(57)【要約】本発明により、ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、ＮＦ−κＢ活性化阻害剤およびＩκＢリン酸化阻害剤が提供される。本発明により、肝癌患者に対するビタミンＫ２の治療剤としての有効性に加え、ビタミンＫ２が長期間投与しても極めて高い安全性が期待できることから、長期間治療を続けることにより、肝癌患者の生活の質を大きく改善することが可能となった。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、ＮＦ−κＢ活性化阻害剤。
【請求項２】
ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、ＩκＢリン酸化阻害剤。
【請求項３】
ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、糖尿病治療剤、及び腎不全治療剤からなる群から選ばれる１以上の剤。
【請求項４】
ビタミンＫ２又はその水和物がＮＦ−κＢの活性化及び／又はＩκＢのリン酸化を阻害することを特徴とする、請求項３記載の剤。
【請求項５】
ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、サイクリンＤ１発現阻害剤。
【請求項６】
ビタミンＫ２がメナテトレノンである、請求項１〜５のいずれか１項記載の剤。
【請求項７】
ビタミンＫ２又はその水和物を生体に投与することを特徴とするＮＦ−κＢ活性化阻害方法。
【請求項８】
ビタミンＫ２又はその水和物を生体に投与することを特徴とするＩκＢリン酸化阻害方法。
【請求項９】
ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む剤を患者に有効量投与することを特徴とする、炎症、リウマチ、免疫抑制、アレルギー、移植拒絶反応、乾癬、ウイルス性疾患、動脈硬化、虚血性再灌流障害、糖尿病、及び腎不全からなる群から選ばれる１以上の疾患の治療方法。
【請求項１０】
請求項４記載の剤を、患者に有効量投与することを特徴とする、炎症、リウマチ、免疫抑制、アレルギー、移植拒絶反応、乾癬、ウイルス性疾患、動脈硬化、虚血性再灌流障害、糖尿病、及び腎不全からなる群から選ばれる１以上の疾患の治療方法。
【請求項１１】
ビタミンＫ２又はその水和物を生体投与することを特徴とするサイクリンＤ１発現阻害方法。
【請求項１２】
ビタミンＫ２がメナテトレノンである、請求項７〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
ＮＦ−κＢ活性化阻害剤を製造するためのビタミンＫ２又はその水和物の使用。
【請求項１４】
ＩκＢリン酸化阻害剤を製造するためのビタミンＫ２又はその水和物の使用。
【請求項１５】
抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、糖尿病治療剤、および腎不全治療剤からなる群から選ばれる１以上を製造するための、ビタミンＫ２又はその水和物の使用。
【請求項１６】
請求項４記載の剤を製造するための、ビタミンＫ２又はその水和物の使用。
【請求項１７】
サイクリンＤ１発現阻害剤を製造するためのビタミンＫ２又はその水和物の使用。
【請求項１８】
ビタミンＫ２がメナテトレノンである、請求項１３〜１７のいずれか１項記載の使用。
【請求項１９】
ビタミンＫ２又はその水和物と、抗腫瘍物質とを組み合わせてなる肝癌治療剤。
【請求項２０】
ビタミンＫ２又はその水和物と、５−ＦＵとを組み合わせてなる肝癌治療剤。
【請求項２１】
ビタミンＫ２がメナテトレノンである、請求項１９または２０記載の肝癌治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、ビタミンＫ２（例えばメナテトレノン）又はその水和物を有効成分として含むサイクリンＤ１発現抑制剤、ＮＦ−κＢ活性化阻害剤およびＩκＢリン酸化阻害剤に関する。また、これらの阻害剤を有効成分として含む癌細胞増殖抑制剤および癌治療剤に関する。さらに、本発明は、ビタミンＫ２（例えばメナテトレノン）又はその水和物を有効成分として含む抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、糖尿病治療剤および腎不全治療剤に関する。
【背景技術】  ビタミンＫは、ビタミンＫ依存性タンパク質のＮ末端に存在するグルタミン酸残基を、生理活性を有するγ−カルボキシグルタミン酸（ＧＬＡ）に変換する酵素であるγ−グルタミルカルボキシラーゼの補酵素である。そして、ビタミンＫは血液凝固ＩＩ因子（プロトロンビン）、ＶＩＩ、ＩＸやＸ等のビタミンＫ依存性タンパク質の生合成に不可欠なビタミンである。
ビタミンＫファミリーは、天然体のＫ１（フィトナジオン）、Ｋ２（メナテトレノン）や合成体のＫ３（メナジオン）から構成される。なかでも、ビタミンＫ２、特にメナテトレノンは骨粗鬆症の治療薬として販売されている。
ビタミンＫ２、例えばメナテトレノンは、肝癌細胞株（Ｈｅｐ３Ｂ、Ｈｅｐ４０）の増殖を抑制することが報告されている（１−３）。また、メナテトレノンは、白血病細胞（Ｐｒｉｍａｒｙ，ＨＬ−６０など）において、アポトーシスや分化を誘導することが知られている（４−７）。さらには、メナテトレノンの側鎖であるゲラニルゲラニオールが、腫瘍細胞株（ＨＬ−６０、Ｋ５６２、Ｍｏｌｔ３、Ｃｏｌｏ３２０ＤＭ）においてアポトーシスを誘導することが報告されており（８）、同様にメナキノン−３、メナキノン−４及びメナキノン−５等のビタミンＫ２が、初代培養白血病細胞においてアポトーシスを誘導することが報告されている（４）。また近年、メナテトレノンが肝癌治療後の患者における肝癌の再発を抑制し、生存率を高めることが知られている（９）。
しかしながら、ビタミンＫ２が、どのような分子機構により癌細胞増殖を抑制するかは十分に解明されていない。
近年、抗腫瘍剤による癌治療においては、抗腫瘍作用を示す分子機構を明らかにすることによって、より治療効果の期待できる患者を選択して治療する、いわゆるオーダーメイド医療が行われている。したがって、癌治療剤の抗腫瘍作用を示す分子機構を明らかにすることは、治療効果の期待できる患者を選択する上で有用である。
また、各種炎症性疾患、リウマチ、免疫反応性疾患、癌転移、ウイルス性疾患は、難治性の疾患であり長期間の治療が必要となるため、副作用の少ない安全性の高い治療剤が求められている。
参考文献
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３）Ｎｉｓｈｉｋａｗａ  Ｙ，Ｃａｒｒ  ＢＩ，Ｗａｎｇ  Ｍ，Ｋａｒ  Ｓ，Ｆｉｎｎ  Ｆ，Ｄｏｗｄ  Ｐ，Ｚｈｅｎｇ  ＺＢ，Ｋｅｒｎｓ  Ｈ  ａｎｄ  Ｎａｇａｎａｔｈａｎ  Ｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２７０：２８３０４−２８３１０，１９９５．
４）Ｙａｇｕｃｈｉ  Ｍ，Ｍｉｙａｚａｗａ  Ｋ，Ｋａｔａｇｉｒｉ  Ｔ，Ｎｉｓｈｉｍａｋｉ  Ｊ，Ｋｉｚａｋｉ  Ｍ，Ｔｏｈｙａｍａ  Ｋ  ａｎｄ  Ｔｏｙａｍａ  Ｋ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１１：７７９−７８７，１９９７
５）Ｙａｇｕｃｈｉ  Ｍ，Ｍｉｙａｚａｗａ  Ｍ，Ｏｔａｗａ  Ｍ，Ｋａｔａｇｉｒｉ  Ｔ，Ｎｉｓｈｉｍａｋｉ  Ｊ，Ｕｃｈｉｄａ  Ｙ，Ｉｗａｓｅ  Ｏ，Ｇｏｔｏｈ  Ａ，Ｋａｗａｎｉｓｈｉ  Ｙ  ａｎｄ  Ｔｏｙａｍａ  Ｋ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１２：１３９２−１３９７，１９９８
６）Ｎｉｓｈｉｍａｋｉ  Ｊ，Ｍｉｙａｚａｗａ  Ｋ，Ｙａｇｕｃｈｉ  Ｍ，Ｋａｔａｇｉｒｉ  Ｔ，Ｋａｗａｎｉｓｈｉ  Ｙ，Ｔｏｙａｍａ  Ｋ，Ｏｈｙａｓｈｉｋｉ  Ｋ，Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  Ｓ，Ｎａｋａｙａ  Ｋ  ａｎｄ  Ｔａｋｉｇｕｃｈｉ  Ｔ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１３：１３９９−１４０５，１９９９
７）Ｍｉｙａｚａｗａ  Ｋ，Ｙａｇｕｃｈｉ  Ｍ，Ｆｕｎａｔｏ  Ｋ，Ｇｏｔｏｈ  Ａ，Ｋａｗａｎｉｓｈｉ  Ｙ，Ｎｉｓｈｉｚａｗａ  Ｙ，Ｙｏｕ  Ａ  ａｎｄ  Ｏｈｙａｓｈｉｋｉ  Ｋ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１５：１１１１−１１１７，２００１
８）Ｏｈｉｚｕｍｉ  Ｈ，Ｍａｓｕｄａ  Ｙ，Ｎａｋａｊｏ  Ｓ，Ｓａｋａｉ  Ｉ，Ｏｈｓａｗａ  Ｓ  ａｎｄ  Ｎａｋａｙａ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１１７：１１−１３，１９９５
９）国際公開第０３／１０５８１９号パンフレット
【発明の開示】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その解決しようとする課題は、メナテトレノンに代表されるビタミンＫ２が、どのような分子機構により癌細胞増殖を抑制するかを解明し、癌患者に対して、有効性が高く、安全性に優れた薬剤および治療方法を提供することにある。
また、本発明は、ビタミンＫ２の分子機構を解明し、新たな疾患の治療剤および治療方法を提供することにある。
本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意検討を重ねた結果、メナテトレノンが肝癌細胞において、サイクリンＤ１の発現を阻害すること、ＮＦ−κＢを阻害すること、ＩκＢのリン酸化を阻害することを見出した。
また、メナテトレノンがサイクリンＤ１の発現を阻害すること、ＮＦ−κＢを阻害すること、ＩκＢのリン酸化を阻害することから、メナテトレノンが癌細胞増殖抑制、癌治療において有用であること、さらに、抗腫瘍剤と組み合わせることにより、メナテトレノンの抗腫瘍作用が増強されることを見出した。
さらには、メナテトレノンがＮＦ−κＢの活性化を阻害することから、抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、糖尿病治療剤または腎不全治療剤として有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、以下に関する。
（１）  ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、ＮＦ−κＢ活性化阻害剤。
（２）  ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、ＩκＢリン酸化阻害剤。
（３）  ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、糖尿病治療剤、及び腎不全治療剤からなる群から選ばれる１以上の剤。
（４）  ビタミンＫ２又はその水和物がＮＦ−κＢの活性化及び／又はＩκＢのリン酸化を阻害することを特徴とする、（３）記載の剤。
（５）  ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、サイクリンＤ１発現阻害剤。
（６）  ビタミンＫ２がメナテトレノンである、（１）〜（５）のいずれか１項記載の剤。
（７）  ビタミンＫ２又はその水和物を生体に投与することを特徴とするＮＦ−κＢ活性化阻害方法。
（８）  ビタミンＫ２又はその水和物を生体に投与することを特徴とするＩκＢリン酸化阻害方法。
（９）  ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む剤を患者に有効量投与することを特徴とする、炎症、リウマチ、免疫抑制、アレルギー、移植拒絶反応、乾癬、ウイルス性疾患、動脈硬化、虚血性再灌流障害、糖尿病、及び腎不全からなる群から選ばれる１以上の疾患の治療方法。
（１０）（４）記載の剤を、患者に有効量投与することを特徴とする、炎症、リウマチ、免疫抑制、アレルギー、移植拒絶反応、乾癬、ウイルス性疾患、動脈硬化、虚血性再灌流障害、糖尿病、及び腎不全からなる群から選ばれる１以上の疾患の治療方法。
（１１）ビタミンＫ２又はその水和物を生体投与することを特徴とするサイクリンＤ１発現阻害方法。
（１２）ビタミンＫ２がメナテトレノンである、（７）〜（１１）のいずれか１項に記載の方法。
（１３）ＮＦ−κＢ活性化阻害剤を製造するためのビタミンＫ２又はその水和物の使用。
（１４）ＩκＢリン酸化阻害剤を製造するためのビタミンＫ２又はその水和物の使用。
（１５）抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、糖尿病治療剤、および腎不全治療剤からなる群から選ばれる１以上を製造するための、ビタミンＫ２又はその水和物の使用。
（１６）（４）記載の剤を製造するための、ビタミンＫ２又はその水和物の使用。
（１７）サイクリンＤ１発現阻害剤を製造するためのビタミンＫ２又はその水和物の使用。
（１８）ビタミンＫ２がメナテトレノンである、（１３）〜（１７）のいずれか１項記載の使用。
（１９）ビタミンＫ２又はその水和物と、抗腫瘍物質とを組み合わせてなる癌治療剤。
（２０）ビタミンＫ２又はその水和物と、５−ＦＵとを組み合わせてなる癌治療剤。
（２１）ビタミンＫ２がメナテトレノンである、（１９）または（２０）記載の癌治療剤。
（２２）癌が、肝癌である、（１９）〜（２１）のいずれか１項記載の癌治療剤。
また、本発明は、以下に関する。
（２３）（１）、（２）および（５）のいずれか１項記載の阻害剤を有効成分として含む、癌細胞増殖抑制剤。
（２４）（１）、（２）および（５）のいずれか１項記載の阻害剤を有効成分として含む、癌治療剤。
（２５）ビタミンＫ２がメナテトレノンである、（２３）または（２４）記載の剤。
（２６）癌が、肝癌である、（２３）〜（２５）のいずれか１項記載の剤。
（２７）（１）、（２）および（５）のいずれか１項記載の阻害剤を、患者に有効量投与することを特徴とする、癌細胞の増殖抑制方法。
（２８）（１）、（２）および（５）のいずれか１項記載の阻害剤を、患者に有効量投与することを特徴とする、癌の治療方法。
（２９）ビタミンＫ２がメナテトレノンである、（２７）または（２８）記載の方法。
（３０）癌が、肝癌である、（２７）〜（２９）のいずれか１項記載の方法。
（３１）（１）、（２）および（５）のいずれか１項記載の阻害剤を有効成分として含む癌細胞増殖抑制剤を製造するためのビタミンＫ２又はその水和物の使用。
（３２）（１）、（２）および（５）のいずれか１項記載の阻害剤を有効成分として含む癌治療剤を製造するためのビタミンＫ２又はその水和物の使用。
（３３）ビタミンＫ２がメナテトレノンである、（３１）または（３２）記載の使用。
（３４）癌が、肝癌である、（３１）〜（３３）のいずれか１項記載の使用。
本発明により、癌細胞、好ましくは肝癌細胞において、サイクリンＤ１の発現を阻害すること、ＮＦ−κＢの活性化を阻害すること、ＩκＢのリン酸化を阻害することが可能となった。また、これらの分子を阻害すると癌細胞、好ましくは肝癌細胞の増殖が抑制されるため、より治療効果の期待できる患者を選択して治療することが可能となった。
また、本発明により、癌患者に対するビタミンＫ２（例えばメナテトレノン）の治療剤としての有効性に加え、ビタミンＫ２と抗腫瘍剤とを組み合わせて使用することによりビタミンＫ２の抗腫瘍作用が増強されることから、癌患者の生活の質を大きく改善することが可能となった。
さらには、本発明により、ビタミンＫ２がＮＦ−κＢの活性化およびＩκＢのリン酸化を阻害することから、ビタミンＫ２は、ＮＦ−κＢの活性化またはＩκＢのリン酸化に関連する疾患の治療に有効であり、ビタミンＫ２は、抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、糖尿病治療剤または腎不全治療剤の有効成分として用いることが可能となった。
【図面の簡単な説明】  図１は、メナテトレノン処理によるサイクリンＤ１の変化をウェスタンブロット法（Ａ）、ＲＴ−ＰＣＲ法（Ｂ）およびルシフェラーゼレポーターアッセイ（Ｃ）により解析した結果を示したものである。
図２は、メナテトレノンがＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性に与える影響をゲルシフトアッセイにより検討した結果を示したものである。
図３は、ＮＦ−κＢの転写活性に与えるメナテトレノンの影響を、ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポータープラスミドを用いて検討した結果を示したものである。
図４は、メナテトレノンによるサイクリンＤ１プロモーター活性調節における転写因子ＡＰ−１およびＮＦ−κＢの役割を検討するため、肝癌細胞において、野生型ＡＰ−１およびＮＦ−κＢ結合部位を持つサイクリンＤ１プロモーターと、結合活性のない変異型ＡＰ−１およびＮＦ−κＢ結合部位を持つサイクリンＤ１プロモーターとを用いてルシフェラーゼレポーターアッセイを行い、ＡＰ−１およびＮＦ−κＢの転写因子の影響を検討した結果を示したものである。
図５は、メナテトレノンによるサイクリンＤ１プロモーター活性に対するＮＦ−κＢ依存性を確認するため、ＮＦ−κＢのサブユニットであるｐ６５／ＲｅｌＡを肝癌細胞に導入し過剰発現させ、メナテトレノンによるサイクリンＤ１プロモーター活性の抑制が解除されるか否かを検討した結果を示したものである。
図６は、肝癌細胞の増殖抑制が、ＮＦ−κＢあるいはサイクリンＤ１に依存的であるか否かを検討するため、ＮＦ−κＢのサブユニットであるｐ６５／ＲｅｌＡあるいはサイクリンＤ１遺伝子を肝癌細胞ＨｅｐＧ２に導入しメナテトレノンによる増殖抑制が変化するかどうかを検討した結果を示したものである。
図７は、肝癌細胞の増殖抑制が、ＮＦ−κＢあるいはサイクリンＤ１に依存的であるか否かを検討するため、ＮＦ−κＢのサブユニットであるｐ６５／ＲｅｌＡあるいはサイクリンＤ１遺伝子を肝癌細胞Ｈｅｐ３Ｂに導入しメナテトレノンによる増殖抑制が変化するかどうかを検討した結果を示したものである。
図８は、肝癌細胞ＨｅｐＧ２，Ｈｅｐ３Ｂ，Ｈｕｈ７にアポトーシスを起こさない低濃度の５−ＦＵ（５μｇ／ｍｌ）とメナテトレノンとを肝癌細胞に作用させ、細胞増殖に与える影響を検討した結果を示したものである。
図９は、ＩκＢのリン酸化、ＩκＢタンパク質の発現量、ｐ６５サブユニットの核への移行をウェスタンブロット法にて解析した結果を示したものである。
図１０は、ＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βにより誘導されるＮＦ−κＢの活性化に対するメナテトレノンの効果を、ルシフェラーゼレポーターアッセイで検討した結果を示したものである。
図１１は、ＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βにより誘導されるＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性に対するメナテトレノンの効果を、ゲルシフトアッセイで検討した結果を示したものである。
図１２は、ＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β刺激下におけるＩκＢのリン酸化およびＩκＢタンパク質量に対するメナテトレノンの効果を、ウェスタンブロット法により解析した結果を示したものである。
図１３は、ＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β刺激下におけるＩＫＫ複合体のキナーゼ活性に対するメナテトレノンの効果を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼアッセイで解析した結果を示したものである。
【発明を実施するための最良の形態】  以下に本発明の実施の形態について説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態にのみ限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、さまざまな形態で実施をすることができる。
なお、本明細書において引用した文献、および公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。
１．概要
ビタミンＫ２は、癌細胞の増殖を抑制する作用を有することが知られている。本発明者は、この癌細胞増殖抑制作用の分子機序を明らかにしたところ、意外にも、ビタミンＫ２は、細胞増殖に重要な役割を担う因子であるサイクリンＤ１の発現を阻害することを見出した。そして、このサイクリンＤ１の発現阻害は、ビタミンＫ２によって、サイクリンＤ１プロモーターの転写因子であるＩκＢのリン酸化が阻害され、ＮＦ−κＢの活性化が阻害されることに起因するものであった。すなわち、ビタミンＫ２は、ＩκＢのリン酸化を阻害することで、ＮＦ−κＢの活性化を阻害し、その結果、ＮＦ−κＢを転写因子とするサイクリンＤ１の発現が阻害されることが初めて明らかとなった。
したがって、本発明は、ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、サイクリンＤ１発現阻害剤、ＮＦ−κＢ活性化阻害剤、ＩκＢリン酸化阻害剤、及びこれらの阻害剤を有効成分として含む癌細胞増殖抑制剤、癌治療剤、並びにビタミンＫ２又はその水和物を用いたサイクリンＤ１発現阻害方法、ＮＦ−κＢ活性化阻害方法、ＩκＢリン酸化阻害方法、および前記抑制剤を用いた癌細胞増殖抑制方法、癌の治療方法を提供する。
また、本発明は、癌患者に対するビタミンＫ２又はその水和物と抗腫瘍物質とを組み合わせてなる癌治療剤を提供する。
さらに、ビタミンＫ２がＮＦ−κＢの活性化を阻害することおよびＩκＢのリン酸化を阻害することから、ビタミンＫ２は、ＮＦ−κＢの活性化又はＩκＢのリン酸化に起因する疾患の治療に有用である。従って、本発明は、ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、糖尿病治療剤または腎不全治療剤およびこれらを用いた治療方法を提供する。本発明において、ビタミンＫ２またはその水和物は、上記の剤全て又は二つ以上の組合せについての有効成分として用いることもできるし、上記の剤の一つについての有効成分として用いることもできる。
（１）ＮＦ−κＢ活性化阻害剤、ＩκＢリン酸化阻害剤
本発明者は、ビタミンＫ２が、肝癌細胞においてＮＦ−κＢの活性化を阻害することおよびＩκＢのリン酸化を阻害することを見出した。従って、ビタミンＫ２はＮＦ−κＢの活性化阻害剤およびＩκＢのリン酸化阻害剤の有効成分として用いることができる。
ＮＦ−κＢは、転写因子の一つであり、ＩκＢと複合体を形成し、不活性化状態で細胞質に存在することが知られている（Ｂａｅｕｅｒｌｅ，Ｐ．Ａ．ａｎｄ  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，５４０−５４６，１９８８；Ｂｅｇ，Ａ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．７，２０６４−２０７０，１９９３；Ｆｉｎｃｏ，Ｔ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１，１１８８３−１１８８８，１９９４．）。不活性化状態の複合体は、ＩκＢのアミノ酸配列のうち第３２番目のセリン（Ｓｅｒｉｎｅ−３２）および第３６番目のセリン（Ｓｅｒｉｎｅ−３６）のリン酸化を介して活性化され、活性化ＮＦ−κＢは、核内へ移行する（Ｆｉｎｃｏ，Ｔ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１，１１８８３−１１８８８，１９９４；Ｂｒｏｗｎ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６７，１４８５−１４８８，１９９５；Ｂｒｏｃｋｍａｎ，Ｊ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５，２８０９−２８１８，１９９５；Ｔｒａｅｎｃｋｎｅｒ，Ｅ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．ＥＭＢＯ  Ｊ．１４，２８７６−２８８３，１９９５；Ｃｈｅｎ，Ｚ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ８４，８５３−８６２，１９９６．）。そして、さまざまなタンパク質の転写を活性化し、サイトカイン、ケモカイン、接着分子、サイクリンなどの発現量を増加させる。
ビタミンＫ２は、ＩκＢのリン酸化を阻害するため、不活性化状態の複合体は活性化されず、その結果、ビタミンＫ２によってＮＦ−κＢの活性化が阻害されることになる。
従って、ビタミンＫ２又はその水和物、あるいは、ビタミンＫ２又はその水和物を含むＮＦ−κＢの活性化を阻害する剤およびＩκＢのリン酸化を阻害する剤は、ＮＦ−κＢの活性化阻害およびＩκＢのリン酸化阻害を介して、サイトカイン、ケモカイン、接着分子、サイクリンなどの発現量の増加を抑制させることが可能となる。すなわち、ＮＦ−κＢ活性化阻害剤およびＩκＢリン酸化阻害剤は、これらの生理活性物質に起因する疾患の治療に有用である。具体的には、当該剤は、例えば、抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、糖尿病治療剤または腎不全治療剤の有効成分として有用である。また、ＮＦ−κＢの活性化阻害剤およびＩκＢリン酸化阻害剤は、サイクリンＤ１の発現抑制剤としても有用である。このサイクリンＤ１は細胞増殖に重要な役割を担うことが知られている。すなわち、ＮＦ−κＢ活性化阻害剤またはＩκＢリン酸化阻害剤は、細胞増殖抑制剤および癌治療剤として有用である。
本明細書において、「癌」は特に限定されず、例えば、脳腫瘍、頚癌、食道癌、甲状腺癌、舌癌、肺癌、乳癌、膵癌、胃癌、肝癌、胆道癌、脾臓癌、大腸癌、小腸や十二指腸の癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌、腎癌、前立腺癌、子宮癌、卵巣癌、精巣癌、肉腫及びメラノーマからなる群から選択される少なくとも１つを挙げることができるが、好ましくは肝癌である。本発明において、ビタミンＫ２は、好ましくはメナテトレノンであり、また、細胞増殖抑制の対象および癌治療の対象は、好ましくは肝癌細胞および肝癌である。
本発明において「ＩκＢリン酸化阻害剤」とは、生体又は生体の一部において、ＮＦ−κＢとの解離に必要なＩκＢのリン酸化を阻害する作用を有する剤を意味する。ＩκＢをリン酸化するＩκＢリン酸化酵素（ＩＫＫ：ＩκＢ  ｋｉｎａｓｅ）の阻害剤、ＩＫＫ複合体のリン酸化活性阻害剤も、本発明におけるＩκＢリン酸化阻害剤に含まれる。
本発明において「ＮＦ−κＢ活性化阻害剤」とは、転写因子ＮＦ−κＢの機能を阻害する作用を有する剤を意味する。例えば、生体または生体の一部において、ＮＦ−κＢがＩκＢとの複合体から解放されるのを阻害する剤、ＮＦ−κＢの核への移行を阻害する剤、ＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性を阻害する剤、ＮＦ−κＢの転写活性を阻害する剤などが挙げられる。
ＮＦ−κＢの活性化の阻害、又はＩκＢのリン酸化の阻害は、生体又はその一部にビタミンＫ２又はその水和物を投与することで行うことができる。例えば前記「生体」がヒトである場合、ヒトへの投与量、投与方法は、後述のビタミンＫ２を含有する医薬組成物の投与量の記載を参照できる。また、例えば前記「生体の一部」が癌細胞株である場合は、ビタミンＫ２を１０−８〜１０−２Ｍ、好ましくは１０−７〜１０−３Ｍ、より好ましくは１０−６〜１０−４Ｍの濃度で含有する培地で１２〜９６時間、好ましくは２４〜７２時間、より好ましくは４８時間培養すると、ＮＦ−κＢの活性化を阻害し、及び／又はＩκＢのリン酸化を阻害することができる。
ＮＦ−κＢ活性化阻害作用及びＩκＢリン酸化阻害作用は、ＮＦ−κＢの転写活性を指標に検討することもでき、例えば、実施例２または３に記載の方法により検討することができる。
本明細書において「生体」とは哺乳動物の生体であり、本発明において「生体」は、好ましくは癌に罹患した哺乳動物の生体であり、より好ましくは肝癌に罹患した哺乳動物の生体である。また、本明細書において、「生体の一部」とは、哺乳動物由来の各臓器、組織、体液（血液、脳脊髄液、リンパ液、唾液などを含む）、又は細胞が含まれる。本発明において「生体の一部」は、好ましくは癌を発症した各臓器、組織または癌細胞であり、より好ましくは癌を発症した肝臓または肝癌細胞である。癌細胞は、初代培養細胞であってもよいし、細胞株であってもよい。
本明細書において、哺乳動物は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物（例えばマウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ブタ、イヌ、ウマ、ウシ、サルなど）を意味する。本明細書において、哺乳動物は好ましくはヒトである。
（２）サイクリンＤ１発現阻害剤
本発明者は、ビタミンＫ２が肝癌細胞においてサイクリンＤ１の発現を阻害することを見出した。従って、ビタミンＫ２は、サイクリンＤ１発現阻害剤の有効成分として用いることができる。
ここで、サイクリンＤ１は、細胞周期を調節するタンパク質として知られており、サイクリンＤ１の発現量が増加すると、Ｒｂ（Ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｐｒｏｔｅｉｎ）と呼ばれるタンパク質をリン酸化する。そしてＲｂがリン酸化されると、転写因子Ｅ２ＦがＥ２Ｆ−Ｒｂ複合体から遊離し、細胞周期のＧ１期からＳ期への移行が促進され、細胞増殖が活性化される（Ｓｈｅｒｒ，Ｃ．Ｊ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４，１６７２−１６７７，１９９６．）。
細胞増殖性疾患としては、癌などがあることから、サイクリンＤ１の発現を阻害するビタミンＫ２は、細胞増殖抑制剤および癌治療剤として有用である。本発明において、ビタミンＫ２は、好ましくはメナテトレノンであり、また、細胞増殖抑制の対象および癌治療の対象は、好ましくは肝癌細胞および肝癌である。
本発明において「サイクリンＤ１発現阻害剤」とは、生体または生体の一部において、サイクリンＤ１の発現量を減少させる作用、またはサイクリンＤ１の発現を停止させる作用を有する剤をいう。
サイクリンＤ１の発現を阻害するには、生体又はその一部にビタミンＫ２又はその水和物を投与すればよい。すなわち、投与されたビタミンＫ２又はその水和物の作用によって、サイクリンＤ１プロモーターの活性が抑制され、サイクリンＤ１の発現が阻害される。例えば前記「生体」がヒトである場合、ヒトへの投与量、投与方法は後述のビタミンＫ２を含有する医薬組成物の投与量の記載を参照できる。また、例えば前記「生体の一部」が癌細胞である場合は、ビタミンＫ２を１０−８〜１０−２Ｍ、好ましくは１０−７〜１０−３Ｍ、より好ましくは１０−６〜１０−４Ｍの濃度で含有する培地で１２〜９６時間、好ましくは２４〜７２時間、より好ましくは４８時間培養すると、サイクリンＤ１の発現を阻害することができる。
サイクリンＤ１の発現量は、例えば、ＲＴ−ＰＣＲ法によりサイクリンＤ１のｍＲＮＡ量を測定することで検討することができるし、ウェスタンブロット法によりサイクリンＤ１のタンパク質量を測定することで検討することもでき、例えば、実施例１に記載の方法により検討することができる。
（３）癌細胞増殖抑制剤、癌治療剤
本明細書において「癌細胞増殖抑制剤」とは、癌細胞、好ましくは肝癌細胞の増殖を抑制させる作用、または癌細胞、好ましくは肝癌細胞の増殖を停止する作用を有する剤をいう。上記のように、サイクリンＤ１発現阻害剤、ＮＦ−κＢ活性化阻害剤、およびＩκＢリン酸化阻害剤は、癌細胞、好ましくは肝癌細胞の増殖抑制に有効である。したがって、これらの阻害剤を生体又はその一部に投与すると、サイクリンＤ１発現阻害、ＮＦ−κＢ活性化阻害、および／またはＩκＢリン酸化阻害を介して、癌細胞、好ましくは肝癌細胞の増殖を抑制することができる。
例えば前記「生体」がヒトである場合、ヒトへの投与量、投与方法は後述のビタミンＫ２を含有する医薬組成物の投与量の記載を参照できる。また、例えば前記「生体の一部」が癌細胞株である場合は、ビタミンＫ２を１０−８〜１０−２Ｍ、好ましくは１０−７〜１０−３Ｍ、より好ましくは１０−６〜１０−４Ｍの濃度で含有する培地で１２〜９６時間、好ましくは２４〜７２時間、より好ましくは４８時間培養すると、細胞増殖を抑制することができる。細胞増殖の抑制作用は、例えば、核酸の取り込み量を測定する方法（トリチウムチミジン法など）、ミトコンドリア活性を測定する方法（ＭＴＴ法、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ法など）、ＤＮＡ量を測定する方法、グルコース消費量を測定する方法、画像解析による細胞数または細胞面積を測定する方法、蛍光強度を測定する方法（蛍光標識された細胞を用いた方法）等、あるいは実施例４又は５に記載の方法によって、確認することもできる。
本発明において「癌治療」とは、癌に罹患した患者の癌進行を抑制すること、癌腫瘍を消失させること、腫瘍の増大を抑制すること、癌の発症を予防すること、又は癌の再発を予防することを意味する。「癌治療剤」とは、前記の治療に用いる剤、治療効果を有する剤をいう。本発明の癌治療剤を患者に投与すると、有効成分として含まれるビタミンＫ２またはその水和物によるサイクリンＤ１発現阻害、ＮＦ−κＢ活性化阻害、および／またはＩκＢリン酸化阻害を介して、癌の治療を行うことができる。
本発明において、治療の対象となる癌腫は、好ましくは肝癌である。
癌治療の効果の有無は、レントゲン写真、ＣＴ、ＭＲＩ、ＰＥＴ等の所見や生検の病理組織診断により、あるいは腫瘍マーカーの値により判断することができる。癌の病期は特に限定されるものではない。例えばＴＮＭ分類により分類される各ステージ（ｓｔａｇｅ  ＩＡ，ＩＢ，ＩＩＡ，ＩＩＢ，ＩＩＩＡ，ＩＩＩＢ，ＩＶ）のものが含まれる。
２．医薬組成物
本発明において、ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む、本発明のサイクリンＤ１発現阻害剤、ＮＦ−κＢ活性化阻害剤、ＩκＢリン酸化阻害剤、抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、腎不全治療剤、癌細胞増殖抑制剤、糖尿病治療剤、または癌治療剤を、以下、「本発明の医薬組成物」と総称することもある。
本発明で使用するビタミンＫ２（メナキノン、ｍｅｎａｑｕｉｎｏｎｅ）は、生体中において腸内細菌により合成されるため、構造の類似する種々の同属体が存在することが知られている。メナキノンの構造式を以下の式（Ｉ）に示す。
2005107731.tif 000002
式（Ｉ）中、ｎは１〜７の整数を示す。本発明においては、ビタミンＫ２のうち、ｎ＝４（メナキノン−４）のオールトランス体である、メナテトレノンを使用することが好ましい。
本発明で使用するメナテトレノンとは、化学名２−メチル−３−テトラプレニル−１，４−ナフトキノン（２−ｍｅｔｈｌ−３−ｔｅｔｒａｐｒｅｎｙｌ−１，４−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）であり、代表的なビタミンＫ２である。その構造式を以下の式（ＩＩ）に示す。
2005107731.tif 000003
メナテトレノンは黄色の結晶又は油状の物質であり、におい及び味はなく、光により分解しやすい。また、水にはほとんど溶けない。なお、メナテトレノンは、ビタミンＫ−ＩＩ、ＶＫ−ＩＩとも称される。
メナテトレノンなどのビタミンＫ２の薬理作用は、血液凝固因子（プロトロンビン、ＶＩＩ、ＩＸ、Ｘ）の生合成過程において、グルタミン酸残基を、生理活性を有するγ−カルボキシグルタミン酸に変換する際のカルボキシル化反応に関与するものである。すなわち、メナテトレノン等のビタミンＫ２の薬理作用は、正常プロトロンビン等の肝合成を促進し、生体の止血機構を賦活して生理的に止血作用を発現するものである。
本発明の医薬組成物の有効成分であるビタミンＫ２、好ましくはメナテトレノンは、無水物であってもよいし、水和物を形成していてもよい。また、メナテトレノンには結晶多形が存在することもあるが特定の結晶形に限定されず、いずれかの結晶形が単一であってもよいし、結晶形混合物であってもよい。さらに、本発明に使用するビタミンＫ２、好ましくはメナテトレノン、またはその水和物が生体内で分解されて生じる代謝物も本発明に包含される。
本発明に使用するビタミンＫ２またはその水和物は、公知の方法で製造することができ、代表的な例としては、特開昭４９−５５６５０号公報に開示される方法によって、容易に製造することができる。また、合成メーカーから市販品として入手することもできる。
また、本発明に使用するメナテトレノンまたはその水和物も、公知の方法で製造することができ、代表的な例として、特開昭４９−５５６５０号公報に開示される方法によれば容易に製造することができるほか、合成メーカーから容易に入手することもできる。また、メナテトレノンは、カプセル剤（例えば、「ケイツーカプセル」、「グラケーカプセル」（以上、エーザイ株式会社製））、注射剤（例えば、「ケイツーＮ注」（エーザイ株式会社製））、シロップ剤（例えば、「ケイツーシロップ」（エーザイ株式会社製））等の製剤としても入手できる。
さらに、本発明に使用するビタミンＫ２には、体内で代謝されてビタミンＫ２、好ましくはメナテトレノンとなる物質を用いることもできる。体内で代謝されてメナテトレノンとなる物質は特に限定されないが、例えば、ビタミンＫ１、フィトナジオン等が挙げられる。フィトナジオンは、ケーワンカプセル（商品名）（エーザイ株式会社製）、ケーワン錠（商品名）（エーザイ株式会社製）またはケーワン散（商品名）（エーザイ株式会社製）として入手することができる。
本発明のビタミンＫ２、好ましくはメナテトレノンまたはその水和物を有効成分として含む医薬組成物は、そのまま用いることもできるが、通常、適当な添加剤を混和し製剤化したものを使用する。
上記添加剤としては、一般に医薬に使用される、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、矯味矯臭剤、乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤、吸収促進剤等を挙げることができ、所望により、これらを適宜組み合わせて使用することもできる。以下に上記添加剤の例を挙げる。
賦形剤：乳糖、白糖、ブドウ糖、コーンスターチ、マンニトール、ソルビトール、デンプン、α化デンプン、デキストリン、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム
結合剤：例えばポリビニルアルコール、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、マクロゴール
滑沢剤：ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、タルク、ポリエチレングリコール、コロイドシリカ
崩壊剤：結晶セルロース、寒天、ゼラチン、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、ペクチン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム
着色剤：三二酸化鉄、黄色三二酸化鉄、カルミン、カラメル、β−カロチン、酸化チタン、タルク、リン酸リボフラビンナトリウム、黄色アルミニウムレーキ等、医薬品に添加することが許可されているもの
矯味矯臭剤：ココア末、ハッカ脳、芳香散、ハッカ油、竜脳、桂皮末
乳化剤または界面活性剤：ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、モノステアリン酸グリセリン、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル
溶解補助剤：ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、安息香酸ベンジル、エタノール、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド
懸濁化剤：前記界面活性剤のほか、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子
等張化剤としては、ブドウ糖、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール
緩衝剤：リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩などの緩衝液
防腐剤：メチルパラベン、プロピルパラベン、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸
抗酸化剤：硫酸塩、アスコルビン酸、α−トコフェロール
安定化剤：一般に医薬に使用されるもの
吸収促進剤：一般に医薬に使用されるもの
また、必要に応じて、ビタミン類、アミノ酸等の成分を配合してもよい。
また、上記製剤としては、錠剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、吸入剤等の経口剤；坐剤、軟膏剤、眼軟膏剤、テープ剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パップ剤、ローション剤等の外用剤または注射剤を挙げることができる。
上記経口剤は、上記添加剤を適宜組み合わせて製剤化することができる。なお、必要に応じてこれらの表面をコーティングしてもよい。
上記外用剤は、上記添加剤のうち、特に賦形剤、結合剤、矯味矯臭剤、乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤または吸収促進剤を適宜組み合わせて製剤化することができる。
上記注射剤は、上記添加剤のうち、特に乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤または吸収促進剤を適宜組み合わせて製剤化することができる。
また、メナテトレノンのカプセル剤は、商品名ケイツーカプセル（エーザイ株式会社製）、グラケーカプセル（エーザイ株式会社製）として、また、シロップ剤は、商品名ケイツーシロップ（エーザイ株式会社製）として、注射剤は商品名ケイツーＮ注（エーザイ株式会社製）として入手することができる。
さらに、上記のとおり本発明に使用するビタミンＫ２には、体内で代謝されてビタミンＫ２、好ましくはメナテトレノンとなる物質（例えば、ビタミンＫ１、フィトナジオン等）を用いることもできる。フィトナジオンのカプセル剤は、商品名ケーワンカプセル（エーザイ株式会社製）として、また、錠剤は、商品名ケーワン錠（エーザイ株式会社製）として、散剤は、商品名ケーワン散（エーザイ株式会社製）として入手することができる。
本発明において、ビタミンＫ２を含有する本発明の医薬組成物は、サイクリンＤ１発現阻害、ＮＦ−κＢ活性化阻害、ＩκＢリン酸化阻害、癌細胞、好ましくは肝癌細胞の増殖抑制、又は癌、好ましくは肝癌の治療に有用である。当該阻害、抑制、治療において、ビタミンＫ２、好ましくはメナテトレノン、またはその水和物の好ましい投与量（有効量）としては、成人（体重６０ｋｇ）あたり、通常、１０〜２００ｍｇ／日であり、好ましくは１５〜１３５ｍｇ／日であり、さらに好ましくは３０〜６０ｍｇ／日（例えば４５ｍｇ／日）である。投与期間は、特に限定されるものではなく、例えば、１〜１０００日、好ましくは７〜３００日である。投与量および投与期間は、癌の治療効果と患者の状態（例えばＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｓｔａｔｕｓ）を勘案しながら、適宜設定することができる。
本発明の医薬組成物を癌に罹患した患者に投与すると、副作用を生じることなく（副作用が生じても患者に影響のない微弱な程度である）、癌の治療効果を得ることが可能である。
本発明において、ビタミンＫ２を含有する医薬組成物は、炎症、リウマチ、免疫抑制、アレルギー、移植拒絶反応、乾癬、ウイルス性疾患、動脈硬化、虚血性再灌流障害、糖尿病、または腎不全に有用である。これらの疾患を治療するに際し、ビタミンＫ２、好ましくはメナテトレノン、またはその水和物の好ましい投与量（有効量）としては、成人（体重６０ｋｇ）あたり、通常、１０〜２００ｍｇ／日であり、好ましくは１５〜１３５ｍｇ／日であり、さらに好ましくは３０〜６０ｍｇ／日（例えば４５ｍｇ／日）である。投与期間は、特に限定されるものではなく、例えば、１〜１０００日、好ましくは７〜３００日である。投与量および投与期間は、癌の治療効果と患者の状態を勘案しながら、適宜設定することができる。
本発明の医薬組成物を患者に投与すると、副作用を生じることなく（副作用が生じても患者に影響のない微弱な程度である）、炎症、リウマチ、免疫抑制、アレルギー、移植拒絶反応、乾癬、ウイルス性疾患、動脈硬化、虚血性再灌流障害、糖尿病または腎不全の治療効果を得ることが可能であり、本発明の医薬組成物は、上記疾患の全部又は二つ以上の組合せを治療対象とすることもできるし、上記疾患の一つを治療対象とすることもできる。
さらに、本発明には、本発明の医薬組成物を製造するための、ビタミンＫ２又はその水和物の使用も含まれる。本発明の使用において、本発明の医薬組成物は、上記の通り、ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む医薬組成物、及び本発明のＮＦ−κＢ活性化阻害剤又はＩκＢリン酸化阻害剤を有効成分として含む医薬組成物である。また、ビタミンＫ２は、好ましくはメナテトレノンである。
また、本発明は、ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む本発明の医薬組成物を患者に投与することを特徴とする、炎症、リウマチ、免疫抑制、アレルギー、移植拒絶反応、乾癬、ウイルス性疾患、動脈硬化、虚血性再灌流障害、糖尿病、及び腎不全からなる群から選ばれる１以上の疾患の治療方法、癌細胞の増殖抑制方法、及び癌の治療方法を含むものである。本発明の方法において、ビタミンＫ２は、好ましくはメナテトレノンである。本発明の方法において、ビタミンＫ２又はその水和物を有効成分として含む医薬組成物、又は本発明のＮＦ−κＢ活性化阻害剤若しくはＩκＢリン酸化阻害剤を有効成分として含む医薬組成物の投与経路および投与方法は特に限定されないが、上記本発明の医薬組成物の記載を参照することができる。
３．抗腫瘍剤との組み合わせ
本発明のビタミンＫ２を含有する剤と抗腫瘍剤との組み合わせは、癌、好ましくは肝癌治療に有用である。すなわち、本発明は、ビタミンＫ２又はその水和物と、抗腫瘍物質とを組み合わせてなる癌治療剤（以下、「本発明の併用医薬組成物」ともいう。）、好ましくは肝癌治療剤を提供する。本発明の併用医薬組成物は、癌の治療、好ましくは肝癌の治療に使用できる。
ビタミンＫ２、好ましくはメナテトレノン、またはその水和物の好ましい投与量（有効量）としては、成人（体重６０ｋｇ）あたり、通常、１０〜２００ｍｇ／日であり、好ましくは１５〜１３５ｍｇ／日であり、さらに好ましくは３０〜６０ｍｇ／日（例えば４５ｍｇ／日）である。投与期間は、特に限定されるものではなく、例えば、１〜１０００日、好ましくは７〜３００日である。投与量および投与期間は、癌の治療効果と患者の状態（例えばＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｓｔａｔｕｓ）を勘案しながら、適宜設定することができる。
一方、抗腫瘍物質とは、腫瘍の増殖を抑制する作用、腫瘍の増殖速度を減速させる作用、腫瘍を縮小させる作用、あるいは腫瘍を消失させる作用などの抗腫瘍作用を有する物質である。抗腫瘍物質の例には、フルオロウラシル（５−ＦＵ、商品名５−ＦＵ）、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、商品名トポテシン、カンプト）、マイトマイシンＣ（ｍｙｔｏｍｙｃｉｎ  Ｃ、商品名マイトマイシン）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、商品名ランダ、ブリプラチン、アイエーコール、コナプリ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ、商品名パラプラチン）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ、商品名Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ、商品名ゼローダ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ、商品名ジェムザール）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ、商品名アドリアシン）、パクリタキセル（商品名タキソール（ｔａｘｏｌ））、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ、商品名タキソテール）などがあげられ、好ましくは５−ＦＵである。抗腫瘍物質の投与量は、通常の臨床用量に従うことが好ましく、適宜、増量または減量することができる。
本発明において「組み合わせてなる」とは、化合物を併用して用いるための組み合わせを意味し、別々の物質を投与時に併用する形態、および混合物としての形態の両方を含む。投与時に併用する形態の場合、ビタミンＫ２若しくはその水和物、又は抗腫瘍物質は製剤化されたものを用いることができる。
さらに、本発明には、抗腫瘍物質と組み合わせてなる医薬組成物を製造するためのビタミンＫ２またはその水和物の使用も含まれる。本発明の使用において、ビタミンＫ２は好ましくはメナテトレノンである。また、本発明の使用において、上記医薬組成物は、癌治療剤として有用である。
また、本発明は、ビタミンＫ２又はその水和物と、抗腫瘍物質とを同時又は別々に患者に有効量投与することを特徴とする癌の治療方法をも含むものである。本発明の治療方法において、ビタミンＫ２は好ましくはメナテトレノンである。本発明の治療方法において、ビタミンＫ２またはその水和物と、抗腫瘍物質との投与径路及び投与方法は特に限定されないが、上記本発明の医薬組成物の記載を参照することができる。
以下に、具体的な例をもって本発明を示すが、本発明はこれに限られるものではない。
実施例中、ビタミンＫ２として、メナテトレノンを用いた（図中の標記は「ビタミンＫ２」とした。）。
【実施例１】  メナテトレノンのサイクリンＤ１の発現に対する効果
メナテトレノンが肝癌細胞に対し濃度依存的に増殖を抑制し、その機序として細胞周期がＧ１期で停止することを既に示している。この分子機構を明らかにするため、Ｇ１期からＳ期への細胞周期の進行に必須の分子であるサイクリンＤ１遺伝子の発現に対するメナテトレノンの効果を検討した。培養肝癌細胞株ＨｅｐＧ２，Ｈｕｈ７，Ｈｅｐ３Ｂに対し、メナテトレノンを０，１０−６，１０−５，１０−４Ｍの濃度で４８時間作用させた後サイクリンＤ１の発現を常法にしたがいウェスタンブロット法及びＲＴ−ＰＣＲ法にて検討した。
また、ウェスタンブロット法及びＲＴ−ＰＣＲ法による検討と同時に、常法にしたがいサイクリンＤ１プロモータールシフェラーゼプラスミドを用いてメナテトレノンのサイクリンＤ１プロモーター活性に与える影響を検討した。プラスミドは、文献Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２７０（４０），２３５８９−２３５９７，１９９５に記載の−１７４５ＣＤ１ＬＵＣを用いた。本明細書において、ルシフェラーゼ活性は、対照における値を１００としたときの相対値（相対ルシフェラーゼ活性）として示す場合がある。
その結果、メナテトレノンにより肝癌細胞におけるサイクリンＤ１の発現は、タンパク質レベル、ｍＲＮＡレベルの両方で濃度依存的に抑制された（図１Ａ、Ｂ）。同様にメナテトレノンは、肝癌細胞におけるサイクリンＤ１プロモーター活性を濃度依存的に抑制した（図１Ｃ）。
以上の結果から、メナテトレノンは、サイクリンＤ１遺伝子の発現をそのプロモーター活性を抑制することで調節しており、これが肝癌細胞における細胞周期のＧ１期停止に寄与していることが明らかになった。
【実施例２】  メナテトレノンによる転写因子ＮＦ−κＢの活性に対する影響
サイクリンＤ１は、そのプロモーター領域に転写因子ＡＰ−１やＮＦ−κＢの結合領域を持ち、これらの転写因子によりその活性が調節されていることが知られている。本実施例では、メナテトレノンがＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性に与える影響を常法にしたがいゲルシフトアッセイにより検討した。同時に、ＮＦ−κＢの転写活性に与えるメナテトレノンの影響をＮＦ−κＢルシフェラーゼレポータープラスミド（クロンテック社製）を用いて検討した。
ゲルシフトアッセイの結果、メナテトレノンは、肝癌細胞Ｈｅｐ３Ｂ，Ｈｕｈ７において濃度依存的にＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性を抑制した（図２）。ＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性は、ＮＦ−κＢ非放射性競合物により阻害されたが、ＤＮＡ結合活性有しない変異ＮＦ−κＢでは抑制されなかった。また、ＮＦ−κＢのサブユニットであるｐ６５およびｐ５０に対する抗体にてＮＦ−κＢの結合バンドのシフトが認められた。
また、ＨｅｐＧ２細胞では、メナテトレノンは、ＮＦ−κＢレポータープラスミドのルシフェラーゼ活性を濃度依存的に抑制した（図３）。
以上の結果から、メナテトレノンは、肝癌細胞におけるＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性、転写活性を特異的に抑制することが明らかになった。
【実施例３】  メナテトレノンのサイクリンＤ１プロモーター活性抑制における転写因子ＮＦ−κＢ依存性の検討
メナテトレノンによるサイクリンＤ１プロモーター活性調節における転写因子ＡＰ−１およびＮＦ−κＢの役割を検討するため、肝癌細胞において、野生型ＡＰ−１およびＮＦ−κＢ結合部位を持つサイクリンＤ１プロモーターと、結合活性のない変異型ＡＰ−１およびＮＦ−κＢ結合部位を持つサイクリンＤ１プロモーターとを用いてルシフェラーゼレポーターアッセイを行い、転写因子ＡＰ−１およびＮＦ−κＢの影響を検討した。メナテトレノンを肝癌細胞に０，１０−６，１０−５，１０−４Ｍの濃度で４８時間作用させた後、ルシフェラーゼレポーターアッセイを行った。プラスミドは、文献Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２７０（４０），２３５８９−２３５９７，１９９５、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．１９（８），５７８５−５７９９，１９９９およびＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．６２，３９９７−４００６，２００２．に記載の−１７４５ＣＤ１ＬＵＣ、−９６４ＣＤ１ＬＵＣ、−９６４ＡＰ−１ｍｔＣＤ１ＬＵＣ、−６６ＣＤ１ＬＵＣ、−６６ＮＦ−κＢｍｕｔＣＤ１ＬＵＣを用いた。
また、メナテトレノンによるサイクリンＤ１プロモーター活性に対するＮＦ−κＢ依存性を確認するため、ＮＦ−κＢのサブユニットであるｐ６５／ＲｅｌＡを肝癌細胞ＨｅｐＧ２に導入し過剰発現させ、メナテトレノンによるサイクリンＤ１プロモーター活性の抑制が解除されるか否かを検討した。メナテトレノンは、ｐ６５／ＲｅｌＡプラスミド（ｐｃＤＮＡ３．１／ｐ６５）をＨｅｐＧ２に導入した１２時間後に、０，１０−６，１０−５，１０−４Ｍの濃度で添加し、４８時間作用させた。
ここで、「ｐ６５／ＲｅｌＡ」は、ＮＦ−κＢのサブユニットであるため、細胞に過剰発現させることにより、ＮＦ−κＢの発現量が増加する。そのため、メナテトレノンがＮＦ−κＢ活性化を抑制することにより、サイクリンＤ１プロモーター活性に対する抑制作用を示す場合には、ＮＦ−κＢの発現量の増加に伴い、メナテトレノンによるサイクリンＤ１プロモーター活性に対する作用が抑制されることが予想される。
その結果、肝癌細胞においては、メナテトレノンは、濃度依存的に野生型サイクリンＤ１プロモーターのルシフェラーゼ活性を抑制した（図４上から１，２段目）。変異ＡＰ−１結合部位を有するサイクリンＤ１プロモーター（−９６４ＡＰ−１ｍｔＣＤ１ＬＵＣ）ではメナテトレノンにより野生型サイクリンＤ１プロモーターと同様にその活性は濃度依存的に抑制された（図４上から３段目）。しかし、野生型ＮＦ−κＢ結合部位を有するサイクリンＤ１プロモーターがメナテトレノンにより濃度依存的に抑制を受けたのに対し（図４下から２段目）、変異ＮＦ−κＢ結合部位を有するサイクリンＤ１プロモーター（−６６ＮＦ−ΚＢｍｕｔＣＤ１ＬＵＣ）では、メナテトレノンによるプロモーター活性の抑制が見られなかった（図４下から１段目）。
さらに、ＮＦ−κＢのサブユニットであるＰ６５／ＲｅｌＡを予め肝癌細胞に導入しておくと、サイクリンＤ１のプロモーター活性は、メナテトレノンによって抑制されなくなった（図５「ＨｅｐＧ２／ｐｃＤＮＡ３．１／ｐ６５」）。
本実施例から、メナテトレノンは、ＮＦ−κＢ活性化を抑制することにより、サイクリンＤ１プロモーター活性に対する抑制作用を示すことが明らかとなった。
【実施例４】  メナテトレノンによる肝癌細胞増殖抑制作用のＮＦ−κＢ、サイクリンＤ１依存性の検討
上記の結果から、メナテトレノンによる肝癌細胞増殖抑制作用は、転写因子ＮＦ−κＢの活性化抑制を通じてターゲット遺伝子の一つであるサイクリンＤ１を抑制しているものと考えられるが、実際に、肝癌細胞の増殖抑制が、ＮＦ−κＢあるいはサイクリンＤ１に依存的であるか否かを検討するため、ＮＦ−κＢのサブユニットであるｐ６５／ＲｅｌＡあるいはサイクリンＤ１遺伝子を肝癌細胞に導入しメナテトレノンによる増殖抑制作用が変化するかどうかを常法にしたがい細胞増殖アッセイにより検討した。
肝癌細胞ＨｅｐＧ２に対しＮＦ−κＢのサブユニットであるｐ６５／ＲｅｌＡあるいはサイクリンＤ１遺伝子を一過性に導入した１２時間後に、メナテトレノンを０，１０−６，１０−５，１０−４Ｍの濃度で４８時間作用させた。その結果、親株、ｍｏｃｋ遺伝子導入細胞ではその増殖が抑制されたのに対し、ｐ６５／ＲｅｌＡあるいはサイクリンＤ１遺伝子が導入された細胞ではメナテトレノンによる増殖抑制作用が消失していた（図６）。同様の結果は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞でも観察された（図７）。
以上の結果は、メナテトレノンによる肝癌細胞増殖抑制作用が転写因子ＮＦ−κＢおよびそのターゲット遺伝子の一つであるサイクリンＤ１の抑制を通じて発現されるものであることを示している。
【実施例５】  肝癌細胞増殖に対するメナテトレノンと５−ＦＵとの相互作用
上記のように、メナテトレノンの肝癌細胞増殖抑制作用が、ＮＦ−κＢの抑制を介して起こっていることが示された。臨床的に肝細胞癌にもよく使用されている抗腫瘍剤である５−ＦＵは、ＮＦ−κＢを活性化することが知られている。そこで、肝癌細胞ＨＬＥ，Ｈｅｐ３Ｂ，Ｈｕｈ７にメナテトレノンを２４時間作用させた後、さらに、前記肝癌細胞にアポトーシスを起こさない低濃度の５−ＦＵ（５μｇ／ｍｌ）を２４時間作用させ、細胞増殖に与える影響を検討した。細胞増殖は、ＢｒｄＵ（５−ブロモ−２’−デオキシウリジン）存在下で細胞を培養したときの、ＢｒｄＵの取り込み率で評価した。
その結果、５−ＦＵを５μｇ／ｍｌの濃度で肝癌細胞に作用させると、５−ＦＵは、肝癌細胞におけるＤＮＡ合成を５０−６０％程度抑制するが、この濃度ではアポトーシスは観察されなかった。これにメナテトレノンを作用させると濃度依存的に肝癌細胞のＤＮＡ合成が抑制され、その抑制の程度は、メナテトレノン単独よりも強く認められた（図８）。
【実施例６】  ５−ＦＵによるＮＦ−κＢの活性化とメナテトレノンによるＮＦ−κＢ活性化の抑制機序の検討
ＮＦ−κＢ活性化の抑制機序を検討するため、通常、細胞質中でＮＦ−κＢと結合しＮＦ−κＢの活性化および核への移行を調節するＩκＢの動態を検討した。ＩκＢのリン酸化、ＩκＢタンパク質の発現量、ｐ６５サブユニットの核への移行をウエスタンブロット法にて解析した。
その結果、５−ＦＵ（５μｇ／ｍｌ）を肝癌細胞ＨｅｐＧ２に作用させるとＩκＢリン酸化が増加し、ＩκＢタンパク質量は減少し、核でのｐ６５の増加が観察された（図９「５ＦＵ５μｇ／ｍｌ」のレーン）。これにメナテトレノンを加えると濃度依存的にＩκＢリン酸化が抑制され、逆にＩκＢのタンパク質量は回復し、核へのｐ６５は再び減少した（図９「５ＦＵ  ５μｇ／ｍｌ＋ＶＫ２」の各レーン）。
以上の結果から、メナテトレノンは、ＩκＢリン酸化を抑制することにより、ＮＦ−κＢ活性化を抑制していることが明らかになった。
【実施例７】  ＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β刺激下におけるＮＦ−κＢ活性化に対するメナテトレノンの効果の検討
発癌プロモーターとして知られるＴＰＡ（１２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌ  ｐｈｏｒｂｏｌ  １３−ａｃｅｔａｔｅ）により誘導されるＮＦ−κＢ活性化に対するメナテトレノンの影響、および生理的な条件下でＮＦ−κＢを活性化する炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αやＩＬ−１βにより誘導されるＮＦ−κＢ活性化に対するメナテトレノンの影響をルシフェラーゼレポーターアッセイおよびゲルシフトアッセイ法で検討した。
プロモーター領域にＮＦ−κＢに対するコンセンサス配列を持つルシフェラーゼプラスミドをレポーター遺伝子としてトランスフェクションした肝癌細胞ＨｅｐＧ２を用いて、非刺激下およびＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β刺激下において、メナテトレノンを０、１０−６、１０−５、１０−４Ｍの各濃度で加え、常法にしたがいルシフェラーゼレポーターアッセイを行い、ＮＦ−κＢ活性を測定した。また、常法にしたがいゲルシフトアッセイ法によりＨｅｐＧ２細胞を用いて非刺激下およびＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β刺激下において、ＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性に与えるメナテトレノンの効果を検討した。
ＨｅｐＧ２細胞に対してメナテトレノンを添加してＮＦ−κＢの活性をルシフェラーゼレポーターアッセイにて測定すると、メナテトレノンは、濃度依存性にＮＦ−κＢ活性を抑制した（図１０）。さらに、ＴＰＡ２０ｎＭ、ＴＮＦ−α  １０ｎＭ、ＩＬ−１β  １ｎＭを加えてＮＦ−κＢを活性化させた状態でメナテトレノンを０、１０−６、１０−５、１０−４Ｍの各濃度で加えたところ、いずれの場合においても誘導されたＮＦ−κＢ活性を濃度依存性に抑制した（図１０）。
同様の条件下で、ＨｅｐＧ２細胞でゲルシフトアッセイを行い、ＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性を検討したところ、非刺激下ではＮＦ−κＢの弱いＤＮＡ結合活性を、メナテトレノンは濃度依存的に抑制した。ＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βによる刺激下では誘導されたＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性は、いずれの場合においてもメナテトレノンにより濃度依存性に抑制された（図１１）。
【実施例８】  ＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β刺激下におけるＩκＢリン酸化に対するメナテトレノンの効果の検討
非刺激下およびＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β刺激下におけるＩκＢリン酸化およびＩκＢタンパク質量に対するメナテトレノンの効果について、抗リン酸化ＩκＢα抗体および抗ＩκＢα抗体を用いてウェスタンブロット法により検討した。また、ＩκＢαのリン酸化を調節しているキナーゼであるＩＫＫ複合体の活性へ与える影響をｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼアッセイで検討した。
非刺激下およびＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β刺激下で回収した細胞の破砕液を、ＩＫＫ複合体のサブユニットのひとつであるＩＫＫαに対する抗体を用いて免疫沈降を行い遠心した。得られた上清をｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇセファロースカラムにかけ、ＩＫＫ複合体タンパク質を溶出して回収した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼアッセイの基質となるＩκＢαは、ＧＳＴ−ＩκＢα（１−５４）融合タンパク質をコードするプラスミドｐＧＳＴ−ＩκＢα（１−５４）を強制発現させ生成したタンパク質をＧＳＴカラムにかけて回収調製した。キナーゼ活性によるリン酸化反応は、基質であるＧＳＴ−ＩκＢα（１−５４）の存在する溶液中にγ−３２Ｐ−ＡＴＰを加え、一定量のＩＫＫ複合体と３７℃で３０分間反応させ、反応産物をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにて電気泳動後、オートラジオグラフィーによりＩκＢαのリン酸化を検出した。
その結果、非刺激下においてメナテトレノンを添加するとＩκＢαリン酸化（図１２「ｐＩκＢα」）は減少を示し、ＩκＢαタンパク質量（図１２「ＩκＢα」）は逆に増加を示した（図１２）。ＴＰＡ  ２０ｎＭ，ＴＮＦ−α  １０ｎＭ，ＩＬ−１β  １ｎＭを添加するとＩκＢαリン酸化は増加し、ＩκＢαタンパク質量は逆に減少した。これにメナテトレノンを添加しておくとＴＰＡ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βによるＩκＢαリン酸化の増加は、メナテトレノンの濃度依存性に抑制され、ＩκＢαタンパク質量の減少は抑制されタンパク質量が回復した（図１２）。
これに対応してｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼアッセイによりＩＫＫ複合体のキナーゼ活性を測定すると、非刺激下ではキナーゼ活性（図１３「ＧＳＴ−ＩκＢα」）を抑制した。ＴＰＡ２０ｎＭ，ＴＮＦ−α  １０ｎＭ，ＩＬ−１β  １ｎＭの存在下ではキナーゼ活性は増加するが、これにメナテトレノンを添加しておくとメナテトレノンの濃度依存性にキナーゼ活性は抑制された（図１３）。メナテトレノンによる抑制の程度はＴＮＦ−α，ＩＬ−１β添加例においてより顕著に見られた（図１３）。
以上の結果から、メナテトレノンは、種々の肝癌細胞において非刺激下および種々のＮＦ−κＢ刺激シグナルの存在下で濃度依存性にＮＦ−κＢの活性下を抑制する作用を有することが明らかとなった。このＮＦ−κＢ活性化抑制作用の機序として、メナテトレノンは、ＮＦ−κＢ（ｐ５０／ｐ６５二量体）の核への移行を抑制し細胞質に停めているＩκＢαのリン酸化を抑制しており、ＩκＢαをリン酸化するＩＫＫ複合体のキナーゼ活性を抑制することによりその作用を発揮していることが示された。
【産業上の利用可能性】  本発明により、癌細胞、好ましくは肝癌細胞において、ビタミンＫ２を用いると、サイクリンＤ１の発現を阻害すること、ＮＦ−κＢを阻害すること、ＩκＢリン酸化を阻害することが可能となった。また、これらの阻害作用により癌細胞、好ましくは肝癌細胞の増殖を抑制するため、より治療効果の期待できる患者を選択して治療することが可能となった。
また、本発明により、癌患者に対するビタミンＫ２（例えばメナテトレノン）の治療剤としての有効性に加え、メナテトレノンと抗腫瘍物質とを組み合わせて使用することによりメナテトレノンの抗腫瘍作用が増強されることから、癌患者の生活の質を大きく改善することが可能となった。
さらには、本発明により、ビタミンＫ２がＮＦ−κＢ活性化およびＩκＢリン酸化を阻害することから、ビタミンＫ２は、抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、移植拒絶抑制剤、乾癬治療剤、抗ウイルス剤、動脈硬化治療剤、虚血性再灌流障害治療剤、糖尿病治療剤および腎不全治療剤の有効成分として用いることが可能となった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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