【手続補正書】
【提出日】令和2年4月28日(2020.4.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の修飾された複数膜貫通型ポリペプチドであって、
【化１】
2019527065.tif 000001
式中、
ＭＳＭＰは少なくとも１つの修飾を含む複数膜貫通型ポリペプチドであり、
ＳＰ１はＭＳＭＰのＣ末端に連結された第１の選択ポリペプチドであり、ここで、ＳＰ１は第１の選択剤に対して耐性を有し、
ＳＰ２はＭＳＭＰのＮ末端に連結された第２の選択ポリペプチドであり、ここで、ＳＰ２は第２の選択剤に対して耐性を有し、
Ｌ１は第１のリンカーであり、
Ｌ２は第２のリンカーであり、
ｘは独立して０−３であり、
ｙは独立して１−５であり、
ｚは独立して１−３であり、および、
ｍとｎは各々独立して０−６０のアミノ酸残基である、修飾された複数膜貫通型ポリペプチド。
【請求項２】
修飾された複数膜貫通型ポリペプチドは、原形質膜タンパク質、核膜タンパク質、表在性膜タンパク質、細胞内膜タンパク質、輸送体、チャネルタンパク質、アドヘシン、トランスロカーゼ、または受容体を含む、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項３】
修飾された複数膜貫通型ポリペプチドは、修飾されたイオンチャネルタンパク質である、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項４】
修飾されたイオンチャネルタンパク質は、修飾されたＴＲＰＶ３、ＫＣａ３．１、またはＴＲＰＣ６である、請求項３に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項５】
修飾された複数膜貫通型ポリペプチドは、修飾されたＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）である、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項６】
修飾されたＧＰＣＲは、修飾されたＣＣＲ７、ＣＣＲ１０、ＧＰＲ５５、ＮＴＲ１、ＥＰ２、またはＥＰ４の受容体である、請求項５に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項７】
修飾されたＧＰＣＲは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、またはそれ以上の修飾されたアミノ酸残基を含む、請求項５に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項８】
修飾されたＧＰＣＲは、約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、またはそれ以上の修飾を含む、請求項５に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項９】
少なくとも１つの修飾は無作為の突然変異誘発方法によって生成される、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項１０】
ＳＰ１は、宿主細胞中で発現するとき、宿主細胞の細胞内部分にある、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項１１】
ＳＰ２は、宿主細胞中で発現するとき、宿主細胞の細胞外部分にある、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項１２】
第１の選択ポリペプチドおよび第２の選択ポリペプチドは、各々独立して、抗生物質耐性遺伝子、栄養要求性遺伝子、または転写活性化因子あるいは転写抑制因子によってコードされる、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項１３】
第１の選択ポリペプチドおよび第２の選択ポリペプチドは、各々独立して、アンピシリン耐性遺伝子、カルベニシリン耐性遺伝子、ゲンタマイシン耐性遺伝子、クロラムフェニコール耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、エリスロマイシン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ストレプトマイシン耐性遺伝子、ｐｙｒＥ遺伝子、ｐｙｒＦ遺伝子、ＨＩＳ３遺伝子、ＵＲＡ３遺伝子、ＬＹＳ２遺伝子、ＡＤＥ１−２遺伝子、β−ガラクトシダーゼ遺伝子、あるいはアルカリホスファターゼ遺伝子によってコードされるポリペプチドである、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項１４】
ＳＰ１ｚはＳＰ１２−３であり、ＳＰ１の各々は他とは異なる、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項１５】
ＳＰ２ｘはＳＰ２２−３であり、ＳＰ２の各々は他とは異なる、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項１６】
第１の選択剤および第２の選択剤は、各々独立して、抗生物質、毒性の代謝産物、温度の上昇、温度の低下、栄養素の不足、または補助因子の不足を含む、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項１７】
修飾された複数膜貫通型ポリペプチドはさらに、式（ＩＩ）の修飾された受容体ポリペプチドを含み、
【化２】
2019527065.tif 000002
式中、
ＲＰはイオンチャネルポリペプチドまたはＧＰＣＲから選択された受容体ポリペプチドであり、ここで、ＲＰは少なくとも１つの修飾を含み、
ＳＰ１はＲＰのＣ末端に連結された第１の選択ポリペプチドであり、ここで、ＳＰ１は第１の選択剤に対して耐性を有し、
ＳＰ２はＲＰのＮ末端に連結された第２の選択ポリペプチドであり、ここで、ＳＰ２は第２の選択剤に対して耐性を有し、
Ｌ１は第１のリンカーであり、
Ｌ２は第２のリンカーであり、
ｘは独立して０−３であり、
ｙは独立して１−５であり、
ｚは独立して１−３であり、および、
ｍとｎは各々独立して０−６０のアミノ酸残基である、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項１８】
修飾された複数膜貫通型ポリペプチドはさらに、式（ＩＩＩ）の修飾された受容体ポリペプチドを含み、
【化３】
2019527065.tif 000003
式中、
ＧＰＣＲは少なくとも１つの修飾を含むＧＰＣＲであり、
ＳＰ１は、ＧＰＣＲのＣ末端に連結された第１の選択ポリペプチドであり、ここで、ＳＰ１は、宿主細胞中で発現するとき、宿主細胞の細胞内部分にあり、第１の選択剤に対して耐性を有し、
ＳＰ２は、ＧＰＣＲのＮ末端に連結された第２の選択ポリペプチドであり、ここで、ＳＰ２は、宿主細胞中で発現するとき、宿主細胞の細胞外部分にあり、第２の選択剤に対して耐性を有し、
Ｌ１は第１のリンカーであり、
Ｌ２は第２のリンカーであり、
ｘは独立して０−３であり、
ｙは独立して１−５であり、
ｚは独立して１−３であり、および、
ｍとｎは各々独立して０−６０のアミノ酸残基である、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項１９】
修飾された複数膜貫通型ポリペプチドはさらに、式（ＩＶ）の修飾された受容体ポリペプチドを含み、
【化４】
2019527065.tif 000004
式中、
ＩＣＰは少なくとも１つの修飾を含むイオンチャネルポリペプチドであり、
ＳＰ１はＩＣＰのＣ末端に連結された第１の選択ポリペプチドであり、ここで、ＳＰ１は第１の選択剤に対して耐性を有し、
ＳＰ２はＩＣＰのＮ末端に連結された第２の選択ポリペプチドであり、ここで、ＳＰ２は第２の選択剤に対して耐性を有し、
Ｌ１は第１のリンカーであり、
Ｌ２は第２のリンカーであり、
ｘは独立して０−３であり、
ｙは独立して１−５であり、
ｚは独立して１−３であり、および、
ｍとｎは各々独立して０−６０のアミノ酸残基である、請求項１に記載の修飾された複数膜貫通型タンパク質。
【請求項２０】
請求項１の修飾された複数膜貫通型ポリペプチドをコードするベクター。
【請求項２１】
請求項１の修飾された複数膜貫通型ポリペプチドを発現する宿主細胞と細胞培養培地とを含む細胞培養組成物。
【請求項２２】
結合を決定するために請求項１の修飾された複数膜貫通型ポリペプチドに対して治療薬をスクリーニングする方法であって、
治療薬を用いて、修飾された複数膜貫通型ポリペプチドをインキュベートする工程；および、
複数膜貫通型ポリペプチドと治療薬との間の結合を検知する工程、を含む、方法。
【請求項２３】
治療薬は小分子またはポリペプチドである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ポリペプチドは抗体またはその結合フラグメントである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
抗体またはその結合フラグメントは、ファージディスプレイ法または酵母ディスプレイ法によって生成される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
インキュベートする工程は、治療薬を用いてインキュベートする前に、ナノ粒子上に複数膜貫通型ポリペプチド生成物を固定する工程をさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記結合は、フローサイトメトリー方法、あるいは酵素結合免疫吸着定量法（ＥＬＩＳＡ）によって検知される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
フローサイトメトリー方法は、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）あるいは蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
治療薬は、修飾された複数膜貫通型ポリペプチドと同等の野生型の調節異常および／または異常な発現に関連する疾病または疾患をさらに処置する、請求項２２に記載の方法。