【手続補正書】
【提出日】令和2年9月1日(2020.9.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィブリンまたはフィブリノゲン、および増量剤を含む架橋された足場、ならびに
前記足場上に堆積しているセラミック
を含む、細胞外マトリックス材料。
【請求項２】
前記セラミックが、リン酸カルシウム鉱物相であるか、またはリン酸カルシウム鉱物相を含む、請求項１に記載の細胞外マトリックス。
【請求項３】
（ａｉ）前記増量剤が、アルギン酸塩、例えばアルギン酸ナトリウムまたは誘導体化アルギン酸塩、例えばプロピルグリコアルギン酸ナトリウムである、
（ａｉｉ）前記増量剤が、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ；例えばコンドロイチン６−硫酸、コンドロイチン４−硫酸、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、キチン、キトサン、デキストラン硫酸またはヒアルロナン）である、あるいは
（ａｉｉｉ）前記増量剤が、ヒドロキシエチルデンプン、エチルセルロース、キサンタンガムおよびアガロースから選択される、請求項１または請求項２に記載の細胞外マトリックス材料。
【請求項４】
細胞外マトリックス材料を調製するための方法であって、セラミックを、フィブリンまたはフィブリノゲン、および増量剤を含む架橋された足場上に堆積させるステップを含む、方法。
【請求項５】
前記セラミックが、リン酸カルシウム鉱物相である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記リン酸カルシウム鉱物相が、生物模倣堆積によって前記足場上に堆積させられる、請求項４または請求項５に記載の方法。
【請求項７】
リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、Ｃａ２＋およびＨＰＯ４２を含み、任意選択でｉ）Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｌ−、ＨＣＯ３−，ＨＰＯ４２−およびＳＯ４２−、ｉｉ）Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｌ−、ＨＣＯ３−およびＨＰＯ４２−、またはｉｉｉ）Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋をさらに含む流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、請求項４から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、請求項５から７のいずれかに記載の方法であって、前記流体が、
（ｂｉ）１〜３０ｍＭのＣａ２＋、好ましくは１〜２０ｍＭのＣａ２、あるいは１〜５ｍＭのＣａ２＋、好ましくは２〜３ｍＭのＣａ２＋、最も好ましくは約２．５ｍＭのＣａ２＋、あるいは１０〜３０ｍＭのＣａ２＋、
（ｂｉｉ）０．５〜１０ｍＭのＨＰＯ４２−、あるいは０．５〜３ｍＭのＨＰＯ４２−、好ましくは０．５〜２ｍＭのＨＰＯ４２−、最も好ましくは約１ｍＭのＨＰＯ４２−、あるいは５〜１０ｍＭのＨＰＯ４２−、
（ｂｉｉｉ）１００〜８００ｍＭのＮａ＋、あるいは１００〜２００ｍＭのＮａ＋、好ましくは１２０〜１６０ｍＭのＮａ＋、さらにより好ましくは１４０〜１５０ｍＭのＮａ＋、最も好ましくは約１４２ｍＭのＮａ＋、あるいは５００〜８００ｍＭのＮａ＋、
（ｂｉｖ）１〜５０ｍＭのＫ＋、あるいは１〜１０ｍＭのＫ＋、好ましくは３〜７ｍＭのＫ＋、最も好ましくは約５ｍＭのＫ＋、あるいは１０〜４０ｍＭのＫ＋、
（ｂｖ）０．５〜２０ｍＭのＭｇ２＋、あるいは０．５〜３ｍＭのＭｇ２＋、好ましくは１〜２ｍＭのＭｇ２＋、最も好ましくは約１．５ｍＭのＭｇ２＋、あるいは５〜１５ｍＭのＭｇ２＋、
（ｂｖｉ）１００〜８００ｍＭのＣｌ−、あるいは１００〜２００ｍＭのＣｌ−、好ましくは１２０〜１６０ｍＭのＣｌ−、より好ましくは１４０〜１５０ｍＭのＣｌ−、最も好ましくは約１４８．８ｍＭのＣｌ−、あるいは５００〜８００ｍＭのＣｌ−、
（ｂｖｉｉ）１〜１００ｍＭのＨＣＯ３−、あるいは１〜１０ｍＭのＨＣＯ３−、好ましくは２〜８ｍＭのＨＣＯ３−、より好ましくは４〜５ｍＭのＨＣＯ３−、最も好ましくは約４．２ｍＭのＨＣＯ３−、あるいは１０〜１００ｍＭのＨＣＯ３−、ならびに
（ｂｖｉｉｉ）１〜１０ｍＭのＳＯ４２−
からなる群から選択される少なくとも１つまたは複数を含む、方法。
【請求項９】
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１〜５ｍＭのＣａ２＋、０．５〜３ｍＭのＨＰＯ４２、１００〜２００ｍＭのＮａ＋、１〜１０ｍＭのＫ＋、０．５〜３ｍＭのＭｇ２＋、１００〜２００ｍＭのＣｌ−および１〜１０ｍＭのＨＣＯ３−を含む流体もしくは２〜３ｍＭのＣａ２＋、０．５〜２ｍＭのＨＰＯ４２−、１２０〜１６０ｍＭのＮａ＋、３〜７ｍＭのＫ＋、１〜２ｍＭのＭｇ２＋、１２０〜１６０ｍＭのＣｌ−および２〜８ｍＭのＨＣＯ３−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記足場が、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、または少なくとも９日間、前記流体と接触させられるか、または前記流体に浸漬させられる、ならびに／あるいは
前記足場が、２０日間まで、好ましくは１０日間まで、最も好ましくは９日間まで、前記流体と接触させられるか、または前記流体に浸漬させられる、請求項７から９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記足場が、
（ａ）フィブリノゲンの水溶液を、凝固剤および増量剤と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた混合物を、架橋剤と共にインキュベートするステップと、
（ｃ）前記架橋剤を除去するために、ステップ（ｂ）で得られた架橋された組成物を洗浄するステップと
を含む方法によって得られた、形成された、または入手可能である、請求項５から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
（ａ）フィブリノゲンの水溶液を、凝固剤および増量剤と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた混合物を、架橋剤と共にインキュベートするステップと、
（ｃ）前記架橋剤を除去するために、ステップ（ｂ）で得られた架橋された組成物を洗浄するステップと
を含む方法によって、前記足場を形成することを含む、請求項５から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
フィブリノゲンが、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％の１つを超える純度レベルで存在する、請求項１１または請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
フィブリノゲンが、切断型のフィブリノゲン、例えばフィブリンＡ、フィブリンＢ、フィブリンＣ、フィブリンＤ、フィブリンＸおよびフィブリンＹとして存在する、請求項１１から１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記切断型のフィブリノゲンが、フィブリンＥである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
フィブリノゲンが、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）またはＨＥＰＥＳ緩衝食塩水でｐＨ４〜１０の間に緩衝化された水溶液として存在する、請求項１１から１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記凝固剤が、酵素または非酵素凝固剤を含む、請求項１１から１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記凝固剤が、トロンビン、例えばヒトトロンビンである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ステップ（ａ）が、発泡剤と混合することを含む、請求項１１から１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記発泡剤が、非イオン性洗浄剤、温度感受性ゲル化界面活性剤（例えばプルロニック１２７）、ジホスファチジルグリセロールタイプのリン脂質または不混和性相とフィブリノゲン水溶液相の混合物を含み、好ましくは前記発泡剤が、プルロニック界面活性剤、例えばプルロニックＦ６８および／またはプルロニックＦ１２７、より好ましくはプルロニックＦ６８を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記発泡剤が、糖界面活性剤のクラスの１種または複数の界面活性剤からなるか、またはそれを含む、請求項１９または請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記発泡剤が、糖アシル界面活性剤のクラスの１種または複数の界面活性剤からなるか、またはそれを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記発泡剤が、Ｃ８〜Ｃ１２のアシル鎖長を有する糖アシル界面活性剤のクラスの発泡剤である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記発泡剤が、少なくとも２種、好ましくは３種の糖界面活性剤を含むか、またはそれからなる、請求項２１から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記発泡剤の糖アシル界面活性剤が、ピラノシド（特に、グルコピラノシド）、マルトシド、およびアシルスクロース界面活性剤のクラスから選択される、ならびに／あるいは
前記糖アシル界面活性剤が、ＯＧＰ、ＯＤＭ、ＤＧＰおよびＤｄＧＰ、ＴＧＰ、ＨＧＰ、ＤＭＰ、デシルスクロース（ｎＤＳ）、ドデシルスクロース（ｎＤｄＳ）、好ましくはＯＧＭ、ＤＭＰおよびＤｄＧＰからなる群から選択される、請求項２２から２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
ステップ（ｂ）で使用される前記架橋剤が、カルボジイミドカップリング剤、例えばＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイニド（ethylcarbodiiniide）（ＥＤＣ）；Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、アジドカップリング剤；ジイソシアネート架橋剤、例えばヘキサメチレンジイソシアネート；エポキシド架橋剤、例えばエピクロロヒドリン、グリシジルエーテルおよびグリシジルアミン；ならびにアルデヒド架橋剤、例えばホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドおよびグリオキサールから選択される、請求項１１から２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
前記架橋剤が、アルデヒド架橋剤、例えばホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドおよびグリオキサールを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記アルデヒド架橋剤が、グルタルアルデヒドである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記方法が、
（ｃｉ）前記方法が、還元剤または毒性低減剤、例えば水素化ホウ素ナトリウムまたはリシンを添加するステップをさらに含むこと、
（ｃｉｉ）前記混合ステップ（ａ）が、例えば曝気により混合して発泡させることによって達成されること、
（ｃｉｉｉ）ステップ（ａ）で得られた前記混合物が、前記インキュベーションステップ（ｂ）の前にキャスティングされ、凍結され、任意選択で凍結乾燥されること、
（ｃｉｖ）前記方法が、二価または多価金属イオン、例えばカルシウム、例えば塩化カルシウムを添加するステップをさらに含むこと、ならびに
（ｃｖ）混合ステップ（ａ）のための前記混合物が、タンパク質安定剤として糖をさらに含み、前記糖が、小さいポリオールまたは炭水化物、例えばグリセロール、ソルビトール、スクロースまたはトレハロースであること
からなる群から選択される少なくとも１つまたは複数の特徴を含む、請求項１１から２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
前記糖が、ステップ（ａ）の前記混合物中、フィブリノゲンに対して好ましくは１０〜１１ｗｔ％の量、好ましくは４〜７．５ｗｔ％の量のトレハロースである、請求項２９の（ｃｖ）に記載の方法。
【請求項３１】
所定の形状を有する細胞外マトリックス組成物を調製するための、請求項１１から３０のいずれかに記載の方法であって、前記方法が、
（ｄｉ）（ｉ）ステップ（ａ）の前記混合物が、前記インキュベーションステップ（ｃ）の前に、所定の形状の型でキャスティングされ、凍結され、任意選択で凍結乾燥されるか、または（ｉｉ）ステップ（ｄ）の生成物が、所定の形状の型で生成され、次に前記生成物が凍結され、任意選択で凍結乾燥されるかのいずれかであること、
（ｄｉｉ）前記増量剤が、アルギン酸塩、例えばアルギン酸ナトリウムまたは誘導体化アルギン酸塩、例えばプロピルグリコアルギン酸ナトリウムであること、
（ｄｉｉｉ）前記増量剤が、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ；例えばコンドロイチン６−硫酸、コンドロイチン４−硫酸、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、キチン、キトサン、デキストラン硫酸またはヒアルロナン）であること、ならびに
（ｄｉｖ）前記増量剤が、ヒドロキシエチルデンプン、エチルセルロース、キサンタンガムおよびアガロースから選択されること
からなる群から選択される少なくとも１つまたは複数の特徴を含む、方法。
【請求項３２】
請求項４から３１のいずれかに記載の方法によって得られた、または入手可能である、細胞外マトリックス材料。
【請求項３３】
リン酸カルシウム鉱物相が、前記細胞外マトリックス材料の重量の少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも５０％である、あるいは
リン酸カルシウム鉱物相が、オルトリン酸カルシウム化合物、好ましくはヒドロキシアパタイトを含む、
請求項１から３または３２のいずれかに記載の細胞外マトリックス材料。
【請求項３４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏでの骨再生のため、または骨欠損の処置のための医薬品の製造において使用するための、請求項１から３または３２に記載の細胞外マトリックス組成物の使用。
【請求項３５】
請求項１から３または３２のいずれか一項に記載の細胞外マトリックス材料を含む組成物であって、
前記組成物は、骨再生のための組成物であり、骨欠損、例えば創傷または骨折に適用されることを特徴とする、組成物であるか、あるいは
前記組成物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏでの骨再生において使用するため、または骨欠損を処置するための組成物である、組成物。
【請求項３６】
前記リン酸カルシウム鉱物相が、オルトリン酸カルシウム化合物、好ましくはヒドロキシアパタイトを含む、
前記リン酸カルシウム鉱物相が、リン酸八カルシウムを含む、あるいは
前記リン酸カルシウム鉱物相が、非晶質および／または結晶性リン酸カルシウム鉱物相を含む、
請求項５から３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
リン酸カルシウム鉱物相が、リン酸八カルシウムを含む、ならびに／あるいは
リン酸カルシウム鉱物相が、非晶質および／または結晶性リン酸カルシウム鉱物相を含む、請求項１から３または３２のいずれかに記載の細胞外マトリックス材料。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０５】
本明細書で前述した細胞外マトリックス材料は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏでの骨再生のために使用することができる。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
フィブリンまたはフィブリノゲン、および増量剤を含む架橋された足場、ならびに
前記足場上に堆積しているセラミック
を含む、細胞外マトリックス材料。
（項目２）
前記セラミックが、リン酸カルシウム鉱物相であるか、またはリン酸カルシウム鉱物相を含む、項目１に記載の細胞外マトリックス。
（項目３）
前記増量剤が、アルギン酸塩、例えばアルギン酸ナトリウムまたは誘導体化アルギン酸塩、例えばプロピルグリコアルギン酸ナトリウムである、項目１または項目２に記載の細胞外マトリックス材料。
（項目４）
前記増量剤が、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ；例えばコンドロイチン６−硫酸、コンドロイチン４−硫酸、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、キチン、キトサン、デキストラン硫酸またはヒアルロナン）である、項目１または項目２に記載の細胞外マトリックス材料。
（項目５）
前記増量剤が、ヒドロキシエチルデンプン、エチルセルロース、キサンタンガムおよびアガロースから選択される、項目１または項目２に記載の細胞外マトリックス材料。
（項目６）
細胞外マトリックス材料を調製するための方法であって、セラミックを、フィブリンまたはフィブリノゲン、および増量剤を含む架橋された足場上に堆積させるステップを含む、方法。
（項目７）
前記セラミックが、リン酸カルシウム鉱物相である、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、生物模倣堆積によって前記足場上に堆積させられる、項目６または項目７に記載の方法。
（項目９）
リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、Ｃａ２＋およびＨＰＯ４２を含み、任意選択でｉ）Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｌ−、ＨＣＯ３−，ＨＰＯ４２−およびＳＯ４２−、ｉｉ）Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｌ−、ＨＣＯ３−およびＨＰＯ４２−、またはｉｉｉ）Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋をさらに含む流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目６から８のいずれかに記載の方法。
（項目１０）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１〜３０ｍＭのＣａ２＋、好ましくは１〜２０ｍＭのＣａ２を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から９のいずれかに記載の方法。
（項目１１）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、０．５〜１０ｍＭのＨＰＯ４２−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１０のいずれかに記載の方法。
（項目１２）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１００〜８００ｍＭのＮａ＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１１のいずれかに記載の方法。
（項目１３）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１〜５０ｍＭのＫ＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１２のいずれかに記載の方法。
（項目１４）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、０．５〜２０ｍＭのＭｇ２＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１３のいずれかに記載の方法。
（項目１５）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１００〜８００ｍＭのＣｌ−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１４のいずれかに記載の方法。
（項目１６）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１〜１００ｍＭのＨＣＯ３−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１５のいずれかに記載の方法。
（項目１７）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１〜１０ｍＭのＳＯ４２−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１６のいずれかに記載の方法。
（項目１８）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１〜５ｍＭのＣａ２＋、好ましくは２〜３ｍＭのＣａ２＋、最も好ましくは約２．５ｍＭのＣａ２＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１７のいずれかに記載の方法。
（項目１９）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、０．５〜３ｍＭのＨＰＯ４２−、好ましくは０．５〜２ｍＭのＨＰＯ４２−、最も好ましくは約１ｍＭのＨＰＯ４２−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１８のいずれかに記載の方法。
（項目２０）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１００〜２００ｍＭのＮａ＋、好ましくは１２０〜１６０ｍＭのＮａ＋、さらにより好ましくは１４０〜１５０ｍＭのＮａ＋、最も好ましくは約１４２ｍＭのＮａ＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１９のいずれかに記載の方法。
（項目２１）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１〜１０ｍＭのＫ＋、好ましくは３〜７ｍＭのＫ＋、最も好ましくは約５ｍＭのＫ＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から２０のいずれかに記載の方法。
（項目２２）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、０．５〜３ｍＭのＭｇ２＋、好ましくは１〜２ｍＭのＭｇ２＋、最も好ましくは約１．５ｍＭのＭｇ２＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から２１のいずれかに記載の方法。
（項目２３）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１００〜２００ｍＭのＣｌ−、好ましくは１２０〜１６０ｍＭのＣｌ−、より好ましくは１４０〜１５０ｍＭのＣｌ−、最も好ましくは約１４８．８ｍＭのＣｌ−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から２２のいずれかに記載の方法。
（項目２４）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１〜１０ｍＭのＨＣＯ３−、好ましくは２〜８ｍＭのＨＣＯ３−、より好ましくは４〜５ｍＭのＨＣＯ３−、最も好ましくは約４．２ｍＭのＨＣＯ３−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から２３のいずれかに記載の方法。
（項目２５）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１〜５ｍＭのＣａ２＋、０．５〜３ｍＭのＨＰＯ４２、１００〜２００ｍＭのＮａ＋、１〜１０ｍＭのＫ＋、０．５〜３ｍＭのＭｇ２＋、１００〜２００ｍＭのＣｌ−および１〜１０ｍＭのＨＣＯ３−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目１１から２４のいずれかに記載の方法。
（項目２６）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、２〜３ｍＭのＣａ２＋、０．５〜２ｍＭのＨＰＯ４２−、１２０〜１６０ｍＭのＮａ＋、３〜７ｍＭのＫ＋、１〜２ｍＭのＭｇ２＋、１２０〜１６０ｍＭのＣｌ−および２〜８ｍＭのＨＣＯ３−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目１１から２５のいずれかに記載の方法。
（項目２７）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１０〜３０ｍＭのＣａ２＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１７のいずれかに記載の方法。
（項目２８）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、５〜１０ｍＭのＨＰＯ４２−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１７または２７のいずれかに記載の方法。
（項目２９）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、５００〜８００ｍＭのＮａ＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１７または２７から２８のいずれかに記載の方法。
（項目３０）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１０〜４０ｍＭのＫ＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１７または２７から２９のいずれかに記載の方法。
（項目３１）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、５〜１５ｍＭのＭｇ２＋を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１７または２７から３０のいずれかに記載の方法。
（項目３２）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、５００〜８００ｍＭのＣｌ−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１７または２７から３１のいずれかに記載の方法。
（項目３３）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１０〜１００ｍＭのＨＣＯ３−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１７または２７から３２のいずれかに記載の方法。
（項目３４）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、前記足場を、１〜１０ｍＭのＳＯ４２−を含む流体と接触させるか、または前記足場を前記流体に浸漬させることによって、前記足場上に堆積させられる、項目７から１７または２７から３３のいずれかに記載の方法。
（項目３５）
前記足場が、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、または少なくとも９日間、前記流体と接触させられるか、または前記流体に浸漬させられる、項目９から３４のいずれかに記載の方法。
（項目３６）
前記足場が、２０日間まで、好ましくは１０日間まで、最も好ましくは９日間まで、前記流体と接触させられるか、または前記流体に浸漬させられる、項目９から３５のいずれかに記載の方法。
（項目３７）
前記足場が、
（ａ）フィブリノゲンの水溶液を、凝固剤および増量剤と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた混合物を、架橋剤と共にインキュベートするステップと、
（ｃ）前記架橋剤を除去するために、ステップ（ｂ）で得られた架橋された組成物を洗浄するステップと
を含む方法によって得られた、形成された、または入手可能である、項目７から３６のいずれかに記載の方法。
（項目３８）
（ａ）フィブリノゲンの水溶液を、凝固剤および増量剤と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた混合物を、架橋剤と共にインキュベートするステップと、
（ｃ）前記架橋剤を除去するために、ステップ（ｂ）で得られた架橋された組成物を洗浄するステップと
を含む方法によって、前記足場を形成することを含む、項目７から３６のいずれかに記載の方法。
（項目３９）
フィブリノゲンが、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％の１つを超える純度レベルで存在する、項目３７または項目３８に記載の方法。
（項目４０）
フィブリノゲンが、切断型のフィブリノゲン、例えばフィブリンＡ、フィブリンＢ、フィブリンＣ、フィブリンＤ、フィブリンＸおよびフィブリンＹとして存在する、項目３７から３９のいずれかに記載の方法。
（項目４１）
前記切断型のフィブリノゲンが、フィブリンＥである、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
フィブリノゲンが、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）またはＨＥＰＥＳ緩衝食塩水でｐＨ４〜１０の間に緩衝化された水溶液として存在する、項目３７から４１のいずれかに記載の方法。
（項目４３）
前記凝固剤が、酵素または非酵素凝固剤を含む、項目３７から４２のいずれかに記載の方法。
（項目４４）
前記凝固剤が、トロンビン、例えばヒトトロンビンである、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
ステップ（ａ）が、発泡剤と混合することを含む、項目３７から４４のいずれかに記載の方法。
（項目４６）
前記発泡剤が、非イオン性洗浄剤、温度感受性ゲル化界面活性剤（例えばプルロニック１２７）、ジホスファチジルグリセロールタイプのリン脂質または不混和性相とフィブリノゲン水溶液相の混合物を含み、好ましくは前記発泡剤が、プルロニック界面活性剤、例えばプルロニックＦ６８および／またはプルロニックＦ１２７、より好ましくはプルロニックＦ６８を含む、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記発泡剤が、糖界面活性剤のクラスの１種または複数の界面活性剤からなるか、またはそれを含む、項目４５または項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記発泡剤が、糖アシル界面活性剤のクラスの１種または複数の界面活性剤からなるか、またはそれを含む、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記発泡剤が、Ｃ８〜Ｃ１２のアシル鎖長を有する糖アシル界面活性剤のクラスの発泡剤である、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記発泡剤が、少なくとも２種、好ましくは３種の糖界面活性剤を含むか、またはそれからなる、項目４７から４９のいずれかに記載の方法。
（項目５１）
前記発泡剤の糖アシル界面活性剤が、ピラノシド（特に、グルコピラノシド）、マルトシド、およびアシルスクロース界面活性剤のクラスから選択される、項目４８から５０のいずれかに記載の方法。
（項目５２）
前記糖アシル界面活性剤が、ＯＧＰ、ＯＤＭ、ＤＧＰおよびＤｄＧＰ、ＴＧＰ、ＨＧＰ、ＤＭＰ、デシルスクロース（ｎＤＳ）、ドデシルスクロース（ｎＤｄＳ）、好ましくはＯＧＭ、ＤＭＰおよびＤｄＧＰからなる群から選択される、項目４８から５１のいずれかに記載の方法。
（項目５３）
ステップ（ｂ）で使用される前記架橋剤が、カルボジイミドカップリング剤、例えばＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイニド（ethylcarbodiiniide）（ＥＤＣ）；Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、アジドカップリング剤；ジイソシアネート架橋剤、例えばヘキサメチレンジイソシアネート；エポキシド架橋剤、例えばエピクロロヒドリン、グリシジルエーテルおよびグリシジルアミン；ならびにアルデヒド架橋剤、例えばホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドおよびグリオキサールから選択される、項目３７から５２のいずれかに記載の方法。
（項目５４）
前記架橋剤が、アルデヒド架橋剤、例えばホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドおよびグリオキサールを含む、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記アルデヒド架橋剤が、グルタルアルデヒドである、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
還元剤または毒性低減剤、例えば水素化ホウ素ナトリウムまたはリシンを添加するステップをさらに含む、項目３７から５５のいずれかに記載の方法。
（項目５７）
前記混合ステップ（ａ）が、例えば曝気により混合して発泡させることによって達成される、項目３７から５６のいずれかに記載の方法。
（項目５８）
ステップ（ａ）で得られた前記混合物が、前記インキュベーションステップ（ｂ）の前にキャスティングされ、凍結され、任意選択で凍結乾燥される、項目３７から５７のいずれかに記載の方法。
（項目５９）
二価または多価金属イオン、例えばカルシウム、例えば塩化カルシウムを添加するステップをさらに含む、項目３７から５８のいずれかに記載の方法。
（項目６０）
混合ステップ（ａ）のための前記混合物が、タンパク質安定剤として糖をさらに含み、
前記糖が、小さいポリオールまたは炭水化物、例えばグリセロール、ソルビトール、スクロースまたはトレハロースである、項目３７から５９のいずれかに記載の方法。
（項目６１）
前記糖が、ステップ（ａ）の前記混合物中、フィブリノゲンに対して好ましくは１０〜１１ｗｔ％の量、好ましくは４〜７．５ｗｔ％の量のトレハロースである、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
（ｉ）ステップ（ａ）の前記混合物が、前記インキュベーションステップ（ｃ）の前に、所定の形状の型でキャスティングされ、凍結され、任意選択で凍結乾燥されるか、または（ｉｉ）ステップ（ｄ）の生成物が、所定の形状の型で生成され、次に前記生成物が凍結され、任意選択で凍結乾燥されるかのいずれかである、所定の形状を有する細胞外マトリックス組成物を調製するための、項目３７から６１のいずれかに記載の方法。
（項目６３）
前記増量剤が、アルギン酸塩、例えばアルギン酸ナトリウムまたは誘導体化アルギン酸塩、例えばプロピルグリコアルギン酸ナトリウムである、項目３７から６２のいずれかに記載の方法。
（項目６４）
前記増量剤が、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ；例えばコンドロイチン６−硫酸、コンドロイチン４−硫酸、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、キチン、キトサン、デキストラン硫酸またはヒアルロナン）である、項目３７から６３のいずれかに記載の方法。
（項目６５）
前記増量剤が、ヒドロキシエチルデンプン、エチルセルロース、キサンタンガムおよびアガロースから選択される、項目３７から６４のいずれかに記載の方法。
（項目６６）
項目６から６５のいずれかに記載の方法によって得られた、または入手可能である、細胞外マトリックス材料。
（項目６７）
リン酸カルシウム鉱物相が、前記細胞外マトリックス材料の重量の少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも５０％である、項目１から５または６６のいずれかに記載の細胞外マトリックス材料。
（項目６８）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏでの骨再生のため、または骨欠損の処置のための医薬品の製造において使用するための、項目１から５または６６に記載の細胞外マトリックス組成物の使用。
（項目６９）
項目１から５または６６に記載の細胞外マトリックス材料を、骨欠損、例えば創傷または骨折に適用するステップを含む、骨再生の方法。
（項目７０）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏでの骨再生において使用するため、または骨欠損を処置するための、項目１から５または６６のいずれかに記載の細胞外マトリックス材料。
（項目７１）
リン酸カルシウム鉱物相が、オルトリン酸カルシウム化合物、好ましくはヒドロキシアパタイトを含む、項目１から５または６６のいずれかに記載の細胞外マトリックス材料。
（項目７２）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、オルトリン酸カルシウム化合物、好ましくはヒドロキシアパタイトを含む、項目７から６５のいずれかに記載の方法。
（項目７３）
リン酸カルシウム鉱物相が、リン酸八カルシウムを含む、項目１から５または６６のいずれかに記載の細胞外マトリックス材料。
（項目７４）
リン酸カルシウム鉱物相が、非晶質および／または結晶性リン酸カルシウム鉱物相を含む、項目１から５、６６または７３のいずれかに記載の細胞外マトリックス材料。
（項目７５）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、リン酸八カルシウムを含む、項目７から６５のいずれかに記載の方法。
（項目７６）
前記リン酸カルシウム鉱物相が、非晶質および／または結晶性リン酸カルシウム鉱物相を含む、項目７から６５のいずれかに記載の方法。