【手続補正書】
【提出日】令和2年7月8日(2020.7.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌免疫療法用のＤＮＡワクチンの製造方法であって、少なくとも以下のステップ：
（ａ）少なくとも１つの抗原または少なくとも１つのその断片をコードする少なくとも１つの真核生物の発現カセットを含む少なくとも１つのＤＮＡ分子を用いて、サルモネラの弱毒化株を形質転換し；
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた少なくとも１つの形質転換細胞クローンを特徴づけし；
（ｃ）ステップ（ｂ）で特徴づけした少なくとも１つの形質転換細胞クローンを選択し、そして、前述の少なくとも１つの選択された形質転換細胞クローンを更に特徴づけすること、
を含み；
前記ステップ（ｂ）が、以下のサブステップ：
（ｂｉ）経時的に、ステップ（ａ）で得られた少なくとも１つの形質転換細胞クローンの細胞増殖を評価し；
（ｂｉｉ）ステップ（ａ）で得られた少なくとも１つの形質転換細胞クローンにおける少なくとも１つの抗原または少なくとも１つのその断片をコードする少なくとも１つの発現カセットを含む少なくとも１つのＤＮＡ分子の安定性を評価し；
（ｂｉｉｉ）ステップ（ａ）で得られた少なくとも１つの形質転換細胞クローンから、少なくとも１つの抗原または少なくとも１つのその断片をコードする少なくとも１つの発現カセットを含む少なくとも１つのＤＮＡ分子を単離し、そして、少なくとも１つの単離されたＤＮＡ分子を、制限分析および／または配列決定によって特徴づけし；
（ｂｉｖ）ステップ（ａ）で得られた少なくとも１つの形質転換細胞クローンから、少なくとも１つの抗原または少なくとも１つのその断片をコードする少なくとも１つの発現カセットを含む少なくとも１つのＤＮＡ分子を単離し、少なくとも１つの単離されたＤＮＡ分子を少なくとも１つの真核細胞にトランスフェクトし、そして、前記少なくとも１つの真核細胞において該少なくとも１つの抗原または少なくとも１つのその断片の発現を評価すること；
のうちの少なくとも１つを含み；
前記ステップ（ｃ）が、以下のサブステップ：
（ｃｉ）ステップ（ｃ）で選択された少なくとも１つの形質転換細胞クローンの細胞懸濁液１ｍｌあたりの生細胞数を評価し；
（ｃｉｉ）ステップ（ｃ）で選択された少なくとも１つの形質転換細胞クローンにおける少なくとも１つの抗原または少なくとも１つのその断片をコードする少なくとも１つの発現カセットを含む少なくとも１つのＤＮＡ分子の安定性を評価し；
（ｃｉｉｉ）ステップ（ｃ）で選択された少なくとも１つの形質転換細胞クローンから、少なくとも１つの抗原または少なくとも１つのその断片をコードする少なくとも１つの発現カセットを含む少なくとも１つのＤＮＡ分子を単離し、そして、少なくとも１つの単離されたＤＮＡ分子を、制限分析および／または配列決定によって特徴づけし；
（ｃｉｖ）ステップ（ｃ）で選択された少なくとも１つの形質転換細胞クローンから、少なくとも１つの抗原または少なくとも１つのその断片をコードする少なくとも１つの発現カセットを含む少なくとも１つのＤＮＡ分子を単離し、少なくとも１つの単離されたＤＮＡ分子を少なくとも１つの真核細胞にトランスフェクトし、そして、前記少なくとも１つの真核細胞において少なくとも１つの抗原または少なくとも１つのその断片の発現を評価し；
（ｃｖ）ステップ（ｃ）で選択された少なくとも１つの形質転換細胞クローンにおいての細菌、真菌および／またはウイルス混入物の存在を試験し；
（ｃｖｉ）ステップ（ｃ）で選択された少なくとも１つの形質転換細胞クローンの細菌株の同一性を確認すること；
のうちの少なくとも１つを含み；かつ、
前記サルモネラの弱毒化株が、サルモネラ・チフィＴｙ２１ａである、方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つの抗原が、腫瘍抗原および腫瘍間質抗原から成る群から選択され、特にヒト腫瘍抗原およびヒト腫瘍間質抗原から成る群から選択され、より特にはヒト野生型腫瘍抗原、ヒト野性型腫瘍抗原と少なくとも８０％の配列同一性を有するタンパク質、ヒト野性型腫瘍間質抗原、およびヒト野性型腫瘍間質抗原と少なくとも８０％の配列同一性を有するタンパク質から成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの抗原が腫瘍抗原であり、該腫瘍抗原が新生抗原である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記腫瘍抗原および／または腫瘍間質抗原は、ある特定の患者の腫瘍細胞または腫瘍間質によって発現されることが示された抗原である、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
患者特異的腫瘍抗原および／または腫瘍間質抗原は、ｍＲＮＡまたはタンパク質レベルでの患者の腫瘍および／または腫瘍間質に関する発現プロファイル、あるいは、患者の腫瘍抗原および／または腫瘍間質抗原に対する既存のＴ細胞性免疫応答をex vivoで評価することによって同定された抗原である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つのＤＮＡ分子が、カナマイシン抗生物質耐性遺伝子、ｐＭＢ１ ｏｒｉ、および前記抗原をコードする真核生物の発現カセットを、ＣＭＶプロモーターの制御下で含み、特にここで、前記ＤＮＡ分子がＤＮＡプラスミドであり、より特にはここで、該ＤＮＡプラスミドが、配列番号１に示される核酸配列を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ステップ（ａ）における前記サルモネラの弱毒化株が、少なくとも１つの抗原または少なくとも１つのその断片をコードする少なくとも１つの発現カセットを含む前記少なくとも１つのＤＮＡ分子を用いたエレクトロポレーションによって形質転換される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ステップ（ｂ）が、前記サブステップ（ｂｉ）、（ｂｉｉ）、（ｂｉｉｉ）および（ｂｉｖ）のうちの１つ、２つ、３つ、または４つすべてを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ステップ（ｃ）が、前記サブステップ（ｃｉ）、（ｃｉｉ）、（ｃｉｉｉ）、（ｃｉｖ）、（ｃｖ）および（ｃｖｉ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ステップ（ｃｖ）における細菌および／または真菌混入物の存在が、少なくとも１つの好適な選択培地の中またはその上で、ステップ（ｃ）において選択された少なくとも１つの形質転換細胞クローンを培養することによって試験される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ステップ（ｃｖｉ）における細菌株の同一性が、ブロモチモールブルーガラクトース寒天培地および／またはＫｌｉｇｌｅｒ鉄寒天培地で、ステップ（ｃ）において選択された少なくとも１つの形質転換細胞クローンを培養することによって、および／またはサルモネラＯ５および／またはＯ９表面抗原の存在下で評価することによって検証される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法によって入手可能なＤＮＡワクチンであって、
前記少なくとも１つの抗原が腫瘍抗原であり、該腫瘍抗原が新生抗原であるＤＮＡワクチン。
【請求項１３】
癌免疫療法における使用のための、請求項１２に記載のＤＮＡワクチン。
【請求項１４】
前記癌免疫療法が個別化癌免疫療法を含む、請求項１３に記載の使用のためのＤＮＡワクチン。
【請求項１５】
患者の少なくとも１つの腫瘍抗原および／または少なくとも１つの腫瘍間質抗原の発現、あるいは／もしくは、少なくとも１つの腫瘍抗原および／または少なくとも１つの腫瘍間質抗原に対する既存のＴ細胞性免疫応答が評価されている、請求項１４に記載の使用のためのＤＮＡワクチン。