【手続補正書】
【提出日】令和2年3月27日(2020.3.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上の改変されたＴＣＲα対立遺伝子を含むＣＡＲ  Ｔ細胞であって、標的抗原に結合するＣＡＲをコードする核酸を含むドナー修復テンプレートが、相同組換え修復によって前記１つ以上のＴＣＲα対立遺伝子に挿入され、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、標的抗原に結合したとき、１つ以上の改変されたＴＣＲα対立遺伝子を欠いている前記標的抗原に結合したＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して、増加した量の１つ以上の炎症性サイトカインを分泌する、ＣＡＲ  Ｔ細胞。
【請求項２】
前記核酸が、前記ＣＡＲをコードする前記ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターをさらに含む、請求項１に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
【請求項３】
前記ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターが、短いＥＦ１αプロモーター、長いＥＦ１αプロモーター、ヒトＲＯＳＡ  ２６遺伝子座、ユビキチンＣ（ＵＢＣ）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ−１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β−アクチンプロモーター、および骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーターからなる群から選択される、請求項２に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
【請求項４】
前記ＣＡＲが、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＳＰＧ４、ＰＳＣＡ、ＲＯＲ１、およびＴＡＧ７２からなる群から選択される抗原に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、および一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
【請求項５】
前記ＣＡＲが、シグナルペプチド、１つ以上のリンカーペプチド、および１つ以上のヒンジペプチド、ならびに任意に、１つ以上のスペーサーペプチドをさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
【請求項６】
前記ＣＡＲが、
（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン；
（ｂ）抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン；
（ｃ）抗ＣＳＰＧ４  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン；
（ｄ）抗ＲＯＲ１  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン；
（ｅ）抗ＰＳＣＡ１  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン；または
（ｆ）抗ＴＡＧ７２  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン
を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
【請求項７】
前記１つ以上の炎症性サイトカインが、ＩＦＮγ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＮＦα、ＩＬ−８、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＭＩＰ−１αからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
【請求項８】
（ａ）請求項１〜７のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞；または
（ｂ）請求項１〜７のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞と、生理学的に許容される賦形剤
を含む、組成物。
【請求項９】
ＣＡＲ  Ｔ細胞を作製する方法であって、
ａ）ＴＣＲα対立遺伝子における標的部位で二本鎖切断を操作することと、
ｂ）前記Ｔ細胞に、ＣＡＲをコードする核酸に作動可能に連結されたＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターを含むドナー修復テンプレートを含むウイルスベクターを形質導入することと、を含み、
前記ドナー修復テンプレートが、前記二本鎖切断（ＤＳＢ）の前記部位で相同組換え修復によって前記ＴＣＲα対立遺伝子に組み込まれ、
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、標的抗原に結合したとき、改変されたＴＣＲα対立遺伝子を欠いている前記標的抗原に結合したＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して、増加した量の１つ以上の炎症性サイトカインを分泌する、方法。
【請求項１０】
前記ドナー修復テンプレートが、前記ＤＳＢの５´のＴＣＲα配列に相同な５´相同アームと、前記ＤＳＢの３´のＴＣＲα配列に相同な３´相同アームとを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ウイルスベクターが、
（ａ）組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）またはレトロウイルスベクター；
（ｂ）ＡＡＶ２からの１つ以上のＩＴＲを有するｒＡＡＶ；
（ｃ）ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、およびＡＡＶ１０からなる群から選択される血清型を有するｒＡＡＶ；
（ｄ）レンチウイルスベクター；あるいは
（ｅ）インテグラーゼ欠損レンチウイルスベクター
である、請求項９または請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記二本鎖切断が、操作されたヌクレアーゼで生成される、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
（ａ）前記操作されたヌクレアーゼが、メガヌクレアーゼ、メガＴＡＬ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼからなる群から選択される、
（ｂ）前記操作されたヌクレアーゼが、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥから操作されるメガヌクレアーゼである、
（ｃ）前記操作されたヌクレアーゼが、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよび操作されたメガヌクレアーゼを含むメガＴＡＬである、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記二本鎖切断が、操作されたエンドヌクレアーゼおよび末端プロセシング酵素によって生じる、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
（ａ）前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡおよび前記末端プロセシング酵素をコードするｍＲＮＡが、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、
（ｂ）前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡ、ウイルス自己切断ペプチド、および末端プロセシング酵素が、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、
（ｃ）前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡ、ＩＲＥＳ要素、および末端プロセシング酵素が、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、または
（ｄ）末端プロセシング酵素またはその生物学的に活性な断片に融合された前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡが、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、
請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）前記末端プロセシング酵素が、５´−３´エキソヌクレアーゼ、５´−３´アルカリ性エキソヌクレアーゼ、３´−５´エキソヌクレアーゼ、５´フラップエンドヌクレアーゼ、ヘリカーゼ、またはテンプレート依存性ＤＮＡポリメラーゼ活性を示す、あるいは
（ｂ）前記末端プロセシング酵素が、Ｔｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片を含む、
請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記１つ以上の炎症性サイトカインが、ＩＦＮγ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＮＦα、ＩＬ−８、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＭＩＰ−１αからなる群から選択される、請求項９〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５１２】
概して、続く特許請求の範囲において、使用される用語は、本明細書および特許請求の範囲に開示される特定の実施形態に特許請求の範囲を限定するものと解釈されるべきではなく、可能性のある全ての実施形態を、かかる特許請求の範囲が権利を有する同等物の全範囲と共に含むものと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、開示により制限されない。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
１つ以上の改変されたＴ細胞受容体アルファ（ＴＣＲα）対立遺伝子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞であって、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、標的抗原に結合したとき、１つ以上の改変されたＴＣＲα対立遺伝子を欠いている前記標的抗原に結合したＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して、増加した量の炎症性サイトカインを分泌する、ＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２)
前記ＣＡＲが、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＳＰＧ４、ＰＳＣＡ、ＲＯＲ１、およびＴＡＧ７２からなる群から選択される標的抗原に結合する細胞外ドメインを含む、項目１に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目３)
前記ＣＡＲは、前記Ｔ細胞受容体のアルファ鎖またはベータ鎖、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、およびＰＤ−１からなる群から選択されるポリペプチドから単離された膜貫通ドメインを含む、項目１または項目２に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目４)
前記ＣＡＲが、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０からなる群から選択されるポリペプチドから単離された１つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインを含む、項目１〜３のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目５)
前記ＣＡＲが、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからなる群から選択されるポリペプチドから単離されたシグナル伝達ドメインを含む、項目１〜４のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目６)
前記ＣＡＲが、ＣＤ８αのヒンジ領域、ＰＤ１のヒンジ領域、およびＣＤ１５２のヒンジ領域からなる群から選択されるヒンジ領域ポリペプチドを含む、項目１〜５のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目７)
前記ＣＡＲが、１つ以上のリンカーポリペプチドを含む、項目１〜６のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目８)
前記ＣＡＲが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、またはＩｇＤのＣＨ２およびＣＨ３領域を含むスペーサー領域ポリペプチドを含む、項目１〜７のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目９)
前記ＣＡＲが、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペプチド、ＣＤ８αシグナルポリペプチド、およびヒトＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファシグナルポリペプチドからなる群から選択されるシグナルペプチドを含む、項目１〜８のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目１０)
前記１つ以上の改変されたＴＣＲα対立遺伝子が、非機能性であるか、または実質的に減少した機能を有する、項目１〜９のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目１１)
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、前記ＣＡＲをコードする核酸を含む１つ以上のプロウイルス組み込み体を含む、項目１〜１０のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目１２)
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、前記ＣＡＲをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含むポリヌクレオチドを含み、前記ポリヌクレオチドが、相同組換え修復によって前記１つ以上のＴＣＲα対立遺伝子に挿入されている、項目１〜１０のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目１３)
前記１つ以上の炎症性サイトカインが、ＩＦＮγ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＮＦα、ＩＬ−８、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＭＩＰ−１αからなる群から選択される、項目１〜１２のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目１４)
ＣＡＲ  Ｔ細胞であって、
ａ）１つ以上の改変されたＴＣＲα対立遺伝子と、
ｂ）標的抗原に結合するＣＡＲをコードする核酸と、を含み、
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、前記標的抗原を発現する標的細胞と接触したとき、１つ以上の改変されたＴＣＲα対立遺伝子を欠いている前記標的抗原に結合したＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して、増加した量の１つ以上の炎症性サイトカインを分泌する、ＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目１５)
ＣＡＲ  Ｔ細胞であって、
ａ）１つ以上の改変されたＴＣＲα対立遺伝子と、
ｂ）標的抗原に結合するＣＡＲをコードする核酸を含む１つ以上のプロウイルス組み込み体と、を含み、
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、標的抗原に結合したとき、１つ以上の改変されたＴＣＲα対立遺伝子を欠いている前記標的抗原に結合したＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して、増加した量の１つ以上の炎症性サイトカインを分泌する、ＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目１６)
１つ以上の改変されたＴＣＲα対立遺伝子を含むＣＡＲ  Ｔ細胞であって、標的抗原に結合するＣＡＲをコードする核酸を含むドナー修復テンプレートが、相同組換え修復によって前記１つ以上のＴＣＲα対立遺伝子に挿入され、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、標的抗原に結合したとき、１つ以上の改変されたＴＣＲα対立遺伝子を欠いている前記標的抗原に結合したＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して、増加した量の１つ以上の炎症性サイトカインを分泌する、ＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目１７)
前記核酸が、前記ＣＡＲをコードする前記ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターをさらに含む、項目１４〜１６のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目１８)
前記ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターが、短いＥＦ１αプロモーター、長いＥＦ１αプロモーター、ヒトＲＯＳＡ  ２６遺伝子座、ユビキチンＣ（ＵＢＣ）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ−１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β−アクチンプロモーター、および骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーターからなる群から選択される、項目１７に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目１９)
前記ＣＡＲが、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＳＰＧ４、ＰＳＣＡ、ＲＯＲ１、およびＴＡＧ７２からなる群から選択される抗原に結合する細胞外ドメインを含む、項目１４〜１８のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２０)
前記ＣＡＲが、膜貫通ドメインおよび１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、項目１４〜１９のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２１)
前記ＣＡＲが、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、および一次シグナル伝達ドメインを含む、項目１４〜２０のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２２)
前記ＣＡＲが、シグナルペプチド、１つ以上のリンカーペプチド、および１つ以上のヒンジペプチド、ならびに任意に、１つ以上のスペーサーペプチドをさらに含む、項目１４〜２１のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２３)
前記ＣＡＲが、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、項目１４〜２１のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２４)
前記ＣＡＲが、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、項目１４〜２１のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２５)
前記ＣＡＲが、抗ＣＳＰＧ４  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、項目１４〜２１のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２６)
前記ＣＡＲが、抗ＲＯＲ１  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、項目１４〜２１のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２７)
前記ＣＡＲが、抗ＰＳＣＡ  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、項目１４〜２１のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２８)
前記ＣＡＲが、抗ＴＡＧ７２  ｓｃＦｖ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、項目１４〜２１のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目２９)
前記１つ以上の炎症性サイトカインが、ＩＦＮγ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＮＦα、ＩＬ−８、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＭＩＰ−１αからなる群から選択される、項目１４〜２８のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞。
(項目３０)
項目１〜２９のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞を含む、組成物。
(項目３１)
項目１〜２９のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞と、生理学的に許容される賦形剤と、を含む、組成物。
(項目３２)
ＣＡＲ  Ｔ細胞を作製する方法であって、
ａ）ＴＣＲα対立遺伝子における標的部位で二本鎖切断を操作することであって、前記切断が、非相同末端連結（ＮＨＥＪ）によって修復され、それによって、改変されたＴＣＲα対立遺伝子を生成する、操作することと、
ｂ）ＣＡＲをコードするウイルスベクターを前記Ｔ細胞に形質導入することと、を含み、
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、標的抗原に結合したとき、改変されたＴＣＲα対立遺伝子を欠いている前記標的抗原に結合したＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して、増加した量の１つ以上の炎症性サイトカインを分泌する、方法。
(項目３３)
前記改変されたＴＣＲα対立遺伝子が、非機能性であるか、または実質的に減少した機能を有する、項目３２に記載の方法。
(項目３４)
前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクターである、項目３２または項目３３に記載の方法。
(項目３５)
前記レトロウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、項目３４に記載の方法。
(項目３６)
ＣＡＲ  Ｔ細胞を作製する方法であって、
ａ）ＴＣＲα対立遺伝子における標的部位で二本鎖切断を操作することと、
ｂ）前記Ｔ細胞に、ＣＡＲをコードする核酸に作動可能に連結されたＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターを含むドナー修復テンプレートを含むウイルスベクターを形質導入することと、を含み、
前記ドナー修復テンプレートが、前記二本鎖切断（ＤＳＢ）の前記部位で相同組換え修復によって前記ＴＣＲα対立遺伝子に組み込まれ、
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、標的抗原に結合したとき、改変されたＴＣＲα対立遺伝子を欠いている前記標的抗原に結合したＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して、増加した量の１つ以上の炎症性サイトカインを分泌する、方法。
(項目３７)
前記ドナー修復テンプレートが、前記ＤＳＢの５´のＴＣＲα配列に相同な５´相同アームと、前記ＤＳＢの３´のＴＣＲα配列に相同な３´相同アームとを含む、項目３６に記載の方法。
(項目３８)
前記ウイルスベクターが、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）またはレトロウイルスである、項目３６または３７に記載の方法。
(項目３９)
前記ｒＡＡＶが、ＡＡＶ２からの１つ以上のＩＴＲを有する、項目３８に記載の方法。
(項目４０)
前記ｒＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、およびＡＡＶ１０からなる群から選択される血清型を有する、項目３８または項目３９に記載の方法。
(項目４１)
前記レトロウイルスが、レンチウイルスである、項目３８に記載の方法。
(項目４２)
前記レンチウイルスが、インテグラーゼ欠損レンチウイルスである、項目４１に記載の方法。
(項目４３)
前記二本鎖切断が、操作されたヌクレアーゼで生成される、項目３２〜４２のいずれか１項に記載の方法。
(項目４４)
前記操作されたヌクレアーゼが、メガヌクレアーゼ、メガＴＡＬ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼからなる群から選択される、項目４２に記載の方法。
(項目４５)
前記メガヌクレアーゼが、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥから操作される、項目４３または項目４４に記載の方法。
(項目４６)
前記操作されたヌクレアーゼが、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよび操作されたメガヌクレアーゼを含むメガＴＡＬである、項目４３または項目４４に記載の方法。
(項目４７)
前記二本鎖切断が、操作されたエンドヌクレアーゼおよび末端プロセシング酵素によって生じる、項目３２〜４６のいずれか１項に記載の方法。
(項目４８)
前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡおよび前記末端プロセシング酵素をコードするｍＲＮＡが、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、項目４７に記載の方法。
(項目４９)
前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡ、ウイルス自己切断ペプチド、および末端プロセシング酵素が、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、項目４７に記載の方法。
(項目５０)
前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡ、ＩＲＥＳ要素、および末端プロセシング酵素が、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、項目４７に記載の方法。
(項目５１)
末端プロセシング酵素またはその生物学的に活性な断片に融合された前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡが、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、項目４７に記載の方法。
(項目５２)
前記末端プロセシング酵素が、５´−３´エキソヌクレアーゼ、５´−３´アルカリ性エキソヌクレアーゼ、３´−５´エキソヌクレアーゼ、５´フラップエンドヌクレアーゼ、ヘリカーゼ、またはテンプレート依存性ＤＮＡポリメラーゼ活性を示す、項目４７〜５１のいずれか１項に記載の方法。
(項目５３)
前記末端プロセシング酵素が、Ｔｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片を含む、項目４７〜５２のいずれか１項に記載の方法。
(項目５４)
前記１つ以上の炎症性サイトカインが、ＩＦＮγ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＮＦα、ＩＬ−８、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＭＩＰ−１αからなる群から選択される、項目３２〜５３のいずれか１項に記載の方法。
(項目５５)
対象におけるがんを治療する方法であって、前記対象に、項目１〜２９のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞、または項目３０もしくは項目３１に記載の組成物を投与することを含む、方法。
(項目５６)
腫瘍を排除するために前記対象に投与される改変されたＴＣＲα対立遺伝子を含むＣＡＲ  Ｔ細胞の治療上有効量が、前記腫瘍を排除するために前記対象に投与される改変されたＴＣＲαを欠いているＣＡＲ  Ｔ細胞の治療上有効量より少ない、項目５５に記載の方法。
(項目５７)
前記がんが、固形がんである、項目５５または項目５６に記載の方法。
(項目５８)
前記がんが、液性がんである、項目５５または項目５６に記載の方法。
(項目５９)
前記液性がんが、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、および真性赤血球増加症、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、菌状息肉腫、菌状息肉腫、未分化大細胞リンパ腫、セザリー症候群、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、多発性骨髄腫、顕性多発性骨髄腫、くすぶり多発性骨髄腫、形質細胞白血病、非分泌性骨髄腫、ＩｇＤ骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、ならびに髄外性形質細胞腫からなる群から選択される血液学的悪性腫瘍である、項目５８に記載の方法。
(項目６０)
前記血液学的悪性腫瘍が、多発性骨髄腫である、項目５６に記載の方法。
(項目６１)
前記血液学的悪性腫瘍が、ＣＬＬである、項目５６に記載の方法。
(項目６２)
治療を必要とする対象におけるＢ細胞関連状態を治療する方法であって、前記対象に、治療上有効量の項目１〜２９のいずれか１項に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞、または前記対象に、治療上有効量の項目３０もしくは項目３１に記載の組成物を投与することを含む、方法。
(項目６３)
前記Ｂ細胞関連状態が、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、不確定な悪性度のＢ細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症、移植後リンパ増殖性障害、免疫調節性障害、関節リウマチ、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、抗リン脂質抗体症候群、シャーガス病、グレーブス病、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発動脈炎、シェーグレン症候群、尋常性天疱瘡、強皮症、多発性硬化症、抗リン脂質抗体症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、グッドパスチャー病、川崎病、自己免疫性溶血性貧血、および急速進行性糸球体腎炎、重鎖病、原発性もしくは免疫細胞関連アミロイドーシス、または意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症である、項目６２に記載の方法。
(項目６４)
前記Ｂ細胞関連状態が、Ｂ細胞悪性腫瘍である、項目６３に記載の方法。
(項目６５)
前記Ｂ細胞関連状態が、形質細胞悪性腫瘍である、項目６３に記載の方法。
(項目６６)
前記Ｂ細胞関連状態が、自己免疫疾患である、項目６３に記載の方法。
(項目６７)
ＣＡＲ  Ｔ細胞の有効性を増大させる方法であって、ＴＣＲα対立遺伝子における標的部位で二本鎖切断（ＤＳＢ）を形成する操作されたヌクレアーゼを導入して、前記ＴＣＲα対立遺伝子を改変させることによって、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞表面上のＴＣＲαシグナル伝達成分の利用能を低減させることを含む、方法。
(項目６８)
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、前記ＣＡＲをコードする１つ以上のプロウイルス組み込み体を含み、前記ＤＳＢが、非相同末端連結（ＮＨＥＪ）によって修復される、項目６７に記載の方法。
(項目６９)
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、前記ＤＳＢで相同組換え修復により前記ＴＣＲα対立遺伝子に組み込まれるＣＡＲをコードする核酸に作動可能に連結されたＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターを含む、項目６７に記載の方法。
(項目７０)
前記操作されたヌクレアーゼが、メガヌクレアーゼ、メガＴＡＬ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼからなる群から選択される、項目６７〜６９のいずれか１項に記載の方法。
(項目７１)
前記メガヌクレアーゼが、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥから操作される、項目７０に記載の方法。
(項目７２)
前記操作されたヌクレアーゼが、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよび操作されたメガヌクレアーゼを含むメガＴＡＬである、項目７０に記載の方法。
(項目７３)
前記二本鎖切断が、操作されたエンドヌクレアーゼおよび末端プロセシング酵素によって生じる、項目６７〜６９のいずれか１項に記載の方法。
(項目７４)
前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡ、および前記末端プロセシング酵素をコードするｍＲＮＡが、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、項目７３に記載の方法。
(項目７５)
前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡ、ウイルス自己切断ペプチド、および末端プロセシング酵素が、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、項目７３に記載の方法。
(項目７６)
前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡ、ＩＲＥＳ要素、および末端プロセシング酵素が、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、項目７３に記載の方法。
(項目７７)
末端プロセシング酵素またはその生物学的に活性な断片に融合された前記操作されたエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡが、前記Ｔ細胞に導入されて、前記二本鎖切断を生じさせる、項目７３に記載の方法。
(項目７８)
前記末端プロセシング酵素が、５´−３´エキソヌクレアーゼ、５´−３´アルカリ性エキソヌクレアーゼ、３´−５´エキソヌクレアーゼ、５´フラップエンドヌクレアーゼ、ヘリカーゼ、またはテンプレート依存性ＤＮＡポリメラーゼ活性を示す、項目７４〜７７のいずれか１項に記載の方法。
(項目７９)
前記末端プロセシング酵素が、Ｔｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片を含む、項目７４〜７８のいずれか１項に記載の方法。
(項目８０)
標的抗原に結合した前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、改変されたＴＣＲα対立遺伝子を欠いている前記標的抗原に結合したＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して増加した量の、ＩＦＮγ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＮＦα、ＩＬ−８、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＭＩＰ−１αからなる群から選択される１つ以上の炎症性サイトカインを分泌する、項目６７〜７８のいずれか１項に記載の方法。