【手続補正書】
【提出日】令和2年4月17日(2020.4.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を提供する方法であって、
（ｉ）インビトロ転写によって生成され得るｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を提供すること；
（ｉｉ）セルロース材料への二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の結合を可能にする条件下で、ＲＮＡ調製物をセルロース材料と接触させること；及び
（ｉｉｉ）セルロース材料へのｄｓＲＮＡの結合を可能にする条件下で、セルロース材料からｓｓＲＮＡを分離すること、を含み、
工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）がセルロース材料へのｄｓＲＮＡの結合を可能にし、セルロース材料へのｓｓＲＮＡの結合を可能にしない条件下で行われ、工程（ｉｉ）においてＲＮＡ調製物がｓｓＲＮＡ及び第１の緩衝液を含む液体として提供され、及び／又はセルロース材料が第１の緩衝液中の懸濁液として提供され、
ここで第1の緩衝液が、セルロース材料へのｄｓＲＮＡの結合を可能にし、セルロース材料へのｓｓＲＮＡの結合を可能にしない濃度で、水、エタノール及び塩を含み、第1の緩衝液中の塩の濃度が１５−７０ｍＭであることを特徴とする、
方法。
【請求項２】
一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を提供する方法であって、
（ｉ）インビトロ転写によって生成され得るｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を提供すること；
（ｉｉ）セルロース材料への二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の結合を可能にする条件下で、ＲＮＡ調製物をセルロース材料と接触させること；及び
（ｉｉｉ）セルロース材料へのｄｓＲＮＡの結合を可能にする条件下で、セルロース材料からｓｓＲＮＡを分離すること、を含み、
工程（ｉｉ）がセルロース材料へのｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡの結合を可能にする条件下で行われ、
工程（ｉｉｉ）がセルロース材料へのｄｓＲＮＡの結合を可能にし、セルロース材料へのｓｓＲＮＡの結合を可能にしない条件下で行われ、
工程（ｉｉｉ）が
（１）ｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡが結合しているセルロース材料を、振盪及び／又は撹拌下で、セルロース材料へのｄｓＲＮＡの結合を可能にし、セルロース材料へのｓｓＲＮＡの結合を可能にしない濃度で水、エタノール及び塩を含む第１の緩衝液と、混合すること、
（２）ｓｓＲＮＡを含む液相をセルロース材料から分離すること、を含み、
第１の緩衝液中の塩の濃度が１５−７０ｍＭであることを特徴とする、
方法。
【請求項３】
インビトロ転写によってｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を生成する工程をさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
工程（ｉｉ）が、ｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を、振盪及び／又は撹拌下で、好ましくは少なくとも５分間、より好ましくは少なくとも１０分間、セルロース材料と混合することを含む、又は
工程（ｉｉ）が、ｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を、振盪及び／又は撹拌下で、好ましくは少なくとも５分間、より好ましくは少なくとも１０分間、セルロース材料と混合することを含み、方法がインビトロ転写によってｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を生成する工程をさらに含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
工程（ｉｉ）において、第１の緩衝液に含まれる塩が塩化ナトリウムである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
（ｉ）第１の緩衝液中のエタノール濃度が１４−２０％（ｖ／ｖ）、好ましくは１４−１６％（ｖ／ｖ）である、かつ／又は
（ｉｉ）第１の緩衝液中の塩の濃度が２０−６０ｍＭである、かつ／又は
（ｉｉｉ）第１の緩衝液が、緩衝物質、好ましくはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、及び／又はキレート剤、好ましくはＥＤＴＡをさらに含む、かつ／又は
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）において、ＲＮＡ調製物、セルロース材料、及び第１の緩衝液の混合物がチューブに入れられ、工程（ｉｉｉ）が、（１）液相及び固相が分離されるようにチューブに重力又は遠心力を適用すること；並びに（２）ｓｓＲＮＡを含む上清を回収するか又はセルロース材料を除去することを含む、又は工程（ｉｉｉ）において、ＲＮＡ調製物、セルロース材料、及び第１の緩衝液の混合物がスピンカラム又はフィルターデバイスに入れられ、工程（ｉｉｉ）が、（１’）液相及び固相が分離されるようにスピンカラム又はフィルターデバイスに重力、遠心力、圧力、又は真空を適用すること；並びに（２’）ｓｓＲＮＡを含むフロースルーを回収することを含む、
請求項４又は５に記載の方法。
【請求項７】
工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）が１回又は２回以上、反復され、工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の１サイクルのうち工程（ｉｉｉ）の後に得られたｓｓＲＮＡ調製物が、次サイクルの工程（ｉｉ）におけるＲＮＡ調製物として使用され、工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の各サイクルのうち工程（ｉｉ）において、新鮮なセルロース材料が使用される、又は
工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）が１回又は２回以上、反復され、工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の１サイクルのうち工程（ｉｉｉ）の後に得られたｓｓＲＮＡ調製物が、次サイクルの工程（ｉｉ）におけるＲＮＡ調製物として使用され、工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の各サイクルのうち工程（ｉｉ）において、新鮮なセルロース材料が使用され、方法がインビトロ転写によってｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を生成する工程をさらに含む、
請求項１、及び４から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
工程（ｉｉ）が、（１）ｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を、振盪及び／又は撹拌下で、好ましくは少なくとも５分間、より好ましくは少なくとも１０分間、セルロース材料と混合すること；並びに（２）ｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡが結合しているセルロース材料を残部から分離することを含む、又は
工程（ｉｉ）が、（１）ｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を、振盪及び／又は撹拌下で、好ましくは少なくとも５分間、より好ましくは少なくとも１０分間、セルロース材料と混合すること；並びに（２）ｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡが結合しているセルロース材料を残部から分離することを含み、方法がインビトロ転写によってｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を生成する工程をさらに含む、請求項２に記載の方法であって、
ここで、好ましくは、工程（ｉｉ）において、ＲＮＡ調製物が、ｓｓＲＮＡ及び第２の緩衝液を含む液体として提供され、及び／又はセルロース材料が第２の緩衝液中の懸濁液として提供され、第２の緩衝液が、セルロース材料へのｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡの結合を可能にする濃度で、水、エタノール及び塩、好ましくは塩化ナトリウムを含み、
より好ましくは、（ｉ）第２の緩衝液中のエタノールの濃度が、少なくとも３５％（ｖ／ｖ）、好ましくは３８−４２％（ｖ／ｖ）である、かつ／又は
（ｉｉ）第２の緩衝液中の塩の濃度が、１５−７０ｎＭ、好ましくは２０−６０ｍＭである、かつ／又は
（ｉｉｉ）第２の緩衝液が、緩衝物質、好ましくはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、及び／又はキレート剤、好ましくはＥＤＴＡをさらに含む、かつ／又は
（ｉｖ）工程（ｉｉ）（２）において、工程（ｉｉ）（１）で得られたＲＮＡ調製物とセルロース材料の混合物がチューブに入れられ、工程（ｉｉ）（２）が、（２ａ）液相及び固相が分離されるようにチューブに重力又は遠心力を適用すること；並びに（２ｂ）上清を除去するか、又はｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡが結合しているセルロース材料を回収することを含む、又は工程（ｉｉ）（２）において、工程（ｉｉ）（１）で得られたＲＮＡ調製物とセルロース材料の混合物がスピンカラム又はフィルターデバイスに入れられ、工程（ｉｉ）（２）が、（２ａ’）液相及び固相が分離されるようにスピンカラム又はフィルターデバイスに重力、遠心力、圧力、又は真空を適用すること；並びに（２ｂ’）フロースルーを廃棄することを含む、かつ／又は
（ｖ）工程（ｉｉ）が、（３）ｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡが結合しているセルロース材料に第２の緩衝液のアリコートを添加すること；（４）得られた混合物を、振盪及び／又は撹拌下で、好ましくは少なくとも５分間、より好ましくは少なくとも１０分間、インキュベートすること；並びに（５）ｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡが結合しているセルロース材料を液相から分離すること；並びに、任意選択的に（６）工程（３）−（５）を１回又は２回以上、反復することをさらに含む、
方法。
【請求項９】
工程（ｉｉｉ）が、（１）ｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡが結合しているセルロース材料を、振盪及び／又は撹拌下で、少なくとも５分間、好ましくは少なくとも１０分間、第１の緩衝液と混合することを含み、第１の緩衝液に含まれる塩が、好ましくは塩化ナトリウムである、又は
工程（ｉｉｉ）が、（１）ｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡが結合しているセルロース材料を、振盪及び／又は撹拌下で、少なくとも５分間、好ましくは少なくとも１０分間、第１の緩衝液と混合することを含み、第１の緩衝液に含まれる塩が、好ましくは塩化ナトリウムであり、方法がインビトロ転写によってｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を生成する工程をさらに含む、請求項２又は８に記載の方法であって、
ここで、より好ましくは、（ｉ）第１の緩衝液中のエタノールの濃度が１４−２０％（ｖ／ｖ）、好ましくは１４−１６％（ｖ／ｖ）である、かつ／又は
（ｉｉ）第１の緩衝液中の塩の濃度が２０−６０ｍＭである、かつ／又は
（ｉｉｉ）第１の緩衝液が、緩衝物質、好ましくはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、及び／又はキレート剤、好ましくはＥＤＴＡをさらに含む、かつ／又は
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）において、セルロース材料と第１の緩衝液の混合物がチューブに入れられ、工程（ｉｉｉ）（２）が、（２ａ）液相及び固相が分離されるようにチューブに重力又は遠心力を適用すること；並びに（２ｂ）ｓｓＲＮＡを含む上清を回収するか又はセルロース材料を除去することを含む、又は工程（ｉｉｉ）において、セルロース材料と第１の緩衝液の混合物がスピンカラム又はフィルターデバイスに入れられ、工程（ｉｉｉ）（２）が、（２ａ’）スピンカラム又はフィルターデバイスに重力、遠心力、圧力、又は真空を適用すること；及び（２ｂ’）ｓｓＲＮＡを含むフロースルーを回収することを含む、
方法。
【請求項１０】
工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）が１回又は２回以上、反復され、工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の１サイクルのうち工程（ｉｉｉ）の後に得られたｓｓＲＮＡ調製物が、次サイクルの工程（ｉｉ）におけるＲＮＡ調製物として使用され、工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の各サイクルのうち工程（ｉｉ）において、新鮮なセルロース材料が使用される、又は
工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）が１回又は２回以上、反復され、工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の１サイクルのうち工程（ｉｉｉ）の後に得られたｓｓＲＮＡ調製物が、次サイクルの工程（ｉｉ）におけるＲＮＡ調製物として使用され、工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の各サイクルのうち工程（ｉｉ）において、新鮮なセルロース材料が使用され、方法がインビトロ転写によってｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を生成する工程をさらに含む、
請求項２、８、及び９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
工程（ｉｉ）において、セルロース材料がカラムに入れられ、工程（ｉｉ）が、ｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡのセルロース材料への結合を可能にする条件下で、カラムにＲＮＡ調製物をロードすることを含み、工程（ｉｉｉ）が、ｄｓＲＮＡのセルロース材料への結合を可能にし、ｓｓＲＮＡのセルロース材料への結合を可能にしない条件下で、セルロース材料からｓｓＲＮＡを溶出することを含む、又は
工程（ｉｉ）において、セルロース材料がカラムに入れられ、工程（ｉｉ）が、ｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡのセルロース材料への結合を可能にする条件下で、カラムにＲＮＡ調製物をロードすることを含み、工程（ｉｉｉ）が、ｄｓＲＮＡのセルロース材料への結合を可能にし、ｓｓＲＮＡのセルロース材料への結合を可能にしない条件下で、セルロース材料からｓｓＲＮＡを溶出することを含み、方法がインビトロ転写によってｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ調製物を生成する工程をさらに含む、
請求項２に記載の方法であって、
好ましくは、工程（ｉｉ）において、ＲＮＡ調製物が提供され、ｓｓＲＮＡ及び第２の緩衝液を含む液体としてカラムにロードされ、第２の緩衝液が、ｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡのセルロース材料への結合を可能にする濃度で、水、エタノール及び塩、好ましくは塩化ナトリウムを含む、
より好ましくは、（ｉ）第２の緩衝液中のエタノール濃度が少なくとも３５％（ｖ／ｖ）、好ましくは３８−４２％（ｖ／ｖ）である、かつ／又は
（ｉｉ）第２の緩衝液中の塩の濃度が１５−７０ｍＭ、好ましくは２０−６０ｍＭである、かつ／又は
（ｉｉｉ）第２の緩衝液が、緩衝物質、好ましくはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、及び／又はキレート剤、好ましくはＥＤＴＡをさらに含む、かつ／又は
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）が、溶離液として第１の緩衝液を使用して実施され、第１の緩衝液に含まれる塩が、好ましくは塩化ナトリウムであり、ここで好ましくは
（ａ）第１の緩衝液中のエタノール濃度が１４−２０％（ｖ／ｖ）、好ましくは１４−１６％（ｖ／ｖ）である、かつ／又は
（ｂ）第１の緩衝液中の塩の濃度が２０−６０ｍＭである、かつ／又は
（ｃ）第１の緩衝液が、緩衝物質、好ましくはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、及び／又はキレート剤、好ましくはＥＤＴＡをさらに含む、
方法。
【請求項１２】
（ｉ）ＲＮＡ調製物が、Ｔ３、Ｔ７及びＳＰ６  ＲＮＡポリメラーゼからなる群から選択されるＲＮＡポリメラーゼを使用することによって生成される、かつ／又は
（ｉｉ）工程（ｉｉ）の前に、ＲＮＡ調製物が、少なくとも１つの予備精製処理に供され、好ましくは、
少なくとも１つの予備精製処理が、以下：好ましくは塩化リチウムを用いた核酸の沈殿；核酸の磁気ビーズへの結合；限外濾過；及び好ましくは二重鎖特異的ヌクレアーゼ（ＤＳＮ）を用いたＤＮＡの分解のうちの一又は複数を含む、かつ／又は
（ｉｉｉ）ｓｓＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はｍｉＲＮＡなどのｍＲＮＡ又は阻害ＲＮＡである、かつ／又は
（ｉｖ）ｓｓＲＮＡが、少なくとも２７００ｎｔ、好ましくは少なくとも３０００ｎｔ、より好ましくは少なくとも３５００ｎｔ、より好ましくは少なくとも４５００のｎｔの長さを有する、かつ／又は
（ｖ）セルロース材料が、セルロース繊維、好ましくは分配クロマトグラフィー試薬としての使用に適したグレードのセルロース繊維を含む、
請求項１から１１の何れか一項に記載の方法。 
【請求項１３】
工程（ｉｉ）においてＲＮＡ調製物と接触させる前に、セルロース材料が洗浄セルロース材料として提供される、請求項１から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
セルロース材料の洗浄が、（Ｉ）セルロース材料を、振盪及び／又は撹拌下で、好ましくは少なくとも５分間、より好ましくは少なくとも１０分間、洗浄溶液と混合すること；並びに（ＩＩ）液体を除去するか又はセルロース材料を回収すること；並びに任意選択的に（ＩＩＩ）工程（Ｉ）及び（ＩＩ）を１回又は２回以上、反復することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
洗浄溶液が、（Ａ）工程（ｉｉ）がｄｓＲＮＡの洗浄セルロース材料への結合を可能にし、ｓｓＲＮＡの洗浄セルロース材料への結合を可能にしない条件下で行われる場合、請求項５、又は請求項６の（ｉ）、（ｉｉ）、又は（ｉｉｉ）の何れか一に定義された第１の緩衝液の組成を有し、又は（Ｂ）工程（ｉｉ）がｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡの洗浄セルロース材料への結合を可能にする条件下で行われる場合、第２の緩衝液が、セルロース材料へのｄｓＲＮＡ及びｓｓＲＮＡの結合を可能にする濃度で、水、エタノール及び塩、好ましくは塩化ナトリウムを含む、第２の緩衝液の組成を有し、任意選択的に、請求項８の（ｉ）、（ｉｉ）、又は（ｉｉｉ）の何れか一項に定義された第２の緩衝液の組成を有する、
請求項１４に記載の方法。