【手続補正書】
【提出日】令和2年5月11日(2020.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）第１のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）分子と、
（ｂ）第２のｇＲＮＡ分子と、
（ｃ）ＮＮＧＲＲＴ（配列番号２４）またはＮＮＧＲＲＶ（配列番号２５）のいずれかのプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を認識する少なくとも１つのＣａｓ９分子と
を含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムであって、
前記第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子のそれぞれが、１９〜２４ヌクレオチド長のターゲティングドメインを有し、かつ、前記システムが、ヒトＤＭＤ遺伝子のエクソン５１にそれぞれ隣接する第１および第２のイントロン中で第１および第２の二本鎖切断を形成することによってエクソン５１を含むジストロフィン遺伝子のセグメントを欠失させるように構成される、システム。
【請求項２】
前記セグメントが、約８００〜９００、約１５００〜２６００、約５２００〜５５００、約２０，０００〜３０，０００、約３５，０００〜４５，０００、または約６０，０００〜７２，０００塩基対の長さを有する、請求項１に記載のシステム。
【請求項３】
前記少なくとも１つのＣａｓ９分子が、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃａｓ９分子である、請求項１又は２に記載のシステム。
【請求項４】
前記少なくとも１つのＣａｓ９分子が、変異黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃａｓ９分子である、請求項３に記載のシステム。
【請求項５】
ウイルスベクターによりコードされる、請求項１〜４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項６】
前記ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項５に記載のシステム。
【請求項７】
第１のガイドＲＮＡ分子と、第２のｇＲＮＡ分子と、少なくとも１つのＣａｓ９分子とを含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムであって、前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子が、以下からなる群から選択されるシステム：
（ｉ）配列番号１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｉ）配列番号３に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｉｉ）配列番号４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｖ）配列番号６に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖ）配列番号７に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉ）配列番号６に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号８に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉｉ）配列番号９に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号１０に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉｉｉ）配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号１２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｘ）配列番号１３に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号１０に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｘ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｘｉ）配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号１０に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；ならびに
（ｘｉｉ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子；および配列番号１６に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子。
【請求項８】
前記少なくとも１つのＣａｓ９分子が、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃａｓ９分子である、請求項７に記載のシステム。
【請求項９】
前記少なくとも１つのＣａｓ９分子が、変異黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃａｓ９分子である、請求項８に記載のシステム。
【請求項１０】
ウイルスベクターによりコードされる、請求項７〜９のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項１１】
前記ベクターが、ＡＡＶベクターである、請求項１０に記載のシステム。
【請求項１２】
医薬品に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項１３】
デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のシステムを含む組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のシステムを含む細胞。
【請求項１６】
細胞中で変異ジストロフィン遺伝子を修正する方法であって、以下のうちの１つ以上を前記細胞に投与することを含む方法：
（ａ）第１のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）分子と、第２のｇＲＮＡ分子と、ＮＮＧＲＲＴ（配列番号２４）またはＮＮＧＲＲＶ（配列番号２５）のいずれかのＰＡＭを認識する少なくとも１つのＣａｓ９分子とを含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムであって、前記第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子のそれぞれが、１９〜２４ヌクレオチド長のターゲティングドメインを有し、かつ、前記システムが、ヒトＤＭＤ遺伝子のエクソン５１にそれぞれ隣接する第１および第２のイントロン中で第１および第２の二本鎖切断を形成することによってエクソン５１を含むジストロフィン遺伝子のセグメントを欠失させるように構成される、システム；または
（ｂ）第１のガイドＲＮＡ分子と、第２のｇＲＮＡ分子と、少なくとも１つのＣａｓ９分子とを含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムであって、前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子が、以下からなる群から選択されるシステム：
（ｉ）配列番号１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｉ）配列番号３に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｉｉ）配列番号４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｖ）配列番号６に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖ）配列番号７に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉ）配列番号６に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号８に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉｉ）配列番号９に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１０に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｖｉｉｉ）配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｘ）配列番号１３に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１０に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｘ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｘｉ）配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１０に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；ならびに
（ｘｉｉ）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１６に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子。
【請求項１７】
前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子が、
（ｉ）配列番号１に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；
（ｉｉ）配列番号３に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号２に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子；ならびに
（ｉｉｉ）配列番号９に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第１のｇＲＮＡ分子、および配列番号１０に記載のヌクレオチド配列を含むターゲティングドメインを含む第２のｇＲＮＡ分子
からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。