【手続補正書】
【提出日】令和1年12月18日(2019.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトα−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ（ＮＡＧＡＬ）ポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片であって、
配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアスパラギン２１３に対応する第１のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのシステイン３２６に対応する第２のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアスパラギン２１３に対応する第１のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換され、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのシステイン３２６に対応する第２のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている、ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項２】
前記第１のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって、好ましくは１つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第２のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって、好ましくは１つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第１のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって、好ましくは１つのアミノ酸によって置換され、前記第２のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって、好ましくは１つのアミノ酸によって置換されている、請求項１に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項３】
−  前記第１のアミノ酸を置換する１つまたは複数の前記アミノ酸が、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群から各々独立して選択される；
−  前記第２のアミノ酸を置換する１つまたは複数の前記アミノ酸が、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群から各々独立して選択される；
−  前記第１のアミノ酸が、そのうち少なくとも１つが負に荷電した側鎖基を含む１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている、または前記第１のアミノ酸が、そのうち少なくとも１つが負に荷電した側鎖基を含む１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている、または前記第１のアミノ酸が、負に荷電した側鎖基を含む１つのアミノ酸によって置換されており、好ましくは、負に荷電した側鎖基を含む少なくとも１つの前記アミノ酸が、アスパラギン酸またはグルタミン酸、好ましくはアスパラギン酸である；
−  前記第２のアミノ酸が、そのうち少なくとも１つが正に荷電した側鎖基もしくは極性非荷電側鎖基を含む１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている、または前記第２のアミノ酸が、そのうち少なくとも１つが正に荷電した側鎖基もしくは極性非荷電側鎖基を含む１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている、または前記第２のアミノ酸が、正に荷電した側鎖基もしくは極性非荷電側鎖基を含む１つのアミノ酸によって置換されており、好ましくは正に荷電した側鎖基を含む少なくとも１つの前記アミノ酸が、アルギニン、ヒスチジンもしくはリシン、好ましくはアルギニンであり、または極性非荷電側鎖基を含む少なくとも１つの前記アミノ酸が、セリン、スレオニン、アスパラギンもしくはグルタミン、好ましくはセリンである；および／あるいは
−  前記第１のアミノ酸が、アスパラギン酸によって置換され、前記第２のアミノ酸が、アルギニンによって置換されている、または前記第２のアミノ酸が、アルギニンによって置換されている、または前記第１のアミノ酸が、アスパラギン酸によって置換され、前記第２のアミノ酸が、セリンによって置換されている、または前記第２のアミノ酸が、セリンによって置換されている、
請求項１または２のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項４】
−  前記第１のアミノ酸がアスパラギンであり、
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つのアミノ酸によって置換されている；および／あるいは
−  前記第２のアミノ酸がシステインであり、
前記システインが、システイン以外の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記システインが、システイン以外の１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記システインが、システイン以外の１つのアミノ酸によって置換されている、
請求項１から３のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項５】
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号２に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号３に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号３に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号４に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号５に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号５に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す、請求項１から４のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項６】
１つまたは複数のアミノ酸のうち少なくとも１つが、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのシステイン３２６に対応する第２のアミノ酸と直接的または間接的に相互作用することが可能であるように、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアスパラギン２１３に対応する第１のアミノ酸が、前記１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
１つまたは複数のアミノ酸のうち少なくとも１つが、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアスパラギン２１３に対応する第１のアミノ酸と直接的または間接的に相互作用することが可能であるように、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのシステイン３２６に対応する第２のアミノ酸が、前記１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記第１のアミノ酸を置換する前記１つまたは複数のアミノ酸のうち少なくとも１つが、前記第２のアミノ酸を置換する前記１つまたは複数のアミノ酸のうち少なくとも１つと直接的または間接的に相互作用することが可能であるように、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアスパラギン２１３に対応する第１のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換され、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのシステイン３２６に対応する第２のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている、ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項７】
前記第１のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって、好ましくは１つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第２のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって、好ましくは１つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第１のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって、好ましくは１つのアミノ酸によって置換され、前記第２のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって、好ましくは１つのアミノ酸によって置換されている、請求項６に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項８】
−  前記第１のアミノ酸がアスパラギンであり、
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つのアミノ酸によって置換されている；
−  前記第２のアミノ酸がシステインであり、
前記システインが、システイン以外の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記システインが、システイン以外の１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記システインが、システイン以外の１つのアミノ酸によって置換されている；および／あるいは
−  前記相互作用が、イオン性相互作用または水素結合相互作用またはファンデルワールス相互作用であり、必要に応じて、前記イオン性相互作用が、少なくとも１つのイオン対の形成を含み、必要に応じて、前記少なくとも１つのイオン対が、前記第１のアミノ酸を置換する前記１つまたは複数のアミノ酸に含まれるアミノ酸の負に荷電した側鎖基と、前記第２のアミノ酸を置換する前記１つまたは複数のアミノ酸に含まれるアミノ酸の正に荷電した側鎖基との間に形成される、または、必要に応じて、前記水素結合相互作用が、直接的相互作用である、もしくは前記水素結合相互作用が、１つもしくは複数の溶媒分子、好ましくは１つもしくは複数の水分子を含む、
請求項６または７のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項９】
α−ガラクトシダーゼ活性を獲得するなどのためにさらに改変される、請求項１から８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項１０】
配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸１７１の位置に対応するアミノ酸位置におけるＳからＥへの置換、および配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸１７４の位置に対応するアミノ酸位置におけるＡからＬへの置換を含む、請求項９に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項１１】
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号６に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号７に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号７に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号８に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号８に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号９に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す、請求項９または１０に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項１２】
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片のＣ末端もしくはＮ末端のいずれかまたは両方の末端に、必要に応じて１つまたは複数のリンカーペプチドによって接続された１つまたは複数の異種アミノ酸配列などの１つまたは複数の異種アミノ酸配列をさらに含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項１３】
異種シグナル配列などのシグナル配列をさらに含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項１４】
１つまたは複数のＮ−グリカンを含み、好ましくは、前記Ｎ−グリカンのうち１つまたは複数がリン酸化され、より好ましくは、前記Ｎ−グリカンの数で４０％またはそれよりも多くがリン酸化される；または
１つまたは複数の前記Ｎ−グリカンがリン酸化され、より好ましくは前記Ｎ−グリカンの数で４０％またはそれよりも多くがリン酸化され、前記リン酸化されたＮ−グリカンのうち１つまたは複数が、脱キャップ化および脱マンノシル化され、好ましくは、前記リン酸化されたＮ−グリカンの数で４０％またはそれよりも多くが、脱キャップ化および脱マンノシル化される、
請求項１から１３のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
【請求項１５】
請求項１から１４のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片をコードする核酸配列を含む、核酸分子。
【請求項１６】
請求項１５に記載の核酸分子と前記核酸分子に作動可能に連結したプロモーターとを含む発現カセットまたは発現ベクターであって、好ましくは、前記発現カセットまたは発現ベクターが、宿主細胞、好ましくは真菌細胞、より好ましくはＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓにおいて、前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片の発現をもたらすように構成される、発現カセットまたは発現ベクター。
【請求項１７】
請求項１から１４のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片、あるいは請求項１５に記載の核酸分子あるいは請求項１６に記載の発現カセットもしくは発現ベクターを含む、医薬組成物。
【請求項１８】
治療における使用のための、請求項１７に記載の医薬組成物であって、必要に応じて、前記治療が遺伝子治療またはｍＲＮＡ治療である、医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１７に記載の医薬組成物であって、前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片が、請求項９から１１のいずれか一項または請求項９から１１のいずれか一項に従属する請求項１２から１４のいずれか一項に記載されるものであり、ファブリー病を処置する方法における使用のためのものである；あるいはヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片が、請求項１から８のいずれか一項または請求項１から８のいずれか一項に従属する請求項１２から１４のいずれか一項に記載されるものであり、シンドラー病または神崎病を処置する方法における使用のためのものである、医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１５に記載の核酸分子または請求項１６に記載の発現カセットもしくは発現ベクターを含む、宿主細胞、あるいは前記宿主細胞の実質的に純粋な培養物であって、必要に応じて、
−  前記宿主細胞が、真菌細胞、好ましくはＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓである；ならびに／または
−  前記宿主細胞が、
−  Ｎ−グリカン活性の外鎖伸長における欠損、例えば、ＯＣＨ１活性における欠損を含むように遺伝子操作される；および／もしくは
−  ＭＮＮ４、ＰＮＯ１、ＭＮＮ６またはそれらのいずれか１つの生物学的に活性なバリアントもしくは断片などの、Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化をもたらすことが可能なポリペプチドの発現を含むように遺伝子操作される、
宿主細胞、あるいは前記宿主細胞の実質的に純粋な培養物。
【請求項２１】
請求項１から１４のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片を産生するための方法であって、
ａ）宿主細胞が、前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片を発現するように、請求項２０に記載の宿主細胞を培養するステップ、
ｂ）前記宿主細胞または宿主細胞培養培地から、前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片を収集するステップであって、必要に応じて単離するステップ
を含み、
必要に応じて、前記方法が、前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片に含まれるリン酸化されたＮ−グリカンの少なくとも一部を脱キャップ化および脱マンノシル化するステップをさらに含み、例えば、前記脱キャップ化および脱マンノシル化が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、または前記宿主細胞中で、または前記宿主細胞の溶解物中で起こる、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明の上記およびさらなる態様ならびに好ましい実施形態は、以下のセクションおよび添付の特許請求の範囲において記載される。添付の特許請求の範囲の主題は、本明細書で具体的に取り込まれる。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒトα−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ（ＮＡＧＡＬ）ポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片であって、
配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアスパラギン２１３に対応する第１のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのシステイン３２６に対応する第２のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアスパラギン２１３に対応する第１のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換され、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのシステイン３２６に対応する第２のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている、ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２）
前記第１のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第２のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第１のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換され、前記第２のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている、項目１に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目３）
前記第１のアミノ酸が、１つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第２のアミノ酸が、１つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第１のアミノ酸が、１つのアミノ酸によって置換され、前記第２のアミノ酸が、１つのアミノ酸によって置換されている、項目１に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目４）
前記第１のアミノ酸がアスパラギンであり、
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つのアミノ酸によって置換されている、項目１から３のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目５）
前記第２のアミノ酸がシステインであり、
前記システインが、システイン以外の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記システインが、システイン以外の１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記システインが、システイン以外の１つのアミノ酸によって置換されている、項目１から４のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目６）
前記第１のアミノ酸を置換する１つまたは複数の前記アミノ酸が、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群から各々独立して選択される、項目１から５のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目７）
前記第２のアミノ酸を置換する１つまたは複数の前記アミノ酸が、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群から各々独立して選択される、項目１から６のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目８）
前記第１のアミノ酸が、そのうち少なくとも１つが負に荷電した側鎖基を含む１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記第１のアミノ酸が、そのうち少なくとも１つが負に荷電した側鎖基を含む１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第１のアミノ酸が、負に荷電した側鎖基を含む１つのアミノ酸によって置換されている、項目１から７のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目９）
負に荷電した側鎖基を含む少なくとも１つの前記アミノ酸が、アスパラギン酸またはグルタミン酸、好ましくはアスパラギン酸である、項目８に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目１０）
前記第２のアミノ酸が、そのうち少なくとも１つが正に荷電した側鎖基もしくは極性非荷電側鎖基を含む１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記第２のアミノ酸が、そのうち少なくとも１つが正に荷電した側鎖基もしくは極性非荷電側鎖基を含む１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第２のアミノ酸が、正に荷電した側鎖基もしくは極性非荷電側鎖基を含む１つのアミノ酸によって置換されている、項目１から９のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目１１）
正に荷電した側鎖基を含む少なくとも１つの前記アミノ酸が、アルギニン、ヒスチジンもしくはリシン、好ましくはアルギニンであり、または極性非荷電側鎖基を含む少なくとも１つの前記アミノ酸が、セリン、スレオニン、アスパラギンもしくはグルタミン、好ましくはセリンである、項目１０に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目１２）
前記第１のアミノ酸が、アスパラギン酸によって置換され、前記第２のアミノ酸が、アルギニンによって置換されている；または
前記第２のアミノ酸が、アルギニンによって置換されている；または
前記第１のアミノ酸が、アスパラギン酸によって置換され、前記第２のアミノ酸が、セリンによって置換されている；または
前記第２のアミノ酸が、セリンによって置換されている、項目１から１１のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目１３）
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号２に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号３に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号３に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号４に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号５に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号５に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す、項目１から１２のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目１４）
１つまたは複数のアミノ酸のうち少なくとも１つが、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのシステイン３２６に対応する第２のアミノ酸と直接的または間接的に相互作用することが可能であるように、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアスパラギン２１３に対応する第１のアミノ酸が、前記１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
１つまたは複数のアミノ酸のうち少なくとも１つが、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアスパラギン２１３に対応する第１のアミノ酸と直接的または間接的に相互作用することが可能であるように、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのシステイン３２６に対応する第２のアミノ酸が、前記１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記第１のアミノ酸を置換する前記１つまたは複数のアミノ酸のうち少なくとも１つが、前記第２のアミノ酸を置換する前記１つまたは複数のアミノ酸のうち少なくとも１つと直接的または間接的に相互作用することが可能であるように、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアスパラギン２１３に対応する第１のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換され、配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのシステイン３２６に対応する第２のアミノ酸が、１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている、ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目１５）
前記第１のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第２のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第１のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換され、前記第２のアミノ酸が、１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている、項目１４に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目１６）
前記第１のアミノ酸が、１つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第２のアミノ酸が、１つのアミノ酸によって置換されている；または
前記第１のアミノ酸が、１つのアミノ酸によって置換され、前記第２のアミノ酸が、１つのアミノ酸によって置換されている、項目１４に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目１７）
前記第１のアミノ酸がアスパラギンであり、
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記アスパラギンが、アスパラギン以外の１つのアミノ酸によって置換されている、項目１４から１６のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目１８）
前記第２のアミノ酸がシステインであり、
前記システインが、システイン以外の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されている；または
前記システインが、システイン以外の１つ、２つもしくは３つのアミノ酸によって置換されている；または
前記システインが、システイン以外の１つのアミノ酸によって置換されている、項目１４から１７のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目１９）
前記相互作用が、イオン性相互作用または水素結合相互作用またはファンデルワールス相互作用である、項目１４から１８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２０）
前記イオン性相互作用が、少なくとも１つのイオン対の形成を含む、項目１９に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２１）
前記少なくとも１つのイオン対が、前記第１のアミノ酸を置換する前記１つまたは複数のアミノ酸に含まれるアミノ酸の負に荷電した側鎖基と、前記第２のアミノ酸を置換する前記１つまたは複数のアミノ酸に含まれるアミノ酸の正に荷電した側鎖基との間に形成される、項目２０に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２２）
前記水素結合相互作用が、直接的相互作用である、または前記水素結合相互作用が、１つもしくは複数の溶媒分子、好ましくは１つもしくは複数の水分子を含む、項目１９に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２３）
α−ガラクトシダーゼ活性を獲得するなどのためにさらに改変される、項目１から２２のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２４）
配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸１７１の位置に対応するアミノ酸位置におけるＳからＥへの置換、および配列番号１に示されるヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸１７４の位置に対応するアミノ酸位置におけるＡからＬへの置換を含む、項目２３に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２５）
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号６に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号７に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号７に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号８に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号８に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す；または
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９に示されるとおりであるか、もしくは前記機能的に活性なバリアントが、配列番号９に対して少なくとも９０％の配列同一性を示す、項目２３または２４に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２６）
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片のＣ末端もしくはＮ末端のいずれかまたは両方の末端に、任意選択で１つまたは複数のリンカーペプチドによって接続された１つまたは複数の異種アミノ酸配列などの１つまたは複数の異種アミノ酸配列をさらに含む、項目１から２５のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２７）
１つまたは複数のＮ−グリカンを含み、好ましくは、前記Ｎ−グリカンのうち１つまたは複数がリン酸化され、より好ましくは、前記Ｎ−グリカンの数で４０％またはそれよりも多くがリン酸化される、項目１から２６のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２８）
前記リン酸化されたＮ−グリカンのうち１つまたは複数が、脱キャップ化および脱マンノシル化され、好ましくは、前記リン酸化されたＮ−グリカンの数で４０％またはそれよりも多くが、脱キャップ化および脱マンノシル化される、項目２７に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目２９）
治療における使用のための、項目１から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目３０）
ファブリー病を処置する方法における使用のための、項目２３から２５のいずれか一項または項目２３から２５のいずれか一項に従属する項目２６から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片、あるいはシンドラー病または神崎病を処置する方法における使用のための、項目１から２２のいずれか一項または項目１から２２のいずれか一項に従属する項目２６から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片。
（項目３１）
かかる処置を必要とするヒト対象においてファブリー病を処置する方法であって、項目２３から２５のいずれか一項または項目２３から２５のいずれか一項に従属する項目２６から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片の治療有効量を前記対象に投与するステップを含む方法、あるいはかかる処置を必要とするヒト対象においてシンドラー病または神崎病を処置する方法であって、項目１から２２のいずれか一項または項目１から２２のいずれか一項に従属する項目２６から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片の治療有効量を前記対象に投与するステップを含む方法。
（項目３２）
項目１から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片を含む、医薬組成物。
（項目３３）
項目１から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片をコードする核酸配列を含む、核酸分子。
（項目３４）
項目３３に記載の核酸分子と前記核酸分子に作動可能に連結したプロモーターとを含む発現カセットまたは発現ベクターであって、好ましくは、前記発現カセットまたは発現ベクターが、宿主細胞、好ましくは真菌細胞、より好ましくはＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓにおいて、前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片の発現をもたらすように構成される、発現カセットまたは発現ベクター。
（項目３５）
治療における使用のための、項目３３に記載の核酸分子または項目３４に記載の発現カセットもしくは発現ベクター。
（項目３６）
前記治療が、遺伝子治療またはｍＲＮＡ治療である、項目３５に記載の使用のための、項目３３に記載の核酸分子または項目３４に記載の発現カセットもしくは発現ベクター。
（項目３７）
ファブリー病を処置する方法における使用のための、項目２３から２５のいずれか一項または項目２３から２５のいずれか一項に従属する項目２６から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片をコードし、好ましくは、前記方法が、遺伝子治療方法またはｍＲＮＡ治療方法である、項目３３に記載の核酸分子または項目３４に記載の発現カセットもしくは発現ベクター。
（項目３８）
シンドラー病または神崎病を処置する方法における使用のための、項目１から２２のいずれか一項または項目１から２２のいずれか一項に従属する項目２６から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片をコードし、好ましくは、前記方法が、遺伝子治療方法またはｍＲＮＡ治療方法である、項目３３に記載の核酸分子または項目３４に記載の発現カセットもしくは発現ベクター。
（項目３９）
かかる処置を必要とするヒト対象においてファブリー病を処置する方法であって、項目２３から２５のいずれか一項または項目２３から２５のいずれか一項に従属する項目２６から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片をコードする項目３３に記載の核酸分子または項目３４に記載の発現カセットもしくは発現ベクターの治療有効量を前記対象に投与するステップを含み、好ましくは、遺伝子治療方法またはｍＲＮＡ治療方法である、方法。
（項目４０）
かかる処置を必要とするヒト対象においてシンドラー病または神崎病を処置する方法であって、項目１から２２のいずれか一項または項目１から２２のいずれか一項に従属する項目２６から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片をコードする項目３３に記載の核酸分子または項目３４に記載の発現カセットもしくは発現ベクターの治療有効量を前記対象に投与するステップを含み、好ましくは、遺伝子治療方法またはｍＲＮＡ治療方法である、方法。
（項目４１）
項目３３に記載の核酸分子または項目３４に記載の発現カセットもしくは発現ベクターを含む、医薬組成物。
（項目４２）
項目３３に記載の核酸分子または項目３４に記載の発現カセットもしくは発現ベクターを含む、宿主細胞。
（項目４３）
前記宿主細胞が、真菌細胞、好ましくはＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓである、項目４２に記載の宿主細胞。
（項目４４）
−  Ｎ−グリカン活性の外鎖伸長における欠損、例えば、ＯＣＨ１活性における欠損を含むように遺伝子操作される；および／あるいは
−  ＭＮＮ４、ＰＮＯ１、ＭＮＮ６またはそれらのいずれか１つの生物学的に活性なバリアントもしくは断片などの、Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化をもたらすことが可能なポリペプチドの発現を含むように遺伝子操作される、項目４２または４３に記載の宿主細胞。
（項目４５）
項目４２から４４のいずれか一項に記載の宿主細胞の実質的に純粋な培養物。
（項目４６）
宿主細胞において項目１から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片の発現を達成するための、項目３３に記載の核酸分子または項目３４に記載の発現カセットもしくは発現ベクターの使用であって、好ましくは、前記宿主細胞が、真菌細胞、より好ましくはＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓである、使用。
（項目４７）
項目１から２８のいずれか一項に記載のヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片を産生するための方法であって、
ａ）宿主細胞が、前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片を発現するように、項目４２から４４のいずれか一項に記載の宿主細胞を培養するステップ、
ｂ）前記宿主細胞または宿主細胞培養培地から、前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片を収集するステップであって、必要に応じて単離するステップ
を含む方法。
（項目４８）
前記ヒトＮＡＧＡＬポリペプチドまたはその機能的に活性なバリアントもしくは断片に含まれるリン酸化されたＮ−グリカンの少なくとも一部の脱キャップ化および脱マンノシル化をさらに含み、例えば、前記脱キャップ化および脱マンノシル化が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、または前記宿主細胞中で、または前記宿主細胞の溶解物中で起こる、項目４７に記載の方法。