【手続補正書】
【提出日】令和2年1月17日(2020.1.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＮＡ発現ベクターであって、
ａ．  ｔｏｘＰと、
ｂ．  Ｆｅが媒介する遺伝子発現調節をブロックする変異体ｔｏｘＯと、
ｃ．  タンパク質をコードするＤＮＡ配列と
を含み、
前記ｔｏｘＰ及び前記変異体ｔｏｘＯが、前記タンパク質をコードするＤＮＡセグメントの発現を調節する、前記ＤＮＡ発現ベクター。
【請求項２】
シグナルペプチドをコードするＤＮＡ配列をさらに含む、請求項１に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項３】
前記タンパク質が前記シグナルペプチドに結合している、請求項２に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項４】
前記変異体ｔｏｘＯが配列番号１である、請求項１に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項５】
前記シグナルペプチドが配列番号５である、請求項２に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項６】
前記タンパク質が、ＣＲＭ１９７、ＣＲＭ１０７、またはこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項７】
前記タンパク質が、配列番号１０〜２０のいずれか１つから選択される、請求項６に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項８】
前記タンパク質が、受容体結合タンパク質またはその機能部分に結合しているジフテリア毒素またはその機能部分を含む、請求項１に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項９】
前記受容体結合タンパク質が、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＥＧＦ、ＦＧＦ、サブスタンスＰ、ＣＤ４、αＭＳＨ、ＧＲＰ、ＴＴ断片Ｃ、ＧＣＳＦ、ヘレグリンβ１、これらの機能部分、またはこれらの組合せを含む群から選択される、請求項８に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項１０】
前記タンパク質が、配列番号１２〜１５および４３のいずれか１つから選択される、請求項８に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項１１】
ＤＮＡ発現ベクターであって、
ａ．  ｔｏｘＰと、
ｂ．  Ｆｅが媒介する遺伝子発現調節をブロックする変異体ｔｏｘＯと、
ｃ．  タンパク質をコードするＤＮＡ配列であって、前記タンパク質が、
ｉ．  シグナル配列、
ｉｉ．  ジフテリア受容体結合ドメインを含まない、または機能しないジフテリア毒素受容体結合ドメインを有する、ジフテリア毒素またはその機能部分、及び
ｉｉｉ．  ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＥＧＦ、ＦＧＦ、サブスタンスＰ、ＣＤ４、αＭＳＨ、ＧＲＰ、ＴＴ断片Ｃ、ＧＣＳＦ、ヘレグリンβ１、これらの機能部分、またはこれらの組合せを含む群から選択されるターゲット受容体結合ドメイン
を含む、前記ＤＮＡ配列と
を含み、
前記ｔｏｘＰ及び前記変異体ｔｏｘＯが、前記タンパク質をコードする前記ＤＮＡ配列の発現を調節する、前記ＤＮＡ発現ベクター。
【請求項１２】
前記ＤＮＡ発現ベクターで形質転換した細菌が、シグナルペプチドに結合しているジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質を生成し、前記シグナルペプチドにより、前記ジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質がペリプラズム、培地、または両方の位置に向けられる、請求項１１に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項１３】
前記細菌が大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）であり、前記シグナルペプチドが前記ジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質を前記ペリプラズムに向ける、請求項１２に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項１４】
前記細菌がコリネバクテリウム・ジフテリエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）であり、前記シグナルペプチドが前記ジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質を前記培地に向ける、請求項１２に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項１５】
配列番号３を含む、請求項１１に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項１６】
切断可能なタンパク質タグをコードするＤＮＡをさらに含む、請求項１２に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項１７】
前記切断可能なタンパク質タグが前記ジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質に結合している、請求項１２に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項１８】
前記ジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質が、配列番号１２〜１５のいずれか１つから選択される、請求項１１に記載のＤＮＡ発現ベクター。
【請求項１９】
凝集体を含まない単量体のジフテリア毒素融合タンパク質を生成するための方法であって、以下のステップ：
ａ．  細菌を、請求項１〜１８に記載のベクターのＤＮＡ発現により形質転換すること、
ｂ．  形質転換体を形成すること、
ｃ．  前記形質転換体を培地内でインキュベートして、前記培地内に分泌されるタンパク質の発現を可能にすること、及び
ｄ．  前記培地から前記タンパク質を精製すること
を含む、前記方法。
【請求項２０】
前記細菌がコリネバクテリウム・ジフテリエである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
凝集体を含まない単量体のジフテリア毒素融合タンパク質を生成するための方法であって、以下のステップ：
ａ．  コリネバクテリウム・ジフテリエ株をＤＮＡベクターにより形質転換することであって、前記ＤＮＡベクターが、
ｉ．  ｔｏｘＰと、
ｉｉ．  Ｆｅが媒介する遺伝子発現調節をブロックする変異体ｔｏｘＯと、
ｉｉｉ．  タンパク質をコードするＤＮＡ配列であって、前記タンパク質が、
ａ．  シグナルペプチド、
ｂ．  ジフテリア受容体結合ドメインを含まない、または機能しないジフテリア毒素受容体結合ドメインを有する、ジフテリア毒素またはその機能部分、及び
ｃ．  ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＥＧＦ、ＦＧＦ、サブスタンスＰ、ＣＤ４、αＭＳＨ、ＧＲＰ、ＴＴ断片Ｃ、ＧＣＳＦ、ヘレグリンβ１、ＴＮＦα、ＴＧＦβ、これらの機能断片、またはこれらの組合せを含む群から選択されるターゲット受容体結合ドメイン
を含む、前記ＤＮＡ配列と
を含み、前記ｔｏｘＰ及び前記変異体ｔｏｘＯが、前記タンパク質をコードする前記ＤＮＡ配列の発現を調節する、前記形質転換すること、
ｂ．  形質転換体を形成すること、
ｃ．  前記形質転換体を培地内でインキュベートして、前記培地内に分泌される前記タンパク質の発現を可能にすること、ならびに
ｄ．  前記培地から前記ジフテリア毒素融合タンパク質を精製すること
を含む、前記方法。
【請求項２２】
前記ジフテリア毒素受容体融合タンパク質が、配列番号１２〜１５のいずれか１つから選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記コリネバクテリウム・ジフテリエ株がコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）  Ｃ７ベータ（−）、ｔｏｘ（−）である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
結核患者を処置する方法に用いるための、請求項２１に示されるように調整されたジフテリア毒素融合タンパク質を含む、医薬組成物。
【請求項２５】
変異体ｔｏｘＯプロモーターを含む、ＤＮＡ発現ベクター。
【請求項２６】
請求項１〜１８に記載のＤＮＡ発現ベクターを含有する、コリネバクテリウム・ジフテリエ株。
【請求項２７】
タンパク質を作製する方法であって、以下のステップ：
ａ．  ｔｏｘＰと、Ｆｅが媒介する遺伝子発現調節をブロックする変異体ｔｏｘＯと、シグナル配列と、タンパク質をコードするＤＮＡ配列とを含むＤＮＡ発現ベクターを提供すること、
ｂ．  細菌株を前記ＤＮＡベクターにより形質転換して、形質転換体を形成すること、
ｃ．  前記形質転換体を培地内である期間の間インキュベートして、前記培地内に分泌されるタンパク質の発現を可能にすること、及び
ｄ．  前記培地から前記タンパク質を精製すること
を含む、前記方法。
【請求項２８】
配列番号１２〜１５および４３のいずれか１つから選択される、融合タンパク質。
【請求項２９】
請求項２８に記載の融合タンパク質を含む、医薬組成物。
【請求項３０】
請求項２８に記載の融合タンパク質と、少なくとも１種以上の他の化学療法剤とを含む、医薬組成物。
【請求項３１】
前記他の化学療法剤が、イソニアジド、リファンピン、リファブチン、リファペンチン、ピラジナミド、エタンブトール、ストレプトマイシン、アミカシン、カナマイシン、エチオナミド、プロチオナミド、テリジドン、チアセタゾン、シクロセリン、カプレオマイシン、パラ−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、ビオマイシン、オフロキサシン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、ベダキリン、またはデラマニド、リネゾリド、テデゾリド、アモキシシリン・クラブラン酸、メロペネム、イミペネム、クラリスロマイシン、またはクロファジミンからなる群から選択される、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
請求項２８に記載の融合タンパク質及び少なくとも１種以上の他の抗微生物剤を含む、医薬組成物。
【請求項３３】
前記抗微生物剤が、イソニアジド、リファンピン、リファブチン、リファペンチン、ピラジナミド、エタンブトール、ストレプトマイシン、アミカシン、カナマイシン、エチオナミド、プロチオナミド、テリジドン、チアセタゾン、シクロセリン、カプレオマイシン、パラ−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、ビオマイシン、オフロキサシン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、ベダキリン、またはデラマニド、リネゾリド、テデゾリド、アモキシシリン・クラブラン酸、メロペネム、イミペネム、クラリスロマイシン、またはクロファジミンからなる群から選択される、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
対象におけるがんを処置または予防する方法に用いるための、配列番号１２〜１５および４３のいずれか１つから選択される融合タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項３５】
対象における結核を処置または予防する方法に用いるための、配列番号１２〜１５および４３のいずれか１つから選択される融合タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項３６】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載のＤＮＡ発現ベクターを含む、原核細胞株。
【請求項３７】
請求項１〜１８のいずれかに記載のＤＮＡ発現ベクターを含む、キット。
【請求項３８】
配列番号２を含むｔｏｘＰ。
【請求項３９】
配列番号１２〜１５および４３のいずれか１つのタンパク質。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
本発明の別の実施形態は、配列番号１１〜１５のいずれか１つのタンパク質である。
[本発明1001]
ＤＮＡ発現ベクターであって、
ａ．  ｔｏｘＰと、
ｂ．  Ｆｅが媒介する遺伝子発現調節をブロックする変異体ｔｏｘＯと、
ｃ．  タンパク質をコードするＤＮＡ配列と
を含み、
前記ｔｏｘＰ及び前記変異体ｔｏｘＯが、前記タンパク質をコードするＤＮＡセグメントの発現を調節する、前記ＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1002]
シグナルペプチドをコードするＤＮＡ配列をさらに含む、本発明1001のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1003]
前記タンパク質が前記シグナルペプチドに結合している、本発明1002のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1004]
前記変異体ｔｏｘＯが配列番号1である、本発明1001のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1005]
前記シグナルペプチドが配列番号5である、本発明1002のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1006]
前記タンパク質が、ＣＲＭ197、ＣＲＭ107、またはこれらの組合せからなる群から選択される、本発明1001のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1007]
前記タンパク質が、配列番号11、7〜20のいずれか1つから選択される、本発明1006のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1008]
前記タンパク質が、受容体結合タンパク質またはその機能部分に結合しているジフテリア毒素またはその機能部分を含む、本発明1001のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1009]
前記受容体結合タンパク質が、ＩＬ−2、ＩＬ−3、ＩＬ−4、ＩＬ−6、ＩＬ−7、ＩＬ−15、ＥＧＦ、ＦＧＦ、サブスタンスＰ、ＣＤ4、αＭＳＨ、ＧＲＰ、ＴＴ断片Ｃ、ＧＣＳＦ、ヘレグリンβ1、これらの機能部分、またはこれらの組合せを含む群から選択される、本発明1008のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1010]
前記タンパク質が、配列番号12〜15のいずれか1つから選択される、本発明1008のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1011]
ＤＮＡ発現ベクターであって、
ａ．  ｔｏｘＰと、
ｂ．  Ｆｅが媒介する遺伝子発現調節をブロックする変異体ｔｏｘＯと、
ｃ．  タンパク質をコードするＤＮＡ配列であって、前記タンパク質が、
ｉ．  シグナル配列、
ｉｉ．  ジフテリア受容体結合ドメインを含まない、または機能しないジフテリア毒素受容体結合ドメインを有する、ジフテリア毒素またはその機能部分、及び
ｉｉｉ．  ＩＬ−2、ＩＬ−3、ＩＬ−4、ＩＬ−6、ＩＬ−7、ＩＬ−15、ＥＧＦ、ＦＧＦ、サブスタンスＰ、ＣＤ4、αＭＳＨ、ＧＲＰ、ＴＴ断片Ｃ、ＧＣＳＦ、ヘレグリンβ1、これらの機能部分、またはこれらの組合せを含む群から選択されるターゲット受容体結合ドメイン
を含む、前記ＤＮＡ配列と
を含み、
前記ｔｏｘＰ及び前記変異体ｔｏｘＯが、前記タンパク質をコードする前記ＤＮＡ配列の発現を調節する、前記ＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1012]
前記ＤＮＡ発現ベクターで形質転換した細菌が、シグナルペプチドに結合しているジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質を生成し、前記シグナルペプチドにより、前記ジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質がペリプラズム、培地、または両方の位置に向けられる、本発明1011のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1013]
前記細菌が大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）であり、前記シグナルペプチドが前記ジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質を前記ペリプラズムに向ける、本発明1012のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1014]
前記細菌がコリネバクテリウム・ジフテリエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）であり、前記シグナルペプチドが前記ジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質を前記培地に向ける、本発明1012のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1015]
配列番号3を含む、本発明1011のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1016]
切断可能なタンパク質タグをコードするＤＮＡをさらに含む、本発明1012のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1017]
前記切断可能なタンパク質タグが前記ジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質に結合している、本発明1012のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1018]
前記ジフテリア毒素受容体結合融合タンパク質が、配列番号12〜15のいずれか1つから選択される、本発明1011のＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1019]
凝集体を含まない単量体のジフテリア毒素融合タンパク質を生成するための方法であって、以下のステップ：
ａ．  細菌を、本発明1001〜1018のベクターのＤＮＡ発現により形質転換すること、
ｂ．  形質転換体を形成すること、
ｃ．  前記形質転換体を培地内でインキュベートして、前記培地内に分泌されるタンパク質の発現を可能にすること、及び
ｄ．  前記培地から前記タンパク質を精製すること
を含む、前記方法。
[本発明1020]
前記細菌がコリネバクテリウム・ジフテリエである、本発明1019の方法。
[本発明1021]
凝集体を含まない単量体のジフテリア毒素融合タンパク質を生成するための方法であって、以下のステップ：
ａ．  コリネバクテリウム・ジフテリエ株をＤＮＡベクターにより形質転換することであって、前記ＤＮＡベクターが、
ｉ．  ｔｏｘＰと、
ｉｉ．  Ｆｅが媒介する遺伝子発現調節をブロックする変異体ｔｏｘＯと、
ｉｉｉ．  タンパク質をコードするＤＮＡ配列であって、前記タンパク質が、
ａ．  シグナルペプチド、
ｂ．  ジフテリア受容体結合ドメインを含まない、または機能しないジフテリア毒素受容体結合ドメインを有する、ジフテリア毒素またはその機能部分、及び
ｃ．  ＩＬ−2、ＩＬ−3、ＩＬ−4、ＩＬ−6、ＩＬ−7、ＩＬ−15、ＥＧＦ、ＦＧＦ、サブスタンスＰ、ＣＤ4、αＭＳＨ、ＧＲＰ、ＴＴ断片Ｃ、ＧＣＳＦ、ヘレグリンβ1、ＴＮＦα、ＴＧＦβ、これらの機能断片、またはこれらの組合せを含む群から選択されるターゲット受容体結合ドメイン
を含む、前記ＤＮＡ配列と
を含み、前記ｔｏｘＰ及び前記変異体ｔｏｘＯが、前記タンパク質をコードする前記ＤＮＡ配列の発現を調節する、前記形質転換すること、
ｂ．  形質転換体を形成すること、
ｃ．  前記形質転換体を培地内でインキュベートして、前記培地内に分泌される前記タンパク質の発現を可能にすること、ならびに
ｄ．  前記培地から前記ジフテリア毒素融合タンパク質を精製すること
を含む、前記方法。
[本発明1022]
前記ジフテリア毒素受容体融合タンパク質が、配列番号12〜15のいずれか1つから選択される、本発明1021の方法。
[本発明1023]
前記コリネバクテリウム・ジフテリエ株がコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）  Ｃ7ベータ（−）、ｔｏｘ（−）である、本発明1021の方法。
[本発明1024]
結核患者を処置する方法であって、以下のステップ：
ａ．  本発明1021に示されるようにジフテリア毒素融合タンパク質を調製すること、
ｂ．  前記ジフテリア毒素融合タンパク質を結核患者に投与すること
を含む、前記方法。
[本発明1025]
変異体ｔｏｘＯプロモーターを含む、ＤＮＡ発現ベクター。
[本発明1026]
本発明1001〜1018のＤＮＡ発現ベクターを含有する、コリネバクテリウム・ジフテリエ株。
[本発明1027]
タンパク質を作製する方法であって、以下のステップ：
ａ．  ｔｏｘＰと、Ｆｅが媒介する遺伝子発現調節をブロックする変異体ｔｏｘＯと、シグナル配列と、タンパク質をコードするＤＮＡ配列とを含むＤＮＡ発現ベクターを提供すること、
ｂ．  細菌株を前記ＤＮＡベクターにより形質転換して、形質転換体を形成すること、
ｃ．  前記形質転換体を培地内である期間の間インキュベートして、前記培地内に分泌されるタンパク質の発現を可能にすること、及び
ｄ．  前記培地から前記タンパク質を精製すること
を含む、前記方法。
[本発明1028]
配列番号12〜15のいずれか1つから選択される、融合タンパク質。
[本発明1029]
本発明1028の融合タンパク質を含む、医薬組成物。
[本発明1030]
本発明1028の融合タンパク質と、少なくとも1種以上の他の化学療法剤とを含む、医薬組成物。
[本発明1031]
前記他の化学療法剤が、イソニアジド、リファンピン、リファブチン、リファペンチン、ピラジナミド、エタンブトール、ストレプトマイシン、アミカシン、カナマイシン、エチオナミド、プロチオナミド、テリジドン、チアセタゾン、シクロセリン、カプレオマイシン、パラ−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、ビオマイシン、オフロキサシン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、ベダキリン、またはデラマニド、リネゾリド、テデゾリド、アモキシシリン・クラブラン酸、メロペネム、イミペネム、クラリスロマイシン、またはクロファジミンからなる群から選択される、本発明1030の医薬組成物。
[本発明1032]
本発明1028の医薬組成物及び少なくとも1種以上の他の抗微生物剤。
[本発明1033]
前記抗微生物剤が、イソニアジド、リファンピン、リファブチン、リファペンチン、ピラジナミド、エタンブトール、ストレプトマイシン、アミカシン、カナマイシン、エチオナミド、プロチオナミド、テリジドン、チアセタゾン、シクロセリン、カプレオマイシン、パラ−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、ビオマイシン、オフロキサシン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、ベダキリン、またはデラマニド、リネゾリド、テデゾリド、アモキシシリン・クラブラン酸、メロペネム、イミペネム、クラリスロマイシン、またはクロファジミンからなる群から選択される、本発明1033の医薬組成物。
[本発明1034]
対象におけるがんを処置または予防する方法であって、前記対象に、有効量の、配列番号12〜15のいずれか1つから選択される融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
[本発明1035]
対象における結核を処置または予防する方法であって、前記対象に、有効量の、配列番号11〜15のいずれか1つから選択される融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
[本発明1036]
本発明1001〜1018のいずれかのＤＮＡ発現ベクターを含む、原核細胞株。
[本発明1037]
本発明1001〜1018のいずれかのＤＮＡ発現ベクターを含む、キット。
[本発明1038]
配列番号2を含むｔｏｘＰ。
[本発明1039]
配列番号12〜15のいずれか1つのタンパク質。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
政府所有についての記載
本発明は、国立衛生研究所の認可を受けたＡＩ０３７８５６、ＡＩ０３６９７３、ＡＩ０９７１３８、およびＡＩ０９５３２１の下、政府支援によってなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
【図１】図１ａ〜１ｂは以下のことを示している：ａ）本発明の変異体ｔｏｘＯ（配列番号１）、ｂ）野生型ｔｏｘＯ（配列番号２５）。
【図２】図２ａ〜２ｂは以下のことを示している：ａ）Ｏｎｔａｋ（登録商標）の製造に使用される古典的デニロイキンジフチトクス（ｃ−デニロイキンジフチトクス）発現ベクターを示している、ｂ）ｔｏｘプロモーター（ｔｏｘＰ）と、本発明の変異体ｔｏｘＯとを含む分泌デニロイキンジフチトクス（ｓ−デニロイキンジフチトクス）発現ベクターを示している。図２ａは配列番号２６を開示し、図２ｂは配列番号２７を開示している。
【図３】血管漏出変異体（ＶＬＭ）を示している。これはｃ−デニロイキンジフチトクス−ＶＬＭと呼ばれ、ＩＬ−２受容体保有細胞の殺滅においてｃ−デニロイキンジフチトクスと同等の効力を有する。
【図４】ｉｎ  ｖｉｔｒｏで血管漏出を生じないｃ−デニロイキンジフチトクス−ＶＬＭを示している。
【図５】マウス生存モデルを用いたときに、ｃ−デニロイキンジフチトクス−ＶＬＭがｃ−Ｏｎｔａｋ（登録商標）よりも顕著に少ない急性毒性をｉｎ  ｖｉｖｏで有することを示している。
【図６】本発明におけるジフテリア毒素ベース融合タンパク質毒素プラットフォーム技術を示している。
【図７】ｃ−デニロイキンジフチトクスのＤＮＡ配列（ＤＮＡ配列番号６）に結合したｔｏｘプロモーター（配列番号２のｔｏｘＰ）及び変異体ｔｏｘオペレーター（ｔｏｘＯ）（ＤＮＡ配列番号１）、シグナルペプチド（ＤＮＡ配列番号４）を有するプラスミドｐＫＮ２．６Ｚ−ＬＣ１２７を示している。
【図８】図８ａ〜８ｂは以下のことを示している：ａ）大腸菌内の細胞質封入体としてのＯｎｔａｋ（登録商標）の従来の製造プロセスにおける問題、ｂ）Ｏｎｔａｋ（登録商標）タンパク質より１つアミノ酸が少ない分泌デニロイキンジフチトクスを生成するための容易かつクリーンな製造プロセスを示している。図８ａは配列番号２８としての「ｆＭＧＡＤＤ」を開示し、図８ｂは配列番号２９としての「ＧＡＤＤ」を開示している。
【図９】本発明のプロセスによって調製されたｓ−デニロイキンジフチトクスの免疫ブロットを示しており、ｓ−デニロイキンジフチトクスはＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｃ７ベータ（−）、ｔｏｘ（−）株内で発現し、培地内に分泌されている。
【図１０】本発明のデニロイキンジフチトクスが結核性肉芽腫内のＩＬ−２Ｒ（ＣＤ２５＋）保有Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることが予想される方法を示している。Ｔｒｅｇは、Ｔｅｆｆ細胞を阻害することにより免疫抑制的である。
【図１１】結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）を有する対象（マウス）のｉｎ  ｖｉｖｏ処置で使用されるジフテリア融合タンパク質を示している。
【図１２】ジフテリア毒素ベース融合タンパク質によって結核菌に感染した対象（マウス）を処置した結果を示している。
【図１３】結核菌に感染した対象（マウス）を処置するためのジフテリア毒素ベース融合タンパク質のレジメンを示している。
【図１４】悪性黒色腫を有する対象（ヒト）を処置するためのジフテリア毒素ベース融合タンパク質の用法を示している。
【図１５】Ｈｉｓ（ヒスチジンタグ）を用いてＶＬＭ  ｓ−Ｏｎｔａｋ及び関連するタンパク質を迅速に生成するための３つのコンストラクトを示している（「Ｈｉｓ６／６ｘ  Ｈｉｓ」及び「Ｈｉｓ９／９ｘ  Ｈｉｓ」はそれぞれ配列番号２３及び４８として開示されている）。
【図１６】Ｃ末端側Ｈｉｓ６  ＶＬＭ  ｓ−Ｏｎｔａｋコンストラクトを用いて生成した純度が９７％超の精製されたＶＬＭ  ｓ−Ｏｎｔａｋを示している（「Ｈｉｓ６」は配列番号２３として開示されている）。