【手続補正書】
【提出日】令和2年1月28日(2020.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生合成ヘパリンを産生するために有効な量のN-硫酸化（NS）二糖類基を含む、グリコサミノグリカン。
【請求項２】
78〜99%のN-硫酸化（NS）二糖類基を含む、請求項1に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項３】
81〜97%のN-硫酸化（NS）二糖類基を含む、請求項1に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項４】
83〜95%のN-硫酸化（NS）二糖類基を含む、請求項1に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項５】
85〜93%のN-硫酸化（NS）二糖類基を含む、請求項1に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項６】
15,000〜19,000Daの最終ヘパリン産物を形成するために適切な重量平均分子量を有し、24,000Da超の分子量を有するヘパリン鎖の割合が合計の20%以下であり、及び分子量16,000〜24,000Daの鎖の割合に対する分子量8,000〜16,000の鎖の割合の比率は、1.0以上である、請求項1〜5の何れか1項に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項７】
生合成ヘパリンを産生するために有効な量のN-硫酸化、2-硫酸化（NS2S）二糖類基を含む、グリコサミノグリカン。
【請求項８】
44〜80%のNS2S基を含む、請求項7に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項９】
50〜78%のNS2S基を含む、請求項7に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項１０】
55〜77%のNS2S基を含む、請求項7に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項１１】
60〜76%のNS2S基を含む、請求項7に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項１２】
NS二糖類基をさらに含む、請求項7〜11の何れか1項に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項１３】
13〜39%のNS基を含む、請求項12に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項１４】
14〜35%のNS基を含む、請求項12に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項１５】
15〜30%のNS基を含む、請求項12に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項１６】
16〜26%のNS基を含む、請求項12に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項１７】
15,000〜19,000Daの最終ヘパリン産物を形成するために適切な重量平均分子量を有し、24,000Da超の分子量を有するヘパリン鎖の割合が合計の20%以下であり、及び分子量16,000〜24,000Daの鎖の割合に対する分子量8,000〜16,000の鎖の割合の比率は、1.0以上である、請求項7〜16の何れか1項に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項１８】
生合成ヘパリンを産生するために有効な量のN-硫酸化、2-硫酸化、6-硫酸化（NS2S6S）二糖類基及びN-硫酸化、6-硫酸化（NS6S）二糖類基を含む、グリコサミノグリカン。
【請求項１９】
31〜73%のNS2S6S二糖類基及び6〜40%のNS6S二糖類基を含む、請求項18に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項２０】
36〜70%のNS2S6S二糖類基及び6〜32%のNS6S二糖類基を含む、請求項18に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項２１】
40〜67%のNS2S6S二糖類基及び6〜26%のNS6S二糖類基を含む、請求項18に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項２２】
43〜64%のNS2S6S二糖類基及び6〜22%のNS6S二糖類基を含む、請求項18に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項２３】
N-硫酸化、2-硫酸化（NS2S）二糖類基及びN-硫酸化（NS）二糖類基をさらに含む、請求項18〜22の何れか1項に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項２４】
0〜27%のNS2S基及び1〜22%のNS基を含む、請求項23に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項２５】
12〜27%のNS2S基及び1〜17%のNS基を含む、請求項23に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項２６】
15,000〜19,000Daの最終ヘパリン産物を形成するために適切な重量平均分子量を有し、24,000Da超の分子量を有するヘパリン鎖の割合が合計の20%以下であり、及び分子量16,000〜24,000Daの鎖の割合に対する分子量8,000〜16,000の鎖の割合の比率は、1.0以上である、請求項18〜25の何れか1項に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項２７】
3S二糖類基を含まない、請求項17〜25の何れか1項に記載のグリコサミノグリカン。
【請求項２８】
生合成ヘパリンを産生するための方法であって、
a. 31〜73%のNS2S6S二糖類基、6〜40%のNS6S二糖類基、0〜27%のNS2S基及び1〜22%のNS基を得る工程;
b. 硫酸供与体の存在下で、グリコサミノグリカンを3-O-スルホトランスフェラーゼアイソフォーム1（3OST-1）である酵素で処理する工程、
を含む、生合成ヘパリンバッチを産生する方法。
【請求項２９】
工程（b）において、十分なグルコサミン残基が、3-O-スルホグルコサミン残基に変換され、その結果、産生されたバッチが、180ユニット/mg以上の抗Xa及び抗IIa活性及び0.85〜1.15の抗Xa/抗IIa比を有する、請求項28に記載の方法。
【請求項３０】
0.9〜1.1の抗Xa/抗IIa比を有する、請求項28に記載の方法。
【請求項３１】
44〜80%のNS2S基及び13〜39%のNS基を含む第2のグリコサミノグリカン中間体を製造する方法であって、当該方法が、
a. ヘパロサン中のN-アセチルグルコサミン残基の総量を変換して、78〜99%のN-硫酸化（NS）二糖類基を含む第1のグリコサミノグリカンを産生する工程、ここで、変換されたN-アセチルグルコサミン残基の前記総量は、最初のグリコサミノグリカン中間体中のNS基の量に相当する; 及び
b. 硫酸供与体の存在下で、前記第1のグリコサミノグリカン中間体を、C5-エピメラーゼ（C5-epi）及び2-O-スルホトランスフェラーゼ（2OST）である酵素で処理する工程、
を含む、前記第2のグリコサミノグリカン中間体を産生する、方法。
【請求項３２】
前記変換が、ヘパロサンを、塩基及びスルホン化試薬と反応させることを含む、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
前記変換が、ヘパロサンを、N-デアセチラーゼ、N-スルホトランスフェラーゼ（NDST）と反応させることを含む、請求項31に記載の方法。
【請求項３４】
31〜73%のNS2S6S二糖類基、6〜40%のNS6S二糖類基、0〜27%のNS2S基及び1〜22%のNS基を含む、第3のグリコサミノグリカン中間体を製造する方法であって、当該方法が、
44〜80%のNS2S基及び13〜39%のNS基を含む第2のグリコサミノグリカン中間体を、6-O-スルホトランスフェラーゼアイソフォーム1及び/又は3（6OST-1/3）である酵素を用い、前記第2のグリコサミノグリカン中間体を前記第3のグリコサミノグリカン中間体に変換するために硫酸供与体の存在下で処理する工程を含む、方法。
【請求項３５】
前記硫酸供与体が、PAPSを含む、請求項28〜34の何れか1項に記載の方法。
【請求項３６】
PAPSが、溶液である、請求項36に記載の方法。
【請求項３７】
前記硫酸供与体が、PAP及びPNPSを含む、請求項28〜34の何れか1項に記載の方法。
【請求項３８】
前記処理が、PAPS、PNPS及び触媒を含むリサイクリングシステムの存在下で行われる、請求項28〜34の何れか1項に記載の方法。
【請求項３９】
前記触媒が、アリールスルホトランスフェラーゼIV（AST-IV）である、請求項38に記載の方法。
【請求項４０】
前記酵素が、溶液中にある、請求項28〜39の何れか1項に記載の方法。
【請求項４１】
前記酵素が、固定化される、請求項28〜39の何れか1項に記載の方法。
【請求項４２】
前記処理が、NDST、C5-Epi、2OST、3OST-1、6OST-1又は6OST-3の一方又は両方、及びPAPSの供給源をコードする遺伝子を含む組換え微生物株内で行われる、請求項28〜34の何れか1項に記載の方法。