(57)【要約】新規な糖尿病合併症の予防・治療剤を提供する。具体的には、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含む、ＡＧＥ２生成阻害ならびにＡＧＥ２血中濃度低下促進作用を有するオリゴペプチドを有効成分として含有する糖尿病合併症の予防・治療剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを有効成分として含有する糖尿病合併症の予防・治療剤。
【請求項２】
側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸が、リジン、アルギニン及びオルニチンからなる群から選ばれる、請求の範囲１に記載の糖尿病合併症の予防・治療剤。
【請求項３】
オリゴペプチドが２〜４残基のアミノ酸からなるものである、請求の範囲１又は２に記載の糖尿病合併症の予防・治療剤。
【請求項４】
オリゴペプチドが誘導体の形態である、請求の範囲１〜３のいずれかに記載の糖尿病合併症の予防・治療剤。
【請求項５】
オリゴペプチドが、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号１）、及びＡｒｇ−Ｌｙｓからなる群から選択される１種又は２種以上の混合物である、請求の範囲１に記載の糖尿病合併症の予防・治療剤。
【請求項６】
糖尿病、糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症及び耐糖能異常からなる群から選択される少なくとも１種用である、請求の範囲１〜５のいずれかに記載の糖尿病合併症の予防・治療剤。
【請求項７】
側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを有効成分として含有するＡＧＥ２生成阻害剤。
【請求項８】
側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを有効成分として含有するＡＧＥ２血中濃度低下促進剤。
【請求項９】
側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを有効成分として含有する、糖尿病合併症の予防・治療、ＡＧＥ２生成阻害、及び／又はＡＧＥ２血中濃度低下促進用の食品。
【請求項１０】
糖尿病合併症の予防・治療、ＡＧＥ２生成阻害、及び／又はＡＧＥ２血中濃度低下促進のために用いるものであるという表示を付した、請求の範囲９に記載の食品。
【請求項１１】
有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを患者に投与することを含む、糖尿病合併症の予防・治療方法。
【請求項１２】
有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを患者に投与することを含む、ＡＧＥ２生成の阻害方法。
【請求項１３】
有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを患者に投与することを含む、ＡＧＥ２血中濃度低下の促進方法。
【請求項１４】
糖尿病合併症の予防・治療薬の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドの使用。
【請求項１５】
ＡＧＥ２生成阻害剤の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドの使用。
【請求項１６】
ＡＧＥ２血中濃度低下促進剤の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドの使用。
【請求項１７】
側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物を糖尿病の予防または治療に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケージ。
【請求項１８】
側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物をＡＧＥ２生成の阻害に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケージ。
【請求項１９】
側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物をＡＧＥ２血中濃度低下の促進に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケージ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、新規な糖尿病合併症の予防・治療剤、詳しくはある種のオリゴペプチドを有効成分として含有する糖尿病合併症の予防・治療剤、該オリゴペプチドを含有するＡＧＥ２生成阻害剤、該オリゴペプチドを含有するＡＧＥ２血中濃度低下促進剤、及び該オリゴペプチドを含有する食品に関する。
【背景技術】  糖尿病は、唯一の血糖降下ホルモンであるインスリンの絶対的又は相対的不足に起因する代謝異常であり、持続的な高血糖を主な特徴とする。高血糖状態の持続は、インスリン不足に起因する代謝異常をさらに増悪させるのみならず、腎臓・神経・網膜などにおける細小血管障害や、動脈硬化などの大血管障害を引き起こし、健康な生活を著しく損なうこととなる。
糖尿病患者の治療の基本は血糖値をコントロールすることであるが、現状ではいかなる血糖降下剤による治療によっても血糖管理は十分でなく、日本国内においては糖尿病の治療を受けている患者の神経障害、網膜症、腎症、足壊疽の有病率はそれぞれ１５．６％、１３．１％、１５．２％、１．６％とかなり高い割合である（厚生労働省健康局総務課生活習慣病対策室平成１４年糖尿病実態調査、２００３）。したがって血糖管理に加えて糖尿病合併症の発症を予防し、進行を抑制する試みは極めて重要である。
近年、糖尿病合併症の発症に、非酵素的な糖化反応によって生成されるＡｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄｏｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＡＧＥｓ）（終末糖化産物）の関与が知られるようになった（Ｓｔｉｔｔ  Ｅｘｐ  Ｍｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ７５，９５−１０８，２００３）。ＡＧＥｓとは、血中のタンパク質あるいはペプチドと、グルコースあるいはその代謝産物や自動酸化分解物が結合してできる化合物の総称であり、これらＡＧＥｓは直接的に細胞の機能障害を誘発することが知られている。特にＡＧＥｓの中でもグリセルアルデヒドから生成されるＡＧＥ２は細胞毒性が強く、糖尿病合併症の発症・進行促進因子として重要な物質のひとつであると考えられている（Ｔａｋｅｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  ５９，１０９４−１１０５，２０００）。ＡＧＥｓによる細胞障害を軽減する試みとしては１）ＡＧＥｓの生成阻害、２）ＡＧＥｓ同士の架橋構造の形成阻害、３）ＡＧＥｓとその受容体との相互作用阻害などが報告されているが（Ｍｅｎｅ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｄｒｕｇｓ  ３，３１５−２０，２００３）、未だ十分な治療成績を上げられていないのが現状である。いずれの場合においても、慢性的な高血糖に起因するＡＧＥｓの生成が細胞障害の出発点となることから、１）の「ＡＧＥｓの生成阻害」は糖尿病合併症発症予防の手段として血糖コントロールの次に重要なアプローチのひとつと考えられるが、特に細胞毒性の強いＡＧＥ２の生成阻害に焦点をあてた試みはこれまでにほとんどなされていない。
ＡＧＥｓの生成を阻害することによって細胞障害を軽減させるアプローチとしては、アミノグアニジン、ピリドキサミン、リジン（Ｊｙｏｔｈｉｒｍａｙｉ  ＧＮ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｐｈｒｏｎ  ８７，１４８−５４，２００１）、ＯＰＢ−９１９５（Ｋａｌｏｕｓｏｖａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｂｌｏｏｄ  Ｐｒｅｓｓ  Ｒｅｓ  ２７，１８−２８，２００４）などを用いる治療法が報告されているが、これらはカルボキシメチルリジンやグルコース由来のＡＧＥ（ＡＧＥ１）の生成阻害を中心に検討がなされたものであり、臨床的にも十分な治療成績は上げられていない。
【発明の開示】
血糖管理に加えて糖尿病合併症の発症を予防し、進行を抑制する試みは極めて重要である。これまでに、糖尿病合併症の発症原因はいくつか知られているが、上記のように、高血糖に起因した原因物質としてＡＧＥｓが重要な役割を果たしていると考えられ、なかでも細胞毒性の強いＡＧＥ２は有力な原因物質のひとつである。従って、本発明が解決しようとする課題は、ＡＧＥ２の生成を抑制し、あるいはＡＧＥ２の血中濃度を低下させることを特徴とする糖尿病合併症の予防・治療剤の提供である。
本発明者らは、上記課題に鑑み、鋭意検討を行った結果、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸からなるオリゴペプチドにＡＧＥ２生成阻害作用ならびにＡＧＥ２血中濃度低下促進作用があることを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明者らは、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸である、リジン、アルギニン及びオルニチンを含むオリゴペプチドを種々作成し、ＡＧＥ２の生成阻害作用を検討した結果、これらアミノ酸を含むオリゴペプチドは、これらのアミノ酸単独と較べてオリゴペプチドとなることで、相乗的に自身がグリセルアルデヒドと反応してＡＧＥ２を形成し、この作用によって共存する通常の血中タンパク質とグリセルアルデヒドから生成されるＡＧＥ２の生成を阻害することを見出した。これらはリジン単体の組み合わせから予想されるよりもはるかに強い活性であり、上記アミノ酸がオリゴペプチドの形態をとることによって相乗的な効果を奏する。また、糖尿病モデルマウスへの投与により血清中のＡＧＥ２濃度が用量依存的に低下することを見出した。生体内ではこれらオリゴペプチドがグリセルアルデヒドと反応してＡＧＥ２となった後は、タンパク質からなるＡＧＥ２に比して排出あるいは分解されやすい特性を有することが考えられる。従って、本発明において用いられるオリゴペプチドは血中ＡＧＥ２レベルを抑制するため、糖尿病合併症の軽減及び予防に有効である。
本発明者らは、かかる知見に基づき、新規な糖尿病合併症の予防・治療剤に係る本発明を完成した。
本発明は以下の内容に関する；
（１）側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを有効成分として含有する糖尿病合併症の予防・治療剤；
（２）側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸が、リジン、アルギニン及びオルニチンからなる群から選ばれる、上記（１）に記載の糖尿病合併症の予防・治療剤；
（３）オリゴペプチドが２〜４残基のアミノ酸からなるものである、上記（１）又は（２）に記載の糖尿病合併症の予防・治療剤；
（４）オリゴペプチドが誘導体の形態である、上記（１）〜（３）のいずれか１項に記載の糖尿病合併症の予防・治療剤；
（５）オリゴペプチドが、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号１）、及びＡｒｇ−Ｌｙｓからなる群から選択される１種又は２種以上の混合物である、上記（１）に記載の糖尿病合併症の予防・治療剤；
（６）糖尿病、糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症及び耐糖能異常からなる群から選択される少なくとも１種用である、上記（１）〜（５）のいずれか１項に記載の糖尿病合併症の予防・治療剤；
（７）側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを有効成分として含有するＡＧＥ２生成阻害剤；
（８）側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを有効成分として含有するＡＧＥ２血中濃度低下促進剤；
（９）側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを有効成分として含有する、糖尿病合併症の予防・治療、ＡＧＥ２生成阻害、及び／又はＡＧＥ２血中濃度低下促進用の食品；
（１０）糖尿病合併症の予防・治療、ＡＧＥ２生成阻害、及び／又はＡＧＥ２血中濃度低下促進のために用いるものであるという表示を付した、上記（９）に記載の食品；
（１１）有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを患者に投与することを含む、糖尿病合併症の予防・治療方法；
（１２）有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを患者に投与することを含む、ＡＧＥ２生成の阻害方法；
（１３）有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを患者に投与することを含む、ＡＧＥ２血中濃度低下の促進方法；
（１４）糖尿病合併症の予防・治療薬の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドの使用；
（１５）ＡＧＥ２生成阻害剤の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドの使用；
（１６）ＡＧＥ２血中濃度低下促進剤の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドの使用；
（１７）側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物を糖尿病の予防または治療に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケージ；
（１８）側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物をＡＧＥ２生成の阻害に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケージ；
（１９）側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物をＡＧＥ２血中濃度低下の促進に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケージ。
【発明を実施するための最良の形態】  本発明の糖尿病合併症の予防・治療剤は、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むオリゴペプチドを有効成分として含有するものであって、薬理学的に許容されうる担体等を適宜含有するものであっても良い。本発明において側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸としては、リジン、アルギニン、オルニチンが挙げられ、それぞれＤ体、Ｌ体又はＤＬ体のいずれであっても良い。入手の容易性の観点からはＬ体が好ましい。
本発明において用いられるオリゴペプチドは、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含むペプチドであって、側鎖にアミノ基もしくはグアジニノ基を有するアミノ酸のみからなるペプチド又は側鎖にアミノ基もしくはグアジニノ基を有するアミノ酸とそれ以外のアミノ酸の両方からなるペプチドのどちらでも良い。また、本発明において用いられるオリゴペプチドは、好ましくは２〜５個、更に好ましくは２〜４個、もっとも好ましくは２〜３個のアミノ酸残基からなるペプチドが挙げられる。
具体的には、本発明において用いられるオリゴペプチドは、少なくとも２残基の側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を含み、例えば、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ａｒｇ、Ｏｒｎ−Ｌｙｓ、Ｏｒｎ−Ａｒｇ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｘ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｘ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｘ−Ａｒｇ、Ｌｙｓ−Ｘ−Ｏｒｎ、Ａｒｇ−Ｘ−Ｏｒｎ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号１）、Ｌｙｓ−Ｘ−Ｌｙｓ−Ｘ（配列番号２）、Ｘ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｘ（配列番号３）、Ａｒｇ−Ｘ−Ａｒｇ−Ｘ（配列番号４）、Ｘ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｘ（配列番号５）、Ｘ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｘ（配列番号６）、Ｌｙｓ−Ｘ−Ａｒｇ−Ｘ（配列番号７）、Ｘ−Ｌｙｓ−Ｘ−Ａｒｇ（配列番号８）、Ｘ−Ｏｒｎ−Ｌｙｓ−Ｘ（配列番号９）、Ｏｒｎ−Ｘ−Ｌｙｓ−Ｘ（配列番号１０）、Ｘ−Ｏｒｎ−Ｘ−Ｌｙｓ（配列番号１１）、Ｏｒｎ−Ｘ−Ａｒｇ−Ｘ（配列番号１２）、Ｘ−Ｏｒｎ−Ａｒｇ−Ｘ（配列番号１３）、Ｏｒｎ−Ａｒｇ−Ｘ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号１４）、Ｘ−Ａｒｇ−Ｘ−Ａｒｇ−Ｘ（配列番号１５）、Ｘ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｘ−Ｘ（配列番号１６）、Ｘ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｘ（配列番号１７）、Ｘ−Ｏｒｎ−Ｘ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号１８）（Ｘはすべてのアミノ酸から選ばれるアミノ酸である。また、上記配列は、Ｎ末からＣ末、Ｃ末からＮ末の両順を含む。）などの組み合わせが挙げられるが、特にこれらに限定されるものではない。好適なオリゴペプチドの例として、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号１）、及びＡｒｇ−Ｌｙｓ（上記配列は、Ｌ体のアミノ酸からなり、Ｎ末からＣ末の順序である。）からなる群から選択されるオリゴペプチドが挙げられる。また、オリゴペプチドは１種又は２種以上を混合して用いることも出来る。
本発明において用いられるオリゴペプチドは（１）化学的に合成する方法、又は（２）酵素的な反応により合成する方法等の公知手法を適宜用いることによって取得することができる。本発明において用いられるオリゴペプチドは、含まれるアミノ酸の残基数が２〜５残基と比較的短いので、化学的に合成する方法が簡便である。
化学的に合成する場合は、該オリゴペプチドをペプチド合成機を用いて合成あるいは半合成することにより行うことができる。化学的に合成する方法としては、例えばペプチド固相合成法が挙げられる。そのようにして合成したオリゴペプチドは通常の手段、例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等によって精製することができる。このようなペプチド固相合成法、およびそれに続くペプチド精製はこの技術分野においてよく知られたものである。
また、本発明において用いられるオリゴペプチドがジペプチド又はトリペプチドである場合には、当該オリゴペプチドを、酵素的な反応により生産することも出来る。例えば、国際公開パンフレットＷＯ２００４／０１１６５３号に記載の方法を用いることが出来る。即ち、一方のアミノ酸又はジペプチドのカルボキシル末端をエステル化又はアミド化したアミノ酸又はジペプチドと、アミノ基がフリーの状態であるアミノ酸（例えばカルボキシル基が保護されたアミノ酸）とを、ペプチド生成酵素の存在下において反応せしめ、生成したジペプチド又はトリペプチドを精製することによっても生産することもできる。ペプチド生成酵素としては、ペプチドを生成する能力を有する微生物の培養物、該培養物より分離した微生物菌体、又は、該微生物の菌体処理物、又は、該微生物に由来するペプチド生成酵素が挙げられる。
本発明において用いられるオリゴペプチドを食品として含有させる場合は、上記に述べた方法で生産したオリゴペプチドを食品に添加して含有させる以外に、タンパク質の分解物として含有させることもできる。例えば、リジン、アルギニンをその構成アミノ酸として多く含有するタンパク質を、酸又はプロテアーゼによって加水分解し、上記オリゴペプチドを生成させ、それをそのまま食品に含有させることもできる。
本発明において用いられるオリゴペプチドには、オリゴペプチドの誘導体も含まれる。具体的にはオリゴペプチドを経口投与した際に吸収時の分解を抑えるべく適宜改変を加えたプロドラッグの形態にあっても良く、ペプチドのＮ末端又は側鎖のアミノ基などの末端アミノ基をアシル基、アルキル基などの保護基を用いて保護したもの、又はペプチドのＣ末端カルボン酸をエステル基などの保護基を用いて保護したものや、オリゴペプチド中の一部のアミノ酸が対応するＤ−アミノ酸に置換されたもの等も含まれる。アシル化の例としては、リジン残基側鎖に直鎖状又は分岐状の炭素原子６〜１０個有するアシル基を付与したものが挙げられる。更に、これらの誘導体には、Ｃ末端アミノ酸残基のカルボキシル基が、アルコール基に置換されたものや、Ｃ末端アミノ酸残基がアミノ基に置換されたものも含まれる。このように誘導体型に変換することにより、体内動態が改善されることもあり、好適な場合もある。また、誘導体として、リジンには、ヒドロキシリジンも含まれる。
保護基の形成及び除去については公知の方法を適用することが出来る。代表的なアミノ保護基としては、例えば、アシル基（ホルミル基、アセチル基など）、アルキル基（イソプロピル基など）、アルコキシカルボニル基（ブトキシカルボニル基など）、フルオレニルメトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられ、Ｎ末端アミノ酸残基や塩基性アミノ酸残基側鎖中のアミノ基が好適に保護される。また、代表的なカルボキシル保護基としては、例えばベンジルエステル、メチルエステル、ｔ−ブチルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル等が挙げられ、Ｃ末端アミノ酸残基や酸性アミノ酸残基側鎖中のカルボキシル基が好適に保護される。
本発明において用いられるオリゴペプチドは塩の形態をも包含する。本発明のオリゴペプチドが塩の形態を成し得る場合、その塩は薬理学的に許容されるものであればよく、例えば、式中のカルボキシル基等の酸性基に対しては、アンモニウム塩、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アルミニウム塩、亜鉛塩、トリエチルアミン、エタノールアミン、モルホリン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、ジシクロヘキシルアミン等の有機アミンとの塩、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸との塩を挙げることができる。式中に塩基性基が存在する場合の塩基性基に対しては、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、臭化水素酸などの無機酸との塩、酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、コハク酸、タンニン酸、酪酸、ヒベンズ酸、パモ酸、エナント酸、デカン酸、テオクル酸、サリチル酸、乳酸、シュウ酸、マンデル酸、リンゴ酸等の有機カルボン酸との塩、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機スルホン酸との塩を挙げることができる。
本発明で用いられるオリゴペブチドは、インビトロとインビボ（血中）の両方でＡＧＥ２生成を阻害し、またインビボでＡＧＥ２の血中濃度低下を促進する作用を有する。上記オリゴペプチド自身反応して、ＡＧＥ２となりうるが、自身がＡＧＥ２となることで、より分子量の大きいタンパク質やペプチドからＡＧＥ２が生成されることを阻害すると考えられる。上記オリゴペプチドは、インビボの血中で、血中タンパク質やペプチドのＡＧＥ２への生成を阻害し、自身がＡＧＥ２となるが、そのＡＧＥ２は速やかに体外に排出されるか、分解されることによって血中のＡＧＥ２濃度低下を促進すると考えられる。
本発明で用いられるオリゴペプチドは、ヒトをはじめウシ、ウマ、ブタ、イヌ、ネコ、マウス、ラット等の哺乳動物に対し優れたＡＧＥ２生成阻害作用、ＡＧＥ２血中濃度低下促進作用を有し、従って、これらのＡＧＥ２生成阻害及び／又は血中濃度低下促進が有効な疾患、具体的には糖尿病合併症の予防・治療に有用である。
本発明の糖尿病合併症の予防・治療剤の対象疾患として、糖尿病、糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症又は耐糖能異常等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
本発明の糖尿病合併症の予防・治療剤の投与方法としては、経口、非経口のいずれであってもよく、投与形態としては、錠剤、散剤、丸剤、顆粒剤、糖衣剤、乳化剤、カプセル剤、シロップ剤、溶液剤、及び懸濁剤等の経口剤、並びに注射剤、エアゾール剤、及び坐剤等の非経口剤が挙げられるが、簡便性の観点からは経口投与形態が好ましい。
本発明の医薬製剤は、上記オリゴペプチドと、薬理学的に許容される担体を含有しうる。薬理学的に許容される担体として、当業者公知のように、例えば、賦形剤（例えば、乳糖、ショ糖、デンプン、Ｄ−マンニトール等）、結合剤（例えば、セルロース、ショ糖、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等）、崩壊剤（例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロース等）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム等）、界面活性剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム等）、溶剤（例えば、水、食塩水、大豆油等）、軟膏基剤（例えば、パラフィン等）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム等）、保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル等）などが挙げられるが、これらに限定されない。
注射剤の場合は、安定性の点から、バイアル等に充填後、冷凍し、通常の凍結乾燥処理により水分を除き、使用直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。
本発明の糖尿病合併症の予防・治療剤の投与量は、患者の年齢、体重、疾患の程度により異なるが、経口の場合、通常、成人１日当たり、上記オリゴペプチドを、１ｍｇ〜５０ｇ、好ましくは１０ｍｇ〜２０ｇ、特に好ましくは５０ｍｇ〜１５ｇを１回から数回に分けて服用するのが適当である。上記オリゴペプチドは、製剤中に１種であっても、複数種含有されていてもよい。複数種の場合、合計量が上記範囲内であればよい。
本発明は、上記オリゴペプチドを含有する食品（飲料を含む）にも関する。本発明は、有効成分がアミノ酸であるため、安全性に優れており、食品の形態でも簡便に使用することができる。食品には、食品として摂取されるもの以外に、栄養を補助する目的で摂取される、健康食品、食品添加物、栄養補助食品等も含まれる。本発明を食品に使用するには、特に困難はなく、例えばジュース、牛乳、菓子、ゼリー等に混ぜて飲食することができる。また、健康食品、食品添加物、栄養補助食品等として使用する場合、例えば錠剤、カプセル、散剤、顆粒、懸濁剤、チュアブル剤、シロップ剤等の形態に調製することができる。さらに、このような食品を保健機能食品として提供することも可能であり、この保健機能食品には、糖尿病合併症の予防・治療、ＡＧＥ２生成阻害、及び／又はＡＧＥ２血中濃度低下促進のために用いるものであるという表示を付した食品、特に特定保健用食品なども含まれる。
上記オリゴペプチドは、１種もしくは複数種を、又はタンパク質の分解物（加水分解産物）のまま（上記オリゴペプチドを含有する場合）、本発明の食品に含有させても良い。本発明の食品は、上記オリゴペプチド換算で、１日当たり１０ｍｇ〜５０ｇ程度摂取することが望ましく、特に好ましくは５０ｍｇ〜１５ｇ程度である。複数種の場合、合計量が上記範囲内であればよい。
本発明の糖尿病合併症の予防・治療剤は通常用いられる糖尿病治療剤、糖尿病合併症の予防・治療剤と併用して用いることも出来る。通常用いられる糖尿病治療剤、糖尿病合併症の予防・治療剤とは、例えば、インスリン製剤、インスリン誘導体、インスリン様作用剤、インスリン分泌促進剤、インスリン抵抗性改善剤、ビグアナイド剤、糖新生阻害剤、糖吸収阻害剤、腎糖再吸収阻害剤、β３アドレナリン受容体アゴニスト、グルカゴン様ペプチド−１（７−３７）、グルカゴン様ペプチド−１（７−３７）類縁体、グルカゴン様ペプチド−１受容体アゴニスト、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤、アルドース還元酵素阻害剤、終末糖化産物生成阻害剤、グリコーゲン合成酵素キナーゼ−３阻害薬、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害薬、抗高脂血症薬、食欲抑制剤、リパーゼ阻害薬、血圧降下剤、末梢循環改善薬、抗酸化剤、糖尿病性神経障害治療薬などの１種又は２種以上の組み合わせや混合物が挙げられる。
組み合わせて使用される薬剤の具体的な化合物や処置すべき好適な疾患について下記の通り例示するが、本発明の内容はこれらに限定されるものではなく、具体的な化合物においてはそのフリー体、及び／又はその他の薬理学的に許容される塩を含む。
インスリン製剤としては、ＮＰＨ、レンテ、ウルトラレンテ、経肺吸収可能なインスリンなどが挙げられる。
インスリン誘導体とは、インスリンから誘導されるタンパク質又はペプチドでインスリン作用を保持しているものをいい、例えばリスプロ、Ｂ１０Ａｓｐ、ｇｌａｒｇｉｎｅなどが挙げられる。
インスリン様作用剤とは、細胞への糖取り込み促進作用などのインスリンの生理作用を、ある程度インスリンに依存せずに発揮することによって、血糖降下作用を発揮する、インスリン誘導体以外のものをいい、例えばインスリン受容体キナーゼ刺激薬（例えばＬ−７８３２８１、ＴＥＲ−１７４１１、ＣＬＸ−０９０１、ＫＲＸ−６１３など）、バナジウムなどが挙げられる。
インスリン分泌促進剤とは、膵臓β細胞に作用し、血液中へのインスリン分泌を増加させることによって、血糖降下作用を発揮するものをいい、例えばスルホニルウレア剤（例えば、トルブタミド、クロルプロパミド、トラザミド、アセトヘキサミド、グリクラジド、グリメピリド、グリピジド、グリベンクラミド（グリブリド）など）、メグリチニド類（例えば、ナテグリニド、レパグリニド、ミチグリニドなど）、スルホニルウレア剤・メグリチニド類以外のＡＴＰ感受性カリウムチャネル阻害剤（例えばＢＴＳ−６７−５８２など）などが挙げられる。
インスリン抵抗性改善剤とは、インスリンの標的組織におけるインスリンの作用を増強することによって、血糖降下作用を発揮するものをいい、例えば、ペルオキシソーム増殖薬活性化受容体（ＰＰＡＲ）γアゴニスト（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、シグリタゾンなどのチアゾリジンジオン系化合物、あるいはＧＩ−２６２５７０、ＧＷ−１９２９、ＪＴＴ−５０１、ＹＭ−４４０などの非チアゾリジンジオン系化合物など）、ＰＰＡＲγアンタゴニスト（例えばｂｉｓｐｈｅｎｏｌ  Ａ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ、ＬＧ−１００６４１など）、ＰＰＡＲαアゴニスト（クロフィブラート、ベザフィブラート、クリノフィブラートなどのフィブラート系化合物、あるいは非フィブラート系化合物など）、ＰＰＡＲα／γアゴニスト（例えばＫＲＰ−２９７など）、レチノイドＸ受容体アゴニスト（例えばＬＧ−１００２６８など）、レチノイドＸ受容体アンタゴニスト（例えばＨＸ５３１など）、プロテインチロシンホスファターゼ−１Ｂ阻害剤（例えばＰＴＰ−１１２など）などが挙げられる。
ビグアナイド剤とは、肝臓における糖新生抑制作用や組織での嫌気的解糖促進作用あるいは末梢におけるインスリン抵抗性改善作用などによって、血糖降下作用を発揮するものをいい、例えば、メトホルミン、フェンホルミン、ブホルミンなどが挙げられる。
糖新生阻害剤とは、主に糖新生を阻害することによって、血糖降下作用を発揮するものをいい、例えば、グルカゴン分泌抑制剤（例えばＭ＆Ｂ  ３９８９０Ａなど）、グルカゴン受容体アンタゴニスト（例えばＣＰ−９９７１１、ＮＮＣ−９２−１６８７、Ｌ−１６８０４９、ＢＡＹ２７−９９５５など）、グルコース−６−ホスファターゼ阻害剤などが挙げられる。
糖吸収阻害剤とは、食物中に含まれる炭水化物の消化管における酵素消化を阻害し、体内への糖の吸収を阻害又は遅延することによって、血糖降下作用を発揮するものをいい、例えば、α−グルコシダーゼ阻害剤（例えばアカルボース、ボグリボース、ミグリトールなど）、α−アミラーゼ阻害剤（例えばＡＺＭ−１２７など）などが挙げられる。
腎糖再吸収阻害剤とは、腎尿細管中の糖の再吸収を阻害することによって、血糖降下作用を発揮するものをいい、例えば、ナトリウム依存性グルコース輸送体阻害剤（例えばＴ−１０９５、フロリジンなど）などが挙げられる。
β３アドレナリン受容体アゴニストとは、脂肪細胞におけるβ３アドレナリン受容体を刺激し、脂肪酸酸化を亢進させてエネルギーを消費させることによって、肥満症、高インスリン血症の改善作用を発揮するものをいい、例えば、ＣＬ−３１６２４３、ＴＡＫ−６７７などが挙げられる。
グルカゴン様ペプチド−１（７−３７）類縁体としては、例えば、エキセンジン−４、ＮＮ−２２１１などが挙げられ、グルカゴン様ペプチド−１受容体アゴニストとしては、例えば、ＡＺＭ−１３４などが挙げられ、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤としては、例えば、ＮＶＰ−ＤＰＰ−７２８などが挙げられる。グルカゴン様ペプチド−１類縁体、グルカゴン様ペプチド−１受容体アゴニスト、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤及びグルカゴン様ペプチド−１は、細胞におけるグルカゴン様ペプチド−１の作用を模倣又は増強することによって、糖尿病改善作用を発揮するものをいう。
アルドース還元酵素阻害剤とは、糖尿病性合併症の処置に好ましいもののうち、糖尿病性合併症を発症する組織において認められる、高血糖状態の持続に起因するポリオール代謝経路の亢進によって過剰に蓄積される細胞内ソルビトールを、アルドース還元酵素を阻害することによって低下させるものをいい、例えば、エパルレスタット、トルレスタット、フィダレスタット、ゼネレスタットなどが挙げられる。
終末糖化産物生成阻害剤とは、糖尿病性合併症の処置に好ましいもののうち、糖尿病状態における高血糖状態の持続によって亢進する終末糖化産物の生成を阻害することによって細胞障害を軽減させるものをいい、本発明の糖尿病合併症予防・治療剤もこのカテゴリーに含まれるが、本発明の糖尿病合併症予防・治療剤と併用する場合は、本発明の糖尿病合併症予防・治療剤以外であって、例えば、ＮＮＣ−３９−００２８、ＯＰＢ−９１９５などが挙げられる。
グリコーゲン合成酵素キナーゼ−３阻害薬としては、例えば、ＳＢ−２１６７６３、ＣＨＩＲ−９８０１４などが挙げられ、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害薬としては、例えばＣＰ−９１１４９などが挙げられる。
抗高脂血症薬としては、例えば、ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムＡ還元酵素阻害剤（例えばプラバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチンなど）、フィブラート系薬剤（例えばクロフィブラート、ベザフィブラート、シンフィブラートなど）、胆汁酸排泄促進薬などが挙げられる。
食欲抑制薬としては、例えば、シブトラミン、マジンドールなどが挙げられ、リパーゼ阻害薬としては、例えば、オルリスタットなどが挙げられる。
血圧降下剤としては、例えば、アンジオテンシン変換酵素阻害薬（例えばカプトプリル、アラセプリルなど）、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬（例えばカンデサルタンシレキセチル、バルサルタンなど）、カルシウム拮抗薬（例えばシルニジピン、アムロジピン、ニカルジピンなど）、利尿薬（例えばトリクロルメチアジド、スピロノラクトンなど）、交感神経遮断薬（例えばクロニジン、レセルピンなど）などが挙げられる。
末梢循環改善薬としては、例えば、イコサペント酸エチルなどが挙げられる。
抗酸化剤としては、例えば、リポ酸、プロブコールなどが挙げられる。
糖尿病性神経障害治療薬としては、例えば、メコバラミン、塩酸メキシレチンなどが挙げられる。
【実施例】  以下実施例を示して本発明をさらに詳しく説明するが、実施例は本発明の説明のために記載するものであり、本発明を限定するものではない。尚、実施例で用いたオリゴペプチドの化学式において、アミノ酸はＬ体であり、配列順序は、Ｎ末からＣ末の順序である。
〔実施例１〕オリゴペプチドとグリセルアルデヒドとの反応によるＡＧＥ２生成能
１０ｍＭのＬｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号１）のいずれかを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に１００ｍＭのグリセルアルデヒドを添加して３７℃で１週間反応させた。１週間後に反応液中のＡＧＥ２濃度を測定した。測定にはウサギより調製した抗ＡＧＥ２ポリクローナル抗体を用い、常法に従ってＥＬＩＳＡ法により行った。
（結果）
【表１】
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各ペプチドのＡＧＥ２生成能はＬｙｓの数が増えるにしたがって上昇することが明らかとなった。その生成能はＬｙｓ−ＬｙｓでＬｙｓ単独の約１０倍であり、数が増えるにしたがって相乗的にＡＧＥ２の生成量が増加した。したがって、アミノ基を側鎖に有するアミノ酸のオリゴペプチドは相乗的にＡＧＥ２の生成促進作用を発現することが確かめられた。
〔実施例２〕オリゴペプチドによるグリセルアルデヒドと血清アルブミンのＡＧＥ２生成阻害能
１０ｍＭのグリセルアルデヒドと１０ｍｇ／ｍｌの牛血清アルブミンを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）にＬｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号１）、Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｌｙｓのいずれかを０、０．１、０．３、１．０又は３．０ｍＭになるように添加して３７℃にて３日間反応させた。３日後に反応液中のＡＧＥ２濃度を測定し、各ペプチド又はアミノ酸によるＡＧＥ２生成阻害のＩＣ５０値を算出した。ＡＧＥ２の測定にはウサギより調製した抗ＡＧＥ２ポリクローナル抗体を用い、常法に従ってＥＬＩＳＡ法により行った。
（結果）
【表２】
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グリセルアルデヒドと血清アルブミンを一定時間混合して反応させてできるＡＧＥ２はＬｙｓ又はＡｒｇおよびそれらを含むオリゴペプチドが共存することでＡＧＥ２化されたアルブミンの蓄積を阻害することが明らかとなった。また、オリゴペプチドの活性はＬｙｓ単独に比べて相乗的に上昇することが確認された。
〔実施例３〕Ｌｙｓ−Ｌｙｓによる糖尿病モデルマウス（ｄｂ／ｄｂマウス）の血清中ＡＧＥ２濃度低下作用
７週齢の雄性ｄｂ／ｄｂマウスを無作為に４群にわけ（１群３匹）、飲み水として蒸留水、１０ｍＭ  Ｌｙｓ−Ｌｙｓ溶液、３０ｍＭ  Ｌｙｓ−Ｌｙｓ溶液、又は１００ｍＭ  Ｌｙｓ−Ｌｙｓ溶液のいずれかを１０日間自由摂取させた後心臓より採血をおこない、血清中のＡＧＥ２濃度を測定した。なお測定にはウサギより調製した抗ＡＧＥ２ポリクローナル抗体を用い、常法に従ってＥＬＩＳＡ法により行った。
（結果）
【表３】
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血清中のＡＧＥ２濃度は摂取させたＬｙｓ−Ｌｙｓ溶液のＬｙｓ−Ｌｙｓ濃度依存的に減少していた。
したがって、上記実施例１および２の結果ともあわせて判断するとＬｙｓ−Ｌｙｓは自らがＡＧＥ２化された後、蓄積することなく体外に排出されたか、分解されることによって血清中のＡＧＥ２濃度の低下が認められたものと考えられる。
【産業上の利用可能性】  本発明の新規な糖尿病合併症の予防・治療剤は、優れたＡＧＥ２の生成阻害作用及び血中ＡＧＥ２濃度低下促進作用を有し、糖尿病合併症の予防及び／又は治療に有用である。また、本発明により、優れたＡＧＥ２生成阻害剤及び血中ＡＧＥ２濃度低下促進剤が提供される。更に、本発明により、糖尿病合併症の予防・治療、ＡＧＥ２生成阻害、及び／又はＡＧＥ２血中濃度低下促進用の食品が提供される。
本発明は、新規な糖尿病合併症の予防・治療薬を提供することが出来るので、医薬の分野で利用可能である。
【配列表フリーテキスト】  配列番号１：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。
配列番号２：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号３：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号４：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号５：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号６：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号７：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号８：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号９：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。１番目のＸａａは任意のアミノ酸、２番目のＸａａはオルニチン、４番目のＸａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号１０：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。１番目のＸａａはオルニチン、２番目のＸａａは任意のアミノ酸、４番目のＸａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号１１：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。１番目のＸａａは任意のアミノ酸、２番目のＸａａはオルニチン、３番目のＸａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号１２：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。１番目のＸａａはオルニチン、２番目のＸａａは任意のアミノ酸、４番目のＸａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号１３：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。１番目のＸａａは任意のアミノ酸、２番目のＸａａはオルニチン、４番目のＸａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号１４：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。１番目のＸａａはオルニチン、３番目のＸａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号１５：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号１６：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号１７：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。
配列番号１８：ＡＧＥ２生成阻害作用を有するペプチド。１番目のＸａａは任意のアミノ酸、２番目のＸａａはオルニチン、３番目のＸａａは任意のアミノ酸を示す。
本出願は、日本で出願された特願２００４−０９１７６７（出願日：２００４年３月２６日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【配列表】
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【国際調査報告】
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