【手続補正書】
【提出日】令和2年11月2日(2020.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０２】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐの単回皮下用量を投与されたヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおける血清トリグリセリド（１Ａ）および全コレステロール（１Ｂ）濃度の平均＋／−ＳＥＭ。投与された用量は研究０日目に１、５、１０、または２５ｍｇ／ｋｇであった。統計的比較は対照Ａｂからの差の二元配置分散分析により行った。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図２】図２は１、５、１０、または２５ｍｇ／ｋｇの用量でのＨ４Ｈ１５３４１Ｐの一回皮下用量の投与後の循環抗ヒト抗体のレベルを示している。
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、対照抗体と比べたＡＮＧＰＴＬ８マウスにおける血清リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）（３Ａ）および肝性リパーゼ（３Ｂ）に対するＨ４Ｈ１５３４１Ｐ  ｍＡｂの効果を示している。統計は対応のないスチューデントｔ検定により行った；＊＊ｐ＜０．０１。
【図４】図４は、ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおける脂質負荷試験でのｍＡｂ  Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐの効果を示している。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ  ｍＡｂの投与は、対照抗体と比べた急性脂肪負荷後のトリグリセリドレベルの低下について評価した。統計はボンフェローニの事後検定を用いた二元配置分散分析により行った；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図５−１】図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、および５Ｆは、ｍＡｂ  Ｈ４Ｈ１５３４１ＰがＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいて血清トリグリセリドを低減することを示している。血清サンプルは非絶食オスＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウス（ｎ＝５／群）から７日前に（ベースライン）およびＨ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体の単回皮下注射（１０ｍｇ／ｋｇ）に続く指定された日に収集した。血清トリグリセリド（５Ａ）およびコレステロール（５Ｂ）は酵素的に測定した。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体を用いた処置の７日後に収集されたそれぞれのマウス由来の血清（２０μｌ）はＨＰＬＣによりサイズ分画した。トリグリセリド（５Ｃ）およびコレステロール（５Ｄ）はそれぞれの画分で測定した。（５Ｅ）ヒトＡＮＧＰＴＬ８の全（遊離プラス抗体結合）血清レベルはＥＬＩＳＡにより測定した。（５Ｆ）固形飼料給餌のＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおけるＨ４Ｈ１５３４１Ｐによる血清トリグリセリドの用量依存性低下は、抗体投与の７および１４日後に測定した。値は平均値のみが示されるクロマトグラムを除いて平均±ＳＥＭである。統計解析はサイダックの補正事後検定を用いて二元配置分散分析により行った；＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図５−２】図５−１の続き。
【図６】図６Ａおよび６Ｂ。Ｈ４Ｈ１５３４１ＰはＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいてＬＰＬ活性を増加しトリグリセリドクリアランスを改善する。（６Ａ）Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体を用いて処置した固形飼料給餌のＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウス（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝５／群）のヘパリン後血漿ＬＰＬおよびＨＬ活性。ヘパリン後血漿はプールし、ヘパリンカラム上で分画して、ＨＬとＬＰＬを分離し、トリグリセリドヒドロラーゼ活性を測定した。（６Ｂ）脂質負荷試験に続く血漿トリグリセリドレベルに対するＨ４Ｈ１５３４１Ｐ処置の効果。オスＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスは、イントラリピッド（２．５μｌ／ｇの２０％イントラリピッド）の静脈内投与の４日前にＨ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体を用いて処置した（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝５／群）。値は平均±ＳＥＭである。統計解析はウェルチのｔ検定（Ａ）およびボンフェローニの事後検定を用いた反復測定二元配置分散分析（Ｂ）により行った。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。ＨＬ＝肝性リパーゼ、ＬＰＬ＝リポタンパク質リパーゼ。
【図７−１】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、および７Ｇ。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐを多回投与するとＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいて血清トリグリセリド、体重および脂肪含量を低減し、エネルギー消費を増やす。血清サンプルは、非絶食状態のオスＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウス（ｎ＝８／群、生後７週間）から収集した。その後、マウスは高脂肪、高コレステロールの食事（ＨＦＨＣ）をさせた。７日後、マウスはＨ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）の毎週皮下注射を受けた。血清サンプルはそれぞれの注射の非絶食６日後に収集した。ＴＧの変化は研究の経過にわたり測定した（７Ａ）。体重は毎週モニターした（７Ｂ）。身体組成は１５週目に測定した（７Ｃ）。呼吸交換率（ＲＥＲ）（７Ｄ）、エネルギー消費（７Ｅ）、食物摂取量（７Ｆ）および自発運動活性（７Ｇ）はＨ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照抗体処置マウスにおいて明暗周期中に測定した。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計解析はおよびボンフェローニの補正事後検定を用いた反復測定二元配置分散分析（７Ａおよび７Ｂ）またはウェルチのｔ検定（７Ｃ〜７Ｇ）により行った。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図７−２】図７−１の続き。
【図８−１】図８Ａ、８Ｂ、８Ｃ、８Ｄ、８Ｅ、および８Ｆ。自然発生高トリグリセリド血症のカニクイザルにＨ４Ｈ１５３４１Ｐを単回投与すると、血漿トリグリセリドが減少し、ＨＤＬ−Ｃが増加する。ベースライン血清サンプルは、非絶食動物から−１５、−７および０日目に収集した。１８頭のサルを３つの群に分けＨ４Ｈ１５３４１Ｐ（３、７または１０ｍｇ／ｋｇ）を投与した。生理食塩水は６頭のサルに投与した。血清サンプルは複数日に収集し、トリグリセリド（８Ａ）、ＨＤＬ−Ｃ（８Ｂ）およびＬＤＬ−Ｃ（８Ｃ）について分析し、ベースラインからのパーセンテージ変化としても表した：トリグリセリド（８Ｄ）、ＨＤＬ−Ｃ（８Ｅ）およびＬＤＬ−Ｃ（８Ｆ）。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計はサイダックの事後検定を用いて反復測定二元配置分散分析により実施した；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図８−２】図８−１の続き。
【図８−３】図８−２の続き。
【図９】図９Ａおよび９Ｂ。ｈＡＮＧＰＴＬ８−ｍＦｃおよびｍｆＡＮＧＰＴＬ８−ｍＦｃへのＨ４Ｈ１５３４１Ｐ結合についてのセンサーグラム。約３０ＲＵのｈＡＮＧＰＴＬ８−ｍＦｃ（９Ａ）およびｍｆＡＮＧＰＴＬ８−ｍＦｃ（９Ｂ）を先ずヤギ抗マウスＩｇＧ２ａポリクローナル抗体固定化ＨＣＡ表面で捕捉した。ＨＢＳ−ＥＴランニングバッファーで３倍に連続希釈した異なる濃度のＨ４Ｈ１５３４１Ｐを後に４分間注射し、１０分間の解離工程が続いた。結合センサーグラムは黒色で示され、動態学値を計算するための作成されたグローバルフィットは灰色で示されている。結合データを適合させるのに使用される最高抗原濃度も提供され、動態学解析の結果は表２０に作表している。
【図１０】図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、および１０Ｄ。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照抗体処置ＨＦＨＣ給餌ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスの代謝パラメータ。循環脂質レベルは、オスＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスおよびその野生型同腹仔から収集した血清から評価した。（１０Ａ）全コレステロール、（１０Ｂ）トリグリセリド、（１０Ｃ）ＬＤＬ−Ｃ、および（１０Ｄ）ＨＤＬ−Ｃが示されている。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計解析はウェルチのｔ検定により行った。＊ｐ＜０．０１。
【図１１−１】図１１Ａ、１１Ｂ、１１Ｃ、および１１Ｄ。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐを多回投与すると、ＨＦＨＣ給餌ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいてエネルギー消費、Ｏ２消費、およびＣＯ２生成が増加する。Ｏ２消費（１１Ａ）およびＣＯ２生成（１１Ｂ）の変化を、図７Ａ〜７Ｇに記載される研究においてＨ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照抗体処置マウスで明暗周期中に評価した。共分散分析を使用して、図１１Ｃに記載される研究において、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照抗体処置マウスについてエネルギー消費と体重の間の相関関係を示している明暗周期中散布図として、ならびに０．０３６８８ｋｇの調整平均体重について明暗周期中の調整平均エネルギー消費として（１１Ｄ）表される間接的熱量測定。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計解析はウェルチのｔ検定により行った。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図１１−２】図１１−１の続き。
【図１２−１】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、および１２Ｆ。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照ａｂ処置ＨＦＨＣ給餌ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスの代謝パラメータ。データは、ＶＯ２（１２Ａ）、ＶＣＯ２（１２Ｂ）、呼吸商（ＲＥＲ）（１２Ｃ）、食物摂取量（１２Ｅ）、エネルギー消費（１２Ｄ）、および自発運動活性（１２Ｆ）について明暗周期中の７２時間にわたる連続測定値として表す。群はすべて８頭の動物を有する。値は平均±ＳＥＭである。
【図１２−２】図１２−１の続き。
【図１２−３】図１２−２の続き。
【図１３−１】図１３Ａ、１３Ｂ、１３Ｃ、１３Ｄ、１３Ｅ、１３Ｆ、および１３Ｇ。ＨＦＨＣ食事で維持されたＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスへのＨ４Ｈ１５３４１Ｐ毎週投与は、体温にも組織ＴＧ貯蔵にも何の効果を及ぼさなかった。体温は、ＨＦＨＣ給餌ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスへのＨ４Ｈ１５３４１Ｐの１０週間の多回注射後直腸プローブを使用して評価した（１３Ａ）。肝臓（１３Ｂ）、心臓（１３Ｃ）、腓腹筋（ＧＡ筋）（１３Ｄ）、精巣上体白色脂肪組織（ｅｐｉＷＡＴ）（１３Ｅ）、皮下白色脂肪組織（ｓｃＷＡＴ）（１３Ｆ）、および褐色脂肪組織（ＢＡＴ）（１３Ｇ）のＴＧ含有量は研究の終了時に測定した。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計解析はウェルチのｔ検定により行った。
【図１３−２】図１３−１の続き。
【図１４−１】図１４Ａ、１４Ｂ、および１４Ｃ。ＨＦＨＣ食餌で維持されたＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスへのＨ４Ｈ１５３４１Ｐ毎週投与は、血糖管理に何の効果も及ぼさなかった。非絶食グルコースの変化（１４Ａ）は図７Ａ〜７Ｇに記載される研究において複数の時点で評価した。グルコース負荷（１４Ｂ）およびインスリン負荷（１４Ｃ）試験はそれぞれ抗体の９および１０の多回用量後に行った。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計解析はおよびボンフェローニの事後検定を用いた反復測定二元配置分散分析により行った。
【図１４−２】図１４−１の続き。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において体重の減少を達成するための方法で使用するための、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤を含む医薬組成物であって、前記ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であり、前記方法は前記対象に前記医薬組成物を投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、前記医薬組成物。
【請求項２】
対象において体脂肪量の低減を達成するための方法で使用するための、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤を含む医薬組成物であって、前記ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であり、前記方法は前記対象に前記医薬組成物を投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、前記医薬組成物。
【請求項３】
対象においてエネルギー消費を増加するための方法で使用するための、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤を含む医薬組成物であって、前記ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であり、前記方法は前記対象に前記医薬組成物を投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、前記医薬組成物。
【請求項４】
対象においてＨＤＬ−Ｃを増加するための方法で使用するための、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤を含む医薬組成物であって、前記ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であり、前記方法は前記対象に前記医薬組成物を投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、前記医薬組成物。
【請求項５】
ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１６２／１７０または３１４／３２２に示される重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列対を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号１６４／１６６／１６８／１７２／１７４／１７６または３１６／３１８／３２０／３２４／３２６／３２８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３ドメインを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記対象における循環トリグリセリド（ＴＧ）が、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤の前記投与１日後、少なくとも５０％低減される、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項８】
肥満に関連する状態または疾患、または前記状態または疾患に関連する少なくとも１つの症状または合併症を処置するための方法で使用するための、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤を含む医薬組成物であって、前記ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であり、前記方法はそれを必要とする患者に前記医薬組成物を投与することを含み、それにより、前記状態または疾患が治療される、または前記状態または疾患に関連する少なくとも１つの症状または合併症が軽減されるかもしくはその頻度または重症度が低減される、前記医薬組成物。
【請求項９】
第２の治療薬の投与をさらに含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
第２の治療薬が、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様タンパク質４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様タンパク質５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様タンパク質６（ＡＮＧＰＴＬ６）、ヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片からなる群から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
第２の治療薬が、インスリン、ビグアナイド（メトホルミン）、スルホニル尿素（例えば、グリブリド、グリピジド）、ＰＰＡＲガンマアゴニスト（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、アルファグルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ボグリボース）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）アゴニスト（例えば、ＢＹＥＴＴＡ（登録商標）（エキセナチド）、ＴＲＵＬＩＣＩＴＹ（商標）（デュラグルチド）、ＶＩＣＴＯＺＡ（登録商標）（リラグルチド）、ＬＹＸＵＭＩＡ（登録商標）（リキシセナチド）、ＴＡＮＺＥＵＭ（商標）（アルビグルチド）、または前述のもののいずれかの類似体、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−４）阻害剤（例えば、サキサグリプチン（ＯＮＧＬＹＺＡ（登録商標））、シタグリプチン（ＪＡＮＵＶＩＡ（登録商標））、およびビルダグリプチン（ＧＡＬＶＵＳ（登録商標））、ナトリウムグルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤（例えば、ＩＮＶＯＫＡＮＡ（商標）（カナグリフロジン）、ＦＯＲＸＩＧＡ（登録商標）（ダパグリフロジン）、エンパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン）、ＳＹＭＬＩＮ（登録商標）（プラムリンチド）、グルカゴン受容体アンタゴニスト、非スルホニル尿素分泌促進物質、インスリン類似体（例えば、速効性リスプロ、アスパルト、グルリジンおよび持効性、デテミルインスリン、デグルデクインスリン、またはグラルギンインスリン）、エキセンディン−４ポリペプチド、ベータ３アドレノセプターアゴニスト、コレステロール取込みおよび／または胆汁酸再吸収の阻害剤、ＬＤＬ−コレステロールアンタゴニスト、コレステリルエステル輸送タンパク質アンタゴニスト（例えば、トルセトラピブ、アナセトラピブ、ダルセトラピブ、またはエバセトラピブ）、エンドセリン受容体アンタゴニスト、成長ホルモンアンタゴニスト、インスリン感受性改善薬、アミリン模倣物またはアゴニスト、カンナビノイド受容体アンタゴニスト、メラノコルチン、メラニン凝集ホルモン受容体アゴニスト、ＳＮＲＩ、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ２１）模倣物、線維芽細胞成長因子受容体１ｃ（ＦＧＦＲ１ｃ）アゴニスト、最終糖化産物形成の阻害剤（例えば、アミノグアニジン）、およびタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤からなる群から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。