにおいて豊富な転写物および自己免疫ブドウ膜炎における自己抗原が、とらえどころのないナルコレプシー自己抗原であり得ることを示唆した。ＥＬＩＳＡアッセイによって、ナルコレプシー患者の血清およびＣＳＦにおいてＴｒｉｂ２に対する高い自己抗体力価が検出され、この血清は、マウス視床下部においてヒポクレチンニューロンの＞８６％と結合した。自己免疫病因論のさらなる証拠は、８０７人のＨＬＡ−ＤＱＢ＊０６０２陽性白色人種ナルコレプシーおよび１０７４人の対応させた対照の最近のゲノム規模での関連研究から来ている。遺伝子解析によって、ＴＣＲＡ遺伝子座の１８Ｋｂのセグメント、連結セグメントをコードするＴ細胞受容体遺伝子の領域およびＴ細胞受容体ベータ（ＴＣＲＢ）遺伝子座のＶセグメント中の別のマーカーにおいて、高い連鎖不均衡で３種のマーカーが同定された、この研究は、ほとんどのヒトナルコレプシーの症例の自己免疫起源を断定する。自発的なナルコレプシーは、１９７０年代にイヌにおいて最初に記載された。しかし、ほとんどのイヌでは、これは、イヌ組織適合複合体、ＤＬＡとは関係しない常染色体劣性形質である。それにも関わらず、ナルコレプシーのイヌ型は、ヒト状態の理解にとって極めて重大であった。１９９９年に、ナルコレプシーのドーベルマンピンシェルおよびラブラドールレトリーバー飼育株の研究によって、ナルコレプシーとヒポクレチン／オレキシン受容体（Ｈｃｒｔｒ−２）遺伝子の調節不全間の連関が立証された。遺伝子起源の相違にも関わらず、天然に存在するイヌモデルは、ヒトナルコレプシー患者のための治療の最適化にとって有用であった。
【００９９】
神経セロイドリポフスチン症／バッテン病
神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬまたはＣＬＮ）は、小児を苦しめる常染色体劣性神経変性リソソーム蓄積症の群である。群として、ＮＣＬは、レチナールおよび脳萎縮をはじめとする細胞変性につながる、ニューロンおよびその他の細胞におけるリポフスチン（ｌｉｐｏｆｕｃｓｉｎ）に似たリソソーム蓄積体の細胞内蓄積によって特徴付けられる。それらは、小児において最もよく見られる進行性の神経変性性疾患であり、発症率は、１２，５００人の生児出生に１人であり、米国ではおよそ４４０，０００人の保有者がいる。サブタイプは、発症の年齢および原因である遺伝子に基づいて分類されている。ハルチア−サンタブオリ病（Ｈａｌｔｉａ−Ｓａｎｔａｖｕｏｕｒｉ  ｄｉｓｅａｓｅ）（小児性ＮＣＬ、ＣＬＮ１）；ヤンスキー−ビールショースキー病（Ｊａｎｓｋｙ−Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）（遅発型小児性ＮＣＬ、ＣＬＮ２）；バッテン病（若年性ＮＣＬ、ＣＬＮ３）；クッフス病（Ｋｕｆｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）（成人性ＮＣＬ、ＣＬＮ４）；および２種の遅発型小児性変異体型、ＣＬＮ５およびＣＬＮ６。しかし、すべてのＮＣＬをバッテン病として分類する医師もいる。ＣＬＮ１は、リソソーム酵素パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ（ＰＰＴ１）リソソームタンパク質チオエステラーゼ（ｔｈｉｏｌｅｓｔｅｒａｓｅ）をコードし、ＣＬＮ２は、リソソームトリペプチジルタンパク質ペプチダーゼ（ＴＰＰ１）をコードする。ＣＬＮ８は、てんかんおよび進行性の精神遅滞と関連している。ＣＬＮ３は、リソソーム膜中に存在し、シナプス小胞タンパク質と共存する機能未知のタンパク質をコードする。バッテン病患者の３／４近くが、両染色体上のＣＬＮ３遺伝子中に１．０２ｋｂの欠失を持っており、残りは、ＣＬＮ３における、ミスセンス突然変異、ナンセンス突然変異、欠失、挿入およびその他の欠陥が占めた。欠陥のあるＣＬＮ３は、てんかん、精神的欠陥、進行性の失明、言語障害および運動技能の喪失につながり、１０代後半または２０代によっては致死的であることが多い。バッテン病患者は、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）に対して自己免疫応答を有する。患者の血清の調査は、試験された２０人の個体すべてにおいて抗ＧＡＤ６５自己抗体を示した。グルタミン酸デカルボキシラーゼは、興奮性神経伝達物質グルタミン酸を阻害性神経伝達物質ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）に変換することに関与する酵素であり、したがって、抗ＧＡＤ自己抗体は、過剰の興奮性神経伝達物質を引き起こし、てんかんにつながり得る。ＧＡＤに対する自己抗体はまた、全身硬直症候群および小脳性運動失調を含め、その他の変性ＣＮＳ疾患においても検出されている。これらの自己抗体は、ＧＡＤの活性を阻害するのに対し、インスリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ、１型糖尿病）において検出されるＧＡＤに対する自己抗体は阻害性ではない。常染色体の障害と自己免疫応答の間につながりがある可能性は興味深く、原因を理解し、治療的介入を開発するために患者および動物モデルの両方においてさらなる研究が必要である。
【０１００】
マウスおよびウシ、ヒツジ、ネコおよび特定のイヌの品種を含めたいくつかの家畜の種において遺伝性ＮＣＬが報告されている。ＮＣＬの発生が報告されたイヌの品種として、イングリッシュセッター、チベタンテリア、アメリカンブルドッグ、ダックスフンド、ポリッシュローランドシープドッグ、ボーダーコリー、ダルメシアン、ミニチュアシュナウツァー、オーストラリアンシェパード、オーストラリアンキャトルドッグおよびゴールデンレトリーバーが挙げられる。イヌにおけるＮＣＬは、ＣＮＳにおける進行性の変性および神経細胞における蛍光物質の蓄積によって特徴付けられる。イヌＣＬＮ２（ＰＰＴ１）、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６およびＣＬＮ８のゲノム配列および転写物が、そのヒト対応物に対して保存されている。イングリッシュセッターにおけるＮＣＬは、ＣＬＮ８における単一点突然変異と関連している。進行性の神経変性は、難治性てんかんおよびおよそ２歳という年齢での死亡を引き起こす。遅発型のＮＣＬは、チベタンテリアおよびポルスキーオフチャレクニジンニ（ＰＯＮ）ドッグにおいて起こり得る。ダックスフンドにおいて発見されたＮＣＬの形態は、ＣＬＮ２（ＴＰＰ１）中の突然変異によって引き起こされ、ヒトにおける遅発型小児性ＮＣＬと似ている網膜変性症をもたらす。ボーダーコリーにおけるＮＣＬの最初に報告された症例は、１９８０年に記録され、原因である突然変異はＣＬＮ５中に位置する。診断用ＤＮＡ検査は、現在、アメリカンブルドッグ、ダックスフンド、イングリッシュセッターおよびチベタンテリアについて利用可能である。
【０１０１】
ほとんどのＮＣＬのマウスモデルがあるが、その限定された大きさ、生存期間および比較的原始的な神経系は、治療的アプローチの試験にとっては減損である。イヌＮＣＬの特性決定は、自己抗体の役割を含めた疾患病理のより良好な理解および疾患進行を停止し、遺伝子欠陥を修正するためのより実験的な療法を調べるための良好な機会を提供するはずである。
【０１０２】
皮膚障害
天疱瘡
天疱瘡は、慢性の、多くの場合有痛性の水疱形成によって特徴付けられる稀な自己免疫皮膚疾患の群である。天疱瘡は、デスモグレイン、デスモソーム（ｄｅｓｍｏｓｏｎｅｓ）と呼ばれる接着部位を介して隣接する上皮細胞を接着する分子「接着剤」に対する自己抗体によって引き起こされる。自己抗体結合デスモグレインは、この結合を破壊し、水泡を引き起こし、これが剥がれ落ちて、開いた傷口が残る。天疱瘡のいくつかのカテゴリーは、標的自己抗原ならびに水泡および傷口の位置に基づいて分類される。尋常性天疱瘡（一般的な天疱瘡）は、デスモグレイン３に対する抗体によって引き起こされ、その結果、ケラチノサイトおよび表皮の基底層間の接着が失われ、重篤度は、デスモグレイン３のレベルに比例する。傷口は口の中で発生することが多く、摂食を妨げる。いずれの年齢でも生じ得るが、尋常性天疱瘡は、通常、４０〜６０歳の間の患者で始まり、アシュケナージ系ユダヤ人においてより多く見られる。北米の白色人種非ユダヤ人およびアシュケナージ系ユダヤ人の尋常性天疱瘡患者の遺伝子型判定によって、ＤＲＢ１＊０４０２およびＤＱＢ１＊０５０３に対する強いＨＬＡ関連が示された。落葉状天疱瘡、重篤度が最小の形態の天疱瘡は、デスモグレイン１に対する自己抗体によって引き起こされる。デスモグレイン１は、皮膚の一番上の乾燥層上でのみ発現されるので、傷口は表在性であり、一般に、尋常性天疱瘡よりも有痛性ではない。尋常性天疱瘡からの別の相違として、傷口が口の中に形成しない点があり、それらはむしろ、通常、頭皮上で始まり、胸、背中および顔面に広がり得る。３１人の白色人種の落葉状天疱瘡患者および８４人の健常対照のゲノム比較によって、ＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子ＤＲＢ１＊０１０２、ＤＲＢ１＊０４０２、ＤＲＢ１＊０４０６およびＤＲＢ１＊１４０４と関連している感受性の増大が示された。腫瘍随伴天疱瘡は、最も一般的でない、最も重篤な形態の天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｏｕｓ）である。この稀な形態は、特定のリンパ腫および白血病を含めたいくつかの形態の癌を伴って起こる。有痛性の傷口は、口、唇および食道上に生じ、肺において狭窄型細気管支炎も引き起こし得る。天疱瘡は、最も一般的には、経口副腎皮質ステロイド、特に、プレドニゾンまたはプレドニゾロンを用いて治療される。効果的な管理は、多くの場合、高用量のこれらの抗炎症薬を必要とする。ミコフェノール酸モフェチル（ＣｅｌｌＣｅｐｔ）、アザチオプリン（ａｚｉａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）（イムラン）、シクロホスファミド（シトキサン）およびメトトレキサートをはじめとする免疫抑制薬が治療レジメンに加えられることが多い。重篤な症例、特に、腫瘍随伴天疱瘡では、静脈内ガンマグロブリンが有用である場合がある。
【０１０３】
米国ではイヌの＜２％が、いくつかの形態の自己免疫皮膚疾患を有すると推測されるが、これは過小評価であり得る。尋常性天疱瘡は、最もよく見られる形態であり、口および粘膜皮膚の移行部、毛のある皮膚および粘膜組織の境界（例えば、眼瞼、唇、鼻孔、肛門および生殖器）中の病変として現れる。これらの水泡は、薄く、容易に破壊される。ヒト尋常性天疱瘡患者は、デスモグレイン３およびデスモグレイン１に対する自己抗体を有する。デスモグレイン３を認識する同様の抗体が、尋常性天疱瘡を有するイヌから得た血清の６０％で検出された。これらの抗体は、正常なヒトケラチノサイトのシートとともにインキュベートされた場合に、解離を引き起こし、発病におけるその役割が確認された。増殖性天疱瘡は、鼠径部周囲および下肢と体幹の間の厚い、一様でない、開いた病変によって特徴付けられる。落葉状天疱瘡は、稀であり、通常、顔面、耳、足および鼠径部に限定される。水泡は、一時的であり、発赤を示し、硬い皮で覆われており、脱毛する。この皮膚障害を有するイヌは、ヒト落葉状天疱瘡においてと同様、病原性ＩｇＧ４自己抗体を有する。これらの抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって検出することが困難であるが、ケラチノサイトと結合されて実証され得る。紅斑性天疱瘡（Ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｉｓ）は、落葉状と似ており、鼻に限定されることが多い。イヌ天疱瘡における自己抗体特性決定は、初期段階にある。これらの障害に関与している自己抗原のさらなる特性決定は、ヒト天疱瘡自己免疫の病理の本発明者らの理解を進め得る。
【０１０４】
内分泌および胃腸障害
甲状腺炎
甲状腺炎は、甲状腺の炎症である。橋本甲状腺炎は、甲状腺ペルオキシダーゼおよび／またはサイログロブリン（ｔｈｙｒｏｇｌｏｂｕｉｎ）に対する抗体によって媒介される甲状腺における濾胞の破壊によって特徴付けられる、最もよく見られる形態である。この自己免疫疾患は、北米における原発性甲状腺機能低下症の最もよく見られる原因であり、平均発症率は、１，０００人あたり１〜１．５症例である。グレーブス甲状腺機能亢進性疾患は、甲状腺刺激ホルモン受容体に対する自己抗体によって媒介され、甲状腺機能を刺激し、甲状腺ホルモンの分泌過多を引き起こす。欧州諸国では、オルド（Ｏｒｄ’ｓ）甲状腺炎と呼ばれる、萎縮型の自己免疫甲状腺炎は、橋本甲状腺炎よりもよく見られる。甲状腺炎の発症は、通常、４５〜６５歳の間に起こる。多数の自己免疫疾患と同様に、有病率は女性において高いが、女性対男性において１０：１〜２０：１の出現という推定比は、自己免疫障害の中でも高い。疾患との地理的および季節的相関、その他の自己免疫疾患においても同様に見られる特徴のエビデンスもある。疲労、体重増加、鬱病および便秘などの、自己免疫甲状腺炎の症状の多くは、その他の状態においても生じ、誤診につながり得る。進行した症例は、合成Ｔ４ホルモンレボチロキシンなどのホルモン補充療法を用いて治療される。
【０１０５】
甲状腺機能亢進症は、イヌにおいて最もよく見られる内分泌疾患である。症例の大部分は、男性における橋本甲状腺炎と似ている自己免疫であり、ヒト自己免疫疾患においてと同様に、特定の組織適合対立遺伝子の発現と関連がある。品種の範囲中の１７３頭の甲状腺機能低下性のイヌの遺伝子型判定によって、ＤＬＡ−ＤＱＡ１＊００１０１、稀なＤＬＡクラスＩＩハプロタイプとの有意な関連が示された。
【０１０６】
同様に、甲状腺機能低下性疾患に冒された２７頭のドーベルマンピンシェルの分析によって、冒されていないイヌと比較して、冒されたイヌにおける稀なＤＬＡハプロタイプの増加が示され、このハプロタイプは、ドーベルマンピンシェルおよびラブラドールにおいてのみ見られた。大型のイヌは、リスクが高いが、トイおよびミニチュア品種は稀にしか冒されない。ドーベルマンピンシェルに加え、甲状腺炎に対する感受性が報告された品種として、ゴールデンレトリーバー、ボルゾイ、ジャイアントシュナウツァー、アキタ、アイリッシュセッター、オールドイングリッシュシープドッグ、シェットランドシープドッグ、スカイテリア、ビーグル、グレートデーンおよびイングリッシュコッカースパニエルが挙げられる。
【０１０７】
１型糖尿病
糖尿病は、米国で推定２３６０万人、人口のおおよそ７．８％を苦しめている代謝障害である。１型糖尿病は、膵臓におけるインスリン産生ベータ細胞の破壊に起因する自己免疫障害であり、グルコース代謝の調節不全をもたらす。症状の発症は、比較的迅速であるが、根底にあるベータ細胞の破壊が、長期間進行し、その後、効果が検出可能である場合がある。１型糖尿病の症状として、のどの渇きおよび排尿の増加、継続的な空腹感、かすみ目、体重減少および疲労を挙げることができる。治療されない場合には、患者は、糖尿病性ケトアシドーシスとしても知られる糖尿病性昏睡に陥り、これは致死的であり得る。２型糖尿病は、かなりより一般的であり、糖尿病の症例の９０〜９５％を占める。自己免疫ではなく、遅い平均発症年齢で生じ、肥満症、糖尿病の家族歴、運動不足および特定の民族的背景と関連している。２型糖尿病では、インスリンは産生されるが、未知の理由のために身体がそれを適切に使用することができない。１型糖尿病においてと同様に、結果は、血液におけるグルコースの蓄積ならびに効率的でないエネルギー代謝および保存である。一部の臨床医および治験責任医師はまた、「成人における潜在性自己免疫糖尿病」（ＬＡＤＡ）と呼ばれるカテゴリーも認識している。これらの症例は、通常、３０歳後に始まり、患者が、インスリン産生ベータ細胞に対する抗体を有し、最終的にベータ細胞が破壊されるので、１型糖尿病のより遅く発生する形態であり得る。ＬＡＤＡは、２型糖尿病の症例の１０％をも占め得る。
【０１０８】
１型糖尿病は、多数のその他の自己免疫疾患とは異なり、男性および女性間で同等に生じる。非白色人種集団よりも白色人種においてより高頻度に生じ、ほとんどのアフリカ人、アメリカ先住民およびアジア人集団では稀である。特定の北ヨーロッパ諸国、例えば、フィンランドおよびスウェーデンは、高率の１型糖尿病を有する。任意の年齢で発症し得るが、発症は、小児期に起こることが最も多い。病因論は未知であるが、１型糖尿病は、家族においてクラスター化し、全体的な遺伝子リスク割合は、およそ１５である。一卵性および二卵性双生児間の１型糖尿病の一致もまた、感受性における強力な遺伝的成分のエビデンスである。ＨＬＡ領域中の対立遺伝子変異が、１型糖尿病における家族クラスター化の４０〜５０％を占める。多数の研究によって、ＨＬＡ領域遺伝子ＤＲＢ１、ＤＱＡ１およびＤＱＢ１の特定の対立遺伝子が、１型糖尿病と強く関連していることが実証された。６０７の白色人種家族および３８のアジア系家族の詳細な分析によって、いくつかの感受性および保護的ＤＲ−ＤＱハプロタイプ（ｈａｌｐｌｏｔｙｅｓ）ならびにこれらのハプロタイプに基づく１型糖尿病リスクにおける著しい階層が示された。ハプロタイプＤＲＢ１＊０３０１−ＤＱＡ１＊０５０１−ＤＱＢ１＊０２０１は、最高の感受性を付与し、３．６４のオッズ比を有するのに対し、最も保護的なハプロタイプは、０．０２のオッズ比と関連していた。ＨＬＡに加えて、ゲノム規模の関連研究（ＧＷＡＳ）によって、白色人種において感受性の一因となるいくつかのその他の遺伝子、例えば、ＩＮＳ、ＣＴＬＡ４、ＰＴＰＮ２２およびＩＬ２ＲＡ／ＣＤ２５が同定された。白色人種およびアジア系１型糖尿病のＧＷＡＳ比較では、ＣＴＬＡ４の疾患関連は、両民族集団において自己免疫甲状腺疾患を有する糖尿病のサブセットにおいて濃縮され、ＩＬ２ＲＡ／ＣＤ２５との関連は両集団において同様であり、ＰＴＰＮ２２との関連は、アジア系患者において強い。その他のヒト自己免疫障害と同様に、感受性は、ＨＬＡ領域中の対立遺伝子と強く、また、より少ない程度に一連のさらなる遺伝子と関係しており、幾分かは、炎症経路と関係している。１型糖尿病は、絶食の８時間後の血糖値の測定に基づいて診断されることが好ましく、これでは、１２６ｍｇ／ｄＬのレベルが指標となると考えられる。治療はなくても、インスリンの注射によって疾患を管理することはできる。
【０１０９】
糖尿病は、イヌにおいて比較的よく見られ、例えば、ＵＫにおける推定有病率は、０．３２％であり、その他の研究では、０．００５％〜１．５％の範囲の有病率が報告されている。ヒトにおいてと同様、イヌ糖尿病の臨床症状として、過度のどの渇き（多飲）、排尿（多尿）、体重減少および血液および尿中の高レベルのグルコースが挙げられる。イヌ糖尿病の発症は、通常、５から１２歳の間で起こり、平均発症は９歳であり、ヒトにおける１型糖尿病の対応する年齢よりも高齢の発症である。ヒト糖尿病のために開発された分類体系は、イヌ糖尿病には容易に当てはまらない。症例を、インスリン依存性または非インスリン依存性のいずれかとして特徴付けた人もいるが、ほとんどすべての糖尿病のイヌがインスリン療法を必要とする。代替の体系によって、症例は、原発性インスリン欠乏性糖尿病（ＩＤＤ）または原発性インスリン抵抗性糖尿病（ＩＲＤ）のいずれかとして分類される。ＩＤＤでは、膵ベータ細胞の免疫媒介性進行性喪失がある。ＩＲＤは、通常、その他のホルモンによるインスリン機能の拮抗作用によって引き起こされ、その他の内分泌障害に続発する場合もある。膵炎、膵臓の炎症は糖尿病のイヌの２８〜４０％において報告されているが、別の研究では、２５３頭のうち８頭の糖尿病のイヌのみが、膵炎の臨床兆候および生化学的兆候を有していた。過去数十年にわたる別個の研究が、イヌ糖尿病の不均一な病理を証明しており、１８症例のうち６症例において、ヒト１型糖尿病および膵島炎との類似性を検出するものもあれば、膵ベータ細胞破壊のエビデンスが、ヒトおよびげっ歯類においてよりも少ないことを報告するものもある。一部の新しく診断された糖尿病のイヌにおいて、インスリンに対する自己抗体、イヌＧＡＤ６５および／またはイヌ膵島抗原−２が同定されている。膵島のリンパ球浸潤は、成人発症型糖尿病を有するイヌのサブセットにおいてのみ見られ、若年発症型糖尿病を有するイヌでは観察されない。したがって、イヌ糖尿病は、ベータ細胞の遅い進行性の破壊を示す、成人における潜在性自己免疫糖尿病（ＬＡＤＡ）、ヒトにおける成人型の１型糖尿病の特徴に匹敵し得る。ヒト２型糖尿病のイヌ相当物のエビデンスはない。
【０１１０】
北米の２４の獣医科大学から得た＞６，０００頭の糖尿病のイヌのデータベースによれば、感受性品種として、ミニチュアシュナウツァー、ビションフリーゼ、ミニチュアプードル、サモエドおよびケアンテリアが挙げられる。同様に、ＵＫの研究では、サモエド、チベタンテリアおよびケアンテリアが、糖尿病になりやすいと見られた。対照的に、ボクサーおよびジャーマンシェパード品種は、あまり感受性ではない。糖尿病は、雄のイヌよりも雌においてより多く蔓延しており、別個の研究によれば、偏りは、５３〜７０％である。
【０１１１】
イヌ糖尿病は、１型糖尿病を含めたヒト自己免疫疾患と同様に、感受性対立遺伝子の複雑な相互作用および環境誘因によって生じる。イヌ糖尿病は、ヒト糖尿病と同様に、季節性のパターンを有し、１１月〜１月の冬場の間に、７月〜９月の夏場の間の２倍の多数の症例が診断され、おそらくは、一般的な環境誘因を反映している。いくつかの遺伝子が、糖尿病感受性と関係しており、イヌ主要組織適合複合体、ＤＬＡの対立遺伝子において最強の関連が見られる。最初に報告された関連はハプロタイプＤＬＡ  ＤＲＢ１＊００９、ＤＱＡ１＊００１、ＤＱＢ１＊００８とのものであった。その後の５３０頭の糖尿病のイヌおよび＞１，０００頭の対照のＤＬＡ分類によって、糖尿病と３種のＤＬＡハプロタイプ間に関連が見られ、ＤＬＡ  ＤＲＢ１＊００９、ＤＱＡ１＊００１、ＤＱＢ１＊００８と最強の関連が見られた。ハプロタイプＤＬＡ  ＤＲＢ１＊００９、ＤＱＡ１＊００１、ＤＱＢ１＊００８は、糖尿病感受性品種（サモエド、ケアンテリア、チベタンテリア）に共通しているが、糖尿病耐性品種（ボクサー、ジャーマンシェパード、ゴールデンレトリーバー）では稀である。ＤＬＡ−ＤＱＡ１＊００１が、イヌにおける甲状腺機能低下症と関連しているというエビデンスもある。対照的に、１種のＤＬＡ−ＤＱハプロタイプ、ＤＱＡ１＊００４／ＤＱＢ１＊０１３は、４６０頭の糖尿病のイヌの分析において大幅に提示が不足しており、耐性対立遺伝子を示す可能性がある。上記のように、一連の遺伝子研究によって、ヒトにおける１型糖尿病と関連しているいくつかの遺伝子座、例えば、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）領域中のいくつかのもの、インスリン可変数タンデムリピート、ＰＴＰＮ２２、ＣＴＬＡ４、ＩＬ−４およびＩＬ−１３が同定された。これらの遺伝子座のうち一部はまた、糖尿病のイヌのＧＷＡＳ分析においても同定された。イヌ糖尿病の４８３の症例および８６９頭の対照の研究によって、３７種のＳＮＰ対立遺伝子関連が同定され、１３種は保護的であり、２４種は感受性を高めた。感受性の増大と関連している遺伝子は、ＩＦＮ−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＩＬ−１０、ＩＬ−２ベータ（ＩＬ−２β）、ＩＬ−６、インスリン、ＰＴＰＮ２２、ＩＬ−４およびＴＮＦ−アルファ（ＴＮＦ−α）を含んでいた。イヌＤＭを発症するリスクの増大と関連しているサイトカインのほとんどが、Ｔｈ２サブセットからのものであり、ＩＬ−４、ＩＬ−６およびＩＬ−１０が主なものである。ＩＬ−４、ＰＴＰＮ２２、ＩＬ−６、インスリン、ＩＧＦ２、ＴＮＦ−アルファ（ＴＮＦ−α）を含めたいくつかのその他の遺伝子は、保護的であった。しかし、個々のＳＮＰは、品種間で可変であり、少数の例では、一部の品種において保護的であったＳＮＰが、その他のものではリスクの増大と関連していた。この相違は、個々の品種の比較的小さい試料サイズを反映するものであり得る。また、イヌ糖尿病が、異なる品種において異なる病因論を有することもあり得る。
【０１１２】
歴史的に、イヌは、糖尿病病理の理解において、また治療戦略の試験において重要な役割を果たしてきた。１８８９年の実験によって、健常なイヌからの膵臓の除去は、多尿および多飲につながることが示され、膵臓は、その後にインスリンとして同定された「抗糖尿病誘発性因子」を分泌し、身体がグルコースを利用することを可能にするという結論につながった。１９２１年には、糖尿病のイヌは、インスリン療法の最初のレシピエントであった。自発的なＮＯＤマウスモデルが、実験薬戦略を試験するための中心であったが、イヌ糖尿病モデルは、より大きな動物モデルにおける薬物および送達システムの前臨床試験の機会を提供し得る。
【０１１３】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）
炎症性腸疾患は、クローン病および潰瘍性大腸炎を含めた慢性炎症性消化管障害のカテゴリーである。潰瘍性大腸炎は、直腸を常に含み、結腸のその他の部分に及ぶこともある結腸の粘膜層の再発性の炎症である。クローン病は、消化管の任意の部分に影響を及ぼし得るが、症例の大部分は、末端回腸において始まる。潰瘍性大腸炎における炎症は、消化管の内側の粘膜層に制限されるが、クローン病は、腸壁全体に影響を及ぼし、繊維症、閉塞および瘻孔につながる場合もある。北米において報告された発症率は、潰瘍性大腸炎については１年あたり１００，０００人あたり２．２〜１４．３症例、クローン病については１年あたり１００，０００人あたり３．１〜１４．６症例の範囲である。９００万の保険金請求の調査に基づいて、成人における潰瘍性大腸炎の有病率は、１００，０００人の集団あたり２３８人であり、クローン病の有病率は、１００，０００人たり２０１人である。これらの主要な炎症性腸疾患両方の発症率が、アジア、日本および南アメリカでは低く、欧州において、および米国においては、発症率は、より南の緯度において低下する。脊椎関節症、関連疾患の群（例えば、強直性脊椎炎、反応性および乾癬性脊椎関節炎、未分化型脊椎関節炎）が、炎症性腸疾患の頻繁な腸外徴候であり、報告された有病率は、クローン病および潰瘍性大腸炎の症例において、それぞれ４５．７％および９．９％である。１，０５２人の潰瘍性大腸炎患者および２，５７１人の対照、欧州系のすべてから得たＤＮＡ試料の最近のゲノム規模の関連研究は、感受性を、ＢＴＮＬ２からＨＬＡ−ＤＱＢ１に広がる領域およびＩＬ２３Ｒ遺伝子座と関係付けた。その他のゲノム研究によって、両方の主要な炎症性腸疾患と関連している遺伝子における幾分かの重複を示されている。クローン病は、ＮＯＤ２およびＡＴＧ１６Ｌ１、細菌の細胞内プロセシングに影響を及ぼし得る２種の遺伝子における遺伝的変異と関連しているが、潰瘍性大腸炎はそうではない。クローン病および潰瘍性大腸炎は両方とも、ＩＬ−２３Ｒをコードする遺伝子ならびにＩＬ１２Ｂ、ＳＴＡＴ３およびＮＫＸ２−３遺伝子領域における変異と関連している。
【０１１４】
ＩＢＤは、ネコおよびイヌの両方における、一般的な消化障害である。イヌおよびネコＩＢＤは、ウシにおけるヨーネ病よりもヒトＩＢＤと、より多くの特徴を共有し、組織における細菌の証拠はほとんどなく、副腎皮質ステロイドおよびスルファサラジンなどの薬物に反応する。発症率は、雄および雌において同様であり、中年のイヌに発症ピークがある。この疾患のリスクの高い品種として、ボクサー、ジャーマンシェパード、ソフトコーテッドウィートンテリア、ロットワイラー、フレンチブルドッグ、ドーベルマンピンシェル、マスチフ、アラスカマラミュートおよびシャーペイが挙げられる。ヒトと同様に、イヌにおけるＩＢＤの発症は、共生腸細菌叢に対する異常な腸反応によって生じると仮説が立てられている。ＩＢＤを有するイヌでは、ＴＬＲ−２、−４および−９が上方制御されるので、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）が、最初の炎症反応の中心であり得、ヒトＩＢＤの症例において述べられるＴＬＲ−４の活性化と似ている。ＩＢＤイヌは、健常なイヌとは異なる小腸細菌を有するので、同様に細菌叢の変化も決定的であり得る。同様のシフトが、ヒトＩＢＤ患者の腸細菌叢において述べられている。病理および自然免疫系の関与における類似性にも関わらず、イヌおよびヒトにおけるＩＢＤに対する適応免疫応答においてはいくつかの相違がある。ヒトＩＢＤでは、Ｔｈ１リンパ球サブセットが優性であるが、イヌＩＢＤでは、Ｔｈ１およびＴｈ２リンパ球の混合活性化がある。副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾン）は、通常、ＩＢＤと診断されたネコの治療の最初の治療単位として投与される。副腎皮質ステロイドは、食事管理およびスルファサラジンが軽減を提供しない場合には、イヌにも使用される。スルファサラジン、５−Ａ  ＳＡ、メサラミンおよび関連化合物は、主に、大腸に限定される、ＩＢＤを有するイヌの好ましい治療選択肢であるが、これらの薬物は、涙の産生に影響を及ぼし得る。スルファサラジンおよび関連化合物は、ネコにとって極めて毒性であり得るサリチル酸塩を含み、したがって、ネコにとっては副腎皮質ステロイドが主な治療薬である。メトロニダゾール、抗生物質および抗炎症薬も、単独で、または副腎皮質ステロイドもしくはスルファサラジンのいずれかと組み合わせて使用できる。副腎皮質ステロイドが上手くいかない場合は、免疫抑制薬アザチオプリンおよびシクロホスファミドを使用してもよい。ヒトおよびイヌにおけるＩＢＤ間は類似しているが、不完全にしか理解されておらず、さらなる研究によって、両種のための実験的治療薬を試験する機会が提供され得る。
【０１１５】
アジソン病
ホルモンコルチゾールおよびアルドステロンの産生を不十分にさせる副腎に対する損傷は、原発性副腎不全症と呼ばれ、アジソン病としても知られている。１００，０００人毎に１〜４人に影響を及ぼす。続発性副腎不全症、アジソン病よりもかなりよく見られる状態は、下垂体腺によって、十分な副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）を産生し、副腎を刺激して、コルチゾールを産生することができないことに起因する。アジソン病の症例の最大８０％が、副腎皮質の自己免疫破壊によって引き起こされ、皮質の＞９０％が破壊されている場合に、ミネラルコルチコイド（アルデステロン（ａｌｄｅｓｔｅｒｏｎｅ））およびグルココルチコイド（コルチゾール）の欠乏を含めた副腎不全症につながる。アジソン病は、西欧の集団では稀である。その他の自己免疫疾患と同様に、特定の主要組織適合対立遺伝子、この場合には、ＨＬＡ  ＤＲＢ１＊０４およびＤＱと強い関連を含む、多遺伝子性障害であり、その他の関連として、ＣＴＬ−４、Ｃｙｐ２７Ｂ１、ＶＤＲの特定の対立遺伝子ならびにＭＩＣ−ＡおよびＭＩＣ−Ｂ遺伝子座が挙げられる。
【０１１６】
イヌの副腎皮質機能低下症は、ヒト状態と似ており、いくつかの品種で、１．５〜９％の範囲の頻度で生じる。ポヂュギースウォータードッグは、大きく影響を受ける品種の１種であり、１９８５年〜１９９６年の間の１１，３８４頭のポヂュギースウォータードッグの分析によって、１．５％の発症率が示された。この品種における副腎皮質機能低下症は、病理および感受性との遺伝的関連の両方においてヒトアジソン病と似ている。ヒトＨＬＡ対立遺伝子ＤＲＢ１＊０４およびＤＲＢ１＊０３０１と類似の、およびヒト遺伝子座ＣＴＬＡ−４と類似の染色体領域上で２種の疾患関連遺伝子座が同定された。ノヴァスコシアダックトーリングレトリーバーもまた、アジソン病に対してリスクが高く、影響を受けるイヌおよび影響を受けないイヌの遺伝子型判定によって、７種の異なるハプロタイプが示され、罹患したイヌにおいてハプロタイプＤＬＡ−ＤＲＢ１＊０１５０２／ＤＱＡ＊００６０１／ＤＱＢ１＊０２３０１の発症率が上がっていた。この副腎障害を有するイヌはまた、感受性ハプロタイプにおいてホモ接合である可能性がより高く、ホモ接合のイヌは、より早く疾患を発症した。
【０１１７】
骨および関節障害
関節リウマチ（ＲＡ）
関節リウマチ（ＲＡ）は、主に、滑膜関節に影響を及ぼす慢性炎症性自己免疫疾患である。この障害は、人工軟骨破壊および関節のこわばりを伴う過剰の滑液および滑膜細胞の過剰増殖によって特徴付けられる。ＲＡは、最も広まっている自己免疫疾患である。世界の人口のおよそ１％が苦しんでおり、男性においてよりも女性において発症率は３倍高い。発症は、最も頻繁には、４０〜５０歳の間に起こる。ＲＡの遺伝的素因は、ＨＬＡ−ＤＲＢ１遺伝子座のいくつかの対立遺伝子、特に、白色人種ではＨＬＡ−ＤＲＢ１＊０４サブタイプ：ＤＲＢ１＊０４０１、＊０４０４、＊０４０５および＊０４０８ならびにその他の民族ではサブタイプＤＲＢ１＊０１０１、＊０１０２および＊１００１と関連している。すべてのＲＡ関連ＨＬＡ−ＤＲＢ１対立遺伝子は、位置７０〜７４、第３の超可変領域：ＱＫＲＡＡ（＊０４０１）に関連アミノ酸配列をコードする。ＱＲＲＡＡ（＊０４０４、＊０４０５、＊０４０８、＊０１０１、＊０１０２）またはＲＲＲＡＡ（＊１００１）。この「共有されるエピトープ」は、白色人種ＲＡ患者の８０〜９０％の少なくとも一方のＨＬＡ−ＤＲＢ１遺伝子座に生じる。
【０１１８】
イヌ関節炎は比較的よく見られ、報告された発症率は、６歳を超えるイヌでは６５％もの高さである。これらの症例の最大９０％が、変形性関節症であり、残りを関節リウマチが占める。ＲＡは、トイおよび小さい品種において、一般に、５〜６歳の間で最もよく生じる。ヒト症例と同様に、感受性と主要組織適合複合体中の特定の遺伝子の間には強い関連性がある。あるゲノム研究では、６１頭の、小関節多発性関節炎と臨床上診断されたイヌから得たＤＮＡ試料および４２５頭の対照から得たＤＮＡ試料を比較した。ＤＬＡ−ＤＲＢ１＊００２、ＤＲＢ１＊００９およびＤＲＢ１＊０１８を含めたいくつかのＤＬＡ−ＤＲＢ１対立遺伝子が、ＲＡのリスクの増大と関連していた。ヒトＲＡ患者のほとんどのＨＬＡ−ＤＲＢ１対立遺伝子の第３の超可変領域中に見られる保存されたアミノ酸モチーフ、ＱＲＲＡＡ／ＲＫＲＡＡは、イヌＲＡと関連しているＤＬＡ−ＤＲＢ１対立遺伝子においても記されていた。コルチコステロイド治療は、症例の約５０％において臨床的緩解をもたらす。より重篤な症例では、緩解を誘導するためにシトキサンまたはイムランを投与する治療が施される。
【０１１９】
循環障害
自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、別名、免疫媒介性溶血性貧血（ＩＭＨＡ）
赤血球の溶解によって引き起こされる貧血として定義される、多数の種類の溶血性貧血がある。鎌形赤血球貧血、サラセミア（Ｔｈａｌｌａｓｅｍｉａ）および遺伝性の球状赤血球症をはじめとするいくつかの形態は、遺伝性であり、赤血球構造の欠陥に起因する。対照的に、後天性溶血性貧血は、遺伝性ではなく、毒性化学物質および薬物に対する曝露、抗ウイルス剤（例えば、リバビリン）、物理的損傷、感染症および免疫障害から生じ得る。自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）は、すべての溶血性貧血の半分超を占める。ＡＩＨＡでは、自己抗体が、補体を固定し、赤血球を溶解し、ヘマトクリットを低下させ、貧血および脱力感を引き起こす。ＡＩＨＡのエビデンスとして、赤血球破壊による、血清ビリルビン、乳酸デヒドロゲナーゼの上昇および血漿ハプトグロビンの減少、細胞喪失の代償としての循環網状赤血球レベルの上昇および骨髄における赤血球過形成が挙げられる。いくつかの症例では、ＡＩＨＡは、別の根底にある疾患、例えば、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）または慢性リンパ性血病（ＣＬＬ）と関連しており、進行した疾患を有するＣＬＬ患者のおよそ１１％が、ＡＩＨＡを発症する。治療レジメンは、自己免疫発作が、ＩｇＧ抗体によって媒介されるか、ＩｇＭ抗体によって媒介されるかどうかに基づいている。ＩｇＧ関連ＡＩＨＡの場合には、コルチゾンおよびその他の免疫抑制薬が推奨される。ＩｇＭ自己抗体は、コルチゾンに対してあまり反応性ではなく、このアイソタイプによって媒介されるＡＩＨＡの形態は、赤血球との結合が低温で生じるので、寒冷凝集素疾患と呼ばれることもある。冬場における実験において起こり得るような、体温が３７℃から２８〜３１℃に低下する場合に、この形態のＡＩＨＡでは、ＩｇＭ抗体が、赤血球の表面上の糖タンパク質の多糖領域と（通常、Ｉ、ｉおよびＰｒ抗原）と結合し得る。このような症例では、低温を避けることが推奨され、赤血球産生を後押しするよう葉酸栄養補助食品が投与される。
【０１２０】
自己免疫性溶血性貧血は、最もよく見られるイヌ免疫媒介性疾患であるが、ネコでは珍しい。臨床兆候として、脱力感、嗜眠、食欲不振症、心拍数および呼吸の増加、蒼白色の粘膜が挙げられ、より重篤な症例では、発熱および黄疸（ｊａｕｎｄｉｃｅ）（黄疸（ｉｃｔｅｒｕｓ））、ビリルビン、ヘモグロビンの分解生成物の増加による歯肉、眼および皮膚の黄変が挙げられる。イヌＡＩＨＡにおける標的膜抗原として、陰イオン交換分子（バンド３）、細胞骨格分子スペクトリンおよび一連の膜糖タンパク質（グリコホリン）が挙げられる。ヒトＡＩＨＡと同様に、標準診断は、クームス試験に基づいた、赤血球と結合している抗体の検出である。症例は、かたまって生じ、発症は季節性であり得る。一研究では、症例の４０％が５月および６月の間に診断され、可能性があるウイルス病因論を示唆した。発症年齢の中央値は、６．４歳であり、雌はより多く冒された。急性型のＡＩＨＡは、コッカースパニエルと品種関連性を有する。その他の自己免疫障害と同様に、ＡＩＨＡに対する感受性は、イヌ組織適合複合体中にコードされる特定の対立遺伝子、ＤＬＡと関連している。１０８頭のクームス陽性ＩＭＨＡを有するイヌの遺伝子型判定によって、ＩＭＨＡを有するイヌで増大した２種のＤＬＡハプロタイプ：ＤＬＡ  ＤＲＢ１＊００６０１、ＤＱＡ１＊００５０１１、ＤＱＢ１＊００３０１およびＤＬＡ  ＤＲＢ１＊０１５、ＤＱＡ１＊００６０１、ＤＱＢ１＊００３０１が同定された。最も冒されたイヌは、その寿命の残りの間、副腎皮質ステロイド、ほとんどの場合、プレドニゾンで維持される。いくつかの症例では、治療レジメンにシトキサン（シクロホスファミド）、シクロスポランＡまたはイムラン（アザチオプリン）が加えられる場合もあるが、一部の研究は、これらの補助的薬物が付加価値を全く有さないと示唆する。ステロイド用量および副作用を低減するために、ダナゾール、アザチオプリン（ａｚｉｏｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、シクロホスファミドまたはシクロスポリンＡをはじめとするさまざまなその他の薬物が、グルココルチコイドと同時投与される場合もある。
【０１２１】
免疫介在性血小板減少症（ＩＭＴ）
血小板減少症は、血小板数の低下であり、免疫介在性血小板減少症（ＩＭＴ）では、これは、細網内皮系（脾臓、骨髄および肝臓）内の抗体および補体媒介性の血小板の破壊の結果である。
【０１２２】
ＩＭＴは、イヌでは比較的よく見られるが、ネコでは珍しい。症状として、皮膚および粘膜の出血、挫傷、外傷、手術または発情後の過剰の出血ならびに尿または糞便中の血液が挙げられる。イヌにおけるすべての血小板減少症の症例のおよそ７０％が、明らかに、自己免疫起源のものである。イヌＩＴＰにおける標的膜抗原は、血小板膜糖タンパク質ＧＰＩＩｂおよびＧＰ１１１ａである。ＩＭＴの症例は、単独で起こる場合も、免疫媒介性溶血性貧血または全身性紅斑性狼瘡と組み合わせて起こる場合もある。ほとんどの症例は、中年のイヌで起こり、雄よりも雌がより多く冒される。診断は、イヌＩＭＴの決定的な検査がないことによって妨害される。その他のイヌ自己免疫障害と同様に、通常、高用量の免疫抑制副腎皮質ステロイド、特に、プレドニゾンを用いて治療される。無応答性の症例はまた、シクロホスファミドおよびビンクリスチンを用いて治療され、後者の薬物は、血小板新生を増強し、ならびに、マクロファージによる、抗体によってコートされた血小板の食作用を抑制する。
【０１２３】
免疫媒介性好中球減少症（ＩＭＮ）
免疫媒介性好中球減少症（ＩＭＮ）は、自己免疫好中球減少症としても知られ、より一般的な免疫血小板減少性紫斑病、小児における好中球減少症と似ている。その他の自己免疫疾患と同様に、病因論は未知であるが、いくつかの研究によって、パルボウイルスＢ１９感染との関連が示唆されている。自己免疫応答は、好中球上の細胞表面抗原と結合している抗体（通常、ＩｇＧ）によって媒介される。Ｆｃ−ガンマ−ＩＩＩｂまたはＦｃγＩＩＩｂ（ＣＤ１６ｂ）の好中球グリコシル化アイソフォーム、グリコシルホスファチジルイノシトール（ｇｌｙｃｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｌｙｉｎｏｓｉｔｏｌ）アンカーを介して膜につながれている糖タンパク質が共通の標的である。抗体はまた、ヒト好中球抗原（ＨＮＡ）、特に、ＨＮＡ−１に対して向けられることが多い。いくつかの臨床症例では、少数の成熟した好中球が検出可能であり、これは、免疫攻撃が、骨髄ではなく末梢循環において生じることを示唆する。顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の血清レベルは正常であるが、ＩＣＡＭ−１、ＴＮＦ−ａおよびＩＬ−１ｂのレベルは、好中球数と逆相関し、これは、低度の炎症を示唆する。ＩＭＮは、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、関節リウマチおよびフェルティ症候群をはじめとする全身の免疫媒介性障害と関連していることが多い。ＳＬＥ患者の半数超がまた、好中球減少症も有し、さらに多くが検出可能な好中球と結合している抗体を有する。
【０１２４】
ＩＭＮは、イヌおよびネコの両方において比較的珍しく、イヌにおける好中球減少症のすべての症例の＜１％を占める。１９８３年に最初に実証され、その後、文献にはわずかな報告しか現れていない。冒された動物は、食欲不振症、発熱および嗜眠を伴って存在し得るが、確定診断には、抗好中球抗体の実証を必要とし、このような試験は容易には利用できない。免疫抑制用量のプレドニゾンなどの副腎皮質ステロイドは、通常、４８〜７２時間内に循環好中球数の迅速なリバウンドを生じさせる。ＩＭＮを有するイヌおよびヒトのおよそ２５％がまた、血小板減少症も有する。
【０１２５】
複数の全身性障害
全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）
全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）は、抗核抗体（ＡＮＡ）、循環免疫複合体および活性化された補体によって特徴付けられる慢性自己免疫疾患である。その他の特徴として、ＣＲ１発現の減少、Ｆｃ受容体機能の欠陥および初期補体成分（例えば、Ｃ４Ａ）の欠乏が挙げられる。ＳＬＥは、複数臓器障害であり、広範な血管病変を引き起こし、関節、皮膚、腎臓、脳、肺、心臓、漿膜および消化管に影響を及ぼす可能性がある。米国におけるＳＬＥの報告された年間発症率は、低リスク群から高リスク群において、１００，０００人の集団あたり６〜３５新規症例で変わる。北欧では、発症率は低く、１００，０００人あたりおよそ４０人である。ヨーロッパ系の子孫ではない個体は、ＳＬＥのより高い頻度およびより高い重篤度を有し得、アフロカリブ族の子孫の１００，０００個体あたり１５９人もの高い範囲である。米国におけるＳＬＥの発症率は、１９９５年から１９７４年の２０年にわたって、１．０から７．６に増大したが、この頻度の増大が、診断の正確度の改善、人口動態の変化、環境変化またはこれらおよびその他の因子の組合せによるかどうかは明らかではない。
【０１２６】
米国におけるＳＬＥの有病率の推定値も、２５０，０００〜５００，０００総症例数で変わるが、Ｌｕｐｕｓ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａによって委託された電話調査に基づいて１００〜２００万とも高く推定されている。有病率の地域差は、環境および／または人種差の影響を反映し得る。例えば、広いバーミンガム、アラバマ州大都市圏における女性の調査によって１００，０００人あたり５００人の有病率が報告された。ＳＬＥは、出産年齢の女性に偏って影響し、ＳＬＥ患者の６０％が、人生の思春期と４０代の間の発症を経験し、この年齢範囲内で、女性対男性の比は、９：１であり、若者および高齢者では、比は３：１である。
【０１２７】
ＳＬＥの病因論は未知であるが、家族歴、遺伝子解析および地理的分布に基づいて、その開始は、遺伝的素因、性ホルモンおよび環境誘因（複数可）によって影響を受けると思われる。一卵性双生児におけるＳＬＥの出現は、遺伝性成分のエビデンスであるが、２５〜６０％という中程度の一致率は、その他の因子もこの障害の一因であることを示唆する。その他の自己免疫障害と同様に、最強の遺伝的関連は、ヒト主要組織適合複合体、ＨＬＡにおいてコードされる遺伝子とである。ＳＬＥ患者は統計的に増大した百分率のＨＬＡ−ＤＲ２およびＨＬＡ−ＤＲ３対立遺伝子を有し、拡張されたハプロタイプＨＬＡ−Ａ１、Ｂ８、ＤＲ３の頻度の増大もある。ＳＬＥと関連しているリスク変異体として言及されるその他の遺伝子として、ＩＲＦ５、ＰＴＰＮ２２、ＳＴＡＴ４、ＩＴＧＡＭ．ＢＬＫ、ＴＮＦＳＦ４およびＢＡＮＫ１が挙げられる。
【０１２８】
ＳＬＥの診断は、いくつかの課題を提起する。症状および冒される臓器障害は可変であり、ＳＬＥの症例の８０％が皮膚および関節に影響を及ぼし、９０％が、筋骨格系に影響を及ぼし、８０％が皮膚に影響を及ぼし、多くの場合、鼻梁から胸にわたる特徴的なチョウの形の発疹を含み、５０％が脱毛症を含み、５０％が胸膜、心膜または腹膜の炎症性漿膜炎を有し、１０％が、溶血性貧血を有し、５０％が、症例の２５％におけるてんかんをはじめとする精神神経合併症を有する。血清中のＡＮＡの検出は、ＳＬＥを示し得るが、患者の５〜１０％は血清陰性である。さらに、正常な、健常な成人女性の２５〜４０％が、ＳＬＥまたはその他の結合組織障害を発症せずに、一時的にＡＮＡ陽性であり得る。したがって、適切な診断には、決定的な同定および治療を遅らせる（ｓｌｏｗ）試験を支援するパネルが必要である。ＳＬＥの症状は変わるので、治療もそのように行う。メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｅ）およびアザチオプリンをはじめとする疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤＳ）は、紅斑の頻度を低下させる。ヒドロキシクロロキン、ＦＤＡ承認抗マラリア薬も投与される。重篤な糸球体腎炎には、患者はシクロホスファミドを処方される。広範な、深刻な臓器障害にも関わらず、予後は最近数十年で向上し、診断されたＳＬＥ患者の１０年生存は現在８０〜９０％を超えている。
【０１２９】
ヒト自己免疫障害と同様に、イヌＳＬＥは、複数臓器を標的とし、遺伝的素因を示す。ノヴァスコシアダックトーリングレトリーバーは、免疫媒介性リウマチ疾患（ＩＭＲＤ）およびステロイド反応性髄膜炎関節炎（ＳＲＭＡ）を含めたＳＬＥ関連疾患になりやすい。ＩＭＲＤ症状は、持続性の跛行、休息後のこわばりおよび関節痛をはじめとするヒトＳＬＥにおけるものと似ている。ＩＭＲＤに苦しむイヌの大部分は、抗核自己抗体（ＡＮＡ）反応性を有する。ＩＭＲＤ（５１症例）、ＳＲＭＡ（４９症例）を有するイヌおよび健常対照（７８症例）の比較配列決定によって、ＤＬＡリスクハプロタイプＤＲＢ１＊００６０１／ＤＱＡ１＊００５０１１／ＤＱＢ１＊０２００１のホモ接合性が、その他の遺伝子型に対してＩＭＲＤのリスクを高めること（ＯＲ＝４．９；ＡＮＡ陽性ＩＭＲＤ、ＯＲ＝７．２）が示された。リスクハプロタイプは、ヒトＨＬＡ−ＤＲＢ１対立遺伝子関節リウマチの共有エピトープとしてこれまでに同定されている５個のアミノ酸のエピトープＲＡＲＡＡを含有する。
【０１３０】
円板状ループスは、瘢痕化皮膚疾患および通常ＡＮＡを欠く患者または任意のその他の自己抗体によって特徴付けられるＳＬＥのサブセットである。症状は、通常、限局化されたままであり、症例の約１０％のみにおいて全身疾患に広がる。イヌ相当物、円板状紅斑性狼瘡は、全身性ループスの良性の形態と考えられる。主に顔面の皮膚炎であり、コリー、ジャーマンシェパード、シェットランドシープドッグ、ジャーマンショートヘアーポインター、シベリアンハスキー、アキタ、チャウチャウ、ブリタニースパニエルおよびシェットランドシープドッグにおいて最もよく見られる。円板状紅斑性狼瘡はまた、性別の不均衡を示し、症例の６０％が雌においてである。
【０１３１】
さらなる自己免疫および神経変性性疾患は、種々の刊行物において教示されている。例えば、Ｌｅｗｉｓ  Ｒら「Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｉｎ  Ｄｏｍｅｓｔｉｃ  Ａｎｉｍａｌｓ」、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１２４巻  Ｉｓｓｕｅ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ−Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ：パートＩ、１７８〜２００頁（オンラインで公開：２００６年１２月１６日）。
【０１３２】
感染性疾患
感染性疾患は、コンパニオンアニマルにおいて観察される別のクラスの自発的に生じる疾患である。自発的に生じる感染性疾患を有するイヌなどのコンパニオンアニマルの、種々の感染性疾患を研究するための動物モデルとしての使用は、いくつかの理由で有益である。一態様では、感染性病原体のさらなる抗生物質耐性株の作製が最小化される、および／または避けられる。別の態様では、望ましくない特徴を有する突然変異感染性病原体、例えば、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ  Ｓｅｒｏｖａｒ  Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の「スーパーシェッダー（ｓｕｐｅｒｓｈｅｄｄｅｒ）」株の作製が最小化される、および／または避けられる。
【０１３３】
コンパニオンアニマルにおいて観察される自発的に生じる感染性疾患として、それだけには限らないが、インフルエンザ、敗血症（例えば、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）敗血症）、細菌感染症（例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、その他のブドウ球菌感染症、大腸菌および腸球菌）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、小児リーシュマニア、ブルセラ症およびコクシジウム症が挙げられる。
【０１３４】
抗原、病原体およびその一部などの感染性疾患の１種または複数の態様を、自発的に生じる感染性疾患を有するコンパニオンアニマルにおいて同時に調べ、感染性疾患と戦うための治療薬または診断薬（例えば、画像処理技術など）の設計のための有益な情報を提供することができる。
【０１３５】
その他の疾患／病状
本発明はまた、イヌにおいて生じる遺伝性の遺伝病のいずれかを研究するためのプラットフォーム技術を提供する。例えば、イヌを含めた種々の動物における遺伝性疾患および遺伝性形質を載せている、＜ｗｗｗ．ｏｍｉａ．ａｎｇｉｓ．ｏｒｇ．ａｕ＞で動物におけるオンラインメンデル性遺伝（Ｏｎｌｉｎｅ  Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ  Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ａｎｉｍａｌ）を参照のこと。イヌは、およそ４５０種の遺伝病を経験する（Ｏｓｔｒａｎｄｅｒら、Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ６１巻：４７５〜４８０頁（１９９７年）。本発明のイヌモデル系を使用することで、ヒトにおける同じ疾患または病状に類似するこれらの４５０種のイヌ遺伝病のうちおよそ２２０種において種々の様式（例えば、複数の抗原）を研究できる。このような遺伝病の例として、それだけには限らないが、腎症、腎臓疾患、ナルコレプシー、網膜変性症、血友病および筋ジストロフィーが挙げられる。
【０１３６】
別の態様では、本発明は、アレルギー、過敏症または喘息の１種または複数の態様の試験のためのプラットフォーム技術として、自発的なアレルギー、過敏症（遅延型過敏症を含む）および喘息のイヌまたはネコのようなコンパニオンアニマルモデル系を提供する。一実施形態では、ネコは、特発性喘息を自発的に発症する。自発的に発症した喘息のネコモデルは、そのようなものとして、喘息発症、進行および再発の根底にある生物学的機序（例えば、免疫細胞の関与、気道閉塞）を調査するために有用である。喘息の生物学的基盤を理解することは、喘息の症状を寛解し得る治療およびその他の薬剤を開発するために使用できる。
【０１３７】
本発明の別の態様では、本明細書に提供されるプラットフォーム技術は、寛容化ワクチンおよびその他の寛容原に適用される。例えば、食物アレルギーは、学校、家および職場の日常の状況においてよく見られる。ピーナッツなどのナッツに対する極度の過敏症を、本明細書に記載されるプラットフォーム技術を使用して調査してもよい。種々の食品（ナッツ、卵、乳製品など）に対する寛容化を、コンパニオンアニマルモデル系において、単一のプラットフォームまたはプラットフォームの組合せ（例えば、複数の食物アレルギー抗原）で調査できる。
【０１３８】
同様に、本発明は、神経疾患および可能性ある治療薬または診断薬を調査するためのイヌまたはネコなどのコンパニオンアニマルモデル系を提供する。例えば、種々の神経疾患または状態の発病が、自発的に生じる神経疾患が生じるコンパニオンアニマルモデル系において観察される。１つの限定されない例として、イヌ脳（例えば、ビーグル）におけるベータ−アミロイド蓄積がある。ベータ−アミロイド蓄積は、アルツハイマー病の発症および／または進行に関与している。本発明のプラットフォーム技術が考慮されるその他の神経疾患または状態として、それだけには限らないが、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、認知機能障害、動脈瘤、変性性脊髄症、重症筋無力症、振戦およびてんかんが挙げられる。
【０１３９】
機械可読ストレージ媒体
コンパニオンアニマルモデル系を使用することによって作製されたデータを、機械可読媒体で保存できる。このようなデータは、生物学的応答、投与される薬剤に対する反応の生理学的パラメータ、同定される抗原（複数可）、投与される薬剤の構造、抗原または免疫原の構造（核酸およびアミノ酸両方の配列を含む）についての情報を含み得る。この情報は、機械可読媒体で保存でき、さらに利用して、イヌモデル系において望ましい免疫応答を誘発した公知の薬剤と同様の構造を有する新規薬剤を作製できる。このようにして、ヒトの治療において使用する可能性のために、望ましい生物学的効果を有する新規薬剤が同定される。
【０１４０】
本発明の別の態様では、機械可読ストレージ媒体を、教育上の目的、例えば、教材またはマニュアルのために使用できる。別の態様では、本発明は、個人、例えば、科学者、慈善家および獣医間の協力を促進することを考慮する。このような協力は、自発的に生じる疾患のコンパニオンアニマルモデル系の使用によって作製されたデータの流布によって発展させることができる。この流布は、有形媒体、例えば、機械可読ストレージ媒体でのこのデータの分布によって達成できる。
【０１４１】
したがって、本発明は、前記データを使用するために使用説明書を用いてプログラムされた機械を使用する場合には、上に記載されている本発明の分子または分子複合体のいずれかのグラフィック３次元描写を示す、機械可読データを用いて符号化されたデータ保存物質を含む、機械可読ストレージ媒体をさらに提供する。好ましい実施形態では、機械可読データストレージ媒体は、前記データを使用するために使用説明書を用いてプログラムされた機械を使用する場合には、分子または分子複合体のグラフィック３次元描写を示す、機械可読データを用いて符号化されたデータ保存物質を含む。
【０１４２】
例えば、データストレージ媒体を読み取るためのシステムは、中央処理装置（「ＣＰＵ」）、例えば、ＲＡＭ（ランダムアクセスメモリ）または「コア」メモリ、マスストレージメモリ（例えば、１つまたは複数のディスクドライブまたはＣＤ−ＲＯＭドライブ）であり得る作業メモリ、１つまたは複数のディスプレイデバイス（例えば、ブラウン管（「ＣＲＴ」）ディスプレイ、発光ダイオード（「ＬＥＤ」）ディスプレイ、液晶ディスプレイ（「ＬＣＤ」）、電子発光ディスプレイ、真空蛍光ディスプレイ、電界放出ディスプレイ（「ＦＥＤ」）、プラズマディスプレイ、プロジェクションパネルなど）、１つまたは複数のユーザー入力デバイス（例えば、キーボード、マイクロフォン、マウス、タッチスクリーンなど）、１つまたは複数の入力ラインおよび１つまたは複数の出力ラインを含み、そのすべてが、従来の双方向システムバスによって相互に連結されている、コンピュータを含み得る。このシステムは、スタンドアロンのコンピュータであってもよく、その他のシステム（例えば、コンピュータ、ホスト、サーバーなど）に対してネットワーク化されていてもよい（例えば、ローカルエリアネットワーク、広域ネットワーク、イントラネット、エクストラネットまたはインターネットによって）。システムはまた、家庭用電化製品および電気器具などのさらなるコンピュータ制御されたデバイスを含み得る。これによって、より良好な結果のために、共同努力がプールされることが可能となる。
【０１４３】
入力ハードウェアは、入力ラインによってコンピュータとつながれていてもよいし、種々の方法で実行されてもよい。本発明の機械可読データは、電話線によって接続されたモデムもしくは複数のモデムまたは専用のデータラインの使用によって入力してもよい。あるいは、またはさらに、入力ハードウェアは、ＣＤ−ＲＯＭデバイスまたはディスクデバイスを含み得る。ディスプレイ端末とともに、キーボードを入力デバイスとして使用してもよい。
【０１４４】
出力ハードウェアは、出力ラインによってコンピュータとつながれていてもよいし、同様に、従来の装置によって実行されてもよい。例として、出力ハードウェアは、ＱＵＡＮＴＡなどのプログラムを使用して本発明の活性部位のグラフィック描写をディスプレイするためのディスプレイデバイスを含み得る。出力ハードウェアはまた、ハードコピー出力が生成され得るようなプリンター、またはシステム出力を後の使用のために保存するためのディスクドライブを含み得る。
【０１４５】
実施中は、ＣＰＵが、種々の入力および出力デバイスの使用を調整し、マスストレージデバイスからのデータアクセスを調整し、作業メモリへアクセスし、作業メモリからアクセスされ、データ処理ステップのシーケンスを決定する。いくつかのプログラムを使用して、本発明の機械可読データを処理してもよい。このようなプログラムは、上に記載される薬物発見のコンピュータによる方法に関連して論じられている。ハードウェアシステムのコンポーネントへの言及は、必要に応じて、データストレージ媒体の以下の説明のいたるところに含まれる。
【０１４６】
本発明において有用な機械可読ストレージデバイスとして、それだけには限らないが、磁気デバイス、電気デバイス、光学デバイスおよびそれらの組合せが挙げられる。このようなデータストレージデバイスの例として、それだけには限らないが、ハードディスクデバイス、ＣＤデバイス、デジタルビデオディスクデバイス、フロッピー（登録商標）ディスクドライブ、リムーバブルハードディスクデバイス、磁気光学ディスクデバイス、磁気テープデバイス、フラッシュメモリデバイス、バブルメモリ装置、ホログラフィックストレージデバイスおよび任意のその他のマスストレージ周辺デバイスが挙げられる。当然のことながら、これらのストレージデバイスが、必要に応じて、ハードウェア（例えば、ドライブ、コントローラ、電源など）を含む。これらのデバイスは、データの保存を可能にするために、必要なハードウェア（例えば、ドライブ、コントローラ、電源など）ならびに任意の必要な媒体（例えば、ディスク、フラッシュカードなど）を含むことを理解すべきである。
【０１４７】
以下の実施例は、単に例示目的で提供されるものであって、決して、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０１４８】
（実施例１）
自発的に生じる疾患の動物モデルにおいて使用するための送達ビヒクルの調製
選択的標的法を可能にする分子特性もしくは物理的特性またはバイオマーカー特性を使用することによって、正常細胞の代わりに癌細胞を選択的に探し出す送達ビヒクルを調製する。この実施例では、送達ビヒクルは、リポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子である。リポソームは、帯電していてもよく（例えば、カチオン性）または帯電していなくてもよい。これらのリポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子は、受容体またはリガンドまたはバイオマーカーと伴に、また、伴わずに作製する。
【０１４９】
また、１種または複数の腫瘍退縮ウイルス（例えば、「Ｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ」、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ、Ｖｉｌｅ  ａｎｄ  Ｐａｎｄｈａ共同編集者、Ｗｉｌｅｙ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００８年に論じられる腫瘍退縮ウイルスのいずれか）を保持する、リポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子を作製する。免疫細胞または走化性物質または免疫モジュレーターと伴に、またはそれらを伴わずに、プロドラッグおよびＲＮＡｉ標的を保持するその他のリポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子を作製する。
【０１５０】
リポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子中にプロドラッグを組み込み、自発的に生じる疾患を有する動物において試験するために使用する。生成物の限定されない例として、癌治療薬およびその他の癌のための薬物がある。同様に、ＲＮＡｉ標的も、リポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子中に組み込む。ＲＮＡｉ（複数可）は、ＲＮＡｉ標的、癌原遺伝子および癌遺伝子には、癌原遺伝子および癌遺伝子の活性化をオフにし、遮断し、または低減するのに役立つ。ＲＮＡｉ（複数可）は、腫瘍抑制因子には、腫瘍抑制因子の活性をオンにし、または増大するためにアゴニストとして役立つ。
【０１５１】
本実施例のリポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子はまた、サイトカイン、ケモカイン、エキソソーム（肥満細胞、ＴおよびＢリンパ球、樹状細胞、血小板などの種々の免疫細胞によって分泌される小粒子）をはじめとする免疫モジュレーターまたは免疫細胞の分化／成熟／クローン増殖を促進する免疫因子（例えば、ＣＴＬＡ−４）とともにパッケージする。この実施例のリポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子中に組み込まれる免疫モジュレーターはまた、免疫抑制細胞（例えば、Ｔ調節性細胞またはＭＤＳＣ）を標的とし、癌免疫療法を増強し得る。
【０１５２】
この実施例のリポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子はまた、エピジェネティクス、例えば、メチル化、プレニル化、アセチル化および脱アセチル化（例えば、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）およびヒストンデアセチラーゼ（ｄｅａｃｅｙｔｌａｓｅｓ）（ＨＤＡＣ））、クロマチン修飾、Ｘ−不活性化および刷り込みに影響を及ぼす因子とともにパッケージする。
【０１５３】
この実施例のリポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子は、これらの送達ビヒクルをより有効にするのに役立つ種々の分子特性を用いて設計する。癌抗原およびその他の種類のバイオマーカー（代謝マーカー）は、分子特性の例である。癌抗原に関するより詳細については実施例３を参照のこと。別の分子特性は、リガンド結合である。結合のための適当なリガンドを使用することによって前転移ニッチが標的とされる。同様に、転移ニッチも標的とされる。特定の種類の癌には、いくつかのマーカーを使用する。例えば、膵臓癌を標的とするにはＡｘｌ受容体を使用するが、これは、＞５０％が転移性膵臓癌において発現されるからである。Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．８巻（７号）：６１８〜２６頁（２００９年）。代謝マーカーの一例として、神経膠芽腫におけるｃＡＭＰ治療の際に量が変化する、以前よりＮ−結合型の糖ペプチドがある。Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ９巻（３号）：５３５〜４９頁（２００９年）。
【０１５４】
この実施例のリポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子はまた、種々の物理的特性を使用して設計する。腫瘍組織は、非腫瘍組織とは異なる物理的勾配を有する。腫瘍対非腫瘍組織の圧力勾配は、当業者に公知の標準技術によって測定する。腫瘍の圧力勾配に従って、腫瘍および身体の腫瘍保有領域を優先的に標的とするための、上記のリポソーム、リポソーム様粒子またはナノ粒子を作製する。
【０１５５】
（実施例２）
薬剤（複数可）の送達のタイミングおよび投薬
この実施例では、均一なまたは不均一なイヌ集団のコホートを自身の対照として使用する。調査下での１種または複数の薬剤の投薬は、用量間で約１週間である。癌治療および免疫モジュレーター間の送達の順序を変え、生物学的応答を測定および／またはモニタリングする。イヌの１群では、癌治療を、最初に、次いで、免疫モジュレーター（複数可）を投与する。別のイヌの群では、免疫モジュレーター（複数可）を、最初に、次いで、癌治療を投与する。
【０１５６】
別の動物の群では、走化性物質を伴う、または伴わない免疫モジュレーターの送達の順序を切り換え、次いで、生物学的応答を測定する。
【０１５７】
（実施例３）
イヌおよび癌抗原／バイオマーカー
トランスレーショナル研究には、複数の癌抗原および／またはバイオマーカーが、互いの種々の組合せで使用される。骨肉腫については、調べられる癌抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、モノクローナル抗体ＴＰ−１およびＴＰ−３（ヒト骨肉腫の細胞上で発現される抗原を検出する）、ｅｒｂＢ−２（ヒト上皮増殖因子受容体２／ｎｅｕ）癌原遺伝子、ビメンチン、オステオポンチン、ＰＣＮＡ、ｐ５３、ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９によって結合される抗原が挙げられる。
【０１５８】
リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫）については、調べられる抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、ＣＤ３抗原（Ｊ  Ｖｅｔ  Ｄｉａｇｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ５巻：６１６〜６２０頁、１９９３年）、Ｔ２００（リンパ球分化抗原の相同体）（Ｃａｎ  Ｊ  Ｖｅｔ  Ｒｅｓ．  ５１巻（１号）：８９〜９４頁、１９８７年）およびイヌリンパ腫モノクローナル抗体２３１によって結合される抗原（Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、７巻、５９〜６２頁、２００９年）が挙げられる。
【０１５９】
血管肉腫については、調べられる抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、ｃ−ｋｉｔ、ＣＤ３４、ＣＤ１３３、ＣＤ４５（Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ．、３４巻（７号）：８７０〜８頁、２００６年）、因子ＶＩＩＩ関連抗原、ＩＣＡＭ−１、αｖβ３インテグリン（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、８１巻（１号）：７６〜８６頁、２００６年）、ＶＥＧＦ受容体１および２、ＣＤ３１、ＣＤ１４６およびαｖβ３インテグリン（Ｎｅｏｐｌａｓｉａ、６巻（２号）：１０６〜１１６頁、２００４年）が挙げられる。
【０１６０】
乳癌については、調べられる抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、ＳｉＳｏ細胞上に発現される受容体結合性癌抗原（ＲＣＡＳ１）（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６巻（６号）：６５１〜６５８頁、２００４年）、シアリルルイスＸおよびＴ／Ｔｎ（Ｖｅｔ  Ｐａｔｈｏｌ  ４６巻：２２２〜２２６頁、（２００９年）が挙げられる。
【０１６１】
精巣癌については、調べられる抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、１１３巻（４号）：３０１〜３１３頁、１９９５年）、ＧＡＴＡ−４（セルトリ細胞において発現され、ライディッヒ（間質性）細胞ではあまりよく見られないる転写因子）（Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、ｄｏｉ：１０．１３５４／ｖｐ．０８−ＶＰ−０２８７−Ｒ−ＢＣ、２００９年）、インヒビン−アルファおよびビメンチン（Ｊ．Ｖｅｔ．Ｓｃｉ．、１０巻（１号）、１〜７頁、２００９年）が挙げられる。
【０１６２】
肥満細胞癌については、調べられる抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、ＣＤ１１７（ＢＭＣ  Ｖｅｔ  Ｒｅｓ．３巻：１９、２００７年）、銀で染色される染色体核小体形成体領域（ＡｇＮＯＲ）および抗増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）（Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、３１巻、６号、６３７〜６４７頁、１９９４年）が挙げられる。
【０１６３】
膀胱癌については、調べられる抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、Ｖ−ＴＢＡまたは尿中腫瘍膀胱抗原（Ａｍ  Ｊ  Ｖｅｔ  Ｒｅｓ．  ６４巻（８号）：１０１７〜２０頁、２００３年）および塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）が挙げられる。
【０１６４】
前立腺癌については、調べられる抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、前立腺ホスファチジン酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｃ  ａｃｉｄ）抗原、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）および上皮Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼ発現の下方制御（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｔ．３巻：８号、２００３年）が挙げられる。
【０１６５】
黒色腫については、調べられる抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、マウスモノクローナル抗体ＩＢＦ９によって認識されるイヌ黒色腫抗原（Ａｍ  Ｊ  Ｖｅｔ  Ｒｅｓ．５８巻（１号）：４６〜５２頁、１９９７年）、Ｓ１００、ヒトメラノソーム特異的抗原（ＨＭＳＡ）１および５、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、ビメンチンおよびＩＢＦ−９（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｖｅｔｓｃｉｔｅ．ｏｒｇ／ｐｕｂｌｉｓｈ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／００００３８／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）が挙げられる。
【０１６６】
白血病については、調べられる抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、ＴＣＲ  Ｖβ遺伝子の再配列（例えば、７種の別個のイヌＴＣＲ  Ｖβ遺伝子の検出）（Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、６９巻、２〜４号、１１３〜１１９頁、１９９９年）が挙げられる。
【０１６７】
肺癌腫については、調べられる抗原および／またはバイオマーカーとして、それだけには限らないが、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）およびＫｉ−６７（ＭＩＢ１）タンパク質（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、１２０巻（４号）：３２１〜３３２頁、１９９９年）が挙げられる。
【０１６８】
（実施例４）
慢性炎症と関連している癌
種々の病状および慢性炎症の疾患進行を研究するために、自発的に生じる慢性炎症を有するイヌおよびネコが使用される。この情報が、慢性炎症を有するヒトを助けること、ならびに、慢性炎症の症状を軽減してイヌおよびネコを助けることにトランスレートされる。理論に束縛されるものではないが、より多くの慢性炎症を発生させるようフィードバックするループを中断することが、癌の発生を減少させ、ある場合には、防ぎ、または遅延するのに役立ち得る。調べられる慢性炎症の特徴として、ＩＬ−１７の役割および効果および骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）がある。
【０１６９】
一実験では、自発的に生じる炎症を有するイヌおよびネコなどのコンパニオンアニマルが、炎症の拡大と関連している癌の低減が見られるかどうかを調べるために使用されるＣｏｘ−２阻害剤を用いて試験されている。別の実験では、これらの動物において、炎症について、リポソームおよびナノ粒子を、慢性炎症を有する組織へ標的とするのに必要なケモカイン勾配およびその他の勾配が試験されている。（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１８１巻、１１７９〜１１８６頁、１９９５年）。サーベイランスにとって有益であるその他の種類の免疫細胞、例えば、ＣＩＫ細胞、ＮＫＧ２ＤおよびＮＫＴ細胞および自然免疫細胞（例えば、ガンマデルタＴ細胞）も同様にモニタリングされている。
【０１７０】
別の実験では、自発的に生じる炎症性筋疾患を有するイヌが、ヒト筋炎のためのトランスレーショナルモデルに使用されている（Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、１１３巻（１〜２）：２００〜２１４頁、２００６年）。
【０１７１】
（実施例５）
変性性疾患
ヒトにおける種々の種類の同様の神経変性性疾患が研究するために、天然に存在する神経変性性疾患を有するイヌなどの動物が使用される。種々の疾状および／または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳまたはルーゲーリック病）の進行を研究するために、イヌ変性性脊髄症を有するイヌが使用される。神経学的状態の進行を停止するための、またはその状態を改善するための候補である種々の薬剤を、イヌ変性性脊髄症を有するイヌに投与し、生理学的効果についてモニタリングして情報を得ることができ、これを、ＡＬＳを有するヒト身体が、同様の薬剤に対してどのように反応するかにトランスレートできる。
【０１７２】
神経変性性疾患についてのトランスレーショナル情報を得るための別の実験では、アルツハイマー病のトランスレーショナルモデルとしてヒト型β−アミロイドを自発的に蓄積するイヌが使用される（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、２８巻（１４号）：３５５５〜３５６６頁、２００８年）。
【０１７３】
その他の実験では、生物学的経路および治療薬を調べるためのヒトてんかんまたはパーキンソン病のトランスレーショナルモデルとして、てんかんまたはパーキンソン病を有するイヌが使用される。
【０１７４】
（実施例６）
非ホジキンリンパ腫のイヌモデルにおける腫瘍ワクチン反応を増強するための骨髄抑制細胞枯渇
この実施例は、実施例の最後の刊行物の一覧に対応する番号を使用することによって刊行物に対する参照を含有する。この実施例の全体的な目標は、既存の癌ワクチンに対する免疫応答を増強するためにＭＳＣ枯渇を利用することによって、より有効な治療的癌ワクチンを開発することである。現在の腫瘍ワクチンの成功率は、ワクチン設計に向けられた多大な量の努力にも関わらず、低いままである。現在の癌ワクチンの相対的な効果のなさは、一部は、抗腫瘍免疫を強く抑制するだけでなく、ワクチンに対する免疫応答を一般に抑制し得る骨髄抑制細胞（ＭＳＣ）の免疫抑制特性に起因する。予備研究によって、リポソームクロドロネート（ＬＣ）を使用するＭＳＣの除去が、自発的なＴ細胞媒介性抗腫瘍免疫を誘発し得ることが示されている。さらに、予備研究によって、ＭＳＣ枯渇が、腫瘍を有さない動物においてワクチンに対する免疫応答を増大させ得ることも示されている。したがって、この実施例は、腫瘍ワクチン接種後の抗腫瘍免疫の生成にＭＳＣ枯渇がどのように影響を及ぼすかをマウスおよびイヌ腫瘍モデルの両方を使用して詳述する。次いで、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の自発的なイヌモデルを使用して、組み合わせたＭＳＣ枯渇／腫瘍ワクチン接種アプローチが、最小残存腫瘍量を低減することにおいて腫瘍ワクチン接種単独よりも有効であるかどうかという問題を調べる。
【０１７５】
目的：マウス腫瘍モデルを使用して、腫瘍ワクチン接種に対する免疫応答を増強するためのＭＳＣ枯渇の最適のタイミングを調べること。非結合仮説は、ＭＳＣの枯渇が、ワクチン接種後ほどなく、ワクチン接種に対するＴ細胞応答を大幅に増強し、大幅に増強された抗腫瘍活性を引き起こすということである。
【０１７６】
癌ワクチンおよびＮＨＬの背景および理論的根拠
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、ワクチン免疫療法の第一の標的と考えられてきたヒトの重要な腫瘍であるが、これは、腫瘍細胞は各々、独特の腫瘍抗原（すなわち、イディオタイプ表面免疫グロブリン分子）を発現するからである。ＮＨＬのほとんどの形態は、化学療法を用いる治療に対して比較的不応性であり、罹患患者には、通常、短い生存期間しかない。したがって、ＮＨＬのためのいくつかの腫瘍ワクチンアプローチが考案されてきた（１〜５）。ほとんどのＮＨＬワクチンは、イディオタイプ抗原受容体を、免疫化のための標的抗原として利用してきた。ＮＨＬ患者では、多数のワクチン研究が実施されており、３つのＮＨＬ研究が第ＩＩＩ相臨床試験を完了するまでに進んでいる（５、６）。残念ながら、有望な予備結果にも関わらず、今までのところ完了した第ＩＩＩ相試験の各々は、もともとの研究のエンドポイントを達成できなかった（５）。ワクチン試験失敗の理由は、明らかではないが、ワクチン設計、不十分なワクチンの効力または患者組み入れ基準と関連している可能性がある。
【０１７７】
大きな臨床成功がないにも関わらず、過去２０年にわたって癌ワクチンの設計および実施においては相当な進歩があった。しかし、第Ｉ相試験を超えて進んだヒト癌ワクチンはまだほとんどない。したがって、ワクチン設計における漸進的な改善は、癌ワクチンが直面するかなりの難関を克服するには十分でない可能性があることは明らかである。したがって、癌免疫療法における研究の焦点は、今、腫瘍免疫の調節における腫瘍微小環境の役割のより良好な理解へとシフトし始めた。この再び焦点を絞ることから現れる１つの新規戦略は、免疫調節および阻害機序を修飾または回避することを使用して、既存の腫瘍ワクチンの有効性を改善できるであろうという考えである。
【０１７８】
骨髄抑制細胞（ＭＳＣ）は、抗腫瘍免疫を阻害する。いくつかの最近の研究は、未熟な骨髄細胞が、腫瘍免疫の抑制において果たす重要な役割をより十分に定義し始めた（７〜１１）。この不十分にしか定義されていない骨髄細胞の集団は、まとめて、骨髄抑制細胞（ＭＳＣ）と呼ばれる。最近、癌を有する動物におけるＭＳＣ集団は、未熟な単球および好中球の混合物からなることが示された（１２）。その異なる系統にも関わらず、単球性および好中球性ＭＳＣは両方とも、異なる機序によってではあるが、Ｔ細胞およびＮＫ細胞機能を抑制することを示した。Ｔ細胞およびＮＫ細胞の抑制は、反応性窒素種、反応性酸素種の産生およびＴＧＦ−βの表面発現ならびにアルギナーゼ産生を含むいくつかの機序によって媒介される。多くの場合、ＭＳＣによる阻害には、Ｔ細胞との直接接触または極めて密接な接触が必要である。最終結果は、ＭＳＣの近傍におけるＴ細胞およびＮＫ細胞が、細胞毒性、増殖およびサイトカイン産生を機能的にできなくされることである。骨髄からのＭＳＣの生成は、腫瘍細胞自体によって産生される、または腫瘍関連炎症に応じて産生されるサイトカインおよび増殖因子によって調節される。ＭＳＣは、骨髄からの放出後、脾臓、骨髄、流入領域リンパ節および腫瘍組織に分布する。
【０１７９】
骨髄抑制細胞は、癌に応じて生成されるだけでなく、種々の炎症刺激によっても誘発される。例えば、拡大された数のＭＳＣが、敗血症、慢性感染症（ウイルス性、真菌性）および慢性炎症性疾患を有する個体中に存在する（１２）。したがって、ＭＳＣは、急性および慢性炎症両方の陰性モジュレーターとして働くよう進化した可能性があることは明らかである（７、１３）。したがって、炎症の調節因子として見なされ、理論に束縛されるものではないが、ＭＳＣは、ワクチン、特に、相当な炎症を誘発するワクチンに対する免疫応答を弱めるよう働く場合もある。このような反応は、癌を有する個体では、特に顕著であるが、これは、彼らがすでに大きく拡大した数のＭＳＣを有するからであろう（１４）。実際、ＧＭ−ＣＳＦを形質導入した黒色腫ワクチンでワクチン接種された黒色腫患者において、腫瘍ワクチン接種に対するちょうどこのようなＭＳＣ反応のエビデンスが報告されている（１５、１６）。ＭＳＣが実際に、腫瘍ワクチン反応を阻害する場合には、ＭＳＣを除去することまたはその効果を阻止することが、癌を有する患者においてワクチン接種に対する有効なＴ細胞免疫応答をブーストするのに役立ち得る。この考えを支持する実験的エビデンスは、細胞を成熟したマクロファージまたは好中球にさせ、その免疫抑制特性を逆転させる、オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）によって誘導されるＭＳＣの分化の研究からもたらされている。腫瘍を有する動物またはヒトがＡＴＲＡで治療されると、自発的な抗腫瘍免疫が改善され、ワクチン反応が大幅に増強された（１７〜１９）。同様の腫瘍ワクチン反応の増強は、ニトロアスピリンを使用してＭＳＣによるＲＯＳ産生が阻害された場合にも報告された（２０）。
【０１８０】
１つの問題は、ＭＳＣ枯渇が、腫瘍免疫を回復させ、腫瘍ワクチンの有効性を改善し得るかどうかである。先の情報に基づいて、理論に束縛されるものではないが、ＭＳＣの除去は、腫瘍ワクチン反応を改善し得る。現在、ｉｎ  ｖｉｖｏでＭＳＣを除去するためのたった２つの現実的な選択肢は、抗体媒介性枯渇を使用することまたはリポソームクロドロネートを使用することである。ＭＳＣの抗体媒介性枯渇は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで幾分かの有効性を示したが、ＭＳＣに特異的な細胞表面マーカーが同定されていないので、現在、実現可能とは考えられていない（２１）。しかし、抗体を用いるＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋細胞の非特異的枯渇は、マクロファージ、単球および好中球の広範な枯渇をもたらし、免疫抑制のリスクを増大する。リポソームクロドロネート（ＬＣ）は、過去には、さまざまな免疫学的調査のためにマウスにおいてマクロファージおよび単球を枯渇させるために広く使用されていた（２２〜２６）。ビスホスホネート薬クロドロネートが、中性リポソーム内にカプセル化されると、リポソームは、食作用性骨髄細胞（マクロファージ、単球、ＭＳＣ）によって効率的に取り込まれ、その後、クロドロネートの細胞内放出およびＡＴＰ結合についての競合によるマクロファージアポトーシスの迅速な誘導が続く（２７、２８）。ＬＣは、好中球を枯渇させないので、大きな免疫抑制のリスクはかなり減少する。
【０１８１】
さらに最近、ＬＣ治療はまた、げっ歯類腫瘍モデルにおいて抗腫瘍活性を実証したが、これらの研究では、ＬＣ治療の抗腫瘍効果は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の枯渇および腫瘍血管新生の阻害の効果によって起こった（２９〜３１）。マクロファージ枯渇剤としてのＬＣの使用が、マウスモデルにおいて、および自己免疫疾患を有するイヌにおいて調べられた（３２、３３）。ＬＣの全身（静脈内）投与はまた、マクロファージの枯渇に加え、相当なＭＳＣ枯渇も誘導し、これは、マウスにおける、およびイヌにおける相当な抗腫瘍活性と関連していた（３４）。
【０１８２】
しかし、疑問は、ＬＣ治療が、腫瘍組織におけるＴＡＭの局所枯渇ではなく全身の免疫効果の誘導によって、抗腫瘍活性を媒介し得るかどうかであった。実際、ＬＣ治療によって引き起こされた抗腫瘍活性は、ＴＡＭの枯渇または腫瘍血管新生の阻害によってではなく、抗腫瘍免疫の自発的な全身活性化によるものであった。したがって、理論に束縛されるものではないが、ＬＣを使用するＭＳＣ枯渇はまた、ワクチン接種に対して適切な順序で投与される場合には、腫瘍ワクチンの有効性を大幅に増強し得る。実際、ＬＣ治療とモデル抗原に対するワクチン接種を組み合わせる実験は、ちょうどこのような効果が生じることを示唆する。したがって、理論に束縛されるものではないが、ＬＣを使用するＭＳＣ枯渇は、ＮＨＬ腫瘍ワクチンの有効性を改善する。この実施例は、この仮説を、まず、マウス腫瘍モデルにおいて調査し、次いで、ＮＨＬのイヌモデルにおいて原理の証明実験を実施する。
【０１８３】
結果：ＬＣの全身投与によって誘発される抗腫瘍活性に関する過去の研究は、ＬＣ送達を最適化して、最大の抗腫瘍活性を生じさせる方法を決定すること、ＬＣによって誘導される抗腫瘍活性に対して感受性である腫瘍種の範囲を評価することおよびＬＣが抗腫瘍活性を生じさせる機序（複数可）を規定することに幾分か焦点をあわせてきた。ＬＣの静脈内投与は、マウスモデルにおいて定着腫瘍の増殖の相当な阻害を誘発する。例えば、定着したｓ．ｃ．ＭＣＡ−２０５（肉腫）腫瘍を有するＣ５７Ｂ１／６マウスへの１週間に１回の２００μｌのＬＣのｉ．ｖ．投与は、腫瘍増殖の大幅な阻害をもたらした（図１）。重要なことに、対照ＰＢＳ含有リポソーム（Ｌ−ＰＢＳ）の投与は、抗腫瘍活性を誘発しかった。同様の抗腫瘍活性はまた、ＣＴ−２６（結腸癌腫）腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスにおいても生じた。また、Ｂ１６（黒色腫）および４Ｔ１（乳癌腫）腫瘍を有するマウスにおいても相当な抗腫瘍活性が観察された。したがって、ＬＣ投与は、腫瘍型およびマウス株に独立して腫瘍増殖を阻害する。
【０１８４】
イヌにおける研究も、ＬＣが抗腫瘍活性を有することを実証した。例えば、軟組織肉腫（ＳＴＳ）または悪性組織球増殖症（ＭＨ）を有するイヌへの１ヶ月に２回のＬＣのｉ．ｖ．投与は、治療された患者のおよそ５０％において腫瘍退縮を誘発する。図２に示されるように、一連のＬＣ単独を用いる治療で治療された、ＳＴＳを有するイヌは、３回目のＬＣ投与の後に始まる大幅な自発的な腫瘍退縮を経験した。治療反応はまた、ＬＣを用いて治療されたＭＨを有するイヌにおいても観察された（３４）。重要なことに、ＬＣを用いる治療は、イヌに、進行癌を有するものでさえ、耐容性良好であり、唯一の注目すべき副作用は、一時的な発熱であり、興味深いことに、これは、ＭＨを有するイヌにおいてのみ観察された。したがって、ＬＣはまた、癌を有するイヌにおいて、有効であり、耐容性良好な抗腫瘍剤である。
【０１８５】
ＬＣ治療が自発的な抗腫瘍活性を誘導し得る免疫学的機序を解明する研究が行われた。ＬＣは、先の研究から、食作用性細胞を枯渇させることが分かっているので、ＬＣ治療が、骨髄抑制細胞（ＭＳＣ）、特に、単球性ＭＳＣ（３５）を枯渇させ得るかどうかを調査した。腫瘍保有マウスへのＬＣのｉ．ｖ．投与の２４時間後、脾臓、血液および腫瘍組織において、ＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋  ＭＳＣを数えた（図３）。血液（図３）、脾臓および腫瘍組織において、相当なＭＳＣ枯渇が生じ、枯渇した細胞のそのほとんどが単球性であった。さらに、ＬＣ治療されたマウスにおいて、ＴＡＭの相当な枯渇および腫瘍血管新生の阻害があった。したがって、ＬＣの全身投与は、癌を有する動物において、ＭＳＣを含めた、食作用性骨髄細胞の複数の異なる集団の相当な枯渇を誘発した。
【０１８６】
ＬＣのｉ．ｖ．投与は、ＭＳＣの全身枯渇をもたらしたという事実に基づいて、次のステップは、ＬＣ治療の抗腫瘍効果が、局所効果（すなわち、ＴＡＭの枯渇）によって媒介されるか、または全身の免疫学的効果によって媒介されるかを調査することとした。この問題に対処するために、Ｔ細胞を欠く腫瘍を保有するマウス（ＲＡＧ２−／−マウス）をＬＣを用いて治療し、ＭＣＡ腫瘍増殖速度を、ＬＣを用いて治療された野生型Ｃ５７Ｂ１／６マウスと比較した。ＬＣ治療の抗腫瘍効果は、ＲＡＧ２−／−マウスではほぼ完全に無効にされ、このことは、ＬＣの抗腫瘍活性は大部分はＴ細胞によって媒介されることを示唆した。したがって、どのＴ細胞サブセットが、ＬＣの抗腫瘍活性を媒介したかを決定するために、ＣＤ８−／−マウスおよびＣＤ４−／−マウスにおいて、腫瘍実験を反復した。ＣＤ８−／−マウスでは、ＬＣの抗腫瘍活性は、ほぼ完全に排除された（図４）のに対し、ＣＤ４−／−マウスでは、ＬＣ活性は、部分的に阻害されただけであった。また、対照は、ＰＢＳ含有リポソームを用いて治療されたマウス（ｌｉｐ対照）を含んでいた。したがって、ＬＣのｉ．ｖ．投与によって誘発される抗腫瘍活性は、ＴＡＭまたは腫瘍血管新生に対する局所効果ではなく、ＣＤ８Ｔ細胞抗腫瘍免疫の全身活性化によって媒介された。これらの結果は、ＭＳＣ枯渇および全身免疫性の活性化が、ＬＣが抗腫瘍活性を生じさせる主な機序である可能性が高いことを示唆するので、重要である。
【０１８７】
ＭＳＣのＬＣ媒介性枯渇が、自発的なＣＤ８Ｔ細胞媒介性抗腫瘍活性を生じさせることができた先行する実験はまた、ＭＳＣ枯渇がワクチン反応を増強できる可能性があることも示唆した。この問題に対処するために、マウスに、モデル抗原としてオボアルブミンを含有するＣＬＤＣアジュバント添加ワクチン（３６）を使用してｓ．ｃ．ワクチン接種し、ＬＣを使用するＭＳＣ枯渇が、ワクチン反応を増強し得るかどうかを、読み出し情報として体液性免疫応答を使用して問うた（図５）。マウスに、ｏｖａ／ＣＬＤＣワクチン単独を用いて、またはｏｖａ／ＣＬＤＣおよび免疫化の３日前のＬＣ治療を用いて（ＬＣ、次いで、Ｖａｃｃ）、またはｏｖａ／ＣＬＤＣおよび免疫化の３日後のＬＣ治療（Ｖａｃｃ、次いで、ＬＣ）を用いて、１回ワクチン接種した。血液を採取し、ｏｖａに対するＩｇＧ反応をＥＬＩＳＡによって調べた。ｏｖａ／ＣＬＤＣを用いてワクチン接種され、免疫化の３日後にＬＣを用いて治療されたマウスは、ｏｖａ／ＣＬＤＣ単独またはｏｖａ／ＣＬＤＣおよび免疫化の３日前のＬＣを用いてワクチン接種されたマウスよりも大幅に高い抗体応答を発生させた。したがって、これらのデータは、実際、ＭＳＣ枯渇は、ワクチンに対して適切な順序で投与された場合に、ワクチン接種に対する免疫応答を増強し得ることを示唆する。さらに、この実験は、非腫瘍保有マウスにおいて実施したが、ワクチン増強効果は、ＭＳＣのかなり大きい集団を有する腫瘍保有動物においては、より顕著であると予想されるということも留意されるべきである。
【０１８８】
実験計画
目的：ＭＳＣ枯渇のタイミングが、ワクチンによって誘導されるＴ細胞応答にどのように影響を及ぼすかを決定する。
【０１８９】
ＬＣは、ＭＳＣの枯渇において有効であるが、ＬＣの投与はまた、マクロファージおよびＤＣをはじめとするその他の関連骨髄細胞の枯渇ももたらす。したがって、ＬＣ投与が、どの細胞が枯渇されたか、およびワクチン接種に対して何時それらが枯渇したかによって、ワクチン反応を阻害または増強し得ることが可能である。したがって、マウス免疫化モデルを使用して、ＣＬＤＣアジュバント添加ワクチンを用いるワクチン接種に対する細胞性および体液性免疫応答に対する、全身ＬＣ投与のタイミングの効果を調べる。最初の実験は、モデル抗原を使用するが、これは、これらの実験の読み出し情報が、極めて頑強で、再現性があるからである。ひとたび、投与の最適のタイミングが同定されれば、２種のマウス癌モデルにおいて、これらの知見の関連性を確認する。Ｂ１６黒色腫モデルは、四量体を使用してＣＤ８Ｔ細胞応答を追跡できるので選択し、一方で、Ａ２０リンパ腫モデルは、イヌＮＨＬモデルとの密接な類似性のために選択した。さらに、ＨＡ抗原をトランスフェクトされているＡ２０細胞系統を使用し、これによって、ＣＤ４Ｔ細胞応答のより正確な評価が可能となる。
【０１９０】
実験的アプローチ：
【０１９１】
【表１】
2012526997.tif 000003
目的：名目上の抗原を用いる、または腫瘍抗原を用いる免疫化に対するＴ細胞および抗体応答を増大するための、ＭＳＣ枯渇の最適なタイミングを決定すること。これらの実験は、１）組み合わせたＭＳＣ枯渇およびワクチン接種が、通常の、および腫瘍保有マウスにおいて免疫応答を増強するかどうかを調べるために、２）免疫応答を最大にするための、ワクチン接種に対するＭＳＣ枯渇の最適なタイミングを同定するために、３）２種のマウス腫瘍モデルにおける、組み合わせたＭＳＣ枯渇および免疫化の、抗腫瘍免疫に対する効果を評価するために設計される。
【０１９２】
最大のＴ細胞応答を誘発するための、ワクチン接種に対するＭＳＣ枯渇の最適なタイミングを決定する。これらの実験は、最大のＴ細胞応答を生じさせるための、ＬＣ治療を使用するＭＳＣ枯渇の最適なタイミングを決定するために設計される。第１の実験では、通常のＣ５７Ｂ１／６マウス（群あたりｎ＝５）に、参照される刊行物（３６）において開発された、強力なカチオン性リポソーム核酸（ＣＬＤＣ）アジュバントを使用して、Ｏｖａを用いてワクチン接種する。評価される動物の１０の実験群は、表１に記載されている。マウスに、ＣＬＤＣアジュバント中の５μｇのＯｖａを用いてｓ．ｃ．ワクチン接種する。ＭＳＣの枯渇は、ｉ．ｖ．投与される２００μｌのリポソームクロドロネート（ＬＣ）の単回注射を使用して達成する。マウスをワクチン接種の７日後に安楽死させ、リンパ組織および血清を採取する。読み出し情報は、フローサイトメトリーによるＣＤ８応答の評価（Ｋｂ−ｏｖａ四量体）、ＣＤ４応答（サイトカイン放出および増殖アッセイ）および体液性反応（Ｏｖａに対する血清抗体をＥＬＩＳＡによって定量化する）を含む。
【０１９３】
データの統計分析。ノンパラメトリックＡＮＯＶＡ（クラスカル−ウォリス）と、それに続く、ダンの多重平均値比較検定を使用して、治療されたマウスにおける免疫応答を、治療されていない対照マウスと比較する。以下のデータについても同様の分析を行う。市販のソフトウェア（Ｐｒｉｓｍ５、ＧａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して統計分析を行い、有意性は、ｐ＜０．０５として定義する。
【０１９４】
免疫化の１日または３日後のいずれかでＬＣを用いる治療によって、最適の免疫応答が生じ、これは、Ｏｖａ特異的ＣＤ８Ｔ細胞の数の増加、多量のＩＦＮ−γ産生およびより高い抗体力価によって反映される。これらのアッセイは、実験室において日常的に行われる。結果によって、ワクチン反応を増強するための、ＭＳＣ枯渇の最適なタイミングの明確な同定が可能となる。単回の免疫化の後に、読み出し情報が明確でない場合には、抗原特異的Ｔ細胞の数を増大するための、最初の免疫化の２週間後に投与される追加免疫化を使用して実験を反復する。
【０１９５】
腫瘍抗原に対するワクチン接種後の免疫応答および抗腫瘍活性に対するＭＳＣ枯渇の効果を評価する。これらの実験は、２種の異なる腫瘍モデルを使用して、定着腫瘍を有するマウスにおいて、ＭＳＣ枯渇が、腫瘍抗原に対するＴ細胞応答を増強し得るかどうかを調べるために設計される。第１のモデルでは、Ｂ１６黒色腫を有するＣ５７Ｂ１／６マウスを使用するが、これは、このモデルにおいて明確に定義された腫瘍抗原（ｔｒｐ２）が同定されており、これによって、四量体試薬を使用してＣＤ８Ｔ細胞応答の正確な定量化が可能となるからである。上記で決定された最適ＭＳＣ枯渇スケジュールを使用して、定着した皮膚のＢ１６腫瘍を有するマウス（群あたり、ｎ＝５）に、５μｇのＣＬＤＣアジュバント中のｔｒｐ２ペプチドを用いてｓ．ｃ．ワクチン接種し、次いで、７日後にブーストする。処理群は、ワクチン接種していない対照マウス、ワクチン接種のみを行ったマウス、ＬＣ治療のみを行ったマウスおよびワクチン接種およびＬＣ治療を用いて処理されたマウスを含む。血液、脾臓およびＬＮ中のｔｒｐ２特異的ＣＤ８Ｔ細胞の数を、フローサイトメトリーおよびＫｂ−ｔｒｐ２四量体を使用してブーストの５日後に評価する。これらの実験を、別の群のマウスで反復して、腫瘍増殖反応に対する組み合わせたＭＳＣ枯渇／ワクチン接種の効果を評価する。これらの研究では、腫瘍増殖速度を、腫瘍直径の３回／週の測定によって評価する。さらに、治療されたマウスおよび対照マウスの全生存期間を評価する。
【０１９６】
第２の腫瘍モデルでは、Ａ２０−ＨＡリンパ腫を有するＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、ワクチン接種に対する免疫応答を評価する。このモデルでは、腫瘍は、Ｔ細胞応答の測定を容易にするためにインフルエンザＨＡ抗原を発現するよう操作されている。２種の異なるワクチンを評価する。１）パラホルムアルデヒド固定されたＡ２０−ＨＡ細胞（ＣＬＤＣアジュバントと混合した、ワクチンあたり１×１０６個の不活性化Ａ２０細胞）または２）ＨＡ抗原ワクチン、５μｇのＣＬＤＣアジュバント中のｒＨＡ。定着した皮膚のＡ２０腫瘍を有するマウス（群あたりｎ＝５）に、ＣＬＤＣアジュバント中の自己Ａ２０−ＨＡ腫瘍細胞を用いて、またはＣＬＤＣアジュバント中のｒＨＡを用いてｓ．ｃ．ワクチン接種し、次いで、７日後にブーストする。処理群は、ワクチン接種していない対照マウス、ワクチン接種のみを行ったマウス、ＬＣ治療のみを行ったマウスおよびワクチン接種およびＬＣ治療を用いて処理されたマウスを含む。評価される免疫応答として、これまでに記載された（３６）、ワクチン接種に対するサイトカイン応答（固定された腫瘍細胞を用いる、またはＨＡ抗原を用いる、脾臓またはＬＮ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ再刺激後のサイトカイン放出）、増殖性応答（固定されたＡ２０腫瘍細胞を用いる、またはｒＨＡ抗原を用いる９６時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏ再刺激後の脾臓またはＬＮ細胞の増殖）の測定およびｉｎ  ｖｉｖｏ  ＣＴＬ活性の評価（養子性に移入された、ＣＦＳＥ標識Ａ２０腫瘍細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ死滅が挙げられる。実験は、別の群のマウスで反復して、腫瘍反応に対する組み合わされたＭＳＣ枯渇／ワクチン接種の効果を評価する。これらの研究では、皮膚に埋め込まれたＡ２０の腫瘍増殖速度を、腫瘍直径の週に３回の測定によって評価する。さらに、治療されたマウスおよび対照マウスの全生存期間を調べる。
【０１９７】
組み合わされたＭＳＣ枯渇／ワクチン接種プロトコールは、Ｂ１６腫瘍モデルにおいて、ワクチン接種単独またはＭＳＣ枯渇単独と比較して、ｔｒｐ２特異的ＣＤ８Ｔ細胞の数の大幅な増大を誘導する。２種の治療の付加効果が観察されない場合には、腫瘍を保有するマウスにおけるＭＳＣの数が、ワクチン反応を阻害するのにまだ十分である場合に備え、週に２回のＬＣ投与を使用して実験を反復する。ｔｒｐ２特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答の規模があまりにも低くて、ｅｘ  ｖｉｖｏで直接測定できない場合には、細胞を４〜５日間、ＩＬ−２および特異的ペプチドの存在下でｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養して、Ｔ細胞の数を増やし、その後、四量体アッセイを行う。ｔｒｐ２特異的Ｔ細胞の数の増大は、組み合わされたＭＳＣ枯渇／ワクチン接種治療を受けているマウスにおける腫瘍増殖速度の大幅な低下および全生存期間の増大と相関する。抗腫瘍免疫応答におけるＣＤ８Ｔ細胞の役割を、ＣＤ８−／−マウスを使用して、または免疫化後のＣＤ８Ｔ細胞の抗体媒介性枯渇によって確認する。
【０１９８】
Ａ２０−ＨＡモデルでは、Ｔ細胞サイトカイン放出およびＣＴＬ活性は、組合せＭＳＣ枯渇／ワクチン接種治療を受けるマウスにおいて増大する。全腫瘍細胞およびＨＡワクチン接種ならびに免疫アッセイの両方を利用することによって、解釈可能なデータが生じる。自己腫瘍細胞およびＭＳＣ枯渇を用いてワクチン接種されたマウスでは、腫瘍増殖速度は大幅に遅くなり、生存は改善される。自己腫瘍ワクチンを用いるワクチン接種は、複雑性および固定された腫瘍細胞上の潜在的な抗原の数の増加のために、ＨＡ抗原単独を用いるワクチン接種よりも有効である可能性が最も高い。
【０１９９】
目的：ＭＳＣ枯渇と組み合わせた腫瘍ワクチン接種が、非ホジキンリンパ腫のイヌモデルにおいて、残存する腫瘍量を大幅に低減するかどうかを調べること。
【０２００】
理論的根拠。マウス腫瘍モデルにおける実験は、ワクチンおよびＬＣ投与のタイミングを最適化して、細胞性免疫を最大にするために、および抗腫瘍活性を評価するために有用である。しかし、ヒト癌研究における結果の予測におけるマウス腫瘍モデルの限界は、周知である。したがって、最良の利用可能な自発的なＮＨＬ腫瘍モデル、Ｂ細胞リンパ腫を有するイヌを使用する。このモデルは、過去に、ＣＭ−ＣＳＦをトランスフェクトされた腫瘍細胞を使用して調製された自己リンパ腫ワクチンの有効性を評価するために使用されてきた。イヌに、固定された自己腫瘍細胞全体を用いてワクチン接種するアプローチは、通常、組換えイディオタイプＩｇ分子からなるヒトＮＨＬワクチンに、完全に類似していない可能性があるが、このようなワクチンを構築することは、イヌ腫瘍モデルでは極めて困難である。表面Ｉｇ分子を保つ、パラホルムアルデヒドで固定された腫瘍細胞を用いて免疫化することによって、関連ワクチン反応が生じる。３つの処理群のイヌを有する保存的研究設計を使用して、ＬＣ治療が、ＮＨＬ腫瘍ワクチン反応を大幅に増強できるかどうかの決定を行う。さらに、研究の主要エンドポイントとしてワクチン接種後の最小残存病変量（ＭＲＤ）の変化を使用することによって（ＤＦＩまたはＯＳＴではなく）、研究エンドポイントがより迅速に、より高い潜在的な正確度で達成されることが可能となる。この種のデータはまた、ヒトＮＨＬワクチンを用いる使用のための戦略としての、ＬＣを用いるＭＳＣ枯渇療法の評価と高度に関連している。
【０２０１】
試験設計。これらの研究は、Ｂ細胞リンパ腫を有するイヌ、ヒトにおけるＮＨＬのイヌ相当物における原理の証明研究として設計される。この研究の主要な目的は、ワクチン接種およびＭＳＣ枯渇が、ワクチン接種単独またはＭＳＣ枯渇単独よりも、残存腫瘍量（血流中のｑＲＴ−ＰＣＲによって検出可能な循環腫瘍ＤＮＡ（３７）の大きな低減をもたらすかどうかを調べることである。マウスにおける研究に、幾分か基づいて、各々、８頭のイヌという群の大きさによって、８０％の検出力で（ＰＳ  Ｐｏｗｅｒ  ａｎｄ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｓｉｚｅ  ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎソフトウェア）、ワクチン接種単独のイヌまたはＬＣ単独で治療されたイヌと比較して、ワクチン接種された／ＭＳＣ枯渇されたイヌにおけるＭＲＤの３０％の低減に基づいて、有意な治療の相違を決定することが可能となるはずである。したがって、組織学的に確認されたＢ細胞リンパ腫を有する２４頭のイヌを無作為化臨床試験に登録する。各イヌを、従来の化学療法（ドキソルビシンおよびＬアスパラギナーゼ）を用いて１０週間治療して、完全な肉眼で見える腫瘍緩解を達成し、その時点で、イヌを治療群１（ワクチン単独）、治療群２（ＬＣ治療単独）または治療群３（ワクチンおよびＬＣ治療）に無作為化する。自己リンパ腫細胞（２ｍｌのＣＬＤＣアジュバント中の、ｓ．ｃ．投与された、ワクチン接種あたり１×１０７個のパラホルムアルデヒド固定された細胞）を使用して、群１および３のイヌに、２週間毎に１回、５回の全部の免疫化の間ワクチン接種する。群２のイヌには、ＬＣ（０．５ｍｌ／ｋｇ）の一連の５回の注入を、２週間に１回与える。群３のイヌには、ワクチン接種し、上記の目的の１つで決定されたワクチン接種に対して最適なタイミングのＬＣ投与を使用してＬＣを用いて治療する。
【０２０２】
ＭＲＤを決定するため、および免疫学的アッセイのために、血液を、治療前、および治療の２、４、６、８および１０週目に採取する。各再チェックの来診時に、リンパ節の大きさを調べる。各再チェック時にＣＢＣを実施して、単球および好中球の数を評価する。研究の完了時に、イヌは、最初の腫瘍再発の時間（無病期間；ＤＦＩ）を調べるために、電話による追跡調査によって追跡調査され続ける。
【０２０３】
腫瘍ワクチンおよびＭＳＣ枯渇のためのＬＣの調製。自己腫瘍ワクチンを、化学療法の投与に先立って各患者から得たリンパ節生検から採取したリンパ腫細胞を使用して調製する。腫瘍細胞の単細胞懸濁液を、穏やかな酵素的解離を使用して調製する。次いで、腫瘍細胞を、表面抗原を保存したまま、腫瘍細胞を軽く固定し、死滅させるよう設計されている、ＰＢＳ中のパラホルムアルデヒドの１％溶液中で一晩固定する。固定された腫瘍細胞のアリコートを、ワクチンを製造するために使用されるまで凍結保存する。ワクチンを、血管肉腫を有するイヌのための同種異系の腫瘍ワクチンを調製するためにこれまでに報告されたもの（３８）と同様の技術を使用して、２ｍｌのＣＬＤＣアジュバントと混合された１×１０７個腫瘍細胞を使用して調製する。ワクチンを側部胸部上の２箇所の異なる部位に皮内に投与する。ワクチン接種を、２週間の間隔で合計５回の免疫化の間反復する。ＭＳＣの枯渇は、悪性の組織球増殖症を有するイヌの治療のために記載されるように調製されたＬＣのｉ．ｖ．投与によって達成される（３４）。ＬＣを、０．５ｍｌ／ｋｇの用量で、遅いｉ．ｖ．注入によって６０分間にわたって２週間毎に１回投与する。ＬＣのこの用量は、これまではイヌに耐容性良好であり、治療されたＭＨを有するイヌのおよそ３０％における一時的な発熱が最も頻繁な有害作用である。
【０２０４】
ワクチン反応の評価。ワクチン反応を、治療の前に、ならびに治療の２、４、６、８および１０週目に採取したＰＢＭＣを使用して評価する。ＰＢＭＣを解凍し、次いで、３種の異なる比（１：１、１：１０、１：１００）でＰＦＡによって固定された自己リンパ腫細胞とともに９６時間インキュベートし、増殖を、ＢｒＤＵ組み込みおよびフローサイトメトリーを使用して評価する。さらに、培養物から上清を集め、市販のイヌＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してＩＦＮ−γ濃度を調べるためにアッセイする。これまでに報告されたように（３９）、ワクチン反応の評価を容易にするために、ネオ抗原（ＫＬＨ）をワクチンに組み込む。ＫＬＨに対する免疫応答を、５０μｇ／ｍｌのＫＬＨとともにｉｎ  ｖｉｔｒｏで９６時間インキュベートされたＰＢＭＣを使用して、増殖およびＩＦＮ−γ放出によって評価する。さらに、ＫＬＨに対する抗体応答を、ＫＬＨ  ＥＬＩＳＡ（３９）を使用して評価する。
【０２０５】
化学療法およびワクチン接種後の分子的緩解の評価。腫瘍ＢＣＲの増幅のための腫瘍ＢＣＲ特異的プライマーセットを設計するために、腫瘍試料を、研究の開始時に採取する（４０、４１）。化学療法の完了時（最初のワクチンの直前）に、および研究の治療相の間、２週間の間隔で、循環リンパ腫細胞（ＭＲＤ）の数のＰＣＲ決定のために血液試料を採取する。ＰＢＭＣを分離し、ＭＲＤ算出および免疫機能の評価のために使用される３つの異なるアリコートで凍結する。定量リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）およびＢ細胞リンパ腫を有するイヌにおけるＭＲＤ量の定量化のためのこれまでに記載されたプロトコール（３７）を使用して循環腫瘍細胞を定量化する。個々の患者イディオタイプＩｇのために具体的に設計されたＰＣＲプライマーを利用する、その研究では、ＰＣＲ技術は、従来の化学療法を使用して誘導された完全な眼に見える腫瘍緩解の後であっても、７頭のイヌ各々において循環腫瘍細胞を検出するのに十分に感受性であると報告された。さらに、７頭の研究されたイヌすべてにおいて、化学療法の中止後、循環腫瘍量は増大し、アッセイは、肉眼的腫瘍再発までの時間について予測的であった。したがって、ｑＲＴ−ＰＣＲアプローチは、ワクチン接種およびＭＳＣ枯渇（すなわち、分子的緩解）に対する腫瘍反応の正確な定量化を達成する。さらに、群間比較は、研究の第一の疑問（すなわち、組み合わされたワクチン接種／ＭＳＣ枯渇治療は、いずれか単独よりも有効であるか）に対処するのに十分に頑強であるはずであり、化学療法のみを用いて治療されたリンパ腫を有するイヌのさらなる群を含む必要はない。
【０２０６】
理論に束縛されるものではないが、自己腫瘍ワクチンおよびＬＣを用いる組み合わされた治療は、腫瘍ワクチン単独またはＬＣ治療単独を受けているイヌと比較して、腫瘍ＭＲＤにおいて、より大きな低減、さらに相当に大きな低減をもたらす。ワクチン接種単独またはＬＣ治療単独はまた、治療前の値と比較して、ＭＲＤを大幅に低減するが、組み合わされたワクチン／ＬＣ治療は、相乗的抗腫瘍活性を引き起こす。ＭＲＤ低減が、研究の主要エンドポイントであると同時に、免疫アッセイ（増殖、サイトカイン産生、標的細胞死滅）はＭＲＤアッセイと相関する。
【０２０７】
文献引用
【０２０８】
【化１】
2012526997.tif 000004
【０２０９】
【化２】
2012526997.tif 000005
【０２１０】
【化３】
2012526997.tif 000006
【０２１１】
【化４】
2012526997.tif 000007
（実施例７）
単球／マクロファージアクチベーターＬ−ＭＴＰ−ＰＥの臨床試験
活性化された単球およびマクロファージは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで化学療法耐性癌細胞を排除し、したがって、自然免疫性のこれらのエフェクター細胞を活性化する薬剤は、化学療法を補完し得る。Ｌ−アラニンＤ−イソグルタミンジペプチドと結合しているＮ−アセチルムラミン酸からなる最小のペプチドグリカンモチーフムラミルジペプチド（ＭＤＰ）は、グラム陰性菌およびグラム陽性菌の共通の膜成分である。完全フロイントアジュバントの重要な成分、ＭＤＰは、自然免疫受容体ＮＡＬＰ３を介して単球およびマクロファージを活性化する。ムラミルトリペプチドホスファチジルエタノールアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）は、ＭＤＰとのアラニンおよびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンの合成コンジュゲーションであり、大きな効力を有する親油性分子を作製し、細胞取り込みを改善し、殺腫瘍性活性をブーストする。親油性ＭＴＰ−ＰＥはまた、食作用性細胞による迅速取り込みのためのリポソームに、より容易に組み込まれる。イヌにおける薬物動態研究によって、迅速なクリアランスおよび毒性の１０倍の低減が確認された。有望な前臨床試験に基づいて、いくつかのイヌおよびネコ癌において臨床試験を実施した。外科的切除後、Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥを、２ｍｇ／ｍ２の用量で、週に２回、８週間、単独または化学療法（ドキソルビシンおよびシクロホスファミドまたはシスプラチン）と組み合わせて投与した。手術の直後に投与した場合には、Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥ治療は、２２２日の生存期間中央値を与え、プラセボリポソームを用いて治療されたイヌ（７７日）よりも有意に長かった（ｐ＜０．００２）。シスプラチン後にＬ−ＭＴＰ−ＰＥを用いて治療された非転移イヌは、１４．４ヶ月の生存期間中央値を有し、シスプラチンおよびプラセボを用いて治療されたイヌ（９．８ヶ月）よりも、やはり有意に長かった（ｐ＜０．０１）。シスプラチンと同時にＬ−ＭＴ−ＰＥを用いる治療も生存期間中央値を向上させたが、１．６ヶ月の相違は有意ではなかった。初期段階黒色腫の治療において長い無病生存期間も注目されたが、乳房切除後のネコまたはイヌ乳房腫瘍においては効果はなかった。
【０２１２】
コンパニオンアニマルにおけるこれらの研究の成功を基に、およそ１５０人の種々の進行性癌（乳癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、腎細胞癌、胃癌および唾液腺腺癌ならびに肉腫）を有する患者において、一連の探索性の第Ｉ相研究を実施した。これらの研究によって、Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥ最大耐量および最適生物学的用量を決定し、これは、イヌ研究への同様の投薬を示す。１９９３年〜１９９７年の、第ＩＩＩ相臨床試験によって、高悪性度骨肉腫を有する新規に診断された患者において、ドキソルビシン、シスプラチンおよび高用量メトトレキサートの標準レジメンに加えられたＬ−ＭＴＰ−ＰＥ（ミファムルチド）および／またはイフォスファミドの有効性を評価した。試験には、非転移性の切除可能な骨肉腫を有する６７８人の患者、Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥを受けている３３２人ならびにＬ−ＭＴＰ−ＰＥを受けている３９人を含む、転移性または切除可能でない骨肉腫を有する１１５人および１１５人の患者が含まれていた。イフォスファミドおよび３種の化学療法薬の添加は、標準治療に対して、薬剤のない生存期間（ＤＦＳ）または全生存（ＯＳ）を大幅には向上させなかったが、Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥの添加は、両方を大幅に向上させた（ＤＦＳ  ｐ＝０．０３０；ＯＳ  ｐ＝０．０３９）。ＩＤＭ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃは、２００６年にＬ−ＭＴＰ−ＰＥのＮＤＡを提出したが、２００７年に、さらなるデータを要求する、現時点では承認しない旨の通知書を受け取った。２００９年３月に、Ｌ−ＭＴ−ＰＥ（ミファムルチド、ＭＥＰＡＣＴ（登録商標））は、欧州連合におけるこの薬物の販売を可能にする、欧州委員会よる中央審査医薬品販売承認を認められた。
【０２１３】
Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥの開発経路は、ヒトおよびイヌ骨肉腫における研究が、並行して進行し、両種における骨肉腫の治療のための薬物の最適化につながり得る情報の二元配置フローを提供し得る方法を示す。
【０２１４】
（実施例８）
電気化学療法（ＥＣＴ）の最適化
癌化学療法薬ブレオマイシンおよびシスプラチンを含めたいくつかの薬物は、高度に疎油性であり、したがって、細胞取り込みが悪い。ブレオマイシンは、かなり疎油性であり、簡単な拡散によってでは標的細胞に入ることができず、特定のタンパク質受容体による、比較的遅い、効率的でない取り込みを必要とし、その結果、培養細胞中に＜０．１％しか内部に取り入れられない。悪い取り込みのために必要とされる高い全身用量は、正常組織に対してかなりの毒性を引き起こしており、抗癌剤としてのブレオマイシンの採用を、その治療可能性にも関わらず妨害している。標的細胞透過性を一時的に変更する短い電気パルスは、この問題の解決法を提供した。これらのパルスは、細胞膜中に孔を誘導し、薬物およびプラスミドの細胞侵入を改善すると思われる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞のエレクトロパルセーション（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｕｌｓａｔｉｏｎ）は、ブレオマイシンの細胞毒性を数千倍高め、シスプラチンの細胞毒性を７０倍高めた。この技術の最初のｉｎ  ｖｉｖｏ研究は、アジュバント放射線療法後の再発性軟組織肉腫を有するネコにおいて１９９７年に実施された。ブレオマイシンとそれに続く方形波を受けたネコの小さいコホートは、１１匹の処理されていない対照に対して、１２匹のネコにおいて長期の生存を有していた。
【０２１５】
その後の第Ｉ／ＩＩ相研究では、イヌおよびネコ軟組織肉腫患者を、二相性電気パルスと併用される病巣内ブレオマイシンを用いて治療し、その結果、長期の緩解を有する４０％を含む８０％という全応答率が得られた。この研究は、イヌ血管周囲細胞腫（ｈｅｍａｇｉｏｐｅｒｉｃｙｔｏｍａｓ）は、電気化学療法（ＥＣＴ）に対して特に反応性であることを示したが、結合組織に適応する専用の電極の開発の必要性も強調した。最適化された電極を用いて、一連の第ＩＩ相研究を、続いて開始した。電気療法とともに手術中または手術後のブレオマイシンを受けている軟組織肉腫を有するネコは、それぞれ、手術単独を用いる４ヶ月と比較して、１２および１９ヶ月という再発の平均時間を改善した。イヌ軟組織肉腫患者を用いる同様の研究は、７３０日の再発までの平均時間ならびにブレオマイシンおよび電気パルスを用いて治療されたイヌにおける９５％の応答率をもたらし、血管周囲細胞腫による最大の感受性であった。さまざまな腫瘍における、ＥＣＴ試験から得た３７０種の生検試料にわたる再調査は、全生存および壊死（ｐ＜０．０００１）および高い率のアポトーシス（ｐ＜０．０００１）の間の強い相関を示した。
【０２１６】
電気パルスの期間および頻度も、コンパニオンアニマルにおける複数の試験によって最適化し、１秒から１００ミリ秒にパルスの期間を低減することおよび反復頻度を１Ｈｚから５０００Ｈｚに増大することによって、患者の不快感を少なくして、腫瘍に必要な４００Ｖ／ｃｍ電場を送達できるであろうということを実証する。最初のｉｎ  ｖｉｖｏ研究は、ちょうど１０年前に開始されたが、いくつかのＥＵ諸国では、ＥＣＴはすでにヒト使用のために承認されており、払い戻されている。獣医学の患者におけるＥＣＴの臨床試験は、最初のヒト腫瘍学試験の直後に始まり、このアプローチは、さまざまな皮膚および皮下腫瘍を有するネコ、イヌおよびウマのためにいくつかの欧州諸国およびブラジルにおいて広く使用されている。技術の最適化は、ヒトおよび獣医学臨床試験において並行して進行し、ヒトおよびコンパニオンアニマルにおける腫瘍間の類似性および両分野で働く腫瘍学者間の情報交換が、新規治療法の開発をどれほど加速し得るかを示す。
【０２１７】
（実施例９）
血管肉腫の治療
リポソームにカプセル化されたムラミルトリペプチドホスファチジルエタノールアミン（Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥ）は、イヌ骨肉腫（上記）の無作為化臨床試験における成功を提供し、したがって、この治療戦略を血管肉腫に拡張した。３２頭のＨＳＡを有し、明白な転移のないイヌを、Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥまたはプラセボとともに、脾摘出術およびドキソルビシン＋シクロホスファミドを用いて治療した。Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥを受けたイヌは、無病生存期間（ｐ＝０．０３７）および全生存（ｐ＝０．０２９）を大幅に改善し、臨床段階Ｉにおいてイヌによる、臨床段階ＩＩにおいてよりも良好な応答があった。バイオアッセイによって、血清腫瘍壊死因子およびインターロイキン−６、重要な免疫サイトカインの大幅な上昇が示された。これらの研究は、イヌにおける満たされていない医学的ニーズのための新規治療アプローチを示唆する。さらに、イヌＨＳＡの研究は、コンパニオンアニマルおよびヒトの治療のための抗転移戦略を伝え得る。
【０２１８】
（実施例１０）
自然および適応免疫性のプラスミドＤＮＡ刺激
細菌の超抗原によって活性化されたＴ細胞は、強い細胞溶解性活性を発現させ、養子性に移入された場合には腫瘍退縮を媒介する。自発的な悪性黒色腫を有する２６頭のイヌを、細菌超抗原ブドウ球菌内毒素ＢをコードするプラスミドＤＮＡならびにＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−２のいずれかを用いて治療し、腫瘍退縮に対するＤＮＡワクチン接種の効果を試験した。すべてのイヌの全応答率（完全および部分緩解）は、４６％であり、小腫瘍において最高であった。組織学的試験によって、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞が、腫瘍中に浸潤することが示され、腫瘍退縮が、高レベルの循環細胞傷害性Ｔリンパ球と相関していることが実証された。この研究では、より高い安定性のためにプラスミドをコンパクトにするために、プラスミドＤＮＡは、カチオン性脂質と錯体を形成した。その後の研究によって、カチオン性脂質および細菌ＤＮＡの組合せは、コードされる遺伝子の不在下で、自然免疫性を効果的に刺激し、強いサイトカイン応答を誘発することが示された。
【０２１９】
（実施例１１）
抗血管新生トロンボスポンジン−１ペプチドミメティクスの開発
この実施例は、マウスモデルからヒト臨床試験への治療薬開発の橋渡しにおいてコンパニオンアニマルにおける自発的な腫瘍がどのように役割を果たし得るかを示す。腫瘍は増殖するので、限局化された血管新生を誘導し、さらなる増殖を支援する適切な血液供給を発達させなくてはならない。したがって、血管新生を阻止することが、多数の癌治療の試みの目的である。トロンボスポンジン−１（ＴＳＰ−１）は、多面的な天然血管新生阻害剤であり、内皮細胞活性化の多数の態様を阻止する。ＴＳＰ−１、ＡＢＴ−５２６およびＡＢＴ−５１０の血管新生ドメインに基づく修飾ノナペプチドは、薬物開発にとって、より実用的な大きさで、このアンタゴニスト活性を共有する。同一遺伝子マウスモデルおよび異種移殖マウスモデルにおける最初の有効性研究によって、ＡＢＴ−５２６およびＡＢＴ−５１０の両方が腫瘍増殖を遅らせることが示された。しかし、血管新生の阻害が、腫瘍を迅速に破壊するとは考えにくく、迅速に進行するマウス癌モデルに基づいて、ヒト臨床試験のための用量を確立することは、最適とは考えられなかった。安全性および有効性を良好に定義するために、２種のＴＳＰ−１ペプチドミメティクスが、自発的なイヌ腫瘍の非盲検の非臨床試験において調べられた。前向き非盲検試験が、ＮＨＬ、軟組織肉腫、乳腺腺癌、頭頸部癌腫および多数のその他の原発性および転移性腫瘍をはじめとするさまざまな癌を有する２４２頭のイヌで実施された（１１５）。薬物動態研究を、ビーグル犬の実験室コロニーにおいて実施し、マウスおよび非近交系コンパニオンアニマル研究間の橋を提供し、初期用量パラメータを確立した。この研究では、用量を制限する毒性は、いずれのイヌにおいても観察されなかった。測定可能な病変の目的退縮（腫瘍の大きさの＞５０％低減）は、１８０頭のうち１９頭の評価可能なイヌにおいて示され、２３頭のイヌにおいて相当な疾患安定化が起こった。これらの反応のほとんどは、ＴＳＰ−１ミメティックを用いる治療の６０日後に起こり、投薬を最適化し、有効性を確認するための適当なモデルとしてのイヌにおける自発的な腫瘍の選択が確認された。この研究によって、ＮＨＬが、より反応性のクラスの腫瘍の１種であることおよびＡＢＴ−５２６が、ＡＢＴ−５１０よりも活性であることが示された。これらの結果に基づいて、ＡＢＴ−５２６の対照二重盲検試験を天然に存在する最初の再発ＮＨＬを有する９４頭のペットのイヌで実施した。この研究は、最適な生物学的用量およびスケジュールのさらなる定義を提供するために、活性の予測的バイオマーカーを同定するために、化学療法と組み合わせて有効性を試験するために設計された。イヌには、ロムスチン（ＣｅｅＮｕ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）およびプラセボまたはＡＢＴ−５２６を与えた。この対照臨床試験では、ＡＢＴ−５２６は、化学療法に応じる症例の数を増大させなかったが、反応期間を中程度に増強した。ＡＢＴ−５１０試験は、一連のヒト第Ｉ相および第ＩＩ相臨床試験に進んだ。３９人のさまざまな進行癌を有するヒト患者における、ＡＢＴ−５１０の第Ｉ相安全性、薬物動態および薬力学的研究によって、少なくとも６ヶ月間６人の患者において��好都合な毒性プロファイルが実証され、塩基性線維芽細胞増殖因子、血管新生のマーカーの減少および安定な疾患が引き起こされた。
【０２２０】
（実施例１２）
ドキシル有害作用の低減
ドキソルビシンは、ＤＮＡの間に介入して複製を阻止するアントラサイクリン系抗生物質であり、ＮＨＬなどの血液学的悪性腫瘍をはじめとするさまざまな癌の治療において、また軟組織肉腫において使用される。ドキシル、ドキソルビシンを含有するペグ化リポソームは、長期の循環、増強された抗腫瘍効力を有し、心毒性は少ない。しかし、遊離ドキソルビシンとは異なり、ドキシルは、手掌足底感覚異常症（ＰＰＥＳ）と呼ばれる、手足疾患と呼ばれることもある有痛性の皮膚反応を誘導する。ヒトと同様に、イヌも長期のドキシル治療後のＰＰＥＳの発生に対して感受性である。事例エビデンスによって、経口ビタミンＢ６（ピリドキシン）が、ＰＰＥＳを軽減または排除し得ることが示唆された。これを試験するために、経口ピリドキシンまたはプラセボと組み合わせた毎日のドキシル化学療法の無作為化二重盲検を、ＮＨＬを有する４１頭のイヌにおいて実施した（１１８）。治療群間の緩解率においては、相違は観察されなかったが、ＰＰＥＳを発症する相対リスクは、プラセボ群では４．２倍高かった。ピリドキシンは、ＰＰＥＳを完全には防がなかった、または逆転させなかったが、症状を遅延または減少させた。イヌにおけるこの探索的試験によって、ヒト患者におけるこの戦略のより広範な試験のための理論的根拠が提供された。
【図１】
2012526997.tif 000008
【図２】
2012526997.tif 000009
【図４】
2012526997.tif 000010
【図５】
2012526997.tif 000011
【図３】
2012526997.tif 000012
【国際調査報告】
2012526997.tif 000013
2012526997.tif 000014
2012526997.tif 000015
2012526997.tif 000016
2012526997.tif 000017
2012526997.tif 000018