【手続補正書】
【提出日】令和1年12月17日(2019.12.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を検出するための検査デバイスであって、
（ａ）
（ｉ）生物学的サンプルを吸収し、前記生物学的サンプルをコンジュゲートパッドに運搬するように構成された、サンプル適用パッド；
（ｉｉ）１種またはそれを超えるビタミンＤ分子に特異的に結合するビタミンＤ結合剤を含む前記コンジュゲートパッド；および
（ｉｉｉ）前記ビタミンＤ結合剤を前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子と複合体化することによって生成されるエピトープに特異的に結合する、第１の領域に固定化された検出剤を有する前記第１の領域を含む検出ゾーン
を含むハウジングを備える、検査デバイス。
【請求項２】
前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子が、２５−ヒドロキシビタミンＤ２、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ４、２５−ヒドロキシビタミンＤ５および１，２５−ヒドロキシビタミンＤ３からなる群より選択される、請求項１に記載の検査デバイス。
【請求項３】
前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子が、２５−ヒドロキシビタミンＤ２および２５−ヒドロキシビタミンＤ３からなる群より選択される、請求項１に記載の検査デバイス。
【請求項４】
前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子が、２５−ヒドロキシビタミンＤ２および２５−ヒドロキシビタミンＤ３である、請求項１に記載の検査デバイス。
【請求項５】
前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子が、２５−ヒドロキシビタミンＤ２からなる、請求項１に記載の検査デバイス。
【請求項６】
前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子が、２５−ヒドロキシビタミンＤ３からなる、請求項１に記載の検査デバイス。
【請求項７】
前記検出ゾーンが、前記ビタミンＤ結合剤が前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子に結合されているか否かを問わず前記ビタミンＤ結合剤に結合することができる、第２の領域に固定化された抗体を有する前記第２の領域をさらに含む、請求項１に記載の検査デバイス。
【請求項８】
前記ビタミンＤ結合剤が、検出試薬にコンジュゲートされている、請求項１に記載の検査デバイス。
【請求項９】
前記検出試薬が、金粒子、ラテックス粒子、炭素ナノ粒子、セレンナノ粒子、銀ナノ粒子、量子ドット、蛍光化合物、色素、酵素およびリポソームからなる群より選択される、請求項８に記載の検査デバイス。
【請求項１０】
前記検出試薬が、金粒子である、請求項８に記載の検査デバイス。
【請求項１１】
前記検出試薬が、ラテックス粒子である、請求項８に記載の検査デバイス。
【請求項１２】
前記サンプル適用パッド、前記コンジュゲートパッドおよび前記検出ゾーンが、前記生物学的サンプルが通る流路に沿って上流から下流に並んでいる、請求項１に記載の検査デバイス。
【請求項１３】
前記生物学的サンプルの粒子性の部分を前記生物学的サンプルの水性の部分と分離するように構成された濾過構成要素を前記サンプル適用パッドと前記コンジュゲートパッドとの間にさらに備える、請求項１に記載の検査デバイス。
【請求項１４】
前記検出剤が、軽鎖および重鎖を含む抗体であり、前記軽鎖が、配列番号１〜５および１６〜２０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；前記重鎖が、配列番号６〜１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、前述の請求項のいずれかに記載の検査デバイス。
【請求項１５】
前記検出剤が、前記ビタミンＤ結合剤よりも前記エピトープに対して高い結合親和性を示す、前述の請求項のいずれかに記載の検査デバイス。
【請求項１６】
前記検出剤が、ｓｃＦｖ、ＶＨ、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２結合単位を含む、前述の請求項のいずれかに記載の検査デバイス。
【請求項１７】
前記検出剤が、軽鎖および重鎖を含む抗体であり、前記軽鎖が、配列番号１〜５および１６〜２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列相同性を共有するアミノ酸配列を含み、前記重鎖が、配列番号６〜１５からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む、前述の請求項のいずれかに記載の検査デバイス。
【請求項１８】
（ａ）前述の請求項のいずれか１項に記載の前記検査デバイスの前記サンプル適用パッドに生物学的サンプルを適用する工程；
（ｂ）前記サンプル適用パッドに追跡緩衝液を適用する工程；および
（ｃ）前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を検出する工程
を含む、方法。
【請求項１９】
前記生物学的サンプル中の前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を定量する工程をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記定量する工程が、前記生物学的サンプルを、十分レベル、不足レベルまたは欠乏レベルの前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を有すると分類する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記十分レベルが、少なくとも３０ｎｇ／ｍＬである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記不足レベルが、少なくとも１０ｎｇ／ｍＬかつ３０ｎｇ／ｍＬ未満である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記欠乏レベルが、１０ｎｇ／ｍＬ未満である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記定量する工程が、（ｉ）前記検出ゾーンのイメージを提供するイメージングデバイス、および（ｉｉ）前記検出ゾーンの前記イメージに基づいて前記生物学的サンプル中の前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を定量するように構成されたプログラムされたコンピュータ上のソフトウェアを使用する工程を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
前記イメージングデバイスおよび前記プログラムされたコンピュータが、単一のデバイスである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記追跡緩衝液が、前記ビタミンＤ結合タンパク質から前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を解離する試薬を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
前記生物学的サンプルが、全血、血清、血漿、尿、唾液、眼内液、髄液および汗からなる群より選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
結合アッセイを行うように構成された検査デバイスを用いて、生物学的サンプル中の１つまたはそれを超えるビタミンＤレベルを検出するための方法であって、
（ａ）前記生物学的サンプルを前記検査デバイスに接触させる工程；
（ｂ）前記生物学的サンプルを、（ｉ）ビタミンＤ結合剤と（ｉｉ）１種またはそれを超えるビタミンＤ分子とによって形成された複合体を含む反応混合物を利用する前記結合アッセイに供する工程；
（ｃ）前記ビタミンＤ結合剤を前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子と複合体化することによって形成されるエピトープに結合する検出剤に前記複合体をさらに曝露する工程
を含み、前記結合アッセイは、前記生物学的サンプルにおいて、液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析の検出感度に匹敵する検出感度を有する、方法。
【請求項２９】
前記検出剤が、軽鎖および重鎖を含む抗体であり、前記軽鎖が、配列番号１〜５および１６〜２０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、前記重鎖が、配列番号６〜１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記検出剤が、前記ビタミンＤ結合剤よりも前記複合体に対して高い結合親和性を示す、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記検出剤が、ｓｃＦｖ、ＶＨ、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２結合単位を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記検出剤が、軽鎖および重鎖を含む抗体であり、前記軽鎖が、配列番号１〜５および１６〜２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列相同性を共有するアミノ酸配列を含み、前記重鎖が、配列番号６〜１５からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
前記生物学的サンプルが、全血、血清、血漿、尿、唾液、眼内液、髄液および汗からなる群より選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）請求項１〜１７のいずれか１項に記載の前記検査デバイス、および
（ｂ）前記キットを使用するための書面の指示書
を含む、キット。
【請求項３５】
滅菌剤、皮膚を穿刺するデバイス、ガーゼ、追跡緩衝液、およびマイクロピペットからなる群より選択される１つまたはそれを超える構成要素をさらに含む、請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
前記滅菌剤が、アルコールワイプである、請求項３５に記載のキット。
【請求項３７】
前記皮膚を穿刺するデバイスが、ランセット、針およびシリンジからなる群より選択される、請求項３５に記載のキット。
【請求項３８】
前記追跡緩衝液が、血液サンプル中のビタミンＤ結合タンパク質から１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を解離するように構成された、請求項３５に記載のキット。
【請求項３９】
シグナル強度を前記生物学的サンプル中の前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子の量に関係づけるカラーチャートをさらに含む、請求項３４に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
本明細書において言及されるすべての刊行物、特許および特許出願は、各個別の刊行物、特許または特許出願が明確かつ個別に参照により援用されると示されたかのように同程度に参照により本明細書中に援用される。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を検出するための検査デバイスであって、
（ａ）
（ｉ）生物学的サンプルを吸収し、前記生物学的サンプルをコンジュゲートパッドに運搬するように構成された、サンプル適用パッド；
（ｉｉ）１種またはそれを超えるビタミンＤ分子に特異的に結合するビタミンＤ結合剤を含む前記コンジュゲートパッド；および
（ｉｉｉ）前記ビタミンＤ結合剤を前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子と複合体化することによって生成されるエピトープに特異的に結合する検出抗体が固定化された第１の領域を含む検出ゾーン
を含むハウジングを備える、検査デバイス。
（項目２）
前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子が、２５−ヒドロキシビタミンＤ２、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ４、２５−ヒドロキシビタミンＤ５および１，２５−ヒドロキシビタミンＤ３からなる群より選択される、項目１に記載の検査デバイス。
（項目３）
前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子が、２５−ヒドロキシビタミンＤ２および２５−ヒドロキシビタミンＤ３からなる群より選択される、項目２に記載の検査デバイス。
（項目４）
前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子が、２５−ヒドロキシビタミンＤ２および２５−ヒドロキシビタミンＤ３である、項目２に記載の検査デバイス。
（項目５）
前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子が、２５−ヒドロキシビタミンＤ２からなる、項目２に記載の検査デバイス。
（項目６）
前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子が、２５−ヒドロキシビタミンＤ３からなる、項目２に記載の検査デバイス。
（項目７）
前記検出ゾーンが、前記ビタミンＤ結合剤が前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子に結合されているか否かを問わず前記ビタミンＤ結合剤に結合することができる第３の抗体が固定化された第２の領域をさらに含む、項目１に記載の検査デバイス。
（項目８）
前記ビタミンＤ結合剤が、検出試薬にコンジュゲートされている、項目１に記載の検査デバイス。
（項目９）
前記検出試薬が、金粒子、ラテックス粒子、炭素ナノ粒子、セレンナノ粒子、銀ナノ粒子、量子ドット、蛍光化合物、色素、酵素およびリポソームからなる群より選択される、項目８に記載の検査デバイス。
（項目１０）
前記検出試薬が、前記金粒子である、項目９に記載の検査デバイス。
（項目１１）
前記検出試薬が、前記ラテックス粒子である、項目９に記載の検査デバイス。
（項目１２）
前記サンプル適用パッド、前記コンジュゲートパッドおよび前記検出ゾーンが、前記生物学的サンプルが通る流路に沿って上流から下流に並んでいる、項目１に記載の検査デバイス。
（項目１３）
前記生物学的サンプルの粒子性の部分を前記生物学的サンプルの水性の部分と分離するように構成された濾過構成要素を前記サンプル適用パッドと前記コンジュゲートパッドとの間にさらに備える、項目１に記載の検査デバイス。
（項目１４）
前記検出抗体が、軽鎖および重鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号１〜５および１６〜２０からなる群より選択される配列を含み；前記重鎖が、配列番号６〜１５からなる群より選択される配列を含む、前述の項目のいずれかに記載の検査デバイス。
（項目１５）
前記検出抗体が、前記ビタミンＤ結合剤よりも前記エピトープに対して高い結合親和性を示す、前述の項目のいずれかに記載の検査デバイス。
（項目１６）
前記検出抗体が、ｓｃＦｖ、ＶＨ、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２結合単位を含む、前述の項目のいずれかに記載の検査デバイス。
（項目１７）
前記検出抗体が、軽鎖および重鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号１〜５および１６〜２０からなる群より選択される配列に対して少なくとも８０％の配列相同性を共有する配列を含み、前記重鎖が、配列番号６〜１５からなる群より選択される配列に対して少なくとも８０％の配列相同性を有する配列を含む、前述の項目のいずれかに記載の検査デバイス。
（項目１８）
（ａ）前述の項目のいずれか１項に記載の前記検査デバイスの前記サンプル適用パッドに生物学的サンプルを適用する工程；
（ｂ）前記サンプル適用パッドに追跡緩衝液を適用する工程；および
（ｃ）前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を検出する工程
を含む、方法。
（項目１９）
前記サンプル中の前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を定量する工程をさらに含む、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記定量する工程が、前記血液サンプルを、十分レベル、不足レベルまたは欠乏レベルの前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を有すると分類する、サンプル１９に記載の方法。
（項目２１）
前記十分レベルが、少なくとも３０ｎｇ／ｍＬである、項目１８に記載の方法。
（項目２２）
前記不足レベルが、少なくとも１０ｎｇ／ｍＬかつ３０ｎｇ／ｍＬ未満である、項目１８に記載の方法。
（項目２３）
前記欠乏レベルが、１０ｎｇ／ｍＬ未満である、項目１８に記載の方法。
（項目２４）
前記定量する工程が、前記検出膜のイメージを提供するイメージングデバイス、および前記検出膜の前記イメージに基づいて前記サンプル中の前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を定量するように構成されたプログラムされたコンピュータ上のソフトウェアを使用する工程をさらに含む、項目１８に記載の方法。
（項目２５）
前記イメージングデバイスおよび前記プログラムされたコンピュータが、単一のデバイスである、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記追跡緩衝液が、ビタミンＤ結合タンパク質から前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を解離する試薬を含む、項目１８に記載の方法。
（項目２７）
前記生物学的サンプルが、全血、血清、血漿、尿、唾液、眼内液、髄液および汗からなる群より選択される、項目１４に記載の方法。
（項目２８）
結合アッセイを行うように構成された検査デバイスを用いて、生物学的サンプル中の１つまたはそれを超えるビタミンＤレベルを検出するための方法であって、
（ａ）前記生物学的サンプルを前記検査デバイスに接触させる工程；
（ｂ）前記生物学的サンプルを、（１）ビタミンＤ結合剤と（２）１種またはそれを超えるビタミンＤ分子とによって形成された複合体を含む反応混合物を利用する前記結合アッセイに供する工程；
（ｃ）前記ビタミンＤ結合剤を前記１種またはそれを超えるビタミンＤ結合分子と複合体化することによって形成されるエピトープに結合する検出剤に前記複合体をさらに曝露する工程
を含み、前記結合アッセイは、前記生物学的サンプルにおいて、液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析の検出感度に匹敵する検出感度を有する、方法。
（項目２９）
前記検出剤が、軽鎖および重鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号１〜５および１６〜２０からなる群より選択される配列を含み、前記重鎖が、配列番号６〜１５からなる群より選択される配列を含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記検出剤が、前記ビタミンＤ結合剤よりも前記複合体に対して高い結合親和性を示す、項目２８に記載の方法。
（項目３１）
前記検出剤が、ｓｃＦｖ、ＶＨ、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２結合単位を含む、項目２８に記載の方法。
（項目３２）
前記検出剤が、軽鎖および重鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号１〜５および１６〜２０からなる群より選択される配列に対して少なくとも８０％の配列相同性を共有する配列を含み、前記重鎖が、配列番号６〜１５からなる群より選択される配列に対して少なくとも８０％の配列相同性を有する配列を含む、項目２８に記載の方法。
（項目３３）
前記生物学的サンプルが、全血、血清、血漿、尿、唾液、眼内液、髄液および汗からなる群より選択される、項目２８に記載の方法。
（項目３４）
（ａ）項目１〜１７のいずれか１項に記載の前記検査デバイス、および
（ｂ）前記キットを使用するための書面の指示書
を含む、キット。
（項目３５）
滅菌剤；皮膚を穿刺するデバイス；ガーゼ；追跡緩衝液；およびマイクロピペットからなる群より選択される１つまたはそれを超える構成要素をさらに含む、項目３４に記載のキット。
（項目３６）
前記滅菌剤が、アルコールワイプである、項目３４に記載のキット。
（項目３７）
前記皮膚を穿刺するデバイスが、ランセット、針およびシリンジからなる群より選択される、項目３４に記載のキット。
（項目３８）
前記追跡緩衝液が、血液サンプル中のビタミンＤ結合タンパク質から１種またはそれを超えるビタミンＤ分子を解離するように構成された、項目３４に記載のキット。
（項目３９）
シグナル強度を前記サンプル中の前記１種またはそれを超えるビタミンＤ分子の量に関係づけるカラーチャートをさらに含む、項目３４に記載のキット。