【手続補正書】
【提出日】令和2年5月25日(2020.5.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的ポリヌクレオチドを修飾するためのゲノム編集複合体であって、細胞膜透過ペプチドと、ゲノム編集システムの１つまたは複数の分子とを含み、前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択され、前記１つまたは複数のゲノム編集システム分子が、
ａ）ＲＮＡ誘導型エンドヌクレアーゼ（ＲＧＥＮ）、および前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列に相補的なガイド配列を含むガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）の一方または両方；
ｂ）ＤＮＡ誘導型エンドヌクレアーゼ（ＤＧＥＮ）、および前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列に相補的なガイド配列を含むガイドＤＮＡ（ｇＤＮＡ）の一方または両方；
ｃ）前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列を認識するジンクフィンガータンパク質（ＺＦＰ）；
ｄ）前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列を認識する転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）；
ｅ）前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列を認識するホーミングエンドヌクレアーゼ；および
ｆ）前記標的ポリヌクレオチド内の組換え部位を認識するインテグラーゼ
からなる群から選択される、ゲノム編集複合体。
【請求項２】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドである、請求項１に記載のゲノム編集複合体。
【請求項３】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドである、請求項１に記載のゲノム編集複合体。
【請求項４】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドである、請求項１に記載のゲノム編集複合体。
【請求項５】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＡＤＧＮ−１００ペプチドである、請求項１に記載のゲノム編集複合体。
【請求項６】
前記細胞膜透過ペプチドが、そのＮ末端に共有結合によって連結しているアセチル基を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項７】
前記細胞膜透過ペプチドが、そのＣ末端に共有結合によって連結しているシステアミド基を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項８】
前記ゲノム編集複合体中の前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、請求項１から７のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項９】
ＲＧＥＮおよびｇＲＮＡの一方または両方を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項１０】
ＲＧＥＮおよびｇＲＮＡを含む、請求項９に記載のゲノム編集複合体。
【請求項１１】
前記ｇＲＮＡが、単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、請求項９または１０に記載のゲノム編集複合体。
【請求項１２】
前記ＲＧＥＮが、Ｃａｓ９である、請求項９から１１のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項１３】
ＲＧＥＮとｇＲＮＡのモル比が、約１：１０〜約１０：１の間である、請求項９から１２のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項１４】
前記細胞膜透過ペプチドと前記ＲＧＥＮのモル比が、約１：１〜約８０：１の間である、請求項９から１３のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項１５】
異なるガイド配列を含む１つまたは複数の追加のｇＲＮＡをさらに含む、請求項９から１４のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項１６】
ＤＧＥＮおよびｇＤＮＡの一方または両方を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項１７】
ＤＧＥＮおよびｇＤＮＡを含む、請求項１６のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項１８】
ＺＦＰを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項１９】
ＴＡＬＥＮを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項２０】
前記標的ポリヌクレオチドに修飾を導入するためのドナー核酸であって、前記標的ポリヌクレオチドの前記修飾を含むように修飾される部分に対応する配列を含むドナー核酸をさらに含む、請求項９から１９のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項２１】
インテグラーゼを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項２２】
前記ゲノム編集複合体の平均直径が、約１０ｎｍ〜約３００ｎｍの間である、請求項１から２１のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
【請求項２３】
請求項１から２２のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体を含むコアを含むナノ粒子。
【請求項２４】
請求項１から２２のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体または請求項２３に記載のナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項２５】
請求項１から２２のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体を調製する方法であって、前記細胞膜透過ペプチドを前記１つまたは複数のゲノム編集システム分子と組み合わせるステップを含み、それによって前記ゲノム編集複合体を形成する方法。
【請求項２６】
ゲノム編集システムの１つまたは複数の分子を細胞に送達するための、請求項１から２２のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体または請求項２３に記載のナノ粒子であって、前記ゲノム編集複合体または前記ナノ粒子が、前記細胞と接触されることを特徴とし、前記ゲノム編集複合体または前記ナノ粒子が、前記１つまたは複数のゲノム編集システム分子を含む、ゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項２７】
前記細胞と前記ゲノム編集複合体またはナノ粒子との接触が、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる、請求項２６に記載のゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項２８】
前記細胞と前記ゲノム編集複合体またはナノ粒子との接触が、ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる、請求項２６に記載のゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項２９】
前記細胞と前記ゲノム編集複合体またはナノ粒子との接触が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる、請求項２６に記載のゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項３０】
前記細胞が、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、線維芽細胞、肝細胞、肺前駆細胞、または神経細胞である、請求項２６から２９のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項３１】
前記ゲノム編集システムが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＩＭ−１、ＣＤ２８、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲおよびＩＣＯＳからなる群から選択される遺伝子内の配列を標的とする、請求項３０に記載のゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項３２】
前記ゲノム編集複合体または前記ナノ粒子が第４の細胞膜透過ペプチドと外来性タンパク質をコードする核酸分子とを含む発現複合体と共に前記細胞に接触されることを特徴とする、請求項１から２３のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項３３】
前記外来性タンパク質が、細胞の表面で発現され得る組換え受容体である、請求項３２に記載のゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項３４】
前記組換え受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項３３に記載のゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項３５】
前記第４の細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、請求項３２から３４のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項３６】
細胞内の標的ポリヌクレオチドを修飾するための請求項１から２２のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体または請求項２３に記載のナノ粒子であって、前記ゲノム編集複合体または前記ナノ粒子が、前記細胞と接触されることを特徴とし、前記ゲノム編集複合体または前記ナノ粒子が、前記標的ポリヌクレオチド内の配列を標的とするゲノム編集システムの１つまたは複数の分子を含む、ゲノム編集複合体またはナノ粒子。
【請求項３７】
個体の疾患を処置するための、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
請求項１から２２のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体および／または請求項２３に記載のナノ粒子を含む組成物を含むキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
一部の実施形態では、上記の実施形態のいずれかによるゲノム編集複合体および／または上記の実施形態のいずれかによるナノ粒子を含む組成物を含むキットが提供される。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
標的ポリヌクレオチドを修飾するためのゲノム編集複合体であって、細胞膜透過ペプチドと、ゲノム編集システムの１つまたは複数の分子とを含み、前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択され、前記１つまたは複数のゲノム編集システム分子が、
ａ）ＲＮＡ誘導型エンドヌクレアーゼ（ＲＧＥＮ）、および前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列に相補的なガイド配列を含むガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）の一方または両方；
ｂ）ＤＮＡ誘導型エンドヌクレアーゼ（ＤＧＥＮ）、および前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列に相補的なガイド配列を含むガイドＤＮＡ（ｇＤＮＡ）の一方または両方；
ｃ）前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列を認識するジンクフィンガータンパク質（ＺＦＰ）；
ｄ）前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列を認識する転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）；
ｅ）前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列を認識するホーミングエンドヌクレアーゼ；および
ｆ）前記標的ポリヌクレオチド内の組換え部位を認識するインテグラーゼ
からなる群から選択される、ゲノム編集複合体。
（項目２）
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドである、項目１に記載のゲノム編集複合体。
（項目３）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号１〜１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目２に記載のゲノム編集複合体。
（項目４）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７５または７６のアミノ酸配列を含む、項目２に記載のゲノム編集複合体。
（項目５）
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドである、項目１に記載のゲノム編集複合体。
（項目６）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号１５〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目５に記載のゲノム編集複合体。
（項目７）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７７のアミノ酸配列を含む、項目５に記載のゲノム編集複合体。
（項目８）
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドである、項目１に記載のゲノム編集複合体。
（項目９）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号４１〜５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目８に記載のゲノム編集複合体。
（項目１０）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、項目８に記載のゲノム編集複合体。
（項目１１）
前記細胞膜透過ペプチドが、ＡＤＧＮ−１００ペプチドである、項目１に記載のゲノム編集複合体。
（項目１２）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号５３〜７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１１に記載のゲノム編集複合体。
（項目１３）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７９または８０のアミノ酸配列を含む、項目１１に記載のゲノム編集複合体。
（項目１４）
前記細胞膜透過ペプチドが、前記細胞膜透過ペプチドのＮ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、前記１つまたは複数の部分が、アセチル、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内移行シグナル、核外移行シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される、項目１から１３のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目１５）
前記細胞膜透過ペプチドが、そのＮ末端に共有結合によって連結しているアセチル基を含む、項目１４に記載のゲノム編集複合体。
（項目１６）
前記細胞膜透過ペプチドが、前記細胞膜透過ペプチドのＣ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、前記１つまたは複数の部分が、システアミド、システイン、チオール、アミド、任意選択で置換されているニトリロ三酢酸、カルボキシル、任意選択で置換されている直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ６アルキル、一級または二級アミン、オシド誘導体、脂質、リン脂質、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内移行シグナル、核外移行シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される、項目１から１５のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目１７）
前記細胞膜透過ペプチドが、そのＣ末端に共有結合によって連結しているシステアミド基を含む、項目１６に記載のゲノム編集複合体。
（項目１８）
前記ゲノム編集複合体中の前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、項目１から１７のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目１９）
前記連結が、共有結合である、項目１８に記載のゲノム編集複合体。
（項目２０）
ＲＧＥＮおよびｇＲＮＡの一方または両方を含む、項目１から１９のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目２１）
ＲＧＥＮおよびｇＲＮＡを含む、項目２０に記載のゲノム編集複合体。
（項目２２）
前記ｇＲＮＡが、単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、項目２０または２１に記載のゲノム編集複合体。
（項目２３）
前記ＲＧＥＮが、Ｃａｓ９である、項目２０から２２のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目２４）
ＲＧＥＮとｇＲＮＡのモル比が、約１：１０〜約１０：１の間である、項目２０から２３のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目２５）
前記細胞膜透過ペプチドと前記ＲＧＥＮのモル比が、約１：１〜約８０：１の間である、項目２０から２４のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目２６）
前記細胞膜透過ペプチドと前記ＲＧＥＮのモル比が、約５：１〜約２０：１の間である、項目２５に記載のゲノム編集複合体。
（項目２７）
異なるガイド配列を含む１つまたは複数の追加のｇＲＮＡをさらに含む、項目２０から２６のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目２８）
前記標的配列が、標的遺伝子内に存在し、前記１つまたは複数の追加のｇＲＮＡが、前記標的遺伝子内の配列に相補的なガイド配列を個々に含む、項目２７に記載のゲノム編集複合体。
（項目２９）
前記標的配列が、第１の標的遺伝子内に存在し、前記１つまたは複数の追加のｇＲＮＡが、１つまたは複数の追加の標的遺伝子内に存在する配列に相補的なガイド配列を個々に含む、項目２７に記載のゲノム編集複合体。
（項目３０）
ＤＧＥＮおよびｇＤＮＡの一方または両方を含む、項目１から１９のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目３１）
ＤＧＥＮおよびｇＤＮＡを含む、項目２０のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目３２）
ＺＦＰを含む、項目１から１９のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目３３）
ＴＡＬＥＮを含む、項目１から１９のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目３４）
ホーミングヌクレアーゼを含む、項目１から１９のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目３５）
前記標的ポリヌクレオチドに修飾を導入するためのドナー核酸であって、前記標的ポリヌクレオチドの前記修飾を含むように修飾される部分に対応する配列を含むドナー核酸をさらに含む、項目２０から３４のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目３６）
前記修飾が、前記標的ポリヌクレオチドにおける１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失または置換である、項目３５に記載のゲノム編集複合体。
（項目３７）
前記ドナー核酸が、一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドである、項目３５または３６に記載のゲノム編集複合体。
（項目３８）
前記修飾が、前記標的ポリヌクレオチド内への異種核酸の挿入である、項目３５に記載のゲノム編集複合体。
（項目３９）
前記ドナー核酸が、５’ホモロジーアームおよび３’ホモロジーアームに隣接した異種核酸を含む二本鎖ＤＮＡであり、前記５’ホモロジーアームおよび前記３’ホモロジーアームが、修飾される前記標的ポリヌクレオチドの領域に隣接する配列と相同である、項目３５または３８に記載のゲノム編集複合体。
（項目４０）
１つまたは複数の追加の標的ポリヌクレオチドに修飾を導入するための１つまたは複数の追加のドナー核酸をさらに含む、項目３５から３９のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目４１）
インテグラーゼを含む、項目１から１９のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目４２）
前記標的ポリヌクレオチドへの挿入のためのドナー核酸をさらに含み、前記インテグラーゼが、前記ドナー核酸内の組換え部位を認識し、前記ドナー核酸を前記標的ポリヌクレオチドに挿入するための前記標的ポリヌクレオチド内の組換え部位と前記ドナー核酸内の組換え部位との組換えを媒介することができる、項目４１に記載のゲノム編集複合体。
（項目４３）
前記ゲノム編集複合体の平均直径が、約１０ｎｍ〜約３００ｎｍの間である、項目１から４２のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体。
（項目４４）
項目１から４３のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体を含むコアを含むナノ粒子。
（項目４５）
前記コアが、１つまたは複数の追加の、項目１から４３のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体をさらに含む、項目４４に記載のナノ粒子。
（項目４６）
前記コアが、前記標的ポリヌクレオチドに修飾を導入するためのドナー核酸であって、前記標的ポリヌクレオチドの前記修飾を含むように修飾される部分に対応する配列を含むドナー核酸をさらに含み、前記ドナー核酸が、第２の細胞膜透過ペプチドと複合体を形成している、項目４４または４５に記載のナノ粒子。
（項目４７）
前記第２の細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、項目４６に記載のナノ粒子。
（項目４８）
前記第２の細胞膜透過ペプチドが、配列番号１〜７０および７５〜８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目４７に記載のナノ粒子。
（項目４９）
前記修飾が、前記標的ポリヌクレオチドにおける１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失または置換である、項目４６から４８のいずれか一項に記載のナノ粒子。
（項目５０）
前記ドナー核酸が、一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドである、項目４９に記載のナノ粒子。
（項目５１）
前記修飾が、前記標的ポリヌクレオチド内への異種核酸の挿入である、項目４６から４８のいずれか一項に記載のナノ粒子。
（項目５２）
前記ドナー核酸が、５’ホモロジーアームおよび３’ホモロジーアームに隣接した異種核酸を含む二本鎖ＤＮＡであり、前記５’ホモロジーアームおよび前記３’ホモロジーアームが、修飾される前記標的ポリヌクレオチドの領域に隣接する配列と相同である、項目５１に記載のナノ粒子。
（項目５３）
前記コアが、１つまたは複数の追加の標的ポリヌクレオチドに修飾を導入するための１つまたは複数の追加のドナー核酸をさらに含む、項目４６から５２のいずれか一項に記載のナノ粒子。
（項目５４）
前記ナノ粒子中の前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、項目４４から５３のいずれか一項に記載のナノ粒子。
（項目５５）
前記コアが、末梢細胞膜透過ペプチドを含むシェルにより被覆されている、項目４４から５３のいずれか一項に記載のナノ粒子。
（項目５６）
前記末梢細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、項目５５に記載のナノ粒子。
（項目５７）
前記末梢細胞膜透過ペプチドが、配列番号１〜７０および７５〜８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目５６に記載のナノ粒子。
（項目５８）
前記シェル内の前記末梢細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、項目５５から５７のいずれか一項に記載のナノ粒子。
（項目５９）
前記連結が、共有結合である、項目５４または５８に記載のナノ粒子。
（項目６０）
前記ナノ粒子の平均直径が、約１０ｎｍ〜約４００ｎｍの間である、項目４４から５９のいずれか一項に記載のナノ粒子。
（項目６１）
項目１から４３のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体または項目４４から６０のいずれか一項に記載のナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（項目６２）
第３の細胞膜透過ペプチドと、外来性タンパク質をコードする核酸分子とを含む発現複合体をさらに含む、項目６１に記載の医薬組成物。
（項目６３）
前記外来性タンパク質が、細胞の表面で発現され得る組換え受容体である、項目６２に記載の医薬組成物。
（項目６４）
前記組換え受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、項目６３に記載の医薬組成物。
（項目６５）
前記第３の細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、項目６２から６４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目６６）
前記第３の細胞膜透過ペプチドが、配列番号１〜７０および７５〜８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目６５に記載の医薬組成物。
（項目６７）
項目１から１９のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体を調製する方法であって、前記細胞膜透過ペプチドを前記１つまたは複数のゲノム編集システム分子と組み合わせるステップを含み、それによって前記ゲノム編集複合体を形成する方法。
（項目６８）
前記１つまたは複数のゲノム編集システム分子が、ＲＧＥＮおよびｇＲＮＡを含み、前記細胞膜透過ペプチドと前記ＲＧＥＮが、それぞれ約１：１〜約８０：１の比で組み合わせられ、前記ＲＧＥＮと前記ｇＲＮＡが、それぞれ約１０：１〜約１：１０の比で組み合わせられる、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
前記細胞膜透過ペプチドと前記ＲＧＥＮが、それぞれ約５：１〜約２０：１の比で組み合わせられる、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記ＲＧＥＮと前記ｇＲＮＡが、約１：１の比で組み合わせられる、項目６８または６９に記載の方法。
（項目７１）
ゲノム編集システムの１つまたは複数の分子を細胞に送達する方法であって、前記細胞を項目１から４３のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体または項目４４から６０のいずれか一項に記載のナノ粒子と接触させるステップを含み、前記ゲノム編集複合体または前記ナノ粒子が、前記１つまたは複数のゲノム編集システム分子を含む、方法。
（項目７２）
前記細胞を前記ゲノム編集複合体またはナノ粒子と接触させる前記ステップが、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
前記細胞を前記ゲノム編集複合体またはナノ粒子と接触させる前記ステップが、ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる、項目７１に記載の方法。
（項目７４）
前記細胞を前記ゲノム編集複合体またはナノ粒子と接触させる前記ステップが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる、項目７１に記載の方法。
（項目７５）
前記細胞が、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、線維芽細胞、肝細胞、肺前駆細胞、または神経細胞である、項目７１から７４のいずれか一項に記載の方法。
（項目７６）
前記細胞がＴ細胞である、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
前記ゲノム編集システムが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＩＭ−１、ＣＤ２８、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲおよびＩＣＯＳからなる群から選択される遺伝子内の配列を標的とする、項目７５または７６に記載の方法。
（項目７８）
前記細胞を、第４の細胞膜透過ペプチドと外来性タンパク質をコードする核酸分子とを含む発現複合体と接触させるステップをさらに含む、項目７１から７７のいずれか一項に記載の方法。
（項目７９）
前記外来性タンパク質が、細胞の表面で発現され得る組換え受容体である、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
前記組換え受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
前記第４の細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、項目７８から８０のいずれか一項に記載の方法。
（項目８２）
前記第４の細胞膜透過ペプチドが、配列番号１〜７０および７５〜８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目８１に記載の方法。
（項目８３）
細胞内の標的ポリヌクレオチドを修飾する方法であって、前記細胞を、項目１から４３のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体または項目４４から６０のいずれか一項に記載のナノ粒子と接触させるステップを含み、前記ゲノム編集複合体または前記ナノ粒子が、前記標的ポリヌクレオチド内の配列を標的とするゲノム編集システムの１つまたは複数の分子を含む、方法。
（項目８４）
個体の疾患を処置する方法であって、前記個体に項目６１から６６のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を投与するステップを含む方法。
（項目８５）
前記疾患が、がん、糖尿病、炎症性疾患、線維症、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、肝臓疾患、肺疾患、腎臓疾患、加齢および変性疾患、ならびにコレステロールレベル異常を特徴とする疾患からなる群から選択される、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記疾患が、がんである、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
前記がんが、固形腫瘍であり、前記医薬組成物が、増殖因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、腫瘍抑制因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現を調節するゲノム編集システムの１つまたは複数の分子を含む、ゲノム編集複合体またはナノ粒子を含む、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
前記がんが、肝臓、肺または腎臓のがんである、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記がんが、血液悪性腫瘍であり、前記医薬組成物が、増殖因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、腫瘍抑制因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現を調節するゲノム編集システムの１つまたは複数の分子を含む、ゲノム編集複合体またはナノ粒子を含む、項目８６に記載の方法。
（項目９０）
前記疾患が、ウイルス感染疾患であり、前記医薬組成物が、ウイルス感染性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節するゲノム編集システムの１つまたは複数の分子を含む、ゲノム編集複合体またはナノ粒子を含む、項目８５に記載の方法。
（項目９１）
前記疾患が、遺伝性疾患であり、前記医薬組成物が、前記遺伝性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節するゲノム編集システムの１つまたは複数の分子を含む、ゲノム編集複合体またはナノ粒子を含む、項目８５に記載の方法。
（項目９２）
前記疾患が、加齢または変性疾患であり、前記医薬組成物が、前記加齢または変性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節するゲノム編集システムの１つまたは複数の分子を含む、ゲノム編集複合体またはナノ粒子を含む、項目８５に記載の方法。
（項目９３）
前記疾患が、線維性または炎症性疾患であり、前記医薬組成物が、前記線維性または炎症性疾患の発症および／または進行に関与する２つまたはそれより多いタンパク質の発現を調節するゲノム編集システムの１つまたは複数の分子を含む、ゲノム編集複合体またはナノ粒子を含む、項目８５に記載の方法。
（項目９４）
前記個体がヒトである、項目８４から９３のいずれか一項に記載の方法。
（項目９５）
項目１から４３のいずれか一項に記載のゲノム編集複合体および／または項目４４から６０のいずれか一項に記載のナノ粒子を含む組成物を含むキット。