【誤訳訂正書】
【提出日】令和2年1月27日(2020.1.27)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルボジイミド結合法又はアジド結合法、清浄及び噴霧凍結乾燥を用いてのＮ−オキシド１，４−エチレンピペラジン及び（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウムハロゲン化物を含む共重合体とのヒアルロニダーゼ酵素の活性結合体を調製する方法であって、結合は水溶性共重合体を使用して行われ、該水溶性共重合体は、一般式
【化１】
2019501217.tif 000001
のＮ−オキシド１，４−エチレンピペラジンと、（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウム又はそのヒドラジドと、１，４−エチレンピペラジンとの共重合体であり、
式中、ｎは構成単位の総数の４０％〜９０％の範囲であり、
ｍは構成単位の総数の３％〜４０％の範囲であり、
ｎ＋ｍ＋ｌ＝１００％であり、
前記共重合体は、酸化と、アルキル化と、アジド結合法の場合にはヒドラジン分解によってポリ−１，４−エチレンピペラジンから得られ、前記酸化は尿素の存在下で酸素を生成できる酸化剤によって行われ、前記アルキル化は低級ハロアルカン酸又はそのアルキルエステルによって行われることを特徴とする、方法。
【請求項２】
前記酸化ステップは、水を含む反応供給材料の全質量の１〜１０重量％、好ましくは３〜６重量％の尿素を添加して行われることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記結合は、動物の精嚢から採取されたヒアルロニダーゼを使用して行われることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
段階的な清浄が、１〜３０ｋＤａの範囲の粒子カットオフの下限を有する半透明のカセット上で精製水を使用して洗浄することによって行われることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
アジド結合法、清浄、濃縮及び希釈又は噴霧凍結乾燥を用いてのＮ−オキシド１，４−エチレンピペラジン及び（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウムハロゲン化物を含む共重合体とのヒアルロニダーゼ酵素の活性結合体を調製する方法であって、結合は水溶性共重合体を使用して行われ、該水溶性共重合体は、一般式
【化２】
2019501217.tif 000002
のＮ−オキシド１，４−エチレンピペラジンと、（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウムのヒドラジドと、１，４−エチレンピペラジンとの共重合体であり、
式中、ｎは構成単位の総数の４０％〜９０％の範囲であり、
ｍは構成単位の総数の３％〜４０％の範囲であり、
ｎ＋ｍ＋ｌ＝１００％であり、
前記共重合体は、酸化と、アルキル化と、アジド結合法の場合にはヒドラジン分解によってポリ−１，４−エチレンピペラジンから得られ、前記酸化は尿素の存在下で酸素を生成できる酸化剤によって行われ、前記アルキル化はハロアルカン酸のアルキルエステルによって行われ、前記アルキル化のステップとヒドラジン分解が組み合わせられることを特徴とする、方法。
【請求項６】
前記酸化ステップは、水を含む反応供給材料の全質量の１〜１０重量％、好ましくは３〜６重量％の尿素を添加して行われることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記清浄は、精製水による１〜３０ｋＤａの範囲の粒子カットオフの下限を有する半透明のカセット上での、前記酸化ステップ、前記アルキル化及び前記ヒドラジン分解のステップ、並びに前記結合ステップの終了時での３回の段階的な洗浄であることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記結合は、３〜２０％のヒドラジド基をその鎖の中に含むＮ−オキシド１，４−エチレンピペラジンの水溶性共重合体を使用して行われることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
ヒアルロニダーゼとの結合は、０〜２５℃の範囲の温度でアジド法を使用して行われることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
カルボジイミド結合法、清浄、希釈及び濃縮又は噴霧凍結乾燥を用いてのＮ−オキシド１，４−エチレンピペラジン及び（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウムハロゲン化物を含む共重合体とのヒアルロニダーゼ酵素の活性結合体を調製する方法であって、結合は水溶性共重合体を使用して行われ、該水溶性共重合体は、一般式
【化３】
2019501217.tif 000003
のＮ−オキシド１，４−エチレンピペラジンと、（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウムと、１，４−エチレンピペラジンとの共重合体であり、
式中、ｎは構成単位の総数の４０％〜９０％の範囲であり、
ｍは構成単位の総数の３％〜４０％の範囲であり、
ｎ＋ｍ＋ｌ＝１００％であり、
前記共重合体は、水性環境下でアルキル化及び酸化によってポリ−１，４−エチレンピペラジンから得られ、前記酸化は尿素の存在下で原子状酸素を生成できる酸化剤によって行われ、前記アルキル化はハロアルカン酸を使用することによって行われることを特徴とする、方法。
【請求項１１】
前記酸化ステップは、水を含む反応供給材料の全質量の１〜１０重量％、好ましくは３〜６重量％の尿素を添加して行われることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記清浄は、前記共重合体の取得ステップ及び結合ステップの終了時に、１〜３０ｋＤａの範囲の粒子カットオフの下限を有する半透明のカセット上で精製水を使用して段階的に行われることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
そのプロセスが、カルボキシル基の最大２５％をその鎖の中に含むＮ−オキシド１，４−エチレンピペラジンの水溶性共重合体を使用して行われることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記結合ステップは、反応過程で生成されたタンパク質の３〜５０重量％の量であるいずれかの水溶性カルボジイミドを使用して行われることを特徴とする、請求項１０に記載の生産方法。
【請求項１５】
結合組織の過形成及び抗炎症作用を同時に阻害する特性を有し、坐剤、塗布薬、注射液又は化粧用クリームの形態で請求項１から１４のいずれかに記載の方法を使用して生産されるＮ−オキシド１，４−エチレンピペラジン及び（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウムハロゲン化物を含む共重合体とのヒアルロニダーゼ酵素の活性結合体の成分を含む、医薬製剤。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
水溶性ポリマーである複素環アミン、例えばＮ−オキシドポリ−１，４−エチレンピペラジンの誘導体が公知である。ポリマーアミンは、結合体用のポリマー担体としてのそれらの特性及び適用性において特有である。Ｎ−オキシド１，４−エチレンピペラジンと（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウムハロゲン化物（ポリオキシドニウム）との共重合体は毒性を示さない。それは、反ラジカル特性及び解毒特性を有しており、そしてＮ−オキシド基により生体分解性である。この共重合体は医療への応用が可能であり、免疫調節剤、免疫補助剤、又はポリマー担体として使用される［特許文献４  Ｎｅｋｒａｓｏｖ  Ａ．Ｖ．，  Ｐｕｃｈｋｏｖａ  Ｎ．Ｇ．，  Ｉｖａｎｏｖａ  Ａ．Ｓ．  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙ−１，４−ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｐｉｐｅｒａｚｉｎ  ｈａｖｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｅ−ｍｏｄｉｌａｔｉｎｇ，  ａｎｔｉｖｉｒｕｓ，  ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．（免疫調節活性、抗ウイルス活性、抗菌活性を有するポリ−１，４−エチレンピペラジンの誘導体）］。このことは、ポリマー担体生産の容易に達成できる簡単な技術の開発の方向性、全ての特定された要件に従うこと、及びそれらに基づく様々な結合プロセスを緊急かつ重要なものにする。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
特許文献５（２００２年７月２０日公開）には、溶媒及び酸化剤を含有した原子状酸素を産生できる水溶液中での、ポリ−１，４−エチレンピペラジンの酸化が記載されている。酸化剤として、有機及び無機過酸化物並びにヒドロペルオキシド、含酸素ハロ酸（ｏｘｙｇｅｎａｔｅｄ  ｈａｌｏａｃｉｄｓ）の塩、オゾン、酸素、水電解で生じる全てのものを使用することが適当である。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
ポリ−１，４−エチレンピペラジン（ＰＥＰ）を酢酸（ＡＡ）水溶液及び過酸化水素（ＨＰ）とＰＥＰ：ＡＡ：ＨＰ＝１：０．４５：０．７の分子比で混合することによって、酸化を行うことが合理的である。酸化プロセスは、不均質な媒体中でポリマーが完全な溶解に達するまで続く。その後、得られたＮ−オキシドポリ−１，４−エチレンピペラジンがアルキル化剤の存在下でアルキル化される。このプロセスは水性環境下で行われる。３０〜１００℃の温度範囲でポリマー鎖の中の第三級窒素原子と共有結合する物質、例えば、ハロ酸又はその環式構造若しくは非環式構造のエステルをアルキル化剤として使用することが推奨される。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
例えば、限外濾過によるその清浄の際にアルキル化のプロセスにおいて得られたＮ−オキシドポリ−１，４−エチレンピペラジンと（Ｎ−カルボキシエチル）−１，４−エチレンピペラジニウムブロマイド（С−ＰＮＯ）との共重合体の溶液を、高分子量の水溶性の生物起源の化合物、特に、生物学的活性物質の結合体又は複合体の更なる合成に使用することができる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
特許文献６（２０１５年７月１０日公開）には、エリスロポエチンの活性を有する糖タンパク質の結合体及びその生産方法が記載されている。その方法は、ポリエチレンピペラジンのＮ−オキシドへの酸化と、Ｎ−オキシドポリ−１，４−エチレンピペラジンと（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウムブロマイドとの共重合体が結果として得られるブロモ酢酸によるアルキル化と、得られた共重合体の清浄とを含む。エリスロポエチンとの共重合体の結合は、カルボジイミド法又はアジド法により行われる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
本発明に最も近いものは、特許文献７（１９９８年６月１０日公開）に記載されている発明である。この特許は、結合組織の病理状態の処置のための、ヒアルロニダーゼ酵素の結合体を含む薬剤に関する。この特許には、以下の一般式に対応する高分子量担体（Ｎ−オキシドポリ−１，４−エチレンピペラジンと（Ｎ−カルボキシエチル）−１，４−エチレンピペラジニウムブロマイド（ポリオキシドニウム）の共重合体（分子量４００００〜１０００００Ｄ））とヒアルロニダーゼ酵素の結合体を、１：（１〜５）の酵素：担体比で得るための方法が記載されている。
【化１】
2019501217.tif 000004
式中、Ｒはヒアルロニダーゼ酵素であり、ｎ＝３００〜７００は単位ユニットの数であり、ｑ＝０．２〜０．４は、アルキル化された構成単位の数であり、ｚ＝０．４〜０．８は、含酸素の構成単位の数である。更に、ウシの精嚢から分離されたヒアルロニダーゼを薬剤において酵素として使用することができる。この方法は、アジド法又は活性化されたコハク酸イミドエステルの方法のいずれかを用いての、ヒアルロニダーゼのポリオキシドニウムとの結合からなる。アジド法が使用される場合、結合体は２ステップで得られる。第１のステップで、ポリオキシドニウムヒドラジドがポリオキシドニウムから得られ、第２のステップで、酵素とのポリオキシドニウムアジドカップリングの反応により結合体が得られる。活性化されたエステルの方法を使用する場合、最初にポリオキシドニウムコハク酸イミドエステルが得られ、次ぎにこれを酵素と結合させる。結合された薬剤は、ロンギダゼ（Ｌｏｎｇｉｄａｚａ）と命名された。Ｎ−オキシドポリ−１，４−エチレンピペラジンと（Ｎ−カルボキシエチル）−１，４−エチレンピペラジニウムブロマイドとの共重合体を得るための方法は、この特許には記載されていない。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
本発明の目的は、改良された特性と増大した生産量を有する、結合組織の過形成阻害特性及び抗炎症作用特性を同時に有する、結合組織の病理状態の処置に適した、Ｎ−オキシドポリ−１，４−エチレンピペラジンと（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウムブロマイドの共重合体を含むポリマー担体とのヒアルロニダーゼ酵素の結合体を得るための方法の開発からなる。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
与えられた課題は、結合のためのカルボジイミド法又はアジド法、清浄及び噴霧凍結乾燥を用いて、Ｎ−オキシド１，４−エチレンピペラジン及び（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウムハロゲン化物を含む共重合体とのヒアルロニダーゼ酵素の活性結合体を得る方法により、解決されることができる。結合は、水溶性共重合体を使用して行われ、その水溶性共重合体は、次の一般式（Ｉ）
【化２】
2019501217.tif 000005
のＮ−オキシド１，４−エチレンピペラジンと、（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウム又はそのヒドラジド誘導体と、１，４−エチレンピペラジンとの共重合体であり、
式中、ｎは構成単位の総数の４０％〜９０％の範囲であり、
ｍは構成単位の総数の３％〜４０％の範囲であり、
ｎ＋ｍ＋ｌ＝１００％であり、
前記共重合体は、尿素の存在下で原子状酸素を生成できる酸化剤による酸化と、低級ハロアルカン酸又はそのアルキルエステルによるアルキル化と、アジド法の場合にはヒドラジン分解のステップを用いて、ポリ−１，４−エチレンピペラジンから得られる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
アジド結合法の場合、アルキル化はハロアルカン酸のアルキルエステルを使用して行われ、アルキル化ステップとヒドラジン分解が組み合わせられる。ヒアルロニダーゼとの結合は、０〜２５℃の範囲の温度でアジド法により行われる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
第２のステップでは、Ｎ−オキシドポリ−１，４−エチレンピペラジンを、３５〜５０℃の温度範囲で４〜６時間に亘って撹拌しながら、有機水溶液（水とＮ−メチルホルムアミドとの混合物）中のハロアルカン酸のエステルによりアルキル化し、次にポリエチレンピペラジンのアルキル誘導体のヒドラジン分解を、２〜８℃でのヒドラジン水和物を使用して処理することによって行う。反応供給材料を０．４５ｎｍの孔サイズを有する濾過要素を備えたカートリッジフィルタで濾過し、次にそれを１０ｋＤａの粒子カットオフの下限を有するカセットを備えた限外濾過ユニットで清浄し（ヒドラジン水和物の割合は０．００１％以下）、その後に供給材料をカートリッジフィルタで滅菌濾過し、ガラスバイアルの中で再構成する。最後にこれを、規定文書の必要条件との適合性について試験して、貯蔵する。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５１】
予め設定された特性（上記を参照）を有するポリ−１，４−エチレンピペラジンを使用し、それを４０〜９５℃において水性環境下でブロモ酢酸により、それぞれの重量比（８５：１５）〜（７０：３０）でアルキル化する。供給材料を５０〜７０℃で３時間に亘って混合し、次いで尿素、酢酸、及び過酸化水素を反応物に添加し、その後、得られた混合物を継続的に撹拌しながら、１８〜２２時間に亘って維持する。次に、酸化プロセスの完了をアンモニア試験を用いて確認する（実施例１と同様）。反応物を０．４５ｎｍの孔サイズを有する濾過要素を備えたカートリッジフィルタで濾過する。ポリマーを、５ｋＤａの粒子カットオフの下限を有する限外濾過ユニットでの洗浄により、過酸化水素含有量が０．００１％以下（過酸化水素含有試験）になるまで清浄する。溶液は１０〜１５％に濃縮され、ポリマー中のカルボキシル基の含有量は６％未満とならないものとする。計算した量のヒアルロニダーゼを反応媒体に撹拌しながら投入し、媒体のｐＨ値を最高で４．８とする。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５９】
Ｎ−オキシド１，４−エチレンピペラジン、（Ｎ−カルボキシメチル）−１，４−エチレンピペラジニウム、及び１，４−エチレンピペラジンの共重合体の分解の研究は、９以下のｐＨを有する水性環境下の７０℃以下の温度では、分解がもっぱらＮ−オキシドの構成単位について起こることを示している。Ｎ−オキシドの熱分解は、マイゼンハイマー転位により進行する。
【化３】
2019501217.tif 000006
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
得られたＮ−オキシドポリ−１，４−エチレンピペラジンを１５００ｍｌの蒸留水に溶解し、６０００ｍｌのＮ−メチルホルムアミドを添加した。得られた溶液に２７５ｍｌのハロアルカン酸のアルキルエステルを添加し、撹拌を継続しながら３５〜５０℃で４〜６時間に亘って静置させた。その後、反応物を２〜８℃に冷却し、撹拌しながら２５０ｍｌのヒドラジン水和物を添加した。反応供給材料を精製水で１０倍に希釈し、０．４５ｎｍの孔サイズを有する濾過要素を備えたカートリッジフィルタで濾過し、ペリコンカセット（１０ｋＤａの粒子カットオフの下限を有する）上での洗浄により清浄して微量のヒドラジン水和物の含有量（０．００１％以下）とした。更に、反応供給材料を１０〜１２％（標的物質により）に濃縮し、滅菌濾過し、ガラスバイアル中で再構成した。Ｎ−オキシドポリ−１，４−エチレンピペラジンのヒドラジド誘導体の溶液２２００ｍｌが得られた。これを規定文書の必要条件との適合性について分析して、貯蔵した。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７９】
実施例６
カルボジイミド結合法を用いての方法
分子量３０ｋＤａを有する２００ｇの量のポリ−１，４−エチレンピペラジンを、５８グラムのブロモ酢酸を含む１．２リットルの沸騰水溶液に添加し、それを７０℃で３時間に亘って加熱し続け、その溶液を連続して撹拌した。その後、反応物に４０ｍｌの酢酸、１４０ｍｌの過酸化水素の３０％水溶液、５０グラムの尿素を添加し、全てを３８〜４２℃で１８〜２０時間に亘って撹拌した。更に、酸化状態の完了をアンモニア試験（この試験は上述した）により確認した。肯定的な結果である場合、反応供給材料を１〜２％の濃度となるように希釈し、０．４５ｎｍの孔サイズを有する濾過要素を備えたカートリッジフィルタで濾過し、５ｋＤａに等しい粒子カットオフの下限を有するペリコンカセット上での精製水による洗浄により清浄した。洗浄のプロセスでは、微量の低分子量の有機酸を取り除くための完全な清浄を目的として、溶液をрН＝１１．０〜１１．５の値までアルカリ性とした。溶液の清浄を、過酸化水素含有量が０．００１％以下（過酸化水素試験）になるまで継続し、溶液を標的物質が１０％となるよう濃縮した。得られた溶液を塩酸によりрН＝４．８〜４．９となるよう酸性化し、その後に５０グラムのヒアルロニダーゼを添加した。ｐＨ値を４．８〜４．９となるように調整した。反応供給材料に、２１０ｍｌの水の中に２．１グラムのＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミドヒドロクロライドを含む溶液を、撹拌しながら１．５〜２時間かけて添加した。結合反応は２〜２５℃で行った。最後での縮合剤溶液の添加後、反応物を予め設定した温度で３０分間に亘って攪拌し、結合の程度を明らかにするために試料を採取した。結合の程度が少なくとも９０％である肯定的な結果の場合、反応物を１８〜２０時間に亘って静置させ、水分を含まない灰によりアルカリ処理してрН＝６．８〜７とし、洗浄し、深層濾過機АР−１５型の形式の濾過材を有するディスクフィルタで濾過した。次いで、反応物を５ｋＤａに等しい粒子カットオフの下限を有するペリコンカセット上の限外濾過ユニットで精製水により清浄した。清浄した溶液を８〜１０％の含有量となるよう濃縮し、０．２２ｎｍの孔サイズを有する濾過要素を備えたカートリッジフィルタで滅菌濾過した。ポリエチレンピペラジンの誘導体を有するヒアルロニダーゼ結合体の得られた溶液は、溶液１ミリリットル中に３０００ＩＵの酵素活性を含有する濃度に希釈されて、最終的に注射可能な製剤（液体形態）又は凍結乾燥した形態（凍結乾燥形態）とすることができた。凍結乾燥させる場合は、公知のロンギダゼ（登録商標）製剤の活性と同じその活性のタイプを有する２６１グラムの成分が得られ、９７％の収率であった。試験結果を表１の実施例６に示す。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９１】
【表１】
2019501217.tif 000007