(57)【要約】  本発明は、天然物由来のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γ（ＰＰＡＲγ）リガンド剤、及びそれを有効成分として含有することを特徴とするインスリン抵抗性症候群、糖尿病、肥満または内臓脂肪型肥満の予防・改善用組成物を提供することを課題とする。  本発明は、クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分とするＰＰＡＲγリガンド剤を提供する。また、本発明は、上記化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性症候群、糖尿病、肥満または内臓脂肪型肥満の予防・改善用組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤。
【請求項２】
該化合物が、Ｎ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン、Ｎ−トランス−フェルロイルチラミン、Ｎ−トランス−フェルロイルピペリジン、Ｎ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン、及びＮ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ−ペンテノイルピペリジン、それらの塩、並びにそれらのエステル化体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物である請求項１記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤。
【請求項３】
クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、内臓脂肪型肥満の予防または処置用組成物。
【請求項４】
クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、２型糖尿病の予防または処置用組成物。
【請求項５】
クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、インスリン抵抗性症候群の予防または処置用組成物。
【請求項６】
クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、メタボリックシンドロームの予防または処置用組成物。
【請求項７】
クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、内臓脂肪症候群の予防または処置用組成物。
【請求項８】
該化合物が、Ｎ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン、Ｎ−トランス−フェルロイルチラミン、Ｎ−トランス−フェルロイルピペリジン、Ｎ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン、及びＮ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ−ペンテノイルピペリジン、それらの塩、並びにそれらのエステル体からなる群より選択される１種以上の化合物である請求項３〜７いずれか１項記載の組成物。
【請求項９】
クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される化合物が、その合計量として、組成物中に０．１重量％〜９９重量％含有される、請求項３〜７いずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤、並びに内臓脂肪型肥満及びその関連病態・症候群の予防・改善用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（peroxisome proliferator-activated receptor：ＰＰＡＲ）は、脂質代謝を維持する遺伝子群の発現制御を担う転写制御因子として同定された核内受容体ファミリーに属するリガンド依存性転写制御因子である。哺乳動物ではＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ（ＰＰＡＲβ、ＮＵＣ−１、ＦＡＡＲ）、ＰＰＡＲγの３種のサブタイプの存在が知られており、ＰＰＡＲαは主に肝臓で、ＰＰＡＲδは普遍的に発現している。ＰＰＡＲγにはＰＰＡＲγ１とＰＰＡＲγ２の２種のアイソフォームが存在しており、ＰＰＡＲγ１は脂肪組織の他に免疫系臓器や副腎、小腸で発現している。ＰＰＡＲγ２は脂肪組織で特異的に発現しており、脂肪細胞の分化・成熟を制御するマスターレギュレーターである（非特許文献１：河田照雄、医学のあゆみ，184, 519〜523, 1998）。【０００３】
ＰＰＡＲγリガンドとしては、１５−デオキシ−Δ１２，１４−プロスタグランジンＪ２やΔ１２−プロスタグランジンＪ２などのアラキドン酸代謝物；ω−３多価不飽和脂肪酸、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの不飽和脂肪酸；９−ヒドロキシオクタデカジエン酸や１３−ヒドロキシオクタデカジエン酸などのエイコサノイド類などが知られている（非特許文献２：J. Auwerx, Diabetologia, 42, 1033〜1049, 1999）。また、共役トリエン構造または共役テトラエン構造を有する炭素数１０〜２６の共役不飽和脂肪酸などがＰＰＡＲγリガンドであることが開示されている（特許文献１：特開２０００−３５５５３８）。さらに、合成化合物では、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンなどのチアゾリジン誘導体がＰＰＡＲγリガンドであることが知られている。【０００４】
ＰＰＡＲγリガンドであるチアゾリジン誘導体は、そのアゴニスト活性と血糖降下作用が相関することからインスリン抵抗性改善作用との関連が注目され、２型糖尿病（インスリン非依存性糖尿病：ＮＩＤＤＭ）に対するインスリン抵抗性改善薬として開発された。すなわち、ＰＰＡＲγリガンドであるチアゾリジン誘導体はＰＰＡＲγを活性化することにより、前駆脂肪細胞から分化した正常機能を有する小型脂肪細胞を増加させ、インスリン抵抗性を惹起するＴＮＦαや遊離脂肪酸の産生や分泌が亢進している肥大脂肪細胞をアポトーシスにより減少させることで、インスリン抵抗性を改善する（非特許文献３：A. Okuno, et al., Journal of Clinical Investigation, 101, 1354〜1361, 1998）。またＰＰＡＲγリガンドは、インスリン抵抗性を改善することから、２型糖尿病だけでなく、高インスリン血症、脂質代謝異常、肥満、高血圧、動脈硬化性疾患といったインスリン抵抗性症候群（非特許文献４：R. A. Degronze, et al., Diabetes Care, 14, 173〜194, 1991）の予防・改善にも有効である。肥満に対する効果としては、２型糖尿病患者にトログリタゾンを投与することにより内臓脂肪が減少することが報告されており（非特許文献５：I. E. Kelly, et al., Diabetes Care, 22, 288〜293, 1999、非特許文献６：Y. Mori, et al., Diabetes Care, 22, 908〜912, 1999）、内臓脂肪型肥満の予防・改善にも有効である。【０００５】
クマペリン及びその誘導体は、コショウ（Piper nigrum L）に代表される香辛料（スパイス）などの天然植物中に含まれている成分である。クマペリンの生理作用として、抗酸化作用（非特許文献７：Envuromental Health Perspectives 67, 135-142, 1986）、発癌抑制作用（特許文献２：特開平１１−１２１７４）などが明らかにされてきている。
【特許文献１】特開２０００−３５５５３８
【特許文献２】特開平１１−１２１７４
【非特許文献１】河田照雄、医学のあゆみ，184, 519〜523, 1998
【非特許文献２】J. Auwerx, Diabetologia, 42, 1033〜1049, 1999
【非特許文献３】A. Okuno, et al., Journal of Clinical Investigation, 101, 1354    〜1361, 1998
【非特許文献４】R. A. Degronze, et al., Diabetes Care, 14, 173〜194, 1991
【非特許文献５】I. E. Kelly, et al., Diabetes Care, 22, 288〜293, 1999
【非特許文献６】Y. Mori, et al., Diabetes Care, 22, 908〜912, 1999
【非特許文献７】Envuromental Health Perspectives 67, 135-142, 1986
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記に鑑み、本発明はＰＰＡＲγリガンド剤、及び、内臓脂肪型肥満または２型糖尿病を処置または予防することが可能であり、さらには、インスリン抵抗性症候群、メタボリックシンドロームあるいは内臓脂肪症候群を処置または予防することができる組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、クマペリン及びその誘導体がＰＰＡＲγリガンド活性を有することを初めて見出し、本発明を完成するに至った。すなわち本発明が提供するのは以下の通りである。
（１）クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤。
（２）該化合物が、Ｎ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン、Ｎ−トランス−フェルロイルチラミン、Ｎ−トランス−フェルロイルピペリジン、Ｎ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン、及びＮ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ−ペンテノイルピペリジン、それらの塩、並びにそれらのエステル体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物である（１）記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤。
（３）クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、内臓脂肪型肥満の予防または処置用組成物。
（４）クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、２型糖尿病の予防または処置用組成物。
（５）クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、インスリン抵抗性症候群の予防または処置用組成物。
（６）クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、メタボリックシンドロームの予防または処置用組成物。
（７）クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、内臓脂肪症候群の予防または処置用組成物。
（８）該化合物が、Ｎ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン、Ｎ−トランス−フェルロイルチラミン、Ｎ−トランス−フェルロイルピペリジン、Ｎ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン、及びＮ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ−ペンテノイルピペリジン、それらの塩、並びにそれらのエステル化体からなる群より選ばれた１種以上の化合物である（３）〜（７）いずれか記載の組成物。
（９）クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される化合物が、その合計量として、組成物中に０．１重量％〜９９重量％含有される、（３）〜（７）いずれかに記載の組成物。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γ（ＰＰＡＲγ）リガンド剤が提供される。本発明の組成物は、内臓脂肪型肥満、または２型糖尿病を処置または予防することが可能であり、さらには、インスリン抵抗性症候群、メタボリックシンドロームあるいは内臓脂肪症候群を処置または予防することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。【００１０】
ここにいうペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（peroxisome proliferator-activated receptor：ＰＰＡＲ）は、脂質代謝を維持する遺伝子群の発現制御を担う転写制御因子として同定された核内受容体ファミリーに属するリガンド依存性転写制御因子である。そのサブタイプの１つであるＰＰＡＲγは、ヒトゲノムでは第3p25染色体にコードされている（ＰＰＡＲαは第22q12-q13.1染色体、ＰＰＡＲδは第6p21.2-p21.1染色体にコードされる）（Folia Pharmacol. Jpn., 117, 319-327, 2001）。【００１１】
本発明のＰＰＡＲγリガンド剤は、クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分とする。ここにいうリガンド剤とは、アゴニスト剤またはアンタゴニスト剤である。内臓脂肪型肥満等の処置または予防の観点から、好ましくはアゴニスト剤である。ある化合物がＰＰＡＲγリガンド剤活性を有するかは、例えば、後述の実施例２に記載したアッセイ等で確認できる。【００１２】
ここにいうクマペリンは、Ｎ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン（Ｉ）であり、下記式(Ｉ)で表される香辛料コショウ由来の化合物である。【００１３】
【化１】
2006068075.tif 000002
【００１４】
また本発明におけるクマペリン誘導体としては、特に限定されないが、例えば、下記式（ＩＩ）〜（Ｖ）で表される、Ｎ−トランス−フェルロイルチラミン（ＩＩ）、Ｎ−トランス−フェルロイルピペリジン（ＩＩＩ）、Ｎ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン（ＩＶ）、Ｎ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ−ペンテノイルピペリジン（Ｖ）などのフェノール性アミド化合物が挙げられ、さらにこれらの化合物の塩、酸化体、還元体、配糖体、エステル化体、アセチル化体、メチル化体などが挙げられる。これらは、植物由来の化合物、あるいは化学合成した化合物でも使用することができる。【００１５】
【化２】
2006068075.tif 000003
【００１６】
【化３】
2006068075.tif 000004
【００１７】
【化４】
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【００１８】
【化５】
2006068075.tif 000006
【００１９】
本発明においては、クマペリンまたはその誘導体として、好ましくは、Ｎ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン（Ｉ）（クマペリン）、Ｎ−トランス−フェルロイルチラミン（ＩＩ）、Ｎ−トランス−フェルロイルピペリジン（ＩＩＩ）、Ｎ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン（ＩＶ）、Ｎ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ−ペンテノイルピペリジン（Ｖ）、またはその塩もしくはエステル化体であり、より好ましくは、Ｎ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン（Ｉ）（クマペリン）、Ｎ−トランス−フェルロイルチラミン（ＩＩ）、Ｎ−トランス−フェルロイルピペリジン（ＩＩＩ）、Ｎ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ，４Ｅ−ペンタジエノイルピペリジン（ＩＶ）、または、Ｎ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２Ｅ−ペンテノイルピペリジン（Ｖ）である。もちろんこれらは単独でも、２種以上混合して使用してもかまわない。【００２０】
本明細書にいうクマペリン及びその誘導体は天然物中に見いだされ、特に好ましくは、コショウから分離採取することができる。あるいは、コショウの果実の乾燥粉砕物から有機溶剤などで抽出されるコショウオレオレジンから分離採取することができる。【００２１】
本発明において、クマペリン及びその誘導体をコショウあるいはコショウオレオレジンから得る方法は特に限定されない。例えば、コショウの果実の乾燥粉砕品あるいはコショウオレオレジンを有機溶剤で処理し、不溶性成分を分離した有機溶剤層を取る。この処理に利用する有機溶剤の例としては、例えば、ｎ−ヘキサン、塩化メチレン、エチレンジクロライドなどが挙げられる。【００２２】
次いで、この有機溶剤層を、例えば重炭酸塩水溶液で処理し、さらに得られる有機溶剤層をアルカリ水溶液で処理し、このアルカリ水溶液層のｐＨを中性から酸性に調整する。上記処理に利用する重炭酸塩の例としては、例えば炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、あるいはこれらの組み合わせが挙げられる。ｐＨ調整剤の例としては、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、乳酸、クエン酸、あるいはそれらの組み合わせが挙げられる。【００２３】
次いで調製した液を有機溶剤で抽出することにより、フェノール性アミド化合物の複数種を含む分離物を取得することができる。得られたフェノール性アミド化合物を、例えば、シリカゲルカラムを用いて、メチレンクロライドとメタノールとの混合溶剤で溶出して、クマペリンおよびその誘導体（Ｉ）〜（Ｖ）を単離し得る。【００２４】
その他、Envuromental Health Perspectives, 67, 135-142, 1986に記載された方法によっても、クマペリン及びその誘導体（Ｉ）〜（Ｖ）を得ることも出来る。【００２５】
さらに、本発明のクマペリン及びその誘導体は、合成して得ることもできる。例えば、Agricultural and Biological Chemistry, 44, 2831, 1980、Tetrahedron, 59, 5337, 2003、特公平１−２１９５１に記載の方法でクマペリン及びその誘導体（Ｉ）〜（Ｖ）を合成することが出来るが、この方法に限定はされない。【００２６】
具体的には、例えば、０℃にて無水ベンゼン中に溶解したブロモクロトン酸を無水ベンゼン中の臭化チオニルに加え、溶媒を留去し、得られた４―ブロモクロトン酸臭化物を無水ベンゼンに溶解し、約０℃でピペリジンと反応させる。反応溶液を室温まで昇温したのち、更に1時間冷却水に注いで、ベンゼンで抽出する。有機溶剤層を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液および水で洗う。乾燥し濃縮してシロップを得る。このシロップをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、アミドを得る。【００２７】
精製したアミドを、例えば１００℃〜１１０℃でトリエチルフォスファイトに加える。反応温度を上げて、適当な時間保持する。過剰のトリエチルフォスファイトを減圧下で留去し、残渣を無水ＤＭＦに溶かし、ｐ−ベンジルオキシベンズアルデヒドの無水ＤＭＦ溶液と混合する。この混合液をＮａＯＥｔ溶液で処理し、室温で攪拌する。混合液を水で希釈し、塩化メチレンで抽出する。乾燥した抽出物をベンゼンで再結晶化し、白色針状結晶を得る。【００２８】
上述のようにして得られたベンジルアミドの酢酸溶液に濃塩酸を加え、混合液を約１００℃で処理し、室温に適当な時間放置する。真空下にて混合液を濃縮した後、水を加え、塩化メチレンで抽出する。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で洗い、酢酸を除去する。その後、水酸化ナトリウム溶液で抽出し、そのアルカリ抽出液を希塩酸で酸性化し、水溶液を塩化メチレンで抽出する。濃縮した産物をアセトンから再結晶化し、クマペリンの針状の結晶を得ることができる。【００２９】
前記クマペリン及びその誘導体（Ｉ）〜（Ｖ）の塩としては、その化合物が形成できる、非毒性酸及び塩基の付加塩形態を含むことを意図する。例えば、該化合物を、適当な酸で処理することによってそれらの薬学的に許容される酸付加塩に変換することができる。この場合の例示的な酸は無機酸、例えば、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、硫酸、リン酸；及び有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、グリコール酸、マレイン酸、マロン酸、シュウ酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸、安息香酸、アスコルビン酸等である。また、塩基付加塩形態とする場合の塩基の例は、ナトリウム、カリウム、カルシウム；薬学的に許容されるアミン、例えばアンモニア、アルキルアミン、ベンザチン；及びアミノ酸、例えば、アルギニン、リジン等である。ここで使用する付加塩という用語は、また該化合物及びその塩が形成することができる溶媒和物、例えば、水和物、アルコレート等を含む。【００３０】
前記クマペリン及びその誘導体（Ｉ）〜（Ｖ）の酸化体、還元体、配糖体、エステル化体、アセチル化体、メチル化体は、それぞれ公知の方法で前記化合物を処理することによって得ることも出来るし、それらが含まれる植物より抽出して得ることも出来る。【００３１】
本発明では、クマペリン及びその誘導体から選択される少なくとも１種の化合物は、純粋な化合物を使用することができるが、これに限定されるものではなく、医薬品や食品として不適当な不純物を含有しない限り半精製または粗製のものを使用することもできる。【００３２】
本明細書にいう、内臓脂肪型肥満、または２型糖尿病を処置または予防するための組成物、さらには、インスリン抵抗性症候群、メタボリックシンドロームあるいは内臓脂肪症候群を処置または予防するための組成物は、クマペリン及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有することを特徴とする。【００３３】
ここにいうインスリン抵抗性症候群とは、インスリン抵抗性と高インスリン血症の２つの存在で特徴付けられ、関連病変として、肥満、２型糖尿病、高血圧、動脈硬化性疾患、および脂質代謝異常のうち１つ以上を合併する疾患群を意味する（Netherlands Journal of Medicine, 50, 191-197, 1997）。【００３４】
ここにいうメタボリックシンドローム症候群とは、腹部肥満（特に内臓脂肪型肥満）を基本症状とし、それに加えて、空腹時高血糖、高中性脂肪血症、低HDLコレステロール血症、又は高血圧等の危険因子を重複して有している場合に該当する症候群である（Circulation Journal, 68, 975-981, 2004）。【００３５】
メタボリックシンドロームの診断基準値は、国によって異なるが、日本では以下の通りである（日本内科学会雑誌、94, 188-202, 2005）：
・腹部肥満：腹部周囲径男性  ≧85cm、女性≧90cm
上記に加え以下のうち２項目以上
・高トリグリセライド血症    ≧150mg/dl  かつ／又は
低HDL-コレステロール血症  ＜40mg/dL
・空腹時高血糖              ≧110mg/dL
・収縮期血圧                ≧130mmHg  かつ／又は
拡張時血圧                ≧85mmHg【００３６】
また、ここでいう内臓脂肪症候群とは、内臓脂肪蓄積、耐糖能異常、高脂血症、高血圧、および低HDLコレステロール血症の５つが合併した疾患群である。（日本内科学会雑誌、 81, 1831-1835, 1992）。【００３７】
内臓脂肪型肥満は男性に多いとされ、女性に多いとされる皮下脂肪型肥満とは異なる。動脈硬化を引き起こす危険因子（リスクファクター）の発生と進展を考える上で、高脂血症、糖尿病、高血圧などのリスクファクターの上流にインスリン抵抗性があり、さらに最上流に内臓脂肪型肥満が位置する。肥満症の診断基準においても特に内臓脂肪が上記症候群の発症原因となる悪玉脂肪として重要視されその蓄積がリスクを高めるとされている（Circulation Journal, 66, 987-992, 2002）。【００３８】
ＰＰＡＲγアゴニストは、内臓脂肪を特異的に減少させることを特徴とすることから、本発明の組成物は特に内臓脂肪型肥満を処置または予防することができ、それによってインスリン抵抗性、さらには糖尿病、高脂血症、高血圧などを処置または予防するものである。【００３９】
上記組成物におけるクマペリン及びその誘導体から選択される少なくとも１種の化合物の総重量としての含有量は、上記疾患類の処置または予防に適する限り限定されないが、例えば０．１〜１００重量％であることができる。十分な効果の観点から、組成物中、０．１〜９９重量％、さらには１重量％〜９９重量％含有されるのが好ましい。より好ましくは当該含量は、１０〜９０重量％であることができる。【００４０】
上記組成物は、その形態は限定されず、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）や健康食品などの飲食品、医薬品、医薬部外品などとして用いることができる。【００４１】
飲食品として用いる場合は、上記組成物を、そのまま直接摂取することができ、また、公知の担体や助剤などを使用してカプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態に製剤化して摂取することができる。【００４２】
さらに、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類、アイスクリーム、氷菓などの冷菓類、茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料、うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類、蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品、ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料、マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類、パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。これら飲食用組成物を摂取する場合、その摂取量は、クマペリンおよびその誘導体の量として成人一人一日当たり通常は０．１〜３０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重がよい。また、家畜やペット用の飼料やペットフードとしても使用することができ、その摂取量はクマペリン及びその誘導体の量として一日当たり０．１〜３０００ｍｇ／ｋｇ体重が好ましい。【００４３】
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、坐剤、貼付剤などに製剤化されたものが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。これら製剤の投与量としては、クマペリンおよびその誘導体の量として成人一人一日当たり通常は０．１〜３０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。また、家畜やペット用の医薬品としても使用することができ、その投与量はクマペリンおよびその誘導体の量として一日当たり０．１〜３０００ｍｇ／ｋｇ体重が好ましい。
【実施例】
【００４４】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【００４５】
（実施例１）  クマペリンの合成
クマペリンを、下記の合成法により調製した。【００４６】
０℃にて無水ベンゼン（１８０ｍｌ）中に溶解したブロモクロトン酸(７４．３ｇ、０．０３Ｍ）を無水ベンゼン（４５ｍｌ）中の臭化チオニル（３４．８ｍｌ、０．０１Ｍ）に加え、溶媒を留去し、得られた4―ブロモクロトン酸臭化物を無水ベンゼン（７５ｍｌ）に溶解し、０℃でピペリジン（８９ｍｌ、０．０８Ｍ）と反応させた。反応溶液を室温まで昇温したのち、更に1時間冷却水に注いで、ベンゼンで抽出した。有機溶剤層を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液および水で洗った。乾燥し濃縮して、３２．４ｇのシロップを得た。このシロップをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、アミドを得た。【００４７】
精製したアミドを、１０５℃でトリエチルフォスファイト（９．６ｇ）に加えた。反応温度を１５０℃に上げて、1時間保持した。過剰のトリエチルフォスファイトを減圧下で留去し、残渣を無水ＤＭＦ（３０ｍｌ）に溶かし、１２．２gのｐ−ベンジルオキシベンズアルデヒドを含む無水ＤＭＦ溶液(４５ｍｌ）と混合した。この混合液をＮａＯＥｔ溶液で処理し、室温で攪拌した。混合液を水で希釈し、塩化メチレンで抽出した。乾燥した抽出物(１９．２ｇ）をベンゼンで再結晶化し、白色針状結晶を得た。【００４８】
上述のようにして得られたベンジルアミド（６ｇ）の酢酸溶液（３００ｍｌ）に濃塩酸（１５０ｍｌ）を加え、混合液を１００℃で２時間処理し、室温で一晩放置した。真空下にて混合液を濃縮した後、水を加え、塩化メチレンで抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で洗い、酢酸を除去した。その後、１Ｎの水酸化ナトリウム溶液で抽出し、そのアルカリ抽出液を希塩酸で酸性化し、水溶液を塩化メチレンで抽出した。濃縮した産物（３ｇ）をアセトンから再結晶化し、クマペリンの針状の結晶（２．１ｇ）を得ることができた。【００４９】
（実施例２）  ＰＰＡＲγリガンド活性
ＣＶ−１細胞（雄性アフリカミドリザル腎臓由来の培養細胞）を９６穴培養プレートに６×１０3ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように植え込み、３７℃、５％ＣＯ2条件下で２４時間培養した。培地には、１０％ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）、１０ｍｌ／Ｌペニシリン・ストレプトマイシン溶液（それぞれ５０００ＩＵ／ｍｌ、５０００μｇ／ｍｌ、GIBCO社）、３７ｍｇ／Ｌアスコルビン酸（和光純薬工業株式会社）を含むＤＭＥＭ（Dulbecco's Modified Eagle Medium：GIBCO社）を用いた。細胞をＯＰＴＩ−ＭＥＭ（GIBCO社）で洗浄した後、ｐＭ−ｍＰＰＡＲγと４×ＵＡＳｇ−ｌｕｃをリポフェクトアミン・プラス（GIBCO社）を用いてトランスフェクションした。なお、ｐＭ−ｍＰＰＡＲγは酵母由来転写因子ＧＡＬ４遺伝子（アミノ酸配列１〜１４７）とマウスＰＰＡＲγリガンド結合部位遺伝子（アミノ酸配列１７４〜４７５）を結合したキメラ蛋白発現用プラスミドであり、４×ＵＡＳｇ−ｌｕｃはルシフェラーゼ遺伝子の上流にＧＡＬ４の応答配列（ＵＡＳｇ）を４回組み込んだレポーター・プラスミドである。トランスフェクションの約２４時間後、サンプルを含む培地に交換し（ｎ＝４）、２４時間培養した。サンプルはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解したものを、無処置対照にはＤＭＳＯを用い、培地に１／１０００量添加した。細胞をＣａ、Ｍｇ含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ＋）で洗浄した後、ルックライト（Packard社）を添加し、トップカウント・マイクロプレートシンチレーション／ルミネッセンスカウンター（Packard社）にてルシフェラーゼの発光強度を測定した。【００５０】
測定群と同様に、コントロール群としてｐＭ−ｍＰＰＡＲγの代わりにｐＭ（ＰＰＡＲγリガンド結合部位遺伝子を除去したプラスミド）を用いて測定した。各サンプルについて、測定群及びコントロール群の発光強度の平均値（ｎ＝４）の比（測定群／コントロール群）を算出し、無処置対照に対する比活性をサンプルのＰＰＡＲγリガンド活性とした。結果を表１に示す。【００５１】
【表１】
2006068075.tif 000007
【００５２】
陽性対照としてトログリタゾン（三共株式会社）を用い、各化合物のＰＰＡＲγリガンド活性を比較した。表１から明らかなように、クマペリンに濃度依存的なＰＰＡＲγリガンド活性が認められた。【００５３】
（実施例３）  クマペリンの毒性試験
本発明のクマペリンの毒性試験を試みた。
クマペリンをラットに、２０００ｍｇ／ｋｇ体重、経口投与したところ死亡例は全く認められず、特に毒性症状も観察されなかった。従って、クマペリンの毒性は全くないかあるいは極めて低いことが確認された。【００５４】
（実施例４）  クマペリン含有錠剤の調製
クマペリン                ４５重量部
乳糖                      ３５重量部
結晶セルロース            １５重量部
ショ糖脂肪酸エステル        ５重量部
上記組成で常法によりクマペリンを含有する飲食用錠剤を調製した。【００５５】
（実施例５）  クマペリン含有ソフトカプセル剤の調製
クマペリン                ４０重量部
ゴマ油                    ５５重量部
グリセリン脂肪酸エステル    ５重量部
上記組成で常法によりクマペリンを含有する飲食用ソフトカプセル剤を調製した。【００５６】
（実施例６）  クマペリン含有クラッカーの調製
クマペリン                  １重量部
薄力粉                  １２０重量部
食塩                        １重量部
ベーキングパウダー          ２重量部
バター                    ３０重量部
水                        ４０重量部
上記組成で常法によりクマペリンを含有するクラッカーを調製した。【００５７】
（実施例７）  クマペリン含有うどんの調製
クマペリン                  １重量部
強力粉                  １００重量部
薄力粉                  １００重量部
食塩                      １０重量部
水                      １００重量部
上記組成で常法によりクマペリンを含有するうどんを調製した。【００５８】
（実施例８）  クマペリン含有ドレッシングの調製
クマペリン                １０重量部
オリーブ油                ８０重量部
食酢                      ６０重量部
食塩                        ３重量部
コショウ                    １重量部
レモン汁                    ５重量部
上記組成で常法によりクマペリンを含有するドレッシングを調製した。
【国際調査報告】
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