【手続補正書】
【提出日】令和2年4月14日(2020.4.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）膜内在性タンパク質（IMP）またはその断片をコードする第1の核酸断片であって、該IMPまたはその断片が、少なくとも1個の膜外領域、少なくとも1個の膜貫通ドメイン、および少なくとも1個の膜内領域を含み、かつ少なくとも1個の膜内領域をコードする第1の核酸断片の一部分が、該第1の核酸断片の5'端または3'端に位置している、第1の核酸断片；ならびに
（b）ワクシニアウイルスF13Lタンパク質またはその機能的断片をコードする第2の核酸断片であって、IMPの膜内領域をコードする第1の核酸断片の一部分にインフレームで融合している、第2の核酸断片
を含む、単離されたポリヌクレオチドであって、該ポリヌクレオチドを含むポックスウイルス感染細胞が、細胞外エンベロープビリオン（EEV）の外側エンベロープ膜の一部としてIMP-F13L融合タンパク質を発現することができる、前記単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２】
IMPが、少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、または少なくとも7個の膜貫通ドメインを含む複数回貫通膜タンパク質である、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
IMPが奇数個の膜貫通ドメインを有し、第1の核酸断片の5'端が膜外領域をコードし、第1の核酸断片の3'端が膜内領域をコードし、かつ第2のポリヌクレオチドの5'端が第1の核酸断片の3'端に融合している、請求項2に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
IMPが、Gタンパク質共役受容体（GPCR）を含む、請求項3に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
IMPが、ヒトfrizzled-4タンパク質（FZD4）またはその断片である、請求項4に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
ポックスウイルスプロモーターに機能的に結合している、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
IMPがCXCケモカイン受容体CXCR4またはその断片である、請求項4に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
IMPが偶数個の膜貫通ドメインを有し、かつ第1の核酸断片の5'端および3'端が両方とも、膜内領域をコードし、第2の核酸断片が、第1の核酸断片の3'端に融合している、請求項2に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
IMPが、ヒトCD20タンパク質またはその断片である、請求項8に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項1〜9のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされる、F13L融合タンパク質。
【請求項１１】
請求項1〜9のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、ポックスウイルスゲノム。
【請求項１２】
ワクシニアウイルスゲノムである、請求項11に記載のポックスウイルスゲノム。
【請求項１３】
請求項12に記載のポックスウイルスゲノムを含む、組換えワクシニアウイルスEEV。
【請求項１４】
（a）ワクシニアウイルス感染性に対して許容状態の宿主細胞に、請求項12に記載のポックスウイルスゲノムを含むワクシニアウイルスを感染させる工程、および
（b）宿主細胞から放出されるEEVを回収する工程
を含む、組換えワクシニアウイルスEEVを作製する方法。
【請求項１５】
（a）ポックスウイルス感染性に対して許容状態の宿主細胞に、膜内在性タンパク質（IMP）またはその断片をポックスウイルスEEV特異的タンパク質またはその膜結合断片との融合タンパク質として発現する組換えポックスウイルスを感染させる工程であって、感染宿主細胞によって産生されるEEVが、EEV外側エンベロープ膜の一部としてIMP融合タンパク質を含む、工程；
（b）宿主細胞から放出されるEEVを回収する工程
を含む、IMPまたはその断片を天然コンフォメーションで提示する方法であって、
該IMPまたはその断片が、EEVの表面上に天然コンフォメーションで提示される、前記方法。
【請求項１６】
EEV特異的タンパク質が、ワクシニアウイルスA33Rタンパク質、A34Rタンパク質、A56Rタンパク質、B5Rタンパク質、A36Rタンパク質、F13Lタンパク質、その任意の膜結合断片、またはその任意の組み合わせである、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
EEV特異的タンパク質が、F13L（SEQ ID NO: 1）またはその機能的断片である、請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
IMPが、少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、または少なくとも7個の膜貫通ドメインを含む複数回貫通膜タンパク質である、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
膜結合EEV特異的タンパク質断片が、ワクシニアウイルスA56Rタンパク質のストーク（stalk）ドメイン、膜貫通ドメイン、および膜内ドメインを含む、請求項16に記載の方法。
【請求項２０】
膜結合EEV特異的タンパク質断片が、ワクシニアウイルスB5Rタンパク質の膜貫通ドメインおよび膜内ドメインを含む、請求項16に記載の方法。
【請求項２１】
膜結合EEV特異的タンパク質断片が、ワクシニアウイルスB5Rタンパク質のストークドメイン、膜貫通ドメイン、および膜内ドメインを含む、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】
（a）少なくとも1個の膜外領域、少なくとも1個の膜貫通ドメイン、および少なくとも1個の膜内領域を含む膜内在性タンパク質（IMP）またはその断片；ならびに
（b）ワクシニアウイルス細胞外エンベロープビリオン（EEV）タンパク質またはその機能的断片
を含む、IMP-EEV融合タンパク質。
【請求項２３】
（a）SEQ ID NO: 2の20〜892位のアミノ酸；
（b）SEQ ID NO: 3；
（c）SEQ ID NO: 4；
（d）SEQ ID NO: 6の20〜370位のアミノ酸；
（e）SEQ ID NO: 7の20〜855位のアミノ酸；
（f）SEQ ID NO: 8の20〜935位のアミノ酸；
（g）SEQ ID NO: 10の20〜243位のアミノ酸；または
（h）SEQ ID NO: 11の20〜281位のアミノ酸
を含む、請求項22に記載のIMP-EEV融合タンパク質。
【請求項２４】
IMPまたはその断片が、そのC末端でEEVタンパク質に融合している、請求項22に記載のIMP-EEV融合タンパク質。
【請求項２５】
IMPまたはその断片が、そのN末端でEEVタンパク質に融合している、請求項22に記載のIMP-EEV融合タンパク質。
【請求項２６】
IMPが、少なくとも2個の膜貫通ドメインを含む複数回貫通膜タンパク質である、請求項22に記載のIMP-EEV融合タンパク質。
【請求項２７】
IMPが奇数個の膜貫通ドメインを含み、N末端が膜外領域であり、C末端が膜内領域である、請求項22に記載のIMP-EEV融合タンパク質。
【請求項２８】
IMPがGタンパク質共役受容体(GPCR)である、請求項27に記載のIMP-EEV融合タンパク質。
【請求項２９】
IMPが偶数個の膜貫通ドメインを含み、N末端およびC末端が両方とも膜内領域である、請求項26に記載のIMP-EEV融合タンパク質。
【請求項３０】
請求項22〜29のいずれか一項に記載の融合タンパク質を含む、組換えポックスウイルスEEV。
【請求項３１】
請求項22〜29のいずれか一項に記載のIMP-EEV融合タンパク質を含む、組換えポックスウイルスEEVであって、該IMPまたはその断片が、それに融合したEEVタンパク質に対して異種であり、IMP-EEV融合タンパク質が、外側エンベロープ膜に位置しており、該IMPまたはその断片が、該外側膜の表面上にその天然コンフォメーションで提示される、前記組換えポックスウイルスEEV。
【請求項３２】
前記ポックスウイルスEEVがワクシニアウイルスEEVである、請求項30または31に記載の組換えポックスウイルスEEV。
【請求項３３】
（a）請求項22〜29のいずれか一項に記載のIMP-EEV融合タンパク質を発現しているワクシニアウイルスであって、IMPまたはその断片がその外側膜タンパク質の表面上に発現している、ワクシニアウイルスを、固体支持体に付着させる工程；
（b）多数の抗原結合ドメインを提示する提示パッケージを含む、抗体提示ライブラリーを提供する工程；
（c）IMPに特異的に結合する抗原結合ドメインを提示する提示パッケージが、それに結合できるように、提示ライブラリーをワクシニアウイルスと接触させる工程；
（d）結合していない提示パッケージを除去する工程；および
（e）IMPまたはその断片に結合した抗原結合ドメインを有する提示パッケージを回収する工程
を含む、複数回貫通膜タンパク質に結合する抗体を選択する方法。
【請求項３４】
ワクシニアウイルスが、固体支持体上のトシル基との反応を介して、固体支持体に付着される、請求項33に記載の方法。
【請求項３５】
固体支持体が、トシル活性化磁気ビーズである、請求項33に記載の方法。
【請求項３６】
ワクシニアウイルスが、ビオチン化されて、ストレプトアビジンコーティング固体支持体に付着される、請求項33に記載の方法。
【請求項３７】
固体支持体が、ストレプトアビジンコーティング磁気ビーズである、請求項33に記載の方法。