(57)【要約】植物に由来するエボジアミン類を含有し、えぐ味、苦味、辛味、不快臭、毒性物質等が低減または除去された呈味性の優れたエボジアミン類含有物質の開発が求められている。  本発明は、エボジアミン類を含有する植物またはその処理物を、超臨界抽出する工程および脂肪酸炭化水素または水性媒体を用いて溶媒抽出する工程のうち少なくとも１工程を行うことにより、えぐ味、苦味、辛味、不快臭、毒性物質等が低減または除去されたエボジアミン類含有組成物およびその製造方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化３】
2005123735.tif 000010
〔式中、＞Ａ−Ｂ−は＞ＣＲ１−ＮＲ２−（式中、Ｒ１は水素またはヒドロキシを表し、Ｒ２は水素または低級アルキルを表すか、Ｒ１とＲ２が一緒になって結合を表す）、または＞Ｃ＝Ｎ＋（Ｒ３）−（式中、Ｒ３は低級アルキルを表す）を表し、ｎは＞Ａ−Ｂ−が＞ＣＲ１−ＮＲ２−のとき０を表し、＞Ａ−Ｂ−が＞Ｃ＝Ｎ＋（Ｒ３）−のとき１を表し、Ｘ−は陰イオンを表す）で表される化合物またはその塩〔以下「エボジアミン類」という〕を含有する植物体またはその処理物を、超臨界抽出する工程および脂肪族炭化水素または水性媒体を用いて溶媒抽出する工程のうちの少なくとも１工程を含むことを特徴とする、エボジアミン類含有組成物の製造方法。
【請求項２】
エボジアミン類含有組成物が粉末の形態である請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
エボジアミン類がエボジアミン、ルタエカルピン、デヒドロエボジアミンまたはヒドロキシエボジアミンである請求項１または２記載の製造方法。
【請求項４】
超臨界抽出する工程が、エボジアミン類を含有する植物体またはその処理物を、超臨界流体の１５重量％未満のエントレーナーが添加された超臨界流体で超臨界抽出して得られる抽出残渣を回収する工程である、請求項１記載の製造方法。
【請求項５】
超臨界流体が二酸化炭素である請求項４記載の製造方法。
【請求項６】
エントレーナーが１価脂肪族アルコール、水性媒体、アセトンまたはヘキサンを含有する請求項４または５記載の製造方法。
【請求項７】
１価脂肪族アルコールがエタノールである請求項６記載の製造方法。
【請求項８】
脂肪族炭化水素または水性媒体を用いて溶媒抽出する工程が、エボジアミン類を含有する植物体またはその処理物を溶媒抽出して得られる抽出残渣を回収する工程である、請求項１記載の製造方法。
【請求項９】
脂肪族炭化水素がヘキサンである請求項１または８記載の製造方法。
【請求項１０】
水性媒体が水である請求項１、８および９のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１１】
超臨界抽出する工程が、エボジアミン類を含有する植物体またはその処理物を、超臨界流体の１５重量％以上のエントレーナーが添加された超臨界流体で超臨界抽出して得られる抽出物を回収する工程である、請求項１記載の製造方法。
【請求項１２】
超臨界流体が二酸化炭素である請求項１１記載の製造方法。
【請求項１３】
エントレーナーが１価脂肪族アルコール、水性媒体、アセトンまたはヘキサンを含有する請求項１１または１２記載の製造方法。
【請求項１４】
１価脂肪族アルコールがエタノールである請求項１３記載の製造方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の製造方法で得られるエボジアミン類含有組成物。
【請求項１６】
請求項１５記載の組成物を含有する製剤、飲食品または飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、植物に由来するエボジアミン類を含有し、えぐ味、苦味、辛味、不快臭、毒性物質等が低減または除去されたエボジアミン類含有組成物およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】  エボジアミン類はミカン科のゴシュユ（呉茱萸）の果実から得られる化合物であって、エボジアミン、ルタエカルピン、デヒドロエボジアミン、ヒドロキシエボジアミン等が例示される。エボジアミン類の薬理作用としては、利尿作用、発汗作用、冷え症改善作用、脳機能改善作用、抗炎症性作用、強心作用、血管弛緩作用、鎮痛作用、脂質代謝改善作用（特許文献１〜５）等が知られており、エボジアミン類を含有する組成物の粉砕物は健康食品としても利用されている。【０００３】  エボジアミン類の製造方法としては、合成方法、エボジアミン含有組成物をアルコール等の溶媒によって抽出する方法が知られている。合成方法によれば純粋なエボジアミン類が得られるが、非常に複雑な合成のステップを必要とし、製品は非常に高価なものとなる。また、アルコール等の溶媒によって抽出する方法においては、得られる製品が強烈なえぐ味、苦味、辛味、不快臭を有し、食品分野での利用が制限されている。
【特許文献１】特開平４−３０５５２７
【特許文献２】特開昭６３−２８７７２４
【特許文献３】特開平６−３１２９３２
【特許文献４】特開昭６０−２２４６２２
【特許文献５】特開平９−４７２０９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】  植物に由来するエボジアミン類を含有し、えぐ味、苦味、辛味、不快臭、毒性物質等が低減または除去された呈味性の優れたエボジアミン類含有組成物の開発が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】  本発明が下記に示される。
（１）式（Ｉ）
【化１】
2005123735.tif 000002
【０００６】〔式中、＞Ａ−Ｂ−は＞ＣＲ１−ＮＲ２−（式中、Ｒ１は水素またはヒドロキシを表し、Ｒ２は水素または低級アルキルを表すか、Ｒ１とＲ２が一緒になって結合を表す）、または＞Ｃ＝Ｎ＋（Ｒ３）−（式中、Ｒ３は低級アルキルを表す）を表し、ｎは＞Ａ−Ｂ−が＞ＣＲ１−ＮＲ２−のとき０を表し、＞Ａ−Ｂ−が＞Ｃ＝Ｎ＋（Ｒ３）−のとき１を表し、Ｘ−は陰イオンを表す）で表される化合物またはその塩〔以下「エボジアミン類」という〕を含有する植物体またはその処理物を、超臨界抽出する工程および脂肪族炭化水素または水性媒体を用いて溶媒抽出する工程のうちの少なくとも１工程を含むことを特徴とする、エボジアミン類含有組成物の製造方法。
（２）エボジアミン類含有組成物が粉末の形態である上記（１）記載の製造方法。
（３）エボジアミン類がエボジアミン、ルタエカルピン、デヒドロエボジアミンまたはヒドロキシエボジアミンである上記（１）または（２）記載の製造方法。
（４）超臨界抽出する工程が、エボジアミン類を含有する植物体またはその処理物を、超臨界流体の１５重量％未満のエントレーナーが添加された超臨界流体で超臨界抽出して得られる抽出残渣を回収する工程である、上記（１）記載の製造方法。
（５）超臨界流体が二酸化炭素である上記（４）記載の製造方法。
（６）エントレーナーが１価脂肪族アルコール、水性媒体、アセトンまたはヘキサンを含有する上記（４）または（５）記載の製造方法。
（７）１価脂肪族アルコールがエタノールである上記（６）記載の製造方法。
（８）脂肪族炭化水素または水性媒体を用いて溶媒抽出する工程が、エボジアミン類を含有する植物体またはその処理物を溶媒抽出して得られる抽出残渣を回収する工程である、上記（１）記載の製造方法。
（９）脂肪族炭化水素がヘキサンである上記（１）または（８）記載の製造方法。
（１０）水性媒体が水である上記（１）、（８）および（９）のいずれか１項に記載の製造方法。
（１１）超臨界抽出する工程が、エボジアミン類を含有する植物体またはその処理物を、超臨界流体の１５重量％以上のエントレーナーが添加された超臨界流体で超臨界抽出して得られる抽出物を回収する工程である、上記（１）記載の製造方法。
（１２）超臨界流体が二酸化炭素である上記（１１）記載の製造方法。
（１３）エントレーナーが１価脂肪族アルコール、水性媒体、アセトンまたはヘキサンを含有する上記（１１）または（１２）記載の製造方法。
（１４）１価脂肪族アルコールがエタノールである上記（１３）記載の製造方法。
（１５）上記（１）〜（１４）のいずれか１項に記載の製造方法で得られるエボジアミン類含有組成物。
（１６）上記（１５）記載の組成物を含有する製剤、飲食品または飼料。
【発明の効果】
【０００７】  えぐ味、苦味、辛味、不快臭、毒性物質等が低減または除去された呈味性の優れたエボジアミン類含有組成物およびその製造方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】  本発明は、式（Ｉ）
【化２】
2005123735.tif 000003
【０００９】〔式中、＞Ａ−Ｂ−は＞ＣＲ１−ＮＲ２−（式中、Ｒ１は水素またはヒドロキシを表し、Ｒ２は水素または低級アルキルを表すか、Ｒ１とＲ２が一緒になって結合を表す）、または＞Ｃ＝Ｎ＋（Ｒ３）−（式中、Ｒ３は低級アルキルを表す）を表し、ｎは＞Ａ−Ｂ−が＞ＣＲ１−ＮＲ２−のとき０を表し、＞Ａ−Ｂ−が＞Ｃ＝Ｎ＋（Ｒ３）−のとき１を表し、Ｘ−は陰イオンを表す）で表される化合物またはその塩〔以下「エボジアミン類」という〕を含有する植物体またはその処理物を、超臨界抽出する工程および脂肪族炭化水素または水性媒体を用いて溶媒抽出する工程のうちの少なくとも１工程を含むことを特徴とする、エボジアミン類含有組成物の製造方法に関する。【００１０】  上記製造方法としては、例えばエボジアミン類を含有する植物体またはその処理物を（Ｉ）超臨界抽出して抽出残渣を回収する工程（以下、超臨界抽出Ａともいう）、（ＩＩ）脂肪族炭化水素または水性媒体を用いて溶媒抽出して抽出残渣を回収する工程（以下、溶媒抽出Ａともいう）あるいは（ＩＩＩ）超臨界抽出して抽出物を回収する工程（以下、超臨界抽出Ｂともいう）を単独または２工程以上組み合わせた方法などが好適に用いられる。【００１１】  得られたエボジアミン類含有組成物はそのまま、あるいは必要に応じて粉砕して粉末とし、そのまま、あるいは使用分野で用いられる適切な添加物を加えて利用することができる。
該エボジアミン類含有組成物は、エボジアミン類含有植物体またはその処理物から従来の抽出方法により得られたエボジアミン類含有組成物と同様に利用できるが、えぐ味、苦味、辛味、不快臭、毒性物質等が低減または除去されているので、さらに広範囲に利用することができる。【００１２】  エボジアミン類含有植物体としては、エボジアミン類を含有する植物体であればいかなるものでもよいが、例えば、ミカン科のゴシュユ属［ゴシュユ（Ｅｖｏｄｉａ ｒｕｔａｅｃａｒｐａ）、ホンゴシュユ（Ｅ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、チョウセンゴシュユ（Ｅ．ｄａｎｉｅｌｌｉ）、ジュヨウシ（Ｅ．ｍｅｌｉａｅｆｏｌｉａ）等］、イヌザンショウ属［ハザレア（Ｆａｇａｒａｒｈｅｔｚａ）等］、サンショウ属［ザントキシラム  レツァ（Ｚａｎｔｏｘｙｌｕｍｒｈｅｔｓａ）、ザントキシラム  バドランガ（Ｚ．ｂｕｄｒｕｎｇａ）、ザントキシラム  フラバム（Ｚ．ｆｌａｖｕｍ）等］、アラリオプシス属［アラリオプシス  タボウエンシス（Ａｒａｌｉｏｐｓｉｓｔａｂｏｕｅｎｓｉｓ）、アラリオプシス  ソヤウキー（Ａ．ｓｏｙａｕｘｉｉ）等］等の植物体があげられる。植物体としては、これらの植物の果実、果皮、種子、種皮、花、葉、茎、樹皮、根等、培養された細胞もしくは器官、カルス等の部位等があげられる。【００１３】  該植物体の処理物としては、これらを物理化学的処理または生物学的処理をして得られる処理物等があげられる。
物理化学的処理としては、天日乾燥、通風乾燥、凍結乾燥等による乾燥処理、ブレンダー、ホモジナイザー、ボールミル等による粉砕処理、加熱処理などがあげられる。生物学的処理としては、細菌、酵母等による発酵処理などがあげられる。【００１４】  また、該植物体の処理物としては、上記のエボジアミン類含有植物体またはその処理物を下記の工程を行って得られるエボジアミン類を含有する抽出物または抽出残渣を用いることもできる。
エボジアミン類含有植物体またはその処理物としては、乾燥処理または粉砕処理されたものが好適に用いられる。【００１５】  以下に本発明のエボジアミン類含有組成物の取得方法を下記のように分けて説明する。
（Ｉ）超臨界抽出Ａによりエボジアミン類含有植物体またはその処理物から得られる抽出残渣を回収することによる、エボジアミン類含有組成物の取得
超臨界抽出は、通常少なくとも抽出槽と分離槽を設けた装置を用い、抽出槽に二酸化炭素等の超臨界流体を循環させながら、超臨界流体の臨界圧力以上の圧力下、必要に応じてエントレーナーを超臨界流体に添加して行なわれる。超臨界流体中には抽出成分が抽出され、分離槽には抽出物が通常固形物または液状物として得られ、抽出槽には抽出残渣が通常固形物として得られる。【００１６】  超臨界抽出を実施するには、通常超臨界抽出装置を用い、超臨界流体を該植物体またはその処理物１重量部に対して、積算量として５〜１０００重量部、好ましくは２０〜５０重量部用いて実施される。
超臨界流体としては、二酸化炭素、アンモニア、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、エタン、プロパン、ブタン、ペンタン、ヘキサン、ジメチルブタン、ベンゼン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロメタン、クロロトリフルオロメタン、ジエチルエーテル、エチルメチルエーテル、ヘキサン、一酸化二窒素等が用いられるが、二酸化炭素が好適に用いられる。【００１７】  必要に応じて超臨界流体にエントレーナーを添加することができる。エントレーナーは、超臨界流体に添加させることにより抽出速度を速める等の効果が期待できる。
エントレーナーとしては、メタノール、エタノール等の１価脂肪族アルコール、水、含水１価脂肪族アルコール、アセトンまたはヘキサン等が用いられる。
エントレーナーの添加量は、積算量として、通常超臨界流体に対して１５重量％未満、好ましくは１０重量％以下である。【００１８】  超臨界抽出は流体の臨界温度および臨界圧力を超えた条件で実施される。これらの条件は用いる超臨界流体の種類によって異なるが、二酸化炭素の場合、３１．０６〜１０００℃、７２．９〜５０００ａｔｍ、好ましくは３１．１〜６０℃、７５〜１０００ａｔｍで実施される。
分離槽の操作は通常１〜５０００ａｔｍ、好ましくは１〜１０００ａｔｍの圧力で、−２７３．１６〜１０００℃好ましくは−８０〜２００℃の温度で実施され、２０分間〜５時間で完了する。【００１９】  超臨界抽出の終了後、抽出槽内に通常固形物として得られる抽出残渣は、そのままを本発明の組成物として用いてもよいし、エボジアミン類含有植物体またはその処理物としてさらなる抽出工程に用いてもよい。
（ＩＩ）溶媒抽出Ａによりエボジアミン類含有植物体またはその処理物から得られる抽出残渣を回収することによる、エボジアミン類含有組成物の取得
溶媒抽出に用いる溶媒としては、脂肪族炭化水素、水性媒体等を単独、または二種以上を組み合わせた混合溶媒として用いることができる。溶媒抽出処理は１回または２回以上行われる。さらに、好ましくは脂肪族炭化水素による抽出と水性媒体による抽出を組み合わせて順次実施することがあげられる。【００２０】  脂肪族炭化水素としては、エボジアミン類がほとんど抽出されず、えぐ味、苦味、辛味、不快臭、毒性物質等を抽出できるものであれば、例えば直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和炭化水素等のいずれも用いられるが、直鎖飽和脂肪酸が好適に用いられる。
脂肪族炭化水素の炭素数は、５〜１０が好ましく、６〜８がより好ましい。
直鎖飽和脂肪族炭化水素としては、例えばペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン等があげられる。【００２１】  分岐鎖飽和脂肪族炭化水素としては、例えば２−メチルペンタン、３−メチルペンタン、２−メチルヘプタン、３−メチルヘプタン、４−メチルヘプタン等があげられる。直鎖不飽和脂肪族炭化水素としては、例えば２−ペンテン、１−ヘキセン、２−ヘキセン、３−ヘキセン、１−ヘプテン、２−ヘプテン、３−ヘプテン等があげられる。
分岐鎖不飽和脂肪族炭化水素としては、例えば２−メチルペンテン、３−メチルペンテン、２−メチルヘプテン、３−メチルヘプテン、４−メチルヘプテン等があげられる。【００２２】  水性媒体としては、水、緩衝液、無機塩水溶液等があげられ、好ましくは水が用いられる。
水としては、水道水、蒸留水、脱イオン水、純水等があげられる。
緩衝液としては、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液等があげられる。
無機塩水溶液の無機塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム等があげられる。【００２３】  溶媒抽出はエボジアミン類含有植物体またはその処理物を溶媒に浸漬させることによって行なわれるが、抽出速度を上げるため等、必要に応じて、種々の装置例えば、撹拌機、超音波発生器、還流抽出器、ソックスレー抽出器、ホモジナイザー、振盪機等、通常の溶媒抽出で使用される機器が用いられる。またエボジアミン類含有植物体またはその処理物が粉砕されていると、抽出を早めかつ容易にすることができるので好ましい。【００２４】  溶媒抽出は、該植物体またはその処理物１重量部に対して通常１〜１０００重量部、好ましくは５〜１００重量部の溶媒を用いて行なわれる。抽出は、溶媒の融点以上、沸点以下の温度で行なわれ、水性媒体では通常０〜１００℃、好ましくは２０〜８０℃、脂肪族炭化水素では０〜３００℃、好ましくは２０〜８０℃で行なわれ、通常３０分間〜１週間で抽出は完了する。【００２５】  溶媒抽出終了後、沈降分離、濾過、遠心分離、圧搾、フィルタープレス等の固液分離方法によって抽出残渣を分離する。得られた抽出残渣は、そのまま本発明の組成物として用いてもよいし、エボジアミン類含有植物体またはその処理物として、さらなる抽出工程に用いてもよい。
（ＩＩＩ）超臨界抽出Ｂによりエボジアミン類含有植物体またはその処理物から得られる抽出物を回収することによる、エボジアミン類含組成物の取得
超臨界抽出Ｂで用いる超臨界流体および超臨界抽出操作としては、超臨界液体へのエントレーナーの添加量が異なる以外は前記（Ｉ）項に記載された超臨界流体および超臨界抽出操作をいずれも適用することができる。【００２６】  エントレーナーの添加量は、積算量として、通常超臨界流体に対して１５重量％以上、好ましくは１５〜２０重量％である。
超臨界抽出Ｂの終了後、例えば、等温・減圧法、等温・気液分離法、等圧・加熱法、等圧・冷却法、吸着法等などを用いて分離操作を行った後、分離槽内に固形物あるいは液状物として、またエントレーナーを使用した場合はエントレーナー溶液として、抽出物を取得することができる。【００２７】  以上のとおり、エボジアミン類を含有する植物体またはその処理物から、（Ｉ）超臨界抽出Ａにより得られる抽出残渣を回収する工程、（ＩＩ）溶媒抽出Ａにより得られる抽出残渣を回収する工程、または（ＩＩＩ）超臨界抽出Ｂにより得られる抽出物を回収する工程を単独または２工程以上組み合わせることにより、えぐ味、苦味、不快臭、毒性物質等が低減または除去されたエボジアミン類含有組成物を取得することができる。【００２８】  超臨界抽出Ａの終了段階における超臨界抽出装置へのエントレーナーの添加量の変更や抽出物の分離は容易に行うことができる。したがって、二段階の超臨界抽出、例えば、超臨界抽出Ａおよび超臨界抽出Ｂを行うことにより、えぐ味、苦味、辛味、不快臭、毒性物質等の低減または除去と、エボジアミン類の抽出とを連続して行うことができるので、好適に用いられる。【００２９】  例えば、エボジアミン類含有植物体またはその処理物を、超臨界抽出Ａにより処理して、抽出槽内に得られる抽出残渣を、好ましくは抽出槽から取り出すことなく、超臨界流体およびエントレーナーを加えて超臨界抽出Ｂを行うことにより、エボジアミン類含有組成物を分離槽に得ることができる。
上記方法により得られるエボジアミン類含有組成物は、さらに固液分離、濃縮または乾燥、精製等の手段を用いて処理することができる。【００３０】  濃縮または乾燥方法としては、加熱濃縮、凍結濃縮、逆浸透濃縮、減圧濃縮、凍結乾燥、自然乾燥、熱風乾燥、通風乾燥、送風乾燥、噴霧乾燥、減圧乾燥、天日乾燥、真空乾燥、スプレードライ、流動層乾燥、泡沫層乾燥、ドラムドライヤー、超音波乾燥、電磁波乾燥があげられ、好ましくは減圧濃縮、スプレードライ、凍結乾燥があげられる。
上記組成物を必要に応じて水性媒体または有機溶媒等に溶解させた後、膜分離法、液体膜分離法、溶媒分配法、分画法等の精製方法を用いることにより、エボジアミン類含有濃度が高く、または不要物が除去された抽出物が得られる。【００３１】  有機溶媒としては、メタノール、エタノール等の１価脂肪族アルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール等の２価脂肪族アルコール、グリセリン等の２価アルコール、酢酸メチル、酢酸エチル等の酢酸アルキル、エチルメチルケトン等の脂肪族ケトン、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、石油エーテル等の脂肪族エーテル、ヘプタン、石油エーテル、シクロヘキサン等の脂環式炭化水素、トルエン、ベンゼン等の芳香族炭化水素、クロロホルム、ジクロロメタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロエテン等のハロゲン化脂肪族炭化水素、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油等の食用油脂、脂肪族炭化水素等があげられる。【００３２】  溶媒分配法としては、例えば、水性媒体と有機溶媒とによる液々抽出法、コロイドを含む液体による水性二相分配法があげられ、分液ロートや向流分配装置等を用いて実施することができる。
分画法としては、例えば、分配クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ゲルクロマトグラフィー、透析等があげられる。このうち、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学社製）、セファデクスＬＨ−２０（ファルマシア社製）、コスモシール１４０Ｃ１８−ＯＰＮ（ナカライテスク社製）等の疎水性吸着レジン、シリカゲル６０（ナカライテスク社製）等の親水性吸着レジンを担体とし、水性媒体、メタノール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、トルエン、ヘキサン等を溶媒とする吸着クロマトグラフィーが好適に用いられる。【００３３】  本発明の組成物の製造に際しては、エボジアミン類を化学変化させないために、例えば抗酸化剤、保存剤等の添加、加熱温度の調整などがなされてもよい。
このようにして得られた組成物を必要に応じて微粉末化することによって、また、組成物をエボジアミン類の原料として、後述される種々の用途に利用できる。
組成物の微粉末化は得られた組成物を乾燥後、適当な機器を用いて粉砕することにより得られる。【００３４】  粉砕機としてはジョークラッシャー、ジャイレトリクラッシャ、コーンクラッシャなどの圧縮破砕機、カッターミル、シュレッダーなどの剪断粗砕機、ハンマークラッシャーなどの衝撃破砕機、ロールクラッシャなどのロールミル、ディスインテグレーター、ケージミルなどの回転解砕機、コーヒーミルなどのスクリューミル、エッジランナーなどのロール転動ミル、スタンプミルなどの打槌ミル、遠心ローラーミル、ボールベアリングミル、バウルミル、ゼゴミル、オングミルなどのローラーミル、スイングハンマーミル、ピンミル、ケージミル、ターボタイプミル、遠心分級ミルなどの高速回転ミル、転動ボールミル、振動ボールミル、遊星ボールミル、ＣＦミルなどの容器振動ミル、流通管式ミル、撹拌槽式ミル、アニュラー式ミル、気流吸い込み、気流衝突、衝突板衝突、流動層タイプなどのジェットミル、超音波破砕機、などの粉砕機や石うす、乳鉢、などの装置を使って粉砕することができる。【００３５】  組成物粉砕物は細かいほどよく、平均粒径１ｍｍ以下、好ましくは０．１ｍｍ以下に調製される。
物理的破砕方法に関しては、ビーズミル等の湿式摩砕機等の使用があげられるが、平均粒径が１ｍｍ以下の微粒子化ができる性能のものであればいずれも使用することができる。【００３６】  エボジアミン類を含有する製剤は、本発明の組成物を必要に応じ担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野において知られている任意の方法により製造される。
製剤化する際には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることができる。
剤形が、錠剤、散剤、顆粒剤等の場合には、乳糖、白糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール等の糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシ等の澱粉、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム等の無機物、カンゾウ末、ゲンチアナ末等の植物末等の賦形剤、澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコーン油等の滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルメロース、ゼラチン、澱粉のり液等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤などを添加して、製剤化することができる。【００３７】  剤形がシロップ剤等の液体調製物である場合は、水、蔗糖、ソルビトール、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油等の油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類などを添加して、製剤化することができる。
エボジアミン類を含有する飲食品としては、ジュース、清涼飲料水、茶、乳酸菌飲料、発酵乳、冷菓、バター、チーズ、ヨーグルト、加工乳、脱脂乳等の乳製品、ハム、ソーセージ、ハンバーグ等の畜肉製品、蒲鉾、竹輪、さつま揚げ等の魚肉練り製品、だし巻き、卵豆腐等の卵製品、クッキー、ゼリー、チューインガム、キャンデー、スナック菓子等の菓子類、パン、麺、漬物類、燻製品、干物、佃煮、塩蔵品、スープ類、調味料等があげられる。【００３８】  エボジアミン類を含有する飼料としては、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類等の動物に対する飼料であれば、例えばイヌ、ネコ、ウサギ、ネズミ等のペット用飼料、ウシ、ブタ等の家畜用飼料、ニワトリ、七面鳥等の家禽用飼料、タイ、ハマチ等の養殖魚用飼料、トカゲ、ワニ、イグアナ等の爬虫類用飼料、カエル等の両生類用飼料等があげられ、穀類、そうこう類、植物性油かす類、動物性飼料原料、その他の飼料原料、生成品等の飼料原料からなる飼料があげられる。【００３９】  以下に、実施例により本発明を説明する。
実施例において用いた超臨界抽出装置および抽出条件を以下に示す。
超臨界抽出装置：三菱化工機社製、抽出槽（容量４Ｌ）抽出は抽出槽圧力３０Ｍｐａ、抽出槽温度４０℃、分離槽圧力４Ｍｐａ、分離槽温度４０℃
攪拌装置：駆動部：スクローラーＳＣＲ−１２０、攪拌羽根：トルネード用攪拌羽根Ｔ−８０、井内盛栄堂社製
【実施例１】
【００４０】超臨界抽出によるエボジアミン類含有組成物の製造（１）
ゴシュユ（乾燥果実：志平商店社製）をフードプロセッサー（ＰＲＯ  ＣＨＥＦ  ＦＯＯＤ  ＰＲＯＣＥＳＳＥＲ，ＰＳ−３００Ｓ：中部工機（株）社製）を用いて粉砕し、得られた粗粉末１２２２．４ｇを超臨界抽出装置の抽出槽に充填した。２時間で積算量として１３．０ｋｇの二酸化炭素を循環させて抽出を行った。その結果、抽出槽から抽出残渣１１８２．４ｇ（製品１）を得た。この残渣は不快臭、不快な味が低減されていた。
一方、分離槽から不快臭の強い抽出物３３．２３ｇ（参考品１）を得た。
【実施例２】
【００４１】超臨界抽出によるエボジアミン類含有組成物の製造（２）
ゴシュユ（志平商店社製）をフードプロセッサーを用いて粉砕し、得られた粗粉末１２２２．４ｇを超臨界抽出装置の抽出槽に充填した。２時間で積算量として１２．０ｋｇの二酸化炭素を循環させつつ、２時間で積算量として１２４４ｇ（超臨界流体の約１０重量％）のエタノールを添加して抽出を行った。その結果、抽出槽から不快臭の低減された抽出残渣１１３８．５ｇ（製品２）を得た。一方、分離槽から得られた混合物を減圧乾固し、不快臭の強い抽出物８７．４９ｇ（参考品２）を得た。
【実施例３】
【００４２】超臨界抽出によるエボジアミン類含有組成物の製造（３）
ゴシュユ（志平商店社製）をロータースピードミル（ｐｕｌｖｅｒｉｓｅｔｔｅ  １４、Ｆｒｉｔｓｃｈ社製、２ｍｍのメッシュ装着）を用いて粉砕した。得られた微粉末１０９３．３ｇを超臨界抽出装置の抽出槽に充填し、２時間で積算量として１１．６ｋｇの二酸化炭素を循環させつつ、積算量１７４０ｇ（超臨界流体の約１５重量％）のエタノールおよび１９７．２ｇ（超臨界流体の約１．７重量％）の水を添加する以外は、実施例２と同一の操作を繰り返した。その結果、分離槽から抽出物１２２．９８ｇ（製品３）および抽出槽から抽出残渣１０５３．２ｇを得た。
【実施例４】
【００４３】超臨界抽出によるエボジアミン類含有組成物の製造（４）
ゴシュユ（志平商店社製）をロータースピードミル（２ｍｍメッシュ装着）を用いて粉砕し、得られた微粉末１０５２．３ｇを超臨界抽出装置の抽出槽に充填した。２時間で積算量として１１．５ｋｇの二酸化炭素を循環させつつ、２時間で積算量として１１６２ｇ（超臨界流体の約１０重量％）のエタノールを添加して抽出を行い、分離槽から抽出液を槽外へ排出した。得られた抽出残渣についてさらに、２時間で積算量として１１．４ｋｇの二酸化炭素を循環させつつ、２時間で積算量として２１６３ｇ（超臨界流体の約１９重量％）のエタノールを添加して抽出を行い、得られた抽出物を減圧乾固して８８．５４ｇの抽出物（製品４）を得た。また、抽出残渣１０１６．２ｇを得た。
【実施例５】
【００４４】溶媒抽出によるエボジアミン類含有組成物の製造（１）
ブレンダーで破砕したゴシュユ（紀伊国屋ゴシュユＭ、紀伊国屋漢方薬局（株）社製）粉末１ｋｇにヘキサン１８Ｌを加え、攪拌装置を用いて撹拌しながら超音波発生器中約６５℃で３時間抽出した。１時間放置した後、混合物をろ過し、抽出液１６．６Ｌと抽出残渣８９５．７３ｇ（乾燥重量）を得た。【００４５】  得られた抽出残渣に蒸留水２０Ｌを加え、スクローラーを用いて、約６５℃で１２時間撹拌した後、更に撹拌しながら超音波発生器で３時間抽出し、１時間放置した。得られた混合物を濾過し、５０００×ｇで５分間遠心分離して、抽出液１５．７Ｌと抽出残渣とを得た。得られた抽出残渣について、この操作をもう一度繰り返し、得られた抽出残渣を凍結乾燥して、４２２．６ｇの粉末（製品５）を得た。この粉末は多少辛味がありピリピリとした持続性の刺激を有するが、えぐ味はほんの僅かで苦味、不快臭はほとんど無かった。
【実施例６】
【００４６】溶媒抽出によるエボジアミン類含有組成物の製造（２）
ゴシュユ（紀伊国屋漢方薬局（株）社製）１２００．３４ｇにヘキサン１８Ｌを加え、スクローラーで撹拌しながら超音波発生器中約６５℃で３時間抽出し、数時間静置した。得られた混合物を濾過し抽出残渣１１１８．６ｇ（乾燥重量）を得た。該抽出残渣にヘキサン１８Ｌを加え、上記操作をもう一度繰り返して、抽出残渣１０９４．０ｇ（乾燥重量）を得た。【００４７】  得られた抽出残渣に蒸留水２０Ｌを加え、混合物をスクローラーで１２時間撹拌した後、更に撹拌しながら超音波発生器で３時間抽出し、２時間放置した。混合物を濾過後、５０００×ｇで５分間遠心分離し抽出残渣を得た。得られた抽出残渣に蒸留水２０Ｌを加え、前記操作をもう一度繰り返した。得られた抽出残渣を凍結乾燥することにより、６６８．７ｇの粉末を得た。
この粉末は、多少辛味がありピリピリとした持続性の刺激を有するが、えぐ味はほんの僅かで苦味、不快臭はほとんど無かった。
この粉末を、ロータースピードミル（０．５ｍｍのメッシュ装着）を使用して微粉末化し、製品６を得た。
【実施例７】
【００４８】溶媒抽出によるエボジアミン類含有組成物の製造（３）
実施例６で得られた製品６の微粉末５００ｇにエタノール９Ｌを加え、スクローラーで撹拌しながら超音波発生器中約６５℃で３時間抽出し、数時間静置した後、混合物を遠心分離した。得られた残渣について同様の操作を２回繰り返して、得られた抽出液を減圧下で濃縮乾固し、４４．０２ｇの不快臭の低減した粘稠な液体（製品７）を得た。
製品７を高速液体クロマトグラフィーで定量したところ、エボジアミン含有量は８．８２％、ルタエカルピン含有量は３．６７％であった。
【実施例８】
【００４９】溶媒抽出によるエボジアミン類含有組成物の製造（４）
実施例７で得られた粘稠な液体２０ｇにエタノール１００ｍＬおよびマルトデキストリン（Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ）４０ｇを加え、得られた懸濁液を減圧下で濃縮乾固した後、乾固物を粉砕して、取り扱いの良好な微粉末（製品８）６０ｇを得た。
【実施例９】
【００５０】  以下のように参考例１〜３を行い、参考品３〜５を得た。
参考例１
ゴシュユ（志平商店社製）をロータースピードミル（０．５ｍｍのメッシュ装着）を使用して微粉末化し、参考品３を得た。
参考例２
ゴシュユ（紀伊国屋漢方薬局（株）社製）をロータースピードミル（２ｍｍのメッシュ装着）を用いて粉砕し、得られた微粉末１０ｇに０．１Ｎ塩酸を含有する７５％エタノール６００ｍｌを加え、３０分間攪拌し、さらに３０分間超音波処理した。混合物を濾過し、濾液を減圧乾固して、２．９８ｇの粉末（参考品４）を得た。
この粉末は、辛味、苦味、えぐ味が強く、不快臭も強く、食用に適するものではなかった。【００５１】参考例３
ゴシュユ（紀伊国屋漢方薬局（株）社製）（未破砕物）１０００ｇにエタノール１８Ｌを加え、スクローラーで撹拌しながら、超音波発生器中約６５℃で３時間抽出した。数時間静置した後、混合物を濾過し、抽出液と抽出残渣とを得た。抽出残渣について同様の操作をもう一度繰り返し、得られた抽出液を合せて減圧乾固して１１０．５５ｇの乾固物（参考品５）を得た。
【実施例１０】
【００５２】  実施例１および２記載の参考品１および２、実施例３記載の製品３、実施例４記載の製品４、ならびに実施例９の参考例２記載の参考品４の各１０ｍｇをジメチルスルフォキサイド（ＤＭＳＯ）１ｍＬに溶解後、エボジアミン（ＥＶＯ）およびルタエカルピン（ＲＵＴ）の含有量を高速液体クロマトグラフィーで定量し、エボジアミン類の抽出物中含有量および原末からの回収率を算出した。原末からの回収率は、参考品４における回収率を１００％として算出した。結果を表１に示す。【００５３】  なお、高速液体クロマトグラフィーによる測定は、カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ−３０３  ２５０ｍｍ×４．６ｍｍＩ．Ｄ．、カラム温度：４０℃、流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ、移動相：アセトニトリル／水（５０／５０）、検出は、ＵＶ２５４ｎｍの条件で行った。
【表１】
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超臨界抽出において、エントレーナーとしてエタノールを超臨界流体の１５重量％以上添加した場合にはエボジアミン類が抽出されたが、エタノールの添加が１０％以下の場合にはエボジアミン類は殆ど抽出されなかった。
【実施例１１】
【００５４】  実施例６記載の製品６の製造に用いた原料、製造過程におけるヘキサン抽出液、熱水抽出液および製品６のエボジアミン類含有量を高速液体クロマトグラフィーで定量した。結果を表２に示す。
【表２】
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エボジアミン類はヘキサンや熱水ではほとんど抽出されなかった。
【実施例１２】
【００５５】  実施例１および２で得られた参考品１および２、ならびに実施例４で得られた製品４について、えぐ味、苦み、辛味、不快臭について、５人のパネラーによる官能評価を行なった。官能評価試験は、各製品を０．５％メチルセルロース４００水溶液中に１．５、０．１５、０．０１５％となるように懸濁・溶解した溶液を用意し、低濃度側から順に２０μＬを口腔内に１０秒間含んだ後、５段階評価を行なった。その結果を表３に示す。数値は評価点の平均を示す。なお、味臭の評価点は次のように定めた。｛０点；全く感じない、１点；殆ど感じない、２点；やや感じる、３点；強く感じる、４点；非常に強く感じる。｝
結果を表３に示す。なお、評価は５名のパネラーの平均値を示す。
【表３】
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製品４の評点は参考品１および２と比較して、試験した製品の濃度０．０１５〜１．５％の全範囲において、官能評価合計点が３．０〜６．０低い値を示した。従って、本発明の製品の不快臭等が低減されていることは明らかである。【００５６】  実施例７で得られた製品７および実施例９の参考例３で得られた参考品５についても、上記と同様の試験を行った。結果を表４に示す。
【表４】
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製品７（ヘキサン・水抽出処理残さのエタノール抽出物）は、参考例５の参考品５（ヘキサン・水抽出未処理ゴシュユのエタノール抽出物）に比べて、試験した濃度０．０１５〜１．５％の全範囲において官能評価合計点が３．６〜７点低い値を示した。従って、本発明品は不快な味や臭が低減されていることは明らかである。
【実施例１３】
【００５７】  実施例６で得られた製品６（本発明の不快な味や臭低減ゴシュユ微粉末）の不快な味や臭低減効果を、マウスの摂食嗜好性として評価した。
製品６を標準粉末飼料（ＣＥ−２、日本クレア社製）に１．５重量％の割合で混合した飼料を、２４時間絶食させた６週齢、雄のｄｄＹマウス５頭に摂取させ、その後２４時間の摂食量を測定した。【００５８】  同様に、標準飼料または標準飼料に参考例１で得られた参考品３（不快な味や臭低減処理を施す前のゴシュユ微粉末）を１．５％含有する飼料を、２４時間絶食させた６週齢、雄のｄｄＹマウス５頭に摂取させて、その後２４時間の摂食量を測定した。その結果を表５に示す。
【表５】
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参考品３は、マウスが味と臭いを忌避するため、その摂食量が有意に低下したが、製品６はマウスが忌避することなく標準飼料と同等量を摂食した。
【実施例１４】
【００５９】  実施例７で得られた製品７（不快な味や臭の低減したゴシュユのエタノール抽出物）の液体の毒性低減効果を、マウスの腹腔内単回投与による急性毒性試験で評価した。製品７の液体２ｇを、２５ｍｌの溶剤（エタノール：Ｔｗｅｅｎ８０：水＝１：１：８）に溶解し、これを０．１２５ｇ／ｋｇ体重から２．０ｇ／ｋｇ体重の用量で、体重約３０ｇの雄のｄｄＹマウス１群６頭に投与し、その後１週間の死亡頭数を計測した。対照として参考品５（不快な味や臭の低減未処理ゴシュユのエタノール抽出物）について同様に試験した。その結果を表６に示す。
【表６】
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製品７を投与したマウス群では、参考品５を投与したマウス群に比べ、顕著に５０％致死量が減少していた。【００６０】  なお、経口投与では４．０ｇ／ｋｇ体重まで投与したが、いずれの抽出物においても死亡例は認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００６１】  えぐ味、苦味、辛味、不快臭、毒性物質等が低減または除去された呈味性の優れたエボジアミン類含有組成物およびその製造方法を提供することができる。
【国際調査報告】
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