【手続補正書】
【提出日】令和2年6月30日(2020.6.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
自殺遺伝子コード配列に作動可能に連結した細胞周期依存性プロモーターを含む発現ベクターを含む宿主細胞であって、前駆細胞である、宿主細胞。
【請求項２】
前記細胞周期依存性プロモーターが、Ｋｉ−６７、ＰＣＮＡ、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＢ２、ＤＬＧＡＰ５またはＴＯＰ２Ａプロモーターである、請求項１に記載の宿主細胞。
【請求項３】
前記細胞周期依存性プロモーターが、Ｋｉ−６７プロモーターである、請求項２に記載の宿主細胞。
【請求項４】
前記細胞周期依存性プロモーターが、合成細胞周期プロモーターである、請求項１に記載の宿主細胞。
【請求項５】
前記自殺遺伝子が、ウイルスチミジンキナーゼ、細菌シトシンデアミナーゼ、ニトロレダクターゼ、カルボキシペプチダーゼＧ２、プリンヌクレオシドホスホリラーゼまたはカスパーゼ９である、請求項１に記載の宿主細胞。
【請求項６】
前記自殺遺伝子が、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ  ＴＫ）遺伝子である、請求項５に記載の宿主細胞。
【請求項７】
前記ＨＳＶ  ＴＫ遺伝子が、ＨＳＶ  ＴＫ変異体である、請求項６に記載の宿主細胞。
【請求項８】
前記ＨＳＶ  ＴＫ変異体が、ＨＳＶ１−ＳＲ１１ＴＫ、ＨＳＶ１−ＳＲ２６ＴＫまたはＨＳＶ１−ＳＲ３９ＴＫである、請求項７に記載の宿主細胞。
【請求項９】
前記ＨＳＶ  ＴＫ変異体が、ＨＳＶ１−ＳＲ３９ＴＫである、請求項７に記載の宿主細胞。
【請求項１０】
選択可能マーカーをさらに含む、請求項１に記載の宿主細胞。
【請求項１１】
前記選択可能マーカーが、抗生物質耐性遺伝子または蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、請求項１０に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
ウイルスベクターとしてさらに定義される、請求項１に記載の宿主細胞。
【請求項１３】
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターまたはポリオーマウイルスベクターである、請求項１２に記載の宿主細胞。
【請求項１４】
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項１２に記載の宿主細胞。
【請求項１５】
前記前駆細胞が、神経前駆細胞、心筋前駆細胞、内皮前駆細胞、膵前駆細胞、腎前駆細胞、オリゴデンドロサイト前駆細胞、造血前駆細胞、骨髄前駆細胞、間葉前駆細胞、網膜前駆細胞または破骨前駆細胞である、請求項１に記載の宿主細胞。
【請求項１６】
神経前駆細胞としてさらに定義される、請求項１に記載の宿主細胞。
【請求項１７】
前記細胞が、多能性幹細胞（ＰＳＣ）から誘導される、請求項１〜１６に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
前記ＰＳＣが、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）である、請求項１７に記載の宿主細胞。
【請求項１９】
前記神経前駆細胞が、ｍｕｓａｓｈｉ、ネスチン、ｓｏｘ２、ビメンチン、ｐａｘ６およびｓｏｘ１からなる群から選択されるマーカーの少なくとも１つを発現するとしてさらに定義される、請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項２０】
請求項１〜１９に記載の宿主細胞と、任意選択で薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１〜１９に記載の宿主細胞を生成する方法であって、
（ａ）ＰＳＣの出発集団を得ることと、
（ｂ）前記ＰＳＣを前駆細胞に分化させることと、
（ｃ）前記前駆細胞を単離および培養することと
を含み、ここで、培養された前記前駆細胞が前記自殺遺伝子コード配列に作動可能に連結した前記細胞周期依存性プロモーターを含むように、前記ＰＳＣまたは前記前駆細胞のいずれかが、請求項１に記載の発現ベクターでトランスフェクトまたは形質導入されて、前記発現ベクターの存在について選択される、方法。
【請求項２２】
前記前駆細胞が、神経前駆細胞、心筋前駆細胞、内皮前駆細胞、膵前駆細胞、腎前駆細胞、オリゴデンドロサイト前駆細胞、造血前駆細胞、骨髄前駆細胞、間葉前駆細胞、網膜前駆細胞または破骨前駆細胞である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記前駆細胞が、神経前駆細胞である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＰＳＣの出発集団が、胚性幹細胞を含む、請求項２１〜２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＰＳＣの出発集団が、人工多能性幹細胞を含む、請求項２１〜２３に記載の方法。
【請求項２６】
集団の細胞を神経前駆細胞に分化させることが、前記ＰＳＣの出発集団を線維芽細胞成長因子または上皮成長因子と接触させることを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＰＳＣの出発集団をＮ２およびＢ２７と接触させることをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
単離することが、前駆細胞を単離するために前記集団の前記細胞を選別することを含む、請求項２１〜２７に記載の方法。
【請求項２９】
トランスフェクトまたは形質導入された細胞を抗生物質と接触させることを含む方法によって、細胞を、前記発現ベクターの存在について選択する、請求項２１〜２８に記載の方法。
【請求項３０】
トランスフェクトまたは形質導入された細胞を選別することを含む方法によって、細胞を、前記発現ベクターの存在について選択する、請求項２１〜２８に記載の方法。
【請求項３１】
対象における細胞補充療法の方法における使用のための組み合わせ物であって、前記組み合わせ物は、本質的に分裂しない細胞であることが知られる細胞を補充するための請求項１〜１９に記載の前駆細胞と、前記自殺遺伝子によって活性化されるプロドラッグとを含み、前記プロドラッグは、周期する前駆細胞を排除するのに有効な量で投与されることを特徴とする、組み合わせ物。
【請求項３２】
前記前駆細胞が、神経前駆細胞、心筋前駆細胞または膵前駆細胞である、請求項３１に記載の組み合わせ物。
【請求項３３】
前記対象が、哺乳動物である、請求項３１〜３２に記載の組み合わせ物。
【請求項３４】
前記哺乳動物が、マウス、ラット、非ヒト霊長類またはヒトである、請求項３３に記載の組み合わせ物。
【請求項３５】
前記宿主細胞のゲノムが、前記対象のゲノムと本質的に同一のゲノムと、請求項１〜１４に記載の発現ベクターとを含む、請求項３１〜３４に記載の組み合わせ物。
【請求項３６】
補充される前記本質的に分裂しない細胞が、ドーパミン作動性細胞を含み、かつ前記宿主細胞が、チロシンヒドロキシラーゼまたはドーパミン活性トランスポーターを発現するとして定義されるドーパミン作動性神経前駆細胞を含む、請求項３１〜３５に記載の組み合わせ物。
【請求項３７】
前記対象が、パーキンソン病を有する、請求項３１〜３６に記載の組み合わせ物。
【請求項３８】
前記プロドラッグが、ガンシクロビルおよび／またはアシクロビルである、請求項３１〜３７に記載の組み合わせ物。
【請求項３９】
前記プロドラッグが、１回より多く投与されることを特徴とする、請求項３１〜３８に記載の組み合わせ物。
【請求項４０】
前記プロドラッグが、前記前駆細胞が分化を開始するのに十分な期間の後に投与されることを特徴とする、請求項３１〜３９に記載の組み合わせ物。
【請求項４１】
前記期間が、３〜６日間である、請求項４０に記載の組み合わせ物。
【請求項４２】
前記期間が、７〜１５日間である、請求項４０に記載の組み合わせ物。
【請求項４３】
前記プロドラッグが、注射によって投与されることを特徴とする、請求項３１〜４０に記載の組み合わせ物。
【請求項４４】
対象における細胞補充療法の方法における使用のための組成物であって、前記組成物は、本質的に分裂しない細胞であることが知られる細胞を補充するための請求項１〜１９に記載の前駆細胞を含み、前記組成物は、前記自殺遺伝子によって活性化されるプロドラッグと組み合わせて投与されることを特徴とし、前記プロドラッグは、周期する前駆細胞を排除するのに有効な量で投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項４５】
対象における細胞補充療法の方法における使用のための組成物であって、前記組成物は、前記自殺遺伝子によって活性化されるプロドラッグを含み、前記組成物は、本質的に分裂しない細胞であることが知られる細胞を補充するための請求項１〜１９に記載の前駆細胞と組み合わせて投与されることを特徴とし、前記組成物は、前記プロドラッグが、周期する前駆細胞を排除するのに有効な量で投与されるように投与されることを特徴とする、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
本発明の他の目的、特徴および利点は以下の詳細な説明から明らかになる。しかしながら、本発明の趣旨および範囲内の様々な変更および修正が、この詳細な説明から当業者に明らかになるため、詳細な説明および特定の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示す一方、説明のためだけに示されていることを理解されたい。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
自殺遺伝子コード配列に作動可能に連結した細胞周期依存性プロモーターを含む発現ベクター。
（項目２）
前記細胞周期依存性プロモーターが、Ｋｉ−６７、ＰＣＮＡ、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＢ２、ＤＬＧＡＰ５またはＴＯＰ２Ａプロモーターである、項目１に記載の発現ベクター。
（項目３）
前記細胞周期依存性プロモーターが、Ｋｉ−６７プロモーターである、項目１〜２に記載の発現ベクター。
（項目４）
前記細胞周期依存性プロモーターが、合成細胞周期プロモーターである、項目１〜３に記載の発現ベクター。
（項目５）
前記自殺遺伝子が、ウイルスチミジンキナーゼ、細菌シトシンデアミナーゼ、ニトロレダクターゼ、カルボキシペプチダーゼＧ２、プリンヌクレオシドホスホリラーゼまたはカスパーゼ９である、項目１〜４に記載の発現ベクター。
（項目６）
前記自殺遺伝子が、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ  ＴＫ）遺伝子である、項目１〜５に記載の発現ベクター。
（項目７）
前記ＨＳＶ  ＴＫ遺伝子が、ＨＳＶ  ＴＫ変異体である、項目６に記載の発現ベクター。
（項目８）
前記ＨＳＶ  ＴＫ変異体が、ＨＳＶ１−ＳＲ１１ＴＫ、ＨＳＶ１−ＳＲ２６ＴＫまたはＨＳＶ１−ＳＲ３９ＴＫである、項目７に記載の発現ベクター。
（項目９）
前記ＨＳＶ  ＴＫ変異体が、ＨＳＶ１−ＳＲ３９ＴＫである、項目７に記載の発現ベクター。
（項目１０）
選択可能マーカーをさらに含む、項目１〜９に記載の発現ベクター。
（項目１１）
前記選択可能マーカーが、抗生物質耐性遺伝子または蛍光タンパク質をコードする遺伝子である、項目１０に記載の発現ベクター。
（項目１２）
ウイルスベクターとしてさらに定義される、項目１〜１１に記載の発現ベクター。
（項目１３）
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターまたはポリオーマウイルスベクターである、項目１２に記載の発現ベクター。
（項目１４）
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、項目１２に記載の発現ベクター。
（項目１５）
項目１〜１４に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
（項目１６）
神経前駆細胞、心筋前駆細胞、内皮前駆細胞、膵前駆細胞、腎前駆細胞、オリゴデンドロサイト前駆細胞、造血前駆細胞、骨髄前駆細胞、間葉前駆細胞、網膜前駆細胞または破骨前駆細胞としてさらに定義される、項目１５に記載の宿主細胞。
（項目１７）
神経前駆細胞としてさらに定義される、項目１５に記載の宿主細胞。
（項目１８）
前記細胞が、多能性幹細胞（ＰＳＣ）から誘導される、項目１５〜１７に記載の宿主細胞。
（項目１９）
前記ＰＳＣが、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）である、項目１８に記載の宿主細胞。
（項目２０）
前記神経前駆細胞が、ｍｕｓａｓｈｉ、ネスチン、ｓｏｘ２、ビメンチン、ｐａｘ６およびｓｏｘ１からなる群から選択されるマーカーの少なくとも１つを発現するとしてさらに定義される、項目１７に記載の宿主細胞。
（項目２１）
項目１５〜２０に記載の宿主細胞と、任意選択で薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
（項目２２）
項目１５〜２０に記載の宿主細胞を生成する方法であって、
（ａ）ＰＳＣの出発集団を得ることと、
（ｂ）前記ＰＳＣを前駆細胞に分化させることと、
（ｃ）前記前駆細胞を単離および培養することと
を含み、ここで、培養された前記前駆細胞が前記自殺遺伝子コード配列に作動可能に連結した前記細胞周期依存性プロモーターを含むように、前記ＰＳＣまたは前記前駆細胞のいずれかが、項目１に記載の発現ベクターでトランスフェクトまたは形質導入されて、前記発現ベクターの存在について選択される、方法。
（項目２３）
前記前駆細胞が、神経前駆細胞、心筋前駆細胞、内皮前駆細胞、膵前駆細胞、腎前駆細胞、オリゴデンドロサイト前駆細胞、造血前駆細胞、骨髄前駆細胞、間葉前駆細胞、網膜前駆細胞または破骨前駆細胞である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記前駆細胞が、神経前駆細胞である、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
前記ＰＳＣの出発集団が、胚性幹細胞を含む、項目２２〜２４に記載の方法。
（項目２６）
前記ＰＳＣの出発集団が、人工多能性幹細胞を含む、項目２２〜２４に記載の方法。
（項目２７）
集団の細胞を神経前駆細胞に分化させることが、前記ＰＳＣの出発集団を線維芽細胞成長因子または上皮成長因子と接触させることを含む、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
前記ＰＳＣの出発集団をＮ２およびＢ２７と接触させることをさらに含む、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
単離することが、前駆細胞を単離するために前記集団の前記細胞を選別することを含む、項目２２〜２８に記載の方法。
（項目３０）
トランスフェクトまたは形質導入された細胞を抗生物質と接触させることを含む方法によって、細胞を、前記発現ベクターの存在について選択する、項目２２〜２９に記載の方法。
（項目３１）
トランスフェクトまたは形質導入された細胞を選別することを含む方法によって、細胞を、前記発現ベクターの存在について選択する、項目２２〜２９に記載の方法。
（項目３２）
本質的に分裂しない細胞であることが知られる細胞を補充するための細胞補充療法の方法であって、有効量の、項目１５〜２０に記載の前駆細胞を投与することと、前記自殺遺伝子によって活性化されるプロドラッグを、周期する前駆細胞を排除するのに有効な量で対象に投与することとを含む、細胞補充療法の方法。
（項目３３）
前記前駆細胞が、神経前駆細胞、心筋前駆細胞または膵前駆細胞である、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記対象が、哺乳動物である、項目３２〜３３に記載の方法。
（項目３５）
前記哺乳動物が、マウス、ラット、非ヒト霊長類またはヒトである、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記宿主細胞のゲノムが、前記対象のゲノムと本質的に同一のゲノムと、項目１〜１４に記載の発現ベクターとを含む、項目３２〜３５に記載の方法。
（項目３７）
補充される前記本質的に分裂しない細胞が、ドーパミン作動性細胞を含み、かつ前記宿主細胞が、チロシンヒドロキシラーゼまたはドーパミン活性トランスポーターを発現するとして定義されるドーパミン作動性神経前駆細胞を含む、項目３２〜３６に記載の方法。
（項目３８）
前記対象が、パーキンソン病を有する、項目３２〜３７に記載の方法。
（項目３９）
前記プロドラッグが、ガンシクロビルおよび／またはアシクロビルである、項目３２〜３８に記載の方法。
（項目４０）
前記プロドラッグが、１回より多く投与される、項目３２〜３９に記載の方法。
（項目４１）
前記プロドラッグが、前記前駆細胞が分化を開始するのに十分な期間の後に投与される、項目３２〜４０に記載の方法。
（項目４２）
前記期間が、３〜６日間である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記期間が、７〜１５日間である、項目４１に記載の方法。
（項目４４）
前記プロドラッグが、注射によって投与される、項目３２〜４１に記載の方法。