【手続補正書】
【提出日】令和2年4月22日(2020.4.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからの偽エクソン４０（ＰＥ４０）のスキッピングを誘導することができるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）であって、配列番号４５、４６または４７の少なくとも１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続するヌクレオチドに相補的な配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）。
【請求項２】
ヒトＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからの偽エクソン４０（ＰＥ４０）のスキッピングを誘導することができるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）であって、以下の配列群のいずれかから選択される配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）：
（ｉ）配列番号６、４、８、２３、３０、３１、３２、３７；
（ｉｉ）配列番号３、５、７、１９、２４、２５、２６、３４、３５、３６；および
（ｉｉｉ）配列番号２１、２７、２８、２９。
【請求項３】
ＵＳＨ２ＡｍＲＮＡにおけるＰＥ４０の出現が、ＵＳＨ２Ａ遺伝子におけるｃ．７５９５−２１４４Ａ＞Ｇ変異に起因するものである、請求項１または２に記載のＡＯＮ。
【請求項４】
２´−Ｏ−メチル、２´−Ｏ−エチル、または２´−Ｏ−プロピルなどの少なくとも１つの２´−Ｏ−アルキル修飾を含むオリゴリボヌクレオチド（ＲＮＡオリゴヌクレオチド）である、請求項１から３までのいずれか一項に記載のＡＯＮ。
【請求項５】
前記ＡＯＮにおけるすべてのヌクレオチドが２´−Ｏ−メチル修飾されている、請求項４に記載のＡＯＮ。
【請求項６】
少なくとも１つのホスホロチオアート結合を有する、請求項１から５までのいずれか一項に記載のＡＯＮ。
【請求項７】
すべての連続するヌクレオチドが、ホスホロチオアート結合によって相互連結している、請求項６に記載のＡＯＮ。
【請求項８】
前記ＡＯＮの発現に寄与する条件下に置かれた場合に、請求項１から３までのいずれか一項に記載のＡＯＮを発現するウイルスベクター。
【請求項９】
請求項１から７までのいずれか一項に記載のＡＯＮ、または請求項８に記載のウイルスベクターおよび薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物であって、硝子体内投与のためのものである医薬組成物。
【請求項１０】
硝子体内投与のためのものであり、１つの眼あたり０．０５ｍｇ〜５ｍｇ、好ましくは０．１〜１ｍｇの総ＡＯＮ、例えば１つの眼あたり約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９または１．０ｍｇの総ＡＯＮの範囲の量で投薬される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
医薬としての使用のための、請求項１から７までのいずれか一項に記載のＡＯＮ、請求項８に記載のベクター、または請求項９もしくは１０に記載の組成物。
【請求項１２】
アッシャー症候群タイプＩＩなどのＵＳＨ２Ａ関連疾患、または前記ＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキップを必要とする状態の処置、防止または遅延のための、請求項１から７までのいずれか一項に記載のＡＯＮ、請求項８に記載のベクター、または請求項９もしくは１０に記載の組成物。
【請求項１３】
ＵＳＨ２Ａ関連疾患、または前記ＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキップを必要とする状態の処置、防止または遅延のための医薬の調製における、請求項１から７までのいずれか一項に記載のＡＯＮ、請求項８に記載のベクター、または請求項９もしくは１０に記載の組成物の使用。
【請求項１４】
細胞においてヒトＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからＰＥ４０をスキップする、エクスビボまたはインビトロでの方法であって、前記細胞に、請求項１から７までのいずれか一項に記載のＡＯＮ、請求項８に記載のベクター、または請求項９もしくは１０に記載の組成物を投与すること；および、前記ＡＯＮが前記ヒトＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキッピングを誘導し、引き起こし、または刺激することを可能にすることを含む方法。
【請求項１５】
ＵＳＨ２Ａ関連疾患、またはＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキップを必要とする状態の、それを患っている個体における処置のための方法に使用するための医薬組成物であって、
請求項１から７までのいずれか一項に記載のＡＯＮ、請求項８に記載のベクター、または請求項９もしくは１０に記載の組成物を含んでおり、
前記方法が、前記個体の細胞に、前記ＡＯＮ、前記ベクター、または前記組成物を投与すること、および、前記ＡＯＮが前記ヒトＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキッピングを誘導し、引き起こし、または刺激することを可能にすることを含む、医薬組成物。
【請求項１６】
前記ＵＳＨ２Ａ関連疾患、または前記ＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキップを必要とする前記状態が、アッシャー症候群タイプＩＩである、請求項１３に記載の使用、または請求項１５に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
本発明はさらに、医薬の調製のための、ＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡのスプライシングの調節を必要とするＵＳＨ２Ａ関連疾患または状態を処置する医薬の調製のための、およびＵＳＨ２Ａ関連疾患または状態の防止、処置または遅延のための医薬の調製のための、本発明に従うＡＯＮの、または本発明に従うウイルスベクターの、または本発明に従う組成物の使用を提供する。したがって、さらなる態様において、医薬の調製のための、ＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡのスプライシングの調節を必要とする状態を処置する医薬の調製のための、およびＵＳＨ２Ａ関連疾患または状態の防止、処置または遅延のための医薬の調製のための、本明細書に定義されたＡＯＮ、ウイルスベクターまたは組成物の使用が提供される。本発明に従う使用における、または方法における処置は、少なくとも１回であるか、１週間、１カ月、数カ月、１年、２、３、４、５、６年またはそれより長く、例えば一生涯続く。本明細書に従う使用のための、本明細書に定義された各ＡＯＮは、ＵＳＨ２Ａ関連疾患または状態を既に患っているかまたはそれを発症するリスクがある個体の細胞、組織および／または器官にインビボ(in vivo)で直接投与するのに適していてよく、インビボ(in vivo)、エクスビボ(ex vivo)またはインビトロ(in vitro)で直接投与されてもよい。本発明のＡＯＮ、組成物、化合物または補助化合物の投与頻度は、疾患の重症度、患者の年齢、患者における変異、ＡＯＮの数（すなわち用量）、前記分子の製剤化、投与経路等々などのいくつかのパラメーターに依存してよい。頻度は、日毎、週毎、２週または３週または４週または５週またはより長い期間に少なくとも１回の間で変動してよい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
本発明に従うＡＯＮの用量範囲は、好ましくは、厳密なプロトコール要件が存在する臨床試験（インビボ(in vivo)での使用）における用量漸増試験に基づいて設計される。本明細書に定義されたＡＯＮは、０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０５〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で使用してよい。適切な硝子体内用量は、１つの眼あたり０．０５ｍｇ〜５ｍｇ、好ましくは０．１〜１ｍｇであり、例えば１つの眼あたり約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９または１．０ｍｇであろう。好ましい実施形態において、０．１ｎＭ〜１μＭの範囲である本明細書に定義されたＡＯＮの濃度が使用される。好ましくは、この範囲は網膜細胞または網膜組織などの細胞モデルにおけるインビトロ(in vitro)での使用のためのものである。より好ましくは、使用される濃度は、１〜４００ｎＭ、さらにより好ましくは１０〜２００ｎＭ、さらにより好ましくは５０〜１００ｎＭの範囲である。いくつかのＡＯＮが使用される場合、この濃度または用量は、ＡＯＮの総濃度もしくは用量、または添加された各ＡＯＮの濃度もしくは用量を意味してよい。好ましい実施形態において、本発明に従う分子のための送達ビヒクルとしての本明細書において先に記載されたウイルスベクター、好ましくは、ＡＡＶベクターは、１回の注射あたり１×１０9〜１×１０17個のウイルス粒子、より好ましくは１回の注射あたり１×１０10〜１×１０12個のウイルス粒子の範囲の用量で投与される。上記で示したＡＯＮの濃度または用量の範囲は、インビボ(in vivo)、インビトロ(in vitro)またはエクスビボ(ex vivo)での使用のために好ましい濃度または用量である。使用するＡＯＮ、処置する標的細胞、遺伝子標的およびその発現レベル、使用する培地ならびにトランスフェクションおよびインキュベーション条件に依存して、使用するＡＯＮの濃度または用量はさらに変動してよく、さらに最適化される必要があり得ることを、当業者は理解するであろう。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
本発明はさらに、細胞におけるＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡのスプライシングを調節する方法であって、細胞、好ましくは網膜細胞を、本発明に従うＡＯＮ、または本発明に従うウイルスベクター、または本発明に従う組成物と接触させることを含む方法を提供する。この態様の特徴は、好ましくは本明細書において先に定義されたものである。細胞を、本発明に従うＡＯＮ、または本発明に従うウイルスベクター、または本発明に従う組成物と接触させることは、当業者に既知のあらゆる方法によって実施してよい。本明細書に記載されたＡＯＮ、ウイルスベクターおよび組成物の送達方法の使用が含まれる。接触は直接的または間接的であってよく、インビボ(in vivo)、エクスビボ(ex vivo)またはインビトロ(in vitro)であってよい。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
本発明はさらに、それを必要とする個体のＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡのスプライシングの調節を必要とするＵＳＨ２Ａ関連疾患または状態（例えばアッシャー症候群タイプＩＩ）の処置のための方法を提供し、前記方法は、前記個体の細胞、好ましくは網膜細胞を、本発明に従うＡＯＮ、または本発明に従うウイルスベクター、または本発明に従う組成物と接触させることを含む。この態様の特徴は、好ましくは本明細書において先に定義されたものである。細胞、好ましくは網膜細胞を、本発明に従うＡＯＮ、または本発明に従うウイルスベクター、または本発明に従う組成物と接触させることは、当業者に既知のあらゆる方法によって実施してよい。本明細書に記載されたＡＯＮ、ウイルスベクターおよび組成物の送達方法の使用が含まれる。接触は直接的または間接的であってよく、インビボ(in vivo)、エクスビボ(ex vivo)またはインビトロ(in vitro)であってよい。好ましいＵＳＨ２Ａ関連疾患または状態は、アッシャー症候群タイプＩＩである。特に示されない限り、本明細書に記載された各実施形態は、本明細書に記載された別の実施形態と組み合わせてよい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
本発明はさらに、細胞におけるＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡのスプライシングを調節する方法に関し、前記方法は、前記細胞を、本発明に従うＡＯＮ、本発明に従うセット、本発明に従うベクター、または本発明に従う組成物と接触させることを含む。前記細胞は、インビトロ(in vitro)細胞、エクスビボ(ex vivo)細胞またはインビボ(in vivo)細胞であってよい。前記方法において使用される前記細胞は、好ましくは、ＵＳＨ２Ａ関連障害を患っているかまたはそのリスクがある（ヒト）対象の眼に存在するか、または（ヒト）対象から得られるであろう。よって、別の好ましい態様において、本発明は、アッシャー症候群タイプＩＩなどのＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡのスプライシングの調節を必要とするＵＳＨ２Ａ関連疾患または状態の、それを患う個体における処置のための方法に関し、前記方法は、前記個体の細胞を、本発明に従うＡＯＮ、本発明に従うセット、本発明に従うベクター、または本発明に従う組成物と接触させることを含む。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
ＵＳＨ２ａ−ＰＥ４０−８、−１７、−２０、−２４、−２８および−２９（配列番号３〜８）を、エクソンスキッピング能力および免疫原性におけるそれらの有効性について、インビトロ(in vitro)でさらに試験した。オリゴヌクレオチドＵＳＨ２ａ−ＰＥ４０−８、−２０および−２８のための標的ヌクレオチド配列（これとオリゴヌクレオチドが（部分的に）重複する）は、以下のとおりであり：５’−ＴＣＴＧＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＧＡＡ−３’（配列番号１０）、これはＰＥ４０内に位置する。オリゴヌクレオチドＵＳＨ２ａ−ＰＥ４０−１７、−２４および−２９のための標的ヌクレオチド配列（これとオリゴヌクレオチドが（部分的に）重複する）は、以下のとおりであり：５’−ＡＧＧ*ＴＡＡＧＡＧＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＡＧＡＡ−３’（配列番号１１）、これはＰＥ４０に部分的に位置し（下線のＡＧ）、その隣接領域は、ｃ．７５９５−２１４４Ａ＞Ｇ変異を含んでいる（アスタリスクを伴う太字のグアノシン）。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
［実施例２］
新規なアンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロ(in vitro)の毒性。
オリゴヌクレオチドは、脊椎動物の自然免疫系のいわゆるパターン認識受容体（ＰＲＲ）の活性化を引き起こす潜在能力を有する（Bauer et al. 2008. Immunobiology 213:315-328）。ＰＲＲ受容体の最もよく研究されたファミリーは、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）である。ＴＬＲは、自然免疫系における主要な役割を果たすタンパク質のクラスである。これらは単独の、膜貫通型の、非触媒性受容体であり、微生物由来の構造的に保存された分子を認識するマクロファージおよび樹状細胞において通常発現する。異なるタイプの核酸によって活性化されるＴＬＲは、エンドソーム上に位置するものである：ＴＬＲ３は二本鎖ＲＮＡを認識し；ＴＬＲ７／８は二本鎖および一本鎖ＲＮＡを認識する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
初代ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のインビトロ(in vitro)曝露を使用して、以前記載されたように（Lankveld 2010. Methods Mol Biol 598:401-423）、（全身性）薬剤特異的免疫応答および免疫毒性を評価した。ＰＢＭＣを使用するインビトロ(in vitro)アッセイは、（炎症性）サイトカインの産生を、全身性免疫応答についてのサロゲートマーカーとして使用する確立された前臨床試験である。ＰＢＭＣアッセイは、試験化合物の免疫原性およびアレルゲン性潜在能力の因子として、忍容性の予測を可能にするものであり、これらの化合物についての安全な用量範囲の推定を可能にし得る。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
［実施例３］
ＵＳＨ２患者から生成された眼杯におけるＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡ中のＰＥ４０スキッピング
自明な理由のために、網膜は、ＵＳＨ２患者から得ることも、インビトロ(in vitro)での研究のために使用することもできない。そのような前臨床研究のための代替案として、そのような患者網膜材料を模したオルガノイドを生成することができ、これは本明細書において眼杯（optic cup）と呼ばれ、時には眼杯（eye cup）とも呼ばれる。複合ヘテロ接合性のＵＳＨ２Ａ  ｃ．７５９５−２１４４Ａ＞Ｇ（ｐ．Ｌｙｓ２５３２Ｔｈｒｆｓ*５６）およびｃ．２２９９ｄｅｌＧ（ｐ．Ｇｌｕ７６７Ｓｅｒｆｓ*２１）変異を有する、アッシャー症候群タイプＩＩ患者からの線維芽細胞を、眼杯生成のために使用した。Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４およびｃ−Ｍｙｃを発現する、ラドバウドＵＭＣ幹細胞技術センター（Radboud UMC Stem Cell Technology Center）によって寛大にも提供された４種のレンチウイルスを使用して、線維芽細胞を再プログラミングした。クローンはおよそ第６継代で凍結保存し、免疫細胞化学によって、多能性幹細胞マーカーであるＳＳＥＡ−４、ＮＡＮＯＧ、ＴＲＡ１−８１およびＯＣＴ３／４の発現についてさらに分析した。全部で３つの個別のクローンを生成し、保存した。これらのクローンは、規定のすべての品質管理（幹細胞マーカーの活性化（ＲＴ−ｑＰＣＲ）ならびに幹細胞および多能性マーカー（ＩＨＣ）の発現）に合格した（データは示さず）。ｉＰＳＣ系統は、以前記載されたように（Zhong et al 2014. Nature Comm 5:4047;1-12）眼杯へと培養した。ｉＰＳＣは小塊へと分化させ、ｍＴｅＳＲ１培地および１０μＭのブレビスタチン（Ｓｉｇｍａ）を含む懸濁液中で培養して、凝集塊形成を誘導した。凝集塊は、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、１％のＮ２サプリメント、１×最小必須培地−非必須アミノ酸、２μｇ／ｍｌのヘパリン（Ｓｉｇｍａ）を含有する神経誘導培地に移した。凝集塊を、マトリゲルコートしたディッシュ上に播種した。培地は毎日交換した。４週間の分化後、神経網膜ドメインを手動で剥離し、２％のＢ２７、１×ＮＥＡＡ、および１％の抗生物質−抗真菌物質を添加したＤＭＥＭ／Ｆ１２培地における懸濁液中で、摂氏３７度の湿潤インキュベーターにおいて培養した。培地は１週間に２回交換した。インキュベーター内で、これらは次第に３次元の眼杯を形成した。ｉＰＳＣ由来眼杯の生成の成功後、これらは、ＵＳＨ２ａ−ＰＥ４０−２４によって、１カ月にわたって２μＭおよび１０μＭで、ＡＯＮを含む培地を１日おきに新しくすることによって処置した。成熟ｍＲＮＡ内へのＰＥ４０の包含を決定するために、隣接するエクソン３９および４２にそれぞれ位置するプライマー５’−ＧＣＴＣＴＣＣＣＡＧＡＴＡＣＣＡＡＣＴＣＣ−３’（配列番号４０）および５’−ＧＡＴＴＣＡＣＡＴＧＣＣＴＧＡＣＣＣＴＣ−３’（配列番号４１）によって、ＵＳＨ２Ａ転写産物分析を実施した。提供されたプロトコールに従って、Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ  ＲＮＡ  ＩＩ単離キット（ＭＡＣＨＥＲＥＹ−ＮＡＧＥＬ、＃７４０９５５．５０、Ｄｕｒｅｎ−Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、ｉＰＳＣおよび眼杯から総ＲＮＡを単離した。その後、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ逆転写酵素キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；カタログ＃１１７５５０５０；ロット＃１７１８５４１）に��るｃＤＮＡ合成のために、０．５〜１．０μｇの総ＲＮＡを使用した。ＵＳＨ２Ａ、ＬＩＮ２８Ａ、ＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧおよびＳＯＸ２を、その後、フォワードおよびリバースプライマーを使用して増幅した。参照としてハウスキーピング遺伝子であるＧＵＳＢを使用した。ＧｏＴａｑ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ａ６００１）を使用して、ＵＳＨ２Ａ、ＬＩＮ２８Ａ、ＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＳＯＸ２およびＧＵＳＢ  ｃＤＮＡを三連で、ｑＰＣＲ機器で増幅した。未処置眼杯は、野生型バンド（９００ｂｐ）およびＰＥ４０配列を含むバンド（１０５２ｂｐ）を明らかにするが、これはゲルにおいて容易に識別される。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７６】
これらの結果から、アンチセンスオリゴヌクレオチド、この特定のケースにおいてはＵＳＨ２ａ−ＰＥ−４０−２４が、アッシャー症候群タイプＩＩを患う（ヘテロ接合性ＰＥ４０）患者の網膜を模したオルガノイドにおいて、ＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからＰＥ４０を効率的にスキップすることができると結論される。
本発明によれば、以下が提供される。
[１]
ヒトＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからの偽エクソン４０（ＰＥ４０）のスキッピングを誘導することができるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）であって、配列番号４５、４６または４７の少なくとも１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続するヌクレオチドに相補的な配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）。
[２]
ヒトＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからの偽エクソン４０（ＰＥ４０）のスキッピングを誘導することができるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）であって、以下の配列群のいずれかから選択される配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）：
（ｉ）配列番号６、４、８、２３、３０、３１、３２、３７；
（ｉｉ）配列番号３、５、７、１９、２４、２５、２６、３４、３５、３６；および
（ｉｉｉ）配列番号２１、２７、２８、２９。
[３]
ＵＳＨ２ＡｍＲＮＡにおけるＰＥ４０の出現が、ＵＳＨ２Ａ遺伝子におけるｃ．７５９５−２１４４Ａ＞Ｇ変異に起因するものである、上記[１]または[２]に記載のＡＯＮ。
[４]
２´−Ｏ−メチル、２´−Ｏ−エチル、または２´−Ｏ−プロピルなどの少なくとも１つの２´−Ｏ−アルキル修飾を含むオリゴリボヌクレオチド（ＲＮＡオリゴヌクレオチド）である、上記[１]から[３]までのいずれかに記載のＡＯＮ。
[５]
前記ＡＯＮにおけるすべてのヌクレオチドが２´−Ｏ−メチル修飾されている、上記[４]に記載のＡＯＮ。
[６]
少なくとも１つのホスホロチオアート結合を有する、上記[１]から[５]までのいずれかに記載のＡＯＮ。
[７]
すべての連続するヌクレオチドが、ホスホロチオアート結合によって相互連結している、上記[６]に記載のＡＯＮ。
[８]
前記ＡＯＮの発現に寄与する条件下に置かれた場合に、上記[１]から[３]までのいずれかに記載のＡＯＮを発現するウイルスベクター。
[９]
上記[１]から[７]までのいずれかに記載のＡＯＮ、または上記[８]に記載のウイルスベクターおよび薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物であって、硝子体内投与のためのものである医薬組成物。
[１０]
硝子体内投与のためのものであり、１つの眼あたり０．０５ｍｇ〜５ｍｇ、好ましくは０．１〜１ｍｇの総ＡＯＮ、例えば１つの眼あたり約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９または１．０ｍｇの総ＡＯＮの範囲の量で投薬される、上記[９]に記載の医薬組成物。
[１１]
医薬としての使用のための、上記[１]から[７]までのいずれかに記載のＡＯＮ、上記[８]に記載のベクター、または上記[９]もしくは[１０]に記載の組成物。
[１２]
アッシャー症候群タイプＩＩなどのＵＳＨ２Ａ関連疾患、またはＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキップを必要とする状態の処置、防止または遅延のための、上記[１]から[７]までのいずれかに記載のＡＯＮ、上記[８]に記載のベクター、または上記[９]もしくは[１０]に記載の組成物。
[１３]
ＵＳＨ２Ａ関連疾患、またはＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキップを必要とする状態の処置、防止または遅延のための医薬の調製における、上記[１]から[７]までのいずれかに記載のＡＯＮ、上記[８]に記載のベクター、または上記[９]もしくは[１０]に記載の組成物の使用。
[１４]
細胞においてヒトＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからＰＥ４０をスキップする方法であって、前記細胞に、上記[１]から[７]までのいずれかに記載のＡＯＮ、上記[８]に記載のベクター、または上記[９]もしくは[１０]に記載の組成物を投与すること；および、前記ＡＯＮが前記ヒトＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキッピングを誘導し、引き起こし、または刺激することを可能にすることを含む方法。
[１５]
ＵＳＨ２Ａ関連疾患、またはＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキップを必要とする状態の、それを患っている個体における処置のための方法であって、前記個体の細胞に、上記[１]から[７]までのいずれかに記載のＡＯＮ、上記[８]に記載のベクター、または上記[９]もしくは[１０]に記載の組成物を投与すること、および、前記ＡＯＮがヒトＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキッピングを誘導し、引き起こし、または刺激することを可能にすることを含む方法。
[１６]
前記ＵＳＨ２Ａ関連疾患、またはＵＳＨ２ＡプレｍＲＮＡからのＰＥ４０のスキップを必要とする前記状態が、アッシャー症候群タイプＩＩである、上記[１３]に記載の使用、または上記[１５]に記載の方法。