(57)【要約】  細胞を保護するための組成物を提供する。細胞を保護するための組成物であって、以下の式Ｉ〜ＩＶのいずれかで表される、フォルミル置換したフェニルまたはピロール化合物：【化８】2005092320.tif 000012ここで、Ｒ１は、Ｈ、ＯＲ３、ＯＲ４、ＮＨＲ３、ＮＨＲ４、ＳＲ３、ＳＲ４、ＳＯ３Ｒ３、ＳＯ３Ｒ４、（ＣＨ２）ｎＲ３、（ＣＨ２）ｎＲ４、（ＣＨ＝ＣＨ）ｎＲ３、（ＣＨ＝ＣＨ）ｎＲ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、ＰｈＲ３、ＰｈＲ４、および（ＣＨ２）ｎＣＨＲ３Ｒ４からなる群から選択される基であり、Ｒ２は、該Ｒ１で定義した基と同意義の基およびＣ（ＮＨＲ３）Ｒ３からなる群から選択される基であり、Ｒ３は、置換または非置換の直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ４は、カルボキシル基で置換された直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｎは、０〜６の整数である；およびキャリアを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞を保護するための組成物であって、
以下の式Ｉ〜ＩＶのいずれかで表される、フォルミル置換したフェニルまたはピロール化合物：
【化１】
2005092320.tif 000009
ここで、Ｒ１は、Ｈ、ＯＲ３、ＯＲ４、ＮＨＲ３、ＮＨＲ４、ＳＲ３、ＳＲ４、ＳＯ３Ｒ３、ＳＯ３Ｒ４、（ＣＨ２）ｎＲ３、（ＣＨ２）ｎＲ４、（ＣＨ＝ＣＨ）ｎＲ３、（ＣＨ＝ＣＨ）ｎＲ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、ＰｈＲ３、ＰｈＲ４、および（ＣＨ２）ｎＣＨＲ３Ｒ４からなる群から選択される基であり、
Ｒ２は、該Ｒ１で定義した基と同意義の基およびＣ（ＮＨＲ３）Ｒ３からなる群から選択される基であり、
Ｒ３は、置換または非置換の直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、カルボキシル基で置換された直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｎは、０〜６の整数である；および
キャリア、を含む、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記式ＩＩで表される４−フォルミルフェニル型構造を有する化合物であって、前記Ｒ１が、末端カルボキシル基で置換された直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または末端ヒドラジノ基もしくは末端アミノ基で置換されたアミノ酸である化合物を含む、組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の組成物であって、前記式ＩＩにおいて、Ｒ１がＮＨ−ＮＨ−ＲａまたはＮＨ−Ｒａであり、ここで、Ｒａが、α−もしくはβ−アスパルチル、またはα−、β−もしくはγ−グルタミルである化合物を含む、組成物。
【請求項４】
請求項３に記載の組成物であって、以下の式Ｖで表される化合物：
【化２】
2005092320.tif 000010
を含む、組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物であって、
前記式ＩＶで表される２−フォルミルピロール型構造を持つ化合物：
ここで、前記Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＲ４、ＮＨＲ４、ＳＲ４、ＳＯ３Ｒ４、（ＣＨ２）ｎＲ３、（ＣＨ２）ｎＲ４、（ＣＨ＝ＣＨ）ｎＲ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、ＰｈＲ４および（ＣＨ２）ｎＣＨＲ３Ｒ４からなる群から選択される基であり、
Ｒ３は、置換または非置換の直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、カルボキシル基で置換された直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｎは、０〜６の整数である；および
キャリア、を含む、組成物。
【請求項６】
請求項５に記載の組成物であって、前記Ｒ２が、ヒドロキシル基で置換された直鎖のＣ１〜Ｃ６アルキルである化合物を含む、組成物。
【請求項７】
請求項６に記載の組成物であって、以下の式ＶＩで表される化合物を含む、組成物：
【化３】
2005092320.tif 000011
【請求項８】
前記細胞が、その増殖を促進されることによって保護される、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記細胞が、そのアポトーシスを抑制されることによって保護される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
細胞を保護するための方法であって、式Ｉ〜ＶＩのいずれかで表されるフォルミル置換したフェニルまたはピロール化合物を被験体に投与する工程を包含する方法。
【請求項１１】
細胞を保護するための組成物の調製のための、式Ｉ〜ＶＩのいずれかで表されるフォルミル置換したフェニルまたはピロール化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、食品および医薬品の分野に関する。より詳細には、本発明は細胞を保護するための組成物に関し、代表的には、この組成物は、フォルミルフェニル型構造を持つ化合物、ならびにフォルミルピロール型構造を持つ化合物を活性成分として含有し、上記細胞を、その増殖を促進すること、そのアポトーシスを抑制することなどによって保護する。
【背景技術】
【０００２】
細胞を保護する作用を示す多くの物質が報告されている。例えば、プロテインキナーゼ阻害剤の一種Ｋ２５２ａは、神経細胞保護作用を有している（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２７７巻、ナンバー５１号、４９４７３−４９４８０頁、２００２年）；カテキン、エピカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキン、およびエピガロカテキンガレートは、細胞増殖促進作用（骨髄増殖活性）を有している（Ｐｌａｎｔａ  ｍｅｄｉｃａ、第６９巻、３２１−３２６頁、２００３年）；プロアントシアニジンは、毛包上皮細胞および皮膚ケラチノサイト増殖促進剤である（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、第１１２巻、ナンバー５１号、３１０−３１６頁、１９９９年）；フォスファチジン酸は、毛包細胞のアポトーシスを抑制する（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、第１２１巻、４４８−４５６頁、２００３年）；ドコサヘキサノイン酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）は、網膜光受容体のアポトーシス（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、第４４巻、ナンバー５号、２２５２−２２５９頁、２００３年）、および神経細胞のアポトーシス（Ｌｉｐｉｄｓ、第３８巻、ナンバー４号、４５３−４５７頁、２００３年）をそれぞれ抑制する；などである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
上記の細胞を保護する作用を示す物質の多くは天然由来の物質である。しかし、一般に、天然由来の物質は、その供給源における含有量が少ないため、食品、医薬品などの用途に必要な量を得ることは、大量の供給源を得、それから抽出および精製することが必要であるため困難である。本発明は、食品、医薬品などの用途に適用し得る、細胞を保護する作用を有する化合物およびそれを有効成分として含む組成物を容易に提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、細胞の増殖を促進する作用、アポトーシスを抑制する作用、細胞を保護する作用を有する物質を鋭意検討した結果、フォルミルフェニル型構造を持つ化合物、ならびにフォルミルピロール型構造を持つ化合物が、これらの作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。【０００５】
即ち、本発明は、以下の（１）〜（１１）に関する。
（１）細胞を保護するための組成物であって、以下の式Ｉ〜ＩＶのいずれかで表される、フォルミル置換したフェニルまたはピロール化合物：【０００６】
【化４】
2005092320.tif 000002
【０００７】
ここで、Ｒ１は、Ｈ、ＯＲ３、ＯＲ４、ＮＨＲ３、ＮＨＲ４、ＳＲ３、ＳＲ４、ＳＯ３Ｒ３、ＳＯ３Ｒ４、（ＣＨ２）ｎＲ３、（ＣＨ２）ｎＲ４、（ＣＨ＝ＣＨ）ｎＲ３、（ＣＨ＝ＣＨ）ｎＲ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、ＰｈＲ３、ＰｈＲ４、および（ＣＨ２）ｎＣＨＲ３Ｒ４からなる群から選択される基であり、Ｒ２は、該Ｒ１で定義した基と同意義の基およびＣ（ＮＨＲ３）Ｒ３からなる群から選択される基であり、Ｒ３は、置換または非置換の直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ４は、カルボキシル基で置換された直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｎは、０〜６の整数である；およびキャリアを含む、組成物。
（２）項（１）に記載の組成物であって、前記式ＩＩで表される４−フォルミルフェニル型構造を有する化合物であって、前記Ｒ１が、末端カルボキシル基で置換された直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または末端ヒドラジノ基もしくは末端アミノ基で置換されたアミノ酸である化合物を含む、組成物。
（３）項（２）に記載の組成物であって、前記式ＩＩにおいて、Ｒ１がＮＨ−ＮＨ−ＲａまたはＮＨ−Ｒａであり、ここで、Ｒａが、α−もしくはβ−アスパルチル、またはα−、β−もしくはγ−グルタミルである化合物を含む、組成物。
（４）項（３）に記載の組成物であって、以下の式Ｖで表される化合物：【０００８】
【化５】
2005092320.tif 000003
【０００９】
を含む、組成物。
（５）項（１）に記載の組成物であって、前記式ＩＶで表される２−フォルミルピロール型構造を持つ化合物：
ここで、前記Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＲ４、ＮＨＲ４、ＳＲ４、ＳＯ３Ｒ４、（ＣＨ２）ｎＲ３、（ＣＨ２）ｎＲ４、（ＣＨ＝ＣＨ）ｎＲ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、ＰｈＲ４および（ＣＨ２）ｎＣＨＲ３Ｒ４からなる群から選択される基であり、
Ｒ３は、置換または非置換の直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、カルボキシル基で置換された直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｎは、０〜６の整数である；およびキャリアを含む、組成物。
（６）項（５）に記載の組成物であって、前記Ｒ２が、ヒドロキシル基で置換された直鎖のＣ１〜Ｃ６アルキルである化合物を含む、組成物。
（７）項（６）に記載の組成物であって、以下の式ＶＩで表される化合物を含む、組成物：【００１０】
【化６】
2005092320.tif 000004
【００１１】
（８）前記細胞が、その増殖を促進されることによって保護される、項（１）に記載の組成物。
（９）前記細胞が、そのアポトーシスを抑制されることによって保護される、（１）に記載の組成物。
（１０）細胞を保護するための方法であって、式Ｉ〜ＶＩのいずれかで表されるフォルミル置換したフェニルまたはピロール化合物を被験体に投与する工程を包含する方法。
（１１）細胞を保護するための組成物の調製のための、式Ｉ〜ＶＩのいずれかで表されるフォルミル置換したフェニルまたはピロール化合物の使用。
【発明の効果】
【００１２】
細胞を保護するための組成物が提供される。この組成物は、細胞増殖の促進、アポトーシスの抑制などによって細胞を保護し、エイズ、インフルエンザ、劇症肝炎、潰瘍性大腸炎、肺繊維症、心不全、自己免疫疾患、関節リウマチ、脳虚血、痴呆症、パーキンソン病、歯周病、脱毛症、皮膚角化症などのような種々疾患の予防または治療を目的とする食品または医薬品、および臓器移植にともなう拒絶反応の軽減または回避を目的とする医薬品として使用可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる定義で用いられることが理解されるべきである。【００１４】
「アルキル」とは、メタン、エタン、プロパンのような脂肪族炭化水素から水素原子が１個失われて生ずる１価の基をいい、一般に、ＣｎＨ２ｎ＋１−で表される（ここで、ｎは正の整数である）。アルキルは、直鎖または分枝鎖であり得る。【００１５】
「置換のアルキル」とは、アルキルの１個または複数個の水素原子が、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシル、フォルミル、およびヒドラジノからなる群から選択される基で置換されたアルキルを意味する。「非置換のアルキル」とは、いずれの水素原子も他の基で置換されていないアルキルを意味する。【００１６】
「フォルミル」とは、−ＣＨＯで表される基をいう。【００１７】
「カルボキシル」とは、−ＣＯＯＨで表される基をいう。【００１８】
「ヒドラジノ」とは、−ＨＮ−ＮＨ２で表される基をいう。【００１９】
「アミノ」とは、−ＮＨ２で表される基をいう。【００２０】
「ヒドロキシル」とは、−ＯＨで表される基をいう。【００２１】
「フォルミル置換したフェニル」とは、フェニルの水素原子がＣＨＯ基で置換されたフェニルをいう。【００２２】
「フォルミル置換したピロール」とは、ピロールの水素原子がＣＨＯ基で置換されたピロールをいう。【００２３】
「４−フォルミルフェニル型構造」とは、フェニルの１個の水素原子がＣＨＯ基で置換され、さらにこのＣＨＯ基に対してｐ位に別の置換基を持つフェニルの構造をいう。【００２４】
「２−フォルミルピロール型構造」とは、ピロールの２位に位置する１個の水素原子がＣＨＯ基で置換されたピロールの構造をいう。【００２５】
「末端カルボキシル基」とは、ある分子の末端（もしくは先端）官能基内の水素原子と置換するためのカルボキシル基を意味する。【００２６】
「末端ヒドラジノ基」とは、ある分子の末端（もしくは先端）官能基内の水素原子と置換するためのヒドラジノ基を意味する。【００２７】
「末端アミノ基」とは、ある分子の末端（もしくは先端）官能基内の水素原子と置換するためのアミノ基を意味する。【００２８】
「アミノ酸」とは、分子内にカルボキシル基とアミノ基とを有する化合物を意味し、アミノ基とカルボキシル基が同一炭素原子に結合するものをα−アミノ酸と称し、相対距離が遠ざかるに従い順次β−、γ−、δ−、・・・アミノ酸と称する。【００２９】
「アスパルチル」とは、モノアミノジカルボン酸であるアスパラギン酸の２個のカルボキシル基のうちの１個からヒドロキシル基を除いてできる基を意味する。【００３０】
「グルタミル」とは、モノアミノジカルボン酸であるグルタミン酸の２個のカルボキシル基のうちの１個からヒドロキシル基を除いてできる基を意味する。【００３１】
上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物が、例えば、細胞を保護する作用を有することを記載する先行技術はない。従って、本発明は、一般式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物を含む、細胞を保護する組成物を提供するものである。特定の理論に拘束されるわけではないが、上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物は、フォルミル基とＲ１基との組み合わせおよびそれらの間の距離が細胞を保護する活性に関連していると考えられる。【００３２】
本発明の組成物に含まれる、上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物は、合成法、酵素法、微生物を用いた製造法、天然物からの抽出法、あるいはそれらの組み合わせなど、いずれの方法を用いても製造することができる。【００３３】
上記式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）または（Ｖ）で表される化合物は、代表的には、例えば、フェニルヒドラジンまたはアニリンを出発原料として合成され得る。フェニルヒドラジンは、アニリンを亜硝酸ナトリウム、塩酸でジアゾ化したのち亜硫酸ナトリウムと反応させて得られる、単斜結晶または微黄色の透明液体である。本発明で用いられる化合物は、フェニルヒドラジンまたはアニリンを出発物質として製造し得る。フェニルヒドラジンまたはアニリンは、当業者に公知の縮合反応によって種々の誘導体を生成する。本発明で用いられる化合物は、このような縮合反応を利用して合成され得る。【００３４】
フォルミルフェニル型化学構造を持つ化合物は、フェニルヒドラジンとモノアミノジカルボン酸（例えば、グルタミン酸）とを公知の方法を用いて縮合させ、加圧されたＣＯ下にて、ＨＣｌ／ＡｌＣｌ３の存在下でフォルミル化を行うことにより得ることができる。【００３５】
また、上記式（ＩＶ）または（ＶＩ）で表される２−フォルミルピロール型化学構造を持つ化合物は、代表的には、市販のピロールまたはピロール型化合物を用い、通常化学反応で用いられるアルキル化反応、アリール化反応およびアシル化反応を行うことにより得ることができる。【００３６】
式（ＩＶ）の式中、Ｒ２で表わされる置換基は、種々の置換基を持つか、または持たない飽和または不飽和のアルキルであり得る。これらの化合物は、ピロール型化合物を出発物質として、これに、通常化学反応で用いられるアルキル化剤、例えば該当するアルキルを有するハロゲン化アルキルなどを添加し、適当なアルカリ、例えば、炭酸カリウム、ｎ−ブチルリチウムのヘキサン溶液などを加え、必要に応じて、反応中に生じる酸の吸収剤（例えば、ジメチルホルムアミド）の存在下、所定の温度条件下で撹拌することによって得ることができる。【００３７】
あるいは、式（ＩＶ）の式中、Ｒ２で表わされる置換基は、種々の置換基を有しまたは有しない脂肪族または芳香族のアシルであり得る。これらの化合物は、ピロール型化合物を出発物質として、これを、適切な溶媒、例えば、ピリジン、塩化メチレン、テトラヒドロフランなどに溶解し、アシル化剤、例えば、酸塩化物、または酸無水物などを加え、適切な溶媒、例えば、ピリジン、トリエチルアミン、ｎ−ブチルリチウムのヘキサン溶液等の存在下、所定の温度条件下で撹拌することによって得ることができる。また、上記の反応を適宜組合せることにより、式（ＩＶ）または（ＶＩ）で表わされる化合物を得ることができる。【００３８】
あるいは、上記式（ＩＶ）または（ＶＩ）で表わされる化合物は、前述の有機合成による手法のほか、担子菌の子実体または培養菌糸体から分離・精製しても良い。例えば、担子菌の子実体または培養菌糸体を加熱抽出して得られたるエキスを、ゲル濾過カラム、疎水性ゲルカラム、イオン交換カラムなどを用いて分離・精製することにより、上記式（ＩＶ）または（ＶＩ）で表わされる化合物を得ることができる。【００３９】
上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物は、細胞を保護するための組成物の有効成分としてそのまま用いられ得るか、または適切なキャリアとともに本発明の組成物中に含有され得る。【００４０】
本明細書で用いる用語「細胞」は、一般に、当該分野で用いられる通常の意味で用いられ、代表的には、多細胞生物体に存在する分化した任意の細胞、クローン化された培養中の細胞を包含する。本明細書で用いられる用語「細胞の保護」は、上記細胞が、生存、増殖および死滅する条件下に置かれたとき、細胞の生存率が低下しないようにすること、増殖速度が増加すること、および細胞の死滅率が低下することをそれぞれ意味する。代表的には、細胞の保護は、細胞の生長または増殖を促進すること、細胞のアポトーシスを抑制することなどにより達成され得る。【００４１】
アポトーシスは、一般に、個体の生命を維持するために、遺伝子によって制御された細胞死であると定義されている。アポトーシスは、個体発生における形態形成や神経系ネットワークの確立ばかりでなく、成熟個体における細胞交替や内分泌系による恒常性の維持、および免疫系の成立などに重要な役割を果たしていることが知られている。さらに、アポトーシスは、上記のように、生命現象の基本的部分に重要な役割を果たしているだけでなく、その抑制または亢進により、癌、自己免疫疾患（全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症）、エイズ、肝炎、中枢神経系の変性疾患（アルツハイマー病、パーキンソン病）など、多くの疾患の発症に深くかかわっていることが明らかにされている。従って、アポトーシスを抑制する作用を有する組成物は、アポトーシスを人為的に制御して、アポトーシス疾患の適正な治療のための有益な手段となり得る。【００４２】
アポトーシスは、一般に、以下のような細胞の形態学的変化と生化学的変化によって定義されている。
（１）アポトーシス細胞を電子顕微鏡で観察すると、細胞表面の微繊毛が消失し、平滑になり、細胞が縮小する。核内ではクロマチンが凝縮し、核が断片化する。そして細胞自体が断片化してアポトーシス小体（ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｂｏｄｙ）が形成され、マクロファージなどの食細胞や隣接する細胞によって貧食除去される。
（２）形態学的変化に先立って、細胞内Ｃａ２＋濃度の上昇や特定タンパク質のリン酸化などが起こる。細胞質中のオルガネラや細胞膜はほぼ正常に保たれるため、細胞の内容物はほとんど漏出しない。【００４３】
本発明は、上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物を単独で、または安定化化合物、希釈剤などのキャリア、あるいは他の成分または薬剤と組み合わせて含む組成物を提供する。本発明の組成物は、上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物が、投与された生体において、細胞を保護するような形態で用いられる。【００４４】
本発明の組成物は、各種の食品ならびに医薬製剤の形態で提供され得る。このような食品および医薬製剤は、活性成分として上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物を単独で、あるいは任意の他の活性成分との混合物として配合されて含み得る。また、このような食品ならびに医薬製剤は、製剤学の技術分野において公知の任意の剤型を取ることができる。【００４５】
本発明の組成物は、経口的または非経口的に投与される。【００４６】
本発明の組成物は、制限されずに、錠剤、カプセル剤、粉末、丸剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、シロップ剤、トローチ剤を含む剤型の形態で経口的に投与される。【００４７】
このような剤型は、賦形剤として、ソルビトール、ラクトース、グルコース、乳糖等の糖類、デキストリン、澱粉、炭酸カルシウム、硫酸カルシウムなどの無機物、結晶セルロース、蒸留水、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油など、一般に、使用される任意の物質を含み得る。【００４８】
このような剤型はまた、製剤化に際し、結合剤、滑沢剤、分散剤、縣濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤などの添加剤を含み得る。このような添加剤は当該分野で公知である。【００４９】
本発明の組成物は、目的とする効果に応じ、上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物を、広範囲で配合量で含有し得る。食品または医薬品として使用するために、例えば、上記経口医薬品としての使用において、疾患の症状、年齢などに依存して、０．０１〜５０重量％の範囲、好ましくは０．１〜２０重量％の範囲、特に好ましくは１〜１０重量％の範囲で配合され得る。【００５０】
本発明の組成物に含まれる上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物の経口投与量は、通常、成人１日あたり１０〜１０００ｍｇの範囲、好ましくは５０〜５００ｍｇの範囲、さらに好ましくは１００〜３００ｍｇの範囲である。【００５１】
本発明の組成物は、制限されずに、上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物を含有する注射液の形態で非経口的に投与される。このような注射液は、水溶液、好ましくはハンクスの溶液、リンゲル溶液、または緩衝化生理食塩水のような生理学的に適合する緩衝液中で処方され得る。本発明の組成物は、制限されずに、上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物を含有する水性注射懸濁物の形態で非経口的に投与される。この水性注射懸濁物は、その濃度を増加させる物質（例えば、カルボキシメチルセルロース、ソルビトール、デキストラン）を含有しても良く、必要に応じて、ゴマ油のような脂肪酸、オレイン酸エチル、トリグリセリドのような合成脂肪酸エステルなどをさらに含んだ油状注射懸濁物としても調製することができる。【００５２】
以下、実施例により、本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の例示であって、本発明を制限する意図はない。
【実施例】
【００５３】
（実施例１：錠剤の製造）
以下に示す組成の錠剤を作製した：４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１：以下の参考例のように合成して得た。以下同様である。）１０．０ｇ、乳糖９０．０ｇ、乾燥コーンスターチ２．０ｇ、タルク１．８ｇ、ステアリン酸マグネシウム０．２ｇ。錠剤の調製は、各成分を均一にし、この混合物を単発式打錠機（菊水製作所社製堅型成形機）にて打錠することにより行い、直径５ｍｍ、重量１５ｍｇの錠剤を得た。【００５４】
（実施例２：顆粒剤の製造）Ｄ―マンニトール９０．０ｇ、クロスポビドン（ポリプラスドンＸＬ）５．５ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース２ｇ、および  ４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）２ｇを乳鉢内で混合し、１８ｍｌの精製水を加えて練合した。この練合物を押し出し造粒機（不二パウダル社製）で造粒し、乾燥機で乾燥、顆粒を得た。【００５５】
（実施例３：ソフトカプセル剤の製造）
４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）１０．０ｇに対し、乳糖９０．０ｇを加えて均一に混合し、４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）を含有する粉末を得た。次に、ゼラチン１００重量部に対し、グリセリン３０重量％を加えてゼラチンを膨潤および溶解し、ゼラチンシートを得た。これに、４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）を含有する粉末を、１カプセルあたり２５０ｍｇ（４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド  ２５ｍｇ相当）の内容量になるように加え、打ち抜き法の一種であるアコージェル法によりソフトカプセルを製造した。【００５６】
（実施例４：ハードカプセル剤の製造）
４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）１０．０ｇに対し乳糖９０．０ｇを加え均一に混合し、４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）を含有する粉末を得た。次に、市販の医薬品用ハードカプセルを用い、４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）を含有する粉末を１カプセルあたり２５０ｍｇ（４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド  ２５ｍｇ相当）の内容量になるように充填し、その後、接合部を希薄ゼラチン溶液でシールを行い、ハードカプセルを製造した。【００５７】
（実施例５：細胞の増殖の促進）
細胞として、ヒトＴ細胞白血病由来浮遊細胞株（Ｊｕｒｋａｔ  ｃｅｌｌ）を用い、本発明の組成物の細胞の増殖を促進する活性を測定した。【００５８】
Ｊｕｒｋａｔ  ｃｅｌｌの増殖活性の測定は、ＭＴＴ法（細胞培養ＩＩＩ、４４７７−４４８２、（１９８４））に準じて行った。要約すれば、この方法は、〔３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ〕（ＭＴＴ）を細胞に取り込ませ、生成されるＭＴＴフォルマザン（ＭＴＴ  ｆｏｒｍａｚａｎ）量を５７０ｎｍ（リファレンス＝６５０ｎｍ）の波長で比色定量し、細胞の増殖活性を測定する方法である。【００５９】
Ｊｕｒｋａｔ  ｃｅｌｌを、５％牛胎児血清を含むＤＭＥＭ培地（ギブコ社製）で３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、対数増殖期前期まで培養し、その時点で、表１に示す濃度となるように４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）を添加し、さらに２４時間培養した後の細胞増殖度をＭＴＴ法にて測定した。結果を表１に示した。【００６０】
【表１】
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【００６１】
表１に示されるように、４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒドは、Ｊｕｒｋａｔ  ｃｅｌｌの増殖を濃度依存的に刺激し、５μｇ／ｌの濃度で、その増殖を約１．７倍促進することが示された。【００６２】
（実施例６：細胞のアポトーシスの抑制）
Ｊｕｒｋａｔ  ｃｅｌｌを、５％牛胎児血清を含むＤＭＥＭ培地（ギブコ社製）で３７℃、５％ＣＯ２下、対数増殖期前期まで培養し、その時点で、４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）を表２に示す濃度となるように添加し、さらに２４時間培養した後に、細胞内のモノ−オリゴヌクレオソーム量をＥＬＩＳＡ法（Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ＥＬＩＳＡＰＬＵＳ、Ｒｏｃｈｅ社製）に従って測定した。なお、アポトーシス細胞において、ＤＮＡの断片化が細胞膜崩壊前に生じ、モノ−オリゴヌクレオソームが細胞質に蓄積することが知られる（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  第７５巻、ナンバー４号、２８７−２９９ページ、１９９７年）。【００６３】
細胞内のモノ−オリゴヌクレオソーム量の相対値を表２に示した。【００６４】
【表２】
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【００６５】
表２に示されるように、４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）添加試験区では、濃度依存的に、細胞内モノ−オリゴヌクレオソーム量の低下が認められ、Ｊｕｒｋａｔ  ｃｅｌｌに対するアポトーシス抑制活性が認められた。【００６６】
（実施例７：細胞の抗癌剤に対する毒性の軽減作用）
Ｊｕｒｋａｔ  ｃｅｌｌ（ヒトＴ細胞系細胞株）を、５％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地（ギブコ社製）で３７℃、５％ＣＯ２下、対数増殖期前期まで培養し、その時点で、抗癌剤であるドキソルビシンと本発明の４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）を表３に示す濃度となるように添加し、さらに２４時間培養した後に、細胞生存率をＭＴＴ法に従って測定した。ドキソルビシン１．０μｇ／ｍｌ添加２４時間後の相対細胞生存率は、無添加対象区（＝１００％）に比べ３７．２％に低下したが、表３に示されるように、４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）とドキソルビシンの共存試験区では、相対細胞生存率の増加が認められた。【００６７】
【表３】
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。【００６８】
（参考例１  β―Ｎ−（γ―グルタミル）―４―フォルミルアニリン（または４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド、式Ｖで表される構造を持つ化合物、本明細書では化合物１と称する、の合成）
化合物１の合成方法をその合成スキームとともに以下に示す。【００６９】
Ｎ−Ｂｏｃ−１−ベンジルグルタミン酸（９６４ｍｇ、２．８６ｍｍｏｌ、２）をＴＨＦ３０ｍｌに溶解させて０℃に冷却し、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（６１９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を加え、０℃にて３０分間攪拌した。次に、パラアミノベンズアルデヒド塩酸塩（６３０ｍｇ、４ｍｍｏｌ、１）、ピリジン０．４ｍｌ  およびＮ，Ｎ’―ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（３４９ｍｇ、２．８６ｍｍｏｌ）を加え、水浴を外して室温で１時間攪拌した。反応液に、トリエチルアミン０．３ｍｌを加え、さらに１６時間攪拌した。その後、反応液を減圧濾過し、酢酸エチル３０ｍｌを加えて１Ｍ  ＨＣｌ、５％ＮａＨＣＯ３および水で洗浄した後、乾燥し減圧濃縮した。残渣（１．３ｇ）をシリカゲルクロマトグラフィーで精製することにより、アミド３（１１５．２ｍｇ）を得た。次に、アミド３（５６．２ｍｇ）をＭｅＯＨ（０．１４ｍｌ）に溶解し、４Ｍ  ＮａＯＨ（０．０４ｍｌ）を加えて室温で３０分間攪拌した。反応混合物に水４ｍｌを加え、酢酸エチルで洗浄後、水相にＤｏｗｅｘ５０ＷＸ８（１ｍｌ）を加えて５分間攪拌した後、Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ８を濾別、水相を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチルを留去した残渣を９８％蟻酸（１．５ｍｌ）で処理することにより、化合物１（１８．６ｍｇ）（２からの収率６．７％）を得た。【００７０】
４−（４−グルタミル）アミノベンズアルデヒド（化合物１）
ＭＳ  ｍ／ｚ  ２５１  （Ｍ＋＋１）；  ＩＲ（ＫＢｒ）n  ３４００，１６７０，１５９０，１５４０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）  （  ２．２０（２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．８），２．６０（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．８，７．３），３．７９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８），７．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３），７．８８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３），９．７９（１Ｈ，ｓ）。【００７１】
【化７】
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【００７２】
以上のように、フォルミルフェニル型構造またはフォルミルピロール型構造を持つ上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表される化合物は、細胞増殖促進活性、アポトーシス抑制活性に代表される細胞保護活性を有し、細胞増殖促進剤、アポトーシス抑制剤、細胞保護剤として有効な組成物を提供し得ることが示された。
【国際調査報告】
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