【手続補正書】
【提出日】令和2年8月17日(2020.8.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
膵島細胞を機能的に再プログラミングする方法であって、
（ａ）対象から膵島細胞の集団を単離するステップ；
（ｂ）臍帯血または末梢血から血小板様細胞を含む血小板に富む画分を単離するステップであって、血小板様細胞がＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＮＫＸ６．１、ＭＡＦＡ、Ｓｕｒ１、Ｋｉｒ６．２、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７０、ガレクチン９、ＴＧＦ−β１、ＡＩＲＥ、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＬ２のうちの１つまたは複数について陽性であり、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＬ１のうちの１つまたは複数について陰性である細胞の集団を含むステップ；および
（ｃ）ステップ（ａ）の膵島細胞の集団と、ステップ（ｂ）の血小板に富む画分とをｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させるステップであって、接触が、膵島細胞の細胞生存能力、生細胞数、細胞サイズ及びＣ−ペプチド放出の１つまたは複数を、工程（ｂ）の血小板に富む画分と接触していない対照膵島細胞と比較して増大させるように膵島細胞を再プログラミングするのに有効であるステップ；
を含む、方法。
【請求項２】
Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ勾配画分から血小板様細胞を含む血小板に富む画分を単離するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
血小板様細胞を含む血小板に富む画分が、全細胞、ミトコンドリア、マイクロパーティクル、エキソソーム、溶解した細胞、およびアルファ顆粒のうちの１つまたは複数を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
血小板様細胞を含む血小板に富む画分が、本質的にミトコンドリアからなる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
全細胞が、造血幹細胞、造血始原細胞、共通リンパ球始原細胞、共通骨髄始原細胞、巨核球−赤血球始原細胞、顆粒球−単球始原細胞、巨核球系列に決定された始原細胞、巨核球、および血小板様細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
血小板様細胞が、ＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＮＫＸ６．１、ＭＡＦＡ、Ｓｕｒ１、Ｋｉｒ６．２、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７０、ガレクチン９、ＴＧＦ−β１、ＡＩＲＥ、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＬ２について陽性であり、且つ、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＬ１について陰性である細胞の集団を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法によって得られる再プログラミングされた膵島細胞を含む細胞生成物。
【請求項８】
高血糖を特徴とする疾患に罹患するレシピエント対象を処置するための方法において使用される請求項７に記載の細胞生成物であって、前記方法は、
（ａ）ドナーから膵島細胞の集団を単離するステップ；
（ｂ）ドナーの臍帯血または末梢血から血小板様細胞を含む血小板に富む画分を単離するステップであって、血小板様細胞がＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＮＫＸ６．１、ＭＡＦＡ、Ｓｕｒ１、Ｋｉｒ６．２、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７０、ガレクチン９、ＴＧＦ−β１、ＡＩＲＥ、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＬ２のうちの１つまたは複数について陽性であり、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＬ１のうちの１つまたは複数について陰性である細胞の集団を含むステップ；
（ｃ）ステップ（ａ）の膵島細胞の集団と、ステップ（ｂ）の血小板に富む画分とをｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させるステップであって、接触が、膵島細胞の細胞生存能力、生細胞数、細胞サイズ及びＣ−ペプチド放出の１つまたは複数を、工程（ｂ）の血小板に富む画分と接触していない対照膵島細胞と比較して増大させるように膵島細胞を再プログラミングするのに有効であるステップ；
（ｄ）治療量の膵島細胞集団を含有する細胞生成物を生成するのに有効な培養条件下、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでステップ（ｃ）の再プログラミングされた膵島細胞を増殖させるステップ；および
（ｅ）ステップ（ｄ）に由来する細胞生成物をレシピエント対象に投与するステップ
を含み、
ステップ（ｄ）に由来する膵島細胞集団を含有する細胞生成物が、高血糖症の症状を軽減するのに有効である、前記細胞生成物。
【請求項９】
ドナーとレシピエント対象が同じ個体である、請求項８に記載の細胞生成物。
【請求項１０】
高血糖症が自己免疫疾患である、請求項８に記載の細胞生成物。
【請求項１１】
自己免疫疾患が糖尿病である、請求項１０に記載の細胞生成物。
【請求項１２】
自己免疫疾患が１型糖尿病である、請求項１０に記載の細胞生成物。
【請求項１３】
ドナーがレシピエント対象に対して同種異系である、請求項８に記載の細胞生成物。
【請求項１４】
ステップ（ｂ）において、血小板様細胞を含む血小板に富む画分が、全細胞、ミトコンドリア、マイクロパーティクル、エキソソーム、溶解した細胞、およびアルファ顆粒のうちの１つまたは複数を含む、請求項８に記載の細胞生成物。
【請求項１５】
ドナーの臍帯血または末梢血に由来する血小板様細胞を含む血小板に富む画分との接触により、増大された細胞生存能力、生細胞数、細胞サイズ及びＣ−ペプチド放出の１つまたは複数を有するように機能的に再プログラミングされ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖および再分化させた、治療量の膵島細胞集団を含有する細胞生成物を含む医薬組成物であって、
前記血小板に富む画分が、ＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＮＫＸ６．１、ＭＡＦＡ、Ｓｕｒ１、Ｋｉｒ６．２、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７０、ガレクチン９、ＴＧＦ−β１、ＡＩＲＥ、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＬ２のうちの１つまたは複数について陽性であり、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＬ１のうちの１つまたは複数について陰性である細胞の集団を含む、医薬組成物。
【請求項１６】
細胞生成物が、
（ａ）ドナーから膵島細胞の集団を単離するステップ；
（ｂ）ドナーの臍帯血または末梢血から血小板様細胞を含む血小板に富む画分を単離するステップであって、血小板様細胞がＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＮＫＸ６．１、ＭＡＦＡ、Ｓｕｒ１、Ｋｉｒ６．２、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７０、ガレクチン９、ＴＧＦ−β１、ＡＩＲＥ、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＬ２のうちの１つまたは複数について陽性であり、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＬ１のうちの１つまたは複数について陰性である細胞の集団を含むステップ；
（ｃ）ステップ（ａ）の膵島細胞集団と、ステップ（ｂ）の血小板に富む画分とをｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させるステップであって、接触が、膵島細胞の細胞生存能力、生細胞数、細胞サイズ及びＣ−ペプチド放出の１つまたは複数を、工程（ｂ）の血小板に富む画分と接触していない対照膵島細胞と比較して増大させるように膵島細胞を再プログラミングするのに有効であるステップ；
（ｄ）治療有効量の膵島細胞集団を含有する細胞生成物を生成するのに有効な培養条件下、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでステップ（ｃ）の再プログラミングされた膵島細胞を増殖させるステップ；および
（ｅ）細胞生成物を薬学的に許容される担体と共に製剤化して、医薬組成物を形成させるステップ
を含むプロセスによって産生される、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
血小板様細胞が、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＬ１について陰性である、ＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＮＫＸ６．１、ＭＡＦＡ、Ｓｕｒ１、Ｋｉｒ６．２、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７０、ガレクチン９、ＴＧＦ−β１、ＡＩＲＥ、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＬ２について陽性であり、且つ、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＬ１について陰性である細胞の集団を含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ドナーの臍帯血または末梢血に由来する血小板様細胞を含む血小板に富む画分との接触により、増大された細胞生存能力、生細胞数、細胞サイズ及びＣ−ペプチド放出の１つまたは複数を有するように機能的に再プログラミングされ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖および再分化させた治療量の膵島細胞集団を含有する細胞生成物を含む医薬組成物であって、
前記血小板に富む画分が、ＯＣＴ３／４、ＮＡＮＯＧ、ＮＫＸ６．１、ＭＡＦＡ、Ｓｕｒ１、Ｋｉｒ６．２、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７０、ガレクチン９、ＴＧＦ−β１、ＡＩＲＥ、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＬ２のうちの１つまたは複数について陽性であり、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＬ１について陰性である細胞の集団を含む、医薬組成物の使用。
【請求項１９】
前記膵島細胞集団が、増加された細胞生存能力、生細胞数、細胞サイズ及びＣ−ペプチド放出を有するように機能的に再プログラミングされた、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
血小板様細胞を含む血小板に富む画分が、全細胞、ミトコンドリア、マイクロパーティクル、エキソソーム、溶解した細胞、およびアルファ顆粒のうちの１つまたは複数を含む、請求項１８に記載の使用。
【請求項２１】
血小板様細胞を含む血小板に富む画分が、本質的にミトコンドリアからなる、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
ミトコンドリアが、T細胞に対して免疫調節活性を奏するのに有効である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
ミトコンドリアが、ＣＤ４＋ＰＤ１＋Ｔ細胞のパーセンテージを増加させるのに有効である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２４】
膵島細胞集団をミトコンドリアと接触させることが、膵島細胞集団の機能及び生存を改善するのに有効である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２５】
膵島細胞集団をミトコンドリアと接触させることが、膵島ベータ細胞集団の機能及び生存を改善するのに有効である、請求項２１に記載の使用。