【手続補正書】
【提出日】令和2年9月18日(2020.9.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９２】
本開示は、アセンブリ方法及びアセンブルした高次抗原の特徴の以下の非限定例で完了される。上述したように、本開示は、肝炎抗原及びＨＩＶエンベロープ抗原を使用して説明されるが、本発明は、主題の方法を使用して産生された抗原に拡張して、抗原の抗原性及び免疫原性を増強するために低次抗原から高次オリゴマーを形成する。本明細書に記載されるように、高次抗原は、当該技術分野で既知の一連の技術を使用してさらに特性決定される。しかし、今日までの分析は、本明細書に記載の還元及びアセンブリ方法により生成された、アセンブルしたオリゴマーが、細胞内で産生された対照抗原には見られない抗体結合プロファイルを示し、それにより、本組成物が、これに基づき、先行技術の抗原と区別することができることを示す。
本発明は以下の態様を含みうる。
[１]
天然低次抗原から細胞外でアセンブルした高次抗原を調製する方法であって、前記方法が、以下のステップ：
（ｉ）１つ以上の天然システインを還元するのに十分な時間及び条件下で、還元剤を含む溶液と、低次抗原を接触させること、
ならびに
（ｉｉ）前記還元剤を除去もしくは希釈するか、または前記還元された低次抗原を酸化剤と接触させて、（ｉ）の低次抗原をアセンブルした高次抗原にアセンブリさせることを誘発すること；を含み、
前記低次抗原の少なくとも１０％がステップ（ｉｉ）で高次の抗原に変換され、それにより、前記アセンブルした高次抗原が、前記低次抗原と比較して、非中和抗体との結合の低下を少なくとも示し、少なくとも１つの中和抗体との結合を保持する、前記方法。
[２]
低次抗原を高次抗原にアセンブリさせる方法の効率を向上させるために、第１ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）が、ステップ（ｉｉ）の残りの低次抗原を含む溶液と共に繰り返される、上記[１]に記載の方法。
[３]
ステップ（ｉ）中またはステップ（ｉ）の前に、低次抗原を含む前記溶液から、天然オリゴマーまたは高次抗原をほぼ枯渇させる、上記[１]または[２]に記載の方法。
[４]
前記低次抗原の少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％以上が、高次抗原に変換される、上記[１]〜[３]のいずれかに記載の方法。
[５]
天然対照高次抗原が１つ以上の中和抗体に結合するか、またはこれらを誘発する能力を、前記アセンブルした高次抗原が保持するか、または上回る、上記[１]〜[４]のいずれかに記載の方法。
[６]
前記アセンブルした高次抗原が、ＨＣＶ  Ｅ２の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）である、上記[１]〜[５]のいずれかに記載の方法。
[７]
前記アセンブルした高次抗原が、超可変領域１（ＨＶＲ１）もしくはその一部、超可変領域２（ＨＶＲ２）もしくはその一部、及び／または遺伝子型間可変領域（ｉｇＶＲ／ＶＲ３）もしくはその一部のうちの１つ以上などの超可変領域の全部または一部を欠いている、上記[６]に記載の方法。
[８]
前記アセンブルしたオリゴマー抗原が、Ｃ５８１、Ｃ５８５、Ｃ６５２、Ｃ６７７、Ｃ４９４、Ｃ４８６、Ｃ４５９、Ｃ４５２、Ｃ５６４、Ｃ５９７、及びＣ５６９からなる群より選択されるアミノ酸残基のうちの１つ以上に、非システイン置換または変異を含む、上記[６]または[７]に記載の方法。
[９]
ワクチン組成物の製造方法であって、上記[１]〜[８]のいずれかに記載の方法を含み、前記アセンブルした高次抗原が、薬学的または生理学的に許容される希釈剤、担体、またはアジュバントと混合される、前記方法。
[１０]
前記抗原が、ウイルスエンベロープ抗原または癌抗原である、上記[１]に記載の方法。
[１１]
前記ウイルスエンベロープ抗原が、肝炎ウイルス抗原またはＨＩＶエンベロープ抗原である、上記[１０]に記載の方法。
[１２]
上記[１]〜[１１]のいずれかに記載の方法により低次抗原から産生される、アセンブルした高次抗原またはそれを含む組成物。
[１３]
組成物であって、高次の細胞外でアセンブルした抗原を含み、前記アセンブルした抗原が天然対照高次抗原と比較して非中和抗体との結合の低下を少なくとも示す、前記組成物。
[１４]
前記アセンブルした高次抗原が、ＨＣＶ−Ｅ２またはＨＣＶ  Ｅ２の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）である、上記[１３]に記載の組成物。
[１５]
前記Ｅ２高次抗原が、超可変領域１（ＨＶＲ１）もしくはその一部、超可変領域２（ＨＶＲ２）もしくはその一部、及び／または遺伝子型間可変領域（ｉｇＶＲ／ＶＲ３）もしくはその一部のうちの１つ以上などの超可変領域の全部または一部を欠いている、上記[１４]に記載の組成物。
[１６]
前記Ｅ２抗原が、Ｃ５８１、Ｃ５８５、Ｃ６５２、Ｃ６７７、Ｃ４９４、Ｃ４８６、Ｃ４５９、Ｃ４５２、Ｃ５６４、Ｃ５９７、及びＣ５６９からなる群より選択されるアミノ酸残基のうちの１つ以上に、非システイン置換または変異を含む、上記[１４]または[１５]のいずれかに記載の組成物。
[１７]
薬学的または生理学的に許容される希釈剤、担体、またはアジュバントを含む、上記[１２]〜[１６]のいずれかに記載の組成物。
[１８]
前記抗原と関連する状態もしくはＨＣＶ感染の処置もしくは予防における、またはこのための薬品の調製における、上記[１２]〜[１７]のいずれかに記載の組成物の使用。
[１９]
ＨＣＶ感染の診断もしくは監視または抗ＨＣＶ処置プロトコールの監視のための診断薬の調製における、上記[１２]に記載のアセンブルした高次抗原または上記[１３]〜[１７]のいずれかに記載の組成物の使用。
[２０]
対象または患者における免疫応答を誘発するための方法であって、前記方法が、免疫応答を誘発するのに十分な時間及び条件下で、前記対象もしくは患者に、上記[１２]に記載のアセンブルした高次抗原または上記[１３]〜[１７]に記載の組成物を有効量投与することを含む、前記方法。
[２１]
ＨＣＶの感染に対して対象を免疫するための方法であって、上記[１２]に記載のアセンブルしたオリゴマーＥ２抗原、または上記[１３]〜[１７]のいずれかに記載の組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
[２２]
対象のＨＣＶ感染症を処置または予防するための方法であって、ＨＣＶ  Ｅ２及びＨＣＶ感染などの抗原に関連する状態を処置または予防するのに十分な時間及び条件下で、上記[１２]に記載のアセンブルしたオリゴマー抗原、または上記[１３]〜[１７]のいずれかに記載の組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
[２３]
前記アセンブルした高次抗原が検出可能なタグまたは精製タグを含む、上記[１３]〜[１６]のいずれかに記載の組成物。
[２４]
上記[１３]〜[１６]のいずれかに記載の高次のアセンブルした抗原に対する精製抗体を生成するための方法であって、対象に有効量の抗原を投与すること、及び産生された前記抗体を精製することを含む、前記方法。
[２５]
上記[１２]〜[１６]に記載のアセンブルした抗原を特異的に認識する抗体。
[２６]
上記[１２]に記載のアセンブルした高次抗原、または上記[１３]〜[１６]のいずれかに記載の組成物を含むキット、または固体もしくは半固体基質。
[２７]
抗原特異的免疫細胞と結合する／これを検出するための、上記[１２]に記載のアセンブルした高次抗原、または上記[１３]〜[１６]のいずれかに記載の組成物の使用。
[２８]
前記抗原に特異的なＢ細胞などの免疫細胞の検出及び／または単離のための、上記[１２]に記載のアセンブルした高次抗原、または上記[１３]〜[１６]のいずれかに記載の組成物の使用。
[２９]
ＨＣＶに特異的な免疫細胞／Ｂ細胞の検出及び／または単離のための方法であって、
ｉ）上記[１３]〜[１６]に記載のアセンブルした高次Ｅ２抗原を用いて、ＨＣＶに特異的な免疫細胞／Ｂ細胞を標識すること；ならびに
ｉｉ）前記標識された免疫細胞／Ｂ細胞をサイトメトリーで検出及び／または単離すること、を含む、前記方法。