【手続補正書】
【提出日】令和2年10月28日(2020.10.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１の核酸配列を含むかもしくはそれからなるか、または配列番号１の前記配列と少なくとも８０％の同一性を有する少なくとも４００ｂｐの核酸配列からなる単離された核酸分子。
【請求項２】
方向選択性網膜神経節細胞における遺伝子の発現を、前記遺伝子をコードする核酸配列が前記単離された核酸分子に機能的に連結される場合にもたらす、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
配列番号１の核酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
最小プロモーターをさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
前記最小プロモーターが、配列番号２の核酸配列を含む、請求項４に記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離された核酸を含む発現カセットであって、前記単離された核酸は、遺伝子をコードする少なくとも核酸配列に機能的に連結される、発現カセット。
【請求項７】
請求項６に記載の発現カセットを含むベクター。
【請求項８】
前記ベクターは、ウイルスベクターである、請求項７に記載のベクター。
【請求項９】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項８に記載のベクター。
【請求項１０】
方向選択性網膜神経節細胞内で遺伝子を発現させるための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離された核酸、請求項６に記載の発現カセットまたは請求項７〜９のいずれか１項に記載のベクターの使用。
【請求項１１】
方向選択性網膜神経節細胞内で遺伝子を発現させる方法であって、単離された細胞、細胞系または細胞集団を請求項６に記載の発現カセットでトランスフェクトする工程を含み、前記遺伝子は、前記細胞が方向選択性網膜神経節であるか、または前記細胞系または細胞集団が方向選択性網膜神経節を含む場合、前記単離された細胞、前記細胞系または前記細胞集団によって発現される、方法。
【請求項１２】
請求項６に記載の発現カセットまたは請求項７〜９のいずれか１項に記載のベクターを含む単離された細胞。
【請求項１３】
前記発現カセットまたはベクターは、前記細胞のゲノム内に安定的に組み込まれる、請求項１２に記載の単離された細胞。
【請求項１４】
前記遺伝子の産物は、光感受性分子である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離された核酸分子、請求項６に記載の発現カセット、請求項７〜９のいずれか１項に記載のベクター、請求項１０に記載の使用、請求項１１に記載の方法または請求項１２もしくは１３に記載の細胞。
【請求項１５】
前記光感受性分子は、ハロロドプシンまたはチャネルロドプシンである、請求項１４に記載の単離された核酸分子、発現カセット、ベクター、使用、方法または細胞。
【請求項１６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離された核酸分子を含む、方向選択性網膜神経節細胞内で遺伝子を発現させるためのキット。
【請求項１７】
ニードル、シリンジ、および／または、単離された核酸分子または薬学的に許容されるその調製物を投与するための取扱説明書をさらに含む、請求項１６に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０３】
ウイルストランスフェクションおよび組織製剤
ＡＡＶ投与のために、麻酔下の動物の眼に先の尖った３０ゲージのニードルによって水晶体に近い強膜内に穿刺した。Ｈａｍｉｌｔｏｎシリンジによって網膜下に２μＬのＡＡＶ粒子懸濁液を注射した。３週間後、単離された網膜を３０分間にわたりＰＢＳ中の４％のＰＦＡ中で固定し、４℃でＰＢＳ中での洗浄工程を続けた。全網膜は、室温で１時間にわたり１０％の標準ロバ血清（ＮＤＳ）、１％のＢＳＡ、ＰＢＳ中の０．５％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００により処置した。ＰＢＳ中の３％のＮＤＳ、１％のＢＳＡ、０．５％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中のモノクローナルのラット抗ＧＦＰ抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社；１：５００）およびポリクローナルのウサギ抗マウス椎体アレスチン抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社：１：２００）を用いる処置を室温で５日間にわたり実施した。二次ロバ抗ラットＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−４８８抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社；１：２００）、抗ウサギＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−６３３およびＨｏｅｃｈｓｔを用いた処置は、２時間にわたり実施した。切片を洗浄し、スライドガラス上にＰｒｏＬｏｎｇ  Ｇｏｌｄ退色防止試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社）とともに載せ、Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ  ７００  ＡｘｉｏイメージャーＺ２レーザー走査型共焦点顕微鏡（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ社）を使用して撮影した。
以下の態様が包含され得る。
［１］  配列番号１の核酸配列を含むかもしくはそれからなるか、または配列番号１の前記配列と少なくとも８０％の同一性を有する少なくとも４００ｂｐの核酸配列からなる単離された核酸分子であって、方向選択性網膜神経節細胞における遺伝子の特異的発現を、前記遺伝子をコードする核酸配列が前記単離された核酸分子に機能的に連結される場合にもたらす、単離された核酸分子。
［２］  最小プロモーター、例えば配列番号２の前記最小プロモーターをさらに含む、上記［１］に記載の単離された核酸分子。
［３］  ストリンジェントな条件下において、上記［１］または［２］に記載の単離された核酸分子にハイブリダイズする配列を含む単離された核酸分子。
［４］  特定の細胞内での遺伝子発現を促進するエレメントとして、上記［１］または［２］に記載の単離された核酸を含む発現カセットであって、前記単離された核酸は、方向選択性網膜神経節細胞において特異的に発現される遺伝子をコードする少なくとも核酸配列に機能的に連結される、発現カセット。
［５］  上記［４］に記載の発現カセットを含むベクター。
［６］  前記ベクターは、ウイルスベクターである、上記［５］に記載のベクター。
［７］  方向選択性網膜神経節細胞内で遺伝子を発現させるための、上記［１］もしくは［２］に記載の核酸、上記［４］に記載の発現カセットまたは上記［５］に記載のベクターの使用。
［８］  方向選択性網膜神経節細胞内で遺伝子を発現させる方法であって、単離された細胞、細胞系または細胞集団を上記［４］に記載の発現カセットでトランスフェクトする工程を含み、前記発現される遺伝子は、前記細胞が方向選択性網膜神経節であるか、または前記細胞が方向選択性網膜神経節を含む場合、前記単離された細胞、前記細胞系または前記細胞集団によって特異的に発現される、方法。
［９］  上記［４］に記載の発現カセットまたは上記［５］に記載のベクターを含む単離された細胞。
［１０］  前記発現カセットまたはベクターは、前記細胞のゲノム内に安定的に組み込まれる、上記［９］に記載の細胞。
［１１］  前記遺伝子の産物は、光感受性分子、例えばハロロドプシンまたはチャネルロドプシンである、上記［１］もしくは［２］に記載の単離された核酸分子、上記［４］に記載の発現カセット、上記［５］に記載のベクター、上記［７］に記載の使用、上記［８］に記載の方法または上記［９］に記載の細胞。
［１２］  上記［１］または［２］に記載の単離された核酸分子を含む、方向選択性網膜神経節細胞内で遺伝子を発現させるためのキット。