【誤訳訂正書】
【提出日】令和2年6月3日(2020.6.3)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２０】
一態様では、凍結乾燥製剤は、以下を含む２０ｃｃバイアル中に提供される。１ｍｇの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを提供する量の化合物１、１７．７ｍｇの無水クエン酸、１７．６ｍｇの無水クエン酸ナトリウム、及び２４０ｍｇの本明細書に記載されるＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ。一実施形態では、２０ｃｃバイアル中の凍結乾燥製剤は、２ｍＬの注射用滅菌水で再構成される。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２４】
本明細書で使用される場合、「組み合わせて」という用語は、１つより多くの療法剤（例えば、１つ以上の予防薬及び／または治療薬）の使用を含む。しかしながら、「組み合わせて」という用語の使用は、療法剤（例えば、予防薬及び／または治療薬）が疾患または障害を有する患者に投与される順序を制限しない。第１の療法剤（例えば、予防薬または治療薬、例えば、本明細書に提供される化合物１の凍結乾燥製剤）は、対象に、第２の療法剤（例えば、予防薬または治療薬）の投与前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、投与と同時に、または投与後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に投与され得る。三重療法剤もまた、本明細書に企図される。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１７】
実施例２：インビトロでのＡＭＬ細胞株における化合物１の抗増殖及びアポトーシス促進効果の評価、ならびにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＴＧ）発光細胞生存性アッセイを介した非腫瘍原性正常細胞の３日間の比較
細胞培養材料：ヒトＡＭＬ、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、及び骨髄腫細胞株は、表１、表２及び表３に示されるベンダーから購入した。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１８】
ヒト正常ドナーＰＢＭＣ及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）患者の芽球は、ＡｌｌＣｅｌｌｓ，ＬＬＣ（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）から入手した。造血性及び原発性細胞試料を、表１に示される培地中、５％  ＣＯ２とともに３７℃で培養した。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２１】
細胞増殖アッセイ：血液学的細胞株の増殖／生存性に対する化合物１の効果（表１、表２、及び表３）
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２２】
ＴＨＬＥ−２またはＰＢＭＣを、製造者の指示に従い、ＣＴＧ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して７２時間のインキュベーション後に査定した。血液学的細胞株を、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ（商標）Ｃｏｍｂｉ試薬分注器（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）によって、５０μＬ総体積中０．１〜０．３×１０６細胞／ｍＬの濃度で化合物プレートに分注した。ＴＨＬＥ−２細胞を、５０μＬ体積中１０００細胞／ウェルで播種し、７２時間インキュベートした。７２時間目に、２５μＬ／ウェルのＣＴＧを、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ（商標）Ｃｏｍｂｉ試薬分注器により分注し、生存細胞による三リン酸アデノシン（ＡＴＰ）の放出を、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプラットフォームを使用して３０分後に相対発光単位として測定した。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２５】
化合物１ウォッシュアウトアッセイ：ウォッシュアウト実験の場合、ＡＭＬ細胞株を、Ｕ底９６ウェルプレートに６０，０００細胞／ウェルの密度で播種した。すべての細胞を、ゼロ時間（ｔ＝０）に化合物１で処理し、次いで各時点で、細胞を化合物作用濃度を１０００倍超えるグルタルイミド（例えば、１００ｎＭの化合物処理のウォッシュアウトの場合、１００μＭのグルタルイミド）を含有するウォッシュアウト培地中に再懸濁した。インキュベーション期間の最後に、プレートを２００ｇで３分間遠心分離し、上澄みを除去し、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ（２．５μＬ／ウェル）及び７−ＡＡＤ（５μＬ／ウェル）を含有する１００μＬ／ウェル１Ｘ  Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ結合緩衝剤中に細胞を再懸濁した。フローサイトメトリーを、ＢＤ  ＦＡＣＳａｒｒａｙ器具を使用して行い、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して結果を定量化した。同時に、ＣＴＧを９６（ブラック）ウェルプレートに添加し、細胞増殖アッセイにおいて上記のように処理した。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２８】
ソース：Ｑｕｅｎｔｍｅｉｅｒ，２００５；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎウェブサイト（ａｔｃｃ．ｏｒｇ／Ｐｒｏｄｕｃｔｓ／Ｃｅｌｌｓ＿ａｎｄ＿Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ／Ｂｙ＿Ｄｉｓｅａｓｅ＿Ｍｏｄｅｌ／Ｃａｎｃｅｒ／Ｓｏｕｒｃｅ＿Ｔｉｓｓｕｅ／Ｌｅｕｋｅｍｉａ．ａｓｐｘ）、Ｌｅｉｂｎｉｚ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨウェブサイト（ｄｓｍｚ．ｄｅ／ｃａｔａｌｏｇｕｅｓ／ｃａｔａｌｏｇｕｅ−ｈｕｍａｎ−ａｎｄ−ａｎｉｍａｌ−ｃｅｌｌ−ｌｉｎｅｓ．ｈｔｍｌ）。
表５：多発性骨髄腫及びリンパ腫細胞株のパネルにおける化合物１の抗増殖効果（続き）
【表１４】
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【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３６】
実施例３：ＩｎｃｕＣｙｔｅ（商標）動的カスパーゼ３／７アポトーシス活性を使用する、インビトロでの化合物１でインキュベートした急性骨髄性白血病細胞株におけるアポトーシス及び生存性の評価
方法．急性骨髄性白血病細胞株パネル：ヒトＡＭＬ細胞株、ＡＭＬ−１９３、Ｆ３６−Ｐ、ＧＤＭ−１、ＨＬ−６０、ＨＮＴ−３４、Ｋａｓｕｍｉ−１、Ｋａｓｕｍｉ−３、ＫＧ−１、ＫＧ−１ａ、ＭＬ−２、ＭＯＬＭ−１３、ＭＵＴＺ−８、ＭＶ−４−１１、ＮＯＭＯ−１、ＯＣＩ−ＡＭＬ２、ＯＣＩ−ＡＭＬ３、ＳＩＧ−Ｍ５、ＴＦ−１、ＴＨＰ−１、及びＵＴ−７は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）及びＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ（ＤＳＭＺ）（Ｇｅｒｍａｎｙ）細胞バンクから入手した。ＡＭＬパネルは、各ＦＡＢ分類（Ｍ０〜Ｍ７）からの細胞株（複数可）を含む（表７）。
表７：急性骨髄性白血病細胞株の特徴
【表１６】
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【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３９】
化合物１での細胞培養物のインキュベーション：化合物１は、凍結された２０μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中３０ｍＭのストック濃度でＣｅｌｇｅｎｅ化学グループによる研究のために提供された。Ｃｏｓｔａｒ９６ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号３５９５）を、１００μＬの１０μｇ／ｍＬフィブロネクチン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｆ１１４１）で４時間、３７℃でコーティングして直ちに使用するか、または後の使用のために一晩冷蔵した。細胞（３０００〜６０００細胞）を、フィブロネクチンでコーティングした９６ウェルプレートの成長培地中に播種し、最小数時間から一晩にわたってインキュベートした。細胞を、ＤＭＳＯを含む化合物１（０〜１０μＭ）及び培地対照を用いて、１２点濃度応答で三重にインキュベートした。０．６％  ＤＭＳＯ（培地中で希釈された）中２００μＭの濃度から始まる化合物１の３倍連続希釈を行った。最も感受性のある細胞株の場合、０．６％  ＤＭＳＯ（培地中で希釈された）中２０μＭの濃度から始まる化合物１の３倍連続希釈を行った。各希釈について、５μＬまたは１０μＬの量を、１００μＬまたは２００μＬの細胞にそれぞれ添加し（最終０．３％  ＤＭＳＯ）、生細胞撮像のためにインキュベートした。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３４１】
用量応答データ分析：１２、２４、４８、７２、及び９６時間の時点において化合物１（０〜１０μＭ）の濃度範囲でインキュベートした各細胞株について、細胞成長（総赤色積分強度（ＲＣＵ×μｍ２／ウェル）または赤色オブジェクト数（１／ウェル）、及び細胞死（緑色オブジェクト数（１／ウェル））の曲線下面積（木）ＡＵＣ）を、各濃度及び複製について、Ｒ「ｐｒａｃｍａ」パッケージ（Ｂｏｒｃｈｅｒｓ  ＨＷ．Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｍａｔｈ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｒ  Ｐａｃｋａｇｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．８．６．ｈｔｔｐｓ：／／ｃｒａｎ．ｒ  ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／ｗｅｂ／ｐａｃｋａｇｅｓ／ｐｒａｃｍａ／ｐｒａｃｍａ．ｐｄｆ．ｐ３４０−３４１．Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２７，２０１５．２０１６年２月１日にアクセス）における「ｔｒａｐｚ」関数によって計算した。次に、４パラメータ対数ロジスティクスモデルを使用して、Ｒ「ｄｒｃ」パッケージ（Ｒｉｔｚ  Ｃ．Ｓｔｒｅｉｂｉｇ  ＪＣ．Ｂｉｏａｓｓａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｕｓｉｎｇ  Ｒ．Ｊ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ２００５；１２（５）：１−２２）からの「ｄｒｍ」関数によって、各時点における相対ＥＣ５０を決定した。≧８０％の二乗されたＲによって適合度を測定し（決定係数またはモデル適合によって説明される変化量）ＥＣ５０パラメータを、≦４０％のパラメータに対する標準誤差の比、及び報告されたＥＣ５０より上及び下の少なくとも１つの濃度点の存在を有することによって査定した。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３４５】
化合物１によるカスパーゼ３／７活性化（アポトーシス誘導）の異なる時点の動態を、ＡＭＬ細胞パネルにわたって観察した。
●アポトーシス応答は、８個の最も感受性の高い細胞株において早くて１２時間で観察された（ＥＣ５０１２時間は、０．０５３〜０．２２７μＭの範囲である）。ＥＣ５０１２時間は、「良好な曲線適合」の欠失に起因してＨＮＴ−３４、ＨＬ−６０、及びＭＵＴＺ−８細胞株において観察されなかったが、カスパーゼ３／７活性化が観察された。
●２４時間までに、２０個の細胞株のうち１４は、良好な曲線適合を有していた（ＥＣ５０２４時間は、０．００７〜０．９１６μＭの範囲である）。２個の細胞株（ＨＮＴ−３４及びＫａｓｕｍｉ−３）は、０．０５μより下のＥＣ５０２４時間を有し、７個の細胞株（ＨＬ−６０、ＭＬ−２、ＭＶ−４−１１、ＫＧ−１、ＭＵＴＺ−８、ＳＩＧ−Ｍ５、及びＮＯＭＯ−１）は、０．０５μＭ〜０．２μＭのＥＣ５０２４時間を有し、５個の細胞株（ＫＧ−１ａ、ＡＭＬ−１９３、ＧＤＭ−１、ＯＣＩ−ＡＭＬ２、及びＭＯＬＭ−１３）は、０．２μＭより大きいＥＣ５０２４時間を有していた。
●化合物１の増加したポテンシーは、一般に、後の時点でＡＭＬ細胞パネルにわたって観察された。ＥＣ５０７２時間及びＥＣ５０９６時間は、それぞれ０．００３〜０．９７１μＭ及び０．００１〜０．４１８μＭの範囲であった。７２時間までに、２０個の細胞株のうち１１個（ＨＮＴ−３４を含む）は、≦０．０５μＭのＥＣ５０７２時間を有し、２０個の細胞株のうち４個は、０．０５〜０．２０μＭのＥＣ５０７２時間を有し、２０個の細胞株のうち４個は、０．２〜１μＭのＥＣ５０７２時間を有していた。同様の結果は、９６時間の時点で観察された。
表９：急性骨髄性白血病細胞株における化合物１誘導性アポトーシスの平均ＥＣ５０値
【表１８】
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【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５０】
結論．ＩｎｃｕＣｙｔｅ（商標）動的カスパーゼ３／７アポトーシスアッセイを使用して、２０個の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株のパネルにおけるアポトーシスに対する化合物１の効果を評価するために、研究を行った。さらに、１３個の赤色標識されたＡＭＬ細胞株を確立して、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（商標）システムを使用して、細胞生存性に対する化合物１の効果を評価し、総生存細胞を定量化した。研究からの結論は、以下を含む。
●化合物１によるアポトーシス誘導に対する異なる感受性が、２０個のＡＭＬ細胞株にわたって観察された。
○８個の細胞株（ＨＮＴ−３４、Ｋａｓｕｍｉ−３、ＨＬ−６０、ＭＬ−２、ＭＶ４−１１、ＫＧ−１、ＭＵＴＺ−８、ＧＤＭ−１）は、４８時間において０．０２７μＭの平均ＥＣ５０（０．００４〜０．０４９μＭの範囲）を有し、高度に感受性として定義された。
○７個の細胞株（ＯＣＩ−ＡＭＬ−２、ＡＭＬ−１９３、ＳＩＧ−Ｍ５、Ｋａｓｕｍｉ−１、ＴＦ−１、Ｎｏｍｏ−１、ＫＧ−１ａ）は、４８時間において０．１１４μＭの平均ＥＣ５０（０．０８１〜０．１４５μＭの範囲）を有し、中度に感受性として定義された。
○５個の細胞株（ＵＴ−７、Ｆ３６−Ｐ、ＭＯＬＭ−１３、ＯＣＩ−ＡＭＬ３、ＴＨＰ−１）は、ＵＴ−７、Ｆ３６−Ｐ、ＭＯＬＭ−１３、及びＯＣＩ−ＡＭＬ３については０．２３１〜０．８９６μＭの範囲のＥＣ５０値（ＴＨＰ−１については１０μＭより大きいＥＣ５０）を有し、最も感受性が低いと定義された。
●化合物１によるアポトーシス誘導に対する異なる動態が、ＡＭＬ細胞パネルにわたって観察された。
○アポトーシス応答は、８個の最も感受性の高い細胞株において早くて１２時間で観察された（曲線適合を有する５個の株について、ＥＣ５０１２時間は、０．０５３〜０．２２７μＭの範囲である）。
○７２時間までに、２０個の細胞株のうち１９個は、化合物１に応答し、ＥＣ５０７２時間及びＥＣ５０９６時間は、それぞれ０．００３〜０．９７１μＭ及び０．００１〜０．４１８μＭの範囲であった。
○ＴＨＰ−１細胞株のみが、すべての時点で１０μＭより大きいＥＣ５０を有していた。
●細胞生存性により測定される化合物１に対する異なる感受性もまた、１２個の赤色標識されたＡＭＬ細胞株にわたって観察された。
○７個の細胞株（ＡＭＬ−１９３、ＭＬ−２、ＨＬ−６０、ＫＧ−１、ＮＯＭＯ−１、ＭＶ−４−１１、ＯＣＩ−ＡＭＬ２）は、０．０５μＭより下のＥＣ５０９６時間（０．００２〜０．０４０μＭの範囲）を有し、これらの株は、０．０１５μＭの平均ＥＣ５０９６時間を有する、高度に感受性として分類された。
○４個の細胞株（ＴＦ−１、ＴＨＰ−１、ＳＩＧ−Ｍ５、ＯＣＩ−ＡＭＬ３）は、０．０５μＭ〜０．２０μＭのＥＣ５０９６時間（０．０５８〜０．１８６μＭの範囲）を有し、これらの株は、０．１２１μＭの平均ＥＣ５０９６時間を有する、中度に感受性として分類された。
○１個の細胞株（ＭＯＬＭ−１３）のみが、０．２μＭより大きいＥＣ５０９６時間を有していた（０．２４８μＭのＥＣ５０９６時間）。この細胞株は、最も低い感受性として分類された。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５３】
１日目に、ドナー試料を受領した。少量を検証用に分離し、大半を培養培地で希釈し（Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）１６４０）、化合物１濃度の範囲で以前に調製された９６ウェルプレートに播種した。各ウェルに播種される生白血病細胞の数は、各試料の白血病細胞のパーセンテージに依存して、８０００〜３２，０００で固定した。プレートを２４、４８、または９６時間インキュベートした。抗体抗Ｄ３４、抗ＣＤ１１７、抗ＨＬＡ−ＤＲ、抗ＣＤ４５、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ６４、抗ＣＤ１３、抗ＣＤ１１ｂ）またはＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖを添加して、前方散乱（ＦＳＣ）または側方散乱（ＳＳＣ）及び異なる表面マーカーの発現のまたは発現の欠失に基づくゲート戦略を使用して白血病細胞を特定した。モノクローナル抗体の選択を行い、各試料における白血病細胞の特定を最適化した。この分析の目的は、表現型の特徴付けだけでなく、これらの細胞の特定でもあった。したがって、Ｅｕｒｏｆｌｏｗ（ｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１２  Ｓｅｐ；２６（９）：１９０８−１９７５）がＡＭＬ（ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１１７）及びヒト白血球抗原ＤＲ（ＨＬＡ−ＤＲ）の「骨格マーカー」として指定されたマーカーが、組合せに含まれた。それらは、ＡＭＬ患者のほぼ９０％における白血病細胞の特定を可能にした。追加のパネル、ＣＤ３４／ＣＤ１４／ＣＤ６４／ＣＤ４５及びＣＤ３４／ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１３／ＣＤ４５も使用して、骨髄性白血病集団の特定を完了した。これは、各特定の試料における病理学的細胞集団の明白な特定のための、２つの最良な抗体の選択を可能にした。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４２６】
すべての治療された対象が、有効性分析に含まれる。白血病応答は、調査者によって決定される。査定は、ＡＭＬにおける国際ワーキンググループの応答基準に基づく（Ｃｈｅｓｏｎ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００３；２１（２４）：４６４２−９）。