【手続補正書】
【提出日】令和2年2月12日(2020.2.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
凍結乾燥組成物であって、
ａ）培養脂肪細胞のセクレトームを含む、細胞不含の濃縮条件培地であって、前記脂肪細胞が、少なくとも１つの脂肪幹細胞（ＡＳＣ）を含み、前記培養脂肪細胞のうちの少なくとも９０％が、周皮細胞マーカー、または間葉系幹細胞（ＭＳＣ）マーカーを発現する、条件培地と、
ｂ）有効量の凍結乾燥剤と
を含む、凍結乾燥組成物。
【請求項２】
前記周皮細胞マーカーが、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４６、および神経／神経膠抗原（ＮＧ２）からなる群から選択され、前記ＭＳＣマーカーが、ＣＤ７３、ＣＤ９０、およびＣＤ１０５からなる群から選択され、前記培養脂肪細胞が、ＣＤ４５、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ３１に関して陰性である、請求項１に記載の凍結乾燥組成物。
【請求項３】
前記凍結乾燥剤が、スクロースである、請求項１に記載の凍結乾燥組成物。
【請求項４】
凍結乾燥の前に濾過され、前記濾過のための緩衝液が、トリス−ＥＤＴＡまたはヒスチジンを含む、請求項１に記載の凍結乾燥組成物。
【請求項５】
少なくとも３ヶ月間の期間、約２０〜３５℃の温度で、貯蔵安定性である、請求項１に記載の凍結乾燥組成物。
【請求項６】
非免疫原性である、請求項１に記載の凍結乾燥組成物。
【請求項７】
前記セクレトームが、治療有効量の、１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子を含む、請求項１に記載の凍結乾燥組成物。
【請求項８】
前記１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子が、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、酵素、マイクロＲＮＡ、リン脂質、多糖類、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項７に記載の凍結乾燥組成物。
【請求項９】
前記少なくとも１つのＡＳＣが、外因的に添加された量のＩＦＮγおよびＴＮＦαの存在下において培養されている、請求項１に記載の凍結乾燥組成物。
【請求項１０】
有効量の請求項１〜９のいずれか一項に記載の凍結乾燥組成物と、持続放出薬物送達マトリックスとを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
前記持続放出薬物送達マトリックスが、生分解性、生体適合性、または生分解性かつ生体適合性である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記脂肪細胞の前記セクレトームから、治療有効量の１つまたは複数の再生因子および抗炎症因子を、最大６ヶ月間の期間、放出する、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記再生因子または抗炎症因子が、組織再生、神経血管修復、または組織再生および神経血管修復の両方を刺激する、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記持続放出薬物送達マトリックスが、ゲル、ペースト様組成物、半固体組成物、および微粒子状組成物からなる群から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記持続放出薬物送達マトリックスが、前記凍結乾燥組成物に対していずれの化学的変化も生物学的変化も引き起こさない、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記持続放出薬物送達マトリックスが、疎水性マトリックスを含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記疎水性マトリックスが、ステアリン酸マグネシウム、パルミチン酸マグネシウム、脂肪酸塩、パルミチン酸セチル、脂肪酸塩、植物油、脂肪酸エステル、トコフェロール、およびこれらの組合せからなる群から選択される、１つまたは複数の疎水性賦形剤を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記疎水性マトリックスが、少なくとも疎水性固体構成成分および疎水性液体構成成分を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記疎水性固体構成成分が、ワックス、フルーツワックス、カルナウバワックス、ビーズワックス、ワックス様アルコール、植物性ワックス、大豆ワックス、合成ワックス、トリグリセリド、脂質、長鎖脂肪酸およびそれらの塩、パルミチン酸マグネシウム、長鎖脂肪酸のエステル、長鎖アルコール、ワックス様アルコール、オキシエチル化植物油、およびオキシエチル化脂肪アルコールからなる群から選択され、
前記液体疎水性構成成分が、植物油、ヒマシ油、ホホバ油、大豆油、シリコーン油、パラフィン油、および鉱油、クレモフォール、オキシエチル化植物油、オキシエチル化脂肪アルコール、トコフェロール、脂質、ならびにリン脂質からなる群から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記凍結乾燥組成物の前記有効量が、約０．０１〜約５０％（重量／重量）である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記凍結乾燥組成物が、粒子状の形態、または溶解した状態で、前記疎水性マトリックス中に分散されている、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
請求項１０に記載の医薬組成物を含み、ヒトまたは哺乳動物の眼に注射するのに好適なサイズおよび形状を有する、剤形。
【請求項２３】
患者における眼科障害の処置において使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の凍結乾燥組成物、または請求項１０〜２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
有効量の凍結乾燥組成物、または医薬組成物を含む、請求項２３に記載の使用のための凍結乾燥組成物、または医薬組成物。
【請求項２５】
前記眼科障害が、血管機能、神経機能、または血管および神経機能に影響を及ぼす前記炎症性眼科疾患または変性眼科疾患であり、滲出型および萎縮型ＡＭＤ、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、点状脈絡膜内層症、網膜分枝静脈閉塞症、虹彩炎、ブドウ膜炎、眼内炎、視神経症、緑内障、シュタルガルト病、網膜剥離、網膜色素変性、若年性網膜隔離症、老年性網膜隔離症、角膜幹細胞疲弊症、角膜表面疾患、角膜への損傷を含む外傷性眼損傷、外傷性脳損傷、外傷性眼損傷、および視覚または網膜に影響を及ぼす外傷性脳損傷からなる群から選択される、請求項２３に記載の使用のための凍結乾燥組成物、または医薬組成物。
【請求項２６】
前記医薬組成物または前記凍結乾燥組成物が、少なくとも２〜６ヶ月ごとの投与に好適である、請求項２３または２４に記載の使用のための凍結乾燥組成物、または医薬組成物。
【請求項２７】
前記医薬組成物または前記凍結乾燥組成物が、前記患者の眼への局所的な投与に好適であるか、または注射による投与に好適であり、前記注射が眼内注射である、請求項２３または２４に記載の使用のための凍結乾燥組成物、または医薬組成物。
【請求項２８】
前記医薬組成物または凍結乾燥組成物が、眼の硝子体腔への注射に好適であるか、結膜下への注射に好適であるか、網膜内への注射に好適であるか、テノン嚢下への注射に好適であるか、または眼球後への注射に好適である、請求項２７に記載の使用のための凍結乾燥組成物、または医薬組成物。
【請求項２９】
前記医薬組成物が、０．５〜１ｍｌの前記凍結乾燥組成物と、前記持続放出薬物送達マトリックスとを含む、請求項２３に記載の使用のための凍結乾燥組成物、または医薬組成物。
【請求項３０】
前記医薬組成物が、硝子体内注射の前に懸濁液中に微粒子化される、請求項２９に記載の使用のための凍結乾燥組成物、または医薬組成物。
【請求項３１】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の凍結乾燥組成物を作製する方法であって、
ａ）脂肪細胞の集団を得るために脂肪組織を酵素消化することであって、前記脂肪細胞の集団が、少なくとも１つの脂肪幹細胞（ＡＳＣ）を含むこと、
ｂ）脂肪細胞を、２〜４×１０５個の細胞／ｃｍ２の播種密度で、第１の培養培地において培養すること、
ｃ）前記細胞を、前記第１の培養培地において、少なくとも１回継代させること、
ｄ）１つまたは複数の周皮細胞マーカーの少なくとも９０％の発現を有する細胞を選択すること、
ｅ）前記選択した細胞を、第２の培養培地において培養することであって、前記第２の培養培地が、血清不含であり、少なくとも１つの炎症性サイトカインを含む、培養すること、
ｆ）前記選択した細胞を、炎症性サイトカインを含有しない基礎培養培地中に移すこと、ｇ）前記脂肪細胞の前記セクレトームを含む、細胞不含の条件培地を生産するために、前記基礎培養培地から細胞を除去すること、および
ｈ）前記条件培地を凍結乾燥させること
を含む、方法。
【請求項３２】
前記第２の血清不含培養培地が、約１０〜約３０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦα、約１〜約２０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ、またはこれらの組合せを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記第２の血清不含培養培地が、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦα、または１０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記細胞を、少なくとも１つの炎症性サイトカインを含有する前記第２の血清不含培養培地において培養することが、前記細胞によるＴＩＭＰ１発現、前記細胞によるＴＳＧ−６発現、またはこれらの組合せを増加させる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記細胞を、少なくとも１つの炎症性サイトカインを含有する前記第２の血清不含培養培地において培養することが、前記細胞による１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子の発現を増加させる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記細胞が、２４時間後に、前記第２の血清不含培養培地から除去される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
前記第１の培養培地中の前記細胞が、２、３、４、または５回継代される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３８】
前記条件培地が、有効量のＥＤＴＡを添加することによって安定化される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
前記条件培地が、凍結乾燥の前に濃縮される、請求項３１に記載の方法。
【請求項４０】
前記条件培地が、約５ｋＤａの分子量カットオフ（ＭＷＣ）で、接線流濾過（ＴＦＦ）を使用して濾過される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＴＦＦ濾過の後に、前記条件培地が、トリスＥＤＴＡ緩衝液またはヒスチジン緩衝液中に透析濾過される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
透析濾過の後に、有効量のスクロースが、凍結乾燥安定剤として添加される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
請求項１０〜４２のいずれかに記載の医薬組成物を作製する方法であって、ゲル、ペースト様、半固体薬物組成物、または微粒子状組成物を形成するために、有効量の前記凍結乾燥組成物を、前記持続放出薬物送達マトリックスと混合することを含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
本出願の他の特色および利点は、実施例と併せて、以下の詳細な説明から明らかとなろう。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
凍結乾燥組成物であって、
ａ）培養脂肪細胞のセクレトームを含む、細胞不含の濃縮条件培地であって、前記脂肪細胞が、少なくとも１つの脂肪幹細胞（ＡＳＣ）を含み、前記培養脂肪細胞のうちの少なくとも９０％が、周皮細胞マーカーを発現する、条件培地と、
ｂ）有効量の凍結乾燥剤と
を含む、凍結乾燥組成物。
（項目２）
前記周皮細胞マーカーが、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ７３、ＣＤ９０、およびＣＤ１０５からなる群から選択され、前記培養脂肪細胞が、ＣＤ４５、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ３１に関して陰性である、項目１に記載の凍結乾燥組成物。
（項目３）
前記培養脂肪細胞のうちの少なくとも９５％が、前記周皮細胞マーカーを発現する、項目２に記載の凍結乾燥組成物。
（項目４）
前記凍結乾燥剤が、スクロースである、項目１に記載の凍結乾燥組成物。
（項目５）
有効量の、濾過のための緩衝液をさらに含む、項目１に記載の凍結乾燥組成物。
（項目６）
前記濾過のための緩衝液が、トリス−ＥＤＴＡまたはヒスチジンを含む、項目５に記載の凍結乾燥組成物。
（項目７）
前記有効量のトリス−ＥＤＴＡが、約２５ｎＭトリスおよび約１ｍＭ  ＥＤＴＡである、項目６に記載の凍結乾燥組成物。
（項目８）
前記脂肪細胞が、脂肪吸引後に得られる、項目１に記載の凍結乾燥組成物。
（項目９）
前記脂肪細胞が、女性から得られる、項目８に記載の凍結乾燥組成物。
（項目１０）
少なくとも３ヶ月間の期間、約２０〜３５℃の温度で、貯蔵安定性である、項目１に記載の凍結乾燥組成物。
（項目１１）
非免疫原性である、項目１に記載の凍結乾燥組成物。
（項目１２）
前記セクレトームが、治療有効量の、１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子を含む、項目１に記載の凍結乾燥組成物。
（項目１３）
前記１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子が、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、酵素、マイクロＲＮＡ、リン脂質、多糖類、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目１２に記載の凍結乾燥組成物。
（項目１４）
前記１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子が、細胞外小胞体から分離している、項目１３に記載の凍結乾燥組成物。
（項目１５）
前記１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子が、前記ＡＳＣによって分泌される細胞外小胞体の内部または表面に結合している、項目１３に記載の凍結乾燥組成物。
（項目１６）
前記少なくとも１つのＡＳＣが、前記１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子の発現を増加させる条件下において培養されている、項目１２に記載の凍結乾燥組成物。
（項目１７）
前記少なくとも１つのＡＳＣが、外因的に添加された量のＩＦＮγおよびＴＮＦαの存在下において培養されている、項目１６に記載の凍結乾燥組成物。
（項目１８）
成長制御アルファタンパク質（ＣＸＣＬ１）、インターロイキン−６（ＩＬ６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２（ＣＣＬ２）、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン８（ＣＣＬ８）、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン５（ＣＣＬ５）、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０（ＣＸＣＬ１０）、または腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１１Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ）のうちの１つまたは複数の発現が、増加する、項目１７に記載の凍結乾燥組成物。
（項目１９）
前記セクレトームが、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１／２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、およびｈｓａ−ｍｉＲ−２６からなる群から選択される１つまたは複数のｍｉＲＮＡを含む、項目１７に記載の凍結乾燥組成物。
（項目２０）
０．０５〜１．５ｍｇ／ｍｌの全タンパク質を含む、項目１２に記載の凍結乾燥組成物。
（項目２１）
１×１０８〜９×１０１１個の細胞外小胞体を含む、項目１に記載の凍結乾燥組成物。
（項目２２）
有効量の項目１に記載の凍結乾燥組成物と、持続放出薬物送達マトリックスとを含む、医薬組成物。
（項目２３）
前記持続放出薬物送達マトリックスが、生分解性、生体適合性、または生分解性かつ生体適合性である、項目２２に記載の医薬組成物。
（項目２４）
前記脂肪細胞の前記セクレトームから、治療有効量の１つまたは複数の再生因子および抗炎症因子を、最大６ヶ月間の期間、放出する、項目２２に記載の医薬組成物。
（項目２５）
前記１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子が、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、酵素、マイクロＲＮＡ、リン脂質、多糖類、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目２４に記載の医薬組成物。
（項目２６）
前記再生因子または抗炎症因子が、組織再生、神経血管修復、または組織再生および神経血管修復の両方を刺激する、項目２５に記載の医薬組成物。
（項目２７）
前記１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子が、細胞外小胞体から分離している、項目２５に記載の医薬組成物。
（項目２８）
前記１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子が、前記ＡＳＣによって分泌される細胞外小胞体の内部または表面に結合している、項目２５に記載の医薬組成物。
（項目２９）
前記少なくとも１つのＡＳＣが、前記１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子の発現を増加させる条件下において培養されている、項目２２に記載の医薬組成物。
（項目３０）
前記少なくとも１つのＡＳＣが、外因的に添加された量のＩＦＮγおよびＴＮＦαの存在下において培養されている、項目２９に記載の医薬組成物。
（項目３１）
成長制御アルファタンパク質（ＣＸＣＬ１）、インターロイキン−６（ＩＬ６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２（ＣＣＬ２）、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン８（ＣＣＬ８）、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン５（ＣＣＬ５）、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０（ＣＸＣＬ１０）、または腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１１Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ）のうちの１つまたは複数の発現が、増加する、項目３０に記載の医薬組成物。
（項目３２）
０．０５ｍｇ／ｍｌ〜１．５ｍｇ／ｍｌの全タンパク質を含む、項目２５に記載の医薬組成物。
（項目３３）
前記持続放出薬物送達マトリックスが、ゲル、ペースト様組成物、半固体組成物、および微粒子状組成物からなる群から選択される、項目２２に記載の医薬組成物。
（項目３４）
前記持続放出薬物送達マトリックスが、巨視的処理によって機械的に形成される、項目３３に記載の医薬組成物。
（項目３５）
前記持続放出薬物送達マトリックスが、前記凍結乾燥組成物に対していずれの化学的変化も生物学的変化も引き起こさない、項目３４に記載の医薬組成物。
（項目３６）
前記持続放出薬物送達マトリックスが、疎水性マトリックスを含む、項目３３に記載の医薬組成物。
（項目３７）
前記疎水性マトリックスが、ステアリン酸マグネシウム、パルミチン酸マグネシウム、脂肪酸塩、パルミチン酸セチル、脂肪酸塩、植物油、脂肪酸エステル、トコフェロール、およびこれらの組合せからなる群から選択される、１つまたは複数の疎水性賦形剤を含む、項目３６に記載の医薬組成物。
（項目３８）
前記疎水性マトリックスが、ステアリン酸マグネシウムおよびトコフェロールを含む、項目３７に記載の医薬組成物。
（項目３９）
前記疎水性マトリックスが、少なくとも疎水性固体構成成分および疎水性液体構成成分を含む、項目３６に記載の医薬組成物。
（項目４０）
前記疎水性固体構成成分が、ワックス、フルーツワックス、カルナウバワックス、ビーズワックス、ワックス様アルコール、植物性ワックス、大豆ワックス、合成ワックス、トリグリセリド、脂質、長鎖脂肪酸およびそれらの塩、パルミチン酸マグネシウム、長鎖脂肪酸のエステル、長鎖アルコール、ワックス様アルコール、オキシエチル化植物油、およびオキシエチル化脂肪アルコールからなる群から選択され、
前記液体疎水性構成成分が、植物油、ヒマシ油、ホホバ油、大豆油、シリコーン油、パラフィン油、および鉱油、クレモフォール、オキシエチル化植物油、オキシエチル化脂肪アルコール、トコフェロール、脂質、ならびにリン脂質からなる群から選択される、項目２２に記載の医薬組成物。
（項目４１）
前記長鎖脂肪酸が、ステアリン酸マグネシウムである、項目４０に記載の医薬組成物。
（項目４２）
前記長鎖アルコールが、パルミチン酸セチルまたはセチルアルコールである、項目４０に記載の医薬組成物。
（項目４３）
前記凍結乾燥組成物の前記有効量が、約０．０１〜約５０％（重量／重量）である、項目２２に記載の医薬組成物。
（項目４４）
前記凍結乾燥組成物の前記有効量が、約０．２％（重量／重量）である、項目４３に記載の医薬組成物。
（項目４５）
前記凍結乾燥組成物が、粒子状の形態で、前記疎水性マトリックス中に分散されている、項目３６に記載の医薬組成物。
（項目４６）
前記凍結乾燥組成物が、溶解した状態で、前記疎水性マトリックス中に分散されている、項目３６に記載の医薬組成物。
（項目４７）
項目２２に記載の医薬組成物を含み、ヒトまたは哺乳動物の眼に注射するのに好適なサイズおよび形状を有する、剤形。
（項目４８）
患者における眼科障害を処置する方法であって、有効量の項目２２に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
（項目４９）
患者における眼科障害を処置する方法であって、有効量の項目１に記載の凍結乾燥組成物を投与することを含む、方法。
（項目５０）
前記眼科障害が、血管機能、神経機能、または血管および神経機能に影響を及ぼす炎症性もしくは変性眼科疾患である、項目４８に記載の方法。
（項目５１）
前記眼科障害が、血管機能、神経機能、または血管および神経機能に影響を及ぼす炎症性もしくは変性眼科疾患である、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
血管機能、神経機能、または血管および神経機能に影響を及ぼす前記炎症性眼科疾患または変性眼科疾患が、滲出型および萎縮型ＡＭＤ、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、点状脈絡膜内層症、網膜分枝静脈閉塞症、虹彩炎、ブドウ膜炎、眼内炎、視神経症、緑内障、シュタルガルト病、網膜剥離、網膜色素変性、若年性網膜隔離症、老年性網膜隔離症、角膜幹細胞疲弊症、角膜表面疾患、角膜への損傷を含む外傷性眼損傷、外傷性脳損傷、外傷性眼損傷、および視覚または網膜に影響を及ぼす外傷性脳損傷からなる群から選択される、項目５０に記載の方法。
（項目５３）
血管機能、神経機能、または血管および神経機能に影響を及ぼす前記炎症性眼科疾患または変性眼科疾患が、滲出型および萎縮型ＡＭＤ、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、点状脈絡膜内層症、網膜分枝静脈閉塞症、虹彩炎、ブドウ膜炎、眼内炎、視神経症、緑内障、シュタルガルト病、網膜剥離、網膜色素変性、若年性網膜隔離症、老年性網膜隔離症、角膜幹細胞疲弊症、角膜表面疾患、角膜への損傷を含む外傷性眼損傷、外傷性脳損傷、外傷性眼損傷、および視覚または網膜に影響を及ぼす外傷性脳損傷からなる群から選択される、項目５１に記載の方法。
（項目５４）
前記医薬組成物または前記凍結乾燥組成物が、少なくとも２〜６ヶ月ごとに投与される、項目４８または４９に記載の方法。
（項目５５）
前記医薬組成物または前記凍結乾燥組成物が、前記患者の眼に局所的に投与されるか、または注射によって投与される、項目４８または４９に記載の方法。
（項目５６）
前記医薬組成物または前記凍結乾燥組成物が、眼内注射によって投与される、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記医薬組成物または凍結乾燥組成物が、眼の硝子体腔に注射されるか、結膜下に注射されるか、網膜内に注射されるか、テノン嚢下に注射されるか、または眼球後に注射される、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記医薬組成物から放出される再生因子が、血管透過性を減少させるか、異常な血管成長を減少させるか、神経血管組織への損傷を低減させるか、神経膠症を低減させるか、網膜機能を改善もしくは保護するか、神経機能を改善もしくは保護するか、視覚を改善もしくは保護するか、またはこれらの任意の組合せを行う、項目５０または５１に記載の方法。
（項目５９）
前記医薬組成物が、０．５〜１ｍｌの前記凍結乾燥組成物と、前記持続放出薬物送達マトリックスとを含む、項目４８に記載の方法。
（項目６０）
前記医薬組成物が、硝子体内注射の前に懸濁液中に微粒子化される、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記凍結乾燥組成物の前記有効量が、約０．０１〜約５０％（重量／重量）である、項目４８に記載の方法。
（項目６２）
前記凍結乾燥組成物の前記有効量が、約０．２％（重量／重量）である、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
項目１に記載の凍結乾燥組成物を作製する方法であって、
ａ）脂肪細胞の集団を得るために脂肪組織を酵素消化することであって、前記脂肪細胞の集団が、少なくとも１つの脂肪幹細胞（ＡＳＣ）を含むこと、
ｂ）脂肪細胞を、２〜４×１０５個の細胞／ｃｍ２の播種密度で、第１の培養培地において培養すること、
ｃ）前記細胞を、前記第１の培養培地において、少なくとも１回継代させること、
ｄ）１つまたは複数の周皮細胞マーカーの少なくとも９０％の発現を有する細胞を選択すること、
ｅ）前記選択した細胞を、第２の培養培地において培養することであって、前記第２の培養培地が、血清不含であり、少なくとも１つの炎症性サイトカインを含む、培養すること、
ｆ）前記選択した細胞を、炎症性サイトカインを含有しない基礎培養培地中に移すこと、ｇ）前記脂肪細胞の前記セクレトームを含む、細胞不含の条件培地を生産するために、前記基礎培養培地から細胞を除去すること、および
ｈ）前記条件培地を凍結乾燥させること
を含む、方法。
（項目６４）
前記脂肪組織が、コラゲナーゼで消化される、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記１つまたは複数の周皮細胞マーカーが、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ１４０ｂ、および神経／神経膠抗原２（ＮＧ２）からなる群から選択される、項目６３に記載の方法。
（項目６６）
前記少なくとも１つの脂肪幹細胞が、ＣＤ４５−である、項目６３に記載の方法。
（項目６７）
前記細胞のうちの少なくとも９５％が、前記１つまたは複数の周皮細胞マーカーを発現する、項目６５に記載の方法。
（項目６８）
前記炎症性サイトカインが、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、およびこれらの組合せからなる群から選択される、項目６３に記載の方法。
（項目６９）
前記第２の血清不含培養培地が、約１０〜約３０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦα、約１〜約２０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ、またはこれらの組合せを含む、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記第２の血清不含培養培地が、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαを含む、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
前記第２の血清不含培養培地が、１０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγを含む、項目６９に記載の方法。
（項目７２）
前記細胞を、少なくとも１つの炎症性サイトカインを含有する前記第２の血清不含培養培地において培養することが、前記細胞によるＴＩＭＰ１発現を増加させる、項目６３に記載の方法。
（項目７３）
前記細胞を、少なくとも１つの炎症性サイトカインを含有する前記第２の血清不含培養培地において培養することが、前記細胞によるＴＳＧ−６発現を増加させる、項目６３に記載の方法。
（項目７４）
ＴＳＧ−６の発現が、少なくとも２倍増加する、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
前記細胞を、１つまたは複数の炎症性サイトカインの存在下において培養することが、前記凍結乾燥組成物のＴ細胞活性を減少させる、項目６３に記載の方法。
（項目７６）
前記細胞を、少なくとも１つの炎症性サイトカインを含有する前記第２の血清不含培養培地において培養することが、前記細胞による１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子の発現を増加させる、項目６３に記載の方法。
（項目７７）
前記１つまたは複数の再生因子または抗炎症因子が、成長制御アルファタンパク質（ＣＸＣＬ１）、インターロイキン−６（ＩＬ６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２（ＣＣＬ２）、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン８（ＣＣＬ８）、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン５（ＣＣＬ５）、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０（ＣＸＣＬ１０）、または腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１１Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ）、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目７６に記載の方法。
（項目７８）
前記細胞が、２４時間後に、前記第２の血清不含培養培地から除去される、項目７５に記載の方法。
（項目７９）
前記第１の培養培地中の前記細胞が、２、３、４、または５回継代される、項目６３に記載の方法。
（項目８０）
前記条件培地が、有効量のＥＤＴＡを添加することによって安定化される、項目６３に記載の方法。
（項目８１）
前記条件培地が、凍結乾燥の前に濃縮される、項目６３に記載の方法。
（項目８２）
前記条件培地が、約５ｋＤａの分子量カットオフ（ＭＷＣ）で、接線流濾過（ＴＦＦ）を使用して濾過される、項目８１に記載の方法。
（項目８３）
ＴＦＦ濾過の後に、前記条件培地が、トリスＥＤＴＡ緩衝液またはヒスチジン緩衝液中に透析濾過される、項目８２に記載の方法。
（項目８４）
透析濾過の後に、有効量のスクロースが、凍結乾燥安定剤として添加される、項目８３に記載の方法。
（項目８５）
項目１０〜４６のいずれかに記載の医薬組成物を作製する方法であって、ゲル、ペースト様、半固体薬物組成物、または微粒子状組成物を形成するために、有効量の前記凍結乾燥組成物を、前記持続放出薬物送達マトリックスと混合することを含む、方法。
（項目８６）
前記凍結乾燥組成物が、前記持続放出薬物送達マトリックス中に再構成される、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
前記医薬組成物が、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類、例えば、ヒアルロン酸、ペクチン、アラビアガム、および他のガム、アルブミン、キトサン、コラーゲン、コラーゲン−ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、フィブリン、フィブリノーゲン、ゼラチン、グロブリン、ポリアミノ酸、アミノ酸を含むポリウレタン、プロラミン、タンパク質ベースのポリマー、コポリマー、およびそれらの誘導体、ならびにそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの賦形剤をさらに含む、項目８５に記載の方法。
（項目８８）
前記ゲル、ペースト様、または半固体の医薬組成物を形成することが、前記持続放出薬物送達マトリックスと前記凍結乾燥組成物との混合物を、アルゴリズム様式で、プレスし、フォールディングするサイクルを繰り返すことを含む、項目８５に記載の方法。
（項目８９）
前記医薬組成物を、好適な剤形に形成すること
をさらに含む、項目８５に記載の方法。
（項目９０）
前記剤形が、眼内注射に好適である、項目８９に記載の方法。