【手続補正書】
【提出日】令和2年11月9日(2020.11.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における非虚血性拡張型心筋症を治療するための単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団であって、
（Ａ）前記対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも２５％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療するものであるか；
（Ｂ）前記対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも１００％増加し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療するものであるか；
（Ｃ）前記対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療するものであるか；
（Ｄ）前記対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療するものであるか；
（Ｅ）前記対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７０％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療するものであるか；
（Ｆ）前記対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも４０％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療するものであるか；又は
（Ｇ）前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも８０％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療するものである、集団。
【請求項２】
対象における加齢による脆弱の症状を治療するための単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団であって、
（Ａ）前記対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも１０％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療するものであるか；
（Ｂ）前記対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも７５％増加し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療するものであるか；
（Ｃ）前記対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも６０％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療するものであるか；
（Ｄ）前記対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療するものであるか；
（Ｅ）前記対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７５％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療するものであるか；
（Ｆ）前記対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも２０％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療するものであるか；
（Ｇ）前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも５０％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療するものであるか；又は
（Ｈ）前記対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比と比較して少なくとも１００％増加し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療するものである、集団。
【請求項３】
前記対象がヒトである、請求項１に記載の集団。
【請求項４】
前記対象が加齢に伴う炎症を示している、請求項２に記載の集団。
【請求項５】
前記間葉系幹細胞が骨髄由来の間葉系幹細胞である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の集団。
【請求項６】
（Ａ）前記間葉系幹細胞がＳＴＲＯ−１を発現していないか；
（Ｂ）ＣＤ４５を発現していないか；
（Ｃ）線維芽細胞表面マーカーを発現していない、又は線維芽細胞形態を有していないか；又は
（Ｄ）遺伝子操作されていない、請求項１〜５のいずれか一項に記載の集団。
【請求項７】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が単一用量又は２つ以上の用量で投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の集団。
【請求項８】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が
（Ａ）少なくとも年１回投与されるか；
（Ｂ）全身に投与されるか；
（Ｃ）点滴又は直接注射によって投与されるか；（Ｄ）静脈内、動脈内、又は腹腔内、好ましくは静脈内に投与されるか；又は
（Ｅ）筋肉注射で、静脈内に、動脈内に、腹腔内に、皮下に、皮内に、経口で、経心内膜で、又は鼻腔内、好ましくは筋肉注射で投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の集団。
【請求項９】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が
（Ａ）約２０×１０６個；
（Ｂ）約１００×１０６個；又は
（Ｃ）約２００×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の集団。
【請求項１０】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団がヒトドナーから得られ、及び同種間葉系幹細胞の前記単離された集団を前記対象に投与する前に、前記対象へのヒトドナーのＭＨＣマッチングのステップは用いられない、請求項１〜９のいずれか一項に記載の集団。
【請求項１１】
対象における非虚血性拡張型心筋症の治療の有効性を決定するインビトロの方法であって、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団の前記対象への投与前後に前記対象から得られた血清中の、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、及びＴＮＦ−α濃度からなる群から選択される１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを決定するステップと、前記単離されたヒト間葉系幹細胞の集団の投与前後に得られた前記血清中の前記１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを比較するステップとを含み、治療が、
（１）疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも２５％減少している、
（２）スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも１００％増加している、
（３）細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少している、
（４）早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少している、
（５）慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７０％減少している、
（６）Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも４０％減少している、及び／又は
（７）前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも８０％減少している
場合に有効である、インビトロの方法。
【請求項１２】
対象における加齢による脆弱の症状の治療の有効性を決定するインビトロの方法であって、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団の前記対象への投与前後に前記対象から得られた血清中の、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及びＴＮＦ−α濃度からなる群から選択される１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを決定するステップと、前記単離されたヒト間葉系幹細胞の集団の投与前後に得られた前記血清中の前記１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを比較するステップとを含み、治療が、
（１）疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも１０％減少している、
（２）スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも７５％増加している、
（３）細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも６０％減少している、
（４）早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少している、
（５）慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７５％減少している、
（６）Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも２０％減少している、
（７）前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも５０％減少している、及び／又は、
（８）前記対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比と比較して少なくとも１００％増加している
場合に有効である、インビトロの方法。
【請求項１３】
非虚血性拡張型心筋症の治療に有効であるかどうか決定するための、血清中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）のレベル、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）のレベル、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞のレベル、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）のレベル、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）のレベル、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）のレベル、及びＴＮＦ−α濃度のインビトロでの使用。
【請求項１４】
加齢による脆弱の治療に有効であるかどうか決定するための、血清中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）のレベル、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）のレベル、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞のレベル、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）のレベル、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）のレベル、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）のレベル、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及びＴＮＦ−α濃度のインビトロでの使用。