【手続補正書】
【提出日】令和2年6月26日(2020.6.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的細胞(10)に付着した第1の検出可能な標識(91)および該標的細胞(10)に付着した第2の検出可能な標識(92)を検出する段階を含む、標的細胞(10)上の受容体分子R(11)と第1の受容体結合部位B1(71)の解離速度定数(koff)を決定する方法であって、
該細胞(10)が、
(i) 該受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも1つの第1の受容体結合部位B1(71)を含む第1の受容体結合試薬(20)であって、第1の多量体化試薬(25)の第1の結合部位Z1(26)に可逆的に結合することができる少なくとも1つの第1の結合パートナーC1(81)をさらに含む、該第1の受容体結合試薬(20)、および
(ii) 該第1の受容体結合試薬(20)の該第1の結合パートナーC1(81)の可逆的結合のための少なくとも2つの第1の結合部位Z1(26)を含む第1の多量体化試薬(25)
と接触されており、
該第1の受容体結合試薬(20)(i)および該第1の多量体化試薬(25)(ii)が、該標的細胞(10)に結合する第1の多価結合複合体を形成し、該第1の多価結合複合体が、1つの該第1の多量体化試薬(25)に結合した少なくとも2つの該第1の受容体結合試薬(20)を含み、かつ
該第1の検出可能な標識(91)が該第1の受容体結合試薬(20)に結合しているかまたは結合することができ、かつ
該第2の検出可能な標識(92)が該受容体分子R(11)に本質的に不可逆的に付着しており、
該第1の検出可能な標識(91)および該第2の検出可能な標識(92)が互いに異なる、該方法。
【請求項２】
前記細胞(10)が、
(iii) 受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも1つの第2の受容体結合部位B2(72)を含む第2の受容体結合試薬(30)であって、第2の多量体化試薬(35)の第2の結合部位Z2(36)に安定的に結合することができる少なくとも1つの第2の結合パートナーC2(82)をさらに含む、該第2の受容体結合試薬(30)、および
(iv) 該第2の受容体結合試薬(30)の該第2の結合パートナーC2(82)の安定的結合のための少なくとも2つの第2の結合部位Z2(36)を含む第2の多量体化試薬(35)
とさらに接触されており、
該第2の受容体結合試薬(30)(iii)および該第2の多量体化試薬(35)(iv)が、該標的細胞(10)に結合する第2の多価結合複合体を形成し、該第2の多価結合複合体が、1つの該第2の多量体化試薬(35)に結合した少なくとも2つの第2の受容体結合試薬(30)を含み、かつ
第2の検出可能な標識(92)が該第2の多価結合複合体に結合している、
請求項1記載の方法。
【請求項３】
前記細胞(10)が、
(iii') 多量体受容体結合試薬M2(40)であって、多量体受容体結合試薬M2(40)が、受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも2つの第2の受容体結合部位B2(72)を含む、該多量体受容体結合試薬M2(40)
とさらに接触されており、
該多量体受容体結合試薬M2(40)が該受容体分子R(11)を介して標的細胞(10)に本質的に不可逆的に結合し、
第2の検出可能な標識(92)が該多量体受容体結合試薬M2(40)に結合している、
請求項1記載の方法。
【請求項４】
前記細胞(10)が、
(iii'') 受容体分子R(11)に特異的に結合する不可逆的受容体結合試薬I2(50)であって、該受容体分子R(11)に本質的に不可逆的に結合する、該不可逆的受容体結合試薬I2(50)
とさらに接触されており、
第2の検出可能な標識(92)が該不可逆的受容体結合試薬I2(50)に結合している、
請求項1記載の方法。
【請求項５】
受容体分子R(11)がT細胞受容体(TCR)である、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
第1の受容体結合部位B1(71)がMHC分子である、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
a. 第1の結合パートナーC1(81)がストレプトアビジン結合ペプチドまたはアビジン結合ペプチドを含み、かつ第1の多量体化試薬(25)がストレプトアビジンもしくはアビジン、または該ストレプトアビジン結合ペプチドもしくはアビジン結合ペプチドに可逆的に結合するストレプトアビジン類似体もしくはアビジン類似体を含む、あるいは
b. 第1の結合パートナーC1(81)が、ストレプトアビジンまたはアビジンに可逆的に結合するビオチン類似体を含み、かつ第1の多量体化試薬(25)がストレプトアビジンもしくはアビジン、または該ビオチン類似体に可逆的に結合するストレプトアビジン類似体もしくはアビジン類似体を含む、
前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
(a) 受容体分子R(11)を含む標的細胞(10)を、(i)第1の受容体結合試薬(20)および(ii)第1の多量体化試薬(25)と接触させる段階、ならびに
(b) 該標的細胞(10)を、(iii)第2の受容体結合試薬(30)および(iv)第2の多量体化試薬(35)と接触させる段階、または
該標的細胞(10)を、(iii')多量体受容体結合試薬M2(40)と接触させる段階、または
該標的細胞(10)を、(iii'')不可逆的受容体結合試薬I2(50)と接触させる段階
を含む、請求項2〜7のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
(c) (i)第1の受容体結合試薬(20)と(ii)第1の多量体化試薬(25)との間の結合を破壊する段階
をさらに含む、請求項8記載の方法。
【請求項１０】
(i)第1の受容体結合試薬(20)と(ii)第1の多量体化試薬(25)との間の結合が、(i)および(ii)を競合試薬CR(60)と接触させることにより破壊され、該競合試薬CR(60)が、該第1の多量体化試薬(25)上の第1の結合部位Z1(26)への結合について第1の結合パートナーC1(81)と競合することができる、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
(d) 標的細胞(10)に付着した第1の検出可能な標識(91)を検出し、かつ該標的細胞(10)に付着した第2の検出可能な標識(92)を検出する段階
をさらに含む、請求項8〜10のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも3つの受容体分子R(11)を含む細胞(10)であって、該細胞(10)が、
(i) 該受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも1つの第1の受容体結合部位B1(71)を含む第1の受容体結合試薬(20)であって、第1の多量体化試薬(25)の第1の結合部位Z1(26)に可逆的に結合することができる少なくとも1つの第1の結合パートナーC1(81)をさらに含む、該第1の受容体結合試薬(20)、および
(ii) 該第1の受容体結合試薬(20)の該第1の結合パートナーC1(81)の可逆的結合のための少なくとも2つの第1の結合部位Z1(26)を含む第1の多量体化試薬(25)
を、少なくとも2つの受容体分子R(11)に結合させており、
該第1の受容体結合試薬(20)(i)および該第1の多量体化試薬(25)(ii)が、標的細胞(10)に結合する第1の多価結合複合体を形成し、該第1の多価結合複合体が、1つの該第1の多量体化試薬(25)に結合した少なくとも2つの該第1の受容体結合試薬(20)を含み、かつ
第1の検出可能な標識(91)が該第1の受容体結合試薬(20)に結合しており、かつ
第2の検出可能な標識(92)が少なくとも1つの受容体分子R(11)に本質的に不可逆的に付着している、該細胞。
【請求項１３】
前記細胞(10)が、
(iii) 受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも1つの第2の受容体結合部位B2(72)を含む第2の受容体結合試薬(30)であって、第2の多量体化試薬(35)の第2の結合部位Z2(36)に安定的に結合することができる少なくとも1つの第2の結合パートナーC2(82)をさらに含む、該第2の受容体結合試薬(30)、および
(iv) 該第2の受容体結合試薬(30)の該第2の結合パートナーC2(82)の安定的結合のための少なくとも2つの第2の結合部位Z2(36)を含む第2の多量体化試薬(35)
を、少なくとも2つの受容体分子R(11)にさらに結合させており、
該第2の受容体結合試薬(30)(iii)および該第2の多量体化試薬(35)(iv)が、標的細胞(10)に結合する第2の多価結合複合体を形成し、該第2の多価結合複合体が、1つの該第2の多量体化試薬(35)に結合した少なくとも2つの第2の受容体結合試薬(30)を含み、かつ
第2の検出可能な標識(92)が該第2の多価結合複合体に結合している、
請求項12記載の細胞。
【請求項１４】
前記細胞(10)が、
(iii') 多量体受容体結合試薬M2(40)であって、多量体受容体結合試薬M2(40)が、受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも2つの第2の受容体結合部位B2(72)を含む、該多量体受容体結合試薬M2(40)
を、少なくとも2つの受容体分子R(11)にさらに結合させており、
該多量体受容体結合試薬M2(40)が該少なくとも2つの受容体分子R(11)を介して該細胞(10)に本質的に不可逆的に結合し、
第2の検出可能な標識(92)が該多量体受容体結合試薬M2(40)に結合している、
請求項12記載の細胞。
【請求項１５】
前記細胞(10)が、
(iii'') 受容体分子R(11)に特異的に結合する不可逆的受容体結合試薬I2(50)であって、該受容体分子R(11)に本質的に不可逆的に結合する、該不可逆的受容体結合試薬I2(50)
を、該受容体分子R(11)にさらに結合させており、
第2の検出可能な標識(92)が該不可逆的受容体結合試薬I2(50)に結合している、
請求項12記載の細胞。
【請求項１６】
受容体分子R(11)がT細胞受容体(TCR)である、請求項12〜15のいずれか一項記載の細胞(10)。
【請求項１７】
標的細胞(10)上の受容体分子R(11)と第1の受容体結合部位B1(71)の解離速度定数(koff)を決定するための試薬キットであって、該キットが、
(i) 該受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも1つの第1の受容体結合部位B1(71)を含む第1の受容体結合試薬(20)であって、第1の多量体化試薬(25)の第1の結合部位Z1(26)に可逆的に結合することができる少なくとも1つの第1の結合パートナーC1(81)をさらに含む、該第1の受容体結合試薬(20)、および
(ii) 該第1の受容体結合試薬(20)の該第1の結合パートナーC1(81)の可逆的結合のための少なくとも2つの第1の結合部位Z1(26)を含む第1の多量体化試薬(25)、
ここで、
該第1の受容体結合試薬(20)(i)および該第1の多量体化試薬(25)(ii)が、該標的細胞(10)に結合する第1の多価結合複合体を形成し、該第1の多価結合複合体が、1つの該第1の多量体化試薬(25)に結合した少なくとも2つの該第1の受容体結合試薬(20)を含み、
第1の検出可能な標識(91)が該第1の受容体結合試薬(20)に結合しているかまたは結合することができる; ならびに
(iii) 該受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも1つの第2の受容体結合部位B2(72)を含む第2の受容体結合試薬(30)であって、第2の多量体化試薬(35)の第2の結合部位Z2(36)に安定的に結合することができる少なくとも1つの第2の結合パートナーC2(82)をさらに含む、該第2の受容体結合試薬(30); および
(iv) 該第2の受容体結合試薬(30)の該第2の結合パートナーC2(82)の安定的結合のための少なくとも2つの第2の結合部位Z2(36)を含む第2の多量体化試薬(35)、
ここで、
該第2の受容体結合試薬(30)(iii)および該第2の多量体化試薬(35)(iv)が、該標的細胞(10)に結合する第2の多価結合複合体を形成し、該第2の多価結合複合体が、1つの該第2の多量体化試薬(35)に結合した少なくとも2つの第2の受容体結合試薬(30)を含み、
第2の検出可能な標識(92)が該第2の多価結合複合体に結合している;
または
(iii') 多量体受容体結合試薬M2(40)であって、多量体受容体結合試薬M2(40)が、該受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも2つの第2の受容体結合部位B2(72)を含む、該多量体受容体結合試薬M2(40)、
ここで、
該多量体受容体結合試薬M2(40)が該受容体分子R(11)を介して該標的細胞(10)に本質的に不可逆的に結合し、
第2の検出可能な標識(92)が該多量体受容体結合試薬M2(40)に結合している;
または
(iii'') 該受容体分子R(11)に特異的に結合する不可逆的受容体結合試薬I2(50)であって、該受容体分子R(11)に本質的に不可逆的に結合する、該不可逆的受容体結合試薬I2(50)、
ここで、
第2の検出可能な標識(92)が該不可逆的受容体結合試薬I2(50)に結合している;
を含み、
該第1の検出可能な標識(91)が該第2の検出可能な標識(92)ではない、該キット。
【請求項１８】
受容体分子R(11)を含む標的細胞(10)と、
(i) 該受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも1つの第1の受容体結合部位B1(71)を含む第1の受容体結合試薬(20)であって、第1の多量体化試薬(25)の第1の結合部位Z1(26)に可逆的に結合することができる少なくとも1つの第1の結合パートナーC1(81)をさらに含む、該第1の受容体結合試薬(20)と、
(ii) 該第1の受容体結合試薬(20)の該第1の結合パートナーC1(81)の可逆的結合のための少なくとも2つの第1の結合部位Z1(26)を含む第1の多量体化試薬(25)と
を含有する第1の容器であって、
該第1の受容体結合試薬(20)(i)および該第1の多量体化試薬(25)(ii)が、該標的細胞(10)に結合する第1の多価結合複合体を形成することができ、該第1の多価結合複合体が、1つの該第1の多量体化試薬(25)に結合した少なくとも2つの該第1の受容体結合試薬(20)を含み、かつ
第1の検出可能な標識(91)が該第1の受容体結合試薬(20)に結合しているかまたは結合することができ、かつ
第2の検出可能な標識(92)が該受容体分子R(11)に本質的に不可逆的に付着しており、
該第1の検出可能な標識(91)が該第2の検出可能な標識(92)ではない、
該第1の容器; ならびに
a. 該第1の多量体化試薬(25)上の該第1の結合部位Z1(26)への結合について第1の結合パートナーC1(81)と競合することができる競合試薬CR(60)、または
b. 好ましくはEDTAもしくはEGTAである金属キレート試薬
を含む流体を含有する第2の容器
を含む機器であって、
該第1の容器および第2の容器が、流体を該第2の容器から該第1の容器へ移動させることができるように接続されている、該機器。
【請求項１９】
第1の容器が、
(iii) 受容体分子R(11)に特異的に結合する少なくとも1つの第2の受容体結合部位B2(72)を含む第2の受容体結合試薬(30)であって、第2の多量体化試薬(35)の第2の結合部位Z2(36)に安定的に結合することができる少なくとも1つの第2の結合パートナーC2(82)をさらに含む、該第2の受容体結合試薬(30)と、
(iv) 該第2の受容体結合試薬(30)の該第2の結合パートナーC2(82)の安定的結合のための少なくとも2つの第2の結合部位Z2(36)を含む第2の多量体化試薬(35)と
をさらに含有し、
該第2の受容体結合試薬(30)(iii)および該第2の多量体化試薬(35)(iv)が、標的細胞(10)に結合する第2の多価結合複合体を形成することができ、該第2の多価結合複合体が、1つの該第2の多量体化試薬(35)に結合した少なくとも2つの第2の受容体結合試薬(30)を含み、かつ
第2の検出可能な標識(92)が該第2の多価結合複合体に結合している、
請求項18記載の機器。
【請求項２０】
(a) 請求項1〜8のいずれか一項記載の方法を用いて、対象から得られたサンプル中のT細胞の解離速度定数(koff)を決定する段階、
(b) 該対象から得られたサンプルから該T細胞を単離する段階
を含む、高アビディティT細胞を単離する方法。