【手続補正書】
【提出日】令和2年6月8日(2020.6.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ボツリヌス菌（Clostridial Botulinum）血清型Ｂ（ＢｏＮＴ／Ｂ）の改変受容体結合ドメインを含む、改変ボツリヌスニューロトキシン（ＢｏＮＴ）ポリペプチドであって、ＢｏＮＴ血清型Ｂ、菌株１（ＢｏＮＴ／Ｂ１）における１２４８または１２４９に対応する位置において１つ以上の置換変異を含む、前記ポリペプチド。
【請求項２】
改変ＢｏＮＴポリペプチドであって、以下：
（ａ）配列番号１〜８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むかまたは配列番号１〜８のいずれか１つのアミノ酸配列からなり、配列番号１〜７のいずれか１つにおける位置１２４８または１２４９において１つ以上の置換変異、または配列番号８における位置１２４９または１２５０において１つ以上の置換変異を有する、または
（ｂ）配列番号１〜８のいずれか１つに対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号１〜７のいずれか１つにおける位置１２４８または１２４９において１つ以上の置換変異、または配列番号８における位置１２４９または１２５０において１つ以上の置換変異を有する、
請求項１に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド。
【請求項３】
置換変異が、配列番号１〜７のいずれか１つにおける位置１２４８または１２４９において、または配列番号８における位置１２４９または１２５０において、トリプトファン（Ｗ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、またはヒスチジン（Ｈ）のいずれか１つを導入し、任意にここで、置換変異が、配列番号１〜７のいずれか１つにおける位置１２４８および１２４９の両方、または配列番号８における位置１２４９および１２５０において、トリプトファン（Ｗ）を導入し、さらに任意にここで、改変ＢｏＮＴポリペプチドが、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド。
【請求項４】
以下：
（ａ）配列番号９〜１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むかまたは配列番号９〜１６のいずれか１つのアミノ酸配列からなり、配列番号９〜１５のいずれか１つにおける位置３８９または３９０において１つ以上の置換変異、または配列番号１６における位置３９０または３９１において１つ以上の置換変異を有する、または
（ｂ）配列番号９〜１６のいずれか１つに対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号９〜１５のいずれか１つにおける位置３８９または３９０において１つ以上の置換変異、または配列番号１６における位置３９０または３９１において１つ以上の置換変異を有する、
改変ＢｏＮＴポリペプチドであって、任意にここで、置換変異が、配列番号９〜１５のいずれか１つにおける位置３８９または３９０、または配列番号１６における位置３９０または３９１において、トリプトファン（Ｗ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、またはヒスチジン（Ｈ）のいずれか１つを導入し、さらに任意にここで、置換変異が、配列番号９〜１５のいずれか１つにおける位置３８９および３９０の両方、または配列番号１６における位置３９０および３９１においてトリプトファン（Ｗ）を導入し、より一層さらに任意にここで、改変ＢｏＮＴポリペプチドが、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド。
【請求項５】
以下：
（ａ）配列番号１７〜２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むかまたは配列番号１７〜２４のいずれか１つのアミノ酸配列からなり、配列番号１７〜２４のいずれか１つにおける位置１２６１または１２６２において１つ以上の置換変異を有する、または
（ｂ）配列番号１７〜２４のいずれか１つに対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号１７〜２４のいずれか１つにおける位置１２６１または１２６２において１つ以上の置換変異を有する、
改変ＢｏＮＴポリペプチドであって、任意にここで、置換変異が、配列番号１７〜２４のいずれか１つにおける位置１２６１または１２６２において、トリプトファン（Ｗ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、またはヒスチジン（Ｈ）のいずれか１つを導入し、さらに任意にここで、置換変異が、配列番号１７〜２４のいずれか１つにおける位置１２６１および１２６２の両方において、トリプトファン（Ｗ）を導入し、より一層さらに任意にここで、改変ＢｏＮＴポリペプチドが、配列番号３５または配列番号３６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド。
【請求項６】
血清型Ｂ、菌株１（ＢｏＮＴ／Ｂ１）のアミノ酸１２４５とアミノ酸１２５２との間のフラグメントに対応するポリペプチドのアミノ酸配列を含む、改変ＢｏＮＴポリペプチドであって、ＢｏＮＴ／Ｂ１における１２４８または１２４９に対応する位置において１つ以上の置換変異を有する、前記ポリペプチド。
【請求項７】
以下：
（ａ）配列番号２５〜３２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むかまたは配列番号２５〜３２のいずれか１つのアミノ酸配列からなり、配列番号２５〜３２のいずれか１つにおける位置４または５において、１つ以上の置換変異を有し、または
（ｂ）配列番号２５〜３２のいずれか１つに対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２５〜３２のいずれか１つにおける位置４または５において、１つ以上の置換変異を有する、
改変ＢｏＮＴポリペプチドであって、任意にここで、置換変異が、配列番号２５〜３２のいずれか１つにおける位置４または５において、トリプトファン（Ｗ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、またはヒスチジン（Ｈ）のいずれか１つを導入し、さらに任意にここで、置換変異が、配列番号２５〜３２のいずれか１つにおける位置４および５の両方においてトリプトファン（Ｗ）を導入し、なお一層さらに任意にここで、改変ＢｏＮＴポリペプチドが、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、
請求項６に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド。
【請求項８】
以下：
ａ）プロテアーゼドメイン；
ｂ）プロテアーゼ切断部位；
ｃ）転位置ドメイン；
をさらに含む、請求項１に記載の改変ボツリヌスニューロトキシン（ＢｏＮＴ）ポリペプチド。
【請求項９】
ＢｏＮＴ／Ｂ１、ＢｏＮＴ／Ｂ２、ＢｏＮＴ／Ｂ３、ＢｏＮＴ／Ｂ４、ＢｏＮＴ／Ｂ５、ＢｏＮＴ／Ｂ６、ＢｏＮＴ／Ｂ７、およびＢｏＮＴ／Ｂ８のいずれか１つの改変受容体結合ドメインを含む、請求項８に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド。
【請求項１０】
改変受容体結合ドメインが、以下：
（ａ）１つの置換変異、任意にここで、１つの置換変異が、ＢｏＮＴ／Ｂ１におけるＩ１２４８Ｆ、Ｉ１２４８Ｙ、Ｉ１２４８Ｈ、Ｉ１２４８Ｗ、Ｖ１２４９Ｗ、Ｖ１２４９Ｆ、Ｖ１２４９Ｙ、またはＶ１２４９Ｈに対応する、または
（ｂ）２つの置換変異、任意にここで、置換変異が、ＢｏＮＴ／Ｂ１におけるＩ１２４８Ｗ／Ｖ１２４９Ｆ、Ｉ１２４８Ｗ／Ｖ１２４９Ｙ、Ｉ１２４８Ｗ／Ｖ１２４９Ｈ、Ｉ１２４８Ｆ／Ｖ１２４９Ｙ、Ｉ１２４８Ｆ／Ｖ１２４９Ｈ、Ｉ１２４８Ｙ／Ｖ１２４９Ｈ、Ｉ１２４８Ｆ／Ｖ１２４９Ｗ、Ｉ１２４８Ｙ／Ｖ１２４９Ｗ、Ｉ１２４８Ｈ／Ｖ１２４９Ｗ、Ｉ１２４８Ｙ／Ｖ１２４９Ｆ、Ｉ１２４８Ｈ／Ｖ１２４９Ｆ、またはＩ１２４８Ｈ／Ｖ１２４９Ｙに対応する、
を含む、請求項８または９に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド。
【請求項１１】
プロテアーゼドメイン、転位置ドメイン、およびプロテアーゼ切断部位が、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される血清型由来であり、任意にここで、プロテアーゼドメイン、転位置ドメイン、およびプロテアーゼ切断部位が、血清型Ｂ、菌株１、または血清型Ａ、菌株１由来のものである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド。
【請求項１２】
改変ＢｏＮＴポリペプチドであって、ＢｏＮＴ／Ｂ１における１１７８、１１９１、または１１９９に対応する位置において、１つ以上の置換変異をさらに含み、任意にここで、置換変異が、ＢｏＮＴ／Ｂ１におけるＥ１１９１Ｍ／Ｓ１１９９Ｙ、Ｅ１１９１Ｍ／Ｓ１１９９Ｗ、Ｅ１１９１Ｍ／Ｗ１１７８Ｑ、Ｅ１１９１Ｖ／Ｓ１１９９Ｙ、１１９１Ｖ／Ｓ１１９９Ｗ、Ｅ１１９９Ｖ／Ｗ１１７８Ｑ、またはＥ１１９９Ｑ／Ｓ１１９９Ｙに対応し、さらに任意にここで、改変ＢｏＮＴポリペプチドが、配列番号４６〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、なおさらに任意にここで、改変ＢｏＮＴポリペプチドが、ＳｙｔＩＩに対して増大した結合アフィニティーを有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド。
【請求項１３】
第２の部分に連結した第１の部分を含むキメラ分子であって、第１の部分が、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチドである、前記キメラ分子。
【請求項１４】
第１の部分と第２の部分とが、共有結合的または非共有結合的に連結している、請求項１３に記載のキメラ分子。
【請求項１５】
第２の部分が、低分子、核酸、短いポリペプチドおよびタンパク質からなる群より選択される、請求項１３または１４に記載のキメラ分子。
【請求項１６】
第２の部分が、以下：
（ａ）生理活性分子、任意にここで、第２の部分が非ポリペプチド薬である、または
（ｂ）非ポリペプチド薬である、
請求項１３または１４に記載のキメラ分子。
【請求項１７】
第２の部分が、治療用ポリペプチドである、請求項１３または１４に記載のキメラ分子。
【請求項１８】
核酸分子であって、以下：
（ａ）請求項１〜１５のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチドに対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む改変ＢｏＮＴポリペプチド、または
（ｂ）請求項１３に記載のキメラ分子、
をコードするポリヌクレオチド配列を含む、前記核酸分子。
【請求項１９】
請求項１８に記載の核酸分子を含む、核酸ベクター。
【請求項２０】
請求項１８に記載の核酸分子または請求項１９に記載の核酸ベクターを含む、細胞。
【請求項２１】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチドを発現する、細胞。
【請求項２２】
改変ボツリヌスニューロトキシン（ＢｏＮＴ）ポリペプチドを生成する方法であって、請求項２１に記載の細胞を前記ＢｏＮＴポリペプチドが生成される条件下において培養するステップを含む、前記方法。
【請求項２３】
請求項１３または１７に記載のキメラ分子を発現する、細胞。
【請求項２４】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチドまたは請求項１３〜１７のいずれか一項に記載のキメラ分子を含む、医薬組成物。
【請求項２５】
処置する方法における使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載のキメラ分子、または請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載のキメラ分子、および請求項２４に記載の医薬組成物の治療有効量を、それにより状態を処置するために対象に投与することを含む、望ましくない神経活動に関連する状態の処置する方法における使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載のキメラ分子、または請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
状態が、過活動の神経細胞または腺（glans）と関連し、
任意にここで、状態が、痙攣性発声障害、痙性斜頚（spasmodic torticollis）、喉頭ジストニア、顎口腔性発声障害、舌ジストニア、痙性斜頚（cervical dystonia）、上肢局所性ジストニア、眼瞼痙攣、斜視、片側顔面痙攣、眼瞼疾患、脳性麻痺、限局性痙攣および他の発声障害、痙攣性大腸炎、神経因性膀胱、アニスムス、四肢痙攣、チック、振戦、歯ぎしり、裂肛、アカラシア、嚥下障害、および他の筋緊張障害、および筋群の不随意運動により特徴づけられる他の障害、流涙、多汗症（hyperhydrosis）、過剰な唾液分泌、過剰な胃腸管分泌、分泌障害、筋痙攣からの疼痛、頭痛、および皮膚科学的または審美的／美容的状態からなる群より選択される、
請求項２６に記載の使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載のキメラ分子、または請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
投与が、注射部位への注射を介するものであり、ここで、注射が、望ましくない神経活動が存在する場所におけるものであり、任意にここで、注射部位における神経細胞（単数または複数）による改変ＢｏＮＴポリペプチドの取り込みが増強されており、ここで、他の領域へのポリペプチドの拡散が減少し、さらに任意にここで、注射における神経細胞（単数または複数）による改変ＢｏＮＴポリペプチドの取り込みが増強されており、ここで、ポリペプチドは、免疫原性が低下している、請求項２６または２７に記載の使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の改変ＢｏＮＴポリペプチド、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載のキメラ分子、または請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
改変ボツリヌスニューロトキシン（ＢｏＮＴ）を作製する方法であって、血清型Ｂ、菌株１（ＢｏＮＴ／Ｂ１）における１２４８または１２４９に対応する位置において１つ以上の置換変異を作製することを含む、前記方法。
【請求項３０】
置換変異が、Ｉ１２４８Ｆ、Ｉ１２４８Ｙ、Ｉ１２４８Ｈ、Ｉ１２４８Ｗ、Ｖ１２４９Ｗ、Ｖ１２４９Ｆ、Ｖ１２４９Ｙ、Ｖ１２４９Ｈ、Ｉ１２４８Ｗ／Ｖ１２４９Ｆ、Ｉ１２４８Ｗ／Ｖ１２４９Ｙ、Ｉ１２４８Ｗ／Ｖ１２４９Ｈ、Ｉ１２４８Ｆ／Ｖ１２４９Ｙ、Ｉ１２４８Ｆ／Ｖ１２４９Ｈ、Ｉ１２４８Ｙ／Ｖ１２４９Ｈ、Ｉ１２４８Ｆ／Ｖ１２４９Ｗ、Ｉ１２４８Ｙ／Ｖ１２４９Ｗ、Ｉ１２４８Ｈ／Ｖ１２４９Ｗ、Ｉ１２４８Ｙ／Ｖ１２４９Ｆ、Ｉ１２４８Ｈ／Ｖ１２４９Ｆ、またはＩ１２４８Ｈ／Ｖ１２４９Ｙに対応する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ＢｏＮＴポリペプチドが、ＢｏＮＴ血清型Ｂ（ＢｏＮＴ／Ｂ）であり、任意にここで、ＢｏＮＴポリペプチドが、ＢｏＮＴ／Ｂ、菌株１〜８のいずれか１つであり、任意にここで、改変ＢｏＮＴポリペプチドが、脂質膜を透過し、さらに任意にここで、改変ＢｏＮＴポリペプチドの神経細胞への結合が増強されており、ここで、増強された結合は、脂質膜を透過することにより媒介され、なおさらに任意にここで、増強された結合が、シナプス前神経終末に特異的であり、より好ましくは、シナプス前神経終末が：
（ａ）マウスシナプス前神経終末である、または
（ｂ）ヒトシナプス前神経終末である、
請求項２９または３０に記載の方法。