【手続補正書】
【提出日】令和2年10月9日(2020.10.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＴ細胞受容体アルファ（ＴＣＲα）遺伝子における標的部位を切断するＩ−ＯｎｕＩホーミングエンドヌクレアーゼ（ＨＥ）バリアントを含むポリペプチドであって、前記Ｉ−ＯｎｕＩバリアントは、配列番号７〜８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列またはその生物学的に活性な断片に少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項２】
前記生物学的に活性な断片は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する対応する野生型Ｉ−ＯｎｕＩ  ＨＥと比較して、１、２、３、４、５、６、７、または８個のＮ末端アミノ酸を欠失している、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記生物学的に活性な断片は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する対応する野生型Ｉ−ＯｎｕＩ  ＨＥと比較して、１、２、３、４、または５個のＣ末端アミノ酸を欠失している、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記Ｉ−ＯｎｕＩ  ＨＥバリアントは、配列番号７〜８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列またはその生物学的に活性な断片を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記ポリペプチドは、配列番号１７に示されるポリヌクレオチド配列に結合する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインをさらに含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインは、１１．５個のＴＡＬＥ反復単位を含み、かつ配列番号１９に示されるポリヌクレオチド配列に結合する、請求項６に記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインは、１０．５個のＴＡＬＥ反復単位を含み、かつ配列番号１８に示されるポリヌクレオチド配列に結合する、請求項６に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記ポリペプチドは、配列番号２０に示されるポリヌクレオチド配列に結合し、かつそれを切断する、請求項６〜８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
（ａ）ペプチドリンカーおよび／またはウイルス自己切断型２Ａペプチド、ならびに
（ｂ）３’−５’エキソヌクレアーゼまたはその生物学的に活性な断片
をさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
前記３’−５’エキソヌクレアーゼは、Ｔｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片を含む、請求項１０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、細胞。
【請求項１５】
前記細胞は、造血細胞、Ｔ細胞、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、および／またはＣＤ８＋細胞、免疫エフェクター細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、請求項１４に記載の細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
特定の実施形態において、細胞の源は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織（ｉｓｓｕｅ）、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍である。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒトＴ細胞受容体アルファ（ＴＣＲα）遺伝子における標的部位を切断するＩ−ＯｎｕＩホーミングエンドヌクレアーゼ（ＨＥ）バリアントを含むポリペプチドであって、前記バリアントは、配列番号１〜５のいずれか１つ、またはその生物学的に活性な断片のアミノ酸置換：Ｌ２６Ｉ、Ｒ２８Ｄ、Ｎ３２Ｒ、Ｋ３４Ｎ、Ｓ３５Ｅ、Ｖ３７Ｎ、Ｇ３８Ｒ、Ｓ４０Ｒ、Ｅ４２Ｓ、Ｇ４４Ｒ、Ｖ６８Ｋ、Ａ７０Ｔ、Ｇ７３Ｓ、Ｎ７５Ｒ、Ｓ７８Ｍ、Ｋ８０Ｒ、Ｌ１３８Ｍ、Ｔ１４３Ｎ、Ｓ１５９Ｐ、Ｓ１７６Ａ、Ｃ１８０Ｈ、Ｆ１８２Ｇ、Ｉ１８６Ｋ、Ｓ１８８Ｖ、Ｓ１９０Ｇ、Ｋ１９１Ｔ、Ｌ１９２Ａ、Ｇ１９３Ｋ、Ｑ１９５Ｙ、Ｑ１９７Ｇ、Ｖ１９９Ｒ、Ｓ２０１Ａ、Ｔ２０３Ｓ、Ｋ２０７Ｒ、Ｙ２２３Ｓ、Ｋ２２５Ｒ、Ｓ２３３Ｒ、Ｄ２３６Ｅ、およびＶ２３８Ｅを含む、ポリペプチド。
（項目２）
ヒトＴ細胞受容体アルファ（ＴＣＲα）遺伝子における標的部位を切断するＩ−ＯｎｕＩホーミングエンドヌクレアーゼ（ＨＥ）バリアントを含むポリペプチドであって、前記バリアントは、配列番号１〜５のいずれか１つ、またはその生物学的に活性な断片のアミノ酸置換：Ｌ２６Ｉ、Ｒ２８Ｄ、Ｎ３２Ｒ、Ｋ３４Ｎ、Ｓ３５Ｅ、Ｖ３７Ｎ、Ｇ３８Ｒ、Ｓ４０Ｒ、Ｅ４２Ｓ、Ｇ４４Ｒ、Ｖ６８Ｋ、Ａ７０Ｔ、Ｇ７３Ｓ、Ｎ７５Ｒ、Ｓ７８Ｍ、Ｋ８０Ｒ、Ｌ１３８Ｍ、Ｔ１４３Ｎ、Ｓ１５９Ｐ、Ｓ１７６Ａ、Ｅ１７８Ｄ、Ｃ１８０Ｈ、Ｆ１８２Ｇ、Ｉ１８６Ｋ、Ｓ１８８Ｖ、Ｓ１９０Ｇ、Ｋ１９１Ｔ、Ｌ１９２Ａ、Ｇ１９３Ｋ、Ｑ１９５Ｙ、Ｑ１９７Ｇ、Ｖ１９９Ｒ、Ｓ２０１Ａ、Ｔ２０３Ｓ、Ｋ２０７Ｒ、Ｙ２２３Ｓ、Ｋ２２５Ｒ、Ｓ２３３Ｒ、Ｄ２３６Ｅ、およびＶ２３８Ｅを含む、ポリペプチド。
（項目３）
前記生物学的に活性な断片は、対応する野生型Ｉ−ＯｎｕＩ  ＨＥと比較して、１、２、３、４、５、６、７、または８個のＮ末端アミノ酸を欠失している、項目１または項目２に記載のポリペプチド。
（項目４）
前記生物学的に活性な断片は、対応する野生型Ｉ−ＯｎｕＩ  ＨＥと比較して、４個のＮ末端アミノ酸を欠失している、項目３に記載のポリペプチド。
（項目５）
前記生物学的に活性な断片は、対応する野生型Ｉ−ＯｎｕＩ  ＨＥと比較して、８個のＮ末端アミノ酸を欠失している、項目３に記載のポリペプチド。
（項目６）
前記生物学的に活性な断片は、対応する野生型Ｉ−ＯｎｕＩ  ＨＥと比較して、１、２、３、４、または５個のＣ末端アミノ酸を欠失している、項目１または項目２に記載のポリペプチド。
（項目７）
前記生物学的に活性な断片は、対応する野生型Ｉ−ＯｎｕＩ  ＨＥと比較して、Ｃ末端アミノ酸を欠失している、項目６に記載のポリペプチド。
（項目８）
前記生物学的に活性な断片は、対応する野生型Ｉ−ＯｎｕＩ  ＨＥと比較して、２個のＣ末端アミノ酸を欠失している、項目６に記載のポリペプチド。
（項目９）
前記Ｉ−ＯｎｕＩ  ＨＥバリアントは、配列番号７〜８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列またはその生物学的に活性な断片に少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１〜８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目１０）
前記ＨＥバリアントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列またはその生物学的に活性な断片を含む、項目１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目１１）
前記ＨＥバリアントは、配列番号８に示されるアミノ酸配列またはその生物学的に活性な断片を含む、項目１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目１２）
前記ポリペプチドは、配列番号１７に示されるポリヌクレオチド配列に結合する、項目１〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目１３）
ＤＮＡ結合ドメインをさらに含む、項目１〜１２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目１４）
前記ＤＮＡ結合ドメインは、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよび亜鉛フィンガーＤＮＡ結合ドメインからなる群より選択される、項目１３に記載のポリペプチド。
（項目１５）
前記ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインは、約９．５個のＴＡＬＥ反復単位、約１０．５個のＴＡＬＥ反復単位、約１１．５個のＴＡＬＥ反復単位、約１２．５個のＴＡＬＥ反復単位、約１３．５個のＴＡＬＥ反復単位、約１４．５個のＴＡＬＥ反復単位、または約１５．５個のＴＡＬＥ反復単位を含む、項目１４に記載のポリペプチド。
（項目１６）
前記ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインは、１１．５個のＴＡＬＥ反復単位を含み、かつ配列番号１９に示されるポリヌクレオチド配列に結合する、項目１４または項目１５に記載のポリペプチド。
（項目１７）
前記ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインは、１０．５個のＴＡＬＥ反復単位を含み、かつ配列番号１８に示されるポリヌクレオチド配列に結合する、項目１４または項目１５に記載のポリペプチド。
（項目１８）
前記ポリペプチドは、配列番号２０に示されるポリヌクレオチド配列に結合し、かつそれを切断する、項目１４〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目１９）
前記亜鉛フィンガーＤＮＡ結合ドメインは、２、３、４、５、６、７、または８個の亜鉛フィンガーモチーフを含む、項目１４に記載のポリペプチド。
（項目２０）
ペプチドリンカーおよびエンドプロセシング酵素またはその生物学的に活性な断片をさらに含む、項目１〜１９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目２１）
ウイルス自己切断型２Ａペプチドおよびエンドプロセシング酵素またはその生物学的に活性な断片をさらに含む、項目１〜２０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目２２）
前記エンドプロセシング酵素またはその生物学的に活性な断片は、５’−３’エキソヌクレアーゼ、５’−３’アルカリエキソヌクレアーゼ、３’−５’エキソヌクレアーゼ、５’フラップエンドヌクレアーゼ、ヘリカーゼ、またはテンプレート非依存性ＤＮＡポリメラーゼ活性を有する、項目２０または項目２１に記載のポリペプチド。
（項目２３）
前記エンドプロセシング酵素は、Ｔｒｅｘ２またはその生物学的に活性な断片を含む、項目２０〜２２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目２４）
前記ポリペプチドは、配列番号１０〜１２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列またはその生物学的に活性な断片を含む、項目１〜２３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目２５）
前記ポリペプチドは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列またはその生物学的に活性な断片を含む、項目２４に記載のポリペプチド。
（項目２６）
前記ポリペプチドは、配列番号１１に示されるアミノ酸配列またはその生物学的に活性な断片を含む、項目２４に記載のポリペプチド。
（項目２７）
前記ポリペプチドは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列またはその生物学的に活性な断片を含む、項目２４に記載のポリペプチド。
（項目２８）
項目１〜２７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
（項目２９）
項目１〜２７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするｍＲＮＡ。
（項目３０）
項目１〜２７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするｃＤＮＡ。
（項目３１）
項目１〜２７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、ベクター。
（項目３２）
項目１〜２７のいずれか１項に記載のポリペプチドを含む、細胞。
（項目３３）
項目１〜２７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、細胞。
（項目３４）
項目２７に記載のベクターを含む細胞。
（項目３５）
項目１〜２７のいずれか１項に記載のポリペプチドにより編集された細胞。
（項目３６）
前記細胞は造血細胞である、項目３２〜３５のいずれか１項に記載の細胞。
（項目３７）
前記細胞はＴ細胞である、項目３２〜３６のいずれか１項に記載の細胞。
（項目３８）
前記細胞はＣＤ３＋、ＣＤ４＋、および／またはＣＤ８＋細胞である、項目３２〜３７のいずれか１項に記載の細胞。
（項目３９）
前記細胞は免疫エフェクター細胞である、項目３２〜３８のいずれか１項に記載の細胞。
（項目４０）
前記細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である、項目３２〜３９のいずれか１項に記載の細胞。
（項目４１）
前記細胞はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、項目３２〜３９のいずれか１項に記載の細胞。
（項目４２）
前記細胞の源は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺問題（ｉｓｓｕｅ）、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍である、項目３２〜４１のいずれか１項に記載の細胞。