【手続補正書】
【提出日】令和1年12月19日(2019.12.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明の別の好ましい実施形態では、本発明によるPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下より選択される6つCDR領域を含む。
1）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
2）それぞれ配列番号：14、配列番号：22、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
3）それぞれ配列番号：14、配列番号：23、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
4）それぞれ配列番号：20、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
5）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：28、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
6）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：29、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
7）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：35及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
8）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：36及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
9）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：31、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
10）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：32、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
11）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：38で示される6つのCDR領域;
12）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：39で示される6つのCDR領域;
13）それぞれ配列番号：21、配列番号：24、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
14）それぞれ配列番号：14、配列番号：25、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
15）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：30、配列番号：17、配列番号：37及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
16）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：40で示される6つのCDR領域;
17）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：41で示される6つのCDR領域;
18）それぞれ配列番号：14、配列番号：26、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
19）それぞれ配列番号：14、配列番号：27、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
20）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：33、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
21）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：34、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域;
22）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：42で示される6つのCDR領域;及び
23）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：30、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR領域。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
i）HCDR1、前記HCDR1の配列がGYX1IH（配列番号：43）である（式中、X1はT、DまたはEである。）；
ii）HCDR2、前記HCDR2の配列がX2IX3PSX4TYTKFNQKFKD（配列番号：44）である（式中、X2はYまたはEであり;X3はN、L、IまたはVであり;X4はS、GまたはAである。）;
iii）HCDR3、前記HCDR3の配列がAREX5IX6X7NYWFFDX8（配列番号：45）である（式中、X5はRまたはNであり;X6はYまたはFであり;X7はSまたはFであり;X8はVまたはRである。）;
iv）LCDR1、前記LCDR1の配列がKASQNVYX1X2VX3（配列番号：46）である（式中、X1はTまたはWであり;X2はAまたはEであり;X3はA、DまたはVである。）;
v）LCDR2、前記LCDR2の配列がX4X5X6NRYT（配列番号：47）である（式中、X4はS、EまたはQであり;X5はAまたはMであり;X6はSまたはVである。）;及び
vi）LCDR3、前記LCDR3の配列がQQX7SX8X9PX10T（配列番号：48）である（式中、X7はY、FまたはLであり;X8はSまたはWであり;X9はY、F、QまたはSであり;X10はY、DまたはEである。）。
から選択される少なくとも1つ以上のCDR領域を含む可変領域を含む、PCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
PCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントが、それぞれ配列番号：43、配列番号：44及び配列番号：45で示されるHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含む、請求項１に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
PCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントが、それぞれ配列番号：46、配列番号：47及び配列番号：48で示されるLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、請求項１に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
PCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントが、それぞれ配列番号：43、配列番号：44及び配列番号：45で示されるHCDR1、HCDR2及びHCDR3及びそれぞれ配列番号：46、配列番号：47及び配列番号：48で示されるLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
前記HCDR1が、配列番号：14、配列番号：20または配列番号：21のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択され;
HCDR2が、配列番号：15、配列番号：22、配列番号：23、配列番号：24、配列番号：25、配列番号：26または配列番号：27のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択され;
HCDR3が、配列番号：16、配列番号：28、配列番号：29または配列番号：30のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択される、請求項１または請求項２に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記LCDR1が、配列番号：17、配列番号：31、配列番号：32、配列番号：33または配列番号：34のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択され;
LCDR2が、配列番号：18、配列番号：35、配列番号：36または配列番号：37、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択され;
LCDR3が、配列番号：19、配列番号：38、配列番号：39、配列番号：40、配列番号：41または配列番号：42のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択される、請求項１または請求項３に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
前記HCDR1が、配列番号：14、配列番号：20または配列番号：21のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択され;
HCDR2が、配列番号：15、配列番号：22、配列番号：23、配列番号：24、配列番号：25、配列番号：26または配列番号：27のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択され；
HCDR3が、配列番号：16、配列番号：28、配列番号：29または配列番号：30のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択され;及び
LCDR1が、配列番号：17、配列番号：31、配列番号：32、配列番号：33または配列番号：34のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択され；
LCDR2が、配列番号：18、配列番号：35、配列番号：36または配列番号：37のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択され;
LCDR3が、配列番号：19、配列番号：38、配列番号：39、配列番号：40、配列番号：41または配列番号：42のアミノ酸配列、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択される、請求項１〜６のいずれか1項に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
PCSK9抗体が、
1）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
2）それぞれ配列番号：14、配列番号：22、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
3）それぞれ配列番号：14、配列番号：23、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
4）それぞれ配列番号：20、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
5）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：28、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
6）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：29、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
7）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：35及び配列番号：19で示される6つのCDR;
8）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：36及び配列番号：19で示されるような6つのCDR;
9）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：31、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
10）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：32、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
11）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：38で示される6つのCDR;
12）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：39で示される6つのCDR;
13）それぞれ配列番号：21、配列番号：24、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
14）それぞれ配列番号：14、配列番号：25、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
15）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：30、配列番号：17、配列番号：37及び配列番号：19で示される6つのCDR;
16）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：40で示される6つのCDR;
17）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：41で示される6つのCDR;
18）それぞれ配列番号：14、配列番号：26、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
19）それぞれ配列番号：14、配列番号：27、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
20）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：33、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
21）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：34、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR;
22）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：16、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：42で示される6つのCDR;及び
23）それぞれ配列番号：14、配列番号：15、配列番号：30、配列番号：17、配列番号：18及び配列番号：19で示される6つのCDR。
から成る群より選択される6つのCDRを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
PCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントが、マウス抗体またはそのフラグメントである、請求項１〜８のいずれか１項に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
PCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントが、キメラ抗体またはそのフラグメントである、請求項１〜８のいずれか１項に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
PCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒト化抗体またはそのフラグメントである、請求項１〜８のいずれか１項に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
ヒト化抗体が、重鎖可変FR領域を含み、該重鎖可変FR領域が、ヒト生殖系列重鎖IGHV1-2*02及びhjh6.1の組合せ配列またはその変異体配列に由来し;該重鎖可変FR領域が、IGHV1-2*02由来のFR1、FR2、FR3領域及びhjh6.1由来のFR4領域またはその変異体配列を含む、請求項１１に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
ヒト化抗体が、配列番号：10で示される重鎖可変領域またはその変異体を含み;該変異体が、配列番号：10に1、2、3、4、5、6、7、8、9または10個のアミノ酸変化の存在を意味する、請求項１２に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
ヒト化抗体が、1〜10個のアミノ酸逆突然変異を有する重鎖FR領域を含み、該逆突然変異が、好ましくは、R72A、T74K、V68A、M70L、M48V、G49A、R67K及びR38Kから成る1つ以上の逆突然変異から選択される、請求項１２に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１５】
PCSK9抗体がVHを含み、前記VHのアミノ酸配列は、配列番号：12、配列番号：49、配列番号：50、配列番号：51、配列番号：52、配列番号：53、配列番号：54、配列番号：55、配列番号：56、配列番号：57または配列番号：58、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１６】
ヒト化抗体が、軽鎖可変領域上の軽鎖FR領域を含み、該軽鎖FR領域の配列が、ヒト生殖系列軽鎖IGKV1-39*01及びhjk4.1の組合せ配列またはその変異体配列に由来し;該軽鎖FR領域が、ヒト生殖系列軽鎖IGKV1-39*01由来のFR1、FR2、FR3及びhjk4.1由来のFR4、またはその突然変異配列を含む、請求項１１に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１７】
ヒト化抗体が、配列番号：11で示される軽鎖可変領域またはその変異体を含み;該変異体が、配列番号：11に1、2、3、4、5、6、7、8、9または10個のアミノ酸変化の存在を意味する、請求項１６に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１８】
ヒト化抗体が、1〜10個のアミノ酸逆突然変異を有する軽鎖FR領域を含み、該逆突然変異が、好ましくは、Q3V、A43S及びY87Fから成る1つ以上の逆突然変異から選択される、請求項１６に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１９】
PCSK9抗体がVLを含み、該VLのアミノ酸配列が、配列番号：13、配列番号：59、配列番号：60、配列番号：61、配列番号：62、配列番号：63、配列番号：64、配列番号：65、配列番号：66、配列番号：67、配列番号：68、配列番号：69または配列番号：70、または前記の配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２０】
PCSK9抗体が、
1）配列番号：12のVH及び配列番号：13のVL;
2）配列番号：49のVH及び配列番号：13のVL;
3）配列番号：50のVH及び配列番号：13のVL;
4）配列番号：51のVH及び配列番号：13のVL;
5）配列番号：52のVH及び配列番号：13のVL;
6）配列番号：53のVH及び配列番号：13のVL;
7）配列番号：12のVH及び配列番号：59のVL;
8）配列番号：12のVH及び配列番号：60のVL;
9）配列番号：12のVH及び配列番号：61のVL;
10）配列番号：12のVH及び配列番号：62のVL;
11）配列番号：12のVH及び配列番号：63のVL;
12）配列番号：12のVH及び配列番号：64のVL;
13）配列番号：54のVH及び配列番号：13のVL;
14）配列番号：55のVH及び配列番号：13のVL;
15）配列番号：56のVH及び配列番号：65のVL;
16）配列番号：12のVH及び配列番号：66のVL;
17）配列番号：12のVH及び配列番号：67のVL;
18）配列番号：57のVH及び配列番号：13のVL;
19）配列番号：58のVH及び配列番号：13のVL;
20）配列番号：12のVH及び配列番号：68のVL;
21）配列番号：12のVH及び配列番号：69のVL;
22）配列番号：12のVH及び配列番号：70のVL;及び
23）配列番号：56のVH及び配列番号：13のVL。
から成る群より選択されるVH及びVLを含む、請求項１１に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２１】
PCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントが、更にヒトIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4またはそれらの変異体、またはそれらの配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列に由来する重鎖定常領域を含み;好ましくは、ヒトIgG1、IgG2またはIgG4、またはアミノ酸変異は血清における抗体の半減期を延長させるヒトIgG1、IgG2もしくはIgG4変異体に由来する重鎖定常領域を含み、より好ましくは、YTE突然変異で導入されたIgG1、IgG2またはIgG4重鎖定常領域を含む;
PCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントが、更にヒトκ鎖、ヒトλ鎖またはそれらの変異体、またはそれらの配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列に由来する軽鎖定常領域を含む、請求項１０〜２０のいずれか１項に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２２】
PCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントが、
1）配列番号：71の重鎖配列及び配列番号：73の軽鎖配列;または
2）配列番号：75の重鎖配列及び配列番号：73の軽鎖配列。
を含む、請求項２１に記載のPCSK9と特異的に結合するPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載のPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするDNA分子。
【請求項２４】
請求項２３に記載のDNA分子を含む発現ベクター。
【請求項２５】
請求項２４に記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞であって、該宿主細胞が、原核細胞及び真核細胞から成る群より選択され、好ましくは真核細胞であり、より好ましくは哺乳動物細胞である。
【請求項２６】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載のPCSK9抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で請求項２５の宿主細胞を培養すること、及び/または該宿主細胞からPCSK9抗体を回収することを含む、PCSK9抗体を調製する方法。
【請求項２７】
治療的有効量の請求項１〜２２のいずれか１項に記載のPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント、及び1つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含有する、医薬組成物。
【請求項２８】
PCSK9媒介性の疾患または病態を治療するための医薬品の調製における、請求項１〜２２のいずれか１項に記載のPCSK9抗体またはその抗原結合フラグメント、または請求項２７に記載の医薬組成物の使用。該疾患または病態が、好ましくは、コレステロール関連疾患であり;より好ましくは、高コレステロール血症、心臓病、メタボリックシンドローム、糖尿病、冠状動脈性心疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病及び一般的な脂質異常症であり；最も好ましくは、高コレステロール血症、脂質異常症、粥状動脈硬化、CVDまたは冠状動脈性心疾患である。