【手続補正書】
【提出日】令和1年12月27日(2019.12.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体と（２）ホスホリルコリン含有重合体を含む抗体複合体であって、前記重合体が前記抗体の可変領域外にあるシステインにおいて前記抗体に共有結合しており、前記システインが組換えＤＮＡ技術によって付加されたものである前記抗体複合体。
【請求項２】
下記（ａ１）〜（ｒ１）のいずれかである請求項１に記載の抗体複合体。
（ａ１）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体が軽鎖と重鎖を有し、前記重鎖がＦｃ領域を含む、抗体複合体
（ｂ１）前記システインが前記重鎖の前記Ｆｃ領域内にある、（ａ１）に記載の抗体複合体
（ｃ１）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体が免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）である、（ｂ１）に記載の抗体複合体
（ｄ１）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体重鎖がＣＤＲＨ１：ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号９）、ＣＤＲＨ２：ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１０）、およびＣＤＲＨ３：ＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶ（配列番号１１）を含み、前記抗ＶＥＧＦ−Ａ軽鎖がＣＤＲＬ１：ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１２）、ＣＤＲＬ２：ＦＴＳＳＬＨＳ（配列番号１３）、およびＣＤＲＬ３：ＱＱＹＳＴＶＰＷＴ（配列番号１４）を含む、（ｂ１）又は（ｃ１）に記載の抗体複合体
（ｅ１）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ重鎖アイソタイプがヒトＩｇＧ１である、（ｃ１）又は（ｄ１）に記載の抗体複合体
（ｆ１）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体の重鎖定常ドメインがヒトＩｇＧ１の定常ドメインと比べて１つ以上の変異を有することでエフェクター機能を調節する、（ｅ１）に記載の抗体複合体
（ｇ１）前記変異が次のアミノ酸位置、すなわち、Ｘがいずれかの天然アミノ酸または非天然アミノ酸であるＥ２３３Ｘ、Ｌ２３４Ｘ、Ｌ２３５Ｘ、Ｇ２３６Ｘ、Ｇ２３７Ｘ、Ａ３２７Ｘ、Ａ３３０Ｘ、およびＰ３３１Ｘ（ＥＵ式付番）のうちの１つ以上のものである、（ｆ１）に記載の抗体複合体
（ｈ１）前記変異がＥ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓ（ＥＵ式付番）からなる群より選択される、（ｇ１）に記載の抗体複合体
（ｉ１）次の変異、すなわちＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ（ＥＵ式付番
）を含む、（ｈ１）に記載の抗体複合体
（ｊ１）前記システインが前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体重鎖内にあり、且つ、Ｑ３４７Ｃ（ＥＵ式付番）またはＬ４４３Ｃ（ＥＵ式付番）である、（ｉ１）に記載の抗体複合体
（ｋ１）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体重鎖の配列が配列番号１であり、および前記抗ＶＥＧＦ−Ａ軽鎖の配列が配列番号２である、（ｊ１）に記載の抗体複合体
（ｌ１）前記システインがＬ４４３Ｃ（ＥＵ式付番）である、（ｊ１）に記載の抗体複合体
（ｍ１）精製されている、（ａ１）〜（ｌ１）のいずれかに記載の抗体複合体
（ｎ１）前記重合体について多分散系である、（ｍ１）に記載の抗体複合体
（ｏ１）前記重合体が約１．２未満の多分散度（ＰＤＩ）を有する、（ｎ１）に記載の抗体複合体
（ｐ１）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体が抗ＶＥＧＦ−Ａ免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）であり、前記ホスホリルコリン含有重合体がリン酸２−（メタクリロイルオキシエチル）−２’−（トリメチルアンモニウム）エチル（ＭＰＣ）単量体を含み、前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体重鎖の配列が配列番号１であり、前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体軽鎖の配列が配列番号２であり、前記抗体が配列番号１中のＣ４４９において前記重合体に結合している、抗体複合体
（ｑ１）前記重合体が９本のアームを有し、且つ
前記重合体が約６００，０００から約９００，０００Ｄａの間の分子量を有する、（ｐ１）に記載の抗体複合体
（ｒ１）下記の構造を有し、
【化１】
2019510734.tif 000001
式中、
前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体の各重鎖が文字Ｈで表され、且つ、前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体の
各軽鎖が文字Ｌで表され、
前記重合体がＣ４４３（ＥＵ式付番）のスルフヒドリルを介して前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体に結合しており、その結合が前記重鎖のうちの１本の上に示されており、
ＰＣが
【化２】
2019510734.tif 000002
であり、前記波線が残りの前記重合体の部分への接続点を表し、Ｘはａ）ＲがＨ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルであるＯＲ、ｂ）Ｈ、またはｃ）Ｂｒをはじめとするいずれかのハライドであり、且つ、
ｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４、ｎ５、ｎ６、ｎ６、ｎ７、ｎ８、およびｎ９の合計が２５００±１５％であるようにｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４、ｎ５、ｎ６、ｎ７、ｎ８、およびｎ９が同一または異なる、（ｐ１）に記載の抗体複合体。
【請求項３】
下記（ａ２）〜（ｈ２）のいずれかである、請求項１又は２に記載の抗体複合体。
（ａ２）前記ホスホリルコリン含有重合体が以下に示されるリン酸２−（メタクリロイルオキシエチル）−２’−（トリメチルアンモニウム）エチル（ＭＰＣ）単量体を含む、抗体複合体
【化３】
2019510734.tif 000003
（ｂ２）前記重合体が３本以上のアームを有し、または３か所以上の重合体開始部位を有する開始剤を用いて合成される、（ａ２）に記載の抗体複合体
（ｃ２）前記重合体が２本、３本、４本、５本、６本、７本、８本、９本、１０本、１１本、もしくは１２本のアームを有し、または２か所、３か所、４か所、５か所、６か所、７か所、８か所、９か所、１０か所、１１か所、もしくは１２か所の重合体開始部位を有する開始剤を用いて合成される、（ｂ２）に記載の抗体複合体
（ｄ２）前記重合体が２本、３本、６本、もしくは９本のアームを有し、または２か所、３か所、６か所、もしくは９か所の重合体開始部位を有する開始剤を用いて合成される、（ｃ２）に記載の抗体複合体
（ｅ２）前記重合体が９本のアームを有し、または９か所の重合体開始部位を有する開始剤を用いて合成される、（ｄ２）に記載の抗体複合体
（ｆ２）前記重合体がサイズ排除クロマトグラフィー・多角度光散乱法（以後「ＳＥＣ−ＭＡＬＳ」）により測定されると約３００，０００と約１，７５０，０００Ｄａの間の分子量を有する、（ｅ２）に記載の抗体複合体
（ｇ２）前記重合体が約５００，０００と約１，０００，０００Ｄａの間の分子量を有
する、（ｆ２）に記載の抗体複合体
（ｈ２）  前記重合体が約７５０，０００と約８５０，０００Ｄａの間の分子量を有する、（ｇ２）に記載の抗体複合体
【請求項４】
下記（ａ３）又は（ｂ３）を含む、医薬組成物。
（ａ３）液体溶液状の請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体複合体
（ｂ３）請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体複合体、および薬学的に許容可能な担体
【請求項５】
下記（ａ４）〜（ｄ４）のいずれかである、重鎖と軽鎖を有する抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体。
（ａ４）前記重鎖がＣＤＲＨ１：ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号９）、ＣＤＲＨ２：ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１０）、およびＣＤＲＨ３：ＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶ（配列番号１１）を含み、前記軽鎖がＣＤＲＬ１：ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１２）、ＣＤＲＬ２：ＦＴＳＳＬＨＳ（配列番号１３）、およびＣＤＲＬ３：ＱＱＹＳＴＶＰＷＴ（配列番号１４）を含み、且つ、
前記重鎖アイソタイプがＩｇＧ１であり、前記ＩｇＧ１定常ドメインが次の変異、すなわちＥ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓ（ＥＵ式付番）のうちの１つ以上を含むことでエフェクター機能を調節する、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体
（ｂ４）次の変異、すなわちＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ（ＥＵ式付番）を含む、（ａ４）に記載の抗体
（ｃ４）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ重鎖の配列が配列番号１であり、前記抗ＶＥＧＦ−Ａ軽鎖の配列が配列番号２である、（ａ４）に記載の抗体
（ｄ４）ＩｇＧである、（ａ４）〜（ｃ４）のいずれかに記載の抗体
【請求項６】
眼疾患の治療または予防のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体複合体、または請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
下記（ａ５）又は（ｂ５）の治療または予防のための、請求項６に記載の抗体複合体、または医薬組成物。
（ａ５）糖尿病網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、病的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼ヒストプラズマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、網膜中心分枝静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、角膜血管新生、網膜血管新生、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、結膜下出血、および高血圧性網膜症からなる群より選択される前記眼疾患
（ｂ５）糖尿病網膜症である前記眼疾患
【請求項８】
ホスホリルコリン含有重合体に複合体化された抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体を含む抗体複合体の作製方法であって、
ホスホリルコリン含有重合体に抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体を複合体化するステップを含み、
前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体が組換えＤＮＡ技術を介して付加されたシステイン残基を含み、前記システインが前記抗体の可変領域外にあり、
前記ホスホリルコリン含有重合体がマレイミド、ビニルスルホン、オルトピリジルジスルフィド、およびヨードアセトアミドからなる群より選択されるスルフヒドリル特異的反応基を含み、且つ
前記ホスホリルコリン含有重合体上の前記スルフヒドリル特異的反応基が前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体上の前記システイン残基と反応して前記抗体複合体を形成する
前記方法。
【請求項９】
下記（ａ）〜（ｋｋｋ）のいずれかである、請求項８に記載の方法。
（ａ）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体が免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）であり、前記システインが前記抗体のＦｃ領域内に存在する、方法
（ｂ）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体が軽鎖と重鎖を有し、前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体重鎖がＣＤＲＨ１：ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号９）、ＣＤＲＨ２：ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１０）、およびＣＤＲＨ３：ＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶ（配列番号１１）を含み、前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体軽鎖がＣＤＲＬ１：ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１２）、ＣＤＲＬ２：ＦＴＳＳＬＨＳ（配列番号１３）、およびＣＤＲＬ３：ＱＱＹＳＴＶＰＷＴ（配列番号１４）を含む、（ａ）に記載の方法
（ｃ）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体重鎖アイソタイプがＩｇＧ１である、（ａ）又は（ｂ）に記載の方法
（ｄ）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体定常ドメインがＩｇＧ１定常ドメインと比べて１つ以上の変異を有することでエフェクター機能を調節する、（ｃ）に記載の方法
（ｅ）前記変異が次のアミノ酸位置、すなわち、Ｘがいずれかの天然アミノ酸または非天然アミノ酸であるＥ２３３Ｘ、Ｌ２３４Ｘ、Ｌ２３５Ｘ、Ｇ２３６Ｘ、Ｇ２３７Ｘ、Ｇ２３６Ｘ、Ｄ２７０Ｘ、Ｋ３２２Ｘ、Ａ３２７Ｘ、Ｐ３２９Ｘ、Ａ３３０Ｘ、Ａ３３０Ｘ、Ｐ３３１Ｘ、およびＰ３３１Ｘ（ＥＵ式付番）のうちの１つ以上のものである、（ｄ）に記載の方法
（ｆ）前記変異がＥ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓ（ＥＵ式付番）からなる群より選択される、（ｅ）に記載の方法
（ｇ）前記変異がＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ（ＥＵ式付番）である、（ｆ）に記載の方法
（ｈ）組換えＤＮＡ技術により付加された前記システイン残基がＱ３４７Ｃ（ＥＵ式付番）およびＬ４４３Ｃ（ＥＵ式付番）からなる群より選択される、（ｇ）に記載の方法
（ｉ）組換えＤＮＡ技術により付加された前記システイン残基がＬ４４３Ｃ（ＥＵ式付番）である、（ｈ）に記載の方法
（ｊ）前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体重鎖の配列が配列番号１であり、前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体軽鎖の配列が配列番号２である、（ｈ）または（ｉ）に記載の方法
（ｋ）前記スルフヒドリル特異的反応基がマレイミドである、方法
（ｌ）前記ホスホリルコリン含有重合体が以下に示されるリン酸２−（メタクリロイルオキシエチル）−２’−（トリメチルアンモニウム）エチル（ＭＰＣ）単量体を含む、（ｋ）に記載の方法
【化４】
2019510734.tif 000004
（ｍ）前記重合体が３本以上のアームを有し、または３か所の重合体開始部位を有する開始剤を用いて合成される、（ｌ）に記載の方法
（ｎ）前記重合体が２本、３本、４本、５本、６本、７本、８本、９本、１０本、１１
本、もしくは１２本のアームを有し、または２か所、３か所、４か所、５か所、６か所、７か所、８か所、９か所、１０か所、１１か所、もしくは１２か所の重合体開始部位を有する開始剤を用いて合成される、（ｍ）に記載の方法
（ｏ）前記重合体が２本、３本、６本、もしくは９本のアームを有し、または２か所、３か所、６か所、もしくは９か所の重合体開始部位を有する開始剤を用いて合成される、（ｎ）に記載の方法
（ｐ）前記重合体が９本のアームを有し、または９か所の重合体開始部位を有する開始剤を用いて合成される、（ｏ）に記載の方法
（ｑ）前記重合体が約３００，０００と１，７５０，０００Ｄａとの間の分子量を有する、（ｐ）に記載の方法
（ｒ）前記重合体が約６００，０００と１，０００，０００Ｄａとの間の分子量を有する、（ｑ）に記載の方法
（ｓ）前記重合体が約６００，０００から８５０，０００Ｄａの間の分子量を有する、（ｒ）に記載の方法
（ｔ）還元システインスルフヒドリル基を作製する条件下において前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体をチオール還元剤と接触させて全てのシステイン残基が還元されている還元型抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体を作製するステップをさらに含む、方法
（ｕ）前記チオール還元剤がトリス［２−カルボキシエチル］ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリトリトール（ＤＴＥ）、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）、β−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、システイン塩酸塩、およびシステインからなる群より選択される、（ｔ）に記載の方法
（ｖ）前記チオール還元剤がＴＣＥＰである、（ｕ）に記載の方法
（ｗ）前記チオール還元剤の濃度が前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体の濃度と比べて１倍と１００倍の間でモル過剰である、（ｖ）に記載の方法
（ｘ）前記チオール還元剤の濃度が前記抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体の濃度と比べて２０倍と５０倍の間でモル過剰である、（ｗ）に記載の方法
（ｙ）前記還元型抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体から前記チオール還元剤を除去するステップ、および前記還元型抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体を酸化剤で処理するステップをさらに含む、（ｗ）に記載の方法
（ｚ）前記酸化剤が空気、ＣｕＳＯ４水溶液、またはデヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）である、（ｘ）に記載の方法
（ａａ）前記抗体複合体を精製するステップをさらに含む、方法
（ｂｂ）前記抗体複合体がイオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、およびそれらの組合せからなる群より選択される技法を用いて精製される、（ａａ）に記載の方法
（ｃｃ）前記精製済み抗体複合体が非複合体型抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体と比べて少なくとも２０％の生物活性を保持する、（ｂｂ）に記載の方法
（ｄｄ）前記精製済み抗体複合体が非複合体型抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体と比べて少なくとも５０％の生物活性を保持する、（ｃｃ）に記載の方法
（ｅｅ）前記精製済み抗体複合体が非複合体型抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体と比べて少なくとも９０％の生物活性を保持する、（ｄｄ）に記載の方法
（ｆｆ）前記精製済み抗体複合体が非複合体型抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体と比べて増加した半減期を有する、（ｃｃ）に記載の方法
（ｇｇ）前記精製済み抗体複合体が非複合体型抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体と比べて少なくとも１．５倍に増加した半減期を有する、（ｆｆ）に記載の方法
（ｈｈ）前記方法が重合媒体中のフリーラジカル重合性ホスホリルコリン含有単量体を重合して前記ホスホリルコリン含有重合体を提供するステップをさらに含み、前記媒体が
前記ラジカル重合性ホスホリルコリン含有単量体、
Ｍｔが遷移金属であり、ｑが前記金属の最大酸化状態であり、且つ、ｑ−１が前記金属の酸化状態であり、前記金属が触媒として作用し得る遷移金属触媒Ｍｔ（ｑ−１）＋であって、Ｘ’が対イオンまたは基であるＭｔ（ｑ−１）＋Ｘ’（ｑ−１）という形態の塩として供給される前記遷移金属触媒、または前記遷移金属を酸化不活性状態から還元活性状態に還元することが可能である還元剤と共に最高の酸化状態にある前記不活性金属塩Ｍｔｑ＋Ｘ’ｑを提供することによりインサイチュで供給される前記遷移金属触媒、
リガンド、および
開始剤
を含む、方法
（ｉｉ）前記ラジカル重合性ホスホリルコリン含有単量体が
【化５】
2019510734.tif 000005
であり、式中、Ｒ１がＨまたはＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４がそれぞれメチルであり、且つ
ＸおよびＹがそれぞれ２である
（ｈｈ）に記載の方法
（ｊｊ）ＭｔがＣｕ、Ｆｅ、Ｒｕ、Ｃｒ、Ｍｏ、Ｗ、Ｍｎ、Ｒｈ、Ｒｅ、Ｃｏ、Ｖ、Ｚｎ、Ａｕ、およびＡｇからなる群より選択される、（ｉｉ）に記載の方法
（ｋｋ）前記金属触媒がＭｔ（ｑ−１）＋Ｘ’（ｑ−１）という形態の塩として供給される、（ｊｊ）に記載の方法
（ｌｌ）Ｍｔ（ｑ−１）＋がＣｕ１＋、Ｆｅ２＋、Ｒｕ２＋、Ｃｒ２＋、Ｍｏ２＋、Ｗ２＋、Ｍｎ３＋、Ｒｈ３＋、Ｒｅ２＋、Ｃｏ＋、Ｖ２＋、Ｚｎ＋、Ａｕ＋、およびＡｇ＋からなる群より選択され、且つ、Ｘ’がハロゲン、Ｃ１〜６アルコキシ、（ＳＯ４）１／２、（ＰＯ４）１／３、（Ｒ７ＰＯ４）１／２、（Ｒ７２ＰＯ４）、トリフレート、ヘキサフルオロホスフェート、メタンスルホネート、アリールスルホネート、ＣＮ、およびＲ７がＨまたはハロゲンで１回から５回にわたって置換されてもよい直鎖もしくは分岐Ｃ１〜６アルキル基であるＲ７ＣＯ２からなる群より選択される、（ｋｋ）に記載の方法
（ｍｍ）Ｍｔ（ｑ−１）＋がＣｕ１＋であり、Ｘ’がＢｒである、（ｌｌ）に記載の方法
（ｎｎ）Ｍｔ（ｑ−１）＋がインサイチュで供給される、（ｉｉ）に記載の方法
（ｏｏ）Ｍｔｑ＋ＸｑがＣｕＢｒ２である、（ｎｎ）に記載の方法
（ｐｐ）前記還元剤が無機化合物である、（ｉｉ）に記載の方法
（ｑｑ）前記無機化合物が低酸化レベルの硫黄化合物、亜硫酸水素ナトリウム、金属イオンを含む無機塩、金属、ヒドラジン水和物、およびそのような化合物の誘導体からなる群より選択される、（ｐｐ）に記載の方法
（ｒｒ）前記還元剤が金属である、（ｑｑ）に記載の方法
（ｓｓ）前記還元剤がＣｕ０である、（ｒｒ）に記載の方法
（ｔｔ）前記還元剤が有機化合物である、（ｉｉ）に記載の方法
（ｕｕ）前記有機化合物がアルキルチオール類、メルカプトエタノール、または容易にエノール化され得るカルボニル化合物、アスコルビン酸、アセチルアセトネート、カンファースルホン酸、ヒドロキシアセトン、還元糖、単糖類、グルコース、アルデヒド、およびそのような有機化合物の誘導体からなる群より選択される、（ｔｔ）に記載の方法
（ｖｖ）前記リガンドが２，２’−ビピリジン、４，４’−ジ−５−ノニル−２，２’−ビピリジン、４，４−ジノニル−２，２’−ジピリジル、４，４’，４’’−トリス（５−ノニル）−２，２’：６’，２’’−テルピリジン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，Ｎ’’−ペンタメチルジエチレントリアミン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、トリス（２−ジメチルアミノエチル）アミン、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ピリジルメチル）オクタデシルアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ［（２−ピリダル）メチル］エチレンジアミン、トリス［（２−ピリジル）メチル］アミン、トリス（２−アミノエチル）アミン、トリス（２−ビス（３−ブトキシ−３−オキソプロピル）アミノエチル）アミン、トリス（２−ビス（３−（２−エチルヘキソキシ）−３−オキソプロピル）アミノエチル）アミン、およびトリス（２−ビス（３−ドデコキシ−３−オキソプロピル）アミノエチル）アミンからなる群より選択される、（ｉｉ）に記載の方法
（ｗｗ）前記リガンドが２，２’−ビピリジンである、（ｖｖ）に記載の方法
（ｘｘ）前記開始剤が以下の構造を有し、
【化６】
2019510734.tif 000006
式中、Ｒ１が求核性反応基であり、Ｒ２がリンカーを含み、Ｒ３が以下の構造を有する重合体合成開始剤部分を含み、
【化７】
2019510734.tif 000007
式中、Ｒ４およびＲ５は同一または異なっており、且つ、アルキル、置換アルキル、アルキレン、アルコキシ、カルボキシアルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、環状アルキルエーテル、アルケニル、アルケニレン、アルキニル、アルキニレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アリール、アリレン、アリレンオキシ、ヘテロアリール、アミノ、アミド、およびそれらのあらゆる組合せからなる群より選択され、
ＺがハロゲンまたはＣＮであり、ｓが１と２０の間の整数である、
（ｉｉ）に記載の方法
（ｙｙ）ＺがＢｒであり、Ｒ４およびＲ５がそれぞれメチルである、（ｘｘ）に記載の方法
（ｚｚ）Ｒ１がＮＨ２−、ＯＨ−、およびＳＨ−からなる群より選択される、（ｙｙ）に記載の方法
（ａａａ）Ｒ１がＮＨ２−である、（ｚｚ）に記載の方法
（ｂｂｂ）Ｒ２がアルキル、置換アルキル、アルキレン、アルコキシ、カルボキシアルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、環状アルキルエーテル、アルケニル、アルケニレン、アルキニル、アルキニレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アリール、アリレン、アリレンオキシ、ヘテロアリール、アミノ、アミド、およびそれらのあらゆる組合せである、（ａａａ）に記載の方法
（ｃｃｃ）Ｒ２が
【化８】
2019510734.tif 000008
であり、式中、ＸおよびＹが同一または異なっており、且つ、１から２０までの整数である、（ｂｂｂ）に記載の方法
（ｄｄｄ）ＸおよびＹがそれぞれ４である、（ｃｃｃ）に記載の方法
（ｅｅｅ）Ｒ３が
【化９】
2019510734.tif 000009
をさらに含み、式中、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８が同一または異なっており、且つ、
【化１０】
2019510734.tif 000010
【化１１】
2019510734.tif 000011
および
【化１２】
2019510734.tif 000012
からなる群より選択され、式中、ＺがＮＣＳ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩである、
（ｄｄｄ）に記載の方法
（ｆｆｆ）ＺがＢｒである、（ｅｅｅ）に記載の方法
（ｇｇｇ）Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ
【化１３】
2019510734.tif 000013
である、（ｅｅｅ）に記載の方法
（ｈｈｈ）前記開始剤が以下の構造
【化１４】
2019510734.tif 000014
を有し、式中、ＡおよびＢが同一または異なっており、且つ、２から１２までの整数であり、ＺがＢｒである、（ｇｇｇ）に記載の方法
（ｉｉｉ）ＡおよびＢがそれぞれ４である、（ｈｈｈ）に記載の方法
（ｊｊｊ）前記重合体をマレイミド試薬と反応させてマレイミド末端を有する重合体を提供するステップをさらに含む、（ｉｉｉ）に記載の方法
（ｋｋｋ）前記マレイミド化合物が
【化１５】
2019510734.tif 000015
である、（ｊｊｊ）に記載の方法
【請求項１０】
配列番号１を含む重鎖アミノ酸可変領域、および
配列番号２を含む軽鎖アミノ酸可変領域
を有する抗体。
【請求項１１】
下記（ａ６）〜（ｃ６）のいずれかである、請求項１０に記載の抗体。
（ａ６）前記抗体がヒトＩｇＧ１であり、重鎖定常ドメインが免疫介在性エフェクター機能を低下させる１つ以上の変異を含む、抗体
（ｂ６）前記抗体が重合体にさらに複合体化して生体複合体をさらに形成し、前記生体複合体が約３５０，０００と１，９００，０００ダルトンとの間の分子量を有する、抗体複合体
（ｃ６）多分散度（ＰＤＩ）が１．５以下である、（ｂ６）に記載の抗体複合体
【請求項１２】
ＶＥＧＦ−Ａに結合する抗体であって、
配列番号１内のＣＤＲＨ１であるＣＤＲＨ１、
配列番号１内のＣＤＲＨ２であるＣＤＲＨ２、
配列番号１内のＣＤＲＨ３であるＣＤＲＨ３、
配列番号２内のＣＤＲＬ１であるＣＤＲＬ１、
配列番号２内のＣＤＲＬ２であるＣＤＲＬ２、
配列番号２内のＣＤＲＬ３であるＣＤＲＬ３、
次の変異、すなわちＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ（ＥＵ式付番）のうちの少なくとも１つ、および
次の変異（ＥＵ式付番）のうちの少なくとも１つ、すなわちＱ３４７ＣまたはＬ４４３Ｃ
を含む前記抗体。
【請求項１３】
前記抗体が次の変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ（ＥＵ式付番）の３変異の全てを含み、且つ、前記抗体がＬ４４３Ｃ（ＥＵ式付番）を含む、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１４】
複合体化タンパク質を調製するための製法であって、
タンパク質内の１つ以上のシステインを還元して溶液中にキャップ除去済みタンパク質を形成すること、
前記キャップ除去済みタンパク質を再酸化して前記還元型タンパク質内に少なくとも１つのジスルフィド結合を再建し、一方で前記タンパク質内の改変システイン残基が遊離チオール状態のままであることで前記溶液中に再酸化キャップ除去済みタンパク質を形成すること、
前記溶液に少なくとも１種類の賦形剤を添加し、重合体誘導性タンパク質沈殿を前記賦形剤により減少させること、
前記溶液に重合体を添加すること、および
前記改変システイン残基において前記再酸化キャップ除去済みタンパク質に前記重合体
を複合体化して複合体化タンパク質を形成すること
を含む前記製法。
【請求項１５】
下記（ａ７）〜（ｋ７）のいずれかである、請求項１４に記載の製法。
（ａ７）前記タンパク質が抗体、抗体タンパク質融合体、またはその結合性断片である、製法
（ｂ７）前記賦形剤が酸または塩基である、（ａ７）に記載の製法
（ｃ７）前記賦形剤が界面活性剤、糖、および荷電アミノ酸のうちの少なくとも１つからなる群より選択される、（ｂ７）に記載の製法
（ｄ７）前記還元型タンパク質と重合体の反応がｐＨ６．０とｐＨ８．５との間の水性条件下で生じる、製法
（ｅ７）前記還元型タンパク質の量が前記重合体の量よりも少ない、製法
（ｆ７）前記重合体が２〜３７セルシウス度で前記タンパク質に複合体化される、製法
（ｇ７）前記複合体化タンパク質を含む溶液をイオン交換媒体、または疎水性相互作用クロマトグラフィーもしくはアフィニティークロマトグラフィー媒体に接触させる処理をさらに含む、製法
（ｈ７）前記イオン交換媒体、または疎水性相互作用クロマトグラフィーもしくはアフィニティークロマトグラフィー媒体によって前記遊離重合体および前記再酸化キャップ除去済みタンパク質から前記複合体化タンパク質が分離される、（ｇ７）に記載の製法
（ｉ７）前記重合体が双性イオンを含む、製法
（ｊ７）前記重合体がホスホリルコリンを含む、製法
（ｋ７）前記重合体が重合体分岐点の中心を前記マレイミド官能基に架橋するＰＥＧリンカーを含む、製法
【請求項１６】
ＶＥＧＦリガンドとＶＥＧＦ受容体との間の相互作用の少なくとも９０％を阻害することが可能である抗ＶＥＧＦ抗体複合体。
【請求項１７】
ＶＥＧＦリガンドとＶＥＧＦ受容体との間の相互作用の少なくとも９５％を阻害する抗ＶＥＧＦ抗体複合体。
【請求項１８】
ＶＥＧＦリガンドとＶＥＧＦ受容体との間の相互作用の少なくとも９０％を阻害する抗ＶＥＧＦ抗体複合体。