(57)【要約】  食品を酵素分解して機能性ペプチドの調製・精製には手間と費用がかかり、たとえ粗精製の段階でも比較的高価な商品となる。また、製造した機能性ペプチドがさらに消化液で分解されて効力を失う可能性もある。  肉類又はタンパク質に還元糖類を結合させることによって消化酵素に対する基質としての反応性を変化させ、それによって優れた血圧調節作用を付与する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質を還元糖類と混合後、脱水し、30〜70℃の環境下で水分含量を0.25〜６％に維持することを含む血圧降下用糖修飾タンパク質の調製方法。
【請求項２】
タンパク質を還元糖類と混合後、脱水し、相対湿度70％以下でかつ30〜70℃の環境に保持することを含む、血圧降下用糖修飾タンパク質の調製方法。
【請求項３】
タンパク質が、アルブミン、ミオシン、プロタミン、大豆タンパク質又は筋肉タンパク質から選ばれる請求項１又は２の血圧降下用糖修飾タンパク質の調製方法。
【請求項４】
脱水を水分含量が10％以下となるまで行う請求項１〜３いずれか１項記載の方法。
【請求項５】
還元糖類が、還元性単糖、又は還元性オリゴ糖である請求項１〜４いずれか１項記載の方法。
【請求項６】
請求項１から５いずれか１項記載の方法で調製された血圧降下用糖修飾タンパク質。
【請求項７】
軟体動物又は甲殻類の筋肉、魚肉、又は畜肉から選ばれた肉類を細切りし、還元糖類と混合後、脱水し、相対湿度70％以下でかつ30〜70℃の環境に保持することを含む、血圧降下用糖修飾肉類の調製方法。
【請求項８】
軟体動物又は甲殻類の筋肉、魚肉、又は畜肉由来の筋肉タンパク質を還元糖類と混合後、脱水し、相対湿度70％以下でかつ30〜70℃の環境に保持することを含むによる血圧降下用糖修飾肉類の調製方法。
【請求項９】
脱水を水分含量が10％以下になるまで行う請求項７又は８記載の方法。
【請求項１０】
還元糖類が、還元性単糖、または、還元性オリゴ糖である請求項７〜９いずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
請求項７〜１０いずれか１項記載の方法で調製された血圧降下用糖修飾肉類。
【請求項１２】
請求項６記載の血圧降下用糖修飾タンパク質を含む飲食品。
【請求項１３】
請求項１１記載の血圧降下用糖修飾肉類を含む飲食品。
【請求項１４】
請求項６記載の血圧降下用糖修飾タンパク質又は請求項１１記載の血圧降下用糖修飾肉類を有効成分として含む抗高血圧剤。
【請求項１５】
タンパク質と糖のメイラード反応で生じる糖修飾タンパク質を有効成分として含む抗高血圧剤。
【請求項１６】
肉類と糖のメイラード反応で生じる糖修飾肉類を有効成分として含む抗高血圧剤。
【請求項１７】
血圧降下に有効である旨の表示を付した請求項１２又は１３記載の飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水産加工業、食肉加工業等の食品加工分野、更には、健康食品、医薬品及び化成品の分野に関わる。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質は脂質、糖質とともに動物が生存するための基本栄養素であり、従来は生体を構成するアミノ酸の供給源として位置づけられてきた。【０００３】
しかし近年、タンパク質は、栄養素としての価値だけでなく生体の代謝活動等を調節するさまざまな機能を持つことが明らかとなってきている。このタンパク質の生体調節機能は多くの場合、消化管プロテアーゼの作用によって食品タンパク質から派生する生理活性ペプチドに起因すると考えられる。【０００４】
たとえば、血清コレステロール代謝を調節するステロイド結合性ペプチド（大豆タンパク質由来：菅野、食品の生体調節機能、pp33-41、学会出版センター、1992）、鎮痛・鎮静作用に関わる外因性オピオイドペプチド（カゼイン：YoshikawaらAgric. Biol. Chem. 48,、 3185-, 1984.（非特許文献１）、植物タンパク質：Fukudome らFEBS Lett. 296、 107-111 、 1984（非特許文献２）、 血圧上昇を抑制するアンジオテンシンI変換酵素（ACE）阻害ペプチド、牛乳カゼイン：MaruyamaらAgric. Biol. Chem., 46, 1393-1394 1982.（非特許文献３）、植物タンパク質：MiyoshiらAgric. Biol. Chem., 55, 1313-1318,1991（非特許文献４）. カツオ節：末綱、日水誌65、  92-96、  1999（非特許文献５）、 ワカメ：Suetsunaら J. Nutr. Biochem, 11, 450-454,2000（非特許文献６）.下記特許文献１−７ など）などが知られており、各種の健康・機能性食品に利用されている。
【特許文献１】特開平 05-306296  カツオ内臓由来
【特許文献２】特許第 3401280号  魚介類由来
【特許文献３】特開平 05-331191  鰹節由来
【特許文献４】特開平 06-345664  チーズホエー由来
【特許文献５】特許第 3129523号  卵白アルブミン由来
【特許文献６】特再 2001-884948  牛乳由来
【特許文献７】特開平 06-277090  カゼイン由来
【非特許文献１】YoshikawaらAgric. Biol. Chem., 48, 3185-, 1984.
【非特許文献２】Fukudome らFEBS Lett. 296, 107-111, 1984
【非特許文献３】MaruyamaらAgric. Biol. Chem., 46, 1393-1394, 1982.
【非特許文献４】MiyoshiらAgric. Biol. Chem., 55, 1313-1318,1991
【非特許文献５】末綱，日水誌65,  92-96,  1999
【非特許文献６】Suetsunaら J. Nutr. Biochem
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来からのタンパク質由来の消化ペプチドがもつ生体調節機能を利用するためには、２つの問題があった。【０００６】
ひとつは、機能性ペプチドを栄養補助食品として摂取するためには、まず、タンパク質から、機能性ペプチドを調製する必要がある。ところが、食品を酵素分解して機能性ペプチドを調製・精製するには手間と費用がかかり、たとえ粗精製の段階でも比較的高価な商品となる。また、製造した機能性ペプチドがさらに消化液で分解されて効力を失う可能性もあった。【０００７】
他方、生体内で機能性消化ペプチドを作り出す食品を習慣的に喫食し、体内で消化により機能性ペプチドを生じさせるためには、まず、効率的に体内で目的とする機能を発現する機能性ペプチドを生じる食品を探索しなければならない。さらに、食品として摂取する以上、効果の期待できる量を日常的に摂取できることも必要である。【０００８】
このように、現有技術での消化ペプチドの調製は、克服すべき点が多く、これらの制限を一挙に解決するためには、普段から多く食べられているタンパク質性食品の生体調節機能を高める何らかの技術開発が必要と考えられる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
そこで、発明者らは、動物性蛋白源として最も一般的である筋肉タンパク質に着目し、上記した機能性消化ペプチドの機能をできるだけ高め、効率的に機能性ペプチドを有効利用できないか検討をおこない、その結果、血圧調節作用を効果的に改善できる方法を開発した。【００１０】
本件発明者らは、メイラード反応を介してさまざまな糖類を筋肉タンパク質に結合させ、その水溶化、安定化、乳化能の改変などを実現化させてきた。この糖修飾タンパク質は、食品としてのさまざまな用途が考えられている。【００１１】
新しい食品素材を開発・利用する際には、その安全性の確認と同時に、消化吸収性の評価を行なう必要がある。そこで、本件発明者らはこの糖修飾タンパク質の消化性を検討した。その結果、消化管で分泌される主要な消化酵素、すなわち胃で分泌されるペプシンに対してはやや消化抵抗性を有し、一方、小腸で消化されるトリプシンの作用をうけてほぼ完全に消化されるという特性を見いだした（図１）。【００１２】
この知見は、糖分子を結合させることによって筋肉タンパク質のもつ「消化されやすさ」はほとんど損なわれていないものの、消化酵素に対する感受性が変化したことを示している。すなわち、消化・吸収過程で生成する消化ペプチドが異なることが明らかである。実際、ゲル濾過分析によって（図２）、消化パターンが異なることが簡単に確認できた。これは、糖修飾によって新たな機能性消化ペプチドを体内で生成させうる可能性を示している。そこで本発明者らは、この糖修飾タンパク質の血圧調節作用を詳細に検討した。【００１３】
その結果、図３に示すように、魚肉タンパク質本来の持っている血圧調節作用が著しく増強されているという従来に全く報告例のない新事実を見いだした。【００１４】
さらに得られた血圧上昇抑制効果が、少なくとも８時間持続することも確認できた。この持続効果は本発明で得られた魚肉タンパク質の特徴である。
【発明の効果】
【００１５】
本件発明により、優れた血圧調節機能を有するタンパク質又は肉類を、効率的に調製することができる。本発明のタンパク質は食品に含まれている状態で喫食することにより、消化管内で優れた血圧調節作用を有する機能性ペプチドを生成して血圧を調節する。そのため、あらかじめ消化ペプチドを調製する必要がなく、また肉類や筋肉タンパク質等という日常的に身近な食品の生体調節機能を増強したことによって、さまざまな加工食品への利用が可能であることから、特別に意識することなくその効果の恩恵を受ける食生活を提供することができる。【００１６】
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2004-173963号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】糖修飾によって起きる筋肉タンパク質の消化酵素に対する感受性変化。  サケ筋肉の7.8％重量に相当するアルギン酸オリゴ糖を結合させた糖修飾筋肉タンパク質（リジン修飾率8.0％）をペプシンで３時間消化（pH2.0）後、さらにトリプシンで３時間消化（pH7.0）した。それぞれの消化率は、消化画分中の窒素量から算出した。この結果は、糖分子を結合させることによって筋肉タンパク質のもつ「消化されやすさ」はほとんど損なわれていないものの、消化酵素に対する感受性が変化したことを示している。
【図２】アルギン酸オリゴ糖修飾によって起きる魚肉タンパク質の消化性の変化。  サケ筋肉の7.8％重量に相当するアルギン酸オリゴ糖を結合させた糖修飾筋肉タンパク質（●：リジン修飾率8.0％）をペプシンで３時間消化（pH2.0）後、さらにトリプシンで３時間消化（pH7.0）し、その消化物の分子量分布をゲル濾過分析（Vo：排除限界分子量2500）によって調べた。通常の魚肉（○）と比べて矢印部分のペプチド分布が大きく異なっているのがわかる。
【図３】本発明で得た糖修飾筋肉タンパク質の血圧調節機能  投与前のＳＨＲラットの収縮期血圧（□）に対し、糖修飾筋肉タンパク質（サケ筋肉の7.8％重量に相当する糖を結合させた）を体重1kgあたり170（○）および670mg（△）経口投与すると、血圧の速やかな低下が観察された。未処理のサケ肉に同量の糖を混合した場合（●：タンパク質としての投与量670mg/kg体重）は、血圧の低下は僅かであり、本発明の効果が顕著に観察できる。
【図４】本発明で得た糖修飾筋肉タンパク質の血圧上昇抑制機能。  １０週齡ＳＨＲラットに対して、糖修飾筋肉タンパク質（サケ筋肉の7.8％重量に相当する糖を結合させた）を、15日間および２８日間、毎日経口投与した。まず未投与のＳＨＲラット（○）では、加齢に伴って徐々に収縮期血圧の上昇が観察された。これに対して、体重1kgあたり70mg（△）を毎日投与した場合には、血圧上昇が抑制された。さらに、170mg（□）を毎日投与した場合には、血圧の上昇が全く起こらなかった。(*:危険率５％、**：危険率１％)
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本件発明は、肉類又はタンパク質に還元糖類を結合させることによって消化酵素に対する基質としての反応性を変化させ、それによって優れた血圧調節作用を付与するというものである。【００１９】
本願発明には、例えば、（１）タンパク質を還元糖類と混合後、脱水し、30〜70℃の環境下で水分含量を0.25〜６％に維持することを特徴とする血圧降下用糖修飾タンパク質の調製方法、及び（２）タンパク質を還元糖類と混合後、脱水し、相対湿度70％以下でかつ30〜70℃の環境に保持することを特徴とする血圧降下用糖修飾タンパク質の調製方法が包含される。【００２０】
以下に、肉類又はタンパク質に還元糖類を結合させることによるタンパク質の血圧降下作用を増強する具体的方法を説明する。【００２１】
［タンパク質を還元糖類で修飾する方法］
肉類又はタンパク質に還元糖類を結合させる方法としては、タンパク質の反応性リジン残基と還元糖類の還元末端の間でメイラード反応を起こさせ、両者の間に共有結合を生じさせる。この際、反応を速やかに進行させるには肉類又はタンパク質と糖の混合物の水分を６％以下に調節する、又は相対湿度３５％以下の環境に40℃以上で保持することが望ましい（本研究者による特許公開：2003-169634）が、タンパク質の種類によってはこれに限られず、相対湿度を70％以下の範囲とすることもできる（実施例５）。【００２２】
水分の調節方法としては、例えば、タンパク質と糖の混合物を脱水処理するが、具体的には、相対湿度１０％の低湿度下での加熱処理、又は凍結乾燥、噴霧乾燥、減圧乾燥等の処理あるいはこれらを組み合わせて処理することにより、肉類又はタンパク質と糖の混合物の水分を６％以下にすることができる。好適には凍結乾燥処理が望ましい。肉類又はタンパク質と糖の混合物の水分含量が、脱水処理終了時点で６％を上回るものであったとしても、相対湿度35％以下で、30〜70℃、より具体的には、例えば、４０℃以上７０℃以下に保持することにより、水分含量を６％以下の範囲にすることもできる。なお、肉類及び筋肉タンパク質は、本処理の条件下で還元糖を結合させることによって水溶化される。【００２３】
メイラード反応の制御については、例えば、タンパク質を還元糖と１：0.5から１０の範囲で混合して凍結乾燥し、水分量を0.6-3％程度に調節する。これを恒温恒湿度下40〜60℃、相対湿度35％程度に数時間〜４日間保持する。これによって、タンパク質のリジン残基と糖の還元末端の間でメイラード反応を起こさせることができる。タンパク質中のリジン修飾率が４-40％程度になった時点で冷却（氷蔵）して反応を停止することにより、目的にあった量の還元糖をタンパク質に結合させる（すなわち糖修飾する）ことができる。【００２４】
［血圧降下作用］
このようにして肉類又はタンパク質の反応性リジン残基に還元糖類を結合させると、タンパク質の高次構造に変化が生じ、そのさまざまな性質に影響がおよぶ。たとえばアルギン酸オリゴ糖を結合させた場合には、反応性リジン残基の2％以上の糖鎖が結合することによって魚肉タンパク質の消化性に変化が生じ、その結果、以下に説明する実施例１と２に示されるように血圧降下調節作用の増強効果が認められる。したがって、本願発明の方法で糖修飾された肉類又は糖修飾タンパク質は、血圧降下のために用いることができる。【００２５】
なお糖修飾反応を継続し続けると、メイラード反応生成物を介してタンパク質間の重合が起こり、結果として消化性の低下に伴って増強した血圧調節作用は徐々に減少することも確認できた（実施例２）。【００２６】
［原材料］
本発明で使用できるタンパク質としては、種々のタンパク質が挙げられるが、具体的には、筋肉タンパク質、卵白アルブミン、プロタミン、大豆タンパク質などを挙げることができる。筋肉タンパク質としては、魚肉、畜肉、貝類、イカ類などあらゆる生物の筋肉タンパク質が挙げられる。これらは良く洗浄しても利用するのはもちろん、脂質や水溶性低分子成分など筋肉タンパク質以外の食品成分が含まれていても全く差し支えがない。筋肉タンパク質には、ミオシン、アクチン、トロポミオシン、トロポニン等が包含される。プロタミンとしては、例えば、魚類精巣由来のもの、具体的には、サケ精巣由来のプロタミンを挙げることができる。【００２７】
本願発明で使用できる肉類には、上記した魚肉、畜肉、貝類、イカ類などあらゆる生物の筋肉細切りした筋肉が含まれる。細切りとは、上記肉を種々の手段で切断することを意味し、例えば、ホモジナイズ処理及び挽肉処理などが含まれ、好適には５ミリ、更に好適には３ミリ以下の網目を通過する程度にまで細切り、あるいはミンチとすることが望ましい。【００２８】
本発明で使用できる還元糖類の例として実施例１、２では、平均重合度６のアルギン酸オリゴ糖についての結果を示したが、実施例３に示すように還元性を有する他の糖質（還元糖）においても同様の効果が期待できる。どの還元糖類を利用するかは、商品開発の目的とそれに伴う対費用効果によって決定すればよい。【００２９】
本件発明で使用できる還元糖類としては、単糖(グルコース、リボースなど)、平均重合度20以下のオリゴ糖類で還元末端を有しているもの、例えば、アルギン酸オリゴ糖、キトサンオリゴ糖などの還元性オリゴ糖が挙げられる。【００３０】
本件発明で熱的に不安定なタンパク質（たとえば冷水域に棲息する魚類の筋肉タンパク質）を利用する場合には、水分調節の過程や糖修飾の過程でタンパク質の変性を抑制するために還元糖類と同時に変性防止剤を混合することが望ましい。本件発明におけるタンパク質変性防止剤としては、ソルビトールやトレハロース等が挙げられる。タンパク質変性防止剤は、添加する還元糖類のタンパク質変性防止効果が小さい場合（たとえば、アルギン酸オリゴ糖等）に特に有効である。なおグルコースのように、変性防止効果を有する還元糖類を用いる場合には、他の変性防止剤との併用は不要である。【００３１】
糖修飾タンパク質の調製過程における肉類又は筋肉タンパク質とアルギン酸オリゴ糖（還元糖）の混合比（重量）は、のぞましくは１：0.1〜１：１０の範囲であるが、その組成自体には特段の指定はなく、要は糖修飾によってタンパク質の消化性に変化が生じさえすればよい。【００３２】
［用途、使用方法］
本発明の方法で調製された糖修飾タンパク質又は糖修飾肉類は、その製造過程で試薬類を用いていないので基本的に食品素材としての利用が可能であり、それゆえ、本発明の目的である、食品として喫食した際に得られるタンパク質の生体調節機能の高度な活用に合致している。【００３３】
また本発明の方法で処理された糖修飾タンパク質又は糖修飾肉類は水溶性にもできるので、消化吸収性が良く、更に、他の食品飲料材料と容易に混合できる。【００３４】
本願発明の血圧降下用タンパク質又は血圧降下用肉類は、血圧降下因子として作用する。本願発明の血圧降下用タンパク質又は血圧降下用肉類は、経口で、そのまま投与することが可能である。【００３５】
更に、本願発明の血圧降下用タンパク質又は血圧降下用肉類は、他の食品に添加して、又は混合して、食品として摂取することも、飲料に添加又は混合して飲料として摂取することも可能である。又血圧降下剤として用いる場合は、製剤様担体と混合し製剤とすることができる。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤とすることができる。添加剤としては、糖類・糖アルコール類（例えば、乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、庶糖）、多糖類（デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、）、ゼラチン、ガム類（アラビアゴム）、合成高分子（ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール）、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、プロピレングリコール等が挙げられる。【００３６】
本願の血圧降下用タンパク質又は血圧降下用肉類は、１日あたり、タンパク質量として、体重１ｋｇあたり0.05ｇから２ｇ、好適には0.１ｇから1ｇ摂取することが望ましい。本願発明の血圧降下用タンパク質は、７日から２１日連続して、又は、２日程度の間隔を置いて摂取することも可能である。【００３７】
更に、本願発明は、前述した調製方法によって製造された血圧降下用タンパク質又は血圧降下用肉類を有効成分としてふくむ抗高血圧剤又は血圧降下剤も包含する。その投与方法は、上述した、血圧降下用タンパク質又は血圧降下用肉類の摂取方法と同様である。【００３８】
次に本件発明の方法を実施例によって詳細に説明する。
【実施例１】
【００３９】
サケ筋肉への血圧調節機能付与（糖修飾タンパク質の安全性、糖修飾タンパク質の投与量が本発明の効果におよぼす影響）
サケ筋肉を2mm目（JIS-8811）のふるいを通過するサイズまでミートチョッパーで細切した。この魚肉100ｇ対してそれに含まれる筋肉タンパク質量（１４％湿重量）と等量のアルギン酸オリゴ糖（１４ｇ）と、タンパク質冷凍変性防止剤としてソルビトール（１４g）を混合した後、凍結乾燥によって水分を4.2％に調節した。続いて６０℃（相対湿度３５％）で３時間保持したところ、アルギン酸オリゴ糖はサケ筋肉中の8％のリジン残基と反応して糖修飾タンパク質（重量比で7.8%に相当する糖が結合）を形成した。【００４０】
この糖修飾タンパク質の消化酵素に対する感受性を調べた。まず、ペプシンで３時間消化（pH2.0）後、さらにトリプシンで３時間消化（pH7.0）した。それぞれの消化率は、消化画分中の窒素量から算出した。結果を図１に示すが、サケの筋肉タンパク質がアルギン酸オリゴ糖修飾を受けることによって、その感受性に変化が生じたことが分かる。更に、消化物の分子量分布をゲル濾過分析（Vo：排除限界分子量2500）によって調べた。結果を図２に示すが、このように、糖修飾の前後で消化物の分布が異なることを確認した。【００４１】
また、この糖修飾タンパク質の消化吸収性を、４週齡の雄ＳＤラットを用いた飼育試験で検討した。その結果、４週間の飼育中、通常の配合飼料と全く差異のない体重増加を示すことが確認できた。【００４２】
そこで、この糖修飾タンパク質の血圧調節機能を調べるため、高血圧症状を呈している１０週齡の雄SHRラット（体重220〜260ｇ）に体重あたり170mgを経口投与したところ、２時間後に収縮期血圧が24 mmHg低下し、この効果は少なくとも６時間維持された。さらに体重あたり670mgを経口投与した実験区では、収縮期血圧が最大35mmHg低下し、８時間経過後も30 mmHgの低下効果を維持し続けていた。なお、糖修飾していないタンパク質に上記試料に含まれるのと同量の糖類を混合してSHRラットに負荷したところ、収縮期血圧の低下範囲は最大で6mmHgであり、実験区との間には有為な差異が認められた（危険率１％）。以上の結果は、アルギン酸オリゴ糖修飾によって魚肉タンパク質の血圧調節機能が著しく増強されたことを示している（図３）。
【実施例２】
【００４３】
サケ筋肉への血圧調節機能付与（２）（タンパク質に結合した還元糖類の量が本発明の効果におよぼす影響）
実施例１と同様の方法で反応時間を1.5時間、３時間、さらに48時間変化させて、糖結合量がそれぞれタンパク質重量の3.0%（Ｐ-3.0）、7.8%（Ｐ-7.8）、13.0%（Ｐ-13.0）、 20.4%（Ｐ-20.4） である糖修飾タンパク質を調製し、これらを１０週齡の雄SHRラット（体重240〜260ｇ）に体重あたり170mgを経口投与した（糖結合量は糖修飾タンパク質をいったん精製後、フェノール硫酸法によって測定した）。その結果、Ｐ-3.0、Ｐ-7.8では投与１時間後に収縮期血圧がそれぞれ16mmHgと22mmHg低下し、さらに４時間後にはいずれも最大で28mmHgの減少を示した。さらに、糖結合量を増加させたＰ-13.0でも全く同様の血圧上昇抑制効果が確認できた。一方、糖を修飾していないタンパク質に上記試料に含まれるのと同量の糖類を混合してSHRラットに負荷したところ、収縮期血圧は投与１時間後では全く変化せず、投与８時間後までの低下は最大で7 mmHgであった。なおＰ-20.4では、収縮期血圧は投与１時間後に17 mmHgまで低下したが、それ以上の減少は見られなかった。Ｐ-3.0、Ｐ-7.8、Ｐ-13.0およびＰ-20.4の糖によるリジン修飾率はそれぞれ4.0%、8.2％、14.8％および26.0％で、特にＰ-20.4ではメイラード反応の進行に伴う著しい褐変化が観察できた。他の３サンプルとは異なり、Ｐ-20.4ではSDS―ポリアクリルアミドゲル電気泳動分析によってタンパク質の重合が認められ、トリプシン―キモトリプシンによる消化率の低下（実施例１に準じて行った）が起こっていた。このようにリジン修飾率4.0％のタンパク質（Ｐ-3.0）においても糖修飾による筋肉タンパク質の血圧調節機能の増強が確認できたが、Ｐ-20.4のように褐変化して過度にメイラード反応が進行すると、その効果が徐々に損なわれることが明らかとなった。 
【実施例３】
【００４４】
経産牛とグルコース
と畜後７日間４℃で保管した経産牛のもも肉をトリミングしてから挽き肉にし、５倍量の生理食塩水で3回洗浄した。得られた洗浄肉100gに対してそれに含まれる筋肉タンパク質量（10.2％湿重量）の５倍重量に相当するグルコースを含む水溶液200mＬを加えて練り込み、薄く延ばして凍結乾燥した（水分含量1.4％）。続いて５０℃（相対湿度５％）で１２時間保持したところ、タンパク質中のリジン残基の61％がグルコースと反応した。この糖修飾タンパク質の血圧調節機能を調べるため、高血圧症状を呈している１０週齡の雄SHRラット（体重230〜288ｇ）に体重あたり700 mgを経口投与したところ、２時間後に収縮期血圧が21mmHg低下し、この効果は少なくとも６時間持続した。一方、糖修飾していないタンパク質に上記試料に含まれるのと同量の糖類を混合してSHRラットに負荷しても、収縮期血圧は有為な低下を示さなかった。この結果より、グルコース修飾による経産牛肉タンパク質の血圧調節機能の増強が確認できた。
【実施例４】
【００４５】
連続長期投与の影響（加齢に伴う血圧上昇の抑制効果）
ＳＨＲラットは成長に伴って徐々に血圧が上昇していくモデル動物である。１０週齡の雄ＳＨＲラットを４週間飼育するにあたり、実施例２と同じ糖修飾魚肉（Ｐ-7.8）を体重あたり70および170 mgを１日１回経口投与し、血圧の変化を調査した。その結果、図４に示すように、通常のＳＨＲラットの収縮期血圧が４週間で１３ mmHg増加したのに対し、糖修飾魚肉を投与しつづけたラットでは、血圧上昇を有意に抑制することができた。さらに，このような継続投与をおこなっても，糖修飾魚肉の投与直後に起きる血圧の低下効果は全く損なわれなかった。
【実施例５】
【００４６】
卵タンパク質への血圧調節機能付与  
卵白アルブミン（主成分はオボアルブミン）は白色レグホンの卵白をpH 5.6で酸沈殿した後、遠心分離で回収し、10mMNaCl に懸濁後HClで中和し回収した。このタンパク質溶液を100mg/mlに調製し、続いて0.1M マルトースを溶解して凍結乾燥した。そして、直ちに60℃、相対湿度65％に４日間保持して卵白アルブミン分子にマルトースを結合させた。さらに硫安分画によってこの糖修飾タンパク質から未反応のマルトースを除去した。【００４７】
上記によって得た卵白アルブミンは53％の有効性リジンが減少しており、1/500重量比のペプシン処理を行ったところ、タンパク質の分解様式が異なっていることをSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動分析によって確認した。そこで、この糖修飾タンパク質の血圧調節機能を調べるため、高血圧症状を呈している１０週齡の雄SHRラット（体重240〜260ｇ）に体重あたり1000mgを経口投与したところ、２時間後に収縮期血圧が22 mmHg低下し、この効果は少なくとも６時間維持された。糖修飾していない卵白アルブミンに上記試料に含まれるのとほぼ同量のマルトースを混合してSHRラットに負荷しても収縮期血圧の低下範囲は最大で8mmHgであり、実験区との間には有為な差異が認められた（危険率１％）。【００４８】
以上の結果は、糖修飾によって卵白アルブミンに血圧調節機能が付加されたことを示している。【００４９】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】平成17年11月1日(2005.11.1)
【手続補正００１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】特許請求の範囲
【請求項１】アルブミン、ミオシン、プロタミン、大豆タンパク質又は筋肉タンパク質から選ばれるタンパク質を還元糖類と混合後、脱水し、３０〜７０℃の環境下で水分含量を６％以下に維持することを含む、糖修飾タンパク質を有効成分として含有する抗高血圧剤の調製方法。
【請求項２】アルブミン、ミオシン、プロタミン、大豆タンパク質又は筋肉タンパク質から選ばれるタンパク質を還元糖類と混合後、脱水し、相対湿度７０％以下でかつ３０〜７０℃の環境に保持することを含む、糖修飾タンパク質を有効成分として含有する抗高血圧剤の調製方法。
【請求項３】（削除）
【請求項４】脱水を水分含量が１０％以下となるまで行う請求項１又は２記載の方法。
【請求項５】還元糖類が、還元性単糖、又は還元性オリゴ糖である請求項１、２又は４いずれか１項記載の方法。
【請求項６】筋肉タンパク質が、軟体動物若しくは甲殻類の筋肉、魚肉、又は畜肉から選ばれた肉類由来である請求項１，２，４又は５いずれか１項記載の方法。
【請求項７】軟体動物若しくは甲殻類の筋肉、魚肉、又は畜肉から選ばれた肉類を細切りし、還元糖類と混合後、脱水し、相対湿度７０％以下でかつ３０〜７０℃の環境に保持することを含む、糖修飾肉類を有効成分として含む抗高血圧剤の調製方法。
【請求項８】軟体動物若しくは甲殻類の筋肉、魚肉、又は畜肉から選ばれた肉類を細切りし、還元糖類と混合後、脱水し、相対湿度７０％以下でかつ水分含量を６％以下に維持することを含む、糖修飾肉類を有効成分として含む抗高血圧剤の調製方法。
【請求項９】脱水を水分含量が１０％以下になるまで行う請求項７又は８記載の方法。
【請求項１０】還元糖類が、還元性単糖、または、還元性オリゴ糖である請求項７〜９いずれか１項記載の方法。
【請求項１１】（削除）
【請求項１２】（削除）
【請求項１３】（削除）
【請求項１４】請求項１，２，４，５又は６いずれか１項記載の方法で調製された糖修飾タンパク質を有効成分として含有する抗高血圧剤。
【請求項１５】請求項７〜１０いずれか１項記載の方法で調製された糖修飾肉類を有効成分として含む抗高血圧剤。
【請求項１６】（削除）
【請求項１７】血圧降下に有効である旨の表示を付した請求項１４又は１５記載の高血圧剤を含有する飲食品。
【国際調査報告】
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