【手続補正書】
【提出日】令和2年1月14日(2020.1.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２個またはそれよりも多い分子の複合体を細胞へと送達するための方法であって、細胞懸濁液を狭窄に通すステップを含み、ここで前記狭窄は、前記細胞を変形し、これにより、分子の前記複合体が前記細胞に進入するように、前記細胞の摂動を引き起こし、前記細胞懸濁液が、分子の前記複合体と接触され、さらに前記複合体の少なくとも２個またはそれよりも多い分子が、非共有結合性相互作用によって会合し、さらに前記複合体は、タンパク質および核酸により形成されたタンパク質−核酸複合体ではなく；
前記複合体における少なくとも２個の分子が、約１μＭ〜約１ｐＭに及ぶ前記複合体における結合親和性を有する、方法。
【請求項２】
分子の前記複合体の形成が、可逆的である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記複合体における少なくとも２個の分子が、約１μＭ〜約１ｎＭまたは約１ｎＭ〜約１ｐＭに及ぶ前記複合体における結合親和性を有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記複合体が、前記細胞懸濁液における、約１分間〜約４８時間の半減期を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記複合体が、前記細胞懸濁液における、約１分間〜約２０分間、約２０分間〜約４０分間、約４０分間〜約１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約６時間、約６時間〜約１２時間、約１２時間〜約２４時間、約２４時間〜約３６時間または約３６時間〜約４８時間の半減期を有する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）前記複合体が、洗浄剤の存在下で解離する；かつ／または
（ｂ）前記細胞懸濁液が、約０℃〜約４０℃に及ぶ温度で分子の前記複合体と接触される；かつ／または
（ｃ）前記細胞懸濁液が、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭに及ぶイオン強度で分子の前記複合体と接触される；かつ／または
（ｄ）前記細胞懸濁液が、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約５００ｍＯｓｍ／Ｌに及ぶ容量オスモル濃度で分子の前記複合体と接触される；かつ／または
（ｅ）前記細胞懸濁液が、約５．５〜約８．５に及ぶｐＨで分子の前記複合体と接触される；かつ／または
（ｆ）前記細胞が前記狭窄を通る際の剪断力が、約１ｋＰａ〜約１０ｋＰａに及ぶ、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
（ａ）前記複合体が、約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度の洗浄剤の存在下で解離する；かつ／または
（ｂ）前記細胞懸濁液が、約０℃〜約４０℃に及ぶ温度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記温度を超える温度で解離する；かつ／または
（ｃ）前記細胞懸濁液が、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭに及ぶイオン強度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、（ｉ）前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記イオン強度を超えるイオン強度、または（ｉｉ）前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記イオン強度に満たないイオン強度で解離する；かつ／または
（ｄ）前記細胞懸濁液が、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約５００ｍＯｓｍ／Ｌに及ぶ容量オスモル濃度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、（ｉ）前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記イオン強度を超える容量オスモル濃度、または（ｉｉ）前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記容量オスモル濃度に満たない容量オスモル濃度で解離する；かつ／または
（ｅ）前記細胞懸濁液が、約５．５〜約８．５に及ぶｐＨで分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記ｐＨを超えるまたはそれを下回るｐＨで解離する；かつ／または
（ｆ）前記細胞が前記狭窄を通る際の剪断力が、約１ｋＰａ〜約１０ｋＰａに及び、前記複合体が、約１０ｋＰａ〜約１００ｋＰａの剪断力で解離する、
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
（ａ）前記複合体が、約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ）または約５％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度の洗浄剤の存在下で解離する；かつ／または
（ｂ）前記細胞懸濁液が、約０℃〜約４０℃に及ぶ温度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、約５０℃を上回る温度で解離する；かつ／または
（ｃ）前記細胞懸濁液が、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭに及ぶイオン強度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、
（ｉ）約３５０ｍＭを超えるイオン強度；もしくは
（ｉｉ）約５０ｍＭに満たないイオン強度
で解離する；かつ／または
（ｄ）前記細胞懸濁液が、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約５００ｍＯｓｍ／Ｌに及ぶ容量オスモル濃度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、
（ｉ）約６００ｍＯｓｍ／Ｌを超える容量オスモル濃度；もしくは
（ｉｉ）約１００ｍＯｓｍ／Ｌに満たない容量オスモル濃度
で解離する；かつ／または
（ｅ）前記細胞懸濁液が、約５．５〜約８．５に及ぶｐＨで分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、約５．５を下回るｐＨで解離する、もしくは分子の前記複合体が、約８．５を超えるｐＨで解離する；かつ／または
（ｆ）前記細胞が前記狭窄を通る際の剪断力が、約１ｋＰａ〜約１０ｋＰａに及び、前記複合体が、約１０ｋＰａ〜約２５ｋＰａ、約２５ｋＰａ〜約５０ｋＰａ、約５０ｋＰａ〜約７５ｋＰａもしくは約７５ｋＰａ〜約１００ｋＰａの剪断力で解離する、
請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
（ａ）前記細胞懸濁液が、約０℃〜約４０℃に及ぶ温度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、約５０℃〜約７０℃の温度で解離する；かつ／または
（ｂ）前記細胞懸濁液が、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭに及ぶイオン強度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、
（ｉ）約３５０ｍＭ〜約１０００ｍＭのイオン強度；もしくは
（ｉｉ）約０ｍＭ〜約５０ｍＭのイオン強度
で解離する；かつ／または
（ｃ）前記細胞懸濁液が、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約５００ｍＯｓｍ／Ｌに及ぶ容量オスモル濃度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、
（ｉ）約６００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約１０００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度；もしくは
（ｉｉ）約０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約１００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度
で解離する；かつ／または
（ｄ）前記細胞懸濁液が、約５．５〜約８．５に及ぶｐＨで分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、約４．０〜約５．５のｐＨで解離する、もしくは分子の前記複合体が、約８．５〜約１０．０で解離する、
請求項６、７または８に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）前記細胞懸濁液が、約０℃〜約４０℃に及ぶ温度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、約５０℃〜約６０℃もしくは約６０℃〜約７０℃の温度で解離する；かつ／または
（ｂ）前記細胞懸濁液が、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭに及ぶイオン強度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、
（ｉ）約３５０ｍＭ〜約４００ｍＭ、約４００ｍＭ〜約５００ｍＭ、約５００ｍＭ〜約６００ｍＭ、約６００ｍＭ〜約７００ｍＭ、約７００ｍＭ〜約８００ｍＭ、約８００ｍＭ〜約９００ｍＭもしくは約９００ｍＭ〜約１０００ｍＭのイオン強度；もしくは
（ｉｉ）約０ｍＭ〜約１０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約２０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約３０ｍＭ、約３０ｍＭ〜約４０ｍＭもしくは約４０ｍＭ〜約５０ｍＭのイオン強度
で解離する；かつ／または
（ｃ）前記細胞懸濁液が、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約５００ｍＯｓｍ／Ｌに及ぶ容量オスモル濃度で分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、
（ｉ）約６００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約７００ｍＯｓｍ／Ｌ、約７００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約８００ｍＯｓｍ／Ｌ、約８００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約９００ｍＯｓｍ／Ｌもしくは約９００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約１０００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度；もしくは
（ｉｉ）約０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約４０ｍＯｓｍ／Ｌ、約４０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約６０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約８０ｍＯｓｍ／Ｌもしくは約８０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約１００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度
で解離する；かつ／または
（ｄ）前記細胞懸濁液が、約５．５〜約８．５に及ぶｐＨで分子の前記複合体と接触され、分子の前記複合体が、約４．０〜約４．５、約４．５〜約５．０、約５．０〜約５．５、約８．５〜約９．０、約９．０〜約９．５もしくは約９．５〜約１０．０のｐＨで解離する、
請求項６から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
分子の前記複合体が、
ａ）１種もしくは複数のポリペプチド、
ｂ）１種もしくは複数の核酸、
ｃ）１種もしくは複数の脂質、
ｄ）１種もしくは複数の炭水化物、
ｅ）１種もしくは複数の小分子、
ｆ）１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｈ）１種もしくは複数のポリペプチドおよび１種もしくは複数の脂質、
ｉ）１種もしくは複数のポリペプチドおよび１種もしくは複数の炭水化物、
ｊ）１種もしくは複数のポリペプチドおよび１種もしくは複数の小分子、
ｋ）１種もしくは複数のポリペプチドおよび１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｌ）１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の脂質、
ｍ）１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の炭水化物、
ｎ）１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の小分子、
ｏ）１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｐ）１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の炭水化物、
ｑ）１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の小分子、
ｒ）１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｓ）１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ｔ）１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｕ）１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｖ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の脂質、
ｗ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の炭水化物、
ｘ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の小分子、
ｙ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｚ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の炭水化物、
ａａ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の小分子、
ａｂ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｃ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ａｄ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｅ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｆ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の炭水化物、
ａｇ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の小分子、
ａｈ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｉ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ａｊ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｋ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｌ）１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ａｍ）１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｎ）１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｏ）１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｐ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の炭水化物、
ａｑ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の小分子、
ａｒ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｓ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ａｔ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｕ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｖ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ａｗ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｘ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｙ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｚ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ｂａ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｂ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｃ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｄ）１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｅ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ｂｆ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｇ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｈ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｉ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｊ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、または
ｂｋ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物
を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記複合体が、（ｉ）抗体、（ｉｉ）１種または複数の転写因子、（ｉｉｉ）リボソームおよびｍＲＮＡ、または（ｉｖ）プロテアソーム、ホロ酵素、ＲＮＡポリメラーゼ、ＤＮＡポリメラーゼ、スプライセオソーム、ヴォールト細胞質リボヌクレオタンパク質、核内低分子リボ核タンパク質（ｓｎＲＮＰ）、テロメラーゼ、ヌクレオソーム、デスシグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）、哺乳動物ラパマイシン標的複合体１（ｍＴＯＲＣ１）、哺乳動物ラパマイシン標的複合体２（ｍＴＯＲＣ２）もしくはクラスＩホスホイノシチド３キナーゼ（クラスＩ  ＰＩ３Ｋ）、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）、ヒストン−ＤＮＡ複合体、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）−アゴニスト複合体、トランスポサーゼ／トランスポゾン複合体、ｔＲＮＡリボソーム複合体、ポリペプチド−プロテアーゼ複合体または酵素−基質複合体のいずれか１つを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞懸濁液が、前記細胞懸濁液が前記狭窄を通る前、通った後、または通るのと同時に前記複合体と接触される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記複合体が、（ａ）前記細胞懸濁液との接触に先立ち、または（ｂ）前記細胞懸濁液において形成される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記複合体が、前記細胞懸濁液との接触に先立ち形成され、前記複合体が、前記細胞懸濁液との接触の約１分、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約４５分、約１時間、約２時間、約３時間または約６時間前に形成される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記複合体が、
（ａ）前記細胞懸濁液との接触に先立ち形成され、前記複合体が、前記細胞懸濁液との接触に先立ち精製される；または
（ｂ）前記細胞懸濁液において形成され、前記複合体の前記分子の１個または複数が、前記細胞懸濁液との接触に先立ち精製される、
請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞懸濁液が、
（ａ）混合細胞集団；または
（ｂ）精製された細胞集団
を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞懸濁液が、原核細胞または真核細胞を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞懸濁液が、細菌細胞、古細菌細胞、酵母細胞、真菌細胞、藻類細胞、植物細胞または動物細胞を含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞懸濁液が、哺乳動物細胞を含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記細胞懸濁液が、ヒト細胞を含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記狭窄が、
（ａ）マイクロ流体チャネル内に含有される；または
（ｂ）ポアである、またはポア内に含有される、
請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ポアが、表面に含有される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記表面が、フィルターおよび／または膜である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ポアサイズが、約０．４μｍ、約１μｍ、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約６μｍ、約７μｍ、約８μｍ、約９μｍ、約１０μｍ、約１１μｍ、約１２μｍ、約１３μｍまたは約１４μｍである、請求項２２から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記狭窄サイズが、前記細胞の直径の関数である、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記狭窄サイズが、前記細胞の直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記狭窄が、
（ａ）約３０μｍの長さおよび約３μｍ〜約８μｍの幅；または
（ｂ）約１０μｍの長さおよび約３μｍ〜約８μｍの幅
を有する、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記細胞懸濁液および前記複合体を、少なくとも１本の電極によって発生された電場と接触させるステップをさらに含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
２個またはそれよりも多い分子の複合体を細胞へと送達するためのシステムであって、前記複合体の少なくとも２個またはそれよりも多い分子が、非共有結合性相互作用によって会合し、前記複合体における少なくとも２個の分子が、約１μＭ〜約１ｐＭに及ぶ前記複合体における結合親和性を有し、さらに前記複合体は、タンパク質および核酸により形成されたタンパク質−核酸複合体ではなく、前記システムは、
（ａ）狭窄を含むマイクロ流体チャネルと、前記細胞を含む細胞懸濁液と、２個またはそれよりも多い分子の前記複合体とを含み、ここで前記狭窄は、前記細胞が前記狭窄を通ることができるように構成されており、前記狭窄が前記細胞を変形させ、これにより、２個またはそれよりも多い分子の前記複合体が前記細胞に進入するように、前記細胞の摂動を引き起こす；または
（ｂ）ポアを有する表面と、前記細胞を含む細胞懸濁液と、２個またはそれよりも多い分子の前記複合体とを含み、ここでポアを有する前記表面は、前記細胞が前記ポアを通ることができるように構成されており、前記ポアが前記細胞を変形させ、これにより、２個またはそれよりも多い分子の前記複合体が前記細胞に進入するように、前記細胞の摂動を引き起こす、
システム。
【請求項３１】
前記表面が、フィルターまたは膜である、請求項３０に記載のシステム。
【請求項３２】
電場を発生するための少なくとも１本の電極をさらに含む、請求項３０または３１に記載のシステム。
【請求項３３】
分子の前記複合体の形成が、可逆的である、請求項３０から３２のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３４】
請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法によって、細胞への２個またはそれよりも多い分子を含む複合体を送達するために使用される、請求項３０から３３のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３５】
２個またはそれよりも多い分子の複合体を含む細胞であって、２個またはそれよりも多い分子の前記複合体が、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法によって前記細胞に送達された、細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
一部の実施形態では、本発明は、２個またはそれよりも多い分子の複合体を含む細胞であって、２個またはそれよりも多い分子の複合体が、本明細書に記載されている方法のいずれかによって細胞へと送達された、細胞を提供する。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
２個またはそれよりも多い分子の複合体を細胞へと送達するための方法であって、細胞懸濁液を狭窄に通すステップを含み、ここで前記狭窄は、前記細胞を変形し、これにより、分子の前記複合体が前記細胞に進入するように、前記細胞の摂動を引き起こし、前記細胞懸濁液が、分子の前記複合体と接触される、方法。
（項目２）
分子の前記複合体の形成が、可逆的である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記複合体の少なくとも２個またはそれよりも多い分子が、非共有結合性相互作用によって会合する、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記複合体における少なくとも２個の分子が、約１μＭ〜約１ｐＭに及ぶ前記複合体における結合親和性を有する、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
前記複合体における少なくとも２個の分子が、約１μＭ〜約１ｎＭまたは約１ｎＭ〜約１ｐＭに及ぶ前記複合体における結合親和性を有する、項目１から４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記複合体が、前記細胞懸濁液における、約１分間〜約４８時間の半減期を有する、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記複合体が、前記細胞懸濁液における、約１分間〜約２０分間、約２０分間〜約４０分間、約４０分間〜約１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約６時間、約６時間〜約１２時間、約１２時間〜約２４時間、約２４時間〜約３６時間または約３６時間〜約４８時間の半減期を有する、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記複合体が、洗浄剤の存在下で解離する、項目１から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記複合体が、約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度の洗浄剤の存在下で解離する、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記複合体が、約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ）または約５％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度の洗浄剤の存在下で解離する、項目８または９に記載の方法。
（項目１１）
前記細胞懸濁液が、約０℃〜約４０℃に及ぶ温度で分子の前記複合体と接触される、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
分子の前記複合体が、前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記温度を超える温度で解離する、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
分子の前記複合体が、約５０℃〜約７０℃の温度で解離する、項目１１または１２に記載の方法。
（項目１４）
分子の前記複合体が、約５０℃〜約６０℃または約６０℃〜約７０℃の温度で解離する、項目１１から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記細胞懸濁液が、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭに及ぶイオン強度で分子の前記複合体と接触される、項目１から１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
分子の前記複合体が、前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記イオン強度を超えるイオン強度で解離する、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
分子の前記複合体が、約３５０ｍＭ〜約１０００ｍＭのイオン強度で解離する、項目１５または１６に記載の方法。
（項目１８）
分子の前記複合体が、約３５０ｍＭ〜約４００ｍＭ、約４００ｍＭ〜約５００ｍＭ、約５００ｍＭ〜約６００ｍＭ、約７００ｍＭ〜約８００ｍＭ、約８００ｍＭ〜約９００ｍＭまたは約９００ｍＭ〜約１０００ｍＭのイオン強度で解離する、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
分子の前記複合体が、前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記イオン強度に満たないイオン強度で解離する、項目１５に記載の方法。
（項目２０）
分子の前記複合体が、約０ｍＭ〜約５０ｍＭのイオン強度で解離する、項目１５または１９に記載の方法。
（項目２１）
分子の前記複合体が、約０ｍＭ〜約１０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約２０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約３０ｍＭ、約３０ｍＭ〜約４０ｍＭまたは約４０ｍＭ〜約５０ｍＭのイオン強度で解離する、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記細胞懸濁液が、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約５００ｍＯｓｍ／Ｌに及ぶ容量オスモル濃度で分子の前記複合体と接触される、項目１から１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
分子の前記複合体が、前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記イオン強度を超える容量オスモル濃度で解離する、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
分子の前記複合体が、約６００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約１０００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度で解離する、項目２２または２３に記載の方法。
（項目２５）
分子の前記複合体が、約６００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約７００ｍＯｓｍ／Ｌ、約７００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約８００ｍＯｓｍ／Ｌ、約８００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約９００ｍＯｓｍ／Ｌまたは約９００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約１０００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度で解離する、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
分子の前記複合体が、前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記容量オスモル濃度に満たない容量オスモル濃度で解離する、項目２２に記載の方法。
（項目２７）
分子の前記複合体が、約０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約１００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度で解離する、項目２２または２６に記載の方法。
（項目２８）
分子の前記複合体が、約０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約４０ｍＯｓｍ／Ｌ、約４０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約６０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約８０ｍＯｓｍ／Ｌまたは約８０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約１００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度で解離する、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記細胞懸濁液が、約５．５〜約８．５に及ぶｐＨで分子の前記複合体と接触される、項目１から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
分子の前記複合体が、前記細胞懸濁液が分子の前記複合体と接触される前記ｐＨを超えるまたはそれを下回るｐＨで解離する、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
分子の前記複合体が、約４．０〜約５．５のｐＨまたは約８．５〜約１０のｐＨで解離する、項目２９または３０に記載の方法。
（項目３２）
分子の前記複合体が、約４．０〜約４．５、約４．５〜約５．０、約５．０〜約５．５、約８．５〜約９．０、約９．０〜約９．５または約９．５〜約１０．０のｐＨで解離する、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記細胞が前記狭窄を通る際の剪断力が、約１ｋＰａ〜約１０ｋＰａに及ぶ、項目１から３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記複合体が、約１０ｋＰａ〜約１００ｋＰａの剪断力で解離する、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記複合体が、約１０ｋＰａ〜約２５ｋＰａ、約２５ｋＰａ〜約５０ｋＰａ、約５０ｋＰａ〜約７５ｋＰａまたは約７５ｋＰａ〜約１００ｋＰａの剪断力で解離する、項目３３または３４に記載の方法。
（項目３６）
分子の前記複合体が、
ａ）１種もしくは複数のポリペプチド、
ｂ）１種もしくは複数の核酸、
ｃ）１種もしくは複数の脂質、
ｄ）１種もしくは複数の炭水化物、
ｅ）１種もしくは複数の小分子、
ｆ）１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｇ）１種もしくは複数のポリペプチドおよび１種もしくは複数の核酸、
ｈ）１種もしくは複数のポリペプチドおよび１種もしくは複数の脂質、
ｉ）１種もしくは複数のポリペプチドおよび１種もしくは複数の炭水化物、
ｊ）１種もしくは複数のポリペプチドおよび１種もしくは複数の小分子、
ｋ）１種もしくは複数のポリペプチドおよび１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｌ）１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の脂質、
ｍ）１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の炭水化物、
ｎ）１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の小分子、
ｏ）１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｐ）１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の炭水化物、
ｑ）１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の小分子、
ｒ）１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｓ）１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ｔ）１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｕ）１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｖ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の脂質、
ｗ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の炭水化物、
ｘ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の小分子、
ｙ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｚ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の炭水化物、
ａａ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の小分子、
ａｂ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｃ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ａｄ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｅ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｆ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の炭水化物、
ａｇ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の小分子、
ａｈ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｉ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ａｊ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｋ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｌ）１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ａｍ）１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｎ）１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｏ）１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｐ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の炭水化物、
ａｑ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の小分子、
ａｒ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｓ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ａｔ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｕ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｖ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ａｗ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｘ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｙ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ａｚ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ｂａ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｂ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｃ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｄ）１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｅ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の小分子、
ｂｆ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｇ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｈ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｉ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、
ｂｊ）１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物、または
ｂｋ）１種もしくは複数のポリペプチド、１種もしくは複数の核酸、１種もしくは複数の脂質、１種もしくは複数の炭水化物、１種もしくは複数の小分子および１種もしくは複数の金属含有化合物
を含む、項目１から３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記複合体が、抗体を含む、項目１から３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
前記複合体が、１種または複数の転写因子を含む、項目１から３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記複合体が、リボソームおよびｍＲＮＡを含む、項目１から３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記複合体が、プロテアソーム、ホロ酵素、ＲＮＡポリメラーゼ、ＤＮＡポリメラーゼ、スプライセオソーム、ヴォールト細胞質リボヌクレオタンパク質、核内低分子リボ核タンパク質（ｓｎＲＮＰ）、テロメラーゼ、ヌクレオソーム、デスシグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）、哺乳動物ラパマイシン標的複合体１（ｍＴＯＲＣ１）、哺乳動物ラパマイシン標的複合体２（ｍＴＯＲＣ２）またはクラスＩホスホイノシチド３キナーゼ（クラスＩ  ＰＩ３Ｋ）、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）、ヒストン−ＤＮＡ複合体、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）−アゴニスト複合体、トランスポサーゼ／トランスポゾン複合体、ｔＲＮＡリボソーム複合体、ポリペプチド−プロテアーゼ複合体または酵素−基質複合体を含む、項目１から３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記細胞懸濁液が、前記細胞懸濁液が前記狭窄を通った後に前記複合体と接触される、項目１から４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記細胞懸濁液が、前記細胞懸濁液が前記狭窄を通る前に前記複合体と接触される、項目１から４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記細胞懸濁液が、前記細胞懸濁液が前記狭窄を通るのと同時に前記複合体と接触される、項目１から４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
前記複合体が、前記細胞懸濁液との接触に先立ち形成される、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記複合体が、前記細胞懸濁液との接触の約１分、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約４５分、約１時間、約２時間、約３時間または約６時間前に形成される、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記複合体が、前記細胞懸濁液との接触に先立ち精製される、項目１から４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
前記複合体が、前記細胞懸濁液において形成される、項目４０に記載の方法。
（項目４８）
前記複合体の前記分子の１個または複数が、前記細胞懸濁液との接触に先立ち精製される、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記細胞懸濁液が、混合細胞集団を含む、項目１から４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記細胞懸濁液が、精製された細胞集団を含む、項目１から４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記細胞懸濁液が、原核細胞または真核細胞を含む、項目１から４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記細胞懸濁液が、細菌細胞、古細菌細胞、酵母細胞、真菌細胞、藻類細胞、植物細胞または動物細胞を含む、項目１から５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記細胞懸濁液が、脊椎動物細胞を含む、項目１から５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
前記細胞懸濁液が、哺乳動物細胞を含む、項目１から５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記細胞懸濁液が、ヒト細胞を含む、項目１から５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記狭窄が、マイクロ流体チャネル内に含有される、項目１から５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記狭窄が、ポアである、またはポア内に含有される、項目１から５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記ポアが、表面に含有される、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記表面が、フィルターである、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記表面が、膜である、項目５８に記載の方法。
（項目６１）
前記ポアサイズが、約０．４μｍ、約１μｍ、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約６μｍ、約７μｍ、約８μｍ、約９μｍ、約１０μｍ、約１１μｍ、約１２μｍ、約１３μｍまたは約１４μｍである、項目５７から６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
前記狭窄サイズが、前記細胞の直径の関数である、項目１から６１のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
前記狭窄サイズが、前記細胞の直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である、項目１から６２のいずれか一項に記載の方法。
（項目６４）
前記狭窄が、約３０μｍの長さおよび約３μｍ〜約８μｍの幅を有する、項目１から６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
前記狭窄が、約１０μｍの長さおよび約３μｍ〜約８μｍの幅を有する、項目１から６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
前記細胞懸濁液および前記複合体を、少なくとも１本の電極によって発生された電場と接触させるステップをさらに含む、項目１から６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目６７）
２個またはそれよりも多い分子の複合体を細胞へと送達するためのシステムであって、前記システムは、狭窄を含むマイクロ流体チャネルと、前記細胞を含む細胞懸濁液と、２個またはそれよりも多い分子の前記複合体とを含み、ここで前記狭窄は、前記細胞が前記狭窄を通ることができるように構成されており、前記狭窄が前記細胞を変形させ、これにより、２個またはそれよりも多い分子の前記複合体が前記細胞に進入するように、前記細胞の摂動を引き起こす、システム。
（項目６８）
２個またはそれよりも多い分子の複合体を細胞へと送達するためのシステムであって、前記システムは、ポアを有する表面と、前記細胞を含む細胞懸濁液と、２個またはそれよりも多い分子の前記複合体とを含み、ここでポアを有する前記表面は、前記細胞が前記ポアを通ることができるように構成されており、前記ポアが前記細胞を変形させ、これにより、２個またはそれよりも多い分子の前記複合体が前記細胞に進入するように、前記細胞の摂動を引き起こす、システム。
（項目６９）
前記表面が、フィルターまたは膜である、項目６８に記載のシステム。
（項目７０）
電場を発生するための少なくとも１本の電極をさらに含む、項目６７から６９のいずれか一項に記載のシステム。
（項目７１）
分子の前記複合体の形成が、可逆的である、項目６７から７０のいずれか一項に記載のシステム。
（項目７２）
前記複合体の少なくとも２個またはそれよりも多い分子が、非共有結合性相互作用によって会合する、項目６７から７１のいずれか一項に記載のシステム。
（項目７３）
項目１から６６のいずれか一項に記載の方法によって、細胞への２個またはそれよりも多い分子を含む複合体を送達するために使用される、項目６７から７２のいずれか一項に記載のシステム。
（項目７４）
２個またはそれよりも多い分子の複合体を含む細胞であって、２個またはそれよりも多い分子の前記複合体が、項目１から６６のいずれか一項に記載の方法によって前記細胞に送達された、細胞。