【手続補正書】
【提出日】令和1年12月13日(2019.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料において、切断された高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）を検出するための方法であって、
（ｉ）ＨＭＷＫを含む疑いのある試料を準備するステップと、
（ｉｉ）前記試料をプロテアーゼと接触させて、複数の消化されたペプチドを産生させるステップと、
（ｉｉｉ）前記複数の消化されたペプチドにおいてシグネチャーペプチドのレベルを測定するステップであって、前記シグネチャーペプチドが、切断されたＨＭＷＫを表す、ステップと、
を含む方法。
【請求項２】
前記シグネチャーペプチドが、切断されたＨＭＷＫの４６ｋＤａの軽鎖を表し、任意選択で、前記切断されたＨＭＷＫの４６ｋＤａの軽鎖を表すシグネチャーペプチドは、ＫＨＮＬＧＨＧＨ（配列番号１）、ＫＨＮＬＧＨＧＨＫＨＥ（配列番号２）；ＫＨＮＬＧＨＧＨＫ（配列番号３）；またはＫＨＮＬＧＨＧＨＫＨＥＲ（配列番号４）であってもよい、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記シグネチャーペプチドが、切断されたＨＭＷＫの５６ｋＤａの軽鎖を表し、任意選択で、前記切断されたＨＭＷＫの５６ｋＤａの軽鎖を表すシグネチャーペプチドは、ＳＳＲＩＧＥ（配列番号５）であってもよい、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記プロテアーゼが、キモトリプシン、エンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃ、エンドプロテイナーゼＡｓｐ−Ｎ、カテプシンＧ、およびエンドプロテイナーゼＬｙｓ−Ｃからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
完全長のＨＭＷＫを表すシグネチャーペプチドのレベルを測定するステップをさらに含み、任意選択で、前記完全長のＨＭＷＫを表すシグネチャーペプチドは、
ＧＨＥＫＱＲＫＨ（配列番号６）；
ＫＱＲＫＨＮＬＧＨＧＨＫＨＥ（配列番号７）；
ＤＷＧＨＫＱＲＫＨＮＬＧＨＧＨＫＨＥＲ（配列番号８）；
ＨＮＬＧＨＧＨＫ（配列番号９）；または
ＳＹＹＦＤＬＴＤＧＬＳ（配列番号１０）
であってもよい、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記切断されたＨＭＷＫを表すシグネチャーペプチドのレベル、前記完全長のＨＭＷＫを表すシグネチャーペプチドのレベル、またはこれら両方のレベルを、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）により測定する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記試料が、ヒトの対象から得られた生体試料である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記生体試料が、血液試料または血漿試料であり、任意選択で、前記生体試料は、正常な血漿試料、ＦＸＩＩａにより活性化された血漿試料、または活性化されていない血漿試料であってもよい、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ヒトの対象が、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）を有する、または有する疑いがある；および／または前記生体試料が、プロテアーゼ阻害剤の混合物を含む液体製剤を含む、真空採血管に回収された血漿試料であり、任意選択で、前記真空採血管は、ＳＣＡＴチューブであってもよい、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｉｉ）が、
（ａ）還元剤の存在下で行われ、任意選択で、前記生体試料は、９０℃で１時間、前記還元剤と共にインキュベートされてもよい；および／または
（ｂ）プロテアーゼ阻害剤、抗凝固剤、またはプロテアーゼ阻害剤と抗凝固剤の両方、の非存在下で行われる、
請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
（ｉｖ）前記ヒトの対象がＨＡＥを有するかどうかを決定するステップであって、規定の参照値と比較して、前記ヒトの対象から得られた生体試料における上昇したレベルの切断されたＨＭＷＫが、前記ヒトの対象がＨＡＥを有することを表す、ステップ；または
（ｖ）前記ヒトの対象にＨＡＥの発作のリスクがあるかどうかを決定するステップであって、規定の参照値と比較して、前記ヒトの対象から得られた生体試料における上昇したレベルの切断されたＨＭＷＫが、前記ヒトの対象にＨＡＥの発作のリスクがあることを表す、ステップ；
をさらに含む、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
試料において完全長の高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）と切断されたＨＭＷＫとを区別するための方法であって、
（ｉ）完全長のＨＭＷＫおよび／または切断されたＨＭＷＫを含む疑いのある試料を準備するステップと、
（ｉｉ）前記試料をプロテアーゼと接触させて、複数の消化されたペプチドを産生させるステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）から得た第１の消化されたペプチドのレベルを測定するステップであって、前記第１の消化されたペプチドが完全長のＨＭＷＫと比較して切断されたＨＭＷＫに固有である、ステップと、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉ）から得た第２の消化されたペプチドのレベルを測定するステップであって、前記第２の消化されたペプチドが、低分子量キニノーゲン（ＬＭＷＫ）と比較してＨＭＷＫに固有である、ステップと、
（ｖ）前記第１の消化されたペプチドと前記第２の消化されたペプチドとの間の比率を決定するステップと、
（ｖｉ）ステップ（ｖ）で決定した比率に基づき、前記試料において、切断されたＨＭＷＫを完全長のＨＭＷＫと区別するステップと、
を含む方法。
【請求項１３】
前記プロテアーゼが、グルタミン酸残基の後ろを切断し、任意選択で、前記プロテアーゼは、エンドプロテイナーゼＧｌｕ−ＣまたはカテプシンＧであってもよい、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記プロテアーゼが、エンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃであり、任意選択で、前記第１の消化されたペプチドはＳＳＲＩＧＥ（配列番号５）であってもよく、前記第２の消化されたペプチドはＳＹＹＦＤＬＴＤＧＬＳ（配列番号１０）であってもよい、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１の消化されたペプチドおよび前記第２の消化されたペプチドを、ＬＣ−ＭＳにより測定する、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記試料が、ヒトの対象から得られた生体試料である、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記生体試料が、血液試料または血漿試料であり、任意選択で、前記生体試料は、正常な血漿試料、ＦＸＩＩａにより活性化された血漿試料、または活性化されていない血漿試料であってもよい、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ヒトの対象が、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）を有する、または有する疑いがある、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記生体試料が、プロテアーゼ阻害剤の混合物を含む液体製剤を含む、真空採血管に回収された血漿試料であり、任意選択で、前記真空採血管はＳＣＡＴチューブであってもよい、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
ステップ（ｉｉ）が還元剤の存在下で行われ、任意選択で、前記生体試料は、９０℃で１時間、前記還元剤と共にインキュベートされる、請求項１２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
ステップ（ｉｉ）が、プロテアーゼ阻害剤、抗凝固剤、またはプロテアーゼ阻害剤と抗凝固剤の両方、の非存在下で行われる、および／または
ステップ（ｉｉ）において、プロテアーゼ／タンパク質の比率が約１：２０である、
請求項１２〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記対象が、ヒトの対象であり、
前記方法が、
（ｖｉｉ）前記ヒトの対象がＨＡＥを有するかどうかを決定するステップであって、規定の参照値と比較して、前記ヒトの対象から得られた生体試料における上昇したレベルの切断されたＨＭＷＫが、前記ヒトの対象がＨＡＥを有することを表す、ステップ；または
（ｖｉｉ）前記ヒトの対象にＨＡＥの発作のリスクがあるかどうかを決定するステップであって、規定の参照値と比較して、前記ヒトの対象から得た生体試料における上昇したレベルの切断されたＨＭＷＫが、前記ヒトの対象にＨＡＥの発作のリスクがあることを表す、ステップ；
をさらに含む、請求項１２〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）を有する、またはＨＡＥのリスクがある、対象を同定するための方法であって、
（ｉ）対象の生体試料を準備するステップと、
（ｉｉ）前記試料をプロテアーゼと接触させて複数の消化されたペプチドを産生させるステップと、
（ｉｉｉ）前記複数の消化されたペプチドにおいて第１のシグネチャーペプチドのレベルを測定するステップであって、前記第１のシグネチャーペプチドが、切断されたＨＭＷＫを表す、ステップと、
（ｉｖ）前記切断されたＨＭＷＫのレベルに基づき、前記対象がＨＡＥを有する、またはＨＡＥの発作のリスクがあるかどうかを決定するステップであって、規定の参照値と比較して、前記生体試料における上昇したレベルの切断されたＨＭＷＫが、前記対象がＨＡＥを有する、またはＨＡＥの発作のリスクがあることを表す、ステップと、
を含む方法。
【請求項２４】
前記プロテアーゼが、キモトリプシンであり、任意選択で、前記第１のシグネチャーペプチドはＫＨＮＬＧＨＧＨ（配列番号１）であってもよい、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記複数の消化されたペプチドにおいて第２のシグネチャーペプチドのレベルを測定するステップであって、前記第２のシグネチャーペプチドがＨＭＷＫを表す、ステップをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１のシグネチャーペプチドと前記第２のシグネチャーペプチドとの間の比率を決定するステップであって、ＨＡＥを有する対象またはＨＡＥの発作のリスクがある対象が、前記第１のシグネチャーペプチドと前記第２のシグネチャーペプチドとの間の比率に基づいて同定される、ステップをさらに含み、任意選択で、前記プロテアーゼはエンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃまたはカテプシンであってもよい、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記プロテアーゼが、エンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃまたはカテプシンであり、任意選択で、前記第１のシグネチャーペプチドはＳＳＲＩＧＥ（配列番号５）であってもよく、前記第２のシグネチャーペプチドはＳＹＹＦＤＬＴＤＧＬＳ（配列番号１０）であってもよい、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
（ｉ）前記第１のシグネチャーペプチド、前記第２のシグネチャーペプチド、またはその両方を、ＬＣ−ＭＳにより測定する；および／または
（ｉｉ）前記生体試料が血液試料または血漿試料である、
請求項２３〜２７のいずれか１項に記載の方法。