(57)【要約】  本発明は、炎症疾患改善用組成物に関し、より詳しくは、皮膚のような上皮組織における炎症反応及び障壁機能改善と、抗老化、皮膚弾力の強化、及び老化を予防又は治療することのできる炎症疾患改善用組成物に関する。本発明によれば、ＡＢＨ抗原の発現調節及び活性調節を介し炎症反応を制御することができるので、本発明の組成物は、ＡＢＨ抗原が発現される皮膚を始めとする人体組織における炎症反応が原因になる疾患の鎮静や治療、及び治療補助を目的とする治療剤の開発標的に活用することができ、さらに角質形成細胞の分化及び皮膚障壁機能の調節による皮膚の正常機能回復及び保湿、しわの改善、美白、弾力の回復などを目的にする外用剤及び外用剤成分を含む化粧品の開発に用いられ得る。
2012514634.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＢＨ抗原又は前記ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質を有効成分として含む炎症疾患改善用組成物。
【請求項２】
前記炎症疾患は、炎症性皮膚疾患及び胃腸、食道、小腸、尿道及び結膜でなる群から選択される組織の炎症性疾患でなる群から選択される請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質は、ＡＢＨ抗原の発現を増加させる物質又はＡＢＨ抗原の発現を減少させる物質であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＡＢＨ抗原の発現を増加させる物質は、ＡＢＯ、ＦＵＴ１及びＦＵＴ２でなる群から選択される遺伝子、又は前記遺伝子を含むベクターであることを特徴とする請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＡＢＨ抗原の発現を減少させる物質は、ＡＢＯ、ＦＵＴ１及びＦＵＴ２でなる群から選択される遺伝子の発現を抑制するｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ及び前記ｓｉＲＮＡやｓｈＲＮＡのアンチセンスコーディング配列を含むベクターでなる群から選択されることを特徴とする請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記炎症性皮膚疾患は乾癬、アトピー、魚鱗癬、天疱瘡、にきび、紅斑性狼瘡、皮膚老化及び皮膚しわでなる群から選択されることを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＡＢＨ抗原又は前記ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質は、全体組成物中に０．００１〜１０重量％の量で含まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物は、薬学的組成物又は化粧料組成物の形態であることを特徴とする請求項１〜請求項７の何れか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物の剤形は、皮膚外用剤の剤形であることを特徴とする請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記化粧料組成物は柔軟化粧水、栄養化粧水、マッサージクリーム、栄養クリーム、パック、ゲル、皮膚粘着タイプの化粧料剤形、ローション、軟膏、クリーム、パッチ及び噴霧剤でなる群から選択される請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記薬学的組成物は固体、半固体及び液状でなる群から選択される経口又は非経口投与剤の形態であることを特徴とする請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＡＢＨ抗原は、タンパク質や脂質の糖質化末端の構造がフコース−ガラクトース末端にＮ−アセチルガラクトサミンが結合したＡ抗原、フコース−ガラクトース末端にガラクトースが結合したＢ抗原、フコース−ガラクトース末端にＮ−アセチルガラクトサミンとガラクトースが全て結合したＡＢ抗原、フコース−ガラクトース末端に何も結合しないＨ抗原でなる群から選択される請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＡＢＨ抗原は、フコース、ガラクトース、グルコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ＦＧ（Ｆｕｃｏｓｅ：Ｇａｌａｃｔｏｓｅ＝１：１、Ｈ−ａｎｔｉｇｅｎ組成）、ＦＧＧ（Ｆｕｃｏｓｅ：Ｇａｌａｃｔｏｓｅ＝１：２、Ｂ−ａｎｔｉｇｅｎ組成）及びＦＧＧＮ（Ｆｕｃｏｓｅ：Ｇａｌａｃｔｏｓｅ：Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ＝１：１：１、Ａ−ａｎｔｉｇｅｎ組成）でなる群から選択される請求項１又は１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＡＢＨ抗原の発現を増加させる物質は、柳抽出物又は黄金抽出物である請求項３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＡＢＨ抗原の発現を減少させる物質は、エゾウコギ抽出物、あざみ抽出物、シイタケ抽出物、高麗人参抽出物及びエキナセア抽出物でなる群から選択される請求項３に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症疾患改善用組成物に関し、より詳しくは皮膚などの炎症反応及び障壁機能改善と、抗老化、皮膚の弾力強化及び老化を予防又は治療することのできる、皮膚を含む上皮細胞における炎症疾患改善用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＡＢＨ抗原はＡＢＯ式血液型を決める抗原であって、ＡＢＯ式血液型は、特定の構造の糖質化末端がＡＢＯ遺伝子の活性の差に従い決定される。このようなＡＢＨ抗原は赤血球の表面に多量に発現されているので、血液型が異なる血液の輸血時に拒否反応を起こす主要原因として作用する。ＡＢＨ抗原は、赤血球以外にも血管、唾腺、汗腺、小腸、大腸、膵臓など、非常に多様な組織で発現されるものと知られており、正常の皮膚では角質形成細胞の分化程度に従い、最も分化が多く起きた顆粒層と、顆粒層直前の細胞等で発現が観察され、有棘層、基底層では殆ど発現が観察されない（Ｒａｖｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＰＭＩＳ  １０８：１−２８（２０００）；Ｌｌｏｙｄ，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｊ  １７：５３１−５４１（２０００）；Ｇｒｅｅｎｗｅｌｌ，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｊ  １４：１５９−１７３（１９９７）；Ｄａｂｅｌｓｔｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  ｄｅｒｍａｔｏｌ  ８２：１３−１７（１９８４））。
【０００３】
ＡＢＨ抗原は、ＡＢＯ遺伝子の多様性に伴いタンパク質や脂質の糖質化末端の構造がフコース−ガラクトース末端にＮ−アセチルガラクトサミンが結合すればＡ抗原（Ａ型）になり、ガラクトースが結合すればＢ抗原（Ｂ型）になり、二種類が共存すればＡＢ型になり、何も結合しなければＨ抗原（Ｏ型）になる（図１を参照）。したがって、共通的に存在するフコース−ガラクトース末端の合成を調節するフコシルトランフエェラーゼ（ｆｕｃｏｓｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）１又は２（ＦＵＴ１又はＦＵＴ２）の発現に従い組織学的な発現状態が調節される。
【０００４】
一方、今まで血液型の種類に伴う輸血時の拒否反応以外に、ＡＢＨ抗原の発現と多様な疾患等の発病率との相関関係を見付けるための努力等が引続かれてきたが、これに対しては未だに報告されたところがなく、ＡＢＨ抗原の機能自体も明確に明かされたところがない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ＡＢＨ抗原又は前記ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質を有効成分に含む炎症疾患改善用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
前記目的を達成するため、本発明は、ＡＢＨ抗原又は前記ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質を有効成分に含む炎症疾患改善用組成物を提供する。本発明において、前記炎症疾患は、炎症性皮膚疾患及び胃腸、食道、小腸、尿道、結膜などのような組織の炎症性疾患が制限なく含まれ得るが、必ずしもこれに限定されるものではない。さらに、本発明の組成物は、薬学的組成物又は化粧料組成物の形態であることが好ましいが、必ずしもこれに限定されるものではない。
【０００７】
本明細書において、前記『ＡＢＨ抗原』は、ＡＢＨ抗原だけでなく、ＡＢＨ抗原の類似体及びＡＢＨ抗原とＡＢＨ抗原類似体の接合体を全て含む意味に使われる。さらに、前記『ＡＢＨ抗原類似体』とは、ＡＢＨ抗体と反応性を有する糖質構造を含む物質であるか、これと類似する構造を有すると共にＡＢＨ抗原の生理的な機能を模写するか抑制することのできる物質、又はこのような類似体を特定のキャリア分子に固定させ接合体を作って添加する場合を含む。例えば、ＡＢＨ抗原類似体はＡＢＨ抗原に一つ以上の異なる化合物、例えば単糖類、アミノ酸などがさらに結合されている物質であって、ＡＢＨ抗原本来の機能と同一の機能をする物質を意味する。さらに、ＡＢＨ抗原としては、抗原をなす単糖類、例えばフコース、ガラクトース、グルコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、又は前記単糖類が組み合わせられた形態の混合物、例えばＦＧ（Ｆｕｃｏｓｅ：Ｇａｌａｃｔｏｓｅ＝１：１、Ｈ−ａｎｔｉｇｅｎ組成）、ＦＧＧ（Ｆｕｃｏｓｅ：Ｇａｌａｃｔｏｓｅ＝１：２、Ｂ−ａｎｔｉｇｅｎ組成）又はＦＧＧＮ（Ｆｕｃｏｓｅ：Ｇａｌａｃｔｏｓｅ：Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ＝１：１：１、Ａ−ａｎｔｉｇｅｎ組成）なども制限なく使用可能であり、前記ＦＧ、ＦＧＧ又はＦＧＧＮにおいて、混合物を構成するそれぞれの単糖類の比は、前記と多少相違しても差し支えない。
【０００８】
さらに、本明細書において『ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質』は、ＡＢＨ抗原の発現を増加させるか減少させる物質を全て含む意味に用いられる。ＡＢＨ抗原の発現を増加させる物質はＡＢＨ抗原の生合成、例えば、ＡＢＯ、ＦＵＴ１、ＦＵＴ２等を含むＡＢＨ抗原の段階別の糖質化酵素等の発現増加又は活性増大、ＡＢＨ抗原が結合されているタンパク質、脂質、糖質などの発現増大などを介しＡＢＨ抗原の生合成を増加させる物質であれば、その種類に係りなく全て含まれ得る。ＡＢＨ抗原の生合成を増加させる物質としては、ＡＢＯ、ＦＵＴ１、ＦＵＴ２などを含むＡＢＨ抗原を合成する段階別の糖質化酵素等をコーディングする遺伝子又はその遺伝子を含むベクターがあり得る。前記遺伝子又はベクターが皮膚に加えられると、ＡＢＨ抗原の発現が増加され、皮膚の分化が正常化されることにより免疫を強化させ、免疫体系の均衡を直し、皮膚障壁機能を強化させることにより健康な皮膚を作ることができる。前記ベクターは、当業界に広く知られている方法等のうち何れか一つにより製作されるか、又は市中で容易に購入することができる。さらに、本発明の好ましい具現例によれば、前記ＡＢＨ抗原の発現を増加させる物質は、柳抽出物又は黄金抽出物であり得る（図６のＢを参照）。
【０００９】
これと同様に、ＡＢＨ抗原の発現を減少させる物質は、ＡＢＨ抗原の生合成、例えば、ＡＢＯ、ＦＵＴ１、ＦＵＴ２などを含むＡＢＨ抗原の段階別の糖質化酵素等の発現減少又は活性減少、ＡＢＨ抗原が結合されているタンパク質、脂質、糖質等の発現減少などを介し、ＡＢＨ抗原の生合成を減少させる物質であれば、その種類に係りなく全て含まれ得る。ＡＢＨ抗原の生合成を減少させる物質は、ＡＢＯ、ＦＵＴ１、ＦＵＴ２などを含むＡＢＨ抗原を合成する段階別の糖質化酵素等の発現を抑制するｓｉＲＮＡやｓｈＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡやｓｈＲＮＡ、アンチセンスコーディング配列を含むベクターがあり得る。前記遺伝子又はベクターが皮膚に加えられると、ＡＢＨ抗原の発現が減少しＴｈ１炎症反応を抑制させ、過多の炎症反応を一時的に和らげることにより炎症疾患の症状を緩和させることができる。前記ベクターは、当業界に広く知られている方法等のうち何れか一つにより製作されるか、又は市中で容易に購入することができる。さらに、本発明の好ましい具現例によれば、前記ＡＢＨ抗原の発現を減少させる物質は、エゾウコギ抽出物、あざみ抽出物、シイタケ抽出物、高麗人参抽出物又はエキナセア抽出物であり得る（図６のＡを参照）。
【００１０】
本発明の組成物において、ＡＢＨ抗原又は前記ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質は、全体組成物の中で０．００１〜１０重量％の量で含まれるのが好ましい。０．００１重量％未満であれば炎症疾患改善の効果が僅かであり、１０重量％を超過すれば、他の成分との混和性と剤形安定性が劣る。このような観点で、前記ＡＢＨ抗原又は前記ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質は０．０１〜５重量％を含むのがより好ましい。
【００１１】
本発明に適用可能な炎症疾患は、炎症性皮膚疾患及び胃腸、食道、小腸、尿道、結膜などのような組織の炎症性疾患が制限なく含まれ得る。前記皮膚疾患には乾癬、アトピー、魚鱗癬、天疱瘡、にきび、紅斑性狼瘡、皮膚老化、皮膚しわなどの疾患が含まれるが、必ずしもこれに限定されるものではなく、皮膚での炎症反応によりもたらされ得る任意の疾患が、全て本発明の皮膚疾患の範囲に含まれ得る。
【００１２】
本発明の組成物の剤形には、特に限定されるものではないが、皮膚外用剤の剤形であるのが好ましく、前記皮膚外用剤剤形の一つの好ましい形態には、柔軟化粧水、栄養化粧水、マッサージクリーム、栄養クリーム、パック、ゲル又は皮膚粘着タイプ化粧料の剤形を有する化粧料組成物を挙げることができ、他の好ましい形態にはローション、軟膏、ゲル、クリーム、パッチ又は噴霧剤のような経皮投与型の剤形を挙げることができる。さらに、各剤形の外用剤組成物において、前記の必須成分以外の他の成分等は、その他外用剤の剤形又は使用目的などに従い、当業者が難なく適宜選定して配合することができる。
【００１３】
本発明の組成物を化粧品に適用する場合、好ましくは化粧品学的に許容可能な媒質又は基剤を含む。これは局所適用に適した全ての剤形であって、例えば溶液、ゲル、固体又は練り無水生成物、水相に油相を分散させて得たエマルジョン、懸濁液、マイクロエマルジョン、マイクロカプセル、微細顆粒球又はイオン型（リポソーム）及び／又は非イオン型の小嚢分散剤の形態で、又はクリーム、スキン、ローション、パウダー、軟膏、スプレー又はコンシールスティックの形態で提供され得る。さらに、泡沫（ｆｏａｍ）の形態又は圧縮された推進剤をさらに含んだエーロゾル組成物の形態でも製造され得る。さらに、本発明の化粧料組成物は、皮膚科学的に許容可能な媒質又は基剤を含むことにより、皮膚科学分野で通常用いられる局所適用又は全身適用することのできる補助剤の形態で製造可能であり、これら組成物は当該分野の通常的な方法により製造され得る。
【００１４】
本発明の組成物を化粧品に適用する場合、前記化粧料組成物は脂肪物質、有機溶媒、溶解剤、濃縮剤及びゲル化剤、軟化剤、抗酸化剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤、芳香剤、界面活性剤、水、イオン型又は非イオン型乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤及びキレート化剤、保存剤、ビタミン、遮断剤、湿潤化剤、必須オイル、染料、顔料、親水性又は親油性活性剤、脂質小嚢又は化粧品に通常用いられる任意の他の成分のような、化粧品学分野で通常用いられる補助剤を含むことができる。これら補助剤は、化粧品学分野で一般に用いられる量で導入される。
【００１５】
本発明の組成物を医薬品に適用する場合、本発明の組成物はＡＢＨ抗原又は前記ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質を有効成分にし、臨床投与時に経口又は非経口で投与可能であり、一般の医薬品製剤の形態で使用可能である。即ち、本発明の炎症疾患改善用組成物は、実際の臨床投与時に経口及び非経口の多様な剤形で投与され得るが、製剤化する場合は、普通用いる充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を用いて調剤される。経口投与のための固形製剤には錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤はＡＢＨ抗原、又は前記ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース又はラクトース、ゼラチンなどを混合して調剤される。さらに、単なる賦形剤以外にマグネシウムスチレートタルクのような潤滑剤等も用いられる。経口投与のための液状製剤には懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、通常用いられる単純希釈剤の水、リキッドパラフィン以外に多様な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれ得る。非経口投与（注射、経皮投与又は外用塗布）のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁溶剤にはプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどが用いられ得る。坐剤の基剤にはウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロール、ゼラチンなどが用いられ得るが、必ずしもこれに限定されるものではない。
【００１６】
本発明において、前記有効成分は商法に従い容易に製剤化することができ、このとき界面活性剤、賦形剤、着色料、香辛料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、その他常用する補助剤を適宜用いることができる。
【００１７】
本発明の組成物の有効成分であるＡＢＨ抗原、又は前記ＡＢＨ抗原の発現を調節する物質の投与量は、炎症疾患の改善が必要な対象の年齢、性別、体重と、治療する特定疾患又は病理状態、疾患又は病理状態の深刻度、投与経路及び処方者の判断に従って変わり得る。このような因子に基づいた投与量の決定は当業者の水準内にあり、注射剤を除いた製剤に対しては局所部位に外用塗布する式で当業者の水準で適用することができ、注射剤の場合は、真皮と皮下脂肪に局所的に注射することができるが、必ずしもこれに限定されるものではない。一般に投与量は、大凡０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜２，０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。さらに好ましい投与量は１μｇ／ｋｇ／日〜１００μｇ／ｋｇ／日である。投薬単位は、例えば個別投薬量の１、２、３又は４倍で、又は１／２、１／３又は１／４倍で含むことができる。個別投薬量は有効成分が１回に投与される量を含み、これは通常１日投与量の全部、１／２、１／３又は１／４倍に該当する。
【００１８】
本発明の好ましい具現例によれば、多様な遺伝的／環境的要因により皮膚に異常炎症反応や免疫体系の不均衡、及び非正常的角質形成細胞の分化が伴われる乾癬、アトピー、魚鱗癬、天疱瘡などの炎症性皮膚疾患の場合を調べた場合、顆粒層でのＡＢＨ抗原の発現が消失するか、角質形成細胞の異常分化に伴い、非正常位置でＡＢＨ抗原の非正常的な発現などの異常現象が観察される（図４及び図５を参照）。このような多様な皮膚疾患等で現われる角質形成細胞の不完全な顆粒層への分化が、患者等の皮膚障壁機能に問題を引き起こす主要原因になり得る。さらに、個体別の最小炎症誘導強度の２倍の紫外線を正常の皮膚に照射した場合も、顆粒層でのＡＢＨ抗原の発現が３日後に大部分消失されるものと表れた（図３を参照）。
【００１９】
本発明の他の具現例によれば、多様な種類の天然物抽出物を角質形成細胞に処理する場合、エゾウコギ、あざみ、シイタケ、高麗人参及びエキナセア抽出物などは細胞で血液型抗原の発現を減少させ、柳及び黄金抽出物などは血液型抗原の発現を増加させる効果が表れた（図６を参照）。前記のように、血液型抗原の発現を増加させる物質の場合は、個体の免疫力を増加させる効果を得ることができ、血液型抗原の発現を減少させる物質の場合は、過多炎症反応を抑制させるのに効果的に用いられ得る。さらに、ＡＢＨ抗原又は前記ＡＢＨ抗原を構成する単糖類の投与が血液型抗原の発現に及ぼす影響を検討してみた結果、ＡＢＨ抗原又は前記ＡＢＨ抗原を構成する物質等を処理すれば、細胞及び皮膚での血液型糖の発現が増加するものと表れた（図７〜図９を参照）。したがって、このような観察結果などに基づく場合、ＡＢＨ抗原の発現が、角質形成細胞の分化過程は勿論、皮膚で発生する炎症反応の状態と密接な相関関係があることが分かる。
【００２０】
さらに、本発明の他の好ましい具現例によれば、ＡＢＨ抗原の発現を調節する実験を介しＡＢＨ抗原の発現が人為的に除去された場合、インターフェロンガンマによるＴｈ１免疫反応が抑制されることを観察した（図１０〜図１２を参照）。さらに、ＡＢＨ抗原の発現を抑制した後ＴＮＦ−α及びＩＬ−１βを処理した場合、対照群で強く誘導されるＢＤ−２遺伝子の発現がより少なく誘導されており（図１３を参照）、さらに他の具現例で、ＡＢＨ抗原の発現を抑制させた場合は角質形成細胞の移動速度が遅くなることが観察された（図１４を参照）。これは特に、アトピー皮膚炎の進行段階を考慮するとき、炎症反応を調節するサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）の不均衡と考えられる、初期段階の原因を分からないＴｈ１炎症反応の低下段階を経た後、正確な抗原が不明な兔疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）レベルの増加を伴う急激なＴｈ２免疫反応の増幅反応が続く過程で、多様な原因による顆粒層のＡＢＨ抗原の発現減少が、初期のＴｈ１炎症反応の減少原因中一つに作用することがあり、これを改善することにより、アトピー皮膚炎のような皮膚疾患の予防及び治療に役立ち得るはずである。さらに、正常人の皮膚が多様な種類の皮膚刺激により引き起される持続的な炎症反応に露出されると、皮膚組織が活性酸素に持続的に露出され、それに伴い皮膚組織の損傷、しわ及び皮膚老化が促進され得るので、適切な皮膚炎症反応の鎮静と制御を介し活性酸素の発生を減少させることにより、皮膚の損傷、しわ及び皮膚老化を予防することができるようになる。
【００２１】
即ち、多様な炎症性皮膚疾患でＡＢＨ抗原が消失すると、非正常的な炎症反応を起こすことになり、正常な皮膚の分化は勿論、皮膚固有の防御機転に良くない波及効果をもたらし、したがって、外部からＡＢＨ抗原を投入するか、ＡＢＨ抗原の発現を増加させる有用な物質を添加することになれば、正常な免疫反応を強化させることができる。したがって、顆粒層でのＡＢＨ抗原の発現を増加させると、皮膚での免疫反応を強化させることにより、一時的又は遺伝的なＡＢＨ抗原の発現減少を補って正常な皮膚の免疫体系を維持することを補助することにより、非正常的な皮膚の免疫体系の不均衡により引き起される各種の皮膚疾患を治療及び予防することができ、皮膚障壁機能の強化を介し健康な皮膚を維持することにも役立つ。
【００２２】
さらに、本発明は、候補物質等から試験管内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）又は生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で表皮の角質形成細胞の分化を促進し、ＡＢＨ抗原の発現を増加させるか減少させる物質を選別することを含む皮膚有用物質のスクリーニング方法を提供する。例えば、候補物質等を細胞に同一の条件で同量ずつ処理したあと細胞を培養し、ウエスタンブロット法などを利用してＡＢＨ抗原の量を測定することにより、有用な物質等を選別することができる。その他にも、候補物質等から有用なタンパク質をスクリーニングする当業界に公知の方法等のうち何れの方法も適用可能である。
【００２３】
さらに、本発明は、正常皮膚及び損傷した皮膚の顆粒層で正常なＡＢＨ抗原の発現量を増大させることにより内因性免疫反応を強化させ、皮膚障壁機能の改善と抗菌ペプチドの発現を促進することを含む皮膚美容方法を提供する。
【００２４】
さらに、本発明は、持続的に炎症反応が起きた皮膚でのＡＢＨ抗原の発現量を一時的に減少させ、Ｔｈ１炎症反応に関連した因子等の発現を弱化させることにより、過多な炎症反応が原因となる皮膚疾患等の症状を緩和させることを含む皮膚炎症鎮静方法を提供する。
【００２５】
さらに、本発明は、免疫機能が弱化した皮膚で顆粒層での正常なＡＢＨ抗原の発現量を増大させ免疫反応を正常化させることにより、非正常的な炎症反応と角質形成細胞の不完全な分化を抑制することを含む皮膚での免疫機能を回復させる方法を提供する。
【発明の効果】
【００２６】
本発明の組成物は、皮膚を始めとする多様な組織で、炎症反応を伴う炎症疾患の症状を改善するか補助する効果があり、皮膚障壁機能の改善と抗菌ペプチドの発現促進を介し、健康な皮膚の維持と皮膚疾患により損傷した弱い皮膚の回復に役立つことができる。さらに、持続的な炎症反応の抑制を介して老化を予防又は改善し、皮膚の弾力を強化させて皮膚のしわを予防又は改善することのできる効果があり、炎症性皮膚疾患及び老化を改善することのできる有用物質のスクリーニングに有効に用いられ得る。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】血液型糖の化学的構造を示す概路図である。
【図２】正常組織でのＡＢＨ抗原の発現様相を示す写真である。
【図３】紫外線照射に伴う皮膚でのＡＢＨ抗原（Ｂ型抗原）の発現減少を示す写真である。
【図４】各種の皮膚疾患組織でのＡＢＨ抗原の発現様相を示す写真である。
【図５】各種の皮膚疾患の免疫組織化学染色の結果を示した図である。
【図６】多様な天然物抽出物がＡＢＨ抗原の発現に及ぼす影響を示す電気泳動写真である。
【図７】ＡＢＨ抗原の処理が血液型抗原の発現に及ぼす影響を示す電気泳動写真である。
【図８】ＡＢＨ抗原を構成する単糖類の投与が血液型抗原の発現に及ぼす影響を示す免疫組織化学染色写真である。
【図９】ＡＢＨ抗原を構成する単糖類の投与が血液型抗原の発現に及ぼす影響を示す電気泳動写真である。
【図１０】ＡＢＨ抗原の除去によるＩＣＡＭ−１、ＨＬＡ−ＤＲの発現減少を示すウエスタンブロット写真である。
【図１１】ＡＢＨ抗原の除去によるＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦの発現減少を示す実時間ＰＣＲ結果のグラフである。
【図１２】ＡＢＨ抗原の除去によるＢＤ−２の発現減少を示す実時間ＰＣＲ結果のグラフである。
【図１３】ＡＢＨ抗原の除去後、ＴＮＦ−α又はＩＬ−１β処理によるＢＤ−２発現の誘導抑制可否を示すグラフである。
【図１４】ＡＢＨ抗原の発現が細胞の移動速度に及ぼす影響を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明を実施例により詳しく説明する。
但し、下記実施例は本発明を例示するためのものであるだけで、本発明の内容が下記実施例により限定されるものではない。
【実施例】
【００２９】
実験例１．  多様な人体組織でのＡＢＨ抗原の発現調査
人体の多様な部位の組織を生検して得た後、ＡＢＨ抗原に特異的に結合する抗体を利用し、免疫組織化学染色法で各組織でのＡＢＨ抗原の発現可否を調査した。具体的に、生検した組織を１０％のホルマリンに入れて一晩中固定させた後、ホルマリンを除去し組織を脱水させてパラフィン中に凝固してブロックを作製した。以後、４μｍの厚さに組織を切断してスライドに貼付け、乾燥機（ｄｒｙ  ｏｖｅｎ）で５８℃で１時間の間パラフィンを溶解させた。キシレン（ｘｙｌｅｎｅ）に５分ずつ４回処理してパラフィンを完全に除去し、１００％のエタノールに１分ずつ２回、９５％のエタノールに１分、８０％のエタノール、７０％のエタノールに１分ずつ浸漬して段階的に組織を再水和させた後、流れる水道水に５分洗浄し、さらに蒸溜水で５分間洗浄した後、ｐＨ  ６．０  ＴＲＳ（Ｄａｋｏ）に入れたまま１２０℃で１０分間オートクレーブ（ａｕｔｏｃｌａｖｅ）させた。湯煎で１０分間組織を冷やした後、蒸溜水で５分ずつ２回洗浄してから、ＰＢＳで５分間洗い出した後ＰＢＳで希釈した３％の過酸化水素水溶液に１０分間浸漬しておいた。その後、組織をＰＢＳに１０分ずつ３回洗浄した後、組織周辺にＰＡＰペンで枠を描き、ブロッキング溶液（Ｚｙｍｅｄ）を組織に３０分間処理した。Ａ型又はＢ型抗原を認知する１次抗体（ＳａｎｔａＣｒｕｚ）を処理した後１６時間の間４℃に放置し、以後ＰＢＳに１０分ずつ３回洗浄した後、ＨＲＰ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）が結合された２次抗体（ＳａｎｔａＣｒｕｚ）を１５分間処理し、ＰＢＳに１０分ずつ２回、蒸溜水に１０分ずつ２回洗浄した。ＡＥＣ発色剤（Ｚｙｍｅｄ）を利用して発色した後、流水に５分間、さらに蒸溜水で５分間洗浄し、Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ（Ｄａｋｏ）で核を染色して流水に１０分間洗浄してから、組織周辺の水分だけ除去した後、水性マウンティング溶液（ａｑｕｅｏｕｓ  ｍｏｕｎｔｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（Ｄａｋｏ）でマウンティングし、顕微鏡で観察し、組織写真を得た。
【００３０】
その結果、ＡＢＨ抗原は赤血球だけでなく、個人の血液型に従い胃腸（Ａ型）、食道（Ａ型）、小腸（Ｂ型）、尿道（Ａ型）、結膜（Ａ型）、皮膚（Ａ型）などの組織でも発現されていることを確認した（図２）。血液型がＡ型の人の組織は、Ａ抗原を認知する抗体にのみ染色が可能であってＢ抗原を認知する抗体には染色されていず、Ｂ型の人はＢ抗原を認知する抗体によってのみ染色が可能であり、ＡＢ型の人は２種の抗体全てが染色可能であり、Ｏ型の人は２種全てが染色されなかった。
【００３１】
実験例２．  紫外線照射に伴うＡＢＨ抗原の発現減少
正常皮膚組織でＡ型の人はＡ抗原を認知する抗体にのみ染色され、主に表皮の顆粒層で染色される（Ｄａｂｅｌｓｔｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  ｄｅｒｍａｔｏｌ  ８２：１３−１７（１９８４））。個人別に皮膚に紫外線を照射したとき、紅斑が発生する最小紅斑強度（ｍｉｎｉｍａｌ  ｅｒｙｔｈｅｍａ  ｄｏｓｅ、ＭＥＤ）を測定し、２  ＭＥＤの強度で紫外線を照射した後、０、２４、４８、７２時間に皮膚組織を生検し、実験例１と同一の方式で免疫組織化学染色法を介しＡＢＨ抗原の発現を調査した。
【００３２】
その結果、２４時間まではＡＢＨ抗原が正常に発現されたが、４８、７２時間になりながら、ＡＢＨ抗原の発現が漸次消失されることを確認した（図３）。
【００３３】
実験例３．  多様な皮膚疾患におけるＡＢＨ抗原の発現減少
炎症が誘導される強い強度の紫外線照射によりＡＢＨ抗原の発現が消失されるとの点に基づき、炎症反応の異常調節により症状が主に表れるものと思われる多様な皮膚疾患でのＡＢＨ抗原の発現程度を調査した。このため、乾癬（Ａ型）、アトピー（Ａ型）、魚鱗癬（Ａ型）、蜂窩織炎（Ａ型）、円板状紅斑性狼瘡（Ａ型）、にきび（Ｂ型）などの皮膚疾患の患者等から組織を生検し、実験例１と同一の方式で免疫組織化学染色法でＡＢＨ抗原の発現を調査した。
【００３４】
その結果、殆どの病理組織で顆粒層での正常なＡＢＨ抗原の発現が消失し、患者に従って非正常的に有棘層や基底層でもＡＢＨ抗原が発現される現象を見せた（図４及び図５）。これは顆粒層の不完全な分化、及び／又は有棘層や基底層の非正常的な分化を示唆する。
【００３５】
実験例４．  天然物抽出物がＡＢＨ抗原の発現に及ぼす影響の調査
多様な種類の天然物抽出物がＡＢＨ抗原の発現に及ぼす影響を調査した。このため、エゾウコギ、あざみ、シイタケ、高麗人参、エキナセア、黄金及び柳抽出物原液（それぞれバイオスペクトラム（株）から購入）をそれぞれ０．１％（ｖ／ｖ）、１％（ｖ／ｖ）及び２％（ｖ／ｖ）の濃度でＨａＣａＴ細胞に処理した後、４８時間の間培養した。以後、ウエスタンブロット実験によりＢ型抗原の発現を調査した。対照群としては、アルファ−チューブリン又はＳＴＡＴ１アルファタンパク質を用いた。
【００３６】
その結果、エゾウコギ、あざみ、シイタケ、高麗人参及びエキナセア抽出物はＨａＣａＴ細胞でＢ型抗原の発現を減少させ、柳及び黄金抽出物はＢ型抗原の発現を増加させる効果があることを確認した（図６）。
【００３７】
実験例５．  ＡＢＨ抗原が血液型抗原の発現に及ぼす影響を調査
Ａ、Ｂ、Ｈ抗原（Ｄｅｘｔｒａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入）を、Ｂ抗原を保有しているＨａＣａＴ細胞に１００ｎＭの濃度で２４時間の間処理した後、ウエスタンブロット分析によりＢ抗原の発現可否を観察した。その結果、Ｂ、Ｈ抗原によりそれぞれＢ型抗原の発現が増加しており、Ａ抗原は２４時間にはＢ型抗原の発現を増加させなかった（図７−０）。さらに、Ａ、Ｂ抗原をそれぞれ１００ｎＭ又は２００ｎＭの濃度でＨａＣａＴ細胞に４８時間の間処理した場合は、Ａ、Ｂ抗原全てＢ型抗原の発現を増加させた（図７）。前記結果から、Ａ、Ｂ、Ｈ抗原全てがＨａＣａＴ細胞のＢ型抗原の発現を増加させるとのことを確認した。
【００３８】
実験例６．  ＡＢＨ抗原を構成する単糖類の投与が血液型抗原の発現に及ぼす影響の調査（１）
一般に、アトピー皮膚炎のある患者の尻皮膚には肉眼で区分される病変はないが、血液型抗原の発現は正常人の皮膚に比べて減少している場合がある。したがって、これを回復させる効果を確認するため、１００％のガラクトース、ＦＧＧ（Ｆｕｃｏｓｅ：Ｇａｌａｃｔｏｓｅ＝１：２、Ｂ−ａｎｔｉｇｅｎ組成）及びＦＧＧＮ（Ｆｕｃｏｓｅ：Ｇａｌａｃｔｏｓｅ：Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ＝１：１：１、Ａ−ａｎｔｉｇｅｎ組成）の組成を有している糖の混合物をポリエチレングリコール：エタノール：水＝３．５：１．５：５で配合した溶媒に０．５％（ｗ／ｖ）で溶解させた。前記溶解物を３０歳の男性Ｂ型アトピー患者（志願者）と２４歳の男性Ａ型アトピー患者（志願者）の尻皮膚に閉鎖的に貼り付けて４８時間ずつ２回（合計９６時間）処理した後生検組織を得た。生検された組織は、ＡＢＨ抗原に特異的に結合する抗体を利用し、実験例１に開示された免疫組織化学染色法と同一の方式で各組織におけるＡＢＨ抗原の発現可否を調査した。
【００３９】
その結果、血液型糖を構成する物質等を処理すると、３０歳の男性Ｂ型アトピー患者（志願者）（図８のＡ）と２４歳の男性Ａ型アトピー患者（志願者）（図８のＢ）全てで細胞及び皮膚での血液型糖の発現が増加するとのことを確認した。
【００４０】
実験例７．  ＡＢＨ抗原を構成する単糖類の投与が血液型抗原の発現に及ぼす影響の調査（２）
前記実験例５に開示されたものと同一のＡ、Ｂ、Ｈ抗原を構成するＦＧＧ及びＦＧＧＮ混合物及びＦＧ（Ｆｕｃｏｓｅ：Ｇａｌａｃｔｏｓｅ＝１：１、Ｈ−ａｎｔｉｇｅｎ組成）混合物と、前記Ａ、Ｂ、Ｈ抗原を構成する単糖類であるグルコース、ガラクトース、フコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン及びＮ−アセチルグルコサミンをそれぞれ０．１、１、１０μＭの濃度で、Ｂ抗原を保有するＨａＣａＴ細胞に２４時間の間処理した後、ウエスタンブロット分析によりＢ抗原の発現可否を観察した。その結果、これら全てがＢ型抗原の発現を増加させるとのことを確認した（図９）。
【００４１】
実験例８．  ＡＢＨ抗原の除去によるＩＣＡＭ−１、ＨＬＡ−ＤＲ発現の減少
一般に、皮膚での炎症過程で最も重要な役割を果たすＴｈ１サイトカインであるインターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）は、多様なＴｈ１免疫反応を媒介する因子等の発現を増大させるが、その中でも特に角質形成細胞が抗原提供細胞としての役割を果たすとき最も重要な分子にはＩＣＡＭ−１とＨＬＡ−ＤＲを挙げることができる（Ｂａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｌａｎｃｅｔ  ３３７：２１１−２１４（１９９１））。Ｂ抗原を保有している角質形成細胞株のＨａＣａＴ細胞を５％  ＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ、Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含むＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ  ｍｏｄｉｆｉｃａｓｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅａｇｌｅ'ｓ  ｍｅｄｉｕｍ、Ｗｅｌｇｅｎｅ）培地で培養し、細胞が３５ｍｍ大きさの培養皿に７０％程度育つように細胞培養器で育てた後、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で２時間インキュベーションした。２．５μｌのリポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を利用し、陰性対照群として目標遺伝子のないＲＮＡ（Ｂｉｏｎｅｅｒ）とＦＵＴ１遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ（Ｂｉｏｎｅｅｒ、配列番号１）を２５０ｐｍｏｌずつトランスフェクションした。翌日培地をＦＢＳのないＤＭＥＭに取り替え、さらに一日後インターフェロンガンマ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を１０ｎｇ／ｍｌの濃度で処理した後、０、１２、１５、１８、２４、３６、４８時間後にそれぞれ細胞からタンパク質を抽出し、ＦＵＴ１のｓｉＲＮＡによるＢ型抗原の発現減少と、抗原提供細胞の主要機能因子であるＩＣＡＭ−１、ＨＬＡ−ＤＲの変化をそれぞれの抗体（Ａｂｃａｍ、Ｄａｋｏ）を利用してウエスタンブロット実験を行った。大きく変化しない対照群タンパク質にはアルファチューブリン（ａｌｐｈａ−ｔｕｂｕｌｉｎ、ＳａｎｔａＣｒｕｚ）を用いた。
【００４２】
その結果、対照群の場合、インターフェロンガンマによりＩＣＡＭ−１とＨＬＡ−ＤＲの発現が大きく増加するが、ＨａＣａＴ細胞でＦＵＴ１のｓｉＲＮＡを２５０ｐｍｏｌ／ｍｌで処理しＢ型抗原の発現を抑制した場合は、インターフェロンガンマによるＩＣＡＭ−１の発現の増加が相当部分抑制されることを確認し、ＨＬＡ−ＤＲの場合は初期１８時間までの発現増加が抑制されるが、２４時間以後には回復し４８時間には逆転されることを確認した（図１０）。
【００４３】
実験例９．  ＡＢＨ抗原の除去によるＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ、ＢＤ−２発現の減少
Ｂ抗原を保有している角質形成細胞株のＨａＣａＴ細胞に、実験例４と同一の方法でリポフェクタミン２０００のみ処理した対照群（ＣＮＴ）、陰性対照群として目標遺伝子のないＲＮＡ（ＮＣ）とＦＵＴ１（ｓｉＦＵＴ１）、ＡＢＯ（ｓｉＡＢＯ）遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ（Ｂｉｏｎｅｅｒ）を２５０ｐｍｏｌずつトランスフェクションした４種類のサンプルに、インターフェロンガンマを処理しないか、１０ｎｇ／ｍｌの濃度で処理した後、２４時間後に細胞からＲＮＡを抽出し、３６ｂ４に補正したＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ、ＢＤ−２（β−ｄｅｆｅｎｓｉｎ  ２）のｍＲＮＡの発現量を、サイバーグリーン（ｓｙｂｒｇｒｅｅｎ、Ｔａｋａｒａ  ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ）を利用した実時間（Ｒｅａｌｔｉｍｅ）ＲＴ−ＰＣＲ法（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、７５００  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  ｓｙｓｔｅｍ）で確認した。このとき、ＦＵＴ１遺伝子のｓｉＲＮＡ配列は実験例４と同一であり、ＡＢＯ遺伝子のｓｉＲＮＡ配列は配列番号２で記載される塩基配列を用いた。さらに、人間ＩＬ−８遺伝子のプライマーには配列番号３及び配列番号４で記載される塩基配列を用い、ＧＭ−ＣＳＦのプライマーには配列番号５及び配列番号６で記載される塩基配列を用い、ＢＤ−２のプライマーには配列番号７及び配列番号８で記載される塩基配列を用いた。
【００４４】
その結果、Ｔｈ１免疫反応を媒介する分子等の中でインターフェロンガンマにより誘導されるＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦの発現がＢ型抗原の除去により減少することを確認しており、皮膚の抗菌ペプチド中一つであるＢＤ−２の発現はインターフェロンガンマに増加されないが、その発現がＢ型抗原の除去により減少することを確認した（図１１及び図１２）。
【００４５】
実験例１０．  ＡＢＨ抗原除去後、ＴＮＦ−α又はＩＬ−１β処理によるＢＤ−２発現の誘導を抑制
ＦＵＴ１遺伝子のｓｈＲＮＡを過発現させ得るレンチウイルスベクターと、ＡＢＯ遺伝子のｓｈＲＮＡを過発現させ得るレンチウイルスベクター（ＳａｎｔａＣｒｕｚから購入）をＨａＣａＴ細胞株に感染させた後、ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）で一ヶ月間選択培養し、陰性対照群レンチウイルスベクターに比べて安定的にＦＵＴ１又はＡＢＯの発現が抑制されるＨａＣａＴ細胞株を製作した。この細胞等にＴＮＦαとＩＬ−１βをそれぞれ２４時間の間処理した後、ＢＤ−２のｍＲＮＡの発現量を３６ｂ４遺伝子の発現量に補正して前記実験例７と同一の実時間ＲＴ−ＰＣＲ法で比較した。
【００４６】
その結果、何等の処理もしない場合、ＢＤ−２の発現は勿論、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αとＩＬ−１βを処理して炎症反応を誘導した場合の増加したＢＤ−２の発現も、ＦＵＴ１又はＡＢＯタンパク質の発現が抑制されたＨａＣａＴ細胞株で全て一定部分減少した（図１３）。
【００４７】
実験例１１．  ＡＢＨ抗原の発現が細胞の移動速度に及ぼす影響
ＨａＣａＴ細胞株にｓｉＲＮＡを処理しないか、実験例４と同一の方法で陰性対照群ｓｉＲＮＡ（ＮＣ）、ＦＵＴ１或いはＡＢＯのｓｉＲＮＡをリポフェクタミン２０００を利用してトランスフェクションし、培養皿に溢れるまで培養した後、一定の幅に傷痕（ｓｃｒａｔｃｈ）を出して細胞のない空間を作った。１０％のＦＢＳが含まれたＤＭＥＭ培地で培養しながら、それぞれ０、２４、４８、７２及び９６時間に写真を撮って細胞の移動を確認した。
【００４８】
その結果、ｓｉＲＮＡを処理しないかＮＣ  ｓｉＲＮＡをトランスフェクションした場合に比べ、ＡＢＯやＦＵＴ１のｓｉＲＮＡをトランスフェクションした場合は、傷痕の閉じる速度が著しく減少し、さらにＦＵＴ１の場合がＡＢＯの場合に比べてさらに遅く閉じる傾向を見せた（図１４）。これは皮膚での傷治癒過程における角質形成細胞の移動速度が、ＦＵＴ１及びＡＢＯの発現が少ない場合、即ち血液型抗原の発現が少ない場合に遅くなり得るとのことを意味する。
【００４９】
前記で検討してみたところのように、多様な炎症性皮膚疾患でＡＢＨ抗原の発現が減少していることに着目し、角質形成細胞で強制にＡＢＨ抗原の発現を除去してみた結果、インターフェロンガンマにより誘導される多様なＴｈ１免疫反応因子等の減少に伴い、免疫システムが正常に比べて弱化することを確認した。したがって、ＡＢＨ抗原の発現を調節することが炎症反応の程度を調節する効果があることを確認した。
【００５０】
製造例１．  薬学的組成物の製造
１．１．  シロップ剤の製造
有効成分を２０％（重量／体積）で含むシロップを次のような方法で製造した。先ず、Ｈ型抗原、サッカリン、糖を温水８０ｇに溶解させた。前記溶液を冷却させた後、これにグリセリン、サッカリン、香味料、エタノール、ソルビン酸及び蒸溜水でなる溶液を製造して混合した。この混合物に水を添加して１００ｍｌになるようにした。
【００５１】
前記シロップ剤の構成成分は次の通りである。
Ｈ型抗原．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．２０ｇ
サッカリン．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．８ｇ
糖．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．２５．４ｇ
グリセリン．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．８．０ｇ
香味料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．０４ｇ
エタノール．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．４．０ｇ
ソルビン酸．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．４ｇ
蒸溜水．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．定量
【００５２】
１．２．  錠剤の製造
Ｂ型抗原２５０ｇをラクトース１７５．９ｇ、じゃがいも澱粉１８０ｇ及びコロイド性ケイ酸３２ｇと混合した。前記混合物に１０％のゼラチン溶液を添加させた後、粉砕して１４メッシュの篩を通過させた。これを乾燥させ、これにじゃがいも澱粉１６０ｇ、滑石５０ｇ及びステアリン酸マグネシウム５ｇを添加して得た混合物を錠剤に作った。
【００５３】
前記錠剤の構成成分は次の通りである。
Ｂ型抗原．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．２５０ｇ
ラクトース．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１７５．９ｇ
じゃがいも澱粉．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１８０ｇ
コロイド性ケイ酸．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．３２ｇ
１０％ゼラチン溶液
じゃがいも澱粉．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１６０ｇ
滑石．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５０ｇ
ステアリン酸マグネシウム．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５ｇ
【００５４】
１．３．  注射液剤の製造
有効成分１０ｍｇを含む注射液剤を次のような方法で製造した。
Ａ型抗原１ｇ、塩化ナトリウム０．６ｇ及びアスコルビン酸０．１ｇを蒸溜水に溶解させて１００ｍｌを作った。前記溶液を瓶に入れ加熱して滅菌させた。
【００５５】
前記注射液剤の構成成分は次の通りである。
Ａ型抗原．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１ｇ
塩化ナトリウム．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．６ｇ
アスコルビン酸．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．１ｇ
蒸溜水．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．定量
【００５６】
製造例２．  化粧料組成物の製造
２．１．  乳化剤形の化粧品の製造
表１に記載された組成で乳化剤形の化粧品を製造した。製造方法は下記の通りである。
１）１〜９の原料を混合した混合物を６５〜７０℃で加熱した。
２）１０の原料を前記段階１）の混合物に投入した。
３）１１〜１３の原料の混合物を６５〜７０℃で加熱して完全に溶解させた。
４）前記段階３）を経ながら、前記２）の混合物を徐々に添加し８，０００ｒｐｍで２〜３分間乳化させた。
５）１４の原料を少量の水に溶解させた後、前記段階４）の混合物に添加し２分間さらに乳化させた。
６）１５〜１７の原料をそれぞれ秤量した後、前記段階５）の混合物に入れて３０秒間さらに乳化させた。
７）前記段階６）の混合物を乳化後、脱気過程を経て２５〜３５℃で冷却させることにより乳化剤形の化粧品を製造した。
【００５７】
【表１】
2012514634.tif 000003
【００５８】
２．２．  可溶化剤形の化粧品の製造
表２に記載された組成で可溶化剤形の化粧品を製造した。製造方法は下記の通りである。
１）２〜６の原料を１の原料（精製水）に入れ、ミキサーを利用して溶解させた。
２）８〜１１の原料を７の原料（アルコール）に入れて完全に溶解させた。
３）前記段階２）の混合物を前記段階１）の混合物に徐々に添加しながら可溶化させた。
【００５９】
【表２】
2012514634.tif 000004
【図１】
2012514634.tif 000005
【図２】
2012514634.tif 000006
【図３】
2012514634.tif 000007
【図４】
2012514634.tif 000008
【図５】
2012514634.tif 000009
【図６】
2012514634.tif 000010
【図７】
2012514634.tif 000011
【図８】
2012514634.tif 000012
【図９】
2012514634.tif 000013
【図１０】
2012514634.tif 000014
【図１１】
2012514634.tif 000015
【図１２】
2012514634.tif 000016
【図１３】
2012514634.tif 000017
【図１４】
2012514634.tif 000018
【配列表】
2012514634000001.app
【国際調査報告】
2012514634.tif 000019
2012514634.tif 000020
2012514634.tif 000021
2012514634.tif 000022
2012514634.tif 000023
2012514634.tif 000024