【手続補正書】
【提出日】令和2年9月9日(2020.9.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然型インスリンＢ鎖の１６番目のアミノ酸、Ｂ鎖の２５番目のアミノ酸、Ａ鎖の１４番目のアミノ酸及びＡ鎖の１９番目のアミノ酸からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸の変異を含む、インスリンアナログ。
【請求項２】
前記変異が、天然型インスリンＢ鎖の１６番目のアミノ酸であるチロシンのグルタミン酸、セリン、トレオニン、またはアスパラギン酸への変異;天然型インスリンＢ鎖の２５
番目のアミノ酸であるフェニルアラニンのアスパラギン酸またはグルタミン酸への変異；天然型インスリンＡ鎖の１４番目のアミノ酸であるチロシンのヒスチジン、リジン、アラニン、またはアスパラギン酸への変異；または天然型インスリンＡ鎖の１９番目のアミノ酸であるチロシンのグルタミン酸、セリン、またはトレオニンへの変異である、
請求項１に記載のインスリンアナログ。
【請求項３】
前記インスリンアナログが、
下記一般式（１）で表される配列番号：５５のＡ鎖と下記一般式（２）で表される配列番号：５６のＢ鎖を含むインスリンアナログ（ただし、前記インスリンアナログのうち、そのＡ鎖が配列番号：５３と一致しながら、同時に、Ｂ鎖が配列番号：５４と一致するものは除く。）：
一般式（１）
【化１】
2019531075.tif 000001
前記一般式（１）において、
Ｘａａ１が、アラニン、グリシン、グルタミン、ヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギンであり、
Ｘａａ５が、アラニン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、またはアスパラギンであり、
Ｘａａ１２が、アラニン、セリン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、またはアスパラギンであり、
Ｘａａ１４が、チロシン、ヒスチジン、リジン、アラニン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１６が、アラニン、ロイシン、チロシン、ヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギンであり、
Ｘａａ１９が、チロシン、グルタミン酸、セリン、またはトレオニンであり、
Ｘａａ２１が、アスパラギン、グリシン、ヒスチジン、またはアラニンである。
一般式（２）
【化２】
2019531075.tif 000002
前記一般式（２）において、
Ｘａａ１６が、チロシン、グルタミン酸、セリン、トレオニン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２５が、フェニルアラニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸であり、
Ｘａａ２７が、トレオニンであるか、不存在であり、
Ｘａａ２８が、プロリン、グルタミン酸、またはアスパラギン酸であるか、不存在である。
【請求項４】
前記インスリンアナログが
前記一般式（１）で表される配列番号：５５のＡ鎖と配列番号：５４のＢ鎖を含む、 
請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項５】
前記インスリンアナログが、
前記配列番号：５３のＡ鎖と一般式（２）で表される配列番号：５６のＢ鎖を含む、
請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項６】
前記一般式（１）において、
Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり
、Ｘａａ１４はチロシン、ヒスチジン、リジン、アラニン、またはアスパラギン酸であり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシン、グルタミン酸、セリン、またはトレオニンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、
前記一般式（２）において、
Ｘａａ１６はチロシン、グルタミン酸、セリン、トレオニン、またはアスパラギン酸であり、Ｘａａ２５はフェニルアラニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸であり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、
請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項７】
前記一般式（１）において、
Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシン、グルタミン酸、またはセリンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、
前記一般式（２）において、
Ｘａａ１６はチロシン、グルタミン酸、セリン、またはアスパラギン酸であり、Ｘａａ２５はフェニルアラニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸であり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、
請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項８】
前記インスリンアナログが、
（１）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はヒスチジンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであ
り、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（２）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はリジンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであり、
Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（３）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はグルタミン酸であり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンで
あり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（４）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はセリンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであり、
Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（５）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はトレオニンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであ
り、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（６）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンで
あり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（７）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はセリンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであり、
Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（８）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はトレオニンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであ
り、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（９）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はアラニンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであり
、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（１０）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）で、Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（１１）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２５はフェニルアラニ
ンであり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（１２）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はアスパラギン酸であり
、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、または；
（１３）前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、 Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はグルタミン酸であり、
Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、
請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項９】
前記インスリンアナログは、配列番号：２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、及び５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載のインスリンアナログ。
【請求項１０】
前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はグルタミン酸であり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、
請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項１１】
前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり
、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はセリンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、
請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項１２】
前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はトレオニンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、
請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項１３】
前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はフェニルアラニンであり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、
請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項１４】
前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、
請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項１５】
前記一般式（１）において、Ｘａａ１はグリシンであり、Ｘａａ５はグルタミンであり、Ｘａａ１２はセリンであり、Ｘａａ１４はチロシンであり、Ｘａａ１６はロイシンであり、Ｘａａ１９はチロシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギンであり、前記一般式（２）において、Ｘａａ１６はチロシンであり、Ｘａａ２５はグルタミン酸であり、Ｘａａ２７はトレオニンであり、Ｘａａ２８はプロリンである、請求項３に記載のインスリンアナログ。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載のインスリンアナログをコードする分離された核酸。
【請求項１７】
請求項１６に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。
【請求項１８】
請求項１７に記載の組換え発現ベクターを含む、形質転換体。
【請求項１９】
前記形質転換体が大腸菌である、請求項１８に記載の形質転換体。
【請求項２０】
下記段階を含む請求項１〜１５のいずれか一項に記載のインスリンアナログを製造する方法：
ａ）請求項１〜１５のいずれか一項に記載のインスリンアナログをコードする核酸を含む形質転換体を培養して、インスリンアナログを発現させる段階；及び
ｂ）発現されたインスリンアナログを分離及び精製する段階。
【請求項２１】
前記分離及び精製が、
ｂ‐１）前記ａ）段階の培養液から形質転換体を収穫して破砕する段階；
ｂ‐２）破砕された細胞溶解物から発現されたインスリンアナログを回収してリフォールディング（refolding）する段階；
ｂ‐３）リフォールディングされたインスリンアナログを陽イオン交換クロマトグラフィーで精製する段階；
ｂ‐４）精製されたインスリンアナログをトリプシン及びカルボキシペプチダーゼＢで処理する段階；
ｂ‐５）処理されたインスリンアナログを陽イオン交換クロマトグラフィー及び陰イオン交換クロマトグラフィーまたは逆相クロマトグラフィーで順次精製する段階を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
有効成分として請求項１〜１５のいずれか一項に記載のインスリンアナログを含む、糖尿病治療用薬学的組成物。
【請求項２３】
有効成分として請求項１〜１５のいずれか一項に記載のインスリンアナログを含む、組成物。