(57)【要約】本発明は、「プロアントシアニジン」又は「プロアントシアニジンを含有するクランベリー抽出物」を有効成分とする、リパーゼ阻害剤、細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤、及び、これらを含む飲食品、医薬品または化粧品を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロアントシアニジンを有効成分とする、リパーゼ阻害剤。
【請求項２】
プロアントシアニジンが、プロアントシアニジン５量体〜９量体である請求項１記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項３】
プロアントシアニジンが、プロアントシアニジン３量体〜７量体である請求項１記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項４】
プロアントシアニジンを含有するクランベリー抽出物を有効成分とする、リパーゼ阻害剤。
【請求項５】
プロアントシアニジンが、プロアントシアニジン５量体〜９量体である請求項４記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項６】
プロアントシアニジンが、プロアントシアニジン３量体〜７量体である請求項４記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項７】
リパーゼがＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ由来である、請求項１〜６の何れかに記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のリパーゼ阻害剤を含有する、飲食品、医薬品または化粧品。
【請求項９】
プロアントシアニジンを有効成分とする、細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤。
【請求項１０】
プロアントシアニジンが、プロアントシアニジン５量体〜９量体である請求項９記載の皮膚疾患の予防・治療剤。
【請求項１１】
プロアントシアニジンが、プロアントシアニジン３量体〜７量体である請求項９記載の皮膚疾患の予防・治療剤。
【請求項１２】
プロアントシアニジンを含有するクランベリー抽出物を有効成分とする、細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤。
【請求項１３】
プロアントシアニジンが、プロアントシアニジン５量体〜９量体である請求項１２記載の皮膚疾患の予防・治療剤。
【請求項１４】
プロアントシアニジンが、プロアントシアニジン３量体〜７量体である請求項１２記載の皮膚疾患の予防・治療剤。
【請求項１５】
細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患がニキビ、吹出物、おでき、面疔、ふけ症、脇臭である、請求項９〜１４の何れかに記載の予防・治療剤。
【請求項１６】
請求項９〜１５のいずれか１項に記載の予防・治療剤を含有する、飲食品、医薬品または化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、主としてリパーゼ阻害剤及び細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】  細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患として、例えば、皮膚に存在する微生物プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ，以下、Ｐ．ａｃｎｅｓと記載する）が産生するリパーゼに起因する炎症性のニキビ、吹出物やおでき、面疔などの炎症性湿疹や、皮膚常在菌のリパーゼ活性の亢進が原因となるふけ症、脇臭等の体臭の発生などが挙げられる。【０００３】  ニキビの原因は、Ｐ．ａｃｎｅｓが産生するリパーゼによって脂肪が分解される結果、分離した脂肪酸による炎症の惹起やＰ．ａｃｎｅｓ自身の増殖促進効果によってさらに炎症が増悪するためと考えられている（特許文献１参照）。また、脂肪酸が酸化された過酸化脂肪酸の働きにより、さらにニキビが悪化すると考えられている。
従来より、ニキビの予防・治療のために植物抽出物が有効であることは公知であり、例えばコケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｖｉｔｉｓ−ｉｄａｅａ  Ｌ．）抽出物及びその抽出分画物より選択した１種又は２種以上を含有してなる微生物性リパーゼ阻害剤（特許文献２参照）、プロアントシアニジンを含有するニキビ予防および治療用皮膚外用剤（特許文献３参照）が知られている。
【特許文献１】特開２００４−２４４３７９号公報
【特許文献２】特開２００２−９７１４７号公報
【特許文献３】特開２００４−１１５４６６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】  本発明は、新規なリパーゼ阻害剤及び細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】  本発明者らは、クランベリー抽出物がリパーゼ阻害剤及び細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤として有用であることを見出した。また本発明者らはクランベリー抽出物中の有効成分を分画し、それがプロアントシアニジンであることを確認し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、以下に関する。
１．プロアントシアニジンを有効成分とする、リパーゼ阻害剤。
２．プロアントシアニジンを含有するクランベリー抽出物を有効成分とする、リパーゼ阻害剤。
３．リパーゼがＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ由来である、１．または２．記載のリパーゼ阻害剤。
４．上記１．〜３．のいずれか１項に記載のリパーゼ阻害剤を含有する、飲食品、医薬品または化粧品。
５．プロアントシアニジンを有効成分とする、細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤。
６．プロアントシアニジンを含有するクランベリー抽出物を有効成分とする、細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤。
７．細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患がニキビ、吹出物、おでき、面疔、ふけ症、脇臭である、上記５．または６．記載の予防・治療剤。
８．上記５．〜７．のいずれか１項に記載の予防・治療剤を含有する、飲食品、医薬品または化粧品。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】１．プロアントシアニジンを有効成分とするリパーゼ阻害剤：
本発明は、プロアントシアニジンを有効成分とする、リパーゼ阻害剤である。リパーゼとしては、細菌性リパーゼ、具体的にはＰ．ａｃｎｅｓなどの皮膚常在菌を由来とするものが挙げられる。
プロアントシアニジンとは、フラバン−３−オールまたはフラバン−３，４−ジオールを構成単位として、４位−６位又は４位−８位で縮合もしくは重合により結合した化合物群をいう。【０００７】  なお、本発明のプロアントシアニジンには、構成単位の３量体、４量体さらに１０量体以上からなる高分子のプロシアニジン、プロデルフィニジン、プロペラルゴニジン等のプロアントシアニジン、およびそれらの立体異性体等も含まれる。
また本発明のプロアントシアニジンには、構成単位間の結合の一つ以上が、４位−６位又は４位−８位の炭素−炭素結合に加えて２位−７位水酸基の炭素−酸素結合（エーテル結合）を有する、すなわち、構成単位が互いに２つの結合（Ａ型結合）を介して結合している構造を有するプロアントシアニジン、いわゆる、Ａ型プロアントシアニジンも含まれる。Ａ型プロアントシアニジンは、クランベリーや落花生などに多く含まれている。【０００８】  本発明においては、これらのプロアントシアニジンの中でも、リパーゼ阻害剤としての効果の点から、プロアントシアニジン５量体〜９量体の混合物、又はプロアントシアニジン３量体〜７量体の混合物等の多量体を使用することが特に好ましい。
本発明のプロアントシアニジンの一例として、Ａ型プロアントシアニジン３量体を次式に示す。
2006068212.tif 000002
【０００９】  本発明のプロアントシアニジンは、単離精製された純品であってもよく、また、プロアントシアニジンを含有する植物抽出物であってもよい。植物抽出物は、ブドウ、カキ、リンゴ、マツ、落花生、くり、アズキ、クランベリー等のプロアントシアニジンを含有する植物体を、水や有機溶媒で抽出することにより得られる。
植物抽出物を更に減圧留去、スプレードライ、あるいは凍結乾燥等に供することにより溶媒を除去し、プロアントシアニジン含量を高めることができる。
プロアントシアニジンを有効成分とするリパーゼ阻害剤は、飲食品、医薬品または化粧品に添加して、経口あるいは非経口的に使用できる。プロアントシアニジンは、重量として、例えば、１ｍｇ〜１０ｇ／成人／日であることが好ましく、更に好ましくは１０ｍｇ〜１ｇ／成人／日となるように添加すればよい。【００１０】２．プロアントシアニジンを含有するクランベリー抽出物を有効成分とする、リパーゼ阻害剤：
また本発明は、プロアントシアニジンを含有するクランベリー抽出物を有効成分とする、リパーゼ阻害剤である。リパーゼとしては、細菌性リパーゼ、具体的にはＰ．ａｃｎｅｓなどの皮膚常在菌を由来とするものが挙げられる。
クランベリーとは、ヨーロッパ、北アメリカ両大陸を原産とする小果樹であり、本発明では、その原種及び栽培品種が使用できる。栽培品種としては、アメリカのウィンスコンシン州の原産でツツジ科スノキ属マクロカルポン種（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ）又はオキソコカス種（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｏｘｙｃｏｃｃｕｓ）の樹高約２０ｃｍ程度の果樹で、品種名はクラウリー（Ｃｒｏｗｌｅｙ）、スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｓ）、ベンレアー（Ｂｅｎｌｅａｒ）、ピルグリム（Ｐｉｌｇｒｉｍ）、アーリーブラック（Ｅａｒｌｙ  ｂｌａｃｋ）、バークマン（Ｂｅｒｇｍａｎ）などがある。【００１１】  「プロアントシアニジンを含有するクランベリー抽出物」（以下単に「クランベリー抽出物」という）とは、リパーゼ阻害活性を有するクランベリー抽出物であり、且つプロアントシアニジンを含有する組成物をいう。ここで、プロアントシアニジンとしては、上記のとおり、構成単位の３量体、４量体さらに１０量体以上からなる高分子のプロシアニジン、プロデルフィニジン、プロペラルゴニジン等のプロアントシアニジン、およびそれらの立体異性体が挙げられる。
該抽出物は、プロアントシアニジンを含有する条件で、クランベリーの植物体を抽出することにより得られる。クランベリーの種子、果実、果肉、果皮類などの組織が抽出原料として利用可能である。また、クランベリー果汁または果汁濃縮物も、本発明のクランベリー抽出物に含まれる。
上記の抽出原料を、水又は有機溶媒等を用いて適当な条件下で抽出することにより、リパーゼ阻害活性を有する組成物が得られる。有機溶媒とは例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等の水溶性アルコール類、アセトン、エチルメチルケトン、アセトニトリル、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、酢酸等である。水溶性有機溶媒は単独で用いてもよいが、任意の比で水と混合して用いてもよい。【００１２】  上記で得られたクランベリー抽出物を本発明の有効成分として使用することもできるが、更に、抽出物の活性を更に高めるため、セファデックス、ポリアミド、シリカゲル、ＯＤＳ等を用いたカラムクロマトグラフ、セルロース膜等を用いた膜分離、酢酸エチル−水等を用いた液液分離、酵母等の微生物の添加による不純物の分解など精製・分離操作を行ってもよい。実施例に示す通り、クランベリー抽出物中のプロアントシアニジンがリパーゼ阻害活性を有しているので、精製・分離操作に際しては、プロアントシアニジン含量を高める条件を採用することが好ましい。
クランベリー果汁の濃縮を行う場合は、液膜流下式、ＴＡＳＴＥ式、限外濾過法、逆浸透膜法、凍結乾燥法、減圧下濃縮する方法などいずれの方法でも濃縮することができる。
プロアントシアニジンを含有するクランベリー抽出物を有効成分とするリパーゼ阻害剤は、飲食品、医薬品または化粧品に添加し、経口あるいは非経口的に使用できる。クランベリー抽出物は、抽出物の乾燥重量として例えば１０ｍｇ〜１００ｇ／成人／日、好ましくは１００ｍｇ〜１０ｇ／成人／日となるように添加すればよい。【００１３】３．細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤
また本発明は、プロアントシアニジン又はクランベリー抽出物を有効成分とする、細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤である。プロアントシアニジン及びクランベリー抽出物は、リパーゼ阻害活性を通じて、細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防または治療効果を発揮することができる。細菌性リパーゼとは、例えば、Ｐ．ａｃｎｅｓなどの皮膚常在菌を由来とするリパーゼである。皮膚疾患とは、例えば、Ｐ．ａｃｎｅｓなどの皮膚常在菌由来のリパーゼに起因するニキビ、吹出物、おでき、面疔、ふけ症、脇臭等の体臭の発生などである。
プロアントシアニジンを皮膚疾患の予防・治療剤の有効成分として使用する場合、重量として例えば１ｍｇ〜１０ｇ／成人／日、好ましくは１０ｍｇ〜１ｇ／成人／日程度の量を、服用者が経口あるいは非経口的に摂取すればよい。また、クランベリー抽出物を皮膚疾患の予防・治療剤として使用する場合は、抽出物の乾燥重量として例えば１０ｍｇ〜１００ｇ／成人／日、好ましくは１００ｍｇ〜１０ｇ／成人／日程度の量を、服用者が経口あるいは非経口的に摂取すればよい。上記の摂取量は、摂取者の体調、性別、年齢、摂取の目的（予防、治療または症状軽減等）に応じて適宜設定すればよい。【００１４】  また本発明は、上記した皮膚疾患の予防・治療剤を含有する、飲食品、医薬品または化粧品である。本発明の剤を飲食品として使用する場合、プロアントシアニジン又はクランベリー抽出物を、適当な飲食品、例えば飲料、菓子、調味料、惣菜に添加すればよい。また、本発明の剤は、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、シロップ剤またはドリンク剤タイプの機能性食品として使用することもできる。
本発明の剤を医薬品として使用する場合、プロアントシアニジン又はクランベリー抽出物を他の成分とともに経口剤、皮膚外用剤または注射剤などとして製剤化することができる。経口剤としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、シロップ剤、ドリンク剤等が、非経口剤としては無菌溶液剤、懸濁液剤等の注射剤、軟膏剤、クリーム、水剤等の外用剤等が挙げられる。製剤化において使用される他の成分とは例えば、賦形剤、統合剤、潤滑剤、膨化剤、甘味料、被覆剤、香料、防腐剤、酸化防止剤、緩衝剤等である。また、カプセル剤の場合は、上記の材料に加えて油脂のような液体担体を含有させることもできる。【００１５】  本発明の剤を化粧品として使用する場合は、プロアントシアニジン又はクランベリー抽出物を、通常使用される基材とともに化粧品として調製すればよい。その使用法としては、皮膚に塗布することが好適である。
【実施例】
【００１６】  以下、実施例により、本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。実施例ではまず、クランベリー抽出物を試料として、細菌性リパーゼ阻害活性及び皮膚疾患（ニキビ）に対する治療効果を確認した。次いで、クランベリー抽出物中の有効成分を分画し、それがプロアントシアニジンであることを確認した。尚、実施例中の数値の単位は、特に断りのない限り重量％である。【００１７】実施例１
〔クランベリー抽出物のリパーゼ阻害活性評価試験〕
以下の方法により、クランベリー抽出物の、細菌性リパーゼ阻害活性を評価した。
（１）細菌性リパーゼの調製
白金耳にて掻き取ったヒト皮脂を煮沸脱気した後冷却した生理食塩水１０ｍＬに分散し、うち１ｍＬを嫌気性菌用ＧＡＭ寒天培地（ニッスイ）に塗布した。
塗布後、３２℃、４８時間培養してＰ．ａｃｎｅｓの単一コロニーを得た。得られたコロニーを、嫌気性菌用ＧＡＭ液体培地（ニッスイ）にて３２℃、４８時間培養した。菌体を遠心回収した後に５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）にて２回分散洗浄し、同緩衝液中にて氷冷下において超音波破砕してＰ．ａｃｎｅｓ由来のリパーゼを含む粗酵素液を得た。【００１８】（２）クランベリー抽出物の調製
スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｓ）種を主としたクランベリーを用いて以下の抽出物を調製し、試験試料とした。
ａ）クランベリー果汁濃縮液
新鮮な生のクランベリー果実１０００ｇを、搾汁機にて搾汁した後、減圧下に濃縮した。濃縮液として、１００ｇを得た。このクランベリー果汁濃縮液の固形分は５０％、総ポリフェノール含量１．３％、総プロアントシアニジン含量０．５％、総アントシアニン含量０．２％であった。
ｂ）クランベリー抽出濃縮液
新鮮なクランベリー果実の搾汁残渣２００ｇに熱水２リットルを加えて２時間９０℃に加温し、固液分離して、抽出液を得た。この抽出液を、減圧下に濃縮し、濃縮液８ｇを得た。このクランベリー果汁濃縮液の固形分は５０％、総ポリフェノール含量４．８％、総プロアントシアニジン含量２．３％、総アントシアニン含量０．６％であった。
ｃ）高純度クランベリー抽出物
クランベリー果実の果汁濃縮液（固形分５０％、総ポリフェノール含量１．３％）５０ｇを、セパビーズ（２００ｇ）を用いたカラムクロマトグラフィーにて精製した。カラムクロマトグラフィーは、果汁濃縮液をイオン交換水２５０ｍｌで希釈後、カラムに吸着させ、イオン交換水で洗浄、ついで７０％エタノール水溶液で溶出した。ポリフェノールを含む画分を集めた後、減圧下濃縮し、ついで凍結乾燥して、粉末１．６ｇを得た。この高純度クランベリー抽出物の総ポリフェノール含量は３４．２％、総プロアントシアニジン含量１２．６％、総アントシアニン含量２．４％であった。【００１９】（３）リパーゼ阻害活性試験
上記（１）のリパーゼ含有粗酵素液に、試験試料として（２）で調製したクランベリー抽出物を各種濃度で加え、クランベリー抽出物のリパーゼ阻害活性を評価した。リパーゼ活性は、４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ−ｏｌｅａｔｅ（４−ＭＵ−ｏｌｅａｔｅ；Ｓｉｇｍａ社）を用いた蛍光測定法により測定した。【００２０】  まず、４−ＭＵ−ｏｌｅａｔｅ、粗酵素液及び試験試料を共存させ、遊離した４−ｍｅｔｈｙｌ−ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４−ＭＵ）の蛍光強度を測定した（Ｅｘ，３５５ｎｍ：Ｅｍ，４６０ｎｍ）。遊離した４−ＭＵ量は４−ＭＵで作製した検量線から算出し、１分間あたりの遊離４−ＭＵ量としてリパーゼ活性を評価した。それぞれのリパーゼ活性はＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定をもちいて有意差検定を行い、コントロールとの差を評価した。結果を表１に示す。【００２１】
【表１】
2006068212.tif 000003
いずれの試験試料も、濃度依存的にＰ．ａｃｎｅｓ由来リパーゼ阻害活性を示した。実施例１によりクランベリー抽出物がリパーゼ阻害剤として有用であることが示された。【００２２】実施例２
〔皮膚疾患（ニキビ）に対する評価試験〕
以下の方法により、クランベリー抽出物を含む試験飲料の、皮膚疾患（ニキビ）に対する効果を評価した。
（１）試験飲料
スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｓ）種を主としたクランベリー果汁に、果糖、酸味料などを配合し、以下組成の飲料（１本１２５ｍｌ）を調製した。
組成：エネルギー  ６８ｋｃａｌ、たんぱく質  ０ｇ、脂質  ０ｇ、炭水化物  １７ｇ、ナトリウム  ８６ｍｇ、ビタミンＣ  ３７．５ｍｇ、クランベリー由来の化合物（キナ酸  ８００ｍｇ、総ポリフェノール含量  ２１１ｍｇ、総プロアントシアニジン含量  ４１ｍｇ、総アントシアニン含量  ９ｍｇ）。【００２３】（２）試験対象者
試験対象者は、肌荒れや吹き出物、ニキビなどの自覚を持つ３０歳代の健常成人女性とした。なお、試験実施に際しては、ヘルシンキ宣言の精神に則り、事前に試験の趣旨および内容を十分に説明し書面による同意を得た。
試験対象者を、年齢や体格、肌質、体質などの属性を考慮し事前の肌測定後、クランベリー果汁濃縮液飲料を摂取する試験群（女性１２名、３５．５±０．６歳）または特に飲料の摂取を指定しない季節変動計測のための対照群（女性１２名、３５．１±０．５歳）の２群に、事前の肌状態ができるだけ均等になるように割り付けた。【００２４】（３）試験スケジュールおよび摂取方法
試験群には試験飲料を毎日朝・夕１本ずつ、１日計２本摂取させた。試験期間は４週間で、各試験項目の測定は、摂取前、摂取２週間後、摂取４週間後の３回行った。試験期間中の生活は、試験飲料の摂取以外は、特に制限事項は設けなかった。【００２５】（４）有効性の評価
有効性の評価は、美容専門家（美容に関する専門知識を有する人）による肌状態の診断によって実施した。
ａ）美容専門家による肌診断
美容専門家による肌診断は、視診・触診を実施し、肌状態を診断した。視診による診断項目は、「ニキビ・吹き出物」、「透明感」、「シミ・ソバカス」、「赤み」、「きめのよさ」、の５項目、触診による診断項目は、「しっとりさ」、「なめらかさ」、「総合的肌状態」の３項目とした。診断項目の判定基準は、非常に悪い（１点）、かなり悪い（２点）、やや悪い（３点）、どちらでもない（４点）、やや良い（５点）、かなり良い（６点）、非常に良い（７点）の７段階で、スコアに置き換えて評価した。なお、美容専門家による肌診断でにおいて、視診・触診を行う専門家は、試験対象者がどの群に属しているか分からないように配慮した。結果を表２に示す。【００２６】
【表２】
2006068212.tif 000004
試験群において、ニキビ・吹き出物（視診）および赤み（視診）において有意な改善が観察された。また、しっとり感、滑らかさなど総合的な肌状態の改善が認められた。クランベリー抽出物がニキビに対する治療効果を有することが示された。【００２７】実施例３
〔Ｐ．ａｃｎｅｓの生育阻害試験〕
実施例１で調製したクランベリー抽出物を試料とし、以下の方法によりＰ．ａｃｎｅｓの生育阻害試験を行った。
実施例１で得たＰ．ａｃｎｅｓの単一コロニーを嫌気性菌用ＧＡＭ液体培地１０ｍＬに植菌し、３２℃で４８時間静置培養した菌液を、煮沸脱気した生理食塩水にて１０倍希釈し、うち１ｍＬを１０ｃｍ２シャーレに固化した嫌気性菌用ＧＡＭ寒天培地に対しコンラージ棒にて均一塗布した。直径１８ｍｍの滅菌濾紙に対し、所定の濃度の試料水溶液を浸透させ、菌体を塗布した寒天培地の中央に静置した。３２℃で４８時間培養後、菌生育が阻害されて形成される円の直径を比較することにより、静菌作用を評価した。なお、陽性対照品として塩化ベンザルコニウムを用いた。結果を表３に示す。【００２８】
【表３】
2006068212.tif 000005
その結果、いずれの試験試料（クランベリー果汁濃縮液、クランベリー抽出濃縮液、高純度クランベリー抽出物の各１０％および２０％水溶液）においても、Ｐ．ａｃｎｅｓに対する生育阻害は認められなかった。よって、クランベリー抽出物はＰ．ａｃｎｅｓに対する抗菌作用を有していないことが示された。
実施例２におけるクランベリー抽出物によるニキビの治療効果は、Ｐ．ａｃｎｅｓの生育阻害ではなく、Ｐ．ａｃｎｅｓのリパーゼ阻害によって発揮されたと考えられる。【００２９】実施例４
〔クランベリー抽出物中の有効成分の分画〕
上記のリパーゼ阻害活性試験系を用いてクランベリー抽出物中の有効成分を分画し、それがプロアントシアニジンであることを確認した。
実施例１記載のクランベリー果汁濃縮液４０ｇを、アンバーライトＸＡＤ７ＨＰ（５０ｍｌ）を用いたカラムクロマトグラフィーに供し、非吸着及びイオン交換水１００ｍｌで溶出した画分を、減圧下濃縮した後、凍結乾燥し、「非ポリフェノール画分」１０．０ｇの粉末を得た。該粉末中の総ポリフェノール含量は０．１％、総プロアントシアニジン含量０．０％、総アントシアニン含量０．０％であった。さらに、「非ポリフェノール画分」を溶出した後のカラムから、７０％エタノール水溶液１００ｍｌで溶出した画分を減圧下濃縮した後、凍結乾燥し、「ポリフェノール画分」０．５ｇの粉末を得た。該粉末中の総ポリフェノール含量は５９．０％、総プロアントシアニジン含量３３．１％、総アントシアニン含量７．３％であった。【００３０】  次に、上記の「ポリフェノール画分」を、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ（８１：１３０６−１３１３，２００１）に記載の方法で分画した。すなわち、「ポリフェノール画分」２ｇをセファデックスＬＨ２０（３００ｍｌ）を用いたカラムクロマトグラフィーに供し、イオン交換水、５０％エタノール水溶液、エタノール、エタノールとメタノールの１：１混合溶液、メタノール、８０％アセトン水溶液の６種類の溶液（各８００ｍｌ）で順に溶出し、それぞれの画分を減圧下濃縮した後、凍結乾燥し、以下６種の分画物を得た。【００３１】（１）イオン交換水で溶出した「ヒドロキシ桂皮酸画分」０．５１ｇ
（２）５０％エタノール水溶液で溶出した「アントシアニン画分」０．４６ｇ
（３）エタノールで溶出した「フラボノール配糖体画分」０．１２ｇ
（４）エタノールとメタノールの１：１混合溶液で溶出した「プロアントシアニジン単量体〜２量体画分」０．１５ｇ
（５）メタノールで溶出した「プロアントシアニジン３量体〜７量体画分」０．３２ｇ
（６）８０％アセトン水溶液で溶出した「プロアントシアニジン５量体〜９量体画分」０．２２ｇ
上記で調製した計８種の分画物について、実施例１記載の方法でリパーゼ阻害活性試験を実施し、各試験試料の５０％阻害濃度（ＩＣ５０値）を求めた。なお、ＩＣ５０値が小さいほど阻害活性が強いことを示す。結果を表４に示す。【００３２】
【表４】
2006068212.tif 000006
【００３３】  クランベリー果汁濃縮液の分画物のうち、「ポリフェノール画分」、特に、「プロアントシアニジン３量体〜７量体画分」および「プロアントシアニジン５量体〜９量体画分」にＰ．ａｃｎｅｓ由来リパーゼに対する強い阻害活性があることが認められた。プロアントシアニジンがリパーゼ阻害剤として有用であることが示された。【００３４】実施例５
実施例１で得たクランベリー抽出物を有効成分として、細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤を含有する飲食品、医薬品または化粧品を調整することができる。
＜錠剤タイプの内服剤または機能性食品＞
クランベリー抽出物１０ｍｇ、乳糖８０ｍｇ、トウモロコシデンプン８ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム２ｍｇ、以上を１錠分として常法により錠剤化する。この錠剤は、内服用の医薬品または機能性食品として使用できる。
＜硬質カプセルタイプ内服剤または機能性食品＞
クランベリー抽出物５０ｍｇ、バレイショデンプン６ｍｇ、軽質無水ケイ酸４ｍｇ、ステアリン酸カルシウム１ｍｇ、乳糖８０ｍｇ、以上を１錠分として含むカプセルを常法により得る。【００３５】＜皮膚外用剤＞
下記成分（５）、（６）および（７）の一部を加熱混合し、７５℃に維持した混合物を、下記成分（１）〜（４）を加熱混合し、７５℃に維持した混合物に徐々に加え、これを冷却しながら成分（７）の残部で溶解した成分（８）および（９）を加え、軟膏を得る。
（成分）（％）
（１）ステアリン酸  １８．０％（２）セタノール  ４．０％（３）ｄｌ−α−トコフェロール  ０．２％（４）フェノキシエタノール  ０．５％（５）トリエタノールアミン  ２．０％（６）グリセリン  ５．０％（７）精製水  残量（８）高純度クランベリー抽出物  １．０％（９）グリチルリチン酸ジカリウム  ０．５％【００３６】＜皮膚塗布用化粧品＞
下記成分（１）〜（６）を混合溶解した溶液と、成分（７）〜（１０）を混合溶解した溶液とを混合して均一にし、化粧水を得る。
（１）グリセリン  １０．０％（２）１，３−ブチレングリコール  ６．０％（３）高純度クランベリー抽出物  ３０．０％（４）クエン酸  ０．１％（５）クエン酸ナトリウム  ０．３％（６）精製水残量（７）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油  ０．５％（８）エチルアルコール  ８．０％（９）パラオキシ安息香酸メチル  ０．１％（１０）香料
【産業上の利用可能性】
【００３７】  本発明によれば、プロアントシアニジンを有効成分とする、クランベリー抽出物由来の新規なリパーゼ阻害剤、及びこれを有効成分とする、細菌性リパーゼに起因する皮膚疾患の予防・治療剤並びにこれを含有する飲食品、医薬品または化粧品を提供することができる。
【国際調査報告】
2006068212.tif 000007
2006068212.tif 000008
2006068212.tif 000009
2006068212.tif 000010