【手続補正書】
【提出日】令和1年12月16日(2019.12.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトIL-2バリアントタンパク質ドメイン、6〜35アミノ酸のペプチドリンカードメイン、およびIgG Fcドメインを含む融合タンパク質であって、各ドメインはアミノ末端（N末端）およびカルボキシ末端（C末端）を有し；該融合タンパク質は、ヒトIL-2バリアントタンパク質ドメインのC末端がペプチド結合によりペプチドリンカードメインのN末端と融合し、IgG FcドメインのN末端がペプチド結合によりペプチドリンカードメインのC末端と融合するように構成されている、前記融合タンパク質。
【請求項２】
ヒトIL-2バリアントタンパク質ドメインが、配列番号1のアミノ酸配列に対してN88R、N88G、D20H、Q126LおよびQ126Fからなる群より選択される置換を有するヒトIL-2を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
ヒトIL-2バリアントタンパク質ドメインが置換C125Sを有するヒトIL-2を含む、請求項１または２に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
ヒトIL-2バリアントタンパク質ドメインが配列番号1のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
ペプチドリンカードメインがグリシンおよびセリン残基を含み、かつ10〜30アミノ酸である、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
IgG Fcドメインが、IgG Fcドメインのエフェクター機能を低減する1つ以上のアミノ酸置換を含有する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
a.配列番号1のアミノ酸配列に対してアミノ酸置換N88RおよびC125Sを有するIL-2バリアントタンパク質、
b. 配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、または配列番号19に記載のリンカーペプチド、ならびに
c. 配列番号2または配列番号3に記載のヒトIgG Fcタンパク質
を含む融合タンパク質。
【請求項８】
請求項１の融合タンパク質および薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の融合タンパク質を含む、ヒト制御性T細胞を選択的に活性化するための医薬組成物。
【請求項１０】
ヒト血液細胞を0.01nM〜1nMの濃度の請求項１記載の融合タンパク質と接触させ、次にフローサイトメトリーによって該タンパク質に結合する細胞を検出することによって、ヒト血液試料中のTreg細胞の数を測定する方法。
【請求項１１】
2つの同一の鎖を含む2量体タンパク質であって、ここで各鎖は請求項１に記載の融合タンパク質を含む、前記2量体タンパク質。
【請求項１２】
ヒトIL-2バリアントタンパク質ドメインが、配列番号1のアミノ酸配列に対して置換C125Sを含む、請求項１１に記載の2量体タンパク質。
【請求項１３】
ペプチドリンカードメインが、グリシン残基、セリン残基、またはグリシンおよびセリン残基の混合物からなる、請求項１１に記載の2量体タンパク質。
【請求項１４】
ヒトIL-2バリアントタンパク質ドメインが置換N88Rを有する、請求項１１に記載の2量体タンパク質。
【請求項１５】
ペプチドリンカードメインがセリンおよびグリシン残基の混合物からなり、かつ12〜17個のアミノ酸残基を含む、請求項１１に記載の2量体タンパク質。
【請求項１６】
ペプチドリンカードメインが比率4：1のグリシン残基 対 セリン残基を含む、請求項１１に記載の2量体タンパク質。
【請求項１７】
請求項１に記載の融合タンパク質をコードする核酸。
【請求項１８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の融合タンパク質を含む、それを必要とする対象において自己免疫疾患を治療するための医薬組成物。
【請求項１９】
自己免疫疾患が、1型糖尿病、全身性エリテマトーデス、移植片対宿主病、自己免疫性血管炎、尋常性天疱瘡、強皮症、潰瘍性大腸炎、クローン病、乾癬、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、円形脱毛症、ブドウ膜炎、視神経脊髄炎、およびデュシェンヌ型筋ジストロフィーからなる群から選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
検証中の自己免疫疾患に対する1つの治療アプローチは、自家性のex vivoで増やしたTreg細胞の移植である（Tang, Q., et al, 2013, Cold Spring Harb. Perspect. Med., 3:1-15）。このアプローチは疾患の動物モデルおよびいくつかの早い段階のヒト臨床試験で見込みを示してきた一方で、それは患者自身のT細胞を用いる個別化治療を必要とし、侵襲的であり、技術的に複雑である。別のアプローチは低用量インターロイキン-2（IL-2）を用いる治療である。Treg細胞は、恒常的に高いレベルの、高親和性IL-2受容体であるIL2Rαβγ（サブユニットIL2RA（CD25）、IL2RB（CD122）およびIL2RG（CD132）から構成される）を発現するという特徴があり、Treg細胞の増殖はIL-2依存的であることが示されている（Malek, T. R., et al., 2010, Immunity, 33:153-65）。慢性移植片対宿主病（GVHD）（Koreth, J., et al., 2011, N Engl J Med., 365:2055-66）およびHCV関連自己免疫性血管炎患者（Saadoum, D., et al., 2011, N Engl J Med., 365:2067-77）の低用量IL-2治療の臨床試験は、Tregレベルの増加、および臨床有効性の兆候を示している。複数の他の自己免疫炎症性疾患におけるIL-2の有効性を検証する新しい臨床試験が始まっている。 
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
前述の発明は理解を明確にする目的で説明と例示によってある程度詳細に記載されているが、添付される特許請求の範囲の趣旨または範囲から逸脱することなく、本発明に対して一定の変更や改変をなし得ることは、当業者であれば本発明の教示に基づいて容易に明らかになる。
［１］  ヒトIL-2バリアントタンパク質ドメイン、6〜35アミノ酸のペプチドリンカーセグメントドメイン、およびIgG Fcドメインを含む融合タンパク質であって、各ドメインはアミノ末端（N末端）およびカルボキシ末端（C末端）を有し；該融合タンパク質は、ヒトIL-2バリアントタンパク質ドメインのC末端がペプチド結合によりペプチドリンカーのN末端と融合し、IgG Fcタンパク質部分のN末端がペプチド結合によりペプチドリンカーのC末端と融合するように構成され；
ここで前記IL-2融合タンパク質は高親和性IL-2受容体を選択的に活性化し、それによってヒト制御性T細胞を選択的に活性化する能力を有する、前記融合タンパク質。
［２］  IL-2バリアントタンパク質が、ヒトIL2タンパク質（配列番号1）に対してN88R、N88G、D20H、Q126LおよびQ126Fからなる群より選択される置換を有するヒトIL-2を含む、上記［１］に記載の融合タンパク質。
［３］  IL-2バリアントタンパク質が置換C125Sを有するヒトIL-2を含む、上記［１］に記載の融合タンパク質。
［４］  両方のIL-2バリアントタンパク質が配列番号1に提供されるN88Rである、上記［１］に記載の融合タンパク質。
［５］  リンカーがグリシンおよびセリン残基を含み、リンカーが10〜30アミノ酸である、上記［１］に記載の融合タンパク質。
［６］  IgG Fcタンパク質が、該融合タンパク質のFc部分のエフェクター機能を低減する1つ以上のアミノ酸置換を含有する、上記［１］に記載の融合タンパク質。
［７］  a. ヒトIL-2（配列番号1）に対してアミノ酸置換N88RおよびC125Sを有するIL-2バリアントタンパク質、
b. 配列番号15に記載のリンカーペプチド、ならびに
c. 配列番号2に記載のヒトIgG1 Fcバリアントタンパク質
を含む融合タンパク質であって、高親和性IL-2受容体を選択的に活性化し、それによってヒト制御性T細胞を選択的に活性化する能力を有する、前記融合タンパク質。
［８］  a. ヒトIL-2（配列番号1）に対してアミノ酸置換N88RおよびC125Sを有するIL-2バリアントタンパク質、
b. 配列番号15に記載のリンカーペプチド、ならびに
c. 配列番号3に記載のヒトIgG2 Fcタンパク質
を含む、融合タンパク質。
［９］  上記［１］の融合タンパク質および薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
［１０］  ヒト制御性T細胞を選択的に活性化する方法であって、該方法は、ヒトIL-2（配列番号1）に対してアミノ酸置換N88RおよびC125Sを有するIL-2バリアントタンパク質、配列番号15に記載のリンカーペプチド、ならびに配列番号2に記載のヒトIgG1 Fcタンパク質を含む医薬組成物を投与することを含み、ここで前記医薬組成物は、ヒト制御性T細胞の濃度が所望のレベルに到達するまで治療上有効量で投与される、前記方法。
［１１］  ヒト制御性T細胞を選択的に活性化する方法であって、該方法は、上記［２］のIL-2バリアントタンパク質、ならびに
a. 配列番号2に記載のヒトIgG1 Fcタンパク質、
b. 配列番号3に記載のヒトIgG2 Fcタンパク質、および
c. 配列番号24に記載のヒトIgG4 Fcタンパク質ドメイン
からなる群より選択されるヒトIgG Fcタンパク質
を含む医薬組成物を投与することを含み、ここで前記医薬組成物は、ヒト制御性T細胞の濃度が所望のレベルに到達するまで治療上有効量で投与される、前記方法。
［１２］  ヒト血液細胞を0.01nM〜1nMの濃度の上記［１］記載の融合タンパク質と接触させ、次にフローサイトメトリーによって該タンパク質に結合する細胞を検出することによって、ヒト血液試料中のTreg細胞の数を測定する方法。
［１３］  2つの同一の鎖を含む2量体タンパク質であって、ここで各鎖はN末端ヒトIL-2バリアントタンパク質部分およびC末端IgG Fcタンパク質部分を含み、ここで
N末端ヒトIL-2バリアントタンパク質部分は、
a. N末端およびC末端を有し；
b. N88R、N88G、D20H、Q126LおよびQ126Fからなる群より選択される少なくとも1つの置換によって配列番号1のヒトIL-2野生型と相違し；
c. 配列番号1に対して少なくとも97％の配列同一性を有し；ならびに
d. Treg細胞上のIL2Rαβγに結合することによってTreg細胞を活性化する能力を有し；
N末端ヒトIL-2バリアントタンパク質はそのC末端で6〜30アミノ酸残基のアミノ酸リンカーのN末端と連結し、ここで該リンカーはまたC末端を有し；ならびに
該アミノ酸リンカーのC末端は、配列番号2に対して95％の配列同一性を有しシステイン残基を含む、IgG Fcタンパク質部分のN末端に連結し；ここで2つの鎖はIgG Fcタンパク質部分のシステイン残基を通して互いに連結されている、前記2量体タンパク質。
［１４］  IL-2バリアントタンパク質が置換C125Sを有するヒトIL-2をさらに含む、上記［１３］に記載の2量体タンパク質。
［１５］  アミノ酸リンカーが、グリシン残基、セリン残基、ならびにグリシンおよびセリン残基の混合物の群から選択されるリンカーからなる、上記［１３］に記載のタンパク質。
［１６］  IL-2バリアントタンパク質部分が置換N88Rを有する、上記［１３］に記載のタンパク質。
［１７］  リンカーが12〜17個のセリンおよびグリシン残基の混合物を含む、上記［１３］に記載のタンパク質。
［１８］  リンカーが比率4：1のグリシン残基 対 セリン残基を含む、上記［１３］に記載の融合タンパク質。
［１９］  上記［１］に記載の融合タンパク質をコードする核酸。