【手続補正書】
【提出日】令和2年10月30日(2020.10.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
その生殖細胞ゲノムが、
（ａ）一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｂ）一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメント、および  
（ｃ）一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメント、
を含む内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位を含むマウスであって、
（ａ）および（ｂ）が、（ｃ）およびマウスＣλ遺伝子セグメントに操作可能に連結され、および
前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、一つ以上のマウスイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）および一つ以上のヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）をさらに含み、前記マウスが、ヒトラムダ可変領域と、ヒトラムダ定常ドメインまたはマウスラムダ定常ドメインのいずれかとを含むイムノグロブリンλ軽鎖を発現する、マウス。
【請求項２】
前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が二つのマウスＥλを含む、請求項１に記載のマウス。
【請求項３】
前記二つのマウスＥλが、マウスＥλおよびマウスＥλ３−１である、請求項２に記載のマウス。
【請求項４】
前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が三つのヒトＥλを含む、請求項１に記載のマウス。
【請求項５】
前記生殖細胞ゲノムが、
（ｉ）一つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、一つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および一つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入を含む内因性イムノグロブリン重鎖座位であって、前記ヒトＶＨ、ＤＨ、およびＪＨ遺伝子セグメントが、マウスイムノグロブリン重鎖定常領域に操作可能に連結されている内因性イムノグロブリン重鎖座位、または
（ｉｉ）一つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、一つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および一つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入を含む内因性イムノグロブリン重鎖座位であって、前記ヒトＶＨ、ＤＨ、およびＪＨ遺伝子セグメントが、マウスイムノグロブリン重鎖定常領域に操作可能に連結されている内因性イムノグロブリン重鎖座位、ならびに一つ以上のヒトＶκ遺伝子セグメントおよび一つ以上のヒトＪκ遺伝子セグメントの挿入を含む内因性イムノグロブリンκ軽鎖座位であって、前記ヒトＶκおよびＪκ遺伝子セグメントが、マウスイムノグロブリンＣκ領域に操作可能に連結されている内因性イムノグロブリンκ軽鎖座位、をさらに含む、請求項１に記載のマウス。
【請求項６】
一つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、一つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および一つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントの前記挿入は、マウスＶＨ、ＤＨ遺伝子セグメントを置き換える、請求項５に記載のマウス。
【請求項７】
前記挿入は、ヒトＶＨ、ＤＨ、およびＪＨ遺伝子セグメント、ならびにその組み合わせの間に天然に存在するヒト非コードＤＮＡを含む、請求項６に記載のマウス。
【請求項８】
一つ以上のヒトＶκ遺伝子セグメントおよび一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメントの前記挿入が、マウスＶκおよびＪκ遺伝子セグメントを置き換える、請求項５に記載のマウス。
【請求項９】
前記挿入は、ヒトＶκおよびＪκ遺伝子セグメント、ならびにその組み合わせの間に天然に存在するヒト非コードＤＮＡを含む、請求項８に記載のマウス。
【請求項１０】
前記マウスイムノグロブリン重鎖定常領域が、内因性マウスイムノグロブリン重鎖定常領域である、請求項５に記載のマウス。
【請求項１１】
前記マウスＣκ領域が、内因性マウスＣκ領域である、請求項５に記載のマウス。
【請求項１２】
前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位は、内因性ＶλおよびＪλ遺伝子セグメントのすべてまたは一部の欠失を含む、請求項１に記載のマウス。
【請求項１３】
前記マウスＣλ遺伝子セグメントが、マウスＣλ遺伝子セグメントである、請求項１に記載のマウス。
【請求項１４】
前記イムノグロブリンκ軽鎖座位は、ヒトイムノグロブリンκ軽鎖座位の近位Ｖκ重複のすべてまたは一部の挿入を含む、請求項５に記載のマウス。
【請求項１５】
前記イムノグロブリン重鎖座位が、内因性マウスＡｄａｍ６遺伝子を欠く、請求項５に記載のマウス。
【請求項１６】
前記イムノグロブリン重鎖座位は、一つ以上のマウスＡｄａｍ６ポリペプチドをコードする一つ以上のヌクレオチド配列の挿入をさらに含む、請求項１５に記載のマウス。
【請求項１７】
前記マウスが、前記内因性イムノグロブリン重鎖座位に対しホモ接合性である、請求項５のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項１８】
前記マウスが、前記内因性イムノグロブリンκ軽鎖座位に対しホモ接合性である、請求項５に記載のマウス。
【請求項１９】
前記マウスが、前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位に対しホモ接合性である、請求項１に記載のマウス。
【請求項２０】
その生殖細胞ゲノムが、操作された内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位を含むマウスを作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）マウス胚性幹細胞内にＤＮＡ断片を導入することであって、前記ＤＮＡ断片は、
（ｉ）一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｉｉ）一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメント、および
（ｉｉｉ）一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメント、
を含むヌクレオチド配列を含み、
ここで（ｉ）〜（ｉｉｉ）は、マウスＣλ遺伝子セグメントに操作可能に連結され、および
前記ヌクレオチド配列は、一つ以上のヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）をさらに含むこと、
（ｂ）（ａ）で作製された前記マウス胚性幹細胞を取得すること、ならびに
（ｃ）（ｂ）の前記マウス胚性幹細胞を使用してマウスを作製すること、を含む、方法。
【請求項２１】
その生殖細胞ゲノムが、操作された内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位を含み、前記操作された内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメント、一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメント、および一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメントの挿入を含み、前記ヒトＶλおよびＪλ遺伝子セグメントが、マウスまたはヒトのＣλ遺伝子セグメントに操作可能に連結され、そして前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、一つ以上のマウスイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）と一つ以上のヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）をさらに含む、マウスを作製する方法であって、前記方法が、
マウスの前記生殖細胞ゲノムが、一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメント、一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメント、および一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメントの挿入を含むよう操作されたイムノグロブリンλ軽鎖座位を含むよう、マウスの前記生殖細胞ゲノムを改変することであって、前記ヒトＶλおよびＪλ遺伝子セグメントが、マウスまたはヒトのＣλ遺伝子セグメントに操作可能に連結され、そして前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、一つ以上のマウスイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）と一つ以上のヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）をさらに含み、それにより前記マウスを作製すること、を含む方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」という用語は同意義として使用される。約またはおよその有無に関わらず、本明細書で使用される任意の数字は、関連分野の当業者により認識される任意の通常の変動を網羅することが意図される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
その生殖細胞ゲノムが、
（ａ）一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｂ）一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメント、および  
（ｃ）一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメント、
を含む内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位を含む齧歯類であって、
（ａ）および（ｂ）が、（ｃ）および齧歯類Ｃλ遺伝子セグメントに操作可能に連結され、および
前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、一つ以上の齧歯類イムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）および一つ以上のヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）をさらに含む、齧歯類。
（項目２）
前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が二つの齧歯類Ｅλを含む、項目１に記載の齧歯類。
（項目３）
前記二つの齧歯類Ｅλが、マウスＥλおよびマウスＥλ３−１である、項目２に記載の齧歯類。
（項目４）
前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が三つのヒトＥλを含む、項目１〜３のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目５）
前記生殖細胞ゲノムが、
（ｉ）一つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、一つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および一つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入を含む内因性イムノグロブリン重鎖座位であって、前記ヒトＶＨ、ＤＨ、およびＪＨ遺伝子セグメントが、齧歯類イムノグロブリン重鎖定常領域に操作可能に連結されている内因性イムノグロブリン重鎖座位、または
（ｉｉ）一つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、一つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および一つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入を含む内因性イムノグロブリン重鎖座位であって、前記ヒトＶＨ、ＤＨ、およびＪＨ遺伝子セグメントが、齧歯類イムノグロブリン重鎖定常領域に操作可能に連結されている内因性イムノグロブリン重鎖座位、ならびに一つ以上のヒトＶκ遺伝子セグメントおよび一つ以上のヒトＪκ遺伝子セグメントの挿入を含む内因性イムノグロブリンκ軽鎖座位であって、前記ヒトＶκおよびＪκ遺伝子セグメントが、齧歯類イムノグロブリンＣκ領域に操作可能に連結されている内因性イムノグロブリンκ軽鎖座位、をさらに含む、項目１〜４のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目６）
一つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、一つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および一つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントの前記挿入は、齧歯類ＶＨ、ＤＨ遺伝子セグメントを置き換える、項目５に記載の齧歯類。
（項目７）
前記挿入は、ヒトＶＨ、ＤＨ、およびＪＨ遺伝子セグメント、ならびにその組み合わせの間に天然に存在するヒト非コードＤＮＡを含む、項目６に記載の齧歯類。
（項目８）
一つ以上のヒトＶκ遺伝子セグメントおよび一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメントの前記挿入が、齧歯類ＶκおよびＪκ遺伝子セグメントを置き換える、項目５または６に記載の齧歯類。
（項目９）
前記挿入は、ヒトＶκおよびＪκ遺伝子セグメント、ならびにその組み合わせの間に天然に存在するヒト非コードＤＮＡを含む、項目８に記載の齧歯類。
（項目１０）
前記齧歯類イムノグロブリン重鎖定常領域が、内因性齧歯類イムノグロブリン重鎖定常領域である、項目５〜８のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１１）
前記齧歯類Ｃκ領域が、内因性齧歯類Ｃκ領域である、項目５〜１０のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１２）
前記内因性イムノグロブリンκ軽鎖座位は、内因性ＶλおよびＪλ遺伝子セグメントのすべてまたは一部の欠失を含む、項目１〜９のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１３）
前記齧歯類Ｃλ遺伝子セグメントが、マウスＣλ□遺伝子セグメントである、項目１〜１２のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１４）
前記イムノグロブリンκ軽鎖座位は、ヒトイムノグロブリンκ軽鎖座位の近位Ｖκ重複のすべてまたは一部の挿入を含む、項目５〜１３のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１５）
前記イムノグロブリン重鎖座位が、内因性齧歯類Ａｄａｍ６遺伝子を欠く、項目５〜１４のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１６）
前記イムノグロブリン重鎖座位は、一つ以上の齧歯類Ａｄａｍ６ポリペプチドをコードする一つ以上のヌクレオチド配列の挿入をさらに含む、項目１５に記載の齧歯類。
（項目１７）
前記齧歯類が、前記内因性イムノグロブリン重鎖座位に対しホモ接合性である、項目５〜１６のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１８）
前記齧歯類が、前記内因性イムノグロブリンκ軽鎖座位に対しホモ接合性である、項目５〜１７に記載の齧歯類。
（項目１９）
前記齧歯類が、前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位に対しホモ接合性である、項目１〜１８のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目２０）
前記齧歯類がラットまたはマウスである、項目１〜１９のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目２１）
その生殖細胞ゲノムが、
（ａ）一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｂ）一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメント、および
（ｃ）一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメント、
を含む内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位を含む単離齧歯類細胞であって、
（ａ）および（ｂ）が、（ｃ）および齧歯類Ｃλ遺伝子セグメントに操作可能に連結され、および  
前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、一つ以上の齧歯類イムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）および一つ以上のヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）をさらに含む、単離齧歯類細胞。
（項目２２）
前記齧歯類細胞が、齧歯類胚性幹細胞である、項目２１に記載の単離齧歯類細胞。
（項目２３）
その生殖細胞ゲノムが、操作された内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位を含む齧歯類を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）齧歯類胚性幹細胞内にＤＮＡ断片を導入することであって、前記ＤＮＡ断片は、
（ｉ）一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｉｉ）一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメント、および
（ｉｉｉ）一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメント、
を含むヌクレオチド配列を含み、
ここで（ｉ）〜（ｉｉｉ）は、齧歯類Ｃλ遺伝子セグメントに操作可能に連結され、および
前記ヌクレオチド配列は、一つ以上のヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）をさらに含むこと、
（ｂ）（ａ）で作製された前記齧歯類胚性幹細胞を取得すること、ならびに
（ｃ）（ｂ）の前記齧歯類胚性幹細胞を使用して齧歯類を作製すること、を含む、方法。
（項目２４）
その生殖細胞ゲノムが、操作された内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位を含み、前記操作された内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメント、一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメント、および一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメントの挿入を含み、前記ヒトＶλおよびＪλ遺伝子セグメントが、齧歯類またはヒトのＣλ遺伝子セグメントに操作可能に連結され、そして前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、一つ以上の齧歯類イムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）と一つ以上のヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）をさらに含む、齧歯類を作製する方法であって、前記方法が、
齧歯類の前記生殖細胞ゲノムが、一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメント、一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメント、および一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメントの挿入を含むよう操作されたイムノグロブリンλ軽鎖座位を含むよう、齧歯類の前記生殖細胞ゲノムを改変することであって、前記ヒトＶλおよびＪλ遺伝子セグメントが、齧歯類またはヒトのＣλ遺伝子セグメントに操作可能に連結され、そして前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、一つ以上の齧歯類イムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）と一つ以上のヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）をさらに含み、それにより前記齧歯類を作製すること、を含む方法。
（項目２５）
前記一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２〜Ｖλ１−４０および／またはＶλ３−２７〜Ｖλ３−１を含む、項目２３または２４に記載の方法。
（項目２６）
前記一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメントが、ヒトＶλ５−５２〜Ｖλ１−４０および／またはＶλ３−２７〜Ｖλ３−１の間に天然に存在するヒト非コードＤＮＡを含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメントおよび前記一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメントが、前記ヒトＪλ−Ｃλ遺伝子セグメント対のＪλ１−Ｃλ１、Ｊλ２−Ｃλ２、Ｊλ３−Ｃλ３、Ｊλ６−Ｃλ６、および前記ヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、項目２６〜２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記ヒトＪλ−Ｃλ遺伝子セグメント対のＪλ１−Ｃλ１、Ｊλ２−Ｃλ２、Ｊλ３−Ｃλ３、およびＪλ６−Ｃλ６は、前記ヒトＪλおよびＣλ遺伝子セグメント対の間に天然に存在するヒト非コードＤＮＡを含み、および前記ヒトＪλ遺伝子セグメントは、ヒトＪλの上流（または５’側）に天然に存在するヒト非コードＤＮＡを含む、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記齧歯類Ｃλ遺伝子セグメントが、マウスＣλ遺伝子セグメントである、項目２３〜２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、三つのヒトＥλを含む、項目２３〜２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、二つの齧歯類Ｅλを含む、項目２３〜３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記二つの齧歯類Ｅλが、マウスＥλおよびマウスＥλ３−１である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
齧歯類において抗体を産生する方法であって、
（ａ）対象抗原で齧歯類を免疫化する工程であって、前記齧歯類は、
（ｉ）一つ以上のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｉｉ）一つ以上のヒトＪλ遺伝子セグメント、および
（ｉｉｉ）一つ以上のヒトＣλ遺伝子セグメント、
を含む内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位を含む生殖細胞ゲノムを有し、
ここで（ｉ）および（ｉｉ）は、（ｉｉｉ）および齧歯類Ｃλ遺伝子セグメントに操作可能に連結され、そして
前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位が、一つ以上の齧歯類イムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）および一つ以上のヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー（Ｅλ）をさらに含む工程、
（ｂ）前記齧歯類が、前記対象抗原に対する免疫反応を生じさせるのに十分な条件下で、前記齧歯類を維持する工程、ならびに
（ｃ）前記齧歯類または齧歯類細胞から、前記対象抗原に結合する抗体を回収する工程、を含む方法。
（項目３４）
前記齧歯類がラットまたはマウスである、項目２３〜３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
その生殖細胞ゲノムが、
（ｉ）ヒトＶλ遺伝子セグメントのＶλ５−５２〜Ｖλ１−４０およびＶλ３−２７〜Ｖλ３−１、
（ｉｉ）ヒトＪλ−Ｃλ遺伝子セグメント対のＪλ１−Ｃλ１、Ｊλ２−Ｃλ２、Ｊλ３−Ｃλ３、およびＪλ６−Ｃλ６、
（ｉｉｉ）ヒトＪλ遺伝子セグメントのＪλ７、および
（ｉｖ）三つのヒトイムノグロブリンλ軽鎖エンハンサー、
を含むホモ接合性内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位を含む齧歯類であって、
ここで（ｉ）〜（ｉｖ）は、互いに操作可能に連結され、そして（ｉ）〜（ｉｉｉ）は齧歯類Ｃλ遺伝子セグメントの上流にあり、ここで前記内因性イムノグロブリンλ軽鎖座位は、内因性齧歯類イムノグロブリンＥλ２−４を欠き、
前記ヒトＶλ遺伝子セグメントのＶλ５−５２〜Ｖλ１−４０およびＶλ３−２７〜Ｖλ３−１が、前記ヒトＶλ遺伝子セグメントの間に天然に存在するヒト非コードＤＮＡを含み、
前記ヒトＪλ−Ｃλ遺伝子セグメント対のＪλ１−Ｃλ１、Ｊλ２−Ｃλ２、Ｊλ３−Ｃλ３、およびＪλ６−Ｃλ６は、前記ヒトＪλ−Ｃλ遺伝子セグメント対の間に天然に存在するヒト非コードＤＮＡを含み、および
前記ヒトＪλ遺伝子セグメントのＪλ７は、ヒトＪλ７の上流（または５’側）に天然に存在するヒト非コードＤＮＡを含む、齧歯類。
（項目３６）
前記齧歯類がラットまたはマウスである、項目３５に記載の齧歯類。