【手続補正書】
【提出日】令和2年8月18日(2020.8.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
融合タンパク質をコードするＲＮＡ分子であって、
融合タンパク質が次の一般式を有する分子／構造を含む、ＲＮＡ分子。
Ｎ’−Ａ−ＬA−Ａ−ＬA−Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｃ’（式Ｉ）または
Ｎ’−Ｂ−Ｌ−Ａ−ＬA−Ａ−ＬA−Ａ−Ｃ’（式ＩＩ）
（式中、Ａは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのリガンドの細胞外ドメインまたはその機能的バリアントを含み、細胞外ドメインは、少なくとも機能的ＴＮＦ相同ドメイン（ＴＨＤ）を含み、細胞外ドメインの前記バリアントは、細胞外ドメインと少なくとも９５％の配列同一性を有し、ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーと三量体形成により結合することができ、
Ｂは、インターロイキンまたは機能的断片または機能的断片の機能的バリアントを含み、前記バリアントはインターロイキンの機能断片と少なくとも９５％の配列同一性を有し、インターロイキンの受容体と結合することができ、
Ｌは、ペプチドリンカーを含み、
ＬAは、出現毎に、独立して共有結合またはペプチドリンカーである）
【請求項２】
Ｌが、融合タンパク質の多量体形成を可能にする多量体形成ドメインをさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項３】
多量体形成ドメインが、二量体形成ドメインであり、ＩｇＥ重鎖ドメイン２（ＥＨＤ２）、ＩｇＭ重鎖ドメイン２（ＭＨＤ２）、ＩｇＧ重鎖ドメイン３（ＧＨＤ３）、ＩｇＡ重鎖ドメイン３（ＡＨＤ２）、ＩｇＤ重鎖ドメイン３（ＤＨＤ３）、ＩｇＥ重鎖ドメイン４（ＥＨＤ４）、ＩｇＭ重鎖ドメイン４（ＭＨＤ４）、Ｆｃドメイン、およびウテログロビン二量体形成ドメインからなる群から選択される、請求項２に記載のＲＮＡ分子。
【請求項４】
融合タンパク質の発現により、融合タンパク質が多量体複合体として存在する、請求項２に記載のＲＮＡ分子。
【請求項５】
リガンドが、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ２７リガンド（ＣＤ２７Ｌ）、４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、ＣＤ３０リガンド（ＣＤ３０Ｌ）、エクトジスプラシン−Ａ１（ＥＤＡ−Ａ１）、エクトジスプラシン−Ａ２（ＥＤＡ−Ａ２）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）、ＬＩＧＨＴ、リンホトキシン−アルファ（ＬＴ−アルファ）、ＴＬ１Ａ、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−アルファ）、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＮＦ−ｋＢ活性化受容体リガンド（ＲＡＮＫＬ）およびＴＷＥＡＫからなる群から選択される、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項６】
ＣＤ４０Ｌの細胞外ドメインが、配列番号１のアミノ酸残基５１〜２６１もしくは１１６〜２６１を含むもしくはこれからなる、ＣＤ２７Ｌの細胞外ドメインが、配列番号２のアミノ酸残基５２〜１９３を含むもしくはこれからなる、４−１ＢＢＬの細胞外ドメインが、配列番号３のアミノ酸残基７１〜２５４を含むもしくはこれからなる、および／またはＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインが、配列番号４のアミノ酸残基５１〜１８３を含むもしくはこれからなる、請求項５に記載のＲＮＡ分子。
【請求項７】
インターロイキンが、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ２１、ＩＬ２７、ＩＬ１−アルファ、ＩＬ１−ベータ、ＩＬ７、ＩＬ１５、ＩＬ１８、ＩＬ９、ＩＬ２３、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＩＬ３１およびＩＬ３３からなる群から選択される、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項８】
インターロイキンが、単一のポリペプチドとして存在するヘテロ二量体インターロイキンである、請求項７に記載のＲＮＡ分子。
【請求項９】
融合タンパク質が、融合タンパク質の検出および／または単離を可能にする少なくとも１個の標識またはタグをさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１０】
融合タンパク質が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および／またはＴ細胞の増殖を増強する、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写された（ＩＶＴ）ＲＮＡ分子である、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１２】
Ｌが、融合タンパク質の二量体形成を可能にする二量体形成ドメインをさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１３】
融合タンパク質の発現により、融合タンパク質が二量体複合体として存在する、請求項２に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１４】
リガンドが、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、４−１ＢＢＬ、およびＯＸ４０Ｌからなる群から選択される、請求項５に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１５】
融合タンパク質が、ＣＤ８+Ｔ細胞の増殖を増強する、請求項１０に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１６】
融合タンパク質の発現により、３つの細胞外ドメインまたはその機能的バリアントがリガンドの受容体に結合することができるホモ三量体を形成する、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１７】
請求項１に記載のＲＮＡ分子により形質転換またはトランスフェクトされた細胞。
【請求項１８】
請求項１に記載のＲＮＡ分子により形質転換またはトランスフェクトされた非ヒト生物。
【請求項１９】
（ｉ）活性剤として、請求項１に記載のＲＮＡ分子および（ｉｉ）薬学的に許容される担体および／または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２０】
（ｉ）活性剤として、請求項１７に記載の細胞および（ｉｉ）薬学的に許容される担体および／または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１に記載のＲＮＡ分子を含むキット。
【請求項２２】
請求項１７に記載の細胞を含むキット。
【請求項２３】
請求項１９に記載の医薬組成物を含むキット。
【請求項２４】
請求項２０に記載の医薬組成物を含むキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１００
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１００】
ヒトＩＬ２および可溶性ＴＮＦリガンドドメインからなる融合タンパク質をコードするＩＶＴ−ＲＮＡ（ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌまたは４−１ＢＢＬ）を、抗原特異的設定でのＣＤ８+Ｔ細胞増殖におけるその効果について検査した（図６）。ＩＬ２  ＲＮＡ単独は、ＣＤ８+Ｔ細胞の中等度増殖を誘導した。可溶性ＴＮＦリガンドをコードする単一のＲＮＡとＩＬ２  ＲＮＡの混合物は、ＩＬ２  ＲＮＡ単独と同様の効果を媒介した。対照的に、ＩＬ２とＴＮＦＲリガンドの融合タンパク質をコードするＲＮＡは、Ｔ細胞増殖を強く増強した。より詳細な解析は、全４種のｈＩＬ２融合タンパク質が、増殖指数（細胞分裂回数）を増強したことを明らかにした（図６Ｂ）。加えて、ｈＩＬ−２−ＣＤ２７ＬおよびｈＩＬ２−ＣＤ４０Ｌ融合体は、分裂した細胞（分裂状態になった細胞）のパーセンテージを増強した（図６Ａ）。
次に、本発明のまた別の好ましい態様を示す。
１．  （ｉ）腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのリガンドの細胞外ドメインまたはその断片もしくはバリアントと、（ｉｉ）インターロイキンまたはその断片もしくはバリアントとを含む、サイトカイン融合タンパク質であって、リガンドの細胞外ドメインまたはその断片もしくはバリアントと、インターロイキンまたはその断片もしくはバリアントとが、共有結合により連結されている、サイトカイン融合タンパク質。
２．  共有結合により連結されたリガンドの３個の細胞外ドメインまたはその断片もしくはバリアントを含むブロックを含み、ブロックとインターロイキンまたはその断片もしくはバリアントとが、共有結合により連結されている、上記１に記載のサイトカイン融合タンパク質。
３．  ３個の細胞外ドメインまたはその断片もしくはバリアントが、リガンドの受容体に結合することができるホモ三量体を形成する、上記２に記載のサイトカイン融合タンパク質。
４．  ３個の細胞外ドメインまたはその断片もしくはバリアントおよび／またはブロックと、インターロイキンまたはその断片もしくはバリアントとが、ペプチドリンカーを介して共有結合により連結されている、上記２または３に記載のサイトカイン融合タンパク質。
５．  次の一般式を有する分子／構造を含む、上記１から４までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質。
Ｎ’−Ａ−ＬA−Ａ−ＬA−Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｃ’（式Ｉ）または
Ｎ’−Ｂ−Ｌ−Ａ−ＬA−Ａ−ＬA−Ａ−Ｃ’（式ＩＩ）
（式中、Ａは、リガンドの細胞外ドメインまたはその断片もしくはバリアントを含み、Ｂは、インターロイキンまたはその断片もしくはバリアントを含み、
Ｌは、ペプチドリンカーを含み、
ＬAは、出現毎に、共有結合およびペプチドリンカーから独立して選択される）
６．  Ｌが、サイトカイン融合タンパク質の多量体形成、好ましくは、二量体形成を可能にする、多量体形成ドメイン、好ましくは、二量体形成ドメインをさらに含む、上記５に記載のサイトカイン融合タンパク質。
７．  二量体形成ドメインが、ＩｇＥ重鎖ドメイン２（ＥＨＤ２）、ＩｇＭ重鎖ドメイン２（ＭＨＤ２）、ＩｇＧ重鎖ドメイン３（ＧＨＤ３）、ＩｇＡ重鎖ドメイン３（ＡＨＤ２）、ＩｇＤ重鎖ドメイン３（ＤＨＤ３）、ＩｇＥ重鎖ドメイン４（ＥＨＤ４）、ＩｇＭ重鎖ドメイン４（ＭＨＤ４）、Ｆｃドメイン、ウテログロビン二量体形成ドメインおよび前述のいずれか１種の機能的バリアントからなる群から選択される、上記６に記載のサイトカイン融合タンパク質。
８．  多量体、好ましくは二量体複合体として存在する、上記６または７に記載のサイトカイン融合タンパク質。
９．  リガンドの細胞外ドメインまたはその断片もしくはバリアントと、インターロイキンまたはその断片もしくはバリアントとが、ペプチドリンカーを介して共有結合により連結されている、上記１に記載のサイトカイン融合タンパク質。
１０．  次の一般式を有する分子／構造を含む、上記１または９に記載のサイトカイン融合タンパク質。
Ｎ’−Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｃ’（式ＩＩＩ）または
Ｎ’−Ｂ−Ｌ−Ａ−Ｃ’（式ＩＶ）
（式中、Ａは、リガンドの細胞外ドメインまたはその断片もしくはバリアントを含み、Ｂは、インターロイキンまたはその断片もしくはバリアントを含み、
Ｌは、ペプチドリンカーを含む）
１１．  三量体複合体として存在し、リガンドの３個の細胞外ドメインまたはその断片もしくはバリアントが、リガンドの受容体に結合することができるホモ三量体を形成する、上記１、９および１０のいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質。
１２．  リガンドが、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＡＰＲＩＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＥＤＡ−Ａ１、ＥＤＡ−Ａ２、ＦａｓＬ、ＧＩＴＲＬ、ＬＩＧＨＴ、ＬＴ−アルファ、ＴＬ１Ａ、ＴＮＦ−アルファ、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫＬおよびＴＷＥＡＫからなる群から、好ましくは、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、４−１ＢＢＬおよびＯＸ４０Ｌからなる群から選択される、上記１から１１までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質。
１３．  ＣＤ４０Ｌの細胞外ドメインが、配列番号１のアミノ酸残基５１〜２６１もしくは１１６〜２６１を含むもしくはこれからなる、ＣＤ２７Ｌの細胞外ドメインが、配列番号２のアミノ酸残基５２〜１９３を含むもしくはこれからなる、４−１ＢＢＬの細胞外ドメインが、配列番号３のアミノ酸残基７１〜２５４を含むもしくはこれからなる、および／またはＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインが、配列番号４のアミノ酸残基５１〜１８３を含むもしくはこれからなる、上記１２に記載のサイトカイン融合タンパク質。
１４．  インターロイキンが、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ２１、ＩＬ２７、ＩＬ１−アルファ、ＩＬ１−ベータ、ＩＬ７、ＩＬ１５、ＩＬ１８、ＩＬ９、ＩＬ２３、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＩＬ３１およびＩＬ３３からなる群から選択される、上記１から１３までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質。
１５．  インターロイキンが、単一のポリペプチドとして存在するヘテロ二量体インターロイキンである、上記１４に記載のサイトカイン融合タンパク質。
１６．  サイトカイン融合タンパク質の検出および／または単離を可能にする少なくとも１個の標識またはタグをさらに含む、上記１から１５までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質。
１７．  サイトカイン融合タンパク質の安定性を増加させる１個または複数の修飾をさらに含む、上記１から１６までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質。
１８．  ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および／またはＴ細胞、好ましくは、ＣＤ８+Ｔ細胞の増殖を増強する、上記１から１７までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質。
１９．  上記１から１８までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質をコードする核酸分子。
２０．  発現制御配列に操作可能に連結された、上記１９に記載の核酸分子。
２１．  ベクターに含有されている、上記１９または２０に記載の核酸分子。
２２．  ＲＮＡ分子、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写された（ＩＶＴ）ＲＮＡ分子である、上記１９に記載の核酸分子。
２３．  上記１９から２２までのいずれか１項に記載の核酸分子により形質転換またはトランスフェクトされた細胞。
２４．  原核細胞である、上記２３に記載の細胞。
２５．  真核細胞、好ましくは、哺乳類細胞、より好ましくは、ヒト細胞である、上記２３に記載の細胞。
２６．  上記１９から２２までのいずれか１項に記載の核酸分子により形質転換またはトランスフェクトされた非ヒト生物。
２７．  活性剤として、上記１から１８までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質、上記１９から２２までのいずれか１項に記載の核酸分子、または上記２３から２５までのいずれか１項に記載の細胞を含む医薬組成物。
２８．  薬学的に許容される担体および／または賦形剤をさらに含む、上記２７に記載の医薬組成物。
２９．  上記１から１８までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質、上記１９から２２までのいずれか１項に記載の核酸分子、上記２３から２５までのいずれか１項に記載の細胞、または上記２７もしくは２８に記載の医薬組成物を含むキット。
３０．  医薬としての使用のための、上記１から１８までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質、上記１９から２２までのいずれか１項に記載の核酸分子、上記２３から２５までのいずれか１項に記載の細胞、または上記２７もしくは２８に記載の医薬組成物。
３１．  がん、感染性疾患、炎症性疾患、代謝性疾患、自己免疫性障害、変性疾患、アポトーシス関連疾患および移植片拒絶からなる群から選択される疾患の処置における使用のための、上記１から１８までのいずれか１項に記載のサイトカイン融合タンパク質、上記１９から２２までのいずれか１項に記載の核酸分子、上記２３から２５までのいずれか１項に記載の細胞、または上記２７もしくは２８に記載の医薬組成物。