【手続補正書】
【提出日】令和2年8月13日(2020.8.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス粒子の血清型を決定する方法であって、
ａ）該ウイルス粒子を変性させる工程であって、場合により、該ウイルス粒子は、酢酸、塩酸グアニジンおよび／または有機溶媒により変性し、そして場合により、該ウイルス粒子は、異種導入遺伝子をコードするウイルスベクターを含む、前記工程と；
ｂ）該変性したウイルス粒子を液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）に供する工程であって、場合により、該液体クロマトグラフィーは、逆相液体クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、親水性相互作用液体クロマトグラフィー、または陽イオン交換クロマトグラフィーである、前記工程と；
ｃ）該ウイルス粒子の１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の質量を決定する工程と；
を含み、
該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の質量の特定の組合せが、ウイルス血清型の指標であり；場合により、該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片の計算された質量は、１つまたはそれ以上のウイルス血清型の１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片の理論的質量に対して比較され；そして場合により、該ウイルス粒子は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子であり、ならびに該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質は、ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３であり、そして場合により、（Ａ）該ＡＡＶ粒子は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子であり、ならびに／または（Ｂ）ＶＰ１および／もしくはＶＰ３のＮ末端は、アセチル化されている、
前記方法。
【請求項２】
ウイルス粒子の血清型を決定する方法であって、
ａ）該ウイルス粒子を変性させる工程であって、場合により、該ウイルス粒子は、酢酸、塩酸グアニジンおよび／または有機溶媒により変性し、そして場合により、該ウイルス粒子は、異種導入遺伝子をコードするウイルスベクターを含む、前記工程と；
ｂ）該変性したウイルス粒子を還元および／またはアルキル化に供する工程と；
ｃ）該変性したウイルス粒子を消化に供して、ウイルス粒子の１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片を生成する工程と；
ｄ）該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片を液体クロマトグラフィー／質
量分析−質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）に供する工程であって、場合により、該液体クロマトグラフィーは、逆相液体クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、親水性相互作用液体クロマトグラフィー、または陽イオン交換クロマトグラフィーである、前記工程と；
ｅ）該ウイルス粒子の該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片の質量を決定する工程と；
を含み、
該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片の質量の特定の組合せが、ウイルス血清型の指標であり；場合により、該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片の計算された質量は、１つまたはそれ以上のウイルス血清型の１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片の理論的質量に対して比較され；そして場合により、該ウイルス粒子は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子であり、ならびに該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質は、ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３であり、そして場合により、（Ａ）該ＡＡＶ粒子は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子であり、ならびに／または（Ｂ）ＶＰ１および／もしくはＶＰ３のＮ末端は、アセチル化されている、
前記方法。
【請求項３】
ウイルス粒子の不均一性を決定する方法であって、
ａ）該ウイルス粒子を変性させる工程であって、場合により、該ウイルス粒子は、酢酸、塩酸グアニジンおよび／または有機溶媒により変性し、そして場合により、該ウイルス粒子は、異種導入遺伝子をコードするウイルスベクターを含む、前記工程と；
ｂ）該変性したウイルス粒子を液体クロマトグラフィー／質量分析／質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）に供する工程であって、場合により、該液体クロマトグラフィーは、逆相液体クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、親水性相互作用液体クロマトグラフィー、または陽イオン交換クロマトグラフィーである、前記工程と；
ｃ）該ウイルス粒子の１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の質量を決定する工程と；
ｄ）工程ｃ）の質量を、ウイルス血清型の１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の理論的質量と比較する工程と；
を含み、
該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の質量のうちの１つまたはそれ以上の偏差が、ウイルスカプシドの不均一性の指標であり；場合により、該不均一性は、混合血清型、変異体カプシド、カプシドアミノ酸置換、切断型カプシド、または改変カプシドのうちの１つまたはそれ以上を含み；そして場合により、該ウイルス粒子は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子であり、ならびに該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質は、ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３であり、そして場合により、（Ａ）該ＡＡＶ粒子は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子であり、ならびに／または（Ｂ）ＶＰ１および／もしくはＶＰ３のＮ末端は、アセチル化されている、
前記方法。
【請求項４】
ウイルス粒子の血清型の不均一性を決定する方法であって、
ａ）該ウイルス粒子を変性させる工程であって、場合により、該ウイルス粒子は、酢酸、塩酸グアニジンおよび／または有機溶媒により変性し、そして場合により、該ウイルス粒子は、異種導入遺伝子をコードするウイルスベクターを含む、前記工程と；
ｂ）該変性したウイルス粒子を還元および／またはアルキル化に供する工程と；
ｃ）該変性したウイルス粒子を消化に供して、該ウイルス粒子の１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片を生成する工程と；
ｄ）該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片を液体クロマトグラフィー／質量分析−質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）に供する工程であって、場合により、該液体クロマトグラフィーは、逆相液体クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、親水
性相互作用液体クロマトグラフィー、または陽イオン交換クロマトグラフィーである、前記工程と；
ｅ）該ウイルス粒子の該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片の質量を決定する工程と；
ｆ）工程ｅ）の質量を、ウイルス血清型の該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の断片の理論的質量と比較する工程と；
を含み、
該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質の質量のうちの１つまたはそれ以上の偏差が、ウイルスカプシドの不均一性の指標であり；場合により、該不均一性は、混合血清型、変異体カプシド、カプシドアミノ酸置換、切断型カプシド、または改変カプシドのうちの１つまたはそれ以上を含み；そして場合により、該ウイルス粒子は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子であり、ならびに該１種またはそれ以上のカプシドタンパク質は、ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３であり、そして場合により、（Ａ）該ＡＡＶ粒子は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子であり、ならびに／または（Ｂ）ＶＰ１および／もしくはＶＰ３のＮ末端は、アセチル化されている、
前記方法。
【請求項５】
（ｉ）質量分析は：
（１）約３．５ｋＶのキャピラリー電圧、
（２）約４５Ｖのサンプリングコーン電圧、および／もしくは
（３）支援付き校正、場合により、ヨウ化ナトリウムが、校正物質として使用される、
を含み；ならびに／または
（ｉｉ）液体クロマトグラフィーは、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）、および／もしくは、逆相液体クロマトグラフィーであり、そして場合により：
（１）該液体クロマトグラフィーは、Ｃ４もしくはＣ８逆相クロマトグラフィーであり、
（２）該クロマトグラフィーは、水中にギ酸、場合により約０．１％のギ酸、を含む移動相Ａを使用し、
（３）該クロマトグラフィーは、アセトニトリル中にギ酸、場合により約０．１％のギ酸、を含む移動相Ｂを含み、そして場合により、該クロマトグラフィーにおける移動相Ｂの割合は、経時的に増加する、段階的に増加する、約１０％から約２０％まで増加する、約２０％から約３０％まで増加する、約３０％から約３８％まで増加する、約６分間で約１０％から約２０％まで増加する、約１０分間で約２０％から約３０％まで増加する、もしくは約４０分間で約３０％から約３８％まで増加する、
請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
（ｉ）質量分析は：
（１）約２．５ｋＶの電源電圧、
（２）約２７５℃のキャピラリー温度、
（３）約５５％のＳ−レンズＲＦレベル、
を含み；ならびに／または
（ｉｉ）液体クロマトグラフィーは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および／もしくは、逆相液体クロマトグラフィーであり、そして場合により：
（１）逆相クロマトグラフィーは、Ｃ１８逆相クロマトグラフィーであり、
（２）該クロマトグラフィーは、水中にギ酸、場合により約０．１％のギ酸、を含む移動相Ａを使用し、
（３）該クロマトグラフィーは、アセトニトリル中にギ酸、場合により約０．１％のギ酸、を含む移動相Ｂを含み、そして場合により、該クロマトグラフィーにおける移動相Ｂの割合は、経時的に増加する、約２％から約６０％まで増加する、もしくは約１２１分
間で約２％から約６０％まで増加する、
の１つまたはそれ以上である
請求項３または４に記載の方法。
【請求項７】
ウイルス粒子がＡＡＶ粒子であり、ここで：
（ｉ）還元は、ＡＡＶ粒子をジチオスレイトール、ベータメルカプトエタノール、もしくはトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）に供することによる；
（ｉｉ）アルキル化は、ＡＡＶ粒子をヨード酢酸、ヨードアセトアミド、または４−ビニルピリジンに供することによる；および／または
（ｉｉｉ）消化は、酵素消化、場合により、エンドペプチダーゼ消化、場合により、トリプシン消化、ＬｙｓＣ消化、Ａｓｐ−Ｎ消化もしくはＧｌｕ−Ｃ消化；または、化学的消化、場合により、臭化シアン消化もしくは酸消化、である；
請求項２または４に記載の方法。
【請求項８】
請求項２に記載の方法と組み合わせた、請求項１に記載の方法を含む、ＡＡＶ粒子の血清型を決定する方法。
【請求項９】
請求項４に記載の方法と組み合わせた、請求項３に記載の方法を含む、ＡＡＶ粒子の不均一性を決定する方法。
【請求項１０】
ウイルス粒子は、ＡＡＶ粒子であり、そして該ＡＡＶ粒子は：
（ｉ）ＡＡＶ１カプシド、ＡＡＶ２カプシド、ＡＡＶ３カプシド、ＡＡＶ４カプシド、ＡＡＶ５カプシド、ＡＡＶ６カプシド、ＡＡＶ７カプシド、ＡＡＶ８カプシド、ＡＡＶｒｈ８カプシド、ＡＡＶ９カプシド、ＡＡＶ１０カプシド、ＡＡＶｒｈ１０カプシド、ＡＡＶ１１カプシド、ＡＡＶ１２カプシド、ＡＡＶ  ＬＫ０３カプシド、ＡＡＶ２Ｒ４７１Ａカプシド、ＡＡＶ２／２−７ｍ８カプシド、ＡＡＶ  ＤＪカプシド、ＡＡＶ  ＤＪ８カプシド、ＡＡＶ２Ｎ  ５８７Ａカプシド、ＡＡＶ２  Ｅ５４８Ａカプシド、ＡＡＶ２  Ｎ７０８Ａカプシド、ＡＡＶ  Ｖ７０８Ｋカプシド、ヤギＡＡＶカプシド、ＡＡＶ１／ＡＡＶ２キメラカプシド、ウシＡＡＶカプシド、マウスＡＡＶカプシド、ｒＡＡＶ２／ＨＢｏＶ１（キメラＡＡＶ／ヒトボカウイルスウイルス１）、ＡＡＶ２ＨＢＫＯカプシド、ＡＡＶＰＨＰ．ＢカプシドもしくはＡＡＶＰＨＰ．ｅＢカプシド、および／または、該ＡＡＶカプシドは、チロシン突然変異、ヘパリン結合突然変異、もしくはＨＢＫＯ突然変異を含む；ならびに／または
（ｉｉ）ＡＡＶ１  ＩＴＲ、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＡＡＶ３  ＩＴＲ、ＡＡＶ４  ＩＴＲ、ＡＡＶ５  ＩＴＲ、ＡＡＶ６  ＩＴＲ、ＡＡＶ７  ＩＴＲ、ＡＡＶ８  ＩＴＲ、ＡＡＶｒｈ８  ＩＴＲ、ＡＡＶ９  ＩＴＲ、ＡＡＶ１０  ＩＴＲ、ＡＡＶｒｈ１０  ＩＴＲ、ＡＡＶ１１  ＩＴＲ、もしくはＡＡＶ１２  ＩＴＲ；
を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３の質量は、ＡＡＶ１カプシド、ＡＡＶ２カプシド、ＡＡＶ３カプシド、ＡＡＶ４カプシド、ＡＡＶ５カプシド、ＡＡＶ６カプシド、ＡＡＶ７カプシド、ＡＡＶ８カプシド、ＡＡＶｒｈ８カプシド、ＡＡＶ９カプシド、ＡＡＶ１０カプシド、ＡＡＶｒｈ１０カプシド、ＡＡＶ１１カプシド、ＡＡＶ１２カプシド、ＡＡＶ  ＬＫ０３カプシド、ＡＡＶ２Ｒ４７１Ａカプシド、ＡＡＶ２／２−７ｍ８カプシド、ＡＡＶ  ＤＪカプシド、ＡＡＶ  ＤＪ８カプシド、ＡＡＶ２  Ｎ５８７Ａカプシド、ＡＡＶ２  Ｅ５４８Ａカプシド、ＡＡＶ２  Ｎ７０８Ａカプシド、ＡＡＶ  Ｖ７０８Ｋカプシド、ヤギＡＡＶカプシド、ＡＡＶ１／ＡＡＶ２キメラカプシド、ウシＡＡＶカプシド、マウスＡＡＶカプシド、ｒＡＡＶ２／ＨＢｏＶ１（キメラＡＡＶ／ヒトボカウイルスウイルス１）、ＡＡＶ２ＨＢＫＯカプシド、ＡＡＶＰＨＰ．ＢカプシドまたはＡＡＶＰＨＰ．ｅＢカプシドのうちの１つまたはそれ以上の理論的質量に対して比較される、
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
ウイルス粒子は、アデノウイルス科、パルボウイルス科、レトロウイルス科、バキュロウイルス科、およびヘルペスウイルス科からなる群から選択されるウイルス科に属し、場合により、該ウイルス粒子は、アタデノウイルス属、アビアデノウイルス属、イクタデノウイルス属、マストアデノウイルス属、シアデノウイルス属、アンビデンソウイルス属、ブレビデンソウイルス属、ヘパンデンソウイルス属、イテラデンソウイルス属、ペンスチルデンソウイルス属、アムドパルボウイルス属、アベパルボウイルス属、ボカパルボウイルス属、コピパルボウイルス属、デペンドパルボウイルス属、エリスロパルボウイルス属、プロトパルボウイルス属、テトラパルボウイルス属、アルファレトロウイルス属、ベータレトロウイルス属、デルタレトロウイルス属、イプシロンレトロウイルス属、ガンマレトロウイルス属、レンチウイルス属、スプマウイルス属、アルファバキュロウイルス属、ベータバキュロウイルス属、デルタバキュロウイルス属、ガンマバキュロウイルス属、イルトウイルス属、マルディウイルス属、シンプレックスウイルス属、バリセロウイルス属、サイトメガロウイルス属、ムロメガロウイルス属、プロボシウイルス属、ロゼオロウイルス属、リンホクリプトウイルス属、マカウイルス属、ペルカウイルス属、およびラジノウイルス属からなる群から選択されるウイルス属に属する、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
ｒＡＡＶ粒子の安定性を改善する方法であって、細胞内のｒＡＡＶ粒子のアセンブリを改善する工程、または細胞内のｒＡＡＶ粒子の形質導入を改善する工程が、親ＶＰ１および／またはＶＰ３のＶＰ１および／またはＶＰ３のアミノ酸残基２を置換する工程を含み；該２位におけるアミノ酸を置換する工程が、親ＶＰ１および／またはＶＰ３のアミノ酸残基２と比較して、ＶＰ１および／またはＶＰ３のＮ末端アセチル化を変更し、場合により、該アミノ酸残基２を置換する工程は、より高い頻度のＮ末端アセチル化もしくはより低い頻度のＮ末端アセチル化をもたらし、および／または、該アミノ酸残基２は、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ａｓｐ，Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、ＰｒｏもしくはＴｙｒで置換されている、場合により、該アミノ酸残基２は、Ｓｅｒ、ＡｓｐもしくはＧｌｕで置換されている、
前記方法。
【請求項１４】
ｒＡＡＶ粒子の安定性を改善する方法であって、細胞内のｒＡＡＶ粒子のアセンブリを改善する工程、または細胞内のｒＡＡＶ粒子の形質導入を改善する工程が、親ＶＰ１および／またはＶＰ３のＶＰ１および／またはＶＰ３の１つまたはそれ以上のアミノ酸残基を置換する工程を含み、該１つまたはそれ以上のアミノ酸残基は、Ａ３５、Ｎ５７、Ｇ５８、Ｎ３８２、Ｇ３８３、Ｎ５１１、Ｇ５１２、Ｎ７１５、またはＧ７１６であり、残基の番号付けはＡＡＶ２のＶＰ１に基づき；該アミノ酸置換は、親ＶＰ１および／またはＶＰ３のアミノ酸残基２と比較して、脱アミド化を変更し、場合により、該１つまたはそれ以上のアミノ酸置換は、ＶＰ１のＡ３５、ＶＰ１のＮ５７、ＶＰ１のＧ５８、ＶＰ３のＮ３８２、ＶＰ３のＧ３８３、ＶＰ３のＮ５１１、ＶＰ３のＧ５１２、ＶＰ３のＮ７１５、またはＶＰ３のＧ７１６にあり；該アミノ酸置換は、親ＡＡＶ粒子のＶＰ１および／またはＶＰ３の脱アミド化と比較して、脱アミド化を変更し、さらに場合により、ＶＰ１の３５位における親Ａｌａ残基は、Ａｓｎで置換されている、および／または、ＶＰ１の５８位における親Ｇｌｙ残基は、Ａｓｐで置換されている、
前記方法。
【請求項１５】
ｒＡＡＶ粒子は：
ａ）ｒＡＡＶベクターをコードする核酸ならびにＡＡＶ  ｒｅｐおよびｃａｐ機能をコードする核酸を宿主細胞にトランスフェクトし、ＡＡＶヘルパー機能をコードする核酸を提供すること；または
ｂ）ｒＡＡＶベクターをコードする核酸ならびにＡＡＶ  ｒｅｐおよびｃａｐ機能をコードする核酸を含み、ＡＡＶヘルパー機能をコードする核酸を提供するＡＡＶ産生細胞；により産生され、
場合により、該ＡＡＶ  ｃａｐ機能は、ＶＰ１および／またはＶＰ３のアミノ酸置換を提供し、該ＶＰ１および／またはＶＰ３のアミノ酸置換は、親ＡＡＶ粒子のＶＰ１および／またはＶＰ３の脱アミド化と比較して、脱アミド化を変更する、
請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＡＡＶ粒子が：
（ｉ）ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ８Ｒ、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ  ＬＫ０３、ＡＡＶ２Ｒ４７１Ａ、ＡＡＶ２／２−７ｍ８、ＡＡＶ  ＤＪ、ＡＡＶ  ＤＪ８カプシド、ＡＡＶ２  Ｎ５８７Ａ、ＡＡＶ２  Ｅ５４８Ａ、ＡＡＶ２  Ｎ７０８Ａ、ＡＡＶ  Ｖ７０８Ｋ、ヤギＡＡＶ、ＡＡＶ１／ＡＡＶ２キメラ、ウシＡＡＶ、マウスＡＡＶ、ｒＡＡＶ２／ＨＢｏＶ１、ＡＡＶ２ＨＢＫＯ、ＡＡＶＰＨＰ．ＢまたはＡＡＶＰＨＰ．ｅＢ血清型カプシド、場合により、ｒＡＡＶ粒子のカプシドは、チロシン突然変異もしくはヘパリン結合突然変異をさらに含む；および／または
（ｉｉ）ｒＡＡＶベクター、場合により、自己相補的なベクター、
を含む、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子であって、親ポリペプチドのＶＰ１および／またはＶＰ３のアミノ酸残基２におけるアミノ酸置換を含み；該ＶＰ１および／またはＶＰ３のアミノ酸残基２におけるアミノ酸置換は、親ＡＡＶ粒子のＶＰ１および／またはＶＰ３のアミノ酸残基２におけるＮ末端アセチル化と比較して、Ｎ末端アセチル化を変更し、場合により：
ａ）該アミノ酸残基２における置換は、より高い頻度のＮ末端アセチル化もしくはより低い頻度のＮ末端アセチル化をもたらす；
ｂ）該ｒＡＡＶ粒子は、ＶＰ１のアミノ酸残基２におけるアミノ酸置換を含み；該ＶＰ１のアミノ酸残基２におけるアミノ酸置換は、親ＡＡＶ粒子のＶＰ１のアミノ酸残基２におけるＮ末端アセチル化と比較して、Ｎ末端アセチル化を変更する；
ｃ）該ｒＡＡＶ粒子は、ＶＰ３のアミノ酸残基２におけるアミノ酸置換を含み；該ＶＰ３のアミノ酸残基２におけるアミノ酸置換は、親ＡＡＶ粒子のＶＰ３のアミノ酸残基２におけるＮ末端アセチル化と比較して、Ｎ末端アセチル化を変更する；ならびに／または
ｄ）該アミノ酸残基２は、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、ＰｒｏもしくはＴｙｒ、場合によりＳｅｒ、ＡｓｐもしくはＧｌｕで置換されている、
前記組換えＡＡＶ粒子。
【請求項１８】
ｒＡＡＶ粒子は：
（ｉ）ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ８Ｒ、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ  ＬＫ０３、ＡＡＶ２Ｒ４７１Ａ、ＡＡＶ２／２−７ｍ８、ＡＡＶ  ＤＪ、ＡＡＶ  ＤＪ８カプシド、ＡＡＶ２  Ｎ５８７Ａ、ＡＡＶ２  Ｅ５４８Ａ、ＡＡＶ２  Ｎ７０８Ａ、ＡＡＶ  Ｖ７０８Ｋ、ヤギＡＡＶ、ＡＡＶ１／ＡＡＶ２キメラ、ウシＡＡＶ、マウスＡＡＶ、ｒＡＡＶ２／ＨＢｏＶ１血清型カプシド、ＡＡＶ２ＨＢＫＯ、ＡＡＶＰＨＰ．ＢもしくはＡＡＶＰＨＰ．ｅＢ血清型カプシド、および／または、該ｒＡＡＶ粒子のカプシドは、チロシン突然変異もしくはヘパリン結合突然変異をさらに含む；ならびに／または
（ｉｉ）ｒＡＡＶベクター、場合により、自己相補的なベクター、そして場合により、該ｒＡＶＶベクターは：
（１）１つまたはそれ以上のＡＡＶ  ＩＴＲ；
（２）ＡＡＶ１  ＩＴＲ、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＡＡＶ３  ＩＴＲ、ＡＡＶ４  ＩＴＲ、ＡＡＶ５  ＩＴＲ、ＡＡＶ６  ＩＴＲ、ＡＡＶ７  ＩＴＲ、ＡＡＶ８  ＩＴＲ、ＡＡＶｒｈ８  ＩＴＲ、ＡＡＶ９  ＩＴＲ、ＡＡＶ１０  ＩＴＲ、ＡＡＶｒｈ１０  ＩＴＲ、ＡＡＶ１１  ＩＴＲ、もしくはＡＡＶ１２  ＩＴＲ；
（３）１つまたはそれ以上のＡＡＶ  ＩＴＲに隣接したコードされた異種導入遺伝子；および／または、
（４）導入遺伝子をコードする第１の核酸配列および導入遺伝子の相補体をコードする第２の核酸配列、該第１の核酸配列は、そのほとんどまたはすべての長さに沿って、該第２の核酸配列と鎖内塩基対を形成することができ、場合により、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、突然変異したＡＡＶ  ＩＴＲにより連結され、突然変異したＡＡＶ  ＩＴＲは、Ｄ領域の欠失を含み、そして末端解離配列の突然変異、を含む；
を含む、
請求項１７に記載のｒＡＡＶ粒子。
【請求項１９】
組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子、場合により、ＡＡＶ１粒子またはＡＡＶ２粒子、であって、ある親ＡＡＶ粒子のＶＰ１またはＶＰ３のアミノ酸残基Ａ３５、Ｎ５７、Ｇ５８、Ｎ３８２、Ｇ３８３、Ｎ５１１、Ｇ５１２、Ｎ７１５、またはＧ７１６における１つまたはそれ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＡＡＶ２のＶＰ１に基づき、そして１つまたはそれ以上のアミノ酸置換は、該親ＡＡＶ粒子のＶＰ１および／またはＶＰ３の脱アミド化と比較して、脱アミド化を変更し、そして場合により：
ａ）該１つまたはそれ以上のアミノ酸置換は、ＶＰ１のＡ３５、ＶＰ１のＮ５７、ＶＰ１のＧ５８、ＶＰ３のＮ３８２、ＶＰ３のＧ３８３、ＶＰ３のＮ５１１、ＶＰ３のＧ５１２、ＶＰ３のＮ７１５、もしくはＶＰ３のＧ７１６のアミノ酸残基にあり、親ＡＡＶ粒子のＶＰ１および／もしくはＶＰ３の脱アミド化と比較して、脱アミド化を変更する；
ｂ）該１つまたはそれ以上のアミノ酸置換は、ＶＰ１のＮ５７、ＶＰ３のＮ３８２、ＶＰ３のＮ５１１、もしくはＶＰ３のＮ７１５におけるＡｓｐの置換を含み、親ＡＡＶ粒子のＶＰ１および／もしくはＶＰ３の脱アミド化と比較して、より高い頻度の脱アミド化をもたらす；
ｃ）該１つまたはそれ以上のアミノ酸置換は、Ｎ５７ＫもしくはＮ５７Ｑ置換を含み、親ＡＡＶ粒子のＶＰ１および／もしくはＶＰ３の脱アミド化と比較して、より低い頻度の脱アミド化をもたらす；
ｄ）該１つまたはそれ以上のアミノ酸置換は、ＶＰ１のＡ３５におけるＡｓｎの置換を含み、親ＡＡＶ粒子のＶＰ１の脱アミド化と比較して、より高い頻度の脱アミド化をもたらす；または
ｅ）該１つまたはそれ以上のアミノ酸置換は、ＶＰ１のＧ５８、ＶＰ３のＧ３８３、ＶＰ３のＧ５１２、もしくはＶＰ３のＧ７１６にあり、親ＡＡＶ粒子のＶＰ１および／もしくはＶＰ３の脱アミド化と比較して、より低い頻度の脱アミド化をもたらし、場合により、該ＶＰ１のＧ５８は、Ａｓｐで置換されている；
前記組換えＡＡＶ粒子。
【請求項２０】
請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ粒子を含む、医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ粒子または請求項２０に記載の医薬組成物を含む、キット。
【請求項２２】
請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ粒子または請求項２０に記載の医薬組成物を含む、製造品。
【請求項２３】
ＡＡＶカプシドタンパク質であって、親ＡＡＶカプシドタンパク質のアミノ酸残基２に
おけるアミノ酸置換を含み；該アミノ酸残基２におけるアミノ酸置換は、親ＡＡＶカプシドタンパク質のアミノ酸残基２におけるＮ末端アセチル化と比較して、Ｎ末端アセチル化を変更し、そして場合により：
ａ）該置換は、より高い頻度のＮ末端アセチル化もしくはより低い頻度のＮ末端アセチル化をもたらす；
ｂ）該ＡＡＶカプシドタンパク質は、ＶＰ１もしくはＶＰ３である；
ｃ）該アミノ酸残基２は、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ａｓｐ，Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、ＰｒｏもしくはＴｙｒ、場合によりＳｅｒ、ＡｓｐもしくはＧｌｕ、で置換されている；および／または
ｄ）該アミノ酸置換は、ＡＡＶカプシドのより少ない脱アミド化をもたらす；
前記ＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項２４】
カプシドタンパク質は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ８Ｒ、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ  ＬＫ０３、ＡＡＶ２Ｒ４７１Ａ、ＡＡＶ２／２−７ｍ８、ＡＡＶ  ＤＪ、ＡＡＶ  ＤＪ８カプシド、ＡＡＶ２  Ｎ５８７Ａ、ＡＡＶ２  Ｅ５４８Ａ、ＡＡＶ２  Ｎ７０８Ａ、ＡＡＶ  Ｖ７０８Ｋ、ヤギＡＡＶ、ＡＡＶ１／ＡＡＶ２キメラ、ウシＡＡＶ、マウスＡＡＶ、ｒＡＡＶ２／ＨＢｏＶ１、ＡＡＶ２ＨＢＫＯ、ＡＡＶＰＨＰ．ＢもしくはＡＡＶＰＨＰ．ｅＢ血清型カプシドであり；および／または、ＡＡＶカプシドタンパク質は、チロシン突然変異もしくはヘパリン結合突然変異をさらに含む、請求項２３に記載のＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項２５】
ＡＡＶカプシドタンパク質であって、親ＡＡＶカプシドタンパク質のアミノ酸置換を含み；該アミノ酸置換は、親ＡＡＶカプシドタンパク質と比較して、カプシドの脱アミド化を変更する、前記ＡＡＶカプシドタンパク質。