【手続補正書】
【提出日】令和2年4月27日(2020.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
疾患または障害に関連する外因性ネオ抗原をコードするポリヌクレオチドおよび免疫原性エンハンサーをコードするポリヌクレオチドを含むＴ細胞。
【請求項２】
前記ネオ抗原が、腫瘍ネオ抗原を含む、請求項１に記載のＴ細胞。
【請求項３】
複数のネオ抗原を含む、請求項１または２に記載のＴ細胞。
【請求項４】
２種から約２０種までのネオ抗原を含む、請求項３に記載のＴ細胞。
【請求項５】
２種から約１０種までのネオ抗原を含む、請求項３または４に記載のＴ細胞。
【請求項６】
ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、ナイーブセントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１から５までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項７】
ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはその両方である、請求項１から６までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項８】
ヒトＴ細胞である、請求項１から７までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項９】
前記免疫原性エンハンサーが、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、誘導性細胞死因子、細菌フラジェリン、ＣＤ８０、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、分泌型ＩＬ−２、ＣＤ２５非依存的にＴ細胞に結合する分泌型ＩＬ−２、分泌型ＩＬ−１５、分泌型ＩＬ−１５−ＩＬ−１５Ｒα複合体、分泌型ＩＦＮβ、分泌型ＩＦＮ−α１、分泌型ＩＬ−７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項１０】
前記免疫原性エンハンサーが、ＩＬ−１２を含む、請求項１から９までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項１１】
前記ＩＬ−１２が、前記Ｔ細胞の細胞表面に局在するＩＬ−１２融合タンパク質を含む、請求項１０に記載のＴ細胞。
【請求項１２】
前記ＩＬ−１２融合タンパク質が、（ａ）ＩＬ−１２ドメイン；および（ｂ）膜貫通ドメインを含む、請求項１１に記載のＴ細胞。
【請求項１３】
前記ＩＬ−１２融合タンパク質が、（ｃ）前記融合タンパク質を分泌経路に導くシグナルドメインをさらに含む、請求項１２に記載のＴ細胞。
【請求項１４】
前記免疫原性エンハンサーが、ＩＬ−１２およびＧＭ−ＣＳＦを含む、請求項９から１３までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項１５】
前記免疫原性エンハンサーが、誘導性細胞死因子を含む、請求項９から１４までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項１６】
前記誘導性細胞死因子が、セリン／トレオニンキナーゼ３（ＲＩＰＫ３）と相互作用する受容体を含む、請求項１５に記載のＴ細胞。
【請求項１７】
前記誘導性細胞死因子が、細胞死シグナル伝達ドメインおよびマルチマー形成ドメインを含む融合タンパク質を含む、請求項１５に記載のＴ細胞。
【請求項１８】
前記細胞死シグナル伝達ドメインが、ＲＩＰＫ３キナーゼドメインを含み、前記マルチマー形成ドメインが、ＦＫ５０６結合タンパク質またはそのマルチマー形成部分を含む、請求項１７に記載のＴ細胞。
【請求項１９】
前記免疫原性エンハンサーが、細菌フラジェリンを含む、請求項９から１８までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項２０】
前記細菌フラジェリンが、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａフェーズ１フラジェリンを含む、請求項１９に記載のＴ細胞。
【請求項２１】
前記細菌フラジェリンが、前記Ｔ細胞の細胞表面に局在する細菌フラジェリン融合タンパク質を含む、請求項１９または２０に記載のＴ細胞。
【請求項２２】
前記細菌フラジェリン融合タンパク質が、（ａ）細菌フラジェリンドメイン；および（ｂ）膜貫通ドメインを含む、請求項２１に記載のＴ細胞。
【請求項２３】
前記細菌フラジェリン融合タンパク質が、（ｃ）前記融合タンパク質を分泌経路に導くシグナルドメインをさらに含む、請求項２２に記載のＴ細胞。
【請求項２４】
外因性共刺激分子をさらに含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項２５】
前記共刺激分子が、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７ＲＰ１、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ１５４、ＩＣＡＭ−１、ＣＤ２ＢＰ２、ＬＩＧＨＴ、ＫＬＲＤ１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）のアゴニスト、ＣＤ１３４（ＯＸ−４０）のアゴニスト、ＣＤ２７のアゴニスト、ＣＤ２８のアゴニスト、ＣＤ４０のアゴニスト、ＣＤ１２２のアゴニスト、ＧＩＴＲのアゴニスト、ＩＣＯＳのアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２４に記載のＴ細胞。
【請求項２６】
前記共刺激分子が、ＣＤ８０を含む、請求項２５に記載のＴ細胞。
【請求項２７】
前記共刺激分子が、ＣＤ１３７Ｌを含む、請求項２４から２６までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項２８】
前記共刺激分子が、前記Ｔ細胞の細胞表面に局在する、請求項２４から２７までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
【請求項２９】
疾患または障害に関連する外因性ネオ抗原と、免疫細胞の細胞表面に局在するＩＬ−１２融合タンパク質を含む免疫原性エンハンサーとを含む免疫細胞であって、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、巨核球、肥満細胞、血小板、赤血球、および顆粒球から選択される免疫細胞。
【請求項３０】
前記ＩＬ−１２融合タンパク質が、（ａ）ＩＬ−１２ドメイン；および（ｂ）膜貫通ドメインを含む、請求項２９に記載の免疫細胞。
【請求項３１】
前記ＩＬ−１２融合タンパク質が、（ｃ）前記融合タンパク質を分泌経路に導くシグナルドメインをさらに含む、請求項３０に記載の免疫細胞。
【請求項３２】
ＧＭ−ＣＳＦ、誘導性細胞死因子、細菌フラジェリン、ＣＤ８０、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、分泌型ＩＬ−２、ＣＤ２５非依存的にＴ細胞に結合する分泌型ＩＬ−２、分泌型ＩＬ−１５、分泌型ＩＬ−１５−ＩＬ−１５Ｒα複合体、分泌型ＩＦＮβ、分泌型ＩＦＮ−α１、分泌型ＩＬ−７、またはそれらの任意の組み合わせから選択される第２の免疫原性エンハンサーをさらに含む、請求項３０から３２までのいずれか一項に記載の免疫細胞。
【請求項３３】
（ａ）請求項１から２８までのいずれか一項に記載のＴ細胞または請求項２９から３２までのいずれか一項に記載の免疫細胞、またはそれらの任意の組み合わせ、および（ｂ）薬学的に許容される担体、希釈剤もしくは賦形剤を含む、組成物。
【請求項３４】
ヒト被験体において疾患または障害を処置するための組成物であって、請求項１から２８までのいずれか一項に記載のＴ細胞、請求項２９から３２までのいずれか一項に記載の免疫細胞、または請求項３３に記載の組成物を含む、組成物。
【請求項３５】
ネオ抗原の発現に関連する疾患または障害を有するヒト被験体を処置するための組成物であって、請求項１から２８までのいずれか一項に記載のＴ細胞、請求項２９から３２までのいずれか一項に記載の免疫細胞、または請求項３３に記載の組成物を含む、組成物。
【請求項３６】
前記疾患または前記障害の再燃または再発が防止される、請求項３４または３５に記載の組成物。
【請求項３７】
複数回投与されることを特徴とする、請求項３４から３６までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記組成物の投与間の期間が、１週間、２週間、３週間、および１カ月から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記疾患または前記障害が、ウイルス感染、細菌感染、過剰増殖性障害、または自己免疫疾患である、請求項３４から３８までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記疾患または前記障害が、過剰増殖性疾患または障害である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
前記過剰増殖性疾患または障害が血液学的悪性疾患または固形がんである、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記過剰増殖性疾患または障害が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）から選択される血液学的悪性疾患である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記過剰増殖性疾患または障害が、胆管がん、膀胱がん、骨および軟部組織癌腫、脳腫瘍、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん、類腱腫、胚性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形膠芽腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、肝臓がん、肺がん、中皮腫、悪性黒色腫、神経芽腫、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、膵管腺癌、原発性星状細胞腫瘍、原発性甲状腺がん、前立腺がん、腎臓がん、腎細胞癌、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、精巣胚細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫および子宮がんから選択される固形がんである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
前記過剰増殖性疾患または障害が肺がんである、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
前記過剰増殖性疾患または障害が悪性黒色腫である、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４６】
前記Ｔ細胞または前記免疫細胞が、前記ヒト被験体に対して同系、同種異系、または自己のものである、請求項３４から４５までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４７】
前記Ｔ細胞または前記免疫細胞が、前記ヒト被験体に対して自己のものである、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
追加の補助治療剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項３４から４７までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４９】
前記補助治療剤と同時にまたは逐次的に投与されることを特徴とする、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
前記補助治療剤が、化学療法；免疫チェックポイント分子の阻害剤；共刺激分子；免疫原性を高める分子；細胞療法；またはワクチンを含む、請求項４８または４９に記載の組成物。
【請求項５１】
前記補助治療剤が、化学療法を含む、請求項４８から５０までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５２】
前記補助治療剤が、免疫チェックポイント分子の阻害剤を含む、請求項４８から５１までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５３】
前記免疫チェックポイント分子の阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、ＰＶＲ１Ｇ（ＣＤ１１２Ｒ）、ＰＶＲＬ２、アデノシン、Ａ２ａＲ、免疫抑制性サイトカイン、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ−５、Ｔｒｅｇ細胞、またはそれらの任意の組み合わせの活性または発現を遮断する作用物質を含む、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
前記ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２の活性または発現を遮断する作用物質が、ＰＤ−１に結合する抗体を含む、請求項５３に記載の組成物。
【請求項５５】
前記補助治療剤が、共刺激分子を含む、請求項４８から５４までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５６】
前記共刺激分子が、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７ＲＰ１、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ１５４、ＩＣＡＭ−１、ＣＤ２ＢＰ２、ＬＩＧＨＴ、ＫＬＲＤ１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）のアゴニスト、ＣＤ１３４（ＯＸ−４０）のアゴニスト、ＣＤ２７のアゴニスト、ＣＤ２８のアゴニスト、ＣＤ４０のアゴニスト、ＣＤ１２２のアゴニスト、ＧＩＴＲのアゴニスト、ＩＣＯＳのアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
前記共刺激分子が、ＣＤ８０を含む、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
前記共刺激分子が、ＣＤ１３７Ｌを含む、請求項５６または５７に記載の組成物。
【請求項５９】
前記補助治療剤が、ワクチンを含む、請求項４８から５８までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６０】
アジュバントと組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項３４から５９までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６１】
前記アジュバントが、ミョウバンまたはアルミニウム塩、ＧＭ−ＣＳＦ、ガンマイヌリン、ＩＳＣＯＭ、リポソーム、ＭＦ５９、モノホスホリルリピドＡ、ビロソームおよび他のウイルス様粒子、またはＡｑｕｉｌａのＱＳ−２１  ｓｔｉｍｕｌｏｎを含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
ネオ抗原をコードする核酸分子を含むトランスポゾン発現構築物。
【請求項６３】
（ａ）プロモーター；（ｂ）第１のｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン逆方向反復；（ｂ）前記ネオ抗原をコードする前記核酸分子；および（ｃ）第２のｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン逆方向反復を含み、前記ネオ抗原をコードする前記核酸分子が、前記第１のｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン逆方向反復と前記第２のｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン逆方向反復の間に位置する、請求項６２に記載のトランスポゾン発現構築物。
【請求項６４】
前記トランスポゾン発現構築物が、プラスミド中に存在する、請求項６２または６３に記載のトランスポゾン発現構築物。
【請求項６５】
細胞表面マーカーをコードする核酸分子をさらに含む、請求項６２から６４までのいずれか一項に記載のトランスポゾン発現構築物。
【請求項６６】
前記細胞表面マーカーが、切断型ヒトＣＤ１９、切断型ヒトＥＧＦＲ、切断型ヒトＮＧＦＲ、切断型ヒトＣＤ３４、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項６５に記載のトランスポゾン発現構築物。
【請求項６７】
ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、誘導性細胞死因子、細菌フラジェリン、ＣＤ８０、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、分泌型ＩＬ−２、ＣＤ２５非依存的にＴ細胞に結合する分泌型ＩＬ−２、分泌型ＩＬ−１５、分泌型ＩＬ−１５−ＩＬ−１５受容体アルファ複合体、分泌型ＩＦＮβ、分泌型ＩＦＮ−α１、分泌型ＩＬ−７、またはそれらの任意の組み合わせから選択される免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子をさらに含む、請求項６２から６６までのいずれか一項に記載のトランスポゾン発現構築物。
【請求項６８】
請求項６２から６７までのいずれか一項に記載のトランスポゾン発現構築物を含むキット。
【請求項６９】
請求項６２から６７までのいずれか一項に記載のトランスポゾン発現構築物を含む宿主細胞。
【請求項７０】
ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼ酵素発現構築物をさらに含む、請求項６９に記載の宿主細胞。
【請求項７１】
免疫系細胞である、請求項６９または７０に記載の宿主細胞。
【請求項７２】
前記免疫系細胞が、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、巨核球、肥満細胞、血小板、赤血球、または顆粒球である、請求項７１に記載の宿主細胞。
【請求項７３】
前記免疫系細胞が、Ｔ細胞である、請求項７２に記載の宿主細胞。
【請求項７４】
前記Ｔ細胞が、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、ナイーブセントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項７３に記載の宿主細胞。
【請求項７５】
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはその両方である、請求項７３または７４に記載の宿主細胞。
【請求項７６】
ヒト細胞である、請求項６９から７５までのいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項７７】
ウイルスベクターをさらに含む、請求項６９から７６までのいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項７８】
前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクターである、請求項７７に記載の宿主細胞。
【請求項７９】
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項８０に記載の宿主細胞。
【請求項８０】
前記ウイルスベクターが、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、誘導性細胞死因子、細菌フラジェリン、ＣＤ８０、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、分泌型ＩＬ−２、ＣＤ２５非依存的にＴ細胞に結合する分泌型ＩＬ−２、分泌型ＩＬ−１５、分泌型ＩＬ−１５−ＩＬ−１５受容体アルファ複合体、分泌型ＩＦＮβ、分泌型ＩＦＮ−α１、分泌型ＩＬ−７、またはそれらの任意の組み合わせから選択される免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子をさらに含む、請求項７７から７９までのいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項８１】
前記ウイルスベクターが、（ａ）前記宿主細胞の細胞表面に局在する融合タンパク質中に含まれるＩＬ−１２をコードする核酸分子および（ｂ）ＧＭ−ＣＳＦをコードする核酸分子を含む、請求項８０に記載の宿主細胞。
【請求項８２】
前記ウイルスベクターが、共刺激分子をコードする核酸分子を含む、請求項７７から８１までのいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項８３】
前記核酸分子が、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７ＲＰ１、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ１５４、ＩＣＡＭ−１、ＣＤ２ＢＰ２、ＬＩＧＨＴ、ＫＬＲＤ１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）のアゴニスト、ＣＤ１３４（ＯＸ−４０）のアゴニスト、ＣＤ２７のアゴニスト、ＣＤ２８のアゴニスト、ＣＤ４０のアゴニスト、ＣＤ１２２のアゴニスト、ＧＩＴＲのアゴニスト、ＩＣＯＳのアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む共刺激分子をコードする、請求項８２に記載の宿主細胞。
【請求項８４】
請求項６９から８３までのいずれか一項に記載の宿主細胞および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む組成物。
【請求項８５】
請求項１から２８までのいずれか一項に記載のＴ細胞を調製する方法であって、前記Ｔ細胞に、（ａ）被験体の試料中で同定されたネオ抗原をコードする核酸分子を含有するｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド；および（ｂ）ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むプラスミドを導入し、それにより、前記Ｔ細胞を調製するステップを含む、方法。
【請求項８６】
前記試料の全エキソームまたはＲＮＡ配列決定を使用して前記ネオ抗原を同定するステップ；および前記ネオ抗原をコードする前記核酸分子を前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミドに挿入するステップをさらに含む、請求項８５に記載のＴ細胞を調製する方法。
【請求項８７】
ネオ抗原をコードする前記核酸分子が、タンデムなミニ遺伝子を含む、請求項８５または８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記タンデムなミニ遺伝子が、２種から約２０種までのネオ抗原を含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記タンデムなミニ遺伝子が、２種から約１０種までのネオ抗原を含む、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記Ｔ細胞が、前記被験体に対して同系、同種異系、または自己のものである、請求項８５から８９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記Ｔ細胞が、前記被験体に対して自己のものである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミドおよび前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むプラスミドが、前記Ｔ細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで導入される、請求項８５から９１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記Ｔ細胞に免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子を含むプラスミドを導入するステップをさらに含む、請求項８５から９２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子が、前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド中に含まれる、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
請求項２９から３２までのいずれか一項に記載の免疫細胞を調製する方法であって、前記免疫細胞に（ａ）被験体の試料中で同定されたネオ抗原をコードする核酸分子を含有するｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド、（ｂ）ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むプラスミド、および（ｃ）前記Ｔ細胞の細胞表面に局在するＩＬ−１２融合タンパク質をコードする核酸分子を導入し、それにより、前記免疫細胞を調製するステップを含む、方法。
【請求項９６】
（ｃ）の核酸分子によりコードされるＩＬ−１２融合タンパク質が、ＩＬ−１２ドメインおよび膜貫通ドメインを含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
（ｃ）の核酸分子によりコードされるＩＬ−１２融合タンパク質が、前記融合タンパク質を分泌経路に導くシグナルドメインをさらに含む、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記ＩＬ−１２融合タンパク質をコードする核酸分子が、プラスミド中に含まれる、請求項９５から９７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
前記ＩＬ−１２融合タンパク質をコードする核酸分子が、（ａ）のｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド中に含まれる、請求項９５から９８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記試料の全エキソームまたはＲＮＡ配列決定を使用して前記ネオ抗原を同定するステップ；および前記ネオ抗原をコードする前記核酸分子を前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミドに挿入するステップをさらに含む、請求項９５から９９までのいずれかに記載の方法。
【請求項１０１】
ネオ抗原をコードする前記核酸分子が、タンデムなミニ遺伝子を含む、請求項９５から１００までのいずれかに記載の方法。
【請求項１０２】
前記タンデムなミニ遺伝子が、２種から約２０種までのネオ抗原を含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記タンデムなミニ遺伝子が、２種から約１０種までのネオ抗原を含む、請求項１０１または１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記免疫細胞が、前記被験体に対して同系、同種異系、または自己のものである、請求項９５から１０３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記免疫細胞が、前記被験体に対して自己のものである、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミドおよび前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むプラスミドが、前記免疫細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで導入される、請求項９５から１０５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記免疫細胞に第２の免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子を含むプラスミドを導入するステップをさらに含む、請求項９５から１０６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記第２の免疫原性エンハンサーが、ＧＭ−ＣＳＦを含む、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記第２の免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子が、ネオ抗原をコードする核酸分子を含む前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド中に含まれる、請求項１０７または１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ＧＭ−ＣＳＦをコードする核酸分子を含むプラスミドが前記免疫細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで導入される、請求項１０９に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
なお別の態様では、免疫細胞を調製する方法であって、前記免疫細胞に（ａ）被験体の試料中で同定されたネオ抗原をコードする核酸分子を含有するｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド、（ｂ）ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むプラスミド、および（ｃ）前記Ｔ細胞の細胞表面に局在するＩＬ−１２融合タンパク質をコードする核酸分子を含むプラスミドを導入し、それにより、前記免疫細胞を調製するステップを含む、方法が提供される。  本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
疾患または障害に関連する外因性ネオ抗原をコードするポリヌクレオチドおよび免疫原性エンハンサーをコードするポリヌクレオチドを含むＴ細胞。
（項目２）
前記ネオ抗原が、腫瘍ネオ抗原を含む、項目１に記載のＴ細胞。
（項目３）
複数のネオ抗原を含む、前記項目のいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目４）
２種から約２０種までのネオ抗原を含む、項目３に記載のＴ細胞。
（項目５）
２種から約１０種までのネオ抗原を含む、項目３または４に記載のＴ細胞。
（項目６）
ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、ナイーブセントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはそれらの任意の組み合わせである、項目１から５までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目７）
ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはその両方である、項目１から６までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目８）
ヒトＴ細胞である、項目１から７までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目９）
前記免疫原性エンハンサーが、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、誘導性細胞死因子、細菌フラジェリン、ＣＤ８０、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、分泌型ＩＬ−２、ＣＤ２５非依存的にＴ細胞に結合する分泌型ＩＬ−２、分泌型ＩＬ−１５、分泌型ＩＬ−１５−ＩＬ−１５Ｒα複合体、分泌型ＩＦＮβ、分泌型ＩＦＮ−α１、分泌型ＩＬ−７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、前記項目のいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目１０）
前記免疫原性エンハンサーが、ＩＬ−１２を含む、項目１から９までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目１１）
前記ＩＬ−１２が、前記Ｔ細胞の細胞表面に局在するＩＬ−１２融合タンパク質を含む、項目１０に記載のＴ細胞。
（項目１２）
前記ＩＬ−１２融合タンパク質が、（ａ）ＩＬ−１２ドメイン；および（ｂ）膜貫通ドメインを含む、項目１１に記載のＴ細胞。
（項目１３）
前記ＩＬ−１２融合タンパク質が、（ｃ）前記融合タンパク質を分泌経路に導くシグナルドメインをさらに含む、項目１２に記載のＴ細胞。
（項目１４）
前記免疫原性エンハンサーが、ＩＬ−１２およびＧＭ−ＣＳＦを含む、項目９から１３までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目１５）
前記免疫原性エンハンサーが、誘導性細胞死因子を含む、項目９から１４までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目１６）
前記誘導性細胞死因子が、セリン／トレオニンキナーゼ３（ＲＩＰＫ３）と相互作用する受容体を含む、項目１５に記載のＴ細胞。
（項目１７）
前記誘導性細胞死因子が、細胞死シグナル伝達ドメインおよびマルチマー形成ドメインを含む融合タンパク質を含む、項目１５に記載のＴ細胞。
（項目１８）
前記細胞死シグナル伝達ドメインが、ＲＩＰＫ３キナーゼドメインを含み、前記マルチマー形成ドメインが、ＦＫ５０６結合タンパク質またはそのマルチマー形成部分を含む、項目１７に記載のＴ細胞。
（項目１９）
前記免疫原性エンハンサーが、細菌フラジェリンを含む、項目９から１８までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目２０）
前記細菌フラジェリンが、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａフェーズ１フラジェリンを含む、項目１９に記載のＴ細胞。
（項目２１）
前記細菌フラジェリンが、前記Ｔ細胞の細胞表面に局在する細菌フラジェリン融合タンパク質を含む、項目１９または２０に記載のＴ細胞。
（項目２２）
前記細菌フラジェリン融合タンパク質が、（ａ）細菌フラジェリンドメイン；および（ｂ）膜貫通ドメインを含む、項目２１に記載のＴ細胞。
（項目２３）
前記細菌フラジェリン融合タンパク質が、（ｃ）前記融合タンパク質を分泌経路に導くシグナルドメインをさらに含む、項目２２に記載のＴ細胞。
（項目２４）
外因性共刺激分子をさらに含む、前記項目のいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目２５）
前記共刺激分子が、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７ＲＰ１、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ１５４、ＩＣＡＭ−１、ＣＤ２ＢＰ２、ＬＩＧＨＴ、ＫＬＲＤ１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）のアゴニスト、ＣＤ１３４（ＯＸ−４０）のアゴニスト、ＣＤ２７のアゴニスト、ＣＤ２８のアゴニスト、ＣＤ４０のアゴニスト、ＣＤ１２２のアゴニスト、ＧＩＴＲのアゴニスト、ＩＣＯＳのアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む、項目２４に記載のＴ細胞。
（項目２６）
前記共刺激分子が、ＣＤ８０を含む、項目２５に記載のＴ細胞。
（項目２７）
前記共刺激分子が、ＣＤ１３７Ｌを含む、項目２４から２６までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目２８）
前記共刺激分子が、前記Ｔ細胞の細胞表面に局在する、項目２４から２７までのいずれか一項に記載のＴ細胞。
（項目２９）
疾患または障害に関連する外因性ネオ抗原と、免疫細胞の細胞表面に局在するＩＬ−１２融合タンパク質を含む免疫原性エンハンサーとを含む免疫細胞であって、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、巨核球、肥満細胞、血小板、赤血球、および顆粒球から選択される免疫細胞。
（項目３０）
前記ＩＬ−１２融合タンパク質が、（ａ）ＩＬ−１２ドメイン；および（ｂ）膜貫通ドメインを含む、項目２９に記載の免疫細胞。
（項目３１）
前記ＩＬ−１２融合タンパク質が、（ｃ）前記融合タンパク質を分泌経路に導くシグナルドメインをさらに含む、項目３０に記載の免疫細胞。
（項目３２）
ＧＭ−ＣＳＦ、誘導性細胞死因子、細菌フラジェリン、ＣＤ８０、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、分泌型ＩＬ−２、ＣＤ２５非依存的にＴ細胞に結合する分泌型ＩＬ−２、分泌型ＩＬ−１５、分泌型ＩＬ−１５−ＩＬ−１５Ｒα複合体、分泌型ＩＦＮβ、分泌型ＩＦＮ−α１、分泌型ＩＬ−７、またはそれらの任意の組み合わせから選択される第２の免疫原性エンハンサーをさらに含む、項目３０から３２までのいずれか一項に記載の免疫細胞。
（項目３３）
（ａ）項目１から２８までのいずれか一項に記載のＴ細胞または項目２９から３２までのいずれか一項に記載の免疫細胞、またはそれらの任意の組み合わせ、および（ｂ）薬学的に許容される担体、希釈剤もしくは賦形剤を含む、組成物。
（項目３４）
疾患または障害を処置するための方法であって、項目１から２８までのいずれか一項に記載のＴ細胞、項目２９から３２までのいずれか一項に記載の免疫細胞、または項目３３に記載の組成物を有効量でそれを必要とするヒト被験体に投与するステップを含む、方法。
（項目３５）
ネオ抗原の発現に関連する疾患または障害を有するヒト被験体を処置するための方法であって、項目１から２８までのいずれか一項に記載のＴ細胞、項目２９から３２までのいずれか一項に記載の免疫細胞、または項目３３に記載の組成物を有効量で前記被験体に投与するステップを含む、方法。
（項目３６）
前記疾患または前記障害の再燃または再発が防止される、項目３４または３５に記載の方法。
（項目３７）
前記Ｔ細胞、前記免疫細胞、または前記組成物が複数回投与される、項目３４から３６までのいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
投与間の期間が、１週間、２週間、３週間、および１カ月から選択される、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記疾患または前記障害が、ウイルス感染、細菌感染、過剰増殖性障害、または自己免疫疾患である、項目３４から３８までのいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記疾患または前記障害が、過剰増殖性疾患または障害である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記過剰増殖性疾患または障害が血液学的悪性疾患または固形がんである、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記過剰増殖性疾患または障害が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）から選択される血液学的悪性疾患である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記過剰増殖性疾患または障害が、胆管がん、膀胱がん、骨および軟部組織癌腫、脳腫瘍、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん、類腱腫、胚性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形膠芽腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、肝臓がん、肺がん、中皮腫、悪性黒色腫、神経芽腫、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、膵管腺癌、原発性星状細胞腫瘍、原発性甲状腺がん、前立腺がん、腎臓がん、腎細胞癌、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、精巣胚細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫および子宮がんから選択される固形がんである、項目４１に記載の方法。
（項目４４）
前記過剰増殖性疾患または障害が肺がんである、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記過剰増殖性疾患または障害が悪性黒色腫である、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
前記Ｔ細胞または前記免疫細胞が、前記ヒト被験体に対して同系、同種異系、または自己のものである、項目３４から４５までのいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
前記Ｔ細胞または前記免疫細胞が、前記ヒト被験体に対して自己のものである、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
追加の補助治療剤を投与するステップをさらに含む、項目３４から４７までのいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記リンパ球または前記組成物が、前記補助治療剤と同時にまたは逐次的に投与される、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記補助治療剤が、化学療法；免疫チェックポイント分子の阻害剤；共刺激分子；免疫原性を高める分子；細胞療法；またはワクチンを含む、項目４８または４９に記載の方法。
（項目５１）
前記補助治療剤が、化学療法を含む、項目４８から５０までのいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記補助治療剤が、免疫チェックポイント分子の阻害剤を含む、項目４８から５１までのいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記免疫チェックポイント分子の阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、ＰＶＲ１Ｇ（ＣＤ１１２Ｒ）、ＰＶＲＬ２、アデノシン、Ａ２ａＲ、免疫抑制性サイトカイン、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ−５、Ｔｒｅｇ細胞、またはそれらの任意の組み合わせの活性または発現を遮断する作用物質を含む、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２の活性または発現を遮断する作用物質が、ＰＤ−１に結合する抗体を含む、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記補助治療剤が、共刺激分子を含む、項目４８から５４までのいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記共刺激分子が、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７ＲＰ１、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ１５４、ＩＣＡＭ−１、ＣＤ２ＢＰ２、ＬＩＧＨＴ、ＫＬＲＤ１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）のアゴニスト、ＣＤ１３４（ＯＸ−４０）のアゴニスト、ＣＤ２７のアゴニスト、ＣＤ２８のアゴニスト、ＣＤ４０のアゴニスト、ＣＤ１２２のアゴニスト、ＧＩＴＲのアゴニスト、ＩＣＯＳのアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記共刺激分子が、ＣＤ８０を含む、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記共刺激分子が、ＣＤ１３７Ｌを含む、項目５６または５７に記載の方法。
（項目５９）
前記補助治療剤が、ワクチンを含む、項目４８から５８までのいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
アジュバントを投与するステップをさらに含む、項目３４から５９までのいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
前記アジュバントが、ミョウバンまたはアルミニウム塩、ＧＭ−ＣＳＦ、ガンマイヌリン、ＩＳＣＯＭ、リポソーム、ＭＦ５９、モノホスホリルリピドＡ、ビロソームおよび他のウイルス様粒子、またはＡｑｕｉｌａのＱＳ−２１  ｓｔｉｍｕｌｏｎを含む、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
ネオ抗原をコードする核酸分子を含むトランスポゾン発現構築物。
（項目６３）
（ａ）プロモーター；（ｂ）第１のｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン逆方向反復；（ｂ）前記ネオ抗原をコードする前記核酸分子；および（ｃ）第２のｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン逆方向反復を含み、前記ネオ抗原をコードする前記核酸分子が、前記第１のｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン逆方向反復と前記第２のｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン逆方向反復の間に位置する、項目６２に記載のトランスポゾン発現構築物。
（項目６４）
前記トランスポゾン発現構築物が、プラスミド中に存在する、項目６２または６３に記載のトランスポゾン発現構築物。
（項目６５）
細胞表面マーカーをコードする核酸分子をさらに含む、項目６２から６４までのいずれか一項に記載のトランスポゾン発現構築物。
（項目６６）
前記細胞表面マーカーが、切断型ヒトＣＤ１９、切断型ヒトＥＧＦＲ、切断型ヒトＮＧＦＲ、切断型ヒトＣＤ３４、またはそれらの任意の組み合わせを含む、項目６５に記載のトランスポゾン発現構築物。
（項目６７）
ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、誘導性細胞死因子、細菌フラジェリン、ＣＤ８０、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、分泌型ＩＬ−２、ＣＤ２５非依存的にＴ細胞に結合する分泌型ＩＬ−２、分泌型ＩＬ−１５、分泌型ＩＬ−１５−ＩＬ−１５受容体アルファ複合体、分泌型ＩＦＮβ、分泌型ＩＦＮ−α１、分泌型ＩＬ−７、またはそれらの任意の組み合わせから選択される免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子をさらに含む、項目６２から６６までのいずれか一項に記載のトランスポゾン発現構築物。
（項目６８）
項目６２から６７までのいずれか一項に記載のトランスポゾン発現構築物を含むキット。
（項目６９）
項目６２から６７までのいずれか一項に記載のトランスポゾン発現構築物を含む宿主細胞。
（項目７０）
ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼ酵素発現構築物をさらに含む、項目６９に記載の宿主細胞。
（項目７１）
免疫系細胞である、項目６９または７０に記載の宿主細胞。
（項目７２）
前記免疫系細胞が、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、巨核球、肥満細胞、血小板、赤血球、または顆粒球である、項目７１に記載の宿主細胞。
（項目７３）
前記免疫系細胞が、Ｔ細胞である、項目７２に記載の宿主細胞。
（項目７４）
前記Ｔ細胞が、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、ナイーブセントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはそれらの任意の組み合わせである、項目７３に記載の宿主細胞。
（項目７５）
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはその両方である、項目７３または７４に記載の宿主細胞。
（項目７６）
ヒト細胞である、項目６９から７５までのいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目７７）
ウイルスベクターをさらに含む、項目６９から７６までのいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目７８）
前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクターである、項目７７に記載の宿主細胞。
（項目７９）
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、項目８０に記載の宿主細胞。
（項目８０）
前記ウイルスベクターが、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、誘導性細胞死因子、細菌フラジェリン、ＣＤ８０、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、分泌型ＩＬ−２、ＣＤ２５非依存的にＴ細胞に結合する分泌型ＩＬ−２、分泌型ＩＬ−１５、分泌型ＩＬ−１５−ＩＬ−１５受容体アルファ複合体、分泌型ＩＦＮβ、分泌型ＩＦＮ−α１、分泌型ＩＬ−７、またはそれらの任意の組み合わせから選択される免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子をさらに含む、項目７７から７９までのいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目８１）
前記ウイルスベクターが、（ａ）前記宿主細胞の細胞表面に局在する融合タンパク質中に含まれるＩＬ−１２をコードする核酸分子および（ｂ）ＧＭ−ＣＳＦをコードする核酸分子を含む、項目８０に記載の宿主細胞。
（項目８２）
前記ウイルスベクターが、共刺激分子をコードする核酸分子を含む、項目７７から８１までのいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目８３）
前記核酸分子が、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７ＲＰ１、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ１５４、ＩＣＡＭ−１、ＣＤ２ＢＰ２、ＬＩＧＨＴ、ＫＬＲＤ１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）のアゴニスト、ＣＤ１３４（ＯＸ−４０）のアゴニスト、ＣＤ２７のアゴニスト、ＣＤ２８のアゴニスト、ＣＤ４０のアゴニスト、ＣＤ１２２のアゴニスト、ＧＩＴＲのアゴニスト、ＩＣＯＳのアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む共刺激分子をコードする、項目８２に記載の宿主細胞。
（項目８４）
項目６９から８３までのいずれか一項に記載の宿主細胞および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む組成物。
（項目８５）
項目１から２８までのいずれか一項に記載のＴ細胞を調製する方法であって、前記Ｔ細胞に、（ａ）被験体の試料中で同定されたネオ抗原をコードする核酸分子を含有するｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド；および（ｂ）ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むプラスミドを導入し、それにより、前記Ｔ細胞を調製するステップを含む、方法。
（項目８６）
前記試料の全エキソームまたはＲＮＡ配列決定を使用して前記ネオ抗原を同定するステップ；および前記ネオ抗原をコードする前記核酸分子を前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミドに挿入するステップをさらに含む、項目８５に記載のＴ細胞を調製する方法。
（項目８７）
ネオ抗原をコードする前記核酸分子が、タンデムなミニ遺伝子を含む、項目８５または８６に記載の方法。
（項目８８）
前記タンデムなミニ遺伝子が、２種から約２０種までのネオ抗原を含む、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記タンデムなミニ遺伝子が、２種から約１０種までのネオ抗原を含む、項目８７または８８に記載の方法。
（項目９０）
前記Ｔ細胞が、前記被験体に対して同系、同種異系、または自己のものである、項目８５から８９までのいずれか一項に記載の方法。
（項目９１）
前記Ｔ細胞が、前記被験体に対して自己のものである、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミドおよび前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むプラスミドが、前記Ｔ細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで導入される、項目８５から９１までのいずれか一項に記載の方法。
（項目９３）
前記Ｔ細胞に免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子を含むプラスミドを導入するステップをさらに含む、項目８５から９２までのいずれか一項に記載の方法。
（項目９４）
前記免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子が、前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド中に含まれる、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
項目２９から３２までのいずれか一項に記載の免疫細胞を調製する方法であって、前記免疫細胞に（ａ）被験体の試料中で同定されたネオ抗原をコードする核酸分子を含有するｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド、（ｂ）ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むプラスミド、および（ｃ）前記Ｔ細胞の細胞表面に局在するＩＬ−１２融合タンパク質をコードする核酸分子を導入し、それにより、前記免疫細胞を調製するステップを含む、方法。
（項目９６）
（ｃ）の核酸分子によりコードされるＩＬ−１２融合タンパク質が、ＩＬ−１２ドメインおよび膜貫通ドメインを含む、項目９５に記載の方法。
（項目９７）
（ｃ）の核酸分子によりコードされるＩＬ−１２融合タンパク質が、前記融合タンパク質を分泌経路に導くシグナルドメインをさらに含む、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
前記ＩＬ−１２融合タンパク質をコードする核酸分子が、プラスミド中に含まれる、項目９５から９７までのいずれか一項に記載の方法。
（項目９９）
前記ＩＬ−１２融合タンパク質をコードする核酸分子が、（ａ）のｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド中に含まれる、項目９５から９８までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１００）
前記試料の全エキソームまたはＲＮＡ配列決定を使用して前記ネオ抗原を同定するステップ；および前記ネオ抗原をコードする前記核酸分子を前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミドに挿入するステップをさらに含む、項目９５から９９までのいずれかに記載の方法。
（項目１０１）
ネオ抗原をコードする前記核酸分子が、タンデムなミニ遺伝子を含む、項目９５から１００までのいずれかに記載の方法。
（項目１０２）
前記タンデムなミニ遺伝子が、２種から約２０種までのネオ抗原を含む、項目１０１に記載の方法。
（項目１０３）
前記タンデムなミニ遺伝子が、２種から約１０種までのネオ抗原を含む、項目１０１または１０２に記載の方法。
（項目１０４）
前記免疫細胞が、前記被験体に対して同系、同種異系、または自己のものである、項目９５から１０３までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１０５）
前記免疫細胞が、前記被験体に対して自己のものである、項目１０４に記載の方法。
（項目１０６）
前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミドおよび前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードする核酸分子を含むプラスミドが、前記免疫細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで導入される、項目９５から１０５までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１０７）
前記免疫細胞に第２の免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子を含むプラスミドを導入するステップをさらに含む、項目９５から１０６までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１０８）
前記第２の免疫原性エンハンサーが、ＧＭ−ＣＳＦを含む、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
前記第２の免疫原性エンハンサーをコードする核酸分子が、ネオ抗原をコードする核酸分子を含む前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンプラスミド中に含まれる、項目１０７または１０８に記載の方法。
（項目１１０）
前記ＧＭ−ＣＳＦをコードする核酸分子を含むプラスミドが前記免疫細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで導入される、項目１０９に記載の方法。