【手続補正書】
【提出日】令和2年10月8日(2020.10.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のポリペプチドであるグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）またはそのアナログ、第２のポリペプチドであるＩｇＧ４ Ｆｃ部分、および第３のポリペプチドである線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）またはそのバリアントを含むか、またはそれらからなる融合タンパク質において、第１のポリペプチドが第２のポリペプチドに第１のリンカーを介して連結され、第３のポリペプチドが第２のポリペプチドに第２のリンカーを介して連結され、前記ＩｇＧ４ Ｆｃ部分が、下記の変異の組み合わせの１つを含む、融合タンパク質：
野生型ＩｇＧ４ Ｆｃと比較しての、
１）Ｓ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋ；
２）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３ＰおよびＲ４０９Ｋ；
３）Ｓ２２８Ｐ、Ｎ２９７ＡおよびＲ４０９Ｋ；
４）Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＲ４０９Ｋ；
５）Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５ＥおよびＲ４０９Ｋ；ならびに
６）Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｒ４０９ＫおよびＫ４４７。
【請求項２】
ＩｇＧ４ Ｆｃ部分が、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
ＧＬＰ−１のアナログが、配列番号７（ＨＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＶ ＳＳＹＬＥＸ２ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷＬＸ３Ｘ４ＧＸ５ Ｘ６）［ここで、Ｘ１はＧまたはＶから選択され；Ｘ２はＥまたはＧから選択され；Ｘ３はＶまたはＫから選択され；Ｘ４はＫまたはＮから選択され；Ｘ５はＧまたはＥから選択され；Ｘ６はＧ、Ｐまたは不存在から選択される］のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
ＧＬＰ−１のアナログが、配列番号１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
ＦＧＦ２１のバリアントが、少なくとも１つのアミノ酸変異を１７０位、１７１位または１７２位に含み、ここで、
１７０位のアミノ酸変異は、Ｇ１７０Ｅ、Ｇ１７０Ａ、Ｇ１７０Ｃ、Ｇ１７０Ｄ、Ｇ１７０Ｎ、およびＧ１７０Ｓからなる群から選択され；
１７１位のアミノ酸変異は、Ｐ１７１Ａ、Ｐ１７１Ｅ、Ｐ１７１Ｈ、Ｐ１７１Ｑ、Ｐ１７１Ｔ、Ｐ１７１Ｙ、Ｐ１７１Ｗ、Ｐ１７１Ｃ、Ｐ１７１Ｇ、Ｐ１７１Ｓ、およびＰ１７１Ｔからなる群から選択され；
１７２位のアミノ酸変異は、Ｓ１７２Ｌ、Ｓ１７２Ｉ、Ｓ１７２Ｖ、Ｓ１７２Ａ、およびＳ１７２Ｍからなる群から選択される、
請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
ＦＧＦ２１のバリアントが、さらに１つまたはそれ以上の変異を、４５位、９８位、１００位、１５０位、１５１位、１５２位、１６７位、１７５位、１７９位および１８０位からなる群から選択される１つまたはそれ以上の位置に含み、ここで、
４５位のアミノ酸変異は、Ａ４５Ｋ、Ａ４５Ｒ、Ａ４５Ｅ、およびＡ４５Ｑからなる群から選択され；
９８位のアミノ酸変異は、Ｌ９８Ｄ、Ｌ９８Ｒ、Ｌ９８Ｅ、Ｌ９８Ｑ、Ｌ９８Ｋ、およびＬ９８Ｔからなる群から選択され；
１００位のアミノ酸変異はＬ１００Ｋであり；
１５０位のアミノ酸変異はＰ１５０Ａであり；
１５１位のアミノ酸変異はＧ１５１Ａであり；
１５２位のアミノ酸変異はＩ１５２Ｖであり；
１６７位のアミノ酸変異は、Ｓ１６７Ｈ、Ｓ１６７Ｃ、またはＳ１６７Ｒからなる群から選択され；
１７５位のアミノ酸変異は、Ｒ１７５Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、またはＲ１７５Ｐからなる群から選択され；
１７９位のアミノ酸変異は、Ｙ１７９Ｓ、Ｙ１７９Ａ、およびＹ１７９Ｆからなる群から選択され；
１８０位のアミノ酸変異は、Ａ１８０Ｓ、Ａ１８０Ｅ、およびＡ１８０Ｇからなる群から選択される、
請求項５に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
ＦＧＦ２１のバリアントが、少なくともアミノ酸変異を９８位または１７１位の１つまたはそれ以上の位置に含み、ここで、
９８位のアミノ酸変異は、Ｌ９８Ｄ、およびＬ９８Ｒからなる群から選択され；
１７１位のアミノ酸変異は、Ｐ１７１Ａ、およびＰ１７１Ｇからなる群から選択される、
請求項５に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
ＦＧＦ２１のバリアントが、さらに１つまたはそれ以上の変異を、１６７位、１７５位および１７９位からなる群から選択される１つまたはそれ以上の位置に含み、ここで、
１６７位のアミノ酸変異は、Ｓ１６７Ｈ、およびＳ１６７Ｃからなる群から選択され；
１７５位のアミノ酸変異は、Ｒ１７５Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、およびＰ１７５Ｐからなる群から選択され；
１７９位のアミノ酸変異は、Ｙ１７９Ｓ、およびＹ１７９Ｆからなる群から選択される、
請求項７に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
第１のリンカーおよび第２のリンカーがそれぞれ、５〜５０アミノ酸残基のポリペプチドを含み、該ポリペプチドは少なくとも５０％のＧを含む、請求項１〜８のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
第１のリンカーおよび／または第２のリンカーがそれぞれ独立に、１、２または３のＧリッチポリペプチドを含む、請求項９に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
第１のリンカーおよび第２のリンカーがそれぞれ独立に、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡから選択される、請求項９に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
融合タンパク質が、ホモ二量体融合タンパク質または非ホモ二量体融合タンパク質である、請求項１〜１１のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれかに記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１４】
請求項１３に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１５】
請求項１４に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１５に記載のベクターを宿主細胞において発現させることを含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の融合タンパク質を製造する方法。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれかに記載の融合タンパク質、および場合により１つまたはそれ以上の薬学的に許容しうる添加剤を含む医薬組成物。
【請求項１８】
代謝疾患の処置において使用するための、請求項１〜１２のいずれかに記載の融合タンパク質または請求項１７に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
本発明の他の一側面において、代謝疾患の処置のための融合タンパク質または医薬組成物が提供される。代謝疾患は、糖尿病、肥満および脂肪肝から選択しうる。
本発明の側面をさらに記載する：
［項１］
第１のポリペプチドであるグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）またはそのアナログ、第２のポリペプチドであるＩｇＧ４ Ｆｃ部分、および第３のポリペプチドである線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）またはそのバリアントを含むか、またはそれらからなる融合タンパク質において、第１のポリペプチドが第２のポリペプチドに第１のリンカーを介して連結され、第３のポリペプチドが第２のポリペプチドに第２のリンカーを介して連結され、野生型ＩｇＧ４ Ｆｃと比較して、前記ＩｇＧ４ Ｆｃ部分の２２８位のセリンがプロリンで置換され、前記ＩｇＧ４ Ｆｃ部分の４０９位のアルギニンがリジンで置換されている、融合タンパク質。
［項２］
ＩｇＧ４ Ｆｃ部分が、野生型ＩｇＧ４ Ｆｃと比較しての、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４ＶもしくはＦ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥまたはＬ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、またはＫ４４７から選択される１つまたはそれ以上の変異をさらに含む、上記項１に記載の融合タンパク質。
［項３］
ＩｇＧ４ Ｆｃ部分が、下記の変異の組み合わせの１つをさらに含む、上記項１に記載の融合タンパク質：
野生型ＩｇＧ４ Ｆｃと比較しての、
１）Ｓ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋ；
２）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３ＰおよびＲ４０９Ｋ；
３）Ｓ２２８Ｐ、Ｎ２９７ＡおよびＲ４０９Ｋ；
４）Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＲ４０９Ｋ；
５）Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５ＥおよびＲ４０９Ｋ；ならびに
６）Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｒ４０９ＫおよびＫ４４７。
［項４］
ＩｇＧ４ Ｆｃ部分が、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、上記項１に記載の融合タンパク質。
［項５］
ＧＬＰ−１のアナログが、配列番号７（ＨＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＶ ＳＳＹＬＥＸ２ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷＬＸ３Ｘ４ＧＸ５ Ｘ６）［ここで、Ｘ１はＧまたはＶから選択され；Ｘ２はＥまたはＧから選択され；Ｘ３はＶまたはＫから選択され；Ｘ４はＫまたはＮから選択され；Ｘ５はＧまたはＥから選択され；Ｘ６はＧ、Ｐまたは不存在から選択される］のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、上記項１に記載の融合タンパク質。
［項６］
ＧＬＰ−１のアナログが、配列番号１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、上記項１に記載の融合タンパク質。
［項７］
ＦＧＦ２１のバリアントが、少なくとも１つのアミノ酸変異を１７０位、１７１位または１７２位に含み、ここで、
１７０位のアミノ酸変異は、Ｇ１７０Ｅ、Ｇ１７０Ａ、Ｇ１７０Ｃ、Ｇ１７０Ｄ、Ｇ１７０Ｎ、およびＧ１７０Ｓからなる群から選択され；
１７１位のアミノ酸変異は、Ｐ１７１Ａ、Ｐ１７１Ｅ、Ｐ１７１Ｈ、Ｐ１７１Ｑ、Ｐ１７１Ｔ、Ｐ１７１Ｙ、Ｐ１７１Ｗ、Ｐ１７１Ｃ、Ｐ１７１Ｇ、Ｐ１７１Ｓ、およびＰ１７１Ｔからなる群から選択され；
１７２位のアミノ酸変異は、Ｓ１７２Ｌ、Ｓ１７２Ｉ、Ｓ１７２Ｖ、Ｓ１７２Ａ、およびＳ１７２Ｍからなる群から選択される、
上記項１に記載の融合タンパク質。
［項８］
ＦＧＦ２１のバリアントが、少なくとも１つのアミノ酸変異を１７０位または１７１位または１７２位に含み、ここで、
１７０位のアミノ酸変異は、Ｇ１７０Ｅ、Ｇ１７０Ａ、Ｇ１７０Ｄ、およびＧ１７０Ｓからなる群から選択され；
１７１位のアミノ酸変異は、Ｐ１７１Ａ、Ｐ１７１Ｅ、Ｐ１７１Ｑ、Ｐ１７１Ｗ、Ｐ１７１Ｃ、Ｐ１７１Ｇ、およびＰ１７１Ｔからなる群から選択され；
１７２位のアミノ酸変異は、Ｓ１７２Ｌ、Ｓ１７２Ｖ、およびＳ１７２Ｍからなる群から選択される、
上記項７に記載の融合タンパク質。
［項９］
ＦＧＦ２１のバリアントが、少なくとも１つのアミノ酸変異を１７０位または１７１位または１７２位に含み、ここで、
１７０位のアミノ酸変異は、Ｇ１７０Ｅ、およびＧ１７０Ａからなる群から選択され；
１７１位のアミノ酸変異は、Ｐ１７１Ａ、Ｐ１７１Ｃ、およびＰ１７１Ｇからなる群から選択され；
１７２位のアミノ酸変異は、Ｓ１７２Ｌである、
上記項７に記載の融合タンパク質。
［項１０］
ＦＧＦ２１のバリアントが、さらに１つまたはそれ以上の変異を、４５位、９８位、１００位、１５０位、１５１位、１５２位、１６７位、１７５位、１７９位および１８０位からなる群から選択される１つまたはそれ以上の位置に含み、ここで、
４５位のアミノ酸変異は、Ａ４５Ｋ、Ａ４５Ｒ、Ａ４５Ｅ、およびＡ４５Ｑからなる群から選択され；
９８位のアミノ酸変異は、Ｌ９８Ｄ、Ｌ９８Ｒ、Ｌ９８Ｅ、Ｌ９８Ｑ、Ｌ９８Ｋ、およびＬ９８Ｔからなる群から選択され；
１００位のアミノ酸変異はＬ１００Ｋであり；
１５０位のアミノ酸変異はＰ１５０Ａであり；
１５１位のアミノ酸変異はＧ１５１Ａであり；
１５２位のアミノ酸変異はＩ１５２Ｖであり；
１６７位のアミノ酸変異は、Ｓ１６７Ｈ、Ｓ１６７Ｃ、またはＳ１６７Ｒからなる群から選択され；
１７５位のアミノ酸変異は、Ｒ１７５Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、またはＲ１７５Ｐからなる群から選択され；
１７９位のアミノ酸変異は、Ｙ１７９Ｓ、Ｙ１７９Ａ、およびＹ１７９Ｆからなる群から選択され；
１８０位のアミノ酸変異は、Ａ１８０Ｓ、Ａ１８０Ｅ、およびＡ１８０Ｇからなる群から選択される、
上記項７に記載の融合タンパク質。
［項１１］
ＦＧＦ２１のバリアントが、さらに１つまたはそれ以上の変異を、４５位、９８位、１６７位、１７５位、１７９位および１８０位からなる群から選択される１つまたはそれ以上の位置に含み、ここで、
４５位のアミノ酸変異は、Ａ４５Ｋ、Ａ４５Ｒ、Ａ４５Ｅ、およびＡ４５Ｑからなる群から選択され；
９８位のアミノ酸変異は、Ｌ９８Ｄ、Ｌ９８Ｒ、Ｌ９８Ｅ、Ｌ９８Ｑ、Ｌ９８Ｋ、およびＬ９８Ｔからなる群から選択され；
１６７位のアミノ酸変異は、Ｓ１６７Ｈ、またはＳ１６７Ｃであり；
１７５位のアミノ酸変異は、Ｒ１７５Ｌ、またはＲ１７５Ｈであり；
１７９位のアミノ酸変異は、Ｙ１７９Ｓ、Ｙ１７９Ａ、およびＹ１７９Ｆからなる群から選択され；
１８０位のアミノ酸変異は、Ａ１８０Ｓ、Ａ１８０Ｅ、およびＡ１８０Ｇからなる群から選択される、
上記項７に記載の融合タンパク質。
［項１２］
ＦＧＦ２１のバリアントが、さらに１つまたはそれ以上の変異を、９８位、１６７位、１７５位および１７９位からなる群から選択される１つまたはそれ以上の位置に含み、ここで、
９８位のアミノ酸変異は、Ｌ９８Ｄ、およびＬ９８Ｒからなる群から選択され；
１６７位のアミノ酸変異は、Ｓ１６７Ｈであり；
１７５位のアミノ酸変異は、Ｒ１７５Ｌであり；
１７９位のアミノ酸変異は、Ｙ１７９Ｆである、
上記項７に記載の融合タンパク質。
［項１３］
ＦＧＦ２１のバリアントが、少なくともアミノ酸変異を９８位または１７１位の１つまたはそれ以上の位置に含み、ここで、
９８位のアミノ酸変異は、Ｌ９８Ｄ、およびＬ９８Ｒからなる群から選択され；
１７１位のアミノ酸変異は、Ｐ１７１Ａ、およびＰ１７１Ｇからなる群から選択される、
上記項７に記載の融合タンパク質。
［項１４］
ＦＧＦ２１のバリアントが、さらに１つまたはそれ以上の変異を、１６７位、１７５位および１７９位からなる群から選択される１つまたはそれ以上の位置に含み、ここで、
１６７位のアミノ酸変異は、Ｓ１６７Ｈ、およびＳ１６７Ｃからなる群から選択され；
１７５位のアミノ酸変異は、Ｒ１７５Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、およびＰ１７５Ｐからなる群から選択され；
１７９位のアミノ酸変異は、Ｙ１７９Ｓ、およびＹ１７９Ｆからなる群から選択される、
上記項１３に記載の融合タンパク質。
［項１５］
ＦＧＦ２１のバリアントが、さらに１つまたはそれ以上の変異を、１６７位、１７５位および１７９位からなる群から選択される１つまたはそれ以上の位置に含み、ここで、
１６７位のアミノ酸変異は、Ｓ１６７Ｈであり；
１７５位のアミノ酸変異は、Ｒ１７５Ｌであり；
１７９位のアミノ酸変異は、Ｙ１７９Ｆである、
上記項１３に記載の融合タンパク質。
［項１６］
第１のリンカーおよび第２のリンカーがそれぞれ、５〜５０アミノ酸残基のポリペプチドを含み、該ポリペプチドは少なくとも５０％のＧを含む、上記項１〜１５のいずれかに記載の融合タンパク質。
［項１７］
第１のリンカーおよび／または第２のリンカーがそれぞれ独立に、１、２または３のＧリッチポリペプチドを含む、上記項１６に記載の融合タンパク質。
［項１８］
第１のリンカーおよび第２のリンカーがそれぞれ独立に、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡから選択される、上記項１６に記載の融合タンパク質。
［項１９］
融合タンパク質が、ホモ二量体融合タンパク質または非ホモ二量体融合タンパク質である、上記項１〜１８のいずれかに記載の融合タンパク質。
［項２０］
上記項１〜１９のいずれかに記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
［項２１］
上記項２０に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
［項２２］
上記項２１に記載のベクターを含む宿主細胞。
［項２３］
上記項２２に記載のベクターを宿主細胞において発現させることを含む、上記項１〜１９のいずれかに記載の融合タンパク質を製造する方法。
［項２４］
上記項１〜１９のいずれかに記載の融合タンパク質、および場合により１つまたはそれ以上の薬学的に許容しうる添加剤を含む医薬組成物。
［項２５］
上記項１〜１９のいずれかに記載の融合タンパク質の、代謝疾患の処置に使用される医薬組成物の製造における使用。
［項２６］
代謝疾患が、糖尿病、肥満および脂肪肝から選択される、上記項２５に記載の使用。
［項２７］
上記項１〜１９のいずれかに記載の融合タンパク質または上記項２４に記載の医薬組成物を処置有効量で患者に投与することを含む、代謝疾患を処置する方法。
［項２８］
代謝疾患の処置において使用するための、上記項１〜１９のいずれかに記載の融合タンパク質または上記項２４に記載の医薬組成物。