【手続補正書】
【提出日】令和2年8月17日(2020.8.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞集団、ゲノム編集エンハンサー、および人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
【請求項２】
ドナー修復鋳型をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記細胞集団は、
（ａ）幹細胞；
（ｂ）造血細胞；
（ｃ）ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ１３３＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋細胞、またはＣＤ３４＋ＣＤ３８ＬｏＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞；
（ｄ）免疫エフェクター細胞；
（ｅ）ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋細胞、またはそれらの組み合わせ；
（ｆ）Ｔ細胞；あるいは
（ｇ）細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞
を含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
（ａ）前記ゲノム編集エンハンサーは、ＤＮＡインターカレーターである；
（ｂ）前記ゲノム編集エンハンサーは、単官能性ＤＮＡインターカレーター、二官能性ＤＮＡインターカレーター、または多官能性ＤＮＡインターカレーターからなる群から選択される；
（ｃ）前記ゲノム編集エンハンサーは、アクリジン、アントラサイクリン、アルカロイド、クマリン、およびフェナントリジンからなる群から選択される；
（ｄ）前記ゲノム編集エンハンサーは、１，８−ナフタルイミド、４’６−ジアミジノ−α−フェニルインドール、アクリジン、アクリジンオレンジ、アクリフラビン、アクロナイシン、アクチノダフニジン（ａｃｔｉｎｏｄａｐｈｎｉｄｉｎｅ）、アミナクリン、アムサクリン、アントラサイクリン、アントラマイシン、アントラピラゾール、ベンゾフェナントリジンアルカロイド、ベルバミン、ベルベリン、ベルベルビン、ブレオマイシン、ＢＯＢＯ−１、ＢＯＢＯ−３、ボルジン、ＢＯ−ＰＲＯ−１、ＢＯ−ＰＲＯ−３、ブブロカプニン（ｂｕｂｌｏｃａｐｎｉｎｅ）、カンプトテシン、カシチン、シャルトルーシン、クロロキン、クロモマイシン、シンコニジン、シンコニン、コプチシン、コラリン、クマリン、クリプトレピン、ダクチノマイシン、ＤＡＰＩ、ダウノルビシン、ジセントリン、ジクタミン、ジスタマイシン、ドキソルビシン、エリプチシン、エメチン、エタクリジン、エチジウム、エボリトリン、ファガリン、ファガロニン、蛍光クマリン、ＧｅｌＳｔａｒ、ゲンタマイシン、グラウシン、ハルマリン、ハルミン、ハルミン、ヘダマイシン、ヘキシジウム、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２、ホミジウム、ヒカントン、イミダゾアクリジノン、インダゾール類似体、ヨウ化物、イソコリジン、イソキノリンアルカロイド、ジャトロリジン、ＪＯＪＯ−１、ＪＯ−ＰＲＯ−１、キネチンリボシド、コクサイニン（ｋｏｋｕｓａｉｎｉｎｅ）、ロベリン、ＬＯＬＯ−１、ＬＯ−ＰＲＯ−１、ルカントン、マスキュリン、マタジン、メパクリン、メタロ−インターカレーター、ミトラマイシン、ミトキサントロン、ネオクリプトレピン、ネトロプシン、ニチジン、ニトラクリン、ノガラマイシン、ノルハルマン、ＯｌｉＧｒｅｅｎ、パルマチン、フェナントリジン、ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ、ピラルビシン、ポリピリジル、ＰＯＰＯ−１、ＰＯＰＯ−３、ＰＯ−ＰＲＯ−１、ＰＯ−ＰＲＯ−３、プロフラビン、プロピジウム、ソラレン、キナクリン、キニジン、キニーネ、キノキサリン、ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ、ロジウム系インターカレーター、ルテニウム系インターカレーター、サンギナリン、セルペンチン、スキムミアニン、ストレプトマイシン、ＳＹＢＲ  ＤＸ、ＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＩＩ、ＳＹＴＯ−１１、ＳＹＴＯ−１２、ＳＹＴＯ−１３、ＳＹＴＯ−１４、ＳＹＴＯ−１５、ＳＹＴＯ−１６、ＳＹＴＯ−１７、ＳＹＴＯ−２０、ＳＹＴＯ−２１、ＳＹＴＯ−２２、ＳＹＴＯ−２３、ＳＹＴＯ−２４、ＳＹＴＯ−２５、ＳＹＴＯ−４０、ＳＹＴＯ−４１、ＳＹＴＯ−４２、ＳＹＴＯ−４３、ＳＹＴＯ−４４、ＳＹＴＯ−４５、ＳＹＴＯ−５９、ＳＹＴＯ−６０、ＳＹＴＯ−６１、ＳＹＴＯ−６２、ＳＹＴＯ−６３、ＳＹＴＯ−６４、ＳＹＴＯ−８０、ＳＹＴＯ−８１、ＳＹＴＯ−８２、ＳＹＴＯ−８３、ＳＹＴＯ−８４、ＳＹＴＯ−８５、ＳＹＴＯＸ  ｂｌｕｅ、ＳＹＴＯＸ  ｇｒｅｅｎ、ＳＹＴＯＸ  ｏｒａｎｇｅ、タクリン、サリドマイド、チアゾールオレンジ、チロロン、ＴＯ−ＰＲＯ−１、ＴＯ−ＰＲＯ−３、ＴＯ−ＰＲＯ−５、ＴＯＴＯ−１、ＴＯＴＯ−３、ウサンバレンシン、ＹＯ−ＰＲＯ−１、ＹＯ−ＰＲＯ−３、ＹＯＹＯ−１、ＹＯＹＯ−３、ならびにそれらの類似体および誘導体からなる群から選択される；
（ｅ）前記ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、ハルミン、ヒカントン、ダウノルビシン、硫酸サンギナリン、キネチンリボシド、乳酸エタクリジン、およびシクロヘキシミドからなる群から選択される；
（ｆ）前記ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、およびハルミンからなる群から選択される；
（ｇ）前記ゲノム編集エンハンサーは、アクリジンまたはジアクリジンである；あるいは
（ｈ）前記ゲノム編集エンハンサーは、アミナクリン（９−アミノアクリジン）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
（ａ）前記人工ヌクレアーゼは、メガヌクレアーゼ、メガＴＡＬ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼからなる群から選択される；
（ｂ）前記人工ヌクレアーゼは、Ｉ−ＡａｂＭＩ、Ｉ−ＡａｅＭＩ、Ｉ−ＡｎｉＩ、Ｉ−ＡｐａＭＩ、Ｉ−ＣａｐＩＩＩ、Ｉ−ＣａｐＩＶ、Ｉ−ＣｋａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＶ、Ｉ−ＣｐａＭＶ、Ｉ−ＣｐａＶ、Ｉ−ＣｒａＭＩ、Ｉ−ＥｊｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｉＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＬｔｒＩＩ、Ｉ−ＬｔｒＩ、Ｉ−ＬｔｒＷＩ、Ｉ−ＭｐｅＭＩ、Ｉ−ＭｖｅＭＩ、Ｉ−ＮｃｒＩＩ、Ｉ−Ｎｃｒｌ、Ｉ−ＮｃｒＭＩ、Ｉ−ＯｈｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＶ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩＩ、Ｉ−ＰｎｏＭＩ、Ｉ−ＳｃｕＭＩ、Ｉ−ＳｍａＭＩ、Ｉ−ＳｓｃＭＩ、およびＩ−Ｖｄｉ１４１Ｉからなる群から選択されるＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼ（ＬＨＥ）から遺伝子操作されたメガヌクレアーゼである；
（ｃ）前記人工ヌクレアーゼは、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、およびＳｍａＭＩからなる群から選択されるＬＨＥから遺伝子操作されたメガヌクレアーゼである；
（ｄ）前記人工ヌクレアーゼは、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥから遺伝子操作されたメガヌクレアーゼである；あるいは
（ｅ）前記人工ヌクレアーゼは、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよび人工メガヌクレアーゼを含むメガＴＡＬである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記人工ヌクレアーゼは、末端プロセシング酵素活性を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記末端プロセシング酵素活性は、５−３’エキソヌクレアーゼ、５−３’アルカリエキソヌクレアーゼ、３−５’エキソヌクレアーゼ、５’フラップエンドヌクレアーゼ、ヘリカーゼまたは鋳型非依存性ＤＮＡポリメラーゼの活性、あるいはＴｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片の３−５’エキソヌクレアーゼ活性である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物は、末端プロセシング酵素、または前記末端プロセシング酵素をコードするｍＲＮＡをさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記末端プロセシング酵素は、５−３’エキソヌクレアーゼ、５−３’アルカリエキソヌクレアーゼ、３−５’エキソヌクレアーゼ、５’フラップエンドヌクレアーゼ、ヘリカーゼまたは鋳型非依存性ＤＮＡポリメラーゼの活性を示す、あるいは前記末端プロセシング酵素は、Ｔｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
（ａ）βグロビン、δグロビン、γグロビン、ＢＣＬ１１Ａ、ＫＬＦ１、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ（ＡＡＶＳ１）、ＨＰＲＴ、アルブミン、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ＬＲＲＫ２、Ｈｔｔ、ＳＯＤ１、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＴＡＲＤＢＰ、ＦＵＳ、ＲＨＯ、ＣＦＴＲ、ＳＦＴＰＢ、ＴＲＡＣ、ＴＲＢＣ、ＰＤ１、ＣＴＬＡ−４、ＨＬＡ  Ａ、ＨＬＡ  Ｂ、ＨＬＡ  Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＬＭＰ７、ＴＡＰ  １、ＴＡＰ２、ＴＡＰＢＰ、ＣＩＩＴＡ、ＤＭＤ、ＧＲ、ＩＬ２ＲＧ、Ｒａｇ−１、ＲＦＸ５、ＦＡＤ２、ＦＡＤ３、ＺＰ１５、ＫＡＳＩＩ、ＭＤＨ、ＥＰＳＰＳ、またはそれらの断片をコードするドナー修復鋳型；
（ｂ）二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）分子；ホルモン；サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＴＮＦ−α）、ケモカイン（例えば、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−３、およびＲＡＮＴＥＳ）、細胞毒（例えば、パーフォリン、グランザイムＡ、およびグランザイムＢ）、サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−１５受容体、およびＩＬ−２１受容体）、または人工抗原受容体をコードするドナー修復鋳型；あるいは
（ｃ）人工Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｄａｒｉｃ受容体もしくはその成分、またはキメラサイトカイン受容体をコードするドナー修復鋳型
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
細胞集団におけるゲノム編集を増大させる方法であって、
（ａ）細胞集団に人工ヌクレアーゼを導入することと、
（ｂ）前記細胞集団をゲノム編集エンハンサーと接触させることと、を含み、
前記ゲノム編集エンハンサーの存在下における前記人工ヌクレアーゼの発現が、前記細胞集団におけるゲノム編集の頻度を増加させる、方法。
【請求項１２】
（ａ）標的部位に二本鎖切断（ＤＳＢ）を生成するように前記人工ヌクレアーゼを導入することと、
（ｂ）前記細胞集団にドナー修復鋳型を導入することと、をさらに含む、請求項１１に記載の方法であって、
前記ゲノム編集エンハンサーおよび前記ドナー修復鋳型の存在下における前記人工ヌクレアーゼの発現が、相同組み換え修復（ＨＤＲ）による前記標的部位における前記ドナー修復鋳型の組み込みの頻度を増加させる、方法。
【請求項１３】
標的部位に二本鎖切断（ＤＳＢ）を生成するように前記人工ヌクレアーゼを導入することをさらに含む、請求項１１に記載の方法であって、
前記ゲノム編集エンハンサーの存在下における前記人工ヌクレアーゼの発現が、前記標的部位におけるＮＨＥＪの頻度を増加させる、方法。
【請求項１４】
前記細胞は
（ａ）造血細胞；
（ｂ）造血幹細胞または造血前駆細胞；
（ｃ）ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ１３３＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋細胞、またはＣＤ３４＋ＣＤ３８ＬｏＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞；
（ｄ）免疫エフェクター細胞；
（ｅ）ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋細胞、またはそれらの組み合わせ；
（ｆ）Ｔ細胞；あるいは
（ｇ）細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞
である、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
（ａ）前記ゲノム編集エンハンサーはＤＮＡインターカレーターである；
（ｂ）前記ゲノム編集エンハンサーは、単官能性ＤＮＡインターカレーター、二官能性ＤＮＡインターカレーター、または多官能性ＤＮＡインターカレーターからなる群から選択される；
（ｃ）前記ゲノム編集エンハンサーは、アクリジン、アントラサイクリン、アルカロイド、クマリン、およびフェナントリジンからなる群から選択される；
（ｄ）前記ゲノム編集エンハンサーは、１，８−ナフタルイミド、４’６−ジアミジノ−α−フェニルインドール、アクリジン、アクリジンオレンジ、アクリフラビン、アクロナイシン、アクチノダフニジン（ａｃｔｉｎｏｄａｐｈｎｉｄｉｎｅ）、アミナクリン、アムサクリン、アントラサイクリン、アントラマイシン、アントラピラゾール、ベンゾフェナントリジンアルカロイド、ベルバミン、ベルベリン、ベルベルビン、ブレオマイシン、ＢＯＢＯ−１、ＢＯＢＯ−３、ボルジン、ＢＯ−ＰＲＯ−１、ＢＯ−ＰＲＯ−３、ブブロカプニン（ｂｕｂｌｏｃａｐｎｉｎｅ）、カンプトテシン、カシチン、シャルトルーシン、クロロキン、クロモマイシン、シンコニジン、シンコニン、コプチシン、コラリン、クマリン、クリプトレピン、ダクチノマイシン、ＤＡＰＩ、ダウノルビシン、ジセントリン、ジクタミン、ジスタマイシン、ドキソルビシン、エリプチシン、エメチン、エタクリジン、エチジウム、エボリトリン、ファガリン、ファガロニン、蛍光クマリン、ＧｅｌＳｔａｒ、ゲンタマイシン、グラウシン、ハルマリン、ハルミン、ハルミン、ヘダマイシン、ヘキシジウム、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２、ホミジウム、ヒカントン、イミダゾアクリジノン、インダゾール類似体、ヨウ化物、イソコリジン、イソキノリンアルカロイド、ジャトロリジン、ＪＯＪＯ−１、ＪＯ−ＰＲＯ−１、キネチンリボシド、コクサイニン（ｋｏｋｕｓａｉｎｉｎｅ）、ロベリン、ＬＯＬＯ−１、ＬＯ−ＰＲＯ−１、ルカントン、マスキュリン、マタジン、メパクリン、メタロ−インターカレーター、ミトラマイシン、ミトキサントロン、ネオクリプトレピン、ネトロプシン、ニチジン、ニトラクリン、ノガラマイシン、ノルハルマン、ＯｌｉＧｒｅｅｎ、パルマチン、フェナントリジン、ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ、ピラルビシン、ポリピリジル、ＰＯＰＯ−１、ＰＯＰＯ−３、ＰＯ−ＰＲＯ−１、ＰＯ−ＰＲＯ−３、プロフラビン、プロピジウム、ソラレン、キナクリン、キニジン、キニーネ、キノキサリン、ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ、ロジウム系インターカレーター、ルテニウム系インターカレーター、サンギナリン、セルペンチン、スキムミアニン、ストレプトマイシン、ＳＹＢＲ  ＤＸ、ＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＩＩ、ＳＹＴＯ−１１、ＳＹＴＯ−１２、ＳＹＴＯ−１３、ＳＹＴＯ−１４、ＳＹＴＯ−１５、ＳＹＴＯ−１６、ＳＹＴＯ−１７、ＳＹＴＯ−２０、ＳＹＴＯ−２１、ＳＹＴＯ−２２、ＳＹＴＯ−２３、ＳＹＴＯ−２４、ＳＹＴＯ−２５、ＳＹＴＯ−４０、ＳＹＴＯ−４１、ＳＹＴＯ−４２、ＳＹＴＯ−４３、ＳＹＴＯ−４４、ＳＹＴＯ−４５、ＳＹＴＯ−５９、ＳＹＴＯ−６０、ＳＹＴＯ−６１、ＳＹＴＯ−６２、ＳＹＴＯ−６３、ＳＹＴＯ−６４、ＳＹＴＯ−８０、ＳＹＴＯ−８１、ＳＹＴＯ−８２、ＳＹＴＯ−８３、ＳＹＴＯ−８４、ＳＹＴＯ−８５、ＳＹＴＯＸ  ｂｌｕｅ、ＳＹＴＯＸ  ｇｒｅｅｎ、ＳＹＴＯＸ  ｏｒａｎｇｅ、タクリン、サリドマイド、チアゾールオレンジ、チロロン、ＴＯ−ＰＲＯ−１、ＴＯ−ＰＲＯ−３、ＴＯ−ＰＲＯ−５、ＴＯＴＯ−１、ＴＯＴＯ−３、ウサンバレンシン、ＹＯ−ＰＲＯ−１、ＹＯ−ＰＲＯ−３、ＹＯＹＯ−１、ＹＯＹＯ−３、ならびにそれらの類似体および誘導体からなる群から選択される；
（ｅ）前記ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、ハルミン、ヒカントン、ダウノルビシン、硫酸サンギナリン、キネチンリボシド、乳酸エタクリジン、およびシクロヘキシミドからなる群から選択される；
（ｆ）前記ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、およびハルミンからなる群から選択される；
（ｇ）前記ゲノム編集エンハンサーは、アクリジンまたはジアクリジンである；あるいは
（ｈ）前記ゲノム編集エンハンサーは、アミナクリン（９−アミノアクリジン）である、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）前記人工ヌクレアーゼは、メガヌクレアーゼ、メガＴＡＬ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼからなる群から選択される；
（ｂ）前記人工ヌクレアーゼは、Ｉ−ＡａｂＭＩ、Ｉ−ＡａｅＭＩ、Ｉ−ＡｎｉＩ、Ｉ−ＡｐａＭＩ、Ｉ−ＣａｐＩＩＩ、Ｉ−ＣａｐＩＶ、Ｉ−ＣｋａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＶ、Ｉ−ＣｐａＭＶ、Ｉ−ＣｐａＶ、Ｉ−ＣｒａＭＩ、Ｉ−ＥｊｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｉＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＬｔｒＩＩ、Ｉ−ＬｔｒＩ、Ｉ−ＬｔｒＷＩ、Ｉ−ＭｐｅＭＩ、Ｉ−ＭｖｅＭＩ、Ｉ−ＮｃｒＩＩ、Ｉ−Ｎｃｒｌ、Ｉ−ＮｃｒＭＩ、Ｉ−ＯｈｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＶ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩＩ、Ｉ−ＰｎｏＭＩ、Ｉ−ＳｃｕＭＩ、Ｉ−ＳｍａＭＩ、Ｉ−ＳｓｃＭＩ、およびＩ−Ｖｄｉ１４１Ｉからなる群から選択されるＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼ（ＬＨＥ）から遺伝子操作されたメガヌクレアーゼである；
（ｃ）前記人工ヌクレアーゼは、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、およびＳｍａＭＩからなる群から選択されるＬＨＥから遺伝子操作されたメガヌクレアーゼである；
（ｄ）前記人工ヌクレアーゼは、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥから遺伝子操作されたメガヌクレアーゼである；あるいは
（ｅ）前記人工ヌクレアーゼは、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよび人工メガヌクレアーゼを含むメガＴＡＬである、請求項１０〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
ある特定の実施形態において、ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、ハルミン、ヒカントン、ダウノルビシン、硫酸サンギナリン、キネチンリボシド、乳酸エタクリジン、およびシクロヘキシミドからなる群から選択される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８４】
ある特定の実施形態において、ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、ハルミン、ヒカントン、ダウノルビシン、硫酸サンギナリン、キネチンリボシド、乳酸エタクリジン、およびシクロヘキシミドからなる群から選択される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２３】
種々の実施形態において、本発明は、一部、薬学的に許容される担体および本明細書で企図される細胞を含む薬学的組成物を企図する。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
細胞集団、ゲノム編集エンハンサー、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目２）
細胞集団、ゲノム編集エンハンサー、ドナー修復鋳型、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目３）
前記細胞集団は、幹細胞を含む、項目１または項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記前記細胞集団は、造血細胞を含む、項目１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５）
前記細胞集団は、ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ１３３＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋細胞、またはＣＤ３４＋ＣＤ３８ＬｏＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞を含む、項目１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６）
前記細胞集団は、免疫エフェクター細胞を含む、項目１または項目２に記載の組成物。
（項目７）
前記細胞集団は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋細胞、またはそれらの組み合わせを含む、項目１または項目２に記載の組成物。
（項目８）
細胞集団は、Ｔ細胞を含む、項目１または項目２に記載の組成物。
（項目９）
前記細胞集団は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞を含む、項目１または項目２に記載の組成物。
（項目１０）
前記細胞の源は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍である、項目１または項目２に記載の組成物。
（項目１１）
ゲノム編集エンハンサー、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目１２）
ゲノム編集エンハンサー、ドナー修復鋳型、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目１３）
前記ゲノム編集エンハンサーは、ＤＮＡインターカレーターである、項目１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１４）
前記ゲノム編集エンハンサーは、単官能性ＤＮＡインターカレーター、二官能性ＤＮＡインターカレーター、または多官能性ＤＮＡインターカレーターからなる群から選択される、項目１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１５）
前記ゲノム編集エンハンサーは、アクリジン、アントラサイクリン、アルカロイド、クマリン、およびフェナントリジンからなる群から選択される、項目１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１６）
前記ゲノム編集エンハンサーは、１，８−ナフタルイミド、４’６−ジアミジノ−α−フェニルインドール、アクリジン、アクリジンオレンジ、アクリフラビン、アクロナイシン、アクチノダフニジン（ａｃｔｉｎｏｄａｐｈｎｉｄｉｎｅ）、アミナクリン、アムサクリン、アントラサイクリン、アントラマイシン、アントラピラゾール、ベンゾフェナントリジンアルカロイド、ベルバミン、ベルベリン、ベルベルビン、ブレオマイシン、ＢＯＢＯ−１、ＢＯＢＯ−３、ボルジン、ＢＯ−ＰＲＯ−１、ＢＯ−ＰＲＯ−３、ブブロカプニン（ｂｕｂｌｏｃａｐｎｉｎｅ）、カンプトテシン、カシチン、シャルトルーシン、クロロキン、クロモマイシン、シンコニジン、シンコニン、コプチシン、コラリン、クマリン、クリプトレピン、ダクチノマイシン、ＤＡＰＩ、ダウノルビシン、ジセントリン、ジクタミン、ジスタマイシン、ドキソルビシン、エリプチシン、エメチン、エタクリジン、エチジウム、エボリトリン、ファガリン、ファガロニン、蛍光クマリン、ＧｅｌＳｔａｒ、ゲンタマイシン、グラウシン、ハルマリン、ハルミン、ハルミン、ヘダマイシン、ヘキシジウム、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２、ホミジウム、ヒカントン、イミダゾアクリジノン、インダゾール類似体、ヨウ化物、イソコリジン、イソキノリンアルカロイド、ジャトロリジン、ＪＯＪＯ−１、ＪＯ−ＰＲＯ−１、キネチンリボシド、コクサイニン（ｋｏｋｕｓａｉｎｉｎｅ）、ロベリン、ＬＯＬＯ−１、ＬＯ−ＰＲＯ−１、ルカントン、マスキュリン、マタジン、メパクリン、メタロ−インターカレーター、ミトラマイシン、ミトキサントロン、ネオクリプトレピン、ネトロプシン、ニチジン、ニトラクリン、ノガラマイシン、ノルハルマン、ＯｌｉＧｒｅｅｎ、パルマチン、フェナントリジン、ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ、ピラルビシン、ポリピリジル、ＰＯＰＯ−１、ＰＯＰＯ−３、ＰＯ−ＰＲＯ−１、ＰＯ−ＰＲＯ−３、プロフラビン、プロピジウム、ソラレン、キナクリン、キニジン、キニーネ、キノキサリン、ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ、ロジウム系インターカレーター、ルテニウム系インターカレーター、サンギナリン、セルペンチン、スキムミアニン、ストレプトマイシン、ＳＹＢＲ  ＤＸ、ＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＩＩ、ＳＹＴＯ−１１、ＳＹＴＯ−１２、ＳＹＴＯ−１３、ＳＹＴＯ−１４、ＳＹＴＯ−１５、ＳＹＴＯ−１６、ＳＹＴＯ−１７、ＳＹＴＯ−２０、ＳＹＴＯ−２１、ＳＹＴＯ−２２、ＳＹＴＯ−２３、ＳＹＴＯ−２４、ＳＹＴＯ−２５、ＳＹＴＯ−４０、ＳＹＴＯ−４１、ＳＹＴＯ−４２、ＳＹＴＯ−４３、ＳＹＴＯ−４４、ＳＹＴＯ−４５、ＳＹＴＯ−５９、ＳＹＴＯ−６０、ＳＹＴＯ−６１、ＳＹＴＯ−６２、ＳＹＴＯ−６３、ＳＹＴＯ−６４、ＳＹＴＯ−８０、ＳＹＴＯ−８１、ＳＹＴＯ−８２、ＳＹＴＯ−８３、ＳＹＴＯ−８４、ＳＹＴＯ−８５、ＳＹＴＯＸ  ｂｌｕｅ、ＳＹＴＯＸ  ｇｒｅｅｎ、ＳＹＴＯＸ  ｏｒａｎｇｅ、タクリン、サリドマイド、チアゾールオレンジ、チロロン、ＴＯ−ＰＲＯ−１、ＴＯ−ＰＲＯ−３、ＴＯ−ＰＲＯ−５、ＴＯＴＯ−１、ＴＯＴＯ−３、ウサンバレンシン、ＹＯ−ＰＲＯ−１、ＹＯ−ＰＲＯ−３、ＹＯＹＯ−１、ＹＯＹＯ−３、ならびにそれらの類似体および誘導体からなる群から選択される、項目１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１７）
前記ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、ハルミン、ヒカントン、ダウノルビシン、硫酸サンギナリン、キネチンリボシド、乳酸エタクリジン、およびシクロヘキシミドからなる群から選択される、項目１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１８）
前記ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、およびハルミンからなる群から選択される、項目１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１９）
前記ゲノム編集エンハンサーは、アクリジンまたはジアクリジンである、項目１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２０）
前記ゲノム編集エンハンサーは、アミナクリン（９−アミノアクリジン）である、項目１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２１）
細胞、アクリジン、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目２２）
細胞、アクリジン、ドナー修復鋳型、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目２３）
細胞、９−アミノアクリジン、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目２４）
細胞、９−アミノアクリジン、ドナー修復鋳型、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目２５）
アクリジン、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目２６）
アクリジン、ドナー修復鋳型、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目２７）
９−アミノアクリジン、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目２８）
９−アミノアクリジン、ドナー修復鋳型、および人工ヌクレアーゼ、ならびに／または任意選択的に、前記人工ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを含む、組成物。
（項目２９）
前記人工ヌクレアーゼは、メガヌクレアーゼ、メガＴＡＬ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼからなる群から選択される、項目１〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３０）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＡａｂＭＩ、Ｉ−ＡａｅＭＩ、Ｉ−ＡｎｉＩ、Ｉ−ＡｐａＭＩ、Ｉ−ＣａｐＩＩＩ、Ｉ−ＣａｐＩＶ、Ｉ−ＣｋａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＶ、Ｉ−ＣｐａＭＶ、Ｉ−ＣｐａＶ、Ｉ−ＣｒａＭＩ、Ｉ−ＥｊｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｉＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＬｔｒＩＩ、Ｉ−ＬｔｒＩ、Ｉ−ＬｔｒＷＩ、Ｉ−ＭｐｅＭＩ、Ｉ−ＭｖｅＭＩ、Ｉ−ＮｃｒＩＩ、Ｉ−Ｎｃｒｌ、Ｉ−ＮｃｒＭＩ、Ｉ−ＯｈｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＶ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩＩ、Ｉ−ＰｎｏＭＩ、Ｉ−ＳｃｕＭＩ、Ｉ−ＳｍａＭＩ、Ｉ−ＳｓｃＭＩ、およびＩ−Ｖｄｉ１４１Ｉからなる群から選択されるＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼ（ＬＨＥ）から遺伝子操作される、項目２９に記載の組成物。
（項目３１）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、およびＳｍａＭＩからなる群から選択されるＬＨＥから遺伝子操作される、項目２９または項目３０に記載の組成物。
（項目３２）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥから遺伝子操作される、項目２９〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３３）
前記メガＴＡＬは、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよび人工メガヌクレアーゼを含む、項目２９に記載の組成物。
（項目３４）
前記ＴＡＬＥ結合ドメインは、約９．５個のＴＡＬＥ反復単位〜約１１．５個のＴＡＬＥ反復単位を含む、項目３３に記載の組成物。
（項目３５）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＡａｂＭＩ、Ｉ−ＡａｅＭＩ、Ｉ−ＡｎｉＩ、Ｉ−ＡｐａＭＩ、Ｉ−ＣａｐＩＩＩ、Ｉ−ＣａｐＩＶ、Ｉ−ＣｋａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＶ、Ｉ−ＣｐａＭＶ、Ｉ−ＣｐａＶ、Ｉ−ＣｒａＭＩ、Ｉ−ＥｊｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｉＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＬｔｒＩＩ、Ｉ−ＬｔｒＩ、Ｉ−ＬｔｒＷＩ、Ｉ−ＭｐｅＭＩ、Ｉ−ＭｖｅＭＩ、Ｉ−ＮｃｒＩＩ、Ｉ−Ｎｃｒｌ、Ｉ−ＮｃｒＭＩ、Ｉ−ＯｈｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＶ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩＩ、Ｉ−ＰｎｏＭＩ、Ｉ−ＳｃｕＭＩ、Ｉ−ＳｍａＭＩ、Ｉ−ＳｓｃＭＩ、およびＩ−Ｖｄｉ１４１Ｉからなる群から選択されるＬＨＥから遺伝子操作される、項目３３または項目３４に記載の組成物。
（項目３６）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、およびＳｍａＭＩからなる群から選択されるＬＨＥから遺伝子操作される、項目３３〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３７）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥから遺伝子操作される、項目３３〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３８）
前記ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよびエンドヌクレアーゼドメインまたはハーフドメインを含む、項目２９に記載の組成物。
（項目３９）
前記ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインは、約９．５個のＴＡＬＥ反復単位〜約１１．５個のＴＡＬＥ反復単位を含む、項目３８に記載の組成物。
（項目４０）
前記エンドヌクレアーゼドメインは、ＩＩ型制限エンドヌクレアーゼから単離される、項目３８または項目３９に記載の組成物。
（項目４１）
前記エンドヌクレアーゼドメインは、ＦｏｋＩから単離される、項目３８〜４０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４２）
前記ＺＦＮは、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインおよびエンドヌクレアーゼドメインまたはハーフドメインを含む、項目３９に記載の組成物。
（項目４３）
前記ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインは、２、３、４、５、６、７、または８個のジンクフィンガーモチーフを含む、項目４２に記載の組成物。
（項目４４）
前記ＺＦＮは、ＴＡＬＥ結合ドメインを含む、項目４２または項目４３に記載の組成物。
（項目４５）
前記ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインは、約９．５個のＴＡＬＥ反復単位〜約１１．５個のＴＡＬＥ反復単位を含む、項目４４に記載の組成物。
（項目４６）
前記エンドヌクレアーゼドメインは、ＩＩ型制限エンドヌクレアーゼから単離される、項目４２〜４５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４７）
前記エンドヌクレアーゼドメインは、ＦｏｋＩから単離される、項目４２〜４６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４８）
前記人工ヌクレアーゼは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼを含む、項目３９に記載の組成物。
（項目４９）
前記Ｃａｓヌクレアーゼは、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１である、項目４８に記載の組成物。
（項目５０）
前記Ｃａｓヌクレアーゼは、１つ以上のＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインをさらに含む、項目４８または項目４９に記載の組成物。
（項目５１）
前記組成物は、ｔｒａｃｒＲＮＡと、前記細胞のゲノムのプロトスペーサー配列を標的とする１つ以上のｃｒＲＮＡと、をさらに含む、項目４８〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５２）
前記組成物は、前記細胞のゲノムのプロトスペーサー配列を標的とする１つ以上のｓｇＲＮＡをさらに含む、項目４８〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５３）
前記人工ヌクレアーゼは、末端プロセシング酵素活性を含む、項目１〜５２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５４）
前記末端プロセシング酵素活性は、５−３’エキソヌクレアーゼ、５−３’アルカリエキソヌクレアーゼ、３−５’エキソヌクレアーゼ、５’フラップエンドヌクレアーゼ、ヘリカーゼまたは鋳型非依存性ＤＮＡポリメラーゼの活性である、項目５３に記載の組成物。
（項目５５）
前記末端プロセシング酵素活性は、Ｔｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片の３−５’エキソヌクレアーゼ活性である、項目５４に記載の組成物。
（項目５６）
前記組成物は、末端プロセシング酵素、または前記末端プロセシング酵素をコードするｍＲＮＡをさらに含む、項目１〜５２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５７）
前記末端プロセシング酵素は、５−３’エキソヌクレアーゼ、５−３’アルカリエキソヌクレアーゼ、３−５’エキソヌクレアーゼ、５’フラップエンドヌクレアーゼ、ヘリカーゼまたは鋳型非依存性ＤＮＡポリメラーゼの活性を示す、項目５６に記載の組成物。
（項目５８）
前記末端プロセシング酵素は、Ｔｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片を含む、項目５６または項目５７に記載の組成物。
（項目５９）
βグロビン、δグロビン、γグロビン、ＢＣＬ１１Ａ、ＫＬＦ１、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ（ＡＡＶＳ１）、ＨＰＲＴ、アルブミン、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ＬＲＲＫ２、Ｈｔｔ、ＳＯＤ１、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＴＡＲＤＢＰ、ＦＵＳ、ＲＨＯ、ＣＦＴＲ、ＳＦＴＰＢ、ＴＲＡＣ、ＴＲＢＣ、ＰＤ１、ＣＴＬＡ−４、ＨＬＡ  Ａ、ＨＬＡ  Ｂ、ＨＬＡ  Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＬＭＰ７、ＴＡＰ  １、ＴＡＰ２、ＴＡＰＢＰ、ＣＩＩＴＡ、ＤＭＤ、ＧＲ、ＩＬ２ＲＧ、Ｒａｇ−１、ＲＦＸ５、ＦＡＤ２、ＦＡＤ３、ＺＰ１５、ＫＡＳＩＩ、ＭＤＨ、ＥＰＳＰＳ、またはそれらの断片をコードするドナー修復鋳型を含む、項目１〜５８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６０）
二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）分子；ホルモン；サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＴＮＦ−α）、ケモカイン（例えば、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−３、およびＲＡＮＴＥＳ）、細胞毒（例えば、パーフォリン、グランザイムＡ、およびグランザイムＢ）、サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−１５受容体、およびＩＬ−２１受容体）、または人工抗原受容体をコードするドナー修復鋳型を含む、項目１〜５８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６１）
人工Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｄａｒｉｃ受容体もしくはその成分、またはキメラサイトカイン受容体をコードするドナー修復鋳型を含む、項目１〜５８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６２）
細胞集団におけるゲノム編集を増大させる方法であって、
（ａ）細胞集団に人工ヌクレアーゼを導入することと、
（ｂ）前記細胞集団をゲノム編集エンハンサーと接触させることと、を含み、
前記ゲノム編集エンハンサーの存在下における前記人工ヌクレアーゼの発現が、前記細胞集団におけるゲノム編集の頻度を増加させる、方法。
（項目６３）
細胞集団における相同組み換え修復（ＨＤＲ）を増大させる方法であって、
（ａ）前記細胞集団をゲノム編集エンハンサーと接触させることと、
（ｂ）標的部位に二本鎖切断（ＤＳＢ）を生成するように人工ヌクレアーゼを導入することと、
（ｂ）前記細胞集団にドナー修復鋳型を導入することと、を含み、
前記ゲノム編集エンハンサーおよび前記ドナー修復鋳型の存在下における前記人工ヌクレアーゼの発現が、相同組み換え修復（ＨＤＲ）による前記標的部位における前記ドナー修復鋳型の組み込みの頻度を増加させる、方法。
（項目６４）
細胞集団における非相同末端結合（ＮＨＥＪ）を増加させる方法であって、
（ａ）前記細胞集団をゲノム編集エンハンサーと接触させることと、
（ｂ）標的部位に二本鎖切断（ＤＳＢ）を生成するように人工ヌクレアーゼを導入することと、
（ａ）細胞集団に人工ヌクレアーゼを導入することと、を含み、
前記ゲノム編集エンハンサーの存在下における前記人工ヌクレアーゼの発現が、前記標的部位におけるＮＨＥＪの頻度を増加させる、方法。
（項目６５）
前記細胞は造血細胞である、項目６２〜６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
前記細胞は免疫エフェクター細胞である、項目６２〜６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目６７）
前記細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、またはそれらの組み合わせである、項目６２〜６６のいずれか一項に記載の方法。
（項目６８）
前記細胞はＴ細胞である、項目６２〜６７のいずれか一項に記載の方法。
（項目６９）
前記細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である、項目６２〜６８のいずれか一項に記載の方法。
（項目７０）
前記細胞の源は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍である、項目６２〜６９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７１）
前記細胞は、造血幹細胞または造血前駆細胞である、項目６２〜６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７２）
前記細胞はＣＤ３４＋細胞である、項目６２〜６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７３）
前記細胞はＣＤ１３３＋細胞である、項目６２〜６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７４）
前記細胞はＣＤ３４＋ＣＤ３８ＬｏＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞である、項目６２〜６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７５）
前記ゲノム編集エンハンサーはＤＮＡインターカレーターである、項目６２〜７４のいずれか一項に記載の方法。
（項目７６）
前記ゲノム編集エンハンサーは、単官能性ＤＮＡインターカレーター、二官能性ＤＮＡインターカレーター、または多官能性ＤＮＡインターカレーターからなる群から選択される、項目６２〜７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７７）
前記ゲノム編集エンハンサーは、アクリジン、アントラサイクリン、アルカロイド、クマリン、およびフェナントリジンからなる群から選択される、項目６２〜７６のいずれか一項に記載の方法。
（項目７８）
前記ゲノム編集エンハンサーは、１，８−ナフタルイミド、４’６−ジアミジノ−α−フェニルインドール、アクリジン、アクリジンオレンジ、アクリフラビン、アクロナイシン、アクチノダフニジン（ａｃｔｉｎｏｄａｐｈｎｉｄｉｎｅ）、アミナクリン、アムサクリン、アントラサイクリン、アントラマイシン、アントラピラゾール、ベンゾフェナントリジンアルカロイド、ベルバミン、ベルベリン、ベルベルビン、ブレオマイシン、ＢＯＢＯ−１、ＢＯＢＯ−３、ボルジン、ＢＯ−ＰＲＯ−１、ＢＯ−ＰＲＯ−３、ブブロカプニン（ｂｕｂｌｏｃａｐｎｉｎｅ）、カンプトテシン、カシチン、シャルトルーシン、クロロキン、クロモマイシン、シンコニジン、シンコニン、コプチシン、コラリン、クマリン、クリプトレピン、ダクチノマイシン、ＤＡＰＩ、ダウノルビシン、ジセントリン、ジクタミン、ジスタマイシン、ドキソルビシン、エリプチシン、エメチン、エタクリジン、エチジウム、エボリトリン、ファガリン、ファガロニン、蛍光クマリン、ＧｅｌＳｔａｒ、ゲンタマイシン、グラウシン、ハルマリン、ハルミン、ハルミン、ヘダマイシン、ヘキシジウム、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２、ホミジウム、ヒカントン、イミダゾアクリジノン、インダゾール類似体、ヨウ化物、イソコリジン、イソキノリンアルカロイド、ジャトロリジン、ＪＯＪＯ−１、ＪＯ−ＰＲＯ−１、キネチンリボシド、コクサイニン（ｋｏｋｕｓａｉｎｉｎｅ）、ロベリン、ＬＯＬＯ−１、ＬＯ−ＰＲＯ−１、ルカントン、マスキュリン、マタジン、メパクリン、メタロ−インターカレーター、ミトラマイシン、ミトキサントロン、ネオクリプトレピン、ネトロプシン、ニチジン、ニトラクリン、ノガラマイシン、ノルハルマン、ＯｌｉＧｒｅｅｎ、パルマチン、フェナントリジン、ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ、ピラルビシン、ポリピリジル、ＰＯＰＯ−１、ＰＯＰＯ−３、ＰＯ−ＰＲＯ−１、ＰＯ−ＰＲＯ−３、プロフラビン、プロピジウム、ソラレン、キナクリン、キニジン、キニーネ、キノキサリン、ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ、ロジウム系インターカレーター、ルテニウム系インターカレーター、サンギナリン、セルペンチン、スキムミアニン、ストレプトマイシン、ＳＹＢＲ  ＤＸ、ＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＩＩ、ＳＹＴＯ−１１、ＳＹＴＯ−１２、ＳＹＴＯ−１３、ＳＹＴＯ−１４、ＳＹＴＯ−１５、ＳＹＴＯ−１６、ＳＹＴＯ−１７、ＳＹＴＯ−２０、ＳＹＴＯ−２１、ＳＹＴＯ−２２、ＳＹＴＯ−２３、ＳＹＴＯ−２４、ＳＹＴＯ−２５、ＳＹＴＯ−４０、ＳＹＴＯ−４１、ＳＹＴＯ−４２、ＳＹＴＯ−４３、ＳＹＴＯ−４４、ＳＹＴＯ−４５、ＳＹＴＯ−５９、ＳＹＴＯ−６０、ＳＹＴＯ−６１、ＳＹＴＯ−６２、ＳＹＴＯ−６３、ＳＹＴＯ−６４、ＳＹＴＯ−８０、ＳＹＴＯ−８１、ＳＹＴＯ−８２、ＳＹＴＯ−８３、ＳＹＴＯ−８４、ＳＹＴＯ−８５、ＳＹＴＯＸ  ｂｌｕｅ、ＳＹＴＯＸ  ｇｒｅｅｎ、ＳＹＴＯＸ  ｏｒａｎｇｅ、タクリン、サリドマイド、チアゾールオレンジ、チロロン、ＴＯ−ＰＲＯ−１、ＴＯ−ＰＲＯ−３、ＴＯ−ＰＲＯ−５、ＴＯＴＯ−１、ＴＯＴＯ−３、ウサンバレンシン、ＹＯ−ＰＲＯ−１、ＹＯ−ＰＲＯ−３、ＹＯＹＯ−１、ＹＯＹＯ−３、ならびにそれらの類似体および誘導体からなる群から選択される、項目６２〜７７のいずれか一項に記載の方法。
（項目７９）
前記ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、ハルミン、ヒカントン、ダウノルビシン、硫酸サンギナリン、キネチンリボシド、乳酸エタクリジン、およびシクロヘキシミドからなる群から選択される、項目６２〜７８のいずれか一項に記載の方法。
（項目８０）
前記ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、およびハルミンからなる群から選択される、項目６２〜７９のいずれか一項に記載の方法。
（項目８１）
前記ゲノム編集エンハンサーは、アクリジンまたはジアクリジンである、項目６２〜８０のいずれか一項に記載の方法。
（項目８２）
前記ゲノム編集エンハンサーは、アミナクリン（９−アミノアクリジン）である、項目６２〜８１のいずれか一項に記載の方法。
（項目８３）
前記人工ヌクレアーゼは、メガヌクレアーゼ、メガＴＡＬ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼからなる群から選択される、項目６２〜８２のいずれか一項に記載の方法。
（項目８４）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＡａｂＭＩ、Ｉ−ＡａｅＭＩ、Ｉ−ＡｎｉＩ、Ｉ−ＡｐａＭＩ、Ｉ−ＣａｐＩＩＩ、Ｉ−ＣａｐＩＶ、Ｉ−ＣｋａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＶ、Ｉ−ＣｐａＭＶ、Ｉ−ＣｐａＶ、Ｉ−ＣｒａＭＩ、Ｉ−ＥｊｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｉＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＬｔｒＩＩ、Ｉ−ＬｔｒＩ、Ｉ−ＬｔｒＷＩ、Ｉ−ＭｐｅＭＩ、Ｉ−ＭｖｅＭＩ、Ｉ−ＮｃｒＩＩ、Ｉ−Ｎｃｒｌ、Ｉ−ＮｃｒＭＩ、Ｉ−ＯｈｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＶ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩＩ、Ｉ−ＰｎｏＭＩ、Ｉ−ＳｃｕＭＩ、Ｉ−ＳｍａＭＩ、Ｉ−ＳｓｃＭＩ、およびＩ−Ｖｄｉ１４１Ｉからなる群から選択されるＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼ（ＬＨＥ）から遺伝子操作される、項目８３に記載の方法。
（項目８５）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、およびＳｍａＭＩからなる群から選択されるＬＨＥから遺伝子操作される、項目８３または項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥから遺伝子操作される、項目８４〜８５のいずれか一項に記載の方法。
（項目８７）
前記メガＴＡＬは、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよび人工メガヌクレアーゼを含む、項目８３に記載の方法。
（項目８８）
前記ＴＡＬＥ結合ドメインは、約９．５個のＴＡＬＥ反復単位〜約１１．５個のＴＡＬＥ反復単位を含む、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＡａｂＭＩ、Ｉ−ＡａｅＭＩ、Ｉ−ＡｎｉＩ、Ｉ−ＡｐａＭＩ、Ｉ−ＣａｐＩＩＩ、Ｉ−ＣａｐＩＶ、Ｉ−ＣｋａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＶ、Ｉ−ＣｐａＭＶ、Ｉ−ＣｐａＶ、Ｉ−ＣｒａＭＩ、Ｉ−ＥｊｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｉＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＬｔｒＩＩ、Ｉ−ＬｔｒＩ、Ｉ−ＬｔｒＷＩ、Ｉ−ＭｐｅＭＩ、Ｉ−ＭｖｅＭＩ、Ｉ−ＮｃｒＩＩ、Ｉ−Ｎｃｒｌ、Ｉ−ＮｃｒＭＩ、Ｉ−ＯｈｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＶ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩＩ、Ｉ−ＰｎｏＭＩ、Ｉ−ＳｃｕＭＩ、Ｉ−ＳｍａＭＩ、Ｉ−ＳｓｃＭＩ、およびＩ−Ｖｄｉ１４１Ｉからなる群から選択されるＬＨＥから遺伝子操作される、項目８７または項目８８に記載の方法。
（項目９０）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、およびＳｍａＭＩからなる群から選択されるＬＨＥから遺伝子操作される、項目８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
（項目９１）
前記メガヌクレアーゼは、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥから遺伝子操作される、項目８７〜９０のいずれか一項に記載の方法。
（項目９２）
前記ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよびエンドヌクレアーゼドメインまたはハーフドメインを含む、項目８３に記載の方法。
（項目９３）
前記ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインは、約９．５個のＴＡＬＥ反復単位〜約１１．５個のＴＡＬＥ反復単位を含む、項目９２に記載の方法。
（項目９４）
前記エンドヌクレアーゼドメインは、ＩＩ型制限エンドヌクレアーゼから単離される、項目９２〜９３に記載の方法。
（項目９５）
前記エンドヌクレアーゼドメインは、ＦｏｋＩから単離される、項目９２〜９４のいずれか一項に記載の方法。
（項目９６）
前記ＺＦＮは、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインおよびエンドヌクレアーゼドメインまたはハーフドメインを含む、項目８３に記載の方法。
（項目９７）
前記ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインは、２、３、４、５、６、７、または８個のジンクフィンガーモチーフを含む、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
前記ＺＦＮは、ＴＡＬＥ結合ドメインを含む、項目９６または項目９７に記載の方法。
（項目９９）
前記ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインは、約９．５個のＴＡＬＥ反復単位〜約１１．５個のＴＡＬＥ反復単位を含む、項目９８に記載の方法。
（項目１００）
前記エンドヌクレアーゼドメインは、ＩＩ型制限エンドヌクレアーゼから単離される、項目９６〜９９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０１）
前記エンドヌクレアーゼドメインは、ＦｏｋＩから単離される、項目９６〜１００のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０２）
前記人工ヌクレアーゼは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼを含む、項目８３に記載の方法。
（項目１０３）
前記Ｃａｓヌクレアーゼは、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１である、項目１０２に記載の方法。
（項目１０４）
前記Ｃａｓヌクレアーゼは、１つ以上のＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインをさらに含む、項目１０２または項目１０３に記載の方法。
（項目１０５）
前記組成物は、ｔｒａｃｒＲＮＡと、前記細胞のゲノムのプロトスペーサー配列を標的とする１つ以上のｃｒＲＮＡと、をさらに含む、項目１０２〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０６）
前記組成物は、前記細胞のゲノムのプロトスペーサー配列を標的とする１つ以上のｓｇＲＮＡをさらに含む、項目１０２〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０７）
前記人工ヌクレアーゼは、末端プロセシング酵素活性を含む、項目６２〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０８）
前記末端プロセシング酵素活性は、５−３’エキソヌクレアーゼ、５−３’アルカリエキソヌクレアーゼ、３−５’エキソヌクレアーゼ、５’フラップエンドヌクレアーゼ、ヘリカーゼまたは鋳型非依存性ＤＮＡポリメラーゼの活性である、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
前記末端プロセシング酵素活性は、Ｔｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片の３−５’エキソヌクレアーゼ活性である、項目１０８に記載の方法。
（項目１１０）
前記組成物は、末端プロセシング酵素、または前記末端プロセシング酵素をコードするｍＲＮＡをさらに含む、項目６２〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１１）
前記末端プロセシング酵素は、５−３’エキソヌクレアーゼ、５−３’アルカリエキソヌクレアーゼ、３−５’エキソヌクレアーゼ、５’フラップエンドヌクレアーゼ、ヘリカーゼまたは鋳型非依存性ＤＮＡポリメラーゼの活性を示す、項目１１０に記載の方法。
（項目１１２）
前記末端プロセシング酵素は、Ｔｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片を含む、項目１１０または項目１１１に記載の方法。
（項目１１３）
βグロビン、δグロビン、γグロビン、ＢＣＬ１１Ａ、ＫＬＦ１、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ（ＡＡＶＳ１）、ＨＰＲＴ、アルブミン、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ＬＲＲＫ２、Ｈｔｔ、ＳＯＤ１、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＴＡＲＤＢＰ、ＦＵＳ、ＲＨＯ、ＣＦＴＲ、ＳＦＴＰＢ、ＴＲＡＣ、ＴＲＢＣ、ＰＤ１、ＣＴＬＡ−４、ＨＬＡ  Ａ、ＨＬＡ  Ｂ、ＨＬＡ  Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＬＭＰ７、ＴＡＰ  １、ＴＡＰ２、ＴＡＰＢＰ、ＣＩＩＴＡ、ＤＭＤ、ＧＲ、ＩＬ２ＲＧ、Ｒａｇ−１、ＲＦＸ５、ＦＡＤ２、ＦＡＤ３、ＺＰ１５、ＫＡＳＩＩ、ＭＤＨ、ＥＰＳＰＳ、またはそれらの断片をコードするドナー修復鋳型を含む、項目６２〜１１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１４）
二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）分子；ホルモン；サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＴＮＦ−α）、ケモカイン（例えば、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−３、およびＲＡＮＴＥＳ）、細胞毒（例えば、パーフォリン、グランザイムＡ、およびグランザイムＢ）、サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−１５受容体、およびＩＬ−２１受容体）、または人工抗原受容体をコードするドナー修復鋳型を含む、項目６２〜１１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１５）
人工Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｄａｒｉｃ受容体もしくはその成分、またはキメラサイトカイン受容体をコードするドナー修復鋳型を含む、項目６２〜１１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１６）
項目６２〜１１５のいずれか一項に記載の方法によって生成される、細胞。
（項目１１７）
項目１１６による細胞を含む、組成物。
（項目１１８）
薬学的に許容される担体および項目１１６による細胞を含む、薬学的組成物。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６４】
特定の実施形態において、ゲノム編集エンハンサーは、チロロン、アミナクリン、臭化ホミジウム（臭化エチジウム）、ハルミン、ヒカントン、ダウノルビシン、硫酸サンギナリン、キネチンリボシド、乳酸エタクリジン、およびシクロヘキシミドからなる群から選択される。