(57)【要約】【課題】  病変部よりも生体浅部にある健常部への傷害を検出し、健常部の障害を防止できる光線力学的治療装置を提供する。【解決手段】  光線力学的治療装置１０は、所定範囲のピーク強度を有する光によって活性化し、該所定範囲外のピーク強度の光には略活性化しない光感受性物質を用いて、生体の深部にある病変部を治療する光線力学的治療装置１０であって、光感受性物質を活性化可能な波長の光を、前記生体にパルス照射する照射装置１２と、光感受性物質の活性化を検出する検出装置１４と、検出装置１４の検出結果に基づいて、病変部よりも浅部にある健常部において光感受性物質が活性化せず、病変部に到達する光が前記所定範囲のピーク強度となるように、光のピーク強度を制御する制御装置１６と、を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定範囲のピーク強度を有する光によって活性化し、該所定範囲外のピーク強度の光には略活性化しない光感受性物質を用いて、生体の深部にある病変部を治療する光線力学的治療装置であって、
前記光感受性物質を活性化可能な波長の光を、前記生体にパルス照射する照射手段と、
前記光感受性物質の活性化を検出する検出手段と、
前記検出手段の検出結果に基づいて、前記病変部よりも浅部にある健常部において前記光感受性物質が活性化せず、前記病変部に到達する前記光が前記所定範囲のピーク強度となるように、前記光のピーク強度を制御する制御手段と、
を有する光線力学的治療装置。
【請求項２】
前記検出手段により前記健常部における前記光感受性物質の活性化が検出された場合、前記制御手段は、前記照射手段により照射する前記光のピーク強度を上昇させる請求項１に記載の光線力学的治療装置。
【請求項３】
前記検出手段は、前記光感受性物質が活性化されたときに生じる一重項酸素から発生する蛍光を検出することによって、前記光感受性物質の活性化を検出する請求項１または２に記載の光線力学的治療装置。
【請求項４】
前記照射手段は、前記病変部近傍の生体表面側に向いて前記光を照射する照射部を含み、
前記検出手段は、前記照射部近傍の生体表面に配置され、該生体表面側に向いた受光部により、前記生体中からの前記蛍光を受光する請求項３に記載の光線力学的治療装置。
【請求項５】
前記検出手段は、さらに、前記生体および前記採光部を冷却する冷却部を有する請求項４に記載の光線力学的治療装置。
【請求項６】
前記照射手段は、前記病変部近傍の生体表面側に向いて前記光を照射する照射部を含み、
前記検出手段は、前記照射部近傍の生体表面に配置され、該生体表面側に向いた受光部により、前記生体内で散乱され生体外に放出される前記光を受光し、受光した光量の増加に基づいて光感受性物質の活性化を検出する請求項１または請求項２に記載の光線力学的治療装置。
【請求項７】
前記検出手段は、さらに、受光した光を復調する復調部を含む請求項４または請求項６に記載の光線力学的治療装置。
【請求項８】
前記検出手段は、前記健常部における前記光感受性物質の濃度を測定し、該濃度の減少に基づいて前記光感受性物質の活性化を検出する請求項１または２に記載の光線力学的治療装置。
【請求項９】
前記検出手段は、前記生体中の酸素分圧を測定し、該酸素分圧の減少に基づいて前記光感受性物質の活性化を検出する請求項１または２に記載の光線力学的治療装置。
【請求項１０】
前記検出手段は、
前記照射部近傍の生体に穿刺される穿刺部と、
前記穿刺部に設けられ、前記生体の表面から前記生体を透過してきた検査光を受光する受光部と、
を含み、
前記受光部により受光した前記検査光の量の増加に基づいて、光感受性物質の活性化を検出する請求項１または２に記載の光線力学的治療装置。
【請求項１１】
前記検査光は、前記光感受性物質を活性化可能な波長の光であり、前記照射手段により照射され、または、前記照射手段とは別個の検査光照射手段により照射される請求項１０に記載の光線力学的治療装置。
【請求項１２】
前記検出手段は、前記健常部における前記光感受性物質から放出されるリン光を検出することによって、前記健常部における酸素濃度を特定し、特定した該酸素濃度の低下に基づいて前記光感受性物質の活性化を検出する請求項１または２に記載の光線力学的治療装置。
【請求項１３】
前記検出手段は、
前記光感受性物質から放出されるリン光を分光する分光部と、
前記リン光を受光する受光時間調節部と、
をさらに有する請求項１２に記載の光線力学的治療装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光線力学的治療装置に関し、特に、生体深部の病変部の治療に際し、病変部より浅部にある健常部を傷害させずに保存しつつ、深部の病変部のみを傷害させる光線力学的治療装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
光化学治療（Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｙ：ＰＤＴ、光線力学的治療ともいう）は、早期癌の内視鏡下治療の他、種々の治療への適用が検討されている。ＰＤＴとは、ポルフィリン誘導体等の光感受性物質（光増感剤）を静脈注射等の方法により投与し、治療対象である癌組織等の組織病変部に選択的に吸収・集積させた後に、レーザ光等の光線を照射することにより該組織病変部を傷害する治療法である。【０００３】
ＰＤＴは、光増感剤が病変部へ選択的に集積する性質と光により増感される性質を利用したものである。ＰＤＴのメカニズムは、次のように提唱されている。病変部に取り込まれた光増感剤は、光線照射により励起される。励起された光増感剤のエネルギーは、病変部内に存在する酸素に移乗して活性な一重項酸素（活性酸素）を生成する。そして、該一重項酸素は、強力な酸化力により、病変部の細胞を壊死させる。このような活性酸素によるＰＤＴ治療は、タイプＩＩ反応と呼ばれている。【０００４】
このようなＰＤＴによる治療において、治療中の活性酸素の発生を検出して、所定量の活性酸素の発生を検出したら、治療が終了したと判断し、治療を停止する方法がある（たとえば、特許文献１参照  ＵＳ６，１２８，５２５）。【０００５】
しかし、上記のように単に活性酸素の発生量を検出するだけでは、生体のどの部分が治療されている場合でも、発生した活性酸素量により、治療が終了したと判断されてしまう。これでは、たとえば、生体深部に病変部がある場合に、病変部だけではなく、生体浅部の健常部において光増感剤が反応していても、所定量の活性酸素の検出により、病変部での治療が不十分なまま治療が終了したと判断されてしまう。結果として、不要に健常部が傷害されて治療が終わる虞がある。あるいは、治療が不必要にも関わらず、健常部が傷害された場合に、これを検出できない。【０００６】
また、生体深部に病変部がある場合に、生体浅部の健常部を保存しつつ、病変部だけを治療する方法が知られている（たとえば、特許文献２参照）。この方法では、レーザ光の焦点を病変部に合わせることによって、病変部だけで、光増感剤が活性化するようにする。【０００７】
しかし、この方法においても、万が一、レーザ光の焦点がずれたり、レーザ強度や薬剤の濃度が変わってしまったりすると、生体浅部の健常部が傷害される虞がある。健常部が傷害された場合に、これを検出できない。
【特許文献１】米国特許第６，１２８，５２５号
【特許文献２】米国特許第５，８２９，４４８号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、病変部よりも生体浅部にある健常部への傷害を検出し、健常部の障害を防止しつつ、病変部への治療を継続できる光線力学的治療装置の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
光線力学的治療装置は、所定範囲のピーク強度を有する光によって活性化し、該所定範囲外のピーク強度の光には略活性化しない光感受性物質を用いて、生体の深部にある病変部を治療する光線力学的治療装置であって、前記光感受性物質を活性化可能な波長の光を、前記生体にパルス照射する照射手段と、前記光感受性物質の活性化を検出する検出手段と、前記検出手段の検出結果に基づいて、前記病変部よりも浅部にある健常部において前記光感受性物質が活性化せず、前記病変部に到達する前記光が前記所定範囲のピーク強度となるように、前記光のピーク強度を制御する制御手段と、を有する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の光線力学的治療装置によれば、光感受性物質の活性化を検出し、病変部よりも浅部にある健常部において光感受性物質が活性化せず、病変部に到達する光が所定範囲のピーク強度となるように、光のピーク強度を制御する。したがって、光感受性物質の活性化により健常部の細胞が傷害されない。すなわち、健常部を保存できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
最初に、光線力学的治療（ＰＤＴ）のメカニズムについて説明し、その後、ＰＤＴを行うための本発明の実施形態について説明する。【００１２】
（ＰＤＴ）
ＰＤＴとは、癌などの局在した病変部位を治療するための方法である。【００１３】
ＰＤＴにおいては、まず、生体に光感受性物質（ＰＤＴ薬剤）が静脈注射等により導入される。ＰＤＴ薬剤とは、病変部に集積する性質を有し、所定範囲の強度を有する光が照射されることにより活性化される薬剤である。ＰＤＴ薬剤としては、ポルフィリン誘導体やクローリン系物質などがあり、ＡＴＸ−Ｓ１０Ｎａ（ＩＩ）などが挙げられる。ＰＤＴ薬剤の持つ集積性により、病変部に高い濃度で薬剤が集積される。集積には時間がかかるので、病変部がある箇所に薬剤を直接注入して、細胞に直接取り込ませてもよい。【００１４】
ＰＤＴ薬剤が病変部に集積した後、病変部に向けて、ＰＤＴ薬剤が活性化可能な光が照射される。ＰＤＴ薬剤が活性化される光とは、たとえば、半導体レーザ、色素レーザ、オプティカルパラメトリックオシレーター（Ｏｐｔｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒ）等の光である。【００１５】
ＰＤＴ薬剤がパルス光により活性化されると、該ＰＤＴ薬剤周辺の酸素が活性化される。活性化された酸素は、一重項酸素として強い酸化力を有する。一重項酸素の酸化力により、病変部の細胞もしくは血管が傷害され、生体が治療される。【００１６】
ＰＤＴにおいては、ＰＤＴ薬剤が集積し、かつ所定範囲のピーク強度の光が照射された部位において治療が行われる。このとき、ピーク強度が所定範囲よりも高すぎても、低すぎても、治療は適当に行われない。ＰＤＴ薬剤が活性化する光のピーク強度の範囲は、導入するＰＤＴ薬剤に従って異なる。【００１７】
ＰＤＴ薬剤が活性化する光のピーク強度の範囲の例を示す。【００１８】
図１は、光のピーク強度と死細胞率との関係を示す図である。死細胞率とは、ＰＤＴ薬剤が活性化して作用することにより傷害される細胞の割合であり、ＰＤＴ薬剤の活性化に伴い高くなる。【００１９】
図１に示す結果は、次の条件により得られた。ＸｅＣｌエキシマーダイレーザ（波長：６６９±３ｎｍ、パルス半値全幅：７ｎｓ）を用いた。光は直径６００μｍの石英ファイバーを用いて、垂直に照射した。パルスピーク強度を０．１７〜１．４ＭＷ／ｃｍ２、繰り返し周波数を５〜８０Ｈｚと光照射条件を変化させて照射した。【００２０】
図１を参照すると、パルスピーク強度０．１７ＭＷ／ｃｍ２、繰り返し周波数８０Ｈｚの時に、死細胞率が６０％となった。一方、１．４ＭＷ／ｃｍ２という高強度パルス励起時には、いずれの繰り返し周波数においても、死細胞率は激減した。死細胞率、すなわち、ＰＤＴ薬剤の活性化率は、繰り返し周波数には依存せずに、パルスピーク強度に依存し、パルスピーク強度が高すぎると、ＰＤＴ効果が得られないことがわかる。【００２１】
このように、ＰＤＴ薬剤が活性化するための光のピーク強度には範囲があり、高すぎても活性化しないことがわかる。【００２２】
ＰＤＴ薬剤は、病変部に集積する性質を有する。しかし、病変部の周辺の健常部にも、病変部よりは低い濃度で存在する。したがって、病変部周辺の健常部において、所定範囲のピーク強度の光が照射されれば、健常部が傷害されてしまう。そこで、生体表面から浅部に健常部があり、その深部に病変部がある場合、健常部では所定範囲のピーク強度以上となり、病変部に到達するときに所定範囲のピーク強度となるように、予め所定範囲よりも高ピーク強度のパルス光を照射する。これにより健常部の傷害を防止できる。【００２３】
しかし、高ピーク強度のパルス光を照射していても、生体の変化やＰＤＴ薬剤の濃度変化などにより、健常部において所定範囲のピーク強度となり、健常部が傷害される虞がある。【００２４】
以下では、このような健常部の傷害を確実に防止できる実施形態を説明する。【００２５】
本発明の実施形態について、図面を参照しつつ説明する。【００２６】
（第１実施形態）
図２は本実施形態における光線力学的治療装置の概略構造を示す図、図３は検出装置の概略構成を示す図である。【００２７】
図２に示すように、光線力学的治療装置１０は、照射装置（照射手段）１２、検出装置（検出手段）１４および制御装置（制御手段）１６を有する。【００２８】
照射装置１２は、照射本体１２０と、照射部１２２とを含む。照射本体１２０は、光源を含み、半導体レーザ、色素レーザ、オプティカルパラメトリックオシレーターの高ピーク強度パルス光を発生する。照射部１２２は、生体の深部にある病変部に近い生体表面に配置されている。照射本体１２０において発生されたパルス光は、照射部１２２に伝送され、照射部１２２から患部に向かって照射される。【００２９】
検出装置１４は、受光部１４０および検出本体１４２を含む。受光部１４０は、生体の表面において、病変部より浅部の健常部に向けて受光面が配置されている。受光部１４０は、ＰＤＴの際に発生する一重項酸素から放出される蛍光と呼ばれる弱い光を受光する。検出本体１４２は、受光部１４０において受光した蛍光に基づいて、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出し、制御装置１６に送信する。【００３０】
検出本体１４２は、図３に示すように、光電子増倍管１４４と、冷却装置１４６とを含む。光電子増倍管１４４は、受光した微弱な蛍光を増幅して検出できる超高感度光センサである。冷却装置１４６は、光電子増倍管１４４の光電面などの周囲の装置から放出される熱放射によるノイズを低減するために、光電子増倍管１４４を冷却する。【００３１】
制御装置１６は、照射装置１２および検出装置１４に接続されている。制御装置１６は、検出装置１４によるＰＤＴ薬剤の活性化の検出に基づいて、照射装置１２により照射させるパルス光のピーク強度を制御する。【００３２】
検出装置１４による蛍光の計測およびＰＤＴ薬剤の活性化の検出について、より詳細に説明する。【００３３】
図４は、一重項酸素蛍光ピークを含むスペクトルを計測した図である。【００３４】
たとえば、濃度４０μｇ／ｍｌのＰＤＴ薬剤溶液を、パルスピーク強度０．３９ＭＷ／ｃｍ２、１．１ＭＷ／ｃｍ２、繰り返し周波数８０Ｈｚの条件により光照射する。そして、冷却装置１４６により冷却した光電子増倍管１４４により、波長１２２０ｎｍから１３２０ｎｍまでの光を測定する。すると、パルスピーク強度が、０．３９ＭＷ／ｃｍ２および１．１ＭＷ／ｃｍ２のいずれであっても、１２７０ｎｍ付近にピークが観察される。この波長に観察されるピークは、ＰＤＴ薬剤が活性化して一重項酸素が発生され、該一重項酸素により放出される蛍光であることが知られている。【００３５】
したがって、上記のような条件でＰＤＴを行う場合には、波長が１２７０ｎｍ付近の蛍光を観察し、ピークが観測された場合に、ＰＤＴ薬剤が活性化したと判断できる。【００３６】
この判断基準にしたがって、検出装置１４は、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出できる。【００３７】
次に、光線力学的治療装置１０の作用について説明する。【００３８】
図５は、光線力学的治療装置の動作の流れを示すフローチャートである。【００３９】
最初に、制御装置１６に、初期治療条件が入力される（ステップＳ１）。初期治療条件とは、照射装置１２に照射させるパルス光のピーク強度、周波数、総エネルギー密度、生体に供給するＰＤＴ薬剤の濃度などである。これらの条件は、予め生体を診察して得られた状況、たとえば、病変部の位置などに基づいて決定される。詳細には、病変部の深度が測定され、病変部においてパルス光のピーク強度がＰＤＴ薬剤が活性化する所定範囲になるように、照射装置１２により照射するパルス光の初期ピーク強度が決定される。【００４０】
初期治療条件に基づいて、照射装置１２の照射部１２２が病変部近傍に配置された後、制御装置１６は、照射装置１２を制御して、病変部位に向かってパルス光を照射させる（ステップＳ２）。パルス光の照射により、病変部において、ＰＤＴ薬剤が活性化され、上述のメカニズムにより、病変部の細胞が傷害される。【００４１】
ＰＤＴの最中には、検出装置１４は、病変部よりも生体表面に近い健常部近傍に配置され、健常部の様子を観察し、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出する（ステップＳ３）。検出装置１４は、ＰＤＴ薬剤の活性化の検出のために、ＰＤＴ薬剤により活性化された一重項酸素の蛍光が健常部から発生しているかを検出する。【００４２】
制御装置１６は、検出装置１４により検出された蛍光に基づいて、健常部でＰＤＴ薬剤が活性化しているか否かを判断する（ステップＳ４）。制御装置１６が蛍光に基づいてＰＤＴ薬剤が活性化している否かをどのように判断するかについては後述する。【００４３】
ＰＤＴ薬剤が活性化している場合（ステップＳ４：ＹＥＳ）、健常部が傷害されているので、制御装置１６は、照射装置１２を制御して、パルス光のピーク強度を強めさせる（ステップＳ５）。これにより、健常部を通過するパルス光の強度が高くなり、健常部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を防止できる。すなわち、病変部に到達したところでパルス光の強度がＰＤＴ薬剤を活性化可能な所定範囲となる。どの程度までパルス光の強度を高めるかについては、後述する。【００４４】
ＰＤＴ薬剤が活性化していない場合（ステップＳ４：ＮＯ）、健常部が傷害されていないので、制御装置１６は、照射装置１２に現在のパルス光のピーク強度を維持させる（ステップＳ６）。【００４５】
そして、制御装置１６は、治療時間などの初期治療条件に基づいて、治療が終了したか否かを判断する（ステップＳ７）。治療が終了していない場合（ステップＳ７：ＮＯ）、ステップＳ２からの処理が繰り返される。治療が終了している場合（ステップＳ７
：ＹＥＳ）、光線力学的治療が終了される。【００４６】
次に、上記ステップＳ４において、ＰＤＴ薬剤が活性化しているか否かの判断の基準について説明する。併せて、ＰＤＴ薬剤が活性化している場合に、ステップＳ５において、どの程度までパルス光の強度を高めるかについて説明する。【００４７】
図６は蛍光効率とピーク強度および死細胞率との関係を示す図、図７は蛍光効率と死細胞率との関係を示す図である。【００４８】
図６においては、横軸に光のピーク強度、左側縦軸に蛍光効率、右側縦軸に死細胞率を示す。ここで、蛍光効率とは、照射装置１２により生体に入射した光の強度に対する、ＰＤＴ薬剤の活性化により生じた活性酸素からの蛍光の強度の割合である。図６では、白丸印によりピーク強度と蛍光効率の関係を示し、黒ひし形印（５Ｈｚ）および黒三角印（８０Ｈｚ）によりピーク強度と死細胞率との関係を示す。【００４９】
図７においては、横軸に蛍光効率、縦軸に死細胞率を示す。ここで、縦軸中の致死細胞率とは、ＰＤＴ薬剤の作用により、組織を構成する細胞が一定以上の割合で死滅したときに、組織としての機能が回復不能となる死細胞率の割合である。【００５０】
図６の白丸印を参照すると、ピーク強度０．４ＭＷ／ｃｍ２以上で励起した場合においては、ピーク強度が高いほど、ＰＤＴのタイプＩＩ反応が減少して、すなわち、一重項酸素の生成が抑制されるため、蛍光効率が低下している。ここでいう蛍光効率とは、照射した光のパワー密度に対する検出された一重項酸素の蛍光パワー密度である。黒ひし形印および黒三角印を参照すると、ピーク強度が高いほど、死細胞率が低下している。これらの傾向を考慮すると、ピーク強度が高いほど、蛍光効率および死細胞率のいずれも減少しているのがわかる。【００５１】
この結果から、蛍光効率および死細胞率には、図７に示すように、正の相関があることがわかる。【００５２】
図７から、致死細胞率となるときの蛍光効率の閾値ｘがわかる。蛍光効率が、閾値ｘ以下であれば、細胞は回復する。したがって、制御装置１６は、検出装置１４により検出する蛍光効率が閾値ｘよりも小さければ、健常部においてＰＤＴ薬剤が活性化しているとは判断しない。逆に、蛍光効率が閾値ｘ以上であれば、健常部においてＰＤＴ薬剤が活性化していると判断する。このように、蛍光効率が閾値ｘ以上か否かが、ステップＳ４においてＰＤＴ薬剤が活性化している否かの判断基準となる。【００５３】
ＰＤＴ薬剤が活性化している場合、閾値ｘよりも小さくできれば、致死細胞率に至らない。したがって、制御装置１６は、蛍光効率が閾値ｘよりも小さくなるように、照射装置１２を制御する。ここで、図６に示す通り、パルス光のピーク強度が大きくなるほど蛍光効率が低下する。したがって、制御装置１６は、照射装置１２を制御して、閾値ｘよりも低い蛍光効率が検出されるまで、パルス光のピーク強度を高める。これが、ステップＳ５において、どの程度までパルス光の強度を高めるかの基準である。【００５４】
このように、制御装置１６は、蛍光効率が閾値ｘよりも小さくなるように制御することによって、自然と、パルス光のピーク強度が病変部においてＰＤＴ薬剤が活性化されるような所定範囲となるように制御できる。【００５５】
第１実施形態における効果は次の通りである。【００５６】
一重項酸素の蛍光に基づいて、ＰＤＴ薬剤の活性化により生じたタイプＩＩ反応が検出される。そして、健常部におけるＰＤＴ薬剤の活性化が検出された場合、照射する光のピーク強度が上昇される。したがって、病変部よりも浅部にある健常部を透過する際の光のピーク強度が、ＰＤＴ薬剤が活性化する所定範囲よりも高くなる。これにより、健常部において光感受性物質が活性化しなくなるので、ＰＤＴ薬剤の活性化により健常部の細胞に深刻な傷害が与えられない。すなわち、健常部が保存される。【００５７】
一重項酸素から発生する蛍光を検出することによって、直接的に光感受性物質の活性化によるタイプＩＩ反応を検出できる。【００５８】
光線力学的治療装置１０は、照射部１２２および受光部１４０が共に生体表面側を向いているので、照射される光を直接受光することなく、生体内で発生された蛍光を受光できる。光線力学的治療装置１０は、照射された光ではなく、生体内で発生された蛍光を受光できるように受光部１４０が生体表面側を向いている。【００５９】
なお、上記検出装置１４は、上記構成に代えて、あるいは上記構成に加えて、分光部を備えてもよい。【００６０】
図８は、分光部を備える検出装置を示す図である。検出装置１４において、受光部１４０には分光部１４８が取り付けられている。分光部１４８は、たとえば、回折格子、プリズム、フィルター、またはそれらをシステム化した分光器などである。分光部１４８によって、波長１２７０ｎｍ付近の光のみを選択的に検出できる。【００６１】
また、光線力学的治療装置１０においては、照射装置１２の照射部１２２と、検出装置１４の受光部１４０とを別体に構成しているが、これに限られない。照射部１２２と受光部１４０とを一体に構成できる。【００６２】
図９は、照射部と受光部とを一体に構成した光線力学的治療装置の概略構成図である。【００６３】
図９に示すように、照射部と受光部とを一体にして先端部１２４として構成する。この場合、照射装置１２と検出装置１４の導光路が共通に用いられる。そこで、先端部１２４と、照射本体１２０および制御装置１６との間に、ダイクロイックミラーなどの光路制御装置１２６が配置される。光路制御装置１２６は、照射本体１２０により照射されるパルス光（波長６７０ｎｍ）については透過する。一方、生体からの蛍光（波長１２７０ｎｍ）については反射して、制御装置１６の方へ蛍光を導く。【００６４】
このように、光路制御装置１２６を配置することにより、照射装置１２と検出装置１４に共通した先端部１２４を用いられる。これにより、装置を簡略化できる。さらに、照射位置と受光位置とを接近させて、健常部におけるＰＤＴ薬剤の活性化をより確実に検出できる。【００６５】
なお、光線力学的治療装置の構成については、他の構成も考えられる。【００６６】
図１０は、光線力学的治療装置の他の構成を示す図である。【００６７】
図１０に示すように、照射装置１２からパルス光の繰り返し周波数を参照信号として取り出し、検出装置１４に設けた検波部１４９に入力するようにしてもよい。この場合、検波部１４９は、参照信号に基づいて、受光部１４０により受光した光からロックイン検出する。このように、受光時に検波することでノイズを低減して、確実にＰＤＴ薬剤の活性化を検出できる。【００６８】
（第２実施形態）
第１実施形態では、一重項酸素から発生する蛍光に基づいてＰＤＴ薬剤の活性化を検出している。第２実施形態では、蛍光ではなく、一旦生体に照射され、生体内を散乱して戻ってきた光を検出することにより、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出する。【００６９】
第２実施形態におけるＰＤＴ薬剤の活性化の検出のメカニズムについて説明する。【００７０】
図１１は、ＰＤＴ薬剤の活性化の検出のメカニズムを示す図である。【００７１】
図１１に示すように、生体に向けてパルス光が照射される。照射されたパルス光は、矢印で示すように生体内を進行する。図中右側の矢印により示すパルス光のように、パルス光の一部は、ＰＤＴ薬剤に吸収される。また、図中中央の矢印により示すパルス光のように、パルス光の一部は、生体を透過していく。図中左側の矢印により示すパルス光のように、パルス光の一部は、生体内で散乱を繰り返し、生体の表面から再度生体の外に放出される。以下では、生体内から再び生体外に放出された光を後方散乱光という。【００７２】
生体の浅部で散乱された光は、照射されたパルス光の入射部位に近い位置での後方散乱光となり、生体の深部で散乱された光は入射部位から離れた位置で後方散乱光として観察されることが知られている。したがって、深部に病変部があり、その浅部に健常部がある場合、入射部位近くで、後方散乱光を観察することで、健常部で散乱したパルス光の後方散乱光を検出できる。【００７３】
後方散乱光の量は、生体と生体に含まれるＰＤＴ薬剤の濃度および分布により変化する。生体浅部でＰＤＴ薬剤が活性化すると、発生した一重項酸素が生体浅部にあるＰＤＴ薬剤を傷害し、傷害されたＰＤＴ薬剤が活性を失い、ＰＤＴ薬剤の濃度が減少する。この現象をブリーチングという。生体浅部の健常部においてブリーチングが起こると、ＰＤＴ薬剤により吸収されるパルス光が減少するので、後方散乱光の量が増加する。【００７４】
このように、生体浅部におけるＰＤＴ薬剤の活性化は、後方散乱光の量の増加という結果になる。これを利用して、第２実施形態では、後方散乱光の量の増加に基づいて、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出する。【００７５】
第２実施形態において用いる光線力学的治療装置の構成は、図２に示すものと同様である。ただし、作用が異なる。【００７６】
照射装置１２は、病変部においてＰＤＴ薬剤が活性化するピーク強度となるパルス光を生体に向けて照射する。パルス光の一部は生体内で散乱して、生体外に後方散乱光として放出される。検出装置１４は、受光部１４０により、後方散乱光を受光する。受光する後方散乱光の量が増えると、すなわち、生体浅部におけるＰＤＴ薬剤の活性化が検出されると、制御装置１６は、照射本体１２０から出力するパルス光の出力を上げる。これにより、生体浅部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を防止する。【００７７】
図１２は、生体浅部でＰＤＴ薬剤が活性化した時の後方散乱光の増加を示す図である。【００７８】
ＰＤＴ薬剤を湿潤した細胞に、パルス光を照射し、そのときの後方散乱光の割合を検出した。その後、ＰＤＴ薬剤の活性化が生じてブリーチングが起こった細胞に、パルス光を照射し、後方散乱光の割合を検出した。同様の実験を５回繰り返した。【００７９】
ブリーチング発生前では、生体に入射したパルス光の量に対する後方散乱光の量の割合を調べると、平均３１％であった。ブリーチング発生後では、生体に入射したパルス光の量に対する後方散乱光の量の割合は平均３３％であった。比較すると２％増加しているので、２÷３１×１００≒６．４％後方散乱光が増加していることがわかる。【００８０】
このように、ＰＤＴ薬剤の活性化により後方散乱光が増加することがわかる。すなわち、後方散乱光の増加を検出すれば、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出できることがわかる。【００８１】
後方散乱光の増加は、上述の通り、ＰＤＴ薬剤濃度の低下による。後方散乱光を検出することにより、ＰＤＴ薬剤濃度を検出することもできる。したがって、ＰＤＴ薬剤濃度に基づいて、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出することもできる。【００８２】
（第３実施形態）
第１実施形態では、一重項酸素から発生する蛍光に基づいてＰＤＴ薬剤の活性化を検出している。第３実施形態では、蛍光ではなく、生体内を透過してきた光を検出することにより、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出する。【００８３】
第３実施形態におけるＰＤＴ薬剤の活性化の検出のメカニズムは、次の通りである。ＰＤＴ薬剤が活性化すると、ブリーチングが生じ、ＰＤＴ薬剤濃度が低下する。この結果、ＰＤＴ薬剤に吸収されずに生体を通り抜けるパルス光の量が多くなる。第３実施形態では、生体を通り抜けるパルス光を、生体に穿刺した検出装置により検出する。これにより、パルス光がＰＤＴ薬剤により吸収される割合（以下、吸光度という）を測定し、ＰＤＴ薬剤濃度の変化を検出する。ＰＤＴ薬剤濃度の低下に基づいて、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出できる。【００８４】
図１３は、第３実施形態に係る光線力学的治療装置の概略構成図である。第１実施形態と同様の構成については、同様の参照番号を付して、その説明を省略する。【００８５】
光線力学的治療装置２０は、照射装置１２、制御装置１６および検出装置２４を有する。【００８６】
検出装置２４は、穿刺部２４０および検出本体２４２を含む。【００８７】
穿刺部２４０は、針または板状に形成され、照射部１２２によりパルス光が照射される病変部よりも若干浅部に穿刺される。穿刺部２４０は、受光面が形成されており、照射部１２２からのパルス光を受光する受光部の役割を果たす。【００８８】
穿刺部２４０は、検出本体２４２に接続されている。検出本体２４２は、穿刺部２４０において受光されたパルス光に基づいて、パルス光の吸光度を測定する。検出本体２４２は、パルス光を照射開始直後の吸光度に対する現在の吸光度の割合を吸収減少として算出する。【００８９】
そして、吸収減少に基づいて、ＰＤＴ薬剤濃度の低下を検出すると共に、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出する。検出本体２４２は、検出結果を制御装置１６に送信する。【００９０】
制御装置１６は、ＰＤＴ薬剤の活性化が検出されると、照射本体１２０から出力するパルス光の出力を上げる。これにより、生体浅部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を防止する。【００９１】
以上のように、ＰＤＴ薬剤濃度の低下を検出することにより、ＰＤＴ薬剤の健常部における活性化を確実に検出できる。【００９２】
なお、穿刺部２４０は、治療の際に穿刺されるものでなくてもよい。穿刺部２４０は、穿刺されずに、治療に先立ち外科的に生体に埋め込まれてもよい。【００９３】
また、上記実施形態では、治療のためのパルス光を検出装置２４により検出して、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出している。しかし、ＰＤＴ薬剤に吸収される波長の光を別途生体に透過し、生体内に配置された穿刺部２４０により受光してもよい。この場合、照射装置１２には、別途、検査用の光を照射する検査光照射部を設ける。【００９４】
たとえば、治療用には照射部１２２から波長が６７０ｎｍの光を照射し、検査用には別途の検査光照射部から波長が４０５ｎｍの検査光を照射する。【００９５】
（第４実施形態）
第１実施形態では、一重項酸素から発生する蛍光に基づいてＰＤＴ薬剤の活性化を検出している。第４実施形態では、蛍光ではなく、生体内の酸素分圧を検出することにより、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出する。【００９６】
第４実施形態におけるＰＤＴ薬剤の活性化の検出のメカニズムは、次の通りである。ＰＤＴ薬剤が活性化すると、一重項酸素が発生する。一重項酸素を発生するために酸素が消費されるので、これにより酸素濃度が低下、すなわち、酸素分圧が低下する。したがって、酸素分圧の低下を検出できれば、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出できる。酸素分圧を測定する方法としてクラーク型酸素電極による経皮的酸素分圧測定法が知られている。【００９７】
図１４は、第４実施形態に係る光線力学的治療装置の概略構成図である。第１実施形態と同様の構成については、同様の参照番号を付して、その説明を省略する。【００９８】
光線力学的治療装置３０は、照射装置１２、制御装置１６および検出装置３４を有する。【００９９】
検出装置３４は、酸素電極３４０および検出本体３４２を有する。【０１００】
酸素電極３４０は、照射部１２２の近傍において、生体に接触するように配置される。酸素電極３４０は、酸素分圧を測定する。検出本体３４２は酸素分圧の低下を検出することによって、生体浅部においてＰＤＴ薬剤が活性化していることを検出する。検出本体３４２は、検出結果を制御装置１６に送信する。【０１０１】
制御装置１６は、ＰＤＴ薬剤の活性化が検出されると、照射本体１２０から出力するパルス光の出力を上げる。これにより、生体浅部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を防止する。【０１０２】
以上のように、酸素分圧の低下を検出することにより、ＰＤＴ薬剤の健常部における活性化を確実に検出できる。【０１０３】
（第５実施形態）
第１実施形態では、一重項酸素から発生する蛍光に基づいてＰＤＴ薬剤の活性化を検出している。第５実施形態では、蛍光ではなく、健常部におけるＰＤＴ薬剤から放出されるリン光を検出することにより、健常部における酸素濃度を特定し、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出する。【０１０４】
第５実施形態におけるＰＤＴ薬剤の活性化の検出のメカニズムは、次の通りである。ＰＤＴ薬剤が活性化されると、ＰＤＴ薬剤のエネルギーによって一重項酸素が発生する。一重項酸素を発生するために酸素が消費されるので、ＰＤＴ薬剤周囲の局所的な酸素濃度が低下する。したがって、病変部の周囲の健常部における酸素濃度の低下を検出できれば、健常部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を検出できる。このとき局所的な酸素濃度の低下を測定できる範囲は、パルス光が照射された際に薬剤が周囲酸素と反応する可能性のある範囲のことである。薬剤の三重項寿命（活性化されている時間）を１ｍｓと仮定すると、局所的な酸素濃度の低下を測定できる範囲は、薬剤を中心におよそ２．６μｍの局所的な範囲である。【０１０５】
ここで、酸素濃度は、ＰＤＴ薬剤から発生されるリン光に基づいて検出できる。リン光は、活性化されたＰＤＴ薬剤のエネルギーが酸素に受け渡されない場合に、ＰＤＴ薬剤が自ら発生する光である。ＰＤＴ薬剤の周囲の酸素濃度が低下すると、エネルギーの受け渡しができずにリン光を発生するＰＤＴ薬剤の確率が増加し、全体としてのリン光の強度も向上する。【０１０６】
したがって、健常部において発生したリン光の強度の増加を検出することによって、酸素濃度の低下を検出でき、結果として、健常部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を検出できる。【０１０７】
リン光を検出する第５実施形態の光線力学的治療装置について説明する。【０１０８】
図１５は、第５実施形態に係る光線力学的治療装置の概略構成図である。第５実施形態に係る光線力学的治療装置は、検出装置の構成を除いて、図２に示す第１実施形態と同様の構成を有する。第１実施形態と同様の構成については、同様の参照番号を付して、その説明を省略する。【０１０９】
また、図１６はリン光が発生するタイミングを示す図、図１７は実験により発生したリン光の波形データを示す図、図１８は発生したリン光の寿命の定義を説明するための図、図１９はリン光の寿命と酸素濃度との相関関係を示す図、図２０は異なる酸素濃度において発生するリン光の波形を示す図である。【０１１０】
光線力学的治療装置４０は、照射装置１２、制御装置１６および検出装置４４を有する。【０１１１】
検出装置４４は、受光部４４０、検出本体４４２を有する。【０１１２】
受光部４４０は、照射部１２２の近傍において、生体に接触するように配置される。受光部４４０は、健常部において発生した光を受光する。なお、病変部でもリン光の発生はありうる。しかし、リン光は非常に微弱なため、病変部で発生したリン光は受光部４４０では検出できない。検出本体４４２は、受光部４４０で受光した光からリン光を検出する。このために、検出本体４４２は、さらに、分光部４４４と、ゲート付光電子増倍管４４６を含む。【０１１３】
分光部４４４は、たとえば、回折格子、プリズム、フィルター、またはそれらをシステム化した分光器などである。分光部４４４によって、リン光の波長付近の光のみを選択的に検出できる。リン光のピーク波長は、ＰＤＴ薬剤から発生する蛍光（図１６参照）の波長と、一重項酸素が基底酸素状態に戻るときに放出する光の波長（たとえば、７６２ｎｍ）との間の値である。【０１１４】
ゲート付光電子増倍管４４６は、ゲート（受光時間調節部）の開閉により、分光部４４４からの光を取り入れる時間を制限しつつ、取り入れた微弱なリン光を増幅して検出できる超高感度光センサである。【０１１５】
光を取り入れる時間を制限する理由は、次の通りである。図１６に示すように、リン光は、励起光、蛍光に続いて発生する光である。励起光は、照射部１２２から照射されるパルス光である。図１６に示す蛍光は、第１実施形態において検出した一重項酸素から発生する蛍光とは異なり、生体内に導入されたＰＤＴ薬剤から発生する。リン光は、周囲に酸素分子が存在しないためＰＤＴ薬剤から酸素にエネルギーを与えることができず、ＰＤＴ薬剤からエネルギーとして直接放出されるときに発生する光である。【０１１６】
このように、リン光は、励起光、蛍光とは異なるタイミングで発生し、図示している以上に励起光および蛍光より微弱である。したがって、ゲート付光電子増倍管４４６は、リン光の発生タイミングに合わせてゲートを開いて、リン光の発生を特定しやすくしている。【０１１７】
リン光は、図１６に示すように、照射装置１２にパルス光発生のトリガー信号が入力された時点ｔ０から計測して、時刻ｔ１とｔ２の間で主に発生している。したがって、ゲート付光電子増倍管４４６は、時刻ｔ１〜ｔ２の間だけゲートを開き、リン光を検出する。ゲートを開くタイミングは測定装置により異なる。たとえば、図１７に示すように、波長７１０ｎｍのパルス光を照射したときの発光の波形（積算回数１０００回）の測定結果を得た場合には、ゲートを開くタイミング、すなわち、時刻ｔ０からｔ１までの時間は、２１７．９９３から２１８．５９３μｓの間であった。また、ゲートの開放時間、すなわち、時刻ｔ１からｔ２までの時間は、２４．００７μｓから２４．６０７μｓの間であった。図１７からわかるようにリン光の寿命は数程度なので、このゲートの開放時間で十分に測定できる。検出装置４４は、光の検出結果を制御装置１６に送信する。【０１１８】
制御装置１６は、検出装置４４で検出した光の検出結果を受信し、次のように作用する。【０１１９】
（１）制御装置１６は、まず、検出装置４４において検出されたリン光の寿命を算出する。（２）制御装置１６は、算出したリン光の寿命から健常部における酸素濃度を特定する。（３）制御装置１６は、特定した酸素濃度に基づいて、健常部においてＰＤＴ薬剤の活性化が起こっているかを検出する。制御装置１６は、ＰＤＴ薬剤の活性化を検出すると、照射本体１２０から出力するパルス光の出力を上げる。これにより、生体浅部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を防止する。【０１２０】
上記制御装置１６の作用を順に具体的に説明する。【０１２１】
（１）リン光の寿命を算出する手順は次の通りである。【０１２２】
制御装置１６は、検出装置４４から送信された信号をそのまま解析すると、図１８の上側に示す波形ｆ＋ｐを得る。この波形ｆ＋ｐは、ＰＤＴ薬剤の蛍光とリン光とが混ざって測定されたグラフである。波形ｆ＋ｐのうち、中央で光強度が若干向上している部分がリン光に相当する。【０１２３】
制御装置１６は、波形ｆ＋ｐのうちリン光の部分を除く部分、すなわち、リン光が現れる前後の値を用いて、リン光が現れる部分を補完し、一点鎖線で示すフィッティング曲線ｆを作成する。フィッティング曲線ｆは、蛍光の強度のみを示すグラフとなる。そして、制御装置１６は、グラフｆ＋ｐとフィッティング曲線ｆとの差分を演算し、リン光のみを示すグラフｐを作成する。【０１２４】
制御装置１６は、作成したグラフｐのピークＰを求め、光強度がピークＰから、ピークＰをｅで除算した値に落ちるまでの時間τを算出する。制御装置１６は、この時間τをリン光の寿命と定義する。【０１２５】
（２）リン光の寿命から健常部における酸素濃度を特定する手順は次の通りである。【０１２６】
制御装置１６には、図１９に示すように、リン光の寿命と酸素濃度との相関関係が予め記憶されている。この相関関係は、実験的に求まる。【０１２７】
たとえば、酸素濃度が１８ｍｍＨｇの場合と、酸素濃度が１５０ｍｍＨｇの場合とでは、図２０に示すように、リン光の波形が異なる。なお、図２０に示す測定結果は、酸素濃度が異なる生体に、波長７１０ｎｍのパルス光を照射して得られた発光の波形（積算回数１０００回）である。上記のリン光寿命の演算手順に従って、それぞれのフィッティング曲線を求め、リン光のみの強度を示すグラフを作成し、寿命を算出する。すると、酸素濃度が１８ｍｍＨｇの場合では、リン光の寿命が０．３６μｓであり、酸素濃度が１５０ｍｍＨｇの場合では、リン光の寿命が０．３４μｓであった。酸素濃度の差によって、０．０２μｓも、リン光の寿命が異なった。このように、実験を重ねることによって、図１９に示す相関関係は求まる。【０１２８】
制御装置１６は、算出したリン光の寿命を、図１９に示す相関関係に当てはめて、酸素濃度を特定する。【０１２９】
（３）特定した酸素濃度に基づいて、健常部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を検出する手順は次の通りである。【０１３０】
制御装置１６には、予め、ＰＤＴ薬剤が活性化しているか否かの判断基準となる酸素濃度値が入力されている。したがって、制御装置１６は、特定した酸素濃度が、当該判断基準値以上か未満かを調べる。そして、酸素濃度が判断基準値未満の場合、健常部でも酸素が使用され、ＰＤＴ薬剤の活性化が発生していると判断する。【０１３１】
以上のように、第５実施形態では、健常部で発生するリン光を検出することによって、酸素濃度を特定し、健常部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を検出できる。特に、リン光は、病変部周囲の健常部における酸素濃度の低下に反比例して寿命が長くなるので、病変部の周囲という局所における酸素濃度の低下を特定できる。したがって、より精度良く、健常部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を検出できる。【０１３２】
また、検出装置４４では、分光部４４４により、リン光を含む波長でフィルタリングし、さらに、ゲート付電子増倍管４４６のゲートにより光を取り込む時間を制限している。したがって、検出装置４４において検出される光の中に含まれる励起光や蛍光などを最小限にできる。リン光の検出精度を向上できる。【０１３３】
なお、第５実施形態では、リン光の寿命を求めることによって、酸素濃度を特定している。しかし、これに限定されない。リン光パルスまたはリン光スペクトルの相対的な光強度に基づいて、酸素濃度を特定してもよい。この場合、予めリン光パルスまたはリン光スペクトルの強度と酸素濃度との相関関係を実験等により求めておく。【０１３４】
また、第５実施形態では、リン光を計測する方法としてゲート付光電子増倍管を例に説明した。しかし、これに限定されない。リン光以外の励起光や蛍光が光電子増倍管に入射する時間を制限するためにポッケルスセルなどの光シャッターを用いてもよい。【０１３５】
以上、第１実施形態〜第５実施形態を通じて説明してきたように、健常部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を検出する。そして、健常部でＰＤＴ薬剤が活性化している場合には、照射するパルス光のピーク強度を高めることによって、ＰＤＴ薬剤が健常部よりも深部の病変部において活性化するようにする。したがって、浅部の健常部を確実に温存したまま、病変部のみを治療できる。【０１３６】
このようなＰＤＴは、経尿道的に尿道組織を温存したまま、深部の前立腺にある前立腺癌を治療することに利用できる。また、急性心筋梗塞のリスクを回避するための線維性被膜温存動脈硬化粥腫の治療にも利用できる。【０１３７】
なお、上記第１実施形態〜第５実施形態においては、生体浅部にある健常部にあえて高ピーク強度の光を照射することによって、生体浅部におけるＰＤＴ薬剤の活性化させずに、生体深部の病変部を治療する光線力学的治療方法に適用している。しかし、本発明は、他の光線力学的治療方法にも適用できる。【０１３８】
他の光線力学的治療方法としては、たとえば、ＰＤＴ薬剤を活性化させる波長の２倍の波長の光を、生体深部の病変部に集光し、自然二光子励起を生じさせて病変部を治療するものがある。このような光線力学的治療方法では、集光により生体深部での光強度を高める一方、生体浅部の健常部においては光強度を低く維持し、浅部の健常部を保存する。【０１３９】
したがって、本発明を適用する際には、生体浅部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を監視し、活性化を検出した場合には、活性酸素による蛍光効率が閾値以下になるようにパルス光の強度を弱める。これにより、生体浅部におけるＰＤＴ薬剤の活性化を防止でき、健常部が傷害を受けないように制御しながら、治療を維持できる。
【図面の簡単な説明】
【０１４０】
【図１】光のピーク強度と死細胞率との関係を示す図である。
【図２】本実施形態における光線力学的治療装置の概略構造を示す図である。
【図３】本検出装置の概略構成を示す図である。
【図４】一重項酸素蛍光ピークを含むスペクトル示す図である。
【図５】光線力学的治療装置の動作の流れを示すフローチャートである。
【図６】蛍光効率とピーク強度および死細胞率との関係を示す図である。
【図７】蛍光効率と死細胞率との関係を示す図である。
【図８】分光部を備える検出装置を示す図である。
【図９】照射部と受光部とを一体に構成した光線力学的治療装置の概略構成図である。
【図１０】光線力学的治療装置の他の構成を示す図である。
【図１１】ＰＤＴ薬剤の活性化の検出のメカニズムを示す図である。
【図１２】生体浅部でＰＤＴ薬剤が活性化した時の後方散乱光の増加を示す図である。
【図１３】第３実施形態に係る光線力学的治療装置の概略構成図である。
【図１４】第４実施形態に係る光線力学的治療装置の概略構成図である。
【図１５】第５実施形態に係る光線力学的治療装置の概略構成図である。
【図１６】リン光が発生するタイミングを示す図である。
【図１７】実験により発生したリン光の波形データを示す図である。
【図１８】発生したリン光の寿命の定義を説明するための図である。
【図１９】リン光の寿命と酸素濃度との相関関係を示す図である。
【図２０】異なる酸素濃度において発生するリン光の波形を示す図である。
【符号の説明】
【０１４１】
１０、２０、３０、４０…光線力学的治療装置、
１２…照射装置、
１４、２４、３４、４４…検出装置、
１６…制御装置、
１２０…照射本体、
１２２…照射部、
１２４…先端部、
１２６…光路制御装置、
１２８…変調部、
１４０、４４０…受光部、
１４２、２４２、３４２、４４２…検出本体、
１４４…光電子増倍管、
１４６…冷却装置、
１４８、４４４…分光部、
１４９…復調部、
２４０…穿刺部、
３４０…酸素電極、
４４６…ゲート付光電子増倍管。
【図１】
2006049132.tif 000002
【図２】
2006049132.tif 000003
【図３】
2006049132.tif 000004
【図４】
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【図５】
2006049132.tif 000006
【図６】
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【図７】
2006049132.tif 000008
【図８】
2006049132.tif 000009
【図９】
2006049132.tif 000010
【図１０】
2006049132.tif 000011
【図１１】
2006049132.tif 000012
【図１２】
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【図１３】
2006049132.tif 000014
【図１４】
2006049132.tif 000015
【図１５】
2006049132.tif 000016
【図１６】
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【図１８】
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【図１９】
2006049132.tif 000019
【図１７】
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【図２０】
2006049132.tif 000021
【国際調査報告】
2006049132.tif 000022
2006049132.tif 000023
2006049132.tif 000024
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