【手続補正書】
【提出日】令和2年2月27日(2020.2.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
ＴＡ酵素は、Escherichia coli由来のgabTトランスアミナーゼ（UniProt P22256；本明細書において配列番号３として規定される）であってもよい。あるいは、ＴＡ酵素は、配列番号１として同定される配列を有するトランスアミナーゼであってもよい。ＴＡ酵素はまた、配列番号１に対する配列類似性に基づいて選択されてよく、および／または所望の反応においてその活性を改善するように変異されてもよい。したがって、アラインメントのＢＬＡＳＴＰ法に基づいて、配列番号１に対して８０％、８５％、９０％、９５％またはそれを超える配列同一性を有し、かつ、トランスアミナーゼ活性を保持する配列は、本発明によって包含される。配列番号1の酵素配列をコードする任意のＤＮＡ配列、またはその変異体も同様に、本発明に包含される。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８４】
配列番号２:
MHSQKRVVVLGSGVIGLSSALILARKGYSVHILARDLPEDVSSQTFASPWAGANWTPFMTLTDGPRQAKWEESTFKKWVE
LVPTGHAMWLKGTRRFAQNEDGLLGHWYKDITPNYRPLPSSECPPGAIGVTYDTLSVHAPKYCQYLARELQKLGATFERR
TVTSLEQAFDGADLVVNATGLGAKSIAGIDDQAAEPIRGQTVLVKSPCKRCTMDSSDPASPAYIIPRPGGEVICGGTYGV
GDWDLSVNPETVQRILKHCLRLDPTISSDGTIEGIEVLRHNVGLRPARRGGPRVEAERIVLPLDRTKSPLSLGRGSARAA
KEKEVTLVHAYGFSSAGYQQSWGAAEDVAQLVDEAFQRYHGAARESKL
配列番号３：
MNSNKELMQRRSQAIPRGVGQIHPIFADRAENCRVWDVEGREYLDFAGGIAVLNTGHLHPKVVAAVEAQLKKLSHTCFQVLAYEPYLELCEIMNQKVPGDFAKKTLLVTTGSEAVENAVKIARAATKRSGTIAFSGAYHGRTHYTLALTGKVNPYSAGMGLMPGHVYRALYPCPLHGISEDDAIASIHRIFKNDAAPEDIAAIVIEPVQGEGGFYASSPAFMQRLRALCDEHGIMLIADEVQSGAGRTGTLFAMEQMGVAPDLTTFAKSIAGGFPLAGVTGRAEVMDAVAPGGLGGTYAGNPIACVAALEVLKVFEQENLLQKANDLGQKLKDGLLAIAEKHPEIGDVRGLGAMIAIELFEDGDHNKPDAKLTAEIVARARDKGLILLSCGPYYNVLRILVPLTIEDAQIRQGLEIISQCFDEAKQ
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2019509734000001.app
【手続補正４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌ−グルホシネートを作製する方法であって、
通気しながら、Ｄ−グルホシネートを、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ（ＤＡＡＯ）酵素と反応させて、ＰＰＯ（２−オキソ−４−（ヒドロキシ（メチル）ホスフィノイル）酪酸）を形成する工程と、
１つまたは複数のアミン供与体由来のアミン基を使用して、トランスアミナーゼ（ＴＡ）酵素によって、ＰＰＯをＬ−グルホシネートにアミノ化する工程と
を含み、
Ｄ−グルホシネートの少なくとも７０％が、Ｌ−グルホシネートに変換され、
ｅｘ  ｖｉｖｏで実施される、
方法。
【請求項２】
アミン供与体が、グルタメートまたはＬ−グルタメートである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｄ−グルホシネートが、ＤおよびＬ−グルホシネートまたはそれらの塩のラセミ混合物
中に元々存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＤＡＡＯ酵素が、配列番号２を参照配列として用いて、５４位、５６位、５８位、２１３位、および２３８位で１つまたは複数の変異を含む変異型ＤＡＡＯであり、
５４位での変異が、Ｎ５４Ｃ、Ｎ５４Ｌ、Ｎ５４Ｔ、およびＮ５４Ｖからなる群から選択され、５６位での変異が、Ｔ５６Ｍであり、５８位での変異が、Ｆ５８Ａ、Ｆ５８Ｇ、Ｆ５８Ｈ、Ｆ５８Ｋ、Ｆ５８Ｎ、Ｆ５８Ｑ、Ｆ５８Ｒ、Ｆ５８Ｓ、およびＦ５８Ｔからなる群から選択される、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
変異が、Ｎ５４Ｖ、Ｆ５８Ｑ、およびＭ２１３Ｓを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＴＡ酵素が、配列番号１によってコードされる酵素である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ＴＡ酵素が、配列番号３において規定されるアミノ酸配列を有するGabTトランスアミナーゼである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
反応させる工程およびアミノ化する工程が、単一容器中で実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
全ての試薬が、反応の開始時に実質的に添加される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
反応させる工程用の試薬およびアミノ化する工程用の試薬が、異なる時期に単一容器に添加される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
反応させる工程およびアミノ化する工程が、別々の容器中で実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
Ｌ−グルホシネートを作製する方法であって、
通気しながら、Ｄ−グルホシネートを、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ（ＤＡＡＯ）酵素と反応させて、ＰＰＯ（２−オキソ−４−（ヒドロキシ（メチル）ホスフィノイル）酪酸）を形成する工程と、
１つまたは複数のアミン供与体由来のアミン基を使用して、トランスアミナーゼ（ＴＡ）酵素によって、ＰＰＯをＬ−グルホシネートにアミノ化する工程と
を含み、
ＤＡＡＯ酵素が、配列番号２を参照配列として用いて、５４位、５６位、５８位、２１３位、および２３８位で１つまたは複数の変異を含む変異型ＤＡＡＯであり、
５４位での変異が、Ｎ５４Ｃ、Ｎ５４Ｌ、Ｎ５４Ｔ、およびＮ５４Ｖからなる群から選択され、５６位での変異が、Ｔ５６Ｍであり、５８位での変異が、Ｆ５８Ａ、Ｆ５８Ｇ、Ｆ５８Ｈ、Ｆ５８Ｎ、Ｆ５８Ｑ、Ｆ５８Ｒ、Ｆ５８Ｓ、およびＦ５８Ｔからなる群から選択され、
Ｄ−グルホシネートの少なくとも７０％が、Ｌ−グルホシネートに変換され、
ｅｘ  ｖｉｖｏで実施される、
方法。
【請求項１３】
ＴＡ酵素が、配列番号３において規定されるアミノ酸配列を有するGabTトランスアミナーゼである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
アミン供与体が、グルタメートである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
１つまたは複数の変異が、Ｎ５４Ｖ、Ｆ５８Ｑ、およびＭ２１３Ｓを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
反応させる工程およびアミノ化する工程が、単一容器中で実施される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
全ての試薬が、反応の開始時に実質的に添加される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
反応させる工程用の試薬およびアミノ化する工程用の試薬が、異なる時期に単一容器に添加される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
反応させる工程およびアミノ化する工程が、別々の容器中で実施される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
ＤＡＡＯ酵素及びＴＡ酵素が支持体に固定化されている、請求項１２に記載の方法。
【請求項２１】
ＤＡＡＯ酵素及びＴＡ酵素が支持体に固定化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
Ｄ−グルホシネート、２−オキソ−４−（ヒドロキシ（メチル）ホスフィノイル）酪酸（ＰＰＯ）、およびＬ−グルホシネートまたはその塩を含む組成物であり、Ｌ−グルホシネートまたはその塩が、組成物中に、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートの総量に基づいて、８０％重量以上の量で存在する、組成物。
【請求項２３】
Ｌ−グルホシネートまたはその塩の量が、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートまたはその塩の総量に基づいて、９０重量％以上である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
Ｌ−グルホシネートまたはその塩の量が、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートまたはその塩の総量に基づいて、９５％重量以上である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
乾燥粉末である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２６】
区域において雑草を選択的に防除する方法であって、有効量の請求項２２に記載の組成物を施用する工程を含む方法。
【請求項２７】
区域において雑草を選択的に防除する方法であって、有効量の請求項２３に記載の組成物を施用する工程を含む方法。
【請求項２８】
区域において雑草を選択的に防除する方法であって、有効量の請求項２４に記載の組成物を施用する工程を含む方法。
【請求項２９】
ＰＰＯが、組成物中に、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートまたはその塩の総量に基づいて、２０％重量未満の量で存在する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３０】
ＰＰＯが、組成物中に、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートまたはその塩の総量に基づいて、１５％重量未満の量で存在する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３１】
ＰＰＯが、組成物中に、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートまたはその塩の総量に基づいて、１０％重量未満の量で存在する、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３２】
ＰＰＯが、組成物中に、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートまたはその塩の総量に基づいて、５％重量未満の量で存在する、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３３】
Ｄ−グルホシネートが、組成物中に、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートまたはその塩の総量に基づいて、１５％重量未満の量で存在する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３４】
Ｄ−グルホシネートが、組成物中に、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートまたはその塩の総量に基づいて、１０％重量未満の量で存在する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３５】
Ｄ−グルホシネートが、組成物中に、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートまたはその塩の総量に基づいて、１０％重量未満の量で存在する、組請求項２３に記載の組成物。
【請求項３６】
Ｄ−グルホシネートが、組成物中に、Ｄ−グルホシネート、ＰＰＯ、およびＬ−グルホシネートまたはその塩の総量に基づいて、５％重量未満の量で存在する、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３７】
Ｌ−グルホシネートまたはその塩がＬ−グルホシネートとして存在する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３８】
Ｌ−グルホシネートまたはその塩がＬ−グルホシネート塩として存在する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３９】
Ｌ−グルホシネート塩が陽イオン性の塩である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
Ｌ−グルホシネート塩が陰イオン性の塩である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４１】
Ｌ−グルホシネート塩がＬ−グルホシネートのハイドロクロライド塩である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４２】
Ｌ−グルホシネート塩がＬ−グルホシネートのアンモニウム塩である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４３】
Ｌ−グルホシネート塩がＬ−グルホシネートのイソプロピルアンモニウム塩である、請求項３８に記載の組成物。