(57)【要約】  本発明は、これまで医薬品や漢方薬、甘味料などの食品添加物や健康食品として経口摂取あるいは充分な食経験があるカンゾウ又はカンゾウ抽出物またはそれに含まれるグラブリジン、グラブロール、グラブレン、および４’−Ｏ−メチルグラブリジンにヒト及び豚の膵臓由来リパーゼ、およびコレステロールエステラーゼを阻害する作用等があることを見出した。またそれを含む餌を与えることにより、実験動物の肥満を抑制し、また中性脂肪やコレステロールを糞中に多く排泄させ、体内への吸収を抑制していることを証明した。これにより、これまで多く用いられてきた食物繊維配合組成物とは全く別のリパーゼ阻害および／またはコレステロールエステラーゼ阻害に基づく中性脂肪及びコレステロール吸収抑制性組成物及び肥満抑性組成物の供給を可能にした。【特許請求の範囲】
【請求項１】
グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれる１種以上の化合物、もしくはその塩、そのエステル、またはその配糖体を有効成分とするリパーゼ阻害剤。
【請求項２】
グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれる１種以上の化合物、もしくはその塩、そのエステル、またはその配糖体を有効成分とする中性脂肪吸収阻害剤。
【請求項３】
グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれる少なくとも１種以上の化合物、もしくはその塩、そのエステル、またはその配糖体を有効成分とする、コレステロールエステラーゼ阻害剤。
【請求項４】
グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれる少なくとも１種以上の化合物、もしくはその塩、そのエステル、またはその配糖体を有効成分とする、コレステロールまたはコレステロールエステルの吸収阻害剤。
【請求項５】
グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれる１種以上の化合物、もしくはその塩、そのエステル、またはその配糖体を有効成分とする肥満予防剤または肥満処置剤。
【請求項６】
前記１種以上の化合物、もしくはその塩、そのエステル、またはその配糖体は、カンゾウ属（Glycyrrhiza）植物材料、または当該植物材料の溶媒抽出物から得られる、請求項１から５のいずれかの剤。
【請求項７】
該溶媒がエタノールを含む、請求項６の剤。
【請求項８】
前記カンゾウ属植物材料がグラブラ（glabra）種である請求項６の剤。
【請求項９】
前記カンゾウ属植物がウラレンシス（uralensis）種である請求項６の剤。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれかの剤と飲食用に許容される担体とを含む、飲食用組成物。
【請求項１１】
請求項１から９のいずれかの剤と医薬用に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１から９のいずれかの剤と飼料用またはペットフード用に許容される担体とを含む、飼料用組成物またはペットフード用組成物。
【請求項１３】
請求項１０から１２のいずれかの組成物を含む製剤。
【請求項１４】
カンゾウ属（Glycyrrhiza）植物材料を溶媒と接触させる工程を含む、請求項１から９のいずれかの剤の製造方法。
【請求項１５】
請求項１から９のいずれかの剤、請求項１０から１２のいずれかの組成物、または請求項１３の製剤のそれぞれの有効量を動物に適用することにより、肥満を予防または肥満を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リパーゼ阻害剤、コレステロールエステラーゼ阻害剤、中性脂肪吸収抑制剤、コレステロール吸収抑制剤及びコレステロールエステル吸収抑制剤、肥満予防剤、肥満処置剤、並びに、それらの作用を有する食品、医薬品、ペットフード又は飼料等に応用可能な組成物、並びにそれらの製法方法に関する。
【関連出願の相互参照】
【０００２】
日本国特許出願２００４−１４３２１０号（２００４年５月１３日出願）および日本国特許出願２００４−２７１５６７（２００４年９月１７日出願）の明細書、請求の範囲、図面および要約を含む全開示内容は、これら全開示内容を参照することによって本出願に合体される。
【背景技術】
【０００３】
肥満は、生活習慣病すなわち、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などの原因と言われる。これらは、やがて動脈硬化症などの血管病を引き起こすマルチプル・リスク・ファクター症候群とも言われている。一方、消費者においては、ダイエットに対する関心は高い反面、脂肪分やコレステロールの多い肉類等を食する機会は以前より増加しており、そのような食事への嗜好は捨てがたいのが現実である。【０００４】
中性脂肪分の多い食事をすると必然的に多量の中性脂肪が体内に吸収されて肥満の原因になってしまうため、中性脂肪の吸収を抑える効果を謳った健康食品も登場してきている。現在、これらの中性脂肪吸収抑制効果を示す成分の本体は、海草由来や穀物由来の食物繊維であることが多い。それらの食物繊維を含む健康食品は、繊維質の中に脂肪を包み込むことにより小腸上皮からの吸収率を低下させ、糞と共に対外へ排泄される割合を増やすという原理に基づいている。【０００５】
その他、中性脂肪の吸収を抑制するものとして、膵臓から分泌されるリパーゼを阻害する物質がある。膵臓リパーゼは、主に十二指腸内で中性脂肪（トリグリセライド）を２−モノアシルグリセロールと脂肪酸に加水分解する。その加水分解物は胆汁やリン脂質とミセルを形成し、小腸上皮細胞から吸収される。したがって、この膵臓リパーゼを阻害する物質は、上述の食物繊維とは違ったメカニズムで中性脂肪の吸収を抑制することが可能である。実際に欧米ではオルリスタット（製品名：XENICAL; Hoffman-La Roche社）がこのメカニズムに基づく肥満抑制用医薬として使用されている。【０００６】
また、リパーゼ阻害活性のある食品として、キチン・キトサンや植物ステロール類（特許文献１）、ペクチン（特許文献２）、大豆蛋白（非特許文献１）、ホスファチジルコリン（非特許文献２）などの他、様々な植物や野菜、茶などの抽出物（特許文献３、４、５、６）や抽出物中の特定化合物（特許文献７）などが報告されている。しかし、それらの食品は、リパーゼ阻害活性が不十分であるために明確な効果を発揮するには多量の摂取が必要であり、また、食品として長く摂取したときの安全性が未知であるなどの課題を有している。【０００７】
一方、コレステロールは、その血中濃度の上昇と比例して脳卒中、心臓病、癌などの罹患率の増加をもたらす。血中のコレステロール、特に悪玉といわれるＬＤＬ（low-density lipoprotein）コレステロールの濃度が高くなると、それらが酸化されて動脈硬化を引き起こすと恐れられている。特に消費者による肉や卵、乳製品の摂取量が増加していることと相俟って、食餌からのコレステロール吸収を抑える効果を謳った健康食品も登場してきている。健康食品分野でコレステロール吸収抑制効果を示す成分としては、大豆たんぱく質、りん脂質結合大豆ペプチド、植物ステロールエステル、サイリウム種子由来食物繊維、低分子アルギン酸ナトリウム、キトサンなどが知られている（非特許文献３）。これらの成分は、腸内でコレステロールと結合もしくは抱合することでコレステロールの吸収阻害及び排泄促進作用を発現するとされるが、同時に脂溶性ビタミン（ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、Ｋ）やβカロチンなどの吸収も抑制される可能性がある点で問題となり得る。【０００８】
なお、上記のようなコレステロール吸収作用にも上述したリパーゼが関与している可能性を示す報告がなされている（非特許文献４、５）。その他、リパーゼと同様に膵臓から小腸上部に分泌されるコレステロールエステラーゼ（EC 3.1.1.13）が、小腸からのコレステロールの吸収に大きく関与するという報告がなされており、その阻害剤の開発も行われている（非特許文献６、７）。【０００９】
最近、カンゾウから得られる所定の抽出物が、マルチプル・リスク・ファクター症候群の予防及び／又は改善に有用であることが見出されている。カンゾウはマメ科カンゾウ属（Glycyrrhiza属）の植物であり、古くから漢方薬や医薬として潰瘍、肝炎などに対し服用されてきおり、また食品添加物（例えば甘味料）として使用されてきた食経験が豊富かつ安全な食材でもある。いずれの品種にも親水性成分であるグリチルリチン（グリチルリチン酸）のほか、疎水性成分のフラボノイドも多く含まれている。特許文献８は、カンゾウから得られる抽出物のうち、カンゾウフラボノイドを多く含み、かつ、グリチルリチン含量が極微量であるカンゾウ疎水性抽出物が、マルチプル・リスク・ファクター症候群の予防及び／又は改善に有用である点を開示している（特許文献８）。【００１０】
さらに、特許文献９は、このカンゾウ疎水性抽出物がＰＰＡＲγリガンド活性を有し、その活性成分はフラボノイドであることを開示している（特許文献９）。具体的には、同文献では、Ｇ．グラブラ由来の抽出物に含有される特徴的なフラボノイドであるグラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢが高いＰＰＡＲγリガンド活性を有している点を開示している。【００１１】
一方、特許文献１０、１１は、化粧水や養毛剤の発明において、所定のカンゾウ抽出物がリパーゼ阻害効果を有する点を開示している（特許文献１０、１１）。また、特許文献１２は、所定のカンゾウ抽出物が血清総コレステロール濃度およびＬＤＬ濃度を低下させる点を開示している（特許文献１２）。ただし、同文献においては、食事由来のコレステロール等の吸収抑制作用があるか否かは不明である。
【特許文献１】特開２００３−２４６７４６
【特許文献２】特開２００３−１９９５３４
【特許文献３】特開平９−１４３０７０
【特許文献４】特開平８−２６８８８２
【特許文献５】特開２００２−５３４８４
【特許文献６】特開２００４−２２５４
【特許文献７】特開平９−４０６８９
【特許文献８】ＷＯ０２／４７６９９
【特許文献９】特願２００２−２２６４８６
【特許文献１０】特開２０００−２２６３２４
【特許文献１１】特開平０９−２４１１３１
【特許文献１２】特開２００２−１１４６９５
【非特許文献１】Agric. Biol. Chem., 38, 97-101 (1974)
【非特許文献２】Agric. Biol. Chem., 40, 889-897 (1976)
【非特許文献３】FOODS & FOOD INGREDIENTS JOURNAL OF JAPAN, 209(7), 559-567 (2004)
【非特許文献４】Biochem. J., 339, 615-620 (1999)
【非特許文献５】J. Biol. Chem., 278(44), 42899-42905 (2003)
【非特許文献６】BMC Pharmacology, (2004) ,4, 1-9
【非特許文献７】J. Biol. Chem., 227(27), 24006-24013 (2002)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の課題は、安全かつ効果的なリパーゼ阻害剤、コレステロールエステラーゼ阻害剤、中性脂肪吸収抑制剤、コレステロール吸収抑制剤及びコレステロールエステル吸収抑制剤の提供である。また、これらを含有する肥満予防剤、肥満処置剤、並びに、それらの作用を有する食品、医薬品、ペットフード又は飼料等に応用可能な組成物、並びにそれらの製法方法の提供である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、多種の化合物を鋭意検討した結果、グリブリジン、グラブレン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジンがリパーゼ阻害作用および及びコレステロールエステラーゼ阻害作用を有することを見いだした。これらグラブリジン以下４成分は、カンゾウ属植物材料中に存在するから、本発明の目的のために、カンゾウ属植物材料そのまま、またはそこから抽出して使用することができる。類似化合物は同様の作用を有しうる。【００１４】
本発明者は、そのカンゾウ抽出物を含む組成物を高脂肪食で飼育しているマウス（またはラット）に経口摂取たところ、以下のような驚くべき結果が得られた：
（ａ）体重増加が実際に抑制される、
（ｂ）そのマウスの糞中に排泄された脂肪の分析の結果、中性脂肪、脂肪酸のほか、コレステロール、コレステロールエステル量（これらすべてを以後、適宜「脂肪」という言葉で総称する）が、カンゾウ抽出物を摂取させなかったマウスおよびラットと比較して実際に増加している、
（ｃ）高脂肪食と共にカンゾウ抽出物を経口摂取させたラットの数時間後の血中トリグリセライド濃度が、対照と比較して顕著に減少する。【００１５】
上記内容を含む検討の結果、本発明は、リパーゼ阻害剤、コレステロールエステラーゼ阻害剤、中性脂肪、コレステロール及びコレステロールエステル吸収抑制剤、肥満予防剤、肥満処置剤、並びに、それらの作用を有する食品、医薬品、ペットフード又は飼料等に応用可能な組成物、並びにそれらの製法方法等を提供する。また、本発明は、上記組成物を含む製剤、例えば経口摂取用製剤を提供する。【００１６】
即ち、本発明は、（１）グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれる１種以上の化合物、もしくはその塩、そのエステル、またはその配糖体を有効成分とするリパーゼ阻害剤、コレステロールエステラーゼ阻害剤、中性脂肪吸収抑制剤、コレステロール吸収抑制剤、コレステロールエステル吸収抑制剤、肥満予防剤、並びに、肥満処置剤である。【００１７】
また、本発明は、上記の剤を含む飲食用組成物、医薬組成物、飼料用組成物、並びに、ペットフード用組成物でもある。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のリパーゼ阻害剤、コレステロールエステラーゼ阻害剤、コレステロール吸収抑制剤等を使用することにより、中性脂肪および／またはコレステロール等の吸収を抑制し、例えばヒトやヒト以外の動物（ヒトを除く哺乳動物を含む）の肥満抑制、生活習慣病の予防等に効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ヒト及びブタの膵臓由来リパーゼに対する阻害活性の結果を示すグラフである。
【図２】糞中に排泄された脂肪量等の測定結果を示すグラフである。
【図３】脂質エマルジョン投与後の血中トリグリセライド濃度の推移の測定結果を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
１．カンゾウ属植物材料
本発明のリパーゼ阻害剤、コレステロールエステラーゼ阻害剤、中性脂肪吸収抑制剤、コレステロール吸収抑制剤及びコレステロールエステル吸収抑制剤、肥満予防剤、肥満処置剤、並びにそれらの作用を有する組成物は、グリキルリーザ・グラブラ（Glycyrrhiza glabra）、Ｇ．ウラレンシス（G. uralensis）、Ｇ．インフラータ（G. inflata）などのカンゾウ属（Glycyrrhiza）植物材料から得られ得る。カンゾウと呼ばれる植物体としては、限定されないが、グリキルリーザ・グラブラ（Glycyrrhiza glabra）、Ｇ．ウラレンシス（G. uralensis）、Ｇ．インフラータ（G. inflata）およびこれらまたはその他との交配種などが挙げられる。カンゾウ属植物材料は好ましくはＧ．グラブラであり得る。カンゾウ属植物からの抽出物を本発明の目的のために好適に使用しうる。【００２１】
該植物材料または抽出物は、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン、ヒスパグラブリジンＢのうちの１種類以上の化合物またはその塩、エステルもしくは配糖体を含有し、膵臓由来リパーゼなどのリパーゼを阻害する活性、コレステロールエステラーゼを阻害する活性、肥満抑制作用、または脂肪吸収抑制作用等を有する。本発明にしたがって、これらのガンゾウ属植物材料またはその抽出物を、リパーゼ阻害剤、コレステロールエステラーゼ阻害剤、中性脂肪吸収抑制剤、コレステロール吸収抑制剤、コレステロールエステル吸収抑制剤、肥満予防剤、または肥満処置剤等（以下、適宜「リパーゼ阻害剤等」と記載する）として使用できる。それらの剤は、さらに、食品添加物等として利用しる。コレステロールエステルは、一般的に、肉類や乳製品に多く含まれ、コレステロール分子中の３位のＯＨ基にオレイン酸その他の脂肪酸がエステル結合したものである。【００２２】
２．化合物
本発明で使用されるグラブリジン（glabridin）、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン（3'-hydroxyl-4'-O-methylglabridin）、４’−Ｏ−メチルグラブリジン（4'-O-methylglabridin）、またはヒスパグラブリジンＢ（hyspaglabridin B）はイソフラバン（isoflavan）に分類されるフラボノイドであり、下記一般式（1）にて表される化合物である。【００２３】
【化１】
2005110400.tif 000002
【００２４】
グラブリジンはＲ１＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＨ、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジンはＲ１＝ＯＨ、Ｒ２＝ＯＣＨ3、４’−Ｏ−メチルグラブリジンはＲ１＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＣＨ3、ヒスパグラブリジンＢはＲ１〜Ｒ２が−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ3）2−Ｏ−で六員環を構成する。【００２５】
本発明で使用されるグラブレン（glabrene）は、イソフラブ−３−エン（isoflav-3-ene）に分類されるフラボノイドであり、下記一般式（２）で表される化合物である。【００２６】
【化２】
2005110400.tif 000003
【００２７】
本発明で使用されるグラブロール（glabrol）は、フラバノン（flavanone）に分類されるフラボノイドであり、下記一般式（３）で表される化合物である。【００２８】
【化３】
2005110400.tif 000004
【００２９】
これらの化合物の１種を、または２種以上混合して使用しうる。【００３０】
本発明では、上記化合物の脂肪酸エステルなどのエステルも好適に使用しうる。該エステルは、例えば飲食用、医薬用、医薬部外品用、化粧品用、美容用、飼料用またはペットフード用等（以下、適宜「飲食用等」と記載する）に好適な任意の有機酸または無機酸とで形成することができる。使用する酸としては、例えば塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、またはリン酸の他、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸などの長鎖脂肪酸、および酢酸、酪酸などの短鎖または炭素数１０前後の中鎖脂肪酸が使用できる。【００３１】
本発明では、上記化合物の塩も好適に使用しうる。例えば、上記化合物が酸性部分を有する場合、飲食用等に許容される上記化合物の塩は、アルカリ金属塩、例えばナトリウム、カリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムまたはマグネシウム塩；および好適な有機配位子、例えば第四級アンモニウム塩とで形成される塩を含む。【００３２】
本発明では、上記化合物の１または２以上の水酸基を介して糖部分に結合されたその配糖体も好適に使用しうる。該配糖体の糖部分は、任意の糖であり得る。該糖部分は限定されないが、単糖類、二糖類、三糖類、オリゴ糖類および多糖類を含みうる。【００３３】
上記化合物は、少なくとも１つの不斉中心を有する場合、それらはエナンチオマーとして存在し得る。上記化合物が少なくとも２以上の不斉中心を有する場合、それらは、ジアステレオ異性体として存在し得る。そのような異性体およびその任意の割合の混合物は、本発明の範囲内に包含される。上記化合物は必要により置換されていてもよい。【００３４】
３．化合物の製造方法
これら化合物を製造する方法は、特に限定されず、グリキルリーザ・グラブラ（Glycyrrhiza glabra）、Ｇ．ウラレンシス（G. uralensis）、Ｇ．インフラータ（G. inflata）などのカンゾウ属植物材料、好ましくはＧ．グラブラ植物材料を、溶媒、好ましくは疎水性または両親媒性、より好ましくは両親媒性の有機または無機溶媒と接触させることによって、当業者に周知の方法（例えば浸漬、または混合）により抽出することを含む。【００３５】
溶媒としては、以下に限定されないが、水、中鎖脂肪酸トリグリセリドなどの油脂、ジメチルフォルムアミド、アセトン、ジメチルスルフォキシド、Ｎ−メチル−２−ピロリドンまたはアルコール性溶媒、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノールまたはｔｅｒｔ−ブタノール、またはエーテル溶媒、例えば、テトラヒドロフランまたは１，４−ジオキサン（０．５から１５容量％、好ましくは２容量％）またはエステル溶媒、例えば、酢酸エチルまたは炭化水素溶媒、例えば、オクタン、ヘキサン、トルエンまたはキシレン、液化炭酸ガスまたは油脂からなる群より選ばれる１種または２種以上の溶媒を使用することができる。【００３６】
簡便には、油脂、メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、液化炭酸ガス等からなる群より選ばれる１または２種以上の溶媒を使用する。抽出温度は、一般に約−２０〜１００℃、普通約１〜８０℃、好ましくは約２０〜６０℃が好適であり得る。抽出時間は普通約０．１時間〜１ヶ月、好ましくは約０．５時間〜７日間が好適であり得る。【００３７】
リパーゼ阻害剤等として、上記の方法等による抽出物を粗抽出物のまま使用してもよいが、さらにカラム処理、脱臭処理、脱色処理などにより粗精製又は精製したものを使用してもよい。もちろん、カンゾウ属植物材料をそのままリパーゼ阻害剤等として使用することもできる。該材料は、植物体の各種部分例えば全草、花、葉、根（根茎）などを使用できる。該材料を、必要に応じて乾燥、裁断、ボールミル、超音波処理、ホモジナイザーなどによって粉砕しうる。【００３８】
勿論、その他植物等の天然由来、化学合成あるいは培養細胞などにより生合成した化合物のいずれも、本発明のリパーゼ阻害剤等として使用することができる。また、該化合物は、精製したものを使用することができるが、飲食品等として不適当な不純物を含有しない限り粗精製したものを使用することもできる。【００３９】
４．カンゾウ抽出物
本発明のカンゾウ抽出物は、自然蒸発、減圧蒸発、加熱濃縮等の当業者に周知の方法により溶媒を除去することによって濃縮した後、濃縮された抽出物（例えば固形物、粉末調整品）とすることができる。濃縮物は、有効成分が濃縮されているため、一般に多量摂取に適している。本発明のカンゾウ抽出物は、液体クロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣで測定した場合にその固形分基準で、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれる少なくとも１種以上の化合物またはその塩、エステルもしくは配糖体を、遊離化合物の１種または２種以上の総量として約１重量％以上、好ましくは約５重量％以上、より好ましくは約１０重量％以上、もっとも好ましくは約１５重量％以上含有してもよい（上限は約９９％重量以下）。【００４０】
５．組成物
本発明の組成物は、飲食用等に許容される担体を含む。それらの担体は、例えば経口、経腸、経皮、皮下、または非経腸投与のため好適な任意の不活性、有機または無機材料であり得、限定されないが水、ゼラチン、アラビアガム、ラクトース、微結晶性セルロース、スターチ、ナトリウムスターチグリコレート、燐酸水素カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、コロイド性二酸化ケイ素、などであることができる。そのような組成物はまた、他の薬理学的活性な剤、および慣行の添加物、例えば安定剤、湿潤剤、乳化剤、香味剤、緩衝剤、などを含みうる。本発明の組成物は、組成物全体を基準とした場合に、上記化合物の総和またはカンゾウ抽出物として約０．００１から９９．９９９重量％、０．０１から９９．９９重量％、または０．１から９９．９重量％含む。飲食用担体は、当業者に周知の任意の食品または食品添加物であり得る。食品添加物は食品衛生法上許容される任意の食品添加物が好ましい。【００４１】
６．リパーゼ阻害活性
本発明において、リパーゼ阻害活性を有することを確認するには、例えば、リパーゼ標品とその基質であるトリグリセライドまたはその類似物質でリパーゼの基質となり得る化合物（例えば４−メチルウンベリフェロンのオレイン酸エステル）を、被検サンプルと共に酵素反応に好適な緩衝液（例えばMcllvain buffer）中で一定時間反応させ、反応後の分解物を比色法や蛍光法、酵素法、液体又はガスクロマトグラフィー、滴定法等で定量することで可能である。【００４２】
７．コレステロールエステラーゼ阻害活性
本発明において、コレステロールエステラーゼ阻害活性を有することを確認するには、例えば、コレステロールエステラーゼ標品とその基質となりうる化合物例えばコレステロールの脂肪酸エステルやその類似物質（例えばコレステリルピレニルフォスフェート）を、被検サンプルと共に酵素反応に好適な緩衝液（例えば胆汁酸塩を含んだリン酸緩衝液）中で一定時間反応させ、反応後の分解物を比色法や蛍光法、酵素法、液体又はガスクロマトグラフィー、滴定法等で定量することで可能である。またコレステロールエステラーゼという酵素はかなり幅広い基質に作用することから、コレステロールエステル以外にも（非特許文献７）に記載されているようなp-Nitrophenyl butyrateでも、またトリアシルグリセロールやリン脂質やそれらの類縁体などを基質として測定することも可能である。【００４３】
８．脂肪吸収抑制、コレステロール吸収抑制等
脂肪吸収抑制効果の確認は、例えば、高脂肪食で動物（マウス、ラットなど）を飼育し、その餌中に被検サンプルを混入させて一定期間飼育した後の体重や体脂肪量を測定する方法、および／または糞中に残存する脂質量を測定する方法で可能である。糞の他に血液や臓器中の脂質量の蓄積を測定することでも確認しうる。コレステロール吸収抑制効果またはコレステロールエステル吸収抑制効果の確認は、脂肪吸収抑制効果の確認と同様の方法において、コレステロール量またはコレステロールエステル量を測定する方法によって確認しうる。サンプルの与え方は飲料水中に混入させても良いし、またゾンデなどを用いて強制的に経口投与しても構わない。また遺伝的肥満モデル動物を普通食で飼育した実験系も考えられるし、ボランティアによるヒトでの試験も可能である。【００４４】
９．製品形態例
本発明の組成物を応用した最終的な製品形態として、例えば、カンゾウ植物材料（例えばカンゾウの粉末または抽出物）をデキストリン粉末や澱粉等と混ぜて粉末体や散剤、顆粒形態にしたり、滑沢剤、結合剤、コーティング剤等を添加して打錠し、錠剤形態にしても良い。カンゾウ植物材料等に対して乳化剤と水とを加えて水溶性剤にすることも可能である。乳化剤としては、例えば高級アルコール類、高級脂肪酸類、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ステアロイル乳酸カルシウム、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステルなどの界面活性剤が挙げられる。【００４５】
本発明のリパーゼ阻害剤等と油脂とを混合した油脂組成物の製品形態としてもよい。グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３'−ヒドロキシ−４'−Ｏ−メチルグラブリジン、４'−Ｏ−メチルグラブリジン、ヒスパグラブリジンＢ、またはカンゾウ抽出物を油脂に溶解する方法は、特に限定されず、通常の撹拌又は混合などの操作により実施できる。該化合物を含む抽出物、あるいは該化合物の粗精製品を用いる場合、該化合物以外の不純物が含まれているため、撹拌又は混合などの操作により該化合物を油脂に溶解した後に、濾過又は遠心分離などの操作により油脂に不溶な不純物を除去することが望ましい。該化合物の精製品を用いる場合、容易に均一な溶液を得ることができる。また、該化合物を含む抽出物、あるいは該化合物の粗精製品を用いる場合、予めエタノールなどの有機溶媒に溶解し、その溶液と油脂を混合した後に、有機溶媒を留去することもできる。【００４６】
中鎖脂肪酸トリグリセリドのような油脂と上記組成物とを調製し、調整した物をカプセル製剤として製剤化してもよい。本発明の組成物を内封する、ソフトカプセル製剤の製品形態としてもよい。ソフトカプセル製剤は、例えば以下のように製造し得る。例えばロータリー式全自動ソフトカプセル 成型機を用いた打ち抜き法、二枚のゼラチンシート間に内容物を入れ金型で両面から圧縮して打ち抜く平板法、または二重ノズルを用いた滴下法（シームレスカプセル等）等を用いて、上記組成物をカプセル皮膜に充填し、成型および乾燥することにより、ソフトカプセル製剤を製造できる。【００４７】
前記ソフトカプセルの原料としては、皮膜用には例えばゼラチン、グリセリン、ペクチンを含む。また好ましくは内容物の増粘用に例えば蜜蝋が使用できる。前記ソフトカプセルの形状は、各種の形状、例えばフットボール(ｏｖａｌ)型、長楕円型、チューブ型、球形、フィッシュ型、セルフカット型、等が挙げられる。また、前記ソフトカプセル の大きさは、目的に応じて適宜選定することができる。例えば、カプセル直径は約６ｍｍ〜９ｍｍ、カプセル外皮の厚みは約０．４ｍｍ〜１．２ｍｍ、質量約０．１ｇ〜０．２５ｇであり得る。【００４８】
本発明のソフトカプセル製剤は、上述のリパーゼ阻害効果、および／またはコレステロールまたはそのエステル吸収阻害効果の他、老人、成人、子供および乳幼児のいずれによっても容易に摂取可能であるという利点もある。本発明のソフトカプセル製剤は、食経験が十分な天然素材であるカンゾウまたはカンゾウ抽出物等から製造されるから、副作用が生ずる可能性が低いことが予想される。本発明のソフトカプセル製剤は、携帯に便利であり、および多量または少量でも摂取することが容易である。【００４９】
その他、カンゾウの粉末または抽出物を小麦粉等と混ぜてベーカリー用やテンプラ粉等といった乾燥粉末体としても良いし、また、カンゾウの粉末または抽出物を食用油に溶解させて脂肪吸収低減食用油脂としても良い。また、カンゾウの粉末または抽出物を乳化剤と共にエマルジョン化し、飲料としても良いし，そのエマルジョンを様々な加工用食材と混合してチューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類、アイスクリーム、氷菓などの冷菓類、うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類、蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品、ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料、ハム、スープ、各種レトルト食品、各種冷凍食品、ペットフードや家畜飼料などへも利用することができる。【００５０】
本発明の組成物を応用したその他の例として、皮膚に感染する菌が皮膚表面の皮脂を分解することによって生ずる皮膚トラブルを防ぐ効能を有する剤（例えば抗炎症剤）、またはそれらのいずれかを含む化粧品（例えば保湿剤、美白剤、紫外線防止剤、化粧水、または化粧クリーム）または養毛剤としての応用も可能である。【００５１】
９．化合物等の有効量
本発明において、リパーゼ阻害、コレステロールエステラーゼ阻害、中性脂肪吸収抑制、コレステロール吸収抑制、コレステロールエステル吸収抑制、肥満予防、または肥満処置のために有効な量は、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジンおよびヒスパグラブリジンＢからなる群より選択される１種または２種以上の遊離化合物の総量として、成人一日一人当たり約０．００００１〜６００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．０００１〜６０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．００１〜６ｍｇ／ｋｇ体重、もっとも好ましくは約０．０１〜０．６ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。もっとも、それらの有効な量は、対象動物の年齢、体重、健康、性別、摂取の様式および時間、排出の割合、上記組成物の組み合わせ、および対象の状態の程度などに依存して異なり得るが、当業者周知の方法により実験的または経験的に決定することができる。【００５２】
好ましくは、本発明の組成物は、本発明の抽出物及び／またはグラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれる少なくとも１種以上またはその塩もしくはエステルを、油脂と混合したものであってもよい。油脂は、カンゾウ抽出物をのぞく組成物基準で、約５から１００重量％、好ましくは約２０から１００重量％、より好ましくは約３０から１００重量％、より好ましくは約４０から１００重量％、より好ましくは約５０から１００重量％、より好ましくは約６０から１００重量％より好ましくは約７０から１００重量％、より好ましくは約８０から１００重量％、もっとも好ましくは約９０から１００重量％含まれることができる。【００５３】
本発明で使用される油脂は、中鎖脂肪酸トリグリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステルであって、好ましくは中鎖脂肪酸トリグリセリドを約５０重量％以上、より好ましくは約６０重量％以上、もっとも好ましくは約７０重量％以上含むものである。ここでの中鎖脂肪酸トリグリセリドは、炭素原子数約６〜１２の脂肪酸を構成脂肪酸とし、その脂肪酸の構成比率は特に限定されないが、炭素原子数約８〜１０の脂肪酸の構成比率は、好ましくは約５０重量％以上、より好ましくは約６０重量％、もっとも好ましくは約７０重量％以上である。とりわけ、２０℃での比重が約０．９４〜０．９６、２０℃での粘度が約２３〜２８ｃＰ（センチポアズ）の中鎖脂肪酸トリグリセリドがさらに好ましい。また、中鎖脂肪酸トリグリセリドは、天然由来のものやエステル交換などにより調製したものなど、いずれも使用することができる。【００５４】
また、本発明で使用される油脂は、部分グリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステルであって、好ましくは部分グリセリドを約５０重量％以上、より好ましくは約６０重量％以上、もっとも好ましくは約７０重量％以上含むものである。ここでの部分グリセリドとは、ジグリセリド（１，２−ジアシルグリセロール、１，３−ジアシルグリセロール）又はモノグリセリド（１−モノアシルグリセロール、２−モノアシルグリセロール）であり、いずれを用いても良いし、両者が混合されたものを用いても良いが、加工性の観点からジグリセリドが好ましい。また、部分グリセリドは、天然由来のものやエステル交換などにより調製したものなど、いずれも使用することができる。【００５５】
１０．リパーゼ阻害剤等
本発明は、有効成分としてグラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれる少なくとも１種以上の化合物、そのエステル、塩、または配糖体を含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤、コレステロールエステラーゼ阻害剤、中性脂肪吸収抑制剤、コレステロール吸収抑制剤、コレステロールエステル吸収抑制剤、肥満予防剤、または肥満処置剤等を提供する。【００５６】
前記リパーゼ阻害剤等は、食品添加物として利用してもよい。本発明の組成物およびリパーゼ阻害剤等の由来となってカンゾウは、食品添加物として使用されてきた実績がある。したがって、本発明の上記組成物およびリパーゼ阻害剤等は、飲食等用として大量に摂取する用途にも有効である。【００５７】
１１．製造方法等
本発明は、カンゾウ属（Glycyrrhiza）植物を溶媒と接触させることによって、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれる少なくとも１種以上の化合物、もしくは、そのエステル、その塩、またはその配糖体を抽出する工程を含む、本発明の組成物または剤の製造方法を提供する。必要により、上記化合物、その塩、エステル、もしくは配糖体は相互に変換してもよい。【００５８】
本発明の剤または組成物を哺乳動物を含む動物一般に摂取させる工程を含めることにより、肥満予防方法または肥満処置方法に応用してもよい。そのような動物一般は、肥満予防または肥満処置の必要のある場合に限らず、必要のない場合も含む。本明細書において、肥満の処置は、少なくとも体重の増加が抑制されること、または必要により体重が減少することを意味する。一般に、肥満とは、ＢＭＩ（体格指数、body mass index）が３０以上の場合を意味する。ここで、ＢＭＩは、計算式ＢＭＩ＝体重[m]/(身長[kg])2で求めることができる。本明細書においては、前記ＢＭＩ値を有する肥満及びそれに至らない肥満予備軍、またいわゆる内臓肥満の場合も肥満に含むものとする。
【実施例】
【００５９】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【００６０】
（実施例１）Ｇ．グラブラのエタノール抽出物の調整
Ｇ．グラブラ（アフガニスタン産）の根茎１．５Ｋｇを７．５Ｌのエタノールで４５℃、２時間抽出する操作を２回行った。抽出液を４０℃保温下でエバポレーターで減圧濃縮して６７０ｍｌの濃縮液を得た。そのうち６００ｍｌに活性炭９．７ｇを加え、３時間攪拌後、濾紙で濾過した盧液をエバポレーターで濃縮乾固して、３２．４ｇの活性炭処理抽出物（グラブラ・エタノール抽出物）を得た。残りの７０ｍｌの濃縮液は活性炭処理せずにそのまま濃縮し、３．７ｇの抽出物を得た。【００６１】
（実施例２）グラブラ・エタノール抽出物ＭＣＴオイル溶解物の調製
実施例１の活性炭処理後のグラブラ・エタノール抽出物３０．０ｇと中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）であるアクターＭ−２（理研ビタミン（株）：脂肪酸組成はＣ８：Ｃ１０＝９９：１）５８ｇとを混合して約１時間撹拌した後、吸引ろ過により不溶分を分離することによって、Ｇ．グラブラ抽出物固形分として３０％含有するＭＣＴオイル溶解物８１．５ｇ得た。得られたＭＣＴオイル溶解物をＨＰＬＣ用メタノールに溶解し、下記の条件にてＨＰＬＣ分析を行った結果、ＭＣＴオイル溶解物１ｇあたりにグラブレン、グラブリジン、グラブロール、４’−Ｏ−メチルグラブリジンがそれぞれ６．６ｍｇ、３０．８ｍｇ、１２．６ｍｇ、９．７ｍｇ含まれていた。【００６２】
なお、本発明のソフトカプセル製剤の実施例として、例えば上記ＭＣＴオイル溶解物をロータリー式ソフトカプセル製造装置を用いてゼラチン皮膜に圧入することで、内容量３６０ｍｇのソフトカプセル剤を得ることができた。【００６３】
（ＨＰＬＣ分析条件）
分析カラムは、Ｊ’ｓｐｈｅｒｅ  ＯＤＳ−Ｈ８０，４．６×２５０ｍｍ（（株）ワイエムシィ）をカラム温度４０℃にて使用した。移動相は、２０ｍＭ  リン酸水溶液に対してアセトニトリルの比率を分析開始から２０ｍｉｎまで３５％で一定とし、２０ｍｉｎ以降７５ｍｉｎ後に７０％となるように一定の比率で上昇させ、７５ｍｉｎから８０ｍｉｎまで８０％で一定とするグラジエント条件で、流速１ｍｌ／ｍｉｎとした。注入量は２０μｌとし、検出波長は２５４ｎｍとした。各化合物の保持時間は、グラブレンが４０．０ｍｉｎ、グラブリジンが５０．２ｍｉｎ、グラブロールが５８．３ｍｉｎ、４’−Ｏ−メチルグラブリジンが６６．８ｍｉｎであった。定量は、各化合物のピーク面積を標準品のピーク面積から得た検量線と比較するとによって行った。【００６４】
（実施例３）リパーゼ阻害活性の確認
上記グラブラ・エタノール抽出物のほか、これまでリパーゼ阻害活性を示すことが報告されている（特開平１０−２６５３２８、特開２００２−５３４８４、特開２００４−１３７１９０）オレアノール酸（シグマ・アルドリッチ）やエピカテキンガレート（和光純薬）、およびグラブリジン標準品について、豚及びヒト膵臓由来リパーゼに対する阻害活性を測定した。【００６５】
豚及びヒト膵臓由来リパーゼに対する阻害活性の測定方法は、以下の通りである。Mcllvaine緩衝液（０．１Ｍ  リン酸水素２ナトリウムに０．１Ｍ  クエン酸水溶液を加えてｐH７．４に調製）２２．５μｌ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した上記各対象物２．５μｌ、Mcllvaine緩衝液に溶解したリパーゼ（ヒトまたは豚の膵臓由来；Sigma社）溶液５０μｌ、同緩衝液で０．１ｍＭに調製した４−メチルウンベリフェロンのオレイン酸エステル（４−MUO）２５μｌを混合し、３７℃で２０分保温した。ヒト由来酵素は１ｕ／ｍｌ、豚由来酵素は１１９ｕ／ｍｌの濃度で添加した。１Ｎの塩酸を５０μｌ添加して反応を止め、１Ｎ−クエン酸ナトリウム水溶液１００μｌ加えてｐＨを４．３付近に調製して蛍光（励起波長３２０ｎｍ、蛍光波長４５０ｎｍ）を測定した。コントロール（ＤＭＳＯのみ）及び上記各サンプル中のリパーゼで切断されて生じた４−メチルウンベリフェロン量（以下「反応値」と略す）は、リパーゼ存在下の蛍光強度からリパーゼ非存在下の蛍光強度を差し引いて求めた。阻害活性は計算式：
阻害活性（％）＝｛１−（サンプル添加物の反応値／コントロールの反応値）｝×１００で計算した。【００６６】
図１に示すように、Ｇ．グラブラのエタノール抽出物、及びＧ．グラブラのエタノール抽出物中に存在する主なフラボノイドである２つのグラブリジン標品（グラブリジン標品およびエピカテキンガレート標品）の２者共、豚及びヒト膵臓由来リパーゼ活性を明らかに阻害することが確認された。なお、図１中、カンゾウ抽出物の量は固形分として表す。カンゾウ抽出物中のグラブリジン量は固形分基準で約１０重量％である。【００６７】
図１に示す結果に加えて、さらに各種対象物についてのリパーゼ阻害活性を測定した。表１は、各種対象物についての、ブタ膵臓リパーゼに対するＩＣ５０値（μｇ／ｍｌ）を示す。表右欄は、対象物の分子量に基づいて計算したモル濃度（μＭ）を示す。使用したリパーゼ酵素は、豚由来で３１０ｕ／ｍｌで添加した。ＬＦＯ（カンゾウ抽出物のＭＣＴオイル溶解物）は、カンゾウグラブラのエタノール抽出物を、グラブリジン濃度１％となるようにＭＣＴに溶解することによって調整した。オルリスタット（商品名XENICAL；ロシュ社）は、比較対照として用いた医薬品である。【００６８】
【表１】
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【００６９】
表１に示すように、上記グラブラ・エタノール抽出物およびＬＦＯの他、Ｇ．グラブラ中のグラブリジン以外のフラボノイドであるグラブロール、グラブレン、４’−Ｏ−メチルグラブリジンも強いリパーゼ阻害活性を示した。これらＧ．グラブラ抽出物中に存在する４つのフラボノイドは、これまでリパーゼ阻害活性を示すことが報告されているオレアノール酸（シグマ・アルドリッチ）、エピカテキンガレート（和光純薬）、およびクルクミン（シグマ）などよりも強いリパーゼ阻害活性を示した。【００７０】
（実施例４）コレステロールエステラーゼ阻害活性の確認
グラブラ・エタノール抽出物、そのグラブラ・エタノール抽出物をＭＣＴ（中鎖脂肪酸トリグリセリド（アクターＭ２；理研ビタミン株式会社））に溶解（カンゾウエタノール抽出物３重量部、中鎖脂肪酸トリグリセリド７重量部）させたサンプル（「ＬＦＯ」）、カンゾウグラブラのエタノール抽出物中に存在する主なフラボノイドであるグラブリジン、グラブロール、グラブレン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン標品のそれぞれについて、ウシ膵臓由来コレステロールエステラーゼに対する阻害活性を検討した。【００７１】
ウシ膵臓由来コレステロールエステラーゼに対する阻害活性の測定方法は、以下の通りである。１００ｍＭ  リン酸バッファ（ｐＨ７．０）に１００ｍ  ＮａＣｌを加えたものを反応液用バッファとした。基質として、Cholesteryl(pyren-1-yl)hexanoate（ChPH；Sigma）１ｍｇおよび卵黄レシチン１０ｍｇを１ｍｌのエタノール（ＥｔＯＨ）に溶解したものを作製した（作製法はChemistry and Physics of Lipids, 36, 335-341, 1985を参照）。上記反応液用バッファを含む反応液全体に対して、基質を１／１００量、タウロコール酸Na（Sigma）を６ｍＭ、DMSOに溶解した被検物を反応液全体の１／３５量、およびコレステロールエステラーゼ（ウシ膵臓由来；オリエンタル酵母社製）を０．１３ユニット／ｍｌ添加し、３７℃で反応させた。蛍光光度計（励起３４０ｎｍ、蛍光３９７ｎｍ）で反応産物である６−ピレニルヘキサノイックアシッドの蛍光強度を継時的に測定した。なお、阻害活性はリパーゼの場合（実施例３）と同様の計算方法を用いた。【００７２】
【表２】
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【００７３】
表２に示すように、Ｇ．グラブラ・エタノール抽出物、それを中鎖脂肪酸に溶解させたサンプル（ＬＦＯ）、またＧ．グラブラのエタノール抽出物中に存在する主なフラボノイドであるグラブリジン、グラブロール、グラブレン、４’−Ｏ−メチルグラブリジンも強いコレステロールエステラーゼ阻害活性を持つことが確認された。【００７４】
（実施例５）体重増加抑制効果の確認
C57BL/6Jマウス（雌）を日本クレア社より８週齢で入手後、表３に示す高脂肪食で８週間飼育し、肥満モデルを作成した。飼育中、餌と水は自由摂取させた。【００７５】
【表３】
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【００７６】
その後体重の特に大きな個体を除き、１０匹づつ４群に分けた。実施例２で取得したＧ．グラブラのエタノール抽出物のＭＣＴオイル溶解物をさらにＭＣＴで希釈して、グラブリジンを１．２％含むカンゾウエタノール抽出物のＭＣＴオイル溶解物（以下「ＬＦＯ」とも表示する）を調製した。そのＭＣＴ溶解物を表３の高脂肪食に混ぜて表４に示す試験用飼料を作製した。カンゾウ抽出物のＭＣＴ溶解物（ＬＦＯ）中のグラブリジン含量は１．２％に調製されている。【００７７】
【表４】
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【００７８】
４群に分けた肥満モデルマウスに自由摂取させて約８週間程度飼育した後、体重を測定した。表５は、各群の体重の変化を示す。有意差検定はＤｕｎｎｅｔによる母平均の多重比較法により行った。【００７９】
【表５】
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【００８０】
表５に示すように、カンゾウ抽出物のＭＣＴオイル溶解物の量に依存して、明らかな体重増加抑制効果が認められることがわかる。【００８１】
（実施例６）糞中のトリグリセライド量等の比較
実施例５に示す体重抑制効果について、リパーゼ阻害による脂肪吸収抑制効果および／またはコレステロールエステラーゼ阻害によるコレステロール吸収抑制効果が関与していることを確認するために、実験期間中に採取した糞の中に残存する中性脂肪（トリグリセライド）、脂肪酸、コレステロール、コレステロールエステル量を比較した。比較結果は、下の表６に示す。【００８２】
糞中のトリグリセライド量等は、糞約０．５ｇを４ｍｌの硫酸ナトリウム溶液（６．２５％）に縣濁し、６ｍｌのヘキサン（３容量）／２−プロパノール（２容量）で２回抽出し、エバポレーター（４０℃）で濃縮し、ガスクロマトグラフィー（カラム：equity-1（supelco社；内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ、長さ２ｍ）；１２０℃から１０℃／分で３４０℃まで昇温）で測定した。定量計算用に使用する標準物質として、トリグリセライド（ＴＧ）量にはトリオレイン（Sigma）、コレステロール量（ＣＨ）にはコレステロ−ル（Sigma）、コレステロールエステル量（ＣＥ）にはコレステロールパルミテート及びコレステロールステアレート（Sigma）を標準として定量した。また糞中に排泄された遊離脂肪酸量（ＦＡ）もオレイン酸（和光純薬）を標準として測定した。カンゾウ抽出物のＭＣＴオイル溶解物（ＬＦＯ）中のグラブリジン含量は１．２％に調製した。【００８３】
【表６】
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【００８４】
表６で明らかなように、カンゾウ抽出物のＭＣＴオイル溶解物を加えた群の場合、糞中に排泄された中性脂肪（ＴＧ：トリグリセライド）、脂肪酸、コレステロール、コレステロールエステル量のそれぞれは、高脂肪食のみの対照群と比較して用量依存的に明らかに増加する傾向が確認できた。脂肪等の吸収を抑制し、その脂肪等を糞中により多く排泄させる効果は、上記した体重抑制効果（実施例４参照）に寄与しているものと考えられる。【００８５】
（実施例７）糞中のトリグリセライド量等の比較
表３で示した高脂肪食に、以下の表７に示す、Ｇ．グラブラのエタノール抽出物のＭＣＴオイル溶解物（ＬＦＯ）を混入させた混餌において、ＳＤラット（６週齢雄；チャールズリバー）を１０日間飼育した。表７中、カンゾウ抽出物のＭＣＴオイル溶解物（ＬＦＯ）とは、カンゾウ抽出物中のグラブリジン量が１％となるようにカンゾウ抽出物をＭＣＴに溶解したものである。【００８６】
【表７】
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【００８７】
１０日間の飼育期間中、３日目、７日目、１０日目のそれぞれの前日から２４時間、各頭毎個別に集めた糞を実施例５と同様に凍結乾燥、抽出し、含まれる脂肪量等を測定した。ｎ数はコントロールが４、その他は３である。有意差検定はＤＵＮＮＥＴの母平均の多重比較法で行った。【００８８】
図２は、ラット糞中の脂肪量等の測定結果を示すグラフである。図２に示すように、Ｇ．グラブラ抽出物を経口で摂取したラットの糞中の脂肪酸、トリグリセライド、コレステロール、コレステロールエステル量は、対照と比較して増加している、すなわち脂肪が糞中に多く排泄されていることが確認された。なお、図２中の＊印は危険率５％で有意、＊＊印は１％有意表す。【００８９】
（実施例８）血中のトリグリセライド濃度の測定
一晩絶食させたＷｉｓｔａｒラット（８週齢雄：チャールズリバー：Ｎ＝６）に対して、表７に示す脂質エマルジョンにグラブラ抽出物（グラブリジンが１％となるようにＭＣＴに溶解）含有ＭＣＴ（ＬＦＯ）を１％、および３％混合したものをゾンデで強制経口摂取した。具体的には、各ラットに対して、２ｍｌの脂質エマルジョン（コーン油：水＝１：１）を経口摂取した。脂質エマルジョンは、表８に示す各組成物を１０分間超音波処理することによって作成した。【００９０】
【表８】
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【００９１】
図３は、経口摂取の１、２、４、６時間経過後の血中のトリグリセライドを、トリグリセライドテストワコーを用いて測定した結果を示すグラフである。血液は頸静脈より０．３ｍｌ採取した。１群につき６匹の測定を行い、有意差検定はＤＵＮＮＥＴによる母平均の多重比較法で行った。図３に示すように、Ｇ．グラブラ抽出物の経口投与によって血中のトリグリセライド濃度が著明に減少していることが確認された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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