【手続補正書】
【提出日】令和2年10月15日(2020.10.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オピオイドをナル-オピオイドに改変する方法であって、以下の工程：
オピオイドを少なくとも第1の酵素と接触させる工程であって、該オピオイドを該少なくとも第1の酵素と接触させることが、該オピオイドからのN-結合型メチル基の除去によって該オピオイドをノル-オピオイドに変換する、工程;および
該ノル-オピオイドを少なくとも第2の酵素と接触させる工程であって、補因子の存在下で該ノル-オピオイドを該少なくとも第2の酵素と接触させることが、該補因子からの側鎖の転移によって該ノル-オピオイドをナル-オピオイドに変換する、工程
を含む、前記方法。
【請求項２】
オピオイドをナル-オピオイドに改変する方法であって、以下の工程：
第1オピオイドを少なくとも1種の酵素と接触させる工程であって、第1オピオイドを該少なくとも1種の酵素と接触させることが、O-結合型メチル基の喪失によって第1オピオイドを第2オピオイドに変換する、工程;
第2オピオイドを少なくとも第2の酵素と接触させる工程であって、該オピオイドを該少なくとも第2の酵素と接触させることが、N-結合型メチル基の喪失によって第2オピオイドをノル-オピオイドに変換する、工程;および
該ノル-オピオイドを少なくとも第3の酵素と接触させる工程であって、補因子の存在下で該ノル-オピオイドを該少なくとも第3の酵素と接触させることが、該補因子からの側鎖の転移によって該ノル-オピオイドをナル-オピオイドに変換する、工程
を含む、前記方法。
【請求項３】
ナル-オピオイドが、第1の酵素および第2の酵素をコードするためのコード配列を含む遺伝子操作された細胞を培養することによって生成される、請求項1記載の方法。
【請求項４】
ノル-オピオイドが、第1の酵素、第2の酵素および第3の酵素をコードするためのコード配列を含む遺伝子操作された細胞を培養することによって生成される、請求項2記載の方法。
【請求項５】
ナル-オピオイドを細胞培養物から回収する工程
をさらに含む、請求項3記載の方法。
【請求項６】
遺伝子操作された細胞から産生されかつ該細胞内に存在しているオピオイドからノル-オピオイドを産生する、該遺伝子操作された細胞であって、該遺伝子操作された細胞によって産生されるN-デメチラーゼをコードしている異種コード配列を含み、該N-デメチラーゼは、該遺伝子操作された細胞内の該オピオイドを該ノル-オピオイドに変換し、該ノル-オピオイドは該遺伝子操作された細胞内で生成される、該遺伝子操作された細胞。
【請求項７】
N-メチルトランスフェラーゼをコードしている異種コード配列をさらに含む、請求項6記載の遺伝子操作された細胞。
【請求項８】
オピオイドが、遺伝子操作された細胞内で、L-チロシンで始まる代謝経路によって生成される、請求項6記載の遺伝子操作された細胞。
【請求項９】
ノル-オピオイドをナル-オピオイドに改変する方法であって、以下の工程：
該ノル-オピオイドを少なくとも1種の酵素と接触させる工程であって、補因子の存在下で該ノル-オピオイドを該酵素と接触させることが、該補因子からの側鎖の転移によって該ノル-オピオイドをナル-オピオイドに変換する、工程
を含む、前記方法。
【請求項１０】
ノル-オピオイド生成物を有する生成物流を形成するための方法であって、以下の工程：
i. 遺伝子操作された細胞と、栄養物および水を含むフィードストックとをバッチ式反応器に供給する工程であって、該遺伝子操作された細胞は、N-デメチラーゼ酵素を含む少なくとも1つの異種コード配列を有する、工程;
ii. 前記バッチ式反応器内で、ノル-オピオイドと細胞材料とを含む溶液を生成するために、該遺伝子操作された細胞を少なくとも約5分間の期間にわたりインキュベートすることにより、該遺伝子操作された細胞を発酵に供する工程;ならびに
iii. 該ノル-オピオイドを含む該生成物流を得るために、少なくとも1つの分離ユニットを用いて該ノル-オピオイドを該細胞材料から分離する、工程
を含む、前記方法。
【請求項１１】
ナル-オピオイドを細胞培養物から回収する工程
をさらに含む、請求項4記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
参照による組み入れ
本明細書において言及した刊行物、特許および特許出願はすべて、参照により、あたかも個々の各刊行物、特許または特許出願が参照により組み入れられて具体的に個々に示されているのと同程度に、本明細書に組み入れられる。
[本発明1001]
第1オピオイドを脱メチル化して第2オピオイドにする方法であって、以下の工程：
第1オピオイドを少なくとも1種の酵素と接触させる工程であって、第1オピオイドを該少なくとも1種の酵素と接触させることが、O-結合型メチル基の喪失によって第1オピオイドを第2オピオイドに変換する、工程
を含み、
ここで、第1オピオイドが、コデインおよびテバインからなる群より選択されることはない、
前記方法。
[本発明1002]
オピオイドを脱メチル化してノル-オピオイドにする方法であって、以下の工程：
第1オピオイドを少なくとも1種の酵素と接触させる工程であって、第1オピオイドを該少なくとも1種の酵素と接触させることが、O-結合型メチル基の喪失によって第1オピオイドを第2オピオイドに変換する、工程;および
第2オピオイドを少なくとも1種の酵素と接触させる工程であって、該オピオイドを該少なくとも1種の酵素と接触させることが、N-結合型メチル基の喪失によって第2オピオイドをノル-オピオイドに変換する、工程
を含む、前記方法。
[本発明1003]
オピオイドを脱メチル化してノル-オピオイドにする方法であって、以下の工程：
オピオイドを少なくとも1種の酵素と接触させる工程であって、該オピオイドを該少なくとも1種の酵素と接触させることが、該オピオイドからのN-結合型メチル基の除去によって該オピオイドをノル-オピオイドに変換する、工程
を含み、
ここで、該オピオイドを該少なくとも1種の酵素にインビトロで接触させる場合、該オピオイドはテバインではない、
前記方法。
[本発明1004]
オピオイドをナル-オピオイドに改変する方法であって、以下の工程：
オピオイドを少なくとも第1の酵素と接触させる工程であって、該オピオイドを該少なくとも第1の酵素と接触させることが、該オピオイドからのN-結合型メチル基の除去によって該オピオイドをノル-オピオイドに変換する、工程;および
該ノル-オピオイドを少なくとも第2の酵素と接触させる工程であって、補因子の存在下で該ノル-オピオイドを該少なくとも第2の酵素と接触させることが、該補因子からの側鎖の転移によって該ノル-オピオイドをナル-オピオイドに変換する、工程
を含む、前記方法。
[本発明1005]
オピオイドをナル-オピオイドに改変する方法であって、以下の工程：
第1オピオイドを少なくとも1種の酵素と接触させる工程であって、第1オピオイドを該少なくとも1種の酵素と接触させることが、O-結合型メチル基の喪失によって第1オピオイドを第2オピオイドに変換する、工程;
第2オピオイドを少なくとも第2の酵素と接触させる工程であって、該オピオイドを該少なくとも第2の酵素と接触させることが、N-結合型メチル基の喪失によって第2オピオイドをノル-オピオイドに変換する、工程;および
該ノル-オピオイドを少なくとも第3の酵素と接触させる工程であって、補因子の存在下で該ノル-オピオイドを該少なくとも第3の酵素と接触させることが、該補因子からの側鎖の転移によって該ノル-オピオイドをナル-オピオイドに変換する、工程
を含む、前記方法。
[本発明1006]
第2オピオイドが、少なくとも1種の酵素をコードするためのコード配列を含む遺伝子操作された細胞を培養することによって生成される、本発明1001の方法。
[本発明1007]
ノル-オピオイドが、第1の酵素をコードするためのコード配列を含む遺伝子操作された細胞を培養することによって生成される、本発明1002の方法。
[本発明1008]
ノル-オピオイドが、第1の酵素および第2の酵素をコードするためのコード配列を含む遺伝子操作された細胞を培養することによって生成される、本発明1003の方法。
[本発明1009]
ナル-オピオイドが、第1の酵素および第2の酵素をコードするためのコード配列を含む遺伝子操作された細胞を培養することによって生成される、本発明1004の方法。
[本発明1010]
ノル-オピオイドが、第1の酵素、第2の酵素および第3の酵素をコードするためのコード配列を含む遺伝子操作された細胞を培養することによって生成される、本発明1005の方法。
[本発明1011]
第2オピオイドを細胞培養物から回収する工程
をさらに含む、本発明1006の方法。
[本発明1012]
ノル-オピオイドを細胞培養物から回収する工程
をさらに含む、本発明1007または1008のいずれかの方法。
[本発明1013]
ナル-オピオイドを細胞培養物から回収する工程
をさらに含む、本発明1009または1010の方法。
[本発明1014]
(S)-1-ベンジルイソキノリンアルカロイドを細胞培養物に添加する工程
をさらに含む、本発明1006〜1013のいずれかの方法。
[本発明1015]
ノル-オピオイドが、遺伝子操作された細胞内で、L-チロシンで始まる代謝経路によって生成される、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1016]
ナル-オピオイドが、遺伝子操作された細胞内で、L-チロシンで始まる代謝経路によって生成される、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1017]
遺伝子操作された細胞内に存在しているオピオイドからノル-オピオイドを産生する、該遺伝子操作された細胞であって、該遺伝子操作された細胞によって産生されるN-デメチラーゼをコードしている異種コード配列を含み、該N-デメチラーゼは、該遺伝子操作された細胞内の該オピオイドを該ノル-オピオイドに変換し、該ノル-オピオイドは該遺伝子操作された細胞内で生成される、該遺伝子操作された細胞。
[本発明1018]
N-メチルトランスフェラーゼをコードしている異種コード配列をさらに含む、本発明1017の遺伝子操作された細胞。
[本発明1019]
オピオイドが、遺伝子操作された細胞内で、L-チロシンで始まる代謝経路によって生成される、本発明1017の遺伝子操作された細胞。
[本発明1020]
遺伝子操作された細胞内に存在しているノル-オピオイドからナル-オピオイドを産生する、該遺伝子操作された細胞であって、該遺伝子操作された細胞によって産生されるN-メチルトランスフェラーゼをコードしている異種コード配列を含み、該N-メチルトランスフェラーゼは、該ノル-オピオイドを該遺伝子操作された細胞内で該ナル-オピオイドに変換する、該遺伝子操作された細胞。
[本発明1021]
ナル-オピオイドが遺伝子操作された細胞内で生成される、本発明1020の遺伝子操作された細胞。
[本発明1022]
ナル-オピオイドが、遺伝子操作された細胞内で、L-チロシンで始まる代謝経路によって生成される、本発明1020の遺伝子操作された細胞。
[本発明1023]
遺伝子操作された細胞が、遺伝子操作された非植物細胞である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1024]
遺伝子操作された非植物細胞が遺伝子操作された酵母細胞である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1025]
O-結合型メチル基の喪失が3'位で起こる、本発明1001または1002の方法。
[本発明1026]
遺伝子操作された細胞によって産生されるナル-オピオイド。
[本発明1027]
化学合成に付随する1種または複数種の検出可能な不純物を含有していない、ナル-オピオイド化合物。
[本発明1028]
ナル-オピオイドがブプレノルフィンであり、化学合成に付随する1種または複数種の不純物が、15,16-デヒドロブプレノルフィン、17,18-デヒドロブプレノルフィン、18,19-デメチルブプレノルフィン、19,19'-エチルブプレノルフィン、2,2'-ビスブプレノルフィン、3-デスヒドロキシブプレノルフィン、3-O-メチルブプレノルフィン、3-O-メチル-N-シアノノルブプレノルフィン、3-O-メチル-N-メチルノルブプレノルフィン、6-O-デスメチルブプレノルフィン、ブプレノルフィンN-オキシド、N-ブト-3-エニルノルブプレノルフィン、N-ブト-3-エニルノルメチルブプレノルフィン、N-ブチルノルブプレノルフィン、N-メチルブプレノルフィン、ノルブプレノルフィン、およびテトラメチルフランブプレノルフィンを含む、本発明1027のナル-オピオイド化合物。
[本発明1029]
ナル-オピオイドがオキシモルホンであり、化学合成に付随する1種または複数種の不純物が、1-ブロモオキシモルホン、6-βオキシモルホール、10-α-ヒドロキシオキシモルホン、10-ケトオキシモルホン、2,2-ビスオキシモルホン、ノルオキシモルホン、オキシモルホンN-オキシド、10-ヒドロキシオキシモルホン、4-ヒドロキシオキシモルホン、8-ヒドロキシオキシモルホン、およびヒドロモルヒノールを含む、本発明1027のナル-オピオイド化合物。
[本発明1030]
ナル-オピオイドがナルトレキソンであり、化学合成に付随する1種または複数種の不純物が、10-ヒドロキシナルトレキソン、10-ケトナルトレキソン、14-ヒドロキシ-17-シクロプロピルメチルノルモルヒノン、2,2'-ビスナルトレキソン、3-シクロプロピルメチルナルトレキソン、3-O-メチルナルトレキソン、8-ヒドロキシナルトレキソン、N-（3-ブテニル）-ノルオキシモルホン、ナルトレキソンアルドール二量体、およびN-ホルミル-ノルオキシモルホンを含む、本発明1027のナル-オピオイド化合物。
[本発明1031]
ナル-オピオイドがナロキソンであり、化学合成に付随する1種または複数種の不純物が、10-α-ヒドロキシナロキソン、10-β-ヒドロキシナロキソン、10-ケトナロキソン、3-O-アリルナロキソン、7,8-ジデヒドロナロキソン、2,2'-ビスナロキソン、およびナロキソンN-オキシドを含む、本発明1027のナル-オピオイド化合物。
[本発明1032]
ナル-オピオイドがナルブフィンであり、化学合成に付随する1種または複数種の不純物が、ナルブフィンのβ-エピマー、2,2'-ビスナルブフィン、6-ケトナルブフィン、10-ケトナルブフィン、α-ノルオキシモルホール、N-（シクロブチルカルボニル）-α-ノルオキシモルホール、およびN-ホルミル-6-α-ノルオキシモホールを含む、本発明1027のナル-オピオイド化合物。
[本発明1033]
化学合成によって作製されるナル-オピオイドと比べて、以下の1種または複数種の不純物:15,16-デヒドロブプレノルフィン、17,18-デヒドロブプレノルフィン、18,19-デメチルブプレノルフィン、19,19'-エチルブプレノルフィン、2,2'-ビスブプレノルフィン、3-デヒドロキシブプレノルフィン、3-O-メチルブプレノルフィン、3-O-メチル-N-シアノノルブプレノルフィン、3-O-メチル-N-メチルノルブプレノルフィン、6-O-デスメチルブプレノルフィン、ブプレノルフィンN-オキシド、N-ブト-3-エニルノルブプレノルフィン、N-ブト-3-エニルノルメチルブプレノルフィン、N-ブチルノルブプレノルフィン、N-メチルブプレノルフィン、ノルブプレノルフィン、テトラメチルフランブプレノルフィン、1-ブロモオキシモルホン、6-βオキシモルホール、10-α-ヒドロキシオキシモルホン、10-ケトオキシモルホン、2,2-ビスオキシモルホン、ノルオキシモルホン、オキシモルホンN-オキシド、10-ヒドロキシオキシモルホン、4-ヒドロキシオキシモルホン、8-ヒドロキシオキシモルホン、ヒドロモルヒノール、10-ヒドロキシナルトレキソン、10-ケトナルトレキソン、14-ヒドロキシ-17-シクロプロピルメチルノルモルヒノン、2,2'-ビスナルトレキソン、3-シクロプロピルメチルナルトレキソン、3-O-メチルナルトレキソン、8-ヒドロキシナルトレキソン、N-（3-ブテニル）-ノルオキシモルホン、ナルトレキソンアルドール二量体、N-ホルミル-ノルオキシモルホン、10-α-ヒドロキシナロキソン、10-β-ヒドロキシナロキソン、10-ケトナロキソン、3-O-アリルナロキソン、7,8-ジデヒドロナロキソン、2,2'-ビスナロキソン、ナロキソンN-オキシド、ナルブフィンのβ-エピマー、2,2'-ビスナルブフィン、6-ケトナルブフィン、10-ケトナルブフィン、α-ノルオキシモルホール、N-（シクロブチルカルボニル）-α-ノルオキシモルホール、またはN-ホルミル-6-α-ノルオキシモホールをより少なく含む、ナル-オピオイド化合物。
[本発明1034]
ナル-オピオイドがブプレノルフィン化合物であり、化学合成ブプレノルフィンと比べて、以下の1種または複数種の不純物:15,16-デヒドロブプレノルフィン、17,18-デヒドロブプレノルフィン、18,19-デメチルブプレノルフィン、19,19'-エチルブプレノルフィン、2,2'-ビスブプレノルフィン、3-デスヒドロキシブプレノルフィン、3-O-メチルブプレノルフィン、3-O-メチル-N-シアノノルブプレノルフィン、3-O-メチル-N-メチルノルブプレノルフィン、6-O-デスメチルブプレノルフィン、ブプレノルフィンN-オキシド、N-ブト-3-エニルノルブプレノルフィン、N-ブト-3-エニルノルメチルブプレノルフィン、N-ブチルノルブプレノルフィン、N-メチルブプレノルフィン、ノルブプレノルフィン、またはテトラメチルフランブプレノルフィンをより少なく含む、本発明1033のナル-オピオイド化合物。
[本発明1035]
ナル-オピオイドがオキシモルホンであり、化学合成オキシモルホンと比べて、以下の1種または複数種の不純物:1-ブロモオキシモルホン、6-βオキシモルホール、10-α-ヒドロキシオキシモルホン、10-ケトオキシモルホン、2,2-ビスオキシモルホン、ノルオキシモルホン、オキシモルホンN-オキシド、10-ヒドロキシオキシモルホン、4-ヒドロキシオキシモルホン、8-ヒドロキシオキシモルホン、またはヒドロモルヒノールをより少なく含む、本発明1033のナル-オピオイド化合物。
[本発明1036]
ナル-オピオイドがナルトレキソンであり、化学合成ナルトレキソンと比べて、以下の1種または複数種の不純物:10-ヒドロキシナルトレキソン、10-ケトナルトレキソン、14-ヒドロキシ-17-シクロプロピルメチルノルモルヒノン、2,2'-ビスナルトレキソン、3-シクロプロピルメチルナルトレキソン、3-O-メチルナルトレキソン、8-ヒドロキシナルトレキソン、N-（3-ブテニル）-ノルオキシモルホン、ナルトレキソンアルドール二量体、またはN-ホルミル-ノルオキシモルホンをより少なく含む、本発明1033のナル-オピオイド化合物。
[本発明1037]
ナル-オピオイドがナロキソンであり、化学合成ナロキソンと比べて、以下の1種または複数種の不純物:10-α-ヒドロキシナロキソン、10-β-ヒドロキシナロキソン、10-ケトナロキソン、3-O-アリルナロキソン、7,8-ジデヒドロナロキソン、2,2'-ビスナロキソン、またはナロキソンN-オキシドをより少なく含む、本発明1033のナル-オピオイド化合物。
[本発明1038]
ナル-オピオイドがナルブフィンであり、化学合成ナルブフィンと比べて、以下の1種または複数種の不純物:ナルブフィンのβ-エピマー、2,2'-ビスナルブフィン、6-ケトナルブフィン、10-ケトナルブフィン、α-ノルオキシモルホール、N-（シクロブチルカルボニル）-α-ノルオキシモルホール、またはN-ホルミル-6-α-ノルオキシモホールをより少なく含む、本発明1033のナル-オピオイド化合物。
[本発明1039]
ナル-オピオイドを産生する遺伝子操作された細胞。
[本発明1040]
ノル-オピオイドを産生する遺伝子操作された細胞。
[本発明1041]
前記遺伝子操作された細胞が異種コード配列を含んでおり、該異種コード配列が、N-デメチラーゼからなる群より選択される酵素をコードしている、本発明1026または1040の方法。
[本発明1042]
前記遺伝子操作された細胞が少なくとも第1および第2の異種コード配列を含んでおり、該第1の異種コード配列が、N-デメチラーゼからなる群より選択される酵素をコードしており、該第2の異種コード配列が、N-メチルトランスフェラーゼからなる群より選択される酵素をコードしている、本発明1026の方法。
[本発明1043]
前記遺伝子操作された細胞が第3の異種コード配列をさらに含み、該第3の異種コード配列が、O-デメチラーゼからなる群より選択される酵素をコードしている、本発明1042の方法。
[本発明1044]
前記遺伝子操作された細胞が、L-DOPAデカルボキシラーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、ノルコクラウリンシンターゼ、ノルコクラウリン6-O-メチルトランスフェラーゼ、コクラウリン-N-メチルトランスフェラーゼ、シトクロムP450 80B1、シトクロムP450レダクターゼ、4'-O-メチルトランスフェラーゼ、1-ベンジルイソキノリンアルカロイドエピメラーゼ、サルタリジンシンターゼ、サルタリジンレダクターゼ、サルタリジノール7-O-アセチルトランスフェラーゼ、テバイン6-O-デメチラーゼ、コデイノンレダクターゼ、コデインO-デメチラーゼ、N-メチルトランスフェラーゼ、O-デメチラーゼおよびN-デメチラーゼからなる群より選択される少なくとも1種の酵素をさらに含む、本発明1042または1043の方法。
[本発明1045]
遺伝子操作された細胞の培養によって産生される前記ナル-オピオイドがLC-MS（液体クロマトグラフィー-質量分析）によって検出可能である、本発明1042、1043または1044の方法。
[本発明1046]
ノル-オピオイドをナル-オピオイドに改変する方法であって、以下の工程：
該ノル-オピオイドを少なくとも1種の酵素と接触させる工程であって、補因子の存在下で該ノル-オピオイドを該酵素と接触させることが、該補因子からの側鎖の転移によって該ノル-オピオイドをナル-オピオイドに変換する、工程
を含む、前記方法。
[本発明1047]
基質からナル-オピオイドを生成することができる遺伝子操作された細胞を含む、基質からナル-オピオイドを調製する方法。
[本発明1048]
前記基質が糖である、本発明1047の方法。
[本発明1049]
前記基質がチロシンである、本発明1047の方法。
[本発明1050]
前記基質がテバインである、本発明1047の方法。
[本発明1051]
前記テバインが遺伝子操作された細胞内で生成される、本発明1050の方法。
[本発明1052]
前記基質がレチクリンである、本発明1047の方法。
[本発明1053]
前記レチクリンが遺伝子操作された細胞内で生成される、本発明1052の方法。
[本発明1054]
前記基質がオピオイドである、本発明1047の方法。
[本発明1055]
前記オピオイドが遺伝子操作された細胞内で生成される、本発明1054の方法。
[本発明1056]
前記基質がノル-オピオイドである、本発明1047の方法。
[本発明1057]
前記ノル-オピオイドが遺伝子操作された細胞内で生成される、本発明1056の方法。
[本発明1058]
遺伝子操作された細胞をタンパク質産生に適した条件下で培養する工程をさらに含み、前記遺伝子操作された細胞が2つの異種コード配列を含み、該2つの異種コード配列は、基質をナル-オピオイドに変換する代謝経路に関与している第1および第2の酵素をそれぞれコードしており、該第1および第2の酵素は、該代謝経路に沿って動作可能に連結されている、本発明1047の方法。
[本発明1059]
ナル-オピオイドを生成する代謝経路に関与している前記第1および第2の酵素の各々が、N-デメチラーゼおよびN-メチルトランスフェラーゼからなる群より選択される、本発明1058の方法。
[本発明1060]
ナル-オピオイドを細胞培養物から回収する工程をさらに含む、本発明1047の方法。
[本発明1061]
ナル-オピオイドが、ナルトレキソン、ナロキソン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロルフィン、ナロデイン、ナルデメジン、ナロキセゴール、6β-ナルトレキソール、ナルトルインドール、メチルナルトレキソン、メチルサミドルファン、アルビモパン、アキセロプラン、ベベンプラン、ジニコチネート、レバロルファン、サミドルファン、ブプレノルフィン、デゾシン、エプタゾシン、ブトルファノール、レボルファノール、ナルブフィン、ペンタゾシン、フェナゾシン、ノルビナルトルフィミンおよびジプレノルフィンからなる群より選択される、本発明1047の方法。
[本発明1062]
基質からノル-オピオイドを生成することができる遺伝子操作された細胞を含む、該基質から該ノル-オピオイドを調製する方法。
[本発明1063]
ナル-オピオイド生成物を有する生成物流を形成するための方法であって、以下の工程：
i. 遺伝子操作された細胞と、栄養物および水を含むフィードストックとをバッチ式反応器に供給する工程であって、該遺伝子操作された細胞は、N-デメチラーゼ酵素とN-メチルトランスフェラーゼ酵素とを含む少なくとも2つの異種コード配列を有する、工程;
ii. 前記バッチ式反応器内で、ナル-オピオイドと細胞材料とを含む溶液を生成するために、該遺伝子操作された細胞を少なくとも約5分間の期間にわたりインキュベートすることにより、該遺伝子操作された細胞を発酵に供する工程;ならびに
iii. 該ナル-オピオイドを含む該生成物流を得るために、少なくとも1つの分離ユニットを用いて該ナル-オピオイドを該細胞材料から分離する、工程
を含む、前記方法。
[本発明1064]
前記遺伝子操作された細胞が、O-デメチラーゼ酵素を含む第3の異種コード配列をさらに含む、本発明1063の方法。
[本発明1065]
ノル-オピオイド生成物を有する生成物流を形成するための方法であって、以下の工程：
i. 遺伝子操作された細胞と、栄養物および水を含むフィードストックとをバッチ式反応器に供給する工程であって、該遺伝子操作された細胞は、N-デメチラーゼ酵素を含む少なくとも1つの異種コード配列を有する、工程;
ii. 前記バッチ式反応器内で、ノル-オピオイドと細胞材料とを含む溶液を生成するために、該遺伝子操作された細胞を少なくとも約5分間の期間にわたりインキュベートすることにより、該遺伝子操作された細胞を発酵に供する工程;ならびに
iii. 該ノル-オピオイドを含む該生成物流を得るために、少なくとも1つの分離ユニットを用いて該ノル-オピオイドを該細胞材料から分離する、工程
を含む、前記方法。
[本発明1066]
ナル-オピオイドの作製方法であって、遺伝子操作された宿主細胞を準備する工程、発酵反応物を生成するために、該遺伝子操作された細胞を少なくとも約5分間の期間にわたりインキュベートすることにより、該遺伝子操作された細胞を発酵に供する工程、および、該発酵反応物から該ナル-オピオイドを精製する工程を含む、前記方法。
[本発明1067]
ノル-オピオイドの作製方法であって、遺伝子操作された宿主細胞を準備する工程、発酵反応物を生成するために、該遺伝子操作された細胞を少なくとも約5分間の期間にわたりインキュベートすることにより、該遺伝子操作された細胞を発酵に供する工程、および、該発酵反応物から該ノル-オピオイドを精製する工程を含む、前記方法。