【手続補正書】
【提出日】令和2年3月19日(2020.3.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
改変Ｕ６プロモーター配列、少なくとも１つの非標的配列を含むｍｉＲＮＡの成熟ガイド鎖、及び５’末端に５〜６つのチミジンを含む、核酸分子。
【請求項２】
前記非標的配列が、ｍｉＲＮＡ−１２２またはｍｉＲＮＡ  ２０８の結合部位である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
前記改変Ｕ６プロモーター配列が、近位配列エレメント（ＰＳＥ）領域または遠位配列エレメント（ＤＳＥ）に少なくとも置換、挿入または欠失を含む、請求項１または２に記載の核酸分子。
【請求項４】
前記改変Ｕ６プロモーター配列が、ＰＳＥ配列中のヌクレオチド−６６のシトシンのチミジンへの置換、ヌクレオチド−５７のシトシンのチミジンへの置換、及びヌクレオチド−５２のチミジンのシトシンへの置換を含む、請求項１または２に記載の核酸分子。
【請求項５】
前記ｍｉＲＮＡの成熟ガイド鎖が、ｍｉＤＵＸ４、ｍｉＲＮ９２、ｍｉＲＮＡ−１７、ｍｉＲＮＡ−１８ａ、ｍｉＲＮＡ−１９ａ、ｍｉＲＮＡ−２０ａ、ｍｉＲＮＡ−１９ｂ−１、ｍｉ−ＲＮＡ−２６ａ、ｍｉＲＮＡ−１２６、ｍｉＲＮＡ−３３５、ｌｅｔ−７ａ  及びｌｅｔ−７ｂ、ｍｉＲＮＡ−３４、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲＮＡ−１０ｂ、ｍｉＲＮＡ−２０８、ｍｉＲＮＡ−４９９、ｍｉＲＮＡ−１９５、ｍｉＲＮＡ−２９ａ、ｍｉＲＮＡ−２９ｂ、またはｍｉＲＮＡ−２９ｃである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項６】
前記ｍｉＲＮＡの成熟ガイド鎖が、配列番号８４８２、配列番号８３７２、配列番号８３７１、配列番号８３７０、配列番号８３６７、配列番号８３６６、配列番号８３６５、配列番号８２１９、配列番号８２１８、配列番号８１５２、配列番号８１４７、配列番号８１４５、配列番号７３９７、配列番号７３９６、配列番号７３９５、配列番号７１０８、配列番号７１０７、配列番号７１０６、配列番号６６３３、配列番号６６３１、配列番号６６２２、配列番号６６１９、配列番号６６０９、配列番号６６０８、配列番号６５６８、配列番号６５６１、配列番号６５６０、配列番号１０９７１、または配列番号１０９７２のヌクレオチド配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項７】
前記ｍｉＲＮＡの成熟ガイド鎖がｍｉＤＵＸ４である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項８】
配列番号１、２、または１０９１３〜１０９６８のいずれか１つの核酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１０】
前記ベクターが、プラスミド、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ウマ随伴ウイルス、アルファウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、ポリオウイルス、シンドビスウイルス、またはワクシニアウイルスである、請求項９に記載のベクター。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む、組換えアデノ随伴ウイルス。
【請求項１２】
前記ＡＡＶが、ＡＡＶ６、ＡＡＶ  ｒｈ．７４、またはＡＡＶ−Ｂ１である、請求項１１に記載の組換えアデノ随伴ウイルス。
【請求項１３】
請求項９もしくは１０に記載のベクターまたは請求項１１もしくは１２に記載の組換えアデノ随伴ウイルスを含む、組成物。
【請求項１４】
細胞内の遺伝子の発現を阻害するための医薬の調製のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは請求項１３に記載の組成物の使用。
【請求項１５】
細胞内のＤＵＸ４遺伝子の発現を阻害するための医薬の調製のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは請求項１３に記載の組成物の使用。
【請求項１６】
ＤＵＸ４  ｍｉＲＮＡをコードするＤＮＡをそれを必要とする動物の骨格筋へ送達するための医薬の調製のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは請求項１３に記載の組成物の使用。
【請求項１７】
顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを治療するための医薬の調製のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは請求項１３に記載の組成物の使用。
【請求項１８】
前記医薬が、筋肉内注射、経皮輸送、または血流への注射のために製剤化される、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
細胞内の遺伝子の発現を阻害するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは請求項１３に記載の組成物を含む、組成物。
【請求項２０】
細胞内のＤＵＸ４遺伝子の発現を阻害するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは請求項１３に記載の組成物を含む、組成物。
【請求項２１】
ＤＵＸ４  ｍｉＲＮＡをコードするＤＮＡをそれを必要とする動物の骨格筋へ送達するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは請求項１３に記載の組成物を含む、組成物。
【請求項２２】
顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを治療するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは請求項１３に記載の組成物を含む、組成物。
【請求項２３】
前記組成物が、筋肉内注射、経皮輸送、または血流への注射のために製剤化される、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物が、筋肉内注射、経皮輸送、血流への注射または肝臓への注射によって投与される、請求項１９〜２２のいずれか一項の記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０７】
ベクター精製及び力価測定：清澄化した溶解物を、以前に記載されているように（Ｘｉａｏ，Ｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ  ７２：２２２４−３２）、イオジキサノール段階勾配精製に供した。４０％イオジキサノール層（ｒＡＡＶを含む）を無塩希釈緩衝液（ｐＨは血清型に応じて異なる）で５倍に希釈し、Ｈｉ−Ｔｒａｐ  ＨＰ−Ｑ／Ｓカラムに適用した。ＮａＣｌ塩勾配で溶出して、ピーク１ｍｌ画分（典型的には３〜５）をプールし、Ｔ２０Ｍ１Ｎ２００（ｐＨ８．０）で透析し、次いで、滅菌濾過し、０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８を補足した。ベクターは−８０℃で保存される。精製されたウイルスを、以前に記載されたように［Ｓｃｈｎｅｐｐ  ａｎｄ  Ｃｌａｒｋ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，６９：４２７−４４３（２００２）］、Ｑ−ＰＣＲを用いて、ｖｇについて力価測定した。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
改変Ｕ６プロモーター配列、少なくとも１つの非標的配列を含むｍｉＲＮＡの成熟ガイド鎖、及び５’末端に５〜６つのチミジンを含む、核酸分子。
(項目２)
前記非標的配列が、ｍｉＲＮＡ−１２２またはｍｉＲＮＡ  ２０８の結合部位である、項目１に記載の核酸分子。
(項目３)
前記改変Ｕ６プロモーター配列が、近位配列エレメント（ＰＳＥ）領域または遠位配列エレメント（ＤＳＥ）に少なくとも置換、挿入または欠失を含む、項目１または２に記載の核酸分子。
(項目４)
前記改変Ｕ６プロモーター配列が、ＰＳＥ配列中のヌクレオチド−６６のシトシンのチミジンへの置換、ヌクレオチド−５７のシトシンのチミジンへの置換、及びヌクレオチド−５２のチミジンのシトシンへの置換を含む、項目１または２に記載の核酸分子。
(項目５)
前記ｍｉＲＮＡの成熟ガイド鎖が、ｍｉＤＵＸ４、ｍｉＲＮ９２、ｍｉＲＮＡ−１７、ｍｉＲＮＡ−１８ａ、ｍｉＲＮＡ−１９ａ、ｍｉＲＮＡ−２０ａ、ｍｉＲＮＡ−１９ｂ−１、ｍｉ−ＲＮＡ−２６ａ、ｍｉＲＮＡ−１２６、ｍｉＲＮＡ−３３５、ｌｅｔ−７ａ  及びｌｅｔ−７ｂ、ｍｉＲＮＡ−３４、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲＮＡ−１０ｂ、ｍｉＲＮＡ−２０８、ｍｉＲＮＡ−４９９、ｍｉＲＮＡ−１９５、ｍｉＲＮＡ−２９ａ、ｍｉＲＮＡ−２９ｂ、またはｍｉＲＮＡ−２９ｃである、項目１〜４のいずれか１項に記載の核酸分子。
(項目６)
前記ｍｉＲＮＡの成熟ガイド鎖が、配列番号８４８２、配列番号８３７２、配列番号８３７１、配列番号８３７０、配列番号８３６７、配列番号８３６６、配列番号８３６５、配列番号８２１９、配列番号８２１８、配列番号８１５２、配列番号８１４７、配列番号８１４５、配列番号７３９７、配列番号７３９６、配列番号７３９５、配列番号７１０８、配列番号７１０７、配列番号７１０６、配列番号６６３３、配列番号６６３１、配列番号６６２２、配列番号６６１９、配列番号６６０９、配列番号６６０８、配列番号６５６８、配列番号６５６１、配列番号６５６０、配列番号１０９７１、または配列番号１０９７２のヌクレオチド配列を含む、項目１〜４のいずれか１項に記載の核酸分子。
(項目７)
前記ｍｉＲＮＡの成熟ガイド鎖がｍｉＤＵＸ４である、項目１〜４のいずれか１項に記載の核酸分子。
(項目８)
配列番号１、２、または１０９１３〜１０９６８のいずれか１つの核酸配列を含む、項目１〜４のいずれか１項に記載の核酸分子。
(項目９)
項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む、ベクター。
(項目１０)
前記ベクターが、プラスミド、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ウマ随伴ウイルス、アルファウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、ポリオウイルス、シンドビスウイルス、またはワクシニアウイルスである、項目９に記載のベクター。
(項目１１)
項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む、組換えアデノ随伴ウイルス。
(項目１２)
前記ＡＡＶが、ＡＡＶ６、ＡＡＶ  ｒｈ．７４、またはＡＡＶ−Ｂ１である、項目１１に記載の組換えアデノ随伴ウイルス。
(項目１３)
項目９もしくは１０に記載のベクターまたは項目１１もしくは１２に記載の組換えアデノ随伴ウイルスを含む、組成物。
(項目１４)
細胞内の遺伝子の発現を阻害する方法であって、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物と前記細胞を接触させることを含む、方法。
(項目１５)
細胞におけるＤＵＸ４遺伝子の発現を阻害する方法であって、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物と前記細胞を接触させることを含む、方法。
(項目１６)
ＤＵＸ４  ｍｉＲＮＡをコードするＤＮＡをそれを必要とする動物の骨格筋に送達する方法であって、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物を前記動物に投与することを含む、方法。
(項目１７)
顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを治療する方法であって、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物を投与することを含む、方法。
(項目１８)
前記組換えアデノ随伴ウイルスが、筋肉内注射、経皮輸送、血流への注射、または肝臓への注射によって投与される、項目１４〜１７のいずれか１項に記載の方法。
(項目１９)
細胞内の遺伝子の発現を阻害するための医薬の調製のための、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物の使用。
(項目２０)
細胞内のＤＵＸ４遺伝子の発現を阻害するための医薬の調製のための、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物の使用。
(項目２１)
ＤＵＸ４  ｍｉＲＮＡをコードするＤＮＡをそれを必要とする動物の骨格筋へ送達するための医薬の調製のための、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物の使用。
(項目２２)
顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを治療するための医薬の調製のための、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物の使用。
(項目２３)
前記医薬が、筋肉内注射、経皮輸送、または血流への注射のために製剤化される、項目１９〜２２のいずれか１項に記載の使用。
(項目２４)
細胞内の遺伝子の発現を阻害するための、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物を含む、組成物。
(項目２５)
細胞内のＤＵＸ４遺伝子の発現を阻害するための、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物を含む、組成物。
(項目２６)
ＤＵＸ４  ｍｉＲＮＡをコードするＤＮＡをそれを必要とする動物の骨格筋へ送達するための、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物を含む、組成物。
(項目２７)
顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを治療するための、項目１〜８のいずれか１項に記載の核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルスまたは項目１３に記載の組成物を含む、組成物。
(項目２８)
前記組成物が、筋肉内注射、経皮輸送、または血流への注射のために製剤化される、項目２４〜２７のいずれか１項に記載の組成物。