【手続補正書】
【提出日】令和2年3月19日(2020.3.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複製不能組換レトロウイルスであって、
Ａ．当該ウイルスは、その表面に１又は２以上のシュードタイピング要素を含み、ここで前記１又は２以上のシュードタイピング要素は、Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞に結合し、当該細胞に対する前記組換レトロウイルスの膜融合を促進する能力を有し、
Ｂ．当該ウイルスは更に、Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞において活性な１又は２以上のプロモーターと作動式に連結された１又は２以上の転写単位を含むポリヌクレオチドを含み、ここで前記１又は２以上の転写単位は、第１及び第２の改変シグナル伝達ポリペプチドをコードし、
ｉ．前記第１の改変シグナル伝達ポリペプチドは、リンパ増殖性要素を含み、前記リンパ増殖性要素は、サイトカイン受容体ポリペプチド又はそのシグナル伝達ドメインを含む断片を含み、ここで前記リンパ増殖性要素は、Ｔ及び／又はＮＫ細胞の増殖及び／又は生存を促進し、
ii．前記第２の改変シグナル伝達ポリペプチドは、キメラ抗原受容体を含み、前記キメラ抗原受容体は、抗原特異的標的化領域、膜貫通ドメイン、及び細胞内活性化ドメインを含み、
Ｃ．当該ウイルスは更に、その表面に活性化要素を含み、ここで前記活性化要素は、膜付着配列に融合されると共に、Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞に結合する能力を有し、ここで前記活性化要素は、前記組換レトロウイルス内のポリヌクレオチドによってコードされたものではない、
複製不能組換レトロウイルス。
【請求項２】
前記第１の改変シグナル伝達ポリペプチドが、前記組換レトロウイルスのゲノム内で、ウイルスＬＴＲ又はその活性断片に対して逆向きにコードされている、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項３】
前記１又は２以上のプロモーターのうち少なくとも１つが、前記複製不能組換レトロウイルスを作製するのに使用されるパッケージング系内で活性でない、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項４】
前記プロモーターのうち少なくとも１つが、ＥＦ１ａプロモーター、ＭＳＣＶプロモーター、又はＣＤ３ｚプロモーターである、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項５】
前記ポリヌクレオチドが更にイントロンを含む、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項６】
前記イントロンがｓｈＲＮＡ又は１又は２以上のｍｉＲＮＡをコードする、請求項５に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項７】
前記イントロンがＥＦ１ａイントロンである、請求項５に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項８】
前記１又は２以上の転写単位のうち第１の転写単位が、更にイントロンを含み、ここで、前記１又は２以上のプロモーターのうち少なくとも１つと、前記イントロンと、前記第１の転写単位の前記第１の改変シグナル伝達ポリペプチドをコードする核酸とが、前記組換レトロウイルスのゲノム内で、ウイルスＬＴＲ又はその活性断片に対して逆向きに存在する、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項９】
前記リンパ増殖性要素が、Ｓｔａｔ３経路、Ｓｔａｔ４経路、又はＳｔａｔ５ 経路を活性化する、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項１０】
前記リンパ増殖性要素が、ＩＬ−７受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＬ−１２受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＬ−１５受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、又はＩＬ−２１受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項１１】
前記リンパ増殖性要素が、構成的に活性である、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項１２】
前記構成的に活性なリンパ増殖性要素が、ＩＬ−７Ｒα変異体又はその機能断片である、請求項１１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項１３】
前記構成的に活性なリンパ増殖性要素が、配列番号２２９のアミノ酸２２９〜２９２を含むと共に、位置２４３にアミノ酸ＰＰＣＬが挿入されてなる、ＩＬ−７Ｒα変異体の機能断片である、請求項１２に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項１４】
前記リンパ増殖性要素が、承認済生物製剤のモノクローナル抗体の認識ドメインと融合されてなる、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項１５】
前記リンパ増殖性要素の発現が、インビボの制御要素によって調節されてなる、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項１６】
前記活性化要素が、
Ａ．ＣＤ３に結合可能なポリペプチド；及び／又は
Ｂ．ＣＤ２８に結合可能なポリペプチド
を含む、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項１７】
前記ＣＤ３に結合可能なポリペプチドが、異種ＧＰＩアンカー付着配列に融合されたＣＤ３結合性ポリペプチドであり、前記膜結合性ＣＤ２８に結合可能なポリペプチドが、異種ＧＰＩアンカー付着配列に融合されたＣＤ２８結合性ポリペプチドである、請求項１６に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項１８】
前記膜結合性ＣＤ３に結合可能なポリペプチドが、抗ＣＤ３抗体である、請求項１６に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項１９】
前記抗ＣＤ３抗体が、ＧＰＩアンカー抗ＣＤ３ｓｃＦｖＦｃである、請求項１８に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項２０】
前記シュードタイピング要素が、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ−Ｇ）エンベロープタンパク質、ネコ内因性ウイルス（ＲＤ１１４）エンベロープタンパク質、麻疹ウイルスＦポリペプチド、若しくは麻疹ウイルスＨポリペプチド、又はその機能断片である、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項２１】
前記複製不能組換レトロウイルスが、レンチウイルス又はγレトロウイルスである、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項２２】
前記１又は２以上のシュードタイピング要素の少なくとも１つが、前記活性化要素である、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルス。
【請求項２３】
Ｔ細胞又はＮＫ細胞を遺伝子的に改変する方法であって、前記Ｔ細胞又はＮＫ細胞をエクスビボで、請求項１に記載の複製不能組換レトロウイルスと接触させることにより、反応混合物を形成することを含み、ここで前記接触により、前記複製不能組換レトロウイルスの前記Ｔ細胞又はＮＫ細胞への融合、及びそれによる遺伝子的に改変されたＴ細胞又はＮＫ細胞の産生が促進される、方法。
【請求項２４】
Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞を遺伝子的に改変する方法であって、
前記Ｔ細胞又はＮＫ細胞をエクスビボで複製不能組換レトロウイルスと接触させることにより、形質導入反応混合物を形成することを含み、
ここで、前記複製不能組換レトロウイルスが、
ａ）その表面に、Ｔ細胞に結合して当該Ｔ細胞に対する前記複製不能組換レトロウイルスの膜融合を促進する、シュードタイピング要素と、
ｂ）ＣＤ３に結合することが可能な、膜結合性ポリペプチドと、
ｃ）前記Ｔ細胞内で活性な１又は２以上のプロモーターと作動式に連結された１又は２以上の転写単位を含むポリヌクレオチドと
を含み、
ここで、前記１又は２以上の転写単位が、リンパ増殖性要素を含む第１の改変シグナル伝達ポリペプチドをコードし、
ここで、前記リンパ増殖性要素が、サイトカイン受容体ポリペプチド又はそのシグナル伝達ドメインを含む断片を含むと共に、Ｔ細胞の増殖及び／又は生存を促進し、
ここで、前記Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞を前記形質導入反応混合物から洗浄除去する前に、前記接触を１５分間〜１４時間に亘って行い、
ここで、前記接触により、前記複製不能組換レトロウイルスの前記Ｔ細胞又はＮＫ細胞への融合、及びそれによる遺伝子的に改変されたＴ細胞又はＮＫ細胞の産生が促進される、方法。