【手続補正書】
【提出日】令和2年10月1日(2020.10.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況の評価を補助する方法であって、
前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも一つの生物マーカーを検出する工程を含み、生物マーカーの少なくとも一つがＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である、方法。
【請求項２】
対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況の評価を補助する方法であって、
ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程と、ここで、前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、前記第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生する、
ｂ）前記サンプル中に存在する前記一又は複数の第１の複合体中のＵＣＨ−Ｌ１を検出する工程と
を含み、
当該方法が、
（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、前記生体サンプルの希釈を必要とせず；又は
（ｉｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、前記ダイナミックレンジで直線性であり；又は
（ｉｉｉ）約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、１０％未満ＣＶの精度及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される、方法。
【請求項３】
対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況の評価を補助する方法であって、
ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程と、ここで、前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーは、それぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それによって、前記第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記第１の特異的結合メンバー又は第２の特異的結合メンバーのいずれかは、検出可能な標識を含む、
ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを評価する工程と、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量が、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す、
を含み、
当該方法が、
（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、前記生体サンプルの希釈を必要とせず；又は
（ｉｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、前記ダイナミックレンジで直線性であり；又は
（ｉｉｉ）約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、１０％未満ＣＶの精度及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される、方法。
【請求項４】
対象者からの生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１を測定する方法であって、
（ａ）前記対象者からの生体サンプルを得ること；
（ｂ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、
（１）ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（２）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの第１の検出抗体−複合体を形成する、少なくとも一つの第１の検出抗体
と接触させること、及び
（ｃ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの第１の検出抗体複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて、前記生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の量若しくは濃度を求めること
を含み、
当該方法が、
（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるに用いることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、前記ダイナミックレンジで直線性であり；又は
（ｉｉ）約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、１０％未満ＣＶの精度及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される、方法。
【請求項５】
前記方法が、前記少なくとも第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも第２の特異的結合メンバーによって結合されていないエピトープに結合する少なくとも一つの第３の特異的結合メンバーをさらに含み、前記第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーの少なくとも二つが、検出可能な標識を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも一つの特異的結合メンバー、少なくとも第２の特異的結合メンバー及び少なくとも第３の特異的結合メンバーが、単一特異性抗体である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記方法が、前記捕捉抗体及び前記第１の検出抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合し、検出可能な標識を含む、少なくとも一つの第２の検出抗体をさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも一つの捕捉抗体、少なくとも一つの検出抗体及び少なくとも第２の検出抗体が、単一特異性抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーのいずれかであって、前記検出可能な標識を含まないメンバーが、固体支持体上に固定化されている、請求項３、５又は６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＵＣＨ−Ｌ１を一又は複数の他の生物マーカーとともに評価する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ＵＣＨ−Ｌ１を前記対象者のグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）状況とともに評価し、前記方法が、
前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも二つの生物マーカーを検出する工程を含み、前記生物マーカーの少なくとも二つが、ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法が、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＵＣＨ−Ｌ１をイムノアッセイ、臨床化学アッセイ又は単分子検出アッセイによって検出する、請求項１、２又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＧＦＡＰをイムノアッセイ、臨床化学アッセイ又は単分子検出アッセイによって検出する、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記方法が、対象者のＧＦＡＰ状況を評価することを含み、当該方法が、
ａ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーと接触させる工程と、ここで、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーが、それぞれ特異的にＧＦＡＰに結合し、それにより、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する、
ｂ）前記サンプル中の前記一又は複数の第２の複合体中のＧＦＡＰを検出する工程と
をさらに含み、
当該方法が、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
前記方法は、対象者のＧＦＡＰ状況を評価することをさらに含み、当該方法が、
ａ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーと接触させる工程と、ここで、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーがそれぞれ特異的にＧＦＡＰに結合することで、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生し、前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーが第２の検出可能な標識を含む、
ｂ）前記一又は複数の第２の複合体からのシグナルを評価する工程と、ここで、（ｉ）前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーからの検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーからの検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量が、サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことから、前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーからの前記検出可能な標識からの前記検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を評価することができる、
をさらに含み、
当該方法が、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる、請求項３、５、６、９又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記方法は、対象者からの生体サンプル中のＧＦＡＰを測定することをさらに含み、
（ａ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、
（１）（ｉ）ＧＦＡＰ若しくはＧＦＡＰ断片上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（ｉｉ）少なくとも一つの検出可能な標識を含み、捕捉抗体によって結合していないＧＦＡＰ上のエピトープに結合してＧＦＡＰ抗原−検出抗体複合体を形成する検出抗体と接触させる工程、及び
（ｂ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＧＦＡＰの量若しくは濃度を求める工程と
をさらに含み、当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰ及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１を求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である、請求項４、７、８又は１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記方法が、約１６ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＧＦＡＰのレベルを検出する、請求項１４、１５又は１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１５，０００ｐｇ／ｍＬ及び約１７５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを検出する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記接触を同時に行う、請求項３、４、１４、１５又は１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記接触を順次に行う、請求項３、４、１４、１５又は１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも一つの捕捉抗体が、固体支持体上に固定化されている、請求項４、８又は１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記方法を約５〜約２０分以内に行う、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記方法を約１５分以内に行う、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記生体サンプルが、全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル、血漿サンプル、組織又は生物学的液体からなる群から選択される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記方法を、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷のないことを確認するために行う、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記外傷性脳損傷が、軽度外傷性脳損傷である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＵＣＨ−Ｌ１の状況が、単一時間点でのＵＣＨ−Ｌ１のレベル又は量を測定することによって評価される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
ＵＣＨ−Ｌ１の状況が、複数の時間点でのＵＣＨ−Ｌ１のレベル又は量を測定することによって評価される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記方法を、前記対象者の臨床状態、前記対象者の臨床検査値、前記対象者の軽度、中等度若しくは重度ＴＢＩを患っているという分類、前記対象者の低若しくは高ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの表示、及び前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある事象のタイミングからなる群から選択される因子とは無関係に、対象者について行うことができる、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記方法を、２０マイクロリットル未満の体積の前記生体サンプルを用いて行う、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記生体サンプルが希釈を必要としない、請求項１、４、７、又は８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記方法が、約２０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記方法が、拡大された検出ウィンドウを提供する、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバーが、固体支持体上に固定化されている、請求項１４に記載の方法。
【請求項３６】
少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーが固体支持体に固定化されている、請求項１４に記載の方法。
【請求項３７】
前記生体サンプルが、希釈されている又は未希釈である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３８】
前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーが単一特異性抗体である、請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項３９】
当該方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、請求項１〜１３及び１６〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＧＦＡＰをイムノアッセイ又は臨床化学アッセイによって検出する、請求項１４に記載の方法。
【請求項４１】
前記方法を、単分子検出アッセイを用いて行う、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法。