【手続補正書】
【提出日】令和2年9月10日(2020.9.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
反芻動物用飼料への飼料添加物として、少なくとも１つのアルファ−１，４／１，６−グリコシドヒドロラーゼ（ＧＬＣＨ）を添加する工程を含む、反芻動物のデンプン消化率およびグルコース収率を増加させる方法であって、前記ヒドロラーゼは（ａ）ペプシン存在下のｐＨ６における前記ヒドロラーゼの活性と比較して、ペプシン存在下の３以下のｐＨで、少なくとも２０％の活性を有し、（ｂ）前記ヒドロラーゼは第一胃、第四胃、および小腸を含む、反芻動物の３つの消化室の少なくとも２つの中で活性であり、かつ（ｃ）前記ヒドロラーゼは前記反芻動物の前記消化室に存在する消化酵素と協働して、デンプン消化率およびグルコース収率を増加させる方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つのＧＬＣＨ酵素は、前記第一胃または第四胃で見出される条件に相当する条件下で、生デンプンを加水分解することができる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヒドロラーゼは、アルファ−アミラーゼ、グルコアミラーゼおよびアルファ−グルコシダーゼからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ヒドロラーゼは、アルファ−アミラーゼおよびグルコアミラーゼからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記アルファ−アミラーゼは、ＧＨ１３ファミリーのメンバーであるか、またはアルファ−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１）；プルラナーゼ（ＥＣ  ３．２．１．４１）；シクロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１９）；シクロマルトデキストリナーゼ（ＥＣ  ３．２．１．５４）；トレハロース−６−リン酸ヒドロラーゼ（ＥＣ３．２．１．９３）；オリゴ−アルファ−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１０）；マルトジェニックアミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１３３）；ネオプルラナーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１３５）；アルファ−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２０）；マルトテトラオース−生成アルファ−アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．６０）；イソアミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．６８）；グルコデキストラナーゼ（ＥＣ  ３．２．１．７０）；マルトヘキサオース−生成アルファ−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．９８）；マルトトリオース−生成アルファ−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１１６）；分枝酵素（ＥＣ  ２．４．１．１８）；トレハロースシンターゼ（ＥＣ  ５．４．９９．１６）；４−アルファ−グルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．２５）；マルトペンタオース−生成アルファ−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．−）；アミロスクラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．４）；スクロースホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．７）；マルト−オリゴシルトレハローストレハロヒドロラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１４１）；イソマルツロースシンターゼ（ＥＣ  ５．４．９９．１１）；マルト−オリゴシルトレハロースシンターゼ（ＥＣ  ５．４．９９．１５）；アミロ−アルファ−１，６−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．３３）；およびアルファ−１，４−グルカン：リン酸アルファ−マルトシルトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．９９．１６）からなる群から選択される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
前記グルコシダーゼは、ＧＨ１３もしくはＧＨ３１ファミリーのメンバーであるか、またはアルファ−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２０）；アルファ−ガラクトシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２２）；アルファ−マンノシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２４）；アルファ−１，３−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．８４）；スクラーゼ−イソマルターゼ（ＥＣ  ３．２．１．４８）（ＥＣ  ３．２．１．１０）；アルファ−キシロシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１７７）；アルファ−グルカンリアーゼ（ＥＣ  ４．２．２．１３）；イソマルトシルトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．−）；オリゴ糖アルファ−１，４−グルコシルトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１６１）；スルホキノボシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．−）からなる群から選択される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項７】
前記グルコアミラーゼは、ＧＨ１５ファミリーのメンバーであるか、またはグルコアミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．３）；グルコデキストラナーゼ（ＥＣ  ３．２．１．７０）；アルファ−トレハラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２８）；およびデキストランデキストリナーゼ（ＥＣ  ２．４．１．２）からなる群から選択される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項８】
反芻動物におけるデンプン消化率を増加させ、グルコース収率を増加させ、乾物の消化を増加させ、かつ醗酵中のガス生成を増加させる方法であって、（ｉ）反芻動物用の飼料添加物としての、少なくとも１つのＧＬＣＨ酵素であって、前記酵素は（ａ）ペプシン存在下のｐＨ６における前記酵素の活性と比較して、ペプシン存在下の３以下のｐＨにおいて、少なくとも２０％の活性を有し、（ｂ）前記酵素は第一胃、第四胃、および小腸を含む、反芻動物の３つの消化室の少なくとも２つの中で活性であり、かつ（ｃ）前記酵素は膵臓アミラーゼと協働して、グルコース収率を増加させる少なくとも１つのＧＬＣＨ酵素と、（ｉｉ）少なくとも１つのプロテアーゼとを含む酵素組成物を前記飼料に添加する工程を含む方法。
【請求項９】
前記少なくとも１つのＧＬＣＨ酵素は、生デンプンを加水分解することができる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＧＬＣＨ酵素は、アルファ−アミラーゼ、グルコアミラーゼおよびアルファ−グルコシダーゼからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記酵素は、アルファ−アミラーゼおよびグルコアミラーゼからなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのＧＬＣＨ酵素は、アルファ−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１）；プルラナーゼ（ＥＣ  ３．２．１．４１）；シクロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１９）；シクロマルトデキストリナーゼ（ＥＣ  ３．２．１．５４）；トレハロース−６−リン酸ヒドロラーゼ（ＥＣ３．２．１．９３）；オリゴ−アルファ−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１０）；マルトジェニックアミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１３３）；ネオプルラナーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１３５）；アルファ−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２０）；マルトテトラオース−生成アルファ−アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．６０）；イソアミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．６８）；グルコデキストラナーゼ（ＥＣ  ３．２．１．７０）；マルトヘキサオース−生成アルファ−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．９８）；マルトトリオース−生成アルファ−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１１６）；分枝酵素（ＥＣ  ２．４．１．１８）；トレハロースシンターゼ（ＥＣ  ５．４．９９．１６）；４−アルファ−グルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．２５）；マルトペンタオース−生成アルファ−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．−）；アミロスクラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．４）；スクロースホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．７）；マルト−オリゴシルトレハローストレハロヒドロラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１４１）；イソマルツロースシンターゼ（ＥＣ  ５．４．９９．１１）；マルト−オリゴシルトレハロースシンターゼ（ＥＣ  ５．４．９９．１５）；アミロ−アルファ−１，６−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．３３）；およびアルファ−１，４−グルカン：リン酸アルファ−マルトシルトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．９９．１６）からなる群から選択される、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記グルコシダーゼは、アルファ−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２０）；アルファ−ガラクトシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２２）；アルファ−マンノシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２４）；アルファ−１，３−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．８４）；スクラーゼ−イソマルターゼ（ＥＣ  ３．２．１．４８）（ＥＣ  ３．２．１．１０）；アルファ−キシロシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１７７）；アルファ−グルカンリアーゼ（ＥＣ  ４．２．２．１３）；イソマルトシルトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．−）；オリゴ糖アルファ−１，４−グルコシルトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１６１）；スルホキノボシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．−）からなる群から選択される、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記グルコアミラーゼはＧＨ１５グリコシルヒドロラーゼファミリーから選択される、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記プロテアーゼは、酸性プロテアーゼまたは中性メタロプロテアーゼからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記プロテアーゼは、真菌性アスパラギン酸プロテアーゼまたは細菌性中性メタロプロテアーゼである、請求項１５に記載の方法。