【手続補正書】
【提出日】令和2年1月31日(2020.1.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞結合剤・細胞毒性剤コンジュゲートを調製する方法であって、イオン強度が高い緩衝溶液の存在下で４〜９の間のｐＨにて細胞結合剤との共有結合を形成することができる反応基を有する細胞毒性剤または細胞毒性剤・リンカー化合物と前記細胞結合剤を反応させる工程を含み、前記細胞結合剤はアミン反応基を有する前記細胞毒性剤または前記細胞毒性剤・リンカー化合物との共有結合を形成するリシンε−ＮＨ２基を含む、前記方法。
【請求項２】
前記ｐＨが７．３〜８．７の間、７．３〜８．４の間、７．６〜８．４の間、７．７〜８．３の間、７．８〜８．２の間、７．９〜８．１の間、８．５〜８．９の間、または８．６〜８．８の間であるか、あるいは前記ｐＨが８．０または８．７である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記緩衝溶液が２０ｍＭ〜５００ｍＭ、５０ｍＭ〜１００ｍＭ、６０ｍＭ〜９０ｍＭ、７０ｍＭ〜８０ｍＭ、１００ｍＭ〜２００ｍＭ、１００ｍＭ〜１６０ｍＭ、または１２０ｍＭ〜１４０ｍＭのイオン強度を有するか、あるいは前記緩衝溶液が７５ｍＭまたは１３０ｍＭのイオン強度を有する請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記緩衝溶液が（ｉ）７．８〜８．９の間のｐＨ及び５０ｍＭ〜２００ｍＭの間のイオン強度、（ｉｉ）７．８〜８．２の間のｐＨ及び７０ｍＭ〜８０ｍＭの間のイオン強度、（ｉｉｉ）８．０のｐＨ及び７５ｍＭのイオン強度、（ｉｖ）８．５〜８．９の間のｐＨ及び１２０ｍＭ〜１４０ｍＭの間のイオン強度、または（ｖ）８．７のｐＨ及び１３０ｍＭのイオン強度を有する請求項１に記載の方法。
【請求項５】
（ｉ）前記緩衝溶液が７．８〜８．９の間のｐＨを有する５０ｍＭ〜２００ｍＭのＥＰＰＳ緩衝液であるか、（ｉｉ）前記緩衝溶液が７．８〜８．２の間のｐＨを有する７０ｍＭ〜８０ｍＭのＥＰＰＳ緩衝液であるか、（ｉｉｉ）前記緩衝溶液が８．０のｐＨを有する７５ｍＭのＥＰＰＳ緩衝液であるか、（ｉｖ）前記緩衝溶液が８．５〜８．９の間のｐＨを有する１２０ｍＭ〜１４０ｍＭのＥＰＰＳ緩衝液であるか、または（ｖ）前記緩衝溶液が８．７のｐＨを有する１３０ｍＭのＥＰＰＳ緩衝液である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
細胞結合剤・細胞毒性剤コンジュゲートを調製する方法であって、７．３〜９．０のｐＨを有する緩衝溶液にて細胞毒性剤または細胞毒性剤・リンカー化合物と細胞結合剤を反応させる工程を含み、前記細胞結合剤はアミン反応基を有する前記細胞毒性剤または前記細胞毒性剤・リンカー化合物との共有結合を形成するリシンε−ＮＨ２基を含む、前記方法。
【請求項７】
細胞結合剤・細胞毒性剤コンジュゲートを調製する方法であって、高濃度の緩衝溶液の存在下で４〜９のｐＨにて細胞結合剤との共有結合を形成することができる反応基を有する細胞毒性剤または細胞毒性剤・リンカー化合物と前記細胞結合剤を反応させる工程を含み、前記細胞結合剤はアミン反応基を有する前記細胞毒性剤または前記細胞毒性剤・リンカー化合物との共有結合を形成するリシンε−ＮＨ２基を含む、前記方法。
【請求項８】
前記緩衝溶液が、ＭＥＳ（（２−（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸））緩衝液、ビス−トリスメタン（２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール）緩衝液、ＡＤＡ（Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸）緩衝液、ＡＣＥＳ（Ｎ−−２−アミノエタンスルホン酸）緩衝液、ＰＩＰＥＳ（ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸））、ＭＯＰＳＯ（β−ヒドロキシ−４−モルフォリンプロパンスルホン酸）緩衝液、ビス−トリスプロパン（１，３−ビス（トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ）プロパン）緩衝液、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）緩衝液、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）緩衝液、ＤＩＰＳＯ（３−（Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］アミノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸またはＮ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＭＯＢＳ（４−（Ｎ−モルフォリノ）ブタンスルホン酸）緩衝液、ＴＡＰＳＯ（３−［［１，３−ジヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−２−イル］アミノ］−２−ヒドロキシプロパン−１−スルホン酸）緩衝液、トリズマ（トリスまたは２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）緩衝液、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））緩衝液、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物）緩衝液、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）緩衝液、トリシン（Ｎ−（２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチル）グリシン）緩衝液、ｇｌｙ−ｇｌｙ、ビシン（２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）酢酸）緩衝液、ＨＥＰＢＳ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（４−ブタンスルホン酸））緩衝液、ＴＡＰＳ（３−［［１，３−ジヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−２−イル］アミノ］プロパン−１−スルホン酸）緩衝液、ＡＭＰＤ（２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール）緩衝液、ＴＡＢＳ（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−４−アミノブタンスルホン酸）緩衝液、ＡＭＰＳＯ（Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）緩衝液、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項９】
さらに、前記細胞毒性剤または前記細胞毒性剤・リンカー化合物の前記細胞結合剤との反応の後、イオン強度が高い反応停止溶液を混合する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記反応停止溶液が、２００ｍＭ〜３０００ｍＭの間、２００ｍＭ〜２０００ｍＭの間、２００ｍＭ〜１０００ｍＭの間、５００ｍＭ〜１０００ｍＭの間、５５０ｍＭ〜１０００ｍＭの間、６００ｍＭ〜１０００ｍＭ、または７００ｍＭ〜１０００ｍＭの間のイオン強度を有する請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
さらに、前記細胞毒性剤または前記細胞毒性剤・リンカー化合物の前記細胞結合剤との反応の後で高濃度緩衝液を含む反応停止溶液を混合する工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
（ｉ）前記反応停止溶液における前記緩衝液の前記濃度が、２００ｍＭ〜３０００ｍＭの間、２００ｍＭ〜２０００ｍＭの間、２００ｍＭ〜１０００ｍＭの間、５００ｍＭ〜１０００ｍＭの間、５５０ｍＭ〜１０００ｍＭの間、６００ｍＭ〜１０００ｍＭの間、１５０ｍＭ〜７５０ｍＭの間、１５０ｍＭ〜６００ｍＭの間、２００ｍＭ〜５００ｍＭの間、２００ｍＭ〜４００ｍＭの間、もしくは２５０ｍＭ〜３５０ｍＭであるか、または（ｉｉ）前記反応停止溶液が７５０ｍＭのＥＰＰＳ及び１５０ｍＭのヒスチジン塩酸塩を含む請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞毒性剤または前記細胞毒性剤・リンカー化合物が以下の構造式：
【化１】
2019510741.tif 000001
の１つまたは薬学上許容できるその塩によって表され、式中、
Ｌは、以下の式：
−ＮＲ５−Ｐ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＲａＲｂ）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）Ｅ       （Ａ１）；または −ＮＲ５−Ｐ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＲａＲｂ）ｍ−Ｓ−Ｚｓ１  （Ａ３）；によって表され、
その際、
Ｒ５は−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり；
Ｐは２〜２０の間のアミノ酸残基を含有するアミノ酸残基またはペプチドであり；
Ｒａ及びＲｂは各存在について、それぞれ独立して−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、または荷電した置換基またはイオン化できる基Ｑであり；
ｍは１〜６の整数であり；
Ｚｓ１は以下の式：
【化２】
2019510741.tif 000002
のいずれか１つから選択され；
ｑは１〜５の整数であり；
Ｍは−Ｈまたはカチオンであり；
−Ｃ（＝Ｏ）Ｅは反応性エステル基を表す、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
Ｒａ及びＲｂが双方ともＨであり、Ｒ５がＨまたはＭｅである請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
Ｐが２〜５のアミノ酸残基を含有し、腫瘍組織で発現されるプロテアーゼによって切断できるペプチドである請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
Ｐが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２１）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２２）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２３）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ、及びＭｅｔ−Ａｌａから選択される請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
Ｑが−ＳＯ３Ｍである請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞毒性剤または前記細胞毒性剤・リンカー化合物が以下の式：
【化３】
2019510741.tif 000003
【化４】
2019510741.tif 000004
の１つまたは薬学上許容できるその塩によって表される請求項１３に記載の方法であって、ここで：
（ｉ）前記反応性エステル基−Ｃ（＝Ｏ）Ｅが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、ニトロフェニル（たとえば、２または４−ニトロフェニル）エステル、ジニトロフェニル（たとえば、２，４−ジニトロフェニル）エステル、スルホ−テトラフルオロフェニル（たとえば、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル）エステル、及びペンタフルオロフェニルエステルから選択されるか；または
（ｉｉ）前記反応性エステル基−Ｃ（＝Ｏ）Ｅが、以下の式：
【化５】
2019510741.tif 000005
によって表され、式中、ＵがＨまたは−ＳＯ３Ｍであるか；または
（ｉｉｉ）前記反応性エステル基−Ｃ（＝Ｏ）Ｅが、以下の式
【化６】
2019510741.tif 000006
によって表される、方法。
【請求項１９】
前記細胞毒性剤が以下の構造式：
【化７】
2019510741.tif 000007
または薬学上許容できるその塩によって表される請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞毒性剤または前記細胞毒性剤・リンカー化合物が以下の構造式：
【化８】
2019510741.tif 000008
の１つまたは薬学上許容できるその塩によって表され、式中、
Ｒｘ１及びＲｘ２は独立して（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；
Ｒｅ１は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；
Ｒｅ２は−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり；
ｎは２〜６の整数であり；
Ｒｋは−Ｈまたは−Ｍｅであり；
Ｚｓ１は以下の式：
【化９】
2019510741.tif 000009
のいずれか１つから選択され；その際、
ｑは１〜５の整数であり；
Ｍは−Ｈまたはカチオンであり；
−Ｃ（＝Ｏ）Ｅは反応性エステル基を表す請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記細胞結合剤が抗体、モノクローナル抗体またはヒト化モノクローナル抗体である請求項１に記載の方法。