【誤訳訂正書】
【提出日】令和1年12月2日(2019.12.2)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６５】
具体的実施形態では、１つ又は２つ以上の銅金属シャペロンの過剰発現は、宿主細胞の１つ又は２つ以上の銅金属シャペロンの生来のプロモーターの転写リプレッサー又はインデューサーの発現を変化させることによって実現できる。例えば、銅金属シャペロンの転写リプレッサーの発現を宿主細胞において減少させることができ、逆に、銅金属シャペロンの転写インデューサー（又はアクチベーター）の発現を宿主細胞において増加させることができる。１つの例では、銅金属シャペロンの転写アクチベーターであるＭａｃ１（金属結合アクチベーター１：酵母の銅不足誘導性転写因子）の発現が宿主細胞において増加され、それにより、銅金属シャペロンの過剰発現がもたされる。転写活性剤（例えばＭａｃ１）の発現の増加は、宿主細胞に転写因子の発現カセット又は発現ベクターを導入することにより実現できる。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
宿主細胞からの銅酵素の産生方法であって、
銅酵素を発現する宿主細胞で銅金属シャペロンを過剰発現させることと、
前記銅酵素を産生するのに十分な条件下で前記宿主細胞を培養することと、を含み、
前記宿主細胞が、実質的に同じ培養条件下で培養されたときに前記銅金属シャペロンを過剰発現しない対応する宿主細胞と比較して、増加した量の前記銅酵素を産生し、
前記宿主細胞が、トリコデルマ・リーゼイ、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・オリザエ、又はタラロマイセス・エメルソニ宿主細胞である、方法。
【請求項２】
前記銅酵素が、前記宿主細胞から分泌される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記銅酵素が、溶解性多糖モノオキシゲナーゼ（ＬＰＭＯ）、ラッカーゼ、チロシナーゼ、アミンオキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、カテコールオキシダーゼ、ドーパミンβ−モノオキシゲナーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、Ｌ−アスコルビン酸オキシダーゼ、ペプチジルグリシンモノオキシゲナーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、ケルセチン２，３−ジオキシゲナーゼ、及びスーパーオキシドジスムターゼからなる群から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記銅酵素が、前記宿主細胞に内因性である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記銅酵素が、前記宿主細胞に異種性である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記銅酵素及び／又は前記銅金属シャペロンの発現が、前記宿主細胞由来のプロモーターによって制御される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記宿主細胞が、トリコデルマ・リーゼイ（T. reesei）細胞であり、前記プロモーターが、トリコデルマ・リーゼイ由来のピルビン酸キナーゼ（ｐｋｉ）又はセロビオヒドロラーゼＩ（ｃｂｈ１）プロモーターである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記宿主細胞が、少なくとも１つの追加の銅酵素を発現し、前記少なくとも１つの追加の銅酵素の産生レベルが、実質的に同じ培養条件下で前記銅金属シャペロンを過剰発現しない対応する宿主細胞と比較して増加している、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記銅金属シャペロンが、膜結合型銅輸送ＡＴＰアーゼである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記膜結合型銅輸送ＡＴＰアーゼが、配列番号６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記膜結合型銅輸送ＡＴＰアーゼが、以下の［表１］及び［表２］に列記されるものから選択される、請求項９又は１０に記載の方法。
【表１】
2017525359.tif 000001
【表２】
2017525359.tif 000002
【請求項１２】
前記銅金属シャペロンが、可溶性銅トランスポーターである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記可溶性銅トランスポーターが、配列番号３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記可溶性銅トランスポーターが、以下の［表３］及び［表４］に列記されるものから選択される、請求項１２又は１３に記載の方法。
【表３】
2017525359.tif 000003
【表４】
2017525359.tif 000004
【請求項１５】
前記宿主細胞で第２の銅金属シャペロンを過剰発現させることを更に含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１の銅金属シャペロンが、配列番号６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む膜結合型銅輸送ＡＴＰアーゼであり、前記第２の銅金属シャペロンが、配列番号３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可溶性銅トランスポーターである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記過剰発現させることが、前記宿主細胞での転写因子Ｍａｃ１の発現を増加させることにより得られる、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記Ｍａｃ１の発現を増加させることが、Ｍａｃ１発現ベクターを前記宿主細胞に導入することを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
宿主細胞の銅毒性の低減方法であって、
宿主細胞で銅金属シャペロンを過剰発現させることを含み、前記宿主細胞が、前記銅金属シャペロンを過剰発現しない対応する宿主細胞と比較して低減された銅毒性を有し、
前記宿主細胞が、トリコデルマ・リーゼイ、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・オリザエ、又はタラロマイセス・エメルソニ宿主細胞である、方法。
【請求項２０】
前記宿主細胞が、銅酵素を過剰発現する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
細胞培養ブロス中の銅濃度の低減方法であって、
銅を含む細胞培養培地で銅金属シャペロンを過剰発現する宿主細胞を培養して、細胞培養ブロスを産生することを含み、結果として生じる細胞培養ブロス中の銅濃度が、実質的に同じ培養条件下で実質的に同じ細胞培養培地で培養されたときに前記銅金属シャペロンを過剰発現しない対応する宿主細胞から得られる細胞培養ブロスの銅濃度と比較して減少し、
前記宿主細胞が、トリコデルマ・リーゼイ、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・オリザエ、又はタラロマイセス・エメルソニ宿主細胞である、方法。
【請求項２２】
組換え宿主細胞であって、
銅酵素をコードする第１のポリヌクレオチドと、
銅金属シャペロンをコードする第２のポリヌクレオチドと、を含み、
前記銅酵素が、前記宿主細胞で発現し、前記銅金属シャペロンが、前記宿主細胞で過剰発現し、
前記銅酵素の発現レベルが、実質的に同じ培養条件下で前記銅金属シャペロンを過剰発現しない対応する宿主細胞と比較して、前記宿主細胞で増加し、
前記宿主細胞が、トリコデルマ・リーゼイ、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・オリザエ、又はタラロマイセス・エメルソニ宿主細胞である、組換え宿主細胞。
【請求項２３】
前記銅酵素が、前記宿主細胞から分泌される、請求項２２に記載の組換え宿主細胞。
【請求項２４】
前記銅酵素が、溶解性多糖モノオキシゲナーゼ（ＬＰＭＯ）、ラッカーゼ、チロシナーゼ、アミンオキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、カテコールオキシダーゼ、ドーパミンβ−モノオキシゲナーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、Ｌ−アスコルビン酸オキシダーゼ、ペプチジルグリシンモノオキシゲナーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、ケルセチン２，３−ジオキシゲナーゼ、及びスーパーオキシドジスムターゼからなる群から選択される、請求項２２又は２３に記載の組換え宿主細胞。
【請求項２５】
前記銅酵素が、以下の［表５］、［表６］、及び［表７］に列記されるものから選択される、請求項２４に記載の組換え宿主細胞。
【表５】
2017525359.tif 000005
【表６】
2017525359.tif 000006
【表７】
2017525359.tif 000007
【請求項２６】
前記銅酵素が、前記宿主細胞に異種性である、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項２７】
前記銅酵素及び／又は前記銅金属シャペロンの発現が、前記宿主細胞のプロモーターによって制御される、請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項２８】
前記宿主細胞が、トリコデルマ・リーゼイであり、前記プロモーターが、トリコデルマ・リーゼイ由来のｐｋｉ又はｃｂｈ１プロモーターである、請求項２７に記載の組換え宿主細胞。
【請求項２９】
前記第２のポリヌクレオチドが、配列番号６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む膜結合型銅輸送ＡＴＰアーゼをコードする、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項３０】
前記第２のポリヌクレオチドが、配列番号３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可溶性銅トランスポーターをコードする、請求項２２〜２９のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項３１】
前記宿主細胞が、第２の銅金属シャペロンをコードする第３のポリヌクレオチドを更に含む、請求項２２〜３０のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項３２】
前記第１の銅金属シャペロンが、配列番号６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む膜結合型銅輸送ＡＴＰアーゼであり、前記第２の銅金属シャペロンが、配列番号３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可溶性銅トランスポーターである、請求項３１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項３３】
前記組換え宿主細胞が、Ｍａｃ１を発現し、Ｍａｃ１の発現増加が、前記宿主細胞での前記銅金属シャペロンの過剰発現をもたらす、請求項２２〜３２のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項３４】
請求項２２〜３３のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞の培養物から得られる上清。
【請求項３５】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法を使用して得られる上清。