【手続補正書】
【提出日】令和2年4月27日(2020.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
操作された哺乳動物細胞から1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させる方法であって、該方法は、
（a）その操作された哺乳動物細胞を、その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させるのに適した条件下にて、培地の中で培養し、そしてその培養中の培地におけるリチウムイオンの濃度を上昇させること；と
（b）その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させること；とを含み、
該培地は、
（i）基本培地または流加培地；と
（ii）リチウムイオンの1種類以上の供給源；とを含む、方法。
【請求項２】
（c）前記1種類以上の組み換えポリペプチドを単離することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記培地が（a）基本培地；または（b）流加培地である、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
前記1種類以上の組み換えポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
前記モノクローナル抗体が、増殖している細胞の増殖を抑制する、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体またはそのフラグメントが結合するのが、HER2、TNF-α、VEGF-A、α4-インテグリン、CD20、CD52、CD25、CD11a、EGFR、呼吸器系合胞体ウイルス（RSV）、糖タンパク質IIb/IIIa、IgG1、IgE、補体成分5（C5）、B細胞活性化因子（BAFF）、CD19、CD30、インターロイキン-1β（IL-1β）、前立腺特異的膜抗原（PSMA）、CD38、RANKL、GD2、SLAMF7（CD319）、プロタンパク質変換酵素サブチリシン／ケキシン9型（PCSK9）、ダビガトラン、細胞傷害性Tリンパ球結合タンパク質4（CTLA4）、インターロイキン-5（IL-5）、プログラムされた細胞死タンパク質（PD-1）、VEGFR2（KDR）、炭疽菌の保護抗原（PA）、インターロイキン-17（IL-17）、インターロイキン-6（IL-6）、インターロイキン-6受容体（IL6R）、インターロイキン-12（IL-12）、インターロイキン-23（IL-23）、スクレロスチン（SOST）、ミオスタチン（GDF-8）、アクチビン受容体様キナーゼ1、デルタ様リガンド4（DLL4）、アンジオポエチン3、VEGFR1、セレクチン、酸化された低密度リポタンパク質（oxLDL）、血小板由来増殖因子受容体β、ニューロピリン1、フォンビルブラント因子（vWF）、インテグリンαvβ3、神経アポトーシス調節プロテイナーゼ1、インテグリンαIIbβ3、β-アミロイド、レティキュロン4（RXN4）／神経突起成長インヒビター（NOGO-A）、神経成長因子（NGF）、LINGO-1、ミエリン結合糖タンパク質、インテグリンα4β7のいずれかである、請求項4に記載の方法。
【請求項８】
前記モノクローナル抗体が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、パリビズマブ、アブシキシマブ、バシリキシマブ、イブリツモマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、アブシキシマブ、アリロクマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、カプロマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、ジヌツキシマブ、エクリズマブ、エロツズマブ、エボロクマブ、イダルシズマブ、イピリムマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、パリビズマブ、ペムブロリズマブ、ラムシルマブ、ラキシバクマブ、エクキヌマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、アラシズマブ、デノスマブ、ブロソズマブ、ロモソズマブ、スタムルマブ、アリロクマブ、アスクリンバクマブ、エノチクマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、イクルクマブ、インクラクマブ、ネスバクマブ、オルチクマブ、ラムシルマブ、リヌクマブ、ベセンクマブ、ボコシズマブ、カプラシズマブ、デムシズマブ、エタラシズマブ、イダルシズマブ、ラルパンシズマブ、タドシズマブ、アデュカヌマブ、アチヌマブ、ファシヌマブ、フルラヌマブ、ガンテネルマブ、オピシヌマブ、バピヌズマブ、クレネズマブ、オザネズマブ、ポネズマブ、レファネズマブ、ソラネズマブ、タネズマブ、ベドリズマブである、請求項5に記載の方法。
【請求項９】
遺伝子操作された哺乳動物細胞によって産生される1種類以上の組み換えポリペプチドのグリコシル化プロファイルを変化させる方法であって、該方法は、
（a）その操作された哺乳動物細胞を、その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させるのに適した条件下にて、培地の中で培養し、そしてその培養中の培地におけるリチウムイオンの濃度を上昇させること；と
（b）その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させること；とを含み、
該培地は、
（i）基本培地または流加培地；と
（ii）リチウムイオンの1種類以上の供給源；とを含み、
ここで、その1種類以上の組み換えポリペプチドが、その培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化したグリコシル化プロファイルを有する、方法。
【請求項１０】
前記変化したグリコシル化プロファイルが、変化した末端マンノースグリカン種を含む、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
前記変化したグリコシル化プロファイルが、マンノース-5-N-アセチルグリコサミン-2（Man5）、マンノース-6-N-アセチルグリコサミン-2（Man6）、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4（G0）、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-フコース（G0F）、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-ガラクトース-1-フコース（G1F）、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-ガラクトース-2-フコース（G2F）から選択された1種類以上のグリカン種の変化を含む、請求項9に記載の方法。
【請求項１２】
グリカン種の総和に対する前記末端マンノースグリカン種の比が約40％〜約50％変化する、請求項9〜11のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１３】
前記1種類以上の組み換えポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項9〜12のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
前記モノクローナル抗体が、増殖している細胞の増殖を抑制する、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体またはそのフラグメントが結合するのが、HER2、TNF-α、VEGF-A、α4-インテグリン、CD20、CD52、CD25、CD11a、EGFR、呼吸器系合胞体ウイルス（RSV）、糖タンパク質IIb/IIIa、IgG1、IgE、補体成分5（C5）、B細胞活性化因子（BAFF）、CD19、CD30、インターロイキン-1β（IL-1β）、前立腺特異的膜抗原（PSMA）、CD38、RANKL、GD2、SLAMF7（CD319）、プロタンパク質変換酵素サブチリシン／ケキシン9型（PCSK9）、ダビガトラン、細胞傷害性Tリンパ球結合タンパク質4（CTLA4）、インターロイキン-5（IL-5）、プログラムされた細胞死タンパク質（PD-1）、VEGFR2（KDR）、炭疽菌の保護抗原（PA）、インターロイキン-17（IL-17）、インターロイキン-6（IL-6）、インターロイキン-6受容体（IL6R）、インターロイキン-12（IL-12）、インターロイキン-23（IL-23）、スクレロスチン（SOST）、ミオスタチン（GDF-8）、アクチビン受容体様キナーゼ1、デルタ様リガンド4（DLL4）、アンジオポエチン3、VEGFR1、セレクチン、酸化された低密度リポタンパク質（oxLDL）、血小板由来増殖因子受容体β、ニューロピリン1、フォンビルブラント因子（vWF）、インテグリンαvβ3、神経アポトーシス調節プロテイナーゼ1、インテグリンαIIbβ3、β-アミロイド、レティキュロン4（RXN4）／神経突起成長インヒビター（NOGO-A）、神経成長因子（NGF）、LINGO-1、ミエリン結合糖タンパク質、インテグリンα4β7のいずれかである、請求項13に記載の方法。
【請求項１７】
前記モノクローナル抗体が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、パリビズマブ、アブシキシマブ、バシリキシマブ、イブリツモマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、アブシキシマブ、アリロクマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、カプロマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、ジヌツキシマブ、エクリズマブ、エロツズマブ、エボロクマブ、イダルシズマブ、イピリムマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、パリビズマブ、ペムブロリズマブ、ラムシルマブ、ラキシバクマブ、エクキヌマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、アラシズマブ、デノスマブ、ブロソズマブ、ロモソズマブ、スタムルマブ、アリロクマブ、アスクリンバクマブ、エノチクマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、イクルクマブ、インクラクマブ、ネスバクマブ、オルチクマブ、ラムシルマブ、リヌクマブ、ベセンクマブ、ボコシズマブ、カプラシズマブ、デムシズマブ、エタラシズマブ、イダルシズマブ、ラルパンシズマブ、タドシズマブ、アデュカヌマブ、アチヌマブ、ファシヌマブ、フルラヌマブ、ガンテネルマブ、オピシヌマブ、バピヌズマブ、クレネズマブ、オザネズマブ、ポネズマブ、レファネズマブ、ソラネズマブ、タネズマブ、ベドリズマブである、請求項14に記載の方法。
【請求項１８】
前記培地が、（c）エタノールおよび／または（d）1種類以上の脂肪酸をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１９】
前記1種類以上の脂肪酸は、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、チモール、酢酸コレステリル、オクタン酸メチル、1-オクタノイル-rac-グリセロール、コレステロール、酪酸（C4）、吉草酸（C5）、カプロン酸（C6）、エナント酸（C7）、カプリル酸（C8）、ペラルゴン酸（C9）、カプリン酸（C10）、ウンデシル酸（C11）、ラウリン酸（C12）、トリデシル酸（C13）、ミリスチン酸（C14）、ペンタデカン酸（C15）、マルガリン酸（C17）、ノナデシル酸（C19）、アラキジン酸（C20）、ヘンイコシル酸（C21）、ベヘン酸（C22）、トリコシル酸（C23）、リグノセリン酸（C24）、ペンタコシル酸（C25）、セロチン酸（C26）、ヘプタコシル酸（C27）、モンタン酸（C28）、ノナコシル酸（C29）、メリシン酸（C30）、ヘントリアコンチル酸（C31）、ラッセル酸（C32）、プシリン酸（C33）、ゲジン酸（C34）、セロプラスチン酸（C35）、ヘキサトリアコンチル酸（C36）、ヘプタトリアコンタン酸（C37）、オクタトリアコンタン酸（C38）からなる群より選択される、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
リチウムイオンの前記1種類以上の供給源は、酢酸リチウム、塩化リチウム、炭酸リチウム、オキシ酪酸リチウム、オロチン酸リチウム、臭化リチウム、クエン酸リチウム、フッ化リチウム、ヨウ化リチウム、硝酸リチウム、硫酸リチウムのうちの1種類以上の群より選択される、請求項1に記載の方法。
【請求項２１】
前記リチウムイオンが約0.1μM〜約25 mMの濃度で存在している、請求項1に記載の方法。
【請求項２２】
前記培地におけるリチウムイオンの濃度を毎日約0.1mM〜約1.11 mM上昇させる、請求項1に記載の方法。
【請求項２３】
前記培地におけるリチウムイオンの濃度を毎日約0.1mM、約0.11 mM、約0.5 mM、約0.44 mM、約1 mM、または約1.11 mM上昇させる、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
前記培地におけるリチウムイオンの濃度を毎日約0.1mM〜約1.11 mM上昇させる、請求項9に記載の方法。
【請求項２５】
前記培地におけるリチウムイオンの濃度を毎日約0.1mM、約0.11 mM、約0.5 mM、約0.44 mM、約1 mM、または約1.11 mM上昇させる、請求項24に記載の方法。