(57)【要約】本発明は、組成物における黄色形成または過酸化物形成を防ぐか、または遅らせる（すなわち阻害する）方法に関する。本発明は、組成物における黄色の量もしくは過酸化物の量を低下または減少させる方法にも関する。さらに具体的に言うと、本発明は、本発明の方法における抗酸化剤、脱酸素剤、ｐＨ、キレート剤、および／または少なくとも２つの因子の使用に関する。本発明は、組成物における黄色形成速度または過酸化物形成速度を予測する方法にも関する。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物における黄色形成もしくは過酸化物形成を防ぐか、または遅らせる方法であって、前記方法は、前記組成物における抗酸化剤または脱酸素剤の使用を含み、前記組成物が、
ａ）緩衝溶液
ｂ）タンパク質製剤
ｃ）タンパク質を含む溶液、および
ｄ）抗体を含む溶液
からなる群から選択される溶液もしくは製剤を含む方法。
【請求項２】
組成物における黄色の量もしくは過酸化物の量を低下または減少させる方法であって、前記方法は、前記組成物における抗酸化剤または脱酸素剤の使用を含み、前記組成物が、
ａ）緩衝溶液
ｂ）タンパク質製剤
ｃ）タンパク質を含む溶液、および
ｄ）抗体を含む溶液
からなる群から選択される溶液もしくは製剤を含む方法。
【請求項３】
前記組成物が、
ａ）ヒスチジン
ｂ）シトレート
ｃ）ホスフェート
ｄ）スクシネート
ｅ）アセテート
ｆ）トリス、および
ｇ）ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、およびｆのうちの２つ以上の任意の組み合わせ
からなる群から選択される化合物を含む、請求項１または２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物がヒスチジンを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が賦形剤を含み、前記賦形剤が、
ａ）ポリソルベート化合物
ｂ）ポリソルベート２０
ｃ）ポリソルベート８０
ｄ）ＮａＣｌ
ｅ）ショ糖
ｆ）グリセロール
ｇ）アルギニン
ｈ）グリシン
ｉ）トレハロース
ｊ）マンニトール
ｋ）キシリトール
ｌ）ラクトース
ｍ）ソルビトール
ｎ）ポロキサマー
ｏ）グリコール
ｐ）ＣａＣｌ２
ｑ）イミダゾール
ｒ）ベンジルアルコール
ｓ）尿素
ｔ）ロイシン
ｕ）イソロイシン
ｖ）スレオニン
ｗ）グルタメートまたはグルタミン酸
ｘ）フェニルアラニン
ｙ）クレゾール、および
ｚ）ａ〜ｙのうちの２つ以上の任意の組み合わせ
からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記抗酸化剤または脱酸素剤が、
ａ）メチオニン
ｂ）アスコルビン酸
ｃ）グルタチオン
ｄ）ビタミンＡ
ｅ）ビタミンＥ
ｆ）セレン
ｇ）パルミチン酸レチニル
ｈ）システイン
ｉ）亜硫酸ナトリウム
ｊ）チオグリセロール
ｋ）チオグリコール酸
ｌ）メタ重亜硫酸、および
ｍ）ａ〜ｌのうちの２つ以上の任意の組み合わせ
からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗酸化剤または脱酸素剤がメチオニンである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗酸化剤または脱酸素剤の濃度が、
ａ）約０．０００１ｍＭ〜約１００００ｍＭ
ｂ）約０．００１ｍＭ〜約１０００ｍＭ
ｃ）約０．０１ｍＭ〜約１００ｍＭ
ｄ）約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭ
からなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物がキレート剤をさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記キレート剤が、
ａ）ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）
ｂ）ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）
ｃ）アスコルビン酸
ｄ）イミノジアセテート
ｅ）イミノジコハク酸四ナトリウム
ｆ）クエン酸
ｇ）ジカルボキシメチルグルタミン酸
ｈ）ＥＤＤＳ（エチレンジアミンジコハク酸）
ｉ）ＤＴＰＭＰ・Ｎａ（ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）の七ナトリウム塩）
ｊ）リンゴ酸
ｋ）ＮＴＡ（ニトリロ三酢酸）
ｌ）無極性アミノ酸
ｍ）メチオニン
ｎ）シュウ酸
ｏ）リン酸 
ｐ）極性アミノ酸
ｑ）アルギニン
ｒ）アスパラギン
ｓ）アスパラギン酸
ｔ）グルタミン酸
ｕ）グルタミン
ｖ）リシン
ｗ）オルニチン
ｘ）シデロホア
ｙ）デスフェリオキサミンＢ
ｚ）コハク酸
ａａ）加水分解されたウール
ｂｂ）キレート樹脂、および
ｃｃ）ＣＨＥＬＥＸ（登録商標）樹脂
からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物の酸素への曝露を減少させることをさらに含み、前記曝露の減少が、
ａ）前記組成物の表面と容器の封止部との間のヘッドスペースのガス含有量を低下させること
ｂ）周囲酸素含有量を低下させること
ｃ）前記組成物を窒素で覆うこと
ｄ）前記組成物に窒素を散布すること、および
ｅ）ａ、ｂ、ｃ、またはｄのうちの任意の組み合わせ
からなる群から選択される手段によって行われる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
酸素への曝露の減少が、ヘッドスペースのガスを酸素以外のガスで置換することによって行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記酸素以外のガスが不活性ガスである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物のｐＨを調整することをさらに含み、前記調整されたｐＨが約６．０以外である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物のｐＨを調整することをさらに含み、前記調整されたｐＨが、
ａ）約７．５〜約７．０
ｂ）約７．０〜約６．５
ｃ）約６．０以下
ｄ）約５．５以下、および
ｅ）約５．０以下
からなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物を光から保護するために、容器の着色および／または容器の包装の使用をさらに含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記組成物におけるキレート剤の使用をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
組成物における黄色の形成または過酸化物の形成を防ぐか、または遅らせる方法であって、前記方法が、黄色の形成または過酸化物の形成を防ぐか、または遅らせるために少なくとも２つの因子の使用を含み、前記組成物が、
ａ）緩衝溶液
ｂ）タンパク質製剤
ｃ）タンパク質を含む溶液、および
ｄ）抗体を含む溶液
からなる群から選択される方法。
【請求項１９】
組成物における黄色の量もしくは過酸化物の量を低下または減少させる方法であって、前記方法が、黄色形成もしくは過酸化物形成を低下または減少させるために少なくとも２つの因子の使用を含み、前記組成物が
ａ）緩衝溶液
ｂ）タンパク質製剤
ｃ）タンパク質を含む溶液、および
ｄ）抗体を含む溶液
からなる群から選択される方法。
【請求項２０】
前記少なくとも２つの因子の使用が、
ａ）メチオニン
ｂ）酸素曝露の減少
ｃ）ＮａＣｌ
ｄ）ポリソルベート化合物
ｅ）ポリソルベート２０
ｆ）ポリソルベート８０
ｇ）アルギニン
ｈ）約５．０のｐＨ
ｉ）約５．５のｐＨ
ｊ）約６．０のｐＨ
ｋ）約６．５のｐＨ
ｌ）約７．０のｐＨ
からなる群から選択される２つ以上の因子の任意の組み合わせの使用を含む、請求項１８または１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも２つの因子の使用が、
ａ）メチオニンおよび酸素曝露の減少
ｂ）メチオニンと約５のｐＨ
ｃ）メチオニンと約６のｐＨ
ｄ）ＮａＣｌとポリソルベート８０、および
ｅ）アルギニンと約７のｐＨ
からなる群から選択される１つ以上の組み合わせの使用を含む、請求項１８または１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
組成物における黄色の量の前記低下または減少が、ｂ＊値の減少率として測定される、請求項２または１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ｂ＊値の減少率が、
ａ）約１０％
ｂ）約２０％
ｃ）約３０％
ｄ）約４０％
ｅ）約５０％
ｆ）約６０％
ｇ）約７０％
ｈ）約８０％
ｉ）約８５％
ｊ）約９０％
ｋ）約９５％、および
ｌ）約９９％
からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
組成物における黄色形成もしくは酸化物形成の速度を予測または決定する方法であって、前記組成物が、
ａ）緩衝溶液
ｂ）タンパク質製剤
ｃ）タンパク質を含む溶液、および
ｄ）抗体を含む溶液
からなる群から選択される溶液または製剤を含み、
前記予測または決定が、特定の範囲の温度で前記組成物をインキュベートするステップ、時間および温度の関数として、形成される黄色の量または過酸化物の量を定量化するステップ、および特定の範囲の温度内または特定の範囲の温度外の任意の温度について、前記組成物における黄色形成速度もしくは過酸化物形成速度の予測または決定を推定するステップを含む方法。
【請求項２５】
前記方法が、組成物の濃度範囲を準備するステップ、および特定の範囲の濃度内または特定の範囲の濃度外の任意の濃度について、前記組成物における黄色形成速度もしくは過酸化物形成速度の予測または決定を推定するステップをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記組成物が、
ａ）ヒスチジン
ｂ）シトレート
ｃ）ホスフェート
ｄ）スクシネート
ｅ）トリス
ｆ）アセテート、および
ｇ）ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、およびｆのうちの２つ以上の任意の組み合わせ
からなる群から選択される化合物を含む、請求項２４または２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記組成物における黄色形成速度もしくは過酸化物形成速度が、組成物保管温度の関数として予測または決定される、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記組成物における黄色形成速度もしくは過酸化物形成速度が、約−８０℃〜約１００℃の間の１℃の増加分における任意の温度の組成物保管温度の関数として予測または決定される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記予測または決定が、２つの因子の相互作用に基づいて計算される、請求項２４〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記予測または決定が、アレニウスモデルに基づく、請求項２４〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、医薬用タンパク質製剤の分野に関する。具体的には、本発明は、組成物における黄色形成を防ぐか、または遅らせる（すなわち、阻害する）方法に関する。本発明は、組成物における黄色の量を低下または減少させる方法にも関する。本発明は、組成物における黄色形成の速度を予測することにも関する。一実施形態において、本発明の方法は、黄色形成を阻害するか、または低下させるために、抗酸化剤、脱酸素剤、ｐＨ、および／またはキレート剤の使用を含む。別の実施形態において、本発明の方法は、黄色形成を阻害するか、または低下させるために、２つ以上の因子の使用を含む。別の実施形態において、本発明は、その組成物中の２つ以上の因子の存在に基づいて、組成物における黄色形成の速度を予測する方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ヒスチジン、シトレート、ホスフェート、スクシネート、アセテート、およびトリスは、医薬用タンパク質製剤の緩衝液として一般に用いられている。ヒスチジンは、バイオ医薬品に典型的に使用されるｐＨ範囲、ｐＨ５．５〜７．４において優れた緩衝能を有し、分解に対して、一部のタンパク質を安定化させることがわかっている。液剤の緩衝液としてヒスチジンを使用することの欠点は、保管中に透明から黄色に色が変わるその性質である。黄色の形成にも関わらず、多数の医薬用タンパク質製剤が、ＮＯＲＤＩＴＲＯＰＩＮ（登録商標）、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、ＫＥＰＩＶＡＮＣＥ（登録商標）、ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＴＥ（商標）、ＫＯＧＥＮＡＴＥ（登録商標）、ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）、ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）、およびＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）を含むが、これらに限定されない緩衝液としてヒスチジンを使用する。これらの医薬用タンパク質製剤のうち、ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＴＥ（商標）、ＫＯＧＥＮＡＴＥ（登録商標）、ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）、およびＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）の処方情報が、凍結乾燥または再構成したタンパク質製剤は淡黄色であり得ると述べている。さらに、ヨーロッパ薬局方のヒスチジンの研究書が、ヒスチジンは特定の色度標準を満たす必要があるが、無色である必要はないと示す。
【０００３】
少なくともいくぶんか黄色に着色しているヒスチジン緩衝液を含む、多くのＦＤＡに承認された市販のタンパク質製剤は、黄色形成がこれらのバイオ医薬品の有効性に害を及ぼすわけでなく、または有効性の喪失を示すわけでもないことを意味すると考えられる。しかし、いくつかの産業、例えば、織物産業、塗装産業、およびプラスチック産業において、黄色形成は、焦げ、汚れ、および一般の製品劣化と関連する。さらに、化学分野において、純粋である時に特に透明か白色である化合物、例えば、ラパマイシンなどは、純粋ではない時に黄色に着色し得る。例えば、米国特許第７，３８４，９５３号を参照されたい。
【０００４】
少なくとも１グループは、ヒスチジン緩衝液を含むタンパク質製剤の効力の喪失の加速が酸化に起因したと主張している。Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ,Ｍ.,ｅｔ  ａｌ.,ＡＡＰＳ  ＰｈａｒｍＳｃｉ.２００１：３（Ｓ１）１８８４,ＡＡＰＳデンバーにおけるポスター発表を参照されたい。Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ,Ｍ.らは、ヒスチジン緩衝液およびＴＷＥＥＮ（登録商標）８０で製剤化したヒト化ＩｇＧ２モノクローナル抗体の効力の喪失の加速を分析し、この効力の喪失が、ヒスチジン緩衝液およびこのモノクローナル抗体の両方の過酸化物による酸化に起因することを見出した。さらに、Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎらは、フリーラジカルおよび４（５）−イミダゾールカルボキシアルデヒド（４（５）−ＩＣＡ）を含むヒスチジン酸化生成物が、効力の喪失の加速の一因であることを見出した。Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ,Ｍ.らは、ヒスチジン酸化生成物４（５）−ＩＣＡの形成に対するＯ２、Ｎ２、およびＥＤＴＡの影響を調べ、Ｎ２は４（５）−ＩＣＡの形成を防ぐが、Ｏ２は４（５）−ＩＣＡの形成を加速させ、ＥＤＴＡは４（５）−ＩＣＡの形成に影響しないことを見出した。しかし、Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ,Ｍ.らは、ヒスチジン緩衝液の酸化と黄色形成との間のいかなる関係も開示せず、ヒスチジンなどの保管中に黄色になる緩衝液の黄色形成を防ぐか、または低下させる方法も開示しなかった。したがって、タンパク質製剤に使用するヒスチジン緩衝液などの緩衝液において、黄色形成を防ぐ、遅らせる、または低下させる方法の（かかる方法が、美的価値のためだけに実行されるとしても）必要性が残っている。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、組成物における黄色形成を防ぐか、または低下させる新しい有用な方法を対象にする。これらの方法は、黄色形成を防ぐか、または低下させるために、抗酸化剤、脱酸素剤、または少なくとも２つの因子の使用を含む。本発明は、組成物における黄色形成の速度を予測する新しい有用な方法も対象にする。
【０００６】
一実施形態において、本発明は、組成物における黄色形成を防ぐか、または遅くする（すなわち、阻害する）方法を提供し、この方法は、抗酸化剤、脱酸素剤、および／またはキレート剤の使用を含む。別の実施形態において、本発明は、組成物における黄色の量を低下または減少させる方法を提供し、この方法は、抗酸化剤、脱酸素剤、および／またはキレート剤の使用を含む。特定の実施形態において、本発明の方法に適用される組成物は、緩衝溶液、タンパク質製剤、タンパク質を含む溶液、および抗体を含む溶液などの溶液または製剤を含む。
【０００７】
特定の実施形態において、これらの組成物は、ヒスチジン、シトレート、ホスフェート、スクシネート、トリス、アセテート、またはこれらのうちの２つ以上の任意の組み合わせを含む。好ましい実施形態において、この組成物はヒスチジンを含む。別の実施形態において、この組成物は、ポリソルベート化合物、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＮａＣｌ、ショ糖、グリセロール、アルギニン、グリシン、トレハロース、マンニトール、キシリトール、ラクトース、ソルビトール、ポロキサマー、グリコール、ＣａＣｌ２、イミダゾール、ベンジルアルコール、尿素、ロイシン、イソロイシン、スレオニン、グルタメートまたはグルタミン酸、フェニルアラニン、クレゾール、またはこれらのうちの２つ以上の任意の組み合わせをさらに含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本発明の方法で使用する抗酸化剤または脱酸素剤は、メチオニン、アスコルビン酸、グルタチオン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、セレン、パルミチン酸レチニル、システイン、亜硫酸ナトリウム、チオグリセロール、チオグリコール酸、メタ重亜硫酸、またはこれらのうちの２つ以上の任意の組み合わせなどの化合物である。好ましい実施形態において、抗酸化剤または脱酸素剤はメチオニンである。いくつかの実施形態において、この抗酸化剤または脱酸素剤の濃度は、約０．０００１ｍＭ〜約１００００ｍＭ、約０．００１ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約１００ｍＭ、および約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭの範囲である。
【０００９】
本発明の実施形態は、組成物における黄色形成を阻害するか、または低下させるキレート剤の使用も含む。キレート剤は当業で知られており、例えば、溶液から微量金属を除去するために一般に使用される。例示的なキレート剤として、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、アスコルビン酸、イミノジアセテート、イミノジコハク酸四ナトリウム、クエン酸、ジカルボキシメチルグルタミン酸、ＥＤＤＳ（エチレンジアミンジコハク酸）、ＤＴＰＭＰ・Ｎａ（ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）七ナトリウム塩）、リンゴ酸、ＮＴＡ（ニトリロ三酢酸）、（メチオニンを含むが、これに限定されない）無極性アミノ酸、シュウ酸、リン酸、（アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、およびオルニチンを含む、これに限定されない）極性アミノ酸、（デスフェリオキサミンＢを含むが、これに限定されない）シデロホア、ならびにコハク酸が挙げられるが、これらに限定されない。キレート剤には、加水分解されたウールまたはキレート樹脂、例えば、ＣＨＥＬＥＸ（登録商標）２０樹脂またはＣＨＥＬＥＸ（登録商標）１００樹脂（例えば、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｈｅｒｃｕｌｅｓ,ＣＡ,ＵＳＡ）などの溶液処理に用いられるキレート剤も含まれ得るが、これらに限定されない。
【００１０】
別の実施形態において、本発明の方法は、この組成物の酸素への曝露を減少させることを含む。いくつかの実施形態において、この組成物の酸素への曝露の減少を、この組成物の表面と容器の封止部との間のヘッドスペースのガス含有量を低下させること、周囲酸素含有量を低下させること、この組成物を窒素で覆うこと、この組成物に窒素を散布すること、またはこれらのうちの任意の組み合わせなどの手段によって実施する。別の実施形態において、この組成物の酸素への曝露の減少を、ヘッドスペースのガスを酸素以外のガスで置換することによって行う。好ましい実施形態において、このヘッドスペースのガスを（例えば、窒素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、およびキセノンであるが、これらに限定されない）１種類以上の不活性ガスで置換する。
【００１１】
一実施形態において、本発明の方法は、組成物のｐＨを調整することを含む。いくつかの実施形態において、この調整されたｐＨは、約７．５〜約７．０、約７．０〜約６．５、約６．０未満、約５．５未満、および約５．０未満の範囲である。
【００１２】
別の実施形態において、本発明の方法は、組成物が光に曝されることから保護するために、容器の着色または包装の使用を含む。一実施形態において、本発明の方法は、組成物が光に曝されることから保護するために、容器の着色および包装の使用を含む。
【００１３】
本発明は、組成物における黄色形成を防ぐか、または遅らせる（すなわち、阻害する）方法を提供し、この方法は、黄色形成を阻害するために少なくとも２つの因子の使用を含む。本発明は、組成物における黄色の量を低下または減少させる方法も提供し、この方法は、黄色形成を低下または減少させるために少なくとも２つの因子の使用を含む。一実施形態において、本発明の方法を、緩衝溶液、タンパク質製剤、タンパク質を含む溶液、および抗体を含む溶液などの溶液または製剤を含む組成物に適用する。
【００１４】
いくつかの実施形態において、この少なくとも２つの因子の使用には、メチオニン、酸素曝露の減少、ＮａＣｌ、ポリソルベート化合物、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、アルギニン、約５．０のｐＨ、約５．５のｐＨ、約６．０のｐＨ、約６．５のｐＨ、約７．０のｐＨの使用などの２つ以上の因子の任意の組み合わせの使用が含まれる。特定の実施形態において、この少なくとも２つの因子の使用には、メチオニンおよび酸素曝露の減少、メチオニンと約５．０のｐＨ、メチオニンと約５．５のｐＨ、メチオニンと約６のｐＨ、ＮａＣｌとポリソルベート８０、およびアルギニンと約７．０のｐＨの使用などの１つ以上の組み合わせの使用が含まれる。
【００１５】
一実施形態において、組成物における黄色の量の低下または減少をｂ＊値の減少率（％）として測定する。いくつかの実施形態において、このｂ＊値の減少率（％）は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％または約９９％である（ｂ＊値の説明については、以下のさらなる記述を参照されたい）。
【００１６】
本発明は、組成物における黄色形成の速度を予測または決定する方法を提供し、この予測または決定は、特定の範囲の温度でこの組成物をインキュベートするステップ、時間および温度の関数として、形成した黄色の量を定量化するステップ、ならびに、特定の範囲の温度内または特定の範囲の温度外の任意の温度について、前記組成物における黄色形成の速度の予測または決定を推定するステップを含む。一実施形態において、本方法の組成物は、緩衝溶液、タンパク質製剤、タンパク質を含む溶液、および抗体を含む溶液などの溶液または製剤を含む。
【００１７】
一実施形態において、黄色形成の速度を予測または決定する方法は、この組成物の濃度範囲を準備するステップ、および特定の範囲の濃度内または特定の範囲の濃度外の任意の濃度について、この組成物における黄色形成の速度の予測または決定を推定するステップをさらに含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、この組成物は、ヒスチジン、シトレート、ホスフェート、スクシネート、トリス、アセテート、またはこれらのうちの２つ以上の任意の組み合わせなどの化合物を含む。一実施形態において、この組成物における黄色形成の速度を、溶液保管温度の関数として予測または決定する。好ましい実施形態において、この組成物における黄色形成の速度を、約−８０℃（マイナス８０℃）〜約＋１００℃の間の１℃の増加分における任意の温度の溶液保管温度の関数として予測または決定する。別の実施形態において、この予測または決定は、２つの因子の相互作用に基づいて計算されるか、または２つの因子の相互作用に基づく。一実施形態において、この予測または決定は、アレニウスモデル（Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ）に基づく。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１Ａ】色度標準の希釈系列に対するＨｕｎｔｅｒＬａｂ  ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ  ＸＥ分光光度計によって測定したＹ（■）ＥＰ色度標準およびＢＹ（◆）ＥＰ色度標準についてのｂ＊値のグラフ、ならびに、色度標準の希釈系列の各セットを視覚的に表した挿入図である。
【図１Ｂ】Ｙ  ＥＰ色度標準の最も近い希釈系列に対するＨｕｎｔｅｒＬａｂ  ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ  ＸＥ分光光度計によって測定したｂ＊値のグラフである。
【図２Ａ】ｂ＊値の変化に対するインタクトな抗体の割合を示すグラフである。△は、抗体を含むヒスチジン緩衝液に相当する。○は、抗体およびポリソルベート８０を含むヒスチジン緩衝液に相当する。●は、抗体およびメチオニンを含むヒスチジン緩衝液に相当する。▼は、抗体、ポリソルベート８０、およびメチオニンを含むヒスチジン緩衝液に相当する。
【図２Ｂ】ｂ＊値の変化に対する抗体の高分子量の凝集物の割合を示すグラフである。△は、抗体を含むヒスチジン緩衝液に相当する。○は、抗体およびポリソルベート８０を含むヒスチジン緩衝液に相当する。●は、抗体およびメチオニンを含むヒスチジン緩衝液に相当する。▼は、抗体、ポリソルベート８０、およびメチオニンを含むヒスチジン緩衝液に相当する。
【図２Ｃ】ｂ＊値の変化に対する酸化した抗体の割合を示すグラフである。△は、抗体を含むヒスチジン緩衝液に相当する。○は、抗体およびポリソルベート８０を含むヒスチジン緩衝液に相当する。●は、抗体およびメチオニンを含むヒスチジン緩衝液に相当する。▼は、抗体、ポリソルベート８０、およびメチオニンを含むヒスチジン緩衝液に相当する。
【図３Ａ】１／Ｔ（絶対温度）に対してｋの自然対数（ボルツマン定数）をプロットすることによって２００ｍＭにおけるヒスチジンの活性化エネルギー（Ｅａ）を決定する２００ｍＭヒスチジン、ｐＨ７．０のアレニウス解析のグラフである。
【図３Ｂ】ヒスチジン濃度の自然対数に対して黄変速度の自然対数をプロットすることによって決定する、２５℃におけるヒスチジンの反応次数を示すグラフである。
【図３Ｃ】ヒスチジン濃度の自然対数に対して黄変速度の自然対数をプロットすることによって決定する、５５℃におけるヒスチジンの反応次数を示すグラフである。
【図４】ｐＨ５．０またはｐＨ７．０のいずれかにおけるポリソルベート８０の存在下または非存在下で、２００ｍＭヒスチジン緩衝液を４０℃でインキュベートした時間（日）に対するｂ＊値の変化を示すグラフである。■はｐＨ７．０におけるポリソルベート８０を有するヒスチジン緩衝液に相当する◆はｐＨ７．０におけるヒスチジン緩衝液に相当する。●はｐＨ５．０におけるポリソルベート８０を有するヒスチジン緩衝液に相当する。▲はｐＨ５．０におけるヒスチジン緩衝液に相当する。
【図５】ヘッドスペース内の様々なガスの存在下で、２００ｍＭヒスチジン緩衝液を４０℃でインキュベートした時間（日）に対するｂ＊値の変化を示すグラフである。×印（×）は、ヘッドスペースの６０％を酸素で覆うことに相当する。□は、ヘッドスペースの１００％を酸素で覆うことに相当する。▲は、ヘッドスペース内の周囲ガス含有量に相当する。■は、ヘッドスペースをＮ２で覆うことに相当する。◆は、Ｎ２を有するヒスチジン緩衝液の散布に相当する。
【図６】空気または窒素（Ｎ２）ガスのいずれかを含むヘッドスペースの様々な体積を有する様々な２００ｍＭヒスチジン含有溶液をｐＨ６．５で保管した時の時間（日）に対する過酸化物濃度の変化を示すグラフである。
【図７】空気または窒素（Ｎ２）ガスを含むヘッドスペースの様々な体積で保管した様々な２００ｍＭヒスチジン含有溶液を、バイアルの中で測定した時の時間（日）に対するｂ＊値の変化を示すグラフである。
【図８】空気または窒素（Ｎ２）ガスを含むヘッドスペースの様々な体積で保管した様々な２００ｍＭヒスチジン含有溶液を、キュベットの中で測定した時の時間（日）に対するｂ＊値の変化を示すグラフである。
【図９】様々な量のＥＤＴＡを含む、２００ｍＭヒスチジン、１００ｍＭグリシン、１００ｍＭグリセロール、０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０のｐＨ７の溶液を、６０℃でインキュベートした時の時間（日）に対するｂ＊値の変化を示すグラフである。溶液の色を、Ｈｕｎｔｅｒ  ＬＡＢ  ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ  ＸＥ装置を用いて測定した。
【図１０】様々な量のメチオニンを含む、２００ｍＭヒスチジン、１００ｍＭグリシン、１００ｍＭグリセロール、０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０のｐＨ７の溶液を、６０℃でインキュベートした時の時間（日）に対するｂ＊値の変化を示すグラフである。溶液の色を、Ｈｕｎｔｅｒ  ＬＡＢ  ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ  ＸＥ装置を用いて測定した。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
定義
当業で一般に使用される用語を本明細書で使用し、特に定義されない限り、以下のとおりである。当業で使用されかつ／または受け入れられている用語の２つ以上の定義がある場合において、本明細書で使用する用語の定義は、それとは反対のことを明確に述べない限り、全てのかかる意味を含むことを意図する。本明細書で言及する全ての公表文献、特許および他の参考文献は、全ての目的のために、参照によりその全体が組込まれる。
【００２１】
「黄色」という用語は、可視スペクトルにおける主な色の１つを表す。例えば、黄変した物質は、およそ４２０〜４３０ｎｍの範囲の光を吸収することができる。黄色を、主観的に、例えば、視覚的に、もしくは客観的に、例えば、分光光度計または比色計を用いて評価することができる。主観的および客観的の両方で色を評価するために、多数の標準物質および式が開発されており、それらを用いて黄色を測定することができる。黄色を測定するために使用することができるカラースケールの例として、ＣＩＥ（国際照明委員会）Ｌ＊ａ＊ｂ＊カラースケール、ＣＩＥ  Ｌ＊ｃ＊ｈ＊カラースケール、およびＨｕｎｔｅｒ  Ｌ、ａ、ｂカラースケールが挙げられるが、これらに限定されない。これらのカラースケールは、反対の一組み：暗い−明るい（Ｌ＊値）、赤−緑（ａ＊値）、および黄色−青（ｂ＊値）として、ヒトの眼の受容体が色を認知することを前提とする反対色説に基づく（「Ｈｕｎｔｅｒ  Ｌ,ａ,ｂ  Ｖｅｒｓｕｓ  ＣＩＥ  １９７６  Ｌ＊ａ＊ｂ＊」,Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏｔｅｓ,Ｉｎｓｉｇｈｔ  ｏｎ  Ｃｏｌｏｒ  Ｖｏｌ.１３,Ｎｏ.２（２００８）参照）。したがって、本明細書で使用する「ｂ＊値」という用語は、組成物の黄色さまたは青さを表す。正のｂ＊（＋ｂ＊）値は組成物の黄色さを表し、負のｂ＊（−ｂ＊）値は組成物の青さを表す。カラースケールおよび測色に関するさらなる情報は、例えば、ＣＩＥ（ｗｗｗ.ｃｉｅ.ｃｏ.ａｔ）またはＨｕｎｔｅｒＬａｂ（ｗｗｗ.ｈｕｎｔｅｒｌａｂ.ｃｏｍ）（Ｈｕｎｔｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ,Ｉｎｃ.,Ｒｅｓｔｏｎ,ＶＡ,ＵＳＡ）から入手できる。
【００２２】
本明細書で使用する「抗酸化剤」という用語は、酸素および過酸化物によって促進される酸化もしくは反応を阻害するか、または遅らせる任意の化合物または物質を表す。
【００２３】
本明細書で使用する「脱酸素剤」という用語は、組成物中の酸素不純物を消費するか、または不活性にする任意の化合物または物質を表す。
【００２４】
「緩衝液」という用語は、その酸塩基共役成分の作用によってｐＨの変化に耐える化合物を表す。
【００２５】
「製剤」と言う用語には、異なる物質を組み合わせた任意の溶液、懸濁液、または剤形が含まれる。本発明の文脈で使用する１製剤には、例えば、タンパク質製剤が含まれる。
【００２６】
「溶液」という用語は、ガス、固体またはガスと固体の両方を有する１つ以上の液体の混合物を表す。本発明の文脈で使用する溶液には緩衝溶液が含まれ、溶液はタンパク質を含むことできるか、または溶液は抗体を含むことができる。
【００２７】
本明細書で使用する「タンパク質」という用語は、「ペプチド」、「ジペプチド」、「トリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ポリペプチド」、「アミノ酸鎖」または２個以上のアミノ酸の（１つまたは複数の）鎖を表すのに使用される任意の他の用語を包含し、「タンパク質」という用語は、これらの用語のいずれかの代わりに、またはこれらの用語のいずれかと互換的に使用され得る。したがって、タンパク質は、単数の「ポリペプチド」および複数の「ポリペプチド」を包含することを意図し、（ペプチド結合としても知られる）アミド結合によって直線的に結合したモノマー（アミノ酸）でできている分子を表す。タンパク質という用語は、２個以上のアミノ酸の任意の（１つまたは複数の）鎖を表し、タンパク質は特定の長さの生成物を表すわけではない。したがって、タンパク質という用語が、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護基（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）／保護基（ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）による誘導体化、タンパク質切断、または天然に存在しないアミノ酸による修飾を含むが、これらに限定されないポリペプチドの発現後修飾の生成物を表すことも意図する。タンパク質は、天然の生物源に由来するか、または組換え技術によって産生されてもよく、必ずしも、指定された核酸配列から翻訳されない。タンパク質は、化学合成を含む任意の方法で生成されてもよい。抗体は２個以上のアミノ酸の鎖を包含し、タンパク質という用語は抗体を含む。
【００２８】
本明細書で使用する「抗体」という用語は、インタクトな免疫グロブリン、またはその抗原結合断片を意味する。（本発明の方法に適用する組成物、溶液、または製剤の一部であってもよい）抗体、抗原結合断片、変異体、またはそれらの誘導体には、ポリクローナル、モノクローナル、多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、プライム化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）抗体、またはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖｓ、一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＬまたはＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生した断片、ならびに抗イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体
が含まれるが、これらに限定されない。免疫グロブリンまたは抗体分子は、免疫グロブリン分子の任意の種類（限定されることなく、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、任意のクラス（限定されることなく、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）または任意のサブクラスであり得る。多特異性抗体および抗原結合断片（例えば、二重特異性、三重特異性、またはより大きな多特異性）には、１種類以上の異なる抗原（例えば、タンパク質）上に存在する２種類以上の異なるエピトープを同時に認識し、結合するそれらの抗体および抗原結合断片が含まれる。したがって、抗体が「単一特異性」であるか、または「多特異性」、例えば、「二重特異性」であるかは、結合ポリペプチドが反応する異なるエピトープの数（すなわち、「ｂｉ」＝２、「多」＝２以上）を表す。
【００２９】
本明細書で使用する「賦形剤」という用語は、組成物中の有効成分以外のもの、例えば、タンパク質または抗体を意味すると意図する。したがって、例えば、賦形剤は、組成物に適切な一貫性、形態、または安定性を与えるために組成物に加えられる、多かれ少なかれ不活性の任意の物質を表す。賦形剤は、有効成分の媒介物または担体としても用いることができる。賦形剤の種類には、抗接着剤、結合剤、コーティング剤、崩壊剤、充填剤、希釈剤、香料、着色料、流動促進剤、滑剤、保存剤、吸着剤、圧縮剤、懸濁剤、分散剤、界面活性剤、および甘味料が含まれるが、これらに限定されない。
【００３０】
ここで留意すべきは、「１つ（ａ）」または「１つ（ａｎ）」という用語が、用語の単数形および複数形の両方を表し、例えば、「１つの抗酸化剤」は、１種類以上の抗酸化剤を表すと理解される。そのようなものとして、「１つ（ａ）」（または「１つ（ａｎ）」）、「１つ以上」、および「少なくとも１つ」という用語は、本明細書で互換的に使用することができる。
【００３１】
本明細書で使用する「約」という用語は、測定または定量に使用される方法および計測手段に固有の変動の程度を認める。例えば、用いる計測手段の精度のレベル、測定される試料の数に基づく標準誤差、および丸め誤差に応じて、「約」という用語は、限定されることなく±１０％を含む。
【００３２】
方法の記述
いくつかの医薬用タンパク質製剤は黄色を有すると記載されており、ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＴＥ（商標）、ＫＯＧＥＮＡＴＥ（登録商標）、ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）、およびＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）を含むが、これらに限定されない。これらの製剤の各々は、少なくともヒスチジン緩衝液を共通して含み、ヨーロッパ薬局方にしたがって、黄色を形成することができる。例えば、シトレート製剤を含む他の製剤は、高温まで加熱した時に、黄色を形成することが示されている。本発明は、かかる製剤における黄色形成を防ぐか、遅らせるか、または低下させる新しい有用な方法を提供する。したがって、本発明の方法は、組成物における黄色形成を防ぐか、遅らせるか、または低下させる方法を含み、この方法は、前記組成物における抗酸化剤、脱酸素剤、および／またはキレート剤の使用を含む。本発明は、組成物における黄色の量を低下または減少させる方法も提供し、この方法は、前記組成物における抗酸化剤、脱酸素剤、またはキレート剤の使用を含む。
【００３３】
本発明の方法に含まれる組成物は、限定されることなく、緩衝溶液、タンパク質製剤、タンパク質を含む溶液、および抗体を含む溶液などの溶液または製剤を包含する。しかし、本発明の方法によって防ぐか、または減少させることができる、黄色を形成する他の組成物は、本発明の範囲に含まれる。特定の実施形態において、これらの組成物には緩衝液が含まれる。緩衝溶液、タンパク質製剤、またはタンパク質もしくは抗体を含む溶液に使用するための多くの緩衝液が当業で知られており、ヒスチジン、シトレート、ホスフェート、スクシネート、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、ッセテート、グリシン、アコニット酸、マレイン酸、フタル酸、カコジル酸、バルビトール（ｂａｒｂｉｔｏｌ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノ−トリス−（ヒドロキシメチル）メタン（ビストリス）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ２酢酸（ＡＤＡ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、１，３−ビス[トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ]プロパン（ビストリスプロパン）、Ｎ−（アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノ−エタンスルホン酸（ＢＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノ−エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン（トリシン）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（ビシン）、グリシルグリシン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノ−プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、１，３−ビス[トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ]プロパン（ビストリスプロパン）を含むが、これらに限定されない。非経口用組成物に適する緩衝液には、ヒスチジン、シトレート、ホスフェート、スクシネート、トリス、アセテート、およびこれらの２つ以上の任意の組み合わせからなる群から選択されるそれらの化合物が含まれる。好ましい実施形態において、この組成物はヒスチジンを含む。
【００３４】
本発明の方法に含まれる組成物は、賦形剤をさらに包含することができる。緩衝溶液、タンパク質製剤、タンパク質を含む溶液、または抗体を含む溶液に使用するための多くの賦形剤が当業で知られており、以下の群から選択される賦形剤を含むが、これらに限定されない：抗接着剤、結合剤、コーティング剤、崩壊剤、充填剤、希釈剤、香料、着色料、流動促進剤、滑剤、保存剤、吸着剤、圧縮剤、懸濁剤、分散剤、界面活性剤、および甘味料。かかる賦形剤の制限のない例として、ポリソルベート化合物、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＮａＣｌ、ショ糖、グリセロール、アルギニン、グリシン、トレハロース、マンニトール、キシリトール、ラクトース、ソルビトール、ポロキサマー、グリコール、ＣａＣｌ２、イミダゾール、ベンジルアルコール、尿素、ロイシン、イソロイシン、スレオニン、グルタメートまたはグルタミン酸、フェニルアラニン、クレゾール、ステアリン酸マグネシウム、微結晶性セルロース、デンプン（トウモロコシ）、二酸化ケイ素、二酸化チタン、ステアリン酸、グリコール酸ナトリウムデンプン、ゼラチン、タルク、ステアリン酸カルシウム、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ＯＰＡ生成物（コーティングおよびインク）、クロスカルメロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、リン酸カルシウム（二塩基）、クロスポビドン、ならびにセラック（およびグレーズ）が挙げられる。本明細書に使用するポリソルベート化合物には、一連のソルビトールの部分的脂肪酸エステル、ならびにソルビトールおよびその無水物の各々のモルについておよそ２０、５、または４モルのエチレンオキシドで共重合したその無水物であるポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの群の中に包含されるポリソルベートの化合物が含まれる（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ５８０（Ｒｏｗｅ,Ｒ.Ｃ.,ｅｔ  ａｌ.ｅｄｓ  ５ｔｈ  ｅｄ.２００６））。本明細書で使用するポロキサマーには、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドの一連の密接に関わるブロック共重合体が含まれる（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ５３５（Ｒｏｗｅ,Ｒ.Ｃ.,ｅｔ  ａｌ.ｅｄｓ  ５ｔｈ  ｅｄ.２００６））。本明細書で使用するグリコールは、アルコールファミリーに属する有機化合物の類のいずれかを表し、エチレングリコール、プロピレングリコール、へキシレングリコール、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコールを含むが、これらに限定されない。
【００３５】
いくつかの実施形態において、好ましい賦形剤には、ポリソルベート化合物、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＮａＣｌ、ショ糖、グリセロール、アルギニン、グリシン、トレハロース、マンニトール、キシリトール、ラクトース、ソルビトール、ポロキサマー、グリコール、ＣａＣｌ２、イミダゾール、ベンジルアルコール、尿素、ロイシン、イソロイシン、スレオニン、グルタメートまたはグルタミン酸、フェニルアラニン、クレゾール、またはこれらのうちの２つ以上の任意の組み合わせなどの化合物が含まれる。
【００３６】
本発明の方法は、組成物の黄色形成を防ぐか、または減少させるために、抗酸化剤、脱酸素剤、および／またはキレート剤の使用を含む。多くの抗酸化剤または脱酸素剤が当業で知られており、ビタミンＥ、αトコフェノール、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、キレート剤、クエン酸、エリソルビン酸、オレイン酸エチル、フマル酸、リンゴ酸、モノチオグリセロール、リン酸、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、チモール、メチオニン、アスコルビン酸、グルタチオン、ビタミンＡ、セレン、パルミチン酸レチニル、システイン、亜硫酸ナトリウム、チオグリセロール、チオグリコール酸、メタ重亜硫酸を含むが、これらに限定されない。本発明の方法の一実施形態において、抗酸化剤または脱酸素剤は、メチオニン、アスコルビン酸、グルタチオン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、セレン、パルミチン酸レチニル、システイン、亜硫酸ナトリウム、チオグリセロール、チオグリコール酸、メタ重亜硫酸、およびこれらの２つ以上の任意の組み合わせからなる群から選択される。好ましい実施形態において、この抗酸化剤または脱酸素剤はメチオニンである。
【００３７】
本発明の方法において使用する抗酸化剤、脱酸素剤、および／またはキレート剤の濃度は、ある程度、選択される特定の抗酸化剤（複数可）、脱酸素剤（複数可）、および／またはキレート剤によって決まるが、そうでなければ、当業者が容易に決定することができる。例えば、抗酸化剤、脱酸素剤、および／またはキレート剤の濃度は、本発明の方法の範囲内の組成物のフェムトモル量〜モル量の範囲に及び得る。いくつかの実施形態において、抗酸化剤、脱酸素剤、および／またはキレート剤の濃度は、約０．０００１ｍＭ〜約１００００ｍＭ、約０．００１〜約１０００ｍＭ、約０．０１〜約１００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭの範囲である。
【００３８】
組成物の黄色形成を防ぐか、または低下させるために、抗酸化剤、脱酸素剤、および／またはキレート剤を用いることに加えて、本発明の方法は、組成物の酸素への曝露を減少させることをさらに含む。組成物の酸素への曝露を減少させる様々な手段は当業で知られており、気密の容器を用いることから容器のヘッドスペース内のガスを低下または交換することなどの手段に及ぶ。組成物の酸素への曝露を減少させるのに適する手段には、組成物の表面と容器の封止部との間のヘッドスペースのガス含有量を低下させること、周囲酸素含有量を低下させること、組成物を窒素で覆うこと、組成物に窒素を散布すること、またはこれらのうちの１つ以上の任意の組み合わせなどの手段が含まれる。一実施形態において、組成物の酸素への曝露の減少は、酸素以外のガスでヘッドスペースのガスを交換することによって行われる。別の実施形態において、ヘッドスペースを（例えば、窒素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、およびキセノンが含まれるが、これらに限定されない）不活性ガスで満たす。
【００３９】
組成物の黄色形成を防ぐか、または低下させるために考えられる他の手段には、組成物のｐＨを調整することが含まれる。タンパク質製剤またはタンパク質もしくは抗体を含む溶液がｐＨの変化に耐えることができる範囲まで、このタンパク質の構造および機能もしくは抗体の構造および機能を維持しながら、黄色形成を防ぐか、または低下させるｐＨを選択することができる。一実施形態において、このｐＨを生理学的ｐＨに調整する。いくつかの実施形態において、調整されたｐＨは、約７．５〜約７．０、約７．０〜約６．５、約６．０未満、約５．５未満、および約５．０未満の範囲にある。
【００４０】
組成物の黄色形成を阻害するか、または低下させるために考えられるさらなる手段には、この溶液の光への曝露を低下させるか、制限することが含まれる。組成物を光から保護するのに適する手段には、容器の着色および／または包装の使用が含まれるが、これらに限定されない。組成物を光から保護するためのかかる手段の制限のない例は当業で知られており、例えば、茶色もしくは他の暗い色のガラス容器またはプラスチック容器、ならびにホイルまたは類似の囲いが含まれる。
【００４１】
本発明の方法は、組成物の黄色形成を防ぐか、または低下させるキレート剤の使用を含む。キレート剤は当業で知られており、例えば、溶液から微量金属を除去するために一般に用いられる。例示的なキレート剤には、ＥＤＴＡ（（エチレンジアミン四酢酸）、ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、アスコルビン酸、イミノジアセテート、イミノジコハク酸四ナトリウム、クエン酸、ジカルボキシメチルグルタミン酸、ＥＤＤＳ（エチレンジアミンジコハク酸）、ＤＴＰＭＰ・Ｎａ（ジエチレントリアミンペンタ(メチレンホスホン酸)七ナトリウム塩）、リンゴ酸、ＮＴＡ（ニトリロ三酢酸）、（メチオニンを含むが、これに限定されない）無極性アミノ酸、シュウ酸、リン酸、（アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、およびオルニチンを含む）極性アミノ酸、（デスフェリオキサミンＢを含むが、これに限定されない）シデロホア、ならびにコハク酸が含まれるが、これらに限定されない。キレート剤には、加水分解されたウールまたはキレート樹脂、例えば、ＣＨＥＬＥＸ（登録商標）２０樹脂またはＣＨＥＬＥＸ（登録商標）１００樹脂などの溶液処理に用いられるキレート剤も含まれ得るが、これらに限定されない。
【００４２】
本発明の方法には、組成物における黄色形成を防ぐか、または低下させる方法も含まれ、この方法は、黄色形成を防ぐか、または遅らせるために少なくとも２つの因子の使用を含む。本発明は、組成物における黄色の量を低下または減少させる方法も提供し、この方法は、黄色形成を低下または減少させるために少なくとも２つの因子の使用を含む。驚くべきことに、１つの因子の使用が、組成物の黄色形成を阻害するか、または低下させなかった場合において、第２の因子の添加が組成物の黄色形成を阻害するか、または低下させたことが分かっている（表２参照）。したがって、一実施形態において、少なくとも２つの因子の使用には、メチオニン、酸素曝露の減少、ＮａＣｌ、ポリソルベート化合物、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、アルギニン、約５．０のｐＨ、約５．５のｐＨ、約６．０のｐＨ、約６．５のｐＨ、約７．０のｐＨの使用などの２つ以上の因子の任意の組み合わせの使用が含まれる。別の実施形態において、この少なくとも２つの因子の使用には、メチオニンおよび酸素曝露の減少、メチオニンと約５．０のｐＨ、メチオニンと約５．５のｐＨ、メチオニンと約６のｐＨ、ＮａＣｌとポリソルベート８０、およびアルギニンと約７．０のｐＨの使用などの因子の１つ以上の組み合わせの使用が含まれる。
【００４３】
本発明の方法には、組成物における黄色の量の低下または減少を、ｂ＊値の減少率（％）として測定する方法が含まれる。ｂ＊値の変化の測定は、比色計または分光光度計を用いて、当業で知られる技術を用いて実行され得る。一実施形態において、このｂ＊値の減少率（％）は０％を超え、１％ずつの増加で１００％まである。いくつかの実施形態において、ｂ＊値の減少率（％）は、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％および約９９％である。
【００４４】
本発明の方法には、組成物の黄色形成の速度を予測または決定する方法も含まれ、この予測または決定は、特定の範囲の温度で組成物をインキュベートするステップ、時間および温度の関数として、形成される黄色の量を定量化するステップ、および特定の範囲の温度内または特定の範囲の温度外の任意の温度について、前記組成物における黄色形成の速度の予測または決定を推定するステップを含む。一実施形態において、黄色形成の速度を予測または決定する方法は、組成物の濃度範囲を準備するステップ、および特定の範囲の濃度内または特定の範囲の濃度外の任意の濃度について、前記組成物における黄色形成の速度の予測または決定を推定するステップをさらに含む。かかるステップを実行する方法は当業で知られている。
【００４５】
さらなる実施形態において、組成物における黄色形成の速度を、溶液保管温度の関数として、予測または決定する。溶液保管温度は、黄色形成の速度を減少することができる温度から、黄色形成の速度を増加させることができる温度にわたって広がり得る。しかし、かかる温度は、緩衝溶液、タンパク質製剤、およびタンパク質もしくは抗体を含む溶液の安定性を妨げるべきではない。したがって、好ましい実施形態において、組成物における黄色形成の速度を、約−８０℃（マイナス８０℃）〜約＋１００℃の間の１℃の増加分における任意の温度の溶液保管温度の関数として、予測または決定する。
【００４６】
別の実施形態において、この予測または決定は、２つの因子の相互作用に基づいて計算されるか、２つの因子の相互作用に基づく。一実施形態において、この予測または決定は、アレニウスモデルに基づく。
【００４７】
実施例
実施例１
黄色標準に基づく黄色形成の測定のためのシステム
ＨｕｎｔｅｒＬａｂカラーシステムを用いて、キュベットまたはバイアルの中で黄変した溶液の程度を分光光度法で測定することができる。ＥＰ色度標準を、ヨーロッパ薬局方「液体の着色の程度（Ｄｅｇｒｅｅ  ｏｆ  Ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｑｕｉｄｓ）」の２．２．２節に記載されたとおりに作った。ＥＰ標準色の原液をＲｉｃｃａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから購入した。ＹおよびＢＹのＥＰ標準を、１ｃｍの光路長の石英キュベットおよび１０ｍＬのガラスバイアルの両方で、ＨｕｎｔｅｒＬａｂ  ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ  ＸＥ装置を用いて測定した。ｂ＊明度を、色度標準を作るために用いられる希釈系列に対してプロットした。
【００４８】
Ｙ（■）およびＢＹ（◆）のＥＰ色度標準の解析は、黄色の溶液が次第に４５のｂ＊値になるまでｂ＊値の直線的増加を示した（図１Ａ）。試料の視覚的評価は、装置の直線性が減少する非常に黄色の試料を除いて、ｂ＊値と関連している（図１Ｂ）。ＨｕｎｔｅｒＬａｂ側色システムは、従来の外観試験よりも、時間と共に変化する色の定量的な、高感度の監視を促す。したがって、かかる分光光度システムを用いて、組成物の黄色を決定することができる。
【００４９】
実施例２
一般的な賦形剤を含むヒスチジン組成物の黄色形成のスクリーニングのための実験計画法
任意の組成物の黄変に対する賦形剤および他の製剤因子の効果を見つけ出すために、スクリーニングを、統計的分析プログラムを含む多数の方法によって設計することができる。ヒスチジン黄変に対する９個の製剤因子の効果を試験するために、Ｄｅｓｉｇｎ  Ｅｘｐｅｒｔ  ６．０．５（Ｓｔａｔ−Ｅａｓｅ）を用いて、Ｄ−最適実験的設計（Ｄ−Ｏｐｔｉｍａｌ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｅｓｉｇｎ）を作成した（表１参照）。この設計は５５個の製剤を含み、２因子相互作用の解析を可能する検出力を有していた。以下の試薬を用いて、複数の製剤を作った：Ｌ−ヒスチジン（Ｊ.Ｔ.Ｂａｋｅｒ）、Ｌ−ヒスチジンモノハイドロクロライド（Ｊ.Ｔ.Ｂａｋｅｒ）、塩化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈまたはＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ショ糖（高純度、低内毒素のビート、Ｆｅｒｒｏ  Ｐｆａｎｓｔｉｅｈｌ）、Ｌ−メチオニン（シグマ）、Ｌ−アルギニンハイドロクロライド（Ｊ.Ｔ.Ｂａｋｅｒ）、グリシン（Ｊ.Ｔ.Ｂａｋｅｒ）、グリセロール（Ｊ.Ｔ.Ｂａｋｅｒ）、ポリソルベート８０（Ｊ.Ｔ.Ｂａｋｅｒ（Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ,ＮＪ,ＵＳＡ））、およびＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ（Ｗｈｉｔｅ  Ｐｌａｉｎｓ,ＮＹ,ＵＳＡ））、ポリソルベート２０（ＥＭＤ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ,ＮＪ,ＵＳＡ）およびＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ)、ならびにバイオジェンアイデック（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）によって生産された典型的なモノクローナル抗体。
【００５０】
【表１】
2012533548.tif 000003
【００５１】
各製剤１０ｍＬを、Ｓｃｈｏｔｔ社製８４１２−Ｂガラス棒つき２０ｍｍ開口の１０ｍＬガラスバイアルに入れた。これらのバイアルを、Ｗｅｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ社の灰色ブチルゴムの、ＴＥＦＬＯＮ（登録商標）−２でコーティングされた２０ｍｍストッパーを用いて栓をした。これらのバイアルを、１８カ月間、２〜８℃、２５oＣ／６０％ＲＨ、または４０oＣ／７５％ＲＨでインキュベートし、黄変の程度を、傷のないバイアルのＨｕｎｔｅｒ  Ｌａｂ分析によって定期的に試験した。
【００５２】
表２に示すように、ヒスチジン緩衝液に個別に加えられる時、ヒスチジン緩衝液の黄変はタンパク質、ポリソルベート８０、グリセロール、グリシン、および高いｐＨ（ｐＨ７．０は、ｐＨ５．０よりも黄色であった）によって加速されるが、ほとんどの場合、メチオニンが黄変を遅らせることを、ＤＯＥパラメータスクリーニングが明らかにした。２因子相互作用をみると、アルギニンおよびｐＨ７．０の組み合わせと同様に、ＮａＣｌおよびポリソルベート８０の組み合わせがヒスチジン緩衝液の黄変を減少させることが分かった。
【００５３】
表２．２５oＣ／６０％ＲＨにおいてインキュベートしたバイアルについてのＤＯＥパラメータスクリーニングの結果
Ｐｒｏｂ＞Ｆは、その結果がノイズに起因する可能性を示す。Ｐ値＜０．０５だけは、有意であると考えられた。
【００５４】
【表２】
2012533548.tif 000004
【００５５】
実施例３
黄色形成に関する生成物の品質分析
ヒスチジン緩衝液の黄色形成が、バイオジェンアイデック社が産生した典型的なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の生成物の品質に影響を与えるかどうかを判定するために、ｍＡｂの試料を追加の賦形剤を含むヒスチジン緩衝液中でインキュベートした。ｍＡｂの他の試料を、同じヒスチジン緩衝液とポリソルベート８０、ヒスチジン緩衝液とメチオニン、またはポリソルベート８０とメチオニンの中でインキュベートした。インタクトな抗体の分析を、ＬＡＢＣＨＩＰ（登録商標）９０ゲルチップ分析によって行った。高分子量の凝集物の分析を、ＴＳＫ−ＧＥＬ（登録商標）Ｇ３０００ＳＷＸＬカラムおよびＴｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社のガードカラム（０．１Ｍのリン酸ナトリウム／０．２Ｍの塩化ナトリウム、移動相ｐＨ６．８、流速０．５ｍＬ／分、６０分の分離、２８０ｎｍにおける検出）を用いるサイズ排除クロマトグラフィーによって行った。酸化した抗体を、ペプチドマップ分析に焦点を合わせたＬＣ−ＭＳによって特定した。
【００５６】
図２に示すように、溶液の色の著しい変化が、必ずしも他の生成物の品質特性の変化に関連するわけではない。視覚的に検出可能な変化がｂ＊値にあるが、ヒスチジン緩衝液（△）、ヒスチジン緩衝液とポリソルベート８０（○）、ヒスチジン緩衝液とメチオニン（●）、またはヒスチジン緩衝液とポリソルベート８０とメチオニン（▼）の中でインキュベートしたｍＡｂの試料について、ｍＡｂ断片化における著しい変化はなかった（図２Ａ）。色に同様の変化のある製剤は、著しく異なるレベルの凝集したｍＡｂ（図２Ｂ）または酸化したｍＡｂ（図２Ｃ）を有した。例えば、ヒスチジン緩衝液とポリソルベート８０（○）中でインキュベートしたｍＡｂ試料は、より高いレベルの酸化したｍＡｂを示した(図２Ｃ）。しかし、溶液の黄変と他の生成物の品質特性との間の弱い相互関係は、生成物の色が必ずしも生成物の品質の予想にならないことを示唆する。
【００５７】
実施例４．タンパク質の非存在下における黄色形成の動力学的評価
ヒスチジン緩衝液の黄色形成の動態を評価するために、濃度および溶液保管温度などのヒスチジン緩衝液の黄変に影響を与える因子を、タンパク質の非存在下で分析した。２０ｍＭ、１００ｍＭ、または２００ｍＭのヒスチジンのいずれかを含む動態分析用の製剤をバイアルに入れ、２〜８℃、２５oＣ／６０％ＲＨ、４０oＣ／７５％ＲＨ、または５５℃でインキュベートした。色の値を、ＨｕｎｔｅｒＬａｂ  ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ  ＸＥ装置を用いて、分光光度法で定期的に測定した。傷のないバイアルの中で測定を行い、その後、これらのバイアルをインキュベーションチャンバーに戻した。
【００５８】
色変化率を経時的に監視し、アレニウス解析で各温度における最初の線形速度を用いて、この反応の活性化エネルギー（Ｅａ）を推定した。例えば、図３Ａに示すように、２００ｍＭヒスチジン、ｐＨ７のアレニウス解析から推定されたＥａは、７３．３ｋＪ／ｍｏｌであると決定した。２０ｍＭおよび１００ｍＭのヒスチジンについての推定Ｅａは、それぞれ、７２．６および８２．６であると決定した（表３）。その後、ヒスチジンの各濃度についてこのＥａを用いて、観察された色変化の温度予測モデルを作った（表３参照）。したがって、ヒスチジン緩衝液の黄変はアレニウスモデルに当てはまるので、冷蔵保存した試料の色変化は、高温実験から予測することができる。
【００５９】
【表３】
2012533548.tif 000005
【００６０】
様々なヒスチジン濃度を含む製剤の色変化の速度を比較して、反応次数も決定した。図３Ｂに示すように、ヒスチジン緩衝液の黄変は、およそ２５℃で１次である（黄変速度＝ｋ（ヒスチジン）１）。しかし、５５℃の湾曲はより複雑な反応次数を示唆する（図３Ｃ）。同様の実験を行い、様々な賦形剤、例えば、限定されないが、ポリソルベート８０、グリシン、グリセロール、および／または酸素の含有量に関して反応次数を決定することができる。
【００６１】
実施例５．酸化機構の結果としての黄色形成の評価
ポリソルベート８０は過酸化物源であるの、ヒスチジン緩衝液の黄色形成に対する酸化効果を評価した。２００ｍＭヒスチジン緩衝液の黄色形成速度を、ｐＨ５．０およびｐＨ７．０で、ポリソルベート８０の存在下または非存在下のいずれかにおいて監視した。図４に示すように、ポリソルベート８０およびより高い７．０のｐＨは、ｐＨ５．０のヒスチジン緩衝液（▲）と比較した場合、独立して調べた場合（ポリソルベート８０の●とｐＨ７．０の◆との比較）と組み合わせて調べた場合（■）の両方において、溶液の黄変を増加させた。
【００６２】
黄色形成における酸化の影響をさらに分析するために、ヒスチジン緩衝液の酸素含有量および容器のヘッドスペースを変化させて調べた。２００ｍＭヒスチジン緩衝液の黄色形成速度を、エアガスから１００％窒素ガスで表面を覆うか、もしくは散布した製剤、または６０％酸素ガスもしくは１００％酸素ガスで覆った製剤のいくつかと共に４０℃で監視した。図５に示すように、ヘッドスペースの酸素の存在は、溶液の黄変を著しく増加させることが分かった。周囲ガスのヘッドスペース（▲）を有しキャップをした溶液、窒素を散布する（◆）か、または窒素で覆って（■）キャップをした溶液は、６０％酸素（×）または１００％酸素（□）で覆った溶液よりも黄色形成がはるかに低いこと示した。したがって、任意の特定の理論によって制約されることを意図しないが、ｐＨ、ポリソルベート８０、およびヘッドスペースのガス含有量の影響は、ヒスチジンの黄変の酸化経路を示唆する。
【００６３】
実施例６．メチオニンの使用がヒスチジン緩衝液の黄変を遅らせる。
ＤＯＥパラメータスクリーニングにおいて、メチオニンがヒスチジン緩衝液の黄変を遅らせることを示した（表２参照）。メチオニンが、様々な容器の封止系において、ポリソルベート８０およびグリシンを含む一般的なタンパク質製剤の賦形剤を含むヒスチジン緩衝液の黄変を同様に遅らせることができるかどうかを判定するために、表４に示すとおりに比較スクリーニングを設定した。
【００６４】
【表４】
2012533548.tif 000006
【００６５】
５０ｍＭヒスチジン（ｐＨ６．０）、１００ｍＭグリシン、ＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ社またはＪ.Ｔ.Ｂａｋｅｒ社のいずれかの０．０５％ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、および１０ｍＭメチオニンを含む製剤をガラスバイアル、ＬＵＥＲ−ＬＯＫ（商標）のＨｙｐａｋ  ＳＣＦ（商標）の１ｍＬ注射器（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、または固定針（ｓｔａｋｅｄ−ｎｅｅｄｌｅ）のＨｙｐａｋ  ＳＣＦ（商標）の１ｍＬ注射器（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）に入れた。注射器およびバイアルを４０oＣ／７５％ＲＨでインキュベートし、６か月間光から保護した。ＨｕｎｔｅｒＬａｂ  ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ  ＸＥを用いて測定するために、注射器から溶液を排出するか、またはバイアルから溶液を除去し、１ｃｍセル光路の石英キュベットに移すことによって、溶液の色を分析した。
【００６６】
ＤＯＥパラメータスクリーニングにおいて示したように、試験した全ての容器の封止系において、ポリソルベート８０の非存在下および存在下の両方で、メチオニンがヒスチジン緩衝液の黄変を著しく遅らせることができた（表５参照）。表２および図４に同様に示すように、ポリソルベート８０はヒスチジン緩衝液の黄変を増加させた（表５参照）。ヒスチジン緩衝液におけるＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ社の超高純度ポリソルベート８０の使用は、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ社から入手した低純度ポリソルベート８０と比較して、黄色形成を著しくはもたらさなかった。上記で論じたとおり、黄色形成は、少なくとも一部において、酸化機構の結果であるように思われる。任意の特定の理論によって制約されることをのぞまないが、抗酸化剤であるものは、おそらく脱酸素剤として作用することによってヒスチジン緩衝液の黄変を遅らせるように思われる。
【００６７】
【表５】
2012533548.tif 000007
【００６８】
表５は、５０ｍＭヒスチジン（ｐＨ６．０）と１００ｍＭグリシン（「ヒスチジンとグリシン」）を含むＬＵＥＲ−ＬＯＫ（商標）のＨｙｐａｋ  ＳＣＦ（商標）の１ｍＬ注射器（「ＬＵＥＲ−ＬＯＫ（商標）」）、固定針のＨｙｐａｋ  ＳＣＦ（商標）の１ｍＬ注射器（「固定針注射器」）およびガラスバイアル（「バイアル」）を４０oＣ／７５％ＲＨでインキュベートし、６か月間光から保護した結果を示す。１０ｍＭメチオニンをさらに含む注射器およびバイアル（「＋メチオニン」）も評価した。ＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ社の０．０５％ポリソルベート８０を含む（「＋ＮＯＦ  ＴＷＥＥＮ（商標）８０」）注射器およびバイアル、ならびにＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ社の０．０５％ポリソルベート８０および１０ｍＭメチオニンを含む（＋ＮＯＦ  ＴＷＥＥＮ（商標）８０とメチオニン）印のついた注射器およびバイアルを評価した。Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ社の０．０５％ポリソルベート８０を含む（「＋Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ  ＴＷＥＥＮ（商標）８０」）注射器およびバイアル、ならびにＪ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ社の０．０５％ポリソルベート８０および１０ｍＭメチオニンを含む（＋Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ  ＴＷＥＥＮ（商標）８０とメチオニン）注射器およびバイアルも評価した。
【００６９】
実施例７．黄変と過酸化物形成、ヘッドスペース体積、ヘッドスペースガス、および溶液含有量との関係
２００ｍＭヒスチジン、０．０５％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ５．０の溶液を、ヘッドスペースガス含有量を変えて、６０℃で、１０ｍＬガラスバイアル中でインキュベートした。溶液の色を、（十分な体積が利用できない場合、１０ｍＬバイアルまたはキュベットのいずれかの中で）Ｈｕｎｔｅｒ  ＬＡＢ  ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ  ＸＥ装置を用いて測定し（図７〜１０参照）、溶液の過酸化物含有量をＰＥＲＯＸＯＱＵＡＮＴ（商標）Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ,Ｗａｌｔｈａｍ,ＭＡ,ＵＳＡ）を用いて決定した（図６参照）。
【００７０】
一般に、溶液が黄変すると二相形成が起き、黄変の初速度は、後の速度よりも速い。同時に、溶液中の過酸化物レベルは最初に増加し、その後、時間と共に減少する。黄変速度における観察される変化がやがて過酸化物含有量の減少におおよそ関連することは、過酸化物が、少なくとも部分的に、色変化を促進している可能性があることを示唆する。
【００７１】
ヘッドスペースガス含有量も、溶液の黄変および過酸化物含有量の両方に寄与する。図６〜１０を参照されたい。ヘッドスペース内の空気と共に溶液の体積を変えて（６、８、１０または１２ｍＬ）バイアルを満たした。液体の少ない（したがって、ヘッドスペースが広い）試料はより認め得るほどに黄色になり、より多くの過酸化物を含んでいた。ヘッドスペース内が空気よりむしろ窒素を含む１セットの試料を製剤化した。これらの溶液は著しく黄色にならず、過酸化物含有量も取るに足らなかった。
【００７２】
ポリソルベートは溶液の黄変を著しく増加し、ポリソルベートを含まなかった溶液も過酸化物含有量が取るに足らなかったことが示された。図６〜８を参照されたい。これらの結果は、ポリソルベート８０による溶液の黄変の加速は、ポリソルベートが含むと知られる過酸化物の不純物と関連する可能性があることを示唆する。
【００７３】
対照的に、ＥＤＴＡは溶液の黄変を効果的に遅らせた。５０μＭ程度のＥＤＴＡが、溶液の黄変を著しく遅らせることができた。図９を参照されたい。同様に、メチオニンも溶液の黄変を効果的に遅らせた。１０μＭ程度のメチオニンが溶液の黄変を著しく遅らせることができた。図１０を参照されたい。
【００７４】
特定の実施形態の前述の記載は本発明の一般的性質を完全に明らかにするので、本発明の一般概念から逸脱することなく、当業者の知識を適用することによって、過度の実験をすることなく、他人がかかる特定の実施形態を様々な適用に容易に変更および／または適用することができる。したがって、かかる適応および変更は、本明細書に提示される教示およびガイダンスに基づいて、開示された実施形態の意味および開示された実施形態の様々な範囲の同等物の中に入ると意図される。本明細書の用語すなわち専門用語は記載の目的のためであり、制限はなく、その結果、本明細書の専門用語すなわち用語は、教示およびガイダンスを考慮して当業者によって解釈されるものである。
【図１Ｂ】
2012533548.tif 000008
【図２Ａ】
2012533548.tif 000009
【図２Ｂ】
2012533548.tif 000010
【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2012533548.tif 000019
【図９】
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【図１０】
2012533548.tif 000021
【図１Ａ】
2012533548.tif 000022
【国際調査報告】
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