(57)【要約】  本開示は、とりわけ、式（Ｉ）（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｚ、Ｘ、ＹおよびＺは本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。また、本明細書中に記載されているとおり、式（Ｉ）のコンジュゲートは式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のコンジュゲートに変換されうる。限定的なものではないが、該コンジュゲートは、制御放出物質および化学センサーを製造するために使用されうる。
2012520879.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式のコンジュゲート：
【化１】
2012520879.tif 000098
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立して、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒｘは水素または場合により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである；
Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、Ｚの１、２、３、４または５個のメチレン単位は、所望により且つ独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、場合により置換されていてもよいアリーレン部分または場合により置換されていてもよいヘテロアリーレン部分から選択される１以上の基で置換されていてもよく、ここで、Ｒａは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールまたは適当なアミノ保護基であり、Ｒｂは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールである；
各場合のＸは、独立して、−ＯＲｃまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、ここで、Ｒｃは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なヒドロキシル保護基、カチオン基またはアフィニティーリガンドであり、各Ｒｄは、独立して、水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なアミノ保護基またはアフィニティーリガンドであり、ここで、Ｘの少なくとも２つはアフィニティーリガンドを含む；
Ｙは水素、ハロゲン、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、ここで、Ｒｅは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘテロアリールである；そして
ｎは５〜２５（５および２５も含む）の整数である］。
【請求項２】
式：
【化２】
2012520879.tif 000099
［式中、
Ｒｘは水素または場合により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである；
Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、Ｚの１、２、３、４または５個のメチレン単位は、所望により且つ独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、場合により置換されていてもよいアリーレン部分または場合により置換されていてもよいヘテロアリーレン部分から選択される１以上の基で置換されていてもよく、ここで、Ｒａは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールまたは適当なアミノ保護基であり、Ｒｂは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールである；
各場合のＸは、独立して、−ＯＲｃまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、ここで、Ｒｃは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なヒドロキシル保護基、カチオン基またはアフィニティーリガンドであり、各Ｒｄは、独立して、水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なアミノ保護基またはアフィニティーリガンドであり、ここで、Ｘの少なくとも２つはアフィニティーリガンドを含む；
Ｙは水素、ハロゲン、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、ここで、Ｒｅは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘテロアリールである；そして
ｎは５〜２５（５および２５も含む）の整数である］のコンジュゲート。
【請求項３】
式：
【化３】
2012520879.tif 000100
［式中、
Ｗは、共有的にコンジュゲート化された薬物または検出可能標識である；
------は単結合または二重結合に相当する；
Ｒｘは水素または場合により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである；
Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、Ｚの１、２、３、４または５個のメチレン単位は、所望により且つ独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、場合により置換されていてもよいアリーレン部分または場合により置換されていてもよいヘテロアリーレン部分から選択される１以上の基で置換されていてもよく、ここで、Ｒａは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールまたは適当なアミノ保護基であり、Ｒｂは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールである；
各場合のＸは、独立して、−ＯＲｃまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、ここで、Ｒｃは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なヒドロキシル保護基、カチオン基またはアフィニティーリガンドであり、各Ｒｄは、独立して、水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なアミノ保護基またはアフィニティーリガンドであり、ここで、Ｘの少なくとも２つはアフィニティーリガンドを含む；
Ｙは水素、ハロゲン、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、ここで、Ｒｅは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘテロアリールである；そして
ｎは５〜２５（５および２５も含む）の整数である］のコンジュゲート。
【請求項４】
各ＸがＯＲｃである、請求項１〜３のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項５】
各ＸがＮ（Ｒｄ）２である、請求項１〜３のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項６】
基：
【化４】
2012520879.tif 000101
が、基：
【化５】
2012520879.tif 000102
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はｎに等しい］の混合物に相当する、請求項１〜３のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項７】
ｎが１０〜２０（１０および２０も含む）の整数である、請求項１〜３のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項８】
各ＸおよびＷが存在しない場合の該コンジュゲートの分子量が１０，０００Ｄａ未満である、請求項１〜３のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項９】
各ＸおよびＷが存在しない場合の該コンジュゲートの分子量が約３００〜約５，０００Ｄａの範囲である、請求項１〜３のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
各ＸおよびＷが存在しない場合の該コンジュゲートの分子量が約３００〜約８００Ｄａの範囲である、請求項１〜３のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
少なくとも２つのＸが、糖を含むアフィニティーリガンドを含む、請求項１〜３のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
少なくとも２つのＸが、グルコース、マンノース、グルコサミン、マンノサミン、メチルグルコース、メチルマンノース、エチルグルコースおよびエチルマンノースからなる群から選択される糖を含むアフィニティーリガンドを含む、請求項１１記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
少なくとも２つのＸが、ビマンノースまたはトリマンノースを含むアフィニティーリガンドを含む、請求項１１記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
少なくとも２つのＸが、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルビマンノース（ＡＥＢＭ）およびアミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）から選択されるアフィニティーリガンドを含む、請求項１１記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
少なくとも２つのＸが、糖とリンカーとを含むアフィニティーリガンドを含み、該糖がアノマー炭素を介して該リンカーに共有結合している、請求項１１記載のコンジュゲート。
【請求項１６】
該アノマー炭素がアルファアノマーである、請求項１５記載のコンジュゲート。
【請求項１７】
Ｗが、共有的にコンジュゲート化された薬物である、請求項３記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
該薬物が抗糖尿病薬である、請求項１７記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
該薬物がインスリン分子である、請求項１７記載のコンジュゲート。
【請求項２０】
該薬物がインスリン増感物質である、請求項１７記載のコンジュゲート。
【請求項２１】
該薬物がインスリン分泌促進物質である、請求項１７記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
該コンジュゲートが、式：
【化６】
2012520879.tif 000103
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｘ、Ｙおよびｎは請求項１に定義されているとおりである）を有する、請求項１記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
該コンジュゲートが、式：
【化７】
2012520879.tif 000104
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、ＹおよびＲｘおよびｎは請求項１に定義されているとおりである）を有する、請求項１記載のコンジュゲート。
【請求項２４】
該コンジュゲートが、式：
【化８】
2012520879.tif 000105
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは請求項１に定義されているとおりである）を有する、請求項１記載のコンジュゲート。
【請求項２５】
Ｒ１およびＲ２がエチルである、請求項２２〜２４のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項２６】
各ＸがＯＲｃである、請求項２５記載のコンジュゲート。
【請求項２７】
該コンジュゲートが、式：
【化９】
2012520879.tif 000106
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは請求項２に定義されているとおりである）を有する、請求項２記載のコンジュゲート。
【請求項２８】
該コンジュゲートが、式：
【化１０】
2012520879.tif 000107
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは請求項２に定義されているとおりである）を有する、請求項２記載のコンジュゲート。
【請求項２９】
該コンジュゲートが、式：
【化１１】
2012520879.tif 000108
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは請求項２に定義されているとおりである）を有する、請求項２記載のコンジュゲート。
【請求項３０】
ＹがＢｒである、請求項２７〜２９のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項３１】
該コンジュゲートが、式：
【化１２】
2012520879.tif 000109
（式中、------、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは請求項３に定義されているとおりである）を有する、請求項３記載のコンジュゲート。
【請求項３２】
該コンジュゲートが、式：
【化１３】
2012520879.tif 000110
（式中、------、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは請求項３に定義されているとおりである）を有する、請求項３記載のコンジュゲート。
【請求項３３】
該コンジュゲートが、式：
【化１４】
2012520879.tif 000111
（式中、------、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは請求項３に定義されているとおりである）を有する、請求項３記載のコンジュゲート。
【請求項３４】
ＹがＢｒである、請求項３１〜３３のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項３５】
（ａ）触媒、開始化合物および１以上の単量体の混合物を準備し、
（ｂ）該混合物を重合させる工程を含む、請求項１記載のコンジュゲートの製造方法であって、該開始化合物が、式：
【化１５】
2012520879.tif 000112
（式中、Ｕ＊は適当な脱離基である）を有するか、またはそれらの混合物であり、該単量体が、式：
【化１６】
2012520879.tif 000113
を有する、製造方法。
【請求項３６】
（ａ）フリーラジカル開始剤と１以上の単量体との混合物を準備し、
（ｂ）該混合物を重合させ、
（ｃ）連鎖停止剤を加えることにより該重合を停止させる工程を含む、請求項１記載のコンジュゲートの製造方法であって、該単量体が、式：
【化１７】
2012520879.tif 000114
を有し、該連鎖停止剤が、式：
【化１８】
2012520879.tif 000115
（式中、Ｑは、−ＳＨ、−ＯＨまたは−ＮＨ２から選択される）の化合物またはそれらの混合物である、製造方法。
【請求項３７】
（ａ）請求項１記載のコンジュゲートを準備し、
（ｂ）該コンジュゲートを適当な脱保護条件下で処理して、請求項２記載のコンジュゲートを得る工程を含む、請求項２記載のコンジュゲートの製造方法。
【請求項３８】
（ａ）請求項２記載のコンジュゲートを準備し、
（ｂ）少なくとも１つの遊離アミノ基を含む薬物または検出可能標識を準備し、
（ｃ）該アミノ基を還元的アミノ化によりアルデヒドにカップリングさせて、請求項３記載のコンジュゲートを得る工程を含む、請求項３記載のコンジュゲートの製造方法。
【請求項３９】
請求項３記載のコンジュゲートと、
該コンジュゲートのアフィニティーリガンドに非共有結合し、それにより該コンジュゲートを架橋して、架橋されたマテリアルを形成する多価架橋剤とを含む、架橋されたマテリアルであって、該多価架橋剤と該アフィニティーリガンドとの間の非共有結合が過剰量の標的分子の存在下で競合的に解離される、架橋されたマテリアル。
【請求項４０】
該標的分子がグルコースであり、該コンジュゲートのアフィニティーリガンドが糖を含む、請求項３９記載のマテリアル。
【請求項４１】
該コンジュゲートのアフィニティーリガンドが、グルコース、マンノース、グルコサミン、マンノサミン、メチルグルコース、メチルマンノース、エチルグルコースおよびエチルマンノースから選択される糖を含む、請求項４０記載のマテリアル。
【請求項４２】
該コンジュゲートのアフィニティーリガンドがビマンノースまたはトリマンノースを含む、請求項４０記載のマテリアル。
【請求項４３】
該コンジュゲートのアフィニティーリガンドがアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルビマンノース（ＡＥＢＭ）またはアミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）を含む、請求項４０記載のマテリアル。
【請求項４４】
該コンジュゲートのアフィニティーリガンドが糖とリンカーとを含み、該糖がアノマー炭素を介して該リンカーに共有結合している、請求項４０記載のマテリアル。
【請求項４５】
該アノマー炭素がアルファアノマーである、請求項４０記載のマテリアル。
【請求項４６】
該多価架橋剤がポリペプチドを含む、請求項３９記載のマテリアル。
【請求項４７】
該多価架橋剤がレクチンを含む、請求項４６記載のマテリアル。
【請求項４８】
該レクチンがＣｏｎＡである、請求項４７記載のマテリアル。
【請求項４９】
該レクチンが化学修飾されている、請求項４７記載のマテリアル。
【請求項５０】
該レクチンがＰＥＧ化（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）されている、請求項４９記載のマテリアル。
【請求項５１】
該レクチンが認識要素に共有結合しており、該認識要素が該レクチンへの結合に関して該コンジュゲートのアフィニティーリガンドおよび標的分子と競合し、該レクチンが、該コンジュゲートのアフィニティーリガンドに対して、該認識要素に対する場合より高いアフィニティーを有する、請求項４９記載のマテリアル。
【請求項５２】
該標的分子がグルコースであり、該コンジュゲートのアフィニティーリガンドと該認識要素との両方が糖を含む、請求項５１記載のマテリアル。
【請求項５３】
該認識要素がグルコースを含む、請求項５２記載のマテリアル。
【請求項５４】
式：
【化１９】
2012520879.tif 000116
［式中、
Ｒ３は、独立して、水素、−ＯＨ、−ＮＯ２およびハロゲンからなる群から選択される；
Ｘは、共有結合または２価の直鎖状または分枝状の飽和または不飽和の場合により置換されていてもよいＣ１−２０炭化水素鎖であり、ここで、Ｘのメチレン単位の１以上は、所望により且つ独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ’）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基により置換されていてもよい；
各場合のＲ’は、独立して、水素、適当な保護基またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分またはヘテロ脂肪族部分である］の光活性化可能なリンカーを使用して、該認識要素が該レクチンに共有結合されている、請求項５１記載のマテリアル。
【請求項５５】
式：
【化２０】
2012520879.tif 000117
［式中、
Ｒ４は水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは−ＣＦ３である；
Ｘは、共有結合または２価の直鎖状または分枝状の飽和または不飽和の場合により置換されていてもよいＣ１−２０炭化水素鎖であり、ここで、Ｘのメチレン単位の１以上は、所望により且つ独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ’）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基により置換されていてもよい；
各場合のＲ’は、独立して、水素、適当な保護基またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分またはヘテロ脂肪族部分である］の光活性化可能なリンカーを使用して、該認識要素が該レクチンに共有結合されている、請求項５１記載のマテリアル。
【請求項５６】
該多価架橋剤がペプチドアプタマーを含む、請求項４６記載のマテリアル。
【請求項５７】
該多価架橋剤がポリヌクレオチドアプタマーを含む、請求項３９記載のマテリアル。
【請求項５８】
１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有し標的分子を含有しないｐＨ７の２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー中で３７℃で配置された場合に該マテリアルが不溶性である、請求項３９記載のマテリアル。
【請求項５９】
標的分子の濃度に依存した速度または度合で該マテリアルからコンジュゲートが放出される、請求項５８記載のマテリアル。
【請求項６０】
該標的分子がグルコースである、請求項５９記載のマテリアル。
【請求項６１】
ＵＳＰ解離試験法ＩＩを５０ｒｐｍを用いた場合、６時間にわたり、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび１００ｍｇ／ｄＬ  グルコースを含有するｐＨ７の２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー中で３７℃で配置された場合に、該マテリアルが実質的に不溶性のままである、請求項６０記載のマテリアル。
【請求項６２】
ＵＳＰ解離試験法ＩＩを５０ｒｐｍを用いた場合、６時間にわたり、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび１００ｍｇ／ｄＬ  グルコースを含有するｐＨ７の２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー中で３７℃で配置された場合に、該マテリアルの１０％未満が溶解する、請求項６０記載のマテリアル。
【請求項６３】
ＵＳＰ解離試験法ＩＩを５０ｒｐｍを用いた場合、６時間にわたり、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび４００ｍｇ／ｄＬ  グルコースを含有するｐＨ７の２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー中で３７℃で配置された場合に、該マテリアルの少なくとも５０％が溶解する、請求項６０記載のマテリアル。
【請求項６４】
ＵＳＰ解離試験法ＩＩを５０ｒｐｍを用いた場合、６時間にわたり、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび４００ｍｇ／ｄＬ  グルコースを含有するｐＨ７の２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー中で３７℃で配置された場合に、該マテリアルの１００％が溶解する、請求項６０記載のマテリアル。
【請求項６５】
該コンジュゲートにおけるＷが薬物である、請求項６０記載のマテリアル。
【請求項６６】
該薬物が抗糖尿病薬である、請求項６５記載のマテリアル。
【請求項６７】
該薬物がインスリン分子である、請求項６５記載のマテリアル。
【請求項６８】
該薬物がインスリン増感物質である、請求項６５記載のマテリアル。
【請求項６９】
該薬物がインスリン分泌促進物質である、請求項６５記載のマテリアル。
【請求項７０】
請求項３９〜６９のいずれか１項記載のマテリアルを患者に投与することを含む方法。
【請求項７１】
該マテリアルを皮下注射により投与する、請求項７０記載の方法。
【請求項７２】
該コンジュゲートにおけるＷがインスリン分子である、請求項７０記載の方法。
【請求項７３】
該患者が糖尿病である、請求項７２記載の方法。
【請求項７４】
該インスリン分子の平均１日用量が１０〜２００Ｕの範囲となるように該マテリアルを投与する、請求項７４記載の方法。
【請求項７５】
該マテリアルを毎日投与する、請求項７４記載の方法。
【請求項７６】
該マテリアルを毎週投与する、請求項７４記載の方法。
【請求項７７】
該マテリアルを毎月投与する、請求項７４記載の方法。
【請求項７８】
該患者がインスリン増感物質の投与をも受けている、請求項７２記載の方法。
【請求項７９】
該患者がインスリン分泌促進物質の投与をも受けている、請求項７２記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は末端官能基化コンジュゲートおよびその用途に関する。
【０００２】
本出願は、２００９年３月２０日付け出願の米国仮出願第６１／１６２，１０５号、２００９年３月２０日付け出願の米国仮出願第６１／１６２，０５８号および２００９年３月２０日付け出願の米国仮出願第６１／１６２，０９２号（それらのそれぞれの内容の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に基づく優先権を主張するものである。
【背景技術】
【０００３】
先行技術において公知の「制御放出（コントロールリリース）」薬物運搬系（例えば、酵素的に不安定なカプセルからの薬物放出を記載しているＳｅａｒｓ，米国特許第４，１４５，４１０号）の大多数は、人体に存在する分子指標（例えば、代謝産物）の量に正比例した間隔および濃度で薬物を放出することはできない。したがって、これらの先行技術の系における薬物の運搬または放出は、厳密な意味では「制御」されておらず、外部または内部因子に非依存的な徐放であるに過ぎない。
【０００４】
注射可能なインスリンでの糖尿病の治療は、制御されていないインスリンの徐放が望ましくない、よく知られており研究されている一例である。実際、該ホルモンの単純な補充は、この疾患に関連した病的続発症を予防するのに十分でないことが明らかである。これらの続発症の発生は、患者に生じる種々の血中グルコース濃度に比例した外因性インスリンを供給できていないことを反映していると考えられる。この問題を解決するために、より生理的なインスリン運搬系を開発するための幾つかの生物学的および生物工学的アプローチが示唆されている（例えば、Ｂｒｏｗｎｌｅｅら，米国特許第４，３４８，３８７号、Ｔａｙｌｏｒら，米国特許第５，８３０，５０６号、第５，９０２，６０３号および第６，４１０，０５３号ならびにＺｉｏｎら，米国特許出願公開第２００４−０２０２７１９を参照されたい）。
【０００５】
ザイオン（Ｚｉｏｎ）の系の或る実施形態においては、多価グルコース結合性分子（例えば、レクチン）がグリコシル化重合体−インスリンコンジュゲートと組合されている。該グリコシル化重合体は複数の糖結合性基を含有し、該グルコース結合性分子の存在下で不溶性架橋物質を形成する。該物質は、グルコース濃度の増加に応答してグリコシル化重合体−インスリンコンジュゲートを放出する。一般に、これらの系は、これまでのところ、デキストランおよびグリコーゲンのような天然炭水化物に基づく高分子量炭水化物構造に基づくものであった。後記のとおり、これらの高分子量天然炭水化物は有用であるが、それらは或る問題を示し、したがって、新規特性および機能を有する代替的コンジュゲートが当技術分野において必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
１つの態様において、本開示は、式（Ｉ）：
【化１】
2012520879.tif 000003
【０００７】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｚ、Ｘ、ＹおよびＺは本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。特に、Ｘの少なくとも２つの出現はアフィニティーリガンド、例えば糖を含む。
【０００８】
式（Ｉ）のコンジュゲートは、他のコンジュゲート、例えば、式（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）：
【化２】
2012520879.tif 000004
【０００９】
（式中、------、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｚ、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートの製造における中間体として有用である。
【００１０】
本開示はまた、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のコンジュゲートの製造方法を提供する。例えば、末端基の官能性、例えば式（Ｉ）において示されるアセタール官能性は、当業者に公知の方法によりアルデヒド官能性に変換されて、式（ＩＩ）のコンジュゲートを与えうる。ある実施形態においては、そのように変換されたそのようなコンジュゲートは次いで、薬物（Ｗ）に共有結合されて、式（ＩＩＩ）の末端官能基化重合体−薬物コンジュゲートを与えうる。ある実施形態においては、これらの末端官能基化重合体−薬物コンジュゲートは、よりランダムに官能基化された重合体−薬物コンジュゲート（すなわち、この場合、該薬物は、該重合体鎖に沿った種々の位置にランダムに位置している）と比べて高いインビボ生物活性保持を示す。薬物の代わりに検出可能標識（Ｗ）（例えば、化学センサーにおけるもの）を含むコンジュゲートの使用も記載する。
【００１１】
１つの態様においては、標的分子（例えば、グルコース）に応答して、制御可能な様態でコンジュゲートを放出しうる架橋されたマテリアル（物質）を製造するために、コンジュゲートが使用されうる。該コンジュゲートのアフィニティーリガンドに非共有結合し、それにより該コンジュゲートを架橋して前記の架橋されたマテリアルを形成する多価架橋剤と、該コンジュゲートとを一緒にすることにより、これらのマテリアルは製造される。該多価架橋剤と該アフィニティーリガンドとの間の非共有結合は、過剰量の該標的分子の存在下、競合的に解離する。
【００１２】
定義：
本明細書の全体にわたって用いる特定の官能基、化学用語および一般用語の定義を以下に詳細に説明する。本発明の目的においては、化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈＥｄ．（表紙の内側）に従い特定され、具体的な官能基は概ね、それに記載されているとおりに定義される。また、有機化学の一般則ならびに特定の官能性部分および反応性は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；ＳｍｉｔｈおよびＭａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載されている。
【００１３】
本明細書に記載されている或る重合体は、特に示さない限り、ＺまたはＥ異性体として存在しうる１以上の二重結合を有しうる。本発明はまた、他の異性体を実質的に含有しない個々の異性体としての重合体、あるいは種々の異性体の混合物（例えば、立体異性体のラセミ混合物）としての重合体を含む。前記重合体自体に加えて、本発明は、これらの重合体の医薬上許容される誘導体、およびこれらの重合体の１以上を含む組成物をも含む。
【００１４】
本明細書中で用いる「ハロ」および「ハロゲン」なる語は、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−Ｃｌ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）およびヨウ素（ヨード、−Ｉ）から選択される原子を意味する。
【００１５】
本明細書中で用いる「脂肪族」または「脂肪族基」なる語は、直鎖状、分枝状または環状（「炭素環式」）であることが可能であり完全に飽和していることが可能であり又は１以上の不飽和単位を含有することが可能であるが芳香族ではない場合により置換されていてもよい炭化水素部分を示す。特に示さない限り、脂肪族基は１〜６個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態においては、脂肪族基は１〜４個の炭素原子を含有し、さらに他の実施形態においては、脂肪族基は１〜３個の炭素原子を含有する。適当な脂肪族基には、直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルおよびアルキニル基、ならびにそれらの混成体、例えば（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキルまたは（シクロアルキル）アルケニルが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００１６】
本明細書中で用いる「不飽和」なる語は、ある部分が１以上の二重または三重結合を有することを意味する。
【００１７】
単独で又はより大きな部分の一部として用いられる「環状脂肪族」、「炭素環」または「炭素環式」なる語は、３〜１０個の構成要素（メンバー）を有する、本明細書に記載されているとおりの場合により置換されていてもよい飽和または部分不飽和環状脂肪族単環式または二環式環系を意味する。環状脂肪族基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロヘプテニル、シクロオクチル、シクロオクテニルおよびシクロオクタジエニルが含まれるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態においては、該シクロアルキルは３〜６個の炭素を有する。
【００１８】
本明細書中で用いる「アルキル」なる語は、１〜６個の炭素原子を含有する脂肪族部分から１個の水素原子を除去することによりに誘導される場合により置換されていてもよい飽和直鎖状または分枝状炭化水素基を意味する。いくつかの実施形態においては、本発明で用いられるアルキル基は１〜５個の炭素原子を含有する。もう１つの実施形態においては、用いられるアルキル基は１〜４個の炭素原子を含有する。さらに他の実施形態においては、該アルキル基は１〜３個の炭素原子を含有する。さらに別の実施形態においては、該アルキル基は１〜２個の炭素原子を含有する。アルキル基の具体例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｓｅｃ−ペンチル、ｉｓｏ−ペンチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ドデシルなどが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００１９】
本明細書中で用いる「アルケニル」なる語は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖状または分枝状脂肪族部分から１個の水素原子を除去することにより誘導される場合により置換されていてもよい１価基を意味する。ある実施形態においては、本発明で用いられるアルケニル基は２〜６個の炭素原子を含有する。ある実施形態においては、本発明で用いられるアルケニル基は２〜５個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態においては、本発明で用いられるアルケニル基は２〜４個の炭素原子を含有する。もう１つの実施形態においては、本発明で用いられるアルケニル基は２〜３個の炭素原子を含有する。アルケニル基には、例えばエテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イルなどが含まれる。
【００２０】
本明細書中で用いる「アルキニル」なる語は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖状または分枝状脂肪族部分から１個の水素原子を除去することにより誘導される場合により置換されていてもよい１価基を意味する。ある実施形態においては、本発明で用いられるアルキニル基は２〜６個の炭素原子を含有する。ある実施形態においては、本発明で用いられるアルキニル基は２〜５個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態においては、本発明で用いられるアルキニル基は２〜４個の炭素原子を含有する。もう１つの実施形態においては、本発明で用いられるアルキニル基は２〜３個の炭素原子を含有する。代表的なアルキニル基には、例えばエチニル、２−プロピニル（プロパルギル）、１−プロピニルなどが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００２１】
「アルアルキル」、「アルアルコキシ」または「アリールオキシアルキル」におけるようなより大きな部分の一部として又は単独で用いられる「アリール」なる語は、合計５〜１０個の環構成要素を有する場合により置換されていてもよい単環式および二環式環系を意味する。ここで、該系内の少なくとも１つの環は芳香族であり、該系内の各環は３〜７個の環構成要素を含有する。「アリール」なる語は「アリール環」なる語と互換的に用いられうる。本開示の或る実施形態においては、「アリール」は、１以上の置換基を含有していてもよいフェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラシルなど（これらに限定されるものではない）を含む芳香族環系を意味する。
【００２２】
「アリーレン」なる語は、本明細書中で定義されているとおりの２価アリール基を意味する。
【００２３】
より大きな部分、例えば「ヘテロアルアルキル」または「ヘテロアルアルコキシ」の一部として又は単独で用いられる「ヘテロアリール」なる語は、５〜１０個の環原子、好ましくは５、６または９個の環原子を有する；一連の環において共有された６、１０または１４個のπ電子を有する；および炭素原子に加えて１〜５個のヘテロ原子を有する場合により置換されていてもよい基を意味する。「ヘテロ原子」なる語は窒素、酸素または硫黄を意味し、窒素または硫黄の任意の酸化形態および塩基性窒素の任意の第四級化形態を含む。ヘテロアリール基には、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニルおよびプテリジニルが含まれるが、これらに限定されるものではない。本明細書中で用いる「ヘテロアリール」および「ヘテロアル−」なる語は、ヘテロ芳香環が１以上のアリール、炭素環式または複素環式環と縮合している基をも含み、ここで、該基または結合点は該ヘテロ芳香環上に位置する。非限定的な具体例には、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル４Ｈ−キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニルおよびテトラヒドロイソキノリニルが含まれる。ヘテロアリール基は単環式または二環式でありうる。「ヘテロアリール」なる語は「ヘテロアリール環」、「ヘテロアリール基」または「ヘテロ芳香族」なる語と互換的に用いられることが可能であり、それらの語はいずれも、場合により置換されていてもよい環を含む。「ヘテロアルアルキル」なる語は、ヘテロアリールにより置換されたアルキル基を意味し、ここで、該アルキルおよびヘテロアリール部分は、独立して、場合により置換されていてもよい。
【００２４】
「ヘテロアリーレン」なる語は、本明細書中に定義されているとおりの２価ヘテロアリール基を意味する。
【００２５】
本明細書中で用いる「ヘテロ脂肪族」または「ヘテロ脂肪族基」は、直鎖状（すなわち、非分枝状）、分枝状または環状（「複素環式」）であることが可能であり完全に飽和していることが可能であり又は１以上の不飽和単位を含有することが可能であるが芳香族ではない、炭素原子に加えて１〜５個のヘテロ原子を有する場合により置換されていてもよい炭化水素部分を意味する。「ヘテロ原子」なる語は、窒素、酸素または硫黄などを意味し、窒素または硫黄の任意の酸化形態および塩基性窒素の任意の第四級化形態を含む。「窒素」なる語は、置換された窒素をも含む。特に示さない限り、ヘテロ脂肪族基は１〜６個の炭素原子を含有し、ここで、１〜３個の炭素原子は、所望により且つ独立して、酸素、窒素および硫黄から選択されるヘテロ原子で置換されていてもよい。いくつかの実施形態においては、ヘテロ脂肪族基は１〜４個の炭素原子を含有し、ここで、１〜２個の炭素原子は、所望により且つ独立して、酸素、窒素および硫黄から選択されるヘテロ原子で置換されていてもよい。さらに他の実施形態においては、ヘテロ脂肪族基は１〜３個の炭素原子を含有し、ここで、１個の炭素原子は、所望により且つ独立して、酸素、窒素および硫黄から選択されるヘテロ原子で置換されていてもよい。適当なヘテロ脂肪族基には、直鎖状または分枝状へテロアルキル、ヘテロアルケニルおよびヘテロアルキニル基が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００２６】
本明細書中で用いる「複素環」、「ヘテロシクリル」、「複素環式基」および「複素環」なる語は互換的に用いられ、場合により置換されていてもよい安定な５〜７員単環式または７〜１０員二環式複素環式部分を意味し、これらは飽和または部分不飽和であり、炭素原子に加えて、前記で定義されたとおりの１以上のヘテロ原子を有する。「窒素」なる語は、置換された窒素を含む。複素環は、安定な構造を与える任意のヘテロ原子または炭素原子において、その付随基に結合しており、該環原子はいずれも、場合により置換されていてもよい。そのような飽和または部分不飽和複素環式基の具体例には、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピロリジニル、ピロリドニル、ピペリジニル、ピロリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニルおよびキヌクリジニルが含まれるが、これらに限定されるものではない。「複素環」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクリル環」、「複素環式基」、「複素環式部分」および「複素環基」なる語は本明細書中で互換的に用いられ、１以上のアリール、ヘテロアリールまたは炭素環式環、例えばインドリニル、３Ｈ−インドリル、クロマニル、フェナントリジニルまたはテトラヒドロキノリニルにヘテロシクリル環が縮合している基をも含むことが可能であり、この場合、該基または結合点は該ヘテロシクリル環上に位置する。ヘテロシクリル基は単環式または二環式でありうる。「ヘテロシクリルアルキル」なる語は、ヘテロシクリルにより置換されたアルキル基を意味し、ここで、該アルキルおよびヘテロシクリル部分は、独立して、場合により置換されていてもよい。
【００２７】
本明細書中で用いる「部分不飽和」なる語は、少なくとも１つの二重または三重結合を含む環部分に関するものである。「部分不飽和」なる語は、複数の不飽和部位を有する環を含むと意図されるが、本明細書中で定義されているアリールまたはヘテロアリール部分を含むとは意図されない。
【００２８】
「２価炭化水素鎖」（「２価アルキレン基」とも称される）なる語はポリメチレン基、すなわち、−（ＣΗ２）ｚ−（式中、ｚは、１〜１０、１〜８、１〜６、１〜４、１〜３、１〜２、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４、または２〜３の正の整数である）である。置換された２価炭化水素鎖は、１以上のメチレン水素原子が置換基により置換されているポリメチレン基である。適当な置換基には、置換された脂肪族基に関して後記に記載されているものが含まれる。
【００２９】
本明細書に記載されているとおり、本発明の化合物は「場合により置換されていてもよい」部分を含有しうる。一般に、「置換」なる語は、その前に「所望により」なる語が付されているかどうかには無関係に、示されている部分の１以上の水素が適当な置換基で置換されることを意味する。特に示さない限り、「場合により置換されていてもよい」基は該基の置換可能な各位置に適当な置換基を有することが可能であり、任意の与えられた構造における２以上の位置が、特定された基から選択される２以上の置換基で置換されうる場合、該置換基はそれぞれの位置において同じであっても異なっていてもよい。本発明により想定される置換基の組合せは、好ましくは、安定な又は化学的に可能な化合物の形成をもたらすものである。本明細書中で用いる「安定」なる語は、製造、検出および或る実施形態においては回収、精製および本明細書に開示されている目的の１以上のための使用を可能にする条件に付された場合に実質的に変化しない化合物に関して用いられる。
【００３０】
「場合により置換されていてもよい」基の置換可能な炭素原子上の適当な１価置換基は、独立して、ハロゲン；−（ＣＨ２）０−４Ｒｏ；−（ＣＨ２）０−４ＯＲｏ；−Ｏ−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲｏ；−（ＣＨ２）０−４ＣＨ（ＯＲｏ）２；−（ＣＨ２）０−４ＳＲｏ；−（ＣＨ２）０−４Ｐｈ（これはＲｏで置換されていてもよい）；−（ＣＨ２）０−４Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ（これはＲｏで置換されていてもよい）；−ＣＨ＝ＣＨＰｈ（これはＲｏで置換されていてもよい）；−ＮＯ２；−ＣＮ；−Ｎ３；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒｏ）２；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒｏ；−Ｎ（Ｒｏ）Ｃ（Ｓ）Ｒｏ；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒｏ）Ｃ（Ｏ）ＮＲｏ２；−Ｎ（Ｒｏ）Ｃ（Ｓ）ＮＲｏ２；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲｏ；−Ｎ（Ｒｏ）Ｎ（Ｒｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒｏ；−Ｎ（Ｒｏ）Ｎ（Ｒｏ）Ｃ（０）ＮＲｏ２；−Ｎ（Ｒｏ）Ｎ（Ｒｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲｏ；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）Ｒｏ；−Ｃ（Ｓ）Ｒｏ；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲｏ；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＳＲｏ；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲｏ３；−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）Ｒｏ；−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０−４ＳＲ−、ＳＣ（Ｓ）ＳＲｏ；−（ＣＨ２）０−４ＳＣ（Ｏ）Ｒｏ；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＮＲｏ２；−Ｃ（Ｓ）ＮＲｏ２；−Ｃ（Ｓ）ＳＲｏ；−ＳＣ（Ｓ）ＳＲｏ、−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）ＮＲｏ２；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲｏ）Ｒｏ；−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒｏ；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒｏ；−Ｃ（ＮＯＲｏ）Ｒｏ；−（ＣＨ２）０−４ＳＳＲｏ；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２Ｒｏ；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２ＯＲｏ；−（ＣＨ２）０−４ＯＳ（Ｏ）２Ｒｏ；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｏ２；−（ＣＨ）０−４Ｓ（Ｏ）Ｒｏ；−Ｎ（Ｒｏ）Ｓ（Ｏ）２ＮＲｏ２；−Ｎ（Ｒｏ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｏ；−Ｎ（ＯＲｏ）Ｒｏ；−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｏ２；−Ｐ（Ｏ）２Ｒｏ；−Ｐ（Ｏ）Ｒｏ２；−ＯＰ（Ｏ）Ｒｏ２；−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲｏ）２；ＳｉＲｏ３；−（Ｃ１−４直鎖状または分枝状アルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒｏ）２；または−（Ｃ１−４直鎖状または分枝状アルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒｏ）２（ここで、各Ｒｏは、後記のとおりに置換されていることが可能であり、独立して、水素、Ｃ１−６脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立して窒素、酸素または硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環であり、あるいは前記の定義にかかわらず、独立して存在する２つのＲｏがそれらの介在原子と一緒になって、独立して窒素、酸素または硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する３〜１２員飽和、部分不飽和またはアリール単環式または二環式環を形成しており、これらは、後記のとおりに置換されていてもよい）である。
【００３１】
Ｒｏ（または独立して存在する２つのＲｏがそれらの介在原子と一緒になって形成される環）上の適当な１価置換基は、独立して、ハロゲン、−（ＣＨ２）０−４Ｒ・、−（ハロＲ・）、−（ＣＨ２）０−２ＯＨ、−（ＣＨ２）０−２ＯＲ・、−（ＣＨ２）０−２ＣＨ（ＯＲ・）２；−Ｏ（ハロＲ・）、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）Ｒ・、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ・、−（ＣＨ２）０−２ＳＲ・、−（ＣＨ２）０−２ＳＨ、−（ＣＨ２）０−２ＮＨ２、−（ＣＨ２）０−２ＮＨＲ・、−（ＣＨ２）０−２ＮＲ・２、−ＮＯ２、−ＳｉＲ・３、−ＯＳｉＲ・３、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ・、−（Ｃ１−４直鎖状または分枝状アルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒｏ）２；または−（Ｃ１−４直鎖状または分枝状アルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ・または−ＳＳＲ・（ここで、各Ｒ・は置換されていないか、あるいは、「ハロ」が前に付されている場合には、１以上のハロゲンのみで置換されており、独立して、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立して窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環である）である。Ｒｏの飽和炭素原子上の適当な２価置換基には、＝Ｏおよび＝Ｓが含まれる。
【００３２】
「場合により置換されていてもよい」基の飽和炭素原子上の適当な２価置換基には以下のものが含まれる：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ＊２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ＊、＝ＮＲ＊、＝ＮＯＲ＊、−Ｏ（Ｃ（Ｒ＊２））２−３Ｏ−または−Ｓ（Ｃ（Ｒ＊２））２−３Ｓ−（ここで、それぞれ独立して存在するＲ＊は、水素、後記のとおりに置換されていてもよいＣ１−６脂肪族、または独立して窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する不飽和５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環から選択される）。「場合により置換されていてもよい」基の置換可能隣接炭素に結合した適当な２価置換基には、−Ｏ（ＣＲ＊２）２−３Ｏ−が含まれ、ここで、それぞれ独立して存在するＲ＊は、水素、後記のとおりに置換されていてもよいＣ１−６脂肪族、または独立して窒素、酸素または硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する不飽和５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環から選択される。
【００３３】
Ｒ＊の脂肪族基上の適当な１価置換基には、ハロゲン、−Ｒ・、−（ハロＲ・）、−ＯＨ、−ＯＲ・、−Ｏ（ハロＲ・）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ・、−ＮＨ２、−ＮＨＲ・、−ＮＲ・２または−ＮＯ２（ここで、各Ｒ・は置換されていないか、あるいは、「ハロ」が前に付されている場合には、１以上のハロゲンのみで置換されており、独立して、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立して窒素、酸素または硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環である）が含まれる。
【００３４】
「場合により置換されていてもよい」基の置換可能窒素上の適当な置換基には以下のものが含まれる：−Ｒ†、−ＮＲ†２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ†２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ†２、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ†２または−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†（ここで、各Ｒ†は、独立して、水素、後記のとおりに置換されていてもよいＣ１−６脂肪族、置換されていない−ＯＰｈ、または独立して窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する置換されていない５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環であり、あるいは前記の定義にかかわらず、独立して存在する２つのＲ†がそれらの介在原子と一緒になって、独立して窒素、酸素または硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する置換されていない３〜１２員飽和、部分不飽和またはアリール単環式または二環式環を形成しており、これらは、後記のとおりに置換されていてもよい）。
【００３５】
Ｒ†の脂肪族基上の適当な１価置換基は、独立して、ハロゲン、−Ｒ・、−（ハロＲ・）、−ＯＨ、−ＯＲ・、−Ｏ（ハロＲ・）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ・、−ＮＨ２、−ＮＨＲ・、−ＮＲ・２または−ＮＯ２（ここで、各Ｒ・は置換されていないか、あるいは、「ハロ」が前に付されている場合には、１以上のハロゲンのみで置換されており、独立して、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立して窒素、酸素または硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環である）である。
【００３６】
本明細書中で用いる「適当なアミノ保護基」は当技術分野でよく知られており、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９に詳細に記載されているものを包含する。適当なアミノ保護基には以下のものが含まれる：メチルカルバマート、エチルカルバマート、９−フルオレニルメチルカルバマート（Ｆｍｏｃ）、９−（２−スルホ）フルオレニルメチルカルバマート、９−（２，７−ジブロモ）フルオロエニルメチルカルバマート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバマート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェナシルカルバマート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルカルバマート（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルカルバマート（Ｔｅｏｃ）、２−フェニルエチルカルバマート（ｈＺ）、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチルカルバマート（Ａｄｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−ハロエチルカルバマート、１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチルカルバマート（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカルバマート（ＴＣＢＯＣ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エチルカルバマート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカルバマート（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２’−および４’−ピリジル）エチルカルバマート（Ｐｙｏｃ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカルバマート、ｔ−ブチルカルバマート（ＢＯＣ）、１−アダマンチルカルバマート（Ａｄｏｃ）、ビニルカルバマート（Ｖｏｃ）、アリルカルバマート（Ａｌｌｏｃ）、１−イソプロピルアリルカルバマート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカルバマート（Ｃｏｃ）、４−ニトロシンナミルカルバマート（Ｎｏｃ）、８−キノリルカルバマート、Ｎ−ヒドロキシピペリジニルカルバマート、アルキルジチオカルバマート、ベンジルカルバマート（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルバマート（Ｍｏｚ）、ｐ−ニトロベンジルカルバマート、ｐ−ブロモベンジルカルバマート、ｐ−クロロベンジルカルバマート、２，４−ジクロロベンジルカルバマート、４−メチルスルフィニルベンジルカルバマート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカルバマート、ジフェニルメチルカルバマート、２−メチルチオエチルカルバマート、２−メチルスルホニルエチルカルバマート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカルバマート、［２−（１，３−ジチアニル）］メチルカルバマート（Ｄｍｏｃ）、４−メチルチオフェニルカルバマート（Ｍｔｐｃ）、２，４−ジメチルチオフェニルカルバマート（Ｂｍｐｃ）、２−ホスホニオエチルカルバマート（Ｐｅｏｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバマート（Ｐｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−シアノエチルカルバマート、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカルバマート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバマート、５−ベンゾイソオキサゾリルメチルカルバマート、２−（トリ��ルオロメチル）−６−クロロモニルメチルカルバマート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカルバマート、３，５−ジメトキシベンジルカルバマート、ｏ−ニトロベンジルカルバマート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカルバマート、フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカルバマート、フェノチアニジル−（１０）−カルボニル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノカルボニル誘導体、Ｎ’−フェニルアミノチオカルボニル誘導体、ｔ−アミルカルバマート、Ｓ−ベンジルチオカルバマート、ｐ−シアノベンジルカルバマート、シクロブチルカルバマート、シクロヘキシルカルバマート、シクロペンチルカルバマート、シクロプロピルメチルカルバマート、ｐ−デシルオキシベンジルカルバマート、２，２−ジメトキシカルボニルビニルカルバマート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバマート、１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピルカルバマート、１，１−ジメチルプロピニルカルバマート、ジ（２−ピリジル）メチルカルバマート、２−フラニルメチルカルバマート、２−ヨードエチルカルバマート、イソボリンルカルバマート、イソブチルカルバマート、イソニコチニルカルバマート、ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバマート、１−メチルシクロブチルカルバマート、１−メチルシクロヘキシルカルバマート、１−メチル−１−シクロプロピルメチルカルバマート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカルバマート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカルバマート、１−メチル−１−フェニルエチルカルバマート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカルバマート、フェニルカルバマート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカルバマート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカルバマート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバマート、２，４，６−トリメチルベンジルカルバマート、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニトロフェニルアセトアミド、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ｎ’−ジチオベンジルオキシカルボニルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンナミド、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、ｏ−ニトロベンズアミド、ｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミド、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加体（ＳＴＡＢＡＳＥ）、５−��換１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換１，３−ジベンジル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１−置換３，５−ジニトロ−４−ピリドン、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピロオリン−３−イル）アミン、第四級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノＮ’−オキシド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ’−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリシリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリシリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニル  ホウ酸（ｂｏｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタカルボニルクロミウム−またはタングステン）カルボニル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホルアミダート、ジベンジルホスホルアミダート、ジフェニルホスホルアミダート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アントラセン��ルホンアミド、４−（４’，８’−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホナミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミドおよびフェナシルスルホンアミド。
【００３７】
本明細書中で用いる「適当なヒドロキシル保護基」は当技術分野でよく知られており、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９に詳細に記載されているものを包含する。適当なヒドロキシル保護基には以下のものが含まれる：メチル、メトキシメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアイアコルメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリル  Ｎ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ、ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４’’−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４’’−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）-１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンゾイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルマート、ベンゾイルホルマート、アセタート、クロロアセタート、ジクロロアセタート、トリクロロアセタート、トリフルオロアセタート、メトキシアセタート、トリフェニルメトキシアセタート、フェノキシアセタート、ｐ−クロロフェノキシアセタート、３−フェニルプロピオナート、４−オキソペンタノアート（レブリナート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノアート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロアート、アダマントアート、クロトナート、４−メトキシクロトナート、ベンゾアート、ｐ−フェニルベンゾアート、２，４，６−トリメチルベンゾアート（メシトアート）、アルキルメチルカルボナート、９−フルオレニルメチルカルボナート（Ｆｍｏｃ）、アルキルエチルカルボナート、アルキル２，２，２−トリクロロエチルカルボナート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカルボナート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカルボナート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカルボナート（Ｐｅｏｃ）、アルキルイソブチルカルボナート、アルキルビニルカルボナート、アルキルアリルカルボナート、アルキルｐ−ニトロフェニルカルボナート、アルキルベンジルカルボナート、アルキルｐ−メトキシベンジルカルボナート、アルキル３，４−ジメトキシベンジルカルボナート、アルキルｏ−ニトロベンジルカルボナート、アルキルｐ−ニトロベンジルカルボナート、アルキルＳ−ベンジルチオカルボナート、４−エトキシ−１−ナフチルカルボナート、メチルジチオカルボナート、２−ヨードベンゾアート、４−アジドブチラート、４−ニトロ−４−メチルペンタノアート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾアート、２−ホルミルベンゼンスルホナート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチラート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾアート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセタート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセタート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセタート、クロロジフェニルアセタート、イソブチラート、モノスクシノアート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノアート、ｏ−（メトキシカルボニル）ベンゾアート、α−ナフトアート、ニトラート、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミダート、アルキルＮ−フェニルカルバマート、ボラート、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェナート、スルファート、メタンスルホナート（メシラート）、ベンジ���スルホナートおよびトシラート（Ｔｓ）。１，２−または１，３−ジオールを保護するための保護基には以下のものが含まれる：メチレンアセタール、エチリデンアセタール、１−ｔ−ブチルエチリデンケタール、１−フェニルエチリデンケタール、（４−メトキシフェニル）エチリデンアセタール、２，２，２−トリクロロエチリデンアセタール、アセトニド、シクロペンチリデンケタール、シクロヘキシリデンケタール、シクロヘプチリデンケタール、ベンジリデンアセタール、ｐ−メトキシベンジリデンアセタール、２，４−ジメトキシベンジリデンケタール、３，４−ジメトキシベンジリデンアセタール、２−ニトロベンジリデンアセタール、メトキシメチレンアセタール、エトキシメチレンアセタール、ジメトキシメチレンオルトエステル、１−メトキシエチリデンオルトエステル、１−エトキシエチリジンオルトエステル、１，２−ジメトキシエチリデンオルトエステル、α−メトキシベンジリデンオルトエステル、１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチリデン誘導体、α−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）ベンジリデン誘導体、２−オキサシクロペンチリデンオルトエステル、ジ−ｔ−ブチルシリレン基（ＤＴＢＳ）、１，３−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサニリデン）誘導体（ＴＩＰＤＳ）、テトラ−ｔ−ブトキシジシロキサン−１，３−ジイリデン誘導体（ＴＢＤＳ）、環状カルボナート、環状ボロナート、エチルボロナートおよびフェニルボロナート。
【００３８】
凝集  −  ２以上の細胞が、本明細書に記載のとおりに架橋剤により「凝集」された場合、それらはそれぞれ、細胞−架橋剤−細胞複合体として該架橋剤と物理的に会合している。典型的には、凝集は、架橋剤濃度が閾値濃度に達してはじめて生じる。この濃度は最小凝集濃度（ＭＡＣ）と称される。与えられた架橋剤に関するＭＡＣは、一般に、溶液吸光度の変化を定量しうる分光光度的プレートリーダーを使用して測定される。
【００３９】
アプタマー  −  本明細書中で用いる「アプタマー」なる語は、標的分子に特異的に結合するポリヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。一般に、アプタマーがその標的分子に「特異的に結合する」と称されるのは、それが標的分子には、検出可能なレベルで会合し、無関係な分子（例えば、該標的分子と共通の構造的特徴を有さない分子）には、類似条件下、検出可能な様態で会合しない場合である。標的分子とアプタマーとの間の特異的結合は、典型的には、標的分子の特定の構造的特徴（例えば、該アプタマーにより認識されるエピトープ）の存在に左右されるであろう。一般に、アプタマーがエピトープＡに特異的である場合、遊離標識エピトープＡとそれに対するアプタマーとの両方を含有する反応における、エピトープＡを含有する分子の存在または遊離未標識エピトープＡの存在は、該アプタマーに結合する標識エピトープＡの量を減少させるであろう。一般に、特異性は絶対的なものである必要はないと理解されるべきである。実際、アプタマーは、標的エピトープに加えて他のエピトープと交差反応しうることが、当技術分野においてよく知られている。そのような交差反応性は、該アプタマーが使用される用途に応じて許容可能でありうる。したがって、アプタマーの特異性の度合は、それが使用されている状況に左右されるであろう。また、特異性は、非標的分子に対するアプタマーのアフィニティーと比較された場合の標的分子に対するアプタマーのアフィニティーのような追加的因子の観点において評価されうると理解されるべきである。
【００４０】
会合  −  ２つの実体が互いに物理的に「会合」していると本明細書において表現されるのは、それらが直接的な非共有的相互作用により結合している場合である。望ましい非共有的相互作用には、免疫グロブリン分子と、該免疫グロブリンが特異的である抗原との間で生じるタイプのもの、例えば、イオン相互作用、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用などが含まれる。物理的会合の強度またはアフィニティーは該相互作用の解離定数（Ｋｄ）として表されることが可能であり、ここで、より小さなＫｄはより大きなアフィニティーを表す。例えば、選択された架橋剤と標的分子との会合特性は、当技術分野でよく知られた方法を用いて定量されうる。
【００４１】
生体分子  −  本明細書中で用いる「生体分子」なる語は、天然に生じるか又は（例えば、合成または組換え法により）人工的に作製されるかには無関係に、細胞および組織において一般に見出される分子（例えば、ポリペプチド、アミノ酸、ポリヌクレオチド、ヌクレオチド、多糖、糖、脂質、核タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、ステロイド、代謝産物など）を意味する。生体分子の具体的なクラスには、酵素、受容体、神経伝達物質、ホルモン、サイトカイン、細胞応答修飾因子、例えば増殖因子および走化性因子、抗体、ワクチン、ハプテン、毒素、インターフェロン、リボザイム、アンチセンス物質、プラスミド、ＤＮＡおよびＲＮＡが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００４２】
薬物  −  本明細書中で用いる「薬物」（「薬」）は、生物学的事象を改変し、抑制し、活性化し、またはそれに影響を及ぼす小分子または生体分子を意味する。例えば、薬物には、抗エイズ物質、抗癌物質、抗生物質、抗糖尿病物質、免疫抑制物質、抗ウイルス物質、酵素インヒビター、神経毒素、オピオイド、催眠薬、抗ヒスタミン薬、潤滑剤、トランキライザ、抗痙攣薬、筋肉弛緩薬および抗パーキンソン物質、抗痙攣物質および筋肉収縮薬、例えばチャネルブロッカー、縮瞳薬および抗コリン作動薬、抗緑内障化合物、抗寄生生物および／または抗原生動物化合物、細胞−細胞外マトリックス相互作用のモジュレーター、例えば細胞増殖インヒビターおよび抗接着分子、血管拡張物質、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質合成のインヒビター、抗高血圧薬、鎮痛薬、解熱薬、ステロイド性および非ステロイド性抗炎症物質、抗血管新生因子、抗分泌因子、抗凝血および／または抗血栓物質、局所麻酔薬、眼用薬、プロスタグランジン、抗うつ薬、抗精神病物質、制吐薬およびイメージング物質が含まれうるが、これらに限定されるものではない。本発明における使用に適した典型的な薬物の、より完全な一覧は、“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ｐａｔｅｎｔｓ，Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”（Ａｘｅｌ  ＫｌｅｅｍａｎｎおよびＪｕｒｇｅｎ  Ｅｎｇｅｌ，Ｔｈｉｅｍｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９９）、“Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ：Ａｎ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ”（Ｓｕｓａｎ  Ｂｕｄａｖａｒｉら編，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）およびＵｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ−２５／Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｒｙ−２０（発行：Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，  Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ  ＭＤ，２００１）に見出されうる。好ましくは、必ずしも必要というわけではないが、該薬物は、使用に関して安全かつ有効であると適当な政府機関または団体により既にみなされているものである。例えば、ＦＤＡにより２１  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§３３０．５、３３１〜３６１および４４０〜４６０に挙げられているヒト用薬、ＦＤＡにより２１  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§５００〜５８９に挙げられている獣医用薬は全て、本発明による使用に許容されるとみなされる。
【００４３】
超分枝  −  本明細書中で用いる「超分枝」構造は、少なくとも１つの枝分かれ分枝（例えば、樹状構造）を含む共有結合構造である。超分枝構造は重合および／または非重合亜構造を含みうる。
【００４４】
レクチン  −  本明細書中で用いる「レクチン」は、糖および多糖に特異的に結合するタンパク質である。レクチンは任意の起源（例えば、植物、動物など）に由来しうる。ある実施形態においては、レクチンは天然源から単離されうる。他の実施形態においては、レクチンは合成的または組換え的に製造されうる。レクチンは生理的条件下で１以上のサブユニットから構成されうる。好ましい実施形態においては、レクチンは生理的条件下で２以上のサブユニット（例えば、４個のサブユニット）から構成される。それらのサブユニットは同じ又は異なることが可能である。
【００４５】
生理的条件  −  本明細書中で用いる「生理的条件」は、典型的な患者の動脈血において見出される条件である。一般に、患者は、哺乳動物、例えばヒト、イヌ、ネコ、マウスなどである。ヒト患者においては、生理的条件下のｐＨは典型的には約７．３５〜約７．４５（好ましくは約７．４０）である。ヒトの生理的温度は約３６．４〜約３７．４の範囲（好ましくは約３６．９℃）である。
【００４６】
重合体  −  本明細書中で用いる「重合体」または「重合構造」は、一連の共有結合単量体を含む構造である。重合体は１つのタイプの単量体または２以上のタイプの単量体から構成されうる。したがって、「重合体」なる語は共重合体を含み、例えば、異なるタイプの単量体が重合体全体において別々に塊化しているブロック共重合体を含む。重合体は直鎖状または分枝状でありうる。
【００４７】
ポリヌクレオチド  −  本明細書中で用いる「ポリヌクレオチド」はヌクレオチドの重合体である。「ポリヌクレオチド」、「核酸」および「オリゴヌクレオチド」なる語は互換的に用いられうる。該重合体は天然ヌクレオシド（すなわち、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシンおよびデオキシシチジン）、ヌクレオシド類似体（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ポリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、４−アセチルシチジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、ジヒドロウリジン、メチルプソイドウリジン、１−メチルアデノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ６−メチルアデノシンおよび２−チオシチジン）、化学的修飾塩基、生物学的修飾塩基（例えば、メチル化塩基）、インターカレート化塩基、修飾糖（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、２’−Ｏ−メチルシチジン、アラビノースおよびヘキソース）または修飾ホスファート基（例えば、ホスホロチオアートおよび５’−ホスホルアミジット結合）を含みうる。
【００４８】
ポリペプチド  −  本明細書中で用いる「ポリペプチド」はアミノ酸の重合体である。「ポリペプチド」、「タンパク質」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は互換的に用いられうる。ポリペプチドは、当技術分野で公知のとおりの天然アミノ酸、非天然アミノ酸（すなわち、天然に存在しないが、ポリペプチド鎖内に組込まれうる化合物）および／またはアミノ酸類似体を含有しうる。また、ポリペプチドにおけるアミノ酸残基の１以上は、例えば、炭水化物基、ホスファート基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、コンジュゲート化、官能基化または他の修飾のためのリンカーなどのような化学的実体の付加により修飾されうる。これらの修飾は該ペプチドの環化、Ｄ−アミノ酸の組込みなどを含みうる。
【００４９】
多糖  −  本明細書中で用いる「多糖」は糖の重合体である。「多糖」、「炭水化物」および「オリゴ糖」なる語は互換的に用いられうる。該重合体は天然糖（例えば、アラビノース、リキソース、リボース、キシロース、リブロース、キシルロース、アロース、アルトロース、ガラクトース、グルコース、グロース、イドース、マンノース、タロース、フルクトース、プシコース、ソルボース、タガトース、マンノヘプツロース、セドヘプツロース、オクトロースおよびシアロース）および／または修飾糖（例えば、２’−フルオロリボース、２’−デオキシリボースおよびヘキソース）を含みうる。典型的な二糖には、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、ゲンチオビオース、イソマルトース、コジビオース、ラミナリビオース、マンノビオース、メリビオース、ニゲロース、ルチノースおよびキシロビオースが含まれる。
【００５０】
小分子  −  本明細書中で用いる「小分子」なる語は、天然に生じるか又は（例えば、化学合成により）人工的に作製されるかには無関係に、比較的低い分子量を有する分子を意味する。典型的には、小分子は単量体であり、約１，５００Ｄａ未満の分子量を有する。
【００５１】
治療  −  本明細書中で用いる「治療する」（または「治療している」、「治療される」、「治療」など）なる語は、状態（例えば、糖尿病）、状態の症状（例えば、高血糖）または状態に対する素因を軽減し、緩和し、改変し、改善し、改良し、またはそれらに影響を及ぼす目的で、それを要する対象に本開示のマテリアルを投与することを意味する。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】図１は、原子転移ラジカル重合（ＡＴＲＰ）法またはフリーラジカル−連鎖移動法による式（Ｉ）のコンジュゲートの合成を示す概要図である。式（ＩＩ）のコンジュゲートは、部分的にはアセタール基の除去により、式（Ｉ）のコンジュゲートから製造される。式（ＩＩＩ）のコンジュゲートは、アルデヒド部分を介する薬物の共有的コンジュゲート化により、式（ＩＩ）のコンジュゲートから製造される。
【図２】図２は、実施例１に記載されている典型的な原子転移ラジカル重合（ＡＴＲＰ）法を示す概要図である。
【図３】図３は、実施例に記載されている典型的なフリーラジカル−連鎖移動法を示す概要図である。
【図４】図４は、典型的なペプチドカップリング試薬を示す概要図である。
【図５】図５は、〜２０Ｕのインスリン相当量／ｋｇの用量での皮下注射（▲）インスリン−デキストラン（７０Ｋ）に関する非糖尿病雄ＳＤラット（ｎ＝３）における血中グルコース低下プロファイルを示す。
【図６】図６は、〜２．５Ｕのインスリン相当量／ｋｇの用量での皮下注射（■）インスリン−グリコーゲン（ＩＩ型オイスター）に関する非糖尿病雄ＳＤラット（ｎ＝３）における血中グルコース低下プロファイルを示す。
【図７】図７は、種々のアフィニティーリガンドで修飾されたレクチンに関する最小凝集濃度（ＭＡＣ）の比較を示す。
【図８】図８は、（◆）ブタ血清、（■）ヒト血清、（▲）ラット血清および（×）１×ＰＢＳバッファーの存在下の３７℃で６時間のインキュベーションの後のグルコース濃度の関数としての、不溶性のままであるグルコース応答性インスリン−グリコーゲン系マテリアルの量を示す。
【図９】図９は、（ａ）アミラーゼ活性（４−ニトロフェニルα−Ｄ−ペンタ−（１→４）−グルコピラノシドレポーター）および（ｂ）グルコシダーゼ活性（４−ニトロフェニルα−Ｄ−グルコピラノシドレポーター）に関する比色シグナル（Ａ４０５）の生成により測定した場合の、ＰＢＳ中のブタ（実線）、ラット（長破線）およびヒト（短破線）血清の１：８希釈物の消化活性を示す。
【図１０】図１０は、標的分子（例えば、グルコース）に応答して、制御可能な様態でコンジュゲート２０を放出しうる架橋マテリアル１０の概要図である。コンジュゲート２０のアフィニティーリガンド４０に非共有結合することによりコンジュゲート２０を架橋して架橋マテリアル１０を形成する多価架橋剤３０と、コンジュゲート２０とを一緒にすることにより、該マテリアルは製造される。多価架橋剤３０とアフィニティーリガンド４０との間の非共有結合は、過剰量の標的分子（例えば、グルコース）の存在下、競合的に解離される。
【図１１】図１１は野生型ヒトインスリンの構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
種々の実施形態の詳細な説明：
本出願は、特許および非特許文書を含む多数の文書に言及している。これらの文書のそれぞれの全体を参照により本明細書に組み入れることとする。
【００５４】
インスリンを運搬するために使用されるのか他の薬物を運搬するために使用されるのかにかかわらず、既存のザイオン（Ｚｉｏｎ）コンジュゲートにおいて使用されるグリコシル化重合体コンジュゲートは或る問題を示す。実際、該グリコシル化重合体の高い分子量（ＭＷ）の結果として、該コンジュゲートは天然薬物より遥かに高いＭＷを有する。したがって、該コンジュゲートは、全身循環内へ、より遅く吸収される。また、該循環に入ると、該コンジュゲートの固有生物活性は低下する可能性があり、消失速度はより遅い可能性がある。ＬａｎｃａｓｔｅｒらのＵＳ２００７／００９９８２０において、本発明者らはこの問題に対する１つの解決策を記載した。該解決策は、投与部位において酵素的に分解する重合体に薬物を結合させること含むものであった。これらの酵素分解可能コンジュゲートは、Ｚｉｏｎ系から一旦放出されると、コンジュゲート化されていないインスリンとより良く似た挙動を示したが、それらは２つの大きな欠点（すなわち、大量の医薬等級のマテリアルの製造における固有の問題、および標的分子の非存在下でさえも生じる、或る種における酵素活性による望ましくない分解）を有することを本発明者らは見出した。
【００５５】
例えば、Ｌａｎｃａｓｔｅｒの典型的なグリコーゲン系コンジュゲートは、広範かつ可変性のＭＷ分布および残留外来タンパク質含量（これはインスリンコンジュゲート化前の除去を必要とした）を有する動物および植物に由来するものであった。製造コストのかなりの増加およびそれに対応する収率低下を招く、ＭＷ分布の多分散性を集中させ減少させるために、グリコーゲンの各ロットおよびタイプをＭＷ分画に付す必要があった。さらに、鎖長の分布だけでなくそれらの種々の鎖長にわたるアフィニティーリガンドの分布をも与える様々な数の糖アフィニティーリガンドで各グリコーゲン鎖を修飾した。
【００５６】
実施例に記載されているとおり、本発明者らは、予期せぬことに、異なる動物種は特有のレベルのコンジュゲート分解酵素活性を有しうることをも見出した。例えば、ラットの場合、アミラーゼ活性は、遊離グリコーゲンコンジュゲートを生物活性にするのに十分なものであったが、架橋コンジュゲートの最低限の分解のみを引き起こすのに十分な程度に低かった。しかし、ブタにおいては、該活性は、架橋コンジュゲートの迅速なインビボ分解を引き起こしてグルコースの非存在下でさえも大量のインスリン放出を招くのに十分な程度に高かった。これらの結果は、コンジュゲートの生物活性と架橋コンジュゲートの望ましくない分解とのバランスをとるためには、コンジュゲートの分解性が各動物種ごとに特異的に設計されることを要する可能性があることを意味する。医薬開発においては、規制機関は通常、ヒトでの臨床試験を開始する前に２つの動物種における同一製剤に関する安全性データを要求する。しかし、酵素分解性における種の相違により、それらの２つの種のそれぞれにおいて薬物動態が異なる可能性があるであろう。
【００５７】
したがって、酵素分解を受けることなくＺｉｏｎ系内で機能しうるコンジュゲートが当技術分野において必要とされている。理想的には、そのようなコンジュゲートはまた、重合性天然物で見られる生産上の問題を伴わない十分に特徴づけられた合成分子であろう。適当な非生分解性コンジュゲートは、未コンジュゲート化薬物に類似した薬物動態学的（ＰＫ）および薬力学的（ＰＤ）特性を示すためには、低分子量のものでなければならない、と本発明者らは仮定した。しかし、コンジュゲートの分子量が減少するにつれて、不溶性架橋マテリアルへとコンジュゲートが自己集合する能力が消失することを、Ｚｉｏｎ系でのこれまでの研究（ＵＳ  ２００４／０２０２７１９および“Ｇｌｕｃｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  ｓｅｌｆ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｔｈｅｓｉｓ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００４）が示していたことにも、本発明者らは気づいていた。この問題を克服するために、本発明者らは、これらのタイプの用途に従来使用されていたものより高いアフィニティーリガンドの新規ファミリーを開発した。同時に、本発明者らは、ある範囲のリンカーアーム長および化学的性質を有する、これらのリガンドを多価様態で化学的に結合させる低分子量のフレームワーク（骨格物質）を開発した。意外にも、本発明者らは、ある高アフィニティーリガンドが、コンジュゲートの生物活性を維持するのに十分な程度に低い分子量を有する適当なフレームワークにコンジュゲート化された場合、適当な多価架橋剤と合わされると不溶性架橋マテリアルをも形成しうることを見出している。後記で更に詳細に説明するとおり、本発明者らは、得られたマテリアルが、種々の濃度の標的分子の存在下でコンジュゲートを放出するように設計されうることも示している。
【００５８】
コンジュゲート
１つの態様においては、本開示は、重合体フレームワークに共有結合した２以上の別々のアフィニティーリガンドを含むコンジュゲートを提供する。一般に、該アフィニティーリガンドは多価架橋剤との結合に関して標的分子と競合しうる。ある実施形態においては、該コンジュゲートは低い多分散性（例えば、１．５未満または１．２５未満）を有する。最終用途に応じて、該コンジュゲートは薬物および／または検出可能標識をも含みうる。後記で更に詳細に説明するとおり、該アフィニティーリガンド、薬物および／または検出可能標識は該コンジュゲートフレームワークに共有結合される。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワーク（すなわち、アフィニティーリガンド、薬物または検出可能標識を含まないもの）は１０，０００Ｄａ未満、例えば、約１００〜約１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワークは約３００〜約５，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワークは約５００〜約２，５００Ｄａの範囲の分子量を有する。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワークは約１，０００〜約２，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワークは約２００〜約１，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワークは約３００〜約８００Ｄａの範囲の分子量を有する。
【００５９】
１．コンジュゲートの一般的説明
１つの態様においては、本開示は、式（Ｉ）：
【化３】
2012520879.tif 000005
【００６０】
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立して、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒｘは水素または場合により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである；
Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、Ｚの１、２、３、４または５個のメチレン単位は、所望により且つ独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、場合により置換されていてもよいアリーレン部分または場合により置換されていてもよいヘテロアリーレン部分から選択される１以上の基で置換されていてもよく、ここで、Ｒａは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールまたは適当なアミノ保護基であり、Ｒｂは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールである；
各場合のＸは、独立して、−ＯＲｃまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、ここで、Ｒｃは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なヒドロキシル保護基、カチオン基またはアフィニティーリガンドであり、各Ｒｄは、独立して、水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なアミノ保護基またはアフィニティーリガンドであり、ここで、Ｘの少なくとも２つはアフィニティーリガンドを含む；
Ｙは水素、ハロゲン、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、ここで、Ｒｅは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘテロアリールである；そして
ｎは５〜２５（５および２５も含む）の整数である］のコンジュゲートを提供する。
【００６１】
これらのコンジュゲートは、他のコンジュゲート、例えば以下の式（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）のコンジュゲートの製造における中間体として有用である。
【化４】
2012520879.tif 000006
【００６２】
（式中、
Ｒｘ、Ｘ、Ｙ、Ｚおよびｎは、前記および本明細書中に定義されているとおりである；
Ｗは、共有的にコンジュゲート化された薬物または検出可能標識である；そして
------は単結合または二重結合に相当する）。
【００６３】
２．典型的な基の説明
ｉ．Ｒ１およびＲ２
前記で一般的に定義されたとおり、Ｒ１およびＲ２は、独立して、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘテロアリールからなる群から選択される。ある実施形態においては、Ｒ１およびＲ２は同一である。
【００６４】
ある実施形態においては、Ｒ１およびＲ２は、場合により置換されていてもよい脂肪族である。ある実施形態においては、Ｒ１およびＲ２は、場合により置換されていてもよいアルキルである。ある実施形態においては、Ｒ１およびＲ２は、独立して、場合により置換されていてもよいメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチル基である。ある実施形態においては、Ｒ１およびＲ２は、独立して、場合により置換されていてもよいメチルまたはエチル基である。ある実施形態においては、Ｒ１およびＲ２は共にメチルである。ある実施形態においては、Ｒ１およびＲ２は共にエチルである。
【００６５】
ｉｉ．Ｒｘ
前記で一般的に定義されたとおり、Ｒｘは水素または場合により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。
【００６６】
ある実施形態においては、Ｒｘは水素である。ある実施形態においては、Ｒｘは、場合により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。ある実施形態においては、Ｒｘは、場合により置換されていてもよいＣ１−３アルキルである。ある実施形態においては、Ｒｘは、場合により置換されていてもよいメチルである。ある実施形態においては、Ｒｘは−ＣＨ３である。
【００６７】
ｉｉｉ．Ｚ
前記で一般的に定義されたとおり、Ｚは２価Ｃ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、Ｚの１、２、３、４または５個のメチレン単位は、所望により且つ独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、場合により置換されていてもよいアリーレン部分または場合により置換されていてもよいヘテロアリーレン部分から選択される１以上の基で置換されていてもよく、ここで、Ｒａは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールまたは適当なアミノ保護基であり、Ｒｂは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールである。
【００６８】
ある実施形態においては、Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−１０炭化水素鎖である。ある実施形態においては、Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−８炭化水素鎖である。ある実施形態においては、Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−６炭化水素鎖である。ある実施形態においては、Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−４炭化水素鎖である。ある実施形態においては、Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−２炭化水素鎖である。ある実施形態においては、Ｚは、−（ＣＨ２）−、−（ＣＨ２ＣＨ２）−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−または−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−である。ある実施形態においては、Ｚは−（ＣＨ２）−または−（ＣＨ２ＣＨ２）−である。ある実施形態においては、Ｚは−（ＣＨ２）−である。ある実施形態においては、Ｚは−（ＣＨ２ＣＨ２）−である。ある実施形態においては、Ｚは−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−である。ある実施形態においては、Ｚは−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）−である。
【００６９】
ある実施形態においては、Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、Ｚの１、２または３個のメチレン単位は、所望により且つ独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、場合により置換されていてもよいアリーレン部分または場合により置換されていてもよいヘテロアリーレン部分から選択される１以上の基で置換されていてもよい。ある実施形態においては、Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、Ｚの１、２または３個のメチレン単位は、所望により且つ独立して、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−または−（Ｃ＝Ｏ）−から選択される１以上の基で置換されていてもよい。ある実施形態においては、Ｚは−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｃ＝ＮＨ）（ＣＨ２）３Ｓ−、−ＣＨ（Ｒｆ）２、−ＣＨ２ＣＨ（Ｒｆ）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（Ｒｆ）２−、−ＣＨ２Ｓ−または−ＣＨ２ＣＨ２Ｓ−であり、ここで、Ｒｆは、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールである（例えば、ある実施形態においては、Ｒｆは、場合により置換されていてもよいアリールであり、ある実施形態においては、Ｒｆはフェニルである）。ある実施形態においては、Ｚは−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２−または−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｃ＝ＮＨ）（ＣＨ２）３Ｓ−である。ある実施形態においては、Ｚは−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２−である。ある実施形態においては、Ｚは−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｃ＝ＮＨ）（ＣＨ２）３Ｓ−である。
【００７０】
ｉｖ．Ｙ
前記で一般的に定義されたとおり、Ｙは水素、ハロゲン、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、ここで、Ｒｅは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘテロアリールである。
【００７１】
ある実施形態においては、Ｙはフリーラジカル開始剤の断片である。そのような断片はＹの定義に含まれ、開始剤断片は、ハロゲン、−ＯＲｅ、−ＳＲｅ、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールおよび場合により置換されていてもよいヘテロアリール部分を含みうる。
【００７２】
例えば、以下の表１に示すとおり、該開始剤がＡＩＢＮ、ＡＢＣＮまたはＶＡＳＯ  ６８（ＤｕＰｏｎｔから商業的に入手可能）である場合、該開始剤断片は、場合により置換されていてもよい脂肪族部分である。ある実施形態においては、該開始剤断片は、１以上のニトリル（−ＣＮ）基で場合により置換されていてもよい。
【表１】
2012520879.tif 000007
【００７３】
ある実施形態においては、Ｙは水素、ハロゲンまたは開始剤断片である。ある実施形態においては、Ｙは水素またはハロゲンである。ある実施形態においては、Ｙは水素または臭素である。
【００７４】
ｖ．Ｘ
前記で一般的に定義されたとおり、各場合のＸは、独立して、−ＯＲｃまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、ここで、Ｒｃは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なヒドロキシル保護基またはアフィニティーリガンドであり、各Ｒｄは、独立して、水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なアミノ保護基またはアフィニティーリガンドである。該コンジュゲートはそれぞれ、Ｘがアフィニティーリガンドを含む少なくとも２つの場合を含む。
【００７５】
ある実施形態においては、各Ｘは−ＯＲｃである。
【００７６】
ある実施形態においては、各Ｘは−ＯＲｃまたは−Ｎ（Ｒｄ）２である。
【００７７】
ある実施形態においては、各Ｘは−Ｎ（Ｒｄ）２である。
【００７８】
ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｃは水素である。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｃは、場合により置換されていてもよい脂肪族部分である。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｃは、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族部分である。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｃは、場合により置換されていてもよいアリールである。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｃは、場合により置換されていてもよいヘテロアリールである。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｃは、適当なヒドロキシル保護基である。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｃはカチオン基である。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｃは、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウムまたはマグネシウムから選択されるカチオンである。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｃはナトリウムカチオンである。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｃはアフィニティーリガンドである。ある実施形態においては、Ｒｃは前記の実施形態のいずれかの組合せであり、例えば、Ｒｃは、水素、カチオン基またはアフィニティーリガンドでありうる。
【００７９】
ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｄは、独立して、水素または場合により置換されていてもよい脂肪族部分である。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｄは、独立して、水素または場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族部分である。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｄは、独立して、水素または場合により置換されていてもよいアリールである。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｄは、独立して、水素または場合により置換されていてもよいヘテロアリールである。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドではない各Ｒｄは、独立して、水素または適当なアミノ保護基である。ある実施形態においては、各Ｒｄは、独立して、水素またはアフィニティーリガンドである。ある実施形態においては、Ｒｄは前記の実施形態のいずれかの組合せであり、例えば、Ｒｄは、水素、アフィニティーリガンドまたは場合により置換されていてもよい脂肪族基でありうる。
【００８０】
本明細書中で用いる「カチオン」なる語は、正電荷を含有する原子または原子の基を意味する。カチオンは１以上のアニオン（例えば、カルボキシラート、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−）基と対になって塩を形成している。典型的なカチオンには、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよびＮ＋（Ｃ１−４アルキル）カチオン種が含まれる。代表的なアルカリ金属カチオンまたはアルカリ土類金属カチオンには、ナトリウムカチオン、リチウムカチオン、カリウムカチオン、カルシウムカチオン、マグネシウムカチオンなどが含まれる。他のカチオンには、対イオン、例えばハリド、ヒドロキシド、カルボキシラート、スルファート、ホスファート、ニトラート、低級アルキルスルホナートおよびアリールスルホナートを使用して形成される無毒性アンモニウム、第四級アンモニウムおよびアミンカチオンが含まれる。例えば、Ｂｅｒｇｅら，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ６６：１−１９，１９７７を参照されたい。
【００８１】
一般に、該コンジュゲート内の２以上のアフィニティーリガンドは多価架橋剤との結合に関して標的分子と競合しうる（後記のとおり）。ある実施形態においては、該架橋剤に対するコンジュゲートおよび標的分子の相対アフィニティーは１：１〜１００：１の範囲である［ここで、１００：１の相対アフィニティーは、コンジュゲート、標的分子および架橋剤の平衡混合物（３７℃でｐＨ７のＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中）において、標的分子の濃度が１００×コンジュゲート濃度である場合、該架橋剤が、ほぼ等しいモル量のコンジュゲートおよび標的分子に結合することを意味する］。ある実施形態においては、該相対アフィニティーは１：１〜５０：１、１：１〜１０：１、１：１〜５：１、または１：１〜２：１の範囲である。それらの２以上の別々のアフィニティーリガンドは、同じ又は異なる化学構造を有しうる。例えば、それらの２以上の別々のアフィニティーリガンドは、標的分子（例えば、グルコース）と同じ化学構造を有することが可能であり、あるいは該標的分子の化学的に関連した種でありうる。例えば、該標的分子がグルコースである場合、該アフィニティーリガンドは糖を含みうる。したがって、ある実施形態においては、該アフィニティーリガンドは多価グルコース結合分子（限定的なものではないが例えば、ＣｏｎＡ、マンナン結合レクチンまたはＭＢＬなど）への結合に関してグルコースと競合しうる。
【００８２】
ある実施形態においては、該アフィニティーリガンドは以下の式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）を有する。
【化５】
2012520879.tif 000008
【００８３】
［式中、
各Ｒ３は、独立して、水素、−ＯＲｙ、−Ｎ（Ｒｙ）２、−ＳＲｙ、−Ｏ−ＹＬ、−Ｇ−ＺＬまたは−ＣＨ２Ｒｚである；
各Ｒｚは、独立して、水素、−ＯＲｙ、−Ｎ（Ｒｙ）２、−ＳＲｙまたは−Ｏ−ＹＬである；
各Ｒｙは、独立して、−Ｒ４、−ＳＯ２Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ４）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ＣＯ２Ｒ４または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）２である；
各ＹＬは、独立して、単糖、二糖または三糖である；
各Ｇは、独立して、共有結合または場合により置換されていてもよいＣ１−９アルキレンであり、ここで、Ｇのメチレン単位の１以上は、所望により、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ４）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）−、−Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）−、−Ｎ（Ｒ４）ＳＯ２−または−Ｎ（Ｒ４）ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）−により置換されていてもよい；
各ＺＬは、独立して、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＯＲ４、−ＳＲ４、−Ｎ３、−Ｃ≡ＣＲ４、−ＣＯ２Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４または−ＯＳＯ２Ｒ４である；そして
各Ｒ４は、独立して、水素であるか、あるいはＣ１−６脂肪族、フェニル、窒素、酸素もしくは硫黄から選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員複素環または窒素、酸素もしくは硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員単環式ヘテロアリール環から選択される場合により置換されていてもよい基である］。
【００８４】
ある実施形態においては、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）のアフィニティーリガンドは単糖である。ある実施形態においては、該アフィニティーリガンドは二糖である。ある実施形態においては、該アフィニティーリガンドは三糖である。ある実施形態においては、該アフィニティーリガンドは四糖である。ある実施形態においては、該アフィニティーリガンドは４個以下の糖部分を含む。
【００８５】
前記で一般的に定義されたとおり、各Ｒ３は、独立して、水素、−ＯＲｙ、−Ｎ（Ｒｙ）２、−ＳＲｙ、−Ｏ−ＹＬ、−Ｇ−ＺＬまたは−ＣＨ２Ｒｚである。ある実施形態においては、Ｒ３は水素である。ある実施形態においては、Ｒ３は−ＯＨである。他の実施形態においては、Ｒ３は−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３である。ある実施形態においては、Ｒ３は−Ｏ−ＹＬである。ある他の実施形態においては、Ｒ３は−Ｇ−ＺＬである。いくつかの実施形態においては、Ｒ３は−ＣＨ２ＯＨである。他の実施形態においては、Ｒ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＹＬである。さらに他の実施形態においては、Ｒ３は−ＮＨ２である。式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）における各Ｒ３置換基は（Ｒ）または（Ｓ）立体化学を有しうると当業者は認識するであろう。
【００８６】
前記で一般的に定義されたとおり、各Ｒｚは、独立して、水素、−ＯＲｙ、−Ｎ（Ｒｙ）２、−ＳＲｙまたは−Ｏ−ＹＬである。いくつかの実施形態においては、Ｒｚは水素である。ある実施形態においては、Ｒｚは−ＯＨである。他の実施形態においては、Ｒｚは−Ｏ−ＹＬである。
【００８７】
前記で一般的に定義されたとおり、各Ｒｙは、独立して、−Ｒ４、−ＳＯ２Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ４）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ＣＯ２Ｒ４または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）２である。いくつかの実施形態においては、各Ｒｙは水素である。他の実施形態においては、Ｒｙは−Ｒ４である。いくつかの実施形態においては、Ｒｙは−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である。ある実施形態においては、Ｒｙはアセチルである。他の実施形態においては、Ｒｙは−ＳＯ２Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ４）２、−ＣＯ２Ｒ４または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）２である。
【００８８】
前記で一般的に定義されたとおり、ＹＬは単糖、二糖または三糖である。ある実施形態においては、ＹＬは単糖である。いくつかの実施形態においては、ＹＬは二糖である。他の実施形態においては、ＹＬは三糖である。いくつかの実施形態においては、ＹＬはマンノース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、ラムノースまたはキシロピラノースである。いくつかの実施形態においては、ＹＬはスクロース、マルトース、ツラノース、トレハロース、セロビオースまたはラクトースである。ある実施形態においては、ＹＬはマンノースである。ある実施形態においては、ＹＬはＤ−マンノースである。糖ＹＬはアノマー炭素を介して−Ｏ−ＹＬの酸素基に結合してグリコシド結合を形成していると当業者は認識するであろう。該グリコシド結合はアルファまたはベータ立体配置を有しうる。
【００８９】
前記で一般的に定義されたとおり、各Ｇは、独立して、共有結合または場合により置換されていてもよいＣ１−９アルキレンであり、ここで、Ｇのメチレン単位の１以上は、所望により、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ４）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）−、−Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）−、−Ｎ（Ｒ４）ＳＯ２−または−Ｎ（Ｒ４）ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）−により置換されていてもよい。いくつかの実施形態においては、Ｇは共有結合である。ある実施形態においては、Ｇは−Ｏ−Ｃ１−８アルキレンである。ある実施形態においては、Ｇは−ＯＣＨ２ＣＨ２−である。
【００９０】
前記で一般的に定義されたとおり、各ＺＬは、独立して、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＯＲ４、−ＳＲ４、−Ｎ３、−Ｃ≡ＣＲ４、−ＣＯ２Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４または−ＯＳＯ２Ｒ４である。いくつかの実施形態においては、ＺＬはハロゲンまたは−ＯＳＯ２Ｒ４である。他の実施形態においては、ＺＬは−Ｎ３または−Ｃ≡ＣＲ４である。ある実施形態においては、ＺＬは−Ｎ（Ｒ４）２、−ＯＲ４または−ＳＲ４である。ある実施形態においては、ＺＬは−ＳＨである。ある実施形態においては、ＺＬは−ＮＨ２である。ある実施形態においては、−Ｇ−ＺＬは−ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２である。
【００９１】
いくつかの実施形態においては、式（ＩＶａ）のＣ１炭素上のＲ３置換基は−Ｇ−ＺＬであり、式（ＩＶａ−ｉ）：
【化６】
2012520879.tif 000009
【００９２】
（式中、Ｒ３、ＧおよびＺＬは、本明細書中に定義され記載されているとおりである）の化合物を与える。
【００９３】
いくつかの実施形態においては、該リガンドは式（ＩＶａ−ｉｉ）：
【化７】
2012520879.tif 000010
【００９４】
（式中、Ｒ３、ＲＺ、ＧおよびＺＬは、本明細書中に定義され記載されているとおりである）を有する。
【００９５】
例えば、ある実施形態においては、以下の１以上を含むアフィニティーリガンドを使用することが可能であろう：グルコース、スクロース、マルトース、マンノース、これらの誘導体（例えば、グルコサミン、マンノサミン、メチルグルコース、メチルマンノース、エチルグルコース、エチルマンノースなど）および／またはより高次の、これらの組合せ（例えば、ビマンノース、直鎖状および／または分枝状トリマンノースなど）。ある実施形態においては、アフィニティーリガンドは単糖を含む。ある実施形態においては、該アフィニティーリガンドは二糖を含む。ある実施形態においては、該アフィニティーリガンドは三糖を含む。ある実施形態においては、該アフィニティーリガンドは多糖を含む。いくつかの実施形態においては、該アフィニティーリガンドは糖および１以上のアミン基を含む。いくつかの実施形態においては、該アフィニティーリガンドはアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）である。いくつかの実施形態においては、該アフィニティリガンドはアミノエチルマンノース（ＡＥＭ）である。いくつかの実施形態においては、該アフィニティーリガンドはアミノエチルビマンノース（ＡＥＢＭ）である。いくつかの実施形態においては、該アフィニティーリガンドはアミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）である。いくつかの実施形態においては、該アフィニティーリガンドはβ−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）である。いくつかの実施形態においては、該アフィニティーリガンドはアミノエチルフコース（ＡＥＦ）である。他の実施形態においては、該アフィニティーリガンドはＤ−グルコサミン（ＧＡ）である。ある実施形態においては、糖リガンドは「Ｄ」立体配置を有する。他の実施形態においては、糖リガンドは「Ｌ」立体配置を有する。以下に、これらの典型的なアフィニティーリガンドの構造を示す。他の典型的なアフィニティーリガンドは当業者により認識されるであろう。
【化８】
2012520879.tif 000011
【００９６】
ある実施形態においては、コンジュゲートは５以上、１０以上または２０以上のアフィニティーリガンドを含みうる。ある実施形態においては、コンジュゲートは、２〜５、２〜１０、２〜２０、２〜２５、２〜５０または２〜１００のアフィニティーリガンドを含むフレームワークを含みうる。ある実施形態においては、コンジュゲートは、わずか２、３または４個の別々のアフィニティーリガンド、例えば、２、３または４個のＡＥＭ、ＡＥＢＭまたはＡＥＴＭリガンド（それらの混合物を含む）を含むフレームワークを含みうる。
【００９７】
ｖｉ．------
------は単結合または二重結合に相当する。ある実施形態においては、------は単結合である。
【００９８】
ｖｉｉ．Ｗ（薬物）
ある実施形態においては、Ｗは薬物である。例えば、該マテリアルを、例えば制御可能な様態で患者において薬物を運搬するために、治療目的で使用される場合に、薬物が含まれうる。コンジュゲートは任意の薬物を含みうると理解されるべきである。コンジュゲートは同一薬物の２コピー以上を含むことが可能であり、および／または２以上のタイプの薬物を含むことが可能である。該コンジュゲートはいずれかの特定の薬物に限定されるものではなく、小分子薬物または生体分子薬物を含みうる。一般に、使用される薬物は、治療すべき疾患または障害に左右されるであろう。
【００９９】
ある実施形態においては、該薬物または検出可能標識はアミノ基を介して重合体フレームワークにコンジュゲート化される。ある実施形態においては、該薬物または検出可能標識は第一級アミノ基を介して重合体フレームワークにコンジュゲート化される。
【０１００】
２つの実体が互いに「共有的（に）コンジュゲート化」されていると本明細書中に表現されている場合、それらは直接的または間接的な共有的相互作用により連結されている。間接的共有的相互作用は、２つの実体がリンカー基（例えば、アルキレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、ヘテロ原子、エステル結合、アミド結合など）を介して共有的に連結されている場合である。
【０１０１】
例えば、ある実施形態においては、基
【化９】
2012520879.tif 000012
【０１０２】
は、基
【化１０】
2012520879.tif 000013
【０１０３】
に相当し、ここで、基［作用剤−ＮＨ−］または［作用剤−Ｎ＝］は、第一級アミノ基を介して直接的に共有的にコンジュゲート化されている薬物である。
【０１０４】
限定的なものではないが、種々の実施形態においては、コンジュゲートは以下の薬物のいずれかを含みうる：ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）、ニフェジピン（ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ）、リバスチグミン（ｒｉｖａｓｔｉｇｍｉｎｅ）、メチルフェニデート（ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｉｄａｔｅ）、フルオロキセチン（ｆｌｕｏｒｏｘｅｔｉｎｅ）、ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、コデイン（ｃｏｄｅｉｎｅ）、エチルモルヒネ（ｅｔｈｙｌｍｏｒｐｈｉｎｅ）、デキストロメトルファン（ｄｅｘｔｒｏｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ）、ノスカピン（ｎｏｓｃａｐｉｎｅ）、ペントキシベリン（ｐｅｎｔｏｘｉｖｅｒｉｎｅ）、アセチルシステイン（ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ）、ブロムヘキシン（ｂｒｏｍｈｅｘｉｎｅ）、エピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）、イソプレナリン（ｉｓｏｐｒｅｎａｌｉｎｅ）、オルシプレナリン（ｏｒｃｉｐｒｅｎａｌｉｎｅ）、エフェドリン（ｅｐｈｅｄｒｉｎｅ）、フェノテロール（ｆｅｎｏｔｅｒｏｌ）、リミテロール（ｒｉｍｉｔｅｒｏｌ）、イプラトロピウム（ｉｐｒａｔｒｏｐｉｕｍ）、コリネテオフィリナート（ｃｈｏｌｉｎｅｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎａｔｅ）、プロキシフィリン（ｐｒｏｘｉｐｈｙｌｌｉｎｅ）、ベクロメタゾン（ｂｅｃｈｌｏｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、デスラノシド（ｄｅｓｌａｎｏｓｉｄｅ）、ジゴキシン（ｄｉｇｏｘｉｎｅ）、ジギトキシン（ｄｉｇｉｔｏｘｉｎ）、ジソピラミド（ｄｉｓｏｐｙｒａｍｉｄｅ）、プロスシラリジン（ｐｒｏｓｃｉｌｌａｒｉｄｉｎ）、チニジン（ｃｈｉｎｉｄｉｎｅ）、プロカインアミド（ｐｒｏｃａｉｎａｍｉｄｅ）、メキシレチン（ｍｅｘｉｌｅｔｉｎ）、フレカイニド（ｆｌｅｃａｉｎｉｄｅ）、アルプレノロール（ａｌｐｒｅｎｏｌｏｌ）、プロプロアノロール（ｐｒｏｐｒｏａｎｏｌｏｌ）、ナドロール（ｎａｄｏｌｏｌ）、ピンドロール（ｐｉｎｄｏｌｏｌ）、オクスプレノロール（ｏｘｐｒｅｎｏｌｏｌ）、ラベタロール（ｌａｂｅｔａｌｏｌ）、チルノロール（ｔｉｒｎｏｌｏｌ）、アテノロール（ａｔｅｎｏｌｏｌ）、ペンタエリトリチルテトラニトラート（ｐｅｎｔａｅｒｉｔｒｉｔｙｌｔｅｔｒａｎｉｔｒａｔｅ）、イソソルビッジニトラート（ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｄｉｎｉｔｒａｔｅ）、イソソルビドモノニトラート（ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｍｏｎｏｎｉｔｒａｔｅ）、ニフェジピン（ｎｉｐｈｅｄｉｐｉｎ）、フェニルアミン、ベラパミル（ｖｅｒａｐａｍｉｌ）、ジルチアゼム（ｄｉｌｔｉａｚｅｍ）、シクランデラル（ｃｙｃｌａｎｄｅｌａｒ）、ニコチニルアルコールホール（ｎｉｃｏｔｉｎｙｌａｌｃｈｏｌｈｏｌ）、イノシトールニコチナート（ｉｎｏｓｉｔｏｌｎｉｃｏｔｉｎａｔｅ）、アルプロスタトジル（ａｌｐｒｏｓｔａｔｄｉｌ）、エチレフリン（ｅｔｉｌｅｐｈｒｉｎｅ）、プレナルテロール（ｐｒｅｎａｌｔｅｒｏｌ）、ドブタミン（ｄｏｂｕｔａｍｉｎｅ）、ドーパミン（ｄｏｐａｍｉｎｅ）、ジヒドロエルゴタミン（ｄｉｈｙｄｒｏｅｒｇｏｔａｍｉｎｅ）、グアネチジン（ｇｕａｎｅｔｉｄｉｎｅ）、ベタニジン（ｂｅｔａｎｉｄｉｎｅ）、メチルドーパ（ｍｅｔｈｙｌｄｏｐａ）、レセルピン（ｒｅｓｅｒｐｉｎｅ）、グアンファシン（ｇｕａｎｆａｃｉｎｅ）、トリメタファン（ｔｒｉｍｅｔｈａｐｈａｎ）、ヒドララジン（ｈｙｄｒａｌａｚｉｎｅ）、ジヒドララジン（ｄｉｈｙｄｒａｌａｚｉｎｅ）、プラゾシン（ｐｒａｚｏｓｉｎｅ）、ジアゾキシド（ｄｉａｚｏｘｉｄ）、カプトプリル（ｃａｐｔｏｐｒｉｌ）、ニフェジピン（ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ）、エナラプリル（ｅｎａｌａｐｒｉｌ）、ニトロプルシド（ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ）、ベンドロフルメチアジド（ｂｅｎｄｒｏｆｌｕｍｅｔｈｉａｚｉｄｅ）、ヒドロコロルチアジド（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｔｈｉａｚｉｄｅ）、メチクロチアジド（ｍｅｔｙｃｈｌｏｔｈｉａｚｉｄｅ）、ポリチアジド（ｐｏｌｙｔｈｉａｚｉｄｅ）、クロルサリドン（ｃｈｌｏｒｔｈａｌｉｄｏｎ）、シネタゾン（ｃｉｎｅｔａｚｏｎ）、クロパミド（ｃｌｏｐａｍｉｄｅ）、メフルシド（ｍｅｆｒｕｓｉｄｅ）、メトラゾン（ｍｅｔｈｏｌａｚｏｎｅ）、ブメタニド（ｂｕｍｅｔａｎｉｄｅ）、エタクリナシド（ｅｔｈａｃｒｙｎａｃｉｄｅ）、スピロノラクトン（ｓｐｉｒｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ）、アミロリド（ａｍｉｌｏｒｉｄｅ）、クロフィブレート（ｃｈｌｏｆｉｂｒａｔｅ）、ニコチン酸、ニケリトロール（ｎｉｃｈｅｒｉｔｒｏｌ）、ブロムフェニラミン（ｂｒｏｍｐｈｅｎｉｒａｍｉｎｅ）、シンナリジン（ｃｉｎｎａｒｉｚｉｎｅ）、デキスクロルフェニラミン（ｄｅｘｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒａｍｉｎｅ）、クレマスチン（ｃｌｅｍａｓｔｉｎｅ）、アンタゾリン（ａｎｔａｚｏｌｉｎｅ）、シプロヘプタジン（ｃｙｐｒｏｈｅｐｔａｄｉｎｅ）、プロエタジン（ｐｒｏｅｔｈａｚｉｎｅ）、シメチジン（ｃｉｍｅｔｉｄｉｎｅ）、ラニチジン（ｒａｎｉｔｉｄｉｎｅ）、スクラルファット（ｓｕｃｒａｌｆａｔ）、パパベリン（ｐａｐａｖｅｒｉｎｅ）、モキサベリン（ｍｏｘａｖｅｒｉｎｅ）、アトロピン（ａｔｒｏｐｉｎ）、ブチルスコポラミン（ｂｕｔｙｌｓｃｏｐｏｌａｍｉｎ）、エメプロン（ｅｍｅｐｒｏｎ）、グルコピロン（ｇｌｕｃｏｐｙｒｒｏｎ）、ヒオスシアミン（ｈｙｏｓｃｙａｍｉｎｅ）、メペンソラル（ｍｅｐｅｎｓｏｌａｒ）、メチルスコポラミン（ｍｅｔｈｙｌｓｃｏｐｏｌａｍｉｎｅ）、オキシフェンシクリミン（ｏｘｉｐｈｅｎｃｙｃｌｉｍｉｎｅ）、プロバンテリン（ｐｒｏｂａｎｔｅｌｉｎｅ）、テロジリン（ｔｅｒｏｄｉｌｉｎ）、センナグリコシド（ｓｅｎｎａｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）、サグラダエクストラクト（ｓａｇｒａｄａｅｘｔｒａｃｔ）、ダントロン（ｄａｎｔｒｏｎ）、ビサコジル（ｂｉｓａｃｈｏｄｙｌ）、ナトリウムピコスルフェート（ｓｏｄｉｕｍｐｉｃｏｓｕｌｆａｔ）、エツロス（ｅｔｕｌｏｓ）、ジフェノールキシレート（ｄｉｐｈｅｎｏｌｘｙｌａｔｅ）、ロペルアミド（ｌｏｐｅｒａｍｉｄｅ）、サラゾスルファピリジン（ｓａｌａｚｏｓｕｌｆａｐｙｒｉｄｉｎｅ）、ピルビン（ｐｙｒｖｉｎ）、メベンダゾール（ｍｅｂｅｎｄａｚｏｌ）、ジメチコン（ｄｉｍｅｔｉｃｏｎ）、フェロフマラート（ｆｅｒｒｏｆｕｍａｒａｔｅ）、フェロスクシナート（ｆｅｒｒｏｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、フェリテトラセミナトリウム（ｆｅｒｒｉｔｅｔｒａｓｅｍｉｓｏｄｉｕｍ）、シアノコバラミン（ｃｙａｎｏｃｈｏｂａｌａｍｉｎｅ）、葉酸（ｆｏｌｉｄ  ａｃｉｄ）ヘパリン、ヘパリン補因子、ジクルマロール（ｄｉｃｕｌｍａｒｏｌｅ）、ワルファリン（ｗａｒｆａｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、因子ＶＩＩＩ、因子ＩＸ、ビタミンＫ、チオペタ（ｔｈｉｏｐｅｔａ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄ）、メルファラン（ｍｅｌｆａｌａｎ）、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎ）、メルカトプリン（ｍｅｒｃａｔｏｐｕｒｉｎ）、チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎ）、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｈｒｉｓｔｉｎ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎ）、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）、デカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、アムサクリン（ａｍｓａｃｈｒｉｎ）、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｈｅｔｉｍｉｄ）、ホスフェストロール（ｐｈｏｓｐｈｅｓｔｒｏｌ）、メドロキシプログレステロン（ｍｅｄｒｏｘｉｐｒｏｇｒｅｓｔｅｒｏｎｅ）、ヒドロキシプロゲステロン（ｈｙｄｒｏｘｉｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ）、メゲステロール（ｍｅｇｅｓｔｅｒｏｌ）、ノレチステロン（ｎｏｒｅｔｉｓｔｅｒｏｎ）、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｐｈｅｎ）、シクロスポリン（ｃｉｃｌｏｓｐｏｒｉｎ）、スルホソミジン（ｓｕｌｆｏｓｏｍｉｄｉｎｅ）、ベンシルペニシリン（ｂｅｎｓｙｌｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ）、フェノキシメチルペニシリン（ｐｈｅｎｏｘｙｍｅｔｈｙｌｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ）、ジクロキサシリン（ｄｉｃｌｏｘａｃｉｌｌｉｎ）、クロキサシリン（ｃｌｏｘａｃｉｌｌｉｎ）、フルコキサシリン（ｆｌｕｃｏｘａｃｉｌｌｉｎ）、アンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）、アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）、ピバンピシリン（ｐｉｖａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）、バカンピシリン（ｂａｃａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）、ピペラシリン（ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ）、メジオシリン（ｍｅｚｉｏｃｉｌｌｉｎ）、メシリナム（ｍｅｃｉｌｌｉｎａｍ）、ピブメシリナム（ｐｉｖｍｅｃｉｌｌｉｎａｍ）、セファロチン（ｃｅｐｈａｌｏｔｉｎ）、セファレキシン（ｃｅｐｈａｌｅｘｉｎ）、セフラジン（ｃｅｐｈｒａｄｉｎ）、セファドロキシル（ｃｅｐｈａｄｒｏｘｉｌ）、セファクロル（ｃｅｐｈａｃｌｏｒ）、セフロキシム（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍ）、セフォタキシム（ｃｅｆｏｔａｘｉｍ）、セフタジジム（ｃｅｆｔａｚｉｄｉｍ）、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ）、アズトレオナム（ａｚｔｒｅｏｎａｍ）、イミペナム（ｉｍｉｐｅｎｅｍ）、シラスタチン（ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ）、テトラサイクリン（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、リサイクリン（ｌｙｍｅｃｙ���ｌｉｎｅ）、デメクロサイクリン（ｄｅｍｅｃｌｏｃｙｃｌｉｎｅ）、メタサイクリン（ｍｅｔａｃｙｃｌｉｎｅ）、オキシテトラサイクリン（ｏｘｉｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、ドキシサイクリン（ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）、クロラムフェニコール（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ）、スピラマイシン（ｓｐｉｒａｍｙｃｉｎ）、フシジン酸、リンコマイシン（ｌｉｎｃｏｍｙｃｉｎ）、クリンダマイシン（ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ）、スペクチノマイシン（ｓｐｅｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、リファンピシン（ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ）、アンホテリシン（ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ）Ｂ、グリセオフルビン（ｇｒｉｓｅｏｆｕｌｖｉｎ）、ナイスタチン（ｎｙｓｔａｔｉｎ）、バンコマイシン（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）、メトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）、チニダゾール（ｔｉｎｉｄａｚｏｌｅ）、トリメトプリム（ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ）、ノフフロキサシン（ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、サラゾスルファピリジン（ｓａｌａｚｏｓｕｌｆａｐｙｒｉｄｉｎ）、アミノサリル（ａｍｉｎｏｓａｌｙｌ）、イソニアジド（ｉｓｏｎｉａｚｉｄ）、エタンブトール（ｅｔａｍｂｕｔｏｌ）、ニトロフラントイン（ｎｉｔｒｏｆｕｒａｎｔｏｉｎ）、ナリジクス酸、メタナミン（ｍｅｔａｎａｍｉｎｅ）、クロロキン（ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎ）、ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｉｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎ）、チニダゾール（ｔｉｎｉｄａｚｏｌ）、ケトコナゾール（ｋｅｔｏｋｏｎａｚｏｌ）、アシクロビル（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）、インターフェロン  イドクスウリジン（ｉｄｏｘｕｒｉｄｉｎ）、レチナール（ｒｅｔｉｎａｌ）、チアミン（ｔｉａｍｉｎ）、デクスパンテノール（ｄｅｘｐａｎｔｅｎｏｌ）、ピリドキシン（ｐｙｒｉｄｏｘｉｎ）、葉酸、アスコルビン酸、トコフェロール、フィトミナジオン（ｐｈｙｔｏｍｉｎａｄｉｏｎ）、フェンフルラミン（ｐｈｅｎｆｌｕｒａｍｉｎ）、コルチコトロピン（ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｎ）、テトラコサクチド（ｔｅｔｒａｃｏｓａｃｔｉｄ）、チロトロピン（ｔｙｒｏｔｒｏｐｉｎ）、ソマトトプリン（ｓｏｍａｔｏｔｏｐｒｉｎ）、ソマトレム（ｓｏｍａｔｒｅｍ）、バソプレッシン（ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ）、リプレッシン（ｌｙｐｒｅｓｓｉｎ）、デスモプレッシン（ｄｅｓｍｏｐｒｅｓｓｉｎ）、オキシトシン（ｏｘｙｔｏｃｉｎ）、クロリオンゴナドトロピン（ｃｈｌ
ｏｒｉｏｎｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ）、コルチゾン（ｃｏｒｔｉｓｏｎ）、ヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）、フルオドロコルチゾン（ｆｌｕｏｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎ）、フルオキシメステロン（ｆｌｕｏｘｉｍｅｓｔｅｒｏｎ）、メステロロン（ｍｅｓｔｅｒｏｌｏｎ）、ナンドロロン（ｎａｎｄｒｏｌｏｎ）、スタノゾロール（ｓｔａｎｏｚｏｌｏｌ）、オキシメトロン（ｏｘｉｍｅｔｏｌｏｎ）、シプロテロン（ｃｙｐｒｏｔｅｒｏｎ）、レボチロキシン（ｌｅｖｏｔｙｒｏｘｉｎ）、リオチロニン（ｌｉｏｔｙｒｏｎｉｎ）、プロピルチオウラシル（ｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ）、カルビマゾール（ｃａｒｂｉｍａｚｏｌ）、チアマゾール（ｔｉａｍａｚｏｌ）、ジヒドロタキステロール（ｄｉｈｙｄｒｏｔａｃｈｙｓｔｅｒｏｌ）、アルファカルシドール（ａｌｆａｃａｌｃｉｄｏｌ）、カルシチロール（ｃａｌｃｉｔｉｒｏｌ）、インスリン、トルブタミド（ｔｏｌｂｕｔａｍｉｄ）、クロルプロパミド（ｃｈｌｏｒｐｒｏｐａｍｉｄ）、トラザミド（ｔｏｌａｚａｍｉｄ）、グリピジド（ｇｌｉｐｉｚｉｄ）、グリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄ）、フェノバルビタール（ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ）、メチピロン（ｍｅｔｈｙｐｒｙｌｏｎ）、ピリチジオン（ｐｙｒｉｔｙｉｄｉｏｎ）、メプロバマート（ｍｅｐｒｏｂａｍａｔ）、クロルジアゼポキシド（ｃｈｌｏｒｄｉａｚｅｐｏｘｉｄ）、ジアゼパム（ｄｉａｚｅｐａｍ）、ニトラゼパム（ｎｉｔｒａｚｅｐａｍ）、バクロフェン（ｂａｃｌｏｆｅｎ）、オキサゼパム（ｏｘａｚｅｐａｍ）、クロラゼパート二カリウム（ｄｉｋａｌｉｕｍｃｌｏｒａｚｅｐａｔ）、ロラゼパム（ｌｏｒａｚｅｐａｍ）、フルニトラゼパム（ｆｌｕｎｉｔｒａｚｅｐａｍ）、アルプラゾラム（ａｌｐｒａｚｏｌａｍ）、ミダゾラム（ｍｉｄａｚｏｌａｍ）、ヒドロキシジン（ｈｙｄｒｏｘｉｚｉｎ）、ダントロレン（ｄａｎｔｒｏｌｅｎｅ）、クロメチアゾール（ｃｈｌｏｍｅｔｉａｚｏｌ）、プロピオンマジン（ｐｒｏｐｉｏｎｍａｚｉｎｅ）、アリメマジン（ａｌｉｍｅｍａｚｉｎｅ）、クロルプロマジン（ｃｈｌｏｒｐｒｏｍａｚｉｎｅ）、レボメプロマジン（ｌｅｖｏｍｅｐｒｏｍａｚｉｎｅ）、アセトフェナジン（ａｃｅｔｏｐｈｅｎａｚｉｎｅ）、フルフェナジン（ｆｌｕｐｈｅｎａｚｉｎｅ）、ペルフェナジン（ｐｅｒｐｈｅｎａｚｉｎｅ）、プロクロルペラジン（ｐｒｏｃｈｌｏｒｐｅｒａｚｉｎｅ）、トリフルオペラジン（ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒａｚｉｎｅ）、ジキシラジン（ｄｉｘｙｒａｚｉｎｅ）、チオジラジン（ｔｈｉｏｄｉｒａｚｉｎｅ）、ペリシアジン（ｐｅｒｉｃｉａｚｉｎ）、クロプロチキセン（ｃｈｌｏｐｒｏｔｈｉｘｅｎｅ）、チザニジン（ｔｉｚａｎｉｄｉｎｅ）、ザレプロン（ｚａｌｅｐｌｏｎ）、ズクロペンチゾール（ｚｕｃｌｏｐｅｎｔｉｚｏｌ）、フルペンチゾール（ｆｌｕｐｅｎｔｉｚｏｌ）、チチキセン（ｔｈｉｔｈｉｘｅｎ）、ハロペリドール（ｈａｌｏｐｅｒｉｄｏｌ）、トリミプラミン（ｔｒｉｍｉｐｒａｍｉｎ）、オピプラモール（ｏｐｉｐｒａｍｏｌ）、クロミプラミン（ｃｈｌｏｍｉｐｒａｍｉｎ）、デシプラミン（ｄｅｓｉｐｒａｍｉｎ）、ロフェプラミン（ｌｏｆｅｐｒａｍｉｎ）、アミトリプチリン（ａｍｉｔｒｉｐｔｙｌｉｎ）、ノルトリプチリン（ｎｏｒｔｒｉｐｔｙｌｉｎ）、プロトリプチリン（ｐｒｏｔｒｉｐｔｙｌｉｎ）、マプトロチリン（ｍａｐｔｒｏｔｉｌｉｎ）、カフェイン、シンナリジン（ｃｉｎｎａｒｉｚｉｎｅ）、シクリジン（ｃｙｃｌｉｚｉｎｅ）、ジメンヒジナート（ｄｉｍｅｎｈｙｄｉｎａｔｅ）、メクロジン（ｍｅｃｌｏｚｉｎｅ）、プロメタジン（ｐｒｏｍｅｔａｚｉｎｅ）、チエチルペラジン（ｔｈｉｅｔｈｙｌｐｅｒａｚｉｎｅ）、メトクロプラミド（ｍｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）、スコポラミン（ｓｃｏｐｏｌａｍｉｎｅ）、フェノバルビタール（ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ）、フェニトイン（ｐｈｅｎｙｔｏｉｎｅ）、エトスクシミド（ｅｔｈｏｓｕｘｉｍｉｄｅ）、プリミドン（ｐｒｉｍｉｄｏｎｅ）、カルバマゼピン（ｃａｒｂａｍａｚｅｐｉｎｅ）、クロナゼパム（ｃｈｌｏｎａｚｅｐａｍ）、オルフェナドリン（ｏｒｐｈｅｎａｄｒｉｎｅ）、アトロピン（ａｔｒｏｐｉｎｅ）、ベンサトロピン（ｂｅｎｓａｔｒｏｐｉｎｅ）、ビペリデン（ｂｉｐｅｒｉｄｅｎ）、メチキセン（ｍｅｔｉｘｅｎｅ）、プロシリジン（ｐｒｏｃｙｌｉｄｉｎｅ）、レボドパ（ｌｅｖｏｄｏｐａ）、ブロモクリプチン（ｂｒｏｍｏｃｒｉｐｔｉ）、アマンタジン（ａｍａｎｔａｄｉｎｅ）、アンベノン（ａｍｂｅｎｏｎ）、ピリドスチグミン（ｐｙｒｉｄｏｓｔｉｇｍｉｎｅ）、シンスチグミン（ｓｙｎｓｔｉｇｍｉｎｅ）、ジスルフィラム（ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ）、モルヒネ（ｍｏｒｐｈｉｎｅ）、コデイン（ｃｏｄｅｉｎｅ）、ペンタゾシン（ｐｅｎｔａｚｏｃｉｎｅ）、ブプレノルフィン（ｂｕｐｒｅｎｏｒｐｈｉｎｅ）、ペチジン（ｐｅｔｈｉｄｉｎｅ）、フェノペリジン（ｐｈｅｎｏｐｅｒｉｄｉｎｅ）、フェンタニル（ｐｈｅｎｔａｎｙｌ）、メサドン（ｍｅｔｈａｄｏｎｅ）、ピリトラミド（ｐｉｒｉｔｒａｍｉｄｅ）、デキストロプロポキシフェン（ｄｅｘｔｒｏｐｒｏｐｏｘｙｐｈｅｎｅ）、ケトベミドン（ｋｅｔｏｂｅｍｉｄｏｎｅ）、アセチルサリチル酸、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、フェナゾン（ｐｈｅｎａｚｏｎｅ）、フェニルブタゾン（ｐｈｅｎｙｌｂｕｔａｚｏｎｅ）、アザプロパゾン（ａｚａｐｒｏｐａｚｏｎｅ）、ピロキシカム（ｐｉｒｏｘｉｃａｍ）、エルゴタミン（ｅｒｇｏｔａｍｉｎｅ）、ジヒドロエルゴタミン（ｄｉｈｙｄｒｏｅｒｇｏｔａｍｉｎｅ）、シプロヘプタジン（ｃｙｐｒｏｈｅｐｔａｄｉｎｅ）、ピジチフェン（ｐｉｚｉｔｉｆｅｎ）、フルメドロキソン（ｆｌｕｍｅｄｒｏｘｏｎ）、アロプリノール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌ）、プロベネシド（ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ）、マルロチオマラートナトリウム（ｓｏｄｉｕｍｍａｕｒｏｔｈｉｏｍａｌａｔｅ）  オーロノフィン（ａｕｒｏｎｏｆｉｎ）、ペニシラミン（ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ）、エストラジオール（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、エストラジオールバレリアナート（ｅｓｔｒａｄｉｏｌｖａｌｅｒｉａｎａｔｅ）、エストリオール（ｅｓｔｒｉｏｌ）、エチニルエストラジオール（ｅｔｈｉｎｙｌｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、ジヒ���ロゲステロン（ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎ）、リネストレノール（ｌｙｎｅｓｔｒｅｎｏｌ）、メドロキシプログレステロン（ｍｅｄｒｏｘｉｐｒｏｇｒｅｓｔｅｒｏｎｅ）、ノルエチステロン（ｎｏｒｅｔｉｓｔｅｒｏｎｅ）、シクロフェニレ（ｃｙｃｌｏｐｈｅｎｉｌｅ）、クロミフェン（ｃｌｏｍｉｐｈｅｎｅ）、レボノルゲストレル（ｌｅｖｏｎｏｒｇｅｓｔｒｅｌ）、メストラノール（ｍｅｓｔｒａｎｏｌ）、オルニダゾール（ｏｒｎｉｄａｚｏｌ）、チニダゾール（ｔｉｎｉｄａｚｏｌ）、エコナゾール（ｅｋｏｎａｚｏｌ）、クロトリマゾール（ｃｈｌｏｔｒｉｍａｚｏｌ）、ナタマイシン（ｎａｔａｍｙｃｉｎｅ）、ミコナゾール（ｍｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、スルベンチン（ｓｕｌｂｅｎｔｉｎ）、メチルエルゴタミン（ｍｅｔｈｙｌｅｒｇｏｔａｍｉｎｅ）、ジノプロスト（ｄｉｎｏｐｒｏｓｔ）、ジノプロストン（ｄｉｎｏｐｒｏｓｔｏｎ）、ゲメプロスト（ｇｅｍｅｐｒｏｓｔ）、ブロモクリプチン（ｂｒｏｍｏｃｒｉｐｔｉｎｅ）、フェニルプロパノールアミン、ナトリウムクロモグリカート（ｓｏｄｉｕｍｃｈｒｏｍｏｇｌｉｃａｔｅ）、アゼタソラミド（ａｚｅｔａｓｏｌａｍｉｄｅ）、ジクロフェンアミド（ｄｉｃｈｌｏｐｈｅｎａｍｉｄｅ）、ベータカロテン、ナロキソン（ｎａｌｏｘｏｎｅ）、葉酸カルシウム、特にクロニジン（ｃｌｏｎｉｄｉｎｅ）、テフィリン（ｔｈｅｐｈｙｌｌｉｎｅ）、ジピラダモール（ｄｉｐｙｒａｄａｍｏｌ）、ヒドロクロチアザード（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｔｈｉａｚａｄｅ）、スコポラミン（ｓｃｏｐｏｌａｍｉｎｅ）、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎｅ）、フロセミド（ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ）、塩化カリウム、モルヒネ（ｍｏｒｐｈｉｎｅ）、イブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）、サルブタモール（ｓａｌｂｕｔａｍｏｌ）、テルブタリン（ｔｅｒｂｕｔａｌｉｎ）、カルシトニン（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）など。この一覧は典型例であると意図され、本開示のコンジュゲートにおいては、任意の薬物が、それが公知であるか後に発見されるかにかかわらず使用可能であると理解されるべきである。
【０１０５】
種々の実施形態においては、コンジュゲートは、ペプチド性または非ペプチド性でありうる例えば以下のようなホルモン薬を含みうる：アドレナリン、ノルアドレナリン、アンジオテンシン、アトリオペプチン、アルドステロン、デヒドロエピアンドロステロン、アンドロステンジオン、テストステロン、ジヒドロテストステロン、カルシトニン、カルシトリオール、カルシジオール、コルチコトロピン、コルチゾール、ドーパミン、エストラジオール、エストロン、エストリオール、エリスロポエチン、濾胞刺激ホルモン、ガストリン、グレリン、グルカゴン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、ヒスタミン、ヒト胎盤性ラクトゲン、インスリン、インスリン様増殖因子、インヒビン、レプチン、ロイコトリエン、リポトロピン、メラトニン、オレキシン、オキシトシン、副甲状腺ホルモン、プロゲステロン、プロラクチン、プロラクチン放出ホルモン、プロスタグランジン、レニン、セロトニン、セクレチン、ソマトスタチン、トロンボポエチン、甲状腺刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（または甲状腺刺激ホルモン）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、チロキシン、トリヨードチロニン、バソプレッシンなど。ある実施形態においては、該ホルモンは、グルカゴン、インスリン、インスリン様増殖因子、レプチン、甲状腺刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（または甲状腺刺激ホルモン）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、チロキシンおよびトリヨードチロニンから選択されうる。この一覧は典型例であると意図され、本開示のコンジュゲートにおいては、任意のホルモン薬が、それが公知であるか後に発見されるかにかかわらず使用可能であると理解されるべきである。
【０１０６】
種々の実施形態においては、コンジュゲートは甲状腺ホルモンを含みうる。
【０１０７】
種々の実施形態においては、コンジュゲートは抗糖尿病薬（すなわち、糖尿病に罹患している患者に有益な効果を与える薬物）を含みうる。
【０１０８】
種々の実施形態においては、コンジュゲートはインスリン分子を含みうる。「インスリン分子」は、生物活性である（すなわち、インビボで投与された場合に、グルコースにおける検出可能な減少を引き起こしうる）限り野生型および修飾形態の両方のインスリンを含むと意図される。野生型インスリンは、精製形態、合成形態または組換え形態のいずれであるかには無関係に、任意の種に由来するインスリンを含む（例えば、ヒトインスリン、ブタインスリン、ウシインスリン、ウサギインスリン、ヒツジインスリンなど）。これらのうちの幾つかは例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から商業的に入手可能である。インスリンの種々の修飾形態が当技術分野で公知である（例えば、ＣｒｏｔｔｙおよびＲｅｙｎｏｌｄｓ，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｅｍｅｒｇ．Ｃａｒｅ．２３：９０３−９０５，２００７ならびにＧｅｒｉｃｈ，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１１３：３０８−１６，２００２ならびにそれらにおいて引用されている参考文献を参照されたい）。インスリンの修飾形態は（例えば、化学的部分、例えば後記のとおりに脂肪アシル鎖またはＰＥＧ基の付加により）化学修飾されることが可能であり、および／または突然変異（すなわち、１以上のアミノ酸の付加、欠失または置換による突然変異）されることが可能である。一般に、インスリンの生物活性突然変異形態は、典型的には、１〜１０（例えば、１〜５または１〜２）アミノ酸の置換、付加または欠失により野生型インスリンとは異なるであろう。ヒトインスリン（Ａ鎖およびＢ鎖）の野生型配列を後記および図１１に示す。
【０１０９】
Ａ鎖（配列番号１）：ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ
Ｂ鎖（配列番号２）：ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ
ヒトインスリンは、アミノ酸Ａ８、Ａ９、Ａ１０およびＢ３０のみにおいて、ウサギ、ブタ、ウシおよびヒツジインスリンとは異なる。
【表２】
2012520879.tif 000014
【０１１０】
種々の実施形態においては、本開示のインスリン分子はＢペプチド配列のＢ２８および／またはＢ２９位において突然変異している。例えば、インスリン  リスプロ（ｌｉｓｐｒｏ）（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））は、ＢペプチドのＣ末端の最後から２番目のリシンおよびプロリン残基が逆転している超速効型インスリン突然変異体（ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン）である。この修飾はインスリン多量体の形成を阻止する。インスリンａｓｐａｒｔ（アスパルト）（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））は、Ｂ２８位のプロリンがアスパラギン酸で置換された、もう１つの超速効型インスリン突然変異体（ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリン）である。この突然変異体も多量体の形成を妨げる。いくつかの実施形態においては、Ｂ２８および／またはＢ２９における突然変異は該インスリンポリペプチド内の他の位置における１以上の突然変異を伴う。例えば、インスリンｇｌｕｌｉｓｉｎｅ（グルリシン）（ＡＰＩＤＲＡ（登録商標））は、Ｂ３位におけるアスパラギン酸がリシン残基により置換されており、Ｂ２９位におけるリシンがグルタミン酸残基により置換されている、さらにもう１つの超速効型インスリン突然変異体（ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリン）である。
【０１１１】
種々の実施形態においては、本開示のインスリン分子は、ヒトインスリンと比較して変化している等電点を有する。いくつかの実施形態においては、等電点の変化は、インスリンＡペプチドのＮ末端および／またはインスリンＢペプチドのＣ末端に１以上のアルギニン残基を付加することにより達成される。そのようなインスリンポリペプチドの具体例には、ＡｒｇＡ０−ヒトインスリン、ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＡｒｇＡ０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリンおよびＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリンが含まれる。もう１つの例として、インスリンｇｌａｒｇｉｎｅ（グラルジン）（ＬＡＮＴＵＳ（登録商標））は、ＡｓｐＡ２１がグリシンにより置換されており、２つのアルギニン残基がＢペプチドのＣ末端に付加されている、典型的な持続型インスリン突然変異体である。これらの変化の効果は、等電点を変化させて、ｐＨ４において完全に可溶性である溶液を与えることである。したがって、いくつかの実施形態においては、本開示のインスリン分子は、Ａ２１がＧｌｙであるＡペプチド配列と、Ｂ３１がＡｒｇ−ＡｒｇであるＢペプチド配列とを含む。本開示は、これらの突然変異および本明細書に記載されている任意の他の突然変異（例えば、ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１−ヒトインスリン、ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＡｒｇＢ３１−ヒトインスリン）の全ての単一および複数の組合せを含むと理解されるべきである。
【０１１２】
種々の実施形態においては、本開示のインスリン分子はトランケート化（末端切断）されている。例えば、ある実施形態においては、本開示のインスリンポリペプチドのＢペプチドはＢ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ２６、Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ２９および／またはＢ３０を欠いている。ある実施形態においては、残基の組合せが本開示のインスリンポリペプチドのＢペプチド配列から欠けている。例えば、Ｂペプチド配列は残基Ｂ（１−２）、Ｂ（１−３）、Ｂ（２９−３０）、Ｂ（２８−３０）、Ｂ（２７−３０）および／またはＢ（２６−３０）を欠いていることが可能である。いくつかの実施形態においては、これらの欠失および／またはトランケート化は前記インスリン分子のいずれにも当てはまる［限定的なものではないが例えば、これにより、デス（Ｂ３０）−インスリンｌｉｓｐｒｏ（リスプロ）、デス（Ｂ３０）−インスリンａｓｐａｒｔ（アスパルト）、デス（Ｂ３０）−インスリンｇｌｕｌｉｓｉｎｅ（グルリシン）、デス（Ｂ３０）−インスリンｇｌａｒｇｉｎｅ（グラルジン）が得られる］。
【０１１３】
いくつかの実施形態においては、インスリン分子はＡまたはＢペプチド配列のＮまたはＣ末端上に追加的なアミノ酸残基を含有する。いくつかの実施形態においては、Ａ０、Ａ２１、Ｂ０および／またはＢ３１位に１以上のアミノ酸残基が位置する。いくつかの実施形態においては、Ａ０位に１以上のアミノ酸残基が位置する。いくつかの実施形態においては、Ａ２１位に１以上のアミノ酸残基が位置する。いくつかの実施形態においては、Ｂ０位に１以上のアミノ酸残基が位置する。いくつかの実施形態においては、Ｂ３１位に１以上のアミノ酸残基が位置する。いくつかの実施形態においては、インスリン分子はＡ０、Ａ２１、Ｂ０またはＢ３１位にいずれの追加的アミノ酸をも含まない。
【０１１４】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、１以上のアミド化アミノ酸が酸性形態で置換されるように突然変異している。例えば、アスパラギンはアスパラギン酸またはグルタミン酸で置換されうる。同様に、グルタミンはアスパラギン酸またはグルタミン酸で置換されうる。特に、ＡｓｎＡ１８、ＡｓｎＡ２１もしくはＡｓｎＢ３またはそれらの残基の任意の組合せはアスパラギン酸またはグルタミン酸により置換されうる。ＧｌｎＡ１５もしくはＧｌｎＢ４またはそれらの両方はアスパラギン酸またはグルタミン酸により置換されうる。ある実施形態においては、インスリン分子はＡ２１位のアスパラギン酸またはＢ３位のアスパラギン酸またはそれらの両方を有する。
【０１１５】
生物活性を維持させたままインスリン分子内の更に他のアミノ酸を突然変異させることが可能である、と当業者は認識するであろう。例えば、限定的なものではないが、以下の修飾も当技術分野で広く受け入れられている：アスパラギン酸でのＢ１０位のヒスチジン残基の置換（ＨｉｓＢ１０→ＡｓｐＢ１０）；アスパラギン酸でのＢ１位のフェニルアラニン残基の置換（ＰｈｅＢ１→ＡｓｐＢ１）；アラニンでのＢ３０位のトレオニン残基の置換（ＴｈｒＢ３０→ＡｌａＢ３０）；アラニンでのＢ２６位のチロシン残基の置換（ＴｙｒＢ２６→ＡｌａＢ２６）；およびアスパラギン酸でのＢ９位のセリン残基の置換（ＳｅｒＢ９→ＡｓｐＢ９）。
【０１１６】
種々の実施形態においては、本開示のインスリン分子は、延長した作用プロファイルを有する。例えば、ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は脂肪酸でアシル化されうる。すなわち、該インスリン分子上のアミノ基と該脂肪酸のカルボン酸基との間でアミド結合が形成される。該アミノ基は該インスリン分子のＮ末端アミノ酸のアルファ−アミノ基であることが可能であり、あるいは該インスリン分子のリシン残基のイプシロン−アミノ基であることが可能である。本開示のインスリン分子は、野生型インスリンに存在する３つのアミノ基の１以上においてアシル化されることが可能であり、あるいは野生型配列内に導入されたリシン残基上でアシル化されることが可能である。ある実施形態においては、インスリン分子はＢ１位においてアシル化されうる。ある実施形態においては、インスリン分子はＢ２９位においてアシル化されうる。ある実施形態においては、該脂肪酸は、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ペンタデシル酸（Ｃ１５）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ヘプタデシル酸（Ｃ１７）およびステアリン酸（Ｃ１８）から選択される。例えば、インスリンｄｅｔｅｍｉｒ（デテミル）（ＬＥＶＥＭＩＲ（登録商標））は、ＴｈｒＢ３０が欠失しておりＣ１４脂肪酸鎖（ミリスチン酸）がＬｙｓＢ２９に結合している持続型インスリン突然変異体である。
【０１１７】
いくつかの実施形態においては、ＡペプチドのＮ末端、ＢペプチドのＮ末端、Ｂ２９位のＬｙｓのイプシロン−アミノ基または本開示のインスリン分子内の任意の他の利用可能なアミノ基は、一般式：
【化１１】
2012520879.tif 000015
【０１１８】
（式中、Ｒｇは水素またはＣ１−３０アルキル基である）の脂肪酸部分に共有結合している。いくつかの実施形態においては、ＲｇはＣ１−２０アルキル基、Ｃ３−１９アルキル基、Ｃ５−１８アルキル基、Ｃ６−１７アルキル基、Ｃ８−１６アルキル基、Ｃ１０−１５アルキル基またはＣ１２−１４アルキル基である。ある実施形態においては、該インスリンポリペプチドはＡ１位の部分にコンジュゲート化される。ある実施形態においては、該インスリンポリペプチドはＢ１位の部分にコンジュゲート化される。ある実施形態においては、該インスリンポリペプチドはＢ２９位のイプシロン−アミノ基の部分にコンジュゲート化される。ある実施形態においては、該インスリン分子のＢ２８位はＬｙｓであり、ＬｙｓＢ２８のイプシロン−アミノ基が該脂肪酸部分にコンジュゲート化される。ある実施形態においては、該インスリン分子のＢ３位はＬｙｓであり、ＬｙｓＢ３のイプシロン−アミノ基が該脂肪酸部分にコンジュゲート化される。いくつかの実施形態においては、該脂肪酸鎖は８〜２０炭素長である。いくつかの実施形態においては、該脂肪酸はオクタン酸（Ｃ８）、ノナン酸（Ｃ９）、デカン酸（Ｃ１０）、ウンデカン酸（Ｃ１１）、ドデカン酸（Ｃ１２）またはトリデカン酸（Ｃ１３）である。ある実施形態においては、該脂肪酸はミリスチン酸（Ｃ１４）、ペンタデカン酸（Ｃ１５）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ヘプタデカン酸（Ｃ１７）、ステアリン酸（Ｃ１８）、ノナデカン酸（Ｃ１９）またはアラキジン酸（Ｃ２０）である。例えば、インスリンｄｅｔｅｍｉｒ（デテミル）（ＬＥＶＥＭＩＲ（登録商標））は、ＴｈｒＢ３０が欠失しておりＣ１４脂肪酸鎖（ミリスチン酸）がＬｙｓＢ２９に結合している持続型インスリン突然変異体である。
【０１１９】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の、１つの突然変異および／または化学修飾を含む：ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン（インスリンｌｉｓｐｒｏ（リスプロ））、ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリン（インスリンａｓｐａｒｔ（アスパルト））、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリン（インスリンｇｌｕｌｉｓｉｎｅ（グルリシン））、ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン（インスリンｇｌａｒｇｉｎｅ（グラルジン））、ＮεＢ２９−ミリストイル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン（インスリンｄｅｔｅｍｉｒ（デテミル））、ＡｌａＢ２６−ヒトインスリン、ＡｓｐＢ１−ヒトインスリン、ＡｒｇＡ０−ヒトインスリン、ＡｓｐＢ１ＧｌｕＢ１３−ヒトインスリン、ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＡｒｇＡ０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、デス（Ｂ２７）−ヒトインスリン、デス（Ｂ２８−Ｂ３０）−ヒトインスリン、デス（Ｂ１）−ヒトインスリン、デス（Ｂ１−Ｂ３）−ヒトインスリン。
【０１２０】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−パルミトイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−パルミトイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１２１】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−パルミトイル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ３０−ミリストイル−ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ３０−パルミトイル−ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（Ｎ−パルミトイル−γ−グルタミル）−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（Ｎ−リトコリル−γ−グルタミル）−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）−ヒトインスリン。
【０１２２】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｓｐＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＡｒｇＢ０ＧｌｙＡ２１ＡｓｐＢ３ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−  ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン。
【０１２３】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−ミリストイル−ＧｌｙＡ２１ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ３０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｓｐＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ミリストイル−ａｒｇＡ０ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン。
【０１２４】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｓｐＢ３ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＡｒｇＡ０ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン。
【０１２５】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−トリデカノイル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１−ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１−ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｎＢ３−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン。
【０１２６】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１−ヒトインスリン。
【０１２７】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン。
【０１２８】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｎＢ３−ヒトインスリン。
【０１２９】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン。
【０１３０】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン。
【０１３１】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン。
【０１３２】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−トリデカノイル−ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイル−ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ドデカノイル−ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０−ヒトインスリン。
【０１３３】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−ホルミル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ホルミル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ホルミル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ヒトインスリン。
【０１３４】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−アセチル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−アセチル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−アセチル−ＮαＡ１−アセチル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−アセチル−ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ヒトインスリン。
【０１３５】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−アセチル−ＮαＢ１−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ヒトインスリン。
【０１３６】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−ブチリル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ブチリル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ヒトインスリン。
【０１３７】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ペンタノイル−ＮαＡ１−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ペンタノイル−ＮαＡ１−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ヒトインスリン。
【０１３８】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘキサノイル−ＮαＡ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘキサノイル−ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ヒトインスリン。
【０１３９】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘプタノイル−ＮαＡ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ヘプタノイル−ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ヒトインスリン。
【０１４０】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮαＢ１−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＮαＡ１−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＮαＡ１−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ヒトインスリン。
【０１４１】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ノナノイル−ＮαＡ１−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ノナノイル−ＮαＡ１−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ヒトインスリン。
【０１４２】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−デカノイル−ヒトインスリン、ＮαＢ１−デカノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−デカノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＮαＡ１−デカノイル−ヒトインスリン、ＮαＡ１−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−デカノイル−ＮαＡ１−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ヒトインスリン。
【０１４３】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１４４】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−アセチル−ＮαＡ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−アセチル−ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１４５】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１４６】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１４７】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ペンタノイル−ＮαＡ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ペンタノイル−ＮαＡ１−ペンタノイル−ＮαＢ１−ペンタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１４８】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘキサノイル−ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘキサノイル−ＮαＡ１−ヘキサノイル−ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１４９】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘプタノイル−ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ヘプタノイル−ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＮαＢ１−ヘプタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１５０】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＮαＡ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−オクタノイル−ＮαＡ１−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１５１】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ノナノイル−ＮαＡ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−ノナノイル−ＮαＡ１−ノナノイル−ＮαＢ１−ノナノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１５２】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２８−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＢ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−デカノイル−ＮαＡ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮαＡ１−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン、ＮεＢ２８−デカノイル−ＮαＡ１−デカノイル−ＮαＢ１−デカノイル−ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリン。
【０１５３】
ある実施形態においては、本開示のインスリン分子は、以下のインスリン分子の１つの、突然変異および／または化学修飾を含む：ＮεＢ２９−ペンタノイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−デス（Ｂ２６）−ヒトインスリン、ＮαＢ１−アセチル−ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＮαＢ１−プロピオニル−ＡｓｐＢ１ＡｓｐＢ３ＡｓｐＢ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ペンタノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ヘキサノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ヘプタノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−オクタノイル−ＮαＢ１−オクタノイル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−プロピオニル−ＮαＡ１−プロピオニル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮαＡ１−アセチル−ＮαＢ１−アセチル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ホルミル−ＮαＡ１−ホルミル−ＮαＢ１−ホルミル−ＧｌｙＡ２１−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮαＢ１−ブチリル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン、ＮεＢ２９−ブチリル−ＮαＡ１−ブチリル−ＮαＢ１−ブチリル−デス（Ｂ３０）−ヒトインスリン。
【０１５４】
本開示は、前記突然変異および／または化学修飾のいずれかを含む、非ヒトインスリン（例えば、ブタインスリン、ウシインスリン、ウサギインスリン、ヒツジインスリンなど）の修飾形態をも含む。
【０１５５】
これらの及び他の修飾インスリン分子は米国特許第６，９０６，０２８号、第６，５５１，９９２号、第６，４６５，４２６号、第６，４４４，６４１号、第６，３３５，３１６号、第６，２６８，３３５号、第６，０５１，５５１号、第６，０３４，０５４号、第５，９５２，２９７号、第５，９２２，６７５号、第５，７４７，６４２号、第５，６９３，６０９号、第５，６５０，４８６号、第５，５４７，９２９号、第５，５０４，１８８号、第５，４７４，９７８号、第５，４６１，０３１号および第４，４２１，６８５号、ならびに米国特許第７，３８７，９９６号、第６，８６９，９３０号、第６，１７４，８５６号、第６，０１１，００７号、第５，８６６，５３８号および第５，７５０，４９７号（それらの開示の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に詳細に記載されている。
【０１５６】
種々の実施形態においては、本開示のインスリン分子は３つの野生型ジスルフィド架橋（すなわち、１つの架橋はＡ鎖の７位とＢ鎖の７位との間、第２の架橋はＡ鎖の２０位とＢ鎖の１９位との間、そして第３の架橋はＡ鎖の６位と１１位との間）を含む。
【０１５７】
インスリン分子を含む薬物をコンジュゲートするための方法を以下に説明する。ある実施形態においては、インスリン分子はＡ１アミノ酸残基を介してコンジュゲートフレームワークにコンジュゲートされる。ある実施形態においては、Ａ１アミノ酸残基はグリシンである。しかし、本開示はＮ末端コンジュゲート化に限定されず、ある実施形態においては、インスリン分子は非末端Ａ鎖アミノ酸残基を介してコンジュゲート化されうると理解されるべきである。特に、本開示は、（野生型の又は部位特異的突然変異誘発により導入された）Ａ鎖内の任意の位置に存在するリシン残基のイプシロン−アミン基を介したコンジュゲート化を含む。Ａ鎖上のコンジュゲート化位置が異なれば、インスリン活性の低下も異なりうると理解されるであろう。ある実施形態においては、インスリン分子はＢ１アミノ酸残基を介してコンジュゲートフレームワークにコンジュゲート化される。ある実施形態においては、Ｂ１アミノ酸残基はフェニルアラニンである。しかし、本開示はＮ末端コンジュゲート化に限定されず、ある実施形態においては、インスリン分子は非末端Ｂ鎖アミノ酸残基を介してコンジュゲート化されうると理解されるべきである。特に、本開示は、（野生型の又は部位特異的突然変異誘発により導入された）Ｂ鎖内の任意の位置に存在するリシン残基のイプシロン−アミン基を介したコンジュゲート化を含む。例えば、ある実施形態においては、インスリン分子はＢ２９リシン残基を介してコンジュゲート化されうる。インスリンｇｌｕｌｉｓｉｎｅ（グルリシン）の場合、Ｂ３リシン残基を介したコンジュゲートフレームワークへのコンジュゲート化が用いられうる。Ｂ鎖上のコンジュゲート化位置が異なれば、インスリン活性の低下も異なりうると理解されるであろう。
【０１５８】
種々の実施形態においては、コンジュゲート化は、インスリン増感物質（すなわち、インスリンの作用を増強する薬物）を含みうる。インスリンの効果を増強する薬物には、ビグアニド（例えば、メトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ））およびグリタゾン（ｇｌｉｔａｚｏｎｅ）が含まれる。最初のグリタゾン薬はトログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）であったが、これは重篤な副作用を有することが判明した。第２世代のグリタゾンには、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）およびロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）が含まれ、ロシグリタゾンは、ある治験において、有害な心血管事象に関連づけられているものの、これらはより高い耐容性を示す。
【０１５９】
種々の実施形態においては、コンジュゲートはインスリン分泌促進物質（すなわち、膵臓のベータ細胞によるインスリンの分泌を刺激する薬物）を含みうる。例えば、種々の実施形態においては、コンジュゲートはスルホニル尿素を含みうる。スルホニル尿素は、膵臓のベータ細胞によるインスリン分泌を、グルコースの作用に対してそれを増感させることにより刺激する。スルホニル尿素は更に、グルカゴン分泌を抑制し、インスリンの作用に対して標的組織を増感させうる。第１世代のスルホニル尿素には、トルブタミド（ｔｏｌｂｕｔａｍｉｄｅ）、クロルプロパミド（ｃｈｌｏｒｐｒｏｐａｍｉｄｅ）およびカルブタミド（ｃａｒｂｕｔａｍｉｄｅ）が含まれる。より低い用量で活性である第２世代のスルホニル尿素には、グリピジド（ｇｌｉｐｉｚｉｄｅ）、グリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）、グリクラジド（ｇｌｉｃｌａｚｉｄｅ）、グリボルヌリド（ｇｌｉｂｏｒｎｕｒｉｄｅ）およびグリメプリド（ｇｌｉｍｅｐｉｒｉｄｅ）が含まれる。種々の実施形態においては、コンジュゲートはメグリチニド（ｍｅｇｌｉｔｉｎｉｄｅ）含みうる。適合なメグリチニドには、ナテグリニド（ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ）、ミチグリニド（ｍｉｔｉｇｌｉｎｉｄｅ）およびレパグリニド（ｒｅｐａｇｌｉｎｉｄｅ）が含まれる。それらの血糖低下作用はスルホニル尿素の場合より速く且つ短い。他のインスリン分泌促進物質には、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）およびＧＬＰ−１類似体（すなわち、１〜１０アミノ酸の置換、付加もしくは欠失および／または化学修飾の点でＧＬＰ−１とは異なる、ＧＬＰ−１様生物活性を有するペプチド）が含まれる。ＧＬＰ−１は、空腹を抑制することにより、および中枢作用により満腹感を増強することにより、およびグルカゴン放出を抑制することにより、食物摂取を減少させる。ＧＬＰ−１は、膵島細胞の増殖を増加させることにより血漿グルコースレベルを低下させ、食物消費後のインスリン産生を増加させる。ＧＬＰ−１は、例えば、リラグルチド（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）の場合のように、そのインビボ半減期を延長させるために脂質コンジュゲート化により化学修飾されうる。さらに他のインスリン分泌促進物質には、エキセンジン（ｅｘｅｎｄｉｎ）−４およびエキセンジン−４類似体（すなわち、１〜１０アミノ酸の置換、付加もしくは欠失および／または化学修飾の点でエキセンジン−４とは異なる、エキセンジン−４様生物活性を有するペプチド）が含まれる。エキセジン−４はアメリカドクトカゲの毒において見出され、ＧＬＰ−１様生物活性を示す。それはＧＬＰ−１より遥かに長い半減期を有し、ＧＬＰ−１とは異なり、生物活性を喪失することなくそのＮ末端の８アミノ酸残基がトランケート化されうる。ＧＬＰ−１およびエキセンジン−４のＮ末端領域はほぼ同一であり、有意な相違は、第２アミノ酸残基がＧＬＰ−１ではアラニンであるがエキセンジン−４ではグリシンであることであり、このことはエキセンジン−４にインビボ消化に対するその抵抗性をもたらす。エキセンジン−４はまた、そのＣ末端に、ＧＬＰ−１と比較した場合に追加的な９アミノ酸残基を有する。Ｍａｎｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３５：７１３−７１６，２００７およびＲｕｎｇｅら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４６：５８３０−５８４０，２００７は、本開示のコンジュゲートにおいて使用されうる種々のＧＬＰ−１およびエキセンジン−４類似体を記載している。ＧＬＰ−１の短い半減期はジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）による酵素消化によるものである。ある実施形態においては、内因性ＧＬＰ−１の効果はＤＰＰ−ＩＶインヒビター（例えば、ビルダグリプチン（ｖｉｌｄａｇｌｉｐｔｉｎ）、シタグリプチン（ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ）、サクサグリプチン（ｓａｘａｇｌｉｐｔｉｎ）、リナグリプチン（ｌｉｎａｇｌｉｐｔｉｎ）またはアログリプチン（ａｌｏｇｌｉｐｔｉｎ））の投与により増強されうる。
【０１６０】
種々の実施形態においては、コンジュゲートはアミリン（ａｍｙｌｉｎ）またはアミリン類似体（すなわち、１〜１０アミノ酸の置換、付加もしくは欠失および／または化学修飾の点でアミリンとは異なる、アミリン様生物活性を有するペプチド）を含みうる。アミリンはグルコースの調節において重要な役割を果たしている（例えば、ＥｄｅｌｍａｎおよびＷｅｙｅｒ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｔｈｅｒ．４：１７５−１８９，２００２を参照されたい）。アミリンは、食物摂取に応答して膵臓のベータ細胞によりインスリンと共に分泌される神経内分泌ホルモンである。インスリンは、血流からのグルコースの消失を調節するように働くが、アミリンは、胃および肝臓からの血流中のグルコースの出現を調節するのを助けるように働く。酢酸プラムリンチド（ｐｒａｍｌｉｎｔｉｄｅ  ａｃｅｔａｔｅ）（ＳＹＭＬＩＮ（登録商標））は典型的なアミリン類似体である。天然ヒトアミリンはアミロイド生成性であるため、プラムリンチドを設計するための戦略は、アミロイド生成性ではないラットアミリンからの残基で或る残基を置換することを含むものであった。特に、プロリン残基は構造破壊性残基であることが公知であり、したがってこれは該ラット配列からヒト配列内へ直接的に移植された。Ｇｌｕ−１０もアスパラギンで置換された。
【０１６１】
種々の実施形態においては、コンジュゲート化前の薬物は１以上の反応性部分（例えば、カルボキシルまたは反応性エステル、アミン、ヒドロキシル、アルデヒド、スルフヒドリル、マレイミジル、アルキニル、アジドなどの部分）を含有しうる。後記のとおり、これらの反応性部分は、ある実施形態においては、コンジュゲート化過程を促進しうる。具体例には、アルファ末端アミンおよび／またはイプシロン−アミンリシン基を含有するペプチド薬が含まれる。これらの反応性部分のいずれもが、それを有さない公知薬物に人工的に付加されうると理解されるであろう。例えば、ペプチド薬の場合、適当なアミノ酸（例えば、リシン）が該アミノ酸配列内に付加または置換されうる。また、後記で更に詳しく説明するとおり、該コンジュゲート化過程は、コンジュゲート化の前に或る反応性部分を選択的に保護することにより制御されうると理解されるであろう。
【０１６２】
前記のとおり、本開示は薬物と標的分子とのいずれかの特定の組合せには限定されない。
【０１６３】
種々の実施形態においては、本開示のマテリアルは、天然フィードバックメカニズムを操作するために利用されうる。例えば、２つの内因性物質のレベルが相互関連している（例えば、グルコースとインスリンとの場合が挙げられ、この場合、インスリンのレベルは、グルコースのレベルが増加するにつれて増加し、グルコースのレベルは、インスリンのレベルが増加するにつれて減少する）、多数の天然フィードバックメカニズム（ほとんどのホルモン制御メカニズムを含む）が存在する。そのような実施形態においては、内因性物質の一方が標的分子（例えば、グルコース）となり、他方が薬物（例えば、インスリン）となる。あるいは、種々の実施形態においては、該薬物は、（ａ）他方の内因性物質と同じ機能（例えば、グルコースレベルを低下させる）を有する、（ｂ）他方の内因性物質の産生を刺激する、および／または（ｃ）他方の内因性物質の効果を増強する分子でありうる。例えば、グルコースが標的分子である場合、薬物としてはインスリンの代わりにインスリン分泌促進物質またはインスリン増感物質を使用しうるであろう。
【０１６４】
人工的フィードバック系の、他の非限定的な具体例には、高レベルのインスリンに応答してグルカゴンコンジュゲートを放出するマテリアル、血栓症指標物質に応答して抗凝血性コンジュゲート［例えば、クマリン、例えば、ワルファリン（ｗａｒｆａｒｉｎ）、アセノクマロール（ａｃｅｎｏｃｏｕｍａｒｏｌ）、フェンプロクモン（ｐｈｅｎｐｒｏｃｏｕｍｏｎ）およびフェニンジオン（ｐｈｅｎｉｎｄｉｏｎｅ）、ヘパリン、直接的トロンビンインヒビター、例えば、アルガトロバン（ａｒｇａｔｒｏｂａｎ）、レピルジン（ｌｅｐｉｒｕｄｉｎ）、ビバリルジン（ｂｉｖａｌｉｒｕｄｉｎ）およびダビガトラン（ｄａｂｉｇａｔｒａｎ）など］を放出するマテリアル、乳酸レベルの増加に応答して乳酸低下薬コンジュゲート（例えば、ジクロロアセタート（ｄｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔａｔｅ））を放出するマテリアルなどが含まれる。
【０１６５】
種々の実施形態においては、マテリアルは、標的分子に直接は関連していない機能を有する薬物を含むコンジュゲートを放出するように設計されうる。限定的なものではないが、食事後に濃度が増加する標的分子（例えば、グルコース）に応答するマテリアルは、長期にわたる食事時薬物投与を行うために使用されうる。定期的におよび／または食事と共に投与される必要のあるいずれの薬物も、そのような運搬系から利益を受けるであろう。当技術分野でよく知られているとおり、多数の伝統的薬物は食事と共に又は食事時に投与される必要がある。例えば、脂肪の吸収を抑制する薬物（例えば、オルリスタット（ｏｒｌｉｓｔａｔ））は食事時間中に有利に使用される。同様に、脂質レベルを低下させる薬物、例えばロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）、アトルバスタチン（ａｔｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）もしくはシンバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ）、またはトリグリセリドレベルを低下させる薬物、例えばジェムフィブロジル（ｇｅｍｆｉｂｒｏｚｉｌ）も食事時に有利に放出されうる。
【０１６６】
ｖｉｉｉ．Ｗ（検出可能標識）
前記のとおり、種々の実施形態においては、Ｗは検出可能標識である。例えば、該コンジュゲートがセンサーなどにおいて使用される場合、生物、組織または細胞内のコンジュゲートの位置を検出するために、検出可能標識を含有させることが可能である。コンジュゲートは、当技術分野で公知のいずれかの検出可能標識を含みうると理解されるべきである。コンジュゲートは同一標識のコピーの２を含むことが可能であり、および／または２以上のタイプの標識を含むことが可能である。一般に、使用される標識は、最終用途、および検出のために用いられる方法に左右されるであろう。
【０１６７】
検出可能標識は、直接的に検出可能または間接的に検出可能（例えば、シグナル生成系の１以上の追加的なメンバーとの協同作用によるもの）でありうる。直接的に検出可能な標識の具体例には、放射能、常磁性、蛍光、光散乱、吸収および比色標識が含まれる。蛍光イソチオシアナート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、γ−フタルアルデヒド、フルオレスカミンなどは全て、典型的な蛍光標識である。化学発光標識、すなわち、二次基質を色素原産物に変換しうる標識は、間接的に検出可能な標識の例である。例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカスヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコアミラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、ルシフェリン、ルシフェラーゼ、エクオリンなどは全て、典型的なタンパク質系化学発光標識である。ルミノール、イソルミノール、テロマチック（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ）アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、シュウ酸エステルなどは、典型的な非タンパク質系化学発光標識である。間接的に標識可能な標識の、もう１つの非限定的な一般に用いられる具体例は、アフィニティーリガンド、すなわち、それ自体は直接的または間接的に検出可能でありうる二次結合相手（例えば、抗体またはアプタマー）に対する強力なアフィニティーを有する標識である。
【０１６８】
一般に、検出可能標識は種々の方法で可視化または検出されることが可能であり、個々の検出方法は、個々の検出可能標識に基づいて選択され、ここで、代表的な検出手段には、例えば、シンチレーション計数、オートラジオグラフィー、常磁性の測定、蛍光測定、光吸収測定、光散乱の測定などが含まれる。
【０１６９】
種々の実施形態においては、コンジュゲート前の標識は１以上の反応性部分（例えば、カルボキシルまたは反応性エステル、アミン、ヒドロキシル、アルデヒド、スルフヒドリル、マレイミジル、アルキニル、アジドなどの部分）を含有しうる。後記のとおり、これらの反応性部分は、ある実施形態においては、コンジュゲート化過程を促進しうる。具体例には、アルファ末端アミンおよび／またはイプシロン−アミンリシン基を含有するペプチド標識が含まれる。これらの反応性部分のいずれもが、それを有さない公知標識に人工的に付加されうると理解されるであろう。例えば、ペプチド標識の場合、適当なアミノ酸（例えば、リシン）が該アミノ酸配列内に付加または置換されうる。また、後記で更に詳しく説明するとおり、該コンジュゲート化過程は、コンジュゲート化の前に或る反応性部分を選択的に保護することにより制御されうると理解されるであろう。
【０１７０】
ｉｘ．ｎ
前記で一般的に定義されたとおり、ｎは５〜２５（５および２５も含む）の整数である。
【０１７１】
ある実施形態においては、ｎは１０〜２５（１０および２５も含む）の整数である。ある実施形態においては、ｎは１５〜２５（１５および２５も含む）の整数である。ある実施形態においては、ｎは５〜２０（５および２０も含む）の整数である。ある実施形態においては、ｎは１０〜２０（１０および２０も含む）の整数である。ある実施形態においては、ｎは１５〜２０（１５および２０も含む）の整数である。ある実施形態においては、ｎは５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５である。ある実施形態においては、ｎは５である。ある実施形態においては、ｎは１０である。ある実施形態においては、ｎは１５である。ある実施形態においては、ｎは２０である。ある実施形態においては、ｎは２５である。
【０１７２】
ある実施形態においては、式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）またはそれらの部分集合のいずれかにおいて示される基：
【化１２】
2012520879.tif 000016
【０１７３】
は、基：
【化１３】
2012520879.tif 000017
【０１７４】
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はｎに等しい］の混合物に相当する。
【０１７５】
ある実施形態においては、ｍおよびｐの各場合は、独立して、１〜２４（１および２４も含む）の整数である。ただし、（ｍ＋ｐ）の和は５以上かつ２５以下である。
【０１７６】
ある実施形態においては、ｍおよびｐは約１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２または１：１（ｍ：ｐ）の比で存在する。ある実施形態においては、ｐおよびｍは約１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、または１：２（ｐ：ｍ）の比で存在する。
【０１７７】
ｘ．典型的なコンジュゲート
ある実施形態においては、本開示は、式（Ｉ−ａ１）：
【化１４】
2012520879.tif 000018
【０１７８】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｘ、Ｙおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）を提供する。
【０１７９】
ある実施形態においては、本開示は、式（Ｉ−ａ２）：
【化１５】
2012520879.tif 000019
【０１８０】
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）を提供する。
【０１８１】
ある実施形態においては、本開示は、式（Ｉ−ａ３）：
【化１６】
2012520879.tif 000020
【０１８２】
（式中、Ｒｃ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）を提供する。
【０１８３】
ある実施形態においては、本開示は、コンジュゲート：
【化１７】
2012520879.tif 000021
【０１８４】
（式中、Ｒｃ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）を提供し、ここで、基：
【化１８】
2012520879.tif 000022
【０１８５】
は、基：
【化１９】
2012520879.tif 000023
【０１８６】
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はそれぞれｎに等しい］の混合物に相当する。ある実施形態においては、ｎは１０である。ある実施形態においては、ｎは２０である。
【０１８７】
ある実施形態においては、本開示は、式（Ｉ−ｂ１）：
【化２０】
2012520879.tif 000024
【０１８８】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、ＹおよびＲｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０１８９】
ある実施形態においては、本開示は、式（Ｉ−ｂ２）：
【化２１】
2012520879.tif 000025
【０１９０】
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０１９１】
ある実施形態においては、本開示は、式（Ｉ−ｂ３）：
【化２２】
2012520879.tif 000026
【０１９２】
（式中、Ｒｃ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０１９３】
ある実施形態においては、本開示は、コンジュゲート：
【化２３】
2012520879.tif 000027
【０１９４】
を提供し、ここで、基：
【化２４】
2012520879.tif 000028
【０１９５】
は、基：
【化２５】
2012520879.tif 000029
【０１９６】
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はそれぞれｎに等しい］の混合物に相当する。ある実施形態においては、ｎは１０である。ある実施形態においては、ｎは２０である。
【０１９７】
ある実施形態においては、本開示は、式（Ｉ−ｃ１）：
【化２６】
2012520879.tif 000030
【０１９８】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０１９９】
ある実施形態においては、本開示は、式（Ｉ−ｃ２）：
【化２７】
2012520879.tif 000031
【０２００】
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２０１】
ある実施形態においては、本開示は、式（Ｉ−ｃ３）：
【化２８】
2012520879.tif 000032
【０２０２】
（式中、Ｒｃ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２０３】
ある実施形態においては、本開示は、コンジュゲート：
【化２９】
2012520879.tif 000033
【０２０４】
を提供し、ここで、基：
【化３０】
2012520879.tif 000034
【０２０５】
は、基：
【化３１】
2012520879.tif 000035
【０２０６】
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はそれぞれｎに等しい］の混合物に相当する。ある実施形態においては、ｎは１０である。ある実施形態においては、ｎは２０である。
【０２０７】
ある実施形態においては、本開示は、式（ＩＩ−ａ１）：
【化３２】
2012520879.tif 000036
【０２０８】
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２０９】
ある実施形態においては、本開示は、コンジュゲート：
【化３３】
2012520879.tif 000037
【０２１０】
を提供し、ここで、基：
【化３４】
2012520879.tif 000038
【０２１１】
は、基：
【化３５】
2012520879.tif 000039
【０２１２】
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はそれぞれｎに等しい］の混合物に相当する。ある実施形態においては、ｎは１０である。ある実施形態においては、ｎは２０である。
【０２１３】
ある実施形態においては、本開示は、式（ＩＩ−ｂ１）：
【化３６】
2012520879.tif 000040
【０２１４】
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２１５】
ある実施形態においては、本開示は、コンジュゲート：
【化３７】
2012520879.tif 000041
【０２１６】
を提供し、ここで、基：
【化３８】
2012520879.tif 000042
【０２１７】
は、基：
【化３９】
2012520879.tif 000043
【０２１８】
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はそれぞれｎに等しい］の混合物に相当する。ある実施形態においては、ｎは１０である。ある実施形態においては、ｎは２０である。
【０２１９】
ある実施形態においては、本開示は、式（ＩＩ−ｃ１）：
【化４０】
2012520879.tif 000044
【０２２０】
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２２１】
ある実施形態においては、本開示は、コンジュゲート：
【化４１】
2012520879.tif 000045
【０２２２】
を提供し、ここで、基：
【化４２】
2012520879.tif 000046
【０２２３】
は、基：
【化４３】
2012520879.tif 000047
【０２２４】
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はそれぞれｎに等しい］の混合物に相当する。ある実施形態においては、ｎは１０である。ある実施形態においては、ｎは２０である。
【０２２５】
ある実施形態においては、本開示は、式（ＩＩＩ−ａ１）：
【化４４】
2012520879.tif 000048
【０２２６】
（式中、------、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２２７】
ある実施形態においては、本開示は、式（ＩＩＩ−ａ２）：
【化４５】
2012520879.tif 000049
【０２２８】
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２２９】
ある実施形態においては、本開示は、コンジュゲート：
【化４６】
2012520879.tif 000050
【０２３０】
を提供し、ここで、基：
【化４７】
2012520879.tif 000051
【０２３１】
は、基：
【化４８】
2012520879.tif 000052
【０２３２】
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はそれぞれｎに等しい］の混合物に相当する。ある実施形態においては、ｎは１０である。ある実施形態においては、ｎは２０である。
【０２３３】
ある実施形態においては、本開示は、式（ＩＩＩ−ｂ１）：
【化４９】
2012520879.tif 000053
【０２３４】
（式中、------、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２３５】
ある実施形態においては、本開示は、式（ＩＩＩ−ｂ２）：
【化５０】
2012520879.tif 000054
【０２３６】
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２３７】
ある実施形態においては、本開示は、コンジュゲート：
【化５１】
2012520879.tif 000055
【０２３８】
を提供し、ここで、基：
【化５２】
2012520879.tif 000056
【０２３９】
は、基：
【化５３】
2012520879.tif 000057
【０２４０】
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はそれぞれｎに等しい］の混合物に相当する。ある実施形態においては、ｎは１０である。ある実施形態においては、ｎは２０である。
【０２４１】
ある実施形態においては、本開示は、式（ＩＩＩ−ｃ１）：
【化５４】
2012520879.tif 000058
【０２４２】
（式中、------、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２４３】
ある実施形態においては、本開示は、式（ＩＩＩ−ｃ２）：
【化５５】
2012520879.tif 000059
【０２４４】
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを提供する。
【０２４５】
ある実施形態においては、本開示は、コンジュゲート：
【化５６】
2012520879.tif 000060
【０２４６】
を提供し、ここで、基：
【化５７】
2012520879.tif 000061
【０２４７】
は、基：
【化５８】
2012520879.tif 000062
【０２４８】
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はそれぞれｎに等しい］の混合物に相当する。ある実施形態においては、ｎは１０である。ある実施形態においては、ｎは２０である。
【０２４９】
コンジュゲートの特徴づけ
式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のコンジュゲートは、核磁気共鳴（例えば、１Ｈ  ＮＭＲ）、分子量および多分散性に関するゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、ならびに鎖当たりの酸基の数の決定のためにはフーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）または酸滴定により特徴づけられうる。
【０２５０】
ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワーク（すなわち、アフィニティーリガンド、薬物または検出可能標識）は１０，０００Ｄａ未満、例えば、約１００〜約１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワークは約３００〜約５，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワークは約５００〜約２，５００Ｄａの範囲の分子量を有する。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワークは約１，０００〜約２，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワークは約２００〜約１，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。ある実施形態においては、該コンジュゲートフレームワークは約３００〜約８００Ｄａの範囲の分子量を有する。
【０２５１】
ある実施形態においては、式（Ｉ）または（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のコンジュゲートの混合物を得る。この混合物中のそれらのコンジュゲートは同じ又は異なる分子量を有しうる。１つの実施形態においては、該混合物中の多分散性は１．５未満である。１つの実施形態においては、該混合物中の多分散性は１．２５未満である。
【０２５２】
ある実施形態においては、０．１重量％未満（当該組成物の全乾燥重量に対して）、例えば０．０１％未満の開始化合物を含有する、式（Ｉ）のコンジュゲートの組成物を提供する。ある実施形態においては、０．１重量％未満（当該組成物の全乾燥重量に対して）、例えば０．０１％未満の単量体を含有する組成物を提供する。
【０２５３】
一般に、コンジュゲート上に負荷させる薬物（または検出可能標識）の量は該薬物（または検出可能標識）の分子量に左右され、該コンジュゲートフレームワークの分子量および／または化学的活性化のレベル（すなわち、該フレームワーク内に付属基が含まれる場合）を調節することにより制御されうる。種々の実施形態においては、該薬物（または検出可能標識）負荷レベルはコンジュゲートに対する薬物（または検出可能標識）の比率として５〜９９％  ｗ／ｗの範囲でありうる。種々の実施形態においては、５０〜９９％の狭い範囲、例えば８０〜９９％の範囲の負荷レベルが用いられうる。
【０２５４】
コンジュゲートの製造方法
１．式（Ｉ）のコンジュゲート
式（Ｉ）のコンジュゲートは、当技術分野公知の方法により製造されうる。例えば、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐａｕｌ  Ｃ．ＨｉｅｍｅｎｚおよびＴｉｍｏｔｈｙ  Ｐ．Ｌｏｄｇｅ，発行：ＣＲＣ，２００７）ならびにＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｇｅｏｒｇｅ  Ｏｄｉａｎ，発行：Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２００４）を参照されたい。ある実施形態においては、式（Ｉ）またはその部分集合のコンジュゲートはフリーラジカル重合法により製造される。
【０２５５】
ｉ．原子転移ラジカル重合（ＡＴＲＰ）法
１つの態様においては、本開示は、
（ａ）触媒、開始化合物および１以上の単量体の混合物を準備し、
（ｂ）該混合物を重合させて重合体を得る工程を含む、式（Ｉ）：
【化５９】
2012520879.tif 000063
【０２５６】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｚ、Ｘ、ＹおよびＺは本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートの製造方法を提供し、ここで、該開始化合物は、式：
【化６０】
2012520879.tif 000064
【０２５７】
（式中、Ｒ１およびＲ２は本明細書中に定義されているとおりであり、Ｕ＊は適当な脱離基である）を有するか、またはそれらの混合物であり、該単量体は、式：
【化６１】
2012520879.tif 000065
【０２５８】
（式中、ＸおよびＲｘは本明細書中に定義されているとおりである）を有する。
【０２５９】
ある実施形態においては、該開始化合物は、式：
【化６２】
2012520879.tif 000066
【０２６０】
（式中、Ｒ１およびＲ２は本明細書中に定義されているとおりであり、Ｕ＊は適当な脱離基である）を有する。
【０２６１】
適当なＵ＊脱離基には、ハロゲン（例えば、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ）、−ＳＲｇ、−ＯＲｇおよびＳｉ（Ｒｇ）３（ここで、それぞれの場合のＲｇは、独立して、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘテロアリールである）が含まれるが、これらに限定されるものではない。該開始化合物は、該生成物がコンジュゲート当たり唯一の末端アセタール基を含有するように設計される。
【０２６２】
ある実施形態においては、該開始化合物は、式：
【化６３】
2012520879.tif 000067
【０２６３】
（式中、Ｒ１およびＲ２は本明細書中に定義されているとおりであり、Ｕ＊は臭素である）を有する。
【０２６４】
ある実施形態においては、該開始化合物は、式：
【化６４】
2012520879.tif 000068
【０２６５】
（式中、Ｒ１およびＲ２は本明細書中に定義されているとおりであり、Ｕ＊は臭素である）を有する。
【０２６６】
該開始化合物がアセタールおよびアルデヒド化合物の混合物：
【化６５】
2012520879.tif 000069
【０２６７】
として与えられた場合、前記方法は更に、未保護アルデヒド基を、工程（ｂ）の生成物上に存在するアセタール基に変換して式（Ｉ）のコンジュゲートを得る追加的工程（ｃ）を含む。当業者は、この変換を促進するために多種多様な反応条件が使用可能であり、したがって、多種多様な反応条件が想定されると理解するであろう。全般的には、Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｍ．Ｂ．ＳｍｉｔｈおよびＪ．Ｍａｒｃｈ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，２００１；Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｉｏｎｓ，Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９；ならびにＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９を参照されたい。ある実施形態においては、工程（ｃ）の反応は、工程（ｂ）の生成物を酸およびアルコール（例えば、ＨＯＲ１、ＨＯＲ２）で処理することにより達成される。典型的な酸には、塩酸、硫酸、リン酸、ポリリン酸、メタンスルホン酸、イートン（Ｅａｔｏｎ’ｓ）試薬（Ｐ２Ｏ５／ＭｅＳＯ３Ｈ）、クロロスルホン酸、ショウノウスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸が含まれる。典型的なアルコールには、メタノール、エタノール、イソプロパノール、エタン−１，２−ジオール、プロパン−１，３−ジオールなどが含まれる。
【０２６８】
前記方法は更に、例えばｐＨ中和工程（工程ｄ）および／またはイオン交換工程（工程ｅ）のような追加的工程を含みうる。
【０２６９】
ある実施形態においては、前記の１以上の単量体は、式：
【化６６】
2012520879.tif 000070
【０２７０】
（式中、Ｒｃは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なヒドロキシル保護基またはカチオン基であり、Ｒｘは本明細書中に定義されているとおりである）を有する。ある実施形態においては、Ｒｃは水素または場合により置換されていてもよい脂肪族基である。ある実施形態においては、Ｒｃは水素である。ある実施形態においては、Ｒｃは、場合により置換されていてもよい脂肪族基である。
【０２７１】
ある実施形態においては、工程（ａ）は単一の単量体を与える。ある実施形態においては、工程（ａ）は２つの（タイプの）単量体を与える。
【０２７２】
典型的な単量体には、アクリル酸（Ｘが−ＯＨであり、ＲｘがＨである場合）、ｔｅｒｔ−ブチルアクリラート（Ｘが−ＯｔＢｕであり、ＲｘがＨである場合）、イソプロピルアクリラート（Ｘが−ＯｉＰｒであり、ＲｘがＨである場合）、メタクリラート（Ｘが−ＯＭｅであり、ＲｘがＨである場合）、ｔｅｒｔ−ブチルメタクリラート（Ｘが−ＯｔＢｕであり、Ｒｘが−ＣＨ３である場合）、およびイソプロピルメタクリラート（Ｘが−ＯｉＰｒであり、Ｒｘが−ＣＨ３である場合）が含まれるが、これらに限定されるものではない。ある実施形態においては、工程（ａ）の単量体の少なくとも１つは、アクリル酸、ｔｅｒｔ−ブチルアクリラート、イソプロピルアクリラート、メタクリラートまたはｔｅｒｔ−ブチルメタクリラートおよびイソプロピルメタクリラートから選択される。ある実施形態においては、工程（ａ）は、アクリル酸、ｔｅｒｔ−ブチルアクリラート、イソプロピルアクリラート、メタクリラートまたはｔｅｒｔ−ブチルメタクリラートおよびイソプロピルメタクリラートから選択される単一の単量体を含む。ある実施形態においては、該単量体はアクリル酸またはｔｅｒｔ−ブチルアクリラートである。ある実施形態においては、該単量体はアクリル酸である。ある実施形態においては、該単量体はｔｅｒｔ−ブチルアクリラートである。
【０２７３】
ある実施形態においては、工程（ａ）の触媒は金属触媒である。ある実施形態においては、工程（ａ）の金属触媒は遷移金属触媒である。ある実施形態においては、工程（ａ）の遷移金属触媒は銅触媒である。ある実施形態においては、該銅触媒はＣｕＣｌ、ＣｕＢｒ、ＣｕＩ、ＣｕＢｒ２またはＣｕＣｌ２である。
【０２７４】
ある実施形態においては、工程（ａ）における試薬は更に、リガンドを含む。典型的なリガンドには、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−ペンタメチルジエチレントリアミン（ＰＭＤＥＴＡ）、トリス［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミン（Ｍｅ６ＴＲＥＮ）、トリス［（２−ピリジル）メチル］アミン（ＴＰＭＡ）、４，４’−ジ−（５−ノニル）−２，２’−ジピリジル（ｄＮｂｐｙ）またはＮ−（ピリジン−２−イルメチレン）オクタン−１−アミンが含まれるが、これらに限定されるものではない。ある実施形態においては、該リガンドＰＭＤＥＴＡまたはＮ−（ピリジン−２−イルメチレン）オクタン−１−アミンである。
【０２７５】
ある実施形態においては、工程（ｂ）は更に、該混合物を加熱することを含む。ある実施形態においては、工程（ｂ）は更に、該混合物を約３５℃〜約１００℃の範囲で加熱することを含む。ある実施形態においては、工程（ｂ）は更に、該混合物を約４０℃〜約９０℃の範囲で加熱することを含む。
【０２７６】
ｉｉ．フリーラジカル重合法
もう１つの態様においては、本開示は、
（ａ）フリーラジカル開始剤と１以上の単量体との混合物を準備し、
（ｂ）該混合物を重合させ、
（ｃ）連鎖停止剤を加えて重合体を得る工程を含む、式（Ｉ）：
【化６７】
2012520879.tif 000071
【０２７７】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｚ、Ｘ、ＹおよびＺは本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートの製造方法を提供し、ここで、該単量体は、式：
【化６８】
2012520879.tif 000072
【０２７８】
（式中、ＸおよびＲｘは本明細書中に定義されているとおりである）で表され、該連鎖停止剤は、式：
【化６９】
2012520879.tif 000073
【０２７９】
（式中、Ｑは、−ＳＨ、−ＯＨまたは−ＮＨ２から選択される）の化合物またはそれらの混合物である。
【０２８０】
ある実施形態においては、前記の１以上の単量体は、式：
【化７０】
2012520879.tif 000074
【０２８１】
（式中、Ｒｃは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なヒドロキシル保護基またはカチオン基である）を有する。ある実施形態においては、Ｒｃは水素または場合により置換されていてもよい脂肪族基である。ある実施形態においては、Ｒｃは水素である。ある実施形態においては、Ｒｃは、場合により置換されていてもよい脂肪族基である。
【０２８２】
ある実施形態においては、工程（ａ）は単一の単量体を与える。ある実施形態においては、工程（ａ）は２つの（タイプの）単量体を与える。
【０２８３】
典型的な単量体には、アクリル酸（Ｘが−ＯＨであり、ＲｘがＨである場合）、ｔｅｒｔ−ブチルアクリラート（Ｘが−ＯｔＢｕであり、ＲｘがＨである場合）、イソプロピルアクリラート（Ｘが−ＯｉＰｒであり、ＲｘがＨである場合）、メタクリラート（Ｘが−ＯＭｅであり、ＲｘがＨである場合）、ｔｅｒｔ−ブチルメタクリラート（Ｘが−ＯｔＢｕであり、Ｒｘが−ＣＨ３である場合）、およびイソプロピルメタクリラート（Ｘが−ＯｉＰｒであり、Ｒｘが−ＣＨ３である場合）が含まれるが、これらに限定されるものではない。ある実施形態においては、工程（ａ）の単量体の少なくとも１つは、アクリル酸、ｔｅｒｔ−ブチルアクリラート、イソプロピルアクリラート、メタクリラートまたはｔｅｒｔ−ブチルメタクリラートおよびイソプロピルメタクリラートから選択される。ある実施形態においては、工程（ａ）は、アクリル酸、ｔｅｒｔ−ブチルアクリラート、イソプロピルアクリラート、メタクリラートまたはｔｅｒｔ−ブチルメタクリラートおよびイソプロピルメタクリラートから選択される単一の単量体を含む。ある実施形態においては、該単量体はアクリル酸またはｔｅｒｔ−ブチルアクリラートである。ある実施形態においては、該単量体はアクリル酸である。ある実施形態においては、該単量体はｔｅｒｔ−ブチルアクリラートである。
【０２８４】
ある実施形態においては、該連鎖停止剤は、式：
【化７１】
2012520879.tif 000075
【０２８５】
（式中、Ｑは−ＳＨから選択される）の化合物またはそれらの混合物である。
【０２８６】
ある実施形態においては、該連鎖停止剤は、式：
【化７２】
2012520879.tif 000076
【０２８７】
（式中、Ｑは−ＳＨから選択される）の化合物またはその混合物である。
【０２８８】
該連鎖停止剤がアセタールとアルデヒドとの混合物：
【化７３】
2012520879.tif 000077
【０２８９】
として与えられた場合、前記方法は更に、未保護アルデヒド基を、工程（ｃ）の生成物上に存在するアセタール基に変換して式（Ｉ）のコンジュゲートを得る追加的工程（ｄ）を含む。当業者は、この変換を促進するために多種多様な反応条件が使用可能であり、したがって、多種多様な反応条件が想定されると理解するであろう。全般的には、Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｍ．Ｂ．ＳｍｉｔｈおよびＪ．Ｍａｒｃｈ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，２００１；Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｉｏｎｓ，Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９；ならびにＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９を参照されたい。ある実施形態においては、工程（ｃ）の反応は、工程（ｂ）の生成物を酸およびアルコール（例えば、ＨＯＲ１、ＨＯＲ２）で処理することにより達成される。典型的な酸には、塩酸、硫酸、リン酸、ポリリン酸、メタンスルホン酸、イートン（Ｅａｔｏｎ’ｓ）試薬（Ｐ２Ｏ５／ＭｅＳＯ３Ｈ）、クロロスルホン酸、ショウノウスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸が含まれる。典型的なアルコールには、メタノール、エタノール、イソプロパノール、エタン−１，２−ジオール、プロパン−１，３−ジオールなどが含まれる。
【０２９０】
前記方法は更に、例えばｐＨ中和工程（工程ｅ）および／またはイオン交換工程（工程ｆ）のような追加的工程を含みうる。
【０２９１】
ある実施形態においては、該フリーラジカル開始剤は光開始剤であり、工程（ｂ）は、該反応混合物を光にさらして重合を誘発させることを含む。ある実施形態においては、該フリーラジカル開始剤は熱開始剤であり、工程（ｂ）は、該反応混合物を加熱して重合を誘発させることを含む。
【０２９２】
典型的な光開始因子には、アセトフェノン、ジフェニル（２，４，６−トリメチルベンゾイル）ホスフィンオキシド、４，４’−ジメトキシベンゾイン、アントラキノン、アントラキノン−２−スルホン酸ナトリウム塩、ベンゼン−クロム（０）トリカルボニル、４−（Ｂｏｃ−アミノメチル）フェニルイソチオシアナート、ベンゾイン、ベンゾインエチルエーテル、ベンゾインイソブチルエーテル、ベンゾインメチルエーテル、ベンゾフェノン、ベンゾフェノン−３，３’，４，４’−テトラカルボン酸ジアンヒドリド、４−ベンゾイルビフェニル、２−ベンジル−２−（ジメチルアミノ）−４’−モルホリノブチロフェノン、４，４’−ビス（ジエチルアミノ）ベンゾフェノン、（±）−ショウノウキノン、２−クロロチオキサンテン−９−オン、５−ジベンゾスベレノン、２，２’−ジエトキシアセトフェノン、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２−ジメトキシ−２−フェニルアセトフェノン、４−（ジメチルアミノ）ベンゾフェノン、４，４’−ジメチルベンジル、３，４−ジメチルベンゾフェノン、４’−エトキシアセトフェノン、２−エチルアントラキノン、フェロセン、３’−ヒドロキシアセトフェノン、４’−ヒドロキシアセトフェノン、３−ヒドロキシベンゾフェノン、４−ヒドロキシベンゾフェノン、１−ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン、２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオフェノン、２−メチルベンゾフェノン、３−メチルベンゾフェノン、９，１０−フェナントレンキノン、４’−フェノキシアセトフェノン、チオキサンテン−９−オン、トリアリールスルホニウムヘキサフルオロホスファート塩、３−メルカプト−１−プロパノール、１１−メルカプト−１−ウンデカノール、１−メルカプト−２−プロパノールおよび３−メルカプト−２−ブタノールが含まれる。
【０２９３】
典型的な熱開始剤には、４，４’−アゾビス（４−シアノ吉草酸）（ＶＡＳＯ  ６８）、１，１’−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（ＡＣＢＮ）、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオニトリル）（ＡＩＢＮ）、ベンゾイルペルオキシド、２，２−ビス（ｔｅｒｔ−ブチルペルオキシ）ブタン、２，５−ビス（ｔｅｒｔ−ブチルペルオキシ）−２，５−ジメチルヘキサン、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド、ｔｅｒｔ−ブチルペルアセタート、クメンヒドロペルオキシド、ｔｅｒｔ−ブチルペルオキシベンゾアート、ラウロイルペルオキシドおよびジクミルペルオキシドが含まれる。
【０２９４】
ある実施形態においては、該フリーラジカル開始剤は熱開始剤である。ある実施形態においては、該フリーラジカル開始剤は、４，４’−アゾビス（４−シアノ吉草酸）（ＶＡＳＯ  ６８）、１，１’−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（ＡＣＢＮ）および２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオニトリル）（ＡＩＢＮ）から選択される熱開始剤である。ある実施形態においては、該フリーラジカル開始剤は４，４’−アゾビス（４−シアノ吉草酸）（ＶＡＳＯ  ６８）である。
【０２９５】
ある実施形態においては、工程（ｂ）は更に、該混合物を加熱することを含む。ある実施形態においては、工程（ｂ）は更に、該混合物を約３５℃〜約１００℃の範囲で加熱することを含む。ある実施形態においては、工程（ｂ）は更に、該混合物を約４０℃〜約９０℃の範囲で加熱することを含む。ある実施形態においては、工程（ｂ）は更に、該混合物を約４０℃〜約７０℃の範囲で加熱することを含む。ある実施形態においては、工程（ｂ）は更に、該混合物を約６０℃に加熱することを含む。
【０２９６】
２．式（Ｉ）のコンジュゲートならびに式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のコンジュゲートの修飾
式（Ｉ）のコンジュゲートは酸単量体（ＸがＯＨである場合）から製造されることが可能であり、得られたコンジュゲートは適当な塩基（例えば、ＬｉＯＨ、ＮａＯＨ、ＫＯＨなど）で処理されて、そのコンジュゲートの、部分的または完全に変換された塩（ＸがＯＲｃであり、ＲｃがＨまたはカチオンである）、例えばナトリウム（Ｎａ）塩を与えうると理解されるであろう。
【０２９７】
一般に、該重合体鎖に沿った多数の基は酸または塩基形態でありうる。例えば、式（Ｉ）のコンジュゲートは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の−ＣＯ２Ｈ基を含みうる。１つの実施形態においては、酸−ＣＯ２Ｈ基からナトリウム塩への変換率が少なくとも５０％でナトリウム塩形態が生成される。１つの実施形態においては、酸−ＣＯ２Ｈ基からナトリウム塩への変換率が少なくとも６０％でナトリウム塩形態が生成される。１つの実施形態においては、酸−ＣＯ２Ｈ基からナトリウム塩への変換率が少なくとも７０％でナトリウム塩形態が生成される。１つの実施形態においては、酸−ＣＯ２Ｈ基からナトリウム塩への変換率が少なくとも８０％でナトリウム塩形態が生成される。１つの実施形態においては、酸基からナトリウム塩への変換率が少なくとも９０％でナトリウム塩形態が生成される。１つの実施形態においては、酸基からナトリウム塩への変換率が１００％でナトリウム塩形態が生成される。
【０２９８】
したがって、１つの態様においては、本開示は、
（ａ）Ｘが−ＯＲｃであり、Ｒｃが水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘテロアリールであるコンジュゲートをフリーラジカル重合法またはＡＴＲＰ法により前記のとおりに準備し、
（ｂ）該コンジュゲートを適当な塩基で処理する工程を含む、式：
【化７４】
2012520879.tif 000078
【０２９９】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｚ、Ｘ、ＹおよびＺは本明細書中に定義されているとおりであり、各場合のＲｃは、独立して、水素またはカチオンであり、ただし、全てのＲｃが水素となることはできない）のコンジュゲートの製造方法を提供する。
【０３００】
また、該重合体鎖に沿って付与された−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ基を、求核基（例えば、ヒドロキシル基、アミノ基）を含有する１以上の化合物と反応させて、そのような化合物を該重合体鎖に沿って共有的にコンジュゲート化させることが可能であると理解されるであろう。
【０３０１】
例えば、ある実施形態においては、該重合体鎖に沿って付与された−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ基をアフィニティーリガンド（例えば、糖またはアミノ糖）と反応させて、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃまたは−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｄ付属基（ここで、ＲｃおよびＲｄは、前記および本明細書中に定義されているとおりのアフィニティーリガンドである）を生成させることが可能である。
【０３０２】
ある実施形態においては、該重合体鎖に沿って付与された−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ基へのアフィニティーリガンドの共有的コンジュゲート化は、カップリング剤、少なくとも１つの遊離ヒドロキシル（−ＯＨ）または遊離アミノ（−ＮＨ２）基を含有するアフィニティーリガンド、および少なくとも１つの付属−ＣＯ２Ｈ基を含有するコンジュゲートを一緒に反応させることにより達成される。ある実施形態においては、該カップリング剤はペプチドカップリング剤である。典型的なペプチドカップリング剤には、ＤＣＣ、ＢＯＰ、ＢｒＯＰ、ＡＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＰｙＡＯＰ、ＰｙＢｒｏＰ、ＰｙＣｌｏＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＥＤＣ／ＨＯＢＴまたは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＡＣ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。他の典型的なペプチドカップリング試薬を図４に示す。
【０３０３】
したがって、もう１つの態様においては、本開示は、
（ａ）Ｘが−ＯＲｃであり、Ｒｃが水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールまたはカチオン基であるコンジュゲートをフリーラジカル重合法またはＡＴＲＰ法により前記のとおりに準備し、
（ｂ）該コンジュゲートを化合物ＨＮ（Ｒｄ）２（ここで、各Ｒｄは、独立して、水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、適当なアミノ保護基またはアフィニティーリガンドである）で処理する工程を含む、式：
【化７５】
2012520879.tif 000079
［式中、前記式に示される基：
【化７６】
2012520879.tif 000080
【０３０４】
は、基：
【化７７】
2012520879.tif 000081
【０３０５】
（式中、（ｍ＋ｐ）の和はｎに等しい）の混合物に対応し、Ｒ１、Ｒ２、Ｚ、Ｒｘ、Ｘ、Ｙ、ｍ、ｎおよびｐは前記および本明細書中に定義されているとおりである］の製造方法を提供する。
【０３０６】
式（ＩＩ）の重合体は、適当な脱保護条件（例えば、酸触媒）下で該アセタール部分を除去して遊離アルデヒド（−ＣＨＯ）部分を得ることにより、前記および本明細書中に記載されている式（Ｉ）の重合体のいずれかから製造されうる。当業者は、この変換を促進するために多種多様な反応条件が使用可能であり、したがって、多種多様な反応条件が想定されると理解するであろう。全般的には、Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｍ．Ｂ．ＳｍｉｔｈおよびＪ．Ｍａｒｃｈ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，２００１；Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｉｏｎｓ，Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９；ならびにＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９を参照されたい。ある実施形態においては、該アセタールは、式（Ｉ）のコンジュゲートを酸で処理することにより除去される。典型的な酸には、塩酸、硫酸、リン酸、ポリリン酸、メタンスルホン酸、イートン（Ｅａｔｏｎ’ｓ）試薬（Ｐ２Ｏ５／ＭｅＳＯ３Ｈ）、クロロスルホン酸、ショウノウスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸が含まれる。
【０３０７】
したがって、もう１つの態様においては、本開示は、式（ＩＩ）：
【化７８】
2012520879.tif 000082
【０３０８】
（式中、Ｒ１、Ｘ、Ｙ、Ｚおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートの製造方法であって、
（ａ）式（Ｉ）：
【化７９】
2012520879.tif 000083
【０３０９】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｚ、Ｘ、ＹおよびＺは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを準備し、
（ｂ）該コンジュゲートを適当な脱保護条件下で処理して式（ＩＩ）のコンジュゲートを得る製造方法を提供する。
【０３１０】
式（ＩＩＩ）のコンジュゲートは、薬物または検出可能標識を式（ＩＩ）のコンジュゲートに共有的にコンジュゲート化させることにより製造されうる。ある実施形態においては、このカップリング反応は、薬物または検出可能標識上に存在する求核基（例えば、ヒドロキシル基、アミノ基、チオール基）を、式（ＩＩ）のコンジュゲート上に存在する末端アルデヒドと反応させることにより達成される。ある実施形態においては、該薬物（または検出可能標識）は少なくとも１つの遊離アミノ基を有し、該薬物（または検出可能標識）は還元的アミノ化により式（ＩＩ）のコンジュゲートにカップリングされる。
【０３１１】
例えば、該薬物はインスリン分子またはその保護形態（例えば、この場合、ある与えられたインスリン残基を該重合体と選択的に反応させるために該インスリン分子内の幾つかのアミンが保護されている）であることが可能であり、該インスリン分子上に存在する遊離アミン基は（還元的アミノ化により）式（ＩＩ）のコンジュゲートの末端アルデヒド部分と反応して式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを与えうる。当業者は、この変換を促進するために多種多様な反応条件が使用可能であり、したがって、多種多様な反応条件が想定されると理解するであろう。全般的には、Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｍ．Ｂ．ＳｍｉｔｈおよびＪ．Ｍａｒｃｈ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，２００１；Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｉｏｎｓ，Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９；ならびにＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９を参照されたい。ある実施形態においては、該還元的アミノ化工程は、ナトリウムシアノボロヒドリド（ＮａＢＨ３ＣＮ）またはナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（ＮａＢＨ（ＯＣＯＣＨ３）３）を使用して行われる。ある実施形態においては、該還元的アミノ化は、イミン形成およびそれに続く還元（例えば、ＮａＢＨ４、水素添加など）を含む２工程法である。
【０３１２】
したがって、さらにもう１つの態様においては、本開示は、式（ＩＩＩ）：
【化８０】
2012520879.tif 000084
【０３１３】
（式中、------、Ｗ、Ｚ、Ｒｘ、Ｘ、Ｙおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートの製造方法であって、
（ａ）式（ＩＩ）：
【化８１】
2012520879.tif 000085
【０３１４】
（式中、Ｒｘ、Ｘ、Ｙ、Ｚおよびｎは前記および本明細書中に定義されているとおりである）のコンジュゲートを準備し、
（ｂ）少なくとも１つの遊離アミノ基を含む薬物または検出可能標識を準備し、
（ｃ）該アミノ基を還元的アミノ化により該アルデヒドにカップリングさせて式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを得ることを含む製造方法を提供する。
【０３１５】
ある実施形態においては、該方法は更に、非共有結合した薬物または検出可能標識を除去することを含む（工程ｄ）。ある実施形態においては、この精製工程（すなわち、除去工程）は、クロマトグラフィー精製（例えば、逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーおよび／またはサイズ排除クロマトグラフィーによる精製）である。ある実施形態においては、非共有結合薬または検出可能標識を除去するために逆相クロマトグラフィーを用いる。ある実施形態においては、非共有結合薬または検出可能標識を除去するためにイオン交換クロマトグラフィーを用いる。ある実施形態においては、非共有結合薬または検出可能標識を除去するためにサイズ排除クロマトグラフィーを用いる。
【０３１６】
多価架橋剤
１つの態様においては、本開示は、本発明のコンジュゲートを多価架橋剤と一緒にすることにより製造された架橋マテリアルを提供する。以下の節では、この目的に使用されうる典型的な架橋剤を説明する。
【０３１７】
後記で更に詳しく説明し図１０に例示するとおり、架橋マテリアル１０は、標的分子（例えば、グルコース）に応答して、制御可能な様態でコンジュゲート２０を放出しうる。コンジュゲート２０のアフィニティーリガンド４０に非共有結合することによりコンジュゲート２０を架橋して架橋マテリアル１０を形成する多価架橋剤３０と、コンジュゲート２０とを一緒にすることにより、該マテリアルは製造される。多価架橋剤３０とアフィニティーリガンド４０との間の非共有結合は、過剰量の標的分子（例えば、グルコース）の存在下、競合的に解離される。
【０３１８】
１．ポリペプチド架橋剤
種々の実施形態においては、該多価架橋剤はポリペプチドを含みうる。後記で更に詳細に説明するとおり、適当な多価ポリペプチドは天然に存在するが（例えば、種々のレクチン）、複数の一価結合性タンパク質（例えば、一価レクチン、ペプチドアプタマー、抗体、細胞膜受容体など）を互いに連結させることによっても構築されうる。更に他の多価ポリペプチドは、これらのタンパク質の結合性断片を化学的に連結させることによっても構築されうる。
【０３１９】
種々の一価および多価リガンド結合性タンパク質は、多数のレクチン、葉酸結合性タンパク質、チロキシン結合性グロブリン、ラクトフェリンなどを含め、（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから）商業的に入手可能である。ＤｅＷｏｌｆおよびＢｅｓｔは、リガンド結合性タンパク質、例えばビオチン結合性タンパク質、脂質結合性タンパク質／疎水性分子の輸送体、細菌ペリプラズム結合性タンパク質、レクチン、血清アルブミン、免疫グロブリン、不活性化酵素、におい物質結合性タンパク質、免疫抑制物質結合性タンパク質ならびにホスファートおよびスルファート結合性タンパク質の総説を記載している（Ｄｅ  ＷｏｌｆｅおよびＢｅｓｔ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｖ．５２：２０７−２３６，２０００ならびにそれにおいて引用されている参考文献を参照されたい）。種々のホルモンに対する細胞膜受容体も当技術分野において記載されている。ある実施形態においては、一価または多価結合性タンパク質は、Ｌｏｏｇｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ  ４２３：１８５−１９０，２００３に記載されているとおり、既存のリガンド結合性タンパク質の論理的コンピュータ設計およびそれに続く部位特異的突然変異誘発により合成されうる。典型的なタンパク質断片には、トランケート化（末端切断型）ＭＢＰ（Ｅｄａら，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６２：１３２６−１３３１，１９９８）、トランケート化コングルチニン（Ｅｄａら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３１６：４３，１９９６）、トランケート化ＳＰ−Ｄ（Ｅｄａら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３２３：３９３，１９９７）および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のグルコース／ガラクトース結合性タンパク質（Ｓａｌｉｎｓら，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９４：１９−２６，２００１）が含まれる。
【０３２０】
ａ．レクチン
ある実施形態においては、多価架橋剤には一価または多価レクチンが含まれうる。後記で更に詳細に説明するとおり、ある実施形態においては、該レクチンを化学修飾することが有利でありうる。糖標的分子（例えば、グルコース）に応答するように設計されたマテリアルにおける使用に、レクチンは特に適している。レクチンは、種子、根、樹皮、真菌、細菌、海草、海綿動物、軟体動物、魚卵、脊椎動物および下等脊椎動物の体液ならびに哺乳類細胞膜を含む種々の天然源から単離されている（例えば、Ｔｈｅ  Ｌｅｃｔｉｎｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌｉｅｎｅｒら編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６を参照されたい）。いくつかのレクチンは組換え法によっても製造されている（例えば、ＳｔｒｅｉｃｈｅｒおよびＳｈａｒｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．３６３：４７−７７，２００３ならびにＵＳ  ２００６／０２４７１５４を参照されたい）。前記のとおり、レクチンは高い特異性で糖および多糖に結合する。例えば、マンノースまたはグルコース残基のみに結合するレクチンもあれば、ガラクトース残基のみを認識するレクチンもある。特定の残基が末端位置に存在することを要するレクチンもあれば、多糖鎖内の残基に結合するレクチンもある。特異的アノマー構造を要するレクチンもあれば、特異的糖配列を認識するレクチンもある。レクチンの構造および特性は文献に詳細に記載されている。最近の総説としては、Ｌｅｃｔｉｎｓ，ＳｈａｒｏｎおよびＬｉｓ編，Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，２００３；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｌｅｃｔｉｎｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ編，Ｗｉｌｅｙ，２０００；ならびにＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｌａｎｔ  Ｌｅｃｔｉｎｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖａｎ  Ｄａｍｍｅら編，Ｗｉｌｅｙ，１９９８を参照されたい。典型的なレクチンには、カルネキシン、カルレチクリン、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ガレクチン（ガラクトース結合性レクチン）、ミエリン関連糖タンパク質、Ｎ−アセチルグルコサミン受容体、セレクチン、シアロアドヘシン、アグレカン、アシアロ糖タンパク質受容体、ＣＤ９４、コレクチン（マンノース結合性レクチン）、マンノース受容体、ベルシカン、アブリン、リシン、コンカナバリンＡ、フィトヘマグルチニンおよびアメリカヤマゴボウ分裂促進因子が含まれる。種々の実施形態においては、植物レクチンのヒト類似体が使用されうる。これらには、ヒトマンナン結合性タンパク質（ＭＢＰ；マンナン結合性レクチンとも称される；Ｓｈｅｒｉｆｆら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１：７８９−７９４（１９９４）；Ｄｕｍｅｓｔｒｅ−Ｐｅｒａｒｄら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３９：４６５−４７３（２００２））、ヒト肺胞界面活性物質プロテインＡ（ＳＰ−Ａ，Ａｌｌｅｎら，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，６７：４５６３−４５６９（１９９９））、ヒト肺胞界面活性���質プロテインＤ（ＳＰ−Ｄ，Ｐｅｒｓｓｏｎら，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６５：５７５５−５７６０（１９９０））、ＣＬ−４３（ヒト血清タンパク質）およびコングルチニンが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３２１】
ｂ．ペプチドアプタマー
ある実施形態においては、多価架橋剤には一価ペプチドアプタマーが含まれうる。当技術分野でよく知られているとおり、ペプチドアプタマーは、タンパク質スカフォールド内で融合した可変リガンド結合性ペプチドループからなる（例えば、Ｈｏｐｐｅ−ＳｅｙｌｅｒおよびＢｕｔｚ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７８：４２６−４３０，２０００ならびにＣｒａｗｆｏｒｄら，Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ２：７２−７９，２００３を参照されたい）。該可変ループは、典型的には、約１０〜２０アミノ酸を含む。種々のスカフォールドタンパク質が使用されうる。一般に、何らかの野生型機能を媒介するスカフォールドの領域を該ペプチドループが破壊するように、挿入部位は選択される［例えば、該可変ループが還元活性部位（野生型タンパク質における−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−ループ）内に挿入されている細菌タンパク質チオレドキシンＡ］。標的分子に対して適当なアフィニティーを有するペプチドアプタマーは、いずれかの公知方法を用いて製造され選択されうる。例えば、酵母ツーハイブリッドライブラリー、酵母発現ライブラリー、細菌発現ライブラリーおよび／または哺乳類細胞内の発現のためのレトロウイルスライブラリーが使用されうる。
【０３２２】
種々の実施形態においては、ペプチドアプタマーはアフィニティークロマトグラフィーにより選択されうる。そのような実施形態においては、ライブラリー内のペプチドアプタマーを標的分子にさらし、該標的に結合しないものを除去する。ついで、結合したペプチドアプタマーを溶出させ、後続のラウンドの選択のためにクローニングした。ついでこれらのペプチドアプタマー（例えば、第１ラウンドの選択において標的分子に対する最高アフィニティーを有するペプチドアプタマー）の１以上から新たなライブラリーを作製し、所望の結合アフィニティーおよび／または特異性を有するペプチドアプタマーが特定されるように溶出条件のストリンジェンシーを増加させ又は修飾した。種々の実施形態においては、該選択方法は、標的分子に対する高いアフィニティーを有するペプチドアプタマーを選択するために溶出条件のストリンジェンシーを徐々に増加させる工程を含みうる。種々の実施形態においては、該選択方法は、標的分子に対する所望の特異性を有するペプチドアプタマーを選択するために溶出条件を変更する工程を含みうる。種々の実施形態においては、該選択方法は、標的分子に対する類似したアフィニティーおよび／または特異性を有するペプチドアプタマーをそれぞれが含む一群のサブライブラリー（または「プール」）を与えうる。種々の実施形態においては、該選択方法は単一のペプチドアプタマー配列（または「モノクローナル」）を与えうる。これらのペプチドアプタマー配列はいずれも、更なる組換え発現のためにクローニングされうると理解されるであろう。
【０３２３】
ｃ．多価架橋剤の作製
多価架橋剤は、２以上の一価結合性タンパク質を単一の構築物へと共有的または非共有的に連結することにより作製されうる。典型的には、２以上のタンパク質（それらは同じ又は異なる配列を有しうる）が互いに直接的に（例えば、カップリング剤により）、またはフレームワークを介して間接的に連結されうる。種々の実施形態においては、２、３、４、５、６、７または８個またはそれ以上のタンパク質が単一の構築物へと合体されうる。種々の実施形態においては、そのような２、３、４、５、６、７または８個またはそれ以上のタンパク質は同一配列を有しうる。これらのアプローチのいずれかは、該タンパク質が、カップリング前に（例えば、付属反応性基を含むように）化学修飾されることを要しうると理解されるであろう。また、本開示の多価架橋剤は特定のカップリング反応またはフレームワークに限定されないと理解されるであろう（例えば、それらは、重合体および／または非重合体構造を含むフレームワークを使用して製造されうる）。さらに、該フレームワークは直鎖状、分枝状、超分枝状および／またはこれらの組合せでありうると理解されるであろう。
【０３２４】
種々の実施形態においては、該多価結合性タンパク質は互いに又はフレームワークに共有結合される。そのような実施形態においては、該タンパク質は直接的に（すなわち、介在化学基を伴わずに）連結されることが可能であり、あるいはスペーサー（例えば、それらのタンパク質の間または該タンパク質とフレームワークとの間の何らかの物理的分離をもたらす共有結合鎖またはカップリング剤）を介して間接的に連結されることが可能である。タンパク質は、アミド、エステル、エーテル、イソ尿素およびイミン結合（これらに限定されるものではない）を含む多数の化学結合により、互いに又はフレームワークに共有結合されうると理解されるべきである。
【０３２５】
種々の実施形態においては、２以上の多価結合性タンパク質が互いに又はフレームワークに非共有結合されうる。ある実施形態においては、ヒト血清中の該非共有結合の解離定数（Ｋｄ）は１ｐｍｏｌ／Ｌ未満である。例えば、当技術分野でよく知られているとおり、非共有結合性リガンド−受容体ペア（限定的なものではないが例えば、ビオチン−アビジンに基づくペア）により、タンパク質は互いに又はフレームワークに非共有結合されうる。そのような実施形態においては、該リガンド受容体ペアの一方のメンバーは一方のタンパク質に共有結合され、該ペアの他方のメンバーは他方のタンパク質またはフレームワークに共有結合される。該タンパク質（またはタンパク質およびフレームワーク）が一緒にされると、該リガンドとその受容体との間の強力な非共有的相互作用が該タンパク質を互いに（または該フレームワークに）非共有結合させる。典型的なリガンド／受容体ペアには、タンパク質／補因子および酵素／基質ペアが含まれる。一般に使用されるビオチン／アビジンペアのほかに、これらには、ビオチン／ストレプトアビジン、ジゴキシゲニン／抗ジゴキシゲニン、ＦＫ５０６／ＦＫ５０６−結合性タンパク質（ＦＫＢＰ）、ラパマイシン／ＦＫＢＰ、シクロフィリン／シクロスポリンおよびグルタチオン／グルタチオントランスフェラーゼペアが含まれるが、これらに限定されるものではない。他の適当なリガンド／受容体ペア、例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ｃ−ｍｙｃ、ＦＬＡＧ（登録商標）ならびに更にＡｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，Ｋｅｓｓｌｅｒ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９０のＫｅｓｓｌｅｒ，ｐｐ．１０５−１５２；Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｐａｓｃａｌ  Ｂａｉｌｌｏｎ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２０００；およびＩｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｈｅｒｍａｎｓｏｎら，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９２に記載されているもの（これらに限定されるものではない）のようなエピトープタグとペアにされたモノクローナル抗体も、当業者に認識されるであろう。
【０３２６】
２．ポリヌクレオチド架橋剤
種々の実施形態においては、該多価架橋剤はポリヌクレオチドアプタマーを含みうる。該ポリヌクレオチドアプタマーは標的分子に結合し、多価である（すなわち、２以上の標的分子に結合可能である）。一般に、多価アプタマーは、まず、標的分子に対するそれらの結合特性に基づいて作製される。当技術分野でよく知られているとおり、インビトロ選択の方法により種々の標的分子に対するアプタマーが作製されうる。ＥｌｌｉｎｇｔｏｎおよびＳｚｏｓｔａｋ（１９９０）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４６：８１８；ＴｕｅｒｋおよびＧｏｌｄ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：５０５；ならびに米国特許第５，５８２，９８１号を参照されたい。２００９年３月２０日付け出願の米国仮出願第６１／１６２、０９２号および２０１０年１月２７日付け出願の対応ＰＣＴ出願（それらのそれぞれを参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されているグルコース結合性ポリヌクレオチドアプタマーも参照されたい。
【０３２７】
典型的には、該方法は、プライマーとして働く、一定の５’および３’末端に隣接した一定の長さのランダムに作製されたポリヌクレオチド配列からなるライブラリーの合成から開始する。ある実施形態においては（例えば、アプタマーを最適化する場合）、標的分子に結合することが知られている配列から開始し、該出発配列からの一定範囲の変化（例えば、ランダムな組合せの単一突然変異）を示す一群のポリヌクレオチドを含むライブラリーを作製することが可能であろう。ついで該ライブラリー内の配列を標的分子にさらし、標的に結合しないものを（例えば、アフィニティークロマトグラフィーにより）除去する。ついで結合配列を溶出させ、増幅して（例えば、クローニングおよびそれに続く配列転写またはＰＣＲにより行う）、後続ラウンドの選択に備える。そのような後続ラウンドの選択においては、所望の結合アフィニティーおよび／または特異性を有する配列を特定するために、溶出条件のストリンジェンシーを増加させ又は修飾する。Ｊａｒｏｓｃｈら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３４：８６，２００６は、一定のプライマー領域を伴うことなく該方法が実施されることを可能にする方法を記載している。
【０３２８】
種々の実施形態においては、該選択方法は、標的分子に対する高いアフィニティーを有するアプタマーを選択するために溶出条件のストリンジェンシーを徐々に増加させる工程を含みうる。
【０３２９】
種々の実施形態においては、該選択方法は、標的分子に対する所望の特異性を有するアプタマーを選択するために溶出条件を（例えば、異なるアフィニティーカラムを使用することにより）変化させる工程を含みうる。
【０３３０】
種々の実施形態においては、該選択方法は、標的分子に対する類似したアフィニティーおよび／または特異性を有するペプチドアプタマーをそれぞれが含む一群のサブライブラリー（または「プール」）を与えうる。種々の実施形態においては、該選択方法は単一のアプタマー配列（または「モノクローナル」）を与えうる。種々の実施形態においては、該アプタマーはＤＮＡに基づくものである。種々の実施形態においては、該アプタマーはＲＮＡに基づくものである。種々の実施形態においては、該アプタマーは混合ＲＮＡ／ＤＮＡアプタマーである。
【０３３１】
多価架橋剤は、これらの一価アプタマーの２以上を単一の構築物へと共有的または非共有的に連結することにより作製されうる。典型的には、２以上のアプタマー（それらは同じ又は異なる配列を有しうる）が互いに直接的に（例えば、カップリング剤により）、または独立したフレームワークを介して間接的に連結されうる。種々の実施形態においては、２、３、４、５、６、７または８個またはそれ以上のアプタマーが単一の構築物へと合体されうる。種々の実施形態においては、そのような２、３、４、５、６、７または８個またはそれ以上のアプタマーは同一配列を有しうる。これらのアプローチのいずれかは、該アプタマーが、カップリング前に（例えば、付属反応性基を含むように）化学修飾されることを要しうると理解されるであろう。また、本開示のアプタマーは特定のカップリング反応またはフレームワークに限定されないと理解されるであろう（例えば、それらは、重合体および／または非重合体構造を含むフレームワークを使用して製造されうる）。さらに、該フレームワークは直鎖状、分枝状、超分枝状および／またはこれらの組合せでありうると理解されるであろう。
【０３３２】
種々の実施形態においては、該アプタマーは互いに又はフレームワークに共有結合される。そのような実施形態においては、該アプタマーは直接的に（すなわち、介在化学基を伴わずに）連結されることが可能であり、あるいはスペーサー（例えば、それらのアプタマーの間または該アプタマーとフレームワークとの間の何らかの物理的分離をもたらす共有結合鎖またはカップリング剤）を介して間接的に連結されることが可能である。アプタマーは、アミド、エステル、エーテル、イソ尿素およびイミン結合（これらに限定されるものではない）を含む多数の化学結合により、互いに又はフレームワークに共有結合されうると理解されるべきである。
【０３３３】
種々の実施形態においては、そのような２以上のアプタマーは互いに又はフレームワークに非共有結合されうる。ある実施形態においては、ヒト血清中の該非共有結合の解離定数（Ｋｄ）は１ｐｍｏｌ／Ｌ未満である。例えば、当技術分野でよく知られているとおり、非共有結合性リガンド−受容体ペア（限定的なものではないが例えば、ビオチン−アビジンに基づくペア）により、アプタマーは互いに又はフレームワークに非共有結合されうる。そのような実施形態においては、該リガンド受容体ペアの一方のメンバーは一方のアプタマーに共有結合され、該ペアの他方のメンバーは他方のアプタマーまたはフレームワークに共有結合される。該アプタマー（またはアプタマーおよびフレームワーク）が一緒にされると、該リガンドとその受容体との間の強力な非共有的相互作用が該アプタマーを互いに（または該フレームワークに）非共有結合させる。典型的なリガンド／受容体ペアには、タンパク質／補因子および酵素／基質ペアが含まれる。一般に使用されるビオチン／アビジンペアのほかに、これらには、ビオチン／ストレプトアビジン、ジゴキシゲニン／抗ジゴキシゲニン、ＦＫ５０６／ＦＫ５０６−結合性タンパク質（ＦＫＢＰ）、ラパマイシン／ＦＫＢＰ、シクロフィリン／シクロスポリンおよびグルタチオン／グルタチオントランスフェラーゼペアが含まれるが、これらに限定されるものではない。他の適当なリガンド／受容体ペア、例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ｃ−ｍｙｃ、ＦＬＡＧ（登録商標）ならびに更にＡｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，Ｋｅｓｓｌｅｒ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９０のＫｅｓｓｌｅｒ，ｐｐ．１０５−１５２；“Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）”，Ｐａｓｃａｌ  Ｂａｉｌｌｏｎ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２０００；および“Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”，Ｈｅｒｍａｎｓｏｎら，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９２に記載されているもの（これらに限定されるものではない）のようなエピトープタグとペアにされたモノクローナル抗体も、当業者に認識されるであろう。
【０３３４】
３．架橋剤の化学修飾
一般に、前記の多価架橋剤はいずれも、例えば望ましくない特性を軽減するために、化学修飾されうると理解されるべきである。
【０３３５】
ｉ．非特異的修飾
ＵＳ  ２００７／０１１０８１１において、本発明者らは、レクチンのインビボ分裂促進性を減少させるためにレクチンをＰＥＧ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｎｇ）することの利益を記載した。したがって、ある実施形態においては、多価架橋剤は１以上の化合物で共有結合的に修飾されうる。限定的なものではないが、これは、活性化ＰＥＧ化（ＰＥＧ）剤（限定的なものではないが例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド活性化ＰＥＧ、ＰＥＧプロピオン酸のスクシンイミジルエステル、ＰＥＧブタン酸のスクシンイミジルエステル、ＰＥＧアルファ−メチルブタノアートのスクシンイミジルエステルなど）、水溶性であるがＰＥＧを含有しない別の重合体、例えばポリ（ビニルアルコール）、例えばカルボジイミド試薬の使用により容易にリシンにカップリングされうる試薬、過フッ素化化合物などとの反応を含みうるであろう。当業者は、Ｌｕｎｄｂｌａｄ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００４に見出されうる包括的な総説を参照することにより他の適当な化合物を容易に認識するであろう。
【０３３６】
一般に、該化合物は、当業者に公知の多数の結合方法（例えば、アミン、カルボキシル、ヒドロキシルまたはスルフヒドリル基を介する方法）のいずれかにより多価架橋剤（例えば、分裂促進性レクチン）に結合されうる。可能な共有結合は同様に様々である（例えば、アミド結合、カルバマート結合、エステル結合、チオエーテル結合、エーテル結合、ジスルフィド結合などを含む）。例えば、ＰＥＧはアミノまたはカルボキシル基を介して簡便に結合される。遊離アミノ基を有するアミノ酸残基には、リシン残基およびＮ末端アミノ酸残基が含まれる。遊離カルボキシル基を有するアミノ酸残基には、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基およびＣ末端アミノ酸残基が含まれる。システイン残基に存在するスルフヒドリル基も、ＰＥＧ（または他の化合物）を結合させるための反応性基として用いられうる。好ましい実施形態においては、ＰＥＧはアミノ基、特に、リシン残基に存在する遊離アミノ基に共有結合される。
【０３３７】
ＰＥＧをタンパク質に直接的に結合させるための多数の方法が、Ｄｅｌｇａｄｏら，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓ．９：２４９−３０４，１９９２；Ｆｒａｎｃｉｓら，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｊ．ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌ．６８：１−１８，１９９８；米国特許第４，００２，５３１号；米国特許第５，３４９，０５２号；ＷＯ  ９５／０６０５８；およびＷＯ  ９８／３２４６６に記載されている。１つのそのような方法はトレシル化（ｔｒｅｓｙｌａｔｅｄ）モノメトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）を使用し、これは、ＭＰＥＧをトレシルクロリド（ＣｌＳＯ２ＣＨ２ＣＦ３）と反応させることにより製造される。トレシル化ＭＰＥＧはレクチン上の露出アミン基と反応する。当業者は、本発明がいずれかの特定のＰＥＧ化剤（または化合物）に限定されるものではないと認識し、当技術分野で公知の他の適当な化合物を特定しうるであろう。
【０３３８】
ある実施形態においては、ＰＥＧ（または他の化合物）は介在リンカーを介して多価架橋剤に結合されうる。例えば、米国特許第５，６１２，４６０号は、ＰＥＧをタンパク質に連結するためのウレタンリンカーを開示している。ＰＥＧは、ＭＰＥＧ−スクシンイミジルスクシナート、１，１’−カルボニルジイミダゾールで活性化されたＭＰＥＧ、ＭＰＥＧ−２，４，５−トリクロロペニルカルボナート、ＭＰＥＧ−ｐ−ニトロフェノールカルボナートおよび種々のＭＰＥＧ−スクシナート誘導体のような化合物との反応により、リンカーを介してタンパク質に結合されうる。多数の追加的なＰＥＧ誘導体、およびＰＥＧをタンパク質に結合させるための反応化学が、ＷＯ  ９８／３２４６６、および他の特許、例えば、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）、Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｓａｎ  Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）および／またはＥｎｚｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ．）に譲渡された特許に記載されている。ある範囲の適当なＰＥＧ化合物および化学を記載している、これらの商業的ＰＥＧ供給業者からのカタログが入手可能である（例えば、Ｎｅｋｔａｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ  ＣＡＴＡＬＯＧ  ２００４を参照されたい）。
【０３３９】
種々の実施形態においては、ポリペプチドに基づく架橋剤のＮ末端アルファ−アミンおよび／またはイプシロン−アミノリシン基はスクシニル化および／または、電荷分布を変化させるために、ならびにそのような変化に伴ういずれかの三次的および四次的な効果を変化させるために、アセチル化されうる。例えば、ポリペプチドは飽和酢酸ナトリウムバッファー中での過剰の無水コハク酸との反応によりスクシニル化されうる。アセチル化は、該修飾剤として無水酢酸を使用すること以外は同じ方法を用いて行われうる。例えば、該タンパク質がコンカナバリンＡである場合、アセチル化およびスクシニル化は共に、該ポリペプチド内の負電荷の密度を増加させるだけでなく、それを、生理的ｐＨにおいて、四量体ではなく二量体へと集合させる（例えば、Ａｇｒａｗａｌら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．７：４２１１−４２１８，１９６８およびＧｕｎｔｈｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７０：１０１２−１０１６，１９７３を参照されたい）。また、得られるこれらのマテリアルのインビボ安全性プロファイルは結果として著しく改善される。
【０３４０】
ｉｉ．結合部位の修飾
ある実施形態においては、該多価架橋剤を修飾するためのより特異的な代替的方法を使用することが有利でありうる。特に、本発明者らは、本開示の或る低分子量コンジュゲートが、高分子量ＰＥＧ試薬（＞５ｋＤａ）を使用して製造された高ＰＥＧ化レクチンと組合された場合に不溶性薬物運搬形を形成しないことを見出している。これは難題である。なぜなら、より低い分子量のＰＥＧ（＜５ｋＤａ）はレクチン分裂促進性において遥かに低い有効性を示すことを、本発明者らは既に見出しているからである。いずれの特定の理論にも限定されるものではないが、より大きなＰＥＧ基は、より小さな低い価数のコンジュゲートとの結合およびネットワーク形成を立体的に妨げる能力を有し、より大きな高い価数のコンジュゲートの場合にはそうでない可能性がある。これを考慮して、本発明者らは、レクチンに基づく架橋剤の安全性プロファイルを改善するために、ＰＥＧに基づかない代替的な解決策を案出した。レクチンの糖結合部位を特異的に標的化し修飾することにより、これを達成した。例えば、マンノースリガンドをコンカナバリンＡ結合部位と直接的に反応させ、未反応マテリアルを高アフィニティーリガンドクロマトグラフィーにより精製することにより、最良のＰＥＧ化レクチンの場合に匹敵する安全性プロファイルを有する架橋剤を合成することが可能であった。いずれの特定の理論にも限定されるものではないが、その機能的概念は、細胞表面が、一定の糖アフィニティー、価数およびリガンド密度を有し、一方、該コンジュゲートが、設計により調節されたこれらの特性の全てを有しうることと考えられる。したがって、レクチン結合部位内へのマンノースの取り込みは、細胞に結合して該細胞を凝集させ又は刺激する該架橋剤の能力を完全に阻止するが、該コンジュゲート上の、より高い密度のより高いアフィニティーのリガンドの取り込みは尚もゲル形成を可能にする。ある実施形態においては、低ＭＷの別個のＰＥＧ鎖での低い度合のＰＥＧ化を用いて、種々の極端な貯蔵条件下、溶解状態の多価レクチンを安定化させて、新たに操作されたコンジュゲートを相補する製造可能な安全で機能的な架橋剤を得ることが可能である。
【０３４１】
一般に、結合部位が修飾されたレクチンは、該レクチン結合部位の１つと会合しうる少なくとも１つの共有結合したアフィニティーリガンドを含むであろう。
【０３４２】
種々の実施形態においては、該修飾レクチンは、唯一の共有結合したアフィニティーリガンドを含みうる。種々の実施形態においては、該レクチンは、結合部位当たり１つの共有結合したアフィニティーリガンドを含みうる。典型的には、多価レクチンは２個または４個の結合部位（例えば、一価レクチンの二量体または四量体）を含むが、本開示は、３、５個またはそれ以上の結合部位を有するレクチンをも含む。本開示はまた、結合部位当たり２以上の共有結合したアフィニティーリガンドを有するレクチンを含む。本開示は更に、種々の数の共有結合したアフィニティーリガンドを含む及び／又は未修飾レクチンを含むレクチンの混合物を含むマテリアルを含む。
【０３４３】
任意のアフィニティーリガンドが、それが、レクチンに共有結合するとレクチンの結合部位と会合しうる限り、この目的に使用可能である。典型的には、アフィニティーリガンドは、レクチン結合部位と相互作用する認識要素、および該認識要素が該結合部位内に結合したら該アフィニティーリガンドが該レクチンに共有結合するのを可能にする反応性リンカーを含むであろう。
【０３４４】
認識要素
レクチンの対応リガンド（例えば、ＣｏｎＡの場合にはグルコースまたはマンノース）と結合に関して競合しうる任意の認識要素が、本開示のアフィニティーリガンドにおいて使用可能であろう。種々の実施形態においては、該認識要素は糖を含む。ある実施形態においては、該糖は天然糖（例えば、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、アラビノース、リボース、キシロースなど）である。ある実施形態においては、該糖は修飾糖（例えば、２’−フルオロリボース、２’−デオキシリボース、ヘキソースなど）である。ある実施形態においては、該認識要素はグルコース、スクロース、マルトース、マンノース、これらの誘導体（例えば、グルコサミン、マンノサミン、メチルグルコース、メチルマンノース、エチルグルコース、エチルマンノースなど）および／またはこれらの、より高次の組合せ（例えば、ビマンノース、直鎖状および／または分枝状トリマンノースなど）である。
【０３４５】
他の典型的な糖は当業者により認識されるであろう。特に、用途に応じて、該コンジュゲートアフィニティーリガンドに関して前記で記載されている糖のいずれも（例えば、式ＩＶａまたはＩＶｂの糖のいずれも）が使用可能であると理解されるべきである。ある実施形態においては、該認識要素は単糖を含む。ある実施形態においては、該認識要素は二糖を含む。ある実施形態においては、該認識要素は三糖を含む。いくつかの実施形態においては、該認識要素は糖および１以上のアミン基を含む。いくつかの実施形態においては、該認識要素はアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）である。いくつかの実施形態においては、該認識要素はアミノエチルマンノース（ＡＥＭ）である。いくつかの実施形態においては、該認識要素はアミノエチルビマンノース（ＡＥＢＭ）である。いくつかの実施形態においては、該認識要素はアミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）である。いくつかの実施形態においては、該認識要素はβ−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）である。いくつかの実施形態においては、該認識要素はアミノエチルフコース（ＡＥＦ）である。他の実施形態においては、該認識要素はＤ−グルコサミン（ＧＡ）である。
【０３４６】
種々の実施形態においては、該認識要素は多糖、糖ペプチドまたは糖脂質を含む。ある実施形態においては、該認識要素は２〜１０個の糖部分、例えば２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の部分を含む。該多糖、糖ペプチドまたは糖脂質の末端および／または内部残基は、問題のレクチンの糖特異性に基づいて選択されうる（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ３１７：５００−５０４，１９７３およびＬｉｓら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５５：３５−６７，１９８６）。
【０３４７】
種々の実施形態においては、個々のレクチン／グルコースの組合せに関する認識要素は実験的に選択されうる。そのような実施形態においては、標的分子グルコースと比較された場合の該レクチンに対するそれらの相対結合アフィニティーに基づいて、１以上の認識要素がスクリーニングされる。ある実施形態においては、このようにして糖および／または多糖のライブラリーがスクリーニングされる。適当な認識要素はグルコースとの検出可能なレベルの競合を示すが、レクチンとグルコースとの間の全ての結合をそれが妨げるほど強くは競合しないであろう。ある実施形態においては、関連レクチン特性に対する種々のアフィニティーリガンドの効果を試験することにより（例えば、後記で更に詳細に説明するとおり、凝集を抑制するそれらの能力、および／またはそれらのマテリアル設定点に基づいて）、種々の認識要素がスクリーングされうる。ある実施形態においては、該認識要素は、該修飾レクチンが組合されるコンジュゲートを考慮して（例えば、該コンジュゲートが該認識要素を該結合部位から脱離して架橋マテリアルを形成するように）選択されるであろう。
【０３４８】
反応性リンカー
アフィニティーリガンドは任意の方法でレクチンに共有結合されうる。ほとんどの方法は、該リガンドの認識要素をレクチン結合部位と会合させること、ついで該反応性リンカーを該レクチンと反応させることを含むであろう。ある実施形態においては、該反応性リンカーは、該認識要素の結合特性を実質的に妨げない位置において該認識要素に結合されうる。例えば、該認識要素が糖または多糖である場合、該リンカーは末端糖のＣ１、Ｃ２またはＣ６位に結合されうる。ある実施形態においては、該リンカーはＣ１位に結合されうる。該Ｃ１位はアノマー炭素とも称され、アルファまたはベータコンホメーションで該リンカーに連結されうる。ある実施形態においては、該リンカーはアルファアノマーとしてＣ１位に結合される。
【０３４９】
ある実施形態においては、光活性化可能なリンカーが使用されうる。例えば、Ｂｅｐｐｕら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７８：１０１３−１０１９，１９７５は、結合部位内でコンカナバリンＡと糖誘導体との間で共有結合を形成させるために紫外線を用いてアリールアジドリンカーが活性化される方法を記載している。スクシニル化コンカナバリンＡを使用して、同様の結果がＦｒａｓｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７３：７９０−７９４，１９７６に記録されている。また、Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５８：７２０８−７２１２，１９８３に記載されているとおり、リシンおよび光活性化可能なガラクトース誘導体を使用する同様の手法が用いられている。また、糖および二糖より高いアフィニティーをレクチンに対して有する複合糖ペプチドリガンドの光活性化可能な誘導体が、Ｂａｅｎｚｉｇｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：４４２１−４４２５，１９８２に記載されている。これらの誘導体は、光活性化可能な基を該糖ペプチドリガンドのペプチド部分に共有結合させることにより製造された。
【０３５０】
一般に、任意の光活性化可能なリンカー、例えばアリール、プリン、ピリミジンもしくはアルキルアジド、ジアゾもしくはジアジリン基、ベンゾフェノンまたはニトロベンゼンが使用可能である。潜在的に有用な光活性化可能なリンカーの、より包括的な一覧が、Ｆｌｅｍｉｎｇ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ５１：１２４７９−１２５２０，１９９５およびＢｒｕｎｎｅｒ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：４８３−５１４，１９９３およびＷｏｎｇ，Ｓ．Ｓ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，（１９９３），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１６８−１９４に見出されうる。
【０３５１】
種々の実施形態においては、該光活性化可能リンカーはジアジリン基を含みうる。紫外線（ＵＶ）でのジアジリン基の光活性化は反応性カルベン中間体を生成し、これは該リンカーの有効範囲内のいずれかのアミノ酸側鎖またはペプチドバックボーンに対する付加反応により共有結合を形成しうる。ジアジリンを活性化するためには、長波長ＵＶ光（約３２０〜３７０ｎｍ、好ましくは約３４５ｎｍ）が典型的に用いられる（例えば、Ｓｕｃｈａｎｅｋら，Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２：２６１−２６８，２００５を参照されたい）。
【０３５２】
種々の実施形態においては、該光活性化可能リンカーはアリールアジド基を含みうる。アリールアジド基がＵＶ光にさらされると、それはニトレン基を形成し、これは二重結合への付加反応、Ｃ−ＨおよびＮ−Ｈ部位内への挿入または後続の環拡大を開始させて求核剤として第一級アミンと反応しうる。第一級アミンがサンプル中に存在する場合、後者の反応経路が優先する。限定的なものではないが、置換アリールアジド（例えば、ヒドロキシまたはニトロ基を有するもの）には長波長ＵＶ光（約３２０〜３７０ｎｍ、好ましくは約３６６ｎｍ）が最も効率的だと考えられ、一方、非置換アリールアジドにはより短い波長が最も効率的だと考えられる。適当なＵＶ光源は、例えばＰｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．から商業的に入手可能である。
【０３５３】
例えば、種々の実施形態においては、該アフィニティーリガンドは、一般式（Ｖ）：Ｒｅ−Ｌ（式中、Ｒｅは認識要素であり、Ｌは反応性リンカーである）を有しうる。ある実施形態においては、Ｒｅは糖部分である。ある実施形態においては、Ｒｅは、該リンカーにＣ１位において共有結合したグルコースまたはマンノース部分である。
【０３５４】
ある実施形態においては、−Ｌは、一般式（ＶＩａ）：
【化８２】
2012520879.tif 000086
【０３５５】
［式中、
Ｒ３は、独立して、水素、−ＯＨ、−ＮＯ２およびハロゲン（例えば、ＦまたはＣｌ）からなる群から選択される；
Ｘは、共有結合または２価の直鎖状または分枝状の飽和または不飽和の場合により置換されていてもよいＣ１−２０炭化水素鎖であり、ここで、Ｘのメチレン単位の１以上は、所望により且つ独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ’）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基により置換されていてもよい；
各場合のＲ’は、独立して、水素、適当な保護基またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分またはヘテロ脂肪族部分である］を有しうる。
【０３５６】
環結合と交差する結合を伴う化学的可変部分が示されているいずれの場合においても（例えば、前記Ｒ３に関して示されている場合）、これは、１以上のそのような可変部分が、所望により、該交差結合を有する環に結合しうることを意味する。そのような環上の各Ｒ３基は任意の適当な位置において結合することが可能であり、これは、該基が該親環上の水素原子の代わりに結合することを意味すると一般に理解される。これは、２つのＲ３基が同一環原子に結合しうる可能性を含む。さらに、２以上のＲ３基が環上に存在する場合、それぞれは、それに結合している他のＲ３基と同じ又は異なることが可能であり、各基は、それらが同一識別記号により表されうる場合であっても、同一分子上の他の位置に結合している可能性のある他の基から独立して定められる。
【０３５７】
ある実施形態においては、該−Ｎ３基はメタ位に存在する。ある実施形態においては、該−Ｎ３基はオルト位に存在する。ある実施形態においては、該−Ｎ３基はパラ位に存在する。
【０３５８】
ある実施形態においては、Ｘの、１、２、３、４または５個のメチレン単位は、所望により且つ独立して置換されていてもよい。ある実施形態においては、ＸはＣ１−１０、Ｃ１−８、Ｃ１−６、Ｃ１−４、Ｃ２−１２、Ｃ４−１２、Ｃ６−１２、Ｃ８−１２またはＣ１０−１２炭化水素鎖から構築され、ここで、Ｘのメチレン単位の１以上は、所望により且つ独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ’）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基により置換されていてもよい。いくつかの実施形態においては、Ｘのメチレン単位の１以上は複素環基により置換されている。いくつかの実施形態においては、Ｘのメチレン単位の１以上はトリアゾール部分により置換されている。ある実施形態においては、Ｘのメチレン単位の１以上は−Ｃ（Ｏ）−により置換されている。ある実施形態においては、Ｘのメチレン単位の１以上は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−により置換されている。ある実施形態においては、Ｘのメチレン単位の１以上は−Ｏ−により置換されている。
【０３５９】
いくつかの実施形態においては、Ｘは
【化８３】
2012520879.tif 000087
【０３６０】
である。
【０３６１】
いくつかの実施形態においては、Ｘは
【化８４】
2012520879.tif 000088
【０３６２】
である。
【０３６３】
いくつかの実施形態においては、Ｘは
【化８５】
2012520879.tif 000089
【０３６４】
である。
【０３６５】
いくつかの実施形態においては、Ｘは
【化８６】
2012520879.tif 000090
【０３６６】
である。
【０３６７】
いくつかの実施形態においては、Ｘは
【化８７】
2012520879.tif 000091
【０３６８】
である。
【０３６９】
いくつかの実施形態においては、Ｘは
【化８８】
2012520879.tif 000092
【０３７０】
である。
【０３７１】
ある実施形態においては、−Ｌは、一般式（ＶＩｂ）：
【化８９】
2012520879.tif 000093
【０３７２】
［式中、Ｘは式（ＶＩａ）に関して前記において定義されているとおりであり、Ｒ４は水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは−ＣＦ３である］を有しうる。
【０３７３】
ある実施形態においては、非光活性化可能リンカーが使用されうる。例えば、米国特許第５，２３９，０６２号および第５，３９５，９２４号は、ｐＨまたは温度の変化により活性化されうるリンカーを記載している。記載されている典型的な反応性リンカーには、塩化シアヌル酸（Ｋａｙら，Ｎａｔｕｒｅ  ２１６：５１４−５１５，１９６７）、またはジクロロ−Ｓ−トリアジン、例えば２−アミノ−４，６−ジクロロ−Ｓ−トリアジン（Ｋａｙら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １９８：２７６−２８５，１９７０）および２，４−ジクロロ−６−メトキシ−Ｓ−トリアジン（Ｌａｎｇら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  １：２１８９−２１９４，１９７７）のような試薬を使用してアフィニティーリガンド内に導入されうるものが含まれる。末端アミン（例えば、リシン上に存在するもの）と主に反応するアルデヒドまたはＮＨＳ−エステルを有する反応性リンカーも使用可能であろう。
【０３７４】
種々の実施形態においては、個々のレクチン／標的分子の組合せに関する反応性リンカーは実験的に選択されうる。そのような実施形態においては、同じ認識要素および異なるリンカー（例えば、異なる長さのリンカー、異なる反応性基を有するリンカー、異なる疎水性を有するリンカーなど）を有する幾つかのアフィニティーリガンドが、関連レクチン特性に対するそれらの効果に基づいて（例えば、後記で更に詳細に説明するとおり、凝集を抑制するそれらの能力、および／またはそれらのマテリアル設定点に基づいて）スクリーニングされる。
【０３７５】
ｉｉ．修飾の程度
一般に、各多価架橋剤に結合している化合物の数（すなわち、置換度）は、該架橋剤の性質、該化合物の性質、利用可能な反応部位の数および反応条件に基づいて変動するであろう。例えば、コンカナバリンＡのサブユニットはそれぞれ、１２個のリシン残基を有する。その結果、コンカナバリンＡが、リシン残基と反応する化合物でＰＥＧ化された場合、各サブユニットはこれらの化合物の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個に共有結合しうるであろう。逆に、コンカナバリンＡの各サブユニットは唯一のグルコース結合部位を含む。したがって、コンカナバリンＡを、該結合部位において反応する化合物と反応させた場合、各サブユニットは唯一のそのような化合物と共有結合するであろう。置換度の決定方法はＤｅｌｇａｄｏら，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓ．９：２４９−３０４，１９９２に記載されている。
【０３７６】
好ましい実施形態においては、多価架橋剤の化学修飾は、複数の化合物および複数の反応条件（例えば、試薬濃度、ｐＨ、温度などを変化させるもの）を用いて最適化されうる。好ましい化合物および反応条件は、望ましくない特性（例えば、分裂促進性）が未修飾架橋剤と比べて軽減される一方、所望の特性（例えば、結合アフィニティー）が実質的に損なわれないようなものである。例えば、種々の化合物および種々の反応条件を用いて或る範囲の修飾組成物を調製するために、自動化ロボット操作装置が使用されうる。ついで通常の直交（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）実験を用いて、当業者は処理組成物の特性をスクリーニングすることが可能である。ある実施形態においては、好ましい条件の周辺で直交最適化の更なるラウンドを行って、その好ましい化合物および反応条件を更に精密化する。
【０３７７】
１つの実施形態においては、最適反応条件は、電気泳動により処理組成物を分離することにより、好ましくは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動物を変性させることにより特定される。種々の実施形態においては、均一に修飾された架橋剤を含む組成物が好ましい。これらの好ましい組成物は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で、未修飾架橋剤の分子量において、より弱いバンドを示すであろう。
【０３７８】
４．架橋剤の精製
種々の実施形態においては、多価架橋剤（それは化学修飾されているか否かに無関係である）は、その特性を改善するために更に加工されうる。したがって、ある実施形態においては、多価架橋剤を含む組成物は、タンパク質断片、未修飾成分などを除去するために精製されうる。一般に、これらの分離は物理的特性（例えば、電荷、分子量および／またはサイズ）および／または化学的特性（例えば、標的分子に対する結合アフィニティー）に基づいて達成されうる。ある実施形態においては、これらの示差特性に基づく２以上の方法を組合せることにより最適除去が達成されうる。１つの実施形態においては、これらの分離は変性条件下で行われる。例えば、未修飾または部分修飾架橋剤は、イオン交換クロマトグラフィーにより、それらの実効電荷に基づいて除去されうる。ゲル濾過クロマトグラフィーは、サイズに基づいて、異なる修飾の架橋剤を互いに識別するために用いられうる。アフィニティークロマトグラフィーは、未修飾または部分修飾架橋剤を除去するために用いられうるもう１つの方法である。このアプローチは、修飾、部分修飾および未修飾架橋剤の、特異的標的分子に対する結合アフィニティーの相違を利用する。
【０３７９】
５．架橋剤の特徴づけ
種々の実施形態においては、多価架橋剤（それが化学修飾されているか否かに無関係である）は、その特性を確認または特徴づけするためにスクリーニングまたは更に試験されうる。代表的アッセイには、アフィニティーアッセイ、凝集アッセイ、Ｔ細胞分裂促進性アッセイ、Ｔ細胞生存性アッセイ、抗原性アッセイなどが含まれる。
【０３８０】
アフィニティーアッセイは、該多価架橋剤をアフィニティーカラム（例えば、標的分子を伴う樹脂）に通過させ、該カラムからの該架橋剤の除去に必要な溶出条件を決定することを含みうる。当技術分野で公知のとおり、平衡透析も用いられうる。該架橋剤を本開示の１以上のコンジュゲートと一緒にし、ついで種々の濃度の標的分子と接触させる設定点（ｓｅｔ  ｐｏｉｎｔ）アッセイも用いられうる。好ましくは、化学修飾された架橋剤の結合アフィニティーは未修飾架橋剤の結合アフィニティーの少なくとも７５％である。より好ましくは、該結合アフィニティーは未修飾架橋剤の少なくとも８５％であり、さらに好ましくは少なくとも９５％である。
【０３８１】
ある実施形態においては、多価架橋剤の最小凝集濃度（ＭＡＣ）を決定するために凝集アッセイが用いられうる。例えば、ある実施形態においては、ＭＡＣは、ＵＳ  ２００７／０１１０８１１に記載されているとおりにウサギ赤血球を使用して決定されうる。化学修飾レクチンの場合、より高いＭＡＣ値は分裂促進性の低下と強く相関することを、本発明者らは見出した。ある実施形態においては、修飾架橋剤は、未修飾架橋剤より高いＭＡＣを有しうる。好ましくは、該ＭＡＣは未修飾架橋剤のＭＡＣの２５倍である。より好ましくは、該ＭＡＣは未修飾架橋剤のＭＡＣの５０倍、さに好ましくは１００倍である。ある実施形態においては、未修飾架橋剤は、ホルムアルデヒド安定化ウサギ赤血球の２％  ｖ／ｖ  懸濁液で、４μｇ／ｍｌを超えるＭＡＣを示す。好ましくは、該ＭＡＣは６μｇ／ｍｌを超える、より好ましくは１０μｇ／ｍｌを超える、より一層好ましくは２５μｇ／ｍｌを超える。
【０３８２】
分裂促進性アッセイは、典型的には、関心のある組成物をＴ細胞培養（例えば、ＰＢＭＣ細胞）と或る期間にわたって接触させ、ついでＴ細胞増殖のレベルを測定することを含むであろう。細胞増殖を測定するための種々の方法が公知である。１つの実施形態においては、４５０ｎｍにおいて分光光度的に細胞密度が測定されうる。もう１つの実施形態においては、５７０ｎＭにおけるＭＴＴの減少を検出することにより間接的尺度が得られうる（例えば、Ｏｈｎｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４５：１９９−２０３，１９９１を参照されたい）。好ましい実施形態においては、細胞増殖のレベルは、トリチウム化チミジン取り込みアッセイを用いて決定される。他の適当な方法が使用可能であり、本発明は特定の増殖アッセイに何ら限定されない、と当業者は認識するであろう。ある実施形態においては、修飾架橋剤のＴ細胞分裂促進性は未修飾架橋剤のＴ細胞分裂促進性の５０％未満である。Ｔ細胞分裂促進性の低下は、ある範囲の架橋剤濃度（例えば、０．０１、０．１、１、１０、１００および１０００μｇ／ｍｌ）にわたって比較チミジン取り込みアッセイを行うことにより評価されうる。好ましい実施形態においては、該チミジン取り込みアッセイは、約５００，０００  ＰＢＭＣを含むサンプルを使用して行われる。ついで該試験組成物（例えば、修飾組成物）は％最大未修飾分裂促進性として表される。％最大未修飾分裂促進性は、全ての測定濃度にわたる該試験組成物に関する最大ＣＰＭ（カウント毎分）値を、全ての測定濃度にわたる該未修飾組成物の最大ＣＰＭ値で割り算することにより得られる。好ましくは、分裂促進性の低下を伴う試験組成物は、該未修飾組成物より少なくとも５０％低いレベルのＴ細胞増殖を誘導する。より好ましくは、該レベルは少なくとも７５％低く、より一層好ましくは少なくとも９０％、９５％または９９％低い。
【０３８３】
Ｔ細胞生存性は、該Ｔ細胞培養にトリパンブルーを加え、該細胞の代表的サンプルを計数することにより同様の実験を用いて測定されうる（該トリパンを取り込むもの又は該トリパンを尚も排除するもの、すなわち、青くなるものと青くならないものとに注目する）。ついで、該トリパンを排除する細胞（「青くない」生細胞）の数を、計数した細胞（「青い」死細胞＋「青くない」生細胞）の総数で割り算することにより、生存率（％）を計算する。他の適当な方法が使用可能であり、本発明は特定の生存性アッセイに何ら限定されない、と当業者は認識するであろう。ある実施形態においては、ＰＢＭＣを５００，０００細胞／ｍｌの濃度で使用してアッセイした場合、修飾架橋剤は、１００μｇ／ｍｌにおいて、１０％を超える細胞生存率を示す。好ましくは、該生存率は２５％を超える、より好ましくは５０％を超える、より一層好ましくは９０％を超える。
【０３８４】
架橋マテリアル
コンジュゲートおよび架橋剤を標的分子の非存在下で一緒にすると、非共有結合により架橋されたマテリアルが形成される。種々の実施形態においては、該マテリアルは、該架橋剤およびコンジュゲートの溶液を混合することにより、自己集合により水溶液中で製造されうる。種々の実施形態においては、該マテリアルの粒子は逆乳化により製造されうる。ＵＳ  ２００４／０２０２７１９に詳細に記載されているとおり、これは、疎水性液体と界面活性剤との混合物に前記水溶液を加え、該混合物を攪拌することにより達成されうる。
【０３８５】
該架橋マテリアルは、一旦形成されると、種々の用途に使用されうる。該マテリアルが遊離標的分子の存在下に配置されると、これらは該架橋剤と該コンジュゲートとの間の相互作用に関して競合する。遊離標的分子が或る濃度を超えると、表面からコンジュゲートを放出することにより該マテリアルが分解し始めるような競合レベルになる。種々の実施形態においては、遊離の度合および／または速度は、標的分子の濃度が増加するにつれて増加する。したがって、コンジュゲートは、標的分子の局所濃度に直接的に関連した様態で該マテリアルから放出される。
【０３８６】
一般に、該マテリアルの放出特性は、該架橋剤、コンジュゲート、標的分子および条件（例えば、ｐＨ、温度など）の性質に左右されるであろう。該コンジュゲートに対する該架橋剤のアフィニティーが該標的分子に対する場合より遥かに大きければ、該マテリアルは、標的分子が高濃度である場合にのみ、コンジュゲートを放出するであろう。該コンジュゲートに対する該架橋剤の相対アフィニティーが減少するにつれて、該マテリアルからのコンジュゲートの放出はより低い標的分子濃度で生じるであろう。該マテリアルの放出特性は、コンジュゲートに対する架橋剤の相対量を変化させることによっても調節されうる。コンジュゲートに対する架橋剤の、より高い比は、より高い標的分子濃度でコンジュゲートを放出するマテリアルを与えるであろう。コンジュゲートに対する架橋剤の、より低い比は、より低い標的分子濃度でコンジュゲートを放出するマテリアルを与えるであろう。用途に応じて、これらの変数は、多種多様な標的分子濃度に応答するマテリアルを与えることを可能にすると理解されるであろう。
【０３８７】
種々の実施形態においては、該架橋マテリアルは、３７℃でｐＨ７のＨＥＰＥＳ緩衝食塩水（１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有し標的分子を含有しない２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）中に配置された場合、不溶性である。種々の実施形態においては、設定点と称される閾値濃度まで標的分子が該バッファーに加えられた場合、該架橋マテリアルは実質的に不溶性のままである。該設定点を超えると、該架橋マテリアルはコンジュゲートの放出の度合および速度の増加を示す。この転移は急激に生じうる、または該設定点の付近の濃度の或る範囲にわたって徐々に生じうると理解されるであろう。一般に、所望の設定点および転移は標的分子の性質および該マテリアルに関する意図される用途に左右されるであろう。特に、特定の標的分子のレベルの増加に応答するように該マテリアルが設計された場合、所望の設定点は、該標的分子の正常生理的濃度範囲に基づいて決定されうる。患者において存在する標的分子の量は、内的および／または外的要因に基づいて変動しうると理解されるべきである。例えば、ある実施形態においては、標的分子の量は、例えば代謝経路またはホルモン周期の変化に応答して、経時的に自然変動しうる（乳酸は忍耐事象中に増加するなど）。ある実施形態においては、該変動は外的事象により生じうる（例えば、食事後のグルコースの増加）。種々の実施形態においては、外的要因は、本開示のマテリアルからのコンジュゲートの放出を人工的に誘導するために用いられうる。例えば、コンジュゲートの放出がグルコースの増加に感受性である場合、高グルコース飲料を摂取することにより、短時間にわたってコンジュゲートを人工的に放出させることが可能であろう。
【０３８８】
種々の実施形態においては、該標的分子はグルコースである。ヒトにおけるグルコース濃度の正常生理的範囲は６０〜２００ｍｇ／ｄＬである。６０ｍｇ／ｄＬ未満のグルコース濃度は低血糖とみなされる。２００ｍｇ／ｄＬを超えるグルコース濃度は高血糖とみなされる。種々の実施形態においては、本開示のマテリアルは、ＵＳＰ溶解試験法ＩＩを５０ｒｐｍで用いて、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｄＬ  グルコースを含有するｐＨ７のＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中に３７℃で６時間配置された場合、実質的に不溶性のままとなりうる。種々の実施形態においては、ＵＳＰ溶解試験法ＩＩを５０ｒｐｍで用いて、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｄＬ  グルコースを含有するｐＨ７のＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中に３７℃で６時間配置された場合、該マテリアルの１、２、４、６、８または１０％未満が溶解する。種々の実施形態においては、ＵＳＰ溶解試験法ＩＩを５０ｒｐｍで用いて、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０または４００ｍｇ／ｄＬ  グルコースを含有するｐＨ７のＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中に３７℃で６時間配置された場合、本開示のマテリアルの少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００％が溶解する。
【０３８９】
以下の表は他の典型的標的分子の正常生理的範囲を示す。
【表３】
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これらの及び他の標的分子の所望の設定点は多種多様な用途に関して容易に決定されうると理解されるであろう。また、該設定点は、ある患者（例えば、患者の性別、異常に低い又は高いレベルの標的分子を有するなどに基づいて）または用途（例えば、より頻繁に放出するように設計された薬物運搬系は、より低い頻度で放出するように設計された系より低い閾値濃度を要しうる）に関して調節される必要がありうると理解されるであろう。
【０３９０】
所望の設定点を有するマテリアルは、本明細書に記載されている材料および方法を用いて通常の実験により作製されうると理解されるであろう。例えば、同じ架橋剤およびコンジュゲートを組合せて、コンジュゲートに対する架橋剤の比（ｗ／ｗ）が次第に増加した一連のマテリアルを得ることが可能である。これらのマテリアルは或る範囲の設定点に及ぶであろう。適当な設定点を有するリードマテリアルが特定されたら、より精密な分析でこの方法を繰返して、最適化されたマテリアルを得ることが可能である。あるいは（またはそれに加えて）同じコンジュゲートを、該コンジュゲートに対する漸増アフィニティーを有する複数の異なる架橋剤と組合せることが可能である。これは、（例えば、コンジュゲートに対する架橋剤のｗ／ｗ比を変化させることにより）更に精密化されうる設定点の範囲を有する複数のマテリアルを与えるであろう。あるいは、同じ架橋剤を複数の異なるコンジュゲートと組合せることにより、該方法を開始させることが可能であろう。種々の実施形態においては、それらのコンジュゲートは、（例えば、種々のアフィニティーリガンドを含んでいるため）該架橋剤に対する種々のアフィニティーを有しうる。種々の実施形態においては、それらのコンジュゲートは同一アフィニティーを含みうるが、（例えば、種々のコンジュゲートフレームワークの結果として）種々の分子量を有しうる。
【０３９１】
用途
もう１つの態様においては、本開示は、該マテリアルの使用方法を提供する。一般に、該マテリアルは、標的分子に応答して、制御可能な様態でコンジュゲートを放出するために使用されうる。後記のとおり、該マテリアルはインビトロまたはインビボで標的分子と接触されうる。
【０３９２】
種々の実施形態においては、マテリアルはインビトロまたはインビボ化学センサーの成分として使用されうる。この態様はグルコースセンサーに関して後記で説明されるが、異なる標的分子を単に使用することにより他の化学センサーが調製されうると前記から理解されるであろう。
【０３９３】
例えば、種々の実施形態においては、本開示のマテリアルは、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）に基づくグルコースセンサーにおいて使用されうる。ＦＲＥＴは、２つの異なる発蛍光団が互いに接近すると、これはそれらの２つの発蛍光団の間のエネルギー転移を可能にして該発蛍光団の一方または両方の蛍光の減少（これは蛍光消光と称される）をもたらすことに基づく（Ｂａｌｌｅｒｓｔａｄｔら，Ａｎａｌ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ  ３４５：２０３−２１２，１９９７）。グルコースの非存在下では、蛍光標識架橋剤と蛍光標識コンジュゲートとの混合物は不溶性架橋マテリアルを形成し、隣接発蛍光団はＦＲＥＴを受けるであろう。グルコースの存在下では、該蛍光標識架橋剤と該蛍光標識コンジュゲートとの平均距離が増加して、ＦＲＥＴのレベルが減少し、それにより個々の蛍光シグナルが増加するであろう。それにより、蛍光のレベルはグルコースのレベルと直接的に相関されうる。
【０３９４】
他の典型的な実施形態においては、本開示のマテリアルは、粘度に基づくグルコースセンサーにおいて使用されうる（例えば、米国特許第６，２６７，００２号、第６，４７７，８９１号および第６，９３８，４６３号を参照されたい）。コンジュゲートと架橋剤とを再び一緒にして架橋マテリアルを形成させる。該マテリアルへのグルコースの添加は今度は粘度の濃度依存的減少を引き起こし、これは（例えば、円錐および平面構造で配置されたマイクロビスコメーターを使用して、せん断速度の関数として）測定可能である。それにより該サンプルの粘度はグルコースのレベルと直接的に相関されうる。これらの２つの典型的なグルコースセンサーは、該コンジュゲート内に薬物が存在することを要しない、と理解されるであろう。また、粘度に基づくセンサーは、該コンジュゲート内に検出可能標識が存在することを要しない、と理解されるであろう。
【０３９５】
種々の実施形態においては、マテリアルは、制御可能な様態で薬物を患者に運搬するために使用されうる。本発明は、本開示のマテリアルを投与することにより疾患または状態を治療することを含む。該マテリアルは、任意の患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、マウスなど）を治療するために使用されうるが、それらは、最も好ましくは、ヒトの治療において使用される。マテリアルは任意の経路により患者に投与されうる。一般に、最も適当な投与経路は、治療される疾患または状態の性質、薬物の性質、標的分子の性質、患者の状態などを含む種々の要因に左右されるであろう。一般に、本開示は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、皮下、心室内、経皮、直腸、膣内、腹腔内、局所（例えば散剤、軟膏剤または滴剤によるもの）、頬側への、または経口もしくは鼻腔内噴霧剤もしくはエアロゾール剤としての投与を含む。これらの種々の経路のための医薬組成物の製剤化（処方）および製造における一般的考慮事項は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９５に見出されうる。
【０３９６】
種々の実施形態においては、該マテリアルは、例えば注射により皮下投与されうる。該マテリアルは、運搬を容易にするために担体に溶解されうる。例えば、該担体は、無菌水、食塩水（塩類液）または緩衝食塩水（緩衝塩類液）（これらに限定されるものではない）を含む水溶液でありうる。一般に、コンジュゲートの形態の薬物の治療的有効量が投与されるであろう。薬物の「治療的有効量」は、該薬物の効力と毒性との比較評価を伴う合理的な利益／リスク比で疾患または状態を治療するのに十分な該薬物の量を意味する。一般に、治療効力および毒性は、細胞培養における又は実験動物での標準的な薬理学的方法により決定されることが可能であり、例えばＥＤ５０（治療被験者の５０％において治療的に有効な用量）およびＬＤ５０（治療被験者の５０％に致死性である用量）を計算することにより決定されうる。ＥＤ５０／ＬＤ５０は該薬物の治療係数を表す。当技術分野でよく知られているとおり、一般に、大きな治療係数を有する薬物が好ましいが、重篤な疾患または状態の場合、特に、代替的治療選択肢が存在しない場合には、より小さな治療係数が許容されうる。ヒトへの投与のための適当な用量範囲の最終的な選択は臨床治験の経過中に決定される。
【０３９７】
種々の実施形態においては、該薬物はインスリンであり、インスリンの平均１日量は１０〜２００Ｕ、例えば２５〜１００Ｕの範囲である（ここで、１Ｕ（単位）のインスリンは〜０．０４ｍｇである）。ある実施形態においては、これらのインスリン用量を伴うマテリアルの量が毎日投与される。ある実施形態においては、これらのインスリン用量の５〜１０倍を伴うマテリアルが毎週投与される。ある実施形態においては、これらのインスリン用量の１０〜２０倍を伴うマテリアルの量が隔週で投与される。ある実施形態においては、これらのインスリンの用量の２０〜４０倍を伴うマテリアルの量が毎月投与される。これと同じアプローチが、公知用量範囲を有する他の承認薬、例えば、任意の承認されているインスリン増感物質およびインスリン分泌促進物質に類推適用されうる、と当業者は認識するであろう。
【０３９８】
いずれかの或る患者に対する薬物の合計１日使用量は、妥当な医学的判断の範囲内で担当医師により決定されると理解されるであろう。いずれかの或る患者に対する具体的な治療的有効量は、治療される疾患または状態；使用される具体的な薬物の活性；使用される具体的な組成物；患者の年齢、体重、全身健康状態、性別および食事；使用される具体的な薬物の投与時機、投与経路および排泄速度；治療の持続期間；使用される具体的な薬物と組合せて又は同時に使用される薬物；ならびに医学分野でよく知られた同様の要因を含む種々の要因に左右されるであろう。種々の実施形態においては、本開示のマテリアルは２回以上投与されうる。例えば、本開示は特に、連続的スケジュール（例えば、１日１回、２日ごとに１回、週１回、２週ごとに１回、月１回など）で皮下注射により患者にマテリアルが投与される方法を含む。
【０３９９】
ある実施形態においては、本開示のマテリアルは、患者（例えば、哺乳動物患者）における高血糖を治療するために使用されうる。ある実施形態においては、該患者は糖尿病患者である。しかし、本方法は糖尿病患者の治療に限定されない。例えば、ある実施形態においては、マテリアルは、血糖調節異常に関連した感染を伴う患者における高血糖を治療するために使用されうる。ある実施形態においては、マテリアルは、糖尿病を治療するために使用されうる。
【０４００】
種々の実施形態においては、本開示のマテリアルは、少なくとも１つの追加的療法を受けている患者に投与されうる。種々の実施形態においては、そのような少なくとも１つの追加的療法は、投与されるマテリアルの場合と同じ疾患または障害を治療することを意図したものである。種々の実施形態においては、そのような少なくとも１つの追加的療法は、主要薬物の副作用を治療することを意図したものである。そのような２以上の療法は、両方の療法から該患者が利益を受ける期間が存在する限り、同じ重複している又は重複していない時間枠内で行われうる。そのような２以上の療法は、両方の療法から該患者が利益を受ける期間が存在する限り、同じ又は異なるスケジュールで行われうる。そのような２以上の療法は、両方の療法から該患者が利益を受ける期間が存在する限り、同じ又は異なる製剤で行われうる。ある実施形態においては、本開示の単一のマテリアルは、同じ疾患または障害を治療するための２以上の薬物を含みうる。ある実施形態においては、同じ疾患または障害を治療するための異なる薬物を含む、本開示の２以上の別々のマテリアルが（混合物として又は別々に）投与されうる。ある実施形態においては、コンジュゲート化されていない二次薬物（すなわち、該マテリアルの成分と単に混合されただけであり、該架橋マテリアルに共有結合していない薬物）が本開示のマテリアル中に含まれうる。例えば、ある実施形態においては、これらのアプローチはいずれも、２以上の抗糖尿病薬を対象に投与するために用いられうる。このアプローチの或る典型的な実施形態はインスリン関連療法に関して後記で更に詳細に説明されるが、他の療法もそのような組合せアプローチにより有益であると前記から理解されるであろう。
【０４０１】
インスリン増感物質（例えば、ビグアニド、例えばメトホルミン、グリタゾン）は、与えられた量のインスリンに対する患者の応答を増強することにより作用する。したがって、インスリン増感物質の投与を受けている患者は、その他の点では同じ患者の場合より低い用量の本開示のインスリン系マテリアルで十分であろう。したがって、ある実施形態においては、インスリンコンジュゲートを含むマテリアルは、インスリン増感物質でも治療されている患者に投与されうる。種々の実施形態においては、本開示のマテリアルは、インスリン増感物質の非存在下で要求される通常用量の７５％までで投与されうる。種々の実施形態においては、通常用量の５０、４０、３０または２０％までが投与されうる。
【０４０２】
インスリン抵抗性は、正常なインスリン応答を得るのにインスリンの正常量では不適当である障害である。例えば、インスリン抵抗性患者は、その抵抗性を克服し十分なグルコース低下効果を得るためには高い用量のインスリンを要しうる。これらの場合、それほど抵抗性でない患者において通常は低血糖を誘発するインスリン用量でさえも、高抵抗性患者においてはグルコース低下効果をもたらさない。同様に、本開示のマテリアルは、それが高レベルのインスリンコンジュゲートを適当な時間枠で放出する場合にのみ、このサブクラスの患者に有効である。ある実施形態においては、このサブクラスの患者の治療は、それらの２つのアプローチを組合せることにより促進されうる。したがって、ある実施形態においては、インスリンのベースラインレベルを得るために、インスリンに基づく伝統的な療法が用いられ、患者に必要な場合には、制御されたインスリン補充をもたらすために、本開示のマテリアルが投与される。したがって、ある実施形態においては、インスリンコンジュゲートを含むマテリアルは、インスリンでも治療されている患者に投与されうる。種々の実施形態においては、該インスリンは、本開示のマテリアルの非存在下で要求される通常用量の７５％までで投与されうる。種々の実施形態においては、該通常用量の５０、４０、３０または２０％までが投与されうる。この組合せアプローチは、インスリン分泌促進物質（例えば、スルホニル尿素、ＧＬＰ−１、エキセンジン−４など）および／またはインスリン増感物質（例えば、ビグアニド、例えば、メトホルミン、グリタゾン）の投与を受けているインスリン抵抗性患者においても使用されうると理解されるであろう。
【０４０３】
キット
本明細書に記載されている低分子量コンジュゲートの重要な製造上の利点は、これらのコンジュゲートおよびアフィニティーリガンド修飾レクチンから製造された架橋マテリアルを開発し試験した後で初めて認識された。該コンジュゲートおよびアフィニティーリガンド修飾レクチンは共に低分子量であるため、該マテリアルは単一の大体積ゲルネットワークではなく粒子の分散液を形成することが判明した。これは重要なことである。なぜなら、高分子量重合体およびＰＥＧ化レクチンで製造された架橋マテリアルは、一旦充填されシリンジプランジャで加圧されると細ゲージ針内を容易に流動するが、それは細ゲージ針でシリンジ内に吸い込まれ得ないからである。これは、最終産物が個々のシリンジ内に予備充填される必要があることを意味し、これは、大規模製造に容易には適用できない複雑で高い経費を要する工程である。一方、該分散液は大量に製造され、通常の多用途薬物バイアル内に無菌条件下で充填されうる。また、コンジュゲート当たりの薬物充填質量の大きな増加ならびに該コンジュゲートおよびアフィニティーリガンド修飾レクチンが最適ネットワークを形成する場合の比を考慮すると、これらのマテリアルにおける有効薬物充填量は、高分子量コンジュゲートで製造されたマテリアルより１桁大きい。例えば、インスリンの該高質量充填は、全ての市販インスリン製剤において用いられている標準濃度である１００Ｕ／ｍｌまでのインスリン等価体を含有する分散液を製造することを可能にする。該分散液は、他のインスリン製品とちょうど同じように穏やかに回転させることにより容易に再懸濁される。また、それらの市販製剤と同様に、該新規分散液は適当な用量体積まで２８Ｇ針で容易に吸い上げられ、有意な加圧を要することなく水とちょうど同じように注射されうる。静菌剤としてのｍ−クレゾール（現在市販されている全てのインスリン製剤で使用されている）の取り込みは性能または安全性プロファイルを変化させず、検出可能な微生物汚染を伴うことなく長期間にわたり、毎日の複数回の使用を可能にする。したがって、種々の実施形態においては、本開示は、架橋マテリアルの分散液を含有する１以上のバイアルを含むキットを提供する。
【０４０４】
もう１つの態様においては、本開示はコンジュゲートおよび／または架橋剤のライブラリーを提供する。これらのライブラリーは、所望の設定点を有するマテリアルを得るのに特に有用でありうる。種々の実施形態においては、ライブラリーは、同じ架橋剤で種々の設定点を与える複数のコンジュゲートを含みうる。種々の実施形態においては、ライブラリーは更に、該ライブラリー内のコンジュゲートで架橋マテリアルを形成する１以上の架橋剤を含みうる。該ライブラリーが２以上のそのようなコンジュゲートを含む場合、コンジュゲートが異なれば、分子量、コンジュゲート分子当たりのアフィニティーリガンドの数および／またはアフィニティーリガンドも異なりうる。種々の実施形態においては、ライブラリーは、２以上のタイプのアフィニティーリガンドを含むコンジュゲートの１以上を含みうる。
【実施例】
【０４０５】
Ｉ．典型的コンジュゲートの製造方法
この一連の第１の実施例は、典型的コンジュゲートの種々の製造方法を記載する。これらの方法は、本発明の範囲内の他のコンジュゲートを与えるように修飾されうると理解されるべきである。
【０４０６】
実施例１
原子転移ラジカル重合による合成
図２は、「生（ｌｉｖｉｎｇ）」フリーラジカル重合としても公知である原子転移ラジカル重合（ＡＴＲＰ）によるコンジュゲートの製造のためのスキームを示す。生ラジカル重合の場合、それは、制御された様態で該反応が行われることを可能にし、低い多分散性を有する重合体を得るために用いられうる。
【０４０７】
この場合、該重合開始剤を別々に合成し、アセタール部分を含有していた。該開始剤を使用して、末端アセタール官能基をそれぞれが含有する重合体鎖を生成させた。
【０４０８】
ａ．開始剤（１）の合成
１−アミノ−３，３’−ジエトキシプロパン（１ｍｌ）のジクロロメタン溶液（３０ｍｌ）に、４−ジメチルアミノピリジン（４ｍｇ）、トリエチルアミン（１．１ｍｌ）およびブロモイソブチリルブロミド（０．８２４ｍｌ）を０℃で滴下した。該溶液をその温度で１５分間攪拌し、ついで室温まで加温した。ついでそれを４時間攪拌した。該反応混合物をジクロロメタンで抽出し、有機層を酸性化水、飽和水性炭酸水素ナトリウム、ブラインおよび水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。該溶液を濾過し、ジクロロメタンをロータリーエバポレーション（回転蒸発）により除去して淡黄色油を得た。該油のプロトンＮＭＲは、該油が非常に純粋であり、重合に使用可能であり、あるいは、好ましい場合にはシリカゲルクロマトグラフィーにより更に精製されうることを示した。
【０４０９】
ｂ．ｔ−ブチルアクリラートのＡＴＲＰ重合のためのリガンドの合成
５．４ｇの２−ピリジンカルボキシアルデヒドを４０ｍｌのジエチルエーテルに加え、該反応混合物を窒素下で０℃に冷却した。５．０ｍｌのオクチルアミンを該攪拌カルボキシアルデヒド−エーテル混合物に１０分にわたって滴下した。該反応混合物を０℃で４時間攪拌し、ついで氷浴を除去し、該反応混合物を更に２時間、室温に加温した。この時、４．０ｇの硫酸マグネシウムを加え、最後の２時間にわたり攪拌した。該混合物を濾過して不溶物を除去し、得られた溶液をロータリーエバポレーター内に配置してジエチルエーテルを除去して、濃オレンジ色油を得た。この油を真空下、１２０℃で蒸留して、透明黄色油を得た。この油は１Ｈ  ＮＭＲにより純粋であることが判明した。このリガンドを後続のＡＴＲＰ合成において使用した。
【化９０】
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【０４１０】
Ｎ−（ピリジン−２−イルメチレン）オクタン−１−アミン（ＡＴＲＰリガンド）
ｃ．ｔ−ブチルアクリラートのＡＴＲＰ重合によるアセタール末端官能基化ポリ（ｔ−ブチルアクリラート）（３）の製造
２．５ｍｌのインヒビター非含有ｔ−ブチルアクリラート、１．６７ｍｌのインヒビター非含有トルエンおよび１．３７ｍｍｏｌのＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−ペンタメチルジエチレントリアミン（ＰＭＤＥＴＡ）またはＡＴＲＰリガンドを１００ｍｌ  シュレンク（Ｓｃｈｌｅｎｋ）型フラスコに加えた。これらを凍結／ポンプ／解凍の３サイクルで脱気し、ついで１９８ｍｇの臭化銅（Ｉ）を加え、室温で３０分間攪拌した。つぎに３３１μｌのＡＴＲＰ開始剤（１）を該溶液に加え、該溶液を室温で１５分間攪拌した。ついで該溶液を４０℃、６０℃または９０℃の油浴内に配置し、得られる所望の重合度に応じて４時間または一晩（１４時間）加熱した。得られた重合体溶液を中性アルミナのカラムで濾過し、該トルエンをロータリーエバポレーションにより除去して粘性重合体を得、これを後続工程で使用した。
【０４１１】
ｄ．ｔ−ブチルアクリラートの加水分解による重合体（４）の製造
得られた粘性重合体を１５ｍｌのジクロロメタンおよび１２ｍｌのトリフルオロ酢酸に溶解し、該混合物を一晩攪拌してポリ（ｔ−ブチルアクリラート）のｔ−ブチル基を加水分解してポリ（アクリル酸）重合体を得た。翌日、ガム様物質がフラスコ内に沈殿していた。該液体／固体混合物をロータリーエバポレーター内に配置して該溶媒の全てを除去して、ガム状固体であるアセタール末端官能基化ポリ（アクリル酸）を得た。この固体を４０ｍｌの脱イオン水中に入れ、５０％  水酸化ナトリウムを使用することにより該溶液のｐＨを８．０にした。１部の重合体溶液に４部のアセトンを加えることにより、該重合体を沈殿させた。得られた懸濁液を激しく混合し、４５００×ｇで５分間遠心分離した。最初の沈殿は、固体ではなく油を与え、該アセトンをデカントする際に注意を要した。得られた油を、ガム状固体を得るためにアセトンで更に２回洗浄し、機械的攪拌に付した。該重合体をジエチルエーテルで２回、洗浄し／沈殿させることにより、微量のアセトンを除去した。ジエチルエーテルの最終デカントの後、真空を用いて残留溶媒を該重合体から除去して、乾燥粉末を得た。
【０４１２】
ｅ．末端アセタールからアルデヒドへの変換
該加水分解工程中、該アセタールはアルデヒド官能基に自発的に変換されることが判明した。この物質はアルデヒド形態で使用可能であったが、あるいは所望により、当業者に公知の方法（例えば、酸触媒と共にメタノールまたはエタノール溶液中に重合体を懸濁させ、４０℃で一晩加熱する）により、該アルデヒド官能基をアセタール官能基へと再変換することが可能であった。後続の化学変換中、該アルデヒド官能基をアセタールとして保護されたままにするのが望ましいことがしばしば見出された。
【０４１３】
ｆ．糖での重合体の修飾による重合体（５）の製造
末端官能基化アセタール−ポリ（アクリル酸）重合体（４）を１−アミノエチル−（α−１，３），（α−１，６）−マンノトリオースで以下のとおりに官能基化した。２０２ｍｇの該アセタール−ポリ（アクリル酸）（ナトリウム形態）を１０．０ｍｌの脱イオン水に加え、ｐＨを６．０に調節した。４４７ｍｇのＥＤＡＣおよび２９３ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を該溶液に加え、これを室温で２５分間攪拌した。この溶液に該１−アミノエチル−（α−１，３），（α−１，６）−マンノトリオース（３．０ｍｌのｐＨ６緩衝化水溶液に溶解された３００ｍｇの糖）の溶液を加えた。得られた混合物を３時間攪拌した。得られた糖修飾アセタールポリ（アクリル酸）をサイズ排除クロマトグラフィーにより精製し、後続工程において使用した。
【０４１４】
ｇ．アセタール−ポリ（アクリル酸−糖）からアルデヒド−ポリ（アクリル酸−糖）（６）への変換
該アセタール−ポリ（アクリル酸）粉末をｐＨ１．０の水溶液中、５０ｍｇ／ｍｌで１２時間攪拌して、該アセタール官能基を該アルデヒド官能基に変換する。該重合体溶液をｐＨ７．０に再中和し、得られた溶液をサイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。
【０４１５】
ｈ．ＭＣＳ２−インスリンの合成
唯一の反応性アミンが該アルデヒド−ポリ（アクリル酸）のアルデヒド部分との反応に利用可能となるように、インスリンの以下の合成を行った。高速攪拌下、７６ｍｌの無水ジメチルスルホキシドおよび３．９７７ｍｇのインスリンを反応フラスコに加えて、インスリンの濃度が５２．３３ｍｇ／ｍｌとなるようにした。３．９７８ｍｌの無水トリエチルアミンを直ちに加えた。該インスリンが完全に溶解するのを待った後、テトラヒドロフラン溶液中の１．５９１ｍｌの１．０Ｍ  ２−（メタノスルホニル）エチルスクシンイミジルカルボナート溶液を該反応混合物に加えた。室温で６０分間攪拌した後、ジメチルスルホキシド中のエタノールアミンの１：２０  希釈液３．９７７ｍｌを加えて該反応をクエンチした。該反応混合物を１６００ｍｌのアセトンに加え、塩酸溶液の添加により該インスリンを沈殿させ、濾過して固体沈殿物を回収することにより、該タンパク質生成物を回収した。該沈殿物をアセトンで洗浄し、最終的な粉末を逆相クロマトグラフィーに付して、望ましくない異性体から所望のＭＳＣ−Ｇｌｙ−Ａ１、ＭＳＣ−Ｌｙｓ−Ｂ２９−インスリン異性体を精製した。液体クロマトグラフィー−質量分析およびエドマン配列決定により、所望の生成物の同一性が確認された。
【０４１６】
ｉ．アルデヒド−ポリ（アクリル酸−糖）とのＭＳＣ２−インスリンの反応による重合体（８）の製造
反応フラスコに４．０ｍｌの５０ｍｇ／ｍｌ  アルデヒド−ポリ（アクリル酸−糖）重合体を加え、ｐＨを６．５に調節した。この溶液にジメチルスルホキシド中のＭＳＣ２−インスリンの１０ｍｇ／ｍｌ  溶液１．２ｍｌを加え、ついでｐＨ６．５の水溶液中のナトリウムシアノボロヒドリド溶液（１００ｍｇ／ｍｌ）０．６７ｍｌを加えた。該反応混合物を、所望の反応変換に応じて３０分間、１時間、１２時間またはそれより長時間、室温で反応させた。共有結合していないインスリンの除去を逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーまたはサイズ排除クロマトグラフィーにより行った。共有結合していないインスリンの残留量を逆相クロマトグラフィーまたは変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によりアッセイした。
【０４１７】
ｊ．ＭＳＣ基の除去による重合体（９）の製造
水性バッファー中の５０ｍｇ／ｍｌのＭＳＣ２−インスリン−ポリ（アクリル酸−糖）コンジュゲートの１．０ｍｌ溶液に０．５ｍｌのメタノールおよび０．５ｍｌのジオキサンを加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、ついで０．１５ｍｌの２．０Ｎ  水酸化ナトリウム溶液を加え、該混合物を２０分間攪拌した。ついで該反応混合物を３体積の脱イオン水により希釈し、ｐＨが７．０になるまで氷酢酸を加えることにより溶液ｐＨを中和した。
【０４１８】
ｋ．コンジュゲートのインビボ生物活性
ＭＳＣ２−インスリン−ポリ（アクリル酸−糖）重合体溶液（濃度約１〜１０ｍｇ／ｍｌ）を２８０ｎｍ光（Ａ２８０）に対するその溶液吸光度に関してアッセイした。正常なＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを該実験の前に少なくとも１時間にわたって絶食させた。該重合体溶液を０．２ミクロンフィルターで濾過して該溶液を無菌にし、該インスリン含有コンジュゲートを時間０（ゼロ）において該動物に皮下投与した。該動物における血液グルコース値を尾静脈において測定し、その時点は注射後−１５、０、１５、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２４０、３００、３６０分であった。該インスリン重合体コンジュゲートはＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいて有意なグルコース低下活性を示すことが観察された（データ非表示）。
【０４１９】
実施例２
フリーラジカル重合による合成
図３は、アセタール含有連鎖移動剤を使用する通常のフリーラジカル重合による重合体の製造のためのスキームを示す。
【０４２０】
ａ．連鎖移動剤の合成およびアクリル酸の重合
攪拌プレート上で油浴を６０℃に予備加熱する。オーブン乾燥長頚シュレンク（Ｓｃｈｌｅｎｋ）フラスコを介して窒素パージを開始する。空気非含有条件および穏やかな混合下、１７０．０ｍｍｏｌのテトラヒドロフランおよび１７．９ｍｍｏｌのアクリル酸をＳｃｈｌｅｎｋフラスコに加える。
【０４２１】
ｂ．連鎖停止剤（１２）の製造
６ｍｍｏｌの１−アミノ−３，３−ジエトキシプロパン、４．８ｍｍｏｌの２−イミノチオラン塩酸塩および２．５ｍｌの脱イオン水を小さなバイアル内で一緒に混合する。５分間、高速攪拌し、該全溶液を室温の該反応混合物に加える。
【０４２２】
ｃ．コンジュゲート（１３）の製造
開始剤を以下のとおりに加える。０．７ｍｍｏｌの４，４’−アゾビス−（４−シアノ吉草酸）（ＶＡＳＯ６８）を２ｍｌのテトラヒドロフランに溶解する。溶解したら、１ｍｌの該開始剤溶液を該反応混合物に室温で加える。数分後、窒素出口を除去するが、フラスコ内の圧力増加を防ぐために窒素入口の接続は維持する。
【０４２３】
Ｓｃｈｌｅｎｋフラスコを油浴に移動させ、温度を６０℃で６０分間維持する。フラスコ内で溶媒の還流が生じるであろう。ついで加熱から引き離し、該重合体溶液を丸底フラスコに移す。全溶媒をロータリーエバポレーションにより除去し、ついで高真空を用いて該サンプルを更に乾燥させる。
【０４２４】
乾燥したら、該重合体を４０ｍｌの脱イオン水に溶解し、５０％  水酸化ナトリウムを使用することにより該溶液のｐＨを８．０にする。１部の重合体溶液に４部のアセトンを加えることにより該重合体を沈殿させる。激しく混合し、４５００×ｇで５分間遠心分離する。最初の沈殿は、固体ではなく油を与え、該アセトンをデカントする際に注意を要する。得られた油を、ガム状固体を得るためにアセトンで更に２回洗浄し、機械的攪拌に付す。該重合体をジエチルエーテルで２回、洗浄し／沈殿させることにより、微量のアセトンを除去する。ジエチルエーテルの最終デカントの後、真空を用いて残留溶媒を該コンジュゲート（１３）から除去して、乾燥粉末を得る。
【０４２５】
コンジュゲート（５）を得るための糖とコンジュゲート（１３）との反応、アセタール基からアルデヒド（６）への変換、ＭＳＣ２−インスリンの合成、インスリン含有コンジュゲート（８および９）のゲル形成および溶出特性、ならびにこのマテリアル（８および９）のインビボ生物活性を、実施例１に既に記載されているとおりに行った。
【０４２６】
実施例３
非ヒトインスリン、インスリン類似体などを含有するコンジュゲート
非ヒトインスリンまたはインスリン類似体（すなわち、１以上の置換、付加または欠失の点でインスリンとは異なる、インスリン様生物活性を有するペプチド）を含む式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを、インスリンの代わりに非ヒトインスリンまたはインスリン類似体を使用して実施例１および２の方法により製造する。
【０４２７】
実施例４
シムリンを含有するコンジュゲート
ペプチド性抗糖尿病薬シムリン（ｓｙｍｌｉｎ）（プラムリンチドアセタート）を天然ペプチドアミリン（ａｍｙｌｉｎ）から誘導する。それも、実施例１または２の方法を用いて式（ＩＩＩ）のコンジュゲート内に含有させることが可能である。
【０４２８】
実施例５
ペプチド性インスリン分泌促進物質を含有するコンジュゲート
実施例１または２の方法を用いて、ペプチド性インスリン分泌促進物質（例えば、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１類似体エクサニチド（ｅｘａｎｉｔｉｄｅ））またはスルホニル尿素（ＳＵ）、例えばグリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）を式（ＩＩＩ）のコンジュゲート内に組込む。
【０４２９】
実施例６
ｒＨＧＨを含有するコンジュゲート
実施例１または２の方法を用いて、ペプチド性薬組換えヒト成長ホルモン（ｒＨＧＨ）を式（ＩＩＩ）のコンジュゲート内に含有させる。
【０４３０】
実施例７
グルカゴンを含有するコンジュゲート
実施例１または２の方法を用いて、ペプチド性薬グルカゴンを式（ＩＩＩ）のコンジュゲート内に含有させる。
【０４３１】
ＩＩ．典型的コンジュゲートのインビトロアッセイ
この一連の第２の実施例は、インスリン−グルコーゲンコンジュゲートの物理化学的特性を試験するために行った幾つかの比較インビトロアッセイを示す。
【０４３２】
実施例８
インスリン−グリコーゲンコンジュゲートの合成
この実施例は、米国特許出願公開第２００７００９９８２０号に従うインスリン−グリコーゲンコンジュゲートの合成を記載する。簡潔に説明すると、１ｇの商業的に入手可能な未精製カキグリコーゲン（ＩＩ型，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を１０ｍｇ／ｍｌの濃度で脱イオン水に溶解する。得られた溶液に固体ＣＮＢｒをグリコーゲンに対するＣＮＢｒの質量比０．６８で加え、３Ｎ  水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を使用してｐＨを１０．７＋／−０．２に一定に維持する。１５分間攪拌した後、別の同じ質量の同等固体ＣＮＢｒを加え、４５分間攪拌しながらｐＨを１０．７＋／−０．２に一定に維持する。ついでインスリンを、グリコーゲンに対するインスリンの質量比０．６０で該溶液に加え、炭酸水素ナトリウムを使用してｐＨを９．１５に調節する。該溶液を一晩攪拌し、５０ｋＤａ  ＭＷＣＯポリエーテルスルホン円形膜フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用して脱イオン水に対して徹底的に限外濾過し、凍結乾燥する。ついで、得られた粉末を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（商標）３０  ＨｉＬｏａｄ  １６／６０（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）充填カラム上で１Ｍ  酢酸移動相を使用するゲル濾過ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）により未コンジュゲート化インスリンから精製する。ついで該インスリングリコーゲン画分を凍結乾燥して該コンジュゲートを純粋な白色粉末として得る。得られた精製マテリアルは、アミノ酸分析（ＵＣＬＡ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）を用いて測定したところ、インスリン−グリコーゲンコンジュゲート当たり１．０ｗｔ％のインスリンを含有していた。
【０４３３】
実施例９
液体クロマトグラフィー分析
この実施例は、実施例８に従い合成されたインスリン−グリコーゲンコンジュゲートのＲＰ−ＨＰＬＣプロファイルを記載する。該インスリン−グリコーゲンコンジュゲートの５ｍｇ／ｍｌ  溶液１００μｌを、８０％  水／２０％  アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）移動相（それぞれは０．１％  ＴＦＡを含有する）で平衡化されたＷａｔｅｒｓ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ８  ５μｍカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）上に注入した。以下の勾配法を用いて、該サンプルを１．０ｍｌ／分で溶出した：０〜５分−一定  ８０％  水／２０％  ＣＨ３ＣＮ、５〜３５分−５０％  水／５０％  ＣＨ３ＣＮへの直線勾配。該溶出プロファイル（データ非表示）は広範かつ不均一であり、これは、種々の化学的および／または分子量物質の広範な分布を示している。
【０４３４】
実施例１０
分子量分布分析
この実施例は、実施例８に従い合成されたインスリン−グリコーゲンコンジュゲートのＭＷ分布を記載する。該ＭＷ分布は、ｐＨ７のＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中の２５ｍｇ／ｍｌ  溶液１ｍｌを、ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水で平衡化されたウルトラヒドロゲルサイズ排除カラム（Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ  Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｏｌｕｍｎ）（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｌｆｏｒｄ，ＭＡ）上に注入することにより決定した。該カラムを０．５ｍｌ／分で３０分にわたって溶出させ、該溶出プロファイルを２８０ｎｍでの吸光度として測定した。同じプロトコールを用いる別の実験において、デキストランＭＷ標準物（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を注入して、ＭＷ対保持時間の検量線を確定した。該検量線および該インスリン−グリコーゲンコンジュゲートの溶出プロファイルに基づいて、平均ＭＷは５００，０００Ｄａと決定され、該分布の６７％は２５０，０００〜１，０００，０００Ｄａの広範囲にわたって溶出した（データ非表示）。
【０４３５】
ＩＩＩ．典型的コンジュゲーとのインビボアッセイ
この一連の第３の実施例は、インスリン−デキストランおよびインスリン−グルコーゲンコンジュゲートの生物活性を試験するために行った幾つかの比較インビボアッセイを示す。
【０４３６】
実施例１１
デキストランおよびグリコーゲンコンジュゲートの生物活性
ａ．インスリン−デキストラン生物活性
この比較例は皮下投与インスリン−デキストラン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＷ〜７０Ｋ）のインビボ薬動力学プロファイルを評価する。後記に示すとおり、米国特許公開第２００４０２０２７１９号に従い合成されたインスリン−デキストランコンジュゲートは、皮下注射後比較的遅く作用する。なぜなら、該コンジュゲート重合体の高ＭＷは全身循環内への吸収速度を有意に妨げるからである。修飾された臭化シアン（ＣＮＢｒ）カップリング反応を用いてインスリン−デキストランを合成した。簡潔に説明すると、５００ｍｇのデキストラン（ＭＷ＝７０Ｋ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を５０ｍｌの脱イオン水に溶解した。得られた溶液に５６ｍｇの固体ＣＮＢｒを加え、５Ｎ  ＮａＯＨ溶液を使用してｐＨを１０．７±０．２に維持した。１５分間攪拌した後、別の５６ｍｇの固体ＣＮＢｒを加え、４５分間攪拌しながらｐＨを１０．７±０．２に維持した。ついで３００ｍｇの組換えヒトインスリン（ＲＨＩ）を該溶液に加え、固体炭酸水素ナトリウムを使用してｐＨを９．１５に調節した。該溶液を一晩攪拌し、１０Ｋ  ＭＷＣＯポリエーテルスルホン円形膜フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用してＤＩ水に対して徹底的に限外濾過し、凍結乾燥した。ついで、得られた粉末を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（商標）７５充填カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）上で１Ｍ  酢酸移動相を使用する高速液体クロマトグラフィー（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）により未コンジュゲート化インスリンから精製した。ついで該インスリン−デキストラン画分を凍結乾燥して該コンジュゲートを純粋な粉末として得た。インスリンコンジュゲート化の度合は、アミノ酸分析（ＵＣＬＡ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）による測定では１０％（ｗ／ｗ）であった。
【０４３７】
０．２５ｍｌの無菌１×ＰＢＳ溶液を使用して該インスリン−デキストランの皮下注射剤（１ｍｌ当たり２０Ｕ相当のインスリン）を、絶食した正常非糖尿病ラット（雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，２００〜２５０ｇ，ｎ＝４）の頚部の背部に投与した。注射後−１５および０分ならびに１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１８０、２４０、３００および３６０分における尾静脈放血により血液サンプルを集めた。商業的に入手可能な試験ストリップ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｘｔｒａ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）を使用して血液グルコース値を測定した。図５に示すとおり、グルコース最低（Ｔｎａｄｉｒ）濃度に達するまでの時間は注射後約３時間であることが分かり、血清グルコースレベルは注射後少なくとも５時間にわたって低下したままである。
【０４３８】
ｂ．インスリン−グリコーゲン生物活性
この実施例は、皮下投与インスリン−グリコーゲンのインビボ薬動力学プロファイルを評価する。該インスリン−グリコーゲンコンジュゲートは、実施例８に従い合成した。２．５相当Ｕのインスリン／ｋｇ用量を、絶食した正常非糖尿病ラット（雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，２００〜２５０ｇ，ｎ＝４）の頚部の背部に注射することにより、該インスリン−グリコーゲンコンジュゲートの生物活性を評価した。注射後−１５および０分ならびに１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１８０、２４０、３００および３６０分における尾静脈放血により血液サンプルを集めた。商業的に入手可能な試験ストリップ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｘｔｒａ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）を使用して血液グルコース値を測定した。前記のインスリン−デキストランコンジュゲートと比較して、該高ＭＷインスリン−グリコーゲンコンジュゲートは、遥かに迅速に且つより大きな度合でグルコースレベルを低下させる（図６を参照されたい）。この迅速な作用および消失プロファイルは皮下注射後の高ＭＷグリコーゲン重合体鎖の迅速な酵素消化によるものである。
【０４３９】
ＩＶ．結合部位修飾レクチン
この一連の第４の実施例は種々の結合部位修飾レクチンの製造および試験を記載する。
【０４４０】
実施例１２
アジドフェニル−糖修飾ＣｏｎＡの合成
全工程は、特に示さない限り、室温で行った。まず、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、２ｍＭ  塩化カルシウム、２ｍＭ  塩化マンガンおよび０．１％  ｗ／ｖ  アジ化ナトリウムを含有する１０ｍＭ  ｐＨ５．０  酢酸バッファー溶液（Ｓ２８バッファー）２００ｍｌに５．０ｇの天然ＣｏｎＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を溶解し、不溶性物質を遠心分離および／または濾過により分離した。天然ＣｏｎＡの種々の市販調製物はかなりの濃度の抑制性糖を含有することを本発明者らは見出しており、ある実施形態においては、光アフィニティー修飾前にそれを除去した。その目的のために、該溶液を、Ｓ２８移動相を伴うＢｉｏｇｅｌ−Ｐ６サイズ排除カラムにより２回精製した。最後に、得られた溶液をＳ２８で１Ｌの最終体積まで希釈した。穏やかな攪拌条件下、０．４ｇのヒドロキノン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を加え、ついで１６５ｍｇのアジドフェニルグルコース（ＡＰＧ，ＰｏｌｙＯｒｇ  Ｉｎｃ．，Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ，ＭＡ）またはアジドフェニルマンノース（ＡＰＭ，ＰｏｌｙＯｒｇ  Ｉｎｃ．，Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ，ＭＡ）を加えた。該溶液を可能な限り遅い攪拌速度で暗所で４℃で１時間攪拌した。１時間の攪拌の後、追加的な不溶性物質を遠心分離および／または濾過により除去した。２００ｍｌの該溶液を９’’×１３’’アルミニウム鍋内に注ぎ、ＣＬ−１０００ＵＶ架橋オーブン（ＵＶＰ，Ｕｐｌａｎｄ，ＣＡ）内で４℃で３６０ｎｍで１５分間反応させた（該ＵＶ反応は、３０２ｎｍの光を用いても生じうる）。該反応後、追加的な不溶性物質を遠心分離および／または濾過により除去した。ついで、清澄化した溶液を、Ｓ２８移動相を伴うＢｉｏｇｅｌ−Ｐ６サイズ排除カラム（Ｅｃｏｎｏｐａｋ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）に通して１回精製した。ついで、溶液全体が反応するまで該ＵＶ架橋反応およびＰ６精製工程を繰返した。最後に、Ｏｍｅｇａ  ３０Ｋ膜を備えたＰａｌｌ接線流動濾過カートリッジ装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）を使用して、合せたＰ６精製溶液を〜１８０ｍｌまで濃縮した。得られた溶液を遠心分離および／または濾過により清澄化し、０．２２μｍフィルターに通した後、アフィニティーカラム精製に付した。
【０４４１】
実施例１３
ジアジリン光反応性リガンドの一般化合成
０．９ｍｍｏｌのアミノエチル（ＡＥ）官能基化糖リガンド（例えば、ＡＥＧ、ＡＥＭ、ＡＥＢＭ、ＡＥＴＭ）を４ｍｌの無水ＤＭＳＯに溶解し、ついで１．６ｍｌの無水トリエチルアミン（ＴＥＡ）を加えて混濁エマルションを得た。別の容器内で、２００ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）のＮＨＳ−ジアジリン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）粉末を４ｍｌの無水ＤＭＳＯに暗所条件下で溶解した。溶解したら、該ＮＨＳ−ジアジリン溶液をＡＥ−糖溶液に滴下し、ついで暗所中、室温で一晩反応させた。該ジアジリン部分（２５４ｎｍ）のＵＶシグナルと該糖シグナル（硫酸−エタノール染色）との共溶出、およびそれに伴う、該ＴＬＣの起点からのＡＥ官能基化糖リガンド（硫酸−エタノール染色）の消失により示されるとおり、該一晩溶液のＴＬＣ分析（５０％  エタノール；５０％  酢酸エチル）は完全な反応を証明した。ついで該溶液を、０．１５Ｍ  塩化ナトリウムを含有するｐＨ５．０の２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ溶液８０ｍｌ中に希釈し、必要に応じてｐＨをｐＨ５に調節し、ついで、ＣｏｎＡとの光アフィニティー反応に必要とされるまで凍結した。
【０４４２】
実施例１４
糖官能基化ジアジリンＣｏｎＡの合成および特徴づけ
全工程は、特に示さない限り、室温で行った。まず、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、２ｍＭ  塩化カルシウム、２ｍＭ  塩化マンガンおよび０．１％  ｗ／ｖ  アジ化ナトリウムを含有する１０ｍＭ  ｐＨ５．０  酢酸バッファー溶液（Ｓ２８バッファー）２００ｍｌに５．０ｇの天然ＣｏｎＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を溶解し、不溶性物質を遠心分離および／または濾過により分離した。天然ＣｏｎＡの種々の市販調製物はかなりの濃度の抑制性糖を含有することを本発明者らは見出しており、ある実施形態においては、光アフィニティー修飾前にそれを除去した。その目的のために、該溶液を、Ｓ２８移動相を伴うＢｉｏｇｅｌ−Ｐ６サイズ排除カラムにより２回精製した。最後に、得られた溶液をＳ２８で１Ｌの最終体積まで希釈した。つぎに該溶液の体積を、１×Ｓ２８を使用して１Ｌ−１／３リガンド体積にし、攪拌棒を含む１Ｌの媒体ボトル内に注いだ。暗所中の穏やかな攪拌条件下、０．４ｇのヒドロキノン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を溶解した。ついで、実施例４３において得た３３ｍｌのジアジリジン−糖コンジュゲートを、暗所中の穏やかな攪拌条件下、７アリコートで加えた。溶解したら、該溶液全体を穏やかな攪拌下、暗所中、４℃で更に１０分間インキュベートした。１０分間の攪拌の後、追加的な不溶性物質を遠心分離および／または濾過により除去した。２５０ｍｌの該溶液を９’’×１３’’アルミニウム鍋内に注ぎ、ＣＬ−１０００ＵＶ架橋オーブン（ＵＶＰ，Ｕｐｌａｎｄ，ＣＡ）内で４℃で３６０ｎｍで１５分間反応させた。該反応後、追加的な不溶性物質を遠心分離および／または濾過により除去した。ついで、清澄化した溶液を、Ｓ２８移動相を伴うＢｉｏｇｅｌ−Ｐ６サイズ排除カラム（Ｅｃｏｎｏｐａｋ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）に通して１回精製した。ついで、溶液全体が反応するまで該ＵＶ架橋反応およびＰ６精製工程を繰返した。最後に、Ｏｍｅｇａ  ３０Ｋ膜を備えたＰａｌｌ接線流動濾過カートリッジ装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）を使用して、合せたＰ６精製溶液を〜１８０ｍｌまで濃縮した。得られた溶液を遠心分離および／または濾過により清澄化し、０．２２μｍフィルターに通した後、アフィニティーカラム精製に付した。
【０４４３】
実施例１５
修飾ＣｏｎＡサンプルのアフィニティーカラム精製
実施例１２および１４に従い合成した光アフィニティー修飾レクチンをアフィニティーカラムクロマトグラフィーにより精製して、完全に反応した物質を未反応および／または部分反応物質から分離した。１００〜２００ｍｌの溶液を、Ｓ２８バッファーで平衡化されたグルコース含有Ｓｕｐｅｒｄｅｘ３０ビーズ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＫ）が充填されたＸＫ５０／１００カラム（直径５０ｍｍ×長さ１００ｃｍ）上に注入した。ついで該カラムをＳ２８で５ｍｌ／分で４時間溶出した。完全に反応していた所望の画分がまず最初に該カラムから溶出し、ついで、部分的アフィニティーを尚も有する部分反応物質がグルコース含有固定相から溶出した。典型的には、７０〜１２０分に溶出した物質を集め、残りは廃棄した。ついで該カラムを、８０ｍＭ  アルファ−メチル−マンノース溶液を含有するＳ２８バッファーで５ｍｌ／分で６時間洗浄して、未反応レクチンを除去し、ついでＳ２８中、５ｍｌ／分で更に６時間にわたり再生させた。集めた画分を、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  ３０Ｋ限外濾過膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）を使用して約１００ｍｌまで濃縮し、０．２２μｍフィルターに通した後、いずれかの更なるアフィニティーカラム精製工程に付した。該カラム精製工程を２回、３回および４回繰返して、後続の研究に十分な程度に精製された物質を得た。４回目の精製工程の後、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  ３０Ｋ限外濾過膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）を使用して、該物質（マテリアル）を、２８０ｎｍにおける溶液吸光度（Ａ２８０）による測定で約１８ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。この溶液を０．２２μｍフィルターに通し、更なる研究に必要となるまで４℃で保存した。
【０４４４】
実施例１６
修飾ＣｏｎＡサンプルの化学的特徴づけ
ａ．ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ＵＶ光に対する曝露により有害なタンパク質分解が生じていないことを保証するために、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を使用する変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）を該マテリアルに対して行った。簡潔に説明すると、１０〜１５％  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ予製ゲル（Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）および１×Ｔｒｉｓ−グリシン−ＳＤＳバッファー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用して該ＰＡＧＥ実験を行った。広範囲の分子量標準（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）および天然コンカナバリンＡレクチン（ＣｏｎＡ，ＶＩ型，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の２ｍｇ／ｍｌ  サンプルも対照として泳動させた。２５μＬの各修飾レクチンまたは対照サンプルを、５μＬのメルカプトエタノール（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有する１×Ｌａｅｍｍｌｉバッファー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）５０μＬに溶解し、該サンプルを沸騰水浴中で約５分間加熱した。該サンプルが室温に冷却した後、２０μＬの各サンプルを該予製ＰＡＧＥゲルのウェル内にローディングした。ついで該サンプルを２００ボルトで６０分間泳動させた。該電気泳動後、該ゲルを脱イオン水：メタノール：氷酢酸（体積比６０：３０：１０）の溶液中で３０分間固定し、ついで脱イオン水中で２回洗浄した。最後に該ゲルを１×Ｂｉｏ−Ｓａｆｅクーマシーブルー染色（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）で６０分間染色した。該最終ゲルをライトテーブルおよびデジタルカメラでイメージングして該染色ゲルを記録した。該染色タンパク質バンドを、分子量および天然ＣｏｎＡ対照サンプルと比較することにより、それらの分子量に関してアッセイした。ＵＶ光に対する曝露中の該修飾レクチンサンプルのタンパク質分解は、天然ＣｏｎＡ対照において存在するものとは明らかに異なる、より低いＭＷであると思われる分子量バンドを与えるであろう。
【０４４５】
ｂ．マトリックス介助レーザーデソープションイオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析
ＭＡＬＤＩは、タンパク質の分子量を特徴づけるためのよく知られた技術である、と当業者は認識するであろう。ＭＡＬＤＩは、修飾レクチンがアフィニティーリガンドに共有結合している度合を計算するために、アフィニティーリガンドにコンジュゲート化され次いでアフィニティーカラム精製に付された後の修飾レクチンサブユニットのＭＷを特徴づけるために用いられうる。
【０４４６】
２ｍｇ／ｍｌの修飾レクチンサンプルを、脱イオン水で予め平衡化されたＢｉｏＳｐｉｎ３０カラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）に加えた。該ＢｉｏＳｐｉｎカラムを１０００×ｇで４分間遠心分離した。得られた溶出物は、実質的に脱塩された修飾レクチンサンプルを含有していた。該サンプルをドライアイス上で凍結させ、シナピン酸マトリックスを使用するＭＡＬＤＩ分析に送った。
【０４４７】
ｃ．分析用超遠心分離（ＡＵＣ）
ＡＵＣは、溶液状態で存在する場合のタンパク質サンプルの天然分子量を決定するために用いられる技術である。いくつかのレクチンは四次構造を含むため（例えば、ＣｏｎＡ）、非変性条件下（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＭＡＬＤＩ）で修飾レクチンの分子量を明らかにすることが推奨される。
【０４４８】
修飾レクチンサンプルおよび対照天然ＣｏｎＡ（ＶＩ型，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）サンプルを１２．５ｍＭ  α−Ｄ−マンノースを含有するＳ２８バッファーに１．０、０．５および０．２５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し、これらをＢｅｃｋｍａｎ  ＸＬ−Ｉ分析用超遠心分離機（Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ，ＭＩＴ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）のＡＵＣセル内に配置し、１０ｋ、２０ｋ、３０ｋまたは４０ｋ  ｒｐｍの速度で連続的に遠心し、各速度で数時間平衡化させた。各セルを２８０ｎｍでスキャンし、Ｗｉｎｍａｔｃｈソフトウェア（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を使用して該ＡＵＣセルの平衡化時間を決定した。各サンプルに関する得られたＡＵＣデータを、ＷｉｎＮｏｎＬｉｎ  ｖ１．０６（ＵＣｏｎｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＣＴ）を使用する非線形最小二乗解析を用いてフィットさせて、該サンプルの分子量を得た。
【０４４９】
ｄ．等温熱量測定
１．４ｍｌ（名目）滴定セルを使用して、Ｍｉｃｒｏ−Ｃａｌ  ＶＰ−ＩＴＣ微小熱量計（Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ，ＭＩＴ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）で２５℃で滴定熱量測定を行った。典型的な修飾レクチン濃度は、ＰＢＳバッファー（１０ｍＭ  ＮａＰＯ４  ｐＨ  ７．２，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，０．２ｍＭ  ＣａＣｌ２）中、４〜６ｍｇ／ｍｌの範囲であった。サンプルを同じバッファー中の１０ｍＭ  メチル−α−Ｄ−マンノピラノシドで滴定した。この場合、最初は該シリンジを清浄するために１回の２μｌの増量を用い、ついで４μｌを９回注入し、１１回目〜３０回目の添加では８μｌに増加させた（２４０秒間隔）。通常、後者の添加は希釈のバックグラウンド熱のみを示した（すなわち、完全飽和）。データ（最初のデータ点および明らかに不良である他のものを排除したもの）を、該装置と共に供給されたＯｒｉｇｉｎｓソフトウェアを使用して単一部位モデルにフィットさせた。
【０４５０】
ｅ．ＭＡＣアッセイ
種々の光アフィニティー標識レクチン（例えば、実施例１２および１４において合成され実施例１５に従い精製されたもの）を、未修飾レクチンが結合しうるアフィニティーリガンドを有する細胞を凝集させるそれらの能力に基づいて比較した。Ｃｒｏｗｌｅｙら，Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．８３：３６８−３７３，１９８２の方法に従い、ホルムアルデヒド安定化ウサギ赤血球の２％  ｖ／ｖ懸濁液を使用して、各組成物の最小凝集濃度（ＭＡＣ）をＶ型ウェルマイクロタイタープレートにおいて決定した。Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｈｉｇａｎ  Ｕｎｉｔ  ｆｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅから入手したウサギ血液から公開方法（Ｎｏｗａｋら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ３９３：１１５−１２３，１９７５）により調製したホルムアルデヒド処理ウサギ赤血球は従来の研究から入手可能であった。ＭＡＣは、視認可能な凝集を示す最高希釈度におけるレクチンタンパク質濃度（結合化合物を含めない）と定義した。
【０４５１】
簡潔に説明すると、レクチン濃度が約０．１〜１０００μｇ／ｍｌにわたる希釈液を使用して、レクチン組成物の水溶液を９６ウェルプレートのウェルに加えた。ついで該ホルムアルデヒド処理ウサギ赤血球のアリコートを各ウェル内にピペッティングした。低いレクチン濃度においては、架橋細胞のネットワークを形成するには不十分なレクチンしか存在せず、該細胞は該Ｖ型ウェルの底に沈降して、該プレートの底に少量の暗色環のようなものを形成した。しかし、レクチン濃度が最小凝集濃度（ＭＡＣ）に達したら、レクチン分子は赤血球表面上の糖受容体を架橋し始めて、Ｖ型ウェルの底に沈降し得ないネットワークを形成し、上方から見て大きな不透明な拡散性の環のようなものを形成した。そのような大きな拡散性環を形成する最低濃度が個々の製剤のＭＡＣ値である。
【０４５２】
以下の表に、前記実施例に従い合成したＣｏｎＡに基づく製剤のＭＡＣ値を要約する（図７も参照されたい）。
【表４】
2012520879.tif 000096
【０４５３】
実施例１７
分裂促進性アッセイ
この実施例は、種々の修飾レクチン組成物のＴ細胞分裂促進性を特徴づけて比較するために用いられうるアッセイを記載する。この典型的なアッセイの修飾および別法は当業者に明らかであろう。このアッセイには高精製Ｔ細胞ではなく末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する。なぜなら、レクチンによるＴ細胞活性化は、一般に、補助細胞と総称される非Ｔ細胞集団（例えば、単球、樹状細胞）の存在を要するからである。典型的なアッセイにおいては、ＰＢＭＣを３名のヒトドナーの全血から単離し、９６ウェルプレート内で約１００，０００細胞／ウェルで別々にプレーティングする。ついで、１０００（または１００）μｇ／ｍｌの濃度から開始する種々のレクチン組成物（例えば、天然および処理物）の三重系列希釈物を該ウェルに加える。該プレートを３７℃で３日間インキュベートし、その時点で０．８μＣｉの３Ｈ−チミジンを更に１８時間にわたって各ウェルに加える。ついで分裂促進性の度合を、増殖性ＰＢＭＣによる３Ｈ−チミジン取り込みにより測定する。いくつかの場合には、新規レクチン組成物（例えば、処理組成物）の分裂促進性を％最大天然分裂促進性として表す。％最大天然分裂促進性は、測定した全濃度にわたる修飾レクチン組成物に関する最大ＣＰＭ（計数／分）値を、測定した全組成物にわたる天然レクチン組成物の最大ＣＰＭ値で割り算することにより得られる。
【０４５４】
これまでの研究において、ＭＡＣ値と％  ＣｏｎＡ最大分裂促進性との間の強い相関性（すなわち、ＭＡＣ値の有意な増加は分裂促進効果の有意な減少を招く）を本発明者らは見出している。したがって、本開示においては、ＭＡＣ値は、ある与えられた化学修飾に関する分裂促進性の潜在的減少を決定するための代用物として用いられる。
【０４５５】
Ｖ．制御可能な様態でコンジュゲートを放出するための架橋マテリアル
この一連の第５の実施例は、制御可能な様態でコンジュゲートを放出するための典型的な架橋マテリアルの製造を記載する。インスリン−グリコーゲンコンジュゲートを使用して製造されたマテリアルを使用して得られた比較例も含まれている。
【０４５６】
実施例１８
修飾ＣｏｎＡから製造された架橋マテリアル
実施例１４の化学修飾コンカナバリンＡの水溶液を実施例１のインスリンコンジュゲートの水溶液に加える。両成分の適当な比において、該インスリンコンジュゲートとレクチンとの間で不溶性架橋マテリアルが形成される。この架橋マテリアルは幾つかのレクチン：重合体質量比にわたって形成されうるであろう。しかし、しばしば、最大形成は１：２〜８：１のレクチン：コンジュゲート質量比で生じるであろう。該架橋マテリアルは、グルコースの濃度が増加すると溶解する。高濃度のグルコースを含有しない水性バッファーの添加は該架橋マテリアルの認識可能な溶解を引き起こさない。
【０４５７】
実施例１９
非糖尿病ラットにおけるＩＰＧＴＴ実験
実施例１８の架橋マテリアル０．３００ｍｌを、体重４００〜５００ｇの３匹の正常雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ｌｏｃａｔｉｏｎ）のそれぞれに皮下注射する。製剤の注射の前に、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｘｔｒａ糖測定器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）を使用して、尾静脈放血により血液グルコース値を測定し、約１００μｌの血清を尾静脈放血により得てバックグラウンドインスリンレベルに関してアッセイする。該研究期間中はラットの檻から餌を除去する。注射後３０分、６０分、９０分および１２０分の時点で血清および血液グルコース値を得る。該注射後１２０分の時点で、３８％  ｗ／ｖ  グルコース溶液の腹腔内注射を行って４ｇ／ｋｇ用量を投与し、ついで血清および血液グルコース値を１３５分、１５０分、１８０分、２１０分、２４０分および３００分の時点で得る。ついで、純粋なインスリンコンジュゲート溶液から作成された標準曲線を用いて、商業的に入手可能なＥＬＩＳＡキット（Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ＥＬＩＳＡ，Ｍｅｒｃｏｄｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して血清インスリン濃度を測定する。
【０４５８】
実施例２０
インスリン−グリコーゲン架橋マテリアルのグルコース応答性溶解に対する種々の動物血清の効果およびアミラーゼ活性に対する相関性
この実施例は、インスリン−グリコーゲンに基づくコンジュゲートを使用して合成されたグルコース応答性製剤に関するグルコース濃度の関数としての種々の動物血清におけるインビトロ溶解を記載する。該インスリン−グリコーゲンコンジュゲートは以下の方法により合成した。まず、ｐＨ８．２の２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＡ）中の１０ｍｇ／ｍｌ  組換えヒトインスリン溶液（ＲＨＩ）６２．５ｍｌをｐＨ９．０に調節し、氷上で冷却してＲＨＩストック溶液を得た。それとは別に、０．３１２ｍｌのトリエチルアミン（ＴＥＡ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＡ）を３ｍｌのＤＩ水に溶解してＴＥＡストック溶液を得た。それとは別に、０．３００ｇのシアノジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボラート（ＣＤＡＰ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を１．２ｍｌのＤＭＳＯに溶解してＣＤＡＰストック溶液を得た。それとは別に、１００ｍｇのマンノサミン−ＨＣｌ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を１．５ｍｌの１００ｍＭ  ｐＨ９  ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水に溶解し、ｐＨを９．０に調節してマンノサミンストック溶液を得た。それとは別に、２．０ｇのカキＩＸ型グリコーゲン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を４０ｍｌの１００ｍＭ  ｐＨ９  ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水に溶解し、ついで該溶液を濾過により清澄化し、氷浴上で冷却した。つぎに１ｍｌのＣＤＡＰストック溶液を該グリコーゲン溶液に加え、１分間混合し、ついで１ｍｌのＴＥＡ溶液を加え、得られた溶液のｐＨを９．０に調節した。さらに１分間攪拌した後、６２ｍｌの該ＲＨＩ溶液を加え、得られた溶液を５分間攪拌し、ついで１．０６５ｍｌの該マンノサミン溶液を加えた。該溶液を室温で一晩攪拌し、５０ｋＤａ  ＭＷＣＯポリエーテルスルホン円形膜フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用して脱イオン水に対して徹底的に限外濾過し、凍結乾燥した。ついで、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（商標）３０  ＨｉＬｏａｄ  １６／６０（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）充填カラム上で１Ｍ  酢酸移動相を使用するゲル濾過ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）により、得られた粉末を未コンジュゲート化インスリンから３回精製した。ついで該インスリングリコーゲン画分を凍結乾燥して、該コンジュゲートを純粋な白色粉末として得た。
【０４５９】
以下のとおり、２４個のグルコース応答性製剤を、多価架橋剤としてアセチル化ＣｏｎＡ（ＡＣＡ）を使用して製造した。ｐＨ７．０のＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中の２５ｍｇ／ｍｌ  インスリン−グリコーゲンコンジュゲート溶液２００μｌをｐＨ７．０のＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中の２５ｍｇ／ｍｌ  化学修飾アセチル化ＣｏｎＡ（ＡＣＡ）溶液２００μｌと混合し、２０分間放置した。つぎに各製剤を遠心分離し、４００μｌのｐＨ７．０のＨＥＰＥＳ緩衝食塩水で室温で５回洗浄した。最終洗浄および遠心分離の後、上清を捨て、残存不溶性マテリアルを５０μｌの１×ＰＢＳに分散させた。
【０４６０】
以下の形態で特定の量のグルコースを含有する個々の動物種からの５０μｌの血清と共に２４×５０μｌの分散液を９６ウェルプレートに加えた。
【表５】
2012520879.tif 000097
【０４６１】
該実験の開始時に各ウェルは白色不透明であるようであった（光透過の低下または４５０ｎｍでの吸光度（Ａ４５０）の上昇により測定された場合）。ついで該９６ウェルプレートを３７℃で６時間インキュベートし、ついで各ウェルのＡ４５０値を再び測定した。残存製剤の％を、Ａ４５０（最終）をＡ４５０（初期）で割り算し１００を掛け算することにより計算した。全てのマテリアルが溶解していたなら、Ａ４５０値はゼロに近く、これはほぼ０％の残存を示すものである。あるいは、マテリアルが全く溶解していなかったなら、Ａ４５０は初期値に近く、これはほぼ１００％の残存を示すものである。
【０４６２】
図８の結果は、インスリン−グリコーゲンから構築された架橋マテリアルが、緩衝食塩水中でインキュベートされた場合、６時間の研究にわたって、理想的なグルコース応答様態で溶解することを示している。しかし、ブタ血清中でインキュベートされた場合には、該マテリアルはグルコース濃度に無関係に完全に溶解する。ラット血清は幾らかのグルコース応答性を維持しているが、グルコースの非存在下でさえも６時間にわたって有意に溶解する。ヒト血清中でインキュベートされたマテリアルの２０％はグルコースの非存在下で尚も溶解する。
【０４６３】
これらの相違を、グリコーゲンのように直鎖状α−１，４グリコシド結合により連結されたオリゴ糖からの比色シグナルの生成を利用するマイクロプレートアッセイをまず開発することにより、各種の固有アミラーゼおよびグルコシダーゼ消化活性に相関させた。アミラーゼ活性を調べるために、４−ニトロフェニル  α−Ｄ−ペンタ−（１→４）−グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用し、４−ニトロフェニル  α−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して、グルコシダーゼ活性を調べた。各アッセイのために、１×ＰＢＳで量を増加させることにより個々の種からの血清を希釈し、既知濃度の比色レポーターを該溶液中に加え、ついで４０５ｎｍにおける吸光度シグナルを時間の関数として測定した。図９ａおよび９ｂは、それぞれアミラーゼおよびグルコシダーゼ活性に関して試験された種々の種の血清のそれぞれにおける酵素活性によるＡ４０５の生成を示す。ここで、ＰＢＳ中の１：８希釈において、ブタ血清はラット血清の場合の約１７倍の消化活性を示していることが分かる。さらに、これらの条件下で試験されたヒト血清においては活性がほとんど無いようである。したがって、それぞれの種の血清におけるマテリアル溶解プロファイルにおける相違は、基礎グリコーゲンコンジュゲートをその種の血清が消化する能力と直接的に相関しているようである。総合すると、これらの結果は、グリコーゲン消化の制約を回避しグルコース応答性マテリアルを尚も形成する生物活性コンジュゲート（例えば、本開示に記載されているもの）を設計するための原動力となった。
【０４６４】
他の実施形態
本発明の他の実施形態は、本明細書または本明細書に開示されている本発明の実施を考慮することにより当業者に明らかとなろう。本明細書および実施例は典型的なものに過ぎないとみなされ、本発明の真の範囲および精神は以下の特許請求の範囲により定められると意図される。
【図１】
2012520879.tif 000118
【図２】
2012520879.tif 000119
【図３】
2012520879.tif 000120
【図４】
2012520879.tif 000121
【図５】
2012520879.tif 000122
【図６】
2012520879.tif 000123
【図７】
2012520879.tif 000124
【図８】
2012520879.tif 000125
【図９】
2012520879.tif 000126
【図１０】
2012520879.tif 000127
【図１１】
2012520879.tif 000128
【配列表】
2012520879000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成23年11月17日(2011.11.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式のコンジュゲート：
【化１】
2012520879.tif 000129
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立して、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により
置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場
合により置換されていてもよいヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒｘは水素または場合により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである；
Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、
Ｚの１、２、３、４または５個のメチレン単位は、所望により且つ独立して、−Ｓ−、−
Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ
）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、場合により置換されていてもよいア
リーレン部分または場合により置換されていてもよいヘテロアリーレン部分から選択され
る１以上の基で置換されていてもよく、ここで、Ｒａは水素、場合により置換されていて
もよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されてい
てもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールまたは適当なアミノ
保護基であり、Ｒｂは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換さ
れていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置
換されていてもよいヘテロアリールである；
各場合のＸは、独立して、−ＯＲｃまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、ここで、Ｒｃは水
素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂
肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテ
ロアリール、適当なヒドロキシル保護基、カチオン基またはアフィニティーリガンドであ
り、各Ｒｄは、独立して、水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置
換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合によ
り置換されていてもよいヘテロアリール、適当なアミノ保護基またはアフィニティーリガ
ンドであり、ここで、Ｘの少なくとも２つはアフィニティーリガンドを含む；
Ｙは水素、ハロゲン、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換され
ていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換
されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、ここで、Ｒｅは水素
、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪
族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘ
テロアリールである；そして
ｎは５〜２５（５および２５も含む）の整数である］。
【請求項２】
以下の式のコンジュゲート：
【化２】
2012520879.tif 000130
［式中、
Ｒｘは水素または場合により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである；
Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、
Ｚの１、２、３、４または５個のメチレン単位は、所望により且つ独立して、−Ｓ−、−
Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ
）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、場合により置換されていてもよいア
リーレン部分または場合により置換されていてもよいヘテロアリーレン部分から選択され
る１以上の基で置換されていてもよく、ここで、Ｒａは水素、場合により置換されていて
もよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されてい
てもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールまたは適当なアミノ
保護基であり、Ｒｂは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換さ
れていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置
換されていてもよいヘテロアリールである；
各場合のＸは、独立して、−ＯＲｃまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、ここで、Ｒｃは水
素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂
肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテ
ロアリール、適当なヒドロキシル保護基、カチオン基またはアフィニティーリガンドであ
り、各Ｒｄは、独立して、水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置
換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合によ
り置換されていてもよいヘテロアリール、適当なアミノ保護基またはアフィニティーリガ
ンドであり、ここで、Ｘの少なくとも２つはアフィニティーリガンドを含む；
Ｙは水素、ハロゲン、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換され
ていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換
されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、ここで、Ｒｅは水素
、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪
族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘ
テロアリールである；そして
ｎは５〜２５（５および２５も含む）の整数である］。
【請求項３】
以下の式のコンジュゲート：
【化３】
2012520879.tif 000131
［式中、
Ｗは、共有的にコンジュゲート化された薬物または検出可能標識である；
------は単結合または二重結合に相当する；
Ｒｘは水素または場合により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである；
Ｚは、場合により置換されていてもよい２価Ｃ１−１０炭化水素鎖であり、ここで、
Ｚの１、２、３、４または５個のメチレン単位は、所望により且つ独立して、−Ｓ−、−
Ｏ−、−ＮＲａ−、−（Ｃ＝ＮＲａ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｓ＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ
）２−、−（ＣＲｂ＝ＣＲｂ）−、−（Ｎ＝Ｎ）−、場合により置換されていてもよいア
リーレン部分または場合により置換されていてもよいヘテロアリーレン部分から選択され
る１以上の基で置換されていてもよく、ここで、Ｒａは水素、場合により置換されていて
もよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されてい
てもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリールまたは適当なアミノ
保護基であり、Ｒｂは水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換さ
れていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置
換されていてもよいヘテロアリールである；
各場合のＸは、独立して、−ＯＲｃまたは−Ｎ（Ｒｄ）２であり、ここで、Ｒｃは水
素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂
肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテ
ロアリール、適当なヒドロキシル保護基、カチオン基またはアフィニティーリガンドであ
り、各Ｒｄは、独立して、水素、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置
換されていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合によ
り置換されていてもよいヘテロアリール、適当なアミノ保護基またはアフィニティーリガ
ンドであり、ここで、Ｘの少なくとも２つはアフィニティーリガンドを含む；
Ｙは水素、ハロゲン、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換され
ていてもよいヘテロ脂肪族、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換
されていてもよいヘテロアリール、−ＯＲｅまたは−ＳＲｅであり、ここで、Ｒｅは水素
、場合により置換されていてもよい脂肪族、場合により置換されていてもよいヘテロ脂肪
族、場合により置換されていてもよいアリールまたは場合により置換されていてもよいヘ
テロアリールである；そして
ｎは５〜２５（５および２５も含む）の整数である］。
【請求項４】
基：
【化４】
2012520879.tif 000132
が、基：
【化５】
2012520879.tif 000133
［式中、（ｍ＋ｐ）の和はｎに等しい］の混合物に相当する、請求項１〜３のいずれか１
項記載のコンジュゲート。
【請求項５】
少なくとも２つのＸが、糖を含むアフィニティーリガンドを含む、請求項１〜３のいず
れか１項記載のコンジュゲート。
【請求項６】
少なくとも２つのＸが、グルコース、マンノース、グルコサミン、マンノサミン、メチ
ルグルコース、メチルマンノース、エチルグルコースおよびエチルマンノースからなる群
から選択される糖を含むアフィニティーリガンドを含む、請求項５記載のコンジュゲート
。
【請求項７】
少なくとも２つのＸが、ビマンノースまたはトリマンノースを含むアフィニティーリガ
ンドを含む、請求項５記載のコンジュゲート。
【請求項８】
少なくとも２つのＸが、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース
（ＡＥＭ）、アミノエチルビマンノース（ＡＥＢＭ）およびアミノエチルトリマンノース
（ＡＥＴＭ）から選択されるアフィニティーリガンドを含む、請求項５記載のコンジュゲ
ート。
【請求項９】
Ｗが、共有的にコンジュゲート化された薬物である、請求項３記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
該薬物がインスリン分子である、請求項９記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
該コンジュゲートが、式：
【化６】
2012520879.tif 000134
【化７】
2012520879.tif 000135
または、
【化８】
2012520879.tif 000136
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｘ、Ｙおよびｎは請求項１に定義されているとおりである）
を有する、請求項１記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
該コンジュゲートが、式：
【化９】
2012520879.tif 000137
【化１０】
2012520879.tif 000138
または、
【化１１】
2012520879.tif 000139
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは請求項２に定義されているとおりである）を有する、請
求項２記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
該コンジュゲートが、式：
【化１２】
2012520879.tif 000140
【化１３】
2012520879.tif 000141
または、
【化１４】
2012520879.tif 000142
（式中、------、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｒｘおよびｎは請求項３に定義されているとおりである）
を有する、請求項３記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
（ａ）触媒、開始化合物および１以上の単量体の混合物を提供し、
（ｂ）該混合物を重合させる工程を含む、請求項１記載のコンジュゲートの製造方法で
あって、該開始化合物が、式：
【化１５】
2012520879.tif 000143
（式中、Ｕ＊は適当な脱離基である）を有するか、またはそれらの混合物であり、該単量
体が、式：
【化１６】
2012520879.tif 000144
を有する、製造方法。
【請求項１５】
（ａ）フリーラジカル開始剤と１以上の単量体との混合物を提供し、
（ｂ）該混合物を重合させ、
（ｃ）連鎖停止剤を加えることにより該重合を停止させる工程を含む、請求項１記載の
コンジュゲートの製造方法であって、該単量体が、式：
【化１７】
2012520879.tif 000145
を有し、該連鎖停止剤が、式：
【化１８】
2012520879.tif 000146
（式中、Ｑは、−ＳＨ、−ＯＨまたは−ＮＨ２から選択される）の化合物またはそれらの
混合物である、製造方法。
【請求項１６】
（ａ）請求項１記載のコンジュゲートを提供し、
（ｂ）該コンジュゲートを適当な脱保護条件下で処理して、請求項２記載のコンジュゲ
ートを得る工程を含む、請求項２記載のコンジュゲートの製造方法。
【請求項１７】
（ａ）請求項２記載のコンジュゲートを提供し、
（ｂ）少なくとも１つの遊離アミノ基を含む薬物または検出可能標識を提供し、
（ｃ）該アミノ基を還元的アミノ化によりアルデヒドにカップリングさせて、請求項３
記載のコンジュゲートを得る工程を含む、請求項３記載のコンジュゲートの製造方法。
【請求項１８】
請求項３記載のコンジュゲートと、
該コンジュゲートのアフィニティーリガンドに非共有結合し、それにより該コンジュゲ
ートを架橋して、架橋されたマテリアルを形成する多価架橋剤とを含む、架橋されたマテ
リアルであって、該多価架橋剤と該アフィニティーリガンドとの間の非共有結合が過剰量
の標的分子の存在下で競合的に解離される、架橋されたマテリアル。
【請求項１９】
該標的分子がグルコースであり、該コンジュゲートのアフィニティーリガンドが糖を含
む、請求項１８記載のマテリアル。
【請求項２０】
該多価架橋剤がレクチンを含む、請求項１８記載のマテリアル。
【請求項２１】
該レクチンが化学修飾されている、請求項２０記載のマテリアル。
【請求項２２】
該多価架橋剤がペプチドアプタマーを含む、請求項１８記載のマテリアル。
【請求項２３】
該コンジュゲートにおけるＷが薬物である、請求項１８記載のマテリアル。
【請求項２４】
該薬物がインスリン分子である、請求項２３記載のマテリアル。
【請求項２５】
請求項１８〜２４のいずれか１項記載のマテリアルを患者に投与することを含む方法。
【国際調査報告】
2012520879.tif 000147