【手続補正書】
【提出日】令和1年12月2日(2019.12.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号４１、配列番号４２に記載のヌクレオチド配列またはその相補体を含むターゲティングドメインを含むガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）。
【請求項２】
第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子を含むＤＮＡターゲティング組成物であって、前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子はそれぞれ請求項１に記載のｇＲＮＡを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子は異なるターゲティングドメインを含む、ＤＮＡターゲティング組成物。
【請求項３】
前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子は、
（ｉ）配列番号１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｉ）配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｉｉ）配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１９に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｖ）配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１８に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖ）配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１９に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉｉ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１８に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉｉｉ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｘ）配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１９に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｘ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｘｉ）配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１８に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；ならびに
（ｘｉｉ）配列番号４１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号４２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子
からなる群から選択される、請求項２に記載のＤＮＡターゲティング組成物。
【請求項４】
クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート関連（Ｃａｓ）タンパク質または前記Ｃａｓタンパク質をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項２に記載のＤＮＡターゲティング組成物。
【請求項５】
請求項１に記載のｇＲＮＡをコードするヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。
【請求項６】
請求項１に記載のｇＲＮＡをコードするヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項７】
（ａ）第１のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）分子、
（ｂ）第２のｇＲＮＡ分子、および／または
（ｃ）ＮＮＧＲＲＴ（配列番号２４）またはＮＮＧＲＲＶ（配列番号２５）のいずれかのプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を認識する少なくとも１種のＣａｓ９分子
をコードするベクターであって、
前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子はそれぞれ請求項１に記載のｇＲＮＡを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子は異なるターゲティングドメインを含む、ベクター。
【請求項８】
前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子および前記Ｃａｓ９分子は、ヒトＤＭＤ遺伝子のエクソン５１に隣接する第１および第２のイントロン中で第１および第２の二本鎖切断を形成するように構成されている、請求項７に記載のベクター。
【請求項９】
前記ベクターはウイルスベクターである、請求項６に記載のベクター。
【請求項１０】
前記ベクターは、前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子および／またはＣａｓ９分子をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結された組織特異的プロモーターを含む、請求項６に記載のベクター。
【請求項１１】
請求項１に記載のｇＲＮＡを含む細胞。
【請求項１２】
請求項１に記載のｇＲＮＡを含むキット。
【請求項１３】
請求項１に記載のｇＲＮＡを含む、細胞中で変異ジストロフィン遺伝子を修正するための組成物。
【請求項１４】
請求項１に記載のｇＲＮＡを含む、対象中で変異ジストロフィン遺伝子をゲノム編集するための組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載のｇＲＮＡを含む、変異ジストロフィン遺伝子を有する、必要とする対象を処置するための組成物。
【請求項１６】
ジストロフィン遺伝子におけるエクソン５１を含むセグメントの欠失用の組成物であって、
（ａ）第１のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）分子をコードするポリヌクレオチド配列と、ＮＮＧＲＲＴ（配列番号２４）またはＮＮＧＲＲＶ（配列番号２５）のいずれかのプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を認識する第１のＣａｓ９分子をコードするポリヌクレオチド配列とを含む第１のベクター、および
（ｂ）第２のｇＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド配列と、ＮＮＧＲＲＴ（配列番号２４）またはＮＮＧＲＲＶ（配列番号２５）のいずれかのプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を認識する第２のＣａｓ９分子をコードするポリヌクレオチド配列とを含む第２のベクター
を含み、
前記第１および第２のｇＲＮＡ分子のそれぞれは、１９〜２４個のヌクレオチドの長さのターゲティングドメインを有し、前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記第１のＣａｓ９分子、および前記第２のＣａｓ９分子は、ヒトＤＭＤ遺伝子のエクソン５１に隣接する第１のイントロン中に第１の二本鎖切断を、かつ第２のイントロン中に第２の二本鎖切断を形成するように構成され、それにより、前記ジストロフィン遺伝子におけるエクソン５１を含むセグメントが欠失される、組成物。
【請求項１７】
前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９に記載のヌクレオチド配列またはその相補体を含むターゲティングドメインを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子は異なるターゲティングドメインを含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
細胞中で変異ジストロフィン遺伝子を修正するための組成物であって、
（ａ）第１のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）分子をコードするポリヌクレオチド配列と、ＮＮＧＲＲＴ（配列番号２４）またはＮＮＧＲＲＶ（配列番号２５）のいずれかのプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を認識する第１のＣａｓ９分子をコードするポリヌクレオチド配列とを含む第１のベクター、および
（ｂ）第２のｇＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド配列と、ＮＮＧＲＲＴ（配列番号２４）またはＮＮＧＲＲＶ（配列番号２５）のいずれかのプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を認識する第２のＣａｓ９分子をコードするポリヌクレオチド配列とを含む第２のベクター
を含み、
前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子のそれぞれは、１９〜２４個のヌクレオチドの長さのターゲティングドメインを有し、前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記第１のＣａｓ９分子、および前記第２のＣａｓ９分子は、ヒトジストロフィン遺伝子のエクソン５１に隣接する第１のイントロン中に第１の二本鎖切断を、かつ第２のイントロン中に第２の二本鎖切断を形成するように構成され、それにより、前記ジストロフィン遺伝子においてエクソン５１を含むセグメントが欠失される、組成物。
【請求項１９】
変異ジストロフィン遺伝子を有する、必要とする対象を処置するための組成物であって、
（ａ）第１のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）分子をコードするポリヌクレオチド配列と、ＮＮＧＲＲＴ（配列番号２４）またはＮＮＧＲＲＶ（配列番号２５）のいずれかのプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を認識する第１のＣａｓ９分子をコードするポリヌクレオチド配列とを含む第１のベクター、および
（ｂ）第２のｇＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド配列と、ＮＮＧＲＲＴ（配列番号２４）またはＮＮＧＲＲＶ（配列番号２５）のいずれかのプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を認識する第２のＣａｓ９分子をコードするポリヌクレオチド配列とを含む第２のベクター
を含み、
前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子のそれぞれは、１９〜２４個のヌクレオチドの長さのターゲティングドメインを有し、前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記第１のＣａｓ９分子、および前記第２のＣａｓ９分子は、ヒトジストロフィン遺伝子のエクソン５１に隣接する第１のイントロン中に第１の二本鎖切断を、かつ第２のイントロン中に第２の二本鎖切断を形成するように構成され、それにより、ジストロフィン遺伝子においてエクソン５１を含むセグメントが欠失される、組成物。
【請求項２０】
前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子は、
（ｉ）配列番号１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｉ）配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｉｉ）配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１９に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｖ）配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１８に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖ）配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１９に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉｉ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１８に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉｉｉ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｘ）配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１９に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｘ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；ならびに
（ｘｉ）配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１８に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子
からなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。