【手続補正書】
【提出日】令和2年6月11日(2020.6.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
鋳型鎖を用いずに核酸分子を合成することができるｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアントであって、前記バリアントが、Ｅ４５７の位置における残基または機能的に同等な残基の少なくとも１つの置換を含み、前記置換はＥ４５７Ｇ／Ｎ／Ｓ／Ｔから選択され、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定され、前記バリアントは配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有する、バリアント。
【請求項２】
前記バリアントが、Ｔ３３１、Ｇ３３２、Ｇ３３３、Ｆ３３４、Ｒ３３６、Ｋ３３８、Ｈ３４２、Ｄ３４３、Ｖ３４４、Ｄ３４５、Ｆ３４６、Ａ３９７、Ｄ３９９、Ｄ４３４、Ｖ４３６、Ａ４４６、Ｌ４４７、Ｌ４４８、Ｇ４４９、Ｗ４５０、Ｇ４５２、Ｒ４５４、Ｑ４５５、Ｆ４５６、Ｒ４５８、Ｒ４６１、Ｎ４７４、Ｅ４９１、Ｄ５０１、Ｙ５０２、Ｉ５０３、Ｐ５０５、Ｒ５０８、Ｎ５０９、およびＡ５１０からなる群より選択される少なくとも１つの位置における残基または機能的に同等な残基の少なくとも１つの変異をさらに含み、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、請求項１に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項３】
ＤＮＡ鎖および／またはＲＮＡ鎖を合成することができる、請求項１または２に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項４】
Ｐｏｌ  ＩＶ、Ｐｏｌ  μ、または末端デオキシリボヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）のバリアントである、請求項１〜３のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項５】
前記バリアントが配列番号１の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する、請求項１〜４の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項６】
前記少なくとも１つのさらなる変異が、１つまたは複数のアミノ酸残基の置換、欠失、または付加からなる、請求項２〜５の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項７】
前記バリアントが、Ｒ３３６およびＲ４５４からなる群より選択される少なくとも１つの位置における残基または機能的に同等な残基の少なくとも１つの変異を含み、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、請求項１〜６の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項８】
前記３つの位置Ｒ３３６、Ｒ４５４、およびＥ４５７における残基または機能的に同等な残基の少なくとも１つの変異を含み、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、請求項１〜７の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項９】
配列
（ｉ）Ｘ１Ｘ２ＧＧＦＲ１Ｒ２ＧＫＸ３Ｘ４（配列番号４）
（式中、
Ｘ１は、Ｍ、Ｉ、Ｖ、Ｌから選択される残基を表し、
Ｘ２は、Ｔ、Ａ、Ｍ、Ｑから選択される残基を表し、
Ｘ３は、Ｍ、Ｋ、Ｅ、Ｑ、Ｌ、Ｓ、Ｐ、Ｒ、Ｄから選択される残基を表し、
Ｘ４は、Ｔ、Ｉ、Ｍ、Ｆ、Ｋ、Ｖ、Ｙ、Ｅ、Ｑ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、Ｄから選択される残基を表す）、
（ｉｉ）Ｘ１Ｘ２ＬＧＸ３Ｘ４ＧＳＲ１Ｘ５Ｘ６ＥＲ２（配列番号５）
（式中、
Ｘ１は、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｓから選択される残基を表し、
Ｘ２は、Ｌ、Ｔ、Ｒから選択される残基を表し、
Ｘ３は、Ｗ、Ｙから選択される残基を表し、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、Ｉから選択される残基を表し、
Ｘ５は、Ｑ、Ｌ、Ｈ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、またはφから選択される残基を表し、
Ｘ６は、Ｆ、Ｙから選択される残基を表す）、
（ｉｉｉ）ＬＸ１ＹＸ２Ｘ３ＰＸ４Ｘ５ＲＮＡ（配列番号６）
（Ｘ１は、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｋから選択される残基を表し、
Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ａ、Ｔから選択される残基を表し、
Ｘ３は、Ｅ、Ｑ、Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｋ、Ｇ、Ｎから選択される残基を表し、
Ｘ４は、Ｗ、Ｓ、Ｖ、Ｅ、Ｒ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｋ、Ｈから選択される残基を表し、
Ｘ５は、Ｅ、Ｑ、Ｄ、Ｈ、Ｌから選択される残基を表す）
の少なくとも１つの半保存領域における残基の少なくとも１つの変異を有する、請求項１〜８の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項１０】
−  配列番号４の配列の前記半保存領域の少なくとも１つの位置Ｒ１、Ｒ２、および／またはＫにおける残基の少なくとも１つの置換、ならびに／または
−  配列番号５の配列の前記半保存領域の少なくとも１つの位置Ｓ、Ｒ１、および／またはＥにおける残基の少なくとも１つの置換、ならびに／または
−  配列番号６の配列の前記半保存領域のＸ１位における残基の欠失ならびに／またはＲ位および／もしくはＮ位における少なくとも１つの置換
を有する、請求項９に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項１１】
前記バリアントが、Ｒ３３６、Ｋ３３８、Ｈ３４２、Ａ３９７、Ｓ４５３、Ｒ４５４、Ｒ４６１、Ｎ４７４、Ｄ５０１、Ｙ５０２、Ｉ５０３、Ｒ５０８、およびＮ５０９からなる群より選択される少なくとも１つの位置における残基または機能的に同等な残基の置換、優先的には、Ｒ３３６、Ａ３９７、Ｒ４５４、Ｒ４６１、Ｎ４７４、Ｄ５０１、Ｙ５０２、およびＩ５０３からなる群より選択される少なくとも１つの位置における残基または機能的に同等な残基の置換を含み、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、請求項１〜１０の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項１２】
Ｒ３３６位、Ｋ３３８位、Ｈ３４２位、Ａ３９７位、Ｓ４５３位、Ｒ４５４位、Ｒ４６１位、Ｎ４７４位、Ｄ５０１位、Ｙ５０２位、Ｉ５０３位、Ｒ５０８位、およびＮ５０９位における前記置換が、Ｒ３３６Ｋ／Ｈ／Ｎ／Ｇ／Ｄ、Ｋ３３８Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｓ／Ｔ／Ｎ、Ｈ３４２Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｓ／Ｔ．Ｎ、Ａ３９７Ｒ／Ｈ／Ｋ／Ｄ／Ｅ、Ｓ４５３Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｓ／Ｔ、Ｒ４５４Ｆ／Ｙ／Ｗ／Ａ、Ｎ４７４Ｓ／Ｔ／Ｎ／Ｑ、Ｄ５０１Ａ／Ｇ／Ｘ、Ｙ５０２Ａ／Ｇ／Ｘ、Ｉ５０３Ａ／Ｇ／Ｘ、Ｒ５０８Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｓ／Ｔ、Ｎ５０９Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｓ／Ｔからなる群より選択される、請求項１１に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項１３】
前記バリアントが、表１に列挙される置換、欠失、置換および／または欠失の組合せを含むかまたは有し、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、請求項１〜１２の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項１４】
前記バリアントが、配列番号１の配列のＴｄＴのバリアントであり、Ｃ３７８位からＬ４０６位の間の残基または機能的に同等な残基の、配列番号２の配列のポリメラーゼＰｏｌμの残基Ｈ３６３〜Ｃ３９０または機能的に同等な残基による置換をさらに含む、請求項１〜１３の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項１５】
前記バリアントが、Ｒ３３６Ｇ−Ｅ４５７Ｎ、Ｒ３３６Ｎ−Ｅ４５７Ｎ、Ｒ３３６Ｎ−Ｒ４５４Ａ−Ｅ４５７Ｎ、Ｒ３３６Ｎ−Ｅ４５７Ｎ、Ｒ３３６Ｎ−Ｒ４５４Ａ−Ｅ４５７Ｇ、Ｒ３３６Ｎ−Ｅ４５７Ｇ、Ｒ３３６Ｇ−Ｒ４５４Ａ−Ｅ４５７Ｎ、Ｒ３３６Ｇ−Ｅ４５７Ｎから選択される置換の組合せを含み、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、請求項１〜１４の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアント。
【請求項１６】
請求項１から１５の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアントをコードする核酸。
【請求項１７】
請求項１６に記載の核酸を含み、発現する発現カセット。
【請求項１８】
請求項１６に記載の核酸または請求項１７に記載の発現カセットを含むベクター。
【請求項１９】
請求項１６に記載の核酸、または請求項１７に記載の発現カセット、または請求項１８に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２０】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアントを産生するための、請求項１６に記載の核酸、請求項１７に記載の発現カセット、請求項１８に記載のベクター、または請求項１９に記載の細胞の使用。
【請求項２１】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアントを産生するためのプロセスであって、前記プロセスは前記バリアントをコードする核酸の発現を可能にする培養条件下で請求項１９に記載の宿主細胞を培養するステップ、任意選択で、そのように発現した前記バリアントを培養培地または前記宿主細胞から回収するステップを含む、プロセス。
【請求項２２】
３’−ＯＨ修飾ヌクレオチドから鋳型鎖を用いずに核酸分子を合成するための、請求項１から１５のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアントの使用。
【請求項２３】
ＤＮＡ鎖またはＲＮＡ鎖を合成するための、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアントの存在下で、少なくとも１つのヌクレオチド、優先的には３’−ＯＨ修飾ヌクレオチドにプライマー鎖を接触させるステップを含む、鋳型鎖を用いない核酸分子の酵素的合成のためのプロセス。
【請求項２５】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片の少なくとも１つのバリアントと、ヌクレオチド、優先的には３’−ＯＨ修飾ヌクレオチドと、任意選択で少なくとも１つのヌクレオチドプライマーとを含む、鋳型鎖を用いない核酸分子の酵素的合成のためのキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３４】
天然のＴｄＴを用い、同様の合成実験を行った。後者は修飾ヌクレオチドを取り込むことができず、所望の配列を合成することは不可能であった。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
鋳型鎖を用いずに核酸分子を合成することができるｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼまたはそのようなポリメラーゼの機能的断片のバリアントであって、前記バリアントが、Ｅ４５７、Ｔ３３１、Ｇ３３２、Ｇ３３３、Ｆ３３４、Ｒ３３６、Ｋ３３８、Ｈ３４２、Ｄ３４３、Ｖ３４４、Ｄ３４５、Ｆ３４６、Ａ３９７、Ｄ３９９、Ｄ４３４、Ｖ４３６、Ａ４４６、Ｌ４４７、Ｌ４４８、Ｇ４４９、Ｗ４５０、Ｇ４５２、Ｒ４５４、Ｑ４５５、Ｆ４５６、Ｒ４５８、Ｒ４６１、Ｎ４７４、Ｅ４９１、Ｄ５０１、Ｙ５０２、Ｉ５０３、Ｐ５０５、Ｒ５０８、Ｎ５０９、およびＡ５１０からなる群より選択される少なくとも１つの位置における残基または機能的に同等な残基の少なくとも１つの変異を含み、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、バリアント。
(項目２)
ＤＮＡ鎖および／またはＲＮＡ鎖を合成することができる、項目１に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目３)
Ｐｏｌ  ＩＶ、Ｐｏｌ  μ、または末端デオキシリボヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）のバリアントである、項目１または２に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目４)
配列番号１の配列と少なくとも６０％の同一性、優先的には配列番号１の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する、前記項目の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目５)
少なくとも１つの変異が、１つまたは複数のアミノ酸残基の置換、欠失、または付加からなる、前記項目の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目６)
前記バリアントが、Ｔ３３１、Ｇ３３２、Ｇ３３３、Ｆ３３４、Ｒ３３６、Ｄ３４３、Ｌ４４７、Ｌ４４８、Ｇ４４９、Ｗ４５０、Ｇ４５２、Ｒ４５４、Ｑ４５５、Ｅ４５７、Ｒ４６１、およびＲ５０８からなる群より選択される少なくとも１つの位置における残基または機能的に同等な残基の少なくとも１つの変異、優先的には、Ｒ３３６、Ｒ４５４、およびＥ４５７からなる群より選択される少なくとも１つの位置における残基または機能的に同等な残基の少なくとも１つの変異を含み、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、前記項目の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目７)
Ｒ３３６、Ｒ４５４、およびＥ４５７からなる群より選択される少なくとも２つの位置における残基の少なくとも１つの変異、優先的には、前記３つの位置Ｒ３３６、Ｒ４５４、およびＥ４５７における残基の変異を含む、前記項目の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目８)
配列
（ｉ）Ｘ１Ｘ２ＧＧＦＲ１Ｒ２ＧＫＸ３Ｘ４（配列番号４）
（式中、
Ｘ１は、Ｍ、Ｉ、Ｖ、Ｌから選択される残基を表し、
Ｘ２は、Ｔ、Ａ、Ｍ、Ｑから選択される残基を表し、
Ｘ３は、Ｍ、Ｋ、Ｅ、Ｑ、Ｌ、Ｓ、Ｐ、Ｒ、Ｄから選択される残基を表し、
Ｘ４は、Ｔ、Ｉ、Ｍ、Ｆ、Ｋ、Ｖ、Ｙ、Ｅ、Ｑ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、Ｄから選択される残基を表す）、
（ｉｉ）Ｘ１Ｘ２ＬＧＸ３Ｘ４ＧＳＲ１Ｘ５Ｘ６ＥＲ２（配列番号５）
（式中、
Ｘ１は、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｓから選択される残基を表し、
Ｘ２は、Ｌ、Ｔ、Ｒから選択される残基を表し、
Ｘ３は、Ｗ、Ｙから選択される残基を表し、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、Ｉから選択される残基を表し、
Ｘ５は、Ｑ、Ｌ、Ｈ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、またはφから選択される残基を表し、
Ｘ６は、Ｆ、Ｙから選択される残基を表す）、
（ｉｉｉ）ＬＸ１ＹＸ２Ｘ３ＰＸ４Ｘ５ＲＮＡ（配列番号６）
（Ｘ１は、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｋから選択される残基を表し、
Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ａ、Ｔから選択される残基を表し、
Ｘ３は、Ｅ、Ｑ、Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｋ、Ｇ、Ｎから選択される残基を表し、
Ｘ４は、Ｗ、Ｓ、Ｖ、Ｅ、Ｒ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｋ、Ｈから選択される残基を表し、
Ｘ５は、Ｅ、Ｑ、Ｄ、Ｈ、Ｌから選択される残基を表す）
の少なくとも１つの半保存領域における残基の少なくとも１つの変異を有する、前記項目の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目９)
−  配列番号４の配列の前記半保存領域の少なくとも１つの位置Ｒ１、Ｒ２、および／またはＫにおける残基の少なくとも１つの置換、ならびに／または
−  配列番号５の配列の前記半保存領域の少なくとも１つの位置Ｓ、Ｒ１、および／またはＥにおける残基の少なくとも１つの置換、ならびに／または
−  配列番号６の配列の前記半保存領域のＸ１位における残基の欠失ならびに／またはＲ位および／もしくはＮ位における少なくとも１つの置換
を有する、項目８に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目１０)
前記バリアントが、Ｒ３３６、Ｋ３３８、Ｈ３４２、Ａ３９７、Ｓ４５３、Ｒ４５４、Ｅ４５７、Ｒ４６１、Ｎ４７４、Ｄ５０１、Ｙ５０２、Ｉ５０３、Ｒ５０８、およびＮ５０９からなる群より選択される少なくとも１つの位置における残基または機能的に同等な残基の置換、優先的には、Ｒ３３６、Ａ３９７、Ｒ４５４、Ｅ４５７、Ｒ４６１、Ｎ４７４、Ｄ５０１、Ｙ５０２、およびＩ５０３からなる群より選択される少なくとも１つの位置における残基または機能的に同等な残基の置換、より優先的には、Ｒ３３６、Ｒ４５４、およびＥ４５７からなる群より選択される少なくとも１つの位置における残基または機能的に同等な残基の置換、さらにより優先的には、Ｅ４５７位における残基または機能的に同等な残基の少なくとも１つの置換を含み、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、前記項目の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目１１)
Ｒ３３６位、Ｋ３３８位、Ｈ３４２位、Ａ３９７位、Ｓ４５３位、Ｒ４５４位、Ｅ４５７位、Ｒ４６１位、Ｎ４７４位、Ｄ５０１位、Ｙ５０２位、Ｉ５０３位、Ｒ５０８位、およびＮ５０９位における前記置換が、Ｒ３３６Ｋ／Ｈ／Ｎ／Ｇ／Ｄ、Ｋ３３８Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｓ／Ｔ／Ｎ、Ｈ３４２Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｓ／Ｔ．Ｎ、Ａ３９７Ｒ／Ｈ／Ｋ／Ｄ／Ｅ、Ｓ４５３Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｓ／Ｔ、Ｒ４５４Ｆ／Ｙ／Ｗ／Ａ、Ｅ４５７Ｇ／Ｎ／Ｓ／Ｔ、Ｎ４７４Ｓ／Ｔ／Ｎ／Ｑ、Ｄ５０１Ａ／Ｇ／Ｘ、Ｙ５０２Ａ／Ｇ／Ｘ、Ｉ５０３Ａ／Ｇ／Ｘ、Ｒ５０８Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｓ／Ｔ、Ｎ５０９Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｓ／Ｔからなる群より選択される、項目１０に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目１２)
前記バリアントが、表１に列挙される置換、欠失、置換および／または欠失の組合せを含むかまたは有し、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、前記項目の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目１３)
前記バリアントが、配列番号１の配列のＴｄＴのバリアントであり、Ｃ３７８位からＬ４０６位の間の残基または機能的に同等な残基の、配列番号２の配列のポリメラーゼＰｏｌμの残基Ｈ３６３〜Ｃ３９０または機能的に同等な残基による置換をさらに含む、前記項目の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目１４)
前記バリアントが、Ｒ３３６Ｇ−Ｅ４５７Ｎ、Ｒ３３６Ｎ−Ｅ４５７Ｎ、Ｒ３３６Ｎ−Ｒ４５４Ａ−Ｅ４５７Ｎ、Ｒ３３６Ｎ−Ｅ４５７Ｎ、Ｒ３３６Ｎ−Ｒ４５４Ａ−Ｅ４５７Ｇ、Ｒ３３６Ｎ−Ｅ４５７Ｇ、Ｒ３３６Ｇ−Ｒ４５４Ａ−Ｅ４５７Ｎ、Ｒ３３６Ｇ−Ｅ４５７Ｎから選択される置換の組合せを含み、示された位置は配列番号１とのアラインメントにより決定される、前記項目の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアント。
(項目１５)
項目１から１４の一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアントをコードする核酸。
(項目１６)
項目１５に記載の核酸のための発現カセット。
(項目１７)
項目１５に記載の核酸または項目１６に記載の発現カセットを含むベクター。
(項目１８)
項目１５に記載の核酸、または項目１６に記載の発現カセット、または項目１７に記載のベクターを含む、宿主細胞。
(項目１９)
項目１から１４のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアントを産生するための、項目１５に記載の核酸、項目１６に記載の発現カセット、項目１７に記載のベクター、または項目１８に記載の細胞の使用。
(項目２０)
項目１から１４のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアントを産生するためのプロセスであって、前記バリアントをコードする核酸の発現を可能にする培養条件下で項目１８に記載の宿主細胞を培養し、任意選択で、そのように発現した前記バリアントを培養培地または前記宿主細胞から回収する、プロセス。
(項目２１)
３’−ＯＨ修飾ヌクレオチドから鋳型鎖を用いずに核酸分子を合成するための、項目１から１４のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアントの使用。
(項目２２)
ＤＮＡ鎖またはＲＮＡ鎖を合成するための、項目２１に記載の使用。
(項目２３)
項目１から１４のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼのバリアントの存在下で、少なくとも１つのヌクレオチド、優先的には３’−ＯＨ修飾ヌクレオチドにプライマー鎖を接触させる、鋳型鎖を用いない核酸分子の酵素的合成のためのプロセス。
(項目２４)
項目１から１４のいずれか一項に記載のｐｏｌＸファミリーＤＮＡポリメラーゼの少なくとも１つのバリアントと、ヌクレオチド、優先的には３’−ＯＨ修飾ヌクレオチドと、任意選択で少なくとも１つのヌクレオチドプライマーとを含む、鋳型鎖を用いない核酸分子の酵素的合成のためのキット。