(57)【要約】  リグニンおよびリグニン様多糖類を主成分とする抽出物を主有効成分とするヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）疾患治療薬、並びにフェニルプロペノイド類の脱水素重合により得られる合成重合体を主有効成分とする、ＨＰＶ疾患治療薬および抗ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）薬を提供する。（１）松かさの熱水抽出あるいはアルカリ水溶液抽出により得られるリグニンおよびリグニン様多糖類を主成分とする抽出物を主有効成分とするＨＰＶ疾患治療薬。（２）下記式（１）で表されるフェニルプロペノイド類の脱水素重合により得られる合成重合体を主有効成分とするＨＰＶ疾患治療薬。    【化１】2006001364.tif 000016（Ｒ1 は水酸基またはメトキシ基、ｎは１〜５の整数で、かつＲ1 の１個以上が水酸基であり、Ｒ2 はカルボキシル基、ヒドロキシメチル基またはメトキシカルボニル基。）（３）前記合成重合体を主有効成分とする抗ＨＩＶ薬。【特許請求の範囲】
【請求項１】
松かさの熱水抽出あるいはアルカリ水溶液抽出により得られるリグニンおよびリグニン様多糖類を主成分とする抽出物を主有効成分とするヒトパピローマウイルス疾患治療薬。
【請求項２】
下記式（１）で表されるフェニルプロペノイド類の脱水素重合により得られる合成重合体を主有効成分とするヒトパピローマウイルス疾患治療薬。
【化１】
2006001364.tif 000015
〔式（１）において、Ｒ1 は水酸基またはメトキシ基を示し、ｎは１〜５の整数であり、かつＲ1 の１個以上が水酸基であり、Ｒ2 はカルボキシル基、ヒドロキシメチル基またはメトキシカルボニル基を示す。〕
【請求項３】
請求項２に記載の合成重合体を主有効成分とする抗ヒト免疫不全ウイルス薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リグニンおよびリグニン様多糖類を主成分とする抽出物であり、ピノソールあるいはピュアノールと呼ばれる成分を主有効成分とするヒトパピローマウイルス疾患治療薬、並びにフェニルプロペノイド類の脱水素重合により得られる合成重合体を主有効成分とする、ヒトパピローマウイルス疾患治療薬および抗ヒト免疫不全ウイルス薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
既に、松の木、松かさ等の針葉樹材料や広葉樹のほか、茶、メグスリノキ、カカオハスク等の植物材料を、熱水やアルカリ水溶液で抽出して得られるリグニンおよびリグニン様多糖類を主成分とする抽出物が、各種のウイルス疾患（例えば、インフルエンザウイルス、ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス等によるもの）に有効な薬理作用を有することが知られ（例えば、特許文献１〜４参照。）、また同様の抽出物は腹水癌や固形癌に有効であることが知られている（例えば、特許文献５、特許文献６参照。）。
その後、本発明者らは特に松かさから得られる抽出物について、他のウイルス性疾患への有効性を検討したところ、ヒトパピローマウイルス疾患にも非常に優れた治療効果を奏することを見いだした。【０００３】
【特許文献１】特開平３−２０６０４３号公報
【特許文献２】特開平１−２３８５３２号公報
【特許文献３】特開平１−２３８５３３号公報
【特許文献４】特開平１−６２１８号公報
【特許文献５】特開昭６４−４６０１号公報
【特許文献６】特開昭６２−２０５０３２号公報
【０００４】
一方、前述した植物材料からリグニンおよびリグニン様多糖類を抽出する処理工程は煩雑で、例えば特許文献１に記載されたウイルス感染防止剤を取得する方法の場合、木質化植物材料をアルコールで煮沸還流したのち、該植物材料を苛性ソーダ水溶液で浸出し、得られた浸出液を酸でｐＨ調節し、さらに透析処理を行う必要があり、工業的には必ずしも有利とはいえない。また、天然物由来のリグニンおよびリグニン様物質の場合、原料となる植物材料の種類によって純度や成分組成が変わり、また同一種の植物材料であっても、産地、生育年齢や気候状態などにより成分組成にバラツキがあるため、有効な薬理効果を安定的に確保するのは必ずしも容易でなかった。
そこで、高品質なリグニン様合成物質を有効成分とし、優れた薬理作用を安定して示す薬剤の開発が望まれている。
【発明の開示】
【０００５】
本発明の課題は、リグニンおよびリグニン様多糖類を主成分とする抽出物を主有効成分とするヒトパピローマウイルス疾患治療薬、並びにフェニルプロペノイド類の脱水素重合により得られる合成重合体を主有効成分とする、ヒトパピローマウイルス疾患治療薬および抗ヒト免疫不全ウイルス薬を提供することにある。
【０００６】
本発明は、第一に、松かさの熱水抽出あるいはアルカリ水溶液抽出により得られるリグニンおよびリグニン様多糖類を主成分とする抽出物（以下、「リグニン様抽出物」という。）を主有効成分とするヒトパピローマウイルス疾患治療薬、からなる。
【０００７】
本発明は、第二に、下記式（１）で表されるフェニルプロペノイド類の脱水素重合により得られる合成重合体（以下、「重合体 [Ｉ] 」という。）を主有効成分とするヒトパピローマウイルス疾患治療薬、からなる。
【０００８】
【化１】
2006001364.tif 000002
〔式（１）において、Ｒ1 は水酸基またはメトキシ基を示し、ｎは１〜５の整数であり、かつＲ1 の１個以上が水酸基であり、Ｒ2 はカルボキシル基、ヒドロキシメチル基またはメトキシカルボニル基を示す。〕
以下では、「ヒトパピローマウイルス」を「ＨＰＶ」と表記する。
【０００９】
本発明は、第三に、重合体 [Ｉ] を主有効成分とする抗ヒト免疫不全ウイルス薬、からなる。
以下では、「ヒト免疫不全ウイルス」を「ＨＩＶ」と表記する。
【００１０】
以下、本発明について詳細に説明する。
リグニン様抽出物
本発明の一方のＨＰＶ疾患治療薬の主有効成分であるリグニン様抽出物は、松かさの熱水抽出あるいはアルカリ水溶液抽出により得られるもので、リグニンおよびリグニン様多糖類を含むものである。
リグニン様抽出物の原料となる松かさとしては、特に限定されるものでなく、黒松、赤松、五葉松等の種々の松かさを使用することができる。
【００１１】
松かさの抽出は、熱水あるいはアルカリ水溶液により行われが、本発明のリグニン様抽出物は、熱水による抽出処理により溶出した成分、アルカリ水溶液による抽出処理により溶出した成分、および熱水抽出後の残渣をさらにアルカリ水溶液で抽出することにより溶出した成分のいずれでも、またこれらのいずれか２つ以上の成分の混合物でもよい。熱水抽出液が油分を含む場合、この油分にも薬効成分が含まれているため、経口服用の場合には非油分と油分の両者を併せて投与してもよい。
【００１２】
−熱水抽出−
熱水による松かさの抽出処理は、例えば特許文献５や特許文献６に記載された方法に準拠して行うことができ、原料となる松かさを必要に応じて、冷水あるいは微温水で洗浄したのち、あるいはアルコール洗浄して脱脂および低分子物質を除去したのち、熱水中で一定時間、煮沸ないし煎じることにより行われ、これらを還流下で行ってもよい。
【００１３】
熱水の使用量や温度、抽出回数、処理温度、処理時間等の処理条件は、原料である松かさの収穫時期や乾燥状態、松かさの使用量等に応じて適宜選定することができる。複数回抽出した場合は、各抽出液を個別に投与しても、２回分以上の抽出液を併せて投与してもよいが、最初の抽出液のみおよび該抽出液を含むものが好ましい。
【００１４】
得られた熱水抽出液は、常温まで冷却したのち、そのままあるいは濃度調整して、経口または注射により投与することができる。また、冷却後の抽出液をガーゼ、ろ紙等によりろ過して投与することもできる。抽出液が油分を含む場合は、該油分を例えば分液漏斗などで分液除去してもよい。
【００１５】
また、熱水抽出液中に含まれる有効成分は次のようにして分画し、各画分を単独でまたは２つ以上を混合して投与することもできる。
分画に際しては、熱水抽出液をろ過して不溶分を除去し、ろ液を減圧下で濃縮したのち、エタノール（EtOH) を投入し、生じた沈殿をろ取する。その後、沈殿を蒸留水に溶解し、得られた水溶液を蒸留水に対して透析したのち、蒸留水で平衡化されたＤＥＡＥ−セルロースカラム（Ｃｌ- 型）で処理して、非吸着画分Fr.Iおよび吸着画分を得る。次いで、吸着画分を０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液、２Ｍ塩化ナトリウム水溶液または０．１５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液により溶出して、それぞれFr.II 、Fr.IIIおよび（Fr.IV+Fr.V) の各画分を得る。また、０．１５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液による溶出画分のうち、Fr.Vは、セファロースＣＬ−４Ｂを用いた０．１５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でのゲルろ過により、さらにFr.V-1（分子量範囲１〜７万）とFr.V-2（分子量範囲７〜２０万）に分ける。
以上の熱水抽出操作の流れを、各画分の松かさ重量に対する収率（括弧内数値、単位：重量％）と併せて図１に示す。
【００１６】
−アルカリ水溶液抽出−
アルカリ水溶液による松かさの抽出処理は、例えば特許文献５に記載された方法に準拠して行うことができ、原料となる松かさを必要に応じて、冷水あるいは微温水で洗浄したのち、あるいはアルコール洗浄して脱脂および低分子物質を除去したのち、直接あるいは前述した熱水抽出により処理した残渣を、アルカリ水溶液により抽出する。
【００１７】
アルカリ水溶液抽出に使用されるアルカリ水溶液の濃度は、適宜選択することができるが、後工程でｐＨを弱酸性に調整することから、あまり高くない方が好ましい。また、アルカリ水溶液の使用量、抽出回数、処理温度、処理時間等の処理条件は、原料である松かさの収穫時期や乾燥状態、松かさの使用量、熱水抽出の残渣量等に応じて適宜選定することができる。
【００１８】
アルカリ水溶液抽出後の抽出液は、例えば遠心分離やろ過して沈殿画分Fr.VI を分離したのち、ｐＨを例えば酢酸、炭酸等で、通常４〜６、好ましくは５前後に調整する。その後、水相に、１倍量（容積換算。以下同様。）のエタノール（EtOH) を加えて混合し、生じた沈殿を例えば遠心分離やろ過して沈殿画分Fr.VIIを分離したのち、２倍量のエタノール（EtOH) または５倍量のエタノール（EtOH) を用いて順次同様に処理することにより、それぞれ沈殿画分Fr.VIII および沈殿画分Fr.IX を分離する。その後、各沈殿画分を蒸留水に対して透析したのち、凍結乾燥する。なお、エタノールの使用量は前記のものに限定されるものではなく、適宜選択することができる。
【００１９】
アルカリ水溶液抽出処理で、使用されるアルカリ水溶液のアルカリとしては、無機アルカリでも有機アルカリでもよいが、好ましくは水酸化ナトリウム（NaOH) 、水酸化カリウムである。また、水相に加えるエタノールに代えて他のアルコールを用いてもよい。
熱水抽出後の残渣についてアルカリ水溶液抽出を行う操作の流れを、各画分の松かさ重量に対する収率（括弧内数値、単位：重量％））と併せて図１に示す。
【００２０】
重合体 [Ｉ] 
次に、本発明の重合体 [Ｉ] は、前記式（１）で表されるフェニルプロペノイド類（以下、「フェニルプロペノイド類（１）」という。）の脱水素重合により得られるものである。
【００２１】
フェノール誘導体（１）は、１価もしくは多価のフェノールないしそれらの誘導体にα，β−二重結合を有する炭素数３の直鎖炭素鎖が結合した構造を有する１−フェニル−２−プロペン誘導体である。
フェノール誘導体（１）は、置換基Ｒ2 の立体配置によりシス型とトランス型があるが、トランス型が安定であり、通常トランス型が重合体粒子の原料として使用される。また、フェノール誘導体（１）は、単一分子としては光学活性を有し、左旋性ないし右旋性の光学異性体として存在するが、両者の光学異性体が等量づつ混合されたときラセミ体となる。本発明における重合体および重合体粒子の原料には、これらの何れの光学異性体でもラセミ体でも使用することができる。
フェノール誘導体（１）としては、特に、水酸基が基−ＣＨ＝ＣＨ−Ｒ2 に対してパラ位に存在する化合物が好ましい。
【００２２】
本発明における好ましいフェノール誘導体（１）の具体例としては、下記式（１−１）〜（１−７）で表される化合物を挙げることができる。
【００２３】
【化２】
2006001364.tif 000003
【００２４】
【化３】
2006001364.tif 000004
【００２５】
【化４】
2006001364.tif 000005
【００２６】
【化５】
2006001364.tif 000006
【００２７】
【化６】
2006001364.tif 000007
【００２８】
【化７】
2006001364.tif 000008
【００２９】
【化８】
2006001364.tif 000009
【００３０】
重合体 [Ｉ] は、例えば、非特許文献１に記載された方法に準拠して、フェノール誘導体（１）の少なくとも１種を、ｐＨが一般に６〜９、好ましくは６〜８の水溶液中、好ましくは、ナトリウム−リン酸緩衝溶液などの緩衝水溶液中にて、例えば過酸化水素などの過酸化物および例えばペルオキシダーゼなどの脱水素酵素の存在下で、脱水素重合することにより合成することができる。
前記脱水素重合に際しては、各反応原料は適宜の方法により混合して反応させることができるが、その好ましい混合操作の例としては、フェノール誘導体（１）と過酸化物との水溶液を脱水素酵素の水溶液中に加える方法、過酸化物の水溶液をフェノール誘導体（１）と脱水素酵素との水溶液中に加える方法等を挙げることができる。
【００３１】
【非特許文献１】Chem. Pharm. Bull., Vol.39, No.4, p.950-955 (1991)
【００３２】
脱水素重合後の重合体 [Ｉ] は、例えばトランス−ｐ−クマル酸などの酸性のフェノール誘導体（１）から得られた重合体 [Ｉ] の場合は、反応溶液を酢酸、塩酸などでｐＨを一般に５以下、好ましくは４以下として、重合体 [Ｉ] を沈殿させたのち、ろ過、遠心分離などにより回収する方法により回収することができ、またトランス−ｐ−クマリルアルコールなどの中性のフェノール誘導体（１）から得られた重合体 [Ｉ] の場合は、例えば、反応溶液を酢酸でｐＨ３に調整して、減圧下で濃縮したのち、残渣をエタノールに溶解し、得られた溶液を減圧下で濃縮する方法などにより回収することができる。
【００３３】
重合体 [Ｉ] は、典型的には、下記式 [ｉ] で表される構造単位（以下、「構造単位 [ｉ] 」という。）が連結した構造を有するものである。
【００３４】
【化９】
2006001364.tif 000010
【００３５】
〔式 [ｉ] において、Ｒ3 は水酸基またはメトキシ基を示し、ｍは０〜４の整数であり、Ｚは下記式 [ａ] 
【００３６】
【化１０】
2006001364.tif 000011
（式 [ａ] 中、Ｒ1 は水酸基またはメトキシ基を示し、ｎは０〜４の整数である。）
【００３７】
で表され、矢印（→）を付した炭素原子の位置で酸素原子に結合している単位を示し、
Ｒ2 はカルボキシル基、ヒドロキシメチル基またはメトキシカルボニル基を示し、重合体分子鎖中で隣接する式 [ｉ] で表される構造単位は＊印を付した２つの結合手間で連結している。〕
また、重合体 [Ｉ] の水溶性を高めるため、マンノースやグリカン類を結合させて使用することもできる。
【００３８】
重合体 [Ｉ] の平均分子量は、通常１，０００〜２００，０００、好ましくは１，０００〜５０，０００である。
【００３９】
重合体 [Ｉ] は、例えば、足底ユウゼイ（疣贅）、尋常性ユウゼイや扁平ユウゼイのほか、子宮内膜炎や子宮けい癌などのＨＰＶに起因する疾患、並びにＨＩＶに起因する症例に対して有効に作用し、これらの疾患ないし症例の治療薬として極めて有用である。
また、自己免疫疾患やＤＮＡ異常による癌なども様々のウイルスによる感染によって引き起こされることが次第に明らかになりつつあるが、重合体 [Ｉ] は、天然リグニン類似の構造を有し、ウイルスに直接結合してウイルスを不活性化し、あるいは免疫を活性化させることによって、自己免疫疾患の原因と考えられている異常蛋白の細胞内合成を抑え、あるいは癌細胞の増殖を抑える作用も期待できるものである。
【００４０】
ＨＰＶ疾患治療薬および抗ＨＩＶ薬
熱水抽出あるいはアルカリ水溶液抽出により得られたリグニン様抽出物を主有効成分とするＨＰＶ疾患治療薬は、前述した抽出工程により得られた各画分をそれぞれ単独で投与ないし施用しても、あるいはいずれか２つ以上の画分を併せて投与ないし施用してもよい。
【００４１】
リグニン様抽出物を主有効成分とするＨＰＶ疾患治療薬および重合体 [Ｉ] を主有効成分とするＨＰＶ疾患治療薬を投与ないし施用する態様としては、症例や患部の場所に応じて、粉末または溶液の経口服用、軟膏の塗布、溶液の注射などを採用することができる。  また、重合体 [Ｉ] を主有効成分とする抗ＨＩＶ薬を投与ないし施用する態様としては、粉末または溶液の経口服用、溶液の注射などを採用することができる。
【００４２】
リグニン様抽出物や重合体 [Ｉ] を粉末として用いる場合、一般にそれらの粒径が小さいほど、体内で吸収されやすく、経口服用時の抵抗感も少なくなり、また軟膏として塗布したときの皮膚内への浸透性や細胞への吸収ないし吸着も促進され、かつ軟膏の調合や溶液の調製も容易となるだけではなく、微細化することによりリグニン様抽出物や重合体 [Ｉ] の分子鎖が切断されて低分子化されることによる体内への吸収促進も計ることができる。
リグニン様抽出物や重合体 [Ｉ] の粒径を小さくする際には、例えば、乳鉢や、ボールミル、ロッドミルなどの粉砕機による処理、酵素処理等を採用することができる。
【００４３】
経口服用および注射に用いられる溶液の媒体には、例えば、水、生理食塩水や、これらの混合物を用いることができる。
また、ＨＰＶ疾患治療薬および抗ＨＩＶ薬には、免疫増強に有効な多糖類やビタミン等の補助薬効成分を添加して、薬効を改善ないし調整したり、あるいは甘草やハーブ等の味付け成分を添加して経口服用しやすくすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４４】
治験例１
進行性子宮けい癌の患者（進行度１ｂ）に、図１に示す画分Fr.VI およびFr.VIIの粒をゼラチンカプセルに封入し、これを１日に１〜３回、リグニン様抽出物の投与量として２０ｍｇ／日を経口により継続服用させたところ、服用開始から４７日後の所見として、癌の進行は認められず進行度１ａとなった。その後も服用を４０日継続したのち、卵巣を残して子宮を切除する手術を行ったところ、切除された患部に癌細胞は全く発見できなかった。これにより、リグニン様抽出物がＨＰＶに起因する子宮けい癌に対する治療薬として有効であることが確認された。【００４５】
治験例２
図１に示す画分Fr.VI およびFr.VIIを用い、表１の患者Ｎｏ．１〜９および１６〜２５では、純水に溶解した水溶液を親水性軟膏に混ぜて、画分濃度５〜１０重量％の軟膏を調製し、この軟膏を表１に示す患者の疾患部位に１日２〜３回塗布し、また患者Ｎｏ．１０〜１５では、同画分Fr.VI およびFr.VIIの粒をゼラチンカプセルに１カプセル当たり３ｍｇ封入し、これを１日に１〜６回、リグニン様抽出物の投与量を３〜１８ｍｇ／日として、経口により継続投与したところ、表１に示すように、一部の患者で進行が停止したほかは、優れた治療効果が確認された。このＨＰＶ疾患に対する治療効果は、軟膏塗布、経口投与とも従来の他の治療薬には見られないものであった。表１において、「治療結果」の項の「期間」は初診時点からの治療期間を意味する。【００４６】
【表１】
2006001364.tif 000012
【００４７】
下記合成例で得た重合体 [Ｉ] の分子量、赤外吸収スペクトル（ＩＲ）、 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル(1Ｈ−ＮＭＲ）および紫外吸収スペクトル（ＵＶ）は、それぞれ次の要領で測定した。
分子量：
試料をリン酸緩衝液（１／１５ＭＰＢ；ｐＨ＝７．４）に溶解した濃度２５μｇ／ミリリットルの溶液を、遠心限外ろ過装置 Centri CellTM（Polyscience 社製）を用い、分画分子量１０，０００ダルトンと３０，０００ダルトンのろ過膜を使用し、遠心力２，５００ｇ（ｇは重力加速度）にて２５分間遠心分離を行って測定した。
ＩＲ：
Perkin Elmer FT-IR1600分光計を用い、重合体粉末とＫＢｒ粉末との混合物で測定した。
1Ｈ−ＮＭＲ：
JEOL EX270分光計を用い、ジメチルスルホキシド溶液で測定した。
ＵＶ：
Shimadsu UV-2100分光光度計を用い、水溶液で測定した。【００４８】
合成例１
トランス−ｐ−クマル酸１ｇを０．０５Ｍナトリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２００ミリリットルに溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和して、溶液Ａを調製した。また、ペルオキシダーゼ１０ｍｇを０．０５Ｍナトリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２００ミリリットルに溶解して、溶液Ｂを調製した。また、３５重量％過酸化水素水１０ミリリットルを０．０５Ｍナトリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）３．４９リットルに加え、攪拌して、溶液Ｃ３．５リットルを調製した。
次いで、溶液Ａと溶液Ｂを混合し、これに溶液Ｃ３．１３リットルを、攪拌しながら１時間かけて滴下したのち、酢酸を加えて溶液をｐＨ３に調整し、冷蔵庫内で１時間冷却した。その後、得られた懸濁液を６，０００ｒｐｍの遠心分離機で処理して、沈殿物を回収し、ｐＨ２の希塩酸４００ミリリットルで２回洗浄したのち、沈殿物をメタノール８０ミリリットルに溶解し、Ｎｏ．２のろ紙でろ過した。その後、ろ液にｐＨ２の希塩酸８００ミリリットルを攪拌下しながら滴下したのち、再び冷蔵庫内で３０分間冷却した。その後、得られた懸濁液を６，０００ｒｐｍの遠心分離機で処理して、沈殿物を回収し、乾燥して、重合体 [Ｉ] ０．６４ｇを得た。【００４９】
この重合体 [Ｉ] は、分子量１０，０００未満が５２重量％、分子量１０，０００以上３０，０００未満が２７重量％および分子量３０，０００以上が２１重量％で、平均分子量１４，３００であり、ＩＲ、 1Ｈ−ＮＭＲおよびＵＶは下記のとおりであった。
ＩＲ（ｃｍ-1）：
３６００−３０００（Ｏ−Ｈ伸縮）、１７０５（Ｃ＝Ｏ伸縮）、１６１０−１４９０（  ベンゼン環の二重結合伸縮）、１３００−１１７０（Ｃ−Ｏ伸縮）。
1Ｈ−ＮＭＲ（化学シフト；ｐｐｍ）：
９．６（ｂｒｓ；カルボキシル基のＨ）、７．７−６．０（ｍ；ベンゼン環および脂肪  族二重結合のＨ）、４．４−３．７（ｍ；酸素原子に隣接するＣＨのＨ）。
ＵＶ（最大強度波長＝２８０ｎｍ；光学濃度＝２．５１（濃度＝５０μｇ／ミリリットル））：
このスペクトルの特徴は天然リグニンとほぼ一致した。
この重合体 [Ｉ] を「重合体 [Ｉａ] 」とする。【００５０】
合成例２
トランス−フェルラ酸１ｇを０．０５Ｍナトリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２００ミリリットルに溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和して、溶液Ａを調製した。また、ペルオキシダーゼ１０ｍｇを０．０５Ｍナトリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２００ミリリットルに溶解して、溶液Ｂを調製した。また、３５重量％過酸化水素水１０ミリリットルを０．０５Ｍナトリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）３．４９リットルに加え、攪拌して、溶液Ｃ３．５リットルを調製した。
次いで、溶液Ａと溶液Ｂを混合し、これに溶液Ｃ２．６５リットルを、攪拌しながら１時間かけて滴下したのち、酢酸を加えて溶液をｐＨ３に調整し、冷蔵庫内で１時間冷却した。その後、得られた懸濁液を６，０００ｒｐｍの遠心分離機で処理して、沈殿物を回収し、ｐＨ２の希塩酸４００ミリリットルで２回洗浄したのち、沈殿物をメタノール８０ミリリットルに溶解し、Ｎｏ．２のろ紙でろ過した。その後、ろ液にｐＨ２の希塩酸８００ミリリットルを攪拌下しながら滴下したのち、再び冷蔵庫内で３０分間冷却した。その後、得られた懸濁液を６，０００ｒｐｍの遠心分離機で処理して、沈殿物を回収し、乾燥して、重合体 [Ｉ] ０．３９ｇを得た。【００５１】
この重合体 [Ｉ] は、分子量１０，０００未満が１８重量％、分子量１０，０００以上３０，０００未満が４７重量％および分子量３０，０００以上が３５重量％で、平均分子量２１，７００であり、ＩＲ、 1Ｈ−ＮＭＲおよびＵＶは下記のとおりであった。
ＩＲ（ｃｍ-1）：
３６００−３０００（Ｏ−Ｈ伸縮）、１７０４（Ｃ＝Ｏ伸縮）、１６４０−１４３０（  ベンゼン環の二重結合伸縮）、１３４０−１１３０（Ｃ−Ｏ伸縮）。
1Ｈ−ＮＭＲ（化学シフト；ｐｐｍ）：
８．７（ｂｒｓ；カルボキシル基のＨ）、７．６−６．０（ｍ；ベンゼン環および脂肪  族二重結合のＨ）、４．５−３．７（ｍ；酸素原子に隣接するＣＨのＨ）、２．８（ｓ  ；ＯＣＨ3 のＨ）。
ＵＶ（最大強度波長＝２８０ｎｍ；光学濃度＝１．７２（濃度＝５０μｇ／ミリリットル））：
このスペクトルの特徴は天然リグニンとほぼ一致した。
この重合体 [Ｉ] を「重合体 [Ｉｂ] 」とする。【００５２】
合成例３
トランス−カフェイン酸１ｇを０．０５Ｍナトリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２００ミリリットルに溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和して、溶液Ａを調製した。また、ペルオキシダーゼ１０ｍｇを０．０５Ｍナトリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２００ミリリットルに溶解して、溶液Ｂを調製した。また、３５重量％過酸化水素水１０ミリリットルを０．０５Ｍナトリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）３．４９リットルに加え、攪拌して、溶液Ｃ３．５リットルを調製した。
次いで、溶液Ａと溶液Ｂを混合し、これに溶液Ｃ２．８６リットルを、攪拌しながら１時間かけて滴下したのち、酢酸を加えて溶液をｐＨ３に調整した。その後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、得られた固形物をエタノール２００ミリリットルに溶解し、Ｎｏ．２のろ紙でろ過した。その後、ろ液をロータリーエバポレーターで濃縮し、得られた固形物を少量の水に溶解したのち、凍結乾燥して、重合体 [Ｉ] を含む粗生成物２．８９ｇを得た。なお、粗生成物の収量がトランス−カフェイン酸の使用量（１ｇ）よりかなり多いのは、遠心分離による回収が不可能で、純度が低いためである。【００５３】
この重合体 [Ｉ] は、分子量１０，０００未満が２７重量％、分子量１０，０００以上３０，０００未満が５４重量％および分子量３０，０００以上が１９重量％で、平均分子量１９，２００であり、ＩＲ、 1Ｈ−ＮＭＲおよびＵＶは下記のとおりであった。
ＩＲ（ｃｍ-1）：
３６００−３０００（Ｏ−Ｈ伸縮）、１６９８（Ｃ＝Ｏ伸縮）、１６４０−１５００（  ベンゼン環の二重結合伸縮）、１２７３（Ｃ−Ｏ伸縮）。
1Ｈ−ＮＭＲ（化学シフト；ｐｐｍ）：
９．２（ｂｒｓ；カルボキシル基のＨ）、７．６−６．４（ｍ；ベンゼン環および脂肪  族二重結合のＨ）、４．０（ｂｒｓ；酸素原子に隣接するＣＨのＨ）。
ＵＶ（最大強度波長＝２８０ｎｍ；光学濃度＝１．８６（濃度＝５０μｇ／ミリリットル））：
このスペクトルの特徴は天然リグニンとほぼ一致した。
この重合体 [Ｉ] を「重合体 [Ｉｃ] 」とする。【００５４】
治験例３
合成例１で得られた重合体 [Ｉａ] を純水に溶解した水溶液を親水性軟膏に混ぜて、重合体 [Ｉａ] 濃度５〜１０重量％の軟膏を調製した。この軟膏を表２に示す患者の疾患箇所に１日２〜３回塗布したところ、表２に示すように、ＨＰＶ疾患に対する優れた治療効果が確認された。表２において、「治療結果」の項の「期間」は初診時点からの治療期間を意味する。【００５５】
【表２】
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【００５６】
治験例４
成人Ｔ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ−１）陽性細胞あるいはＭＴ−４細胞を用い、重合体 [Ｉａ] および重合体 [Ｉｂ] について、ＨＩＶに感染していない細胞に対する５０％細胞毒性濃度（ＣＣ５０、単位μｇ／ミリリットル（ｍｌ））とＨＩＶ感染による細胞傷害を５０％阻止する濃度（ＥＣ５０、単位μｇ／ミリリットル（ｍｌ））、および有効係数（ＳＩ＝ＣＣ５０／ＥＣ５０）を評価して、松かさから抽出した天然リグニン配糖体を比較した。ここで、ＣＣ５０はＨＩＶに感染していない細胞での５０％増殖を抑制する濃度であり、ＥＣ５０はＨＩＶに感染させた細胞でのＨＩＶ増殖を５０％抑制する濃度である。
評価結果を表３に示す。これにより、重合体 [Ｉａ] および重合体 [Ｉｂ] が天然リグニン配糖体より良好な抗ＨＩＶ活性を示すことが確認された。【００５７】
【表３】
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【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明のＨＰＶ疾患治療薬は、植物材料から容易かつ大量に入手可能な松かさから抽出されるリグニンおよびリグニン様多糖類を主成分とする抽出物、並びに安定した工業的プロセスにより高純度に製造することができる重合体 [Ｉ] について、新たに優れた薬効を見いだしたものであり、また当該重合体 [Ｉ] を主有効成分とする本発明の抗ＨＩＶ薬は、感染が拡大しつつあるＨＩＶに対して極めて優れた薬効を示す。特に、重合体 [Ｉ] は、天然リグニンよりむしろ優れた薬効を安定して示すものである。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】松かさの熱水抽出およびアルカリ水溶液抽出の流れを例示する図である。
【図１】
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【国際調査報告】
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