(57)【要約】  硫酸化フコース含有多糖の低分子化物及び／又は薬理学的に許容されるその塩を含有することを特徴とする、血栓症の予防又は治療のための組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
硫酸化フコース含有多糖の低分子化物及び／又は薬理学的に許容されるその塩を含有することを特徴とする、血栓症の予防又は治療のための組成物。
【請求項２】
褐藻類由来の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含有する請求項１記載の組成物。
【請求項３】
硫酸化フコース含有多糖及び／又は硫酸化フコース含有多糖含有物を酵素処理することにより得られる硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含有する請求項１記載の組成物。
【請求項４】
硫酸化フコース含有多糖及び／又は硫酸化フコース含有多糖含有物を酸処理することにより得られる硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含有する請求項１記載の組成物。
【請求項５】
ゲルろ過カラムクロマトグラフィーで測定した際のプルラン換算の平均分子量が４０００〜８０００の範囲である請求項１記載の組成物。
【請求項６】
２〜１１糖で構成される硫酸化フコース含有オリゴ糖及び／又は薬理学的に許容されるその塩を含有することを特徴とする、血栓症の予防又は治療のための組成物。
【請求項７】
２〜１１糖で構成される硫酸化フコース含有オリゴ糖が、下記一般式（化１）〜（化６）から選択される少なくとも１つの化合物である請求項６記載の組成物。
【化１】
2005095427.tif 000020
【化２】
2005095427.tif 000021
【化３】
2005095427.tif 000022
【化４】
2005095427.tif 000023
【化５】
2005095427.tif 000024
【化６】
2005095427.tif 000025
（全式中、ＲはＨ又はＳＯ３Ｈであり、Ｒの少なくとも１つはＳＯ３Ｈである。）
【請求項８】
医薬である請求項１または６記載の組成物。
【請求項９】
食品又は飲料である請求項１または６記載の組成物。
【請求項１０】
硫酸化フコース含有多糖及び／又は硫酸化フコース含有多糖含有物の酸分解による低分子化物であって、ゲルろ過カラムクロマトグラフィーで測定した際のプルラン換算の平均分子量が４０００〜８０００の範囲である低分子化物。
【請求項１１】
請求項１０記載の低分子化物を有効成分として含有することを特徴とする医薬。
【請求項１２】
請求項１０記載の低分子化物を含有することを特徴とする食品又は飲料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は血栓症の予防又は治療に有効な組成物、特に食用の組成物、医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
血栓症は、生体の血管内で血液の凝固が起こり、血液の循環が妨げられる疾患である。血栓の形成により、当該部位、その周辺の組織への血液の供給が減少することから種々の障害が発生する。脳梗塞、心筋梗塞、深部静脈血栓症（エコノミークラス症候群等）は血栓形成に起因する疾患の代表例である。また、血栓症は血栓形成部位に障害を与える場合のほか、形成された血栓が血液の循環によって他の部位に運ばれ、その部位に障害を与える場合もある。【０００３】
血栓症の主な原因は血小板の活性化、凝固・線溶系の異常であり、これらの要因に対応した抗血栓薬、すなわち抗血小板薬、抗凝固薬が使用されている。
抗凝固薬としては、ビタミンＫ拮抗薬であるワルファリン（ジクマロール）、ヘパリンが汎用されているが、ワルファリンは食事によって摂取されるビタミンＫ量や他薬物の影響を受けやすく、その使用において注意が必要とされる。また、ヘパリンは注射薬として投与される必要がある。
さらに、ウロキナーゼや組織プラスミノーゲンアクチベータ（t-PA）のような血栓溶解作用を有する酵素製剤も血栓症の治療に使用されているが、酵素製剤はその製造、品質管理、保存や投与経路についての問題が多い。
さらにこれらの抗血栓薬には、出血傾向の出現等の副作用が見られることが多く、その使用において注意が必要とされる。【０００４】
近年、食生活の変化や社会の高齢化に伴って血栓症は増加の傾向にあると言われている。治療のみならず、血栓症の予防にも使用するという観点からは、経口摂取で効果を示す抗凝固薬が望まれている。ヘパリン同様に糖鎖骨格を有する抗凝固剤として、デルマタン硫酸（例えば、特許文献１、特許文献２）、Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステル（例えば、特許文献３）等が開発されているがいずれも経口投与によって効果を示しうることは明らかにされていない。【０００５】
【特許文献１】国際公開第９５／０９１８８号パンフレット
【特許文献２】特開平１０−１５８１７４号公報
【特許文献３】特表２００２−５０２４５４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、経口で効果を発現することができ、かつ日常的に摂取可能な血栓症の予防又は治療用の組成物を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、天然物由来の抗血栓作用を有する物質について研究を重ねた結果、低分子化した硫酸化フコース含有多糖を経口で摂取した場合に血栓の形成が顕著に抑制されることを見出し、本発明を完成させた。【０００８】
すなわち、本発明の第１の発明は、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物及び／又は薬理学的に許容されるその塩を含有することを特徴とする、血栓症の予防又は治療のための組成物に関する。【０００９】
本発明の第１の発明の組成物は、褐藻類由来の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含有してもよい。【００１０】
本発明の第１の発明の組成物は、硫酸化フコース含有多糖及び／又は硫酸化フコース含有多糖含有物を酵素処理することにより得られる硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含有してもよい。【００１１】
本発明の第１の発明の組成物は、硫酸化フコース含有多糖及び／又は硫酸化フコース含有多糖含有物を酸処理することにより得られる硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含有してもよい。【００１２】
本発明の第１の発明によれば、ゲルろ過カラムクロマトグラフィーで測定した際のプルラン換算の平均分子量が４０００〜８０００の範囲であってもよい。【００１３】
本発明の第２の発明は、２〜１１糖で構成される硫酸化フコース含有オリゴ糖及び／又は薬理学的に許容されるその塩を含有することを特徴とする、血栓症の予防又は治療のための組成物に関する。【００１４】
本発明の第２の発明の組成物は、２〜１１糖で構成される硫酸化フコース含有オリゴ糖が、下記一般式（化１）〜（化６）から選択される少なくとも１つの化合物であってもよい。【００１５】
【化１】
2005095427.tif 000002
【００１６】
【化２】
2005095427.tif 000003
【００１７】
【化３】
2005095427.tif 000004
【００１８】
【化４】
2005095427.tif 000005
【００１９】
【化５】
2005095427.tif 000006
【００２０】
【化６】
2005095427.tif 000007
（全式中、ＲはＨ又はＳＯ３Ｈであり、Ｒの少なくとも１つはＳＯ３Ｈである。）【００２１】
本発明の第１または２の発明の組成物は、医薬であってもよい。【００２２】
本発明の第１または２の発明の組成物は、食品又は飲料であってもよい。【００２３】
本発明の第３の発明は、硫酸化フコース含有多糖及び／又は硫酸化フコース含有多糖含有物の酸分解による低分子化物であって、ゲルろ過カラムクロマトグラフィーで測定した際のプルラン換算の平均分子量が４０００〜８０００の範囲である低分子化物に関する。【００２４】
本発明の第４の発明は、本発明の第３の発明の低分子化物を有効成分として含有することを特徴とする医薬に関する。【００２５】
本発明の第５の発明は、本発明の第３の発明の低分子化物を含有することを特徴とする食品又は飲料に関する。
【発明の効果】
【００２６】
本発明の組成物、当該組成物を含有する医薬、食品又は飲料は血栓症、脳梗塞、心筋梗塞、深部静脈血栓症（エコノミークラス症候群等）、不安定狭心症、脳卒中、肺塞栓症の予防又は治療に対して極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】硫酸化フカンオリゴ糖の血栓予防効果を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
すなわち、本発明者らは鋭意研究の結果、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物、特に特定の硫酸化フコース含有オリゴ糖や、硫酸化フコース含有多糖の酸分解物が抗血栓作用を有することを見出し、本発明を完成させた。【００２９】
以下、本発明に関して具体的に説明する。【００３０】
本発明に開示される血栓症の予防又は治療のための組成物は硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含有することを特徴とする。なお、本明細書において、硫酸化フコース含有多糖とは、硫酸化フコースを構成糖として含む多糖（フコイダン、フコイジンとも称される）を意味する。本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物は、下記の硫酸化フコース含有多糖及び／又は硫酸化フコース含有多糖含有物を酵素学的手法、化学的手法、物理学的手法等の公知の方法又はこれらの方法を組み合わせて低分子化することにより得ることができる。また、当該組成物としては、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含んでいればよく、その原料、例えば海藻やナマコ由来の成分が混合されていてもよい。【００３１】
本発明において硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の製造に用いられる硫酸化フコース含有多糖としては特に限定はなく、例えば、海藻類やナマコ由来の硫酸化フコース含有多糖を使用することができ、特に好適には褐藻類由来の硫酸化フコース含有多糖が好適に使用される。ここで褐藻類としては、特に限定はないが、例えば、ガゴメ、マコンブ、トロロコンブ、レッソニア  ニグレッセンス、ワカメ、アラメ、カジメ、ジャイアントケルプ等のコンブ目海藻、モズク、オキナワモズク、マツモ等のナガマツモ目海藻、ヒバマタ、ヒジキ、ホンダワラ等のヒバマタ目海藻を使用することができ、好適にはコンブ目に属する褐藻を使用することができる。これらの褐藻類由来の硫酸化フコース含有多糖は構成糖として硫酸化フコースを多く含むことから、本発明においてより好適に使用できる。なお、海藻由来の硫酸化フコース含有多糖は、その由来となる海藻の種類によって構造が異なることが知られており（バイオサイエンスとインダストリー，Ｖｏｌ．６０，Ｎｏ．６（２００２））、本発明において、特に好適に使用される海藻類はガゴメである。【００３２】
本発明において、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の製造に用いられる硫酸化フコース含有多糖の分子種としては、特に限定はないが、例えば硫酸化フカン（例えば、国際公開第９９／４１２８８号パンフレット、国際公開第０３／０６２４１２号パンフレット、および国際公開第２００４／００１０３１号パンフレット参照）、硫酸化グルクロノフカン（例えば、国際公開第０１／８１５６０号パンフレット参照）、硫酸化フコガラクタン（例えば、国際公開第０３／０２３０３６号パンフレット参照）、硫酸化フコグルクロノマンナン（例えば、国際公開第０２／０８６１１６号パンフレット参照）、Ｆ−フコイダン（フコース硫酸含有多糖−Ｆ；例えば、国際公開第９７／２６８９６号パンフレット参照）、Ｕ−フコイダン（フコース硫酸含有多糖−Ｕ；例えば、国際公開第９７／２６８９６号パンフレット参照）、これらの混合物が使用できる。本発明において特に好適には、コンブ目海藻由来の硫酸化フカンが使用される。なお、本明細書において、硫酸化フカンとは硫酸基とフコースを主要構成成分とする硫酸化フコース含有多糖のことを意味する。コンブ目海藻由来の硫酸化フカンの主鎖は一般の糖よりも酸に対して弱いＬ−フコースからなるため、加熱や酸処理により容易に低分子化することができる。特にガゴメ（Kjellmaniella crassifolia）、マコンブ（Laminaria japonica）、あるいはレッソニア  ニグレッセンス（Lessonia nigrescens）等の海藻は硫酸化フカンの含有量が多く原料として好適である。【００３３】
本発明で使用される硫酸化フカンは公知の方法、例えば特開2003-199596に記載の方法により製造することができる。例えば、褐藻類の水溶性画分抽出液を公知の方法、例えばｐＨが４〜９、温度は１００℃以下での抽出により得る。また、上記抽出液中のアミノ酸や低分子の色素等は限外ろ過により効率良く除去できる。疎水性物質の除去には活性炭処理等も有効である。【００３４】
このようにして褐藻類の硫酸化フカン含有画分を得ることができる。また、該画分を陰イオン交換カラムによる分離に供すればより純度の高い硫酸化フカンを得ることもできる。本発明においては、該硫酸化フカン含有画分や純度の高い硫酸化フカンのいずれも、後述の低分子化処理に使用可能である。【００３５】
本発明に使用される硫酸化フカンの１例としては、下記一般式（化７）に表される主骨格のものが例示される。下記一般式（化７）において、ｎは１以上の整数であり、例えば１〜２０，０００の範囲、さらに好ましくは１〜１０，０００の範囲のものが本発明に使用される硫酸化フカンに含まれる。また、本発明に使用される硫酸化フカンには、上記範囲であれば、下記一般式（化７）が連続的に繰り返した構造を持つもの、及び他の構造が介在して、非連続的に下記一般式（化７）が含有される構造を持つもののいずれもが含まれる。【００３６】
【化７】
2005095427.tif 000008
（式中、ＲはＨ又はＳＯ３Ｈであり、Ｒの少なくとも１つはＳＯ３Ｈである。）【００３７】
また、本発明において使用される硫酸化フコース含有多糖含有物としては、例えば上記の海藻類藻体やその乾燥処理物、細断物、粉砕物、抽出物等が使用できる。当該抽出物の抽出方法としては、公知の方法により行えばよく特に限定はないが、例えば、海藻の乾燥物からの熱水抽出物を硫酸化フコース含有多糖含有物として使用することができる。当該熱水抽出物としては、抽出工程において塩化カルシウムを添加することで褐藻に含まれているアルギン酸を低減させた抽出物や、脱塩処理等を施した抽出物を硫酸化フコース含有多糖含有物として使用することもできる。さらに後述の低分子化処理を効率的に行なうという観点から、当該抽出物から高分子画分を除去することもできる。例えば、排除分子量３万の限外ろ過膜を使用し、高分子画分を除去することもできる。【００３８】
本発明において、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物は、上記の硫酸化フコース含有多糖及び／又は硫酸化フコース含有多糖含有物を、酵素学的手法、化学的手法、物理学的手法等の公知の方法をこれらの方法を組み合わせることにより製造することができる。当該低分子化物の分子量としては、例えば糖残基の数で、２〜５００糖、好適には２〜３００糖、特に好適には２〜１００糖の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を使用することができる。なお、本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物のうち、２〜２０糖で構成されるものについては硫酸化フコース含有オリゴ糖と称し、当該オリゴ糖であって硫酸化フコースのみからなるオリゴ糖を硫酸化フカンオリゴ糖と称する。本発明には前記式（化１）〜（化６）に示される２〜１１糖で構成される硫酸化フカンオリゴ糖が好適に使用され、さらに好適には１０糖未満のものが使用される。【００３９】
以下、酵素学的手法により得られる硫酸化フコース含有多糖の低分子化物について説明する。本発明において、酵素学的手法により得られる硫酸化フコース含有多糖の低分子化物としては、特に限定はないが、例えば、アルテロモナス  ｓｐ．  ＳＮ−１００９（ＦＥＲＭ  ＢＰ−５７４７、後にフカノバクター  リィティカス  ＳＮ−１００９と改名、特開２００３−１９９５９６参照）より調製される硫酸化フカン分解酵素、フラボバクテリウム  ｓｐ．  ＳＡ−００８２株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−５４０２）より調製されるエンド型フコイダン分解酵素や硫酸化フコガラクタン分解酵素を使用することにより製造することができる。なお、これらの分解酵素の調製法や酵素処理方法、得られる分解物については、それぞれ特開２００３−１９９５９６、国際公開第９７／２６８９６号パンフレット、国際公開第００／５０４６４号パンフレットに開示されている。なお、前記の各酵素は、国際公開第９９／１１７９７号パンフレット、国際公開第０３／０２３０３６号パンフレットに記載の遺伝子工学的手法により調製することもできる。【００４０】
本発明において、特に好適にはガゴメ由来の硫酸化フカン及び／又は硫酸化フカン含有物を硫酸化フカン分解酵素により消化することで得られる硫酸化フカンの低分子化物を使用することができる。硫酸化フカン分解酵素は、硫酸化フカンやその低分子化物などに作用してフコースとフコースの間のα−Ｌ−フコシル結合をエンド的に加水分解し、還元性末端にＬ−フコースを持つオリゴ糖を生成させる。本発明に使用される硫酸化フカンの低分子化物としては、硫酸化フカンに硫酸化フカン分解酵素を作用させて得られる還元性末端糖がＬ−フコースであるオリゴ糖が例示される。【００４１】
硫酸化フカン分解酵素の調製は、特に限定はないが、前述のフカノバクター  リィティカス  ＳＮ−１００９を培養して、特開２００３−１９９５９６に記載の方法で調製することができる。また、上記フカノバクター  リィティカス  ＳＮ−１００９の他にフカノバクター  リィティカス  ＳＮ−１００９の自然的又は人工的変異株、その他アルテロモナス属、フカノバクター属に属する菌種等であって、本発明に使用する硫酸化フカン分解酵素生産能を有する微生物により調製することができる。【００４２】
本発明に使用される硫酸化フカンの低分子化物は、硫酸化フカン分解酵素を硫酸化フカン及び／又は硫酸化フカン含有物に作用させることによって調製することができる。硫酸化フカン含有物としては、例えば硫酸化フカンの部分精製品、褐藻類由来の硫酸化フコース含有多糖画分、褐藻類の水性溶媒抽出物、褐藻類藻体、もしくはこれらの混合物が好適に使用できる。【００４３】
本発明に使用される硫酸化フカンオリゴ糖を調製するにあたり、硫酸化フカン、もしくは硫酸化フカン含有物の溶解は通常の方法で行えばよく、溶解液中の硫酸化フカン、もしくは該硫酸化フカン含有物の濃度はその最高溶解濃度でもよいが、通常はその操作性、反応に使用する硫酸化フカン分解酵素の量を考慮して選定すればよい。硫酸化フカンの溶解液としては、水、緩衝液等より目的に応じて選択すればよい。溶解液のｐＨは通常中性付近で、酵素反応は通常３０℃付近で行う。反応に使用する硫酸化フカン分解酵素の配合比率や使用量、反応液の組成、反応時間等を調整することによって、硫酸化フカンオリゴ糖の分子量を調整することもできる。上記の様にして得られた硫酸化フカンオリゴ糖を分子量分画あるいは陰イオン交換カラムにより分画することによって、更に均一な分子量あるいは均一な荷電密度分布の硫酸化フカンオリゴ糖を調製することができる。分子量分画は通常よく使用されている方法を適用することができ、例えばゲルろ過法や分子量分画膜を使用すればよい。低分子化物は、必要に応じて更にイオン交換樹脂処理、活性炭処理等の精製操作を行ってもよく、必要に応じて脱塩処理、無菌処理、凍結乾燥処理をすることもできる。この方法により、後述するごとく、ＮＭＲ分析により構造決定可能な均一な構造の本発明の硫酸化フカンオリゴ糖を得ることができる。【００４４】
このようにして得られた硫酸化フカンオリゴ糖としては、特に限定はないが例えば、上記一般式（化１）〜（化６）で表される化学構造を有する硫酸化フカンオリゴ糖が例示される。なお、当該オリゴ糖はガゴメやレッソニア由来の硫酸化フコース含有多糖を硫酸化フカン分解酵素により消化することで得られるオリゴ糖である（特開２００３−１９９５９６参照）。【００４５】
また、化学的手法による本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の製造方法として、例えば酸分解法が例示される。硫酸化フコース含有多糖の酸分解条件としては、特に限定はないが、例えば硫酸化フコース含有多糖やその含有物を酸水溶液に溶解又は懸濁するか、もしくは固体酸の存在下で酸分解反応を行うことにより、本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物が生成する。また、反応時に加熱することにより、本発明に使用される低分子化物の生成に必要な時間が短縮される。使用できる酸としては、特に限定はないが、塩酸、硫酸、硝酸等の無機酸、クエン酸、ギ酸、酢酸、乳酸、アスコルビン酸、リンゴ酸等の有機酸が例示される。また固体酸としては陽イオン交換樹脂、陽イオン交換繊維、陽イオン交換膜等の固体酸が例示される。操作上の観点から、特に好適には陽イオン交換樹脂が好適に使用される。使用される陽イオン交換樹脂とは、特に限定はないが、例えば、三菱化学（株）製のダイヤイオンＳＫ−ＨやＰＫ２０８ＬＨが例示される。【００４６】
本発明に使用される酸分解法による硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の平均分子量としては、特に限定するものではないが、ゲルろ過カラムクロマトグラフィーで測定したプルラン換算の平均分子量が例えば４０００〜８０００、好適には４５００〜７５００、より好適には５０００〜７０００の範囲である低分子化物が例示される。さらに好適には分子量５９００のプルランを指標として本発明の低分子化物の平均分子量をコントロールするのが好ましい。なお、本発明者らは、ガゴメ由来の硫酸化フカンオリゴ糖の１つとして下記式（化８）で表される化合物を分離しており（例えば、特開２００３−１９９５９６）、当該オリゴ糖の分子量を上記と同様の方法で測定したところ約５９００であった。すなわち、本発明で使用される酸分解法による硫酸化フコース含有多糖の低分子化物としては、構成糖の平均数が約７糖である低分子化物が好適に使用される。【００４７】
【化８】
2005095427.tif 000009
【００４８】
酸の濃度についても特に限定はないが、好ましくは０．０００１〜５規定、より好ましくは０．０１〜１規定程度の濃度で使用可能である。また、反応温度も特に限定はないが、０〜２００℃、好ましくは２０〜１３０℃、さらに好ましくは６０〜１００℃に設定すれば良い。【００４９】
また、反応時間も特に限定するものではないが、好ましくは数秒〜数日間に設定すれば良く、好適には３０分〜５時間、特に好適には１時間〜４時間が例示される。なお、上記の使用できる酸や酸の濃度、反応温度、反応時間については、本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の生成量や調製する低分子化物の分子量に応じて適宜設定することが出来る。【００５０】
なお、本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の製造方法としては、原料、例えば褐藻からの公知の硫酸化フコース含有多糖の抽出工程の際に前述の酵素学的手法や化学的手法を施すことにより、より効率的に本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を製造することも出来る。【００５１】
上記の様にして得られた硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を分子量分画あるいは陰イオン交換カラムにより分画することによって、更に均一な分子量あるいは均一な荷電密度分布の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を調製することができる。分子量分画は通常よく使用されている方法を適用することができ、例えばゲルろ過法や分子量分画膜を使用すればよい。低分子化物は、必要に応じて更にイオン交換樹脂処理、活性炭処理等の精製操作を行ってもよく、必要に応じて脱塩処理、無菌処理、凍結乾燥処理をすることもできる。【００５２】
本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物は、硫酸基を分子中に有しており、該基は種々の塩基と反応し、塩を形成する。本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物は、塩になった状態が安定であり、例えばナトリウム及び／又はカリウム及び／又はカルシウム等の塩の形態で提供される。これらの物質の塩はダウエックス５０Ｗ等の陽イオン交換樹脂を利用することによって遊離の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物に導くことが可能である。また、これらは、必要に応じ公知慣用の塩交換を行い所望の種々の塩に交換することができる。【００５３】
本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の塩としては、薬学的に許容される塩を用いることができ、例えばナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、カルシウム、マグネシウム、亜鉛等のアルカリ土類金属、アンモニウム等の塩が挙げられる。【００５４】
また、本発明の組成物としては、上記の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物及び／又は薬理学的に許容される塩を含有する他、その他の成分を含有していても良い。ここでその他の成分としては、特に限定されるものではないが、例えば、下記に示すような医薬に使用される公知の担体を含有していても良い。【００５５】
本発明の組成物、すなわち硫酸化フコース含有多糖の低分子化物及び／又は薬理学的に許容されるその塩を含有する組成物を経口投与することで血栓症の予防効果が見られることから、本発明の組成物は血栓症の治療又は予防に極めて有用である。さらに後述の実施例２に記載のとおり、本発明の組成物は経口投与することによる出血傾向が出現しないことから、副作用のない医薬品素材として極めて有用である。なお、本発明において血栓症としては、血管内での血液の凝固が要因となって起こる各種疾患を包含するものであり、例えば、脳梗塞、心筋梗塞、深部静脈血栓症（エコノミークラス症候群等）、不安定狭心症、脳卒中、肺塞栓症についても本発明の血栓症に包含される。【００５６】
また、下記実施例４に示すとおり、本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物は、うっ血モデルにおける血栓の形成を抑制する。うっ血モデルは特に静脈血流が停滞することで血液が凝固する状態を呈しており、深部静脈血栓症のモデルの一つである。深部静脈血栓症とは、手術侵襲、長期臥床、高張輸液、ギプス固定などが発症の危険因子となり、大腿の奥にある静脈に血のかたまりができる症状をいう。この血栓の一部が歩いている間に血流に乗って肺にとび、肺の血管を閉塞してしまうと肺塞栓症が発症する。また、足から脳や心臓に移動すると、卒中や心臓発作を誘発する恐れもある。これらの症状は、ＱＯＬ（生活の質）を非常に悪化させることに加えて、時には死に至ることもあるため、静脈血栓形成を抑制することには大きな意味がある。すなわち、本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物はこのモデルにおいても血栓形成抑制作用を有することから、血栓の治療又は予防のための医薬品や機能性食品素材として非常に有用である。【００５７】
また、下記実施例５に示すとおり、本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物は、シャントモデルにおける血栓の形成を抑制する。シャントモデルは特に動脈内での組織損傷や血流のうっ滞に対する血液の凝固状態をモデル化したものである。動脈壁の病変としては、狭窄をともなう粥状硬化症、動脈炎、火傷などがあげられる。また、いったん血栓が形成されると血流がおそくなるため血栓が発育しやすくなるといわれている。動脈血栓が生じる部位によってはきわめて重篤な病状を生じさせるため、動脈血栓形成抑制することには大きな意味がある。すなわち、本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物はこのモデルにおいても血栓形成抑制作用を有することから、血栓の治療又は予防のための医薬品や機能性食品素材として非常に有用である。【００５８】
さらに本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物は、実施例４〜６に示されるとおり、硫酸化フコース含有多糖と比較してもより高い血栓症の予防又は治療作用を発揮し、出血傾向も見られず、経口で効果を発揮する点において、非常に有用な医薬、食品素材である。【００５９】
本発明の医薬としては、前記の本発明の組成物の他、前記の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物（以下、本発明の有効成分または前記有効成分と称することがある）そのものであってもよく、また本発明の組成物を含む組成物であってもよい。本発明の医薬は、たとえば、前記組成物を当該組成物と同じ用途に使用可能な他の成分、すなわち抗血栓作用を有する組成物などと配合して使用することができる。【００６０】
本発明の医薬の製造は、通常、前記有効成分を薬学的に許容できる液状または固体状の担体と配合することにより行われ、所望により溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えて、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等の固形剤、通常液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤とすることができる。また、使用前に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品や、その他、外用剤とすることもできる。【００６１】
担体は、本発明の医薬の投与形態および剤型に応じて選択することができる。固体組成物からなる経口剤とする場合は、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤等とすることができ、たとえば、デンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩などが利用される。また経口剤の調製に当っては、更に結合剤、崩壊剤、界面活性剤、潤沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料などを配合することもできる。たとえば、錠剤または丸剤とする場合は、所望によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロースなどの糖衣または胃溶性もしくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。液体組成物からなる経口剤とする場合は、薬理学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤などとすることができ、例えば、精製水、エタノールなどが担体として利用される。また、さらに所望により湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、防腐剤などを添加してもよい。【００６２】
一方、非経口剤とする場合は、常法に従い本発明の前記有効成分を希釈剤としての注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、落花生油、大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどに溶解ないし懸濁させ、必要に応じ、殺菌剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤などを加えることにより調製することができる。また、固体組成物を製造し、使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。【００６３】
外用剤としては、経皮投与用または経粘膜（口腔内、鼻腔内）投与用の、固体、半固体状または液状の製剤が含まれる。また、座剤なども含まれる。例えば、乳剤、ローション剤などの乳濁剤、外用チンキ剤、経粘膜投与用液剤などの液状製剤、油性軟膏、親水性軟膏などの軟膏剤、フィルム剤、テープ剤、パップ剤などの経皮投与用または経粘膜投与用の貼付剤などとすることができる。【００６４】
以上の各種製剤は、それぞれ公知の担体などを利用して、適宜、常法により製造することができる。また、かかる製剤における有効成分の含有量は、その投与形態、投与方法などを考慮し、好ましくは後述の本発明の医薬の投与量範囲で当該有効成分を投与できるような量であれば特に限定されるものではない。例えば、本発明の医薬１００重量％中、通常、０．００１〜１００重量％、好ましくは０．０１〜９０重量％、より好ましくは０．１〜８０重量％である。【００６５】
本発明の医薬を投与することにより、血栓症の予防又は治療効果がみられることから、本発明の医薬は脳梗塞、心筋梗塞、深部静脈血栓症（エコノミークラス症候群等）、不安定狭心症、脳卒中、肺塞栓症の予防又は治療効果が期待できる。【００６６】
本発明の医薬は、製剤形態に応じた適当な投与経路で投与される。投与方法も特に限定はなく、内用、外用および注射によることができる。注射剤は、例えば静脈内、筋肉内、皮下、皮内などに投与し得、外用剤では、たとえば、坐剤をその適する投与方法により投与すればよい。なお、本発明の組成物は経口投与での効果が顕著であることから、好適な投与形態としては、内用が挙げられる。【００６７】
本発明の医薬としての投与量は、その製剤形態、投与方法、使用目的および当該医薬の投与対象である患者の年齢、体重、症状によって適宜設定され一定ではない。一般には、製剤中に含有される前記有効成分の投与量で、ヒト（例えば成人）１日当り０．００００１ｍｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０００１ｍｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．００１ｍｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である。もちろん投与量は、種々の条件によっても変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。投与は、所望の投与量範囲内において、１日内において単回で、または数回に分けて行ってもよく、所定期間に渡って行ってもよい。【００６８】
本発明に係る有効成分には、後述するように特に毒性は認められない。また、副作用の発生の心配もない。それゆえ、該有効成分によれば、安全かつ適切に血栓症の予防又は治療効果を発現させることができる。従って、当該有効成分を含んでなる本発明の医薬、食品又は飲料は、血栓症の予防または治療に有効である。特に本発明の組成物は経口により血栓形成の抑制効果を有することから、本発明の組成物は医薬としてのみではなく、血栓症および血栓症が要因となって誘発される各種疾患の予防又は治療を目的とすることを付した機能性食品（特定保健用食品）素材としても極めて有用である。本発明の機能性食品又は飲料は目の焦点が合わない、手足のしびれ、めまい、ろれつが回らない、頭が重い、吐気がする、頭が激しく痛む等の自覚症状が見られる方や、肩こりの激しい方、血圧が気になる方に対しても有用である。【００６９】
また、本発明は、本発明の組成物を含有する食品又は飲料を提供する。ここで、「含有」とは、含有、添加および／または希釈を意味する。本発明の食品又は飲料は、その抗血栓作用により、上記の疾患の症状改善、予防に極めて有用である。【００７０】
なお、本明細書において、前記「含有」とは食品又は飲料中に本発明で使用される有効成分が含まれるという態様を、前記「添加」とは食品又は飲料の原料に、本発明で使用される有効成分を添加するという態様を、前記「希釈」とは本発明で使用される有効成分に、食品又は飲料の原料を添加するという態様をいうものである。【００７１】
本発明の食品又は飲料の製造法に特に限定はない。たとえば、配合、調理、加工などは一般の食品又は飲料のものに従えばよく、それらの製造法により製造することができ、得られた食品又は飲料に前述の本発明の組成物が含有されていれば良い。【００７２】
本発明の食品または飲料としては特に限定はないが、たとえば、本発明に係る前記有効成分が含有されてなる、穀物加工品（小麦粉加工品、デンプン類加工品、プレミックス加工品、麺類、マカロニ類、パン類、あん類、そば類、麩、ビーフン、はるさめ、包装餅など）、油脂加工品（可塑性油脂、てんぷら油、サラダ油、マヨネーズ類、ドレッシングなど）、大豆加工品（豆腐類、味噌、納豆など）、食肉加工品（ハム、ベーコン、プレスハム、ソーセージなど）、水産製品（冷凍すりみ、かまぼこ、ちくわ、はんぺん、さつま揚げ、つみれ、すじ、魚肉ハム、ソーセージ、かつお節、魚卵加工品、水産缶詰、つくだ煮など）、乳製品（原料乳、クリーム、ヨーグルト、バター、チーズ、練乳、粉乳、アイスクリームなど）、野菜・果実加工品（ペースト類、ジャム類、漬け物類、果実飲料、野菜飲料、ミックス飲料など）、菓子類（ガム、飴、チョコレート、クッキー、ビスケット類、菓子パン類、ケーキ、餅菓子、米菓類など）、アルコール飲料（日本酒、中国酒、ワイン、ウイスキー、焼酎、ウオッカ、ブランデー、ジン、ラム酒、ビール、清涼アルコール飲料、果実酒、リキュールなど）、嗜好飲料（緑茶、紅茶、ウーロン茶、コーヒー、清涼飲料、乳酸飲料など）、調味料（しょうゆ、ソース、酢、みりんなど）、缶詰・瓶詰め・袋詰め食品（牛飯、釜飯、赤飯、カレー、その他の各種調理済み食品）、半乾燥または濃縮食品（レバーペースト、その他のスプレッド、そば・うどんの汁、濃縮スープ類）、乾燥食品（即席麺類、即席カレー、インスタントコーヒー、粉末ジュース、粉末スープ、即席味噌汁、調理済み食品、調理済み飲料、調理済みスープなど）、冷凍食品（すき焼き、茶碗蒸し、うなぎかば焼き、ハンバーグステーキ、シュウマイ、餃子、各種スティック、フルーツカクテルなど）、固形食品、液体食品（スープなど）、香辛料類などの農産・林産加工品、畜産加工品、水産加工品などが挙げられる。【００７３】
本発明の食品または飲料には前記有効成分が単独もしくは複数含有、添加および／または希釈されており、その抗血栓作用を発現するための必要量が含まれていれば特にその形状に限定はなく、タブレット状、顆粒状、カプセル状等の形状の経口的に摂取が容易な形状物も包含する。【００７４】
本発明の食品又は飲料中の前記有効成分の含有量は特に限定されず、その官能と活性発現の観点から適宜選択できるが、例えば、食品又は飲料１００重量％中、０．０１重量％以上、好ましくは０．０５〜１０重量％、より好ましくは０．１〜５重量％である。また本発明の食品又は飲料は、好ましくはそれらに含有される有効成分が、ヒト（例えば成人）１日当り０．００００１ｍｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０００１ｍｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．００１ｍｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重となるように摂取すればよい。もちろん摂取量は、種々の条件によっても変動するので、上記摂取量より少ない量で十分な場合もあるし、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。【００７５】
本発明で使用される前記有効成分は、その作用発現にとっての有効量の投与を生物に対し行っても毒性は認められない。たとえば経口投与の場合、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の乾燥粉末を１ｇ／ｋｇ体重でマウスに単回投与しても死亡例は認められない。また、前記有効成分は、ラットに対し１ｇ／ｋｇ体重を経口単回投与しても死亡例は認められない。【００７６】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例】
【００７７】
実施例１  硫酸化フカンオリゴ糖（酵素処理物）の製造
（１）ガゴメを充分乾燥後、乾燥物２００ｋｇを自由粉砕機（ホソカワミクロン製）により粉砕した。イオン交換水５０００リットルに塩化カルシウム二水和物（日本曹達社製）７３ｋｇを溶解し、次にガゴメ粉砕物２００ｋｇを混合した。液温１２℃から液温９０℃となるまで水蒸気吹込みにより４０分間昇温させ、次いで攪拌下９０〜９５℃に２時間保温し、次いで冷却し、冷却物５０００リットルを得た。次いで固液分離装置（タナベウィルテック社製）を用い、冷却物の固液分離を行い、約４８００リットルの固液分離上清液を調製した。固液分離上清液４８００リットルを分画分子量３万の限外ろ過膜（ダイセン・メンブレン・システム社製ＦＥ１０−ＦＣ−ＦＵＳ０３８２）を用い、３００リットルまで濃縮した。次いでイオン交換水を３００リットル加え、また３００リットルまで濃縮するという操作を５回行い、脱塩処理を行い、得られた処理液３００リットルに、濾過助剤Ｓｉｌｉｋａ＃６００S（中央シリカ社製）４ｋｇとｃｅｌｉｔｅ＃５４５（ジョンズ・マンビル社製）１４ｋｇを加えて濾過し、３００リットルのガゴメ由来の抽出液を得た。この抽出液を遠心薄膜式濃縮機（大川原製作所製エバポールＣＥＰ−３０Ｓ）で濃縮し、５０リットルの濃縮液を得た。この濃縮液を凍結乾燥し、硫酸化フコース含有多糖乾燥物６．２ｋｇを得た。【００７８】
（２）実施例１−（１）で得られた２ｋｇの硫酸化フコース含有多糖を３００ｍＭの塩化ナトリウムと５０ｍＭの塩化カルシウムを含む５０ｍＭのイミダゾール−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５)に溶解し、不溶物を遠心分離法により除去した。得られた硫酸化フコース含有多糖溶液に、５０ｍＵ／ｍｌの硫酸化フカン分解酵素溶液（特開２００３−１９９５９６に記載のフカノバクター  リィティカス由来硫酸化フカン分解酵素）を５リットル加え、２５℃で、２４時間反応させた。さらに、同濃度の硫酸化フカン分解酵素溶液を３リットル加え、２５℃で、２４時間反応させた。
こうして得られた硫酸化フコース含有多糖の酵素消化物を分画分子量３万の限外ろ過膜（ダイセン・メンブレン・システム社製ＦＥ１０−ＦＣ−ＦＵＳ０３８２）を装着させた限外ろ過機により処理し、ろ過液９０リットルを回収した。
得られたろ過液を、ＲＯ膜（ＳＵ−６１０，東レ製）を装着させた逆浸透膜ろ過システムにより、濃縮、脱塩後、２等分し、それぞれを２００ｍＭの塩化ナトリウムを含む２０ｍＭのイミダゾール−塩酸緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化した、４５リットルのＤＥＡＥ−セファロースＦＦカラムにかけ、同緩衝液で洗浄後、２００ｍＭから１Ｍの塩化ナトリウムの濃度勾配により溶出させた。溶出液を５リットルずつ分画し、それぞれをセルロースアセテート膜電気泳動法により分析し、泳動距離の長い低分子オリゴ糖（５、６、７糖が多く含有）と、泳動距離の短い高分子オリゴ糖に区別した。低分子オリゴ糖画分をまとめ、ＲＯ膜（ＳＵ−６１０，東レ製）を装着させた逆浸透膜ろ過システムにより、濃縮、脱塩後、凍結乾燥し、本発明の硫酸化フカンオリゴ糖１５０ｇを得た。【００７９】
実施例２  硫酸化フカンオリゴ糖の血栓形成抑制作用
Ｗｉｓｔａｒラット（８週齢、雄性、体重２７０±１８ｇ）はＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ（Ｑｕｅｂｅｃ，  Ｃａｎａｄａ）より購入した。実施例１で調製した硫酸化フカンオリゴ糖は水に溶解して０．１％水溶液を調製し、飲水として３０日間与えた。対照群のラットには水を与えた。３０日目にトロンボシス試験を行った。トロンボシス試験は、Ｂｌａｋｅらの方法にしたがって行った。すなわち、ラットをバルビタールとメトキシフルラン（Ｊａｎｓｓｅｎ社、Ｔｏｒｏｎｔｏ）で麻酔をし、頸部を切開して頸静脈を露出させた。その頸静脈上に１０％ホルマリンを加えた６５％メタノール溶液を数滴滴下し、すぐに閉じた。４時間後に、再びラットを麻酔下で、頸部を開口して頸静脈に形成された血栓の状態を観察した。血栓の状態は、綿棒で血管を軽く触ることにより調べ、強固なものをＨａｒｄ  ｃｌｏｔ、不安定で柔らかいものをＳｏｆｔ  ｃｌｏｔ、血栓が認められないものをＮｅｇａｔｉｖｅと判定した。血栓発生率（Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）（％）は、（Ｈａｒｄ  ｃｌｏｔの観察された個体数）／（実験に用いた個体数）×１００と、（Ｓｏｆｔ  ｃｌｏｔの観察された個体数）／（実験に用いた個体数）×１００をグラフ化し、図１に示す。図中、Ｈａｒｄ  ｃｌｏｔを黒棒で、Ｓｏｆｔ  ｃｌｏｔを白棒で示す。なお、本実験に用いた個体数は、対照群が１０匹、０．１％硫酸化フカンオリゴ糖投与群が１９匹である。
また、同時に腹部下大動脈より採血を行い、０．３％クエン酸ナトリウム処理をした血漿を回収し、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）をＡＰＴＴ  Ｋｉｔ（Ｖｅｎｔｕｒａ社、ＵＳＡ）を用いて測定した。その結果を表１に示す。【００８０】
【表１】
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【００８１】
図１に示す様に対照群のラットと比較すると、飲用水に硫酸化フカンオリゴ糖を０．１％添加した群では有意に血栓の形成が抑制された。
また、表１に示す様に硫酸化フカンオリゴ糖の投与によるＡＰＴＴ値の増加はなく、硫酸化フカンオリゴ糖の経口投与による出血傾向の副作用が出現する可能性はないと考えられた。【００８２】
実施例３  硫酸化フコース含有多糖の酸分解物の製造
（１）ガゴメを充分乾燥後、乾燥物２００ｋｇを自由粉砕機（ホソカワミクロン製）により粉砕した。イオン交換水５０００リットルに塩化カルシウム二水和物（日本曹達社製）７３ｋｇを溶解し、次にガゴメ粉砕物２００ｋｇを混合した。液温１２℃から液温９０℃となるまで水蒸気吹込みにより４０分間昇温させ、次いで攪拌下９０〜９５℃に２時間保温し、次いで冷却し、冷却物５０００リットルを得た。次いで固液分離装置（タナベウィルテック社製）を用い、冷却物の固液分離を行い、約４８００リットルの固液分離上清液を調製した。固液分離上清液４８００リットルを分画分子量３万の限外ろ過膜（ダイセン・メンブレン・システム社製ＦＥ１０−ＦＣ−ＦＵＳ０３８２）を用い、３００リットルまで濃縮した。次いでイオン交換水を加え、また３００リットルまで濃縮するという操作を５回行い、脱塩処理を行った。処理液を抜き出した後、イオン交換水でＵＦ膜を押し出し、両者をあわせ濃縮脱塩液とした。この濃縮脱塩液４５０リットルに、濾過助剤Ｓｉｌｉｋａ＃６００Ｓを４ｋｇとｃｅｌｉｔｅ＃５４５を１４ｋｇ添加し、４ｋｇの濾過助剤Ｓｉｌｉｋａ＃６００Ｓでプレコートしたリンターフィルター（内外醸機工業社製）で濾過を行った。得られた濾過液４００リットルをガゴメ由来の抽出液とした。【００８３】
（２）上記実施例３−（１）で調製したガゴメ由来の抽出液３８リットル（フコース硫酸含有多糖定量値において１５ｇ／リットル）を湯浴にて９０℃まで加熱した。このとき熱水で洗浄を行った７６ｇの三菱化学（株）社製樹脂ダイヤイオンＳＫ−１０４Ｈ（０．０２ｇ／１０ミリリットル）を添加した。その後温度を保ちながら３０分毎にサンプリングを行い、昭和電光社製ゲルろ過カラムＳｈｏｄｅｘ  ＯＨｐａｋ  ＳＢ８０３を用い高速液体クロマトグラフィーにて平均分子量の測定を行った。加熱３時間を経過した時点で平均分子量が分子量５９００であるプルラン標準物質（昭和電工社製）と同じ溶出位置となったため冷却を行った。室温まで冷却された後、１００メッシュストレーナーにより添加した樹脂を取り除き、加熱処理液を得た。得られた加熱処理液を５％水酸化カルシウム懸濁液でｐＨを６．６に調整した。このｐＨ調整液を凍結乾燥し、硫酸化フコース含有多糖の酸分解物凍乾物５８５ｇを得た。【００８４】
実施例４  うっ血モデルによる血栓形成抑制試験
雄性Ｗｉｓｔａｒラットを日本ＳＬＣ社から購入し、予備飼育の後１２週齢より実験に用いた。水道水に実施例１−（１）で調製した硫酸化フコース含有多糖を５％の割合で、また、実施例３で調製した硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を１％の割合で飲用水に溶解し、ラットに自由摂取させた。連続１週間投与を行った後、うっ血血栓の形成を誘導した。血栓形成誘導は、ペントバルビタールナトリウム麻酔下に腹部を切開して行った。下大静脈を露出し、左腎静脈から腸骨静脈までのすべての分枝を結紮した後、最後に左腎静脈の直下で下大静脈を結紮し、下大静脈内をうっ血状態とした。４時間後、腹部を再切開して下大静脈内に形成された血栓を取り出し、重量を測定した。水道水を自由摂取させた群を対照群として、硫酸化フコース含有多糖投与群および硫酸化フコース含有多糖の酸分解物投与群と比較した。各群９匹の平均値±標準誤差を表２に示した。【００８５】
【表２】
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【００８６】
その結果、対照群に比し硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を投与した群においては血栓重量の顕著な抑制作用が認められた。硫酸化フコース含有多糖では硫酸化フコース含有多糖の酸分解物より高用量を投与したときにのみ抑制作用が認められた。いずれの投与群でも、投与期間中の体重変化および摂水量の変化には影響しなかった。【００８７】
実施例５  シャントモデルによる血栓形成抑制試験
雄性Ｗｉｓｔａｒラットを日本ＳＬＣ社から購入し、予備飼育の後１２週齢より実験に用いた。実施例４と同様に、硫酸化フコース含有多糖５％および硫酸化フコース含有多糖の酸分解物１％を飲用水に溶解し、ラットに自由摂取させた。連続１週間投与を行った後、動静脈シャント内に血栓を形成させた。血栓形成は、ペントバルビタールナトリウム麻酔下に頸部を切開して行った。頸動脈と頸静脈の間に予め絹糸を挿入したシャントを形成し、血液を灌流した。１５分後絹糸を取り出し、絹糸上に形成した血栓の重量を測定した。水道水を自由摂取させた群を対照群として、硫酸化フコース含有多糖投与群および硫酸化フコース含有多糖の酸分解物投与群と比較した。各群８〜９匹の平均値±標準誤差を表３に示した。【００８８】
【表３】
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【００８９】
その結果、対照群に比し硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を投与した群においては血栓重量の顕著な抑制作用が認められた。硫酸化フコース含有多糖では硫酸化フコース含有多糖の酸分解物より高用量を投与したときにのみ抑制作用が認められた。いずれの投与群でも、投与期間中の体重変化および摂水量の変化に大きな差がなかった。【００９０】
実施例６  ラット血しょう中の抗Ｘａ活性試験
実施例１−（１）で調製した硫酸化フコース含有多糖および実施例３で調製した硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を蒸留水に溶解し、健常ラット血しょうを用いて、これらの抗Ｘａ活性を測定した。活性測定には合成基質（Ｓ−２２２２、ＫＡＢＩ社）を用い、一定量の過剰Ｘａ因子の共存下で残存する活性をｐ−ニトロアニリンの吸光度を測定することにより活性測定を行った。緩衝液を添加した時の吸光度をブランクとして、硫酸化フコース含有多糖および硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を添加した時の吸光度を表４に示した。【００９１】
【表４】
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【００９２】
緩衝液を添加したときのブランクに比し、硫酸化フコース含有多糖を添加するとラット血しょう中のＸａ因子の活性が抑制された。硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を添加した場合には、さらに強く抑制された。
Ｘａ因子は血栓の形成において、プロトロンビンがトロンビンになる際に働く重要な因子であるが、硫酸化フコース含有多糖の酸分解物は、硫酸化フコース含有多糖と比較してもより強くＸａ因子の働きを抑制することにより、血栓形成をより効果的に抑制する可能性が確認された。【００９３】
実施例７
下記の表５または表６に示す配合で常法に従って２種類のキャンディーを試作した。
【表５】
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【００９４】
【表６】
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【００９５】
実施例８
下記の表７または表８に示す配合で常法に従って２種類のチョコレートを試作した。【００９６】
【表７】
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【００９７】
【表８】
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【００９８】
実施例９
下記の表９または表１０に示す配合で常法に従って２種類のクッキーを試作した。【００９９】
【表９】
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【０１００】
【表１０】
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【産業上の利用可能性】
【０１０１】
本発明により硫酸化フコース含有多糖の低分子化物、硫酸化フコース含有オリゴ糖を含有する血栓症の予防又は治療のための組成物、当該組成物を含有する医薬、食品又は飲料が提供される。当該医薬、食品又は飲料は、脳梗塞、心筋梗塞、深部静脈血栓症、不安定狭心症、脳卒中、肺塞栓症の治療又は予防に有用である。
【図１】
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【国際調査報告】
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