【手続補正書】
【提出日】令和2年4月13日(2020.4.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラアロ抗原受容体（CALLAR）をコードする単離された核酸配列であって、アロ抗原またはその断片をコードする核酸配列と、膜貫通ドメインをコードする核酸配列と、4-1BBの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列と、CD3ζシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列とを含む、前記単離された核酸配列。
【請求項２】
キメラアロ抗原受容体（CALLAR）をコードする単離された核酸配列であって、第VIII因子のA2サブユニットをコードする核酸配列と、膜貫通ドメインをコードする核酸配列と、共刺激分子の細胞内ドメインをコードする核酸配列と、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列とを含む、前記単離された核酸配列。
【請求項３】
前記アロ抗原が、第VIII因子またはその断片である、請求項1に記載の単離された核酸配列。
【請求項４】
前記第VIII因子またはその断片が、SEQ ID NO:2およびSEQ ID NO:4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項3に記載の単離された核酸配列。
【請求項５】
前記第VIII因子の断片が、第VIII因子のA2サブユニットおよびC2サブユニットからなる群より選択される、請求項3に記載の単離された核酸配列。
【請求項６】
前記膜貫通ドメインの核酸配列が、CD8α鎖ヒンジおよび膜貫通ドメインをコードする、請求項1または2のいずれか一項に記載の単離された核酸配列。
【請求項７】
前記CD8α鎖ヒンジが、SEQ ID NO:7のアミノ酸配列を含み、かつ前記膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:8のアミノ酸配列を含む、請求項6に記載の単離された核酸配列。
【請求項８】
前記共刺激分子の細胞内ドメインをコードする核酸配列が、4-1BBシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む、請求項2に記載の単離された核酸配列。
【請求項９】
前記4-1BB細胞内ドメインが、SEQ ID NO:10のアミノ酸配列を含む、請求項1または8のいずれか一項に記載の単離された核酸配列。
【請求項１０】
前記細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列が、CD3ζシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む、請求項2に記載の単離された核酸配列。
【請求項１１】
前記CD3ζシグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:12のアミノ酸配列を含む、請求項1または10のいずれか一項に記載の単離された核酸配列。
【請求項１２】
請求項1〜11のいずれか一項に記載の単離された核酸配列を含む、ベクター。
【請求項１３】
レンチウイルスベクターである、請求項12に記載のベクター。
【請求項１４】
RNAベクターである、請求項12に記載のベクター。
【請求項１５】
アロ抗原またはその断片を含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、4-1BBの細胞内ドメインと、CD3ζシグナル伝達ドメインとを含む、単離されたキメラアロ抗原受容体（CALLAR）。
【請求項１６】
第VIII因子のA2サブユニットを含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子の細胞内ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、単離されたキメラアロ抗原受容体（CALLAR）。
【請求項１７】
前記アロ抗原が、第VIII因子またはその断片である、請求項15に記載の単離されたCALLAR。
【請求項１８】
前記第VIII因子またはその断片が、SEQ ID NO:2およびSEQ ID NO:4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項17に記載の単離されたCALLAR。
【請求項１９】
前記第VIII因子の断片が、第VIII因子のA2断片およびC2断片からなる群より選択される、請求項17に記載の単離されたCALLAR。
【請求項２０】
前記膜貫通ドメインが、CD8α鎖ヒンジおよび膜貫通ドメインを含む、請求項15または16のいずれか一項に記載の単離されたCALLAR。
【請求項２１】
前記CD8α鎖ヒンジが、SEQ ID NO:7のアミノ酸配列を含み、かつ前記膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:8のアミノ酸配列を含む、請求項20に記載の単離されたCALLAR。
【請求項２２】
前記共刺激分子の細胞内ドメインが、4-1BB細胞内ドメインを含む、請求項16に記載の単離されたCALLAR。
【請求項２３】
前記4-1BB細胞内ドメインが、SEQ ID NO:10を含む、請求項15または22のいずれか一項に記載の単離されたCALLAR。
【請求項２４】
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3ζシグナル伝達ドメインを含む、請求項16に記載の単離されたCALLAR。
【請求項２５】
前記CD3ζシグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:12のアミノ酸配列を含む、請求項15または24のいずれか一項に記載の単離されたCALLAR。
【請求項２６】
請求項15〜25のいずれか一項に記載のCALLARを含む、遺伝子改変細胞。
【請求項２７】
CALLARを発現し、かつ、B細胞上に発現した抗体に対して高い親和性を有する、請求項26に記載の細胞。
【請求項２８】
CALLARを発現し、かつ、抗体を発現するB細胞の死滅を誘導する、請求項26に記載の細胞。
【請求項２９】
CALLARを発現し、かつ、健常細胞に対する限定された毒性を有する、請求項26に記載の細胞。
【請求項３０】
ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、γδT細胞、ナチュラルキラー細胞、単球、サイトカイン誘導性キラー細胞、それらの細胞株、および他のエフェクター細胞からなる群より選択される、請求項26に記載の細胞。
【請求項３１】
血友病を有する対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、キメラアロ抗原受容体（CALLAR）をコードする単離された核酸配列を含む遺伝子改変T細胞の有効量を含み、該単離された核酸配列が、アロ抗原またはその断片をコードする核酸配列、膜貫通ドメインをコードする核酸配列、4-1BBの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列、およびCD3ζシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む、前記薬学的組成物。
【請求項３２】
血友病を有する対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、キメラアロ抗原受容体（CALLAR）をコードする単離された核酸配列を含む遺伝子改変T細胞の有効量を含み、該単離された核酸配列が、第VIII因子のA2サブユニットをコードする核酸配列、膜貫通ドメインをコードする核酸配列、共刺激分子の細胞内ドメインをコードする核酸配列、および細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む、前記薬学的組成物。
【請求項３３】
前記対象がヒトである、請求項31または32のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
前記改変T細胞が、第VIII因子抗体に対して高い親和性を有する、請求項31または32のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
前記改変T細胞が、第VIII因子抗体を発現するB細胞を標的とする、請求項34に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
（a）第VIII因子のA2サブユニットまたは第VIII因子のC2サブユニットと、リンカーと、膜貫通領域および細胞質ドメインを含むKIRの断片とを含む、キメラアロ抗原受容体（CALLAR）、ならびに
（b）DAP12
を含む、単離されたKIR/DAP12受容体複合体。
【請求項３７】
前記KIRが、KIRS2またはKIR2DS2である、請求項36に記載の単離されたKIR/DAP12受容体複合体。
【請求項３８】
前記リンカーが、短いグリシン-セリンリンカーである、請求項36に記載の単離されたKIR/DAP12受容体複合体。
【請求項３９】
請求項36〜38のいずれか一項に記載の単離されたKIR/DAP12受容体複合体を含む、遺伝子改変細胞。
【請求項４０】
単離されたキメラアロ抗原受容体（CALLAR）とDAP12とを含む遺伝子改変細胞であって、該CALLARが、第VIII因子のA2サブユニットまたは第VIII因子のC2サブユニットを含む細胞外ドメイン、リンカー、およびKIRの断片を含み、該KIRが、膜貫通領域および細胞質ドメインを含む、前記遺伝子改変細胞。
【請求項４１】
前記KIRが、KIRS2またはKIR2DS2である、請求項40に記載の遺伝子改変細胞。
【請求項４２】
前記リンカーが、短いグリシン-セリンリンカーである、請求項40または41のいずれか一項に記載の遺伝子改変細胞。
【請求項４３】
血友病を有する対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、
第VIII因子のA2サブユニットまたは第VIII因子のC2サブユニットをコードする核酸配列と、リンカーをコードする核酸配列と、膜貫通領域および細胞質ドメインを含むKIRの断片をコードする核酸配列とを含むキメラアロ抗原受容体（CALLAR）をコードする単離された核酸配列を含み、かつ、DAP12をコードする核酸配列をさらに含む、遺伝子改変T細胞の有効量
を含む、前記薬学的組成物。
【請求項４４】
前記リンカーが、短いグリシン-セリンリンカーである、請求項43に記載の薬学的組成物。
【請求項４５】
血友病を有する対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、
第VIII因子のA2サブユニットまたは第VIII因子のC2サブユニットと、リンカーと、膜貫通領域および細胞質ドメインを含むKIRの断片とを含むキメラアロ抗原受容体（CALLAR）を含み、かつ、DAP12をさらに含む、遺伝子改変T細胞の有効量
を含む、前記薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
さらに、血友病を有する対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置するための方法が含まれる。方法は、第VIII因子のA2サブユニットまたは第VIII因子のC2サブユニット、リンカー、膜貫通領域および細胞質ドメインを含むKIRの断片を含むキメラアロ抗原受容体（CALLAR）を含み、かつ、DAP12をさらに含む遺伝子改変T細胞の有効量を、対象に投与する段階を含み、それにより、血友病を有する対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置する。
[本発明1001]
キメラアロ抗原受容体（CALLAR）をコードする単離された核酸配列であって、アロ抗原またはその断片をコードする核酸配列と、膜貫通ドメインをコードする核酸配列と、4-1BBの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列と、CD3ζシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列とを含む、前記単離された核酸配列。
[本発明1002]
キメラアロ抗原受容体（CALLAR）をコードする単離された核酸配列であって、第VIII因子のA2サブユニットをコードする核酸配列と、膜貫通ドメインをコードする核酸配列と、共刺激分子の細胞内ドメインをコードする核酸配列と、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列とを含む、前記単離された核酸配列。
[本発明1003]
前記アロ抗原が、第VIII因子またはその断片である、本発明1001の単離された核酸配列。
[本発明1004]
前記第VIII因子またはその断片が、SEQ ID NO:2およびSEQ ID NO:4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1003の単離された核酸配列。
[本発明1005]
前記第VIII因子の断片が、第VIII因子のA2サブユニットまたはC2サブユニットからなる群より選択される、本発明1003の単離された核酸配列。
[本発明1006]
前記膜貫通ドメインの核酸配列が、CD8α鎖ヒンジおよび膜貫通ドメインをコードする、本発明1001または1002のいずれかの単離された核酸配列。
[本発明1007]
前記CD8α鎖ヒンジが、SEQ ID NO:7のアミノ酸配列を含み、かつ前記膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:8のアミノ酸配列を含む、本発明1006の単離された核酸配列。
[本発明1008]
前記共刺激分子の細胞内ドメインをコードする核酸配列が、4-1BBシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む、本発明1002の単離された核酸配列。
[本発明1009]
前記4-1BB細胞内ドメインが、SEQ ID NO:10のアミノ酸配列を含む、本発明1001または1008のいずれかの単離された核酸配列。
[本発明1010]
前記細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列が、CD3ζシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む、本発明1002の単離された核酸配列。
[本発明1011]
前記CD3ζシグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:12のアミノ酸配列を含む、本発明1001または1010のいずれかの単離された核酸配列。
[本発明1012]
本発明1001〜1011のいずれかの単離された核酸配列を含む、ベクター。
[本発明1013]
レンチウイルスベクターである、本発明1012のベクター。
[本発明1014]
RNAベクターである、本発明1012のベクター。
[本発明1015]
アロ抗原またはその断片を含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、4-1BBの細胞内ドメインと、CD3ζシグナル伝達ドメインとを含む、単離されたキメラアロ抗原受容体（CALLAR）。
[本発明1016]
第VIII因子のA2サブユニットを含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子の細胞内ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、単離されたキメラアロ抗原受容体（CALLAR）。
[本発明1017]
前記アロ抗原が、第VIII因子またはその断片である、本発明1015の単離されたCALLAR。
[本発明1018]
前記第VIII因子またはその断片が、SEQ ID NO:2およびSEQ ID NO:4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1015の単離されたCALLAR。
[本発明1019]
前記第VIII因子の断片が、第VIII因子のA2断片およびC2断片からなる群より選択される、本発明1017の単離されたCALLAR。
[本発明1020]
前記膜貫通ドメインが、CD8α鎖ヒンジおよび膜貫通ドメインを含む、本発明1015または1016のいずれかの単離されたCALLAR。
[本発明1021]
前記CD8α鎖ヒンジが、SEQ ID NO:7のアミノ酸配列を含み、かつ前記膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:8のアミノ酸配列を含む、本発明1020の単離されたCALLAR。
[本発明1022]
前記共刺激分子の細胞内ドメインが、4-1BB細胞内ドメインを含む、本発明1016の単離されたCALLAR。
[本発明1023]
前記4-1BB細胞内ドメインが、SEQ ID NO:10を含む、本発明1015または1022のいずれかの単離されたCALLAR。
[本発明1024]
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3ζシグナル伝達ドメインを含む、本発明1016の単離されたCALLAR。
[本発明1025]
前記CD3ζシグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:12のアミノ酸配列を含む、本発明1015または1024のいずれかの単離されたCALLAR。
[本発明1026]
本発明1015〜1025のいずれかのCALLARを含む、遺伝子改変細胞。
[本発明1027]
CALLARを発現し、かつ、B細胞上に発現した抗体に対して高い親和性を有する、本発明1026の細胞。
[本発明1028]
CALLARを発現し、かつ、抗体を発現するB細胞の死滅を誘導する、本発明1026の細胞。
[本発明1029]
CALLARを発現し、かつ、健常細胞に対する限定された毒性を有する、本発明1026の細胞。
[本発明1030]
ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、γδT細胞、ナチュラルキラー細胞、単球、サイトカイン誘導性キラー細胞、それらの細胞株、および他のエフェクター細胞からなる群より選択される、本発明1026の細胞。
[本発明1031]
血友病を有する対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置するための方法であって、該方法は、キメラアロ抗原受容体（CALLAR）をコードする単離された核酸配列を含む遺伝子改変T細胞の有効量を該対象に投与する段階を含み、該単離された核酸配列が、アロ抗原またはその断片をコードする核酸配列、膜貫通ドメインをコードする核酸配列、4-1BBの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列、およびCD3ζシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含み、それにより、血友病を有する該対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置する、前記方法。
[本発明1032]
血友病を有する対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置するための方法であって、該方法は、キメラアロ抗原受容体（CALLAR）をコードする単離された核酸配列を含む遺伝子改変T細胞の有効量を該対象に投与する段階を含み、該単離された核酸配列が、第VIII因子のA2サブユニットをコードする核酸配列、膜貫通ドメインをコードする核酸配列、共刺激分子の細胞内ドメインをコードする核酸配列、および細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含み、それにより、血友病を有する該対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置する、前記方法。
[本発明1033]
前記対象がヒトである、本発明1031または1032のいずれかの方法。
[本発明1034]
前記改変T細胞が、第VIII因子抗体に対して高い親和性を有する、本発明1031または1032のいずれかの方法。
[本発明1035]
前記改変T細胞が、第VIII因子抗体を発現するB細胞を標的とする、本発明1034の方法。
[本発明1036]
（a）第VIII因子のA2サブユニットまたは第VIII因子のC2サブユニットと、リンカーと、膜貫通領域および細胞質ドメインを含むKIRの断片とを含む、キメラアロ抗原受容体（CALLAR）、ならびに
（b）DAP12
を含む、単離されたKIR/DAP12受容体複合体。
[本発明1037]
前記KIRが、KIRS2またはKIR2DS2である、本発明1036の単離されたKIR/DAP12受容体複合体。
[本発明1038]
前記リンカーが、短いグリシン-セリンリンカーである、本発明1036の単離されたKIR/DAP12受容体複合体。
[本発明1039]
本発明1036〜1038のいずれかの単離されたKIR/DAP12受容体複合体を含む、遺伝子改変細胞。
[本発明1040]
単離されたキメラアロ抗原受容体（CALLAR）とDAP12とを含む遺伝子改変細胞であって、該CALLARが、第VIII因子のA2サブユニットまたは第VIII因子のC2サブユニットを含む細胞外ドメイン、リンカー、およびKIRの断片を含み、該KIRが、膜貫通領域および細胞質ドメインを含む、前記遺伝子改変細胞。
[本発明1041]
前記KIRが、KIRS2またはKIR2DS2である、本発明1040の遺伝子改変細胞。
[本発明1042]
前記リンカーが、短いグリシン-セリンリンカーである、本発明1040または1041のいずれかの遺伝子改変細胞。
[本発明1043]
血友病を有する対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置するための方法であって、該方法は、
第VIII因子のA2サブユニットまたは第VIII因子のC2サブユニットをコードする核酸配列と、リンカーをコードする核酸配列と、膜貫通領域および細胞質ドメインを含むKIRの断片をコードする核酸配列とを含むキメラアロ抗原受容体（CALLAR）をコードする単離された核酸配列を含み、かつ、DAP12をコードする核酸配列をさらに含む、遺伝子改変T細胞の有効量
を該対象に投与する段階を含み、それにより、血友病を有する該対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置する、前記方法。
[本発明1044]
前記リンカーが、短いグリシン-セリンリンカーである、本発明1043の方法。
[本発明1045]
血友病を有する対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置するための方法であって、該方法は、
第VIII因子のA2サブユニットまたは第VIII因子のC2サブユニットと、リンカーと、膜貫通領域および細胞質ドメインを含むKIRの断片とを含むキメラアロ抗原受容体（CALLAR）を含み、かつ、DAP12をさらに含む、遺伝子改変T細胞の有効量
を該対象に投与する段階を含み、それにより、血友病を有する該対象においてFVIII抗体と関連する障害を処置する、前記方法。