【手続補正書】
【提出日】令和1年11月29日(2019.11.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
鳥の受精した未孵化卵の性別決定の方法であって、
（ａ）性染色体Ｚ及びＷの少なくとも一方の少なくとも１つの位置又は場所に組み込まれた少なくとも１つの外因性レポーター遺伝子を含む少なくとも１羽のトランスジェニック鳥動物を提供または取得する工程であって、前記レポーター遺伝子が、少なくとも１つの生物発光レポーター遺伝子である、工程と、
（ｂ）前記トランスジェニック鳥対象から、又はその任意の細胞の、少なくとも１個の受精卵を取得する工程と、
（ｃ）少なくとも１つの検出可能なシグナルが検出されるかどうかを前記卵内で決定する工程であって、前記少なくとも１つの検出可能なシグナルの検出が、前記鳥胚内で前記少なくとも１つのレポーター遺伝子の発現、それによって、前記染色体Ｗ又は染色体Ｚの存在を示す工程と、
を含む方法。
【請求項２】
前記レポーター遺伝子がルシフェラーゼである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記方法がさらに、工程（ｃ）で検出される前記検出可能なシグナルの形成のために、工程（ｂ）の前記卵に、前記生物発光レポーター遺伝子と適合性のある基質及び酵素のうちの少なくとも一方を提供する工程を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１つのトランスジェニック鳥対象が雌の鳥動物であり、
（ａ）前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が雌の染色体Ｚの少なくとも１つの位置に組み込まれ、それによって、検出可能なシグナルの検出が、前記未孵化卵内の前記胚が雄であることを示す；または
（ｂ）前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が雌の染色体Ｗの少なくとも１つの位置に組み込まれ、それによって、検出可能なシグナルの検出が、前記未孵化卵内の前記胚が雌であることを示す、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が、少なくとも１つのプログラム可能に遺伝子操作されたヌクレアーゼ（ＰＥＮ）を用いて、前記トランスジェニック鳥対象の前記性染色体に組み込まれ、
好ましくは、前記ＰＥＮが、クラスター化され、規則的に間隔が空いた短い回文構造の繰り返し（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔ（ＣＲＩＳＰＲ））タイプＩＩシステムであり、
好ましくは、前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が、少なくとも１つのＣＲＩＳＰＲ／ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼ９（Ｃａｓ９）システムによって媒介される相同性指向性修復（ＨＤＲ）により前記トランスジェニック鳥動物の前記性染色体に組み込まれ、
好ましくは、前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が、（ａ）少なくとも１つのＣａｓ９タンパク質をコードする少なくとも１つの核酸配列及び少なくとも１つのガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）をコードする少なくとも１つの核酸配列を含む少なくとも１つの第１の核酸配列、並びに（ｂ）少なくとも１つの前記レポーター遺伝子を含む少なくとも１つの第２の核酸配列を、前記鳥動物の少なくとも１つの細胞又は前記鳥動物に導入される少なくとも１つの細胞に共トランスフェクトすることによって、前記トランスジェニック鳥動物の性染色体に組み込まれる、
請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が、（ａ）性染色体Ｗの遺伝子座１０２２８５９〜１０２４２１５の少なくとも１つの部位；または（ｂ）性染色体Ｚの遺伝子座４２１７２７４８〜４２１７７７４８の少なくとも１つの部位に組み込まれる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
性染色体Ｚ及びＷの少なくとも一方の少なくとも１つの遺伝子座に組み込まれた少なくとも１つの外因性レポーター遺伝子を含む鳥トランスジェニック動物であって、前記レポーター遺伝子が、少なくとも１つの生物発光レポーター遺伝子である、鳥トランスジェニック動物。
【請求項８】
前記レポーター遺伝子がルシフェラーゼである、請求項７に記載のトランスジェニック動物。
【請求項９】
前記少なくとも１羽のトランスジェニック鳥動物が雌であり、
（ａ）前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が雌染色体Ｚの少なくとも１つの位置に組み込まれている、または
（ｂ）前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が雌染色体Ｗの少なくとも１つの位置に組み込まれている、
請求項７に記載のトランスジェニック動物。
【請求項１０】
前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が、少なくとも１つのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムによって媒介されるＨＤＲによる前記トランスジェニック鳥動物の前記性染色体に組み込まれており、
好ましくは、前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が、（ａ）少なくとも１つのＣａｓ９タンパク質をコードする少なくとも１つの核酸配列及び少なくとも１つのｇＲＮＡをコードする少なくとも１つの核酸配列を含む少なくとも１つの第１の核酸配列、並びに（ｂ）少なくとも１つの前記レポーター遺伝子を含む少なくとも１つの第２の核酸配列を、前記鳥動物の少なくとも１つの細胞又は前記鳥動物に導入される少なくとも１つの細胞に共トランスフェクトすることによって、前記トランスジェニック鳥対象の性染色体に組み込まれる、
請求項７に記載のトランスジェニック動物。
【請求項１１】
前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が、（ａ）性染色体Ｗの遺伝子座１０２２８５９〜１０２４２１５の少なくとも１つの部位；または（ｂ）性染色体Ｚの遺伝子座４２１７２７４８〜４２１７７７４８の少なくとも１つの部位に組み込まれている、請求項７〜１０のいずれか１項に記載のトランスジェニック動物。
【請求項１２】
性染色体Ｚ及びＷの少なくとも一方の少なくとも１つの遺伝子座に組み込まれた少なくとも１つの外因性レポーター遺伝子を含む細胞であって、前記レポーター遺伝子が、少なくとも１つの生物発光レポーター遺伝子であり、好ましくは、前記細胞は鳥細胞であり、好ましくは、前記鳥細胞は始原生殖細胞（ＰＧＣ）である、細胞。
【請求項１３】
前記少なくとも１つのレポーター遺伝子がルシフェラーゼであり、
前記レポーター遺伝子が、（ａ）性染色体Ｗの遺伝子座１０２２８５９〜１０２４２１５の少なくとも１つの部位；または（ｂ）性染色体Ｚの遺伝子座４２１７２７４８〜４２１７７７４８の少なくとも１つの部位に組み込まれている、
請求項１２に記載の細胞。
【請求項１４】
（ａ）少なくとも１つのＣａｓ９タンパク質をコードする少なくとも１つの核酸配列と少なくとも１つのガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）をコードする少なくとも１つの核酸配列とを含む、少なくとも１つの第１の核酸配列；および
（ｂ）少なくとも１つのレポーター遺伝子を含む少なくとも１つの第２の核酸配列、
を含むキットであって、
好ましくは、前記レポーター遺伝子は、少なくとも１つの生物発光レポーター遺伝子であり、
好ましくは、前記少なくとも１つのレポーター遺伝子が、前記性染色体の少なくとも１つの非コード領域に組み込まれ、前記少なくとも１つのｇＲＮＡが、配列番号１及び２のいずれか１つに示す核酸配列を含み、
好ましくは、（ｉ）前記ｇＲＮＡが配列番号１に示す核酸配列を含み、前記第２の核酸配列内に含まれる前記少なくとも１つのレポーター遺伝子は、その５’及び３’で、それぞれ配列番号４及び５に示すアミノ酸配列を含む相同アームが隣接している；または（ｉｉ）前記ｇＲＮＡが配列番号２に示す核酸配列を含み、前記第２の核酸配列内に含まれる前記少なくとも１つのレポーター遺伝子は、その５’及び３’で、それぞれ配列番号６及び７に示すアミノ酸配列を含む相同アームが隣接している、
キット。
【請求項１５】
性染色体Ｚ及びＷの少なくとも一方の少なくとも１つの遺伝子座に組み込まれた少なくとも１つの外因性レポーター遺伝子を含む１羽のトランスジェニック鳥動物の作製に使用するための、請求項１４に記載のキット。