【手続補正書】
【提出日】令和2年3月26日(2020.3.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体細胞内の核酸集団を安定化させるためのキットであって、
少なくとも１種の不可逆タンパク質翻訳阻害剤と、
少なくとも１種のリボ核酸転写阻害剤と、
電子伝達鎖阻害剤及び／又は電子伝達鎖デカップリング剤を含む少なくとも１種の電子伝達鎖剤と、
を含む、生体細胞キット。
【請求項２】
前記キットが第２のタンパク質翻訳阻害剤を更に含む、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
前記第２のタンパク質翻訳阻害剤が、
（ｉ）可逆タンパク質翻訳阻害剤である、
（ｉｉ）前記不可逆タンパク質翻訳阻害剤と比較して速効性である、及び／又は
（ｉｉｉ）細胞膜透過性である、
請求項２に記載のキット。
【請求項４】
前記第２のタンパク質翻訳阻害剤が、ジアゾオキシド、グルタルイミド抗生物質、シクロヘキシミド、及び／又はトコンアルカロイドである、請求項２又は３に記載のキット。
【請求項５】
（ｉ）前記少なくとも１種の不可逆タンパク質翻訳阻害剤が細胞膜透過性である、
（ｉｉ）前記少なくとも１種のリボ核酸転写阻害剤が細胞膜透過性である、及び／又は
（ｉｉｉ）前記少なくとも１種の電子伝達鎖剤が細胞膜透過性である、
請求項１から４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項６】
前記少なくとも１種の不可逆タンパク質翻訳阻害剤がアミノグリコシド抗生物質、Ｄ−ガラクトサミン、及び／又はエメチンである、請求項１から５のいずれか１項に記載のキット。
【請求項７】
前記少なくとも１種のリボ核酸転写阻害剤がＣＤＫ９阻害剤、オーレスライシン、チオルチン、アマニチン、及び／又はトリプトリドである、請求項１から６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項８】
前記少なくとも１種のリボ核酸転写阻害剤が不可逆阻害剤である、請求項１から７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項９】
前記少なくとも１種の電子伝達鎖剤が可逆活性を有する、請求項１から８のいずれか
１項に記載のキット。
【請求項１０】
前記電子伝達鎖剤が電子伝達鎖阻害剤である、請求項１から９のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１１】
前記電子伝達鎖剤がアジ化ナトリウムである、請求項１から１０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１２】
前記少なくとも１種の不可逆タンパク質翻訳阻害剤、前記少なくとも１種のリボ核酸転写阻害剤、及び前記少なくとも１種の電子伝達鎖剤の少なくとも１つが溶液中に提供される、請求項１から１１のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１３】
前記キットがRNase阻害剤を含まない、請求項１から１２のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１４】
前記キットがプロテアーゼ阻害剤、及び／又は溶解緩衝液を更に含む、請求項１から１３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１５】
前記少なくとも１種の不可逆タンパク質翻訳阻害剤、前記少なくとも１種のリボ核酸転写阻害剤、及び前記少なくとも１種の電子伝達鎖剤の２つ以上がマスターミックス中に提供される、請求項１から１４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１６】
生体細胞中の核酸集団を安定化させる方法であって、
前記生体細胞と、少なくとも１種の不可逆タンパク質翻訳阻害剤、少なくとも１種のリボ核酸転写阻害剤、並びに電子伝達鎖阻害剤及び／又は電子伝達鎖デカップリング剤を含む少なくとも１種の電子伝達鎖剤と、を接触させるステップであって、
前記接触が、前記核酸集団を安定化させるのに十分な期間にわたり行われ、それにより、前記生体細胞が安定化生体細胞に変換される、ステップ
を含む、方法。
【請求項１７】
前記生体細胞が、前記少なくとも１種の不可逆タンパク質翻訳阻害剤、少なくとも１種のリボ核酸転写阻害剤、及び少なくとも１種の電子伝達鎖剤のそれぞれに同時に接触される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記少なくとも１種の不可逆タンパク質翻訳阻害剤、少なくとも１種のリボ核酸転写阻害剤、及び少なくとも１種の電子伝達鎖剤のそれぞれの存在下で前記安定化生体細胞を貯蔵することを更に含む、請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記貯蔵ステップが、少なくとも８時間行われ、及び／又は約０℃〜約４℃の温度で行われる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記安定化生体細胞と溶解試薬とを接触させることにより前記安定化生体細胞を溶解させることを更に含む、請求項１６から１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記溶解された安定化生体細胞から放出された安定化核酸集団の少なくとも一部分を分離することを更に含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記安定化溶解生体細胞から放出された安定化核酸集団の少なくとも一部分から少なくとも１クラスの核酸を分析することを更に含む、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
分析することが、前記少なくとも１クラスの核酸をシーケンスすることを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記少なくとも１クラスの核酸がリボ核酸である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
エンクロージャを含むマイクロ流体デバイス内の生体細胞中の核酸集団を安定化させる方法であって、
前記マイクロ流体デバイスの前記エンクロージャ内に前記生体細胞を配置することであって、前記エンクロージャが、フロー領域と、前記フロー領域に流体接続された少なくとも１つのチャンバとを含み、前記フロー領域及び少なくとも１つのチャンバが流体培地を閉じ込めるように構成される、配置することと、
前記生体細胞と、少なくとも１種の不可逆タンパク質翻訳阻害剤、少なくとも１種のリボ核酸転写阻害剤、並びに電子伝達鎖阻害剤及び／又は電子伝達鎖デカップリング剤を含む少なくとも１種の電子伝達鎖剤と、を接触させることであって、
前記接触が、前記生体細胞の前記核酸集団を安定化させるのに十分な期間にわたり行われ、それにより、前記生体細胞が安定化生体細胞に変換される、接触させることと、
を含む、方法。
【請求項２６】
前記マイクロ流体デバイス内に前記生体細胞を配置することが、前記少なくとも１つのチャンバ内に前記生体細胞を配置することを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記少なくとも１つのチャンバが、分離領域と前記分離領域を前記フロー領域に流体接続する接続領域とを有する隔離ペンを含み、前記分離領域及び前記接続領域が、前記流体培地の成分が前記フロー領域と前記隔離ペンの前記分離領域との間で実質的に拡散のみにより交換されるように構成される、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記マイクロ流体デバイスの前記エンクロージャ内に前記生体細胞の配置することが、前記隔離ペンの前記分離領域内に前記生体細胞を配置することを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記マイクロ流体デバイス内に前記安定化生体細胞を貯蔵することを更に含む、請求項２５から２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記貯蔵ステップが、少なくとも８時間行われ、及び／又は約０℃〜約４℃の温度で行われる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記マイクロ流体デバイスから前記安定化生体細胞を搬出することを更に含む、請求項２５から３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記安定化生体細胞と溶解試薬とを接触させることにより前記安定化生体細胞を溶解させることを更に含む、請求項２５から３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記溶解された安定化生体細胞から放出された安定化核酸集団の少なくとも一部分を分離することを更に含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記溶解された安定化生体細胞から放出された前記安定化核酸集団の前記少なくとも一部分から少なくとも１クラスの核酸を分析することを更に含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記生体細胞が哺乳動物細胞である、請求項１６から３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記生体細胞が免疫細胞である、請求項１６から３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記免疫細胞がＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及び／又はマクロファージである、請求項３６に記載の方法。