【手続補正書】
【提出日】令和2年3月12日(2020.3.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
流路と、前記流路に流体接続された隔離ペンとを有するマイクロ流体デバイスにおいてＴリンパ球を増殖させる方法であって、
前記流路がマイクロ流体チャネルを備え、
前記隔離ペンが、分離領域と、前記分離領域を前記チャネルに流体接続する接続領域と、を備え、
前記隔離ペンの前記分離領域が、前記マイクロ流体デバイスの非掃引領域であり、
当該方法が、
１から５個のＴリンパ球を前記マイクロ流体デバイスの前記隔離ペンに導入することと、
前記１から５個のＴリンパ球と活性化剤とを接触させることと、
前記隔離ペンに導入された前記１から５個のＴリンパ球が増殖を行うことを可能にするのに十分な時間の期間にわたり、前記マイクロ流体デバイスの前記流路を通して培養培地をかん流させることと、
を含む方法。
【請求項２】
前記隔離ペンが、約５×１０５から約５×１０６立方ミクロンの体積を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記隔離ペンの少なくとも１つの内面が、コーティング材料を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記コーティング材料が、前記隔離ペンの前記少なくとも１つの内面に共有結合で結合され、前記コーティング材料が、アルキレンエーテル部分、糖部分、アミノ酸部分又はそれらの組合せを含むポリマーを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記コーティング材料が、それぞれ結合基とアルキル部分とを含む分子を含み、前記結合基は、前記隔離ペンの前記少なくとも１つの内面に共有結合で結合される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記コーティング材料が、結合基とカチオン部分及び／又はアニオン部分とを有する分子を含み、前記結合基が、前記隔離ペンの少なくとも１つの内面に共有結合で結合される、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記活性化剤が、前記コーティング材料に共有結合で結合されるか又は安定に結合される、請求項３から６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記１から５個のＴリンパ球は、対象から採取された末梢血サンプル又は対象の固形腫瘍サンプルから分離されたＴリンパ球の集団に由来する、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記集団が、ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔリンパ球が富化される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記集団が、ＣＣＲ７＋Ｔリンパ球又はＣＤ６２Ｌ＋Ｔリンパ球が富化される、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔリンパ球、ＣＤ６９＋Ｔリンパ球、ＰＤ−１＋Ｔリンパ球及びＰＤ−Ｌ１＋Ｔリンパ球の１つ、２つ、３つ又は４つを枯渇させることを含む、請求項８から１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記１から５個のＴリンパ球を前記隔離ペンに導入することが、
前記１から５個のＴリンパ球を含有する流体を前記マイクロ流体デバイスの前記マイクロ流体チャネルに流入させることと、
前記マイクロ流体チャネルに位置する前記１から５個のＴリンパ球を選択することと、
前記１から５個の選択されたＴリンパ球を前記隔離ペン内に移動させることと、
を含む、請求項１から１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記１から５個の選択されるＴリンパ球が、少なくとも部分的には、それらの細胞表面がマーカーＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はそれらの任意の組合せを含むために選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記１から５個の選択されるＴリンパ球が、少なくとも部分的には、それらの細胞表面がマーカーＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋又はそれらの任意の組合せを含むために選択される、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記１から５個のＴリンパ球を選択することが、前記１から５個のＴリンパ球を含むＴリンパ球の集団を、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７又はＣＤ６２Ｌに特異的に結合する抗体で標識することを含み、
前記１から５個の選択されるＴリンパ球が、少なくとも部分的には、それらが前記抗体を伴うことに基づいて選択される、
請求項１２から１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記１から５個の選択されるＴリンパ球が、少なくとも部分的には、それらの細胞表面がＣＤ４５ＲＯ＋でないために選択される、請求項１２から１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記１から５個の選択されるＴリンパ球が、少なくとも部分的には、それらの細胞表面がＣＤ６９＋でなく、ＰＤ−１＋でなく、且つ／又はＰＤ−Ｌ１＋でないために選択される、請求項１２から１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記１から５個の選択されるＴリンパ球が、少なくとも部分的には、それらが蛍光標識を伴う抗原で標識されるために選択される、請求項１２から１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗原が、ＭＨＣタンパク質で複合体化されるペプチドを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記１から５個のＴリンパ球が、前記隔離ペンに導入される前に活性化剤に接触される、請求項１から１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記１から５個のＴリンパ球を前記隔離ペンに導入することが、前記活性化剤を前記隔離ペンに導入することをさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記１から５個のＴリンパ球が、前記隔離ペンに導入された後に前記活性化剤に接触される、請求項１から１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
（ｉ）前記活性化剤が、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８アゴニスト抗体を含み、
（ｉｉ）前記活性化剤が、固体担体にコンジュゲートされる抗ＣＤ３アゴニスト抗体を含み、
（ｉｉｉ）前記活性化剤が、固体担体にコンジュゲートされる抗ＣＤ２８アゴニスト抗体を含み、及び／又は
（ｉｖ）前記活性化剤が、可溶性抗ＣＤ２８アゴニスト抗体を含む、
請求項１から２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記培養培地が、前記マイクロ流体デバイスの前記流路を通して少なくとも２４時間の期間にわたってかん流される、請求項１から２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記培養培地が、ヒト血清とＩＬ２とを含み、及び／又は前記培養培地は、ＩＬ７、ＩＬ１５、ＩＬ２１若しくはそれらの任意の組合せを含む、請求項１から２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
１又は２個のＴリンパ球が、前記マイクロ流体デバイスの前記隔離ペンに導入される、請求項１から２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
当該方法が、前記増殖されたＴリンパ球を前記マイクロ流体デバイスから搬出することを含む、請求項１から２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記マイクロ流体デバイスが、複数の隔離ペンを含み、１から５個のＴリンパ球が、前記複数のそれぞれの隔離ペンに導入され、且つそれぞれの隔離ペンに導入される前及び／又は後に前記活性化剤に接触される、請求項１から２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法に従って産生されたＴリンパ球と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項３０】
前記１から５個のＴリンパ球を前記隔離ペンに導入することが、前記マイクロ流体チャネルに位置する１から５個のＴリンパ球を選択するために誘電泳動（ＤＥＰ）を用い、前記１から５個のＴリンパ球を前記隔離ペン内に移動させることを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項３１】
前記接続領域が、前記マイクロ流体チャネルへの基端開口部であって約２０ミクロンから約１００ミクロンの範囲の幅Ｗｃｏｎを有する基端開口部と、前記分離領域への先端開口部と、を有し、
前記基端開口部から前記先端開口部までの前記接続領域の長さＬｃｏｎが、前記接続領域の前記基端開口部の幅Ｗｃｏｎの少なくとも１．０倍である、
請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記マイクロ流体チャネルが、前記接続領域の前記基端開口部において、約２０ミクロンから約１００ミクロンの高さＨｃｈを有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記マイクロ流体チャネルが、前記接続領域の前記基端開口部において、約１００ミクロンから約２５０ミクロンの幅Ｗｃｈを有する、請求項３１に記載の方法。