【手続補正書】
【提出日】令和2年8月17日(2020.8.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
成体細胞をインスリン産生細胞に機能的に再プログラミングする方法であって、
（ａ）ヒト対象から末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団を単離するステップ；
（ｂ）臍帯血または末梢血から血小板様細胞を含む血小板に富む画分を単離するステップ；
（ｃ）ステップ（ａ）のＰＢＭＣの集団と、ステップ（ｂ）の血小板に富む画分とをｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させるステップであって、接触が、ＰＢＭＣを、１つまたは複数の胚性バイオマーカーを発現する未熟細胞型に再プログラミングするのに有効である、ステップ；および
（ｄ）インスリン産生細胞集団を生成するのに有効な培養条件下、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで未熟細胞型を増殖させるステップであって、インスリン産生細胞集団がヒトベータ細胞特異的転写因子を発現し、ヒト膵臓ベータ細胞と機能的に同等である、ステップ
を含む、方法。
【請求項２】
ステップ（ａ）の成体ＰＢＭＣがＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ勾配画分から単離される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
血小板様細胞を含む血小板に富む画分が、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ勾配画分から単離される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
血小板様細胞を含む血小板に富む画分が、全細胞、マイクロパーティクル、エキソソーム、溶解した細胞、およびアルファ顆粒のうちの１つまたは複数を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
全細胞、マイクロパーティクル、エキソソーム、溶解した細胞、およびアルファ顆粒のうちの１つまたは複数を含む、血小板様細胞を含む血小板に富む画分が、転写因子、増殖因子、またはその両方を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
全細胞が、造血幹細胞、造血始原細胞、共通リンパ球始原細胞、共通骨髄始原細胞、巨核球−赤血球始原細胞、顆粒球−単球始原細胞、巨核球系列に決定された始原細胞、巨核球、および血小板様細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ｃ）に由来する１つまたは複数の胚性バイオマーカーを発現する未熟細胞型が、ＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＮＫＸ６．１、ＭＡＦＡ、Ｓｕｒ１、Ｋｉｒ６．２、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７０、ガレクチン９、ＴＧＦ−β１、ＡＩＲＥ、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＬ２のうちの１つまたは複数を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか1項に記載の方法によって得られるインスリン産生細胞集団を含む細胞生成物。
【請求項９】
高血糖を特徴とする疾患に罹患するレシピエント対象を処置するための方法において使用するための請求項８に記載の細胞生成物であって、前記方法は、
（ａ）ヒトドナーから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団を単離するステップ；
（ｂ）ドナーの臍帯血または末梢血から血小板様細胞を含む血小板に富む画分を単離するステップ；
（ｃ）ステップ（ａ）のＰＢＭＣの集団と、ステップ（ｂ）の血小板に富む画分とをｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させるステップであって、接触が、ＰＢＭＣを、１つまたは複数の胚性バイオマーカーを発現する未熟細胞型に再プログラミングするのに有効である、ステップ；
（ｄ）治療量のインスリン産生細胞集団を含有する細胞生成物を生成するのに有効な培養条件下、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで未熟細胞型を増殖させるステップであって、インスリン産生細胞集団がヒトベータ細胞特異的転写因子を発現し、ヒト膵臓ベータ細胞と機能的に同等である、ステップ；および
（ｅ）ステップ（ｄ）に由来する細胞生成物をレシピエント対象に投与するステップ
を含み、
ステップ（ｄ）に由来する治療有効量のインスリン産生細胞集団を含有する細胞生成物が、高血糖症の症状を軽減するのに有効である、前記細胞生成物。
【請求項１０】
ドナーとレシピエント対象が同じ個体である、請求項９に記載の細胞生成物。
【請求項１１】
高血糖症が自己免疫疾患である、請求項９に記載の細胞生成物。
【請求項１２】
自己免疫疾患が糖尿病である、請求項１１に記載の細胞生成物。
【請求項１３】
自己免疫疾患が１型糖尿病である、請求項１１に記載の細胞生成物。
【請求項１４】
ドナーがレシピエント対象に対して同種異系である、請求項９に記載の細胞生成物。
【請求項１５】
インスリン産生細胞集団がヒトベータ細胞特異的転写因子を発現し、ヒト膵臓ベータ細胞と機能的に同等である、治療量のインスリン産生細胞集団を含有する細胞生成物を含む医薬組成物であって、医薬組成物が、
（ａ）ヒトドナーから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団を単離するステップ；
（ｂ）ドナーの臍帯血または末梢血から血小板様細胞を含む血小板に富む画分を単離するステップ；
（ｃ）ステップ（ａ）のＰＢＭＣの集団と、ステップ（ｂ）の血小板に富む画分とをｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させるステップであって、接触が、ＰＢＭＣを、１つまたは複数の胚性バイオマーカーを発現する未熟細胞型に再プログラミングするのに有効である、ステップ；
（ｄ）治療有効量のインスリン産生細胞集団を含有する細胞生成物を生成するのに有効な培養条件下、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで未熟細胞型を増殖させるステップであって、インスリン産生細胞集団がヒトベータ細胞特異的転写因子を発現し、ヒト膵臓ベータ細胞と機能的に同等である、ステップ；および
（ｅ）細胞生成物を薬学的に許容される担体と共に製剤化して、医薬組成物を形成させるステップ
を含むプロセスによって産生され、
ステップ（ｄ）に由来する治療有効量のインスリン産生細胞集団を含有する細胞生成物が、高血糖症の症状を軽減するのに有効であり、
ステップ（ｃ）の１つまたは複数の胚性バイオマーカーを発現する未熟細胞型が、ＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＮＫＸ６．１、ＭＡＦＡ、Ｓｕｒ１、Ｋｉｒ６．２、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７０、ガレクチン９、ＴＧＦ−β１、ＡＩＲＥ、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＬ２のうちの１つまたは複数について陽性であり、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＬ１について陰性である細胞の集団を含む、医薬組成物。
【請求項１６】
ＣＸＣＬ１０、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＬ１について陰性である、ＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＮＫＸ６．１、ＭＡＦＡ、Ｓｕｒ１、Ｋｉｒ６．２、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７０、ガレクチン９、ＴＧＦ−β１、ＡＩＲＥ、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＬ２のうちの１つまたは複数を提示する機能的に再プログラミングされた成体細胞の集団。
【請求項１７】
機能的に再プログラミングされた細胞がインスリンを産生することができる、請求項１６に記載の成体細胞の集団。
【請求項１８】
インスリン産生細胞集団がヒトベータ細胞特異的転写因子を発現し、ヒト膵臓ベータ細胞と機能的に同等である、治療量のインスリン産生細胞集団を含有する細胞生成物を含む医薬組成物の、高血糖対象への送達のために製剤化された薬剤の調製のための、使用であって、インスリン産生細胞集団が、
（ａ）ヒトドナーから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団を単離するステップ；
（ｂ）ドナーの臍帯血または末梢血から血小板様細胞を含む血小板に富む画分を単離するステップ；
（ｃ）ステップ（ａ）のＰＢＭＣの集団と、ステップ（ｂ）の血小板に富む画分とをｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させるステップであって、接触が、ＰＢＭＣを、１つまたは複数の胚性バイオマーカーを発現する未熟細胞型に再プログラミングするのに有効である、ステップ；および
（ｄ）細胞生成物を生成するのに有効な培養条件下、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで未熟細胞型を増殖させるステップ
を含むプロセスによって産生される、使用。
【請求項１９】
高血糖が、自己免疫疾患の結果生じ、治療量が、自己免疫疾患の症状を改善するのに有効である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
疾患が１型糖尿病である、請求項１９に記載の使用。