【事件の表示】
　特願２０１２−２４８６６０「体性に由来する複数の細胞種からなる原始的な器官様をなし得る細胞塊」拒絶査定不服審判事件〔平成２５年　４月　４日出願公開、特開２０１３−　５９３３７〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯
　本願は，平成１９年　６月２５日に出願した特願２００７−１６６８９３号（優先権主張番号：特願２００６−１７６７６３号　優先日：平成１８年６月２７日　日本）の一部を，特許法第４４条第１項の規定により平成２４年１１月１２日に新たな特許出願として分割したものであって，以降の手続の経緯は以下のとおりのものである。
平成２６年　５月２０日付け　拒絶理由通知書
平成２６年　７月２３日　　　意見書・手続補正書
平成２６年１１月１９日付け　拒絶理由通知書(最後)
平成２７年　３月２７日付け　拒絶査定
平成２７年　６月３０日　　　審判請求書・手続補正書
第２　本願発明の認定
　この出願の請求項１に係る発明は、平成２７年６月３０日付け手続補正書により補正された特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定されるとおりのものであり、その請求項１に係る発明(以下、「本願発明」という。)は、次のとおりである。
「【請求項１】
　体性に由来する複数の体性細胞種からなる原始的な器官様をなし得る細胞塊の製造方法であって、
　外毛根鞘細胞と間葉系細胞を含み、該間葉系細胞が未分化状態を保っている培養液を用意し、
　該培養液を混合後、その混合細胞培養液にＷｎｔシグナル活性化剤を添加し、
　前記Ｗｎｔシグナル活性化剤を含有する培養液を所定期間にわたり非平面接触性培養に委ね、
　前記非平面接触性培養した培養物の培地をＷｎｔシグナル活性化剤非含有培地と交換し、更に所定期間培養する、
　ことを含んでなる、方法。」
第３　原査定における拒絶の理由の概要
　原査定の拒絶の理由は、本願発明の詳細な説明は、本願請求項１，４〜６，９〜１２に記載された発明を当業者がその実施をすることができる程度に明確かつ十分に記載されておらず、この出願は、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない、及び、本願請求項１，４〜６，９〜１２に記載された発明は、本願の発明の詳細な説明に記載されたものでなく、この出願は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない、というものである。
第４　当審の判断
１．本願明細書の記載事項
ア．「【０００６】
　本発明は、複数種の分化した体性細胞を組み合わせ、培養することで、原始的な器官様をなし得る細胞塊を提供することを課題とする。」
イ．「【０００９】
　本発明により、複数種の体性細胞種をからなる原始的な器官様をなし得る細胞塊の提供が可能となる。
　【００１０】
　本発明でいう体性細胞とは、生体の各種器官を構成する細胞へと分化するに至った細胞をいい、未分化状態の幹細胞とは相反する細胞をいう。本発明においては、２以上の体性細胞を使用することを特徴とし、好ましくは、上皮系細胞系と間葉系細胞との組み合わせ、内皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせ、あるいは上皮系細胞と間葉系細胞と内皮系細胞と組み合わせなど、様々であってよい。」
ウ．「【００１１】
　本発明に係る細胞塊により形成し得る器官としては、特に限定されるものではないが、例えば毛包、肺、腎臓、肝臓、膵臓、脾臓、心臓、胆嚢、小腸、結腸、大腸、関節、骨、歯、血管、リンパ管、角膜、軟骨、嗅覚器官、聴覚器官、など、様々な器官が挙げられる。」
エ．「【００１８】
　本発明においては、上記複数の体性細胞の混合物にＷｎｔシグナル活性化剤を添加し、培養を行うことを特徴とする。Ｗｎｔシグナルとは、β−カテニンの核移行を促し、転写因子としての機能を発揮する一連の作用をいう。本シグナルは細胞間相互作用に起因し、例えば、ある細胞から分泌されたＷｎｔ３Ａというタンパクがさらに別の細胞に作用し、細胞内のβ−カテニンが核移行し、転写因子として作用する一連の流れが含まれる。一連の流れは上皮間葉相互作用を例とする器官構築の最初の現象を引き起こす。Ｗｎｔシグナルはβ−カテニン経路、ＰＣＰ経路、Ｃａ2+経路の三つの経路を活性化することにより、細胞の増殖や分化、器官形成や初期発生時の細胞運動など各種細胞機能を制御することで知られる。Ｗｎｔシグナルがもつその未分化状態維持機能により、分化を抑制する目的でＥＳ細胞の培養の際に利用されてはいるが（例えば、Noburo Sato et al., Nature Medicine Vol.10, No.1, Jan. 2004)、体性細胞の培養におけるその利用及び効果については全く知られていない。」
オ．「【実施例】
【００２６】
　毛乳頭細胞
　ヒト由来毛乳頭細胞はドナーより提供された頭皮組織より調製した。真皮組織を除去後、脂肪組織内に存在する毛包部位を実体顕微鏡下にてピンセットおよび眼科はさみを用いて採取した。採取した毛包は抗生剤入りの培養液内に移し、さらに同顕微鏡下にて毛乳頭細胞部位を目視にて分離採取した。分離した毛乳頭細胞は培地内にて１０ｃｍ丸型ディッシュ（ＴＲＰ社製）において、３７℃、９５％ＣＯ2下にて１週間以上培養し、後の実験に供した。使用した培地はＡｄｖａｎｃｅｄ−ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１５％牛胎児由来血清、２０ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦ、１０ｎｇ／ｍｌｎｏＥＧＦ、２ｍＭのＬ−グルタミン、ペニシリン・ストレプトマイシン・アンフォテリシン混合液《100倍希釈》、３．５ｕｌ／５００ｍｌのβメルカプトエタノールである。細胞は適宜同じ条件下で継代培養した。継代の際には、０．５％トリプシン／ＥＤＴＡ溶液にて細胞剥離を行い、細胞を新たなディッシュに移し入れ、同じ組成の新鮮培地で継代培養を行った。
　【００２７】
　ＢＩＯ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）を添加する場合、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホオキサイド）にて１０ｍＭ溶解して、０．１〜５μＭとなるように添加した。」
カ．「【００３０】
ハンギングドロップ培養
培地構成
　Ａｄｖａｎｃｅｄ−ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）３０％、２ｍＭのＬ−グルタミン、ペニシリン・ストレプトマイシン混合液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）（１００倍希釈）３．５μｌ／５００ｍｌのβメルカプトエタノールとＨｕｍｅｄｉａＫＧ−２（クラボウ社）を１：１にて混合した。Ｂｉｏ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）を添加する場合、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホオキサイド）にて１０ｍＭ溶解して、０．１〜５μＭとなるように添加した。
　【００３１】
作成方法
　毛乳頭細胞はＰ３（継代数１をＰ1と表記）以上にてＢｉｏ負荷有り又は無しで、表皮角化細胞についてはＰ３以内の細胞を準備した。各細胞が１×１０5個になるように、トリプシン処理後に各々の培地により希釈した。Ｂｉｏ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）を添加する場合、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホオキサイド）にて１０ｍＭ溶解して、０．１〜５μＭとなるように添加した。１０ｃｍ角の四角い培養皿（フタ）天井側に各培養液２５〜３５μｌを分注して混合し、適当な大きさのドーム上の水滴を作成した。注意深くフタを閉じ、培養液が落下しないようにして、３７℃、５％ＣＯ2雰囲気にて培養した。３日後、上記で使用したのと同じ培地にて、培地交換を行った。さらに４日間培養後、一部は下記のＲＴ−ＰＣＲ解析（１）へ供した。残りは、すべての培地をＢｉｏ無しの条件にある培地へ交換した。３日目に同様な培地交換をおこない、７日目に生成した細胞塊を回収し、下記の免疫染色へ供した。」
キ．「【００５１】
　Ｗｎｔ１０Ｂ　ＲＴ−ＰＣＲ
　毛乳頭細胞はＰ３（継代数１をＰ1と表記）にてＢｉｏ負荷なしで、外毛根鞘細胞についてはＰ３以内の細胞を準備した。　各細胞が３×１０3個になるように、トリプシン処理後に各々の培地により希釈した。　Ｂｉｏ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホオキサイド）にて１０ｍＭ溶解して、０．１〜５μＭとなるように添加した。１０ｃｍ角の四角い培養皿（フタ）天井側に各培養液２５〜３５μｌを分注して混合し、適当な大きさのドーム上の水滴を作成した。注意深くフタを閉じ、培養液が落下しないようにして、３７℃、５％ＣＯ2雰囲気にて培養した。
　【００５２】
　３日後、上記にて使用したのと同じ培地にて、培地交換を行った。７日後にサンプルを回収し、下記のとおりのＲＴ−ＰＣＲ解析（３）に供した（図９の「７日」）。さらに残りの同様の細胞については培地をＢｉｏ無しの培地へ交換して分化誘導させ、１０日後と１４日後に回収したサンプルを同様に下記のとおりのＲＴ−ＰＣＲ解析（３）に供した（図９の「１０日」および「１４日」）。
　【００５３】
　ＲＴ−ＰＣＲ解析（３）
　サンプルからＴＲＩＺＯＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、ＲＮＡを抽出した。各ＲＮＡ２００ｎｇ相当をＲｅｖＴｒａＡＣＥ（ＴＯＹＯＢＯ）５０μｌの反応系にてｃＤＮＡへ逆転写した。得られたサンプル４μｌを下記のプライマーを用い、２０μｌの系で定量ＰＣＲ（LightCycler system、Roche）にかけた。LightCycler　FastStart DNA Master SYBR Green Ｉ（Ｒｏｃｈｅ）の反応プロトコール［９５℃、１０ｓｅｃ；６３℃、１０ｓｅｃ；７２℃、１５ｓｅｃを４０サイクル］を用いた。
Sense Primer（順鎖）　gaagttctctcgggatttcttggatcc　（配列番号１５）
Anti-Sense Primer（逆鎖）　cggttgtgggtatcaatgaagatgg（配列番号１６）
　【００５４】
　その結果を図９に示す。データはすべて、細胞塊においてＢＩＯを負荷させていない場合の３日後の発現量に対する相対的な発現量として表した。Ｗｎｔ１０Ｂは毛包の形態形成期と発毛期において、主に上皮系細胞により発現され、上皮系細胞−間葉系細胞の相互作用に関与する遺伝子であることが知られている。図に示すとおり、ＢＩＯの存在下で培養することによりＷｎｔシグナルを活性化せしめた細胞においては、ＢＩＯの存在下で培養する限りはＷｎｔ１０Ｂの発現は、ＢＩＯの非存在下で培養したコントロールと同程度しか認められなかったのに対し、その後ＢＩＯを取り除くことで細胞の分化を誘導せしめた細胞では、Ｗｎｔ１０Ｂの発現が、経時的に高まった。よって、本実験系では、ＢＩＯの存在下で培養後、ＢＩＯを除いて培養することで、毛包上皮系細胞（外毛根鞘細胞）の分化、さらには自律的な器官形成が誘導されることが明らかとなった。」
２．判断
　請求項１、及び第４　１．ア．等の記載からみて、本願発明の解決しようとする課題は、複数種の体性細胞種からなる原始的な器官様をなし得る細胞塊を製造できる方法を提供することにあると認められる。
　そして、本願明細書には、上記第４　１．ウ．のとおり、該細胞塊により形成し得る器官について、「例えば毛包、肺、腎臓、肝臓、膵臓、脾臓、心臓、胆嚢、小腸、結腸、大腸、関節、骨、歯、血管、リンパ管、角膜、軟骨、嗅覚器官、聴覚器官、など、様々な器官」が例示されている。
　一方、本願明細書の実施例には、上記第４　１．オ．〜キ．のとおり、複数種の体性細胞種として外毛根鞘細胞と毛乳頭細胞を組み合わせて、Ｗｎｔシグナル活性化剤としてＢＩＯを用いた場合に自立的な器官が形成されており、間葉系細胞が毛乳頭細胞であり、原始的な器官様をなし得る細胞塊における器官が毛包である場合については、上記課題が解決できることを当業者が認識できる程度に記載されていると認められる。
　しかしながら、一般に、上皮、神経系細胞を除く、ほとんどの細胞が間葉系細胞に属するといえるほど、間葉系細胞には非常に多くの種類が含まれることが当業者によく知られている(例えば、山元寅男，間葉系細胞の発生・分化，日本網内系学会会誌，１９８９年１２月，Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．４，ｐｐ．２７７−２８４参照)。
　また、Ｗｎｔシグナルは、本願の原出願前に哺乳動物において１９種のＷｎｔ遺伝子が同定されており、単一なシグナル経路でないことも公知である(例えば、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ，２００５，１５（３），ｐｐ．５２７−５３１［ＰｕｂＭｅｄ：１５７０２２４９］Ａｂｓｔｒａｃｔ参照)。
　そして、本願発明は、多くの種類の間葉系細胞と外毛根鞘細胞の組み合わせから、上記のような様々な器官となる細胞塊を製造する方法を包含していると認められるが、複数存在するＷｎｔシグナルのどの経路を活性化すれば、どのような細胞や器官が得られるかについての技術常識が存在するとは認められないから、間葉系細胞が毛乳頭細胞以外の任意の細胞である場合に、任意の原始的な器官様をなし得る細胞塊を形成することを当業者が合理的に理解できるとは認められない。
　したがって、本願発明は、発明の詳細な説明及び技術常識等により、発明の課題を解決できると当業者が認識できる範囲を超える発明が記載されていると認められる。
　よって、本願発明は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない。
３．審判請求人の主張について
　審判請求人は、平成２７年６月３０日付け審判請求書において、「本願発明は特許されるべきものである。」と主張するのみで、具体的な根拠及び理由を何ら述べておらず、本願発明が特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていないことは上記第４　２．のとおりであるから、審判請求人の主張は認められない。
第５．むすび
　以上のとおり、本願発明は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしておらず、特許を受けることができないものであるから、他の理由について言及するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。
よって、結論のとおり審決する。