【手続補正書】
【提出日】令和2年3月27日(2020.3.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生弱毒化組換えアルファウイルスであって、
（ｉ）不活性化されたサブゲノムプロモーター、及び
（ｉｉ）非構造タンパク質４（ｎｓＰ４）コード配列の末端の１つと前記アルファウイルスのサブゲノムＲＮＡコード配列の開始ＡＵＧとの間に、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）の挿入を有するアルファウイルス核酸を含み、
少なくとも１つのウイルスＩＲＥＳは、生存可能な弱毒化アルファウイルスを産生することができるＩ型またはＩＩ型ピコルナウイルスＩＲＥＳまたは他のＩＲＥＳ配列を含む前記生弱毒化組換えアルファウイルス。
【請求項２】
前記ＩＲＥＳ配列は、エンテロウイルスＩＲＥＳ、エンテロウイルス７１  ＩＲＥＳ（ＥＶ７１  ＩＲＥＳ）、ライノウイルスＩＲＥＳ、ヒトライノウイルスＩＲＥＳ（ＨＲＶ  ＩＲＥＳ）、アフトウイルスＩＲＥＳ、アフトウイルス：サブタイプ：口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ  ＩＲＥＳ）、テロウイルスＩＲＥＳ（ＴＭＥＶ  ＩＲＥＳ）、及びフラビウイルスＩＲＥＳ、フラビウイルスサブタイプ：ヘパシウイルス（ＨＣＶ  ＩＲＥＳ）からなる群から選択され、
前記アルファウイルスは弱毒化される、請求項１に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項３】
前記サブゲノムプロモーターは、前記非構造タンパク質４（ｎｓＰ４）コード配列の末端とサブゲノムＲＮＡコード配列の開始ＡＵＧとの間の前記サブゲノムＲＮＡの５’ＵＴＲの欠失により不活性化される、請求項１または２に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項４】
前記サブゲノムプロモーターは、前記アルファウイルスの非構造タンパク質４の前記カルボキシ末端に位置するクラスター化点突然変異によって不活性化される、請求項１または２に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項５】
前記生アルファウイルスは、チクングニヤウイルス（ＣＨＩＫ）、オニョンニョンウイルス、ロスリバーウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、またはコロナウイルス科及びトガウイルス科の他のアルファウイルス、ベバールウイルス、マヤロウイルス、サブタイプ：ウナウイルス、オニョンニョンウイルス：サブタイプ：イボ−オラウイルス（Ｉｇｂｏ−Ｏｒａ  ｖｉｒｕｓ）、ロスリバーウイルス：サブタイプ：ベバールウイルス、サブタイプ：ゲッタウイルス；サブタイプ：サギヤマウイルス、セムリキ森林ウイルス：サブタイプ：Ｍｅ  Ｔｒｉウイルスを含むセムリキ森林ウイルス複合体、及びそれらの組み合わせの１つ以上を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項６】
前記クラスター化点突然変異は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、及び配列番号５からなる群から選択される少なくとも１つのポリヌクレオチド配列の７４７４、７４７７、７４８０、７４８１、７４８３、７４８６、７４８９、７４９２、７４９５、７４９８、７５０１、７５０２、及び７５０３の位置に２つ以上の点突然変異を含む同義の点突然変異である請求項４に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項７】
前記サブゲノムプロモーターの前記突然変異は、非構造タンパク質４の前記カルボキシ末端の前記アミノ酸配列を改変しない、請求項３、４または６に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項８】
前記アルファウイルスの前記非構造タンパク質のいずれか１つに適応変異をさらに含み、
前記適応変異は、ウイルス複製、放出、及びウイルス力価の増加のために選択され得る請求項１〜７のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項９】
前記ＩＲＥＳは、エンテロウイルス７１ＩＲＥＳ（ＥＶ７１  ＩＲＥＳ）を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項１０】
前記ＩＲＥＳは、ヒトライノウイルスＩＲＥＳ（ＨＲＶ  ＩＲＥＳ）を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項１１】
前記ＩＲＥＳは、口蹄疫ウイルスＩＲＥＳ（ＦＭＤＶ  ＩＲＥＳ）を含む請求項１〜８のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項１２】
前記ＩＲＥＳは、テロウイルスＩＲＥＳ（ＴＭＥＶ  ＩＲＥＳ）を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項１３】
前記ＩＲＥＳは、ヘパシウイルスＩＲＥＳ（ＨＣＶ  ＩＲＥＳ）を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項１４】
前記アルファウイルスは、チクングニヤウイルスである請求項１〜１３のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項１５】
前記アルファウイルスは、東部ウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、または西洋ウマ脳炎ウイルスである請求項１〜１３のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項１６】
前記アルファウイルスは、蚊及び蚊細胞において複製することができない請求項１〜１５のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項１７】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の生弱毒化アルファウイルスをコードするヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項１８】
請求項１７に記載の前記ベクターを含み、発現する宿主細胞。
【請求項１９】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の弱毒化組換えアルファウイルス、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２０】
前記アルファウイルスへの曝露から前記アルファウイルスへの感染の発症を減少させるために、対象において免疫応答を誘導するための、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記対象は、ヒト、家畜、または他の飼育動物またはペットである請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
蚊に感染することができない、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の生弱毒化組換えアルファウイルスを製造する方法であって、
非構造タンパク質４（ｎｓＰ４）コード配列の一端と前記アルファウイルスのサブゲノムＲＮＡコード配列の開始ＡＵＧとの間に、
エンテロウイルスＩＲＥＳ、ライノウイルスＩＲＥＳ、アフトウイルスＩＲＥＳ、アフトウイルス：ＩＲＥＳ、及びフラビウイルスＩＲＥＳからなる群から選択される内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をクローニングすることを含む方法。
【請求項２３】
前記アルファウイルスは、前記サブゲノムプロモーターを不活性化することによりさらに弱毒化される請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＩＲＥＳは、ＥＶ７１  ＩＲＥＳ、ＨＲＶ  ＩＲＥＳ、ＦＭＤＶ  ＩＲＥＳ、ＴＭＥＶ  ＩＲＥＳ、またはＨＣＶ  ＩＲＥＳを含む請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記生弱毒化組換えアルファウイルスは、チクングニヤウイルス（ＣＨＩＫ）、オニョンニョンウイルス、ロスリバーウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、またはコロナウイルス科及びトガウイルス科の他のアルファウイルス、ベバールウイルス、マヤロウイルス、サブタイプ：ウナウイルス、オニョンニョンウイルス：サブタイプ：イボ−オラウイルス、ロスリバーウイルス：サブタイプ：ベバールウイルス、サブタイプ：ゲッタウイルス；サブタイプ：サギヤマウイルス、セムリキ森林ウイルス：サブタイプ：Ｍｅ  Ｔｒｉウイルスを含むセムリキ森林ウイルス複合体、及びそれらの組み合わせの１つ以上を含む請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２６】
キットであって、
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の少なくとも１つの生弱毒化組換えアルファウイルス、及び
少なくとも１つの容器を含む前記キット。
【請求項２７】
１つ以上の安定剤を含む組成物をさらに含み、
前記組成物は、生弱毒化組換えアルファウイルスの不活性化を減少させる、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
生弱毒化組換えアルファウイルスであって、
ａ）エンベロープ糖タンパク質遺伝子の下流にあり、前記アルファウイルスの前記３’ＵＴＲの上流に配置されたキャプシド遺伝子、
ｂ）前記エンベロープ糖タンパク質遺伝子の３’末端と前記配置されたキャプシド遺伝子との間に導入された、少なくとも１つのＩＲＥＳで、前記遺伝子は、エンベロープ糖タンパク質遺伝子、挿入ＩＲＥＳ、配置されたキャプシド遺伝子、及び３’ＵＴＲとして、５’から３’に位置し、また、
ｃ）前記ＩＲＥＳの上流に位置する前記エンベロープ糖タンパク質遺伝子は、ＩＲＥＳ非依存的な様式で翻訳され、一方、前記配置されたキャプシドはＩＲＥＳ依存的に翻訳され、
前記少なくとも１つのウイルスＩＲＥＳは、生存可能な生弱毒化アルファウイルスを産生することができるＩ型またはＩＩ型ピコルナウイルスＩＲＥＳまたは他のＩＲＥＳ配列である、生弱毒化組換えアルファウイルス。
【請求項２９】
前記ＩＲＥＳ配列は、エンテロウイルスＩＲＥＳ、ライノウイルスＩＲＥＳ、アフトウイルスＩＲＥＳ、タイロウイルスＩＲＥＳ、及びフラビウイルスＩＲＥＳからなる群より選択され、前記アルファウイルスは、弱毒化されている、請求項２８に記載の生弱毒化組換えアルファウイルス。
【請求項３０】
前記ＩＲＥＳは、エンテロウイルス７１ＩＲＥＳ（ＥＶ７１  ＩＲＥＳ）、ヒトライノウイルスＩＲＥＳ（ＨＲＶ  ＩＲＥＳ）、口蹄疫ウイルスＩＲＥＳ（ＦＭＤＶ  ＩＲＥＳ）、タイロウイルスＩＲＥＳ（ＴＭＥＶ  ＩＲＥＳ）、またはヘパシウイルスＩＲＥＳ（ＨＣＶ  ＩＲＥＳ）を含む請求項２８または２９に記載の生弱毒化組換えアルファウイルス。
【請求項３１】
前記生弱毒化組換えアルファウイルスは、チクングニヤウイルス（ＣＨＩＫ）、オニョンニョンウイルス、ロスリバーウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、またはコロナウイルス科及びトガウイルス科の他のアルファウイルス、ベバールウイルス、マヤロウイルス、サブタイプ：ウナウイルス、オニョンニョンウイルス：サブタイプ：イボ−オラウイルス、ロスリバーウイルス：サブタイプ：ベバールウイルス、サブタイプ：ゲッタウイルス；サブタイプ：サギヤマウイルス、セムリキ森林ウイルス：サブタイプ：Ｍｅ  Ｔｒｉウイルスを含むセムリキ森林ウイルス複合体、及びそれらの組み合わせの１つ以上を含む、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【請求項３２】
前記生弱毒化アルファウイルスは、チクングニヤウイルス（ＣＨＩＫＶ）である請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の弱毒化アルファウイルス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
配列の簡単な説明
配列番号１は、ＣＨＩＫＶ−ＥＶ７１  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号２は、ＣＨＩＫＶ−ＨＲＶ２  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号３は、ＣＨＩＫＶ−ＦＭＤＶ  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号４は、ＣＨＩＫＶ−ＴＭＥＶ  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号５は、ＣＨＩＫＶ−ＨＣＶ  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号６は、ＥＶ７１  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号７は、ＨＲＶ２  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号８は、ＦＭＤＶ  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号９は、ＴＭＥＶ  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号１０は、ＨＣＶ  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号１１は、ＣＨＩＫＶ−ＨＡＶ  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号１２は、ＣＨＩＫＶ−ＦＧＦ１  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号１３は、ＨＡＶ  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号１４は、ＦＧＦ１  ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号１５は、本明細書に開示される特定の実施形態において使用されるプライマーのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号１６は、本明細書に開示される特定の実施形態において使用されるプライマーのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号１７は、本明細書に開示される特定の実施形態において使用されるプローブのポリヌクレオチド配列の一例であり、配列番号１８は、ＣＨＩＫ−ＩＲＥＳのいくつかの構造ポリペプチドを表し、配列番号１９は、ＣＨＩＫ−ＩＲＥＳ非構造ポリペプチドの非構造ポリペプチドを表し、また、配列番号２０は、ＥＭＣＶ−ＩＲＥＳのポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号２１は、ＶＥＥＶ  ＺＰＣ９３８フラグメント野生型のポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号２２は、ＶＥＥＶ  ＺＰＣ９３８フラグメント野生型のポリペプチド配列の例であり、配列番号２３は、ＶＥＥＶ  ＺＰＣ９３８フラグメント突然変異体のポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号２４は、ＶＥＥＶ  ６８Ｕ２０１フラグメント野生型のポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号２５は、ＶＥＥＶ  ６８Ｕ２０１フラグメント野生型のポリペプチド配列の例であり、配列番号２６は、ＶＥＥＶ  ６８Ｕ２０１フラグメント突然変異体のポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号２７は、ＷＥＥＶ  Ｉｍｐ１８１フラグメント野生型のポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号２８は、ＷＥＥＶ  Ｉｍｐ１８１フラグメント野生型のポリペプチド配列の例であり、配列番号２９は、ＷＥＥＶ  Ｉｍｐ１８１フラグメント突然変異体のポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号３０は、ＥＥＥＶ  ＦＬ９３−９３９フラグメント野生型のポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号３１は、ＥＥＥＶ  ＦＬ９３−９３９フラグメント野生型のポリペプチド配列の例であり、配列番号３２は、ＥＥＥＶ  ＦＬ９３−９３９フラグメント突然変異体のポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号３３は、ＣＨＩＫＶ  ＬａＲｅｕｎｉｏｎフラグメント野生型のポリヌクレオチド配列の例であり、配列番号３４は、ＣＨＩＫＶ  ＬａＲｅｕｎｉｏｎフラグメント野生型のポリペプチド配列の例であり、配列番号３５は、ＣＨＩＫＶ  ＬａＲｅｕｎｉｏｎフラグメント突然変異体のポリヌクレオチド配列の例である。