【手続補正書】
【提出日】令和2年7月27日(2020.7.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨組織に移植されたときにオッセオインテグレーションを促進するようインプラントの表面を機能化するための方法であって、
（a）インプラントの表面に間葉前駆（MP）細胞を播種する工程、
（b）該表面上で細胞外マトリクス（ECM）を生成するよう該細胞を培養および増殖する工程、ならびに
（c）該表面を除細胞化する工程であって、それによってインプラントの表面を機能化する、工程
を含む、方法。
【請求項２】
除細胞化する工程が、ECMを維持しつつ表面から細胞を除去する、請求項1記載の方法。
【請求項３】
除細胞化する工程が、水、アルコールまたは非イオン性界面活性剤を含む処理溶液中で表面をインキュベートすることを含み、例えば、(i) 処理溶液が、脱イオン水からなるか、(ii) 処理溶液が、エタノールと水との混合物であるか、または(iii) 処理溶液が、次式：
2019524320.tif 000001
を有する非イオン性界面活性剤を含む、請求項2記載の方法。
【請求項４】
非イオン性界面活性剤が、ポリエチレングリコールtert-オクチルフェニルエーテル（トリトンX-100（商標））である、請求項3記載の方法。
【請求項５】
表面が、37℃で約30〜60分間インキュベートされる、請求項3記載の方法。
【請求項６】
除細胞化する工程が、生理学的緩衝液中で表面を凍結させることを含み、例えば、生理学的緩衝液が、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）である、請求項1記載の方法。
【請求項７】
表面が、-80℃で30分間超凍結され、その後に解凍される、請求項6記載の方法。
【請求項８】
除細胞化する工程の後に、表面をヌクレアーゼで処理する工程をさらに含み、例えば、表面が、DNAseおよびRNAseで処理される、請求項1記載の方法。
【請求項９】
エタノール-水溶液の連続適用により表面を脱水する工程をさらに含み、ここで、連続適用される各々の溶液は、より高濃度のエタノールを含み、その最終回の適用は、100％エタノールの適用である、請求項8記載の方法。
【請求項１０】
表面にMP細胞を播種する前に、生細胞の接着を補助する少なくとも1種類の分子で表面をコーティングする工程をさらに含み、例えば、前記分子が、ポリペプチド、ゼラチン、マトリゲル、エンタクチン、糖タンパク質、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ポリ-D-リジン、ポリ-L-オルニチン、プロテオグリカン、ビトロネクチン、多糖類、ヒドロゲルおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
除細胞化後に表面に再播種する工程をさらに含み、再播種する工程が、表面にMP細胞を播種することを含む、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
再播種されたMP細胞を培養および増殖する工程をさらに含む、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
（b）の培養する工程が、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21日超である、または約2〜14日間である、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
(i) インプラントを滅菌する工程、および任意でインプラントをパッケージングする工程、(ii) インプラントを対象の骨組織に移植する工程、(iii) 除細胞化後に表面上のECMを分析する工程、または(iv) （a）の前に、MP細胞を生成するよう多能性幹（PS）細胞を分化および増殖する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項１５】
PS細胞が、対象から収集された細胞を再プログラムすることにより生成される人工多能性幹（iPS）細胞である、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
（a）生体適合性金属または生体適合性材料から構成されるインプラント、および
（b）三次元足場を有する骨組織移植片
を含む、ハイブリッド骨インプラント。
【請求項１７】
骨組織移植片が人工物である、請求項16記載のハイブリッド骨インプラント。
【請求項１８】
足場上に播種されかつオッセオインテグレーションを促進するよう培養された細胞を、足場が含む、請求項16記載のハイブリッド骨インプラント。
【請求項１９】
インプラント材料が、チタン、鋼鉄、PMMA、シリコーン、PEEK、アルミナ、ジルコニア、リン酸カルシウムまたはそれらの1つもしくは複数の組み合わせを含む、請求項16記載のハイブリッド骨インプラント。
【請求項２０】
移植片が、幹細胞由来または前駆細胞由来の細胞を含む、請求項16記載のハイブリッド骨インプラント。
【請求項２１】
移植片が、人工多能性幹細胞由来の細胞を含む、請求項16記載のハイブリッド骨インプラント。
【請求項２２】
足場が、除細胞化された骨組織から本質的になり、例えば、骨組織がウシ骨組織であるか、または骨組織がヒト骨組織である、請求項16記載のハイブリッド骨インプラント。
【請求項２３】
足場が、1種類または複数種類の合成材料を含み、例えば、合成材料が、セラミック、セメント、複合ポリマーまたはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項16記載のハイブリッド骨インプラント。
【請求項２４】
インプラントおよび/または足場が、機能化されている、請求項16記載のハイブリッド骨インプラント。
【請求項２５】
足場が、インプラント材料を収容する1つまたは複数の開口部を含む、請求項16記載のハイブリッド骨インプラント。
【請求項２６】
移植片が、(i) 骨移植片であるか、(ii) 血管形成されているか、または(iii) 2種類またはそれ以上の細胞型を含む、請求項16記載のハイブリッド骨インプラント。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
さらに別の局面において、本発明は、医療処置を行う方法を提供する。この方法は、（a）対象から細胞を得る工程、（b）人工多能性幹（iPS）細胞を生成するよう（a）の細胞を再プログラムする工程、（c）間葉前駆（MP）細胞を生成するよう該iPS細胞を分化および増殖する工程、（d）該MP細胞をインプラントの表面に播種する工程、（e）表面上で細胞外マトリクス（ECM）を生成するよう該MP細胞を培養および増殖する工程、（f）表面を除細胞化する工程であって、それによって骨組織に移植したときにオッセオインテグレーションを促進するようインプラントの表面を機能化する、工程、ならびに（g）インプラントを対象の骨組織に移植する工程を含む。
[本発明1001]
骨組織に移植されたときにオッセオインテグレーションを促進するようインプラントの表面を機能化するための方法であって、
（a）インプラントの表面に間葉前駆（MP）細胞を播種する工程、
（b）該表面上で細胞外マトリクス（ECM）を生成するよう該細胞を培養および増殖する工程、ならびに
（c）該表面を除細胞化する工程であって、それによってインプラントの表面を機能化する、工程
を含む、方法。
[本発明1002]
除細胞化する工程が、ECMを維持しつつ表面から細胞を除去する、本発明1001の方法。
[本発明1003]
除細胞化する工程が、水、アルコールまたは非イオン性界面活性剤を含む処理溶液中で表面をインキュベートすることを含む、本発明1002の方法。
[本発明1004]
処理溶液が、脱イオン水からなる、本発明1003の方法。
[本発明1005]
処理溶液が、エタノールと水との混合物である、本発明1003の方法。
[本発明1006]
処理溶液が、次式：
2019524320.tif 000002
を有する非イオン性界面活性剤を含む、本発明1003の方法。
[本発明1007]
非イオン性界面活性剤が、ポリエチレングリコールtert-オクチルフェニルエーテル（トリトンX-100（商標））である、本発明1006の方法。
[本発明1008]
表面が、37℃で約30〜60分間インキュベートされる、本発明1003の方法。
[本発明1009]
除細胞化する工程が、生理学的緩衝液中で表面を凍結させることを含む、本発明1001の方法。
[本発明1010]
生理学的緩衝液が、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）である、本発明1009の方法。
[本発明1011]
表面が、-80℃で30分間超凍結され、その後に解凍される、本発明1009の方法。
[本発明1012]
除細胞化する工程の後に、表面をヌクレアーゼで処理する工程をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1013]
表面が、DNAseおよびRNAseで処理される、本発明1012の方法。
[本発明1014]
エタノール-水溶液の連続適用により表面を脱水する工程をさらに含み、ここで、連続適用される各々の溶液は、より高濃度のエタノールを含み、その最終回の適用は、100％エタノールの適用である、本発明1012の方法。
[本発明1015]
表面にMP細胞を播種する前に、生細胞の接着を補助する少なくとも1種類の分子で表面をコーティングする工程をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1016]
前記分子が、ポリペプチド、ゼラチン、マトリゲル、エンタクチン、糖タンパク質、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ポリ-D-リジン、ポリ-L-オルニチン、プロテオグリカン、ビトロネクチン、多糖類、ヒドロゲルおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される、本発明1015の方法。
[本発明1017]
除細胞化後に表面に再播種する工程をさらに含み、再播種する工程が、表面にMP細胞を播種することを含む、本発明1001の方法。
[本発明1018]
再播種されたMP細胞を培養および増殖する工程をさらに含む、本発明1017の方法。
[本発明1019]
（b）の培養する工程が、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21日超である、または約2〜14日間である、本発明1001の方法。
[本発明1020]
インプラントを滅菌する工程、および任意でインプラントをパッケージングする工程をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1021]
インプラントを対象の骨組織に移植する工程をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1022]
除細胞化後に表面上のECMを分析する工程をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1023]
（a）の前に、MP細胞を生成するよう多能性幹（PS）細胞を分化および増殖する工程をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1024]
PS細胞が、対象から収集された細胞を再プログラムすることにより生成される人工多能性幹（iPS）細胞である、本発明1023の方法。
[本発明1025]
本発明1001〜1025のいずれかの方法により製造される、インプラント。
[本発明1026]
生体適合性金属または生体適合性材料から構成される、本発明1025のインプラント。
[本発明1027]
チタン、鋼鉄、PMMA、シリコーン、PEEK、アルミナ、ジルコニア、リン酸カルシウムおよびそれらの組み合わせから選択される少なくとも1つの材料から構成される、本発明1026のインプラント。
[本発明1028]
歯科用インプラントとして設計される、本発明1025のインプラント。
[本発明1029]
ネジ山を含む、本発明1025のインプラント。
[本発明1030]
（a）本発明1025〜1029のいずれかのインプラント、および
（b）三次元足場を有する骨組織移植片
を含む、ハイブリッド骨インプラント。
[本発明1031]
骨組織移植片が人工物である、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1032]
足場上に播種されかつ細胞とインプラントとのオッセオインテグレーションを促進するよう培養された細胞を、足場が含む、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1033]
インプラント材料が、チタン、鋼鉄、PMMA、シリコーン、PEEK、アルミナ、ジルコニア、リン酸カルシウムまたはそれらの1つもしくは複数の組み合わせを含む、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1034]
移植片が、幹細胞由来または前駆細胞由来の細胞を含む、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1035]
移植片が、人工多能性幹細胞由来の細胞を含む、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1036]
足場が、除細胞化された骨組織から本質的になる、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1037]
骨組織が、ウシ骨組織である、本発明1036のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1038]
骨組織が、ヒト骨組織である、本発明1037のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1039]
足場が、1種類または複数種類の合成材料を含む、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1040]
合成材料が、セラミック、セメント、複合ポリマーまたはそれらの任意の組み合わせを含む、本発明1039のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1041]
足場が、機能化されている、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1042]
足場が、インプラント材料を収容する1つまたは複数の開口部を含む、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1043]
移植片が、骨移植片である、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1044]
移植片が、血管形成されている、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1045]
移植片が、2種類またはそれ以上の細胞型を含む、本発明1030のハイブリッド骨インプラント。
[本発明1046]
（a）対象から細胞を得る工程、
（b）人工多能性幹（iPS）細胞を生成するよう（a）の細胞を再プログラムする工程、
（c）間葉前駆（MP）細胞を生成するよう該iPS細胞を分化および増殖する工程、
（d）該MP細胞をインプラントの表面に播種する工程、
（e）表面上で細胞外マトリクス（ECM）を生成するよう該MP細胞を培養および増殖する工程、
（f）表面を除細胞化する工程であって、それによって、骨組織に移植したときにオッセオインテグレーションを促進するようインプラントの表面を機能化する、工程、ならびに
（g）インプラントを対象の骨組織に移植する工程
を含む、医療処置を行うための方法。
[本発明1047]
除細胞化する工程が、ECMを維持しつつ表面から細胞を除去する、本発明1046の方法。
[本発明1048]
除細胞化する工程が、水、アルコールまたは非イオン性界面活性剤を含む処理溶液中で表面をインキュベートすることを含む、本発明1047の方法。
[本発明1049]
処理溶液が、脱イオン水からなる、本発明1048の方法。
[本発明1050]
処理溶液が、エタノールと水との混合物である、本発明1048の方法。
[本発明1051]
処理溶液が、次式：
2019524320.tif 000003
を有する非イオン性界面活性剤を含む、本発明1048の方法。
[本発明1052]
非イオン性界面活性剤が、ポリエチレングリコールtert-オクチルフェニルエーテル（トリトンX-100（商標））である、本発明1051の方法。
[本発明1053]
表面が、37℃で約30〜60分間インキュベートされる、本発明1048の方法。
[本発明1054]
除細胞化する工程が、生理学的緩衝液中で表面を凍結させることを含む、本発明1046の方法。
[本発明1055]
生理学的緩衝液が、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）である、本発明1054の方法。
[本発明1056]
表面が、-80℃で30分間超凍結され、その後に解凍される、本発明1054の方法。
[本発明1057]
除細胞化する工程の後に、表面をヌクレアーゼで処理する工程をさらに含む、本発明1046の方法。
[本発明1058]
表面が、DNAseおよびRNAseで処理される、本発明1057の方法。
[本発明1059]
エタノール-水溶液の連続適用により表面を脱水する工程をさらに含み、ここで、連続適用される各々の溶液は、より高濃度のエタノールを含み、その最終回の適用は、100％エタノールの適用である、本発明1057の方法。
[本発明1060]
表面にMP細胞を播種する前に、生細胞の接着を補助する少なくとも1種類の分子で表面をコーティングする工程をさらに含む、本発明1046の方法。
[本発明1061]
前記分子が、ポリペプチド、ゼラチン、マトリゲル、エンタクチン、糖タンパク質、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ポリ-D-リジン、ポリ-L-オルニチン、プロテオグリカン、ビトロネクチン、多糖類、ヒドロゲルおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される、本発明1060の方法。
[本発明1062]
除細胞化後に表面に再播種する工程をさらに含み、再播種する工程が、表面にMP細胞を播種することを含む、本発明1046の方法。
[本発明1063]
再播種されたMP細胞を培養および増殖する工程をさらに含む、本発明1062の方法。
[本発明1064]
（b）の培養工程が、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21日超である、本発明1046の方法。
[本発明1065]
培養が、約14日間である、本発明1046の方法。
[本発明1066]
インプラントを対象の骨組織に移植する工程をさらに含む、本発明1046の方法。
[本発明1067]
除細胞化後に表面上のECMを分析する工程をさらに含む、本発明1046の方法。
[本発明1068]
インプラントを移植する工程の前に、インプラントを滅菌する工程をさらに含む、本発明1046の方法。
[本発明1069]
インプラントを移植する工程の前に、インプラントをパッケージングする工程をさらに含む、本発明1046の方法。