【手続補正書】
【提出日】令和2年9月1日(2020.9.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脱メチル化複合体であって、該脱メチル化複合体は、
（ａ）以下：
（ｉ）ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素；ならびに
（ｉｉ）以下を含むポリヌクレオチド：
（１）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（２）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列；および
（３）１またはこれより多くのＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含むリボ核タンパク質複合体であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該ポリヌクレオチドに結合される、リボ核タンパク質複合体；ならびに
（ｂ）以下：
（ｉ）ＰＵＦドメイン；
（ｉｉ）ＴＥＴ脱メチル化ドメイン；および
（ｉｉｉ）脱メチル化エンハンサードメイン、
を含む脱メチル化タンパク質結合体であって、ここで該脱メチル化タンパク質結合体は、該１またはこれより多くのＰＢＳ配列に結合する該ＰＵＦドメインを介して該リボ核タンパク質複合体に結合して、脱メチル化複合体を形成する脱メチル化タンパク質結合体、
を含む脱メチル化複合体。
【請求項２】
前記ＴＥＴ脱メチル化ドメインは、ＴＥＴ１ドメイン、ＴＥＴ２ドメインまたはＴＥＴ３ドメインである、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
前記ＴＥＴ１ドメインは、配列番号５１の配列を有する、請求項２に記載の複合体。
【請求項４】
前記脱メチル化エンハンサードメインは、Ｇｒｏｗｔｈ  Ａｒｒｅｓｔ  ａｎｄ  ＤＮＡ−Ｄａｍａｇｅ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ａｌｐｈａ（ＧＡＤＤ４５Ａ）ドメインである、請求項１に記載の複合体。
【請求項５】
前記ＧＡＤＤ４５ドメインは、配列番号８５のアミノ酸配列を有する、請求項４に記載の複合体。
【請求項６】
請前記脱メチル化エンハンサードメインは、ＮＥＩＬ２ドメインである、請求項１に記載の複合体。
【請求項７】
前記ＮＥＩＬ２ドメインは、配列番号８６のアミノ酸配列を有する、請求項６に記載の複合体。
【請求項８】
前記ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項９】
前記ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、ｄＣａｓ９である、請求項１に記載の複合体。
【請求項１０】
前記標的ポリヌクレオチド配列は、遺伝子、転写調節配列、プロモーター、エンハンサーまたはサイレンサーの一部である、請求項１に記載の複合体。
【請求項１１】
前記標的ポリヌクレオチド配列は、過剰メチル化核酸配列または過剰メチル化ＣｐＧ配列である、請求項１に記載の複合体。
【請求項１２】
前記１またはこれより多くのＰＢＳ配列は、長さ８ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項１３】
前記１またはこれより多くのＰＢＳ配列は、同一である、請求項１に記載の複合体。
【請求項１４】
前記ポリヌクレオチドは、１〜５０個のＰＢＳ配列を含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項１５】
１またはこれより多くのＰＢＳ配列は、配列番号１のヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項１６】
前記ＰＵＦドメインは、ＰＵＦａドメイン、ＰＵＦｂドメイン、ＰＵＦｃドメイン、またはＰＵＦｗドメインを含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項１７】
前記ＰＵＦａドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有する、前記ＰＵＦｂドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有する、前記ＰＵＦｃドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を有する、かつ／または前記ＰＵＦｗドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を有する、請求項１６に記載の複合体。
【請求項１８】
非ヒト哺乳動物細胞において標的核酸配列を脱メチル化するための方法であって、該方法は、
（ａ）脱メチル化を要する標的核酸を含む非ヒト哺乳動物細胞を提供する工程；
（ｂ）該非ヒト哺乳動物細胞に、ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素をコードする第１のポリヌクレオチドを送達する工程；
（ｃ）該非ヒト哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（ｉｉ）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列、および
（ｉｉｉ）１またはこれより多くのＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含む第２のポリヌクレオチドを送達する工程であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該第２のポリヌクレオチドに結合される工程；
（ｄ）該非ヒト哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）Ｃ末端およびＮ末端を有するＰＵＦドメイン；
（ｉｉ）ＴＥＴ脱メチル化ドメイン；および
（ｉｉｉ）脱メチル化エンハンサードメイン、
を含む脱メチル化タンパク質結合体をコードする第３のポリヌクレオチドを送達する工程であって、それによって該送達された脱メチル化タンパク質結合体は、該細胞において該標的核酸配列を脱メチル化する工程、
を包含する方法。
【請求項１９】
キットであって、
（ｉ）請求項１に記載のリボ核タンパク質複合体または該リボ核タンパク質複合体をコードする核酸；および
（ｉｉ）請求項１に記載の脱メチル化タンパク質結合体または該メチル化タンパク質結合体をコードする核酸、
を含む、キット。
【請求項２０】
脱メチル化複合体であって、該脱メチル化複合体は、
（ａ）以下：
（ｉ）ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素；ならびに
（ｉｉ）以下を含むポリヌクレオチド：
（１）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（２）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列；
（３）第１のＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列；ならびに
（４）第２のＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含むリボ核タンパク質複合体であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該ポリヌクレオチドに結合されるリボ核タンパク質複合体；
（ｂ）以下：
（ｉ）Ｃ末端を有する第１のＰＵＦドメイン、および
（ｉｉ）該第１のＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結されたＴＥＴ脱メチル化ドメイン、
を含む脱メチル化タンパク質結合体であって、ここで該脱メチル化タンパク質結合体は、該第１のＰＢＳ配列に結合する該第１のＰＵＦドメインを介して該リボ核タンパク質複合体に結合する脱メチル化タンパク質結合体；ならびに
（ｃ）以下：
（ｉ）第２のＰＵＦドメイン；および
（ｉｉ）該第２のＰＵＦドメインに作動可能に連結された脱メチル化エンハンサードメイン、
を含む脱メチル化エンハンサー結合体であって、ここで該脱メチル化エンハンサー結合体は、該第２のＰＢＳ配列に結合する該第２のＰＵＦドメインを介して該リボ核タンパク質複合体に結合して、脱メチル化複合体を形成する脱メチル化エンハンサー結合体、
を含む脱メチル化複合体。
【請求項２１】
非ヒト哺乳動物細胞において標的核酸配列を脱メチル化するための方法であって、該方法は、
（ａ）脱メチル化を要する標的核酸を含む非ヒト哺乳動物細胞を提供する工程；
（ｂ）該非ヒト哺乳動物細胞に、ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素をコードする第１のポリヌクレオチドを送達する工程；
（ｃ）該非ヒト哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（ｉｉ）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列；
（ｉｉｉ）第１のＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、および
（ｉｖ）第２のＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含む第２のポリヌクレオチドを送達する工程であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該第２のポリヌクレオチドに結合される工程；
（ｄ）該非ヒト哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）第１のＰＵＦドメイン；および
（ｉｉ）脱メチル化ドメインであって、該脱メチル化ドメインは、該第１のＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結された脱メチル化ドメイン、
を含む脱メチル化タンパク質結合体をコードする第３のポリヌクレオチドを送達する工程；ならびに
（ｅ）該非ヒト哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）第２のＰＵＦドメイン；および
（ｉｉ）該第２のＰＵＦドメインに作動可能に連結された脱メチル化エンハンサードメイン、
を含む脱メチル化エンハンサー結合体をコードする第４のポリヌクレオチドを送達する工程であって、それによって該送達された脱メチル化タンパク質結合体は、該細胞において該標的核酸配列を脱メチル化する工程、
を包含する方法。
【請求項２２】
前記ＰＵＦドメインがＮ末端およびＣ末端を有し、前記ＴＥＴ脱メチル化ドメインが該ＰＵＦドメインの該Ｃ末端に作動可能に連結され、前記脱メチル化エンハンサードメインが該ＰＵＦドメインの該Ｎ末端に作動可能に連結される、請求項１に記載の脱メチル化複合体。
【請求項２３】
前記ＰＵＦドメインがＮ末端およびＣ末端を有し、前記脱メチル化エンハンサードメインがＣ末端を有し、前記脱メチル化エンハンサードメインが該ＰＵＦドメインの該Ｃ末端に作動可能に連結され、前記ＴＥＴ脱メチル化ドメインが該脱メチル化エンハンサードメインの該Ｃ末端に作動可能に連結される、請求項１に記載の脱メチル化複合体。
【請求項２４】
前記ＰＵＦドメインがＮ末端およびＣ末端を有し、前記ＴＥＴ脱メチル化ドメインが該ＰＵＦドメインの該Ｃ末端に作動可能に連結され、前記脱メチル化エンハンサードメインが該ＰＵＦドメインの該Ｎ末端に作動可能に連結される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＰＵＦドメインがＮ末端およびＣ末端を有し、前記脱メチル化エンハンサードメインがＣ末端を有し、前記脱メチル化エンハンサードメインが該ＰＵＦドメインの該Ｃ末端に作動可能に連結され、前記ＴＥＴ脱メチル化ドメインが該脱メチル化エンハンサードメインの該Ｃ末端に作動可能に連結される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
哺乳動物細胞において標的核酸配列を脱メチル化するためのインビトロ方法であって、該方法は、
（ａ）脱メチル化を要する標的核酸を含む哺乳動物細胞を提供する工程；
（ｂ）該哺乳動物細胞に、ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素をコードする第１のポリヌクレオチドを送達する工程；
（ｃ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（ｉｉ）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列、および
（ｉｉｉ）１またはこれより多くのＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含む第２のポリヌクレオチドを送達する工程であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該第２のポリヌクレオチドに結合される工程；
（ｄ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）Ｃ末端およびＮ末端を有するＰＵＦドメイン；
（ｉｉ）ＴＥＴ脱メチル化ドメイン；および
（ｉｉｉ）脱メチル化エンハンサードメイン、
を含む脱メチル化タンパク質結合体をコードする第３のポリヌクレオチドを送達する工程であって、それによって該送達された脱メチル化タンパク質結合体は、該細胞において該標的核酸配列を脱メチル化する工程、
を包含する方法。
【請求項２７】
哺乳動物細胞において標的核酸配列を脱メチル化するためのインビトロ方法であって、該方法は、
（ｆ）脱メチル化を要する標的核酸を含む哺乳動物細胞を提供する工程；
（ｇ）該哺乳動物細胞に、ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素をコードする第１のポリヌクレオチドを送達する工程；
（ｈ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（ｉｉ）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列；
（ｉｉｉ）第１のＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、および
（ｉｖ）第２のＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含む第２のポリヌクレオチドを送達する工程であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該第２のポリヌクレオチドに結合される工程；
（ｉ）該非ヒト哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）第１のＰＵＦドメイン；および
（ｉｉ）脱メチル化ドメインであって、該脱メチル化ドメインは、該第１のＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結された脱メチル化ドメイン、
を含む脱メチル化タンパク質結合体をコードする第３のポリヌクレオチドを送達する工程；ならびに
（ｊ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）第２のＰＵＦドメイン；および
（ｉｉ）該第２のＰＵＦドメインに作動可能に連結された脱メチル化エンハンサードメイン、
を含む脱メチル化エンハンサー結合体をコードする第４のポリヌクレオチドを送達する工程であって、それによって該送達された脱メチル化タンパク質結合体は、該細胞において該標的核酸配列を脱メチル化する工程、
を包含する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本明細書で記載される任意の実施形態が、実施例の節に記載されるのみのものまたは本発明の一局面の下のみでのものを含め、具体的に権利放棄されるかまたは別段不適切でなければ、任意の１またはこれより多くの他の実施形態と組み合わされ得ることは、理解されるべきである。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
脱メチル化複合体であって、該脱メチル化複合体は、
（ａ）以下：
（ｉ）ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素；ならびに
（ｉｉ）以下を含むポリヌクレオチド：
（１）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（２）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列；および
（３）１またはこれより多くのＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含むリボ核タンパク質複合体であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該ポリヌクレオチドに結合される、リボ核タンパク質複合体；ならびに
（ｂ）以下：
（ｉ）Ｃ末端およびＮ末端を有するＰＵＦドメイン；
（ｉｉ）該ＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結されたＴＥＴ脱メチル化ドメイン；および
（ｉｉｉ）該ＰＵＦドメインのＮ末端に作動可能に連結されて、タンパク質結合体を形成する脱メチル化エンハンサードメイン、
を含む脱メチル化タンパク質結合体であって、ここで該脱メチル化タンパク質結合体は、該１またはこれより多くのＰＢＳ配列に結合する該ＰＵＦドメインを介して該リボ核タンパク質複合体に結合して、脱メチル化複合体を形成する脱メチル化タンパク質結合体、
を含む脱メチル化複合体。
（項目２）
前記ＴＥＴ脱メチル化ドメインは、ＴＥＴ１ドメイン、ＴＥＴ２ドメインまたはＴＥＴ３ドメインである、項目１に記載の複合体。
（項目３）
前記ＴＥＴ１ドメインは、配列番号５１の配列を有する、項目２に記載の複合体。
（項目４）
前記脱メチル化エンハンサードメインは、Ｇｒｏｗｔｈ  Ａｒｒｅｓｔ  ａｎｄ  ＤＮＡ−Ｄａｍａｇｅ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ａｌｐｈａ（ＧＡＤＤ４５Ａ）ドメインである、項目１〜３のいずれか１項に記載の複合体。
（項目５）
前記ＧＡＤＤ４５ドメインは、配列番号８５のアミノ酸配列を有する、項目４に記載の複合体。
（項目６）
請前記脱メチル化エンハンサードメインは、ＮＥＩＬ２ドメインである、項目１〜３のいずれか１項に記載の複合体。
（項目７）
前記ＮＥＩＬ２ドメインは、配列番号８６のアミノ酸配列を有する、項目５に記載の複合体。
（項目８）
前記ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含む、項目１〜７のいずれか１項に記載の複合体。
（項目９）
前記ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、ｄＣａｓ９である、項目１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
（項目１０）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、遺伝子の一部である、項目１〜９のいずれか１項に記載の複合体。
（項目１１）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、転写調節配列の一部である、項目１〜９のいずれか１項に記載の複合体。
（項目１２）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、プロモーター、エンハンサーまたはサイレンサーの一部である、項目１〜９または１１のいずれか１項に記載の複合体。
（項目１３）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、過剰メチル化核酸配列である、項目１〜１２のいずれか１項に記載の複合体。
（項目１４）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、過剰メチル化ＣｐＧ配列である、項目１〜１３のいずれか１項に記載の複合体。
（項目１５）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、ｈＭＬＨ１プロモーターの一部である、項目１〜９または１１〜１４のいずれか１項に記載の複合体。
（項目１６）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、Ｓｏｘ遺伝子の一部である、項目１〜１０または１３〜１４のいずれか１項に記載の複合体。
（項目１７）
前記１またはこれより多くのＰＢＳ配列は、長さ８ヌクレオチドを含む、項目１〜１６のいずれか１項に記載の複合体。
（項目１８）
前記１またはこれより多くのＰＢＳ配列は、同一である、項目１〜１７のいずれか１項に記載の複合体。
（項目１９）
前記ポリヌクレオチドは、１〜５０個のＰＢＳ配列を含む、項目１〜１８のいずれか１項に記載の複合体。
（項目２０）
１またはこれより多くのＰＢＳ配列は、配列番号１のヌクレオチド配列を含む、項目１〜１９のいずれか１項に記載の複合体。
（項目２１）
前記ＰＵＦドメインは、ＰＵＦａドメイン、ＰＵＦｂドメイン、ＰＵＦｃドメイン、またはＰＵＦｗドメインを含む、項目１〜２０のいずれか１項に記載の複合体。
（項目２２）
前記ＰＵＦａドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有する、項目２１に記載の複合体。
（項目２３）
前記ＰＵＦｂドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有する、項目２１に記載の複合体。
（項目２４）
前記ＰＵＦｃドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を有する、項目２１に記載の複合体。
（項目２５）
前記ＰＵＦｗドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を有する、項目２１に記載の複合体。
（項目２６）
哺乳動物細胞において標的核酸配列を脱メチル化するための方法であって、該方法は、
（ａ）脱メチル化を要する標的核酸を含む哺乳動物細胞を提供する工程；
（ｂ）該哺乳動物細胞に、ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素をコードする第１のポリヌクレオチドを送達する工程；
（ｃ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（ｉｉ）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列、および
（ｉｉｉ）１またはこれより多くのＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含む第２のポリヌクレオチドを送達する工程であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該第２のポリヌクレオチドに結合される工程；
（ｄ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）Ｃ末端およびＮ末端を有するＰＵＦドメイン；
（ｉｉ）該ＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結されたＴＥＴ脱メチル化ドメイン；および
（ｉｉｉ）該ＰＵＦドメインのＮ末端に作動可能に連結されて、タンパク質結合体を形成する脱メチル化エンハンサードメイン、
を含む脱メチル化タンパク質結合体をコードする第３のポリヌクレオチドを送達する工程であって、それによって該送達された脱メチル化タンパク質結合体は、該細胞において該標的核酸配列を脱メチル化する工程、
を包含する方法。
（項目２７）
前記脱メチル化タンパク質結合体は、前記リボ核タンパク質複合体に、前記１またはこれより多くのＰＢＳ配列に結合する前記ＰＵＦドメインを介して結合して、脱メチル化複合体を形成する、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記第１のポリヌクレオチドは、第１のベクター内に含まれる、項目２６または２７に記載の方法。
（項目２９）
前記第２のポリヌクレオチドは、第２のベクター内に含まれる、項目２６〜２８のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
前記第３のポリヌクレオチドは、第３のベクター内に含まれる、項目２６〜２９のいずれか１項に記載の方法。
（項目３１）
前記第１の、第２のまたは第３のベクターはいずれも、同じである、項目２６〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記送達する工程は、トランスフェクションによって行われる、項目２６〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
キットであって、
（ｉ）項目１〜２５のいずれか１項に記載のリボ核タンパク質複合体または該リボ核タンパク質複合体をコードする核酸；および
（ｉｉ）項目１〜２５のいずれか１項に記載の脱メチル化タンパク質結合体または該メチル化タンパク質結合体をコードする核酸、
を含む、キット。
（項目３４）
トランスフェクション薬剤をさらに含む、項目３３に記載のキット。
（項目３５）
がん患者からサンプルを集めるためにサンプル収集デバイスをさらに含む、項目３３または３４に記載のキット。
（項目３６）
脱メチル化複合体であって、該脱メチル化複合体は、
（ａ）以下：
（ｉ）ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素；ならびに
（ｉｉ）以下を含むポリヌクレオチド：
（１）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（２）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列；および
（３）１またはこれより多くのＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含むリボ核タンパク質複合体であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該ポリヌクレオチドに結合される、リボ核タンパク質複合体；ならびに
（ｂ）以下：
（ｉ）Ｃ末端を有するＰＵＦドメイン；
（ｉｉ）Ｎ末端およびＣ末端を有する脱メチル化エンハンサードメインであって、ここで該脱メチル化エンハンサードメインのＮ末端は、該ＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結される脱メチル化エンハンサードメイン；および
（ｉｉｉ）該脱メチル化エンハンサードメインのＣ末端に作動可能に連結されたＴＥＴ脱メチル化ドメイン；
を含む脱メチル化タンパク質結合体であって、ここで該脱メチル化タンパク質結合体は、該１またはこれより多くのＰＢＳ配列に結合する該ＰＵＦドメインを介して該リボ核タンパク質複合体に結合して、脱メチル化複合体を形成する脱メチル化タンパク質結合体、
を含む脱メチル化複合体。
（項目３７）
前記ＴＥＴ脱メチル化ドメインは、ＴＥＴ１ドメイン、ＴＥＴ２ドメインまたはＴＥＴ３ドメインである、項目３６に記載の複合体。
（項目３８）
前記ＴＥＴ１ドメインは、配列番号５１の配列を有する、項目３７に記載の複合体。
（項目３９）
前記脱メチル化エンハンサードメインは、Ｇｒｏｗｔｈ  Ａｒｒｅｓｔ  ａｎｄ  ＤＮＡ−Ｄａｍａｇｅ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ａｌｐｈａ（ＧＡＤＤ４５Ａ）ドメインである、項目３６〜３８のいずれか１項に記載の複合体。
（項目４０）
前記ＧＡＤＤ４５ドメインは、配列番号８５のアミノ酸配列を有する、項目３９に記載の複合体。
（項目４１）
前記脱メチル化エンハンサードメインは、ＮＥＩＬ２ドメインである、項目３６〜３８のいずれか１項に記載の複合体。
（項目４２）
前記ＮＥＩＬ２ドメインは、配列番号８６のアミノ酸配列を有する、項目４１に記載の複合体。
（項目４３）
前記ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含む、項目３６〜４２のいずれか１項に記載の複合体。
（項目４４）
前記ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、ｄＣａｓ９である、項目３６〜４３のいずれか１項に記載の複合体。
（項目４５）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、遺伝子の一部である、項目３６〜４４のいずれか１項に記載の複合体。
（項目４６）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、転写調節配列の一部である、項目３６〜４４のいずれか１項に記載の複合体。
（項目４７）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、プロモーター、エンハンサーまたはサイレンサーの一部である、項目３６〜４４または４６のいずれか１項に記載の複合体。
（項目４８）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、過剰メチル化核酸配列である、項目３６〜４７のいずれか１項に記載の複合体。
（項目４９）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、過剰メチル化ＣｐＧ配列である、項目３６〜４８のいずれか１項に記載の複合体。
（項目５０）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、ｈＭＬＨ１プロモーターの一部である、項目３６〜４４または４６〜４９のいずれか１項に記載の複合体。
（項目５１）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、Ｓｏｘ遺伝子の一部である、項目３６〜４５または４８〜４９のいずれか１項に記載の複合体。
（項目５２）
前記１またはこれより多くのＰＢＳ配列は、長さ８ヌクレオチドを含む、項目３６〜５１のいずれか１項に記載の複合体。
（項目５３）
前記１またはこれより多くのＰＢＳ配列は、同一である、項目３６〜５２のいずれか１項に記載の複合体。
（項目５４）
前記ポリヌクレオチドは、１〜５０個のＰＢＳ配列を含む、項目３６〜５３のいずれか１項に記載の複合体。
（項目５５）
１またはこれより多くのＰＢＳ配列は、配列番号１のヌクレオチド配列を含む、項目３６〜５４のいずれか１項に記載の複合体。
（項目５６）
前記ＰＵＦドメインは、ＰＵＦａドメイン、ＰＵＦｂドメイン、ＰＵＦｃドメイン、またはＰＵＦｗドメインを含む、項目３６〜５５のいずれか１項に記載の複合体。
（項目５７）
前記ＰＵＦａドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有する、項目５６に記載の複合体。
（項目５８）
前記ＰＵＦｂドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有する、項目５６に記載の複合体。
（項目５９）
前記ＰＵＦｃドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を有する、項目５６に記載の複合体。
（項目６０）
前記ＰＵＦｗドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を有する、項目５６に記載の複合体。
（項目６１）
哺乳動物細胞において標的核酸配列を脱メチル化するための方法であって、該方法は、
（ａ）脱メチル化を要する標的核酸を含む哺乳動物細胞を提供する工程；
（ｂ）該哺乳動物細胞に、ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素をコードする第１のポリヌクレオチドを送達する工程；
（ｃ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（ｉｉ）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列；および
（ｉｉｉ）１またはこれより多くのＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含む第２のポリヌクレオチドを送達する工程であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該第２のポリヌクレオチドに結合される工程；
（ｄ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）Ｃ末端を有するＰＵＦドメイン；
（ｉｉ）Ｎ末端およびＣ末端を有する脱メチル化エンハンサードメインであって、ここで該脱メチル化エンハンサードメインのＮ末端は、該ＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結される脱メチル化エンハンサードメイン；ならびに
（ｉｉｉ）該脱メチル化エンハンサードメインのＣ末端に作動可能に連結されたＴＥＴ脱メチル化ドメイン
を含む脱メチル化タンパク質結合体をコードする第３のポリヌクレオチドを送達する工程であって、それによって該送達された脱メチル化タンパク質結合体は、該細胞において該標的核酸配列を脱メチル化する工程、
を包含する方法。
（項目６２）
前記脱メチル化タンパク質結合体は、前記リボ核タンパク質複合体に、前記１またはこれより多くのＰＢＳ配列に結合する前記ＰＵＦドメインを介して結合して、脱メチル化複合体を形成する、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
前記第１のポリヌクレオチドは、第１のベクター内に含まれる、項目６１または６２に記載の方法。
（項目６４）
前記第２のポリヌクレオチドは、第２のベクター内に含まれる、項目６１〜６３のいずれか１項に記載の方法。
（項目６５）
前記第３のポリヌクレオチドは、第３のベクター内に含まれる、項目６１〜６４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６６）
前記第１の、第２のまたは第３のベクターはいずれも、同じである、項目６１〜６５のいずれか１項に記載の方法。
（項目６７）
前記送達する工程は、トランスフェクションによって行われる、項目６１〜６６のいずれか１項に記載の方法。
（項目６８）
キットであって、
（ｉ）項目３６〜６０のいずれか１項に記載のリボ核タンパク質複合体または該リボ核タンパク質複合体をコードする核酸；および
（ｉｉ）項目３６〜６０のいずれか１項に記載の脱メチル化タンパク質結合体または該メチル化タンパク質結合体をコードする核酸、
を含むキット。
（項目６９）
トランスフェクション薬剤をさらに含む、項目６８に記載のキット。
（項目７０）
がん患者からサンプルを集めるためにサンプル収集デバイスをさらに含む、項目６８または６９に記載のキット。
（項目７１）
脱メチル化複合体であって、該脱メチル化複合体は、
（ａ）以下：
（ｉ）ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素；ならびに
（ｉｉ）以下を含むポリヌクレオチド：
（１）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（２）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列；
（３）第１のＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列；ならびに
（４）第２のＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含むリボ核タンパク質複合体であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該ポリヌクレオチドに結合されるリボ核タンパク質複合体；
（ｂ）以下：
（ｉ）Ｃ末端を有する第１のＰＵＦドメイン、および
（ｉｉ）該第１のＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結されたＴＥＴ脱メチル化ドメイン、
を含む脱メチル化タンパク質結合体であって、ここで該脱メチル化タンパク質結合体は、該第１のＰＢＳ配列に結合する該第１のＰＵＦドメインを介して該リボ核タンパク質複合体に結合する脱メチル化タンパク質結合体；ならびに
（ｃ）以下：
（ｉ）第２のＰＵＦドメイン；および
（ｉｉ）該第２のＰＵＦドメインに作動可能に連結された脱メチル化エンハンサードメイン、
を含む脱メチル化エンハンサー結合体であって、ここで該脱メチル化エンハンサー結合体は、該第２のＰＢＳ配列に結合する該第２のＰＵＦドメインを介して該リボ核タンパク質複合体に結合して、脱メチル化複合体を形成する脱メチル化エンハンサー結合体、
を含む脱メチル化複合体。
（項目７２）
前記ＴＥＴ脱メチル化ドメインは、ＴＥＴ１ドメイン、ＴＥＴ２ドメインまたはＴＥＴ３ドメインである、項目７１に記載の複合体。
（項目７３）
前記ＴＥＴ１ドメインは、配列番号５１の配列を有する、項目７２に記載の複合体。
（項目７４）
前記脱メチル化エンハンサードメインは、Ｇｒｏｗｔｈ  Ａｒｒｅｓｔ  ａｎｄ  ＤＮＡ−Ｄａｍａｇｅ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ａｌｐｈａ（ＧＡＤＤ４５Ａ）ドメインである、項目７１〜７３のいずれか１項に記載の複合体。
（項目７５）
前記ＧＡＤＤ４５ドメインは、配列番号８５のアミノ酸配列を有する、項目７４に記載の複合体。
（項目７６）
前記脱メチル化エンハンサードメインは、ＮＥＩＬ２ドメインである、項目７１〜７３のいずれか１項に記載の複合体。
（項目７７）
前記ＮＥＩＬ２ドメインは、配列番号８６の配列を有する、項目７６に記載の複合体。
（項目７８）
前記第１のＰＵＦドメインは、ＰＵＦａドメインである、項目７１〜７７のいずれか１項に記載の複合体。
（項目７９）
前記ＰＵＦａドメインは、配列番号２の配列を有する、項目７８に記載の複合体。
（項目８０）
前記第２のＰＵＦドメインは、ＰＵＦｃドメインである、項目７１〜７９のいずれか１項に記載の複合体。
（項目８１）
前記ＰＵＦｃドメインは、配列番号４の配列を有する、項目８０に記載の複合体。
（項目８２）
前記脱メチル化エンハンサードメインは、前記第２のＰＵＦドメインのＮ末端に作動可能に連結される、項目７１〜８１のいずれか１項に記載の複合体。
（項目８３）
前記脱メチル化エンハンサードメインは、前記第２のＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結される、項目７１〜８１のいずれか１項に記載の複合体。
（項目８４）
前記ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含む、項目７１〜８３のいずれか１項に記載の複合体。
（項目８５）
前記ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、ｄＣａｓ９である、項目７１〜４３のいずれか１項に記載の複合体。
（項目８６）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、遺伝子の一部である、項目７１〜８５のいずれか１項に記載の複合体。
（項目８７）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、転写調節配列の一部である、項目７１〜８５のいずれか１項に記載の複合体。
（項目８８）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、プロモーター、エンハンサーまたはサイレンサーの一部である、項目７１〜８５または８７のいずれか１項に記載の複合体。
（項目８９）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、過剰メチル化核酸配列である、項目７１〜８８のいずれか１項に記載の複合体。
（項目９０）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、過剰メチル化ＣｐＧ配列である、項目７１〜８９のいずれか１項に記載の複合体。
（項目９１）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、ｈＭＬＨ１プロモーターの一部である、項目７１〜８５または８７〜９０のいずれか１項に記載の複合体。
（項目９２）
前記標的ポリヌクレオチド配列は、Ｓｏｘ遺伝子の一部である、項目７１〜８６または８９〜９０のいずれか１項に記載の複合体。
（項目９３）
前記第１のまたは前記第２のＰＢＳ配列は、長さ８ヌクレオチドを含む、項目７１〜９２のいずれか１項に記載の複合体。
（項目９４）
前記第１のまたは前記第２のＰＢＳ配列は、配列番号１のヌクレオチド配列を含む、項目７１〜９３のいずれか１項に記載の複合体。
（項目９５）
前記第１のまたは前記第２のＰＵＦドメインは、ＰＵＦａドメイン、ＰＵＦｂドメイン、ＰＵＦｃドメイン、またはＰＵＦｗドメインを含む、項目７１〜９４のいずれか１項に記載の複合体。
（項目９６）
前記第１のまたは前記第２のＰＵＦａドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有する、項目９５に記載の複合体。
（項目９７）
前記第１のまたは前記第２のＰＵＦｂドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有する、項目９５に記載の複合体。
（項目９８）
前記第１のまたは前記第２のＰＵＦｃドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を有する、項目９５に記載の複合体。
（項目９９）
前記第１のまたは前記第２のＰＵＦｗドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を有する、項目９５に記載の複合体。
（項目１００）
哺乳動物細胞において標的核酸配列を脱メチル化するための方法であって、該方法は、
（ａ）脱メチル化を要する標的核酸を含む哺乳動物細胞を提供する工程；
（ｂ）該哺乳動物細胞に、ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素をコードする第１のポリヌクレオチドを送達する工程；
（ｃ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）標的ポリヌクレオチド配列に相補的なＤＮＡ標的化配列；
（ｉｉ）該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素に対する結合配列；
（ｉｉｉ）第１のＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、および
（ｉｖ）第２のＰＵＦ結合部位（ＰＢＳ）配列、
を含む第２のポリヌクレオチドを送達する工程であって、ここで該ヌクレアーゼ欠損性ＲＮＡ誘導型ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素は、該結合配列を介して該第２のポリヌクレオチドに結合される工程；
（ｄ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）第１のＰＵＦドメイン；および
（ｉｉ）脱メチル化ドメインであって、該脱メチル化ドメインは、該第１のＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結された脱メチル化ドメイン、
を含む脱メチル化タンパク質結合体をコードする第３のポリヌクレオチドを送達する工程；ならびに
（ｅ）該哺乳動物細胞に、以下：
（ｉ）第２のＰＵＦドメイン；および
（ｉｉ）該第２のＰＵＦドメインに作動可能に連結された脱メチル化エンハンサードメイン、
を含む脱メチル化エンハンサー結合体をコードする第４のポリヌクレオチドを送達する工程であって、それによって該送達された脱メチル化タンパク質結合体は、該細胞において該標的核酸配列を脱メチル化する工程、
を包含する方法。
（項目１０１）
前記脱メチル化タンパク質結合体は、前記リボ核タンパク質複合体に、前記第１のＰＢＳ配列に結合する前記第１のＰＵＦドメインを介して結合する、項目１００に記載の方法。
（項目１０２）
前記脱メチル化エンハンサー結合体は、前記リボ核タンパク質複合体に、前記第２のＰＢＳ配列に結合する前記第２のＰＵＦドメインを介して結合する、項目１００または１０１に記載の方法。
（項目１０３）
前記脱メチル化エンハンサードメインは、前記第２のＰＵＦドメインのＮ末端に作動可能に連結される、項目１００〜１０２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０４）
前記脱メチル化エンハンサードメインは、前記第２のＰＵＦドメインのＣ末端に作動可能に連結される、項目１００〜１０２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０５）
前記第１のポリヌクレオチドは、第１のベクター内に含まれる、項目１００〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０６）
前記第２のポリヌクレオチドは、第２のベクター内に含まれる、項目１００〜１０５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０７）
前記第３のポリヌクレオチドは、第３のベクター内に含まれる、項目１００〜１０６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０８）
前記第４のポリヌクレオチドは、第４のベクター内に含まれる、項目１００〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０９）
前記第１の、第２の、第３のまたは第４のベクターはいずれも、同じである、項目１００〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１０）
前記送達する工程は、トランスフェクションによって行われる、項目１００〜１０９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１１）
キットであって、
（ｉ）項目７１〜９９のいずれか１項に記載のリボ核タンパク質複合体または該リボ核タンパク質複合体をコードする核酸；
（ｉｉ）項目７１〜９９のいずれか１項に記載の脱メチル化タンパク質結合体または該脱メチル化タンパク質結合体をコードする核酸；および
（ｉｉｉ）項目７１〜９９のいずれか１項に記載の脱メチル化エンハンサー結合体または該脱メチル化エンハンサー結合体をコードする核酸、
を含むキット。
（項目１１２）
トランスフェクション薬剤をさらに含む、項目１１１に記載のキット。
（項目１１３）
がん患者からサンプルを集めるためにサンプル収集デバイスをさらに含む、項目１１１または１１２に記載のキット。