【手続補正書】
【提出日】令和2年10月12日(2020.10.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
目的物質の製造方法であって、
以下の工程：目的物質を生産する能力を有する微生物を利用して目的物質を製造すること
を含み、
前記微生物が、Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステインヒドロラーゼの活性が非改変株と比較して増大するように改変されており、
前記目的物質が、下記（Ｘ）〜（Ｚ）からなる群より選択される、方法：
（Ｘ）生合成にＳ−アデノシルメチオニンを要求する代謝物；
（Ｙ）Ｌ−メチオニン；および
（Ｚ）それらの組み合わせ。
【請求項２】
前記製造が、炭素源を含有する培地で前記微生物を培養し、前記目的物質を該培地中に生成蓄積させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記製造が、前記微生物を利用して前記目的物質の前駆体を該目的物質に変換することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記変換が、前記前駆体を含有する培地で前記微生物を培養し、前記目的物質を該培地中に生成蓄積させることを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記変換が、前記微生物の菌体を反応液中の前記前駆体に作用させ、前記目的物質を該反応液中に生成蓄積させることを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記菌体が、前記微生物の培養液に含まれる菌体、該培養液から回収された菌体、該培養液の処理物に含まれる菌体、該回収された菌体の処理物に含まれる菌体、またはそれらの組み合わせである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記前駆体が、プロトカテク酸、プロトカテクアルデヒド、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−オルニチン、グリシン、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
さらに、前記目的物質を回収することを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステインヒドロラーゼが、sahH遺伝子にコードされるタンパク質である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記sahH遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする、請求項９に記載の方法：
（ａ）配列番号１４５に示すアミノ酸配列を含むタンパク質；
（ｂ）配列番号１４５に示すアミノ酸配列において、１〜１０個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および／または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステインヒドロラーゼ活性を有するタンパク質；および
（ｃ）配列番号１４５に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステインヒドロラーゼ活性を有するタンパク質。
【請求項１１】
前記Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステインヒドロラーゼの活性が、Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステインヒドロラーゼをコードする遺伝子の発現を増大させることにより増大した、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステインヒドロラーゼをコードする遺伝子の発現が、該遺伝子のコピー数を増大させること、および／または該遺伝子の発現調節配列を改変することによって増大した、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記微生物が、腸内細菌科（Enterobacteriaceae）に属する細菌、コリネ型細菌、または酵母である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記微生物が、コリネバクテリウム（Corynebacterium）属細菌である、請求項１３に
記載の方法。
【請求項１５】
前記微生物が、コリネバクテリウム・グルタミカム（Corynebacterium glutamicum）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記微生物が、エシェリヒア（Escherichia）属細菌である、請求項１３に記載の方法
。
【請求項１７】
前記微生物が、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記代謝物（Ｘ）が、バニリン、バニリン酸、メラトニン、エルゴチオネイン、ムギネ酸、フェルラ酸、ポリアミン、グアイアコール、４−ビニルグアイアコール、４−エチルグアイアコール、およびクレアチンからなる群より選択される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記微生物が、さらに、前記目的物質の生合成に関与する酵素の活性が非改変株と比較して増大するように改変されている、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記目的物質の生合成に関与する酵素が、３−デオキシ−Ｄ−アラビノ−ヘプツロソン酸−７−リン酸シンターゼ、３−デヒドロキナ酸シンターゼ、３−デヒドロキナ酸デヒド
ラターゼ、３−デヒドロシキミ酸デヒドラターゼ、Ｏ−メチルトランスフェラーゼ、芳香族アルデヒドオキシドレダクターゼ、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記微生物が、さらに、ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼの活性が非改変株と比較して増大するように改変されている、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記微生物が、さらに、前記目的物質以外の物質の副生に関与する酵素の活性が非改変株と比較して低下するように改変されている、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記目的物質以外の物質の副生に関与する酵素が、バニリン酸デメチラーゼ、プロトカテク酸３，４−ジオキシゲナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、シキミ酸デヒドロゲナーゼ、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記微生物が、さらに、Ｌ−システイン生合成酵素の活性が非改変株と比較して増大するように改変されている、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記Ｌ−システイン生合成酵素が、cysI遺伝子、cysX遺伝子、cysH遺伝子、cysD遺伝子、cysN遺伝子、cysY遺伝子、cysZ遺伝子、fpr2遺伝子、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される遺伝子にコードされるタンパク質である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記Ｌ−システイン生合成酵素の活性が、cysR遺伝子にコードされるタンパク質の活性を増大させることにより、増大した、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記微生物が、さらに、NCgl2048遺伝子にコードされるタンパク質の活性が非改変株と比較して低下するように改変されている、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記微生物が、さらに、エノラーゼの活性が非改変株と比較して低下するように改変されている、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
バニリンの製造方法であって、
請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法によりバニリン酸を製造すること；および
前記バニリン酸をバニリンに変換すること
を含む、方法。
【請求項３０】
前記微生物が、コリネバクテリウム（Corynebacterium）属細菌である、請求項２９に
記載の方法。
【請求項３１】
前記微生物が、コリネバクテリウム・グルタミカム（Corynebacterium glutamicum）である、請求項２９に記載の方法。