【手続補正書】
【提出日】令和2年10月6日(2020.10.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下：
（ｉ）直径約１００ｎｍ未満のコアナノ粒子と、
（ｉｉ）前記コアを囲む必要に応じたシェルと、
（ｉｉｉ）第１の部分と第２の部分とを含む被覆であって、前記第１の部分は、前記コアナノ粒子の表面に結合するか、または存在する場合には前記シェルの表面に結合し、前記第２の部分は、前記コアナノ粒子にも前記シェルにも結合せず、固定数の結合部位を有する官能化末端を含む、被覆と
を含むナノスケール分子タグであって、
前記コア、前記シェル、および前記被覆のうちのいずれか１つまたは任意の組み合わせが、顕微鏡、または蛍光および／もしくは光散乱の強度もしくはパワーを測定する装置によって検出可能である前記分子タグの蛍光、光散乱、および／またはリガンド結合特性に寄与し、
構成要素（ｉ）および（ｉｉｉ）、または（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）が共に以下の機能性：
（ａ）アセンブルされた構造の光散乱の強度もしくはパワーが、前記光散乱の強度もしくはパワーを検出する前記装置の基準ノイズの特定のレベルより上で検出可能であること；
（ｂ）蛍光強度が、機器の検出限界より上で検出されるために十分な輝度を有すること；および／または
（ｃ）リガンド特異性がリガンド結合構成要素によって付与されること
を提供する、ナノスケール分子タグ。
【請求項２】
前記結合部位の固定数が１である、請求項１に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項３】
前記コアナノ粒子が、光散乱の強度またはパワーを測定する前記装置によって検出可能である、高い屈折率、表面形状、または光散乱特性に寄与する他の属性を有するナノ材料からなる、請求項１または請求項２に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項４】
単一のアセンブルされた分子ナノタグが、顕微鏡または光散乱の強度もしくはパワーを測定する前記装置で検出可能である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項５】
前記コアナノ粒子が、量子ナノ結晶、金、銀、銅、ＴｉＯ２、シリカ、カーボン、ＣｄＳｅ、ＺｎＳ、またはグラファイトを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項６】
前記ナノスケール分子タグの前記構成要素の累積的光学特性によって、１つまたは複数の光散乱波長に関する検出装置の感度限界（Ｙｌｉｍｉｔ）より大きいパワーの収集がもたらされ、前記累積光学特性が、屈折率、吸光係数、直径、共鳴、透過率、および反射のうちの１つまたは複数を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項７】
前記構成要素が、パラメータＮＲＡＱＤ＝ＮＲｅｆｒａｃｔｉｖｅ  ｉｎｄｅｘ，Ａｎｇｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｑｕａｎｔｕｍ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  ａｎｄ  Ｄｉａｍｅｔｅｒを有し、式中ＮＲＡＱＤが、光散乱の強度またはパワーを測定する装置を使用して１つまたは複数の波長に関する検出限界（Ｙｌｉｍｉｔ）より大きくなければならず、強度
またはパワーが、単位面積当たりのパワーの単位として定義される、請求項１〜６のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項８】
前記被覆が、前記量子ナノ結晶の表面に対して親和性を有するポリマーを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項９】
前記ポリマーが、核酸分子、例えばホスホロチオエートＤＮＡを含む、請求項８に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項１０】
前記ポリマーが、蛍光もしくは光散乱特性またはそれら両方についての属性を有する、請求項８または請求項９に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項１１】
前記ポリマーが、前記分子タグの蛍光、光散乱および／またはリガンド結合特性に寄与する、請求項１０に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項１２】
前記官能化末端が、第２の結合パートナーまたは標的リガンドに対して特異的に結合することができる第１の結合パートナーを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項１３】
前記第１の結合パートナーおよび前記第２の結合パートナーがそれぞれ、
ベンジルグアニンとＳＮＡＰ−タグ；
ベンジルグアニンとＣＬＩＰ−タグ；
クリックライゲーションコンジュゲート；
ビオチンとストレプトアビジン；
一本鎖オリゴヌクレオチドと相補的一本鎖オリゴヌクレオチド；
一本鎖オリゴヌクレオチドとアプタマー；
ＤＣＦＰｙＬと前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；または
抗体と抗原
から選択される、請求項１２に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項１４】
前記抗原が、腫瘍関連抗原を含む、請求項１３に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項１５】
前記抗原がタンパク質タグを含む、請求項１３に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項１６】
フルオロフォアを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
【請求項１７】
フローサイトメーターにおいて、試料中の単一標的分子を検出するための方法において使用するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグを含む組成物であって、前記方法は；
前記試料に、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグを接触させるステップであって、前記ナノスケール分子タグの官能化末端が、前記試料中に存在する場合には前記標的分子に特異的に結合する、ステップと、
光散乱の強度またはパワーを測定する機器を使用して前記試料を分析するステップであって、前記機器は、側方散乱もしくは前方光散乱の検出、または蛍光の検出、またはその任意の組み合わせによって、前記標的分子に結合した個々のナノスケール分子タグを検出するように小粒子を解析するために構成される、ステップと
を含む、組成物。
【請求項１８】
前記試料が、例えば２つのチャネル、例えば２つの側方散乱チャネルにおいて少なくとも２つの検出角度を使用して光散乱の強度またはパワーを測定する前記装置において分析される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
第１の側方散乱チャネルがトリガーとして使用され、第２の側方散乱チャネルが検出器として使用される、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
並列した閾値下事象を検出するステップを含む、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記試料が生物試料である、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記生物試料が生体膜を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記生物試料が細胞外小胞を含む、請求項２１または請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記標的分子が腫瘍抗原を含む、請求項１７〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記腫瘍抗原が、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、ＣＤ２４、ＣＤ１３３、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＰＤ−Ｌ１、ＧＰＣ−１、Ｍｕｃ−１、ＣＤ４４、ＣＤ２６、ＣＤ１４７、ＥｐＣＡＭ、ＰＳＭＡ、またはＰＤ−Ｌ１を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
以下：
（ｉ）２００ｎｍまたは１００ｎｍまたは５０ｎｍ未満のアセンブルされた直径または長さを有する構成要素と、
（ｉｉ）所望の蛍光および光散乱特性に寄与する構成要素と、
（ｉｉｉ）第１の部分と第２の部分とを有する一本鎖核酸分子などの構成要素であって、前記第１の部分が、ナノ粒子の原子価を固定数（例えば、１）の機能的結合部位に低減する、コアナノ粒子の表面に結合するホスホロチオエートＤＮＡを含む、構成要素と、
（ｉｖ）指定された標的に関する機能的リガンドに被覆結合部位を接続するためのリンカーと、
（ｖ）指定された標的に関する機能的リガンド（タンパク質、ヌクレオチド、炭水化物、または他のリガンド結合要素からなる）と
を含むナノスケール分子タグであって、
前記コア、前記シェル、および前記被覆のうちのいずれか１つまたは任意の組み合わせが、顕微鏡、または蛍光および／もしくは光散乱の強度もしくはパワーを測定する装置によって検出可能である前記分子タグの蛍光、光散乱、および／またはリガンド結合特性に寄与する、ナノスケール分子タグ。
【請求項２７】
バイオマーカーを有するサブミクロン粒子、例えばＥＶを検出する方法において使用するための、請求項１〜１６または２６のいずれか一項に記載の分子ナノタグを含む組成物であって、前記バイオマーカーが、請求項１〜１６または２６のいずれか一項に記載の分子ナノタグを用いて検出され、機能的リガンドが前記バイオマーカーに対して特異的である、組成物。
【請求項２８】
前記バイオマーカーが、腫瘍抗原を含み、サブミクロン粒子が、請求項１〜１６または２６のいずれか一項に記載の分子ナノタグで染色され、前記機能的リガンドが前記腫瘍抗原に対して特異的であり、次いで顕微鏡または装置を使用して染色された前記粒子を検出する、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記腫瘍抗原が、ＰＳＭＡ、メソテリン、ＥｐＣａｍ、ＨＥＲ２、ＥＧＲＦ、ＣＤ２４、ＣＤ１３３、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＰＤ−Ｌ１、ＧＰＣ−１、またはＭｕｃ−１である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記バイオマーカーが、ウイルス抗原を含み、前記方法が、前記機能的リガンドが前記ウイルス抗原に対して特異的である請求項１〜１６または２６のいずれか一項に記載の分子ナノタグで前記サブミクロン粒子を染色するステップと、次いで顕微鏡または装置を使用して染色された前記サブミクロン粒子を検出するステップとを含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３１】
前記ウイルス抗原が、ＨＩＶ、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＨＴＬＶ−Ｉ、エプスタインバーウイルス、または他のウイルス病原体に由来する、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記バイオマーカーが、免疫系細胞抗原またはマーカーを含み、前記方法が、前記機能的リガンドが前記免疫系抗原またはマーカーに対して特異的である請求項１〜１６または２６のいずれか一項に記載の分子ナノタグで前記サブミクロン粒子を染色するステップと、次いで顕微鏡または装置を使用して染色された前記サブミクロン粒子を検出するステップとを含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３３】
前記免疫系抗原またはマーカーが、ＭＨＣクラスＩＩ抗原、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、または他の任意の免疫細胞バイオマーカーを含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記バイオマーカーが、疾患抗原またはマーカーを含み、前記方法が、前記機能的リガンドが前記疾患抗原またはマーカーに対して特異的である請求項１〜１５または２５のいずれか一項に記載の分子ナノタグで前記粒子を染色するステップと、次いで顕微鏡または装置を使用して染色された前記サブミクロン粒子を検出するステップとを含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３５】
前記疾患抗原またはマーカーが、アルツハイマー病、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、糖尿病、炎症性腸疾患、リウマチ疾患、炎症性疾患、内分泌疾患、消化器疾患、神経疾患、自己免疫疾患、心血管疾患、または腎疾患のマーカーを含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
１つまたは複数のナノスケール分子タグを個々に検出するために、一般的なデコンボリューション法をスペクトル散乱データに適用する、１つまたは複数の標的を検出するための、請求項１〜１６または２６に記載の１つまたは複数のナノスケール分子タグを含む組成物。
【請求項３７】
下流のアッセイにおいて選別された標的の選別および使用のために、単一のまたはまれなエピトープ感度を用いて１つまたは複数の標的を検出するための、請求項１１〜１６または２６に記載の１つまたは複数のナノスケール分子タグを含む組成物。
【請求項３８】
分析または選別のために１つまたは複数の標的を検出するためのアレイまたは多重化セットとしての、請求項１〜１６または２６に記載の１つまたは複数のナノスケール分子タグを含む組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８９】
開示される本発明の原理が適用され得る多くの可能性がある実施形態を考慮して、例証される実施形態は、単に本発明の例にすぎず、本発明の範囲を制限すると解釈すべきではないと認識すべきである。むしろ、本発明の範囲は以下の特許請求の範囲によって定義される。したがって、本発明者らは、これらの特許請求の範囲の範囲および精神に含まれる全てを本発明として特許請求する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
以下：
（ｉ）直径約１００ｎｍ未満のコアナノ粒子と、
（ｉｉ）前記コアを囲む必要に応じたシェルと、
（ｉｉｉ）第１の部分と第２の部分とを含む被覆であって、前記第１の部分は、前記コアナノ粒子の表面に結合するか、または存在する場合には前記シェルの表面に結合し、前記第２の部分は、前記コアナノ粒子にも前記シェルにも結合せず、固定数の結合部位を有する官能化末端を含む、被覆と
を含むナノスケール分子タグであって、
前記コア、前記シェル、および前記被覆のうちのいずれか１つまたは任意の組み合わせが、顕微鏡、または蛍光および／もしくは光散乱の強度もしくはパワーを測定する装置によって検出可能である前記分子タグの蛍光、光散乱、および／またはリガンド結合特性に寄与し、
構成要素（ｉ）および（ｉｉｉ）、または（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）が共に以下の機能性：
（ａ）アセンブルされた構造の光散乱の強度もしくはパワーが、前記光散乱の強度もしくはパワーを検出する前記装置の基準ノイズの特定のレベルより上で検出可能であること；
（ｂ）蛍光強度が、機器の検出限界より上で検出されるために十分な輝度を有すること；および／または
（ｃ）リガンド特異性がリガンド結合構成要素によって付与されること
を提供する、ナノスケール分子タグ。
(項目２)
前記結合部位の固定数が１である、項目１に記載のナノスケール分子タグ。
(項目３)
前記コアナノ粒子が、光散乱の強度またはパワーを測定する前記装置によって検出可能である、高い屈折率、表面形状、または光散乱特性に寄与する他の属性を有するナノ材料からなる、項目１または項目２に記載のナノスケール分子タグ。
(項目４)
単一のアセンブルされた分子ナノタグが、顕微鏡または光散乱の強度もしくはパワーを測定する前記装置で検出可能である、項目１〜３のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
(項目５)
前記コアナノ粒子が、量子ナノ結晶、金、銀、銅、ＴｉＯ２、シリカ、カーボン、ＣｄＳｅ、ＺｎＳ、またはグラファイトを含む、項目１〜３のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
(項目６)
前記ナノスケール分子タグの前記構成要素の累積的光学特性によって、１つまたは複数の光散乱波長に関する検出装置の感度限界（Ｙｌｉｍｉｔ）より大きいパワーの収集がもたらされ、前記累積光学特性が、屈折率、吸光係数、直径、共鳴、透過率、および反射のうちの１つまたは複数を含む、項目１〜５のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
(項目７)
前記構成要素が、パラメータＮＲＡＱＤ＝ＮＲｅｆｒａｃｔｉｖｅ  ｉｎｄｅｘ，Ａｎｇｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｑｕａｎｔｕｍ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  ａｎｄ  Ｄｉａｍｅｔｅｒを有し、式中ＮＲＡＱＤが、光散乱の強度またはパワーを測定する装置を使用して１つまたは複数の波長に関する検出限界（Ｙｌｉｍｉｔ）より大きくなければならず、強度
またはパワーが、単位面積当たりのパワーの単位として定義される、項目１〜６のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
(項目８)
前記被覆が、前記量子ナノ結晶の表面に対して親和性を有するポリマーを含む、項目１〜７のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
(項目９)
前記ポリマーが、核酸分子、例えばホスホロチオエートＤＮＡを含む、項目８に記載のナノスケール分子タグ。
(項目１０)
前記ポリマーが、蛍光もしくは光散乱特性またはそれら両方についての属性を有する、項目８または項目９に記載のナノスケール分子タグ。
(項目１１)
前記ポリマーが、前記分子タグの蛍光、光散乱および／またはリガンド結合特性に寄与する、項目１０に記載のナノスケール分子タグ。
(項目１２)
前記官能化末端が、第２の結合パートナーまたは標的リガンドに対して特異的に結合することができる第１の結合パートナーを含む、項目１〜１１のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
(項目１３)
前記第１の結合パートナーおよび前記第２の結合パートナーがそれぞれ、
ベンジルグアニンとＳＮＡＰ−タグ；
ベンジルグアニンとＣＬＩＰ−タグ；
クリックライゲーションコンジュゲート；
ビオチンとストレプトアビジン；
一本鎖オリゴヌクレオチドと相補的一本鎖オリゴヌクレオチド；
一本鎖オリゴヌクレオチドとアプタマー；
ＤＣＦＰｙＬと前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；または
抗体と抗原
から選択される、項目１２に記載のナノスケール分子タグ。
(項目１４)
前記抗原が、腫瘍関連抗原を含む、項目１３に記載のナノスケール分子タグ。
(項目１５)
前記抗原がタンパク質タグを含む、項目１３に記載のナノスケール分子タグ。
(項目１６)
フルオロフォアを含む、項目１〜１３のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグ。
(項目１７)
フローサイトメーターにおいて、試料中の単一標的分子を検出するための方法であって；
前記試料に、項目１〜１６のいずれか一項に記載のナノスケール分子タグを接触させるステップであって、前記ナノスケール分子タグの官能化末端が、前記試料中に存在する場合には前記標的分子に特異的に結合する、ステップと、
光散乱の強度またはパワーを測定する機器を使用して前記試料を分析するステップであって、前記機器は、側方散乱もしくは前方光散乱の検出、または蛍光の検出、またはその任意の組み合わせによって、前記標的分子に結合した個々のナノスケール分子タグを検出するように小粒子を解析するために構成される、ステップと
を含む、方法。
(項目１８)
前記試料が、例えば２つのチャネル、例えば２つの側方散乱チャネルにおいて少なくとも２つの検出角度を使用して光散乱の強度またはパワーを測定する前記装置において分析される、項目１７に記載の方法。
(項目１９)
第１の側方散乱チャネルがトリガーとして使用され、第２の側方散乱チャネルが検出器として使用される、項目１８に記載の方法。
(項目２０)
並列した閾値下事象を検出するステップを含む、項目１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
(項目２１)
前記試料が生物試料である、項目１７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
(項目２２)
前記生物試料が生体膜を含む、項目２１に記載の方法。
(項目２３)
前記生物試料が細胞外小胞を含む、項目２１または項目２２に記載の方法。
(項目２４)
前記標的分子が腫瘍抗原を含む、項目１７〜２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目２５)
前記腫瘍抗原が、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、ＣＤ２４、ＣＤ１３３、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＰＤ−Ｌ１、ＧＰＣ−１、Ｍｕｃ−１、ＣＤ４４、ＣＤ２６、ＣＤ１４７、ＥｐＣＡＭ、ＰＳＭＡ、またはＰＤ−Ｌ１を含む、項目２４に記載の方法。
(項目２６)
以下：
（ｉ）２００ｎｍまたは１００ｎｍまたは５０ｎｍ未満のアセンブルされた直径または長さを有する構成要素と、
（ｉｉ）所望の蛍光および光散乱特性に寄与する構成要素と、
（ｉｉｉ）第１の部分と第２の部分とを有する一本鎖核酸分子などの構成要素であって、前記第１の部分が、ナノ粒子の原子価を固定数（例えば、１）の機能的結合部位に低減する、コアナノ粒子の表面に結合するホスホロチオエートＤＮＡを含む、構成要素と、
（ｉｖ）指定された標的に関する機能的リガンドに被覆結合部位を接続するためのリンカーと、
（ｖ）指定された標的に関する機能的リガンド（タンパク質、ヌクレオチド、炭水化物、または他のリガンド結合要素からなる）と
を含むナノスケール分子タグであって、
前記コア、前記シェル、および前記被覆のうちのいずれか１つまたは任意の組み合わせが、顕微鏡、または蛍光および／もしくは光散乱の強度もしくはパワーを測定する装置によって検出可能である前記分子タグの蛍光、光散乱、および／またはリガンド結合特性に寄与する、ナノスケール分子タグ。
(項目２７)
バイオマーカーを有するサブミクロン粒子、例えばＥＶを検出する方法であって、前記バイオマーカーが、項目１〜１６または２６のいずれか一項に記載の分子ナノタグを用いて検出され、機能的リガンドが前記バイオマーカーに対して特異的である、方法。
(項目２８)
前記バイオマーカーが、腫瘍抗原を含み、サブミクロン粒子が、項目１〜１６または２６のいずれか一項に記載の分子ナノタグで染色され、前記機能的リガンドが前記腫瘍抗原に対して特異的であり、次いで顕微鏡または装置を使用して染色された前記粒子を検出する、項目２７に記載の方法。
(項目２９)
前記腫瘍抗原が、ＰＳＭＡ、メソテリン、ＥｐＣａｍ、ＨＥＲ２、ＥＧＲＦ、ＣＤ２４、ＣＤ１３３、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＰＤ−Ｌ１、ＧＰＣ−１、またはＭｕｃ−１である、項目２８に記載の方法。
(項目３０)
前記バイオマーカーが、ウイルス抗原を含み、前記方法が、前記機能的リガンドが前記ウイルス抗原に対して特異的である項目１〜１６または２６のいずれか一項に記載の分子ナノタグで前記サブミクロン粒子を染色するステップと、次いで顕微鏡または装置を使用して染色された前記サブミクロン粒子を検出するステップとを含む、項目２７に記載の方法。
(項目３１)
前記ウイルス抗原が、ＨＩＶ、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＨＴＬＶ−Ｉ、エプスタインバーウイルス、または他のウイルス病原体に由来する、項目３０に記載の方法。
(項目３２)
前記バイオマーカーが、免疫系細胞抗原またはマーカーを含み、前記方法が、前記機能的リガンドが前記免疫系抗原またはマーカーに対して特異的である項目１〜１６または２６のいずれか一項に記載の分子ナノタグで前記サブミクロン粒子を染色するステップと、次いで顕微鏡または装置を使用して染色された前記サブミクロン粒子を検出するステップとを含む、項目２７に記載の方法。
(項目３３)
前記免疫系抗原またはマーカーが、ＭＨＣクラスＩＩ抗原、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、または他の任意の免疫細胞バイオマーカーを含む、項目３２に記載の方法。
(項目３４)
前記バイオマーカーが、疾患抗原またはマーカーを含み、前記方法が、前記機能的リガンドが前記疾患抗原またはマーカーに対して特異的である項目１〜１５または２５のいずれか一項に記載の分子ナノタグで前記粒子を染色するステップと、次いで顕微鏡または装置を使用して染色された前記サブミクロン粒子を検出するステップとを含む、項目２７に記載の方法。
(項目３５)
前記疾患抗原またはマーカーが、アルツハイマー病、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、糖尿病、炎症性腸疾患、リウマチ疾患、炎症性疾患、内分泌疾患、消化器疾患、神経疾患、自己免疫疾患、心血管疾患、または腎疾患のマーカーを含む、項目３４に記載の方法。
(項目３６)
１つまたは複数のナノスケール分子タグを個々に検出するために、一般的なデコンボリューション法をスペクトル散乱データに適用する、１つまたは複数の標的を検出するための項目１〜１６または２６に記載の１つまたは複数のナノスケール分子タグの使用。
(項目３７)
下流のアッセイにおいて選別された標的の選別および使用のために、単一のまたはまれなエピトープ感度を用いて１つまたは複数の標的を検出するための、項目１１〜１６または２６に記載の１つまたは複数のナノスケール分子タグの使用。
(項目３８)
分析または選別のために１つまたは複数の標的を検出するためのアレイまたは多重化セットとしての、項目１〜１６または２６に記載の１つまたは複数のナノスケール分子タグの使用。