【手続補正書】
【提出日】令和2年7月17日(2020.7.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アシルＣｏＡの内因性又は外因性供給源から一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アルコールを生成する能力を有する組換えヤロウイア・リポリティカ（Yarrowia lipolytica）微生物であって、
（ａ）一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アシル−ＣｏＡの、対応する一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アルコールへの変換を触媒する、ミドリムシ属(Euglena)脂肪アルコール形成脂肪アシルレダクターゼをコードし、かつ発現する異種核酸分子
を含む、組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項２】
ミドリムシ属（Euglena）脂肪アルコール形成脂肪アシルレダクターゼが、還元当量としてＮＡＤＰＨの代わりにＮＡＤＨを使用する、請求項１に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項３】
ミドリムシ属（Euglena）脂肪アルコール形成脂肪アシルレダクターゼが、ミドリムシ（Euglena gracilis）由来である、請求項１又は２に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項４】
ミドリムシ属（Euglena）脂肪アルコール形成脂肪アシルレダクターゼが、配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項５】
ミドリムシ属（Euglena）脂肪アルコール形成脂肪アシルレダクターゼが、配列番号７５のアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項６】
飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アシル−ＣｏＡの、対応する一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アシル−ＣｏＡへの変換を触媒する、配列番号３９、５４、６０、６２、７８、７９、８０、９５、９７、９９、１０１、１０３及び１０５からなる群から選択される脂肪アシルデサチュラーゼをコードする核酸分子を少なくとも１つ含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項７】
ｆａｏ１遺伝子の、欠失、破壊、変異及び／又は低下を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項８】
ａ）脂肪アシル−ＣｏＡのα，β−エノイル−ＣｏＡへの変換を触媒する１つ以上の酵素；
ｂ）１つ以上の脂肪アルコールデヒドロゲナーゼ；
ｃ）１つ以上の脂肪アルコールオキシダーゼ；
ｄ）脂肪酸のω−ヒドロキシ脂肪酸への変換を触媒する１つ以上の酵素；及び
ｅ）１つ以上のジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ；
から選択される１つ以上の内因性酵素の活性の欠失、破壊、変異、及び／又は低下を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項９】
（ｉ）ＹＡＬＩ０Ｅ３２８３５ｇ（ＰＯＸ１）、ＹＡＬＩ０Ｆ１０８５７ｇ（ＰＯＸ２）、ＹＡＬＩ０Ｄ２４７５０ｇ（ＰＯＸ３）、ＹＡＬＩ０Ｅ２７６５４ｇ（ＰＯＸ４）、ＹＡＬＩ０Ｃ２３８５９ｇ（ＰＯＸ５）、ＹＡＬＩ０Ｅ０６５６７ｇ（ＰＯＸ６）からなる群から選択される１つ以上のアシル−ＣｏＡオキシダーゼ；
（ｉｉ）ＹＡＬＩ０Ｆ０９６０３ｇ（ＦＡＤＨ）、ＹＡＬＩ０Ｄ２５６３０ｇ（ＡＤＨ１）、ＹＡＬＩ０Ｅ１７７８７ｇ（ＡＤＨ２）、ＹＡＬＩ０Ａ１６３７９ｇ（ＡＤＨ３）、ＹＡＬＩ０Ｅ１５８１８ｇ（ＡＤＨ４）、ＹＡＬＩ０Ｄ０２１６７ｇ（ＡＤＨ５）、ＹＡＬＩ０Ａ１５１４７ｇ（ＡＤＨ６）、ＹＡＬＩ０Ｅ０７７６６ｇ（ＡＤＨ７）からなる群から選択される１つ以上の（脂肪）アルコールデヒドロゲナーゼ；
（ｉｉｉ）（脂肪）アルコールオキシダーゼＹＡＬＩ０Ｂ１４０１４ｇ（ＦＡＯ１）；
（ｉｖ）ＹＡＬＩ０Ｅ２５９８２ｇ（ＡＬＫ１）、ＹＡＬＩ０Ｆ０１３２０ｇ（ＡＬＫ２）、ＹＡＬＩ０Ｅ２３４７４ｇ（ＡＬＫ３）、ＹＡＬＩ０Ｂ１３８１６ｇ（ＡＬＫ４）、ＹＡＬＩ０Ｂ１３８３８ｇ（ＡＬＫ５）、ＹＡＬＩ０Ｂ０１８４８ｇ（ＡＬＫ６）、ＹＡＬＩ０Ａ１５４８８ｇ（ＡＬＫ７）、（ＹＡＬＩ０Ｃ１２１２２ｇ（ＡＬＫ８）、ＹＡＬＩ０Ｂ０６２４８ｇ（ＡＬＫ９）、ＹＡＬＩ０Ｂ２０７０２ｇ（ＡＬＫ１０）、ＹＡＬＩ０Ｃ１００５４ｇ（ＡＬＫ１１）及びＹＡＬＩ０Ａ２０１３０ｇ（Ａｌｋ１２）からなる群から選択される１つ以上のシトクロムＰ４５０酵素；及び
（ｖ）ＹＡＬＩ０Ｅ３２７９１ｇ（ＤＧＡ１）及びＹＡＬＩ０Ｄ０７９８６ｇ（ＤＧＡ２）からなる群から選択される１つ以上のジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ
から選択される１つ以上の内因性酵素の活性の欠失、破壊、変異及び／又は低下を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項１０】
脂肪アシル−ＣｏＡのα，β−エノイル−ＣｏＡへの変換を触媒する、ＣＡＡ０４６５９、ＣＡＡ０４６６０、ＣＡＡ０４６６１、ＣＡＡ０４６６２、ＣＡＡ０４６６３及びＣＡＧ７９２１４のそれぞれの活性の欠失、破壊、変異及び／又は低下を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項１１】
ＦＡＯ１酵素、並びに脂肪アシル−ＣｏＡのα，β−エノイル−ＣｏＡへの変換を触媒する、ＣＡＡ０４６５９、ＣＡＡ０４６６０、ＣＡＡ０４６６１、ＣＡＡ０４６６２、ＣＡＡ０４６６３及びＣＡＧ７９２１４のそれぞれの活性の欠失、破壊、変異及び／又は低下を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項１２】
一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アルコールが、Ｚ９−１４：ＯＨ、Ｚ１１−１４：ＯＨ、Ｅ１１−１４：ＯＨ、Ｚ９−１６：ＯＨ、Ｚ１１−１６：ＯＨ、Ｚ１１Ｚ１３−１６：ＯＨ及びＺ１３−１８：ＯＨからなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項１３】
飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪酸の内因性又は外因性供給源から一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アルコールを生成する能力を有する組換えヤロウイア・リポリティカ（Yarrowia lipolytica）微生物であって、
（ａ）飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アシル−ＣｏＡの、対応する一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アシル−ＣｏＡへの変換を触媒する、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する脂肪アシルデサチュラーゼをコードする少なくとも１つの核酸分子；及び
（ｂ）（ａ）からの一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アシル−ＣｏＡの、対応する一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アルコールへの変換を触媒する、配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する脂肪アルコール形成脂肪アシルレダクターゼをコードする少なくとも１つの核酸分子
を含む、組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項１４】
ａ）１つ以上の脂肪アルコールデヒドロゲナーゼ；
ｂ）脂肪酸のω−ヒドロキシ脂肪酸への変換を触媒する１つ以上の酵素；及び
ｃ）１つ以上のジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ；
から選択される１つ以上の内因性酵素の活性の欠失、破壊、変異、及び／又は低下を含む、請求項１３に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項１５】
（ａ）１つ以上の脂肪アルコールデヒドロゲナーゼ；
（ｂ）ＹＡＬＩ０Ｅ２５９８２ｇ（ＡＬＫ１）、ＹＡＬＩ０Ｆ０１３２０ｇ（ＡＬＫ２）、ＹＡＬＩ０Ｅ２３４７４ｇ（ＡＬＫ３）、ＹＡＬＩ０Ｂ１３８１６ｇ（ＡＬＫ４）、ＹＡＬＩ０Ｂ１３８３８ｇ（ＡＬＫ５）、ＹＡＬＩ０Ｂ０１８４８ｇ（ＡＬＫ６）、ＹＡＬＩ０Ａ１５４８８ｇ（ＡＬＫ７）、（ＹＡＬＩ０Ｃ１２１２２ｇ（ＡＬＫ８）、ＹＡＬＩ０Ｂ０６２４８ｇ（ＡＬＫ９）、ＹＡＬＩ０Ｂ２０７０２ｇ（ＡＬＫ１０）、ＹＡＬＩ０Ｃ１００５４ｇ（ＡＬＫ１１）及びＹＡＬＩ０Ａ２０１３０ｇ（Ａｌｋ１２）からなる群から選択される１つ以上のシトクロムＰ４５０酵素；及び
（ｃ）ＹＡＬＩ０Ｅ３２７９１ｇ（ＤＧＡ１）及びＹＡＬＩ０Ｄ０７９８６ｇ（ＤＧＡ２）からなる群から選択される１つ以上のジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ
から選択される１つ以上の内因性酵素の活性の欠失、破壊、変異及び／又は低下を含む、請求項１３に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項１６】
脂肪アシル−ＣｏＡのα，β−エノイル−ＣｏＡへの変換を触媒する、ＣＡＡ０４６５９、ＣＡＡ０４６６０、ＣＡＡ０４６６１、ＣＡＡ０４６６２、ＣＡＡ０４６６３及びＣＡＧ７９２１４のそれぞれの活性の欠失、破壊、変異及び／又は低下を含む、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項１７】
ＦＡＯ１酵素、並びに脂肪アシル−ＣｏＡのα，β−エノイル−ＣｏＡへの変換を触媒する、ＣＡＡ０４６５９、ＣＡＡ０４６６０、ＣＡＡ０４６６１、ＣＡＡ０４６６２、ＣＡＡ０４６６３及びＣＡＧ７９２１４のそれぞれの活性の欠失、破壊、変異及び／又は低下を含む、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項１８】
一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アルコールが、Ｚ９−１４：ＯＨ、Ｚ１１−１４：ＯＨ、Ｅ１１−１４：ＯＨ、Ｚ９−１６：ＯＨ、Ｚ１１−１６：ＯＨ、Ｚ１１Ｚ１３−１６：ＯＨ及びＺ１３−１８：ＯＨからなる群から選択される、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物。
【請求項１９】
飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪酸の内因性又は外因性供給源から一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アルコールを生成する方法であって：一不飽和又は多価不飽和Ｃ６〜Ｃ２４脂肪アルコールの生成に適正な炭素源を供給する原料を含む培養培地で請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組換えヤロウイア・リポリティカ微生物を培養することを含む方法。