【手続補正書】
【提出日】令和2年5月15日(2020.5.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
混合特性の単離細胞であって、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）表現型と筋細胞表現型を示す、細胞。
【請求項２】
前記ＭＳＣ表現型は、
（ａ）ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ９０、ＣＤ１４６及びＣＤ４４から成る群から選択される複数の発現マーカーの発現、ならびにＭＨＣＩＩの発現の欠如；
（ｂ）免疫抑制能力；
（ｃ）抗炎症能力；および
（ｄ）炎症、傷害又は疾患の部位に帰着する能力；
のうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
前記筋細胞表現型は、
（ａ）ＭｙｏＤ、Ｍｙｆ６、Ｍｙｆ５、ＭＲＦ４、ＩＴＧＡ７、オステオプロテゲリン、イリシン、ジストロフィン、ミオシン重鎖、ミオゲニン、ＰＡＸ７、ＴＡＬＮＥＣ２、Ｃ−ＭＥＴ、Ｇ−ＣＳＦ、オステオプロテゲリン、ＩＬ−１０及びＭＥＦ２Ａから成る群から選択される複数の発現マーカーの発現、ならびにオステオカラシン、ＰＰＡＲＧ３及びＣＯＬ２Ａ１の発現の欠如；
（ｂ）筋シンシチウムと融合する能力；
（ｃ）衛星細胞表現型；および
（ｄ）筋芽細胞表現型；
のうちの少なくとも１つを含む、請求項１または２に記載の細胞。
【請求項４】
前記細胞は、
（ａ）ＭＳＣを用意し、ＲＯＣＫ阻害剤、酸性培地及び５−ＡＺＡの内の少なくとも１種と前記ＭＳＣを接触させ、ＰＤＧＦＢＢ、ＨＧＦ、ＰＤＧＦβ、ＰＤＧＦＡＡ、ＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦβ及びＩＧＦ１の内の少なくとも１種を前記ＭＳＣに導入すること（任意選択で、前記細胞は、ＰＣＡＴ１と、ＮＥＡＴ１又はＧＡＳ５と、ＰＴＥＮＰ１の発現阻害剤と、を前記ＭＳＣに更に導入することによって生成されてもよい）；
（ｂ）筋細胞、筋細胞の馴化培地、又は筋細胞の細胞外小胞とＭＳＣを共培養すること；
（ｃ）ＮＡＮＯＧ、ＳＯＸ２、ＫＬＦ４、ＯＣＴ４又はこれらの組み合わせの内のいずれか１種をＭＳＣに導入すること（任意選択で、前記細胞は、５−ＡＺＡを含む培地中で前記細胞を更にインキュベートすることによって生成されてもよい）；
（ｄ）酸性培地、低酸素、低接着プレート、ＦＧＦ又はＥＧＦを補充した低血清培地、５−ＡＺＡを補充した培地、ＲＯＣＫ阻害剤、ＳＴＡＴ３、ＮＦ−ＫＢ活性化剤、ＣＨＩＲ９９０２１、メトホルミン、トラニルシプロミン、Ｇｓｋ３阻害剤、３−デアザネプラノシンＡ、ｍＴｏｒ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、チアゾビビン、Ａ８３−０１、ＬｉＣｌ、ＳＢ４３１５４２、５−ＡＺＡ、ラパマイシン、ＥＲＫ活性化剤及びバルプロ酸から成る群から選択される小分子を含む培地、及びこれらの組み合わせの内のいずれか１種でＭＳＣを培養すること；
（ｅ）ＭＹＦ５、ＰＡＸ３、ＰＡＸ７、ジストロフィン、マイクロジストロフィン、ユートロフィン、ＭｙｏＤとＰＡＸ３、ＭｙｏＤとＰＡＸ７、及びＭｙｏＤとＭＹＦ５から成る群から選択される少なくとも１種の転写因子をＭＳＣに導入すること；
（ｆ）ＭＳＣを用意し、酸性培地、ＲＯＣＫ阻害剤及び５−ＡＺＡの内の少なくとも１種と前記ＭＳＣを接触させ、ＢＩＬ、ＰＡＲ５、ＢＩＣ、ＤＩＳＣ２、ＧＡＳ５ＤＬＧ２ＡＳ、７ＳＫ、Ｙ１、ＬＩＮＣＲＮＡ、ＰＣＡＴ−１、ＳＦＭＢＴ２、Ｙ４、ＳＣＡ８、ＭＡＬＡＴ１、ＭＥＧ３、ＮＥＡＴ１、ＥＧＯ、ＧＡＳ５、ＫＲＡＳＰ１、ＬＯＣ２８５１９、ＢＣ２００及びＨ１９から成る群から選択される少なくとも１種の長い非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）を前記ＭＳＣに導入すること（任意選択で、前記少なくとも１種のｌｎｃＲＮＡは、ＰＡＲ５、ＤＩＳＣ２及びＰＣＡＴ１から選択されてもよく、前記細胞は、ＭＡＬＡＴ１、ＭＥＧ３、ＮＥＡＴ１、ＥＧＯ、ＧＡＳ５、ＫＲＡＳＰ１、ＬＯＣ２８５１９、ＢＣ２００及びＨ１９から成る群から選択される少なくとも１種のｌｎｃＲＮＡを前記ＭＳＣに更に導入することによって生成されてもよいか、または前記細胞は、前記ＭＳＣでのＡＮＲＩＬ、ＰＴＥＮＰ１及びａＨＩＦの内の少なくとも１種の発現を更に下方制御することによって生成されてもよい）；および
（ｇ）ＭＳＣを用意し、酸性培地、ＲＯＣＫ阻害剤及び５−ＡＺＡの内の少なくとも１種と前記ＭＳＣを接触させ、ｍｉＲ−１０ｂ、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２５ａ、ｍｉＲ−１４０−５ｐ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、ｍｉＲ−１５０、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１８１ｂ、ｍｉＲ−２１５、ｍｉＲ−２９６、ｍｉＲ−３３０、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−５２０、ｍｉＲ−５２４、ｍｉＲ−５４３、ｍｉＲ−５５０、ｍｉＲ−５６１、ｍｉＲ−５６４、ｍｉＲ−５８２、ｍｉＲ−５８３、ｍｉＲ−５８７、ｍｉＲ−６１３、ｍｉＲ−６１４、ｍｉＲ−６２９、ｍｉＲ−６３４、ｍｉＲ−６４５、ｍｉＲ−６４６、ｍｉＲ−６４９、ｍｉＲ−６６１、ｍｉＲ−６６２、ｍｉＲ−６６３、ｍｉＲ−６６５、ｍｉＲ−６６８、ｍｉＲ−６７１、ｍｉＲ−８８７、ｍｉＲ−１１８３、ｍｉＲ−１２２４、ｍｉＲ−１２２５、ｍｉＲ−１２２８、ｍｉＲ−１２３４、ｍｉＲ−１２４６、ｍｉＲ−１２４７、ｍｉＲ−１２５７、ｍｉＲ−１２５８、ｍｉＲ−１２６８、ｍｉＲ−１２６９、ｍｉＲ−１２８９、ｍｉＲ−１２８７、ｍｉＲ−１９０９、ｍｉＲ−１９１１、ｍｉＲ−７５９、ｍｉＲ−３１５０、ｍｉＲ−３１７４、ｍｉＲ−３１８０、ｍｉＲ−３１９１、ｍｉＲ−３１９７、ｍｉＲ−４２９２、ｍｉＲ−２１１５、ｍｉＲ−４３１２、ｍｉＲ−９２、９３及びｍｉＲ−９９から成る群から選択される少なくとも１種のｍｉＲＮＡを前記ＭＳＣに導入すること（任意選択で、前記少なくとも１種のｍｉＲは、ｍｉＲ−１０ｂ、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１５４、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１８１、ｍｉＲ−２１５、ｍｉＲ−６１４及びｍｉＲ−６６８から成る群から選択されてもよい）；
のうちのいずれか１つによって生成される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５】
前記ＭＳＣは臍帯又は胎盤に由来する、請求項４に記載の細胞。
【請求項６】
混合特性の前記細胞は、
（ａ）ＳＯＸ２、ＫＬＦ４、ＯＣＴ４及びＮＡＮＯＧから成る群から選択される複数の幹細胞性マーカーを発現する；
（ｂ）ＶＥＧＦ、ＧＤＮＦ及びＩＧＦ１から選択される少なくとも１種の栄養因子を分泌する；
（ｃ）前記細胞の表面の筋細胞標的化部分又は前記細胞の細胞外小胞の表面を含む；および
（ｄ）治療剤を含む、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項７】
前記筋細胞標的化部分は、カベオリン３に対するリガンド、Ｍ−カドヘリン、ニコチン性アセチルコリン受容体に対するリガンド、ミオスタチンのドミナントネガティブ突然変異体、及び１型アンジオテンシンＩＩの内のいずれか１種を含み、任意選択で、前記筋細胞標的化部分はＭ−カドヘリンであってもよい、請求項６に記載の細胞。
【請求項８】
前記治療剤は、薬物、リードスルー薬物、ＲＮＡ、ＤＮＡ分子、ベクター、エクソンスキリングオリゴヌクレオチド、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンタゴミル、長い非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）及びウイルスから成る群から選択される、請求項６または７に記載の細胞。
【請求項９】
（ａ）前記ＲＮＡは修飾ＭｙｏＤ  ｍＲＮＡである；
（ｂ）前記薬物はジストロフィン又はマイクロジストロフィンであり、任意選択で、前記細胞は、抗ｍｉＲ−２１４をさらに含んでもよい；
（ｃ）前記アンタゴミルは、抗ｍｉＲ−４２４、抗ｍｉＲ−１９５、抗ｍｉＲ−１６、抗ｍｉＲ−４９７、抗ｍｉＲ−１３５、抗ｍｉＲ−６７９３、抗ｍｉＲ−２１、抗ｌｅｔ７、抗ｍｉＲ−１３３ｂ、抗ｍｉＲ−２１４及びこれらの組み合わせから成る群から選択される；および
（ｄ）前記アンタゴミルは抗ｌｅｔ−７である；
のうちの少なくとも１つを特徴とする、請求項８に記載の細胞。
【請求項１０】
請求項１〜９の細胞のいずれかの単離細胞外小胞。
【請求項１１】
（ａ）請求項１〜９のいずれか一項に記載の混合特性の細胞；
（ｂ）請求項１０に記載の細胞外小胞；及び
（ｃ）これらの組み合わせ；
の内のいずれか１種を含む、医薬組成物であって、任意選択で、薬学的に許容し得る担体又はアジュバントを更に含んでもよい、医薬組成物。
【請求項１２】
筋肉関連疾患又は筋損傷の治療、予防又は改善を必要とする対象において筋肉関連疾患又は筋損傷を治療、予防又は改善する方法であって、請求項１１に記載の医薬組成物を前記対象に投与して前記筋肉関連疾患又は筋損傷を治療、予防又は改善することを含み、任意選択で、前記組成物は、前記対象に対して同種異系又は自家性であるＭＳＣに由来する細胞を含んでもよい、方法。
【請求項１３】
（ａ）前記筋肉関連疾患又は筋損傷は、運動ニューロン疾患、末梢ニューロン疾患、筋ジストロフィー、脊髄損傷、筋肉疲労、心筋傷害、炎症性筋疾患、重症筋無力症、筋肉減少症、悪液質、線維症、平滑筋傷害及び骨格筋傷害から成る群から選択され、任意選択で、前記筋ジストロフィーはデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）であってもよい；または
（ｂ）前記筋肉関連疾患又は筋損傷は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、線維症、悪液質及び筋ジストロフィーから成る群から選択され、任意選択で、前記線維症は心線維症であってもよい；
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記筋肉関連疾患はＡＬＳであり、この方法は、星状細胞表現型又は神経幹細胞（ＮＳＣ）表現型に分化した少なくとも１種のＭＳＣを投与する段階を更に含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記筋ジストロフィーがＤＭＤであり、前記方法が
（ａ）未分化ＭＳＣ、
（ｂ）前記未分化ＭＳＣの細胞外小胞、及び
（ｃ）これらの組み合わせ
の内のいずれか１種を投与することを更に含む、請求項１３に記載の方法。