【手続補正書】
【提出日】令和2年4月23日(2020.4.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バイオ人工肺臓器を提供する方法であって、
ヒトドナーから増殖性の基底幹細胞集団を提供するステップであって、前記細胞が、Ｋｒｔ５+ｐ６３+細胞である、ステップと；
最大５回の継代で、前記細胞を培養において維持および増大させるステップであって、細胞が６０〜１００％コンフルエンシーで継代されるステップと；
気道および血管系を含む無細胞肺組織マトリックスを提供するステップであって、前記肺組織マトリックスが、外から添加したテネイシン−ｃまたは外から添加したフィブリリン−２の１つまたは両方を含むステップと；
前記肺組織マトリックスに、前記気道を通して前記幹細胞を、および前記血管系を通して内皮細胞を播種するステップと；
ｎｏｔｃｈ阻害剤を含む液体培地を使用して、あらかじめ選択された程度に臓器を成熟させるために十分な時間、前記肺組織マトリックスに湿式換気を提供することを含む条件で前記マトリックスを臓器チャンバーに維持するステップと、
を含む方法。
【請求項２】
前記臓器チャンバーが、各々がチャンバー圧センサーによって伝達されるデータに反応して二方向排液ポンプを制御する制御モジュールによって制御されるチャンバー圧センサーと二方向排液チャンバーポンプとを備える、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記肺組織マトリックスの肺静脈に接続された静脈ラインにおける圧力レベルを培地リザーバーにおける圧力レベルと平衡にすることによって、肺内外圧差を防止するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記臓器チャンバーが、前記臓器チャンバーに接続された空気圧制御モジュールをさらに備え、前記空気圧制御モジュールが、
吸気相の間、前記臓器チャンバーにおいて陰圧を生成し；
平衡相の間、前記臓器チャンバー圧を維持し；および
呼気相の間、前記臓器チャンバーにおいて陽圧を生成する、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
湿式換気が、
前記肺組織マトリックスの気道にも接続された気管ラインであって、コントローラーに接続された二方向気管ポンプを含む前記気管ラインを、培地リザーバーに接続するステップと；
前記二方向気管ポンプを使用して前記肺組織マトリックスを培地によって膨らませるステップと；
前記二方向気管ポンプを使用し前記肺組織マトリックスから培地を引き抜いて、前記肺組織マトリックスをしぼませるステップとを含み、
前記培地が湿式換気の間、絶えず補充される、
請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記湿式換気が、
前記肺組織マトリックスの気道にも接続された気管ラインであって、各々がコントローラーに接続された第１のポンプと第２のポンプとを含む前記気管ラインを、培地リザーバーに接続するステップと；
前記第１のポンプを使用して、前記肺組織マトリックスを培地によって膨らませるステップと；
前記第２のポンプを使用し前記肺組織マトリックスから培地を引き抜いて、前記肺組織マトリックスをしぼませるステップとを含み、
前記培地が湿式換気の間、絶えず補充される、
請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記コントローラーが、前記気管ラインに接続された気管圧センサーによって伝達されるデータに反応して前記二方向気管ポンプを制御する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ｎｏｔｃｈ阻害剤を含む液体培地を使用して湿式換気を少なくとも２、５、７、または１０日間提供し、任意選択で、その後に、ｎｏｔｃｈ阻害剤を含まない液体培地を使用して追加の湿式換気をするステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
播種の前に、前記肺組織マトリックスにテネイシン−ｃまたはフィブリリン−２の１つまたは両方を接触させるステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法によって産生された機能的な肺。
【請求項１１】
前記臓器が、完全な肺またはその血管柄付きの部分である、請求項１０に記載の機能的な肺。
【請求項１２】
肺活量が損なわれたまたは低減した対象を治療する方法に使用するための請求項１０に記載の肺。
【請求項１３】
前記Ｋｒｔ５+ｐ６３+細胞が前記ドナーの気道から得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
細胞が８０％コンフルエンシーで継代される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ｎｏｔｃｈ阻害剤が、ガンマセクレターゼ阻害剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
肺組織マトリックスへの播種前に、細胞がＲＯＣＫ阻害剤の非存在下での培養において継代される、請求項１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４５】
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明と共に説明してきたが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を説明するためのものであり、それを制限するためのものではないと理解される。他の態様、利点、および変更は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．バイオ人工肺臓器を提供する方法であって、
ヒトドナーから増殖性の基底幹細胞集団を提供するステップであって、前記細胞が、好ましくは前記ドナーの気道から得たＫｒｔ５+ｐ６３+細胞である、ステップと；
任意選択でＲＯＣＫ阻害剤の非存在下で、任意選択で最大５回の継代（好ましくは、細胞を６０〜１００％、好ましくは８０％コンフルエンシーで継代した）まで、前記細胞を培養において維持および増大させるステップと；
気道および実質的な血管系を含む（無細胞）肺組織マトリックスを提供するステップと；
前記肺組織マトリックスに、前記気道を通して前記幹細胞を、および前記血管系を通して内皮細胞を播種するステップと；
前記気道における機能的上皮および機能的血管系の形成にとって十分な条件で前記マトリックスを維持するステップであって、前記マトリックスの維持が、ｎｏｔｃｈ阻害剤、好ましくはガンマセクレターゼ阻害剤を含む液体培地を使用して、第１の所望の程度に臓器を成熟させて、湿潤成熟臓器を産生させるために十分な時間、前記肺組織マトリックスに湿式換気を提供することと、任意選択で湿式換気の間、臓器チャンバーにおいて実質的に一定の流体レベルを維持することとを含む、ステップと、
を含む方法。
２．前記臓器チャンバーが、各々がチャンバー圧センサーによって伝達されるデータに反応して二方向排液ポンプを制御する制御モジュールによって制御されるチャンバー圧センサーと二方向排液チャンバーポンプとを備える、上記１に記載の方法。
３．静脈ラインにおける圧力レベルを培地リザーバーにおける圧力レベルと平衡にすることによって、肺内外圧差を防止するステップをさらに含む、上記１に記載の方法。
４．前記臓器チャンバーが、前記臓器チャンバーに接続された空気圧制御モジュールをさらに備え、前記空気圧制御モジュールが、
吸気相の間、前記臓器チャンバーにおいて陰圧を生成し；
平衡相の間、前記臓器チャンバー圧を維持し；および
呼気相の間、前記臓器チャンバーにおいて陽圧を生成する、
上記１に記載の方法。
５．湿式換気が、
コントローラーに接続された二方向気管ポンプを含む気管ラインを、培地リザーバーに接続するステップと；
前記二方向気管ポンプを使用して前記肺組織マトリックスを培地によって膨らませるステップと；
前記二方向気管ポンプを使用し前記肺組織マトリックスから培地を引き抜いて、前記肺組織マトリックスをしぼませるステップとを含み、
前記培地が湿式換気の間、絶えず補充される、
上記１に記載の方法。
６．前記湿式換気が、
各々がコントローラーに接続された第１のポンプと第２のポンプとを含む前記気管ラインを、培地リザーバーに接続するステップと；
前記第１のポンプを使用して、前記肺組織マトリックスを培地によって膨らませるステップと；
前記第２のポンプを使用し前記肺組織マトリックスから培地を引き抜いて、前記肺組織マトリックスをしぼませるステップとを含み、
前記培地が湿式換気の間、絶えず補充される、
上記１に記載の方法。
７．前記コントローラーが、前記気管ラインに接続された気管圧センサーによって伝達されるデータに反応して前記二方向気管ポンプを制御する、上記６に記載の方法。
８．ｎｏｔｃｈ阻害剤を含む液体培地を使用して湿式換気を少なくとも２、５、７、または１０日間提供し、任意選択で、その後に、ｎｏｔｃｈ阻害剤を含まない液体培地を使用して追加の湿式換気をするステップを含む、上記１に記載の方法。
９．前記肺組織マトリックスが、外から添加したテネイシン−ｃおよび／または外から添加したフィブリリン−２の１つまたは両方を含む、上記１に記載の方法。
１０．播種の前に、前記肺組織マトリックスにテネイシン−ｃまたはフィブリリン−２の１つまたは両方を接触させるステップを含む、上記９に記載の方法。
１１．上記１〜１０に記載の方法によって産生された機能的な肺。
１２．前記臓器が、完全な肺またはその血管柄付きの部分である、上記１１に記載の機能的な肺。
１３．上記１１に記載の肺を対象に移植するステップを含む、肺活量が損なわれたまたは低減した対象を治療する方法。
１４．肺活量が損なわれたまたは低減した対象を治療する方法における、上記１１に記載の機能的な肺の使用。
１５．肺活量が損なわれたまたは低減した対象を治療する方法に使用するための上記１１に記載の機能的な肺。