【手続補正書】
【提出日】令和2年7月3日(2020.7.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における腫瘍の治療のための細胞傷害性リンパ球の集団であって、
前記細胞傷害性リンパ球の集団が、
対象の腫瘍から予め単離された細胞傷害性リンパ球を、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するタンパク質をコードする核酸を前記細胞傷害性リンパ球に導入することによって遺伝子改変することと、ここで、遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する前記タンパク質を発現及び分泌する；
前記遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球を拡大培養して遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球の集団を作成することと、
を含む方法から得られ、前記遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球の集団が前記対象に投与して前記腫瘍を治療するためのものである、細胞傷害性リンパ球の集団。
【請求項２】
前記核酸配列がコードする、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する前記タンパク質が、
（ａ）ｉ）配列番号２〜４に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び配列番号６〜８に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、又は
（ａ）ｉｉ）３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、各ＣＤＲが、配列番号２〜４に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列との比較で２つ以下の保存的アミノ酸置換を含む、第１のポリペプチド、及び３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、各ＣＤＲが、配列番号６〜８に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列との比較で２つ以下の保存的アミノ酸置換を含む、第２のポリペプチド、あるいは
（ｂ）ｉ）配列番号１０〜１２に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び配列番号１４〜１６に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、又は
（ｂ）ｉｉ）３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、各ＣＤＲが、配列番号１０〜１２に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列との比較で２つ以下の保存的アミノ酸置換を含む、第１のポリペプチド、及び３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、各ＣＤＲが、配列番号１４〜１６に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列との比較で２つ以下の保存的アミノ酸置換を含む、第２のポリペプチド、
含む抗原結合部分を含む、請求項１に記載の対象における腫瘍の治療のための細胞傷害性リンパ球の集団。
【請求項３】
前記遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球が、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する前記タンパク質を構成的に発現するか、又は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する前記タンパク質を誘導的に発現する、請求項１又は２に記載の対象における腫瘍の治療のための細胞傷害性リンパ球の集団。
【請求項４】
前記核酸が、前記細胞傷害性リンパ球のゲノムに組み込まれる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の対象における腫瘍の治療のための細胞傷害性リンパ球の集団。
【請求項５】
前記細胞傷害性リンパ球が、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋  Ｔ細胞又はＣＤ４＋  Ｔヘルパー細胞であるか、あるいは前記細胞傷害性リンパ球がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の対象における腫瘍の治療のための細胞傷害性リンパ球の集団。
【請求項６】
前記遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球が、前記腫瘍からの抗原に特異的な受容体を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の対象における腫瘍の治療のための細胞傷害性リンパ球の集団。
【請求項７】
ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する前記タンパク質が、以下のタンパク質：
ａ）タンパク質であって、
前記第１のポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記第２のポリペプチドが、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む、タンパク質；及び
ｂ）タンパク質であって、前記第１のポリペプチドが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記第２のポリペプチドが、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、タンパク質；
のうちの１つから選択され；
任意選択で、前記第１のポリペプチドが軽鎖であり、且つ前記第２のポリペプチドが重鎖であり、
更に任意選択で、前記タンパク質がヒト化抗体又は単鎖抗体（ｓｃＦｖ）であり、前記単鎖抗体が、前記第１及び第２のポリペプチドであって、互いに直接又はリンカーを介して融合されている前記第１及び第２のポリペプチドを含み、また更に任意選択で、前記ｓｃＦｖが、配列番号１７又は配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含み、また更に任意選択で、前記タンパク質が、前記抗原結合部分に直接又はリンカーを介して融合された免疫グロブリンＦｃドメインを含むマキシボディであり、任意選択で、前記免疫グロブリンＦｃドメインが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン又はＩｇＧ４  Ｆｃドメインであり、更に任意選択で、前記タンパク質が、配列番号１８又は配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の対象における腫瘍の治療のための細胞傷害性リンパ球の集団。
【請求項８】
遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球を作製する方法であって、癌を有するか又は有すると疑われる対象から単離された細胞傷害性リンパ球を、請求項６に記載の核酸を前記細胞傷害性リンパ球に導入することによって遺伝子改変することであって、前記遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する前記タンパク質を発現及び分泌する、遺伝子改変することを含む方法。
【請求項９】
前記細胞傷害性リンパ球をインビトロで拡大培養して、拡大培養された遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球の集団を提供することを含
み、任意選択で、
前記遺伝子改変前に前記対象から前記細胞傷害性リンパ球を単離することを更に含み、
任意選択で、前記単離することが、前記対象の腫瘍又は末梢血から前記細胞傷害性リンパ球を単離することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞傷害性リンパ球は、Ｔ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり、任意選択で、前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋  Ｔ細胞又はＣＤ４＋  Ｔヘルパー細胞である、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
前記核酸は、前記細胞傷害性リンパ球のゲノムに組み込まれ、任意選択で、
前記細胞傷害性リンパ球は、ナイーブＴ細胞と比べて１つ以上の活性化抗原の増加した発現レベルを呈し、
前記１つ以上の活性化抗原が、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ６９、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＢＴＬＡ、ＰＤ−１、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、及びＨＬＡ−ＤＲから選択され、
更に任意選択で、
前記遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球が、前記対象の腫瘍からの抗原に特異的なＴ細胞受容体を含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するタンパク質であって、
（ａ）ｉ）配列番号２〜４に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び配列番号６〜８に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、又は
（ａ）ｉｉ）３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、各ＣＤＲが、配列番号２〜４に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列との比較で２つ以下の保存的アミノ酸置換を含む、第１のポリペプチド、及び３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、各ＣＤＲが、配列番号６〜８に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列との比較で２つ以下の保存的アミノ酸置換を含む、第２のポリペプチド、あるいは
（ｂ）ｉ）配列番号１０〜１２に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び配列番号１４〜１６に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、又は
（ｂ）ｉｉ）３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、各ＣＤＲが、配列番号１０〜１２に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列との比較で２つ以下の保存的アミノ酸置換を含む、第１のポリペプチド、及び３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、各ＣＤＲが、配列番号１４〜１６に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列との比較で２つ以下の保存的アミノ酸置換を含む、第２のポリペプチド、
含む抗原結合部分を含む、タンパク質。
【請求項１３】
前記抗原結合部分が、配列番号２〜４に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び配列番号６〜８に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含み、任意選択で、前記第１のポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記第２のポリペプチドが、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載のタンパク質。
【請求項１４】
前記抗原結合部分が、配列番号１０〜１２に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び配列番号１４〜１６に示される３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含み、任意選択で、前記第１のポリペプチドが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記第２のポリペプチドが、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載のタンパク質。
【請求項１５】
前記第１のポリペプチドが軽鎖であり、且つ前記第２のポリペプチドが重鎖であり、
更に任意選択で、前記タンパク質がヒト化抗体又は単鎖抗体（ｓｃＦｖ）であり、前記単鎖抗体が、前記第１及び第２のポリペプチドであって、互いに直接又はリンカーを介して融合されている前記第１及び第２のポリペプチドを含み、また更に任意選択で、前記ｓｃＦｖが、配列番号１７又は配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１６】
前記タンパク質が、前記抗原結合部分に直接又はリンカーを介して融合された免疫グロブリンＦｃドメインを含むマキシボディであり、任意選択で、前記免疫グロブリンＦｃドメインが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン又はＩｇＧ４  Ｆｃドメインであり、更に任意選択で、前記タンパク質が、配列番号１８又は配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１７】
請求項１２〜１６のいずれか一項に記載のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、任意選択で、前記核酸が、
前記タンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列に作動可能に連結されているプロモーターを含み、任意選択で、前記プロモーターが、構成的プロモーター又は誘導性プロモーターである、核酸。
【請求項１８】
請求項１７に記載の核酸を含む細胞であって、任意選択で、前記核酸が前記細胞のゲノムに組み込まれている、細胞。
【請求項１９】
前記細胞が、前記タンパク質を発現及び分泌するように遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球である、請求項１８に記載の細胞。
【請求項２０】
前記細胞傷害性リンパ球が、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋  Ｔ細胞又はＣＤ４＋  Ｔヘルパー細胞であり、任意選択で、前記Ｔ細胞が末梢血に由来する、請求項１９に記載の細胞。
【請求項２１】
前記細胞傷害性リンパ球が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり、任意選択で、前記ＮＫ細胞が末梢血に由来する、請求項１９に記載の細胞。
【請求項２２】
前記細胞傷害性リンパ球が、対象からの腫瘍に由来する腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）であり、前記ＴＩＬが、前記腫瘍からの抗原に特異的な受容体を含む、請求項１９に記載の細胞。
【請求項２３】
前記細胞傷害性リンパ球が、ナイーブＴ細胞と比べて１つ以上の活性化抗原の増加した発現レベルを呈し、任意選択で、前記１つ以上の活性化抗原が、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ６９、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＢＴＬＡ、ＰＤ−１、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、及びＨＬＡ−ＤＲから選択され、任意選択で、
前記細胞傷害性リンパ球が、腫瘍関連抗原に特異的なＴ細胞受容体を含む、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２４】
癌を有するか又は有すると疑われる個体を治療する方法に使用するための、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載のＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するタンパク質であって、任意選択で、前記が固形腫瘍であり、任意選択で、前記タンパク質が、前記タンパク質をコードする核酸として前記対象に投与するためのものであるか、あるいは更に任意選択で、前記タンパク質が、前記タンパク質を発現及び分泌する前記遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球として、前記対象に投与するためのものであり、任意選択で、前記細胞傷害性リンパ球が、請求項１９〜２３のいずれか一項に記載の細胞である、タンパク質。
【請求項２５】
個体の治療において第１の細胞上のＰＤ−Ｌ１と第２の細胞上のＰＤ−１との間の相互作用を低下させるための使用のための請求項１２〜１６のいずれか一項に記載のタンパク質であって、任意選択で、前記タンパク質が全身投与又は局所投与のためのものであり、任意選択で、前記局所投与が、腫瘍内投与を含む、タンパク質。