【手続補正書】
【提出日】令和2年9月18日(2020.9.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞処理の方法であって：
複数の細孔を含む膜の１つ以上の細孔に複数の細胞を通過させると共に、前記細胞を薬剤に暴露して、前記細胞内に変化を引き起こし、それにより前記薬剤を前記細胞の少なくとも１つに進入させることを含み；
前記細孔の各々は、入口開口部から出口開口部に延び、約７ミクロン〜約９ミクロンの範囲内の最大断面寸法を有する、方法。
【請求項２】
前記最大断面寸法が約８ミクロン〜約９ミクロンの範囲内、場合により最大断面寸法が約７ミクロン、場合により最大断面寸法が約８ミクロン、場合により最大断面寸法が約９ミクロンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の方法であって、
前記細胞が循環細胞であり、
場合により前記循環細胞が、ＣＤ３４＋細胞、前駆細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、造血性幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、免疫エフェクター細胞、ＣＤ３＋細胞、並びにＴ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択され、
場合により前記循環細胞が、キメラ抗原受容体を発現するように操作される、方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細孔が、約７ミクロン〜約１０ミクロンの範囲内の長さを有し、
場合により前記細孔が、約１８ミクロン〜約２１ミクロンの範囲内の長さを有する、方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法であって、
前記膜が、約７ｍｍ２〜約８０ｍｍ２の範囲内の活性表面積を有する、方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法であって、
前記膜が、約１ｘ１０５〜約２ｘ１０６細孔／ｃｍ２の範囲内の表面細孔密度を有する、方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細胞及び前記薬剤が液体担体中に配置され、前記液体担体が、前記液体担体に印加される圧力によって前記細孔を通して押され、
場合により前記液体担体中の前記細胞の濃度が、約１０，０００〜約２００，０００細胞／マイクロリットルの範囲内であり、
場合により前記細胞の前記濃度が約５０，０００〜約２００，０００細胞／マイクロリットルの範囲内であり、
場合により前記細胞の前記濃度が約１００，０００〜約２００，０００細胞／マイクロリットルの範囲内であり、
場合により前記細胞の前記濃度が約１５０，０００〜約２００，０００細胞／マイクロリットルの範囲内である、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、
前記液体担体に印加される前記圧力が、前記細胞が前記細孔を少なくとも約１０〜約２０ｍｌ（ミリリットル）／分の流速で通過するような圧力であり、
場合により前記液体担体に印加される前記圧力が、約５ｐｓｉ〜約２０ｐｓｉの範囲内である、方法。
【請求項９】
請求項７〜８のいずれか一項に記載の方法であって、
前記液体担体が、水、基本細胞培養培地、血清フリー培地、ＨＳＣブリュー、１つ以上のサイトカイン、１つ以上の増殖因子、１つ以上の生存率向上剤、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、洗剤、膜安定剤及びそれらの組み合わせのいずれかを含み、場合により前記１つ以上の生存率向上剤が、ＵＭ１７１、ＳＲ１、（（Ｓ）−２−（６−（２−（ｌＨ−インドール−３−イル）エチルアミノ）−２−（５−フルオロピリジン−３−イル）−９Ｈ−プリン−９−イル）プロパン−ｌ−オール、及びそれらの組み合わせのいずれかであり、
場合により前記１つ以上のサイトカインが、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ−３Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法であって、
前記膜の前記細孔が、少なくとも部分的にポリビニルピロリドンで被覆されている、方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法であって、
前記薬剤が、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、プラスミド、リボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）、タンパク質、ペプチド、脂質、多糖、オリゴ糖、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アプタマー、ナノ粒子、色素、膜非透過性化合物、及びそれらの組み合わせのいずれかを含む、方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法であって、
前記薬剤が遺伝子編集システムであり、
前記遺伝子編集システムが、場合により、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システム、ＺＦＮ遺伝子編集システム、ＴＡＬＥＮ遺伝子編集システム、メガヌクレアーゼ遺伝子編集システム又はＣｒｅリコンビナーゼ遺伝子編集システムであり、
前記ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムが、場合により１つ以上のＲＮＰを含み、
場合により前記ＲＮＰがＣａｓ９−ｇＲＮＡ複合体である、方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法であって、
前記薬剤が、約２ｋＤａを超える、場合により約２ｋＤａ〜約１００ｋＤａの範囲内の分子量を有する、方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法であって、
前記膜が高分子材料を含み、
場合により前記高分子材料が、ポリカーボネート、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリスチレン、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリイミド（ＰＩ）、環状オレフィンコポリマー（ＣＯＣ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、ポリエステル及びポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）からなる群から選択される、方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法であって、
前記膜が半導体、セラミック又は金属のいずれかを含む、方法。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細孔が、前記細孔の各々の長さに沿って実質的に均一の断面積を有し、
場合により前記細孔が実質的に円筒状である、方法。
【請求項１７】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細孔が規則的な又は不規則な断面形状を有し、
場合により前記規則的な断面形状が、円形、長円形及び多角形形状のいずれかであり、
場合により前記多角形形状が、正方形、矩形、六角形及び八角形形状からなる群から選択される、方法。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細胞を前記膜に通過させることの前に、不均一細胞の収集物から前記細胞を選択することを更に含み、
場合により前記選択された細胞が、ＣＤ３４＋、造血性幹細胞、造血性前駆細胞、造血性幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、免疫エフェクター細胞、ＣＤ３＋細胞、Ｔ細胞並びにＮＫ細胞からなる群から選択され、
場合により前記選択された細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される、方法。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細胞の少なくとも約４０％が、前記１つ以上の細孔を通過することによって前記薬剤を取り込み、
場合により前記細胞の少なくとも約５０％が、前記１つ以上の細孔を通過することによって前記薬剤を取り込み、
場合により前記細胞の少なくとも約６０％が、前記１つ以上の細孔を通過することによって前記薬剤を取り込み、
場合により前記細胞の少なくとも約７０％が、前記１つ以上の細孔を通過することによって前記薬剤を取り込み、
場合により前記細胞の少なくとも約８０％が、前記１つ以上の細孔を通過することによって前記薬剤を取り込み、
場合により前記細胞の少なくとも約９０％が、前記１つ以上の細孔を通過することによって前記薬剤を取り込む、方法。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細胞が、約５０％を超える細胞生存率で前記薬剤を取り込み、
場合により前記細胞が、約６０％を超える細胞生存率で前記薬剤を取り込み、
場合により前記細胞が、約７０％を超える細胞生存率で前記薬剤を取り込み、
場合により前記細胞が、約８０％を超える細胞生存率で前記薬剤を取り込み、
場合により前記細胞が、約９０％を超える細胞生存率で前記薬剤を取り込む、方法。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法であって、
前記膜が、前記細孔の最大長さと実質的に等しい最大厚さを有する、方法。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細孔が実質的に均一の長さを有し、前記膜が、前記長さと実質的に等しい厚さを有する、方法。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法であって、
前記薬剤が、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、プラスミド、リボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）、タンパク質、ペプチド、脂質、多糖、オリゴ糖、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アプタマー、ナノ粒子、色素、膜非透過性化合物、膜不透過性小分子、及びそれらの組み合わせのいずれかを含み、
場合により前記薬剤が、５０グラム／リットルまでの濃度を有する、方法。
【請求項２４】
請求項１〜２２のいずれか一項に記載の細胞処理の方法からなる、治療のための細胞を作る方法。
【請求項２５】
治療のための細胞処理の方法であって：
複数の細孔を含む膜の１つ以上の細孔に複数の細胞を通過させると共に、前記細胞を薬剤に暴露して、前記細胞内に変化を引き起こし、それにより前記薬剤を前記細胞の少なくとも１つに進入させることを含み；
前記細孔の各々は、入口開口部から出口開口部に延び、約７ミクロン〜約９ミクロンの範囲内の最大断面寸法を有し、
前記遺伝子編集複合体は、遺伝子療法で使用するために、少なくとも１つの細胞を改変するように構成される、方法。
【請求項２６】
請求項２５の方法であって、
前記遺伝子編集複合体は、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集複合体を含み、
場合により前記ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集複合体は、少なくとも１つのＲＮＡ複合体を含み、
場合により前記ＲＮＡ複合体は、Ｃａｓ９−ｇＲＮＡ複合体である、方法。
【請求項２７】
請求項２５〜２６のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細胞が、造血性幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）を含み、
場合により前記造血性幹細胞及び前駆細胞が、ＣＤ３４＋細胞を含む、方法。
【請求項２８】
請求項２５〜２６のいずれか一項に記載の方法であって、
前記遺伝子編集複合体が、前記細胞の遺伝子修正を達成するように構成される、方法。
【請求項２９】
請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法であって、
前記細胞を収集することを含み、
場合により収集した前記細胞を凍結保存することを更に含む、方法。