【手続補正書】
【提出日】令和2年11月10日(2020.11.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号８３のＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノム配列内の複数のヌクレオチドに相補的である配列を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項２】
前記オリゴヌクレオチドが、前記ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのエンハンサーＩ領域内の少なくとも１２ヌクレオチドに相補的である、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのヌクレオチド位置９６７〜ヌクレオチド位置１３２２に対応するゲノム領域に存在する少なくとも１２ヌクレオチドに相補的である配列を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項４】
前記オリゴヌクレオチドの前記配列が、配列番号１〜６５からなる群から選択される、請求項３に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
前記オリゴヌクレオチドが、第２のヌクレオチドに対するホスホロチオエート（ＰＳ）結合を有する少なくとも１つの第１のヌクレオチドを含有し、前記第１のヌクレオチドが、Ｆ及びＯ−アルキルからなる群から選択される置換で２’位において修飾され、前記Ｏ−アルキルが、任意にアルコキシで置換されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
シトシン核酸塩基を有する前記オリゴヌクレオチドの各ヌクレオチドが、２’−Ｏ−Ｍｅ、５−メチルシトシン（５ｍｍＣ）であるように修飾され、各他のヌクレオチドが、２’位においてＯ−Ｍｅ修飾（ｍＡ、ｍＧ及びｍＵ）を含むように修飾され、各ヌクレオチドが、ヌクレオチド間にホスホロチオエート（ＰＳ）結合を含有する、請求項５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチドの前記配列が、配列番号６６〜７２及び７４〜８２からなる群から選択される、請求項６に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項８】
前記オリゴヌクレオチドが、第２のヌクレオチドに対するチオホスホロアミダート（ＮＰＳ）結合を有する少なくとも１つの第１のヌクレオチドを含有し、前記第１のヌクレオチドが、Ｆ及びＯ−アルキルからなる群から選択される置換で２’位において修飾され、前記Ｏ−アルキルが、任意にアルコキシで置換されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項９】
シトシン核酸塩基を有する前記オリゴヌクレオチドの各ヌクレオチドが、２’−Ｏ−Ｍｅ、５−メチルシトシン（５ｍｍＣ）を含むように修飾され、各他のヌクレオチドが、２’位においてＯ−Ｍｅ修飾（ｍＡ、ｍＧ及びｍＵ）を含むように修飾され、各ヌクレオチドが、ヌクレオチド間にチオホスホロアミダート（ＮＰＳ）結合を含有する、請求項８に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
前記オリゴヌクレオチドの前記配列が、配列番号７３である、請求項９に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
前記オリゴヌクレオチドに共役された少なくとも１つの標的化部分を更に含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
前記オリゴヌクレオチドに共役された前記標的化部分が、ＧａｌＮＡｃ、パルミトイル及びトコフェロール誘導体からなる群から選択される、請求項１１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
前記オリゴヌクレオチドの前記配列が、配列番号８０〜８２からなる群から選択される、請求項１２に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む、医薬組成物。
【請求項１５】
ＨＢＶの治療をするための請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記オリゴヌクレオチドの配列が、配列番号１〜８２からなる群から選択される、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記オリゴヌクレオチドの投与が、対象におけるＨＢｅＡｇレベル、ＨＢｓＡｇレベル又はＨＢＶ  ＤＮＡレベルのうちの少なくとも１つの減少をもたらす、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記オリゴヌクレオチドの投与が、対象におけるＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡの低減をもたらす、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
抗ウイルス剤、ヌクレオチド類似体、ヌクレオシド類似体、逆転写酵素阻害剤、免疫調節物質、治療ワクチン、ウイルス侵入阻害剤、カプシド阻害剤、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｃｃｃＤＮＡ阻害剤からなる群から選択される１種又は２種以上の追加の治療剤を更に含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本開示は、オリゴヌクレオチド及びその医薬組成物を対象とする。オリゴヌクレオチドは、配列番号８３のＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノム配列内の複数のヌクレオチドに相補的である配列を含む。実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノム内の少なくとも１２ヌクレオチドに相補的である配列を含む。実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのエンハンサーＩ領域内で少なくとも１２ヌクレオチドに相補的である。実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのヌクレオチド位置９６７〜ヌクレオチド位置１３２２に対応する領域に存在する、少なくとも１２ヌクレオチドに相補的である配列を含む。実施形態では、オリゴヌクレオチドの配列は、配列番号１〜６５のうちのいずれか１つである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
一態様では、本開示は、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのエンハンサーＩ付近又はその中の複数のヌクレオチドに相補的である配列を含むオリゴヌクレオチドを提供し、ここでエンハンサーＩは、配列番号８３のＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノム配列のヌクレオチド位置９００〜ヌクレオチド位置１３１０に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのエンハンサーＩ領域内で少なくとも１５ヌクレオチドに相補的である。ある実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのエンハンサーＩ領域内で少なくとも１９ヌクレオチドに相補的である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
別の態様では、本開示は、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのヌクレオチド位置９６０〜ヌクレオチド位置１３３０に対応するゲノム領域に存在する少なくとも１５ヌクレオチドに相補的である配列を含むオリゴヌクレオチドを提供し、ここでＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノム配列は、配列番号８３である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのヌクレオチド位置９６０〜ヌクレオチド位置１３３０に対応するゲノム領域に存在する、少なくとも１９ヌクレオチドに相補的である配列を含む。追加的に又は代替的に、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの配列は、配列番号１〜８２からなる群から選択される。追加的に又は代替的に、上記実施形態のうちのいずれかにおいて、オリゴヌクレオチドは、第２のヌクレオチドへのＰＳ結合を有する少なくとも１つの第１のヌクレオチドを含み、当該第１のヌクレオチドは、Ｆ及びＯ−アルキルからなる群から選択される置換で２’位において修飾され、当該Ｏ−アルキルは、任意にアルコキシで置換される。追加的に又は代替的に、上記の実施形態のうちのいずれかにおいて、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオチドは、ＰＳ結合によってオリゴヌクレオチドの他のヌクレオチドに結合され、Ｏ−Ｍｅで２’位において修飾される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
別の態様では、本開示は、ＨＢＶの治療に使用するためのオリゴヌクレオチドを提供し、ここでオリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのエンハンサーＩ付近又はその中の複数のヌクレオチドに相補的である配列を含み、エンハンサーＩは、配列番号８３のＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのヌクレオチド位置９００〜ヌクレオチド位置１３１０に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡゲノムのヌクレオチド位置９６０〜ヌクレオチド位置１３３０に対応するゲノム領域に存在する、少なくとも１５ヌクレオチドに相補的である配列を含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの配列は、配列番号１〜８２からなる群から選択される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
【図１】ＨＢＶゲノムの物理的マップを示す。ＨＢＶゲノムは、長さがおよそ３２００ヌクレオチドであり、エンハンサーＩ領域のヌクレオチド配列は、位置９００で始まり、位置１３１０で終わる。
【図２Ａ】様々な濃度の配列番号７１で治療されたＨＢＶ感染したＰＨＨのサザンブロット結果を示す。
【図２Ｂ】様々な濃度の配列番号７１で治療されたＨＢＶ感染したＰＨＨのｑＰＣＲ結果を示す。
【図２Ｃ】様々な濃度の配列番号７１で治療されたＨＢＶ感染したＰＨＨのｃｃｃＤＮＡレベルの低減率％を示す。
【図２Ｄ】様々な濃度の配列番号７５、配列番号７２及び配列番号７０で治療されたＨＢＶ感染したＰＨＨのサザンブロット結果を示す。図２Ａ〜図２Ｄにおいて、ＰＨＨを０日目にＨＢＶに感染させ、４日目に示されたｃｃｃＤＮＡ標的化オリゴヌクレオチドで治療した。１１日目にＨｉｒｔ  ＤＮＡ抽出法を使用して、ＰＨＨからＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡを抽出した。
【図３Ａ】投与後２４時間、７２時間、又は１６８時間のマウスにおける、配列番号７１及び配列番号８０（配列番号７１は３’ＧａｌＮＡｃを有する）のインビボ肝臓濃度を示す。
【図３Ｂ】マウスにおける配列番号７１及び配列番号８０の肝臓Ｃｍａｘ及び肝臓半減期を示す。図３Ａ〜図３Ｂについて、１０ｍｇ／ｋｇの示されたオリゴヌクレオチドを、Ｃ５７Ｂｌ／６雌マウス（ｎ＝３）に皮下送達した。
【図４Ａ】配列番号７１及び配列番号７２で治療されたＨＢＶ感染したＰＨＨが、ＩＦＮ活性化遺伝子発現の増加を呈したことを示す。
【図４Ｂ】配列番号７１、配列番号７２、ＰＢＳ（陰性対照）及びレシキモド（Ｒ８４８）（陽性対照）と接触させたＰＢＭＣ（ＨＢＶ陰性ドナー由来）において観察されたサイトカイン誘導のレベルを示す。
【図５Ａ】コンセンサスＨＢＶゲノム配列（配列番号８３）を示す。
【図５Ｂ】コンセンサスＨＢＶゲノム配列（配列番号８３）を示す。
【手続補正７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５Ａ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５Ａ】
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