【手続補正書】
【提出日】令和2年7月20日(2020.7.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイクロ流体デバイスを用いて、活性化Ｔリンパ球が富化されたサンプルを作製する方法であって、
前記マイクロ流体デバイスが、流路を備え、
前記流路が、第１の領域を有し、
前記第１の領域が、幅を有するメインチャネルで画定され、
前記第１の領域が、ポストの第１のアレイを備え、
前記ポストの第１のアレイが、前記メインチャネルの幅全体にわたって延在し、
前記方法が、活性化Ｔリンパ球と休止Ｔリンパ球との混合物を含む流体サンプルを、前記マイクロ流体デバイスの前記流路の前記第１の領域を通して流動させることを含み、
前記流路の前記第１の領域における流体の流れの方向が、第１の方向を画定し、
前記第１のアレイの前記ポストが、行及び列において配置され、
前記第１のアレイのポストの前記行が、前記第１の領域の前記第１の方向と傾斜角（ε）だけ異なる第１のアレイ方向を画定し、前記第１のアレイのポストの前記列が、１／εに等しい周期性で周期的に繰り返し、εは、ラジアン単位で測定され、
前記第１のアレイのそれぞれの各列の隣接ポストが、前記流体サンプルの流体が前記列に対して略横方向に貫流することができるギャップによって分離され、前記ギャップの大部分が、前記第１のアレイの主要なギャップサイズに対応する特性サイズを有し、
前記第１のアレイが、４ミクロンから１０ミクロンの臨界サイズ（Ｄc）によって特徴付けられる、
方法。
【請求項２】
前記第１のアレイが、４ミクロンから７ミクロンのＤcによって特徴付けられる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１のアレイが、１／５ラジアンから１／３０ラジアンの傾斜角εを有し、
前記第１のアレイの前記主要なギャップサイズが、１５ミクロンから４０ミクロンであり、
前記第１のアレイの前記ポストが、３０ミクロンから１００ミクロンの直径を有する、
請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１のアレイの前記列が、前記第１の領域の前記第１の方向に対して横方向に配置される、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記第１のアレイの前記ポストが、丸形状の断面又は多角形状の断面を有する、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記第１のアレイの前記ポストの全てが、同一の配向を有し、前記配向が、前記ポストの前記断面形状の対称軸が、前記第１の方向によって画定される軸に平行でないようにされている、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記マイクロ流体デバイスの前記流路が、前記流体サンプルが前記マイクロ流体デバイスの前記第１の領域を通して通過した後に前記流体サンプルを受容するように構成される第２の領域を含み、前記第２の領域が、前記第２の領域を、前記流体サンプルの第１の部分を受容する第１のチャネルと、前記流体サンプルの第２の部分を受容する第２のチャネルとに分離する仕切りを有し、
前記第２の領域の前記仕切りが、前記流体サンプルの前記第２の部分において、Ｄcよりも大きい直径を有するＴリンパ球が前記流体サンプルに対して富化されるように位置決めされる、請求項１から６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記流体サンプルの前記第１の部分が、前記流体サンプルの８５％から９５％を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第１のチャネルが、第１の長さを含み、且つ前記第２のチャネルが、第２の長さを含み、前記第２のチャネルの前記第２の長さが、前記第１のチャネルの前記第１の長さの少なくとも５倍である、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
ＣＤ８+、ＣＤ４５  ＲＯ+／ＲＡ-、ＣＣＲ７-、ＣＤ６２Ｌ-の表現型を有するＴリンパ球、及び／又はＣＤ８+、ＣＤ４５  ＲＯ+／ＲＡ-、ＣＣＲ７+、ＣＤ６２Ｌ-の表現型を有するＴリンパ球が、前記流体サンプルの前記第２の部分において富化される、請求項７から９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記流体サンプルが、前記流路の前記第１の領域を通して０．０１マイクロリットル／秒から１０マイクロリットル／秒のレートで流動される、請求項１から１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記第２のチャネルが幅を有し、前記第２のチャネルがポストの第２のアレイを含む第１のサブ領域を含み、前記ポストの第２のアレイが、前記第２のチャネルの幅全体にわたって延在し、前記流体サンプルを、前記流路の前記第１の領域を通して流動させることが、前記流体サンプルの前記第２の部分が、それに含有される任意の細胞と共に、前記第１のサブ領域の前記ポストの第２のアレイを通して流動することを引き起こし、
更に、前記第２のチャネルの前記第１のサブ領域における流体フローの方向が、第２の方向を画定し、
前記第２のアレイの前記ポストが、行及び列において配置され、
前記第２のアレイのポストの前記行が、前記第２の方向と傾斜角（ε’）だけ異なる第２のアレイ方向を画定し、及び前記第２のアレイのポストの前記列が、１／ε’に等しい周期性で周期的に繰り返し、ε’は、ラジアン単位で測定され、
前記第２のアレイのそれぞれの各列の隣接ポストが、前記流体サンプルの前記第２の部分の流体が前記列に対して略横方向に貫流することができるギャップによって分離され、前記ギャップの大部分が、前記第２のアレイの二次的なギャップサイズに対応する特性サイズを有し、及び
前記第２のアレイが、４ミクロンから１０ミクロンの臨界サイズ（Ｄc）によって特徴付けられる、請求項７から１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ポストの第２のアレイが、４ミクロンから７ミクロンのＤcによって特徴付けられる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポストの第２のアレイが、７ミクロンから１０ミクロンのＤcによって特徴付けられる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記第２のアレイが、１／５ラジアンから１／３０ラジアンの傾斜角ε’を有し、
前記第２のアレイの前記二次的なギャップサイズが、１５ミクロンから４０ミクロンであり、
前記第２のアレイの前記ポストが、３０ミクロンから１００ミクロンの直径を有する、
請求項１２から１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記第２のアレイの前記列が、前記第２のチャネルの前記第１のサブ領域の前記第２の方向に対して横方向に配置される、請求項１２から１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記第２のアレイの前記ポストが、丸形状の断面又は多角形状の断面を有する、請求項１２から１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記第２のアレイの前記ポストの全てが、同一の配向を有し、前記配向が、前記ポストの前記断面形状の対称軸が、前記第２の方向によって画定される軸に平行でないようなものである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記第２のチャネルが、前記流体サンプルが前記第１のサブ領域を通して通過した後に前記流体サンプルの前記第２の部分を受容するように構成される第２のサブ領域を含み、前記第２のサブ領域が、前記第２のチャネルを、前記流体サンプルの前記第２の部分から流体の第１のサブ部分を受容する第３のチャネルと、前記流体サンプルの前記第２の部分から流体の第２のサブ部分を受容する第４のチャネルとに分離する仕切りを有し、
前記第２のサブ領域の前記仕切りが、前記流体の第２のサブ部分において、Ｄcよりも大きい直径を有するＴリンパ球が前記流体サンプルの前記第２の部分に対して富化されるように位置決めされる、請求項１２から１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記流体の第１のサブ部分が、前記流体サンプルの前記第２の部分の少なくとも５０％を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記流体サンプルが、対象から得られる末梢血サンプル又はそれに由来するサンプルである、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記流体サンプルが、少なくとも１つの非Ｔリンパ球細胞型が枯渇している、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記流体サンプルが、ＣＤ８+Ｔリンパ球が富化されている、請求項２１又は２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記流体サンプルが、
エフェクタＴリンパ球（ＴEFF）が枯渇している；
ナイーブＴリンパ球（Ｔnaive）又はＣＤ４５ＲＡ+表現型を有する細胞が富化されている；又は
セントラルメモリＴリンパ球（ＴCM）或いはＣＣＲ７+及び／又はＣＤ６２Ｌ+表現型と組み合わせてＣＤ４５ＲＯ+表現型を有する細胞が富化されている、
請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記流体サンプル中の前記Ｔリンパ球を活性化剤と接触させることを更に含み、
前記Ｔリンパ球が、少なくとも、前記流体サンプルを、前記マイクロ流体デバイスの前記流路の前記第１の領域を通して流動させる前に前記活性化剤に接触される、
請求項１から２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記活性化剤が、人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含み、前記ａＡＰＣが、抗原ペプチドと複合体化されるＭＨＣクラスＩ分子及びＣＤ２８アンタゴニストを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記活性化剤が、樹状細胞（ＤＣ）を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記マイクロ流体デバイスの前記流路の前記第２のチャネルからＴリンパ球集団を選択的に搬出することを更に含み、前記Ｔリンパ球集団が、前記マイクロ流体デバイスの前記流路の前記第１のチャネルを貫流した任意の細胞又はＴリンパ球とは別個に搬出される、請求項７から１０、１２から２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
請求項７から１０、１２から２０のいずれか１項に記載の方法に従って選別されたＴリンパ球を含む組成物であって、前記Ｔリンパ球が、前記マイクロ流体デバイスの前記流路の前記第２のチャネルから細胞を搬出することによって取得され、Ｔリンパ球集団が、前記マイクロ流体デバイスの前記流路の前記第１のチャネルを貫流した任意の細胞又はＴリンパ球とは別個に搬出される、組成物。