【手続補正書】
【提出日】令和2年1月23日(2020.1.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記配列：
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬ（配列番号１）
に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる、スプリットインテインＮ断片。
【請求項２】
下記配列：
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬＤＬＫＱＶＤＧＬＰ（配列番号２）
に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる、請求項１に記載のスプリットインテインＮ断片。
【請求項３】
請求項１または２に記載のスプリットインテインＮ−断片と化合物とを含んでなる、複合体。
【請求項４】
前記化合物がペプチドまたはポリペプチドである、請求項３に記載の複合体。
【請求項５】
前記化合物が抗体鎖である、請求項３に記載の複合体。
【請求項６】
前記化合物が抗体重鎖である、請求項３に記載の複合体。
【請求項７】
前記化合物が、ペプチド、オリゴヌクレオチド、薬物または細胞傷害性分子を含むものである、請求項３に記載の複合体。
【請求項８】
下記配列：
ＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号３）
に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる、スプリットインテインＣ断片。
【請求項９】
前記Ｃ断片の前記アミノ酸配列が、下記配列：
ＭＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号４）
に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むものである、請求項８に記載のスプリットインテインＣ断片。
【請求項１０】
下記配列：
ＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＧＥＰＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号３８９）
に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる、スプリットインテインＣ断片。
【請求項１１】
請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片と化合物とを含んでなる、複合体。
【請求項１２】
前記化合物がデンドリマーである、請求項１１に記載の複合体。
【請求項１３】
前記化合物が、下記構造：
【化１】
2019506163.tif 000001
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素（Ｈ）およびカーゴ分子からなる群から選択されるものである］
を有するデンドリマーである、請求項１１に記載の複合体。
【請求項１４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ色素分子である、請求項１３に記載の複合体。
【請求項１５】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ下記構造：
【化２】
2019506163.tif 000002
を有するフルオレセイン誘導体である、請求項１３に記載の複合体。
【請求項１６】
前記化合物が、ペプチドまたはポリペプチドである、請求項１１に記載の複合体。
【請求項１７】
前記化合物が、ペプチド、オリゴヌクレオチド、薬物または細胞傷害性分子を含むものである、請求項１１に記載の複合体。
【請求項１８】
前記化合物が、ペプチド、オリゴヌクレオチド、薬物または細胞傷害性分子に結合してなる１，２−アミノチオールである、請求項１１に記載の複合体。
【請求項１９】
前記化合物が、ペプチド、オリゴヌクレオチド、薬物または細胞傷害性分子に結合してなる１，２−アミノアルコールである、請求項１１に記載の複合体。
【請求項２０】
下記構造：
【化３】
2019506163.tif 000003
［式中、ＩｎｔＣは、請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片であり、ｎは０〜８である］
を有する複合体。
【請求項２１】
下記構造：
【化４】
2019506163.tif 000004
［式中、ＩｎｔＣは、請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片であり、ｎは０〜８である］
を有する複合体。
【請求項２２】
下記構造：
【化５】
2019506163.tif 000005
［式中、ＩｎｔＣは、請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片であり、Ｘは、硫黄（Ｓ）または酸素（Ｏ）である］
を有する複合体。
【請求項２３】
請求項１または２に記載のスプリットインテインＮ断片と、
請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片と
を含んでなる組成物。
【請求項２４】
請求項１または２に記載のスプリットインテインＮ断片をコードするヌクレオチド配列を含んでなるヌクレオチドプラスミド。
【請求項２５】
請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片をコードするヌクレオチド配列を含んでなるヌクレオチドプラスミド。
【請求項２６】
２つの複合体をスプライシングするための方法であって、
第１の化合物と、請求項１または２に記載のスプリットインテインＮ断片とを含む第１の複合体と、第２の化合物と、請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片とを含む第２の複合体とを接触させ、当該接触が、前記スプリットインテインＮ断片と前記スプリットインテインＣ断片とを結合させてインテイン中間体を形成する条件下で実施されることを特徴とする工程と、
前記インテイン中間体を反応させて前記第１の化合物と前記第２の化合物とのコンジュゲートを形成する工程と
を少なくとも含んでなることを特徴とする、方法。
【請求項２７】
第１の化合物と、請求項１または２に記載のスプリットインテインＮ断片とを含む第１の複合体と、第２の化合物と、請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片とを含む第２の複合体とを接触させ、当該接触が、前記スプリットインテインＮ断片と前記スプリットインテインＣ断片とを結合させてインテイン中間体を形成する条件下で実施されることを特徴とする工程と、
前記インテイン中間体と求核剤とを反応させて前記第１の化合物と前記求核剤とのコンジュゲートを形成する工程と
を少なくとも含んでなることを特徴とする方法。
【請求項２８】
前記第１の化合物が、ポリペプチドまたは抗体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記第２の化合物が、デンドリマーまたはポリペプチドである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
下記配列：
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬＤＬＫＱＶＤＧＬＰＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号３９０）
に対して少なくとも９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるインテイン。
【請求項３１】
２つの複合体を一緒にスプライシングするためのキットであって、
請求項１または２に記載のスプリットインテインＮ断片と、
請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片と、
前記スプリットインテインＮ断片と前記スプリットインテインＣ断片とを結合させてインテイン中間体を形成するための試薬と、
求核剤と
を含んでなる、キット。
【請求項３２】
合成コンセンサスインテインペプチド配列を生成するための方法であって、
複数の相同インテインペプチド配列の集団を生成する工程と、
前記複数の相同インテインペプチド配列の集団内の高速スプライシングに関連するアミノ酸を同定する工程と、
第２の複数の相同インテインペプチド配列の亜集団を生成し、当該第２の複数の相同インテインペプチド配列が高速スプライシングに関連するアミノ酸を含むことを特徴とする工程と、
前記亜集団の少なくとも３つのペプチド配列のアライメントを作製する工程と、
前記少なくとも３つのペプチド配列の各位置で最も頻繁に出現するアミノ酸残基を決定する工程と、
前記少なくとも３つのペプチド配列の各位置で最も頻繁に出現するアミノ酸残基に基づいて合成コンセンサスインテインペプチド配列を生成する工程と
を少なくとも含んでなることを特徴とする、方法。
【請求項３３】
請求項１または２に記載のスプリットインテインＮ断片のアミノ酸配列をコードする第１のヌクレオチド配列と、請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片のアミノ酸配列をコードする第２のヌクレオチド配列とを融合させ、前記第１のヌクレオチド配列と前記第２のヌクレオチド配列との融合物が隣接インテインをコードするようにする工程を少なくとも含んでなることを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項３３に記載の方法であって、
下記配列：
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬ（配列番号１）
を含んでなるスプリットインテインＮ断片のアミノ酸配列をコードする第１のヌクレオチド配列と、
下記配列：
ＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号３）
を含んでなるスプリットインテインＣ断片のアミノ酸配列をコードする第２のヌクレオチド配列と
を融合させ、前記第１のヌクレオチド配列と前記第２のヌクレオチド配列との融合物が隣接インテインをコードするようにする工程を少なくとも含んでなることを特徴とする、方法。
【請求項３５】
請求項８、９または１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片のアミノ酸配列をコードする第２のヌクレオチ配列と融合してなる、請求項１または２に記載のスプリットインテインＮ断片のアミノ酸配列をコードする第１のヌクレオチド配列を含んでなる遺伝子融合物。
【請求項３６】
下記配列：
ＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号３）
を含んでなる、スプリットインテインＣ断片のアミノ酸配列をコードする第２のヌクレオチド配列と融合してなる、
下記配列：
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬ（配列番号１）
を含んでなる、スプリットインテインＮ断片のアミノ酸配列をコードする第１のヌクレオチド配列を含んでなる、請求項３５に記載の遺伝子融合物。
【請求項３７】
請求項１に記載のスプリットインテインＮ断片または請求項８〜１０のいずれか一項に記載のスプリットインテインＣ断片をコードするヌクレオチド。