【手続補正書】
【提出日】令和2年4月20日(2020.4.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(i) ヘニパウイルス属のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質、及び(ii) 造血細胞、間質細胞、肝細胞、筋細胞又は神経系の細胞から選択される標的細胞に結合する少なくとも1つの細胞ターゲティングドメイン、を含む、融合タンパク質。
【請求項２】
前記細胞ターゲティングドメインが、DARPin、scFv、ターゲティングペプチド、及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項1に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
(i)ヘニパウイルス属のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質、及び(ii) DARPin、ターゲティングペプチド、又はこれらの組合せから選択される少なくとも1つの細胞ターゲティングドメイン、を含む、融合タンパク質。
【請求項４】
(i) 配列番号9の配列と比較した、E501A、W504A、Q530A、及びE533Aの点突然変異を含むヘニパウイルス属のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質、及び(ii)少なくとも1つの細胞ターゲティングドメイン、を含む、融合タンパク質。
【請求項５】
ヘニパウイルス属のウイルスが、ニパウイルス(NiV)、シーダウイルス、又はヘンドラウイルスである、請求項1から4のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
ヘニパウイルス属のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質が、ニパウイルスエンベロープ糖タンパク質Gと比較して少なくとも1つの修飾を含み、配列番号9と少なくとも80％同一の配列を含む、請求項1から5のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
エンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質が細胞質領域の切断を有する、請求項1から6のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
エンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質は、配列番号9の配列と比較して、E501A、W504A、Q530A、及びE533Aの点突然変異を含む、請求項1から3及び5から7のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
エンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質が、配列番号9のN末端において34アミノ酸の細胞内切断を有する、請求項1から8のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
造血細胞が、T細胞、B細胞、単球、Th1細胞、Th2細胞、Treg細胞、マスト細胞、樹状細胞(DC)、ナチュラルキラー(NK)細胞、ナチュラルキラーT(NKT)細胞、マクロファージ、造血幹細胞、前駆T細胞、前駆B細胞、赤芽球、血小板又は好中球から選択される、請求項1から9のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
少なくとも1つの細胞ターゲティングドメインが、CD3、CD8、CD4、CD11b、CD62L、CD56、CCR5、又はCXCR4に特異的である、請求項1から10のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
少なくとも1つの細胞ターゲティングドメインが、抗CD8scFvを含み、抗CD8scFvターゲティングドメインが、配列番号4の配列に記載されたscFvの可変重鎖及び可変軽鎖を含む、請求項1から11のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
少なくとも1つの細胞ターゲティングドメインが、抗CD8scFvを含み、抗CD8scFvターゲティングドメインが、配列番号4の配列に記載されたscFvを含む、請求項1から12のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
請求項1から13のいずれか一項に記載の融合タンパク質を含む、偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項１５】
a)(i)パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G若しくはエンベロープ糖タンパク質H又は膜貫通ドメインに由来するタンパク質と、(ii)少なくとも1つの細胞ターゲティングドメインとを含む、少なくとも1つの細胞ターゲティング融合タンパク質、
b)(i)パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G若しくはエンベロープ糖タンパク質H又は膜貫通ドメインに由来するタンパク質と、(ii)サイトカイン、増殖因子、ホルモン、神経伝達物質、アポトーシスリガンド、又はこれらの組合せから選択される少なくとも1つの機能的ドメインとを含む、少なくとも1つのモジュレーティング融合タンパク質、及び
c)パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Fに由来する、少なくとも1つの糖タンパク質
を含み、
前記細胞ターゲティング融合タンパク質、及び/又は前記モジュレーティング融合タンパク質が、パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G又はエンベロープ糖タンパク質Hに由来するタンパク質を含み、
パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G又はエンベロープ糖タンパク質Hに由来する前記タンパク質が、前記エンベロープ糖タンパク質G又はエンベロープ糖タンパク質Hの細胞質領域の少なくとも1つの部分を欠く、
偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項１６】
前記パラミクソウイルス科のウイルスが、モルビリウイルス属又はヘニパウイルス属のウイルスである、請求項15に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項１７】
パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G又はエンベロープ糖タンパク質Hに由来する前記タンパク質が、前記エンベロープ糖タンパク質G又はエンベロープ糖タンパク質Hの、少なくとも1つの天然受容体に結合することが、少なくとも部分的に可能でない、請求項15又は16に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項１８】
a)(i) ヘニパウイルス属のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質、及び(ii)少なくとも1つの細胞ターゲティングドメイン、を含む、少なくとも1つの細胞ターゲティング融合タンパク質、
b)(i) パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G又はエンベロープ糖タンパク質H又は膜貫通ドメインに由来するタンパク質、及び(ii)少なくとも1つの機能的ドメインを含む、少なくとも1つのモジュレーティング融合タンパク質、並びに
c)パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Fに由来する、少なくとも1つの糖タンパク質、
を含む、偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項１９】
治療用タンパク質、アポトーシスタンパク質、キメラ抗原受容体、細胞表面受容体、抗体、抗体断片、shRNA、抗原、サイトカイン、マイクロRNA、CRISPR(clustered, regularly interspaced, short palindromic repeat)/CASエレメント、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ、又はS/MAR(Scaffold/Matrix Attachment Region)エピソーム、リガンド、及び/又は受容体をコードする目的の遺伝子を含む、請求項15から18のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項２０】
キメラ抗原受容体をコードする遺伝子を含む、請求項15から19のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項２１】
a)(i) ヘニパウイルス属のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質、及び(ii) 少なくとも1つの細胞ターゲティングドメイン、を含む、少なくとも1つの細胞ターゲティング融合タンパク質、
b) パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Fに由来する、少なくとも1つの糖タンパク質、並びに
c) キメラ抗原受容体をコードする遺伝子、
を含む、偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項２２】
a)(i) ヘニパウイルス属のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質であって、該糖タンパク質Gは細胞質領域に34アミノ酸の切断を有する、タンパク質、及び(ii) 少なくとも1つの細胞ターゲティングドメイン、を含む、少なくとも1つの細胞ターゲティング融合タンパク質、並びに
b) ヘニパウイルス属のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Fに由来する少なくとも1つの糖タンパク質であって、該糖タンパク質Fは細胞質領域に22アミノ酸の切断を有する、糖タンパク質、
を含む、偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項２３】
ヘニパウイルス属のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Gに由来する前記タンパク質が、前記エンベロープ糖タンパク質Gの、少なくとも1つの天然受容体に結合することが、少なくとも部分的に可能でない、請求項18から22のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項２４】
ヘニパウイルス属のウイルスは、ニパウイルス、シーダウイルス、又はヘンドラウイルスである、請求項18から23のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項２５】
エンベロープ糖タンパク質に由来するタンパク質が、配列番号9のニパウイルスエンベロープ糖タンパク質Gと比較して少なくとも1つの修飾を含み、配列番号9と少なくとも80％同一の配列を含む、請求項15から24のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項２６】
エンベロープ糖タンパク質Gに由来するタンパク質が細胞質領域に切断を有する、請求項15から21及び23から25のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項２７】
エンベロープ糖タンパク質Gが、ヘニパウイルス属のものであり、配列番号9のN末端の34アミノ酸の細胞質切断を有する、請求項22又は26に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項２８】
タンパク質が、ヘニパウイルス属のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Gに由来し、配列番号9の配列と比較して、E501A、W504A、Q530A、及びE533Aの点突然変異を含む、請求項15から27のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項２９】
エンベロープFに由来する糖タンパク質が、ニパウイルスエンベロープ糖タンパク質Fと比較して少なくとも一つの修飾を含み、配列番号11と少なくとも80%同一の配列を有するタンパク質を含む、請求項15から28のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項３０】
エンベロープ糖タンパク質Fに由来する前記糖タンパク質が、前記エンベロープ糖タンパク質Fの細胞質領域の少なくとも1つの部分の切断を有する、請求項15から29のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項３１】
エンベロープ糖タンパク質Fが、配列番号11のC末端において22アミノ酸の細胞質切断を有する、請求項22又は30に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項３２】
前記細胞ターゲティングドメインが、DARPin、ScFv、ターゲティングペプチド、及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項15から31のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項３３】
少なくとも一つの細胞ターゲティングドメインが、造血細胞、間質細胞、肝細胞、筋細胞又は神経系の細胞から選択される標的細胞に結合する、請求項15から32のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項３４】
少なくとも1つの細胞ターゲティングドメインが、CD3、CD8、CD4、がん細胞マーカー、CD11b、CD19、CD62L、CD56、Glut-1（グルコーストランスポーター）、CD22、CD20、CCR5、又はCXCR4に特異的である、請求項15から33のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項３５】
少なくとも1つの細胞ターゲティングドメインが、抗CD8scFvを含み、抗CD8scFvターゲティングドメインが、配列番号4の配列に記載されたscFvの可変重鎖及び可変軽鎖を含む、請求項15から34のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項３６】
少なくとも1つの細胞ターゲティングドメインが、抗CD8scFvを含み、抗CD8scFvターゲティングドメインが、配列番号4の配列に記載されたscFvを含む、請求項15から35のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項３７】
サイトカインが、インターロイキン(IL)、TNF(腫瘍壊死因子)、及びインターフェロンからなる群から選択される、請求項15から36のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項３８】
インターロイキンは、IL-2、IL-7、IL-15、又はIL-21である、請求項37に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項３９】
モジュレーティング融合タンパク質がIL-7を含む、請求項15から38のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項４０】
標的細胞の活性を選択的にモジュレートし、任意選択で、前記標的細胞に選択的に形質導入する、請求項14から39のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項４１】
標的細胞の活性を選択的にモジュレートし、任意選択で、前記標的細胞に選択的に形質導入するために使用するための医薬の製造における、請求項14から39のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクターの使用。
【請求項４２】
標的細胞の活性を選択的にモジュレートし、かつ/又は標的細胞に対して選択的に形質導入するための方法であって、請求項14から39のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクターを、前記標的細胞を含む細胞と接触させる工程を含む、in vitro又はex vivoでの方法。
【請求項４３】
医薬としての使用のための、請求項14から39のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項４４】
免疫療法、遺伝子治療、及び/又はワクチン接種における請求項43に記載の使用のための偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項４５】
免疫疾患、がん、遺伝疾患、アレルギー疾患、炎症性疾患、感染性疾患、代謝疾患、神経疾患、筋疾患、及びこれらの組合せの予防及び/又は処置における、請求項43又は44に記載の使用のための偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクター。
【請求項４６】
請求項1から13のいずれか一項に記載の細胞ターゲティング融合タンパク質をコードする核酸。
【請求項４７】
細胞ターゲティング融合タンパク質をコードする配列、及び/又はモジュレーティング融合タンパク質をコードする配列を含む核酸であって、
・  前記細胞ターゲティング融合タンパク質が、(i)パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G若しくはエンベロープ糖タンパク質H又は膜貫通ドメインに由来するタンパク質と、(ii)少なくとも1つの細胞ターゲティングドメインとを含み、
・  前記モジュレーティング融合タンパク質が、(i)パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G若しくはエンベロープ糖タンパク質H又は膜貫通ドメインに由来するタンパク質と、(ii)少なくとも1つの機能的ドメインとを含む
核酸。
【請求項４８】
前記パラミクソウイルス科のウイルスがヘニパウイルス属である、請求項47に記載の核酸。
【請求項４９】
前記細胞ターゲティング融合タンパク質が、パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G若しくはエンベロープ糖タンパク質Hに由来するタンパク質を含む、請求項47又は48に記載の核酸。
【請求項５０】
配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、及び配列番号13からなる群から選択される配列を含み、かつ/又は、配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号8、及び配列番号14の配列からなる群から選択される配列をコードする配列を含む、請求項47から49のいずれか一項に記載の核酸。
【請求項５１】
請求項46から50のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
【請求項５２】
請求項15から39のいずれか一項に記載の偽型レトロウイルス様粒子又はレトロウイルスベクターを作製するための方法であって、パッケージング細胞株に、
(i)(i)パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G若しくはエンベロープ糖タンパク質H又は膜貫通ドメインに由来するタンパク質と、(ii)少なくとも1つの細胞ターゲティングドメインとを含む細胞ターゲティング融合タンパク質をコードする、少なくとも1つの核酸、
(ii)(i)パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G若しくはエンベロープ糖タンパク質H又は膜貫通ドメインに由来するタンパク質と、(ii)少なくとも1つの機能的ドメインとを含むモジュレーティング融合タンパク質をコードする、少なくとも1つの核酸、
(iii)パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質Fに由来する糖タンパク質をコードする、少なくとも1つの核酸、及び
(iv)前記レトロウイルスに由来するコアタンパク質をコードする核酸を含む、少なくとも1つのベクター
を共トランスフェクトする工程を含み、
前記細胞ターゲティング融合タンパク質、及び/又は前記モジュレーティング融合タンパク質が、パラミクソウイルス科のウイルスのエンベロープ糖タンパク質G又はエンベロープ糖タンパク質Hに由来するタンパク質を含む、
方法。
【請求項５３】
配列番号4のscFvに記載されたscFvの可変重鎖及び可変軽鎖を含む、抗CD8scFvターゲティングドメイン。
【請求項５４】
配列番号4にscFvとして記載されたscFvを含む、抗CD8scFvターゲティングドメイン。