【手続補正書】
【提出日】令和2年11月9日(2020.11.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子改変ヒト初代リンパ球集団を産生する方法であって、前記方法は、
ｅｘ  ｖｉｖｏで、初代リンパ球集団にｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔ（ＣＲＩＳＰＲ）系を導入するステップであって、前記初代リンパ球集団が、ヒト対象から得られたものであり、前記ＣＲＩＳＰＲ系が、ヌクレアーゼおよびガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）を含み、前記ヌクレアーゼが、前記集団の複数の初代リンパ球における遺伝子において二本鎖切断を導入し、前記二本鎖切断は、前記遺伝子の発現を抑制し、前記遺伝子は、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、ＴＣＲＡ、ＴＲＡＣ、アデノシンＡ２ａ受容体（ＡＤＯＲＡ）、ＣＤ２７６、Ｖセットドメイン含有Ｔ細胞活性化インヒビター１（ＶＴＣＮ１）、Ｂリンパ球およびＴリンパ球関連（ＢＴＬＡ）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ１）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体，３ドメイン，長細胞質テール，１（ＫＩＲ３ＤＬ１）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２（ＨＡＶＣＲ２）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１（ＨＰＲＴ）、アデノ随伴ウイルス組込み部位１（ＡＡＶＳ１）、もしくはケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体５（遺伝子／偽遺伝子）（ＣＣＲ５）、ＣＤ１６０分子（ＣＤ１６０）、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、ＣＤ９６分子（ＣＤ９６）、細胞傷害性および制御性Ｔ細胞分子（ＣＲＴＡＭ）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン７（ＳＩＧＬＥＣ７）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン９（ＳＩＧＬＥＣ９）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ）、カスパーゼ８（ＣＡＳＰ８）、カスパーゼ１０（ＣＡＳＰ１０）、カスパーゼ３（ＣＡＳＰ３）、カスパーゼ６（ＣＡＳＰ６）、カスパーゼ７（ＣＡＳＰ７）、Ｆａｓ関連細胞死ドメイン（ＦＡＤＤ）、Ｆａｓ細胞表面細胞死受容体（ＦＡＳ）、形質転換増殖因子ベータ受容体ＩＩ（ＴＧＦＢＲＩＩ）、形質転換増殖因子ベータ受容体Ｉ（ＴＧＦＢＲ１）、ＳＭＡＤファミリーメンバー２（ＳＭＡＤ２）、ＳＭＡＤファミリーメンバー３（ＳＭＡＤ３）、ＳＭＡＤファミリーメンバー４（ＳＭＡＤ４）、ＳＫＩがん原遺伝子（ＳＫＩ）、ＳＫＩ様がん原遺伝子（ＳＫＩＬ）、ＴＧＦＢ誘導因子ホメオボックス１（ＴＧＩＦ１）、インターロイキン１０受容体サブユニットアルファ（ＩＬ１０ＲＡ）、インターロイキン１０受容体サブユニットベータ（ＩＬ１０ＲＢ）、ヘムオキシゲナーゼ２（ＨＭＯＸ２）、インターロイキン６受容体（ＩＬ６Ｒ）、インターロイキン６シグナル伝達因子（ＩＬ６ＳＴ）、ｃ−ｓｒｃチロシンキナーゼ（ＣＳＫ）、グリコスフィンゴ脂質ミクロドメインにより膜アンカーされるリンタンパク質１（ＰＡＧ１）、シグナル閾値調節膜貫通アダプター１（ＳＩＴ１）、フォークヘッドボックスＰ３（ＦＯＸＰ３）、ＰＲドメイン１（ＰＲＤＭ１）、塩基性ロイシンジッパー転写因子，ＡＴＦ様（ＢＡＴＦ）、可溶型グアニル酸シクラーゼ１アルファ２（ＧＵＣＹ１Ａ２）、可溶型グアニル酸シクラーゼ１アルファ３（ＧＵＣＹ１Ａ３）、可溶型グアニル酸シクラーゼ１ベータ２（ＧＵＣＹ１Ｂ２）、タンパク質のプロリルヒドロキシラーゼドメイン（ＰＨＤ１、ＰＨＤ２、ＰＨＤ３）ファミリー、もしくは可溶型グアニル酸シクラーゼ１ベータ３（ＧＵＣＹ１Ｂ３）、ｅｇｌ−９ファミリーの低酸素症誘導性因子１（ＥＧＬＮ１）、ｅｇｌ−９ファミリーの低酸素症誘導性因子２（ＥＧＬＮ２）、ｅｇｌ−９ファミリーの低酸素症誘導性因子３（ＥＧＬＮ３）、およびタンパク質ホスファターゼ１調節サブユニット１２Ｃ（ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ）からなる群から選択されるステップと；
前記ＣＲＩＳＰＲ系の前記導入後に、ｅｘ  ｖｉｖｏで、前記初代リンパ球集団に外因性トランス遺伝子を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを導入し、それにより遺伝子改変初代リンパ球集団を産生するステップであって、前記外因性トランス遺伝子が、前記集団における少なくとも約２０％の細胞に組み込まれる、ステップと
を含む、方法。
【請求項２】
前記トランス遺伝子が、前記初代リンパ球集団の少なくとも約２５％、３０％、４０％または５０％の細胞に組み込まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＡＡＶベクターの導入の約３〜１５日後に測定して、前記遺伝子改変初代細胞集団のうちの少なくとも約２０％、３０％、４０％または５０％の遺伝子改変初代リンパ球が、前記外因性トランス遺伝子を発現する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記遺伝子改変初代リンパ球集団が、前記ＡＡＶベクターの導入の１、２、３、４、７、１０または１４日後に測定して、前記ＡＡＶベクターの導入後少なくとも約７０％の生細胞を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＡＡＶベクターが、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクター、ハイブリッドＡＡＶベクター、キメラＡＡＶベクター、自己相補的ＡＡＶ（ｓｃＡＡＶ）ベクター、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＡＡＶベクターが、キメラＡＡＶベクターであり、必要に応じて、前記ＡＡＶベクターが、少なくとも１つのＡＡＶカプシド遺伝子配列における修飾を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ヌクレアーゼがＣａｓ９である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ｅｘ  ｖｉｖｏで、前記初代リンパ球集団に、Ｅ４ｏｒｆ６、Ｅ１Ｂ５５Ｋ、ＨＰＶ１８  Ｅ７、ｈＡｄ５  Ｅ１Ａ、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択されるウイルスタンパク質を導入するステップをさらに含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記遺伝子が、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）または細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）である、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記初代リンパ球集団が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記外因性トランス遺伝子が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記トランス遺伝子が、ＴＲＡＣまたはＴＣＲＢ遺伝子における二本鎖切断に組み込まれる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記トランス遺伝子が、前記遺伝子における前記二本鎖切断に組み込まれる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＣＲＩＳＰＲ系を前記集団に導入する前記ステップが、電気穿孔を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
がんの処置における使用のための組成物であって、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法によって産生された遺伝子改変ヒト初代リンパ球集団を含む、組成物。
【請求項１６】
前記がんが、消化器がん、乳がん、リンパ腫または前立腺がんである、請求項１５に記載の組成物。