【手続補正書】
【提出日】令和2年9月18日(2020.9.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
消化器管の管腔に３−ヒドロキシブチレート(３−ＨＢ)を送達するための、３−ＨＢを産生する遺伝子操作された嫌気性細菌および経口摂取可能担体を含む、組成物。
【請求項２】
遺伝子操作された嫌気性細菌が(Ｒ)−３−ヒドロキシブチレート((Ｒ)−３−ＨＢ)を産生する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
細菌が(Ｒ)−３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼを発現できる非天然遺伝子を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
細菌がブチレートを天然に産生する、請求項１〜３の何れかに記載の組成物。
【請求項５】
細菌がクロストリジウム綱細菌であり、所望によりク細菌がロストリジウム綱の分類群Ｉ、IVおよび／またはXIVａのものであり、所望によりク細菌がクロストリジウム属由来であり、所望により細菌がクロストリジウム・ブチリクムである、請求項１〜４の何れかに記載の組成物。
【請求項６】
細菌がホスホトランスブチリラーゼおよび／または酪酸キナーゼをコードする天然遺伝子を有する、請求項１〜５の何れかに記載の組成物。
【請求項７】
細菌が唯一の発酵産物として(Ｒ)−３−ヒドロキシブチレートを産生する、または細菌が発酵産物として(Ｒ)−３−ヒドロキシブチレートをアセテートおよび／またはブチレートと組み合わせて産生する、請求項１〜６の何れかに記載の組成物。
【請求項８】
医薬として使用するための薬学的に許容される担体を含む、請求項１〜７の何れかに記載の組成物。
【請求項９】
対象における炎症性疾患、障害または状態の処置または予防のための、請求項１〜８の何れかに記載の組成物。
【請求項１０】
消化器障害の処置または予防のための、所望により消化器障害が炎症性腸疾患または結腸癌であり、炎症性腸疾患が過敏性腸症候群、クローン病、嚢炎、憩室炎および潰瘍性大腸炎から選択される、請求項１〜９の何れかに記載の組成物。
【請求項１１】
組成物が経口投与用である、請求項８〜１０の何れかに記載の組成物。
【請求項１２】
組成物が３−ＨＢを大腸、好ましくは大腸の嫌気性部分、好ましくは結腸および／または末端回腸に送達する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
ａ)消化器細菌叢異常の処置；
ｂ)クロストリジウム・ディフィシル感染の処置または予防
ｃ)対象における腸内細菌叢の調節または
ｄ)動物給餌
に使用するための、請求項１〜７の何れかに記載の組成物。
【請求項１４】
食品において使用するためであって、食品が飲料、飲み物、栄養補助食品または機能性食品である、請求項１〜７の何れかに記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９７】
実施例８  −  胃および小腸条件における生存評価
ＣＨＮ−１の胞子を１mL  ＰＢＳに再懸濁し、ｇ／Ｌでアラビノガラクタン、１、ペクチン、２、キシラン、１、デンプン、３、グルコース、０.４、酵母抽出物、３、ペプトン、１、ムチン、４、システイン、０.５およびペプシン、１を含む９mLの模擬胃培地(ＧＳＭ)に接種した。培地をオートクレーブ前に１Ｍ  ＨＣｌを使用してｐＨ３に調節した。ＧＳＭ培養を、嫌気性に、３７℃で１００rpmで撹拌しながら２時間インキュベートし、その後、ｇ／Ｌでパンクレアチン、３、脱水胆汁抽出物、８、重炭酸ナトリウム、１０を含む、５mLの予還元膵臓胆汁を添加した。培養を、嫌気性に、３７℃で５０rpmで撹拌しながら４時間インキュベートした。ＧＳＭは予還元しなかったが、胃で遭遇する好気性条件およびその後の嫌気性インキュベーションによる消化管の移動により遭遇する酸素減少を模倣するために、キャビネットに移す前に３７℃で保存した。サンプルをインキュベーションのｔ＝０時間、２時間、４時間および６時間に取った。サンプルを連続的に希釈し、ＲＣＭ寒天プレート上に３つの個別の２０μLスポットを植種した。プレートを嫌気性に３７℃で一夜インキュベートし、コロニーをカウントして、胃および小腸条件における胞子の生存能を評価した。
図２１は、ＣＨＮ−１の胞子が胃酸条件を生き残り、故に生存可能であることを示す。
さらに、本発明は次の態様を包含する。
項１
対象における炎症性疾患、障害または状態を処置する方法において使用するための、３−ヒドロキシ酪酸(３−ＨＢ)またはその塩。
項２
３−ＨＢの少なくとも約９０％が(Ｒ)−異性体((Ｒ)−３−ＨＢ)である、項１に記載の３−ＨＢ。
項３
対象における炎症性疾患、障害または状態を処置する方法において使用するための、３−ＨＢまたはその塩を含む医薬組成物。
項４
組成物が３−ＨＢまたはその塩を胃腸管、好ましくは胃腸管の管腔に送達するように製剤されている、項３に記載の使用のための医薬組成物。
項５
対象における炎症性疾患、障害または状態を処置する方法において使用するための医薬組成物であって、ここで、組成物は３−ＨＢ送達手段を含み、方法が３−ＨＢ送達手段の胃腸管の管腔への送達を含む、医薬組成物。
項６
３−ＨＢ送達手段がプロドラッグまたは３−ＨＢを胃腸管の管腔に送達するための生物学的送達系である、項５に記載の使用のための医薬組成物。
項７
生物学的送達系が３−ＨＢを産生する嫌気性細菌からなる、項６に記載の使用のための医薬組成物。
項８
嫌気性細菌が遺伝子操作されている、項７に記載の使用のための医薬組成物。
項９
嫌気性細菌が(Ｒ)−３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼを発現できる非天然遺伝子を含むブチレート産生細菌である、項８に記載の使用のための医薬組成物。
項１０
嫌気性細菌が偏性嫌気性菌、好ましくはクロストリジウム・ブチリクムを形成する胞子である、項９に記載の使用のための医薬組成物。
項１１
３−ＨＢの少なくとも約９０％が(Ｒ)−異性体((Ｒ)−３−ＨＢ)である、項３〜１０の何れかに記載の使用のための医薬組成物。
項１２
医薬組成物が放出調節のために製剤されている、項３〜１１の何れかに記載の使用のための医薬組成物。
項１３
医薬組成物が経口投与用である、項５〜１２の何れかに記載の使用のための医薬組成物。
項１４
医薬組成物が３−ＨＢまたはその塩または送達手段を含むコアを囲む放出調節層またはコーティングを含む、項１３に記載の使用のための医薬組成物。
項１５
医薬組成物が約５.５〜約７のｐＨで３−ＨＢまたはその塩または送達手段を胃腸管に送達するように製剤されている、項１３または項１４に記載の使用のための医薬組成物。
項１６
医薬組成物が食後経口投与５〜２４時間後に３−ＨＢまたはその塩または送達手段を胃腸管に送達するように製剤されている、項１３または項１４に記載の使用のための医薬組成物。
項１７
医薬組成物が３−ＨＢまたはその塩または送達手段を大腸、好ましくは大腸の嫌気性部分、好ましくは結腸および／または末端回腸に送達するように製剤されている、項１３〜１６の何れかに記載の使用のための医薬組成物。
項１８
対象がヒトである、項１もしくは項２に記載の使用のための３−ＨＢまたは項３〜１７の何れかに記載の使用のための医薬組成物。
項１９
炎症性疾患、障害または状態が炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、好ましくはクローン病または潰瘍性大腸炎、または結腸直腸癌である、項１もしくは項２に記載の使用のための３−ＨＢまたは項３〜１８の何れかに記載の使用のための医薬組成物。
項２０
対象における炎症性疾患、障害または状態を処置する方法であって、対象に
ａ) ３−ヒドロキシ酪酸(３−ＨＢ)またはその塩；
ｂ) ３−ＨＢまたはその塩を含む医薬組成物；および／または
ｃ) ３−ＨＢ送達手段を含む医薬組成物
を投与することを含む、方法。
項２１
実質的にここに記載する３−ヒドロキシ酪酸(３−ＨＢ)または医薬組成物。
項２２
(Ｒ)−３−ヒドロキシブチレートを産生する遺伝子操作された嫌気性細菌および経口摂取可能担体を含む、組成物。
項２３
細菌が(Ｒ)−３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼを発現できる非天然遺伝子を含む、項２２に記載の組成物。
項２４
細菌がクロストリジウム綱細菌である、項２２または項２３に記載の組成物。
項２５
細菌がクロストリジウム綱の分類群Ｉ、IVおよび／またはXIVａのものである、項２２〜２４の何れかに記載の組成物。
項２６
細菌がクロストリジウム属由来である、項２２〜２５の何れかに記載の組成物。
項２７
細菌がクロストリジウム・ブチリクムである、項２２〜２６の何れかに記載の組成物。
項２８
細菌がホスホトランスブチリラーゼおよび／または酪酸キナーゼをコードする天然遺伝子を有する、項２２〜２７の何れかに記載の組成物。
項２９
細菌が唯一の発酵産物として(Ｒ)−３−ヒドロキシブチレートを産生する、項２２〜２８の何れかに記載の組成物。
項３０
細菌が発酵産物として(Ｒ)−３−ヒドロキシブチレートをアセテートおよび／またはブチレートと組み合わせて産生する、項２２〜２９の何れかに記載の組成物。
項３１
医薬として使用するための薬学的に許容される担体を含む、項２２〜３０の何れかに記載の組成物。
項３２
消化器障害の処置または予防に使用するための、項２２〜３１の何れかに記載の組成物。
項３３
消化器障害が炎症性腸疾患または結腸癌である、項３２に記載の組成物。
項３４
炎症性腸疾患が過敏性腸症候群、クローン病、嚢炎、憩室炎および潰瘍性大腸炎から選択される、項３３に記載の組成物。
項３５
消化器細菌叢異常の処置に使用するための、項２２〜３１の何れかに記載の組成物。
項３６
クロストリジウム・ディフィシル感染の処置または予防に使用するための、項２２〜３１の何れかに記載の組成物。
項３７
対象における腸内細菌叢の調節に使用するための、項２２〜３１の何れかに記載の組成物。
項３８
動物給餌に使用するための、項２２〜３１の何れかに記載の組成物。
項３９
カプセル、錠剤または粉末の形態である、項２２〜３１の何れかに記載の組成物。
項４０
食品において使用するための、項２２〜３０の何れかに記載の組成物。
項４１
食品が飲料、飲み物、栄養補助食品または機能性食品である、項４０に記載の組成物。
項４２
クロストリジウム種が胞子または栄養細胞の形態である、項２２〜４１の何れかに記載の組成物。
項４３
クロストリジウム種が１×１０６〜１×１０１０ＣＦＵ／組成物ｇの量で存在し得る、項２２〜４２の何れかに記載の組成物。
項４４
(Ｒ)−３−ヒドロキシブチレートを産生する遺伝子操作された嫌気性細菌を投与することを含む、消化器疾患または障害を処置または予防する方法。
項４５
(Ｒ)−３−ヒドロキシブチレートを産生する遺伝子操作された嫌気性細菌を投与することを含む、消化器細菌叢異常を処置または予防する方法。
項４６
(Ｒ)−３−ヒドロキシブチレートを産生する遺伝子操作された嫌気性細菌を投与することを含む、クロストリジウム・ディフィシル感染を処置または予防する方法。
項４７
(Ｒ)−３−ヒドロキシブチレートを産生する遺伝子操作された嫌気性細菌を投与することを含む、対象における腸内細菌叢を調節する方法。
項４８
動物に該細菌を含む餌または餌添加物を投与することを含む、項４７に記載の方法。
項４９
細菌がクロストリジウム綱である、項４２〜４８の何れかに記載の方法。
項５０
細菌が(Ｒ)−３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼを発現できる非天然遺伝子を含む、項４２〜４９の何れかに記載の方法。
項５１
細菌を経口で投与することを含む、項４２〜５０の何れかに記載の方法。
項５２
さらにプレバイオティックを含む、項４２〜５１の何れかに記載の方法。