【手続補正書】
【提出日】令和2年5月22日(2020.5.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
膵島オルガノイドを作製する方法であって、ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養する段階を含み、それによって膵島オルガノイドを作製する、前記方法。
【請求項２】
iPSC由来β様細胞を脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞と共に培養する段階；および/または
iPSC由来β様細胞をiPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞と共に培養する段階であって、任意で該細胞がヒト細胞である、段階
をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項３】
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) である；および/または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、請求項2記載の方法。
【請求項４】
ジェランガムを含む3次元マトリックス中にiPSC由来β様細胞を含む、細胞培養物。
【請求項５】
脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、請求項4記載の細胞培養物。
【請求項６】
iPSC由来β様細胞がヒトiPSC由来β様細胞である；
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) である；および/または
内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、
請求項4または5記載の細胞培養物。
【請求項７】
ジェランガムを含む3次元マトリックス中にヒトiPSC由来β様細胞、ヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)、およびヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) を含む、細胞培養物。
【請求項８】
iPSC由来β様細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、前記膵島オルガノイド。
【請求項９】
iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞をさらに含むか；または脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含み；任意で、脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) でありかつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、請求項8記載の膵島オルガノイド。
【請求項１０】
KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、またはグルカゴン分泌をさらに示す、請求項9記載の膵島オルガノイド。
【請求項１１】
Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、およびFoxa2からなる群より選択されるβ細胞転写因子を発現する、請求項8記載の膵島オルガノイド。
【請求項１２】
iPSC由来β様細胞、iPSC由来α細胞、iPSC由来δ細胞、iPSC由来導管細胞、脂肪由来幹細胞 (hADSC)、および内皮細胞を含む、膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示す、前記膵島オルガノイド。
【請求項１３】
iPSC由来外分泌成分によって囲まれた請求項8〜12のいずれか一項記載の膵島オルガノイドを含む、膵臓オルガノイドであって、任意で、iPSC由来外分泌成分が、PDX1、Nkx6-1、およびPtf1からなる群より選択されるマーカーを発現する、前記膵臓オルガノイド。
【請求項１４】
請求項8〜13のいずれか一項記載のオルガノイドを移植された非ヒト生物。
【請求項１５】
膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質を同定する方法であって、
(a) 候補作用物質を膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドと接触させる段階；および
(b) 該候補作用物質と接触させたオルガノイドの活性を測定する段階
を含み、オルガノイドの活性が参照と比較して変化した場合に、候補作用物質が、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質として同定される、前記方法。
【請求項１６】
膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質を同定する方法であって、
(a) 膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドが移植された非ヒト対象に候補作用物質を投与する段階；および
(b) 該非ヒト対象の膵臓活性を測定する段階
を含み、非ヒト対象の膵臓活性が参照と比較して変化した場合に、候補作用物質が、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質として同定される、前記方法。
【請求項１７】
オルガノイドまたは非ヒト対象において膵臓疾患を誘発または模倣する段階をさらに含み、任意で、非ヒト対象がマウスである、請求項15または16記載の方法。
【請求項１８】
非ヒト対象が肝臓オルガノイドをさらに移植される、請求項15または16記載の方法。
【請求項１９】
以下の作用物質、すなわち遊離脂肪酸 (FFA)、グルコース、およびサイトカインのうちのいずれか1つまたは複数をオルガノイドと接触させることまたは非ヒト対象に投与することによって、疾患が誘発される；または
ヒト膵癌微小環境を作製するためにオルガノイドを膵癌細胞、星状細胞、および免疫細胞と共に培養することによって、疾患が模倣される、
請求項17または18記載の方法。
【請求項２０】
膵臓活性が、インスリン分泌、β細胞アポトーシス、NDUFA4、ESRRG、G6PC2、MDH1、LDHA、KCNK3、またはMAFAポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現または活性、アミラーゼ分泌、外分泌成分のアポトーシス、コラーゲン合成、および星状細胞活性化からなる群より選択される、請求項15または16記載の方法。
【請求項２１】
候補作用物質がインスリン分泌を増加させる；
膵臓活性を調節する作用物質として同定された候補作用物質が、膵臓疾患を処置する能力についてさらに試験される；
膵臓疾患が2型糖尿病または膵癌である；および/または
オルガノイドが、請求項8〜13のいずれか一項記載のオルガノイドである、
請求項15〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
膵臓疾患または1型糖尿病の治療を必要とする対象の、該対象への膵島オルガノイドの移植による膵臓疾患または1型糖尿病の治療のための、膵島オルガノイドを含む薬学的組成物あって、該膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞を含み、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、前記薬学的組成物。
【請求項２３】
膵島オルガノイドが、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞をさらに含むか；または膵島オルガノイドが、脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含み；および任意で、脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) でありかつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、請求項22記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
膵島オルガノイドが、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、またはグルカゴン分泌をさらに示す；
膵島オルガノイドが、Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、およびFoxa2からなる群より選択されるβ細胞転写因子を発現する；
膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞、iPSC由来α細胞、iPSC由来δ細胞、iPSC由来導管細胞、脂肪由来幹細胞 (hADSC)、および内皮細胞を含み、該オルガノイドが、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示す；および/または
膵島オルガノイドが、iPSC由来外分泌成分によって囲まれており、任意で、iPSC由来外分泌成分が、PDX1、Nkx6-1、およびPtf1からなる群より選択されるマーカーを発現する、
請求項22記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
膵島オルガノイドが、請求項8〜13のいずれか一項記載のオルガノイドである、請求項22〜24のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
前記薬学的組成物が免疫抑制剤と併用される；
対象がヒトである；および/または
膵臓疾患が1型糖尿病または2型糖尿病である、
請求項22〜25のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞およびiPSC由来外分泌成分細胞を培養することによって作製された、膵臓オルガノイド。
【請求項２８】
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の肝細胞を培養することによって作製された、肝臓オルガノイド。
【請求項２９】
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の心筋細胞を培養することによって作製された、心臓オルガノイド。
【請求項３０】
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の腸細胞を培養することによって作製された、腸オルガノイド。
【請求項３１】
iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞がヒトのものである、請求項27〜30のいずれか一項記載の膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
【請求項３２】
脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含み；任意で、脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) でありかつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、請求項27〜31のいずれか一項記載の記載の膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
【請求項３３】
膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドが、血管新生する；
肝臓オルガノイドが、AFP、ALB、およびCyp3a7からなる群より選択されるマーカーを発現する；
肝臓オルガノイドが、インスリンシグナル伝達、パルミチン酸によるインスリン抵抗性、および脂質蓄積を示す；
心臓オルガノイドが、hMlc2a、hNkx2-5、αMHC、およびKCNQ1からなる群より選択されるマーカーを発現する；
心臓オルガノイドが、心拍動を示す；
腸オルガノイドが、CDX2、Muc2、およびLgr5からなる群より選択されるマーカーを発現する；または
腸オルガノイドが、R-スポンジンに応答して出芽を示す、
請求項27〜32のいずれか一項記載の膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
【請求項３４】
Wnt4またはWnt5aタンパク質を含む培地中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養する段階を含む、膵島オルガノイドを作製する方法であって、人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞が3次元マトリックス中で培養され、および任意で、Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、前記方法。
【請求項３５】
ジェランガムおよびWnt4またはWnt5aタンパク質を含む3次元マトリックス中に存在するヒトiPSC由来β様細胞を含む、細胞培養物であって、ならびに任意で、Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、前記細胞培養物。
【請求項３６】
Wnt4またはWnt5aタンパク質を含む培地中で培養されたiPSC由来β様細胞を含む、膵島オルガノイドであって、該オルガノイドが、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) およびKCl刺激インスリン分泌のうちの片方または両方を示し、任意で、Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、前記膵島オルガノイド。
【請求項３７】
請求項36記載のオルガノイドを移植された非ヒト生物。
【請求項３８】
Wnt5aタンパク質を含む3次元 (3D) 培養マトリックス培地中で脂肪由来幹細胞 (ADSC) を培養する段階を含む、人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のオルガノイドを作製するためにADSCの自己組織化を増強する方法であって、任意で、Wnt5aタンパク質が組換えヒトWnt5aタンパク質である、前記方法。
【請求項３９】
ADSCが、ジェランガムを含む3D培養マトリックス中で培養される、請求項38記載の方法。
【請求項４０】
3D培養マトリックス培地が、iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞より選択されるiPSC由来細胞を含む、請求項38または39記載の方法。
【請求項４１】
iPSC由来のオルガノイドが、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドより選択される、請求項38〜40のいずれか一項記載の方法。
【請求項４２】
人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のオルガノイドがヒト人工多能性幹細胞 (hiPSC) 由来のオルガノイドである、請求項40または41記載の方法。
【請求項４３】
膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドが、それぞれ、iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞より選択されるiPSC由来細胞に由来し、任意で、iPSC由来細胞がヒトのものである、請求項38〜43のいずれか一項記載の方法。
【請求項４４】
請求項38〜43のいずれか一項記載の方法によって生成された、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４１】
本明細書において提供される任意の組成物または方法は、本明細書において提供される他の組成物および方法のいずれか1つまたは複数と組み合わせることができる。
[本発明1001]
膵島オルガノイドを作製する方法であって、ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養する段階を含み、それによって膵島オルガノイドを作製する、方法。
[本発明1002]
iPSC由来β様細胞を脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞と共に培養する段階をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
iPSC由来β様細胞をiPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞と共に培養する段階をさらに含む、本発明1001または1002の方法。
[本発明1004]
iPSC由来β様細胞、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞がヒトのものである、本発明1001または1003の方法。
[本発明1005]
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) である、本発明1002の方法。
[本発明1006]
内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、本発明1002の方法。
[本発明1007]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中にiPSC由来β様細胞を含む細胞培養物。
[本発明1008]
脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、本発明1007の細胞培養物。
[本発明1009]
iPSC由来β様細胞がヒトiPSC由来β様細胞である、本発明1007または本発明1008の細胞培養物。
[本発明1010]
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) である、本発明1008または本発明1009の細胞培養物。
[本発明1011]
内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、本発明1008〜1010のいずれかの細胞培養物。
[本発明1012]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中にヒトiPSC由来β様細胞、ヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)、およびヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) を含む、細胞培養物。
[本発明1013]
iPSC由来β様細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、膵島オルガノイド。
[本発明1014]
iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞をさらに含む、本発明1013の膵島オルガノイド。
[本発明1015]
脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、本発明1013の膵島オルガノイド。
[本発明1016]
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) であり、かつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、本発明1015の膵島オルガノイド。
[本発明1017]
KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、またはグルカゴン分泌をさらに示す、本発明1014の膵島オルガノイド。
[本発明1018]
Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、およびFoxa2からなる群より選択されるβ細胞転写因子を発現する、本発明1013の膵島オルガノイド。
[本発明1019]
iPSC由来β様細胞、iPSC由来α細胞、iPSC由来δ細胞、iPSC由来導管細胞、脂肪由来幹細胞 (hADSC)、および内皮細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示す、膵島オルガノイド。
[本発明1020]
iPSC由来外分泌成分によって囲まれた本発明1013〜1019のいずれかの膵島オルガノイドを含む、膵臓オルガノイド。
[本発明1021]
iPSC由来外分泌成分が、PDX1、Nkx6-1、およびPtf1からなる群より選択されるマーカーを発現する、本発明1020の膵臓オルガノイド。
[本発明1022]
本発明1013〜1021のいずれかのオルガノイドを移植された非ヒト生物。
[本発明1023]
哺乳動物である、本発明1022の非ヒト生物。
[本発明1024]
マウスである、本発明1023の非ヒト生物。
[本発明1025]
膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質を同定する方法であって、
(a) 候補作用物質を膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドと接触させる段階；および
(b) 該候補作用物質と接触させたオルガノイドの活性を測定する段階
を含み、オルガノイドの活性が参照と比較して変化した場合に、候補作用物質が、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質として同定される、方法。
[本発明1026]
膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質を同定する方法であって、
(a) 膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドが移植された非ヒト対象に候補作用物質を投与する段階；および
(b) 該非ヒト対象の膵臓活性を測定する段階
を含み、非ヒト対象の膵臓活性が参照と比較して変化した場合に、候補作用物質が、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質として同定される、方法。
[本発明1027]
オルガノイドまたは非ヒト対象において膵臓疾患を誘発または模倣する段階をさらに含む、本発明1025または本発明1026の方法。
[本発明1028]
非ヒト対象が肝臓オルガノイドをさらに移植される、本発明1025または本発明1026の方法。
[本発明1029]
以下の作用物質、すなわち遊離脂肪酸 (FFA)、グルコース、およびサイトカインのうちのいずれか1つまたは複数をオルガノイドと接触させることまたは非ヒト対象に投与することによって、疾患が誘発される、本発明1027または本発明1028の方法。
[本発明1030]
ヒト膵癌微小環境を創出するためにオルガノイドを膵癌細胞、星状細胞、および免疫細胞と共に培養することによって、疾患が模倣される、本発明1027または本発明1028の方法。
[本発明1031]
膵臓活性が、インスリン分泌、β細胞アポトーシス、NDUFA4、ESRRG、G6PC2、MDH1、LDHA、KCNK3、またはMAFAポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現または活性、アミラーゼ分泌、外分泌成分のアポトーシス、コラーゲン合成、および星状細胞活性化からなる群より選択される、本発明1025または1026の方法。
[本発明1032]
候補作用物質がインスリン分泌を増加させる、本発明1025〜1031のいずれかの方法。
[本発明1033]
膵臓活性を調節する作用物質として同定された候補作用物質が、膵臓疾患を処置する能力についてさらに試験される、本発明1025〜1031のいずれかの方法。
[本発明1034]
膵臓疾患が2型糖尿病または膵癌である、本発明1025〜1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
オルガノイドが、本発明1013〜1020のいずれかのオルガノイドである、本発明1025〜1034のいずれかの方法。
[本発明1036]
非ヒト対象がマウスである、本発明1026の方法。
[本発明1037]
対象における膵臓疾患を処置する方法であって、膵島オルガノイドを対象に移植する段階を含み、該膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞を含み、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、方法。
[本発明1038]
対象における1型糖尿病を処置する方法であって、膵島オルガノイドを対象に移植する段階を含み、該膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞を含み、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、方法。
[本発明1039]
膵島オルガノイドが、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞をさらに含む、本発明1037または1038の方法。
[本発明1040]
膵島オルガノイドが、脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、本発明1037または1038の方法。
[本発明1041]
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) であり、かつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、本発明1040の方法。
[本発明1042]
膵島オルガノイドが、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、またはグルカゴン分泌をさらに示す、本発明1037または1038の方法。
[本発明1043]
膵島オルガノイドが、Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、およびFoxa2からなる群より選択されるβ細胞転写因子を発現する、本発明1037〜1042のいずれかの方法。
[本発明1044]
膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞、iPSC由来α細胞、iPSC由来δ細胞、iPSC由来導管細胞、脂肪由来幹細胞 (hADSC)、および内皮細胞を含み、該オルガノイドが血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示す、本発明1037〜1043のいずれかの方法。
[本発明1045]
膵島オルガノイドがiPSC由来外分泌成分によって囲まれている、本発明1037〜1044のいずれかの方法。
[本発明1046]
iPSC由来外分泌成分が、PDX1、Nkx6-1、およびPtf1からなる群より選択されるマーカーを発現する、本発明1045の方法。
[本発明1047]
膵島オルガノイドが、本発明1013〜1021のいずれかのオルガノイドである、本発明1037〜1046のいずれかの方法。
[本発明1048]
対象が免疫抑制剤を投与される、本発明1037〜1047のいずれかの方法。
[本発明1049]
対象がヒトである、本発明1037〜1048のいずれかの方法。
[本発明1050]
膵臓疾患が1型糖尿病または2型糖尿病である、本発明1037〜1049のいずれかの方法。
[本発明1051]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養することによって作製された膵島オルガノイド。
[本発明1052]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞およびiPSC由来外分泌成分細胞を培養することによって作製された膵臓オルガノイド。
[本発明1053]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の肝細胞を培養することによって作製された肝臓オルガノイド。
[本発明1054]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の心筋細胞を培養することによって作製された心臓オルガノイド。
[本発明1055]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の腸細胞を培養することによって作製された腸オルガノイド。
[本発明1056]
iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞がヒトのものである、本発明1051〜1055のいずれかの膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
[本発明1057]
脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、本発明1051〜1055のいずれかの膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
[本発明1058]
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) であり、かつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、本発明1057の膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
[本発明1059]
血管新生する、本発明1051〜1055のいずれかの膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
[本発明1060]
AFP、ALB、およびCyp3a7からなる群より選択されるマーカーを発現する、本発明1053の肝臓オルガノイド。
[本発明1061]
インスリンシグナル伝達、パルミチン酸によるインスリン抵抗性、および脂質蓄積を示す、本発明1053の肝臓オルガノイド。
[本発明1062]
hMlc2a、hNkx2-5、αMHC、およびKCNQ1からなる群より選択されるマーカーを発現する、本発明1054の心臓オルガノイド。
[本発明1063]
心拍動を示す、本発明1054の心臓オルガノイド。
[本発明1064]
CDX2、Muc2、およびLgr5からなる群より選択されるマーカーを発現する、本発明1055の腸オルガノイド。
[本発明1065]
R-スポンジンに応答して出芽を示す、本発明1055の腸オルガノイド。
[本発明1066]
膵島オルガノイドを作製する方法であって、Wnt4またはWnt5aタンパク質を含む培地中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養する段階を含む、方法。
[本発明1067]
人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞が3次元マトリックス中で培養される、本発明1066の方法。
[本発明1068]
Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、本発明1066または本発明1067の方法。
[本発明1069]
培地が組換えヒトWnt4タンパク質を含む、本発明1068の方法。
[本発明1070]
培地が組換えヒトWnt5aタンパク質を含む、本発明1068の方法。
[本発明1071]
ヒトiPSC由来β様細胞およびWnt4またはWnt5aタンパク質を含む、細胞培養物。
[本発明1072]
ヒトiPSC由来β様細胞が、ジェランガムを含む3次元マトリックス中に存在する、本発明1071の細胞培養物。
[本発明1073]
Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、本発明1071または本発明1072の細胞培養物。
[本発明1074]
培地が組換えヒトWnt4タンパク質を含む、本発明1073の細胞培養物。
[本発明1075]
培地が組換えヒトWnt5aタンパク質を含む、本発明1073の細胞培養物。
[本発明1076]
Wnt4またはWnt5aタンパク質を含む培地中で培養されたiPSC由来β様細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、膵島オルガノイド。
[本発明1077]
KCl刺激インスリン分泌またはグルコース刺激インスリン分泌をさらに示す、本発明1076の膵島オルガノイド。
[本発明1078]
Fltp遺伝子およびEsrrg遺伝子を発現する、本発明1076または本発明1077の膵島オルガノイド。
[本発明1079]
Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、本発明1076〜1078のいずれかの膵島オルガノイド。
[本発明1080]
培地が組換えヒトWnt4タンパク質を含む、本発明1079の膵島オルガノイド。
[本発明1081]
培地が組換えヒトWnt5aタンパク質を含む、本発明1079の膵島オルガノイド。
[本発明1082]
本発明1076〜1081のいずれかのオルガノイドを移植された非ヒト生物。
[本発明1083]
人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のオルガノイドを作製するために脂肪由来幹細胞 (ADSC) の自己組織化を増強する方法であって、Wnt5aタンパク質を含む3次元 (3D) 培養マトリックス培地中でADSCを培養する段階を含む、方法。
[本発明1084]
ADSCが、ジェランガムを含む3D培養マトリックス中で培養される、本発明1083の方法。
[本発明1085]
ADSCの3D培養マトリックス培地が、iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞より選択されるiPSC由来細胞を含む、本発明1083または本発明1084の方法。
[本発明1086]
iPSC由来のオルガノイドが、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドより選択される、本発明1083〜1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のオルガノイドがヒト人工多能性幹細胞 (hiPSC) 由来のオルガノイドである、本発明1085または本発明1086の方法。
[本発明1088]
Wnt5aタンパク質が組換えヒトWnt5aタンパク質である、本発明1083〜1087のいずれかの方法。
[本発明1089]
膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドが、それぞれ、iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞より選択されるiPSC由来細胞に由来する、本発明1086〜1088のいずれかの方法。
[本発明1090]
iPSC由来細胞がヒトのものである、本発明1089の方法。
[本発明1091]
本発明1083〜1090のいずれかの方法によって生成された、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。