【手続補正書】
【提出日】令和2年4月22日(2020.4.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
−ヒトサイトメガロウイルスβ２．７  ＲＮＡの少なくとも１つのセンスまたはアンチセンスＲＮＡサブドメイン
−および、ペイロード
を含み、各サブドメインが、ミトコンドリア内に局在化することができる、核酸送達構築物。
【請求項２】
ヒトサイトメガロウイルスβ２．７  ＲＮＡからのＲＮＡ配列が、β２．７  ＲＮＡ（配列番号１または配列番号２）、β２．７  ＲＮＡのドメイン１（Ｄ１；配列番号３または配列番号７）、β２．７  ＲＮＡのドメイン２（Ｄ２；配列番号４または配列番号８）、β２．７  ＲＮＡのドメイン３（Ｄ３；配列番号５または配列番号９）、β２．７  ＲＮＡのドメイン４（Ｄ４；配列番号６または配列番号１０）およびそれらの組合せからなる群から選択されるＲＮＡ配列のうちの１つまたは複数の９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する、請求項１に記載の核酸送達構築物。
【請求項３】
ヒトサイトメガロウイルスβ２．７  ＲＮＡからのＲＮＡ配列が、β２．７  ＲＮＡ（配列番号１または配列番号２）、β２．７  ＲＮＡのドメイン１（Ｄ１；配列番号３または配列番号７）、β２．７  ＲＮＡのドメイン２（Ｄ２；配列番号４または配列番号８）、β２．７  ＲＮＡのドメイン３（Ｄ３；配列番号５または配列番号９）、β２．７  ＲＮＡのドメイン４（Ｄ４；配列番号６または配列番号１０）およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１または２に記載の核酸送達構築物。
【請求項４】
ヒトサイトメガロウイルスβ２．７  ＲＮＡからの１つもしくは２つもしくは３つもしくは４つまたはそれよりも多いＲＮＡ配列が、β２．７  ＲＮＡの全長配列（配列番号１（センス））、β２．７  ＲＮＡの全長配列（配列番号２（アンチセンス））、β２．７  ＲＮＡのドメイン１（配列番号３（センス））、β２．７  ＲＮＡのドメイン１（配列番号７（アンチセンス））、β２．７  ＲＮＡのドメイン２（配列番号４（センス））、β２．７  ＲＮＡのドメイン２（配列番号８（アンチセンス））、β２．７  ＲＮＡのドメイン３（配列番号５（センス））、β２．７  ＲＮＡのドメイン３（配列番号９（アンチセンス））、β２．７  ＲＮＡのドメイン４（配列番号６（センス））およびβ２．７  ＲＮＡのドメイン４（配列番号１０（アンチセンス））からなる群から選択される配列を含む、請求項３に記載の核酸送達構築物。
【請求項５】
ヒトサイトメガロウイルスβ２．７  ＲＮＡからのＲＮＡ配列が、β２．７  ＲＮＡのドメイン２、ドメイン３およびドメイン４（配列番号１１（センス）または配列番号３９（アンチセンス））；またはβ２．７  ＲＮＡのドメイン１、ドメイン３およびドメイン４（配列番号１２（センス）または配列番号４０（アンチセンス））；またはβ２．７  ＲＮＡのドメイン１、ドメイン２およびドメイン４（配列番号１３（センス）または配列番号４１（アンチセンス））；またはβ２．７  ＲＮＡのドメイン１、ドメイン２およびドメイン３（配列番号１４（センス）または配列番号４２（アンチセンス））を含む、請求項３に記載の核酸送達構築物。
【請求項６】
少なくとも１つのスペーサー配列を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸送達構築物。
【請求項７】
核酸送達構築物が、少なくとも２つのスペーサー配列を含む場合、少なくとも１つのスペーサー配列が、ヒトサイトメガロウイルスβ２．７  ＲＮＡからのＲＮＡ配列の５’末端にあり、かつ少なくとも１つの別のスペーサー配列が、３’末端にある、請求項６に記載の核酸送達構築物。
【請求項８】
少なくとも１つのスペーサー配列が、Ｓ１ａ（配列番号２６）、Ｓ１ｂ（配列番号２７）、Ｓ２ａ（配列番号２８）、Ｓ２ｂ（配列番号２９）、Ｓ３ａ（配列番号３０）、Ｓ３ｂ（配列番号３１）、Ｓ４ａ（配列番号３２）、Ｓ４ｂ（配列番号３３）、Ｓ６ａ（配列番号３４）、Ｓ６ｂ（配列番号３５）、Ｓ８ａ（配列番号３６）、Ｓ８ｂ（配列番号３７）およびスペーサーＦ３Ａ（配列番号３８）からなる群から選択され、かつ／または任意選択で、スペーサー配列が、停止コドンを含む、請求項６または７に記載の核酸送達構築物。
【請求項９】
各ＲＮＡ配列が、式Ｉ：
【化１】
2019514972.tif 000001
に従い、β２．７  ＲＮＡのドメイン１（Ｄ１；配列番号３または配列番号７）、ドメイン２（Ｄ２  配列番号４または配列番号８）、ドメイン３（Ｄ３；配列番号５または配列番号９）およびドメイン４（Ｄ４；配列番号６または配列番号１０）からなる群から選択され、
式中、各Ｘが独立して、Ｄ１（配列番号３または配列番号７）、Ｄ２（配列番号４または配列番号８）、Ｄ３（配列番号５または配列番号９）、Ｄ４（配列番号６または配列番号１０）あるいは単一ドメインの二つ組、三つ組、四つ組、五つ組、六つ組、七つ組、八つ組またはより長い反復を含むそれらの組合せからなる群から選択され；各Ｘに任意選択で、請求項６〜８で定義する少なくとも１つまたは複数のスペーサー配列が先行するか、もしくは続くか、または隣接する、請求項３に記載の核酸送達構築物。
【請求項１０】
ヒトサイトメガロウイルスβ２．７  ＲＮＡからのＲＮＡ配列が、ＲＮＡ配列の四量体であり、各ＲＮＡ配列が、式ＩＩ：
【化２】
2019514972.tif 000002
に従い、β２．７  ＲＮＡのドメイン１（Ｄ１；配列番号３または配列番号７）、ドメイン２（Ｄ２  配列番号４または配列番号８）、ドメイン３（Ｄ３；配列番号５または配列番号９）およびドメイン４（Ｄ４；配列番号６または配列番号１０）からなる群から選択され、
式中、各Ｘが独立して、Ｄ１（配列番号３または配列番号７）、Ｄ２（配列番号４または配列番号８）、Ｄ３（配列番号５または配列番号９）、Ｄ４（配列番号６または配列番号１０）あるいは単一ドメインの二つ組、三つ組、四つ組、五つ組、六つ組、七つ組、八つ組またはより長い反復を含むそれらの組合せからなる群から選択され；スペーサー配列Ｓ１ａ、Ｓ１ｂ、Ｓ２ａ、Ｓ２ｂ、Ｓ３ａ、Ｓ３ｂ、Ｓ４ａおよびＳ４ｂが、請求項８で定義する通りである、請求項３に記載の核酸送達構築物。
【請求項１１】
各Ｘが、Ｄ２（配列番号４または配列番号８）であるか；もしくは各Ｘが、Ｄ３（配列番号５または配列番号９）であるか；または核酸送達構築物が、配列番号１５もしくは配列番号５１に記載の核酸配列を含むか、もしくは核酸送達構築物が、配列番号１６もしくは配列番号５２に記載の核酸配列を含む、請求項１０に記載の核酸送達構築物。
【請求項１２】
ヒトサイトメガロウイルスβ２．７  ＲＮＡからのＲＮＡ配列が、式ＩＩＩ：
【化３】
2019514972.tif 000003
に従い、β２．７  ＲＮＡのドメイン１（Ｄ１；配列番号３または配列番号７）、ドメイン２（Ｄ２；配列番号４または配列番号８）、ドメイン３（Ｄ３；配列番号５または配列番号９）およびドメイン４（Ｄ４；配列番号６または配列番号１０）からなる群から選択されるＲＮＡ配列の八量体であり、
式中、ＸおよびＹが、互いに異なり、各Ｘおよび各Ｙが独立して、Ｄ１（配列番号３または配列番号７）、Ｄ２（配列番号４または配列番号８）、Ｄ３（配列番号５または配列番号９）、Ｄ４（配列番号６または配列番号１０）あるいは単一ドメインの二つ組、三つ組、四つ組、五つ組、六つ組、七つ組、八つ組またはより長い反復を含むそれらの組合せからなる群から選択され；スペーサー配列Ｓ１ａ、Ｓ１ｂ、Ｓ２ａ、Ｓ２ｂ、Ｓ３ａ、Ｓ３ｂ、Ｓ４ａおよびＳ４ｂが、請求項８で定義する通りである、請求項３に記載の核酸送達構築物。
【請求項１３】
Ｘが、Ｄ３（配列番号５または配列番号９）であり、かつＹが、Ｄ２（配列番号４または配列番号８）であるか；もしくはＸが、Ｄ２（配列番号４または配列番号８）であり、かつＹが、Ｄ３（配列番号５または配列番号９）であるか；または核酸送達構築物が、配列番号１７もしくは配列番号５３に記載の核酸配列を含むか；もしくは核酸送達構築物が、配列番号１８に記載の核酸配列を含む、請求項１２に記載の核酸送達構築物。
【請求項１４】
ヒトサイトメガロウイルスβ２．７  ＲＮＡからのＲＮＡ配列が、式ＩＶ：
【化４】
2019514972.tif 000004
に従い、β２．７  ＲＮＡのドメイン１（Ｄ１；配列番号３または配列番号７）、ドメイン２（Ｄ２；配列番号４または配列番号８）、ドメイン３（Ｄ３；配列番号５または配列番号９）およびドメイン４（Ｄ４；配列番号６または配列番号１０）からなる群から選択されるＲＮＡ配列の八量体であり、
式中、ＸおよびＹが、互いに異なり、各Ｘおよび各Ｙが独立して、Ｄ１（配列番号３または配列番号７）、Ｄ２（配列番号４または配列番号８）、Ｄ３（配列番号５または配列番号９）、Ｄ４（配列番号６または配列番号１０）あるいは単一ドメインの二つ組、三つ組、四つ組、五つ組、六つ組、七つ組、八つ組またはより長い反復を含むそれらの組合せからなる群から選択され；スペーサー配列Ｓ１ａ、Ｓ１ｂ、Ｓ２ａ、Ｓ２ｂ、Ｓ３ａ、Ｓ３ｂ、Ｓ４ａおよびＳ４ｂが、請求項８で定義する通りである、請求項３に記載の核酸送達構築物。
【請求項１５】
Ｘが、Ｄ３（配列番号５または配列番号９）であり、かつＹが、Ｄ２（配列番号４または配列番号８）であるか；または核酸送達構築物が、配列番号１９に記載の核酸配列を含む、請求項１４に記載の核酸送達構築物。
【請求項１６】
配列番号２０〜配列番号８２のいずれか一つに記載の配列を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の核酸送達構築物。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の核酸配列を含むベクター、組換え細胞または組換え生物。
【請求項１８】
核酸配列が、構成的に発現されるか、または構成的でなく発現される、請求項１７に記載の組換え細胞または組換え生物。
【請求項１９】
ドメイン１（Ｄ１；配列番号３または７）、ドメイン２（Ｄ２；配列番号４または８）、ドメイン３（Ｄ３；配列番号５または９）およびドメイン４（Ｄ４；配列番号６または１０）からなる群から選択されるヒトサイトメガロウイルスβ２．７  ＲＮＡの少なくとも１つまたは複数のセンスまたはアンチセンスＲＮＡ配列を含む核酸配列。
【請求項２０】
ミトコンドリア遺伝子機能を向上させるか、もしくは欠陥があるミトコンドリア遺伝子機能を抑制するか、または両方の（ただし、この場合、ミトコンドリア遺伝子は互いに異なる）方法であって、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の核酸送達構築物を対象に投与することを含み、ミトコンドリア遺伝子機能が、互いに異なる、方法。
【請求項２１】
ミトコンドリア病を治療する方法であって、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の核酸送達構築物を対象に投与することを含む方法。
【請求項２２】
核酸送達構築物が、アンチセンスＲＮＡを送達するために使用される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ミトコンドリア病が、母性遺伝真性糖尿病、レーバー遺伝性視神経萎縮症（ＬＨＯＮ）、神経障害、運動失調症、網膜色素変性症、赤色ぼろ線維・ミオクローヌスてんかん（ＭＥＲＲＦ）、ミトコンドリア筋症脳症乳酸アシドーシスおよび脳卒中様症状（ＭＥＬＡＳ）、パーキンソン病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、カーンズ・セイヤー症候群（ＫＳＳ）、ピアソン症候群および進行性眼筋麻痺（ＰＥＯ）からなる群から選択される、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
ミトコンドリア病が、ＭＴ−ＴＬ１（ｔＲＮＡロイシン）、ＭＴ−ＮＤ１、ＭＴ−ＮＤ４、ＭＴ−ＮＤ６、ＭＴ−ＡＴＰ６、ＭＴ−ＴＫ（ｔＲＮＡリジン）、ＭＴ−ＮＤ１、ＭＴ−ＮＤ５、ＭＴ−ＴＨ（ヒスチジン）、ＭＴ−ＴＬ１（ロイシン）、ＭＴ−ＴＶ（バリン）およびそれらの組合せからなる群から選択される、少なくとも１つの冒された（ミトコンドリア）遺伝子を標的化することにより治療される、請求項２１または２２に記載の方法。