【手続補正書】
【提出日】令和2年5月15日(2020.5.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、または前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体の組成物を産生することが可能な組換え宿主細胞であって、
（ａ）ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１９カルボキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１９カルボキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドは、配列番号２０７に記載のアミノ酸配列と少なくとも４０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号２０１に記載のアミノ酸配列と少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１４１、１４５、１８５、または２０３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号４、１７７、１８３または２１１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１２７、１３３、１３５、１３７または１４７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１８１に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１３ヒドロキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１３ヒドロキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドは、配列番号１４１に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号７に記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１２７、１３３、１３５、１３７、１３９または１５３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの双方のＣ２’のβ１，２グリコシル化及び／またはＣ３’のβ１，３グリコシル化が可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの双方のＣ２’のβ１，２グリコシル化及び／またはＣ３’のβ１，３グリコシル化が可能なポリペプチドは、配列番号２０１に記載のアミノ酸配列と少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１６９または１９９に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１３７に記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１６に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１１または１３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；及び／または
（ｄ）ステビオール前駆体を、そのＣ−１９カルボキシル位またはＣ−１９ヒドロキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ステビオール前駆体を、そのＣ−１９カルボキシル位またはＣ−１９ヒドロキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドは、配列番号２０７に記載のアミノ酸配列と少なくとも４０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１２７、１３３、１３５、１３７、１４７または１５３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１４１、１４３、１４５、１８５、２０３または２０５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１７７、１８３、２０９または２１１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１８１に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
を含み、前記遺伝子のうちの少なくとも１つは組換え遺伝子である、前記組換え宿主細胞。
【請求項２】
以下：
（ａ）ゲラニルゲラニルピロホスファート（ＧＧＰＰ）をファルネシルジホスファート（ＦＰＰ）及びイソペンテニルジホスファート（ＩＰＰ）から合成することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ＧＧＰＰを合成することが可能なポリペプチドは、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２または１１６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）ｅｎｔ−コパリルジホスファートをＧＧＰＰから合成することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ｅｎｔ−コパリルジホスファートを合成することが可能なポリペプチドは、配列番号３４、３６、３８、４０、４２または１２０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ｅｎｔ−カウレンをｅｎｔ−コパリルジホスファートから合成することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ｅｎｔ−カウレンを合成することが可能なポリペプチドは、配列番号４４、４６、４８、５０または５２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｄ）ｅｎｔ−カウレン酸をｅｎｔ−カウレンから合成することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ｅｎｔ−カウレン酸を合成することが可能なポリペプチドは、配列番号６０、６２、１１７、６６、６８、７０、７２、７４または７６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｅ）シトクロムＰ４５０複合体を還元することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記シトクロムＰ４５０複合体を還元することが可能なポリペプチドは、配列番号７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０または９２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；及び／または
（ｆ）ステビオールをｅｎｔ−カウレン酸から合成することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ステビオールを合成することが可能なポリペプチドは、配列番号９４、９７、１００〜１０４、１０６、１０８、１１０、１１２または１１４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｇ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの双方のＣ３’のβ１，３グリコシル化が可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの双方のＣ３’のβ１，３グリコシル化が可能なポリペプチドは、配列番号９に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
の１つ以上をさらに含み、前記遺伝子のうちの少なくとも１つは組換え遺伝子である、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項３】
前記１つ以上の組換え遺伝子の発現が、
（ａ）前記１つ以上の組換え遺伝子を欠損している対応する宿主と比較して、前記細胞により蓄積される前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの組成物の量を増加させる；及び
（ｂ）前記１つ以上の組換え遺伝子を欠損している対応する宿主と比較して、前記細胞により蓄積される前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物の前記量を、少なくとも約５％増加させる；及び／または
（ｃ）前記１つ以上の組換え遺伝子を欠損している対応する宿主と比較して、前記細胞により蓄積されるｅｎｔ−カウレン酸＋２Ｇｌｃ（＃７）、ｅｎｔ−カウレン酸＋３Ｇｌｃ（異性体１）、ｅｎｔ−カウレン酸＋３Ｇｌｃ（異性体２）、ステビオール−１３−Ｏ−グルコシド（１３−ＳＭＧ）、レバウジオシドＡ（ＲｅｂＡ）、レバウジオシドＢ（ＲｅｂＢ）、ステビオール＋４Ｇｌｃ（＃３６）、ステビオール＋６Ｇｌｃ（異性体１）、ステビオール＋７Ｇｌｃ（異性体２）、及び／またはｅｎｔ−カウレノール＋３Ｇｌｃ（異性体１及び／または異性体２）の前記量を増加させる、
請求項１または２に記載の組換え宿主細胞。
【請求項４】
植物細胞、真菌細胞、藻類細胞、または細菌細胞を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項５】
前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体が、ステビオール−１３−Ｏ−グルコシド（１３−ＳＭＧ）、ステビオール−１９−Ｏグルコシド（１９−ＳＭＧ）、ステビオール−１，２−ビオシド、ステビオール−１，３−ビオシド、１，２−ステビオシド、１，３−ステビオシド、ルブソシド、レバウジオシドＡ（ＲｅｂＡ）、レバウジオシドＢ（ＲｅｂＢ）、レバウジオシドＣ（ＲｅｂＣ）、レバウジオシドＤ（ＲｅｂＤ）、レバウジオシドＥ（ＲｅｂＥ）、レバウジオシドＦ（ＲｅｂＦ）、レバウジオシドＭ（ＲｅｂＭ）、レバウジオシドＱ（ＲｅｂＱ）、レバウジオシドＩ（ＲｅｂＩ）、ズルコシドＡ、モノグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸、ジグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸、トリグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸、モノグリコシル化ｅｎｔ−カウレノール、ジグリコシル化ｅｎｔ−カウレノール、トリグリコシル化ｅｎｔ−カウレノール、トリグリコシル化ステビオールグリコシド、テトラグリコシル化ステビオールグリコシド、ペンタグリコシル化ステビオールグリコシド、ヘキサグリコシル化ステビオールグリコシド、ヘプタグリコシル化ステビオールグリコシド、または前記のいずれかの異性体であるか、またはそれらの前記組成物が、これらを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項６】
前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体が、表１のＫＡ１．５８及び／または表１の化合物５．２４であるか、またはそれらの前記組成物が、これらを含む、請求項５に記載の組換え宿主細胞。
【請求項７】
植物細胞、真菌細胞、藻類細胞、または細菌細胞を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項８】
１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの組成物を細胞培養物中で産生する方法であって、前記遺伝子が発現される条件下、前記細胞培養物中で請求項１〜７のいずれか一項に記載の前記組換え宿主細胞を成長させることを含み、前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物が、前記組換え宿主細胞により産生される、前記方法。
【請求項９】
前記遺伝子が構成的に発現され、及び／または前記遺伝子の発現が誘導される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記組換え宿主細胞により蓄積される、ｅｎｔ−カウレン酸＋２Ｇｌｃ（＃７）、ｅｎｔ−カウレン酸＋３Ｇｌｃ（異性体１）、ｅｎｔ−カウレン酸＋３Ｇｌｃ（異性体２）、１３−ＳＭＧ、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、ステビオール＋４Ｇｌｃ（＃３６）、ステビオール＋６Ｇｌｃ（異性体１）、ステビオール＋７Ｇｌｃ（異性体２）、及び／またはｅｎｔ−カウレノール＋３Ｇｌｃ（異性体１及び／または異性体２）の量が、前記１つ以上の組換え遺伝子を欠損している対応する宿主と比較して、少なくとも約５％増加する、請求項８に記載の方法。 
【請求項１１】
１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの組成物を産生するための方法であって、 以下：
（ａ）ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１９カルボキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１９カルボキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドは、配列番号２０７に記載のアミノ酸配列と少なくとも４０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号２０１に記載のアミノ酸配列と少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１４１、１４５、１８５または２０３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号４、１７７、１８３または２１１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１２７、１３３、１３５、１３７または１４７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１８１に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１３ヒドロキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１３ヒドロキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドは、配列番号１４１に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号７に記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１２７、１３３、１３５、１３７、１３９または１５３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの双方のＣ２’のβ１，２グリコシル化及び／またはＣ３’のβ１，３グリコシル化が可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの双方のＣ２’のβ１，２グリコシル化及び／またはＣ３’のβ１，３グリコシル化が可能なポリペプチドは、配列番号２０１に記載のアミノ酸配列と少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１６９または１９９に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１３７に記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１６に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１１または１３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；及び／または
（ｄ）ステビオール前駆体を、そのＣ−１９カルボキシル位またはＣ−１９ヒドロキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、
ここで、前記ステビオール前駆体を、そのＣ−１９カルボキシル位またはＣ−１９ヒドロキシル位でグリコシル化することが可能なポリペプチドは、配列番号２０７に記載のアミノ酸配列と少なくとも４０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１２７、１３３、１３５、１３７、１４７または１５３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１４１、１４３、１４５、１８５、２０３または２０５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号１７７、１８３、２０９または２１１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１８１に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
を使用する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞の細胞培地中の植物由来または合成のステビオール、ステビオール前駆体、及び／またはステビオールグリコシドの全細胞生物変換を含み、
ここで、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、前記組換え宿主細胞内で発現される組換えポリペプチドであり、
それにより、前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物を産生することを含む、前記方法。
【請求項１２】
組換え宿主細胞が、植物細胞、真菌細胞、藻類細胞、または細菌細胞である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの組成物を産生するためのインビトロの方法であって、以下：
（ａ）ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１３ヒドロキシル位でグリコシル化することが可能であり、及び配列番号１４１に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号７に記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１２７、１３３、１３５、１３７、１３９または１５３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの双方のＣ３’のβ１，３グリコシル化が可能であり、及び配列番号９に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｃ）ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１９カルボキシル位でグリコシル化することが可能であり、及び配列番号２０７に記載のアミノ酸配列と少なくとも４０％の配列同一性、配列番号２０１に記載のアミノ酸配列と少なくとも４５％の配列同一性、配列番号１４１、１４５、１８５または２０３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性、配列番号４、１７７、１８３または２１１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性、配列番号１２７、１３３、１３５、１３７または１４７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、または配列番号１８１に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／または
（ｄ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１１または１３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び
植物由来または合成のステビオールグリコシド前駆体、または植物由来または合成のステビオール前駆体、
を反応混合物に添加することを含み、 
ここで、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つは組換えポリペプチドであり；及び
それにより、前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物を産生することを含み、
ここで、任意に前記反応混合物は、以下：
（ｉ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ウリジンジホスファート（ＵＤＰ）−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、及び／またはＮ−アセチル−グルコサミン；及び
（ｉｉ）反応緩衝液及び／または塩
を含む、前記方法。
【請求項１４】
前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体が、１３−ＳＭＧ、１９−ＳＭＧ、ステビオール−１，２−ビオシド、ステビオール−１，３−ビオシド、１，２−ステビオシド、１，３−ステビオシド、ルブソシド、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＣ、ＲｅｂＤ、ＲｅｂＥ、ＲｅｂＦ、ＲｅｂＭ、ＲｅｂＱ、ＲｅｂＩ、ズルコシドＡ、モノグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸、ジグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸、トリグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸、モノグリコシル化ｅｎｔ−カウレノール、ジグリコシル化ｅｎｔ−カウレノール、トリグリコシル化ｅｎｔ−カウレノール、トリグリコシル化ステビオールグリコシド、テトラグリコシル化ステビオールグリコシド、ペンタグリコシル化ステビオールグリコシド、ヘキサグリコシル化ステビオールグリコシド、ヘプタグリコシル化ステビオールグリコシド、または前記のいずれかの異性体であるか、またはそれらの前記組成物が、これらを含む、請求項８〜１３のいずれか一項に記載の方法。 
【請求項１５】
前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体が、表１のＫＡ１．５８及び／または表１の化合物５．２４であるか、またはそれらの前記組成物が、これらを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記産生された１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物の少なくとも一部を、前記細胞培養物または前記反応混合物から単離することをさらに含む、請求項８〜１５のいずれか一項に記載の方法であって、
前記単離するステップが、以下：
（ａ）前記産生された１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物の少なくとも一部を得るために、前記細胞培養物または前記反応混合物の液体を、１つ以上の吸着樹脂と接触させること；または
（ｂ）前記産生された１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物の少なくとも一部を得るために、前記細胞培養物または前記反応混合物の液体を、１つ以上のイオン交換または逆相クロマトグラフィーカラムと接触させること；または
（ｃ）前記産生された１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物の少なくとも一部を結晶化または抽出すること、
それにより、前記産生された１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物の少なくとも一部を単離すること
を含む、前記方法。
【請求項１７】
前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物の少なくとも一部を、前記細胞培養物から回収することをさらに含む、請求項８〜１５のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細胞培養物は、ステビア植物由来のステビオールグリコシド組成物と比較して、前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはステビオール前駆体のグリコシド、またはそれらの前記組成物について富化されており；
前記回収された１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体は、ステビア植物から回収されたステビオールグリコシド組成物とは異なる相対量で存在する、前記方法。
【請求項１８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞を含む、細胞培養物であって、以下：
（ａ）前記組換え宿主細胞により産生された１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物；
（ｂ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ＵＤＰ−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、及び／またはＮ−アセチル−グルコサミン；及び
（ｃ）微量金属、ビタミン、塩、酵母ニトロゲンベース（ＹＮＢ）、及び／またはアミノ酸を含む補助栄養素、
をさらに含み、
前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物が、前記細胞培養物の少なくとも１ｍｇ／リットルの濃度で存在し；
前記細胞培養物が、ステビア植物由来のステビオールグリコシド組成物と比較して、前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはステビオール前駆体のグリコシド、またはそれらの前記組成物について富化されており、及び植物由来のステビア抽出物と比較して低減したステビア植物由来構成成分レベルを有する、前記細胞培養物。
【請求項１９】
細胞培養物中の請求項１〜７のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞の細胞溶解物であって、以下：
（ａ）前記組換え宿主細胞により産生された１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物；
（ｂ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ＵＤＰ−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、及び／またはＮ−アセチル−グルコサミン；及び
（ｃ）微量金属、ビタミン、塩、酵母ニトロゲンベース、ＹＮＢ、及び／またはアミノ酸を含む補助栄養素
を含み、
前記組換え宿主細胞により産生された前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの前記組成物が、前記細胞培養物の少なくとも１ｍｇ／リットルの濃度で存在する、前記細胞溶解物。
【請求項２０】
反応混合物であって、以下：
ここで、前記単離ステップが、前記細胞培養物の液相を前記細胞培養物または前記反応混合物の固相から分離して、産生された前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物を含む上清を得ることを含む、および
（ａ）ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１３ヒドロキシル位でグリコシル化することが可能であり、及び配列番号１４１に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；配列番号７に記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１２７、１３３、１３５、１３７、１３９または１５３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの双方のＣ３’のβ１，３グリコシル化が可能であり、及び配列番号９に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｃ）ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１９カルボキシル位でグリコシル化することが可能であり、及び配列番号２０７に記載のアミノ酸配列と少なくとも４０％の配列同一性、配列番号２０１に記載のアミノ酸配列と少なくとも４５％の配列同一性、配列番号１４１、１４５、１８５または２０３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性、配列番号４、１７７、１８３または２１１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性、配列番号１２７、１３３、１３５、１３７または１４７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、または配列番号１８１に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／または
（ｄ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチド；または配列番号１１または１３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含み、及び、
（ｅ）１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体、またはそれらの組成物；
（ｆ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ウリジンジホスファート（ＵＤＰ）−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、及び／またはＮ−アセチル−グルコサミン；及び
（ｇ）反応緩衝液及び／または塩
をさらに含む、前記反応混合物。
【請求項２１】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞により産生された１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体の組成物であって、
前記組換え宿主細胞により産生された前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体が、ステビア植物由来のステビオールグリコシド組成物とは異なる及び植物由来のステビア抽出物と比較して低減したステビア植物由来構成成分レベルを有する相対量で存在する、前記組成物。
【請求項２２】
請求項８〜１５のいずれか一項に記載の方法により産生された１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体の組成物であって、
前記組換え宿主細胞により産生された前記１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体が、ステビア植物由来のステビオールグリコシド組成物とは異なる及び植物由来のステビア抽出物と比較して低減したステビア植物由来構成成分レベルを有する相対量で存在する、前記組成物。
【請求項２３】
請求項２１または２２に記載の１つ以上のステビオールグリコシド及び／またはグリコシル化ステビオール前駆体の組成物を含む、甘味料組成物。
【請求項２４】
請求項２３に記載の甘味料組成物を含む、食品、飲料または飲料濃縮物。
【請求項２５】
単離核酸分子であって、
（ａ）ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１９カルボキシル位またはその触媒活性部分でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードし、
ここで、ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１９カルボキシル位またはその前記触媒活性部分でグリコシル化することが可能な前記コードされたポリペプチドは、配列番号２０７に記載のアミノ酸配列と少なくとも４０％の配列同一性、配列番号２０１に記載のアミノ酸配列と少なくとも４５％の配列同一性、配列番号１４１、１４５、１８５または２０３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性、配列番号１７７、１８３または２１１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性、配列番号１２７、１３３、１３５、１３７または１４７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、または配列番号１８１に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有する；
（ｂ）ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１３ヒドロキシル位またはその触媒活性部分でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードし、
ここで、ステビオールまたはステビオールグリコシドを、そのＣ−１３ヒドロキシル位またはその前記触媒活性部分でグリコシル化することが可能な前記コードされたポリペプチドは、配列番号１４１に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性；または配列番号１２７、１３３、１３５、１３７、１３９または１５３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する；
（ｃ）ステビオールグリコシドまたはその触媒活性部分の１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの双方のＣ２’のβ１，２グリコシル化及び／またはＣ３’のβ１，３グリコシル化が可能なポリペプチドをコードし、
ここで、ステビオールグリコシドまたはその前記触媒活性部分の１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの双方のＣ２’のβ１，２グリコシル化及び／またはＣ３’のβ１，３グリコシル化が可能な前記コードされたポリペプチドは、配列番号２０１に記載のアミノ酸配列と少なくとも４５％の配列同一性、配列番号１６９または１９９に記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性、または配列番号１３７に記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する；及び／または
（ｄ）ステビオール前駆体を、そのＣ−１９カルボキシル位またはＣ−１９ヒドロキシル位またはその触媒活性部分でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードし、
ここで、ステビオール前駆体を、そのＣ−１９カルボキシル位またはＣ−１９ヒドロキシル位またはその前記触媒活性部分でグリコシル化することが可能な前記コードされたポリペプチドは、配列番号２０７に記載のアミノ酸配列と少なくとも４０％の配列同一性、配列番号１２７、１３３、１３５、１３７、１４７または１５３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、配列番号１４１、１４３、１４５、１８５、２０３または２０５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性、配列番号１７７、１８３、２０９または２１１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性、または配列番号１８１に記載のアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有する、
前記単離核酸分子。
【請求項２６】
ｃＤＮＡである、請求項２５に記載の単離核酸分子。