【手続補正書】
【提出日】令和1年11月22日(2019.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルスの複製方法であって、
（１）遺伝子改変を欠くアイソジェニック細胞と比較した場合、細胞における抗ウイルス遺伝子の発現を減少させる遺伝子改変を有する細胞集合を取得し、並びに／又は、
（２）インビトロでウイルスを細胞に接種し、そして
（３）細胞を所定の期間培養してウイルスを複製させ、ここで当該細胞が、アイソジェニック細胞の集合よりも多くのウイルスを産生することができる、前記方法。
【請求項２】
前記遺伝子改変が、細胞のゲノム内であるか及び／又はプログラム可能なヌクレアーゼによって導入された、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヌクレアーゼが、ＲＮＡ誘導操作ヌクレアーゼ（ＲＧＥＮ）、転写活性化因子様ヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ヌクレアーゼが、ＲＮＡ誘導操作ヌクレアーゼ（ＲＧＥＮ）である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ヌクレアーゼが、抗ウイルス遺伝子又はその制御領域に、欠失、置換、又は挿入を導入する、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項６】
前記遺伝子改変が、前記細胞における抗ウイルス遺伝子の前記発現を減少させるポリヌクレオチドをコードする導入遺伝子である、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ポリヌクレオチドが、アンチセンスポリヌクレオチド、センスポリヌクレオチド、マイクロRNA、前記抗ウイルス遺伝子によりコードされるタンパク質に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、二本鎖ＲＮＡ分子、又はそれに由来するプロセッシングされたＲＮＡ分子である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ウイルス複製方法であって、当該方法が、以下の：
（１）細胞集合を得ること、
（２）化合物を欠くアイソジェニック細胞と比較した場合、抗ウイルス遺伝子の発現を減少させるか、及び／又は細胞における抗ウイルスタンパク質活性のレベルを減少させる外因性化合物を細胞に投与すること、
（３）細胞にインビトロでウイルスを播種すること、並びに、
（４）所定の時間、細胞をインキュベートして、ウイルスを複製すること、
を含み、ここで当該細胞は、アイソジェニック細胞の集合よりも多くのウイルスを産生することができる、前記方法。
【請求項９】
前記外因性化合物が、炭素系小分子、タンパク質結合剤、プログラム可能なヌクレアーゼ、ポリヌクレオチド、又はこれらのうち２つ以上の組合せである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記タンパク質結合剤又は前記ポリヌクレオチドが、前記細胞へ投与される導入遺伝子から発現される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記導入遺伝子が、前記細胞において培養されるウイルス中に存在する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗ウイルス遺伝子が、I型、II型、又はIII型インターフェロン経路である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗ウイルス遺伝子及び／又はタンパク質が、以下の：
ＩＦＮＡＲ１、ＩＬ−１ＲＡ、ＤＤＩ２、ＨＳＢＰ１、ＧＮＡＺ、ＮＰＲ２、ＣＮＯＴ４、ＭＤＡ５、ＩＦＮα、ＩＬ−６、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮλ、ＵＢＥ１ＤＣ１、ＣＤＸ２、ＬＯＣ１００８５９３３９、ＩＬ２８ＲＡ、ＺＦＰＭ２、ＴＲＩＭ５０、ＤＮＡＳＥＩＬ２、ＰＨＦ２１Ａ、ＧＡＰＤＨ、ＢＡＣＥ２、ＰＣＧＦ５、ＣＡＰＮ１３、ＵＢＡ５、ＮＰＲ２、ＩＦＩＨ１、ＬＡＭＰ１、ＥＦＲ３Ａ、ＡＲＲＤＣ３、ＡＢＩ１、ＳＣＡＦ４、ＧＡＤＬ１、ＺＫＳＣＡＮ７、ＰＬＶＡＰ、ＲＰＵＳＤ１、ＣＹＹＲ１、ＵＰＦ３Ａ、ＡＳＡＰ１、ＮＸＦ１、ＴＯＰ１ＭＴ、ＲＡＬＧＡＰＢ、ＳＵＣＬＡ２、ＧＯＲＡＳＰ２、ＮＳＵＮ６、ＣＥＬＦ１、ＡＮＧＰＴＬ７、ＳＬＣ２６Ａ６、ＷＢＳＣＲ２７、ＳＩＬ１、ＨＴＴ、ＭＹＯＣ、ＴＭ９ＳＦ２，ＣＥＰ２５０、ＦＡＭ１８８Ａ、ＢＣＡＲ３、ＧＯＬＰＨ３Ｌ、ＨＮ１、ＡＤＣＹ７、ＡＫＡＰ１０、ＡＬＸ１、ＣＢＬＮ４、ＣＲＫ、ＣＸＯＲＦ５６、ＤＤＸ１０、ＥＩＦ２Ｓ３、ＥＳＦ１、ＧＢＦ１、ＧＣＯＭ１、ＧＴＰＢＰ４、ＨＯＸＢ９、ＩＦＴ４３、ＩＭＰ４、ＩＳＹ１、ＫＩＡＡ０５８６、ＫＰＮＡ３、ＬＲＲＩＱ１、ＬＵＣ７Ｌ、ＭＥＣＲ、ＭＲＰＬ１２、ＰＯＬＲ３Ｅ、ＰＷＰ２、ＲＰＬ７Ａ、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＳＬＣ４７Ａ２、ＳＭＹＤ２、ＳＴＡＢ１、ＴＴＫ、ＷＮＴ３、ＸＰＯ１、ＡＨＨＲ、ＺＮＦ３３４、ＳＳＲ４、ＫＬＲＣ１、ＳＩＸ５、ＴＣＬ１Ｂ、ＺＮＦ２１１、ＭＡＧＥＬ２、ＳＢＮ０１、ＯＲ１Ｄ５、ＳＬＣ１７Ａ９、ＺＮＦ６０７、ＧＣＥＴ２、ＴＭＥＭ２２３、ＺＮＦ１４６、ＮＬＲＰ１３、ＲＬＮ２、ＮＣＲ２、ＯＲ４Ｂ１、ＧＬＵＤ２、ＩＦＮＡＲ２、ＩＦＮＧＲ１、ＩＮＦＧＲ２、ＩＬ−１０Ｒ２、ＩＦＮκ、ＩＦＮΩ、ＩＬ−１ＲＢ及びＨＴＲＡ４からなる群のうちの１、２、３、４、又はそれ以上から選ばれる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞は、
１）ニワトリ胚性線維芽細胞（ＣＥＦ）由来の初代細胞由来であり；
２）ニワトリ組織由来の初代細胞由来であり；
３）ニワトリ由来の不死化細胞由来であり；
４）胚性由来幹細胞株ＥＢ１４由来であり；
５）胚性由来幹細胞株ＥＢ６６由来であり；
６）不死化ひよこ胚細胞株ＰＢＳ−１由来であり；
７）ニワトリ線維化細胞株ＤＦ−１由来であり；
８）マジン―ダービー（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ）イヌ腎臓細胞；
９）アフリカミドリザル腎臓由来Ｖｅｒｏ細胞；  
１０）ヒト網膜由来ＰＥＲ．Ｃ６細胞；又は
１１）ＭＲＣ−５二倍体細胞株由来である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ウイルスが、オルトミクソウイルス科、ヘルペスウイルス科、パラミクソウイルス科、フラビウイルス科、又はコロナウイルス科であるか、又は感染性ファブリーキウス嚢病ウイルスである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記オルトミクソウイルス科ウイルスが、以下の：
i) 動物ウイルス
ii)インフルエンザAウイルス、インフルエンザBウイルス、及びインフルエンザCウイルスから選ばれる、
iii)インフルエンザＡウイルスである、及び
iv)Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ１Ｎ３、Ｈ１Ｎ４、Ｈ１Ｎ５、Ｈ１Ｎ６、Ｈ１Ｎ７、Ｈ１Ｎ９、Ｈ２Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ２Ｎ３、Ｈ２Ｎ４、Ｈ２Ｎ５、Ｈ２Ｎ７、Ｈ２Ｎ８、Ｈ２Ｎ９、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ３、Ｈ３Ｎ４、Ｈ３Ｎ５、Ｈ３Ｎ６、Ｈ３Ｎ８、Ｈ４Ｎ１、Ｈ４Ｎ２、Ｈ４Ｎ３、Ｈ４Ｎ４、Ｈ４Ｎ５、Ｈ４Ｎ６、Ｈ４Ｎ８、Ｈ４Ｎ９、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ３、Ｈ５Ｎ６、Ｈ５Ｎ７、Ｈ５Ｎ８、Ｈ５Ｎ９、Ｈ６Ｎ１、Ｈ６Ｎ２、Ｈ６Ｎ３、Ｈ６Ｎ４、Ｈ６Ｎ５、Ｈ６Ｎ６、Ｈ６Ｎ７、Ｈ６Ｎ８、Ｈ６Ｎ９、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ４、Ｈ７Ｎ５、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ８、Ｈ７Ｎ９、Ｈ９Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ９Ｎ３、Ｈ９Ｎ５、Ｈ９Ｎ６、Ｈ９Ｎ７、Ｈ９Ｎ８、Ｈ１０Ｎ１、Ｈ１０Ｎ３、Ｈ１０Ｎ４、Ｈ１０Ｎ６、Ｈ１０Ｎ７、Ｈ１０Ｎ８、Ｈ１０Ｎ９、Ｈ１１Ｎ２、Ｈ１１Ｎ３、Ｈ１１Ｎ６、Ｈ１１Ｎ９、Ｈ１２Ｎ１、Ｈ１２Ｎ４、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１２Ｎ９、Ｈ１３Ｎ２、Ｈ１３Ｎ６、Ｈ１３Ｎ８、Ｈ１３Ｎ９、Ｈ１４Ｎ５、Ｈ１５Ｎ２、Ｈ１５Ｎ８、Ｈ１５Ｎ９  及びＨ１６Ｎ３から選ばれる、
のうちの１以上である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法を用いて産生されるウイルス。
【請求項１８】
ワクチン組成物を提供する方法であって、
（１）請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法を用いてウイルスを複製すること、
（２）細胞から複製されたウイルス、又はその粒子を回収すること、及び、
（３）回収されたウイルスからワクチン組成物を調製すること、
を含む、前記方法。
【請求項１９】
遺伝子改変を欠くアイソジェニック細胞と比較した場合、細胞において抗ウイルス遺伝子の発現を減少させる、プログラム可能なヌクレアーゼにより導入された遺伝子改変を含むインビトロでの細胞集合であって、当該細胞が、アイソジェニック細胞の集合より多くのウイルスを産生することができる、前記細胞集合。
【請求項２０】
請求項１９に記載の細胞集合の製造方法であって、以下の：
（１）遺伝子改変を１又は複数の細胞に導入すること、
（２）工程１）から産生された細胞を、遺伝子改変を欠くアイソジェニック細胞よりも多くのウイルスを産生する能力についてスクリーニングし、
（３）遺伝子改変を欠くアイソジェニック細胞よりも多くのウイルスを産生する遺伝子改変を有する１又は複数の細胞を選択し、そして
（４）場合により選択された細胞をクローン増幅すること
を含む、前記方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法により産生される細胞集合。
【請求項２２】
化合物を欠くアイソジェニック細胞と比較した場合に、細胞において抗ウイルス遺伝子の発現を低下させ、及び／又は抗ウイルスタンパク質活性のレベルを低下させる外因性化合物を含む、インビトロにおける細胞集合であって、ここで当該細胞が、アイソジェニック細胞の集合よりも多くのウイルスを産生することができ、そしてここで当該ウイルスがオルソミクソウイルス科である、前記細胞集合。