(57)【要約】  従来その利用が疎まれてきた魚貝類の内臓の有効利用を図るもので、とくに、フグの内臓の人細胞の活性剤としての機能として人の外面細胞の活性剤としての機能を見出すこと、とくに、フグの内臓の毛髪の成長を促す機能の存在を見出し、それを利用して直接的な育毛効果を有する新規育毛剤を得ることにある。フグの肝臓から抽出したアルコール類および有機溶媒に溶解しうる油脂成分からなる有機物質または前記油脂成分にカルボキシル基や水酸基等の親水性の反応基が結合した極性の高い有機物質からなるフグの肝臓から抽出した皮膚細胞活性化剤と、このフグの肝臓から抽出した皮膚細胞活性化剤を１０体積％以上含有する毛髪育成剤である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚貝類の肝臓から抽出用液によって抽出したアルコール類および有機溶媒に溶解しうる油脂成分からなる皮膚細胞活性化剤。
【請求項２】
魚貝類の肝臓から抽出用液によって抽出したアルコール類および有機溶媒に溶解しうる油脂成分にカルボキシル基や水酸基等の親水性の反応基を結合した極性の高い有機物質からなる皮膚細胞活性化剤。
【請求項３】
抽出用液が、ＰＢＳ、 ＭｅＯＨ等の極性の高い溶媒またはヘキサンやクロロホルム等の極性の低い種々の油脂成分等を溶解させる溶媒である請求項１または請求項２に記載の皮膚細胞活性化剤。
【請求項４】
魚貝類がフグである請求項１または請求項２に記載の皮膚細胞活性化剤。
【請求項５】
請求項１または２に記載の皮膚細胞活性化剤を１０体積％以上配合した毛髪育成剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種魚貝類の肝臓の抽出物からなる人の皮膚細胞の活性化に機能する皮膚細胞活性化剤とその皮膚細胞活性化剤を使用した毛髪育成剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
昨今、各種の高級魚貝類の養殖が盛んに行われるようになり、その調理加工に際して取り出された内臓、その他の食材としての不要部位の処分が社会問題化されつつある。【０００３】
とくに、フグに代表されるフグ毒を有する魚類の肝臓を含む内臓部分はその毒性のためにその処分について問題があり、その有効利用について種々模索されている。【０００４】
一方、内蔵を含む各種の魚貝類から得た油性分を、種々の植物、海草類と混合して、養毛剤、美容剤のような皮膚外用剤としての利用も試みられている。【０００５】
例えば、特許文献１には、ツバキ油、オリーブ油のような植物油と深海鮫から抽出した未精製のスクワランとを混合した養毛剤が開示されている。【０００６】
また、特許文献２には、育毛・養毛成分として、アンジオテンシン変換酵素の阻害剤（１）バリルチロシン、イソロイシルチロシンおよびこれらオリゴペプチドを含む魚貝類の加水分解物、ならびに（２）バリルプロリルプロリン、イソロイシルプロリルプロリンおよびこれらオリゴペプチドを含む脱脂乳の乳酸発酵物のうち一種以上との配合物が、頭皮の末梢血流を改善し、育毛、養毛効果に優れていることも開示されている。【０００７】
さらに、特許文献３には、リノール酸、リノレン酸及びγ−リノレン酸の３種の不飽和脂肪酸と炭素数２０以上の脂肪酸を各種の植物油と魚油を含むオイルの皮膚外用剤が肌荒れ改善効果、皮膚弾性回復効果、皮膚老化防止効果を有することが開示されている。【０００８】
この様に、魚貝類から得たいわゆる魚油を含む多くの育毛剤が知られているが、魚油としての人の外面細胞の活性化のための有効な機能は知られておらず、毛髪促進剤に使用された場合も、精々、間接的な血行促進作用や皮脂分泌抑制作用等の二次的な効果が期待されているに過ぎない。
【特許文献１】特開２００２−２４１２３５号公報
【特許文献２】特開２００２−２８４６４７号公報
【特許文献３】特開２００３−７３２６８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の第１の課題は、従来、その利用が阻まれてきた魚貝類の内臓の人の外面細胞の活性化剤としての有効利用を図ることにある。【００１０】
また、その第２の課題は、フグ毒を有する魚貝類の内臓の人細胞の活性剤としての機能を見出すことにある。【００１１】
さらに、他の課題は、フグの内臓の毛髪の成長を促す機能の存在を見出し、それを利用して直接的な育毛効果を有する新規育毛剤を得ることにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の皮膚細胞活性化剤は、魚貝類の肝臓をアルコール類を始め、ヘキサンやクロロホルム等の種々の有機溶媒に溶解して得られた油脂成分、あるいは、この油脂成分に、カルボキシル基や水酸基等の親水性の反応基を結合せしめた極性の高い有機物質である。【００１３】
また、魚貝類の中でも、フグの肝臓から抽出した有機物質は、毛髪の成長を促す機能を有する。【００１４】
これらの有機物質の抽出液としては、ＰＢＳ、 ＭｅＯＨ等の極性の高い溶媒に限らず、ヘキサンやクロロホルム等の極性の低い種々の油脂成分等を溶解させる特性を有するものが使用できる。【００１５】
また、アルコール類を始め、ヘキサンやクロロホルム等の種々の有機溶媒に溶解しうる油脂成分の有機物質、あるいは、これらの油脂成分にカルボキシル基や水酸基等の親水性の反応基が結合した極性の高い有機物質を人体の皮膚細胞の活性化溶液、とくに、育毛剤や毛髪剤液として使用する場合は、１．０容積％含有させれば充分である。【００１６】
また、育毛剤として有効な、前記有機物質の抽出原料としてのフグの肝臓としては、その取り扱い上、安全な無害化された肝臓を使用してもその効果は失われない。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の魚貝類の内臓類、とくに、肝臓から得た抽出液は、外層細胞の活性剤として機能し、とくに、フグの肝臓から得た抽出液は、毛髪の育成剤、再生剤として極めて有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下、実施例によって、本発明の実施の形態を説明する。
【実施例】
【００１９】
養殖トラ・フグの肝臓と精巣を対象に、ヒト外毛根鞘細胞（ｈＯＲＳ）増殖促進活性を評価し、次いで、 高い増殖促進活性を示した肝臓ＭｅＯＨ抽出液について、インビボによる育毛効果試験を行った。【００２０】
（ヒト外毛根鞘細胞(ｈＯＲＳ)増殖促進活性の評価）
９６個のウエル・プレートのそれぞれに０．０１%コラーゲンタイプ・ 溶液を１００マイクロリッター添加し、２時間静置後、等量のＰＢＳ（生理的リン酸緩衝液）で３回洗浄を行い、プレートをＰＢＳによるコーティングを行った。【００２１】
ヒト外毛根鞘細胞 (ｈＯＲＳ) 細胞をそれぞれのプレートに１００マイクロリッター(２×１０３ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ) ずつ播種し、細胞の接着のため２４ 時間培養した。【００２２】
培養後、各供試サンプルを１%含むように調製した培養培地 (１%ＦＢＳ添加 Ｅ−ＲＤＦ−ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）合培地；１：１) に交換し、さらに４８時間培養を行った。【００２３】
培養後のそれぞれのウエル・プレートに、５ｍｇ／ｍｌＭＴＴ液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ)を １０マイクロリッター加え ４ 時間反応後、１０% ＳＤＳ (０．０１ M ＨＣｌ) を各ウエル・プレートに１００マイクロリッター加え、生成物を完全に溶出後、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｄｅｌ ４５０； Ｂｉｏ−Ｒａｄ）で吸光値 (５７０ｎｍ−６５５ｎｍ) を測定した。その後、下記式により陰性対照を１００％として、ｈＯＲＳ細胞の増殖促進活性を調べた。【００２４】
増殖活性 (%) ＝（フグ内蔵抽出液添加で培養した細胞の吸光値）／
（抽出溶媒添加で培養した細胞の吸光値）
これによって、フグの肝臓の増殖活性は、ＰＢＳ抽出液の４倍濃縮液で、１２２．２%、ＭｅＯＨ抽出液の１２．５マイクログラム／ｍｌの濃度で、１２８．５%であるのに対し、精巣はそれぞれがせいぜい１０５％程度であった。【００２５】
これによって、フグの肝臓には充分な細胞増殖促進活性を有することが分かった。【００２６】
（インビボ 育毛効果試験）
上記抽出液の試験試料溶解溶媒添加の陰性対照を１００%としてｈＯＲＳ細胞増殖促進活性によるインビボ 育毛効果試験を行った。【００２７】
育毛効果試験は、以下の方法に従い行った。【００２８】
まず、C３Ｈ／Ｈｅ マウスを固形飼料 (日本クレアによる販売品) 並びに水道水を自由摂取させて６週齢まで飼育し、その後、１試験区当たり３匹ずつマウスを隔離し、２週間の予備飼育を行った。【００２９】
予備飼育後、試験マウスの背部を縦が約５ｃｍ、横約３ｃｍの長方形状に注意深くシェーバーで剃毛し、剃毛部位に試験試料を３０日間、毎日５０マイクロリッターずつ塗布した。なお、抽出液の塗布濃度は、２%(ｗ／ｖ)とし、育毛効果の評価は、剃毛した皮膚が淡桃色から毛の成長により灰色化し、さらに毛の発生への変化を観察することによって行った。【００３０】
フグ肝臓ならびに精巣より調製した抽出液を対象に、ｈＯＲＳ細胞増殖促進活性を評価した。【００３１】
図１〜図４は、それぞれ、肝臓と精巣より調製したＰＢＳ抽出液とＭｅＯＨ 抽出液の場合の細胞増殖促進活性を示す。横軸には、ＰＢＳ抽出液の場合には希釈率を示し、またはＭｅＯＨ 抽出液の場合には濃度を示す。【００３２】
図１に示すように、肝臓のＰＢＳ抽出液の場合は、８倍の希釈率から細胞増殖促進効果を奏し、４倍濃縮液の場合には１２２．２%の増殖促進活性が観察された。また、図２に示すように、ＭｅＯＨ 抽出液の場合は、１２．５マイクログラム／ｍｌの濃度において、１２８．５% の活性が観察された。【００３３】
一方、図３と図４に示すように、精巣より調製したＰＢＳ並びにＭｅＯＨ抽出液は何れも顕著なｈＯＲＳ 細胞増殖促進活性を示さなかった。【００３４】
さらに、肝臓のＰＢＳ 抽出液の剃毛したマウスの背部に抽出液を塗布して育毛効果を試験した。その結果、塗布開始後１０日目に発毛の兆候として皮膚の灰色化が観察され、１５日目においては、明らかな毛の発育が観察された。さらに塗布開始２０日目において、剃毛前と同等の毛の発育が観察された。【００３５】
このように、フグの内蔵の中でも肝臓からのＭｅＯＨ抽出物試料はインビボにおいて強い育毛効果を有することが明らかとなり、育毛剤への応用に有望であることが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
上記実施例は、フグ肝臓の抽出液の外毛根鞘細胞（ｈＯＲＳ）増殖促進活性について行ったものであるが、その効果は、外毛根鞘細胞に限らず、一般の皮膚細胞の活性化にも効果があるものと推測される。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】フグ肝臓のＰＢＳ抽出物の外毛根鞘細胞増殖促進の活性を示す。
【図２】フグ肝臓のＭｅＯＨ抽出物の外毛根鞘細胞増殖促進の活性を示す。
【図３】フグ精巣のＰＢＳ抽出物の外毛根鞘細胞増殖促進の活性を示す。
【図４】フグ精巣のＭｅＯＨ抽出物の外毛根鞘細胞増殖促進の活性を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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