【手続補正書】
【提出日】令和2年9月28日(2020.9.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＣＩと診断を受けた患者において軽度認知機能障害（ＭＣＩ）からアルツハイマー病（ＡＤ）への移行を予測するためのインビトロ細胞アッセイであって、前記アッセイは：
ａ．ヒト海馬前駆細胞を、前記前駆細胞の増殖期中、前記患者から得られた血清を含む培養培地中で培養するステップ；
ｂ．その後、前記海馬前駆細胞を、前記前駆細胞の分化期間中、前記患者から得られた血清を含む培養培地中で培養するステップ；
ｃ．培養された前記前駆細胞の増殖レベルを決定するステップ；
ｄ．培養された前記前駆細胞の平均細胞数を決定するステップ；および
ｅ．増殖した前記海馬前駆細胞の分化後のアポトーシス細胞死をモニターするステップを含み、
統計解析を（ｃ）〜（ｅ）の各々の結果により行い、統計解析結果は前記患者のＭＣＩからＡＤへの移行への予測となる、
前記アッセイ。
【請求項２】
ＡＤ薬物臨床治験に選択することの適格性に関して、ＭＣＩと診断を受けた患者の層別化を支援するインビトロ細胞アッセイであって、前記アッセイは：
ａ．ヒト海馬前駆細胞を、前記前駆細胞の増殖期中、前記患者から得られた血清を含む培養培地中で培養するステップ；
ｂ．その後、前記海馬前駆細胞を、前記前駆細胞の分化期間中、前記患者から得られた血清を含む培養培地中で培養するステップ；
ｃ．培養された前記前駆細胞の増殖レベルを決定するステップ；
ｄ．培養された前記前駆細胞の平均細胞数を決定するステップ；および
ｅ．増殖した前記海馬前駆細胞の分化後のアポトーシス細胞死をモニターするステップを含み、
統計解析を（ｃ）〜（ｅ）の各々の結果により行い、前記統計解析結果を使用して前記臨床治験に選択することの前記患者の適格性を決定することができる、
前記アッセイ。
【請求項３】
前記方法を使用して、ＡＤ薬物臨床治験に選択された患者が前記治験に含まれるのに適した候補であったかどうかを遡及的に判別する、請求項２に記載のアッセイ。
【請求項４】
（ｆ）分化後に存在する成熟神経細胞、未成熟神経細胞、もしくはグリア細胞のレベル、ならびに／または
（ｇ）増殖中もしくは増殖後のアポトーシスレベル、
の１つ以上を測定することをさらに含み、
（ｆ）および／または（ｇ）の結果を使用して、臨床治験に選択することの前記患者の適格性を決定することができる、
請求項２または３に記載のアッセイ。
【請求項５】
ＭＣＩと診断された患者に行った治療の有効性の評価を支援するインビトロ細胞アッセイであって、前記アッセイが：
ａ．ヒト海馬前駆細胞を、前記前駆細胞の増殖期中、前記患者から得られた血清を含む培養培地中で培養するステップ；
ｂ．その後、前記海馬前駆細胞を、前記前駆細胞の分化期間中、前記患者から得られた血清を含む培養培地中で培養するステップ；
ｃ．培養された前記前駆細胞の増殖レベルを決定するステップ；
ｄ．培養された前記前駆細胞の平均細胞数を決定するステップ；および
ｅ．増殖した前記海馬前駆細胞の分化後のアポトーシス細胞死をモニターするステップを含み、
前記アッセイを治療期間中規則的間隔で反復して異なる時点において（ｃ）〜（ｅ）の各々の結果を生じ、前記異なる時点における結果の比較を使用して前記治療有効性の評価を支援することができる、
前記アッセイ。
【請求項６】
前記患者が、ＭＣＩからＡＤへ移行することを予測され、
前記ＭＣＩからＡＤへの移行予測が、請求項１に記載のアッセイを行った結果である、請求項５に記載のアッセイ。
【請求項７】
前記規則的間隔が、６か月の間隔である、請求項５または６に記載のアッセイ。
【請求項８】
（ｆ）分化後に存在する成熟神経細胞、未成熟神経細胞、もしくはグリア細胞のレベル、ならびに／または
（ｇ）増殖中もしくは増殖後のアポトーシスレベル、
の１つ以上を測定することをさらに含み、
（ｆ）および／または（ｇ）の結果を使用して、経時的に治療の有効性をモニターすることができる、
請求項５〜７のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項９】
ＭＣＩと診断された患者の病気進行をモニターするためのインビトロ細胞アッセイであって、前記アッセイが：
ａ．ヒト海馬前駆細胞を、前記前駆細胞の増殖期中、前記患者から得られた血清を含む培養培地中で培養するステップ；
ｂ．その後、前記海馬前駆細胞を、前記前駆細胞の分化期間中、前記患者から得られた血清を含む培養培地中で培養するステップ；
ｃ．培養された前記前駆細胞の増殖レベルを決定するステップ；
ｄ．培養された前記前駆細胞の平均細胞数を決定するステップ；および
ｅ．増殖した前記海馬前駆細胞の分化後のアポトーシス細胞死をモニターするステップを含み、
前記方法を規則的間隔で反復して異なる時点において（ｃ）〜（ｅ）の各々の結果を生じ、前記異なる時点の結果の比較を使用して病気進行をモニターすることができる、
前記アッセイ。
【請求項１０】
前記規則的間隔が、６か月の間隔であり、
前記アッセイが、
（ｆ）分化後に存在する成熟神経細胞、未成熟神経細胞、もしくはグリア細胞のレベル、ならびに／または
（ｇ）増殖中もしくは増殖後のアポトーシスレベル、
の１つ以上を測定することをさらに含み、
異なる時点において測定された（ｆ）および／または（ｇ）の結果の比較を使用して病気進行をモニターすることができる、
請求項９に記載のアッセイ。
【請求項１１】
（ａ）および（ｂ）における前記培養培地中の前記血清の最終濃度が、０．５％〜５％である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１２】
ステップ（ａ）が、前記培養培地中に前記細胞を播種した２４時間後に前記培養培地に前記血清を添加することを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１３】
ステップ（ａ）における前記培養培地が、ＥＧＦ、ｂＦＧＦおよび４−ＯＨＴを含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１４】
ステップ（ａ）において言う前記増殖期が、４８時間の期間である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１５】
前記培養培地が、ステップ（ａ）と（ｂ）の間で交換され、（ｂ）において使用される前記培養培地はＥＧＦ、ｂＦＧＦおよび４−ＯＨＴの全てを含むことはない、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１６】
ステップ（ｂ）において言う前記分化期が、７日以下の期間である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１７】
前記海馬前駆細胞が、ヒト多分化能海馬前駆細胞である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１８】
前記海馬前駆細胞が、条件付不死化細胞である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１９】
前記海馬前駆細胞が、ＨＰＣ０Ａ０７／０３Ｃセルライン由来細胞である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項２０】
前記海馬前駆細胞の増殖レベルを、前記増殖期の終わりに決定する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項２１】
前記平均細胞数を、前記増殖期の終わりおよび前記分化期の終わりにおいて決定する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項２２】
アポトーシス細胞死を、前記分化期の終わりにおいて決定する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項２３】
アポトーシス細胞死を、ＣＣ３発現の測定により決定する、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項２４】
未成熟神経細胞を、Ｄｃｘの発現レベルの決定により測定し、
成熟神経細胞を、Ｓ１００βの発現レベルの決定により測定し、
増殖中のアポトーシスを、ＣＣ３の発現レベルの決定により測定する、請求項４、８および１０のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか一項に記載のアッセイまたは方法におけるヒト海馬前駆細胞を含む基質の使用。
【請求項２６】
ＭＣＩからＡＤへの移行のバイオマーカー、ＡＤの進行のバイオマーカーおよび／またはＡＤをモニターするためのバイオマーカーとしての海馬神経新生の使用。
【請求項２７】
ＡＤの治療標的および／またはＡＤ発症を遅延する介入標的としての海馬神経新生の使用。
【請求項２８】
請求項２６に記載のＭＣＩからＡＤへの移行のバイオマーカーとして、または、請求項２７に記載のＡＤの治療標的および／またはＡＤ発症を遅延する介入標的としての海馬神経新生の使用であって、ヒト血清に不死化ヒト海馬前駆細胞を暴露することにより海馬神経新生をインビトロで測定する、前記使用。