【手続補正書】
【提出日】令和2年1月10日(2020.1.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．患者から得られた少なくとも１つの固形腫瘍サンプルから解離細胞サンプルを提供することと、
ｂ．ＤＥＰ構成と、第１の流体培地の流れを含むための少なくとも１つのフロー領域と、前記フロー領域に流体接続された、第２の流体培地の流れを含むための少なくとも１つの分離領域と、を有するマイクロ流体デバイスに前記解離細胞サンプルをロードすることと、
ｃ．少なくとも１つのＢ細胞を前記解離細胞サンプルから前記マイクロ流体デバイスの少なくとも１つの分離領域にＤＥＰ力により移動させることにより少なくとも１つの単離されたＢ細胞を得ることと、
ｄ．癌細胞関連抗原に結合可能な抗体を産生する少なくとも１つの単離されたＢ細胞を同定することと、
ｅ．前記少なくとも１つの同定されたＢ細胞又はそれに由来するＢ細胞のクローン集団の一部若しくは全部で抗体シーケンシングを行うことと、
ｆ．前記少なくとも１つの同定されたＢ細胞の抗体から、少なくとも重鎖及び軽鎖のＣＤＲ配列を備える抗体治療剤を生成することと、
を含む、抗体治療剤の調製方法。
【請求項２】
前記分離領域が、Ｂ細胞リンパ球生存能を向上させる少なくとも１つの調整された表面を備え、前記調整された表面が、共有結合された分子を備え、前記共有結合された分子が、アルキレンエーテル部分、アミノ酸部分、糖類部分、又はこれらの任意の組み合わせを備える、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの調整された表面が、共有結合された親水性分子の層を備える、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記マイクロ流体デバイスが、前記フロー領域の少なくとも一部を備えるマイクロ流体チャネルと、少なくとも１つの隔離チャンバであって、各隔離チャンバが、前記少なくとも１つの分離領域の１つと、前記分離領域を前記マイクロ流体チャネルに流体接続する接続領域と、を備える隔離チャンバと、を備え、
前記接続領域が、前記マイクロ流体チャネルへの基端開口部と、前記少なくとも１つの分離領域への先端開口部と、を備え、
前記基端開口部から前記先端開口部までの前記接続領域の長さＬｃｏｎが、前記接続領域の前記基端開口部の幅Ｗｃｏｎの少なくとも１．０倍であり、
前記少なくとも１つの隔離チャンバの前記分離領域が、前記接続領域に対して１つの開口を有し、
前記フロー領域が実質的に第１の流体培地で満たされ、前記少なくとも１つの隔離チャンバの前記分離領域が実質的に第２の流体培地で満たされている間、前記第２の流体培地の成分が前記第１の流体培地中に拡散可能であると共に前記第１の流体培地の成分が前記第２の流体培地中に拡散可能であり、
前記フロー領域から前記分離領域内への前記第１の流体培地のフローが実質的にない、
請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記接続領域が約２０ミクロンから約１００ミクロンの幅Ｗｃｏｎを有する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つの隔離チャンバが、約０．５ｎｌから約２．５ｎｌの容積を含む、請求項４又は５に記載の方法。
【請求項７】
前記解離細胞サンプルをロードする前に、前記解離細胞サンプル中のＢ細胞を検出可能マーカーで標識することを更に含み、
前記少なくとも１つのＢ細胞を前記少なくとも１つの分離領域内に移動させることが、前記検出可能マーカーの検出に基づいて、移動させる少なくとも１つのＢ細胞を選択することを含む、
請求項１から６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１つのＢ細胞と、Ｂ細胞の活性を刺激する刺激剤と、を接触させることを更に含み、
前記少なくとも１つのＢ細胞が１〜１０日間にわたり前記刺激剤に接触される、
請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記刺激剤が、ＣＤ４０アゴニスト及び／又は１つ以上のＣＤ４０Ｌ＋支持細胞を含み、
前記刺激剤が、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニストを更に含む、
請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
培養培地を前記少なくとも１つのＢ細胞に提供することを更に含み、
前記培養培地が、Ｂ細胞増殖を促進する１つ以上の成長誘導剤を含み、
前記１つ以上の成長誘導剤が、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−２１、及びＢＡＦＦからなる群から選択される少なくとも１つの作用剤を含む、
請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記癌細胞関連抗原に結合可能な抗体を産生する前記少なくとも１つの単離されたＢ細胞を同定することが、前記癌細胞関連抗原を含む流体培地を前記マイクロ流体デバイス内に導入することを含み、
前記流体培地が、可溶化癌細胞関連抗原又は前記癌細胞関連抗原を含む微小物体を含む、
請求項１から１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記微小物体がビーズであり、前記癌細胞関連抗原が前記ビーズにコンジュゲートされている、又は
前記微小物体が細胞であり、前記癌細胞関連抗原が、前記少なくとも１つの腫瘍サンプル中に存在する癌細胞の細胞表面上に存在する膜関連抗原である、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記微小物体がビーズであり、前記癌細胞関連抗原が、前記少なくとも１つの腫瘍サンプルから単離された癌細胞から得られる細胞膜調製物に由来する、又は
前記微小物体が、前記少なくとも１つの腫瘍サンプルから単離された癌細胞である、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記癌細胞関連抗原を前記マイクロ流体デバイス内に導入することが、
前記癌細胞関連抗原を含む微小物体を含有する流体培地を前記マイクロ流体デバイスの前記フロー領域に通して流動させることと、
前記培地中の前記微小物体の少なくとも幾つかが、前記少なくとも１つの分離領域に近接する前記フロー領域の一部に位置決めされたとき、前記流体培地の流れを停止することと、
前記微小物体の少なくとも１つを、少なくとも１つのＢ細胞を含む前記マイクロ流体デバイスの少なくとも１つの前記分離領域内に移動させ、少なくとも１つの微小物体及び少なくとも１つのＢ細胞を有する少なくとも１つの分離領域を生成することと、
を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
癌細胞関連抗原に結合可能な抗体を産生する前記少なくとも１つの単離されたＢ細胞を同定するこが、
標識された抗体結合剤を含有する流体培地を前記マイクロ流体デバイスの前記フロー領域に通して流動させることと、
前記流体培地中の前記標識された抗体結合剤の少なくとも幾つかが、前記少なくとも１つの分離領域に近接する前記フロー領域の一部に位置決めされたとき、前記流体培地の流れを停止することと、
前記癌細胞関連抗原への前記標識された抗体結合剤の結合を監視することと、
を更に含み、
任意で、前記標識された抗体結合剤が、前記癌細胞関連抗原との混合物で提供される、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記解離細胞サンプルをロードする前に、
前記解離細胞サンプルを分画して元の解離サンプルよりも高い濃度のＢ細胞を有するＢ細胞富化画分を単離することと、
前記Ｂ細胞富化画分を前記マイクロ流体デバイス内にロードすることと、
を更に含み、
任意で、前記分画することが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１３８、ＰＮＡ、及びＧＬ７から選択される少なくとも１つのマーカーを用いて前記解離細胞サンプルからＢ細胞を選択する、
請求項１から１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記少なくとも１つの腫瘍サンプルを生成した腫瘍が三次リンパ様構造を有する、請求項１から１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの腫瘍サンプルを生成した腫瘍が、乳癌、泌尿生殖器癌、腎細胞癌、精巣癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮癌、頸癌、神経系癌、神経芽腫、腸癌、結腸直腸癌、肺癌、又は黒色腫である、請求項１から１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｂ細胞により産生された抗体が非癌細胞に結合可能であるかを同定するためにマイクロ流体デバイスを使用することを更に含み、
任意で、前記非癌細胞が、前記少なくとも１つの腫瘍サンプルを提供した前記患者に由来する、
請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
癌を有する患者の治療のための医薬品の製造における、請求項１から１９のいずれか１項に記載の方法により産生された抗体又はそのフラグメントの使用。
【請求項２１】
前記腫瘍サンプルが、治療される同一の患者から採取されている、請求項２０に記載の使用。