【手続補正書】
【提出日】令和1年12月9日(2019.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
【請求項２】
アミノ酸位置９、１０、１１、１２、１３、１４、２７、２８、６１、７７、１１９、１４０、１４１、１４９、１５７、１５９、２３１、２３３、２４４、２５４、２７１、３０９、３２７、４０７、４１３、４５１、４８０、５２７、５４４、５５７、５６７、５９１、６４８、６４９、７０３、７０６、７１９、７４５、７４７、７４９、７５７、７７０、７７１、または７８４に対応するアミノ酸位置に１つまたは複数の突然変異を有する、請求項１に記載のＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項３】
アミノ酸位置９、１０、１１、１２、１３、１４、２７、２８、５６、６１、１１１、１１９、１４０、１４９、１５４、１５７、１６２、１６４、２０４、２３１、２３３、２４４、２５４、２７１、２７３、３０２、３０９、３２７、４０７、４１３、４７７、４８０、４８１、５２７、５４４、５４６、５５７、５６７、５９１、６４８、６４９、７０３、７０６、７０７、７０８、７０９、７１０、７１９、７２０、７３６、７４１、７４５、７４７、７４９、７５７、７７０、７７１、または７８４に対応するアミノ酸位置に１つまたは複数の突然変異を有する、請求項１に記載のＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項４】
以下のアミノ酸位置：
（ａ）配列番号３８の１２、２７、２８、１１９、１４１、１５７、１５９、２３１、２３３、及び２４４位；
（ｂ）配列番号３８の１２、２８、１１９、１４０、１５７、１５９、２３３、２４４、２５４、及び４０７位；
（ｃ）配列番号３８の１２、２７、１１１、１１９、１４１、１５７、１５９、２３１、２３３、２４４、及び２５４位；
（ｄ）配列番号３８の１２、２８、１１９、１４０、１４９、１５７、１５９、２３１、２３３、及び４０７位；
（ｅ）配列番号３８の１２、２７、２８、１１９、１４０、１５７、１５９、２３３、２４４、及び４０７位；
（ｆ）配列番号３８の１０、１１、１２、２８、１１９、１４１、１５９、２３１、２３３、２４４、及び４０７位；
（ｇ）配列番号３８の１１、１２、２７、２８、１１９、１４１、１５７、１５９、１９７、２３１、２３３、２４４、４０７、及び４７７位；
（ｈ）配列番号３８の１１、１２、２８、１１９、１４１、１５７、１５９、１９７、２３１、２３３、２４４、及び４０７位；または
（ｉ）配列番号３８の１１、１２、２７、２８、１１９、１４１、１４９、１５７、１５９、２３１、２３３、及び４０７位
の各々における突然変異を有し、脂肪酸からω−ヒドロキシル化脂肪酸への変換を触媒する、請求項１に記載のＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
【請求項５】
（ａ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２７、２８、１１９、１４１、１５７、１５９、２３１、２３３、及び２４４位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｒ２７Ｌ、Ｑ２８Ｍ、Ｋ１１９Ｒ、Ｖ１４１Ｔ、Ｓ１５７Ｒ、Ｖ１５９Ｍ、Ａ２３１Ｙ、Ｓ２３３Ｌ、及びＡ２４４Ｒである；
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、１１９、１４０、１５７、１５９、２３３、２４４、２５４、及び４０７位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｑ２８Ｍ、Ｋ１１９Ｒ、Ｓ１４０Ｎ、Ｓ１５７Ｒ、Ｖ１５９Ｍ、Ｓ２３３Ｌ、Ａ２４４Ｒ、Ｒ２５４Ｇ、及びＮ４０７Ｇである；
（ｃ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２７、１１１、１１９、１４１、１５７、１５９、２３１、２３３、２４４、及び２５４位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｒ２７Ｌ、Ｆ１１１Ａ、Ｋ１１９Ｒ、Ｖ１４１Ｔ、Ｓ１５７Ｒ、Ｖ１５９Ｍ、Ａ２３１Ｙ、Ｓ２３３Ｌ、Ａ２４４Ｒ、及びＲ２５４Ｇである；
（ｄ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、１１９、１４０、１４９、１５７、１５９、２３１、２３３、及び４０７位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｑ２８Ｍ、Ｋ１１９Ｒ、Ｓ１４０Ｎ、Ｐ１４９Ｇ、Ｓ１５７Ｒ、Ｖ１５９Ｍ、Ａ２３１Ｙ、Ｓ２３３Ｌ、及びＮ４０７Ｇである；
（ｅ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２７、２８、１１９、１４０、１５７、１５９、２３３、２４４、及び４０７位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｒ２７Ｌ、Ｑ２８Ｍ、Ｋ１１９Ｒ、Ｓ１４０Ｎ、Ｓ１５７Ｒ、Ｖ１５９Ｍ、Ｓ２３３Ｌ、Ａ２４４Ｒ、及びＮ４０７Ｇである；
（ｆ）配列番号３８のアミノ酸位置１０、１１、１２、２８、１１９、１４１、１５９、２３１、２３３、２４４、及び４０７位における前記突然変異が、それぞれ、Ｄ１０Ｙ、Ｉ１１Ｌ、Ｑ１２Ｗ、Ｑ２８Ｍ、Ｋ１１９Ｒ、Ｖ１４１Ｔ、Ｖ１５９Ｍ、Ａ２３１Ｙ、Ｓ２３３Ｌ、Ａ２４４Ｒ、及びＮ４０７Ｇである；
（ｇ）配列番号３８のアミノ酸位置１１、１２、２７、２８、１１９、１４１、１５７、１５９、１９７、２３１、２３３、２４４、４０７、及び４７７位における前記突然変異が、それぞれ、Ｉ１１Ｌ、Ｑ１２Ｗ、Ｒ２７Ｌ、Ｑ２８Ｍ、Ｋ１１９Ｒ、Ｖ１４１Ｔ、Ｓ１５７Ｒ、Ｖ１５９Ｍ、Ａ１９７Ｔ、Ａ２３１Ｙ、Ｓ２３３Ｌ、Ａ２４４Ｒ、Ｎ４０７Ｇ、及びＰ４７７Ｇである；
（ｈ）配列番号３８のアミノ酸位置１１、１２、２８、１１９、１４１、１５７、１５９、１９７、２３１、２３３、２４４、及び４０７位における前記突然変異が、それぞれ、Ｉ１１Ｌ、Ｑ１２Ｗ、Ｑ２８Ｍ、Ｋ１１９Ｒ、Ｖ１４１Ｔ、Ｓ１５７Ｒ、Ｖ１５９Ｍ、Ａ１９７Ｔ、Ａ２３１Ｙ、Ｓ２３３Ｌ、Ａ２４４Ｒ、及びＮ４０７Ｇである；ならびに
（ｉ）配列番号３８のアミノ酸位置１１、１２、２７、２８、１１９、１４１、１４９、１５７、１５９、２３１、２３３、及び４０７位における前記突然変異が、それぞれ、Ｉ１１Ｌ、Ｑ１２Ｗ、Ｒ２７Ｌ、Ｑ２８Ｍ、Ｋ１１９Ｒ、Ｖ１４１Ｔ、Ｐ１４９Ｇ、Ｓ１５７Ｒ、Ｖ１５９Ｍ、Ａ２３１Ｙ、Ｓ２３３Ｌ、及びＮ４０７Ｇである、
請求項４に記載のＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
【請求項６】
アミノ酸位置１２位および以下のアミノ酸位置の各々：
（ａ）配列番号３８の２７、１１９、１４０、１５７、１５９、２３３、及び２４４位；
（ｂ）配列番号３８の２８、６１、１１９、２３１、３０９、４１３、及び４８０位；
（ｃ）配列番号３８の１１９、２３１、及び４８０位；
（ｄ）配列番号３８の２８、７７、１１９、１４１、２３１、及び４０７位；
（ｅ）配列番号３８の２８、６１、１４１、２３１、及び４０７位；
（ｆ）配列番号３８の２８、１１９、２３１、及び２４４位；
（ｇ）配列番号３８の２８、４０７、及び４８０位；
（ｈ）配列番号３８の１４１、２３１、４１３、及び４８１位；
（ｉ）配列番号３８の２８、１１１、２３１、及び４０７位；
（ｊ）配列番号３８の２８、６１、１４０、及び１４９位；
（ｋ）配列番号３８の２８、７７、１１９、１５９、２３１、２５４、４０７、及び４８０位；
（ｌ）配列番号３８の２８、２５４、３０９、４０７、及び４５１位；
（ｍ）配列番号３８の２８、２５４、３０９、４０７、及び４８０位；
（ｎ）配列番号３８の２８、３０９、４０７、４５１、及び４８０位；
において突然変異を含み、脂肪酸からω−ヒドロキシル化脂肪酸への変換を触媒する、請求項１に記載のＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
【請求項７】
（ａ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２７、１１９、１４０、１５７、１５９、２３３、及び２４４位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｒ２７Ｌ、Ｋ１１９Ｒ、Ｓ１４０Ｎ、Ｓ１５７Ｒ、Ｖ１５９Ｍ、Ｓ２３３Ｌ、及びＡ２４４Ｒである；
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、６１、１１９、２３１、３０９、４１３、及び４８０位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｒ、Ｑ２８Ｍ、Ｎ６１Ｌ、Ｋ１１９Ｒ、Ａ２３１Ｖ、Ｎ３０９Ｓ、Ｙ４１３Ｒ、及びＩ４８０Ｇである；
（ｃ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、１１９、２３１、及び４８０における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｒ、Ｋ１１９Ｒ、Ａ２３１Ｖ、及びＩ４８０Ｇである；
（ｄ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、７７、１１９、１４１、２３１、及び４０７位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｔ、Ｑ２８Ｍ、Ｒ７７Ｑ、Ｋ１１９Ｒ、Ｖ１４１Ｔ、Ａ２３１Ｗ、及びＮ４０７Ｇである；
（ｅ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、６１、１４１、２３１、及び４０７位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｒ、Ｑ２８Ｍ、Ｎ６１Ｌ、Ｖ１４１Ｔ、Ａ２３１Ｙ、及びＮ４０７Ｇである；
（ｆ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、１１９、２３１、及び２４４位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｑ２８Ｍ、Ｋ１１９Ｒ、Ａ２３１Ｙ、及びＡ２４４Ｒである；
（ｇ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、４０７、及び４８０位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｑ２８Ｔ、Ｎ４０７Ｇ、及びＩ４８０Ｇである；
（ｈ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、１４１、２３１、４１３、及び４８１位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｒ、Ｖ１４１Ｔ、Ａ２３１Ｙ、Ｙ４１３Ｒ、及びＧ４８１Ｉである； 
（ｉ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、１１１、２３１、及び４０７位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｔ、Ｑ２８Ｍ、Ｆ１１１Ａ、Ａ２３１Ｖ、及びＮ４０７Ｇである、
（ｊ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、６１、１４０、及び１４９位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｔ、Ｑ２８Ｍ、Ｎ６１Ｌ、Ｓ１４０Ｎ、及びＰ１４９Ｒである；
（ｋ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、７７、１１９、１５９、２３１、２５４、４０７、及び４８０位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｑ２８Ｔ、Ｒ７７Ｑ、Ｋ１１９Ｒ、Ｖ１５９Ｍ、Ａ２３１Ｙ、Ｒ２５４Ｇ、Ｎ４０７Ｇ、及びＩ４８０Ｇである；
（ｌ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、２５４、３０９、４０７、及び４５１位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｑ２８Ｔ、Ｒ２５４Ｇ、Ｎ３０９Ｓ、Ｎ４０７Ｇ、及びＶ４５１Ｍである；
（ｍ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、２５４、３０９、４０７、及び４８０位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｑ２８Ｔ、Ｒ２５４Ｇ、Ｎ３０９Ｓ、Ｎ４０７Ｇ、及びＩ４８０Ｇである；ならびに
（ｎ）配列番号３８のアミノ酸位置１２、２８、３０９、４０７、４５１、及び４８０位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ１２Ｗ、Ｑ２８Ｔ、Ｎ３０９Ｓ、Ｎ４０７Ｇ、Ｖ４５１Ｍ、及びＩ４８０Ｇである、
請求項６に記載のＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
【請求項８】
組換え宿主細胞における前記ＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントの発現が、対応する宿主細胞における配列番号６または配列番号３８のＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドの発現により産生されるω−ヒドロキシル化脂肪酸の力価と比較して、より高いω−ヒドロキシル化脂肪酸の力価をもたらす、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントを発現する、組換え宿主細胞。
【請求項１０】
ＥＣ  ３．１．２．−、ＥＣ  ３．１．１．５、またはＥＣ  ３．１．２．１４のチオエステラーゼポリペプチドをさらに発現する、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項１１】
炭素源含有培地において培養された場合に、配列番号３８または配列番号６を含む対応するＣＹＰ１５３Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドを発現する宿主細胞により産生されるω−ヒドロキシル化脂肪酸組成物の力価よりも、少なくとも１０％高い、少なくとも１５％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも２５％高い、または少なくとも３０％高い力価を有するω−ヒドロキシル化脂肪酸組成物を産生する、請求項１０に記載の組換え宿主細胞。
【請求項１２】
（ｉ）請求項１〜７のいずれか１項に記載の組換え宿主細胞を炭素源の存在下で培養すること
を含む、ω−ヒドロキシル化脂肪酸を産生する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
本開示のなお別の態様は、力価の増大したω−ＯＨ脂肪酸を産生する方法であって、宿主細胞（上記）を炭素源で培養し、ω−ＯＨ脂肪酸またはその組成物を採取することを含む方法を提供する。特に、本方法は、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ８：１、Ｃ９：１、Ｃ１０：１、Ｃ１１：１、Ｃ１２：１、Ｃ１３：１、Ｃ１４：１、Ｃ１５：１、Ｃ１６：１、Ｃ１７：１、Ｃ１８：１、Ｃ１９：１及び／またはＣ２０：１脂肪酸または脂肪酸誘導体或いはその組成物を産生することを包含する。１つの実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、不飽和ω−ＯＨ  Ｃ１６：１脂肪酸またはその組成物である。別の実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、飽和ω−ＯＨ  Ｃ１６脂肪酸またはその組成物である。１つの実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、不飽和ω−ＯＨ  Ｃ１２：１脂肪酸またはその組成物である。別の実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、飽和ω−ＯＨ  Ｃ１２脂肪酸またはその組成物である。１つの実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、不飽和ω−ＯＨ  Ｃ１４：１脂肪酸またはその組成物である。別の実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、飽和ω−ＯＨ  Ｃ１４脂肪酸またはその組成物である。１つの実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、不飽和ω−ＯＨ  Ｃ１８：１脂肪酸またはその組成物である。別の実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、飽和ω−ＯＨ  Ｃ１８脂肪酸またはその組成物である。１つの実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、不飽和ω−ＯＨ  Ｃ１０：１脂肪酸またはその組成物である。別の実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、飽和ω−ＯＨ  Ｃ１０脂肪酸またはその組成物である。１つの実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、不飽和ω−ＯＨ  Ｃ８：１脂肪酸またはその組成物である。別の実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、飽和ω−ＯＨ  Ｃ８脂肪酸またはその組成物である。１つの実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、不飽和ω−ＯＨ  Ｃ２０：１脂肪酸またはその組成物である。別の実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、飽和ω−ＯＨ  Ｃ２０脂肪酸またはその組成物である。１つの実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、不飽和ω−ＯＨ  Ｃ２２：１脂肪酸またはその組成物である。別の実施形態において、採取されるω−ＯＨ脂肪酸は、飽和ω−ＯＨ  Ｃ２２脂肪酸またはその組成物である。
[本発明1001]
配列番号38のアミノ酸配列に対して少なくとも90％の配列同一性を備えるＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントであって、アミノ酸位置12位における突然変異と、以下のアミノ酸位置：
（ａ）配列番号38の12、27、28、119、141、157、159、231、233、及び244位；
（ｂ）配列番号38の12、28、119、140、157、159、233、244、254、及び407位；
（ｃ）配列番号38の12、27、111、119、141、157、159、231、233、244、及び254位；
（ｄ）配列番号38の12、28、119、140、149、157、159、231、233、及び407位；
（ｅ）配列番号38の12、27、28、119、140、157、159、233、244、及び407位；
（ｆ）配列番号38の10、11、12、28、119、141、159、231、233、244、及び407位；
（ｇ）配列番号38の11、12、27、28、119、141、157、159、197、231、233、244、407、及び477位；
（ｈ）配列番号38の11、12、28、119、141、157、159、197、231、233、244、及び407位；または
（ｉ）配列番号38の11、12、27、28、119、141、149、157、159、231、233、及び407位
の各々における突然変異とを含み、脂肪酸からω−ヒドロキシル化脂肪酸への変換を触媒する、前記ＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
[本発明1002]
（ａ）配列番号38のアミノ酸位置12、27、28、119、141、157、159、231、233、及び244位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ12Ｗ、Ｒ27Ｌ、Ｑ28Ｍ、Ｋ119Ｒ、Ｖ141Ｔ、Ｓ157Ｒ、Ｖ159Ｍ、Ａ231Ｙ、Ｓ233Ｌ、及びＡ244Ｒである；
（ｂ）配列番号38のアミノ酸位置12、28、119、140、157、159、233、244、254、及び407位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ12Ｗ、Ｑ28Ｍ、Ｋ119Ｒ、Ｓ140Ｎ、Ｓ157Ｒ、Ｖ159Ｍ、Ｓ233Ｌ、Ａ244Ｒ、Ｒ254Ｇ、及びＮ407Ｇである；
（ｃ）配列番号38のアミノ酸位置12、27、111、119、141、157、159、231、233、244、及び254位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ12Ｗ、Ｒ27Ｌ、Ｆ111Ａ、Ｋ119Ｒ、Ｖ141Ｔ、Ｓ157Ｒ、Ｖ159Ｍ、Ａ231Ｙ、Ｓ233Ｌ、Ａ244Ｒ、及びＲ254Ｇである；
（ｄ）配列番号38のアミノ酸位置12、28、119、140、149、157、159、231、233、及び407位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ12Ｗ、Ｑ28Ｍ、Ｋ119Ｒ、Ｓ140Ｎ、Ｐ149Ｇ、Ｓ157Ｒ、Ｖ159Ｍ、Ａ231Ｙ、Ｓ233Ｌ、及びＮ407Ｇである；
（ｅ）配列番号38のアミノ酸位置12、27、28、119、140、157、159、233、244、及び407位における前記突然変異が、それぞれ、Ｑ12Ｗ、Ｒ27Ｌ、Ｑ28Ｍ、Ｋ119Ｒ、Ｓ140Ｎ、Ｓ157Ｒ、Ｖ159Ｍ、Ｓ233Ｌ、Ａ244Ｒ、及びＮ407Ｇである；
（ｆ）配列番号38のアミノ酸位置10、11、12、28、119、141、159、231、233、244、及び407位における前記突然変異が、それぞれ、Ｄ10Ｙ、Ｉ11Ｌ、Ｑ12Ｗ、Ｑ28Ｍ、Ｋ119Ｒ、Ｖ141Ｔ、Ｖ159Ｍ、Ａ231Ｙ、Ｓ233Ｌ、Ａ244Ｒ、及びＮ407Ｇである；
（ｇ）配列番号38のアミノ酸位置11、12、27、28、119、141、157、159、197、231、233、244、407、及び477位における前記突然変異が、それぞれ、Ｉ11Ｌ、Ｑ12Ｗ、Ｒ27Ｌ、Ｑ28Ｍ、Ｋ119Ｒ、Ｖ141Ｔ、Ｓ157Ｒ、Ｖ159Ｍ、Ａ197Ｔ、Ａ231Ｙ、Ｓ233Ｌ、Ａ244Ｒ、Ｎ407Ｇ、及びＰ477Ｇである；
（ｈ）配列番号38のアミノ酸位置11、12、28、119、141、157、159、197、231、233、244、及び407位における前記突然変異が、それぞれ、Ｉ11Ｌ、Ｑ12Ｗ、Ｑ28Ｍ、Ｋ119Ｒ、Ｖ141Ｔ、Ｓ157Ｒ、Ｖ159Ｍ、Ａ197Ｔ、Ａ231Ｙ、Ｓ233Ｌ、Ａ244Ｒ、及びＮ407Ｇである；ならびに
（ｉ）配列番号38のアミノ酸位置11、12、27、28、119、141、149、157、159、231、233、及び407位における前記突然変異が、それぞれ、Ｉ11Ｌ、Ｑ12Ｗ、Ｒ27Ｌ、Ｑ28Ｍ、Ｋ119Ｒ、Ｖ141Ｔ、Ｐ149Ｇ、Ｓ157Ｒ、Ｖ159Ｍ、Ａ231Ｙ、Ｓ233Ｌ、及びＮ407Ｇである、
本発明1001のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
[本発明1003]
（ａ）前記（ａ）のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントが、配列番号166のアミノ酸配列を含む；
（ｂ）前記（ｂ）のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントが、配列番号168のアミノ酸配列を含む；
（ｃ）前記（ｃ）のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントが、配列番号170のアミノ酸配列を含む；
（ｄ）前記（ｄ）のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントが、配列番号172のアミノ酸配列を含む；
（ｅ）前記（ｅ）のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントが、配列番号174のアミノ酸配列を含む；
（ｆ）前記（ｆ）のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントが、配列番号176のアミノ酸配列を含む；
（ｇ）前記（ｇ）のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントが、配列番号178のアミノ酸配列を含む；
（ｈ）前記（ｈ）のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントが、配列番号180のアミノ酸配列を含む；及び
（ｉ）前記（ｉ）のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントが、配列番号182のアミノ酸配列を含む、
本発明1002のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
[本発明1004]
配列番号166、配列番号168、配列番号170、配列番号172、配列番号174、配列番号176、配列番号178、配列番号180、及び配列番号182からなる群から選択される、ＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
[本発明1005]
組換え宿主細胞における前記ＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントの発現が、対応する宿主細胞における配列番号6または配列番号38のＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドの発現により産生されるω−ヒドロキシル化脂肪酸の力価と比較して、より高いω−ヒドロキシル化脂肪酸の力価をもたらす、本発明1001〜1004のいずれかのＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
[本発明1006]
ハイブリッドＣＹＰ153Ａ−ＲｅｄＲｈＦ融合タンパク質バリアントである、本発明1001〜1004のいずれかのＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント。
[本発明1007]
本発明1001〜1004のいずれかのＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントを発現する、組換え宿主細胞。
[本発明1008]
ＥＣ  3．1．2．−、ＥＣ  3．1．1．5、またはＥＣ  3．1．2．14のチオエステラーゼポリペプチドをさらに発現する、本発明1007の組換え宿主細胞。
[本発明1009]
炭素源含有培地において培養された場合に、配列番号38または配列番号6を含む対応するＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドを発現する宿主細胞により産生されるω−ヒドロキシル化脂肪酸組成物の力価よりも、少なくとも10％高い、少なくとも15％高い、少なくとも20％高い、少なくとも25％高い、または少なくとも30％高い力価を有するω−ヒドロキシル化脂肪酸組成物を産生する、本発明1008の組換え宿主細胞。
[本発明1010]
本発明1007〜1009のいずれかの組換え宿主細胞を含む、細胞培養物。
[本発明1011]
（ｉ）本発明1007〜1009のいずれかの組換え宿主細胞または本発明1010の細胞培養物を炭素源の存在下で培養すること、及び
（ｉｉ）ω−ヒドロキシル化脂肪酸を採取すること
を含む、ω−ヒドロキシル化脂肪酸を産生する方法。
[本発明1012]
（ｉ）ＥＣ  3．1．2．−、ＥＣ  3．1．1．5、またはＥＣ  3．1．2．14のチオエステラーゼ、及び
（ｉｉ）本発明1001〜1006のいずれかのＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント
を含むポリペプチドをコードする少なくとも2つの核酸配列を発現するように操作された経路を含む、組換え微生物。
[本発明1013]
前記ＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアントが、自給型ＣＹＰ153Ａ−ＲｅｄＲｈＦハイブリッド融合ポリペプチドバリアントである、本発明1001〜1006のいずれかのＣＹＰ153Ａ−レダクターゼハイブリッド融合ポリペプチドバリアント、または本発明1007〜1009のいずれかの組換え宿主細胞、または本発明1010の細胞培養物、または本発明1011の方法、または本発明1012の組換え微生物。