【手続補正書】
【提出日】令和2年4月10日(2020.4.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞培養物中で１つ以上のステビオールグリコシドまたはステビオールグリコシド組成物を産生することができる組み換え宿主細胞であって、
（ａ）ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）からウリジン５’−三リン酸（ＵＴＰ）を合成することができるポリペプチドをコードする組み換え遺伝子、
（ｂ）グルコース−６−リン酸をグルコース−１−リン酸に変換することができるポリペプチドをコードする組み換え遺伝子、ならびに／または 
（ｃ）ＵＴＰ及びグルコース−１−リン酸からウリジン二リン酸グルコース（ＵＤＰ−グルコース）を合成することができるポリペプチドをコードする組み換え遺伝子を含む、前記組み換え宿主細胞。
【請求項２】
（ａ）ＵＤＰからＵＴＰを合成することができる前記ポリペプチドが、配列番号１２３に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドを含み、
（ｂ）グルコース−６−リン酸をグルコース−１−リン酸に変換することができる前記ポリペプチドが、配列番号２、配列番号１１９、配列番号１４３に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号１４１、配列番号１４５、もしくは配列番号１４７に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、かつ／あるいは 
（ｃ）ＵＴＰ及びグルコース−１−リン酸からＵＤＰ−グルコースを合成することができる前記ポリペプチドが、配列番号１２１、配列番号１２７に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド、配列番号１２５、配列番号１２９、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、もしくは配列番号１３９に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号１３１に明記されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、請求項１に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項３】
（ａ）ステビオールもしくはそのＣ−１３ヒドロキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、ステビオールもしくはそのＣ−１３ヒドロキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号７に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’をベータ１，３グリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’をベータ１，３グリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号９に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ステビオールもしくはそのＣ−１９カルボキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、ステビオールもしくはそのＣ−１９カルボキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号４に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、及び／または
（ｄ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’をベータ１，２グリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’をベータ１，２グリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号１１に明記されるアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するポリペプチド、配列番号１３に明記されるアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するポリペプチド、もしくは配列番号１６に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
を更に含む、請求項１または２に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項４】
（ｅ）ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）及びイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）からゲラニルゲラニルピロリン酸（ＧＧＰＰ）を合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、ＧＧＰＰを合成することができる前記ポリペプチドが、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、もしくは配列番号１１６に明記されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
（ｆ）ＧＧＰＰからｅｎｔ−コパリル二リン酸を合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、ｅｎｔ−コパリル二リン酸を合成することができる前記ポリペプチドが、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、もしくは配列番号１２０に明記されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
（ｇ）ｅｎｔ−コパリル二リン酸からｅｎｔ−カウレンを合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、ｅｎｔ−カウレンを合成することができる前記ポリペプチドが、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、もしくは配列番号５２に明記されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
（ｈ）ｅｎｔ−カウレンからｅｎｔ−カウレン酸を合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、ｅｎｔ−カウレン酸を合成することができる前記ポリペプチドが、配列番号６０、配列番号６２、配列番号１１７、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、もしくは配列番号７６に明記されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
（ｉ）チトクロムＰ４５０複合体を還元することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、チトクロムＰ４５０複合体を還元することができる前記ポリペプチドが、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２に明記されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、かつ／または 
（ｊ）ｅｎｔ−カウレン酸からステビオールを合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、ステビオールを合成することができる前記ポリペプチドが、配列番号９４、配列番号９７、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、もしくは配列番号１１４に明記されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
を更に含む、請求項３に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項５】
前記組み換え宿主細胞が、
（ａ）配列番号１２３に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）からウリジン５’−三リン酸（ＵＴＰ）を合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子、
（ｂ）各々が配列番号２及び／もしくは配列番号１１９に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する、グルコース−６−リン酸をグルコース−１−リン酸に変換することができるポリペプチドをコードする１つ以上の遺伝子、及び 
（ｃ）配列番号１２１に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する、ＵＴＰ及びグルコース−１−リン酸からＵＤＰ−グルコースを合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項６】
前記組み換え宿主細胞が、
（ａ）ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）からウリジン５’−三リン酸（ＵＴＰ）を合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子、
（ｂ）グルコース−６−リン酸をグルコース−１−リン酸に変換することができるポリペプチドをコードする遺伝子、
（ｃ）配列番号１２１に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する、ＵＴＰ及びグルコース−１−リン酸からＵＤＰ−グルコースを合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子、
（ｄ）配列番号１２５、配列番号１２９、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、もしくは配列番号１３９に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性、または配列番号１２７に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、または配列番号１３１に明記されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有する、ＵＴＰ及びグルコース−１−リン酸からＵＤＰ−グルコースを合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ならびに
以下、
（ｅ）配列番号７に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有する、ステビオールもしくはそのＣ−１３ヒドロキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子、
（ｂ）配列番号９に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有する、ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’をベータ１，３グリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子、
（ｃ）配列番号４に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有する、ステビオールもしくはそのＣ−１９カルボキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子、
（ｄ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’をベータ１，２グリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、該ポリペプチドは、配列番号１１に明記されるアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するポリペプチド、配列番号１３に明記されるアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するポリペプチド、もしくは配列番号１６に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
のうちの１つ以上を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項７】
前記組み換え宿主細胞が、
（ａ）配列番号１２３に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）からウリジン５’−三リン酸（ＵＴＰ）を合成することができるポリペプチドをコードする組み換え遺伝子、
（ｂ）各々が配列番号２及び／もしくは配列番号１１９に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する、グルコース−６−リン酸をグルコース−１−リン酸に変換することができるポリペプチドをコードする１つ以上の組み換え遺伝子、ならびに／または 
（ｃ）配列番号１２１に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する、ＵＴＰ及びグルコース−１−リン酸からＵＤＰ−グルコースを合成することができるポリペプチドをコードする組み換え遺伝子
を含み、
ここで、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）からウリジン５’−三リン酸（ＵＴＰ）を合成することができるポリペプチドをコードする前記遺伝子、グルコース−６−リン酸をグルコース−１−リン酸に変換することができるポリペプチドをコードする前記１つ以上の遺伝子、ならびに／またはＵＴＰ及びグルコース−１−リン酸からＵＤＰ−グルコースを合成することができるポリペプチドをコードする前記遺伝子が、前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主細胞と比較して、過剰発現される；及び
ここで、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）からウリジン５’−三リン酸（ＵＴＰ）を合成することができるポリペプチドをコードする前記遺伝子、グルコース−６−リン酸をグルコース−１−リン酸に変換することができるポリペプチドをコードする前記１つ以上の遺伝子、ならびに／またはＵＴＰ及びグルコース−１−リン酸からＵＤＰ−グルコースを合成することができるポリペプチドをコードする前記遺伝子が、前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主細胞と比較して、少なくとも１０％、または少なくとも１５％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも１００％、または少なくとも１２５％、または少なくとも１５０％、または少なくとも１７５％、または少なくとも２００％過剰発現される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項８】
前記１つ以上の組み換え遺伝子の発現が、
（ａ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって蓄積されるＵＤＰ−グルコースの量を増加させる；
（ｂ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって蓄積されるＵＤＰ−グルコースの量を少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、または少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約２５０％増加させる；
（ｃ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって産生される前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物の量を増加させる；
（ｄ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって産生される前記１つ以上のステビオールグリコシドの量を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約１００％増加させる；
（ｅ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって産生される合計ステビオールグリコシドの量を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、または少なくとも約２５％増加させる；及び／または
（ｆ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって産生されるＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＤ、及び／またはＲｅｂＭの量を増加させる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項９】
前記１つ以上の組み換え遺伝子の発現が、
（ａ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって蓄積される前記１つ以上のステビオールグリコシドのうちの１つまたは前記ステビオールグリコシド組成物を減少させる；
（ｂ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって蓄積される前記１つ以上のステビオールグリコシドの量を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、または少なくとも約５０％減少させる；
（ｃ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって蓄積されるＲｅｂＢ、ＲｅｂＤ、及び／または１３−ＳＭＧの量を減少させる；及び／または
（ｄ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって産生される合計ステビオールグリコシドの量を５％未満、２．５％未満、または１％未満減少させる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項１０】
前記１つ以上のステビオールグリコシドが、ステビオール−１３−Ｏ−グルコシド（１３−ＳＭＧ）、ステビオール−１，２−ビオシド、ステビオール−１，３−ビオシド、ステビオール−１９−Ｏ−グルコシド（１９−ＳＭＧ）、１，２−ステビオシド、１，３−ステビオシド（ＲｅｂＧ）、ルブソシド、レバウジオシドＡ（ＲｅｂＡ）、レバウジオシドＢ（ＲｅｂＢ）、レバウジオシドＣ（ＲｅｂＣ）、レバウジオシドＤ（ＲｅｂＤ）、レバウジオシドＥ（ＲｅｂＥ）、レバウジオシドＦ（ＲｅｂＦ）、レバウジオシドＭ（ＲｅｂＭ）、レバウジオシドＱ（ＲｅｂＱ）、レバウジオシドＩ（ＲｅｂＩ）、ズルコシドＡ、及び／もしくはそれらの異性体であるか、または前記ステビオールグリコシド組成物が、それ（ら）を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項１１】
前記組み換え宿主細胞が、植物細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、真菌細胞、藻類細胞、または細菌細胞である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項１２】
細胞培養物中で１つ以上のステビオールグリコシドまたはステビオールグリコシド組成物を産生する方法であって、前記遺伝子が発現される条件下で、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞を前記細胞培養物中で培養することを含み、前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物が、前記組み換え宿主細胞によって産生される、前記方法。
【請求項１３】
前記遺伝子が恒常的に発現される、かつ／または前記遺伝子の発現が誘導される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）前記細胞によって蓄積されるＵＤＰ−グルコースの量が、前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、少なくとも少なくとも約１０％増加する；
（ｂ）前記細胞によって産生されるＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＤ、及び／またはＲｅｂＭの量が、前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、少なくとも約５％増加する；
（ｃ）前記細胞によって産生される合計ステビオールグリコシドの量が、前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、少なくとも約５％増加する；及び／または
（ｄ）前記細胞培養物中に存在するＵＤＰ−グルコースの量が、前記期間全体を通した任意の点で、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、または少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約２５０％増加する、
請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
（ａ）前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、前記細胞によって蓄積されるＲｅｂＢ、ＲｅｂＤ、及び／または１３−ＳＭＧの量が、少なくとも約５％減少する；及び／または
（ｂ）前記細胞によって産生される合計ステビオールグリコシドの量が、前記１つ以上の組み換え遺伝子を欠く対応する宿主と比較して、約５％未満減少する、
請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記組み換え宿主細胞が、発酵槽内、ある温度である期間成長され、前記温度及び期間が、前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物の産生を促進する、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
１つ以上のステビオールグリコシドまたはステビオールグリコシド組成物を産生するための方法であって、
（ａ）配列番号１２３に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する、ＵＤＰからＵＴＰを合成することができるポリペプチド、
（ｂ）配列番号２、１１９、もしくは１４３のいずれか１つに明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、または配列番号１４１、１４５、もしくは１４７のいずれか１つに明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有する、グルコース−６−リン酸をグルコース−１−リン酸に変換することができるポリペプチド、及び／あるいは
（ｃ）配列番号１２１もしくは１２７に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、配列番号１２５、１２９、１３３、１３５、１３７、もしくは１３９のいずれか１つに明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性、または配列番号１３１に明記されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有する、ＵＴＰ及びグルコース−１−リン酸からＵＤＰ−グルコースを合成することができるポリペプチド、ならびに 
以下、 
（ｄ）ステビオールもしくはそのＣ−１３ヒドロキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができるポリペプチド、ここで、ステビオールもしくはそのＣ−１３ヒドロキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号７に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
（ｅ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’をベータ１，３グリコシル化することができるポリペプチド、ここで、ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’をベータ１，３グリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号９に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
（ｆ）ステビオールもしくはそのＣ−１９カルボキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができるポリペプチド、ここで、ステビオールもしくはそのＣ−１９カルボキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号４に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、及び／または 
（ｇ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’をベータ１，２グリコシル化することができるポリペプチド、ここで、ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’をベータ１，２グリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号１１または１３に明記されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号１６に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
のうちの１つ以上を使用する、組み換え宿主細胞の細胞培養培地中での植物由来もしくは合成のステビオール及び／またはステビオールグリコシドのホールセル生物変換を含み、
ここで、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つが、前記組み換え宿主細胞内で発現される組み換えポリペプチドであり、それにより前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物を産生する、前記方法。
【請求項１８】
前記組み換え宿主細胞が、植物細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、真菌細胞、藻類細胞、または細菌細胞である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
１つ以上のステビオールグリコシドまたはステビオールグリコシド組成物を産生するためのin vitro方法であって、
（ａ）以下：
（i）配列番号１２３に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性を有する、ＵＤＰからＵＴＰを合成することができるポリペプチド、
（ii）配列番号２、１１９、または１４３のいずれか１つに明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、または配列番号１４１、１４５、または１４７のいずれか１つに明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有する、グルコース−６−リン酸をグルコース−１−リン酸に変換することができるポリペプチド、及び／または
（iii）配列番号１２１または１２７に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、配列番号１２５、１２９、１３３、１３５、１３７、または１３９のいずれか１つに明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性、または配列番号１３１に明記されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有する、ＵＴＰ及びグルコース−１−リン酸からＵＤＰ−グルコースを合成することができるポリペプチド、
のうちの１つ以上、および
（i）ステビオールもしくはそのＣ−１３ヒドロキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができるポリペプチド、ここで、ステビオールもしくはそのＣ−１３ヒドロキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号７に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ii）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’をベータ１，３グリコシル化することができるポリペプチド、ここで、ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’をベータ１，３グリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号９に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（iii）ステビオールもしくはそのＣ−１９カルボキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができるポリペプチド、ここで、ステビオールもしくはそのＣ−１９カルボキシル基のステビオールグリコシドをグリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号４に明記されるアミノ酸配列と少なくとも５５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、及び／または 
（iv）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’をベータ１，２グリコシル化することができるポリペプチド、ここで、ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、もしくは１３−Ｏ−グルコース及び１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’をベータ１，２グリコシル化することができる前記ポリペプチドが、配列番号１１または１３に明記されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号１６に明記されるアミノ酸配列と少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、
のうちの１つ以上
ならびに植物由来もしくは合成のステビオールまたはステビオールグリコシドを反応混合物に添加すること
ここで、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つが組み換えポリペプチドである、及び
（ｂ）前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物を前記反応混合物において産生すること
を含む、前記方法。
【請求項２０】
請求項１２〜１９のいずれか一項に記載の方法であって、産生された前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物を細胞培養物または前記反応混合物から単離すること、
ここで、前記単離ステップが、前記細胞培養物の液相を前記細胞培養物または前記反応混合物の固相から分離して、産生された前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物を含む上清を得ることを含む、および
（ａ）前記上清を１つ以上の吸着樹脂と接触させて、産生された前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物の少なくとも一部分を得ること、または、
（ｂ）前記上清を１つ以上のイオン交換もしくは逆相クロマトグラフィーカラムと接触させて、産生された前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物の少なくとも一部分を得ること、または、
（ｃ）産生された前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物を結晶化または抽出すること、
それにより産生された前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物を単離すること
を更に含む、前記方法。
【請求項２１】
請求項１２〜１９のいずれか一項に記載の方法であって、前記１つ以上のステビオールグリコシドを単独でまたは前記１つ以上のステビオールグリコシドを含む組成物として前記細胞培養物または前記反応混合物から回収することを更に含み、
ここで、前記回収された組成物は、ステビア植物のステビオールグリコシド組成物と比較して、前記１つ以上のステビオールグリコシドについて濃縮され、および植物由来のステビア抽出物から得られたステビオールグリコシド組成物と比較して、低減したレベルのステビア植物由来の構成成分を有する、前記方法。
【請求項２２】
前記１つ以上のステビオールグリコシドが、ステビオール−１３−Ｏ−グルコシド（１３−ＳＭＧ）、ステビオール−１，２−ビオシド、ステビオール−１，３−ビオシド、ステビオール−１９−Ｏ−グルコシド（１９−ＳＭＧ）、１，２−ステビオシド、１，３−ステビオシド（ＲｅｂＧ）、ルブソシド、レバウジオシドＡ（ＲｅｂＡ）、レバウジオシドＢ（ＲｅｂＢ）、レバウジオシドＣ（ＲｅｂＣ）、レバウジオシドＤ（ＲｅｂＤ）、レバウジオシドＥ（ＲｅｂＥ）、レバウジオシドＦ（ＲｅｂＦ）、レバウジオシドＭ（ＲｅｂＭ）、レバウジオシドＱ（ＲｅｂＱ）、レバウジオシドＩ（ＲｅｂＩ）、ズルコシドＡ、及び／もしくはそれらの異性体であるか、または前記ステビオールグリコシド組成物が、それ（ら）を含む、請求項１２〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞を含む細胞培養物であって、前記細胞培養物が、
（ａ）前記組み換え宿主細胞によって産生される前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物、
（ｂ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ＵＤＰ−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、及び／またはＮ−アセチル−グルコサミン、ならびに 
（ｃ）微量金属、ビタミン、塩、ＹＮＢ、及び／またはアミノ酸を含む追加の栄養素を更に含み、
前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物が、少なくとも１ｍｇ／リットルの前記細胞培養物の濃度で存在し、 
前記細胞培養物が、ステビア植物に由来するステビオールグリコシド組成物と比較して、前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物について濃縮され、植物由来のステビア抽出物と比較して、低減したレベルのステビア植物由来の構成成分を有し、
ＵＤＰ−グルコースが、前記細胞培養物中に少なくとも１００μＭの濃度で存在し、及び
前記細胞培養物が、ステビア植物に由来するステビオールグリコシド組成物と比較して、ＵＧＰ−グルコースについて濃縮され、植物由来のステビア抽出物と比較して、低減したレベルのステビア植物由来の構成成分を有する、前記細胞培養物。
【請求項２４】
前記細胞培養物中で成長される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞に由来する細胞溶解物であって、
（ａ）前記組み換え宿主細胞によって産生される前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物、
（ｂ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ＵＤＰ−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、及び／もしくはＮ−アセチル−グルコサミン、ならびに／または 
（ｃ）微量金属、ビタミン、塩、酵母窒素原、ＹＮＢ、及び／もしくはアミノ酸を含む追加の栄養素を含み、
前記組み換え宿主細胞によって産生される前記１つ以上のステビオールグリコシドまたは前記ステビオールグリコシド組成物が、少なくとも１ｍｇ／リットルの前記細胞培養物の濃度で存在する、前記細胞溶解物。