(57)【要約】  血小板凝集抑制作用を有し、物性、経口吸収性に優れた化合物の提供。  次式（Ｉｂ）【化１】2006013962.tif 000082で表される化合物及びその製造法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉｂ）
【化１】
2006013962.tif 000033
で表される化合物。
【請求項２】
［１−（６−メトキシピリダジン−３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン・１塩酸。
【請求項３】
無水物である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
２水和物である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
次式（Ｉｃ）
【化２】
2006013962.tif 000034
で表される化合物。
【請求項６】
［１−（６−メトキシピリダジン−３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン・１Ｌ−酒石酸。
【請求項７】
無水物である、請求項５または６に記載の化合物。
【請求項８】
次式（Ｉｂ）
【化３】
2006013962.tif 000035
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＩ）
【化４】
2006013962.tif 000036
で表される化合物を含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項９】
次式（Ｉｂ）
【化５】
2006013962.tif 000037
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＩＩ）
【化６】
2006013962.tif 000038
で表される化合物をメタノール中、ナトリウムメトキシドと反応させ、次に水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）
【化７】
2006013962.tif 000039
で表される化合物を得、さらにこれを含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項１０】
次式（Ｉｂ）
【化８】
2006013962.tif 000040
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＶ）
【化９】
2006013962.tif 000041
で表される化合物をメタノール中、濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させることにより、式（ＩＩＩ）
【化１０】
2006013962.tif 000042
で表される化合物を得、さらにこれをメタノール中、ナトリウムメトキシドと反応させ、次に水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）
【化１１】
2006013962.tif 000043
で表される化合物を得、さらにこれを含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項１１】
次式（Ｉｂ）
【化１２】
2006013962.tif 000044
で表される化合物の製造方法であって、アセチルピリジンとシュウ酸ジメチルエステルをナトリウムメトキシド存在下に、メタノール中で処理することにより、式（ＩＶ）
【化１３】
2006013962.tif 000045
で表される化合物を得、これをメタノール中、濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させることにより、式（ＩＩＩ）
【化１４】
2006013962.tif 000046
で表される化合物を得、これをメタノール中、ナトリウムメトキシドと反応させ、次に水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）
【化１５】
2006013962.tif 000047
で表される化合物を得、さらにこれを含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項１２】
次式（Ｉｂ）
【化１６】
2006013962.tif 000048
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＶ）
【化１７】
2006013962.tif 000049
で表される化合物をメタノール中、メタンスルホン酸又は濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させ、次いでナトリウムメトキシドを添加し、さらに水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）
【化１８】
2006013962.tif 000050
で表される化合物を得、さらにこれを含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項１３】
次式（Ｉｂ）
【化１９】
2006013962.tif 000051
で表される化合物の製造方法であって、アセチルピリジンとシュウ酸ジメチルエステルをナトリウムメトキシド存在下に、メタノール中で処理することにより、式（ＩＶ）
【化２０】
2006013962.tif 000052
で表される化合物を得、さらにこれをメタノール中、メタンスルホン酸又は濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させ、次いでナトリウムメトキシドを添加し、さらに水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）
【化２１】
2006013962.tif 000053
で表される化合物を得、さらにこれを含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項１４】
次式（Ｉｂ）
【化２２】
2006013962.tif 000054
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＩ）
【化２３】
2006013962.tif 000055
で表される化合物をアセトニトリル中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項１５】
次式（Ｉｂ）
【化２４】
2006013962.tif 000056
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＩＩ）
【化２５】
2006013962.tif 000057
で表される化合物をメタノール中、ナトリウムメトキシドと反応させ、次に水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）
【化２６】
2006013962.tif 000058
で表される化合物を得、さらにこれをアセトニトリル中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項１６】
次式（Ｉｂ）
【化２７】
2006013962.tif 000059
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＶ）
【化２８】
2006013962.tif 000060
で表される化合物をメタノール中、濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させることにより、式（ＩＩＩ）
【化２９】
2006013962.tif 000061
で表される化合物を得、さらにこれをメタノール中、ナトリウムメトキシドと反応させ、次に水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）
【化３０】
2006013962.tif 000062
で表される化合物を得、さらにこれをアセトニトリル中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項１７】
次式（Ｉｂ）
【化３１】
2006013962.tif 000063
で表される化合物の製造方法であって、アセチルピリジンとシュウ酸ジメチルエステルをナトリウムメトキシド存在下に、メタノール中で処理することにより、式（ＩＶ）
【化３２】
2006013962.tif 000064
で表される化合物を得、これをメタノール中、濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させることにより、式（ＩＩＩ）
【化３３】
2006013962.tif 000065
で表される化合物を得、これをメタノール中、ナトリウムメトキシドと反応させ、次に水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）
【化３４】
2006013962.tif 000066
で表される化合物を得、さらにこれをアセトニトリル中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項１８】
次式（Ｉｂ）
【化３５】
2006013962.tif 000067
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＶ）
【化３６】
2006013962.tif 000068
で表される化合物をメタノール中、メタンスルホン酸又は濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させ、次いでナトリウムメトキシドを添加し、さらに水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）
【化３７】
2006013962.tif 000069
で表される化合物を得、さらにこれをアセトニトリル中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項１９】
次式（Ｉｂ）
【化３８】
2006013962.tif 000070
で表される化合物の製造方法であって、アセチルピリジンとシュウ酸ジメチルエステルをナトリウムメトキシド存在下に、メタノール中で処理することにより、式（ＩＶ）
【化３９】
2006013962.tif 000071
で表される化合物を得、次いでこれをメタノール中、メタンスルホン酸又は濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させ、次いでナトリウムメトキシドを添加し、さらに水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）
【化４０】
2006013962.tif 000072
で表される化合物を得、さらにこれをアセトニトリル中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法。
【請求項２０】
次式（Ｉｃ）
【化４１】
2006013962.tif 000073
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＩ）
【化４２】
2006013962.tif 000074
で表される化合物をアセトニトリル中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させることにより、式（Ｉａ）
【化４３】
2006013962.tif 000075
で表される化合物を得、さらにこれをＬ−酒石酸と反応させることを特徴とする製造方法。
【請求項２１】
次式（ＩＩ）
【化４４】
2006013962.tif 000076
で表される化合物を製造する方法であって、
次式（ＩＩＩ）
【化４５】
2006013962.tif 000077
で表される化合物とナトリウムメトキシドとを、メタノール中で反応させ、次に水酸化ナトリウムで処理することを特徴とする製造方法。
【請求項２２】
次式（ＩＩ）
【化４６】
2006013962.tif 000078
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＶ）
【化４７】
2006013962.tif 000079
で表される化合物をメタノール中、メタンスルホン酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させ、次いでナトリウムメトキシドを添加し、さらに水酸化ナトリウムで処理することを特徴とする製造方法。
【請求項２３】
次式（ＩＩ）
【化４８】
2006013962.tif 000080
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＶ）
【化４９】
2006013962.tif 000081
で表される化合物をメタノール中、濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させ、次いでナトリウムメトキシドを添加し、さらに水酸化ナトリウムで処理することを特徴とする製造方法。
【請求項２４】
請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物と製薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物。
【請求項２５】
請求項２４に記載の医薬組成物を含有する医薬。
【請求項２６】
請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物を有効成分として含有する医薬。
【請求項２７】
虚血性疾患の予防および／または治療に用いる請求項２５または２６に記載の医薬。
【請求項２８】
請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物を有効量投与することを特徴とする虚血性疾患の予防および／または治療方法。
【請求項２９】
請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物の、医薬を製造するための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血小板凝集抑制薬として有用なピラゾール誘導体とその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血小板は、血管損傷時に凝集して止血血栓を形成して出血を防止する重要な役割を担っているが、その一方で、血管内の血管内皮が損傷された部位、狭窄した部位等には、凝集して血栓や塞栓を誘発する。これら血栓や塞栓が原因となって、心筋梗塞、狭心症、虚血性脳血管障害、末梢血管障害等の虚血性疾患が引き起こされる。従って、虚血性疾患の予防や治療には、血小板凝集抑制薬が用いられている。中でも、低用量のアスピリンは、古くから血小板凝集抑制薬として使用されてきており、その効果は１０万人の患者に投与された複数の臨床試験結果をメタアナリシスしたＡＰＴ（Ａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔ  Ｔｒｉａｌｉｓｔｓ’ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ）で証明されている（非特許文献１参照）。
しかしながら、アスピリンには、胃腸等の出血、いわゆるアスピリン潰瘍を引き起こすという副作用が知られており、その副作用は投与量に依存することなく、１００人に１人の割合で起きている（非特許文献２参照）。【０００３】
アスピリンの血小板凝集抑制作用は、シクロオキシゲナーゼ（Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ）の抑制作用に基づくことが知られている。シクロオキシゲナーゼには、シクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）とシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）があるが、アスピリンは低用量でＣＯＸ−１を選択的、非可逆的に阻害して血小板の凝集を抑制するが、ＣＯＸ−１を阻害することがアスピリン潰瘍を引き起こす原因ともなっている（非特許文献３および４参照）。【０００４】
以上のように、アスピリンは血小板凝集抑制薬として有用であるが、その作用機序であるＣＯＸ−１阻害作用に基づく胃腸障害を副作用として伴うことから、ＣＯＸ−１阻害作用のない血小板凝集抑制薬が求められている。【０００５】
また、非ステロイド性抗炎症薬は、ＣＯＸ−２を選択的に阻害して抗炎症作用を示すことが知られている。ある種の選択的なＣＯＸ−２阻害薬については、心血管に対する副作用や血栓症を引き起こすことが報告されている（非特許文献５〜７）。【０００６】
一方、これまでに抗血栓作用を有するピラゾール誘導体としては、化合物（Ａ）（特許文献１および非特許文献８参照）および化合物（Ｂ）（特許文献２参照）が知られている。しかしながら、これらの化合物のコラーゲン誘発血小板凝集抑制作用は、ＣＯＸの阻害作用と比較して強いものではないことから、アスピリンと同様の副作用が生じる危険性があることが懸念される。【０００７】
【化１】
2006013962.tif 000002
【０００８】
【特許文献１】特許第２５８６７１３号明細書
【特許文献２】国際公開９７／２９７７４号パンフレット
【非特許文献１】ＢＭＪ，３０８巻，８１−１０６頁，１９９４年
【非特許文献２】ＢＭＪ，３２１巻，１１８３−１１８７頁，２０００年
【非特許文献３】Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，５７巻，Ｓｕｐｐｌ．２，Ｓ５−Ｓ７頁，２００１年
【非特許文献４】Ｄｒｕｇｓ Ｔｏｄａｙ，３５巻，２５１−２６５頁，１９９９年
【非特許文献５】Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３巻，１５２０−１５２８頁，２０００年
【非特許文献６】ＪＡＭＡ  ２８６巻，９５４−９５９，２００１年
【非特許文献７】Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４３巻，１８９１−１８９６，２０００年
【非特許文献８】Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，４５巻，９８７−９９５頁，１９９７年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、強力に血小板凝集を阻害し、物性、安全性、経口吸収性等に優れた化合物およびその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、このような血小板凝集抑制薬を求めて鋭意研究した結果、ある特定の塩で塩化したピラゾール誘導体が、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２を阻害することなく強力に血小板凝集を阻害し、さらに高い経口吸収性、良好な安定性、といった医薬品として極めて優れた性質を有することを見出し、本発明を完成した。【００１１】
すなわち、本発明は、式（Ｉａ）【００１２】
【化２】
2006013962.tif 000003
【００１３】
で表される、［１−（６−メトキシピリダジン−３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（以下、化合物（１ａ）とする。）の塩酸塩（以下、化合物（１ｂ）とする。）、およびそのＬ−酒石酸塩（以下、化合物（１ｃ）とする。）を提供するものである。
本発明はまた、上記化合物の製造方法を提供するものである。
本発明はまた、上記化合物と製薬的に許容される担体を含有する医薬組成物を提供するものである。
本発明はまた、上記化合物を有効成分として含有する虚血性疾患を予防および／または治療するための医薬を提供するものである。
本発明はまた、上記の化合物を有効量投与することを特徴とする虚血性疾患の予防および／または治療方法を提供するものである。
本発明は更に、上記の化合物の、医薬を製造するための使用を提供するものである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の化合物（１ｂ）および化合物（１ｃ）は、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２を阻害することなく強力に血小板凝集を抑制し、血栓形成を阻害する作用を有し、さらに結晶安定性が高く、経口吸収性も良好である。従って、心筋梗塞、狭心症（慢性安定狭心症、不安定狭心症等）、虚血性脳血管障害（一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、脳梗塞等）、末梢血管障害、人工血管置換後閉塞、冠動脈インターベンション（冠動脈バイパス術（ＣＡＧＢ）、経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）、ステント留置等）後の血栓性閉塞、糖尿病網膜症・腎症、心人工弁置換時閉塞など、血栓・塞栓を原因とする虚血性疾患の予防および／または治療に有用である。また、血管手術、血液体外循環等に伴う血栓・塞栓の予防および／または治療に有用である。更に、慢性動脈閉塞症に伴う、潰瘍、疼痛、冷感等の阻血性症状の改善に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】化合物（１ｂ）無水物のＸ線回折（図１Ａ）および熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）（図１Ｂ）の解析結果を示す。
【図２】化合物（１ｂ）２水和物のＸ線回折（図２Ａ）および熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）（図２Ｂ）の解析結果を示す。
【図３】化合物（１ｃ）無水物のＸ線回折（図３Ａ）および熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）（図３Ｂ）の解析結果を示す。
【図４】化合物（１ａ）（図４Ａ）、化合物（１ｂ）（図４Ｂ）および化合物（１ｃ）（図４Ｃ）の吸脱湿挙動を示す。
【図５】化合物（１ｂ）経口投与１時間後のモルモットＰＲＰにおけるコラーゲン誘発血小板凝集を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明の化合物（１ａ）、（１ｂ）および（１ｃ）（それぞれ、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）および（Ｉｃ）で表される。）は、下記の製造工程により製造することができる。【００１７】
【化３】
2006013962.tif 000004
【００１８】
本製造工程について、以下にさらに詳細に述べる。
アセチルピリジン（ＡＰ）とシュウ酸ジメチルエステル（ＤＭＯ）をナトリウムアルコキシド（ナトリウムメトキシドまたはナトリウムエトキシド）存在下に、アルコール（メタノールまたはエタノール）溶液中で処理することにより、２，４−ジオキソ−４−（２−ピリジニル）ブタン酸メチルエステル（ＭＤＰ）を得ることができる。反応温度は、−１０〜１００℃が好ましい。ＡＰおよびＤＭＯは、市販のものを用いてもよいし、有機化学の通常の知識に基づいて製造したものを用いてもよい。【００１９】
次いで、ＭＤＰをメタノール中、室温で３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジン（ＣＨＰ）を１等量添加した後、適当量の塩酸を加えて加熱還流することにより、１−（６−クロロ−３−ピリダジニル）−５−（２−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル（ＣＭＰ）を製造できる。３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンは、市販のもの、またはジクロロピリダジンにヒドラジンを反応させる方法もしくはその方法に準じた方法で製造したものを用いてもよい。【００２０】
また、ＭＤＰをメタノール中、室温でＣＨＰを１等量等添加した後、適当量の酸を加えて加熱還流し、次いで反応液を４０℃〜６０℃程度に冷却し、さらに、ナトリウムメトキシドと塩基を順次添加することにより、式（ＩＩ）で表される、１−（６−メトキシー３−ピリダジニル）−５−（２−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（ＭＣＰ）に導くこともできる。添加する酸として、塩酸、メタンスルホン酸などを例示できる。好ましくは塩酸を用いることができる。塩基としては、水酸化ナトリウムを用いることができる。ＣＭＰ等の製造中間体を精製することなくＭＤＰからＭＣＰを製造することができるので、高収率でＭＣＰを得ることができる。【００２１】
ＣＭＰは、ナトリウムメトキシドと塩基を順次添加することにより、１工程かつ高収率で、ＭＣＰに導くことができる。塩基としては、水酸化ナトリウムを用いることができる。反応温度は、−２０〜１００℃が好ましく、特に−５〜５０℃が好ましい。この時、反応液に塩酸を加えることによりＭＣＰを晶析することが出来る。この反応はメタノール中で行うのが好ましい。【００２２】
次にＭＣＰとＮ−メチルピペラジンを縮合反応することにより、本発明の化合物（１ａ）あるいは（１ｂ）を得ることが出来る。
本縮合反応には、ペプチド合成法として一般的に用いられる方法を適用すればよい。ペプチド合成法としては、例えば、アジド法、酸クロリド法、酸無水物法、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）法、活性エステル法、カルボニルジイミダゾール法、ＤＣＣ／ＨＯＢＴ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）法、水溶性カルボジイミドを使用する方法、ジエチル シアノホスフェートを使用する方法等を挙げることができ、それらの方法は、Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｙ．Ｓ．ＫｌａｕｓｎｅｒおよびＭ．Ａ．Ｏｎｄｅｔｔｉ著”Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ａ  Ｗｉｌｅｙ−ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７６年）、Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔ著”Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７６年）、日本化学会編”第４版実験化学講座２２巻，有機合成ＩＶ”（丸善株式会社、１９９２年）等に記載されている。添加剤としては１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物が好ましく、縮合剤としては１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ジシクロヘキシルカルボジイミドが好ましく、添加剤と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドの組み合せ、又は添加剤とジシクロヘキシルカルボジイミドの組み合せが好ましい。例えば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドの組み合せ、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物とジシクロヘキシルカルボジイミドの組み合せが好ましい。この縮合反応に用いる溶媒としては、各種溶媒を使用することが出来、メタノール、エタノール、イソプロパノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ピリジン、クロロホルム、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、水等またはこれらの混合溶媒を挙げることができる。１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドの組み合せの場合は、含水エタノールが好ましい。また、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物とジシクロヘキシルカルボジイミドの組み合せの場合は、アセトニトリルが特に好ましい。反応温度は、−２０〜５０℃が好ましく、−１０〜３０℃がより好ましい。Ｎ−メチルピペラジンは、市販の化合物を用いてもよく、また文献に記載の方法もしくはそれらの方法に準じた方法によって製造したものを用いればよい。【００２３】
この縮合反応時に濃塩酸を共存させることにより、化合物（１ｂ）を結晶として得ることができる。この反応では化合物（１ａ）を精製することなく化合物（１ｂ）を製造出来るので、高収率で化合物（１ｂ）を得ることができる。【００２４】
化合物（１ｂ）は化合物（１ａ）を塩酸で処理することによっても得ることが出来るが、その場合、塩化に適した化合物（１ａ）の結晶を得る必要がある。塩化に適した化合物（１ａ）を得るためには、ヘキサン等医薬品の製造に用いることが推奨されていない有機溶媒を用いてスラリー処理を行う必要がある。【００２５】
ヘキサンは、ＩＣＨのガイドラインにてクラス２（医薬品中の残留を規制すべき溶媒）に分類されており、濃度限界値２９０ｐｐｍという極めて厳しい濃度制限が課せられている。一方、本発明の方法によれば、エタノールやイソプロパノールといったクラス３（毒性が低く、ヒトの健康に及ぼすリスクも低い溶媒。５０００ｐｐｍまで許容範囲として認められている。）に分類される溶媒を用いるのみで製造することができる。したがって、クラス２の溶媒を用いない方法でも製造できる化合物（１ｂ）は、医薬品として利用価値の高い化合物であると考えられる。【００２６】
また、本発明の化合物（１ｂ）は、優れた吸脱湿挙動を示すと共に、水、日本薬局方第１液（ＪＰ１液）および日本薬局方第２液（ＪＰ２液）すべてに対し良好な溶解性を示した。さらに、本発明の化合物（１ｂ）は、ヒトおよびモルモットの血小板凝集を強力に抑制した。また、良好な経口吸収性を示し、塩化鉄誘発血栓モデルにおいて血栓形成を強力に抑制した。さらに、安全性に関しても問題は認められなかった。【００２７】
化合物（１ａ）は化合物（１ｂ）を水酸化ナトリウムで処理することによっても製造することができる。したがって、化合物（１ｂ）は化合物（１ａ）を取得するための中間体としても有用である。【００２８】
化合物（１ｃ）は、化合物（１ａ）をエタノールに溶解し、Ｌ−酒石酸と反応させることにより製造することが出来る。【００２９】
本発明の化合物（１ｃ）は、結晶多型がなく、優れた吸脱湿挙動を示すと共に、水、ＪＰ１液およびＪＰ２液すべてに対し良好な溶解性を示し、湿度に関係なく結晶形の変化は認められなかった。さらに、湿熱、乾熱および光照射に対しても非常に安定であった。以上のように、本発明の化合物（１ｃ）は、物性的な観点から、医薬品として非常に高い資質を有する化合物である。【００３０】
本発明は、さらに、式（ＩＩＩ）【００３１】
【化４】
2006013962.tif 000005
【００３２】
で表される化合物（ＣＭＰ）とナトリウムメトキシドとを、メタノール中で反応させ、次いで水酸化ナトリウムで処理することを特徴とする、式（ＩＩ）【００３３】
【化５】
2006013962.tif 000006
【００３４】
で表される化合物（ＭＣＰ）を高収率で製造する方法に関する。【００３５】
本方法により、１−（６−メトキシ−３−ピリダジニル）−５−（２−ピリジル）ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル（ＭＭＰ）を精製することなく、１工程かつ高収率でＣＭＰからＭＣＰを製造することができる。ＭＣＰをナトリウムメトキシド−メタノール溶液で処置し、ＭＭＰを単離し、次にＭＭＰを塩基で処置してＭＣＰを得る場合、ＣＭＰからＭＣＰへの収率は十分なものではなかった。本発明の方法によれば、９７％という極めて高収率でＭＣＰへ導くことが可能である。【００３６】
本発明は、さらに、式（ＩＩ）【００３７】
【化６】
2006013962.tif 000007
【００３８】
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＶ）【００３９】
【化７】
2006013962.tif 000008
【００４０】
で表される化合物をメタノール中、濃塩酸またはメタンスルホン酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させ、次いでナトリウムメトキシドを添加し、さらに水酸化ナトリウムで処理することを特徴とする製造方法に関する。
本方法により、ＣＭＰ等の製造中間体を精製することなくＤＭＰからＭＣＰを製造することができるので、高収率でＭＣＰを得ることができる。【００４１】
さらに本発明は、次式（Ｉｃ）【００４２】
【化８】
2006013962.tif 000009
【００４３】
で表される化合物（１ｃ）の製造方法であって、式（ＩＩ）【００４４】
【化９】
2006013962.tif 000010
【００４５】
で表されるＭＣＰを、アセトニトリル中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させることにより、式（Ｉａ）【００４６】
【化１０】
2006013962.tif 000011
【００４７】
で表される化合物を得、さらにこれをＬ−酒石酸と反応させることを特徴とする方法を提供するものである。【００４８】
さらに本発明は、次式（Ｉｂ）【００４９】
【化１１】
2006013962.tif 000012
【００５０】
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＩ）【００５１】
【化１２】
2006013962.tif 000013
【００５２】
で表される化合物をアセトニトリル又は含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法を提供するものである。【００５３】
さらに本発明は、次式（Ｉｂ）【００５４】
【化１３】
2006013962.tif 000014
【００５５】
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＩＩ）【００５６】
【化１４】
2006013962.tif 000015
【００５７】
で表される化合物をメタノール中、ナトリウムメトキシドと反応させ、次に水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）【００５８】
【化１５】
2006013962.tif 000016
【００５９】
で表される化合物を得、さらにこれをアセトニトリル又は含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法を提供するものである。【００６０】
さらに、本発明は、次式（Ｉｂ）【００６１】
【化１６】
2006013962.tif 000017
【００６２】
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＶ）【００６３】
【化１７】
2006013962.tif 000018
【００６４】
で表される化合物をメタノール中、濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させることにより、式（ＩＩＩ）【００６５】
【化１８】
2006013962.tif 000019
【００６６】
で表される化合物を得、さらにこれをメタノール中、ナトリウムメトキシドと反応させ、次に水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）【００６７】
【化１９】
2006013962.tif 000020
【００６８】
で表される化合物を得、さらにこれをアセトニトリル又は含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法を提供するものである。【００６９】
さらに、本発明は、次式（Ｉｂ）【００７０】
【化２０】
2006013962.tif 000021
【００７１】
で表される化合物の製造方法であって、アセチルピリジンとシュウ酸ジメチルエステルをナトリウムメトキシド存在下に、メタノールで処理することにより、式（ＩＶ）【００７２】
【化２１】
2006013962.tif 000022
【００７３】
で表される化合物を得、これをメタノール中、濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させることにより、式（ＩＩＩ）【００７４】
【化２２】
2006013962.tif 000023
【００７５】
で表される化合物を得、これをメタノール中、ナトリウムメトキシドと反応させ、次に水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）【００７６】
【化２３】
2006013962.tif 000024
【００７７】
で表される化合物を得、さらにこれをアセトニトリル又は含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法を提供するものである。【００７８】
さらに、本発明は、次式（Ｉｂ）【００７９】
【化２４】
2006013962.tif 000025
【００８０】
で表される化合物の製造方法であって、式（ＩＶ）【００８１】
【化２５】
2006013962.tif 000026
【００８２】
で表される化合物をメタノール中、メタンスルホン酸又は濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させ、次いでナトリウムメトキシドを添加し、さらに水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）【００８３】
【化２６】
2006013962.tif 000027
【００８４】
で表される化合物を得、さらにこれをアセトニトリル又は含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次いで濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法を提供するものである。【００８５】
さらに、本発明は、次式（Ｉｂ）【００８６】
【化２７】
2006013962.tif 000028
【００８７】
で表される化合物の製造方法であって、アセチルピリジンとシュウ酸ジメチルエステルをナトリウムメトキシド存在下に、メタノール中で処理することにより、式（ＩＶ）【００８８】
【化２８】
2006013962.tif 000029
【００８９】
で表される化合物を得、これをメタノール中、メタンスルホン酸又は濃塩酸存在下、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンと反応させ、次いでナトリウムメトキシドを添加し、さらに水酸化ナトリウムで処理することにより、式（ＩＩ）【００９０】
【化２９】
2006013962.tif 000030
【００９１】
で表される化合物を得、さらにこれをアセトニトリル又は含水エタノール中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物およびジシクロヘキシルカルボジイミド存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させ、次に濃塩酸で処理することを特徴とする製造方法を提供するものである。【００９２】
ＭＣＰから直接化合物（１ｃ）を合成すること、あるいは、化合物（１ａ）を単離することなく化合物（１ｂ）から化合物（１ｃ）を取得することはできなかった。本方法は、製造することが極めて困難である化合物（１ｃ）を取得することを可能とする方法である。【００９３】
本発明の化合物（１ａ）、（１ｂ）および（１ｃ）は、いずれもコラーゲン誘発血小板凝集を強力に阻害した。さらに、化合物（１ａ）および（１ｂ）は、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいても強力にコラーゲン凝集を阻害し、良好な経口吸収性を示した。また、化合物（１ｂ）は、高シェアストレス誘発の血栓症モデルでも血栓形成を強く阻害した。従って、本発明の化合物（１ｂ）は、ヒトを含む哺乳類において、心筋梗塞、狭心症（慢性安定狭心症、不安定狭心症等）、虚血性脳血管障害（一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、脳梗塞等）、末梢血管障害、人工血管置換後閉塞、冠動脈インターベンション（冠動脈バイパス術（ＣＡＧＢ）、経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）、ステント留置等）後の血栓性閉塞、糖尿病網膜症・腎症、心人工弁置換時閉塞など、血栓・塞栓を原因とする虚血性疾患の予防および／または治療剤として有用である。また、血管手術、血液体外循環等に伴う血栓・塞栓の予防および／または治療剤として有用である。更に、慢性動脈閉塞症に伴う、潰瘍、疼痛、冷感などの阻血性症状の改善にも有用である。【００９４】
本発明の化合物（１ａ）、（１ｂ）または（１ｃ）を医薬として使用する場合、投与量は患者の年齢、性別、症状等により異なるが、成人１人当たりの１日量は、０．１ｍｇ〜１ｇが好ましく、特に０．５ｍｇ〜５００ｍｇが好ましい。この場合、１日量を数回に分けて投与することも可能であり、必要な場合には上記の１日量を超えて投与することも可能である。【００９５】
本発明の化合物（１ａ）、（１ｂ）または（１ｃ）を有効成分とする医薬は、必要に応じた投与法および剤形により使用可能であり、その製剤は通常用いられている各種製剤の調製法にて必要に応じて薬学的に許容される担体を配合して、投与法に合致した剤形を選択すればよく、投与法および剤形は特に限定されるものではない。
経口用製剤としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、丸剤、カプセル剤等の固形製剤の他に、液剤、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤等の液体製剤を挙げることができる。
注射剤としては、化合物（１ａ）、（１ｂ）または（１ｃ）を溶解して容器に充填してもよく、またそれを凍結乾燥等によって固形として要時調製の製剤としてもよい。
これらの製剤を調製する場合には、製剤学上許容される添加物、例えば、結合剤、崩壊剤、溶解促進剤、滑沢剤、充填剤、賦形剤等を必要に応じて選択して用いることができる。
【実施例】
【００９６】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
［実施例１］［１−（６−メトキシピリダジン−３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン・１塩酸塩（化合物（１ｂ））の合成
実施例１−１）  ２，４−ジオキソ−４−（２−ピリジニル）ブタン酸  メチルエステル（ＭＤＰ）
１０Ｌ四頚フラスコにメタノール（５．３Ｌ）を入れ、ナトリウムメトキシド（４０２ｇ）を溶解した。続いてジメチルシュウ酸（８７８ｇ）、アセチルピリジン（６００ｇ、５５６ｍＬ）を添加し、滴下ロートを２００ｍＬのメタノールで洗浄した。反応懸濁液を室温で１６．５時間攪拌した。反応液をステンレス缶に移し、ここに１１．１Ｌの水を添加し氷冷した。次いで、５Ｎ塩酸（１０Ｌ）を添加し、ｐＨを３．０へ調整した。氷冷下２．５時間攪拌した後、結晶を濾過した。得られた結晶を、３００ｍＬの水で１回、１０Ｌのイソプロパノールで２回洗浄した。結晶を減圧乾燥し、標題化合物（９０４ｇ、８８％）を得た。
ｍｐ８６−８７℃；1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）  δ  ３．９５（ｓ，３Ｈ）、７．５２（ｂｒ，１Ｈ），７．６４（ｂｒ，１Ｈ），７．９１（ｂｒ，１Ｈ），８．１７（ｂｒ，１Ｈ）８．７３（ｂｒ，１Ｈ）．【００９７】
実施例１−２）  １−（６−クロロ−３−ピリダジニル）−５−（２−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸  メチルエステル（ＣＭＰ）
２０Ｌ四頚フラスコにメタノール（６．０Ｌ）、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジン（ＣＨＰ，４２５ｇ）、実施例１−１）で得たＭＤＰ（６００ｇ）を入れ、２時間加熱還流した。濃塩酸１２０ｍＬを加え、１１時間還流した後、反応液を室温に冷却し２．０Ｌの水を添加した。次いで、５Ｎ水酸化ナトリウム溶液を３６０ｍＬ添加してｐＨを８．５へ調整した。さらに水（１０．０Ｌ）を加えた後、室温にて１時間攪拌した。析出した結晶を濾別し、１．２Ｌの水で洗浄した。得られた結晶を１．２Ｌの６７％含水メタノール溶液でスラリー処理し濾過した。濾別した結晶を減圧乾燥して、標題化合物(ＣＭＰ，６６５ｇ，７３％)を得た。
ｍｐ１６４−１６５℃；1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）  δ  ４．００（ｓ，３Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．２７ （ｄｄ，Ｊ＝４．９，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝７．７，７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝４．９，１Ｈ）．【００９８】
実施例１−３）  １−（６−メトキシー３−ピリダジニル）−５−（２−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（ＭＣＰ）
２０Ｌ四頚フラスコにてナトリウムメトキシド（１７１ｇ）を７．５Ｌのメタノールに溶解した。ここに実施例１−２）で得たＣＭＰ（５００ｇ）を添加し、４０℃で１．５時間攪拌した。次いで５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）を添加し、４０℃で１時間攪拌した後、反応液の温度を室温まで下げた。反応液に７．５Ｌの水、活性炭（２５０ｇ）を添加し３０分間攪拌した。活性炭を濾過し、濾液に５Ｎ塩酸（５５０ｍＬ）を添加しｐＨを３．３に調整した。反応液を室温で終夜攪拌した後析出した結晶を濾取し、冷水（１．０Ｌ）およびメタノール（７５０ｍＬ）で結晶を洗浄した。得られた結晶は減圧乾燥して、標題化合物）（ＭＣＰ，４５５ｇ，９７％）を得た。
ｍｐ２２７−８℃（ｄｅｃｏｍｐ．）；1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ４．０４（ｓ，３Ｈ），７．３４（ｄｄ，Ｊ＝４．７，７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄｄ，Ｊ＝７．６，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），８．３５（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），１３．２（ｂｒ，１Ｈ）．【００９９】
実施例１−４）  ［１−（６−メトキシピリダジンー３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン・１塩酸塩（化合物（１ｂ））
５Ｌの四頚フラスコに９５％エタノール（１．０Ｌ）を入れ、実施例１−３）で得たＭＣＰ（２６０ｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物（ＨＯＢｔ・Ｈ2Ｏ，２０１ｇ）、Ｎ−メチル−ピペラジン（１７５ｇ）、1−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（水溶性カルボジイミド：ＷｓＣＩ，２５２ｇ）を添加し、室温で１．５時間攪拌した。反応液に濃塩酸（１８２ｍＬ）を滴下した後エタノール（１．３Ｌ）を添加し、５０℃で1時間攪拌した。反応液の温度をゆっくりと室温に戻し（７℃／時間）、さらに２時間氷冷した。その後、結晶を濾取し、６００ｍＬのエタノールで結晶を洗浄した。得られた結晶を減圧乾燥して、粗製の標題化合物（３４４ｇ，９５％）を得た。３Ｌの三頚フラスコにて、上記粗製標題化合物（３４０ｇ)を７０％エタノール（１１２ｍＬ）に添加し、６０℃に加熱して溶解後グラスフィルターで濾過した。フラスコを７０％エタノール（６８ｍＬ）およびエタノール（５００ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を濾液に加えた。１０Ｌ四頚フラスコに濾液を移し、エタノールを３．４Ｌ加え、これを６０℃に加熱し２時間攪拌した。その後ゆっくりと５０℃まで冷却して１．５時間攪拌し、結晶を徐々に析出させた。さらにゆっくりと氷温まで降温したのち結晶を濾取した。得られた結晶を７００ｍＬのエタノールで洗浄した後減圧乾燥して、標題化合物（３０３ｇ，８９％)を得た。
ｍｐ２２７−２２８℃（ｄｅｃｏｍｐ．）；1Ｈ  ＮＭＲ（ｄ2Ｏ）  δ  ２．９５（ｓ，３Ｈ），３．２−３．６(ｂｒ，〜４Ｈ)，４．０９(ｓ，３Ｈ)，７．２６（ｓ，１Ｈ），７．４７(ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ)，７．４８−７．５１(ｍ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄｄ，Ｊ＝７．８，７．４Ｈｚ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）．【０１００】
［実施例２］  １−（６−メトキシピリダジン−３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（化合物（１ａ））の合成
（方法１）
１Ｌ四頚フラスコにアセトニトリル（３５０ｍＬ）を入れ、実施例１−３）で得たＭＣＰ（３５．０ｇ）、ＨＯＢｔ・Ｈ2Ｏ(３７．１ｇ)、Ｎ−メチル−ピペラジン（２３．６g）、ＷｓＣＩ（３０．９ｇ）を添加し、室温で１６時間攪拌した。反応液にトリエチルアミン（５８ｍＬ）を添加し減圧濃縮した後、水（２００ｍＬ）を添加し、さらに飽和炭酸水素ナトリウム水２５０ｍＬを加え結晶を析出させた。結晶の析出した懸濁液をクロロホルム（２２０ｍＬ）で３回抽出し、炭酸水素ナトリウム水２２０ｍＬ、蒸留水２２０ｍＬで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後４５ｇまで濃縮し、ヘキサンを４５０ｍＬ添加してスラリー処理を行った。その後、結晶を濾取し、得られた結晶を減圧乾燥して、標題化合物(４１．７ｇ，９３％）を得た。
ｍｐ１３９−１４０℃（ｄｅｃｏｍｐ．）；1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）  δ  ２．３３（ｓ，３Ｈ），２．４５（ｍ，２Ｈ），２．５１（ｍ，２Ｈ），３．８６（ｍ，２Ｈ），４．０７（ｍ，２Ｈ），４．１１（ｓ，３Ｈ），７．１０（ｓ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝４．８，７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝７．５，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ).【０１０１】
（方法２）
１Ｌ三頚フラスコに実施例１−４）で得た化合物（１ｂ）１２６．７ｇを入れ、水（６４０ｍＬ）を添加し、５０℃にて攪拌しながら５ＮＮａＯＨ水溶液（６４ｍＬ）を滴下した。滴下修了後、反応液を２℃まで冷却した。析出した結晶の懸濁した反応液を濾過し、得られた結晶を水（２００ｍＬ）で洗浄した後、減圧乾燥して化合物（１ａ）（９５．９ｇ；８３％）を得た。【０１０２】
［実施例３］  ［１−（６−メトキシピリダジン−３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン・１Ｌ−酒石酸塩（化合物（１ｃ））の合成
５０ｍＬ二頚フラスコに８０％イソプロパノール(１０ｍＬ)、実施例２で得た化合物（１ａ）（２．５ｇ）、Ｌ−酒石酸（１．０ｇ）を入れ６０℃に加熱し溶解した。イソプロパノール（５ｍＬ）、続いてイソプロパノール(１０ｍＬ)を添加し結晶を析出させた。その後ゆっくりと室温まで冷却した後、氷冷し、結晶を濾取した。得られた結晶は減圧乾燥して、標題化合物(３．３ｇ，９６％)を得た。
ｍｐ１８０−１８１℃（ｄｅｃｏｍｐ．）；1Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）  δ  ２．９９（ｓ，３Ｈ），３．１−３．９（ｍ，〜８Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），４．４５（ｓ，２Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４７−７．５１（ｍ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄｄ，Ｊ＝７．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ）．【０１０３】
なお、実施例１〜３のＮＭＲスペクトルにおいて、ａ）は、ＴＭＳを標準とし、ｂ）はＴＰＳ（（３−トリメチルシリル）−２，２，３，３−ｄ４−プロピオン酸ナトリウム）を標準としていることを意味する。【０１０４】
［実施例４］  ［１−（６−メトキシピリダジン−３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン・１塩酸塩（化合物（１ｂ））無水物の結晶
ＭＣＰをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、およびトリエチルアミン存在下、Ｎ−メチルピペラジンと反応させた。反応液に水と酢酸エチルを加えて分液し、さらに水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を併せて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾別後、溶媒を減圧留去して得た残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、化合物（１ａ）を得た。得られた化合物（１ａ）９９．９８ｍｇを、１０％含水エタノール（０．８ｍｌ）に溶解し、０．０２２ｍＬの濃塩酸を加え７０℃に加温、溶解した。室温に戻した後２日間静置し結晶を析出させた。析出した結晶を濾取し、風乾し、化合物（１ｂ）無水物の結晶を６３．４ｍｇ（５８％）得た。元素分析：理論値（Ｃ19Ｈ21Ｎ7Ｏ2・ＨＣｌ）;Ｃ，５４．８７；Ｈ，５．３３；Ｎ，２３．５７；Ｃｌ，８．５２．実測値；Ｃ，５４．６３；Ｈ，５．３３；Ｎ２３．５０；Ｃｌ，８．６４．
本結晶について、常法に従い粉末Ｘ線回折、熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）を実施した。結果を図１Ａおよび図１Ｂに示す。【０１０５】
［実施例５］  ［１−（６−メトキシピリダジン−３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン・１塩酸塩（化合物（１ｂ））２水和物の結晶
実施例１−４）で得られた化合物（１ｂ）の無水物（２００．０ｍｇ）をシャーレにとり、飽和硝酸カリウム水溶液（９３％  ＲＨ）を共存させたデシケーター中に室温で７日間保存し、吸湿させた結晶を得た（２１６．１ｍｇ）。
元素分析：理論値（Ｃ19Ｈ21Ｎ7Ｏ2・ＨＣｌ・２Ｈ2Ｏ）；Ｃ，５０．５０；Ｈ，５．８０；Ｎ，２１．７０；Ｃｌ，７．８５．実測値；Ｃ，５０．４２；Ｈ，５．７４；Ｎ，２１．４４；Ｃｌ，７．８３．
本結晶の粉末Ｘ線回折およびＴＧ／ＤＴＡを常法に従って測定した。結果を図２Ａおよび図２Ｂに示す。【０１０６】
［実施例６］  ［１−（６−メトキシピリダジンー３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン・１Ｌ−酒石酸塩（化合物（１ｃ））無水物の結晶
実施例２で得られた、化合物（１ａ）３．０ｇを、５％含水エタノール（３０ｍｌ）に溶解し、１．２４ｇのＬ−酒石酸を加え５０℃に加温、溶解した。室温に戻し、１５時間スターラーにて攪拌した。析出した結晶を濾取、風乾し、化合物（１ｃ）の結晶４．０ｇ（９６％）を得た。
元素分析：理論値（Ｃ19Ｈ21Ｎ7Ｏ2・Ｃ4Ｈ6Ｏ6）；Ｃ，５２．１７；Ｈ，５．１４；Ｎ，１８．５２．実測値；Ｃ，５１．９１；Ｈ，４．９５；Ｎ，１８．５６．
本結晶について、粉末Ｘ線回折、熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）を常法に従って測定した。結果を図３Ａおよび図３Ｂに示す。【０１０７】
［実施例７］  １−（６−メトキシ−３−ピリダジニル）−５−（２−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（ＭＣＰ）
ＣＨＰ（３．５ｇ）のメタノール溶液（１００ｍｌ）にＭＤＰ（５．０ｇ）および濃塩酸（１ｍｌ）を加え、１４時間加熱還流した。反応液を５０℃に冷却後、そのままの温度にて２８％ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（１２．０ｍｌ）を加え、１時間攪拌した。次いで、反応液に１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１５．０ｍｌ）を加え、５０℃にて１時間攪拌した後、室温まで冷却した。反応液に水（４５ｍｌ）、活性炭（２５０ｍｇ）を添加し、室温にて１時間攪拌した。活性炭を濾去後、濾液に５Ｎ塩酸（８．０ｍｌ）を添加し、ｐＨ３．０程度に調整し、室温にて１時間攪拌した。析出した結晶を濾取後、減圧乾燥し、標題化合物（５．７３ｇ）を得た。各種スペクトルデータは、実施例１−３）と完全に一致した。【０１０８】
[実施例８]  １−（６−メトキシ−３−ピリダジニル）−５−（２−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（ＭＣＰ）
ＣＨＰ（３．５ｇ）のメタノール溶液（１００ｍｌ）にＭＤＰ（５．０ｇ）およびメタンスルホン酸（０．７８ｍｌ）を加え、１４時間加熱還流した。反応液を５０℃に冷却後、そのままの温度にて２８％ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（１２．０ｍｌ）を加え、１時間攪拌した。次いで、反応液に１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１５．０ｍｌ）を加え、５０℃にて１時間攪拌した後、室温まで冷却した．反応液に水（４５ｍｌ）、活性炭（２５０ｍｇ）を添加し、室温にて１時間攪拌した。活性炭を濾去後、濾液に５Ｎ塩酸（８．０ｍｌ）を添加し、ｐＨ３．０程度に調整し、室温にて１時間攪拌した。析出した結晶を濾取後、減圧乾燥し、標題化合物（５．５７ｇ）を得た。各種スペクトルデータは，実施例１−３）と完全に一致した。【０１０９】
［実施例９］  ［１−（６−メトキシピリダジン−３−イル）−５−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン・１塩酸（化合物（１ｂ））
ＭＣＰ（５．０ｇ）をアセトニトリル（５０ｍｌ）に懸濁し，１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物（ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ，３．４ｇ）、Ｎ−メチル−ピペラジン（３．７ｍｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，５．２ｇ）を加え、４０℃にて３時間攪拌した。反応液に水を加え、そのままの温度にて１時間攪拌した。室温まで冷却し、析出した結晶を濾別後、得られた濾液を減圧濃縮した。残渣をエタノール（５０ｍｌ）に溶解し、濃塩酸（２．８ｍｌ）を加え、室温にて１時間攪拌した。得られた結晶を濾取後、減圧乾燥し、標題化合物（６．３ｇ）を得た。各種スペクトルデータは、実施例１−４）と完全に一致した。【０１１０】
［試験例１］吸脱湿挙動の検討
上記実施例で得た、化合物（１ａ）、（１ｂ）および（１ｃ）について、常法にしたがって吸脱湿性を評価した。すなわち、結晶約２０ｍｇをマイクロバランス（自動水蒸気吸着装置）に付し、相対湿度範囲１０〜９０％での経時的重量を計測することにより水分の吸脱着量を測定した。
その結果、化合物（１ａ）、（１ｂ）および（１ｃ）、いずれの化合物も４０〜６０％ＲＨにおいて±１％以内の重量変化しか示さなかった（図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｃ）。【０１１１】
［試験例２］結晶安定性の検討
上記実施例で得た化合物（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）ならびに化合物（１ａ）の各種塩化合物を２５℃、相対湿度、０、５２％または９３％で３日間保存し、重量および結晶形変化を検討した。結果を表１に示す。フマル酸塩は低湿度で、化合物（１ａ）およびクエン酸は高湿度で、結晶形の変化が観察された。なお、化合物（１ａ）の各種塩化合物は、実施例３の方法に準じて製造した。化合物（１ｃ）は、重量変化が僅かで結晶形の変化もなく、安定性が極めて高いことがわかった。【０１１２】
【表１】
2006013962.tif 000031
【０１１３】
［試験例３］血小板凝集抑制作用
血液凝固阻止剤として１／１０容量の３．１３％クエン酸ナトリウムを用いて、ヒトあるいは麻酔下モルモットから静脈血を採取し、１８０ｇで１０分間遠心して多血小板血漿（ＰＲＰ）を分離した。上層のＰＲＰを分取後、下層をさらに１６００ｇで１０分間遠心して上層の乏血小板血漿（ＰＰＰ）を分取した。ＰＲＰ２００μＬに化合物（１）あるいは比較例１〜３の溶液１μＬを加えて３７℃で２分間静置後、コラーゲン２μＬを添加して血小板凝集を誘起した。血小板凝集率はＰＡＭ−１２Ｃ（ＳＳＲエンジニアリング）を用いて測定した。ＰＰＰの光透過率を１００％凝集値とし、それぞれの化合物の各濃度存在下における血小板の凝集率を求め、各化合物のＩＣ50値を算出した。結果を表２に示す。【０１１４】
［試験例４］シクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）およびシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害作用
Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＣｏｍｐａｎｙのＣＯＸ阻害薬スクリーニングアッセイキット（カタログ番号５６０１０１，５６０１２１）を用いて、各化合物のＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２阻害活性を測定した。
測定前に反応緩衝液、ヘム、アラキドン酸、ＳｎＣｌ2、ＥＩＡ緩衝液、洗浄緩衝液、プロスタグランジン（ＰＧ）スクリーニングＥＩＡ標準液、ＰＧスクリーニングアセチルコリンエステラーゼ（ＡｃｈＥ）、トレーサー（発色酵素ＨＲＰコンジュゲート）、ＰＧスクリーニングＥＩＡ抗血清を用意した。
（１）ＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２によるＰＧＦ2αの産生
各濃度の実施例化合物およびＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２を含む反応液を３７℃で１０分間静置後、アラキドン酸１０μＬを加えて３７℃で２分間静置した。反応後に１Ｎ−塩酸５０μＬを加えて反応を停止した後、ＳｎＣｌ2溶液１００μＬを加えて５分間室温で静置した。
（２）ＥＬＩＳＡによるＰＧＦ2αの定量
マウス抗ウサギＩｇＧでコーティングした９６ウェルプレートの各ウェルに抗血清（ウサギ抗ＰＧＦ2α抗体）５０μＬを加えた後、上記のＰＧＦ2α産生反応液を２０００倍に希釈した溶液５０μＬ、ＡｃｈＥトレーサー５０μＬを順次加えて室温で１８時間静置した。洗浄緩衝液で各ウェルを５回洗浄して過剰のＡｃｈＥトレーサーを除去後、エルマン（Ｅｌｌｍａｎ）試薬２００μＬを添加した。６０分間暗室に静置した後、４０５ｎｍで吸光度を測定した。【０１１５】
（３）阻害活性の算出
ＰＧスクリーニングＥＩＡ標準液を用いて標準曲線を作成し、上記の吸光度からＰＧＦ2αの産生量を求めた。阻害率の算出においては、実施例化合物を含まない反応液を用いて得たＰＧＦ2αの産生量を１００％として、実施例化合物各濃度における阻害率を算出し、ＩＣ５０を求めた。結果を表２に示す。【０１１６】
【表２】
2006013962.tif 000032
【０１１７】
化合物（１ａ）および化合物（１ｂ）は低濃度で、ヒトおよびモルモットの血小板凝集を阻害した。一方、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２に対しては、血小板凝集を抑制する１００倍の濃度のＩＣ50を示した。【０１１８】
［試験例５］  経口吸収性の検討
絶食した体重２９０−３６０ｇのモルモットに、化合物（１ａ）に換算して２ｍｇ／ｍＬの濃度になるように０．５％メチルセルロース（ＭＣ）に懸濁した化合物（１ｂ）を、１０ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与した。対照群には溶媒である０．５％ＭＣのみを５ｍＬ／ｋｇ投与した。投与１時間後、モルモットをケタミンとキシラジン麻酔後開腹し、腹大動脈より１／１０容量の３．１３％クエン酸ナトリウムを用いて採血した。得られた血液から、試験例３と同様の方法でＰＲＰを調製しコラーゲン誘発血小板凝集を測定した。ただし、血小板凝集の惹起には終濃度で０．８μｇ〜２．５μｇのコラーゲンを用いた。
結果を図５に示す。化合物（１ｂ）を１０ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与されたモルモットの血中では、コラーゲン刺激で誘発される血小板凝集が強力に抑制された。化合物（１ｂ）は良好に吸収され薬効を示すことがわかった。
【図１】
2006013962.tif 000083
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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2006013962.tif 000090
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