【手続補正書】
【提出日】令和2年3月12日(2020.3.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘルパーウイルス粒子、アデノ随伴ウイルス粒子、および緩衝液を含有する試料中のヘルパーウイルスを不活性化する方法であって、
該試料を、４５℃を超えるまたはそれに等しい温度まで加熱すること
を含み、該緩衝液が、１０ｍＭもしくはそれを超える濃度の二価もしくは三価カチオン、または１０ｍＭもしくはそれを超える濃度のコスモトロピック塩を含む、方法。
【請求項２】
前記試料が、４５℃から６５℃の間、４５℃から６０℃の間、４５℃から５５℃の間、４７℃から５３℃の間の温度まで、または４８℃もしくは４９℃の温度まで加熱される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記試料が、１分から６時間の間、１０分から１８０分の間、２０分から１８０分の間、２０分から６０分の間、または２０分から４０分の間の期間、前記温度に維持される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
３．７またはそれを超えるヘルパーウイルスの対数減少をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記アデノ随伴ウイルス粒子が、４．７ｋｂを超えるＤＮＡ、およそ５．１ｋｂのＤＮＡ、およそ４．７ｋｂのＤＮＡ、４．０ｋｂ未満のＤＮＡ、またはおよそ３．０ｋｂのＤＮＡのゲノムを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記アデノ随伴ウイルス粒子が、実質的に自己相補性であるゲノムを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記緩衝液が、カオトロピック塩をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記カオトロピック塩が、尿素の塩またはグアニジンの塩である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記緩衝液が、グリセロール、プロピレングリコール、および１，６−ヘキサンジオールを含む群から選択されるポリオールをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記緩衝液が、４℃から７０℃の間の温度においてｐＨを３．０から１０．０の間または７．０から９．０の間に維持する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記緩衝液が、４０ｍＭ  ビス−トリスプロパン、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２０ｍＭシトレート、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．００１％（ｗ／ｖ）Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記緩衝液が、トリス緩衝液、リン酸緩衝液またはトリアゾールアミン緩衝液である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記ヘルパーウイルスが、アデノウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
アデノウイルスが、Ａｄ５である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
二価または三価カチオンの前記濃度が、１５ｍＭを超える、２０ｍＭを超える、５０ｍＭを超える、１００ｍＭを超える、２００ｍＭを超える、１０ｍＭ〜５００ｍＭである、２０ｍＭ〜４００ｍＭである、３０ｍＭ〜３００ｍＭである、５０ｍＭ〜２５０ｍＭである、または７０ｍＭ〜２００ｍＭである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記緩衝液が、１０ｍＭまたはそれを超える濃度の、Ｍｇ、Ｃａ、Ｍｎ、Ｎｉ、Ｚｎ、Ｃｏ、Ｓｒ、Ｃｕ、Ｃｒ、ＦｅおよびＳｃからなる群から選択される金属の二価または三価カチオンを含み、前記二価カチオンが、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、Ｎｉ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃｏ２＋、Ｓｒ２＋、Ｃｕ２＋およびＣｒ２＋からなる群から選択され、前記三価カチオンが、Ｓｃ３＋である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記カチオンが、Ｍｇ２＋である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記緩衝液が、１０ｍＭまたはそれを超える濃度の、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、リン酸カリウム、および塩化セシウムを含む群から選択されるコスモトロピック塩を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記緩衝液が、１０ｍＭまたはそれを超える濃度の硫酸アンモニウムを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
コスモトロピック塩の前記濃度が、０．１Ｍ〜１Ｍ、０．２Ｍ〜０．８Ｍ、０．３Ｍ〜０．７Ｍ、０．４Ｍ〜０．６Ｍまたは０．５Ｍである、請求項１８に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明の不活性化の一部の方法は、活性ヘルパーウイルスの５．０を超える対数減少を達成する。これらの方法のサブセットは、ヘルパーウイルスの６．０を超える、または６．３を超える対数減少を達成する。一部の方法では、ヘルパーウイルスは、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、またはバキュロウイルスである。ヘルパーウイルスがアデノウイルスである方法のサブセットにおいて、アデノウイルスはＡｄ５である。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヘルパーウイルス粒子、アデノ随伴ウイルス粒子、および緩衝液を含有する試料中のヘルパーウイルスを不活性化する方法であって、
該試料を、４５℃を超えるまたはそれに等しい温度まで加熱すること
を含み、該緩衝液が、１０ｍＭもしくはそれを超える濃度の二価もしくは三価カチオン、または１０ｍＭもしくはそれを超える濃度のコスモトロピック塩を含む、方法。
（項目２）
前記試料が、４５℃から６５℃の間の温度まで加熱される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記試料が、４５℃から６０℃の間の温度まで加熱される、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記試料が、４５℃から５５℃の間の温度まで加熱される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記試料が、４７℃から５３℃の間の温度まで加熱される、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記試料が、４８℃まで加熱される、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記試料が、４９℃まで加熱される、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記試料が、１分から６時間の間の期間、前記温度に維持される、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記試料が、１０分から１８０分の間の期間、前記温度に維持される、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記試料が、２０分から１８０分の間の期間、前記温度に維持される、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記試料が、２０分から６０分の間の期間、前記温度に維持される、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記試料が、２０分から４０分の間の期間、前記温度に維持される、項目１に記載の方法。
（項目１３）
６．３またはそれを超えるヘルパーウイルスの対数減少をもたらす、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記アデノ随伴ウイルス粒子が、４．７ｋｂを超えるＤＮＡのゲノムを含む、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記アデノ随伴ウイルス粒子が、５．１ｋｂを超えるＤＮＡのゲノムを含む、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記アデノ随伴ウイルス粒子が、およそ４．７ｋｂのＤＮＡのゲノムを含む、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記アデノ随伴ウイルス粒子が、４．０ｋｂ未満のＤＮＡのゲノムを含む、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記アデノ随伴ウイルス粒子が、およそ３．０ｋｂのＤＮＡのゲノムを含む、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記アデノ随伴ウイルス粒子が、実質的に自己相補性であるゲノムを含む、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記緩衝液が、カオトロピック塩をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目２１）
前記カオトロピック塩が、尿素の塩である、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記カオトロピック塩が、グアニジンの塩である、項目２０に記載の方法。
（項目２３）
前記緩衝液が、グリセロール、プロピレングリコール、および１，６−ヘキサンジオールを含む群から選択されるポリオールをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目２４）
前記緩衝液が、４℃から７０℃の間の温度においてｐＨを３．０から１０．０の間に維持する、項目１に記載の方法。
（項目２５）
前記緩衝液が、４℃から７０℃の間の温度においてｐＨを７．０から９．０の間に維持する、項目１に記載の方法。
（項目２６）
前記緩衝液が、４０ｍＭ  ビス−トリスプロパン、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２０ｍＭシトレート、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．００１％（ｗ／ｖ）Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目２７）
前記緩衝液が、トリス緩衝液である、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
前記緩衝液が、リン酸緩衝液である、項目２４に記載の方法。
（項目２９）
前記緩衝液が、トリアゾールアミン緩衝液である、項目２４に記載の方法。
（項目３０）
前記ヘルパーウイルスが、アデノウイルスである、項目１に記載の方法。
（項目３１）
アデノウイルスが、Ａｄ５である、項目２８に記載の方法。
（項目３２）
二価または三価カチオンの前記濃度が、１５ｍＭを超える、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
二価または三価カチオンの前記濃度が、２０ｍＭを超える、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
二価または三価カチオンの前記濃度が、５０ｍＭを超える、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
二価または三価カチオンの前記濃度が、１００ｍＭを超える、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
二価または三価カチオンの前記濃度が、２００ｍＭを超える、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
二価または三価カチオンの前記濃度が、１０ｍＭ〜５００ｍＭである、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
二価または三価カチオンの前記濃度が、２０ｍＭ〜４００ｍＭである、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
二価または三価カチオンの前記濃度が、３０ｍＭ〜３００ｍＭである、項目３７に記載の方法。
（項目４０）
二価または三価カチオンの前記濃度が、５０ｍＭ〜２５０ｍＭである、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
二価または三価カチオンの前記濃度が、７０ｍＭ〜２００ｍＭである、項目３７に記載の方法。
（項目４２）
前記緩衝液が、１０ｍＭまたはそれを超える濃度の、Ｍｇ、Ｃａ、Ｍｎ、Ｎｉ、Ｚｎ、Ｃｏ、Ｓｒ、Ｃｕ、Ｃｒ、ＦｅおよびＳｃからなる群から選択される金属の二価または三価カチオンを含む、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記カチオンが、二価カチオンである、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
前記カチオンが、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、Ｎｉ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃｏ２＋、Ｓｒ２＋、Ｃｕ２＋およびＣｒ２＋からなる群から選択される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記カチオンが、Ｃａ２＋である、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
前記カチオンが、Ｍｇ２＋である、項目４３に記載の方法。
（項目４７）
前記カチオンが、三価カチオンである、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記カチオンが、Ｓｃ３＋である、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記緩衝液が、１０ｍＭまたはそれを超える濃度の、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、リン酸カリウム、および塩化セシウムを含む群から選択されるコスモトロピック塩を含む、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記緩衝液が、１０ｍＭまたはそれを超える濃度の硫酸アンモニウムを含む、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
コスモトロピック塩の前記濃度が、０．１Ｍ〜１Ｍである、項目４９または５０に記載の方法。
（項目５２）
コスモトロピック塩の前記濃度が、０．２Ｍ〜０．８Ｍである、項目４９または５０に記載の方法。
（項目５３）
コスモトロピック塩の前記濃度が、０．３Ｍ〜０．７Ｍである、項目４９または５５５０に記載の方法。
（項目５４）
コスモトロピック塩の前記濃度が、０．４Ｍ〜０．６Ｍである、項目４９または５０に記載の方法。
（項目５５）
コスモトロピック塩の前記濃度が、０．５Ｍである、項目４９または５０に記載の方法。