【手続補正書】
【提出日】令和2年10月22日(2020.10.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インスリン様成長因子結合タンパク質３受容体（ＩＧＦＢＰ−３Ｒ）に結合し活性化するアゴニスト。
【請求項２】
前記アゴニストが小分子、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体であることを特徴とする、請求項１に記載のアゴニスト。
【請求項３】
前記アゴニストが、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、アミノ酸配列ＡＴＳ、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、アミノ酸配列ＳＡＳおよび配列番号３３からなる群から選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）または、前記少なくとも１つのＣＤＲと少なくとも９０％同一であるＣＤＲを含む抗体であることを特徴とする、請求項１に記載のアゴニスト。
【請求項４】
前記抗体が、
ｉ）配列番号２、配列番号６または配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖、および／または
ｉｉ）配列番号４、配列番号８または配列番号１２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖、
を含むことを特徴とする、請求項３に記載の抗体。
【請求項５】
ｉ）前記重鎖が配列番号２と少なくとも９０％同一であり、前記軽鎖が配列番号４と少なくとも９０％同一であるか、
ｉｉ）前記重鎖が配列番号６と少なくとも９０％同一であり、前記軽鎖が配列番号８と少なくとも９０％同一であるか、または
ｉｉｉ）前記重鎖が配列番号１０と少なくとも９０％同一であり、前記軽鎖が配列番号１２と少なくとも９０％同一である、
ことを特徴とする、請求項３に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体が、検出可能な標識を含むことを特徴とする、請求項３に記載の抗体。
【請求項７】
ＩＧＦＢＰ−３Ｒを発現している癌の治療を必要とする患者において、ＩＧＦＢＰ−３Ｒを発現している癌を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアゴニストの治療的有効量を含む、医薬組成物。
【請求項８】
前記癌が乳癌、結腸癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、肝臓癌、頭頸部癌、前立腺癌または液性腫瘍であることを特徴とする、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記液性腫瘍が白血病であることを特徴とする、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
インスリン抵抗性の治療を必要とする患者においてインスリン抵抗性を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアゴニストの治療的有効量を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
炎症性疾患の治療を必要とする患者において炎症性疾患を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアゴニストの治療的有効量を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
前記炎症性疾患が、潰瘍性大腸炎、大腸炎、クローン病、アテローム性動脈硬化症、慢性消化性潰瘍、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症、結核、関節炎、慢性副鼻腔炎、喘息、肝炎、強直性脊椎炎、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎および歯周炎からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記関節炎が、変形性関節症、関節リウマチ（ＲＡ）または乾癬性関節炎であることを特徴とする、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
癌を有する対象者の予後の診断を補助する方法であって、
ｉ）前記対象者からの腫瘍試料におけるＴＭＥＭ２１９発現のレベルを測定し、
ｉｉ）ステップｉ）で得られるＴＭＥＭ２１９発現のレベルと、ＴＭＥＭ２１９発現の対応する参照レベルとを比較し、
ｉｉｉ）ＴＭＥＭ２１９発現の前記レベルが、ＴＭＥＭ２１９発現の前記対応する参照レベルと同じであるか、または、低い場合は、
ｉｖ）前記患者の予後は不良であることを示し、
ｖ）ＴＭＥＭ２１９発現の前記レベルが、ＴＭＥＭ２１９発現の前記対応する参照レベルよりも高い場合は、
ｉｖ）前記患者の予後は良好であることを示す、
ことを含む方法。
【請求項１５】
前記癌が乳癌、結腸癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、頭頸部癌、前立腺癌、肝臓癌または液性腫瘍であることを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記液性腫瘍が白血病であることを特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記予後が、前記患者における前記癌の再発のリスク、転移のリスク、前記患者の全生存期間および、前記患者に対する化学療法の有効性の予測の１以上を含むことを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
ＴＭＥＭ２１９に結合し活性化するアゴニストを提供することが本開示の目的である。いくつかの側面において、アゴニストは小分子、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体である。他の側面において、アゴニストは配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、アミノ酸配列ＡＴＳ、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、アミノ酸配列ＳＡＳおよび配列番号３３からなる群から選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、またはこの少なくとも１つのＣＤＲと少なくとも９０％同一であるＣＤＲを含む抗体である。さらなる側面において、抗体はｉ）配列番号２、配列番号６または配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）、および／またはｉｉ）配列番号４、配列番号８または配列番号１２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）、を含む。さらなる側面において、ｉ）重鎖は配列番号２と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号４と少なくとも９０％同一であるか、ｉｉ）重鎖は配列番号６と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号８と少なくとも９０％同一であるか、またはｉｉｉ）重鎖は配列番号１０と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号１２と少なくとも９０％同一である。いくつかの側面において、抗体は検出可能な標識を含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本開示はまた、ＴＭＥＭ２１９を発現している癌の治療を必要とする患者において、ＴＭＥＭ２１９を発現している癌を治療する方法であって、ＴＭＥＭ２１９に結合し活性化するアゴニストの治療的有効量をその患者に投与することを含む方法を提供する。いくつかの側面において、アゴニストは小分子、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体である。他の側面において、アゴニストは配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、アミノ酸配列ＡＴＳ、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、アミノ酸配列ＳＡＳおよび配列番号３３からなる群から選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはこの少なくとも１つのＣＤＲと少なくとも９０％同一であるＣＤＲを含む抗体である。さらなる側面において、抗体はｉ）配列番号２、配列番号６または配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖、および／またはｉｉ）配列番号４、配列番号８または配列番号１２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖、を含む。さらなる側面において、ｉ）重鎖は配列番号２と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号４と少なくとも９０％同一であるか、ｉｉ）重鎖は配列番号６と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号８と少なくとも９０％同一であるか、またはｉｉｉ）重鎖は配列番号１０と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号１２と少なくとも９０％同一である。いくつかの側面において、癌は乳癌、結腸癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、肝臓癌または白血病である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本開示はまた、インスリン抵抗性の治療を必要とする患者においてインスリン抵抗性を治療する方法であって、ＴＭＥＭ２１９に結合し活性化するアゴニストの治療的有効量をその患者に投与することを含む方法を提供する。いくつかの側面において、アゴニストは小分子、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体である。他の側面において、アゴニストは配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、アミノ酸配列ＡＴＳ、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、アミノ酸配列ＳＡＳおよび配列番号３３からなる群から選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはこの少なくとも１つのＣＤＲと少なくとも９０％同一であるＣＤＲを含む抗体である。さらなる側面において、抗体はｉ）配列番号２、配列番号６または配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖、および／またはｉｉ）配列番号４、配列番号８または配列番号１２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖、を含む。さらなる側面において、ｉ）重鎖は配列番号２と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号４と少なくとも９０％同一であるか、ｉｉ）重鎖は配列番号６と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号８と少なくとも９０％同一であるか、またはｉｉｉ）重鎖は配列番号１０と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号１２と少なくとも９０％同一である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本開示はさらに、炎症性疾患の治療を必要とする患者において炎症性疾患を治療する方法であって、ＴＭＥＭ２１９に結合し活性化するアゴニストの治療的有効量をその患者に投与することを含む方法を提供する。いくつかの側面において、アゴニストは小分子、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体である。他の側面において、アゴニストは配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、アミノ酸配列ＡＴＳ、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、アミノ酸配列ＳＡＳおよび配列番号３３からなる群から選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはこの少なくとも１つのＣＤＲと少なくとも９０％同一であるＣＤＲを含む抗体である。さらなる側面において、抗体はｉ）配列番号２、配列番号６または配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖、および／またはｉｉ）配列番号４、配列番号８または配列番号１２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖、を含む。さらなる側面において、ｉ）重鎖は配列番号２と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号４と少なくとも９０％同一であるか、ｉｉ）重鎖は配列番号６と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号８と少なくとも９０％同一であるか、またはｉｉｉ）重鎖は配列番号１０と少なくとも９０％同一であり、軽鎖は配列番号１２と少なくとも９０％同一である。いくつかの側面において、抗体は検出可能な標識を含む。いくつかの側面において、炎症性疾患は潰瘍性大腸炎、大腸炎、クローン病、アテローム性動脈硬化症、慢性消化性潰瘍、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症、結核、関節炎、慢性副鼻腔炎、喘息、肝炎、強直性脊椎炎、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎または慢性歯周炎からなる群から選択される。さらなる側面において、関節炎は変形性関節症、関節リウマチ（ＲＡ）および乾癬性関節炎である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
【図１Ａ】ヒト癌におけるＩＧＦＢＰ３およびＴＭＥＭ２１９（ＩＧＦＢＰ−３Ｒ）の遺伝子発現レベルを示す図である。ＣｅｌｌＸ  ｔｏｏｌ５を用いて、公表されている乳癌、大腸癌および肺癌の遺伝子発現データをＴＣＧＡから調べた。
【図１Ｂ】ヒト癌におけるＩＧＦＢＰ３およびＴＭＥＭ２１９（ＩＧＦＢＰ−３Ｒ）の遺伝子発現レベルを示す図である。図は、Ｃｈａｍｐｉｏｎｓ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ社（ハッケンサック、ニュージャージー州）によって提供されているＣｈａｍｐｉｏｎｓ  ＴｕｍｏｒＧｒａｆｔ  Ｄａｔａｂａｓｅを用いた、肝細胞癌、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、大腸癌、卵巣癌、膵臓癌におけるＴＭＥＭ２１９発現のＲＮＡ配列決定データ分析を示す。
【図２】乳癌患者の生存率に対するＴＭＥＭ２１９の高／低発現の影響を示す図である。ＫＭプロット解析の評価は、ＴＭＥＭ２１９の高発現を有する乳癌患者群（ｎ＝４２３）とＴＭＥＭ２１９の低発現を有する乳癌患者群（ｎ＝１２３７）と間の生存率の有意な差（Ｐ値＝４．９Ｅ−６、ＨＲ＝０．６３、ＣＩ  ０．５２〜０．７７）を示している。
【図３Ａ】肺癌患者の生存率に対するＩＧＦＢＰ−３／ＩＧＦＢＰ−３Ｒ発現の影響を示す図である。肺癌患者の生存率に対するＴＭＥＭ２１９の高／低発現の影響をＳｙｎＴａｒｇｅｔツールおよび、ＧＳＥ３０２１９研究からのデータを用いて評価した。発現中央値に基づいて、ＴＭＥＭ２１９発現が高い群（ｎ＝１６２）と低い群（ｎ＝１３１）とに分類した。ログランクＰ値（Ｐ値＝０．００１０８）を評価した。ＴＭＥＭ２１９低発現、ＩＧＦＢＰ３低発現の場合を示す。
【図３Ｂ】肺癌患者の生存率に対するＩＧＦＢＰ−３／ＩＧＦＢＰ−３Ｒ発現の影響を示す図である。肺癌患者の生存率に対するＴＭＥＭ２１９の高／低発現の影響をＳｙｎＴａｒｇｅｔツールおよび、ＧＳＥ３０２１９研究からのデータを用いて評価した。発現中央値に基づいて、ＴＭＥＭ２１９発現が高い群（ｎ＝１６２）と低い群（ｎ＝１３１）とに分類した。ログランクＰ値（Ｐ値＝０．００１０８）を評価した。ＴＭＥＭ２１９高発現、ＩＧＦＢＰ３高発現の場合を示す。
【図３Ｃ】肺癌患者の生存率に対するＩＧＦＢＰ−３／ＩＧＦＢＰ−３Ｒ発現の影響を示す図である。肺癌患者の生存率に対するＴＭＥＭ２１９の高／低発現の影響をＳｙｎＴａｒｇｅｔツールおよび、ＧＳＥ３０２１９研究からのデータを用いて評価した。発現中央値に基づいて、ＴＭＥＭ２１９発現が高い群（ｎ＝１６２）と低い群（ｎ＝１３１）とに分類した。ログランクＰ値（Ｐ値＝０．００１０８）を評価した。ＴＭＥＭ２１９高発現、ＴＭＥＭ２１９低発現の場合を示す。
【図３Ｄ】肺癌患者の生存率に対するＩＧＦＢＰ−３／ＩＧＦＢＰ−３Ｒ発現の影響を示す図である。肺癌患者の生存率に対するＴＭＥＭ２１９の高／低発現の影響をＳｙｎＴａｒｇｅｔツールおよび、ＧＳＥ３０２１９研究からのデータを用いて評価した。発現中央値に基づいて、ＴＭＥＭ２１９発現が高い群（ｎ＝１６２）と低い群（ｎ＝１３１）とに分類した。ログランクＰ値（Ｐ値＝０．００１０８）を評価した。ＩＧＦＢＰ３高発現、ＩＧＦＢＰ３低発現の場合を示す。
【図４】細胞におけるＴＭＥＭ２１９／ＩＧＦＢＰ−３相互作用、腫瘍増殖のＩＧＦＢＰ−３誘発抑制の中枢経路、アポトーシスの誘導による腫瘍血管新生、転移および化学療法抵抗性ならびに癌細胞における腫瘍誘発ＮＦ  Ｂ活性の抑制の模式図である。
【図５Ａ】ＴＭＥＭ２１９（ＩＧＦＢＰ−３Ｒ）アゴニストｍＡｂ可変領域のヌクレオチドとアミノ酸配列を示す図である。ｍＡｂ＃２４５重鎖（配列番号２）。
【図５Ｂ】ＴＭＥＭ２１９（ＩＧＦＢＰ−３Ｒ）アゴニストｍＡｂ可変領域のヌクレオチドとアミノ酸配列を示す図である。ｍＡｂ＃２４５軽鎖（配列番号４）。
【図５Ｃ】ＴＭＥＭ２１９（ＩＧＦＢＰ−３Ｒ）アゴニストｍＡｂ可変領域のヌクレオチドとアミノ酸配列を示す図である。ｍＡｂ＃２７４重鎖（配列番号６）。
【図５Ｄ】ＴＭＥＭ２１９（ＩＧＦＢＰ−３Ｒ）アゴニストｍＡｂ可変領域のヌクレオチドとアミノ酸配列を示す図である。ｍＡｂ＃２７４軽鎖（配列番号８）。
【図５Ｅ】ＴＭＥＭ２１９（ＩＧＦＢＰ−３Ｒ）アゴニストｍＡｂ可変領域のヌクレオチドとアミノ酸配列を示す図である。ＴＭＥＭ２１９＃２７４−ｈＩｇＧ１キメラ重鎖（配列番号１０）。
【図５Ｆ】ＴＭＥＭ２１９（ＩＧＦＢＰ−３Ｒ）アゴニストｍＡｂ可変領域のヌクレオチドとアミノ酸配列を示す図である。ＴＭＥＭ２１９＃２７４−ｈＩｇＧ１キメラ軽鎖（配列番号１２）。
【図６Ａ】乳癌細胞におけるＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの増殖抑制効果を示す図である。乳癌細胞におけるＴＭＥＭ２１９発現を示す典型的なウエスタンイムノブロット（ＷＩＢ）。
【図６Ｂ】乳癌細胞におけるＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの増殖抑制効果を示す図である。乳房細胞を集密度４０％まで増殖させ、３０ｎＭ  ＩＧＦＢＰ−３ＲアゴニストｍＡｂ＃２（＃２７４）を加えた１％ＦＢＳ含有培地で３日間処理した。
【図６Ｃ】乳癌細胞におけるＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの増殖抑制効果を示す図である。異なる濃度のＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂ＃２（＃２７４）で３日間乳癌細胞を同様に処理し、ＴＣ２０自動細胞計数器を用いて生細胞を計数した（ｎ＝３、２連で）。ＭＣＦ−１０Ａは正常乳腺上皮細胞であり、ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄはエストロゲン応答性乳癌細胞であり、ＭＤＡ−ＭＢ２３１、Ｈｓ５７８Ｔはトリプルネガティブ乳癌細胞である。
【図７Ａ】ＴＭＥＭ２１９を発現する生物発光ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞では見られるがＴＭＥＭ２１９ノックダウンＭＤＡ２３１細胞では見られない、ＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの抗癌効果を示す図である。ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２（＃２７４）での処理によって、カスパーゼ３の顕著な活性化、全ＰＡＲＰの減少、腫瘍で活性化されるＮＦ−ｋＢシグナル伝達の抑制が見られた。
【図７Ｂ】ＴＭＥＭ２１９を発現する生物発光ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞では見られるがＴＭＥＭ２１９ノックダウンＭＤＡ２３１細胞では見られない、ＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの抗癌効果を示す図である。ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２（＃２７４）での処理によって細胞増殖抑制が見られた。
【図７Ｃ】ＴＭＥＭ２１９を発現する生物発光ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞では見られるがＴＭＥＭ２１９ノックダウンＭＤＡ２３１細胞では見られない、ＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの抗癌効果を示す図である。ＴＭＥＭ２１９＃２７４−ｈＩｇＧ１キメラはＭＣＦ−７細胞溶解物中にＴＭＥＭ２１９が検出される。
【図７Ｄ】ＴＭＥＭ２１９を発現する生物発光ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞では見られるがＴＭＥＭ２１９ノックダウンＭＤＡ２３１細胞では見られない、ＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの抗癌効果を示す図である。ＴＭＥＭ２１９＃２７４−ｈＩｇＧ１キメラは、同様に、カスパーゼ３を活性化し、生物発光ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞における腫瘍で活性化されるＮＦ−κＢシグナル伝達を抑制する。
【図７Ｅ】ＴＭＥＭ２１９を発現する生物発光ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞では見られるがＴＭＥＭ２１９ノックダウンＭＤＡ２３１細胞では見られない、ＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの抗癌効果を示す図である。ＴＭＥＭ２１９のＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９を用いたノックダウンは、ＴＭＥＭ２１９タンパク質発現の完全ノックダウン（上パネル、ｓｇＲＮＡ−１およびｓｇＲＮＡ−２）および次のＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂ＃２７４誘発増殖抑制の消失をもたらした（下部パネル、ｓｇＲＮＡ−１およびｓｇＲＮＡ−２）。
【図７Ｆ】ＴＭＥＭ２１９を発現する生物発光ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞では見られるがＴＭＥＭ２１９ノックダウンＭＤＡ２３１細胞では見られない、ＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの抗癌効果を示す図である。ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂの作用メカニズムを示す。ＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂはＴＭＥＭ２１９に特異的に結合し、ヒト癌においてカスパーゼ依存アポトーシスの誘導および、腫瘍で活性化されるＮＦ−ｋＢシグナル伝達経路の抑制によって抗腫瘍機能を発揮する。
【図８Ａ】生物発光同所性ＭＤＡ２３１ＴＮＢＣマウスにおけるＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂの抗腫瘍効果を示す図である。腫瘍細胞注入後１５日目に、週に２回、１ｍｇ／ｋｇ体重の濃度でＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２（＃２７４）を腹腔内投与した。ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２（＃２７４）投与によって、腫瘍細胞注入後２６日目および２９日目に、それぞれ２０％（ｐ＜０．０５）および２５％（ｐ＜０．０１）までの腫瘍縮小が見られた。
【図８Ｂ】生物発光同所性ＭＤＡ２３１ＴＮＢＣマウスにおけるＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂの抗腫瘍効果を示す図である。腫瘍細胞注入後１５日目に、週に２回、１ｍｇ／ｋｇ体重の濃度でＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２（＃２７４）を腹腔内投与した。ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２（＃２７４）投与によって、ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂが投与されたマウスにおいて明白な体重変化および主要臓器における損傷は見られなかった。
【図８Ｃ】生物発光同所性ＭＤＡ２３１ＴＮＢＣマウスにおけるＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂの抗腫瘍効果を示す図である。腫瘍細胞注入後１５日目に、週に２回、１ｍｇ／ｋｇ体重の濃度でＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２（＃２７４）を腹腔内投与した。ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２（＃２７４）投与によって、腫瘍細胞注入後２６日目および２９日目に、それぞれ２０％（ｐ＜０．０５）および２５％（ｐ＜０．０１）までの腫瘍縮小が見られた。
【図９Ａ】ＰＤＸ  ＴＮＢＣにおけるＴＭＥＭ２１９を示す図である。ＰＤＸ  ＴＮＢＣ細胞におけるタンパク質レベルでのＴＭＥＭ２１９の発現プロフィール。
【図９Ｂ】ＰＤＸ  ＴＮＢＣにおけるＴＭＥＭ２１９を示す図である。ＰＤＸ  ＴＮＢＣ細胞におけるｍＲＮＡレベルでのＴＭＥＭ２１９の発現プロフィール。
【図９Ｃ】ＰＤＸ  ＴＮＢＣにおけるＴＭＥＭ２１９を示す図である。化学療法感受性細胞（ＷＨＩＭ３０）および化学療法抵抗性細胞（ＷＨＩＭ２）におけるＴＭＥＭ２１９発現の免疫組織化学染色。原倍率４０倍。
【図９Ｄ】ＰＤＸ  ＴＮＢＣにおけるＴＭＥＭ２１９を示す図である。化学療法感受性および化学療法抵抗性細胞ＰＤＸ  ＴＮＢＣ細胞におけるＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの増殖抑制効果。細胞をｍＡｂ＃２（＃２７４）で３日間処理した。ｎ＝３、ｐ／ｓ：放射輝度（光子／秒）、＊＊＊：ｐ＜０．００１、対照：ビヒクル（マウスＩｇＧ  ５０ｎＭ）。
【図１０Ａ】生物発光同所性ＷＨＩＭ３０  ＰＤＸ  ＴＮＢＣマウスにおけるＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂの抗腫瘍効果を示す図である。ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２投与によって、腫瘍細胞注入後３０日目において２９％までの腫瘍縮小が見られた。
【図１０Ｂ】生物発光同所性ＷＨＩＭ３０  ＰＤＸ  ＴＮＢＣマウスにおけるＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂの抗腫瘍効果を示す図である。ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂが投与されたマウスにおいて、明らかな体重も主要臓器における損傷も見られなかった。
【図１０Ｃ】生物発光同所性ＷＨＩＭ３０  ＰＤＸ  ＴＮＢＣマウスにおけるＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂの抗腫瘍効果を示す図である。マウスＩｇＧが投与された対照と、ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂが投与された腫瘍との３０日目の原発腫瘍サイズの比較を示す。マウスＩｇＧまたはＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２は、腫瘍細胞注入後５日目に週に２回１ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で腹腔内に投与した。
【図１０Ｄ】生物発光同所性ＷＨＩＭ３０  ＰＤＸ  ＴＮＢＣマウスにおけるＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂの抗腫瘍効果を示す図である。マウスＩｇＧが投与された対照と、ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂが投与された腫瘍との３０日目の原発腫瘍重量の比較を示す。マウスＩｇＧまたはＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２は、腫瘍細胞注入後５日目に週に２回１ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で腹腔内に投与した。
【図１１】正常肺上皮細胞およびＮＳＣＬＣ細胞におけるＩＧＦＢＰ−３／ＴＭＥＭ２１９軸を示す図である。ＴＭＥＭ２１９は、正常細胞および非小細胞肺癌細胞において同様なレベルで発現される。しかしながら、ＩＧＦＢＰ−３の発現は、ＢＥＡＳ２Ｂ正常肺上皮細胞と比較して癌細胞において顕著に抑制されている。もっと驚くべきことは、ＩＧＦＢＰ−３は、ＣＳＣＣ２０細胞を除いて大部分のＮＳＣＬＣ細胞においてタンパク分解されていることである。
【図１２Ａ】肺癌細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ−ＮＮＫＡ）には有するが正常肺上皮細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ）には有さないＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの増殖抑制効果を示す図である。集密度４０％まで増殖させたＮＫＡ細胞を示す。
【図１２Ｂ】肺癌細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ−ＮＮＫＡ）には有するが正常肺上皮細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ）には有さないＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの増殖抑制効果を示す図である。１ｍＭ  ｍＡｂ＃１（＃２４５）で３日間処理した対照。
【図１２Ｃ】肺癌細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ−ＮＮＫＡ）には有するが正常肺上皮細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ）には有さないＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの増殖抑制効果を示す図である。３０ｎＭ  ｍＡｂ＃（＃２７４）で３日間処理した対照。
【図１２Ｄ】肺癌細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ−ＮＮＫＡ）には有するが正常肺上皮細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ）には有さないＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの増殖抑制効果を示す図である。同様に、ＢＥＡＳ２Ｂ−ＮＮＫＡ肺癌を１〜１００ｎＭ  ＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂ＃２（＃２７４）で３日間処理し、生細胞をＴＣ２０自動細胞計数器を用いて（ｎ＝３、２連で）計数した。
【図１２Ｅ】肺癌細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ−ＮＮＫＡ）には有するが正常肺上皮細胞（ＢＥＡＳ２Ｂ）には有さないＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂの増殖抑制効果を示す図である。同様に、正常肺上皮細胞を１〜１００ｎＭ  ＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂ＃２（＃２７４）で３日間処理し、生細胞をＴＣ２０自動細胞計数器を用いて（ｎ＝３、２連で）計数した。
【図１３Ａ】ＣＡＣに対するＡＡＴの治療効果の可能性を示す図である。最後のＤＳＳサイクル（７７日目）後に３日毎に１８日間ＡＡＴで処理し、９８日目に腫瘍を検査した。結腸組織における肉眼的変化。
【図１３Ｂ】ＣＡＣに対するＡＡＴの治療効果の可能性を示す図である。最後のＤＳＳサイクル（７７日目）後に３日毎に１８日間ＡＡＴで処理し、９８日目に腫瘍を検査した。結腸組織における腫瘍発生率（＊  ｐ＜０．０５、＊＊  ｐ＜０．０１）。
【図１３Ｃ】ＣＡＣに対するＡＡＴの治療効果の可能性を示す図である。最後のＤＳＳサイクル（７７日目）後に３日毎に１８日間ＡＡＴで処理し、９８日目に腫瘍を検査した。組織をさらに処理してヘマトキシリン／エオジン染色を行った。原倍率は、それぞれ４０倍、１００倍。
【図１３Ｄ】ＣＡＣに対するＡＡＴの治療効果の可能性を示す図である。最後のＤＳＳサイクル（７７日目）後に３日毎に１８日間ＡＡＴで処理し、９８日目に腫瘍を検査した。組織をさらに処理してＩＨＣ染色を行った。原倍率は、それぞれ４０倍、１００倍。
【図１３Ｅ】ＣＡＣに対するＡＡＴの治療効果の可能性を示す図である。最後のＤＳＳサイクル（７７日目）後に３日毎に１８日間ＡＡＴで処理し、９８日目に腫瘍を検査した。ＡＡＴ処理は、循環中のＩＧＦＢＰ−３タンパク質分解の顕著な抑制をもたらす。
【図１４Ａ】ＡＯＭ／ＤＳＳマウスモデルにおける結腸炎関連結腸癌に対するＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂ＃２（＃２７４）の抗腫瘍効果を示す図である。
【図１４Ｂ】ＡＯＭ／ＤＳＳマウスモデルにおける結腸炎関連結腸癌に対するＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂ＃２（＃２７４）の抗腫瘍効果の作用メカニズムを示す図である。ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃２（＃２７４）は結腸癌の細胞増殖を抑制する。
【図１４Ｃ】ＡＯＭ／ＤＳＳマウスモデルにおける結腸炎関連結腸癌に対するＴＭＥＭ２１９アゴニストｍＡｂ＃２（＃２７４）の抗腫瘍効果の作用メカニズムを示す図である。ＴＭＥＭ２１９  ｍＡｂ＃１（＃２４５）は、ＨＴ−２９結腸癌細胞においてＴＮＦ−αで活性化された炎症性ＮＦ−κＢシグナル伝達を抑制する。
【図１５Ａ】ＨＦＤを与えたマウスにＡＡＴを投与することによって、インスリン感受性の上昇と、肝脂肪合成および内臓脂肪炎症の減少に伴うＩＧＦＢＰ−３タンパク質分解の減少をもたらすことを示す図である。ＡＡＴの有り無しで毎週（６０ｍｇ／体重（ｋｇ））７週間処理したＨＦＤを与えたマウスにおけるインスリン耐性試験を示す。ＩＴＴ前に、マウスを６時間絶食させた（１群あたりｎ＝３）。
【図１５Ｂ】ＨＦＤを与えたマウスにＡＡＴを投与することによって、インスリン感受性の上昇と、肝脂肪合成および内臓脂肪炎症の減少に伴うＩＧＦＢＰ−３タンパク質分解の減少をもたらすことを示す図である。ＡＡＴの有り無しの７週間処理での肝臓（Ａ，Ｃ）および内臓脂肪（Ｂ，Ｄ）のＨＥ染色。ＡＡＴ処理は、脂肪肝の減少と、内臓脂肪への単球の侵入をもたらす。
【図１５Ｃ】ＨＦＤを与えたマウスにＡＡＴを投与することによって、インスリン感受性の上昇と、肝脂肪合成および内臓脂肪炎症の減少に伴うＩＧＦＢＰ−３タンパク質分解の減少をもたらすことを示す図である。ＡＡＴの有り無しで７週間処理したＨＦＤを与えたマウスにおける血清ＩＧＦＢＰ−３タンパク質分解レベル（全ＩＧＦＢＰ−３に対するＩＧＦＢＰ−３フラグメントの比）（＊  Ｐ＜０．０５）。
【図１６】ＴＭＥＭ２１９は、ＩＧＦＢＰ−３誘発インスリン感受性改善機能を媒介することを示す図である。ＩＧＦＢＰ−３アゴニストモノクローナルＡｂ（＃２４５および＃２７４）は初期ヒト脂肪細胞におけるグルコース取り込みのＴＮＦ−ａ誘発抑制を抑制するが、非アゴニストｍＡｂ（Ｃ３１４）はそれを抑制しない（ｎ＝３、２連で、＊＊  ｐ＜０．０１）。