【手続補正書】
【提出日】令和2年5月12日(2020.5.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された混合細胞集団から濃縮γδＴ細胞集団を製造する生体外方法であって、δ１ＴＣＲまたはδ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞またはδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤に、前記混合細胞集団を直接接触させて、臨床上妥当なレベルの濃縮γδＴ細胞集団をもたらすことを含む、方法。
【請求項２】
i）δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤が、δ１可変領域を含むエピトープに特異的に結合する薬剤から選択される；
ii）薬剤が、図２４中のコンセンサス配列のアミノ酸配列を含むδ１ＴＣＲ可変領域に結合するものであり、任意選択的に薬剤が、デルタＪ１及びデルタＪ２のＫ１２０に突然変異を含む突然変異体δ１ＴＣＲポリペプチドに対する低減された結合性を有する；
ｉｉｉ）薬剤が、δ１可変領域の残基Ａｒｇ７１、Ａｓｐ７２及びＬｙｓ１２０を含むエピトープに結合するものである；
ｉｖ）δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤が、δ１−０５、δ１−０８、δ１−１８、δ１−２２、δ１−２３、δ１−２６、δ１−３５、δ１−３７、δ１−３９、δ１−１１３、δ１−１４３、δ１−１４９、δ１−１５５、δ１−１８２、δ１−１８３、δ１−１９１、δ１−１９２、δ１−１９５、δ１−１９７、δ１−１９９、δ１−２０１、δ１−２０３、δ１−２３９、δ１−２５３、δ１−２５７、δ１−２７８、δ１−２８２、δ１−２８５からなる群から選択されかつ場合によってはＴＳ８．２、ＴＳ−１及びＲ９．１２からなる群からも選択される抗体と同じもしくは本質的に同じエピトープに結合するか、または前記抗体と競合する薬剤から選択される；
ｖ）δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤が、δ２可変領域を含むエピトープに特異的に結合する薬剤から選択され、場合によっては薬剤が、δ２可変領域のＧ３５に突然変異を含む突然変異体δ２ＴＣＲポリペプチドに対する低減された結合性を有する；
vi）δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤が、δ２−１４、δ２−１７、δ２−２２、δ２−３０、δ２−３１、δ２−３２、δ２−３３、δ２−３５、δ２−３６、及びδ２−３７からなる群から選択されかつ場合によってはさらに１５Ｄ及びＢ６から選択される抗体と同じもしくは本質的に同じエピトープに結合するか、または前記抗体と競合する薬剤から選択される；
vii）１つ以上の薬剤が、δ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞を、δ１ＴＣＲ、δ３ＴＣＲ、δ４ＴＣＲ及びδ５ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することにより選択的に増殖させ、場合によっては１つ以上の薬剤が、δ１−３９からなる群から選択される抗体と同じエピトープに結合する薬剤から選択される；または
viii）１つ以上の薬剤が、δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞を、δ１ＴＣＲ及びδ４ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することにより選択的に増殖させ、場合によっては１つ以上の薬剤が、δ１−１８及びδ１−３５からなる群から選択される抗体と同じエピトープに結合する薬剤から選択される、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
i）濃縮γδＴ細胞集団が、抗原提示細胞またはアミノホスフェートによって増殖させられていない；
ii）δ１Ｔ細胞またはδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤が、抗体である；
iii）δ１Ｔ細胞またはδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤が、表面に固定されている；
ｉｖ）前記単離された混合細胞集団が、末梢血試料、臍帯血試料または腫瘍から選択される；
ｖ）前記濃縮γδＴ細胞集団が多クローン性のＴＣＲ多様性を含む；
ｖｉ）濃縮γδＴ細胞集団がさらに、対象への投与のために製剤化される；
ｖｉｉ）前記濃縮γδＴ細胞集団が治療的有効量のγδＴ細胞を含む：かつ／又は
ｖｉｉｉ）前記γδＴ細胞集団がさらに、１つ以上の腫瘍認識部分を安定的に発現するように操作されている、
請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ｉ）第１γδＴ細胞増殖において、
−  δ１ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞を選択的に増殖させるか；
−  δ１ＴＣＲ、δ３ＴＣＲ、δ４ＴＣＲ及びδ５ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させるか；
−  δ１ＴＣＲ及びδ４ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞を選択的に増殖させるか；または
−  δ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる、１つ以上の活性化剤
に前記混合細胞集団を直接接触させ、それによって第１濃縮γδＴ細胞集団を製造すること、ならびにその後、
ｉｉ）第２γδＴ細胞増殖において、前記第１濃縮γδＴ細胞集団の少なくとも一部を抗原提示細胞（ＡＰＣ）に直接接触させ、それによって第２濃縮γδＴ細胞集団を製造すること
を含み、
第２濃縮γδＴ細胞集団が臨床上妥当な数のγδＴ細胞を含み、かつ
場合によっては第２γδＴ細胞増殖が、
−  δ１ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞を選択的に増殖させるか；
−  δ１ＴＣＲ、δ３ＴＣＲ、δ４ＴＣＲ及びδ５ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させるか；
−  δ１ＴＣＲ及びδ４ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞を選択的に増殖させるか；または
−  δ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる、１つ以上の第２活性化剤
に前記第１濃縮γδＴ細胞集団の少なくとも一部を直接接触させることをさらに含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
（a）前記第２活性化剤のうちの１つ以上が、前記第１γδＴ細胞増殖の前記活性化剤のうちの１つ以上とは構造的に異なっている；又は（ｂ）前記第２活性化剤が、前記第１γδＴ細胞増殖の前記第１活性化剤とは構造的に異なっている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
（a）
ｉ）の前記１つ以上の活性化剤が、
δ１Ｔ細胞、
δ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞；または
δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞
を選択的に増殖させる薬剤であり、かつ
δ１−０５、δ１−０８、δ１−１８、δ１−２２、δ１−２３、δ１−２６、δ１−３５、δ１−３７、δ１−３９、δ１−１１３、δ１−１４３、δ１−１４９、δ１−１５５、δ１−１８２、δ１−１８３、δ１−１９１、δ１−１９２、δ１−１９５、δ１−１９７、δ１−１９９、δ１−２０１、δ１−２０３、δ１−２３９、δ１−２５３、δ１−２５７、δ１−２７８、δ１−２８２、δ１−２８５からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＴＳ−１、Ｒ９．１２及びＴＳ８．２から選択される抗体と同じエピトープに結合する、薬剤
から選択されるものであり、
場合によっては、前記第２γδＴ細胞増殖が、
−  δ１ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞を選択的に増殖させるか；
−  δ１ＴＣＲ、δ３ＴＣＲ、δ４ＴＣＲ及びδ５ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させるか；または
−  δ１ＴＣＲ及びδ４ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞を選択的に増殖させる、１つ以上の第２活性化剤
に前記第１濃縮γδＴ細胞集団の少なくとも一部を直接接触させることをさらに含み、
前記第２活性化剤が、
δ１−０５、δ１−０８、δ１−１８、δ１−２２、δ１−２３、δ１−２６、δ１−３５、δ１−３７、δ１−３９、δ１−１１３、δ１−１４３、δ１−１４９、δ１−１５５、δ１−１８２、δ１−１８３、δ１−１９１、δ１−１９２、δ１−１９５、δ１−１９７、δ１−１９９、δ１−２０１、δ１−２０３、δ１−２３９、δ１−２５３、δ１−２５７、δ１−２７８、δ１−２８２、δ１−２８５からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＴＳ−１、Ｒ９．１２及びＴＳ８．２から選択される抗体
と同じエピトープに結合するものである；または
（ｂ）
ｉ）の前記１つ以上の活性化剤が、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤であり、かつ
δ２−１４、δ２−１７、δ２−２２、δ２−３０、δ２−３１、δ２−３２、δ２−３３、δ２−３５、δ２−３６、及びδ２−３７からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＢ６及び１５Ｄから選択される抗体と同じエピトープに結合する、薬剤
から選択されるものであり、かつ
場合によっては、前記第２γδＴ細胞増殖が、
δ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の第２活性化剤
に前記第１濃縮γδＴ細胞集団の少なくとも一部を直接接触させることをさらに含み、
前記第２活性化剤が、
δ２−１４、δ２−１７、δ２−２２、δ２−３０、δ２−３１、δ２−３２、δ２−３３、δ２−３５、δ２−３６、及びδ２−３７からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＢ６及び１５Ｄから選択される抗体
と同じエピトープに結合するものである
請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
ｉ）第１γδＴ細胞増殖において、
δ１ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞を選択的に増殖させるかまたはδ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる、１つ以上の第１薬剤
に前記混合細胞集団を直接接触させ、それによって第１濃縮γδＴ細胞集団を製造すること、ならびにその後、
ｉｉ）第２γδＴ細胞増殖において、
（ａ）γδＴ細胞を増殖させるかまたは、
（ｂ）−  δ１ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞を選択的に増殖させるか、
−  δ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させるか、
−  δ１、δ３、δ４及びδ５ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させるか、もしくは
−  δ１及びδ４ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞を選択的に増殖させる、１つ以上の第２薬剤
に前記第１濃縮γδＴ細胞集団の少なくとも一部を直接接触させ、それによって第２濃縮γδＴ細胞集団を製造すること
を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項８】
（ａ）前記第２活性化剤のうちの１つ以上が、前記第１γδＴ細胞増殖の前記活性化剤のうちの１つ以上とは構造的に異なっている；または（ｂ）前記第２活性化剤が、前記第１γδＴ細胞増殖の前記第１活性化剤とは構造的に異なっている、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ｉ）前記１つ以上の第１薬剤が、
δ１Ｔ細胞；
δ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞；または
δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞
を選択的に増殖させる薬剤であり、かつ
δ１−０５、δ１−０８、δ１−１８、δ１−２２、δ１−２３、δ１−２６、δ１−３５、δ１−３７、δ１−３９、δ１−１１３、δ１−１４３、δ１−１４９、δ１−１５５、δ１−１８２、δ１−１８３、δ１−１９１、δ１−１９２、δ１−１９５、δ１−１９７、δ１−１９９、δ１−２０１、δ１−２０３、δ１−２３９、δ１−２５３、δ１−２５７、δ１−２７８、δ１−２８２、δ１−２８５からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＴＳ−１、Ｒ９．１２及びＴＳ８．２から選択される抗体と同じエピトープに結合する、薬剤
から選択されるものであり、
場合によっては、前記１つ以上の第２薬剤が、
δ１Ｔ細胞；
δ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞；または
δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞
を選択的に増殖させる薬剤であり、かつ
δ１−０５、δ１−０８、δ１−１８、δ１−２２、δ１−２３、δ１−２６、δ１−３５、δ１−３７、δ１−３９、δ１−１１３、δ１−１４３、δ１−１４９、δ１−１５５、δ１−１８２、δ１−１８３、δ１−１９１、δ１−１９２、δ１−１９５、δ１−１９７、δ１−１９９、δ１−２０１、δ１−２０３、δ１−２３９、δ１−２５３、δ１−２５７、δ１−２７８、δ１−２８２、δ１−２８５からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＴＳ−１、Ｒ９．１２及びＴＳ８．２から選択される抗体と同じエピトープに結合する、薬剤
から選択されるものである；または
ｉｉ）前記１つ以上の第１薬剤が、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤であり、かつ
δ２−１４、δ２−１７、δ２−２２、δ２−３０、δ２−３１、δ２−３２、δ２−３３、δ２−３５、δ２−３６、及びδ２−３７からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＢ６及び１５Ｄから選択される抗体と同じエピトープに結合する、薬剤
から選択されるものであり、
場合によっては前記１つ以上の第２薬剤が、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤であり、かつ
δ２−１４、δ２−１７、δ２−２２、δ２−３０、δ２−３１、δ２−３２、δ２−３３、δ２−３５、δ２−３６、及びδ２−３７からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＢ６及び１５Ｄから選択される抗体と同じエピトープに結合する、薬剤
から選択されるものである
請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記濃縮γδＴ細胞集団中のδ１Ｔ細胞の百分率がδ１Ｔ細胞の６０％より高い、または前記濃縮γδＴ細胞集団中のδ２Ｔ細胞の百分率がδ２Ｔ細胞の６０％もしくは８０％より高い、請求項１、２、または４〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
δ１Ｔ細胞；
δ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞；または
δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞
を選択的に増殖させる前記薬剤が、
ＴＳ−１もしくはＴＳ８．２抗体と競合しないかまたはＴＳ−１、ＴＳ８．２もしくはＲ９．１２抗体と競合しない薬剤
であり、
場合によっては
δ１Ｔ細胞；
δ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞；または
δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞
を選択的に増殖させる前記薬剤が、
ヒトδ１ＴＣＲのδ１ＴＣＲビン１δ１エピトープ、ビン１ｂδ１エピトープ、ビン２δ１エピトープ、ビン２ｂδ１エピトープ、ビン２ｃδ１エピトープ、ビン３δ１エピトープ、ビン４δ１エピトープ、ビン５δ１エピトープ、ビン６δ１エピトープ、ビン７δ１エピトープ、ビン８δ１エピトープまたはビン９δ１エピトープ
に結合する薬剤である、
請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ｉ）δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、Ｂ６または１５Ｄ抗体と競合しない薬剤であり、場合によってはδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、ヒトδ２ＴＣＲの残基７２〜８３内または残基１〜２７内のδ２ＴＣＲエピトープに結合する薬剤である；または
ｉｉ）δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、
ヒトδ２ＴＣＲのδ２ＴＣＲビン１δ２エピトープ、ビン２δ２エピトープ、ビン３δ２エピトープまたはビン４δ２エピトープ
に結合する薬剤である
請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
無血清培養条件及び／または懸濁細胞培養条件を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
−  第１増殖の開始、
−  ドナー試料を提供するステップ、または
−  前記混合細胞集団を１つ以上の活性化剤に直接接触させる第１ステップ
から９０日未満、６０日未満、３０日未満、２１日未満または１９日未満のうちに、前記単離された混合細胞集団から増殖した少なくとも約１０８個のγδＴ細胞を実現する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
ｉ）δ１−０５、δ１−０８、δ１−１８、δ１−２２、δ１−２３、δ１−２６、δ１−３５、δ１−３７、δ１−３９、δ１−１１３、δ１−１４３、δ１−１４９、δ１−１５５、δ１−１８２、δ１−１８３、δ１−１９１、δ１−１９２、δ１−１９５、δ１−１９７、δ１−１９９、δ１−２０１、δ１−２０３、δ１−２３９、δ１−２５３、δ１−２５７、δ１−２７８、δ１−２８２、δ１−２８５、δ２−１４、δ２−１７、δ２−２２、δ２−３０、δ２−３１、δ２−３２、δ２−３３、δ２−３５、δ２−３６、及びδ２−３７からなる群から選択される抗体と同じもしくは本質的に同じエピトープに結合するか、または前記抗体と競合し、場合によっては前記抗体がＴＳ８．２、ＴＳ−１またはＲ９．１２ではない；または
ii)ヒトδ２ＴＣＲのビン１δ２エピトープ、ビン２δ２エピトープ、ビン３δ２エピトープもしくはビン４δ２エピトープ；または、ヒトδ１ＴＣＲのビン１δ１エピトープ、ビン１ｂδ１エピトープ、ビン２δ１エピトープ、ビン２ｂδ１エピトープ、ビン２ｃδ１エピトープ、ビン３δ１エピトープ、ビン４δ１エピトープ、ビン５δ１エピトープ、ビン６δ１エピトープ、ビン７δ１エピトープ、ビン８δ１エピトープもしくはビン９δ１エピトープ
に結合し、場合によっては、前記抗体がＴＳ８．２、ＴＳ−１またはＲ９．１２ではない；または
iii)δ１−０５、δ１−０８、δ１−１８、δ１−２２、δ１−２３、δ１−２６、δ１−３５、δ１−３７、δ１−３９、δ１−１１３、δ１−１４３、δ１−１４９、δ１−１５５、δ１−１８２、δ１−１８３、δ１−１９１、δ１−１９２、δ１−１９５、δ１−１９７、δ１−１９９、δ１−２０１、δ１−２０３、δ１−２３９、δ１−２５３、δ１−２５７、δ１−２７８、δ１−２８２、δ１−２８５、δ２−１４、δ２−１７、δ２−２２、δ２−３０、δ２−３１、δ２−３２、δ２−３３、δ２−３５、δ２−３６、及びδ２−３７からなる群から選択されるいずれか１つの抗体の相補性決定領域を含む、
抗体。
【請求項１６】
δ１ＴＣＲ；
δ２ＴＣＲ；
δ１及びδ４ＴＣＲ；または
δ１、δ３、δ４及びδ５ＴＣＲ
に特有のエピトープに結合する抗体をコードする核酸であって、異種プロモーターに機能可能に繋げられており、場合によっては：
ｉ）前記核酸が、
δ１−０５、δ１−０８、δ１−１８、δ１−２２、δ１−２３、δ１−２６、δ１−３５、δ１−３７、δ１−３９、δ１−１１３、δ１−１４３、δ１−１４９、δ１−１５５、δ１−１８２、δ１−１８３、δ１−１９１、δ１−１９２、δ１−１９５、δ１−１９７、δ１−１９９、δ１−２０１、δ１−２０３、δ１−２３９、δ１−２５３、δ１−２５７、δ１−２７８、δ１−２８２、δ１−２８５からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＴＳ−１、Ｒ９．１２及びＴＳ８．２から選択される抗体と同じエピトープもしくは本質的に同じエピトープに結合するか、または前記抗体と競合する、抗体
をコードする；
ｉｉ）前記核酸が、
δ２−１４、δ２−１７、δ２−２２、δ２−３０、δ２−３１、δ２−３２、δ２−３３、δ２−３５、δ２−３６、及びδ２−３７からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＢ６及び１５Ｄから選択される抗体と同じエピトープもしくは本質的に同じエピトープに結合するか、または前記抗体と競合する、抗体
をコードする；
ｉｉｉ）前記核酸が、
δ１−０５、δ１−０８、δ１−１８、δ１−２２、δ１−２３、δ１−２６、δ１−３５、δ１−３７、δ１−３９、δ１−１１３、δ１−１４３、δ１−１４９、δ１−１５５、δ１−１８２、δ１−１８３、δ１−１９１、δ１−１９２、δ１−１９５、δ１−１９７、δ１−１９９、δ１−２０１、δ１−２０３、δ１−２３９、δ１−２５３、δ１−２５７、δ１−２７８、δ１−２８２、δ１−２８５からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＴＳ−１、Ｒ９．１２及びＴＳ８．２から選択される抗体のＣＤＲを含む、抗体
をコードするか；または
ｉｖ）前記核酸が、
δ２−１４、δ２−１７、δ２−２２、δ２−３０、δ２−３１、δ２−３２、δ２−３３、δ２−３５、δ２−３６、及びδ２−３７からなる群から選択されかつ場合によってはさらにＢ６及び１５Ｄから選択される抗体のＣＤＲを含む、抗体
をコードする、
核酸。
【請求項１７】
請求項１６に記載の核酸、及び／または
請求項１５に記載の抗体
を含み、
場合によっては前記核酸が、前記抗体と融合した膜アンカーまたは膜貫通ドメインをコードし、前記抗体が前記宿主細胞の細胞外表面において提示される、
宿主細胞。