【手続補正書】
【提出日】令和2年10月5日(2020.10.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シトロネラール及び／またはシトロネロールを生産可能な組換え宿主細胞であって、 
（ａ）ゲラニル二リン酸シンターゼ（ＧＰＰＳ）ポリペプチドをコードする遺伝子またはネリル二リン酸シンターゼ（ＮＰＰＳ）ポリペプチドをコードする遺伝子と、 
（ｂ）ゲラニオールシンターゼ（ＧＥＳ）ポリペプチドをコードする遺伝子またはネリルシンターゼ（ＮＥＳ）ポリペプチドをコードする遺伝子と、を含み、 
前記組換え宿主細胞が、イリドイドシンターゼ（ＩＳＹ）ポリペプチドをコードする遺伝子またはエノエートレダクターゼ（ＥＮＲ）ポリペプチドをコードする遺伝子をさらに含み、前記遺伝子のうちの少なくとも１つが組換え遺伝子である、前記組換え宿主細胞。 
【請求項２】
シトロネラール、シトロネロール、またはシトロネル酸を生産可能な組換え宿主細胞であって、 
（ａ）ゲラニル二リン酸シンターゼ（ＧＰＰＳ）ポリペプチドをコードする遺伝子またはネリル二リン酸シンターゼ（ＮＰＰＳ）ポリペプチドをコードする遺伝子と、 
（ｂ）ゲラニオールシンターゼ（ＧＥＳ）ポリペプチドをコードする遺伝子またはネリルシンターゼ（ＮＥＳ）ポリペプチドをコードする遺伝子と、を含み、 
前記組換え宿主細胞が、イリドイドシンターゼ（ＩＳＹ）ポリペプチドをコードする遺伝子及びシトロネラール／シトロネロールデヒドロゲナーゼ（ＣｉＤＨ）ポリペプチドをコードする遺伝子をさらに含み、前記遺伝子のうちの少なくとも１つが組換え遺伝子である、前記組換え宿主細胞。 
【請求項３】
（ａ）前記ＧＰＰＳポリペプチドが、配列番号１７、５９〜６２、８７、または８８のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含み、 
（ｂ）前記ＮＰＰＳポリペプチドが、配列番号５３、７４、または７５のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含み、 
（ｃ）前記ＧＥＳポリペプチドが、配列番号１８または６３〜６６のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも４０％の配列同一性を有するポリペプチドを含み、 
（ｄ）前記ＮＥＳポリペプチドが、配列番号５６〜５８のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含み、 
（ｅ）前記ＩＳＹポリペプチドが、配列番号５４または５５のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含み、 
（ｆ）前記ＥＮＲポリペプチドが、配列番号７〜９、２１、２２、３３、３４、３７、４４〜４８、５４、５５、または６７のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含み、 
（ｇ）前記ＣｉＤＨポリペプチドが、配列番号４９〜５２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、請求項１または請求項２に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項４】
前記シトロネラールが、ｄ−シトロネラール、ｌ−シトロネラール、またはそれらの組み合わせである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項５】
前記シトロネロールが、ｄ−シトロネロール、ｌ−シトロネロール、またはそれらの組み合わせである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項６】
前記組換え宿主細胞が、植物細胞、哺乳類細胞、昆虫細胞、真菌細胞、藻類細胞、または細菌細胞を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項７】
前記組換え宿主細胞が細菌細胞である、請求項６に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項８】
前記細菌細胞が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ細胞、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ細胞、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ細胞、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ細胞、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ細胞、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ細胞、またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細胞である、請求項７に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項９】
前記組換え宿主細胞が、ＡＤＨ６、ＲＦＸ１、ＧＲＥ２、ＡＲＩ１、ＧＣＹ１、及びＡＹＲ１のうちの１つ以上の欠失をさらに含む酵母細胞である、請求項６に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項１０】
前記酵母が、 
（ａ）ＡＤＨ６、ＲＦＸ１、ＧＲＥ２、ＡＲＩ１、ＧＣＹ１、及びＡＹＲ１の欠失、または 
（ｂ）ＡＤＨ６、ＲＦＸ１、ＧＲＥ２、及びＡＲＩ１の欠失を含む、請求項９に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項１１】
前記組換え宿主細胞が、異種ＮＡＤＨオキシダーゼポリペプチドをコードする遺伝子をさらに含む酵母細胞である、請求項６、９および１０のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項１２】
前記異種ＮＡＤＨオキシダーゼポリペプチドが、配列番号６９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、請求項１１に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項１３】
前記異種ＮＡＤＨオキシダーゼポリペプチドが、配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を有する、請求項１２に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項１４】
前記組換え宿主細胞が、カルボン酸レダクターゼ（ＣＡＲ）ポリペプチドをコードする遺伝子をさらに含む酵母細胞である、請求項６および９〜１３のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項１５】
前記ＣＡＲポリペプチドが、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、請求項１４に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項１６】
前記ＣＡＲポリペプチドが、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列を有する、請求項１５に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項１７】
前記組換え酵母細胞が、ホスホパネイン（ｐｈｏｓｐｈｏｐａｎｅｉｎｅ）トランスフェラーゼ（ＰＰＴａｓｅ）ポリペプチドをコードする遺伝子をさらに含む、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項１８】
前記ＰＰＴａｓｅポリペプチドが、配列番号７１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、請求項１７に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項１９】
前記ＰＰＴａｓｅポリペプチドが、配列番号７１に記載されるアミノ酸配列を有する、請求項１８に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項２０】
前記酵母細胞がＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞である、請求項６および９〜１９のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項２１】
前記Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞が、野生型よりも低いファルネシルピロリン酸シンターゼ活性をもたらすように転写的に下方調節または変異されているファルネシルピロリン酸シンターゼ（ＥＲＧ２０）遺伝子を含有する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。 
【請求項２２】
シトロネラール、シトロネロール、またはシトロネル酸の生産方法であって、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞を細胞培養液中、前記遺伝子が発現される条件下で増殖させることを含み、前記シトロネラール、シトロネロール、またはシトロネル酸が前記組換え宿主細胞によって生産される、前記方法。 
【請求項２３】
前記組換え宿主細胞が、前記ＧＰＰＳポリペプチドをコードする遺伝子もしくは前記ＮＰＰＳポリペプチドをコードする遺伝子、前記ＧＥＳポリペプチドをコードする遺伝子もしくは前記ＮＥＳポリペプチドをコードする遺伝子、前記ＧｅＤＨポリペプチドをコードする遺伝子もしくは前記ＮｅＤＨポリペプチドをコードする遺伝子、前記ＩＳＹポリペプチドをコードする遺伝子、前記ＣｉＤＨポリペプチドをコードする遺伝子、及び／または前記ＥＮＲポリペプチドをコードする遺伝子を含む、１つ以上のプラスミドで形質転換され、前記遺伝子のうちの少なくとも１つが組換え遺伝子である、請求項２２に記載の方法。 
【請求項２４】
前記組換え宿主細胞が、前記ＧＰＰＳポリペプチドをコードする遺伝子もしくは前記ＮＰＰＳポリペプチドをコードする遺伝子、前記ＧＥＳポリペプチドをコードする遺伝子もしくは前記ＮＥＳポリペプチドをコードする遺伝子、前記ＧｅＤＨポリペプチドをコードする遺伝子もしくは前記ＮｅＤＨポリペプチドをコードする遺伝子、前記ＩＳＹポリペプチドをコードする遺伝子、前記ＣｉＤＨポリペプチドをコードする遺伝子、及び／または前記ＥＮＲポリペプチドをコードする遺伝子で形質転換され、前記遺伝子のうちの少なくとも１つが組換え遺伝子である、請求項２２に記載の方法。 
【請求項２５】
前記組換え遺伝子のうちの少なくとも１つが前記宿主細胞ゲノム内に組み込まれる、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の方法。