【手続補正書】
【提出日】令和2年4月27日(2020.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物流体において標的細胞を非標的細胞から分離する方法であって、
前記標的細胞のサイズ、前記非標的細胞のサイズ、前記生物流体の圧縮度、前記標的細胞の圧縮度、前記非標的細胞の圧縮度、前記標的細胞の凝集能、および前記非標的細胞の凝集能の少なくとも１つを変化させる添加剤を導入することによって前記生物流体を前処理することと、
前記前処理した生物流体をマイクロ流体分離チャンネルの流入口に流入させることと、
前記標的細胞が前記分離チャンネルに沿った少なくとも１つの主流内に蓄積し、前記非標的細胞が前記分離チャンネルに沿った少なくとも１つの副流内に蓄積するように前記マイクロ流体分離チャンネルに音響エネルギーを加えることと
を含む、方法。
【請求項２】
前記標的細胞を含む前記少なくとも１つの主流を収集することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記非標的細胞を含む前記少なくとも１つの副流を別に収集することをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記添加剤を、細胞凝集剤、脱イオン水、デタージェント、界面活性剤、前記生物流体の塩分を調節する溶液、前記生物流体の張度を調節する溶液、前記生物流体の粘度を調節する溶液、前記生物流体のモル浸透圧濃度を調節する溶液、前記生物流体のイオン濃度を調節する溶液、およびこれらの組み合わせからなる群から選択することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞凝集剤が長鎖ポリサッカライドであるように選択することをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞凝集剤が１００〜５００ｋＤの分子量を有する長鎖ポリサッカライドを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記細胞凝集剤が約０．５％〜約２５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する長鎖ポリサッカライドを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記細胞凝集剤が非標的細胞と結合して凝集させる抗体を含む溶液であるように選択することをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞凝集剤が血小板活性化因子または細胞接着分子であるように選択することをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
添加剤を導入して、前記生物流体の密度、前記標的細胞の密度、および前記非標的細胞の密度の少なくとも１つを変化させることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記添加剤を密度勾配メディウム、密度添加剤、およびこれらの組み合わせからなる群から選択することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記密度添加剤が非イオン性ヨウ素化化合物であるように選択することをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記添加剤を導入して、前記流体の前記密度を約１．００〜約１．１５ｇ／ｍＬの密度に調節することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記添加剤を導入して、前記流体の前記密度を約１．０４〜約１．０７ｇ／ｍＬの密度に調節することをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
添加剤を導入して前記生物流体の密度および前記非標的細胞の凝集能を変化させることを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記生物流体を血液バフィーコート、白血球アフェレシス産物、末梢血、全血、リンパ液、滑液、脊髄液、骨髄、腹水、およびこれらの組み合わせまたは下位成分から選択することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記標的細胞が単核球、リンパ球、単球、顆粒球、無顆粒白血球、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、これらのサブクラス、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される白血球であるように選択することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記標的細胞がリンパ球であるように選択することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記生物流体をドナー被験体から得ることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの主流を後処理することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記後処理された主流を収集することをさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記後処理された主流をレシピエント被験体に導入することをさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの主流に試薬を投与して投与懸濁液を調製することをさらに含み、前記試薬が細胞活性化を生物化学的に誘発するように構成される抗原または活性化試薬から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記標的細胞がリンパ球であるように選択して前記投与懸濁液における活性化リンパ球を非活性化リンパ球から分離することをさらに含む方法であって、
前記投与懸濁液を第二マイクロ流体分離チャンネルの流入口に流入させることと、
前記第二マイクロ流体分離チャンネルに音響エネルギーを加えて、前記活性化リンパ球が第二マイクロ流体分離チャンネルに沿った少なくとも１つの主流内に蓄積し、前記非活性化リンパ球が前記第二分離チャンネルに沿った少なくとも１つの副流に蓄積することと
を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記生物流体に隣接する第二流体を前記マイクロ流体分離チャンネルの流入口に流入させて、前記生物流体および前記第二流体が実質的に並行して実質的に層化流で流れることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記前処理流体をマイクロ流体分離チャンネルの流入口に約０．０３〜約０．５ｍＬ／分の流速で流入させることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
添加剤を導入して前記非標的細胞の凝集能を調節することを含み、前記非標的細胞が赤血球を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
添加剤を導入して前記非標的細胞の凝集能を調節することを含み、前記非標的細胞が血小板を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記標的細胞および前記非標的細胞の少なくとも１つが、生きた細胞、凍結細胞、保存細胞、または細胞培養で増殖された細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
生物流体において標的細胞を非標的細胞から分離するように構成されるマイクロ流体細胞分離のためのシステムであって、
少なくとも１つの流入口、第一流出口、および第二流出口を含む少なくとも１つのマイクロ流体分離チャンネル、
前記少なくとも１つのマイクロ流体分離チャンネルの前記少なくとも１つの流入口と流体接続される前記生物流体の供給源、
前記生物流体の前記供給源と流体接続され、少なくとも１種類の添加剤を前記生物流体に導入するように構成される添加剤の供給源で、前記添加剤が前記標的細胞のサイズ、前記非標的細胞のサイズ、前記生物流体の圧縮度、前記標的細胞の圧縮度、前記非標的細胞の圧縮度、前記標的細胞の凝集能、および前記非標的細胞の凝集能の少なくとも１つを変化することができる添加剤の供給源、ならびに
前記少なくとも１つのマイクロ流体分離チャンネルの壁に接続される少なくとも１つの音響トランスデューサー
を含む、システム。
【請求項３１】
前記少なくとも１つの音響トランスデューサーが、定常音響波を前記マイクロ流体分離チャンネルを横断して加えるように配置される、請求項３０に記載のシステム。
【請求項３２】
並行して接続される少なくとも２つのマイクロ流体分離チャンネルおよび前記生物流体を前記少なくとも２つのマイクロ流体分離チャンネルに分配するように構成されるマニホルドをさらに含む、請求項３０に記載のシステム。
【請求項３３】
前記システムで流入生物流体量を測定するように構成される少なくとも１つのセンサーをさらに含む、請求項３２に記載のシステム。
【請求項３４】
前記マニホルドが、前記少なくとも１つのセンサーと電気的に接続され、前記システムで前記流入流体量の測定に反応して前記生物流体を前記少なくとも２つのマイクロ流体分離チャンネルに分配するように構成される、請求項３３に記載のシステム。
【請求項３５】
前記添加剤が前記生物流体の密度、前記標的細胞の密度、および前記非標的細胞の密度の少なくとも１つを変化させることがさらにできる、請求項３０に記載のシステム。
【請求項３６】
前記流体の密度および標的細胞または非標的細胞の濃度の少なくとも１つ測定するように構成される少なくとも１つのセンサーをさらに含む、請求項３５に記載のシステム。
【請求項３７】
前記少なくとも１つのセンサーおよび前記添加剤の前記供給源と電気的に接続され、前記生物流体の密度および前記生物流体における前記標的細胞または前記非標的細胞の濃度の少なくとも１つの測定に反応して前記添加剤の所定容量を前記生物流体に導入するように構成されるコントロールモジュールをさらに含む、請求項３６に記載のシステム。
【請求項３８】
前記所定容量が前記生物流体の前記密度を約１．００〜約１．１５ｇ／ｍＬの密度に調節するように決定される、請求項３７に記載のシステム。
【請求項３９】
前記所定容量が前記生物流体の前記密度を約１．０４〜約１．０７ｇ／ｍＬの密度に調節するように決定される、請求項３８に記載のシステム。
【請求項４０】
流出懸濁液の少なくとも１つのパラメータを測定するように構成される少なくとも１つのセンサーをさらに含む、請求項３０に記載のシステム。
【請求項４１】
前記流出懸濁液のヘマトクリット（ＨＣＴ％）および前記流出懸濁液における前記標的細胞または前記非標的細胞の濃度の少なくとも１つを測定するように構成される少なくとも１つのセンサーをさらに含む、請求項４０に記載のセンサー。
【請求項４２】
前記少なくとも１つのセンサーおよび前記音響トランスデューサーと電気的に接続され、前記流出懸濁液における前記少なくとも１つのパラメータの測定に反応して前記音響トランスデューサーに送達される出力、電圧、および周波数の少なくとも１つを調節するように構成されるコントロールモジュールをさらに含む、請求項４０に記載のシステム。
【請求項４３】
前記コントロールモジュールが前記流出懸濁液の前記ＨＣＴ％を約１％未満に調節するように構成される、請求項４２に記載のシステム。
【請求項４４】
前記生物流体のＨＣＴ％および標的細胞または非標的細胞の濃度の少なくとも１つを測定するように構成される少なくとも１つのセンサーをさらに含む、請求項３０に記載のシステム。
【請求項４５】
前記少なくとも１つのセンサーおよび前記添加剤の前記供給源と電気的に接続され、前記生物流体の前記ＨＣＴ％および前記生物流体における前記標的細胞または前記非標的細胞の前記濃度の測定に反応して前記添加剤の所定容量を前記生物流体に導入するように構成されるコントロールモジュールをさらに含む、請求項４４に記載のシステム。
【請求項４６】
前記添加剤の前記所定容量が前記生物流体の前記ＨＣＴ％を約１０％未満に調節するように決定される、請求項４５に記載のシステム。
【請求項４７】
前記少なくとも１つのマイクロ流体分離チャンネルの前記少なくとも１つの流入口と流体接続され、前記生物流体および前記第二流体が実質的に並行して実質的に層化流で流れるように前記第二流体を前記生物流体に導入するように構成される第二流体の供給源をさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項４８】
前記マイクロ流体分離チャンネルの前記第一流出口と流体接続される第一収集チャンネルおよび前記マイクロ流体分離チャンネルの前記第二流出口と流体接続される第二収集チャンネルをさらに含む、請求項３０に記載のシステム。
【請求項４９】
前記第一収集チャンネルが、前記生物流体の前記供給源と流体接続される再循環ラインを含み、標的細胞豊富化流体を前記第一流入口から前記生物流体の前記供給源に再循環するように構成される、請求項４８に記載のシステム。
【請求項５０】
前記第一および第二収集チャンネルが収集容器と流体接続される、請求項４８に記載のシステム。
【請求項５１】
ドナー被験体および前記生物流体の前記供給源と流体接続される腔内ラインと接続可能であり、前記ドナー被験体から生物流体を取り出して、前記生物流体を前記生物流体の前記供給源に送達するように構成される、請求項３０に記載のシステム。
【請求項５２】
前記分離チャンネルの前記第一および第二流出口の少なくとも１つならびにレシピエント被験体と流体接続される腔内ラインと接続可能であり、流出懸濁液を前記レシピエント被験体に送達するように構成される、請求項３０に記載のシステム。
【請求項５３】
前記マイクロ流体分離チャンネルが熱可塑性材料から形成される、請求項３０に記載のシステム。