(57)【要約】本開示により、外因性標的分子に結合する多価架橋剤、およびコンジュゲート枠組構造に結合された２つ以上の個別の親和性リガンドを含むコンジュゲートを含む架橋物質体であって、該２つ以上の親和性リガンドは、該架橋剤との結合に関して該外因性標的分子と競合し、異なるコンジュゲート上の親和性リガンドと該架橋剤間の非共有結合性相互作用の結果、該物質体内で該コンジュゲートが架橋される架橋物質体を提供する。また、該コンジュゲートは薬物も含む。
2012516339.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
外因性標的分子に結合する多価架橋剤、および
薬物と、コンジュゲート枠組構造に結合された２つ以上の個別の親和性リガンドとを含むコンジュゲートを含む架橋物質体であって、
該２つ以上の親和性リガンドは、該架橋剤との結合に関して該外因性標的分子と競合し、異なるコンジュゲート上の親和性リガンドと該架橋剤間の非共有結合性相互作用の結果、該物質体内で該コンジュゲートが架橋される、
架橋物質体。
【請求項２】
外因性標的分子が糖質を含む、請求項１に記載の物質体。
【請求項３】
外因性標的分子がα−メチル−マンノースである、請求項２に記載の物質体。
【請求項４】
コンジュゲートの親和性リガンドが糖質を含む、請求項２に記載の物質体。
【請求項５】
コンジュゲートの親和性リガンドが、グルコース、マンノース、グルコサミン、マンノサミン、メチルグルコース、メチルマンノース、エチルグルコース、およびエチルマンノースから選択される糖質を含む、請求項４に記載の物質体。
【請求項６】
コンジュゲートの親和性リガンドが、ビマンノースまたはトリマンノースを含む、請求項４に記載の物質体。
【請求項７】
コンジュゲートの親和性リガンドが、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルビマンノース（ＡＥＢＭ）またはアミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）を含む、請求項４に記載の物質体。
【請求項８】
コンジュゲートの親和性リガンドが、糖質とリンカーを含み、該糖質が該リンカーにアノマー炭素を介して共有結合されている、請求項４に記載の物質体。
【請求項９】
アノマー炭素がαアノマーである、請求項８に記載の物質体。
【請求項１０】
多価架橋剤がポリペプチドを含む、請求項１に記載の物質体。
【請求項１１】
多価架橋剤がレクチンを含む、請求項１０に記載の物質体。
【請求項１２】
レクチンがＣｏｎ  Ａレクチンである、請求項１１に記載の物質体。
【請求項１３】
レクチンが化学修飾されている、請求項１１に記載の物質体。
【請求項１４】
レクチンがペグ化されている、請求項１３に記載の物質体。
【請求項１５】
レクチンが認識エレメントに共有結合されており、該認識エレメントは、外因性の標的分子および該コンジュゲートの親和性リガンドと、レクチンに対する結合に関して競合するものであり、該レクチンは、該認識エレメントに対してよりも該コンジュゲートの親和性リガンドに対して高い親和性を有するものである、請求項１３に記載の物質体。
【請求項１６】
外因性標的分子が糖質であり、該コンジュゲートの親和性リガンドと認識エレメントがどちらも糖質を含む、請求項１５に記載の物質体。
【請求項１７】
認識エレメントが該レクチンに、式：
【化１】
2012516339.tif 000069
（式中、
Ｒ３は、独立して、水素、−ＯＨ、−ＮＯ２、およびハロゲンからなる群より選択され；
ＸＬは共有結合であるか、または二価の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和の任意選択で置換されているＣ１−２０炭化水素鎖であり、ここで、ＸＬの１つ以上のメチレン単位は、任意選択で独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ’）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）−、複素環式基、アリール基、またはヘテロアリール基で置き換えられており；
存在するＲ’は各々、独立して、水素、適切な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分である）
の光励起性リンカーを用いて共有結合される、請求項１５に記載の物質体。
【請求項１８】
認識エレメントが該レクチンに、式：
【化２】
2012516339.tif 000070
（式中、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは−ＣＦ３であり；
ＸＬは共有結合であるか、または二価の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和の、場合により置換されているＣ１−２０炭化水素鎖であり、ここで、ＸＬの１つ以上のメチレン単位は、場合により独立して、−０−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ０２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）−、複素環式基、アリール基、またはヘテロアリール基で置き換えられており；
存在するＲ’は各々、独立して、水素、適切な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分である）
の光励起性リンカーを用いて共有結合される、請求項１５に記載の物質体。
【請求項１９】
多価架橋剤がペプチドアプタマーを含む、請求項１０に記載の物質体。
【請求項２０】
多価架橋剤がポリヌクレオチドアプタマーを含む、請求項１に記載の物質体。
【請求項２１】
薬物が抗糖尿病薬である、請求項１に記載の物質体。
【請求項２２】
薬物がインスリン分子である、請求項１に記載の物質体。
【請求項２３】
薬物がインスリン感受性改善薬である、請求項１に記載の物質体。
【請求項２４】
薬物がインスリン分泌促進薬（ｓｅｃｒｅｔａｔｏｇｕｅ）である、請求項１に記載の物質体。
【請求項２５】
コンジュゲート枠組構造がポリマー系である、請求項１に記載の物質体。
【請求項２６】
コンジュゲート枠組構造がポリマー系でない、請求項１に記載の物質体。
【請求項２７】
コンジュゲート枠組構造が分岐型または超分岐型である、請求項１に記載の物質体。
【請求項２８】
コンジュゲート枠組構造が多糖を含む、請求項１に記載の物質体。
【請求項２９】
コンジュゲートが一般式：
【化３】
2012516339.tif 000071
（式中、
Ｒｘは、水素または任意選択で置換されているＣ１−６アルキルであり；
Ｚ１は、任意選択で置換されている二価のＣ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、Ｚ１の１、２、３、４または５個のメチレン単位は、任意選択で独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、任意選択で置換されているアリーレン部分または任意選択で置換されているヘテロアリーレン部分から選択される１つ以上の基で置き換えられており、式中、Ｒａは、水素、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、または適当なアミノ保護基であり、Ｒｂは、水素、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、または任意選択で置換されているヘテロアリールであり；
存在するＸ１は各々、独立して、−ＯＲＣまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、式中、Ｒｃは、水素、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、適当なヒドロキシル保護基、カチオン基、または親和性リガンドであり、各Ｒｄは、独立して、水素、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、適当なアミノ保護基、または親和性リガンドであるが、存在するＸ１の少なくとも２つは親和性リガンドを含むものとし；
Ｙ１は、水素、ハロゲン、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、式中、Ｒｅは、水素、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、または任意選択で置換されているヘテロアリールであり；
ｒは、５〜２５（両端を含む）の整数であり；
Ｗ１は、薬物であり；
【化４】
2012516339.tif 000072
は、共有結合性の単結合または二重結合に相当する）
のものである、請求項１に記載の物質体。
【請求項３０】
コンジュゲートが一般式：
【化５】
2012516339.tif 000073
（式中、［（Ａ−Ｔ）］
は各々、コンジュゲート内の存在し得る分岐部を表し；
（Ａ−Ｔ）は各々、該コンジュゲートの分岐内の存在し得る反復部を表し；
−Ａ−は各々、独立して、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環式からなる群より選択される任意選択で置換されている基であり；
存在するＴは各々、独立して、共有結合であるか、または二価の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和の任意選択で置換されているＣ１−３０炭化水素鎖であり、ここで、Ｔの１つ以上のメチレン単位は、任意選択で独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環式基、アリール基またはヘテロアリール基で置き換えられており；
存在するＲは各々、独立して、水素、適当な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
−Ｂは、−Ｔ−ＬＢ−Ｘであり；
存在するＸは各々、独立して、親和性リガンドであり；
存在するＬＢは各々、独立して、共有結合であるか、またはＴとＸとの共有結合性コンジュゲーションに由来する基であり；
−Ｄは、−Ｔ−ＬＤ−Ｗであり；
存在するＷは各々、独立して、薬物であり；
存在するＬＤは各々、独立して、共有結合であるか、またはＴとＷとの共有結合性コンジュゲーションに由来する基であり；
ｋは、２〜１１（両端を含む）の整数であり、コンジュゲート内にｋ−分岐部が少なくとも２つあることを規定し；
ｑは、１〜４（両端を含む）の整数であり；
ｋ＋ｑは、３〜１２（両端を含む）の整数であり；
存在するｐは各々、独立して、１〜５（両端を含む）の整数であり；
存在するｎは各々、独立して、０〜５（両端を含む）の整数であり；
存在するｍは各々、独立して、１〜５（両端を含む）の整数であり；
存在するｖは各々、独立して、０〜５（両端を含む）の整数であるが、各ｋ−分岐部において、存在する少なくとも１つのｎは≧１であり、存在する少なくとも１つのｖは≧１であるものとする）
のものである、請求項１に記載の物質体。
【請求項３１】
ＸおよびＷがそれぞれ存在しないコンジュゲートの分子量が１０，０００Ｄａ未満である、請求項２９または３０に記載の物質体。
【請求項３２】
ＸおよびＷがそれぞれ存在しないコンジュゲートの分子量が約３００〜約５，０００Ｄａの範囲である、請求項３１に記載の物質体。
【請求項３３】
ＸおよびＷがそれぞれ存在しないコンジュゲートの分子量が約３００〜約８００Ｄａの範囲である、請求項３１に記載の物質体。
【請求項３４】
１５０ｍＭのＮａＣｌを含み、外因性標的分子を含まない、３７ＣでｐＨ７の２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液に入れたとき不溶性である、請求項１に記載の物質体。
【請求項３５】
コンジュゲートが該物質体から、外因性標的分子の濃度に依存性の速度で、または外因性標的分子の濃度に依存性の程度まで放出される、請求項１に記載の物質体。
【請求項３６】
外因性標的分子がα−メチル−マンノースである、請求項３５に記載の物質体。
【請求項３７】
５０ｒｐｍでＵＳＰ溶出試験法ＩＩを使用し、３７Ｃで通常のヒト血清中に６時間入れたとき、実質的に不溶性のままである、請求項３６に記載の物質体。
【請求項３８】
５０ｒｐｍでＵＳＰ溶出試験法ＩＩを使用し、３７Ｃで通常のヒト血清中に６時間入れたとき、１０％未満の物質体が溶解する、請求項３６に記載の物質体。
【請求項３９】
５０ｒｐｍでＵＳＰ溶出試験法ＩＩを使用し、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび４００ｍｇ／ｄＬのグルコースを含む３７ＣでｐＨ７，２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液に６時間入れたとき、実質的に不溶性のままである、請求項３６に記載の物質体。
【請求項４０】
５０ｒｐｍでＵＳＰ溶出試験法ＩＩを使用し、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび４００ｍｇ／ｄＬのグルコースを含む３７ＣでｐＨ７，２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液に６時間入れたとき、１０％未満の物質体が溶解する、請求項３６に記載の物質体。
【請求項４１】
患者に請求項１〜４０いずれか一項に記載の物質体を投与すること、および続いて、刺激量の外因性標的分子を該患者に投与することを含む方法。
【請求項４２】
該物質体が皮下注射によって投与される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
コンジュゲートが、該枠組構造に結合させたインスリン分子を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
該物質体が、インスリン分子の平均日用量が１０〜２００Ｕの範囲となるように投与される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
該物質体が毎日投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
該物質体が毎週投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
該物質体が毎月投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
患者がインスリン感受性改善薬も受けている、請求項４４に記載の方法。
【請求項４９】
患者がインスリン分泌促進薬も受けている、請求項４４に記載の方法。
【請求項５０】
該物質体と外因性標的分子が異なる経路によって投与される、請求項４１に記載の方法。
【請求項５１】
該物質体が皮下（ｓｕｂｕｃｔａｎｅｏｕｓ）注射によって投与され、外因性標的分子が経口投与される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
該物質体と外因性標的分子の相対投与頻度が異なる、請求項４１に記載の方法。
【請求項５３】
外因性標的分子が該物質体よりも高頻度で投与される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
該物質体が毎日投与され、外因性標的分子が１日１回より多く投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
該物質体が週２回、毎週、隔週または毎月投与され、外因性標的分子が毎日投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
該物質体が毎月投与され、外因性標的分子が週２回、毎週、または隔週投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
該物質体が毎週投与され、外因性標的分子が毎日投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５８】
該物質体が毎月投与され、外因性標的分子が毎日投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５９】
該物質体が毎月投与され、外因性標的分子が毎週投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６０】
外因性標的分子が糖質である、請求項４１〜５９いずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
外因性標的分子がα−メチル−マンノースである、請求項６０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２００９年１月２８日に出願された米国特許仮出願第６１／１４７，８７８号、２００９年３月１２日に出願された米国特許仮出願第６１／１５９，６４３号、２００９年３月２０日に出願された米国特許仮出願第６１／１６２，１０７号、２００９年３月２０日に出願された米国特許仮出願第６１／１６２，０５３号、２００９年３月２０日に出願された米国特許仮出願第６１／１６２，０５８号、２００９年３月２０日に出願された米国特許仮出願第６１／１６２，０８４号、２００９年３月２０日に出願された米国特許仮出願第６１／１６２，０９２号、２００９年３月２０日に出願された米国特許仮出願第６１／１６２，１０５号、２００９年３月２５日に出願された米国特許仮出願第６１／１６３，０８４号、２００９年６月２４日に出願された米国特許仮出願第６１／２１９，８９７号、２００９年７月７日に出願された米国特許仮出願第６１／２２３，５７２号、および２００９年１０月１９日に出願された米国特許仮出願第６１／２５２，８５７号に対する優先権を主張するものであり、これらの内容は各々、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
「制御放出」薬物送達系のほとんどは、投与後の薬物の放出を遅滞または遅延させることにより奏功する。このような系は、一部の特定の型の薬物には有用である（例えば、血清プロフィールにおけるピークと溝が少なくなる、副作用が低減されるなどのため）が、より複雑な放出プロフィール（例えば、グルコースといった内因性物質に比例した放出、固定時間点または変動時間点での脈動放出など）が必要とされる薬物には適さない。例えば、注射用インスリンでの真性糖尿病の処置は、インスリンの緩徐な低速放出が有効でない場合のよく知られた試験症例である。実際、ホルモンの単純な補充は、この疾患と関連する病的続発症の予防に充分でないことが明らかである。このような続発症の発生は、患者体内での血中グルコースの濃度変動に合わせて外因性インスリンの提供（すなわち、真の「制御放出」系）ができていないことを反映していると考えられる。その結果、当該技術分野において、代替的な制御放出薬物送達系、特に、投与後の制御が可能な系の必要性が存在している。本開示により、かかる系を提供する。
【発明の概要】
【０００３】
一態様において、本開示により、外因性標的分子に結合する多価架橋剤、およびコンジュゲート枠組構造に結合された２つ以上の個別の親和性リガンドを含むコンジュゲートを含む架橋物質体であって、該２つ以上の親和性リガンドは、該架橋剤との結合に関して該外因性標的分子と競合し、異なるコンジュゲート上の親和性リガンドと該架橋剤間の非共有結合性相互作用の結果、該物質体内で該コンジュゲートが架橋される架橋物質体を提供する。また、該コンジュゲートは薬物も含む。薬物と親和性リガンドは、コンジュゲート枠組構造に、共有結合されていても、非共有結合で結合されていてもよい。一般に、このような物質体は、外因性標的分子の局所濃度の増大によってコンジュゲートの放出が刺激（ｔｒｉｇｇｅｒ）されるように設計される。また、本開示により、先に本開示の物質体を投与した患者に刺激量の外因性標的分子を投与する、該物質体の使用方法を提供する。また、本開示により、該物質体の作製方法を提供する。別の態様では、本開示により、例示的な架橋物質体および外因性標的分子を提供する。
【０００４】
定義
本明細書全体を通して用いる具体的な官能基、化学用語および一般用語の定義を、より詳細に以下に記載する。本発明の解釈上、化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ、第７５版の内表紙記載の元素周期表（ＣＡＳ版）に従って特定されるものであり、具体的な官能基は上記文献に概ね定義されている。さらに、有機化学の一般原則ならびに具体的な官能性部分および反応性は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ、Ｓａｕｓａｌｉｔｏ、，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第５版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２００１；Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８９；Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ、Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、１９８７に記載されている。
【０００５】
アシル−本明細書で用いる場合、用語「アシル」は、一般式−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＸ１）２、−Ｃ（＝Ｓ）ＲＸ１、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＲＸ１）２、および−Ｃ（＝Ｓ）Ｓ（ＲＸ１）、−Ｃ（＝ＮＲＸ１）ＲＸ１、−Ｃ（＝ＮＲＸ１）ＯＲＸ１、−Ｃ（＝ＮＲＸ１）ＳＲＸ１、および−Ｃ（＝ＮＲＸ１）Ｎ（ＲＸ１）２（式中、ＲＸ１は水素；ハロゲン；置換もしくは非置換のヒドロキシル；置換もしくは非置換のチオール；置換もしくは非置換のアミノ；置換もしくは非置換のアシル；環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分岐もしくは非分岐の脂肪族；環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分岐もしくは非分岐のヘテロ脂肪族；環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分岐もしくは非分岐のアルキル；環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分岐もしくは非分岐のアルケニル；置換もしくは非置換のアルキニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のヘテロアリール、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、モノ−もしくはジ脂肪族アミノ、モノ−もしくはジヘテロ脂肪族アミノ、モノ−もしくはジアルキルアミノ、モノ−もしくはジヘテロアルキルアミノ、モノ−もしくはジアリールアミノ、またはモノ−もしくはジヘテロアリールアミノであるか；または２つのＲＸ１基が一緒になって５〜６員の複素環式の環を形成している）を有する基をいう。例示的なアシル基としては、アルデヒド（−ＣＨＯ）、カルボン酸（−ＣＯ２Ｈ）、ケトン、アシルハライド、エステル、アミド、イミン、カーボネート、カルバメート、および尿素が挙げられる。アシル置換基としては、限定されないが、安定な部分（例えば、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシなど、これらは各々、さらに置換されていてもよく、そうでなくてもよい）の形成をもたらす本明細書に記載の任意の置換基が挙げられる。
【０００６】
脂肪族−本明細書で用いる場合、用語「脂肪族」または「脂肪族基」は、直鎖（すなわち、非分岐）、分岐または環式（「炭素環式」）であり得、完全飽和であってもよく、または１つ以上の不飽和単位を含んでいてもよいが、芳香族ではない、任意選択で置換されている炭化水素部分を表す。特に記載のない限り、脂肪族基は１〜１２個の炭素原子を含む。一部の実施形態では、脂肪族基は１〜６個の炭素原子を含む。一部の実施形態では、脂肪族基は１〜４個の炭素原子を含むものであり、また他の実施形態では、脂肪族基は１〜３個の炭素原子を含む。好適な脂肪族基としては、限定されないが、線状または分岐のアルキル、アルケニルおよびアルキニル基、ならびにそのハイブリッド（（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキルまたは（シクロアルキル）アルケニルなど）が挙げられる。
【０００７】
アルケニル−本明細書で用いる場合、用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分枝鎖の脂肪族部分から１個の水素原子の除去によって誘導される、任意選択で置換されている一価の基を表す。一部の特定の実施形態では、本発明において使用されるアルケニル基は、２〜６個の炭素原子を含む。一部の特定の実施形態では、本発明において使用されるアルケニル基は、２〜５個の炭素原子を含む。一部の実施形態では、本発明において使用されるアルケニル基は、２〜４個の炭素原子を含む。別の実施形態では、使用されるアルケニル基は２〜３個の炭素原子を含む。アルケニル基としては、例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イルなどが挙げられる。
【０００８】
アルキル−本明細書で用いる場合、用語「アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含む脂肪族部分から１個の水素原子の除去によって誘導される、任意選択で置換されている直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素原子団をいう。一部の実施形態では、本発明において使用されるアルキル基は１〜５個の炭素原子を含む。別の実施形態では、使用されるアルキル基は１〜４個の炭素原子を含む。さらに他の実施形態では、アルキル基は１〜３個の炭素原子を含む。また別の実施形態では、アルキル基は１〜２個の炭素を含む。アルキル原子団の例としては、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｓｅｃ−ペンチル、イソ−ペンチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ドデシルなどが挙げられる。
【０００９】
アルキニル−本明細書で用いる場合、用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分枝鎖の脂肪族部分から１個の水素原子の除去によって誘導される任意選択で置換されている一価の基をいう。一部の特定の実施形態では、本発明において使用されるアルキニル基は２〜６個の炭素原子を含む。一部の特定の実施形態では、本発明において使用されるアルキニル基は２〜５個の炭素原子を含む。一部の実施形態では、本発明において使用されるアルキニル基は２〜４個の炭素原子を含む。別の実施形態では、使用されるアルキニル基は２〜３個の炭素原子を含む。代表的なアルキニル基としては、限定されないが、エチニル、２−プロピニル（プロパギル）、１−プロピニルなどが挙げられる。
【００１０】
アリール−本明細書で用いる場合、単独または、「アラルキル」、「アラルコキシ」もしくは「アリールオキシアルキル」などのより大きな部分の一部として使用される用語「アリール」は、合計５〜１０個の環構成員を有し、系内の少なくとも１つの環は芳香族であり、系内の各環は３〜７個の環構成員を含む、任意選択で置換されている単環式および二環式の環系をいう。用語「アリール」は、用語「アリール環」と互換的に用いていることがあり得る。本発明の一部の特定の実施形態では、「アリール」は、限定されないが、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラシルなどが挙げられ、１つ以上の置換基を有していてもよい芳香族環系をいう。
【００１１】
アリールアルキル−本明細書で用いる場合、用語「アリールアルキル」は、アリール基（例えば、芳香族またはヘテロ芳香族基）で置換されているアルキル基をいう。
【００１２】
二価の炭化水素鎖−本明細書で用いる場合、用語「二価の炭化水素鎖」（「二価のアルキレン基」ともいう）は、ポリメチレン基、すなわち−（ＣＨ２）Ｚ−であり、式中、ｚは、１〜３０、１〜２０、１〜１２、１〜８、１〜６、１〜４、１〜３、１〜２、２〜３０、２〜２０、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４、または２〜３の正の整数である。置換された二価の炭化水素鎖は、１つ以上のメチレン水素原子が置換基と置き換えられたポリメチレン基である。好適な置換基としては、置換されている脂肪族基について後述するものが挙げられる。
【００１３】
カルボニル−本明細書で用いる場合、用語「カルボニル」は、炭素−酸素二重結合を含む一価または二価の部分をいう。カルボニル基の非限定的な例としては、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、エノン、アシルハライド、無水物、尿素、カルバメート、カーボネート、チオエステル、ラクトン、ラクタム、ヒドロキサメート、イソシアネート、およびクロロホルメートが挙げられる。
【００１４】
脂環式−本明細書で用いる場合、用語「脂環式」、「炭素環」、または「炭素環式」は、単独またはより大きな部分の一部として使用され、３〜１０員を有する本明細書に記載の、任意選択で置換されている飽和または部分不飽和の、環式の脂肪族の単環式または二環式の環系をいう。脂環式基としては、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロヘプテニル、シクロオクチル、シクロオクテニル、およびシクロオクタジエニルが挙げられる。一部の実施形態では、シクロアルキルは３〜６個の炭素を有する。
【００１５】
ハロゲン−本明細書で用いる場合、用語「ハロ」および「ハロゲン」は、フッ素（フルオロ，−Ｆ）、塩素（クロロ，−Ｃｌ）、臭素（ブロモ，−Ｂｒ）、およびヨウ素（ヨード，−Ｉ）から選択される原子をいう。
【００１６】
ヘテロ脂肪族−本明細書で用いる場合、用語「ヘテロ脂肪族」または「ヘテロ脂肪族基」は、炭素原子に加えて１〜５個のヘテロ原子を有し、直鎖（すなわち、非分岐）であっても、分岐であっても環式（「複素環式」）であってもよく、完全飽和であってもよく、１つ以上の不飽和単位を含んでいてもよいが、芳香族ではない、任意選択で置換されている炭化水素部分を表す。特に記載のない限り、ヘテロ脂肪族基は１〜６個の炭素原子を含み、１〜３個の炭素原子が、任意選択で独立して、酸素、窒素およびイオウから選択されるヘテロ原子で置き換えられている。一部の実施形態では、ヘテロ脂肪族基は１〜４個の炭素原子を含み、１〜２個の炭素原子が、任意選択で独立して、酸素、窒素およびイオウから選択されるヘテロ原子で置き換えられている。また他の実施形態では、ヘテロ脂肪族基は１〜３個の炭素原子を含み、１個の炭素原子が、任意選択で独立して、酸素、窒素およびイオウから選択されるヘテロ原子で置き換えられている。好適なヘテロ脂肪族基としては、限定されないが、線状または分岐のヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、およびヘテロアルキニル基が挙げられる。
【００１７】
ヘテロアラルキル−本明細書で用いる場合、用語「ヘテロアラルキル」は、ヘテロアリールで置換されているアルキル基をいい、アルキル部分およびヘテロアリール部分は、独立して、任意選択で置換されている。
【００１８】
ヘテロアリール−本明細書で用いる場合、単独または、例えば、「ヘテロアラルキル」もしくは「ヘテロアラルコキシ」など、より大きな部分の一部として使用される用語「ヘテロアリール」は、５〜１０個の環内原子、好ましくは５、６または９個の環内原子を有し；環式アレイ内で共有される６、１０または１４個のπ原子を有し；炭素原子に加えて１〜５個のヘテロ原子を有する、任意選択で置換されている基をいう。ヘテロアリール基としては、限定されないが、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニル、およびプテリジニルが挙げられる。また、用語「ヘテロアリール」および「ヘテロアル（ｈｅｔｅｒｏａｒ−）」には、本明細書で用いる場合、ヘテロ芳香族環が１つ以上のアリール、炭素環式または複素環式の環に縮合され、その結合原子団または結合点が該ヘテロ芳香族環上にある基が包含される。非限定的な例としては、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、４Ｈ−キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニル、およびテトラヒドロイソキノリニルが挙げられる。ヘテロアリール基は単環式であっても二環式であってもよい。用語「ヘテロアリール」は、用語「ヘテロアリール環」、「ヘテロアリール基」、または「ヘテロ芳香族」（これらの用語はいずれも任意選択で置換されている環を包含する）と互換的に用いることがある。
【００１９】
ヘテロ原子−本明細書で用いる場合、用語「ヘテロ原子」は窒素、酸素またはイオウをいい、窒素またはイオウの任意の酸化形態、および塩基性窒素の任意の第４級化形態を包含する。また、用語「窒素」は、置換されている窒素を包含する。
【００２０】
複素環式−本明細書で用いる場合、用語「複素環」、「ヘテロシクリル」、「複素環式の原子団」、および「複素環式の環」は互換的に用い、任意選択で置換されている、安定な５〜７員の単環式または７〜１０員の二環式の複素環式部分であって、飽和または部分不飽和のいずれかであり、炭素原子に加えて１つ以上の上記に定義したヘテロ原子を有するものをいう。複素環式の環は、その懸垂基に、安定な構造がもたらされる任意のヘテロ原子または炭素原子で結合され得、任意の環内原子は任意選択で置換されていてもよい。かかる飽和または部分不飽和の複素環式の原子団の例としては、限定されないが、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピロリジニル、ピロリドニル、ピペリジニル、ピロリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニル、およびキヌクリジニルが挙げられる。用語「複素環」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクリル環」、「複素環式基」、「複素環式部分」、および「複素環式の原子団」は、本明細書において互換的に用い、また、ヘテロシクリル環が１つ以上のアリール、ヘテロアリールまたは炭素環式の環（インドリニル、３Ｈ−インドリル、クロマニル、フェナントリジニルまたはテトラヒドロキノリニルなど）に縮合されており、その結合原子団または結合点が該ヘテロシクリル環上にある基を包含する。ヘテロシクリル基は単環式であっても二環式であってもよい。用語「ヘテロシクリルアルキル」はヘテロシクリルで置換されているアルキル基をいい、アルキル部分およびヘテロシクリル部分は、独立して、任意選択で置換されている。
【００２１】
不飽和−本明細書で用いる場合、用語「不飽和」は、ある部分が１つ以上の二重結合または三重結合を有することを意味する。
【００２２】
部分不飽和−本明細書で用いる場合、用語「部分不飽和」は、少なくとも１つの二重結合または三重結合を含む環部分をいう。用語「部分不飽和」は、多数の不飽和部位を有する環を包含することを意図するが、本明細書で定義したアリール部分またはヘテロアリール部分を含むことは意図しない。
【００２３】
任意選択で置換されている（置換されていてもよい）−本明細書に記載のように、本発明の化合物は、「任意選択で置換されている」部分を含んでいてもよい。一般に、用語「置換されている」は、前に用語「任意選択で」があってもなくても、表示された部分の１つ以上の水素が適当な置換基で置き換えられていることを意味する。特に記載のない限り、「任意選択で置換されている」基は、該基の各置換可能な位置に適当な置換基を有していてもよく、任意の所与の構造内の１つより多くの位置が、指定された群から選択される１つより多くの置換基で置換され得る場合、該置換基は、１つ１つの位置において同じであるか、異なるかのいずれかであり得る。本発明で想定される置換基の組合せは、好ましくは、安定な、または化学的に実現可能な化合物の形成をもたらすものである。用語「安定な」は、本明細書で用いる場合、生成、検出、ならびに一部の特定の実施形態では回収、精製、および本明細書に開示した目的の１つ以上のための使用を可能にする条件に供されたときに、実質的に改変されない化合物をいう。
【００２４】
「任意選択で置換されている」基の置換可能な炭素原子上の好適な一価の置換基は、独立して、ハロゲン；−（ＣＨ２）０−４Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４ＯＲ°；−Ｏ−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０−４ＣＨ（ＯＲｏ）２；−（ＣＨ２）０−４ＳＲ°；−（ＣＨ２）０−４Ｐｈ（Ｒ°で置換されていてもよい）；−（ＣＨ２）０−４Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ（Ｒ°で置換されていてもよい）；−ＣＨ＝ＣＨＰｈ（Ｒ°で置換されていてもよい）；−ＮＯ２；−ＣＮ；−Ｎ３；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）２；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲｏ；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ°３；−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）Ｒ°；−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０−４ＳＲ、−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０−４ＳＣ（Ｏ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＳＲ°；−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°、−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（ＮＯＲ°）Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４ＳＳＲ°；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ°；−（ＣＨ２）０−４ＯＳ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ°２；−Ｐ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｐ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ°）２；ＳｉＲ°３；−（Ｃ１−４直鎖もしくは分枝鎖のアルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２；または−（Ｃ１−４直鎖もしくは分枝鎖のアルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２であり、式中、各Ｒ°は、以下に定義するとおりに置換されていてもよく、独立して、水素、Ｃ１−６脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立して窒素、酸素もしくはイオウから選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環であるか、あるいは、上記の定義にかかわらず、独立して存在する２つのＲ°が、その介在原子（１つもしくは複数）を一緒になって、独立して窒素、酸素もしくはイオウから選択される０〜４個のヘテロ原子を有し、以下に定義するとおりに置換されていてもよい、３〜１２員の飽和、部分不飽和またはアリール単環式または二環式の環を形成している。
【００２５】
Ｒ°（または２つの独立して存在するＲ°がその介在原子と一緒になって形成される環）上の好適な一価の置換基は、独立して、ハロゲン、−（ＣＨ２）０−２Ｒ●、−（ハロＲ●）、−（ＣＨ２）０−２ＯＨ、−（ＣＨ２）０−２ＯＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＣＨ（ＯＲ●）２；−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）Ｒ●、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＳＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＳＨ、−（ＣＨ２）０−２ＮＨ２、−（ＣＨ２）０−２ＮＨＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＮＲ●２、−ＮＯ２、−ＳｉＲ●３、−ＯＳｉＲ●３、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ●、−（Ｃ１−４直鎖もしくは分枝鎖のアルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、または−ＳＳＲ●であり、式中、各Ｒ●は非置換であるか、もしくは前に「ハロ」がある場合は１つ以上のハロゲンでのみ置換されており、独立して、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−０（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立して窒素、酸素もしくはイオウから選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環から選択される。Ｒ°の飽和炭素原子上の好適な二価の置換基としては、＝０および＝Ｓが挙げられる。
【００２６】
「任意選択で置換されている」基の飽和炭素原子上の好適な二価の置換基としては、以下のもの：＝０、＝Ｓ、＝ＮＮＲ＊２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）０Ｒ＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ＊、＝ＮＲ＊、＝Ｎ０Ｒ＊、−Ｏ（Ｃ（Ｒ＊２））２−３０−、または−Ｓ（Ｃ（Ｒ＊２））２−３Ｓ−が挙げられ、ここで、独立して存在するＲ＊は各々、水素、以下に定義するとおりに置換されていてもよいＣ１−６脂肪族、または独立して窒素、酸素もしくはイオウから選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の５〜６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環から選択される。「任意選択で置換されている」基の置換可能なビシナル炭素に結合された好適な二価の置換基としては：−０（ＣＲ＊２）２−３Ｏ−（式中、独立して存在するＲ＊は各々、水素、以下に定義するとおりに置換されていてもよいＣ１−６脂肪族、または独立して窒素、酸素もしくはイオウから選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の５〜６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環から選択される）が挙げられる。
【００２７】
Ｒ＊の脂肪族基上の好適な置換基は、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、または−ＮＯ２（式中、各Ｒ●は非置換であるか、もしくは前に「ハロ」がある場合は１つ以上のハロゲンでのみ置換されており、独立して、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立して窒素、酸素もしくはイオウから選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環である）である。
【００２８】
「任意選択で置換されている」基の置換可能な窒素上の好適な置換基としては、−Ｒ†、ＮＲ†２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ†２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ†２、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ†２、または−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（０）２Ｒ†が挙げられ；式中、各Ｒ†は、独立して、水素、以下に定義するとおりに置換されていてもよいＣ１−６脂肪族、非置換の−ＯＰｈ、または独立して窒素、酸素もしくはイオウから選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の５〜６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環であるか、あるいは、上記の定義にかかわらず、独立して存在する２つのＲ†が、その介在原子（１つもしくは複数）と一緒になって、独立して窒素、酸素またはイオウから選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の３〜１２員の飽和、部分不飽和またはアリールの単環式または二環式の環を形成している。
【００２９】
Ｒ†の脂肪族基上の好適な置換基は、独立して、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、または−ＮＯ２（式中、各Ｒ●は非置換であるか、もしくは前に「ハロ」がある場合は１つ以上のハロゲンでのみ置換されており、独立して、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立して窒素、酸素もしくはイオウから選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環である）である。
【００３０】
好適な保護基−本明細書で用いる場合、用語「好適な保護基」は、化合物内の位置に応じたアミノ保護基またはヒドロキシル保護基をいい、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９９に詳細に記載されているものが挙げられる。
【００３１】
好適なアミノ保護基としては、メチルカルバメート、エチルカルバメート、９−フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、９−（２−スルホ）フルオレニルメチルカルバメート、９−（２，７−ジブロモ）フルオロエニルメチルカルバメート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバメート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェンアシルカルバメート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルカルバメート（Ｔｅｏｃ）、２−フェニルエチルカルバメート（ｈＺ）、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチルカルバメート（Ａｄｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−ハロエチルカルバメート、１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチルカルバメート（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（ＴＣＢＯＣ）、１−メチル−１−（４−ビフェニル）エチルカルバメート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカルバメート（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２’−および４’−ピリジル）エチルカルバメート（Ｐｙｏｃ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカルバメート、ｔ−ブチルカルバメート（ＢＯＣ）、１−アダマンチルカルバメート（Ａｄｏｃ）、ビニルカルバメート（Ｖｏｃ）、アリルカルバメート（Ａｌｌｏｃ）、１−イソプロピルアリルカルバメート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカルバメート（Ｃｏｃ）、４−ニトロシンナミルカルバメート（Ｎｏｃ）、８−キノリルカルバメート、Ｎ−ヒドロキシピペリジニルカルバメート、アルキルジチオカルバメート、ベンジルカルバメート（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルバメート（Ｍｏｚ）、ｐ−ニトロベンジルカルバメート、ｐ−ブロモベンジルカルバメート、ｐ−クロロベンジルカルバメート、２，４−ジクロロベンジルカルバメート、４−メチルスルフィニルベンジルカルバメート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカルバメート、ジフェニルメチルカルバメート、２−メチルチオエチルカルバメート、２−メチルスルホニルエチルカルバメート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカルバメート、［２−（１，３−ジチアニル）］メチルカルバメート（Ｄｍｏｃ）、４−メチルチオフェニルカルバメート（Ｍｔｐｃ）、２，４−ジメチルチオフェニルカルバメート（Ｂｍｐｃ）、２−ホスホニオエチルカルバメート（Ｐｅｏｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバメート（Ｐｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−シアノエチルカルバメート、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカルバメート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバメート、５−ベンゾイソオキサゾリルメチルカルバメート、２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルカルバメート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカルバメート、３，５−ジメトキシベンジルカルバメート、ｏ−ニトロベンジルカルバメート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカルバメート、フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカルバメート、フェノチアジニル−（１０）−カルボニル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノカルボニル誘導体、Ｎ’−フェニルアミノチオカルボニル誘導体、ｔ−アミルカルバメート、Ｓ−ベンジルチオカルバメート、ｐ−シアノベンジルカルバメート、シクロブチルカルバメート、シクロヘキシルカルバメート、シクロペンチルカルバメート、シクロプロピルメチルカルバメート、ｐ−デシルオキシベンジルカルバメート、２，２−ジメトキシカルボニルビニルカルバメート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバメート、１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピルカルバメート、１，１−ジメチルプロピニルカルバメート、ジ（２−ピリジル）メチルカルバメート、２−フラニルメチルカルバメート、２−ヨードエチルカルバメート、イソボルニル（ｂｏｒｙｎｌ）カルバメート、イソブチルカルバメート、イソニコチニルカルバメート、ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバメート、１−メチルシクロブチルカルバメート、１−メチルシクロヘキシルカルバメート、１−メチル−１−シクロプロピルメチルカルバメート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−フェニルエチルカルバメート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカルバメート、フェニルカルバメート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカルバメート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリメチルベンジル、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニトロフェニルアセトアミド、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ｎ’−ジチオベンジルオキシカルボニルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンナミド、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、ｏ−ニトロベンズアミド、ｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミド、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物（ＳＴＡＢＡＳＥ）、５−置換１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換１，３−ジベンジル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１−置換３，５−ジニトロ−４−ピリドン、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピロリン（ｐｙｒｏｏｌｉｎ）−３−イル）アミン、第４級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノＮ’−オキシド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ’−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリチリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリチリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタカルボニルクロム−またはタングステン）カルボニル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホルアミデート＜ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ＞、ジベンジルホスホルアミデート、ジフェニルホスホルアミデート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Νｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Νｐｙｓ）、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６，−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アントラセンスルホンアミド、４−（４’、８’−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤΝＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド、ならびにフェンアシルスルホンアミドが挙げられる。
【００３２】
好適なヒドロキシル保護基としては、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−Ａ０Ｍ）、グアヤコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル，ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェンアシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４”−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾル−１−イル）ビス（４’，４”−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンゾイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシ���ル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルメート、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセテート、３−フェニルプロピオネート、４−オキソペンタノエート（レブリネート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノエート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロエート、アダマントエート、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、２，４，６−トリメチルベンゾエート（メシトエート）、アルキルメチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート（Ｆｍｏｃ）、アルキルエチルカーボネート、アルキル２，２，２−トリクロロエチルカーボネート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート（Ｐｅｏｃ）、アルキルイソブチルカーボネート、アルキルビニルカーボネートアルキルアリルカーボネート、アルキルｐ−ニトロフェニルカーボネート、アルキルベンジルカーボネート、アルキルｐ−メトキシベンジルカーボネート、アルキル３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、アルキルｏ−ニトロベンジルカーボネート、アルキルｐ−ニトロベンジルカーボネート、アルキルＳ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチルカーボネート、メチルジチオカーボネート、２−ヨードベンゾエート、４−アジドブチレート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼンスルホネート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチレート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチレート、モノスクシネート（ｓｕｃｃｉｎｏａｔｅ）、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート、ｏ−（メトキシカルボニル）ベンゾエート、α−ナフトエート、ナイトレート、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミデート、アルキルＮ−フェニルカルバメート、ボレート、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェネート、スルフェート、メタンスルホネート（メシレート）、ベンジルスルホネート、およびトシレート（Ｔｓ）が挙げられる。１，２−または１，３−ジオールを保護するには、保護基として、メチレンアセタール、エチリデンアセタール、１−ｔ−ブチルエチリデンケタール、１−フェニルエチリデンケタール、（４−メトキシフェニル）エチリデンアセタール、２，２，２−トリクロロエチリデンア��タール、アセトニド、シクロペンチリデンケタール、シクロヘキシリデンケタール、シクロヘプチリデンケタール、ベンジリデンアセタール、ｐ−メトキシベンジリデンアセタール、２，４−ジメトキシベンジリデンケタール、３，４−ジメトキシベンジリデンアセタール、２−ニトロベンジリデンアセタール、メトキシメチレンアセタール、エトキシメチレンアセタール、ジメトキシメチレンオルトエステル、１−メトキシエチリデンオルトエステル、１−エトキシエチリジンオルトエステル、１，２−ジメトキシエチリデンオルトエステル、α−メトキシベンジリデンオルトエステル、１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチリデン誘導体、α−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）ベンジリデン誘導体、２−オキサシクロペンチリデンオルトエステル、ジ−ｔ−ブチルシリレン基（ＤＴＢＳ）、１，３−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサニリデン）誘導体（ＴＩＰＤＳ）、テトラ−ｔ−ブトキシジシロキサン−１，３−ジイリデン誘導体（ＴＢＤＳ）、環式のカーボネート、環式のボロネート、エチルボロネート、およびフェニルボロネートが挙げられる。
【００３３】
凝集された−２つ以上の細胞が本明細書に記載の架橋剤によって「凝集された」場合、該細胞は、各々、架橋剤と、細胞−薬剤−細胞複合体の状態で物理的に会合している。典型的には、凝集は、架橋剤の濃度が一旦閾値濃度に達したときしか起こらない。この濃度を最小凝集濃度（ＭＡＣ）と称する。所与の架橋剤のＭＡＣは、一般的には、溶液中での吸光度の変化を定量することができる分光測光プレートリーダーを用いて測定される。
【００３４】
アプタマー−本明細書で用いる場合、用語「アプタマー」は、標的分子に特異的に結合するポリヌクレオチドまたはポリペプチドをいう。一般に、アプタマーは、検出可能なレベルで標的分子と会合するが、同様の条件下で、無関連な分子存在体（例えば、標的分子と共通の構造的特徴を共有していない分子）とは検出可能に会合しない場合、標的分子に「特異的に結合する」といわれる。標的分子とアプタマー間の特異的会合は、典型的には、アプタマーによって認識されるエピトープなどの、標的分子の特定の構造的特徴の有無に依存する。一般的に、アプタマーがエピトープＡに特異的である場合、遊離の標識エピトープＡおよびこれに対するアプタマーの両方を含む反応液中におけるエピトープＡ含有分子の存在または遊離の非標識エピトープＡの存在により、アプタマーに結合する標識エピトープＡの量は低減される。一般に、特異性は絶対的である必要はないことが理解されよう。実際、アプタマーが、標的エピトープに加えて他のエピトープと交差反応することがあり得ることは当該技術分野で周知である。かかる交差反応性は、アプタマーが使用される適用用途によっては許容される場合があり得る。したがって、アプタマーの特異性の度合は、これが使用されている状況に依存する。また、特異性は、非標的分子に対するアプタマーの親和性対標的分子に対するアプタマーの親和性など、さらなる要素との関連において評価され得ることも理解されよう。
【００３５】
会合している−本明細書で用いる場合、２つの存在体は、直接的な非共有結合性相互作用によって結合している場合、互いに物理的に「会合している」。望ましい非共有結合性相互作用としては、免疫グロブリン分子と該免疫グロブリンに特異的な抗原との間で生じる型のもの、例えば、イオン性相互作用、水素結合、ファン・デル・ワールス相互作用、疎水性相互作用などが挙げられる。物理的会合の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）に換算して表示され得、ここで、Ｋｄが小さいほど大きな親和性を表す。例えば、選択された架橋剤と標的分子との会合特性は、当該技術分野で周知の方法を用いて定量され得る。
【００３６】
生物分解性の−本明細書で用いる場合、用語「生物分解性の」は、生理学的条件下またはエンドソーム条件下で分解される（すなわち、その共有結合性の構造の少なくとも一部が失われる）分子をいう。生物分解性の分子は、必ずしも加水分解的に分解可能である必要はなく、分解に酵素の作用を必要としてもよい。
【００３７】
生体分子−本明細書で用いる場合、用語「生体分子」は、天然に存在するものであっても人工的に作出されたものであっても（例えば、合成もしくは組換えによる方法）、細胞内および組織内に一般的に見られる分子（例えば、ポリペプチド、アミノ酸、ポリヌクレオチド、ヌクレオチド、多糖類、糖類、脂質、核タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、ステロイド類、代謝産物など）をいう。生体分子の具体的な類型としては、限定されないが、酵素、受容体、神経伝達物質、ホルモン、サイトカイン、細胞応答修飾因子（増殖因子および化学走化性因子など）、抗体、ワクチン、ハプテン、毒素、インターフェロン、リボザイム、アンチセンス剤、プラスミド、ＤＮＡ、およびＲＮＡが挙げられる。
【００３８】
薬物−本明細書で用いる場合、用語「薬物」は、生物学的事象を改変するか、阻害するか、活性化させるか、あるいは影響を及ぼす小分子または生体分子をいう。例えば、薬物としては、限定されないが、抗ＡＩＤＳ物質、抗癌物質、抗生物質、抗糖尿物質、免疫抑制薬、抗ウイルス物質、酵素阻害薬、神経毒、オピオイド、催眠薬、抗ヒスタミン薬、潤滑薬（ｌｕｂｒｉｃａｎｔ）、精神安定薬、鎮痙薬、筋弛緩薬ならびに抗パーキンソン物質、鎮痙薬および筋肉収縮剤（ｍｕｓｃｌｅ  ｃｏｎｔｒａｃｔａｎｔ）（チャネル遮断薬、縮瞳薬および抗コリン作用薬など）、抗緑内障化合物、抗寄生虫および／または抗原虫化合物、細胞−細胞外マトリックス相互作用の調節薬（細胞増殖阻害薬および抗接着分子など）、血管拡張剤、ＤＮＡ、ＲＮＡもしくはタンパク質の合成阻害薬、抗高血圧薬、鎮痛薬、解熱薬、ステロイド系および非ステロイド系抗炎症剤、抗血管形成因子、抗分泌因子、抗凝固薬および／または抗血栓剤、局所麻酔薬、眼科用薬、プロスタグランジン、抗鬱薬、抗精神病物質、制吐薬、ならびにイメージング剤が挙げられ得る。本発明における使用に適した例示的な薬物のより完全な列挙は、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ｐａｔｅｎｔｓ，Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」（Ａｘｅｌ  ＫｌｅｅｍａｎｎおよびＪｕｒｇｅｎ  Ｅｎｇｅｌによる），Ｔｈｉｅｍｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９９；「Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ：Ａｎ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ」，Ｓｕｓａｎ  Ｂｕｄａｖａｒｉら編，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６，およびＵｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ−２５／Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ−２０，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．出版，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ  ＭＤ，２００１を見るとよい。好ましくは（必ずしもそうでないが）、薬物は、適切な政府機関または行政団体によって、既に使用が安全かつ有効であるとみなされているものである。例えば、ＦＤＡによって２１  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§  ３３０．５、３３１〜３６１、および４４０〜４６０にリストアップされたヒトに使用するための薬物；ＦＤＡによって２１  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§  ５００〜５８９にリストアップされた獣医学的使用のための薬物はすべて、本発明による使用に許容され得るとみなす。
【００３９】
外因性の−本明細書で用いる場合、「外因性の」分子は、患者に投与されない限り有意なレベルで患者に存在しないものである。一部の特定の実施形態では、患者はヒトである。本明細書で用いる場合、分子は、正常ヒト血清に含まれる該分子が０．１ｍＭ未満である場合、有意なレベルで患者に存在しない。一部の特定の実施形態では、正常ヒト血清に含まれる該分子は、０．０８ｍＭ未満、０．０６ｍＭ未満、または０．０４ｍＭ未満であり得る。
【００４０】
超分岐−本明細書で用いる場合、「超分岐」構造は、少なくとも１つの分岐した分岐を含む共有結合性の構造（例えば、デンドリマー構造）である。超分岐構造は、ポリマー基礎構造および／または非ポリマー基礎構造を含むものであり得る。
【００４１】
正常ヒト血清−本明細書で用いる場合、「正常ヒト血清」は、８名以上の健常者由来の凝固させた全血の液体部分を、ほぼ等量プールすることにより得られるヒト血清である。健常個体は、血液採取の時点で疾患症状を呈していない、無作為に選択される１８〜３０歳の個体である。
【００４２】
相同性割合−本明細書で用いる場合、用語「相同性割合」は、本開示において定義する最適アラインメント後の２つの配列間の配列同一性の割合をいう。例えば、２つのヌクレオチド配列は、以下に論考するように一致が最大となるようにアラインメントしたときに該２つの配列内のヌクレオチドの配列が同じである場合、「同一」であるという。２つのヌクレオチド配列間の配列の比較は、典型的には、２つの最適にアラインメントされた配列の配列を、領域または「比較域」において比較し、配列が類似している領域を特定および比較することにより行なわれる。比較のための配列の最適アラインメントは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄ．Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズム、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズム、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法、このようなアルゴリズムのコンピュータでの実行、または目視検査によって行なわれ得る。
【００４３】
配列同一性の割合−「配列同一性の割合」は、２つの最適にアラインメントされた配列を比較域において比較することにより判定され、この場合、ヌクレオチド配列の比較域内の部分には、２つの配列の最適アラインメントのための参照配列（これは付加または欠失を含まない）と比較したとき、付加または欠失（すなわち、ギャップ）が含まれ得る。この割合は、両方の配列に同一のヌクレオチド残基が存在している位置の数を求め、マッチングした位置の数を得、マッチングした位置の数を比較域内の位置の総数で除算し、結果に１００を乗算して配列同一性の割合を得ることにより計算される。上記に示すこの配列同一性の定義は、当業者によって使用されているものであり得る定義である。この定義自体に、アルゴリズムの補助はなんら必要とされない。アルゴリズムは、配列同一性を計算するものではなく、配列の最適アラインメントを容易にするのに役立つものにすぎない。この定義から、２つの比較対象配列間の配列同一性には明確な１つだけの値が存在することになり、この値は、最適アラインメントで得られる値に対応する。
【００４４】
ポリマー−本明細書で用いる場合、「ポリマー」または「ポリマー構造」は、共有結合された一連のモノマーを含む構造である。ポリマーは、１つの型のモノマーで構成されたものであってもよく、１種類より多くの型のモノマーで構成されたものであってもよい。したがって、用語「ポリマー」は、コポリマー（例えば、ポリマー全体において異なる型のモノマーが個々の集団で存在しているブロックコポリマー）を包含する。ポリマーは線状であっても分岐型であってもよい。
【００４５】
ポリヌクレオチド−本明細書で用いる場合、「ポリヌクレオチド」はヌクレオチドのポリマーである。用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」、および「オリゴヌクレオチド」は、互換的に用いていることがあり得る。該ポリマーは、天然ヌクレオシド（すなわち、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、およびデオキシシチジン）、ヌクレオシド類似体（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、４−アセチルシチジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、ジヒドロウリジン、メチルプソイドウリジン、１−メチルアデノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、および２−チオシチジン）、化学修飾塩基、生物学的に修飾塩基（例えば、メチル化塩基）、介在＜ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｅｄ＞塩基、修飾糖類（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、２’−Ｏ−メチルシチジン、アラビノース、およびヘキソース）、または修飾リン酸基（例えば、ホスホロチオエートおよび５’−Ｎ−ホスホルアミダイト結合）を含むものであり得る。
【００４６】
ポリペプチド−本明細書で用いる場合、「ポリペプチド」は、アミノ酸のポリマーである。用語「ポリペプチド」、「タンパク質」、「オリゴペプチド」、および「ペプチド」は、互換的に用いていることがあり得る。ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸（すなわち、天然には存在しないが、ポリペプチド鎖内に組み込まれ得る化合物）および／または当該技術分野で知られているようなアミノ酸類似体を含むものであり得る。また、ポリペプチドのアミノ酸残基の１つ以上が、例えば、糖鎖基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、コンジュゲーション、官能化または他の修飾のためのリンカーなどの化学的存在体の付加によって修飾されていてもよい。このような修飾としては、ペプチドの環化、Ｄ−アミノ酸の組込みなどが挙げられ得る。
【００４７】
多糖−本明細書で用いる場合、「多糖」は、糖質のポリマーである。用語「多糖」、「糖鎖」、および「オリゴ糖」は、互換的に用いていることがあり得る。該ポリマーは、天然糖質（例えば、アラビノース、リキソース、リボース、キシロース、リブロース、キシルロース、アロース、アルトロース、ガラクトース、グルコース、グロース、イドース、マンノース、タロース、フルクトース、プシコース、ソルボース、タガトース、マンノヘプツロース、セドヘプツロース、オクツロース（ｏｃｔｏｌｏｓｅ）、およびシアロース（ｓｉａｌｏｓｅ））および／または修飾糖質（例えば、２’−フルオロリボース、２’−デオキシリボース、およびヘキソース）を含むものであり得る。例示的な二糖としては、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、ゲンチオビオース、イソマルトース、コージビオース、ラミナリビオース、マンノビオース、メリビオース、ニゲロース、ルチノース、およびキシロビオースが挙げられる。
【００４８】
小分子−本明細書で用いる場合、用語「小分子」は、天然に存在するものであろうと、人工的に作出されたものであろうと（例えば、化学合成によって）、比較的低い分子量を有する分子をいう。典型的には、小分子は単量体であり、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する。
【００４９】
処置する−本明細書で用いる場合、用語「処置する」（または「処置すること」、「処置された」、「処置」など）は、病状（例えば、糖尿病）、病状の症状（１つまたは複数）（例えば、高血糖症）、病状に対する素因を軽減する、緩和する、改変する、改善する、好転させる、または影響を及ぼす目的で、処置を必要とする被検体への本開示の物質体の投与をいう。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】ＡＥＧ、ＡＥＭ、ＡＥＢＭおよびＡＥＴＭの化学構造を示す。これらの糖類を主体とする親和性リガンドのＣｏｎ  Ａに対する親和性は、図示のとおりに増大する。
【図２】実施例で使用した、ＴＳＢ−Ｃ４系コンジュゲートを含むいくつかの例示的コンジュゲートの化学構造を示す。
【図３】（ａ）ＴＳＢ−Ｃ４−ＡＥＢＭ−２−インスリン／天然Ｃｏｎ  Ａ（α−メチルマンノース応答性物質体）での、非糖尿病ＳＤラットに皮下注射後の時間点０における（◆）血清インスリンおよび（○）血中グルコースレベルのプロットである。α−メチルマンノースのｉ．ｐ．注射は、＊で示した１２０分の時点で投与した。
【図４】外因性標的分子に応答してコンジュゲート２０を制御可能に放出し得る架橋物質体１０の模式図である。該物質体は、コンジュゲート２０と、コンジュゲート２０の親和性リガンド４０に非共有結合で結合し、それによりコンジュゲート２０を架橋して架橋物質体１０を形成する多価架橋剤３０とを合わせることにより調製される。多価架橋剤３０と親和性リガンド４０間の非共有結合は、過剰量の外因性標的分子の存在下で競合的に解離される。
【図５】野生型ヒトインスリンの構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
一部の特定の実施形態の詳細な説明
本出願書類では、特許文献および非特許文献を含むいくつかの文献に言及している。これらの各文献は、その全体が引用により本明細書に組み込まれる。一態様において、本開示により、外因性分子に結合する多価架橋剤、およびコンジュゲート枠組構造に結合された２つ以上の個別の親和性リガンドを含むコンジュゲートを含む架橋物質体であって、該２つ以上の親和性リガンドは、該架橋剤との結合に関して該外因性分子と競合し、異なるコンジュゲート上の親和性リガンドと該架橋剤間の非共有結合性相互作用の結果、該物質体内で該コンジュゲートが架橋される架橋物質体を提供する。また、該コンジュゲートは薬物も含む。薬物と親和性リガンドは、コンジュゲート枠組構造に、共有結合されていても、非共有結合で結合されていてもよい。一般に、このような物質体は、外因性分子の局所濃度の増大によってコンジュゲートの放出が刺激されるように設計される。また、本開示により、先に本開示の物質体を投与した患者に刺激量の外因性標的分子を投与する、該物質体の使用方法を提供する。また、本開示により、該物質体の作製方法を提供する。別の態様では、本開示により、例示的な架橋物質体および外因性標的分子を提供する。
【００５２】
該架橋剤は、外因性分子（例えば、限定されないが、α−メチル−マンノース、マンノース、Ｌ−フコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、合成薬物（例えば、モルヒネ）など）に結合し、多価である。該コンジュゲートは、該架橋剤との結合に関して外因性分子と競合する個別の親和性リガンドを２つ以上含むコンジュゲート枠組構造を含む。架橋剤とコンジュゲートを外因性分子の非存在下で合わせると、非共有結合性架橋物質体が形成される。該物質体を遊離外因性分子の存在下に入れると、該分子は、架橋剤とコンジュゲート間の相互作用に関して競合する。遊離の外因性分子がある一定濃度より多くなると、コンジュゲートが放出されることにより、該物質体が分解され始めるような競合レベルになる。その結果、コンジュゲートは該物質体から、外因性の分子の局所濃度に直接関連する様式で放出される。種々の実施形態において、該物質体は、通常のヒト血清中では該コンジュゲートを実質的に放出しない。後者の特性により、外因性分子の非存在下での該物質体からのコンジュゲートの非制御放出が実質的に確実になくなる。以下に論考するように、種々の実施形態において、該物質体の特性を、通常のヒト血清中で、ある量のコンジュゲートを放出するように調整することが望ましい場合があり得る（例えば、外的に刺激される成分に加えて、内因的に制御される成分を供給するため）。
【００５３】
外因性標的分子
本開示は、なんら特定の外因性分子に限定されない。本実施例において、本発明者らは、α−メチル−マンノースが刺激物質となる物質体を記載する。本発明者らは、レクチンコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ  Ａ）に対して内因性グルコースよりもずっと高い親和性（約４０倍）を有するため、特定のマンノース誘導体を本発明の例示の目的で選択する。この結合親和性の違いにより、本発明者らが、内因性グルコースレベルに応答したコンジュゲートの放出は行なわないが外因性α−メチル−マンノースには応答してコンジュゲートを放出するＣｏｎ  Ａ架橋物質体を使用することが可能であった（実施例１参照）。実施例１の物質体の外因性標的分子として、α−メチル−マンノースと同様（またはそれ以上）のＣｏｎ  Ａ結合親和性を有する他の外因性グルコースまたはマンノース誘導体が使用され得たことは認識されよう。限定されないが、このようなものとしては、マンノース、Ｌ−フコース、ビマンノース、メチルビマンノース、エチルビマンノース（ｂｉｍｍａｎｏｓｅ）、トリマンノース、メチルトリマンノース、エチルトリマンノース、そのアミノ誘導体などが挙げられる。Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎらにより、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４３：２００３−２００７、１９６８およびＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：４：８７６−８８３、１９６５において、いくつかのＣｏｎ  Ａインヒビターおよびその相対親和性の概説が示されている。同様に、他の外因性糖質（およびその誘導体）が、グルコースまたはマンノース以外の糖質を認識する架橋剤（例えば、他のレクチン、アプタマーなど）とともに使用され得ることは理解されよう。実際、一部の特定の実施形態では、内因性グルコースに結合しない架橋剤を使用することが好都合な場合があり得る。グルコースに結合しない例示的なレクチンとしては、スノードロップ（Ｇａｌａｎｔｈｕｓ  ｎｉｖａｌｉｓ）、ニンニク（Ａｌｌｉｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ）、およびアリウム・ウルシヌム（Ａｌｌｉｕｍ  ｕｒｓｉｎｕｍ）などの単子葉植物から単離されるものが挙げられる。また、以下に論考するように、グルコース結合性がないため選択されたアプタマーを使用してもよい。このようなアプローチはいずれも、内因性グルコースレベルの変動によって刺激される放出のリスクが低減され得る。種々の実施形態において、このアプローチは、他の内因性分子、例えば、クレアチニン、尿素などの他の代謝産物の存在下での放出が回避されるように拡張することができる。
【００５４】
本実施例および前述の内容は、糖質結合架橋剤および外因性糖質が関与するものであるが、本発明は、かかる系に限定されないことは理解されよう。実際、レクチン主体の系は、一般的に外因性糖質に限定されるが、アプタマー主体の系は、多くの異なる外因性分子に結合するように設計することができる。例えば、本発明の方法は、外因性薬物レベルが高すぎる状態になったとき、この外因性薬物の効果を中和する薬物コンジュゲートを放出する架橋物質体を作製するため、例えば、限定されないが、高レベルのオピオイド（例えば、モルヒネなど）に応答してナルトレキソンコンジュゲートを放出する物質体を作製するために使用され得る。この後者の例は、種々の実施形態において、外因性分子が患者に意図的に投与されたものでない分子であってもよいことを強調する。したがって、本発明の物質体および方法は、先に投与された物質体からコンジュゲートを放出させる意図的な目的で刺激物質を投与する状況に有用であるが、外因性分子（例えば、薬物乱用者によるモルヒネなどのオピオイド）非処方的摂取、注射または吸入に対して反作用させるために該物質体を存在させる状況においても有用であり得る。
【００５５】
コンジュゲート
コンジュゲートは、コンジュゲート枠組構造に結合された２つ以上の個別の親和性リガンドを含む。該２つ以上の個別の親和性リガンドは、該外因性標的分子と、該架橋剤との結合に関して競合する。また、コンジュゲートは薬物も含む。親和性リガンドと薬物はコンジュゲート枠組構造に、共有結合されていても、非共有結合で結合されていてもよい。
【００５６】
親和性リガンド
２つ以上の個別の親和性リガンドは、同じ化学構造を有するものであっても、異なる化学構造を有するものであってもよい。２つ以上の個別の親和性リガンドは、外因性標的分子そのものと同じ化学構造を有するものであってもよく、外因性標的分子種と化学的に関連するものであってもよい。唯一の要件は、該リガンドが、外因性標的分子と、架橋剤との結合に関して競合することである。一部の特定の実施形態では、該コンジュゲートおよび外因性標的分子の架橋剤に対する相対親和性は、１：１〜１００：１の範囲である（この場合、１００：１の相対親和性は、コンジュゲート、外因性標的分子および架橋剤の平衡混合物において（ｐＨ７のＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水中、３７Ｃで）、外因性標的分子の濃度がコンジュゲートの濃度の１００倍である場合、架橋剤が、ほぼ等モル量のコンジュゲートと外因性標的分子に結合することを意味する）。一部の特定の実施形態では、この相対親和性は１：１〜５０：１、１：１〜１０：１、１：１〜５：１または１：１〜２：１の範囲である。種々の実施形態において、例えば、該コンジュゲートおよび外因性標的分子に対する架橋剤の相対親和性を微調整するために、親和性リガンドが外因性標的分子と異なる化学構造を有することが好都合な場合があり得る。例えば、外因性標的分子がα−メチル−マンノースである場合、１つ以上の該親和性リガンドとして糖質または多糖が使用され得る。したがって、一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは、レクチン（例えば、限定されないが、Ｃｏｎ  Ａ、マンナン結合レクチンまたはＭＢＬなど）に対する結合に関してα−メチル−マンノースと競合し得るものである。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）：
【化１】
2012516339.tif 000003
【００５７】
（式中：
各Ｒ１は、独立して、水素、−ＯＲｙ、−Ｎ（Ｒｙ）２、−ＳＲｙ、−Ｏ−Ｙ、−Ｇ−Ｚ、または−ＣＨ２Ｒｘであり；
各Ｒｘは、独立して、水素、−ＯＲｙ、−Ｎ（Ｒｙ）２、−ＳＲｙ、または−Ｏ−Ｙであり；
各Ｒｙは、独立して、−Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２、−ＣＯ２Ｒ２、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）２であり；
各Ｙは、独立して、単糖、二糖または三糖であり；
各Ｇは、独立して、共有結合であるか、または任意選択で置換されているＣ１−９アルキレンであり、ここで、Ｇの１つ以上のメチレン単位は、任意選択で、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）ＳＯ２−、または−Ｎ（Ｒ２）ＳＯ２Ｎ（Ｒ２）−で置き換えられており；
各Ｚは、独立して、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ２）２、−ＯＲ２、−ＳＲ２、−Ｎ３、−Ｃ≡ＣＲ２、−ＣＯ２Ｒ２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２、または−ＯＳＯ２Ｒ２であり；
各Ｒ２は、独立して、水素であるか、またはＣ１−６脂肪族、フェニル、窒素、酸素もしくはイオウから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の複素環式の環、または窒素、酸素もしくはイオウから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式のヘテロアリール環から選択される、任意選択で置換されている基である）のものである。
【００５８】
一部の特定の実施形態では、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）の親和性リガンドは単糖である。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは二糖である。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは三糖である。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは四糖である。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは、４個以下の糖質部分を含むものである。
【００５９】
上記に一般的に定義したように、各Ｒ１は、独立して、水素、−ＯＲｙ、−Ｎ（Ｒｙ）２、−ＳＲｙ、−Ｏ−Ｙ、−Ｇ−Ｚ、または−ＣＨ２Ｒｘである。一部の特定の実施形態では、Ｒ１は水素である。一部の特定の実施形態では、Ｒ１は−ＯＨである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３である。一部の特定の実施形態では、Ｒ１は−Ｏ−Ｙである。一部の特定の他の実施形態では、Ｒ１は−Ｇ−Ｚである。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ２ＯＨである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ２−Ｏ−Ｙである。また他の実施形態では、Ｒ１は−ＮＨ２である。当業者には、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）における各Ｒ１置換基が（Ｒ）または（Ｓ）の立体化学構造であり得ることが認識されよう。
【００６０】
上記に一般的に定義したように、各Ｒｘは、独立して、水素、−０Ｒｙ、−Ｎ（Ｒｙ）２、−ＳＲｙ、または−Ｏ−Ｙである。一部の実施形態では、Ｒｘは水素である。一部の特定の実施形態では、Ｒｘは−ＯＨである。他の実施形態では、Ｒｘは−Ｏ−Ｙである。
【００６１】
上記に一般的に定義したように、各Ｒｙは、独立して、−Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２、−ＣＯ２Ｒ２、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）２である。一部の実施形態では、Ｒｙは水素である。他の実施形態では、Ｒｙは−Ｒ２である。一部の実施形態では、Ｒｙは−Ｃ（Ｏ）Ｒ２である。一部の特定の実施形態では、Ｒｙはアセチルである。他の実施形態では、Ｒｙは、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２）２、−ＣＯ２Ｒ２、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）２である。
【００６２】
上記に一般的に定義したように、Ｙは単糖、二糖または三糖である。一部の特定の実施形態では、Ｙは単糖である。一部の実施形態では、Ｙは二糖である。他の実施形態では、Ｙは三糖である。一部の実施形態では、Ｙは、マンノース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、ラムノース、またはキシロピラノースである。一部の実施形態では、Ｙは、スクロース、マルトース、ツラノース、トレハロース、セロビオース、またはラクトースである。一部の特定の実施形態では、Ｙはマンノースである。一部の特定の実施形態では、ＹはＤ−マンノースである。当業者には、糖Ｙが、−Ｏ−Ｙの酸素基にアノマー炭素を介して結合され、グリコシド結合を形成していることが認識されよう。グリコシド結合は、α立体配置であってもβ立体配置であってもよい。
【００６３】
上記に一般的に定義したように、各Ｇは、独立して、共有結合であるか、または任意選択で置換されているＣ１−９アルキレンであり、ここで、Ｇの１つ以上のメチレン単位は、任意選択で、−０−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）ＳＯ２−または−Ｎ（Ｒ２）ＳＯ２Ｎ（Ｒ２）−で置き換えられている。一部の実施形態では、Ｇは二重結合である。一部の特定の実施形態では、Ｇは−０−Ｃ１−８アルキレンである。一部の特定の実施形態では、Ｇは−ＯＣＨ２ＣＨ２−である。
【００６４】
上記に一般的に定義したように、各Ｚは、独立して、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ２）２、−ＯＲ２、−ＳＲ２、−Ｎ３、−Ｃ≡ＣＲ２、−ＣＯ２Ｒ２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２、または−ＯＳＯ２Ｒ２である。一部の実施形態では、Ｚは、ハロゲンまたは−ＯＳＯ２Ｒ２である。他の実施形態では、Ｚは、−Ｎ３または−Ｃ≡ＣＲ２である。一部の特定の実施形態では、Ｚは、−Ｎ（Ｒ２）２、−ＯＲ２、または−ＳＲ２である。一部の特定の実施形態では、Ｚは−ＳＨである。一部の特定の実施形態では、Ｚは−ＮＨ２である。一部の特定の実施形態では、−Ｇ−Ｚは−ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２である。
【００６５】
一部の実施形態では、式（ＩＶａ）のＣ１炭素上のＲ１置換基は−Ｇ−Ｚであり、式（ＩＶａ−ｉ）：
【化２】
2012516339.tif 000004
【００６６】
（式中、Ｒ１、ＧおよびＺは、本明細書において定義および記載のとおりである）の化合物が得られる。
【００６７】
一部の実施形態では、リガンドは、式（ＩＶａ−ｉｉ）：
【化３】
2012516339.tif 000005
【００６８】
（式中、Ｒ１、Ｒｘ、ＧおよびＺは、本明細書において定義および記載のとおりである）のものである。
【００６９】
例えば、一部の特定の実施形態では、以下：グルコース、スクロース、マルトース、マンノース、これらの誘導体（例えば、グルコサミン、マンノサミン、メチルグルコース、メチルマンノース、エチルグルコース、エチルマンノースなど）および／またはこれらの高次の組合せ（例えば、ビマンノース、線状および／または分岐のトリマンノースなど）の１種類以上を含む親和性リガンドが使用され得る。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは単糖を含む。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは二糖を含む。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは三糖を含む。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは多糖を含む。一部の実施形態では、親和性リガンドは糖と１つ以上のアミン基を含む。一部の実施形態では、親和性リガンドはアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）である。一部の実施形態では、親和性リガンドはアミノエチルマンノース（ＡＥＭ）である。一部の実施形態では、親和性リガンドはアミノエチルビマンノース（ＡＥＢＭ）である。一部の実施形態では、親和性リガンドはアミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）である。一部の実施形態では、親和性リガンドはβ−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）である。一部の実施形態では、親和性リガンドはアミノエチルフコース（ＡＥＦ）である。他の実施形態では、親和性リガンドはＤ−グルコサミン（ＧＡ）である。一部の特定の実施形態では、糖リガンドは「Ｄ」立体配置のものである。他の実施形態では、糖リガンドは「Ｌ」立体配置のものである。以下に、本発明らは、これらの例示的な親和性リガンドの構造を示す。他の例示的な親和性リガンドは、当業者に認識されよう。
【化４】
2012516339.tif 000006
【００７０】
種々の実施形態において、該親和性リガンドは、多糖、糖ペプチドまたは糖脂質である。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドは、２〜１０個の糖質部分、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の該部分を含む。多糖、糖ペプチドまたは糖脂質の末端および／または内部残基は、対象のレクチンの糖特異性に基づいて選択され得る（例えば、Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ３１７：５００−５０４、１９７３およびＬｉｓら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５５：３５−６７、１９８６を参照のこと）。
【００７１】
種々の実施形態において、特定のコンジュゲート／架橋剤の組合せに対する親和性リガンドは、実験に基づいて選択され得る。かかる実施形態によれば、１つ以上の親和性リガンドが、外因性標的分子（および場合によっては、以下に論考する内因性分子）と比較したときの架橋剤に対する相対結合親和性に基づいてスクリーニングされる。一部の特定の実施形態では、糖質および／または多糖類のライブラリーが、この様式でスクリーニングされる。好適な親和性リガンドは、外因性標的分子との検出可能なレベルの競合を示すが、架橋剤と外因性標的分子間の結合を完全に妨げるほど強く競合しないものである。
【００７２】
種々の実施形態において、親和性リガンドは、架橋剤に関して内因性分子と競合する能力に基づいて選択される。特に、一部の特定の実施形態では、該架橋剤に対して、潜在する競合性内因性分子（例えば、該架橋剤がグルコース結合性の場合は、グルコース）よりもずっと高い親和性を有するが、適当な外因性標的分子（例えば、α−メチル−マンノース）に競合的に非結合となり得ない親和性リガンドを選択することが好都合な場合がある。これにより、外因性標的分子の非存在下で架橋物質体から放出される程度が最小限になる。例えば、本発明者らは、実施例１〜２において、生理学的レベルの内因性グルコースの存在下でバックグラウンド放出をほとんど示さなかったが、外因性α−メチル−マンノースに対して有意な応答をもたらした２つのＡＥＢＭ親和性リガンドとの例示的なコンジュゲートを説明する。他の実施形態では、一定量のグルコース応答性放出は可能であるが、放出を人為的にモジュレートするために外因的に刺激され得る親和性リガンドを選択することが望ましい場合があり得る。
【００７３】
他の例示的な外因性標的分子／親和性リガンドの組合せは当業者に認識されよう。一般に、親和性リガンドは、標的分子自体を用いて、および／または標的分子の誘導体を作製することにより（例えば、標的分子に対して化学修飾および／または立体化学修飾を行ない、次いで、得られた誘導体を、対象の架橋剤に対する相対親和性に関してスクリーニングすることにより）、任意の外因性標的分子に対して作製され得る。
【００７４】
より詳細に以下に論考するように、親和性リガンドは、コンジュゲートの枠組構造内に天然に存在するものであってもよい（例えば、ポリマー主鎖の一部として、またはモノマーの側鎖基として）。択一的に（または付加的に）、親和性リガンドは、コンジュゲートの枠組構造内に人工的に組み込まれたものであってもよい（例えば、コンジュゲートの枠組構造に合成的に付加された化学基の形態で）。一部の特定の実施形態では、コンジュゲートは、５個以上、１０個以上、２０個以上、２５個以上、５０個以上、または１００個以上の親和性リガンドを含む枠組構造を含むものであり得る。一部の特定の実施形態では、コンジュゲートは、２〜５、２〜１０、２〜２０、２〜２５、２〜５０または２〜１００個の親和性リガンドを含む枠組構造を含むものであり得る。一部の特定の実施形態では、コンジュゲートは、２、３または４個程度の少ない個別の親和性リガンドを含む枠組構造を含むものであり得る。
【００７５】
親和性リガンドをコンジュゲート枠組構造にコンジュゲートさせるための方法は、より詳細に以下に論考する。一部の特定の実施形態では、親和性リガンドが糖を含む場合、コンジュゲーション（直接であれ間接的であれ）には、糖のＣ１、Ｃ２またはＣ６位が関与する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲーションはＣ１位が関与するものである。Ｃ１位は、アノマー炭素とも称され、コンジュゲートの枠組構造に、αまたはβコンホメーションで連結され得る。一部の特定の実施形態では、Ｃ１位はαアノマーとして構成される。他の実施形態では、Ｃ１位はβアノマーとして構成される。
【００７６】
薬物
上記のように、コンジュゲートは薬物も含む。コンジュゲートには任意の薬物が含まれ得ることは理解されよう。コンジュゲートは、１コピーより多くの同じ薬物を含むものであり得、および／または１種類より多くの型の薬物を含むものであり得る。コンジュゲートは、任意の特定の薬物に限定されず、小分子薬または生体分子薬を含むものであってもよい。一般に、使用される薬物（１種類または複数種）は、処置対象の疾患または障害に依存する。
【００７７】
例えば、限定されないが、種々の実施形態において、コンジュゲートは、以下の薬物：ジクロフェナク、ニフェジピン、リバスチグミン、メチルフェニデート、フルオキセチン、ロシグリタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、コデイン、エチルモルヒネ、デキストロメトルファン、ノスカピン、ペントキシベリン（ｐｅｎｔｏｘｉｖｅｒｉｎｅ）、アセチルシステイン、ブロムヘキシン、エピネフリン、イソプレナリン、オルシプレナリン、エフェドリン、フェノテロール、リミテロール、イプラトロピウム、コリンテオフィリネート、プロキシフィリン、ベクロメタゾン、ブデソニド、デスラノシド、ジゴキシン、ジギトキシン、ジソピラミド、プロスシラリジン、キニジン、プロカインアミド、メキシレチン、フレカイニド、アルプレノロール、プロプラノロール（ｐｒｏｐｒｏａｎｏｌｏｌ）、ナドロール、ピンドロール、オクスプレノロール、ラベタロール、チモロール、アテノロール、四硝酸ペンタエリスリトール、硝酸イソソルビド、イソソルビドモノニトラート、ニフェジピン、フェニルアミン、ベラパミル、ジルチアゼム、シクランデラール（ｃｙｃｌａｎｄｅｌａｒ）、ニコチニルアルコール、ニコチン酸イノシトール、アルプロスタジル（ａｌｐｒｏｓｔａｔｄｉｌ）、エチレフリン、プレナルテロール、ドブタミン、ドパミン、ジヒドロエルゴタミン、グアネチジン、ベタニジン、メチルドパ、レセルピン、グアンファシン、トリメタファン、ヒドララジン、ジヒドララジン、プラゾシン、ジアゾキサイド、カプトプリル、ニフェジピン、エナラプリル、ニトロプルシド、ベンドロフルメチアジド、ヒドロクロロチアジド、メチクロチアジド、ポリチアジド、クロルタリドン、シネタゾン、クロパミド、メフルシド、メトラゾン、ブメタニド、エタクリナシド、スピロノラクトン、アミロリド、クロフィブラート、ニコチン酸、ニケリトロール（ｎｉｃｈｅｒｉｔｒｏｌ）、ブロモフェニルアミン、シンナリジン、デキシクロルフェニラミン、クレマスチン、アンタゾリン、シプロヘプタジン、プロメタジン（ｐｒｏｅｔｈａｚｉｎｅ）、シメチジン、ラニチジン、スクラルファート、パパベリン、モキサベリン、アトロピン、ブチルスコポラミン、エメプロン、グルコピロン、ヒヨスチアミン、メペンソラール、メチルスコポラミン、オキシフェンサイクリミン、プロバンテリン、テロジリン、センナグリコシド、サグラダエキストラクト、ダントロン、ビサコジル、ピコスルファートナトリウム、エチュロス、ジフェノキシレート（ｄｉｐｈｅｎｏｌｘｙｌａｔｅ）、ロペラミド、サラゾスルファピリジン、ピルヴィン、メベンダゾール、ジメチコン、フェロフマレート、フェロサクシネート、フェリテトラセミナトリウム、シアノコバラミン、葉酸ヘパリン、ヘパリン補因子、ジクルマロール、ワルファリン、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ビタミンＫ、チオテパ、ブスルファン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、カルムスチン、メルカプトプリン、チオグアニン、アザチオプリン、シタラビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、プロカルバジン、ダカルバジン、ロムスチン、エストラムスチン、テニポシド、エトポシド、シスプラチン、アムサクリン、アミノグルテチミド、ホスフェストロール、メドロキシプログレステロン（ｍｅｄｒｏｘｉｐｒｏｇｒｅｓｔｅｒｏｎｅ）、ヒドロキシプロゲステロン、メゲステロール、ノレチステロン、タモキシフェン、シクロスポリン、スルフィソミジン、ベンシルペニシリン、フェノキシメチルペニシリン、ジクロキサシリン、クロキサシリン、フルクロキサシリン、アンピシリン、アモキシリン、ピバンピシリン、バカンピシリン、ピペラシリン、メジオシリン、メシリナム、ピブメシリナム、セファロチン、セファレキシン、セフラジン、セファドロキシル、セファクロル、セフロキシム、セフォタキシム、セフタジジム、セフォキシチン、アズトレオナム、イミペネム、シラスタチン、テトラサイクリン、リメサイクリン、デメクロサイクリン、メタサイクリン、オキシテトラサイクリン、ドキシサイクリン、クロルアンフェニコール、スピラマイシン、フシジン酸、リンコマイシン、クリンダマイシン、スペクチノマイシン、リファンピシン、アンフォテリシンＢ、グリセオフルビン、ニスタチン、バンコマイシン、メトロニダゾール、チニダゾール、トリメトプリム、ノルフロキサシン、サラゾスルファピリジン、アミノサリル、イソニアジド、エタンブトール（ｅｔａｍｂｕｔｏｌ）、ニトロフラントイン、ナリジクス酸、メテナミン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、チニダゾール、ケトコナゾール、アシクロビル、インターフェロン、イドクスウリジン、レチノール、チアミン、デキスパンテノール、ピリドキシン、葉酸、アスコルビン酸、トコフェロール、フィトミナジオン、フェンフルナミン、コルチコトロピン、テトラコサクチド、チロトロピン、ソマトトロピン、ソマトレム、バソプレシン、リプレシン、デスモプレシン、オキシトシン、クロリオンゴナドトロピン、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、フルオキシメステロン、メステロロン、ナンドロロン、スタノゾロール、オキシメトロン、シプロテロン、レボチロキシン、リオチロニン、プロピルチオウラシル、カルビマゾール、チアマゾール、ジヒドロタキステロール、アルファカルシドール、カルシチロール、インスリン、トルブタミド、クロルプロパミド、トラズアミド、グリピジド、グリベンクラミド、フェノバルビタール、メチプリロン、ピリチルジオン、メプロバメート、クロルジアゼポキシド、ジアゼパム、ニトラゼパム、バクロフェン、オキサゼパム、クロラゼプ酸二カリウム（ｄｉｋａｌｉｕｍｃｌｏｒａｚｅｐａｔ）、ロラゼパム、フルニトラゼパム、アルプラゾラム、ミダゾラム、ヒドロキシジン、ダントロレン、クロメチアゾール、プロピオンマジン、アリメマジン、クロルプロマジン、レボメプロマジン、アセトフェナジン、フルフェナジン、ペルフェナジン、プロクロルペナジン、トリフルオペラジン、ジキシラジン、チオリダジン（ｔｈｉｏｄｉｒａｚｉｎｅ）、ペリシアジン、クロプロチキセン（ｃｈｌｏｐｒｏｔｈｉｘｅｎｅ）、チザニジン、ザレプロン、ズクロペンチゾール、フルペンチゾール、チチキセン、ハロペリドール、トリミプラミン、オピプラモール、クロミプラミン、デシプラミン、ロフェプラミン、アミトリプチリン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、マプトロチリン、カフェイン、シンナリジン、サイクリジン、メンヒドリナート（ｄｉｍｅｎｈｙｄｉｎａｔｅ）、メクロジン、プロメタジン、チエチルペラジン、メトクロプラミド、スコポラミン、フェノバルビタール、フェニトイン、エトスクシミド、プリミドン、カルバマゼピン、クロナゼパム、オルフェナドリン、アトロピン、ベンサトロピン、ビペリデン、メチキセン、プロシリジン、レボドパ、ブロモクリプチン、アマンタジン、アンベノン、ピリドスチグミン、シンスチグミン、ジスルフィラム、モルヒネ、コデイン、ペンタゾシン、ブプレノルフィン、ペチジン、フェノペリジン、フェンタニル、メタドン、ピリトラミド、デキストロプロポキシフェン、ケトベミドン、アセチルサリチル酸、セレコキシブ、フェナゾン、フェニルブタゾン、アザプロパゾン、ピロキシカム、エルゴタミン、ジヒドロエルゴタミン、シプロヘプタジン、ピジチフェン、フルメドロキソン、アロプリノール、プロベネシド、金チオリンゴ酸ナトリウムアウラノフィン（ａｕｒｏｎｏｆｉｎ）、ペニシラミン、エストロジオール、吉草酸エストラジオール、エストリオール、エチニルエストラジオール、ジヒドロゲステロン、リネストレノール、メドロキシプログレステロン、ノルエチステロン、シクロフェニル、クロミフェン、レボノルゲストレル、メストラノール、オルニダゾール、チニダゾール、エコナゾール、クロトリマゾール、レボノルゲストレル、メストラノール、オルニダゾール、チニダゾール、エコナゾール、クロトリマゾール、ナタマイシン、ミコナゾール、スルベンチン、メチルエルゴタミン、ジノプロスト、ジノプロストン、ゲメプロスト、ブロモクリプチン、フェニルプロパノールアミン、クロモグリク酸ナトリウム、アセタゾラミド、ジクロフェナミド、ベータカロテン、ナロキソン、ホリナートカルシウム、特にクロニジン、テオフィリン、ジピラダモール、ヒドロクロルチアジド、スコポルアミン、インドメタシン、フロセミド、塩化カリウム、モルヒネ、イブプロフェン、サルブタモール、テルブタリンカルシトニンなどのいずれか１つを含むものであり得る。この列挙は例示を意図していること、および既知のものであれ、後に見い出されるものものであれ、任意の薬物が本開示のコンジュゲートに使用され得ることは理解されよう。
【００７８】
種々の実施形態において、コンジュゲートは、ホルモン薬（ペプチド系であっても非ペプチド系であってもよい）、例えば、アドレナリン、ノルアドレナリン、アンギオテンシン、アトリオペプチン、アルドステロン、デヒドロエピアンドロステロン、アンドロステンジオン、テストステロン、ジヒドロテストステロン、カルシトニン、カルシトリオール、カルシジオール、コルチコトロピン、コルチゾール、ドパミン、エストラジオール、エストロン、エストリオール、エリトロポイエチン、卵胞刺激ホルモン、ガストリン、グレリン、グルカゴン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ヒスタミン、ヒト胎盤性ラクトゲン、インスリン、インスリン様増殖因子、インヒビン、レプチン、ロイコトリエン、リポトロピン、メラトニン、オレキシン、オキシトシン、副甲状腺ホルモン、プロゲステロン、プロラクチン、プロラクチン放出ホルモン、プロスタグランジン（ｐｒｏｓｔｇｌａｎｄｉｎ）、レニン、セロトニン、セクレチン、ソマトスタチン、トロンボポエチン、甲状腺刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（または甲状腺刺激ホルモン）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、サイロキシン、トリヨードサイロニン、バソプレシンなどを含むものであり得る。一部の特定の実施形態では、ホルモンは、グルカゴン、インスリン、インスリン様増殖因子、レプチン、甲状腺刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（または甲状腺刺激ホルモン）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、サイロキシン、およびトリヨードサイロニンから選択され得る。この列挙は例示を意図していること、および既知のものであれ、後に見い出されるものであれ、任意のホルモン薬が本開示のコンジュゲートに使用され得ることは理解されよう。
【００７９】
種々の実施形態において、コンジュゲートは甲状腺ホルモンを含むものであり得る。
【００８０】
種々の実施形態において、コンジュゲートは抗糖尿病薬（すなわち、糖尿病に苦しむ患者に対して有益な効果を有する薬物）を含むものであり得る。
【００８１】
種々の実施形態において、コンジュゲートはインスリン分子を含むものであり得る。「インスリン分子」により、本発明者らは、生理活性である（すなわち、インビボで投与したとき、検出可能なグルコースの低減を引き起こし得る）限り、野生型インスリンおよび修飾型インスリンのどちらも包含することを意図する。野生型インスリンとしては、精製型であれ、合成型であれ、組換え型であれ、任意の種由来のインスリンが挙げられる（例えば、ヒトインスリン、ブタインスリン、ウシインスリン、ウサギインスリン、ヒツジインスリンなど）。これらのいくつかは市販されており、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から入手可能である。さまざまな修飾型インスリンが当該技術分野で知られている（例えば、ＣｒｏｔｔｙおよびＲｅｙｎｏｌｄｓ、Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｅｍｅｒｇ．Ｃａｒｅ．２３：９０３−９０５、２００７、ならびにＧｅｒｉｃｈ、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１１３：３０８〜１６，２００２、ならびにそこに挙げられた参考文献を参照のこと）。修飾型インスリンは、化学修飾されたもの（例えば、ＰＥＧ基もしくは後述する脂肪族アシル鎖などの化学部分の付加によって）および／または変異されたもの（すなわち、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失もしくは置換によって）であり得る。一般に、生理活性のある変異型形態のインスリンは、典型的には、野生型インスリンと１〜１０（例えば、１〜５または１〜２）個のアミノ酸の置換、付加または欠失により異なる。ヒトインスリンの野生型配列（Ａ鎖およびＢ鎖）を、以下および図５に示す。
【００８２】
Ａ鎖（配列番号：１）：ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ
Ｂ鎖（配列番号：２）：ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ
ヒトインスリンは、ウサギ、ブタ、ウシ、およびヒツジインスリンとアミノ酸Ａ８、Ａ９、Ａ１０、およびＢ３０のみが異なる（以下の表を参照のこと）。
【表１】
2012516339.tif 000007
【００８３】
種々の実施形態において、本開示のインスリン分子は、Ｂペプチド配列のＢ２８位および／またはＢ２９位が変異されたものである。例えば、インスリンリスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））は、ＢペプチドのＣ末端の最後から２番目のリジンとプロリン残基が逆転した速効性インスリン変異型（ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン）である。この修飾により、インスリン多量体の形成がブロックされる。インスリンアスパルト（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））は、Ｂ２８位のプロリンがアスパラギン酸で置換された別の速効性インスリン変異型（ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリン）である。この変異型も多量体の形成を抑制する。一部の実施形態では、Ｂ２８位および／またはＢ２９位の変異は、インスリンポリペプチド内の別の箇所に１つ以上の変異を伴う。例えば、インスリングルリジン（ＡＰＩＤＲＡ（登録商標））は、Ｂ３位のアスパラギン酸がリジン残基で置き換えられ、Ｂ２９位のリジンがグルタミン酸残基で置き換えられた、また別の速効性インスリン変異型（ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリン）である。
【００８４】
種々の実施形態において、本開示のインスリン分子は、ヒトインスリンと比べてシフトした等電点を有する。一部の実施形態では、等電点のシフトは、インスリンＡペプチドのＮ末端および／またはインスリンＢペプチドのＣ末端に１つ以上のアルギニン残基を付加することによりなされる。かかるインスリンポリペプチドの例としては、ＡｒｇＡ０−ヒトインスリン、ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＡｒｇＡ０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、およびＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリンが挙げられる。さらなる一例として、インスリングラルギン（ＬＡＮＴＵＳ（登録商標））は、ＡｓｐＡ２１がグリシンで置き換えられ、２つのアルギニン残基がＢペプチドのＣ末端に付加された例示的な長期作用性インスリン変異型である。これらの変更の効果は、等電点がシフトしてｐＨ４で完全に可溶性の溶液が得られることである。したがって、一部の実施形態では、本開示のインスリン分子は、Ａ２１がＧｌｙであるＡペプチド配列と、Ｂ３１がＡｒｇ−ＡｒｇであるＢペプチド配列とを含むものである。本開示は、本明細書に記載したこれらの変異および任意の他の変異（例えば、ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１−ヒトインスリン、ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＡｒｇＢ３１−ヒトインスリン）の単独および多くの組合せをすべて包含することは理解されよう。
【００８５】
種々の実施形態において、本開示のインスリン分子は切断型である。例えば、一部の特定の実施形態では、本開示のインスリンポリペプチドのＢペプチド配列は、Ｂｌ、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ２６、Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ２９および／またはＢ３０がないものである。一部の特定の実施形態では、本開示のインスリンポリペプチドのＢペプチド配列に残基の組合せがない。例えば、Ｂペプチド配列は、残基Ｂ（１〜２）、Ｂ（１〜３）、Ｂ（２９〜３０）、Ｂ（２８〜３０）、Ｂ（２７〜３０）および／またはＢ（２６〜３０）がないものであり得る。一部の実施形態では、これらの欠失および／または切断は、前記の任意のインスリン分子に適用される（例えば、限定されないが、ｄｅｓ（Ｂ３０）−インスリンリスプロ、ｄｅｓ（Ｂ３０）−インスリンアスパルト、ｄｅｓ（Ｂ３０）−インスリングルリジン、ｄｅｓ（Ｂ３０）−インスリングラルギンなどを作製するため）。
【００８６】
一部の実施形態では、インスリン分子は、ＡまたはＢペプチド配列のＮ−またはＣ末端にさらなるアミノ酸残基を含む。一部の実施形態では、Ａ０、Ａ２１、Ｂ０および／またはＢ３１位に１つ以上のアミノ酸残基が存在する。一部の実施形態では、Ａ０位に１つ以上のアミノ酸残基が存在する。一部の実施形態では、Ａ２１位に１つ以上のアミノ酸残基が存在する。一部の実施形態では、Ｂ０位に１つ以上のアミノ酸残基が存在する。一部の実施形態では、Ｂ３１位に１つ以上のアミノ酸残基が存在する。一部の特定の実施形態では、インスリン分子は、Ａ０、Ａ２１、Ｂ０またはＢ３１位に、さらなるアミノ酸残基を全く含まない。
【００８７】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、１つ以上のアミド化アミノ酸が酸性形態で置き換えられるように変異されている。例えば、アスパラギンは、アスパラギン酸またはグルタミン酸で置き換えられ得る。同様に、グルタミンは、アスパラギン酸またはグルタミン酸で置き換えられ得る。特に、ＡｓｎＡ１８、ＡｓｎＡ２１、またはＡｓｎＢ３、またはこれらの残基の任意の組合せが、アスパラギン酸またはグルタミン酸で置き換えられ得る。ＧｌｎＡ１５またはＧｌｎＢ４または両方が、アスパラギン酸またはグルタミン酸で置き換えられ得る。一部の特定の実施形態では、インスリン分子は、Ａ２１位にアスパラギン酸、またはＢ３位にアスパラギン酸、またはこれら両方を有する。
【００８８】
当業者には、生物学的活性を保持したまま、インスリン分子内のまた別のアミノ酸を変異させることも可能であることが認識されよう。例えば、限定されないが、以下の修飾：Ｂ１０位のヒスチジン残基のアスパラギン酸での置き換え（ＨｉｓＢ１０→ＡｓｐＢ１°）；Ｂｌ位のフェニルアラニン残基アスパラギン酸での置き換え（ＰｈｅＢ１→ＡｓｐＢ１）；Ｂ３０位のトレオニン残基のアラニンでの置き換え（ＴｈｒＢ３０→ＡｌａＢ３０）；Ｂ２６位のチロシン残基のアラニンでの置き換え（ＴｙｒＢ２６→ＡｌａＢ２６）；およびＢ９位のセリン残基のアスパラギン酸での置き換え（ＳｅｒＢ９→ＡｓｐＢ９）も当該技術分野で広く認められている。
【００８９】
種々の実施形態において、本開示のインスリン分子は、持続性の作用プロフィールを有するものである。したがって、一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、脂肪酸でアシル化されたものであり得る。すなわち、インスリン分子上のアミノ基と脂肪酸のカルボン酸基との間にアミド結合が形成される。アミノ基は、インスリン分子のＮ末端アミノ酸のα−アミノ基であってもよく、インスリン分子のリジン残基のε−アミノ基であってもよい。本開示のインスリン分子は、野生型インスリンに存在する３つのアミノ基の１つ以上がアシル化されたものであり得るか、または野生型配列に導入されたリジン残基がアシル化されたものであり得る。一部の特定の実施形態では、インスリン分子はＢ１位がアシル化されたものであり得る。一部の特定の実施形態では、インスリン分子はＢ２９位がアシル化されたものであり得る。一部の特定の実施形態では、脂肪酸は、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ペンタデシル酸（Ｃ１５）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ヘプタデシル酸（Ｃ１７）およびステアリン酸（Ｃ１８）から選択される。例えば、インスリンデテミル（ＬＥＶＥＭＩＲ（登録商標））は、ＴｈｒＢ３０が欠失しており、Ｃ１４脂肪酸鎖（ミリスチン酸）がＬｙｓＢ２９に結合された長期作用性インスリン変異型である。
【００９０】
一部の実施形態では、ＡペプチドのＮ末端、ＢペプチドのＮ末端、Ｂ２９位のＬｙｓのε−アミノ基、または本開示のインスリン分子内の任意の他の利用可能なアミノ基が、一般式：
【化５】
2012516339.tif 000008
【００９１】
（式中、ＲＦは、水素またはＣ１−３０アルキル基である）の脂肪酸部分に共有結合される。一部の実施形態では、ＲＦは、Ｃ１−２０アルキル基、Ｃ３−１９アルキル基、Ｃ５−１８アルキル基、Ｃ６−１７アルキル基、Ｃ８−１６アルキル基、Ｃ１０−１５アルキル基、またはＣ１２−１４アルキル基である。一部の特定の実施形態では、インスリンポリペプチドは該部分に、Ａ１位でコンジュゲートされる。一部の特定の実施形態では、インスリンポリペプチドは該部分に、Ｂ１位でコンジュゲートされる。一部の特定の実施形態では、インスリンポリペプチドは該部分に、Ｂ２９位のＬｙｓのε−アミノ基でコンジュゲートされる。一部の特定の実施形態では、インスリン分子のＢ２８位がＬｙｓであり、ＬｙｓＢ２８のε−アミノ基が脂肪酸部分にコンジュゲートされる。一部の特定の実施形態では、インスリン分子のＢ３位がＬｙｓであり、ＬｙｓＢ３のε−アミノ基が脂肪酸部分にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、脂肪酸鎖は８〜２０炭素長である。一部の実施形態では、脂肪酸は、オクタン酸（Ｃ８）、ノナン酸（Ｃ９）、デカン酸（Ｃ１０）、ウンデカン酸（Ｃ１１）、ドデカン酸（Ｃ１２）、またはトリデカン酸（Ｃ１３）である。一部の特定の実施形態では、脂肪酸は、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ペンタデカン酸（Ｃ１５）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ヘプタデカン酸（Ｃ１７）、ステアリン酸（Ｃ１８）、ノナデカン酸（Ｃ１９）、またはアラキジン酸（Ｃ２０）である。例えば、インスリンデテミル（ＬＥＶＥＭＩＲ（登録商標））は、ＴｈｒＢ３０が欠失しており、Ｃ１４脂肪酸鎖（ミリスチン酸）がＬｙｓＢ２９に結合された長期作用性インスリン変異型である。
【００９２】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン（インスリンリスプロ）、ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリン（インスリンアスパルト）、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリン（インスリングルリジン）、ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン（インスリングラルギン）、ＮεＢ２９−ミリストイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン（インスリンデテミル）、ＡｌａＢ２６−ヒトインスリン、ＡｓｐＢ１−ヒトインスリン、ＡｒｇＡ０−ヒトインスリン、ＡｓｐＢ１ＧｌｕＢ１３−ヒトインスリン、ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＡｒｇＡ０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ｄｅｓ（Ｂ２７）−ヒトインスリン、ｄｅｓ（Ｂ２８−Ｂ３０）−ヒトインスリン、ｄｅｓ（Ｂ１）−ヒトインスリン、ｄｅｓ（Ｂ１−Ｂ３）−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−パルミトイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル（ｍｙｒｉｓｏｔｙｌ）−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−パルミトイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【００９３】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−パルミトイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ３０−ミリストイル−ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ３０−パルミトイル−ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（Ｎ−パルミトイル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（Ｎ−リトコリル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【００９４】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｓｐＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＡｒｇＢ０ＧｌｙＡ２１ＡｓｐＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【００９５】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリンポリペプチド：ＮεＢ２８−ミリストイル−ＧｌｙＡ２１ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ３０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｓｐＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ａｒｇＡ０ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【００９６】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｓｐＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【００９７】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１−ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１−ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｎＢ３−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【００９８】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【００９９】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１００】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｎＢ３−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１０１】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１０２】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１０３】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−ホルミル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ホルミル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ホルミル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１０４】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−アセチル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−アセチル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−アセチル−ＮαＡ１−アセチル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−アセチル−ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１０５】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−アセチル−ＮαＢ１−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１０６】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−ブチリル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ブチリル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１０７】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ペンタノイル−ＮαＡ１−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ペンタノイル−ＮαＡ１−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１０８】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘキサノイル−ＮαＡ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘキサノイル−ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１０９】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘプタノイル−ＮαＡ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘプタノイル−ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１１０】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮαＢ１−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＮαＡ１−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＮαＡ１−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１１１】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ノナノイル−ＮαＡ１−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ノナノイル−ＮαＡ１−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１１２】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−デカノイル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−デカノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−デカノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＮαＡ１−デカノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＮαＡ１−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１１３】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１１４】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−アセチル−ＮαＡ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−アセチル−ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１１５】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１１６】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１１７】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ペンタノイル−ＮαＡ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ペンタノイル−ＮαＡ１−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１１８】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘキサノイル−ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘキサノイル−ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１１９】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘプタノイル−ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘプタノイル−ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１２０】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＮαＡ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＮαＡ１−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１２１】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ノナノイル−ＮαＡ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ノナノイル−ＮαＡ１−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１２２】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２８−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−デカノイル−ＮαＡ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−デカノイル−ＮαＡ１−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１２３】
一部の特定の実施形態では、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子：ＮεＢ２９−ペンタノイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ｄｅｓ（Ｂ２６）−ヒトインスリン、ＮαＢ１−アセチル−ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ＡｓｐＢ１ＡｓｐＢ３ＡｓｐＢ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ペンタノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ブチリル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリンのうちの１つの変異および／または化学修飾を含む。
【０１２４】
また、本開示は、前記の変異および／または化学修飾のいずれか１つを含む非ヒトインスリン（例えば、ブタインスリン、ウシインスリン、ウサギインスリン、ヒツジインスリンなど）の修飾型も包含する。
【０１２５】
これらおよび他の修飾インスリン分子は、米国特許第６，９０６，０２８号；同第６，５５１，９９２号；同第６，４６５，４２６号；同第６，４４４，６４１号；同第６，３３５，３１６号；同第６，２６８，３３５号；同第６，０５１，５５１号；同第６，０３４，０５４号；同第５，９５２，２９７号；同第５，９２２，６７５号；同第５，７４７，６４２号；同第５，６９３，６０９号；同第５，６５０，４８６号；同第５，５４７，９２９号；同第５，５０４，１８８号；同第５，４７４，９７８号；同第５，４６１，０３１号；および同第４，４２１，６８５号；ならびに米国特許第７，３８７，９９６号；同第６，８６９，９３０号；同第６，１７４，８５６号；同第６，０１１，００７号；同第５，８６６，５３８号；および同第５，７５０，４９７号に詳細に記載されており、その全開示内容は、引用により本明細書に組み込まれる。
【０１２６】
種々の実施形態において、本開示のインスリン分子は、３つの野生型ジスルフィド結合（すなわち、Ａ鎖の７位とＢ鎖の７位間に１つ、Ａ鎖の２０位とＢ鎖の１９位間に２つ目、およびＡ鎖の６位と１１位間に３つ目）を含む。
【０１２７】
インスリン分子を含む薬物をコンジュゲートさせるための方法を以下に記載する。一部の特定の実施形態では、インスリン分子はコンジュゲートの枠組構造に、Ａ１アミノ酸残基を介してコンジュゲートされる。一部の特定の実施形態では、Ａ１アミノ酸残基はグリシンである。しかしながら、本開示はＮ末端コンジュゲーションに限定されないこと、および一部の特定の実施形態では、インスリン分子は、非末端Ａ鎖アミノ酸残基を介してコンジュゲートされてもよいことは理解されよう。特に、本開示は、Ａ鎖内の任意の位置に存在するリジン残基（野生型または部位特異的変異誘発によって導入されたもの）のε−アミン基を介したコンジュゲーションを包含する。Ａ鎖上のコンジュゲーション位置が異なると、異なるインスリン活性の低下がもたらされ得ることは認識されよう。一部の特定の実施形態では、インスリン分子はコンジュゲートの枠組構造に、Ｂ１アミノ酸残基を介してコンジュゲートされる。一部の特定の実施形態では、Ｂ１アミノ酸残基はフェニルアラニンである。しかしながら、本開示はＮ末端コンジュゲーションに限定されないこと、および一部の特定の実施形態では、インスリン分子は、非末端Ｂ鎖アミノ酸残基を介してコンジュゲートされてもよいことは理解されよう。特に、本開示は、Ｂ鎖内の任意の位置に存在するリジン残基（野生型または部位特異的変異誘発によって導入されたもの）のε−アミン基を介したコンジュゲーションを包含する。例えば、一部の特定の実施形態では、インスリン分子はＢ２９リジン残基を介してコンジュゲートされ得る。インスリングルリジンの場合では、Ｂ３リジン残基を介したコンジュゲートの枠組構造に対するコンジュゲーションが使用され得る。Ｂ鎖上のコンジュゲーション位置が異なると、異なるインスリン活性の低下がもたらされ得ることは認識されよう。
【０１２８】
一部の特定の実施形態では、リガンドは、インスリン分子などの薬物１つのより多くのコンジュゲーション点にコンジュゲートされる。例えば、インスリン分子は、Ａ１のＮ末端とＢ２９リジンの両方にコンジュゲートされ得る。一部の実施形態では、炭酸緩衝液中でアミドコンジュゲーションが起こり、Ｂ２９位とＡｌ位にコンジュゲートされるが、Ｂ１位にはコンジュゲートされない。他の実施形態では、インスリン分子は、Ａ１のＮ末端、Ｂ１のＮ末端、およびＢ２９リジンにコンジュゲートされ得る。また他の実施形態では、保護基が、コンジュゲーションがＢ１位とＢ２９位またはＢｌ位とＡｌ位で起こるように使用される。インスリン分子上のコンジュゲーション点の任意の組合せが使用され得ることは認識されよう。一部の実施形態では、コンジュゲーション点の少なくとも１つは変異リジン残基、例えばＬｙｓＡ３である。
【０１２９】
種々の実施形態において、コンジュゲートはインスリン感受性改善薬（すなわち、インスリンの作用を増強する薬物）を含むものであり得る。インスリンの効果を増強する薬物としては、ビグアニド（例えば、メトホルミン）およびグリタゾンが挙げられる。最初のグリタゾン薬はトログリタゾンであったが、これは重度の副作用を有することが判明した。第２世代のグリタゾンとしてはピオグリタゾンおよびロシグリタゾンが挙げられ、これらは耐容性がより良好であるが、ロシグリタゾンは、一部の治験において有害な心血管事象と関連していた。
【０１３０】
種々の実施形態において、コンジュゲートはインスリン分泌促進薬（すなわち、膵臓のβ細胞によるインスリンの分泌を刺激する薬物）を含むものであり得る。例えば、種々の実施形態において、コンジュゲートはスルホニル尿素を含むものであり得る。スルホニル尿素は、膵臓のβ細胞によるインスリンの分泌を、該細胞をグルコースの作用に対して感作することにより刺激する。さらに、スルホニル尿素はグルカゴンの分泌を抑止し、標的組織をインスリンの作用に対して感作し得る。第１世代のスルホニル尿素としては、トルブタミド、クロルプロパミドおよびカルブタミドが挙げられる。より低い用量で活性な第２世代のスルホニル尿素としては、グリピジド、グリベンクラミド、グリクラジド、グリボルヌリドおよびグリメピリドが挙げられる。種々の実施形態において、コンジュゲートはメグリチニドを含むものであり得る。好適なメグリチニドとしては、ナテグリニド、ミチグリニドおよびレパグリニドが挙げられる。これらの血糖降下作用は、スルホニル尿素のものより速いが短い。他のインスリン分泌促進薬としては、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）およびＧＬＰ−１類似体（すなわち、ＧＬＰ−１様生理活性を有し、ＧＬＰ−１とは１〜１０個のアミノ酸の置換、付加もしくは欠失および／または化学修飾によって異なるペプチド）が挙げられる。ＧＬＰ−１は、中枢作用によって胃内容物排出を抑止して満腹感を増大させることにより、およびグルカゴンの放出を抑制することにより食物摂取量を低減させる。ＧＬＰ−１は、膵島細胞の増殖を増大させ、摂食後のインスリン生成を増大させることにより血漿グルコースレベルを低下させる。ＧＬＰ−１は、例えば、そのインビボ半減期を長くするため、リラグルチドの場合のように脂質のコンジュゲーションによって化学修飾され得る。また他のインスリン分泌促進薬としては、エキセンジン−４およびエキセンジン−４類似体（すなわち、エキセンジン−４様生理活性を有し、エキセンジン−４とは１〜１０個のアミノ酸の置換、付加もしくは欠失および／または化学修飾によって異なるペプチド）が挙げられる。エキセンジン−４は、アメリカドクトカゲ（Ｇｉｌａ  Ｍｏｎｓｔｅｒ）に毒中に見られ、ＧＬＰ−１様生理活性を示す。これは、ＧＬＰ−１よりもずっと長い半減期を有し、ＧＬＰ−１とは異なり、生理活性を失うことなく、Ｎ末端の８個のアミノ酸残基が切断され得る。ＧＬＰ−１およびエキセンジン−４のＮ末端領域は、ほぼ同一であり、有意な差は２番目のアミノ酸残基、ＧＬＰ−１ではアラニン、エキセンジン−４ではグリシンであり、これにより、エキセンジン−４に、インビボ消化に対する抵抗性が付与される。また、エキセンジン−４はＧＬＰ−１と比較すると、Ｃ末端に、さらに９個のアミノ酸残基も有する。Ｍａｎｎら  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３５：７１３−７１６，２００７およびＲｕｎｇｅら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４６：５８３０−５８４０，２００７には、本開示のコンジュゲートに使用され得るさまざまなＧＬＰ−１およびエキセンジン−４類似体が記載されている。ＧＬＰ−１の短い半減期は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）による酵素的消化に起因する。一��の特定の実施形態では、内因性ＧＬＰ−１の効果は、ＤＰＰ−ＩＶ阻害薬（例えば、ビルダグリプチン、シタグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチンまたはアログリプチン）の投与によって増強され得る。
【０１３１】
種々の実施形態において、コンジュゲートはアミリンまたはアミリン類似体（すなわち、アミリン様生理活性を有し、アミリンとは１〜１０個のアミノ酸の置換、付加もしくは欠失および／または化学修飾によって異なるペプチド）を含むものであり得る。アミリンは、グルコースの調節に重要な役割を果たしている（例えば、ＥｄｅｌｍａｎおよびＷｅｙｅｒ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｔｈｅｒ．４：１７５〜１８９、２００２を参照のこと）。アミリンは、食物摂取量に応答して膵臓のβ細胞によってインスリンとともに共分泌される神経内分泌ホルモンである。インスリンは血流からのグルコースの消失を調節する働きをするが、アミリンは、胃および肝臓から血流中へのグルコースの出現の調節を補助する働きをする。酢酸プラムリンチド（ＳＹＭＬＩＮ（登録商標））は例示的なアミリン類似体である。天然ヒトアミリンはアミロイド形成性であるため、プラムリンチドを設計するためのストラテジーは、ある特定の残基を、アミロイド形成性でないラットアミリン由来の残基で置換することを伴うものであった。特に、プロリン残基は構造破壊性残基であることがわかっており、そのため、該残基は、ラット配列からヒト配列に直接グラフトされた。また、Ｇｌｕ−１０もアスパラギンで置換された。
【０１３２】
種々の実施形態において、プレコンジュゲート薬物は、１つ以上の反応性部分（例えば、カルボキシルまたは反応性エステル、アミン、ヒドロキシル、アルデヒド、スルフヒドリル、マレイミジル、アルキニル、アジドなどの部分）を含むものであり得る。以下に論考するように、このような反応性部分により、一部の特定の実施形態では、コンジュゲーションプロセスが助長され得る。具体例としては、α末端アミンおよび／またはε−アミンリジン基を有するペプチド薬が挙げられる。このような反応性部分はいずれも、既に存在するものでない場合は、既知の薬物に人工的に付加され得ることは認識されよう。例えば、ペプチド薬の場合、適当なアミノ酸（例えば、リジン）が、アミノ酸配列に付加されるか、または該配列内で置換され得る。また、より詳細に以下に論考するように、コンジュゲーションプロセスは、コンジュゲーション前に特定の反応性部分を選択的にブロックすることにより制御され得ることは認識されよう。
【０１３３】
上記に論考したように、本開示は、なんら特定の薬物／外因性の標的分子の組合せに限定されない。
【０１３４】
コンジュゲートの枠組構造
コンジュゲートは、親和性リガンドを天然に含む枠組構造から調製され得るもの（例えば、グリコゲンおよびデキストランなどの多糖類は、グルコース親和性リガンドを天然に含む）、および／または親和性リガンドを、天然もしくは合成の枠組構造内に人工的に組み込むことにより調製され得るものである。本開示のコンジュゲートは特定の枠組構造に限定されないことは理解されよう。例えば、コンジュゲートは、ポリマー構造および／または非ポリマー構造を含む枠組構造を用いて調製され得る。また、コンジュゲートの枠組構造は、線状、分岐、超分岐型および／またはこれらの組合せであり得ることも理解されよう。以下のセクションに、いくつかの例示的なコンジュゲート枠組構造を示す。
【０１３５】
種々の実施形態において、コンジュゲートは、ポリマー構造を含む枠組構造から調製され得る。例えば、反応性懸垂基（例えば、カルボキシルまたは反応性のエステル、アミン、ヒドロキシル、アルデヒド、スルフヒドリル、マレイミジル、アルキニル、アジドなど）を有するポリマーが使用され得る。異なる懸垂基が単一の枠組構造内で混合されていてもよいことは認識されよう（例えば、適切なモノマーを所望の比率で共重合させることにより、ポリマー枠組構造を得る）。以下に論考するように、このような反応性基は、親和性リガンドおよび／または薬物を枠組構造に結合させるために使用され得る。また、異なる枠組構造のコポリマー、混合物および付加物も使用され得る。かかる組合せは、物質体の機械的および化学的特性を最適化するのに有用であり得る。
【０１３６】
種々の実施形態において、カルボキシル（または反応性のエステル）懸垂基を有する枠組構造（−ＣＯＯＨ含有枠組構造、またはＣＢＦ）が使用され得る。かかる枠組構造は、カルボキシル基を天然に含むものであってもよく、カルボキシル基を含むように修飾されたものであってもよい。例示的なポリマーＣＢＦとしては、限定されないが、カルボキシル化多糖類（ＣＰＳ）、例えば、アルギネート（Ａｇ）、カルボキシメチル化−Ｄ−マンノ−Ｄ−グルカン（ＣＭＭＧ、Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．から入手可能）、カルボキシメチルデキストラン（ＣＭＤｅｘ）、カルボキシメチルキチン（ＣＭＣｈ、Ｋａｔａｋｕｒａ  Ｃｈｉｋｋａｌｉｎ  Ｃｏ．から入手可能）、Ｎ−脱硫酸化Ｎ−アセチル化ヘパリン（ＤＳＨ）、およびヒアルロン酸（ＨＡ）などが挙げられる。ＤＳＨおよびＣＭＤｅｘは、Ｓｕｇａｈａｒａら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ，２４，５３５−５４３（２００１）に従って合成され得る。一般に、ヒドロキシル化枠組構造は、塩基性条件下でのクロロ酢酸との反応によってカルボキシル化され得る。ポリマー枠組構造の場合、モノマーに対するカルボキシル置換の度合は、１〜１００ｍｏｌ％の間で異なり得る。天然に存在するカルボキシル化ポリマーとしては、限定されないが、ポリ−Ｌ−グルタメートおよびポリ−Ｌ−アスパルテートなどのカルボキシル化ポリ（アミノ酸）（ＣＰＡＡ）が挙げられる。カルボキシレート含有量は、カルボキシル化アミノ酸（例えば、ポリマー主鎖の一部となるカルボキシル基に加えてカルボキシル基を有するアミノ酸）と、非カルボキシル化アミノ酸（例えば、カルボキシル基のみがポリマー主鎖の一部となるアミノ酸）を共重合させることにより、１〜１００％ｍｏｌ  ＣＯＯＨ／ｍｏｌ  ＡＡ残基の間で変動させ得る。
【０１３７】
種々の実施形態において、アミン懸垂基を有する枠組構造（−ＮＨ２含有枠組構造、またはＮＢＦ）が使用され得る。かかる枠組構造は天然に存在するものであってもよく、第１級アミンを含むように化学修飾されたものであってもよい。後者としては、限定されないが、ポリマー枠組構造、例えば、アミン懸垂多糖類（ＮＰＳ）（脱アセチル化キトサン（Ｃｈ）（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．）など）およびジエチルアミノエチルエーテルデキストラン（ＤＥＡＥＤｅｘ），ＭＷ  ５００，０００ｇ／ｍｏｌ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｐａ．）が挙げられる。かかるポリマー枠組構造の場合、モノマーに対するアミン置換の度合は、１〜１００ｍｏｌ％の間で異なり得る。他の好適なＮＢＦとしては、限定されないが、２’位がプリン塩基の１つ以上がアミン基で誘導体化されたポリヌクレオチドが挙げられる。天然に存在するアミン化ポリマーとしては、限定されないが、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）およびそのエナンチオマーなどのポリ（アミノ酸）が挙げられる。アミン含有量は、アミン化アミノ酸（例えば、最終的にポリマー主鎖の一部となるアミン基に加えてアミンを有するアミノ酸）と、非アミン化アミノ酸（例えば、アミンのみが最終的にポリマー主鎖の一部となるアミノ酸）を共重合させることにより、１〜１００％ｍｏｌ  ＮＨ２／ｍｏｌ  アミノ酸残基の間で変動させ得る。
【０１３８】
種々の実施形態において、ヒドロキシル懸垂基を有するポリマー（−ＯＨ含有枠組構造、またはＯＢＦ）が使用され得る。かかる枠組構造は、天然にヒドロキシル化されたものであってもよく、ヒドロキシル基を含むように化学修飾されたものであってもよい。デキストランに加えて、天然に存在するポリマーＯＢＦとしては、限定されないが、酵母マンナン（Ｍｎ）、プルラン（Ｐｌ）、アミロース（Ａｍ）、アミロペクチン（ＡｍＰ）、グリコゲン（Ｇｌ）、セルロース（Ｃｌ）、ヒアルロネート（Ｈｙ）、コンドロイチン（ＣｈＤ）、およびデキストリン（Ｄｘ）（これらはすべて、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから市販品として入手され得る）などの多糖類が挙げられる。また、ポリ（セリン）、ポリ（トレオニン）、ポリ（チロシン）、およびポリ（４−ヒドロキシプロリン）などのポリ（アミノ酸）も、ヒドロキシル化ポリマーとして使用され得る。ポリ（アミノ酸）のヒドロキシル含有量は、ヒドロキシル化アミノ酸を非ヒドロキシル化アミノ酸と共重合させることにより、１〜１００％ｍｏｌ  −ＯＨ／ｍｏｌ  アミノ酸残基の間で変動させ得る。もちろん、カルボキシル（または反応性のエステル）、アミノ、およびヒドロキシル懸垂基は、適切なアミノ酸を所望の比率で共重合させることにより、単一のポリマー内で混合されていてもよい。
【０１３９】
種々の実施形態において、スルフヒドリル懸垂基を有する枠組構造（−ＳＨ含有枠組構造、またはＳＢＦ）が使用され得る。ＳＢＦは、天然にスルフヒドリル化されたものであってもよく、スルフヒドリル基を含むように標準的な有機化学手法を用いて化学修飾されたものであってもよい。他の実施形態では、アルデヒド、マレイミジル、アルキニル、アジドなどの懸垂基を有する枠組構造が使用され得る。
【０１４０】
前述の類型の枠組構造に加えて、使用され得る一部の例示的なポリマーとしては、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ＰＬＡ−ＰＧＡコポリマー（ＰＬＧＡ）、ポリ（無水物）、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（プロピルフマレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリアミド、ポリアセタール、生物分解性ポリシアノアクリレートおよび生物分解性ポリウレタンが挙げられる。
【０１４１】
種々の実施形態において、下記一般式（Ｉ）のコンジュゲートが使用され得る。
【化６】
2012516339.tif 000009
【０１４２】
式（ＩＶ）のコンジュゲートの種々の実施形態を実施例９に詳細に記載するが、一般に、
Ｒｘは、水素または任意選択で置換されているＣ１−６アルキルであり；
Ｚ１は、任意選択で置換されている二価のＣ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、Ｚ１の１、２、３、４または５個のメチレン単位は、任意選択で独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、任意選択で置換されているアリーレン部分または任意選択で置換されているヘテロアリーレン部分から選択される１つ以上の基で置き換えられており、式中、Ｒａは、水素、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、または適当なアミノ保護基であり、Ｒｂは、水素、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、または任意選択で置換されているヘテロアリールであり；
存在するＸ１は各々、独立して、−ＯＲＣまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、式中、Ｒｃは、水素、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、適当なヒドロキシル保護基、カチオン基、または親和性リガンドであり、各Ｒｄは、独立して、水素、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、適当なアミノ保護基、または親和性リガンドであるが、存在するＸ１の少なくとも２つは親和性リガンドを含むものとし；
Ｙ１は、水素、ハロゲン、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、式中、Ｒｅは、水素、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、または任意選択で置換されているヘテロアリールであり；
ｒは、５〜２５（両端を含む）の整数であり；
Ｗ１は、薬物であり；
【化７】
2012516339.tif 000010
【０１４３】
は、共有結合性の単結合または二重結合に相当する
ことを理解されたい。
【０１４４】
種々の実施形態において、下記の一般式（ＩＩ）コンジュゲートが使用され得る：
【化８】
2012516339.tif 000011
【０１４５】
（式中：
［（Ａ−Ｔ）］は各々、該コンジュゲート内の存在し得る分岐部を表し；
（Ａ−Ｔ）は各々、該コンジュゲートの分岐内の存在し得る反復部を表し；
−Ａ−は各々、独立して、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環式からなる群より選択される任意選択で置換されている基であり；
Ｔは各々、独立して、共有結合であるか、または二価の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和の任意選択で置換されているＣ１−３０炭化水素鎖であり、ここで、Ｔの１つ以上のメチレン単位は、任意選択で独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環式基、アリール基またはヘテロアリール基で置き換えられており；
Ｒは各々、独立して、水素、適当な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
−Ｂは、−Ｔ−ＬＢ−Ｘであり；
Ｘは各々、独立して、親和性リガンドであり；
ＬＢは各々、独立して、共有結合であるか、またはＴとＸとの共有結合性コンジュゲーションに由来する基であり；
−Ｄは、−Ｔ−ＬＤ−Ｗであり；
Ｗは各々、独立して、薬物であり；
ＬＤは各々、独立して、共有結合であるか、またはＴとＷとの共有結合性コンジュゲーションに由来する基であり；
ｋは、２〜１１（両端を含む）の整数であり、該コンジュゲート内にｋ−分岐部が少なくとも２つあることを規定し；
ｑは、１〜４（両端を含む）の整数であり；
ｋ＋ｑは、３〜１２（両端を含む）の整数であり；
ｐは各々、独立して、１〜５（両端を含む）の整数であり；
ｎは各々、独立して、０〜５（両端を含む）の整数であり；
ｍは各々、独立して、１〜５（両端を含む）の整数であり；
ｖは各々、独立して、０〜５（両端を含む）の整数であるが、各ｋ−分岐部において、存在する少なくとも１つのｎは≧１であり、存在する少なくとも１つのｖは≧１であるものとする）。
【０１４６】
一般式（ＩＩ）（および本明細書における他の式）には、１つ１つの水素を明示していないことは理解されよう。例えば、中央の−Ａ−がＣ６アリール基であり、ｋ＋ｑ＜６である場合、Ｃ６アリール環上の空き位置（１つまたは複数）には水素が含まれることは認識されよう。
【０１４７】
一般に、−Ａ−は各々、存在し得る分岐節を表すこと、ならびに各節の分岐の数は、中央の−Ａ−のｋと、中央でない−Ａ−のｎの値によって決定されることは認識されよう。ｋ≧２であるため、該コンジュゲートは常に少なくとも２つのｋ−分岐部を含む。当業者には、各ｎの存在が０〜５の整数であり得るため、本開示において、このようなコンジュゲートでは、分岐実施形態と超分岐（例えば、デンドリマー様）実施形態の両方が想定されることが認識されよう。各ｋ−分岐部において、存在する少なくとも１つのｎが≧１であり、存在する少なくとも１つのｖが≧１であることを必要とする条件により、どのコンジュゲートも、Ｂ（すなわち、親和性リガンド）の存在を伴う少なくとも２つの個別のｋ−分岐部を含むことが確実になる。
【０１４８】
一部の特定の実施形態では、ｐ−括弧部分内に存在する−Ａ−は各々、ｎ≧１の値に該当する数のｎ−括弧部分で置換されている。例えば、両方のｋ−分岐部においてｋ＝２およびｐ＝２である場合、該コンジュゲートは、式（ＩＩａ）：
【化９】
2012516339.tif 000012
【０１４９】
のものであり得る。
【０１５０】
他の実施形態では、ｐ−括弧部分内の末端に存在する−Ａ−のみが、ｎ≧１の値に該当する数のｎ−括弧部分で置換されている。例えば、両方のｋ−分岐部においてｋ＝２およびｐ＝２である（ならびに両方のｋ−分岐部内の最初のｐ−括弧部分はｎ＝０である）場合、該コンジュゲートは、式（ＩＩｂ）：
【化１０】
2012516339.tif 000013
【０１５１】
のものであり得る。
【０１５２】
一部の特定の実施形態では、ｍ−括弧部分内に存在する−Ａ−は各々、ｖ≧１の値に該当する数のＢ部分で置換されている。例えば、ｋ＝２、存在する各ｐ＝１、および存在する各ｍ＝２である場合、該コンジュゲートは、式（ＩＩｃ）：
【化１１】
2012516339.tif 000014
【０１５３】
のものであり得る。
【０１５４】
他の実施形態では、ｍ−括弧部分内の末端に存在する−Ａ−のみが、ｖ≧１の値に該当する数のＢ部分で置換されている。例えば、Ｋ＝２、存在する各ｐ＝１、および存在する各ｍ＝２である（ならびに各ｎ−分岐部内の第１のｍ−括弧部分についてｖ＝０である）場合、該コンジュゲートは、式（ＩＩｄ）：
【化１２】
2012516339.tif 000015
【０１５５】
のものであり得る。
【０１５６】
さらなる一例として、先の式の両方のｋ−分岐部においてｑ＝１およびｎ＝１である場合、該コンジュゲートは、式（ＩＩｅ）：
【化１３】
2012516339.tif 000016
【０１５７】
のものであり得る。
【０１５８】
あるいはまた、先の式の両方のｋ−分岐部においてｑ＝１およびｎ＝２である場合、該コンジュゲートは、式（ＩＩｆ）：
【化１４】
2012516339.tif 000017
【０１５９】
のものであり得る。
【０１６０】
種々の実施形態において、本開示により、また、コンジュゲートの枠組構造に非共有結合で結合された親和性リガンドおよび／または薬物を含むコンジュゲートが提供される。
【０１６１】
例えば、一部の実施形態では、本開示により、式中：−Ａ−、Ｔ、Ｄ、ｋ、ｑ、ｋ＋ｑ、ｐ、ｎ、ｍおよびｖは各々、上記および本明細書において記載のとおりに定義し；
−Ｂは、−Ｔ−ＬＲＰＢ−Ｘであり；
Ｘは各々、独立して、親和性リガンドであり；
ＬＲＰＢは各々、独立して、ＴとＸ間に非二重結合を形成するリガンド−受容体ペアであり、ヒト血清中の解離定数が１ｐｍｏｌ／Ｌ未満である、
前述の任意の式のコンジュゲートが提供される。
【０１６２】
また他の実施形態では、本開示により、式中：−Ａ−、Ｔ、Ｂ、ｋ、ｑ、ｋ＋ｑ、ｐ、ｎ、ｍおよびｖは各々、上記および本明細書において記載のとおりに定義し；
−Ｄは、−Ｔ−ＬＲＰＤ−Ｗであり；
Ｗは各々、独立して、薬物または検出可能な標識であり；
ＬＲＰＤは各々、独立して、ＴとＷ間に非二重結合を形成するリガンド−受容体ペアであり、ヒト血清中の解離定数が１ｐｍｏｌ／Ｌ未満である、
前述の任意の式のコンジュゲートが提供される。
【０１６３】
他の実施形態では、本開示により、式中：−Ａ−、Ｔ、ｋ、ｑ、ｋ＋ｑ、ｐ、ｎ、ｍおよびｖは各々、上記および本明細書において記載のとおりに定義し；
−Ｂは、−Ｔ−ＬＲＰＢ−Ｘであり；
存在するＸは各々、独立して、親和性リガンドであり；
存在するＬＲＰＢは各々、独立して、ＴとＸ間に非二重結合を形成するリガンド−受容体ペアであり、ヒト血清中の解離定数が１ｐｍｏｌ／Ｌ未満であり、
−Ｄは、−Ｔ−ＬＲＰＤ−Ｗであり；
存在するＷは各々、独立して、薬物であり；
存在するＬＲＰＤは各々、独立して、ＴとＷ間に非二重結合を形成するリガンド−受容体ペアであり、ヒト血清中の解離定数が１ｐｍｏｌ／Ｌ未満である、
前述の任意の式のコンジュゲートが提供される。
【０１６４】
種々の実施形態において、本開示のコンジュゲートは、一般式（ＩＩＩ）：
【化１５】
2012516339.tif 000018
（式中、−Ａ−、Ｂ、Ｔ、Ｄ、ｖ、ｍ、ｎおよびｐは本明細書において定義および記載のとおりであり、ｋは、１〜１１（両端を含む）の整数であり、ｊは、２〜４（両端を含む）の整数である）を有するものであり得る。式（ＩＩＩ）のコンジュゲートは、薬物に対するリガンドのコンジュゲーション部位を多数有するものであり得る。ｑが１である場合、式中、ｊが２、３または４である式（ＩＩＩ）のコンジュゲートに対して、当業者には、上記のもの（式（ＩＩａ）〜（ＩＩｆ））に対して示される類似した亜属が想定され得ることは認識されよう。
【０１６５】
例示の目的で、および混乱の回避のため、式（ＩＩＩ）のコンジュゲート内に存在する−Ａ−Ｄ−Ａ−（すなわち、ｊが２である場合）を、−Ａ−Ｔ−ＬＤ−Ｗ−ＬＤ−Ｔ−Ａ−（薬物がコンジュゲートの枠組構造に共有結合されている場合）または−Ａ−Ｔ−ＬＲＰＤ−Ｗ−ＬＲＰＤ−Ｔ−Ａ−（薬物がコンジュゲートの枠組構造に非共有結合されている場合）で表すことがあり得ることを理解されたい。
【０１６６】
例示的な基の説明
−Ａ−（節）
一部の特定の実施形態では、存在する−Ａ−は各々、独立して、アシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環式からなる群より選択される、任意選択で置換されている基である。一部の実施形態では、各−Ａ−
は同じである。一部の実施形態では、中央の−Ａ−は、他のすべての−Ａ−と異なる。一部の特定の実施形態では、−Ａ−はすべて、中央の−Ａ−以外、同じである。一部の実施形態では、−Ａ−は、任意選択で置換されているアリールまたはヘテロアリール基である。一部の実施形態では、−Ａ−は６員のアリールである。一部の特定の実施形態では、−Ａ−はフェニルである。一部の特定の実施形態では、−Ａ−は、Ｎ、ＯまたはＳから選択されるヘテロ原子である。一部の実施形態では、−Ａ−は窒素原子である。一部の実施形態では、−Ａ−は酸素原子である。一部の実施形態では、−Ａ−はイオウ原子である。一部の実施形態では、−Ａ−は炭素原子である。
【０１６７】
Ｔ（スペーサー）
一部の特定の実施形態では、存在するＴは各々、独立して、二価の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和の、任意選択で置換されているＣ１−２０炭化水素鎖であり、Ｔの１つ以上のメチレン単位は、任意選択で独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環式基、アリール基、またはヘテロアリール基で置き換えられている。一部の特定の実施形態では、Ｔの１、２、３、４または５個のメチレン単位が、任意選択で独立して置き換えられている。一部の特定の実施形態では、Ｔは、Ｃ１−１０、Ｃ１−８、Ｃ１−６、Ｃ１−４、Ｃ２−１２、Ｃ４−１２、Ｃ６−１２、Ｃ８−１２、またはＣ１０−１２炭化水素鎖で構築されており、ここで、Ｔの１つ以上のメチレン単位は、任意選択で独立して、−０−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環式基、アリール基、またはヘテロアリール基で置き換えられている。一部の実施形態では、Ｔの１つ以上のメチレン単位が複素環式基で置き換えられている。一部の実施形態では、Ｔの１つ以上のメチレン単位がトリアゾール部分で置き換えられている。一部の特定の実施形態では、Ｔの１つ以上のメチレン単位が−Ｃ（Ｏ）−で置き換えられている。一部の特定の実施形態では、Ｔの１つ以上のメチレン単位が−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−で置き換えられている。一部の特定の実施形態では、Ｔの１つ以上のメチレン単位が−０−で置き換えられている。
【０１６８】
一部の実施形態では、Ｔが
【化１６】
2012516339.tif 000019
【０１６９】
である。
【０１７０】
一部の実施形態では、Ｔが
【化１７】
2012516339.tif 000020
【０１７１】
である。
【０１７２】
一部の実施形態では、Ｔが
【化１８】
2012516339.tif 000021
【０１７３】
である。
【０１７４】
一部の実施形態では、Ｔが
【化１９】
2012516339.tif 000022
【０１７５】
である。
【０１７６】
一部の実施形態では、Ｔが
【化２０】
2012516339.tif 000023
【０１７７】
である。
【０１７８】
一部の実施形態では、Ｔが
【化２１】
2012516339.tif 000024
【０１７９】
である。
【０１８０】
一部の特定の実施形態では、各Ｔは同じである。
【０１８１】
一部の特定の実施形態では、各Ｔ（Ｂ基とＤ基の外側）が二重結合であり、該コンジュゲートは、一般式（Ｖ）または（ＶＩ）：
【化２２】
2012516339.tif 000025
（式中、−Ａ−、Ｂ、Ｄ、ｖ、ｍ、ｎ、ｐ、ｋおよびｊは、それぞれ、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）で定義および記載のとおりである）のものである。
【０１８２】
一般式（Ｖ）または（ＶＩ）の一部の特定の実施形態では、−Ａ−は各々、中央の−Ａ−以外は二重結合であり、各ｖは１であり、該コンジュゲートは式（ＶＩＩ）または（ＶＩＩＩ）：
【化２３】
2012516339.tif 000026
【０１８３】
（式中、−Ａ−、Ｂ、Ｄ、ｑ、ｋおよびｊは、それぞれ、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）で定義および記載のとおりである）のものである。
【０１８４】
式（ＶＩＩ）の一部の特定のかかる実施形態では、ｋ＝２およびｑ＝１である。
【０１８５】
他の実施形態では、ｋ＝３およびｑ＝１である。
【０１８６】
他の実施形態では、ｋ＝２およびｑ＝２である。
【０１８７】
式（ＶＩＩＩ）の一部の特定のかかる実施形態では、ｋ＝１およびｊ＝２である。
【０１８８】
他の実施形態では、ｋ＝２およびｊ＝２である。
【０１８９】
他の実施形態では、ｋ＝３およびｊ＝２である。
【０１９０】
他の実施形態では、ｋ＝１およびｊ＝３である。
【０１９１】
他の実施形態では、ｋ＝２およびｊ＝３である。
【０１９２】
他の実施形態では、ｋ＝３およびｊ＝３である。
【０１９３】
一部の実施形態では、本開示により、一般式（ＶＩＩａ）：
【化２４】
2012516339.tif 000027
【０１９４】
（式中、ＢおよびＤは、本明細書において定義および記載のとおりである）のコンジュゲートが提供される。
【０１９５】
例えば、一部の実施形態では、本開示により、式：
【化２５】
2012516339.tif 000028
【０１９６】
（式中、ＷおよびＸは、本明細書において定義および記載のとおりである）のコンジュゲートが提供される。
【０１９７】
一部の実施形態では、本開示により、一般式（ＶＩＩｂ）：
【化２６】
2012516339.tif 000029
【０１９８】
（式中、ＢおよびＤは、本明細書において定義および記載のとおりである）のコンジュゲートが提供される。
【０１９９】
例えば、一部の実施形態では、本開示により、式：
【化２７】
2012516339.tif 000030
2012516339.tif 000031
【０２００】
（式中、ＷおよびＸは、本明細書において定義および記載のとおりである）のコンジュゲートが提供される。
【０２０１】
一部の実施形態では、本開示により、一般式（ＶＩＩｃ）：
【化２８】
2012516339.tif 000032
【０２０２】
（式中、ＢおよびＤは、本明細書において定義および記載のとおりである）のコンジュゲートが提供される。
【０２０３】
例えば、一部の実施形態では、本開示により、式：
【化２９】
2012516339.tif 000033
【０２０４】
（式中、ＷおよびＸは、本明細書において定義および記載のとおりである）のコンジュゲートが提供される。
【０２０５】
式中、ｊが２、３または４である式（ＶＩＩＩ）のコンジュゲートに対して、当業者には、式（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）および（ＶＩＩｃ）のものならびにその一種に類似した亜属が想定され得ることは認識されよう。例えば、ｊが２である場合、一部の特定の実施形態では、本開示により、式：
【化３０】
2012516339.tif 000034
【０２０６】
（式中、ＢおよびＤは、本明細書において定義および記載のとおりである）のコンジュゲートが提供される。
【０２０７】
一部の特定の実施形態では、本開示により、式：
【化３１】
2012516339.tif 000035
2012516339.tif 000036
【０２０８】
（式中、Ｗ、Ｘおよびｊは、本明細書において定義および記載のとおりである）のコンジュゲートが提供される。
【０２０９】
Ｂ（リガンド）
種々の実施形態において、−Ｂは、−Ｔ−ＬＢ−Ｘであり、式中、Ｘはリガンドであり；ＬＢは、共有結合であるか、またはＸとＴとの共有結合性コンジュゲーションに由来する基である。例示的なリガンドは先に記載した。
【０２１０】
Ｄ（薬物）
種々の実施形態において、−Ｄは−Ｔ−ＬＤ−Ｗであり、式中、Ｗは薬物であり、ＬＤは共有結合であるか、またはＷとＴとの共有結合性コンジュゲーションに由来する基である。例示的な薬物は上記のとおりであった。
【０２１１】
ＬＢおよびＬＤ（共有結合性コンジュゲーション）
当業者には、さまざまなコンジュゲーション化学反応が、ＸとＴおよび／またはＷとＴ（包括的には、「構成要素」）の共有結合性コンジュゲーションに使用され得ることが認識されよう。かかる手法は当該技術分野で広く知られており、例示的な手法を以下に論考する。該構成要素は、直接結合されていてもよく（すなわち、介在化学基なしで）、スペーサー（例えば、コンジュゲート要素とコンジュゲートの枠組構造の残部との間に、ある程度の物理的隔離をもたらすカップリング剤または共有結合鎖）を介して間接的に結合されていてもよい。該構成要素はコンジュゲート枠組構造に、任意の数の化学結合（例えば、限定されないが、アミド、アミン、エステル、エーテル、チオエーテル、イソ尿素、イミンなどの結合）によって共有結合され得ることは理解されよう。一部の特定の実施形態では、ＬＢおよび／またはＬＤ（一般的に、このセクションでの解釈上では「Ｌ」）は二重結合である。一部の実施形態では、Ｌは、Ｔの任意選択で置換されているカルボニル反応性、チオール反応性、アミン反応性、またはヒドロキシル反応性の部分を、ＸまたはＷのカルボキシル、チオール、アミンまたはヒドロキシル基とコンジュゲートさせることに由来する任意選択で置換されている部分である。一部の実施形態では、Ｌは、ＸまたはＷの任意選択で置換されているカルボキシル反応性、チオール反応性、アミン反応性、またはヒドロキシル反応性の部分を、Ｔのカルボキシル、チオール、アミンまたはヒドロキシル基とコンジュゲートさせることに由来する任意選択で置換されている部分である。一部の実施形態では、Ｌは、
【化３２】
2012516339.tif 000037
【０２１２】
である。一部の実施形態では、Ｌはスクシンイミド部分である。
【０２１３】
種々の実施形態において、該構成要素はコンジュゲート枠組構造に、当該技術分野で知られた「クリックケミストリー」反応を用いて共有結合され得る。該反応としては、例えば、付加環化反応、求核性開環反応、および炭素−炭素多重結合に対する付加が挙げられる（例えば、ＫｏｌｂおよびＳｈａｒｐｌｅｓｓ，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ８：１１２８−１１３７，２００３ならびにそこに挙げられた参考文献ならびにＤｏｎｄｏｎｉ，Ｃｈｅｍ．Ａｓｉａｎ  Ｊ．２：７００−７０８，２００７、ならびにそこに挙げられた参考文献を参照のこと）。上記に論考したように、種々の実施形態において、該構成要素はコンジュゲート枠組構造に、天然の、または化学的に付加した懸垂基を介して結合され得る。一般に、１対の反応性基の第１と第２の構成員（例えば、反応してアミド結合をもたらすカルボキシル基とアミン基）は、該構成要素と枠組構造のいずれか一方に存在し得る（すなわち、２つの構成員の相対位置は、これらが反応してコンジュゲートが得られる限り重要でない）ことは認識されよう。例示的な結合は、より詳細に以下に論考する。種々の実施形態において、カルボキシル（または反応性エステル）含有構成要素が、−ＯＨ含有枠組構造（ＯＢＦ）に、ＫｉｍらによるＢｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２４：４８４３−４８５１（２００３）に概要が示された手順を用いてコンジュゲートされ得る。簡単には、ＯＢＦをＤＭＳＯに、カルボキシル含有構成要素とともに溶解させ、触媒としてのＮ’，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）によって、乾燥雰囲気下で反応させる。カルボキシル含有構成要素は、−ＮＨ２含有枠組構造（ＮＢＦ）に、カルボジイミド（ＥＤＡＣ）カップリング手順を用いてコンジュゲートされ得る。この手順を使用し、カルボキシル含有構成要素を、ｐＨ５の緩衝液中、ＥＤＡＣとの反応によって官能化した後、ＮＢＦに付加する。このような場合（および以下の任意の場合）ではいずれも、得られた生成物は、当業者に利用可能な任意の数の手段によって、例えば限定されないが、サイズ排除クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、シリカゲルクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、限外濾過、および選択的沈殿によって精製され得る。
【０２１４】
種々の実施形態において、アミン含有構成要素は−ＣＯＯＨ含有枠組構造（ＣＢＦ）にカップリングされ得る。ＣＢＦには、活性化型エステル部分が使用されている（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、２００８およびそこに挙げられた参考文献を参照のこと）。簡単には、末端活性化カルボン酸エステル（例えば、−ＮＨＳ、−ＳＳＣ、−ＮＰＣなど）を有するＣＢＦを、無水有機溶媒（ＤＭＳＯまたはＤＭＦなど）に溶解させる。次いで、所望の当量数のアミン含有構成要素を添加し、室温で数時間混合する。また、アミン含有構成要素は、Ｂａｕｄｙｓら，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．９：１７６−１８３，１９９８に記載のように、安定なアミド結合を得るためにＣＢＦにコンジュゲートされ得る。この反応は、トリブチルアミン（ＴＢＡ）とクロロギ酸イソブチルを、ＣＢＦとアミン含有構成要素のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液に、無水条件下で添加することにより行なわれ得る。あるいはまた、アミン含有構成要素をＯＢＦに、限定されないが、臭化シアン（ＣＮＢｒ）、Ｎ−シアノトリエチルアンモニウムテトラフルオロボレート（ＣＴＥＡ）、１−シアノ−４−（ジメチルアミノ）−ピリジニウムテトラフルオロボレート（ｆｌｕｏｒｂｏｒａｔｅ）（ＣＤＡＰ）、およびｐ−ニトロフェニルシアネート（ｐＮＰＣ）などの試薬を用いるシアノ化（ｃｙａｎａｌａｔｉｏｎ）によってカップリングさせてもよい。ＣＮＢｒ反応は、水溶液中で弱塩基性ｐＨにて行なわれ得る。ＣＤＡＰ反応は、ＤＭＳＯと水の混合物中で弱塩基性ｐＨにて、触媒としてトリエチルアミン（ＴＥＡ）を用いて行なわれる。一部の特定の実施形態では、アミン含有構成要素はＮＢＦに、例えば、ピリジンを含む水性緩衝溶液中でのグルタルアルデヒドカップリング後、グリシンでのクエンチングによってコンジュゲートされ得る。一部の特定の実施形態では、アミン含有構成要素はアルデヒド含有枠組構造に、シッフ塩基カップリング手順の使用後、還元することによりコンジュゲートされ得る（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、２００８およびそこに挙げられた参考文献、ならびにＭｅｉら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１６：１６８０−１６８６、１９９９およびそこに挙げられた参考文献を参照のこと）。簡単には、末端活性化型アルデヒド（例えば、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ブチルアルデヒドなど）を有する枠組構造を、中性またはそれより低いｐＨを有する（好ましくないアルデヒドの加水分解を抑制するため）水性緩衝液に溶解させる。次いで、所望の当量数のアミン含有構成要素を添加し、室温で混合した後、過剰の適当な還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム、ナトリウムシアノボロヒドリド、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドピリジンボラン、トリエチルアミンボランなど）を添加する。
【０２１５】
種々の実施形態において、ヒドロキシル含有構成要素はＯＢＦに、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）手順に従ってコンジュゲートされ得る。この手順を使用し、ＯＢＦをｐＨ１１．４の重炭酸緩衝液に添加し、ＤＶＳで活性化させ、続いてヒドロキシル含有構成要素を添加した後、グリシンを添加して反応液を中和およびクエンチする。また、ヒドロキシル含有構成要素をＯＢＦに、エステル結合をもたらす上記の活性化型エステル部分を用いてカップリングさせてもよい。
【０２１６】
種々の実施形態において、スルフヒドリル含有構成要素がマレイミド含有枠組構造（ＭＢＦ）に、チオエーテル結合をもたらす比較的穏和な手順を用いてカップリングされ得る（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、２００８およびそこに挙げられた参考文献を参照のこと）。マレイミド基は活性化型エステルよりもはるかに加水分解されにくいため、反応を水性条件下で行なってもよい。簡単には、ＭＢＦをｐＨ６．５〜７．５の緩衝水溶液に溶解させた後、所望の当量数のスルフヒドリル含有構成要素を溶解させる。室温で数時間混合した後、チオエーテルカップリングコンジュゲートは精製され得る。また、スルフヒドリル含有構成要素を、Ｔｈｏｍａら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２１：５９１９−５９２９、１９９９に記載の方法に従ってＮＢＦにコンジュゲートさせてもよい。この反応は、ＮＢＦを無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に懸濁させた後、２，６−ルチジンと酸無水物を添加し、続いて反応性の中間体を精製することを伴う。次いで、スルフヒドリル含有構成要素を該中間体のＤＭＦ溶液（トリエチルアミンを含む）に添加する。種々の実施形態において、アジド含有構成要素をアルキン含有枠組構造（ＡＢＦ）に、銅（Ｉ）触媒型の現代版Ｈｕｉｓｇｅｎ型アジド−アルキン付加環化を用いてカップリングさせると、１，４−ジ−置換１，２，３−トリアゾールを得ることができる（例えば、Ｄｏｎｄｏｎｉ，Ｃｈｅｍ．Ａｓｉａｎ  Ｊ．２：７００−７０８，２００７およびそこに挙げられた参考文献、ならびにＤｅｄｏｌａら，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．５：１００６−１０１７，２００７を参照のこと）。この反応は、一般的に「クリック」反応と称され、例えば、無希釈ＴＨＦ中で、触媒系としてＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンとＣｕ（ＰＰｈＳ）３Ｂｒを用いて行なわれ得る（例えば、Ｗｕら、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．５７７５−５７７７、２００５を参照のこと）。また、この反応は、３：１（ＴＨＦ：水）混合物中、触媒系としてアスコルビン酸ナトリウムとＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏを用いて行なわれ得る（例えば、Ｗｕら、上掲を参照のこと）。いずれの場合も、アジド含有構成要素をＡＢＦに所望の当量数で添加した後、室温で１２〜４８時間混合する。あるいはまた、アルキン含有構成要素をアジド含有枠組構造に、上記のものと厳密に同じ条件を用いてコンジュゲートさせてもよい。
【０２１７】
一部の特定の該構成要素は、天然で、１つより多くの同じ化学反応性部分を有するものであり得る。一部の例では、該構成要素が該部位のうちの唯一の部位で選択的に反応するように化学反応型および条件を選択することが可能である。例えば、インスリンが反応性アミンを介してコンジュゲートされている場合、一部の特定の実施形態では、Ｎ末端α−Ｐｈｅ−Ｂ１は、インスリン生理活性を保持するのに、Ｎ末端α−Ｇｌｙ−Ａ１およびε−Ｌｙｓ−Ｂ２９よりも好ましい結合部位である（例えば、Ｍｅｉら，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１６：１６８０−１６８６，１９９９およびそこに挙げられた参考文献、ならびにＴｓａｉら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６：１２６４−１２６８，１９９７を参照のこと）。インスリンとヘキサデセナール（末端がアルデヒドの分子）との例示的な反応において、研究者らにより、この２つの構成要素を、ナトリウムシアノボロヒドリドの存在下、５４％イソプロパノールを含む１．５ＭのｐＨ６．８のサリチル酸ナトリウム水溶液中で、１：６（インスリン：アルデヒドｍｏｌ／ｍｏｌ）の比で一晩混合すると、単一置換Ｐｈｅ−Ｂ１第２級アミンコンジュゲート生成物への８０％を超える変換がもたらされることが見出された（Ｍｅｉら，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１６：１６８０−１６８６，１９９９）。彼らの研究により、溶媒、ｐＨ、およびインスリン：アルデヒド比の選択はすべて、反応の選択性および収率に影響を及ぼすことが示された。しかしながら、ほとんどの場合、化学反応条件の選択によって選択性を得ることは困難である。したがって、一部の特定の実施形態では、反応に所望される１つの部位以外すべての部位の該構成要素（例えば、インスリン）を選択的に保護し、続いて、物質体を反応させ、精製した後、脱保護工程を行なうことが好都合な場合があり得る。例えば、文献にて入手可能なインスリンのアミン基の選択的保護の例は数多くあり、酸性（ＢＯＣ）、弱酸性（無水シトラコン酸）、および塩基性（ＭＳＣ）条件下で脱保護され得るものが挙げられる（例えば、Ｔｓａｉら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６：１２６４−１２６８，１９９７；Ｄｉｘｏｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１０９：３１２−３１４，１９６８；およびＳｃｈｕｅｔｔｌｅｒら，Ｄ．Ｂｒａｎｄｅｎｂｕｒｇ  Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒ’ｓ  Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．３６０：１７２１，１９７９を参照のこと）。一例では、Ｇｌｙ−Ａ１とＬｙｓ−Ｂ２９のアミンがｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）基で選択的に保護され得、次いで、この基は、９０％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／１０％アニソールの溶液中、４Ｃで１時間のインキュベーションによるコンジュゲーション後に除去される。一実施形態では、インスリンの乾燥粉末を無水ＤＭＳＯに溶解させた後、過剰のトリエチルアミンを溶解させる。この溶液に、ほぼ２当量の重炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル溶液（ＴＨＦ中）をゆっくり添加し、溶液を３０〜６０分間混合する。反応後、粗製溶液を過剰のアセトンに注入した後、希ＨＣｌを滴下し、反応したインスリンを沈殿させる。この沈殿物を遠心分離し、アセトンで洗浄し、真空下で完全に乾燥させる。所望のジ−ＢＯＣ保護生成物は、未反応インスリン、所望でないジ−ＢＯＣ異性体、ならびにモノ−ＢＯＣおよびトリ−ＢＯＣ副生成物から、調整用逆相ＨＰＬＣまたはイオン交換クロマトグラフィーを用いて分離され得る（例えば、Ｔｓａｉら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６：１２６４−１２６８、１９９７を参照のこと）。逆相ＨＰＬＣの場合、粗製生成物の７０％水／３０％アセトニトリル溶液（０．１％のＴＦＡ含有）をＣ８カラムに負荷し、アセトニトリル漸増勾配により溶出させる。所望のジ−ＢＯＣピークを収集し、回転濃縮してアセトニトリルを除去し、凍結乾燥させて純粋な生成物を得る。
【０２１８】
ＬＲＰＢおよびＬＲＰＤ（非共有結合性コンジュゲーション）
当業者には、さまざまなコンジュゲーション化学反応が、ＸとＴおよび／またはＷとＴ（包括的には、「構成要素」）の非共有結合性コンジュゲーションに使用され得ることが認識されよう。かかる手法は当該技術分野で広く知られており、例示的な手法を以下に論考する。一部の特定の実施形態では、ヒト血清中での該非共有結合の解離定数（Ｋｄ）が１ｐｍｏｌ／Ｌ未満である。例えば、該構成要素はコンジュゲート枠組構造に、当該技術分野でよく知られた非共有結合性のリガンド−受容体ペア（例えば、限定されないが、ビオチン−アビジン系ペア）によって非共有結合され得る。かかる実施形態では、リガンド受容体ペアの一方の構成員が該構成要素に共有結合され、該ペアの他方の構成員がコンジュゲートの枠組構造に共有結合される。該構成要素とコンジュゲート枠組構造を合わせると、リガンドとその受容体間の強力な非共有結合性相互作用によって、該構成要素がコンジュゲートの枠組構造に非共有結合で結合された状態になる。典型的なリガンド／受容体ペアとしては、タンパク質／補因子および酵素／基質のペアが挙げられる。よく使用されるビオチン／アビジンペアの他に、このようなペアとしては、限定されないが、ビオチン／ストレプトアビジン、ジゴキシゲニン／抗ジゴキシゲニン、ＦＫ５０６／ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）、ラパマイシン／ＦＫＢＰ、シクロフィリン／シクロスポリン、およびグルタチオン／グルタチオントランスフェラーゼのペアが挙げられる。他にも適当なリガンド／受容体ペア、例えば、限定されないが、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ｃ−ｍｙｃ、ＦＬＡＧ（登録商標）、さらには、Ｋｅｓｓｌｅｒ  ｐｐ．１０５−１５２，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ」，Ｋｅｓｓｌｅｒ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９０；「Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」，Ｐａｓｃａｌ  Ｂａｉｌｌｏｎ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２０００；およびＨｅｒｍａｎｓｏｎらによる「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９２に記載のものなどのエピトープタグとのペアでのモノクローナル抗体が当業者に認識され得よう。
【０２１９】
ｋおよびｑ
一般式（ＩＩ）のコンジュゲートでは、ｋは２〜１１（両端を含む）の整数であり、該コンジュゲート内にｋ−分岐部が少なくとも２つあることを規定する。一部の特定の実施形態では、ｋ＝２または３である。ｑは１〜４（両端を含む）の整数であり、中央の−Ａ−基に結合されたＤ基の数を規定する。一部の特定の実施形態では、ｑ＝１である。一部の実施形態では、ｑ＝２である。ｋ＋ｑは３〜６（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、ｋ＋ｑ＝３または４である。
【０２２０】
一般式（ＩＩＩ）のコンジュゲートでは、ｊが２、３または４のとき、ｋは、１〜１１（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、ｋは１、２または３である。ｑは１〜４（両端を含む）の整数であり、中央の−Ａ−基に結合されたＤ基の数を規定する。一部の特定の実施形態では、ｑ＝１である。一部の実施形態では、ｑ＝２である。ｋ＋ｑは３〜６（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、ｋ＋ｑ＝３または４である。
【０２２１】
ｐおよびｍ
存在するｐは各々、独立して１〜５（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、存在する各ｐは同じである。一部の特定の実施形態では、ｐ＝１、２または３である。一部の特定の実施形態では、ｐ＝１である。
【０２２２】
存在するｍは各々、独立して１〜５（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、存在する各ｍは同じである。一部の特定の実施形態では、ｍ＝１、２または３である。一部の特定の実施形態では、ｍ＝１である。
【０２２３】
ｎおよびｖ
存在するｎは各々、独立して０〜５（両端を含む）の整数であるが、各ｋ−分岐部において、存在するｎの少なくとも１つは≧１であるものとする。所与のｋ−分岐部内の分岐を、本明細書ではｎ−分岐部と称する。
【０２２４】
一部の特定の実施形態では、ｐ−括弧部分内に存在する−Ａ−は各々、ｎ≧１の値に該当する数のｎ−括弧部分で置換されている（例えば、上記式（ＩＩａ）を参照のこと）。一部のかかる実施形態では、該コンジュゲート内に存在する各ｎは同じである。このような実施形態の一部において、ｎ＝１または２である。
【０２２５】
他の実施形態では、ｐ−括弧部分内の末端に存在する−Ａ−のみが、ｎ≧１の値に該当する数のｎ−括弧部分で置換されている（例えば、上記の式（ＩＩｂ）を参照のこと）。一部の特定の実施形態では、各ｋ−分岐部に含まれるｎ≧１の存在は１つだけである（すなわち、存在する他のすべてのｎ＝０）。一部のかかる実施形態では、該コンジュゲート内に存在する各ｎは同じである。このような実施形態の一部において、ｎ＝１または２である。
【０２２６】
存在するｖは各々、独立して０〜５（両端を含む）の整数であるが、各ｋ−分岐部において、存在するｖの少なくとも１つは≧１であるものとする。
【０２２７】
一部の特定の実施形態では、ｍ−括弧部分内に存在する−Ａ−各々、ｖ≧１の値に該当する数のＢ部分で置換されている（例えば、上記式（ＩＩｃ）を参照のこと）。一部のかかる実施形態では、該コンジュゲート内に存在する各ｖは同じである。このような実施形態の一部において、ｖ＝１または２である。
【０２２８】
他の実施形態では、ｍ−括弧部分内の末端に存在する−Ａ−のみが、ｖ≧１の値に該当する数のＢ部分で置換されている（例えば、上記式（ＩＩｄ）を参照のこと）。一部の特定の実施形態では、各ｋ−分岐部は、含まれるｖ≧１の存在が１つだけである（すなわち、存在する他のすべてのｖ＝０）。一部のかかる実施形態では、該コンジュゲート内に存在する各ｖは同じである。このような実施形態の一部において、ｖ＝１または２である。一部の特定の実施形態では、各ｎ−分岐部は、含まれるｖ≧１の存在が少なくとも１つである。一部の特定の実施形態では、各ｎ−分岐部は、含まれるｖ≧１の存在が１つだけである（すなわち、存在する他のすべてのｖ＝０）。一部のかかる実施形態では、該コンジュゲート内に存在する各ｖは同じである。このような実施形態の一部において、ｖ＝１または２である。
【０２２９】
ｊ
式（ＩＩ）のｊは１〜４（両端を含む）の整数であり、Ｄ基へのコンジュゲーションの数を規定する。一部の特定の実施形態では、ｊ＝１である。一部の特定の実施形態では、ｊ＝２である。一部の実施形態では、ｊ＝３である。他の実施形態では、ｊ＝４である。
【０２３０】
薬物負荷
一般に、コンジュゲートに負荷される薬物の数は、該薬物の分子量に依存し、コンジュゲートの枠組構造の分子量および／または化学的活性化（すなわち、懸垂基を枠組構造に付加した場合）のレベルを調整することにより制御され得る。種々の実施形態において、薬物負荷レベルは、コンジュゲート（すなわち、薬物を含む）に対して薬物が５〜９９％ｗ／ｗの範囲であり得る。種々の実施形態において、５０〜９９％のより狭い範囲内（例えば、８０〜９９％の範囲）の負荷レベルが使用され得る。
【０２３１】
その他
種々の実施形態において、生物分解性の枠組構造が使用され得る。種々の実施形態において、例えば、生物分解性が適用用途に関係がない場合、および／または得られた枠組構造もしくはコンジュゲートが充分に良好に排出され、生物分解性が必要でない場合は、非生物分解性の枠組構造が使用され得る。種々の実施形態において、コンジュゲートの枠組構造（またはスペーサー（例えば、薬物と枠組構造の間に存在する場合））は、酵素による消化に感受性である。種々の実施形態において、酵素は投与部位に存在する。当業者には、コンジュゲート枠組構造を切断することがあり得るいくつかの酵素が患者に存在することが認識されよう。限定されないが、このようなものとしては、サッカリダーゼ、ペプチダーゼ、およびヌクレアーゼが挙げられる。例示的なサッカリダーゼとしては、限定されないが、マルターゼ、スクラーゼ、アミラーゼ、グルコシダーゼ、グルコアミラーゼ、およびデキストラナーゼが挙げられる。例示的なペプチダーゼとしては、限定されないが、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ、プロリルエンドペプチダーゼ、プロリダーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼ、およびグリシルグリシンジペプチダーゼが挙げられる。例示的なヌクレアーゼとしては、限定されないが、デオキシリボヌクレアーゼＩ、リボヌクレアーゼＡ、リボヌクレアーゼ（ｒｉｂｏｎｕｃｅｌａｓｅ）Ｔ１、およびヌクレアーゼＳｌが挙げられる。
【０２３２】
また、当業者には、酵素の選択によっては、酵素的切断に感受性であるコンジュゲート枠組構造がいくつか存在することが認識されよう。例えば、サッカリダーゼ分解が所望される場合、多糖類を含む枠組構造が使用され得る（例えば、限定されないが、１，４−結合α−Ｄ−グルコース残基の反復鎖を含む多糖を含むコンジュゲートは、α−アミラーゼによって分解される）。限定されないが、好適な多糖類としては、任意の数の供給源、例えば限定されないが、スイートコーン、牡蠣、肝臓（ヒト、ウシ、ウサギ、ラット、ウマ）、筋肉（ウサギ脚部、ウサギ腹部、魚、ラット）、ウサギの毛、フナガイ（ｓｌｉｐｐｅｒ  ｌｉｍｐｅｔ）、パン酵母、および真菌由来のグリコゲンおよび部分消化グリコゲンが挙げられる。使用され得る他の多糖ポリマーおよびスペーサーとしては、カルボキシル化多糖類、−ＮＨ２懸垂多糖類、ヒドロキシル化多糖類、アルギネート、コラーゲン−グリコサミノグリカン、コラーゲン、マンナン、アミロース、アミロペクチン、セルロース、ヒアルロネート、コンドロイチン、デキストリン、キトサンなどが挙げられる。ペプチダーゼ切断が所望される場合、切断酵素によって認識されるアミノ酸配列を含むポリペプチドが使用され得る（例えば、限定されないが、［−グリシン−プロリン−］配列を含むコンジュゲートは、プロリダーゼによって分解される）。一部の特定の実施形態では、アミン化アミノ酸と非アミン化アミノ酸のコポリマー、ヒドロキシル化アミノ酸と非ヒドロキシル化アミノ酸のコポリマー、カルボキシル化アミノ酸と非カルボキシル化アミノ酸のコポリマー、上記のもののコポリマーまたは上記のものの付加物が使用され得る。ヌクレアーゼ分解が所望される場合、ポリヌクレオチドが使用され得る（例えば、限定されないが、連続アデノシン残基のオリゴマーを含むポリヌクレオチドを含むコンジュゲートは、リボヌクレアーゼＡによって分解される）。
【０２３３】
種々の実施形態において、コンジュゲート（すなわち、コンジュゲート型薬物および／または化学的もしくは酵素的分解によってコンジュゲートから放出された薬物）の薬物動態的および／または薬力学的挙動は、対応する非コンジュゲート薬物と実質的に同じであり得る（例えば、ともに、皮下投与した場合）。例えば、薬物動態的（ＰＫ）見地から、血清濃度曲線は、同等量の非コンジュゲート薬物を投与した場合と実質的に同じであり得る。付加的または択一的に、血清Ｔ最大、血清Ｃ最大、平均血清滞留時間（ＭＲＴ）、平均血清吸収時間（ＭＡＴ）および／または血清半減期は、非コンジュゲート薬物を投与した場合と実質的に同じであり得る。薬力学的（ＰＤ）見地からは、該コンジュゲートは、体内物質に対して、非コンジュゲート薬物と実質的に同様に作用し得る。例えば、インスリンコンジュゲートの場合、該コンジュゲートは、血中グルコースレベルに対して非コンジュゲートインスリンと実質的に同様の影響を及ぼし得る。この場合、実質的に同様の薬力学的挙動は、最小血中グルコース濃度（Ｔ底）に達するまでの時間、血中グルコースレベルが初期値の一定の割合より下（例えば、初期値の７０％またはＴ７０％  ＢＧＬ）の状態に維持される持続時間など比較することにより観察され得る。このようなＰＫおよびＰＤ特性は、公開された任意のさまざまな薬物動態的および薬力学的方法に従って測定され得ることは認識されよう（例えば、皮下送達に適した方法については、Ｂａｕｄｙｓら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．９：１７６−１８３，１９９８を参照のこと）。
【０２３４】
一実施形態において、コンジュゲート（すなわち、架橋剤なしの単離された形態）では、非コンジュゲート薬物で測定される値の４０％以内である  薬物動態的（ＰＫ）パラメータ（最大血清薬物濃度に達する時間（Ｔ最大）、平均薬物滞留時間（ＭＲＴ）、血清半減期、および平均薬物吸収時間（ＭＡＴ）など）が得られる。種々の実施形態において、コンジュゲートでは、非コンジュゲート薬物で得られるものの３５％、３０％、２５％、２０％、１５％以内、あるいはさらに１０％以内であるＰＫパラメータが得られる。一部の実施形態では、コンジュゲートでは、非コンジュゲート薬物で得られるものの２０％以内であるＰＫパラメータが得られる。例えば、皮下送達のためのインスリンコンジュゲートに関する実施形態では、コンジュゲートで、１５〜３０分のインスリンＴ最大、５０分未満の平均インスリン滞留時間（ＭＲＴ）、または４０分未満の平均インスリン吸収時間（ＭＡＴ）が得られ得、これらはすべて、ヒト組換えインスリン処置群で測定される値の２０％以内である。一部の特定の実施形態では、コンジュゲートで、２０〜２５分のインスリンＴ最大、４５分未満の平均インスリン滞留時間（ＭＲＴ）、および３５分未満の平均インスリン吸収時間（ＭＡＴ）が得られ得る。一部の特定の実施形態では、コンジュゲートで、１２０分未満、例えば、１００分未満の血清半減期が得られ得る。
【０２３５】
一実施形態において、本発明のコンジュゲートでは、物質の最小／最大血中濃度に達する時間（Ｔ底／Ｔ最大）または物質の血中レベルが初期値の７０％より下／１３０％より上の状態に維持される持続時間（Ｔ７０％ＢＬ／Ｔ１３０％ＡＬ）などの薬力学的（ＰＤ）パラメータが得られる。例えば、皮下送達のためのインスリンコンジュゲートに関する実施形態では、コンジュゲートで、４５〜６０分のグルコースＴ底および１８０分未満のグルコースＴ７０％ＢＬが得られ得、これらはどちらも、ヒト組換えインスリン処置群で測定される値の２０％以内である。一部の特定の実施形態では、コンジュゲートで、５０〜５５分のグルコースＴ底および１６０分未満のグルコースＴ７０％ＢＬが得られ得る。種々の実施形態において、コンジュゲートで、非コンジュゲート薬物で得られるものの４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％以内、あるいはさらに１０％以内であるＰＤパラメータが得られる。一部の実施形態では、コンジュゲートで、非コンジュゲート薬物で得られるものの２０％以内であるＰＤパラメータが得られる。
【０２３６】
コンジュゲートの調製のための中間体
一態様において、本発明は、本開示のコンジュゲートを調製するための試薬を提供する。したがって、種々の実施形態において、一般式（ＩＩ）：
（式中、−Ａ−、Ｔ、Ｄ、ｋ、ｑ、ｋ＋ｑ、ｐ、ｎ、ｍおよびｖは各々、上記および本明細書において記載のとおりに定義し；Ｂは、−Ｔ−ＬＢ’であり；
存在するＬＢ’は各々、独立して、水素、アルキン含有部分、アジド含有部分、または任意選択で置換されているカルボニル反応性、チオール反応性、アミン反応性、もしくはヒドロキシル反応性部分である）の化合物が提供される。
【０２３７】
他の実施形態では、一般式（ＩＩ）：
（式中、−Ａ−、Ｔ、Ｂ、ｋ、ｑ、ｋ＋ｑ、ｐ、ｎ、ｍおよびｖは各々、上記および本明細書において記載のとおりに定義し；
Ｄは、−Ｔ−ＬＤ’であり；
存在するＬＤ’は各々、独立して、水素、アルキン含有部分、アジド含有部分、または任意選択で置換されているカルボニル反応性、チオール反応性、アミン反応性、もしくはヒドロキシル反応性部分である）の化合物が提供される。
【０２３８】
コンジュゲートの調製方法
本実施例に記載のように、本発明者らは、例示的な薬物としてインスリン、ならびに例示的な親和性リガンドとしてアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルビマンノース（ＡＥＢＭ）、および／またはアミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）を使用し、前記コンジュゲートの調製方法の例を示した。限定されないが、２つの親和性リガンドと１つの薬物分子を有し、すべての枠組構造の構成要素間の距離が短いコンジュゲートは、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）、Ｔｒｉｓ−スクシンイミジルアミノトリアセテート（ＴＳＡＴ）、ｔｒｉｓ−スクシンイミジル−１，３，５−ベンゼントリカルボキシレート（ＴＳＢ）、およびベンゼン−１，３，５−トリカルボキシ−（Ｎ−４−酪酸−ＮＨＳ−エステル）アミド（ＴＳＢ−Ｃ４）をコンジュゲート枠組構造として用いて調製され得る。枠組構造の構成要素間にさらなる間隔が所望される場合は、スクシンイミジル（６−アミノカプロイル）アミノトリアセテート（ＴＳＡＴ−Ｃ６）、スクシンイミジル（６−アミノ（ＰＥＯ−６））アミノトリアセテート（ＴＳＡＴ−ＰＥＯ−６）、ベンゼン−１，３，５−トリカルボキシ−（Ｎ−６−アミノカプロン酸−ＮＨＳエステル）アミド（ＴＳＢ−Ｃ６）、およびベンゼン−１，３，５−トリカルボキシ−（Ｎ−−１０−アミノデカン酸−ＮＨＳエステル）アミド（ＴＳＢ−Ｃ１０）が使用され得る。ＴＳＡＴ−Ｃ６スペーサーアームの化学的性質はＴＳＡＴ−ＰＥＯ−６と比べ、該コンジュゲートに対して、より疎水性の性質を付与する。例えば、例示の目的で、一実施形態において、親和性リガンド（例えば、ＡＥＧ、ＡＥＭ、ＡＥＭＢおよびＡＥＴＭ）とインスリンの両方を、ＴＳＡＴ−Ｃ６枠組構造に対して、末端活性化型エステルを介して反応させると、インスリン−ＴＳＡＴ−Ｃ６−ＡＥＧ−２、インスリン−ＴＳＡＴ−Ｃ６−ＡＥＭ−２、インスリン−ＴＳＡＴ−Ｃ６−ＡＥＭＢ−２、およびインスリン−ＴＳＡＴ−Ｃ６−ＡＥＴＭ−２コンジュゲートが得られ得る。本実施例に論考しているように、種々の親和性リガンドを事前に合成する。また、インスリンのＡ１およびＢ２９アミノ基は、本実施例に記載のようにして、各インスリンがＰｈｅ−Ｂ１  α−アミノ基でのみ反応し得るようにＢＯＣ−保護する。ほぼ１当量のＢＯＣ−インスリンを、４０〜５０ｍｇ／ｍｌのＤＭＳＯ溶液として、室温で、過剰のトリエチルアミンを含有する５０ｍｇ／ｍｌのＴＳＡＴ−Ｃ６のＤＭＳＯ溶液に添加し、ほぼ１時間反応させる。次に、過剰のＡＥＧ、ＡＥＭ、ＡＥＢＭおよび／またはＡＥＴＭ（２〜１０当量）を１００ｍｇ／ｍｌのＤＭＳＯ溶液として添加し、さらに２時間反応させる。反応後、このＤＭＳＯ溶液をｐＨ５の生理食塩水緩衝液中で１０倍に超希釈した後、ｐＨを８．０に調整し、溶液をＢｉｏｇｅｌ  Ｐ２カラムに通して低分子量反応体および塩類を除去する。ボイド画分中に溶出された物質を、３Ｋ限外濾過装置を用いて濃縮した後、これを、分取規模の逆相ＨＰＬＣカラム（Ｃ８，０．１％のＴＦＡを含むアセトニトリル／水移動相）にインジェクションし、所望の生成物を未反応ＢＯＣ２−インスリンから精製する。所望の溶出ピークを収集し、プールし、回転濃縮してアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥して乾燥粉末を得る。最後に、この凍結乾燥粉末を９０％ＴＦＡ／１０％アニソールに４Ｃで１時間溶解させた後、０．１５０Ｍ  ＮａＣｌを含むＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．２）中で１０倍超希釈することにより、ＢＯＣ保護基を除去する。ＮａＯＨ溶液を用いてｐＨを７．０〜８．０に調整した後、この物質をＢｉｏｇｅｌ  Ｐ２カラムに通して、アニソール、ＢＯＣ、および他の混入塩を除去する。脱保護した精製コンジュゲートの水溶液を、次いで、所望のレベルまで濃縮し、必要時まで４Ｃで保存する。
【０２３９】
この例示的な手順を使用し、ＴＳＡＴ−Ｃ６枠組構造を異なる枠組構造（後述）で置き換えることにより、親和性リガンドと薬物が異なる、コンジュゲーション化学反応が異なる、枠組構造の構成要素間の間隔が異なる、および／または結合価が異なる他のコンジュゲートが作製され得ることは認識されよう。
【０２４０】
例えば、枠組構造の構成要素間にさらなる距離が必要とされる場合、および／またはコンジュゲーション部位に保存電荷が必要とされる場合は、適切なサイズのアミン含有ジエチルアセタール（例えば、アミノプロピオンアルデヒドジエチルアセタール（ＡＰＤＡ）またはアミノブチルアルデヒドジエチルアセタール（ＡＢＤＡ））を、本明細書に記載の該枠組構造上の反応性基の１つにコンジュゲートさせた後、残りの反応性基と対象の親和性リガンド（例えば、ＡＥＭ、ＡＥＢＭ、またはＡＥＴＭ）との反応を完了させてもよい。次いで、酸性条件下で該ジエチルアセタールから反応性アルデヒド基を顕在化させた後、インスリンとの還元的アミノ化を行なうと、薬物コンジュゲーション工程が完了し得、次いで、ＡＢＤＡ−ＴＳＡＴ、ＡＢＤＡ−ＬＣＴＳＡＴなどが使用され得る。また別の例では、テトラキス−（Ｎ−スクシンイミジルカルボキシプロピル）ペンタエリトリトール（ＴＳＰＥ）を使用し、多価性の増大のために３つの親和性リガンドと１つ薬物分子が結合され得る。また、上記のいずれかの教示を用いて、さらに高次の結合価を有する超分岐（例えば、デンドリマー様）コンジュゲートが作製され得ることは当業者に認識されよう。例えば、ＲｏｅｃｋｅｎｄｏｒｆおよびＬｉｎｄｈｏｒｓｔにより、Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２１７：２０２−２３８，２００１に、超分岐構造を作製するための現行のアプローチの包括的な概説が示されている。さらに、既に所定の多価性度合を含むリガンドを、上記の手順に従って再度反応させ、さらに高次のリガンド多重性を得てもよい。例えば、反応性末端アミンを含む二価のＡＥＭ−２、ＡＥＢＭ−２、またはＡＥＴＭ−２分子は、２つの各親和性リガンドを、反応性アミンもコンジュゲートされる適当な枠組構造にコンジュゲートさせることにより調製され得る。反応性末端アミンを含む三価のＡＥＭ−３、ＡＥＢＭ−３、またはＡＥＴＭ−３分子は、３つの各親和性リガンドを、反応性アミンもコンジュゲートされる適当な枠組構造にコンジュゲートさせることにより調製され得る。ＮＨ２−二価糖類を上記のものと同じ枠組構造と反応させると、薬物分子１つあたり４〜６個のリガンドを有する薬物コンジュゲートが得られ得る。ＮＨ２−三価糖類を上記のものと同じ枠組構造と反応させると、薬物分子１つあたり６〜９個のリガンドを有する薬物コンジュゲートが得られ得る。
【０２４１】
すべての場合において、異なるリガンドの混合物は同じ薬物に、多価枠組構造の化学的性質、結合価、およびリガンド：該枠組構造の化学量論性を調整することにより該枠組構造を介してコンジュゲートされ得ることを認識されたい。例えば、インスリン−ＡＥＭ−１−ＡＥＢＭ−１、インスリン−ＡＥＢＭ−１−ＡＥＴＭ−１、インスリンＡＥＭ−２−ＡＥＴＭ−２、およびインスリンＡＥＭ−１−ＡＥＴＭ−２はすべて、この混合型リガンド法に従って合成され得る。
【０２４２】
最後に、一部の場合では、親和性リガンドを枠組構造に、薬物とは異なる手段によってコンジュゲートさせることが望ましい場合があり得る。例えば、二価マレイミド／活性（ａｃｔｉｖａｔｅ）一価エステル官能化枠組構造（例えば、スクシンイミジル−３，５−ジマレイミドフェニルベンゾエート（ＳＤＭＢ））は、２つのスルフヒドリル官能化親和性リガンドと、１つのアミン官能化薬物を個別の工程でコンジュゲートさせるために使用され得る。例えば、インスリンまたは別のアミン含有薬物が枠組構造の活性化型エステル部分に、本明細書に記載の方法を用いてコンジュゲートされ得る。別工程で、アミノエチル糖類（ＡＥＭ、ＡＥＢＭ、ＡＥＴＭ）を、４−イミノチオランを用いた反応によって、末端スルフヒドリル含有リガンドに変換させてもよい。最後に、枠組構造−ジ−マレイミド−インスリンコンジュゲートを、過剰のスルフヒドリル官能化糖類と混合すると、二価糖類−インスリンコンジュゲートの生成がもたらされ得る。
【０２４３】
多価架橋剤
一部の特定の実施形態では、本開示のコンジュゲートを多価架橋剤と合わせ、架橋物質体が形成され得る。以下のセクションに、使用され得る例示的な架橋剤を記載する。
【０２４４】
より詳細に以下に論考し、図４に図示するように、架橋物質体１０は、外因性標的分子に応答してコンジュゲート２０を制御可能に放出し得るものである。該物質体は、コンジュゲート２０を、コンジュゲート２０の親和性リガンド４０に非共有結合で結合し、それによりコンジュゲート２０を架橋して架橋物質体１０を形成する多価架橋剤３０と合わせることにより調製される。多価架橋剤３０と親和性リガンド４０間の非共有結合は、過剰量の外因性標的分子の存在下で競合的に解離される。
【０２４５】
１．ポリペプチド架橋剤
種々の実施形態において、多価架橋剤はポリペプチドを含むものであり得る。より詳細に以下に論考するように、適当な多価ポリペプチドは天然に存在するもの（例えば、種々のレクチン）であるが、多数の一価の結合性タンパク質、例えば、一価のレクチン、ペプチドアプタマー、抗体、細胞膜受容体などを連結することにより構築することもできる。さらに他の多価ポリペプチドは、このようなタンパク質の結合性断片を化学的に連結することにより構築されたものであり得る。
【０２４６】
さまざまな一価および多価リガンド結合タンパク質が市販されており（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから）、いくつかのレクチン、葉酸結合タンパク質、サイロキシン結合グロブリン、ラクトフェリンなどが挙げられる。ＤｅＷｏｌｆおよびＢｅｓｔには、リガンド結合タンパク質、例えば、ビオチン結合タンパク質、脂質結合タンパク質／疎水性分子の輸送体、細菌ペリプラズム結合タンパク質、レクチン、血清アルブミン、免疫グロブリン、不活化型酵素、匂い物質結合タンパク質、免疫抑制薬結合タンパク質、ならびにリン酸−および硫酸結合タンパク質の概説が示されている（Ｄｅ  ＷｏｌｆｅおよびＢｅｓｔ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｖ．５２：２０７−２３６，２０００ならびにそこに挙げられた参考文献を参照のこと）。また、さまざまなホルモンの細胞膜受容体も当該技術分野で報告されている。一部の特定の実施形態では、一価または多価の結合タンパク質は、Ｌｏｏｇｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ  ４２３：１８５−１９０，２００３に記載のように、コンピュータによる合理的設計の後、既存のリガンド結合タンパク質の部位特異的変異誘発によって合成され得る。例示的なタンパク質断片としては、切断型ＭＢＰ（Ｅｄａら，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６２：１３２６−１３３１，１９９８）、切断型コングルチニン（Ｅｄａら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３１６：４３，１９９６）、切断型ＳＰ−Ｄ（Ｅｄａら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３２３：３９３，１９９７）、および大腸菌のグルコース／ガラクトース結合タンパク質（Ｓａｌｉｎｓら，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９４：１９−２６，２００１）が挙げられる。
【０２４７】
ａ．レクチン
一部の特定の実施形態では、一価または多価のレクチンが多価架橋剤に含まれ得る。より詳細に以下に論考するように、一部の特定の実施形態では、レクチンを化学修飾することが好都合な場合があり得る。レクチンは、糖（例えば、α−メチル−マンノース）に応答するように設計された物質体における使用に特に好適である。レクチンは、さまざまな天然供給源、例えば、種子、根、樹皮、真菌、細菌、海草、海綿、軟体類、魚卵、無脊椎動物および下等脊椎動物の体液、ならびに哺乳動物細胞膜から単離されている（例えば、Ｔｈｅ  Ｌｅｃｔｉｎｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌｉｅｎｅｒら編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６を参照のこと）。また、いくつかのレクチンが組換え産生されている（例えば、ＳｔｒｅｉｃｈｅｒおよびＳｈａｒｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．３６３：４７−７７，２００３ならびに米国特許公開公報第２００６０２４７１５４号を参照のこと）。上記のように、レクチンは糖質および多糖類に、高い特異性度合で結合する。例えば、一部のレクチンはマンノース残基またはグルコース残基のみに結合するが、別の一部のものは、ガラクトース残基のみを認識する。一部のレクチンは、特定の残基が末端位置に存在することを要するが、別の一部のものは、多糖鎖内部の残基に結合する。一部のレクチンは特定のアノマー構造を必要とし、また別のものは、特定の糖鎖配列を認識する。レクチンの構造および性質は文献に広く記載されている。最近の概説については、Ｌｅｃｔｉｎｓ，ＳｈａｒｏｎおよびＬｉｓ編，Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，２００３；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｌｅｃｔｉｎｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ編，Ｗｉｌｅｙ，２０００；ならびにＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｌａｎｔ  Ｌｅｃｔｉｎｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖａｎ  Ｄａｍｍｅら編，Ｗｉｌｅｙ，１９９８を参照のこと。例示的なレクチンとしては、カルネキシン、カルレチクリン、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ガレクチン（ガラクトース結合レクチン）、ミエリン関連糖タンパク質、Ｎ−アセチルグルコサミン受容体、セレクチン、シアロアドヘシン、アグリカン、アシアロ糖タンパク質受容体、ＣＤ９４、コレクチン（マンノース結合レクチン）、マンノース受容体、バーシカン、アブリン、リシン、コンカナバリンＡ、フィトヘマグルチニンおよびヤマゴボウマイトジェンが挙げられる。種々の実施形態において、植物レクチンのヒト類似体が使用され得る。このようなものとしては、限定されないが、ヒトマンナン結合タンパク質（ＭＢＰ，マンナン結合レクチンとも称される、Ｓｈｅｒｉｆｆら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１：７８９−７９４（１９９４）；Ｄｕｍｅｓｔｒｅ−Ｐｅｒａｒｄら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３９：４６５−４７３（２００２））、ヒト肺サーファクタントタンパク質Ａ（ＳＰ−Ａ，Ａｌｌｅｎら，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，６７：４５６３−４５６９（１９９９））、ヒト肺サーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰ−Ｄ，Ｐｅｒｓｓｏｎら，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６５：５７５５−５７６０（１９９０））、ＣＬ−４３（ヒト血清タンパク質）、ならびにコングルチニンが挙げられる。
【０２４８】
ｂ．ペプチドアプタマー
一部の特定の実施形態では、一価のペプチドアプタマーが多価架橋剤に含まれ得る。当該技術分野で周知のように、ペプチドアプタマーは、タンパク質骨格内に融合された可変リガンド結合ペプチドループからなるものである（例えば、Ｈｏｐｐｅ−ＳｅｙｌｅｒおよびＢｕｔｚ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７８：４２６−４３０，２０００ならびにＣｒａｗｆｏｒｄら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ２：７２−７９，２００３を参照のこと）。この可変ループは、典型的には約１０〜２０個のアミノ酸を含む。さまざまな骨格タンパク質が使用され得る。一般に、挿入部位は、該ペプチドループがなければ、一部の野生型機能を媒介するであろう骨格内の領域が、該ループによって分断されるように選択される（例えば、可変ループが還元性活性部位（野生型タンパク質内の−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−ループ）内に挿入された細菌タンパク質チオレドキシン−Ａ）。標的分子に対して適当な親和性を有するペプチドアプタマーは、任意の既知の方法を用いて調製および選択され得る。例えば、哺乳動物細胞における発現のための酵母ツーハイブリッドライブラリー、酵母発現ライブラリー、細菌発現ライブラリーおよび／またはレトロウイルスライブラリーが使用され得る。
【０２４９】
種々の実施形態において、ペプチドアプタマーは、アフィニティクロマトグラフィーによって選択され得る。かかる実施形態によれば、ライブラリー内のペプチドアプタマーは標的分子に曝露され、標的に結合しないものは除去される。次いで、結合したペプチドアプタマーを溶出させ、後続の選択ラウンドのためにクローニングする。次いで、このペプチドアプタマーのうちの１種類以上（例えば、第１ラウンドの選択で、標的分子に対して最も高い親和性を有するペプチドアプタマー）から新たなライブラリーを作製し、所望の結合親和性および／または特異性を有するペプチドアプタマーが同定されるように溶出条件のストリンジェンシーを増大または変更する。種々の実施形態において、該選択プロセスは、標的分子に対して高い親和性を有するペプチドアプタマーを選択するために、溶出条件のストリンジェンシーを徐々に増大させる工程を伴うものであり得る。種々の実施形態において、該選択プロセスは、標的分子に対して所望の特異性を有するペプチドアプタマーを選択するために、溶出条件を変更する工程を伴うものであり得る（例えば、異なるアフィニティカラムの使用によって）。種々の実施形態において、該選択プロセスは、各々が標的分子に対して同様の親和性および／または特異性を有するペプチドアプタマーを含む下位ライブラリー（または「プール」）の集合体を作製するものであり得る。種々の実施形態において、該選択プロセスは、単一のペプチドアプタマー配列（または「モノクローナル」）を作製するものであり得る。このようなペプチドアプタマー配列はいずれも、その後の組換え発現のためにクローニングされ得ることは認識されよう。
【０２５０】
ｃ．多価架橋剤の作製
多価架橋剤は、２つ以上の一価の結合性タンパク質を共有結合または非共有結合により連結し、単一の構築物にすることにより作製され得る。典型的には、２つ以上のタンパク質（同じ配列を有するものであっても異なる配列を有するものであってもよい）は、互いに直接連結され得るか（例えば、カップリング剤によって）、または枠組構造を介して間接的に連結され得る。種々の実施形態において、２、３、４、５、６、７もしくは８個またはそれ以上のタンパク質が単一の構築物に結合され得る。種々の実施形態において、２、３、４、５、６、７もしくは８個またはそれ以上のタンパク質は、同じ配列を有するものであり得る。このようなアプローチのいずれか１つにおいて、カップリング前に、タンパク質を化学修飾することが必要な場合があり得る（例えば、反応性懸垂基を含めるため）ことは認識されよう。また、本開示の多価架橋剤は、特定のカップリング反応または枠組構造に限定されない（例えば、該多価架橋剤は、ポリマー構造および／または非ポリマー構造を含む枠組構造を用いて調製されるものであってもよい）ことも認識されよう。さらに、枠組構造は線状、分岐、樹枝状および／またはこれらの組合せであり得ることが認識されよう。例示的な枠組構造およびカップリング化学反応を、以下に、該コンジュゲートとの関連において記載する。
【０２５１】
種々の実施形態において、一価の結合性タンパク質が互いに、または枠組構造に共有結合される。かかる実施形態において、該タンパク質は、直接連結されていてもよく（すなわち、介在化学基なしで）、またはスペーサー（例えば、該タンパク質同士、または該タンパク質と枠組構造との間に、ある程度の物理的隔離をもたらすカップリング剤または共有結合鎖）を介して間接的に連結されていてもよい。以下に、該コンジュゲートとの関連において論考するように、該タンパク質は互いに、または枠組構造に、任意の数の化学結合、例えば限定されないが、アミド、エステル、エーテル、イソ尿素およびイミン結合によって共有結合され得ることは理解されよう。
【０２５２】
種々の実施形態において、２つ以上の一価の結合性タンパク質が互いに、または枠組構造に非共有結合され得る。一部の特定の実施形態では、ヒト血清中での該非共有結合の解離定数（Ｋｄ）が１ｐｍｏｌ／Ｌ未満である。例えば、該タンパク質は互いに、または枠組構造に、当該技術分野でよく知られた非共有結合性のリガンド−受容体ペア（例えば、限定されないが、ビオチン−アビジン系ペア）によって非共有結合され得る。かかる実施形態では、リガンド受容体ペアの一方の構成員が一方のタンパク質に共有結合され、該ペアの他方の構成員が他方のタンパク質または枠組構造に共有結合される。該タンパク質同士（または該タンパク質と枠組構造）を合わせると、リガンドとその受容体間の強力な非共有結合性相互作用によって、該タンパク質が互いに（または枠組構造に）非共有結合で結合された状態になる。典型的なリガンド／受容体ペアとしては、タンパク質／補因子および酵素／基質のペアが挙げられる。よく使用されるビオチン／アビジンペアの他に、このようなペアとしては、限定されないが、ビオチン／ストレプトアビジン、ジゴキシゲニン／抗ジゴキシゲニン、ＦＫ５０６／ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）、ラパマイシン／ＦＫＢＰ、シクロフィリン／シクロスポリン、およびグルタチオン／グルタチオントランスフェラーゼのペアが挙げられる。他にも適当なリガンド／受容体ペア、例えば、限定されないが、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ｃ−ｍｙｃ、ＦＬＡＧ（登録商標）、さらには、Ｋｅｓｓｌｅｒ  ｐｐ．１０５−１５２，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ「Ｋｅｓｓｌｅｒ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９０；」Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」，Ｐａｓｃａｌ  Ｂａｉｌｌｏｎ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２０００；およびＨｅｒｍａｎｓｏｎらによる「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９２に記載のものなどのエピトープタグとのペアでのモノクローナル抗体が当業者に認識され得よう。
【０２５３】
２．ポリヌクレオチド架橋剤
種々の実施形態において、多価架橋剤はポリヌクレオチドアプタマーを含むものであり得る。ポリヌクレオチドアプタマーは標的分子に結合し、多価である（すなわち、１つより多くの標的分子に結合し得る）。一般に、まず、一価のアプタマーを、その標的分子に対する結合特性に基づいて作製する。当該技術分野で周知のように、さまざまな標的分子に対するアプタマーが、インビトロ選択プロセスによって作製され得る。ＥｌｌｉｎｇｔｏｎおよびＳｚｏｓｔａｋ（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４６：８１８；ＴｕｅｒｋおよびＧｏｌｄ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：５０５；ならびに米国特許第５，５８２，９８１号を参照のこと。また、米国特許仮出願第６１／１６２，０９２号（２００９年３月２０日出願）、および対応ＰＣＴ出願（２０１０年１月２７日出願）（これらは各々、引用により本明細書に組み込まれる）に記載のポリヌクレオチドアプタマーも参照のこと。
【０２５４】
典型的には、このプロセスは、プライマーとしての機能を果たす一定の５’末端と３’末端にフランキングされた固定長のランダムに作製したポリヌクレオチド配列からなるライブラリーの合成から始める。一部の特定の実施形態では（例えば、アプタマーを最適化する場合）、標的分子に結合することがわかっている配列から始め、出発配列からの限定的な範囲の変化を示すポリヌクレオチドの集合体（例えば、単一変異のランダムな組）を含むライブラリーを作製してもよい。次いで、ライブラリー内の配列は標的分子に曝露され、標的に結合しないものは除去される（例えば、アフィニティクロマトグラフィーによって）。次いで、結合した配列を溶出させ、後続の選択ラウンドの準備のために増幅し（例えば、クローニングの後、転写によって、またはＰＣＲによって）、該選択ラウンドでは、所望の結合親和性および／または特異性を有する配列が同定されるように溶出条件のストリンジェンシーを増大または変更する。Ｊａｒｏｓｃｈら（２００６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３４：８６には、該プロセスを、該一定のプライマー領域なしで行なうことが可能な方法が記載されている。
【０２５５】
種々の実施形態において、該選択プロセスは、標的分子に対して高い親和性を有するアプタマーを選択するために、溶出条件のストリンジェンシーを徐々に増大させる工程を伴うものであり得る。
【０２５６】
種々の実施形態において、該選択プロセスは、標的分子に対して所望の特異性を有するアプタマーを選択するために、溶出条件を変更する工程を伴うものであり得る（例えば、異なるアフィニティカラムの使用によって）。
【０２５７】
種々の実施形態において、該選択プロセスは、各々が標的分子に対して同様の親和性および／または特異性を有するアプタマーを含む下位ライブラリー（または「プール」）の集合体を作製するものであり得る。種々の実施形態において、該選択プロセスは、単一のアプタマー配列（または「モノクローナル」）を作製するものであり得る。種々の実施形態において、アプタマーはＤＮＡ系である。
【０２５８】
種々の実施形態において、アプタマーはＲＮＡ系である。種々の実施形態において、アプタマーは、混合型ＲＮＡ／ＤＮＡアプタマーである。多価のアプタマーは、２つ以上のこのような一価のアプタマーを共有結合または非共有結合により連結し、単一の構築物にすることにより作製され得る。例示的な方法を以下の実施例４に記載する。典型的には、２つ以上のアプタマー（同じ配列を有するものであっても異なる配列を有するものであってもよい）は、互いに直接結合され得るか（例えば、カップリング剤によって）、または独立した枠組構造を介して間接的に連結され得る。種々の実施形態において、２、３、４、５、６、７または８個のアプタマーが単一の構築物に結合され得る。種々の実施形態において、２、３、４、５、６、７または８個のアプタマーは、同じ配列を有するものであり得る。このようなアプローチのいずれか１つにおいて、カップリング前に、アプタマーを化学修飾することが必要な場合があり得る（例えば、反応性懸垂基を含めるため）ことは認識されよう。また、本開示のアプタマーは、特定のカップリング反応または枠組構造に限定されない（例えば、該アプタマーは、ポリマー構造および／または非ポリマー構造を含む枠組構造を用いて調製されるものであってもよい）ことも認識されよう。さらに、枠組構造は線状、分岐、樹枝状および／またはこれらの組合せであり得ることが認識されよう。例示的な枠組構造およびカップリング化学反応を、以下に、該コンジュゲートとの関連において記載する。
【０２５９】
種々の実施形態において、アプタマーが互いに、または枠組構造に共有結合される。かかる実施形態において、アプタマーは、直接結合されていてもよく（すなわち、介在化学基なしで）、スペーサー（例えば、アプタマー同士、またはアプタマーと枠組構造との間に、ある程度の物理的隔離をもたらすカップリング剤または共有結合鎖）を介して間接的に結合されていてもよい。以上に、該コンジュゲートとの関連において論考するように、アプタマーは互いに、または枠組構造に、任意の数の化学結合、例えば限定されないが、アミド、エステル、エーテル、イソ尿素およびイミン結合によって共有結合され得ることは理解されよう。
【０２６０】
種々の実施形態において、２つ以上のアプタマーが互いに、または枠組構造に非共有結合される。一部の特定の実施形態では、ヒト血清中での該非共有結合の解離定数（Ｋｄ）が１ｐｍｏｌ／Ｌ未満である。例えば、アプタマーは互いに、または枠組構造に、当該技術分野でよく知られた非共有結合性のリガンド−受容体ペア（例えば、限定されないが、ビオチン−アビジン系ペア）によって非共有結合され得る。かかる実施形態では、リガンド受容体ペアの一方の構成員が一方のアプタマーに共有結合され、該ペアの他方の構成員が他方のアプタマーまたは枠組構造に共有結合される。アプタマー（またはアプタマーと枠組構造）を合わせると、リガンドとその受容体間の強力な非共有結合性相互作用によって、アプタマーが互いに（または枠組構造に）非共有結合で結合された状態になる。典型的なリガンド／受容体ペアとしては、タンパク質／補因子および酵素／基質のペアが挙げられる。よく使用されるビオチン／アビジンペアの他に、このようなペアとしては、限定されないが、ビオチン／ストレプトアビジン、ジゴキシゲニン／抗ジゴキシゲニン、ＦＫ５０６／ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）、ラパマイシン／ＦＫＢＰ、シクロフィリン／シクロスポリン、およびグルタチオン／グルタチオントランスフェラーゼのペアが挙げられる。他にも適当なリガンド／受容体ペア、例えば、限定されないが、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ｃ−ｍｙｃ、ＦＬＡＧ（登録商標）、さらには、Ｋｅｓｓｌｅｒ  ｐｐ．１０５−１５２，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ「Ｋｅｓｓｌｅｒ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９０；」Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」，Ｐａｓｃａｌ  Ｂａｉｌｌｏｎ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２０００；およびＨｅｒｍａｎｓｏｎらによる「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９２に記載のものなどのエピトープタグとのペアでのモノクローナル抗体が当業者に認識され得よう。
【０２６１】
３．架橋剤の化学修飾
一般に、前記の任意の多価架橋剤は、例えば、望ましくない性質を軽減するために化学修飾され得ることは理解されよう。
【０２６２】
ｉ．非特異的修飾
ＵＳ２００７−０１１０８１１において、本発明者らは、レクチンのインビボマイトジェン活性を低減するために、これをペグ化する有益性を記載した。したがって、一部の特定の実施形態では、多価架橋剤は、１種類以上の化合物との共有結合により修飾されたものであり得る。限定されないが、これは、活性化型ペグ化（ＰＥＧ）剤（例えば、限定されないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド活性化型ＰＥＧ、ＰＥＧプロピオン酸のスクシンイミジルエステル、ＰＥＧブタン酸のスクシンイミジルエステル、ＰＥＧα−メチルブタノエートのスクシンイミジルエステルなど）、別の水溶性だが非ＰＥＧ含有ポリマー（ポリ（ビニルアルコール）など）、例えばカルボジイミド試薬の使用によってリジンに容易にカップリングされ得る試薬、ペルフルオロ化合物などとの反応を伴うものであり得る。当業者には他の適当な化合物が、例えば、Ｌｕｎｄｂｌａｄ  による「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ」，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，第３版，２００４にて知得され得る包括的な概説を参照することにより容易に認識されよう。
【０２６３】
一般に、該化合物（１種類または複数種）は多価架橋剤（例えば、マイトジェンレクチン）に、当業者に既知のいくつかの結合方法のいずれかによって（例えば、アミン、カルボキシル、ヒドロキシルまたはスルフヒドリル基によって）結合され得る。考えられ得る共有結合も同様に多様である（例えば、アミド結合、カルバメート結合、エステル結合、チオエーテル結合、エーテル結合、ジスルフィド結合などが挙げられる）。一部の特定の実施形態では、適当な反応性基が多価架橋剤（例えば、マイトジェンレクチン）に、当該技術分野で知られた部位特異的変異誘発によって適切なアミノ酸を導入することによりグラフトされ得る。例えば、ＰＥＧは、アミノまたはカルボキシル基を介して簡便に結合される。遊離アミノ基を有するアミノ酸残基としては、リジン残基およびＮ末端アミノ酸残基が挙げられる。遊離カルボキシル基を有するアミノ酸残基としては、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基およびＣ末端アミノ酸残基が挙げられる。また、システイン残基に見られるスルフヒドリル基も、ＰＥＧ（または他の化合物）を結合させるための反応性基として使用され得る。好ましい実施形態では、ＰＥＧは、アミノ基、特に、リジン残基に見られる遊離アミノ基に共有結合される。
【０２６４】
ＰＥＧをタンパク質に直接結合させるための数多くの方法が、Ｄｅｌｇａｄｏら，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓ．９：２４９−３０４，１９９２；Ｆｒａｎｃｉｓら，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｊ．ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌ．６８：１−１８，１９９８；米国特許第４，００２，５３１号；米国特許第５，３４９，０５２号；ＷＯ９５／０６０５８；およびＷＯ９８／３２４６６に記載されている。かかる方法の一例では、ＭＰＥＧをトレシルクロリド（ＣｌＳＯ２ＣＨ２ＣＦ３）と反応させることにより作製されるトレシル化モノメトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）が使用される。トレシル化ＭＰＥＧは、レクチン上の露出アミン基と反応する。当業者には、本発明が、任意の特定のペグ化剤（または化合物）に限定されず、当該技術分野で周知の他の適当な化合物を同定することができることは認識されよう。
【０２６５】
一部の特定の実施形態では、ＰＥＧ（または他の化合物）は多価架橋剤に、介在リンカーを介して結合され得る。例えば、米国特許第５，６１２，４６０号には、ＰＥＧをタンパク質に連結させるためのウレタンリンカーが開示されている。ＰＥＧはタンパク質にリンカーを介して、ＭＰＥＧ−スクシンイミジルスクシネート、１，１’−カルボニルジイミダゾールで活性化させたＭＰＥＧ、ＭＰＥＧ−２，４，５−トリクロロフェニル（ｐｅｎｙｌ）カーボネート、ＭＰＥＧ−ｐ−ニトロフェノールカーボネート、および種々のＭＰＥＧ−スクシネート誘導体などの化合物との反応によって結合され得る。ＰＥＧをタンパク質に結合させるためのいくつかのさらなるＰＥＧ誘導体および反応化学が、ＷＯ９８／３２４６６および他の特許、例えば、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  ｏｆ  Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、ＡＬ；Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｓａｎ  Ｃａｒｌｏｓ、ＣＡ；および／またはＥｎｚｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｏｆ  Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪに譲渡されたものに記載されている。このような市販のＰＥＧ供給元から、一連の適当なＰＥＧ化合物および化学反応が記載されたカタログを入手することができる（例えば、Ｎｅｋｔａｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ  ＣＡＴＡＬＯＧ  ２００４を参照のこと）。
【０２６６】
種々の実施形態において、ポリペプチド系架橋剤のＮ末端α−アミンおよび／またはε−アミノリジン基は、電荷の分布を変更するため、ならびにかかる変更に伴う任意の第３級および第４級効果のために、スクシニル化および／またはアセチル化してもよい。例えば、ポリペプチドは、飽和酢酸ナトリウム緩衝液中での過剰の無水コハク酸との反応によってスクシニル化され得る。アセチル化は、修飾剤として無水酢酸を用いる以外は同じ手順を用いて行なわれ得る。例えば、タンパク質がコンカナバリンＡである場合、アセチル化およびスクシニル化のどちらも、ポリペプチド内の負電荷の密度を増大させるだけでなく、生理学的ｐＨにおいて四量体ではなく二量体としての合成を強いる（例えば、Ａｇｒａｗａｌら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．７：４２１１−４２１８，１９６８およびＧｕｎｔｈｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，（ＵＳＡ）７０：１０１２−１０１６，１９７３を参照のこと）。また、結果として、得られるこの物質体のインビボ安全性プロフィールが大きく改善される。また、結果として、得られるこの物質体のインビボ安全性プロフィールが大きく改善される。
【０２６７】
ｉｉ．結合部位の修飾
一部の特定の実施形態では、より特異的で択一的な多価架橋剤の修飾方法を使用することが好都合な場合があり得る。特に、本発明者は、本開示の特定の低分子量コンジュゲートでは、高分子量ＰＥＧ試薬（＞５ｋＤａ）を用いて作製された高度にペグ化されたレクチンと合わせた場合、不溶性の薬物送達系が形成されないことを見出した。これは、本発明者らが以前に、低分子量ＰＥＧ（＜５ｋＤａ）は、レクチンのマイトジェン活性の低減における有効性がずっと低いことを見い出していたため、難題をもたらすものである。なんら特定の理論に限定されることを望まないが、より大きなＰＥＧ基によって、より小さな低結合価コンジュゲートとの結合および網目形成は立体的に妨げられ得るが、大きな高結合価コンジュゲートは妨げられ得ないであろう。このことに鑑み、本発明者らは、レクチン系架橋剤の安全性プロフィールを改善するための択一的な非ＰＥＧ系溶液を考案した。本発明者らは、これを、レクチンの糖類結合部位を特異的に標的化して修飾することにより達成した。例えば、マンノースリガンドを直接コンカナバリンＡの結合部位内に反応させ、未反応物を高い親和性リガンドクロマトグラフィーによって精製することにより、本発明者らは、最良にペグ化されたレクチンのものに匹敵する安全性プロフィールを有する架橋剤を合成することができた。なんら特定の理論に限定されることを望まないが、この機能概念は、細胞表面は規定の糖類親和性、結合価およびリガンド密度を有するが、該コンジュゲートは、これらの特性がすべて設計によって調整されたものであり得るということであると考えられる。したがって、レクチン結合部位内にマンノースを組み込むと、架橋剤が細胞に結合し、それにより該細胞を凝集させるか、または刺激する能力が完全に無効になるが、より高密度の高親和性リガンドの該コンジュゲートへの組込みでは、ゲルの形成が依然として可能である。一部の特定の実施形態では、ペグ化度合が小さく、低ＭＷの個々のＰＥＧ鎖の組込みが、さまざまな極端な保存条件下における溶液中で多価レクチンを安定化させ、新たに設計されたコンジュゲートを補完する製造可能で安全な機能性架橋剤を得るために使用され得る。
【０２６８】
一般に、結合部位修飾レクチンは、レクチン結合部位のうちの１つと会合し得る少なくとも１つの共有結合された親和性リガンドを含む。種々の実施形態において、修飾レクチンは、共有結合された親和性リガンドを１つしか含まないものであり得る。種々の実施形態において、該レクチンは、結合部位１つあたり１つの共有結合された親和性リガンドを含むものであり得る。典型的には、多価レクチンは２つまたは４つの結合部位を含むもの（例えば、一価のレクチンの二量体または四量体）であるが、本開示はまた、３つ、５つまたはそれ以上の結合部位を有するレクチンも包含する。また、本開示は、結合部位１つあたり１つより多くの共有結合された親和性リガンドを有するレクチンも包含する。さらに、本開示は、異なる数の共有結合された親和性リガンドを含むレクチン、および／または未修飾レクチンを含むレクチンの混合物を含む物質体を包含する。
【０２６９】
一旦レクチンに共有結合した該レクチンの結合部位と会合し得る限り、任意の親和性リガンドがこの目的に使用され得る。典型的には、親和性リガンドは認識エレメントを含み、認識エレメントは、一旦結合部位内に結合したら、レクチン結合部位および反応性リンカー（これは、親和性リガンドがレクチンに共有結合されるのを可能にする）と相互作用する。
【０２７０】
認識エレメント
レクチンのコグネートリガンド（例えば、Ｃｏｎ  Ａの場合は、グルコースまたはマンノース）との結合に関して競合し得る任意の認識エレメントが本開示の親和性リガンドに使用され得る。種々の実施形態において、認識エレメントは糖質を含むものである。一部の特定の実施形態では、糖質は天然糖（例えば、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、アラビノース、リボース、キシロースなど）である。一部の特定の実施形態では、糖質は、修飾糖質（例えば、２’−フルオロリボース、２’−デオキシリボース、ヘキソースなど）である。一部の特定の実施形態では、認識エレメントは、グルコース、スクロース、マルトース、マンノース、これらの誘導体（例えば、グルコサミン、マンノサミン、メチルグルコース、メチルマンノース、エチルグルコース、エチルマンノースなど）および／またはこれらの高次の組合せ（例えば、線状および／または分岐のビマンノース、線状および／または分岐のトリマンノースなど）である。
【０２７１】
他の例示的な糖質は当業者に認識されよう。特に、適用用途に応じて、該コンジュゲートの親和性リガンドとの関連において上記の糖質のいずれか１つ（例えば、式ＩＶａまたはＩＶｂの糖質のいずれか１つ）が使用され得ることは理解されよう。一部の特定の実施形態では、認識エレメントは単糖を含むものである。一部の特定の実施形態では、認識エレメントは二糖を含むものである。一部の特定の実施形態では、認識エレメントは三糖を含むものである。一部の実施形態では、認識エレメントは糖質と１つ以上のアミン基を含むものである。一部の実施形態では、認識エレメントはアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）である。一部の実施形態では、認識エレメントはアミノエチルマンノース（ＡＥＭ）である。一部の実施形態では、認識エレメントはアミノエチルビマンノース（ＡＥＢＭ）である。一部の実施形態では、認識エレメントはアミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）である。一部の実施形態では、認識エレメントはβ−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）である。一部の実施形態では、認識エレメントはアミノエチルフコース（ＡＥＦ）である。他の実施形態では、認識エレメントはＤ−グルコサミン（ＧＡ）である。
【０２７２】
種々の実施形態において、認識エレメントは、多糖、糖ペプチドまたは糖脂質を含むものである。一部の特定の実施形態では、認識エレメントは、２〜１０個の糖質部分、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の該部分を含む。多糖、糖ペプチドまたは糖脂質の末端および／または内部残基は、対象のレクチンの糖特異性に基づいて選択され得る（例えば、Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ３１７：５００−５０４、１９７３およびＬｉｓら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５５：３５−６７、１９８６を参照のこと）。
【０２７３】
種々の実施形態において、特定のレクチン／外因性の標的分子の組合せに対する認識エレメントは、実験に基づいて選択され得る。かかる実施形態によれば、１つ以上の認識エレメントが、外因性の標的分子と比較したときのレクチンに対する相対結合親和性に基づいてスクリーニングされる。一部の特定の実施形態では、糖質および／または多糖類のライブラリーが、この様式でスクリーニングされる。適当な認識エレメントは、外因性標的分子との検出可能なレベルの競合を示すが、レクチンと外因性標的分子間の結合を完全に妨げるほど強く競合しないものである。一部の特定の実施形態では、異なる認識エレメントが、該当するレクチンの特性に対する種々の親和性リガンドの効果を試験することにより（例えば、凝集を抑止する能力、および／またはその物質セットポイント（以下、および各実施例においてより詳細に論考する）に基づいて）スクリーニングされ得る。一部の特定の実施形態では、認識エレメントは、修飾レクチンと合わされるコンジュゲートを考慮して（例えば、該コンジュゲートが認識エレメントを結合部位から移動させ、それにより、架橋物質体を形成することができるように）選択される。
【０２７４】
反応性リンカー
親和性リガンドは、レクチンに任意の様式で共有結合され得る。ほとんどの方法は、リガンドの認識エレメントをレクチン結合部位と会合させること、次いで、反応性リンカーをレクチンと反応させることを伴う。一部の特定の実施形態では、反応性リンカーは認識エレメントに、認識エレメントの結合特性に実質的に支障がない位置で結合され得る。例えば、認識エレメントが糖質または多糖である場合、リンカーは、末端の糖のＣ１、Ｃ２またはＣ６位に結合され得る。一部の特定の実施形態では、リンカーはＣ１位に結合され得る。Ｃ１位は、アノマー炭素とも称され、リンカーに、αまたはβコンホメーションで連結され得る。一部の特定の実施形態では、リンカーはＣ１位にαアノマーとして結合される。
【０２７５】
一部の特定の実施形態では、光励起性リンカーが使用され得る。例えば、Ｂｅｐｐｕら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７８：１０１３−１０１９、１９７５では、紫外光を用いてアリールアジドリンカーを活性化させ、コンカナバリンＡと結合部位内の糖類誘導体間に二重結合を形成させる方法が報告された。スクシニル化コンカナバリンＡを用いたＦｒａｓｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７３：７９０−７９４，１９７６でも同様の結果が記録された。また、リシンおよびＨｏｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５８：７２０８−７２１２，１９８３に記載のガラクトースの光励起性誘導体を使用し、同様の手順が使用された。また、レクチンに対して糖質および二糖よりも高い親和性を有する複雑な糖ペプチドリガンドの光励起性誘導体が、Ｂａｅｎｚｉｇｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：４４２１−４４２５，１９８２によって報告されている。このような誘導体は、光励起性基を糖ペプチドリガンドのペプチド部分に共有結合することにより作製された。
【０２７６】
一般に、アリール、プリン、ピリミジン、またはアルキルアジド、ジアゾもしくはジアジリン基、ベンゾフェノン、またはニトロベンゼンなどの任意の光励起性リンカーが使用され得る。潜在的に有用な光励起性リンカーのより包括的な一覧は、Ｆｌｅｍｉｎｇ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ５１：１２４７９−１２５２０，１９９５ならびにＢｒｕｎｎｅｒ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：４８３−５１４，１９９３およびＷｏｎｇ，Ｓ．Ｓ．「Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ」，（１９９３），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１６８−１９４を見るとよい。
【０２７７】
種々の実施形態において、光励起性リンカーはジアジリン基を含むものであり得る。紫外（ＵＶ）光でのジアジリン基の光励起により、反応性カルベン中間体が生成されるが、この反応性カルベン中間体は、リンカーの範囲内の任意のアミノ酸側鎖またはペプチド主鎖との付加反応によって二重結合を形成し得るものである。ジアジリンの活性化には、長波長ＵＶ光（約３２０〜３７０ｎｍ、好ましくは約３４５ｎｍ）が典型的に使用される（例えば、Ｓｕｃｈａｎｅｋら、Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２：２６１−２６８，２００５を参照のこと）。種々の実施形態において、光励起性リンカーはアリールアジド基を含むものであり得る。
【０２７８】
アリールアジド基をＵＶ光に曝露すると、ナイトレン基が形成されるが、このナイトレン基は、二重結合との付加反応、Ｃ−Ｈ部位およびＮ−Ｈ部位内への挿入、または後続の環拡大を開始させ、求核試薬として第１級アミンと反応し得るものである。後者の反応経路は、試料中に第１級アミンが存在する場合、優勢となる。限定されないが、置換型アリールアジド（例えば、ヒドロキシまたはニトロ基を有する）では、長波長ＵＶ光（約３２０〜３７０ｎｍ、好ましくは約３６６ｎｍ）が非常に効率的であると考えられるが、非置換のアリールアジドでは、短波長が非常に効率的であると考えられる。好適なＵＶ光源は、例えば、Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬから市販されている。
【０２７９】
例えば、種々の実施形態において、親和性リガンドは、一般式（ＩＸ）：Ｒｅ−Ｌ１のものであり得、式中、Ｒｅは認識エレメントであり、−Ｌ１は反応性リンカーである。一部の特定の実施形態では、Ｒｅは糖質部分である。一部の特定の実施形態では、Ｒｅは、リンカーにＣ１位で共有結合されたグルコースまたはマンノース部分である。
【０２８０】
一部の特定の実施形態では、−Ｌ１は、一般式（Ｘａ）：
【化３３】
2012516339.tif 000038
【０２８１】
（式中：
Ｒ３は、独立して、水素、−ＯＨ、−ＮＯ２、およびハロゲン（例えば、−Ｆまたは−Ｃｌ）からなる群より選択され；
ＸＬは共有結合であるか、または二価の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和の場合により置換されているＣ１−２０炭化水素鎖であり、ここで、ＸＬの１つ以上のメチレン単位は、場合により独立して、−０−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ０２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）−、複素環式基、アリール基、またはヘテロアリール基で置き換えられており；
存在するＲ’は各々、独立して、水素、適切な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分である）
を有するものであり得る。
【０２８２】
化学可変部が環の結合と交差している結合に結合されて表示されている場合（例えば、上記のＲ３で示している場合）はいずれも、これは、１つ以上のかかる可変部が、該交差している結合を有する環に任意選択で結合されていることを意味する。かかる環上の各Ｒ３基は任意の適当な位置に結合され得；これは、該基が、親環上の水素原子の代わりに結合されていることを意味すると一般的に理解されたい。これは、２つのＲ３基が同じ環内原子に結合され得る可能性を含む。さらに、１つより多くのＲ３基が環上に存在する場合、各々は同じであってもよく、結合されている他のＲ３基と異なっていてもよく、各基は、同じ識別名で表され得る場合であっても、同じ分子の別の箇所に結合され得る他の基とは独立して定義される。
【０２８３】
一部の特定の実施形態では、−Ｎ３基はメタ位である。一部の特定の実施形態では、−Ｎ３基はオルト位である。一部の特定の実施形態では、−Ｎ３基はパラ位である。
【０２８４】
一部の特定の実施形態では、ＸＬの１、２、３、４または５個のメチレン単位が、任意選択で独立して置き換えられている。一部の特定の実施形態では、ＸＬは、Ｃ１−１０、Ｃ１−８、Ｃ１−６、Ｃ１−４、Ｃ２−１２、Ｃ４−１２、Ｃ６−１２、Ｃ８−１２、またはＣ１０−１２炭化水素鎖で構築されており、ここで、ＸＬの１つ以上のメチレン単位は、任意選択で独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ０２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）−、複素環式基、アリール基、またはヘテロアリール基で置き換えられている。一部の実施形態では、ＸＬの１つ以上のメチレン単位が複素環式基で置き換えられている。一部の実施形態では、ＸＬの１つ以上のメチレン単位がトリアゾール部分で置き換えられている。一部の特定の実施形態では、ＸＬの１つ以上のメチレン単位が−Ｃ（Ｏ）−で置き換えられている。一部の特定の実施形態では、ＸＬの１つ以上のメチレン単位が−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−で置き換えられている。一部の特定の実施形態では、ＸＬの１つ以上のメチレン単位が−Ｏ−で置き換えられている。
【０２８５】
一部の実施形態では、ＸＬは
【化３４】
2012516339.tif 000039
【０２８６】
である。
【０２８７】
一部の実施形態では、ＸＬは
【化３５】
2012516339.tif 000040
【０２８８】
である。
【０２８９】
一部の実施形態では、ＸＬは
【化３６】
2012516339.tif 000041
【０２９０】
である。
【０２９１】
一部の実施形態では、ＸＬは
【化３７】
2012516339.tif 000042
【０２９２】
である。
【０２９３】
一部の実施形態では、ＸＬは
【化３８】
2012516339.tif 000043
【０２９４】
である。
【０２９５】
一部の実施形態では、ＸＬは
【化３９】
2012516339.tif 000044
【０２９６】
である。
【０２９７】
一部の特定の実施形態では、−Ｌ１は、一般式（Ｘｂ）：
【化４０】
2012516339.tif 000045
【０２９８】
（式中、ＸＬは、式Ｘａで上記に定義したとおりであり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは−ＣＦ３である）
のものであり得る。
【０２９９】
一部の特定の実施形態では、非光励起性リンカーが使用され得る。例えば、米国特許第５，２３９，０６２号および同第５，３９５，９２４号には、ｐＨまたは温度の変化によって活性化され得るリンカーが記載されている。論考された例示的な反応性リンカーとしては、シアヌル酸（Ｋａｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ２１６：５１４−５１５、１９６７）またはジクロロ−Ｓ−トリアジン（２−アミノ−４，６−ジクロロ−Ｓ−トリアジンなど（Ｋａｙら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １９８：２７６−２８５、１９７０））および２，４−ジクロロ−６−メトキシ−Ｓ−トリアジン（Ｌａｎｇら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  １：２１８９−２１９４、１９７７）などの試薬を用いて親和性リガンドに導入され得るものが挙げられる。また、主に末端アミン（リジンに見られるものなど）と反応し得るＮＨＳ−エステルまたはアルデヒドを有する反応性リンカーも使用され得る。
【０３００】
種々の実施形態において、特定のレクチン／標的分子の組合せに対する反応性リンカーは、実験に基づいて選択され得る。かかる実施形態によれば、同じ認識エレメントと異なるリンカー（例えば、長さが異なるリンカー、反応性基が異なるリンカー、疎水性が異なるリンカーなど）を有するいくつかの親和性リガンドが、該当するレクチンの特性に対する効果に基づいて（例えば、凝集および／または物質セットポイント（以下、および本実施例においてより詳細に論考する）を抑止する能力に基づいて）スクリーニングされる。
【０３０１】
ｉｉ．修飾の程度
一般に、各多価架橋剤に結合される化合物の数（すなわち、置換の度合）は、架橋剤の性質、化合物（１種類または複数種）の性質、利用可能な反応部位の数および反応条件によって異なる。例えば、コンカナバリンＡのサブユニットは各々、１２個のリジン残基を含む。その結果、コンカナバリンＡが、リジン残基と反応する化合物でペグ化された場合、各サブユニットは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の該化合物に共有結合され得る。逆に、コンカナバリンＡの各サブユニットは、グルコース結合部位を１つだけ含む。したがって、コンカナバリンＡを、該結合部位で反応する化合物と反応させた場合、各サブユニットは、かかる化合物１つだけと共有結合する。置換の度合を測定するための方法は、Ｄｅｌｇａｄｏら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓ．９：２４９−３０４、１９９２に論考されている。
【０３０２】
好ましい実施形態では、多価架橋剤の化学修飾は、複数の化合物および複数の反応条件（例えば、試薬濃度、ｐＨ、温度などが異なる）を用いて最適化され得る。好ましい化合物および反応条件は、望ましくない特性（例えば、マイトジェン活性）は非修飾架橋剤と比べて低減されるが、所望の特性（例えば、結合親和性）は実質的に障害されないようなものである。例えば、ロボットによる自動取り扱い装置を使用し、種々の化合物および種々の反応条件を用いて、一連の修飾組成物が調製され得る。常套的なオルトゴナル実験手法を使用すると、当業者は、該被処理組成物の特性をスクリーニングすることができよう。一部の特定の実施形態では、好ましい条件について好ましい化合物および反応条件をさらに精密化するために、さらなる回数のオルトゴナル最適化が行なわれる。
【０３０３】
一実施形態において、至適反応条件は、被処理組成物を電気泳動によって、好ましくは変性ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動によって分離させることにより特定される。種々の実施形態において、均一に修飾された架橋剤を含む組成物が好ましい。このような好ましい組成物は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで測定したとき、非修飾架橋剤の分子量において弱いバンドを有する。
【０３０４】
４．架橋剤の精製
種々の実施形態において、多価架橋剤は（化学修飾されていようと、そうでなかろうと）、その特性を改善するために、さらに処理を施してもよい。したがって、一部の特定の実施形態では、多価架橋剤を含む組成物は、タンパク質断片、非修飾成分などを除去するために精製され得る。一般に、このような分離は、物理的特性（例えば、電荷；分子量；および／またはサイズ）および／または化学的特性（例えば、標的分子に対する結合親和性）に基づいて行なわれ得る。一部の特定の実施形態では、最適な除去は、このような特性の違いに依存する方法を２つ以上組み合わせることにより行なわれ得る。一実施形態において、このような分離は変性条件下で行なわれる。例えば、非修飾または一部修飾架橋剤は、その正味電荷に基づいてイオン交換クロマトグラフィーによって除去され得る。ゲル濾過クロマトグラフィーを使用すると、差次的に修飾された架橋剤が、サイズに基づいて識別され得る。アフィニティクロマトグラフィーは、非修飾または一部修飾架橋剤を除去するために使用され得る別の方法である。このアプローチは、特定の標的分子に対する修飾架橋剤、一部修飾架橋剤および非修飾架橋剤の結合親和性の違いを利用したものである。
【０３０５】
５．架橋剤の特性評価
種々の実施形態において、多価架橋剤は（化学修飾されていようと、そうでなかろうと）、その特性を確認または特性評価するために、スクリーニングまたはさらなる試験を行なってもよい。代表的なアッセイとしては、親和性アッセイ、凝集アッセイ、Ｔ細胞マイトジェン活性アッセイ、Ｔ細胞バイアビリティアッセイ、抗原性アッセイなどが挙げられる。
【０３０６】
親和性アッセイは、多価架橋剤をアフィニティカラム（例えば、標的分子を伴うレジン）に通すこと、および該架橋剤をカラムから除去するのに必要とされる溶出条件を決定することを伴うものであり得る。また、平衡透析を当該技術分野で知られているとおりに使用することもできる。また、該架橋剤を１種類以上の本開示のコンジュゲートと合わせ、次いで種々の濃度の標的分子と接触させるセットポイントアッセイを使用してもよい。好ましくは、化学修飾された架橋剤の結合親和性は、非修飾架橋剤のものの少なくとも７５％である。より好ましくは該結合親和性は、非修飾架橋剤のものの少なくとも８５％、さらにより好ましくは少なくとも９５％である。
【０３０７】
一部の特定の実施形態では、凝集アッセイを用いて多価架橋剤の最小凝集濃度（ＭＡＣ）が測定され得る。例えば、一部の特定の実施形態では、ＭＡＣは、米国特許第２００７０１１０８１１号に記載されているように、ウサギ赤血球を用いて測定され得る。本発明者らは、化学修飾レクチンの場合、高いＭＡＣ値は低いマイトジェン活性と強く相関していることを見い出した。一部の特定の実施形態では、修飾架橋剤は、非修飾架橋剤よりも高いＭＡＣを有するものであり得る。好ましくは、該ＭＡＣは、非修飾架橋剤のものの２５倍である。より好ましくは、該ＭＡＣは、非修飾架橋剤のものの５０倍、さらにより好ましくは１００倍超である。一部の特定の実施形態では、修飾架橋剤は、ホルムアルデヒド安定化ウサギ赤血球の２％ｖ／ｖ懸濁液で、４ｕｇ／ｍｌより大きいＭＡＣを示す。好ましくは、ＭＡＣは６ｕｇ／ｍｌより大きく、より好ましくは１０ｕｇ／ｍｌより大きく、さらにより好ましくは２５ｕｇ／ｍｌより大きい。
【０３０８】
マイトジェン活性アッセイは、典型的には、対象の組成物をＴ細胞培養物（例えば、ＰＢＭＣ細胞）と、ある期間接触させること、次いで、Ｔ細胞増殖レベルを測定することを伴う。細胞増殖を測定するための種々の方法が知られている。一実施形態では、細胞密度が４５０ｎｍで分光測光的に測定され得る。別の実施形態では、５７０ｎｍにおけるＭＴＴの低減を検出することにより、間接測定値が得られ得る（例えば、Ｏｈｎｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４５：１９９−２０３、１９９１を参照のこと）。好ましい実施形態では、細胞増殖レベルは、トリチウム標識チミジン取込みアッセイを用いて測定される。当業者には、他の適当な方法も使用され得ること、および本発明は、なんら特定の増殖アッセイに限定されないことが認識されよう。一部の特定の実施形態では、修飾架橋剤のＴ細胞マイトジェン活性は、非修飾架橋剤のＴ細胞マイトジェン活性の５０％未満である。Ｔ細胞マイトジェン活性の低下は、一連の架橋剤濃度（例えば、０．０１、０．１、１、１０、１００および１０００ｕｇ／ｍｌ）全体について相対（ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ）チミジン取込みアッセイを行なうことにより評価され得る。好ましい実施形態では、チミジン取込みアッセイは、ほぼ５００，０００個のＰＢＭＣを含む試料で行なわれる。次いで、試験組成物（例えば、修飾組成物）のマイトジェン活性を、最大非修飾マイトジェン活性に対する％で表示する。最大非修飾マイトジェン活性に対する％は、測定した全濃度での試験組成物の最大ＣＰＭ（カウント毎分）値を、測定した全濃度での非修飾組成物の最大ＣＰＭ値で除算することにより得られる。好ましくは、マイトジェン活性の低下を伴う試験組成物は、非修飾組成物よりも少なくとも５０％低いＴ細胞増殖レベルを誘導する。より好ましくは、該レベルは、少なくとも７５％低く、さらにより好ましくは少なくとも９０％、９５％または９９％低い。
【０３０９】
Ｔ細胞バイアビリティは、同様の実験を使用し、トリパンブルーをＴ細胞培養物に添加し、該細胞の代表的な試料を計数すること（トリパンを取り込むか、または依然としてトリパンを排除するかのいずれかであるもの、すなわち、青色になったものと、そうでないものに注目すること）により測定され得る。次いで、トリパンを排除した細胞（「青色でない」生細胞）の数を、計数された細胞総数（「青色」の死細胞＋「青色でない」生細胞）で除算することにより、バイアビリティ％を計算する。当業者には、他の適当な方法も使用され得ること、および本発明は、なんら特定のバイアビリティアッセイに限定されないことことが認識されよう。一部の特定の実施形態では、修飾架橋剤は、１００ｕｇ／ｍｌで、５００，０００細胞／ｍｌの濃度のＰＢＭＣを用いてアッセイしたとき、１０％より高い細胞バイアビリティパーセントを示す。好ましくは、細胞バイアビリティパーセントは２５％より高く、より好ましくは５０％より高く、さらにより好ましくは９０％より高い。
【０３１０】
架橋物質体
コンジュゲートと架橋剤を外因性の標的分子の非存在下で合わせると、非共有結合性架橋物質体が形成される。種々の実施形態において、該物質体は、水溶液中で、架橋剤とコンジュゲートの溶液を混合することにより自己集合によって調製され得る。種々の実施形態において、逆乳化によって該物質体の粒子が調製され得る。より詳細に米国特許第２００４／０２０２７１９号に記載されているように、これは、前記水溶液を、疎水性液と界面活性剤の混合物に添加し、混合物を撹拌することにより行なわれ得る。
【０３１１】
架橋物質体は、形成されたら、さまざまな適用用途に使用され得る。該物質体を遊離外因性の標的分子の存在下に入れると、該分子は、架橋剤とコンジュゲート間の相互作用に関して競合する。ある一定濃度より上の遊離外因性の標的分子では、競合レベルは、コンジュゲートが表面から放出されることにより、該物質体が分解され始めるようなものになる。種々の実施形態において、放出の程度および／または速度は、外因性の標的分子の濃度が増大するにつれて増大する。その結果、コンジュゲートは該物質体から、外因性の標的分子の局所濃度に直接関連する様式で放出される。
【０３１２】
一般に、該物質体の放出特性は、架橋剤、コンジュゲート、外因性標的分子の性質および条件（例えば、ｐＨ、温度、該架橋剤に結合する内因性分子の性質および濃度など）に依存する。架橋剤の親和性が、外因性の標的分子に対するよりもコンジュゲートに対する方がずっと大きい場合、該物質体は、高い外因性の標的分子濃度でコンジュゲートのみを放出する。コンジュゲートに対する架橋剤の相対親和性が減少するにつれて、該物質体からのコンジュゲートの放出は、より低い外因性の標的分子濃度で起こる。また、該物質体の放出特性は、コンジュゲートに対する架橋剤の相対量を変更することにより調整され得る。コンジュゲートに対する架橋剤の比率が高いほど、より高い外因性の標的分子濃度でコンジュゲートを放出する物質体がもたらされる。コンジュゲートに対する架橋剤の比率が低いほど、より低い外因性の標的分子濃度でコンジュゲートを放出する物質体がもたらされる。適用用途に応じて、このような変更により、多種多様な外因性の標的分子濃度に応答する物質体を作製することが可能なことは認識されよう。
【０３１３】
種々の実施形態において、架橋物質体は、３７ＣでｐＨ７のＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（１５０ｍＭのＮａＣｌを含む２５ｍＭのＨＥＰＥＳ）に入れたとき不溶性である。種々の実施形態において、外因性の標的分子を該緩衝液に、セットポイントと称される閾値濃度まで添加したとき、架橋物質体は実質的に不溶性のままである。セットポイントより上では、架橋物質体は、コンジュゲートの放出の程度および速度の増大を示す。この遷移は、急激に起こることもあり、セットポイント近くの一連の濃度にわたって緩徐に起こり得ることは認識されよう。一般に、所望のセットポイントおよび遷移は、外因性の標的分子の性質および該物質体の意図される適用用途に依存する。特に、該物質体を、特定の外因性標的分子のレベルの増大に応答するように設計した場合、所望のセットポイントは、外因性標的分子のＰＫプロフィール（特に、Ｃ最大）に基づいて決定され得る。患者内に存在する外因性標的分子の量は、投与の経路、用量およびスケジュールに依存し、さらに、送達手段に依存する（経口送達される外因性標的分子に対しては、例えば、即時放出、持続放出および／または遅延放出製剤が使用され得る）ことは理解されよう。
【０３１４】
任意の外因性の標的分子に対する所望のセットポイントは、さまざまな異なる適用用途に対して容易に決定され得ることは認識されよう。また、セットポイントは、特定の患者（例えば、患者の性別、患者が異常に低い、もしくは高レベルの外因性の標的分子の吸収を有することなどに基づいて）または適用用途（例えば、高頻度基準で放出するように設計された薬物送達系は、低頻度で放出するように設計された系よりも低い閾値濃度を必要とし得る）に対して調整する必要があり得ることも認識されよう。
【０３１５】
所望のセットポイントを有する物質体は、本明細書に記載の材料および方法を用いて、常套的な実験手法によって作製され得ることは認識されよう。例えば、同じ架橋剤とコンジュゲートを組み合わせて、コンジュゲートに対する架橋剤の比（ｗ／ｗ）を漸増させた一連の物質体を作製することができる。このような物質体は、ある範囲のセットポイントをカバーする。適当なセットポイントを有するリード物質体が特定されたら、最適化物質体を得るために、より精密な解像を用いて該プロセスを繰り返してもよい。択一的に（または付加的に）、同じコンジュゲートを、該コンジュゲートに対して親和性を漸増させた複数の異なる架橋剤と組み合わせてもよい。これにより、ある範囲のセットポイントを有する複数の物質体が得られ、これを、さらに精密化してもよい（例えば、コンジュゲートに対する架橋剤のｗ／ｗ比を変更することにより）。あるいはまた、同じ架橋剤を複数の異なるコンジュゲートと組み合わせることにより該プロセスを開始してもよい。種々の実施形態において、該コンジュゲートは、該架橋剤に対して種々の親和性を有するものであり得る（例えば、異なる親和性リガンドを含めた結果として）。種々の実施形態において、該コンジュゲートは、同じ親和性リガンドを含むが、異なる分子量を有するものであり得る（例えば、コンジュゲート枠組構造が異なる結果として）。
【０３１６】
種々の実施形態において、該物質体は、５０ｒｐｍでＵＳＰ溶出試験法ＩＩを使用し、３７Ｃで通常のヒト血清中に６時間入れたとき、実質的に不溶性のままである。種々の実施形態において、５０ｒｐｍでＵＳＰ溶出試験法ＩＩを使用し、３７Ｃで通常のヒト血清中に６時間入れたとき、溶解する物質体は１％未満、２％未満、４％未満、６％未満、８％未満または１０％未満である。種々の実施形態において、本開示の物質体は、５０ｒｐｍでＵＳＰ溶出試験法ＩＩを使用し、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０または４００ｍｇ／ｄＬのグルコースを含む３７ＣでｐＨ７のＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水に６時間入れたとき、実質的に不溶性のままであり得る。種々の実施形態において、５０ｒｐｍでＵＳＰ溶出試験法ＩＩを使用し、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、または４００ｍｇ／ｄＬのグルコースを有する３７ＣでｐＨ７のＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水に６時間入れたとき、溶解する物質体は１、２、４、６、８または１０％未満である。
【０３１７】
使用
別の態様では、本開示により、該物質体の使用方法を提供する。一般に、該物質体は、外因性の標的分子に応答して該コンジュゲートを制御可能に放出させるために使用され得る。
【０３１８】
種々の実施形態において、該物質体は、患者に薬物を制御可能に送達するために使用され得る。本発明は、本開示の物質体を投与することによる疾患または病状の処置を包含する。該物質体は、任意の患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、マウスなど）の処置に使用され得るが、ヒトの処置に最も好ましく使用される。該物質体は、患者に任意の経路によって投与され得る。一般に、最も適切な投与経路は、さまざまな要素、例えば、処置対象の疾患または病状の性質、薬物の性質、標的分子の性質、患者の体調などに依存する。一般に、本開示は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、皮下、脳室内、経皮、経直腸、膣内、腹腔内、経表面（粉剤、軟膏もしくは滴剤により）、口腔内による投与、または経口もしくは経鼻スプレー剤もしくはエーロゾル剤としての投与を包含する。このような種々の経路のための医薬組成物の製剤化および製造における一般的な考慮事項は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９５に記載されている。
【０３１９】
種々の実施形態において、該物質体は、例えば注射によって皮下投与され得る。該物質体を、送達を容易にするための担体に溶解させてもよい。例えば、担体は、水溶液、限定されないが、例えば滅菌水、生理食塩水または緩衝生理食塩水であり得る。一般に、コンジュゲート形態の薬物の治療有効量が投与される。薬物の「治療有効量」により、妥当な便益／リスク比（これは、薬物の有効性と毒性の均衡が関与する）で疾患または病状を処置するのに（例えば、その症状が改善される、進行が遅延される、再発が抑制される、発症が遅延されるなどに）充分な薬物の量を意図する。一般に、治療有効性と毒性は、標準的な薬理学的手順によって、細胞培養物において、または実験動物を用いて、例えば、ＥＤ５０（処置した被検体の５０％において治療上有効である用量）およびＬＤ５０（処置した被検体の５０％に対して致死性の用量）を計算することにより判定され得る。ＥＤ５０／ＬＤ５０は薬物の治療指数を表す。一般に、当該技術分野で周知のように、大きな治療指数を有する薬物が好ましいが、重篤な疾患または病状の場合、特に、択一的な治療選択肢がない場合は、小さい治療指数が許容され得る。ヒトに対する投与のための適切な最終選択用量範囲は、臨床試験の過程で決定される。
【０３２０】
種々の実施形態において、薬物はインスリンであり、インスリンの平均日用量は１０〜２００Ｕ、例えば、２５〜１００Ｕの範囲である（ここで、インスリン１単位は約０．０４ｍｇである）。一部の特定の実施形態では、このようなインスリン用量を伴う量の該物質体が、１日単位で投与される。一部の特定の実施形態では、このようなインスリン用量の５〜１０倍の用量を伴う量の該物質体が、１週間単位で投与される。一部の特定の実施形態では、このようなインスリン用量の１０〜２０倍の用量を伴う量の該物質体が、隔週単位で投与される。一部の特定の実施形態では、このようなインスリン用量の２０〜４０倍の用量を伴う量の該物質体が、月単位で投与される。当業者には、この同じアプローチを、用量範囲が既知の承認された他の薬物（例えば、本明細書に記載の承認されたインスリン感受性改善薬およびインスリン分泌促進薬のいずれか）に当てはめてもよいことは認識されよう。
【０３２１】
任意の所与の患者に対する薬物の１日の総使用量は、担当医師によって妥当な医学的判断の範囲内で決定されることは理解されよう。任意の特定の患者に対する具体的な治療有効量は、さまざまな要素、例えば、処置対象の疾患または病状；使用される具体的な薬物の活性；使用される具体的な組成物；患者の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事；使用される具体的な薬物の投与期間、投与経路および排出速度；処置の持続時間；使用される具体的な薬物と併用して、または同時に使用されている薬物；ならびに医学分野で周知の同様の要素に依存する。種々の実施形態において、本開示の物質体は、１回より多くの場合で投与され得る。例えば、本開示は、具体的に、該物質体が患者に皮下注射によって、連続的スケジュール（例えば、１日１回、２日に１回、週１回、２週間に１回、月１回など）で投与される方法を包含する。
【０３２２】
一部の特定の実施形態では、本開示の物質体は、患者（例えば、哺乳動物患者）の高血糖症を処置するために使用され得る。一部の特定の実施形態では、患者は糖尿病である。しかしながら、本発明の方法は糖尿病患者の処置に限定されない。例えば、一部の特定の実施形態では、該物質体は、血糖コントロールの障害に関連する感染を有する患者の高血糖症を処置するために使用され得る。一部の特定の実施形態では、該物質体は糖尿病を処置するために使用され得る。
【０３２３】
種々の実施形態において、本開示の物質体は、少なくとも１種類のさらなる治療薬を受けている患者に投与され得る。種々の実施形態において、該少なくとも１種類のさらなる治療法は、投与される該物質体と同じ疾患または障害の処置を意図するものである。種々の実施形態において、該少なくとも１種類のさらなる治療法は、主薬の副作用の処置を意図するものである。この２種類以上の治療法は、患者が両方の治療法の恩恵を受けている間中、同じ時間枠で投与しても、重複する時間枠で投与しても、重複しない時間枠で投与してもよい。この２種類以上の治療法は、患者が両方の治療薬の恩恵を受けている間中、同じスケジュールで投与しても、異なるスケジュールで投与してもよい。この２種類以上の治療法は、患者が両方の治療薬の恩恵を受けている間中、同じ製剤にて投与しても、異なる製剤にて投与してもよい。一部の特定の実施形態では、本開示の単独の物質体は、同じ疾患または障害を処置するための薬物を１種類より多く含むものであり得る。一部の特定の実施形態では、同じ疾患または障害を処置するための異なる薬物を含む本開示の２種類以上の別個の物質体が投与され得る（混合物として、または別々に）。一部の特定の実施形態では、非コンジュゲート型の二次薬物を本開示の物質体に含めてもよい（すなわち、該物質体の成分と単に混合されるだけで、該架橋物質体に共有結合されない薬物）。例えば、一部の特定の実施形態では、このようなアプローチのいずれかを用いて、１種類より多くの抗糖尿病薬が被検体に投与され得る。この本発明のアプローチの一部の特定の例示的な実施形態をインスリン関連治療との関連において、より詳細に以下に記載するが、前述のことから、他の治療法のかかる併用アプローチの恩恵を受けることは認識されよう。
【０３２４】
インスリン感受性改善薬（例えば、メトホルミン、グリタゾンなどのビグアニド）は、所与の量のインスリンに対する患者の応答を増大させることにより作用する。したがって、インスリン感受性改善薬を受けている患者に必要とされる、本開示のインスリン系物質体の用量は、該改善薬を受けていない同一の患者よりも少ない。したがって、一部の特定の実施形態では、インスリンコンジュゲートを含む該物質体が、インスリン感受性改善薬での処置も受けている患者に投与され得る。種々の実施形態において、本開示の物質体は、インスリン感受性改善薬の非存在下で必要とされる通常の用量の７５％までで投与され得る。種々の実施形態において、該通常の用量の５０、４０、３０または２０％までが投与され得る。
【０３２５】
インスリン抵抗性は、通常のインスリン量が、正常なインスリン応答をもたらすのに不充分な障害である。例えば、インスリン抵抗性患者には、その抵抗性を克服し、充分なグルコース降下効果をもたらすために、高用量のインスリンが必要とされ得る。このような場合、抵抗性が低い患者において通常、低血糖が誘導され得るインスリン用量では、高度に抵抗性の患者において同等のグルコース降下効果は奏されない。同様に、本開示の物質体は、適当な時間枠で高レベルのインスリン−コンジュゲートが放出される場合、このサブクラスの患者に対してのみ有効である。一部の特定の実施形態では、このサブクラスの患者の処置は、該２つのアプローチを併用することにより助長され得る。したがって、一部の特定の実施形態では、従来のインスリン系治療剤を用いてインスリンのベースラインレベルを得、患者の必要時に、本発明の物質体を投与してインスリン補充の制御をもたらす。したがって、一部の特定の実施形態では、インスリンコンジュゲートを含む物質体が、インスリンでの処置も受けている患者に投与され得る。種々の実施形態において、インスリンは、本開示の物質体の非存在下で必要とされる通常の用量の７５％までで投与され得る。種々の実施形態において、該通常の用量の５０、４０、３０または２０％までが投与され得る。この併用アプローチは、インスリン分泌促進薬（例えば、スルホニル尿素、ＧＬＰ−１、エキセンジン−４など）および／またはインスリン感受性改善薬（例えば、メトホルミン、グリタゾンなどのビグアニド）を受けているインスリン抵抗性患者でも使用され得ることは認識されよう。
【０３２６】
該物質体は、上記のようにして投与されると、適当な外因性標的分子の投与によって刺激され得る。一部の特定の実施形態では、刺激量の外因性標的分子が投与される。本明細書で用いる場合、外因性標的分子の「刺激量」は、先に投与された物質体からのある程度の量のコンジュゲートの放出が引き起こされるのに充分な量である。該物質体に対する前述の任意の投与方法が、外因性標的分子に等しく適用されることは理解されよう。また、該物質体および外因性標的分子の投与方法が同じであっても異なっていてもよいことも理解されよう。種々の実施形態において、投与方法は異なる（例えば、例示の目的で、該物質体は、皮下注射によって１週間単位で投与され得るが、外因性標的分子は、１日単位で経口投与される）。外因性標的分子の経口投与は、患者のコンプライアンスが助長されるため、特に価値がある。一般に、物質体からのコンジュゲートの放出プロフィールは、外因性標的分子のＰＫプロフィールと関連することは認識されよう。したがって、コンジュゲートの放出プロフィールは、外因性標的分子のＰＫプロフィールを制御することにより適応され得る。当該技術分野でよく知られているように、外因性標的分子のＰＫプロフィールは、使用される用量、経路、頻度および製剤に基づいて適応され得る。例えば、コンジュゲートの短期間で強い放出が所望される場合は、経口即時放出製剤が使用され得る。対照的に、コンジュゲートの長期間であまり強くない放出が所望される場合では、代わりに、経口持続放出製剤が使用され得る。即時放出製剤および持続放出製剤の製剤化および製造における一般的な考慮事項は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１９版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９５を見るとよい。一般に、該物質体のセットポイントは、コンジュゲートの放出が起こる外因性標的分子製剤のＣ最大未満であることは認識されよう。例えば、種々の実施形態において、該セットポイントは、Ｃ最大の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０％未満であってよい。
【０３２７】
また、本開示の物質体と外因性標的分子の相対投与頻度は、同じであっても異なっていてもよいことも認識されよう。一部の特定の実施形態では、外因性標的分子は該物質体よりも高頻度で投与される。例えば、一部の特定の実施形態では、該物質体は毎日投与され得るが、外因性標的分子は１日１回より多く投与される。一部の特定の実施形態では、該物質体は週２回、毎週、隔週または毎月投与され得るが、外因性標的分子は毎日投与される。一部の特定の実施形態では、該物質体は毎月投与され、外因性標的分子は週２回、毎週、または隔週投与される。
【０３２８】
キット
別の態様において、本開示により、架橋剤とコンジュゲートと、物質体を調製するための他の試薬とを含むキットを提供する。例えば、キットは、複数のコンジュゲートおよび複数の架橋剤を内包する個別の容器を含むものであり得る。キットのコンジュゲートと架橋剤を混合すると、架橋物質体が形成される。種々の実施形態において、該物質体は皮下送達用に設計され、キットはシリンジを含む。種々の実施形態において、キットは、架橋物質体が予め充填されたシリンジを含むものであり得る。また、キットに、該コンジュゲートと架橋剤を混合して架橋物質体を得るための使用説明書を含めてもよい。また、キットは、外因性標的分子の製剤、例えば、カプセル剤または錠剤などの経口投薬形態を含むものであってもよい。
【０３２９】
また別の態様では、本開示により、コンジュゲートおよび／または架橋剤のライブラリーを提供する。このようなライブラリーは、所望のセットポイントを有する物質体の作製に特に有用であり得る。種々の実施形態において、ライブラリーは、同じコンジュゲートで異なるセットポイントをもたらす複数の架橋剤を含むものであり得る。種々の実施形態において、ライブラリーは、さらに、ライブラリー内で架橋剤とともに架橋物質体を形成する１種類以上のコンジュゲートを含むものであり得る。ライブラリーが１種類より多くのかかるコンジュゲートを含む場合、異なるコンジュゲートは、異なる分子量、コンジュゲート分子１つあたり異なる数の親和性リガンドおよび／または異なる親和性リガンドを有するものであり得る。種々の実施形態において、ライブラリーは、１種類より多くの型の親和性リガンドを含むコンジュゲートを１つ以上含むものであり得る。種々の実施形態において、ライブラリーは、同じ架橋剤で異なるセットポイントをもたらす複数のコンジュゲートを含むものであり得る。種々の実施形態において、ライブラリーは、さらに、ライブラリー内でコンジュゲートとともに架橋物質体を形成する１種類以上の架橋剤を含むものであり得る。
【０３３０】
実施例
実施例１−α−メチル−マンノース刺激型物質体の合成
例示的コンジュゲートを、実施例８の方法に従い、骨格としてＴＳＢ−Ｃ４、親和性リガンドとしてＡＥＢＭ、および薬物としてＮＨ２−Ｂ１−ＢＯＣ２（Ａｌ、Ｂ２９）−インスリンを用いて合成した（親和性リガンドおよびコンジュゲートの構造については図１〜２を、これらの出発材料を調製するために使用した方法については実施例３〜７を参照のこと）。０．５０ｍｌの２．３ｍｇ／ｍｌコンジュゲート溶液（ｐＨ８．２の０．１５０Ｍ塩化ナトリウム含有２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｓ１４緩衝液）中）を遠心チューブに添加し、続いて、０．５００ｍｌの１８ｍｇ／ｍｌ  天然Ｃｏｎ  Ａ（ＮＣＡ）溶液（ｐＨ７．４の０．１５０Ｍ塩化ナトリウム含有２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｓ２４緩衝液）中）と速やかに混合すると、不溶性粒子の分散体が形成された。この分散体を室温で２０分間放置し、次いで、上清みから遠心分離によって分離した。得られたケークを、１．０ｍｌのｐＨ７．４の０．１５０Ｍ塩化ナトリウム含有２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｓ２４緩衝液）で５回洗浄した。最後の洗浄後、残留不溶物を３７Ｃで一晩インキュベートした。翌日、残留粒子を再度、遠心分離によって単離し、１．０ｍｌのＳ２４中でさらに１回洗浄した。得られた不溶物を、総容量０．３０ｍｌ（Ｓ２４を使用）中に分散させ、後の試験のために確保した。このプロセスは、任意の量の所望の生成物を生成させるために直接的に規模拡大してもよい。
【０３３１】
実施例２−非糖尿病ラットにおけるα−メチル−マンノース刺激
０．３００ｍｌの実施例１で調製した製剤を、３匹の正常雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）（体重４００〜５００ｇ）のそれぞれに皮下注射した。製剤の注射の前に、血中グルコース値を、尾静脈からの採血によりＰｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｘｔｒａ血糖測定器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）を用いて測定し、尾静脈からの採血により、ほぼ１００ｕｌの血清を得、インスリンのバックグラウンドレベルをアッセイした。試験期間中は、飼料をラットケージから除いた。血清中および血中グルコース値は、注射後３０分、６０分、９０分および１２０分の時点で得た。注射の１２０分後、２５％ｗ／ｖのα−メチル−マンノース溶液の腹腔内注射液を、２ｇ／ｋｇ用量となるように注射した後、血清中および血中グルコース値を１３５分、１５０分、１８０分、２１０分、２４０分、および３００分の時点で得た。続いて、血清インスリン濃度を、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ＥＬＩＳＡ，Ｍｅｒｃｏｄｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用し、純粋なインスリンコンジュゲート溶液で作成した標準曲線を用いて測定した。このアッセイでは、内因性ラットインスリンは交差反応しない。したがって、得られた結果はいずれも、外因的に投与されたインスリンコンジュゲートのみによるものであって、内因性ラットインスリンによるものではなかった。
【０３３２】
図３は、腹腔内α−メチル−マンノース負荷試験（ＩＰ（α−ＭＭ）ＴＴ）後のベースラインからの血清インスリン濃度の約４倍の増大を示し、インビボでのα−メチル−マンノース応答性送達を示す。さらに、実験の最初の２時間の間に生理学的に正常な血中グルコースレベルで放出されたコンジュゲートはごくわずかであり、事実上、α−メチル−マンノースの導入前に低血糖は誘導されなかった。しかしながら、外因的に送達されたα−メチル−マンノースによって血清インスリンコンジュゲート濃度の４倍の増大が誘導されると、有意な血糖降下効果が奏された。
【０３３３】
実施例３−ＴＳＢ−Ｃ４枠組構造の合成
１，３，５−ベンゼントリカルボニルクロリド（１ｇ、３．８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（ＤＣＭ）（５ｍＬ）溶液を、ω−アミノ酸（３．１当量）の１Ｎ  ＮａＯＨ（２５ｍＬ）の激しく撹拌した溶液に、氷浴中で滴下する。氷浴を除き、撹拌を室温で４時間継続する。２Ｎ  ＨＣｌ（約１５ｍＬ）を、ほぼｐＨ２になるまで滴下し、得られたスラリーをさらに２時間撹拌する。沈殿物を濾過し、冷水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、真空下で風乾させ、次いで、６０Ｃの炉内で一晩乾燥させる。得られた白色固形物を、さらに精製せずに使用する。各ω−アミノ酸の収量（４−アミノ酪酸：収量１．６ｇ、９１％；６−アミノカプロン酸：収量１．９ｇ、９２％）。
【０３３４】
上記の物質を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（３．１ｍｍｏｌ、３．１当量）を含むＤＭＳＯ（５ｍＬ）中に入れ、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−エチルカルボジイミド（ＥＤＣＩ、３．６ｍｍｏｌ、３．６当量）を室温で添加する。’得られた溶液を２４時間撹拌し、水（１２５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機相を水（２×５０ｍＬ）、ブライン（１×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させる。溶媒をエバポレートし、半固形残渣をアセトニトリル（１０ｍＬ）を用いて摩砕する。固形物を濾過し、冷溶媒で洗浄し、真空下で風乾させ、次いで、６０Ｃの炉内で一晩乾燥させる。生成物は、尿素副生成物を含まない。ベンゼン−１，３，５−トリカルボキシ−（Ｎ−６−アミノカプロン酸−ＮＨＳエステル）アミド（ＴＳＢ−Ｃ６）：３０４ｍｇ、３６％、ｍｐ  １４０〜１４２Ｃ。ベンゼン−１，３，５−トリカルボキシ−（Ｎ−４−酪酸−ＮＨＳ−エステル）アミド（ＴＳＢ−Ｃ４）：２４５ｍｇ、４５％、ｍｐ  １８２〜１８４Ｃ。
【０３３５】
実施例４−アジドエチルマンノース（ＡｚＥＭ）の合成
ａ．ブロモエチルマンノースの合成
ＤＯＷＥＸ  ５０Ｗｘ４レジン（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ、ＭＡ）を脱イオン水で洗浄して脱色する。２２５ｇのＤ−マンノース（１．２５ｍｏｌ；１当量、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）と１４０ｇのＤＯＷＥＸ  ５０Ｗｘ４の混合物を、２．２Ｌの２−ブロモエタノール（３０．５ｍｏｌ，２５当量；１２４．９７ｇ／ｍｏｌ；１．７６２ｇ／ｍＬ；ＢＰ＝１５０Ｃ；Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）で処理し、この撹拌混合物を８０Ｃまで４時間加熱する。反応を、ＴＬＣ（２０％メタノール／ジクロロメタン（ＤＣＭ））によってモニタリングする。約４時間後に反応が終了し、次いで、室温まで放冷する。この溶液を濾過してレジンを除去し、レジンを酢酸エチルとＤＣＭとで洗浄する。得られた濾液を回転式エバポレータ内でストリッピングすると、琥珀色の油状物となる。
【０３３６】
この琥珀色の油状物をシリカゲル（４ｋｇのシリカ充填ＤＣＭ）で、以下のようにして精製する。粗製物をＤＣＭに溶解させ、カラムに負荷し、次いで、２×４Ｌの１０％メタノール／ＤＣＭ；２×４Ｌの１５％メタノール／ＤＣＭ；および３×４Ｌの２０％メタノール／ＤＣＭを用いて溶出させる。生成物含有画分（ＴＬＣに基づいて）をプールし、ストリッピングして乾固させ、１５２ｇの１−α−ブロモエチル−グルコース（４２％）を得る。
【０３３７】
ｂ．ブロモエチルマンノースのアジドエチルマンノース（ＡｚＥＭ）への変換
加熱マントル、オーバーヘッドスターラーおよび温度計を取り付けた５Ｌ容の丸底３つ口フラスコに、１５０ｇのブロモエチルマンノース（５２５ｍｍｏｌ）を仕込む。この油状物を２Ｌの水に溶解させ、６８．３ｇのアジ化ナトリウム（１．０５ｍｏｌ、２当量；６５ｇ／ｍｏｌ；Ａｌｆａ−Ａｅｓａｒ）で処理した後、７．９ｇのヨウ化ナトリウム（５２．５ｍｍｏｌ、０．０８当量；１４９．８９ｇ／ｍｏｌ；Ａｌｆａ−Ａｅｓａｒ）で処理し、この溶液を５０Ｃまで昇温させ、一晩撹拌する。この溶液を室温まで冷却させ、回転式エバポレータにて濃縮乾固する。固形残渣を、３×５００ｍＬの５：１（容量比）ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨにより４０Ｃで温浸させる。合わせた有機部分を濾過し、蒸発乾固させ、ジドエチルマンノースをオフホワイト色として得る。
【０３３８】
ｃ．アジドエチルマンノースの再精製
３２ｇのアジドエチルグルコースを１００ｍＬの水中に入れる。混濁した溶液を、ガラスマイクロファイバーフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｂ）に通して濾過する。濾液を回転式エバポレータにてエバポレートすると固形物になる。この固形物をメタノール（１００ｍＬ）中に入れ、混濁した溶液を、再度、ガラスマイクロファイバーフィルターに通して濾過する。得られた薄黄色の濾液を真空下でストリッピングすると固形物になる。
【０３３９】
この固形物を最小限のメタノール（５０ｍＬ）中に入れ、酢酸エチル（１５０ｍＬ）を、撹拌下でゆっくり添加する。重質スラリーを冷却させ、濾過する。固形物を風乾させ（吸湿性）、６０Ｃの炉内に一晩入れる。母液を真空下でエバポレートすると、黄色のゴム状物となる。
【０３４０】
実施例５−アジドエチルマンノビオース（ＡｚＥＢＭ）の合成
実施例４のＡｚＥＭ化合物を、ベンゼンジメチルエーテルを用いて選択的に保護し、カラムクロマトグラフィーによって精製し、続いて臭化ベンジルと反応させ、１−α−（２−アジドエチル）−４，６−ベンズアルデヒドジアセタール−３−ベンジル−マンノピラノシドを得る。続いて、厳格な無水条件下でのトリフレート銀化学反応を用いて、この生成物を１−α−ブロモ−２，３，４，６−テトラベンゾイルマンノピラノシドでグリコシル化し、保護型アジドエチルマンノビオース生成物を得る。次いで、この中間生成物を脱保護してベンゾイル基を除去し、ＡｚＥＢＭを得る。
【０３４１】
実施例６−アジドエチルマンノビオース（ＡＥＢＭ）の合成
実施例５のアジド末端化合物は、パラジウム／炭素触媒、少量の酢酸、および溶媒としてエタノールを使用することにより、室温で容易に水素化され、対応するアミン末端化合物が得られる。プロセスは、ＡＥＴＭに関して以下に記載するものと同一であるが、試薬、溶媒などの量を、水素化対象の糖類−リガンドをモル数に応じて増減すべきであることは、当業者に理解されよう。
【０３４２】
ａ．マン（α−１，３）−マン（α−１．６）−α−１−アミノエチルマンノピラノシド（「アミノエチルトリマンノース」，ＡＥＴＭ）
５．３ｇ（９．２５ｍｍｏｌ）マン（α−１，３）−マン（α−１．６）−α−１−アジドエチルマンノピラノシドの１００ｍＬの水／５０ｍＬのエタノールの溶液に、０．８ｇの５％Ｐｄ／Ｃを添加した。激しく撹拌したこの懸濁液を、３０〜４０ｐｓｉで４８時間、またはＴＬＣで出発材料が見られなくなるまで水素化した（ＳＧ，メタノール，ＳＭ  Ｒｆ  ０．７５，Ｐｄｔ  Ｒｆ  ０．０，ＰＭＡ  ｖｉｓ．）。この懸濁液をセライトにて濾過し、これをエタノール（２×５０ｍＬ）ですすぎ洗浄し、濾液を真空濃縮した。
【０３４３】
この物質のＨＰＬＣ（Ｃ１８，３％アセトニトリル／９７％０．１％Ｈ３ＰＯ４、２２０ｎｍ、２ｍｌ／分）では、注入カラムボイド物質のｕｖ吸着、Ｒｔ  ２．５分が得られ、ベンゾエートエステルが示された。
【０３４４】
濾液を７０ｍＬの水と１２ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨで希釈し、この溶液を室温で一晩撹拌した（ＨＰＬＣ：カラムボイドＲｔ  ２．５分におけるｕｖ物質なし、Ｒｔ  １０．５分におけるｕｖ物質は安息香酸とともに共溶出）。２ｇの脱色用活性炭を添加し、撹拌懸濁液を８０Ｃまで加熱し、室温まで冷却させ、セライトにて濾過した。濾液のｐＨを２Ｎ  ＨＣｌで８．０に調整し、無色の溶液を約５０％容量まで真空濃縮した。
【０３４５】
この溶液をレジンカラム（Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ、５０ｇ）に負荷し、溶出画分が中性ｐＨになるまで（６×７５ｍＬ）水で洗浄し、残留する酸副生成物（あれば）を除去した。アミン生成物をカラムから、０．２５Ｎ水酸化アンモニウム（６×７５ｍＬ）で洗い出し、アミン生成物−ニンヒドリン検出を含む画分を合わせ、２５〜３０ｍＬまで真空濃縮した。この濃縮溶液を３００ｍＬの撹拌エタノールに滴下し、撹拌をさらに２時間継続した。生成物を濾過し、新鮮エタノールで洗浄し（２×５０ｍＬ）、重量が一定になるまで風乾させた。得られた白色の非晶質固形物を、真空炉内で８０Ｃにて５時間さらに乾燥させ、４．１ｇの白色の粒状固形物を得た（ＴＹ  ５．１ｇ）。ＮＭＲでは、芳香族プロトンはなかった。１Ｈ  ＮＭＲ  ３００  ＭＨｚ（Ｄ２Ｏ）δ  ５．０８（ｓ，１Ｈ）、４．８７（ｓ，１Ｈ）、４．８１（ｓ，１Ｈ）、４．８−３．６（ｍ，１８Ｈ）、２．９（ｍ，２Ｈ）。
【０３４６】
実施例７−ＮＨ２−Ｂ１−ＢＯＣ２（Ａ１，Ｂ２９）−インスリンの合成
典型的な合成において、４ｇの粉末化インスリン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を、１００ｍｌの無水ＤＭＳＯに室温で溶解させた後、４ｍｌのトリエチルアミン（ＴＥＡ）を添加する。この溶液を室温で３０分間撹拌する。次に、１．７９ｍｌ（２．６当量）のジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート／ＴＨＦ溶液（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）をインスリン−ＴＥＡ溶液にゆっくり添加し、ほぼ１時間混合する。５ｍｌのＤＭＳＯ中に２５０ｕｌのエタノールアミンを含む４ｍｌのストック溶液を添加した後、５分間混合することによって、反応液をクエンチする。クエンチ後、溶液を全部、１６００ｍｌのアセトンに注入し、スパチュラで軽く混合する。次に、１８．９％ＨＣｌ：水の溶液の８×４００μｌのアリコートを混合物の表面上に滴下し、反応したインスリンを沈殿させる。次いで、この沈殿物を遠心分離し、上清みを第２のビーカー内にデカンテーションし、一方、沈殿物ケークは確保する。上清み液に、１８．９％ＨＣｌ：水溶液のさらなる８×４００μｌのアリコートを混合物の表面上に滴下し、反応したインスリンの第２の沈殿物を得る。この第２の沈殿物を遠心分離し、上清みを廃棄する。２回の沈殿工程の合わせた遠心ケークをアセトンで１回洗浄した後、室温で真空乾燥させて粗製粉末を得る。これは、典型的には、６０％の所望のＢＯＣ２生成物と、４０％のＢＯＣ３物質を含む。
【０３４７】
分取用逆相ＨＰＬＣ法を使用し、純粋なＢ０Ｃ２−インスリンを粗製粉末から単離する。緩衝液Ａは、０．１％ＴＦＡを含む脱イオン水であり、緩衝液Ｂは、０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルである。粗製粉末を２５ｍｇ／ｍｌで７０％Ａ／３０％Ｂの混合物に溶解させ、シリンジ濾過した後、カラムに注入する。精製前、カラム（Ｗａｔｅｒｓ  ＳｙｍｍｅｔｒｙＰｒｅｐ  Ｃ１８，７ｕｍ，１９×１５０ｍｍ）を１５ｍｌ／分で、７０％Ａ／３０％Ｂ移動相により、Ｗａｔｅｒｓ  ＤｅｌｔｒａＰｒｅｐ  ６００システムを用いて平衡化させる。ほぼ５ｍｌの粗製粉末溶液を、１５ｍｌ／分の流速で５分間かけてカラムに注入した後、次の３．５分間では、７０％Ａ／３０％Ｂから６２％Ａ／３８％Ｂの線状勾配を使用し、この状態でさらに２．５分間保持する。この方法を使用すると、所望のＢＯＣ２ピークはほぼ１０．６分に溶出され、直後にＢＯＣ３ピークが溶出される。収集したら、この溶液を回転濃縮してアセトニトリルを除去し、凍結乾燥させて、純粋なＢＯＣ２−インスリン粉末を得る。具体物は、ＬＣ−ＭＳ（ＨＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によって確認し、コンジュゲーション部位は、Ｎ末端配列決定法（Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）によって調べる。
【０３４８】
実施例８−コンジュゲートの合成
ＴＳＢ−Ｃ４枠組構造を６０ｍＭで１．０ｍｌの無水ＤＭＳＯに溶解させた後、４００ｕｌ（過剰）のトリエチルアミン（ＴＥＡ）を添加する。この溶液を高速で１０分間、室温にて撹拌する。次いで、ＮＨ２−Ｂ１−ＢＯＣ２（Ａ１，Ｂ２９）−インスリン（ＭＷ＝６，００８ｇ／ｍｏｌを、別途、７．９ｍｌのＤＭＳＯに７．４ｍＭの濃度で溶解させる。溶解したら、薬物溶液を全部、１０分間かけて枠組構造／ＤＭＳＯ／ＴＥＡ溶液に滴下した後、室温で２時間混合する。次いで、残留した活性化型エステルを、アミン官能化ＡＥＢＭ親和性リガンドと以下のようにして反応させる。親和性リガンドの３７０ｍＭ溶液を、適切な容量の乾燥ＤＭＳＯにて調製する。溶解したら、充分な溶液を添加して、初期活性化型エステル基の数Ｎ−１の３倍に等しい、いくつかの反応性当量を得る。例えば、枠組構造１つあたりＮ＝３の初期活性化型エステル基が存在するならば、（３×（３−１）×６０ｍＭ／３７０ｍＭ）＝０．９７３ｍｌの親和性リガンド溶液を添加する。枠組構造１つあたりＮ＝４の初期活性化型エステル基が存在するならば、（３×（４−１）×６０ｍＭ／３７０ｍＭ）＝１．４６ｍｌの親和性リガンド溶液を添加する、などである。親和性リガンド溶液を添加した後、この溶液を室温でさらに１時間撹拌し、反応の終了を確実にする。
【０３４９】
次いで、得られた溶液を、０．１５０ＭのＮａＣｌを含む２０ｍＭ（ｐＨ５．０）のＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水溶液中で１０倍に超希釈した後、希ＨＣｌで最終ｐＨ８．０にｐＨ調整する。この水溶液を、まず、サイズ排除（コンジュゲート物質と非コンジュゲート物質の所望の分離のための適切な固相を使用）によって精製する。カラムボイド容積に通したこの溶液を、次いで、適切なサイズの限外濾過膜を用いてほぼ１０ｍｌに濃縮する。この溶液を、さらに精製して所望の生成物を得る（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ８、７ｕｍ、１９×１５０ｍｍカラム上での分取用逆相ＨＰＬＣを使用）。緩衝液Ａは、０．１％ＴＦＡを含む脱イオン水であり、緩衝液Ｂは、０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルである。精製前、カラムを１５ｍｌ／分で、８０％Ａ／２０％Ｂ移動相により、Ｗａｔｅｒｓ  ＤｅｌｔｒａＰｒｅｐ  ６００システムを用いて平衡化させる。ほぼ５ｍｌの粗製溶液を、２分間かけて１５ｍｌ／分の流速でカラムに注入した後、次の５分間では、８０％Ａ／２０％Ｂから７５％Ａ／２５％Ｂの線状勾配を使用し、続いて、次の２２分間では、７５％Ａ／２５％Ｂから６２％Ａ／３８％Ｂのゆるい線形勾配を使用する。所望のピークの保持時間は、使用する薬物、枠組構造および親和性リガンドに応じて異なる。収集したら、この溶液を回転濃縮してアセトニトリルを除去し、凍結乾燥させて純粋なコンジュゲートを得、その具体物は、ＬＣ−ＭＳ（ＨＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によって確認され得る。出発材料のＮＨ２−Ｂ１−ＢＯＣ２（Ａ１，Ｂ２９）−インスリンは、Ｐｈｅ−Ｂ１末端に１つしか遊離アミン基がないため、Ｐｈｅ−Ｂ１は、Ｎ末端配列決定法によって各脱保護最終生成物において確認されるように、枠組構造に対する唯一のインスリンコンジュゲーション部位である。
【０３５０】
実施例９−式（Ｉ）のコンジュゲート
この実施例では、式（Ｉ）：
【化４１】
2012516339.tif 000046
【０３５１】
のいくつかの例示的なコンジュゲートを記載する。
【０３５２】
このコンジュゲートのまた他の実施形態ならびにこのコンジュゲートの中間体および作製方法は、米国特許仮出願第６１／１６２，１０５号（２００９年３月２０日出願）および対応ＰＣＴ出願（２０１０年１月２７日出願）を見るとよい。これらの関連出願の全内容は、引用により本明細書に組み込まれる。
【０３５３】
一部の特定の実施形態では、式（Ｉ）のコンジュゲートは、下記の例示的な基の１つ以上を含むものであり得る。
【０３５４】
Ｒｘ
一部の特定の実施形態では、Ｒｘは水素である。一部の特定の実施形態では、Ｒｘは、任意選択で置換されているＣ１−６アルキルである。一部の特定の実施形態では、Ｒｘは、任意選択で置換されているＣ１−３アルキルである。一部の特定の実施形態では、Ｒｘは、任意選択で置換されているメチルである。一部の特定の実施形態では、Ｒｘは−ＣＨ３である。
【０３５５】
Ｚ１
一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、任意選択で置換されている二価のＣ１−１０、Ｃ１−８、Ｃ１−６、Ｃ１−４またはＣ１−２の炭化水素鎖である。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、−（ＣＨ２）−、−（ＣＨ２ＣＨ２）−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−、または−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−である。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、−（ＣＨ２）−または−（ＣＨ２ＣＨ２）−である。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、−（ＣＨ２）−である。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、−（ＣＨ２ＣＨ２）−である。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−である。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−である。
【０３５６】
一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、任意選択で置換されている二価のＣ１−１０の炭化水素鎖であって、Ｚ１の１、２または３個のメチレン単位が、任意選択で独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、任意選択で置換されているアリーレン部分または任意選択で置換されているヘテロアリーレン部分から選択される１つ以上の基で置き換えられている。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、任意選択で置換されている二価のＣ１−１０炭化水素鎖であって、Ｚ１の１、２または３個のメチレン単位が、任意選択で独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、または−（Ｃ＝Ｏ）−から選択される１つ以上の基で置き換えられている。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｃ＝ＮＨ）（ＣＨ２）３Ｓ−、−ＣＨ（Ｒｆ）２、−ＣＨ２ＣＨ（Ｒｆ）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（Ｒｆ）２−、−ＣＨ２Ｓ−、または−ＣＨ２ＣＨ２Ｓ−であり、式中、Ｒｆは、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリールである（例えば、一部の特定の実施形態では、Ｒｆは、任意選択で置換されているアリールであり；一部の特定の実施形態では、Ｒｆはフェニルである）。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２−または−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｃ＝ＮＨ）（ＣＨ２）３Ｓ−である。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２−である。一部の特定の実施形態では、Ｚ１は、−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｃ＝ＮＨ）（ＣＨ２）３Ｓ−である。
【０３５７】
Ｙ１
一部の特定の実施形態では、Ｙ１は、フリーラジカル開始剤の断片である。かかる断片は、ハロゲン、−ＯＲｅ、−ＳＲｅ、任意選択で置換されている脂肪族、任意選択で置換されているヘテロ脂肪族、任意選択で置換されているアリール、および任意選択で置換されているヘテロアリール部分を含むものであり得るため、Ｙ１の定義に包含される。
【０３５８】
一部の特定の実施形態では、Ｙ１は、水素、ハロゲン、または開始剤の断片である。一部の特定の実施形態では、Ｙ１は、水素またはハロゲンである。一部の特定の実施形態では、Ｙ１は、水素または臭素である。
【０３５９】
Ｘ１
一部の特定の実施形態では、Ｘ１は−ＯＲｃである。一部の特定の実施形態では、Ｘ１は、−ＯＲｃと−Ｎ（Ｒｄ）２の混合物である。一部の特定の実施形態では、Ｘ１は、−Ｎ（Ｒｄ）２である。
【０３６０】
Ｗ１および
【化４２】
2012516339.tif 000047
【０３６１】
一部の特定の実施形態では、
【化４３】
2012516339.tif 000048
【０３６２】
は共有結合性の単結合である。
【０３６３】
一部の特定の実施形態では、Ｗ１はポリマーに、アミノ基によって共有結合されている。一部の特定の実施形態では、Ｗ１はポリマーに、第１級アミノ基によって共有結合されている。
【０３６４】
例えば、一部の特定の実施形態では、基
【化４４】
2012516339.tif 000049
【０３６５】
は、基
【化４５】
2012516339.tif 000050
【０３６６】
に相当し、式中、［薬物−ＮＨ−］基または［薬物−Ｎ＝］基は、第１級アミノ基によって共有結合により直接コンジュゲートされた薬物である。他の実施形態では、薬物は、懸垂アミノ基を末端とするスペーサー基（例えば、アルキレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、エステル結合、アミド結合など）を含むものであり得る。後者の実施形態により、薬物の活性部分とポリマーとの間隔を大きくすることが可能になる。
【０３６７】
ｒ
一部の特定の実施形態では、ｒは１０〜２５（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、ｒは１５〜２５（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、ｒは２０〜２５（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、ｒは５〜２０（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、ｒは１０〜２０（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、ｒは１５〜２０（両端を含む）の整数である。一部の特定の実施形態では、ｒは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５である。一部の特定の実施形態では、ｒは５である。一部の特定の実施形態では、ｒは１０である。一部の特定の実施形態では、ｒは１５である。一部の特定の実施形態では、ｒは２０である。一部の特定の実施形態では、ｒは２５である。
【０３６８】
一部の特定の実施形態では、基：
【化４６】
2012516339.tif 000051
【０３６９】
は、基：
【化４７】
2012516339.tif 000052
【０３７０】
（式中、（ｇ＋ｔ）の和はｒに等しい）の混合物に相当する。一部の特定の実施形態では、各場合のｇとｔは、独立して、１〜２４（両端を含む）の整数であるが、（ｇ＋ｔ）の和は５以上２５以下であるものとする。一部の特定の実施形態では、ｇとｔは、約１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、または１：１（ｇ：ｔ）の比率で存在する。一部の特定の実施形態では、ｇとｔは、約１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、または１：２（ｇ：ｔ）の比率で存在する。
【０３７１】
例示的なコンジュゲート
一部の特定の実施形態では、式（Ｉ−ａ１）：
【化４８】
2012516339.tif 000053
【０３７２】
のコンジュゲートが使用され得る。
【０３７３】
一部の特定の実施形態では、式（Ｉ−ａ２）：
【化４９】
2012516339.tif 000054
【０３７４】
のコンジュゲートが使用され得る。
【０３７５】
一部の特定の実施形態では、式（Ｉ−ｂ１）：
【化５０】
2012516339.tif 000055
【０３７６】
のコンジュゲートが使用され得る。
【０３７７】
一部の特定の実施形態では、式（Ｉ−ｂ２）：
【化５１】
2012516339.tif 000056
【０３７８】
のコンジュゲートが使用され得る。
【０３７９】
一部の特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃｌ）：
【化５２】
2012516339.tif 000057
【０３８０】
のコンジュゲートが使用され得る。
【０３８１】
一部の特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ２）：
【化５３】
2012516339.tif 000058
【０３８２】
のコンジュゲートが使用され得る。
【０３８３】
これらの任意の例示的なコンジュゲートにおいて、基：
【化５４】
2012516339.tif 000059
【０３８４】
は、基：
【化５５】
2012516339.tif 000060
【０３８５】
（式中、それぞれ、（ｇ＋ｔ）の和はｒに等しい）の混合物に相当する。一部の特定の実施形態では、ｒは１０である。一部の特定の実施形態では、ｒは２０である。
【０３８６】
コンジュゲートの特性評価
該コンジュゲートは、任意の解析方法、例えば、核磁気共鳴（例えば、１Ｈ  ＮＭＲ）；分子量と多分散性はゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）；および鎖１本あたりの酸基の数の測定はフーリエ変換赤外分光分析（ＦＴＩＲ）または酸滴定によって特性評価することができる。
【０３８７】
一部の特定の実施形態では、コンジュゲートの枠組構造（すなわち、親和性リガンド、または薬物を含まない）は、１０，０００Ｄａ未満、例えば約１００〜約１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲート枠組構造は約３００〜約５，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲート枠組構造は約５００〜約２，５００Ｄａの範囲の分子量を有する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲート枠組構造は約１，０００〜２，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲート枠組構造は約２００〜１，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲート枠組構造は約３００〜８００Ｄａの範囲の分子量を有する。
【０３８８】
一部の特定の実施形態では、コンジュゲートの混合物を作製する。該コンジュゲートは、この混合物において、同じ分子量を有するものであっても異なる分子量を有するものであってもよい。一実施形態において、混合物の多分散性は１．５未満である。一実施形態において、混合物の多分散性は１．２５未満である。
【０３８９】
実施例１０−式（ＩＩ）のコンジュゲート
この実施例では、式（ＩＩ）：
【化５６】
2012516339.tif 000061
【０３９０】
のいくつかの例示的なコンジュゲートを記載する。
【０３９１】
このコンジュゲートのまた他の実施形態ならびにこのコンジュゲートの中間体および作製方法は、米国特許仮出願第６１／１４７，８７８号（２００９年１月２８日出願）、米国特許仮出願第６１／１５９，６４３号（２００９年３月１２日出願）、米国特許仮出願第６１／１６２，１０７号（２００９年３月２０日出願）、米国特許仮出願第６１／１６３，０８４号（２００９年３月２５日出願）、米国特許仮出願第６１／２１９，８９７号（２００９年６月２４日出願）、米国特許仮出願第６１／２２３，５７２号（２００９年７月７日出願）、米国特許仮出願第６１／２５２，８５７号（２００９年１０月１９日出願）、および対応ＰＣＴ出願（２０１０年１月２７日出願）を見るとよい。これらの関連出願の全内容は、引用により本明細書に組み込まれる。
【０３９２】
一部の実施形態では、本開示により、一般式（ＩＩａ−１）：
【化５７】
2012516339.tif 000062
【０３９３】
のコンジュゲートを提供する。
【０３９４】
例えば、一部の実施形態では、本開示により、式：
【化５８】
2012516339.tif 000063
【０３９５】
のコンジュゲートを提供する。
【０３９６】
一部の実施形態では、本開示により、一般式（ＩＩａ−２）：
【化５９】
2012516339.tif 000064
【０３９７】
のコンジュゲートを提供する。
【０３９８】
例えば、一部の実施形態では、本開示により、式：
【化６０】
2012516339.tif 000065
2012516339.tif 000066
【０３９９】
のコンジュゲートを提供する。
【０４００】
一部の実施形態では、本開示により、一般式（ＩＩａ−３）：
【化６１】
2012516339.tif 000067
【０４０１】
のコンジュゲートを提供する。
【０４０２】
例えば、一部の実施形態では、本開示により、式：
【化６２】
2012516339.tif 000068
【０４０３】
のコンジュゲートを提供する。
【０４０４】
コンジュゲートの特性評価
該コンジュゲートは、任意の解析方法、例えば、核磁気共鳴（例えば、１Ｈ  ＮＭＲ）；分子量と多分散性はゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）；フーリエ変換赤外分光分析（ＦＴＩＲ）などよって特性評価することができる。
【０４０５】
一部の特定の実施形態では、コンジュゲートの枠組構造（すなわち、親和性リガンド、薬物または検出可能な標識を含まない）は、１０，０００Ｄａ未満、例えば約１００〜約１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲート枠組構造は約３００〜約５，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲート枠組構造は約５００〜約２，５００Ｄａの範囲の分子量を有する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲート枠組構造は約１，０００〜２，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲート枠組構造は約２００〜１，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。一部の特定の実施形態では、コンジュゲート枠組構造は約３００〜８００Ｄａの範囲の分子量を有する。
【０４０６】
実施例１１−アジドフェニル−糖類修飾Ｃｏｎ  Ａの合成
本実施例および以降の実施例では、本開示の物質体を調製するために使用され得るいくつかの例示的な結合部位修飾レクチンの調製を記載する。
【０４０７】
特に記載のない限り、工程はすべて、室温で行なった。まず、５．０ｇの天然Ｃｏｎ  Ａ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、２ｍＭ塩化カルシウム、２ｍＭ塩化マンガンおよび０．１％ｗ／ｖ  アジ化ナトリウム（Ｓ２８緩衝液）を含む２００ｍｌの１０ｍＭ（ｐＨ５．０）の酢酸緩衝液溶液に溶解させ、不溶物（あれば）を遠心分離および／または濾過によって分離した。本発明者らは、種々の天然Ｃｏｎ  Ａ市販調製物は、認識可能な濃度の阻害性糖類を含むことを見い出し、該糖類は、一部の特定の実施形態では光親和性修飾の前に除去される。この目的のため、この溶液を、Ｂｉｏｇｅｌ−Ｐ６サイズ排除カラム（Ｓ２８移動相を使用）に２回通して精製した。最後に、得られた溶液をＳ２８で最終容量１Ｌまで希釈した。穏やかな撹拌条件下、０．４ｇのヒドロキノン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を添加した後、１６５ｍｇのアジドフェニルグルコース（ＡＰＧ，ＰｏｌｙＯｒｇ  Ｉｎｃ．，Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ，ＭＡ）またはアジドフェニルマンノース（ＡＰＭ，ＰｏｌｙＯｒｇ  Ｉｎｃ．，Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ，ＭＡ）のいずれかを添加した。この溶液を、暗所にて４Ｃで１時間、可能な限り低い撹拌速度で撹拌した。１時間の撹拌後、さらなる不溶物（あれば）を遠心分離および／または濾過によって除去した。２００ｍｌのこの溶液を、９インチ×１３インチのアルミニウムパンに注入し、ＣＬ−１０００  ＵＶ架橋炉（ＵＶＰ、Ｕｐｌａｎｄ、ＣＡ）内部で、４Ｃにて１５分間、３６０ｎｍで反応させた（また、ＵＶ反応は、３０２ｎｍの光を用いて行なってもよい）。反応後、さらなる不溶物（あれば）を遠心分離および／または濾過によって除去した。次いで、清澄化した溶液をＢｉｏｇｅｌ−Ｐ６サイズ排除カラム（Ｅｃｏｎｏｐａｋ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）に１回通して精製した（Ｓ２８移動相を使用）。次いで、ＵＶ架橋反応およびＰ６精製プロセスを、溶液が全部反応するまで繰り返した。最後に、合わせたＰ６精製溶液を、Ｏｍｅｇａ  ３０Ｋ膜を備えたＰａｌｌタンジェンシャルフロー濾過カートリッジ装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）を用いて約１８０ｍｌまで濃縮した。得られた溶液を遠心分離および／または濾過によって清澄化し、０．２２ｕｍフィルターに通した後、アフィニティカラム精製を行なった。
【０４０８】
実施例１２−ジアジリン光反応性リガンドの一般的な合成
０．９ｍｍｏｌのアミノエチル（ＡＥ）官能化糖類リガンド（例えば、ＡＥＧ、ＡＥＭ、ＡＥＢＭ、ＡＥＴＭ）を４ｍｌの無水ＤＭＳＯに溶解させた後、１．６ｍｌの無水トリエチルアミン（ＴＥＡ）を添加すると、乳濁液が形成された。別個の容器において、２００ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）のＮＨＳ−ジアジリン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）粉末を、暗条件下で、４ｍｌの無水ＤＭＳＯに溶解させた。溶解したら、ＮＨＳ−ジアジリン溶液をＡＥ−糖類溶液に滴下し、次いで、室温で一晩暗所にて反応させた。一夜溶液のＴＬＣ解析（５０％エタノール：５０％酢酸エチル）により、ジアジリン部分のＵＶシグナル（２５４ｎｍ）と、糖類シグナル（硫酸−エタノール染色）の共溶出と同時に、ＴＬＣの基部からのＡＥ官能化糖類リガンドの消失（硫酸−エタノール染色）が示されたため、反応の終了を確認した。次いで、溶液を、０．１５Ｍの塩化ナトリウムを含む８０ｍｌの２５ｍＭのＨＥＰＥＳ溶液（ｐＨ５．０）中で希釈し、必要であればｐＨをｐＨ５に調整し、次いで、Ｃｏｎ  Ａとの光親和性反応に必要とされるまで凍結させた。
【０４０９】
実施例１３−糖類官能化ジアジリンＣｏｎ  Ａの合成および特性評価
特に記載のない限り、工程はすべて、室温で行なった。まず、５．０ｇの天然Ｃｏｎ  Ａ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、２ｍＭ塩化カルシウム、２ｍＭ塩化マンガンおよび０．１％ｗ／ｖ  アジ化ナトリウム（Ｓ２８緩衝液）を含む２００ｍｌの１０ｍＭ（ｐＨ５．０）の酢酸緩衝液溶液に溶解させ、不溶物（あれば）を遠心分離および／または濾過によって分離した。本発明者らは、種々の天然Ｃｏｎ  Ａ市販調製物は、認識可能な濃度の阻害性糖類を含むことを見い出し、該糖類は、一部の特定の実施形態では光親和性修飾の前に除去される。この目的のため、この溶液を、Ｂｉｏｇｅｌ−Ｐ６サイズ排除カラム（Ｓ２８移動相を使用）に２回通して精製した。最後に、得られた溶液をＳ２８で最終容量１Ｌまで希釈した。次に、この溶液の容量を、１×Ｓ２８を用いて１Ｌ〜リガンド容量の１／３にし、撹拌バーを入れた１Ｌ容メディアボトル内に注入した。穏やかな撹拌条件下、暗所にて、０．４ｇのヒドロキノン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を溶解させた。次に、実施例４３で得られたジアジリン−糖類コンジュゲート３３ｍｌを、７回に分けて、穏やかな撹拌条件下、暗所にて添加した。溶解したら、溶液を全部、穏やかな撹拌下、暗所にて４Ｃでさらに１０分間インキュベートした。１０分間の撹拌後、さらなる不溶物（あれば）を遠心分離および／または濾過によって除去した。２５０ｍｌのこの溶液を、９インチ×１３インチのアルミニウムパンに注入し、ＣＬ−１０００  ＵＶ架橋炉（ＵＶＰ、Ｕｐｌａｎｄ、ＣＡ）内部で、４Ｃにて１５分間、３６０ｎｍで反応させた。反応後、さらなる不溶物（あれば）を遠心分離および／または濾過によって除去した。次いで、清澄化した溶液をＢｉｏｇｅｌ−Ｐ６サイズ排除カラム（Ｅｃｏｎｏｐａｋ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）に１回通して精製した（Ｓ２８移動相を使用）。次いで、ＵＶ架橋反応およびＰ６精製プロセスを、溶液が全部反応するまで繰り返した。最後に、合わせたＰ６精製溶液を、Ｏｍｅｇａ  ３０Ｋ膜を備えたＰａｌｌタンジェンシャルフロー濾過カートリッジ装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）を用いて約１８０ｍｌまで濃縮した。得られた溶液を遠心分離および／または濾過によって清澄化し、０．２２ｕｍフィルターに通した後、アフィニティカラム精製を行なった。
【０４１０】
他の実施形態
本発明の他の実施形態は、本明細書の検討または本明細書に開示した発明の実施により、当業者に自明となろう。本明細書および実施例は単なる例示とみなし、本発明の真の範囲および趣旨は、以下の特許請求の範囲に示されていることを意図する。
【図１】
2012516339.tif 000074
【図２】
2012516339.tif 000075
【図３】
2012516339.tif 000076
【図４】
2012516339.tif 000077
【図５】
2012516339.tif 000078
【配列表】
2012516339000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成23年9月27日(2011.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
外因性標的分子に結合する多価架橋剤、および
薬物と、コンジュゲート枠組構造に結合された２つ以上の個別の親和性リガンドとを含むコンジュゲートを含む架橋物質体であって、
該２つ以上の親和性リガンドは、該架橋剤との結合に関して該外因性標的分子と競合し、異なるコンジュゲート上の親和性リガンドと該架橋剤間の非共有結合性相互作用の結果、該物質体内で該コンジュゲートが架橋される、
架橋物質体。
【請求項２】
外因性標的分子が糖質を含む、請求項１に記載の物質体。
【請求項３】
外因性標的分子がα−メチル−マンノースである、請求項２に記載の物質体。
【請求項４】
コンジュゲートの親和性リガンドが、グルコース、マンノース、グルコサミン、マンノサミン、メチルグルコース、メチルマンノース、エチルグルコース、およびエチルマンノースから選択される糖質を含む、請求項２に記載の物質体。
【請求項５】
コンジュゲートの親和性リガンドが、ビマンノースまたはトリマンノースを含む、請求項２に記載の物質体。
【請求項６】
コンジュゲートの親和性リガンドが、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルビマンノース（ＡＥＢＭ）またはアミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）を含む、請求項２に記載の物質体。
【請求項７】
多価架橋剤がレクチンを含む、請求項１に記載の物質体。
【請求項８】
レクチンが認識エレメントに共有結合されており、該認識エレメントは、外因性の標的分子および該コンジュゲートの親和性リガンドと、レクチンに対する結合に関して競合するものであり、該レクチンは、該認識エレメントに対してよりも該コンジュゲートの親和性リガンドに対して高い親和性を有するものである、請求項７に記載の物質体。
【請求項９】
外因性標的分子が糖質であり、該コンジュゲートの親和性リガンドと認識エレメントがどちらも糖質を含む、請求項８に記載の物質体。
【請求項１０】
多価架橋剤がペプチドアプタマーを含む、請求項１に記載の物質体。
【請求項１１】
多価架橋剤がポリヌクレオチドアプタマーを含む、請求項１に記載の物質体。
【請求項１２】
薬物がインスリン分子である、請求項１に記載の物質体。
【請求項１３】
コンジュゲートが一般式：
【化１】
2012516339.tif 000079
（式中、
Ｒｘは、水素または置換されていてもよいＣ１−６アルキルであり；
Ｚ１は、置換されていてもよい二価のＣ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、Ｚ１の１、２、３、４または５個のメチレン単位は、独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、置換されていてもよいアリーレン部分または置換されていてもよいヘテロアリーレン部分から選択される１つ以上の基で置き換えられていてもよく、式中、Ｒａは、水素、置換されていてもよい脂肪族、置換されていてもよいヘテロ脂肪族、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、または適当なアミノ保護基であり、Ｒｂは、水素、置換されていてもよい脂肪族、置換されていてもよいヘテロ脂肪族、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり；
Ｘ１は各々、独立して、−ＯＲＣまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、式中、Ｒｃは、水素、置換されていてもよい脂肪族、置換されていてもよいヘテロ脂肪族、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、適当なヒドロキシル保護基、カチオン基、または親和性リガンドであり、各Ｒｄは、独立して、水素、置換されていてもよい脂肪族、置換されていてもよいヘテロ脂肪族、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、適当なアミノ保護基、または親和性リガンドであるが、Ｘ１の少なくとも２つは親和性リガンドを含むものとし；
Ｙ１は、水素、ハロゲン、置換されていてもよい脂肪族、置換されていてもよいヘテロ脂肪族、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、式中、Ｒｅは、水素、置換されていてもよい脂肪族、置換されていてもよいヘテロ脂肪族、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり；
ｒは、５〜２５（両端を含む）の整数であり；
Ｗ１は、薬物であり；
【化２】
2012516339.tif 000080
は、共有結合性の単結合または二重結合に相当する）
のものである、請求項１に記載の物質体。
【請求項１４】
コンジュゲートが一般式：
【化３】
2012516339.tif 000081
（式中、
［（Ａ−Ｔ）］は各々、コンジュゲート内の存在し得る分岐部を表し；
（Ａ−Ｔ）は各々、該コンジュゲートの分岐内の存在し得る反復部を表し；
−Ａ−は各々、独立して、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環式からなる群より選択される置換されていてもよい基であり；
Ｔは各々、独立して、共有結合であるか、または二価の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和の置換されていてもよいＣ１−３０炭化水素鎖であり、ここで、Ｔの１つ以上のメチレン単位は、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環式基、アリール基またはヘテロアリール基で置き換えられていてもよく；
Ｒは各々、独立して、水素、適当な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
−Ｂは、−Ｔ−ＬＢ−Ｘであり；
Ｘは各々、独立して、親和性リガンドであり；
ＬＢは各々、独立して、共有結合であるか、またはＴとＸとの共有結合性コンジュゲーションに由来する基であり；
−Ｄは、−Ｔ−ＬＤ−Ｗであり；
Ｗは各々、独立して、薬物であり；
ＬＤは各々、独立して、共有結合であるか、またはＴとＷとの共有結合性コンジュゲーションに由来する基であり；
ｋは、２〜１１（両端を含む）の整数であり、コンジュゲート内にｋ−分岐部が少なくとも２つあることを規定し；
ｑは、１〜４（両端を含む）の整数であり；
ｋ＋ｑは、３〜１２（両端を含む）の整数であり；
ｐは各々、独立して、１〜５（両端を含む）の整数であり；
ｎは各々、独立して、０〜５（両端を含む）の整数であり；
ｍは各々、独立して、１〜５（両端を含む）の整数であり；
ｖは各々、独立して、０〜５（両端を含む）の整数であるが、各ｋ−分岐部において、少なくとも１つのｎは≧１であり、少なくとも１つのｖは≧１であるものとする）
のものである、請求項１に記載の物質体。
【請求項１５】
患者に請求項１〜１４いずれか一項に記載の物質体を投与すること、および続いて、刺激量の外因性標的分子を該患者に投与することを含む方法。
【国際調査報告】
2012516339.tif 000082
2012516339.tif 000083