【手続補正書】
【提出日】令和2年1月14日(2020.1.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、薬学的組成物：
少なくとも2種類の免疫チェックポイント阻害剤と少なくとも1種類のサイトカインとの組合せであって、各々が組成物中に治療有効量で存在している、組合せ、および
薬学的に許容される担体。
【請求項２】
少なくとも2種類のチェックポイント阻害剤が、CD137、CD134、PD-1、KIR、LAG-3、PD-Ll、CTLA-4、B7.1、B7H3、CCRY、OX-40およびCD40の阻害剤からなる群より選択される少なくとも2種類の異なる阻害剤を含む、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項３】
少なくとも2種類のチェックポイント阻害剤が、CTLA-4阻害剤およびPD-1阻害剤であり、任意で、該CTLA-4阻害剤が、イピリムマブまたはトレメリムマブであり、さらに任意で、該CTLA-4阻害剤がイピリムマブであり、該PD-1阻害剤がペンブロリズマブである、および／または該PD-1阻害剤が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、MK-3475およびMED 14736からなる群より選択される、請求項2記載の薬学的組成物。
【請求項４】
少なくとも1種類のサイトカインが、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγおよびIFNαからなる群より選択される、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項５】
治療有効量の核酸薬物をさらに含む、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項６】
少なくとも2種類の免疫チェックポイント阻害剤と少なくとも1種類のサイトカインとの組合せであって、各々が組成物中に治療有効量で存在している、組合せ、および薬学的に許容される担体を含む、患者の腫瘍を処置する方法に用いるための薬学的組成物であって、該方法が、該組成物を、腫瘍を処置するのに充分な量で患者に腫瘍内投与する段階を含む、薬学的組成物。
【請求項７】
少なくとも2種類のチェックポイント阻害剤が、CTLA-4阻害剤およびPD-1阻害剤であり、任意で、サイトカインがGM-CSFである、請求項6記載の薬学的組成物。
【請求項８】
方法が、治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与する段階をさらに含む、請求項6記載の薬学的組成物。
【請求項９】
方法が、前記組成物の投与の前に、投与と並行して、および／または投与後に、腫瘍の少なくとも一部分にエネルギーを適用して該腫瘍の一部分における細胞の細胞膜の破壊を引き起こす段階をさらに含み、それにより、傷害ゾーンを作り、任意で、エネルギーの適用が、凍結療法処置の適用によって、またはRF-EMBもしくは凍結療法とRF-EMBの両方によって行われる、請求項6記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
方法が、前記組成物の投与の前に、投与と並行して、および／または投与後に、一連の電気パルスを傷害部に施す段階をさらに含み、それにより、傷害ゾーンに隣接している細胞に可逆的にエレクトロポレーションする、請求項9記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
方法が、治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与する段階をさらに含む、請求項10記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
患者の腫瘍を処置する方法に用いるための、治療有効量の核酸薬物を含む薬学的組成物であって、該方法が腫瘍の少なくとも一部分にアブレーションする段階、および組成物を該腫瘍に投与する段階を含む、薬学的組成物。
【請求項１３】
転移がんを処置する方法に用いるための、少なくとも2種類の免疫チェックポイント阻害剤と少なくとも1種類のサイトカインとの組合せを含む薬学的組成物であって、該方法が、
腫瘍を処置するのに充分な量で該組成物を患者に腫瘍内投与する段階;および
腫瘍の少なくとも一部分にエネルギーを適用して該腫瘍の一部分における細胞の細胞膜の破壊を引き起こす段階であって、それにより、傷害ゾーンを作る、段階
を含み、
該細胞の細胞膜を破壊しかつ該細胞の細胞内成分および膜抗原を露出させ、該抗原によって免疫系が賦活されるような条件下で、該エネルギーの適用が行われる、
薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
[本発明1001]
以下を含む、薬学的組成物：
少なくとも2種類の免疫チェックポイント阻害剤と少なくとも1種類のサイトカインとの組合せであって、各々が組成物中に治療有効量で存在している、組合せ、および
薬学的に許容される担体。
[本発明1002]
少なくとも2種類のチェックポイント阻害剤が、CD137、CD134、PD-1、KIR、LAG-3、PD-Ll、CTLA-4、B7.1、B7H3、CCRY、OX-40およびCD40の阻害剤からなる群より選択される少なくとも2種類の異なる阻害剤を含む、本発明1001の薬学的組成物。
[本発明1003]
少なくとも2種類のチェックポイント阻害剤が、CTLA-4阻害剤およびPD-1阻害剤である、本発明1002の薬学的組成物。
[本発明1004]
CTLA-4阻害剤が、イピリムマブまたはトレメリムマブである、本発明1003の薬学的組成物。
[本発明1005]
PD-1阻害剤が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、MK-3475およびMED 14736からなる群より選択される、本発明1003の薬学的組成物。
[本発明1006]
CTLA-4阻害剤がイピリムマブであり、PD-1阻害剤がペンブロリズマブである、本発明1003の薬学的組成物。
[本発明1007]
少なくとも1種類のサイトカインが、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγおよびIFNαからなる群より選択される、本発明1001の薬学的組成物。
[本発明1008]
少なくとも1種類のサイトカインがGM-CSFである、本発明1007の薬学的組成物。
[本発明1009]
およそ0.5〜10 mg/mlの濃度のCTLA-4阻害剤、およそ0.5〜20 mg/mlの濃度のPD-1阻害剤、およびおよそ10〜500μg/mlの濃度のサイトカインを含む、本発明1003の薬学的組成物。
[本発明1010]
治療有効量の核酸薬物をさらに含む、本発明1001の薬学的組成物。
[本発明1011]
核酸薬物がDNAプラスミドである、本発明1010の薬学的組成物。
[本発明1012]
DNAプラスミドが、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNαおよびその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含む、本発明1011の薬学的組成物。
[本発明1013]
およそ15 ml未満の体積である、本発明1001の薬学的組成物。
[本発明1014]
少なくとも2種類の免疫チェックポイント阻害剤および少なくとも1種類のサイトカインが、腫瘍内投与のために製剤化されている、本発明1001の薬学的組成物。
[本発明1015]
以下の段階を含む、患者の腫瘍を処置する方法：
患者に、
少なくとも2種類の免疫チェックポイント阻害剤と少なくとも1種類のサイトカインとの組合せであって、各々が組成物中に治療有効量で存在している、組合せ、および
薬学的に許容される担体
を含む組成物を、腫瘍を処置するのに充分な量で腫瘍内投与する段階。
[本発明1016]
少なくとも2種類のチェックポイント阻害剤が、CTLA-4阻害剤およびPD-1阻害剤である、本発明1015の方法。
[本発明1017]
サイトカインがGM-CSFである、本発明1016の方法。
[本発明1018]
治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与する段階をさらに含む、本発明1015の方法。
[本発明1019]
前記投与する段階が、組成物を患者の腫瘍に、複数の分枝を備えた注射デバイスを用いて投与することを含む、本発明1016の方法。
[本発明1020]
前記投与する段階が、組成物を患者の腫瘍に、単一の分枝を備えた注射デバイスを用いて投与することを含む、本発明1016の方法。
[本発明1021]
組成物が単回用量で注射される、本発明1016の方法。
[本発明1022]
組成物が1回より多くの用量で注射される、本発明1016の方法。
[本発明1023]
混合物が、およそ0.5〜10 mg/mlの濃度のCTLA-4阻害剤、およそ0.5〜20 mg/mlの濃度のPD-1阻害剤、およびおよそ10〜500μg/mlの濃度のサイトカインを含む、本発明1016の方法。
[本発明1024]
組成物がおよそ15 mlの体積である、本発明1016の方法。
[本発明1025]
組成物がおよそ15 ml未満の体積である、本発明1016の方法。
[本発明1026]
腫瘍の少なくとも一部分をアブレーションする段階をさらに含み、それにより、傷害ゾーンを作る、本発明1015の方法。
[本発明1027]
アブレーションする段階が組成物の投与の前に行われる、本発明1026の方法。
[本発明1028]
アブレーションする段階が組成物の投与と並行して行われる、本発明1026の方法。
[本発明1029]
アブレーションする段階が組成物の投与後に行われる、本発明1026の方法。
[本発明1030]
アブレーションする段階が、組成物の投与と並行して、および該投与後に行われる、本発明1026の方法。
[本発明1031]
アブレーションする段階が、冷凍アブレーション、熱アブレーション、IRE、RF-EMB、RF-EMB型アブレーション、超音波アブレーション、高密度焦点式超音波アブレーション、光線力学療法を使用するアブレーション、非加熱衝撃波を使用するアブレーション、キャビテーション、他の機械的物理的細胞破壊、またはその任意の組合せを用いて行われる、本発明1026の方法。
[本発明1032]
少なくとも一部分をアブレーションする段階が、RF-EMBと冷凍アブレーションの両方を用いて行われる、本発明1031の方法。
[本発明1033]
少なくとも一部分をアブレーションする段階が、冷凍アブレーションを用いて行われる、本発明1031の方法。
[本発明1034]
冷凍アブレーションが、少なくとも1つのクライオプローブを用いて行われる、本発明1033の方法。
[本発明1035]
冷凍アブレーションが、少なくとも1回の凍結-解凍サイクルを含む、本発明1033の方法。
[本発明1036]
冷凍アブレーションが、1〜4回の凍結-解凍サイクルを含む、本発明1033の方法。
[本発明1037]
凍結-解凍サイクルの凍結部分が、少なくとも30秒間の長さである、本発明1035の方法。
[本発明1038]
凍結-解凍サイクルの凍結部分が、およそ30秒間〜15分間の長さである、本発明1035の方法。
[本発明1039]
凍結-解凍サイクルの凍結部分が、およそ-30℃〜-196℃の温度で行われる、本発明1035の方法。
[本発明1040]
凍結-解凍サイクルの解凍部分が積極的解凍プロセスである、本発明1035の方法。
[本発明1041]
凍結-解凍サイクルの解凍部分が消極的解凍プロセスである、本発明1035の方法。
[本発明1042]
一連の電気パルスを傷害部に施す段階をさらに含み、それにより、傷害ゾーンに隣接している細胞に可逆的にエレクトロポレーションする、本発明1032の方法。
[本発明1043]
電気パルスを施すことがアブレーションと並行して行われる、本発明1042の方法。
[本発明1044]
電気パルスを施すことがアブレーションの前に行われる、本発明1042の方法。
[本発明1045]
電気パルスを施すことがアブレーションの後に行われる、本発明1042の方法。
[本発明1046]
電気パルスがクライオプローブによって施される、本発明1042の方法。
[本発明1047]
一連の電気パルスが、およそ1〜1000パルスを含む、本発明1042の方法。
[本発明1048]
一連の電気パルスが、およそ1〜4000パルスを含む、本発明1042の方法。
[本発明1049]
電気パルスが100〜500 kHzの周波数を含む、本発明1042の方法。
[本発明1050]
電気パルスがバイポーラである、本発明1042の方法。
[本発明1051]
電気パルスが即時電荷反転を有する、本発明1042の方法。
[本発明1052]
治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与する段階をさらに含む、本発明1042の方法。
[本発明1053]
治療有効量の核酸薬物を傷害部に投与する段階をさらに含む、本発明1042の方法。
[本発明1054]
核酸薬物の投与が、電気パルスを施すことの前に行われる、本発明1052の方法。
[本発明1055]
核酸薬物の投与が、電気パルスを施すことと並行して行われる、本発明1052の方法。
[本発明1056]
核酸薬物がDNAプラスミドである、本発明1052の方法。
[本発明1057]
DNAプラスミドが、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNα、またはその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含む、本発明1056の方法。
[本発明1058]
少なくとも一部分をアブレーションする段階が、RF-EMBを用いて行われる、本発明1031の方法。
[本発明1059]
RF-EMBがプローブを用いて行われる、本発明1058の方法。
[本発明1060]
プローブによって一連の電気パルスを施し、それにより、該プローブに直に隣接しているかまたは該プローブと関連している傷害ゾーンを作り、該傷害ゾーンに隣接しているかまたは該傷害ゾーンと関連している細胞に可逆的にエレクトロポレーションする、本発明1059の方法。
[本発明1061]
一連の電気パルスが、およそ1〜1000パルスを含む、本発明1060の方法。
[本発明1062]
一連の電気パルスが、およそ1〜4000パルスを含む、本発明1061の方法。
[本発明1063]
電気パルスが100〜500 kHzの周波数を含む、本発明1060の方法。
[本発明1064]
電気パルスがバイポーラである、本発明1060の方法。
[本発明1065]
電気パルスが即時電荷反転を有する、本発明1060の方法。
[本発明1066]
治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与する段階をさらに含む、本発明1060の方法。
[本発明1067]
核酸薬物がDNAプラスミドである、本発明1066の方法。
[本発明1068]
DNAプラスミドが、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNα、またはその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含む、本発明1067の方法。
[本発明1069]
腫瘍の一部分が、がん細胞を含み、
該細胞の細胞膜を破壊しかつ該細胞の細胞内成分および膜抗原を露出させる条件下で、アブレーションする段階が行われる、本発明1026の方法。
[本発明1070]
細胞の細胞内成分および膜抗原がアブレーションによって変性しないように、アブレーションが行われる、本発明1069の方法。
[本発明1071]
腫瘍のアブレーション部分の周囲の組織が免疫学的有能細胞およびシグナル伝達分子をアブレーション組織の内外に輸送し得るように、アブレーションが行われる、本発明1069の方法。
[本発明1072]
細胞の露出した細胞内成分および膜抗原の量が免疫系を賦活するのに充分な量であるように、アブレーションが行われる、本発明1070の方法。
[本発明1073]
細胞の露出した細胞内成分および膜抗原の量が免疫寛容を生じさせない量であるように、アブレーションが行われる、本発明1070の方法。
[本発明1074]
治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与する段階をさらに含む、本発明1026の方法。
[本発明1075]
核酸薬物がDNAプラスミドである、本発明1074の方法。
[本発明1076]
腫瘍のアブレーション部分のすぐ周囲の細胞に可逆的にエレクトロポレーションする段階をさらに含む、本発明1074の方法。
[本発明1077]
DNAプラスミドが、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNαおよびその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含む、本発明1075の方法。
[本発明1078]
腫瘍の少なくとも一部分にアブレーションする段階、および治療有効量の核酸薬物を該腫瘍に投与する段階を含む、患者の腫瘍を処置する方法。
[本発明1079]
アブレーションする段階が、RF-EMBと冷凍アブレーションを用いて行われる、本発明1078の方法。
[本発明1080]
アブレーションする段階が、RF-EMBを用いて行われる、本発明1078の方法。
[本発明1081]
RF-EMBがプローブを用いて行われる、本発明1079の方法。
[本発明1082]
RF-EMBが、一連の電気パルスを施す段階を含み、それにより、プローブに直に隣接している傷害ゾーンを作り、該傷害ゾーンに隣接している細胞に可逆的にエレクトロポレーションする、本発明1081の方法。
[本発明1083]
一連の電気パルスが、およそ1〜1000パルスを含む、本発明1082の方法。
[本発明1084]
電気パルスが100〜500 kHzの周波数を含む、本発明1082の方法。
[本発明1085]
電気パルスがバイポーラである、本発明1082の方法。
[本発明1086]
電気パルスが即時電荷反転を有する、本発明1082の方法。
[本発明1087]
核酸薬物がDNAプラスミドである、本発明1080の方法。
[本発明1088]
DNAプラスミドが、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNα、またはその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含む、本発明1087の方法。
[本発明1089]
アブレーションする段階が、冷凍アブレーションを用いて行われる、本発明1078の方法。
[本発明1090]
冷凍アブレーションがプローブを用いて行われる、本発明1089の方法。
[本発明1091]
一連の電気パルスを施す段階をさらに含み、それにより、プローブに直に隣接している傷害ゾーンを作り、該傷害ゾーンに隣接している細胞に可逆的にエレクトロポレーションする、本発明1090の方法。
[本発明1092]
一連の電気パルスが、およそ1〜1000パルスを含む、本発明1091の方法。
[本発明1093]
電気パルスが100〜500 kHzの周波数を含む、本発明1091の方法。
[本発明1094]
電気パルスがバイポーラである、本発明1091の方法。
[本発明1095]
電気パルスが即時電荷反転を有する、本発明1091の方法。
[本発明1096]
核酸薬物がDNAプラスミドである、本発明1089の方法。
[本発明1097]
DNAプラスミドが、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNα、またはその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含む、本発明1096の方法。
[本発明1098]
組成物を投与する段階が、注射デバイスを備えたアブレーションプローブを用いて該組成物を投与することを含む、本発明1001〜1077のいずれかの方法。
[本発明1099]
アブレーションプローブが、組成物が投与される速度を制御するためのポンプをさらに備える、本発明1098の方法。
[本発明1100]
少なくとも1種類のサイトカインが第1のサイトカインであり、治療有効量の第2のサイトカインを投与する段階をさらに含む、本発明1001〜1077のいずれかの方法。
[本発明1101]
第2のサイトカインが第1のサイトカインと同じであっても異なっていてもよい、本発明1100の方法。
[本発明1102]
第2のサイトカインが腫瘍内に注射される、本発明1100の方法。
[本発明1103]
第2のサイトカインが腫瘍内に、該腫瘍をアブレーションする段階の後に注射される、本発明1102の方法。
[本発明1104]
第2のサイトカインが、静脈内、筋肉内、皮下またはその任意の組合せで投与される、本発明1101の方法。
[本発明1105]
組成物の投与前にプローブの位置確認テストを行う工程をさらに含む、本発明1001〜1077のいずれかの方法。
[本発明1106]
プローブの位置確認テストを行う工程が、該プローブによるテスト注射を腫瘍内に施すこと、およびテスト注射を施している間に腫瘍内圧を測定することを含む、本発明1105の方法。
[本発明1107]
テスト注射を施している間に、周囲の腫瘍組織と比べて腫瘍内圧の上昇または低下が測定された場合、再度プローブの位置確認を行う工程、あるいは
腫瘍内圧が周囲の腫瘍組織の圧力と変わらない場合、組成物を投与する工程
をさらに含む、本発明1106の方法。
[本発明1108]
患者に、少なくとも2種類の免疫チェックポイント阻害剤と少なくとも1種類のサイトカインとの組合せを含む組成物を、腫瘍を処置するのに充分な量で腫瘍内投与する段階;および
腫瘍の少なくとも一部分をアブレーションする段階であって、それにより、傷害ゾーンを作る、段階
を含み、
細胞の細胞膜を破壊しかつ該細胞の細胞内成分および膜抗原を露出させ、該抗原によって免疫系が賦活されるような条件下で、アブレーションする段階が行われる、
転移がんを処置する方法。
[本発明1109]
細胞の細胞内成分および膜抗原がアブレーションによって変性しないように、アブレーションが行われる、本発明1108の方法。
[本発明1110]
腫瘍のアブレーション部分のすぐ周囲の部分が、免疫学的有能細胞およびシグナル伝達分子をアブレーション組織の内外に輸送し得るように、アブレーションが行われる、本発明1108の方法。
[本発明1111]
治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与する段階;および
一連の電気パルスを施す段階であって、それにより、傷害ゾーンに隣接している細胞に可逆的にエレクトロポレーションする、段階
をさらに含む、本発明1108の方法。
[本発明1112]
核酸薬物がDNAプラスミドである、本発明1111の方法。
[本発明1113]
DNAプラスミドが、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNα、またはその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含む、本発明1112の方法。
[本発明1114]
ツール本体部;
腫瘍内に挿入可能な第1端部;
ガス源と電源とに接続可能な第2端部;
該第1端部に取り付けられた冷却ヘッド;および
該第1端部に取り付けられた少なくとも1つの電極であって、該少なくとも1つの電極が、該腫瘍の第1の部分をアブレーションするように構成されており、該冷却ヘッドが、該ツールの第1端部が該腫瘍内に挿入されると該腫瘍の第2の部分を凍結させるように構成されている、電極
を備える、プローブ。
[本発明1115]
少なくとも1つの電極が、電源とプローブの第1端部とに接続されたワイヤである、本発明1114のプローブ。
[本発明1116]
少なくとも1つの電極が、ツール本体部から伸縮可能である、本発明1114のプローブ。
[本発明1117]
少なくとも1つの電極が、プローブの本体部である、本発明1114のプローブ。
[本発明1118]
ツールの第1端部から伸縮可能であり、該ツールの第2端部に取り付けられた流体リザーバに流体接続されている、少なくとも1本の針
をさらに備える、本発明1114のプローブ。
[本発明1119]
少なくとも1本の針が、流体を流体リザーバから腫瘍の一部分に送達するように構成されている、本発明1118のプローブ。
[本発明1120]
流体リザーバがプラスミドを含む、本発明1119のプローブ。
[本発明1121]
少なくとも1本の針が、複数の分枝で終結している、本発明1119のプローブ。
[本発明1122]
冷却ヘッドがツール本体部から伸縮可能である、本発明1114のプローブ。
[本発明1123]
少なくとも1つの電極がツール本体部から伸縮可能である、本発明1114のプローブ。
[本発明1124]
ツールの本体部を覆う断熱部を備える、本発明1114のプローブ。
[本発明1125]
ツールの本体部を覆う電気絶縁部を備える、本発明1114のプローブ。
[本発明1126]
腫瘍の第1の部分が該腫瘍の第2の部分と重複している、本発明1114のプローブ。
[本発明1127]
中央ツール本体部;
該中央ツール本体部に接続されている第1端部であって、腫瘍内に挿入可能であり、冷却ヘッドを有する、第1端部;
該ツール本体部に接続されている第2端部であって、ガス源に接続可能である、第2端部;ならびに
該中央ツール本体部の一部分を封入するように構成されている鞘部であって、取り外し可能な該鞘部が:
電気的に絶縁された本体部、
電源に取り付けられるように構成されたコネクタ、および
該中央ツール本体部の導電性部分と接続されるように構成された電気接点
を備え、
取り外し可能な該鞘部が、電源から中央ツール本体部を通して第1端部に電気インパルスを伝送することにより該腫瘍の第1の部分をアブレーションするように構成されている、鞘部
を備え、
該冷却ヘッドが、該ツールの第1端部が該腫瘍内に挿入されると該腫瘍の第2の部分を凍結させるように構成されている、
プローブ。
[本発明1128]
鞘部が中央ツール本体部から取り外し可能である、本発明1127のプローブ。
[本発明1129]
不関電極に取り付け可能である、本発明1127のプローブ。
[本発明1130]
ツール本体部と、
腫瘍内に挿入可能な第1端部、および第2端部と、
該第1端部に取り付けられた冷却ヘッドと、
該第1端部に取り付けられた少なくとも1つの電極であって、該少なくとも1つの電極が、該腫瘍の第1の部分をアブレーションするように構成されており、該冷却ヘッドが、該ツールの第1端部が該腫瘍内に挿入されると該腫瘍の第2の部分を凍結させるように構成されている、電極と
を備える、ツール;
該ツールの第2端部から該ツールにガスを供給するための凍結機;ならびに
該ツールの第2端部から該ツールに電気パルスを供給するための電気パルス発生器
を備える、電気パルスとの併用で凍結療法を施すためのシステム。
[本発明1131]
第2のツール本体部;
腫瘍内に挿入可能な該第2のツールの第1端部;
凍結機および電気パルス発生器に接続可能な該第2のツールの第2端部;
該第2のツールの第1端部に取り付けられた冷却ヘッド;ならびに
該第2のツールの第1端部に取り付けられた第2電極
を備える第2のツールを備える、本発明1130のシステム。
[本発明1132]
第2電極および少なくとも1つの電極が、該第2電極と該少なくとも1つの電極の間に広がる腫瘍の第1の部分をアブレーションするように構成されており、第2のクール（cool）の冷却ヘッドが、該ツールの第1端部と該第2のツールの第1端部が該腫瘍内に挿入されると該腫瘍の第3の部分を凍結させるように構成されている、本発明1131のシステム。
[本発明1133]
ツール本体部;
腫瘍内に挿入可能な第1端部;
電源に接続可能な第2端部;および
該第1端部に取り付けられた第2電極であって、腫瘍の第1の部分が、前記少なくとも1つの電極と該第2電極の間に広がっている、第2電極
を備える第2のツールを備える、本発明1130のシステム。
[本発明1134]
電源に電気的に接続された不関電極を備える、本発明1130のシステム。
本発明の1つまたは複数の態様の詳細を、添付の図面および以下の説明に示す。特に定義していない限り、本明細書で用いる科学技術用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本発明における使用のための方法および材料を本明細書に記載している;当技術分野において公知の他の適切な方法および材料もまた使用することができる。材料、方法および実施例は実例にすぎず、限定を意図するものではない。本明細書において挙げた刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリーおよび他の参考文献はすべて、参照によりその全体が組み入れられる。矛盾する場合は、本明細書（定義を含む）に支配される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
少なくとも1種類のサイトカインは、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNαおよび/またはその組合せからなる群より選択され得る。一部の態様では、サイトカインは組換え顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）（例えば、サルグラモスチム）であり得る。一部の態様では、組成物は、第1のサイトカインおよび第2のサイトカインを含み得る。一部の場合では、第1および第2のサイトカインは同じものであり、他の場合では、これらは異なるものである。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
一部の場合では、薬学的組成物は、
少なくとも2種類の免疫チェックポイント阻害剤と少なくとも1種類のサイトカインとの組合せであって、各々が組成物中に治療有効量で存在している、組合せ、
薬学的に許容される担体、および
治療有効量の核酸薬物
を含む、本質的にこれらからなる、またはこれらからなる。核酸薬物は、例えば、DNA、DNAプラスミド、nDNA、mtDNA、gDNA、RNA、siRNA、miRNA、mRNA、piRNA、アンチセンスRNA、snRNA、snoRNA、vRNAなどであり得る。例えば、核酸薬物はDNAプラスミドであり得る。一部の場合では、DNAプラスミドは、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNαおよび/またはその組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含み得る、本質的に該ヌクレオチド配列からなり得る、または該ヌクレオチド配列からなり得る。核酸薬物は、例えば、細胞の治療効果の向上または患者への治療用剤の供給において臨床的有用性を有し得る。別の場合では、核酸薬物はマーカーまたは耐性遺伝子としての機能を果たし得る。ヌクレオチド配列は、細胞から分泌され得る遺伝子をコードしても、細胞から分泌され得ない遺伝子をコードしてもよい。核酸薬物は、遺伝子と、該遺伝子の発現を高めるためのプロモーター配列とをコードしてもよい。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
一部の場合では、方法は、治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与することをさらに含む、本質的に該投与からなる、または該投与からなる。一部の場合では、方法は、治療有効量の核酸薬物を病変部に投与することをさらに含む、本質的に該投与からなる、または該投与からなる。核酸薬物の投与は、例えば、電気パルスを施す前および/または電気パルスを施すことと並行して行われ得る。一部の場合では、核酸薬物が、本明細書に開示の治療用核酸である。一部の場合では、核酸薬物はDNAプラスミドである。例えば、DNAプラスミドは、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNαおよび/またはその組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含み得る。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
一部の場合では、方法は、治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与することをさらに含む。核酸薬物は、本明細書に記載の任意の治療用核酸であり得る。一部の場合では、核酸薬物はDNAプラスミドである。例えば、DNAプラスミドは、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNαおよび/またはその組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含み得る。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
一部の場合では、本明細書に開示の方法は、治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与することをさらに含む。核酸薬物は本明細書に記載の治療用核酸であり得る。一部の場合では、核酸薬物はDNAプラスミドである。一部の場合では、DNAプラスミドは、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNαおよびその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含む。一部の場合では、本明細書に開示の方法は、腫瘍のアブレーション部分のすぐ周囲の細胞に可逆的にエレクトロポレーションすることをさらに含む。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
一部の場合では、核酸薬物はDNAプラスミドである。DNAプラスミドは、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNα、またはその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含み得る。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
一部の場合では、アブレーションは、例えば冷凍アブレーションを用いて、例えばプローブを用いて行われる。一部の場合では、方法は、一連の電気パルスを施すことをさらに含み、それにより、プローブに直に隣接している傷害ゾーンを作り、該傷害ゾーンに隣接している細胞に可逆的にエレクトロポレーションする。一部の場合では、一連の電気パルスは、およそ1〜1000パルスを含む、および/または100〜500 kHzの周波数を含む。一部の場合では、一連の電気パルスは、およそ1〜4000パルスを含む、および/または100〜500 kHzの周波数を含む。一部の場合では、電気パルスは、バイポーラである、および/または即時電荷反転を有する。一部の場合では、核酸はDNAであり、一部の場合では、DNAプラスミドは、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNα、またはその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含む。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
一部の場合では、方法は、治療有効量の核酸薬物を腫瘍に投与すること;および一連の電気パルスを施すことであって、それにより、傷害ゾーンに隣接している細胞にエレクトロポレーションすること、をさらに含み得る。核酸薬物はDNAプラスミドであり得る。例えば、DNAプラスミドは、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNα、またはその任意の組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含むもの、本質的に該ヌクレオチド配列からなるもの、または該ヌクレオチド配列からなり得る。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
したがって、本明細書において、チェックポイント阻害剤とサイトカイン（1種類または複数種）の混合物を含む、薬学的組成物を提供する。チェックポイント阻害剤は、免疫系を賦活して腫瘍を攻撃し、免疫系の下方調節を担う免疫応答タンパク質を阻害する機能を果たす。チェックポイント阻害剤は、例えば、CD137、CD134、PD-1、KIR、LAG-3、PD-L1、CTLA-4、B7.1、B7H3、CCRY、OX-40および/またはCD40の阻害剤であり得る。薬学的組成物は、任意の組合せのチェックポイント阻害剤を含み得る。例えば、特に有用なのはPD-1阻害剤とCTLA-4阻害剤の組合せである。当業者であれば、多くの他の組合せも有用であることが認識され得よう。非限定的な組合せリストとしては、CD137阻害剤とCD134阻害剤;PD-1阻害剤とKIR阻害剤;LAD-3阻害剤とPD-L1阻害剤;CTLA-4阻害剤とCD40阻害剤;CD 134阻害剤とPD-1阻害剤;KIR阻害剤とLAG-3阻害剤;PD-L1阻害剤とCTLA-4阻害剤;CD40阻害剤とCD 137阻害剤;CTLA-4阻害剤とPD-L1阻害剤;PD-1阻害剤とCD40阻害剤、または当技術分野において公知の2種類以上のチェックポイント阻害剤の任意の組合せが挙げられる。また、薬学的組成物には少なくともサイトカインも含められ得る。少なくとも1種類のサイトカインは、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNαおよび/またはその組合せを含み得る。該組成物は第1のサイトカインと第2のサイトカインを含み得る。当業者であれば、一部の場合において、第1および第2のサイトカインは異なっていてもよいことが認識されよう。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
一部の場合では、薬学的組成物は、治療有効量の核酸薬物をさらに含む。核酸薬物は、例えば、DNA、nDNA、mtDNA、gDNA、RNA、siRNA、miRNA、mRNA、piRNA、アンチセンスRNA、snRNA、snoRNA、vRNAなどであり得る。例えば、核酸薬物はDNAプラスミドであり得る。かかるDNAプラスミドは、GM-CSF、IL-12、IL-6、IL-4、IL-2、TNF、IFNγ、IFNαおよび/またはその組合せからなる群より選択される遺伝子をコードしているヌクレオチド配列を含み得る、本質的に該ヌクレオチド配列からなり得る、または該ヌクレオチド配列からなり得る。核酸薬物は、臨床的有用性、例えば、細胞の治療効果の向上または患者への治療用剤の供給を有し得る。他の場合では、核酸薬物はマーカーまたは耐性遺伝子としての機能を果たし得る。ヌクレオチド配列は、細胞から分泌され得る遺伝子をコードしても、細胞から分泌され得ない遺伝子をコードしてもよい。核酸薬物は、遺伝子と、該遺伝子の発現を高めるためのプロモーター配列とをコードしてもよい。