【手続補正書】
【提出日】令和1年12月11日(2019.12.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉのヒアルロン酸又はその塩の蛍光複合体：
2019501262.tif 000001
（式中，Ｒ＋はＨ＋，又はＮａ＋，Ｋ＋，Ｍｇ２＋又はＣａ２＋を含む群から選択される生理学的に許容される塩であり，
Ｒ１は−Ｈ又は式IIのCypate残基であり，ここで〜は，式IIのCypate残基の共有結合の位置であり，
2019501262.tif 000002
少なくとも１つの繰り返し単位において１つのＲ１は式IIのCypate残基であり，ただし該単位に式IIのCypate残基であるＲ１が存在する場合は，該単位における他のＲ１はＨであり，そして
ｎは２〜６２５の範囲の整数である）。
【請求項２】
一般式Ｉのヒアルロン酸又はその塩の蛍光複合体のグルコサミン部分の６位が式IIのCypate残基で置換されている請求項１記載の蛍光複合体。
【請求項３】
一般式Iのヒアルロン酸又はその塩の複合体における式IIのCypate残基の置換度が，０．１〜２％，好ましくは１．０％である請求項１又は２記載の蛍光複合体。
【請求項４】
５７０nm〜７９０nmまでの領域の光を吸収し，６８０nm〜８５０nmまでの領域，好ましくは８５０nmの光を発する請求項１〜３いずれか１項記載の蛍光複合体。
【請求項５】
Ｒ＋，Ｒ１及びｎは請求項１で定義したとおりであり，同時に，少なくとも１つの繰り返し単位において，少なくとも１つのＲ１がＣ（＝Ｏ）Ｒ２であり，ここでＲ２はＣｘＨｙ置換基であり，ｘは５〜１７の範囲中の整数であり，ｙは１１〜３５の範囲中の整数であり，それは直鎖又は分岐した飽和又は不飽和のＣ６−Ｃ１８脂肪鎖である請求項１〜３いずれか１項記載のヒアルロン酸又はその塩の蛍光複合体の疎水化誘導体。
【請求項６】
一般式Ｉのヒアルロン酸又はその塩の複合体において置換基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２の置換度が３〜７０％，好ましくは５〜１２％である請求項５記載の疎水化誘導体。
【請求項７】
５７０nm〜７９０nmまでの領域の光を吸収し，６８０nm〜８５０nmまでの領域，好ましくは８５０nmの光を発する請求項５又は６記載の疎水化誘導体。
【請求項８】
次式III
2019501262.tif 000003
のCypate Iを，ジメチルスルホキシド，ジメチルホルムアミド，ホルムアミド又はアセトニトリルを含む群から選択され，好ましくはジメチルスルホキシドである非プロトン性極性溶媒中で，Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールを用いて活性化し，次式IV
2019501262.tif 000004
の反応性中間体モノ-イミダゾリドを生じさせ，それをイミダゾールの形態でその場で生成される有機塩基，又は反応混合物に添加される，例えば１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン，Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，６−ヘキサンジアミン，Ｎ−メチルモルホリン，イミダゾール，トリエチルアミン又はＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンを含む群から選択される添加される有機塩基，好ましくはその場で生成されるイミダゾール，及び上記のような極性の非プロトン性溶媒の存在下で，ヒアルロン酸又はその塩と反応させることを特徴とする請求項１〜４いずれか１項記載の複合体の調製方法。
【請求項９】
前記Cypateの活性化が２０〜６０℃の範囲，好ましくは２２℃から２５℃の範囲の温度で，１０分から２０時間，好ましくは０．５〜２時間行われることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１０】
複合体形成の反応が４０℃〜８０℃，好ましくは４０℃〜６０℃，より好ましくは６０℃の温度で，１２〜４８時間，好ましくは２４時間行われることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１１】
CypateＩ：ヒアルロン酸又はその塩：Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール：有機塩基のモル比が，反応混合物中で０．５：１：０．５：０．５〜３．５，好ましくはモル比で０．５：１：０．５：１であることを特徴とする請求項８〜１０いずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
一般式V：  Ｒ２ＣＯＯＨ    (V)
（式中，Ｒ２はＣｘＨｙであり，ここでｘは５〜１７の範囲の整数であり，ｙは１１〜３５の範囲の整数であり，ＣｘＨｙは直鎖又は分岐した飽和又は不飽和鎖である）の脂肪酸の活性化を，一般式VI
2019501262.tif 000005
（式中，Ｒ３はＨ, −ＮＯ２，−ＣＯＯＨ，ハロゲン化物，Ｃ１−Ｃ６アルキルアルコキシを含んでいる群から選択され，好ましくはＨである１つ以上の置換基である）の置換又は未置換の塩化ベンゾイルを用いて，１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン，Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，６−ヘキサンジアミン，Ｎ−メチルモルホリン，トリエチルアミン又はＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンを含む群から選択され，好ましくはトリエチルアミンである有機塩基；及びイソプロピルアルコール，テトラヒドロフランを含む群から選択され，好ましくはイソプロピルアルコールである極性溶媒の存在下で行い，一般式VII
2019501262.tif 000006
（Ｒ２及びＲ３は上記で定義したとおりである）の反応性無水物を生成させること，
請求項１〜３いずれか１項記載の一般式Ｉのヒアルロン酸又はその塩の蛍光複合体を，有機塩基，好ましくは１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン，Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，６−ヘキサンジアミン，Ｎ−メチルモルホリン，イミダゾール，トリエチルアミン又はＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンを含む群から選択され，より好ましくはトリエチルアミンであるアミン；水と，イソプロピルアルコール，ジメチルスルホキシド又はテトラヒドロフランを含む群から選択され，好ましくはイソプロピルアルコールである水混和性極性溶媒との混合物の存在下でエステル化することを特徴とする請求項５〜７いずれか１項記載の蛍光複合体の疎水化誘導体の調製方法。
【請求項１３】
一般式Vの脂肪酸の活性化を，０℃〜６０℃の範囲の温度で０．５〜２４時間，好ましくは０℃〜２５℃の温度で０．５時間行い，前記ヒアルロン酸又はその塩の蛍光複合体のエステル化を，２２〜２５℃の範囲の温度で０．５〜２時間，好ましくは２時間行うことを特徴とする請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記有機塩基の量が，前記ヒアルロン酸又はその塩の二量体当たり２〜６モル当量，好ましくは４モル当量に相当し，
前記置換された又は未置換の塩化ベンゾイルの量が，前記ヒアルロン酸又はその塩の二量体当たり０．２〜２．０モル当量，好ましくは０．６モル当量に相当し，
前記脂肪酸の量が，前記ヒアルロン酸又はその塩の０．２〜２．０モル当量，好ましくは０．６モル当量に相当することを特徴とする請求項１２又は１３記載の方法。
【請求項１５】
前記水と水混和性極性溶媒との混合物中の水の含有量が５０〜８０％v/vの範囲，好ましくは５０％v/vである請求項１２〜１４いずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
好ましくは器官又は新生物のインビボイメージングのための，複合体の分布のインビボイメージングのための医薬の用途における使用のための請求項１〜４のいずれか一項の蛍光複合体又は請求項５〜７いずれか１項記載のその疎水化誘導体。
【請求項１７】
静脈内，腹腔内又は皮下適用における使用のための請求項１６記載の蛍光複合体又はその疎水化誘導体。
【請求項１８】
触診不可能な及び／又は触診可能な腫瘍のインビボイメージングのための用途における使用のための請求項１６記載の蛍光複合体又はその疎水化誘導体。
【請求項１９】
静脈内，腹腔内投与における使用のための請求項１８の蛍光複合体又はその疎水化誘導体。
【請求項２０】
前記蛍光複合体の前記疎水化誘導体の凝集物及び少なくとも一つ以上の非極性薬剤，好ましくは医薬及び／又はナノ粒子を含む凝集した請求項５〜７いずれか１項記載の蛍光複合体の疎水化誘導体をベースとする組成物。
【請求項２１】
前記医薬が，細胞増殖抑止剤，好ましくはドキソルビシン又はパクリタキセルであることを特徴とする請求項２０記載の組成物。
【請求項２２】
前記蛍光複合体の前記疎水化誘導体がＲ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１７Ｈ３３を有し，かつナノ粒子が超常磁性ナノ粒子であることを特徴とする請求項２０記載の組成物。
【請求項２３】
ヒアルロン酸又はその塩の蛍光複合体の前記疎水化誘導体の重量に対して非極性化合物２〜１５重量％，好ましくは２〜６重量％を含有することを特徴とする請求項２０〜２２いずれか１項記載の組成物。
【請求項２４】
新生物のインビボイメージングのための医薬用途における使用のための請求項２０〜２３いずれか１項記載の組成物。
【請求項２５】
新生物の治療における使用のための請求項２０〜２３記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
好ましくは，本発明の一般式Ｉのヒアルロナンとヘプタメチンインドシアニン蛍光剤（Cypate）との疎水化複合体は，非極性薬剤(nonpolar agent)，好ましくは医薬品又は疎水性表面を有するナノ粒子のカプセル封入（非共有結合）に使用することができる。該疎水化複合体は，凝集して，それらの挙動を有するポリマーミセルと類似したシステムを形成することができる。従って，本発明の凝集した疎水化蛍光複合体をベースとして，疎水化蛍光複合体の凝集物と，少なくとも一つ以上の非極性薬剤，好ましくは医薬品，より好ましくは細胞増殖抑止剤，最も好ましくはドキソルビシン又はパクリタキセル，及び／又はナノ粒子，好ましくは超常磁性ナノ粒子（即ちＳＰＩＯＮ）を含む組成物が形成される。ＳＰＩＯＮは好ましくは組成中の鉄の量が０．３〜３重量％好ましくは１〜１．５重量％である酸化鉄（Ｆｅ２Ｏ３，Ｆｅ３Ｏ４）をベースとする。超常磁性ナノ粒子の大きさは４〜６nm，好ましくは５nmである。好ましい実施態様では，該組成物は，Ｒ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１７Ｈ３３である本発明の凝集した疎水化蛍光複合体と，ナノ粒子，好ましくは酸化鉄（Ｆｅ２Ｏ３，Ｆｅ３Ｏ４）をベースとする超常磁性のナノ粒子を含む。そのような組成物は好ましくはさらに細胞増殖抑止剤，好ましくはドキソルビシン又はパクリタキセルを含むことができる。