【手続補正書】
【提出日】令和2年3月27日(2020.3.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
小型運動性幹（small mobile stem（ＳＭＳ））細胞集団を培養する方法であって、
単離されたＳＭＳ細胞集団を増殖培地中で懸濁培養することを含む方法。
【請求項２】
前記単離されたＳＭＳ細胞集団が、臍帯血、末梢血、骨髄または固形組織から単離されたものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＳＭＳ細胞集団が、フラスコ、容器、チャンバー、流路、チューブ、ベッセル、ニッチまたはバイオリアクター中で培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記フラスコ、容器、チャンバー、流路、チューブ、ベッセル、ニッチまたはバイオリアクターの表面の少なくとも一部に、エッチングが施されている、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記フラスコ、容器、チャンバー、流路、チューブ、ベッセル、ニッチまたはバイオリアクターの表面の少なくとも一部に施されているエッチングが、幾何学的形状、線状、網状、溝状、隆起状または曲線状である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記流路がマイクロ流路である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記単離されたＳＭＳ細胞集団を単離または継代することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
遺伝子産物をコードする遺伝子を、前記単離されたＳＭＳ細胞集団にトランスフェクトすることをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記遺伝子産物を単離または精製することさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記単離された懸濁状態のＳＭＳ細胞集団を接着細胞から分離することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞の培養が、培地を流動または循環させながら行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
小型運動性幹（small mobile stem（ＳＭＳ））細胞の懸濁培養物中で細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質を製造する方法であって、
単離されたＳＭＳ細胞集団を、ＥＣＭタンパク質が産生される条件下で懸濁培養することを含む方法。
【請求項１３】
前記単離されたＳＭＳ細胞集団を、ヘッジホッグ阻害剤、ＴＧＦ／ＢＭＰ活性化因子、アスコルビン酸、増殖培地中に含まれている血清、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ブチルヒドロキシアニソール、β−メルカプトエタノール、アスコルビン酸−２−リン酸エステル、デキサメタゾン、β−グリセロリン酸塩、ジメチルスルホキシド、インスリン、イソブチルメチルキサンチン、インドメタシンもしくはポリスチレンまたはこれらの組み合わせと接触させることによって、懸濁培養物中の前記単離されたＳＭＳ細胞集団における前記ＥＣＭタンパク質の産生を誘導することをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＥＣＭタンパク質を単離することをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
培養物中で細管または脈管構造を製造する方法であって、
細管または脈管構造が形成される条件下で、小型運動性幹（small mobile stem（ＳＭＳ））細胞から産生された細胞外マトリックス（ＥＣＭ）とともに内皮細胞を培養することを含む方法。
【請求項１６】
血管新生または動脈新生を促進または抑制する薬剤を添加することをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
脈管の成長の程度または脈管形成の質を測定することをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
対象における創傷の治療用または緩和用組成物であって、
小型運動性幹（small mobile stem（ＳＭＳ））細胞から得られた細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質を有効成分として含む組成物。
【請求項１９】
前記ＥＣＭタンパク質が創傷被覆材に含まれている、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記創傷被覆材が、包帯、ワイプ、ガーゼ、スポンジ、メッシュ、パッド、絆創膏または吸収材を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ＥＣＭタンパク質が、粉末、エアロゾル剤、クリーム剤、乳剤、フォーム剤、起泡性液剤、ゲル剤、ローション剤、軟膏剤、ペースト剤、塗布剤、血清製剤、液剤またはスプレー剤に製剤化されている、請求項１８に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
現在、医学研究において幹細胞やこの細胞から分化誘導された細胞の使用は大きな関心を集めており、特に、遺伝性疾患、遺伝性障害および／または遺伝性病態などの様々な要因によって損傷を受けた組織を治療するための薬剤の提供が期待されている。幹細胞は、非対称分裂能、自己複製能および様々な細胞種への分化能を有する。理論上、幹細胞は、任意の生物種の損傷細胞や損傷組織を補填することができると考えられている。このような再生プロセスは、あらゆる多細胞生物に本質的に存在するものであり、様々な程度で見られる。しかし、ヒトでは、幹細胞の再生能や修復能は器官によって大幅に異なり、心臓や脳などの生命の維持に不可欠な器官の多くは、損傷を受けても自然に治癒することはほとんどない。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
本明細書で提供される実施形態のいくつかは、細胞集団による脈管形成、血管新生または動脈新生を誘導、促進または支援する薬剤または化合物を選択する方法に関する。いくつかの実施形態において、この方法は、本明細書に記載のＳＭＳ細胞から産生された細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を提供することを含む。いくつかの実施形態において、前記方法は、脈管形成能、血管新生能または動脈新生能を有する細胞（たとえば内皮細胞など）を含む第１の細胞集団に、前記ＳＭＳ細胞から産生された前記ＥＣＭを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、前記方法は、前記ＥＣＭと接触させた第１の細胞集団を薬剤または化合物と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、前記方法は、前記薬剤または化合物と接触させた後の、前記ＥＣＭと接触させた第１の細胞集団における脈管形成、血管新生または動脈新生の質または量を、前記薬剤または化合物と接触させずに前記ＥＣＭ上で培養した好ましくは第１の細胞集団と同じ細胞種の第２の細胞集団と比較することによって、前記薬剤または化合物が第１の細胞集団において脈管形成、血管新生または動脈新生を誘導、促進または支援するかどうかを判断することを含む。いくつかの実施形態において、第２の細胞集団と比較して、第１の細胞集団における脈管形成、血管新生または動脈新生の量が多く、またはそれらの質が高い場合、細胞集団による脈管形成、血管新生または動脈新生を誘導、促進または支援する薬剤または化合物として前記薬剤または化合物が選択される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１９】
６８．細胞集団による脈管形成、血管新生または動脈新生を誘導、促進または支援する薬剤または化合物を選択する方法であって、
ＳＭＳ細胞から産生された細胞外マトリックス（ＥＣＭ）、たとえば前記態様のいずれか１つに従って製造されるＥＣＭなどを提供すること；
脈管形成能、血管新生能または動脈新生能を有する細胞（たとえば内皮細胞など）を含む第１の細胞集団に、前記ＳＭＳ細胞から産生された前記ＥＣＭを接触させること；
前記ＥＣＭと接触させた第１の細胞集団を薬剤または化合物と接触させること；および
前記薬剤または化合物と接触させた後の、前記ＥＣＭと接触させた第１の細胞集団における脈管形成、血管新生または動脈新生の質または量を、前記薬剤または化合物と接触させずに前記ＥＣＭ上で培養した好ましくは第１の細胞集団と同じ細胞種の第２の細胞集団と比較することによって、前記薬剤または化合物が第１の細胞集団において脈管形成、血管新生または動脈新生を誘導、促進または支援するかどうかを判断すること
を含み、
第２の細胞集団と比較して、第１の細胞集団における脈管形成、血管新生または動脈新生の量が多く、またはそれらの質が高い場合、細胞集団による脈管形成、血管新生または動脈新生を誘導、促進または支援する薬剤または化合物として前記薬剤または化合物が選択されることを特徴とする方法。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８１】
幹細胞
本明細書において「幹細胞」は、ある特化した機能を有する別の細胞種（たとえば「完全に分化した」細胞）に、適切な条件下で分化することが可能であり、別の適切な条件下では、後述するように、未分化多能性または未分化万能性を維持したまま自己複製することが可能な細胞を指す。本明細書において「細胞」は、単一の細胞および細胞集団（たとえば２個以上の細胞を含む集団）を指す。細胞集団は、１種類の細胞のみを含む純粋な集団であってもよい。あるいは、細胞集団は２種以上の細胞を含んでいてもよい。幹細胞は、たとえば末梢血、臍帯血、骨髄、固形組織などから得られた小型運動性幹（small mobile stem（ＳＭＳ））細胞であることが好ましい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９３】
本明細書において「細胞マーカー」は、特定の細胞を特徴付けることが可能な表現型特性、または他の種類の細胞から特定の細胞を識別することが可能な表現型特性を指す。マーカーは、タンパク質（分泌タンパク質、細胞表面タンパク質、内部タンパク質など；細胞によって合成されたタンパク質または細胞内に取り込まれたタンパク質）、核酸（mRNAや、酵素活性を有する核酸分子など）、多糖類のいずれであってもよい。前記マーカーには、目的の細胞種に特異的な抗体、レクチン、プローブ、または核酸増幅反応によって検出可能な、前述のような細胞成分の決定因子も含まれる。また、遺伝子産物の機能に基づく生化学的アッセイまたは酵素アッセイによってこれらのマーカーを同定することもできる。転写産物をコードする遺伝子およびマーカーの発現を引き起こす事象も各マーカーと関連している。マーカーが、（抗体またはPCRアッセイを使用して測定された遺伝子産物の総量として）少なくとも５倍の発現量または（細胞集団中の陽性細胞の頻度として）５倍の頻度で発現されている場合に、未分化細胞集団または分化細胞集団においてマーカーが差次的に発現されていると見なされる。10倍、100倍または10,000倍というようにマーカーの発現量または頻度が高くなればなるほどより好ましい。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２３６】
以下の表１および各項目に対応する図面（図４〜図１３）に示すように、ＳＭＳ細胞を様々な種類の細胞へと分化させることができる。
【表１】
2019513416.tif 000001
2019513416.tif 000002