(57)【要約】  本発明は、タンパク質加水分解産物組成物、タンパク質加水分解産物組成物を製造する方法、およびタンパク質加水分解産物組成物を含む食品を提供する。タンパク質加水分解産物組成物は、一般に４７ｋＤａ断片に富んだポリペプチドの混合物を含み、このポリペプチドの約１０％〜約６６％が４７ｋＤａ断片である。
2012513772.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４７ｋＤａ断片に富んだポリペプチドの混合物を含むダイズタンパク質加水分解産物組成物であって、前記ポリペプチドの約１０重量％〜約６６重量％が４７ｋＤａ断片である、前記ダイズタンパク質加水分解産物組成物。
【請求項２】
配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、および配列番号８からなる群から選択される、少なくとも１つのオリゴペプチドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
富化疎水性β−コングリシニンコア領域を含む、タンパク質画分。
【請求項４】
請求項１に記載のダイズタンパク質加水分解産物組成物を含む食品。
【請求項５】
チーズ、乳化肉、泡立て食品、フードバー、すり身製品、押し出し食品、飲料、全筋食品、ヨーグルト、プディング、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４に記載の食品。
【請求項６】
ａ．ｐＨ４．５における等電沈殿から誘導されるダイズ粉またはダイズ濃縮物を使用してダイズタンパク質スラリーを調製するステップと、
ｂ．グルタミン酸およびアスパラギン酸のＣ末端でタンパク質を切断する酵素を用いて前記ダイズタンパク質スラリーを加水分解して、タンパク質画分を得るステップと
を含むタンパク質画分を製造する方法。
【請求項７】
グルタミン酸およびアスパラギン酸のＣ末端でタンパク質を切断する酵素を用いてβ−コングリシニンを加水分解することによって、β−コングリシニンのα’およびαサブユニットの親水性延長領域をβ−コングリシニンからから選択的に加水分解して、疎水性β−コングリシニンコア領域富化タンパク質製品を生成させる、疎水性β−コングリシニンコア領域富化タンパク質製品を製造する方法。
【請求項８】
前記酵素がプロテアーゼである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記酵素がセリンプロテアーゼである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記酵素がバチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）からのセリンプロテアーゼである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ａ．タンパク質材料と、前記タンパク質材料を４７ｋＤａ断片に富んだポリペプチド混合物に切断するエンドペプチダーゼとを接触させるステップを含み、前記ポリペプチド混合物が前記タンパク質加水分解産物組成物を含み、前記ポリペプチドの約１０重量％〜約６６重量％が４７ｋＤａ断片である、
タンパク質加水分解産物組成物を製造する方法。
【請求項１２】
前記エンドペプチダーゼがセリンプロテアーゼである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記セリンプロテアーゼが、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）に由来する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
４７ｋＤａ断片に富んだポリペプチド混合物を含むタンパク質加水分解産物組成物を含む食品であって、前記ポリペプチドの約１０重量％〜約６６重量％が４７ｋＤａ断片である、食品。
【請求項１５】
前記食品が、チーズ、すり身製品、乳化肉、泡立て食品、フードバー、押し出し食品、飲料、全筋食品、ヨーグルト、プディング、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１４に記載の食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連特許の相互参照］
本明細書は、参照によってその全体を本明細書に援用する、２００８年１２月３１日に出願された米国仮特許出願第６１／１４１，９４１号の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、高い白色指数を有し、低温における増粘をはじめとするユニークな粘弾性特性を有する、β−コングリシニンの疎水性コア領域を含むタンパク質加水分解産物組成物と、タンパク質加水分解産物組成物を製造する方法と、タンパク質加水分解産物組成物を含む食品に関する。
【背景技術】
【０００３】
動物ベースタンパク質および乳タンパク質の限定的な入手可能性およびコスト増大と相まって、世界的なタンパク質消費の増大は、ダイズタンパク質などの植物性タンパク質に対する関心の高まりをもたらした。
【０００４】
ダイズは優れたタンパク質源である一方、その色は灰色であり、食品によっては使用に適さない傾向がある。ダイズタンパク質の灰色または淡いベージュ色は、飲料、肉塊用途、およびチーズのような様々な製品中でのダイズタンパク質の使用に難題をもたらすことが多い。消費者は、灰色または淡いベージュ色を必ずしも歓迎しない。したがって必要なのは、白色度を増大させたダイズタンパク質製品である。さらにダイズタンパク質は、凝固のために典型的に高温および高固形分を要する。したがって特性が乳ベースのチーズと同様であるダイズチーズを製造することは、困難であった。最小限の熱を加えると凝固するダイズタンパク質を有することは、有益であろう。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の様々な態様の一つは、β−コングリシニンの富化疎水性コア領域（４７ｋＤａ断片）を含むタンパク質加水分解産物組成物の提供である。タンパク質加水分解産物組成物は４７キロダルトン（ｋＤａ）断片に富んだポリペプチドの混合物を含み、前記ポリペプチドの少なくとも約１０重量％〜約６６重量％が４７ｋＤａ断片である。
【０００６】
本発明は、富化疎水性β−コングリシニンコア領域を含むタンパク質画分をさらに開示する。β−コングリシニンおよびその誘導ペプチドは、哺乳類においてコレステロールを低下させることが知られている（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．２００４；Ｌｏｖａｔｉ  ｅｔ．ａｌ．２０００；Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０００７】
本発明の別の態様は、タンパク質加水分解産物組成物を調製する方法を包含する。方法は、タンパク質材料と、タンパク質材料を４７ｋＤａ断片に富んだポリペプチド混合物に切断するエンドペプチダーゼとを接触させるステップを含む。さらなる態様は、タンパク質画分を調製する方法を開示する。
【０００８】
本発明の一態様は、疎水性β−コングリシニンコア領域富化タンパク質製品を製造する方法を包含し、タンパク質をグルタミン酸およびアスパラギン酸のＣ末端で切断する酵素を使用することにより、β−コングリシニンのα’およびαサブユニットの親水性延長領域がβ−コングリシニンから加水分解され、ポリペプチドの少なくとも約１０重量％〜約６６重量％が４７ｋＤａ断片である、疎水性β−コングリシニンコア領域富化タンパク質生成物が生じる。
【０００９】
本発明のさらなる態様は、タンパク質加水分解産物組成物を含む食品を提供する。タンパク質加水分解産物組成物は４７ｋＤａ断片に富んだポリペプチドの混合物を含み、前記ポリペプチドの少なくとも約１０重量％〜約６６重量％が４７ｋＤａ断片である。
【００１０】
本発明の他の態様および特徴は、ある程度明白であり、ある程度は以降に指摘されるであろう。
【００１１】
カラー図面への言及
本明細書は、少なくとも１つのカラー撮影写真を含む。この特許出願公報のカラー写真付きコピーは、要請と必要な手数料の支払いがあれば、特許庁から提供されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ＧＥを使用して加水分解した単離ダイズタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥである。レーン１は標準ダイズタンパク質単離物ＳＵＰＲＯ（登録商標）５００Ｅであり、レーン２は対照非加水分解単離物であり、レーン３はバチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）からのセリンプロテアーゼ（グルタミルエンドペプチダーゼ（ＧＥ）とも称される）を用いて加水分解した単離物であり（１ｋｇの単離物あたり１２ｍｇのＧＥ）、レーン４は１ｋｇの単離物あたり２４ｍｇのＧＥを用いて加水分解した単離物であり、レーン５は１ｋｇの単離物あたり４８ｍｇのＧＥを用いて加水分解した単離物であり、レーン６は分子量標準である。
【図２】ＧＥ処理されたまたはＧＥ処理されていない、小麦粉中の一般ダイズタンパク質のクーマシー染色ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）画像である。レーン１は、ＧＥ処理なしの一般ダイズタンパク質対照を含有する。レーン２は、１ｋｇのタンパク質あたり２．４ｍｇのＧＥを用いて処理された一般ダイズタンパク質を含有する。レーン３は、１ｋｇのタンパク質あたり４．８ｍｇのＧＥを用いて処理された一般ダイズタンパク質を含有する。β−コングリシニンのα’およびαサブユニットは左側に示され、４７ｋＤａ領域は左側に示される。
【図３】ＧＥを使用して加水分解した酸沈殿ダイズタンパク質カードのＳＤＳ−ＰＡＧＥである。レーン１は分子量標準を示し、レーン２は加水分解なしの対照カードスラリーであり、レーン３、４、および５は、１ｋｇのカードスラリー固形物あたりそれぞれ２４、４８、および９６ｍｇの濃度のＧＥを用いて３０分間にわたり加水分解したサンプルを含有し、レーン６、７、および８は、１ｋｇのカードスラリー固形物あたりそれぞれ２４、４８、および９６ｍｇの濃度のＧＥを用いて６０分間にわたり加水分解したサンプルを含有し、レーン９、１０、および１１は、１ｋｇのカードスラリー固形物あたりそれぞれ２４、４８、および９６ｍｇの濃度のＧＥを用いて１２０分間にわたり加水分解したサンプルを含有し、レーン１２は標準ダイズタンパク質単離物ＳＵＰＲＯ（登録商標）５００Ｅを含有する。
【図４】ノカルディオプシス・プラシナ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｐｒａｓｉｎａ）からのセリンプロテアーゼ（ＳＰ）である別のセリンプロテアーゼで処理された単離ダイズタンパク質加水分解産物と対比した、ＧＥ処理された単離ダイズタンパク質加水分解産物の白色指数の比較を示す。
【図５】ＮａＣｌ処理による、ＧＥ加水分解産物からの４７ｋＤａのポリペプチドの富化を示す。Ｉ：１ｋｇのタンパク質あたり４．８ｍｇのＧＥで処理された原サンプルを示す；ＩＩ：タンパク質を２％ＮａＣｌに溶解して７５℃で３０分間混合する工程を描写し；ＩＩＩ：ＮａＣｌ処理サンプルを３，０００×Ｇで１０分間遠心処理する工程を描写する；ＩＶ：主に７Ｓ富化画分の１１Ｓおよびβサブユニットからなる上清画分を示す；Ｖ：主に４７ｋＤａのポリペプチド富化画分からなる沈殿画分を描写する；ＶＩ：未処理ダイズタンパク質を示す。
【図６】ＧＥ処理ダイズタンパク質中のその他のタンパク質構成要素からの４７ｋＤａ断片の陰イオン交換クロマトグラフィーによる分離と共に、クロマトグラフィー分離から収集された各画分（１〜１０）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。ゲルＡは対照タンパク質からのものであり、ゲルＢは１ｋｇのタンパク質あたり４．８ｍｇのＧＥで加水分解したサンプルからのものである。画分１は、クロマトグラフィー中の非結合画分中のタンパク質を示す。ゲルＢの画分１中の主要タンパク質は、４７ｋＤａのポリペプチドである。
【図７】対照、１ｋｇのタンパク質あたり２．４ｍｇのＧＥ、および１ｋｇのタンパク質あたり４．８ｍｇのＧＥ、すなわち本発明の実施例１〜３の熱水和率（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｈｙｄｒａｔｉｏｎ  Ｒａｔｉｏ（ＴＨＲ））値を示す。
【図８】ＧＥ変性ダイズタンパク質の迅速粘度分析装置（Ｒａｐｉｄ  Ｖｉｓｃｏ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＲＶＡ））試験の結果を示す。
【図９】β−コングリシニンのαサブユニットの潜在的ＧＥ切断部位（下線付き残基）を示し、４７ｋＤａ断片を太字で示す。
【図１０】大規模調製品からのＧＥ処理加水分解産物のＳＤＳ−ＰＡＧＥである。レーン１は、標準ダイズタンパク質単離物ＳＵＰＲＯ（登録商標）５００Ｅを含有する。レーン２は、酵素なしの対照単離物であり、レーン３は、乾燥物質基準で、サンプルの１ｋｇのタンパク質あたり６ｍｇのＧＥを用いて加水分解したサンプルであり、レーン４は、１ｋｇのタンパク質あたり６ｍｇのＧＥを用いて加水分解したサンプルに遠心分離を施した沈殿物であり、レーン５は、１ｋｇのタンパク質あたり６ｍｇのＧＥを用いて加水分解したサンプルに遠心分離を施した上清である。レーン６は、乾燥物質基準で、サンプルの１ｋｇのタンパク質あたり１２ｍｇのＧＥを用いて加水分解したサンプルであり、レーン７は、１ｋｇのタンパク質あたり１２ｍｇのＧＥを用いて加水分解したサンプルに遠心分離を施した沈殿物であり、レーン８は、１ｋｇのタンパク質あたり１２ｍｇのＧＥを用いて加水分解したサンプルに遠心分離を施した上清である上清である。レーン９は分子量標準である。
【図１１】１ｋｇのタンパク質あたり６および１２ｍｇのＧＥの酵素用量で処理したダイズタンパク質加水分解産物から作成したゲルのカラー写真である。ゲルは加水分解産物および加水分解産物ＵＦから作成し、加水分解産物にはｐＨ４．５での沈殿を施してより短い断片を除去した。
【図１２】対照と対比した、ＧＥ処理サンプルＳＱＳ官能性データの比較を示す。
【図１３】ＳＰ処理酸カードと対比した、ＧＥ処理酸カードの白色指数の比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、タンパク質加水分解産物組成物、タンパク質加水分解産物組成物を製造する方法、およびタンパク質加水分解産物組成物を含む食品を提供する。ダイズタンパク質材料をグルタミン酸またはアスパラギン酸のカルボキシル末端（Ｃ末端）側で特異的に切断するエンドペプチダーゼを用いたダイズタンパク質の消化は、約４７ｋＤａのポリペプチド断片を含む組成物をもたらすことが発見されている。４７ｋＤａのタンパク質断片は、β−コングリシニンの疎水性β−コングリシニンコア領域を含む。β−コングリシニンの疎水性β−コングリシニンコア領域は、典型的に４７ｋＤａであるαおよびα’サブユニットを含む。β−コングリシニンのβサブユニットは約４７〜５０ｋＤａである。本発明の組成物は、約１０％〜約６６％の４７ｋＤａ断片を含む。これらのタンパク質加水分解産物組成物は、出発ダイズタンパク質材料と比較して、改善された白色指数およびユニークな粘弾性特性を有し、それらをヨーグルト、チーズ、プディング、および泡立てた食品のために理想的なものにする。
【００１４】
グルタミルエンドペプチダーゼ（「ＧＥ」と呼ぶ）とも称される、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）からのセリンプロテアーゼ（ＵＮＩＰＲＯＴ：Ｐ８００５７；それぞれその全体を参照によって援用する、米国特許番号第４，２６６，０３１号明細書、米国特許番号第５，８７４，２７８号明細書、および米国特許番号第５，４５９，０６４号明細書、および国際公開第０１／１６２８５号パンフレット、国際公開第９２／１３９６４号パンフレット、国際公開第ＷＯ９１／１３５５３号パンフレット、および国際公開第ＷＯ９１／１３５５４号パンフレットで開示され特徴付けられる）は、タンパク質をグルタミン酸およびアスパラギン酸残基のＣ末端で切断する。基質を変更することで、同一の酵素および基質濃度の酵素反応の結果として、異なる加水分解の結果が達成される。噴霧乾燥ダイズタンパク質単離物にＧＥ反応を実施すると反応はよりランダムであり、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（図１）から明らかなように様々な分子量のペプチド断片が発生したが、タンパク質の等電沈殿によるダイズフレークからできたダイズタンパク質スラリーに反応を実施すると、タンパク質はより自然な形態であって、加水分解パターンは大きく異なった。ＳＤＳ−ＰＡＧＥデータに基づいて（図２および３）、加水分解はより選択的な切断と４７ｋＤａのタンパク質断片の蓄積をもたらし、それはまたβ−コングリシニンの切断に非常に特異的なようであり、グリシニンに付随するバンドはＧＥ加水分解の結果として変化しないようであった。この技術は、富化β−コングリシニンコア領域画分のある材料の大規模な生産を可能にする。
【００１５】
Ｉ．タンパク質加水分解産物組成物を調製する方法
本発明の一態様は、４７ｋＤａ断片に富んだポリペプチド混合物を含む、タンパク質加水分解産物組成物を調製する方法を提供する。方法は、タンパク質材料と、タンパク質材料をグルタミン酸またはアスパラギン酸のカルボキシル末端側で特異的に切断するエンドペプチダーゼとを接触させて、それによって４７ｋＤａ断片に富んだポリペプチド混合物を作り出すステップを含む。
【００１６】
ａ．加水分解
方法は、タンパク質材料をより小さいサイズのポリペプチドの混合物に切断するステップを含む。一般に、タンパク質材料をエンドペプチダーゼに接触させて、加水分解産物を形成する。エキソペプチダーゼを使用して、加水分解産物をさらに切断してもよい。
【００１７】
ｉ．タンパク質材料
適切なタンパク質材料の非限定的例としては、ダイズ、アマランス、クズウコン、ソバ、カノーラ、キャッサバ、チャナ豆（ヒヨコ豆）、トウモロコシ、マメ科植物、レンズ豆、ハウチワ豆、キビ、オート麦、エンドウ豆、ライ麦、ソルガム、ヒマワリ、タピオカ、ライ小麦、乳製品、およびこれらの組み合わせが挙げられる。一実施形態では、タンパク質材料はダイズタンパク質材料であってもよい。多様なダイズタンパク質材料を本発明の方法で使用して、ダイズタンパク質加水分解産物を作り出してもよい。一般にダイズタンパク質材料は、当該技術分野で知られている方法に従って丸ダイズから誘導されてもよい。丸ダイズは、一般ダイズ（すなわち非遺伝子改変ダイズ）、遺伝子改変ダイズ、およびこれらの組み合わせであってもよい。遺伝子改変ダイズとしては、高β−コングリシニンダイズおよび高オレイン酸ダイズなどのタンパク質、油、または炭水化物組成物が変更されたダイズが挙げられる。ダイズタンパク質材料の適切な例としては、ダイズ抽出物、ダイズカード、ダイズ粉、単離ダイズタンパク質、ダイズタンパク質濃縮物、豆乳、豆乳粉末、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００１８】
一実施形態では、方法で使用されるダイズタンパク質材料は、単離ダイズタンパク質（ＩＳＰまたはダイズタンパク質単離物とも称される）であってもよい。一般に、単離ダイズタンパク質は、無水ベースで少なくとも約９０％のダイズタンパク質のタンパク質含量を有する。単離ダイズタンパク質は未処理ダイズタンパク質を含んでもよく、またはそれは部分的に加水分解されたダイズタンパク質を含んでもよい。単離ダイズタンパク質は、７Ｓ、１１Ｓ、２Ｓ、および１５Ｓなどの保存タンパク質サブユニットの含量が高くてもよい。本発明で使用してもよい単離ダイズタンパク質の非限定的例は、例えばＳｏｌａｅ，ＬＬＣ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から市販され、ＳＵＰＲＯ（登録商標）５００Ｅ、ＳＵＰＲＯ（登録商標）６２０、ＳＵＰＲＯ（登録商標）７１０、およびＳＵＰＲＯ（登録商標）ＥＸ３３単離ダイズタンパク質などが挙げられる。
【００１９】
別の実施形態では、ダイズタンパク質材料は、無水ベースで約６５％〜約９０％未満のタンパク質含量を有する、ダイズタンパク質濃縮物（ＳＰＣ）であってもよい。本発明で有用な適切なダイズタンパク質濃縮物の例としては、Ｓｏｌａｅ，ＬＬＣ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から市販されるＡＬＰＨＡ（登録商標）ＤＳＰ−Ｃ、Ｐｒｏｃｏｎ（商標）、ＡＬＰＨＡ（登録商標）１２、およびＡＬＰＨＡ（登録商標）５８００が挙げられる。代案としては、ダイズタンパク質濃縮物を単離ダイズタンパク質と混合して、ダイズタンパク質材料源として単離ダイズタンパク質の一部を置き換えてもよい。
【００２０】
さらに別の実施形態では、ダイズタンパク質材料は、無水ベースで約４９％〜約６５％のタンパク質含量を有するダイズ粉であってもよい。ダイズ粉は、脱脂ダイズ粉、部分的脱脂ダイズ粉、または全脂ダイズ粉であってもよい。代案としては、ダイズ粉を単離ダイズタンパク質またはダイズタンパク質濃縮物と混合してもよい。ダイズ粉、単離ダイズタンパク質、またはダイズタンパク質濃縮物のあらゆる組み合わせが役に立つ。当業者は、最終用途製品の所望の属性に応じて、これらの成分を組み合わせ得る。
【００２１】
ダイズ粉を使用する場合、出発原料は典型的に脱脂ダイズ粉またはフレークである。全脂ダイズは、およそ４０重量％のタンパク質とおよそ２０重量％の油を含有する。脱脂ダイズ粉またはフレークが出発タンパク質材料を形成する場合、これらの全脂丸ダイズは従来の方法によって脱脂してもよい。例えばダイズを清潔にして脱皮し、ひき割りして一連の圧扁ロールを通過させ、次にヘキサンまたはその他の適切な溶剤の使用によって溶剤抽出を実施し、油を抽出して脱脂フレークを生成してもよい。脱脂フレークを粉砕して、ダイズ粉を製造してもよい。方法は全脂ダイズ粉を用いては未だ実施されていないが、全脂ダイズ粉もまたタンパク質源の役割を果たすと考えられる。しかし全脂ダイズ粉を処理する場合、油を除去する三段階遠心分離などの分離工程の使用が必要になる見込みが高い。
【００２２】
さらなる実施形態では、ダイズタンパク質材料は豆乳であってもよい。代案としては、豆乳を単離ダイズタンパク質、ダイズタンパク質濃縮物、またはダイズ粉と混合してもよい。ダイズ粉、単離ダイズタンパク質、またはダイズタンパク質濃縮物のあらゆる組み合わせが役立つ。当業者は、最終用途製品の所望の属性に応じて、これらの成分を組み合わせることができる。
【００２３】
代案の実施形態では、ダイズタンパク質材料は粉末豆乳であってもよい。代案としては、粉末豆乳は、単離ダイズタンパク質、ダイズタンパク質濃縮物、またはダイズ粉と混合してもよい。ダイズ粉、単離ダイズタンパク質、またはダイズ濃縮物のあらゆる組み合わせが役立つ。当業者は、最終用途製品の所望の属性に応じて、これらの成分を組み合わせることができる。
【００２４】
さらなる代案の実施形態では、ダイズタンパク質材料は、遠心分離機内での沈降分離に基づいて、４つの主要保存タンパク質画分またはサブユニット（７Ｓ、１１Ｓ．２Ｓ、および１５Ｓ）に分離された材料であってもよい。一般に、１１Ｓ画分は高度にグリシニンに富み、７Ｓ画分は高度にβ−コングリシニンに富む。
【００２５】
一般に出発ダイズタンパク質材料は、典型的に一連のサイズのタンパク質の混合物を含む。一実施形態では、ダイズ材料中のタンパク質は、サイズが約１０００ダルトン〜約５００，０００ダルトンの範囲であってもよい。別の実施形態では、ダイズ材料中のタンパク質は、サイズが約３０００ダルトン〜約１００，０００ダルトンの範囲であってもよい。
【００２６】
別の実施形態では、タンパク質材料はダイズ以外の植物に由来してもよい。非限定的例として、適切な植物としてはアマランス、クズウコン、大麦、ソバ、カノーラ、キャッサバ、チャナ豆（ヒヨコ豆）、マメ科植物、レンズ豆、ハウチワ豆、トウモロコシ、キビ、オート麦、エンドウ豆、ジャガイモ、米、ライ麦、ソルガム、ヒマワリ、タピオカ、ライ小麦、小麦、およびそれらの混合物が挙げられる。特に好ましい植物タンパク質としては、大麦、カノーラ、ハウチワ豆、トウモロコシ、オート麦、エンドウ豆、ジャガイモ、米、小麦、およびこれらの組み合わせが挙げられる。一実施形態では、植物タンパク質材料は、カノーラ粉、カノーラタンパク質単離物、カノーラタンパク質濃縮物、およびこれらの組み合わせであってもよい。別の実施形態では、植物タンパク質材料は、トウモロコシタンパク質粉末、トウモロコシタンパク質濃縮物、トウモロコシタンパク質単離物、トウモロコシ胚芽、トウモロコシグルテン、トウモロコシグルテンミール、トウモロコシ粉、ゼインタンパク質、およびこれらの組み合わせであってもよい。なおも別の実施形態では、植物タンパク質材料は、大麦粉末、大麦タンパク質濃縮物、大麦タンパク質単離物、ひき割り大麦、大麦粉、およびこれらの組み合わせであってもよい。代案の実施形態では、植物タンパク質材料は、ハウチワ豆粉、ハウチワ豆タンパク質単離物、ハウチワ豆タンパク質濃縮物、およびこれらの組み合わせであってもよい。別の代案の実施形態では、植物タンパク質材料は、オートミール、オート麦粉、オート麦タンパク質粉、オート麦タンパク質単離物、オート麦タンパク質濃縮物、およびこれらの組み合わせであってもよい。さらに別の実施形態では、植物タンパク質材料は、エンドウ豆粉、エンドウ豆タンパク質単離物、エンドウ豆タンパク質濃縮物、およびこれらの組み合わせであってもよい。なおも別の実施形態では、植物タンパク質材料は、ジャガイモタンパク質粉末、ジャガイモタンパク質単離物、ジャガイモタンパク質濃縮物、ジャガイモ粉、およびこれらの組み合わせであってもよい。さらなる実施形態では、植物タンパク質材料は、米粉、ひき割り米、米タンパク質粉末、米タンパク質単離物、米タンパク質濃縮物、およびこれらの組み合わせであってもよい。別の代案の実施形態では、植物タンパク質材料は、小麦タンパク質粉末、小麦グルテン、小麦胚芽、小麦粉、小麦タンパク質単離物、小麦タンパク質濃縮物、可溶化小麦タンパク質、およびこれらの組み合わせであってもよい。
【００２７】
別の実施形態では、タンパク質材料は乳製品に由来してもよい。適切な乳タンパク質の非限定的例としては、脱脂粉乳、乳タンパク質単離物、乳タンパク質濃縮物、酸カゼイン、カゼイネート（例えばカゼイン酸ナトリウムおよびカゼイン酸カルシウム）カゼインタンパク質単離物、カゼインタンパク質濃縮物、乳清タンパク質濃縮物、乳清タンパク質単離物、およびこれらの組み合わせが挙げられる。乳タンパク質材料は、牛、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ラクダ、ラクダ科、ヤク、および水牛に由来してもよい。
【００２８】
ダイズタンパク質材料と、少なくとも１つのその他のタンパク質材料との組み合わせを本発明の方法で使用してもよいこともまた、想定される。すなわちタンパク質加水分解産物組成物は、ダイズタンパク質材料と、少なくとも１つのその他のタンパク質材料との組み合わせから調製してもよい。一実施形態では、タンパク質加水分解産物組成物は、ダイズタンパク質材料と、大麦、カノーラ、ハウチワ豆、トウモロコシ、オート麦、エンドウ豆、ジャガイモ、米、小麦、および乳製品からなる群から選択される１つのその他のタンパク質材料との組み合わせから調製してもよい。別の実施形態では、タンパク質加水分解産物組成物は、ダイズタンパク質材料と、大麦、カノーラ、ハウチワ豆、トウモロコシ、オート麦、エンドウ豆、ジャガイモ、米、小麦、および乳製品からなる群から選択される２つのその他のタンパク質材料との組み合わせから調製してもよい。さらなる実施形態では、タンパク質加水分解産物組成物は、ダイズタンパク質材料と、大麦、カノーラ、ハウチワ豆、トウモロコシ、オート麦エンドウ豆ジャガイモ、米、小麦、および乳製品からなる群から選択される、３つ以上のその他のタンパク質材料との組み合わせから調製してもよい。非限定的組み合わせとしては、ダイズタンパク質と乳タンパク質、ダイズタンパク質とカノーラタンパク質、ダイズタンパク質と小麦タンパク質、ダイズタンパク質とトウモロコシタンパク質、ダイズタンパク質と米タンパク質、ダイズタンパク質とエンドウ豆タンパク質、ダイズタンパク質とハウチワ豆タンパク質が挙げられる。
【００２９】
さらにダイズタンパク質以外のおよびダイズタンパク質を含む、様々なタンパク質材料の組み合わせも実現可能である。
【００３０】
ｂ．タンパク質スラリー
組み合わせで使用されるダイズタンパク質材料およびその他のタンパク質材料の濃度は変動し得て、また変動する。ダイズタンパク質材料の量は、組み合わせ中で使用される総タンパク量の約１％〜約９９％で変動してもよい。一実施形態では、ダイズタンパク質材料の量は、組み合わせで使用される総タンパク量の約１％〜約２０％に及んでもよい。別の実施形態では、ダイズタンパク質材料の量は、組み合わせで使用される総タンパク質の約２０％〜約４０％に及んでもよい。なおも別の実施形態では、ダイズタンパク質材料の量は、組み合わせで使用される総タンパク質の約４０％〜約８０％に及んでもよい。さらなる実施形態では、ダイズタンパク質材料の量は、組み合わせで使用される総タンパク質の約８０％〜約９９％に及んでもよい。同様に（少なくとも１つの）その他のタンパク質材料の量は、組み合わせで使用される総タンパク量の約１％〜約９９％に及んでもよい。一実施形態では、その他のタンパク質材料の量は、組み合わせで使用される総タンパク量の約１％〜約２０％に及んでもよい。別の実施形態では、その他のタンパク質材料の量は、組み合わせで使用される総タンパク量の約２０％〜約４０％に及んでもよい。なおも別の実施形態では、その他のタンパク質材料の量は、組み合わせで使用される総タンパク量の約４０％〜約８０％に及んでもよい。さらなる実施形態では、その他のタンパク質材料の量は、組み合わせで使用される総タンパク量の約８０％〜約９９％に及んでもよい。
【００３１】
本発明の方法では、タンパク質材料は典型的に水に混合されまたは分散されて、約１重量％〜約２５重量％のタンパク質（現状のまま）を含むスラリーを形成する。一実施形態では、スラリーは、約１重量％〜約５％重量のタンパク質（現状のまま）を含んでもよい。別の実施形態では、スラリーは、約６重量％〜約１０重量％のタンパク質（現状のまま）を含んでもよい。さらなる実施形態では、スラリーは、約１１重量％〜約１５重量％のタンパク質（現状のまま）を含んでもよい。なおも別の実施形態では、スラリーは、約１６重量％〜約２５重量％のタンパク質（現状のまま）を含んでもよい。
【００３２】
タンパク質材料を水に分散した後、タンパク質材料スラリーを約７０℃〜約９０℃に約２分〜約２０分加熱して、推定上の内在性プロテアーゼ阻害物質を不活性化してもよい。タンパク質スラリーのｐＨおよび温度は、加水分解反応を最適化し、加水分解反応で使用するエンドペプチダーゼがその最適活性レベルで確実に機能するように調節し得る。タンパク質スラリーのｐＨは、一般に当該技術分野で知られている方法に従って調節およびモニターしてもよい。タンパク質スラリーのｐＨは、約５．０〜約１１．０の値に調節および維持してもよい。しかし一実施形態では、タンパク質スラリーのｐＨは調節されない。ｐＨは約６．３〜約６．８に保たれる。次に酵素処理タンパク質スラリーを約６．３〜約６．８のｐＨで３０分間インキュベートし、次にｐＨを７．０に調節する。一実施形態では、タンパク質スラリーのｐＨを調節して約７．０〜約８．０に保ってもよい。別の実施形態では、タンパク質スラリーのｐＨを調節して約８．０〜約９．０に保ってもよい。さらに別の実施形態では、タンパク質スラリーのｐＨを調節して約９．０〜約１０．０に保ってもよい。好ましい実施形態では、タンパク質スラリーのｐＨを調節して約８．０に保ってもよい。タンパク質スラリーの温度は、当該技術分野で知られている方法に従って調節して、加水分解反応中に好ましくは約３０℃〜約７０℃に保ってもよい。一般にこの範囲を超えるまたはこの範囲未満の温度は、エンドペプチダーゼを不活性化するかもしれない。一実施形態では、タンパク質スラリーの温度は、当該技術分野で知られている方法に従って調節して、加水分解反応中に約４０℃〜約６０℃に保ってもよい。
【００３３】
ｉ．エンドペプチダーゼ
加水分解反応は、一般にタンパク質材料のスラリーにエンドペプチダーゼを添加して、反応混合物を形成することで開始される。エンドペプチダーゼとタンパク質材料との反応は、タンパク質材料のより小型のポリペプチドへの加水分解をもたらす。このエンドペプチダーゼは、グルタミン酸またはアスパラギン酸どちらかのカルボキシル末端側で、選択的にタンパク質を切断する。エンドペプチダーゼはセリンプロテアーゼであり、具体的にはＧＥである。ＧＥは約６．０〜約１１．０のｐＨおよび約３０℃〜約７０℃の温度で最適活性を有し、最適温度はｐＨ９．０で約５０℃である。
【００３４】
エンドペプチダーゼは、微生物起源の酵素であり得る。微生物酵素は特徴（最適ｐＨ、温度など）が幅広く、一貫して比較的大量に得られ得ることから、動物または植物酵素でない微生物酵素の使用が有利である。適切なエンドペプチダーゼの非限定的例としては、先に論じたようなＧＥ、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）（ＵＮＩＰＲＯＴ：Ｐ８００５７）からのセリンプロテアーゼが挙げられる。ＧＥは、グルタミン酸またはアスパラギン酸のカルボキシル末端側でペプチド結合を切断する。
【００３５】
一実施形態では、エンドペプチダーゼは、表１に示す配列番号１と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有して、プロテアーゼ活性を有する、セリンプロテアーゼであってもよい。別の実施形態では、エンドペプチダーゼは、表１に示す配列番号１と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有して、プロテアーゼ活性を有するセリンプロテアーゼであってもよい。なおも別の実施形態では、エンドペプチダーゼは、表１に示す配列番号１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有して、プロテアーゼ活性を有するセリンプロテアーゼであってもよい。代案の実施形態では、エンドペプチダーゼは、表１に示す配列番号１と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有して、プロテアーゼ活性を有するセリンプロテアーゼであってもよい。別の代案の実施形態では、エンドペプチダーゼは、表１に示す配列番号１と少なくとも９７％同一のアミノ酸配列を有して、プロテアーゼ活性を有するセリンプロテアーゼであってもよい。さらなる実施形態では、エンドペプチダーゼは、表１に示す配列番号１と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有して、プロテアーゼ活性を有するセリンプロテアーゼであってもよい。
【００３６】
【表１】
2012513772.tif 000003
【００３７】
２つのアミノ酸配列間の配列同一性の程度は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌのＢＬＡＳＴｐアルゴリズムを使用して判定してもよい（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４−２２６８，１９９０）。配列同一性百分率は、比較ウィンドウ全体で２つの最適に整合された配列を比較することによって判定され、比較ウィンドウ内のアミノ酸配列の一部は、２つの配列の最適整合のために、参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して付加または欠失（すなわちギャップ）を含んでもよい。百分率は、双方の配列で同一のアミノ酸が現れる位置の数を判定して、マッチした位置の数を得て、マッチした位置の数を比較ウィンドウ中の位置の総数で除して、結果に１００を乗じて配列同一性の百分率を得ることにより計算される。
【００３８】
当業者は、ポリペプチドの機能に影響を及ぼすことなく、アミノ酸残基が同様の側鎖を有する別のアミノ酸残基によって置換されてもよいことを理解するであろう。例えば脂肪族側鎖を有する一群のアミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンであり；脂肪族−ヒドロキシル側鎖を有する一群のアミノ酸は、セリンおよびスレオニンであり；アミド含有側鎖を有する一群のアミノ酸は、アスパラギンおよびグルタミンであり；芳香族側鎖を有する一群のアミノ酸は、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンであり；塩基性側鎖を有する一群のアミノ酸は、リジン、アルギニン、およびヒスチジンであり；イオウ含有側鎖を有する一群のアミノ酸は、システインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換基としては、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、およびアスパラギン−グルタミンが挙げられる。したがってエンドペプチダーゼは、配列番号１と比較して少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有してもよい。一実施形態では、エンドペプチダーゼは、配列番号１と比較して約３５の保存的アミノ酸置換を有してもよい。別の実施形態では、エンドペプチダーゼは、配列番号１と比較して約２５の保存的アミノ酸置換を有してもよい。さらに別の実施形態では、エンドペプチダーゼは、配列番号１と比較して約１５の保存的アミノ酸置換を有してもよい。なおも実施形態では、エンドペプチダーゼは、配列番号１と比較して約１０の保存的アミノ酸置換を有してもよい。さらに別の実施形態では、エンドペプチダーゼは、配列番号１と比較して約５の保存的アミノ酸置換を有してもよい。さらなる実施形態では、エンドペプチダーゼは配列番号１と比較して約１の保存的アミノ酸置換を有してもよい。
【００３９】
プロテアーゼ活性を有するあらゆる配列の断片は、例えばあらゆるシグナルペプチドおよび／またはプロペプチドが切除された後などのプロセッシング後の活性酵素のアミノ酸配列であってもよい。
【００４０】
エンドペプチダーゼはまた、例えばウシまたはブタ起源などの哺乳類起源の酵素であってもよい。
【００４１】
タンパク質材料とエンドペプチダーゼの様々な組み合わせを表２に示す。
【００４２】
【表２】
2012513772.tif 000004
【００４３】
タンパク質スラリーに添加されるエンドペプチダーゼの量は、タンパク質材料源、所望の加水分解度、および加水分解反応時間に応じて変動し得て、また変動する。量は、１キログラムのタンパク質材料あたり約１ｍｇ〜約５０００ｍｇのエンドペプチダーゼの範囲であってもよい。一実施形態では、量は、１キログラムのタンパク質材料あたり１ｍｇ〜約２０ｍｇのエンドペプチダーゼの範囲であってもよい。別の実施形態では、量は、１キログラムのタンパク質材料あたり２０ｍｇ〜約１０００ｍｇのエンドペプチダーゼの範囲であってもよい。さらに別の実施形態では、量は、１キログラムのタンパク質材料あたり約１０００ｍｇ〜約５０００ｍｇのエンドペプチダーゼの範囲であってもよい。
【００４４】
当業者には理解されるように、加水分解反応時間は、例えばエンドペプチダーゼ濃度および所望の加水分解度に応じて変動し得て、また変動する。一般的に言えば、加水分解反応時間は、約５分間〜約５時間など、２、３分から数時間の範囲であってもよい。好ましい実施形態では、反応時間は約３０分であってもよい。
【００４５】
加水分解反応を終結させるために、エンドペプチダーゼを不活性化するのに十分高い温度に反応混合物を加熱してもよい。例えば反応混合物をおよそ９０℃の温度に加熱することは、ほとんどのプロテアーゼを実質的に熱不活性化する。
【００４６】
ｉｉ．任意のエキソペプチダーゼ
方法は、タンパク質加水分解産物とエキソペプチダーゼとを接触させるステップをさらに含んでもよい。一般にエキソペプチダーゼは、ポリペプチド鎖の末端近くのみに作用する。遊離アミノ末端に作用するものは、単一アミノ酸残基（すなわちアミノペプチダーゼ；ＡＰ）、ジペプチド（すなわちジペプチジル−ペプチダーゼ）またはトリペプチド（すなわちトリペプチジル−ペプチダーゼ）を遊離させる。遊離カルボキシル末端に作用するエキソペプチダーゼは、単一アミノ酸（すなわちカルボキシペプチダーゼ；ＣＰ）またはジペプチド（すなわちペプチジル−ジペプチダーゼ）を遊離させる。いくつかのエキソペプチダーゼは、ジペプチドに対して特異的であり（すなわちジペプチダーゼ）、またはイソペプチド結合によって置換され、環化されまたは連結された末端残基を除去する。イソペプチド結合は、カルボキシル基とα−アミノ基との結合以外のペプチド結合であり、この酵素群はωペプチダーゼによって特徴付けられる。
【００４７】
典型的にエキソペプチダーゼは、約６．０〜約８．０のｐＨ、および約５０℃〜約６０℃の温度において最適活性を有する食品等級酵素である。エキソペプチダーゼは、微生物起源であってもよい。本発明の方法で使用するのに適したエキソペプチドの例としては、コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）からのアミノペプチダーゼ（参照によってその全体を援用する国際公開第９６／２８５４２号パンフレットの配列番号２）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）からのアミノペプチダーゼ（ＵＮＩＰＲＯＴＥ：Ｑ６５ＤＨ７）、コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）からのカルボキシペプチダーゼＤ（ＵＮＩＰＲＯＴ：Ｑ２ＴＺ１１）、コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）からのカルボキシペプチダーゼＹ（ＵＮＩＰＲＯＴ：Ｑ２ＴＹＡ１）、これらの組み合わせが挙げられる。
【００４８】
タンパク質加水分解産物に添加されるエキソペプチダーゼの量は、多様な要因に応じて変動し得て、また変動する。エキソペプチダーゼの量は、１キログラムの出発タンパク質材料あたり約１ｍｇ〜約５，０００ｍｇのエキソペプチダーゼの範囲であってもよい。一実施形態では、量は、１キログラムの出発タンパク質材料あたり１ｍｇ〜約２０ｍｇのエキソペプチダーゼの範囲であってもよい。別の実施形態では、量は、１キログラムの出発タンパク質材料あたり２０ｍｇ〜約１，０００ｍｇのエキソペプチダーゼの範囲であってもよい。さらに別の実施形態では、量は、１キログラムの出発タンパク質材料あたり約１，０００ｍｇ〜約５，０００ｍｇのエキソペプチダーゼの範囲であってもよい。
【００４９】
タンパク質加水分解産物のｐＨを調節して、溶液のｐＨをエキソペプチダーゼに最適のレベルにしてもよい。加水分解産物のｐＨは、酸性溶液または塩基性溶液のどちらかの添加によって調節してもよい。エキソペプチダーゼ反応時間は変動し得て、また変動する。一般的に言えば、加水分解反応時間は、約５分〜約５時間などの２、３分から数時間の範囲であってもよい。好ましい実施形態では、反応時間は約３０〜６０分であってもよい。反応は、エンドペプチダーゼ反応について上で論じたのと同様の方法で終結させてもよい。
【００５０】
ｃ．実施形態
例示的実施形態では、タンパク質材料はダイズに由来してもよく、ダイズ材料は単離ダイズタンパク質であってもよい。エンドペプチダーゼはＧＥであり、反応は約４０℃〜約７０℃の温度、および約６．０〜約８．５のｐＨで実施してもよい。
【００５１】
さらなる例示的実施形態では、タンパク質材料はダイズに由来してもよく、ダイズ材料はダイズタンパク質濃縮物であってもよい。エンドペプチダーゼはＧＥであり、反応は約４０℃〜約７０℃の温度、および約６．０〜約８．５のｐＨで実施してもよい。ダイズタンパク質濃縮物は、単離ダイズタンパク質と組み合わせて使用してもよい。
【００５２】
さらなる例示的実施形態では、タンパク質材料はダイズに由来してもよく、ダイズ材料はダイズ粉であってもよい。エンドペプチダーゼはＧＥであり、反応は約４０℃〜約７０℃の温度、および約６．０〜約８．５のｐＨで実施してもよい。ダイズ粉は、ダイズタンパク質濃縮物および／または単離ダイズタンパク質と組み合わせて使用してもよい。
【００５３】
例示的実施形態では、タンパク質材料はダイズに由来してもよく、ダイズ材料は豆乳であってもよい。エンドペプチダーゼはＧＥであり、反応は約４０℃〜約７０℃の温度、および約６．０〜約８．５のｐＨで実施してもよい。豆乳は、ダイズ粉、ダイズタンパク質濃縮物、および／または単離ダイズタンパク質と組み合わせて使用してもよい。
【００５４】
別の例示的実施形態では、タンパク質材料はダイズに由来してもよく、ダイズ材料は粉末豆乳であってもよい。エンドペプチダーゼはＧＥであり、反応は約４０℃〜約７０℃の温度、および約６．０〜約８．５のｐＨで実施してもよい。粉末豆は、豆乳、ダイズ粉、ダイズタンパク質濃縮物、および／または単離ダイズタンパク質と共に使用してもよい。
【００５５】
ＩＩ．タンパク質加水分解産物組成物
本発明の別の態様は、タンパク質加水分解産物組成物を包含する。タンパク質加水分解産物組成物は、４７ｋＤａ断片に富んだポリペプチドの混合物を含む。タンパク質加水分解産物組成物のポリペプチドは、約１０％〜約６６％が４７ｋＤａ断片である。タンパク質加水分解産物組成物中のポリペプチドは、ダイズ、アマランス、クズウコン、ソバ、カノーラ、キャッサバ、チャナ豆（ヒヨコ豆）、トウモロコシ、マメ科植物、レンズ豆、ハウチワ豆、キビ、オート麦、エンドウ豆、ライ麦ソルガム、ヒマワリ、タピオカ、ライ小麦、乳製品、およびこれらの組み合わせをはじめとする異なるタンパク質源に由来してもよい。一実施形態では、タンパク質材料はダイズタンパク質材料であってもよい。多様なダイズタンパク質材料を本発明の方法で使用して、ダイズタンパク質加水分解産物を作り出してもよい。一般にダイズタンパク質材料は、当該技術分野で知られている方法に従って丸ダイズから誘導されてもよい。丸ダイズは、一般ダイズ（すなわち非遺伝子改変ダイズ）、遺伝子改変ダイズ、およびこれらの組み合わせであってもよい。遺伝子改変ダイズとしては、高β−コングリシニンダイズおよび高オレイン酸ダイズなどのタンパク質、油、または炭水化物組成物が変性されたダイズが挙げられる。ダイズタンパク質材料の適切な例としては、ダイズ抽出物、ダイズカード、ダイズ粉、単離ダイズタンパク質、ダイズタンパク質濃縮物、豆乳、粉末豆乳、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００５６】
一般にタンパク質加水分解産物組成物は、出発タンパク質材料との比較で、様々な長さおよび分子サイズのポリペプチド混合物を含む。例示的実施形態では、ポリペプチドの分子サイズは４７ｋＤａ断片に富んでいる。
【００５７】
タンパク質加水分解産物組成物の加水分解度は、タンパク質材料源および反応の完結度に応じて変動し得て、また変動する。
【００５８】
タンパク質加水分解産物組成物は、本明細書に記載される白色指数を使用した測定で改善された白色度を有する（図４）。０．５％〜１％の加水分解度では、ゲルまたはスラリーのどちらかにした際に、得られる製品の白色度に著しい効果が見られる。製品の白色指数に対する酵素濃度の影響は、用量に依存して増大する。より白い加水分解産物は、飲料、ゲルおよび食肉系などの多数の食品用途で使用するのに望ましい。本発明のダイズタンパク質加水分解産物は、非加水分解ダイズタンパク質よりも色がはるかに薄い。酵素ＧＥは、タンパク質をグルタミン酸およびアスパラギン酸残基のＣ末端で切断する。白色度は、下述の白色指数を使用して測定される。
【００５９】
白色指数
ダイズタンパク質製品の「白色指数」は、ダイズタンパク質含有組成物の色を指す。多数のダイズタンパク質含有組成物は、様々な程度に黄色がかったまたは茶色がかった色を有する。一般にこれらの組成物の色は「改善」し得て、すなわち製品の「白色指数」を本発明の方法によって増大し得る。一般に白色指数は、白色指数（ＷＩ）の定型表現、ＷＩ＝Ｌ−３ｂを使用して、それから白色指数を計算してもよい組成物について、Ｌ、ａ、およびｂ色値を提供する比色計を使用して判定される。Ｌ構成要素は、一般にサンプルの白色度または「明度」を示唆し、０に近いＬ値が黒色サンプルを示唆するのに対し、１００に近いＬ値は白色サンプルを示唆する。ｂ値はサンプル中に存在する黄色および青色を示唆し、正のｂ値が黄色の存在を示唆するのに対し、負のｂ値は青色の存在を示唆する。その他の色測定で使用してもよいａ値は、赤色および緑色を示唆し、正の値が赤色の存在を示唆するのに対し、負の値は緑色の存在を示唆する。ｂおよびａ値では、対応する色の強度が増大するにつれて、測定の絶対値が直接増大する。一般に比色計は、比色計と共に提供される白色標準タイルを使用して標準化される。次にサンプルをガラスセル内に入れ、それを比色計に挿入する。サンプルセルを不透明カバーで覆い、周辺光がサンプルを通過して検出器に到達し、サンプル測定中に定数として機能する可能性を最小化する。同一材料の複数サンプルが一般に測定されるので、読み取りをした後、サンプルセルを空にして典型的に再充填し、材料の白色指数を測定値の平均値として表す。適切な比色計としては、一般に、例えば光学センサーＤ２５付きモデル＃ＤＰ−９０００をはじめとするＲｅｓｔｏｎ，ＶＡのＨｕｎｔｅｒＬａｂによって製造されるものが挙げられる。
【００６０】
処理前後における懸濁液の５重量％固形分サンプルの白色指数測定は、光学センサーＤ−２５を含むＨｕｎｔｅｒＬａｂ  ＤＰ−９０００比色計を使用して判定され、これらはどちらもＨｕｎｔｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＨｕｎｔｅｒＬａｂ）（Ｒｅｓｔｏｎ，ＶＡ）によって製造される。大量生産基盤での白色指数の測定では、５ｇのタンパク質サンプルを脱イオン水（１００ｍＬ）に添加して、５％ｗ／ｗで分散させるＨｕｎｔｅｒ比色計を使用して得られる結果は、Ｌ、ａ、およびｂの単位で報告される。白色指数は、白色指数＝Ｌ−３ｂを使用して、Ｌおよびｂ尺度値から計算される。
【００６１】
ダイズタンパク質加水分解産物
タンパク質材料がダイズである実施形態では、タンパク質加水分解産物組成物は、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、少なくとも１つのポリペプチドを含んでもよい（表６参照）。本発明はまた、本発明のダイズタンパク質加水分解産物組成物から精製されてもよい、あらゆるポリペプチドも包含する。オリゴペプチドは、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、親和クロマトグラフィー、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などのクロマトグラフィー法によって精製してもよい。例えばポリペプチド断片は、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６からなる群から選択されてもよい。さらに本発明はまた、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６と配列が実質的に同様のポリペプチドをも包含する。典型的にオリゴペプチドは、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６を有するオリゴペプチドと、少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％の配列同一性を有してもよい。
【００６２】
食品
本発明のさらなる態様は、本明細書に記載されるいずれかのタンパク質加水分解産物組成物を含む、食品の提供である。代案としては、食品は、本明細書に記載されるいずれかの単離ポリペプチド断片を含んでもよい。
【００６３】
特定のタンパク質加水分解産物組成物または単離ポリペプチド断片の選択は、形成される食品次第で変動し得て、また変動する。本発明の食品は、飲料、ヨーグルト、プロテインバー、泡立て食品、チーズ、およびその他の乳ベースの用途、および押し出し食品を含み得る。それはまた、肉ベースのゲル、および塊肉用途で使用し得る。苦味または渋み官能特性を最小化することが望ましい食品では、６％よりも１％に近い加水分解度を有するダイズタンパク質加水分解産物組成物が、典型的に選択される。さらに穀類およびダイズ／マメ科植物官能特性を最小化することが望ましい食品では、１％よりも６％に近い加水分解度を有するダイズタンパク質加水分解産物組成物が、典型的に選択される。
【００６４】
言及されたように、タンパク質加水分解産物組成物は、多様な食品および／または飲料用途で使用し得る。飲料の非限定的例としては、スムージー、栄養飲料、エナジードリンク、スポーツドリンク、豆乳飲料、フレーバーダイズ飲料、ライスミルク飲料、乳児用調製粉乳、茶、コーヒー飲料、またはこれらの組み合わせが挙げられる。
【００６５】
別の実施形態では、タンパク質加水分解産物を乳製品で使用し得る。乳製品としては、チーズ、アイスクリーム、アイスクリーム製品、ミルクセーキ、ヨーグルト、ホイップクリーム、サワークリーム、カテージチーズ、または乳飲料が挙げられるが、これらに限定されるものではない。乳飲料としては、ミルク、フレーバー乳飲料、ヤギ乳、液体ヨーグルト、スムージー、またはバターミルクが挙げられる。
【００６６】
代案の実施形態では、タンパク質加水分解産物を栄養補給剤中で使用し得る。栄養補給剤は、液体または固体であってもよい。別の代案の実施形態では、グラノーラバー、シリアルバー、栄養バー、またはエネルギーバーなどのプロテインバー中でタンパク質加水分解産物を使用し得る。
【００６７】
なおも別の実施形態では、タンパク質加水分解産物を押し出し食品中で使用し得る。押し出し食品としては、朝食用シリアル、パスタ、パン、ベークド製品（すなわちケーキ、パイ、ロール、クッキー、クラッカー）、パフスナック製品、ナゲット、またはトルティーヤなどの穀物由来製品が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００６８】
さらに別の実施形態では、タンパク質加水分解産物を肉製品または肉類似食品中で使用し得る。肉製品の例としては、加工肉、挽肉、塊肉製品、およびすり身製品が挙げられるが、これらに限定されるものではない。肉は獣肉または魚介類肉であってもよい。肉類似食品は、獣肉または魚介類肉のテクスチャを模倣する、テクスチャ加工された植物または乳タンパク質であってもよい。肉類似食品は、食品中の肉の一部分または全部であってもよい。
【００６９】
これらのタンパク質加水分解産物を使用して製造し得る泡立て食品としては、ケーキやトルテのためのアイシングおよびトッピング、ペストリーやパイやドーナツのためのフィリング、パフェおよびムース、およびメレンゲが挙げられる。
【００７０】
定義
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語を下で定義する。
【００７１】
【表３】
2012513772.tif 000005
【００７２】
「加水分解度」（ＤＨ）という用語は、加水分解された特異的ペプチド結合の％を指す（すなわち未処理タンパク質中に存在するペプチド結合総数中の切断数）。％ＤＨは、簡易化トリニトロベンゼンスルホン酸（Ｓ−ＴＮＢＳ）法を使用して推定される。この手順は正確で再現性があり、食物タンパク質加水分解産物の加水分解度を判定するのに一般に適用できる手順である。
【００７３】
「エンドペプチダーゼ」という用語は、オリゴペプチドまたはポリペプチド鎖中で内部ペプチド結合を加水分解する酵素を指す。エンドペプチダーゼ群は、酵素サブクラスＥＣ３．４．２１−２５（国際生化学分子生物学連合（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）酵素分類体系）を構成する。
【００７４】
「エキソペプチダーゼ」という用語は、アミノまたはカルボキシル末端またはその近くで、タンパク質および／またはペプチドを加水分解する酵素を指す。エキソペプチダーゼ群は、酵素サブクラスＥＣ３．４．１１−１８（国際生化学分子生物学連合酵素分類体系）を構成する。
【００７５】
「食品等級酵素」は、一般に安全と認められ（ＧＲＡＳ）認可されており、ヒトなどの生物が摂取した際に安全な酵素である。典型的に、酵素、およびそれから酵素が誘導されてもよい製品は、当てはまる法的および規制ガイドラインに従って製造される。
【００７６】
「加水分解産物」は、水の効果によって化合物が切断された際に得られる反応生成物である。タンパク質加水分解産物は、熱的、化学的、または酵素的分解に引き続いて生じる。反応中に、タンパク質はポリペプチドと遊離アミノ酸に分解される。これらの生成物は、可溶性または水不要性、または水性緩衝溶液であってもよい。
【００７７】
「ペプチド」は、一般に２０以下のアミノ酸の短いアミノ酸ポリマーである。「ポリペプチド」は、２０を超えるアミノ酸のポリマーである。これらのどちらのポリマーも一次構造のみを含有する。ポリペプチドは、最初にタンパク質合成中に形成され、それらの天然状態に「折りたたみ」されると（すなわち二次、三次、および四次構造の形成）タンパク質になる。本明細書では、ポリペプチドへの言及は、タンパク質の加水分解からの長鎖ポリマーの生成を意味する。
【００７８】
「タンパク質」は、その天然（すなわち未変性）状態にある活性分子を形成する、アミノ酸のポリマーである。タンパク質の天然状態は、一次、二次、三次、および／または四次構造を有し得る。タンパク質の一次構造は、そのアミノ酸配列である。タンパク質は典型的に、鎖内アミノ酸の相互作用から形成される二次構造を有する。これらの構造は水素結合を通じて形成され、相互作用するアミノ酸のαらせんか、またはβシートとして知られている相互作用するアミノ酸の「シート」のどちらかである。タンパク質はまた、典型的に三次構造も有する。三次構造はアミノ酸残基の鎖内相互作用を通じて形成され、イオン性、疎水性、またはその他の化学相互作用を通じて発生する。タンパク質によっては、分子的に相互作用して四次構造を形成する１つ以上の「サブユニット」を含有する。タンパク質サブユニットは１本鎖ポリペプチド鎖から構成され、二次および（通常）三次構造を含有する。
【００７９】
「穀物」、「ダイズ／マメ科植物」、または「苦味」などの用語を記載するのに使用される「官能特性」という用語は、具体的には実施例１１で説明されるようなＳＱＳ採点システムに従って判定される。
【００８０】
「単離ダイズタンパク質」または「ダイズタンパク質単離物」という用語は、本明細書での用法では、無水ベースで少なくとも約９０％のダイズタンパク質のタンパク質含量を有するダイズ材料を指す。単離ダイズタンパク質は、子葉からダイズのさやおよび胚芽を除去し、子葉を圧扁または粉砕して圧扁または粉砕子葉から油を除去し、子葉繊維から子葉ダイズタンパク質および炭水化物を分離して、引き続いて炭水化物からダイズタンパク質を分離することにより、ダイズから形成される。
【００８１】
「ダイズタンパク質濃縮物」という用語は、本明細書での用法では無水ベースで約６５％から約９０％未満のダイズタンパク質のタンパク質含量を有するダイズ材料である。ダイズタンパク質濃縮物はまた、典型的に無水ベースで約３．５重量％から約２０重量％までのダイズ子葉繊維である、ダイズ子葉繊維も含有してもよい。ダイズタンパク質濃縮物は、ダイズのさやおよび胚芽を除去し、子葉を圧扁または粉砕して圧扁または粉砕子葉から油を除去し、子葉の可溶性炭水化物からダイズタンパク質およびダイズ子葉繊維を分離することによりダイズから形成される。
【００８２】
「ダイズ粉」という用語は、本明細書での用法では、全脂ダイズ粉、酵素活性ダイズ粉、脱脂ダイズ粉、部分的脱脂ダイズ粉、およびそれらの混合物を指す。脱脂ダイズ粉は好ましくは約１％未満の油を含み、Ｎｏ．１００メッシュ（Ｕ．Ｓ．標準）篩を通過し得るようなサイズを有する粒子から形成される、脱脂ダイズ材料の粉砕された形態を指す。ダイズケーク、チップ、フレーク、ミール、または材料混合物は、従来のダイズ粉砕工程を使用してダイズ粉に粉砕される。ダイズ粉は、無水ベースで約４９％〜約６５％のダイズタンパク質含量を有する。好ましくはダイズ粉は非常に微細に粉砕され、最も好ましくは約１％未満のダイズ粉が３００メッシュ（Ｕ．Ｓ．標準）スクリーンに保持されるように粉砕される。全脂ダイズ粉は、通常１８％〜２０％である元の油を全部含む粉砕丸ダイズを指す。ダイス粉は酵素活性であってもよく、またはそれは加熱処理済またはトーストされて酵素活性が最小化されていてもよい。酵素活性ダイズ粉とは、その天然酵素を無効力化しないように加熱処理が最低限である全脂ダイズ粉を指す。
【００８３】
「豆乳」という用語は、本明細書での用法では、微粉砕ダイズと、ダイズ粉と、ダイズフレークと、ダイズ濃縮物と、単離ダイズタンパク質と、ダイズ乳清タンパク質と、不溶性物質が除去されている、ダイズ、ダイズフレーク、およびダイズ粉のいずれか１つ以上の水性抽出物とのいずれか１つ以上の水性混合物を指す。豆乳は、脂肪、炭水化物、甘味料、着色剤、安定剤、増粘剤、香味料、酸、および塩基をはじめとするが、これらに限定されるものではない追加的構成要素を含んでもよい。
【００８４】
「粉末豆乳」という用語は、本明細書での用法では脱水豆乳を指す。豆乳は、噴霧乾燥、トレイ乾燥、トンネル乾燥、および凍結乾燥をはじめとするが、これらに限定されるものではない数多くの方法によって脱水されてもよい。
【００８５】
「簡易化トリニトロベンゼンスルホン酸（Ｓ−ＴＮＢＳ）法」という用語は、本明細書での用法では、食品タンパク質加水分解産物の加水分解度を判定するための、正確で再現性のある一般に適用できる手順を指す。このためには、０．１ｇのダイズタンパク質加水分解産物を１００ｍＬの０．０２５Ｎ  ＮａＯＨに溶解した。加水分解産物溶液のアリコート（２．０ｍＬ）を８ｍＬの０．０５Ｍナトリウムホウ酸塩緩衝液（ｐＨ９．５）と混合した。２ｍＬの緩衝化加水分解産物溶液を０．２０ｍＬの１０％トリニトロベンゼンスルホン酸を用いて処理し、室温で暗中１５分間のインキュベーションがそれに続いた。４ｍＬの０．１Ｍ亜硫酸ナトリウム−０．１Ｍリン酸ナトリウム溶液（１：９９の比率）を添加して反応をクエンチし、吸光度を４２０ｎｍで読み取った。０．１ｍＭのグリシン溶液を標準として使用した。以下の計算を使用して、グリシン標準溶液の％回収率を判定した：[（４２０ｎｍでのグリシン吸光度−４２０ｎｍでの空試験吸光度）×（１００／０．７１０）]。９４％以上の値が許容可能と見なされた。（Ｊｅｎｓ  Ａｄｌｅｒ−Ｎｉｓｓｅｎ（１９７９）“Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅｇｒｅｅ  ｏｆ  Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ  ｂｙ  Ｔｒｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ，”Ｊ．Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．１  ２７（６）：１２５６−１２６２．）
【００８６】
本発明またはその好ましい実施形態の要素を導入する際に、冠詞「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、および「ｓａｉｄ」は、要素が１つ以上あることを意味することが意図される。「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」、および「ｈａｖｉｎｇ」という用語は、包括的であることが意図され、列挙した要素以外の追加的要素があってもよいことを意味する。
【００８７】
本発明の範囲を逸脱することなく、上記化合物、生成物、および方法に様々な変更を加えることができるので、上記の説明および下述の実施例に含まれる全ての物質は例証的なものとして解釈され、制限を意図するものではない。
【実施例】
【００８８】
以下の実施例は、本発明の様々な実施形態を例証する。
【００８９】
実施例１．脱脂ダイズ粉からのダイズタンパク質製品の調製
約３０ポンドの脱脂ダイズ粉を２５０ポンドの水に添加して、ｐＨ６．５で１０％固形分のスラリーを形成した。スラリーを５４℃（１３０°Ｆ）に加熱して、ｐＨ調節なしに３０分間撹拌した。次に８０ｍｌのＮａＯＨ（０．６％固体ベース）によってスラリーのｐＨをｐＨ７．０に調節し、中性スラリーを形成した。中性スラリーを１６０．５℃（３２１°Ｆ）に加熱して、２７秒間保持した。熱い中和スラリーを５３℃（１２８°Ｆ）に冷却し、次に噴霧乾燥機内で乾燥させてダイズタンパク質製品を形成した。乾燥機に対する固形分は、ｐＨ６．８４で９．９％であった。
【００９０】
実施例２．２．４ｍｇのＧＥを用いて処理された脱脂ダイズ粉からのダイズタンパク質製品の調製
約３０ポンドの脱脂ダイズ粉を２５０ポンドの水に添加して、ｐＨ６．５で１０％固形分のスラリーを形成した。スラリーを５４℃（１３０°Ｆ）に加熱して、１ｋｇのタンパク質固形物あたり２．４ｍｇのＧＥ酵素タンパク質を添加し、撹拌しながら３０分間保持した。３０分後に７０ｍｌのＮａＯＨ（０．６％固形分ベース）によってｐＨを７．０に調節し、酵素処理中性スラリーを形成した。ｐＨは酵素処理中に６．２３に低下した。酵素処理中性スラリーを１６０．５℃（３２１°Ｆ）に加熱して、２７秒間保持した。熱い中性酵素処理スラリーを５３℃（１２８°Ｆ）に冷却し、次に噴霧乾燥機内で乾燥させた。乾燥機に対する固形分は、ｐＨ６．８２で９．６％であった。
【００９１】
実施例３．４．８ｍｇのＧＥを用いて処理された脱脂ダイズ粉からのダイズタンパク質製品の調製
３０ポンドの脱脂ダイズ粉を２５０ポンドの水に添加して、ｐＨ６．５で１０％固形分のスラリーを形成した。スラリーを５４℃（１３０°Ｆ）に加熱して、１ｋｇのタンパク質固形物あたり４．８ｍｇのＧＥ酵素タンパク質を添加し、撹拌しながら３０分間保持した。３０分後に１００ｍｌのＮａＯＨ（０．８％固形分ベース）によってｐＨを７．０に調節し、酵素処理中性スラリーを形成した。ｐＨは酵素処理中に６．３２に低下した。酵素処理中性スラリーを１６０．５℃（３２１°Ｆ）に加熱して、２７秒間保持した。熱い中性酵素処理スラリーを５３℃（１２８°Ｆ）に冷却し、次に噴霧乾燥機内で乾燥させた。乾燥機に対する固形分は、ｐＨ６．８４で９．６％であった。
【００９２】
標準操作手順を使用して、実施例１〜３のタンパク質組成物をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析し、図２はゲルの画像を提示する。この分析はＧＥがβ−コングリシニンのαおよびα’サブユニットの延長領域を選択的に切断することによって、それを４７ｋＤａの断片である疎水性コア領域から遊離させたことを明らかにした。
【００９３】
実施例４．塩処理による４７ｋＤａポリペプチドの富化
実施例２からのダイズタンパク質製品を２％の塩（ＮａＣｌ）でさらに処理した。手順は次のとおりであった：２ｇのＮａＣｌを１００ｍｌの水に溶解して２％塩溶液を調製した。実施例２で製造した各２ｇのダイズタンパク質製品を５０ｇの塩溶液と合わせ、７５℃で３０分間混合して分散体を得た。分散体を３０００×Ｇで１０分間遠心分離して、上清から沈殿物を分離した。図５に提示されるように、上清はグリシニン（１１Ｓ）およびβ−コングリシニンβサブユニット（７Ｓ）を含有すると同定され、沈殿物は４７ｋＤａのポリペプチドを含有すると同定される。
【００９４】
実施例５．陰イオンクロマトグラフィーによる４７ｋＤａのポリペプチドの富化
陰イオン交換カラムＱ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＸＬ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＧＥ処理タンパク質中のその他のタンパク質構成要素から４７ｋＤａのポリペプチドを分離した。１ｍｌの１％タンパク質溶液を１ｍｌカラムに１ｍｌ／分の流速で通過させ、次に１ｍｌの脱イオン水をカラムに通した。水溶出サンプルは、図６、ＧＥ加水分解産物のクロマトグラフの画分１、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルＢのサンプル１に示されるように、主に４７ｋＤａのポリペプチドと同定された。結果は４７ｋＤａのポリペプチドが、非常に疎水性またはカチオン性のどちらかであることを示唆する。
【００９５】
実施例６．熱水和比によって測定される水結合能力
熱水和比（ＴＨＲ）試験、熱を加えて２％塩溶液中のダイズタンパク質の水和比を判定する試験。ＴＨＲ値は例えば肉、ヨーグルト、プディングなどの様々な用途におけるダイズタンパク質の水結合能力を示唆する。ＴＨＲ試験手順では２％の塩溶液を調製し、５０グラムのこの溶液と、無水ベースで２グラムのダイズタンパク質製品とを合わせ、混合して分散体を得る。分散体を遠心分離して、固形分上清から分離する。３２５メッシュのステンレス鋼ファブリックを通して上清を濾過し、濾液を得る。次に濾液を秤量する。ＴＨＲは以下の式で判定される。
【数１】
2012513772.tif 000006
式中、Ａは塩溶液の重量である。Ｂは水分を含めるように調節されたダイズタンパク質製品のサンプル重量である。ダイズタンパク質製品の水分含量が４．２２％であれば、絶対乾燥含量は９５．７８％である。水分を含めた場合、無水ベースで２グラムのダイズタンパク質製品は２．０９グラムの重さになる（２／．９５７８＝２．０９）。Ｃは濾液重量である。
Ｄは無水ベースで２グラム重量のダイズタンパク質製品である。
【００９６】
ＧＥ変性タンパク質および対照のＴＨＲ試験結果を図７に示す。ＧＥ加水分解タンパク質は、対照よりも顕著により大きいＴＨＲを有する。これはＧＥ変性タンパク質が、塩の存在下でより多くの水を保持し得ることを示唆する。この結果は、ＧＥ変性タンパク質が、肉、ヨーグルト、およびプディング用途において可能性を有するかもしれないことを暗示する。
【００９７】
実施例７．迅速粘度分析装置（ＲＶＡ）分析
迅速粘度分析装置（ＲＶＡ）は、制御された時間にわたって温度および剪断力を正確に調節する粘度法を提供し得る、加熱冷却粘度計である。
【００９８】
ダイズタンパク質濃縮物および粉は主にタンパク質と繊維を含有し、それは熱処理の影響を被りやすい。加熱工程に対応するＲＶＡ粘度プロフィールは、ダイズタンパク質製品の熱感度を反映するかもしれない。したがってＲＶＡ加熱プロフィールをサンプル間で比較することは、いくつかの食品用途におけるダイズタンパク質製品の熱応答を予測する有益な手段になり得る。
【００９９】
プログラムは、２５℃〜７５℃（５分間維持）への加熱工程と、次に２５℃への冷却の間に、１０％タンパク質スラリーの粘度を記録するようにデザインされる。
【０１００】
図８に示すように、ＧＥ加水分解はダイズタンパク質の熱感度を変化させ、ＧＥ処理の用量が高いほど粘度変化がより顕著であった。結果は、ＧＥ変性ダイズタンパク質が、チーズ、ヨーグルト、プディングなどの食品用途において、低温で増粘またはゲル化するかもしれないことを示唆する。
【０１０１】
実施例８．ＧＥを使用したダイズタンパク質単離物のベンチトップ加水分解と、ダイズフレークから得られる酸沈殿ダイズタンパク質の加水分解との対比
図９に示される延長領域中の多数の潜在的切断部位によって、この領域はＧＥ加水分解を被りやすくなる。タンパク質が天然状態にある場合は延長領域が優先的に加水分解されるのに対し、より変性された状態では、加水分解は分子全体を通じて起きる。
【０１０２】
タンパク質抽出、等電沈殿、タンパク質再スラリー化、ＵＨＴ低温殺菌と、それに続く噴霧乾燥を伴う、当該技術分野で知られている標準単離手順を使用して作成したダイズタンパク質単離物を基質として使用した。１０％固形分のダイズタンパク質単離物スラリーは、１０グラムのダイズタンパク質単離物と９０グラムの水とを混合して作成した。０．１Ｎ  ＮａＯＨによってｐＨを８．０に調節し、 乾燥物質基準で１ｋｇのダイズタンパク質単離物あたり１２、２４、および４８ｍｇの酵素タンパク質の酵素濃度を使用して、ＧＥを用いた酵素加水分解を５０℃で３０分間実施し、スラリーを８５℃で５分間加熱することにより加水分解を終結させた。サンプルを冷却してＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を実施し、結果を図１に示す。
【０１０３】
酸沈殿ダイズタンパク質カードスラリーを基質として使用し、上で開示された加水分解手順に従った。タンパク質抽出、等電沈殿、タンパク質再スラリー化、ＵＨＴ低温殺菌と、それに続く噴霧乾燥を伴う標準単離物手順から、スラリーが得られた。ＵＨＴ低温殺菌前の再スラリー化工程からスラリーサンプルを収集した。スラリーは１０％固形分であり、０．１Ｎ  ＮａＯＨによってｐＨを８．０に調節し、ＧＥを用いた酵素加水分解を５０℃で実施した。加水分解を３０、６０、および１２０分間実施した。乾燥物質基準で１ｋｇのダイズタンパク質単離物あたり２４、４８、および９６ｍｇの酵素タンパク質の酵素濃度を使用した。スラリーを８５℃で５分間加熱して、加水分解を終結した。サンプルを冷却してＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を実施して、結果を図３に示す。図１と図３を比較すると、基質の状態、すなわち変性−対−天然に基づいて加水分解パターンが大きく異なることが明らかである。天然状態では、酵素濃度が高く加水分解が長時間に及んでも、４７ｋＤａの画分は加水分解に対して比較的安定しており、この画分を頑強な製造工程を用いて収集できることもまた分かる。
【０１０４】
実施例９．ダイズ粉からの４７ｋＤａの富化画分の調製
５００ポンドの脱脂ダイズ粉を５０００ポンドの水と混合して、３２℃で１０％固形分スラリーを作成した。スラリーを遠心分離によって分離して第１の上清および第１の沈殿物を収集した。第１の沈殿物を３０００ポンドの水を用いて再度スラリー化し、スラリーを遠心分離によって分離した。第２の沈殿物を廃棄して第２の上清を収集し、第１の上清に添加して合わせた上清を形成した。合わせた上清のｐＨをＨＣｌで４．５３に調節して、カードを形成した。カードを３２℃で遠心分離によって分離し、水を用いて１０％固形分に再度スラリー化した。
【０１０５】
カードスラリーの３分の１を取り出し、ＮａＯＨ／ＫＯＨ混合物によってｐＨを７．２に調節し、中性カードを形成した。中性カードを１５７℃で９秒間加熱して低温殺菌し、６１℃に冷却した。中性カードを噴霧乾燥して、対照ダイズタンパク質単離物を得た。
【０１０６】
カードスラリーの３分の２を取り出し、ＮａＯＨ／ＫＯＨ混合物によってｐＨを８．０に調節した。ｐＨ８．０のカードスラリーを５５℃に加熱して、ＧＥを添加した。
【０１０７】
酵素を含むスラリーを撹拌しながら３０分間保持して、酵素処理を完結させた。次に酵素処理スラリーを２つの部分に分けた。
【０１０８】
第１の酵素処理部分のｐＨをＮａＯＨ／ＫＯＨ混合物を用いて７．２に調節し、１６１℃に加熱して９秒間保持し、５５℃に冷却して噴霧乾燥し、酵素処理ダイズタンパク質単離物を形成した。
【０１０９】
第２の酵素処理部分のｐＨをＨＣｌを用いて４．５に調節し、酵素処理カードを形成して、次に６０℃で遠心分離によって分離した。酵素処理カードを水を用いて１０％固形分のスラリーにし、ＮａＯＨ／ＫＯＨ混合物を用いてｐＨ７．２に中和し、１６０℃で９秒間加熱して５６℃に冷却し、噴霧乾燥して酵素処理ダイズタンパク質単離物を形成した。
【０１１０】
２種類の酵素処理を行った：第１の処理では１ｋｇの固形物あたり６ｍｇのＧＥの用量を使用し、第２の処理では１ｋｇの固形物あたり１２ｍｇのＧＥの用量を使用した。
【０１１１】
図１０は、この実施例で生成した加水分解産物のＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。
【０１１２】
実施例１０．白色度のより高いダイズタンパク質加水分解産物を作り出すための新しい酵素ＧＥの使用
実施例９で製造されたタンパク質製品を使用して、ゲルを作成した。ゲルを作成するために、水を用いてサンプルを１：６の比率に分散し、混合して６オンスの缶に入れて沸騰水浴内中で３０分間煮沸し、ゲルを形成した。これらのゲルの写真を図１１をに示す。図１１から、ＧＥ処理製品が白色度のより高いゲルを生じたことが明らかである。
【０１１３】
実施例９で製造されたタンパク質製品からできたスラリーの白色指数を５％濃度で測定し、表４に示す。
【０１１４】
【表４】
2012513772.tif 000007
【０１１５】
より高いＧＥ濃度を用いて処理されたタンパク質製品の白色指数は、ＧＥ未処理タンパク質製品よりも１２．２単位高かった。
【０１１６】
実施例１１．ＧＥ加水分解産物の官能分析
独自仕様の官能スクリーニング法であるＳｏｌａｅ定性スクリーニング（Ｓｏｌａｅ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ（ＳＱＳ））法を使用して、実施例９で調製されたＧＥ加水分解産物の風味特性を評価した。この方法は、試験サンプルおよび対照サンプル間の直接比較に基づき、それは定性的および定量的方向差分の両者を提供する。１０人の評価担当者パネルに、各サンプル（５％スラリーに希釈）、および未処理単離ダイズタンパク質の５％スラリーである対照サンプルのアリコートを提供した。
【０１１７】
評価プロトコルは、カップの底をテーブルに付けたまま、カップを３回回転させることを含んでなった。サンプルを２秒間置いた後、各食味検査員は約１０ｍＬ（小さじ２杯）を少しずつ口に含んで口内に１０秒間巡らせ、次に吐き出した。次に食味検査員は、表５に提示する尺度に従って、試験サンプルおよび対照サンプル間の違いを評価した。
【０１１８】
【表５】
2012513772.tif 000008
【０１１９】
試験サンプルが、基準と異なると評価された場合（すなわちＳＱＳスコア２、３、または４を有する）、試験サンプルをさらに評価して、試験サンプルが対照サンプルとどのように異なるのかに関する診断情報を提供する。したがって試験サンプルが対照サンプルよりもわずかにより多くの、中程度により多くの、または極めてより多くの属性を有すれば（表５参照）、それぞれ＋１、＋２、＋３のスコアを割り当てる。同様に試験サンプルが対照サンプルよりもわずかにより少ない、中程度により少ない、または極めてより少ない属性を有すれば、それぞれ−１、−２、−３のスコアを割り当てる。この分析は、試験サンプルおよび対照サンプル間の定量的方向差分のアセスメントを提供する。
【０１２０】
各ＧＥ加水分解産物についての診断スコア（対照との差）を図１２に示す。ＧＥ加水分解産物は対照（未処理単離ダイズタンパク質）と比較して、わずかにより少ない穀物およびダイズ／マメ科植物風味特性を有した。
【０１２１】
実施例１２：ＳＰ酵素と比較したＧＥを使用したダイズタンパク質単離物のベンチトップ加水分解の白色指数
ａ）ＧＥ加水分解：実施例８記載されるようにサンプルを作成した。
ｂ）ＳＰ加水分解：ＳＰ加水分解のために、ＳＰの酵素用量以外は、実施例８に記載されるのと同一プロトコルに従った。ＳＰで使用された酵素用量は、１ｋｇの単離物あたり３．３ｍｇの酵素、および１ｋｇの単離物あたり６．６ｍｇの酵素であった。スラリーを８５℃で５分間加熱して、加水分解を終結させた。サンプルを冷却して分析した。
【０１２２】
ＧＥおよびＳＰ酵素を用いて調製した双方のサンプルについて加水分解産物スラリーの白色指数を測定し、それらを図１３に示す。各加水分解産物の％ＤＨは、Ｓ−ＴＮＢＳ法を使用して得た。
【０１２３】
ＧＥを用いて加水分解した場合、一般加水分解サンプルの白色指数が％ＤＨと共に増大するのに対し、同一％ＤＨ範囲内のＳＰによる加水分解は、白色指数に対して影響を及ぼさなかった。
【０１２４】
実施例１３：より少ない用量のＧＥおよびＳＰ酵素を使用してパイロットプラント内で調製された酸カードのベンチトップ加水分解
実施例９に記載されるようにしてパイロットプラント内で製造された一般酸カードを使用した。カードの固形分は１０％であり、ｐＨを８．０に調節してサンプルをいくつかの２００ｇバッチに等分した。２００ｇのカードバッチサイズを使用して、乾燥物質基準で、１ｋｇのカード固形物あたり０、１、２、３、４、５、および６ｍｇのＧＥを用いた酵素加水分解を５０℃で３０分間実施した。２００ｇのカードバッチサイズを使用して、乾燥物質基準で、１ｋｇのカード固形物あたり０、０．５、１、２、および３．３６ｍｇのＳＰを用いた酵素加水分解を５０℃で３０分間実施した。スラリーを８５℃で５分間加熱して、加水分解を終結させた。サンプルを冷却し、白色指数について試験した。使用した酵素の投入量はごく少量であったが、ＧＥ処理サンプルでは白色指数には用量に依存した増大が見られ、ＳＰ処理サンプルではこのような効果は見られなかった（図４）。
【０１２５】
実施例１４．ＧＥを用いたダイズタンパク質の加水分解
加水分解反応。出発原料は０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ８．５に懸濁された１０％ダイズタンパク質単離物（例えばＳＵＰＲＯ（登録商標）５００Ｅ）であった。タンパク質スラリーのｐＨをＨＣｌを用いて８．０に調節した。タンパク質スラリーを約７０℃に加熱して、混合物をバチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）からのセリンプロテアーゼ（ＧＥ）を用いて加水分解した。ＧＥは、１ｋｇのダイズタンパク質単離物あたり１９．５ｍｇ、３９．０ｍｇ、７８．１ｍｇ、１５６．３ｍｇ、または３１２．５ｍｇのプロテアーゼ酵素タンパク質の濃度で使用した。加水分解反応を７０℃で１２０分間進行させた。混合物のｐＨが約４．０になるように、１Ｍギ酸ナトリウム、ｐＨ３．７を添加して反応を停止させ、加水分解産物中のダイズタンパク質の最終濃度は５％であった。
【０１２６】
実施例１５．ＧＥ加水分解産物中のペプチドの同定
実施例１４で調製されたＧＥ加水分解産物中のペプチド断片を液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）によって同定した。表６は、プログリシニンのグリシニンサブユニットＧ２およびＡ鎖から誘導されるペプチド断片を提示する。
【０１２７】
【表６】
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【０１２８】
実験例１．ダイズタンパク質加水分解産物を含む酸飲料
本発明に従った酸飲料を調製する。１３０．０部のダイズタンパク質成分および８，５３９部の脱イオン水を容器に入れる。内容物が均等に分散するまで、高剪断下で混合する。次に分散体を約７４℃〜約７９℃（約１６５°Ｆ〜約１７５°Ｆ）に加熱して、さらに１０分間混合する。次に混合しながら、１，１８０部の高果糖コーンシロップ、１３１部のリンゴ果汁濃縮物（６８ブリックス）、および２０．０部の無水クエン酸を添加する。８５％クエン酸によってｐＨを３．８〜４．０に調製する。内容物を第１段階では２５００ポンド／平方インチ、第２段階では５００ポンド／平方インチで均質化し、１０７℃で７秒間の低温殺菌がそれに続く。ボトルに飲料を熱間充填し、次に氷浴に入れて飲料温度をほぼ室温にして冷蔵庫に入れる。
【０１２９】
実験例２．ダイズタンパク質加水分解産物を含む乾燥配合物
以下の実験例は、下の表７に列挙する構成要素と共に本発明のタンパク質を含む乾燥配合物の調製を実証する。
【０１３０】
【表７】
2012513772.tif 000010
【０１３１】
実験例３．実験例２で調製された乾燥配合物を含む飲料
実験例２で調製された乾燥配合物を液体に添加して、即席飲料を調製する。添加順序は重要ではない。
【０１３２】
即席飲料中に、液体は総組成物の約８５重量％〜約９５重量％存在し、即席飲料のｐＨは約６．８〜約７．４である。
【０１３３】
実験例３は、２９．７１グラムの実験例２の製品を２４０ｍｌのスキムミルクに添加して調製される、発明の即席飲料である。内容物は３０秒間混合される。
【０１３４】
実験例４．実験例２で調製された乾燥配合物を含む飲料
実験例２で調製された乾燥配合物を液体に添加して、即席飲料を調製する。添加順序は重要でない。
【０１３５】
即席飲料中に、液体は総組成物の約８５重量％〜約９５重量％存在し、即席飲料のｐＨは約６．８〜約７．４である。
【０１３６】
実験例４は、２９．７１グラムの実験例２の製品を２４０ｍｌの水に添加して調製される、発明の即席飲料である。内容物は３０秒間混合される。
【０１３７】
実験例５．ダイズタンパク質加水分解産物を含む無香料低脂肪豆乳
【０１３８】
【表８】
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【０１３９】
クエン酸を６０℃（１４０°Ｆ）の水に分散する。混合速度を上昇させてタンパク質を水に分散する。タンパク質が完全に分散したら、スラリー温度を７５℃（１６７°Ｆ）に上昇させて混合速度を低下させ、混合を１０分間継続する。マルトデキストリン、糖、およびカラゲナンをプレブレンドしてタンパク質スラリーに添加し、混合を低速で５分間継続する。ヒマワリ油をスラリーに添加して、均質になるまで混合を低速でおよそ３分間継続する。４５％水酸化カリウムを使用してスラリーのｐＨを７．０〜７．２に調節し、均質化、低温殺菌、および冷却処理する。製品を７２℃（１６２°Ｆ）に加熱し、第２段階で７５０ｐｓｉ、第１段階で２２５０ｐｓｉで均質化する、スラリーを１００℃（２１２°Ｆ）に予熱して、１４１℃（２８６°Ｆ）で６秒間ＵＨＴ処理する。製品を３１℃（８８°Ｆ）に冷却し、滅菌ボトルに充填する。冷蔵する。
【０１４０】
実験例６．５０％ダイズタンパク質加水分解産物および５０％スキムミルクを含む無香料飲料
【０１４１】
１食分：８ｇのタンパク質／２６０ｇ
【表９】
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【０１４２】
全ての脱イオン水中で、中程度の速度混合を使用してクエン酸を１５℃（５９°Ｆ）で分散する。ＳＵＰＲＯ（登録商標）Ｐｌｕｓを水に分散する。全ての塊が分散した後に、スラリーを７７℃（１７０°Ｆ）に加熱して、混合を低速で１０分間継続する。マルトデキストリン、砂糖、ビタミン／ミネラルプレミックス、リン酸マグネシウム、セルロース、およびカラゲナンをドライブレンドする。ドライブレンドをタンパク質スラリーに添加して、混合を５分間継続する。ヒマワリ油を添加して、混合を３分間継続する。スラリーｐＨを測定し、必要ならば５０％クエン酸溶液または１Ｎ  ＮａＯＨのどちらかを使用して、ｐＨを６．９〜７に調節する。スキムミルクを７２℃（１６２°Ｆ）に緩慢に加熱して、タンパク質スラリーを加熱スキムミルクに添加する。着香剤を添加して混合するスラリーに完全に均質混合するまで混合する。低速混合で３分間混合し、最終スラリーｐＨを記録する。次のように処理する：製品を７２℃（１６２°Ｆ）に加熱して第２段階では７５０ｐｓｉ、第１段階では２２５０ｐｓｉで均質化する。スラリーを１０４℃（２２０°Ｆ）に予熱して、１４１℃（２８６°Ｆ）で６秒間ＵＨＴ処理する。製品を３１℃（８８°Ｆ）に冷却して詰める。冷蔵保存する。
【０１４３】
実験例７．タンパク質源としてカゼイン酸カルシウム、無脂肪粉乳（ＮＦＤＭ）、およびダイズタンパク質加水分解産物を含むバニラフレーバーの体重管理飲料
１食分：１０ｇのタンパク質／１１オンス
【０１４４】
【表１０】
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【０１４５】
配合物は次のようにプレブレンドする：配合のスクロースのごく一部と共に、カラゲナンおよびセルロース。アラビアガムおよび残りのスクロース。カノーラ油を混合する。
【０１４６】
次に混合する：カリウムおよびクエン酸ナトリウムを高剪断混合を使用して水に添加する。次にプレブレンドされたカラゲナンおよびセルロースを分散する。５分間混合する。ダイズタンパク質、カゼイン酸カルシウム、およびＮＦＤＭを分散して、６５℃（１５０°Ｆ）への加熱を開始する。１５分間水和させ、６５℃（１５０°Ｆ）に達したら混合速度を低下させる。カノーラ油／乳化剤配合物を約７０℃（１５８°Ｆ）に加熱して乳化剤を溶解するが、これにはいくらかの混合を必要とするかもしれない。次に熱い油混合物をバッチタンクに添加して５分間混合すると、気泡は分散するであろう。炭酸カルシウム、リン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、およびビタミンプレミックスに、スクロース／アラビアガム配合物を添加して、１０分間混合する。バニラ風味を添加して４５％ＫＯＨを用いてｐＨを７．０〜７．２に調節する。２８６°Ｆ／６秒間、２５００／５００ｐｓｉでＵＨＴ処理する。
【０１４７】
実験例８．ダイズタンパク質加水分解産物を含む乾燥配合飲料運動能力向上飲料モデル
【０１４８】
【表１１】
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【０１４９】
ミキサーをきれいにして殺菌する。ダイズタンパク質およびココア粉末を篩にかける。全ての成分を中速で１５分間混合する。乾燥粉末を殺菌済み容器内に保存する。
【０１５０】
実験例９．ダイズタンパク質加水分解産物を含む押し出し物
工程は、例えば乾燥ベースで１０％〜９０％のタンパク質などの特定レベルのタンパク質を得るための成分配合物の調合に始まる。適切なタンパク質の％を達成するために、タンパク質は、ＩＳＰ、ダイズタンパク質濃縮物、ダイズ粉、その他の植物性タンパク質、乳タンパク質などの異なるタンパク源の組み合わせであり得る。本発明のダイズタンパク質加水分解産物もまた、タンパク質構成要素の一部として使用される。配合を１００％にするその他の部分については、その他の構成要素は、水分、灰分、脂肪、炭水化物、および当業者に知られているその他の成分を含み得る。デンプン、穀物粉または穀類からの誘導体、繊維、ガム、シロップ、脂肪、塩、砂糖、フレーバーなどのこれらの成分の複数原料を使用し得る。
【０１５１】
最終製品の組成を規定した後、通常、乾式混合を使用して乾燥成分を均質化し、それを供給押し出しホッパーに送る。次にプレコンディショナーを使用する場合はその中に調合物を供給し、または調合物を直接押し出し機内に供給する。水および／または蒸気をプレコンディショナー内に注入して、配合物を前水和し、および／または予熱する。水は乾燥供給ベースで約０％〜３０％、蒸気は０％〜１５％で、プレコンディショナーに注入される。プレコンディショナーからの材料の速度（乾燥、液体および蒸気）は、押し出し機のバレル径とスクリュー溝孔面積、バレル径、および供給速度に関係するスクリューの開放性次第で、０．２〜１５０（ポンド／分）以上であり得る。
【０１５２】
乾燥または予備調整供給物を適切に「調理」する押し出し機の能力は、長さ対直径比Ｌ／Ｄに左右される。典型的に、乾燥ベースで２０％を超える総タンパク量の高タンパク質製品では、１５：１を超えるＬ／Ｄの押し出し機が使用される。成分は、２００ｒｐｍ〜１０００ｒｐｍの典型的なスクリュー速度で稼働する押し出し機に供給される。次のような異なる押し出し用途分野において適切な製品特性を達成するために、典型的な範囲（０％〜４０％）で、追加の水、蒸気、シロップおよび／またはその他の成分を押し出し機バレル内で合わせる。
直接膨脹「朝食用シリアル、ナゲット、スナックなど」。
組織化製品。「組織化植物性タンパク質（ＴＶＰ）など」。
水分５０％を超える高水分押し出し「肉タイプテクスチャ、パスタなど」。
【０１５３】
これらの成分はバレルの異なる領域において押し出し機内で合わせてもよく、あらかじめ設計されたスクリュー配置によって剪断して、適切な最終製品属性を達成する。ダイが押し出し機の終端で使用されて、背圧および押し出し充填が生じ、適切な調理、押し出し物温度および圧力が生じて、材料がダイを出るときに適度な膨張が得られる。ダイは最良の結果のために対称性でなくてはならず、利用できるあらゆる配置または形状を有し得る。
【０１５４】
押し出し機は連続ロープを製造し、それは正面フライス、外面フライス、およびその他の機器などの第２の機器を使用して、小片に縮小させ得る。正面フライスは、穀物、スナック、ナゲットなどの低水分直接膨張製品のために使用される。また正面切削は、パスタまたは立体スナック「ペレット」のためにも使用される。
【０１５５】
外面フライスは、「四角形、波形、直線棒状などの」スナック、高水分押し出しなどのために使用される。その他の機器は、切断装置および粒子破砕機「Ｆｉｔｚミル、ローラーミル、Ｃｏｍｍｉｔｒｏｌミル、ＴＶＰ、ＴＣなど」の組み合わせであり得る。
【０１５６】
製品を適切な粒度に縮小させた後、通常の貯蔵所条件で保存安定性にするために、典型的に２％〜１０％である適切な規格に乾燥させる。１２％を超える場合は凍結または冷蔵すべきである。
【０１５７】
考慮すべき１つの追加的典型的な属性は、密度（０．１２〜０．３５ｇ／ｃｃ）である。
【０１５８】
製品は、乾燥および篩掛け工程後に包装される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１２】
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【図１３】
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【図６】
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【図１１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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