(57)【要約】  上記の循環障害全般に対する予防または治療薬として、循環障害が生じている部位の血液循環を効率的に改善させ、組織障害を十分に防止または改善できる薬物を提供する。  ポルフィリン金属錯体をアルブミンに包接させた化合物について、薬理効果の研究を行った結果、本化合物が循環障害時の血流低下を効率的に改善し、組織障害を十分に防止または改善することを見出し本発明に到達した。すなわち、本発明は、ポルフィリン金属錯体をアルブミンに包接させた化合物を含む循環障害改善剤である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポルフィリン金属錯体をアルブミンに包接させた化合物を含む循環障害改善剤。
【請求項２】
ポルフィリン金属錯体が鉄錯体である、請求項１記載の循環障害改善剤。
【請求項３】
鉄が２価の状態にある、請求項１記載の循環障害改善剤。
【請求項４】
アルブミンがヒト血清アルブミンあるいは遺伝子組換え型ヒト血清アルブミンである、請求項１記載の循環障害改善剤。
【請求項５】
アルブミンが高分子化合物により修飾されている、請求項１記載の循環障害改善剤。
【請求項６】
高分子化合物が、ポリエチレングリコール、デキストランおよびポリアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも１種の高分子化合物である、請求項１記載の循環障害改善剤。
【請求項７】
ポルフィリン金属錯体が、一般式（１）
【化１】
2006120915.tif 000011
[式中、Ｒ1 は置換基を有していてもよい鎖式もしくは脂環式炭化水素基、Ｒ２は下記一般式（３）で示される基を示す。
一般式（３）
【化２】
2006120915.tif 000012
（式中、Ｒ3 はＣ1 〜Ｃ18のアルキル基、または一般式（４）で示される基を示す。）
一般式（４）
【化３】
2006120915.tif 000013
（式中、Ｒ4 は低級アルキル基、Ｒ5 はＣ1 〜Ｃ10のアルキレン基を示す。）
Ｍは元素周期表第６〜１０族の遷移金属原子または金属イオン、Ｘ- はハロゲンイオンを表わし、Ｘ- の個数は金属イオンの価数から２を差し引いた数を示す。]で示される化合物である、請求項１記載の循環障害改善剤。
【請求項８】
ポルフィリン金属錯体が、一般式（２）
【化４】
2006120915.tif 000014
[式中、Ｒ2 は下記一般式（３）で示される基を示す。
一般式（３）
【化５】
2006120915.tif 000015
（式中、Ｒ3 はＣ1 〜Ｃ18のアルキル基、または一般式（４）で示される基である。）
一般式（４）
【化６】
2006120915.tif 000016
（式中、Ｒ4 は低級アルキル基、Ｒ5 はＣ1 〜Ｃ10のアルキレン基を示す。）
Ｍは元素周期表第６〜１０族の遷移金属原子または金属イオン、Ｘ- はハロゲンイオンを表わし、Ｘ- の個数は金属イオンの価数から２を差し引いた数を示す。]で示される化合物である、請求項１記載の循環障害改善剤。
【請求項９】
ポルフィリン金属錯体が、一般式（５）
【化７】
2006120915.tif 000017
[式中、Ｒ１は置換基を有していてもよい鎖式若しくは脂環式炭化水素基、Ｒ４は低級アルキル基、Ｒ５はＣ1 〜Ｃ10のアルキレン基を示す。Ｍは鉄、コバルトまたはクロムあるいはこれらのイオンを表す。]
【請求項１０】
前記金属原子または金属イオンが、鉄、コバルトまたはクロムまたはこれらのイオンである、請求項７または８のいずれかに記載の循環障害改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療分野において、生体における血液の循環障害を改善する薬剤に関する。さらに詳細には、心機能低下、全身性の持続する高血圧、低血圧、循環ショック、および局所の充血、うっ血、乏血あるいは虚血、梗塞、出血等の血流低下に起因する循環障害に対して、血流を増加させ、組織障害を防止または改善する薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液の循環障害は、中枢性および末梢性に大別され、末梢性はさらに全身性および局所性に分けられる。中枢性血液循環障害とは心臓の機能低下が一次的原因となるもので急性および慢性の左心機能不全および右心機能不全が含まれる。全身性末梢血液循環障害とは血液循環系全体の末梢循環障害で心臓に一次的原因のないものをいい、持続する高血圧、低血圧および循環ショックなどが起因する。局所性末梢血液循環障害は局所の充血、うっ血、乏血あるいは虚血、梗塞、出血等などに伴う障害である。【０００３】
これら循環障害に対する予防または治療薬には、その起因となる病態の治療薬、循環障害の直接的な改善薬として血管拡張剤および血栓溶解剤等が使用されてきたが、全身の血圧低下および血栓溶解後、活性酸素による再灌流組織障害等が生じるため、循環障害が生じている部位の血液循環を効率的に改善させ、組織障害を十分に防止または改善できる薬物はいまだ開発されていない。【０００４】
一方で、出血性ショックの蘇生液（赤血球代替物）、心筋梗塞等における虚血部位への酸素供給液、移植臓器の灌流液や保存液、人工心肺等の体外循環回路の補填液、再生組織の培養細胞への酸素供給液、癌治療用増感剤等の利用を期待して、種々の人工酸素輸液が研究されている。人工酸素輸液の一例として、ポルフィリン金属錯体をアルブミンに包接させた化合物が研究されてきた（例えば、特許文献１参照）。【０００５】
【特許文献１】特開２００４−１０４９５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記の循環障害全般に対する予防または治療薬として、循環障害が生じている部位の血液循環を効率的に改善させ、組織障害を十分に防止または改善できる薬物を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ポルフィリン金属錯体をアルブミンに包接させた化合物について、薬理効果の研究を行った結果、本化合物が循環障害時の血流低下を効率的に改善し、組織障害を十分に防止または改善することを見出し本発明に到達した。
本発明者らは、ポルフィリン鉄錯体をアルブミンに包接させた化合物について、複数の血流低下モデルあるいは虚血モデル動物を用いて検討した結果、いずれのモデルに対しても充分な血流改善効果および組織障害抑制効果を示すことが確認された。【０００８】
すなわち、本発明は、
（１）ポルフィリン金属錯体をアルブミンに包接させた化合物を含む循環障害改善剤、
（２）ポルフィリン金属錯体が鉄錯体である、上記（１）記載の循環障害改善剤、
（３）鉄が２価の状態にある、上記（１）記載の循環障害改善剤、
（４）アルブミンがヒト血清アルブミンあるいは遺伝子組換え型ヒト血清アルブミンである、上記（１）記載の循環障害改善剤、
（５）アルブミンが高分子化合物により修飾されている、上記（１）記載の循環障害改善剤、および
（６）高分子化合物が、ポリエチレングリコール、デキストランおよびポリアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも１種の高分子化合物である、上記（１）記載の循環障害改善剤に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の循環障害改善剤は、出血や血管狭窄及び閉塞等による血流量低下時に、循環障害が生じた部位の血流量を増加させる効果を有する。またその血流量増加効果により、組織障害を改善する効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は（１）５％ｒＨＳＡ投与、（２）ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰ投与の場合の脱血ラットにおける下肢血流低下への作用を比較したレーザードップラー式血流画像化装置による画像である。
【００１１】
【図２】図２は（１）正常対照、（２）低速灌流による虚血対照、（３）虚血＋５％ｒＨＳＡ投与、（４）虚血＋ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰ投与の場合のラット摘出心臓における虚血性心機能障害に対する改善作用を比較した図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明において用いられるポルフィリン金属錯体とは、ポルフィリン誘導体に中心金属が配位した、２位置側鎖を有するテトラフェニルポルフィリン金属錯体である。ポルフィリンとは、４つのピロール環がα位置で４つのメチン基と交互に結合した大環状化合物とその誘導体である。【００１３】
本発明で用いるポルフィリン金属錯体としては、下記一般式（１）に示すような錯体が好ましい。
一般式（１）【００１４】
【化１】
2006120915.tif 000002
(式中、Ｒ1は置換基を有していてもよい鎖式もしくは脂環式炭化水素基、Ｒ2 は下記一般式（３）で示される置換基、Ｍは元素周期表第６〜１０族の遷移金属原子または金属イオン、Ｘ- はハロゲンイオンを表わし、Ｘ- の個数は金属イオンの価数から２を差し引いた数を示す。)【００１５】
本発明のポルフィリン金属錯体では、上記一般式（１）において、Ｒ1がシクロヘキサノイル基を含む置換基であるものが好ましく、例えば下記一般式（２）に示すようなポルフィリン金属錯体が好ましい。
一般式（２）【００１６】
【化２】
2006120915.tif 000003
(式中、Ｒ2 は下記一般式（３）で示される置換基、Ｍは元素周期表第６〜１０族の遷移金属原子または金属イオン、Ｘ- はハロゲンイオンを表わし、Ｘ- の個数は金属イオンの価数から２を差し引いた数を示す。)【００１７】
また、上記一般式（１）または（２）において、２位置の置換基（Ｒ2）としては、下記一般式（３）で示されるものが挙げられる。
一般式（３）【００１８】
【化３】
2006120915.tif 000004
（式中、Ｒ3 はＣ1 〜Ｃ18のアルキル基、または下記一般式（４）で示されるものである。）
一般式（４）【００１９】
【化４】
2006120915.tif 000005
（式中、Ｒ4 はこれが結合しているイミダゾールの中心金属への配位を阻害しない基、Ｒ5 はアルキレン基を示す。）【００２０】
前記一般式（４）において、Ｒ4 としては水素、あるいはメチル基、エチル基、またはプロピル基などの低級アルキル基が好ましく、Ｒ5 としてはＣ1 〜Ｃ10のアルキレン基が好ましい。【００２１】
本発明の前記一般式（１）で示されるテトラフェニルポルフィリン金属錯体においては、中心金属（Ｍ）に塩基が配位した錯体が好ましい。
また、２位の置換基自体が軸塩基として中心金属に配位したイミダゾール誘導体であることが好ましく、例えば、下記一般式（５）のポルフィリン金属錯体が挙げられる。
一般式（５）【００２２】
【化５】
2006120915.tif 000006
(式中、Ｒ１は置換基を有していてもよい鎖式若しくは脂環式炭化水素基、Ｒ４は低級アルキル基、Ｒ５はＣ1 〜Ｃ10のアルキレン基を示す。Ｍは鉄、コバルトまたはクロムまたはこれらのイオンを示す。)【００２３】
本発明のポルフィリン金属錯体における中心金属（例えば、上記一般式（１）におけるＭ）は、元素周期表第６〜１０族の遷移金属原子であり、金属イオンの形態であってもよい。そのうち、鉄、コバルト、クロムなどが好ましく、さらに好ましくは２価の鉄（鉄（II））、３価の鉄（鉄（III））または２価のコバルト（コバルト（II））である。より好ましくは２価の鉄である。【００２４】
これらポルフィリン金属錯体の中でも特に、下記一般式（６）で示す、２−［８−（２−メチル−１−イミダゾリル）オクタノイルオキシメチル］−５，１０，１５，２０−テトラキス｛［α，α，α，α−ｏ−（１−メチルシクロヘキサノイル）］フェニル｝ポルフィナト鉄（ＩＩ）錯体が好ましい。
一般式(６)【００２５】
【化６】
2006120915.tif 000007
【００２６】
さらに、本発明に用いるアルブミンとポルフィリン鉄錯体としては、上記一般式（６）で示す２−［８−（２−メチル−１−イミダゾリル）オクタノイルオキシメチル］−５，１０，１５，２０−テトラキス｛［α，α，α，α−ｏ−（１−メチルシクロヘキサノイル）］フェニル｝ポルフィナト鉄（ＩＩ）錯体（ＦｅｃｙｃＰ）の合成過程を短縮することで、合成操作での有害物質の使用を省き、収率を上げる工夫がなされたもの、すなわち、下記一般式（７）で示す、５，１０，１５−トリス（α，α，α−ｏ−シクロヘキサンアミドフェニル）−２０−モノ［β−ｏ−６−｛Ｎ−（２−メチル−１−イミダゾリル）｝ヘキサンアミドフェニル］ポルフィリンの中心に鉄が配位した錯体（ｒＨＳＡ−Ｆｅｃｙｃ３Ｐ）が挙げられる。
一般式(７)【００２７】
【化７】
2006120915.tif 000008
【００２８】
本発明のポルフィリン金属錯体がアルブミンに包接された化合物とは、アルブミンによって形成される内部疎水領域内にポルフィリン金属錯体が包埋・固定（包接）されたものである。
アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）１モルに対するポルフィリン金属錯体の結合数は、通常約１〜８である。アルブミン１モルに包接・結合されたポルフィリン金属錯体の数は、例えば、スカチャード・プロット（Scatchard plot）（C.J. Halfman， T.Nishida， Biochemistry，１１巻，３４９３頁（１９７２）を参照）等を作成することにより決定できる。【００２９】
本発明に用いるアルブミンは、ヒト血清アルブミン、組換えヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン等その由来に制限はない。ヒトへの適用を考えた場合、ヒト血清アルブミンまたは遺伝子組換え技術により製造されたヒト血清アルブミン（以下、組換えヒト血清アルブミン）であることが好ましく、特に組換えヒト血清アルブミンであることが好ましい。【００３０】
近年、遺伝子組換え技術の発展により、構造・組成および物理化学的特徴がヒト血清アルブミンと全く同一である高純度の組換えヒト血清アルブミンが開発されてきており（K.Kobayashi et al., Therapeutic Apheresis, ２巻, ２５７−２６２頁（１９９８）参照）、この組換えヒト血清アルブミンに置換ポルフィリン金属錯体を包接させてなる、ポルフィリン金属錯体−組換えヒト血清アルブミン包接化合物は、全合成系として提供できるので、工業的規模での製造も比較的容易である。
また、アルブミンは、血漿タンパク質であるから、生体への適用に優れている。【００３１】
さらに、本発明で用いるアルブミンは、高分子化合物で修飾されていることが好ましい。高分子化合物としては、医療用に用いることができアルブミンを修飾することのできる高分子化合物であれば特に限定されないが、例えば、ポリエチレングリコール、デキストランおよびポリアミノ酸等が挙げられ、好ましくはポリエチレングリコールである。
ポリエチレングリコールとしては、例えば、は１９７７年にAbuchowskiら（A. Abuchowski et al., Journal of Biological Chemistry, ２５２巻, ３５７８−３５８１頁（１９７７）およびJournal of Biological Chemistry, ２５２巻, ３５８２−３５８６頁（１９７７）を参照）により用いられて以来、ペプチド性医薬品の分子修飾に汎用されている高分子であり、生体内半減期の延長に加え、抗原性の低下を目的とした研究例（Y. Kawasaki et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, ２１６巻, ４１０−４１４頁（１９８１）、N. Katre et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, ８４巻, １４８７−１４９１頁（１９８７）およびMJ. Knauf et al., Journal of Biological Chemistry, ２６３巻, １５０６４−１５０７０頁（１９８８）を参照）が数多く報告されている。【００３２】
本発明の循環障害治療剤は、ポルフィリン金属錯体がアルブミンに包接された化合物を含有する薬剤であり、さらに安定化剤等の添加された種々の医薬組成物も本願発明の範囲に含まれる。
本発明の循環障害治療剤の剤形は、医療用の種々の剤形とすることができるが、注射剤が好ましい。本発明を注射剤として製造する場合は、適当な溶剤、必要に応じて、ｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、懸濁剤、溶解補助剤、担体等を添加し、常法により注射剤にすることができる。【００３３】
本発明の循環障害治療剤は、種々の疾患・症状に伴う循環障害の治療および予防の為に使用される。種々の疾患・症状としては、高血圧、高脂血症および糖尿病などの疾患、血栓等による血管閉塞および急性出血あるいは慢性出血に伴う虚血症状、虚血後の再灌流障害等、その他に臓器移植が挙げられる。これらに伴う循環障害の例としては、例えば、虚血性脳疾患(脳梗塞、一過性脳虚血発作、脳血栓、脳塞栓)、脳梗塞後遺症、脳血管攣縮、虚血性心疾患(心筋梗塞)、狭心症、閉塞性血栓血管炎（バージャー病）、閉塞性動脈硬化症、血栓性静脈炎、レイノー病およびレイノー症候群、肢端紫藍症、凍瘡・凍傷、肢端知覚異常、間欠性跛行、特発性脱疽、メニエール病、メニエール症候群および眩暈症、慢性動脈閉塞症、虚血性膵炎、虚血性視神経症、虚血性大腸炎等が挙げられる。【００３４】
本発明の循環障害治療剤は、対象臓器として、例えば、脳、心臓、肺、肝臓、腎臓、膵臓、脾臓、腸、骨格筋、骨髄、神経、網膜、血管等に使用することができる。【００３５】
本発明の循環障害改善剤を注射剤として投与する場合の投与方法としては、例えば静脈内投与、動脈内投与、門脈内投与、病巣内直接投与が挙げられる。【００３６】
本発明の循環障害改善剤の投与量は、患者の年齢、体重、性別、投与方法、症状によって異なるが、通常成人１人１日あたり、非経口投与（例えば、注射あるいは持続点滴）で約１〜２５００ｍL（例えば、ＦｅｃｙｃＰとして、４ｍｇ〜１１ｇ）、好ましくは約１〜１０００ｍＬ（例えば、ＦｅｃｙｃＰとして、４ｍｇ〜４ｇ）の範囲で投与する。【００３７】
以下に実施例をあげて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００３８】
以下の実施例で用いる、２−[８−(２−メチル−１−イミダゾリル)オクタノイルオキシメチル]−５，１０，１５，２０−テトラキス｛［α，α，α，α−ｏ−（１−メチルシクロヘキサノイルアミノ）］フェニル｝ポルフィナト鉄錯体（ＩＩ）は、T. Komatsu et al.， Bioconjugate Chemistry，１３巻，３９７−４０２頁（２００２）に記載の方法により製造した。【００３９】
（製造例１）  ポルフィリン鉄錯体のアルブミン包接体の製造
一酸化炭素雰囲気下で、２−[８−（２−メチル−１−イミダゾリル）オクタノイルオキシメチル]−５，１０，１５，２０−テトラキス｛［α，α，α，α−ｏ−（１−メチルシクロヘキサノイルアミノ）］フェニル｝ポルフィナト鉄錯体１．０７ｍｍｏＬのエタノール溶液１．５Ｌに０．６ＭのＬ−アスコルビン酸水溶液１．５Ｌを添加して還元し、この液を遺伝子組換えヒト血清アルブミン（以下、ｒＨＳＡと略す）０．２７ｍｍｏＬを含有するリン酸緩衝水溶液（ｐＨ７．４、１／３０ｍＭ）６．５Ｌに加え、撹拌した。その混合液にリン酸緩衝水溶液（ｐＨ７．４、１／３０ｍＭ）６０Ｌを加えながら、限外ろ過装置（ミリポア製限外濾過膜：限外分子量３０，０００）を用いて定容量限外ろ過透析を行い、混合液中に含まれるエタノールを除去した。この混合液を３００ｍＬに濃縮後、ｒＨＳＡ濃度が終濃度０．７５ｍＭ（５w/v％）となるようリン酸緩衝水溶液（ｐＨ７．４、１／３０ｍＭ）を用いて調製し、所望のポルフィリン鉄錯体−アルブミン包接化合物の分散液（以下、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰと略す）を得た。
ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰは酸素ガス（１００％）通気下に、５００Ｗハロゲンランプを用いて２０分間光照射した後、実験例１および２に使用した。
なお、ｒＨＳＡは、（株）バイファ製のもの（２５w/v％製剤）を用いた。【００４０】
（実験例１）  ラット出血性血流低下モデルに対する作用
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（８週齢）を用い、セボフルラン吸入麻酔下（導入２．０％、維持１．５％）に脱血し、血流量を低下させた。右総頸動脈より２ｍＬの脱血、右大腿静脈より２ｍＬの５％ｒＨＳＡの投与を９回繰り返し、総血液量の約７０％量を５％ｒＨＳＡで交換し、１０分後に右総頸動脈より総血液量の３０％量を脱血した。脱血終了後、速やかに、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰ、あるいは対照として５％ｒＨＳＡの総血液量の３０％量を右大腿静脈内に投与した。なお、脱血および投与は１ｍＬ／分の速度で行った。脱血前、脱血終了直後および投与終了２５分後に、下肢の血流量をレーザードップラー式血流画像化装置（(株)モンテシステム製、ＭｏｏｒＬＤＩ−ＬＫII）を用いて非侵襲下に測定した。得られた結果を画像化し、図１に示す。【００４１】
ラットの下肢血流量は、脱血終了後には低下し、５％ｒＨＳＡを投与しても、血流量の回復は認められず、むしろさらに低下した。一方、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰは、脱血により低下した血流量を、脱血前とほぼ同程度までに回復した。従って、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰは出血性の血流量低下に対して血流量を増加させ改善させることが明らかとなった。【００４２】
（実験例２）  ラット虚血性脳血流低下モデルに対する作用
ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰを投与した場合の両側総頚動脈閉塞ラットの脳血流改善低下に対する改善作用について実験を行った。
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（１０週齢）を用い、ペントバルビタールナトリウム (５０ ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与) 麻酔下に両側総頸動脈を結紮し、脳血流量を低下させた。ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰ は１０ ｍＬ／ｋｇを両側総頸動脈結紮１０分後に尾静脈内に投与した。大脳皮質血流量を両側総頚動脈結紮前、結紮直後およびｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰ投与終了５分後に、レーザードップラー式血流画像化装置（(株)モンテシステム製、ＭｏｏｒＬＤＩ−ＬＫII）を用いて非侵襲下に測定した。得られた結果は画像を数値化し、結紮前の値を１００％として表１に示す。【００４３】
【表１】
2006120915.tif 000009
【００４４】
表１の結果から、大脳皮質血流量は、両側総頚動脈結紮前（１００％）に比べ、結紮直後には５５．４％および７３．７％に低下し、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰの１０ｍＬ／ｋｇを静脈内投与すると、それぞれ６３．７％および８２．８％に上昇した。従って、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰは虚血性脳血流量の低下に対して血流量を増加させ改善させることが明らかとなった。【００４５】
（実験例３）  脳血流低下による虚血性脳機能障害に対する作用
ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰを投与した場合の両側総頚動脈閉塞ラットの脳血流低下による虚血性脳機能障害に対する改善作用について実験を行った。
Ｆｉｓｃｈｅｒ系雄性ラット（８週齢）を用い、エーテル軽麻酔下に両側総頸動脈を結紮により閉塞し、脳虚血を惹起させた。ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰ の１および３ｍＬ／ｋｇ、あるいは対照として５％ｒＨＳＡの３ｍＬ／ｋｇを両側総頸動脈閉塞直後に尾静脈内に投与し、覚醒下に閉塞終了後３．５時間までの虚血性発作（発作性跳躍および痙攣）発現の有無および２４時間後までの生死を観察した。虚血性発作の発現率（発現例数/使用例数×１００（％））および死亡率（死亡例数/使用例数×１００（％））を指標に薬物の効果を調べた。得られた結果を表２に示す。【００４６】
【表２】
2006120915.tif 000010
【００４７】
虚血性発作の発現率は５％ｒＨＳＡの３ｍＬ／ｋｇ投与では８０％であったが、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰ の１ あるいは３ ｍＬ／ｋｇ投与ではともに３３％を示し、発現率は低下した。また、死亡率はｒＨＳＡの３ ｍＬ／ｋｇ投与では１００％であったが、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰを１ あるいは３ ｍＬ／ｋｇ投与で、それぞれ８７あるいは６７％を示し、死亡率は低下した。従って、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰは虚血性脳機能障害に対して改善作用を有することが明らかとなった。【００４８】
（実験例４）  低速灌流による虚血性心機能障害の改善作用
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（８〜１０週齢）の心臓をペントバルビタールナトリウム麻酔下に摘出し、ランゲンドルフ（Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ）の方法に従って大動脈内にカニューレを挿入し、栄養液で灌流した。心機能として心収縮力を測定するために、左心室内に生理食塩液を注入したバルーンを挿入し、得られた圧波形を解析し、左心室内圧の拡張終期圧および最大上昇速度を計測した。栄養液は９５％Ｏ２−５％ＣＯ２混合ガスを通気し、３７℃に保温したクレブス−ヘンゼライト（Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ）液（ＮａＣｌ  １１８ｍＭ、ＫＣｌ  ４．７ｍＭ、ＫＨ２ＰＯ４  １．２ｍＭ、  ＭｇＳＯ４  １．２ｍＭ、ＣａＣｌ２  ２．５ｍＭ、ＮａＨＣＯ３  ２５ｍＭ、グルコース  １１ｍＭ、ｐＨ７．４）を用い、２０ｍＬ／分の流量で２０分間灌流し安定化させた。心筋虚血は、流量を１／１０（２ｍＬ／分）に下げ、６０分間低速灌流することによって惹起させた。５％ｒＨＳＡ群（虚血＋５％ｒＨＳＡ群、ｎ＝７）およびｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰ群（虚血＋ｒＨＳＡ-ＦｅｃｙｃＰ群、ｎ＝７）については、低速流量へ切り換えると同時に、５％ｒＨＳＡおよびｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰをそれぞれ大動脈内に挿入したカニューレの側管より０．２ｍＬ／分の速度で６０分間、灌流液中に持続適用した。虚血対照群（ｎ＝７）については側管から薬液を適用しなかった。
低速灌流終了後、流量を再度２０ｍＬ／分に戻し、６０分間灌流を継続した。心臓は電気刺激装置を用いてペーシング（心拍数３３０拍／分）を行った。
各々の実験群について、低速灌流開始時から１２０分経過時までの各時点で、左心室内圧拡張終期圧および左心室内最大上昇速度の測定を行った。
なお比較のため、実験期間中終始２０ｍＬ／分で灌流した正常対照群（ｎ＝７）についても、左心室内圧拡張終期圧および左心室内最大上昇速度を同様に測定した。
左心室内圧最大上昇速度は低速灌流開始時を１００％として表した。また各群の左心室内圧拡張終期圧および左心室内圧最大上昇速度は平均値±標準誤差で表し、有意差検定はそれぞれＤｕｎｎｅｔｔの検定およびＳｔｅｅｌの検定（いずれも有意水準５％）を実施した。得られた結果を図２のグラフに示す。【００４９】
左心室内圧拡張終期圧は、心収縮力の低下とともに上昇するが、正常対照群では実験中ほぼ一定の値（７．０〜１１．９ｍｍＨｇ）を示した。虚血対照群では低速灌流虚血開始後徐々に上昇し、虚血６０分後に虚血前の流量に戻すとさらに著しい上昇がみられ、虚血再灌流障害を来した。５％ｒＨＳＡ群は虚血対照群とほぼ同じ推移を示した。一方、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰ群は低速流量虚血期間中、虚血対照群と比較し低値を維持し、虚血前の流量に戻すとわずかに上昇したものの、虚血対照群に比べて有意に低下した。【００５０】
左心室内圧最大上昇速度は、心収縮力の低下とともに低下するが、正常対照群では時間経過とともに徐々に低下し、最大でも約３０％の低下に留まった。虚血対照群では低速灌流虚血開始後著しく低下し、虚血６０分後に虚血前の流量に戻すと上昇するものの、約６０％までしか回復しなかった。５％ｒＨＳＡ群は虚血対照群とほぼ同じ推移を示した。一方、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰ群では低速灌流虚血期間中は虚血対照群とほぼ同じ推移を示したが、虚血前の流量に戻すと、５分後には正常対照群とほぼ同じ値にまで回復した。低速灌流終了後５分、２０分および３０分には、虚血対照群と比較して有意に高値を示した。従って、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰは、心臓の虚血および虚血再灌流によって惹起される心機能障害を抑制することが明らかとなった。【００５１】
以上、ｒＨＳＡ−ＦｅｃｙｃＰは、各種組織において、出血、血管閉塞または血管狭窄などによって低下した血流量を増加させ、機能障害を改善させることから、本剤は循環障害改善剤として有用であることは明らかである。【００５２】
本願発明の包接化合物は、循環障害治療剤として種々の医療用用途に使用することができ、種々の疾患・症状に伴う循環障害に適用することができる。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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