(57)【要約】  白金、金、又はそれらの混合物などの貴金属ナノ粒子及びペクチンやキトサンなどの天然物由来多糖類を含み、貴金属触媒として高い反応効率を保持し、細胞内取り込み性に優れ、かつ不快臭などの問題のない貴金属ナノコロイド溶液、及び該貴金属ナノコロイド溶液を含むスーパーオキサイドアニオン消去剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
貴金属ナノ粒子及び天然物由来多糖類を含む貴金属ナノコロイド溶液を含むスーパーオキサイドアニオン消去剤。
【請求項２】
天然物由来多糖類がキトサン、ペクチン、又はそれらの混合物である請求項１に記載のスーパーオキサイドアニオン消去剤。
【請求項３】
上記貴金属として白金及び金からなる２種の貴金属を含む請求項１又は２に記載のスーパーオキサイドアニオン消去剤。
【請求項４】
白金及び金の割合が約１：１であり、キトサンの含有率が貴金属ナノコロイド溶液の全重量に対して約0.01重量％である請求項３に記載のスーパーオキサイドアニオン消去剤。
【請求項５】
白金及び金の割合が約１：１であり、ペクチンの含有率が貴金属ナノコロイド溶液の全重量に対して約0.01〜0.025重量％である請求項３に記載のスーパーオキサイドアニオン消去剤。
【請求項６】
貴金属ナノ粒子の90%以上の粒径が0.1 nmから10 nmの範囲に分布する請求項１ないし５のいずれか１項に記載のスーパーオキサイドアニオン消去剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は白金などの貴金属のナノ粒子を含み、高いスーパーオキサイドアニオン消去能を有する貴金属ナノコロイド溶液に関する。
【背景技術】
【０００２】
白金ナノ粒子とポリアクリル酸塩とを含有し、スーパーオキサイドアニオンを半減する濃度が200μモル／リットル以下である白金ナノコロイド溶液が知られている（国際公開WO2005/023467）。この発明の好ましい形態では、保護材としてポリアクリル酸塩（ナトリウムまたはカリウム塩）を用いており、Ｒ値（モノマー単位あたりに換算したポリアクリル酸塩のモル数と白金のモル数との比率）が80から180の間となるように白金ナノコロイド溶液を調製する。この白金ナノコロイド溶液中に含まれる白金ナノ粒子の90％以上の粒径は0.1から10 nmの間に分布している。また、貴金属を含む２元ナノコロイド溶液としては、特開平9-225317号公報などに、ニッケルと貴金属とを含む触媒、とくに水素化触媒としての使用などが開示されている。特開平9-225317号公報に記載された発明の好ましい態様では、保護材として環状アミド構造をもつビニル系ポリマー、とくにポリビニルピロリドン、とりわけポリＮ−ビニル−２−ピロリドンがもっとも活性の高い触媒となるので好ましいとされており、Ｒ値（モノマー対全金属のモル比）で0.1〜100、好ましくは1〜20であるとされている。【０００３】
しかしながら、従来提案されている上記の貴金属ナノコロイド溶液はいずれもＲ値が大きく、貴金属の触媒としての反応効率が低下し、細胞内への貴金属粒子の取り込みが少ないという欠点を有している。例えば、本発明者らの研究により、これらの貴金属ナノコロイド溶液は、短時間（1分以内）のスーパーオキサイドアニオン消去能や細胞膜に対する接近能力、又はターゲット性においてビタミンＣと比較して劣る場合があることが判明している。また、上記国際公開WO2005/023467や特開平9-225317号公報などに開示された貴金属ナノコロイド溶液で用いられるポリアクリル酸塩やポリビニルピロリドンなどの保護材は特異な不快臭を有するという問題もある。上記の理由から、貴金属触媒として高い反応効率を保持しており、細胞内取り込み性に優れ、かつ不快臭などの問題を回避した貴金属ナノコロイド溶液の提供が望まれている。【０００４】
金ナノコロイド溶液の調製にあたりキトサンを用いる報告があり(K. Esumi, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 32, pp.117-123, 2003)、得られた金ナノコロイド溶液がヒドロキシラジカルを消去することが示されているが、スーパーオキサイドアニオン消去剤として高い活性を有することは示唆ないし教示されていない。また、金と白金の２元ナノコロイド化に関しては、可視光線による水中からの水素発生（A.Harriman, J. chem. Soc., Commun., 24, 1990）が知られており、各種貴金属と白金との組み合わせと水素発生との関係については戸嶋らの報告がある（Toshima, N., Hirakawa,K., Polymer J. 3, pp.1127-1132, 1999)）しかしながら、２元金属ナノコロイドがスーパーオキサイドアニオン消去剤として高い活性を有することはこれらの文献には示唆ないし教示されていない。【０００５】
また、アルギン酸塩、澱粉、グリコーゲン、ゼラチン、ペクチン 、キトサン、キチン質、セルロースおよびその誘導体、アラビアゴム、ローカストビーンゴム、カラヤゴム、トラガカントゴム、ガティゴム、アガーアガー、カラゲーニン、イナゴマメゴム、グアーゴム、及びキサンタンゴムからなる群から選択される親水コロイドを含む親水コロイド包帯であって、ナノ結晶性の白金を配合した包袋が知られている（特表2004-529930号公報）。しかしながら、この発明ににおける「親水コロイド」とは、水およびポリオール(膨潤剤)の存在下で増粘性ゲルを形成することができるポリマー（合成的に調製されたか、あるいは天然に存在するポリマー）を意味しており、膨潤剤は選択した親水コロイドを膨潤させてゲル相を形成する作用を有していることから、ナノコロイドの調製において用いられる保護材のように金属に配位している状態のものではない。
【非特許文献１】Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 32, pp.117-123, 2003
【非特許文献２】J. Chem. Soc., Commun., 24, 1990
【非特許文献３】Polymer J. 3, pp.1127-1132, 1999
【特許文献１】国際公開WO2005/023467
【特許文献２】特開平9-225317号公報
【特許文献３】特表2004-529930号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、新規な貴金属ナノコロイド溶液を提供することにある。より具体的には、貴金属触媒として高い反応効率を保持しており、細胞内取り込み性に優れ、かつ不快臭などの問題のない貴金属ナノコロイド溶液を提供することが本発明の課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究を行なった結果、キトサン又はペクチンなどの天然物由来多糖類を保護材として用いて貴金属ナノコロイド溶液を調製すると、得られた貴金属ナノコロイド溶液が貴金属触媒として高い反応効率を保持しており、かつ細胞内取り込み性に優れていることを見出した。そして、この貴金属ナノコロイド溶液を極めて高い活性を有するスーパーオキサイドアニオン消去剤として使用できることを見出した。本発明は上記の知見を基にして完成された。【０００８】
すなわち、本発明により、貴金属ナノ粒子及び天然物由来多糖類を含む貴金属ナノコロイド溶液を含むスーパーオキサイドアニオン消去剤が提供される。
この発明の好ましい態様によれば、Ｒ値が3〜4の範囲である上記のスーパーオキサイドアニオン消去剤、貴金属として白金及び金からなる２種の貴金属を含む上記のスーパーオキサイドアニオン消去剤、天然物由来多糖類がキトサン、ペクチン、又はそれらの混合物である上記のスーパーオキサイドアニオン消去剤が提供される。
別の観点からは、ヒトを含む哺乳類の生体内でスーパーオキサイドアニオンを消去する方法であって、貴金属ナノ粒子及び天然物由来多糖類を含む貴金属ナノコロイド溶液をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法が本発明により提供される。
さらに、本発明により、貴金属ナノ粒子及び天然物由来多糖類を含む貴金属ナノコロイド溶液を含む飲料又は食品が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】キトサン/白金・金ナノコロイド溶液において金の含有率を変化させた場合のスーパーオキシドアニオン残存率を示した図である。
【図２】ペクチン/白金・金ナノコロイド溶液において金の含有率を変化させた場合のスーパーオキシドアニオン残存率を示した図である。
【図３】キトサン/白金・金ナノコロイド溶液 (白金:金＝1:1)においてキトサン濃度を変化させた場合のスーパーオキシドアニオン残存率を示した図である。
【図４】ペクチン/白金・金ナノコロイド溶液 (白金:金＝1:1)においてペクチン濃度を変化させた場合のスーパーオキシドアニオン残存率を示した図である。
【図５】ビオチン化キトサン/白金・金ナノコロイド溶液 (白金:金＝1:1)についてスーパーオキシドアニオン残存率を測定した結果を示した図である。
【図６】本発明の白金ナノコロイド溶液（CP-PT）とポリアクリル酸を用いた白金ナノコロイド(PAA-Pt)のpH安定性を測定した結果を示した図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤に含まれる貴金属ナノコロイド溶液は、貴金属ナノ粒子及び天然物由来多糖類を含むことを特徴としている。
貴金属の種類は特に限定されず、金、ルテニウム、ロジウム、パラジウム、オスミウム、イリジム、又は白金のいずれを用いてもよいが、好ましい貴金属は金、ルテニウム、ロジウム、パラジウム、又は白金である。これらのうち、金又は白金が好ましい。また、金と白金の２つを組み合わせて用いることも好ましい。２種以上の貴金属を含む貴金属ナノコロイド溶液を調製する場合には、２種以上の貴金属微粒子を含む混合物又は２種以上の貴金属の合金などを用いることができる。本発明の貴金属ナノコロイド溶液中には、貴金属以外の１種又は２種以上の金属のナノ粒子が存在していてもよい。【００１１】
天然物由来多糖類としては、例えば、分子内に遊離のカルボキシル基やアミノ基などを有する天然物由来の多糖などが好ましい。例えば、アルギン酸、ヒアルロン酸、キチン・キトサン、ペクチン（ペクチン酸及びペクチニン酸）、マンヌロン酸、N-アセチルグルコサミン、D-ガラクトピラノシルウロン酸、グルクロン酸、グルコサミン、N-アセチルグルコサミン、メトキシ化したD-ガラクトピラノシルウロン酸、ラムノガラクツロナン、シクロデキストリン、アミロペクチン、メチルセルロースなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。これらのうち、アルギン酸、キチン・キトサン、ヒアルロン酸、ペクチン（高メトキシルペクチン及び低メトキシルペクチンのいずれをも含む）などが好ましく、最も好適には低メトキシルペクチンなどを用いることができるが、これらに限定されることはない。２種類以上の天然物由来多糖類を組み合わせて用いてもよい。【００１２】
本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤において、天然物由来多糖類は貴金属ナノコロイドの保護材として作用する。天然物由来多糖類は、適宜の化学修飾を施されていてもよい。例えば、必要に応じて適宜のスペーサーなどを介して他の生理活性物質と結合できるように化学修飾されたものであってもよい。例えば、キトサンではビオチンなどを結合した天然物由来多糖類を用いることができ、貴金属ナノコロイド溶液を調製した後に種々の生理活性物質などをアビジンに結合させ、生理活性物質を含む貴金属ナノコロイド溶液を調製することができる。ペクチンについては可溶化できる限り配合範囲に制限はなく、二価金属イオンの多い硬水中でも長期に安定を保つという特徴があり、特に食品への応用に有利である。また、従来用いられていたポリアクリル酸ナトリウムに比べてpHの影響を受けることなく、貴金属ナノコロイドの活性が安定しているなどの特徴もある。【００１３】
貴金属ナノコロイド溶液に含まれる貴金属ナノ粒子の粒径は特に限定されないが、50 nm以下の平均粒径を有するナノ粒子を用いることができ、好ましくは平均粒径が20 nm以下、さらに好ましくは平均粒径が10 nm以下、特に好ましくは平均粒径が1〜6 nm程度のナノ粒子を用いることができる。さらに細かなナノ粒子を用いることも可能である。貴金属ナノ粒子の90%以上の粒径が0.1 nmから10 nmの範囲に分布することが好ましい。【００１４】
遷移金属微粒子、好ましくは貴金属微粒子の製造方法は種々知られており（例えば、特公昭57-43125号公報、特公昭59-120249号公報、及び特開平9-225317号公報、特開平10-176207号公報、特開2001-79382号公報、特開2001-122723号公報など）、当業者はこれらの方法を参照することによって本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤に含まれる貴金属ナノコロイド溶液を容易に調製することができる。例えば、貴金属ナノ粒子の製造方法として、沈殿法又は金属塩還元反応法と呼ばれる化学的方法、あるいは燃焼法と呼ばれる物理的方法などを利用できる。本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤に含まれる貴金属ナノコロイド溶液は、いずれの方法で調製されたナノ粒子を含んでいてもよいが、製造の容易性と品質面から金属塩還元反応法で調製されたナノ粒子を用いることが好ましい。【００１５】
金属塩還元反応法では、例えば、水溶性若しくは有機溶媒可溶性の貴金属塩又は貴金属錯体の水溶液又は有機溶媒溶液を調製し、この溶液に天然物由来多糖類を加えた後、溶液のpHを9〜11に調節し、不活性雰囲気下で加熱還流することにより還元して貴金属ナノ微粒子を含む貴金属ナノコロイド溶液を得ることができる。貴金属の水溶性又は有機溶媒可溶性の塩の種類は特に限定されないが、例えば、酢酸塩、塩化物、硫酸塩、硝酸塩、スルホン酸塩、又はリン酸塩などを用いることができ、これらの錯体を用いてもよい。天然物由来多糖類の使用量は特に限定されないが、通常は溶液の全重量に対して0.005〜0.1重量％程度であり、好ましくは0.01〜0.025重量％程度である。上記の反応に際して、各種の界面活性剤、例えばアニオン性、ノニオン性、又は脂溶性等の界面活性剤を使用することも可能である。還元をアルコールを用いて行う際には、エチルアルコール、n-プロピルアルコール、n-ブチルアルコール、n-アミルアルコール、又はエチレングリコールなどが用いられる。もっとも、貴金属ナノ粒子の調製方法は上記に説明した方法に限定されることはない。【００１６】
典型的には、貴金属塩の水溶液にアルコール、ヒドラジン、テトラヒドロホウ酸ナトリウム、又はクエン酸等の還元剤を添加して溶媒沸点近傍に加温し、溶媒還流、紫外線照射、及び超音波照射などを組み合わせて貴金属の還元反応を行なった後に溶媒を除いて乾固し、得られた貴金属ナノ粒子を所望の溶媒に懸濁することにより貴金属ナノコロイド溶液を調製するｋとができる。本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤に含まれる貴金属ナノコロイド溶液は、分散媒が実質的に水のみからなることが好ましいが、エタノールやグリセリンなどの水と混じりあう有機溶媒を少量含んでいてもよい。【００１７】
本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤としては、上記の方法により調製された貴金属ナノコロイド溶液をそのまま用いてもよい。本明細書において用いられる「貴金属ナノコロイド溶液」の用語には、貴金属ナノ粒子が会合してクラスターを形成した水性分散液も包含される。また、「ナノ」の用語は、貴金属微粒子の平均粒径が一般的にナノメーターのオーダーで測定可能であることを意味しているが、いかなる意味においても限定的に解釈してはならない。例えば、平均粒径が0.01 nm程度の微粒子も本明細書で用いられるナノ粒子の範囲に包含される。【００１８】
いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、キトサン又はペクチンなどの天然物由来多糖類を保護材として用いることにより、本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤に含まれる貴金属ナノコロイド溶液はＲ値が80未満、好ましくは40未満、より好ましくは5未満、特に好ましくは3から4の範囲内であり、従来の貴金属ナノコロイド溶液に比べ遙かに小さい（Ｒ値については技術情報協会「金属ナノ粒子の合成・調製、コントロール技術と応用展開（2004年12月22日発刊）」を参照のこと）。本発明においてはＲ値はモノマー単位あたりに換算した天然物由来多糖類のモル数と白金のモル数との比率を意味する）。この性質により、本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤では貴金属ナノ粒子の反応性が極めて高く、また細胞接近性が非常に高いという特徴がある。また、１分以内の初期反応が向上し、効率的に貴金属ナノコロイド溶液を調製することができるという特徴もある【００１９】
本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤は医薬としてヒトを含む哺乳類動物に投与し、生体内においてスーパーオキサイドアニオンの消去作用を発揮できる。また、本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤は、スーパーオキサイドアニオンの消去作用を有する飲料、特に飲料水として使用することができる。また、本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤を食品に添加したり、加工食品の製造に用いたりして、本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤を含む食品を調製して健康食品として用いることもできる。さらに、本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤は化粧料に配合することにより美肌又は美白効果などを発揮させることができ、あるいは医療用具又は歯科材料の調製や、細胞培養用の培地の調製などに用いることも可能である。
【実施例】
【００２０】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
例１
100 mLのナスフラスコにキトサン 2 mg (焼津水産化学工業製、COS-Y、12.4μmol)と精製水 19.7 mL (milli-Q)を加えて室温で10分間攪拌した後、テトラクロロ金酸４水和物水溶液 0.2 mL (和光純薬工業製、1.66×10-2M, 3.32μmol)を加えた。室温で60分攪拌した後、冷却したNaBH4水溶液 0.1 mL (和光純薬工業製、0.4 M)を加えてさらに30分攪拌を続け、その後に一晩静置して紅色透明溶液（キトサン/金ナノコロイド溶液、166μM）を得た。このキトサン/金ナノコロイド溶液のＲ値を技術情報協会「金属ナノ粒子の合成・調製、コントロール技術と応用展開」に記載された方法に準じて測定したところ3.7であった。【００２１】
例２
テトラクロロ金酸４水和物水溶液 0.2 mLをテトラクロロ白金酸６水和物水溶液 0.2 mL (和光純薬工業製、1.66×10-2M, 3.32μmol)に変更した以外は例１と同様にしてキトサン/白金ナノコロイド溶液を得た。
例３
例１において、テトラクロロ金酸４水和物水溶液 0.2 mLに替えて、テトラクロロ金酸４水和物水溶液 0.1 mL(和光純薬工業製、1.66×10-2M, 3.32μmol)及びテトラクロロ白金酸６水和物水溶液 0.1 mL (和光純薬工業製、1.66×10-2M, 3.32μmol)の混合物を用いた以外は、例１と同様にしてキトサン/白金・金ナノコロイド溶液を得た。同様にして、テトラクロロ金酸４水和物水溶液及びテトラクロロ白金酸６水和物水溶液の比率が異なる混合物を用いて、金の含有率が異なるキトサン/白金・金ナノコロイド溶液を調製した。【００２２】
例４
100 mLのナスフラスコにペクチン 2 mg (ユニテックフーズ、12.4μmol)と精製水 19.7 mL (milli-Q)を加えて室温で10分間攪拌した後、テトラクロロ金酸４水和物水溶液 0.2 mL (和光純薬工業製、1.66×10-2M, 3.32μmol)を加えた。室温で60分攪拌した後、冷却したNaBH4水溶液 0.1 mL (和光純薬工業製、0.4 M)を加えてさらに30分攪拌を続け、その後に一晩静置して紅色透明溶液（ペクチン/金ナノコロイド溶液、166μM）を得た。このペクチン/金ナノコロイド溶液のＲ値を例１に記載された方法に準じて測定したところ3.7であった。【００２３】
例５
テトラクロロ金酸４水和物水溶液 0.2 mLをテトラクロロ白金酸６水和物水溶液 0.2 mL (和光純薬工業製、1.66×10-2M, 3.32μmol)に変更した以外は例４と同様にしてペクチン/白金ナノコロイド溶液を得た。
例６
例４において、テトラクロロ金酸４水和物水溶液 0.2 mLに替えて、テトラクロロ金酸４水和物水溶液 0.1 mL(和光純薬工業製、1.66×10-2M, 3.32μmol)及びテトラクロロ白金酸６水和物水溶液 0.1 mL (和光純薬工業製、1.66×10-2M, 3.32μmol)の混合物を用いた以外は、例１と同様にしてキトサン/白金・金ナノコロイド溶液を得た。同様にして、テトラクロロ金酸４水和物水溶液及びテトラクロロ白金酸６水和物水溶液の比率が異なる混合物を用いて、金の含有率が異なるペクチン/白金・金ナノコロイド溶液を調製した。【００２４】
例７
例１〜６で調製した貴金属ナノコロイド溶液のスーパーオキシドアニオン消去作用を検討した。スーパーオキシドアニオン消去作用の評価にはヒポキサンチン(HXN)/キサンチンオキシダーゼ(XOD)系を用いた。
(1) 200 mM リン酸バッファー (pH7.5)中に5.5 mM ヒポキサンチンを含む溶液 50μL
(2) DMPO（5,5-ジメチル-1-ピロリン-N-オキシド) 15μL
(3) 精製水中に100μLの試料を含む溶液（コントロールの場合は精製水のみ）
(4) 200 mM リン酸バッファー (pH7.5)中に0.2 U/mL XODを含む溶液 50μL(失活を防ぐために氷上で保管したもの)
以上の(1)〜(4)を混合して45秒後に測定を行なった。測定条件は以下のとおりである。
測定機器：ＪＥＳ−ＦＡ１００
周波数：9420 MHz（値は一定せず微動する）
FIELD CENTER： 335.6 mT, Width = +/- 5.000 mT
POWER： 4.000000 mW, SWEEP TIME = 1.0 min
分子量マーカー: 700【００２５】
白金と金を含むナノコロイド溶液において金の含有率を変化させた場合のスーパーオキシドアニオン残存率を図１（キトサン/白金・金ナノコロイド溶液）及び図２（ペクチン/白金・金ナノコロイド溶液）に示す。いずれのナノコロイド溶液についても、金の含有率が25〜50％程度の比率において高いスーパーオキシドアニオン消去能が認められた。
図３及び図４には、それぞれキトサン及びペクチンの量を変化させた場合の結果を示す。キトサンについては0.01重量％、ペクチンについては0.01〜0.025重量％程度で最大の活性が得られた。【００２６】
例８
ビオチン化試薬（ビオチニレーション・キット(Sulfo-OSu)、同仁化学研究所製）を用いてキットのマニュアルに従ってキトサンのビオチン化及びビオチン化率の測定を行なった。得られたキトサンのビオチン化率は0.02から0.1(mol/mol)であった。このビオチン化キトサンを用いて例３と同様にして白金・金ナノコロイド溶液を調製した。得られたビオチン化キトサン/白金・金ナノコロイド溶液についてスーパーオキシドアニオン残存率を測定した結果を図５に示す。ビオチン化したキトサンを用いた場合にもスーパーオキシドアニオン消去能は維持されていた。【００２７】
例９（比較例）
アリーン冷却管と三方コックを接続した100 ml二口ナス底フラスコに、蒸留水22.6 mlを入れ、塩化白金酸結晶（H2PtCl6・6H2O：和光純薬工業株式会社製試薬）を蒸留水に溶解し、濃度を16.6 mMに調製した塩化白金酸水溶液を2 ml加え、スターラーチップで撹拌し、還流が起こるまで加熱した。還流が起こった後、クエン酸３ナトリウム結晶（和光純薬工業製試薬）を蒸留水に溶解し、濃度を38.8 mMに調製したクエン酸水溶液を8.6 ml加え、30分間還流した。反応液のUV-Visスペクトルを測定して、白金イオンピークが消失し、金属固体特有の散乱による吸収の飽和を確認し、還元反応が完了したことを確認し、冷却してサンプル溶液を得た。【００２８】
例１０：
アリーン冷却管と三方コックを接続した100 ml二口ナス底フラスコに、蒸留水22.6 mlを入れ、塩化白金酸結晶（H2PtCl6・6H2O：和光純薬工業株式会社製試薬）を蒸留水に溶解し、濃度を16.6 mMに調製した塩化白金酸水溶液を2 ml加え、スターラーチップで撹拌し、還流が起こるまで加熱した。還流が起こった後、クエン酸３ナトリウム結晶（和光純薬工業製試薬）を蒸留水に溶解し、濃度を38.8 mMに調製したクエン酸水溶液を8.6 ml加え、30分間還流した。反応液のUV-Visスペクトルを測定して、白金イオンピークが消失し、金属固体特有の散乱による吸収の飽和を確認し、還元反応が完了したことを確認した。室温まで冷却した後、ペクチン（UNIPECTINE AYD30、ユニテックフーズ株式会社製試薬）を蒸留水に１時間以上かけて溶解し、濃度を1.98 g/Lに調整したペクチン溶液を10 ml加え、１時間撹拌した。その後、溶媒をエバポレーターで除いた後、蒸留水33.2 mlで再分散してサンプル溶液を得た。【００２９】
例１１
アリーン冷却管と三方コックを接続した100 ml二口ナス底フラスコに、蒸留水43.8 ml入れ、塩化白金酸結晶（H2PtCl6・6H2O：和光純薬工業株式会社製試薬）を蒸留水に溶解し、濃度を16.6 mMに調製した塩化白金酸水溶液を4 ml加え、スターラーチップで撹拌し、還流が起こるまで加熱した。還流が起こった後、クエン酸３ナトリウム結晶（和光純薬工業製試薬）を蒸留水に溶解し、濃度を77.2 mMに調製したクエン酸水溶液を8.6 ml加え、30分間還流した。反応液のUV-Visスペクトルを測定して、白金イオンピークが消失し、金属固体特有の散乱による吸収の飽和を確認し、還元反応が完了したことを確認した。室温まで冷却した後、ペクチン（UNIPECTINE AYD30、ユニテックフーズ株式会社製試薬）を蒸留水に１時間以上かけて溶解し、濃度を3.96g/Lに調整したペクチン溶液を10 ml加え、１時間撹拌してサンプル溶液を得た。【００３０】
例１２
例９（ペクチンなし、比較例）及び例１０のサンプル溶液について硬水中での安定性の違いを検討した。硬水として市販のエビアン（500 ml中、ナトリウム2.5 mg(0.22 mM)、カルシウム39 mg(1.95 mM)、及びマグネシウム12 mg(1 mM)を含む硬度291度の中硬水、pH7.2）を用いた。例９のサンプルを硬水で10倍希釈して１日後に観察したところ沈殿が生じていた。一方、例１０の試料を５倍希釈して１日後に観察したところ均一分散していた。【００３１】
例１３
例１０のサンプル(CP-PT)及びポリアクリル酸を用いた白金ナノコロイド(PAA-Pt)を用いてpH安定性を検討した。分光光度計（アマシャム製 Ultrospec 6300 pro）を用い、過酸化水素の分光吸収(210 nm)で400μMの過酸化水素の消去率を測定し、残存する吸光度から白金ナノコロイドの活性を計算した。結果を図６に示す。この結果から、従来のナノコロイドに比べて例１０の白金ナノコロイドではpH変動による活性への影響が顕著に少ないことが分かる。
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤に含まれる貴金属ナノコロイド溶液は貴金属触媒として高い反応効率を保持しており、かつ貴金属ナノ粒子の細胞内取り込み性に優れている。従って、本発明のスーパーオキサイドアニオン消去剤は、極めて高い活性を有する消去剤として有用である。また、本発明の消去剤は不快臭がなく、医薬の有効成分のほか、飲料又は食品に添加するに際して極めて望ましい性質を有している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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