【手続補正書】
【提出日】令和2年1月29日(2020.1.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫細胞のｅｘ−ｖｉｖｏ遺伝子改変のための方法であって、該方法は、該免疫細胞に、
（ａ）トランスポサーゼ酵素をコードする配列を含む核酸配列またはアミノ酸配列であって、該トランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列が、ＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列である、配列と、
（ｂ）トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列を含む組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列と
を送達するステップを含み、
該送達するステップが、該免疫細胞の電気穿孔またはヌクレオフェクションを含み、
該トランスポサーゼ酵素をコードするＤＮＡ配列の量および／または該トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列の量を含むＤＮＡの総量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり１０μｇと等しいかまたはそれ未満であり、
該電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、該トランスポサーゼ酵素をコードするＤＮＡ配列の量および／または該トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列の量を含むＤＮＡの総量の濃度が、１００μｇ／ｍＬに等しいかまたはそれ未満である、方法。
【請求項２】
トランスポサーゼ酵素をコードする前記配列が、ｍＲＮＡ配列、ＤＮＡ配列、またはアミノ酸配列である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記免疫細胞を１つまたは複数のサイトカインで刺激するステップをさらに含み、必要に応じて、該免疫細胞を１つまたは複数のサイトカインで刺激する該ステップが、前記送達するステップの後または該送達するステップの前に存在し、必要に応じて、該１つまたは複数のサイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−７、および／またはＩＬ−１５を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記免疫細胞が自家免疫細胞であり、必要に応じて、該免疫細胞が、Ｔリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、サイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞、またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
トランスポサーゼ酵素をコードする前記ｍＲＮＡ配列がｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生される、請求項２から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記トランスポサーゼ酵素が、
（ｉ）ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼ酵素であって、必要に応じて、
MGSSLDDEHILSALLQSDDELVGEDSDSEVSDHVSEDDVQSDTEEAFIDEVHEVQPTSSGSEILDEQNVIEQPGSSLASNRILTLPQRTIRGKNKHCWSTSKSTRRSRVSALNIVRSQRGPTRMCRNIYDPLLCFKLFFTDEIISEIVKWTNAEISLKRRESMTSATFRDTNEDEIYAFFGILVMTAVRKDNHMSTDDLFDRSLSMVYVSVMSRDRFDFLIRCLRMDDKSIRPTLRENDVFTPVRKIWDLFIHQCIQNYTPGAHLTIDEQLLGFRGRCPFRVYIPNKPSKYGIKILMMCDSGTKYMINGMPYLGRGTQTNGVPLGEYYVKELSKPVHGSCRNITCDNWFTSIPLAKNLLQEPYKLTIVGTVRSNKREIPEVLKNSRSRPVGTSMFCFDGPLTLVSYKPKPAKMVYLLSSCDEDASINESTGKPQMVMYYNQTKGGVDTLDQMCSVMTCSRKTNRWPMALLYGMINIACINSFIIYSHNVSSKGEKVQSRKKFMRNLYMSLTSSFMRKRLEAPTLKRYLRDNISNILPKEVPGTSDDSTEEPVMKKRTYCTYCPSKIRRKANASCKKCKKVICREHNIDMCQSCF（配列番号１）
と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼ酵素；あるいは
（ｉｉ）Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼ酵素、必要に応じて、機能亢進性Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ  ＳＢ１００Ｘトランスポサーゼであって、必要に応じて、
MGKSKEISQDLRKKIVDLHKSGSSLGAISKRLKVPRSSVQTIVRKYKHHGTTQPSYRSGRRRYLSPRDERTLVRKVQINPRTTAKDLVKMLEETGTKVSISTVKRVLYRHNLKGRSARKKPLLQNRHKKARLRFATAHGDKDRTFWRNVLWSDETKIELFGHNDHRYVWRKKGEACKPKNTIPTVKHGGGSIMLWGCFAAGGTGALHKIDGIMRKENYVDILKQHLKTSVRKLKLGRKWVFQMDNDPKHTSKVVAKWLKDNKVKVLEWPSQSPDLNPIENLWAELKKRVRARRPTNLTQLHQLCQEEWAKIHPTYCGKLVEGYPKRLTQVKQFKGNATKY（配列番号２）
と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含むか、または、
MGKSKEISQDLRKRIVDLHKSGSSLGAISKRLAVPRSSVQTIVRKYKHHGTTQPSYRSGRRRYLSPRDERTLVRKVQINPRTTAKDLVKMLEETGTKVSISTVKRVLYRHNLKGHSARKKPLLQNRHKKARLRFATAHGDKDRTFWRNVLWSDETKIELFGHNDHRYVWRKKGEACKPKNTIPTVKHGGGSIMLWGCFAAGGTGALHKIDGIMDAVQYVDILKQHLKTSVRKLKLGRKWVFQHDNDPKHTSKVVAKWLKDNKVKVLEWPSQSPDLNPIENLWAELKKRVRARRPTNLTQLHQLCQEEWAKIHPNYCGKLVEGYPKRLTQVKQFKGNATKY（配列番号３）
と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼ酵素
である、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列を含む前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列が環状であり、必要に応じて、トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列がプラスミドベクター内またはミニサークルＤＮＡベクター内に含有されている、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列が線状である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列がｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列が、
（ｉ）環状ＤＮＡの制限消化の産物であって、必要に応じて、該環状ＤＮＡが、プラスミドベクターまたはミニサークルＤＮＡベクターである、産物；
（ｉｉ）ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の産物；または
（ｉｉｉ）二本鎖のｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡ配列であって、必要に応じて、該ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡ配列が、抗原、プロモーター、ポリＡテール、およびテロメア末端を含む抗原発現カセットだけをコードする酵素プロセスにより産生される、配列である、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
前記免疫細胞が、ヒトまたは非ヒト哺乳動物から単離されるか、またはそれに由来し、必要に応じて、該非ヒト哺乳動物が、齧歯動物、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ウマ、ウシ、ラクダ、または霊長類である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列が、キメラ抗原受容体をコードする配列またはその一部分をさらに含み、必要に応じて、キメラ抗原受容体をコードする該配列の該一部分が、抗原認識領域をコードし、必要に応じて、該抗原認識領域が、１つまたは複数の相補性決定領域、抗体、抗体模倣物、タンパク質足場、またはそれらの断片を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
（ｉ）前記抗体が、キメラ抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体であり、必要に応じて、該抗体が、アフィニティー調整されているか、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ＶＨＨ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡＢ）、小モジュラー免疫医薬（ＳＭＩＰ）分子、もしくはナノボディを含むか、またはそれからなり、必要に応じて、該ＶＨＨがラクダ科抗体であり、必要に応じて、該ＶＨＨがヒト化抗体である；
（ｉｉ）前記抗体断片が、相補性決定領域、可変領域、重鎖、軽鎖、もしくはそれらの任意の組合せを含むか、またはそれからなる；
（ｉｉｉ）前記抗体模倣物が、アフィボディ、アフィリン、アフィマー、アフィチン、アルファボディ、アンチカリン、アビマー、ＤＡＲＰｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ、Ｋｕｎｉｔｚドメインペプチド、もしくはモノボディを含むか、またはそれからなる；あるいは
（ｉｖ）前記タンパク質足場が、センチリンを含むか、またはそれからなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＤＮＡ配列であり、
（ｂ）該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の量、および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり１．６７μｇと等しいかまたはそれ未満であり、
必要に応じて、該電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の該量および該トランスポゾンをコードする該ＤＮＡ配列の該量の濃度が、１６．７μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満であり、
必要に応じて、該トランスポサーゼがＳｕｐｅｒ  ｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポサーゼである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法に従って改変された免疫細胞であって、必要に応じて、Ｔリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、サイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞、またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、免疫細胞。
【請求項１６】
前記免疫細胞が、第２の遺伝子編集ツールによってさらに改変されており、必要に応じて、該第２の遺伝子編集ツールが、Ｃａｓ９、不活性化Ｃａｓ９（ｄＣａｓ９）またはＴＡＬＥ配列のいずれかに作動可能に連結したエンドヌクレアーゼを含み、必要に応じて、該エンドヌクレアーゼが、共有結合または非共有結合で、Ｃａｓ９またはＴＡＬＥ配列のいずれかに作動可能に連結している、請求項１６に記載の免疫細胞。
【請求項１７】
請求項１５から１６のいずれか一項に記載の免疫細胞を含む組成物。
【請求項１８】
疾患または障害の処置を必要とする被験体における疾患または障害の処置における使用のための、請求項１７に記載の組成物であって、必要に応じて、該疾患または障害が、がんであり、必要に応じて、該疾患または障害が、感染性疾患である、組成物。
【請求項１９】
前記免疫細胞が自家免疫細胞または同種免疫細胞である、請求項１９に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
本開示は、ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、またはそれらの任意の組合せを含む、改変された免疫細胞の生存率を向上させるための培養培地を提供する。改変された免疫細胞は、Ｔリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、サイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞、またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞でありうる。改変された免疫細胞は、１つまたは複数の外来性ＤＮＡ配列を含有しうる。改変された免疫細胞は、１つまたは複数の外来性ＲＮＡ配列を含有しうる。改変された免疫細胞は、電気穿孔またはヌクレオフェクトされていてもよい。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
免疫細胞のｅｘ−ｖｉｖｏ遺伝子改変のための方法であって、該免疫細胞に、
（ａ）トランスポサーゼ酵素をコードする配列を含む核酸配列またはアミノ酸配列と、
（ｂ）トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列を含む組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列と
を送達するステップを含む方法。
（項目２）
トランスポサーゼ酵素をコードする前記配列がｍＲＮＡ配列である、項目１に記載の方法。
（項目３）
トランスポサーゼ酵素をコードする前記配列がＤＮＡ配列である、項目１に記載の方法。
（項目４）
トランスポサーゼ酵素をコードする前記配列がアミノ酸配列である、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記送達するステップが、前記免疫細胞の電気穿孔またはヌクレオフェクションを含む、項目１から４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記免疫細胞を１つまたは複数のサイトカインで刺激するステップをさらに含む、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記免疫細胞を１つまたは複数のサイトカインで刺激する前記ステップが、前記送達するステップの後に存在する、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記免疫細胞を１つまたは複数のサイトカインで刺激する前記ステップが、前記送達するステップの前に存在する、項目６に記載の方法。
（項目９）
前記１つまたは複数のサイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−７、および／またはＩＬ−１５を含む、項目６から８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記免疫細胞が自家免疫細胞である、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記免疫細胞がＴリンパ球である、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記免疫細胞がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記免疫細胞がサイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞である、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記免疫細胞がナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
トランスポサーゼ酵素をコードする前記ｍＲＮＡ配列がｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生される、項目２および５から１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記トランスポサーゼ酵素がＳｕｐｅｒ  ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ｓＰＢｏ）トランスポサーゼ酵素である、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記Ｓｕｐｅｒ  ｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポサーゼ酵素が、
MGSSLDDEHILSALLQSDDELVGEDSDSEVSDHVSEDDVQSDTEEAFIDEVHEVQPTSSGSEILDEQNVIEQPGSSLASNRILTLPQRTIRGKNKHCWSTSKSTRRSRVSALNIVRSQRGPTRMCRNIYDPLLCFKLFFTDEIISEIVKWTNAEISLKRRESMTSATFRDTNEDEIYAFFGILVMTAVRKDNHMSTDDLFDRSLSMVYVSVMSRDRFDFLIRCLRMDDKSIRPTLRENDVFTPVRKIWDLFIHQCIQNYTPGAHLTIDEQLLGFRGRCPFRVYIPNKPSKYGIKILMMCDSGTKYMINGMPYLGRGTQTNGVPLGEYYVKELSKPVHGSCRNITCDNWFTSIPLAKNLLQEPYKLTIVGTVRSNKREIPEVLKNSRSRPVGTSMFCFDGPLTLVSYKPKPAKMVYLLSSCDEDASINESTGKPQMVMYYNQTKGGVDTLDQMCSVMTCSRKTNRWPMALLYGMINIACINSFIIYSHNVSSKGEKVQSRKKFMRNLYMSLTSSFMRKRLEAPTLKRYLRDNISNILPKEVPGTSDDSTEEPVMKKRTYCTYCPSKIRRKANASCKKCKKVICREHNIDMCQSCF（配列番号１）
と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記トランスポサーゼ酵素がＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼ酵素である、項目１から１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼが機能亢進性Ｓｌｅｅｐｉｎｇ
Ｂｅａｕｔｙ  ＳＢ１００Ｘトランスポサーゼである、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼ酵素が、
MGKSKEISQDLRKKIVDLHKSGSSLGAISKRLKVPRSSVQTIVRKYKHHGTTQPSYRSGRRRYLSPRDERTLVRKVQINPRTTAKDLVKMLEETGTKVSISTVKRVLYRHNLKGRSARKKPLLQNRHKKARLRFATAHGDKDRTFWRNVLWSDETKIELFGHNDHRYVWRKKGEACKPKNTIPTVKHGGGSIMLWGCFAAGGTGALHKIDGIMRKENYVDILKQHLKTSVRKLKLGRKWVFQMDNDPKHTSKVVAKWLKDNKVKVLEWPSQSPDLNPIENLWAELKKRVRARRPTNLTQLHQLCQEEWAKIHPTYCGKLVEGYPKRLTQVKQFKGNATKY（配列番号２）
と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、項目１８または１９に記載の方法。
（項目２１）
前記Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼ酵素が、
MGKSKEISQDLRKRIVDLHKSGSSLGAISKRLAVPRSSVQTIVRKYKHHGTTQPSYRSGRRRYLSPRDERTLVRKVQINPRTTAKDLVKMLEETGTKVSISTVKRVLYRHNLKGHSARKKPLLQNRHKKARLRFATAHGDKDRTFWRNVLWSDETKIELFGHNDHRYVWRKKGEACKPKNTIPTVKHGGGSIMLWGCFAAGGTGALHKIDGIMDAVQYVDILKQHLKTSVRKLKLGRKWVFQHDNDPKHTSKVVAKWLKDNKVKVLEWPSQSPDLNPIENLWAELKKRVRARRPTNLTQLHQLCQEEWAKIHPNYCGKLVEGYPKRLTQVKQFKGNATKY（配列番号３）
と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、項目１８または１９に記載の方法。
（項目２２）
トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列を含む前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列が環状である、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列がプラスミドベクター内に含有されている、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列がミニサークルＤＮＡベクター内に含有されている、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列が線状である、項目１から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列がｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生される、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列が、環状ＤＮＡの制限消化の産物である、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２８）
前記環状ＤＮＡが、プラスミドベクターまたはミニサークルＤＮＡベクターである、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列が、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の産物である、項目２５または２６に記載の方法。
（項目３０）
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列が、二本鎖のｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡ配列である、項目２５または２６に記載の方法。
（項目３１）
前記ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡ配列が、抗原、プロモーター、ポリＡテール、およびテロメア末端を含む抗原発現カセットだけをコードする酵素プロセスにより産生される、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記免疫細胞が、ヒトから単離されるか、またはそれに由来する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記免疫細胞が、非ヒト哺乳動物から単離されるか、またはそれに由来する、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記非ヒト哺乳動物が、齧歯動物、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ウマ、ウシ、ラクダ、または霊長類である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
トランスポゾンをコードする前記組換えの天然に存在しないＤＮＡ配列が、キメラ抗原受容体をコードする配列またはその一部分をさらに含む、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
キメラ抗原受容体をコードする前記配列の前記一部分が、抗原認識領域をコードする、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記抗原認識領域が、１つまたは複数の相補性決定領域を含む、項目３５または３６に記載の方法。
（項目３８）
前記抗原認識領域が、抗体、抗体模倣物、タンパク質足場、またはそれらの断片を含む、項目３５または３６に記載の方法。
（項目３９）
前記抗体が、キメラ抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記抗体がアフィニティー調整されている、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記抗体が、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ＶＨＨ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡＢ）、小モジュラー免疫医薬（ＳＭＩＰ）分子、もしくはナノボディを含むか、またはそれからなる、項目３８に記載の方法。
（項目４２）
前記ＶＨＨがラクダ科抗体である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記ＶＨＨがヒト化抗体である、項目４１または４２に記載の方法。
（項目４４）
前記抗体断片が、相補性決定領域、可変領域、重鎖、軽鎖、もしくはそれらの任意の組合せを含むか、またはそれからなる、項目３８に記載の方法。
（項目４５）
前記抗体模倣物が、アフィボディ、アフィリン、アフィマー、アフィチン、アルファボディ、アンチカリン、アビマー、ＤＡＲＰｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ、Ｋｕｎｉｔｚドメインペプチド、もしくはモノボディを含むか、またはそれからなる、項目３８に記載の方法。
（項目４６）
前記タンパク質足場が、センチリンを含むか、またはそれからなる、項目３８に記載の方法。
（項目４７）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＤＮＡ配列であり、
（ｂ）該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の量、および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり１０μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記ＤＮＡ配列の前記量および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、１００μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目４８に記載の方法。
（項目４９）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＤＮＡ配列であり、
（ｂ）該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の量、および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり７．５μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記ＤＮＡ配列の前記量および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、７５μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＤＮＡ配列であり、
（ｂ）該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の量、および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり６．０μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記ＤＮＡ配列の前記量および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、６０μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記トランスポサーゼがＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼである、項目５０または５１に記載の方法。
（項目５４）
前記Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  ＢｅａｕｔｙトランスポサーゼがＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ  １００Ｘ（ＳＢ１００Ｘ）トランスポサーゼである、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＤＮＡ配列であり、
（ｂ）該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の量、および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり５．０μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記ＤＮＡ配列の前記量および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、５０μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＤＮＡ配列であり、
（ｂ）該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の量、および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり２．５μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記ＤＮＡ配列の前記量および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、２５μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＤＮＡ配列であり、
（ｂ）該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の量、および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり１．６７μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記ＤＮＡ配列の前記量および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、１６．７μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記トランスポサーゼがＳｕｐｅｒ  ｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポサーゼである、項目５９または６０に記載の方法。
（項目６２）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＤＮＡ配列であり、
（ｂ）該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の量、および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり０．５５μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記ＤＮＡ配列の前記量および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、５．５μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＤＮＡ配列であり、
（ｂ）該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の量、および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり０．１９μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記ＤＮＡ配列の前記量および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、１．９μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＤＮＡ配列であり、
（ｂ）該トランスポサーゼ酵素をコードする該ＤＮＡ配列の量、および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の量が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり０．１μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目６７）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記ＤＮＡ配列の前記量および前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、１．０μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＲＮＡ配列であり、
（ｂ）前記トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり１０μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目６９）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、１００μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＲＮＡ配列であり、
（ｂ）前記トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり７．５μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目７１）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、７５μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＲＮＡ配列であり、
（ｂ）前記トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり６．０μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目７３）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、６０μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目７２に記載の方法。
（項目７４）
前記トランスポサーゼがＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼである、項目７２または７３に記載の方法。
（項目７５）
前記Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  ＢｅａｕｔｙトランスポサーゼがＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ  １００Ｘ（ＳＢ１００Ｘ）トランスポサーゼである、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＲＮＡ配列であり、
（ｂ）前記トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり５．０μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目７７）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、５０μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目７６に記載の方法。
（項目７８）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＲＮＡ配列であり、
（ｂ）前記トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり２．５μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目７９）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、２５μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＲＮＡ配列であり、
（ｂ）前記トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり１．６７μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８１）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、１６．７μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目８０に記載の方法。
（項目８２）
前記トランスポサーゼがＳｕｐｅｒ  ｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポサーゼである、項目８０または８１に記載の方法。
（項目８３）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＲＮＡ配列であり、
（ｂ）前記トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり０．５５μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８４）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、５．５μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目８３に記載の方法。
（項目８５）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＲＮＡ配列であり、
（ｂ）前記トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり０．１９μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８６）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、１．９μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
（ａ）前記トランスポサーゼ酵素をコードする前記核酸配列がＲＮＡ配列であり、
（ｂ）前記トランスポゾンをコードするＤＮＡ配列が、電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物１００μＬ当たり０．１μｇと等しいかまたはそれ未満である、項目５から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８８）
前記電気穿孔またはヌクレオフェクション反応物中の、前記トランスポゾンをコードする前記ＤＮＡ配列の前記量の濃度が、１．０μｇ／ｍＬと等しいかまたはそれ未満である、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
項目１から８８のいずれか一項に記載の方法に従って改変された免疫細胞。
（項目９０）
Ｔリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、サイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞、またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、項目８９に記載の免疫細胞。
（項目９１）
第２の遺伝子編集ツールによってさらに改変されている、項目８９または９０に記載の免疫細胞。
（項目９２）
前記第２の遺伝子編集ツールが、Ｃａｓ９またはＴＡＬＥ配列のいずれかに作動可能に連結したエンドヌクレアーゼを含む、項目９１に記載の免疫細胞。
（項目９３）
前記エンドヌクレアーゼが、共有結合で、Ｃａｓ９またはＴＡＬＥ配列のいずれかに作動可能に連結している、項目９２に記載の免疫細胞。
（項目９４）
前記エンドヌクレアーゼが、非共有結合で、Ｃａｓ９またはＴＡＬＥ配列のいずれかに作動可能に連結している、項目９２に記載の免疫細胞。
（項目９５）
前記Ｃａｓ９が不活性化Ｃａｓ９（ｄＣａｓ９）である、項目８９から９４のいずれか一項に記載の免疫細胞。
（項目９６）
前記不活性化Ｃａｓ９が、触媒部位内にＤ１０ＡおよびＮ５８０Ａを含む、項目９５に記載の免疫細胞。
（項目９７）
前記Ｃａｓ９が小型の不活性化Ｃａｓ９（ｄＳａＣａｓ９）である、項目９５または９６に記載の免疫細胞。
（項目９８）
前記ｄＳａＣａｓ９が、
mkrnyilglaigitsvgygiidyetrdvidagvrlfkeanvennegrrskrgarrlkrrrrhriqrvkkllfdynlltdhselsginpyearvkglsqklseeefsaallhlakrrgvhnvneveedtgnelstkeqisrnskaleekyvaelqlerlkkdgevrgsinrfktsdyvkeakqllkvqkayhqldqsfidtyidlletrrtyyegpgegspfgwkdikewyemlmghctyfpeelrsvkyaynadlynalndlnnlvitrdenekleyyekfqiienvfkqkkkptlkqiakeilvneedikgyrvtstgkpeftnlkvyhdikditarkeiienaelldqiakiltiyqssediqeeltnlnseltqeeieqisnlkgytgthnlslkainlildelwhtndnqiaifnrlklvpkkvdlsqqkeipttlvddfilspvvkrsfiqsikvinaiikkyglpndiiielareknskdaqkminemqkrnrqtnerieeiirttgkenakyliekiklhdmqegkclysleaipledllnnpfnyevdhiiprsvsfdnsfnnkvlvkqeeaskkgnrtpfqylsssdskisyetfkkhilnlakgkgrisktkkeylleerdinrfsvqkdfinrnlvdtryatrglmnllrsyfrvnnldvkvksinggftsflrrkwkfkkernkgykhhaedaliianadfifkewkkldkakkvmenqmfeekqaesmpeieteqeykeifitphqikhikdfkdykyshrvdkkpnrelindtlystrkddkgntlivnnlnglydkdndklkklinkspekllmyhhdpqtyqklklimeqygdeknplykyyeetgnyltkyskkdngpvikkikyygnklnahlditddypnsrnkvvklslkpyrfdvyldngvykfvtvknldvikkenyyevnskcyeeakklkkisnqaefiasfynndlikingelyrvigvnndllnrievnmidityreylenmndkrppriiktiasktqsikkystdilgnlyevkskkhpqiikkg（配列番号４）
のアミノ酸配列を含む、項目９７に記載の免疫細胞。
（項目９９）
項目８９から９８のいずれか一項に記載の免疫細胞を含む組成物。
（項目１００）
それを必要とする被験体における疾患または障害の処置のための、項目９９に記載の組成物の使用。
（項目１０１）
前記疾患または障害が、がんである、項目１００に記載の使用。
（項目１０２）
前記疾患または障害が、感染性疾患である、項目１００に記載の使用。
（項目１０３）
前記免疫細胞が自家免疫細胞である、項目９９から１０２のいずれか一項に記載の使用。
（項目１０４）
前記免疫細胞が同種免疫細胞である、項目９９から１０２のいずれか一項に記載の使用。
（項目１０５）
ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、またはそれらの任意の組合せを含む改変された免疫細胞の生存率を向上させるための培養培地。
（項目１０６）
前記改変された免疫細胞が、Ｔリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、サイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞、またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、項目１０５に記載の培養培地。
（項目１０７）
前記改変された免疫細胞が、１つまたは複数の外来性ＤＮＡ配列を含有する、項目１０５または１０６に記載の培養培地。
（項目１０８）
前記改変された免疫細胞が、１つまたは複数の外来性ＲＮＡ配列を含有する、項目１０５または１０６に記載の培養培地。
（項目１０９）
前記改変された免疫細胞が、電気穿孔またはヌクレオフェクトされている、項目１０５から１０８のいずれか一項に記載の培養培地。