【手続補正書】
【提出日】令和2年4月20日(2020.4.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１〜１０８４から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導するガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含む組成物。
【請求項２】
配列番号１０８９〜１２７８から選択される配列と同一である、または配列番号１０８９〜１２７８から選択される配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含む組成物。
【請求項３】
前記ガイドＲＮＡが、転写因子４（ＴＣＦ４）遺伝子内のトリヌクレオチドリピート（ＴＮＲ）における配列またはその近傍の配列を標的化し、配列番号１〜１９０から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
配列番号１０８９〜１２７８から選択される配列と、少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
表７の５’の標的配列のいずれか１つにヌクレアーゼを誘導する第１のガイドＲＮＡと、表７の３’の標的配列のいずれか１つにヌクレアーゼを誘導する第２のガイドＲＮＡを含む、２つのガイドＲＮＡを含む組成物。
【請求項６】
前記第１および第２のガイドＲＮＡが、以下の標的配列対：
【表１−１】
2019515914.tif 000001
【表１−２】
2019515914.tif 000002
【表１−３】
2019515914.tif 000003
【表１−４】
2019515914.tif 000004
【表１−５】
2019515914.tif 000005
のいずれか１つにヌクレアーゼを誘導する、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
以下のガイドＲＮＡの対：
ａ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｂ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｃ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｄ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１２５に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｅ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｆ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０７に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｇ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１２５に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｈ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１２５に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｉ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０７に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｊ．ヌクレアーゼを配列番号６４に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０６に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｋ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｌ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｍ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｎ．ヌクレアーゼを配列番号５３に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｏ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｐ．ヌクレアーゼを配列番号７４に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｑ．ヌクレアーゼを配列番号７４に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｒ．ヌクレアーゼを配列番号７４に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｓ．ヌクレアーゼを配列番号７４に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０８に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｔ．ヌクレアーゼを配列番号７７に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｕ．ヌクレアーゼを配列番号７７に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する第２のガイドＲＮＡ、ならびに
ｖ．ヌクレアーゼを配列番号７７に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０８に誘導する第２のガイドＲＮＡ、から選択される２つのガイドＲＮＡを含む組成物。
【請求項８】
ａ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７１を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９７を含む、または
ｂ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７３を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９７を含む、または
ｃ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７４を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２００を含む、または
ｄ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７３を含み、ヌクレアーゼを配列番号１２５に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２１３を含む、または
ｅ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７４を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９７を含む、または
ｆ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７３を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０７に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９５を含む、または
ｇ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７１を含み、ヌクレアーゼを配列番号１２５に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２１３を含む、または
ｈ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７４を含み、ヌクレアーゼを配列番号１２５に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２１３を含む、または
ｉ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７４を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０７に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９５を含む、または
ｊ．ヌクレアーゼを配列番号６４に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１５２を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０６に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９４を含む、または
ｋ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７３を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２０２を含む、または
ｌ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７４を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２０２を含む、または
ｍ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７１を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２０２を含む、または
ｎ．ヌクレアーゼを配列番号５３に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１４１を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２０２を含む、または
ｏ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７１を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２００を含む、または
ｐ．ヌクレアーゼを配列番号７４に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１６２を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２０２を含む、または
ｑ．ヌクレアーゼを配列番号７４に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１６２を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９７を含む、または
ｒ．ヌクレアーゼを配列番号７４に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１６２を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２００を含む、または
ｓ．ヌクレアーゼを配列番号７４に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１６２を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０８に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９６を含む、または
ｔ．ヌクレアーゼを配列番号７７に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１６５を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９７を含む、または
ｕ．ヌクレアーゼを配列番号７７に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１６５を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２００を含む、または
ｖ．ヌクレアーゼを配列番号７７に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１６５を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０８に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９６を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
ａ．前記ガイドＲＮＡが、ＶＩＩＩ型コラーゲンのα２サブユニット（Ｃｏｌ８Ａ２）遺伝子を標的化し、配列番号１９１〜１０６３から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導し、任意選択で、前記組成物が、配列番号１９１〜１０６３から選択される標的配列の最初の２０ヌクレオチドと相補的な配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるか、またはその配列と同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含み、配列番号１９１〜１０６３の最初の２０ヌクレオチド内のチミンがウラシルと置き換えられている；または
ｂ．前記ガイドＲＮＡが、Ｃｏｌ８Ａ２遺伝子産物内のＧｌｎ４５５Ｌｙｓ変異を標的化し、配列番号１０６４〜１０６９から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導し、任意選択で、前記組成物が、配列番号１０６４〜１０６９から選択される標的配列の最初の２０ヌクレオチドと相補的な配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるか、またはその配列と同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含み、配列番号１０６４〜１０６９の最初の２０ヌクレオチド内のチミンがウラシルと置き換えられている；または
ｃ．前記ガイドＲＮＡが、Ｃｏｌ８Ａ２遺伝子産物内のＧｌｎ４５５Ｖａｌ変異を標的化し、配列番号１０７０〜１０７５から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導し、任意選択で、前記組成物が、配列番号１０７０〜１０７５から選択される標的配列の最初の２０ヌクレオチドと相補的な配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるか、またはその配列と同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含み、配列番号１０７０〜１０７５の最初の２０ヌクレオチド内のチミンがウラシルと置き換えられている；または
ｄ．前記ガイドＲＮＡが、Ｃｏｌ８Ａ２遺伝子産物内のＬｅｕ４５０Ｔｒｐ変異を標的化し、配列番号１０７６〜１０８４から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導し、任選択で、前記組成物が、配列番号１０７６〜１０８４から選択される標的配列の最初の２０ヌクレオチドと相補的な配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるか、またはその配列と同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含み、配列番号１０７６〜１０８４の最初の２０ヌクレオチド内のチミンがウラシルと置き換えられている、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ガイドＲＮＡがデュアルガイドまたはシングルガイドである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
少なくとも１つのガイドＲＮＡが、ｃｒＲＮＡ、ｔｒＲＮＡ、またはｃｒＲＮＡおよびｔｒＲＮＡを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
少なくとも１つのガイド配列がベクター上にコードされ、
任意選択で、前記ベクターが、第１のガイド配列および第２のガイド配列を含み、
任意選択で、前記第１のガイド配列および前記第２のガイド配列が、同一のプロモーターおよび／または制御配列によって制御される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
第１のガイド配列と第２のガイド配列とが異なるベクター上にコードされる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ガイド配列が、標的遺伝子のプラス鎖内のまたは標的遺伝子のマイナス鎖内の標的配列に相補的である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ベクターが、標的遺伝子の反対の鎖内の第１の標的配列と第２の標的配列にそれぞれ相補的である第１のガイド配列と第２のガイド配列を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ガイドＲＮＡが化学修飾されている、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
ヌクレアーゼをさらに含み、
任意選択で、前記ヌクレアーゼがＣａｓタンパク質またはニッカーゼであり、
任選選択で、前記Ｃａｓタンパク質が、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム由来であり、
任意選択で、前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９またはＣｐｆ１であり、
任意選択で、前記ヌクレアーゼが修飾されており、
任意選択で、前記修飾ヌクレアーゼが核局在シグナル（NLS）を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬製剤。
【請求項１９】
ヒト対象において転写因子４（ＴＣＦ４）遺伝子内のトリヌクレオチドリピート（ＴＮＲ）の少なくとも一部を切り出すのに使用するための、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物または請求項１８に記載の医薬製剤。
【請求項２０】
２つのガイドＲＮＡが使用され、前記第１のものがヌクレアーゼを前記ＴＮＲの５’の配列に誘導し、前記第２のものがヌクレアーゼを前記ＴＮＲの３’の配列に誘導する、請求項１９に記載の使用のための組成物または製剤。
【請求項２１】
前記ヒト対象が、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、後部多形性角膜ジストロフィー（ＰＰＣＤ）、統合失調症または原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）を有し、任意選択で、前記対象がＦＥＣＤの家族歴を有する、請求項１９に記載の使用のための組成物または製剤。
【請求項２２】
前記対象が、投与の結果として、視力の改善、安定化、または低下の緩徐化を有する、および／または
前記対象が、投与の結果として、角膜厚測定によって測定されるときに、改善、安定化、または変化の緩徐化を有する、および／または
前記対象が、投与の結果として、スペキュラーマイクロスコピーに基づいて、改善、安定化、または変化の緩徐化を有する、および／または
前記対象が、投与の結果として、角膜移植が必要とされるまでの時間の遅延を有する、
請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の使用のための組成物または製剤。
【請求項２３】
前記ＴＮＲが、約４０以上のトリヌクレオチドリピートである、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の使用のための組成物または製剤。
【請求項２４】
前記ＴＮＲ全体が切り出される、請求項１９〜２３のいずれか１項に記載の使用のための組成物または製剤。
【請求項２５】
前記組成物または医薬製剤が、ウイルスベクターまたは脂質ナノ粒子を介して投与される、請求項１９〜２４のいずれか１項に記載の使用のための組成物または製剤。
【請求項２６】
点眼薬または軟膏の共投与をさらに含む、請求項１９〜２５のいずれか１項に記載の使用のための組成物または製剤。
【請求項２７】
ソフトコンタクトレンズの使用をさらに含む、請求項１９〜２６のいずれか１項に記載の使用のための組成物または製剤。
【請求項２８】
ヒト対象において、Ｇｌｎ４５５Ｌｙｓ、Ｇｌｎ４５５Ｖａｌ、またはＬｅｕ４５０ＴｒｐのようなＣＯＬ８Ａ２遺伝子の変異アレルの発現を低下させるか、または前記変異アレルを修正するためにヌクレオチド配列を改変するのに使用するためのものであり、
任意選択で、Ｇｌｎ４５５Ｌｙｓ、Ｇｌｎ４５５Ｖａｌ、またはＬｅｕ４５０Ｔｒｐ遺伝子産物の発現をもたらす前記変異が、それぞれｃ．１３６４Ｃ＞Ａ、ｃ．１３６３〜１３６４ＣＡ＞ＧＴ、またはｃ．１３４９Ｔ＞Ｇである、
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物または請求項１８に記載の医薬製剤。
【請求項２９】
ＴＣＦ４遺伝子内のＴＮＲ過伸長を有するか、またはＧｌｎ４５５Ｌｙｓ、Ｇｌｎ４５５Ｖａｌ、もしくはＬｅｕ４５０Ｔｒｐ変異を有する遺伝子産物をもたらすＣＯＬ８Ａ２遺伝子内の変異を有するヒト対象を治療するための医薬の調製のためのものであり、
任意選択で、Ｇｌｎ４５５Ｌｙｓ、Ｇｌｎ４５５Ｖａｌ、またはＬｅｕ４５０Ｔｒｐ遺伝子産物の発現をもたらす前記変異が、それぞれｃ．１３６４Ｃ＞Ａ、ｃ．１３６３〜１３６４ＣＡ＞ＧＴ、またはｃ．１３４９Ｔ＞Ｇであり、
任意選択で、２つのガイドＲＮＡが使用され、前記第１のものがヌクレアーゼを前記ＴＮＲの５’の配列に誘導し、前記第２のものがヌクレアーゼを前記ＴＮＲの３’の配列に誘導する、
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物または請求項１８に記載の医薬製剤の使用。
【請求項３０】
フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、後部多形性角膜ジストロフィー（ＰＰＣＤ）、統合失調症または原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）を治療するための医薬の調製のための、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物または請求項１８に記載の医薬製剤の使用。
【請求項３１】
実質的に明細書に記載され、かつ例示される、および／または添付の図面に関して記載されるような、請求項１、２、５および７のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４０】
本明細書において使用されるとき、用語、約は、明示的に示されるか否かにかかわらず、例えば整数、分数、およびパーセンテージを含む数値を指す。用語、約は、一般に、当業者が言及された値と等価（例えば同一の機能または結果を有する）であると考える数値の範囲（例えば、言及された範囲の＋／−５〜１０％）を指す。少なくともおよび約などの用語が、数字の値または範囲の列挙に先行するとき、用語は、リストに提示される全ての値または範囲を修飾する。いくつかの場合において、用語、約は、もっとも近い有効数字に四捨五入された数字を含み得る。
以下の態様を包含し得る。
［１］  配列番号１〜１０８４から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導するガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含む組成物。
［２］  配列番号１０８９〜１２７８から選択される配列と、少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含む組成物。
［３］  配列番号１０８９〜１２７８から選択される配列と同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含む組成物。
［４］  前記ガイドＲＮＡが、転写因子４（ＴＣＦ４）遺伝子内のトリヌクレオチドリピート（ＴＮＲ）における配列またはその近傍の配列を標的化し、配列番号１〜１９０から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導する、上記［１］に記載の組成物。
［５］  配列番号１０８９〜１２７８から選択される配列と、少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含む、上記［４］に記載の組成物。
［６］  以下のガイドＲＮＡの対：
ａ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｂ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｃ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｄ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｅ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｆ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０７に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｇ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１２５に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｈ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１２５に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｉ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０７に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｊ．ヌクレアーゼを配列番号６４に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１０６に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｋ．ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｌ．ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｍ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｎ．ヌクレアーゼを配列番号５３に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する第２のガイドＲＮＡ、
ｏ．ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する第２のガイドＲＮＡ、ならびに
ｐ．ヌクレアーゼを配列番号７４に誘導する第１のガイドＲＮＡと、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する第２のガイドＲＮＡ、から選択される２つのガイドＲＮＡを含む組成物。
［７］  ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７７を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９７を含む、上記［６］に記載の組成物。
［８］  ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７３を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９７を含む、上記［６］に記載の組成物。
［９］  ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７４を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２００を含む、上記［６］に記載の組成物。
［１０］  ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７３を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２００を含む、上記［６］に記載の組成物。
［１１］  ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７４を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０９に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９７を含む、上記［６］に記載の組成物。
［１２］  ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７３を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０７に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９５を含む、上記［６］に記載の組成物。
［１３］  ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７１を含み、ヌクレアーゼを配列番号１２５に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２１３を含む、上記［６］に記載の組成物。
［１４］  ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７４を含み、ヌクレアーゼを配列番号１２５に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２１３を含む、上記［６］に記載の組成物。
［１５］  ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７４を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０７に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９５を含む、上記［６］に記載の組成物。
［１６］  ヌクレアーゼを配列番号６４に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１５２を含み、ヌクレアーゼを配列番号１０６に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１１９４を含む、上記［６］に記載の組成物。
［１７］  ヌクレアーゼを配列番号８５に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７３を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２０２を含む、上記［６］に記載の組成物。
［１８］  ヌクレアーゼを配列番号８６に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７４を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２０２を含む、上記［６］に記載の組成物。
［１９］  ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７１を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２０２を含む、上記［６］に記載の組成物。
［２０］  ヌクレアーゼを配列番号５３に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１４１を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２０２を含む、上記［６］に記載の組成物。
［２１］  ヌクレアーゼを配列番号８３に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１７１を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１２に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２００を含む、上記［６］に記載の組成物。
［２２］  ヌクレアーゼを配列番号７４に誘導する前記第１のガイドＲＮＡが配列番号１１６２を含み、ヌクレアーゼを配列番号１１４に誘導する前記第２のガイドＲＮＡが配列番号１２０２を含む、上記［６］に記載の組成物。
［２３］  前記ガイドＲＮＡが、ＶＩＩＩ型コラーゲンのα２サブユニット（Ｃｏｌ８Ａ２）遺伝子を標的化し、配列番号１９１〜１０６３から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導する、上記［１］に記載の組成物。
［２４］  配列番号１９１〜１０６３から選択される標的配列の最初の２０ヌクレオチドと相補的な配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるか、またはその配列と同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含み、配列番号１９１〜１０６３の最初の２０ヌクレオチド内のチミンがウラシルと置き換えられている、上記［２３］に記載の組成物。
［２５］  前記ガイドＲＮＡが、Ｃｏｌ８Ａ２遺伝子産物内のＧｌｎ４５５Ｌｙｓ変異を標的化し、配列番号１０６４〜１０６９から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導する、上記［１］に記載の組成物。
［２６］  配列番号１０６４〜１０６９から選択される標的配列の最初の２０ヌクレオチドと相補的な配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるか、またはその配列と同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含み、配列番号１０６４〜１０６９の最初の２０ヌクレオチド内のチミンがウラシルと置き換えられている、上記［２５］に記載の組成物。
［２７］  前記ガイドＲＮＡが、Ｃｏｌ８Ａ２遺伝子産物内のＧｌｎ４５５Ｖａｌ変異を標的化し、配列番号１０７０〜１０７５から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導する、上記［１］に記載の組成物。
［２８］  配列番号１０７０〜１０７５から選択される標的配列の最初の２０ヌクレオチドと相補的な配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるか、またはその配列と同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含み、配列番号１０７０〜１０７５の最初の２０ヌクレオチド内のチミンがウラシルと置き換えられている、上記［２７］に記載の組成物。
［２９］  前記ガイドＲＮＡが、Ｃｏｌ８Ａ２遺伝子産物内のＬｅｕ４５０Ｔｒｐ変異を標的化し、配列番号１０７６〜１０８４から選択される標的配列にヌクレアーゼを誘導する、上記［１］に記載の組成物。
［３０］  配列番号１０７６〜１０８４から選択される標的配列の最初の２０ヌクレオチドと相補的な配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、または９０％同一であるか、またはその配列と同一であるガイド配列を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡを含み、配列番号１０７６〜１０８４の最初の２０ヌクレオチド内のチミンがウラシルと置き換えられている、上記［２９］に記載の組成物。
［３１］  前記ガイドＲＮＡがデュアルガイドである、上記［１］〜［３０］のいずれか１項に記載の組成物。
［３２］  前記ガイドＲＮＡがシングルガイドである、上記［１］〜［３０］のいずれか１項に記載の組成物。
［３３］  少なくとも１つのガイドＲＮＡが、ｃｒＲＮＡ、ｔｒＲＮＡ、またはｃｒＲＮＡおよびｔｒＲＮＡを含む上記［１］〜［３２］のいずれか１項に記載の組成物。
［３４］  少なくとも１つのガイド配列がベクター上にコードされる、上記［１］〜［３３］のいずれか１項に記載の組成物。
［３５］  前記ベクターが、第１のガイド配列および第２のガイド配列を含む、上記［３４］に記載の組成物。
［３６］  第１のガイド配列と第２のガイド配列とが異なるベクター上にコードされる、上記［１］〜［３３］のいずれか１項に記載の組成物。
［３７］  前記第１のガイド配列および前記第２のガイド配列が、同一のプロモーターおよび／または制御配列によって制御される、上記［３４］または［３５］に記載の組成物。
［３８］  前記ガイド配列が、標的遺伝子のプラス鎖内の標的配列に相補的である、上記［１］〜［３７］のいずれか１項に記載の組成物。
［３９］  前記ガイド配列が、標的遺伝子のマイナス鎖内の標的配列に相補的である、上記［１］〜［３７］のいずれか１項に記載の組成物。
［４０］  第１のガイド配列と第２のガイド配列が、標的遺伝子の反対の鎖内の第１の標的配列と第２の標的配列に相補的である、上記［１］〜［３９］のいずれか１項に記載の組成物。
［４１］  前記ガイドＲＮＡが化学修飾されている、上記［１］〜［３９］のいずれか１項に記載の組成物。
［４２］  ヌクレアーゼをさらに含む、上記［１］〜［４１］のいずれか１項に記載の組成物。
［４３］  前記ヌクレアーゼがＣａｓタンパク質である、上記［４２］記載の組成物。
［４４］  前記Ｃａｓタンパク質が、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム由来である、上記［４３］に記載の組成物。
［４５］  前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９である、上記［４３］に記載の組成物。
［４６］  前記Ｃａｓタンパク質がＣｐｆ１である、上記［４３］に記載の組成物。
［４７］  前記ヌクレアーゼがニッカーゼである、上記［４２］に記載の組成物。
［４８］  前記ヌクレアーゼが修飾されている、上記［４２］に記載の組成物。
［４９］  前記修飾ヌクレアーゼが核局在シグナル（NLS）を含む、上記［４８］に記載の組成物。
［５０］  上記［１］〜［４９］のいずれか１項に記載の組成物と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬製剤。
［５１］  ヒト対象において転写因子４（ＴＣＦ４）遺伝子内のトリヌクレオチドリピート（ＴＮＲ）の少なくとも一部を切り出す方法であって、上記［１］〜［４９］のいずれか１項に記載の組成物または上記［５０］に記載の薬学的製剤を投与することを含む、方法。
［５２］  ２つのガイドＲＮＡが使用され、前記第１のものがヌクレアーゼを前記ＴＮＲの５’の配列に誘導し、前記第２のものがヌクレアーゼを前記ＴＮＲの３’の配列に誘導する、上記［５１］に記載の方法。
［５３］  前記ヒト対象が、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）を有する、上記［５１］に記載の方法。
［５４］  前記対象がＦＥＣＤの家族歴を有する、上記［５３］に記載の方法。
［５５］  前記対象が、投与の結果として、視力の改善、安定化、または低下の緩徐化を有する、上記［５１］〜［５４］のいずれか１項に記載の方法。
［５６］  前記対象が、投与の結果として、角膜厚測定によって測定されるときに、改善、安定化、または変化の緩徐化を有する、上記［５１］〜［５４］のいずれか１項に記載の方法。
［５７］  前記対象が、投与の結果として、スペキュラーマイクロスコピーに基づいて、改善、安定化、または変化の緩徐化を有する、上記［５１］〜［５４］のいずれか１項に記載の方法。
［５８］  前記対象が、投与の結果として、角膜移植が必要とされるまでの時間の遅延を有する、上記［５１］〜［５４］のいずれか１項に記載の方法。
［５９］  前記ＴＮＲが、約４０以上のトリヌクレオチドリピートである、上記［５１］〜［５８］のいずれか１項に記載の方法。
［６０］  前記ＴＮＲ全体が切り出される、上記［５１］〜［５９］のいずれか１項に記載の方法。
［６１］  前記組成物または薬学的製剤が、ウイルスベクターを介して投与される、上記［５１］〜［６０］のいずれか１項に記載の方法。
［６２］  前記組成物または薬学的製剤が、脂質ナノ粒子を介して投与される、上記［５１］〜［６０］のいずれか１項に記載の方法。
［６３］  点眼薬または軟膏の共投与をさらに含む、上記［５１］〜［６２］のいずれか１項に記載の方法。
［６４］  ソフトコンタクトレンズの使用をさらに含む、上記［５１］〜［６３］のいずれか１項に記載の方法。
［６５］  前記ヒト対象が統合失調症を有する、上記［５１］に記載の方法。
［６６］  前記ヒト対象が原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）を有する、上記［５１］に記載の方法。
［６７］  ヒト対象において、Ｇｌｎ４５５Ｌｙｓ、Ｇｌｎ４５５Ｖａｌ、またはＬｅｕ４５０ＴｒｐのようなＣＯＬ８Ａ２遺伝子の変異アレルの発現を低下させるか、または前記変異アレルを修正するためにヌクレオチド配列を改変する方法であって、上記［１］〜［５０］のいずれか１項に記載の組成物または上記［５１］に記載の薬学的製剤を投与することを含む、方法。
［６８］  前記ヒト対象が、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）または後部多形性角膜ジストロフィー（ＰＰＣＤ）を有する、上記［６７］に記載の方法。
［６９］  前記対象がＦＥＣＤの家族歴を有する、上記［６８］に記載の方法。
［７０］  前記対象が、投与の結果として、視力の改善、安定化、または低下の緩徐化を有する、上記［６７］〜［６９］のいずれか１項に記載の方法。
［７１］  前記対象が、投与の結果として、角膜厚測定によって測定されるときに、改善、安定化、または変化の緩徐化を有する、上記［６７］〜［７０］のいずれか１項に記載の方法。
［７２］  前記対象が、投与の結果として、スペキュラーマイクロスコピーに基づいて、改善、安定化、または変化の緩徐化を有する、上記［６７］〜［７１］のいずれか１項に記載の方法。
［７３］  前記対象が、投与の結果として、角膜移植が必要とされるまでの時間の遅延を有する、上記［６７］〜［７２］のいずれか１項に記載の方法。
［７４］  Ｇｌｎ４５５Ｌｙｓ、Ｇｌｎ４５５Ｖａｌ、またはＬｅｕ４５０Ｔｒｐ遺伝子産物の発現をもたらす前記変異が、それぞれｃ．１３６４Ｃ＞Ａ、ｃ．１３６３〜１３６４ＣＡ＞ＧＴ、またはｃ．１３４９Ｔ＞Ｇである、上記［６７］〜［７３］のいずれか１項に記載の方法。
［７５］  前記組成物または薬学的製剤が、ウイルスベクターを介して投与される、上記［６７］〜［７４］のいずれか１項に記載の方法。
［７６］  前記組成物または薬学的製剤が、脂質ナノ粒子を介して投与される、上記［６７］〜［７４］のいずれか１項に記載の方法。
［７７］  点眼薬または軟膏の共投与をさらに含む、上記［６７］〜［７６］のいずれか１項に記載の方法。
［７８］  ソフトコンタクトレンズの使用をさらに含む、上記［６７］〜［７７］のいずれか１項に記載の方法。
［７９］  ＴＣＦ４遺伝子内のＴＮＲ過伸長を有するか、またはＧｌｎ４５５Ｌｙｓ、Ｇｌｎ４５５Ｖａｌ、もしくはＬｅｕ４５０Ｔｒｐ変異を有する遺伝子産物をもたらすＣＯＬ８Ａ２遺伝子内の変異を有するヒト対象を治療するための医薬の調製のための、上記［１］〜［５０］のいずれか１項に記載の組成物または上記［５１］に記載の薬学的製剤の使用。