【手続補正書】
【提出日】令和2年6月12日(2020.6.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肺高血圧症を治療する方法に使用するための、単離細胞外小胞またはエクソソームを含む医薬組成物であって、
前記単離細胞外小胞またはエクソソームは、間葉系間質細胞から得られたものであり、
前記方法は、前記単離細胞外小胞またはエクソソームを、前記肺高血圧症の治療を必要とする対象に投与することを含み、
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、前記間葉系間質細胞から得た全細胞外小胞またはエクソソームにおける発現産物の平均量と比較して、（ａ）解糖経路中の遺伝子、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子、および（ｃ）電子伝達系中の遺伝子からなる群から選択される１つまたは複数の発現産物の発現が増加している細胞外小胞またはエクソソームを含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記細胞外小胞またはエクソソームが、前記間葉系間質細胞から得た全細胞外小胞またはエクソソームにおける同じ発現産物の平均量と比較して、少なくとも２０％高い発現産物の発現を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
（ａ）解糖経路中の遺伝子がＰＫ、ＡＧＩ、ＡＬＤＯ、ＡＬＤＯＡ、ＥＮＯ３、ＧＰＩ、ＨＫ２、ＨＫ３、ＰＦＫ、ＰＧＭ、ＴＰＩ、ＧＡＰＤＨ、ＥＮＯ、およびＰＧＡＭからなる群から選択され、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子がＭＤＨ２、ＯＧＤＨ、ＰＣ、ＰＤＨＡ１、ＰＤＨＢ、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、およびＳＵＣＬＧ２からなる群から選択され、（ｃ）電子伝達系中の遺伝子がＥＴＦＡ、ＡＴＰａｓｅ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＡ９、ＮＤＵＦＳ２、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、ＵＱＣＲＨ１、Ｃｏｘ６ｃ１、およびＣｏｘ１０からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記遺伝子がＰＫである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記遺伝子がＡＴＰａｓｅである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象の肺組織におけるグルコース酸化を正常化する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが少なくとも０．１５ｎｍｏｌ／ｍｉｎ／ｍＬのＰＫ活性を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、３週間の慢性低酸素状態曝露を施しＰＢＳで処理した対照マウスと比較して少なくとも１０％、３週間の慢性低酸素状態曝露を施したマウスの右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を下げることができる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、２４時間の低酸素状態曝露を施しＰＢＳ対照で処理した対照ＳＭＣ細胞溶解物と比較して少なくとも２０％、２４時間の低酸素状態曝露を施したＳＭＣ細胞溶解物によるＯ２消費を増大することができる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ミトコンドリア機能障害と関連した疾患または状態を治療する方法に使用するための、単離細胞外小胞またはエクソソームを含む医薬組成物であって、
前記単離細胞外小胞またはエクソソームは、間葉系間質細胞から得られたものであり、
前記方法は、前記単離細胞外小胞またはエクソソームを前記疾患または状態の治療を必要とする対象に投与することを含み、
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、前記間葉系間質細胞から得た全細胞外小胞またはエクソソームにおける発現産物の平均量と比較して、（ａ）解糖経路中の遺伝子、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子、および（ｃ）電子伝達系中の遺伝子からなる群から選択される１つまたは複数の発現産物の発現が増加した細胞外小胞またはエクソソームを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
（ａ）解糖経路中の遺伝子がＰＫ、ＡＧＩ、ＡＬＤＯ、ＡＬＤＯＡ、ＥＮＯ３、ＧＰＩ
、ＨＫ２、ＨＫ３、ＰＦＫ、ＰＧＭ、ＴＰＩ、ＧＡＰＤＨ、ＥＮＯ、およびＰＧＡＭからなる群から選択され、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子がＭＤＨ２、ＯＧＤＨ、ＰＣ、ＰＤＨＡ１、ＰＤＨＢ、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、およびＳＵＣＬＧ２からなる群から選択され、かつ（ｃ）電子伝達系中の遺伝子がＥＴＦＡ、ＡＴＰａｓｅ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＡ９、ＮＤＵＦＳ２、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、ＵＱＣＲＨ１、Ｃｏｘ６ｃ１、およびＣｏｘ１０からなる群から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記遺伝子がＰＫである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが少なくとも０．１５ｎｍｏｌ／ｍｉｎ／ｍＬのＰＫ活性を有する、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記遺伝子がＡＴＰａｓｅである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象の肺組織におけるグルコース酸化を正常化する、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記ミトコンドリア機能障害と関連した疾患または状態が、前記対象におけるミトコンドリアのグルコース酸化の低減と関連している、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記ミトコンドリア機能障害と関連した疾患または状態が、フリードライヒ運動失調症、レーベル遺伝性視神経症、カーンズセイヤー症候群、乳酸アシドーシスおよび脳血管発作様症状発現を伴うミトコンドリア脳筋症、リー症候群、肥満症、アテローム性動脈硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、がん、心不全、心筋梗塞（ＭＩ）、アルツハイマー病、ハンチントン病、統合失調症、双極性障害、脆弱Ｘ症候群、および慢性疲労症候群からなる群から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
肺高血圧症を治療または予防することができる細胞外小胞またはエクソソームを単離する方法であって、以下のステップ：
ａ．細胞外小胞またはエクソソームを含む間葉系間質細胞の培養培地を用意するステップ、
ｂ．前記培養培地の他の成分から前記細胞外小胞またはエクソソームの少なくとも一部分を分離するステップ、
ｃ．他の細胞外小胞またはエクソソーム集団から細胞外小胞またはエクソソーム集団を単離するステップであって、前記集団が、前記間葉系間質細胞から得た全細胞外小胞またはエクソソームにおける発現産物の平均量と比較して、（ａ）解糖経路中の遺伝子、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子、および（ｃ）電子伝達系中の遺伝子からなる群から選択される１つまたは複数の発現産物の発現が増加している、ステップ
を含む方法。
【請求項１９】
前記細胞外小胞またはエクソソーム集団をリン脂質検出によって単離する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
（ａ）解糖経路中の遺伝子がＰＫ、ＡＧＩ、ＡＬＤＯ、ＡＬＤＯＡ、ＥＮＯ３、ＧＰＩ、ＨＫ２、ＨＫ３、ＰＦＫ、ＰＧＭ、ＴＰＩ、ＧＡＰＤＨ、ＥＮＯ、およびＰＧＡＭからなる群から選択され、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子がＭＤＨ２、ＯＧＤＨ、ＰＣ、ＰＤＨＡ１、ＰＤＨＢ、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、およびＳＵＣＬＧ２からなる群から選択され、かつ（ｃ）電子伝達系中の遺伝子がＥＴＦＡ、ＡＴＰａｓｅ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＡ９、ＮＤＵＦＳ２、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、Ｕ
ＱＣＲＨ１、Ｃｏｘ６ｃ１、およびＣｏｘ１０からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記遺伝子がＰＫである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記遺伝子がＡＰＴａｓｅである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
肺高血圧症を治療または予防することができる細胞外小胞またはエクソソームを単離する方法であって、以下のステップ：
ａ．細胞外小胞またはエクソソームを含む間葉系間質細胞の培養培地を用意するステップ、
ｂ．前記培養培地の他の成分から前記細胞外小胞またはエクソソームの少なくとも一部分を分離するステップ、
ｃ．分子量に基づき細胞外小胞またはエクソソームの異なる集団を分離するステップ、
ｄ．前記細胞外小胞またはエクソソームの異なる集団で低酸素状態曝露マウスを処理するステップ、
ｅ．酸素正常状態マウス、低酸素状態曝露マウス、および前記細胞外小胞またはエクソソームで処理した低酸素状態曝露マウスの右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を測定するステップ、
ｆ．前記ＲＶＳＰに基づき細胞外小胞またはエクソソームの強力な集団を同定するステップ
を含む方法。
【請求項２４】
細胞外小胞またはエクソソームで処理した低酸素状態曝露マウスのＲＶＳＰの低酸素状態曝露マウスのＲＶＳＰに対する比が０．８５以下である場合、細胞外小胞またはエクソソームの集団が強力である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
デルタＲＶＳＰが５未満であり、デルタＲＶＳＰが細胞外小胞またはエクソソームで処理した低酸素状態曝露マウスのＲＶＳＰマイナス酸素正常状態マウスのＲＶＳＰである場合、細胞外小胞またはエクソソームの集団が強力である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
ステップｃにおいて、細胞外小胞またはエクソソームの異なる集団をリン脂質検出によって分離する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記細胞外小胞またはエクソソームの強力な集団が、前記間葉系間質細胞から得た全細胞外小胞またはエクソソームにおける発現産物の平均量と比較して、（ａ）解糖経路中の遺伝子、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子、および（ｃ）電子伝達系中の遺伝子からなる群から選択される１つまたは複数の発現産物の発現が増加している、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）解糖経路中の遺伝子がＰＫ、ＡＧＩ、ＡＬＤＯ、ＡＬＤＯＡ、ＥＮＯ３、ＧＰＩ、ＨＫ２、ＨＫ３、ＰＦＫ、ＰＧＭ、ＴＰＩ、ＧＡＰＤＨ、ＥＮＯ、およびＰＧＡＭからなる群から選択され、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子がＭＤＨ２、ＯＧＤＨ、ＰＣ、ＰＤＨＡ１、ＰＤＨＢ、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、およびＳＵＣＬＧ２からなる群から選択され、かつ（ｃ）電子伝達系中の遺伝子がＥＴＦＡ、ＡＴＰａｓｅ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＡ９、ＮＤＵＦＳ２、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、ＵＱＣＲＨ１、Ｃｏｘ６ｃ１、およびＣｏｘ１０からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
前記遺伝子がＰＫである、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
前記遺伝子がＡＴＰａｓｅである、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】
気管支肺異形成症を治療または予防することができる細胞外小胞またはエクソソームを単離する方法であって、以下のステップ：
ａ．細胞外小胞またはエクソソームを含む間葉系間質細胞の培養培地を用意するステップ、
ｂ．前記培養培地の他の成分から前記細胞外小胞またはエクソソームの少なくとも一部分を分離するステップ、
ｃ．分子量に基づき細胞外小胞またはエクソソームの異なる集団を分離するステップ、
ｄ．前記細胞外小胞またはエクソソームの異なる集団で低酸素状態曝露マウスを処理するステップ、
ｅ．酸素正常状態マウス、低酸素状態曝露マウス、および前記細胞外小胞またはエクソソームで処理した低酸素状態曝露マウスの右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を測定するステップ、
ｆ．前記ＲＶＳＰに基づき細胞外小胞またはエクソソームの強力な集団を同定するステップを
含む方法。
【請求項３２】
ステップｂにおける分離がサイズ排除クロマトグラフィーによる、請求項２３または請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項２３または請求項３１に従って得られる単離細胞外小胞またはエクソソームを含む組成物。
【請求項３４】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが約１００ｎｍの平均直径を有する、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームがＦＬＯＴおよび／またはＡＮＸＡ２を発現する、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、前記間葉系間質細胞の全細胞外小胞またはエクソソームにおけるｍｉｒ２０４の平均量と比較してｍｉｒ２０４の発現が増加している、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３７】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、全間葉系間質細胞中のＣＤ１０５、ＧＡＰＤＨ、ＤＬＳＴ、および／またはＡＴＰ５Ａ１の平均量と比較してＣＤ１０５、ＧＡＰＤＨ、ＤＬＳＴ、および／またはＡＴＰ５Ａ１の増大した発現を含有するＭＳＣから分泌される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３８】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、間葉系間質細胞の全細胞外小胞またはエクソソームにおけるＳＯＲＣＳ１、ＦＨＩＴおよび／またはＡＮＫＲＤ３０ＢＬの平均量と比較してＳＯＲＣＳ１、ＦＨＩＴおよび／またはＡＮＫＲＤ３０ＢＬのＲＮＡ発現が増大している、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３９】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームがＭＨＣＩＩ汚染物質を実質的に含まない、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４０】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームがフィブロネクチンを実質的に含まない、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４１】
気管支肺異形成症を治療または予防する方法に使用するための、単離細胞外小胞またはエクソソームを含む医薬組成物であって、
前記方法が、前記気管支肺異形成症の治療または予防を必要とする対象に、請求項３１から４０のいずれか一項に記載の単離細胞外小胞またはエクソソームを投与することを含む、医薬組成物。
【請求項４２】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象の免疫調節能力を増大させる、請求項４１に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象におけるＩＬ−６および／またはＴＮＦαの発現を低減させる、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象の血管形成を促進する、請求項４１に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象における酸素過剰誘導型アポトーシスを低減させる、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象におけるシトクロムＣレベルを低減させる、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象のミトコンドリア代謝を増大させる、請求項４１に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象における管形成を修復する、請求項４１に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象におけるＧＬＵＤ１および／またはＰＤＨ遺伝子発現を上方制御する、請求項４１に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象におけるＰＤＫ４遺伝子発現を下方制御する、請求項４１に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象におけるＳＩＲＴ４遺伝子発現を下方制御する、請求項４１に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記対象にシルデナフィルを投与することをさらに含む、請求項１から１７および４１から５１に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４０】
図３６中に示したように、強力集団と微細小胞汚染物質のＲＮＡｓｅｑクラスタリング解析において、強力なエクソソーム（ＣＯＭ２）が微細小胞汚染物質から差次的に群がり、それらはＳＯＲＣＳ１、ＦＨＩＴおよびＡＮＫＲＤ３０ＢＬが富化状態である。図３７中に示したように、強力なエクソソーム（ＣＯＭ２）は、ＧＡＰＤＨ発現の高発現レベルに相当するＣＯＭ１より低いＣＴ値を有する。
また、本発明は以下を提供する。
[１]
肺高血圧症を治療する方法であって、それを必要とする対象に間葉系間質細胞から得た単離細胞外小胞またはエクソソームを投与することを含み、前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、前記間葉系間質細胞から得た全細胞外小胞またはエクソソームにおける発現産物の平均量と比較して、（ａ）解糖経路中の遺伝子、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子、および（ｃ）電子伝達系中の遺伝子からなる群から選択される１つまたは複数の発現産物の発現が増加している細胞外小胞またはエクソソームを含む、方法。
[２]
前記細胞外小胞またはエクソソームが、前記間葉系間質細胞から得た全細胞外小胞またはエクソソームにおける同じ発現産物の平均量と比較して、少なくとも２０％高い発現産物の発現を含む、上記[１]に記載の方法。
[３]
（ａ）解糖経路中の遺伝子がＰＫ、ＡＧＩ、ＡＬＤＯ、ＡＬＤＯＡ、ＥＮＯ３、ＧＰＩ、ＨＫ２、ＨＫ３、ＰＦＫ、ＰＧＭ、ＴＰＩ、ＧＡＰＤＨ、ＥＮＯ、およびＰＧＡＭからなる群から選択され、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子がＭＤＨ２、ＯＧＤＨ、ＰＣ、ＰＤＨＡ１、ＰＤＨＢ、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、およびＳＵＣＬＧ２からなる群から選択され、（ｃ）電子伝達系中の遺伝子がＥＴＦＡ、ＡＴＰａｓｅ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＡ９、ＮＤＵＦＳ２、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、ＵＱＣＲＨ１、Ｃｏｘ６ｃ１、およびＣｏｘ１０からなる群から選択される、上記[１]に記載の方法。
[４]
前記遺伝子がＰＫである、上記[１]に記載の方法。
[５]
前記遺伝子がＡＴＰａｓｅである、上記[１]に記載の方法。
[６]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象の肺組織におけるグルコース酸化を正常化する、上記[１]に記載の方法。
[７]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが少なくとも０．１５ｎｍｏｌ／ｍｉｎ／ｍＬのＰＫ活性を有する、上記[１]に記載の方法。
[８]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、３週間の慢性低酸素状態曝露を施しＰＢＳで処理した対照マウスと比較して少なくとも１０％、３週間の慢性低酸素状態曝露を施したマウスの右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を下げることができる、上記[１]に記載の方法。
[９]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、２４時間の低酸素状態曝露を施しＰＢＳ対照で処理した対照ＳＭＣ細胞溶解物と比較して少なくとも２０％、２４時間の低酸素状態曝露を施したＳＭＣ細胞溶解物によるＯ２消費を増大することができる、上記[１]に記載の方法。
[１０]
ミトコンドリア機能障害と関連した疾患または状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に間葉系間質細胞から得た単離細胞外小胞またはエクソソームを投与することを含み、前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、前記間葉系間質細胞から得た全細胞外小胞またはエクソソームにおける発現産物の平均量と比較して、（ａ）解糖経路中の遺伝子、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子、および（ｃ）電子伝達系中の遺伝子からなる群から選択される１つまたは複数の発現産物の発現が増加した細胞外小胞またはエクソソームを含む、方法。
[１１]
（ａ）解糖経路中の遺伝子がＰＫ、ＡＧＩ、ＡＬＤＯ、ＡＬＤＯＡ、ＥＮＯ３、ＧＰＩ
、ＨＫ２、ＨＫ３、ＰＦＫ、ＰＧＭ、ＴＰＩ、ＧＡＰＤＨ、ＥＮＯ、およびＰＧＡＭからなる群から選択され、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子がＭＤＨ２、ＯＧＤＨ、ＰＣ、ＰＤＨＡ１、ＰＤＨＢ、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、およびＳＵＣＬＧ２からなる群から選択され、かつ（ｃ）電子伝達系中の遺伝子がＥＴＦＡ、ＡＴＰａｓｅ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＡ９、ＮＤＵＦＳ２、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、ＵＱＣＲＨ１、Ｃｏｘ６ｃ１、およびＣｏｘ１０からなる群から選択される、上記[１０]に記載の方法。
[１２]
前記遺伝子がＰＫである、上記[１０]に記載の方法。
[１３]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが少なくとも０．１５ｎｍｏｌ／ｍｉｎ／ｍＬのＰＫ活性を有する、上記[１３]に記載の方法。
[１４]
前記遺伝子がＡＴＰａｓｅである、上記[１０]に記載の方法。
[１５]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象の肺組織におけるグルコース酸化を正常化する、上記[１０]に記載の方法。
[１６]
前記ミトコンドリア機能障害と関連した疾患または状態が、前記対象におけるミトコンドリアのグルコース酸化の低減と関連している、上記[１０]に記載の方法。
[１７]
前記ミトコンドリア機能障害と関連した疾患または状態が、フリードライヒ運動失調症、レーベル遺伝性視神経症、カーンズセイヤー症候群、乳酸アシドーシスおよび脳血管発作様症状発現を伴うミトコンドリア脳筋症、リー症候群、肥満症、アテローム性動脈硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、がん、心不全、心筋梗塞（ＭＩ）、アルツハイマー病、ハンチントン病、統合失調症、双極性障害、脆弱Ｘ症候群、および慢性疲労症候群からなる群から選択される、上記[１０]に記載の方法。
[１８]
肺高血圧症を治療または予防することができる細胞外小胞またはエクソソームを単離する方法であって、以下のステップ：
ａ．細胞外小胞またはエクソソームを含む間葉系間質細胞の培養培地を用意するステップ、
ｂ．前記培養培地の他の成分から前記細胞外小胞またはエクソソームの少なくとも一部分を分離するステップ、
ｃ．他の細胞外小胞またはエクソソーム集団から細胞外小胞またはエクソソーム集団を単離するステップであって、前記集団が、前記間葉系間質細胞から得た全細胞外小胞またはエクソソームにおける発現産物の平均量と比較して、（ａ）解糖経路中の遺伝子、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子、および（ｃ）電子伝達系中の遺伝子からなる群から選択される１つまたは複数の発現産物の発現が増加している、ステップ
を含む方法。
[１９]
前記細胞外小胞またはエクソソーム集団をリン脂質検出によって単離する、上記[１８]に記載の方法。
[２０]
（ａ）解糖経路中の遺伝子がＰＫ、ＡＧＩ、ＡＬＤＯ、ＡＬＤＯＡ、ＥＮＯ３、ＧＰＩ、ＨＫ２、ＨＫ３、ＰＦＫ、ＰＧＭ、ＴＰＩ、ＧＡＰＤＨ、ＥＮＯ、およびＰＧＡＭからなる群から選択され、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子がＭＤＨ２、ＯＧＤＨ、ＰＣ、ＰＤＨＡ１、ＰＤＨＢ、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、およびＳＵＣＬＧ２からなる群から選択され、かつ（ｃ）電子伝達系中の遺伝子がＥＴＦＡ、ＡＴＰａｓｅ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＡ９、ＮＤＵＦＳ２、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、ＵＱＣＲＨ１、Ｃｏｘ６ｃ１、およびＣｏｘ１０からなる群から選択される、上記[１８]に記載の方法。
[２１]
前記遺伝子がＰＫである、上記[１８]に記載の方法。
[２２]
前記遺伝子がＡＰＴａｓｅである、上記[１８]に記載の方法。
[２３]
肺高血圧症を治療または予防することができる細胞外小胞またはエクソソームを単離する方法であって、以下のステップ：
ａ．細胞外小胞またはエクソソームを含む間葉系間質細胞の培養培地を用意するステップ、
ｂ．前記培養培地の他の成分から前記細胞外小胞またはエクソソームの少なくとも一部分を分離するステップ、
ｃ．分子量に基づき細胞外小胞またはエクソソームの異なる集団を分離するステップ、
ｄ．前記細胞外小胞またはエクソソームの異なる集団で低酸素状態曝露マウスを処理するステップ、
ｅ．酸素正常状態マウス、低酸素状態曝露マウス、および前記細胞外小胞またはエクソソームで処理した低酸素状態曝露マウスの右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を測定するステップ、
ｆ．前記ＲＶＳＰに基づき細胞外小胞またはエクソソームの強力な集団を同定するステップ
を含む方法。
[２４]
細胞外小胞またはエクソソームで処理した低酸素状態曝露マウスのＲＶＳＰと低酸素状態曝露マウスのＲＶＳＰの比が０．８５以下である場合、細胞外小胞またはエクソソームの集団が強力である、上記[２３]に記載の方法。
[２５]
デルタＲＶＳＰが５未満であり、デルタＲＶＳＰが細胞外小胞またはエクソソームで処理した低酸素状態曝露マウスのＲＶＳＰマイナス酸素正常状態マウスのＲＶＳＰである場合、細胞外小胞またはエクソソームの集団が強力である、上記[２３]に記載の方法。
[２６]
ステップｃにおいて、細胞外小胞またはエクソソームの異なる集団をリン脂質検出によって分離する、上記[２３]に記載の方法。
[２７]
前記細胞外小胞またはエクソソームの強力な集団が、前記間葉系間質細胞から得た全細胞外小胞またはエクソソームにおける発現産物の平均量と比較して、（ａ）解糖経路中の遺伝子、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子、および（ｃ）電子伝達系中の遺伝子からなる群から選択される１つまたは複数の発現産物の発現が増加している、上記[２３]に記載の方法。
[２８]
（ａ）解糖経路中の遺伝子がＰＫ、ＡＧＩ、ＡＬＤＯ、ＡＬＤＯＡ、ＥＮＯ３、ＧＰＩ、ＨＫ２、ＨＫ３、ＰＦＫ、ＰＧＭ、ＴＰＩ、ＧＡＰＤＨ、ＥＮＯ、およびＰＧＡＭからなる群から選択され、（ｂ）ＴＣＡ回路中の遺伝子がＭＤＨ２、ＯＧＤＨ、ＰＣ、ＰＤＨＡ１、ＰＤＨＢ、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、およびＳＵＣＬＧ２からなる群から選択され、かつ（ｃ）電子伝達系中の遺伝子がＥＴＦＡ、ＡＴＰａｓｅ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＡ９、ＮＤＵＦＳ２、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＣ、ＵＱＣＲＨ１、Ｃｏｘ６ｃ１、およびＣｏｘ１０からなる群から選択される、上記[２３]に記載の方法。
[２９]
前記遺伝子がＰＫである、上記[２３]に記載の方法。
[３０]
前記遺伝子がＡＴＰａｓｅである、上記[２３]に記載の方法。
[３１]
気管支肺異形成症を治療または予防することができる細胞外小胞またはエクソソームを単離する方法であって、以下のステップ：
ａ．細胞外小胞またはエクソソームを含む間葉系間質細胞の培養培地を用意するステップ、
ｂ．前記培養培地の他の成分から前記細胞外小胞またはエクソソームの少なくとも一部分を分離するステップ、
ｃ．分子量に基づき細胞外小胞またはエクソソームの異なる集団を分離するステップ、
ｄ．前記細胞外小胞またはエクソソームの異なる集団で低酸素状態曝露マウスを処理するステップ、
ｅ．酸素正常状態マウス、低酸素状態曝露マウス、および前記細胞外小胞またはエクソソームで処理した低酸素状態曝露マウスの右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を測定するステップ、
ｆ．前記ＲＶＳＰに基づき細胞外小胞またはエクソソームの強力な集団を同定するステップを
含む方法。
[３２]
ステップｂにおける分離がサイズ排除クロマトグラフィーによる、上記[２３]または[３１]に記載の方法。
[３３]
上記[２３]または[３１]に従って得られる単離細胞外小胞またはエクソソームを含む組成物。
[３４]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが約１００ｎｍの平均直径を有する、上記[３３]に記載の組成物。
[３５]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームがＦＬＯＴおよび／またはＡＮＸＡ２を発現する、上記[３３]に記載の組成物。
[３６]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、前記間葉系間質細胞の全細胞外小胞またはエクソソームにおけるｍｉｒ２０４の平均量と比較してｍｉｒ２０４の発現が増加している、上記[３３]に記載の組成物。
[３７]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、全間葉系間質細胞中のＣＤ１０５、ＧＡＰＤＨ、ＤＬＳＴ、および／またはＡＴＰ５Ａ１の平均量と比較してＣＤ１０５、ＧＡＰＤＨ、ＤＬＳＴ、および／またはＡＴＰ５Ａ１の増大した発現を含有するＭＳＣから分泌される、上記[３３]に記載の組成物。
[３８]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが、間葉系間質細胞の全細胞外小胞またはエクソソームにおけるＳＯＲＣＳ１、ＦＨＩＴおよび／またはＡＮＫＲＤ３０ＢＬの平均量と比較してＳＯＲＣＳ１、ＦＨＩＴおよび／またはＡＮＫＲＤ３０ＢＬのＲＮＡ発現が増大している、上記[３３]に記載の組成物。
[３９]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームがＭＨＣＩＩ汚染物質を実質的に含まない、上記[３３]に記載の組成物。
[４０]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームがフィブロネクチンを実質的に含まない、上記[３３]に記載の組成物。
[４１]
気管支肺異形成症を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に上記[３１]から[４０]のいずれか]に記載の単離細胞外小胞またはエクソソームを投与することを含む方法。
[４２]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象の免疫調節能力を増大させる、上記[４１]に記載の方法。
[４３]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象におけるＩＬ−６および／またはＴＮＦαの発現を低減させる、上記[４２]に記載の方法。
[４４]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象の血管形成を促進する、上記[４１]に記載の方法。
[４５]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象における酸素過剰誘導型アポトーシスを低減させる、上記[４４]に記載の方法。
[４６]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象におけるシトクロムＣレベルを低減させる、上記[４４]に記載の方法。
[４７]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象のミトコンドリア代謝を増大させる、上記[４１]に記載の方法。
[４８]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象における管形成を修復する、上記[４１]に記載の方法。
[４９]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象におけるＧＬＵＤ１および／またはＰＤＨ遺伝子発現を上方制御する、上記[４１]に記載の方法。
[５０]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象におけるＰＤＫ４遺伝子発現を下方制御する、上記[４１]に記載の方法。
[５１]
前記単離細胞外小胞またはエクソソームが前記対象におけるＳＩＲＴ４遺伝子発現を下方制御する、上記[４１]に記載の方法。
[５２]
前記対象にシルデナフィルを投与することをさらに含む、上記[１]から[１７]および[４１]から[５１]に記載の方法。