(57)【要約】  本発明は、増殖性疾患、特に固形腫瘍疾患を治療するための（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤化合物、および（ｂ）インスリン感受性増進剤化合物を含む医薬組合せ剤；このような組合せ剤を含む医薬組成物；増殖性疾患を治療する薬物を調製するためのこのような組合せ剤の使用；同時、別個または逐次的使用向けの組合せ製剤として、このような組合せ剤を含む商業的パッケージもしくは製品に関し、温血動物、特にヒトの治療方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
同時、別個または逐次的使用向けの組合せ剤であって、（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤化合物阻害剤、および（ｂ）インスリン感受性増進剤化合物を含む組合せ剤であり、前記活性成分が、それぞれの場合、遊離の形態、またはそれらの薬学的に許容される塩もしくは任意の水和物の形態で存在し、場合によって少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む組合せ剤。
【請求項２】
増殖性疾患に対して共同して治療的に有効である、ある量の請求項１に記載の組合せ剤と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項３】
前記感受性増進剤化合物が、ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）の活性化剤である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
増殖性疾患の治療において使用するための、かつ／またはＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の阻害に起因する血糖増加可能性を克服するための、請求項１に記載の組合せ剤または請求項２もしくは３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
増殖性疾患の治療のための、かつ／またはＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の阻害に起因する血糖増加可能性を克服する薬物を調製するための、請求項１に記載の組合せ剤または請求項２もしくは３に記載の医薬組成物の使用。
【請求項６】
前記増殖性疾患が、固形腫瘍疾患である、請求項４または５に記載の使用。
【請求項７】
前記増殖性疾患が、ＬＫＢ１の機能喪失突然変異を媒介する肺腫瘍である、請求項４または５に記載の使用。
【請求項８】
前記増殖性疾患が、乳癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、膵癌、黒色腫、頭頚部、脳癌、子宮体癌、およびポイツ−ジェガーズ症候群のある患者における癌である、請求項４または５に記載の使用。
【請求項９】
前記ホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤化合物が、２−メチル−２−［４−（３−メチル−２−オキソ−８−キノリン−３−イル−２，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−フェニル］−プロピオニトリルおよびそのモノトシレート塩、８−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−ピペラジン−１−イル−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、または５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミンおよびその塩酸塩から選択される、請求項４または５に記載の使用。
【請求項１０】
前記インスリン感受性増進剤化合物が、ビグアナイドまたはグリタゾンである、請求項６のいずれかに記載の使用。
【請求項１１】
（ａ）１種または複数の単位剤形のホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤と、（ｂ）１種または複数の単位剤形のビグアナイドもしくはグリタゾンインスリン感受性増進剤化合物とを含む組合せ製剤。
【請求項１２】
有効量のホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤化合物阻害剤およびインスリン感受性増進剤化合物を投与するステップを含む、増殖性疾患に罹っている患者を治療する方法であって、同時、別個または逐次的使用のため、前記活性成分が、それぞれの場合、遊離の形態、またはそれらの薬学的に許容される塩もしくは任意の水和物の形態で存在し、場合によって少なくとも１種の薬学的に許容される担体が存在する方法。
【請求項１３】
前記増殖性疾患が、固形腫瘍疾患である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記増殖性疾患が、ＬＫＢ１の機能喪失突然変異を媒介する肺腫瘍である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記増殖性疾患が、乳癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、膵癌、黒色腫、頭頚部、脳癌、子宮体癌、およびポイツ−ジェガーズ症候群のある患者における癌である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記患者が、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の阻害に起因する血糖増加可能性を克服している、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記ホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤化合物が、２−メチル−２−［４−（３−メチル−２−オキソ−８−キノリン−３−イル−２，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−フェニル］−プロピオニトリルおよびそのモノトシレート塩、８−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−ピペラジン−１−イル−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、または５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミンおよびその塩酸塩から選択される、請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、同時、別個もしくは逐次的使用向けの、特に増殖性疾患、とりわけＰＩ３Ｋ／Ａｋｔおよび／もしくはＲＡＳ／ＭＡＰＫ経路が調節不全である増殖性疾患を治療するための医薬組合せ剤であって、（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ(phosphoinositide 3-kinase)（ＰＩ３Ｋ）阻害剤化合物、および（ｂ）抗糖尿病性化合物、ならびに場合によって少なくとも１種の医薬として許容可能な担体を含む医薬組合せ剤；このような組合せ剤を含む医薬組成物；増殖性疾患を治療する薬物を調製するためのこのような組合せ剤の使用；同時、別個または逐次的使用向けの組合せ製剤として、このような組合せ剤を含む商業的パッケージもしくは製品に関し、温血動物、特にヒトの治療方法に関する。
【０００２】
発明の背景
癌治療のための初期の臨床試験において、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路のいくつかの阻害剤が目下存在する。それらのいくつかは、血糖値を劇的に増大させる。
【０００３】
発明の概要
本発明は、（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤化合物、および（ｂ）抗糖尿病性化合物、ならびに場合によって少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組合せ剤であって、増殖性疾患、とりわけＰＩ３Ｋ／Ａｋｔおよび／もしくはＲＡＳ／ＭＡＰＫ経路が調節不全である増殖性疾患を治療するための同時、別個または逐次的使用向けの医薬組合せ剤に関する。
【０００４】
本発明はまた、（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤化合物、および（ｂ）抗糖尿病性化合物、ならびに場合によって少なくとも１種の薬学的に許容される担体の組合せ剤を含む医薬組成物であって、増殖性疾患、とりわけＰＩ３Ｋ／Ａｋｔおよび／もしくはＲＡＳ／ＭＡＰＫ経路が調節不全である増殖性疾患を治療するための同時、別個または逐次的使用向けの医薬組成物にも関する。
【０００５】
本発明はまた、増殖性疾患を治療する薬物を調製するための、このような組合せ剤の使用にも関する。
【０００６】
本発明はまた、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔおよび／もしくはＲＡＳ／ＭＡＰＫ経路が調節不全である増殖性疾患に罹っている温血動物、特にヒトを治療する方法であって、（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤化合物および（ｂ）抗糖尿病性化合物を投与するステップを含む方法にも関する。
【０００７】
本発明はまた、同時、別個または逐次的使用向けの組合せ製剤として、本組合せ剤を含む商業的パッケージもしくは製品にも、また温血動物、特にヒトの治療方法にも関する。
【０００８】
本発明の一態様において、この増殖性疾患は、乳癌、卵巣癌、例えば大腸癌（ＣＲＣ）などの結腸の癌、および一般にＧＩ（胃腸）管、子宮頸癌(cervix cancer)、例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの肺癌、頭頚部癌、膀胱癌、例えば腎細胞癌（ＲＣＣ）などの腎臓癌、肝癌、脳癌、子宮体癌、神経内分泌腫瘍、甲状腺癌、膵癌、前立腺の癌、またはカポジ肉種を含む、固形腫瘍である。
【０００９】
本発明の他の態様において、この増殖性疾患は、ポイツ−ジェガーズ症候群(Peutz-Jeghers syndrome)であり、このものは腸管の過誤腫(hamartomas)、および上皮癌の発生率増加によって特徴付けられる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＨＥＲ２不活性の、乳癌細胞増殖の阻害剤としてのメトホルミン(metformin)を例示する。
【図２】化合物Ａにメトホルミンを加えた組合せ治療が、細胞増殖への阻害効果をもたらすことを例示する。
【図３】メトホルミンがｐ−ＭＡＰＫを減少させ（ＨＥＲ２およびＥＧＦＲの下方制御による）、またメトホルミンが、ｐ−ＡＭＰＫを活性化しｍＴＯＲ機能（ｐＳ６）を阻害する、メトホルミンおよび化合物Ａの生化学的効果を例示する。
【００１１】
発明の詳細な説明
ＷＯ２００６／１２２８０６は、ＰＩ３−キナーゼなどの脂質キナーゼの活性を阻害すると記述されているイミダゾキノリン誘導体を記載している。本発明に適している特定のイミダゾキノリン誘導体、それらの調製、およびそれらを含有する適切な医薬製剤が、ＷＯ２００６／１２２８０６において記述され、式Ｉの化合物
【００１２】
【化１】
2012526772.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、ナフチルまたはフェニルであり、この場合前記フェニルが、ハロゲン；置換されない、もしくはハロゲン、シアノ、イミダゾリルもしくはトリアゾリルにより置換される低級アルキル；シクロアルキル；低級アルキル、低級アルキルスルホニル、低級アルコキシもしくは低級アルコキシ低級アルキルアミノからなる群から独立に選択される１つもしくは２つの置換基により置換されるアミノ；置換されない、もしくは低級アルキルおよび低級アルキルスルホニルからなる群から独立に選択される１つもしくは２つの置換基により置換されるピペラジニル；２−オキソ−ピロリジニル；低級アルコキシ低級アルキル；イミダゾリル；ピラゾリル；ならびにトリアゾリルからなる群から独立に選択される、１つもしくは２つの置換基により置換され、
Ｒ２は、ＯまたはＳであり、
Ｒ３は、低級アルキルであり、
Ｒ４は、置換されない、またはハロゲン、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ、もしくは、置換されないもしくは低級アルキルにより置換されるピペラジニルにより置換されるピリジル；置換されない、または低級アルコキシにより置換されるピリミジニル；置換されない、またはハロゲンにより置換されるキノリニル；キノキサリニル；あるいはアルコキシにより置換されるフェニルであり、
Ｒ５は、水素またはハロゲンであり、
ｎは０または１であり、
Ｒ６はオキシドであり、但しｎ＝１の場合、基Ｒ６を有するＮ原子が正電荷を有するとの条件を有し、
Ｒ７は、水素またはアミノである。）、もしくはそれらの互変異性体、あるいはそれらの薬学的に許容される塩または水和物もしくは溶媒和物が含まれる。
【００１３】
式Ｉの化合物の定義において使用される基および記号は、その出版物が、本明細書により、参照により本出願中に組み込まれているＷＯ２００６／１２２８０６中において開示されている意味を有する。
【００１４】
本発明の好ましい化合物は、ＷＯ２００６／１２２８０６において具体的に記述されている化合物である。本発明の非常に好ましい化合物は、２−メチル−２−［４−（３−メチル−２−オキソ−８−キノリン−３−イル−２，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−フェニル］−プロピオニトリルおよびそのモノトシレート塩（化合物Ａ）である。２−メチル−２−［４−（３−メチル−２−オキソ−８−キノリン−３−イル−２，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−フェニル］−プロピオニトリルの合成は、例えば、ＷＯ２００６／１２２８０６中に実施例１として記載されている。本発明の他の非常に好ましい化合物は、８−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−ピペラジン−１−イル−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン（化合物Ｂ）である。８−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−ピペラジン−１−イル−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンの合成は、例えば、ＷＯ２００６／１２２８０６中に実施例８６として記載されている。
【００１５】
ＷＯ０７／０８４７８６はピリミジン誘導体を記載し、これらは、ＰＩ３−キナーゼなどの脂質キナーゼの活性を有することが見出されている。本発明に適している特定のピリミジン誘導体、それらの調製、およびそれらを含有する適切な医薬製剤は、ＷＯ０７／０８４７８６において記述され、式ＩＩの化合物、
【００１６】
【化２】
2012526772.tif 000003
またはそれらの立体異性体、互変異性体、もしくは医薬として許容可能な塩が含まれ、上式において、
Ｗは、ＣＲｗまたはＮであり、この場合Ｒｗは、
（１）水素、
（２）シアノ、
（３）ハロゲン、
（４）メチル、
（５）トリフルオロメチル、
（６）スルホンアミド
からなる群から選択され、
Ｒ１は、
（１）水素、
（２）シアノ、
（３）ニトロ、
（４）ハロゲン、
（５）置換された、また置換されないアルキル、
（６）置換された、また置換されないアルケニル、
（７）置換された、また置換されないアルキニル、
（８）置換された、また置換されないアリール、
（９）置換された、また置換されないヘテロアリール、
（１０）置換された、また置換されない複素環、
（１１）置換された、また置換されないシクロアルキル、
（１２）−ＣＯＲ１ａ、
（１３）−ＣＯ２Ｒ１ａ、
（１４）−ＣＯＮＲ１ａＲ１ｂ、
（１５）−ＮＲ１ａＲ１ｂ、
（１６）−ＮＲ１ａＣＯＲ１ｂ、
（１７）−ＮＲ１ａＳＯ２Ｒ１ｂ、
（１８）−ＯＣＯＲ１ａ、
（１９）−ＯＲ１ａ、
（２０）−ＳＲ１ａ、
（２１）−ＳＯＲ１ａ、
（２２）−ＳＯ２Ｒ１ａおよび
（２３）−ＳＯ２ＮＲ１ａＲ１ｂ
からなる群から選択され、この場合、Ｒ１ａ、およびＲ１ｂは、
（ａ）水素、
（ｂ）置換された、もしくは置換されないアルキル、
（ｃ）置換された、また置換されないアリール、
（ｄ）置換された、また置換されないヘテロアリール、
（ｅ）置換された、また置換されない複素環、および
（ｆ）置換された、また置換されないシクロアルキル
からなる群から独立に選択され、
Ｒ２は、
（１）水素、
（２）シアノ、
（３）ニトロ、
（４）ハロゲン、
（５）ヒドロキシ、
（６）アミノ、
（７）置換された、また置換されないアルキル、
（８）−ＣＯＲ２ａ、および
（９）−ＮＲ２ａＣＯＲ２ｂ、
からなる群から選択され、この場合、Ｒ２ａ、およびＲ２ｂは、
（ａ）水素、
（ｂ）置換された、もしくは置換されないアルキル、
からなる群から独立に選択され、
Ｒ３は、
（１）水素、
（２）シアノ、
（３）ニトロ、
（４）ハロゲン、
（５）置換された、また置換されないアルキル、
（６）置換された、また置換されないアルケニル、
（７）置換された、また置換されないアルキニル、
（８）置換された、また置換されないアリール、
（９）置換された、また置換されないヘテロアリール、
（１０）置換された、また置換されない複素環、
（１１）置換された、また置換されないシクロアルキル、
（１２）−ＣＯＲ３ａ、
（１３）−ＮＲ３ａＲ３ｂ、
（１４）−ＮＲ３ａＣＯＲ３ｂ、
（１５）−ＮＲ３ａＳＯ２Ｒ３ｂ、
（１６）−ＯＲ３ａ、
（１７）−ＳＲ３ａ、
（１８）−ＳＯＲ３ａ、
（１９）−ＳＯ２Ｒ３ａおよび
（２０）−ＳＯ２ＮＲ３ａＲ３ｂ
からなる群から選択され、この場合、Ｒ３ａ、およびＲ３ｂは、
（ａ）水素、
（ｂ）置換された、もしくは置換されないアルキル、
（ｃ）置換された、また置換されないアリール、
（ｄ）置換された、また置換されないヘテロアリール、
（ｅ）置換された、また置換されない複素環、および
（ｆ）置換された、また置換されないシクロアルキル
からなる群から独立に選択され、また
Ｒ４は、
（１）水素、および
（２）ハロゲン、
からなる群から選択される。
【００１７】
式Ｉの化合物の定義において使用される基および記号は、その出版物が、本明細書により、参照により本出願中に組み込まれているＷＯ０７／０８４７８６中において開示される意味を有する。
【００１８】
本発明の好ましい化合物は、ＷＯ０７／０８４７８６において具体的に記述されている化合物である。本発明の非常に好ましい化合物は、５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミンおよびその塩酸塩（化合物Ｃ）である。５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミンの合成は、ＷＯ０７／０８４７８６中に実施例１０として記載されている。
【００１９】
一態様において、本発明は、組合せ製剤もしくは医薬組成物などの組合せ剤であって、（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤化合物、および（ｂ）抗糖尿病剤、すなわちインスリン感作物質であり、またＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）の活性化剤、例えばビグアナイド(biguanide)またはチアゾリジンジオン(thiazolidinedione)（グリタゾン(glitazone)）などである抗糖尿病剤を含む組合せ剤に関する。
【００２０】
例示的なビグアナイド化合物には、インスリン感受性増進剤であり、また例えば非インスリン依存糖尿病（ＮＩＤＤＭ）を制御もしくは管理するのに有用な薬剤が含まれる。ビグアナイドの非限定的例には、メトホルミン、フェンホルミン(phenformin)またはブホルミン(buformin)など、およびそれらの薬学的に許容される塩もしくは異性体が含まれる。好ましい実施形態において、ビグアナイドはメトホルミンである。メトホルミン（ジメチルジグアニド）およびその塩酸塩の調製は、最先端技術であり、Ｅｍｉｌ  Ａ．ＷｅｒｎｅｒおよびＪａｍｅｓ  Ｂｅｌｌ、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２１、１９２２、１７９０〜１７９４により最初に開示された。メトホルミンは、例えば、商標ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ（商標）のもとに販売される形態として、投与することができる。
【００２１】
他の態様において、本発明は、（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤化合物、および（ｂ）メトホルミンを含む、組合せ製剤もしくは医薬組成物などの組合せ剤に関する。
【００２２】
他の実施形態において、抗糖尿病剤は、チアゾリジンジオン（グリタゾン）である。例示的なグリタゾンには、５−｛［４−（２−（５−エチル−２−ピリジル）エトキシ）フェニル］−メチル｝チアゾリジン−２，４−ジオン（ピオグリタゾン(pioglitazone)、ＥＰ０１９３２５６Ａ１）、５−｛［４−（２−（メチル−２−ピリジニル−アミノ）−エトキシ）フェニル］メチル｝−チアゾリジン−２，４−ジオン（ロシグリタゾン(rosiglitazone)、ＥＰ０３０６２２８Ａ１）、５−｛［４−（（３，４−ジヒドロ−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）メトキシ）−フェニル］−メチル｝チアゾリジン−２，４−ジオン（トログリタゾン(troglitazone)、ＥＰ０１３９４２１）、（Ｓ）−（（３，４−ジヒドロ−２−フェニル−メチル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−イル）メチル−チアゾリジン−２，４−ジオン（エングリタゾン(englitazone)、ＥＰ０２０７６０５Ｂ１）、５−（２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イルメチル）−２−メトキシ−Ｎ−（４−トリフルオロメチル−ベンジル）ベンズアミド（ＫＲＰ２９７、ＪＰ１００８７６４１−Ａ）、５−［６−（２−フルオロ−ベンジルオキシ）ナフタレン−２−イルメチル］チアゾリジン−２，４−ジオン（ＭＣＣ５５５、ＥＰ０６０４９８３Ｂ１）、５−｛［４−（３−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）−１−オキソプロピル）−フェニル］−メチル｝チアゾリジン−２，４−ジオン（ダルグリタゾン(darglitazone)、ＥＰ０３３２３３２）、５−（２−ナフチルスルホニル）−チアゾリジン−２，４−ジオン（ＡＹ−３１６３７、ＵＳ４，９９７，９４８）、５−｛［４−（１−メチル−シクロヘキシル）メトキシ）−フェニル］メチル｝−チアゾリジン−２，４−ジオン（シグリタゾン(ciglitazone)、ＵＳ４，２８７，２００）、５−｛４−［（６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）メトキシ］ベンジル｝−１，３−チアゾリジン−２，４−ジオン（リボグリタゾン(rivoglitazone)、ＣＡＳ番号１８５４２８−１８−６）が含まれ、それぞれの場合、それぞれの物質の後の括弧内に引用されている資料中に、それぞれの場合特に、化合物特許請求範囲および実施例の最終生成物として、一般名で、具体的に開示され、最終生成物、医薬製剤および特許請求範囲の主題は、本明細書により、これらの出版物への参照により、本出願中に組み込まれている。ＤＲＦ２１８９および５−｛［４−（２−（２，３−ジヒドロインドール−１−イル）エトキシ）フェニル］メチル｝−チアゾリジン−２，４−ジオンの調製は、Ｂ．Ｂ．Ｌｏｈｒａｙらの、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８，４１，１６１９〜１６３０の、１６２７および１６２８頁の例２ｄおよび３ｇ中に記載されている。本明細書において言及される５−［３−（４−クロロフェニル］）−２−プロピニル］−５−フェニルスルホニル）−チアゾリジン−２，４−ジオンおよび、Ａがフェニルエチニルである他の化合物の調製は、Ｊ．ＷｒｏｂｅｌらのＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８，４１，１０８４〜１０９１中に記載される方法により行うことができる。
【００２３】
特に、ＭＣＣ５５５は、ＥＰ０６０４９８３Ｂ１の４９頁３０〜４５行において開示されるように製剤することができ；エングリタゾンは、ＥＰ０２０７６０５Ｂ１の６頁５２行〜７頁６行に開示されるように、または２４頁の実施例２７もしくは２８と同様に製剤することができ；またダルグリタゾンおよび５−｛４−［２−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）−エトキシ）］ベンジル｝−チアゾリジン−２，４−ジオン（ＢＭ−１３．１２４６）は、ＥＰ０３３２３３２Ｂ１の８頁４２行〜５４行に開示されるように製剤することができる。ＡＹ−３１６３７は、ＵＳ４，９９７，９４８の４欄３２〜５１行において開示されるように投与することができ、またロシグリタゾンは、ＥＰ０３０６２２８Ａ１の９頁３２〜４０行において開示されるように投与することができ、後者はそのマレイン酸塩として投与することが好ましい。ロシグリタゾンは、例えば、商標ＡＶＡＮＤＩＡ（商標）のもとに販売される形態として、投与することができる。トログリタゾンは、例えば、商標ＲｅＺｕｌｉｎ（商標）、ＰＲＥＬＡＹ（商標）、ＲＯＭＯＺＩＮ（商標）（英国において）またはＮＯＳＣＡＬ（商標）（日本において）のもとに販売される形態として、投与することができる。ピオグリタゾンは、ＥＰ０１９３２５６Ａ１の実施例２において開示されるように投与することができ、一塩酸塩の形態とすることが好ましい。個々の患者の必要性に対応して、ピオグリタゾンを、例えば商標ＡＣＴＯＳ（商標）のもとに販売される形態として、投与することが可能である。シグリタゾンは、例えば、ＵＳ４，２８７，２００の実施例１３において開示されるように製剤することができる。本発明のために有用である、ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）の他の活性化剤には、参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２００８／０１６２７８、ＵＳ２００５／００３８０６８、ＷＯ２００７／０６２５６８、ＷＯ２００８／００６４３２、ＷＯ２００８／０８３１２４、ＷＯ２００７／００５７８５、ＦＲ２８４６６５６、ＥＰ１７５４４８３Ａ１、ＷＯ２００６／０７１０９５Ａ１を含む、ＺｈｏｕらのＡｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａ２００９，１９６，１７５〜１９０中に記載されまた引用されている化合物が含まれる。
【００２４】
本明細書において使用される用語「組合せ製剤(combined preparation)」により、特に、上記において定義した組合せ相手（ａ）および（ｂ）を独立に投与することができるという、または、組合せ相手（ａ）および（ｂ）の顕著な量による種々の固定された組合せ剤を使用することによって、すなわち同時にもしくは異なる時点で投与することができるという意味の「パーツキット」を定義している。その場合、このパーツキットのパーツを、例えば、同時に、もしくは時系列的に時間をずらして、すなわちパーツキットの任意のパーツについて異なる時点で、また等しいもしくは異なる時間間隔で投与することができる。組合せ製剤における、投与される組合せ相手（ａ）の、組合せ相手（ｂ）に対する合計量の比率は、例えば、治療される患者の部分母集団のニーズまたは個別のニーズにうまく対処するために、変動させることができる。
【００２５】
本発明の一実施形態において、（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤化合物阻害剤は、化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ｃである。
【００２６】
本明細書において使用される用語「治療する(treating)」もしくは「治療(treatment)」は、疾患の進行の遅れをもたらす治療を含む。本明細書において使用される用語「進行の遅れ(delay of progression)」は、患者への本組合せ剤の投与が、治療される増殖性疾患の前段階もしくは初期相において行われ、その場合患者について、例えば、対応する疾患の前状態(pre-form)が診断され、あるいはそれらの患者が、例えば、医学的処置中である状態、または、事故が招いた状態であり、その事故下で対応する疾患が発現する可能性がある状態にあることを意味する。
【００２７】
本発明の一実施形態において、増殖性疾患は「固形腫瘍」である。用語「固形腫瘍(solid tumor)」は、特に乳癌、卵巣癌、大腸癌（ＣＲＣ）などの結腸の癌、および一般にＧＩ（胃腸）管、子宮頸癌、例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの肺癌、頭頚部癌、膀胱癌、例えば腎細胞癌（ＲＣＣ）などの腎臓癌、肝癌、脳癌、子宮体癌、神経内分泌腫瘍、甲状腺癌、膵癌、前立腺の癌またはカポジ肉種を意味する。
【００２８】
好ましい実施形態において、増殖性疾患は、肺癌、特にセリン／トレニオンキナーゼ１１（ＳＴＫ１１、ＬＫＢ１とも呼ばれる）における生殖細胞突然変異を媒介する肺腫瘍である。一次性ヒト肺腺癌においてＬＫＢ１の体細胞突然変異を不活性化することが報告されている。すなわち、１４４例の解析されたヒト肺腺癌および扁平細胞肉種のそれぞれ３４％および１９％でＬＫＢ１における生殖細胞突然変異が見出されている。ＬＫＢ１の機能喪失(loss-of-function)突然変異はまた、ＰＩ３Ｋおよび／またはＲＡＳ／ＭＡＰＫ経路の機能不全性不活性化とも強く協同しており、これらは肺腫瘍の一般的な変性作用である。ＬＫＢ１の機能喪失突然変異を媒介する肺腫瘍が、本発明の組合せ剤により効果的に治療されうることがここに見出されている。
【００２９】
好ましい実施形態において、増殖性疾患は、ポイツ−ジェガーズ症候群であり、これは腸管の過誤腫によって、また上皮癌の発生率の増加によって特徴付けられる。
【００３０】
本発明の他の実施形態に従って、本発明の組合せ剤により治療できる増殖性疾患には、乳癌、卵巣癌、結腸癌、膵癌、黒色腫、頭頚部癌、子宮体癌および脳癌が含まれる。
【００３１】
本発明の組合せ剤は、固形腫瘍だけでなく液状腫瘍(liquid tumor)の成長をも抑制する。その上、腫瘍の型および使用される特定の組合せ剤に応じて、腫瘍体積の減容を得ることができる。本明細書において開示される組合せ剤はまた、腫瘍の転移性広がり、および微小転移巣の成長もしくは発現を予防するのにも適合している。本明細書において開示される組合せ剤は、特に、予後の悪い患者の治療に適しており、とりわけこのような予後の悪い患者は肺腫瘍を有する。
【００３２】
分類番号、一般名および商標名により特定される本活性剤の構造は、実際の標準解説版「メルクインデックス」またはデータベース、例えばＰａｔｅｎｔｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（例えば、ＩＭＳ  Ｗｏｒｌｄ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ）から取ることができる。それらの対応する内容は、参照により本明細書に組み込まれている。
【００３３】
組合せ相手（ａ）および（ｂ）を参照する場合、薬学的に許容される塩も含まれることを意図する点は、理解されるであろう。これらの組合せ相手（ａ）および（ｂ）が、例えば、少なくとも１つの塩基中心を有する場合、それらは酸付加塩を形成することができる。所望される場合、対応してさらに塩基中心が存在する酸付加塩を形成することもできる。酸性基（例えば、ＣＯＯＨ）を有する組合せ相手（ａ）および（ｂ）は、塩基により塩を形成することもできる。組合せ相手（ａ）もしくは（ｂ）またははその薬学的に許容される塩は、水和物の形態で使用することも、あるいは晶出に用いられる他の溶媒を含むこともできる。
【００３４】
（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤化合物、および（ｂ）ビグアナイドインスリン感受性増進剤を含む組合せ剤であり、それぞれの場合、活性成分が遊離の形態で、または薬学的に許容される塩の形態で存在し、場合によって少なくとも１種の薬学的に許容される担体が存在する組合せ剤を、本明細書において以後、本発明の組合せ剤(COMBINATION OF THE INVENTION)と呼ぶであろう。
【００３５】
本発明の組合せ剤は、効力および安全性の両方について相乗的および付加的利点の両方を有する。組合せ剤のホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤化合物の治療効果は、ビグアナイドインスリン感受性増進剤を調節する化合物によって、その組合せ剤のそれぞれの成分のより低い安全投与量範囲をもたらすことができる。その上、インスリン感受性増進剤は、ＰＩ３Ｋ調節剤のシグナルに起因する血糖増加可能性を克服するのに有用である。
【００３６】
本発明の組合せ剤の薬理学的活性は、例えば、臨床試験、または本明細書において以後本質的に記述される試験手順により実証できる。適切な臨床試験は、例えば、進行した固形腫瘍を有する患者における非盲検非無作為性の用量漸増試験である。このような試験は、本発明の組合せ剤の活性成分の付加性もしくは相乗性を証明することができる。これらの試験の結果、または試験計画の変更によって、増殖性疾患への有利な効果および／またはブドウ糖恒常性を、直接測定することができ、これらはそれ自体当業者に知られていることである。これらの試験は、特に、活性成分を使用した単独療法の効果と、本発明の組合せ剤の効果とを比較するのに適している。組合せ相手（ａ）を固定用量で投与し、最大許容用量に到達するまで、組合せ相手（ｂ）の用量を漸増させるのが好ましい。
【００３７】
本発明の組合せ剤を含み増殖性疾患に対して治療的に有効である、ある量を含む医薬組成物を提供することが本発明の１つの目的である。この組成物において、組合せ相手（ａ）および（ｂ）は、１つの組合せ単位剤形としてもしくは２つの別個の単位剤形として、一緒に、１つずつ順に、もしくは別個に投与することができる。単位剤形は、固定した組合せとすることもできる。
【００３８】
本発明による医薬組成物は、それ自体知られている形で調製することができ、ヒトを含む哺乳動物（温血動物）への経口もしくは直腸などの経腸的、および非経口的（腸管外）投与に適するものである。別法として、薬剤が別々に投与される場合、一方を経腸的製剤とすることができ、また他方を非経口的に投与することができる。
【００３９】
この新規な医薬組成物は、例えば、約１０％〜約１００％、好ましくは約２０％〜約６０％の活性成分を含有する。経腸的もしくは非経口的投与のための組合せ療法向け医薬製剤は、例えば、糖被覆錠剤、錠剤、カプセル剤または座薬、またさらにアンプルなどの単位剤形のものである。他に指示されない限り、これらはそれ自体知られている形で、例えば従来の混合、造粒、糖被覆、溶解または凍結乾燥方法によって調製される。複数の剤形単位を投与することによって必要な有効量に達するので、それぞれの剤形の個々の用量中に含有される組合せ相手の単位含量は、それ自体で有効な量を構成する必要がないことが理解されるであろう。
【００４０】
経口剤形向け組成物を調製する場合、例えば散剤、カプセル剤および錠剤などの経口固体製剤の場合、任意の通常の医薬媒体、例えば、水、グリコール、油、アルコール、芳香剤、保存剤、着色剤など；またはデンプン、糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体が使用でき、固体経口製剤は液体製剤よりも好ましい。投与し易いため、錠剤およびカプセル剤は、最も有利な経口単位剤形であり、この場合固体医薬担体が明らかに使用されている。
【００４１】
特に、本発明の組合せ剤のそれぞれの組合せ相手の治療有効量は、同時にまたは逐次的に、任意の順序で投与でき、またこれらの成分は別々に、もしくは固定組合せ剤として投与できる。例えば、本発明により、増殖性疾患の進行を遅らせる、もしくは治療する方法は、（ｉ）第１の組合せ相手を、遊離の形態もしくは薬学的に許容される塩の形態で投与するステップと、（ｉｉ）同時にまたは逐次的に、任意の順序で、共同して治療有効量で、好ましくは相乗作用的に有効な量で第２の組合せ相手を遊離の形態もしくは薬学的に許容される塩の形態で投与するステップとを含むことができる。本発明の組合せ剤の個々の組合せ相手は、分割した形態もしくは単一の組合せ形態で治療の過程中に異なる時点で別々に、または同時に投与することができる。さらに、用語：投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）は、生体内でそれ自体組合せ相手に変換される、組合せ相手のプロドラッグの使用をも包含する。したがって、本発明は、全てのこのような同時治療もしくは交互治療の方式を包含するものと理解されるべきであり、用語「投与する」はそれに従って解釈されるべきである。
【００４２】
本発明の組合せ剤は、組合せ製剤または医薬組成物とすることができる。
【００４３】
さらに、本発明は、増殖性疾患を有する温血動物を治療する方法であって、前記増殖性疾患に対して治療的に有効である量で、本発明の組合せ剤をその動物に投与するステップを含む方法に関する。
【００４４】
その上、本発明は、増殖性疾患を治療するための、また増殖性疾患を治療する薬物を調製するための本発明の組合せ剤の使用に関する。
【００４５】
さらに、本発明は、増殖性疾患の進行を遅らせもしくは治療する際における、本発明の組合せ剤の同時、別個もしくは逐次使用のための指示書と一緒に、本発明の組合せ剤を活性成分として含む商業的パッケージを提供する。
【００４６】
本発明の好ましい実施形態は、
化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ｃおよびメトホルミン、
化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ｃおよびフェンホルミン、
化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ｃおよびピオグリタゾン、
化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ｃおよびリボグリタゾン、
化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ｃおよびロシグリタゾン、
化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ｃおよびシグリタゾン、
化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ｃおよびダルグリタゾン、
化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ｃおよびエングリタゾン、
を含む組合せ剤によって表される。
【００４７】
さらなる態様において、本発明は、
同時、別個もしくは逐次使用向けの組合せ剤であって、（ａ）本発明の組合せ剤であり、活性成分が、それぞれの場合遊離の形態もしくは薬学的に許容される塩もしくは任意のその水和物の形態で存在する組合せ剤と、場合によって少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む組合せ剤；
増殖性疾患に対して共同して治療的に有効である、ある量の本発明の組合せ剤と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物；
増殖性疾患を治療するための本発明の組合せ剤の使用；
増殖性疾患を治療する薬物を調製するための本発明の組合せ剤の使用；
ＰＩ３Ｋ阻害剤が化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ｃから選択される組合せ剤、本発明の組合せ剤の使用；
ビグアナイドインスリン感受性増進剤化合物が、ビグアナイド、例えばメトホルミンまたはフェンホルミンである、本発明の組合せ剤の使用；
ビグアナイドインスリン感受性増進剤化合物が、グリタゾン、例えば、ピオグリタゾン、リボグリタゾン、ロシグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾンである、本発明の組合せ剤の使用
を提供する。
【００４８】
さらに、特に、本発明は、（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤化合物の１種または複数の単位剤形、および（ｂ）ビグアナイドインスリン感受性増進剤化合物を含む組合せ製剤に関する。
【００４９】
その上、特に、本発明は、増殖性疾患を治療し、かつ／またはＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の阻害に起因する血糖増加可能性を克服する薬物を調製するための（ａ）ホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤化合物、および（ｂ）ビグアナイドインスリン感受性増進剤化合物を含む組合せ剤の使用に関する。
【００５０】
本発明の組合せ剤において使用されるそれぞれの組合せ相手の有効な投与量は、使用される特定の化合物もしくは医薬組成物、投与の方式、治療される状態、治療される状態の重症度に応じて変動しうる。したがって、本発明の組合せ剤の投与計画は、投与経路ならびに患者の直腸および肝臓機能を含む様々な因子に従って選択される。通常の熟練を有する医師、臨床家または獣医師は、病状の進行を抑制、反撃もしくは阻止するために必要な活性成分の単独有効量を容易に決定および処方することができる。毒性がなく効力をもたらす範囲内にある活性成分濃度を達成する最適な精度は、目標部位への活性成分利用可能性の動態学に基づいた投与計画を必要とする。
【００５１】
本発明の組合せ剤に用いられる組合せ相手を、単一薬剤として販売される形態で使用する場合、本明細書において他に言及されない限り、本明細書において記述される有益な効果をもたらすため、それぞれの販売される薬剤の包装挿入紙上に提供される情報に従って、それらの投与量および投与方式を実施することができる。
【００５２】
化合物Ａは、約２５〜１６００ｍｇ／日変動する投与量範囲でヒトに投与できる。
化合物Ｂは、約２．５〜１５０ｍｇ／３回／週または２．５〜７５ｍｇ／日変動する投与量範囲でヒトに投与できる。
化合物Ｃは、約１２．５〜６００ｍｇ／日変動する投与量範囲でヒトに投与できる。
メトホルミンは、例えば８５０ｍｇ／２回／日ヒトに投与できる。
【００５３】
本発明の組合せ剤の有益な効果は、関連技術の技術者にそれ自体知られている他の試験モデルによっても測定することができる。
【００５４】
下記の実施例は、例示として提供され、本発明の範囲を限定する意図のものではない。本教示の精神および本質的特性から逸脱せずに、本明細書において記述されているものの変更、修正および他の実施が、当業者に対し生じるであろう。その中で言及される細胞系は、それらが単に代表的なものであり、それらが代表的である異なる細胞系および腫瘍細胞で置き換えることができるので、本発明の範囲を限定するとは考えられない。したがって、本発明の範囲は、先行する例示的記述によってでなく、代わりに下記の特許請求範囲によって画定されるべきであり、この特許請求の範囲の意味および等価性の範囲内に納まる全ての変更は、その中に包含されることを意図するものである。
【実施例１】
【００５５】
乳癌細胞系パネルにおけるＡＭＰＫおよびＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲの二重目標設定
ＭＣＦ−７（ＨＥＲ２）、ＳＫ−ＢＲ−３、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞を、種々の用量の、化合物Ａとしても知られる２−メチル−２−［４−（３−メチル−２−オキソ−８−キノリン−３−イル−２，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−フェニル］−プロピオニトリル、メトホルミン、または組み合わせた両方の薬剤で処理している。リン酸化ならびに全ＡＭＰＫ、ＭＡＰＫ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＳ６リボソームタンパク質のレベルを、ウエスタンブロットにより評価している。細胞増殖性解析は、ＷＳＴ−１およびクリスタルバイオレット比色アッセイを使用して３回行っている。
【００５６】
メトホルミンは、図１および２において例示するように、ＭＣＦ−７（ＨＥＲ２）、ＳＫ−ＢＲ−３、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞系の用量依存性成長抑制を誘起する。図２において例示するように、化合物Ａにメトホルミンを加えたものの組合せ処理は、いずれの単独処理よりも大きい細胞増殖阻害効果をもたらす。メトホルミンはＡＭＰＫを活性化して、ｍＴＯＲＣ１活性を低下させ、またｐ−Ｓ６リボソームタンパク質のレベルを低下させる。メトホルミンによる処理は、受容体チロシンキナーゼ（ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２）発現の減少およびｐ−ＭＡＰＫの減少にも関連している。化合物Ａは、ｐ−ＡＫＴおよびｐ−Ｓ６を著しく減少させる。しかし、他のｍＴＯＲ阻害剤について記述されるように、化合物Ａは、ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２を含むいくつかの受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のトランス活性化によりＭＡＰＫリン酸化を増進させる。図３に例示されるように、メトホルミンは、おそらくＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２を下方制御することによって、化合物Ａにより誘発されるＭＡＰＫ経路のトランス活性化を妨げる。このデータは、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２を過剰発現する細胞において、メトホルミンをＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせることの根拠を提供する。
【００５７】
メトホルミンおよび化合物Ａの組合せ剤は、ＥＧＦＲ活性およびＨＥＲ２活性乳癌細胞系の成長を阻害する。本発明者らは、乳癌において、強い抗腫瘍効果を顕現させるために、ＡＭＰＫ経路およびＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の両方に目標を絞ることの根拠を提供している。
【実施例２】
【００５８】
ヌードマウス異種移植モデルにおけるＡ５４９非小細胞肺腫瘍へのＰＩ３Ｋ阻害剤とメトホルミンとの組合せ効果
Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞を、種々の用量の２−メチル−２−［４−（３−メチル−２−オキソ−８−キノリン−３−イル−２，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−フェニル］−プロピオニトリルモノトシレート塩（化合物Ａとしても知られる）もしくは５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン塩酸塩（化合物Ｃとしても知られる）、単一用量のメトホルミン、または組み合わせた両方の薬剤で処理している。Ａ５４９ヒトＮＳＣＬＣ細胞（ＡＴＣＣ−ＣＣＬ−１８５：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、メリーランド州、米国、から入手可能）は、ＩＩ型肺胞上皮細胞の特性を示す（Ｌｉｅｂｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１７（１）：６２〜７０［１９７６］）。Ａ５４９ＮＳＣＬＣ細胞は、腫瘍抑制遺伝子ＣＤＫＮ２ＡおよびＳＴＫ１１（ＬＫＢ１とも呼ばれる）中の、またＫＲＡＳ中の突然変異について同型接合性(homozygous)である。（Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｔｒｕｓｔ  Ｓａｎｇｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ：Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ｏｆ  Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ、Ｃｏｓｍｉｃ  ＩＤ  Ｎｏ．９０５９４９、ウエブサイト：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ｐｅｒｌ／ｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＣＧＰ／ｃｏｒｅ＿ｌｉｎｅ＿ｖｉｅｗｅｒ？ａｃｔｉｏｎ＝ｓａｍｐｌｅ＆ｎａｍｅ＝Ａ５４９で入手可能である）。
【００５９】
Ａ５４９腫瘍細胞は、ペニシリンＧナトリウム１００単位／ｍＬ、ストレプトマイシン硫酸塩１００μｇ／ｍＬ、ゲンタマイシン２５μｇ／ｍＬ、１００％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミンおよび１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含有するＫａｉｇｈｎ修正Ｈａｍ’ｓＦ１２培地で成長させる。これらの細胞は、ＣＯ２５％および空気９５％の雰囲気において、３７℃の加湿インキュベータ内の組織培養フラスコ中で培養される。細胞は、９週齢のメスｎｕ／ｎｕ（ヌード）マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、インディアナポリス、インディアナ州）に注射するため、トリプシンにより２回、単層をはがすことにより収集し、マトリゲル(Matrigel)５０％を含有する冷リン酸塩緩衝食塩水中に細胞５×１０７個／ｍＬで再懸濁させる。
【００６０】
０．２ｍＬのＡ５４９細胞懸濁液（細胞１×１０７個）を、試験１日目に体重（ＢＷ）範囲１９．９〜２７．３ｇを有する、９週齢のメスｎｕ／ｎｕ（ヌード）マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、インディアナポリス、インディアナ州）の右脇腹に皮下注射する。腫瘍平均体積１５０〜２２０ｍｍ３に近付くと、それらの成長をモニターするため、腫瘍の２か所の寸法をカリパスで測る。移植２２日後、マウスを、個別の腫瘍サイズ１０８〜２２１ｍｍ３を有する８もしくは９匹の１１群に分類する。式［（幅）２×（長さ）］／２（式中、幅＝ｍｍによる腫瘍の幅および長さ＝ｍｍによる腫瘍の長さ）を使用して、ｍｍ３による腫瘍体積を測定する。腫瘍重量は、１ｍｇが腫瘍体積１ｍｍ３に等しいとの仮定により推定することができる。
【００６１】
１１群のヌードマウスを下記のように治療する。マウス９匹の１群は、全ての解析についての対照標準（Ｃまたは対照）の役割を果たし、ｐＨ４で５０ｍＭ酢酸ナトリウム（媒体１）を腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、次いでＮ−メチルピロリドン１０％：ポリエチレングリコール３００（ＰＥＧ３００）９０％を含む組成物（媒体２）を経口胃管栄養法（ｐ．ｏ．）により投与する。メトホルミン（メトホルミン塩酸塩、Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ）単独療法による全ての治療剤は、結果表１において提供されるように、本試験の終了まで単回用量メトホルミン１９２．３ｍｇ／ｋｇで毎日１回腹腔内（ｉ．ｐ．）投与される。メトホルミンは、投与のためｐＨ４で５０ｍＭ酢酸ナトリウム中に溶解される。
【００６２】
化合物Ａまたは化合物Ｃ単独療法についての全ての治療剤は、結果表１において提供されるように、本試験の終了まで種々の用量で毎日１回経口胃管栄養法（ｐ．ｏ．）により投与される。化合物Ａおよび化合物Ｃは、光から保護し−２０℃で貯蔵される。１００％Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）中の貯蔵溶液（１０倍）を５日ごとに調製し、分取し、室温で暗所に貯蔵する。それぞれの治療日に、貯蔵溶液分取物を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ３００）で希釈して、１０％ＮＭＰ：９０％ＰＥＧ３００中の配合された薬剤（化合物Ａまたは化合物Ｃ）を提供する。投与用溶液は光から保護され、また配合された薬剤は、調製後１時間以内に投与される。
【００６３】
組合せ療法のため、化合物Ａまたは化合物Ｃは、メトホルミンの腹腔内（ｉ．ｐ．）投与後３０分以内に、経口胃管栄養法（ｐ．ｏ．）により投与されるが、２０日目には、化合物Ａまたは化合物Ｃは、メトホルミンの直後に与えられる。化合物Ａ、化合物Ｃおよびメトホルミンは、上記において単独療法について開示されるように、また結果表１において開示されるように調製および投与される。
【００６４】
パクリタキセル（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、Ｂｅｖｅｒｌｙ、マサチューセッツ州、米国）が、５回の投与について、１日おきに１日１回、大量瞬時尾静脈注射（ｉ．ｖ．）により投与される。パクリタキセルは、エタノール５０％およびＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ５０％中に溶解されて、１０倍貯蔵溶液を調製し、室温で貯蔵される。それぞれの投与日に、パクリタキセルの貯蔵溶液分取物を、水中５％デキストロースで希釈して、エタノール５％およびＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ５％を含有する投与用溶液を提供する。
【００６５】
全ての群において、前回のＢＷが繰り越される週末を除いて、投与日に測定されるそれぞれの動物の体重に合わせて、投与体積が１０ｍＬ／ｋｇ（０．２ｍＬ／２０ｇマウス）により定められる。最大許容投与量（ＭＴＤ）について許容できる毒性は、試験中の群平均ＢＷ損失１５％未満、および治療関連の死亡率せいぜい１０％として定義される。３回連続測定で１５％を超えるＢＷ減少のある、または１回測定で２０％を超えるＢＷ減少のある任意の動物は、安楽死させるように計画されている。
【００６６】
Ａ５４９細胞において腫瘍成長阻害についての短期間の効力は、２０日目に測定され、この日は、対照標準の平均腫瘍体積が、ほとんど５００ｍｍ３の終点に達する日である。２０日目までに、腫瘍が終点まで進行するものはなかったが、２０日目以前に動物６匹が死亡した。２０日目に試験に残ったそれぞれの動物について、１日目（投与の開始）と終点日との間の腫瘍体積差を測定することによって、統計的および図上解析を行った。抗腫瘍活性をＴ／Ｃ％（治療群についての終点日と１日目の間の平均腫瘍体積変化を、対照標準に対して比較する）、またはＴ／Ｔ０％（治療群についての終点日と１日目の間の平均腫瘍体積変化を、実験開始におけるその群の腫瘍体積（Ｔ０）に対して比較する）で表している。Ｔ／Ｃ≦４０％は、一般に、治療的に活性である可能性を示している。部分回帰により、試験の間、３回連続測定について、腫瘍体積は、その開始体積の５０％以下であり、またこれらの３回測定の１回もしくは複数について１３．５ｍｍ３以上であったことが示されている。完全回帰により、試験が経過する間に、腫瘍体積が、３回連続測定について１３．５ｍｍ３未満になったことが示される。
【００６７】
結果表１は、標準的２０日実験について、Ａ５４９腫瘍についての結果を要約している。１９２．３ｍｇ／ｋｇでのメトホルミン単独療法は、２０日腫瘍成長阻害アッセイにおけるＡ５４９ヒトＮＳＣＬＣ異種移植モデルにおいて活性であるようには見えなかった。パクリタキセルへの応答は、この異種移植モデルについて報告された従来の結果と一致している。
【００６８】
化合物Ｃ３２．７ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、対照標準と比較してＴ／Ｔ０−１７％および有意なメジアン（中央値）腫瘍縮小（ｐ＜０．０１）をもたらしているが、化合物Ｃ単独療法と比較して、非有意的な改善を示している。化合物Ｃ３２．７ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療はさらに、メトホルミン単独療法と比較して有意なメジアン腫瘍縮小（ｐ＜０．００１）をもたらしている。化合物Ｃ５４．４にメトホルミンを加えたものによる組合せ治療は、毒性のため初期に終了させた。
【００６９】
化合物Ａ４１．１ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、対照標準と比較して、有意な腫瘍縮小（ｐ＜０．００１）と共にＴ／Ｔ０−２７％をもたらしているが、化合物Ａ単独療法と比較して、非有意的な改善を示している。化合物Ａ４１．１ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療はさらに、有意なメジアン腫瘍縮小をもたらしている。化合物Ａ６８．５ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものによる組合せ治療は、対照標準と比較してＴ／Ｔ０−３０％をもたらしている。この組合せは、マウス８匹の群の中で１匹の死亡が、死亡率限界１０％を超えた後は、評価できなかった。
【００７０】
化合物Ａにメトホルミンを加えたものおよび化合物Ｃにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、ヒトＮＳＣＬＣ細胞株の成長を阻害する。化合物Ａにメトホルミンを加えたものおよび化合物Ｃにメトホルミンを加えたものの組合せ治療により、対照標準および／またはメトホルミン単独療法と比較して、ヒトＮＳＣＬＣ細胞系の成長阻害性が改善される状態にあることが実証されている。
【００７１】
【表１−１】
2012526772.tif 000004
【表１−２】
2012526772.tif 000005
【実施例３】
【００７２】
ヌードマウス異種移植モデルにおけるＨ５２０非小細胞肺腫瘍へのＰＩ３Ｋ阻害剤とメトホルミンとの組合せ効果
ＥＧＦＲゼロのＨ５２０ヒト非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞を、種々の用量の２−メチル−２−［４−（３−メチル−２−オキソ−８−キノリン−３−イル−２，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−フェニル］−プロピオニトリルモノトシレート塩（化合物Ａとしても知られる）もしくは５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン塩酸塩（化合物Ｃとしても知られる）、単一用量のメトホルミン、または組み合わせた両方の薬剤で処理している。Ｈ５２０ヒトＮＳＣＬＣ細胞（ＮＣｌ−Ｈ５２０、ＡＴＣＣ−ＨＴＢ−１８２：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、メリーランド州、米国、から入手可能）は、肺の扁平上皮癌を有する患者から採取した肺塊の試料から分離している（Ｂａｎｋｓ−Ｓｃｈｌｅｇｅｌら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，４５（３）：１１８７〜１１９７（１９８５））。
【００７３】
Ｈ５２０腫瘍細胞は、ペニシリンＧナトリウム１００単位／ｍＬ、ストレプトマイシン硫酸塩１００μｇ／ｍＬおよびゲンタマイシン２５μｇ／ｍＬを含有するＲＰＭＩ  １６４０培地で成長させる。培地は、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミンおよび１ｍＭピルビン酸ナトリウムを補充し、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび０．０７５％重炭酸ナトリウムで緩衝させている。これらの細胞は、ＣＯ２５％および空気９５％の雰囲気において、３７℃の加湿インキュベータ内の組織培養フラスコ中で培養される。細胞は、８週齢のメスｎｕ／ｎｕ（ヌード）マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、インディアナポリス、インディアナ州）に注射するため、トリプシンにより１回単層をはがすことにより収集し、マトリゲル５０％を含有するリン酸塩緩衝食塩水中に細胞５×１０７個／ｍＬで再懸濁させる。
【００７４】
０．２ｍＬのＨ５２０腫瘍細胞懸濁液（細胞１×１０７個）を、試験の１日目に体重（ＢＷ）範囲１８．１〜２６．９ｇを有する、８週齢のメスｎｕ／ｎｕ（ヌード）マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、インディアナポリス、インディアナ州）の右脇腹に皮下注射する。腫瘍を週に２回モニターし、次いでそれらの平均体積が１２０〜１８０ｍｍ３に近付くと毎日モニターする。移植８日後、マウスを、個別の腫瘍サイズ１２６〜１９６ｍｍ３、および群平均腫瘍サイズ１５１〜１５３ｍｍ３を有する８匹のマウスの１１群に分類する。式［（幅）２×（長さ）］／２（式中、幅＝ｍｍによる腫瘍の幅および長さ＝ｍｍによる腫瘍の長さ）を使用して、ｍｍ３による腫瘍体積を測定する。腫瘍重量は、１ｍｇが腫瘍体積１ｍｍ３に等しいとの仮定により推定することができる。
【００７５】
１１群のヌードマウスを下記のように治療する。マウス８匹の１群は、全ての解析についての対照標準（Ｃまたは対照）の役割を果たし、ｐＨ４で５０ｍＭ酢酸ナトリウム（媒体１）を腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、次いでＮ−メチルピロリドン１０％：ポリエチレングリコール３００（ＰＥＧ３００）９０％を含む組成物（媒体２）を経口胃管栄養法（ｐ．ｏ．）により投与する。メトホルミン（メトホルミン塩酸塩、Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ）単独療法による全ての治療剤は、結果表２において提供されるように、試験の終了まで単回用量メトホルミン１９２．３ｍｇ／ｋｇが１日１回腹腔内（ｉ．ｐ．）投与される。メトホルミンは、投与のためｐＨ４で５０ｍＭ酢酸ナトリウム中に溶解される。
【００７６】
化合物Ａまたは化合物Ｃ単独療法についての全ての治療剤は、結果表２において提供されるように、試験の終了まで種々の用量で毎日１回経口胃管栄養法（ｐ．ｏ．）により投与される。化合物Ａは−２０℃で貯蔵される。化合物Ｃは、光から保護し−２０℃で貯蔵される。１００％Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）中の貯蔵溶液（１０倍）を５日ごとに調製し、分取し、室温で暗所に貯蔵する。それぞれの治療日に、貯蔵溶液分取物を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ３００）で希釈して、１０％ＮＭＰ：９０％ＰＥＧ３００中の配合された薬剤（化合物Ａまたは化合物Ｃ）を提供する。投与用溶液は光から保護され、また配合された薬剤は、調製後１時間以内に投与される。
【００７７】
組合せ療法のため、化合物Ａまたは化合物Ｃは、メトホルミンの腹腔内（ｉ．ｐ．）投与後３０分以内に、経口胃管栄養法（ｐ．ｏ．）により投与されるが、２０日目には、化合物Ａまたは化合物Ｃは、メトホルミンの直後に与えられる。化合物Ａ、化合物Ｃおよびメトホルミンは、上記において単独療法について開示されるように、また結果表２において開示されるようにそれぞれ調製および投与される。
【００７８】
パクリタキセル（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、Ｂｅｖｅｒｌｙ、マサチューセッツ州、米国）が、５回の投与について、１日おきに１日１回、大量瞬時尾静脈注射（ｉ．ｖ．）により投与される。パクリタキセルは、エタノール５０％およびＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ５０％中に溶解されて、１０倍貯蔵溶液を調製し、室温で貯蔵される。それぞれの投与日に、パクリタキセルの貯蔵溶液分取物を、水中５％デキストロースで希釈して、エタノール５％およびＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ５％を含有する投与用溶液を提供する。
【００７９】
全ての群において、前回のＢＷが繰り越される週末を除いて、投与日に測定されるそれぞれの動物の体重に合わせて、投与体積が１０ｍＬ／ｋｇ（０．２ｍＬ／２０ｇマウス）により定められる。最大許容投与量（ＭＴＤ）について許容できる毒性は、試験中の群平均ＢＷ損失１５％未満、および治療関連の死亡率が動物１０匹の中でせいぜい１匹として定義される。３回連続測定で１５％を超えるＢＷ減少のある、または１回測定で２０％を超えるＢＷ減少のある任意の動物は、安楽死させるように計画されている。
【００８０】
Ｈ５２０細胞における腫瘍成長阻害についての短期間の効力は、２０日目に測定され、この日は、対照標準の平均腫瘍体積が、ほとんど１０００ｍｍ３の終点に達する日である。２０日目までに、腫瘍が終点まで進行するものはなかったが、２０日目以前に動物１６匹が死亡もしくは安楽死されている。試験２０日目に残ったそれぞれの動物について、１日目（投与の開始）と終点日との間の腫瘍体積差を測定することによって、統計的および図上解析を行った。抗腫瘍活性をＴ／Ｃ％（治療群についての終点日と１日目の間の平均腫瘍体積変化を、対照標準に対して比較する）で表している。Ｔ／Ｃ≦４０％は、治療的に活性である可能性があるものと分類される。部分回帰により、試験の間、３回連続測定について、腫瘍体積が、その開始体積の５０％以下であり、またこれらの３回測定の１回もしくは複数について１３．５ｍｍ３以上であったことが示されている。完全回帰により、試験が経過する間に、腫瘍体積が、３回連続測定について１３．５ｍｍ３未満になったことが示される。
【００８１】
結果表２は、標準的な２０日実験について、Ｈ５２０腫瘍についての結果を要約している。１９２．３ｍｇ／ｋｇでのメトホルミン単独療法は、２０日腫瘍成長阻害アッセイにおけるＨ５２０ヒトＮＳＣＬＣ異種移植モデルにおいて腫瘍成長を調節することはないように見える。３０ｍｇ／ｋｇでのパクリタキセル単独療法は、対照標準と比較してＴ／Ｃ５％および統計的に有意なメジアン腫瘍縮小（ｐ＜０．００１）をもたらした。
【００８２】
化合物Ｃ３２．７ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、Ｔ／Ｃ６２％をもたらしたが、死亡２匹のため統計的に評価できなかった。化合物Ｃ５４．４ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、Ｔ／Ｃ１２５％をもたらしたが、死亡５匹のため統計的に評価できなかった。
【００８３】
化合物Ａ４１．１ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、Ｔ／Ｃ６０％をもたらした。これは、改善された成長阻害性を示すが、対照標準と比較して、統計的に有意ではない。化合物Ａ６８．５ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、Ｔ／Ｃ３６％をもたらした。これは、対応する化合物Ａ単独療法に優る改善である。６８．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ組合せ治療および単独治療についての結果は、３匹の死亡のため統計的に評価できなかった。
【００８４】
化合物Ａにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、ヒトＮＳＣＬＣ細胞系の成長を阻害する。化合物Ａにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、対照標準および化合物Ａ単独療法と比較して、ヒトＮＳＣＬＣ細胞系の成長阻害性を改善したことが実証されている。このＨ５２０異種移植モデルでは、メトホルミンは、化合物Ａおよび／または化合物Ｃの毒性を増加させる可能性がありうる。
【００８５】
【表２−１】
2012526772.tif 000006
【表２−２】
2012526772.tif 000007
【実施例４】
【００８６】
ヌードマウスにおけるＨ４６０非小細胞肺腫瘍へのＰＩ３Ｋ阻害剤とメトホルミンとの組合せ効果
Ｈ４６０ヒト非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞を、種々の用量の２−メチル−２−［４−（３−メチル−２−オキソ−８−キノリン−３−イル−２，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−フェニル］−プロピオニトリルモノトシレート塩（化合物Ａとしても知られる）もしくは５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン塩酸塩（化合物Ｃとしても知られる）、単一用量のメトホルミン、または組み合わせた両方の薬剤で処理している。Ｈ４６０ヒトＮＳＣＬＣ細胞（ＮＣｌ−Ｈ４６０、ＡＴＣＣ−ＨＴＢ−１７７：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、メリーランド州、米国、から入手可能）は、肺の大細胞癌を有する患者の複数の流体から由来している。
【００８７】
Ｈ４６０腫瘍細胞は、ペニシリンＧナトリウム１００単位／ｍＬ、ストレプトマイシン硫酸塩１００μｇ／ｍＬおよびゲンタマイシン２５μｇ／ｍＬを含有するＲＰＭＩ  １６４０培地内で成長させる。培地には、１０％ウシ胎児血清、および２ｍＭグルタミンを補充している。これらの細胞は、ＣＯ２５％および空気９５％の雰囲気において、３７℃の加湿インキュベータ内の組織培養フラスコ中で培養される。細胞は、９週齢のメスｎｕ／ｎｕ（ヌード）マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、インディアナポリス、インディアナ州）に注射するため、トリプシンにより２回単層をはがすことにより収集し、リン酸塩緩衝食塩水中に細胞５×１０７個／ｍＬで再懸濁させる。
【００８８】
０．２ｍＬのＨ４６０腫瘍細胞懸濁液（細胞１×１０７個）を、試験の１日目に体重（ＢＷ）範囲１８．１〜２６．９ｇを有する、９週齢のメスｎｕ／ｎｕ（ヌード）マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、インディアナポリス、インディアナ州）の右脇腹に皮下注射する。腫瘍を週に２回モニターし、次いでそれらの平均体積が１００〜１５０ｍｍ３に近付くと毎日モニターする。移植１０日後、マウスを、個別の腫瘍サイズ７５〜１９６ｍｍ３、および群平均腫瘍サイズ１１９〜１２２ｍｍ３を有する８匹のマウスの１１群に分類する。式［（幅）２×（長さ）］／２（式中、幅＝ｍｍによる腫瘍の幅および長さ＝ｍｍによる腫瘍の長さ）を使用して、ｍｍ３による腫瘍体積を測定する。腫瘍重量は、１ｍｇが腫瘍体積１ｍｍ３に等しいとの仮定により推定することができる。
【００８９】
１１群のヌードマウスを下記のように治療する。マウス８匹の１群は、全ての解析についての対照標準（Ｃまたは対照）の役割を果たし、ｐＨ４で５０ｍＭ酢酸ナトリウム（媒体１）を腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、次いでＮ−メチルピロリドン１０％：ポリエチレングリコール３００（ＰＥＧ３００）９０％を含む組成物（媒体２）を経口胃管栄養法により（ｐ．ｏ．）投与する。メトホルミン（メトホルミン塩酸塩、Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ）単独療法による全ての治療は、結果表３において提供されるように、試験の終了まで単回用量メトホルミン１９２．３ｍｇ／ｋｇが毎日１回腹腔内（ｉ．ｐ．）投与される。メトホルミンは、投与のためｐＨ４で５０ｍＭ酢酸ナトリウム中に溶解される。
【００９０】
化合物Ａまたは化合物Ｃ単独療法についての全ての治療は、結果表３において提供されるように、試験の終了まで種々の用量で毎日１回経口胃管栄養法（ｐ．ｏ．）により投与される。化合物Ａは−２０℃で貯蔵される。化合物Ｃは、光から保護し−２０℃で貯蔵される。１００％Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）中の貯蔵溶液（１０倍）を５日ごとに調製し、分取し、室温で暗所に貯蔵する。それぞれの治療日に、貯蔵溶液分取物を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ３００）で希釈して、１０％ＮＭＰ：９０％ＰＥＧ３００中の配合された薬剤（化合物Ａまたは化合物Ｃ）を提供する。投与用溶液は光から保護され、また配合された薬剤は、調製後１時間以内に投与される。
【００９１】
組合せ療法のため、化合物Ａまたは化合物Ｃは、メトホルミンの腹腔内（ｉ．ｐ．）投与後３０分以内に、経口胃管栄養法（ｐ．ｏ．）により投与されるが、２０日目には、化合物Ａまたは化合物Ｃは、メトホルミンの直後に与えられる。化合物Ａ、化合物Ｃおよびメトホルミンは、上記において単独療法について開示されるように、また結果表３において開示されるようにそれぞれ調製および投与される。
【００９２】
パクリタキセル（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、Ｂｅｖｅｒｌｙ、マサチューセッツ州、米国）が、５回の投与について、１日おきに１日１回、大量瞬時尾静脈注射（ｉ．ｖ．）により投与される。パクリタキセルは、エタノール５０％およびＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ５０％中に溶解されて、１０倍貯蔵溶液を調製し、室温で貯蔵される。それぞれの投与日に、パクリタキセルの貯蔵溶液分取物を、水中５％デキストロースで希釈して、エタノール５％およびＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ５％を含有する投与用溶液を提供する。
【００９３】
全ての群において、前回のＢＷが繰り越される週末を除いて、投与日に測定されるそれぞれの動物の体重に合わせて、投与体積が１０ｍＬ／ｋｇ（０．２ｍＬ／２０ｇマウス）により定められる。最大許容投与量（ＭＴＤ）について許容できる毒性は、試験中の群平均ＢＷ損失１５％未満、および治療関連の死亡率が動物１０匹の中でせいぜい１匹として定義される。３回連続測定で１５％を超えるＢＷ減少のある、または１回測定で２０％を超えるＢＷ減少のある任意の動物は、安楽死させるように計画されている。
【００９４】
Ｈ４６０細胞における腫瘍成長阻害についての短期間の効力は、１２日目に測定され、この日は、対照標準の平均腫瘍体積が、ほとんど１０００ｍｍ３の終点に達する日である。試験１２日目に残ったそれぞれの動物について、１日目（投与の開始）と終点日との間の腫瘍体積差を測定することによって、統計的および図上解析を行った。抗腫瘍活性をＴ／Ｃ％（治療群についての終点日と１日目の間の平均腫瘍体積変化を、対照標準に対して比較する）で表している。Ｔ／Ｃ≦４０％は、治療的に活性である可能性があるものと分類される。部分回帰により、試験の間、３回連続測定について、腫瘍体積が、その開始体積の５０％以下であり、またこれらの３回測定の１回もしくは複数について１３．５ｍｍ３以上であったことが示されている。完全回帰により、試験が経過する間に、腫瘍体積が、３回連続測定について１３．５ｍｍ３未満になったことが示される。
【００９５】
結果表３は、標準的な１２日実験について、Ｈ４６０腫瘍についての結果を要約している。１９２．３ｍｇ／ｋｇでのメトホルミン単独療法は、１２日腫瘍成長阻害アッセイにおけるＨ４６０ヒトＮＳＣＬＣ異種移植モデルにおいて腫瘍成長に影響を及ぼすようには見えなかった。パクリタキセルへの応答は、この異種移植モデルについて報告された従来の結果と一致している。
【００９６】
化合物Ａ４１．１ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、対照標準と比較してＴ／Ｃ１９％で、統計的に有意な、改善された腫瘍成長の阻害をもたらしている（Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓおよびｐｏｓｔ−ｈｏｃ  Ｄｕｎｎの多重比較検定で解析した場合ｐ＜０．０５、ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定によるＡＮＯＶＡで解析した場合ｐ＜０．０１）。化合物Ａ４１．１ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療はさらに、メトホルミン単独療法と比較して１９％で、統計的に有意な、改善された腫瘍成長の阻害をもたらし（ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定によるＡＮＯＶＡで解析した場合ｐ＜０．０１）、また化合物Ａ単独療法に優る、統計的には有意ではない改善をもたらしている。化合物Ａ６８．５ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、対照標準と比較してＴ／Ｃ３１％で、改善された腫瘍成長の阻害をもたらしている。化合物Ａ６８．５ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、さらに、メトホルミン単独療法と比較して３１％で、統計的に有意な、改善された腫瘍成長の阻害をもたらし（ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定によるＡＮＯＶＡで解析した場合ｐ＜０．０１）、化合物Ａ単独療法に優る改善ではない。
【００９７】
化合物Ｃ３２．７ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、対応する化合物Ｃ単独療法と比較して、Ｔ／Ｃ５９％で、腫瘍成長の阻害性を改善しなかった。化合物Ｃ５４．４ｍｇ／ｋｇにメトホルミンを加えたものの組合せ治療は、毒性のため初期に終了させた。
【００９８】
化合物Ａにメトホルミンを加えた組合せ剤は、ヒトＮＳＣＬＣ細胞系の成長を阻害する。化合物Ａにメトホルミンを加えた組合せ治療は、対照標準、メトホルミン単独療法および化合物Ａ単独療法と比較して、ヒトＮＳＣＬＣ細胞系の成長阻害性を改善したことが実証されている。しかし、このＨ４６０異種移植モデルでは、メトホルミンは、化合物Ｃと組み合わせて効力または耐容性(tolerability)を増進することはないように見える。
【００９９】
【表３−１】
2012526772.tif 000008
【表３−２】
2012526772.tif 000009
【図１】
2012526772.tif 000010
【図２】
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【図３】
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