【手続補正書】
【提出日】令和2年6月26日(2020.6.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のプロモーターポリヌクレオチド配列に機能的に連結した異種グルコース透過酵素遺伝子を含む宿主細胞であって、該グルコース透過酵素が、グルコースに親和性を示し、該宿主細胞、細胞膜を横切るグルコースの輸送を促進するトランスポーターであり、該第１のプロモーターポリヌクレオチド配列が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ由来であり、長さが１００塩基対未満であり、異なる成長条件にわたって遺伝子を構成的に発現することができ、協調して、プロモーター活性のレベルが増加的に上昇する複数のプロモーターを含むプロモーターのラダーを形成することができる、宿主細胞。
【請求項２】
前記第１のプロモーターポリヌクレオチド配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の宿主細胞。
【請求項３】
前記グルコース透過酵素遺伝子が、配列番号１３、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号９および配列番号１４から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする遺伝子である、請求項１または２に記載の宿主細胞。
【請求項４】
前記グルコース透過酵素遺伝子が、配列番号２３、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号１９および配列番号２４から選択されるヌクレオチド配列を有する遺伝子である、請求項１または２に記載の宿主細胞。
【請求項５】
第２のプロモーターポリヌクレオチド配列に機能的に連結したヘキソキナーゼ遺伝子をさらに含み、該第２のプロモーターポリヌクレオチド配列が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ由来であり、長さが１００塩基対未満であり、異なる成長条件にわたって遺伝子を構成的に発現することができ、協調して、プロモーター活性のレベルが増加的に上昇する複数のプロモーターを含むプロモーターのラダーを形成することができる、請求項１から４のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項６】
前記第２のプロモーターポリヌクレオチド配列が、配列番号２、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項５に記載の宿主細胞。
【請求項７】
前記ヘキソキナーゼ遺伝子が、配列番号１５および配列番号１６から選択されるポリペプチド配列をコードする遺伝子である、請求項５または６に記載の宿主細胞。
【請求項８】
前記ヘキソキナーゼ遺伝子が、配列番号２５および配列番号２６から選択されるヌクレオチド配列を有する遺伝子である、請求項５または６に記載の宿主細胞。
【請求項９】
グルコースからの生体分子の産生を増加させることが可能な微生物を生成するための方法であって、
ａ）宿主微生物を遺伝的に改変するステップであって、該改変するステップは、グルコース透過酵素遺伝子のライブラリー由来のグルコース透過酵素遺伝子を、該宿主微生物のゲノムに導入することを含み、グルコース透過酵素遺伝子の該ライブラリー由来の各グルコース透過酵素遺伝子は、プロモーターポリヌクレオチド配列に機能的に連結しており、各グルコース透過酵素は、グルコースに親和性を示し、該宿主微生物細胞膜を横切るグルコースの輸送を促進するトランスポーターをコードし、該プロモーターポリヌクレオチド配列が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ由来であり、長さが１００塩基対未満であり、異なる成長条件にわたって遺伝子を構成的に発現することができ、協調して、プロモーター活性のレベルが増加的に上昇する複数のプロモーターを含むプロモーターのラダーを形成することができ、該改変は、該グルコース透過酵素遺伝子を発現する該宿主微生物の株を生成させる、ステップと；
ｂ）該宿主微生物の複数の株が生成するまでステップａ）を複数ラウンド繰り返すステップであって、該宿主微生物の該複数の株の各株は、グルコース透過酵素遺伝子の該ライブラリー由来の別々のグルコース透過酵素遺伝子を発現する、ステップと；
ｃ）該宿主微生物の該複数の株の各株を、発酵条件下で、グルコースを含む炭素源と接触させるステップと；
ｄ）対照微生物によりグルコースから産生された生体分子の量と比較して増加した量の該生体分子をグルコースから産生する該宿主微生物の各株を選択するステップであって、該対照微生物は、グルコース透過酵素遺伝子の該ライブラリー由来のグルコース透過酵素遺伝子を発現しない、ステップと
を含む方法。
【請求項１０】
前記プロモーターポリヌクレオチド配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号１３、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号９、配列番号１４またはこれらの組合せのポリペプチド配列をコードする遺伝子を含む、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号２３、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号１９、配列番号２４またはこれらの組合せのヌクレオチド配列を有する遺伝子を含む、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１３】
ヘキソキナーゼ遺伝子のライブラリー由来のヘキソキナーゼ遺伝子を導入するステップであって、ヘキソキナーゼ遺伝子の該ライブラリー由来の各ヘキソキナーゼ遺伝子が、プロモーターポリヌクレオチド配列に機能的に連結しており、該プロモーターポリヌクレオチド配列が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ由来であり、長さが１００塩基対未満であり、異なる成長条件にわたって遺伝子を構成的に発現することができ、協調して、プロモーター活性のレベルが増加的に上昇する複数のプロモーターを含むプロモーターのラダーを形成することができる、ステップをさらに含む、請求項９から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ヘキソキナーゼ遺伝子の前記ライブラリー由来の各ヘキソキナーゼ遺伝子に機能的に連結した前記プロモーターポリヌクレオチド配列が、配列番号２、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ヘキソキナーゼ遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号１５および／または配列番号１６のポリペプチド配列をコードする遺伝子を含む、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
ヘキソキナーゼ遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号２５および／または配列番号２６のヌクレオチド配列を有する遺伝子を含む、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１７】
グルコース透過酵素遺伝子のライブラリーであって、グルコース透過酵素遺伝子の該ライブラリー内の各グルコース透過酵素遺伝子が、プロモーターポリヌクレオチド配列に機能的に連結しており、各グルコース透過酵素は、グルコースに親和性を示し、該宿主細胞膜を横切るグルコースの輸送を促進するトランスポーターをコードし、該プロモーターポリヌクレオチド配列が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ由来であり、長さが１００塩基対未満であり、異なる成長条件にわたって遺伝子を構成的に発現することができ、協調して、プロモーター活性のレベルが増加的に上昇する複数のプロモーターを含むプロモーターのラダーを形成することができる、ライブラリー。
【請求項１８】
前記プロモーターポリヌクレオチド配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択される、請求項１７に記載のライブラリー。
【請求項１９】
グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号１３、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号９、配列番号１４またはこれらの組合せのポリペプチド配列をコードする遺伝子を含む、請求項１７または１８に記載のライブラリー。
【請求項２０】
グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号２３、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号１９、配列番号２４またはこれらの組合せのヌクレオチド配列を有する遺伝子を含む、請求項１７または１８に記載のライブラリー。
【請求項２１】
グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリー内の各グルコース透過酵素遺伝子が、キメラ構築物の第１の部分であり、該キメラ構築物が、第２の部分を含み、該第２の部分が、ヘキソキナーゼ遺伝子である、請求項１７から２０のいずれか一項に記載のライブラリー。
【請求項２２】
前記ヘキソキナーゼ遺伝子が、プロモーターポリヌクレオチド配列に機能的に連結しており、該プロモーターポリヌクレオチド配列が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ由来であり、長さが１００塩基対未満であり、異なる成長条件にわたって遺伝子を構成的に発現することができ、協調して、プロモーター活性のレベルが増加的に上昇する複数のプロモーターを含むプロモーターのラダーを形成することができる、請求項２１に記載のライブラリー。
【請求項２３】
前記プロモーターポリヌクレオチド配列が、配列番号２、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択される、請求項２２に記載のライブラリー。
【請求項２４】
ヘキソキナーゼ遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号１５および／または配列番号１６のポリペプチド配列をコードする遺伝子を含む、請求項２２または２３に記載のライブラリー。
【請求項２５】
ヘキソキナーゼ遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号２５および／または配列番号２６のヌクレオチド配列を有する遺伝子を含む、請求項２２または２３に記載のライブラリー。
【請求項２６】
生体分子を産生する方法であって、請求項１７から２５のいずれか一項に記載のライブラリー由来のグルコース透過酵素遺伝子を宿主細胞に導入するステップと、該宿主細胞を該生体分子の産生に適した条件下で培養するステップとを含む方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
さらに別の態様では、第１のコドン最適化ポリヌクレオチドおよび第２のコドン最適化ポリヌクレオチドを含む、単離された、合成または組換えポリヌクレオチドであって、第１のポリヌクレオチドおよび第２のポリヌクレオチドが、宿主細胞における発現のためにそれぞれコドン最適化されており、第１のコドン最適化ポリヌクレオチドが、グルコース透過酵素活性を有するポリペプチドをコードしており、第２のコドン最適化ポリヌクレオチドが、グルコキナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする、単離された、合成または組換えポリヌクレオチドが本明細書に提供される。一部の場合では、第１のコドン最適化ポリヌクレオチドは、配列番号２３、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号１９および配列番号２４から選択される。一部の場合では、第２のコドン最適化ポリヌクレオチドは、配列番号２５および配列番号２６から選択される。一部の場合では、グルコース透過酵素活性を有するポリペプチドは、配列番号１３、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号９および配列番号１４から選択される配列を含む。一部の場合では、グルコキナーゼ活性を有するポリペプチドは、配列番号１５および配列番号１６から選択される配列を含む。一部の場合では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉおよび／またはＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍである。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
第１のプロモーターポリヌクレオチドに機能的に連結した異種グルコース透過酵素遺伝子を含む宿主細胞であって、該第１のプロモーターポリヌクレオチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択されるヌクレオチド配列を含む、宿主細胞。
（項目２）
前記グルコース透過酵素遺伝子が、細菌グルコース透過酵素遺伝子である、項目１に記載の宿主細胞。
（項目３）
前記細菌グルコース透過酵素遺伝子が、配列番号１３、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号９および配列番号１４から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする遺伝子である、項目２に記載の宿主細胞。
（項目４）
前記細菌グルコース透過酵素遺伝子が、配列番号２３、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号１９および配列番号２４から選択されるヌクレオチド配列を有する遺伝子である、項目２に記載の宿主細胞。
（項目５）
第２のプロモーターポリヌクレオチドに機能的に連結したヘキソキナーゼ遺伝子をさらに含み、該第２のプロモーターポリヌクレオチドが、配列番号２、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択されるヌクレオチド配列を含む、項目１から４のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目６）
前記ヘキソキナーゼ遺伝子が、グルコキナーゼ遺伝子である、項目５に記載の宿主細胞。
（項目７）
前記グルコキナーゼ遺伝子が、細菌グルコキナーゼ遺伝子である、項目６に記載の宿主細胞。
（項目８）
前記細菌グルコキナーゼ遺伝子が、配列番号１５および配列番号１６から選択されるポリペプチド配列をコードする遺伝子である、項目７に記載の宿主細胞。
（項目９）
前記細菌グルコキナーゼ遺伝子が、配列番号２５および配列番号２６から選択されるヌクレオチド配列を有する遺伝子である、項目７に記載の宿主細胞。
（項目１０）
前記第１のプロモーターポリヌクレオチドと前記第２のプロモーターポリヌクレオチドとが異なっている、項目５から９のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目１１）
前記第１のプロモーターポリヌクレオチドと前記第２のプロモーターポリヌクレオチドとが同一である、項目５から９のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目１２）
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する、項目１から１１のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目１３）
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍである、項目１から１１のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目１４）
グルコースから生体分子を産生する方法であって、項目１から１３のいずれか一項に記載の宿主細胞を前記生体分子の産生に適した条件下で培養するステップを含む方法。
（項目１５）
前記生体分子が、低分子、アミノ酸、ヌクレオチド、有機酸またはアルコールである、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記アミノ酸が、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、アスパラギン酸、アスパラギン、トレオニン、イソロイシン、メチオニンまたはリシンである、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記有機酸が、スクシネート、ラクテートまたはピルベートである、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
前記アルコールが、エタノールまたはイソブタノールである、項目１５に記載の方法。
（項目１９）
グルコースからの生体分子の産生を増加させることが可能な微生物を生成するための方法であって、
ａ）宿主微生物を遺伝的に改変するステップであって、該改変するステップは、グルコース透過酵素遺伝子のライブラリー由来のグルコース透過酵素遺伝子を、該宿主微生物のゲノムに導入することを含み、グルコース透過酵素遺伝子の該ライブラリー由来の各グルコース透過酵素遺伝子は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択されるヌクレオチド配列を含むプロモーターに機能的に連結しており、該改変は、該グルコース透過酵素遺伝子を発現する該宿主微生物の株を生成させる、ステップと；
ｂ）該宿主微生物の複数の株が生成するまでステップａ）を複数ラウンド繰り返すステップであって、該宿主微生物の該複数の株の各株は、グルコース透過酵素遺伝子の該ライブラリー由来の別々のグルコース透過酵素遺伝子を発現する、ステップと；
ｃ）該宿主微生物の該複数の株の各株を、発酵条件下で、グルコースを含む炭素源と接触させるステップと；
ｄ）対照微生物によりグルコースから産生された生体分子の量と比較して増加した量の該生体分子をグルコースから産生する該宿主微生物の各株を選択するステップであって、該対照微生物は、グルコース透過酵素遺伝子の該ライブラリー由来のグルコース透過酵素遺伝子を発現しない、ステップと
を含む方法。
（項目２０）
グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリー内の前記グルコース透過酵素遺伝子のそれぞれが、細菌グルコース透過酵素遺伝子である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
細菌グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号１３、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号９、配列番号１４またはこれらの組合せのポリペプチド配列をコードする遺伝子を含む、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
細菌グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号２３、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号１９、配列番号２４またはこれらの組合せのヌクレオチド配列を有する遺伝子を含む、項目２０に記載の方法。
（項目２３）
ヘキソキナーゼ遺伝子のライブラリー由来のヘキソキナーゼ遺伝子を導入するステップであって、ヘキソキナーゼ遺伝子の該ライブラリー由来の各ヘキソキナーゼ遺伝子が、プロモーターポリヌクレオチドに機能的に連結しており、該プロモーターポリヌクレオチドが、配列番号２、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択される配列を含む、ステップをさらに含む、項目１９から２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
ヘキソキナーゼ遺伝子の前記ライブラリー由来の各ヘキソキナーゼ遺伝子の前記導入が、グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリー由来の各グルコース透過酵素遺伝子の前記導入と同時である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
ヘキソキナーゼ遺伝子の前記ライブラリー由来の各ヘキソキナーゼ遺伝子が、グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリー由来のグルコース透過酵素遺伝子を含むキメラ構築物中に存在する、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記ヘキソキナーゼ遺伝子が、グルコキナーゼ遺伝子である、項目２３から２５のいずれかに記載の方法。
（項目２７）
前記グルコキナーゼ遺伝子が、細菌グルコキナーゼ遺伝子である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
細菌グルコキナーゼ遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号１５および／または配列番号１６のポリペプチド配列をコードする遺伝子を含む、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
細菌グルコキナーゼ遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号２５および／または配列番号２６のヌクレオチド配列を有する遺伝子を含む、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記グルコース透過酵素遺伝子に機能的に連結した前記プロモーターポリヌクレオチドと前記ヘキソキナーゼ遺伝子に機能的に連結した前記プロモーターポリヌクレオチドとが異なっている、項目２３から２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記グルコース透過酵素遺伝子に機能的に連結した前記プロモーターポリヌクレオチドと前記ヘキソキナーゼ遺伝子に機能的に連結した前記プロモーターポリヌクレオチドとが同一である、項目２３から２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記宿主微生物が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する、項目１９から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記宿主微生物が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍである、項目１９から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記導入するステップが、形質転換、形質導入または電気穿孔によって実施される、項目１９から３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記生体分子が、低分子、アミノ酸、ヌクレオチド、有機酸またはアルコールである、項目１９から３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記アミノ酸が、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、アスパラギン酸、アスパラギン、トレオニン、イソロイシン、メチオニンまたはリシンである、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記有機酸が、スクシネート、ラクテートまたはピルベートである、項目３５に記載の方法。
（項目３８）
前記アルコールが、エタノールまたはイソブタノールである、項目３５に記載の方法。
（項目３９）
グルコース透過酵素遺伝子のライブラリーであって、グルコース透過酵素遺伝子の該ライブラリー内の各グルコース透過酵素遺伝子が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択されるヌクレオチド配列を含むプロモーターに機能的に連結している、ライブラリー。
（項目４０）
各グルコース透過酵素遺伝子が、細菌グルコース透過酵素遺伝子である、項目３９に記載のライブラリー。
（項目４１）
細菌グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号１３、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号９、配列番号１４またはこれらの組合せのポリペプチド配列をコードする遺伝子を含む、項目４０に記載のライブラリー。
（項目４２）
細菌グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号２３、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号１９、配列番号２４またはこれらの組合せのヌクレオチド配列を有する遺伝子を含む、項目４０に記載のライブラリー。
（項目４３）
グルコース透過酵素遺伝子の前記ライブラリー内の各グルコース透過酵素遺伝子が、キメラ構築物の第１の部分であり、該キメラ構築物が、第２の部分を含み、該第２の部分が、ヘキソキナーゼ遺伝子である、項目３９から４２のいずれか一項に記載のライブラリー。
（項目４４）
前記ヘキソキナーゼ遺伝子が、プロモーターポリヌクレオチドに機能的に連結しており、該プロモーターポリヌクレオチドが、配列番号２、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８から選択される配列を含む、項目４３に記載のライブラリー。
（項目４５）
前記ヘキソキナーゼ遺伝子が、グルコキナーゼ遺伝子である、項目４３から４４のいずれかに記載のライブラリー。
（項目４６）
前記グルコキナーゼ遺伝子が、細菌グルコキナーゼ遺伝子である、項目４５に記載のライブラリー。
（項目４７）
細菌グルコキナーゼ遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号１５および／または配列番号１６のポリペプチド配列をコードする遺伝子を含む、項目４６に記載のライブラリー。
（項目４８）
細菌グルコキナーゼ遺伝子の前記ライブラリーが、配列番号２５および／または配列番号２６のヌクレオチド配列を有する遺伝子を含む、項目４６に記載のライブラリー。
（項目４９）
前記グルコース透過酵素遺伝子に機能的に連結した前記プロモーターポリヌクレオチドと前記ヘキソキナーゼ遺伝子に機能的に連結した前記プロモーターポリヌクレオチドとが異なっている、項目４４から４８のいずれか一項に記載のライブラリー。
（項目５０）
前記グルコース透過酵素遺伝子に機能的に連結した前記プロモーターポリヌクレオチドと前記ヘキソキナーゼ遺伝子に機能的に連結した前記プロモーターポリヌクレオチドとが同一である、項目４４から４８のいずれか一項に記載のライブラリー。
（項目５１）
生体分子を産生する方法であって、項目３９から５０のいずれか一項に記載のライブラリー由来のグルコース透過酵素遺伝子を宿主細胞に導入するステップと、該宿主細胞を該生体分子の産生に適した条件下で培養するステップとを含む方法。
（項目５２）
前記生体分子が、アミノ酸、ヌクレオチド、有機酸またはアルコールである、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記アミノ酸が、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、アスパラギン酸、アスパラギン、トレオニン、イソロイシン、メチオニンまたはリシンである、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記有機酸が、スクシネート、ラクテートまたはピルベートである、項目５２に記載の方法。
（項目５５）
前記アルコールが、エタノールまたはイソブタノールである、項目５２に記載の方法。
（項目５６）
前記宿主細胞が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する、項目５１から５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記宿主細胞が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍである、項目５１から５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記導入するステップが、形質転換、形質導入または電気穿孔によって実施される、項目５１から５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
配列番号２３、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号１９および配列番号２４から選択されるコドン最適化ポリヌクレオチドを含む、単離された、合成または組換えポリヌクレオチドであって、宿主細胞における発現のためにコドン最適化されている、単離された、合成または組換えポリヌクレオチド。
（項目６０）
配列番号２５および配列番号２６から選択されるコドン最適化ポリヌクレオチドを含む、単離された、合成または組換えポリヌクレオチドであって、宿主細胞における発現のためにコドン最適化されている、単離された、合成または組換えポリヌクレオチド。
（項目６１）
第１のコドン最適化ポリヌクレオチドおよび第２のコドン最適化ポリヌクレオチドを含む、単離された、合成または組換えポリヌクレオチドであって、該第１のポリヌクレオチドおよび該第２のポリヌクレオチドが、宿主細胞における発現のためにそれぞれコドン最適化されており、該第１のコドン最適化ポリヌクレオチドが、グルコース透過酵素活性を有するポリペプチドをコードし、該第２のコドン最適化ポリヌクレオチドが、グルコキナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする、単離された、合成または組換えポリヌクレオチド。
（項目６２）
前記第１のコドン最適化ポリヌクレオチドが、配列番号２３、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号１９および配列番号２４から選択される、項目６１に記載の単離された、合成または組換えポリヌクレオチド。
（項目６３）
前記第２のコドン最適化ポリヌクレオチドが、配列番号２５および配列番号２６から選択される、項目６１または６２に記載の単離された、合成または組換えポリヌクレオチド。
（項目６４）
グルコース透過酵素活性を有する前記ポリペプチドが、配列番号１３、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号９および配列番号１４から選択される配列を含む、項目６１に記載の単離された、合成または組換えポリヌクレオチド。
（項目６５）
グルコキナーゼ活性を有する前記ポリペプチドが、配列番号１５および配列番号１６から選択される配列を含む、項目６１または６４に記載の単離された、合成または組換えポリヌクレオチド。
（項目６６）
前記宿主細胞が、Ｅ．ｃｏｌｉおよび／またはＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍである、項目５９から６５のいずれかに記載の単離された、合成または組換えポリヌクレオチド。