【手続補正書】
【提出日】令和2年6月12日(2020.6.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉｄ）：
2019532012.tif 000001
［式中、
Ａは、ジベンゾシクロオクチン、トランス−シクロオクテン、アジド、テトラジン、マレイミド、チオール、１，３−ニトロン、アルデヒド、ケトン、ヒドラジン及びヒドロキシルアミンからなる群より選択され；
「リンカー」は、２から８０個の炭素原子を有し、且つＯ、Ｎ、若しくはＳから選択される一又は複数のヘテロ原子を有してもよい分岐又は非分岐、直鎖又は環状、置換又は無置換の飽和又は不飽和基であり；且つ
「組織反応性前駆体部分」が、（ｉ）チラミド若しくはその誘導体若しくはそのアナログ、又は（ｉｉ）キノンメチド前駆体である。］
を有するコンジュゲート。
【請求項２】
「組織反応性前駆体部分」が、
2019532012.tif 000002
からなる群より選択される化合物に由来する、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３】
「リンカー」が式（Ｉａ）：
2019532012.tif 000003
［式中、
ｄ及びｅは、それぞれ独立して２から２０の整数であり；
ｔ及びｕは、独立して０又は１であり；
Ｑは、結合、Ｏ、Ｓ又はＮ（Ｒｃ）（Ｒｄ）であり；
Ｒａ及びＲｂは、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｆ、Ｃｌ又はＮ（Ｒｃ）（Ｒｄ）であり；
Ｒｃ及びＲｄは、独立してＣＨ３又はＨであり；且つ
Ｘ及びＹは、独立して、１から１２個の炭素原子を有し、且つ一又は複数のＯ、Ｎ、若しくはＳヘテロ原子を有してもよい分岐又は非分岐、直鎖又は環状、置換又は無置換の飽和又は不飽和基である。］
を有する、請求項１又は２に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
Ｒａ及びＲｂがそれぞれ水素である、請求項３に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
Ｑが酸素である、請求項３又は４に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
Ｒａ及びＲｂがそれぞれ水素であり、Ｑが酸素であり；ｅが２から１０の範囲である、請求項３に記載のコンジュゲート。
【請求項７】
式（ＩＶ）：
2019532012.tif 000004
［式中、
Ａは、ジベンゾシクロオクチン、トランス−シクロオクテン、アジド、テトラジン、マレイミド、チオール、１，３−ニトロン、アルデヒド、ケトン、ヒドラジン及びヒドロキシルアミンからなる群より選択され；
「リンカー」は、２から８０個の炭素原子を有し、且つＯ、Ｎ、若しくはＳから選択される一又は複数のヘテロ原子を有してもよい分岐又は非分岐、直鎖又は環状、置換又は無置換の飽和又は不飽和基であり；且つ
Ｚは、発色団、フルオロフォア、酵素、ハプテン及びキレーターからなる群より選択される。］
を有するコンジュゲート。
【請求項８】
Ｚが、テトラメチルローダミン、シアニン５及びダブシルからなる群より選択される発色団である、又は
Ｚが
2019532012.tif 000005
からなる群より選択される、
請求項７に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
式（ＩＶａ）：
2019532012.tif 000006
の構造を有する、又は
式（ＩＶｂ）： 
2019532012.tif 000007
の構造を有する、又は
式（ＩＶｃ）：
2019532012.tif 000008
の構造を有する、又は
式（ＩＶｄ）：
2019532012.tif 000009
の構造を有する、又は
2019532012.tif 000010
である、又は
2019532012.tif 000011
である、又は
2019532012.tif 000012
である、又は
2019532012.tif 000013
である、又は
2019532012.tif 000014
である、又は
2019532012.tif 000015
である、又は
2019532012.tif 000016
である、又は
2019532012.tif 000017
である、
請求項７に記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
生物学的試料中の第１の標的を検出する方法であって、
（ｉ）生物学的試料を第１の標的に特異的な第１の検出プローブと接触させ、第１の検出プローブ−標的複合体を形成すること；
（ｉｉ）生物学的試料を、第１の検出プローブ−標的複合体が第１の酵素で標識されることになるように第１の酵素を含む、第１の検出プローブに特異的な第１の標識化コンジュゲートと接触させること；
（ｉｉｉ）生物学的試料を、請求項１から６の何れか一項に記載のコンジュゲートを含むクリックコンジュゲートの第１の対の第１のメンバーと接触させることであって、第１の酵素が、クリックコンジュゲートの第１の対の第１のメンバーを、第１の標的に近位又はその直上の生物学的試料と共有結合して第１の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体を形成する第１の反応中間体に変換する、生物学的試料を組織反応性部分を含むクリックコンジュゲートの第１の対の第１のメンバーと接触させること；
（ｉｖ）生物学的試料を、第１の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体とクリックコンジュゲートの第１の対の第２のメンバーとの間に共有結合が形成されて第１の組織−クリックコンジュゲート付加物が形成されるように第１の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体の第１の反応性部分と反応することができる請求項７から９の何れか一項に記載のコンジュゲートを含むクリックコンジュゲートの第１の対の第２のメンバーと接触させること；及び
（ｖ）第１の組織−クリックコンジュゲート付加物の第１のレポーター部分からシグナルを検出すること
を含む、方法。
【請求項１１】
クリックコンジュゲートの第１の対の第２のメンバーが、少なくとも一の発色団を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
クリックコンジュゲートの第１の対の第１のメンバーが、キノンメチド前駆体部分を含み、且つクリックコンジュゲートの第１の対の第２のメンバーが発色団を含む、又は
クリックコンジュゲートの第１の対の第１のメンバーが、チラミド部分を含み、且つクリックコンジュゲートの第１の対の第２のメンバーが発色団を含む、
請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
第１の検出プローブが一次抗体であり、且つ第１の標識化コンジュゲートが抗−抗体抗体を含む、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
第１の酵素が、ホスファターゼ、ホスホジエステラーゼ、エステラーゼ、リパーゼ、アミダーゼ、プロテアーゼ、ニトロレダクターゼ、ウレアーゼ、スルファターゼ、チトクロムＰ４５０、アルファ−グルコシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、ベータ−ラクタマーゼ、アルファ−グルコロニダーゼ、ベータ−グルコロニダーゼ、アルファ−５−ガラクトシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、ノイラミニダーゼ、アルファ−ラクターゼ及びベータ−ラクターゼからなる群より選択される、請求項１０から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
生物学的試料中の第２の標的を検出することをさらに含み、第２の標的が以下：
（ｉ）生物学的試料を第２の標的に特異的な第２の検出プローブと接触させ、第２の検出プローブ−標的複合体を形成すること；
（ｉｉ）生物学的試料を、第２の検出プローブ−標的複合体が第２の酵素で標識されることになるように第２の酵素を含む、第２の検出プローブに特異的な第２の標識化コンジュゲートと接触させること；
（ｉｉｉ）生物学的試料を、請求項１から６の何れか一項に記載のコンジュゲートを含むクリックコンジュゲートの第２の対の第１のメンバーと接触させることであって、第２の酵素が、クリックコンジュゲートの第２の対の第１のメンバーを、第２の標的に近位又はその直上の生物学的試料と共有結合して第２の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体を形成する第２の反応中間体に変換する、生物学的試料を組織反応性部分を含むクリックコンジュゲートの第２の対の第１のメンバーと接触させること；
（ｉｖ）生物学的試料を、第２の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体とクリックコンジュゲートの第２の対の第２のメンバーとの間に共有結合が形成されるように第２の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体の第１の反応性部分と反応することができる請求項７から９の何れか一項に記載のコンジュゲートを含むクリックコンジュゲートの第２の対の第２のメンバーと接触させること；及び
（ｖ）第２の組織−クリックコンジュゲート付加物の、第１のレポーター部分とは異なる第２のレポーター部分からシグナルを検出すること
により検出される、請求項１０から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
クリックコンジュゲートの第２の対の第２のメンバーが、少なくとも一の発色団を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
クリックコンジュゲートの第２の対の第１のメンバーが、キノンメチド前駆体部分を含み、且つクリックコンジュゲートの第２の対の第２のメンバーが発色団を含む、又は、
クリックコンジュゲートの第２の対の第１のメンバーが、チラミド部分を含み；且つクリックコンジュゲートの第２の対の第２のメンバーが発色団を含む、
請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
第２の検出プローブが一次抗体であり、且つ第２の第１の標識化コンジュゲートが抗−抗体抗体を含む、請求項１５から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
第２の酵素が、ホスファターゼ、ホスホジエステラーゼ、エステラーゼ、リパーゼ、アミダーゼ、プロテアーゼ、ニトロレダクターゼ、ウレアーゼ、スルファターゼ、チトクロムＰ４５０、アルファ−グルコシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、ベータ−ラクタマーゼ、アルファ−グルコロニダーゼ、ベータ−グルコロニダーゼ、アルファ−５−ガラクトシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、ノイラミニダーゼ、アルファ−ラクターゼ及びベータ−ラクターゼからなる群より選択される、請求項１５から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
工程の一又は複数が自動化システムによって実施される、請求項１０から１９のいずれか一項に記載の方法。