【手続補正書】
【提出日】令和2年1月24日(2020.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物中のＴ細胞依存性二重特異性抗体（ＴＤＢ）を検出するための方法であって、前記二重特異性抗体が、標的抗原結合断片及びＣＤ３結合断片を含み、前記方法が、
Ｔ細胞及び標的細胞の集団を、前記組成物と接触させることを含み、前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞活性化に応答する応答要素に作動可能に連結したレポーターをコードする核酸を含み、前記標的細胞が、前記標的抗原を発現し、
前記レポーターの発現が、ＴＤＢの存在を示す、方法。
【請求項２】
Ｔ細胞の集団を、０．０１ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で前記ＴＤＢを含む組成物と接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
組成物中のＴＤＢの量を定量化するための方法であって、前記ＴＤＢが、標的抗原結合断片及びＣＤ３結合断片を含み、前記方法が、
Ｔ細胞及び標的細胞の集団を、前記組成物の１つ以上の濃度で、前記組成物と接触させることであって、前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞活性化に応答する応答要素に作動可能に連結したレポーターをコードする核酸を含み、前記標的細胞が、前記標的抗原を発現する、前記接触させることと、
前記レポーターの発現を、前記Ｔ細胞及び標的細胞の集団を異なる濃度の精製したＴＤＢと接触させることにより生じる標準曲線と抗体濃度の関数として相関させることと、を含む、方法。
【請求項４】
Ｔ細胞の集団を、約０．０１ｎｇ／ｍＬ〜約１００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で前記ＴＤＢを含む組成物と接触させる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記標準曲線が、前記Ｔ細胞を、約０．０１ｎｇ／ｍＬ〜約１００ｎｇ／ｍＬの範囲である異なる濃度の精製した抗ＣＤ３抗体と接触させることにより生じる、請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞集団におけるＴ細胞対標的細胞の比が、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、または約１：１０である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記細胞集団が、約１×１０３〜約１×１０６または約１×１０４〜約５×１０４の範囲である、請求項３〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＴＤＢの特異性を決定するための方法であって、前記ＴＤＢが、標的抗原結合断片及びＣＤ３結合断片を含み、前記方法が、
ａ）Ｔ細胞及び試験細胞の集団を、前記ＴＤＢと接触させることであって、前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞活性化に応答する応答要素に作動可能に連結したレポーターをコードする核酸を含み、前記試験細胞が、前記標的抗原を発現しない、前記接触させることと、
ｂ）Ｔ細胞及び試験細胞の集団を、前記ＴＤＢと接触させることであって、前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞活性化に応答する応答要素に作動可能に連結したレポーターをコードする核酸を含み、前記試験細胞が、前記標的抗原を発現しない、前記接触させることと、
パートａ）中の前記試験細胞の存在下の前記レポーターの発現を、パートｂ）中の標的細胞の存在下の前記レポーターの発現と比較することと、を含み、前記試験細胞対前記標的細胞の前記レポーターの発現の比が、前記ＴＤＢの前記特異性を示す、方法。
【請求項９】
ステップａ）の前記細胞集団におけるＴ細胞対試験細胞の比、及び／またはステップｂ）の前記細胞集団におけるＴ細胞対標的細胞の比が、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、または約１：１０である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ステップａ）及び／またはｂ）の前記細胞集団が、約１×１０３〜約１×１０６及び／または約１×１０４〜約５×１０４の範囲である、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
ステップａ）のＴ細胞及び試験細胞の集団ならびにステップｂ）のＴ細胞及び標的細胞の集団を、約０．０１ｎｇ／ｍＬ〜約１００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で前記ＴＤＢを含む組成物と接触させる、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
試験細胞の集団が標的抗原を発現するかどうかを決定するための方法であって、
ａ）前記試験細胞の集団をＴ細胞の集団と接触させることであって、前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞活性化に応答する応答要素に作動可能に連結したレポーターをコードする核酸を含む、前記接触させることと、
ｂ）Ｔ細胞及び試験細胞の集団を前記ＴＤＢと接触させることであって、前記ＴＤＢが、標的抗原結合断片及びＣＤ３結合断片を含む、前記接触させることと、を含み、
前記レポーターの発現が、前記試験細胞によって発現される前記標的抗原の存在を示す、方法。
【請求項１３】
前記試験細胞が、腫瘍細胞、免疫細胞、または血管細胞である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記試験細胞が、Ｔ細胞を含まない、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
Ｔ細胞対試験細胞の比が、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、または約１：１０である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
試験細胞及びＴ細胞の集団が、約１×１０３〜約１×１０６または約１×１０４〜約５×１０４の範囲である、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
試験細胞及びＴ細胞の集団が、約０．０１ｎｇ／ｍＬ〜約１００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度でＴＤＢと接触される、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記レポーターが、ルシフェラーゼ、蛍光タンパク質、アルカリホスファターゼ、ベータラクタマーゼ、またはベータガラクトシダーゼである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ルシフェラーゼが、ホタルルシフェラーゼ、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ、またはナノルシフェラーゼである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｔ細胞活性化に応答する応答要素が、ＮＦＡＴプロモーター、ＡＰ−１プロモーター、ＮＦκＢプロモーター、ＦＯＸＯプロモーター、ＳＴＡＴ３プロモーター、ＳＴＡＴ５プロモーター、またはＩＲＦプロモーターである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｔ細胞活性化に応答する応答要素が、ＮＦＡＴ、ＡＰ−１、ＮＦκＢ、ＦＯＸＯ、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５、及びＩＲＦのうちの任意の１つ以上からのＴ細胞活性化応答要素を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｔ細胞の集団が、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞の集団である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｔ細胞の集団が、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞またはＣＴＬＬ−２  Ｔ細胞の集団である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記標的抗原が、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ４０、ＣＤ７９α（ＣＤ７９ａ）、ＣＤ７９β（ＣＤ７９ｂ）、ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２受容体、ＨＥＲ３受容体、ＨＥＲ４受容体、ＦｃＲＨ５、ＣＬＬ１、ＬＦＡ−１、Ｍａｃ１、ｐ１５０、９５、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ、αｖ／β３インテグリン、ＶＥＧＦ、ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体；肥満（ＯＢ）受容体；ｍｐｌ受容体；ＣＴＬＡ−４；プロテインＣ、ＢＲ３、ｃ−ｍｅｔ、組織因子、β７、Ｔｅｎｂ２、ＳＴＥＡＰ、または膜貫通腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ａ）前記標的抗原がＨＥＲ２受容体であり、前記標的細胞がＢＴ−４７４細胞であるか、
ｂ）前記標的抗原がＨＥＲ２受容体であり、前記標的細胞がＳＫＢＲ３細胞であるか、
ｃ）前記標的抗原がＣＤ２０であり、前記標的細胞がＷｉｌ２−Ｓ細胞であるか、または
ｄ）前記標的抗原がＣＤ７９ｂであり、前記標的細胞がＢＪＡＢ細胞である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記レポーターが、前記細胞を前記組成物と接触させた１、２、３、４、５、６、７、８、１２、１６、２０、または２４時間後のうちの任意の１つ以上に検出される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
二重特異性抗体を含む組成物中のＴＤＢの検出のためのキットであって、前記二重特異性抗体が、標的抗原結合断片及びＣＤ３結合断片を含み、Ｔ細胞活性化に応答する応答要素に作動可能に連結したレポーターを含む操作されたＴ細胞を含む、キット。
【請求項２８】
ＴＤＢアッセイ標準物及び／またはＴＤＢ対照をさらに含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項２９】
前記標的抗原を発現する標的細胞をさらに含む、請求項２７または２８に記載のキット。
【請求項３０】
前記標的抗原が、標的細胞の表面上に発現される、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３１】
前記レポーターが、ルシフェラーゼ、蛍光タンパク質、アルカリホスファターゼ、ベータラクタマーゼ、またはベータガラクトシダーゼである、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３２】
前記ルシフェラーゼが、ホタルルシフェラーゼ、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ、またはナノルシフェラーゼである、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
前記Ｔ細胞活性化に応答する応答要素が、ＮＦＡＴプロモーター、ＡＰ−１プロモーター、ＮＦκＢプロモーター、ＦＯＸＯプロモーター、ＳＴＡＴ３プロモーター、ＳＴＡＴ５プロモーター、またはＩＲＦプロモーターである、請求項２７〜３２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３４】
前記Ｔ細胞活性化に応答する応答要素が、ＮＦＡＴ、ＡＰ−１、ＮＦκＢ、ＦＯＸＯ、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５、及びＩＲＦのうちの任意の１つ以上からのＴ細胞活性化応答要素を含む、請求項３３に記載のキット。
【請求項３５】
前記Ｔ細胞の集団が、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞の集団である、請求項２７〜３４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３６】
前記Ｔ細胞の集団が、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞またはＣＴＬＬ−２  Ｔ細胞の集団である、請求項２７〜３５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３７】
前記標的抗原が、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ４０、ＣＤ７９α（ＣＤ７９ａ）、ＣＤ７９β（ＣＤ７９ｂ）、ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２受容体、ＨＥＲ３受容体、ＨＥＲ４受容体、ＦｃＲＨ５、ＣＬＬ１、ＬＦＡ−１、Ｍａｃ１、ｐ１５０、９５、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ、αｖ／β３インテグリン、ＶＥＧＦ、ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体；肥満（ＯＢ）受容体；ｍｐｌ受容体；ＣＴＬＡ−４；プロテインＣ、ＢＲ３、ｃ−ｍｅｔ、組織因子、β７、Ｔｅｎｂ２、ＳＴＥＡＰ、または膜貫通腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である、請求項２７〜３６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３８】
ａ）前記標的抗原がＨＥＲ２受容体であり、前記標的細胞がＢＴ−４７４細胞であるか、
ｂ）前記標的抗原がＨＥＲ２受容体であり、前記標的細胞がＳＫＢＲ３細胞であるか、
ｃ）前記標的抗原がＣＤ２０であり、前記標的細胞がＷｉｌ２−Ｓ細胞であるか、または
ｄ）前記標的抗原がＣＤ７９ｂであり、前記標的細胞がＢＪＡＢ細胞である、請求項２９〜３７のいずれか一項に記載のキット。