【手続補正書】
【提出日】令和2年6月11日(2020.6.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
好ましい態様において、前記発光分子がフルオロフォアであり、より好ましくは、前記フルオロフォアが、以下：
【化２】
2019528456.tif 000001
からなる群から選択され、ここで各Rは、H, CH3, C2H5及びC3H7から独立して選択され、最も好ましくは、前記フルオロフォアは、以下：
【化３】
2019528456.tif 000002
からなる群から選択される。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
好ましい態様において、前記発光分子がフルオロフォアであり、より好ましくは、前記フルオロフォアが、以下：
【化５】
2019528456.tif 000003
からなる群から選択され、ここで各Rは、H, CH3, C2H5及びC3H7から独立して選択され、最も好ましくは、前記フルオロフォアは、以下：
【化６】
2019528456.tif 000004
からなる群から選択される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
フルオロフォアは、限定されないが、Alexa Fluor(登録商標)(Alex FluorはMolecular Probes, Inc.の登録商標であり、同社から入手出来る) 350, 405, 430, 488, 532, 546, 555, 568, 594, 610, 633, 635, 647, 660, 680, 700, 750及び790、Brilliant VioletTM (Brilliant VioletはBioLegend(登録商標)から入手出来る) 420, 510, 605, 650, 711及び786、Brilliant Ultra-VioletTM (Brilliant Ultra-VioletはBD Biosciences, Inc.) 395及び737 nm、Dylight(登録商標)(DylightはPierce Biotechnology, Inc.の登録商標であり、同社から入手出来る)350, 405, 488, 550, 594, 633, 650, 680, 755及び800、Violetfluor(登録商標)450及びRedfluor(登録商標)710(Violetfluor及びRedfluorはTonbo Biotechnologies Corporationの登録商標であり、同社から入手出来る)、アロフィコシアニン(APC)、APC Alexa Fluor(登録商標)750、APC-Cy7、ペリジニン-クロロフィルタンパク質(PerCP)、PerCP-Cy5、PerCP-Cy5.5、PerCP-Cy7、プロビジウムヨーダイド(PI)、フィコエリトリン(PE)、PE-Cy5、PE-Cy5.5、PE-Cy7、PE-Texas Red(登録商標)(Texas RedはMolecular Probes, Inc.の登録商標)、フルオレセイン(FITC)、アミノメチルクマリン(AMCA)、Marina Blue(登録商標)及びCscade Blue(登録商標)(Marina Blue及びCascade BlueはMolecular Probes, Inc.の登録商標であり、同社から入手出来る)、Cascade Yellow, Pacific Blue, Qdot(登録商標)605 (QdotはLife Technologies Corpの登録商標)、テトラメチルローダミン(TRlTC)、Cy3、Cy5、Cy5.5、Texas Red(登録商標)、及び以下：
【化７】
2019528456.tif 000005
(式中、RはH, CH3, C2H5及びC3H7から独立して選択される)の化合物を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上の循環腫瘍細胞を同定する方法であって：
(i)対象に由来する血液又は血清試料を、発光分子及び磁性ビーズからなる群から選択される物質と結合させたリン脂質エーテル(PLE)類似体を含有する組成物と接触させる工程；
(ii)当該血液又は血清試料を蛍光顕微鏡又はフローサイトメトリーに供する工程；
を含み、当該物質が磁性ビーズである場合、当該物質はリンカーを介してPLEと結合する、方法。
【請求項２】
前記物質が結合したPLEが、式(I)〜(IV)：
【化１】
2019528456.tif 000006
からなる群から選択され、ここで：
nは16〜30の整数であり；
Yは-H, -OH, -OR, -C(O)OH, 及び-OC(O)Rからなる群から選択され、ここでRはアルキルであり；かつ
Xは発光分子又は磁性ビーズである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Xが発光分子である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記発光分子がフルオロフォアである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記フルオロフォアが、以下：
【化２】
2019528456.tif 000007
からなる群から選択され、ここで各Rは、H, CH3, C2H5及びC3H7から独立して選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記物質が結合したPLE類似体が式(II)の化合物であり、前記フルオロフォアが、以下：
【化３】
2019528456.tif 000008
からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記Xが磁性ビーズである、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記磁性ビーズが、ナノ磁性ビーズ、マイクロ磁性ビーズ、常磁性ビーズ、及び超常磁性ビーズからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記リンカーが、ビオチン-ストレプトアビジンリンカー、アゼチジノンリンカー、及びアミン-、アジド、アルキン-、カルボキシル-及びヒドロキシル基リンカー並びにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記１つ以上の循環腫瘍細胞が、乳癌、肺癌、胸腺癌、子宮頸癌、扁平上皮癌、前立腺癌、膵臓癌及び直腸結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、及び癌幹細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
１つ以上の循環腫瘍細胞(CTC)を単離する方法であって：
(i)対象に由来する血液又は血清試料を、発光分子及び磁性ビーズからなる群から選択される物質と結合させたリン脂質エーテル(PLE)類似体を含有する組成物と接触させる工程；
(ii)当該血液又は血清試料をフローサイトメトリー又は磁場に供する工程；
を含み、当該物質が磁性ビーズである場合、当該物質はリンカーを介してPLEと結合し、当該血液又は血清試料は磁場に供され、そして当該物質が発光分子である場合、当該血液又は血清試料はフローサイトメトリーに供される、方法。
【請求項１２】
前記物質が結合したPLEが、式(I)〜(IV)：
【化４】
2019528456.tif 000009
からなる群から選択され、ここで：
nは16〜30の整数であり；
Yは-H, -OH, -OR1, -C(O)OH, 及び-OC(O)R1からなる群から選択され、ここでR1はアルキルであり；かつ
Xは発光分子又は磁性ビーズである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記Xが発光分子である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記発光分子がフルオロフォアである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記フルオロフォアが、以下：
【化５】
2019528456.tif 000010
からなる群から選択され、ここで各Rは、H, CH3, C2H5及びC3H7から独立して選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記物質が結合したPLE類似体が式(II)の化合物であり、前記フルオロフォアが、以下：
【化６】
2019528456.tif 000011
からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記Xが磁性ビーズである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記磁性ビーズが、ナノ磁性ビーズ、マイクロ磁性ビーズ、常磁性ビーズ、及び超常磁性ビーズからなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記リンカーが、ビオチン-ストレプトアビジンリンカー、アゼチジノンリンカー、及びアミン-、アジド、アルキン-、カルボキシル-及びヒドロキシル基リンカー並びにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記１つ以上のCTCが、乳癌、肺癌、胸腺癌、子宮頸癌、扁平上皮癌、前立腺癌、膵臓癌及び直腸結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、及び癌幹細胞からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
前記１つ以上の単離されたCTCが、タンパク質単離、RNA単離、DNA単離、遺伝子転移解析、遺伝子増幅解析及び蛍光in-situハイブリダイゼーションからなる群から選択される方法において利用される、請求項１１に記載の方法。