(57)【要約】【課題】            低分子の抗腫瘍剤を腫瘍組織に選択的に集積させるため高分子化する方法において、分子量を増大し、腫瘍選択性をより向上させ、かつ簡単な工程で、純度の高い製品を得る方法の提供。【解決手段】        スチレン・マレイン酸共重合体無水物と低分子癌治療用医薬とを縮合剤の非存在下、アルカリ性条件下で反応させ、可溶化した後ｐＨを６〜８に調節し、高分子成分の分離操作により高分子薬剤ミセル複合体を回収することによる高分子型抗腫瘍剤の製造方法。【選択図】          なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
スチレン・マレイン酸共重合体と低分子癌治療用医薬とを縮合剤の非存在下、アルカリ性条件下で反応させ、可溶化した後ｐＨを６〜８に調節し、高分子成分分離操作により高分子薬剤ミセル複合体を回収することを特徴とする高分子型抗癌治療用医薬の製造方法。
【請求項２】
低分子癌治療用医薬がアントラサイクリン系抗腫瘍剤、白金系抗腫瘍剤またはローズベンガルであることを特徴とする請求項１記載の高分子型癌治療用医薬の製造方法。
【請求項３】
アントラサイクリン系抗腫瘍剤がドキソルビシンまたはピラルビシンであることを特徴とする請求項２記載の高分子型癌治療用医薬の製造方法。
【請求項４】
スチレン・無水マレイン酸共重合体を無水物のままで用いることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の高分子型癌治療用医薬の製造方法。
【請求項５】
スチレン・マレイン酸共重合体及び／又は低分子癌治療用医薬の有機溶媒溶液をアルカリ性条件下で反応させることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の高分子型癌治療用医薬の製造方法。
【請求項６】
超音波処理を行い反応させることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の高分子型癌治療用医薬の製造方法。
【請求項７】
高分子成分分離操作が、分子量３，０００〜５０，０００の限外濾過膜によるものであることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の高分子型癌治療用医薬の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は癌治療用医薬を高分子ミセル複合体とすることにより、腫瘍部に選択的に集積させ、更に腫瘍部での滞留時間を長くし、投与回数を減らすことを可能にし、また、それにより抗腫瘍効果を増大させ、正常器官組織への副作用を軽減した高分子型癌治療用医薬の改良製造方法に関する。更に詳しくは、アントラサイクリン系、白金系薬剤、およびローズベンガル等の低分子癌治療用医薬と、スチレン・マレイン酸共重合体（以下SMAという）とを直接、特定のpH条件で、縮合剤の非存在下に特定の立体配置をとるべく、かつ腎排泄の分子サイズよりも大きい高分子ミセル複合体となるように配位させた高分子型癌治療用医薬の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に制癌剤などの薬剤を経口投与、あるいは、注射等により投与しても、その効果は病巣に対する特異性がなく、そのため強力な薬剤であっても効果が充分に発揮できないのみならず、病巣以外の正常器官・組織に対しても作用し、重大な副作用を起こす。このような強力な薬剤はその副作用のため、投与量の増加が制限されている。そのため、ドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）といわれる病巣指向型の薬剤開発は現在世界的に競って研究開発が続けられている理由である。DDS研究は特に副作用の影響が大きい制癌剤分野で重要である。【０００３】
本発明者は抗腫瘍剤の高分子化により、病巣指向型及び徐放型製剤となることに着目し、先に40Kda以上の高分子型薬剤は腫瘍組織に選択的に集積し、より長時間滞留するというユニークな現象を見出し、これをEPR(enhanced permeabi1ity and retention)効果と名づけた(非特許文献１)。この現象は高分子型薬剤や脂質微粒子等において観察される。【０００４】
発明者らは、このような知見に基づき、これまで薬剤を種々の高分子と反応させて得られた多数の高分子型薬剤を作成した。これら高分子化薬剤が上記ＥＰＲ効果によって高い腫瘍集積性や炎症部への集積性が付与され、その結果、低分子量の抗腫瘍剤に比べて、抗腫瘍効果が格段に優れているのみならず、正常器官に対する副作用が少ない優れた高分子型抗腫瘍剤となることを見出した（特許文献１、特許文献２、特許文献３、非特許文献２）。【０００５】
これら高分子型抗腫瘍剤の中でも、特許文献３に記載された、低分子抗腫瘍剤とスチレン・マレイン酸共重合体（SMA）とから得られたミセル複合体（以下SMAミセル複合体という）は、特許文献２のように低分子抗腫瘍剤とポリマーとが共有結合により結合した高分子型抗腫瘍剤とは異なり、両者が非共有結合により会合し、高分子ミセル複合体構造を形成しており、特に抗腫瘍効果が優れ、しかも正常器官に対する副作用が少ない優れた癌治療用医薬である。【０００６】
【特許文献１】特開平１１−６０４９９
【特許文献２】特開２００３−７３２７３
【特許文献３】WO 2004/10349 A1
【非特許文献１】Cancer Res., 44, 2115−2121, 1984; ibid, 46, 6387−92, 1986;
【非特許文献２】J. Controll. Release, 74, 47−61, 2001; Adv. Enzyme Regul., 41, 189−207, 2001
【非特許文献３】Cancer Res., 63, 3567−3574, 2003;
【非特許文献４】Bioconj.Chem. 13, 1031−1038, 2002;
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記特許文献３にはSMAミセル複合体の製造方法として、SMAの半ブチルエステルなど、SMAの誘導体を用い、酸性条件下、水溶解性カルボジイミド等、脱水縮合剤の存在下で反応させ、ついでpHを８以上に上げた後中性に調節し、高分子成分の分離精製操作、例えばセファデックスなどゲルクロマトグラフィー、限外濾過膜等により高分子成分を回収する方法が開示されている。【０００８】
この方法によれば、一般に用いられるミセル化剤やリポゾーム製剤における必須構成成分としての乳化剤（例えばシュガーエステル、フォスファチジルコリン、スフィンゴシン、コレステロールなど）を用いることなく、ミセル化薬剤を製造することができた。【０００９】
しかしながらこの方法では、あらかじめ、加水分解、加アルコール分解等により、SMAの半ブチル化物に変換したり、あるいはSMA無水物の加水分解による開環操作が必要であり、さらにそれらSMA誘導体の精製ステップが必要であった。【００１０】
また、この反応においては、水溶解性カルボジイミドのような高価な脱水縮合剤を必要とした。またこのような縮合剤を用いた場合、縮合剤の完全除去が極めて困難であり、その完全除去を期すと薬剤の活性低下を伴う等、実用化が困難であること等の問題も生ずる。また、この方法によって得られたSMA-ピラルビシンミセルについていえば、その分子量が約３万５千で、腎排泄の限界分子量よりも有意に小さく、問題であった。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発明者らは、この点を解決できる、よりシンプルで安価な製造方法を研究した結果、反応の各段階において、特定のpH条件で反応させることにより、縮合剤の非存在下でも反応が進行し、効率よく高純度の薬剤が得られ、またSMAを無水物のままの形で直接に薬剤と反応させることもできることを見出した。【００１２】
即ち本発明は、スチレン・マレイン酸共重合体と低分子抗腫瘍成分とを縮合剤の非存在下、アルカリ性条件下で反応させ、可溶化した後ｐＨを６〜８に調節し、高分子成分の分離操作により高分子薬剤ミセル複合体成分を回収することを特徴とする高分子型癌治療用医薬の製造方法である。ここに癌治療用医薬とは、直接腫瘍を壊死させる抗腫瘍剤の他に、放射線やレーザー治療を行なう場合に、あらかじめ投与する光増感剤等、癌治療に用いられる薬剤も含まれる。
また癌治療用医薬は固形癌のみならず、リンパ腫、白血病（成人Ｔ細胞白血病、エイズ関連Ｔ細胞白血病を含む）等のすべての癌の治療薬が含まれる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、アントラサイクリン系抗腫瘍剤等の低分子量薬剤とSMAとからなるミセル複合体を単純な方法で合成し、しかも縮合剤を用いないため、精製工程が簡単で純度の高い製品が得られる。
また本発明により得られた高分子型癌治療用医薬は、薬剤とSMAが非共有結合により会合したミセル複合体であり、後述するように、前記非特許文献２のような共有結合により高分子化された薬剤とは大きく違っており、分子量は１０万〜１８万と大きく増大し、そのため腫瘍部に対し、より選択的に集積し、また腫瘍内の滞留期間も長い。それによって抗腫瘍効果が優れ、しかも正常器官に対する副作用が少ない等制癌性薬剤としてより有用性が高いものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明で用いられる低分子癌治療用医薬は、SMAに包含されて高分子ミセル複合体構造を形成するものであれば、特に限定されないが、特にアントラサイクリン系抗腫瘍剤、白金系抗腫瘍剤およびローズベンガルが好適である。アントラサイクリン系抗腫瘍剤は式(1)及び(2)に示されるような7,8,9,10−テトラヒドロ−5,12−ナフタセンキノンのグリコシド構造を有する抗生物質であり、ピラルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、アモルビシノール等が挙げられるが、特に下記式(1)で示されるドキソルビシン及び式(2)で示されるピラルビシンが好ましい。【００１５】
【化１】
2006112362.tif 000002
【００１６】
【化２】
2006112362.tif 000003
【００１７】
白金系抗腫瘍剤としては式(3)に示され、通称シスプラチンと呼ばれるるシスジアミンジクロロ白金や式(4)類似のオキザリプラチンのような重金属錯体がある。オキザリプラチンは蒸留水中では安全であるが、生理食塩水中、血中、体液中あるいは酸性およびアルカリ性のpH溶液中では不安定である。とくに高温では不安定である。オキザリプラチンそのものは制癌剤としては毒性が強く、限られた注意深い使用が求められる。これに対し、このものの高分子化したSMA−ミセル体はこれらの各種条件下で安定化し、なおかつ高分子として体内で挙動し、EPRにもとづく固型腫瘍に対する選択的なデリバリーが可能となり、副作用の低減化と薬効の増大効果があるので、これらの薬剤についても本発明の方法が適用できる。【００１８】
【化３】
2006112362.tif 000004
【００１９】
【化４】
2006112362.tif 000005
【００２０】
光増感剤は放射線やレーザー治療等の増感剤として用いられる。このような光増感剤として、例えばローズベンガルもミセル複合体とすることにより、EPR効果により腫瘍集積性が上昇し、レーザー、紫外線、放射線などの光照射による表層部腫瘍の治療剤となるので、このような光増感剤のミセル化にも本発明の方法が適用できる。【００２１】
カンプトテシン、タキソール等のアルカロイド系もSMAとのミセル複合体構造を形成し、その高分子型抗腫瘍剤も上記SMA−ピラルビシンと同じ方法で製造することができる。【００２２】
本発明において高分子化剤として用いるSMAは、スチレンと無水マレイン酸との共重合によって得られ、下記式(5)または(6)に示される繰り返し単位を有する共重合体であり、必須成分としてスチレンと無水マレイン酸とを有する。【００２３】
【化５】
2006112362.tif 000006
【００２４】
【化６】
2006112362.tif 000007
但し、ＲはＨまたはその他の炭化水素、アミノ酸、アルコール類である。【００２５】
本発明においてはSMAはスチレン・無水マレイン酸共重合体を無水物のまま(5)、あるいは完全開環したスチレン・マレイン酸（または、その半アルキルエステル体）(6)のいずれも用いることもできるが、無水物のままで用いる方が加水分解等の操作が不要であり、簡便に実施できる点では好ましいが、一方開環したスチレン・マレイン酸を用いる方法も極度に高いｐＨ(12以上)まで上げなくてもミセル形成は短時間に終了し、強アルカリ性による薬剤成分の分解が防止できるなどの利点がある。【００２６】
SMAは重合度により各種の分子量のものが存在するが、本発明において高分子化剤として用いるSMAはトリマー（約６６０Da）から約４０KDaのサイズを有するものが好適である。より厳密には分子量８００〜２５００が体内に集積せず、体外排泄される容易さから好ましい。【００２７】
低分子薬剤とSMAとの反応による高分子ミセル複合体の製造は、アントラサイクリン系抗腫瘍剤を例にとると、SMA(無水物)をそのまま抗腫瘍剤と混合し、炭酸ソーダのようなアルカリ性液を加えてアルカリ性とし、撹拌加温する。適宜炭酸ソーダを加えてアルカリ性に維持する。全体が可溶化した後、酸で中和する。これによって生成物が沈殿し、薬剤のミセルへの取り込みが効率的に行なわれる。更にpHを最適条件（中性）に調節した後、限外ろ過、カラムクロマトグラフィー等の高分子成分の分離精製操作を用いて、高分子成分を回収する。この操作の間、構造変化と分子間作用を伴い、SMAミセルの低分子薬剤の取り込みが進行し、かくしてミセル構造が生成する。【００２８】
アントラサイクリン系抗腫瘍剤を原料とする場合、従来法では塩酸塩が用いられていたが、本発明方法でSMAと結合させる場合は、遊離体を用いることもでき、この方法では第１に有機溶媒の使用が可能となり、より高い薬物含有量のものが容易に得られること、第２に溶媒の除去が容易であること、脱塩酸処理が不要である等の点で、塩酸塩を用いる方法より有利である。【００２９】
薬剤とSMAとの反応は薬剤及び／またはSMA無水物を有機溶媒に溶解して反応させても良い。水に不溶性の化合物はテトラヒドロフラン、ジメチルスルフォキシドなどの有機溶剤に溶解して反応させることができる。SMAの溶剤としてはアセトン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルフォキサイド、メチルセルソルブ、アセトニトリル、エチルアルコール、グリセリンなどが使用できるが、特にアセトン、アセトニトリルなどが好ましい。有機溶媒溶液の濃度は1〜30％が好ましい。このときピリジン、ジアミノエタンなどを触媒として加えることもできる。【００３０】
薬剤とSMAとの反応を超音波を照射しながら行なっても良い。超音波を照射することにより、より短時間に、より効率良くミセルを形成することができる。照射条件は例えば、１分 On、１分 Offで５分〜６０分、少なくとも５〜１０分続ける。【００３１】
高分子成分分離操作は、分子量３，０００〜５０，０００の限外濾過膜によって行なうのが好ましい。好ましくは、Cut off 分子量３万〜５万のものがよい。本法によって生ずるSMA−ピラルビシンは分子量が５万以上である。より正確には見かけの中心分子量が１３万〜１４万のものである。【００３２】
このように本発明の高分子型癌治療用医薬は、ミセル複合体を形成させるために、界面活性剤等の補助成分の存在を必要とせず、また脱水縮合剤も使用せず、原料である癌治療用医薬とSMAのみを用いて製造され、SMAと薬剤のみからなる安定なミセル複合体構造の薬剤を調製することができる。【００３３】
なお、必要に応じて、安定化剤として、乳糖、マニトール、アミノ酸、グリセリン、レシチン等を薬剤と同量ないし100倍量存在下にこのミセルを調製することもできる。【００３４】
本発明の高分子型ミセル複合体癌治療用医薬は低分子薬剤とSMAとの反応により、高分子ミセル複合体構造が形成され、薬剤がミセル内に包摂されて取り込まれたたものであり、薬剤とSMAとの結合状態は水素結合、疎水結合、あるいはイオン結合であって、アミド結合、エステル結合などの共有結合には存在しないものである。【００３５】
このようにして製造されたミセル型SMA薬剤複合体は、これまでの高分子化薬剤において見られたように、元の低分子量薬剤と比べると、ユニークな薬理学的性質が付与されていることは言うまでもないが、更に特許文献３の方法で製造されたものと比べても、薬剤として下記のごとき優れた性質をもっている。【００３６】
従来の方法によるSMA〜薬剤ミセル複合体の分子サイズが４万以下であったのに対し、今回の本発明により得られたSMAミセル複合体の分子サイズは１０万以上約１３〜１８万という大幅に高分子化したものであり、これは腎排泄限界である分子量４万を超えているので、血中濃度、血中滞留性が大きく向上し、それにより、よりＥＰＲ効果が発現し、腫瘍選択的な薬剤として各種の制癌剤の改善に大きく貢献している。図2にそのデータを示す。【００３７】
また、ミセル内の薬物含有量が通常のリポソーム（ｗ／ｗ１０〜２０％）に比べて大幅に増加（ｗ／ｗ４０〜６０％）している。さらにカルボジイミドなどの不純物の除去は極めて困難で、５回精製してもその残留窒素としてみとめられる。これを元素分析値の窒素分量からＮ含量の差として証明することができる（表１）。このように縮合剤、触媒成分等の混入がないことから、それに由来する副作用の減少効果も期待される。
【実施例１】
【００３８】
（本発明によるSMAピラルビシンミセル複合体の製造）
(1)ピラルビシン塩酸塩100mg、SMA100mgをビーカーにとり、25mMのNa2CO3を加えpH 11.0でマグネチックスターラーで撹拌する。これを20〜45℃に調節し、撹拌を続け、１０時間反応させ全体が可溶化したところで0.1M塩酸によりpHを3〜5に下げる。さらに３０分撹拌したあと、0.5M NaHCO3によりpH 8〜10とし、撹拌下分子量５万のCut offの限外濾過膜を用いて濃縮洗浄（1/10量まで減量）する。同様の操作で１０倍量の0.01M NaHCO3で１回、１０倍量の蒸留水で２回、計３回濃縮洗浄を繰り返す。約200mgのSMA−ピラルビシンミセル複合体が得られた。
ピラルビシンの活性として培養大腸癌細胞SW480を用いた収率は９５％であった。【００３９】
得られたSMAピラルビシンミセル複合体の性質を図１（赤外線吸収スペクトル）、図２(分子量比較)、図３(紫外・可視吸収スペクトル)に示した。図１−Aは本発明によるSMA−ピラルビシンの赤外スペクトル（KBrぺレット）、図１−Bは従来の方法によるSMA−ピラルビシンであり、1600cm-1付近と、1200-1300cm-1付近に複数のピークがあり、不純物が多いことを示している。【００４０】
図２は本発明方法で得られたSMAピラルビシンミセル複合体と各種標品のセファデックスG−150、G−100、セファクリルHR300より得られた分子量の各種分子量マーカーとの比較を示すグラフである。図２によれば、本発明方法によるSMA−ピラルビシンは従来法に比べて分子量がはるかに大きい。【００４１】
さらに元素分析によるＣ,Ｈ,及びＮの量を測定し、その結果を表１に示した。表１によれば、従来法ではＮ含量が多く、これはカルボジイミド由来のもので、高い濃度の夾雑物を含んだものであり、またＳMＡ成分が薬剤に比較して多いためＣ値が高いという結果が得られている。これに比べて本発明で得られた製品は薬剤の取り込み効率が良く、不純物が少ないことを示している。【００４２】
【表１】
2006112362.tif 000008
[比較例１]【００４３】
（従来法によるSMA−ピラルビシンミセル複合体の製造）
SMA10mg/mlを純水に溶解してpHを12に調節し、50℃、4時間加熱し加水分解SMAを調製し、これに濃度10mg/m1のピラルビシン水溶液(10m1)を加え、100m1ビーカーで、室温にてマグネチックバーで攪拌混合し、0.01M塩酸を滴下、混合して、混合物のpHを5に再調節したのち、ジメチルアミノプロピルカルボジイミド(EDAC)(シグマケミカルSt.Louis,MO,USA)10mg/ml(10 ml total/final volume)を２分間隔で10分の１づつ１０回添加し、更に３０分間反応させた。着色した沈殿物が生成し、これを遠心分離または濾過により採取した。
沈殿物を冷酸性水で２回洗浄し(pH5.O以下)、水に溶解し、pH10に調節した後、pHを7に下げた。透析チューブで透析し、10KDaカットオフ膜(Millipore Corporation, Bedford, MA,USA)で限外濾過により1/10容積に濃縮した後、10倍量の蒸留水を加え、この工程を3回繰り返した。ついで濃縮内容物(5m1)をSephadex G−50 Fine (3 x 52cm)カラムを用いてゲル濾過クロマトグラフィーにかけ、ついで凍結乾燥した。収量は１４０mgであり、凍結乾燥後の収率は、SMA及びピラルビシンベースで70%、ピラルビシン重量ベースで80%であった。【００４４】
実施例1および比較例１で得られたSMA−ピラルビシンミセル複合体のサイズ径を光散乱光度法により測定した。得られたサイズ径分布図を図４a（実施例１）および図４b（比較例１）に示す。従来法で得られたミセル複合体は２つのピークが存在しているが、本発明方法で得られたミセル複合体はピークが一つであり、純度が高く、医薬として優れている。なお測定条件は下記のとおりである。
温度：２５℃
溶媒：脱イオン水
濃度：1mg/ml   0.45μフィラー【００４５】
本発明の方法(実施例１)と、特許文献３によるカルボジイミドを用いる調製法(比較例１)の比較を表２示した。【００４６】
【表２】
2006112362.tif 000009
【００４７】
表２の結果から明らかなように、本発明の方法では、従来法よりSMAミセル複合体が高収率で得られるのみならず、得られたSMAピラルビシンミセル複合体は、従来法で得られたものに比べ、より高分子量であり、腎排泄がなく、ＥＰＲ効果を示し、またミセル中の薬物含量が大きく、生物活性も大きい等、腫瘍選択的な癌治療用医薬として優れている。
［実施例３］【００４８】
（SMA−オギザリプラチンミセル複合体の製造方法）
[方法１]
オキザリプラチン2.5gを50mlの蒸留水に溶かし、これに1.0gのSMAの粉末を攪拌下に加える。これにさらに10mMNa2CO3を撹拌下に加え、さらに２日間室温で攪拌を続け、可溶部を遠心により集める（分画1）。次に遠心管の底部の沈殿物に対し、10mM Na2CO3を加え、pHを最終10〜11.0となるように撹拌下に放置する。上記の操作は40〜50℃で行う。数時間〜1日すると次第に可溶化し、このものは1〜2日後に透明となり、その上澄の分画を遠心にて集める（分画2）。分画1と分画2を合わせ、それを上記のように限外フィルターにかけ濃縮し、実施例１と同様に10mM Na2CO3の10倍量の蒸留水にて数時間かけて3000ダルトンのろ過膜で濃縮洗浄操作を2回、さらに蒸留水による濃縮と洗浄を2〜3回くり返し、凍結乾燥標品となす。【００４９】
［方法２］
オキザリプラチン0.5gを蒸留水100mlに溶かし、25〜40℃とし、これに対しSMAの部分加アルコール分解物の微粉末を1.5g加え、次に50mMのNa2CO3を30ml加え、撹拌下にジアミノヘキサン0.2gを加え、4〜15℃に維持し、10mMのNa2CO3を加えpHを11附近に保つ。このとき、SMAが溶解（無水残基の分解）した時点でpHを0.1M 酢酸で弱酸性にし、15℃以下に放置し、数時間後に沈殿物を得る。【００５０】
かくして得られたSMA−Oxaliplatinミセルはゲル濾過クロマトグラフィー（セファデックスG−50F）で2つの違ったピークを得ることができる。最初のそれをSO−1、2番目のそれをSO−2と呼ぶ。SO−1とSO−2は違ったサイズのミセルである（下記参照）。このとき、両ミセルは250nmおよび280nmの吸収をもつ。各溶出ピークをそれぞれ別にプールし、10mM NaHCO3を50ml加えpHを中性にし、可溶化したもの（ミセル）に10倍の蒸留水を加え、限外膜等で濃縮と洗浄操作を行う。これを3回繰り返し、凍結乾燥する。この方法（2）は方法（1）よりもより短時間（1/10）内にミセルを作成することができる。
ジアミノヘキサンの代わりに他のポリアミン（プロタミン、プトレシン、スパミジン、アルギニン等、前記、背景の項参照）を加えることもできる。また、超音波（例えばBranson社製あるいはDr. Hielscher UP 50Hなど）を適宜加えることもミセル化の促進に有効である。【００５１】
SMAの量をOxaliplatinの量（w/w）に比べ、方法2（3:1）のように多くすることによって、より低分子量側SO−2（分子量数千以上）のミセルの収量が多くなり、高分子量側のミセル（SO−1）（分子量数万前後）は少なくなる。SO−1はより水に溶け難く、SO−2は水に易溶であり、両者とも血清アルブミンと結合し、生体内においては両者の分子量は増加し、十数万〜数万となることを示している。即ち、SO−1、SO−2ともにその高分子量のためEPR効果を示し、より腫瘍指向性が高まり、従って薬効も高まり、全身性の副作用を減ずるという利点を有するものである。【００５２】
SO−1、SO−2ともにもとのoxaliplatinよりも親油性が増加し、油剤化製剤となし、そのものを経口投与剤、あるいは腫瘍の栄養血管からの動脈内投与に用いる動注用製剤とすることができる。とくにSO−1にこの傾向が強い。用いる油脂はオリーブオイル、大豆油などの食用油、リピオドール（フランス、Gelbe社製）、中鎖および長鎖脂肪酸トリグリセリド、これらのモノ、ジ・グリセリド類を用いることができる。この方法（2）は方法（1）よりもより短時間（1/10）内にミセルを作成することができる。油剤化ミセルの製造に際しては、SO−1またはSO−2の1/100〜10/100量（w/w）の大豆レシチンの水溶液あるいは懸濁液を作成し、そのものを常温により凍結乾燥し、レシチン処理をほどこしたSO−1又はSO−2を1〜10mg/mlになるように、上記油脂に懸濁可溶化する。
［実施例４］（SMA−ローズベンガル・ミセル複合体（光増感用ミセル）の製造方法）【００５３】
SMAをアセトンの7％（w/w）溶液とし、これを300mlのビーカーに調製する。次に水あるいは溶媒にとかした光増感剤ローズベンガル（薬剤）の30%溶液50mlを攪拌下に先のSMA溶液に少量ずつ添加する。１M Na2CO3を用いてpHを10.0〜11.0となし、マグネチックスターラーにより攪拌を数時間つづけると次第にミセル包含体となる。pHを維持するため必要に応じて10mM Na2CO3 溶液を滴下し、pH11.0附近で数時間攪拌し、ミセルの安定化を行う。次いで、このものに対し、撹拌下に0.1M塩酸を加え、pH5以下にして、SMA−ミセルの沈澱を行う。温度を10〜20℃に保ち、懸濁液を遠心分離し、上澄を捨て沈澱を得る。この沈殿物を中性〜弱アルカリ性になるように10mM NaHCO3 を加え再び可溶化する。次に、限外膜フィルターを用いて500nmの吸収のある高分子分画のローズベンガルのミセル分画を得る。そのものを限外膜（3000Da cut off）で濃縮する。実施例1と同様に大過剰の蒸留水を加え、濃縮と洗浄を同時に行うことも出来る。透析あるいは限外フィルターを用いて脱塩した分画を凍結乾燥し、SMA−ローズベンガル・ミセルの標品を得ることができる。このSMA−ローズベンガル・ミセルは低温（10〜20℃）では、30〜40℃より、より早くローズベンガルをミセルから遊離する。この光増感剤ミセルはEPR効果により腫瘍集積性が上昇し、レーザー、紫外線、放射線などの光照射による表層部腫瘍の治療剤となる。あるいはまた、発するその蛍光によりこれら腫瘍の診断に応用することができる。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
多くの低分子量の制癌剤は抗腫瘍効果が強力であるが、腫瘍部への選択的集積性がなく、そのため正常器官・組織に対する副作用が大きい。そのため、それらの投与量が制限されている。このような薬剤とSMAとのミセル複合体を形成させ、分子量５万以上の高分子型癌治療用医薬とすることにより、EPR効果が発揮され、抗腫瘍効果が向上し、正常器官・組織に対する副作用が著しく軽減される。本発明はこのような薬剤とSMAとのミセル複合体を製造するための改良製造方法であり、特定のpH条件でSMAとを直接、反応させることにより、脱水縮合剤が不要で、精製を省略することができ、工程が簡略化される。またSMAの加水分解を省略することもできる。【００５５】
また本発明の方法で得られたSMAミセル複合体は従来法で得られたものに比べて、腎排泄限界の分子量４万以上の高分子量であるので、血中濃度、血中滞留性が大きく向上し、薬剤の効果が優れる。【００５６】
またミセルへの取り込み量が大きく、また脱水縮合剤不使用のため、高純度の製品が得られ、生物活性も大きいので、癌治療用医薬として優れた薬効を有するものが得られる。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】図１−Aは本発明方法(実施例１)で得られたSMAピラルビシンミセル複合体の赤外線吸収スペクトルである。図１−Bは従来の方法(比較例１)で得られたSMAピラルビシンミセル複合体の赤外線吸収スペクトルである。
【図２】本発明方法で得られたSMAピラルビシンミセル複合体及び各種標品の分子量の比較を示すグラフである。
【図３】本発明方法で得られたSMA−ピラルビシンミセル複合体の紫外吸収スペクトルである。
【図４】光散乱光度法による本発明および従来法で得られたSMA−ピラルビシンミセル複合体のサイズ径分布図である。
【図１】
2006112362.tif 000010
【図２】
2006112362.tif 000011
【図３】
2006112362.tif 000012
【図４】
2006112362.tif 000013
【国際調査報告】
2006112362.tif 000014
2006112362.tif 000015
2006112362.tif 000016
2006112362.tif 000017