【手続補正書】
【提出日】令和2年4月2日(2020.4.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有するバリアントを含む変異体ライセニンモノマーであって、前記バリアントは、９つのモノマーを含むポアを形成することが可能であり、かつ、Ｔ１０６またはＴ１０４の位置において修飾を含む、変異体ライセニンモノマー。
【請求項２】
前記バリアントが、Ｅ９４の位置において修飾を含む、請求項１に記載の変異体モノマー。
【請求項３】
前記バリアントが、Ｋ３７、Ｇ４３、Ｋ４５、Ｖ４７、Ｓ４９、Ｔ５１、Ｈ８３、Ｖ８８、Ｔ９１、Ｔ９３、Ｖ９５、Ｙ９６、Ｓ９８、Ｋ９９、Ｖ１００、Ｉ１０１、Ｐ１０８、Ｐ１０９、Ｔ１１０、Ｓ１１１、Ｋ１１２、及びＴ１１４から選択される位置のうちの１つ以上における修飾を含む、請求項１または請求項２に記載の変異体モノマー。
【請求項４】
前記バリアントが、以下の置換：
Ｄ３５Ｎ／Ｓ；
Ｋ３７Ｎ／Ｗ／Ｓ／Ｑ；
Ｇ４３Ｋ；
Ｋ４５Ｄ／Ｒ／Ｎ／Ｑ／Ｔ／Ｙ；
Ｖ４７Ｋ／Ｓ／Ｎ；
Ｓ４９Ｋ／Ｌ；
Ｔ５１Ｋ；
Ｓ７４Ｋ／Ｒ；
Ｅ７６Ｄ／Ｎ；
Ｓ７８Ｒ／Ｋ／Ｎ／Ｑ；
Ｓ８０Ｋ／Ｒ／Ｎ／Ｑ；
Ｓ８２Ｋ／Ｒ／Ｎ／Ｑ；
Ｈ８３Ｓ／Ｋ；
Ｅ８４Ｒ／Ｋ／Ｎ／Ａ；
Ｅ８５Ｎ；
Ｓ８６Ｋ／Ｑ、好ましくは、Ｓ８６Ｋ；
Ｖ８８Ｉ／Ｔ；
Ｓ８９Ｋ；
Ｍ９０Ｋ／Ｉ／Ａ；
Ｔ９１ＫまたはＴ９１Ｓ；
Ｅ９２Ｄ／Ｓ、好ましくは、Ｅ９２Ｄ；
Ｔ９３Ｋ；
Ｅ９４Ｄ／Ｑ／Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｒ／Ｓ／Ｎ、好ましくは、Ｅ９４Ｄ／Ｑ／Ｋ／Ｎ；
Ｖ９５Ｓ；
Ｙ９６ＤまたはＹ９６Ｓ；
Ｓ９８ＫまたはＳ９８Ｑ；
Ｋ９９Ｑ／ＬまたはＫ９９Ｓ；
Ｖ１００Ｓ；
Ｉ１０１Ｓ；
Ｅ１０２Ｎ／Ｑ／Ｄ／Ｓ；
Ｔ１０４Ｒ／Ｋ／Ｑ；
Ｔ１０６Ｒ／Ｋ／Ｑ；
Ｐ１０８Ｋ／Ｒ；
Ｐ１０９Ｋ；
Ｔ１１０Ｋ／Ｒ；
Ｓ１１１Ｋ；
Ｋ１１２Ｓ；
Ｔ１１４Ｋ；
Ｒ１１５Ｓ；
Ｑ１１７Ｓ；および
Ｎ１１９Ｓ
のうちの１つ以上を含む、請求項１または２に記載の変異体モノマー。
【請求項５】
前記バリアントが、以下の位置の組み合わせのうちの１つ以上における修飾を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の変異体モノマー：
Ｅ９４／Ｋ９９／Ｔ１０６；
Ｅ９４／Ｔ９３／Ｔ１０６；
Ｅ９４／Ｔ９１／Ｔ１０６；
Ｈ８３／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｅ９４／Ｙ９６／Ｔ１０６；
Ｋ４５／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｅ９４／Ｓ９８／Ｋ９９／Ｔ１０６；
Ｋ３７／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｋ４５／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｋ３７／Ｅ９４／Ｅ１０２／Ｔ１０６；
Ｋ３７／Ｅ９４／Ｔ１０４／Ｔ１０６；
Ｋ４５／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｋ４５／Ｖ４７／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｖ４７／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｔ５１／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｋ４５／Ｓ４９／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｓ４９／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｋ４５／Ｔ１０６；
Ｇ４３／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｖ８８／Ｍ９０／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｖ４７／Ｖ８８／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｋ４５／Ｓ４９／Ｅ９４／Ｅ９２／Ｔ１０６；
Ｋ４５／Ｖ４７／Ｅ９２／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｅ９４／Ｋ９９／Ｔ１０６；
Ｄ３５／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｋ３７／Ｅ９４／Ｅ１０２／Ｔ１０６；
Ｋ４５／Ｓ４９／Ｅ９２／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｔ５１／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６；
Ｅ８５／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｍ９０／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｔ９１／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｅ９２／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｔ９３／Ｅ９４／Ｔ１０６；
Ｅ９４／Ｔ１０４；および
Ｅ９４／Ｔ１０６。
【請求項６】
前記バリアントが、以下の置換の組み合わせのうちの１つ以上を含む、請求項５に記載の変異体モノマー：
Ｅ９４Ｄ／Ｋ９９Ｑ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ９４Ｄ／Ｔ９３Ｋ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ９４Ｄ／Ｔ９１Ｋ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｈ８３Ｋ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ９４Ｑ／Ｙ９６Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ４５Ｄ／Ｅ９４Ｋ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ４５Ｒ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ９４Ｄ／Ｓ９８Ｋ／Ｋ９９Ｌ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ３７Ｎ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ３７Ｗ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ３７Ｓ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ４５Ｎ／Ｅ９４Ｎ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ３７Ｑ／Ｅ９４Ｄ／Ｅ１０２Ｎ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ３７Ｓ／Ｅ９４Ｄ／Ｅ１０２Ｓ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ３７Ｓ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０４Ｋ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ４５Ｑ／Ｅ９４Ｑ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ４５Ｔ／Ｖ４７Ｋ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｖ４７Ｓ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｔ５１Ｋ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ４５Ｙ／Ｓ４９Ｋ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｓ４９Ｌ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ４５Ｒ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｖ４７Ｋ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｇ４３Ｋ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｖ８８Ｉ／Ｍ９０Ａ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｖ４７Ｎ／Ｖ８８Ｔ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ４５Ｎ／Ｓ４９Ｋ／Ｅ９４Ｎ／Ｅ９２Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｋ４５Ｎ／Ｖ４７Ｋ／Ｅ９２Ｄ／Ｅ９４Ｎ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ９４Ｄ／Ｋ９９Ｑ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｒ；
Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０４Ｒ；
Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０４Ｋ；
Ｅ９４Ｑ／Ｔ１０４Ｑ；
Ｅ９４Ｑ／Ｔ１０６Ｑ；
Ｅ９４Ｄ／Ｍ９０Ｋ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ８５Ｎ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｄ３５Ｎ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｄ３５Ｓ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ９２Ｄ／Ｅ９４Ｑ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ９４Ｑ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｍ９０Ｉ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｓ８２Ｋ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｍ９０Ｋ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｔ９１Ｋ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｔ９３Ｋ／Ｅ９４Ｄ／Ｔ１０６Ｋ；
Ｅ９４Ｑ／Ｔ１０６Ｑ；および
Ｅ９４Ｑ／Ｔ１０６Ｋ。
【請求項７】
前記モノマーが、任意の数及び任意の組み合わせの、請求項１〜６のいずれか１項に定義される修飾及び／または置換を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異体ライセニンモノマー。
【請求項８】
前記バリアントにおいて、（ａ）配列番号２の３４位〜７０位のアミノ酸に対応するアミノ酸のうちの２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、または２０個が欠失されており、（ｂ）配列番号２の７１位〜１０７位のアミノ酸に対応するアミノ酸のうちの２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、または２０個が欠失されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載の変異体ライセニンモノマー。
【請求項９】
配列番号２中の以下のアミノ酸に対応するアミノ酸が欠失されている、請求項８に記載の変異体モノマー：
（ｉ）Ｎ４６／Ｖ４７／Ｔ９１／Ｔ９２、または
（ｉｉ）Ｎ４８／Ｓ４９／Ｔ９１／Ｔ９２。
【請求項１０】
前記バリアントが、
配列番号２の以下の位置、（ａ）Ｅ８４、Ｅ８５、Ｅ９２、Ｅ９７、及びＤ１２６、（ｂ）Ｅ８５、Ｅ９７、及びＤ１２６、もしくは（ｃ）Ｅ８４及びＥ９２のうちの１つ以上における置換、または
Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｋ／Ｅ９２Ｑ／Ｅ９７Ｓ／Ｄ１２６Ｇのうちの１つ以上、もしくは、適切な場合、Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｋ／Ｅ９２Ｑ／Ｅ９７Ｓ／Ｄ１２６Ｇの全てにおける置換、をさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の変異体モノマー。
【請求項１１】
前記バリアントが、
Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｋ／Ｅ９２Ｑ／Ｅ９４Ｄ／Ｅ９７Ｓ／Ｔ１０６Ｋ／Ｄ１２６Ｇ
を含む、請求項１０に記載の変異体モノマー。
【請求項１２】
前記変異体が、化学修飾されている、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の変異体モノマー。
【請求項１３】
ライセニンに由来する２つ以上の共有結合したモノマーを含む構造体であって、前記モノマーのうちの少なくとも１つが請求項１〜１２のいずれか１項に定義される変異体ライセニンモノマーである、構造体。
【請求項１４】
前記２つ以上のモノマーが、遺伝的に融合されている、請求項１３に記載の構造体。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の変異体ライセニンモノマーまたは請求項１３に記載の構造体をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の少なくとも１つの変異体ライセニンモノマー及び／または請求項１３または１４に記載の少なくとも１つの構造体を含む、ポア。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の６〜１２個の変異体ライセニンモノマーを含むホモオリゴマーポアである、請求項１６に記載のポア。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の少なくとも１つの変異体ライセニンモノマーを含むヘテロオリゴマーポアである、請求項１６に記載のポア。
【請求項１９】
標的分析物を特徴付ける方法であって、
（ａ）前記標的分析物を、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のポアと、前記標的分析物が前記ポアを通って移動するように接触させることと、
（ｂ）前記分析物が前記ポアに対して移動する間に、１つ以上の測定値であって、前記標的分析物の１つ以上の特徴を示す、測定値をとり、それによって前記標的分析物を特徴付けることと、を含む、方法。
【請求項２０】
（ｉ）前記ポアが、チャンバを２つの区画に分離する膜内に存在し、各区画が水溶液を含み、
（ｉｉ）ステップ（ａ）が、１つの区画に前記分析物を提供することを含み、
（ｉｉｉ）ステップ（ｂ）が、前記膜にわたって電位差を印加することを含み、及び／または
（ｉｖ）ステップ（ｃ）が、前記膜にわたる電流を測定することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記標的分析物が、金属イオン、無機塩、ポリマー、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、染料、漂白剤、医薬品、診断薬、レクリエーショナルドラッグ、爆発物、または環境汚染物質である、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記標的分析物が、標的ポリヌクレオチドである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ステップ（ａ）が、前記標的ポリヌクレオチドを前記ポア及びポリヌクレオチド結合タンパク質と接触させることを含み、前記タンパク質が前記ポアを通る前記標的ポリヌクレオチドの移動を制御する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記標的ポリヌクレオチドを特徴付けることが、前記標的ポリヌクレオチドの配列を推定することまたは前記標的ポリヌクレオチドをシークエンシングすることを含む、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
標的ポリヌクレオチドを特徴付けるためのセンサを形成する方法であって、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のポアとポリヌクレオチド結合タンパク質との間で複合体を形成し、それにより前記標的ポリヌクレオチドを特徴付けるためのセンサを形成することを含む、方法。
【請求項２６】
前記複合体が、（ａ）前記標的ポリヌクレオチドの存在下で前記ポア及び前記ポリヌクレオチド結合タンパク質を接触させることと、（ａ）前記ポアにわたって電位を印加することと、によって形成される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記電位が、電圧電位または化学的電位である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記複合体が、前記ポアを前記ポリヌクレオチド結合タンパク質に共有結合させることによって形成される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
標的ポリヌクレオチドを特徴付けるためのセンサであって、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のポアとポリヌクレオチド結合タンパク質との間の複合体を含む、センサ。
【請求項３０】
標的分析物を特徴付けるための、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のポアの使用。
【請求項３１】
（ａ）請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のポアと、（ｂ）膜とを含む、標的ポリヌクレオチドを特徴付けるためのキット。
【請求項３２】
前記キットが、両親媒性層を含むチップをさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
（ａ）請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の複数のポアと、（ｂ）複数のポリヌクレオチド結合タンパク質とを含む、試料中の標的ポリヌクレオチドを特徴付けるための装置。
【請求項３４】
配列番号２に示される配列を含むライセニンモノマーのポリヌクレオチドを特徴付ける能力を改善する方法であって、請求項１〜１２のいずれか１項に定義される前記修飾及び／または置換のうちの１つ以上を行うことを含む、方法。
【請求項３５】
請求項１３または１４に記載の構造体を生成する方法であって、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の少なくとも１つの変異体ライセニンモノマーを、ライセニン由来の１つ以上のモノマーに共有結合させることを含む、方法。
【請求項３６】
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のポアを形成する方法であって、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の少なくとも１つの変異体モノマーまたは請求項１３または１４に記載の少なくとも１つの構造体を、十分な数の、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のモノマー、請求項１３または１４に記載の構造体、及び／またはライセニン由来のモノマーとオリゴマー形成させて、ポアを形成することを含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３３８】
実施例３に説明されるものと同様の実験を、Ｅ９２Ｃ（変異Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｓ／Ｅ９２Ｃ／Ｅ９４Ｄ／Ｅ９７Ｓ／Ｔ１０６Ｋ／Ｄ１２６Ｇ／Ｃ２７２Ａ／Ｃ２８３Ａを有する配列番号２を介して結合された２−ヨード−Ｎ−（２−フェニルエチル）アセトアミドを有するライセニン−（Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｓ／Ｅ９２Ｃ／Ｅ９４Ｄ／Ｅ９７Ｓ／Ｔ１０６Ｋ／Ｄ１２６Ｇ／Ｃ２７２Ａ／Ｃ２８３Ａ）９及びＥ９２Ｃ（変異Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｓ／Ｅ９２Ｃ／Ｅ９４Ｄ／Ｅ９７Ｓ／Ｔ１０６Ｋ／Ｄ１２６Ｇ／Ｃ２７２Ａ／Ｃ２８３Ａを有する配列番号２）を介して結合された１−ベンジル−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンを有するライセニン−（Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｓ／Ｅ９２Ｃ／Ｅ９４Ｄ／Ｅ９７Ｓ／Ｔ１０６Ｋ／Ｄ１２６Ｇ／Ｃ２７２Ａ／Ｃ２８３Ａ）上で実施した。
本発明は、以下の態様を包含し得る。
［１］
配列番号２に示されるアミノ酸配列のバリアントを含む変異体ライセニンモノマーであって、前記バリアントが、以下の位置、Ｋ３７、Ｇ４３、Ｋ４５、Ｖ４７、Ｓ４９、Ｔ５１、Ｈ８３、Ｖ８８、Ｔ９１、Ｔ９３、Ｖ９５、Ｙ９６、Ｓ９８、Ｋ９９、Ｖ１００、Ｉ１０１、Ｐ１０８、Ｐ１０９、Ｔ１１０、Ｓ１１１、Ｋ１１２、及びＴ１１４のうちの１つ以上における修飾を含む、変異体ライセニンモノマー。
［２］
前記バリアントが、以下の位置、Ｔ９１、Ｖ９５、Ｙ９６、Ｓ９８、Ｋ９９、Ｖ１００、Ｉ１０１、及びＫ１１２のうちの１つ以上における修飾を含む、上記［１］に記載の変異体モノマー。
［３］
前記修飾が、セリン（Ｓ）またはグルタミン（Ｑ）による置換である、上記［２］に記載の変異体モノマー。
［４］
前記バリアントが、以下の置換、Ｔ９１Ｓ、Ｖ９５Ｓ、Ｙ９６Ｓ、Ｓ９８Ｑ、Ｋ９９Ｓ
、Ｖ１００Ｓ、Ｉ１０１Ｓ、及びＫ１１２Ｓのうちの１つ以上を含む、上記［２］または［３］に記載の変異体モノマー。
［５］
前記バリアントが、以下の位置、Ｋ３７、Ｇ４３、Ｋ４５、Ｖ４７、Ｓ４９、Ｔ５１、Ｈ８３、Ｖ８８、Ｔ９１、Ｔ９３、Ｙ９６、Ｓ９８、Ｋ９９、Ｐ１０８、Ｐ１０９、Ｔ１１０、Ｓ１１１、及びＴ１１４のうちの１つ以上における修飾を含む、上記［１］に記載の変異体モノマー。
［６］
前記修飾が、アスパラギン（Ｎ）、トリプトファン（Ｗ）、セリン（Ｓ）、グルタミン（Ｑ）、リジン（Ｋ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、トレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、ロイシン（Ｌ）、またはイソロイシン（Ｉ）による置換である、上記［５］に記載の変異体モノマー。
［７］
前記バリアントが、以下の置換、Ｋ３７Ｎ／Ｗ／Ｓ／Ｑ、Ｇ４３Ｋ、Ｋ４５Ｄ／Ｒ／Ｎ／Ｑ／Ｔ／Ｙ、Ｖ４７Ｋ／Ｓ／Ｎ、Ｓ４９Ｋ／Ｌ、Ｔ５１Ｋ、Ｈ８３Ｓ／Ｋ、Ｖ８８Ｉ／Ｔ、Ｔ９１Ｋ、Ｔ９３Ｋ、Ｙ９６Ｄ、Ｓ９８Ｋ、Ｋ９９Ｑ／Ｌ、Ｐ１０８Ｋ／Ｒ、Ｐ１０９Ｋ、Ｔ１１０Ｋ／Ｒ、Ｓ１１１Ｋ、及びＴ１１４Ｋのうちの１つ以上を含む、上記［５］または［６］に記載の変異体モノマー。
［８］
前記バリアントが、以下の位置の組み合わせのうちの１つ以上における修飾を含む、上記［５］〜［７］のいずれか１項に記載の変異体モノマー：
【表１６】
2019520035.tif 000001
［９］
前記バリアントが、以下の置換の組み合わせのうちの１つ以上を含む、上記［８］に記載の変異体モノマー：
【表１７】
2019520035.tif 000002
［１０］
配列番号２に示されるアミノ酸配列のバリアントを含む変異体ライセニンモノマーであって、前記バリアントが、以下の置換のうちの１つ以上を含む、変異体ライセニンモノマー：
Ｄ３５Ｎ／Ｓ、
Ｓ７４Ｋ／Ｒ、
Ｅ７６Ｄ／Ｎ、
Ｓ７８Ｒ／Ｋ／Ｎ／Ｑ、
Ｓ８０Ｋ／Ｒ／Ｎ／Ｑ、
Ｓ８２Ｋ／Ｒ／Ｎ／Ｑ、
Ｅ８４Ｒ／Ｋ／Ｎ／Ａ、
Ｅ８５Ｎ、
Ｓ８６Ｋ／Ｑ、
Ｓ８９Ｋ、
Ｍ９０Ｋ／Ｉ／Ａ、
Ｅ９２Ｄ／Ｓ、
Ｅ９４Ｄ／Ｑ／Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｒ／Ｓ／Ｎ、
Ｅ１０２Ｎ／Ｑ／Ｄ／Ｓ、
Ｔ１０４Ｒ／Ｋ／Ｑ、
Ｔ１０６Ｒ／Ｋ／Ｑ、
Ｒ１１５Ｓ、
Ｑ１１７Ｓ、及び
Ｎ１１９Ｓ。
［１１］
前記バリアントが、置換Ｅ９４Ｄ／Ｑ／Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｒ／Ｓ、Ｓ８６Ｑ、及びＥ９２Ｓのうちの１つ以上を含む、上記［１０］に記載の変異体モノマー。
［１２］
前記バリアントが、以下の置換のうちの１つ以上を含む、上記［１０］に記載の変異体モノマー：
Ｄ３５Ｎ／Ｓ、
Ｓ７４Ｋ／Ｒ、
Ｅ７６Ｄ／Ｎ、
Ｓ７８Ｒ／Ｋ／Ｎ／Ｑ、
Ｓ８０Ｋ／Ｒ／Ｎ／Ｑ、
Ｓ８２Ｋ／Ｒ／Ｎ／Ｑ、
Ｅ８４Ｒ／Ｋ／Ｎ／Ａ、
Ｅ８５Ｎ、
Ｓ８６Ｋ、
Ｓ８９Ｋ、
Ｍ９０Ｋ／Ｉ／Ａ、
Ｅ９２Ｄ、
Ｅ９４Ｄ／Ｑ／Ｋ／Ｎ、
Ｅ１０２Ｎ／Ｑ／Ｄ／Ｓ、
Ｔ１０４Ｒ／Ｋ／Ｑ、
Ｔ１０６Ｒ／Ｋ／Ｑ、
Ｒ１１５Ｓ、
Ｑ１１７Ｓ、及び
Ｎ１１９Ｓ。
［１３］
前記バリアントが、以下の置換の組み合わせのうちの１つ以上を含む、上記［１２］に記載の変異体モノマー：
【表１８】
2019520035.tif 000003
2019520035.tif 000004
［１４］
配列番号２に示されるアミノ酸配列のバリアントを含む変異体ライセニンモノマーであって、前記バリアントが、以下の位置の組み合わせのうちの１つ以上における変異を含む、変異体ライセニンモノマー：
【表１９】
2019520035.tif 000005
［１５］
前記バリアントが、以下の置換の組み合わせのうちの１つ以上を含む、上記［１４］に記載の変異体モノマー：
【表２０】
2019520035.tif 000006
2019520035.tif 000007
［１６］
配列番号２に示されるアミノ酸配列のバリアントを含む変異体ライセニンモノマーであって、前記バリアントが、以下の置換の対のうちの１つ以上を含む、変異体ライセニンモノマー：
Ｅ８４Ｒ／Ｅ９４Ｄ、
Ｅ８４Ｋ／Ｅ９４Ｄ、
Ｅ８４Ｎ／Ｅ９４Ｄ、
Ｅ８４Ａ／Ｅ９４Ｑ、
Ｅ８４Ｋ／Ｅ９４Ｑ、及び
Ｅ９４Ｑ／Ｄ１２１Ｓ。
［１７］
前記モノマーが、任意の数及び任意の組み合わせの、上記［１］〜［１６］のいずれか１項に定義される修飾及び／または置換を含む、上記［１］〜［１６］のいずれか１項に記載の変異体ライセニンモノマー。
［１８］
配列番号２に示される配列のバリアントを含む変異体ライセニンモノマーであって、前記バリアントにおいて、（ａ）配列番号２の３４位〜７０位のアミノ酸に対応するアミノ酸のうちの２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、または２０個が欠失されており、（ｂ）配列番号２の７１位〜１０７位のアミノ酸に対応するアミノ酸のうちの２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、または２０個が欠失されている、変異体ライセニンモノマー。
［１９］
（ａ）及び（ｂ）において同じ数のアミノ酸が欠失されている、上記［１８］に記載の変異体モノマー。
［２０］
欠失されている前記アミノ酸の前記位置が、表１もしくは２の１行または表１及び／もしくは２の２行以上に示されている、上記［１８］または［１９］に記載の変異体。
［２１］
配列番号２中の以下のアミノ酸に対応するアミノ酸が欠失されている、上記［１８］〜［２０］のいずれか１項に記載の変異体モノマー：
（ｉ）Ｎ４６／Ｖ４７／Ｔ９１／Ｔ９２、または
（ｉｉ）Ｎ４８／Ｓ４９／Ｔ９１／Ｔ９２。
［２２］
前記バリアントが、適切な場合、上記［１］〜［１７］のいずれか１項に定義される前記修飾及び／または置換のうちのいずれかをさらに含む、上記［１８］〜［２１］のいずれか１項に記載の変異体モノマー。
［２３］
前記バリアントが、
配列番号２の以下の位置、（ａ）Ｅ８４、Ｅ８５、Ｅ９２、Ｅ９７、及びＤ１２６、（ｂ）Ｅ８５、Ｅ９７、及びＤ１２６、もしくは（ｃ）Ｅ８４及びＥ９２のうちの１つ以上における置換、または
Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｋ／Ｅ９２Ｑ／Ｅ９７Ｓ／Ｄ１２６Ｇのうちの１つ以上、もしくは、適切な場合、Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｋ／Ｅ９２Ｑ／Ｅ９７Ｓ／Ｄ１２６Ｇの全てにおける置換、をさらに含む、上記［１］〜［２２］のいずれか１項に記載の変異体モノマー。
［２４］
前記バリアントが、以下の置換の組み合わせのうちの１つを含む、上記［２３］に記載の変異体モノマー：
Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｋ／Ｅ９２Ｑ／Ｅ９４Ｄ／Ｅ９７Ｓ／Ｄ１２６Ｇ、
Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｋ／Ｅ９２Ｑ／Ｅ９４Ｑ／Ｅ９７Ｓ／Ｄ１２６Ｇ、または
Ｅ８４Ｑ／Ｅ８５Ｋ／Ｅ９２Ｑ／Ｅ９４Ｄ／Ｅ９７Ｓ／Ｔ１０６Ｋ／Ｄ１２６Ｇ。
［２５］
ポアを形成することが可能である、上記［１］〜［２４］のいずれか１項に記載の変異体ライセニンモノマー。
［２６］
前記バリアントが、配列番号２に示される配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む、上記［１］に記載の変異体ライセニンモノマー。
［２７］
ライセニンに由来する２つ以上の共有結合したモノマーを含む構造体であって、前記モノマーのうちの少なくとも１つが上記［１］〜［２６］のいずれか１項に定義される変異体ライセニンモノマーである、構造体。
［２８］
前記２つ以上のモノマーが、同じであるか、または異なる、上記［２７］に記載の構造体。
［２９］
前記２つ以上のモノマーが、遺伝的に融合されている、上記［２７］または［２８］に記載の構造体。
［３０］
上記［１］〜［２６］のいずれか１項に記載の変異体ライセニンモノマーまたは上記［２７］に記載の構造体をコードする、ポリヌクレオチド。
［３１］
上記［１］〜［２６］のいずれか１項に記載の少なくとも１つの変異体ライセニンモノマー及び／または上記［２７］〜［２９］のいずれか１項に記載の少なくとも１つの構造体を含む、ポア。
［３２］
上記［１］〜［２６］のいずれか１項に記載の６〜１２個の変異体ライセニンモノマーを含むホモオリゴマーポアである、上記［３１］に記載のポア。
［３３］
上記［１］〜［２６］のいずれか１項に記載の少なくとも１つの変異体ライセニンモノマーを含むヘテロオリゴマーポアである、上記［３１］に記載のポア。
［３４］
標的分析物を特徴付ける方法であって、
（ａ）前記標的分析物を、上記［３１］〜［３３］のいずれか１項に記載のポアと、前記標的分析物が前記ポアを通って移動するように接触させることと、
（ｂ）前記分析物が前記ポアに対して移動する間に、１つ以上の測定値であって、前記標的分析物の１つ以上の特徴を示す、測定値をとり、それによって前記標的分析物を特徴付けることと、を含む、方法。
［３５］
（ｉ）前記ポアが、チャンバを２つの区画に分離する膜内に存在し、各区画が水溶液を含み、
（ｉｉ）ステップ（ａ）が、１つの区画に前記分析物を提供することを含み、
（ｉｉｉ）ステップ（ｂ）が、前記膜にわたって電位差を印加することを含み、及び／または
（ｉｖ）ステップ（ｃ）が、前記膜にわたる電流を測定することを含む、上記［３４］に記載の方法。
［３６］
前記標的分析物が、金属イオン、無機塩、ポリマー、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、染料、漂白剤、医薬品、診断薬、レクリエーショナルドラッグ、爆発物、または環境汚染物質である、上記［３４］または［３５］に記載の方法。
［３７］
前記標的分析物が、標的ポリヌクレオチドである、上記［３６］に記載の方法。
［３８］
ステップ（ａ）が、前記標的ポリヌクレオチドを前記ポア及びポリヌクレオチド結合タンパク質と接触させることを含み、前記タンパク質が前記ポアを通る前記標的ポリヌクレオチドの移動を制御する、上記［３７］に記載の方法。
［３９］
前記標的ポリヌクレオチドを特徴付けることが、前記標的ポリヌクレオチドの配列を推定することまたは前記標的ポリヌクレオチドをシークエンシングすることを含む、上記［３７］または［３８］に記載の方法。
［４０］
標的ポリヌクレオチドを特徴付けるためのセンサを形成する方法であって、上記［３１］〜［３３］のいずれか１項に記載のポアとポリヌクレオチド結合タンパク質との間で複合体を形成し、それにより前記標的ポリヌクレオチドを特徴付けるためのセンサを形成することを含む、方法。
［４１］
前記複合体が、（ａ）前記標的ポリヌクレオチドの存在下で前記ポア及び前記ポリヌクレオチド結合タンパク質を接触させることと、（ａ）前記ポアにわたって電位を印加することと、によって形成される、上記［４０］に記載の方法。
［４２］
前記電位が、電圧電位または化学的電位である、上記［４１］に記載の方法。
［４３］
前記複合体が、前記ポアを前記ポリヌクレオチド結合タンパク質に共有結合させることによって形成される、上記［４０］に記載の方法。
［４４］
標的ポリヌクレオチドを特徴付けるためのセンサであって、上記［３１］〜［３３］のいずれか１項に記載のポアとポリヌクレオチド結合タンパク質との間の複合体を含む、センサ。
［４５］
標的分析物を特徴付けるための、上記［３１］〜［３３］のいずれか１項に記載のポアの使用。
［４６］
（ａ）上記［３１］〜［３３］のいずれか１項に記載のポアと、（ｂ）膜とを含む、標的ポリヌクレオチドを特徴付けるためのキット。
［４７］
前記キットが、両親媒性層を含むチップをさらに含む、上記［４６］に記載のキット。
［４８］
（ａ）上記［３１］〜［３３］のいずれか１項に記載の複数のポアと、（ｂ）複数のポリヌクレオチド結合タンパク質とを含む、試料中の標的ポリヌクレオチドを特徴付けるための装置。
［４９］
配列番号２に示される配列を含むライセニンモノマーのポリヌクレオチドを特徴付ける能力を改善する方法であって、上記［１］〜［２６］のいずれか１項に定義される前記修飾及び／または置換のうちの１つ以上を行うことを含む、方法。
［５０］
上記［２７］〜［３０］のいずれか１項に記載の構造体を生成する方法であって、上記［１］〜［２６］のいずれか１項に記載の少なくとも１つの変異体ライセニンモノマーを、ライセニン由来の１つ以上のモノマーに共有結合させることを含む、方法。
［５１］
上記［３１］〜［３３］のいずれか１項に記載のポアを形成する方法であって、上記［１］〜［２６］のいずれか１項に記載の少なくとも１つの変異体モノマーまたは上記［２７］〜［３０］のいずれか１項に記載の少なくとも１つの構造体を、十分な数の、上記［１］〜［２６］のいずれか１項に記載のモノマー、上記［２７］〜［３０］のいずれか１項に記載の構造体、及び／またはライセニン由来のモノマーとオリゴマー形成させて、ポアを形成することを含む、方法。