【手続補正書】
【提出日】令和1年12月19日(2019.12.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、システム：
導入遺伝子またはＲＮＡをコードする核酸の上流の、ポリアデニル化シグナルまたは転写の終止エレメント、
前記導入遺伝子またはＲＮＡをコードする核酸、及び
ペアになったリコンビナーゼ認識部位
を含む、プロモーターのないドナーベクター；ならびに
前記ペアになったリコンビナーゼ認識部位に特異的なリコンビナーゼをコードする２つの遺伝子を含む、１つの発現ベクター、または
２つの発現ベクターであって、
第１の発現ベクターが、前記ペアになったリコンビナーゼ認識部位のうちの１つに特異的な第１のリコンビナーゼをコードする１つの遺伝子を含み、
第２の発現ベクターが、前記ペアになったリコンビナーゼ認識部位のうちの他のものに特異的な第２のリコンビナーゼをコードする１つの遺伝子を含む、２つの発現ベクター。
【請求項２】
前記プロモーターのないドナーベクターが、転写後調節エレメントをさらに含む、請求項１に記載のシステム。
【請求項３】
前記プロモーターのないドナーベクターが、前記導入遺伝子またはＲＮＡをコードする核酸の下流にポリアデニル化シグナルをさらに含む、請求項１または２に記載のシステム。
【請求項４】
前記プロモーターのないドナーベクターが、
ＰＧＫポリアデニル化シグナル（ｐＡ）と；
三量体化ＳＶ４０ｐＡと；
前記導入遺伝子またはＲＮＡをコードする核酸と；
ｌｏｘＰ及びフリッパーゼ認識標的（ＦＲＴ）と；
ウサギβ−グロビンｐＡと；
ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と
を含む、請求項１に記載のシステム。
【請求項５】
前記ペアになったリコンビナーゼ認識部位がｌｏｘＰ及びフリッパーゼ認識標的（ＦＲＴ）であり、前記リコンビナーゼがｃｒｅ及びｆｌｐである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項６】
前記ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項７】
前記ＲＮＡがｓｈＲＮＡである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項８】
前記ＲＮＡがｓｇＲＮＡである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項９】
前記導入遺伝子またはＲＮＡが疾患関連突然変異を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項１０】
導入遺伝子またはＲＮＡをコードする核酸の上流の、ポリアデニル化シグナルまたは転写終止エレメントと；
前記導入遺伝子またはＲＮＡをコードする核酸と；
ペアになったリコンビナーゼ認識部位と
を含む、プロモーターのないドナーベクター。
【請求項１１】
転写後調節エレメントをさらに含む、
請求項１０に記載の、プロモーターのないドナーベクター。
【請求項１２】
前記導入遺伝子またはＲＮＡをコードする核酸の下流に、ポリアデニル化シグナルをさらに含む、
請求項１０または１１に記載の、プロモーターのないドナーベクター。
【請求項１３】
ＰＧＫポリアデニル化シグナル（ｐＡ）と；
三量体化ＳＶ４０ｐＡと；
導入遺伝子またはＲＮＡをコードする核酸と；
ｌｏｘＰ及びフリッパーゼ認識標的（ＦＲＴ）と；
ウサギβ−グロビンｐＡと；
ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と
を含む、
請求項１０に記載の、プロモーターのないドナーベクター。
【請求項１４】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のシステムを含む、非ヒト動物モデル。
【請求項１５】
デュアルリコンビナーゼ媒介性カセット交換が起こっている、請求項１４に記載の非ヒト動物モデル。
【請求項１６】
前記動物がマウスである、請求項１４または１５に記載の非ヒト動物モデル。
【請求項１７】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のシステムを提供する段階と；
前記システムを非ヒト動物へ投与する段階と；
前記非ヒト動物にエレクトロポレーションを行う段階と
を含む、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の非ヒト動物モデルを産生する方法。
【請求項１８】
請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の非ヒト動物モデルを提供する段階と；
薬物候補を投与する段階と；
前記非ヒト動物モデルに対する前記薬物候補の効果を査定する段階と
を含む、前記薬物候補をスクリーニングする方法。
【請求項１９】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のシステムを含む細胞を含む、対象における疾患または病態を治療するための医薬組成物。
【請求項２０】
前記細胞が幹細胞である、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
デュアルリコンビナーゼ媒介性カセット交換が前記細胞において起こっている、請求項１９または２０に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
[本発明1001]
以下を含む、システム：
導入遺伝子またはＲＮＡの上流の、ポリアデニル化シグナルまたは転写の終止エレメント、
前記導入遺伝子またはＲＮＡ、及び
ペアになったリコンビナーゼ認識部位
を含む、プロモーターのないドナーベクター；ならびに
前記ペアになったリコンビナーゼ認識部位に特異的なリコンビナーゼをコードする2つの遺伝子を含む、1つの発現ベクター、または
2つの発現ベクターであって、
第1の発現ベクターが、前記ペアになったリコンビナーゼ認識部位のうちの1つに特異的な第1のリコンビナーゼをコードする1つの遺伝子を含み、
第2の発現ベクターが、前記ペアになったリコンビナーゼ認識部位のうちの他のものに特異的な第2のリコンビナーゼをコードする1つの遺伝子を含む、2つの発現ベクター。
[本発明1002]
前記プロモーターのないドナーベクターが、転写後調節エレメントをさらに含む、本発明1001のシステム。
[本発明1003]
前記プロモーターのないドナーベクターが、前記導入遺伝子またはＲＮＡの下流にポリアデニル化シグナルをさらに含む、本発明1001のシステム。
[本発明1004]
前記プロモーターのないドナーベクターが、
ＰＧＫポリアデニル化シグナル（ｐＡ）と；
三量体化ＳＶ40ｐＡと；
前記導入遺伝子またはＲＮＡと；
ｌｏｘＰ及びフリッパーゼ認識標的（ＦＲＴ）と；
ウサギβ−グロビンｐＡと；
ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と
を含む、本発明1001のシステム。
[本発明1005]
前記ペアになったリコンビナーゼ認識部位がｌｏｘＰ及びフリッパーゼ認識標的（ＦＲＴ）であり、前記リコンビナーゼがｃｒｅ及びｆｌｐである、本発明1001のシステム。
[本発明1006]
前記ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、本発明1001のシステム。
[本発明1007]
前記ＲＮＡがｓｈＲＮＡである、本発明1001のシステム。
[本発明1008]
前記ＲＮＡがｓｇＲＮＡである、本発明1001のシステム。
[本発明1009]
前記導入遺伝子またはＲＮＡが疾患関連突然変異を含む、本発明1001のシステム。
[本発明1010]
導入遺伝子またはＲＮＡの上流の、ポリアデニル化シグナルまたは転写終止エレメントと；
前記導入遺伝子またはＲＮＡと；
ペアになったリコンビナーゼ認識部位と
を含む、プロモーターのないドナーベクター。
[本発明1011]
転写後調節エレメントをさらに含む、
本発明1010の、プロモーターのないドナーベクター。
[本発明1012]
前記導入遺伝子またはＲＮＡの下流に、ポリアデニル化シグナルをさらに含む、
本発明1010の、プロモーターのないドナーベクター。
[本発明1013]
ＰＧＫポリアデニル化シグナル（ｐＡ）と；
三量体化ＳＶ40ｐＡと；
導入遺伝子またはＲＮＡと；
ｌｏｘＰ及びフリッパーゼ認識標的（ＦＲＴ）と；
ウサギβ−グロビンｐＡと；
ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と
を含む、
本発明1010の、プロモーターのないドナーベクター。
[本発明1014]
本発明1001のシステムを含む、非ヒト動物モデル。
[本発明1015]
デュアルリコンビナーゼ媒介性カセット交換が起こっている、本発明1014の非ヒト動物モデル。
[本発明1016]
前記動物がマウスである、本発明1014の非ヒト動物モデル。
[本発明1017]
本発明1001のシステムを提供する段階と；
前記システムを非ヒト動物へ投与する段階と；
前記非ヒト動物にエレクトロポレーションを行う段階と
を含む、本発明1014の非ヒト動物モデルを産生する方法。
[本発明1018]
本発明1014の非ヒト動物モデルを提供する段階と；
薬物候補を投与する段階と；
前記非ヒト動物モデルに対する前記薬物候補の効果を査定する段階と
を含む、前記薬物候補をスクリーニングする方法。
[本発明1019]
本発明1001のシステムを含む細胞を提供する段階と；
前記細胞を対象へ投与する段階と
を含む、前記対象における疾患または病態を治療する方法。
[本発明1020]
前記細胞が幹細胞である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
デュアルリコンビナーゼ媒介性カセット交換が前記細胞において起こっている、本発明1019の方法。