【手続補正書】
【提出日】令和2年1月27日(2020.1.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体での外傷性脳傷害（TBI）を診断および/またはモニタリングするために被験体由来のサンプル中の少なくとも1種のmiRNAのレベルを検出する方法であって、該サンプルが血清を含む体液サンプルであり、該少なくとも1種のmiRNAが、miR-143、miR-425-5p、miR-502、miR-21およびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、上記方法。
【請求項２】
標的miRNAに対して特異的な少なくとも1種のプローブを含む、被験体での外傷性脳傷害（TBI）を診断および/またはモニタリングするためのキットであって、該標的miRNAが、miR-143、miR-425-5p、miR-502、miR-21およびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択され、該診断および/またはモニタリングが、被験体由来の血清を含む体液サンプル中の標的miRNAのレベルを決定することを含む、上記キット。
【請求項３】
被験体での外傷性脳傷害（TBI）を診断および/またはモニタリングするためのバイオマーカーとしての、サンプル中の少なくとも1種のmiRNAの使用であって、該少なくとも1種のmiRNAが、miR-143、miR-425-5p、miR-502、miR-21およびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択され、該診断および/またはモニタリングが、被験体由来の血清を含む体液サンプル中のmiRNAのレベルを決定することを含む、上記使用。
【請求項４】
前記診断および/またはモニタリングがさらに、前記少なくとも1種のmiRNAのレベルを所定の閾値または参照レベルと比較することを含み、場合により該参照レベルが、健康被験体から採取された対照サンプル中の参照miRNAのレベル、または被験体から採取されたサンプル中の参照miRNAのレベルである、請求項1に記載の方法、請求項2に記載のキット、または請求項3に記載の使用。
【請求項５】
前記診断および/またはモニタリングがさらに、以下のmiRNA：
（a）miR-505、miR-203、miR-654-3p、miR-655、miR-184、miR-301b、miR-425-5p、miR-502、miR-21、miR-let-7g、miR-335、miR-126*、miR-193a-5p、miR-144*、miR-190、miR-194、miR-365、miR-590-3p、miR-624、miR-625*、miR-671-3p、hsa-let-7c-5p、hsa-let-7i-5p、miR-142-3p、miR-148a-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-181a-5p、miR-20a-5p、miR-20b-5p、miR-221-3p、miR-24-3p、miR-27b-3p、miR-29a-3p、miR-29c-3p、miR-424-5p、miR-30a-5p；miR-107；miR-135b-5p；miR-199b-5p；miR-324-5p；miR-652-3p；miR-10a、miR-132、miR-223、miR-143、miR-148b、miR-18a、miR-192、miR-429、miR-618、miR-95、miR-130a、miR-152、miR-27b、miR-301、miR-326、miR-345、miR-361、miR-422a、miR-579、miR-642、miR-99a、miR-520D-3pおよびmiR-629、またはいずれかのその組み合わせ、
（b）miR-505、miR-203、miR-654-3p、miR-655、miR-184、miR-301b、miR-425-5p、miR-502、miR-21、miR-let-7g、miR-335、hsa-miR-126*、miR-193a-5p、miR-144*、miR-190、miR-194、miR-365、miR-590-3p、miR-624、miR-625*、およびmiR-671-3p、またはいずれかのその組み合わせ、
（c）miR-505、miR-203、miR-654-3p、miR-655、miR-184、miR-301b、miR-425-5p、miR-502、miR-21、miR-let-7gおよびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせ、
（d）let-7c-5p、let-7i-5p、miR-142-3p、miR-148a-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-181a-5p、miR-20a-5p、miR-20b-5p、miR-221-3p、miR-24-3p、miR-27b-3p、miR-29a-3p、miR-29c-3p、およびmiR-424-5p；miR-30a-5p；miR-107；miR-135b-5p；miR-199b-5p；miR-324-5p；miR-652-3p、またはいずれかのその組み合わせ、あるいは
（e）miR-10a、miR-132、miR-223、miR-143、miR-148b、miR-18a、miR-192、miR-429、miR-618、miR-95、miR-130a、miR-152、miR-194、miR-27b、miR-301、miR-326、miR-345、miR-361、miR-422a、miR-579、miR-642、miR-99a、miR-520D-3pおよびmiR-629、またはいずれかのその組み合わせ
からなる群より選択される少なくとも1種の追加のmiRNAのレベルを決定することを含む、請求項1もしくは4に記載の方法、請求項2もしくは4に記載のキット、または請求項3もしくは4に記載の使用。
【請求項６】
前記少なくとも1種のmiRNAが、以下のmiRNA：miR-425-5p；miR-502；miR-21；およびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、請求項1、4もしくは5のいずれか1項に記載の方法、請求項2、4もしくは5に記載のキット、または請求項3〜5のいずれか1項に記載の使用。
【請求項７】
前記TBIが軽度TBI（mTBI）であり、かつ前記miRNAが、以下のmiRNA：miR-425-5pおよびmiR-502からなる群より選択され、場合によりmiR-425-5pおよび/またはmiR-502のレベルが、所定の閾値未満であると決定されるか、または参照と比較して低下している場合に、前記被験体がmTBIを有すると診断される、請求項6に記載の方法、キットまたは使用。
【請求項８】
前記TBIが重度TBI（sTBI）であり、かつ前記miRNAが、以下のmiRNA：miR-21およびmiR-335からなる群より選択され、場合によりmiR-21およびmiR-335のレベルが、所定の閾値を超えると決定されるか、または参照と比較して増大している場合に、前記被験体がsTBIを有すると診断される、請求項6に記載の方法、キットまたは使用。
【請求項９】
前記TBIが中等度〜重度TBI（m-sTBI）であり、前記miRNAがmiR-143であり、場合によりmiR-143のレベルが、所定の閾値を超えると決定されるか、または参照と比較して増大している場合に、前記被験体がm-sTBIを有すると診断される、請求項6に記載の方法、キットまたは使用。
【請求項１０】
前記診断および/またはモニタリングが、以下のmiRNA：
(i) miR-425-5pおよびmiR-502から選択される、第1のmiRNA；および
(ii) miR-21およびmiR-335から選択される、第2のmiRNA
のレベルを決定するステップを含み、場合によりmiR-425-5pもしくはmiR-502のレベルが、所定の閾値未満であると決定されるか、または参照と比較して低下しており、かつ、miR-21もしくはmiR-335のレベルが、所定の閾値を超えると決定されるか、または参照と比較して増大している場合に、前記被験体が、いずれかの重症度のTBIを有すると診断される、請求項6に記載の方法、キットまたは使用。
【請求項１１】
前記少なくとも1種のmiRNAのレベルが、
（a）傷害後72時間以下、
（b）傷害後48時間以下、
（c）傷害後24時間以下、
（d）傷害から最大20日まで、
（e）傷害から最大18日まで、
（f）傷害から最大15日まで、
（g）傷害後15日目、
（h）傷害後少なくとも7日、
（i）傷害後少なくとも10日、
（j）傷害後少なくとも14日、
で前記被験体から取得された体液サンプル中で決定される、請求項1もしくは4〜10のいずれか1項に記載の方法、請求項2もしくは4〜10に記載のキット、または請求項3〜10のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１２】
標的miRNAに対して特異的な少なくとも1種のプローブを用いて官能化されている基板を含む、TBIを診断および/またはモニタリングするための検出システム用センサー素子であって、該標的miRNAが、miR-143、miR-425-5p、miR-502、miR-21およびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、上記センサー素子。
【請求項１３】
前記プローブが核酸を含み、場合により前記核酸が、前記標的miRNAの配列の相補体である配列に対して少なくとも80％同一である配列を含む、請求項12に記載のセンサー素子。
【請求項１４】
前記基板が、金属、プラスチック、ガラス、シリカ、シリコン、黒鉛もしくはグラフェン、またはいずれかのその組み合わせから形成される、請求項13に記載のセンサー素子。
【請求項１５】
以下の構成要素：
・請求項12〜14のいずれか1項に記載のセンサー素子；および
・前記プローブに対する標的miRNAの結合を検出することが可能である検出デバイスを備えた、TBIを診断および/またはモニタリングするための検出システム。
【請求項１６】
標的miRNAに特異的な少なくとも1種の追加のプローブをさらに含み、該miRNAが、miR-505、miR-203、miR-654-3p、miR-655、miR-184、miR-301b、miR-let-7g、miR-126*、miR-193a-5p、miR-144*、miR-190、miR-194、miR-365、miR-590-3p、miR-624、miR-625*、miR-671-3p、hsa-let-7c-5p、hsa-let-7i-5p、miR-142-3p、miR-148a-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-181a-5p、miR-20a-5p、miR-20b-5p、miR-221-3p、miR-24-3p、miR-27b-3p、miR-29a-3p、miR-29c-3p、miR-30a-5p；miR-107；miR-135b-5p；miR-199b-5p；miR-324-5p；miR-652-3p；miR-424-5p、miR-10a、miR-132、miR-223、miR-148b、miR-18a、miR-192、miR-429、miR-618、miR-95、miR-130a、miR-152、miR-27b、miR-301、miR-326、miR-345、miR-361、miR-422a、miR-579、miR-642、miR-99a、miR-520D-3pおよびmiR-629、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択され、場合により該miRNAが、miR-425-5p、miR-502、miR-21およびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、請求項12〜14のいずれか1項に記載のセンサー素子または請求項15に記載の検出システム。
【請求項１７】
それを必要とする被験体を処置する方法での使用のための、TBIを軽減させるための治療用組成物であって、該被験体由来の体液サンプル中の少なくとも1種のmiRNAのレベルを決定することにより、該被験体がTBIを有すると特定され、該体液サンプルが血清を含み、該少なくとも1種のmiRNAが、miR-143、miR-425-5p、miR-502、miR-21およびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、上記治療用組成物。
【請求項１８】
TBIを軽減させるための前記治療用組成物が、以下の療法：神経保護薬および鎮静剤の少なくとも1種から選択される、請求項17に記載の治療用組成物。
【請求項１９】
追加の標的miRNAをさらに含み、該追加の標的miRNAが、以下のmiRNA：miR-505、miR-203、miR-654-3p、miR-655、miR-184、miR-301b、miR-425-5p、miR-502、miR-21、miR-let-7g、miR-335、miR-126*、miR-193a-5p、miR-144*、miR-190、miR-194、miR-365、miR-590-3p、miR-624、miR-625*、miR-671-3p、hsa-let-7c-5p、hsa-let-7i-5p、miR-142-3p、miR-148a-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-181a-5p、miR-20a-5p、miR-20b-5p、miR-221-3p、miR-24-3p、miR-27b-3p、miR-29a-3p、miR-29c-3p、miR-30a-5p；miR-107；miR-135b-5p；miR-199b-5p；miR-324-5p；miR-652-3p、miR-424-5p、miR-10a、miR-132、miR-223、miR-143、miR-148b、miR-18a、miR-192、miR-429、miR-618、miR-95、miR-130a、miR-152、miR-27b、miR-301、miR-326、miR-345、miR-361、miR-422a、miR-579、miR-642、miR-99a、miR-520D-3pおよびmiR-629、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択され、場合により前記追加の標的miRNAが、以下のmiRNA：miR-425-5p；miR-502；miR-21；およびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、請求項17または18に記載の治療用組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０５】
本発明のいずれかの態様と関連して本明細書中に行なわれる記述は、適切な場合、本発明のいずれかの他の態様に等しく適用できることが理解されるであろう。
本発明は、例えば以下の実施形態を包含する：
［実施形態１］被験体由来の体液サンプル中の少なくとも1種のmiRNAのレベルを決定するステップを含む、被験体での外傷性脳傷害（TBI）を診断および/またはモニタリングする方法。
［実施形態２］前記少なくとも1種のmiRNAが、以下のmiRNA：
miR-505、miR-203、miR-654-3p、miR-655、miR-184、miR-301b、miR-425-5p、miR-502、miR-21、miR-let-7g、miR-335、miR-126*、miR-193a-5p、miR-144*、miR-190、miR-194、miR-365、miR-590-3p、miR-624、miR-625*、miR-671-3p、hsa-let-7c-5p、hsa-let-7i-5p、miR-142-3p、miR-148a-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-181a-5p、miR-20a-5p、miR-20b-5p、miR-221-3p、miR-24-3p、miR-27b-3p、miR-29a-3p、miR-29c-3p、miR-424-5p、miR-30a-5p；miR-107；miR-135b-5p；miR-199b-5p；miR-324-5p；miR-652-3p；miR-10a、miR-132、miR-223、miR-143、miR-148b、miR-18a、miR-192、miR-429、miR-618、miR-95、miR-130a、miR-152、miR-27b、miR-301、miR-326、miR-345、miR-361、miR-422a、miR-579、miR-642、miR-99a、miR-520D-3pおよびmiR-629、またはいずれかのその組み合わせ
からなる群より選択される、実施形態1に記載の方法。
［実施形態３］前記少なくとも1種のmiRNAが、以下のmiRNA：miR-505、miR-203、miR-654-3p、miR-655、miR-184、miR-301b、miR-425-5p、miR-502、miR-21、miR-let-7g、miR-335、hsa-miR-126*、miR-193a-5p、miR-144*、miR-190、miR-194、miR-365、miR-590-3p、miR-624、miR-625*、およびmiR-671-3p、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、実施形態1または2に記載の方法。
［実施形態４］前記少なくとも1種のmiRNAが、以下のmiRNA：miR-505、miR-203、miR-654-3p、miR-655、miR-184、miR-301b、miR-425-5p、miR-502、miR-21、miR-let-7gおよびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、実施形態1〜3のいずれかに記載の方法。
［実施形態５］前記少なくとも1種のmiRNAが、以下のmiRNA：let-7c-5p、let-7i-5p、miR-142-3p、miR-148a-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-181a-5p、miR-20a-5p、miR-20b-5p、miR-221-3p、miR-24-3p、miR-27b-3p、miR-29a-3p、miR-29c-3p、およびmiR-424-5p；miR-30a-5p；miR-107；miR-135b-5p；miR-199b-5p；miR-324-5p；miR-652-3p、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、実施形態1または2に記載の方法。
［実施形態６］前記少なくとも1種のmiRNAが、以下のmiRNA：miR-10a、miR-132、miR-223、miR-143、miR-148b、miR-18a、miR-192、miR-429、miR-618、miR-95、miR-130a、miR-152、miR-194、miR-27b、miR-301、miR-326、miR-345、miR-361、miR-422a、miR-579、miR-642、miR-99a、miR-520D-3pおよびmiR-629、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、実施形態1または2に記載の方法。
［実施形態７］前記少なくとも1種のmiRNAが、以下のmiRNA：miR-425-5p；miR-502；miR-21；およびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、実施形態1〜4のいずれかに記載の方法。
［実施形態８］前記TBIが軽度TBI（mTBI）であり、かつ前記miRNAが、以下のmiRNA：miR-425-5pおよびmiR-502からなる群より選択される、実施形態7に記載の方法。
［実施形態９］miR-425-5pおよび/またはmiR-502のレベルが、所定の閾値未満であると決定されるか、または参照と比較して低下している場合に、前記被験体がmTBIを有すると診断される、実施形態8に記載の方法。
［実施形態１０］前記TBIが重度TBI（sTBI）であり、かつ前記miRNAが、以下のmiRNA：miR-21およびmiR-335からなる群より選択される、実施形態7に記載の方法。
［実施形態１１］miR-21およびmiR-335のレベルが、所定の閾値を超えると決定されるか、または参照と比較して増大している場合に、前記被験体がsTBIを有すると診断される、実施形態10に記載の方法。
［実施形態１２］以下のmiRNA：
(i) miR-425-5pおよびmiR-502から選択される、第1のmiRNA；および
(ii) miR-21およびmiR-335から選択される、第2のmiRNA
のレベルを決定するステップを含む、実施形態7に記載の方法。
［実施形態１３］miR-425-5pもしくはmiR-502のレベルが、所定の閾値未満であると決定されるか、または参照と比較して低下しており、かつ、miR-21もしくはmiR-335のレベルが、所定の閾値を超えると決定されるか、または参照と比較して増大している場合に、前記被験体が、いずれかの重症度のTBIを有すると診断される、実施形態12に記載の方法。
［実施形態１４］前記方法がTBIを診断するためのものであり、かつ、前記少なくとも1種のmiRNAのレベルが、傷害後48時間以下で前記被験体から取得された体液サンプル中で決定される、実施形態1〜13のいずれかに記載の方法。
［実施形態１５］前記体液サンプルが、唾液、血液、血漿または血清を含む、実施形態1〜14のいずれかに記載の方法。
［実施形態１６］前記体液サンプルが唾液である、実施形態15に記載の方法。
［実施形態１７］標的miRNAに対して特異的なプローブを用いて官能化されている基板を含む、TBIを診断および/またはモニタリングするための検出システム用センサー素子。
［実施形態１８］前記プローブが核酸を含む、実施形態17に記載のセンサー素子。
［実施形態１９］前記核酸が、前記標的miRNAの配列の相補体である配列に対して少なくとも80％同一である配列を含む、実施形態18に記載のセンサー素子。
［実施形態２０］前記基板が、金属、プラスチック、ガラス、シリカ、シリコン、黒鉛もしくはグラフェン、またはいずれかのその組み合わせから形成される、実施形態17〜19のいずれかに記載のセンサー素子。
［実施形態２１］以下の構成要素：
・実施形態17〜20のいずれかに記載のセンサー素子；および
・前記プローブに対する標的miRNAの結合を検出することが可能である検出デバイスを備えた、TBIを診断および/またはモニタリングするための検出システム。
［実施形態２２］標的miRNAに対して特異的な少なくとも1種のプローブを含む、被験体由来の体液サンプル中で外傷性脳傷害（TBI）を診断および/またはモニタリングする方法での使用のためのキット。
［実施形態２３］以下のステップ：
被験体由来の体液サンプル中の少なくとも1種のmiRNAのレベルを決定するステップ；および
該少なくとも1種のmiRNAのレベルに基づいて、TBIを軽減させるための療法を施すことが適切であるか否かを決定するステップ
を含む、TBIを軽減させるための療法を被験体に施すことが適切であるか否かを決定するための方法。
［実施形態２４］被験体由来の体液サンプル中の少なくとも1種のmiRNAのレベルを決定することにより、該被験体がTBIを有するか否かを特定するステップを含む、TBIに罹患していることが疑われる被験体の適切な処置を決定する方法。
［実施形態２５］前記被験体がTBIを有すると特定される場合に、適切な処置が、以下の処置：該被験体をさらに評価すること；該被験体を活動から除外すること；該被験体を病院または外来に収容すること；および該被験体に対して、TBIを軽減させるための療法を施すこと、のうちの少なくとも1つであると決定される、実施形態24に記載の方法。
［実施形態２６］それを必要とする被験体を処置する方法での使用のための、TBIを軽減させるための療法であって、該被験体由来の体液サンプル中の少なくとも1種のmiRNAのレベルを決定することにより、該被験体がTBIを有すると特定される、上記療法。
［実施形態２７］TBIを軽減させるための前記療法が、以下の療法：神経保護薬、鎮静剤；および昇圧蘇生（hypertensive resuscitation）の使用の回避のうちの少なくとも1種から選択される、実施形態24〜26のいずれかに記載の方法。
［実施形態２８］標的miRNAに対して特異的なプローブを含む、被験体での外傷性脳傷害（TBI）を診断および/またはモニタリングする方法での使用のための組成物。
［実施形態２９］複数のプローブを含む、実施形態28に記載の組成物。
［実施形態３０］前記miRNAが、以下のmiRNA：miR-505、miR-203、miR-654-3p、miR-655、miR-184、miR-301b、miR-425-5p、miR-502、miR-21、miR-let-7g、miR-335、miR-126*、miR-193a-5p、miR-144*、miR-190、miR-194、miR-365、miR-590-3p、miR-624、miR-625*、miR-671-3p、hsa-let-7c-5p、hsa-let-7i-5p、miR-142-3p、miR-148a-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-181a-5p、miR-20a-5p、miR-20b-5p、miR-221-3p、miR-24-3p、miR-27b-3p、miR-29a-3p、miR-29c-3p、miR-30a-5p；miR-107；miR-135b-5p；miR-199b-5p；miR-324-5p；miR-652-3p、miR-424-5p、miR-10a、miR-132、miR-223、miR-143、miR-148b、miR-18a、miR-192、miR-429、miR-618、miR-95、miR-130a、miR-152、miR-27b、miR-301、miR-326、miR-345、miR-361、miR-422a、miR-579、miR-642、miR-99a、miR-520D-3pおよびmiR-629、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、実施形態17〜29のいずれかに記載のセンサー素子、検出システム、キット、方法または組成物。
［実施形態３１］前記miRNAが、以下のmiRNA：miR-425-5p；miR-502；miR-21；およびmiR-335、またはいずれかのその組み合わせからなる群より選択される、実施形態30に記載のセンサー素子、検出システム、キット、方法または組成物。