【手続補正書】
【提出日】令和1年11月29日(2019.11.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９６】
様々な刊行物、特許、及び特許出願を、本明細書に引用し、その開示の全体を、参照によって組み込む。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
（構成１）
(i)N-グリコシル化コンセンサス配列を含む標的タンパク質をコードする核酸;(ii)前記N-グリコシル化コンセンサス配列内に存在するアミノ酸残基にグルコースを付加するN-グリコシルトランスフェラーゼ(NGT)をコードする核酸、及び(iii)前記グルコースへの単糖の付加を触媒するグリコシルトランスフェラーゼをコードする核酸を含む宿主細胞。
（構成２）
前記標的タンパク質が、宿主細胞にとって異種である、構成1記載の宿主細胞。
（構成３）
前記NGTが、宿主細胞にとって異種である、構成1記載の宿主細胞。
（構成４）
前記グルコースへの単糖の付加を触媒する前記グリコシルトランスフェラーゼが、宿主細胞にとって異種である、構成1記載の宿主細胞。
（構成５）
前記NGTが、アクチノバシラス・プルロニューモニエのNGT、ヘモフィルスの種のNGT、マンヘイミアの種のNGT、ビベルスティニアの種のNGT、又はエルシニアの種のNGTである、構成1〜4のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成６）
前記グルコースへの単糖の付加を触媒する前記グリコシルトランスフェラーゼが、ガラクトシルトランスフェラーゼである、構成1〜5のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成７）
前記ガラクトシルトランスフェラーゼが、髄膜炎菌のLgtB、淋菌のLgtB、髄膜炎菌のLgtE、カンピロバクター・ジェジュニのCgtB、大腸菌のWaaX、ヘリコバクター・ピロリのHP0826、又は真核生物β4Gal-T1である、構成6記載の宿主細胞。
（構成８）
シアリルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含む、構成1〜7のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成９）
前記シアリルトランスフェラーゼが、1以上のシアル酸残基を前記ガラクトースに付加する、構成8記載の宿主細胞。
（構成１０）
前記シアリルトランスフェラーゼが、宿主細胞にとって異種である構成8又は9記載の宿主細胞。
（構成１１）
前記シアリルトランスフェラーゼが、カンピロバクター・ジェジュニのCstII、カンピロバクター・ジェジュニのCstI、髄膜炎菌のLst、又は淋菌のLstである、構成8〜10のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成１２）
ポリシアリルトランスフェラーゼ(polyST)をコードする核酸をさらに含む、構成1〜11のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成１３）
前記polySTが、ポリシアル酸を合成する、構成12記載の宿主細胞。
（構成１４）
前記ポリシアル酸が、少なくとも10個、少なくとも25個、少なくとも50個、少なくとも75個、又は少なくとも100個のシアル酸残基を含む、構成13記載の宿主細胞。
（構成１５）
前記polySTが、宿主細胞にとって異種である、構成12〜14のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成１６）
前記polySTが、髄膜炎菌のpolyST若しくはその相同体、大腸菌K1のpolyST若しくはその相同体、マンヘイマニア・ヘモリチカ(Mannheimania haemolytica) のpolyST若しくはその相同体、又はモラクセラ・ノンリキファシエン(Moraxella nonliquifacien)のpolyST若しくはその相同体である、構成12〜15のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成１７）
前記polySTが、髄膜炎菌血清型B株のpolyST又はその相同体である、構成16記載の宿主細胞。
（構成１８）
CMP-Neu5Acシンテターゼをコードする核酸をさらに含む、構成1〜17のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成１９）
前記CMP-Neu5Acシンテターゼが、宿主細胞にとって異種である、構成18記載の宿主細胞。
（構成２０）
前記CMP-Neu5Acシンテターゼが、髄膜炎菌のSynBである、構成18又は19記載の宿主細胞。
（構成２１）
前記宿主細胞が、原核生物宿主細胞である、構成1〜20のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成２２）
前記宿主細胞が、大腸菌である、構成21記載の宿主細胞。
（構成２３）
前記宿主細胞が、エシェリキア種、シゲラ種、クレブシエラ種、
キサントモナス(Xhantomonas)種、サルモネラ種、エルシニア種、ラクトコッカス種、ラクトバシラス種、シュードモナス種、コリネバクテリウム種、ストレプトマイセス種、ストレプトコッカス種、スタフィロコッカス種、バシラス種、又はクロストリジウム種である、構成21記載の宿主細胞。
（構成２４）
前記宿主細胞が、真核生物宿主細胞である、構成1〜20のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成２５）
前記宿主細胞が、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞、キネトプラスト目細胞、又は哺乳類細胞である、構成24記載の宿主細胞。
（構成２６）
前記標的タンパク質が、細菌タンパク質である、構成1〜25のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成２７）
前記標的タンパク質が、真核生物タンパク質である、構成1〜25のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成２８）
前記標的タンパク質が、治療用タンパク質である、構成1〜27のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成２９）
前記治療用タンパク質が、酵素、サイトカイン、ホルモン、成長因子、阻害剤タンパク質、タンパク質受容体、タンパク質受容体と結合するリガンド、又は抗体である、構成28記載の宿主細胞。
（構成３０）
前記酵素又は阻害剤が、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第X因子、第XIII因子、第VIIa因子、アンチトロンビンIII(AT-III)、プロテインC、組織プラスミノーゲン活性化因子(tPA)及びtPAバリアント、ウロキナーゼ、ヒルジン、ストレプトキナーゼ、グルコセレブロシダーゼ、アルグルコシダーゼ-α、ラロニダーゼ(α-L-イズロニダーゼ)、イデュルスルファーゼ(Idursulphase)(イズロン酸-2-スルファターゼ)、ガルスルファーゼ(Galsulphase)、アガルシダーゼ-β(ヒトα-ガラクトシダーゼA)、ボツリヌストキシン、コラゲナーゼ、ヒトDNAse-I、ヒアルロニダーゼ、パパイン、L-アスパラギナーゼ、ウリカーゼ(尿酸オキシダーゼ)、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ(グルカルピダーゼ)、α1プロテアーゼ阻害剤(α1アンチトリプシン)、ラクターゼ、膵酵素(リパーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ)、又はアデノシンデアミナーゼである、構成29記載の宿主細胞。
（構成３１）
前記サイトカインが、インターフェロン-α(INF-α)、インターフェロン-β(INF-β)、インターフェロン-γ(INF-γ)、インターロイキン-2(IL2)、キメラジフテリア毒素-IL-2(デニロイキンジフチトクス)、インターロイキン-1(IL1)、IL1B、IL3、IL4、IL11、IL21、IL22、IL1受容体アンタゴニスト(アナキンラ)、又は腫瘍壊死因子α(TNF-α)である、構成29記載の宿主細胞。
（構成３２）
前記抗体が、アダリムマブ(ヒュミラ)及びレミケード(インフリキシマブ);レオプロ(アブシキシマブ);リツキサン(リツキシマブ);シムレクト(バシリキシマブ);シナジス(パリビズマブ);ハーセプチン(トラスツズマブ);マイロターグ(ゲムツズマブオゾガマイシン);キャンパス(アレムツズマブ);ゼヴァリン(イブリツモマブチウキセタン);ゾレア(オマリズマブ);ベキサール(トシツモマブ-I-131);アービタックス(セツキシマブ);アバスチン(ベバシズマブ);タイサブリ(ナタリズマブ);アクテムラ(トシリズマブ);ベクティビックス(パニツムマブ);ルセンティス(ラニビズマブ);ソリリス(エクリズマブ);シムジア(セルトリズマブペゴル);シンポニー(ゴリムマブ);イラリス(カナキヌマブ);ステラーラ(ウステキヌマブ);アーゼラ(オファツムマブ);プロリア(デノスマブ);ヌマックス(モタビズマブ);アブスラックス(ラキシバクマブ);ベンリスタ(ベリムマブ);ヤーボイ(イピリムマブ);アドセトリス(ブレンツキシマブベドチン);パージェタ(ペルツズマブ);カドサイラ(Ado-トラスツズマブエムタンシン);又はガジヴァ(オビヌツズマブ)である、構成29記載の宿主細胞。
（構成３３）
前記ホルモン又は成長因子が、インスリン、プラムリンタイド、成長ホルモン(GH)、インスリン様成長因子(IGF1)、ヒト副甲状腺ホルモン、カルシトニン、グルカゴン様ペプチド-1アゴニスト(GLP-1)、グルカゴン、成長ホルモン放出ホルモン(GHRH)、セクレチン、甲状腺刺激ホルモン(TSH)、ヒト骨形成タンパク質2(hBMP2)、ヒト骨形成タンパク質7(hBMP7)、性腺刺激ホルモン放出ホルモン(GnRH)、ケラチノサイト増殖因子(KGF)、血小板由来成長因子(PDGF)、線維芽細胞増殖因子7(FGF7)、線維芽細胞増殖因子20(FGF20)、線維芽細胞増殖因子21(FGF21)、上皮成長因子(EGF)、血管内皮増殖因子(VEGF)、ニューロトロフィン-3、ヒト卵胞刺激ホルモン(FSH)、ヒト絨毛性ゴナドトロピン(HCG)、ルトロピン-α、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)、又は顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)である、構成29記載の宿主細胞。
（構成３４）
前記宿主細胞が、オリゴサッカリルトランスフェラーゼ(OST)を含まない、構成1〜33のいずれか1項記載の宿主細胞。
（構成３５）
N-グリコシル化コンセンサス配列内に存在する、アミノ酸残基に組みつけられたグルコースを含む(ここでは、前記グルコースは、単糖に結合されている)グリコシル化標的タンパク質を産生するための方法であって、(i)構成1〜34のいずれか1項記載の宿主細胞を、タンパク質産生に適した条件下で培養することと、(ii)前記標的タンパク質を単離することとを含む前記方法。
（構成３６）
前記グリコシル化標的タンパク質がN-グリコシル化されている、構成35記載の宿主細胞。
（構成３７）
シアル酸付加された標的タンパク質を産生するための方法であって、(i)構成8〜36のいずれか1項記載の宿主細胞を、タンパク質産生に適した条件下で培養することと、(ii)前記シアル酸付加された標的タンパク質を単離することとを含む前記方法。
（構成３８）
ポリシアル酸付加された標的タンパク質を産生するための方法であって、(i)構成12〜36のいずれか1項記載の宿主細胞を、タンパク質産生に適した条件下で培養することと、(ii)前記ポリシアル酸付加された標的タンパク質を単離することとを含む前記方法。
（構成３９）
前記宿主細胞が、Neu5Acが添加された培地で培養される、構成37又は38記載の方法。
（構成４０）
前記組成物中の前記タンパク質の前記少なくとも80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、又は99%が、シアル酸付加又はポリシアル酸付加されている、構成37〜39のいずれか1項記載の方法によって産生されたタンパク質を含む組成物。
（構成４１）
前記タンパク質中に存在するN-グリコシル化コンセンサス配列の少なくとも80%、85%、90%、95%、又は99%が、結合されたグルコースを含む、構成35〜39のいずれか1項記載の方法によって産生されるタンパク質。
（構成４２）
前記タンパク質中に存在するN-グリコシル化コンセンサス配列の少なくとも80%、85%、90%、95%、又は99%が、同一の結合された多糖を含む、構成35〜39のいずれか1項記載の方法によって産生されるタンパク質。
（構成４３）
前記組成物中のタンパク質の少なくとも80%、85%、90%、95%、又は99%が、前記NGTによってN-グリコシル化されている、構成35〜39のいずれか1項記載の方法によって産生されるタンパク質を含む組成物。
（構成４４）
前記組成物中に存在する各タンパク質中に存在するN-グリコシル化コンセンサス配列の少なくとも80%、85%、90%、95%、又は99%が、結合されたグルコースを含む、構成43記載の組成物。
（構成４５）
前記組成物中に存在する各タンパク質中に存在するN-グリコシル化コンセンサス配列の少なくとも80%、85%、90%、95%、又は99%が、同一の結合された多糖を含む、構成43又は44記載の組成物。
（構成４６）
グルコースが、N-グリコシル化コンセンサス配列内に存在するアミノ酸残基に結合されている、前記N-グリコシル化コンセンサス配列を含むN-グリコシル化されたタンパク質であって、以下の方法によって産生される前記タンパク質:
(i)タンパク質産生に適した条件下で宿主細胞(ここでは、前記宿主細胞は、(a)N-グリコシル化コンセンサス配列を含む標的タンパク質をコードする核酸;(b)前記N-グリコシル化コンセンサス配列内に存在するアミノ酸残基にグルコースを付加するN-グリコシルトランスフェラーゼ(NGT)をコードする核酸、及び(c)前記グルコースへの単糖の付加を触媒するグリコシルトランスフェラーゼをコードする核酸を含む)を培養することと、
(ii)前記宿主細胞によって産生されたN-グリコシル化されたタンパク質を単離すること。
（構成４７）
前記タンパク質が、少なくとも1、少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも10、又は少なくとも20個の前記N-グリコシル化コンセンサス配列を含む、構成46記載のN-グリコシル化されたタンパク質。
（構成４８）
前記N-グリコシル化コンセンサス配列の少なくとも80%、85%、90%、95%、又は99%が、前記N-グリコシル化コンセンサス配列内に存在するAsn残基に結合されたグルコースを含む、構成47記載のN-グリコシル化されたタンパク質。
（構成４９）
前記タンパク質中に存在する前記N-グリコシル化コンセンサス配列の少なくとも80%、85%、90%、95%、又は99%が、同一の結合された多糖を含む、構成47又は48記載のN-グリコシル化されたタンパク質。
（構成５０）
構成41、42、又は46〜49のいずれか1項記載のタンパク質を含む医薬組成物。
（構成５１）
産生された標的タンパク質が、その非グリコシル化状態にある前記標的タンパク質と比較して改善された薬物動態を有する、構成37〜39のいずれか1項記載の方法。
（構成５２）
前記組成物中の標的タンパク質が、その非グリコシル化状態にある前記標的タンパク質と比較して改善された薬物動態を有する、構成40、43〜45、又は50のいずれか1項記載の組成物。
（構成５３）
前記標的タンパク質が、その非グリコシル化状態にある前記標的タンパク質と比較して改善された薬物動態を有する、構成41、42、又は46〜49のいずれか1項記載のタンパク質。
（構成５４）
治療の必要のある対象において疾患又は障害を治療する方法であって、構成40、43〜45、50、又は52のいずれか1項記載の組成物を投与することを含む前記方法。
（構成５５）
前記疾患又は障害が、対象における欠損型の標的タンパク質の存在、対象における標的タンパク質の非存在、対象における標的タンパク質の発現低下、標的タンパク質によって結合されている受容体、又は標的タンパク質によって結合されているリガンドによって引き起こされる、構成54記載の方法。
（構成５６）
前記対象が、ヒトである、構成54又は55記載の方法。
（構成５７）
構成1〜34のいずれか1項記載の宿主細胞を含むキット。
（構成５８）
構成40、43〜45、又は50のいずれか1項記載の組成物を含むキット。
（構成５９）
構成41、42、又は46〜49のいずれか1項記載のタンパク質を含むキット。
（構成６０）
前記N-グリコシル化コンセンサス配列が、アスパラギン(Asn)-X-セリン(Ser)/トレオニン(Thr)(ここでは、Xは、プロリン(Pro)以外のあらゆるアミノ酸であり得る)である、構成1〜59のいずれか1項記載の宿主細胞、方法、タンパク質、組成物、又はキット。
（構成６１）
前記N-グリコシル化コンセンサス配列が、Y-X-Z(ここでは、Yは、アスパラギン(Asn)、グルタミン(Gln)、又はセリン(Ser)であり得、Xは、Pro以外のあらゆるアミノ酸であり得、Zは、あらゆるアミノ酸であり得る)である、構成1〜59のいずれか1項記載の宿主細胞、方法、タンパク質、組成物、又はキット。
（構成６２）
Yが、Asnである、構成61記載の宿主細胞、方法、タンパク質、組成物、又はキット。
（構成６３）
Yが、Glnである、構成61記載の宿主細胞、方法、タンパク質、組成物、又はキット。
（構成６４）
Yが、Serである、構成61記載の宿主細胞、方法、タンパク質、組成物、又はキット。
（構成６５）
Zが、Ser、Thr、グリシン(Gly)、バリン(Val)、アラニン(Ala)、又はアスパラギン酸(Asp)である、構成61〜64のいずれか1項記載の宿主細胞、方法、タンパク質、組成物、又はキット。
（構成６６）
グリコシル化された組換え型標的タンパク質を宿主細胞中で産生するための方法であって、前記細胞におけるオリゴサッカリルトランスフェラーゼ(OST)又は化学的結合の使用を含まない前記方法。
（構成６７）
グリコシル化された組換え型標的タンパク質を宿主細胞中で産生するための方法であって、前記細胞において標的タンパク質及びN-グリコシルトランスフェラーゼ(NGT)を培養することを含む前記方法。
（構成６８）
前記標的タンパク質が、少なくとも1つの末端グリコシル化タグを含む、構成67記載の方法。
（構成６９）
前記標的タンパク質が、少なくとも1つの埋め込み型グリコシル化タグを含む、構成67記載の方法。
（構成７０）
前記標的タンパク質が、少なくとも1つの末端グリコシル化タグと少なくとも1つの埋め込み型グリコシル化タグを含む、構成67記載の方法。
（構成７１）
前記末端グリコシル化タグが、少なくとも1、少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも10、又は少なくとも20個のN-グリコシル化コンセンサス配列を含む、構成68又は70記載の方法。
（構成７２）
前記埋め込み型グリコシル化タグが、少なくとも1、少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも10、又は少なくとも20個のN-グリコシル化コンセンサス配列を含む、構成69又は70記載の方法。