【手続補正書】
【提出日】令和2年3月13日(2020.3.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体分泌細胞（ＡＳＣ）の分泌抗体による細胞外効果を示す、ＡＳＣを含む細胞集団を同定する方法であって、
０．６以上の平均アスペクト比（チャンバーの高さ：最小横寸法）を有する複数のオープンチャンバー内に、それぞれ約１０〜約１００個の細胞を含む複数の細胞集団を保持するステップであって、前記異なる複数のオープンチャンバーが、それぞれ第１の構成要素及び任意選択の第２の構成要素を備えるマイクロ流体装置の第１の構成要素に存在し、前記第１の構成要素が前記任意選択の第２の構成要素と共に可逆的なシールを形成し、
前記複数の細胞集団のうちの少なくとも１つの個々の細胞集団が、１つ以上のＡＳＣを含み、
前記複数のオープンチャンバーのうちの前記個々のオープンチャンバー又はそのサブセットが、１つ以上の読み出し粒子を含む読み出し粒子集団をさらに含む、ステップ、
前記オープンチャンバーの内容物をインキュベートするステップ、
前記複数のオープンチャンバー又はそのサブセットを細胞外効果の存在についてアッセイするステップであって、前記読み出し粒子集団又はその亜集団が、前記細胞外効果の直接的又は間接的な読み出しを提供する、ステップ、及び
前記アッセイするステップの結果に基づいて、少なくとも１つの個々の細胞集団内の１つ以上の前記ＡＳＣが前記細胞外効果を示すか否かを決定するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記マイクロ流体装置が、前記第２の構成要素を備える、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１つ以上のＡＳＣが、形質細胞、Ｂ細胞、形質芽球、記憶Ｂ細胞の増殖によって産生される細胞、ハイブリドーマ細胞、抗体を産生するようにエンジニアリングされた組換え細胞、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記読み出し粒子集団のうちの１つ以上が、１つ以上の読み出しビーズ、１つ以上の読み出し細胞、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記複数の読み出し粒子集団又はそのサブセットが、その表面にＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）又は可溶化ＧＰＣＲを発現する１つ以上の読み出し細胞を含み、かつ
前記細胞外効果が、ＧＰＣＲのアンタゴニズム、ＧＰＣＲのアゴニズム、又は前記１つ以上のＡＳＣによって分泌される抗体によるＧＰＣＲへの結合である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記複数の読み出し粒子集団又はそのサブセットが、その表面にイオンチャネルを発現する１つ以上の読み出し細胞を含み、かつ
前記細胞外効果が、前記イオンチャネルのアンタゴニズム、前記イオンチャネルのアゴニズム、又は前記１つ以上のＡＳＣによって分泌される抗体による前記イオンチャネルへの結合である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記読み出し粒子集団のうちの１つ以上が、抗原又はエピトープで官能化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記読み出し粒子集団のうちの１つ以上が、抗体結合部分で官能化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体結合部分が、プロテインＡ、プロテインＡ／Ｇ、プロテインＧ、免疫グロブリンに結合するモノクローナル抗体、免疫グロブリンに結合するモノクローナル抗体断片、免疫グロブリンに結合するポリクローナル抗体、免疫グロブリンに結合するポリクローナル抗体断片、又はこれらの組み合わせである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記複数の細胞集団が、液体カラムによって生成される静水圧によって、ディスペンサーによって、又は前記上部構成要素若しくは前記底部構成要素を上下に動かして流体をマイクロチャンバーに移動させることによって前記オープンチャンバーに充填される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記複数の読み出し粒子集団又はそのサブセットが、液体カラムによって生成される静水圧によって、ディスペンサーによって、又は前記上部構成要素若しくは前記底部構成要素を上下に動かして流体をマイクロチャンバーに移動させることによって前記オープンチャンバーに充填される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞外効果が、前記１つ以上のＡＳＣ又はそのサブセットによって分泌される抗体と前記読み出し粒子集団又はその亜集団との間の結合相互作用である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記結合相互作用が、抗原−抗体結合特異性相互作用、抗原−抗体結合親和性相互作用、又は抗原−抗体結合動力学相互作用である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞外効果が、アポトーシスの調節、細胞増殖の調節、読み出し粒子の形態学的外観の変化、読み出し粒子内のタンパク質の局在の変化、読み出し粒子によるタンパク質の発現、アクセサリー粒子の生物活性の中和、前記ＡＳＣによって誘導される読み出し細胞の細胞溶解、前記ＡＳＣによって誘導される前記読み出し細胞の細胞アポトーシス、読み出し細胞の壊死、抗体の内在化、アクセサリー粒子の内在化、前記ＡＳＣによる酵素中和、可溶性シグナル伝達分子の中和、又はこれらの組み合わせである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記細胞集団のうちの１つ以上を、前記複数のチャンバーのうちの１つ以上のチャンバーにおいて実質的に単一平面で維持するステップをさらに含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記読み出し粒子集団のうちの１つ以上を、前記１つ以上の細胞集団と実質的に同一平面で維持するステップをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞外効果が検出されるチャンバーから細胞集団を回収するステップをさらに含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
第１の構成要素及び任意選択の第２の構成要素を備えるマイクロ流体装置の、０．６以上の平均アスペクト比（チャンバーの高さ：最小横寸法）を有する複数の異なるオープンチャンバー内において、前記回収された細胞集団に由来する複数の細胞亜集団を保持するステップであって、前記第１の構成要素が、前記任意選択の第２の構成要素と共に可逆的なシールを形成し、
前記複数のオープンチャンバーは、前記第１の構成要素に存在し、
前記複数の細胞亜集団のうちの個々の細胞亜集団が、１つ以上の抗体分泌細胞（ＡＳＣ）を含み、かつ前記複数のオープンチャンバーのうちの個々のオープンチャンバー内に保持され、
前記複数のオープンチャンバーのうちの個々のオープンチャンバー又はそのサブセットが、１つ以上の読み出し粒子を含む読み出し粒子集団をさらに含む、ステップ、
前記チャンバーの内容物をインキュベートするステップ、
前記複数のチャンバー又はそのサブセットを前記細胞外効果の存在についてアッセイするステップであって、前記読み出し粒子集団又はその亜集団が、前記細胞外効果の直接的又は間接的な読み出しを提供する、ステップ、並びに
前記アッセイするステップの結果に基づいて、前記細胞外効果を示す１つ以上のＡＳＣを含む複数の細胞亜集団の中から細胞亜集団を同定するステップをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記複数の細胞亜集団のうちの前記細胞亜集団が平均約１〜約２５個の細胞を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記第２の構成要素が存在し、前記第２の構成要素がエラストマーである、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記第２の構成要素が複数の層を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記第２の構成要素がパターン化されていない、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記第２の構成要素が、１つ以上の流路及び１つ以上のプッシュダウン弁構造を備える、請求項２０に記載の方法。