【手続補正書】
【提出日】令和2年1月8日(2020.1.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種以上の外因性の多糖分解酵素を産生するように遺伝子改変された乳酸（ＬＡ）利用細菌であって、前記１種以上の外因性の多糖分解酵素がセルラーゼ、ヘミセルラーゼ、アミラーゼまたはそれらの組み合わせを含む、ＬＡ利用細菌。
【請求項２】
前記多糖分解酵素が、好熱性細菌に由来し、前記好熱性細菌が、クロストリジウム属の種（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．）、パエニバチルス属の種（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、サーモビフィダ・フスカ（Ｔｈｅｒｍｏｂｉｆｉｄａ  ｆｕｓｃａ）、バチルス属の種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、ゲオバチルス属の種（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、クロモハロバクター属の種（Ｃｈｒｏｍｏｈａｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）およびロドサーマス・マリナス（Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ  ｍａｒｉｎｕｓ）からなる群より選択される；または
前記多糖分解酵素が、中温細菌に由来し、前記中温細菌が、クレブシエラ属の種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐ．）、コーネラ属の種（Ｃｏｈｎｅｌｌａ  ｓｐ．）、ストレプトマイセス属の種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、アセチビブリオ・セルロリチカス（Ａｃｅｔｉｖｉｂｒｉｏ  ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ルミノコッカス・アルブス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ａｌｂｕｓ）、バチルス属の種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）およびラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）からなる群より選択される；または
前記多糖分解酵素が、真菌の酵素であり、前記真菌の酵素が、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、フミコーラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、フサリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、ペニシリウム・フェルタナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｆｅｌｌｕｔａｎｕｍ）およびサーモマイセス・ラヌギノス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕ）からなる群より選択される真菌に由来する、
請求項１に記載のＬＡ利用細菌。
【請求項３】
前記ＬＡ利用細菌が、プロピオニバクテリウム属の種（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、メガスフェラ属の種（Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、セレノモナス属の種（Ｓｅｌｅｎｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）およびベイロネラ属の種（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）からなる群より選択される；または
前記ＬＡ利用細菌が、プロピオニバクテリウム属の種である；または
前記プロピオニバクテリウム属の種が、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）である、
請求項１に記載のＬＡ利用細菌。
【請求項４】
セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、アミラーゼまたはそれらの組み合わせを含む複数の外因性の多糖分解酵素を産生するように遺伝子改変された乳酸（ＬＡ）利用細菌の集団であって、前記集団は、ＬＡ利用細菌の亜集団を複数含み、各亜集団は、異なる多糖分解酵素を産生するように遺伝子改変されており、
前記多糖分解酵素が、好熱性細菌に由来し、前記好熱性細菌が、クロストリジウム属の種、パエニバチルス属の種、サーモビフィダ・フスカ、バチルス属の種、ゲオバチルス属の種、クロモハロバクター属の種およびロドサーマス・マリナスからなる群より選択される；または
前記多糖分解酵素が、中温細菌に由来し、前記中温細菌が、クレブシエラ属の種、コーネラ属の種、ストレプトマイセス属の種、アセチビブリオ・セルロリチカス、ルミノコッカス・アルブス、バチルス属の種およびラクトバチルス・ファーメンタムからなる群より選択される；または
前記多糖分解酵素が、真菌の酵素であり、前記真菌の酵素が、トリコデルマ・リーゼイ、フミコーラ・インソレンス、フサリウム・オキシスポラム、アスペルギルス・オリゼ、ペニシリウム・フェルタナムおよびサーモマイセス・ラヌギノスからなる群より選択される真菌に由来する、
ＬＡ利用細菌の集団。
【請求項５】
前記ＬＡ利用細菌が、プロピオニバクテリウム属の種から選択される、または
前記プロピオニバクテリウム属の種が、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒである、
請求項４に記載のＬＡ利用細菌の集団。
【請求項６】
有機廃棄物を処理するための方法であって、
前記方法は、前記有機廃棄物を、請求項１に記載のＬＡ利用細菌と、または請求項４に記載の乳酸利用細菌の集団と、前記ＬＡ利用細菌によって乳酸が消費される条件であって前記多糖分解酵素の発現および活性に適している条件の下で接触させることを含み、
前記処理は、前記有機廃棄物からＤ−乳酸、Ｌ−乳酸またはその両方を除去し、且つ前記廃棄物中の多糖を分解して可溶性の還元糖を遊離させる、
方法。
【請求項７】
前記廃棄物からの乳酸の除去が、可溶性の還元糖への多糖の分解と同時に行われる；あるいは
前記廃棄物からの乳酸の除去が、可溶性の還元糖への多糖の分解の前に行われ、
前記多糖分解酵素が、前記ＬＡ利用細菌の好適な増殖温度よりも高い温度において好適な活性を有し、前記方法が、（ｉ）前記ＬＡ利用細菌の増殖および前記多糖分解酵素の発現に適している第１の温度において前記有機廃棄物を、前記廃棄物からＤ−乳酸、Ｌ−乳酸またはその両方を除去するのに十分な時間、前記ＬＡ利用細菌と接触させることと、（ｉｉ）前記多糖分解酵素の活性に適している第２の温度まで温度を上昇させることと、を含む、または
前記多糖分解酵素が、前記ＬＡ利用細菌の好適な増殖ｐＨよりも高い、または低い、ｐＨにおいて好適な活性を有し、前記方法が、（ｉ）前記ＬＡ利用細菌の増殖および前記多糖分解酵素の発現に適している第１のｐＨにおいて前記有機廃棄物を、前記廃棄物からＤ−乳酸、Ｌ−乳酸またはその両方を除去するのに十分な時間、前記ＬＡ利用細菌と接触させることと、（ｉｉ）前記多糖分解酵素の活性に適している第２のｐＨにｐＨを調整することと、を含む、
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記処理が、１つの容器内で実施される、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
有機廃棄物から個別の乳酸エナンチオマーを生産するための方法であって、
（ｉ）前記有機廃棄物を、請求項１に記載のＬＡ利用細菌と、または請求項４に記載のＬＡ利用細菌の集団と、前記ＬＡ利用細菌による乳酸の消費ならびに前記多糖分解酵素の発現および活性に適した条件の下で接触させることによって前記有機廃棄物を処理して、前記廃棄物中に存在するＤ−乳酸、Ｌ−乳酸またはそれらの組み合わせを除去するとともに前記廃棄物中の多糖を分解して可溶性の還元糖を遊離させることと、
（ｉｉ）前記ＬＡ利用細菌を不活性化することと、
（ｉｉｉ）Ｄ−乳酸およびＬ−乳酸のうちの一方のみを産生する乳酸生成微生物を用いて、（ｉ）で得られた可溶性の還元糖を発酵させて個別の乳酸エナンチオマーを得ることと、
（ｉｖ）発酵ブロスから前記個別の乳酸エナンチオマーを回収することと、
を含む、方法。
【請求項１０】
プロピオン酸菌による外因性の多糖分解酵素の発現および分泌のための発現ベクターであって、
プロピオン酸菌の複製タンパク質をコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列と、
少なくとも１つのプロピオン酸菌の複製開始点のヌクレオチド配列と、
セルラーゼ、ヘミセルラーゼおよびアミラーゼから選択される多糖分解酵素をコードする少なくとも１つの核酸配列に翻訳可能に融合されているプロピオン酸菌のシグナルペプチド（ＳＰ）をコードする少なくとも１つの核酸配列に機能可能に連結されている少なくとも１つのプロモーターの核酸配列を含む、少なくとも１つの発現カセットと、
を含む発現ベクター。
【請求項１１】
前記発現カセットが、配列番号３３〜４９のうちのいずれか１つによって表される核酸配列を含む、または
前記発現カセットが、配列番号３３〜４９のうちのいずれか１つによって表される核酸配列からなる、
請求項１０に記載の発現ベクター。
【請求項１２】
プロピオン酸菌の複製タンパク質をコードするヌクレオチド配列が、配列番号８４の核酸配列を含む、請求項１０に記載の発現ベクター。
【請求項１３】
前記プロモーターの核酸配列が、配列番号２７〜３２およびそれらのホモログからなる群より選択される、請求項１０に記載の発現ベクター。
【請求項１４】
前記ＳＰのアミノ酸配列が、配列番号８７〜１７９の配列からなる群より選択される、請求項１０に記載の発現ベクター。
【請求項１５】
前記多糖分解酵素の配列が、配列番号１４〜２６およびそれらのホモログからなる群より選択される、請求項１０に記載の発現ベクター。