【手続補正書】
【提出日】令和2年3月5日(2020.3.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）第１の標的抗原結合ドメインが第１のドメインリンカーによってＣＤ−３抗原に対する第１の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドに連結されたものを含む第１のポリペプチド；ここで、該第１のポリペプチドは半減期延長ドメインをさらに含む；および
ｂ）第２の標的抗原結合ドメインが第２のドメインリンカーによってＣＤ−３抗原に対する第２の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドに連結されたものを含む第２のポリペプチド；ここで、該第２のポリペプチドは半減期延長ドメインをさらに含む、
を含むポリペプチド構築物の対において、
該第１のｓｃＦｖドメインは、第１のＶＨドメインおよび第１のＶＬドメインが、該第１のＶＨドメインおよび該第１のＶＬドメインの間の第１のプロテアーゼ切断部位を含む第１のｓｃＦｖリンカー部分を介して連結されたものを含み、該第１のＶＨドメインおよび該第１のＶＬドメインは、相互作用して、第１のＶＨ／ＶＬ対を形成し、ここで、該第１のＶＨドメインは不活性であり（ｉＶＨ）、該第１のＶＬドメインは活性であるので（ａＶＬ）、該第１のｓｃＦｖドメインは該ＣＤ−３抗原に特異的に結合せず；
該第２のｓｃＦｖドメインは、第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインが、該第２のＶＨドメインおよび該第２のＶＬドメインの間の第２のプロテアーゼ切断部位を含む第２のｓｃＦｖリンカー部分を介して連結されたものを含み、該第２のＶＨドメインおよび該第２のＶＬドメインは、相互作用して、第２のＶＨ／ＶＬ対を形成し、ここで、該第２のＶＬドメインは不活性であり（ｉＶＬ）、該第２のＶＨドメインは活性であるので（ａＶＨ）、該第２のｓｃＦｖドメインは該ＣＤ−３抗原に特異的に結合しない、
ポリペプチド構築物の対。
【請求項２】
ａ）該第１のポリペプチドが、ＮからＣ末端に向かって、
ｉ）該第１の標的抗原結合ドメイン；
ii）該第１のドメインリンカー；
iii）該第１のｓｃＦｖドメイン；ここで、該第１のｓｃＦｖドメインは、
１）該第１の活性なＶＬドメイン、
２）切断可能なリンカー、および
３）該第１の不活性なＶＨドメイン、
を含む；
iv）第３のドメインリンカー；および
ｖ）該半減期延長ドメイン、
を含み；
ｂ）該第２のポリペプチドが、ＮからＣ末端に向かって、
ｉ）該第２の標的抗原結合ドメイン；
ii）該第２のドメインリンカー；
iii）該第２のｓｃＦｖドメイン；ここで、該第２のｓｃＦｖドメインは、
１）該第２の活性なＶＨドメイン、
２）切断可能なリンカー、および
３）該第２の不活性なＶＬドメイン、
を含む；
iv）第４のドメインリンカー；および
ｖ）該半減期延長ドメイン、
を含む、
請求項１に記載のポリペプチド構築物の対。
【請求項３】
該半減期延長ドメインがヒトＨＳＡに結合する、請求項１または２に記載のポリペプチド構築物の対。
【請求項４】
該半減期延長ドメインが、配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＮＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＫＦＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＲＤＴＬＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＴＩＧＧＳＬＳＶＳＳＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６のアミノ酸３９７〜５１１）
を有する、請求項１〜３のいずれかに記載のポリペプチド構築物の対。
【請求項５】
該半減期延長ドメインが、配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＮＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＫＦＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＲＤＴＬＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＴＩＧＧＳＬＳＶＳＳＱＧＴＬＶＴＶＳＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７６のアミノ酸３９７〜５１７）
を有する、請求項１〜４のいずれかに記載のポリペプチド構築物の対。
【請求項６】
該第１および第２の標的抗原結合ドメインが、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ及びＦＯＬＲ１からなる群から選択される標的抗原に結合する、請求項１〜５のいずれかに記載のポリペプチド構築物の対。
【請求項７】
該第１および第２のプロテアーゼ切断部位が、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、メプリン、マトリプターゼ、トロンビン、ｕＰＡ及びカテプシンからなる群から選択されるヒトプロテアーゼによって切断される、請求項１〜６のいずれかに記載のポリペプチド構築物の対。
【請求項８】
該第１および第２のポリペプチドのそれぞれが、さらなる標的抗原結合ドメインを含む、請求項１〜７のいずれかに記載のポリペプチド構築物の対。
【請求項９】
該第１および第２の標的抗原結合ドメインが同じである、請求項１〜８のいずれかに記載のポリペプチド構築物の対。
【請求項１０】
該第１および第２の標的抗原結合ドメインが異なる、請求項１〜８のいずれかに記載のポリペプチド構築物の対。
【請求項１１】
該ａＶＨドメインが、配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４４のアミノ酸１３７〜２６１）
を含み、該ａＶＬドメインが、配列：
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＫＦＬＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＶＬＷＹＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号４６のアミノ酸１〜１０９）
を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載のポリペプチド構築物の対。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれかに記載される第１のポリペプチドをコードする第１の核酸、および請求項１〜１１のいずれかに記載される第２のポリペプチドをコードする第２の核酸を含む発現ベクター。
【請求項１３】
請求項１２に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれかに記載のポリペプチド構築物の対、請求項１２に記載の発現ベクター、または請求項１３に記載の宿主細胞を含む薬学的組成物。
【請求項１５】
癌の処置用である、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
ａ）第１の標的抗原結合ドメイン；
ｂ）ドメインリンカー；
ｃ）第１のｓｃＦｖドメイン；ここで、該第１のｓｃＦｖドメインは、第１のＶＨドメインおよび第１のＶＬドメインが、該第１のＶＨドメインおよび該第１のＶＬドメインの間の第１のプロテアーゼ切断部位を含む第１のｓｃＦｖリンカー部分を介して連結されたものを含み、該第１のＶＨドメインおよび該第１のＶＬドメインは、相互作用して、第１のＶＨ／ＶＬ対を形成し、ここで、該第１のＶＨドメインおよび該第１のＶＬドメインの一方が、不活性な第１のＶＨドメインまたは不活性な第１のＶＬドメインであるので、該第１のｓｃＦｖドメインは該ＣＤ−３抗原に特異的に結合しない；
ｄ）第３のプロテアーゼ切断部位を含んでもよい、ドメインリンカー；
ｅ）第２の標的抗原結合ドメイン；
ｆ）ドメインリンカー；
ｇ）第２のｓｃＦｖドメイン；ここで、該第２のｓｃＦｖドメインは、第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインが、該第２のＶＨドメインおよび該第２のＶＬドメインの間の第２のプロテアーゼ切断部位を含む第２のｓｃＦｖリンカー部分を介して連結されたものを含み、該第２のＶＨドメインおよび該第２のＶＬドメインは、相互作用して、第２のＶＨ／ＶＬ対を形成し、ここで、該第２のＶＨドメインおよび該第２のＶＬドメインの一方が、不活性な第２のＶＨドメインまたは不活性な第２のＶＬドメインであるので、該第２のｓｃＦｖドメインは該ＣＤ−３抗原に特異的に結合しない、
を含む、ＣＤ−３抗原に対する単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドにおいて、
該単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドが該第１および第２のプロテアーゼ切断部位を切断しうるプロテアーゼに暴露されると、該活性なＶＨおよび該活性なＶＬは、該ＣＤ−３抗原に結合することのできる活性な単一鎖ｓｃＦｖを形成しうる、
単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７０】
本発明の実施形態をさらに記載する：
［項１］
ＣＤ−３抗原に対する単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドであって、前記ｓｃＦｖポリペプチドが、第１のＶＨドメインと第１のＶＬドメインとの間の第１のプロテアーゼ切断部位を含む第１のｓｃＦｖリンカー部分を通じて接合される、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインを含む、第１のｓｃＦｖドメインであって、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインが、相互作用して、第１のＶＨ／ＶＬ対を形成し、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインのうちの一方が、不活性であり、そのため、前記第１のｓｃＦｖドメインが、前記ＣＤ−３抗原に特異的に結合せず、前記第１のｓｃＦｖポリペプチドが、第２のプロテアーゼ切断部位を任意選択で含む第１のドメインリンカー部分を通じて接合される、第１のｓｃＦｖドメインと、
第２のＶＨドメインと第２のＶＬドメインとの間の第３のプロテアーゼ切断部位を含む第２のｓｃＦｖリンカー部分を介して接合される、前記第２のＶＨドメイン及び前記第２のＶＬドメインを含む第２のｓｃＦｖドメインであって、前記第２のＶＨドメイン及び前記第２のＶＬドメインが、相互作用して、第２のＶＨ／ＶＬ対を形成し、前記第２のＶＨドメイン及び前記第２のＶＬのうちの一方が、不活性であり、そのため、前記第２のｓｃＦｖドメインが、前記ＣＤ−３抗原に特異的に結合しない、第２のｓｃＦｖドメインと、を含み、
前記第１のｓｃＦｖドメインが、第２のドメインリンカーを通じて、第１の標的抗原結合ドメインに接合され、前記第２のドメインリンカーが、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインから選択されるメンバーを、前記第１の標的抗原結合ドメインに接合し、
前記第２のｓｃＦｖドメインが、第３のドメインリンカーを通じて、第２の標的抗原結合ドメインに接合され、前記第３のドメインリンカーが、前記第２のＶＨドメイン及び前記第２のＶＬドメインから選択されるメンバーを、前記第２の標的抗原結合ドメインに接合する、単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２］
ＣＤ−３抗原に対する単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドであって、前記ｓｃＦｖポリペプチドが、第１のＶＨドメインと第１のＶＬドメインとの間の第１のプロテアーゼ切断部位を含む第１のｓｃＦｖリンカー部分を通じて接合される、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインを含む、第１のｓｃＦｖドメインであって、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインが、相互作用して、第１のＶＨ／ＶＬ対を形成し、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインのうちの一方が、不活性な第１のＶＨドメインまたは不活性な第１のＶＬドメインであり、そのため、前記第１のｓｃＦｖドメインが、前記ＣＤ−３抗原に特異的に結合せず、前記第１のｓｃＦｖポリペプチドが、第２のプロテアーゼ切断部位を任意選択で含む第１のドメインリンカー部分を通じて接合される、第１のｓｃＦｖドメインと、
第２のＶＨドメインと第２のＶＬドメインとの間の第３のプロテアーゼ切断部位を含む第２のｓｃＦｖリンカー部分を介して接合される、前記第２のＶＨドメイン及び前記第２のＶＬドメインを含む第２のｓｃＦｖドメインであって、前記第２のＶＨドメイン及び前記第２のＶＬが、相互作用して、第２のＶＨ／ＶＬ対を形成し、前記第２のＶＨドメイン及び前記第２のＶＬドメインのうちの一方が、不活性な第２のＶＨドメインまたは不活性な第２のＶＬドメインであり、そのため、前記第２のｓｃＦｖドメインが、前記ＣＤ−３抗原に特異的に結合しない、第２のｓｃＦｖドメインと、を含み、
前記第１のｓｃＦｖドメインが、第２のドメインリンカーを通じて、第１の標的抗原結合ドメインに接合され、前記第２のドメインリンカーが、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインから選択されるメンバーを、前記第１の標的抗原結合ドメインに接合し、
前記第２のｓｃＦｖドメインが、第３のドメインリンカーを通じて、第２の標的抗原結合ドメインに接合され、前記第３のドメインリンカーが、前記第２のＶＨドメイン及び前記第２のＶＬドメインから選択されるメンバーを、前記第２の標的抗原結合ドメインに接合し、
前記単一鎖ｓｃＦｖを、前記第１のｓｃＦｖリンカー部分の前記第１のプロテアーゼ切断部位を切断することができる第１のプロテアーゼと接触させると、前記不活性な第１のＶＨドメインまたは前記不活性な第１のＶＬドメインが、前記単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドから分離され、
第２のプロテアーゼが、前記第２のｓｃＦｖリンカー部分の前記第２のプロテアーゼ切断部位を切断することができ、前記不活性な第２のＶＨドメインまたは前記不活性な第２のＶＬドメインが、前記単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドから分離され、
それにより、前記ＣＤ−３抗原に結合することができる活性な単一鎖ｓｃＦｖを形成する、単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３］
ＣＤ−３抗原に対する単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドであって、前記ｓｃＦｖポリペプチドが、第１のＶＨドメインと第１のＶＬドメインとの間の第１のプロテアーゼ切断部位を含む第１のｓｃＦｖリンカー部分を通じて接合される、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインを含む、第１のｓｃＦｖドメインであって、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインが、相互作用して、第１のＶＨ／ＶＬ対を形成し、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインのうちの一方が、不活性であり、そのため、前記第１のｓｃＦｖドメインが、前記ＣＤ−３抗原に特異的に結合せず、前記第１のｓｃＦｖポリペプチドが、第２のプロテアーゼ切断部位を任意選択で含む第１のドメインリンカー部分を通じて接合される、第１のｓｃＦｖドメインと、
第１の標的抗原結合ドメインであって、前記第１のドメインリンカーが、前記第１のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインから選択されるメンバーを、前記第１の標的抗原結合ドメインに接合する、第１の標的抗原結合ドメインと、を含む、単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項４］
前記第１のＶＬドメイン、前記第１のＶＨドメイン、前記第１の標的抗原結合ドメイン、及びこれらの組み合わせから選択されるメンバーに接合される、少なくとも１つの半減期延長ドメインをさらに含む、上記項１〜３のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項５］
前記第１のＶＬドメイン、前記第１のＶＨドメイン、前記第２のＶＬドメイン、前記第２のＶＨドメイン、前記第１の標的抗原結合ドメイン、前記第２の標的抗原結合ドメイン、及びこれらの組み合わせから選択されるメンバーに接合される、少なくとも１つの半減期延長ドメインをさらに含む、上記項１〜２のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項６］
前記少なくとも１つの半減期延長ドメインが、前記不活性なＶＨドメイン及び前記不活性なＶＬドメイン以外のドメインに結合されている、上記項５に記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項７］
前記少なくとも１つの半減期延長ドメインが、血清タンパク質に結合することができる部分を含む、上記項５〜６のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項８］
前記血清タンパク質が、血清アルブミンである、上記項７に記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項９］
前記少なくとも１つの半減期延長ドメインが、ｓｃＦｖ、可変重ドメイン（ＶＨ）、可変軽ドメイン（ＶＬ）、ナノボディ、ペプチド、リガンド、または小分子を含む、上記項５〜８のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項１０］
少なくとも１つの半減期延長ドメインが、プロテアーゼ切断の前に、前記単一鎖ｓｃＦｖのＮ末端、Ｃ末端、及びこれらの組み合わせから選択されるメンバーに位置する、上記項５〜９のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項１１］
少なくとも１つの半減期延長ドメインが、プロテアーゼ切断の前に、前記ｓｃＦｖポリペプチドのＣ末端またはＮ末端にない、上記項５〜９のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項１２］
前記半減期延長ドメインが、その中に切断可能な部分を含むリンカーを通じて、前記第１のＶＬドメイン、前記第１のＶＨドメイン、前記第２のＶＬドメイン、前記第２のＶＨドメイン、前記第１の標的抗原結合ドメイン、前記第２の標的抗原結合ドメイン、及びこれらの組み合わせから選択されるメンバーに結合される、上記項５〜１１のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項１３］
前記ＣＤ−３抗原が、１つ以上のＣＤ３抗原から選択される、上記項１〜１２のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項１４］
前記標的抗原結合ドメインが、異常細胞によって発現される抗原に結合する、上記項１〜１３のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項１５］
前記異常細胞が、悪性細胞である、上記項１４に記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項１６］
前記標的抗原結合ドメインが、細胞表面受容体に結合する、上記項１〜１５のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項１７］
前記標的抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖ、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、非Ｉｇドメイン、または前記標的抗原に特異的に結合するリガンドを含む、上記項１〜１６のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項１８］
少なくとも１つの標的抗原結合ドメインが、腫瘍抗原に特異的に結合する、上記項１〜１７のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項１９］
前記細胞表面受容体が、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ｃＭｅｔ、ＣＥＡ、ＦｏＩＲ、及びこれらの組み合わせから選択されるメンバーである、上記項１６に記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２０］
前記第１のｓｃＦｖリンカー及び前記第２のｓｃＦｖリンカーが、同じ配列または異なる配列のポリペプチドリンカーである、上記項１〜１９のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２１］
前記第１のプロテアーゼ切断部位及び前記第２のプロテアーゼ切断部位が、同じプロテアーゼまたは異なるプロテアーゼに対する切断部位である、上記項１〜２０のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２２］
前記第１のプロテアーゼ切断部位及び前記第２のプロテアーゼ切断部位が、同じ配列または異なる配列である、上記項１〜２１のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２３］
前記第１のドメインリンカー及び前記第２のドメインリンカーが、同じ配列または異なる配列のポリペプチドリンカーである、上記項１〜２及び４〜２２のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２４］
前記プロテアーゼ切断部位が、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、スレオニンプロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ、メタロプロテイナーゼ、ゼラチナーゼ、及びアスパラギンペプチドリアーゼのうちの少なくとも１つによって切断される、上記項１〜２３のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２５］
前記プロテアーゼ切断部位が、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カリクレイン、ｈＫ１、ｈＫ１０、ｈＫ１５、プラスミン、コラゲナーゼ、ＩＶ型コラゲナーゼ、ストロメリシン、Ｘａ因子、キモトリプシン様プロテアーゼ、トリプシン様プロテアーゼ、エラスターゼ様プロテアーゼ、スブチリシン様プロテアーゼ、アクチニダイン（ａｃｔｉｎｉｄａｉｎ）、ブロメライン、カルパイン、カスパーゼ、カスパーゼ−３、Ｍｉｒ１−ＣＰ、パパイン、ＨＩＶ−１プロテアーゼ、ＨＳＶプロテアーゼ、ＣＭＶプロテアーゼ、キモシン、レニン、ペプシン、マトリプターゼ、レグマイン、プラスメプシン、ネペンテシン、メタロエキソペプチダーゼ、メタロエンドペプチダーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、エンテロキナーゼ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ、ｈＫ３）、インターロイキン−１β変換酵素、トロンビン、ＦＡＰ（ＦＡＰ−α）、メプルン（ｍｅｐｒｎ）、グランザイム、ジペプチジルペプチダーゼ、及びジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６）のうちの少なくとも１つによって切断される、上記項１〜２４のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２６］
前記プロテアーゼ切断ドメインが、腫瘍の部位で切断される、上記項１〜２５のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２７］
前記プロテアーゼ切断部位を切断する前記プロテアーゼが、前記腫瘍の微小環境内の細胞によって発現される、上記項１〜２６のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２８］
前記プロテアーゼ切断部位が、前記単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドが投与される対象の血液中で切断される、上記項１〜２７のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項２９］
前記ｓｃＦｖポリペプチドが、２つ以上のプロテアーゼ切断ドメインをさらに含む、上記項１〜２８のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３０］
前記プロテアーゼ切断ドメインが、前記半減期延長ドメインまたは前記ＣＤ−３結合ドメイン内にある、上記項５〜２９のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３１］
前記プロテアーゼ切断ドメインが、前記半減期延長ドメインまたは前記ＣＤ−３結合ドメイン内にない、上記項５〜２９のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３２］
１つ以上のＣＤ−３結合ドメインが、ヒトＣＤ−３に特異的な単一鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）に由来するポリペプチドを含む、上記項１〜３１のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３３］
前記ＣＤ−３結合ドメインが、ＣＤ３ε（イプシロン）、ＣＤ３δ（デルタ）、及びＣＤ３γ（ガンマ）から選択されるメンバーに特異的なＣＤ３結合ドメインである、上記項１〜３２のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３４］
１つ以上のＣＤ３結合ドメインが、ムロモナブ−ＣＤ３（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１）、ビジリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ）、ＳＰ３４、Ｉ２Ｃ、Ｘ３５、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ−Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆ１１１−４０９、ＣＬＢ−Ｔ３．４．２、ＴＲ−６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ−Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ−１４１、ＸＩＩＩ−４６、ＸＩＩＩ−８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２−８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２−４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ−Ｔ３０１、ＳＭＣ２、Ｆ１０１．０１、ＵＣＨＴ−１、及びＷＴ−３１からなる群から選択される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、上記項３３に記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３５］
１つ以上のＣＤ−３結合ドメインが、ヒト化されている、上記項１〜３４のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３６］
前記プロテアーゼ切断部位のプロテアーゼ切断に続いて、１つ以上の前記ＣＤ３結合ドメインが、ＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対して１０００ｎＭ以下のＫＤ結合を有する、上記項３３に記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３７］
前記プロテアーゼ切断部位のプロテアーゼ切断に続いて、１つ以上の活性化ＣＤ３結合ドメインが、ＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対して１００ｎＭ以下のＫＤ結合を有する、上記項３６に記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３８］
前記プロテアーゼ切断部位のプロテアーゼ切断に続いて、１つ以上の活性化ＣＤ３結合ドメインが、ＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対して１０ｎＭ以下のＫＤ結合を有する、上記項３７に記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項３９］
１つ以上のＣＤ−３結合ドメインが、カニクイザルＣＤ３との交差反応性を有する、上記項１〜３８のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項４０］
１つ以上のＣＤ−３結合ドメインが、本明細書で提供されるアミノ酸配列を含むＣＤ３結合ドメインである、上記項１〜３９のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項４１］
前記標的抗原結合ドメインが、ＥＧＦＲ結合ドメインである、上記項１〜４０のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項４２］
前記ＶＬドメイン及び前記ＶＨドメインが、３つのＣＤＲを各々含む、上記項１〜４１のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項４３］
前記不活性なＶＬ及び前記不活性なＶＨから選択されるメンバーが、前記ＶＬ及びＶＨの親配列に対して突然変異した少なくとも１つのアミノ酸を含む少なくとも１つのＣＤＲを含む、上記項１〜４２のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項４４］
前記不活性なＶＬ及び前記不活性なＶＨから選択されるメンバーが、前記ＶＬ及びＶＨの前記ＣＤＲ２の親配列に対して突然変異した少なくとも１つのアミノ酸を含むＣＤＲ２ドメインを含む、上記項１〜４３のいずれかの単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項４５］
前記不活性なＶＬ及び前記不活性なＶＨから選択されるメンバーが、前記第１のドメインリンカー及び前記第１のｓｃＦｖリンカーから選択されるメンバーを、前記ＣＤＲに組み込むことによって、前記ＶＬ及びＶＨの前記ＣＤＲの親配列に対して突然変異した少なくとも１つのＣＤＲを含む、上記項１〜４４のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド。
［項４６］
上記項１〜４５のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
［項４７］
上記項４６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
［項４８］
上記項４７に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
［項４９］
薬学的組成物であって、
（ｉ）上記項１〜４５のいずれか１項に記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチド、
（ｉｉ）上記項４６に記載のポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）上記項４７に記載のベクター、
（ｉｖ）上記項４８に記載の宿主細胞、及びその組み合わせ、ならびに
（ｖ）薬学的に許容される担体、から選択されるメンバーを含む、薬学的組成物。
［項５０］
上記項１〜４５のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドを生成するためのプロセスであって、上記項１〜４５に記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞を、前記単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドの発現を可能にする条件下で培養することと、前記生成された単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドを、前記培養物から回収及び精製することと、を含む、プロセス。
［項５１］
増殖性疾患、腫瘍性疾患、炎症性疾患、免疫学的障害、自己免疫疾患、感染性疾患、ウイルス性疾患、アレルギー反応、寄生虫反応、移植片対宿主疾患、もしくは宿主対移植片疾患の治療または改善のための方法であって、そのような治療または改善を必要とする対象への、上記項１〜４５のいずれかに記載の単一鎖ｓｃＦｖポリペプチドの投与を含む、方法。
［項５２］
前記対象が、ヒトである、上記項５２に記載の方法。
［項５３］
プロドラッグ組成物であって、
ｉ）第１のプロテアーゼ切断部位を含む第１のｓｃＦｖリンカー部分を通じて接合される、第１のＶＨドメイン及び第１のＶＬドメインを含む、第１のｓｃＦｖドメインを含む、ＣＤ３結合ドメインをコードする、第１のポリペプチド配列であって、前記第１のｓｃＦｖドメインがＣＤ３に特異的に結合しないようにする、第１のポリペプチド配列と、
ｉｉ）第２のプロテアーゼ切断部位を含む第２のｓｃＦｖリンカー部分を通じて接合される、第２のＶＨドメイン及び第２のＶＬドメインを含む、第２のｓｃＦｖドメインを含む、腫瘍抗原結合ドメインをコードする、第２のポリペプチド配列であって、前記第２のｓｃＦｖドメインが腫瘍抗原に特異的に結合しないようにする、第２のポリペプチド配列と、
ｉｉｉ）任意選択で少なくとも１つの半減期延長ドメインと、を含む、プロドラッグ組成物。
［項５４］
前記第１のポリペプチド配列及び前記第２のポリペプチド配列が、プロテアーゼ切断部位を任意選択で含む第１のドメインリンカー部分によって動作可能に連結されている、上記項５４に記載のプロドラッグ組成物。
［項５５］
プロドラッグ組成物であって、
ｉ）第１のポリペプチド配列であって、ａ）第１のプロテアーゼ切断部位を含む第１のｓｃＦｖリンカー部分を通じて接合される、第１のＶＨドメイン及び第１のＶＬドメインを含む、第１のｓｃＦｖドメインを含む、第１のＣＤ３結合ドメインであって、前記第１のｓｃＦｖドメインが、ＣＤ３に特異的に結合しない、第１のＣＤ３結合ドメイン、及びｂ）第１の腫瘍抗原結合ドメインを含む、第１のポリペプチド配列と、
ｉｉ）第２のポリペプチド配列であって、ａ）第２のプロテアーゼ切断部位を含む第２のｓｃＦｖリンカー部分を通じて接合される、第２のＶＨドメイン及び第２のＶＬドメインを含む、第２のｓｃＦｖドメインを含む、第２のＣＤ３結合ドメインであって、前記第２のｓｃＦｖドメインが、ＣＤ３に特異的に結合しない、第２のＣＤ３結合ドメイン、及びｂ）第２の腫瘍抗原結合ドメインを含む、第２のポリペプチド配列と、
ｉｉｉ）任意選択で少なくとも１つの半減期延長ドメインと、を含み、
前記第１のＶＨドメイン及び前記第２のＶＬドメインが、ＣＤ３に特異的に結合する、ならびに／または前記第２のＶＨドメイン及び前記第１のＶＬドメインが、ＣＤ３に特異的に結合する、プロドラッグ組成物。
［項５６］
前記第１の腫瘍抗原結合ドメイン及び前記第２の腫瘍抗原結合ドメインが、同じ腫瘍抗原に結合する、上記項５６に記載のプロドラッグ組成物。
［項５７］
前記第１の腫瘍抗原結合ドメイン及び前記第２の腫瘍抗原結合ドメインが、異なる腫瘍抗原タンパク質に結合する、上記項５６に記載のプロドラッグ組成物。
［項５８］
前記第１の腫瘍抗原結合ドメインが、第１の腫瘍細胞上に存在する第１の腫瘍抗原に結合し、前記第２の腫瘍抗原結合ドメインが、前記第１の腫瘍細胞上に存在する第２の腫瘍抗原に結合する、上記項５６に記載のプロドラッグ組成物。
全ての引用文献は、本明細書にそれらの全体が参考として明示的に援用される。