【手続補正書】
【提出日】令和2年8月20日(2020.8.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
角膜ジストロフィーの予防、改善、又は治療のためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムのためにデザインされた一本鎖ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項２】
（ｉ）配列番号（１０＋４ｎ）又は配列番号（１１＋４ｎ）（ｎは、０から２２１までの整数である）からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有するＣＲＩＳＰＲ標的化ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）配列と、（ｉｉ）トランス活性化型ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）配列とを含み、前記ｃｒＲＮＡ配列及び前記ｔｒａｃｒＲＮＡ配列は、天然には一緒に存在しないものである、請求項１に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項３】
前記ｔｒａｃｒＲＮＡは、配列番号２又は配列番号６のヌクレオチド配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項２に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項４】
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムのためにデザインされたｓｇＲＮＡ対であって、
（ｉ）（ａ）病因性突然変異又はＳＮＰの３’末端側にシスにある第１のプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を生成する突然変異又は一塩基多型（ＳＮＰ）のための第１のｃｒＲＮＡ配列と、（ｂ）ｔｒａｃｒＲＮＡ配列とを含み、該第１のｃｒＲＮＡ配列及び該ｔｒａｃｒＲＮＡ配列は、天然には一緒に存在しないものである、第１のｓｇＲＮＡと、
（ｉｉ）（ａ）病因性突然変異又はＳＮＰの５’末端側にシスにある第２のＰＡＭを生成する突然変異又はＳＮＰのための第２のｃｒＲＮＡガイド配列と、（ｂ）ｔｒａｃｒＲＮＡ配列とを含み、該第２のｃｒＲＮＡ配列及び該ｔｒａｃｒＲＮＡ配列は、天然には一緒に存在しないものである、第２のｓｇＲＮＡと、
を含む、ｓｇＲＮＡ対。
【請求項５】
前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムは、角膜ジストロフィーの予防、改善、又は治療のためのシステムである、請求項４に記載のｓｇＲＮＡ対。
【請求項６】
前記ＰＡＭを生成する突然変異又は前記ＳＮＰは、ＴＧＦＢＩ遺伝子中に存在する、請求項４又は５に記載のｓｇＲＮＡ対。
【請求項７】
前記ＰＡＭを生成する突然変異又は前記ＳＮＰは、ＴＧＦＢＩ遺伝子のイントロン中に存在する、請求項４〜６のいずれか一項に記載のｓｇＲＮＡ対。
【請求項８】
前記第１のｃｒＲＮＡ配列及び前記第２のｃｒＲＮＡ配列の少なくとも１つは、図１９〜図３５に列挙される配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、及び／又は前記第１のｃｒＲＮＡ配列及び前記第２のｃｒＲＮＡ配列の少なくとも１つは、表２に列挙される配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項４〜７のいずれか一項に記載のｓｇＲＮＡ対。
【請求項９】
（ｉ）Ｃａｓ９ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド分子と請求項１〜３のいずれか一項に記載のｓｇＲＮＡとを含む少なくとも１つのベクター、又は（ｉｉ）Ｃａｓ９ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド分子と請求項４〜８のいずれか一項に記載のｓｇＲＮＡ対とを含む少なくとも１つのベクターを含み、前記ベクター中の前記Ｃａｓ９ヌクレアーゼ及び前記ｓｇＲＮＡ対は、天然には一緒に存在しないものである、操作されたクラスターを形成し規則正しい間隔を持つ短いパリンドロームリピート（ＣＲＩＳＰＲ）／ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）システム。
【請求項１０】
前記Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、又はそれらの変異体由来のヌクレアーゼである、請求項９に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項１１】
前記Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、配列番号４又は配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９又は１０に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項１２】
前記Ｃａｓ９ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド分子は、配列番号３又は配列番号７からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項１３】
修復ヌクレオチド分子を更に含む、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項１４】
１つ以上の核局在化シグナル（ＮＬＳ）を更に含む、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項１５】
前記ｓｇＲＮＡ及び前記Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、同じベクター上に含まれている、請求項９〜１４のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項１６】
標的配列を有するＤＮＡ分子によってコードされる遺伝子産物の発現を変化させるための、請求項９〜１５のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムであって、前記ＤＮＡ分子は細胞中に含まれ発現される、前記操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項１７】
（ａ）前記標的配列とハイブリダイズするｓｇＲＮＡに作動的に連結された第１の調節エレメントと、
（ｂ）Ｃａｓ９ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド分子に作動的に連結された第２の調節エレメントと、
を含み、前記ｓｇＲＮＡは、前記標的配列を標的とし、かつ前記Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、前記ＤＮＡ分子を開裂する、請求項１６に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項１８】
前記細胞は、真核細胞である、請求項１６又は１７に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項１９】
前記細胞は、哺乳動物細胞又はヒト細胞である、請求項１６又は１７に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項２０】
被験体における突然変異又は一塩基多型（ＳＮＰ）と関連する疾患を予防、改善、又は治療するための、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムであって、前記ＤＮＡ分子は、突然変異配列を含む、前記操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項２１】
被験体における遺伝子突然変異又は一塩基多型（ＳＮＰ）と関連する角膜ジストロフィーを予防、改善、又は治療するための、操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムであって、
（ｉ）Ｃａｓ９ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド分子と、
（ｉｉ）プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）の５’末端に隣接する標的配列に相補性のヌクレオチド配列にハイブリダイズするＣＲＩＳＰＲ標的化ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）配列と、
を含む少なくとも１つのベクターを含み、前記標的配列又は前記ＰＡＭは、角膜ジストロフィーを引き起こす突然変異又はＳＮＰを含み、前記Ｃａｓ９ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド分子及び前記ｃｒＲＮＡ配列は、天然には一緒に存在しないものである、前記操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項２２】
前記ＰＡＭは、前記突然変異又は前記ＳＮＰを含む、請求項２１に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項２３】
前記ｃｒＲＮＡ配列は、前記標的配列を含み、かつ前記ｃｒＲＮＡ配列は、１７ヌクレオチド長〜２４ヌクレオチド長である、請求項２１又は２２に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項２４】
前記ｃｒＲＮＡ配列は、配列番号（１０＋４ｎ）（ｎは、０から２２１までの整数である）からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項２５】
前記ＰＡＭ及び前記Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、ストレプトコッカス又はスタフィロコッカス由来のヌクレアーゼである、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項２６】
前記ＰＡＭは、ＮＧＧ又はＮＮＧＲＲＴ（Ｎは、Ａ、Ｔ、Ｇ、及びＣのいずれかであり、かつＲは、Ａ又はＧである）からなる、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項２７】
前記被験体の角膜中に導入するための、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項２８】
前記被験体の角膜中に注射するための、請求項２１〜２７のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項２９】
前記標的配列を有するＤＮＡ分子を含み発現する、前記被験体の細胞中に導入するための、請求項２１〜２８のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項３０】
前記角膜ジストロフィーは、上皮基底膜ジストロフィー（ＥＢＭＤ）、メースマン角膜ジストロフィー（ＭＥＣＤ）、ティール−ベーンケ角膜ジストロフィー（ＴＢＣＤ）、格子状角膜ジストロフィー（ＬＣＤ）、顆粒状角膜ジストロフィー（ＧＣＤ）、及びシュナイダー角膜ジストロフィー（ＳＣＤ）からなる群から選択される、請求項２１〜２９のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項３１】
前記ＳＮＰは、ＴＧＦＢＩ、ＫＲＴ３、ＫＲＴ１２、ＧＳＮ、及びＵＢＩＡＤ１からなる群から選択される遺伝子中に位置している、請求項２１〜３０のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項３２】
前記遺伝子突然変異又は前記ＳＮＰを含む突然変異配列は、
（ｉ）Ｌｅｕ５０９Ａｒｇ、Ａｒｇ６６６Ｓｅｒ、Ｇｌｙ６２３Ａｓｐ、Ａｒｇ５５５Ｇｌｎ、Ａｒｇ１２４Ｃｙｓ、Ｖａｌ５０５Ａｓｐ、Ｉｌｅ５２２Ａｓｎ、Ｌｅｕ５６９Ａｒｇ、Ｈｉｓ５７２Ａｒｇ、Ａｒｇ４９６Ｔｒｐ、Ｐｒｏ５０１Ｔｈｒ、Ａｒｇ５１４Ｐｒｏ、Ｐｈｅ５１５Ｌｅｕ、Ｌｅｕ５１８Ｐｒｏ、Ｌｅｕ５１８Ａｒｇ、Ｌｅｕ５２７Ａｒｇ、Ｔｈｒ５３８Ｐｒｏ、Ｔｈｒ５３８Ａｒｇ、Ｖａｌ５３９Ａｓｐ、Ｐｈｅ５４０ｄｅｌ、Ｐｈｅ５４０Ｓｅｒ、Ａｓｎ５４４Ｓｅｒ、Ａｌａ５４６Ｔｈｒ、Ａｌａ５４６Ａｓｐ、Ｐｈｅ５４７Ｓｅｒ、Ｐｒｏ５５１Ｇｌｎ、Ｌｅｕ５５８Ｐｒｏ、Ｈｉｓ５７２ｄｅｌ、Ｇｌｙ５９４Ｖａｌ、Ｖａｌ６１３ｄｅｌ、Ｖａｌ６１３Ｇｌｙ、Ｍｅｔ６１９Ｌｙｓ、Ａｌａ６２０Ａｓｐ、Ａｓｎ６２２Ｈｉｓ、Ａｓｎ６２２Ｌｙｓ、Ａｓｎ６２２Ｌｙｓ、Ｇｌｙ６２３Ａｒｇ、Ｇｌｙ６２３Ａｓｐ、Ｖａｌ６２４＿Ｖａｌ６２５ｄｅｌ、Ｖａｌ６２４Ｍｅｔ、Ｖａｌ６２５Ａｓｐ、Ｈｉｓ６２６Ａｒｇ、Ｈｉｓ６２６Ｐｒｏ、Ｖａｌ６２７ＳｅｒｆｓＸ４４、Ｔｈｒ６２９＿Ａｓｎ６３０ｉｎｓＡｓｎＶａｌＰｒｏ、Ｖａｌ６３１Ａｓｐ、Ａｒｇ６６６Ｓｅｒ、Ａｒｇ５５５Ｔｒｐ、Ａｒｇ１２４Ｓｅｒ、Ａｓｐ１２３ｄｅｌｉｎｓ、Ａｒｇ１２４Ｈｉｓ、Ａｒｇ１２４Ｌｅｕ、Ｌｅｕ５０９Ｐｒｏ、Ｌｅｕ１０３＿Ｓｅｒ１０４ｄｅｌ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、Ａｓｐ１２３Ｈｉｓ、Ａｒｇ１２４Ｌｅｕ、及び／又はＴｈｒ１２５＿Ｇｌｕ１２６ｄｅｌを含む突然変異ＴＧＦＢＩタンパク質、
（ｉｉ）Ｇｌｕ４９８Ｖａｌ、Ａｒｇ５０３Ｐｒｏ、及び／又はＧｌｕ５０９Ｌｙｓを有する突然変異ＫＲＴ３タンパク質、
（ｉｉｉ）Ｍｅｔ１２９Ｔｈｒ、Ｍｅｔ１２９Ｖａｌ、Ｇｌｎ１３０Ｐｒｏ、Ｌｅｕ１３２Ｐｒｏ、Ｌｅｕ１３２Ｖａｌ、Ｌｅｕ１３２Ｈｉｓ、Ａｓｎ１３３Ｌｙｓ、Ａｒｇ１３５Ｇｌｙ、Ａｒｇ１３５Ｉｌｅ、Ａｒｇ１３５Ｔｈｒ、Ａｒｇ１３５Ｓｅｒ、Ａｌａ１３７Ｐｒｏ、Ｌｅｕ１４０Ａｒｇ、Ｖａｌ１４３Ｌｅｕ、Ｖａｌ１４３Ｌｅｕ、Ｌｌｅ３９１＿Ｌｅｕ３９９ｄｕｐ、Ｉｌｅ４２６Ｖａｌ、Ｉｌｅ４２６Ｓｅｒ、Ｔｙｒ４２９Ａｓｐ、Ｔｙｒ４２９Ｃｙｓ、Ａｒｇ４３０Ｐｒｏ、及び／又はＬｅｕ４３３Ａｒｇを有する突然変異ＫＲＴ１２タンパク質、
（ｉｖ）Ａｓｐ２１４Ｔｙｒを有する突然変異ＧＳＮタンパク質、並びに、
（ｖ）Ａｌａ９７Ｔｈｒ、Ｇｌｙ９８Ｓｅｒ、Ａｓｎ１０２Ｓｅｒ、Ａｓｐ１１２Ａｓｎ、Ａｓｐ１１２Ｇｌｙ、Ａｓｐ１１８Ｇｌｙ、Ａｒｇ１１９Ｇｌｙ、Ｌｅｕ１２１Ｖａｌ、Ｌｅｕ１２１Ｐｈｅ、Ｖａｌ１２２Ｇｌｕ、Ｖａｌ１２２Ｇｌｙ、Ｓｅｒ１７１Ｐｒｏ、Ｔｙｒ１７４Ｃｙｓ、Ｔｈｒ１７５Ｉｌｅ、Ｇｌｙ１７７Ａｒｇ、Ｌｙｓ１８１Ａｒｇ、Ｇｌｙ１８６Ａｒｇ、Ｌｅｕ１８８Ｈｉｓ、Ａｓｎ２３２Ｓｅｒ、Ａｓｎ２３３Ｈｉｓ、Ａｓｐ２３６Ｇｌｕ、及び／又はＡｓｐ２４０Ａｓｎを有する突然変異ＵＢＩＡＤ１タンパク質、
からなる群から選択される突然変異タンパク質をコードする、請求項２１〜３１のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項３３】
（ｉ）前記遺伝子突然変異若しくは前記ＳＮＰを含む突然変異配列は、Ａｒｇ１２４Ｃｙｓを含む突然変異ＴＧＦＢＩタンパク質をコードし、かつ前記ｃｒＲＮＡ配列は、配列番号５８、配列番号５４、配列番号５０、若しくは配列番号４２を含み、
（ｉｉ）前記遺伝子突然変異若しくは前記ＳＮＰを含む突然変異配列は、Ａｒｇ１２４Ｈｉｓを含む突然変異ＴＧＦＢＩタンパク質をコードし、かつ前記ｃｒＲＮＡ配列は、配列番号９４、配列番号９０、配列番号８６、配列番号８２、配列番号７８、配列番号７４、若しくは配列番号７０を含み、
（ｉｉｉ）前記遺伝子突然変異若しくは前記ＳＮＰを含む突然変異配列は、Ａｒｇ１２４Ｌｅｕを含む突然変異ＴＧＦＢＩタンパク質をコードし、かつ前記ｃｒＲＮＡ配列は、配列番号１１４、配列番号１１０、配列番号１０６、若しくは配列番号９８を含み、
（ｉｖ）前記遺伝子突然変異若しくは前記ＳＮＰを含む突然変異配列は、Ａｒｇ５５５Ｇｌｎを含む突然変異ＴＧＦＢＩタンパク質をコードし、かつ前記ｃｒＲＮＡ配列は、配列番号１７８、配列番号１７４、配列番号１７０、配列番号１６６、配列番号１６２、若しくは配列番号１５８を含み、
（ｖ）前記遺伝子突然変異若しくは前記ＳＮＰを含む突然変異配列は、Ａｒｇ５５５Ｔｒｐを含む突然変異ＴＧＦＢＩタンパク質をコードし、かつ前記ｃｒＲＮＡ配列は、配列番号１４６、配列番号１４２、配列番号１３８、配列番号１３４、配列番号１３０、若しくは配列番号１２６を含み、及び／又は、
（ｖｉ）前記遺伝子突然変異若しくは前記ＳＮＰを含む突然変異配列は、Ｌｅｕ５２７Ａｒｇを含む突然変異ＴＧＦＢＩタンパク質をコードし、かつ前記ｃｒＲＮＡ配列は、配列番号４７４、配列番号４７８、配列番号４８２、若しくは配列番号４８６を含む、
請求項２１〜３２のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項３４】
前記遺伝子突然変異又は前記ＳＮＰを含む突然変異配列は、Ａｒｇ１２４Ｈｉｓを含む突然変異ＴＧＦＢＩタンパク質をコードし、かつ前記ｃｒＲＮＡは、配列番号８６又は配列番号９４を含む、請求項２１〜３３のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項３５】
前記角膜ジストロフィーは、前記ＳＮＰと関連しており、かつ前記標的配列又は前記ＰＡＭは、角膜ジストロフィーを引き起こすＳＮＰ部位を含む、請求項２１〜３４のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項３６】
前記標的配列又は前記ＰＡＭは、複数のＳＮＰ部位を含む、請求項２１〜３５のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項３７】
前記被験体は、ヒトである、請求項２１〜３６のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項３８】
被験体における遺伝子突然変異又は一塩基多型（ＳＮＰ）と関連する角膜ジストロフィーを予防、改善、又は治療するための、操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムであって、
（ｉ）Ｃａｓ９ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド分子と、
（ｉｉ）病因性突然変異又はＳＮＰの３’末端側にシスにある第１のプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）の５’末端に隣接する第１の標的配列に相補性のヌクレオチド配列にハイブリダイズする第１のＣＲＩＳＰＲ標的化ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）配列であって、前記第１の標的配列又は前記第１のＰＡＭが、第１の祖先型突然変異部位又はＳＮＰ部位を含む、第１のｃｒＲＮＡ配列と、
（ｉｉｉ）病因性突然変異又はＳＮＰの５’末端側にシスにある第２のＰＡＭの５’末端に隣接する第２の標的配列に相補性のヌクレオチド配列にハイブリダイズする第２のｃｒＲＮＡ配列であって、前記第２の標的配列又は前記第２のＰＡＭが、第２の祖先型突然変異部位又はＳＮＰ部位を含む、第２のｃｒＲＮＡ配列と、
を含む少なくとも１つのベクターを含み、前記少なくとも１つのベクターは、天然に一緒に存在するｃｒＲＮＡ配列及びＣａｓ９ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド分子を有しない、前記操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項３９】
前記ＰＡＭを生成する突然変異又は前記ＳＮＰは、ＴＧＦＢＩ遺伝子中に存在する、請求項３８に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項４０】
前記ＰＡＭを生成する突然変異又は前記ＳＮＰは、ＴＧＦＢＩ遺伝子のイントロン中に存在する、請求項３８又は３９に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項４１】
前記第１のｃｒＲＮＡ配列及び前記第２のｃｒＲＮＡ配列の少なくとも１つは、図１９〜図３５に列挙される配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、及び／又は前記第１のｃｒＲＮＡ配列及び前記第２のｃｒＲＮＡ配列の少なくとも１つは、表２に列挙される配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項４２】
前記第１のＰＡＭは、前記第１の突然変異部位若しくは前記ＳＮＰ部位を含み、及び／又は前記第２のＰＡＭは、前記第２の突然変異部位若しくは前記ＳＮＰ部位を含む、請求項３８〜４１のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項４３】
前記第１のｃｒＲＮＡ配列は、前記第１の標的配列を含み、
前記第２のｃｒＲＮＡ配列は、前記第２の標的配列を含み、
前記第１のｃｒＲＮＡ配列は、１７ヌクレオチド長〜２４ヌクレオチド長であり、及び／又は、
前記第２のｃｒＲＮＡ配列は、１７ヌクレオチド長〜２４ヌクレオチド長である、
請求項３８〜４２のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項４４】
前記第１のＰＡＭ及び／又は前記第２のＰＡＭ並びに前記Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、ストレプトコッカス又はスタフィロコッカス由来である、請求項３８〜４３のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項４５】
前記第１のＰＡＭ及び前記第２のＰＡＭの両方は、ストレプトコッカス又はスタフィロコッカス由来である、請求項３８〜４４のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項４６】
前記ＰＡＭは、ＮＧＧ又はＮＮＧＲＲＴ（Ｎは、Ａ、Ｔ、Ｇ、及びＣのいずれかであり、かつＲは、Ａ又はＧである）からなる、請求項３８〜４５のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項４７】
前記被験体の角膜中に導入するための、請求項３８〜４６のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項４８】
前記被験体の角膜中に注射するための、請求項３８〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記標的配列を有するＤＮＡ分子を含み発現する、前記被験体の細胞中に導入するための、請求項３８〜４８のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項５０】
前記角膜ジストロフィーは、上皮基底膜ジストロフィー（ＥＢＭＤ）、メースマン角膜ジストロフィー（ＭＥＣＤ）、ティール−ベーンケ角膜ジストロフィー（ＴＢＣＤ）、格子状角膜ジストロフィー（ＬＣＤ）、顆粒状角膜ジストロフィー（ＧＣＤ）、及びシュナイダー角膜ジストロフィー（ＳＣＤ）からなる群から選択される、請求項３８〜４９のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項５１】
前記病因性突然変異又は前記ＳＮＰを含む突然変異配列は、Ｌｅｕ５０９Ａｒｇ、Ａｒｇ６６６Ｓｅｒ、Ｇｌｙ６２３Ａｓｐ、Ａｒｇ５５５Ｇｌｎ、Ａｒｇ１２４Ｃｙｓ、Ｖａｌ５０５Ａｓｐ、Ｉｌｅ５２２Ａｓｎ、Ｌｅｕ５６９Ａｒｇ、Ｈｉｓ５７２Ａｒｇ、Ａｒｇ４９６Ｔｒｐ、Ｐｒｏ５０１Ｔｈｒ、Ａｒｇ５１４Ｐｒｏ、Ｐｈｅ５１５Ｌｅｕ、Ｌｅｕ５１８Ｐｒｏ、Ｌｅｕ５１８Ａｒｇ、Ｌｅｕ５２７Ａｒｇ、Ｔｈｒ５３８Ｐｒｏ、Ｔｈｒ５３８Ａｒｇ、Ｖａｌ５３９Ａｓｐ、Ｐｈｅ５４０ｄｅｌ、Ｐｈｅ５４０Ｓｅｒ、Ａｓｎ５４４Ｓｅｒ、Ａｌａ５４６Ｔｈｒ、Ａｌａ５４６Ａｓｐ、Ｐｈｅ５４７Ｓｅｒ、Ｐｒｏ５５１Ｇｌｎ、Ｌｅｕ５５８Ｐｒｏ、Ｈｉｓ５７２ｄｅｌ、Ｇｌｙ５９４Ｖａｌ、Ｖａｌ６１３ｄｅｌ、Ｖａｌ６１３Ｇｌｙ、Ｍｅｔ６１９Ｌｙｓ、Ａｌａ６２０Ａｓｐ、Ａｓｎ６２２Ｈｉｓ、Ａｓｎ６２２Ｌｙｓ、Ａｓｎ６２２Ｌｙｓ、Ｇｌｙ６２３Ａｒｇ、Ｇｌｙ６２３Ａｓｐ、Ｖａｌ６２４＿Ｖａｌ６２５ｄｅｌ、Ｖａｌ６２４Ｍｅｔ、Ｖａｌ６２５Ａｓｐ、Ｈｉｓ６２６Ａｒｇ、Ｈｉｓ６２６Ｐｒｏ、Ｖａｌ６２７ＳｅｒｆｓＸ４４、Ｔｈｒ６２９＿Ａｓｎ６３０ｉｎｓＡｓｎＶａｌＰｒｏ、Ｖａｌ６３１Ａｓｐ、Ａｒｇ６６６Ｓｅｒ、Ａｒｇ５５５Ｔｒｐ、Ａｒｇ１２４Ｓｅｒ、Ａｓｐ１２３ｄｅｌｉｎｓ、Ａｒｇ１２４Ｈｉｓ、Ａｒｇ１２４Ｌｅｕ、Ｌｅｕ５０９Ｐｒｏ、Ｌｅｕ１０３＿Ｓｅｒ１０４ｄｅｌ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、Ａｓｐ１２３Ｈｉｓ、Ａｒｇ１２４Ｌｅｕ、及び／又はＴｈｒ１２５＿Ｇｌｕ１２６ｄｅｌを含む突然変異ＴＧＦＢＩタンパク質からなる群から選択される突然変異タンパク質をコードする、請求項３８〜５０のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項５２】
前記角膜ジストロフィーは、前記ＳＮＰと関連しており、
前記第１の標的配列若しくは前記第１のＰＡＭは、前記第１の祖先型ＳＮＰ部位を含み、及び／又は、
前記第２の標的配列若しくは前記第２のＰＡＭは、前記第２の祖先型ＳＮＰ部位を含む、
請求項３８〜５１のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項５３】
前記病因性突然変異又は前記ＳＮＰを含む突然変異配列は、Ａｒｇ１２４Ｈｉｓを含む突然変異ＴＧＦＢＩタンパク質をコードする、請求項３８〜５２のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項５４】
前記標的配列又は前記ＰＡＭは、複数の突然変異部位又はＳＮＰ部位を含む、請求項３８〜５３のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項５５】
前記被験体は、ヒトである、請求項３８〜５４のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム。
【請求項５６】
被験体における角膜ジストロフィーを治療するための医薬組成物であって、
（ａ）前記被験体から角膜ジストロフィー標的核酸中に核酸突然変異を含む複数の幹細胞を取得することと、
（ｂ）前記複数の幹細胞の１つ以上の幹細胞中の核酸突然変異を操作することで前記核酸突然変異を修正し、それにより１つ以上の操作された幹細胞を形成させることと、
（ｃ）前記１つ以上の操作された幹細胞を単離することと、
を含み、前記複数の幹細胞の１つ以上の幹細胞中の核酸突然変異を操作することは、請求項９〜５５のいずれか一項に記載の操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムを前記１つ以上の幹細胞に導入することを含む方法によって得られる、前記複数の幹細胞の１つ以上の幹細胞を含む、前記医薬組成物。