【手続補正書】
【提出日】令和2年5月11日(2020.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
不活性化病原体を含む免疫原性ワクチン組成物を産生する方法であって、ＲＮＡまたはＤＮＡゲノムを有する病原体をフェントン試薬と接触させることを含み、前記薬剤が病原体免疫原性を保持しながら前記病原体を非感染性にするのに十分な量で、かつそれに十分な期間にわたって、遷移金属と組み合わせた過酸化水素を含む、方法。
【請求項２】
病原体特異的抗体、Ｂ細胞、もしくはＴ細胞免疫アッセイ、凝集アッセイ、または他の好適なアッセイを使用して、前記非感染性の病原体の免疫原性を確認することをさらに含み、不活性化された病原体を含む免疫原性ワクチン組成物を産生することが提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記フェントン試薬が、Ｃｕおよび／またはＦｅからなる群から選択される少なくとも１つの遷移金属イオンと組み合わせた過酸化水素を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
異なる遷移金属イオンの混合物が、過酸化水素と組み合わせて使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記病原体が、ウイルス、または細菌である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記病原体が、ウイルスである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ウイルスが、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、またはＯｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科由来である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ウイルスが、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ、または科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ由来である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記ウイルスが、チクングニア熱ウイルス（ＣＨＩＫＶ、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、デング熱ウイルス血清型４〜９および黄熱ウイルス（ＤＥＮＶ１〜４、ＹＦＶ、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）、またはインフルエンザウイルス（科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記病原体が、細菌である、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記細菌が、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが、Ｃ．ｃｏｌｉまたはＣ．ｊｅｊｕｎｉである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記細菌が、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ種である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記病原体が、前記フェントン試薬と接触される前に単離または精製される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記フェントン試薬と、式Ｉを有する化合物、
【化１５】
2019515047.tif 000001
、
（式中、Ｒ１が独立して、Ｈ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびそれらの薬学的に許容される塩と接触させることを含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ＸおよびＲ２がＨであり、Ｒ１がＨ（イサチンβ−チオセミカルバゾン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチンβ−チオセミカルバゾン）である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒ１が−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））である、請求項１７に記載の方法。
【化１６】
2019515047.tif 000002
【請求項１９】
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記フェントン試薬と、各々が式ＩＩ〜Ｖ、
【化１７】
2019515047.tif 000003
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化１８】
2019515047.tif 000004
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンであり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化１９】
2019515047.tif 000005
（式中、Ｒ２およびＲ３が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびそれらの薬学的に許容される塩を含む塩、のうち１つを有する１つ以上の化合物と、ならびにそれらの組み合わせと接触させることを含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
式ＩＩのＸがＨであり、式（ＩＩ）のＲ１がＨ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）であり、式（ＩＩＩ）のＸ、Ｒ１、およびＲ２がＨ（インドール、２，３−ジオン、３−ヒドラゾン）であり、式（ＩＶ）のＲ２およびＲ３がＨ（チオセミカルバジド）であり、式（Ｖ）のＲ２およびＲ３がＨ（セミカルバジド）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記フェントン試薬、チオセミカルバジド、および式ＶＩを有する化合物と接触させることを含み、
【化２０】
2019515047.tif 000006
式中、Ｒ１が、Ｈまたは低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
ＲＮＡまたはＤＮＡゲノムを有する不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物であって、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法によって産生される、免疫原性ワクチン組成物。
【請求項２５】
前記不活性化された病原体が、病原体特異的抗体、Ｂ細胞、もしくはＴ細胞応答を誘発するか、または前記病原体による感染症を軽減するか、または前記病原体による感染症に起因する症状を緩和するのに好適な前記生物学的に活性な病原体の１つ以上の優勢な抗原性エピトープを保持する、請求項２４に記載の免疫原性ワクチン組成物。
【請求項２６】
病原体に対する免疫応答を対象において誘発するための組成物であって、前記組成物が、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法によって産生される、ＲＮＡまたはＤＮＡゲノムを有する不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物である、組成物。
【請求項２７】
不活性化病原体を含む免疫原性ワクチン組成物を産生する方法であって、メチサゾン、メチサゾン類似体（複数可）、メチサゾン官能基／下部構造、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されたメチサゾン型試薬と組み合わされた過酸化水素と、ＲＮＡまたはＤＮＡゲノムを有する病原体を、前記薬剤が病原体免疫原性を保持しながら前記病原体を非感染性にするのに十分な量で、かつそれに十分な期間にわたって、接触させることを含む、方法。
【請求項２８】
病原体特異的抗体、Ｂ細胞、もしくはＴ細胞免疫アッセイ、凝集アッセイ、または他の好適なアッセイを使用して、前記非感染性の病原体の免疫原性を確認することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ＲＮＡまたはＤＮＡゲノムを有する不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物であって、請求項２７または２８に記載の方法によって産生される、免疫原性ワクチン組成物。
【請求項３０】
病原体に対する免疫応答を対象において誘発するための組成物であって、前記組成物が、請求項２９に記載の方法によって産生された、ＲＮＡまたはＤＮＡゲノムを有する不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物である、組成物。
【請求項３１】
病原体を不活性化するための方法であって、前記方法が、前記病原体を非感染性にするのに十分な量で、かつそれに十分な期間にわたって、ＲＮＡまたはＤＮＡゲノムを有する病原体を、過酸化水素または遷移金属と組み合わされた過酸化水素を含有するフェントン試薬と、メチサゾン試薬と接触させることを含む、方法。
【請求項３２】
前記病原体の不活性化が、前記病原体を前記過酸化水素またはフェントン試薬のいずれかのみと接触させることによってもたらされる速度と比較して増大した速度で継続する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記フェントン試薬が、Ｃｕおよび／またはＦｅからなる群から選択される少なくとも１つの遷移金属イオンと組み合わせた過酸化水素を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
異なる遷移金属イオンの混合物が、過酸化水素と組み合わせて使用される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記病原体が、ウイルス、または細菌である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記病原体が、ウイルスである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ウイルスが、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、またはＯｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科由来である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ウイルスが、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ、または科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ由来である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記ウイルスが、チクングニア熱ウイルス（ＣＨＩＫＶ、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、デング熱ウイルス血清型１〜４および黄熱ウイルス（ＤＥＮＶ１〜４、ＹＦＶ、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）、またはインフルエンザウイルス（科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記病原体が、細菌である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記細菌が、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが、Ｃ．ｃｏｌｉまたはＣ．ｊｅｊｕｎｉである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記細菌が、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ種である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記病原体が、前記フェントン試薬と接触される前に単離または精製される、請求項３１に記載の方法。
【請求項４６】
前記メチサゾン試薬が、式Ｉを有する化合物、
【化２１】
2019515047.tif 000007
、
（式中、Ｒ１が独立して、Ｈ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびそれらの薬学的に許容される塩を含む、請求項３１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
ＸおよびＲ２がＨであり、Ｒ１がＨ（イサチンβ−チオセミカルバゾン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチンβ−チオセミカルバゾン）である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
Ｒ１が−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記メチサゾン試薬が、各々が式ＩＩ〜Ｖ、
【化２２】
2019515047.tif 000008
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化２３】
2019515047.tif 000009
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンであり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化２４】
2019515047.tif 000010
（式中、Ｒ２およびＲ３が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびそれらの薬学的に許容される塩を含む塩、のうち１つを有する１つ以上の化合物と、ならびにそれらの組み合わせを含む、請求項３１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
式ＩＩのＸがＨであり、式（ＩＩ）のＲ１がＨ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）であり、式（ＩＩＩ）のＸ、Ｒ１、およびＲ２がＨ（インドール、２，３−ジオン、３−ヒドラゾン）であり、式（ＩＶ）のＲ２およびＲ３がＨ（チオセミカルバジド）であり、式（Ｖ）のＲ２およびＲ３がＨ（セミカルバジド）である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記メチサゾン試薬が、チオセミカルバジドおよび式ＶＩを有する化合物を含み、
【化２５】
2019515047.tif 000011
式中、Ｒ１が、Ｈまたは低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）である、請求項５１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
フェントン型化学（ならびに、最適にメチサゾン、メチサゾン類似体、メチサゾン官能基（複数可）／下部構造（複数可）、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるメチサゾン型試薬の使用をさらに含む本明細書に記載される方法）を使用して行われた本開示の二重酸化方法は、抗原性特性を維持しながらロバストな病原体不活性化を提供して、ワクチン接種後の免疫応答の増強をもたらす高度に効果的なワクチンを提供する。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
不活性化病原体を含む免疫原性ワクチン組成物を産生する方法であって、病原体をフェントン試薬と接触させることを含み、前記薬剤が病原体免疫原性を保持しながら前記病原体を非感染性にするのに十分な量で、かつそれに十分な期間にわたって、遷移金属と組み合わせた過酸化水素を含む、方法。
（項目２）
病原体特異的抗体、Ｂ細胞、もしくはＴ細胞免疫アッセイ、凝集アッセイ、または他の好適なアッセイを使用して、前記非感染性の病原体の免疫原性を確認することをさらに含み、不活性化された病原体を含む免疫原性ワクチン組成物を産生することが提供される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記フェントン試薬が、Ｃｕ、Ｆｅ、およびＣｓからなる群から選択される少なくとも１つの遷移金属イオンと組み合わせた過酸化水素を含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
異なる遷移金属イオンの混合物が、過酸化水素と組み合わせて使用される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記ゲノム病原体が、ＲＮＡまたはＤＮＡを含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記病原体が、ウイルス、または細菌である、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記病原体が、ウイルスである、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ウイルスが、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、またはＯｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科由来である、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記ウイルスが、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ、または科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ由来である、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記ウイルスが、チクングニア熱ウイルス（ＣＨＩＫＶ、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、デング熱ウイルス血清型４〜９および黄熱ウイルス（ＤＥＮＶ１〜４、ＹＦＶ、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）、またはインフルエンザウイルス（科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓである、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記病原体が、細菌である、項目６に記載の方法。
（項目１２）
前記細菌が、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが、Ｃ．ｃｏｌｉまたはＣ．ｊｅｊｕｎｉである、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記細菌が、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種である、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ種である、項目１１に記載の方法。
（項目１６）
前記病原体が、前記フェントン試薬と接触される前に単離または精製される、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記フェントン試薬と、式Ｉを有する化合物、
【化１５】
2019515047.tif 000012
、
（式中、Ｒ１が独立して、Ｈ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびそれらの薬学的に許容される塩と接触させることを含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
ＸおよびＲ２がＨであり、Ｒ１がＨ（イサチンβ−チオセミカルバゾン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチンβ−チオセミカルバゾン）である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
Ｒ１が−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））である、項目１８に記載の方法。
【化１６】
2019515047.tif 000013
（項目２０）
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記フェントン試薬と、各々が式ＩＩ〜Ｖ、
【化１７】
2019515047.tif 000014
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化１８】
2019515047.tif 000015
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンであり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化１９】
2019515047.tif 000016
（式中、Ｒ２およびＲ３が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびそれらの薬学的に許容される塩を含む塩、のうち１つを有する１つ以上の化合物と、ならびにそれらの組み合わせと接触させることを含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
式ＩＩのＸがＨであり、式（ＩＩ）のＲ１がＨ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）であり、式（ＩＩＩ）のＸ、Ｒ１、およびＲ２がＨ（インドール、２，３−ジオン、３−ヒドラゾン）であり、式（ＩＶ）のＲ２およびＲ３がＨ（チオセミカルバジド）であり、式（Ｖ）のＲ２およびＲ３がＨ（セミカルバジド）である、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記病原体を接触させることが、前記病原体を、前記フェントン試薬、チオセミカルバジド、および式ＶＩを有する化合物と接触させることを含み、
【化２０】
2019515047.tif 000017
式中、Ｒ１が、Ｈまたは低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）である、項目２０に記載の方法。
（項目２３）
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）である、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物であって、項目１〜２４のいずれか一項に記載の方法によって産生される、免疫原性ワクチン組成物。
（項目２６）
前記不活性化された病原体が、病原体特異的抗体、Ｂ細胞、もしくはＴ細胞応答を誘発するか、または前記病原体による感染症を軽減するか、または前記病原体による感染症に起因する症状を緩和するのに好適な前記生物学的に活性な病原体の１つ以上の優勢な抗原性エピトープを保持する、項目２５に記載の免疫原性ワクチン組成物。
（項目２７）
前記ゲノム病原体が、ＲＮＡまたはＤＮＡを含む、項目２５に記載の免疫原性ワクチン組成物。
（項目２８）
病原体に対する免疫応答を誘発する方法であって、前記方法が、
不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物であって、項目１〜２４のいずれか一項に記載の方法によって産生される、免疫原性ワクチン組成物を得ることと、
前記免疫原性ワクチン組成物を対象に投与し、それにより、前記対象における前記病原体に対する免疫応答を誘発することと、を含む、方法。
（項目２９）
前記ゲノム病原体が、ＲＮＡまたはＤＮＡを含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
不活性化病原体を含む免疫原性ワクチン組成物を産生する方法であって、メチサゾン、メチサゾン類似体（複数可）、メチサゾン官能基／下部構造、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されたメチサゾン型試薬と組み合わされた過酸化水素と病原体を、前記薬剤が病原体免疫原性を保持しながら前記病原体を非感染性にするのに十分な量で、かつそれに十分な期間にわたって、接触させることを含む、方法。
（項目３１）
病原体特異的抗体、Ｂ細胞、もしくはＴ細胞免疫アッセイ、凝集アッセイ、または他の好適なアッセイを使用して、前記非感染性の病原体の免疫原性を確認することをさらに含む、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記ゲノム病原体が、ＲＮＡまたはＤＮＡを含む、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物であって、項目３０〜３２のいずれか一項に記載の方法によって産生される、免疫原性ワクチン組成物。
（項目３４）
病原体に対する免疫応答を誘発する方法であって、前記方法が、
項目３３に記載の方法によって産生された不活性化された病原体を有する免疫原性ワクチン組成物を得ることと、
前記免疫原性ワクチン組成物を対象に投与し、それにより、前記対象における前記病原体に対する免疫応答を誘発することと、を含む、方法。
（項目３５）
病原体を不活性化するための方法であって、前記方法が、前記病原体を非感染性にするのに十分な量で、かつそれに十分な期間にわたって、病原体を、過酸化水素または遷移金属と組み合わされた過酸化水素を含有するフェントン試薬と、メチサゾン試薬と接触させることを含む、方法。
（項目３６）
前記病原体の不活性化が、前記病原体を前記過酸化水素またはフェントン試薬のいずれかのみと接触させることによってもたらされる速度と比較して増大した速度で継続する、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記フェントン試薬が、Ｃｕ、Ｆｅ、およびＣｓからなる群から選択される少なくとも１つの遷移金属イオンと組み合わせた過酸化水素を含む、項目３５に記載の方法。
（項目３８）
異なる遷移金属イオンの混合物が、過酸化水素と組み合わせて使用される、項目３５に記載の方法。
（項目３９）
前記ゲノム病原体が、ＲＮＡまたはＤＮＡを含む、項目３５に記載の方法。
（項目４０）
前記病原体が、ウイルス、または細菌である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記病原体が、ウイルスである、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記ウイルスが、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、またはＯｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科由来である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記ウイルスが、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ、または科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ由来である、項目４１に記載の方法。
（項目４４）
前記ウイルスが、チクングニア熱ウイルス（ＣＨＩＫＶ、科：Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、属：Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、デング熱ウイルス血清型１〜４および黄熱ウイルス（ＤＥＮＶ１〜４、ＹＦＶ、科：Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ、科：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）、またはインフルエンザウイルス（科：Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、属：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓである、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記病原体が、細菌である、項目４０に記載の方法。
（項目４６）
前記細菌が、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒが、Ｃ．ｃｏｌｉまたはＣ．ｊｅｊｕｎｉである、請求項４６に記載の方法。
（項目４８）
前記細菌が、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種である、項目４５に記載の方法。
（項目４９）
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ種である、項目４５に記載の方法。
（項目５０）
前記病原体が、前記フェントン試薬と接触される前に単離または精製される、項目３５に記載の方法。
（項目５１）
前記メチサゾン試薬が、式Ｉを有する化合物、
【化２１】
2019515047.tif 000018
、
（式中、Ｒ１が独立して、Ｈ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびそれらの薬学的に許容される塩を含む、項目３５〜５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
ＸおよびＲ２がＨであり、Ｒ１がＨ（イサチンβ−チオセミカルバゾン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチンβ−チオセミカルバゾン）である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
Ｒ１が−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチンβ−チオセミカルバゾン（メチサゾン））である、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記メチサゾン試薬が、各々が式ＩＩ〜Ｖ、
【化２２】
2019515047.tif 000019
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンである）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化２３】
2019515047.tif 000020
（式中、Ｒ１がＨ、または−ＯＨで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり、Ｘが独立して、Ｈまたはハロゲンであり、Ｒ２が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびその薬学的に許容される塩を含む塩、
【化２４】
2019515047.tif 000021
（式中、Ｒ２およびＲ３が独立して、Ｈ、−ＯＨまたはアリールで任意に置換される低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル）である）、およびそれらの薬学的に許容される塩を含む塩、のうち１つを有する１つ以上の化合物と、ならびにそれらの組み合わせを含む、項目３５〜５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
式ＩＩのＸがＨであり、式（ＩＩ）のＲ１がＨ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）であり、式（ＩＩＩ）のＸ、Ｒ１、およびＲ２がＨ（インドール、２，３−ジオン、３−ヒドラゾン）であり、式（ＩＶ）のＲ２およびＲ３がＨ（チオセミカルバジド）であり、式（Ｖ）のＲ２およびＲ３がＨ（セミカルバジド）である、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記メチサゾン試薬が、チオセミカルバジドおよび式ＶＩを有する化合物を含み、
【化２５】
2019515047.tif 000022
式中、Ｒ１が、Ｈまたは低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル）である、項目５４に記載の方法。
（項目５７）
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）、−ＣＨ３（Ｎ−メチル−イサチン）、またはプロピル（Ｎ−プロピル−イサチン）である、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
Ｒ１が、Ｈ（イサチン）である、項目５６に記載の方法。