【手続補正書】
【提出日】令和2年9月29日(2020.9.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
レンチウイルスベクター産生系であって、
ａ．細胞成長を制御するためのレンチウイルス培養補充物と、
ｂ．カチオン性脂質、ならびに少なくとも１つのヘルパー脂質および／または中性脂質を含む、脂質集合体と、
ｃ．プロピオン酸ナトリウム、酪酸ナトリウム、およびカフェインを含む、レンチウイルス産生亢進剤と、を含み、
無血清である、前記レンチウイルスベクター産生系。
【請求項２】
前記カチオン性脂質がＤＨＤＭＳを含む、請求項１に記載のレンチウイルス産生系。
【請求項３】
前記少なくとも１つのヘルパー脂質および／または中性脂質がＤＯＰＥを含むか、又はＤＯＰＥとコレステロールとを含む、請求項１に記載のレンチウイルス産生系。
【請求項４】
２９３細胞におけるレンチウイルスの産生のために設計されており、前記２９３細胞が浮遊培養で成長するものであってもよい、請求項１〜３のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
【請求項５】
前記２９３細胞が２９３Ｆ細胞またはその誘導体である、請求項４に記載のレンチウイルスベクター産生系。
【請求項６】
前記２９３Ｆ細胞、またはそれに由来する細胞が、５日後以降の細胞死が２０％未満で、約１×１０6〜約２０×１０6の密度で成長することができる、請求項５に記載のレンチウイルスベクター産生系。
【請求項７】
前記レンチウイルス培養補充物が、
アミノ酸および／またはジペプチドと、糖源、糖アルコール、および／または炭素源と、を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
【請求項８】
前記レンチウイルス培養補充物がアミノ酸とグルコースとを含む、請求項７に記載のレンチウイルスベクター産生系。
【請求項９】
前記レンチウイルス培養補充物が、
ａ．鉱物および／または微量金属、および／または
ｂ．ビタミンおよび／またはビタミン前駆体、
を含む、請求項７または８のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
【請求項１０】
前記レンチウイルス培養補充物が、約１％〜約１０％、または、約１％、３．５％、５％、もしくは１０％、例えば約３．５％で添加される、請求項１〜９のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
【請求項１１】
前記レンチウイルス培養補充物中の前記グルコースの浸透圧が、約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約７００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約５５０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約６５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約５７５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約６２５ｍＯｓｍ／ｋｇである、および／または前記レンチウイルス培養補充物中の前記グルコースの濃度が、約８５ｍｇ／ｍｌ〜約１１５ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ〜約１１０ｍｇ／ｍｌ、約９５ｍｇ／ｍｌ〜約１０５ｍｇ／ｍｌである、請求項８に記載のレンチウイルスベクター産生系。
【請求項１２】
前記レンチウイルス培養補充物が、約１０００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約１５００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１１００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約１４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約１３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、またはそれらの間の任意の浸透圧もしくは範囲を有するか、または約１１００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１１５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１２００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１５００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
【請求項１３】
前記レンチウイルス亢進剤がバルプロ酸を含み、バルプロ酸が約０．５〜１ｍＭで含まれてもよい、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生
【請求項１４】
プロピオン酸ナトリウムが約３〜１５ｍＭ、または約３〜５ｍＭ、または約５〜約８ｍＭで含まれる、および／または酪酸ナトリウムが約１．５〜３ｍＭ、または約１．５〜２．５ｍＭ、または約２．５ｍＭ〜３ｍＭで含まれる、および／またはカフェインが約０．７５〜３ｍＭ、または約２〜３ｍＭ、または約１〜２ｍＭで含まれる、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系を使用することを含む、レンチウイルスベクター産生のための方法。
【請求項１６】
レンチウイルスベクター産生のための方法であって、
ａ．無血清培地中で真核細胞を浮遊培養することと、
ｂ．細胞成長を制御するためにレンチウイルス培養補充物を提供することであって、前記補充物がアミノ酸および／またはジペプチドと、糖源、糖アルコール、および／または炭素源と、を含むことと、
ｃ．カチオン性脂質と、少なくとも１つのヘルパー脂質および／または中性脂質とを含むトランスフェクション試薬を用いて、前記細胞をレンチウイルスベクターでトランスフェクトすることと、
ｄ．レンチウイルス産生を促進することができる、プロピオン酸ナトリウム、酪酸ナトリウム、およびカフェインを含む、レンチウイルス産生増強剤を提供することと、
を含む、方法。
【請求項１７】
前記細胞が、約１×１０6〜約２０×１０6個／ｍＬの細胞密度を有する浮遊細胞培養物中で成長する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記方法が、２９３細胞または２９３細胞の誘導体、例えば２９３Ｆ細胞または２９３Ｆ細胞の誘導体の培養のためである、請求項１６〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記レンチウイルス培養補充物が、約１％〜約１０％、または、約１％、３．５％、５％、もしくは１０％、例えば約３．５％で添加される、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記レンチウイルス培養補充物が、約１０００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約１５００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有する、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記カチオン性脂質がＤＨＤＭＳを含む、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１つのヘルパー脂質および／または中性脂質がＤＯＰＥを含むか、又はＤＯＰＥとコレステロールとを含む、請求項１６〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記レンチウイルス培養補充物が、細胞培養培地中の細胞播種の２４〜３６時間後に添加される、請求項１６〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
本明細書で使用する場合、約という用語は、明示的に示されているかどうかにかかわらず、例えば整数、分数、および百分率を含む数値を指す。約という用語は、一般に、当業者が、列挙された値と等価である（例えば、同じ関数または結果を有する）と考えるであろう数値範囲（例えば、列挙された範囲の±５〜１０％）を指す。少なくともおよび約のような用語が数値または範囲のリストに先行する場合、この用語はリストに提供されているすべての値または範囲を変更する。一部の場合、約という用語は最も近い有効数字に丸められる数値を含むことがある。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕レンチウイルスベクター産生系であって、
ａ．細胞成長を制御するためのレンチウイルス培養補充物と、
ｂ．カチオン性脂質、ならびに少なくとも１つのヘルパー脂質および／または中性脂質を含む、脂質集合体と、
ｃ．プロピオン酸ナトリウム、酪酸ナトリウム、およびカフェインを含む、レンチウイルス産生亢進剤と、を含み、
無血清である、前記レンチウイルスベクター産生系。
〔２〕前記カチオン性脂質がＤＨＤＭＳを含む、前記〔１〕に記載のレンチウイルス産生系。
〔３〕前記少なくとも１つのヘルパー脂質および／または中性脂質がＤＯＰＥを含む、前記〔１〕に記載のレンチウイルス産生系。
〔４〕前記少なくとも１つのヘルパー脂質および／または中性脂質が、ＤＯＰＥとコレステロールとを含む、前記〔１〕に記載のレンチウイルス産生系。
〔５〕２９３細胞におけるレンチウイルスの産生のために設計されている、前記〔１〕〜〔３〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔６〕前記２９３細胞が浮遊培養におけるガウンである、前記〔５〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔７〕前記２９３細胞が２９３Ｆ細胞またはその誘導体である、前記〔５〕または〔６〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔８〕前記２９３Ｆ細胞、またはそれに由来する細胞が、５日後以降の細胞死が２０％未満で、約１×１０6〜約２０×１０6の密度で成長することができる、前記〔７〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔９〕前記レンチウイルス培養補充物が、
ａ．アミノ酸および／またはジペプチドと、糖源、糖アルコール、および／または炭素源と、を含む、前記〔１〕〜〔７〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔１０〕前記レンチウイルス培養補充物がアミノ酸とグルコースとを含む、前記〔７〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔１１〕前記レンチウイルス培養補充物が、
ａ．鉱物および／または微量金属、および／または
ｂ．ビタミンおよび／またはビタミン前駆体、
を含む、前記〔９〕または〔１０〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔１２〕前記レンチウイルス培養補充物が、Ｌ−アラニル−Ｌ−システイン二量体と、Ｌ−アラニル−Ｌ−チロシン二水和物と、Ｄ−グルコースと、グリシンと、Ｌ−アラニンと、Ｌ−アルギニンと、Ｌ−アスパラギンと、Ｌ−アスパラギン酸と、Ｌ−グルタミン酸と、Ｌ−ヒスチジンと、Ｌ−ヒドロキシプロリンと、Ｌ−イソロイシンと、Ｌ−ロイシンと、Ｌ−リジンと、Ｌ−メチオニンと、Ｌ−フェニルアラニンと、Ｌ−プロリンと、Ｌ−セリンと、Ｌ−スレオニンと、Ｌ−トリプトファンと、Ｌ−バリンと、を含む、前記〔９〕〜〔１１〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔１３〕前記レンチウイルス培養補充物が、約１％〜約１０％で添加される、前記〔１〕〜〔１２〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔１４〕前記レンチウイルス培養補充物が、約１％、３．５％、５％、または１０％で添加される、前記〔１３〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔１５〕前記レンチウイルス培養補充物が、約３．５％で添加される、前記〔１４〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔１６〕前記レンチウイルス培養補充物中の前記グルコースの浸透圧が、約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約７００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約５５０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約６５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約５７５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約６２５ｍＯｓｍ／ｋｇである、前記〔１〕〜〔１５〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔１７〕前記レンチウイルス培養補充物中の前記グルコースの濃度が、約８５ｍｇ／ｍｌ〜約１１５ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ〜約１１０ｍｇ／ｍｌ、約９５ｍｇ／ｍｌ〜約１０５ｍｇ／ｍｌである、前記〔１〕〜〔１６〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔１８〕前記レンチウイルス培養補充物が、約１０００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約１５００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１１００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約１４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約１３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、またはそれらの間の任意の浸透圧もしくは範囲を有する、前記〔１〕〜〔１７〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔１９〕前記レンチウイルス培養補充物が、約１１００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１１５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１２００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約１５００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有する、前記〔１〕〜〔１６〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔２０〕前記ＤＨＤＭＳが約０．４〜０．６ｍＭで含まれる、前記〔１〕〜〔１９〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔２１〕ＤＯＰＥが約０．２〜０．５ｍＭ／ｍＬで含まれる、前記〔１〕〜〔２０〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔２２〕コレステロールが０．１〜０．６ｍＭ／ｍＬで含まれる、前記〔１〕〜〔２１〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔２３〕唯一のヘルパーおよび／または中性脂質がＤＯＰＥである、前記〔１〕〜〔２１〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔２４〕ＤＨＤＭＳ：ＤＯＰＥのモル比が、合計１．０になり、かつ約０．６：０．４〜０．７：０．３の範囲である、前記〔２３〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔２５〕ＤＨＤＭＳ：ＤＯＰＥのモル比が、合計１．０になり、かつ約０．６２５：０．３７５〜０．６７５：０．３２５の範囲である、前記〔２３〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔２６〕ＤＨＤＭＳ：ＤＯＰＥのモル比が、合計１．０になり、約０．６：０．４〜０．６２５：０．３７５の範囲である、前記〔２３〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔２７〕ＤＨＤＭＳ：ＤＯＰＥ：コレステロールのモル比が合計１．０になり、前記ＤＨＤＭＳモル比が約０．４〜０．６の範囲であり、前記ＤＯＰＥモル比が約０．２〜０．５の範囲であり、前記コレステロールモル比が約０．１〜０．６の範囲である前記〔１〕〜〔２２〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔２８〕ＤＨＤＭＳ：ＤＯＰＥ：コレステロールのモル比が、表２、４または５から選択される、前記〔１〕〜〔２２〕または〔２５〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔２９〕ＤＨＤＭＳ：ＤＯＰＥ：コレステロールのモル比が、表４からの実行番号１×Ｒ３、１×Ｒ４、１×Ｒ６、１×Ｒ７、１×Ｒ９、１×Ｒ１０、１×Ｒ１１、１×Ｒ１２、または表５からの２×ｂＲ１３もしくは２×ｂＲ１４から選択される、前記〔１〕〜〔２２〕、〔２５〕または〔２６〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔３０〕前記レンチウイルス亢進剤がバルプロ酸を含む、前記〔１〕〜〔２９〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔３１〕プロピオン酸ナトリウムおよび／または酪酸ナトリウムが水溶液として提供される、前記〔１〕〜〔３０〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔３２〕カフェインがレンチウイルス発現培地中で提供される、前記〔１〕〜〔３１〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔３３〕プロピオン酸ナトリウムが約３〜１５ｍＭで含まれる、前記〔１〕〜〔３２〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔３４〕プロピオン酸ナトリウムが約３〜５ｍＭで含まれる、前記〔３３〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔３５〕プロピオン酸ナトリウムが約５〜約８ｍＭで含まれる、前記〔３３〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔３６〕酪酸ナトリウムが約１．５〜３ｍＭで含まれる、前記〔１〕〜〔３５〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔３７〕酪酸ナトリウムが約１．５〜２．５ｍＭで含まれる、前記〔３６〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔３８〕酪酸ナトリウムが約２．５ｍＭ〜３ｍＭで含まれる、前記〔３６〕に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔３９〕カフェインが約０．７５〜３ｍＭで含まれる、前記〔１〕〜〔３８〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔４０〕カフェインが約２〜３ｍＭで含まれる、前記〔１〕〜〔３９〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔４１〕カフェインが約１〜２ｍＭで含まれる、前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔４２〕バルプロ酸が約０．５〜１ｍＭで含まれる、前記〔１〕〜〔４１〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔４３〕前記レンチウイルス産生亢進剤成分の量が、表３、表６、または表７における量のいずれかから選択される、前記〔１〕〜〔４２〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系。
〔４４〕前記亢進剤成分の量が、表６中の実行１×Ｒ５、１×Ｒ６、１×Ｒ１３、１×Ｒ１４、１×Ｒ１５、１×Ｒ１６、１×Ｒ１７、１×Ｒ１８、１×Ｒ１９、１×Ｒ２２、１×Ｒ２６、１×Ｒ２７、１×Ｒ２９、１×Ｒ３０、または１×Ｒ３１における量のいずれかから選択される、前記〔１〕〜〔４３〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター生産系。
〔４５〕前記〔１〕〜〔４４〕のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター産生系を使用することを含む、レンチウイルスベクター産生のための方法。
〔４６〕レンチウイルスベクター産生のための方法であって、
ａ．無血清培地中で真核細胞を培養することと、
ｂ．細胞成長を制御するためにレンチウイルス培養補充物を提供することと、
ｃ．トランスフェクション効率を高めるために、ＤＨＤＭＳと、ＤＯＰＥと、コレステロールとを含むトランスフェクション試薬を用いて、前記細胞をレンチウイルスベクターでトランスフェクトすることと、
ｄ．レンチウイルス産生を促進することができる、プロピオン酸ナトリウム、酪酸ナトリウム、およびカフェインを含む、レンチウイルス産生増強剤を提供することと、
を含む、方法。
〔４７〕前記培養真核細胞が、高密度条件下での成長に適応した浮遊培養物中にある、前記〔４５〕〜〔４６〕のいずれか１項に記載の方法。
〔４８〕前記細胞が、少なくとも１×１０6個／ｍＬの細胞密度を有する浮遊細胞培養物中で成長する、前記〔４７〕に記載の方法。
〔４９〕前記細胞が、少なくとも１０×１０6個／ｍＬの細胞密度を有する浮遊細胞培養物中で成長する、前記〔４７〕に記載の方法。
〔５０〕前記細胞が、少なくとも２０×１０6個／ｍＬの密度を有する浮遊細胞培養物中で成長する、前記〔４７〕に記載の方法。
〔５１〕前記方法が、２９３細胞または２９３細胞の誘導体の培養のためである、前記〔４５〕〜〔５０〕のいずれか１項に記載の方法。
〔５２〕前記方法が、２９３Ｆ細胞または２９３Ｆ細胞の誘導体の培養のためである、前記〔５１〕に記載の方法。
〔５３〕前記レンチウイルス培養補充物が、前記〔７〕〜〔１７〕のいずれか１項に従う、前記〔１〕〜〔５２〕のいずれか１項に記載の方法。
〔５４〕前記トランスフェクション試薬が、前記〔２〕〜〔４〕または〔２０〕〜〔２９〕のいずれか１項に従う、前記〔１〕〜〔５３〕のいずれか１項に記載の方法。
〔５５〕前記レンチウイルス産生増強剤が、前記〔３０〕〜〔４４〕のいずれか１項に従う、前記〔１〕〜〔５４〕のいずれか１項に記載の方法。
〔５６〕前記レンチウイルス培養補充物が、細胞培養培地中の細胞播種の２４〜３６時間後に添加される、前記〔１〕〜〔５６〕のいずれか１項に記載の方法。
〔５７〕前記方法により、約２．５×１０8ＴＵ／ｍｌの非濃縮レンチウイルスベクターを産生することができる、前記〔１〕〜〔５６〕のいずれか１項に記載の方法。
〔５８〕前記浮遊細胞培養物の容積が、約１０ｍＬ〜約５Ｌである、前記〔１〕〜〔５７〕のいずれか１項に記載の方法。
〔５９〕細胞生存度が、５日後以降に少なくとも８０％である、前記〔１〕〜〔５８〕のいずれか１項に記載の方法。