【手続補正書】
【提出日】令和2年2月13日(2020.2.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター粒子を精製するための方法であって、
（ａ）ｒＡＡＶベクター粒子を含む細胞及び細胞培養上清を回収して、回収物を製造するステップと、
（ｂ）任意選択でステップ（ａ）で製造された前記回収物を濃縮して、濃縮された回収物を製造するステップと、
（ｃ）ステップ（ａ）で製造された前記回収物又はステップ（ｂ）で製造された前記濃縮された回収物を溶解して、溶解物を製造するステップと、
（ｄ）ステップ（ｃ）で製造された前記溶解物を処理して、前記溶解物中の混入核酸を減少させ、それにより核酸が減少した溶解物を製造するステップと、
（ｅ）ステップ（ｄ）で製造された前記核酸が減少した溶解物を濾過して、清澄化された溶解物を製造し、任意選択で前記清澄化された溶解物を希釈して、希釈され清澄化された溶解物を製造するステップと、
（ｆ）ステップ（ｅ）で製造された前記清澄化された溶解物又は希釈され清澄化された溶解物を、アニオン交換カラムクロマトグラフィーに供して、ｒＡＡＶベクター粒子で構成されるカラム溶出物を製造し、任意選択で前記カラム溶出物を濃縮して、濃縮されたカラム溶出物を製造するステップと、
（ｇ）ステップ（ｆ）で製造された前記カラム溶出物又は前記濃縮されたカラム溶出物を、サイズ排除カラムクロマトグラフィーに供して、ｒＡＡＶベクター粒子で構成される第２のカラム溶出物を製造し、それによりｒＡＡＶベクター粒子をタンパク質不純物から分離して、任意選択で前記第２のカラム溶出物を希釈して、希釈された第２のカラム溶出物を製造するステップと、
（ｈ）ステップ（ｇ）で製造された前記第２のカラム溶出物又は前記希釈された第２のカラム溶出物を、カチオン交換カラムクロマトグラフィーに供して、ｒＡＡＶベクター粒子で構成される第３のカラム溶出物を製造し、それによりｒＡＡＶベクター粒子をタンパク質又は他の産生不純物から分離して、任意選択で前記第３のカラム溶出物を濃縮して、濃縮された第３のカラム溶出物を製造するステップと、
（ｉ）ステップ（ｈ）で製造された前記第３のカラム溶出物又は前記濃縮された第３のカラム溶出物を濾過して、それにより精製されたｒＡＡＶベクター粒子を製造するステップと
を含む方法。
【請求項２】
ステップ（ｂ）及び／又はステップ（ｆ）及び／又はステップ（ｈ）の前記濃縮が、限外濾過／透析濾過によってなされ、任意選択でタンジェンシャルフロー濾過によってなされる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ（ａ）で製造された前記回収物、又はステップ（ｂ）で製造された前記濃縮された回収物の前記溶解が微小流動化による、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ステップ（ｄ）が、ヌクレアーゼで処理して、それにより混入核酸を減少させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ステップ（ｅ）の前記清澄化された溶解物又は前記希釈され清澄化された溶解物の前記濾過が、両端を含めて約０．１〜０．８ミクロンの間の細孔直径を有するフィルターによる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ステップ（ｅ）の前記清澄化された溶解物又は前記希釈され清澄化された溶解物の前記希釈が、酢酸塩緩衝水溶液を用いる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ｇ）の前記第２のカラム溶出物の前記希釈が、酢酸塩緩衝水溶液を用いる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ｉ）及び／又はステップ（ｉ）から生じた前記ｒＡＡＶベクター粒子が、界面活性剤を用いて製剤化されて、ＡＡＶベクター製剤が製造される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ステップ（ｆ）の前記アニオン交換カラムクロマトグラフィーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）調整カラムクロマトグラフィーを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｆ）の前記アニオン交換カラムが、前記ｒＡＡＶベクター粒子の前記カラムからの溶出の前に、前記カラムを界面活性剤水溶液で洗浄することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｈ）の前記カチオン交換カラムが、前記ｒＡＡＶベクター粒子の前記カラムからの溶出の前に、前記カラムを界面活性剤溶液で洗浄することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、ステップ（ｆ）の前記アニオン交換カラムから、トリスＣｌ／ＮａＣｌ緩衝水溶液に溶出される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、ステップ（ｈ）の前記カチオン交換カラムから、リン酸／ＮａＣｌ緩衝水溶液に溶出される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
塩化セシウム勾配超遠心分離のステップが除外される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡ、リボザイム及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される核酸をコードする導入遺伝子を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛膜性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポエチン、アンジオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦα）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィンＮＴ−３及びＮＴ４／５、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アグリン、ネトリン−１及びネトリン−２、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、エフリン、ノギン、ソニックヘッジホッグ並びにチロシンヒドロキシラーゼからなる群から選択される遺伝子生成物をコードする導入遺伝子を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン（ＩＬ１〜ＩＬ−１７）、単球走化性タンパク質、白血病阻止因子、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子α及びβ、インターフェロンα、β、及びγ、幹細胞因子、ｆｌｋ−２／ｆｌｔ３リガンド、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、ヒト化抗体、単鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、単鎖Ｔ細胞受容体、クラスＩ及びクラスＩＩのＭＨＣ分子からなる群から選択される遺伝子生成物をコードする導入遺伝子を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、カルバモイルシンテターゼＩ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギノスクシネートシンテターゼ、アルギノスクシネートリアーゼ、アルギナーゼ、フマリルアセトアセテートヒドロラーゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、アルファ−１アンチトリプシン、グルコース−６−ホスファターゼ、ポルホビリノーゲンデアミナーゼ、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、シスタチオンベータ−シンターゼ、分岐鎖ケト酸デカルボキシラーゼ、アルブミン、イソバレリル−ｃｏＡデヒドロゲナーゼ、プロピオニルＣｏＡカルボキシラーゼ、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、グルタリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、インスリン、ベータ−グルコシダーゼ、ピルベートカルボキシレート、肝ホスホリラーゼ、ホスホリラーゼキナーゼ、グリシンデカルボキシラーゼ、ＲＰＥ６５、Ｈ−タンパク質、Ｔ−タンパク質、嚢胞性線維症膜貫通制御因子（ＣＦＴＲ）配列、及びジストロフィンｃＤＮＡ配列からなる群から選択される先天性代謝異常の修正に有用なタンパク質をコードする導入遺伝子を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、第ＶＩＩＩ因子又は第ＩＸ因子をコードする導入遺伝子を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ステップ（ａ）で製造された前記回収物又はステップ（ｂ）で製造された前記濃縮された回収物から全ｒＡＡＶベクター粒子の約４０〜７０％を回収する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＡＡＶ親和性カラム精製により製造又は精製されたｒＡＡＶベクター粒子よりも高い純度を有するｒＡＡＶベクター粒子を製造する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
アニオン交換カラム精製と組み合わされたＡＡＶ親和性カラムにより製造又は精製されたｒＡＡＶベクター粒子よりも高い純度を有するｒＡＡＶベクター粒子を製造する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
アニオン交換カラム及びカチオン交換精製と組み合わされたＡＡＶ親和性カラムにより製造又は精製されたｒＡＡＶベクター粒子よりも高い純度を有するｒＡＡＶベクター粒子を製造する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９及びＡＡＶ１０からなる群から選択されるＡＡＶから誘導される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター粒子を精製するための方法であって、
（ａ）ｒＡＡＶベクター粒子を含む細胞及び細胞培養上清を回収して、回収物を製造するステップと、
（ｂ）任意選択でステップ（ａ）で製造された前記回収物を濃縮して、濃縮された回収物を製造するステップと、
（ｃ）ステップ（ａ）で製造された前記回収物、又はステップ（ｂ）で製造された前記濃縮された回収物を溶解して、溶解物を製造するステップと、
（ｄ）ステップ（ｃ）で製造された前記溶解物を処理して、前記溶解物中の混入核酸を減少させ、それにより核酸が減少した溶解物を製造するステップと、
（ｅ）ステップ（ｄ）で製造された前記核酸が減少した溶解物を濾過して、清澄化された溶解物を製造し、任意選択で前記清澄化された溶解物を希釈して、希釈され清澄化された溶解物を製造するステップと、
（ｆ）ステップ（ｅ）で製造された前記清澄化された溶解物又は希釈され清澄化された溶解物を、カチオン交換カラムクロマトグラフィーに供して、ｒＡＡＶベクター粒子で構成されるカラム溶出物を製造し、それによりｒＡＡＶベクター粒子をタンパク質又は他の産生不純物から分離して、任意選択で前記カラム溶出物を濃縮して、濃縮されたカラム溶出物を製造するステップと、
（ｇ）ステップ（ｆ）で製造された前記カラム溶出物又は前記濃縮されたカラム溶出物を、サイズ排除カラムクロマトグラフィーに供して、ｒＡＡＶベクター粒子で構成される第２のカラム溶出物を製造し、それによりｒＡＡＶベクター粒子をタンパク質不純物から分離して、任意選択で前記第２のカラム溶出物を希釈して、希釈された第２のカラム溶出物を製造するステップと、
（ｈ）ステップ（ｇ）で製造された前記第２のカラム溶出物又は前記希釈された第２のカラム溶出物を、アニオン交換カラムクロマトグラフィーに供して、ｒＡＡＶベクター粒子で構成される第３のカラム溶出物を製造し、任意選択で前記第３のカラム溶出物を濃縮して、濃縮された第３のカラム溶出物を製造するステップと、
（ｉ）ステップ（ｈ）で製造された前記第３のカラム溶出物又は前記濃縮された第３のカラム溶出物を濾過して、それにより精製されたｒＡＡＶベクター粒子を製造するステップと
を含む方法。
【請求項２６】
ステップ（ｂ）及び／又はステップ（ｆ）及び／又はステップ（ｈ）の前記濃縮が、限外濾過／透析濾過によってなされ、任意選択でタンジェンシャルフロー濾過によってなされる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ステップ（ａ）で製造された前記回収物又はステップ（ｂ）で製造された前記濃縮された回収物の前記溶解が微小流動化による、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
ステップ（ｄ）が、ヌクレアーゼで処理して、それにより混入核酸を減少させることを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
ステップ（ｅ）の前記清澄化された溶解物又は前記希釈され清澄化された溶解物の前記濾過が、両端を含めて約０．１〜０．８ミクロンの間の細孔直径を有するフィルターによる、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
ステップ（ｅ）の前記清澄化された溶解物又は前記希釈され清澄化された溶解物の前記希釈が、酢酸塩緩衝水溶液を用いる、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
ステップ（ｇ）の前記第２のカラム溶出物の前記希釈が、酢酸塩緩衝水溶液を用いる、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
ステップ（ｉ）から生じた前記ｒＡＡＶベクター粒子が界面活性剤で製剤化されて、ＡＡＶベクター製剤が製造される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
ステップ（ｈ）の前記アニオン交換カラムクロマトグラフィーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）調整カラムクロマトグラフィーを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３４】
ステップ（ｈ）の前記アニオン交換カラムクロマトグラフィーが、前記ｒＡＡＶベクター粒子の前記カラムからの溶出の前に、前記カラムをＰＥＧ溶液で洗浄することを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３５】
ステップ（ｈ）の前記アニオン交換カラムが、前記ｒＡＡＶベクター粒子の前記カラムからの溶出の前に、前記カラムを界面活性剤水溶液で洗浄することを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
ステップ（ｆ）の前記カチオン交換カラムが、前記ｒＡＡＶベクター粒子の前記カラムからの溶出の前に、前記カラムを界面活性剤溶液で洗浄することを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、ステップ（ｈ）の前記アニオン交換カラムから、トリスＣｌ／ＮａＣｌ緩衝水溶液に溶出される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３８】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、ステップ（ｆ）の前記カチオン交換カラムから、リン酸／ＮａＣｌ緩衝水溶液に溶出される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３９】
塩化セシウム勾配超遠心分離のステップが除外される、請求項２５〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡ、リボザイム及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される核酸をコードする導入遺伝子を含む、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛膜性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポエチン、アンジオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦα）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィンＮＴ−３及びＮＴ４／５、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アグリン、ネトリン−１及びネトリン−２、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、エフリン、ノギン、ソニックヘッジホッグ並びにチロシンヒドロキシラーゼからなる群から選択される遺伝子生成物をコードする導入遺伝子を含む、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン（ＩＬ１〜ＩＬ−１７）、単球走化性タンパク質、白血病阻止因子、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子α及びβ、インターフェロンα、β、及びγ、幹細胞因子、ｆｌｋ−２／ｆｌｔ３リガンド、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、ヒト化抗体、単鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、単鎖Ｔ細胞受容体、クラスＩ及びクラスＩＩのＭＨＣ分子からなる群から選択される遺伝子生成物をコードする導入遺伝子を含む、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、カルバモイルシンテターゼＩ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギノスクシネートシンテターゼ、アルギノスクシネートリアーゼ、アルギナーゼ、フマリルアセトアセテートヒドロラーゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、アルファ−１アンチトリプシン、グルコース−６−ホスファターゼ、ポルホビリノーゲンデアミナーゼ、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、シスタチオンベータ−シンターゼ、分岐鎖ケト酸デカルボキシラーゼ、アルブミン、イソバレリル−ｃｏＡデヒドロゲナーゼ、プロピオニルＣｏＡカルボキシラーゼ、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、グルタリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、インスリン、ベータ−グルコシダーゼ、ピルベートカルボキシレート、肝ホスホリラーゼ、ホスホリラーゼキナーゼ、グリシンデカルボキシラーゼ、ＲＰＥ６５、Ｈ−タンパク質、Ｔ−タンパク質、嚢胞性線維症膜貫通制御因子（ＣＦＴＲ）配列、及びジストロフィンｃＤＮＡ配列からなる群から選択される先天性代謝異常の修正に有用なタンパク質をコードする導入遺伝子を含む、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、第ＶＩＩＩ因子又は第ＩＸ因子をコードする導入遺伝子を含む、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
ステップ（ａ）で製造された前記回収物、又はステップ（ｂ）で製造された前記濃縮された回収物から全ｒＡＡＶベクター粒子の約４０〜７０％を回収する、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
ＡＡＶ親和性カラム精製により製造又は精製されたｒＡＡＶベクター粒子よりも高い純度を有するｒＡＡＶベクター粒子を製造する、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
アニオン交換カラム精製と組み合わされたＡＡＶ親和性カラムにより製造又は精製されるｒＡＡＶベクター粒子よりも高い純度を有するｒＡＡＶベクター粒子を製造する、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
アニオン交換カラム及びカチオン交換精製と組み合わされたＡＡＶ親和性カラムにより製造又は精製されたｒＡＡＶベクター粒子よりも高い純度を有するｒＡＡＶベクター粒子を製造する、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ｒＡＡＶベクター粒子が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９及びＡＡＶ１０からなる群から選択されるＡＡＶから誘導される、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。