【手続補正書】
【提出日】令和2年8月13日(2020.8.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｄｇｋα遺伝子およびＤｇｋζ遺伝子から選択される少なくとも１つの人工的に操作された免疫調節遺伝子を有する人工的に設計された免疫細胞であって、
前記人工的に操作された免疫調節遺伝子は、１または複数のインデルを含み、
前記インデルは、
１ｂｐから３０ｂｐのヌクレオチドの１または複数の欠失、および／または、
１ｂｐから３０ｂｐのヌクレオチドの１または複数の挿入であり、
前記インデルは、プロトスペーサー隣接モチーフ配列（ＰＡＭ配列）に位置しているか、またはＰＡＭ配列の５'末端または３'末端に隣接する連続する１ｂｐから３０ｂｐの範囲内に位置しており、
前記インデルは前記免疫調節遺伝子の核酸配列内に位置しており、
前記インデルは、Ｄｇｋα遺伝子またはＤｇｋζ遺伝子のエクソン領域に位置する、
人工的に設計された免疫細胞。
【請求項２】
前記免疫細胞は、人工的に操作されたＤｇｋα遺伝子およびＤｇｋζ遺伝子を含み、
前記人工的に操作されたＤｇｋα遺伝子およびＤｇｋζ遺伝子は抑制活性を有する、
請求項１に記載の人工的に設計された免疫細胞。
【請求項３】
前記インデルの少なくとも１つが、Ｄｇｋα遺伝子のエクソン６領域、エクソン７領域、およびエクソン８領域から選択されるＤｇｋα遺伝子のエクソン領域の少なくとも１つに位置する、
請求項１または２に記載の人工的に設計された免疫細胞。
【請求項４】
前記インデルの少なくとも１つが、Ｄｇｋζ遺伝子のエクソン３領域、エクソン５領域、エクソン６領域、エクソン８領域、エクソン１０領域、エクソン１１領域、およびエクソン１２領域から選択されるＤｇｋζ遺伝子のエクソン領域の少なくとも１つの標的配列に位置する、
請求項１から３のいずれか一項に記載の人工的に設計された免疫細胞。
【請求項５】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、および幹細胞から分化した免疫細胞から成る群から選択される少なくとも１つの細胞である、
請求項１から４のいずれか一項に記載の人工的に設計された免疫細胞。
【請求項６】
前記免疫細胞はキメラ抗原受容体をさらに含む、
請求項１から５のいずれか一項に記載の人工的に設計された免疫細胞。
【請求項７】
Ｄｇｋα遺伝子またはＤｇｋζ遺伝子のエクソン領域に位置する１または複数のインデルを有する人工的に設計された免疫細胞を産生するための組成物であって、
（ｉ）Ｄｇｋα遺伝子またはＤｇｋζ遺伝子のエクソン領域に位置する１または複数の標的配列に相補的結合を形成できるガイド核酸、またはこれをコードする核酸、および、
（ｉｉ）エディタータンパク質、またはこれをコードする核酸
を備え、
前記ガイド核酸が形成する前記相補的結合は、０〜５のミスマッチを含む、
人工的に設計された免疫細胞を産生するための組成物。
【請求項８】
前記ガイド核酸および前記エディタータンパク質は、リボ核タンパク質の形態である、
請求項７に記載の人工的に設計された免疫細胞を産生するための組成物。
【請求項９】
前記ガイド核酸は、同じ配列を有するか、
または、Ｄｇｋα遺伝子のエクソン領域の配列番号１３〜２４から選択される１または複数の標的配列と相補的結合を形成することができるか、および／または、Ｄｇｋζ遺伝子のエクソン領域の配列番号１０９〜１２５から選択される１または複数の標的配列と相補的結合を形成することができる、
請求項７または８に記載の人工的に設計された免疫細胞を産生するための組成物。
【請求項１０】
前記ガイド核酸は、同じ配列を有するか、
または、Ｄｇｋα遺伝子のエクソン領域の配列番号１９、２０、２１、および２３から選択される１または複数の標的配列と相補的結合を形成することができるか、および／または、Ｄｇｋζ遺伝子のエクソン領域の配列番号１０９、１１０、１１１、１１２、および１１３から選択される１または複数の標的配列と相補的結合を形成することができる、
請求項９に記載の人工的に設計された免疫細胞を産生するための組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、Ｄｇｋα遺伝子のエクソン領域に位置する標的配列に相補的結合を形成することができるガイド核酸、およびＤｇｋζ遺伝子のエクソン領域に位置する標的配列に相補的結合を形成することができるガイド核酸を含む、
請求項７から１０のいずれか一項に記載の人工的に設計された免疫細胞を産生するための組成物。
【請求項１２】
ガイドドメイン、第１相補ドメイン、リンカードメイン、および、第２相補ドメインを備えるガイド核酸であって、
前記ガイドドメインは、同じ配列を有するか、
またはＤｇｋα遺伝子のエクソン領域の配列番号１３〜２４から選択される１または複数の標的配列と相補的結合を形成することができるか、および／または、Ｄｇｋζ遺伝子のエクソン領域の配列番号１０９〜１２５から選択される１または複数の標的配列と相補的結合を形成することができる、
ガイド核酸。
【請求項１３】
前記ガイドドメインは同じ配列を有するか、
またはＤｇｋα遺伝子のエクソン領域の配列番号１９、２０、２１、および２３から選択される１または複数の標的配列と相補的結合を形成することができるか、および／または、Ｄｇｋζ遺伝子のエクソン領域の配列番号１０９、１１０、１１１、１１２、および１１３から選択される１または複数の標的配列と相補的結合を形成することができる、
請求項１２に記載のガイド核酸。
【請求項１４】
Ｄｇｋα遺伝子またはＤｇｋζ遺伝子のエクソン領域に位置する１または複数のインデルを有する人工的に操作された免疫細胞を作成する方法であって、
人体から単離された免疫細胞を、
（ａ）Ｄｇｋα遺伝子またはＤｇｋζ遺伝子のエクソン領域に位置する１または複数の標的配列に相補的結合を形成することができるガイド核酸、および
（ｂ）ストレプトコッカス・ピオゲネス由来Ｃａｓ９タンパク質、カンピロバクター・ジェジュニ由来Ｃａｓ９タンパク質、ストレブトコッカス・サーモフィラス由来Ｃａｓ９タンパク質、ストレブトコッカス・アウレウス由来Ｃａｓ９タンパク質、ナイセリア・メニンジティディス由来Ｃａｓ９タンパク質およびＣｐｆ１タンパク質から成る群から選択される少なくとも１つであるエディタータンパク質
から選択される少なくとも１つに接触させる段階と、
前記免疫細胞のＤｇｋα遺伝子またはＤｇｋζ遺伝子の１または複数の核酸配列に１または複数のインデルを誘導する段階を備え、
前記インデルは、
１ｂｐから３０ｂｐのヌクレオチドの１または複数の欠失、および/または
１ｂｐから３０ｂｐのヌクレオチドの１または複数の挿入であり、
前記インデルは、プロトスペーサー隣接モチーフ配列（ＰＡＭ配列）内に位置しているか、前記ＰＡＭ配列の５'末端または３'末端に隣接する１ｂｐ〜３０ｂｐの範囲内に位置しており、
前記インデルは免疫調節遺伝子の核酸配列内に位置しており、
前記インデルは、Ｄｇｋα遺伝子またはＤｇｋζ遺伝子のエクソン領域に位置する、
方法。
【請求項１５】
前記ガイド核酸は、同じ配列を有するか、
または、Ｄｇｋα遺伝子のエクソン領域の配列番号１９、２０、２１、および２３から選択される１または複数の標的配列と相補的結合を形成することができるか、および／または、Ｄｇｋζ遺伝子のエクソン領域の配列番号１０９、１１０、１１１、１１２、および１１３から選択される１または複数の標的配列と相補的結合を形成することができる、
請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記接触させる段階は、エレクトロポレーション、リポソーム、プラスミド、ウイルスベクター、ナノ粒子およびタンパク質移行ドメイン融合タンパク質法から選択される１または複数の方法によって実行される、
請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ウイルスベクターは、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ワクチニアウイルス、ポックスウイルス、単純疱疹ウイルスの群から選択される少なくとも１つである、
請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
（ａ）請求項１２に記載のガイド核酸、および、
（ｂ）ストレプトコッカス・ピオゲネス由来Ｃａｓ９タンパク質、カンピロバクター・ジェジュニ由来Ｃａｓ９タンパク質、ストレブトコッカス・サーモフィラス由来Ｃａｓ９タンパク質、ストレブトコッカス・アウレウス由来Ｃａｓ９タンパク質、ナイセリア・メニンジティディス由来Ｃａｓ９タンパク質およびＣｐｆ１タンパク質から成る群から選択される１または複数のタンパク質を含むエディタータンパク質
を備える遺伝子操作キット。