【手続補正書】
【提出日】令和2年5月11日(2020.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
不活性化された病原体を含む免疫原性ワクチン組成物を産生するための方法であって、前記方法が、標準的な反応条件下でＲＮＡまたはＤＮＡゲノムを有する病原体を化学的不活性化剤のみと接触させることによって保持される病原体の抗原性および／または免疫原性と比較して、病原体の抗原性および／または免疫原性の保持を増強しながら、前記化学的不活性化剤が前記病原体を非感染性にするのに十分な量で、かつそれに十分な期間にわたって、１つ以上の無機多原子オキシアニオンの存在下で、前記病原体を前記化学的不活性化剤と接触させることを含み、前記無機多原子オキシアニオンが、少なくとも５０ｍＭのレベルのリン酸塩（ＨＰＯ４２−）、少なくとも２５ｍＭのレベルの硫酸塩（ＳＯ４２−）、少なくとも０．０５ｍＭのレベルのトリメタリン酸塩（Ｐ３Ｏ９３−）、または少なくとも０．０５ｍＭのレベルの三リン酸塩（Ｐ３Ｏ１０５−）のうちの１つ以上を含む、方法。
【請求項２】
前記化学的不活性化剤が、１つ以上の化学的酸化剤、アルキル化剤、または架橋剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化学的酸化剤が、過酸化水素、ホルムアルデヒド、β−プロピオラクトン（ＢＰＬ）、バイナリーエチレンイミン（ＢＥＩ）不活性化、または遷移金属と組み合わせた過酸化水素を含むフェントン型試薬（複数可）のうちの１つ以上を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記無機多原子オキシアニオンが、少なくとも５０ｍＭのレベルのリン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、少なくとも２５ｍＭのレベルの硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）、少なくとも０．０５ｍＭのレベルのトリメタリン酸ナトリウム（Ｎａ３Ｐ３Ｏ９）、少なくとも０．０５ｍＭのレベルの三リン酸ナトリウム（Ｎａ５Ｐ３Ｏ１０）、または少なくとも１５０ｍＭのレベルの硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）のうちの１つ以上から選択される多原子オキシアニオンである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記無機多原子オキシアニオンが、少なくとも１００、少なくとも５００、少なくとも７５０ｍＭ、少なくとも１０００ｍＭ、もしくは少なくとも１５００ｍＭのレベルのリン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも５００ｍＭ、少なくとも７５０ｍＭ、少なくとも１０００ｍＭ、もしくは少なくとも１５００ｍＭのレベルの硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）、少なくとも０．１、少なくとも０．５、少なくとも１．５、少なくとも３、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも３０、もしくは少なくとも６０ｍＭのレベルのトリメタリン酸ナトリウム（Ｎａ３Ｐ３Ｏ９）、少なくとも０．１、少なくとも０．５、少なくとも１．５、少なくとも３、少なくとも１０、少なくとも１５、もしくは少なくとも３０ｍＭのレベルの三リン酸ナトリウム（Ｎａ５Ｐ３Ｏ１０）、または少なくとも２５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、もしくは少なくとも１５００ｍＭのレベルの硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）のうちの１つ以上である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
病原体特異的抗体、Ｂ細胞、もしくはＴ細胞免疫アッセイ、凝集アッセイ、または他の好適なアッセイを使用して、前記非感染性の病原体の免疫原性を確認することをさらに含み、不活性化された病原体を含む免疫原性ワクチン組成物を産生することが提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記フェントン試薬が、Ｃｕイオン、および／またはＦｅイオンから選択される少なくとも１つの遷移金属イオンと組み合わせた過酸化水素を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
異なる遷移金属イオンの混合物が、過酸化水素と組み合わせて使用される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記病原体が、ウイルス、または細菌である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記病原体が、ウイルスである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ウイルスが、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、またはＯｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科由来である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ウイルスが、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ、または科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ由来である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記ウイルスが、チクングニア熱ウイルス（ＣＨＩＫＶ、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、デング熱ウイルス血清型１〜４（ＤＥＮＶ１〜４）、および黄熱ウイルスＹＦＶ）、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）、またはインフルエンザウイルス（科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記病原体が、細菌である、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
前記細菌が、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが、Ｃ．ｃｏｌｉまたはＣ．ｊｅｊｕｎｉである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記細菌が、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ種である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記病原体が、前記不活性化試薬と接触される前に単離または精製される、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記１つ以上の無機多原子オキシアニオンの存在下で過酸化水素または前記フェントン試薬と、かつ式Ｉを有する化合物、
【化２１】
2019515046.tif 000001
（式中、Ｒ１が独立して、Ｈ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびそれらの薬学的に許容される塩と接触させることを含む、請求項３〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＸおよびＲ２がＨであり、Ｒ１がＨ（イサチンβ−チオセミカルバゾン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチンβ−チオセミカルバゾン）である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＸがＨであり、Ｒ１が−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））である、請求項２１に記載の方法。
【化２２】
2019515046.tif 000002
【請求項２３】
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記フェントン試薬と、各々が式ＩＩ〜Ｖ、
【化２３】
2019515046.tif 000003
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化２４】
2019515046.tif 000004
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンであり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化２５】
2019515046.tif 000005
（式中、Ｒ２およびＲ３が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびそれらの薬学的に許容される塩を含む塩、のうちの１つを有する１つ以上の化合物、ならびにそれらの組み合わせと接触させることを含む、請求項３〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
式（ＩＩ）のＸがＨであり、式（ＩＩ）のＲ１がＨ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）であり、式（ＩＩＩ）のＸ、Ｒ１、およびＲ２がＨ（インドール、２，３−ジオン、３−ヒドラゾン）であり、式（ＩＶ）のＲ２およびＲ３がＨ（チオセミカルバジド）であり、式（Ｖ）のＲ２およびＲ３がＨ（セミカルバジド）である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記フェントン試薬、チオセミカルバジド、および式ＶＩを有する化合物と接触させることを含み、
【化２６】
2019515046.tif 000006
式中、Ｒ１が、Ｈまたは低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物であって、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法によって産生される、免疫原性ワクチン組成物。
【請求項２９】
病原体に対する免疫応答を対象において誘発するための組成物であって、前記組成物が、請求項２８に記載の方法によって調製された不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物である、組成物。
【請求項３０】
病原体を不活性化するための方法であって、前記方法が、過酸化水素またはフェントン試薬のいずれかのみと接触させることによってもたらされる速度と比較して増大した速度で、前記過酸化水素または前記フェントン試薬が前記病原体を非感染性にするのに十分な量で、かつそれに十分な期間にわたって、１つ以上の無機多原子オキシアニオンの存在下で、ＲＮＡまたはＤＮＡゲノムを有する病原体を、前記過酸化水素、または遷移金属と組み合わせた過酸化水素を含有する前記フェントン試薬と接触させることを含み、前記無機多原子オキシアニオンが、少なくとも５０ｍＭのレベルのリン酸塩（ＨＰＯ４２−）、少なくとも２５ｍＭのレベルの硫酸塩（ＳＯ４２−）、少なくとも０．０５ｍＭのレベルのトリメタリン酸塩（Ｐ３Ｏ９３−）、または少なくとも０．０５ｍＭのレベルの三リン酸塩（Ｐ３Ｏ１０５−）のうちの１つ以上を含む、方法。
【請求項３１】
前記無機多原子オキシアニオンが、少なくとも５０ｍＭのレベルのリン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、少なくとも２５ｍＭのレベルの硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）、少なくとも０．０５ｍＭのレベルのトリメタリン酸ナトリウム（Ｎａ３Ｐ３Ｏ９）、少なくとも０．０５ｍＭのレベルの三リン酸ナトリウム（Ｎａ５Ｐ３Ｏ１０）、または少なくとも１５０ｍＭのレベルの硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）のうちの１つ以上から選択される多原子オキシアニオンである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記無機多原子オキシオキシアニオン（ｏｘｙｏｘｙａｎｉｏｎ）が、少なくとも１００、少なくとも５００、少なくとも７５０ｍＭ、少なくとも１０００ｍＭ、もしくは少なくとも１５００ｍＭのレベルのリン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも５００ｍＭ、少なくとも７５０ｍＭ、少なくとも１０００ｍＭ、もしくは少なくとも１５００ｍＭのレベルの硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）、少なくとも０．１、少なくとも０．５、少なくとも１．５、少なくとも３、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも３０、もしくは少なくとも６０ｍＭのレベルのトリメタリン酸ナトリウム（Ｎａ３Ｐ３Ｏ９）、少なくとも０．１、少なくとも０．５、少なくとも１．５、少なくとも３、少なくとも１０、少なくとも１５、もしくは少なくとも３０ｍＭのレベルの三リン酸ナトリウム（Ｎａ５Ｐ３Ｏ１０）、または少なくとも２５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、もしくは少なくとも１５００ｍＭのレベルの硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）のうちの１つ以上である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記フェントン試薬が、Ｃｕおよび／またはＦｅからなる群から選択される少なくとも１つの遷移金属イオンと組み合わせた過酸化水素を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
異なる遷移金属イオンの混合物が、過酸化水素と組み合わせて使用される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記病原体が、ウイルス、または細菌である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
前記病原体が、ウイルスである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ウイルスが、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、またはＯｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科由来である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ウイルスが、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ、または科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ由来である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記ウイルスが、チクングニア熱ウイルス（ＣＨＩＫＶ、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、デング熱ウイルス血清型１〜４および黄熱ウイルス（ＤＥＮＶ１〜４、ＹＦＶ、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）、またはインフルエンザウイルス（科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記病原体が、細菌である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記細菌が、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが、Ｃ．ｃｏｌｉまたはＣ．ｊｅｊｕｎｉである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記細菌が、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ種である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記病原体が、前記接触の前に単離または精製される、請求項３０〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、式Ｉを有する化合物、
【化２７】
2019515046.tif 000007
（式中、Ｒ１が独立して、Ｈ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびそれらの薬学的に許容される塩と接触させることをさらに含む、請求項３０〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
ＸおよびＲ２がＨであり、Ｒ１がＨ（イサチンβ−チオセミカルバゾン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチンβ−チオセミカルバゾン）である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
Ｒ１が−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記メチサゾン試薬が、各々が式ＩＩ〜Ｖ、
【化２８】
2019515046.tif 000008
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化２９】
2019515046.tif 000009
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンであり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化３０】
2019515046.tif 000010
（式中、Ｒ２およびＲ３が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびそれらの薬学的に許容される塩を含む塩、のうちの１つを有する１つ以上の化合物、ならびにそれらの組み合わせを含む、請求項３０〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
式ＩＩのＸがＨであり、式（ＩＩ）のＲ１がＨ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）であり、式（ＩＩＩ）のＸ、Ｒ１、およびＲ２がＨ（インドール、２，３−ジオン、３−ヒドラゾン）であり、式（ＩＶ）のＲ２およびＲ３がＨ（チオセミカルバジド）であり、式（Ｖ）のＲ２およびＲ３がＨ（セミカルバジド）である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記メチサゾン試薬が、チオセミカルバジドおよび式ＶＩを有する化合物を含み、
【化３１】
2019515046.tif 000011
式中、Ｒ１が、Ｈまたは低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）である、請求項５１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
フェントン型化学（ならびに、最適にメチサゾン、メチサゾン類似体、メチサゾン官能基（複数可）／下部構造（複数可）、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるメチサゾン型試薬の使用をさらに含む本明細書に記載される方法）を使用して、および特に、高レベルの無機多原子オキシアニオン（例えば、標準的なリン酸緩衝生理食塩水反応条件下で病原体を化学的不活性化剤（複数可）のみと接触させることによって保持される病原体の免疫原性と比較して、病原体の免疫原性の保持を増強するのに十分なレベル）の存在下で行われる本開示の単独酸化（例えば、過酸化水素）、および二重酸化方法は、抗原性特性を維持しながら急速な病原体不活性化、およびロバストな病原体不活性化を提供して、ワクチン接種後の免疫応答の増強をもたらす高度に効果的なワクチンを提供する。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
不活性化された病原体を含む免疫原性ワクチン組成物を産生するための方法であって、前記方法が、標準的な反応条件下で病原体を化学的不活性化剤のみと接触させることによって保持される病原体の抗原性および／または免疫原性と比較して、病原体の抗原性および／または免疫原性の保持を増強しながら、前記化学的不活性化剤が前記病原体を非感染性にするのに十分な量で、かつそれに十分な期間にわたって、１つ以上の無機多原子オキシアニオンの存在下で、前記病原体を前記化学的不活性化剤と接触させることを含む、方法。
（項目２）
前記化学的不活性化剤が、１つ以上の化学的酸化剤、アルキル化剤、または架橋剤である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記化学的酸化剤が、過酸化水素、ホルムアルデヒド、β−プロピオラクトン（ＢＰＬ）、バイナリーエチレンイミン（ＢＥＩ）不活性化、または遷移金属と組み合わせた過酸化水素を含むフェントン型試薬（複数可）のうちの１つ以上を含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記無機多原子オキシアニオンが、多原子オキシアニオンである、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記無機多原子オキシアニオンが、リン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）、トリメタリン酸ナトリウム（Ｎａ３Ｐ３Ｏ９）、三リン酸ナトリウム（Ｎａ５Ｐ３Ｏ１０）、または硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）のうちの１つ以上から選択される多原子オキシアニオンである、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記無機多原子オキシアニオンが、少なくとも１５、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも５００、少なくとも７５０ｍＭ、少なくとも１０００ｍＭ、および少なくとも１５００ｍＭのレベルのリン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、少なくとも５、少なくとも１５、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも５００ｍＭ、少なくとも７５０ｍＭ、少なくとも１０００ｍＭ、および少なくとも１５００ｍＭのレベルの硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）、少なくとも０．０５、少なくとも０．１、少なくとも０．５、少なくとも１．５、少なくとも３、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも３０、もしくは少なくとも６０ｍＭのレベルのトリメタリン酸ナトリウム（Ｎａ３Ｐ３Ｏ９）、少なくとも０．０５、少なくとも０．１、少なくとも０．５、少なくとも１．５、少なくとも３、少なくとも１０、少なくとも１５、もしくは少なくとも３０ｍＭのレベルの三リン酸ナトリウム（Ｎａ５Ｐ３Ｏ１０）、または少なくとも１０、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、および少なくとも１５００ｍＭのレベルの硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）のうちの１つ以上である、項目５に記載の方法。
（項目７）
病原体特異的抗体、Ｂ細胞、もしくはＴ細胞免疫アッセイ、凝集アッセイ、または他の好適なアッセイを使用して、前記非感染性の病原体の免疫原性を確認することをさらに含み、不活性化された病原体を含む免疫原性ワクチン組成物を産生することが提供される、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記フェントン試薬が、Ｃｕイオン、および／またはＦｅイオン、および／またはＣｓイオンから選択される少なくとも１つの遷移金属イオンと組み合わせた過酸化水素を含む、項目３に記載の方法。
（項目９）
異なる遷移金属イオンの混合物が、過酸化水素と組み合わせて使用される、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記病原体が、ＲＮＡまたはＤＮＡを含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記病原体が、ウイルス、または細菌である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記病原体が、ウイルスである、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記ウイルスが、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、またはＯｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科由来である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記ウイルスが、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ、または科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ由来である、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記ウイルスが、チクングニア熱ウイルス（ＣＨＩＫＶ、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、デング熱ウイルス血清型１〜４（ＤＥＮＶ１〜４）、および黄熱ウイルスＹＦＶ）、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）、またはインフルエンザウイルス（科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓである、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
前記病原体が、細菌である、項目１１に記載の方法。
（項目１７）
前記細菌が、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが、Ｃ．ｃｏｌｉまたはＣ．ｊｅｊｕｎｉである、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記細菌が、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種である、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ種である、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
前記病原体が、前記不活性化試薬と接触される前に単離または精製される、項目１に記載の方法。
（項目２２）
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記１つ以上の無機多原子オキシアニオンの存在下で過酸化水素または前記フェントン試薬と、かつ式Ｉを有する化合物、
【化２１】
2019515046.tif 000012
（式中、Ｒ１が独立して、Ｈ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびそれらの薬学的に許容される塩と接触させることを含む、項目３〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
ＸおよびＲ２がＨであり、Ｒ１がＨ（イサチンβ−チオセミカルバゾン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチンβ−チオセミカルバゾン）である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
ＸがＨであり、Ｒ１が−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））である、項目２３に記載の方法。
【化２２】
2019515046.tif 000013
（項目２５）
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記フェントン試薬と、各々が式ＩＩ〜Ｖ、
【化２３】
2019515046.tif 000014
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化２４】
2019515046.tif 000015
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンであり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化２５】
2019515046.tif 000016
（式中、Ｒ２およびＲ３が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびそれらの薬学的に許容される塩を含む塩、のうちの１つを有する１つ以上の化合物、ならびにそれらの組み合わせと接触させることを含む、項目３〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
式（ＩＩ）のＸがＨであり、式（ＩＩ）のＲ１がＨ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）であり、式（ＩＩＩ）のＸ、Ｒ１、およびＲ２がＨ（インドール、２，３−ジオン、３−ヒドラゾン）であり、式（ＩＶ）のＲ２およびＲ３がＨ（チオセミカルバジド）であり、式（Ｖ）のＲ２およびＲ３がＨ（セミカルバジド）である、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記フェントン試薬、チオセミカルバジド、および式ＶＩを有する化合物と接触させることを含み、
【化２６】
2019515046.tif 000017
式中、Ｒ１が、Ｈまたは低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）である、項目２５に記載の方法。
（項目２８）
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）である、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物であって、項目１〜２９のいずれか一項に記載の方法によって産生される、免疫原性ワクチン組成物。
（項目３１）
病原体に対する免疫応答を誘発する方法であって、前記方法が、
項目３０に記載の方法によって調製された不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物を得ることと、
前記免疫原性ワクチン組成物を対象に投与し、それにより、前記対象における前記病原体に対する免疫応答を誘発することと、を含む、方法。
（項目３２）
病原体を不活性化するための方法であって、前記方法が、過酸化水素またはフェントン試薬のいずれかのみと接触させることによってもたらされる速度と比較して増大した速度で、前記過酸化水素または前記フェントン試薬が前記病原体を非感染性にするのに十分な量で、かつそれに十分な期間にわたって、１つ以上の無機多原子オキシアニオンの存在下で、前記病原体を、前記過酸化水素、または遷移金属と組み合わせた過酸化水素を含有する前記フェントン試薬と接触させることを含む、方法。
（項目３３）
前記化学的不活性化剤が、１つ以上の化学的酸化剤、アルキル化剤、または架橋剤である、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記化学的酸化剤が、過酸化水素、ホルムアルデヒド、β−プロピオラクトン（ＢＰＬ）、バイナリーエチレンイミン（ＢＥＩ）不活性化、または遷移金属と組み合わせた過酸化水素を含むフェントン型試薬（複数可）のうちの１つ以上を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記無機多原子オキシアニオンが、多原子オキシアニオンである、項目３２に記載の方法。
（項目３６）
前記無機多原子オキシアニオンが、リン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）、トリメタリン酸ナトリウム（Ｎａ３Ｐ３Ｏ９）、三リン酸ナトリウム（Ｎａ５Ｐ３Ｏ１０）、または硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）のうちの１つ以上から選択される多原子オキシアニオンである、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記無機多原子オキシオキシアニオン（ｏｘｙｏｘｙａｎｉｏｎ）が、少なくとも１５、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも５００、少なくとも７５０ｍＭ、少なくとも１０００ｍＭ、および少なくとも１５００ｍＭのレベルのリン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、少なくとも５、少なくとも１５、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも５００ｍＭ、少なくとも７５０ｍＭ、少なくとも１０００ｍＭ、および少なくとも１５００ｍＭのレベルの硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）、少なくとも０．０５、少なくとも０．１、少なくとも０．５、少なくとも１．５、少なくとも３、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも３０、もしくは少なくとも６０ｍＭのレベルのトリメタリン酸ナトリウム（Ｎａ３Ｐ３Ｏ９）、少なくとも０．０５、少なくとも０．１、少なくとも０．５、少なくとも１．５、少なくとも３、少なくとも１０、少なくとも１５、もしくは少なくとも３０ｍＭのレベルの三リン酸ナトリウム（Ｎａ５Ｐ３Ｏ１０）、または少なくとも１０、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、および少なくとも１５００ｍＭのレベルの硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）のうちの１つ以上である、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記フェントン試薬が、Ｃｕ、Ｆｅ、およびＣｓからなる群から選択される少なくとも１つの遷移金属イオンと組み合わせた過酸化水素を含む、項目３２に記載の方法。
（項目３９）
異なる遷移金属イオンの混合物が、過酸化水素と組み合わせて使用される、項目３２に記載の方法。
（項目４０）
前記病原体ゲノムが、ＲＮＡまたはＤＮＡを含む、項目３２に記載の方法。
（項目４１）
前記病原体が、ウイルス、または細菌である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記病原体が、ウイルスである、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記ウイルスが、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、またはＯｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科由来である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記ウイルスが、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ、または科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ由来である、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記ウイルスが、チクングニア熱ウイルス（ＣＨＩＫＶ、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、デング熱ウイルス血清型１〜４および黄熱ウイルス（ＤＥＮＶ１〜４、ＹＦＶ、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）、またはインフルエンザウイルス（科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓである、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記病原体が、細菌である、項目４１に記載の方法。
（項目４７）
前記細菌が、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが、Ｃ．ｃｏｌｉまたはＣ．ｊｅｊｕｎｉである、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記細菌が、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種である、項目４６に記載の方法。
（項目５０）
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ種である、項目４６に記載の方法。
（項目５１）
前記病原体が、前記接触の前に単離または精製される、項目４６に記載の方法。
（項目５２）
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、式Ｉを有する化合物、
【化２７】
2019515046.tif 000018
（式中、Ｒ１が独立して、Ｈ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびそれらの薬学的に許容される塩と接触させることをさらに含む、項目３２〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
ＸおよびＲ２がＨであり、Ｒ１がＨ（イサチンβ−チオセミカルバゾン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチンβ−チオセミカルバゾン）である、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
Ｒ１が−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））である、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記メチサゾン試薬が、各々が式ＩＩ〜Ｖ、
【化２８】
2019515046.tif 000019
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化２９】
2019515046.tif 000020
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンであり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化３０】
2019515046.tif 000021
（式中、Ｒ２およびＲ３が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびそれらの薬学的に許容される塩を含む塩、のうちの１つを有する１つ以上の化合物、ならびにそれらの組み合わせを含む、項目３２〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
式ＩＩのＸがＨであり、式（ＩＩ）のＲ１がＨ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）であり、式（ＩＩＩ）のＸ、Ｒ１、およびＲ２がＨ（インドール、２，３−ジオン、３−ヒドラゾン）であり、式（ＩＶ）のＲ２およびＲ３がＨ（チオセミカルバジド）であり、式（Ｖ）のＲ２およびＲ３がＨ（セミカルバジド）である、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記メチサゾン試薬が、チオセミカルバジドおよび式ＶＩを有する化合物を含み、
【化３１】
2019515046.tif 000022
式中、Ｒ１が、Ｈまたは低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）である、項目５５に記載の方法。
（項目５８）
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）である、項目５７に記載の方法。