【手続補正書】
【提出日】令和2年8月27日(2020.8.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
5'から3'の順に以下：
（a）ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ（PGK）プロモーター配列またはその機能的ホモログもしくは変種と、
（b）ヒトFANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種をコードする配列と、
（c）ウッドチャック肝炎ウイルス調節エレメント（WPRE）RNA輸送シグナル配列またはその機能的変種もしくはフラグメントと
を含むポリヌクレオチド配列を含む発現カセットであって、ヒトFANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種をコードする配列が、PGKプロモーター配列に機能的に連結されている、発現カセット。
【請求項２】
FANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種が、SEQ ID NO:25に示される配列を含む、請求項1記載の発現カセット。
【請求項３】
FANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種をコードする配列が、SEQ ID NO:8に示される配列を含む、請求項1記載の発現カセット。
【請求項４】
PGKプロモーターが、SEQ ID NO:7のヌクレオチド配列を含む、請求項1記載の発現カセット。
【請求項５】
WPREエレメントが、SEQ ID NO:23のヌクレオチド配列を含む、請求項1記載の発現カセット。
【請求項６】
SEQ ID NO:24のヌクレオチド配列を含む、請求項1記載の発現カセット。
【請求項７】
1つまたは複数のエンハンサー配列をさらに含む、請求項1〜6のいずれか一項記載の発現カセット。
【請求項８】
（d）ポリプリントラクト（PPT）またはポリアデニル化（ポリA)シグナル配列
をさらに含む、請求項1〜7のいずれか一項記載の発現カセット。
【請求項９】
以下の配列：
（e）パッケージングシグナル配列、
（f）短縮型Gag配列、
（g）Rev応答エレメント（RRE）、
（h）セントラルポリプリントラクト（cPPT）、
（i）セントラルターミナル配列（CTS）、および
（j）上流配列エレメント（USE）、任意でサルウイルス40由来（SV40-USE）
のうちの1つまたは複数をさらに含む、請求項1〜8のいずれか一項記載の発現カセット。
【請求項１０】
請求項1〜9のいずれか一項記載の発現カセットを含む、組換え遺伝子送達ベクター。
【請求項１１】
ウイルスまたはウイルスベクターである、請求項10記載の組換え遺伝子送達ベクター。
【請求項１２】
ウイルスまたはウイルスベクターが、レンチウイルス（LV）である、請求項11記載の組換え遺伝子送達ベクター。
【請求項１３】
請求項1〜9のいずれか一項記載の発現カセットまたは請求項10〜12のいずれか一項記載の組換え遺伝子送達ベクターを含む、細胞。
【請求項１４】
造血幹細胞である、請求項13記載の細胞。
【請求項１５】
CD34+細胞である、請求項13記載の細胞。
【請求項１６】
薬学的に許容される賦形剤および請求項10〜12のいずれか一項記載の組換え遺伝子送達ベクターを含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
薬学的に許容される賦形剤および請求項13〜15のいずれか一項記載の細胞を含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
その必要がある対象においてファンコニ貧血を処置するための、請求項16または請求項17記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
請求項1〜9のいずれか一項記載の発現カセットを含むCD34+細胞を含む、その必要がある対象においてファンコニ貧血を処置するための薬学的組成物。
【請求項２０】
CD34+細胞が、前記対象から得られたものである、請求項19記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
CD34+細胞が、前記対象を（i）G-CSFまたはフィルグラスチムおよび（ii）プレリキサホルの組み合わせで処置した後に該対象から得られたものである、請求項20記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
CD34+細胞が、前記発現カセットを含む組換え遺伝子送達ベクターを用いて形質導入されたものである、請求項20または21記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
CD34+細胞が、該CD34+細胞と前記組換え遺伝子送達ベクターを約24時間接触させることによって形質導入されたものである、請求項22記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
その必要がある対象においてファンコニ貧血を処置するためのCD34+細胞が濃縮された細胞集団を調製する方法であって、
（a）（i）G-CSFまたはフィルグラスチムおよび（ii）プレリキサホルの組み合わせを投与した該対象由来のCD34+細胞を含む生物学的サンプルを提供する工程であって、該生物学的サンプルが任意で末梢血または骨髄である、工程、
（b）該生物学的サンプルから、CD34+細胞が濃縮された細胞集団を調製する工程、ならびに
（c）請求項1〜9のいずれか一項記載の発現カセットを含む組換え遺伝子送達ベクターを用いて、CD34+細胞が濃縮された細胞集団に形質導入する工程であって、該形質導入が、該CD34+細胞が濃縮された細胞集団とレンチウイルスベクターを約24時間接触させることを含む、工程を含む、方法。
【請求項２５】
前記細胞集団を調製する工程が、赤血球を除去する工程を含む、請求項24記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞集団を調製する工程が、陽性選択、陰性選択またはそれらの組み合わせによりCD34+細胞を濃縮する工程を含む、請求項24または25記載の方法。
【請求項２７】
前記対象におけるファンコニ貧血の発症を阻害する、ファンコニ貧血の進行を停止させる、および／またはファンコニ貧血の血液学的症状の進行を逆転させる、請求項18〜23のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
ファンコニ貧血の血液学的症状が、BMF、血小板減少症、白血球減少症、汎血球減少症、好中球減少症および貧血のうちの1つまたは複数から選択される、請求項27記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
[本発明1001]
5'から3'の順に以下：
（a）ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ（PGK）プロモーター配列またはその機能的ホモログもしくは変種と、
（b）ヒトFANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種をコードする配列と、
（c）ウッドチャック肝炎ウイルス調節エレメント（WPRE）RNA輸送シグナル配列またはその機能的変種もしくはフラグメントと
を含むポリヌクレオチド配列を含む発現カセットであって、ヒトFANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種をコードする配列が、PGKプロモーター配列に機能的に連結されている、発現カセット。
[本発明1002]
FANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種が、SEQ ID NO:25に示される配列を含む、本発明1001の発現カセット。
[本発明1003]
FANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種をコードする配列が、SEQ ID NO:8に示される配列を含む、本発明1001の発現カセット。
[本発明1004]
PGKプロモーターが、SEQ ID NO:7のヌクレオチド配列を含む、本発明1001の発現カセット。
[本発明1005]
WPREエレメントが、SEQ ID NO:23のヌクレオチド配列を含む、本発明1001の発現カセット。
[本発明1006]
SEQ ID NO:24のヌクレオチド配列を含む、本発明1001の発現カセット。
[本発明1007]
1つまたは複数のエンハンサー配列をさらに含む、本発明1001〜1008のいずれかの発現カセット。
[本発明1008]
（d）ポリプリントラクト（PPT）またはポリアデニル化（ポリA)シグナル配列
をさらに含む、本発明1001の発現カセット。
[本発明1009]
以下の配列：
（e）パッケージングシグナル配列、
（f）短縮型Gag配列、
（g）Rev応答エレメント（RRE）、
（h）セントラルポリプリントラクト（cPPT）、
（i）セントラルターミナル配列（CTS）、および
（j）上流配列エレメント（USE）、任意でサルウイルス40由来（SV40-USE）
のうちの1つまたは複数をさらに含む、本発明1001の発現カセット。
[本発明1010]
本発明1001〜1009のいずれかの発現カセットを含む、組換え遺伝子送達ベクター。
[本発明1011]
ウイルスまたはウイルスベクターである、本発明1010の組換え遺伝子送達ベクター。
[本発明1012]
ウイルスまたはウイルスベクターが、レンチウイルス（LV）である、本発明1011の組換え遺伝子送達ベクター。
[本発明1013]
本発明1001の発現カセットまたは本発明1011もしくは本発明1012の組換え遺伝子送達ベクターを含む、細胞。
[本発明1014]
造血幹細胞である、本発明1013の細胞。
[本発明1015]
CD34+細胞である、本発明1013の細胞。
[本発明1016]
薬学的に許容される賦形剤および本発明1010〜1012のいずれかの組換え遺伝子送達ベクターを含む、薬学的組成物。
[本発明1017]
薬学的に許容される賦形剤および本発明1013〜1015のいずれかの細胞を含む、薬学的組成物。
[本発明1018]
その必要がある対象においてファンコニ貧血を処置する方法であって、本発明1017または本発明1017の薬学的組成物を該対象に提供する工程を含む、方法。
[本発明1019]
その必要がある対象においてファンコニ貧血を処置するための方法であって、発現カセットを含むCD34+細胞を該対象に提供する工程を含み、該発現カセットは、5’から3'の順に以下：
（a）ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ（PGK）プロモーター配列またはその機能的ホモログもしくは変種と、
（b）ヒトFANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種をコードする配列と、
（c）ウッドチャック肝炎ウイルス調節エレメント（WPRE）RNA輸送シグナル配列またはその機能的変種もしくはフラグメントと
を含むポリヌクレオチド配列を含み、ヒトFANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種をコードする配列が、PGKプロモーター配列に機能的に連結されている、方法。
[本発明1020]
CD34+細胞が、前記対象から得られた、本発明1019の方法。
[本発明1021]
CD34+細胞が、前記対象を（i）G-CSFまたはフィルグラスチムおよび（ii）プレリキサホルの組み合わせで処置した後に該対象から得られた、本発明1020の方法。
[本発明1021]
CD34+細胞が、前記発現カセットを含む組換え遺伝子送達ベクターを用いて形質導入された、本発明1020の方法。
[本発明1022]
CD34+細胞が、該CD34+細胞と前記組換え遺伝子送達ベクターを約24時間接触させることによって形質導入された、本発明1021の方法。
[本発明1023]
その必要がある対象においてファンコニ貧血を処置するための方法であって、
（a）該対象においてCD34+細胞を動員するために、該対象に（i）G-CSFまたはフィルグラスチムおよび（ii）プレリキサホルの組み合わせを提供する工程、
（b）該対象からCD34+細胞を含む生物学的サンプルを入手する工程であって、該生物学的サンプルが任意で末梢血または骨髄である、工程、
（c）該生物学的サンプルから、CD34+細胞が濃縮された細胞集団を調製する工程、
（d）5'から3'の順に以下：
（i）プロモーター配列またはその機能的ホモログもしくは変種と、
（ii）ヒトFANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種をコードする配列と
を含むポリヌクレオチド配列を含む発現カセットを含む組換え遺伝子送達ベクターを用いて、CD34+細胞が濃縮された細胞集団に形質導入する工程であって、ヒトFANCAポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは変種をコードする配列が、PGKプロモーター配列に機能的に連結されており、該形質導入が、該CD34+細胞が濃縮された細胞集団とレンチウイルスベクターを約24時間接触させることを含む、工程、ならびに
（e）工程（d）に起因するレンチウイルスベクターを用いて形質導入された細胞集団を該対象に提供する工程
を含む、方法。
[本発明1024]
前記細胞集団を調製する工程が、赤血球を除去する工程を含む、本発明1023の方法。
[本発明1025]
前記細胞集団を調製する工程が、陽性選択、陰性選択またはそれらの組み合わせによりCD34+細胞を濃縮する工程を含む、本発明1023の方法。
[本発明1026]
前記対象におけるファンコニ貧血の発症を阻害する、ファンコニ貧血の進行を停止させる、および／またはファンコニ貧血の血液学的症状の進行を逆転させる、本発明1023の方法。
[本発明1027]
ファンコニ貧血の血液学的症状が、BMF、血小板減少症、白血球減少症、汎血球減少症、好中球減少症および貧血のうちの1つまたは複数から選択される、本発明1026の方法。
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかとなり、かつそれらに包含される。