【手続補正書】
【提出日】令和1年12月26日(2019.12.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作することができるヒト免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法であって、前記方法が、
ａ）免疫エフェクター細胞を含む凍結インプットサンプル、例えば血漿アフェレーシスサンプルを用意し、
ｂ）前記凍結インプットサンプルを融解させて、融解サンプルを生成し、および
ｃ）前記融解サンプルに対して水簸を行い、免疫エフェクター細胞を収集することによって、ＣＡＲの発現に好適である免疫エフェクター細胞を含むアウトプットサンプルを生成すること
を含み、適宜：
（ｉ）前記方法が、前記融解サンプルの粘度を、例えば、前記融解サンプルに等張液、例えばＰＢＳを添加することにより、調整する工程を含む、および／または
（ｉｉ）前記水簸が、
１）約３０〜８２ｍＬ／分もしくは５０〜８０ｍＬ／分の流量を使用して行われ、および／または収集容量が、各画分について約２５０〜１２５０ｍＬもしくは３００〜１０００ｍＬであり、例えば、前記水簸が、約３０、４０、５０、６０、７０、７２、もしくは８２ｍＬ／分、例えば、約７０または７２ｍＬ／分の流量を使用して行われ、
２）約２５０、４００、５００、９００、もしくは９７５ｍＬ、例えば、約４００もしくは９７５ｍＬの収集容量を使用して行われ；および／または
３）約２４００ｒｐｍで行われる、
方法。
【請求項２】
ｄ）流動条件下でＣＤ１９＋細胞を枯渇させること、
ｅ）イオジキサノールを含む媒体、例えば、６０％イオジキサノール水溶液、例えばＯｐｔｉｐｒｅｐ媒体であって／あるか、フィコールより高い密度（例えば、１．０７７ｇ／ｍｌより高い、例えば約１．３２ｇ／ｍｌ）を有する媒体を使用して、密度遠心分離を実施すること、
ｆ）デキストロースおよび／または塩化ナトリウムを含む緩衝液、例えばＤ５媒体（５％デキストロースおよび０．４５％塩化ナトリウム）を用いる洗浄工程、例えば、ＣＳ５（ＣｅｌｌＳａｖｅｒ５＋）装置を使用して行われる洗浄工程を（例えば、前記融解サンプルに対して）実施すること、ならびに
ｇ）流動条件下でＣＤ３／ＣＤ２８＋細胞の陽性選択を実施すること
の１、２、３または全てをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記インプットサンプルが
少なくとも１０％、１５％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３５％もしくは４０％単球、
少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％単球、
６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％もしくは２０％未満Ｔ細胞、
少なくとも１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％Ｂ細胞、および／または
少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％腫瘍細胞、例えば、リンパ芽球
を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記アウトプットサンプルが
２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．２％もしくは０．１％未満単球、
前記インプットサンプルと比較して百分率５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％もしくは１％未満の単球、
少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％もしくは９９．９％Ｔ細胞、
前記インプットサンプルと比較して百分率少なくとも５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％もしくは１％Ｔ細胞、
ＣＤ８＋Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞、
２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．２％もしくは０．１％未満Ｂ細胞、
少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．７％もしくは９９．９％ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞、
少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．７％もしくは９９．９％ＣＤ８＋ＣＤ２５＋細胞、
２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．２％もしくは０．１％未満腫瘍細胞、および／または
前記インプットサンプルと比較して百分率５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％もしくは１％未満の腫瘍細胞
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％Ｔ細胞のＴ細胞収量回収率を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＣＡＲをコードする核酸と前記アウトプットサンプルを接触させる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法であって、適宜、前記方法が、ＣＡＲをコードする核酸を前記アウトプットサンプル中の前記免疫エフェクター細胞の１以上に導入することを含み、適宜、前記ＣＡＲが、抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、一次シグナル伝達ドメインおよび／または共刺激シグナル伝達ドメインを含むシグナル伝達ドメインとを含み、ならびに適宜、前記形質導入が、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％または５０％の形質導入効率をもたらす、方法。
【請求項７】
ＣＡＲをコードする核酸と前記アウトプットサンプルを接触させた後、前記アウトプットサンプルが、
少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％ＣＡＲ＋ＣＤ４＋セントラルメモリー細胞を含む、
少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％もしくは５０％ＣＡＲ＋細胞を含む、
少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％ＣＡＲ＋ＣＤ８＋セントラルメモリー細胞を含む、
形質導入された細胞１個あたり１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２もしくは０．１ｐｇ未満ＩＦＮ−ガンマを産生する；および／または
少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５もしくは３０の細胞毒性レベル（例えば、ＥＣ５０ｒｅｃ）を有する、
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記形質導入効率をアッセイする工程、ならびに／またはデキストロースおよび／もしくは塩化ナトリウムを含む緩衝液、例えばＤ５媒体を用いて、例えばＣＳ５＋装置を使用して、前記インプットサンプルに対する洗浄工程を実施することをさらに含む、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記インプットサンプルが、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を包含する、１種または複数の急性白血病；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を包含する、１種または複数の慢性白血病；Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞の新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型または大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常および骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞の新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、前白血病状態、非定型的および／または非典型的ながん、悪性腫瘍、前がん状態もしくは増殖性疾患を包含する、追加の血液がんもしくは血液学的状態、ならびにそれらのあらゆる組合せからなる群から選択されるがんを有する患者からのものである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記アウトプットサンプル中の細胞上の１以上の細胞表面マーカー、例えば、ＣＤ４５、ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ２５もしくはＣＤ１４をアッセイする工程、ならびに／または
免疫エフェクター細胞を、例えば、形質導入前に、例えば、ＣＤ３および／もしくはＣＤ２８に結合する試薬、例えば、ＣＤ３および／もしくはＣＤ２８抗体にカップリングされている基質（例えばビーズ）と接触させることにより刺激する工程
をさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
水簸から５画分（例えば、第１の画分、第２の画分、第３の画分、第４の画分、および第５の画分）を収集することをさらに含む請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法であって、適宜：
（ｉ）第１の画分が、約３０〜５０ｍＬ／分（例えば、約３０ｍＬ／分）の流量を使用して収集される、
第２の画分が、約０〜５０ｍＬ／分（例えば、約３０ｍＬ／分）の流量を使用して収集される、
第３の画分が、約５０〜８０ｍＬ／分（例えば、約７０ｍＬ／分）の流量を使用して収集される、
第４の画分が、約５０〜８０ｍＬ／分（例えば、約７２ｍＬ／分）の流量を使用して収集される、および／または
第５の画分が、約８０〜１５０ｍＬ／分（例えば、約８２ｍＬ／分）の流量を使用して収集される；
（ｉｉ）第１、第３、または第４の画分が、約１８００〜２４００ｒｐｍ（例えば、約２４００ｒｐｍ）での遠心分離を使用して収集される、および／または
第２の画分が、約０〜２４００ｒｐｍ（例えば、約２４００ｒｐｍ）での遠心分離を使用して収集される；および／または
（ｉｉｉ）第１の画分が、約９００ｍＬの収集容量を使用して収集される、
第２の画分が、約５００ｍＬの収集容量を使用して収集される、
第３の画分が、約９７５ｍＬの収集容量を使用して収集される、
第４の画分が、約４００ｍＬの収集容量を使用して収集される、および／または
第５の画分が、約２５０ｍＬの収集容量を使用して収集される、
方法。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法を使用して得られる、反応混合物。
【請求項１３】
（ｉ）少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％Ｔ細胞と１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％未満単球、ここで、前記反応混合物中の細胞の総数が合計１００％であり、前記Ｔ細胞の１以上がＣＡＲを発現する；または
（ｉｉ）合計少なくとも１ｘ１０６、２ｘ１０６、５ｘ１０６、１ｘ１０７、２ｘ１０７、５ｘ１０７、１ｘ１０８、２ｘ１０８、もしくは５ｘ１０８個の細胞、
１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％もしくは１％未満Ｂ細胞および／または
１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％もしくは１％未満がん細胞、例えばリンパ芽球
を含む、請求項１２に記載の反応混合物。