【手続補正書】
【提出日】令和2年7月6日(2020.7.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）修飾ヒト活性第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩａ）ポリペプチドであって、
前記ＦＶＩＩａのＣ末端に直列に結合した３個のＣＴＰ分子を含み、
前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａポリペプチドは、実質的に純粋な活性型であり、
前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａポリペプチドは、
ａ．高シアル酸含量；
ｂ．高グリコシル化型を含み、
前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａは、
ｃ．低酸化型；
ｄ．高い比率のカルボキシル化グルタミン酸残基；
ｅ．少なくとも６０％の荷電Ｎ−グリカン；
ｆ．少なくとも１０，５００Ｕ／ｍｇの効力；
またはこれらの任意の組み合わせ、の内の少なくとも１つをさらに含み、
前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａは、配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む、ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａ。
【請求項２】
前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａのアミノ酸配列は、配列番号７のシステイン残基１３５とシステイン残基２６２との間のジスルフィド（Ｓ−Ｓ）架橋を含むジスルフィド結合二本鎖ヘテロダイマーの構造として存在し、前記二本鎖は、配列番号７のアミノ酸１〜１５２を含む軽鎖およびアミノ酸１５３〜４９０を含む重鎖を含む、請求項１に記載のＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａ。
【請求項３】
ａ．前記高シアル酸含量が、少なくとも１５ｍｏｌ／ｍｏｌからなる、
ｂ．前記高グリコシル化型が、少なくとも１０ｍｏｌ／ｍｏｌのＯ−グリカン含量を含む、
ｃ．前記低い比率の酸化型が、５％未満からなる、
ｄ．前記高い比率のカルボキシル化グルタミン酸（Ｇｌａ）残基が、少なくとも９０％のＧｌａ残基からなる、
ｅ．荷電Ｎ−グリカンの前記比率が、８５．３％および８４．２％からなる群から選択される、
ｆ．前記効力が、１５，５６３Ｕ／ｍｇ、１６，７２０Ｕ／ｍｇ、２２，４７８Ｕ／ｍｇおよび２３，６０８Ｕ／ｍｇからなる群から選択される、
ｇ．前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａが、ＣＴＰ当たり、少なくとも４つのＯ結合型グリコシル化部位のグリコシル化を含む、
または、これらの任意の組み合わせを含む、
請求項１または２に記載のＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａ。
【請求項４】
ａ．前記実質的に純粋な活性型が、少なくとも６０％の前記活性ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａの高グリコシル化型を含む、
ｂ．前記純度パーセンテージが、９７．３％、９７．６％、９７．４％および９７．０％からなる群から選択される、
または、これらの任意の組み合わせを含む、
請求項１〜３のいずれか１項に記載のＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａ。
【請求項５】
ヒト絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）修飾ヒト活性第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩａ）ポリペプチドの製造方法であって、
前記ポリペプチドが、ＦＶＩＩのＣ末端に直列に結合した３個のＣＴＰ分子を含み、
前記方法が、
（Ｉ）所定の数の細胞に前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩをコードするコード部分を含む発現ベクターを安定に遺伝子導入するステップであって、
（ＩＩ）前記遺伝子導入された細胞が、前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩを発現および分泌する、該ステップ；
（ＩＩＩ）前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩを過剰発現する細胞クローンを取得するステップ；
（ＩＶ）溶液中で前記クローンを所定の規模まで増殖するステップ；
（Ｖ）前記クローンを含有する前記溶液をハーベストするステップ；
（ＶＩ）前記クローンを含む前記溶液を濾過し、前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩを含む清澄化ハーベスト溶液を得るステップ；および
（ＶＩＩ）前記清澄化ハーベスト溶液からＣＴＰ修飾ＦＶＩＩを精製および活性化して、目的の濃度のＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａを有する精製されたタンパク質溶液を得て、それによりＣＴＰ修飾ＦＶＩＩを製造するステップを含み；
前記製造されたＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａが、
ａ．少ない酸化型；
ｂ．高い比率のカルボキシル化グルタミン酸残基；
ｃ．少なくとも６０％の荷電Ｎ−グリカン；または
ｄ．少なくとも１０，５００Ｕ／ｍｇの効力；
の内の少なくとも１つを含み、
前記製造されたＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａのアミノ酸配列は、配列番号７で示される、方法。
【請求項６】
前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａポリペプチドの純度が、少なくとも９０％であるか、または、９７．３％、９７．６％、９７．４％および９７．０％からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ａ．前記増殖するステップが、前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩを最適に発現および分泌するワーキングセルバンク（ＷＣＢ）から得たクローンを増殖することを含むか、または、
前記増殖するステップが、前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩを最適に発現および分泌するマスターセルバンク（ＭＣＢ）から得たクローンを増殖することを含む、
ｂ．前記製造方法が、動物不含プロセスである、
ｃ．前記クローンが、少なくとも４０ｍｇ／ＬのレベルでＣＴＰ修飾ＦＶＩＩを発現および分泌する、
ｄ．前記クローンが、一連の継代培養ステップにより、生産バイオリアクターのレベルまで溶液中で増殖される、
ｅ．ウィルス除去が、約２２のウィルス対数減少係数（ＬＲＦ）を示す、
または、これらの任意の組み合わせを含む、
請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
前記バイオリアクターが、使い捨て型のバイオリアクターまたはステンレス鋼バイオリアクターを含むか、または、
前記バイオリアクターが、流加バッチ方式バイオリアクターとして運転される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記清澄化ハーベストの前記精製が、
前記清澄化ハーベスト溶液に、アフィニティカラム、マルチモデルまたは混合モードカラム、疎水性相互作用カラム、およびアニオン交換カラムを順次通過させるステップであって、前記陰イオン交換溶出液が、限外濾過／透析濾過ステップに供されるステップ；および
前記清澄化ハーベスト中または前記クロマトグラフィーカラムのいずれか後に収集した前記溶出液中、またはこれらの任意の組み合わせ中に存在するウィルスを不活化するステップであって、ウィルスの不活化が、前記ウィルスに対し毒性の溶液中でのインキュベーションもしくはナノ濾過、またはこれらの任意の組み合わせを含む、該ステップ；を含むステップを実施することを含み、
それにより、精製されたＣＴＰ修飾ＦＶＩＩに到達する、請求項５〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ウィルス除去が、約２２のウィルス対数減少係数（ＬＲＦ）を示す、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ａ．前記製造されたＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａが、高度グリコシル化されている、
ｂ．前記製造されたＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａが、高Ｏ−グリカン含量を含む、
または、これらの任意の組み合わせを含む、
請求項５〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記製造されたＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａのグリコシル化パターンが、ＣＴＰ当たり、少なくとも４つのＯ結合型グリコシル化部位のグリコシル化を含む、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
ａ．前記製造されたＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａが、高度にシアル化されている、
ｂ．前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａが、少なくとも１５ｍｏｌ／ｍｏｌからなるシアル酸含量を含む、
ｃ．前記高Ｏ−グリカン含量が、少なくとも１０ｍｏｌ／ｍｏｌからなるＯ−グリカン含量を含む、
ｄ．前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａの低い比率の酸化型が、５％未満の酸化型からなる、
ｅ．前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａの高い比率のカルボキシル化グルタミン酸残基（Ｇｌａ）が、少なくとも９０％のＧｌａからなる、
ｆ．荷電Ｎ−グリカンの前記比率が、８５．３％および８４．２％からなる群から選択される、
ｇ．前記効力が、１５，５６３Ｕ／ｍｇ、１６，７２０Ｕ／ｍｇ、２２，４７８Ｕ／ｍｇおよび２３，６０８Ｕ／ｍｇからなる群から選択される、
ｈ．前記方法が、高度グリコシル化ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａの少なくとも２０％の回収率を達成する、
ｉ．前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａポリペプチドの回収率が、９７．３、９７．６、９７．４および９７．０％からなる群から選択される、
または、これらの任意の組み合わせを含む、
請求項５〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａの少なくとも６０％が、カルボキシル化グルタミン酸残基（Ｇｌａ）の高グリコシル化型を含む、請求項５〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記製造されたＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａのアミノ酸配列が、配列番号７のシステイン残基１３５とシステイン残基２６２との間のジスルフィド（Ｓ−Ｓ）架橋を含むジスルフィド結合二本鎖ヘテロダイマーの構造として存在し、
前記二本鎖が、配列番号７のアミノ酸１〜１５２を含む軽鎖およびアミノ酸１５３〜４９０を含む重鎖を含む、請求項５〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
ヒト絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）修飾ヒト活性第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩａ）ポリペプチドであって、
前記ＦＶＩＩのＣ末端に直列に結合した３個のＣＴＰ分子を含み、
請求項５〜１５のいずれか１項に記載の方法により製造される、ＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａポリペプチド。
【請求項１７】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のＣＴＰ修飾ＦＶＩＩａと、薬学的に許容可能なキャリアとを含む、組成物。