(57)【要約】一般式（Ｉ）をもつ、２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの新規の化合物であって、該式において、Ｒは、メチルあるいはエチルである低級アルキル基であり、Ｒ1とＲ2は、カルボン酸ナトリウム‐メチルエステルであり、該新規の化合物は、５‐フルオロウラシルとの組合せで相乗的な細胞毒性効果をもつものである。    【化１】2012520264.tif 000016
2012520264.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの化合物であって、一般式Ｉをもち、
ここで、Ｒは、メチルあるいはエチルである低級アルキル基であり、
Ｒ1とＲ2は、カルボン酸ナトリウム‐メチルエステルである、化合物。
【化１】
2012520264.tif 000013
【請求項２】
２，４，６‐トリメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸のジナトリウム塩であり、式ＩＶをもつ、請求項１に記載の化合物。
【化２】
2012520264.tif 000014
【請求項３】
４‐エチル‐２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸のジナトリウム塩であり、式ＶＩをもつ、請求項１に記載の化合物。
【化３】
2012520264.tif 000015
【請求項４】
薬剤としての利用のための、請求項１〜３のいずれか一つに記載の化合物。
【請求項５】
癌の治療における利用のための、請求項１〜３のいずれか一つに記載の化合物。
【請求項６】
癌治療用薬剤の製造のための、請求項１〜３のいずれか一つに記載の化合物の利用。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれか一つに記載の化合物および５‐フルオロウラシルを含む、組合せ医薬品。
【請求項８】
請求項１〜３のいずれか一つに記載の化合物と５‐フルオロウラシルとの有効成分の好ましい比率が、１：１００〜１００：１、さらに好ましくは１：２０〜２０：１、最も好ましくは１０：１である、請求項７に記載の組合せ医薬品。
【請求項９】
薬剤としての、請求項７に記載の組合せ医薬品の利用。
【請求項１０】
癌治療用薬剤の製造のための、請求項１から３のいずれか一つに記載の化合物と５‐フルオロウラシルを含む、請求項７に記載の組合せ医薬品の利用。
【請求項１１】
請求項７に記載の組合せ医薬品ならびに薬学的に許容され得る希釈剤あるいは担体を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の水溶性の２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの化合物に関するものであり、該化合物は一般式Ｉをもつものである。
ここで、Ｒは、メチルまたはエチルである低級アルキル基であり、
Ｒ1とＲ2は、カルボン酸ナトリウム‐メチルエステルである。
【化１】
2012520264.tif 000003
【０００２】
一般式Ｉをもつ、新規の水溶性の２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの化合物は、５‐フルオロウラシルとの組合せで相乗的な細胞毒性効果を有する。
【背景技術】
【０００３】
癌は、動物および人間の主な死因である。癌患者に投与されるべき、活性を持ち且つ安全な抗腫瘍薬を得るために、いくつかの試みが成され、また今もなおその試みが続けられている。本発明によって解決されるべき問題は、癌治療において有益な更なる化合物を提供することである。
【０００４】
５‐フルオロウラシル（５‐ＦＵ）は、フッ化ピリミジン類似体であって、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、そして胃癌を含むさまざまな種類の癌の治療および苦痛緩和管理のための、代謝拮抗抗癌剤として広く利用されているものである。５‐フルオロウラシルは、治療不能だと見なされる癌患者によく処方される。実証されたその臨床的有用性にも拘わらず、用量制限することがあり得、また患者を５‐フルオロウラシルを使用する治療に耐えられなくしてしまうかもしれない、５‐フルオロウラシルの利用に関連したいくつもの重大な不利益がある。
【０００５】
５‐フルオロウラシルの抗癌作用を増強することにより改善される治療適応を有する、癌治療に有用である新規の化合物、組成物、そして方法が、当該技術において非常に必要とされている。
【０００６】
抗転移作用を有する２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸のカルボン酸‐メチルエステルのジナトリウム塩（Ｃａｒｂａｔｏｎｅ）は、１９８０年３月６日に国際公開第８０／００３４５号（ＩＮＳＴ  ＯＲＧＡＮＩＣＨＥＳＫＯＧＯ  ＳＩＮＴＥＺＡ）において開示されているが、これは、一般式Ｉをもつ２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの化合物に最も類似した化合物である。
【０００７】
同じＣａｒｂａｔｏｎｅが、ＺＩＤＥＲＭＡＮＥ，Ａ氏その他“Ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ  ｏｆ  ２，６‐ｄｉｍｅｔｈｙｌ‐１，４‐ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ‐３，５‐ｂｉｓ‐ｃａｒｂｏｎｙｌ  ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ  ｏｎ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｇｅｎｔｓ．”（「２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルヒドロキシ酢酸のジナトリウム塩の、さまざまな抗腫瘍薬の作用に対する増強効果」）Ｅｋｓｐ  Ｏｎｋｏｌ．、１９８７年第９巻第２号５０〜５２ページに記載されたが、ここでは、該Ｃａｒｂａｔｏｎｅは、マウスにおいてシクロホスファン毒性を減らすために利用されたのであり、また白血病Ｐ３８８、マウス肉腫３７、そしてウォーカー癌肉腫に対する、シクロホスファン、５‐フルオロウラシル、そしてアラビノシルシトシンの細胞増殖抑制作用を増強している。記載されたとおり、Ｃａｒｂａｔｏｎｅは抗腫瘍活性を示さなかった。
【０００８】
ＵＬＤＲＩＫＩＳ，Ｊ氏その他“１，４−Ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ａ  ｍｅａｎｓ  ｆｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ．”（「抗腫瘍製剤の作用を増強するための手段としての１，４‐ジヒドロピリジン誘導体」）ＬＡＴＶＩＪＡＳ  ＰＳＲ  ＺＩＮＡＴＮＵ  ＡＫＡＤＥＭＩＪＡＳ  ＶＥＳＴＩＳ，ＫＩＭＩＪＡＳ  ＳＥＲＩＪＡ、１９８３年第１巻１２２〜１２３ページにおいて、２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸のカルボン酸‐メチルエステルのジナトリウム塩（Ｃａｒｂａｔｏｎｅ）が、５‐フルオロウラシルの抗腫瘍活性を増すことが記載されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
発明の開示
本発明の目的は、５‐ＦＵの細胞毒性効果を効果的に且つ相乗的に増強するであろう化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記の目的は、新規の水溶性の２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの化合物を提供することにより達成され、該化合物は一般式Ｉをもつ。
ここで、Ｒは、メチルやエチルのような低級アルキル基であり、
Ｒ1とＲ2は、カルボン酸ナトリウム‐メチルエステルである。
【化２】
2012520264.tif 000004
【００１１】
式Ｉに従った化合物は：
２，４，６‐トリメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸のジナトリウム塩であって、式ＩＶをもつものである。
【化３】
2012520264.tif 000005
４‐エチル‐２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸のジナトリウム塩であって、式ＶＩをもつものである。
【化４】
2012520264.tif 000006
【００１２】
一般式Ｉをもつ化合物は５‐ＦＵの細胞毒性効果を相乗的に増強するのであり、この特性のため、一般式Ｉをもつ化合物は薬剤に利用することができる。一般式Ｉをもつ化合物は、注射液剤としてまた錠剤として利用することができる。
【００１３】
本発明の目的は、前記式Ｉの化合物の調製方法である。
【００１４】
２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの化合物の調製のための一般的なプロセスは、アセト酢酸エステル誘導体の二つの分子、ホルムアルデヒドとアンモニアの縮合を含む。その後、エタノール中の水酸化ナトリウムで処理する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、以下の非限定的な実施例を参照にすることによって、より詳細に説明されるであろう。
【実施例１】
【００１６】
２，４，６‐トリメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸のジナトリウム塩の調製。
【化５】
2012520264.tif 000007
【００１７】
アセト酢酸の２‐メトキシカルボニルメチルエステル（２モル）は、アセトアルデヒド（１モル）とアンモニア（１モル）で縮合された。その後、２，４，６‐トリメチル‐３，５‐ビス（メトキシカルボニル）‐１，４‐ジヒドロピリジンが、エタノール中の水酸化ナトリウムで処理される。
【００１８】
２，４，６‐トリメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸のジナトリウム塩は、室温で乾かされた。収率７６％。融点は２７８〜２８０℃。
【００１９】
1Ｈ‐ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４‐ＣＨ3）；２．１９（６Ｈ，ｓ，２，６‐ＣＨ3）；３．７６（１Ｈ，ｋｖ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４‐Ｈ）；４．１５および４．２３（４Ｈ，ＡＢカルテット，Ｊ＝１６Ｈｚ，３，５‐ＣＯＯＣＨ2ＣＯ）；８．５６（１Ｈ，ｐｌ．ｓ，ＮＨ）。
【実施例２】
【００２０】
４‐エチル‐２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸のジナトリウム塩の調製。
【化６】
2012520264.tif 000008
【００２１】
アセト酢酸の２‐メトキシカルボニルメチルエステル（２モル）は、プロピオンアルデヒド（１モル）とアンモニア（１モル）で縮合された。その後、４‐エチル‐２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸が、エタノール中の水酸化ナトリウムで処理される。
【００２２】
４‐エチル‐２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸のジナトリウム塩は、室温で乾かされた。融点は６５〜６７℃。
【００２３】
1Ｈ‐ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，ＴＭＳ）δ：０．５９（３Ｈ，ｔｒ，ＣＨ3）；１．２３‐１．２４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨ3）；２．１７（６Ｈ，ｓ，２．６‐ＣＨ3）；３．８０（１Ｈ，ｔｒ，４‐ＣＨ）；４．１０（４Ｈ，ｋｖ，‐ＣＨ２‐）；８．３０（１Ｈ，ｓ，Ｎ‐Ｈ）。
【実施例３】
【００２４】
一般式Ｉをもつ新規の２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの化合物は、ヒト乳癌細胞ＭＤＡ‐ＭＢ‐４３５ｓに対する該化合物の細胞毒性効果をインビトロで単独で、および５‐フルオロウラシルとの組合せで試験することによって、抗腫瘍効果があると評価された。
【００２５】
細胞培養と細胞生存率の測定
ＭＤＡ‐ＭＢ‐４３５ｓ細胞を、１０％のウシ胎児血清を含む、抗生物質のない、ダルベッコ変法イーグル培地の９６ウェルプレートに播種し、そして５‐フルオロウラシルと、２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの化合物の、さまざまな濃度にさらして７２時間、培養した。細胞生存率を、「Ｓｅｇａｒｍａｎ氏その他、１９８５年」に記載されているように修正されたクリスタルバイオレット染色（ＣＶＳ）試験を利用して測定した。つまり、細胞を１％のグルタルアルデヒドで１５分間固定し、水で洗浄し、そして０．０５％のクリスタルバイオレットで１５分間、室温で染色した。水道水で洗浄することによって残余のクリスタルバイオレットを取り除いた後、クリスタルバイオレット染色剤を、エタノールクエン酸ナトリウム（１：１）緩衝液を用いて溶出し、そしてマイクロプレートリーダーを利用して、５４０ｎｍでの吸光度を測定した。
【００２６】
細胞生存率５０％の減少を引き起こす化合物の濃度に相当する、ＩＣ50値を、個々の化合物およびそれらの組合せについて計算し、表１にまとめてある。
【００２７】
一般式Ｉをもつ２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの化合物と５‐ＦＵとを組合せる治療のＩＣ50の結果は、表１にまとめられる。
【００２８】
５‐フルオロウラシル、２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸のカルボン酸‐メチルエステルのジナトリウム塩（Ｃａｒｂａｔｏｎｅ）、そして一般式Ｉをもつ２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸エステルタイプの化合物、およびそれらの組合せ（モル比１０：１における）についてのＩＣ50であって、インビトロでのヒト乳癌細胞ＭＤＡ‐ＭＢ‐４３５ｓの生存率についてのものである。
【表１】
2012520264.tif 000009
【００２９】
比較実験結果は、２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ジカルボン酸のカルボン酸‐メチルエステルのジナトリウム塩（Ｃａｒｂａｔｏｎｅ）を、単独でおよび５‐ＦＵと組合せる治療で利用することによって得られた。Ｃａｒｂａｔｏｎｅは、ＭＤＡ‐ＭＢ‐４３５ｓ‐ヒト乳癌細胞における５‐ＦＵの細胞毒性効果を相乗的に増強するが、２，４，６‐トリメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸のジナトリウム塩および４‐エチル‐２，６‐ジメチル‐１，４‐ジヒドロピリジン‐３，５‐ビス‐カルボニルオキシ酢酸のジナトリウム塩ほどには効果的ではなく、これは表１に示されるとおりである。
【００３０】
本発明を例証するのであり逸脱するわけではない、経口使用のための可能な医薬組成物は、以下の錠剤製品の組成である。
【表２】
2012520264.tif 000010
【００３１】
本発明を例証するのであり逸脱するわけではない、経口使用のための可能な医薬組成物は、以下のカプセル製品の組成である。
【表３】
2012520264.tif 000011
【００３２】
本発明を例証するのであり逸脱するわけではない、経口使用のための可能な医薬組成物は、以下の液剤および／またはシロップ剤製品の組成である。
【表４】
2012520264.tif 000012
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３３】
【特許文献１】国際公開第８０／００３４５号
【国際調査報告】
2012520264.tif 000017
2012520264.tif 000018
2012520264.tif 000019