(57)【要約】本発明は一部では、結腸癌発生を予防または軽減する方法であって、結腸直腸癌のリスクのある患者に、式（Ｉ）で表される化学予防剤を含む医薬品を投与することを含む、方法を対象とする。本開示は一部では、結腸の固形腫瘍および／または腺癌の発生を予防および／または低減する、例えば、結腸癌の症状を最少化するまたは引き延ばす方法であって、患者、例えばヒトに本明細書で開示する化合物を投与することを含む方法を対象とする。2012510965.tif 000013
2012510965.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
結腸癌発生を予防または軽減する方法であって、結腸直腸癌のリスクのある患者に、
【化８】
2012510965.tif 000010
で表される化学予防剤またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含む医薬品を投与することを含む方法。
【請求項２】
前記患者がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者が検出可能な結腸直腸癌を有していない、請求項２または３に記載の方法。
【請求項４】
投与の際またはその前に、自然変異頻度の結腸癌細胞が前記患者において存在する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記患者が、クローン病、炎症性腸疾患または潰瘍性大腸炎を有する、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
癌のリスクのある患者における腺癌の臨床症状を遅延させる方法であって、前記患者に、
【化９】
2012510965.tif 000011
で表される有効量の化学予防化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を投与することを含む方法。
【請求項７】
前記遅延が、化学予防化合物を投与されていない患者と比較して少なくとも１年である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記患者が、前記患者に存在する結腸癌細胞の変異率の少なくとも約３０％の減少を有する、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記患者が、一般個体群と比較して腺癌を有する高いリスクがある、請求項６から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記患者が遺伝的ベースのリスクを有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記腺癌が、胸部、結腸、肺、頸部、膵臓、前立腺および／または肝細胞の癌である、請求項６から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記化学予防化合物は全身投与される、請求項６から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記化学予防化合物は経口投与される、請求項６から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
結腸直腸腫瘍を有する患者への全身投与に適した組成物であって、
【化１０】
2012510965.tif 000012
で表される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体および薬学的に許容される賦形剤を含み、前記化合物が、全身投与されたときに腫瘍の成長を阻害するのに有効な量で存在する、組成物。
【請求項１５】
前記腫瘍の成長の阻害が腫瘍倍増時間の遅れとして測定される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記腫瘍倍増時間が２倍に延長される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記腫瘍の成長の阻害が前記腫瘍の体積の減少によって測定される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記腫瘍の体積が少なくとも３０％減少する、請求項１７に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２００８年１２月５日に出願されたＥＰ０８４２５７７５．７、２００９年３月５日に出願された米国特許出願第６１／１５７６７４号および２００９年７月１日に出願された米国特許出願第６１／２２２，２８１号に対する優先権を主張し、これらの全ては、本明細書において参照として援用される。
【背景技術】
【０００２】
背景
結腸直腸癌は、潰瘍性大腸炎またはクローン病を有する患者における重大な合併症である。結腸疾患の診断での初期段階、その程度および重症度、原発性硬化性胆管炎の存在および／または癌の家族歴は、結腸直腸癌の発症に対する独立した危険因子を代表する。アスピリンは、結腸癌において化学予防効果を発揮することが分かっているが、これがそうした効果を発揮するその機序は複雑である。
【０００３】
結腸直腸癌および固形腫瘍癌ならびに腺癌（乳癌、前立腺癌、肺癌および肝細胞癌（ｈｅｐｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）など）などの癌に対する化学予防薬の活性のための１つの標的はＤＮＡ複製の改善である。ＤＮＡ複製の忠実度は、ポリメラーゼの正確さ、そのプルーフリーディング活性および／または複製後ミスマッチ修復系の精度の産物である。忠実複製の非効率性は、ヒト癌の発症のカギである可能性がある。結腸直腸細胞における効率を増進させる化学予防薬は、癌の生命に関わる症状を著しく軽減し、癌死亡を減少させる可能性がある。しかし、５−アミノサリチル酸（５−ａｍｉｎｏ  ｓａｌｉｃｙｃｌｉｃ  ａｃｉｄ）などの化学予防薬の潜在性を有し得るいくつかの薬物は、全身投与された場合、不活性化され、循環系から排除され、経口で投与された場合、５−アミノ−サリチル酸は散発性および大腸炎関連結腸直腸癌を発現している可能性のある左結腸に到達しない。
【０００４】
例えば、経口で投与された場合、ある時間の間活性が保持され、その結果そうした薬物が身体の患部または癌のリスクのある身体の領域、例えば左結腸に到達することができる化学予防薬が依然として必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は一部では、結腸の固形腫瘍および／または腺癌の発生を予防および／または低減する、例えば結腸癌の症状を最少化するまたは引き延ばす方法であって、患者、例えばヒトに本明細書で開示する化合物を投与することを含む方法を対象とする。
【０００６】
例えば、結腸癌発生または他の癌発生（例えば、腺癌）を予防または低減する方法であって、癌、例えば結腸癌のリスクのある患者に
【０００７】
【化１】
2012510965.tif 000003
【０００８】
で表される化学予防剤またはその薬学的に許容される塩および／もしくは立体異性体を含む医薬品を投与することを含む方法を提供する。
【０００９】
例えば、本明細書で開示する方法は、その患者がヒトである、方法を含むことができる。患者は、例えば、検出可能な結腸直腸癌を有していても有していなくてもよい。いくつかの実施形態では、投与の際またはその前に、患者において、自然変異頻度の結腸癌細胞が存在する。他の実施形態では、その患者はクローン病、炎症性腸疾患または潰瘍性大腸炎を有する。
【００１０】
本明細書では、癌、例えば結腸癌のリスクのある患者における結腸直腸腫瘍（または、例えば固形腫瘍または腺癌、例えば、肺癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌または肝細胞癌）の臨床症状を遅延させる方法であって、患者に有効量の上記化学予防化合物を投与することを含む方法も提供する。例えば、その遅延は、化学予防化合物を投与されていない患者と比較して少なくとも１年である。他の実施形態では、患者は、その患者に存在する癌細胞、例えば結腸癌細胞の変異率の少なくとも約３０％の減少を得ることができる。
【００１１】
本発明の上記および他の態様および利点は、以下の図面、詳細な説明および特許請求の範囲を考慮すれば明らかになるであろう。
【００１２】
以下の図面を参照すれば、本発明をより完全に理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、ＣＦＳＥ標識化ＨＣＴ１１６細胞をフローサイトメトリーで評価し、続いて漸増用量の５−ＡＳＡおよび本明細書で開示する化合物１４、２０、２６、３１、３８、３９で処理した成長阻害の割合を示す。
【図２】図２は、化合物１４によるＨＣＴ−１１６およびＨＴ−２９細胞の成長の阻害を表す。ＣＦＳＥ標識化細胞は、未処理（Ｕｎｔｒ）のままであるか、または化合物１４で処理したものである（いくつかの図では２〜１４と記している）。
【図３】図３Ａは、時間依存的な方法によるＨＣＴ−１１６細胞成長の阻害を表す。図３Ｂは可逆的阻害を表す。
【図４】図４Ａは、未処理のままであるか、または傾斜用量の化合物１４の存在下または非存在下、抗−ＣＤ３／ＣＤ２８で４８時間処理した増殖性結腸ＩＥＬ（上皮内リンパ球）の割合を示す代表的なヒストグラムを示す。データは３つの実験の平均±ＳＤを示す。図４Ｂは、未処理のままであるか、または化合物１４で４８時間処理した増殖性線維芽細胞の割合を示すヒストグラムである。データは３つの実験の平均±ＳＤを示す。
【図５】図５は、化合物１４処理した細胞がＧ０／Ｇ１期において蓄積することを示している。
【図６】図６は、Ｔｈｒ−１４およびＴｙｒ−１５残基でのＣＤＫ２リン酸化に対する化合物１４の影響を示す。
【図７】図７ＡおよびＢは、マウスにおいて化合物１４を用量依存的に投与すると、ＣＴ２６誘発腫瘍のインビボでの形成が低下することを示している。図７Ｃは、サイクリンＤ１タンパク質の発現に対する、化合物１４を用いたマウスの皮下注射の結果を示す。図７Ｄは、安定化したＣＴ２６誘発腫瘍のサイズに対する、化合物１４を用いたマウスの皮下注射の結果を表す。
【図８】図８Ａは、ＰＢＳ（Ｃｔｒ）または化合物１４で処理したマウスの結腸腫瘍の発現を示す代表的な内視鏡写真である。右側の差し込み図は、腫瘍発現の内視鏡的（ｅｎｄｏｃｓｃｏｐｉｃ）評点づけを示す。図８Ｂは、Ｈ＆Ｅ染色結腸断面の代表的写真である。図８Ｃは、腫瘍性病変の多様性に対する処理の効果を表す。
【図９】図９は、化合物１４の４Ｔ１細胞の成長の阻害を表す。ＣＦＳＥ標識化細胞は、未処理（Ｕｎｔｒ）のままであるか、または傾斜用量の化合物１４で２４時間処理したものであり、増殖細胞の割合はフローサイトメトリーで評価した。データは３つの実験の平均±ＳＤを示す（＊Ｐ＝０．０３、＊＊Ｐ＜０．０１）。
【図１０】図１０は、インビボでの４Ｔ１誘発腫瘍の形成の減少を表す。対照（ｃｔｒ）および化合物１４処理マウスにおいて成長した異種移植片の代表的な写真画像を、それぞれのヒストグラムの下部に示す（対照ｖｓ化合物１４処理マウス、＊Ｐ＜０．０１）。
【図１１】図１１は、開示化合物を用いた４Ｔ１誘発転移のインビボでの形成の低下を表す。代表的な写真画像は、対照（Ｃｔｒ）および化合物１４処理マウスの肝臓および肺のホモジネートから得られた４Ｔ１細胞腫瘍病巣を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、一部では、本明細書で開示する特定の化合物が癌細胞、例えば結腸直腸癌細胞における複製忠実度を改善する能力を有するという発見によっている。一態様では、本開示は、例えば結腸癌などの癌を発症するリスクがある、および／またはそれを発症しやすいことを示す危険因子を有する患者における癌、例えば結腸癌の発症を予防または低減する方法を対象とする。本開示の方法は、本明細書で開示する化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む。
【００１５】
本発明をさらに説明する前に、本明細書、実施例および添付の特許請求の範囲で使用する具体的な用語をここに集める。これらの定義は、本開示の残りの部分に照らして読まれるべきであり、当業者によるのと同様に理解されるべきである。別段の定義のない限り、本明細書で用いるすべての技術的および科学的用語は、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有するものとする。
【００１６】
対象とする方法で扱われる「患者」、「被験体」または「宿主」は、ヒトまたは、例えばマウスもしくはラットなどの小動物およびウマ、ウシ、イヌ、ネコ等を含むヒト以外の動物を意味する。
【００１７】
「治療薬」という用語は、当技術分野で認識されており、被験体において局所および／または全身で作用する生物学的、生理学的または薬理学的に活性な物質である任意の化学的部分を指す。「薬物」とも称される治療薬の例は、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、ｔｈｅ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｄｅｓｋ  ＲｅｆｅｒｅｎｃｅおよびＴｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓなどの周知の文献に記載されており、それらには、これらに限定されないが、医薬品；ビタミン；ミネラルサプリメント；疾患または病気の治療、予防、診断、治癒または緩和のために使用される物質；身体の構造または機能に影響を及ぼす物質；あるいは生理学的環境に置かれた後、生物学的に活性になるまたはより活性になるプロドラッグが含まれる。
【００１８】
「治療効果」という用語は、当技術分野で認識されており、これは、動物、特に哺乳動物、より具体的にはヒトにおける薬理学的に活性な物質によって引き起こされる局所的および／または全身的な効果を指す。したがって、この用語は、疾患の診断、治癒、緩和、治療または予防において、あるいは動物またはヒトにおける望ましい肉体的または精神的な成長および／または状態の増進において使用するための任意の物質を意味する。「治療有効量」という語句は、任意の治療に適用できる妥当な利益／リスク比で、何らかの所望の局所的または全身的効果をもたらす物質の量を意味する。そうした物質の治療有効量は、治療を受ける被験体および疾患の状態、被験体の体重および年齢、その病状の重症度、投与の様式などに応じて変わることになるが、当業者はそれを容易に決定することができる。例えば、本発明の特定の組成物は、そうした治療に適用できる妥当な利益／リスク比をもたらすのに十分な量で投与することができる。
【００１９】
「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、当技術分野で認識されており、これは、任意の状態または疾患の少なくとも１つの症状を治癒させ、また改善することを指す。
【００２０】
「アルキル」という用語は、当技術分野で認識されており、それらには、直鎖アルキル基、分枝鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基およびシクロアルキル置換アルキル基を含む飽和脂肪族基が含まれる。特定の実施形態では、直鎖または分枝鎖アルキルは、その主鎖中に約３０個以下の炭素原子（例えば、直鎖の場合Ｃ１〜Ｃ３０、分枝鎖の場合Ｃ３〜Ｃ３０）、あるいは約２０個以下、例えば１〜６個の炭素を有する。同様に、シクロアルキルは、その環構造中に約３〜約１０個の炭素原子、あるいは環構造中に約５、６もしくは７個の炭素を有する。「アルキル」という用語は、ハロ置換アルキルも含むように定義される。
【００２１】
さらに、「アルキル」（または「低級アルキル」）という用語は、炭化水素主鎖の１つまたは複数の炭素上の水素を置き換える置換基を有するアルキル部分を指す「置換アルキル」を含む。そうした置換基は、例えば、ヒドロキシル、カルボニル（カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミルまたはアシルなど）、チオカルボニル（チオエステル、チオアセテートまたはチオホルメートなど）、アルコキシル、ホスホリル、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキルまたは芳香族もしくは複素芳香族部分を含むことができる。当業者は、適切な場合、炭化水素鎖上で置換された部分が、それ自体置換されていてよいことを理解されよう。例えば、置換アルキルの置換基は、置換および非置換形態のアミノ、アジド、イミノ、アミド、ホスホリル（ホスホネートおよびホスフィネートを含む）、スルホニル（スルフェート、スルホンアミド、スルファモイルおよびスルホネートを含む）およびシリル基ならびにエーテル、アルキルチオ、カルボニル（ケトン、アルデヒド、カルボキシレートおよびエステルを含む）、−ＣＮなどを含むことができる。置換アルキルの例を以下に示す。シクロアルキルは、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキルチオ、アミノアルキル、カルボニル−置換アルキル、−ＣＮなどでさらに置換されていてよい。
【００２２】
オルト、メタおよびパラという用語は、当技術分野で認識されており、それぞれ１，２−、１，３−および１，４−ジ置換ベンゼンを指す。例えば、１，２−ジメチルベンゼンとオルト−ジメチルベンゼンという名称は同義語である。
【００２３】
任意の構造において２回以上出現する場合、各表現、例えばアルキル、ｍ、ｎなどの定義は、同一構造内において他の所でのその定義から独立であるものとする。
【００２４】
本発明の組成物に含まれる特定の化合物は、特定の幾何異性体または立体異性体で存在することができる。さらに、本発明の化合物は光学的に活性であってよい。本発明では、シスおよびトランス異性体、ＲおよびＳ鏡像異性体、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、そのラセミ混合物およびそれらの他の混合物を含むそうしたすべての化合物が本発明の範囲内に含まれるものとする。追加の不斉炭素原子が、アルキル基などの置換基に存在することができる。そうしたすべての異性体ならびにその混合物は本発明に含まれるものとする。
【００２５】
「置換」または「で置換された（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｗｉｔｈ）」ということは、そうした置換が置換原子および置換基の許容される原子価に従っており、そして、その置換が安定な化合物、例えば自然発生的に転位、環化、脱離または他の反応などの変換を受けない化合物を生じるという暗黙の条件が含まれるを理解されよう。
【００２６】
「置換された（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）」という用語は、有機化合物のすべての許容される置換基を含むことも考慮される。幅広い態様においては、その許容される置換基は、有機化合物の非環式および環状、分枝状および非分枝状の、炭素環式および複素環式、芳香族および非芳香族置換基を含む。例示的な置換基には、例えば本明細書で上記したものが含まれる。許容される置換基は、適切な有機化合物について１つもしくは複数であってよく、またそれは同じであっても異なっていてもよい。本発明のために、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満足する本明細書で説明する有機化合物の水素置換基および／または許容される任意の置換基を有していてよい。本発明は、どんな様式でも、有機化合物の許容される置換基によって限定されるものではない。
【００２７】
本発明のために、化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ、６７ｔｈ  Ｅｄ．、１９８６〜８７年の表紙裏の元素周期表、ＣＡＳ版によって特定される。また、本発明のために、「炭化水素」という用語は、少なくとも１個の水素と１個の炭素原子を有する許容されるすべての化合物を含むものとする。幅広い態様では、その許容される炭化水素は、置換されていても置換されていなくてもよい非環式および環状、分枝状および非分枝状の、炭素環式および複素環式、芳香族および非芳香族有機化合物を含む。
【００２８】
「薬学的に許容される塩」という用語は、当技術分野で認識されており、例えば、本発明の組成物中に含まれるものを含む化合物の比較的非毒性の無機酸付加塩および有機酸付加塩を指す。
【００２９】
「薬学的に許容される担体」という用語は、当技術分野で認識されており、これは、任意の対象組成物またはその成分を１つの器官または身体の一部から他の器官または身体の一部へ運ぶまたは輸送するのに関わる、液体もしくは固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒もしくはカプセル化材料などの薬学的に許容される物質、組成物またはビヒクルを指す。各担体は、対象組成物およびその成分と適合し、かつ患者に対して有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。薬学的に許容される担体として働く物質のいくつかの例には、（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖類；（２）トウモロコシデンプンおよびバレイショデンプンなどのデンプン；（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体；（４）粉末トラガカント；（５）モルト；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）ココアバターおよび坐剤用ワックスなどの賦形剤；（９）ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油などの油類；（１０）プロピレングリコールなどのグリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール；（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）パイロジェン除去水；（１７）等張食塩水；（１８）リンガー溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液ならびに（２１）製剤において使用される他の非毒性の適合物質が含まれる。
【００３０】
化合物
本開示の方法において使用するのに考慮される化合物は、式Ｉで表される化合物
【００３１】
【化２】
2012510965.tif 000004
【００３２】
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、ＨおよびＣ１〜６アルキルからなる群から選択され、またはＲ１とＲ２はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、任意に置換されていてよい５または６個の原子を有する芳香族環または脂肪族環を形成しており、
ＹおよびＺは、それぞれ独立に、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨからなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、フェニル、ベンジル、ビニル、アリル、Ｃ１〜６アルキルまたは１個もしくは複数のハロゲンで置換されたＣ１〜６アルキルからなる群から選択される）
またはその薬学的に許容される塩、鏡像異性体または立体異性体を含む。
【００３３】
一実施形態では、ＹはＨまたはＣＯＯＨであってよい。例えば、ＹはＨであってよく、ＺはＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨであってよく、またＹはＣＯＯＨであってよく、Ｚは−ＯＲ３であってよい。いくつかの実施形態では、Ｒ３はメチル、エチル、ｎ−プロピルまたはイソプロピルであってよい。
【００３４】
他の実施形態では、ＮＲ１Ｒ２部分は４’位にあっても３’位にあってもよい。特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はＨである。
【００３５】
例示的化合物は、式ＩＩａもしくは式ＩＩｂで表される化合物
【００３６】
【化３】
2012510965.tif 000005
【００３７】
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、ＨおよびＣ１〜６アルキルからなる群から選択され、またはＲ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、５または６個の原子を有する芳香族環または脂肪族環を形成しており、
Ｒ６は、−ＮＨＯＨ、ＯＨおよび−ＯＲ９からなる群から選択され、
Ｒ９はＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ４は、Ｈ、フェニル、ベンジル、ビニル、アリル、Ｃ１〜６アルキルまたは１つもしくは複数のハロゲンで置換されたＣ１〜６アルキルから選択され、
Ｒ５およびＲ７は、それぞれ独立に、水素またはハロであり、あるいは
Ｒ４とＲ５、またはＲ４とＲ６は一緒になって、ハロまたはＣ１〜６アルキルで任意に置換された５または６個の原子を有する縮合複素環を形成しており、
Ａは縮合複素環である）
またはその薬学的に許容される塩、鏡像異性体もしくは立体異性体、またはその薬学的に許容される塩も含む。
【００３８】
特定の実施形態では、式ＩＩａのＮＲ１Ｒ２部分は４’位にあってもまた３’位にあってもよい。特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はＨである。
【００３９】
いくつかの実施形態では、Ｒ９はメチル、エチル、ｎ−プロピルまたはイソプロピルであってよい。
【００４０】
いくつかの実施形態では、化合物は、
【００４１】
【化４】
2012510965.tif 000006
【００４２】
（式中、ｐは１または２であり、Ｒ６はＯＨまたは−ＯＲ９であり、Ｒ９は上記定義通りであり、Ｒ１０は、その出現ごとに独立に、Ｈ、ハロまたはＣ１〜６アルキル、例えばメチルもしくはエチルからなる群から選択される）
で表すことができる。
【００４３】
本明細書で考慮される例示的化合物は、
【００４４】
【化５】
2012510965.tif 000007
【００４５】
またはその薬学的に許容される塩を含むものとする。
【００４６】
いくつかの実施形態では、考慮される化合物は、４−アミノ−Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアミド（化合物１３）；６−メトキシキノリン−５−カルボン酸（化合物３６）；６−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸（化合物３７）；５−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物３８）を含む。
【００４７】
他の例示的化合物は、
【００４８】
【化６】
2012510965.tif 000008
【００４９】
で表される化合物を含む。
【００５０】
本明細書で考慮される化合物は、化合物のラセミ混合物および鏡像異性体、例えば、（±）−２−ヒドロキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２０）；（±）−２−メトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物２３）；（±）−２−エトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物３２）；（±）−２−エトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物３３）；（±）−２−メトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「±３４」（ラセミ体）；（±）−２−エトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３９）；（±）−２−エトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物４０）を含む。
【００５１】
例えば、本発明の方法において使用する化合物は以下のラセミ混合物：（Ｒ，Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−（３−アミノフェニル）酢酸（化合物１０）；（Ｒ，Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−（４−アミノフェニル）酢酸（化合物１１）；（Ｒ，Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２１）；（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物２２）；（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３５）；（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−３−（４−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）の鏡像異性体、ならびに鏡像異性体、例えば、（＋）２−Ｓ−メトキシ−３−（４−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）；（−）２−Ｒ−メトキシ−３−（４−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）であってよい。
【００５２】
考慮される化合物の他のラセミ型混合物には、例えば、（±）−２−ヒドロキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物１０）；（±）−２−ヒドロキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物１１）；（±）−２−ヒドロキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２１）および（±）−２−メトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物２２）が含まれる。
【００５３】
本開示の方法において使用するのに考慮される他の化合物：５−アミノサリチロ−ヒドロキサム酸（５−ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｏ−ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ）（化合物５）；３−ジメチルアミノサリチル酸（化合物６）；２−メトキシ−４−アミノ安息香酸（化合物７）；２−メトキシ−５−アミノ安息香酸（化合物８）；５−メチルアミノサリチル酸（化合物９）；４−メチルアミノサリチル酸（化合物１２）；４−アセチルアミノサリチル酸（化合物１６）；２−エトキシ−４−アミノ安息香酸（化合物１８）；２−エトキシ−５−アミノ安息香酸（化合物１９）；４−ジメチルアミノサリチル酸（化合物２４）；２−エトキシ−４−アミノベンゾイルヒドロキサム酸（化合物２５）；６−ヒドロキシキノリン−５−カルボン酸（化合物２７）；２−（２−プロピル）オキシ−４−アミノ安息香酸（化合物３０）；４−（１−ピペラジニル）サリチル酸（化合物４１）；（Ｒ，Ｓ）５−オキサ−キノリン−６−カルボン酸（化合物１５）；６−メトキシキノリン−５−カルボン酸（化合物３６）；６−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸（化合物３７）；５−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物３８）；および４−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物４２）。
【００５４】
考慮される化合物を作製するための方法は、例えばＷＯ２００７／０１０５１６およびＷＯ２００７／０１０５１４に見ることができる。そのそれぞれの全体を参照により本明細書に組み込む。
【００５５】
治療への応用
結腸癌発生または結腸癌を予防または低減する方法は本開示の一部を形成する。そうした方法は、患者、例えば結腸直腸癌のリスクのある患者に本明細書で開示するもの、例えば式Ｉ、式ＩＩａ、式ＩＩｂおよび本明細書で開示する化合物などの化学予防剤を含む医薬品を投与することを含むことができる。結腸癌または結腸癌発生のリスクのある患者は、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患またはクローン病を有する患者を含むことができる。リスクのある患者は、診断で初期段階のクローン病または大腸炎、広範および／または重篤な結腸疾患を有する患者、原発性硬化性胆管炎を有する患者および／または癌の家族歴を有する患者も含むことができる。結腸直腸癌のリスクのある患者は、そうした癌の家族歴を有する患者（例えば、家族性腺腫様ポリポーシスまたは遺伝性非ポリポーシスを有する患者）および／または慢性潰瘍性大腸炎および／または腺腫性ポリープなどの腺腫性ポリープを有する患者を含むことができる。
【００５６】
上記方法を用いて治療される患者は検出可能な結腸直腸癌を有していても有していなくてもよい。別の実施形態では、患者において、本明細書で開示する化合物の最初の投与の前またはその投与過程の間に自然変異頻度の結腸癌細胞が存在していてもいなくてもよい。いくつかの実施形態では、患者は、開示化合物を投与して、例えば１日、２日、１週間、１カ月または６カ月またはそれ以上の後、患者の中に存在する結腸癌細胞の変異率の少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、さらには５０％またはそれ以上の減少を有する。理論に拘束されるわけではないが、本明細書で開示する化合物は、細胞周期を通して進行に関係する細胞機構と相互作用することによって、変異率を低減することができる。そうした進行は、細胞周期チェックポイントの開始によってＤＮＡ複製（Ｓ期）および／または細胞分裂（有糸分裂）などのその過程の減速をもたらすことができ、これは、ＤＮＡが遭遇する可能性のある損傷を修復するか、またはアポトーシスを受ける機会を細胞に与える。両方の場合、これは、変異または損傷した細胞の蓄積を防止し、ＤＮＡの完全性の維持をもたらす。
【００５７】
本明細書では、患者、例えば癌、例えば結腸癌のリスクのある患者における結腸直腸腫瘍または固形腫瘍（例えば、乳癌、前立腺癌、肺癌または肝細胞）の臨床症状を遅延させる方法であって、患者に有効量の本明細書で開示する例えば式Ｉ、式ＩＩａまたは式ＩＩｂの化学予防化合物を投与することを含む方法も考慮する。考慮される癌のリスクのある患者には、一般個体群と比べて、例えば乳癌を有すると遺伝的に考えられる患者、または喫煙者が（近くに）いる、もしくは現在喫煙者である患者（例えば、非喫煙者と比べて肺癌のリスクが高い）が含まれる。
【００５８】
そうした化合物の投与は、例えば少なくとも毎日であってよい。本明細書で開示する化合物の投与の結果としての患者の腫瘍、例えば結腸直腸腫瘍の臨床症状の遅延は、本明細書で開示するものなどの化学予防化合物を投与されていない患者と比較して、少なくとも、例えば６カ月、１年、１８カ月、さらには２年またはそれ以上であってよい。そうした方法は、患者に有効量の開示化合物を全身投与（例えば、経口投与）することを含む。
【００５９】
例えば、本明細書は、結腸直腸腫瘍を有する患者への全身投与に適し得る組成物であって、式Ｉ、式ＩＩａまたは式ＩＩｂで表される化合物および薬学的に許容される賦形剤または担体を含む組成物を提供する。その化合物は、全身投与された場合、腫瘍の成長を阻害するのに有効な量で存在する。そうした腫瘍成長の阻害は、例えば腫瘍倍増時間の遅延として測定することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍倍増時間を２倍、３倍、４倍、さらには５倍または１０倍に引き延ばす。他の実施形態では、腫瘍の成長を、前記腫瘍の体積の減少により測定することができる。患者、例えば哺乳動物に投与した場合、開示する組成物は、少なくとも１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％またはそれ以上の腫瘍体積の減少をもたらすことができる。
【００６０】
一実施形態では、式Ｉ、式ＩＩａまたは式ＩＩｂで表される化合物は、それを必要とする患者の結腸癌発生を予防または軽減するのに５−アミノサリチル酸（メサラジン）より、例えば、約２倍、３倍、５倍さらには１０倍より多く効果的である。
【００６１】
乳癌、頸癌（ｃｅｒｖｉｘ）、膵臓癌、前立腺腺癌および／または肝細胞癌などの固形腫瘍または腺癌を予防または軽減する方法も本開示の一部を形成する。そうした方法は、患者、例えば、そうした癌のリスクのある患者に、本明細書で開示するもの、例えば式Ｉ、式ＩＩａまたは式ＩＩｂおよび本明細書で開示する化合物などの化学予防剤を含む医薬品を投与することを含むことができる。
【００６２】
一般に、活性成分の治療有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、任意に約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、任意に約１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲となる。投与される量は、治療を受ける疾患または適応症の種類および程度、具体的な患者の全体的健康状態、送達される結合タンパク質の相対的な生物学的効能、結合タンパク質の処方、処方物中の賦形剤の存在およびその種類ならびに投与経路などの変数に依存することになる。所望の血中濃度または組織内濃度を迅速に達成するため、投与される最初の投薬量を上記の上限値を超えて増加させることができ、また、最初の投薬量を最適値より少なくすることができる。１日用量は、具体的な状態に応じて治療の過程で漸増させることができる。ヒトへの投薬量は、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇで実施するように設計された慣用的な第Ｉ期用量漸増試験（Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｄｏｓｅ  ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ）で最適化することができる。投薬頻度は、投与経路、投薬量および治療を受ける病状などの因子に応じて変えることができる。投薬頻度の例は、１日１回、１週間に１回および２週間に１回である。
【００６３】
考慮される処方物または組成物は、開示化合物を含み、典型的には化合物および薬学的に許容される担体を含む。
【００６４】
本発明の組成物は、その目的とする用途に応じて、当技術分野で周知の様々な手段で投与することができる。例えば、本発明の組成物を経口で投与する場合、それらは錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤またはシロップ剤として処方することができる。あるいは、本発明の処方物を、注射剤（静脈内、筋肉内または皮下）、点滴製剤または坐剤として非経口で投与することができる。眼の粘膜経路で施すために、本発明の組成物を点眼剤または眼軟膏剤として処方することができる。これらの処方物は慣用的な手段で調製することができ、望むなら、その組成物を、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、可溶化剤、懸濁助剤、乳化剤またはコーティング剤などの慣用的な任意の添加剤と混合することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示の組成物および方法は、全身投与を含み、この全身投与としては、例えば、腹腔内投与が挙げられる。対象発明の処方物では、湿潤剤、乳化剤および滑沢剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、防腐剤および酸化防止剤が処方される剤中に存在していてよい。
【００６５】
対象組成物は、経口、経鼻、局所（頬側および舌下を含む）、経直腸、経膣、エアゾールおよび／または非経口投与に適している。処方物は、単位剤形で存在することが好都合であり、製薬技術分野で周知の任意の方法で調製することができる。単一用量を得るために担体材料と混合できる組成物の量は、治療を受ける被験体および具体的な投与方法によって変わる。
【００６６】
これらの処方物を調製する方法は、本発明の組成物と担体および任意の１つまたは複数の副成分を一緒にするステップを含む。一般に、処方物は、剤を液体担体もしくは微粉化された固体担体またはその両方と均一かつ密に一緒にし、次いで、必要なら、その生成物を成形することによって調製する。
【００６７】
経口投与に適した処方物は、それぞれが所定量のその対象組成物を活性成分として含むカプセル剤、カシェ剤、丸薬、錠剤、ロゼンジ剤（香味付けベース、通常スクロースおよびアカシアまたはトラガカントを用いて）、粉剤、顆粒剤の形態であってよく、あるいは水性もしくは非水性液体中の溶液または懸濁液として、水中油型もしくは油中水型の乳濁液として、エリキシル剤もしくはシロップ剤として、または香錠（ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアなどの不活性ベースを用いて）としてであってよい。本発明の組成物は、ボーラス投与、舐剤またはペーストとして投与することもできる。
【００６８】
経口投与用の固体剤形（カプセル剤、錠剤、丸薬、フィルムコート錠剤、糖衣錠剤、粉剤、顆粒剤など）では、対象組成物を、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの１つもしくは複数の薬学的に許容される担体および／または以下：（１）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸などの充填剤もしくは増量剤；（２）、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシアなどの結合剤；（３）グリセロールなどの保湿剤；（４）寒天、炭酸カルシウム、バレイショデンプンもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケートおよび炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；（５）パラフィンなどの溶解遅延剤；（６）四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；（７）、例えば、アセチルアルコール（ａｃｅｔｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ）およびグリセロールモノステアレートなどの湿潤剤；（８）カオリンおよびベントナイト粘土などの吸収剤；（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびその混合物などの滑沢剤；ならびに（１０）着色剤のいずれかと混合する。カプセル剤、錠剤および丸薬の場合、組成物は緩衝剤も含むことができる。同種の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いた軟質および硬質充填ゼラチンカプセル剤の充填剤として用いることもできる。
【００６９】
処方物および組成物は、開示化合物の微粉化結晶を含むことができる。微粉化は、化合物単独の結晶で実施しても、また、結晶と薬学的賦形剤または担体の一部もしくは全体との混合物で実施してもよい。開示化合物の微粉化結晶の平均粒径は、例えば約５〜約２００ミクロンまたは約１０〜約１１０ミクロンであってよい。
【００７０】
錠剤は、任意に１つもしくは複数の副成分と一緒に圧縮または成形して作製することができる。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤または分散剤を用いて調製することができる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿潤させた対象組成物の混合物を適切な機械で成形することによって作製することができる。フィルムコート錠剤または糖衣錠剤、カプセル剤、丸薬および顆粒剤などの錠剤および他の固体剤形は、任意に、割線を入れるか、または腸溶コーティングや製剤処方技術分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。
【００７１】
経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容される乳剤、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。対象組成物に加えて、液体剤形は、当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油類（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、シクロデキストリンおよびその混合物を含むことができる。
【００７２】
対象組成物に加えて懸濁液は、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカントならびにその混合物のような懸濁化剤を含むことができる。
【００７３】
経直腸または経膣投与のための処方物は坐剤として存在することができる。その坐剤は対象組成物を、室温では固体であるが体温では液体であり、したがって体腔内で溶融して活性剤を放出する、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、坐剤用ワックスまたはサリチレートを含む１つもしくは複数の適切な非刺激性の賦形剤または担体と混合することによって調製することができる。経膣投与に適した処方物には、当技術分野で適切であることが公知である担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡状または噴霧処方物も含まれる。
【００７４】
対象組成物の経皮または局所投与のための剤形には、粉剤、噴霧剤、軟膏剤、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチおよび吸入剤が含まれる。活性成分を滅菌状態下で、薬学的に許容される担体および必要とされる任意の防腐剤、緩衝剤または噴射剤と混合することができる。
【００７５】
軟膏剤、ペースト、クリームおよびゲルは、対象組成物に加えて、動物性および植物性脂肪、油類、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛またはその混合物などの賦形剤を含むことができる。
【００７６】
粉剤および噴霧剤は、対象組成物に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末またはこれらの物質の混合物などの賦形剤を含むことができる。噴霧剤は、慣用的な噴射剤、例えばクロロフルオロ炭化水素および揮発性非置換炭化水素、例えばブタンおよびプロパンを追加的に含むことができる。
【００７７】
あるいは、本発明の組成物および化合物はエアゾールで投与することもできる。これは、化合物を含む水性エアゾール、リポソーム製剤または固体粒子を調製することによって実施される。非水性（例えば、フルオロカーボン噴射剤）懸濁剤を使用することができる。対象組成物中に含まれる化合物の分解をもたらし得る、せん断にその剤を曝すことを最少にするので、超音波噴霧器を使用することができる。
【００７８】
通常、水性エアゾールは、対象組成物の水溶液または水性懸濁液を慣用的な薬学的に許容される担体および安定剤と一緒に処方することによって作製する。担体および安定剤は、具体的な対象組成物の要件によって変わってくるが、一般に非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃまたはポリエチレングリコール）、血清アルブミンのような無害なタンパク質、ソルビタンエステル、オレイン酸、レシチン、グリシンなどのアミノ酸、緩衝剤、塩、糖または糖アルコールを含む。エアゾールは一般に等張液から調製する。
【００７９】
非経口投与に適した本発明の医薬組成物は、対象組成物を、酸化防止剤、緩衝剤、静菌薬、対象レシピエントの血液と等張性の処方物を付与する溶質、懸濁化剤または増粘剤を含むことができる、１つまたは複数の薬学的に許容される滅菌した等張性の水溶液もしくは非水性溶液、分散液、懸濁液もしくは乳液、または使用直前に滅菌注射用溶液もしくは分散液に再構成することができる滅菌粉末と一緒に含む。
【００８０】
本発明の医薬組成物で使用できる適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびその適切な混合液、オリーブ油などの植物油ならびにオレイン酸エチルおよびシクロデキストリンなどの注入可能な有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を用いることによって、分散液の場合は所要粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。対象組成物を用いた治療の効能は、当業者に公知の多数の様式で判定することができる。
【００８１】
組成物が特定の成分を有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、または含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載されている説明を通して、組成物は、言及されている成分からも本質的になる、または言及されている成分からもなるものとする。同様に、特定のプロセスステップを有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、または含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載されている場合、そのプロセスは、言及されているプロセスステップからも本質的になる、または言及されているプロセスステップからもなるものとする。別段の指定のない限り、本発明が使用可能であるならば、そのステップの順番または具体的な作業を行う順番は重要ではない。さらに、別段の記載のない限り、２つ以上のステップまたは作業は同時に行うことができる。
【実施例】
【００８２】
（実施例１）
細胞増殖−結腸直腸
実施例１〜３で使用した試薬は、特に指定しない限り、すべてＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）からのものである。化合物を培養液中に２５ｍＭストック溶液として溶解し、必要に応じて、その溶液をＮａＯＨでｐＨ７．４に調節した。ヒトＣＲＣ細胞系、ＨＣＴ−１１６およびＨＴ−２９（それぞれ野生型かまたは変異ｐ５３を発現する）を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシンおよび５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを含むマッコイ５Ａ中で保持した。マウスのＣＲＣ細胞系、ＣＴ２６を、１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地中で保持した。
【００８３】
細胞増殖
細胞成長アッセイのため、血清飢餓（ｓｅｒｕｍ−ｓｔａｒｖｅｄ）ＨＣＴ−１１６、ＨＴ−２９およびＣＴ２６細胞を、６ウェルの培養皿において適切な完全培地中、２×１０５細胞／ｍｌ／ウェルで培養し（ｐｌａｔｅ）、終夜かけて付着させた。次いで細胞を、製造者の取扱説明書に従って、カルボキシフルオセイン二酢酸スクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｍｉｌａｎ  Ｉｔａｌｙ）で３７℃で標識付けした。３０分後、培地を取り出し、０．０５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む新鮮な媒体と漸増用量の５−ＡＳＡまたは開示化合物を加えた。２４時間後、細胞を集め、ＰＢＳ１Ｘで２回洗浄し、次いで、暗所において４℃で、５μｇ／ｍｌのＰＩで１５分間インキュベートした。ＣＦＳＥおよび／またはＰＩ陽性細胞をフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）で測定した。増殖に対する化合物１４（２−メトキシ−５−アミノ−Ｎ−ヒドロキシベンズアミド）の負の影響が可逆的であるかどうか判定するために、細胞を、化合物１４（１．５および３ｍＭ）の存在下または非存在下で２４時間培養した（第１培養）。次いで、未処理のままで置くか、または十分に洗浄し、そして化合物１４の非存在下の培地でさらに２４時間培養した（第２培養）。次いで、フローサイトメトリーで増殖細胞の割合を評価した。
【００８４】
図１は、化合物１４は顕著な抗増殖作用を有しており、これが、ＣＲＣ（結腸直腸癌）細胞増殖の阻害において、５−ＡＳＡより約１０倍より多く、強力であることを示している。
【００８５】
図２は、化合物１４が、ＨＣＴ−１１６およびＨＴ−２９細胞の両方の増殖を用量依存的に阻害することを確認するものである。データは４つの実験の平均±ＳＤを示す（ＨＣＴ−１１６：未処理ｖｓ化合物１４処理細胞、＊Ｐ＝０．０２、＊＊Ｐ＝０．００５、＊＊＊Ｐ＜０．００１；ＨＴ−２９：未処理ｖｓ化合物１４処理細胞、†Ｐ＝０．００６、††Ｐ＜０．００１）。図２の右側の差し込み図は、未処理のままであるか、または化合物１４で処理したＨＣＴ−１１６細胞の代表的なヒストグラムである。線の上の数字は増殖細胞の割合を示す。
【００８６】
化合物１４の抗増殖作用は時間依存的であった（図３Ａ）。ＨＣＴ−１１６細胞を、未処理のままか、または漸増用量の化合物１４でそれぞれ２４、４８および７２時間処理した。データは３つの実験の平均±ＳＤを示す。
【００８７】
化合物を取り除いても変わらずＣＲＣ細胞が増殖するので、その効果は完全に可逆的である（図３Ｂ）。代表的なヒストグラムは、化合物１４（１．５〜３ｍＭ）の存在下または非存在下で２４時間培養した（第１培養）増殖性ＨＣＴ−１１６細胞の割合を示す。次いで、細胞を、未処理のままにするか、または十分に洗浄し、そして化合物１４の非存在下の培地を用いてさらに２４時間培養した（第２培養）。３つの別々の実験のうちの１つを示す。等濃度のマンニトールで処理した細胞では効果は認められなかった。これは、化合物１４の効果は、培地における浸透圧の変化に起因するものではないことを明らかに示している（データは示されていない）。化合物１４は、正常な結腸の上皮内リンパ球および線維芽細胞の増殖に影響を及ぼさなかった（図４）。
【００８８】
細胞周期
細胞周期分布の分析のため、血清飢餓細胞を、０．０５％ＢＳＡおよび望む濃度の化合物１４を含む培地中で２４時間培養した。細胞に１０μＭ  ＢｒｄＵで６０分間パルスを与え、次いでこれを収集し、ＰＢＳ１Ｘで２回洗浄し、７０％冷エタノール中で固定し、−２０℃で少なくとも３時間貯蔵した。次いで細胞をＰＢＳ１Ｘで２回洗浄し、２Ｍ  ＨＣｌ中で変性させ、抗ＢｒｄＵモノクローナル抗体（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）で染色し、続いてＦＩＴＣ抱合型二次抗マウスＩｇＧ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）で染色した。１００μｇ／ｍｌ  ＰＩで染色した後、細胞をフローサイトメトリーで分析した。化合物の濃度を増大させると、Ｇ０／Ｇ１期の細胞数の漸進的な蓄積と、ＳおよびＧ２／Ｍ期ＤＮＡ含量を有する細胞の減少がもたらされる。ＨＣＴ−１１６細胞を、化合物１４を用いるかまたは用いないで２４時間処理した。図５の値は、細胞周期の異なる期における細胞の割合であり、４つの実験の平均±ＳＤを示す（未処理ｖｓ化合物１４処理細胞＊Ｐ＜０．０４、＊＊Ｐ＜０．００１）。右側の差し込み図は細胞周期分布の代表的なドット表示を示す。
【００８９】
図６中、示した時間点において、化合物１４を用いるかまたは用いないで処理した、化合物１４処理したＨＣＴ−１１６細胞はＣＤＫ２の活性化も示した。これは図６に示すようにトレオニン１４およびチロシン１５残基上のこのキナーゼの高度のリン酸化を特徴とする。ｐ−ＣＤＫ２および全ＣＤＫ２をウエスタンブロット法で分析した。４つの代表的なウエスタンブロット法のうちの１つを示す。
【００９０】
（実施例２）
ＣＴ２６誘発腫瘍のインビボでの形成
ＣＴ２６細胞（３００μｌ  ＰＢＳ１Ｘ中の１×１０５細胞）を、その毛をそり脱毛したＢａｌｂ／ｃマウスの脇腹に皮下注射した。５つのグループのそれぞれ１０匹のマウスにＣＴ２６を埋め込んだ。第１のグループに毎日皮下で３００μｌ  ＰＢＳ（対照）を施し、残りのグループには毎日皮下で３００μｌ  ＰＢＳに溶解した化合物１４を１、４、８または１２ｍｇ／ｋｇ／マウスの最終濃度で施した。化合物１４とＰＢＳとの両方を第３日目から投与を開始した。実験を、全身投与した場合、化合物１４が抗癌活性を有しているかどうかを評価するためにさらに進めた。そのために、ＣＴ２６接種して３日後、マウスにＰＢＳまたは化合物１４（８ｍｇ／ｋｇ／マウス）を腹腔内に注射した。対照として、マウスに皮下で化合物１４（８ｍｇ／ｋｇ／マウス）を施した。マウスの体重減少を経時的にモニターした。２週間後、マウスを屠殺し、腫瘍の写真を撮り、次いで切除し、その質量を以下の式：１／２×（短径）×（長径）×（高さ）に従って計算した。全抽出物を異種移植片から調製し、市販の抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて、ウエスタンブロット法によりサイクリンＤ１タンパク質含有量を分析した。化合物１４が、確立されたＣＲＣ異種移植片の成長を低下させることができるかどうかを試験するために、上記したようにして、Ｂａｌｂ／ｃマウスにＣＴ２６を埋め込んだ。２週間後、ノギスで測って類似した腫瘍のサイズを有するマウスを、それぞれ８匹のマウスの３グループに分けた。第１のグループに毎日皮下で３００μｌ  ＰＢＳ（対照）を施し、第２のグループに毎日皮下で３００μｌ  ＰＢＳに溶解した５−ＡＳＡ（８０ｍｇ／ｋｇ）を施した。最後のグループに毎日皮下で３００μｌ  ＰＢＳに溶解した化合物１４（８ｍｇ／ｋｇ）を施した。マウスの体重減少を経時的にモニターした。２週間後、マウスを屠殺し、腫瘍の写真を撮り、次いで切除し、上記したようにしてその質量を計算した。この試験は地方倫理委員会（Ｌｏｃａｌ  Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認されたものである。
【００９１】
対照と処理グループの両方の試験の間、体重減少は観察されず、すべての動物は試験の最後まで生存した。注射して１４日後、ＣＴ２６誘発の肉眼で見える腫瘍が、対照マウスの１０／１０、皮下で化合物１４で処理したマウスの５／１０、腹腔内で化合物１４で処理したマウスの７／１０で認められた。化合物１４で処理したマウスは、対照と比較して腫瘍質量の有意の減少を示した。化合物１４の抗腫瘍効果は用量依存的であり、それはその薬物を皮下で投与したか腹腔内に投与したかに関係なく認められた。その基礎には５−ＡＳＡとの差がある。その理由は、全身投与した場合、５−ＡＳＡはＣＲＣ成長を制御するのに有効でないからである。
【００９２】
図７Ａは、化合物１４の投与により、インビボでのＣＴ２６誘発腫瘍の形成が用量依存的に減少していることを示している。対照（ｃｔｒ）および化合物１４処理マウスにおいて生じたＣＴ２６異種移植片の代表的な写真画像を、対応するヒストグラムの下に示す（対照ｖｓ．化合物１４処理マウス、＊Ｐ＜０．０１；＊＊Ｐ＜０．００１）。図７Ｂは、腹腔内で投与した場合、化合物１４はＣＴ２６誘発異種移植片を阻害することを示している。対照マウスには毎日ＰＢＳを施した。データはすべての実験の平均±ＳＤを示す（対照ｖｓ化合物１４処理マウス  ＊Ｐ＜０．００１）。
【００９３】
異種移植片から調製されたタンパク質のウエスタンブロットにより、化合物１４が、サイクリンＤ１タンパク質の発現を減少させることが示された（図７Ｃ）。ＰＢＳ（Ｃｔｒ）で処理するかまたは２つの異なる用量の化合物１４で処理したＣＴ２６誘発腫瘍の全抽出物におけるサイクリンＤ１タンパク質の発現。同様の結果が得られた３つの別個の実験のうちの１つを示す。肝臓、腎臓、脾臓および結腸の組織学的分析によれば、化合物１４を施されたマウスにおいて形態学的変化は認められなかった。
【００９４】
化合物１４が、確立されたＣＲＣ異種移植片の成長を低下させるかどうかを試験するために、上記のようにしてＣＴ２６誘発腫瘍を誘発させ、１４日目にマウスを３つのグループに無作為に割り振り、化合物１４（８ｍｇ／ｋｇマウス／日）、５−ＡＳＡ（８０ｍｇ／ｋｇマウス／日）またはビヒクル（ＰＢＳ）を２週間皮下注射した。マウスを経時的にモニターし、２８日目に屠殺した。５−ＡＳＡではなく化合物１４は、ＰＢＳで処理したマウスと比較して、腫瘍のサイズを有意に減少させた。図７Ｄは、化合物１４を皮下投与すると、安定したＣＴ２６誘発腫瘍のサイズを減少させることを示している。データはすべての実験の平均±ＳＤを示す（対照ｖｓ化合物１４処理マウス  ＊Ｐ＝０．００３）。
【００９５】
（実施例３）
大腸炎関連の結腸癌の誘発
Ｂａｌｂ／ｃマウスに、０日目にＡＯＭ（１０ｍｇ／ｋｇ）の第１の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を施した。ＡＯＭ注射後７日目に、マウスに飲用水中２％ＤＳＳを７日間施した。ＤＳＳ投与を停止して１週間後、マウスにＡＯＭ（５ｍｇ／ｋｇ）の第２の腹腔内注射を施した。次いで第２のＡＯＭ注射の７日後、マウスに飲用水中２％ＤＳＳを再度７日間施した。２週間後、マウスを２つのグループに無作為に割り振り、ＰＢＳまたは１６ｍｇ／ｋｇ／マウスの化合物１４を、屠殺するまで２日毎に４９日間腹腔内注射した（化合物１４が進行中の粘膜炎症によって妨害される可能性を排除するために、処理を、最後のＤＳＳ投与の２週間後に開始した）。マウスを内視鏡的にスクリーニングし、上記したようにして腫瘍性病変を評価した。試験の最後にすべてのマウスを屠殺し、結腸試料を組織学的に分析し、固有層単核細胞（ＬＰＭＣ）を単離するために使用した。以下の抗体（ＣＤ４：カタログ番号５５２０５１、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ、Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ；ＣＤ８：カタログ番号２２１５００８４ＳおよびＣＤ２５：カタログ番号２２１５０２５３、Ｉｍｍｕｎｏｔｏｏｌｓ、Ｆｒｉｅｓｏｙｔｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いたフローサイトメトリーにより、一定分量のＬＰＭＣについてＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ２５の発現を評価し、残りのＬＰＭＣは、ＲＮＡを抽出し、ＣＯＸ−２、ＴＮＦαおよびＩＬ−１βの発現をリアルタイムＰＣＲにより評価するために使用した。そのために、以下のプライマー：
【００９６】
【化７】
2012510965.tif 000009
【００９７】
を使用した。
【００９８】
結腸部分をヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。炎症の程度と腫瘍性病変の存在を、盲検的な様式で同一病理学者によって評価し、等級付けした。ＰＣＮＡについての免疫組織化学を、ＰＣＮＡ染色キット（ＺＹＭＥＤ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を用いて、製造者の取扱説明書に従って実施した。複数の結腸性、平坦状およびポリープ状病変が、ＡＯＭ／ＤＳＳを施されたマウスにおいて見られた。化合物１４は、両方のタイプの病変を有意に減少させた（ポリープ状および平坦状病変をカウントした（＊Ｐ＝０．００１；＊＊Ｐ＝０．０２；図８Ｃは、腫瘍性病変の多様性に対する化合物１４治療の効果を表す）。図８Ａは、ＰＢＳ（Ｃｔｒ）または化合物１４で処理したマウスにおける、結腸腫瘍の成長を示す代表的な内視鏡写真である。右側の差し込み図は、未処理のままであるか、または化合物１４で処理したマウスにおける腫瘍成長の内視鏡的評点づけを示す。データは、グループ当たり少なくとも６匹のマウスを考慮したすべての実験の平均±ＳＤを示す（対照ｖｓ化合物１４処理マウス  ＊Ｐ＝０．０３）。図８Ｂは、ＰＢＳ（対照）または化合物１４で処理したマウスのＨ＆Ｅ染色結腸部分を示す（原倍率（ｏｒｉｇｉｎａｌ  ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、×４０）。ポリープ状または平坦状病変が、それぞれ対照および化合物１４処理マウスにおいて見られた。下部左側の差し込み図は、ＰＢＳ（×４００）で処理したマウスにおける異形成部位を含む代表的なＨ＆Ｅ染色結腸部分を示す。下部右側の差し込み図は、ＰＢＳで処理したマウスの結腸小胞中に浸潤している腫瘍性部位を示す。増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）染色により化合物１４の抗増殖作用が確認された。一方、化合物１４で処理したマウスの正常な結腸粘膜におけるＰＣＮＡ染色には有意の変化は認められなかった。したがって、これにより、化合物１４は、正常な結腸細胞の成長に実質的に影響を及ぼさないことが確認された。
【００９９】
値を平均±ＳＤで表し、スチューデントｔ検定を用いて分析した。マウスの体重と腫瘍のサイズの変化の統計的解析をχ２試験を用いて実施した。有意性を０．０５未満のＰ値と定義した。
【０１００】
（実施例４）
細胞増殖−胸部
別段の指定のない限り、試薬はすべてＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）から得た。化合物１４を培地中の２５ｍＭストック溶液として溶解した。肺と肝臓の両方に自然発生的に転移したＢＡＬＢ／ｃ乳癌から誘導された４Ｔ１細胞、６−チオグアニン耐細胞系をＡＴＣＣから入手し、１０％不活性化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％ペニシリン−ストレプトマイシンを含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％ＣＯ２での加湿環境下、３７℃で保持した。細胞成長アッセイのため、血清飢餓４Ｔ１細胞を、カルボキシフルオセイン二酢酸スクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｍｉｌａｎ  Ｉｔａｌｙ）で、３７℃で３０分間標識化し、次いで漸増用量の化合物１４で処理した。２４時間後、細胞を５μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で、４℃で１５分間インキュベートした。ＣＦＳＥおよび／またはＰＩ陽性細胞をフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）で測定した。
【０１０１】
生後８〜１０週のメスのＢａｌｂ／ｃマウスを４Ｔ１同系腫瘍モデルのために使用した。４Ｔ１細胞（３００μｌ  ＰＢＳ１Ｘ中に１×１０５個の細胞）を皮下（ｓ．ｃ．）で、その毛をそり脱毛したマウスの脇腹に注射した。３つのグループのそれぞれ８匹のマウスに４Ｔ１を埋め込んだ。第１のグループに毎日皮下で３００μｌ  ＰＢＳ（対照）を施し、残りのグループには毎日皮下または腹腔内（ｉ．ｐ．）で化合物１４（８ｍｇ／ｋｇ／マウス）を注射した。化合物１４とＰＢＳとの両方を第３日目から投与を開始した。マウスの体重減少を経時的にモニターし、１４日目に屠殺した。腫瘍の写真を撮り、切除し、その質量を以下の式：１／２×（短径）×（長径）×（高さ）に従って計算した。
【０１０２】
自然転移を、先にＰｕｌａｓｋｉおよびＯｓｔｒａｎｄ−Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８巻、１４８６〜１４９３頁、１９９８年）に記載されている方法を適用して測定した。４Ｔ１腫瘍細胞（１００μｌ１Ｘ  ＰＢＳ中に１×１０５細胞）を、生後８〜１０週のメスのＢａｌｂ／ｃマウスの腹部乳腺に皮下注射した。４Ｔ１を注射して３日後、マウスに化合物１４（８ｍｇ／ｋｇ／マウス）またはＰＢＳ（対照）を腹腔内で毎日施した。マウスの体重減少を経時的にモニターし、３５日目に屠殺した。肺と肝臓を各マウスから除去し、以下のように処理した：肝臓試料を細かく刻み、プラットホーム型振とう器（ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｒｏｃｋｅｒ）上で１ＸＰＢＳ、０．０１％ＢＳＡ、１ｍｇ／ｍｌヒアルロニダーゼおよび１ｍｇ／ｍｌ  Ｉ型コラゲナーゼを含む酵素溶液で、３７℃で２０分間消化させた。肺試料を細かく刻み、回転ホイール上で、１Ｘ  ＰＢＳ、１ｍｇ／ｍｌ  ＩＶ型コラゲナーゼおよび１０単位／ｍｌエラスターゼを含む酵素カクテルで、４℃で１時間消化させた。最後に、試料を７０μｍナイロン製細胞ろ過器でろ過し、１Ｘ  ＰＢＳで３回洗浄した。得られた細胞調製物を再懸濁させそのまま蒔くか、または１０ｃｍ組織培養皿中で２０ｍｌの６０μＭ６−チオグアニンを含む培地に連続希釈した。クローン原性増殖のために、懸濁液を１０％ＣＯ２空気雰囲気下、３７℃でインキュベートした。６−チオグアニン耐性腫瘍細胞は１０〜１４日以内に病巣を形成し、その時点でそれらをメタノールで固定し、カウントするために０．０３％メチレンブルーで染色した。全コロニー形成細胞を器官当たりで計算した。
【０１０３】
化合物１４は、インビトロで４Ｔ１細胞の増殖を用量依存的に阻害した（図９）。さらに、化合物１４で処理したマウス（４Ｔ１細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに接種し、次いで動物を、４Ｔ１注射後３日目から化合物１４（８ｍｇ／ｋｇ／マウス）またはＰＢＳを皮下または腹腔内で毎日投与処理した）は、対照と比較して４Ｔ１誘発腫瘍質量の有意の減少を示した（図１０）。図１０は、この効果が、化合物１４の投与経路とは関係なく見られることを示している。
【０１０４】
（実施例５）
Ｂａｌｂ／ｃマウスの乳腺中への４Ｔ１細胞の注射によって誘発された乳癌転移のインビボでのモデルを実施した。化合物１４処理したマウスは、クローン原性転移アッセイで評価して肺と肝臓の両方の転移性腫瘍細胞の数の減少を示した（図１１）。このモデルでは、個々の腫瘍細胞は培地中で病巣を形成し、各病巣は個々のクローン原性腫瘍細胞を表している。したがって、病巣の数は器官当たりの転移性腫瘍細胞の直接的な尺度である。
【０１０５】
（参照による援用）
本明細書で参照した特許文献および科学論文のそれぞれの開示全体をすべての目的のために参照により本明細書に援用する。
【０１０６】
（等価物）
本発明は、その趣旨または本質的特徴から逸脱することなく、他の特定の形態において具体化することができる。したがって、上記実施形態は、本明細書で説明する本発明を限定するものではなく、あらゆる点で例示的なものであると考えられるべきである。したがって、本発明の範囲は、上記説明によってではなく添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の等価の意味および範囲内にあるすべての変更は本発明に包含されるものとする。
【図１】
2012510965.tif 000014
【図２】
2012510965.tif 000015
【図３】
2012510965.tif 000016
【図４】
2012510965.tif 000017
【図５】
2012510965.tif 000018
【図６】
2012510965.tif 000019
【図７】
2012510965.tif 000020
【図８】
2012510965.tif 000021
【図９】
2012510965.tif 000022
【図１０】
2012510965.tif 000023
【図１１】
2012510965.tif 000024
【配列表】
2012510965000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成23年8月3日(2011.8.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
結腸直腸癌のリスクのある患者における結腸癌発生を予防または軽減するための組成物であって、
【化８】
2012510965.tif 000025
で表される化学予防剤またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含む医薬品を含む、組成物。
【請求項２】
前記患者がヒトである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記患者が検出可能な結腸直腸癌を有していない、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
投与の際またはその前に、自然変異頻度の結腸癌細胞が前記患者において存在する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項５】
前記患者が、クローン病、炎症性腸疾患または潰瘍性大腸炎を有する、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
癌のリスクのある患者における腺癌の臨床症状を遅延させるための組成物であって、
【化９】
2012510965.tif 000026
で表される有効量の化学予防化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含む、組成物。
【請求項７】
前記遅延が、化学予防化合物を投与されていない患者と比較して少なくとも１年である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記患者が、前記患者に存在する結腸癌細胞の変異率の少なくとも約３０％の減少を有する、請求項６または７に記載の組成物。
【請求項９】
前記患者が、一般個体群と比較して腺癌を有する高いリスクがある、請求項６から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記患者が遺伝的ベースのリスクを有する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記腺癌が、胸部、結腸、肺、頸部、膵臓、前立腺および／または肝細胞の癌である、請求項６から１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物は全身投与されることを特徴とする、請求項６から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物は経口投与されることを特徴とする、請求項６から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
結腸直腸腫瘍を有する患者への全身投与に適した組成物であって、
【化１０】
2012510965.tif 000027
で表される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体および薬学的に許容される賦形剤を含み、前記化合物が、全身投与されたときに腫瘍の成長を阻害するのに有効な量で存在する、組成物。
【請求項１５】
前記腫瘍の成長の阻害が腫瘍倍増時間の遅れとして測定される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記腫瘍倍増時間が２倍に延長される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記腫瘍の成長の阻害が前記腫瘍の体積の減少によって測定される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記腫瘍の体積が少なくとも３０％減少する、請求項１７に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
以下の図面を参照すれば、本発明をより完全に理解することができる。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
結腸癌発生を予防または軽減する方法であって、結腸直腸癌のリスクのある患者に、
【化８】
2012510965.tif 000028
で表される化学予防剤またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含む医薬品を投与することを含む方法。
（項目２）
前記患者がヒトである、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記患者が検出可能な結腸直腸癌を有していない、項目２または３に記載の方法。
（項目４）
投与の際またはその前に、自然変異頻度の結腸癌細胞が前記患者において存在する、項目１または２に記載の方法。
（項目５）
前記患者が、クローン病、炎症性腸疾患または潰瘍性大腸炎を有する、項目１から４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
癌のリスクのある患者における腺癌の臨床症状を遅延させる方法であって、前記患者に、
【化９】
2012510965.tif 000029
で表される有効量の化学予防化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を投与することを含む方法。
（項目７）
前記遅延が、化学予防化合物を投与されていない患者と比較して少なくとも１年である、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記患者が、前記患者に存在する結腸癌細胞の変異率の少なくとも約３０％の減少を有する、項目６または７に記載の方法。
（項目９）
前記患者が、一般個体群と比較して腺癌を有する高いリスクがある、項目６から８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記患者が遺伝的ベースのリスクを有する、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記腺癌が、胸部、結腸、肺、頸部、膵臓、前立腺および／または肝細胞の癌である、項目６から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記化学予防化合物は全身投与される、項目６から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記化学予防化合物は経口投与される、項目６から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
結腸直腸腫瘍を有する患者への全身投与に適した組成物であって、
【化１０】
2012510965.tif 000030
で表される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体および薬学的に許容される賦形剤を含み、前記化合物が、全身投与されたときに腫瘍の成長を阻害するのに有効な量で存在する、組成物。
（項目１５）
前記腫瘍の成長の阻害が腫瘍倍増時間の遅れとして測定される、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
前記腫瘍倍増時間が２倍に延長される、項目１５に記載の組成物。
（項目１７）
前記腫瘍の成長の阻害が前記腫瘍の体積の減少によって測定される、項目１６に記載の組成物。
（項目１８）
前記腫瘍の体積が少なくとも３０％減少する、項目１７に記載の組成物。
【国際調査報告】
2012510965.tif 000031
2012510965.tif 000032