【手続補正書】
【提出日】令和2年10月16日(2020.10.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管症を治療または予防するために用いる医薬組成物であって、
（ｉ）間葉系幹細胞（ＭＳＣ）と接触させた、前記ＭＳＣの１種または複数の成分を含む培養培地の一部、または（ｉｉ）ＭＳＣ由来のエクソソームを含み、
前記ＭＳＣは、ｅｘ  ｖｉｖｏでプロスタサイクリンに曝露されており、前記プロスタサイクリンへの曝露が、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣと比較して、前記ＭＳＣにおける１種または複数の抗炎症性因子の発現を増加させ、かつ／または１種または複数の炎症誘発性因子の発現を減少させる、医薬組成物。
【請求項２】
前記ＭＳＣが、０．３μｇ／ｍＬ〜８３．３μｇ／ｍＬのプロスタサイクリンを含む組成物に曝露されている、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記プロスタサイクリンが、トレプロスチニル、その誘導体または塩である、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに少なくとも２４時間、又は少なくとも４８時間曝露される、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記血管症が、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、冠動脈疾患、および糖尿病性血管症からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ＭＳＣが、増殖後に前記プロスタサイクリンに曝露される、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣと比較して、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の発現レベルを減少させている、前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣと比較して、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＨＬＡ、およびＴＧＦβからなる群から選択される１種または複数の抗炎症性因子の発現レベルを増加させている、前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣの発現レベルより少なくとも５０％低いＴＮＦαの発現レベルを有する、あるいは、前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣの発現レベルより少なくとも５０％高いＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＨＬＡ、およびＴＧＦβのうちの少なくとも１種の発現レベルを有する、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
（ｉ）前記ＭＳＣと接触させた、前記ＭＳＣの１種または複数の成分を含む培養培地の一部であって、前記ＭＳＣは、ｅｘ  ｖｉｖｏで、濃度が０．３〜１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルまたはその塩に、少なくとも２４時間曝露されており、前記ＭＳＣの１種または複数の成分は、エクソソーム、微小胞、マイクロＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、非コードＲＮＡ、ミトコンドリア、増殖因子、およびその組合せからなる群から選択される、前記培養培地の一部、又は（ｉｉ）前記ＭＳＣ由来のエクソソームであって、前記ＭＳＣがｅｘ  ｖｉｖｏで、濃度が０．３〜１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルまたはその塩に、少なくとも２４時間曝露されている、前記エクソソームを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ＭＳＣが、濃度が０．３μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルまたはその塩に、少なくとも２４時間曝露される、請求項１〜８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】
間葉系幹細胞（ＭＳＣ）と接触させた、前記ＭＳＣの１種または複数の成分を含む培養培地を含む組成物を調製する方法であって、
前記ＭＳＣをｅｘ  ｖｉｖｏでプロスタサイクリンに曝露させるステップであって、前記プロスタサイクリンへの曝露が、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣと比較して、前記ＭＳＣにおける１種または複数の抗炎症性因子の発現を増加させ、かつ／または１種または複数の炎症誘発性因子の発現を減少させる、ステップ、および
前記ＭＳＣまたはエクソソームを含む前記培養培地の少なくとも一部を分離するステップを含む、方法。
【請求項１１】
前記ＭＳＣの１種または複数の成分が、エクソソーム、微小胞、マイクロＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、非コードＲＮＡ、ミトコンドリア、増殖因子、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記培養培地からエクソソームを分離することをさらに含む、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１０〜１２のいずれかに記載の方法によって得られた分離されたエクソソームを含む組成物。
【請求項１４】
少なくとも１種の薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
血管症を治療または予防するための少なくとも１種の追加の治療剤をさらに含む、請求項１３又は１４に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３３】
トレプロスチニルへの曝露による免疫調節作用に関する提案されたモデルを図７に例示する。具体的には、トレプロスチニルへのＭＳＣの曝露によって、細胞内シグナル伝達（１）または核シグナル伝達（２、３、４）を介し、炎症誘発性サイトカインが減少し、抗炎症性サイトカインが増加した。追加の分析によって、トレプロスチニルに曝露されたＭＳＣにおける、ＲＮＡ発現における変化（３）によって評価される核シグナル伝達（２）を介した抗炎症状態への遺伝子再プログラミングが認められた。
本発明は、次の態様にも関する。
（１）血管症を治療または予防する方法であって、
（ｉ）間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む組成物、または（ｉｉ）前記ＭＳＣと接触させた、前記ＭＳＣの１種または複数の成分を含む培養培地の一部を含む組成物、または（ｉｉｉ）ＭＳＣ由来のエクソソームを含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記ＭＳＣは、ｅｘ  ｖｉｖｏでプロスタサイクリンに曝露されており、前記プロスタサイクリンへの曝露が、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣと比較して、前記ＭＳＣにおける１種または複数の抗炎症性因子の発現を増加させ、かつ／または１種または複数の炎症誘発性因子の発現を減少させる、方法。
（２）前記ＭＳＣが、０．３μｇ／ｍＬ〜８３．３μｇ／ｍＬのプロスタサイクリンを含む組成物に曝露されている、上記（１）に記載の方法。
（３）前記ＭＳＣが、０．３μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬのプロスタサイクリンに曝露されている、上記（１）に記載の方法。
（４）前記プロスタサイクリンが、トレプロスチニル、その誘導体または塩である、上記（１）に記載の方法。
（５）前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに少なくとも２４時間曝露される、上記（１）に記載の方法。
（６）前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに少なくとも４８時間曝露される、上記（１）に記載の方法。
（７）前記血管症が、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、冠動脈疾患、および糖尿病性血管症からなる群から選択される、上記（１）に記載の方法。
（８）前記血管症が、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）である、上記（１）に記載の方法。
（９）前記ＭＳＣが、増殖後に前記プロスタサイクリンに曝露される、上記（１）に記載の方法。
（１０）前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣと比較して、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の発現レベルを減少させている、上記（１）に記載の方法。
（１１）前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣと比較して、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＨＬＡ、およびＴＧＦβからなる群から選択される１種または複数の抗炎症性因子の発現レベルを増加させている、上記（１）に記載の方法。
（１２）前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣの発現レベルより少なくとも５０％低いＴＮＦαの発現レベルを有する、上記（１）に記載の方法。
（１３）前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣの発現レベルより少なくとも５０％高いＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＨＬＡ、およびＴＧＦβのうちの少なくとも１種の発現レベルを有する、上記（１）に記載の方法。
（１４）ＭＳＣを含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含み、前記ＭＳＣは、ｅｘ  ｖｉｖｏで、濃度が０．３〜１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルまたはその塩に、少なくとも２４時間曝露されている、上記（１）に記載の方法。
（１５）前記ＭＳＣと接触させた、前記ＭＳＣの１種または複数の成分を含む培養培地の一部を含む組成物を、前記対象に投与することを含み、前記ＭＳＣは、ｅｘ  ｖｉｖｏで、濃度が０．３〜１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルまたはその塩に、少なくとも２４時間曝露されており、前記ＭＳＣの１種または複数の成分は、エクソソーム、微小胞、マイクロＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、非コードＲＮＡ、ミトコンドリア、増殖因子、およびその組合せからなる群から選択される、上記（１）に記載の方法。
（１６）前記ＭＳＣ由来のエクソソームを含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含み、前記ＭＳＣは、ｅｘ  ｖｉｖｏで、濃度が０．３〜１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルまたはその塩に、少なくとも２４時間曝露されている、上記（１）に記載の方法。
（１７）前記ＭＳＣが、濃度が０．３μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルまたはその塩に、少なくとも２４時間曝露される、上記（１）に記載の方法。
（１８）間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む組成物、または前記ＭＳＣと接触させた、前記ＭＳＣの１種または複数の成分を含む培養培地を含む組成物を調製する方法であって、
前記ＭＳＣをｅｘ  ｖｉｖｏでプロスタサイクリンに曝露させるステップであって、前記プロスタサイクリンへの曝露が、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣと比較して、前記ＭＳＣにおける１種または複数の抗炎症性因子の発現を増加させ、かつ／または１種または複数の炎症誘発性因子の発現を減少させる、ステップ、および
前記ＭＳＣまたはエクソソームを含む前記培養培地の少なくとも一部を分離するステップを含む、方法。
（１９）前記ＭＳＣを０．３μｇ／ｍＬ〜５０μｇ／ｍＬのプロスタサイクリンに曝露させることを含む、上記（１８）に記載の方法。
（２０）前記ＭＳＣを０．３μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬのプロスタサイクリンに曝露させることを含む、上記（１８）に記載の方法。
（２１）前記プロスタサイクリンが、トレプロスチニル、その誘導体または塩である、上記（１８）に記載の方法。
（２２）前記ＭＳＣが、プロスタサイクリンに少なくとも２４時間曝露される、上記（１８）に記載の方法。
（２３）前記ＭＳＣが、プロスタサイクリンに少なくとも４８時間曝露される、上記（１８）に記載の方法。
（２４）前記ＭＳＣが、増殖後にプロスタサイクリンに曝露される、上記（１８）に記載の方法。
（２５）前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣと比較して、ＴＮＦαの発現レベルを減少させている、上記（１８）に記載の方法。
（２６）前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣと比較して、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＨＬＡ、およびＴＧＦβからなる群から選択される１種または複数の抗炎症性因子の発現レベルを増加させている、上記（１８）に記載の方法。
（２７）前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣの発現レベルより少なくとも５０％低いＴＮＦαの発現レベルを有する、上記（１８）に記載の方法。
（２８）前記プロスタサイクリンに曝露された前記ＭＳＣが、前記プロスタサイクリンに曝露されていない対照ＭＳＣの発現レベルより少なくとも５０％高いＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＨＬＡ、およびＴＧＦβのうちの少なくとも１種の発現レベルを有する、上記（１８）に記載の方法。
（２９）前記ＭＳＣの１種または複数の成分が、エクソソーム、微小胞、マイクロＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、非コードＲＮＡ、ミトコンドリア、増殖因子、およびその組合せからなる群から選択される、上記（１８）に記載の方法。
（３０）前記ＭＳＣが、濃度が０．３μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルまたはその塩を含む組成物に、少なくとも２４時間曝露される、上記（１８）に記載の方法。
（３１）前記培養培地からエクソソームを分離することをさらに含む、上記（１８）に記載の方法。
（３２）上記（１８）に記載の方法によって得られた分離されたＭＳＣを含む組成物。
（３３）上記（１８）に記載の方法によって得られた分離されたエクソソームを含む組成物。
（３４）少なくとも１種の薬学的に許容される担体をさらに含む、上記（３２）に記載の組成物。
（３５）血管症を治療または予防するための少なくとも１種の追加の治療剤をさらに含む、上記（３２）に記載の組成物。
（３６）少なくとも１種の薬学的に許容される担体をさらに含む、上記（３３）に記載の組成物。
（３７）血管症を治療または予防するための少なくとも１種の追加の治療剤をさらに含む、上記（３３）に記載の組成物。
（３８）変化した遺伝子発現パターンを有するＭＳＣの集団を含む組成物であって、前記変化した遺伝子発現パターンは、対照ＭＳＣの発現レベルより少なくとも５０％低いＴＮＦαの発現レベルおよび／または対照ＭＳＣの発現レベルより少なくとも５０％高いＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＨＬＡおよびＴＧＦβのうちの少なくとも１種の発現レベルを含み、前記変化した遺伝子発現パターンを有するＭＳＣの集団は、前記組成物中のすべてのＭＳＣの少なくとも５０％を占める、組成物。