【手続補正書】
【提出日】令和2年11月5日(2020.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複合的な体液において、ミスフォールド標的タンパク質を伴う疾患に関連する、二次構造変化を起こしている標的タンパク質に対する潜在的な薬物の効力をインビトロで決定するための薬物スクリーニングアッセイであって、
（ａ）
赤外線透過材料のコアを備える内部反射素子と、
前記コアの少なくとも１つの表面に直接グラフトされている、前記標的タンパク質用の少なくとも１つの受容体であって、前記標的タンパク質への特異的かつ立体配座的に独立した結合が可能な抗体である前記標的タンパク質用の前記少なくとも１つの受容体と
を有する赤外線センサー素子を含むＩＲセル内で、可溶性の標的タンパク質を有する前記複合的な体液の試料のフラックスを行って、前記ＩＲセルを通してＩＲビームを送って、かつそれから赤外線スペクトルを得る、ステップと；
（ｂ）前記コアの前記表面にグラフトされている、前記標的タンパク質用の前記受容体に前記標的タンパク質をロードしている、ステップ（ａ）の同じＩＲセル内で、潜在的な薬物を有する溶液のフラックスを行って、前記ＩＲセルを通してＩＲビームを送って、かつそれから赤外線スペクトルを得る、ステップと；
（ｃ）得られた前記赤外線スペクトルを解析して、前記試料中の前記可溶性の標的タンパク質の二次構造分布を決定することにより前記潜在的な薬物の効果を評価する、ステップであって、前記潜在的な薬物の適用後、（ａ）における相応するアミドＩバンドに比較して、（ｂ）の前記スペクトルにおいてβシートに特徴的なアミドＩバンドのアップシフトまたは消失によって、前記潜在的な薬物の前記効力が示される、ステップと
を含む、薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項２】
（ｉ）前記ＩＲセルの前記赤外線透過材料は、ヒ化ガリウム、シリコン、ゲルマニウム、セレン化亜鉛およびダイヤモンドから独立して選択され、好ましくはゲルマニウムであり；および／または
（ｉｉ）前記疾患に関連する立体配座転移を起こしている前記標的タンパク質は、健康状態依存性の、特徴的な二次構造組成のアミロイド形成性ペプチドまたは（ポリ）ペプチドであり、それには、アルツハイマー病に関連するアミロイド−ベータ（Ａβ）ペプチドおよびタウタンパク質、パーキンソン病に関連するアルファ−シヌクレイン、クロイツフェルト−ヤコブ病に関連するプリオンタンパク質、またはハンチントン病に関連するハンチンチンタンパク質が挙げられ、前記標的タンパク質は、好ましくはＡβペプチドまたはタウタンパク質であり；および／または
（ｉｉｉ）標的タンパク質を含む前記複合的な体液の前記試料は、ヒトＣＳＦ、血清または血漿である、請求項１に記載の薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項３】
前記内部反射素子は、
台形または平行四辺形の形状であるゲルマニウム内部反射素子であり、
前記抗体が、前記少なくとも１つの受容体の自由にアクセス可能なアミン基を短いシラン／チオールリンカー上のアミン反応基と反応させ、かつ短いシラン／チオールリンカー上の残留するアミン反応基を前記標的タンパク質と交差反応しないブロッキング物質でブロッキングする、前記短いシランリンカーを用いたシラン化によってまたは前記短いチオールリンカーを用いたチオール化によって、前記内部ゲルマニウム反射素子の少なくとも１つの表面に直接グラフトされている、請求項１に記載の薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項４】
前記内部反射素子は、
（ｉ）ゲルマニウム単結晶、好ましくは台形に切断されたゲルマニウム単結晶であり；および／もしくは
（ｉｉ）前記反射素子を通して、赤外光の１回を超える通過を可能としまたは提供し；および／もしくは
（ｉｉｉ）異なる波長での蛍光の検出を含めて別の光学的方法による並行解析にさらに適しており；ならびに／または
（ｉｖ）前記標的タンパク質と交差反応しない前記ブロッキング物質は、カゼイン、エタノールアミン、Ｌ−リジン、ポリエチレングリコール、アルブミン、およびそれらの誘導体から選択される、請求項１または３に記載の薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項５】
前記シランリンカーおよびチオールリンカーは、均一なシランリンカーおよびチオールリンカー、シランリンカーの混合物およびチオールリンカーの混合物を含み、原子が２０個以下または原子が１５個以下の有効リンカー鎖長（合算数の炭素およびヘテロ原子）を有し、好ましくは、前記シランリンカーは、以下の式のうちの１つを有する：
（ｉ）  Ｘ３Ｓｉ−（ＣＨ２）ｎ−Ｙ−（ＣＨ２）ｎ’−Ｚ、
（ｉｉ）  Ｘ２Ｒ１Ｓｉ−（ＣＨ２）ｎ−Ｙ−（ＣＨ２）ｎ’−Ｚまたは
（ｉｉｉ）  Ｘ（Ｒ１）２Ｓｉ−（ＣＨ２）ｎ−Ｙ−（ＣＨ２）ｎ’−Ｚ、
および前記チオールリンカーは以下の式を有する：
（ｉｖ）  ＷＳ−（ＣＨ２）ｎ−Ｙ−（ＣＨ２）ｎ’−Ｚ、
［式中、Ｗは、ＨまたはＲ１Ｓ−であり、Ｘは、出現する毎にハロゲンおよびＣ１〜６アルコキシから独立して選択され、ｎは、１〜１０の整数であり、ｎ’は、１〜５の整数である；Ｒ１は、出現する毎にＣ１〜６アルキルから独立して選択され、Ｙは、化学結合、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＲ２−、−Ｓ−、−ＳＳ−、−ＮＲ２ＣＯ−、−ＣＯＮＲ２−、−ＮＲ２ＳＯ２−および−ＳＯ２ＮＲ２−（式中、Ｒ２はＨまたはＣ１〜６アルキルである）から選択され、およびＺは、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよびそれらのエステル誘導体を含めてアミン反応基である］、
請求項１、３または４に記載の薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項６】
前記赤外線センサー素子は、
（ｉ）シラン化により取得可能であり、かつ式（ｉ）〜（ｉｉｉ）の前記リンカーにおいて、ＸはＣ１〜６アルコキシ基から、好ましくはメトキシ基およびエトキシ基から独立して選択され、Ｙは−ＮＨＣＯ−であり、Ｚは−ＣＯ２Ｈまたはそのエステル誘導体であり、ならびにｎは１〜５の整数でありおよびｎ’は１〜３の整数であり、好ましくは、ｎは３でありおよびｎ’は２であり；または
（ｉｉ）チオール化により取得可能であり、かつ式（ｉｖ）の前記リンカーにおいて、ＷはＨであり、Ｙは化学結合であり、Ｚは−ＣＯ２Ｈまたはそのエステル誘導体であり、ならびにｎは１〜８の整数でありおよびｎ’は１〜５の整数であり、好ましくは、ｎは８でありおよびｎ’は４である、
請求項５に記載の薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項７】
（ｉ）前記標的タンパク質はＡβペプチドであり、前記Ａβペプチドに結合する前記受容体は抗体であり、好ましくは、抗体Ａ８９７８を含めて前記Ａβペプチドのセントラルエピトープに特異的に結合する抗体であり；または
（ｉｉ）前記標的タンパク質はタウタンパク質であり、前記タウタンパク質に結合する前記受容体は抗体であり、好ましくは、抗体タウ−５を含めて全てのタウ変異体（リン酸化、切断型、３〜４反復領域、およびアイソフォーム）がアクセス可能なエピトープに特異的に結合する抗体である、
請求項１から６のいずれか一項に記載の薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項８】
前記標的タンパク質の前記アミドＩバンドのシフトは、前記潜在的な薬物の前記効力を示す分類指標である、請求項１から７のいずれか一項に記載の薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項９】
前記潜在的な薬物は抗体などのアミドバンドを有する場合、前記方法は、前記標的タンパク質の前記アミドＩバンドのシフトを検出するために、前記潜在的な薬物の参照スペクトルを差し引くステップをさらに含む、請求項１に記載の薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項１０】
前記標的タンパク質はＡβペプチドであり、
Ａβペプチド二次構造を示す任意の値への前記アミドＩバンドのシフト、好ましくはアミドＩバンド最大値のシフト、最も好ましくは、前記Ａβペプチドの原線維画分については１６２６ｃｍ−１から１６５５ｃｍ−１へのシフト、および前記Ａβペプチドの全画分については１６３６ｃｍ−１から１６５５ｃｍ−１へのシフトによって、前記潜在的な薬物の前記効力が示される、請求項８または９に記載の薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項１１】
前記標的タンパク質はタウタンパク質であり、
タウタンパク質二次構造を示す任意の値への前記アミドＩバンドのシフト、好ましくは前記アミドＩバンド最大値のシフト、最も好ましくは、前記タウタンパク質の原線維画分については１６２６ｃｍ−１から１６５５ｃｍ−１へのシフト、および前記タウタンパク質の全画分については１６３６ｃｍ−１から１６５５ｃｍ−１へのシフトによって、前記潜在的な薬物の前記効力が示される、請求項９に記載の薬物スクリーニングアッセイ。
【請求項１２】
潜在的な薬物とミスフォールドタンパク質を伴う疾患に関連する立体配座転移を起こしている標的タンパク質との間の相互作用を直接解析するための、赤外線センサー素子の使用であって、
前記赤外線センサー素子が、
赤外線透過材料のコアを備える内部反射素子と、
前記コアの少なくとも１つの表面に直接グラフトされている、前記標的タンパク質用の少なくとも１つの受容体であって、前記標的タンパク質への特異的かつ立体配座的に独立した結合が可能な抗体である前記標的タンパク質用の前記少なくとも１つの受容体と
を有する赤外線センサー素子である、前記使用。
【請求項１３】
前記潜在的な薬物による治療の際、前記標的タンパク質の二次構造または構造変化の解析が、所望の標的タンパク質に対する前記薬物の前記効力についての直接的な情報を与える、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
神経変性疾患の治療のための薬物候補のプレセレクション用である、請求項１３に記載の使用。