【手続補正書】
【提出日】令和2年10月27日(2020.10.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０４】
【図１】図１は、ＦＶＩＩＩ  ｋｏマウスにおける組み換えＦＶＩＩＩとともに又は組み換えＦＶＩＩＩなしでｒＤ’Ｄ３−ＦＰ又はｒＤ’Ｄ３−Ｈｉｓを皮下又は静脈内投与した後の、切断型フォン・ヴィルブランド因子（ＶＷＦ）を含む組み換えポリペプチド（本明細書以後では：組み換えポリペプチドとも）のレベルを示す。ｒＤ’Ｄ３−ＦＰをそのアルブミン成分を介して定量し、そしてｒＤ’Ｄ３−Ｈｉｓデータを等モル濃度に計算した。データを時点あたりｎ＝１〜４匹のマウスの平均±ＳＤとして示す。実線は皮下（ｓ．ｃ．）処置を表し、そして点線は静脈内（ｉ．ｖ．）処置を表す。略語：ｓ．ｃ．：皮下；ｉ．ｖ．：静脈内；
【図２】図２は、ＦＶＩＩＩ  ｋｏマウスにおける組み換えＦＶＩＩＩとともに又は組み換えＦＶＩＩＩなしでｒＤ’Ｄ３−ＦＰ又はｒＤ’Ｄ３−Ｈｉｓを皮下投与した後の組み換えポリペプチド血漿レベルの最大濃度及びＡＵＣを示す。ｒＤ’Ｄ３−ＦＰをそのアルブミン成分を介して定量し、そしてｒＤ’Ｄ３−Ｈｉｓデータを等モル濃度で計算した。データを時点あたりｎ＝１〜４匹のマウスについての平均±ＳＤとして示す。Ｃｍａｘ及びＡＵＣ０−ｉｎｆの見積もりを２コンパートメント吸収モデリングにより行った；
【図３】図３は、ＦＶＩＩＩ  ｋｏマウスにおける組み換えＦＶＩＩＩとともに又は組み換えＦＶＩＩＩなしでｒＤ’Ｄ３−ＦＰ又はｒＤ’Ｄ３−Ｈｉｓを皮下投与した後のｒＤ’Ｄ３−ＦＰ又はｒＤ’Ｄ３−Ｈｉｓのバイオアベイラビリティを示す。ｒＤ’Ｄ３−ＦＰをそのアルブミン成分を介して定量し、そしてｒＤ’Ｄ３−Ｈｉｓデータを等モル濃度に計算した。データを時点あたりｎ＝１〜４匹のマウスから計算された平均ＡＵＣ０−ｉｎｆから計算した。ＡＵＣ０−ｉｎｆの見積もりを２コンパートメント吸収モデリングにより行った。ｒＦＶＩＩＩを用いるか又は用いずに様々な用量でｒＤ’Ｄ３−ＦＰを使用した３つの異なるｉ．ｖ．群についてｒＤ’Ｄ３−ＦＰの場合、バイオアベイラビリティを、ｉ．ｖ．投与と比較してｓ．ｃ．投与後のＡＵＣ０−ｉｎｆのパーセンテージとして計算した；
【図４】図４は、ＦＶＩＩＩ  ｋｏマウスにおける組み換えＦＶＩＩＩを用いるか又は用いないｒＤ’Ｄ３−ＦＰ又はｒＤ’Ｄ３−Ｈｉｓの皮下又は静脈内投与後のＦＶＩＩＩ活性血漿レベルを示す。ＦＶＩＩＩを発色ＦＶＩＩＩ活性として定量した。データを時点あたりｎ＝２〜３匹のマウスについての平均±ＳＤとして示す。実線はｓ．ｃ．処置を表し、そして点線はｉ．ｖ．処置を表す；略語：ｓ．ｃ．：皮下；ｉ．ｖ．：静脈内；
【図５】図５は、ＦＶＩＩＩ  ｋｏマウスにおける組み換えＦＶＩＩＩを用いるか又は用いないｒＤ’Ｄ３−ＦＰ又はｒＤ’Ｄ３−Ｈｉｓの皮下投与後のＦＶＩＩＩ活性血漿レベルの最大濃度及びＡＵＣを示す。ＦＶＩＩＩを発色ＦＶＩＩＩ活性として定量した。データを時点あたりｎ＝２〜３匹のマウスについての平均±ＳＤとして示す。Ｃｍａｘ及びＡＵＣ０−ｉｎｆの見積もりを２コンパートメント−吸収モデリングにより行った；
【図６】図６は、ＦＶＩＩＩ  ｋｏマウスにおける組み換えＦＶＩＩＩを用いたｒＤ’Ｄ３−ＦＰ又はｒＤ’Ｄ３−Ｈｉｓの皮下投与後の発色ＦＶＩＩＩ活性のバイオアベイラビリティを示す。時点あたりｎ＝２〜３匹のマウスから計算された平均ＡＵＣ０−ｉｎｆからデータを計算した。ＡＵＣ０−ｉｎｆの見積もりを２コンパートメント−吸収モデリングにより行った。バイオアベイラビリティを、ｒＦＶＩＩＩを用いるか又は用いずに異なる用量でｒＤ’Ｄ３−ＦＰを使用して２つの異なるｉ．ｖ．群についてｒＤ’Ｄ３−ＦＰの場合に、ｉ．ｖ．投与と比較してｓ．ｃ．投与後のＡＵＣ０−ｉｎｆのパーセンテージとして計算した。ＦＶＩＩＩ用量及び選択されたｒＤ’Ｄ３−ＦＰ用量をグラフに数値として示す；
【図７】図７は、ブタにおける組み換えＦＶＩＩＩを用いるか又は用いないｒＤ’Ｄ３−ＦＰの皮下又は静脈内投与後の組み換えポリペプチド血漿レベルを示す。ｒＤ’Ｄ３−ＦＰをそのアルブミン成分を介して定量した。データを時点あたりｎ＝１〜３匹のブタについての平均±ＳＤとして示す。実線はｓ．ｃ．処置を表し、そして点線はｉ．ｖ．処置を表す。略語：ｓ．ｃ．：皮下；ｉ．ｖ．：静脈内；
【図８】図８は、ブタにおける組み換えＦＶＩＩＩを用いるか用いないｒＤ’Ｄ３−ＦＰの皮下又は静脈内投与後のＦＶＩＩＩ活性血漿レベルを示す。ＦＶＩＩＩを発色ＦＶＩＩＩ活性として定量した。データを時点あたりｎ＝１〜３匹のブタについての平均±ＳＤとして示す。実線はｓ．ｃ．処置を表し、そして点線はｉ．ｖ．処置を表す。略語：ｓ．ｃ．：皮下；ｉ．ｖ．：静脈内；
【図９】図９は、ＦＶＩＩＩ  ｋｏマウスにおける様々な組み換えＦＶＩＩＩ又は血漿由来のＦＶＩＩＩを用いるか又は用いないｒＤ’Ｄ３−ＦＰの皮下又は静脈内投与後の組み換えポリペプチド血漿レベルを示す。ｒＤ’Ｄ３−ＦＰをそのアルブミン成分を介して定量した。データを時点あたりｎ＝２〜３匹のマウスについての平均±ＳＤとして示す。実線はｓ．ｃ．処置を表し、そして点線はｉ．ｖ．処置を表す。略語：ｓ．ｃ．：皮下；ｉ．ｖ．：静脈内；
【図１０−１】図１０は、ＦＶＩＩＩ  ｋｏマウスにおける様々な組み換えＦＶＩＩＩ又は血漿由来のＦＶＩＩＩを用いるか又は用いないｒＤ’Ｄ３−ＦＰの皮下又は静脈内投与後のＦＶＩＩＩ活性血漿レベルを示す（図１０Ａ  Ｂｅｒｉａｔｅ（Ｒ）、図１０Ｂ  Ａｄｖａｔｅ（Ｒ）及び図１０Ｃ  ＲｅＦａｃｔｏ  ＡＦ（Ｒ））。ＦＶＩＩＩを発色ＦＶＩＩＩ活性として定量した。データを時点あたりｎ＝２〜３匹のマウスについての平均±ＳＤとして示す。実線はｓ．ｃ．処置を表し、そして点線はｉ．ｖ．処置を表す。略語：ｓ．ｃ．：皮下；ｉ．ｖ．：静脈内；
【図１０−２】図１０−１の続き。
【図１１】図１１は、ＦＶＩＩＩ  ｋｏマウスにおける組み換えＦＶＩＩＩを用いたｒＤ’Ｄ３−ＦＰ  ＥＹＡ又はｒＤ’Ｄ３−ＣＴＰの皮下又は静脈内投与後の組み換えポリペプチド血漿レベルを示す。ｒＤ’Ｄ３−ＦＰ  ＥＹＡをそのアルブミン成分を介して定量し、そしてｒＤ’Ｄ３−ＣＴＰをそのＤ’Ｄ３成分を介して定量した。データを時点あたりｎ＝３匹のマウスの平均±ＳＤとして示す。実線はｓ．ｃ．処置を表し、そして点線はｉ．ｖ．処置を表す。略語：ｓ．ｃ．：皮下；ｉ．ｖ．：静脈内；及び
【図１２】図１２は、ＦＶＩＩＩ  ｋｏマウスにおける組み換えＦＶＩＩＩを用いたｒＤ’Ｄ３−ＦＰ  ＥＹＡ又はｒＤ’Ｄ３−ＣＴＰの皮下又は静脈内投与後のＦＶＩＩＩ活性血漿レベルを示す。ＦＶＩＩＩを発色ＦＶＩＩＩ活性として定量した。データを時点あたりｎ＝３匹のマウスについての平均±ＳＤとして示す。実線はｓ．ｃ．処置を表し、そして点線はｉ．ｖ．処置を表す。略語：ｓ．ｃ．：皮下；ｉ．ｖ．：静脈内。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液凝固障害の処置又は予防における使用のための、切断型フォン・ヴィルブランド因子（ＶＷＦ）を含む組み換えポリペプチドを含む医薬組成物であって、該処置又は予防は、血液凝固障害を有する被験体に組み換えポリペプチド及び第ＶＩＩＩ因子タンパク質（ＦＶＩＩＩ）を血管外投与することを含み、ここで該組み換えポリペプチドは該ＦＶＩＩＩに結合することができ、そしてここで投与しようとする組み換えポリペプチドの投与しようとするＦＶＩＩＩに対するモル比は５０より大きい、上記医薬組成物。
【請求項２】
血液凝固障害の処置又は予防における使用のための、切断型フォン・ヴィルブランド因子（ＶＷＦ）を含む組み換えポリペプチドを含む医薬組成物であって、該処置又は予防は、血液凝固障害を有する被験体に血管外に組み換えポリペプチドを、及び第ＶＩＩＩ因子タンパク質（ＦＶＩＩＩ）を投与することを含み、ここで該組み換えポリペプチドは該ＦＶＩＩＩに結合することができ、そしてここで投与しようとする組み換えポリペプチドの投与しようとするＦＶＩＩＩに対するモル比は５０より大きい、上記医薬組成物。
【請求項３】
上記ポリペプチドは、半減期延長部分（ＨＬＥＭ）を含む、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
被験体はヒト被験体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ポリペプチドはダイマーとして存在するか、又は高比率のダイマーを少なくとも有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ダイマーポリペプチドは、１ｎＭ未満、好ましくは５００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、９０ｐＭ未満又は８０ｐＭ未満の解離定数ＫＤにより特徴づけられるＦＶＩＩＩ結合親和性を有する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ポリペプチドは、皮下、皮内又は筋肉内のいずれかに投与される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
切断型ＶＷＦは、配列番号４のアミノ酸７７６〜８０５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは配列番号４のアミノ酸７６４〜１２４２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
切断型ＶＷＦは、（ａ）配列番号４のアミノ酸７６４〜１２４２、（ｂ）配列番号４のアミノ酸７６４〜１２４２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は（ｃ）  （ａ）若しくは（ｂ）のフラグメントのいずれかからなる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ＨＬＥＭは、切断型ＶＷＦに融合された異種アミノ酸配列である、請求項３〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
上記異種アミノ酸配列は、アルブミン又はそのフラグメント、トランスフェリン又はそのフラグメント、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのＣ末端ペプチド、ＸＴＥＮ配列、ホモ−アミノ酸反復（ＨＡＰ）、プロリン−アラニン−セリン反復（ＰＡＳ）、アファミン、アルファ−フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、アルブミン又は免疫グロブリン定常領域に生理条件下で結合することができるポリペプチド、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、特に免疫グロブリン定常領域及びその部分、好ましくは免疫グロブリンのＦｃ部分に結合することができるポリペプチド、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択されるポリペプチドを含むか又は該ポリペプチドからなる、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ＨＬＥＭが組み換えポリペプチドに結合されている、請求項３〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
上記ＨＬＥＭは、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、エラスチン様ポリペプチド、ヘパロサンポリマー、ヒアルロン酸及びアルブミン結合リガンド、例えば脂肪酸鎖、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
投与されたＦＶＩＩＩの平均滞留時間（ＭＲＴ）は、組み換えポリペプチドの同時投与により、参照処置と比較して好ましくは少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、又は少なくとも５倍増加し、ここで該参照処置は、投与しようとする組み換えポリペプチドがＨＬＥＭを含まないこと以外は、かつ／又は投与しようとする組み換えポリペプチドの投与しようとするＦＶＩＩＩに対するモル比が５０未満であること以外は、上記処置と同じである、請求項３〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
投与された組み換えポリペプチドの平均滞留時間（ＭＲＴ）は、参照処置と比較して好ましくは少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、又は少なくとも３倍増加し、ここで該参照処置は、投与しようとする組み換えポリペプチドがＨＬＥＭを含まないこと以外は、かつ／又は投与しようとする組み換えポリペプチドの投与しようとするＦＶＩＩＩに対するモル比が５０未満であること以外は、上記処置と同じである、請求項３〜１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
投与されたＦＶＩＩＩの終末期半減期は、組み換えポリペプチドの同時投与により、参照処置と比較して好ましくは少なくとも１．２倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍又は少なくとも３倍増加し、ここで該参照処置は、投与しようとする組み換えポリペプチドがＨＬＥＭを含まないこと以外は、かつ／又は投与しようとする組み換えポリペプチドの投与しようとするＦＶＩＩＩに対するモル比が５０未満であること以外は、上記処置と同じである、請求項３〜１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ＨＬＥＭを有する上記ポリペプチドと同時投与されたＦＶＩＩＩの１％トラフレベルに達する期間は、参照処置と比較して延長されており、ここで該参照処置は、ＦＶＩＩＩが該ＨＬＥＭを有していない組み換えポリペプチドとともに投与されること以外は上記処置と同じである、請求項３〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ポリペプチドの血漿半減期は、内在性ＶＷＦの血漿半減期と比較して、かつ／又は正常ヒト血漿（ＮＨＰ）のＶＷＦの血漿半減期と比較して増加しており、ここでポリペプチドの血漿半減期は、内在性ＶＷＦよりも、かつ／又は正常ヒト血漿（ＮＨＰ）のＶＷＦの血漿半減期と比較して、好ましくは少なくとも１００％、少なくとも２００％又は好ましくは４００％高い、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
血液凝固障害が血友病Ａ又はフォン・ヴィルブランド病である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
組み換えポリペプチド及びＦＶＩＩＩタンパク質の同時投与は、（ｉ）組み換えポリペプチド及びＦＶＩＩＩタンパク質を含む単一の組成物で一緒に投与することにより、又は（ｉｉ）それぞれ別々の組成物で提供される組み換えポリペプチド（第一の化合物）及びＦＶＩＩＩタンパク質（第二の化合物）を投与すること［ここで第一の化合物は第二の化合物の前に、後に、又は同時に投与される］のいずれかにより達成される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ＦＶＩＩＩは血漿由来のタンパク質又は組み換えＦＶＩＩＩタンパク質である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
ＦＶＩＩＩは血管外に投与され、そしてここで組み換えポリペプチドと同時投与された後の投与されたＦＶＩＩＩのバイオアベイラビリティは、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも５％、好ましくは少なくとも７％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
組み換えポリペプチドのバイオアベイラビリティは、少なくとも３０％、好ましくは少なくとも３５％、より好ましくは少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
同時投与されたＦＶＩＩＩタンパク質の投薬量は、２５００ＩＵ／ｋｇ、１５００ＩＵ／ｋｇ、１０００ＩＵ／ｋｇ、６００ＩＵ／ｋｇ、５００ＩＵ／ｋｇ又は４００ＩＵ／ｋｇを超えない、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
上記組み換えポリペプチドのＦＶＩＩＩとの同時投与後に、ＦＶＩＩＩについての最大濃度（Ｃｍａｘ）は、少なくとも１０ｍＩＵ／ｍＬ、少なくとも２５ｍＩＵ／ｍＬ、少なくとも５０ｍＩＵ／ｍＬ、少なくとも１００ｍＩＵ／ｍＬ、少なくとも２００ｍＩＵ／ｍＬ、少なくとも３００ｍＩＵ／ｍＬ又は少なくとも４００ｍＩＵ／ｍＬのＦＶＩＩＩ活性、好ましくは発色ＦＶＩＩＩ活性である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
上記組み換えポリペプチドのＦＶＩＩＩとの同時投与後に、組み換えポリペプチドについてのクリアランス（ＣＬ）値は、参照処置と比較して、少なくとも２分の１、少なくとも５分の１又は少なくとも１０分の１に減少し、ここで該参照処置は、投与しようとする組み換えポリペプチドがＨＬＥＭを含まないこと以外は、かつ／又は投与しようとする組み換えポリペプチドの投与しようとするＦＶＩＩＩに対するモル比が５０未満であること以外は、上記処置と同じである、請求項３〜２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
上記組み換えポリペプチドのＦＶＩＩＩとの同時投与後に、投与されたＦＶＩＩＩのクリアランス（ＣＬ）値は、参照処置と比較して、好ましくは少なくとも１．５分の１、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも５分の１、少なくとも７．５分の１又は少なくとも１０分の１に減少し、ここで該参照処置は、投与しようとする組み換えポリペプチドがＨＬＥＭを含まないこと以外は、かつ／又は投与しようとする組み換えポリペプチドの投与しようとするＦＶＩＩＩに対するモル比が５０未満であること以外は上記処置と同じである、請求項３〜２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
組み換えポリペプチドの投与しようとするＦＶＩＩＩに対するモル比は、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００又は少なくとも１０００である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
請求項１〜２８のいずれか１項において定義された血液凝固障害の処置又は予防における使用のための医薬組成物であって、該組成物は、
（ｉ）請求項１〜２８のいずれか１項に記載の切断型フォン・ヴィルブランド因子（ＶＷＦ）を含む組み換えポリペプチド、及び
（ｉｉ）第ＶＩＩＩ因子タンパク質（ＦＶＩＩＩ）
を含み；
ここで医薬組成物内のＦＶＩＩＩタンパク質に対する組み換えポリペプチドのモル比は５０より大きく、そして該組み換えポリペプチドは、該ＦＶＩＩＩに結合することができ、該処置は、血液凝固障害に罹患している被験体に医薬組成物を血管外に投与することを含み、そして
該医薬組成物は血管外同時投与用に処方される、上記医薬組成物。
【請求項３０】
（ｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）タンパク質を含む第一の組成物、及び（ｉｉ）請求項１〜２８のいずれか１項に記載の使用のために提供される切断型フォン・ヴィルブランド因子（ＶＷＦ）を含む組み換えポリペプチドを含む第二の組成物を含む、血液凝固障害の処置又は予防における使用のための医薬キット。