【手続補正書】
【提出日】令和2年10月6日(2020.10.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換えトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−β単量体であって、
（ｉ）配列番号２の残基７７に対応するアミノ酸残基におけるシステインからセリンへの置換と、
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸残基５２〜７１に対応するα３ヘリックスの欠失と、
（ｉｉｉ）組換えＴＦＧ−β単量体の正味電荷を増加させる、野生型ＴＦＧ−β単量体と比べて少なくとも１個のアミノ酸置換と
を含む、組換えＴＧＦ−β単量体。
【請求項２】
ＴＧＦ−βＩＩ型受容体（ＴβＲＩＩ）に対する前記組換えＴＧＦ−β単量体の親和性を高める、野生型ＴＦＧ−β２単量体と比べて少なくとも１個のアミノ酸置換をさらに含む、請求項１に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
【請求項３】
ヒトＴＧＦ−β２単量体である、請求項１または請求項２に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
【請求項４】
前記単量体の正味電荷を増加させる前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、
配列番号２の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるロイシンからアルギニンへの置換；
配列番号２の残基７３に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからリジンへの置換；または
配列番号２の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるロイシンからアルギニンへの置換、および残基７３に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからリジンへの置換の両方
を含む、請求項３に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
【請求項５】
ＴβＲＩＩに対する前記単量体の親和性を高める前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、配列番号２の残基２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８もしくは９９に対応するアミノ酸残基、またはそれらの２つもしくはそれよりも多い残基の任意の組合せにおいて置換を含む、請求項３または請求項４に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
【請求項６】
ＴβＲＩＩに対する前記単量体の親和性を高める前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、残基２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６または３７に少なくとも１個の置換、および残基８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９に少なくとも１個の置換を含む、請求項５に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
【請求項７】
ＴβＲＩＩに対する前記単量体の親和性を高める前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、残基２５におけるリジンからアルギニン、残基２６におけるアルギニンからリジン、残基８９におけるロイシンからバリン、残基９２におけるイソロイシンからバリン、残基９４におけるアスパラギンからアルギニン、残基９５におけるスレオニンからリジン、残基９８におけるイソロイシンからバリン、またはそれらの２つもしくはそれよりも多い任意の組合せを含む、請求項６に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
【請求項８】
残基２５におけるリジンからアルギニン、残基２６におけるアルギニンからリジン、残基８９におけるロイシンからバリン、残基９２におけるイソロイシンからバリン、残基９４におけるアスパラギンからアルギニン、残基９５におけるスレオニンからリジン、および残基９８におけるイソロイシンからバリンを含む、請求項７に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
【請求項９】
配列番号８または配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項３から８のいずれか一項に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
【請求項１０】
ヒトＴＧＦ−β１単量体である、請求項１または請求項２に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
【請求項１１】
前記単量体の正味電荷を増加させる前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、
配列番号１の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるイソロイシンからアルギニンへの置換；
配列番号１の残基７４に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからリジンへの置換；
配列番号１の残基７５に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからセリンへの置換；または
配列番号１の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるイソロイシンからアルギニンへの置換、残基７４に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからリジンへの置換、および残基７５に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからセリンへの置換
を含む、請求項１０に記載の組換えヒトＴＧＦ−β１単量体。
【請求項１２】
配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１０または請求項１１に記載の組換えヒトＴＧＦ−β１単量体。
【請求項１３】
ヒトＴＧＦ−β３単量体である、請求項１または請求項２に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
【請求項１４】
前記単量体の正味電荷を増加させる前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、
配列番号３の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるロイシンからグルタミン酸への置換；
配列番号３の残基７２に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからグルタミン酸への置換；
配列番号３の残基７４に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからアスパラギン酸への置換；または
配列番号３の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるロイシンからグルタミン酸への置換、残基７２に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからグルタミン酸への置換、および残基７４に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからアスパラギン酸への置換
を含む、請求項１３に記載の組換えヒトＴＧＦ−β３単量体。
【請求項１５】
配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１３または請求項１４に記載の組換えヒトＴＧＦ−β３単量体。
【請求項１６】
ＰＥＧ化されている、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
【請求項１７】
グリコシル化または高グリコシル化されている、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
【請求項１８】
請求項１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体および異種タンパク質を含む、融合タンパク質。
【請求項１９】
前記異種タンパク質がタンパク質タグを含む、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
前記異種タンパク質がＦｃドメインを含む、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
前記異種タンパク質がアルブミンまたはアルブミン結合ポリペプチドを含む、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
前記異種タンパク質が、抗体、その抗原結合断片、または標的化部分を含む、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
一本鎖ポリペプチドである、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２４】
二量体ポリペプチドを形成する、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
ヘテロ二量体である、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
多量体である、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
放射線療法剤、化学療法のための細胞傷害剤、または薬物を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体、または請求項１８から２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
イメージング剤、蛍光色素、または蛍光タンパク質タグを含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体、または請求項１８から２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
請求項１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体、または請求項１８から２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、組成物。
【請求項３０】
細胞におけるＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する方法において使用するための、請求項１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体もしくは請求項１８から２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質を含む組成物、または請求項２９に記載の組成物であって、前記方法は、前記細胞を前記組換えＴＧＦ−β単量体、前記融合タンパク質または前記組成物と接触させることを含む、組成物。
【請求項３１】
前記方法が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記方法が、前記組換えＴＧＦ−β単量体、融合タンパク質または組成物を、異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する疾患または障害を有する対象に投与することを含むｉｎ  ｖｉｖｏ方法である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
対象における異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する疾患または障害を処置するための、請求項１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体もしくは請求項１８から２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質を含む組成物、または請求項２９に記載の組成物。
【請求項３４】
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、線維性障害である、請求項３２または請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、乳がん、脳がん、膵臓がん、前立腺がんまたは皮膚がんである、請求項３２または請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、眼疾患である、請求項３２または請求項３３に記載の組成物。
【請求項３７】
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、結合組織の遺伝性障害である、請求項３２または請求項３３に記載の組成物。
【請求項３８】
請求項１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体をコードする、単離された核酸分子。
【請求項３９】
プロモーターに作動可能に連結された、請求項３８に記載の核酸分子。
【請求項４０】
請求項３８または請求項３９に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項４１】
請求項３８または請求項３９に記載の核酸分子、または請求項４０に記載のベクターを含む単離された細胞。
【請求項４２】
Ｔリンパ球である、請求項４１に記載の単離された細胞。
【請求項４３】
対象における異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する疾患または障害を処置するための組成物であって、請求項４１または請求項４２に記載の単離された細胞を含む組成物。
【請求項４４】
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、線維性障害である、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、乳がん、脳がん、膵臓がん、前立腺がんまたは皮膚がんである、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４６】
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、眼疾患である、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４７】
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、結合組織の遺伝性障害である、請求項４３に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明の前述のおよび他の目的、特徴、および利点は、添付図面を参照して進められる以下の詳細な記述からより明らかになるであろう。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
組換えトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−β単量体であって、
（ｉ）配列番号２の残基７７に対応するアミノ酸残基におけるシステインからセリンへの置換と、
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸残基５２〜７１に対応するα３ヘリックスの欠失と、
（ｉｉｉ）組換えＴＦＧ−β単量体の正味電荷を増加させる、野生型ＴＦＧ−β単量体と比べて少なくとも１個のアミノ酸置換と
を含む、組換えＴＧＦ−β単量体。
（項目２）
ＴＧＦ−βＩＩ型受容体（ＴβＲＩＩ）に対する前記組換えＴＧＦ−β単量体の親和性を高める、野生型ＴＦＧ−β２単量体と比べて少なくとも１個のアミノ酸置換をさらに含む、項目１に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
（項目３）
ヒトＴＧＦ−β２単量体である、項目１または項目２に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
（項目４）
前記単量体の正味電荷を増加させる前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、
配列番号２の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるロイシンからアルギニンへの置換；
配列番号２の残基７３に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからリジンへの置換；または
配列番号２の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるロイシンからアルギニンへの置換、および残基７３に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからリジンへの置換の両方
を含む、項目３に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
（項目５）
ＴβＲＩＩに対する前記単量体の親和性を高める前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、配列番号２の残基２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８もしくは９９に対応するアミノ酸残基、またはそれらの２つもしくはそれよりも多い残基の任意の組合せにおいて置換を含む、項目３または項目４に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
（項目６）
ＴβＲＩＩに対する前記単量体の親和性を高める前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、残基２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６または３７に少なくとも１個の置換、および残基８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９に少なくとも１個の置換を含む、項目５に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
（項目７）
ＴβＲＩＩに対する前記単量体の親和性を高める前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、残基２５におけるリジンからアルギニン、残基２６におけるアルギニンからリジン、残基８９におけるロイシンからバリン、残基９２におけるイソロイシンからバリン、残基９４におけるアスパラギンからアルギニン、残基９５におけるスレオニンからリジン、残基９８におけるイソロイシンからバリン、またはそれらの２つもしくはそれよりも多い任意の組合せを含む、項目６に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
（項目８）
残基２５におけるリジンからアルギニン、残基２６におけるアルギニンからリジン、残基８９におけるロイシンからバリン、残基９２におけるイソロイシンからバリン、残基９４におけるアスパラギンからアルギニン、残基９５におけるスレオニンからリジン、および残基９８におけるイソロイシンからバリンを含む、項目７に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
（項目９）
配列番号８または配列番号１０のアミノ酸配列を含む、項目３から８のいずれか一項に記載の組換えヒトＴＧＦ−β２単量体。
（項目１０）
ヒトＴＧＦ−β１単量体である、項目１または項目２に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
（項目１１）
前記単量体の正味電荷を増加させる前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、
配列番号１の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるイソロイシンからアルギニンへの置換；
配列番号１の残基７４に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからリジンへの置換；
配列番号１の残基７５に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからセリンへの置換；または
配列番号１の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるイソロイシンからアルギニンへの置換、残基７４に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからリジンへの置換、および残基７５に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからセリンへの置換
を含む、項目１０に記載の組換えヒトＴＧＦ−β１単量体。
（項目１２）
配列番号７のアミノ酸配列を含む、項目１０または項目１１に記載の組換えヒトＴＧＦ−β１単量体。
（項目１３）
ヒトＴＧＦ−β３単量体である、項目１または項目２に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
（項目１４）
前記単量体の正味電荷を増加させる前記少なくとも１個のアミノ酸置換が、
配列番号３の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるロイシンからグルタミン酸への置換；
配列番号３の残基７２に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからグルタミン酸への置換；
配列番号３の残基７４に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからアスパラギン酸への置換；または
配列番号３の残基５１に対応するアミノ酸残基におけるロイシンからグルタミン酸への置換、残基７２に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからグルタミン酸への置換、および残基７４に対応するアミノ酸残基におけるアラニンからアスパラギン酸への置換
を含む、項目１３に記載の組換えヒトＴＧＦ−β３単量体。
（項目１５）
配列番号９のアミノ酸配列を含む、項目１３または項目１４に記載の組換えヒトＴＧＦ−β３単量体。
（項目１６）
ＰＥＧ化されている、項目１から１５のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
（項目１７）
グリコシル化または高グリコシル化されている、項目１から１５のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体。
（項目１８）
項目１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体および異種タンパク質を含む、融合タンパク質。
（項目１９）
前記異種タンパク質がタンパク質タグを含む、項目１８に記載の融合タンパク質。
（項目２０）
前記異種タンパク質がＦｃドメインを含む、項目１８に記載の融合タンパク質。
（項目２１）
前記異種タンパク質がアルブミンまたはアルブミン結合ポリペプチドを含む、項目１８に記載の融合タンパク質。
（項目２２）
前記異種タンパク質が、抗体、その抗原結合断片、または標的化部分を含む、項目１８に記載の融合タンパク質。
（項目２３）
一本鎖ポリペプチドである、項目１８に記載の融合タンパク質。
（項目２４）
二量体ポリペプチドを形成する、項目１８に記載の融合タンパク質。
（項目２５）
ヘテロ二量体である、項目１８に記載の融合タンパク質。
（項目２６）
多量体である、項目１８に記載の融合タンパク質。
（項目２７）
放射線療法剤、化学療法のための細胞傷害剤、または薬物を含む、項目１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体、または項目１８から２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
（項目２８）
イメージング剤、蛍光色素、または蛍光タンパク質タグを含む、項目１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体、または項目１８から２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
（項目２９）
項目１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体、または項目１８から２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、組成物。
（項目３０）
細胞におけるＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する方法であって、前記細胞を、項目１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体、項目１８から２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、または項目２９に記載の組成物と接触させることを含む、方法。
（項目３１）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法である、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記組換えＴＧＦ−β単量体、融合タンパク質または組成物を、異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する疾患または障害を有する対象に投与することを含む、ｉｎ  ｖｉｖｏ方法である、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
対象における異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する疾患または障害を処置する方法であって、項目１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体、項目１８から２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、または項目２９に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目３４）
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、線維性障害である、項目３２または項目３３に記載の方法。
（項目３５）
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、乳がん、脳がん、膵臓がん、前立腺がんまたは皮膚がんである、項目３２または項目３３に記載の方法。
（項目３６）
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、眼疾患である、項目３２または項目３３に記載の方法。
（項目３７）
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、結合組織の遺伝性障害である、項目３２または項目３３に記載の方法。
（項目３８）
項目１から１７のいずれか一項に記載の組換えＴＧＦ−β単量体をコードする、単離された核酸分子。
（項目３９）
プロモーターに作動可能に連結された、項目３８に記載の核酸分子。
（項目４０）
項目３８または項目３９に記載の核酸分子を含むベクター。
（項目４１）
項目３８または項目３９に記載の核酸分子、または項目４０に記載のベクターを含む単離された細胞。
（項目４２）
Ｔリンパ球である、項目４１に記載の単離された細胞。
（項目４３）
対象における異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する疾患または障害を処置する方法であって、項目４１または項目４２に記載の単離された細胞を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目４４）
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、線維性障害である、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、乳がん、脳がん、膵臓がん、前立腺がんまたは皮膚がんである、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、眼疾患である、項目４３に記載の方法。
（項目４７）
異常なＴＧＦ−βシグナル伝達に関連する前記疾患または障害が、結合組織の遺伝性障害である、項目４３に記載の方法。