【手続補正書】
【提出日】令和2年8月31日(2020.8.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の抗体を含む組成物であって、
２つ以上の蛍光標識および２つ以上のスペーサー分子が前記第１の抗体に共有結合し、  前記蛍光標識およびスペーサー分子が互いに共有結合していない、組成物。
【請求項２】
前記第１の抗体が、等量の蛍光標識を用いて調製されたが前記スペーサー分子を含まない第２の抗体よりも高い蛍光発光レベルを示す、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記第１の抗体が第２の抗体よりも高い蛍光発光レベルを示し、前記第１の抗体および前記第２の抗体がそれぞれ同数の共有結合した蛍光標識を有し、前記第２の抗体が共有結合したスペーサー分子を有さない、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記スペーサー分子が、前記蛍光標識の消光を、前記スペーサー分子の非存在下での消光と比較して減少させる、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記スペーサー分子が、反応性基を介して前記抗体にコンジュゲートされている、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記反応性基がアミン基である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記アミン基がリジン残基上にある、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記スペーサー分子が、
アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイル（−Ｃ（Ｏ）ＣnＨm）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルの炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルのアルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ）x−（ＣＨ2）y−ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ1~6アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ3+）、第４級アンモニウム（−ＮＲ3+）基（式中、ＲはＣ1~6アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ3+）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ1~6アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；
アルキル、アルケニル、およびアルキニル基（−ＣnＨm）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基の炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、スルホネート基（−ＯＳＯ3−）、カルボキシレート基（−ＣＯ2−）、ホスフェート基（−ＯＰＯ3−）、ホスホネート基（−ＰＯ3−）、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ）x−（ＣＨ2）y−ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ1~6アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ3+）、第４級アンモニウム（−ＮＲ3+）基（式中、ＲはＣ1~6アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ3+）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ1~6アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；および
アセテート分子から選択されるか、または
前記スペーサー分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＭＳ−（ＰＥＧ）、またはベタインを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記スペーサー分子が、アセテートおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
蛍光標識の抗体に対する比が１〜５０である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
蛍光標識の抗体に対する前記比が５〜３０である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
蛍光標識された生体分子の蛍光を増加させる方法であって、
（ａ）スペーサー分子を生体分子にコンジュゲートすることと、
（ｂ）前記生体分子に蛍光標識をコンジュゲートすることと、を含み、
ステップ（ａ）および（ｂ）は同時にまたは任意の順序で行うことができ、
前記スペーサー分子と蛍光標識は互いにコンジュゲートされていない、方法。
【請求項１３】
前記スペーサー分子が、前記蛍光標識の消光を、前記スペーサー分子の非存在下での消光と比較して減少させる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記スペーサー分子が、反応性基を介して前記生体分子にコンジュゲートされている、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記反応性基がアミン基である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記アミン基がリジン残基上にある、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記スペーサー分子が、
アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイル（−Ｃ（Ｏ）ＣnＨm）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルの炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルのアルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ）x−（ＣＨ2）y−ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ1~6アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ3+）、第４級アンモニウム（−ＮＲ3+）基（式中、ＲはＣ1~6アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ3+）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ1~6アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；
アルキル、アルケニル、およびアルキニル基（−ＣnＨm）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基の炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、スルホネート基（−ＯＳＯ3−）、カルボキシレート基（−ＣＯ2−）、ホスフェート基（−ＯＰＯ3−）、ホスホネート基（−ＰＯ3−）、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ）x−（ＣＨ2）y−ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ1~6アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ3+）、第４級アンモニウム（−ＮＲ3+）基（式中、ＲはＣ1~6アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ3+）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ1~6アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；および
アセテート分子から選択されるか、または
前記スペーサー分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＭＳ−（ＰＥＧ）、またはベタインを含む、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
蛍光標識された生体分子を調製する方法であって、
（ａ）反応性基および２つ以上の蛍光標識をスペーサー分子にコンジュゲートし、それによって蛍光標識されたスペーサー分子を形成することと、
（ｂ）前記蛍光標識されたスペーサー分子を前記生体分子にコンジュゲートし、それによって前記蛍光標識された生体分子を形成することと、を含み、
前記蛍光標識された生体分子の個々の蛍光標識が、蛍光標識１個あたりに基づいて０．５以上の蛍光比を有する、方法。
【請求項１９】
平均１〜１０個の蛍光標識されたスペーサー分子が各生体分子にコンジュゲートされている、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
平均３〜１０個の蛍光標識されたスペーサー分子が各生体分子にコンジュゲートされている、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記スペーサー分子が、
アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイル（−Ｃ（Ｏ）ＣnＨm）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルの炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルのアルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ）x−（ＣＨ2）y−ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ1~6アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ3+）、第４級アンモニウム（−ＮＲ3+）基（式中、ＲはＣ1~6アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ3+）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ1~6アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；
アルキル、アルケニル、およびアルキニル基（−ＣnＨm）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基の炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、スルホネート基（−ＯＳＯ3−）、カルボキシレート基（−ＣＯ2−）、ホスフェート基（−ＯＰＯ3−）、ホスホネート基（−ＰＯ3−）、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ）x−（ＣＨ2）y−ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ1~6アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ3+）、第４級アンモニウム（−ＮＲ3+）基（式中、ＲはＣ1~6アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ3+）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ1~6アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；および
アセテート分子から選択されるか、または
前記スペーサー分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＭＳ−（ＰＥＧ）、またはベタインを含む、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記蛍光標識されたスペーサー分子がマルチアームポリマーである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
マルチアームポリマーが分岐鎖ポリエチレングリコール分子である、請求項２２に記載の方法。