【手続補正書】
【提出日】令和2年1月10日(2020.1.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−１ＢＢＬ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５もしくはＩＬ−７、または、それぞれの場合に、その断片もしくは変異型を含む第１の外因性ポリペプチドを含む、除核赤血球系細胞。
【請求項２】
前記第１の外因性ポリペプチドが、４−１ＢＢＬまたはその断片もしくは変異型を含む、請求項１に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項３】
前記第１の外因性ポリペプチドが、ＩＬ−１２またはその断片もしくは変異型を含む、請求項１に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項４】
前記第１の外因性ポリペプチドが、ＩＬ−１５またはその断片もしくは変異型を含む、請求項１に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項５】
前記第１の外因性ポリペプチドが、ＩＬ−７またはその断片もしくは変異型を含む、請求項１に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項６】
前記第１の外因性ポリペプチドが、前記除核赤血球系細胞の表面に存在する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項７】
前記第１の外因性ポリペプチドが、膜貫通ポリペプチドまたは表面アンカー型ポリペプチドである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項８】
前記第１の外因性ポリペプチドが、膜貫通ドメインを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項９】
（ｉ）前記膜貫通ドメインが、Ｉ型またはＩＩ型赤血球膜貫通ドメインである；および／または（ｉｉ）前記膜貫通ドメインが、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）を含む、請求項８に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項１０】
前記除核赤血球系細胞が、造血前駆細胞を、前記第１の外因性ポリペプチドをコードする核酸と接触させることと、除核赤血球系細胞を形成するように、前記細胞が培養中で増殖して分化できるようにすることとを含む方法によって調製される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項１１】
前記第１の外因性ポリペプチドが、ソルターゼ移入シグネチャを欠く、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項１２】
前記除核赤血球系細胞が、第２の外因性ポリペプチドをさらに含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項１３】
前記除核赤血球系細胞が、第３の外因性ポリペプチドをさらに含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項１４】
前記第１の外因性ポリペプチドが、４−１ＢＢＬまたはその断片もしくは変異型を含み、前記第２の外因性ポリペプチドが、ＩＬ−１２またはその断片もしくは変異型を含む、請求項１２に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項１５】
前記第１の外因性ポリペプチドが、４−１ＢＢＬまたはその断片もしくは変異型を含み、前記第２の外因性ポリペプチドが、ＩＬ−１５またはその断片もしくは変異型を含む、請求項１２に記載の除核赤血球系細胞。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれかに記載の複数の除核赤血球系細胞を含む、医薬組成物。
【請求項１７】
対象においてがんを治療する方法における使用のための、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１に記載の除核赤血球系細胞を作製する方法であって、前記方法は、
造血前駆細胞を、前記第１の外因性ポリペプチドをコードする核酸と接触させることと、
除核赤血球系細胞を形成するように、前記細胞が培養中で増殖して分化できるようにすることと
を含む、方法。
【請求項１９】
対象においてがんを治療する方法における使用のための、除核赤血球系細胞を含む組成物であって、前記除核赤血球系細胞が、４−１ＢＢＬ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５もしくはＩＬ−７、または、それぞれの場合に、その断片もしくは変異型を含む第１の外因性ポリペプチドを含む、組成物。
【請求項２０】
前記第１の外因性ポリペプチドが、４−１ＢＢＬまたはその断片もしくは変異型を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記第１の外因性ポリペプチドが、ＩＬ−１２またはその断片もしくは変異型を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記第１の外因性ポリペプチドが、ＩＬ−１５またはその断片もしくは変異型を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
前記第１の外因性ポリペプチドが、ＩＬ−７またはその断片もしくは変異型を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２４】
前記除核赤血球系細胞が、第２の外因性ポリペプチドをさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２５】
対象においてがんを治療する方法における使用のための、除核赤血球系細胞を含む組成物であって、前記除核赤血球系細胞が、複数の外因性ポリペプチドを含み、前記複数のうちの第１および第２の外因性ポリペプチドが、薬剤相加的、薬剤相乗的、乗法的、独立機能、局在ベース、近接依存性、スキャフォールドベース、多量体ベース、または代償性活性を有する、組成物。
【請求項２６】
対象においてがんを治療する方法における使用のための、除核赤血球系細胞を含む組成物であって、前記除核赤血球系細胞が、第１の外因性ポリペプチド、第２の外因性ポリペプチド、および第３の外因性ポリペプチドを含む、組成物。
【請求項２７】
対象においてがんを治療する方法における使用のための、除核赤血球系細胞を含む組成物であって、前記除核赤血球系細胞が、第１の外因性ポリペプチドおよび第２の外因性ポリペプチドを含み、
ａ）前記第１および第２の外因性ポリペプチドが同一標的に作用するか；
ｂ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１の内因性ヒトタンパク質に、前記第２の外因性ポリペプチドが第２の内因性ヒト標的タンパク質に結合するか；
ｃ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１の標的に作用し、前記第２の外因性ポリペプチドが第２の標的に作用し、前記第１および第２の標的が同一生物学的経路の構成要素であるか；
ｄ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１のアポトーシス促進ポリペプチドを含み、前記第２の外因性ポリペプチドが第２のアポトーシス促進ポリペプチドを含むか；
ｅ）少なくとも１、２、５、１０、３０、または６０秒間；１、２、５、１０、３０、または６０分間、または１、２、３、６、１２、または１４時間にわたり前記第１および第２の外因性ポリペプチドが互いに近接しているか；
ｆ）前記第１および第２の外因性ポリペプチドが、互いに５００、２００、１００、５０、２０、１０、５、２、または１ｎＭ未満のＫｄを有するか；
ｇ）前記第１の外因性ポリペプチドが、抗原提示ポリペプチドを含み、前記第２の外因性ポリペプチドが、抗原を含むか；
ｈ）前記第１および第２の外因性ポリペプチドが異なる標的に作用するか；
ｉ）前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドが、重量基準またはコピー数基準で、約１：１、約２：１〜１：２、約５：１〜１：５、約１０：１〜１：１０、約２０：１〜１：２０、約５０：１〜１：５０、約１００：１〜１：１００の存在比を有するか；
ｊ）前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドが、それぞれ、約１：１、約２：１〜１：２、約５：１〜１：５、約１０：１〜１：１０、約２０：１〜１：２０、約５０：１〜１：５０、約１００：１〜１：１００の比率で、第１の標的および第２の標的に対するＫｄを有するか；
ｋ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１の標的に対する第１の活性を有し、前記第２の外因性ポリペプチドが第１の標的に対する第２の活性を有するか；
ｌ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１の標的に作用し、前記第２の外因性ポリペプチドが第２の標的に作用し、前記第１および第２の標的は同一経路の部分であるか；
ｍ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１の標的に作用し、第２の外因性ポリペプチドが第２の標的に作用し、前記第１および第２の標的が異なる経路の部分であるか；
ｎ）前記第１の外因性ポリペプチドが、除核赤血球系細胞を所望の部位に局在させ、前記第２の外因性ポリペプチドが、治療活性を有するか；
ｏ）前記第１の外因性ポリペプチドが、第１の細胞に結合し、前記第２の外因性ポリペプチドが、第２の細胞に結合するか；
ｐ）前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドが、非ヒトタンパク質であるか；
ｑ）前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドがどちらも酵素であるか；
ｒ）前記第１の外因性ポリペプチドが中間分子の形成を促進し、前記第２の外因性ポリペプチドが前記中間分子に作用するか；または
ｓ）前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドが、経路の連続的段階に作用する、組成物。
【請求項２８】
対象においてがんを治療する方法における使用のための、除核赤血球系細胞を含む組成物であって、前記除核赤血球系細胞が、
標的と相互作用する第１の外因性ポリペプチド、および
前記標的を修飾する第２の外因性ポリペプチド
を含み、
（ａ）前記第２の外因性ポリペプチドが、抗体を切断する部分を含むか；
（ｂ）前記第２の外因性ポリペプチドが、前記標的を修飾する酵素を含むか；
（ｃ）前記第２の外因性ポリペプチドが、前記標的の二次、三次、または四次構造を修飾するポリペプチドを含み、いくつかの実施形態では、前記標的が、別の分子と相互作用する能力を変化させるか；
（ｄ）前記第２の外因性ポリペプチドが、前記標的を、第１の標的ドメインおよび第２の標的ドメインの間で切断するポリペプチドを含むか；
（ｅ）前記標的が、ポリペプチド、炭水化物、脂質、または核酸であるか；
（ｆ）前記第１の外因性ポリペプチドが、標的と結合するが切断せず、前記第２の外因性ポリペプチドが、結合を切断するか；
（ｇ）前記標的が抗体を含み、前記第１の外因性ポリペプチドが前記抗体標的の可変領域に結合するか；
（ｈ）前記標的が抗体を含み、前記第１の外因性ポリペプチドが抗体標的の定常領域に結合するか；
（ｉ）前記第１の外因性ポリペプチドが、約１〜２ｐＭ、２〜５ｐＭ、５〜１０ｐＭ、１０〜２０ｐＭ、２０〜５０ｐＭ、５０〜１００ｐＭ、１００〜２００ｐＭ、２００〜５００ｐＭ、５００〜１０００ｐＭ、１〜２ｎＭ、２〜５ｎＭ、５〜１０ｎＭ、１０〜２０ｎＭ、２０〜５０ｎＭ、５０〜１００ｎＭ、１００〜２００ｎＭ、２００〜５００ｎＭ、５００〜１０００ｎＭ、１〜２μＭ、２〜５μＭ、５〜１０μＭ、１０〜２０μＭ、２０〜５０μＭ、または５０〜１００μＭの、前記標的に対する親和性を有するか、；
（ｊ）前記第２の外因性ポリペプチドが、前記標的に対して約１０−１〜１０−７Ｍ、１０−１〜１０−２Ｍ、１０−２〜１０−３Ｍ、１０−３〜１０−４Ｍ、１０−４〜１０−５Ｍ、１０−５〜１０−６Ｍ、または１０−６〜１０−７ＭのＫＭを有するか；
（ｋ）前記標的に対する前記第２の外因性ポリペプチドのＫＭ（Ｍ単位で測定）で除した、前記標的に対する前記第１の外因性ポリペプチドのＫｄ（Ｍ単位で測定）の比率が、約１×１０−９〜２×１０−９、２×１０−９〜５×１０−９、５×１０−９〜１×１０−８、１×１０−８〜２×１０−８、２×１０−８〜５×１０−８、５×１０−８〜１×１０−７、１×１０−７〜２×１０−７、２×１０−７〜５×１０−７、５×１０−７〜１×１０−６、１×１０−６〜２×１０−６、２×１０−６〜５×１０−６、５×１０−６〜１×１０−５、１×１０−５〜２×１０−５、２×１０−５〜５×１０−５、５×１０−５〜１×１０−４、１×１０−４〜２×１０−４、２×１０−４〜５×１０−４、５×１０−４〜１×１０−３、１×１０−３〜２×１０−３、２×１０−３〜５×１０−３、５×１０−３〜１×１０−２、１×１０−２〜２×１０−２、２×１０−２〜５×１０−２、５×１０−２〜１×１０−１、１×１０−１〜２×１０−１、２×１０−１〜５×１０−１、または５×１０−１〜１であるか；
（ｌ）前記標的を修飾する前記第２の外因性ポリペプチドの観察された反応速度が、その他の点では類似した反応条件下において、類似しているが前記第１の外因性ポリペプチドを欠く除核細胞の反応速度より高いか；
（ｍ）前記赤血球系細胞上の前記第２の外因性ポリペプチドの平均数に対する、前記赤血球系細胞上の前記第１の外因性ポリペプチドの平均数の比率が、約５０：１、２０：１、１０：１、８：１、６：１、４：１、２：１、１：１、１：２、１：４、１：６、１：８、１：１０、１：２０、または１：５０であるか；
（ｎ）前記標的に対する前記第１の外因性ポリペプチドの親和性が、前記修飾された標的に対する前記第１の外因性ポリペプチドの親和性より高いか；
（ｏ）前記除核赤血球系細胞の治療有効用量が、投与時における対象の末梢血中の前記標的の量に対する化学量論比より少ないか；
（ｐ）有効用量中の前記除核赤血球系細胞数が、投与時における前記対象の末梢血中の前記標的の数より少ないか；
（ｑ）予め選択された量の除核赤血球系細胞に含まれる前記第２の外因性ポリペプチドの数が、標的に対する基準値より少ないか；
（ｒ）予め選択された量の除核赤血球系細胞に含まれる前記第１の外因性ポリペプチドの数が、標的に対する基準値より少ないか；
（ｓ）予め選択された量の除核赤血球系細胞に含まれる前記第１の外因性ポリペプチドの数および前記第２の外因性ポリペプチドの数が、それぞれ標的に対する基準値より少ないか；
（ｔ）前記第２の外因性ポリペプチドが、少なくとも１０−１Ｍ、１０−２Ｍ、１０−３Ｍ、１０−４Ｍ、１０−５Ｍ、１０−６Ｍ、または１０−７ＭのＫＭで標的を修飾するか；
（ｕ）前記第２の外因性ポリペプチドが、シャペロンを含むか；
（ｖ）前記第１の外因性ポリペプチドが表面露出部分を含み、前記第２の外因性ポリペプチドが表面露出部分を含むか；または
（ｗ）前記除核赤血球系細胞の有効量が、前記第２の外因性ポリペプチドを欠くその他の点では類似した除核赤血球系細胞の有効量より少ない
の１つまたは複数である、組成物。
【請求項２９】
膜貫通ドメインと、抗薬物抗体に結合できる表面露出ポリペプチドとを含む第１の外因性ポリペプチド、および
膜貫通ドメインおよび表面露出ＩｄｅＳポリペプチドを含む第２の外因性ポリペプチド
を含む、除核赤血球系細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
本明細書に記載されるものと同様のまたは同等の方法および材料が、本発明でまたは本発明の試験で用いられ得るが、適切な方法および材料は下述のとおりである。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、およびその他の参考文献（例えば、配列データベース参照番号）は、その全体が参照により援用される。例えば、本明細書において、例えば、本明細書中の任意の表において参照される全てのＧｅｎＢａｎｋ、Ｕｎｉｇｅｎｅ、およびＥｎｔｒｅｚ配列は、参照により援用される。別段の指定がない限り、本明細書中の任意の表を含む本明細書で特定される配列受入番号は、２０１６年１月１１日現在のデータベース入力項目を参照する。１つの遺伝子またはタンパク質が複数の配列受入番号を参照する場合、配列変異型の全てが包含される。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
複数の第１および第２の外因性ポリペプチドが、薬剤相加的、薬剤相乗的、乗法的、独立機能、局在ベース、近接依存性、スキャフォールドベース、多量体ベース、または代償性活性を有する、複数の外因性ポリペプチドを含む、例えば、網状赤血球などの除核赤血球。
（項目２）
第１の外因性ポリペプチド、第２の外因性ポリペプチド、および第３の外因性ポリペプチドを含む、例えば、網状赤血球などの除核赤血球。
（項目３）
第１の外因性ポリペプチドおよび第２の外因性ポリペプチドを含む、例えば、網状赤血球などの除核赤血球であって、
ａ）前記第１および第２の外因性ポリペプチドが同一標的に作用し、任意選択的に、前記標的が細胞表面受容体および／または内因性ヒトタンパク質であり；
ｂ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１の内因性ヒトタンパク質に、前記第２の外因性ポリペプチドが第２の内因性ヒト標的タンパク質に、例えば、５００、２００、１００、５０、２０、１０、５、２、または１ｎＭ未満のＫｄで結合し；
ｃ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１の標的に作用し（例えば、結合し）、前記第２の外因性ポリペプチドが第２の標的に作用し（例えば、結合し）、前記第１および第２の標的が同一生物学的経路の構成要素であり、任意選択的に、前記標的が細胞表面受容体、内因性ヒトタンパク質、またはその双方であり；
ｄ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１のアポトーシス促進ポリペプチドを含み、前記第２の外因性ポリペプチドが第２のアポトーシス促進ポリペプチド、例えば、ＴＲＡＩＬ受容体リガンド、例えば、ＴＲＡＩＬポリペプチドを含み；
ｅ）前記第１および第２の外因性ポリペプチドが互いに近接しており、少なくとも１、２、５、１０、３０、または６０秒間；１、２、５、１０、３０、または６０分間、または１、２、３、６、１２、または１４時間にわたり、例えば、１０、７、５、４、３、２、１、０．５、０．２、または０．１ｎｍ未満の間隔であり；
ｆ）前記第１および第２の外因性ポリペプチドが、互いに５００、２００、１００、５０、２０、１０、５、２、または１ｎＭ未満のＫｄを有し；
ｇ）前記第１の外因性ポリペプチドが、抗原提示ポリペプチド、例えば、ＭＨＣ分子、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ分子を含み、前記第２の外因性ポリペプチドが、抗原、例えば、がん抗原を含み；
ｈ）前記第１および第２の外因性ポリペプチドが異なる標的に作用し、任意選択的に、前記標的の少なくとも１つが細胞表面受容体および／または内因性ヒトタンパク質であり、例えば、前記第１の外因性ポリペプチドが第１の細胞型、例えば、がん細胞に結合し、前記第２の外因性ポリペプチドが第２の細胞型、例えば、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞に結合し；
ｉ）前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドが、重量基準またはコピー数基準で、約１：１、約２：１〜１：２、約５：１〜１：５、約１０：１〜１：１０、約２０：１〜１：２０、約５０：１〜１：５０、約１００：１〜１：１００の存在比を有し；
ｊ）前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドが、それぞれ、約１：１、約２：１〜１：２、約５：１〜１：５、約１０：１〜１：１０、約２０：１〜１：２０、約５０：１〜１：５０、約１００：１〜１：１００の比率で、第１の標的および第２の標的に対するＫｄを有し；
ｋ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１の標的に対する第１の活性（例えば、結合）を有し、前記第２の外因性ポリペプチドが第１の標的に対する第２の活性（例えば、結合）を有し、例えば、前記第１および第２の外因性ポリペプチドが単一標的に結合し；
ｌ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１の標的に作用し（例えば、結合し）、前記第２の外因性ポリペプチドが第２の標的に作用し（例えば、結合し）、前記第１および第２の標的は同一経路の部分であり、任意選択的に、前記第１の外因性ポリペプチドが第１の標的に作用し、同時に前記第２の外因性ポリペプチドが第２の標的に作用し；
ｍ）前記第１の外因性ポリペプチドが第１の標的に作用し（例えば、結合し）、第２の外因性ポリペプチドが第２の標的に作用し（例えば、結合し）、前記第１および第２の標的が様々な経路の部分であり、任意選択的に、前記第１および第２の経路がどちらも所与の細胞性応答を促進するように作用し；
ｎ）前記第１の外因性ポリペプチドが、除核赤血球を例えば、ヒト細胞などの所望の部位に局在させ、前記第２の外因性ポリペプチドが、例えば、Ｔ細胞活性化活性、例えば、Ｔ細胞阻害活性または抗原提示活性などの免疫調節活性などの治療活性を有し；
ｏ）前記第１の外因性ポリペプチドが例えば、第１の細胞型、例えばがん細胞などの第１の細胞に結合し、前記第２の外因性ポリペプチドが例えば、第２の細胞型、例えば、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞などの第２の細胞に結合し；
ｐ）前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドが、非ヒトタンパク質であり；
ｑ）前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドがどちらも、例えば、生合成酵素などの酵素であり；
ｒ）前記第１の外因性ポリペプチドが中間分子の形成を促進し、前記第２の外因性ポリペプチドが中間分子に作用し；または
ｓ）前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドが、経路の連続的段階に作用する、除核赤血球。
（項目４）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドが薬剤相加的活性を有する、項目１〜３のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目５）
前記第１のポリペプチドが（例えば、抗ＥＰＣＡＭ分子を含んでなる）がん細胞に結合し、前記第２の外因性ポリペプチドが（例えば、抗ＣＤ４５抗体分子を含んでなる）がん細胞に結合する、項目４に記載の除核赤血球。
（項目６）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドが薬剤相乗的活性を有する、項目１〜３のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目７）
前記第１の外因性ポリペプチドが、アポトーシスを媒介する第１の細胞受容体に対するリガンド（例えば、ＴＲＡＩＬ受容体に対するリガンドであり、例えば、ＴＲＡＩＬポリペプチドを含む）を含み、前記第２の外因性ポリペプチドが、アポトーシスを媒介する第１の細胞受容体に対するリガンド（例えば、ＴＲＡＩＬ受容体に対するリガンドであり、例えば、ＴＲＡＩＬポリペプチドを含む）を含む、項目６に記載の除核赤血球。
（項目８）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドが乗法的活性を有する、項目１〜３のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目９）
前記第１の外因性ポリペプチドが、表２のＴ細胞活性化リガンドまたはそのＴ細胞活性化変異型（例えば、断片）を含んでなり、前記第２の外因性ポリペプチドが、表２の第２のＴ細胞活性化リガンドまたはそのＴ細胞活性化変異型（例えば、断片）を含んでなる、項目８に記載の除核赤血球。
（項目１０）
前記第１の外因性ポリペプチドが、表３の阻害性リガンドの阻害剤またはその阻害性断片もしくは変異型を含んでなり、前記第２の外因性ポリペプチドが、表３の阻害性リガンドの第２の阻害剤またはその阻害性断片もしくは変異型を含んでなる、項目８に記載の除核赤血球。
（項目１１）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドが独立機能活性を有する、項目１〜３のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目１２）
前記第１の外因性ポリペプチドが第１のサイトカインに結合し、前記第２の外因性ポリペプチドが第２のサイトカインに結合する、項目１１に記載の除核赤血球。
（項目１３）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドが局在ベース活性を有する、項目１〜３のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目１４）
前記第１の外因性ポリペプチドが、がん細胞にまたはその近くに結合する（例えば、腫瘍新生血管に結合する）標的化部分を含み、前記第２の外因性ポリペプチドが、抗がん機能（例えば、酵素、血管新生阻害剤、免疫賦活性分子、またはアポトーシス促進剤を含んでなる）を有する、項目１３に記載の除核赤血球。
（項目１５）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドが近接依存性活性を有する、項目１〜３のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目１６）
標的部分または部分群との相互作用の前、最中、または後において、複数のポリペプチド間の近接性が、生体内または生体外でこのような近接性の非存在下では見られない性質または結果を与える、項目１５項に記載の除核赤血球。
（項目１７）
前記第１の外因性ポリペプチドが、例えば、標的細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞）上の第１の標的細胞ポリペプチドなどの第１の標的部分と相互作用し、例えば、結合し、前記第２の外因性ポリペプチドが、例えば、前記標的細胞（例えば、その中で前記第１および第２の標的細胞ポリペプチドの結合が、前記細胞の生物学的特性を変化させる）上の第２の標的細胞ポリペプチドなどの第２の標的部分と相互作用し、例えば、結合する、項目１５に記載の除核赤血球。
（項目１８）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドがスキャフォールドベース活性を有する、項目１〜３のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目１９）
前記第１のポリペプチドががん細胞の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ４５、ＥＧＦＲ、またはＨＥＲ２）に結合し、前記第２のポリペプチドが免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ３）の細胞表面マーカーに結合する、項目１８に記載の除核赤血球。
（項目２０）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドが多量体ベース活性を有する、項目１〜３のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目２１）
前記第１の外因性ポリペプチドがＭＨＣＩＩα鎖を含み、前記第２の外因性ポリペプチドがＭＨＣＩＩβ鎖ポリペプチドを含む、項目２０に記載の除核赤血球。
（項目２２）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドが代償性活性を有する、項目１〜３のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目２３）
前記第１の外因性ポリペプチドが治療用タンパク質であり、前記第２の外因性ポリペプチドが第１の外因性ポリペプチドの阻害剤であり、例えば、前記第１の外因性ポリペプチドが前記第２の外因性ポリペプチドに結合するよりも、前記第１の外因性ポリペプチドが前記標的により強力に結合する、項目２２に記載の除核赤血球。
（項目２４）
前記第１の外因性ポリペプチドが抗ＣＤ４０抗体分子を含んでなり、前記第２の外因性ポリペプチドがＣＤ４０またはその断片もしくは変異型を含んでなる、項目２２に記載の除核赤血球。
（項目２５）
前記第１の外因性ポリペプチドが、前記赤血球の標的細胞との融合を促進し、前記第２の外因性ポリペプチドが、表１、表２、または表３のいずれかのポリペプチドである、項目１〜２４のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目２６）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドが相互に作用し、例えば、前記第１の外因性ポリペプチドが例えば、切断またはリン酸化によって前記第２の外因性ポリペプチドを修飾する、項目１〜２５のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目２７）
前記第１および第２の外因性ポリペプチドが、二量体または多量体タンパク質を形成する、項目１〜２６のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目２８）
少なくとも２つであるが、５、６、７、８、９、または１０以下の異なる外因性ポリペプチド、例えば、前記除核赤血球によって保持されない１つまたは複数の外因性核酸によってコードされる外因性ポリペプチドを含む、項目１〜２７のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目２９）
前記外因性ポリペプチドが、前記除核赤血球によって保持されない１つまたは複数の外因性核酸によってコードされる、項目１〜２８のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目３０）
前記第１、第２、および任意選択的に、第３の外因性ポリペプチドの１つまたは複数（例えば、２または３つ）が、膜貫通ポリペプチドまたは表面アンカー型ポリペプチドである、項目１〜２９のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目３１）
前記第１の外因性ポリペプチドが、標的細胞上の部分と相互作用し、例えば、結合し、前記第２の外因性ポリペプチドが前記標的細胞の特性を変化させ、例えば、前記標的細胞を殺滅しまたは活性化する、項目１〜３０のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目３２）
前記第１の外因性ポリペプチドおよび前記第２の外因性ポリペプチドが、重量基準またはコピー数基準で、約１：１、約２：１〜１：２、約５：１〜１：５、約１０：１〜１：１０、約２０：１〜１：２０、約５０：１〜１：５０、または約１００：１〜１：１００の存在比を有する、項目１〜３１のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目３３）
前記第１および第２のポリペプチドの双方が化学量論的作用機序を有するか、またはその双方が触媒作用機序を有し、どちらも例えば、約１：１または約２：１〜１：２などの同様の存在量で存在する、項目１〜３２のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目３４）
前記第１の外因性ポリペプチドが、前記第２の外因性ポリペプチドよりも、重量またはコピー数基準で少なくとも約１０％、２０％、３０％、５０％、または２、３、４、５、１０、２０、５０、または１００倍豊富である（任意選択的に１０倍または１００倍に至る）、項目１〜３３のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目３５）
前記第１のポリペプチドが化学量論的作用機序を有し、前記第２のポリペプチドが触媒作用機序を有し、前記第１のポリペプチドが前記第２のポリペプチドよりも豊富である、項目１〜３４のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目３６）
ａ）０．３％、０．３５％、０．４％、０．４５％、または０．５％のＮａＣｌでの５０％未満の細胞溶解の浸透圧脆性；
ｂ）約１０〜２００ｆＬの細胞容積、または約１ミクロン〜約２０ミクロン、約２ミクロン〜約２０ミクロン、約３ミクロン〜約２０ミクロン、約４ミクロン〜約２０ミクロン、約５ミクロン〜約２０ミクロン、約６ミクロン〜約２０ミクロン、約５ミクロン〜約１５ミクロン、または約１０ミクロン〜約３０ミクロンの細胞の直径；
ｃ）１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％を超える胎児ヘモグロビン；または少なくとも約２０、２５、または３０ｐｇ／細胞のヘモグロビン；または
ｄ）アネキシンＶ染色による測定で、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％未満の細胞表面側のホスファチジルセリン含有量
の１つまたは複数の特性を有する、項目１〜３５のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目３７）
複数の外因性ポリペプチドの少なくとも１つ、例えば、全部が、グリコシル化されている、項目１〜３６のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目３８）
網状赤血球である、項目１〜３７のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目３９）
前記外因性ポリペプチドまたはポリペプチド群が、ＬＰＸＴＧ（配列番号１７）などのソルターゼ移入シグネチャを欠く、項目１〜３８のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目４０）
例えば、融合タンパク質などの外因性ポリペプチドが、
ｉ）赤血球系細胞表面の前記融合タンパク質の少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、９５、または９９％が同一配列を有し；
ｉｉ）前記融合タンパク質の少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、９５、または９９％が、同一膜貫通領域であり；
ｉｉｉ）前記融合タンパク質が完全長内因性膜タンパク質を含まず、例えば、完全長内因性膜タンパク質のセグメントを含み、このセグメントが、完全長内因性膜タンパク質の少なくとも１、２、３、４、５、１０、２０、５０、１００、２００、または５００個のアミノ酸を欠き；
ｉｖ）前記融合タンパク質の少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、９５、または９９％が、１、２、３、４、５、１０、２０、または５０個のアミノ酸を超えて互いに異ならず；
ｖ）前記外因性ポリペプチドは、ソルターゼ移入シグネチャを欠き；
ｖｉ）前記外因性ポリペプチドが、１、２、３、４、または５未満の配列の異なる融合ポリペプチド上に存在する部分を含み；
ｖｉｉ）前記外因性ポリペプチドが、単一の融合ポリペプチドとして存在し；
ｖｉｉｉ）前記融合タンパク質が、内因性膜貫通タンパク質と前記部分との接合部にＧｌｙ−Ｇｌｙを含有せず；
ｉｘ）前記融合タンパク質がＧｌｙ−Ｇｌｙを含有せず、または前記融合タンパク質がＧｌｙ−Ｇｌｙを含有せず、または細胞外領域にＧｌｙ−Ｇｌｙを含有せず、膜貫通部分の１、２、３、４、５、１０、２０、５０、または１００個のアミノ酸内の細胞外領域にＧｌｙ−Ｇｌｙを含有せず；
またはそれらの組み合わせである、項目１〜３９のいずれか一項に記載の除核赤血球。
（項目４１）
標的と相互作用する第１の外因性ポリペプチド、および
標的を修飾する第２の外因性ポリペプチド
を含む除核赤血球系細胞であって、
（ａ）前記第２の外因性ポリペプチドが、例えば、ＩｄｅＳポリペプチドなどであり、例えば、ヒンジ領域で、ＣＨ２領域で、またはヒンジとＣＨ２領域との間で抗体を切断する部分を含み；
（ｂ）前記第２の外因性ポリペプチドが、標的上の部位を修飾し、例えば、それに特異的であり、例えば、それに結合し、（例えば、特異的に）結合して修飾し、例えば、共有結合的に修飾し、例えば、部分を切断または除去しまたはそれを前記標的に付着させる、酵素（例えば、プロテアーゼ）を含み、前記標的が任意選択的に、抗体であり；
（ｃ）前記第２の外因性ポリペプチドが、ポリペプチド、例えば、酵素、例えば、前記標的の二次、三次、または四次構造を修飾するプロテアーゼを含み、いくつかの実施形態では、前記標的が、例えば、前記第１の外因性ポリペプチドまたは前記第１の外因性ポリペプチド以外の分子などの別の分子と相互作用する能力を変化させ、例えば、減少または増加させ、任意選択的に、前記標的が抗体を含み；
（ｄ）前記第２の外因性ポリペプチドが、例えば、ポリペプチドなどの標的を、例えば、第１の基質に結合する第１の標的ドメインおよび第２の基質に結合する第２の標的ドメインなどの、第１の標的ドメインおよび第２の標的ドメインの間で切断する、酵素（例えば、プロテアーゼ）などのポリペプチドを含み；
（ｅ）前記標的が、ポリペプチド；炭水化物（例えば、グリカン）、脂質（例えば、リン脂質）、または核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）であり；
（ｆ）前記第１の外因性ポリペプチドが、例えば、抗体などの標的と結合するが切断せず、前記第２の外因性ポリペプチドが、例えば、抗体中の共有結合などの共有結合などの結合を切断し；
（ｇ）前記標的が抗体を含み、前記第１の外因性ポリペプチドが前記抗体標的の可変領域に結合し；
（ｈ）前記標的が抗体を含み、前記第１の外因性ポリペプチドが抗体標的の定常領域に結合し；
（ｉ）前記第１の外因性ポリペプチドが、約１〜２ｐＭ、２〜５ｐＭ、５〜１０ｐＭ、１０〜２０ｐＭ、２０〜５０ｐＭ、５０〜１００ｐＭ、１００〜２００ｐＭ、２００〜５００ｐＭ、５００〜１０００ｐＭ、１〜２ｎＭ、２〜５ｎＭ、５〜１０ｎＭ、１０〜２０ｎＭ、２０〜５０ｎＭ、５０〜１００ｎＭ、１００〜２００ｎＭ、２００〜５００ｎＭ、５００〜１０００ｎＭ、１〜２μＭ、２〜５μＭ、５〜１０μＭ、１０〜２０μＭ、２０〜５０μＭ、または５０〜１００μＭの標的親和性を有し；
（ｊ）前記第２の外因性ポリペプチドが、前記標的に対して約１０−１〜１０−７Ｍ、１０−１〜１０−２Ｍ、１０−２〜１０−３Ｍ、１０−３〜１０−４Ｍ、１０−４〜１０−５Ｍ、１０−５〜１０−６Ｍ、または１０−６〜１０−７ＭのＫＭを有し；
（ｋ）前記標的に対する前記第２の外因性ポリペプチドのＫＭ（Ｍ単位で測定）で除した、前記標的に対する前記第１の外因性ポリペプチドのＫｄ（Ｍ単位で測定）の比率が、約１×１０−９〜２×１０−９、２×１０−９〜５×１０−９、５×１０−９〜１×１０−８、１×１０−８〜２×１０−８、２×１０−８〜５×１０−８、５×１０−８〜１×１０−７、１×１０−７〜２×１０−７、２×１０−７〜５×１０−７、５×１０−７〜１×１０−６、１×１０−６〜２×１０−６、２×１０−６〜５×１０−６、５×１０−６〜１×１０−５、１×１０−５〜２×１０−５、２×１０−５〜５×１０−５、５×１０−５〜１×１０−４、１×１０−４〜２×１０−４、２×１０−４〜５×１０−４、５×１０−４〜１×１０−３、１×１０−３〜２×１０−３、２×１０−３〜５×１０−３、５×１０−３〜１×１０−２、１×１０−２〜２×１０−２、２×１０−２〜５×１０−２、５×１０−２〜１×１０−１、１×１０−１〜２×１０−１、２×１０−１〜５×１０−１、または５×１０−１〜１であり；
（ｌ）前記標的を修飾する前記第２の外因性ポリペプチドの観察された反応速度が、その他の点では類似した反応条件下において、類似しているが前記第１の外因性ポリペプチドを欠く除核細胞の反応速度より高く；
（ｍ）前記赤血球系細胞上の前記第２の外因性ポリペプチドの平均数に対する、前記赤血球系細胞上の前記第１の外因性ポリペプチドの平均数の比率が、約５０：１、２０：１、１０：１、８：１、６：１、４：１、２：１、１：１、１：２、１：４、１：６、１：８、１：１０、１：２０、または１：５０であり；
（ｎ）前記標的に対する前記第１の外因性ポリペプチドの親和性が、前記修飾された（例えば、切断された）標的に対する前記第１の外因性ポリペプチドの親和性より高く；
（ｏ）前記除核赤血球系細胞の治療有効用量が、投与時における対象の末梢血中の前記標的の量に対する化学量論比より少なく（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、または９９．９９％少なく）；
（ｐ）有効用量中の前記除核赤血球系細胞数が、例えば、投与時における前記対象の末梢血中の標的分子などの前記標的の数より少なく（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、または９９．９９％少なく）；
（ｑ）前記第２の外因性ポリペプチドの数が、例えば、除核赤血球系細胞の有効用量または生体外有効量などの予め選択された除核赤血球系細胞の量で構成され、標的に対する基準値より少なく（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、または９９．９９％少なく）、例えば、投与時における前記対象の末梢血中の前記標的の数より少なく；
（ｒ）前記第１の外因性ポリペプチドの数が、例えば、除核赤血球系細胞の有効用量または生体外有効量などの予め選択された除核赤血球系細胞の量で構成され、標的に対する基準値より少なく（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、または９９．９９％少なく）、例えば、投与時における前記対象の末梢血中の前記標的の数より少なく；
（ｓ）前記第１の外因性ポリペプチドの数および前記第２の外因性ポリペプチドの数が、例えば、除核赤血球系細胞の有効用量などの予め選択された除核赤血球系細胞の量で構成され、それぞれ標的に対する基準値より少なく（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、または９９．９９％少なく）、例えば、投与時における前記対象の末梢血中の前記標的の数より少なく；
（ｔ）前記第２の外因性ポリペプチドが、少なくとも１０−１Ｍ、１０−２Ｍ、１０−３Ｍ、１０−４Ｍ、１０−５Ｍ、１０−６Ｍ、または１０−７ＭのＫＭで標的を修飾し（例えば、切断し）；
（ｕ）前記第２の外因性ポリペプチドが、シャペロンを含み；
（ｖ）前記第１の外因性ポリペプチドが表面露出部分を含み、前記第２の外因性ポリペプチドが表面露出部分を含み；または
（ｗ）前記除核赤血球系細胞の有効量が、前記第２の外因性ポリペプチドを欠くその他の点では類似した除核赤血球系細胞の有効量より少ない（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、または９９．９９％少ない）
の１つまたは複数である、除核赤血球系細胞。
（項目４２）
（ｂ）前記第２の外因性ポリペプチドが、標的上の部位を修飾し、例えば、それに特異的であり、例えば、それに結合し、（例えば、特異的に）結合して修飾し、例えば、共有結合的に修飾し、例えば、部分を切断または除去しまたはそれを前記標的に付着させる、酵素（例えば、プロテアーゼ）を含み、前記標的は任意選択的に、例えば、抗薬物抗体などの抗体である、項目４１に記載の除核赤血球系細胞。
（項目４３）
前記修飾が、前記標的が、例えば、前記第１の外因性ポリペプチドまたは前記第１の外因性ポリペプチド以外の分子などの別の分子と相互作用する能力を変化させ、例えば、増加または減少させる、項目４１または４２に記載の除核赤血球系細胞。
（項目４４）
（ｄ）前記第２の外因性ポリペプチドが、例えば、ポリペプチドなどの前記標的を、例えば、第１の基質に結合する第１の標的ドメインおよび第２の基質に結合する第２の標的ドメインなどの、第１の標的ドメインおよび第２の標的ドメインの間で切断する、酵素（例えば、プロテアーゼ）などのポリペプチドを含む、項目４１〜４３のいずれか一項に記載の除核赤血球系細胞。
（項目４５）
前記第１の標的ドメインが前記第２の標的ドメインから放出される、項目４４に記載の除核赤血球系細胞。
（項目４６）
切断が、前記第１の基質に対する前記第１の標的ドメインの親和性、および前記第２の基質に対する前記第２の標的ドメインの親和性の片方または双方を変化させる、項目４４または４５に記載の除核赤血球系細胞。
（項目４７）
前記標的が抗体を含み、前記第１の標的ドメインが１つまたは複数のＣＤＲ含み、前記第２の標的ドメインが例えば、Ｆｃ領域などの定常領域の一部を含む、項目４１〜４６のいずれか一項に記載の除核赤血球系細胞。
（項目４８）
前記標的が、感染成分以外の、例えば、細菌成分、ウイルス成分、真菌成分、または寄生成分以外のものである、項目４１〜４７のいずれか一項に記載の除核赤血球系細胞。
（項目４９）
前記第１の外因性ポリペプチドが、標的結合ドメインを含む、項目４１〜４８のいずれか一項に記載の除核赤血球系細胞。
（項目５０）
前記第１の外因性ポリペプチドの表面露出部分が、前記標的に結合する、項目４１〜４９のいずれか一項に記載の除核赤血球系細胞。
（項目５１）
前記第２の外因性ポリペプチドの表面露出部分が、例えば、プロテアーゼ活性などの酵素活性を含む、項目４１〜５０のいずれか一項に記載の除核赤血球系細胞。
（項目５２）
前記第２の外因性ポリペプチドの表面露出部分が、前記標的を酵素的に修飾し、例えば、切断する、項目４１〜５１のいずれか一項に記載の除核赤血球系細胞。
（項目５３）
前記標的が抗薬物抗体を含み、前記第１の外因性ポリペプチドがそれに対して抗薬物抗体が結合するポリペプチドを含み、前記第２の外因性ポリペプチドが抗薬物抗体を切断してＦａｂ部分およびＦｃ部分を生じるプロテアーゼを含む、項目４１〜５２のいずれか一項に記載の除核赤血球系細胞。
（項目５４）
前記除核赤血球が、前記第２の外因性ポリペプチドを欠くその他の点では類似した除核赤血球よりも速い速度で、対象の身体から前記標的を排除できる、項目４１〜５３のいずれか一項に記載の除核赤血球系細胞。
（項目５５）
前記除核赤血球が、前記標的と、または例えば、切断中に前記標的に作用する前記第２の外因性タンパク質の反応生成物と、複合体形成する、項目４１〜５４のいずれか一項に記載の除核赤血球系細胞。
（項目５６）
膜貫通ドメインと、抗薬物抗体に結合できる表面露出ポリペプチドとを含む第１の外因性ポリペプチド、および
膜貫通ドメインおよび表面露出ＩｄｅＳポリペプチドを含む第２の外因性ポリペプチドを含む除核赤血球系細胞。
（項目５７）
例えば、少なくとも１０８、１０９、１０１０、１０１１、または１０１２個の細胞などの項目１〜５６のいずれか一項に記載の複数の細胞を含む医薬品などの製剤。
（項目５８）
がんを治療するための、項目１〜５６のいずれか一項に記載の細胞。
（項目５９）
前記がんが、（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、肛門がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、腸がん、脳腫瘍、乳がん、原発不明がん（ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ  ｕｎｋｎｏｗｎ  ｐｒｉｍａｒｙ）、骨転移がん、脳転移がん、肝臓転移がん、肺転移がん、カルチノイド、子宮頸がん、絨毛がん、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、眼がん、胆嚢がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、妊娠性絨毛腫瘍（ＧＴＴ）、有毛細胞白血病、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、腎臓がん、喉頭がん、白血病、肝臓がん、肺がん、ＮＳＣＬＣ、リンパ腫、黒色腫皮膚がん、中皮腫、男性がん、奇胎妊娠、口腔および中咽頭がん、骨髄腫、鼻および洞がん、鼻咽頭がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、食道がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、前立腺がん、希少がん、直腸がん、唾液腺がん、二次がん、皮膚がん（非黒色腫）、軟部組織肉腫、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、精巣がん、甲状腺がん、原発不明がん（ｕｎｋｎｏｗｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃａｎｃｅｒ）、子宮がん、膣がん、および外陰部がんから選択される、項目５８に記載の細胞。