【手続補正書】
【提出日】令和2年3月25日(2020.3.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コードされたマイクロＲＮＡクラスターを含むレンチウイルスベクターであって、前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、配列番号３１と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む、レンチウイルスベクター。
【請求項２】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、配列番号３１と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項３】
パッケージング細胞によって生成され、かつ標的細胞に感染することができるレンチウイルス粒子であって、
ａ．前記標的細胞に感染することができるエンベロープタンパク質；および
ｂ．配列番号３１と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むコードされたマイクロＲＮＡクラスター
を含む、レンチウイルス粒子。
【請求項４】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、配列番号３１と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項３に記載のレンチウイルス粒子。
【請求項５】
前記標的細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項３に記載のレンチウイルス粒子。
【請求項６】
レンチウイルス粒子に感染した初代Ｔ細胞を含む改変細胞であって、前記レンチウイルス粒子は、
ａ．前記標的細胞に感染することができるエンベロープタンパク質；および
ｂ．配列番号３１と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むコードされたマイクロＲＮＡクラスター
を含む、改変細胞。
【請求項７】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、配列番号３１と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項６に記載の改変細胞。
【請求項８】
前記初代Ｔ細胞が、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項６に記載の改変細胞。
【請求項９】
ＨＩＶに感染した細胞を処置する方法であって、
ａ．ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる、ＨＩＶに感染した被験体から単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を治療有効量のｅｘ  ｖｉｖｏ刺激剤と接触させるか、または接触させてあるステップと、
ｂ．前記ＰＢＭＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏでレンチウイルス粒子によって形質導入するか、または形質導入してあるステップであって、ここで、前記レンチウイルス粒子は、
ｉ．前記ＰＢＭＣに感染することができるエンベロープタンパク質；および
ｉｉ．配列番号３１と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むコードされたマイクロＲＮＡクラスター
を含む、ステップと、
ｃ．少なくとも約１日間にわたって、形質導入された前記ＰＢＭＣを培養するか、または培養してあるステップとを含む、方法。
【請求項１０】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、配列番号３１と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
請求項９に記載の方法によって産生された形質導入されたＰＢＭＣを含む組成物であって、前記組成物が、被験体に注入されるか、または注入されていることを特徴とする、組成物。
【請求項１２】
前記ＰＢＭＣからＨＩＶ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を陽性選択するか、または陽性選択してあるステップをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
請求項９に記載の方法において使用するための、ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激剤を含む組成物であって、前記方法は、前記被験体を、有効量の前記ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激剤で免疫化するか、または免疫化してあるステップをさらに含み、前記免疫化は、前記ｅｘ  ｖｉｖｏ刺激剤との前記末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の接触の前に生じる、組成物。
【請求項１４】
前記ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激剤および前記ｅｘ  ｖｉｖｏ刺激剤のそれぞれが、ペプチドおよびワクチンから独立して選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
コードされたマイクロＲＮＡクラスターを含むレンチウイルスベクターであって、前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、（ｉ）配列番号１と少なくとも９０％の配列同一性、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性、および（ｉｉｉ）配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性を含む配列を含む、レンチウイルスベクター。
【請求項１６】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、（ｉ）配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性、または（ｉｉｉ）配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１５に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１７】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３を含む配列を含む、請求項１５に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１８】
標的細胞に感染することができるレンチウイルス粒子であって、
ａ．前記標的細胞に感染することができるエンベロープタンパク質；および
ｂ．（ｉ）配列番号１と少なくとも９０％の配列同一性、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性、および（ｉｉｉ）配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性を含む配列を含むコードされたマイクロＲＮＡクラスター
を含む、レンチウイルス粒子。
【請求項１９】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、（ｉ）配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性、または（ｉｉｉ）配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１８に記載のレンチウイルス粒子。
【請求項２０】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３を含む配列を含む、請求項１８に記載のレンチウイルス粒子。
【請求項２１】
前記標的細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項１８に記載のレンチウイルス粒子。
【請求項２２】
レンチウイルス粒子に感染した初代Ｔ細胞を含む改変細胞であって、前記レンチウイルス粒子は、
ａ．前記標的細胞に感染することができるエンベロープタンパク質；および
ｂ．（ｉ）配列番号１と少なくとも９０％の配列同一性、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性、および（ｉｉｉ）配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性を含む配列を含むコードされたマイクロＲＮＡクラスター
を含む、改変細胞。
【請求項２３】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、（ｉ）配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性、または（ｉｉｉ）配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項２２に記載の改変細胞。
【請求項２４】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３を含む配列を含む、請求項２２に記載の改変細胞。
【請求項２５】
ＨＩＶに感染した細胞を処置する方法であって、
ａ．ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる、ＨＩＶに感染した被験体から単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を治療有効量のｅｘ  ｖｉｖｏ刺激剤と接触させるか、または接触させてあるステップと、
ｂ．前記ＰＢＭＣを、ｅｘ  ｖｉｖｏでレンチウイルス粒子によって形質導入するか、または形質導入してあるステップであって、ここで、前記レンチウイルス粒子は、
ｉ．前記ＰＢＭＣに感染することができるエンベロープタンパク質；および
ｉｉ．（ｉ）配列番号１と少なくとも９０％の配列同一性、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性、および（ｉｉｉ）配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性を含む配列を含むコードされたマイクロＲＮＡクラスター
を含む、ステップとを含む、方法。
【請求項２６】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、（ｉ）配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性、または（ｉｉｉ）配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記コードされたマイクロＲＮＡクラスターは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３を含む配列を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
請求項２５に記載の方法によって産生された形質導入されたＰＢＭＣを含む組成物であって、前記組成物が、被験体に注入されるか、または注入されていることを特徴とする、組成物。
【請求項２９】
前記ＰＢＭＣからＨＩＶ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を陽性選択するか、または陽性選択してあるステップをさらに含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
請求項２５に記載の方法において使用するための、ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激剤を含む組成物であって、前記方法は、前記被験体を、有効量の前記ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激剤で免疫化するか、または免疫化しているステップをさらに含み、前記免疫化は、前記ｅｘ  ｖｉｖｏ刺激剤との前記末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の接触の前に生じる、組成物。
【請求項３１】
前記ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激剤および前記ｅｘ  ｖｉｖｏ刺激剤のそれぞれが、ペプチドおよびワクチンから独立して選択される、請求項３０に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１５】
以上、本発明の好ましい実施形態のうちのいくつかを記載し、具体的に例示したが、本発明がこのような実施形態に限定されることは意図していない。本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、これに様々な改変を行ってよい。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
ＨＩＶに感染した細胞を処置する方法であって、
（ａ）ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる、ＨＩＶに感染した被験体から単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を治療有効量の刺激剤と接触させるステップと、
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子エレメントをコードするウイルス送達系を前記ＰＢＭＣにｅｘ  ｖｉｖｏで形質導入するステップであって、前記少なくとも１つの遺伝子エレメントが、ケモカイン受容体ＣＣＲ５の産生を阻害することができる低分子ＲＮＡ、またはＨＩＶ  ＲＮＡ配列をターゲティングすることができる少なくとも１つの低分子ＲＮＡを含む、ステップと、
（ｃ）少なくとも１日間にわたって、形質導入された前記ＰＢＭＣを培養するステップとを含む、方法。
（項目２）
形質導入された前記ＰＢＭＣを被験体に注入するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記被験体がヒトである、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記刺激剤がペプチドを含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記ペプチドがｇａｇペプチドを含む、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記刺激剤がワクチンを含む、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記ワクチンがＨＩＶワクチンを含む、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ＨＩＶワクチンが、ＭＶＡ／ＨＩＶ６２Ｂワクチンまたはそのバリアントを含む、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記少なくとも１つの遺伝子エレメントが、ケモカイン受容体ＣＣＲ５の産生を阻害することができる低分子ＲＮＡと、ＨＩＶ  ＲＮＡ配列をターゲティングすることができる少なくとも１つの低分子ＲＮＡとを含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記ＨＩＶ  ＲＮＡ配列が、ＨＩＶ  Ｖｉｆ配列、ＨＩＶ  Ｔａｔ配列、またはそれらのバリアントを含む、項目１または９に記載の方法。
（項目１１）
前記少なくとも１つの遺伝子エレメントが、マイクロＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを含む、項目１または９に記載の方法。
（項目１２）
前記少なくとも１つの遺伝子エレメントが、マイクロＲＮＡクラスターを含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記少なくとも１つの遺伝子エレメントが、
ＡＧＧＴＡＴＡＴＴＧＣＴＧＴＴＧＡＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＴＧＡＧＣＴＴＧＣＴＣＴＡＣＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＣＡＧＡＴＧＧＧＴＡＧＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＧＴＴＴＡＣＣＧＣＴＧＣＣＴＡＣＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＧＧＣＴＴ（配列番号１）
と少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％のパーセント同一性を有するマイクロＲＮＡを含む、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記少なくとも１つの遺伝子エレメントが、
ＡＧＧＴＡＴＡＴＴＧＣＴＧＴＴＧＡＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＴＧＡＧＣＴＴＧＣＴＣＴＡＣＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＣＡＧＡＴＧＧＧＴＡＧＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＧＴＴＴＡＣＣＧＣＴＧＣＣＴＡＣＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＧＧＣＴＴ（配列番号１）
を含む、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
前記少なくとも１つの遺伝子エレメントが、
ａ．ＣＡＴＣＴＣＣＡＴＧＧＣＴＧＴＡＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＧＧＧＧＧＡＴＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＡＡＣＴＴＧＴＧＴＴＧＡＡＴＣＴＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＡＡＧＡＡＣＡＣＡＴＣＣＧＣＡＣＴＧＡＣＡＴＴＴＴＧＧＴＡＴＣＴＴＴＣＡＴＣＴＧＡＣＣＡ（配列番号２）
と少なくとも８０％、もしくは少なくとも８５％、もしくは少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％のパーセント同一性、または
ｂ．ＧＧＧＣＣＴＧＧＣＴＣＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＡＴＴＣＣＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＣＣＡＴＡＧＣＧＴＧＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＣＴＡＴＧＧＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＣＧＧＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴＣＣＣＡＡＴＧＡＣＣＧＣＧＴＣＴＴＣＧＴＣＧ（配列番号３）
と少なくとも８０％、もしくは少なくとも８５％、もしくは少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％のパーセント同一性
を有するマイクロＲＮＡを含む、項目１１に記載の方法。
（項目１６）
前記少なくとも１つの遺伝子エレメントが、
ａ．ＣＡＴＣＴＣＣＡＴＧＧＣＴＧＴＡＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＧＧＧＧＧＡＴＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＡＡＣＴＴＧＴＧＴＴＧＡＡＴＣＴＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＡＡＧＡＡＣＡＣＡＴＣＣＧＣＡＣＴＧＡＣＡＴＴＴＴＧＧＴＡＴＣＴＴＴＣＡＴＣＴＧＡＣＣＡ（配列番号２）；または
ｂ．ＧＧＧＣＣＴＧＧＣＴＣＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＡＴＴＣＣＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＣＣＡＴＡＧＣＧＴＧＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＣＴＡＴＧＧＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＣＧＧＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴＣＣＣＡＡＴＧＡＣＣＧＣＧＴＣＴＴＣＧＴＣＧ（配列番号３）
を含む、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記マイクロＲＮＡクラスターが、
ＡＧＧＴＡＴＡＴＴＧＣＴＧＴＴＧＡＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＴＧＡＧＣＴＴＧＣＴＣＴＡＣＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＣＡＧＡＴＧＧＧＴＡＧＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＧＴＴＴＡＣＣＧＣＴＧＣＣＴＡＣＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＧＧＣＴＴＣＣＣＧＧＧＣＡＴＣＴＣＣＡＴＧＧＣＴＧＴＡＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＧＧＧＧＧＡＴＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＡＡＣＴＴＧＴＧＴＴＧＡＡＴＣＴＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＡＡＧＡＡＣＡＣＡＴＣＣＧＣＡＣＴＧＡＣＡＴＴＴＴＧＧＴＡＴＣＴＴＴＣＡＴＣＴＧＡＣＣＡＧＣＴＡＧＣＧＧＧＣＣＴＧＧＣＴＣＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＡＴＴＣＣＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＣＣＡＴＡＧＣＧＴＧＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＣＴＡＴＧＧＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＣＧＧＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴＣＣＣＡＡＴＧＡＣＣＧＣＧＴＣＴＴＣＧＴＣ（配列番号３１）
と少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％のパーセント同一性を有する配列を含む、項目１２に記載の方法。
（項目１８）
前記マイクロＲＮＡクラスターが、
ＡＧＧＴＡＴＡＴＴＧＣＴＧＴＴＧＡＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＴＧＡＧＣＴＴＧＣＴＣＴＡＣＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＣＡＧＡＴＧＧＧＴＡＧＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＧＴＴＴＡＣＣＧＣＴＧＣＣＴＡＣＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＧＧＣＴＴＣＣＣＧＧＧＣＡＴＣＴＣＣＡＴＧＧＣＴＧＴＡＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＧＧＧＧＧＡＴＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＡＡＣＴＴＧＴＧＴＴＧＡＡＴＣＴＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＡＡＧＡＡＣＡＣＡＴＣＣＧＣＡＣＴＧＡＣＡＴＴＴＴＧＧＴＡＴＣＴＴＴＣＡＴＣＴＧＡＣＣＡＧＣＴＡＧＣＧＧＧＣＣＴＧＧＣＴＣＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＡＴＴＣＣＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＣＣＡＴＡＧＣＧＴＧＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＣＴＡＴＧＧＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＣＧＧＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴＣＣＣＡＡＴＧＡＣＣＧＣＧＴＣＴＴＣＧＴＣ（配列番号３１）
を含む、項目１２に記載の方法。
（項目１９）
被験体においてＨＩＶ感染を処置する方法であって、
（ａ）有効量の第１の刺激剤で前記被験体を免疫化するステップと、
（ｂ）前記被験体から白血球を取り出し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を精製するステップと、
（ｃ）前記ＰＢＭＣを治療有効量の第２の刺激剤とｅｘ  ｖｉｖｏで接触させるステップと、
（ｄ）少なくとも１つの遺伝子エレメントをコードするウイルス送達系を前記ＰＢＭＣにｅｘ  ｖｉｖｏで形質導入するステップと、
（ｅ）少なくとも１日間にわたって、形質導入された前記ＰＢＭＣを培養するステップとを含む、方法。
（項目２０）
形質導入された前記ＰＢＭＣを前記被験体に注入するステップをさらに含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記第１の刺激剤および前記第２の刺激剤が同じである、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
前記第１の刺激剤および前記第２の刺激剤のうちの少なくとも１つが、ＨＩＶワクチンを含む、項目１９に記載の方法。
（項目２３）
前記ＨＩＶワクチンが、ＭＶＡ／ＨＩＶ６２Ｂワクチンまたはそのバリアントを含む、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記ウイルス送達系がレンチウイルス粒子を含む、項目１９に記載の方法。
（項目２５）
前記少なくとも１つの遺伝子エレメントが、ケモカイン受容体ＣＣＲ５の産生を阻害することができる低分子ＲＮＡ、またはＨＩＶ  ＲＮＡ配列をターゲティングすることができる少なくとも１つの低分子ＲＮＡを含む、項目１９に記載の方法。