【手続補正書】
【提出日】令和2年11月10日(2020.11.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
励起ビームを放出するように構成された励起光源；
該励起光源に光学的に結合されたスキャナであって、該スキャナは、複数のチャネルに位置する標的粒子からの蛍光を生成するために、基板の複数のチャネルにわたって、該励起光源からの励起ビームをスキャンするように構成されている、該スキャナ；
該標的粒子から生成された蛍光を受け、かつ検出するように構成された、検出器；
該複数のチャネルから該標的粒子を取り出すための抽出ビームを提供するように構成された抽出レーザであって、該スキャナが光学的に結合されている、該抽出レーザ；ならびに
該検出器、該スキャナ、および該抽出レーザに結合された回路であって、該回路は、該標的粒子を有する該複数のチャネルの位置を同定し、かつ、毎秒約500,000マイクロチャネルを超える、または毎秒約1,000,000個の標的粒子を超える速度で、検出された蛍光に応答して該複数のチャネルから該標的粒子を選択的に取り出すために、該スキャナおよび該抽出レーザを制御するように構成されている、該回路
を含む、装置。
【請求項２】
毎秒約1,000,000〜約2,000,000個の標的粒子の範囲内の速度で、複数のチャネルから標的粒子を取り出すように構成されている、請求項1記載の装置。
【請求項３】
スキャナが、複数のチャネルにわたって励起ビームおよび抽出ビームを同時にスキャンするために、励起光源および抽出レーザに光学的に結合されている、請求項1記載の装置。
【請求項４】
スキャナ、励起ビームおよび抽出ビームが、複数のチャネルにわたって励起ビームおよび抽出ビームを独立にスキャンするために、光学素子と整列し、該励起ビームが該抽出ビームから離れている、請求項1記載の装置。
【請求項５】
複数の抽出ビームが光学素子により生成され、該複数の抽出ビームは、互いから離れ、独立して変調される、請求項1記載の装置。
【請求項６】
光学素子が、励起ビームを複数のチャネルの第一のチャネルに集束させると同時に抽出ビームを該複数のチャネルの第二のチャネルに集束させるように構成され、該第一のチャネルが該第二のチャネルとは異なる位置にある、請求項1記載の装置。
【請求項７】
第一のチャネルは第二のチャネルから約100μm〜約5mmの範囲内の距離だけ離れている、請求項6記載の装置。
【請求項８】
スキャナが1つまたは複数の実質的に平坦な鏡面を含み、励起ビームおよび抽出ビームが、該1つまたは複数の実質的に平坦な鏡面から光学的に反射するように配置されている、請求項1記載の装置。
【請求項９】
スキャナが、(1)複数のチャネルにわたって励起ビームを反射させかつスキャンするように構成された第一のスキャナと、(2)複数のチャネルにわたって抽出ビームを反射させかつスキャンするように構成された第二のスキャナとを含み、
(a)複数のチャネルにおける標的粒子から蛍光を生成するための、第一のスキャナによる該励起ビームのスキャンと、(b)複数のチャネルから標的粒子を選択的に取り出すために、第二のスキャナによる該抽出ビームのスキャンとを同調させるように、回路が構成されている、
請求項1記載の装置。
【請求項１０】
第一のスキャナおよび第二のスキャナが、基板の1つの側に位置する、請求項9記載の装置。
【請求項１１】
第一のスキャナおよび第二のスキャナが、基板の両側に位置する、請求項9記載の装置。
【請求項１２】
第一のスキャナおよび第二のスキャナが、それぞれ、ポリゴンスキャナ、ガルバノメータスキャナ、音響光学変調器、デジタル光処理システム（DLPS）およびレゾナントスキャナからなる群より選択される、請求項9記載の装置。
【請求項１３】
スキャナが、ポリゴンスキャナ、ガルバノメータスキャナおよび音響光学変調器からなる群より選択される、請求項1記載の装置。
【請求項１４】
回路および検出器は、標的粒子の蛍光が閾値量よりも高いときに複数のチャネルにおける標的粒子の存在を検出するように構成され、蛍光のレベルが標的粒子の蛍光応答を生成するために用いられる、請求項1記載の装置。
【請求項１５】
回路および検出器が、蛍光応答に基づいて、複数のチャネルの各チャネルを選択的に照射するように構成され、蛍光と照射との間の経過時間の長さが約10ns〜約100μsの範囲内にある、請求項14記載の装置。
【請求項１６】
励起光源、抽出レーザおよび回路が共通のクロックに対して同期化される、請求項1記載の装置。
【請求項１７】
励起光源が、複数の波長を放出するように構成され、該複数の波長それぞれが、該複数の波長の他のピークから離れたピークを含む、請求項1記載の装置。
【請求項１８】
励起光源が、発光ダイオード（LED）およびレーザからなる群より選択される、請求項1記載の装置。
【請求項１９】
光学素子が対物レンズを含み、励起光源、該対物レンズおよび検出器が共焦点配置に整列している、請求項4記載の装置。
【請求項２０】
対物レンズがFシータ光学素子を含む、請求項19記載の装置。
【請求項２１】
検出器が、電荷結合素子（CCD）検出器アレイまたは相補型金属酸化膜半導体（CMOS）検出器アレイを含む、請求項1記載の装置。
【請求項２２】
スキャナが、基板の複数のチャネルにわたって、励起光源からの励起ビームを、毎秒約100,000〜約300,000,000チャネルの範囲内の速度でスキャンするように構成されている、請求項1記載の装置。
【請求項２３】
励起光源から励起ビームを放出する工程；
複数のチャネルに位置する標的粒子からの蛍光を生成するために、基板の複数のチャネルにわたって、該励起光源からの励起ビームを、スキャナによってスキャンする工程；
検出器によって、該標的粒子から生成された蛍光を受け、かつ検出する工程；
該複数のチャネルから該標的粒子を取り出すために、抽出レーザから抽出ビームを提供する工程であって、該スキャナが該抽出レーザに光学的に結合されている、該工程；ならびに
該標的粒子を有する該複数のチャネルの位置を同定し、かつ、毎秒約500,000マイクロチャネルを超える、または毎秒約1,000,000個の標的粒子を超える速度で、検出された蛍光に応答して該複数のチャネルから該標的粒子を選択的に取り出すために、該スキャナおよび該抽出レーザを、回路によって制御する工程であって、該回路は、該検出器、該スキャナ、および該抽出レーザに結合されている、該工程
を含む、標的粒子を検出し、かつ選別する方法。
【請求項２４】
標的粒子が、所望の表現型の細胞を含む、請求項23記載の方法。
【請求項２５】
抽出される標的粒子の95％超がHSCおよび／またはHSPCである、請求項23記載の方法。
【請求項２６】
抽出された標的粒子が、さらなる滅菌工程を要することなく、治療用途に適している、請求項23記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
特定の態様において、前記方法の細胞性物質は、ヒト対象から得られる、および／または5％未満のHSCおよびHSPCを含む。特定の態様においては、抽出される細胞の95％超がHSCおよび／またはHSPCである。特定の態様においては、抽出される細胞の95％超が前記所望の表現型の細胞である。特定の態様においては、前記抽出する工程から5時間以内に細胞を評価することにより決定した場合に、抽出される細胞の95％超が生存可能である。特定の態様において、抽出された細胞は、さらなる滅菌工程を要することなく、治療用途に適している。抽出された細胞は本質的に病原体フリーであり得る。抽出された細胞は0.1％未満の病原体を含み得る。特定の態様において、本開示は、本明細書における方法のいずれかによって得られる抽出された細胞およびその医薬組成物を提供する。
[本発明1001]
以下を含む、標的粒子を検出し、かつ選別するためのカセット：
第一の表面および第二の表面ならびに該第一の表面から該第二の表面まで延びる複数のマイクロチャネルを有する基板；
該基板から放出された標的粒子を受けるための内面を含む、該基板を受けるように構成された第一のハウジング；
該第一のハウジングといっしょに該基板を封入するやり方で該第一のハウジングに結合された第二のハウジングであって、該第一または第二のハウジングが第一のフィルポートをさらに含む、第二のハウジング；および
該第一のハウジングおよび該第二のハウジングの一方またはそれぞれの中に位置する、カセットの外側から該基板への電磁放射線の伝送を可能にする透過性部分。
[本発明1002]
透過性部分が、約250nm〜1600nmの範囲の波長に対して少なくとも部分的に透過性である、本発明1001のカセット。
[本発明1003]
透過性部分が第一のハウジング中に位置する、本発明1001または1002のカセット。
[本発明1004]
透過性部分が第二のハウジング中に位置する、本発明1001〜1003のいずれかのカセット。
[本発明1005]
第一のフィルポートが、試料物質混合物をカセットの中に受けるように構成されている、本発明1001〜1004のいずれかのカセット。
[本発明1006]
第一のハウジングが第一のフィルポートを含む、本発明1001〜1005のいずれかのカセット。
[本発明1007]
第二のハウジングが第一のフィルポートを含む、本発明1001〜1005のいずれかのカセット。
[本発明1008]
第一または第二のハウジングがリリースポートをさらに含む、本発明1001〜1007のいずれかのカセット。
[本発明1009]
リリースポートが、カセット中の該リリースポートの外への標的粒子の移送を可能にするために、内面と流体連通している、本発明1008のカセット。
[本発明1010]
第一のハウジングがリリースポートを含む、本発明1008または1009のカセット。
[本発明1011]
第二のハウジングがリリースポートを含む、本発明1008または1009のカセット。
[本発明1012]
第二のハウジングが第一のハウジングの上に配置されている、本発明1001〜1011のいずれかのカセット。
[本発明1013]
第一のハウジングが第二のハウジングに対して実質的に平行な平面に配置されている、本発明1001〜1012のいずれかのカセット。
[本発明1014]
第一の表面および第二の表面ならびに該第一の表面から該第二の表面まで延びる複数のマイクロチャネルを有する基板；
該基板から放出された標的粒子を受けるための内面を含む、該基板を受けるように構成された第一のハウジング；
該第一のハウジングといっしょに該基板を封入するやり方で該第一のハウジングに結合された第二のハウジング
を含み、
該第一または第二のハウジングが、標的粒子混合物をカセットに導入するための第一のフィルポートをさらに含み、
該第一または第二のハウジングが、該カセットから標的粒子を放出するためのリリースポートをさらに含む、
標的粒子を検出し、かつ選別するためのカセット。
[本発明1015]
第一のハウジングが第一のフィルポートを含む、本発明1014のカセット。
[本発明1016]
第二のハウジングが第一のフィルポートを含む、本発明1014のカセット。
[本発明1017]
第一のハウジングがリリースポートを含む、本発明1014〜1016のいずれかのカセット。
[本発明1018]
第二のハウジングがリリースポートを含む、本発明1014〜1016のいずれかのカセット。
[本発明1019]
第一のハウジングおよび第二のハウジングの1つまたはそれぞれの中に位置する、該カセットの外側から基板への電磁放射線の伝送を可能にする透過性部分
をさらに含む、本発明1014〜1018のいずれかのカセット。
[本発明1020]
透過性部分が、約250nm〜1600nmの範囲の波長に対して少なくとも部分的に透過性である、本発明1019のカセット。
[本発明1021]
第二のハウジングが第一のハウジングの上に配置されている、本発明1014〜1020のいずれかのカセット。
[本発明1022]
第一のハウジングが第二のハウジングに対して実質的に平行な平面に配置されている、本発明1014〜1021のいずれかのカセット。
[本発明1023]
第一のハウジングと第二のハウジングとが1つのハウジングユニットとして不可逆的に結合されている、本発明1001〜1022のいずれかのカセット。
[本発明1024]
第一および第二のハウジングが可逆的なやり方で互いに結合されている、本発明1001〜1022のいずれかのカセット。
[本発明1025]
基板がガラスを含む、本発明1001〜1024のいずれかのカセット。
[本発明1026]
複数のマイクロチャネルが互いに対して実質的に平行に配置されている、本発明1001〜1025のいずれかのカセット。
[本発明1027]
複数のマイクロチャネルが約100万〜約1000億のマイクロチャネルである、本発明1001〜1026のいずれかのカセット。
[本発明1028]
複数のマイクロチャネルが約50nm〜約500μmの平均内径を有する、本発明1001〜1027のいずれかのカセット。
[本発明1029]
基板の第一の表面から第二の表面までの距離が平均で約10μm〜約1mmである、本発明1001〜1028のいずれかのカセット。
[本発明1030]
基板が、
基板の第一の表面の周囲から垂直に延びる、該基板の該第一の表面上への流体の封じ込めを可能にする縁取り要素
をさらに含む、本発明1001〜1029のいずれかのカセット。
[本発明1031]
第一のフィルポートと流体連通した試料ウェルをさらに含み、
該試料ウェルが、試料物質混合物を前記基板のマイクロチャネルの中に装填するように構成されている、
本発明1001〜1030のいずれかのカセット。
[本発明1032]
試料ウェルが基板の第一の表面と接触している、本発明1031のカセット。
[本発明1033]
試料ウェルが基板の第一の表面を横切って移動可能である、本発明1031または1032のカセット。
[本発明1034]
試料ウェルが手動的、機械的または電子式に移動可能である、本発明1033のカセット。
[本発明1035]
第一または第二のハウジングが第二のフィルポートをさらに含む、本発明1001〜1034のいずれかのカセット。
[本発明1036]
第一または第二のフィルポートが第一のハウジングの内面と流体連通している、本発明1035のカセット。
[本発明1037]
第一または第二のハウジングが第三のフィルポートをさらに含む、本発明1001〜1036のいずれかのカセット。
[本発明1038]
基板と接触するように配置された、または該基板に隣接して配置された水分補給膜
をさらに含む、本発明1001〜1037のいずれかのカセット。
[本発明1039]
第一、第二または第三のフィルポートが水分補給膜と流体連通している、本発明1038のカセット。
[本発明1040]
第一および第二のハウジングがカセットへの汚染物質侵入を防ぐ、本発明1001〜1039のいずれかのカセット。
[本発明1041]
内面が収集ウェルをさらに含む、本発明1001〜1040のいずれかのカセット。
[本発明1042]
収集ウェルがリリースポートと流体連通している、本発明1041のカセット。
[本発明1043]
第一または第二のハウジングが、
第一または第二のハウジングおよび基板の第一または第二の表面に取り付けられて該基板の表面に張力を加える金属フレーム
をさらに含む、本発明1001〜1042のいずれかのカセット。
[本発明1044]
基板が第一端、第二端および中間部分を含み、該第一端、該第二端および該中間部分がすべて実質的に同じ平面内にある、本発明1001〜1043のいずれかのカセット。
[本発明1045]
標的粒子が細胞を含む、本発明1001〜1044のいずれかのカセット。
[本発明1046]
使用前に滅菌される、本発明1001〜1045のいずれかのカセット。
[本発明1047]
基板が3mm×3mm×0.3mm〜5000mm×15000mm×1000mmの寸法を有する、本発明1001〜1046のいずれかのカセット。
[本発明1048]
基板が3mm×3mm×0.3mm〜10000mm×10000mm×100mmの寸法を有する、本発明1001〜1047のいずれかのカセット。
[本発明1049]
カセットの1つまたは複数の構成要素と接触している接触型探触子
をさらに含む、本発明1001〜1048のいずれかのカセット。
[本発明1050]
第一の表面および第二の表面ならびに該第一の表面から該第二の表面まで延びる複数のマイクロチャネル
を含む、基板であって、
該マイクロチャネルが標的粒子および不透明な材料を含み、
該標的粒子の少なくとも約50％が、透明なゲルまたは透明な固体またはそれらの組み合わせを含むスペーサにより、該不透明な材料から少なくとも約1μm離されている、基板。
[本発明1051]
標的粒子の少なくとも約50％が、透明なゲルまたは透明な固体を含むスペーサにより、不透明な材料から少なくとも約1μm離されている、本発明1050の基板。
[本発明1052]
透明なゲルまたは固体が、アガロース、コラーゲン、マトリゲル、アルギネートおよびそれらの組み合わせを含む、本発明1050または1051の基板。
[本発明1053]
本発明1001〜1053のいずれかのカセットと、標的粒子の検出および選別におけるその使用のための指示書とを含む、キット。
[本発明1054]
以下の工程を含む、標的粒子を検出し、かつ選別する方法：
試料物質混合物を本発明1001〜1053のいずれかのカセットの中に加える工程；
該試料物質混合物を前記基板のマイクロチャネルの中に装填する工程；
該マイクロチャネルの内容物をスキャンする工程であって、1つまたは複数の標的粒子を含むマイクロチャネルを検出する、工程；および
該標的粒子を該基板から内面へ放出する工程。
[本発明1055]
試料物質混合物が第一のフィルポートを通してカセットの中に加えられる、本発明1054の方法。
[本発明1056]
試料物質混合物が試料ウェルに加えられる、本発明1054または1055の方法。
[本発明1057]
試料物質混合物が基板に加えられる、本発明1054または1055の方法。
[本発明1058]
試料物質混合物が細胞懸濁液を含む、本発明1054〜1057のいずれかの方法。
[本発明1059]
試料物質混合物が約1×106〜約100×109個の細胞を含む、本発明1058の方法。
[本発明1060]
試料ウェルが、ほぼ等しい量の試料物質混合物を基板の各マイクロチャネルの中に装填する、本発明1054〜1059のいずれかの方法。
[本発明1061]
マイクロチャネルをスキャンする工程が、第一の波長によるマイクロチャネルの照射および該マイクロチャネルからの第二の波長の検出を含み、該第二の波長が標的粒子と対応する、本発明1054〜1060のいずれかの方法。
[本発明1062]
マイクロチャネルの内容物をスキャンする工程が、複数の異なる波長によるマイクロチャネルの照射および該マイクロチャネルからの発光の検出を含み、
該発光が1つまたは複数の標的粒子と対応する、
本発明1054〜1060のいずれかの方法。
[本発明1063]
マイクロチャネルの内容物をスキャンする工程が、1つの波長によるマイクロチャネルの照射および該マイクロチャネルからの複数の発光の検出を含み、
該複数の発光が1つまたは複数の標的粒子と対応する、
本発明1054〜1060のいずれかの方法。
[本発明1064]
マイクロチャネルの内容物をスキャンする工程が、複数の異なる波長によるマイクロチャネルの照射および該マイクロチャネルからの複数の発光の検出を含み、
該発光の1つまたは複数が1つまたは複数の標的粒子と対応する、
本発明1054〜1060のいずれかの方法。
[本発明1065]
第一および第二の波長が独立して約200nm〜約1.5mmから選択される、本発明1064の方法。
[本発明1066]
標的粒子が第三の波長からのエネルギーによって基板から内面へ放出される、本発明1054〜1065のいずれかの方法。
[本発明1067]
第三の波長が約200nm〜約1.5mmから選択される、本発明1066の方法。
[本発明1068]
第三の波長が約350nm〜約1200nmから選択される、本発明1067の方法。
[本発明1069]
標的粒子が細胞である、本発明1054〜1068のいずれかの方法。
[本発明1070]
放出する工程ののち、標的粒子を内面からリリースポートへ移す工程をさらに含む、本発明1054〜1069のいずれかの方法。
[本発明1071]
標的粒子を内面からリリースポートへ移す工程が、第一または第二のフィルポートに溶液を加えて該標的粒子を該リリースポートへ移すことを含む、本発明1070の方法。
[本発明1072]
溶液が緩衝液である、本発明1071の方法。
[本発明1073]
基板を音波処理する工程をさらに含み、
該音波処理する工程がスキャンする工程の前に実施される、
本発明1054〜1072のいずれかの方法。
[本発明1074]
音波処理する工程が、装填する工程の前に、それと同時並行に、またはその後に、あるいはそれらの組み合わせで実施される、本発明1073の方法。
[本発明1075]
音波処理する工程が、基板を接触型探触子と接触させることを含む、本発明1074の方法。
[本発明1076]
透明な溶液と複数の不透明な粒子とを含む第一の混合物を基板のマイクロチャネルに加える工程；および
試料成分と水溶液とを含む第二の混合物を基板のマイクロチャネルに加える工程
を含む、複数のマイクロチャネルを含む基板のマイクロチャネルの中に混合物を装填する方法。
[本発明1077]
透明な溶液がゲル化剤を含む、本発明1076の方法。
[本発明1078]
ゲル化剤が、天然ガム、デンプン、ペクチン、寒天、ゼラチンまたはそれらの組み合わせを含む、本発明1077の方法。
[本発明1079]
第二の混合物の添加の前に第一の混合物を固化させる工程をさらに含む、本発明1076〜1078のいずれかの方法。
[本発明1080]
マイクロチャネルへの第一の混合物の添加の後かつ該マイクロチャネルへの第二の混合物の添加の前に、試薬を加えて該第一の混合物の一部分を該マイクロチャネルから取り出す工程をさらに含む、本発明1079の方法。
[本発明1081]
試料成分が細胞である、本発明1076〜1080のいずれかの方法。
[本発明1082]
複数の不透明な粒子が第四の波長の放射線を吸収する、本発明1076〜1081のいずれかの方法。
[本発明1083]
第四の波長が約250nm〜約1.5mmから選択される、本発明1082の方法。
[本発明1084]
複数の不透明な粒子の90％以上がマイクロチャネル中の試料成分と接触しない、本発明1076〜1083のいずれかの方法。
[本発明1085]
複数の不透明な粒子が、マイクロチャネル中、試料成分から少なくとも約1μm以上の距離だけ離されている、本発明1076〜1083のいずれかの方法。
[本発明1086]
試料成分と、不透明なコアおよび該コアを包囲するシェルを含む粒子とを基板のマイクロチャネルに加える工程を含む、複数のマイクロチャネルを含む基板のマイクロチャネルの中に混合物を装填する方法。
[本発明1087]
シェルが透明な材料を含む、本発明1086の方法。
[本発明1088]
透明な材料がゲルを含む、本発明1087の方法。
[本発明1089]
試料成分が細胞を含む、本発明1076〜1088のいずれかの方法。
[本発明1090]
試料成分および粒子が順次に基板のマイクロチャネルに加えられる、本発明1086〜1089のいずれかの方法。
[本発明1091]
試料成分および粒子が同時に基板のマイクロチャネルに加えられる、本発明1086〜1089のいずれかの方法。
[本発明1092]
不透明なコアが磁性ビーズを含む、本発明1086〜1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
第一に、試料成分と、波長X1を吸収しない複数の第一の粒子とをマイクロチャネルに加える工程；および
第二に、該マイクロチャネルに、波長X1を吸収する複数の第二の粒子を該マイクロチャネルに加える工程
を含む、複数のマイクロチャネルを含む基板のマイクロチャネルの中に混合物を装填する方法。
[本発明1094]
複数の第二の不透明な粒子が磁性ビーズを含む、本発明1093の方法。
[本発明1095]
標的粒子と、複数の磁性粒子と、複数の非磁性粒子とを含む試料物質混合物をマイクロチャネルに加える工程；および
該複数のマイクロチャネルの上または下から磁力を加えて該磁性粒子を引き寄せて、該非磁性粒子の上または下に層を形成する工程
を含む、複数のマイクロチャネルを含む基板のマイクロチャネルの中に試料混合物を装填する方法。
[本発明1096]
磁力を加えたのち、磁性粒子の50％以上が標的粒子と接触しない、本発明1095の方法。
[本発明1097]
磁力を加えたのち、磁性粒子の50％以上が試料成分から少なくとも約1μm以上離されている、本発明1095または1096の方法。
[本発明1098]
非磁性粒子が、シリカ、アガロース、ポリスチレンまたはそれらの組み合わせを含む粒子から選択される、本発明1095〜1097のいずれかの方法。
[本発明1099]
標的粒子が無傷細胞または溶解細胞を含む、本発明1098の方法。
[本発明1100]
試料物質混合物中の磁性粒子：非磁性粒子の重量比が約1：0.5〜約1：10である、本発明1095〜1099のいずれかの方法。
[本発明1101]
試料物質混合物中の磁性粒子の濃度が約1mg/mL〜約30mg/mLである、本発明1095〜1100のいずれかの方法。
[本発明1102]
試料物質混合物中の非磁性粒子の濃度が約1mg/mL〜約100mg/mLである、本発明1095〜1101のいずれかの方法。
[本発明1103]
まず、試料混合物を基板のマイクロチャネルに加える工程；
該試料混合物を加えたのち、蛍光物質で標識された粒子を該基板の該マイクロチャネルに加える工程；および
該マイクロチャネル中の標的粒子の数を定量する工程
を含む、基板のマイクロチャネル中の標的粒子の数を定量する方法。
[本発明1104]
マイクロチャネル中の標的粒子の数を定量する工程が、顕微鏡検査法を使用して実施される、本発明1103の方法。
[本発明1105]
粒子が不透明なビーズである、本発明1103または1104の方法。
[本発明1106]
不透明なビーズがDynabead、AgaroseおよびProMagから選択される、本発明1105の方法。
[本発明1107]
試料混合物がマイクロチャネルに加えられてから約5分以上後に粒子が加えられる、本発明1103〜1106のいずれかの方法。
[本発明1108]
標的粒子が細胞を含む、本発明1103〜1107のいずれかの方法。
[本発明1109]
以下の工程を含む、基板のマイクロチャネル中の標的粒子の数を定量する方法：
標的粒子を含む試料混合物を基板のマイクロチャネルの中に加える工程；
蛍光物質を該基板の該マイクロチャネルに加える工程；および
該マイクロチャネルから放出された蛍光を検出することによって該マイクロチャネル中の標的粒子の数を定量する工程であって、該放出された蛍光の強度が標的粒子計数に相関する、工程。
[本発明1110]
蛍光物質が溶解状態にある、本発明1109の方法。
[本発明1111]
試料混合物および蛍光物質が同時並行的にマイクロチャネルに加えられる、本発明1109または1110の方法。
[本発明1112]
蛍光物質が標的粒子と会合する、本発明1109の方法。
[本発明1113]
放出される高い蛍光が低い標的粒子計数またはゼロ標的粒子計数と相関し、放出される低い蛍光が高い標的粒子計数と相関する、本発明1109〜1112のいずれかの方法。
[本発明1114]
標的粒子が細胞である、本発明1109〜1113のいずれかの方法。
[本発明1115]
以下を含む、標的粒子を検出し、かつ選別するためのカセット：
第一の表面および第二の表面を有する基板であって、該第二の表面が、試料物質混合物を該第二の表面に付着させるように構成されている、基板；
該基板から放出された標的粒子を受けるための内面を含む、該基板を受けるように構成された第一のハウジング；
該第一のハウジングといっしょに該基板を封入するやり方で該第一のハウジングに結合された第二のハウジングであって、該第一または第二のハウジングが第一のフィルポートをさらに含む、第二のハウジング；および
該第一のハウジングおよび該第二のハウジングの一方またはそれぞれの中に位置する、カセットの外側から該基板への電磁放射線の伝送を可能にする透過性部分。
[本発明1116]
第二の表面への試料物質混合物の付着を高めるために、基板の該第二の表面が少なくとも部分的にコートされている、本発明1115のカセット。
[本発明1117]
第二の表面への標的粒子の付着を高めるために、基板の該第二の表面が少なくとも部分的にコートされている、本発明1115または1116のカセット。
[本発明1118]
基板がガラスを含む、本発明1115〜1117のいずれかのカセット。
[本発明1119]
表面上または複数のチャネル中に位置する標的粒子から蛍光を生成するための励起ビームを放出するための励起光源；
該標的粒子から蛍光を受けるための検出器；
該表面または複数のチャネルから標的粒子を取り出すための抽出ビームを提供するための抽出レーザ；
該表面または複数のチャネルへの該励起ビームおよび該抽出ビームをスキャンするための、該抽出ビームに結合されたスキャナ；および
該表面またはチャネルから検出された蛍光に応答して標的粒子を選択的に取り出すための、該検出器および該抽出ビームに結合された回路
を含む、毎秒約5,000〜約100,000,000個の標的粒子の範囲内の速度で該表面または複数のチャネルを処理するように構成されている、標的粒子を選別するための装置。
[本発明1120]
表面上に位置する標的粒子から蛍光を生成するための励起ビームを放出するための励起光源；
該標的粒子から蛍光を受けるための検出器；
該表面から標的粒子を取り出すための抽出ビームを提供するための抽出レーザ；
該表面への該励起ビームおよび該抽出ビームをスキャンするための、該抽出ビームに結合されたスキャナ；
該表面から検出された蛍光に応答して標的粒子を選択的に取り出すための、該検出器および該抽出ビームに結合された回路
を含む、毎秒約5,000〜約100,000,000個の標的粒子の範囲内の速度で該表面を処理するように構成されている、本発明1119の装置。
[本発明1121]
複数のチャネル中に位置する標的粒子から蛍光を生成するための励起ビームを放出するための励起光源；
該標的粒子から蛍光を受けるための検出器；
複数のチャネルから標的粒子を取り出すための抽出ビームを提供するための抽出レーザ；
複数のチャネルへの該励起ビームおよび該抽出ビームをスキャンするための、該抽出ビームに結合されたスキャナ；および
該チャネルから検出された蛍光に応答して標的粒子を選択的に取り出すための、該検出器および該抽出ビームに結合された回路
を含む、毎秒約5,000〜約100,000,000個の標的粒子の範囲内の速度で該複数のチャネルを処理するように構成されている、本発明1119の装置。
[本発明1122]
回路、抽出レーザおよび検出器が、毎秒約25,000〜約20,000,000個の標的粒子の範囲内の速度で表面または複数のチャネルを処理するように構成されている、本発明1119の装置。
[本発明1123]
スキャナが、表面または複数のチャネルに沿って励起ビームおよび抽出ビームをいっしょにスキャンするために、該励起ビームおよび該抽出ビームに光学的に結合されている、本発明1119または1120の装置。
[本発明1124]
スキャナ、励起ビームおよび抽出ビームが、表面または複数のチャネルへの励起ビームおよび抽出ビームをスキャンするために、光学素子と整列し、該励起ビームが該抽出ビームから離れている、本発明1123の装置。
[本発明1125]
スキャナおよび複数の抽出ビームが、表面または複数のチャネルへの抽出ビームをスキャンするために、光学素子と整列し、該抽出ビームが互いから離れ、独立して変調される、本発明1123の装置。
[本発明1126]
光学素子が、励起ビームを表面上の第一の位置または複数のチャネルの第一のチャネルに集束させると同時に抽出ビームを該表面上の第二の位置または該複数のチャネルの第二のチャネルに集束させるように構成され、該第一の位置が該第二の位置から約100μm〜約5mmの範囲内の距離だけ離れ、任意で、該距離が約250μm〜約1mmの範囲内である、本発明1124の装置。
[本発明1127]
スキャナ、光学素子、励起ビームおよび抽出ビームが、該励起ビームを表面上の第一の位置または複数のチャネルの第一のチャネルに集束させると同時に該抽出ビームを該表面上の第二の位置または該複数のチャネルの第二のチャネルに集束させるように配置され、該第一の位置が該第二の位置から約100μm〜約1mmの範囲内の距離だけ離れている、本発明1124の装置。
[本発明1128]
スキャナが1つまたは複数の実質的に平坦な鏡面を含み、励起ビームおよび抽出ビームが、該複数の実質的に平坦な鏡面それぞれからいっしょに反射するように配置されている、本発明1123の装置。
[本発明1129]
スキャナが、励起ビームを反射させかつスキャンするための第一のスキャナと、抽出ビームを反射させかつスキャンするための第二のスキャナとを含み、表面または複数のチャネルから標的粒子を選択的に取り出すために、アレイに沿って、該第一のスキャナによる該励起ビームのスキャンと該第二のスキャナによる該抽出ビームのスキャンとを同調させるように回路が構成されている、本発明1123の装置。
[本発明1130]
第一のスキャナおよび第二のスキャナが、表面または複数のチャネルを画定する基板の1つの側に位置する、本発明1129の装置。
[本発明1131]
第一のスキャナおよび第二のスキャナが、表面または複数のチャネルを画定する支持体の両側に位置する、本発明1129の装置。
[本発明1132]
第一のスキャナおよび第二のスキャナが、独立して、ポリゴンスキャナ、ガルバノメータスキャナ、音響光学変調器、デジタル光処理システム（DLPS）およびレゾナントスキャナからなる群より選択される、本発明1129の装置。
[本発明1133]
スキャナが、ポリゴンスキャナ、ガルバノメータスキャナおよび音響光学変調器からなる群より選択される、本発明1129の装置。
[本発明1134]
回路および検出器が、表面の各位置または複数のチャネルの各チャネルにおける閾値量よりも高い標的粒子の蛍光を検出し、蛍光応答に基づいて、該表面の各位置または該複数のチャネルの各チャネルを選択的に照射するように構成され、該蛍光と該照射との間の経過時間の長さが約10ns〜約100μsの範囲内、任意で約100ns〜約10μsの範囲内にある、本発明1119の装置。
[本発明1135]
励起光源、抽出レーザおよび回路が共通のクロックに対して同期化される、本発明1119の装置。
[本発明1136]
励起光源が、複数の波長を放出するように構成され、該複数の波長それぞれが、該複数の波長の他のピークから離れたピークを含む、本発明1119の装置。
[本発明1137]
励起光源が、LEDおよびレーザからなる群より選択される、本発明1119の装置。
[本発明1138]
光学素子が対物レンズを含み、励起光源、該対物レンズおよび検出器が共焦点配置に整列している、本発明1119の装置。
[本発明1139]
対物レンズがFシータ光学素子を含む、本発明1138の装置。
[本発明1140]
スキャナがミラーを含み、
共焦点配置で表面上の複数の位置への励起ビームをスキャンし、かつ該表面上の該複数の位置からの蛍光を計測するために、光学素子が、
該励起ビームを、該ミラーによって第一の角度で対物レンズに通して該表面の該位置に集束させ、該表面の該位置における第一の標的粒子からの第一の蛍光を、該ミラーによって該第一の角度で該対物レンズに通して検出器に伝送するように配置され、
該励起ビームを、該ミラーによって第二の角度で該対物レンズに通して該表面の第二の位置に集束させ、該表面の該第二の位置における第二の標的粒子からの蛍光を、該ミラーによって該第二の角度で該対物レンズに通して該検出器に伝送するように配置されている、
本発明1138の装置。
[本発明1141]
スキャナがミラーを含み
共焦点配置で複数のチャネルへの励起ビームをスキャンし、かつ該複数のチャネルからの蛍光を計測するために、光学素子が、
該励起ビームを、該ミラーによって第一の角度で対物レンズに通して該複数のチャネルの第一のチャネルに集束させ、該複数のチャネルの該第一のチャネル中の第一の標的粒子からの第一の蛍光を、該ミラーによって該第一の角度で該対物レンズに通して検出器に伝送するように配置され、
該励起ビームを、該ミラーによって第二の角度で該対物レンズに通して該複数のチャネルの第二のチャネルに集束させ、該複数のチャネルの該第二のチャネル中の第二の標的粒子からの蛍光を、該ミラーによって該第二の角度で該対物レンズに通して該検出器に伝送するように配置されている、
本発明1138の装置。
[本発明1142]
光学素子が、励起ビームを、検出器の視野と同軸に、対物レンズに通して伝送するように配置されている、本発明1138の装置。
[本発明1143]
励起ビームが表面のある位置または複数のチャネルのうちあるチャネルに集束するとき、検出器の視野が、該表面または該複数のチャネルを画定する基板の表面に沿って約100mm以下であり、任意で、該ビームが、拡散無限共役励起光を利用するように構成されている、本発明1138の装置。
[本発明1144]
検出器が、表面または複数のチャネルにおける視野を含み、該表面または複該数のチャネルにおけるビームの半値全幅断面サイズが該表面または該複数のチャネルにおける該視野以下であり、任意で、該半値全幅断面サイズが該視野の約半分以下である、本発明1138の装置。
[本発明1145]
検出器の視野が、アパーチャ、アパーチャを横切る寸法、ピンホール、ミラー、およびミラーを横切る反射面を横切る最大寸法からなる群より選択される光学構造によって画定される、本発明1144の装置。
[本発明1146]
検出器が複数の検出器を含み、該複数の検出器それぞれの視野が励起ビームと共焦点配置に整列している、本発明1138の装置。
[本発明1147]
励起ビームが複数の重なり合う励起ビームを含み、該複数の励起ビームそれぞれが検出器と共焦点配置に整列している、本発明1138の装置。
[本発明1148]
励起ビームが第一の励起ビームおよび第二の励起ビームを含み、第一の検出器の第一の視野が該第一の励起ビームと共焦点であり、第二の検出器の第二の視野が該第二の励起ビームと共焦点である、本発明1138の装置。
[本発明1149]
1つの標的粒子を含むために、複数のチャネルそれぞれの最大断面寸法が約10μm〜約100μmの範囲内である、本発明1119の装置。
[本発明1150]
標的粒子の蛍光に応答して、表面またはチャネルから標的粒子を抽出するのに十分な量のエネルギーで抽出ビームをパルシングし、標的粒子の生存を可能にするように回路が構成され、任意で、該標的粒子を抽出するためのエネルギーの量が約0.1μJ〜約1000μJの範囲内である、本発明1119の装置。
[本発明1151]
複数の標的粒子を抽出するための複数のパルスを生成するように回路が構成され、各抽出される標的粒子への抽出エネルギーの量が約1μJ〜約50μJの範囲内であり、各抽出される標的粒子への該抽出エネルギーの持続時間が約0.1ns〜約1000nsの範囲内であり、複数の抽出される標的粒子それぞれへのピーク抽出パワーが約0.1W〜約107Wの範囲内である、本発明1150の装置。
[本発明1152]
標的粒子を含むようにサイズ設定された複数のチャネルに光を向けるための対物レンズ；
該複数のチャネルに含まれた該標的粒子から蛍光を生成するために該対物レンズに光学的に結合された、励起ビームを生成するための光源；
該標的粒子から蛍光を受けるための、該対物レンズに光学的に結合された二次元アレイ検出器；
該複数のチャネルから標的粒子を取り出すための抽出ビームを生成するためのレーザ；および
該複数のチャネルへの該抽出ビームをスキャンするための、該抽出ビームに光学的に結合されたスキャナ
を含む、標的粒子を選別するための装置。
[本発明1153]
対物レンズが、表面または複数のチャネルに向かう該レンズの第一の側に第一の光路を画定し、該表面または該複数のチャネルから離れている該対物レンズの第二の側に第二の光路を画定し、抽出ビーム、励起ビームおよび二次元アレイ検出器が該第二の光路の少なくとも一部分に沿って該対物レンズに光学的に結合している、本発明1152の装置。
[本発明1154]
抽出ビームを対物レンズに結合するための第一のビームスプリッタと、励起ビームを該対物レンズに結合し、二次元アレイ検出器を該対物レンズに結合するための第二のビームスプリッタとをさらに含む、本発明1152の装置。
[本発明1155]
第一のビームスプリッタが、抽出ビームを対物レンズに向けて反射するための、該対物レンズに向けられた該第一のビームスプリッタの表面に位置するダイクロイックコーティングを含み、第二のビームスプリッタが、励起ビームを該対物レンズに向けて反射させ、該対物レンズを通過する標的粒子からの蛍光を二次元アレイ検出器に伝送するように構成されたダイクロイックビームスプリッタを含む、本発明1154の装置。
[本発明1156]
スキャナからの抽出ビームを対物レンズに結合するためのFシータリレーレンズをさらに含む、本発明1156の装置。
[本発明1157]
スキャナからの抽出ビームを対物レンズに結合するためのFシータリレーレンズ対をさらに含む、本発明1156の装置。
[本発明1158]
ビームスプリッタと励起光源との間で励起ビームを濾波するための、励起ビームに結合された波長セレクタをさらに含み、
任意で、該波長セレクタが、複数のフィルタを含むフィルタホイール、プリズムおよび格子からなる群より選択される、
本発明1152の装置。
[本発明1159]
複数の標的粒子を含む試料物質混合物を含む複数のマイクロチャネルを有する基板を提供する工程；
励起ビームによって該マイクロチャネルの内容物をスキャンする工程；
マイクロチャネル中の該標的粒子の存在を示す、該マイクロチャネルから放出された蛍光シグナルを検出する工程；および
抽出ビームによってマイクロチャネルから該標的粒子を抽出する工程
を含み、1つのマイクロチャネルから該蛍光を検出する工程と該標的粒子を抽出する工程との間の経過時間の長さが約10ns〜約100μsである、標的粒子を検出し、かつ選別する方法。
[本発明1160]
複数の標的粒子を含む試料物質混合物を含む複数のマイクロチャネルを有する基板を提供する工程；
励起ビームによって該マイクロチャネルの内容物をスキャンする工程；
マイクロチャネル中の該標的粒子の存在を示す、該マイクロチャネルから放出された蛍光シグナルを検出する工程；および
抽出ビームによって該マイクロチャネルから該標的粒子を抽出する工程
を含み、励起ビームによって該マイクロチャネルをスキャンする工程が、毎秒1,000,000マイクロチャネルを超える、毎秒2,000,000マイクロチャネルを超える、または毎秒3,000,000マイクロチャネルを超える速度で起こる、標的粒子を検出し、かつ選別する方法。
[本発明1161]
複数の標的粒子を含む試料物質混合物を含む複数のマイクロチャネルを有する基板を提供する工程；
励起ビームによって該マイクロチャネルの内容物をスキャンする工程；
マイクロチャネル中の該標的粒子の存在を示す、該マイクロチャネルから放出された蛍光シグナルを検出する工程；および
抽出ビームによってマイクロチャネルから該標的粒子を抽出する工程
を含み、抽出ビームによって該マイクロチャネルから該標的粒子を抽出する工程が、毎秒500,000マイクロチャネルを超える、毎秒600,000マイクロチャネルを超える、毎秒700,000マイクロチャネルを超える、毎秒800,000マイクロチャネルを超える、毎秒900,000マイクロチャネルを超える、または毎秒1,000,000マイクロチャネルを超える速度で起こる、標的粒子を検出し、かつ選別する方法。
[本発明1162]
複数の標的粒子を含む試料物質混合物を含む複数のマイクロチャネルを有する基板を提供する工程；
励起ビームによって該マイクロチャネルの内容物をスキャンする工程；
マイクロチャネル中の該標的粒子の存在を示す、該マイクロチャネルから放出された蛍光シグナルを検出する工程；および
抽出ビームによってマイクロチャネルから該標的粒子を抽出する工程
を含み、該マイクロチャネルから該標的粒子を抽出する工程が、90％を超える、95％を超える、または99％を超える純度で粒子の収集を生じさせる、標的粒子を検出し、かつ選別する方法。
[本発明1163]
a. 蛍光励起光を試料に向け、該試料から放出された蛍光の放出を誘発するように構成された蛍光励起光源；
b. 該試料から放出された蛍光を受けるように構成された対物レンズ；および
c. 該対物レンズによって受けられた放出された蛍光を検出するように構成された光検出器
を含み、該蛍光励起光源が、該蛍光励起光が該対物レンズを通過しないよう、蛍該光励起光を該試料に向けるように構成されている、蛍光顕微鏡。
[本発明1164]
蛍光励起光が対物レンズを通過しないよう該蛍光励起光を試料に向けることが、光検出器によって検出されるバックグラウンド蛍光を減らす、本発明1163の蛍光顕微鏡。
[本発明1165]
蛍光励起光が対物レンズを通過しないよう該蛍光励起光を試料に向けることが、光検出によって検出されるスペックルノイズを減らす、本発明1163の蛍光顕微鏡。
[本発明1166]
細胞性物質をスクリーニングして所望の表現型の細胞を同定する工程を含む、細胞を選別する方法であって、
該細胞性物質が、毎秒100,000細胞以上の速度でスクリーニングされる、方法。
[本発明1167]
細胞性物質が、毎秒500,000細胞以上の速度でスクリーニングされる、本発明1166の方法。
[本発明1168]
細胞性物質が、毎秒1,000,000細胞以上の速度でスクリーニングされる、本発明1167の方法。
[本発明1169]
所望の表現型の細胞を、細胞性物質から毎秒100,000細胞以上の速度で抽出する工程をさらに含む、本発明1166〜1168のいずれかの方法。
[本発明1170]
所望の表現型の細胞が、毎秒300,000細胞以上の速度で抽出される、本発明1169の方法。
[本発明1171]
細胞性物質が、スルーホールを有するアレイ中でスクリーニングされる、本発明1166〜1170のいずれかの方法。
[本発明1172]
所望の表現型の細胞がアレイから抽出される、本発明1171の方法。
[本発明1173]
前記抽出工程が、電磁放射線を使用して所望の表現型の細胞を解放することを含む、本発明1171〜1172のいずれかの方法。
[本発明1174]
アレイの各スルーホールが0〜約5個の細胞を含み、該アレイの該スルーホールの少なくとも30％が少なくとも1つの細胞を含む、本発明1173の方法。
[本発明1175]
細胞性物質が、ヒト対象から得られる、および／または、5％未満のHSCおよびHSPCを含む、本発明1166〜1174のいずれかの方法。
[本発明1176]
抽出される細胞の95％超がHSCおよび／またはHSPCである、本発明1169〜1175のいずれかの方法。
[本発明1177]
抽出される細胞の95％超が所望の表現型の細胞である、本発明1169〜1176のいずれかの方法。
[本発明1178]
前記抽出工程から5時間以内に該細胞を評価することにより決定した場合に、抽出される細胞の95％超が生存可能である、本発明1169〜1177のいずれかの方法。
[本発明1179]
抽出された細胞が、さらなる滅菌工程を要することなく、治療用途に適している、本発明1169〜1178のいずれかの方法。
[本発明1180]
抽出された細胞が本質的に病原体フリーである、本発明1169〜1179のいずれかの方法。
[本発明1181]
抽出された細胞が0.1％未満の病原体を含む、本発明1169〜1179のいずれかの方法。
[本発明1182]
本発明1169〜1181のいずれかの方法によって得られる、抽出された細胞。
[本発明1183]
本発明1182の抽出された細胞を含む、医薬組成物。