(57)【要約】本発明はＧＰＲ１１９としての活性を有し、２型糖尿病を含む代謝障害の治療に有用な治療化合物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2012520284.tif 000115
［式中、
ｐは１または２であり；
ｐが２のとき、ＺはＮ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｎ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、またはＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルで適宜置換されていてもよいＣ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４ハロアルキルおよびハロゲンから選択される１もしくは２個の基で適宜置換されていてもよいＮ−ヘテロアリールであり；
ｐが１のとき、Ｚは−Ｎ−ＣＨ２−フェニル（ここで、該フェニルはＣ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキルおよびハロから独立して選択される１または２個の基で適宜置換されていてもよい）でもよく；
Ａはパラ置換フェニルまたは１もしくは２個の窒素原子を含むパラ置換６員ヘテロアリール環であり；
ＢはＮ、ＯおよびＳから選択される１個もしくはそれ以上のヘテロ原子を含む５員ヘテロアリール環、または１もしくは２個の窒素原子を含むパラ置換６員ヘテロアリール環であり；
Ｂが５員ヘテロアリール環であるとき、Ｘは−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−または−ＣＲ７Ｈ−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−であり；Ｂが６員ヘテロアリール環であるとき、Ｘは−Ｏ−または−ＣＲ６Ｈ−Ｏ−であり；
Ｒ１は水素、ハロ、シアノ、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４ハロアルキルであり；
ｑは１または２であり；
Ｒ２は
【化２】
2012520284.tif 000116
１個もしくはそれ以上のハロ基で適宜置換されていてもよいフェニル、または１個もしくはそれ以上のハロもしくはメチル基で適宜置換されていてもよいピリジルであり；
Ｒ３は独立してハロまたはメチルであり；
ｎは０または１であり；
ｍは０、１または２であり；
Ｒ４はＣ２−６アルキルまたはＣ３−６シクロアルキル（ここで、該シクロアルキルはＣ１−４アルキルで適宜置換されていてもよい）であり；
Ｒ５は水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ６およびＲ７は独立して水素またはＣ１−２アルキルである］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
式（Ｉａ）：
【化３】
2012520284.tif 000117
で定義される立体化学を有する請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
ｐが２である請求項１または２の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
ＺがＮ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４である、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒ４がＣ２−６アルキルである、請求項４に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
ＺがＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルで適宜置換されていてもよいＣ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４ハロアルキルおよびハロゲンから選択される１または２個の基で適宜置換されていてもよいＮ−ヘテロアリールである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
Ｚが適宜置換されていてもよいオキサジアゾールまたはピリミジンである請求項６の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項８】
Ａがフェニル、ピリジルまたはピリミジニルである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項９】
Ｒ１が水素である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１０】
Ｂがオキサジアゾール、チアゾールまたはピリジンである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１１】
Ｂが５員ヘテロアリール環のときＸが−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−であり；Ｂが６員ヘテロアリール環のときＸが−ＣＲ６Ｈ−Ｏ−である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１２】
Ｒ２が１個またはそれ以上のハロ基で置換されたフェニルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１３】
Ｒ２が１個またはそれ以上のフルオロ基で置換されたフェニルである、請求項１２に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１４】
Ｒ６およびＲ７が独立して水素またはメチルである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１５】
遊離塩基として実施例１から２９のいずれか１つにおいて定義される化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩；および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１７】
ＧＰＲ１１９が関連する疾患または病態の治療方法であって、治療上有効量の請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を治療が必要な対象に投与する段階を特徴とする方法。
【請求項１８】
ＧＰＲ１１９およびＤＰＰ−ＩＶが関連する疾患または病態の治療方法であって、治療上有効量の請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を治療が必要な対象に投与する段階を特徴とする方法。
【請求項１９】
２型糖尿病の治療方法であって、治療上有効量の請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を治療が必要な対象に投与する段階を特徴とする方法。
【請求項２０】
肥満、メタボリックシンドローム（シンドロームＸ）、耐糖能障害、高脂血症、高トリグリセライド血症、高コレステロール血症、低ＨＤＬレベルまたは高血圧の治療方法であって、治療上有効量の請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を治療が必要な患者に投与することを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２型糖尿病を含む代謝障害の治療に有用な治療化合物に関する。特に、本発明は、ＧＰＲ１１９アゴニストとしての活性を有する化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
インスリン非依存性２型糖尿病に関連する病態生理を標的とする薬剤は多くの副作用を有し、大多数の患者における脂質代謝異常および高脂血症に適切に対処していない。治療はしばしば、食事、運動、血糖降下剤およびインスリンを用いて個々の患者における必要性に焦点を合わせるが、新規抗糖尿病薬、特により副作用が少なく、より忍容性が高いであろう薬剤は常に必要とされてきた。
【０００３】
同様に、メタボリックシンドローム（シンドロームＸ）は人々を高い冠動脈疾患のリスク下に置き、中心性肥満（腹部における過剰な脂肪組織）、耐糖能障害、高トリグリセライドおよび低ＨＤＬコレステロール、および高血圧などの危険因子の集団として特徴付けられる。心筋虚血および微小血管障害は、未治療または不完全に治療されたメタボリックシンドロームとの関連で確立された病的状態である。
【０００４】
肥満は体の大きさに比べて過剰な脂肪組織量で特徴付けられる。臨床的には、体脂肪量は肥満度指数（ＢＭＩ;体重（ｋｇ）／慎重（ｍ）２）または腹囲で見積もられる。ＢＭＩが３０を超えると各人は肥満と見なされ、過体重であることの医学的帰結は確立されている。体重の増加、特に腹部の体脂肪によるものが、糖尿病、高血圧、心疾患、および多数の別の合併症、例えば関節炎、脳卒中、胆嚢疾患、筋肉および呼吸器における問題、背部痛、さらにはいくつかの癌のリスクの増加と関連することは、長い間受け入れられてきた医学的見解となっている。
【０００５】
新規抗糖尿病薬、特により副作用が少なく、より忍容性が高い薬剤、および特に体重と無関係または好ましくは体重の低下を引き起こす薬剤は常に必要とされてきた。
【０００６】
ＧＰＲ１１９（以前はＧＰＲ１１６と呼ばれていた）はヒトおよびラットの受容体を開示するWO00/50562においてＳＮＯＲＦ２５として同定されたＧＰＣＲであり、また、US 6,468,756はマウスの受容体（受入番号：ＡＡＮ９５１９４（ヒト）、ＡＡＮ９５１９５（ラット）およびＡＮＮ９５１９６（マウス））も開示している。
【０００７】
ヒトにおいて、ＧＰＲ１１９は膵臓、小腸、結腸および脂肪組織において発現されている。ヒトＧＰＲ１１９受容体の発現プロファイルは、その糖尿病治療の標的としての高い有用性を示している。
【０００８】
ＧＰＲ１１９アゴニストは胃腸管からのＧＬＰ−１の放出を刺激することが示されている。それにより、ＧＰＲ１１９アゴニストは、（１）膵臓からのグルコース依存的インスリンの放出を増強し、経口グルコース耐性を改善し；（２）β−細胞のｃＡＭＰ濃度を増加させることにより疾患の進行を減弱し；（３）おそらくはＧＬＰ−１の摂食低下能を通して体重の減少を引き起こす。
【０００９】
国際特許出願 WO2005/061489、WO2006/070208、WO2006/067532、WO2006/067531、WO2007/003960、WO2007/003961、WO2007/003962、WO2007/003964、WO2007/116229、WO2007/116230、WO2007/138362、WO2008/081204、WO2008/081205、WO2008/081206、WO2008/081207、WO2008/081208、WO2009/050522、WO2009/050971、WO2010/004343、WO2010/004344、WO2010/004345、 WO2010/004347およびWO2010/00166はＧＰＲ１１９受容体アゴニストを開示する。
【００１０】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）はユビキタスだが特異性の高いセリンプロテアーゼであり、最後から２番目の位置のＬ−プロリンまたはＬ−アラニンでポリペプチドからＮ−末端側のジペプチドを切り出す。ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤を用いた研究から、ＧＬＰ−１の不活性化におけるＤＰＰ−ＩＶの重要な役割が示された。ＧＬＰ−１が活性である期間を延ばすことにより、インスリンの分泌が刺激され、グルカゴンの放出が阻害され、胃内容排出が遅延される。ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は２型糖尿病の治療に有用であり、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤の例は、例えばビルダグリプチン、シタグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチンである。
【００１１】
ＧＰＲ１１９アゴニストおよびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤を組み合わせて用いる可能性は示唆されてはいるが、これには患者への２つの別々の製剤または２つの活性成分を含む複合製剤の投与が必要であり、２つの活性成分の物理化学的、薬物動態学的、および薬力学的性質の適合性の達成に関する問題を孕んでいる。本願の優先日より後に公開された国際特許出願WO2009/034388はＧＰＲ１１９アゴニストおよびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤としての２つの活性を有する化合物を開示している。
【００１２】
本発明の化合物もまた、ＧＰＲ１１９アゴニストおよびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤としての２つの活性を有し得る。
【発明の概要】
【００１３】
本発明は、ＧＰＲ１１９アゴニストとしての活性を有し、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤としての活性も有し得、２型糖尿病を含む代謝障害の治療に有用な化合物に関する。
【００１４】
（発明の詳細な説明）
本発明は式（Ｉ）：
【化１】
2012520284.tif 000002
［式中、
ｐは１または２であり；
ｐが２のとき、ＺはＮ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｎ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５またはＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルで適宜置換されていてもよいＣ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４ハロアルキルおよびハロゲンから選択される１もしくは２個の基で適宜置換されていてもよいＮ−ヘテロアリールであり；
ｐが１のとき、Ｚは−Ｎ−ＣＨ２−フェニル（ここで、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキルおよびハロから独立して選択される１または２個の基で適宜置換されていてもよい）でもよく；
Ａはパラ置換フェニルまたは１もしくは２個の窒素原子を含むパラ置換６員ヘテロアリール環であり；
ＢはＮ、ＯおよびＳから選択される１個もしくはそれ以上のヘテロ原子を含む５員ヘテロアリール環、または１もしくは２個の窒素原子を含むパラ置換６員ヘテロアリール環であり；
Ｂが５員ヘテロアリール環のとき、Ｘは−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−または−ＣＲ７Ｈ−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−であり；Ｂが６員ヘテロアリール環のとき、Ｘは−Ｏ−または−ＣＲ６Ｈ−Ｏ−であり；
Ｒ１は水素、ハロ、シアノ、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４ハロアルキルであり；
ｑは１または２であり；
Ｒ２は
【化２】
2012520284.tif 000003
１個もしくはそれ以上のハロ基で適宜置換されていてもよいフェニル、または１個もしくはそれ以上のハロもしくはメチル基で適宜置換されていてもよいピリジルであり；
Ｒ３は独立してハロまたはメチルであり；
ｎは０または１であり；
ｍは０、１または２であり；
Ｒ４はＣ２−６アルキルまたはＣ３−６シクロアルキル（ここで、シクロアルキルはＣ１−４アルキルで適宜置換されていてもよい）であり；
Ｒ５は水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ６およびＲ７は独立して水素またはＣ１−２アルキルである］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１５】
本発明の化合物の好ましい実施態様は式（Ｉａ）：
【化３】
2012520284.tif 000004
で定義される立体化学を有し、かかる化合物はＤＰＰ−ＩＶ阻害活性を示す。
【００１６】
本発明の実施態様の１つにおいて、各ｐは独立して１または２であり、即ち４、５または６員環を形成する。本発明の実施態様の別の１つにおいて、各ｐは同一であり、即ち４または６員環を形成する。本発明の化合物において、ｐは好ましくは２である。
【００１７】
本発明の実施態様の１つにおいて、ＺはＮ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４である。
本発明のさらなる実施態様の１つにおいて、ＺはＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルで適宜置換されていてもよいＣ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４ハロアルキルおよびハロゲンから選択される１または２個の基で適宜置換されていてもよいＮ−ヘテロアリールである。
ＺがＮ−ヘテロアリールのとき、好ましいヘテロアリール基は例えばオキサジアゾールおよびピリミジンである。
Ａは好ましくはフェニル、ピリジルまたはピリミジニルである。
Ｒ１は好ましくは水素である。
【００１８】
本発明の実施態様の１つにおいて、Ｂは５員ヘテロアリール環であり、別の１つにおいてＢは６員ヘテロアリール環である。
Ｂが５員ヘテロアリールのとき、Ｘは好ましくは−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−であり；Ｂが６員ヘテロアリール環のとき、Ｘは好ましくは好ましくは−ＣＲ６Ｈ−Ｏ−である。
Ｒ２は好ましくはフェニルまたはピリジルであり、より好ましくはフェニルであり、さらにより好ましくはフェニルである。
Ｒ２は１個またはそれ以上のハロ基で置換されたフェニルであり、それは好ましくは１から３個のハロ基で置換され、該ハロ基は好ましくはフルオロまたはクロロであり、より好ましくはフルオロである。
Ｒ２がピリジルのとき、それは好ましくは２−ピリジルである。
Ｒ２が置換されたピリジルのとき、好ましくはそれは１から３個のハロまたはメチル基で置換され、より好ましくは１または２個のメチル基で置換される。
ｎは好ましくは１である。
Ｒ４は好ましくはＣ２−６アルキルである。
Ｒ６およびＲ７は好ましくは独立して水素またはメチルである。
【００１９】
本明細書中で述べられる化合物の一群は、式（Ｉｂ）：
【化４】
2012520284.tif 000005
［式中、
ｐは１または２であり；
ｐが２のとき、ＺはＮ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｎ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５またはＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４ハロアルキルもしくはハロゲンから選択される１もしくは２個の基で適宜置換されていてもよいＮ−ヘテロアリールであり；
ｐが１のとき、Ｚは−Ｎ−ＣＨ２−フェニル（ここで、該フェニルはＣ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキルおよびハロから独立して選択される１または２個の基で適宜置換されていてもよい）であり；
Ａはパラ置換フェニルまたは１もしくは２個の窒素原子を含むパラ置換６員ヘテロアリール環であり；
ＢはＮ、ＯおよびＳから選択される１個もしくはそれ以上のヘテロ原子を含む５員ヘテロアリール環、または１もしくは２個の窒素原子を含むパラ置換６員ヘテロアリール環であり；
Ｂが５員ヘテロアリール環のとき、Ｘは−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−であり、Ｂが６員ヘテロアリール環のとき、Ｘは−Ｏ−または−ＣＲ６Ｈ−Ｏ−であり；
Ｒ１は水素、ハロ、シアノ、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４ハロアルキルであり；
ｑは１または２であり；
Ｒ２は
【化５】
2012520284.tif 000006
または１個もしくはそれ以上のハロ基で適宜置換されていてもよいフェニルであり；
Ｒ３は独立してハロまたはメチルであり；
ｎは０または１であり；
ｍは０、１または２であり；
Ｒ４はＣ２−６アルキルであり；
Ｒ５はＣ１−４アルキルであり；
Ｒ６は水素またはＣ１−２アルキルである］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。
【００２０】
式（Ｉｂ）の化合物の好ましい実施態様において、それらは式（Ｉａ）で定義される立体化学を有する。
【００２１】
各可変部における好ましい基を上で各可変部について概説したが、本発明の好ましい化合物は、式（Ｉ）においていくつかの可変部または各可変部が各可変部の好ましい基から選択される化合物を含む。故に、本発明は記載された好ましい基の全ての組み合わせを包含するよう意図される。
【００２２】
本発明の化合物の分子量は、好ましくは８００未満であり、より好ましくは６００未満である。
【００２３】
特に断らない限り、本明細書中で用いられる用語「アルキル」は直鎖または分枝鎖の炭素鎖を意味する。アルキル基の例は、例えばエチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−およびｔｅｒｔ−ブチルである。
【００２４】
用語「ヘテロアリール」環は、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子を最大２個含む５または６員の含窒ヘテロアリール環を意味する。かかるヘテロアリール環の例は、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、およびトリアジニルである。
【００２５】
環Ａおよび環Ｂに関するパラ置換の言及は、環Ａ上における基−Ｂ−ならびにＮ−含有ヘテロ環および環Ｂ上における基−Ｘ−ならびに−Ａ−の位置を意味する。
【００２６】
本明細書中に記載される化合物は、１つまたはそれ以上の不斉中心を有していてもよく、故に、ジアステレオマーおよび光学異性体が生じ得る。本発明は、全てのかかるジアステレオマーならびにそれらのラセミ混合物、高純度に分割されたエナンチオマー、全ての存在可能な幾何異性体、およびそれらの医薬的に許容される塩を包含する。本発明は、本発明の化合物の全ての立体異性体およびその医薬的に許容される塩を包含する。さらに、立体異性体の混合物ならびに単離された特定の立体異性体もまた、包含される。かかる化合物の製造に用いられる合成方法の過程、または当業者に周知のラセミ化もしくはエピマー化手法を使用する際において、かかる方法の生成物は立体異性体の混合物であってもよい。
【００２７】
本発明の化合物の互変異性体が存在するとき、特に設定または記載されない限り、本発明の化合物は全ての可能な互変異性体およびその医薬的に許容される塩、およびそれらの混合物を包含する。
【００２８】
本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩が溶媒和物または多形相の形態で存在するとき、本発明は全ての存在可能な溶媒和物および多形相の形態を包含する。溶媒和物を形成する溶媒の種類は、溶媒が医薬的に許容される限り、特に限定されない。例えば、水、エタノール、プロパノール、アセトンなどが用いられ得る。
【００２９】
用語「医薬的に許容される塩」は、医薬的に許容される無毒な塩基または酸から形成される塩を意味する。本発明の化合物が酸性の場合、その対応する塩は、無機塩基および有機塩基を含む医薬的に許容される無毒な塩基から製造することができる。かかる無機塩基に由来する塩は、例えばアルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅（１価および２価）、三価鉄、二価鉄、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛などによる塩である。特に好ましいものは、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウムおよびナトリウム塩である。医薬的に許容される無毒な有機塩基に由来する塩は、例えば１級、２級ならびに３級アミン、および環状アミン、例えば天然に存在する置換アミンならびに合成置換アミンの塩である。塩を形成し得る別の医薬的に許容される無毒な有機塩基 は、例えばアルギニン、ベタニン、カフェイン、コリン、Ｎ’，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミンレジン、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどである。
【００３０】
本発明の化合物が塩基性の場合、その対応する塩は無機および有機酸を含む医薬的に許容される無毒な酸から製造することができる。かかる酸は、例えば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸などである。
【００３１】
本発明の化合物は医薬的使用を意図されるため、それらは高純度な形態で提供されることが好ましく、例えば、少なくとも純度６０％において、より適切には少なくとも純度７５％において、とりわけ少なくとも純度９８％（％は重量に基づく）において提供される。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物は以下のようにして製造することができる（ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ａ、Ｂ、Ｘ、Ｚ、Ｍ、ｎ、ｐ、ｑは式（Ｉ）で定義されたものと同義である）。ＰＧは保護基、Ｈａｌはハロゲンであり、Ｅはハロゲンまたはトリフレートのどちらかである。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物はスキーム１に概説されるように製造することができる。式（ＩＶ）の化合物は、例えば１２０℃、ＤＢＵおよびＤＭＳＯといった標準的な条件下における適切な式（ＩＩ）のハロ芳香族化合物の式（ＩＩＩ）のアミン類によるＳＮＡｒ置換反応により製造することができる。あるいは、式（ＩＶ）の化合物は、１１０℃、トルエンなどの適切な溶媒中におけるＰｄ２（ｄｂａ）３およびＢＩＮＡＰといったブッフバルト・ハートウィッグ条件下における適切な式（ＩＩ）のハロ芳香族化合物と式（ＩＩＩ）のアミン類の反応により製造することができる。当業者に周知の標準的な条件を用いたアミン官能性の脱保護反応により、上記のように式（Ｉ）の化合物が得られる。
【化６】
2012520284.tif 000007
【００３４】
Ｂが１または２個の窒素原子を含むパラ置換６員ヘテロアリール環であり、Ｘが−Ｏ−または−ＣＲ６Ｈ−Ｏ−である式（ＩＩ）の基礎的要素は、スキーム２に概説されるように製造することができる。式（Ｖ）のアリールハライドは、例えば８０℃、ＤＭＦ／水などの適切な溶媒中における［１，１−ビス(ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウムといった標準的な鈴木条件下において、式（ＶＩ）のボロネート類で処理することができる。
【化７】
2012520284.tif 000008
【００３５】
あるいは、Ｂが１または２個の窒素原子を含むパラ置換６員ヘテロアリール環であり、Ｘが−Ｏ−または−ＣＲ６Ｈ−Ｏ−である式（ＩＩ）の基礎的要素は、スキーム３に概説されるようにして製造することができる。式（ＶＩＩ）のアリールボロネートは、１１０℃、［１，１−ビス(ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウムなどの適切な触媒の存在下、１，４−ジオキサンなどの適切な溶媒中における式（Ｖ）のアリールハライドとビス（ピナコレート）ジボロンの反応により製造することができる。式（ＩＩ）の基礎的要素は、例えば８０℃、ＤＭＦ／水などの適切な溶媒中における［１，１−ビス(ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウムといった標準的な鈴木条件下における式（ＶＩＩ）のボロネート類と式（ＶＩＩＩ）のアリールハライドまたはアリールトリフレートの反応により製造することができる。
【化８】
2012520284.tif 000009
【００３６】
Ｂが１または２個の窒素原子を含むパラ置換６員ヘテロアリール環であり、Ｘが−Ｏ−または−ＣＲ６Ｈ−Ｏ−である式（Ｖ）の基礎的要素は、スキーム４に概説されるように製造することができる。式（ＩＸ）のアルコール類は、例えばトルエンなどの適切な溶媒中でアゾジカルボン酸ジピペリジドおよびトリブチルホスフィンを用いる標準的な光延条件下において、式（Ｘ）のヒドロキシアリール類で処理することができる。
【化９】
2012520284.tif 000010
【００３７】
あるいは、Ｂが１または２個の窒素原子を含むパラ置換６員ヘテロアリール環であり、Ｘが−Ｏ−または−ＣＲ６Ｈ−Ｏ−である式（Ｖ）の基礎的要素は、スキーム５に概説されるように製造することができる。式（ＩＸ）のアルコールは、１２０℃、ＤＢＵおよびＤＭＳＯといった標準的なＳＮＡｒ条件下において、適切な式（ＸＩ）のジハロアリール化合物で処理することができる。
【化１０】
2012520284.tif 000011
【００３８】
Ｂが１，２，４−オキサジアゾール−５−イル、Ｘが−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−である式（ＩＩ）の基礎的要素は、スキーム６に概説されるように製造することができる。式（ＸＩＩ）のアミドオキシムは、７８℃、Ｋ２ＣＯ３などの適切な塩基の存在下、エタノール／水などの適切な溶媒中における式（ＸＩＩＩ）のニトリルとヒドロキシルアミン塩酸塩の反応により製造することができる。上記の式（ＩＩ）の基礎的要素は、ＤＭＦなどの適切な溶媒中、クロロギ酸イソブチルおよびトリエチルアミンといった標準的な条件下における式（ＸＩＩ）のアミドオキシムと式（ＸＩＶ）の酸の反応により製造することができる。
【化１１】
2012520284.tif 000012
【００３９】
Ｂが１，２，４−オキサジアゾール−３−イル、Ｘが−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−である式（ＩＩ）の基礎的要素は、スキーム７に概説されるように製造することができる。式（ＸＶ）のアミドオキシムは、７８℃、Ｋ２ＣＯ３などの適切な塩基の存在下、エタノール／水などの適切な溶媒中における式（ＸＶＩ）のニトリルとヒドロキシルアミン塩酸塩の反応により製造することができる。上記の式（ＩＩ）の基礎的要素は、ＤＭＦなどの適切な溶媒中、クロロギ酸イソブチルおよびトリエチルアミンといった標準的な条件下における式（ＸＶ）と式（ＸＶＩＩ）の酸の反応により製造することができる。
【化１２】
2012520284.tif 000013
【００４０】
Ｂがチアゾール−２−イル、Ｘが−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−である式（ＩＩ）の基礎的要素は、スキーム８に概説されるように製造することができる。式（ＸＶＩＩＩ）の１級アミド類は、例えば、ＤＣＭなどの適切な溶媒中、ＨＯＢＴおよびＥＤＣＩといった標準的なアミドカップリング条件下における式（ＸＩＶ）の酸と１，４−ジオキサン溶液中のアンモニアの反応により製造することができる。式（ＸＩＸ）のチオアミド類は、例えば、還流下、トルエンなどの適切な溶媒中でローソン試薬（Lawesson’s reagent）を用いる標準的な条件下における式（ＸＶＩＩＩ）の１級アミド類の反応により製造することができる。上記の式（ＩＩ）の基礎的要素は、例えば、室温、エタノールといった標準的なハンチュ（Hantzsch）条件下における式（ＸＸ）のブロモケトン類と式（ＸＩＸ）のチオアミドの反応により製造することができる。
【化１３】
2012520284.tif 000014
【００４１】
Ｂがチアゾール−５−イル、Ｘが−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−である式（ＩＩ）の基礎的要素は、スキーム９に概説されるように製造することができる。式（ＸＸＩ）の１級アミド類は、例えば、ＤＣＭなどの適切な溶媒中、ＨＯＢＴおよびＥＤＣＩといった標準的なアミドカップリング条件下における式（ＸＶＩＩ）の酸と１，４−ジオキサン溶液中のアンモニアの反応により製造することができる。式（ＸＸＩＩ）のチオアミドは、例えば、還流下、トルエンなどの適切な溶媒中でローソン試薬を用いる標準的な条件下における式（ＸＶＩＩＩ）の１級アミド類の反応により製造することができる。上記の式（ＩＩ）の基礎的要素は、例えば、室温、エタノールといった標準的なハンチュ条件下における式（ＸＸＩＩＩ）のクロロケトン類と式（ＸＸＩＩ）のチオアミドの反応により製造することができる。
【化１４】
2012520284.tif 000015
【００４２】
Ｘが−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−である式（ＸＶＩ）の基礎的要素は、スキーム１０に概説されるように製造することができる。式（ＸＸＩＶ）のアルコール類は、例えば、０℃、ＴＨＦなどの適切な溶媒中におけるＮａＨといった標準的な条件下において、式（ＸＸＶ）のブロミド類で処理することができる。
【化１５】
2012520284.tif 000016
【００４３】
式（ＸＸ）の基礎的要素は、スキーム１１に概説されるように製造することができる。式（ＸＸＶＩ）のケトン類は、ＴＨＦなどの適切な溶媒中において、トリメチルフェニルアンモニウムトリブロミドで処理することができる。
【化１６】
2012520284.tif 000017
【００４４】
Ｘが−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−である式（ＸＸＩＩＩ）の基礎的要素は、スキーム１２に概説されるように製造することができる。式（ＸＸＩＶ）のアルコール類は、Ｋ２ＣＯ３などの適切な塩基の存在下、ＤＭＦなどの適切な溶媒中において１，３−ジクロロアセトンで処理することができる。
【化１７】
2012520284.tif 000018
【００４５】
式（ＩＩＩ）の基礎的要素の例および合成は他で記載されている： Benbow et.al., WO2007/148185； Brackes et.al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2007, 17 2005-2012; Pei et.al., J. Med. Chem., 2007, 50 (8), 1983-1987； Cox et.al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2007, 17 4579-4583； Wright et.al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2007, 17 5638-5642。
【００４６】
ｐが２、Ｘが−Ｏ−またはＣＲ６Ｈ−Ｏ−である式（ＩＸ）の基礎的要素の合成は他で記載されている： Fang et. al., WO2008/070692； Alper et. al., WO2008/097428； Wacker et.al., WO2009/012275。
【００４７】
ｐが１、Ｘが−Ｏ−またはＣＲ６Ｈ−Ｏ−である式（ＩＸ）の基礎的要素の合成は他で記載されている： Arnould et.al., WO2007/091046； Evans et.al., WO2008/079028。
【００４８】
Ｘが−Ｏ−ＣＲ６Ｈ−である式（ＸＩＶ）の基礎的要素の合成は他で記載されている： Bertram et.al., WO2007/116229。
【００４９】
式（Ｉ）の別の化合物は、上記と同様の方法またはそれ自体周知の方法により製造されてもよい。式（Ｉ）の化合物の製造に関するさらなる詳細は、実施例に述べる。
【００５０】
式（Ｉ）の化合物は、単独で製造されてもよく、少なくとも２個、例えば５個から１０００個、好ましくは１０から１００個の式（Ｉ）の化合物を含む化合物ライブラリーとして製造されてもよい。化合物ライブラリーは、コンビナトリアル「split and mix」アプローチ、または多重パラレル合成により、液相もしくは固相化学を用い、当業者に周知の方法を用いて製造されてもよい。
【００５１】
式（Ｉ）の化合物の製造中、中間体化合物の不安定な官能基、例えばヒドロキシ、カルボキシならびにアミノ基は保護されてもよい。保護基は、式（Ｉ）の化合物の製造中のいずれのステージにおいて除去されてもよく、あるいは最終的な式（Ｉ）の化合物に存在していてもよい。種々の不安定な官能基を保護することができる方法および得られた保護誘導体を切断する方法に関する包括的な議論は、例えば、Protective Groups in Organic Chemistry, T.W. Greene and P.G.M. Wuts, (1991) Wiley-Interscience, New York, 2nd editionに見られる。
【００５２】
上に記載したような式（Ｉ）の化合物およびその中間体の製造工程もまた、本発明のさらなる態様に包含される。
【００５３】
上のスキームまたは実施例で定義したいずれの新規中間体もまた、本発明の範囲に包含される。故に、本発明のさらなる態様により、上と同義の式（ＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＸＩＶ）、（ＸＶ）、（ＸＶＩ）、（ＸＶＩＩＩ）、（ＸＩＸ）および（ＸＸＩＩＩ）のいずれか１つの化合物が提供される。好ましい基の式（Ｉ）の化合物に関連して上に記載される変数は、中間体化合物にも適用される。
【００５４】
上で示されるように、本発明の化合物はＧＰＲ１１９アゴニストとして、例えば糖尿病の治療および／または予防に有用である。かかる使用のために、本発明の化合物は通常医薬組成物の形態で投与される。
【００５５】
本発明の化合物はまた、デュアルＧＰＲ１１９アゴニスト／ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤として、例えば糖尿病の治療および／または予防に有用である。かかる使用のために、本発明の化合物は通常医薬組成物の形態で投与される。
【００５６】
本発明はまた、薬剤として使用するための本発明の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００５７】
本発明はまた、本発明の化合物を医薬的に許容される担体との組み合わせで含む医薬組成物を提供する。
【００５８】
好ましくは、該組成物は医薬的に許容される担体および無毒で治療上有効量の本発明の化合物、またはその医薬的に許容される塩を含む。
【００５９】
さらに、本発明の化合物はまた、ＧＰＲ１１９および適宜ＤＰＰ−ＩＶを調節し、糖尿病の治療または予防効果を得ることにより疾患の治療に有用であり、医薬的に許容される担体および無毒な治療上有効量の本発明の化合物、またはその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。
【００６０】
該医薬組成物は別の治療上の成分またはアジュバントを適宜含んでいてもよい。該組成物は、経口、経直腸、局所、および非経口（例えば、皮下、筋肉内、静脈内）投与に適した組成物を含むが、与えられたいずれの例における大半の適切な経路は、特定のホスト、および活性成分が投与される目的の病態の性質ならびに重篤度に依存する。該医薬組成物は便宜上単位投与剤形で存在してもよく、製剤学分野で周知のいずれの方法により製造されてもよい。
【００６１】
医療現場において、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩は、一般的な医薬品配合技法により活性成分として医薬的担体と緊密な混合物に組み合わせてもよい。該担体は、投与、例えば経口または非経口（静脈内を含む）投与のための製造形態に依存して、様々な形態を取り得る。
【００６２】
故に、該医薬組成物は、各々が所定量の活性成分を含む経口投与に適した個別の単位、例えばカプセル剤、カシェ剤または錠剤として提供されてもよい。さらに、該組成物は、粉剤、顆粒剤、液剤、水性の液体による懸濁剤、非水性の液剤、水中油エマルジョン剤、または油中水液体エマルジョン剤として提供され得る。上で設定した一般的な投与剤形に加え、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩はまた、放出制御されるような方法および／または送達装置で投与されてもよい。該組成物はいずれの製剤学的方法により製造されてもよい。一般的に、かかる方法は、活性成分と、１つまたはそれ以上の必要成分を構成する担体を会合させる工程を含む。一般的に、該組成物は、活性成分と液体の担体または微細に破砕した固体の担体またはその混合物を均一かつ緊密に混合することにより製造される。生成物は次いで、目的の形態に便利に剤形化され得る。
【００６３】
本発明の化合物または医薬的に許容される塩はまた、１つまたはそれ以上の別の治療上の活性成分と組み合わせて医薬組成物に含まれ得る。
【００６４】
用いられ得る医薬的担体は、例えば、固体、液体または気体である。固体の担体の例は、乳糖、白土、ショ糖、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸である。液体の担体の例は、液糖、ピーナツ油、オリーブ油および水である。気体の担体の例は、二酸化炭素および窒素である。
【００６５】
経口投与剤形の製造には、いずれの便利な媒体が用いられてもよい。例えば、水、グリセロール、油、アルコール、香料、保存剤、着色剤などが経口用液剤、例えば懸濁剤、エリキシル剤および液剤の製造に用いられてもよい；他方、デンプン、砂糖、結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などの担体は、経口用の固形製剤、例えば粉剤、カプセル剤および錠剤の製造に用いられてもよい。投与が簡便であるため、錠剤およびカプセル剤が好ましい経口投与単位であり、これには固体の医薬的担体が用いられる。適宜、錠剤は標準的な水性または非水性の技法によりコーティングされてもよい。
【００６６】
本発明の化合物を含む錠剤は、適宜１つまたはそれ以上の付属の成分またはアジュバントと共に圧縮または成形して製造されてもよい。圧縮された錠剤は、適切な機械により、流動性のよい形状（free flowing form）、例えば粉末または顆粒の活性成分を、適宜結合剤、滑沢剤、不活性な希釈剤、界面活性剤または分散剤と混合して圧縮することにより製造されてもよい。成形錠剤は、適切な機械により、粉末の化合物を不活性な液体の希釈剤で湿潤させた混合物を成形して製造してもよい。各錠剤は、好ましくは、約０．０５ｍｇから約５ｇの活性成分を含み、各カシェ剤またはカプセル剤は、好ましくは約０．０５ｍｇから約５ｇの活性成分を含む。
【００６７】
例えば、ヒトへの経口投与を意図する製剤は、総組成の約５から９５％の適当で都合のよい量の担体原料を配合した約０．５ｍｇから約５ｇの活性薬剤を含んでいてもよい。投与単位剤形は一般的に約１ｍｇから約２ｇの活性成分、典型的には２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇまたは１０００ｍｇを含む。
【００６８】
非経口投与に適した本発明の医薬組成物は、活性成分を含んだ水溶液または水懸濁剤として製造されてもよい。適切な界面活性剤、例えばヒドロキシプロピルセルロースが含有され得る。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、またはそれらの油混合物を用いて分散液を製造することもできる。さらに、微生物の有害な成長を防ぐために、保存剤を含んでいてもよい。
【００６９】
注射による使用に適した本発明の医薬組成物は、滅菌水による水溶液または分散液を含む。さらに、該組成物は、かかる滅菌された注射用溶液または分散液の即時調製のための滅菌された粉末の形態を取っていてもよい。全ての場合において、最終的な注射用の形態は滅菌された状態でなくてはならず、簡単に注射できるような効果的な液体でなくてはならない。該医薬組成物は、製造および保存条件において安定でなくてはならず；故に、好ましくは、バクテリアや真菌による汚染作用から保護されるべきである。担体は例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、植物油、それらの適切な混合物を含む溶媒でも分散媒体でもよい。
【００７０】
本発明の医薬組成物は、局所使用に適した剤形、例えば噴霧剤、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、散布剤などでもよい。さらに、該組成物は、経皮装置における使用に適した剤形でもよい。これらの製剤は、本発明の化合物、またはその医薬的に許容される塩を一般的な製造方法により含有する。例えば、クリーム剤または軟膏剤は親水性材料と水を、約５ｗｔ％から約１０ｗｔ％の化合物と混合し、目的の固さを有するクリーム剤または軟膏剤を生成することにより製造される。
【００７１】
本発明の化合物の医薬組成物は、経直腸投与に適した剤形（ここで、担体は固体である）でもよい。混合物が投与単位の座剤を形成することが望ましい。適切な担体は、例えばココアバターおよび該分野で一般的に用いられる別の材料である、座剤は便宜上、まず組成物を軟化または融解させた担体と混合し、次いで冷却、成形することにより製造されてもよい。
【００７２】
前述の担体成分に加え、上記の医薬製剤は、適当な１つまたはそれ以上の追加の担体成分を希釈剤、緩衝剤、香料、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑沢剤、保存剤（抗酸化剤を含む）などを含んでいてもよい。さらに、該製剤を目的のレシピエントの血液と等張に保つために別のアジュバントを含んでいてもよい。本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組成物は、粉剤、または濃縮液剤の形態で製造されてもよい。
【００７３】
一般的に、上で示した病態の治療には１日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１５０ｍｇ／ｋｇ体重のオーダーの投与レベルが有用であり、あるいは１日あたり約０．５ｍｇから約７ｇが有用である。例えば、肥満は１日あたり、体重１ｋｇあたり約０．０１から５０ｍｇの化合物の投与で効果的に治療され得、あるいは患者１日あたり約０．５ｍｇから約３．５ｇである。
【００７４】
しかしながら、いずれの特定の患者における特定の投与レベルは、様々な因子、例えば年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路、排泄速度、薬の組み合わせおよび治療下にある特定の疾患の重篤度に依存することは理解されるべきである。
【００７５】
本発明の化合物は、ＧＰＲ１１９および適宜ＤＰＰ−ＩＶが関連する病態または疾患の治療に使用され得る。
【００７６】
故に、本発明はまた、ＧＰＲ１１９および適宜ＤＰＰ−ＩＶが関与する疾患または病態の治療方法であって、治療上有効量の本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩を治療が必要な対象に投与することを特徴とする方法を提供する。かかる疾患または病態は、糖尿病、肥満、耐糖能障害、インスリン抵抗性および糖尿病合併症（例えば神経症、腎症、網膜症、白内障、心血管系合併症ならびに脂質代謝異常)である。また、摂取した脂肪に異常な感受性を有し機能性胃腸症を発症する患者の治療方法も提供される。本発明の化合物はまた、代謝性疾患、例えばメタボリックシンドローム（シンドロームＸ）、耐糖能障害、高脂血症、高トリグリセライド血症、高コレステロール血症、低ＨＤＬレベルおよび高血圧の治療に用いられ得る。
【００７７】
本発明はまた、２型糖尿病の治療方法であって、治療上有効量の本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩を治療が必要な患者に投与することを特徴とする方法を提供する。
【００７８】
本発明はまた、肥満、メタボリックシンドローム（シンドロームＸ）、耐糖能障害、高脂血症、高トリグリセライド血症、高コレステロール血症、低ＨＤＬレベルおよび高血圧の治療方法であって、治療上有効量の本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩を治療が必要な患者に投与することを特徴とする方法を提供する。
【００７９】
本発明はまた、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩の、上と同義の病態の治療における使用を提供する。
【００８０】
本発明はまた、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩の、上と同義の病態の治療薬の製造における使用を提供する。
【００８１】
本発明の方法における用語「治療」は、治療的および予防的治療を含む。
【００８２】
本発明の化合物は、糖尿病の治療のための既知の化合物または組み合わせに比べ、有利な性質を示し得る。
【００８３】
本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩は、単独、または１つもしくはそれ以上の別の治療的に活性な化合物との組み合わせで投与されてもよい。別の治療的に活性な化合物は、本発明の化合物と同じ、または異なる疾患または病態の治療のためのものでもよい。治療的に活性な化合物は、同時、時間差、または別々に投与されてもよい。
【００８４】
本発明の化合物は、肥満および／または糖尿病の治療のための別の活性な化合物、例えばインスリンならびにインスリンアナログ、胃リパーゼ阻害剤、膵リパーゼ阻害剤、スルホニル尿素およびそのアナログ、ビグアナイド系化合物（例えば、メトホルミン）、α２アゴニスト、グリタゾン、ＰＰＡＲ−γアゴニスト、ＰＰＡＲ−α／γアゴニスト混合物、ＲＸＲアゴニスト、脂肪酸酸化阻害剤、α−グルコシダーゼ阻害剤、β−アゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、脂質低下剤、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、抗肥満薬（例えば、膵リパーゼ阻害剤、ＭＣＨ−１アンタゴニストおよびＣＢ−１アンタゴニスト（またはインバースアゴニスト））、アミリンアンタゴニスト、リポキシゲナーゼ阻害剤、ソモスタチンアナログ、グルコキナーゼ活性化剤、グルカゴンアンタゴニスト、インスリンシグナリングアゴニスト、ＰＴＰ１Ｂ阻害剤、糖新生阻害剤、抗脂肪分解剤、ＧＳＫ阻害剤、ガラニン受容体アゴニスト、食欲低下薬、ＣＣＫ受容体アゴニスト、レプチン、セロトニン作動性／ドパミン作動性抗肥満薬、再取込み阻害剤（シブトラミン）、ＣＲＦアンタゴニスト、ＣＲＦ結合タンパク質、甲状腺ホルモン様化合物、アルドース還元酵素阻害剤、グルココルチコイド受容体アンタゴニスト、ＮＨＥ−１阻害剤またはソルビトール脱水素酵素阻害剤と共に投与されてもよい。
【００８５】
本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１つの別の薬剤、例えば糖尿病または肥満の別の治療薬の組み合わせの療法は、本発明のさらなる態様を表す。
【００８６】
本発明はまた、哺乳類（例えばヒト）における糖尿病の治療方法であって、治療上有効量の本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩、および別の薬剤、例えば糖尿病または肥満の別の１つの治療薬を治療が必要な哺乳類に投与することを特徴とする方法を提供する。
【００８７】
本発明はまた、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩、および別の薬剤の糖尿病の治療における使用を提供する。
【００８８】
本発明はまた、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩の、糖尿病の治療のために別の薬剤と組み合わせて用いる薬物の製造における使用を提供する。
【００８９】
本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩、および別の薬剤は同時投与されてもよく、あるいは時間差もしくは別々に投与されてもよい。
【００９０】
同時投与は、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩および別の薬剤を含む製剤の投与、または各薬剤の異なる製剤の同時もしくは時間差での投与を含む。本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩、および別の化合物の薬理学的プロファイルが許すなら、２つの薬剤の同時投与が好ましい。
【００９１】
本発明はまた、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩、および別の化合物の糖尿病の治療のための薬物の製造における使用を提供する。
【００９２】
本発明はまた、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩、および別の抗糖尿病薬、および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本発明はまた、上記の方法におけるかかるその使用を包含する。
【００９３】
本明細書中の全ての刊行物、例えば、限定されないが、本明細書中で引用される特許及び特許出願は、個々の刊行物が引用により完全に説明されたかのように具体的かつ個別に組み入れられるよう、引用によりここに取り込む。
【００９４】
本発明は以下の実施例の言及により記載されるが、これは例示が目的であり、本発明の範囲の限定を意図するものではない。
【実施例】
【００９５】
（材料および方法）
特に断らない限り、カラムクロマトグラフィはＳｉＯ２（４０−６３メッシュ）上で行われた。ＬＣＭＳデータは以下のようにして得られた：Ａｔｌａｎｔｉｓ ３μＣ１８カラム（３．０ｘ２０．０ｍＭ、流速＝０．８５ｍｌ／分）、０．１％ＨＣＯ２Ｈを含むＨ２Ｏ−ＭｅＣＮ溶液で６分間かけて溶出、ＵＶ検出２２０ｎｍ。グラジエント情報：０．０−０．３分、１００％Ｈ２Ｏ；０．３−４．２５分：１０％Ｈ２Ｏ−９０％ＭｅＣＮに上昇；４．２５−４．４分：１００％ＭｅＣＮに上昇；４．４−４．９分：１００％ＭｅＣＮでホールド；４．９−６．０分：１００％Ｈ２Ｏに戻す。質量スペクトルデータはｐｏｓｉｔｉｖｅ（ＥＳ＋）またはｎｅｇａｔｉｖｅ（ＥＳ−）イオンモードのエレクトロスプレーイオン化ソースを用いて得た。
【００９６】
ＬＣＭＳ−方法２のデータは以下のようにして得た：Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム（２．１ｘ５０ｍＭ、２．５μＭ、流速０．８ｍｌ／分）、ＭｅＣＮ−１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３溶液で１．５分間かけて溶出、ＵＶ検出２１５−３５０ｎｍ。グラジエント情報：０−０．８分：９８％ＭｅＣＮ  ２％ＮＨ４ＨＣＯ３から９８％ＮＨ４ＨＣＯ３  ２％ＭｅＣＮ；０．８−１．２分：９８％ＮＨ４ＨＣＯ３  ２％ＭｅＣＮでホールド。質量スペクトルはｐｏｓｉｔｉｖｅ（ＥＳ＋）モードのエレクトロスプレーイオン化ソースを用いて得た。
【００９７】
ＬＣＭＳ−方法３のデータは以下のようにして得た：Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム（２．１ｘ５．０ｍＭ、２．５５μＭ、流速０．８ｍｌ／分）、ＭｅＣＮ−１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３溶液で５分間かけて溶出、ＵＶ検出２１５−３５０ｎｍ。グラジエント情報：０−４分：９８％ＭｅＣＮ  ２％ＮＨ４ＨＣＯ３から９８％ＮＨ４ＨＣＯ３  ２％ＭｅＣＮ；４−４．６分：９８％ＮＨ４ＨＣＯ３  ２％ＭｅＣＮでホールド。質量スペクトルはｐｏｓｉｔｉｖｅ（ＥＳ＋）モードのエレクトロスプレーイオン化ソースを用いて得た。
【００９８】
ＬＣＭＳ−方法４のデータは以下のようにして得た：Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム（３．０ｘ１５０ｍＭ、５μＭ、流速１．０ｍｌ／分）、ＭｅＣＮ−１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３溶液で５分間かけて溶出、ＵＶ検出２１５−３５０ｎｍ。グラジエント情報：０−０．１分：５％ＭｅＣＮ  ９５％ＮＨ４ＨＣＯ３でホールド；０．１−３．０分：５％ＭｅＣＮ  ９５％ＮＨ４ＨＣＯ３から５％ＮＨ４ＨＣＯ３  ９５％ＭｅＣＮ；３．０−３．９分：５％ＮＨ４ＨＣＯ３  ９５％ＭｅＣＮ。質量スペクトルはｐｏｓｉｔｉｖｅ（ＥＳ＋）モードのエレクトロスプレーイオン化モードを用いて得た。
【００９９】
キラル−ＨＰＬＣはＤａｉｃｅｌ ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＡ ２５０ｘ２０ｍｍ、５μＭカラムを用いて得た。
【０１００】
略語および頭字語：ＡｃＯＨ：酢酸；ａｔｍ：雰囲気；ＢＡ：ｎ−ブチルアミン；ＣＨＣｌ３：クロロホルム；ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＤＥＡ：ジエチルアミン；ＤＩＰＥＡ： ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＡＰ：ジメチルピリジン−４−イルアミン；ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド;ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ＥＤＣＩ：（３−ジメチルアミノプロピル）エチルカルボジイミド塩酸塩；ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル；ＥｔＯＨ：エタノール;ｈ：時間；ＨＣｌ：塩酸得；ＨＣＯ２Ｈ：ギ酸；Ｈ２Ｏ：水；ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物；ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィ；ＩＨ：イソヘキサン；ＩＭＳ：工業用変性アルコール；ＩＰＡ：イソプロピルアルコール；Ｍ：モル濃度；ＭｅＣＮ：アセトニトリル;ＭｅＯＨ：メタノール；ＭｇＳＯ４：硫酸マグネシウム；ｍｉｎ：分；ＭＴＢＥ：メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル；ＮａＨＣＯ３：炭酸水素ナトリウム；Ｎａ２ＣＯ３：炭酸ナトリウム；ＮａＯＨ：水酸化ナトリウム；Ｎａ２ＳＯ４：硫酸ナトリウム；ＮＨ３：アンモニア；ＮＨ４ＨＣＯ３：炭酸水素アンモニウム；ＮＨ４ＯＨ：水酸化アンモニウム；Ｐｄ：パラジウム；ＲＴ：保持時間；ｒ．ｔ．：室温；ｓａｔ：飽和；ＳＣＸ：強陽イオン交換レジン；ＳｉＯ２：シリカゲル；ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＴＦＡＡ：トリフルオロ酢酸無水物；ＴｓＯＨ：ｐ−トルエンスルホン酸一水和物
【０１０１】
以下の化合物の合成は他で記載されている：４−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル：Bradley et. al., WO2007/003961；４−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル：Bertram et. al, WO2007/116229；（３Ｓ，４Ｓ）−３，４−ジアジド−１−ベンジルピロリジン：Benbow et. al., WO2007/148185。別の全ての化合物は市販のものである。
【０１０２】
製造１：４−［５−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１８】
2012520284.tif 000019
６−クロロニコチン酸（５００ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）溶液にＥＤＣＩ（０．７４ｇ、３．８９ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（５８３ｍｇ、３．８１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１０分間撹拌した。４−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８６６ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１６時間撹拌し、溶媒を減圧除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で分液処理した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、次いでブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、次いで溶媒を減圧除去した。残渣をトルエンに溶解し、反応液を１１０℃で１６時間加熱した。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、７０：３０）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 3.97 分 ； m/z (ES+) = 395.2 [M + H]+.
【０１０３】
製造２：４−［５−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１９】
2012520284.tif 000020
２−クロロピリミジン−５−カルボン酸（１００ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（９９μＬ、０．６３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１０分間撹拌した。４−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１７２ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で７２時間撹拌した。反応溶媒を減圧除去し、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に再溶解した。有機混合物を水、次いでブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。得られた残渣をトルエンに溶解し、８０℃で１６時間加熱した。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、６０：４０）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 3.77 分 ； m/z (ES+) = 396.1 [M + H]+.
【０１０４】
製造３：４−［３−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２０】
2012520284.tif 000021
４−カルボキシメトキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．５１ｇ、５．８３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液にＥＤＣＩ（１．１１ｇ、６．９９ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（０．９５ｇ、６．９９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１０分間撹拌した。６−クロロ−Ｎ−ヒドロキシニコチンアミジン（１．００ｇ、５．８３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１７時間撹拌し、溶媒を減圧除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で分液処理し、次いで有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。残渣をトルエンに溶解し、２０時間加熱還流し、溶媒を減圧除去し、生成物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に再溶解した。溶液を水（１００ｍＬ）、次いでブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、ＥｔＯＡｃ／ＩＨから再結晶化し、表題化合物を得た：保持時間= 4.02 分 ； m/z (ES+) = 395.1 [M + H]+.
【０１０５】
製造４：４−｛（Ｒ）−１−［３−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２１】
2012520284.tif 000022
製造３で説明される方法を用い、表題化合物を４−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルと６−クロロ−Ｎ−ヒドロキシニコチンアミジンの反応により製造した：保持時間= 4.20 分 ； m/z (ES+) = 409.2 [M + H]+.
【０１０６】
製造５：４−［５−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化２２】
2012520284.tif 000023
ＨＣｌのジオキサン（４Ｍ、１０ｍＬ）溶液中の４−［５−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造１、５７８ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を２時間撹拌し、溶媒を減圧除去した。該生成物のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．６６ｍＬ、４．７０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃に冷却した。クロロギ酸イソプロピルのトルエン（１Ｍ、１．７６ｍＬ、１．７６ｍｍｏｌ）溶液を滴下して加え、次いで得られた反応物を室温で１６時間撹拌した。粗混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液（５０ｍＬ）およびブラインで洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 3.75 分 ； m/z (ES+) = 381.2 [M + H]+.
【０１０７】
以下の化合物は、製造５で説明される方法を用い、適当なｔｅｒｔ−ブチルカルバメート保護化合物から製造された：
【表１】
2012520284.tif 000024
【０１０８】
製造９：４−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化２３】
2012520284.tif 000025
炉乾燥したフラスコ内、アルゴン下の４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（１０．０ｇ、５３．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液を０℃に冷却した。水素化ナトリウム（６０％／ミネラル油、８．５５ｇ、２１３．６ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、得られた混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで室温で３０分間撹拌した。反応物に（Ｓ）−２−ブロモプロピオン酸（４．８２ｇ、５３．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液を３０分間かけて滴下して加え；次いでさらにＴＨＦ（６０ｍＬ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。水を注意深く加えて反応をクエンチし、ＴＨＦを減圧除去した。得られた水性の混合物をＥｔ２Ｏで洗浄し、２Ｍ  ＨＣｌでｐＨ１に酸性化した。混合物をＥｔＯＡｃ（２ｘ１５０ｍＬ）で抽出し、次いで有機画分を合わせ、乾燥し、（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz , CDCl3): 4.97 - 4.86 (m, 1H), 4.19 - 4.09 (m, 1H), 3.89 - 3.79 (m, 2H), 3.66 - 3.58 (m, 1H), 3.18 - 3.08 (m, 2H), 1.91 - 1.80 (m, 2H), 1.65 - 1.50 (m, 2H), 1.47 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.26 - 1.22 (m, 6H).
【０１０９】
製造１０：４−（（Ｒ）−１−カルバモイルエトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化２４】
2012520284.tif 000026
炉乾燥したフラスコ内、アルゴン下の４−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造９、２００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液にＥＤＣＩ（１７７ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（１２６ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１０分間撹拌した。ＮＨ３のジオキサン（０．５Ｍ、１５μＬ、７．７２ｍｍｏｌ）溶液を加え、反応物を室温で２４時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）および水（２５ｍＬ）で分液処理した。有機層を除去し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２５ｍＬ）、次いでブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、５：９５、０：１００）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 2.49 分 ； m/z (ES+) = 259.2 [M + H]+.
【０１１０】
製造１１：４−（（Ｒ）-シアノメチルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化２５】
2012520284.tif 000027
炉乾燥したフラスコ内、アルゴン下の４−（（Ｒ）−１−カルバモイルエトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造１０、２００ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を０℃に冷却した。該溶液にトリエチルアミン（３２０μＬ、２．３４ｍｍｏｌ）、次いでＴＦＡＡ（１６５μＬ、１．１６ｍｍｏｌ）を加え、混合物をこの温度において１時間撹拌した。水を加えて反応をクエンチし、混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出した。有機画分をブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 3.62 分 ； m/z (ES+) = 240.1 [M + H]+.
【０１１１】
製造１２：４−［（Ｒ）−１−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸 イソプロピルエステル
【化２６】
2012520284.tif 000028
４−（（Ｒ）-シアノメチルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造１１、５１ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液にヒドロキシルアミン（５０％重量／水、４７０μＬ、０．０２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を８０℃で１６時間加熱した。混合物を減圧濃縮し、残渣をトルエン（ｘ３）で共沸し、表題化合物を得た：保持時間= 2.02 分 ； m/z (ES+) = 274.1 [M + H]+.
【０１１２】
以下の化合物は、製造２で説明される方法を用い、４−［（Ｒ）−１−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造１２）と適当なカルボン酸の反応により製造された：
【表２】
2012520284.tif 000029
【０１１３】
製造１５：３−（２，５−ジフルオロフェニル）−４−ニトロブタン酸メチルエステル
【化２７】
2012520284.tif 000030
（２Ｅ）−３−（２，５−ジフルオロフェニル）アクリル酸（２１．１０ｇ、１１４．７ｍｍｏｌ）のＤＣＭおよびＭｅＯＨ(ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、４：１、２５０ｍＬ）混合物溶液にトリメチルシリルジアゾメタン（２Ｍ／Ｅｔ２Ｏ、５７．３４ｍＬ、１１４．７ｍｍｏｌ）の溶液を１５分間かけて加え、反応完了まで反応物を室温で撹拌した。反応混合物が無色になるまでＡｃＯＨを滴下して加え、次いで溶媒を減圧除去した。残渣をＭｅＣＮ（１１４ｍＬ）に再溶解し、ニトロメタン（７．４５ｍＬ、１３７．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、ＤＢＵ（１７．４９ｍＬ、１１７．０ｍｍｏｌ）を３０分間かけて滴下して加えた。反応物を室温に昇温し、１６時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、９５：５、９０：１０）で精製し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz, CDCl3): 7.18 - 7.00 (m, 3H), 4.91 - 4.77 (m, 2H), 4.27 - 4.17 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.91 (m, 2H).
【０１１４】
製造１６：（トランス）−１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−５−ニトロピペリジン−２−オン
【化２８】
2012520284.tif 000031
３−（２，５−ジフルオロフェニル）−４−ニトロブタン酸メチルエステル（製造１５、１６．２７ｇ、６２．８１ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（１．９４ｇ、６４．６３ｍｍｏｌ）およびベンジルアミン（１３．７ｍＬ、１２５．６２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ混合物を密閉チューブ内において９０℃で１６時間加熱した。反応完了後、混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）および２Ｍ  ＨＣｌ（６００ｍＬ）で分液処理した。有機画分を分離し、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、７０：３０）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 3.72分； m/z (ES+) = 347.1 [M + H]+.
【０１１５】
製造１７：（トランス）−１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−３−ニトロピペリジン塩酸塩
【化２９】
2012520284.tif 000032
アルゴン下の（トランス）−１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−５−ニトロピペリジン−２−オン（製造１６、１０．４４ｇ、３０．１７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（９０ｍＬ）溶液にボラン−ジメチルスルフィド錯体（２．０Ｍ／ＤＣＭ、４５．３ｍＬ、９０．６０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を７０℃で３時間加熱した。室温に冷却後、混合物をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）で希釈し、次いで１Ｍ  ＨＣｌ（３０ｍＬ）を加えた。混合物を１０分間撹拌し、溶媒を減圧除去した。ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）および１Ｍ  ＨＣｌ（２０ｍＬ）をさらに加え、反応物を１０分間撹拌した。溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 3.30分； m/z (ES+) = 333.1 [M + H]+.
【０１１６】
製造１８：［（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピペリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化３０】
2012520284.tif 000033
（トランス）−１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−３−ニトロピペリジン塩酸塩（製造１７、１１．１２ｇ、３０．１７ｍｍｏｌ）および亜鉛末（１５．６９ｇ、２４１．３６ｍｍｏｌ）のＡｃＯＨ（５５ｍＬ）およびＥｔＯＨ（５５ｍＬ）混合物溶液を８０℃に加熱した。反応完了後、混合物を濾過し、溶媒を減圧除去した。得られた残渣のＭｅＯＨ（３０ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ジオキサン（４Ｍ、３０ｍＬ）を加え、溶媒を減圧除去した。該物質をＥｔ２Ｏ（ｘ２）、次いでトルエン（ｘ３）でトリチュレートし、アミンを塩酸塩として得た。生成物のＴＨＦ（１５０ｍＬ）および水（７５ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、トリエチルアミン（１２．６ｍＬ、９０．５１ｍｍｏｌ）、次いでジ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（９．５９ｇ、４５．２６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温に昇温し、反応完了まで１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で分液処理し、有機相を分離した。水相をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で抽出し、有機画分を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、８０：２０）、さらにキラルＨＰＬＣ（ＩＨ：ＩＰＡ：ＤＥＡ  ９０：１０：０．１、１５ｍｌ／分、２７０ｎｍ、保持時間= ９．８分）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 2.68分； m/z (ES+) = 403.2 [M + H]+.
【０１１７】
製造１９：［（３Ｒ，４Ｒ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピペリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化３１】
2012520284.tif 000034
［（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピペリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造１８、１．８９ｇ、４．７０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（９４ｍＬ）溶液をＨ−Ｃｕｂｅ装置（１０％ ｐｄ／Ｃ Ｃａｔｃａｒｔ ７０、３０バール、８０℃）に流速１ｍＬ／分で通した。溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.37 分； m/z (ES+) = 313.2[M + H]+.
【０１１８】
製造２０：２−メトキシピリミジン−５−カルボニトリル
【化３２】
2012520284.tif 000035
炉乾燥したフラスコ内の５−ブロモ−２−メトキシピリミジン（２．５５ｇ、１３．４９ｍｍｏｌ）およびシアン化亜鉛（１．９０ｇ、１６．１９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液にパラジウムテトラキス（４．６８ｇ、４．０５ｍｍｏｌ）を加え、混合物をアルゴンで１０分間バブルし、反応完了まで８５℃で加熱した。反応溶媒を減圧濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で分液処理した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２ｘ１５０ｍＬ）で抽出した。有機画分を合わせ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２ｘ１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＤＣＭ、１：９、ＤＣＭ、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９５：５）で精製し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz , CDCl3): 8.80 (s, 2H), 4.12 (s, 3H)
【０１１９】
製造２１：Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシピリミジン−５−カルボキシアミジン
【化３３】
2012520284.tif 000036
２−メトキシピリミジン−５−カルボニトリル（製造２０、１．２１ｇ、９．０１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）溶液にヒドロキシルアミン（５０％重量／水、０．６５ｍＬ、９．９１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を６５℃で１６時間加熱した。混合物を減圧濃縮し、表題化合物を得た：保持時間= 0.85 分 ； m/z (ES+) = 169.0 [M + H]+.
【０１２０】
製造２２：４−［３−（２−メトキシピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化３４】
2012520284.tif 000037
４−カルボキシメトキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．０８ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液にＥＤＣＩ（０．９６ｇ、５．００ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（０．７７ｇ、５．００ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１５分間撹拌した。Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシピリミジン−５−カルボキシアミジン（製造２１、０．７０ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１６時間撹拌し、溶媒を減圧除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で分液処理し、有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。残渣をトルエン（３０ｍＬ）に溶解し、完了まで８５℃で加熱した。溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 3.58 分 ； m/z (ES+) = 392.2 [M + H]+.
【０１２１】
製造２３：４−［３−（２−メトキシピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化３５】
2012520284.tif 000038
４−［３−（２−メトキシピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造２２、１．３３ｇ、３．４０ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ジオキサン（４Ｍ、２．５５ｍＬ、１０．１９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で４時間撹拌した。ＨＣｌ／ジオキサン（７．５ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）のさらなる一部を加え、撹拌を７２時間続けた。溶媒を減圧除去し、中間体生成物２−メトキシ−５−［５−（ピペリジン−４−イルオキシメチル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］ピリミジン塩酸塩を得た：保持時間= 1.95 分 ； m/z (ES+) = 292.1 [M + H]+.
該生成物のＤＣＭ（２０ｍＬ）懸濁液にトリエチルアミン（０．９９ｍＬ、７．１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃で加熱した。クロロギ酸イソプロピル（１Ｍ／トルエン、３．７３ｍＬ、３．７３ｍｍｏｌ）を２０分間かけて滴下して加え；反応物を室温でさらに２時間撹拌した。混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で分液処理し、有機相を分離した。水相をＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出し、有機画分を合わせ、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９８：２、９７：３、９６：４）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 3.44 分 ； m/z (ES+) = 378.2 [M + H]+. 
【０１２２】
製造２４：４−［３−（２−ヒドロキシピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【０１２３】
2012520284.tif 000039
アルゴン雰囲気下の４−［３−（２−メトキシピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造２３、８８５ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（３０ｍＬ）溶液にヨウ化ナトリウム（１０５４ｍｇ、７．０３ｍｍｏｌ）、次いでトリメチルシリルクロリド（８９３μＬ、７．０３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を６５℃で１６時間加熱した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および飽和チオ硫酸ナトリウム溶液（１００ｍＬ）で分液処理し、有機相を分離した。水相をＥｔＯＡｃ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出し、有機画分を合わせ、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１００：０、９８：２、９６：４、９４：６）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 2.76 分 ； m/z (ES+) = 364.2 [M + H]+.
【０１２４】
製造２５：４−［３−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化３６】
2012520284.tif 000040
アルゴン下の４−［３−（２−ヒドロキシピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造２４、１９９ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）のオキシ塩化リン（６ｍＬ）溶液にＮ，Ｎ−ジメチルアミノアニリン（９０μＬ、０．７１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で５時間加熱した。氷（５０ｍＬ）を滴下して反応をクエンチし、有機物をＤＣＭ（３ｘ５０ｍＬ）に抽出した。有機画分を合わせ、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９７：３）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 3.71 分 ； m/z (ES+) = 382.1 [M + H]+.
【０１２５】
製造２６：４−｛（Ｒ）−１−［３−（２−メトキシピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化３７】
2012520284.tif 000041
製造２２で説明される方法を用い、４−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造９）をＮ−ヒドロキシ−２−メトキシピリミジン−５−カルボキシアミジン（製造２１）と反応させた。カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９７：３）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 3.55 分 ； m/z (ES+) = 392.2 [M + H]+.
【０１２６】
製造２７：４−｛（Ｒ）−１−［３−（２−ヒドロキシピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化３８】
2012520284.tif 000042
製造２４で説明される方法を用い、表題化合物を４−｛（Ｒ）−１−［３−（２−メトキシピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造２６）から製造した：保持時間= 2.87 分 ； m/z (ES+) = 378.2 [M + H]+.
【０１２７】
製造２８：４−｛（Ｒ）−１−［３−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化３９】
2012520284.tif 000043
製造２５で説明される方法を用い、４−｛（Ｒ）−１−［３−（２−ヒドロキシピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造２７）から表題化合物を製造した：保持時間= 3.82 分 ； m/z (ES+) = 396.1 [M + H]+.
【０１２８】
製造２９：（トランス）−３−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化４０】
2012520284.tif 000044
（トランス）−３−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．００ｇ、７．１３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．５９ｍＬ、１１．４０ｍｍｏｌ）のジオキサンおよび水（２：１、７５ｍＬ）混合物溶液を０℃に冷却し、クロロギ酸９−フルオレンイルメチル（２．３１ｇ、８．９２ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温に昇温し、１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、次いで該溶液を水、１Ｍ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、ブラインで洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、９０：１０、８０：２０、７０：３０）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 4.28分； m/z (ES+) = 503.3 [M + H]+.
【０１２９】
製造３０：［（トランス）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル塩酸塩
【化４１】
2012520284.tif 000045
（トランス）−３−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造２９、１．５０ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）のジオキサン（３０ｍＬ）溶液にＨＣｌのジオキサン（４Ｍ、３０ｍＬ）溶液を加え、反応物を室温で１６時間撹拌し、この後、沈殿物が生じた。それ以上沈殿が観察されなくなるまでＥｔ２Ｏを混合物に加え、溶媒をデカントした。残渣をさらなるＥｔ２Ｏに懸濁し、混合物を５分間撹拌し、溶媒をデカントした。この工程をさらに２回繰り返し、得られた残渣を濃縮乾燥し、表題化合物を得た：保持時間= 2.82分； m/z (ES+) = 403.1 [M + H]+.
【０１３０】
製造３１：（３Ｒ，４Ｓ）−３−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化４２】
2012520284.tif 000046
（トランス）−３−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造２９）のキラルＨＰＬＣ分離により表題化合物を得た：ＩＨ：ＣＨＣｌ３：ＩＰＡ：ＤＥＡ  ８５：１０：５：０．１、１５ｍｌ／分、２７０ｎｍ、保持時間＝９．４分.
【０１３１】
製造３２：[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸 ９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル塩酸塩
【化４３】
2012520284.tif 000047
製造３０で説明される方法を用い、（３Ｒ，４Ｓ）−３−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造３１）から表題化合物を得た：保持時間= 2.82分； m/z (ES+) = 403.1 [M + H]+.
【０１３２】
製造３３：２，４−ジフルオロ−１−（（Ｅ）−２−ニトロビニル）ベンゼン
【化４４】
2012520284.tif 000048
アルゴン下の２，４−ジフルオロベンズアルデヒド（２５．０ｇ、０．１８ｍｏｌ）およびニトロメタン（１１．４ｍＬ、０．２１ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５３ｍＬ）溶液を−１５℃に冷却し、ＮａＯＨ（７．４ｇ、０．１９ｍｏｌ）の水（２６ｍＬ）溶液を２０分間かけて滴下して加えた。得られた混合物を−１５℃で撹拌し、３０分後、沈殿物が生じた。さらにＭｅＯＨを加えてスラリーを形成し、撹拌を１５分間続け、反応物を０℃に昇温した。氷水を加え、混合物を１５分間撹拌し、４Ｍ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）を加えた。有機画分をＤＣＭ（３ｘ３００ｍＬ）で抽出し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。残渣の一部（１０．０ｇ、５０ｍｍｏｌ）を酢酸無水物（８．１ｍＬ、９０ｍｏｌ）に溶解し、アルゴン下で０℃に冷却した。ＤＭＡＰ（０．４ｇ、３ｍｍｏｌ）を加え、反応物をこの温度において２０分間撹拌し、室温に昇温し、さらに１６時間撹拌した。反応溶媒を減圧除去し、得られた残渣をＤＣＭに再溶解した。少量の１Ｍ  ＮａＯＨ溶液を加えて残存している酢酸無水物を壊し、次いで得られた溶液を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ)で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 3.60 分； m/z (ES+) = 186.1 [M + H]+.
【０１３３】
製造３４：（トランス）−１−ベンジル−３−（２，４−ジフルオロフェニル）−４−ニトロピロリジン
【化４５】
2012520284.tif 000049
アルゴン下の２，４−ジフルオロ−１−（（Ｅ）−２−ニトロビニル）ベンゼン（製造３３、８．０ｇ、４３．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２５０ｍＬ）溶液を−３０℃に冷却した。温度を３０℃に維持するようにＮ−（メトキシメチル）−Ｎ−（トリメチルシリルメチル）ベンジルアミン（１１．７ｍＬ、４５．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１０分間撹拌し、ＴＦＡ（０．３ｍＬ、４．３ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１６時間以上撹拌した。反応混合物を水、次いでブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 3.05 分； m/z (ES+) = 319.1 [M + H]+. 
【０１３４】
製造３５：［（トランス）−１−ベンジル−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化４６】
2012520284.tif 000050
ＡｃＯＨおよびＥｔＯＨ（１：１、５００ｍＬ）混合物中の（トランス）−１−ベンジル−３−（２，４−ジフルオロフェニル）−４−ニトロピロリジン（製造３４、２５．０ｇ、０．０８ｍｏｌ）および亜鉛末（１７．８ｇ、０．２８ｍｏｌ）混合物を７０℃に加熱した。４５時間後、さらなる亜鉛末（１２．０ｇ、０．１８ｍｏｌ）を加え、加熱を２０分間続けた。反応完了後、溶媒を減圧除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃに再溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、次いでブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、中間体生成物（トランス）−１−ベンジル−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イルアミンを得た：保持時間= 1.82 分； m/z (ES+) = 289.1 [M + H]+.
アルゴン下の該生成物のＴＨＦ（４００ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（２０．４ｍＬ、０．１５ｍｏｌ）を加え、溶液を０℃に冷却した。ジ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１９．０ｇ、０．０９ｍｏｌ）を５分間かけて加え；反応物を１６時間かけて室温に昇温した。溶媒を減圧除去し、次いで得られた残渣をＥｔＯＡｃに再溶解し、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。該生成物にヘプタン（１００ｍＬ）を加え、完全に溶解するまで該懸濁液を超音波処理した。溶液を６０時間静置し、沈殿を形成させた。溶媒をデカントし、固形物を新鮮な一部分のヘプタン（５０ｍＬ）で洗浄し、表題化合物を得た：保持時間= 2.74 分； m/z (ES+) = 389.3 [M + H]+.
【０１３５】
製造３６：[（３Ｒ，４Ｓ）−１−ベンジル−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化４７】
2012520284.tif 000051
［（トランス）−１−ベンジル−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造３５）のキラルＨＰＬＣ分離により表題化合物を得た：ＩＨ：ＩＰＡ：ＤＥＡ  ９６：４：０．１、１５ｍｌ／分、２７０ｎｍ、保持時間＝９．８分.
【０１３６】
製造３７：[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化４８】
2012520284.tif 000052
製造１９で説明される方法（ただし、圧力は１０バール、温度は５０℃）を用い、表題化合物を[（３Ｒ，４Ｓ）−１−ベンジル−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造３６）から製造した：保持時間= 2.38 分； m/z (ES+) = 299.1 [M + H]+.
【０１３７】
製造３８：４−（（Ｒ）−１−｛５−［６−（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）ピリダジン−３−イル］−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル｝エトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化４９】
2012520284.tif 000053
６−クロロピリダジン−３−カルボン酸（６０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液にＥＤＣＩ（１０７ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（６９ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１５分間撹拌した。４−［（Ｒ）−１−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造１２、１０３ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を４時間続け、溶媒を減圧除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃおよび水で分液処理し、次いで有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。残渣をトルエンに溶解し、１６時間加熱還流し、溶媒を減圧濃縮し、該生成物をＥｔＯＡｃに再溶解した。該溶液を水、次いでブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、１：１）による精製により表題化合物を得た：保持時間= 3.87 分 ； m/z (ES+) = 495.2 [M + H]+.
【０１３８】
製造３９：３−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）アゼチジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化５０】
2012520284.tif 000054
アルゴン下の３−ヒドロキシアゼチジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．００ｇ、１７．３２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、水素化ナトリウム（６０％／ミネラル油、０．７６ｇ、１８．９８ｍｍｏｌ）を１０分間かけて少量ずつ加えた。反応物を室温で７２時間撹拌し、次いで水（５０ｍＬ）を加えた。混合物をＥｔＯＡｃ（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、得られた水溶液を２Ｍ  ＨＣｌでｐＨ１に酸性化した。混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ８０ｍＬ）で抽出し、有機画分を合わせ、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz, CDCl3): 4.40 - 4.31 (m, 1H), 4.16 - 4.08 (m, 2H), 4.04 - 3.93 (m, 2H), 3.90 - 3.85 (m, 1H), 1.48 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.44 (s, 9H).
【０１３９】
製造４０：３−（（Ｒ）−１−メトキシカルボニルエトキシ）アゼチジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化５１】
2012520284.tif 000055
０℃に冷却した３−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）アゼチジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造３９、３．２９ｇ、１３．４０ｍｍｏｌ）のトルエンおよびＭｅＯＨ（４：１、２５ｍＬ）混合物溶液にトリメチルシリルジアゾメタン（２Ｍ／ヘキサン、８．７１ｍＬ、１７．４２ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下して加えた。反応物をこの温度において３０分間撹拌し、ＡｃＯＨ（１ｍＬ）を加えてクエンチした。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１００：０、９８：２、９５：５）による精製により、表題化合物を得た：1H NMR  δH (400MHz, CDCl3): 4.35 - 4.27 (m, 1H), 4.13 - 4.04 (m, 2H), 3.99 - 3.91 (m, 2H), 3.87 - 3.82 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 1.44 - 1.41 (m, 12H).
【０１４０】
製造４１：（Ｒ）−２−（アゼチジン−３−イルオキシ）プロピオン酸メチルエステル トリフルオロ酢酸塩
【化５２】
2012520284.tif 000056
アルゴン下、０℃に冷却した３−（（Ｒ）−１−メトキシカルボニルエトキシ）アゼチジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４０、２．６９ｇ、１０．３７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液にＴＦＡ（１０ｍＬ）を加え、反応物をこの温度において１時間撹拌した。ＴＦＡのさらなる一部（２ｍＬ）を加え、撹拌を３０分間続けた。溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz, DMSO-d6): 4.51 - 4.43 (m, 1H), 4.24 - 4.17 (m, 1H), 4.16 - 4.08 (m, 2H), 3.96 - 3.83 (m, 2H), 3.66 (s, 3H), 1.30 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
【０１４１】
製造４２：３−（（Ｒ）−１−メトキシカルボニルエトキシ）アゼチジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化５３】
2012520284.tif 000057
アルゴン下の（Ｒ）−２−（アゼチジン−３−イルオキシ）プロピオン酸メチルエステルトリフルオロ酢酸塩（製造４１、１．４２ｇ、５．１９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液を０℃に冷却した。トリエチルアミン（１．６６ｍＬ、１１．９３ｍｍｏｌ）、次いでクロロギ酸イソプロピル(１Ｍ／トルエン、６．２２ｍＬ、６．２２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、反応物をこの温度において２時間撹拌した。混合物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ（３０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３０ｍＬ）、次いでブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９９：０、９８：２）で精製し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz, CDCl3): 4.94 - 4.86 (m, 1H), 4.38 - 4.30 (m, 1H), 4.17 - 4.09 (m, 2H), 4.01 - 3.94 (m, 2H), 3.91 - 3.86 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 1.43 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.22 (d, J = 6.2 Hz, 6H).
【０１４２】
製造４３：３−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）アゼチジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化５４】
2012520284.tif 000058
０℃に冷却した３−（（Ｒ）−１−メトキシカルボニルエトキシ）アゼチジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造４２、８２９ｍｇ、３．３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６ｍＬ）溶液に水（１．５ｍＬ）、次いで水酸化リチウム一水和物（２９８ｍｇ、７．１０ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物をこの温度において３時間撹拌した。反応物を減圧濃縮し、次いで水（１５ｍＬ）を加え、溶液をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で精製した。１Ｍ  ＨＣｌで水相をｐＨ１に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２ｘ３０ｍＬ）で抽出した。有機画分を合わせ、水（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz, DMSO-d6): 4.77 - 4.66 (m, 1H), 4.39 - 4.31 (m, 1H), 4.08 - 4.00 (m, 2H), 3.99 - 3.92 (m, 1H), 3.77 - 3.66 (m, 2H), 1.28 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.15 (d, 6H).
【０１４３】
製造４４：２，５−ジフルオロ−１−（（Ｅ）−２−ニトロビニル）ベンゼン
【化５５】
2012520284.tif 000059
製造３３で説明される方法を用いて２，５−ジフルオロベンズアルデヒドから表題化合物を製造した。ＤＭＡＰとの反応後、粗混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。生じた沈殿物を３０分間撹拌し；濾過し、乾燥し、表題化合物を得た：1H NMR δH (300MHz, CDCl3): 8.00 - 7.96 (m, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.25 - 7.11 (m, 3H).
【０１４４】
製造４５：（トランス）−１−ベンジル−３−（２，５−ジフルオロフェニル）−４−ニトロピロリジン
【化５６】
2012520284.tif 000060
製造３４で説明される方法を用い（ただし、反応は０℃で行った）、表題化合物を２，５−ジフルオロ−１−（（Ｅ）−２−ニトロビニル）ベンゼン（製造４４）から製造した。カラムクロマトグラフィ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、１００：０、９８：２、９５：５、９０：１０）による精製により、表題化合物を得た。LCMS 方法2：保持時間= 0.96 分； m/z (ES+) = 319.2 [M + H]+.  
【０１４５】
製造４６：［（トランス）−１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化５７】
2012520284.tif 000061
ＡｃＯＨおよびＥｔＯＨの混合物（１：１、８２０ｍＬ）中の（トランス）−１−ベンジル−３−（２，５−ジフルオロフェニル）−４−ニトロピロリジン（製造４５、４５．６ｇ、０．１４ｍｏｌ）および亜鉛末（５７．０ｇ、０．８６ｍｏｌ）の混合物を６５℃で加熱した。反応完了後、混合物を濾過し、ＡｃＯＨで洗浄し、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣をＥｔＯＡｃに再溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、次いでブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ３、１００：０：０、９５：５：０、９０：１０：０、９０：１０：５）で精製し、中間体生成物（トランス）−１−ベンジル−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ピロリジン−３−イルアミンを得た。LCMS方法 2：保持時間= 0.80 分； m/z (ES+) = 289.4 [M + H]+.
アルゴン下の該生成物（１２．２ｇ、４２．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（１２．０ｍＬ、８４．６ｍｏｌ）を加え、混合物を０℃に冷却した。ジ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１１．０ｇ、５０．４ｍｏｌ）を５分間かけて加え；次いで反応物を室温に昇温し、１６時間撹拌した。溶媒を濃縮し、得られた残渣をＥｔＯＡｃに再溶解し、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。該生成物をヘプタンで数回トリチュレートし、表題化合物を得た。LCMS方法 3：保持時間= 3.08 分； m/z (ES+) = 389.5 [M + H]+.
【０１４６】
製造４７：[（３Ｒ，４Ｓ）−１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化５８】
2012520284.tif 000062
［（トランス）−１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４６）のキラルＨＰＬＣ分離により表題化合物を得た：ＩＨ：ＩＰＡ：ＤＥＡ  ９６：４：０．１、１５ｍｌ／分、２７０ｎｍ、保持時間＝１０．９分.
【０１４７】
製造４８：[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化５９】
2012520284.tif 000063
製造１９で説明される方法を用い（ただし、反応は９０℃で行った）、[（３Ｒ，４Ｓ）−１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４７）から表題化合物を得た：保持時間= 2.35 分； m/z (ES+) = 299.2 [M + H]+.
【０１４８】
製造４９：[（３Ｒ，４Ｓ）−１−（５−シアノピリミジン−２−イル)−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化６０】
2012520284.tif 000064
２−クロロピリミジン−５−カルボニトリル（７１ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）および[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８、１６０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）混合物にＤＢＵ（７６μＬ、０．５１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をアルゴンで５分間バブルし、７０℃で１６時間加熱した。室温に冷却後、粗反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で分液処理し、有機相を分離した。水相をさらにＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出し、次いで有機画分を合わせ、水（３０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍＬ）、次いでブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１００：０、９８：２）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 4.03 分； m/z (ES+) = 402.1 [M + H]+.  
【０１４９】
製造５０：{（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１−［５−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）−ピリミジン−２−イル］ピロリジン−３−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化６１】
2012520284.tif 000065
製造２１で説明される方法を用い、[（３Ｒ，４Ｓ）−１−（５−シアノピリミジン−２−イル)−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４９）から表題化合物を製造した：保持時間= 2.72 分； m/z (ES+) = 435.2 [M + H]+.
【０１５０】
製造５１：３−［（Ｒ）−１−（３−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）エトキシ］アゼチジン−１−カルボン酸 イソプロピルエステル
【化６２】
2012520284.tif 000066
製造２２で説明される方法を用い、３−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）アゼチジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造４３）を{（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１−［５−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）ピリミジン−２−イル］ピロリジン−３−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造５０）と反応させた。カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、６：４）による精製により、表題化合物を得た：保持時間= 4.44 分 ； m/z (ES+) = 630.2 [M + H]+.
【０１５１】
製造５２：[（３Ｒ，４Ｓ）−１−（５−シアノピラジン−２−イル)−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化６３】
2012520284.tif 000067
５−クロロピラジン−２−カルボニトリル（１４０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）および[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８、３００ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）混合物にＤＢＵ（１５０μＬ、１．０１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をアルゴンで５分間バブルし、次いで７０℃で３時間加熱した。室温に冷却後、粗反応混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）および水（７５ｍＬ）で分液処理し、有機相を分離し、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、６０：４０）による精製により表題化合物を得た：保持時間= 3.93 分； m/z (ES+) = 402.1 [M + H]+.
【０１５２】
製造５３：{（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１−［５−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）ピラジン−２−イル］ピロリジン−３−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化６４】
2012520284.tif 000068
製造１２で説明される方法を用い（ただし、反応物は３時間だけ加熱した）、[（３Ｒ，４Ｓ）−１−（５−シアノピラジン−２−イル)−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造５２）から表題化合物を得た：保持時間= 2.73 分； m/z (ES+) = 435.2 [M + H]+.
【０１５３】
製造５４：［（トランス）−１−ベンジル−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化６５】
2012520284.tif 000069
製造４６で説明される方法を用い、２，４，５−トリフルオロベンズアルデヒドから表題化合物を３工程で製造した。LCMS方法 3：保持時間= 3.10 分； m/z (ES+) = 407.3 [M + H]+.
【０１５４】
製造５５：［（トランス）−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化６６】
2012520284.tif 000070
オートクレーブ内の［（トランス）−１−ベンジル−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造５４、４０．１ｇ、９８．８ｍｍｏｌ）のＩＭＳ（３２５ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）混合物溶液をアルゴン雰囲気下に置いた。パラジウム炭素（５％、４．０ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を最少量のトルエンのスラリーとして加え、次いで反応物を水素雰囲気下（５０ａｔｍ）に置き、７２時間撹拌した。Ｃｅｌｉｔｅを通して粗混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を減圧濃縮し、表題化合物を得た。LCMS方法 4：保持時間= 2.42 分； m/z (ES+) = 317.2 [M + H]+.
【０１５５】
製造５６：[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化６７】
2012520284.tif 000071
［（トランス）−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造５５、５９．５ｇ、１８８ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（２００ｍＬ）に懸濁し、７０℃で加熱した。該懸濁液に温めた（Ｓ）−（＋）−ナプロキセン（２１．５ｇ、９３ｍｍｏｌ）溶液を加え、混合物を加熱還流した。加熱を中止し、１６時間撹拌しながら混合物をゆっくりと室温に冷却した。得られた沈殿物を濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、濾液をＤＣＭ（２４００ｍＬ）および１Ｍ  ＮａＯＨ（６００ｍＬ）で分液処理した。有機相を分離し、１Ｍ  ＮａＯＨ、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。全過程を２回目に繰り返し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz, CD3OD): 7.38 - 7.25 (m, 1H), 7.14 - 7.01 (m, 1H).
【０１５６】
製造５７：３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化６８】
2012520284.tif 000072
３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１０．０ｇ、５３．４ｍｍｏｌ）のＨＣｌ／ジオキサン溶液（４Ｍ、１２５ｍＬ）の溶液を室温で４０分間撹拌し、反応溶媒を減圧除去した。残渣をＤＣＭ（１５０ｍＬ）に懸濁し、トリエチルアミン（２２．０ｍＬ、１６０．２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃に冷却した。クロロギ酸イソプロピルのトルエン溶液（１Ｍ、６４ｍＬ、６４ｍｍｏｌ）を滴下して加え、次いで得られた混合物を氷浴から取り出し、室温で１時間撹拌した。クロロギ酸イソプロピルのさらなる一部（５３．４ｍＬ、５３．４ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を室温で１６時間続けた。粗反応混合物を水（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ、９：１：０．１）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 2.29 分； m/z (ES+) = 174.0 [M + H]+. 
【０１５７】
製造５８：３−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化６９】
2012520284.tif 000073
製造９で説明される方法と類似の方法を用いて表題化合物を製造した。最初のワークアップ後、残渣を１Ｍ  ＮａＯＨ溶液に溶解し、Ｅｔ２Ｏで洗浄した。２Ｍ  ＨＣｌで水相をｐＨ１に酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.70 分； m/z (ES+) = 246.2 [M + H]+.
【０１５８】
製造５９：３−（（Ｒ）−１−カルバモイルエトキシ）ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化７０】
2012520284.tif 000074
アルゴン下の３−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造５８、１．００ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液にＥＤＣＩ（０．９４ｇ、４．９０ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（０．６６ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１０分間撹拌した。ＮＨ３のジオキサン溶液（０．０５Ｍ、２０．４μＬ、４０．８０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で４時間加熱した。ＮＨ３／ジオキサンのさらなる一部（０．０５Ｍ、１０ｍＬ）を加え、反応物を１時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で分液処理した。有機相を除去し、水相をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で抽出した。有機画分を合わせ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍＬ）、次いでブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９５：５）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 2.53 分 ； m/z (ES+) = 245.2 [M + H]+.
【０１５９】
製造６０：３−（（Ｒ）-シアノメチルメトキシ）ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化７１】
2012520284.tif 000075
製造１１で説明される方法を用い、３−（（Ｒ）−１−カルバモイルエトキシ）ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造５９）から表題化合物を製造した：保持時間= 3.06 分 ； m/z (ES+) = 227.1 [M + H]+.
【０１６０】
製造６１：３−［（Ｒ）−１−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）エトキシ］ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化７２】
2012520284.tif 000076
製造１２で説明される方法を用い（ただし、反応物の加熱は２時間とした）、３−（（Ｒ）-シアノメチルメトキシ）ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６０）から表題化合物を製造した：保持時間= 1.99 分 ； m/z (ES+) = 260.1 [M + H]+.
【０１６１】
製造６２：３−｛（Ｒ）−１−［５−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］エトキシ｝ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化７３】
2012520284.tif 000077
０℃に冷却した２−クロロピリミジン−２−オール（１０３ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（１０１μＬ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え、反応物をこの温度において１０分間撹拌した。３−［（Ｒ）−１−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）エトキシ］ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６１、１６９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え、氷浴を取り外し、混合物を室温で１時間撹拌した。反応溶媒を濃縮乾燥し、得られた残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、水、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。残渣をトルエンに溶解し、８０℃で１８時間加熱し、次いで１時間加熱還流した。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、１：１）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 3.53 分 ； m/z (ES+) = 382.1 [M + H]+.
【０１６２】
製造６３：１−ピペリジン−４−イルエタノール
【化７４】
2012520284.tif 000078
α−メチル−４−ピリジンメタノール（３．７ｇ、３０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１００ｍＬ）溶液にＡｃＯＨ（１．９ｍＬ、３３ｍｍｏｌ）および酸化白金（０．５ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を水素雰囲気下において室温で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をＭｅＯＨに溶解し、それにＮａＯＨ（１．６ｇ、４０ｍｍｏｌ）および水（１．６ｍＬ）のＭｅＯＨ溶液を加えた。反応物を３０分間撹拌し、溶媒を減圧除去し、得られた残渣をジエチルエーテルに３０分間懸濁した。混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz, CDCl3): 3.63 - 3.55 (m, 1H), 3.39 - 3.31 (m, 2H), 2.7 - 2.6 (m, 2H), 2.01 - 1.92 (m, 2H), 1.76 - 1.69 (m, 0H), 1.67 - 1.54 (m, 2H), 1.51 - 1.42 (m, 1H), 1.1 - 1.14 (m, 3H).
【０１６３】
製造６４：４−（１−ヒドロキシエチル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化７５】
2012520284.tif 000079
３ツ口フラスコ内、アルゴン下の１−ピペリジン−４−イルエタノール（製造６３、５．０ｇ、３８．７６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）溶液にＤＩＰＥＡ（８．８ｍＬ、５０．３９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を０℃に冷却した。クロロギ酸イソプロピルのトルエン溶液（４６．５ｍＬ、４６．５ｍｍｏｌ）を１０分間かけて滴下して加え；次いで反応物を室温に昇温し、さらに２．５時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭに希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ溶液で分液処理した。有機層を分離し、１Ｍ  ＨＣｌ溶液、ブラインで洗浄し、フェーズセパレーターに通した。溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz, CDCl3): 4.97 - 4.87 (m, 1H), 4.28 - 4.14 (m, 2H), 3.66 - 3.55 (m, 1H), 2.77 - 2.63 (m, 2H), 1.88 - 1.81 (m, 1H), 1.67 - 1.59 (m, 1H), 1.48 - 1.38 (m, 1H), 1.26 - 1.16 (m, 11H).
【０１６４】
製造６５：４−[１−（５−ブロモピリジン−２−イルオキシ）エチル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化７６】
2012520284.tif 000080
アルゴン下の４−（１−ヒドロキシエチル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６４、７．４ｇ、３４．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）乾燥溶液を０℃に冷却した。水素化ナトリウム（６０％／ミネラル油、２．８ｇ、６８．８ｍｍｏｌ）を一度に加え、次いで反応物を室温で１時間撹拌した。５−ブロモ−２−クロロピリジン（１３．２ｇ、６８．８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を８０℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃおよび水で分液処理した。有機相を分離し、水、次いでブラインで洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、イソ−ヘキサン（２ｘ６ｍＬ）、次いでジエチルエーテルでトリチュレートし、表題化合物を得た：保持時間= 4.34 分； m/z (ES+) = 371.2 [M + H]+.
【０１６５】
製造６６：４−｛１−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル)ピリジン−２−イルオキシ］エチル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化７７】
2012520284.tif 000081
４−[１−（５−ブロモピリジン−２−イルオキシ）エチル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６５、４．２ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）のジオキサン（９０ｍＬ）溶液に酢酸カリウム（３．３ｇ、３３．９ｍｍｏｌ）、［１，１−ビス(ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（０．９ｇ、１．１ｍｍｏｌ）およびビス（ピナコレート）ジボロン（３．４ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物にアルゴンを１０分間バブルし；１１０℃で１６時間加熱した。溶媒を減圧除去し、次いで粗物質をカラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、１００：０、９７．５：２．５、９５：５）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 4.55 分； m/z (ES+) = 419.4 [M + H]+.
【０１６６】
製造６７：（３Ｓ，４Ｓ）−４−アジド−１−ベンジルピロリジン−３−イルアミン
【化７８】
2012520284.tif 000082
０℃に冷却した（３Ｓ，４Ｓ）−３，４−ジアジド−１−ベンジルピロリジン（１５．６ｇ、６４．１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５００ｍＬ）溶液にトリフェニルホスフィン（１６．５ｇ、６２．８１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液を４時間かけて滴下して加え、得られた混合物を室温に昇温し、１６時間撹拌した。反応溶媒を減圧除去し、得られた残渣をＴＨＦ（５００ｍＬ）および水（１．３ｍＬ）に再溶解し、４時間加熱還流し、次いで室温で１６時間撹拌した。反応溶媒を減圧除去し、得られた残渣をＥｔ２Ｏでトリチュレートした。沈殿物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をＥｔ２Ｏに再び溶解し、濾過した。濾液を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、９０：１０、８０：２０、５０：５０、０：１００、次いでＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ、９：１）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 0.77 分； m/z (ES+) = 218.1 [M + H]+.
【０１６７】
製造６８：(（３Ｓ，４Ｓ）−４−アジド−１−ベンジルピロリジン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化７９】
2012520284.tif 000083
０℃に冷却した（３Ｓ，４Ｓ）−４−アジド−１−ベンジルピロリジン−３−イルアミン（製造６７、６．０ｇ、２７．７４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４．６ｍＬ、３３．２９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液にジ炭酸ジｔｅｒｔ−ブチル（７．３ｇ、３３．２９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を２０分間かけて滴下して加えた。得られた混合物を室温に昇温し、７２時間撹拌した。反応溶媒を飽和ＮａＨＣＯ３溶液、次いでブラインで洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）で精製し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz, CDCl3): 7.37 - 7.26 (m, 5H), 4.09 - 4.02 (m, 1H), 3.84 - 3.76 (m, 1H), 3.68 - 3.59 (m, 2H), 3.12 - 3.01 (m, 1H), 2.91 - 2.82 (m, 1H), 2.55 - 2.35 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
【０１６８】
製造６９：(（３Ｓ，４Ｓ）−４−アミノ−１−ベンジルピロリジン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化８０】
2012520284.tif 000084
WO2007/148185で説明される方法を用い、(（３Ｓ，４Ｓ）−４−アジド−１−ベンジルピロリジン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造６８）から表題化合物を得た。
【０１６９】
製造７０：［（３Ｓ，４Ｓ）−１−ベンジル−４−（２−オキソピペリジン−１−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化８１】
2012520284.tif 000085
WO2007/148185で説明される方法を用い、(（３Ｓ，４Ｓ）−４−アミノ−１−ベンジルピロリジン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造６９）から表題化合物を２工程で製造した。
【０１７０】
製造７１：［（３Ｓ，４Ｓ）−４−（２−オキソピペリジン−１−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化８２】
2012520284.tif 000086
［（３Ｓ，４Ｓ）−１−ベンジル−４−（２−オキソピペリジン−１−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造７０、２．６ｇ、７．０７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１４０ｍＬ）溶液をＨ−Ｃｕｂｅ装置（１０％ ｐｄ／Ｃ Ｃａｔｃａｒｔ ７０、１０バール、９０℃）に流速１ｍＬ／分で通した。溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：1H NMR δH (400MHz, CDCl3):  5.25 - 5.07 (m, 1H), 4.85 - 4.62 (m, 1H), 4.34 - 4.07 (m, 1H), 3.49 - 3.28 (m, 3H), 3.24 (s, 1H), 2.99 (s, 1H), 2.87 - 2.73 (m, 1H), 2.52 - 2.39 (m, 2H), 2.38 - 2.22 (m, 2H), 1.91 - 1.74 (m, 1H), 1.54 - 1.38 (m, 9H).
【０１７１】
製造７２：［（３Ｓ，４Ｓ）−１−（５−ブロモピリミジン−２−イル)−４−（２−オキソピペリジン−１−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化８３】
2012520284.tif 000087
［（３Ｓ，４Ｓ）−４−（２−オキソピペリジン−１−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造７１、４１５ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−クロロピリミジン（２８３ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（２１９μＬ、１．４６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）混合物を７０℃で１時間加熱した。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃおよび水で分液処理した。有機相を分離し、ブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、１：１）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 3.44分 ； m/z (ES+) = 440.1 [M + H]+.
【０１７２】
製造７３：[（３Ｒ，４Ｓ）−１−（５−ブロモピリミジン−２−イル)−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化８４】
2012520284.tif 000088
[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８、５４０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−クロロピリミジン（３５０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（２７０μＬ、１．８ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）混合物を７０℃で３０分間加熱した。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃおよび水で分液処理した。有機相を分離し、ブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、１：１）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 4.32分 ； m/z (ES+) = 455.1 [M + H]+. 
【０１７３】
実施例１：４−（５−{６−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリジン−３−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化８５】
2012520284.tif 000089
４−［５−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造５、１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、［（トランス）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸−９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル塩酸塩（製造３０、１７２ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１４３μＬ、０．８２ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（２ｍＬ）混合物を反応完了まで８０℃で加熱した。混合物を少量のＤＣＭで希釈し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９６：４）で精製した。さらにキラルＨＰＬＣ（ＭＴＢＥ：ＥｔＯＨ：ＢＡ ８０：２０：０．１、１１ｍｌ／分、２８５ｎｍ、保持時間＝３５．０分）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 2.75 分； m/z (ES+) = 525.2 [M + H]+.
【０１７４】
実施例２：４−（５−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化８６】
2012520284.tif 000090
４−［５−（６−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６、１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、［（トランス）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸−９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル塩酸塩（製造３０、１７２ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１４３μＬ、０．８３ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（２ｍＬ）混合物を８０℃で１６時間加熱した。反応混合物を減圧濃縮し、ＤＣＭ（１５０ｍＬ）に再溶解した。有機混合物を水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９６：４）、次いでキラルＨＰＬＣ（ＭｅＯＨ：ＴＨＦ：ＣＨＣｌ３  ５５：２５：２０、１１ｍｌ／分、２８５ｎｍ、保持時間＝６．８分)で精製し、中間体生成物４−（５−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステルを得た：保持時間= 4.89 分； m/z (ES+) = 748.3 [M + H]+.
０℃に冷却した該生成物のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液にピペリジン（０．５ｍＬ）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を滴下して加えた。混合物をこの温度において２時間撹拌し、溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９８：２、９２：８）で精製した。ＴｓＯＨ（１ｅｑ．）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を加え、溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.78 分； m/z (ES+) = 526.4 [M + H]+.
【０１７５】
実施例３：４−（５−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化８７】
2012520284.tif 000091
４−［５−（６−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６、６５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８、５９ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３８μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（１ｍＬ）混合物を反応完了まで８０℃で加熱した。反応混合物を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９９：１、９６：４）、中間体生成物４−（５−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸 イソプロピルエステルを得た：保持時間= 4.47 分； m/z (ES+) = 644.5 [M + H]+.
０℃に冷却した該生成物のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に ＴＦＡ（１ｍＬ）を滴下して加え、反応物を室温で４５分間撹拌した。混合物をＤＣＭ（７５ｍＬ）で希釈し、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶液を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９６：４）で精製し、表題化合物を遊離アミンとして得た。ＴｓＯＨ（１ｅｑ．）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を該生成物に加え、溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.79 分； m/z (ES+) = 544.2 [M + H]+. 
【０１７６】
実施例４：４−（５−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化８８】
2012520284.tif 000092
実施例３で説明される方法を用い、４−［５−（６−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸 イソプロピルエステル（製造６）および[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造３７）から表題化合物を製造した：保持時間= 2.75 分； m/z (ES+) = 544.3 [M + H]+. 
【０１７７】
実施例５：４−（３−｛６−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリジン−３−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化８９】
2012520284.tif 000093
実施例１で説明される方法を用い、４−［３−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造７）を［（トランス）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸−９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル塩酸塩（製造３０）と反応させ、表題化合物を遊離アミンとして得た（キラルＨＰＬＣ：ＭＴＢＥ：ＭｅＯＨ：ＢＡ  ８０：２０：０．１、１２ｍｌ／分、２８５ｎｍ、保持時間＝３２．８分）。ＴｓＯＨ（１ｅｑ．）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を該生成物に加え、溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.80 分； m/z (ES+) = 525.2 [M + H]+.
【０１７８】
実施例６：４−（３−｛６−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリジン−３−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化９０】
2012520284.tif 000094
実施例５で説明される方法を用い、表題化合物を４−［３−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造７）および［（トランス）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸−９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル塩酸塩（製造３０）から製造した。キラルＨＰＬＣ：ＭＴＢＥ：ＭｅＯＨ：ＢＡ  ８０：２０：０．１、１２ｍｌ／分、２８５ｎｍ、保持時間＝２９．２分）。
LCMS：保持時間= 2.80 分 ； m/z (ES+) = 525.2 [M + H]+. 
【０１７９】
実施例７：４−（３−｛６−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリジン−３−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化９１】
2012520284.tif 000095
実施例５で説明される方法を用い、表題化合物を４−｛（Ｒ−１−［３−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造８）および［（トランス）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸−９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル塩酸塩（製造３０）から製造した（キラルＨＰＬＣ：ＭＴＢＥ：ＭｅＯＨ：ＢＡ  ８０：２０：０．１、１２ｍｌ／分、２８５ｎｍ、保持時間＝２０．４分）。
LCMS：保持時間= 2.89 分； m/z (ES+) = 539.5 [M + H]+.
【０１８０】
実施例８：４−（３−｛６−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリジン−３−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化９２】
2012520284.tif 000096
実施例３で説明される方法を用い、４−［３−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造７）を[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８）と反応させた。ＴＦＡと反応後、粗混合物をＳＣＸカートリッジに通し、ＭｅＯＨ、次いでＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨで溶出し、塩基性の画分を回収し、表題化合物を遊離アミンとして得た。該生成物のＭｅＯＨ溶液にＴｓＯＨ（１ｅｑ．）のＭｅＯＨ溶液を加え、溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.82 分； m/z (ES+) = 543.2 [M + H]+. 
【０１８１】
実施例９：４−［（Ｒ）−１−（３−｛６−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリジン−３−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化９３】
2012520284.tif 000097
４−｛（Ｒ−１−［３−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造８、７９ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８、６０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３８μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（１ｍＬ）混合物を８０℃で７２時間加熱し、次いでそれ以上反応しなくなるまで８５℃で加熱した。混合物を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９９：１、９７：３）で精製し、中間体生成物４−［（Ｒ）−１−（３−｛６−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリジン−３−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステルを得た：保持時間= 4.39 分； m/z (ES+) = 657.4 [M + H]+.
０℃に冷却した該生成物のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液にＴＦＡ（１ｍＬ）を滴下して加え、反応物を室温で４５分間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９７：３）で精製し、表題化合物を遊離アミンとして得た。ＴｓＯＨ（１ｅｑ．）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を該生成物に加え、次いで溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.93 分； m/z (ES+) = 557.3 [M + H]+.
【０１８２】
実施例１０：４−［（Ｒ）−１−（５−{２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸 イソプロピルエステル
【化９４】
2012520284.tif 000098
実施例３で説明される方法を用い、４−｛（Ｒ）−１−［５−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造１３）を[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８）と反応させた。ＴＦＡと反応後、粗混合物をＳＣＸカートリッジに通し、ＭｅＯＨ、次いでＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨで溶出し、塩基性の画分を回収し、表題化合物を得た：保持時間= 2.80 分； m/z (ES+) = 558.2 [M + H]+.
【０１８３】
実施例１１：４−［（Ｒ）−１−（５−｛５−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピラジン−２−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化９５】
2012520284.tif 000099
４−｛（Ｒ）−１−［５−（５−クロロピラジン−２−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造１４、１２７ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）溶液に[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８、９８ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（４８μＬ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を７０℃で１時間加熱した。混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で分液処理し、有機相を分離した。水相をＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出し、次いで有機画分を合わせ、ブラインで洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９８：２）で精製し、中間体生成物４−［（Ｒ）−１−（５−｛５−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピラジン−２−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステルを得た：保持時間= 4.43 分； m/z (ES+) = 658.3 [M + H]+.
０℃に冷却した該生成物のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液にＴＦＡ（１ｍＬ）を滴下して加え、完了まで室温で撹拌した。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９５：５）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 2.74 分； m/z (ES+) = 558.2 [M + H]+.
【０１８４】
実施例１２：４−｛５−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−５’イル］−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル塩酸塩
【化９６】
2012520284.tif 000100
４−［５−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造５、３８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、［（３Ｒ，４Ｒ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピペリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造１９、３１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１８μＬ、０．１１ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（０．３０ｍＬ）混合物を反応完了まで８０℃で加熱した。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧濃縮し、中間体生成物４−｛５−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルアミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−５’イル］−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステルを得た：保持時間= 4.53 分； m/z (ES+) = 657.2 [M + H]+.
該生成物のＤＣＭ（３ｍＬ）溶液にＴＦＡ（３ｍＬ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。粗混合物をＳＣＸカートリッジに通し、ＭｅＯＨ、次いでＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨで精製し、塩基性の画分を回収し、減圧濃縮し、表題化合物を遊離アミンとして得た。残渣をＨＣｌのジオキサン溶液（４Ｍ）に溶解し、次いで溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.85 分； m/z (ES+) = 557.3 [M + H]+.
【０１８５】
実施例１３：４−｛３−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−５’−イル］−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル二塩酸塩
【化９７】
2012520284.tif 000101
実施例１２で説明される方法を用い、表題化合物を４−［３−（６−クロロピリジン−３−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸 イソプロピルエステル（製造７）および［（３Ｒ，４Ｒ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピペリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造１９）から製造した。ＳＣＸカートリッジで精製後、残渣をさらにプレパラティブＨＰＬＣで精製した。実施例１２で説明される方法を用いて塩を形成させ、表題化合物をその二塩酸塩として得た：保持時間= 2.73 分； m/z (ES+) = 557.2 [M + H]+.  
【０１８６】
実施例１４：４−（３−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化９８】
2012520284.tif 000102
４−［３−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造２５、４０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）および[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造３７、３８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（０．４ｍＬ）溶液にＤＢＵ（１６μＬ、０．１０ｍｍｏｌ）を加え、混合物にアルゴンを１分間バブルし、７０℃で１６時間加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）で分液処理し、有機相を分離した。水相をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出し、次いで有機画分を合わせ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１００：０、９８：２）による精製により、中間体生成物４−（３−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステルを得た：保持時間= 4.43 分； m/z (ES+) = 644.3 [M + H]+.
アルゴン下、０℃に冷却した該生成物のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液にＴＦＡ（１ｍＬ）を加え、反応物をこの温度において２時間撹拌した。さらにＴＦＡ（０．５ｍＬ）を加え、反応が完了するまで撹拌を続けた。粗混合物をＳＣＸカートリッジに通し、ＭｅＯＨ、次いでＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨで溶出した。塩基性の画分を回収し、減圧濃縮し、表題化合物を遊離アミンとして得た。該生成物のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液にＴｓＯＨ（１ｅｑ．）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を加え、次いで溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.86 分； m/z (ES+) = 544.2 [M + H]+. 
【０１８７】
以下の実施例は、実施例１４で説明される方法を用い、適当な２−クロロピリミジン中間体と適当なアミンの基礎的要素との反応により製造された：
【表３】
2012520284.tif 000103
【０１８８】
実施例１９：４−（３−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化９９】
2012520284.tif 000104
アルゴン下の４−［３−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造２５、１９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）および[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸−９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル塩酸塩（製造３２、３１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（０．４ｍＬ）溶液にＤＢＵ（１５μＬ、０．１０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を８０℃で６５時間加熱した。混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、得られた溶液をＥｔＯＡｃ（３ｘ３０ｍＬ）で抽出した。有機画分を合わせ、水（３０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３０ｍＬ）、およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１００：０、９８：２、９７：３、９５：５、９２：８）で精製し、表題化合物を遊離アミンとして得た。該生成物のＤＣＭ（４ｍＬ）溶液にＴｓＯＨ（１ｅｑ．）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を加え、溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.74 分； m/z (ES+) = 526.2 [M + H]+.
【０１８９】
実施例２０：４−［（Ｒ）−１−（３−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化１００】
2012520284.tif 000105
実施例１９で説明される方法を用い、表題化合物を４−｛（Ｒ）−１−［３−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造２８）と[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸−９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル塩酸塩（製造３２）の反応により製造した：保持時間= 2.84 分； m/z (ES+) = 540.3 [M + H]+.  
【０１９０】
実施例２１：４−［（Ｒ）−１−（５−{６−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリダジン−３−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化１０１】
2012520284.tif 000106
４−（（Ｒ）−１−｛５−［６−（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）ピリダジン−３−イル］−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル｝エトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造３８、１２ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）および[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８、８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）混合物を７０℃で１時間加熱した。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機画分を合わせ、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去し、中間体生成物４−［（Ｒ）−１−（５−{６−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリダジン−３−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステルを得た：保持時間= 4.23 分； m/z (ES+) = 658.3 [M + H]+.
０℃に冷却した該生成物のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液にＴＦＡ（０．５ｍＬ）を滴下して加え、反応物を室温で１時間撹拌した。粗混合物をＳＣＸカートリッジに通し、ＭｅＯＨ、次いでＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨで溶出し、塩基性の画分を回収し、減圧濃縮した。さらにカラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９５：５）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 2.72 分； m/z (ES+) = 558.2 [M + H]+.  
【０１９１】
実施例２２：３−［（Ｒ）−１−（３−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）エトキシ］アゼチジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩
【化１０２】
2012520284.tif 000107
０℃に冷却した３−［（Ｒ）−１−（３−｛２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）エトキシ］アゼチジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造５１、１０９ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液にＴＦＡ（１．０ｍＬ）を滴下して加え、反応物をこの温度において２時間撹拌した。ＴＦＡのさらなる一部（０．５ｍＬ）を加え、撹拌を３０分間続けた。粗反応混合物をＳＣＸカートリッジに通し、ＭｅＯＨ、次いでＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨで溶出し、塩基性の画分を回収し、減圧濃縮した。該生成物のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液にＴｓＯＨ（１ｅｑ．）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を加え、溶媒を減圧除去し、表題化合物を得た：保持時間= 2.73 分； m/z (ES+) = 530.2 [M + H]+.
【０１９２】
実施例２３：４−［（Ｒ）−１−（３−｛５−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピラジン−２−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化１０３】
2012520284.tif 000108
４−（（Ｒ）−１−カルボキシエトキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造９、７２ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液にＥＤＣＩ（６３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（４５ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１０分間撹拌した。｛（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１−［５−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）ピラジン−２−イル］ピロリジン−３−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造５３、１２０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１６時間撹拌した。反応溶媒を減圧濃縮し、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で分液処理した。有機相を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧濃縮した。残渣をトルエンに溶解し、１６時間加熱還流した。溶媒を減圧除去し、カラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９７：３）で精製し、中間体生成物を得た：保持時間= 4.39 分； m/z (ES+) = 658.3 [M + H]+.
０℃に冷却した該生成物のＤＣＭ（７ｍＬ）溶液にＴＦＡ（０．７ｍＬ）を加えた。氷浴を取り外し、反応物を室温で１時間撹拌した。プレパラティブＨＰＬＣ、次いでカラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９５：５）で精製し、表題化合物を得た：保持時間= 2.79 分； m/z (ES+) = 558.2 [M + H]+.    
【０１９３】
実施例２４：４−［（Ｒ）−１−（５−{２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化１０４】
2012520284.tif 000109
４−｛（Ｒ）−１−［５−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］エトキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造１３、１００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）および[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造５６、８０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１．０ｍＬ）混合物をＤＢＵ（３８μＬ、０．２５ｍｍｏｌ）で処理し、反応物を７０℃で３時間加熱した。反応混合物を水（７０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。有機画分を合わせ、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧除去し、中間体生成物４−［（Ｒ）−１−（５−{２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル）エトキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステルを得た：保持時間= 4.69 分； m/z (ES+) = 676.3 [M + H]+.
０℃に冷却した該生成物のＤＣＭ（７ｍＬ）溶液にＴＦＡ（０．７ｍＬ）を滴下して加え、得られた反応物を室温で１時間撹拌した。粗混合物をＳＣＸカートリッジに通し、ＭｅＯＨ、次いでＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨで溶出し、塩基性の画分を回収し、減圧濃縮し、表題化合物を得た：保持時間= 2.88 分； m/z (ES+) = 576.2 [M + H]+.
【０１９４】
実施例２５：（Ｒ）−３−［（Ｒ）−１−（５−{２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル）エトキシ］ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化１０５】
2012520284.tif 000110
３−｛（Ｒ）−１−［５−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］エトキシ｝ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６２、６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８、４８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２９μＬ、０．１８ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（１ｍＬ）混合物を反応完了まで８０℃で加熱した。溶媒を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、１：１）、次いでキラルＨＰＬＣ （ＩＨ：ＥｔＯＨ：ＴＨＦ  ７０：２０：１０、１５ｍｌ／分、２９０ｎｍ、保持時間＝１１．４分）で精製し、中間体生成物（Ｒ）−３−［（Ｒ）−１−（５−{２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル）エトキシ］ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステルを得た：保持時間＝4.49 分； m/z (ES+) = 644.5 [M + H]+.
０℃に冷却した該生成物のＤＣＭ（０．５ｍＬ）溶液にＴＦＡ（０．０５ｍＬ）を滴下して加え、反応物を２時間撹拌した。ＴＦＡのさらなる一部（０．０５ｍＬ）を加え、反応完了まで撹拌を続けた。粗混合物をＳＣＸカートリッジに通し、ＭｅＯＨ、次いでＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨ（１０％）で溶出した。塩基性の画分を回収し、減圧濃縮し、表題化合物を得た：保持時間= 2.83 分； m/z (ES+) = 544.0 [M + H]+.
【０１９５】
実施例２６：（Ｓ）−３−［（Ｒ）−１−（５−{２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル）エトキシ］ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化１０６】
2012520284.tif 000111
実施例２５で説明される方法を用い、３−｛（Ｒ）−１−［５−（２−クロロピリミジン−５−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］エトキシ｝ピロリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６２）と[（３Ｒ，４Ｓ）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造４８）の反応により表題化合物を製造した（キラルＨＰＬＣ：ＩＨ：ＥｔＯＨ：ＴＨＦ  ７０：２０：１０、１５ｍｌ／分、２９０ｎＭ、保持時間：９．８分）。
LCMS：保持時間= 2.72 分； m/z (ES+) = 544.2 [M + H]+. 
【０１９６】
実施例２７：４−［（Ｓ）−１−（５−{２−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２−オキソピペリジン−１−イル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝ピリジン−２−イルオキシ）エチル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化１０７】
2012520284.tif 000112
４−｛１−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル)ピリジン−２−イルオキシ］エチル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６６、３５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）および［（３Ｓ，４Ｓ）−１−（５−ブロモピリミジン−２−イル)−４−（２−オキソピペリジン−１−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造７２、４４２ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７ｍＬ）および水（１．８ｍＬ）混合物溶液に［１，１−ビス(ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（８２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４１８ｍＬ、３．００ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をマイクロ波反応器内において８０℃で２０分間加熱し；次いでさらに５分間、８０℃で反応させ、Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。有機混合物を水、１Ｍ  クエン酸、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、次いでブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧除去した。カラムクロマトグラフィ（ＩＨ：ＥｔＯＡｃ、１：１、０：１００）、次いでキラルＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ：ＴＨＦ：ＭｅＯＨ、６７：３０：３、１ｍｌ/分、２８５ｎｍ、保持時間＝７．４８分）で精製し、中間体生成物４−［（Ｓ）−１−（５−{２−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２−オキソピペリジン−１−イル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝ピリジン−２−イルオキシ）エチル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステルを得た：保持時間= 4.18分 ； m/z (ES+) = 652.2 [M + H]+.
該生成物のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液にＴＦＡ（０．５ｍＬ）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。粗混合物を直接ＳＣＸカートリッジに通し、ＭｅＯＨ、次いでＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨ（１０％）で溶出した。塩基性の画分を回収し、減圧濃縮し、表題化合物を得た：保持時間= 2.83分 ； m/z (ES+) = 552.4 [M + H]+.
【０１９７】
実施例２８：４−［（Ｓ）−１−（５−{２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝ピリジン−２−イルオキシ）エチル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化１０８】
2012520284.tif 000113
実施例２７で説明される方法を用い、４−｛１−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル)ピリジン−２−イルオキシ］エチル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６６）と[（３Ｒ，４Ｓ）−１−（５−ブロモピリミジン−２−イル)−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造７３）の反応により表題化合物を製造した（キラルＨＰＬＣ条件および中間体の保持時間：ＭＴＢＥ：ＴＨＦ  ８５：１５、１ｍｌ／分、２８５ｎｍ、保持時間＝８．６分）。
LCMS：保持時間= 3.00 分 ； m/z (ES+) = 567.3 [M + H]+.
【０１９８】
実施例２９：４−［（Ｒ）−１−（５−{２−[（３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル］ピリミジン−５−イル｝ピリジン−２−イルオキシ）エチル］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
【化１０９】
2012520284.tif 000114
実施例２７で説明される方法を用い、４−｛１−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−イルオキシ］エチル｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（製造６６）と[（３Ｒ，４Ｓ）−１−（５−ブロモピリミジン−２−イル)−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（製造７３）の反応から表題化合物を製造した（キラルＨＰＬＣ条件および中間体の保持時間：ＭＴＢＥ：ＴＨＦ  ８５：１５、１ｍｌ／分、２８５ｎｍ、保持時間＝７．２分）。
LCMS：保持時間= 3.10 分 ； m/z (ES+) = 567.3 [M + H]+.
【０１９９】
本発明の化合物の生物学的活性は以下のアッセイシステムにおいて試験されてもよい。
【０２００】
（ＧＰＲ１１９酵母レポーターアッセイ）
酵母レポーターアッセイ
酵母細胞ベースのレポーターアッセイは先に文献に記載されている（例えば、Miret J. J. et al, 2002, J. Biol. Chem., 277：6881-6887; Campbell R.M. et al, 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett., 9：2413-2418; King K. et al, 1990, Science, 250：121-123); WO 99/14344; WO 00/12704; および US 6,100,042参照）。簡潔には、内因性酵母Ｇ−アルファ（ＧＰＡ１）を欠損させ、多様な技法を用いて構築したＧ−タンパク質キメラで置き換えるよう酵母細胞を操作したものである。さらに、内因性酵母ＧＰＣＲ、Ｓｔｅ３を欠損させ、最適な哺乳類ＧＰＣＲを異種発現させた。酵母において、フェロモンシグナリング伝達経路における要素が、これは真核細胞でも保存されているが（例えば、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ経路）、Ｆｕｓ１の発現を駆動する。β-ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）をＦｕｓ１プロモーター制御下に置くことにより、受容体の活性化が酵素の読み出しに繋がるシステムが構築されている。
【０２０１】
Agatep et alにより記載された酢酸リチウム法の変法により、酵母細胞を形質転換した（Agatep, R. et al, 1998, Transformation of Saccharomyces cerevisiae by the lithium acetate/single-stranded carrier DNA/polyethylene glycol (LiAc/ss-DNA/PEG) protocol. Technical Tips Online, Trends Journals, Elsevier）。簡潔には、酵母細胞を酵母トリプトンプレート（ＹＴ）上で終夜成長させた。キャリアー一本鎖ＤＮＡ（１０μｇ）、２つのＦｕｓ１ｐ-ＬａｃＺレポータープラスミド各２μｇ（１つはＵＲＡ選択マーカー、１つはＴＲＰを有する）、酵母発現ベクター（２μｇの複製起点）に組み込んだＧＰＲ１１９（ヒトまたはマウスの受容体）２μｇおよび酢酸リチウム／ポリエチレングリコール／ＴＥバッファーをエッペンドルフチューブにピペットで入れた。受容体／受容体不含コントロールを含んだ酵母発現プラスミドはＬＥＵマーカーを有する。酵母細胞をこの混合物に接種し、反応を３０℃で６０分間進めた。酵母細胞に４２℃で１５分間熱ショックを与えた。次いで、細胞を洗浄し、選択用プレートに播種した。選択用プレートは、既定の合成酵母培地からＬＥＵ、ＵＲＡおよびＴＲＰ（ＳＤ−ＬＵＴ）を差し引いたものである。３０℃で２−３日間インキュベート後、選択用プレートに生えたコロニーをＬａｃＺアッセイで試験した。
【０２０２】
β−ガラクトシダーゼの蛍光定量的酵素アッセイを行うために、ヒトまたはマウスＧＰＲ１１９受容体を保持する酵母細胞を液体ＳＤ−ＬＵＴ培地で不飽和濃度まで終夜成長させた（即ち、細胞はまだ分裂中であり、未だ静止期には達していなかった）。これらの細胞を新鮮な培地で最適なアッセイ濃度に希釈し、９０μＬの酵母細胞を９６−ウェルの黒色ポリスチレンプレート（Costar）に加えた。ＤＭＳＯに溶解し、１０％ＤＭＳＯで１０ｘ濃度に希釈した化合物をプレートに加え、プレートを３０℃に４時間置いた。４時間後、β−ガラクトシダーゼの基質を各ウェルに加えた。これらの実験において、フルオレセインを放出し、蛍光定量の読み出しを可能にする酵素の基質であるフルオレセインジ（β−Ｄ−ガラクトシダーゼ）（ＦＤＧ）を用いた。２０μＬ／ウェルの５００μＭ  ＦＤＧ／２．５％ Ｔｒｉｔｏｎ １００を加えた（界面活性剤は細胞の透過性を維持するために必要である）。細胞と基質を６０分間インキュベート後、２０μＬ／ウェルの１Ｍ  炭酸ナトリウムを加えて反応を終了させ、蛍光シグナルを増強した。蛍光光度計を用いて４８５／５３５ｎｍでプレートを読み取った。
【０２０３】
このアッセイにおいて、実施例１から２９の全てが、蛍光シグナルをバックグランドシグナル（即ち、化合物不含１％ＤＭＳＯ存在下で得られたシグナル）の少なくとも〜１．５倍に増強する活性を示した。少なくとも５倍に増強する本発明の化合物が好ましいであろう。
【０２０４】
ｃＡＭＰアッセイ
組み換えヒトＧＰＲ１１９を安定発現している細胞株を確立し、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の細胞内レベルに対する本発明の化合物の影響の調査にこの細胞株を用いた。細胞の単層をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、刺激バッファー（＋１％ ＤＭＳＯ）中の様々な濃度の化合物により３７℃で３０分間刺激した。次いで、細胞を溶解し、Perkin Elmer AlphaScreenTM (Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay) cAMP キットを用いてｃＡＭＰ含量を決定した。バッファーおよびアッセイ条件は製造者のプロトコルに記載の通りである。
【０２０５】
本発明の化合物により濃度依存的な細胞内ｃＡＭＰレベルが得られ、通常ＥＣ５０は＜１０μＭであった。ｃＡＭＰアッセイにおいて１μＭ以下のＥＣ５０を示す化合物が好ましいであろう。
【０２０６】
ＤＰＰ−ＩＶアッセイ方法
ＤＰＰ−ＩＶ活性は、蛍光発生ペプチド基質であるＨ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−７−アミノ−４−メチルクマリン（ＧＰ−ＡＭＣ）の切断のモニターにより測定した（生成物である７−アミノ−４−メチルクマリンは励起３８０ｎｍ、発光４６０ｎｍにおける蛍光により定量化される）。アッセイは、９６−ウェルプレート（Ｂｌａｃｋ ＯｐｔｉＰｌａｔｅ−９６Ｆ）、総体積１００μＬ／ウェル（５０ｍＭ  トリス、ｐＨ７．６、１００μＭ  ＧＰ−ＡＭＣ、１０−２５μＵ  組み換えヒトＤＰＰ−ＩＶ、および１％ＤＭＳＯの最終濃度における様々な希釈の阻害剤からなる）において行った。３７℃で３０分間インキュベート後、プレートを蛍光光度計で読み取った。組み換えヒトＤＰＰ−ＩＶ（Ａｓｎ２９−Ｐｒｏ７６６残基）はＢｉｏＭｏｌから購入した。
【０２０７】
実施例１から５３の全てが、このアッセイにおいて＜２０μＭのＩＣ５０を有していた。式（Ｉａ）の化合物は通常＜２０μＭのＩＣ５０を有していた。
【０２０８】
（膵β細胞（ＨＩＴ−Ｔ１５）のインビトロモデルにおける本発明の化合物の抗糖尿病効果）
細胞培養
ＨＩＴ−Ｔ１５細胞（継代数６０）をＡＴＣＣから得、１０％ウシ胎児血清および３０ｎＭ亜セレン酸ナトリウムを含んだＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。全ての実験は、この細胞株が継代数８１回以上で性質が変わることを記載した文献に従い(Zhang HJ, Walseth TF, Robertson RP. Insulin secretion and cAMP metabolism in HIT cells. Reciprocal and serial passage-dependent relationships. Diabetes. 1989 Jan;38(1)：44-8)、７０回以下の継代数の細胞で行われた。
【０２０９】
ｃＡＭＰアッセイ
ＨＩＴ−Ｔ１５細胞を標準的な培養用培地を用い、９６ウェルプレートに１００，０００細胞／０．１ｍＬ／ウェルで播種し、２４時間培養し、培地を廃棄した。細胞を室温で１５分間、１００μｌの刺激バッファー（ハンクス平衡塩類溶液、５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．５ｍＭ ＩＢＭＸ、０．１％ ＢＳＡ、ｐＨ７．４）でインキュベートした。これを廃棄し、０．５％ＤＭＳＯ存在下の０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０μＭの範囲の刺激バッファー中の化合物希釈物で置き換えた。細胞を室温で３０分間インキュベートした。次いで、７５μＬの溶解バッファー（５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．３％ Ｔｗｅｅｎ−２０、０．１％ ＢＳＡ、ｐＨ７．４）を各ウェルに加え、プレートを９００ｒｐｍで２０分間振盪した。微粒子状物質を３０００ｒｐｍ、５分間の遠心により除去し、次いでサンプルを３８４−ウェルプレートに２つの複製で移し、Perkin Elmer AlphaScreen cAMP assayキットの説明書に従って次に進んだ。簡単には、８μＬのサンプル、５μＬのアクセプタービーズ混合物および１２μＬの検出混合物を含む２５μＬの反応液を、最終的な反応成分の濃度がキットの説明書の指示と同じになるようにセットアップした。反応液を室温で１５０分間インキュベートし、プレートをPackard Fusion装置で読み取った。ｃＡＭＰの測定値を既知のｃＡＭＰ量の標準曲線（０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０、１００、３００、１０００ｎＭ）と比較し、読み取った値をｃＡＭＰ量の絶対値に変換した。データはＸＬｆｉｔ ３ソフトウェアで解析した。
【０２１０】
代表的な本発明の化合物は、ｃＡＭＰを１０μＭ以下のＥＣ５０において増加させることが示された。ｃＡＭＰアッセイにおいて１μＭ以下のＥＣ５０を示す化合物が好ましいであろう。
【０２１１】
インスリン分泌アッセイ
ＨＩＴ−Ｔ１５細胞を標準的な培養用培地で１２−ウェルプレートに１０６細胞／１ｍｌ／ウェルで播種し、３日間培養し、培地を廃棄した。細胞を補足クレブス・リンガーバッファー（ＫＲＢ）（１１９ｍＭ  ＮａＣｌ、４．７４ｍＭ  ＫＣｌ、２．５４ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．１９ｍＭ  ＭｇＳＯ４、１．１９ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、２５ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１％ウシ血清アルブミン）で２回洗浄した。細胞を１ｍｌ  ＫＲＢで３７℃において３０分間インキュベートし、バッファーを廃棄した。これに次いで、ＫＲＢで３０分間２回目のインキュベートを行い、これを回収し、各ウェルにおけるインスリンの基底分泌レベルの測定に用いた。次いで、１ｍｌ  ＫＲＢ中の化合物希釈物（０、０．１、０．３、１、３、１０μＭ）を２つの複製ウェルに加え、５．６ｍＭ  グルコースを添加した。３７℃で３０分間インキュベート後、インスリンレベルを測定するためにサンプルを採取した。インスリンの測定は、ＭｅｒｃｏｄｉａラットインスリンＥＬＩＳＡキットを用い、製造者の指示に従い、既知のインスリン濃度の標準曲線を用いて行った。各ウェルについて、インスリンレベルは、グルコースの非存在下におけるインキュベーション前から基底分泌レベルを差し引いて補正した。データはＸＬｆｉｔ ３ソフトウェアを用いて解析した。
【０２１２】
本発明の化合物は１０μＭ以下のＥＣ５０においてインスリン分泌を増加させることが望ましい。
【０２１３】
経口グルコース負荷試験
本発明の化合物が経口グルコース（Ｇｌｃ）耐性に及ぼす影響は、オスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを用いて評価することができる。ラットはＧｌｃ投与の１６時間前から絶食させ、試験中も絶食状態を維持した。試験中、ラットは水を自由に摂取することができた。Ｇｌｃ負荷投与の６０分前に動物の尾に切り口を入れ、次いで血液（１滴）をＧｌｃ基底レベルの測定用に採取した。次いで、ラットの体重を量り、試験化合物またはベヒクル（２０％ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン水溶液)を経口投与し、４５分後にさらに血液サンプルを採取し、Ｇｌｃ負荷（２ｇ  ｋｇ−１、経口）を行った。血液サンプルは、Ｇｌｃ投与後、尾の切り口から５、１５、３０、６０、１２０および１８０分後に採取した。血中グルコースレベルは、採取直後に市販のグルコース計（OneTouch（登録商標） UltraTM、Lifescanから購入）を用いて測定した。本発明の化合物は、好ましくは≦１００ｍｇ  ｋｇ−１の投与量においてＧｌｃ変動を統計学的に有意に減少させる。
【０２１４】
本発明の化合物が経口グルコース（Ｇｌｃ）耐性に及ぼす影響はまた、オスＣ５７Ｂｌ／６またはオスｏｂ／ｏｂマウスを用いて評価することができる。マウスをＧｌｃ投与５時間前に絶食させ、実験中も絶食状態を維持した。実験中、マウスは水を自由に摂取することができた。Ｇｌｃ負荷投与の４５分前に動物の尾に切り口を入れ、血液（２０μＬ）を基底Ｇｌｃレベルの測定用に採取した。次いで、マウスの体重を量り、試験化合物またはベヒクル（２０％ ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン水溶液または２５％ Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４）を経口投与し、３０分後、さらに血液サンプルを（２０μＬ）採取し、Ｇｌｃ負荷（２−５ｇ ｋｇ−１、経口）を行った。次いで、血液サンプル（２０μＬ）をＧｌｃ投与後２５、５０、８０、１２０、および１８０分後に採取した。Ｇｌｃレベル測定用の２０μＬの血液サンプルは、尾の切り口から使い捨てマイクロピペと（Dade Diagnostics Inc.、プエルトリコ）に取り、４８０μＬの溶血試薬を加えた。次いで、９６−ウェルアッセイプレート中で、希釈した溶血血液の複製２０μＬアリコートに１８０μＬのトリンダーグルコース試薬（Trinders glucose reagent）(シグマ酵素的（トリンダー）比色法）を加えた。混合後、サンプルを室温で３０分間維持し、Ｇｌｃスタンダード（シグマ グルコース／尿素窒素複合スタンダードセット）に対して読み取った。本発明の化合物は、好ましくは≦１００ｍｇ  ｋｇ−１の投与量においてＧｌｃ変動を統計学的に有意に減少させる。
【国際調査報告】
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