【手続補正書】
【提出日】令和2年6月15日(2020.6.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
５ｎｇ／ｇ乾燥重量未満のミモシン含量を有するオジギソウ細胞抽出物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ調製のための方法であって、以下の工程：
ａ．オジギソウの無菌植物材料の準備工程、
ｂ．前記植物材料からの細胞の脱分化工程、
ｃ．未分化細胞を未分化状態で維持するための液体培地中での未分化細胞の懸濁培養工程、
ｄ．前記培養培地中での未分化細胞バイオマスの増殖培養工程、
ｅ．増殖の停止および５ｎｇ／ｇ乾燥重量未満のミモシン含量を有する細胞抽出物の取得工程、
を含んでなる、方法。
【請求項２】
前記オジギソウ植物材料が、葉、茎、葉柄、根、種子、花および蕾からなる群から選択されるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
脱分化の工程ｂ）が、１以上の成長因子を含有する固体培地上で行われる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記１以上の成長因子が、オーキシン、サイトカイン、ジベレリンおよびそれらの混合物からなる群から選択されるホルモンを含むものである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
脱分化細胞のカルスを得るために、脱分化の工程ｂ）が繰り返される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
工程ｃ）が、１以上の成長因子を含有する液体培地で行われる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記１以上の成長因子が脱分化培地のものと同じものである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
増殖培養の工程ｄ）が、連続継代培養または液体培養培地での希釈により一定細胞密度が得られるまで行われる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
以下の付加的工程：
ｆ．液体／固体分離工程、
ｇ．５ｎｇ／ｇ乾燥重量未満のミモシン含量を有する培養培地から分離されたバイオマスからなる細胞抽出物の回収工程、
を含んでなる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
以下の付加的工程：
ｆ．液体／固体分離工程、
ｇ．５ｎｇ／ｇ乾燥重量未満のミモシン含量を有する培養培地の液相からなる細胞抽出物の回収工程、
を含んでなる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
抽出物を破砕し、５ｎｇ／ｇ乾燥重量未満のミモシン含量を有する破砕細胞材料を回収する付加的工程を含んでなる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
得られた破砕材料の液体／固体分離が行われ、次いで、５ｎｇ／ｇ乾燥重量未満のミモシン含量を有する細胞抽出物としての液相の回収が行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
得られた破砕材料の液体／固体分離が行われ、次いで、５ｎｇ／ｇ乾燥重量未満のミモシン含量を有する細胞抽出物としての細胞残屑の固相の回収が行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記工程ｃ）および／または工程ｄ）の培養培地が、フェニルアンモニアリアーゼ基質を含有するものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記フェニルアンモニアリアーゼ基質が、フェニルアラニン、特にＬ−フェニルアラニン、桂皮酸、アスパラギン酸、グルタミン酸およびそれらの混合物からなる群から選択されるものである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
得られた抽出物が、少なくとも１種類のＮ−フェニルプロペノイルアミノ酸を含有する、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｎ−フェニルプロペノイルアミノ酸が、
Ｐ１：１−Ｏ−（４−クマロイル）−β−Ｄ−グルコース
Ｃ１５Ｈ１８Ｏ８
【化１】
2019518051.tif 000001
Ｐ２：Ｎ−ｐ−クマロイルアスパラギン酸またはアスパラギン酸；（Ｓ）型、Ｎ−（４−ヒドロキシシンナモイル）
Ｃ１３Ｈ１３ＮＯ６
【化２】
2019518051.tif 000002
Ｐ３：Ｎ−シス−（ｐ−クマロイル）グルタミン酸またはグルタミン酸；（Ｓ）型、Ｎ−（４−ヒドロキシ−Ｚ−シンナモイル）
Ｃ１４Ｈ１５ＮＯ６
【化３】
2019518051.tif 000003
Ｐ５：４−ヒドロキシシンナミド
Ｃ９Ｈ９ＮＯ２
【化４】
2019518051.tif 000004
Ｐ６：グルタミン酸；（Ｓ）型、Ｎ−シンナモイル
Ｃ１４Ｈ１４ＮＯ５
【化５】
2019518051.tif 000005
およびそれらの混合物、
からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
乾燥重量５ｎｇ／ｇ未満のミモシン含量を有する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる、オジギソウ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養抽出物。
【請求項１９】
ミモシン含量が５ｎｇ／ｇ乾燥重量未満である、オジギソウ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養抽出物。
【請求項２０】
少なくとも１種類のＮ−フェニルプロペノイルアミノ酸を含有する、請求項１８または１９に記載の抽出物。
【請求項２１】
前記少なくとも１種類のＮ−フェニルプロペノイルアミノ酸が、
Ｐ１：１−Ｏ−（４−クマロイル）−β−Ｄ−グルコース
Ｃ１５Ｈ１８Ｏ８
【化６】
2019518051.tif 000006
Ｐ２：Ｎ−ｐ−クマロイルアスパラギン酸またはアスパラギン酸；（Ｓ）型、Ｎ−（４−ヒドロキシシンナモイル）
Ｃ１３Ｈ１３ＮＯ６
【化７】
2019518051.tif 000007
Ｐ３：Ｎ−シス−（ｐ−クマロイル）グルタミン酸またはグルタミン酸；（Ｓ）型、Ｎ−（４−ヒドロキシ−Ｚ−シンナモイル）
Ｃ１４Ｈ１５ＮＯ６
【化８】
2019518051.tif 000008
Ｐ５：４−ヒドロキシシンナミド
Ｃ９Ｈ９ＮＯ２
【化９】
2019518051.tif 000009
Ｐ６：グルタミン酸；（Ｓ）型、Ｎ−シンナモイル
Ｃ１４Ｈ１４ＮＯ５
【化１０】
2019518051.tif 000010
およびそれらの混合物、
からなる群から選択される、請求項２０に記載の抽出物。
【請求項２２】
抽出物中の少なくとも１種類のＮ−フェニルプロペノイルアミノ酸の総含量が、１〜５０μｇ／ｇ乾燥バイオマスである、請求項２０または２１に記載の抽出物。
【請求項２３】
前記細胞が未分化細胞である、請求項１８〜２２のいずれか一項に記載の抽出物。
【請求項２４】
炎症性皮膚障害の処置において使用するための、請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の抽出物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項２５】
胸腺間質性リンパ球新生因子の阻害剤として使用するための、請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の抽出物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項２６】
前記炎症性皮膚障害が、アトピー性皮膚炎、掻痒症および掻痒症のためのかゆみ、湿疹ならびに乾癬から選択されるものである、請求項２４に記載の抽出物。
【請求項２７】
請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の抽出物を含んでなる、胸腺間質性リンパ球新生因子の阻害剤として使用するための、組成物。
【請求項２８】
アトピー性皮膚炎、掻痒症および掻痒症のためのかゆみ、湿疹ならびに乾癬から選択される炎症性皮膚障害の処置のための、有効量の請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の抽出物と少なくとも１種類の皮膚科学的賦形剤とを含んでなる、皮膚科学的組成物。
【請求項２９】
請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の抽出物と美容的に許容可能な賦形剤と組み合わせて含んでなる、美容組成物。
【請求項３０】
請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の抽出物を皮膚科学的に許容可能な賦形剤と組み合わせて含んでなる、皮膚科学的組成物。
【請求項３１】
皮膚老化の、および環境汚染による酸化ストレスなどの皮膚酸化ストレスに関連する皮膚障害の美容的処置のための、請求項２９に記載の美容組成物。