(57)【要約】本発明は、キサントフィル類の回収方法を提供し、該方法は、キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させ、該キサントフィル類を該樹脂に吸着させる吸着工程；および該樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる脱着工程；を含む。好ましくは、吸着工程と脱着工程との間に樹脂を洗浄する洗浄工程を含む。樹脂としては親水性のアクリル酸系および／またはメタクリル酸系の樹脂が好ましく用いられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キサントフィル類の回収方法であって、
該キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させ、該キサントフィル類を該樹脂に吸着させる吸着工程；および
該樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる脱着工程；を含む、方法。
【請求項２】
さらに、前記吸着工程と前記脱着工程の間に、前記親水性樹脂を洗浄する洗浄工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記親水性樹脂が、アクリル酸系および／またはメタクリル酸系の樹脂である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記親水性樹脂と接触するキサントフィル類を含有する試料が、キサントフィル類を含有する油性物質である、請求項１から３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項５】
前記キサントフィル類を含有する油性物質が藻類から得られる、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記藻類が、ヘマトコッカス属に属する緑藻である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記親水性樹脂と接触するキサントフィル類を含有する試料が、アルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭素類、およびケトン類からなる群から選択される少なくとも１つの溶媒に溶解されている、請求項１から６のいずれかの項に記載の方法。
【請求項８】
前記アルコール類、飽和炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭素類、およびケトン類が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、トルエン、キシレン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸メチル、酢酸エチル、ジクロロメタン、四塩化炭素、アセトン、およびメチルエチルケトンからなる群から選択される少なくとも１つの溶媒である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記キサントフィル類の溶出に使用する極性溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸メチル、酢酸エチル、アセトン、およびメチルエチルケトンからなる群から選択される少なくとも１つの溶媒である、請求項１から８のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１０】
前記キサントフィル類がアスタキサンチン類である、請求項１から９のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１１】
キサントフィル脂肪酸エステルを主成分とし、かつ遊離のキサントフィルに換算したときにキサントフィル含量が３０質量％以上となるキサントフィル類を含有する、キサントフィル類濃縮物。
【請求項１２】
前記キサントフィル類濃縮物が、キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させ、該キサントフィル類を該親水性樹脂に吸着させる工程；
該親水性樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる工程；を含む、方法によって得られる、請求項１１に記載のキサントフィル濃縮物。
【請求項１３】
前記キサントフィル濃縮物がアスタキサンチン類濃縮物である、請求項１１または１２に記載の濃縮物。
【請求項１４】
前記アスタキサンチン類が、ヘマトコッカス属に属する緑藻から得られる、請求項１３に記載の濃縮物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キサントフィルを含有する油性物質からキサントフィルを回収する方法に関する。さらに、本発明は、キサントフィルを高濃度で含有するキサントフィル含有物に関する。
【背景技術】
【０００２】
カロチノイドは、動植物界に広く分布する黄色から赤色の色素である。カロチノイドはリコペンを原型とし、分子末端の閉環および環への酸素原子の導入などにより５００種類以上存在することが知られている。末端が閉環された炭化水素はカロチンと呼ばれ、このカロチン構造中に酸素原子を含む化合物はキサントフィルと呼ばれている。
このように、キサントフィルは、ポリエン色素の一種であるカロチノイドに酸素官能基が導入されたカロチン誘導体であり、カンタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン、アドニルビン、β−クリプトキサンチン、アスタキサンチン等が知られている。
キサントフィルは、食材用色素として有用であることが知られている。また、キサントフィルには、生物活性を有する化合物が数多く存在している。例えば、Ｃ．Ｓａｔｏ，Ｎｅｗ  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，４４巻，Ｎｏ．１０，１〜５頁，２００２年には、ルテインやゼアキサンチンが加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）の予防に効果があることが記載されている。また、Ｋ．Ｙａｚａｗａ，Ｎｅｗ  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，４６巻，Ｎｏ．５，１７〜２４頁，２００４年には、アスタキサンチンが一重項酸素の消去剤やフリーラジカルの捕捉剤として抗酸化作用を有し、動脈硬化を促す因子であるＬＤＬ（低比重リポ蛋白）コレステロールの酸化抑制作用等を有することが記載されている。
このような優れた作用を有するキサントフィルは、植物、動物、および微生物などの多くの生物に見出される。これらの生物中のキサントフィル濃度は必ずしも高くなく、十分な量のキサントフィルを製造するために使用される生物は、現在のところ限られている。例えば、ルテインおよびゼアキサンチンは果実あるいはマリーゴールドの花弁から抽出生産されている。アスタキサンチンは、化学合成されるものもあるが、例えば、緑藻、珪藻などの微細藻類（例えば、ヘマトコッカス属、ドナリエラ属の藻類）、酵母（例えば、ファフイア属）などから生産されている。
ところで、キサントフィルには水酸基を有するものがある。例えば、藻類などで生産されるキサントフィルの一種であるアスタキサンチンは、２個の水酸基を有する。そのため、水酸基に脂肪酸が結合したモノエステルあるいはジエステルとして存在する場合が多い。特にモノエステル体が多く、脂肪酸と結合していないフリー体は極めて微量である。このようなエステル体は、フリー体に比べて、一般に光、酸素などに対して安定性が高く（風間成孔ら、食品工業，４６巻，Ｎｏ．２４，２５〜３５頁，２００３年）、製造上ハンドリングが容易であり、また場合によっては、動物体内への吸収も優れている（Ｐｈｙｌｉｐｓ  Ｅ．Ｂｒｏｗｅｎら、Ｊ．Ｎｕｔｒ．，１３２巻，３６６８−３６７３頁，２００２年）。
しかし、キサントフィルの脂肪酸エステルは、脂肪酸とのエステル結合を持つ中性脂質であるトリグリセライドやジグリセライドと種々の化学的な挙動が類似する。しかも、アスタキサンチンなどのキサントフィルを生産する藻類では、同時に上記中性脂質も大量に生産する。そのため、キサントフィルを通常の有機溶媒で抽出しようとすると、キサントフィルよりも大量の中性脂質がキサントフィルとともに抽出される。すなわち、キサントフィルを低濃度（１０％以下）で含有する中性脂質が回収される。従って、高濃度のアスタキサンチンを得るには、化学的挙動が相互に類似する中性脂質とキサントフィルの脂肪酸エステルとを分離する必要がある。
大量の油脂（中性脂質）の中から、キサントフィルを回収する方法として、晶析による方法がある。例えば、特許第３２６６７１９号公報には、アスタキサンチンを含有するクロロホルムの溶液からアスタキサンチンを晶析させて精製する方法が示されている。また、特表平１１−５０８６０３号公報には、マリーゴールドの花弁から抽出した含油成分からキサントフィルジエステルを晶析法により精製する方法が開示されている。
しかし、クロロホルムを用いる晶析方法は、クロロホルムの毒性の問題などから食品の製造工程に用いるには適当でない。また、晶析法は、晶析したい物質を所定の濃度以上の濃度とする必要があること、所望の物質以外の物質が晶出する場合があること、目的の物質が結晶構造をとりにくい場合には晶析物の純度が低下することなどの問題がある。
さらに、特開２００４−４１１４７号公報には、超臨界抽出法によるアスタキサンチン濃縮物を得る方法が開示されている。しかし、この方法は高圧条件下で行うため、設備にコストがかかる上、藻類の細胞壁を破壊して補助溶剤と混練し、いったん成形体を形成しなければならないなどの操作上の問題がある。
他方、キサントフィルのような酸素原子を有しないカロチノイド（例えば、カロチン）などを油脂類から除去するために、樹脂を用いる方法が種々検討されている。例えば、特開昭６１−１２６５７号公報、Ｂ．Ｓ．Ｂａｈａｒｉｎら，ＪＡＯＣＳ，７５巻，Ｎｏ．３，３９９−４０４頁，１９９８年、Ｒ．Ａ．Ｌａｔｉｐら，ＪＡＯＣＳ，７７巻，Ｎｏ．１２，１２７７−１２８１頁，２０００年、およびＫ．Ｗ．Ｃｈａｎら，Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｌｉｐｉｄｓ，７巻，１２７−１４１頁，２０００年には、カロチン含有粗パーム油（ＣＰＯ）を直接、あるいはアルコールに溶解して、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体の合成樹脂と接触させてカロチンを吸着させ、アルコールで樹脂を洗浄し、ついでヘキサンでカロチンを溶出することによる、カロチンの回収方法が開示されている。
また、特開昭６３−５０７３号公報には、カロチンを含有する油脂を必要に応じてアルコールに溶解し、ポリアクリル酸エステル樹脂またはポリメタクリル酸樹脂と接触させ、アルコールで洗浄した後ヘキサンなどの疎水性溶媒で溶出することによる、カロチンの回収方法が記載されている。
上記のカロチンの回収方法は、いずれも、パーム油中に含まれる非常に低濃度（数百ｐｐｍ程度）のカロチンを、加熱条件下（例えば、４０〜８０℃）で上記樹脂と接触させるため、大規模な設備が必要となるなどの問題がある。さらに、これらの樹脂をキサントフィルの濃縮に使用した例は、ほとんど知られていない。
【発明の開示】
【０００３】
本発明は、キサントフィル類の回収方法を提供する。特に、藻類の抽出物などの、中性脂質などの油性物質中に存在するキサントフィル類を濃縮するための効率的な方法を提供することを目的とする。
本発明は、キサントフィル類の回収方法であって、該キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させ、該キサントフィル類を該親水性樹脂に吸着させる吸着工程；および、該親水性樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる脱着工程；を含む方法を提供する。
一つの実施態様では、さらに、上記吸着工程と脱着工程の間に、上記親水性樹脂を洗浄する洗浄工程を含む。
別の実施態様においては、上記親水性樹脂は、アクリル酸系の樹脂である。
また、別の実施態様においては、上記親水性樹脂と接触するキサントフィル類を含有する試料は、キサントフィル類を含有する油性物質である。
さらに、別の実施態様においては、上記キサントフィル類を含有する油性物質は藻類から得られる。
好ましい実施態様では、上記藻類はヘマトコッカス属に属する緑藻である。
さらに異なる実施態様においては、上記親水性樹脂と接触するキサントフィル類を含有する試料は、アルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭素類、およびケトン類からなる群から選択される少なくとも１つの溶媒に溶解されている。
別の実施態様では、上記アルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭素類、およびケトン類は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、トルエン、キシレン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸メチル、酢酸エチル、ジクロロメタン、四塩化炭素、アセトン、およびメチルエチルケトンからなる群から選択される少なくとも１つの溶媒である。
また、別の実施態様では、上記キサントフィル類の溶出に使用する極性溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸メチル、酢酸エチル、アセトン、およびメチルエチルケトンからなる群から選択される少なくとも１つの溶媒である。
別の実施態様では、上記キサントフィル類はアスタキサンチン類である。
また、本発明は、キサントフィル脂肪酸エステルを主成分とし、かつ遊離のキサントフィルに換算したときにキサントフィル含量が３０質量％以上となるキサントフィル類を含有するキサントフィル類濃縮物を提供する。
一つの実施態様では、上記キサントフィル類濃縮物は、キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させ、該キサントフィル類を該親水性樹脂に吸着させる工程；該親水性樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる工程；を含む方法によって得られる。
別の実施態様では、上記キサントフィル濃縮物はアスタキサンチン類濃縮物である。
また、別の実施態様では、上記アスタキサンチン類はヘマトコッカス属に属する緑藻から得られる。
本発明の方法によれば、親水性樹脂、好ましくはアクリル酸系樹脂、メタクリル酸系樹脂などのエステル結合を有する樹脂にキサントフィル類を吸着させ、アルコールあるいはアセトンなどの極性溶媒で溶出させることにより、高濃度のキサントフィル類が回収される。特に、藻類などから得られる、アスタキサンチン類などのキサントフィル類が低濃度で溶解している油性物質から、キサントフィル類を高濃度かつ効率的に回収することができる。その結果、キサントフィル脂肪酸エステルを主成分とし、かつ遊離のキサントフィルに換算したときにキサントフィル含量が３０質量％以上となるキサントフィル類を含有する、キサントフィル類濃縮物が提供される。
この濃縮物中のキサントフィル脂肪酸エステルとしての濃度は、推定で約４３質量％以上であり、約７０質量％以上となり得る。このような高濃度のキサントフィル脂肪酸は、食品の色素材料、魚の飼料、医薬品およびその中間体の原料などとして、有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００４】
本明細書で、キサントフィルは、カロチン構造中に酸素原子を含む化合物をいい、酸素原子に加えて、さらに１個または２個の水酸基を有する化合物も含む。水酸基を１個有する化合物としては、例えば、クリプトキサンチン、フェニコキサンチンなどがある。水酸基を２個有する化合物としては、例えば、ゼアキサンチン、４−ケトゼアキサンチン、アスタキサンチンなどがある。
本発明のキサントフィル類の回収方法は、キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させる工程を含む。まず、Ａ：出発材料であるキサントフィル類を含有する試料およびＢ：親水性樹脂について説明し、次いで、Ｃ：キサントフィル類の回収方法について説明する。
Ａ：出発材料
本明細書で、「キサントフィル類」というときは、水酸基を含まないキサントフィル、水酸基を１個または２個有する遊離のキサントフィル、１個の水酸基に脂肪酸が結合した形態であるキサントフィルの脂肪酸モノエステル、および２個の水酸基に脂肪酸が結合した形態のキサントフィルの脂肪酸ジエステルからなる群から選択される少なくとも１つのキサントフィルを含むことを意味する。例えば、アスタキサンチンは、水酸基を２個有するキサントフィルであるので、アスタキサンチン類というときは、アスタキサンチン（遊離体）、アスタキサンチン脂肪酸モノエステルおよびアスタキサンチン脂肪酸ジエステルからなる群から選択される少なくとも１つの化合物を意味する。
キサントフィル類と脂肪酸エステルを形成し得る脂肪酸としては、ラウリン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、パルミトオレイン酸、ヘプタデカン酸、エライジン酸、リシノール酸、ペトロセリン酸エステル、バクセン酸、エレオステアリン酸、プニシン酸、リカン酸、パリナリン酸、ガドール酸、５−エイコセン酸、５−ドコセン酸、セトール酸、エルシン酸、５，１３−ドコサジエン酸、セラコール酸、デセン酸、ステリング酸、ドデセン酸、オレイン酸、ステアリン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、リノール酸、α−リノレン酸、アラキドン酸などが挙げられる。
本発明の方法に用いられるキサントフィル類の由来には特に制限がない。例えば、果実、花弁などの植物のキサントフィル抽出物、藻類のキサントフィル抽出物などが挙げられるが、これらに制限されない。本明細書においては、このような抽出物を「親水性樹脂と接触するキサントフィル類を含有する試料」という。あるいは、キサントフィル類を含有する試料は、キサントフィル類が油脂などの油性物質に溶解されている形態でもよく、本明細書においてはこのような試料を「キサントフィル類を含有する油性物質」という。さらに、キサントフィル類または上記のキサントフィル類を含有する試料は、以下のＣ−１：吸着工程の項で詳述するような有機溶媒に溶解されていてもよい。
藻類のキサントフィル抽出物について説明する。ヘマトコッカスなどの藻類においては、キサントフィル類であるアスタキサンチン類が藻体内に蓄積されるが、同時に中性脂質などの油性物質も生産される。アスタキサンチン類の抽出に一般に用いられる有機溶媒抽出法では、アスタキサンチン類は中性脂質などとともに抽出される。藻類に由来する油性物質中のアスタキサンチン類の濃度は、抽出溶媒、抽出方法などにもよるが、一般的には１〜１０質量％程度である。なお、藻類のアスタキサンチン類は、培養条件にもよるが、アスタキサンチン脂肪酸モノエステルが主成分であり、全キサントフィル類の少なくとも５０質量％以上、より好ましくは６０質量％以上、さらに好ましくは７０質量％以上を占める。アスタキサンチン脂肪酸ジエステルは、１５〜３０質量％程度含有され、遊離のアスタキサンチンは１質量％以下である場合が多い。緑藻類のヘマトコッカス属に属する藻類、好ましくはヘマトコッカス  プルビアリスに由来するアスタキサンチン類を含有する油性物質が好ましく用いられる。
Ｂ：親水性樹脂
本発明に用いられる「親水性樹脂」は、樹脂に対する吸着の度合いが目的物であるキサントフィル類と夾雑物、特に中性脂質、との間で異なる樹脂であれば、特に制限はない。このような樹脂としては、例えば、アクリル酸および／またはメタクリル酸を含む重合体を骨格とする、エステル結合を有する樹脂が挙げられる。例えば、ポリアクリル酸樹脂、ポリメタクリル酸樹脂、アクリル酸とメタクリル酸の共重合体樹脂、アクリル酸および／またはメタクリル酸と、メチルメタクリレート、ポリエチルメタクリレート、ポリメチルアクリレート、ポリエチルアクリレートなどとの共重合体樹脂が好ましく用いられる。市販の合成吸着剤であるメタクリル酸共重合体樹脂（商品名：ＨＰ２ＭＧ（三菱化学株式会社製）、ＸＡＤ７ＨＰ（オルガノ株式会社製）など）を用いてもよい。
Ｃ：キサントフィル類の回収方法
本発明のキサントフィルの回収方法は、キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂（以下、単に樹脂ということがある）とを接触させてキサントフィルを樹脂に吸着させる工程（吸着工程）、必要に応じて、樹脂を洗浄する洗浄工程、および樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる工程（脱着工程）を含んでいる。
Ｃ−１：吸着工程
キサントフィル類が有機溶媒に溶解している場合、そのまま樹脂と接触させてもよい。用いる溶媒によっては、キサントフィル類が樹脂に吸着しない場合があり得るが、その場合、有機溶剤をアルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭素類、ケトン類などの溶媒で希釈するか、これらの溶媒に置換してから、吸着させることが好ましい。アルコール類としては、炭素数１〜５の低級アルコールが好ましく、メタノール、エタノール、プロパノールおよびイソプロパノールがさらに好ましい。飽和炭化水素類としては、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、石油エーテル、ケロセンなどが挙げられる。芳香族系炭化水素類としては、トルエン、キシレンなどが挙げられる。エーテル類としては、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどが挙げられる。エステル類としては、酢酸メチル、酢酸エチルなどが挙げられる。ハロゲン化炭化水素類としては、ジクロロエタン、四塩化炭素などが挙げられる。ケトン類としては、アセトン、メチルエチルケトンなどが挙げられる。
キサントフィル類が油性物質に溶解している場合、そのまま樹脂と接触させて、キサントフィル類を吸着させてもよい。あるいは、予め、上記のアルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭素類、またはケトン類にキサントフィル類を含む油性物質を溶解あるいは希釈した後、樹脂と接触させてもよい。上記有機溶媒は、単独で用いてもよく、組み合わせて用いてもよい。吸着に際して、油性物質に対して添加するアルコールなどの溶媒は、キサントフィル類を含有する油性物質の等倍〜３００倍量（容積比）添加することが好ましく、２倍〜１００倍量添加することがさらに好ましい。
Ｃ−２：洗浄工程
洗浄工程は、必須でないが、行う方が好ましい。洗浄工程は、特にキサントフィル類が油性物質中に溶解しているときには有用である。中性脂質などの油性物質を、アルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭素類、ケトン類などの有機溶媒で溶解し、洗浄することにより、不純物を除去することができる。洗浄に用いる有機溶媒としては、アルコール類、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、石油エーテル、ケロセン、トルエン、キシレン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジクロロエタン、四塩化炭素、アセトン、メチルエチルケトンなどが挙げられる。なお、アセトン、メチルエチルケトンのような脱着能力の高い溶媒を用いた場合、夾雑物とともに目的とするキサントフィルの脱着が起こり、夾雑物と目的物との分離が難しくなる場合がある。キサントフィル類の吸着樹脂への保持性を考慮すると、アルコール類または飽和炭化水素類を使用することが好ましい。アルコール類としては、メタノール、エタノール、プロパノールおよびイソプロパノールが好ましく、飽和炭化水素類としては、ペンタン、ヘキサン、およびヘプタンが好適に用いられる。洗浄に用いる有機溶媒は、単独で用いてもよく、組み合わせて用いてもよい。洗浄に使用する有機溶媒の量は特に制限はないが、使用する樹脂の容量の等倍〜２０倍量、好ましくは２倍〜１０倍量である。洗浄工程で使用する溶媒は、吸着工程で用いた溶媒と同じであってもよく、異なっていてもよい。例えば、キサントフィル類を含む油性物質をアルコールあるいはヘキサンに溶解した場合、洗浄工程では、アルコールを用いてもよく、ヘキサンを用いてもよい。
Ｃ−３：脱着工程
脱着工程は、親水性樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる工程である。用いる極性溶媒に特に制限はないが、アルコール類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類、ケトン類などが好ましく用いられる。アルコール類としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールが挙げられる。エーテル類としては、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどが挙げられる。エステル類としては、酢酸メチル、酢酸エチルなどが挙げられる。ハロゲン化炭化水素類としては、二塩化エチレンなどが挙げられる。ケトン類としては、アセトン、メチルエチルケトンなどが挙げられる。これらの有機溶媒は単独で用いてもよく、組み合わせて用いてもよい。脱着に使用する極性有機溶媒の量は特に制限はないが、使用する樹脂の容量の等倍〜５０倍量、好ましくは２倍〜１０倍量である。
Ｃ−４：吸着−洗浄−脱着工程
キサントフィル類の樹脂への吸着方法に特に制限はない。バッチ式で撹拌しながら吸着−洗浄−脱着を行ってもよいし、樹脂をカラムに充填し、吸着−洗浄−脱着を行ってもよい。工程管理上からは、カラムを用いて行うことが好ましい。
Ｃ−５：各工程に用いる有機溶媒の組合せ
各工程に用いる有機溶媒は、全ての工程において同一であってもよいし、異なってもよい。例えば、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒を全てエタノールとしてもよいし、メタノール−エタノール−エタノールとしてもよい。
しかしながら、各工程における使用溶媒を同じ溶媒、例えば、エタノールとすることによって、１種類の溶媒にて高濃度のキサントフィル類を回収することも可能である。その結果、溶媒の回収が容易になり、溶媒のリサイクルが可能となる。さらに、キサントフィル類含有濃縮物を食品、医薬品などに用いる場合、毒性の化学物質を含まないことが必要とされるが、残留エタノールがあったとしても、エタノールは毒性が非常に低いため、問題とならない。このように、すべての工程においてエタノールを用いることは、キサントフィル類の製造の点および得られるキサントフィル類の品質の点において、非常に有利である。
一方、例えば、メタクリル酸共重合体樹脂を用い、洗浄工程にエタノールを使用する場合、この洗浄工程において、目的とするキサントフィル類の脱着が徐々に起こり得る。そのため、溶出液の回収を開始する時点によって、キサントフィル類の濃度および回収率に大きな差が生じる。したがって、このような溶媒を選択した場合、回収開始時点については、濃度と回収率とのどちらを優先するかを考慮して決定する必要がある。
Ｄ：キサントフィル濃縮物
上記方法により、キサントフィル類の濃縮物が製造される。この濃縮物中には、キサントフィル脂肪酸エステルを主成分とし、かつ遊離のキサントフィルに換算したときにキサントフィル含量が３０質量％以上のキサントフィル類が含有される。
キサントフィル含量が３０質量％の場合、キサントフィル脂肪酸エステルとしての濃度は、推定で、約４５質量％となる。緑藻、例えばヘマトコッカス属の藻類を用いた濃縮物の場合、キサントフィルはほとんどがアスタキサンチンである。市販のヘマトコッカス由来のアスタキサンチン含有物の分析から、アスタキサンチンに結合している脂肪酸の平均分子量が約２９０であり、そしてモノエステルが７５％およびジエステルが２５％の割合であると仮定される。したがって、本発明の方法によれば、遊離のアスタキサンチンに換算したときに、アスタキサンチン含量が３０質量％以上の濃縮物が得られた場合、アスタキサンチン脂肪酸エステル濃度として少なくとも約４３質量％のアスタキサンチン脂肪酸エステルが回収される。
【実施例】
【０００５】
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこの実施例に制限されるものではない。なお、本実施例では、キサントフィル類を含む油性物質の例として緑藻であるヘマトコッカス  プルビアリスから抽出したヘマトコッカス抽出物を用いた。このヘマトコッカス抽出物中のキサントフィル類のほとんどはアスタキサンチン類である。このキサントフィル類を含有するヘマトコッカス抽出物は、食品添加物ヘマトコッカス藻色素として食品添加物協会から入手可能である。
また、キサントフィルの濃度（キサントフィル類を遊離のキサントフィルに換算した濃度）は、以下の計算式から求めた。
総キサントフィル濃度（質量％）＝（Ａ＊１００＊Ｆ）／（Ｗ＊２０８５）
ここで、Ａは、試料の４７８ｎｍにおける吸光度（光路長１ｃｍ）、
Ｆは、試料の希釈倍率、および
Ｗは、試料の質量（ｇ）である。
キサントフィル類の組成は、高速液体クロマトグラフィーにより、分析した。
（実施例１）
メタクリル酸共重合体樹脂（商品名：ＨＰ２ＭＧ、三菱化学株式会社製）を３０ｍｌ充填した直径２０ｍｍのカラムを準備した。キサントフィル類を含有するヘマトコッカス抽出物２０１ｍｇ（キサントフィル濃度９．６質量％）をエタノール溶液（１２ｍｌ）に溶解したものを、このカラムに通液し、キサントフィル類を吸着させた。ついで、このカラムにエタノール６０ｍｌを通液し、樹脂を洗浄した。この洗浄画分を分取し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）およびリンモリブデン酸法による発色で分析した。展開溶媒（石油エーテル：アセトン（４：１（容量比））で展開したところ、トリアシルグリセリド（ＴＧ）などを主成分とする油脂分、および少量のキサントフィル類が検出された。エタノール洗浄後、さらにエタノール１６０ｍｌを、ＳＶ＝１．５で通液して、キサントフィル類を回収した。回収に際して、溶出液は１０ｍｌずつ分取した。各画分について、溶出溶媒（エタノール）で１０倍に希釈し、４７８ｎｍにおける吸光度を測定した。吸光度が１．０以上であり、かつＴＬＣによる観察でキサントフィル類以外の物質がほぼ検出されない画分を集め、エタノールを留去して、４３質量％のキサントフィルを含む濃縮物が１９．８ｍｇ得られた。キサントフィル類は、約４．５倍に濃縮され、キサントフィル類の回収率は４４％であった。実施例１における吸着工程の使用溶媒−洗浄工程の使用溶媒−脱着工程の使用溶媒の組合せは、エタノール−エタノール−エタノールである。これらの結果をまとめて、表１に示す。
（実施例２）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を１９６ｍｇ用い  吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、エタノール−エタノール−アセトンとし、アセトンを６０ｍｌ使用したこと以外は実施例１と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。
（実施例３）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を２０５ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、ヘキサン−ヘキサン−エタノールとし、洗浄工程のヘキサンを１６５ｍｌ使用したこと以外は実施例１と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。この実施例３では、ヘキサン洗浄によってはＴＧなどの油性成分が十分に洗浄されずに残り、脱着溶媒のエタノールで油性成分が溶出した。ＴＬＣ分析では、エタノールを通液することにより、まず、油性成分が溶出し、次いでキサントフィル類が溶出する傾向が見られた。
（実施例４）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を２１１ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、ヘキサン−ヘキサン−アセトンとしたこと以外は実施例３と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。この実施例４では、ヘキサン洗浄によっては、ＴＧなどの油性成分が十分に洗浄されずに残り、脱着溶媒のアセトンで油性成分が溶出した。ＴＬＣ分析では、アセトンを通液することにより、まず、油性成分が溶出し、次いで、キサントフィル類が溶出する傾向が見られた。
（実施例５）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を２０７ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、ヘキサン−エタノール−エタノールとしたこと以外は実施例１と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。
（実施例６）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を１９９ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、ヘキサン−エタノール−アセトンとし、エタノールを６０ｍｌ用いたこと以外は実施例４と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。この実施例６では、エタノール洗浄によってＴＧなどの油性成分がほぼ洗浄され、洗浄によるキサントフィル類の溶出はほとんど認められなかった。
（実施例７）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を２０６ｍｇ用い、樹脂として、メタクリル酸共重合体樹脂（商品名：ＸＡＤ７ＨＰ、オルガノ株式会社製）を用いたこと以外は実施例２と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。
（比較例１）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を２０２ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、エタノール−エタノール−ヘキサンとしたこと以外は実施例１と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表２に示す。
（比較例２）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度１１質量％）を２００ｍｇ用い、樹脂として、スチレン系樹脂（商品名：ＨＰ２０、三菱化学株式会社製）を用いたこと以外は実施例２と同様にして、すなわち、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、エタノール−エタノール−アセトンとして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表２に示す。
（比較例３）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度１１質量％）を１８９ｍｇ用い、樹脂として修飾スチレン系樹脂（商品名：ＳＰ２０７、三菱化学株式会社製）を用いたこと以外は比較例２と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表２に示す。
（比較例４）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度１１質量％）を２１０ｍｇ用い、樹脂としてフェノール系樹脂（商品名：ＸＡＤ７０１、オルガノ株式会社製）を用いたこと以外は比較例２と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表２に示す。
【表１】
2006090871.tif 000002
【表２】
2006090871.tif 000003
表１および２からわかるように、メタクリル系共重合体樹脂などの親水性樹脂を用い、脱着工程における溶出溶媒としてエタノール、アセトンなどの極性溶媒を用いると、キサントフィル類は３．３倍以上、好ましくは４倍以上に濃縮され、そして、遊離のキサントフィルに換算したキサントフィル濃度も高かった。脂肪酸エステルとしての濃度に換算すると、遊離キサントフィル濃度（質量％）の約１．５倍高い濃度となる。
これに対して、比較例１のように、溶出溶媒として疎水性のヘキサンを用いると、濃縮倍率は上がるものの、キサントフィル類の収率は極めて悪くなることがわかる。また、カロチンの精製に使用される疎水性のスチレン系樹脂を用いた比較例２〜４では、キサントフィル類の回収率は高いものの、キサントフィルの濃度はほとんど向上せず、精製できなかった。
（比較例５）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を１９６ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、ヘキサン−ヘキサン−ヘキサンとしたこと以外は実施例１と同様にして、キサントフィル濃縮を試みた。しかし、目的とするキサントフィル類は樹脂に吸着したままであり、キサントフィル類を含む濃縮物は得られなかった（データは示さず）。
【産業上の利用可能性】
【０００６】
本発明の方法は、キサントフィル類、特に油性物質中に溶解しているキサントフィル類を回収するために優れた方法であり、親水性樹脂と、毒性の少ない１種類の溶媒を組み合わせて用いるだけで、キサントフィル類を高濃度に濃縮できるので、キサントフィル類の製造において、非常に有用である。そして、本発明の方法によって提供される脂肪酸と結合したキサントフィル類の濃縮物は、安定性と安全性に優れかつ高濃度であるため、食品、医薬品などの製造に有用である。
【手続補正書】
【提出日】平成18年11月15日(2006.11.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キサントフィル類の回収方法であって、
該キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させ、該キサントフィル類を該樹脂に吸着させる吸着工程；および
該樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる脱着工程；
を含む、方法。
【請求項２】
さらに、前記吸着工程と前記脱着工程の間に、前記親水性樹脂を洗浄する洗浄工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記親水性樹脂が、アクリル酸系および／またはメタクリル酸系の樹脂である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記親水性樹脂と接触するキサントフィル類を含有する試料が、キサントフィル類を含有する油性物質である、請求項１から３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項５】
前記キサントフィル類を含有する油性物質が藻類から得られる、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記藻類が、ヘマトコッカス属に属する緑藻である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記親水性樹脂と接触するキサントフィル類を含有する試料が、アルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類、およびケトン類からなる群から選択される少なくとも１つの溶媒に溶解されている、請求項１から６のいずれかの項に記載の方法。
【請求項８】
前記アルコール類、飽和炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類、およびケトン類が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、トルエン、キシレン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸メチル、酢酸エチル、ジクロロメタン、四塩化炭素、アセトン、およびメチルエチルケトンからなる群から選択される少なくとも１つの溶媒である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記キサントフィル類の溶出に使用する極性溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸メチル、酢酸エチル、アセトン、およびメチルエチルケトンからなる群から選択される少なくとも１つの溶媒である、請求項１から８のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１０】
前記キサントフィル類がアスタキサンチン類である、請求項１から９のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１１】
キサントフィル脂肪酸エステルを主成分とし、かつ遊離のキサントフィルに換算したときにキサントフィル含量が３０質量％以上となるキサントフィル類を含有する、キサントフィル類濃縮物。
【請求項１２】
前記キサントフィル類濃縮物が、キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させ、該キサントフィル類を該親水性樹脂に吸着させる工程；
該親水性樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる工程；
を含む、方法によって得られる、請求項１１に記載のキサントフィル濃縮物。
【請求項１３】
前記キサントフィル濃縮物がアスタキサンチン類濃縮物である、請求項１１または１２に記載の濃縮物。
【請求項１４】
前記アスタキサンチン類が、ヘマトコッカス属に属する緑藻から得られる、請求項１３に記載の濃縮物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キサントフィルを含有する油性物質からキサントフィルを回収する方法に関する。さらに、本発明は、キサントフィルを高濃度で含有するキサントフィル含有物に関する。
【背景技術】
【０００２】
カロチノイドは、動植物界に広く分布する黄色から赤色の色素である。カロチノイドはリコペンを原型とし、分子末端の閉環および環への酸素原子の導入などにより５００種類以上存在することが知られている。末端が閉環された炭化水素はカロチンと呼ばれ、このカロチン構造中に酸素原子を含む化合物はキサントフィルと呼ばれている。
【０００３】
このように、キサントフィルは、ポリエン色素の一種であるカロチノイドに酸素官能基が導入されたカロチン誘導体であり、カンタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン、アドニルビン、β−クリプトキサンチン、アスタキサンチン等が知られている。
【０００４】
キサントフィルは、食材用色素として有用であることが知られている。また、キサントフィルには、生物活性を有する化合物が数多く存在している。例えば、非特許文献１には、ルテインやゼアキサンチンが加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）の予防に効果があることが記載されている。また、非特許文献２には、アスタキサンチンが一重項酸素の消去剤やフリーラジカルの捕捉剤として抗酸化作用を有し、動脈硬化を促す因子であるＬＤＬ（低比重リポ蛋白）コレステロールの酸化抑制作用等を有することが記載されている。
【０００５】
このような優れた作用を有するキサントフィルは、植物、動物、および微生物などの多くの生物に見出される。これらの生物中のキサントフィル濃度は必ずしも高くなく、十分な量のキサントフィルを製造するために使用される生物は、現在のところ限られている。例えば、ルテインおよびゼアキサンチンは果実あるいはマリーゴールドの花弁から抽出生産されている。アスタキサンチンは、化学合成されるものもあるが、例えば、緑藻、珪藻などの微細藻類（例えば、ヘマトコッカス属、ドナリエラ属の藻類）、酵母（例えば、ファフイア属）などから生産されている。
【０００６】
ところで、キサントフィルには水酸基を有するものがある。例えば、藻類などで生産されるキサントフィルの一種であるアスタキサンチンは、２個の水酸基を有する。そのため、水酸基に脂肪酸が結合したモノエステルあるいはジエステルとして存在する場合が多い。特にモノエステル体が多く、脂肪酸と結合していないフリー体は極めて微量である。このようなエステル体は、フリー体に比べて、一般に光、酸素などに対して安定性が高く（非特許文献３）、製造上ハンドリングが容易であり、また場合によっては、動物体内への吸収も優れている（非特許文献４）。
【０００７】
しかし、キサントフィルの脂肪酸エステルは、脂肪酸とのエステル結合を持つ中性脂質であるトリグリセライドやジグリセライドと種々の化学的な挙動が類似する。しかも、アスタキサンチンなどのキサントフィルを生産する藻類では、同時に上記中性脂質も大量に生産する。そのため、キサントフィルを通常の有機溶媒で抽出しようとすると、キサントフィルよりも大量の中性脂質がキサントフィルとともに抽出される。すなわち、キサントフィルを低濃度（１０％以下）で含有する中性脂質が回収される。従って、高濃度のアスタキサンチンを得るには、化学的挙動が相互に類似する中性脂質とキサントフィルの脂肪酸エステルとを分離する必要がある。
【０００８】
大量の油脂（中性脂質）の中から、キサントフィルを回収する方法として、晶析による方法がある。例えば、特許文献１には、アスタキサンチンを含有するクロロホルムの溶液からアスタキサンチンを晶析させて精製する方法が示されている。また、特許文献２には、マリーゴールドの花弁から抽出した含油成分からキサントフィルジエステルを晶析法により精製する方法が開示されている。
【０００９】
しかし、クロロホルムを用いる晶析方法は、クロロホルムの毒性の問題などから食品の製造工程に用いるには適当でない。また、晶析法は、晶析したい物質を所定の濃度以上の濃度とする必要があること、所望の物質以外の物質が晶出する場合があること、目的の物質が結晶構造をとりにくい場合には晶析物の純度が低下することなどの問題がある。
【００１０】
さらに、特許文献３には、超臨界抽出法によるアスタキサンチン濃縮物を得る方法が開示されている。しかし、この方法は高圧条件下で行うため、設備にコストがかかる上、藻類の細胞壁を破壊して補助溶剤と混練し、いったん成形体を形成しなければならないなどの操作上の問題がある。
【００１１】
他方、キサントフィルのような酸素原子を有しないカロチノイド（例えば、カロチン）などを油脂類から除去するために、樹脂を用いる方法が種々検討されている。例えば、特許文献４および非特許文献５〜７には、カロチン含有粗パーム油（ＣＰＯ）を直接、あるいはアルコールに溶解して、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体の合成樹脂と接触させてカロチンを吸着させ、アルコールで樹脂を洗浄し、ついでヘキサンでカロチンを溶出することによる、カロチンの回収方法が開示されている。
【００１２】
また、特許文献５には、カロチンを含有する油脂を必要に応じてアルコールに溶解し、ポリアクリル酸エステル樹脂またはポリメタクリル酸樹脂と接触させ、アルコールで洗浄した後ヘキサンなどの疎水性溶媒で溶出することによる、カロチンの回収方法が記載されている。
【００１３】
上記のカロチンの回収方法は、いずれも、パーム油中に含まれる非常に低濃度（数百ｐｐｍ程度）のカロチンを、加熱条件下（例えば、４０〜８０℃）で上記樹脂と接触させるため、大規模な設備が必要となるなどの問題がある。さらに、これらの樹脂をキサントフィルの濃縮に使用した例は、ほとんど知られていない。
【特許文献１】特許第３２６６７１９号公報
【特許文献２】特表平１１−５０８６０３号公報
【特許文献３】特開２００４−４１１４７号公報
【特許文献４】特開昭６１−１２６５７号公報
【特許文献５】特開昭６３−５０７３号公報
【非特許文献１】Ｃ．Ｓａｔｏ，Ｎｅｗ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，４４巻，Ｎｏ．ｌ０，１〜５頁，２００２年
【非特許文献２】Ｋ．Ｙａｚａｗａ，Ｎｅｗ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，４６巻，Ｎｏ．５，１７〜２４頁，２００４年
【非特許文献３】風間成孔ら、食品工業，４６巻，Ｎｏ．２４，２５〜３５頁，２００３年
【非特許文献４】Ｐｈｙｌｉｐｓ  Ｅ．Ｂｒｏｗｅｎら、Ｊ．Ｎｕｔｒ．，１３２巻，３６６８−３６７３頁，２００２年
【非特許文献５】Ｂ．Ｓ．Ｂａｈａｒｉｎら，ＪＡＯＣＳ，７５巻，Ｎｏ．３，３９９−４０４頁，１９９８年
【非特許文献６】Ｒ．Ａ．Ｌａｔｉｐら，ＪＡＯＣＳ，７７巻，Ｎｏ．１２，１２７７−１２８１頁，２０００年
【非特許文献７】Ｋ．Ｗ．Ｃｈａｎら，Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｌｉｐｉｄｓ，７巻，１２７‐１４１頁，２０００年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、キサントフィル類の回収方法を提供する。特に、藻類の抽出物などの、中性脂質などの油性物質中に存在するキサントフィル類を濃縮するための効率的な方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、キサントフィル類の回収方法であって、該キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させ、該キサントフィル類を該親水性樹脂に吸着させる吸着工程；および、該親水性樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる脱着工程；を含む方法を提供する。
【００１６】
一つの実施態様では、さらに、上記吸着工程と脱着工程の間に、上記親水性樹脂を洗浄する洗浄工程を含む。
【００１７】
別の実施態様においては、上記親水性樹脂は、アクリル酸系の樹脂である。
【００１８】
また、別の実施態様においては、上記親水性樹脂と接触するキサントフィル類を含有する試料は、キサントフィル類を含有する油性物質である。
【００１９】
さらに、別の実施態様においては、上記キサントフィル類を含有する油性物質は藻類から得られる。
【００２０】
好ましい実施態様では、上記藻類はヘマトコッカス属に属する緑藻である。
【００２１】
さらに異なる実施態様においては、上記親水性樹脂と接触するキサントフィル類を含有する試料は、アルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類、およびケトン類からなる群から選択される少なくとも１つの溶媒に溶解されている。
【００２２】
別の実施態様では、上記アルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類、およびケトン類は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、トルエン、キシレン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸メチル、酢酸エチル、ジクロロメタン、四塩化炭素、アセトン、およびメチルエチルケトンからなる群から選択される少なくとも１つの溶媒である。
【００２３】
また、別の実施態様では、上記キサントフィル類の溶出に使用する極性溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸メチル、酢酸エチル、アセトン、およびメチルエチルケトンからなる群から選択される少なくとも１つの溶媒である。
【００２４】
別の実施態様では、上記キサントフィル類はアスタキサンチン類である。
【００２５】
また、本発明は、キサントフィル脂肪酸エステルを主成分とし、かつ遊離のキサントフィルに換算したときにキサントフィル含量が３０質量％以上となるキサントフィル類を含有するキサントフィル類濃縮物を提供する。
【００２６】
一つの実施態様では、上記キサントフィル類濃縮物は、キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させ、該キサントフィル類を該親水性樹脂に吸着させる工程；該親水性樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる工程；を含む方法によって得られる。
【００２７】
別の実施態様では、上記キサントフィル濃縮物はアスタキサンチン類濃縮物である。
【００２８】
また、別の実施態様では、上記アスタキサンチン類はヘマトコッカス属に属する緑藻から得られる。
【発明の効果】
【００２９】
本発明の方法によれば、親水性樹脂、好ましくはアクリル酸系樹脂、メタクリル酸系樹脂などのエステル結合を有する樹脂にキサントフィル類を吸着させ、アルコールあるいはアセトンなどの極性溶媒で溶出させることにより、高濃度のキサントフィル類が回収される。特に、藻類などから得られる、アスタキサンチン類などのキサントフィル類が低濃度で溶解している油性物質から、キサントフィル類を高濃度かつ効率的に回収することができる。その結果、キサントフィル脂肪酸エステルを主成分とし、かつ遊離のキサントフィルに換算したときにキサントフィル含量が３０質量％以上となるキサントフィル類を含有する、キサントフィル類濃縮物が提供される。
【００３０】
この濃縮物中のキサントフィル脂肪酸エステルとしての濃度は、推定で約４３質量％以上であり、約７０質量％以上となり得る。このような高濃度のキサントフィル脂肪酸は、食品の色素材料、魚の飼料、医薬品およびその中間体の原料などとして、有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
本明細書で、キサントフィルは、カロチン構造中に酸素原子を含む化合物をいい、酸素原子に加えて、さらに１個または２個の水酸基を有する化合物も含む。水酸基を１個有する化合物としては、例えば、クリプトキサンチン、フェニコキサンチンなどがある。水酸基を２個有する化合物としては、例えば、ゼアキサンチン、４−ケトゼアキサンチン、アスタキサンチンなどがある。
【００３２】
本発明のキサントフィル類の回収方法は、キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂とを接触させる工程を含む。まず、Ａ：出発材料であるキサントフィル類を含有する試料およびＢ：親水性樹脂について説明し、次いで、Ｃ：キサントフィル類の回収方法について説明する。
【００３３】
Ａ：出発材料
本明細書で、「キサントフィル類」というときは、水酸基を含まないキサントフィル、水酸基を１個または２個有する遊離のキサントフィル、１個の水酸基に脂肪酸が結合した形態であるキサントフィルの脂肪酸モノエステル、および２個の水酸基に脂肪酸が結合した形態のキサントフィルの脂肪酸ジエステルからなる群から選択される少なくとも１つのキサントフィルを含むことを意味する。例えば、アスタキサンチンは、水酸基を２個有するキサントフィルであるので、アスタキサンチン類というときは、アスタキサンチン（遊離体）、アスタキサンチン脂肪酸モノエステルおよびアスタキサンチン脂肪酸ジエステルからなる群から選択される少なくとも１つの化合物を意味する。
【００３４】
キサントフィル類と脂肪酸エステルを形成し得る脂肪酸としては、ラウリン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、パルミトオレイン酸、ヘプタデカン酸、エライジン酸、リシノール酸、ペトロセリン酸、バクセン酸、エレオステアリン酸、プニシン酸、リカン酸、パリナリン酸、ガドール酸、５−エイコセン酸、５−ドコセン酸、セトール酸、エルシン酸、５，１３−ドコサジエン酸、セラコール酸、デセン酸、ドデセン酸、オレイン酸、ステアリン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、リノール酸、α−リノレン酸、アラキドン酸などが挙げられる。
【００３５】
本発明の方法に用いられるキサントフィル類の由来には特に制限がない。例えば、果実、花弁などの植物のキサントフィル抽出物、藻類のキサントフィル抽出物などが挙げられるが、これらに制限されない。本明細書においては、このような抽出物を「親水性樹脂と接触するキサントフィル類を含有する試料」という。あるいは、キサントフィル類を含有する試料は、キサントフィル類が油脂などの油性物質に溶解されている形態でもよく、本明細書においてはこのような試料を「キサントフィル類を含有する油性物質」という。さらに、キサントフィル類または上記のキサントフィル類を含有する試料は、以下のC-1：吸着工程の項で詳述するような有機溶媒に溶解されていてもよい。
【００３６】
藻類のキサントフィル抽出物について説明する。ヘマトコッカスなどの藻類においては、キサントフィル類であるアスタキサンチン類が藻体内に蓄積されるが、同時に中性脂質などの油性物質も生産される。アスタキサンチン類の抽出に一般に用いられる有機溶媒抽出法では、アスタキサンチン類は中性脂質などとともに抽出される。藻類に由来する油性物質中のアスタキサンチン類の濃度は、抽出溶媒、抽出方法などにもよるが、一般的には１〜１０質量％程度である。なお、藻類のアスタキサンチン類は、培養条件にもよるが、アスタキサンチン脂肪酸モノエステルが主成分であり、全キサントフィル類の少なくとも５０質量％以上、より好ましくは６０質量％以上、さらに好ましくは７０質量％以上を占める。アスタキサンチン脂肪酸ジエステルは、１５〜３０質量％程度含有され、遊離のアスタキサンチンは１質量％以下である場合が多い。緑藻類のヘマトコッカス属に属する藻類、好ましくはヘマトコッカス  プルビアリスに由来するアスタキサンチン類を含有する油性物質が好ましく用いられる。
【００３７】
Ｂ：親水性樹脂
本発明に用いられる「親水性樹脂」は、樹脂に対する吸着の度合いが目的物であるキサントフィル類と夾雑物、特に中性脂質、との間で異なる樹脂であれば、特に制限はない。このような樹脂としては、例えば、アクリル酸および／またはメタクリル酸を含む重合体を骨格とする、エステル結合を有する樹脂が挙げられる。例えば、ポリアクリル酸樹脂、ポリメタクリル酸樹脂、アクリル酸とメタクリル酸の共重合体樹脂、アクリル酸および／またはメタクリル酸と、メチルメタクリレート、ポリエチルメタクリレート、ポリメチルアクリレート、ポリエチルアクリレートなどとの共重合体樹脂が好ましく用いられる。市販の合成吸着剤であるメタクリル酸共重合体樹脂（商品名：ＨＰ２ＭＧ（三菱化学株式会社製）、ＸＡＤ７ＨＰ（オルガノ株式会社製）など）を用いてもよい。
【００３８】
Ｃ：キサントフィル類の回収方法
本発明のキサントフィルの回収方法は、キサントフィル類を含有する試料と親水性樹脂（以下、単に樹脂ということがある）とを接触させてキサントフィルを樹脂に吸着させる工程（吸着工程）、必要に応じて、樹脂を洗浄する洗浄工程、および樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる工程（脱着工程）を含んでいる。
【００３９】
C-1：吸着工程
キサントフィル類が有機溶媒に溶解している場合、そのまま樹脂と接触させてもよい。用いる溶媒によっては、キサントフィル類が樹脂に吸着しない場合があり得るが、その場合、有機溶剤をアルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類、ケトン類などの溶媒で希釈するか、これらの溶媒に置換してから、吸着させることが好ましい。アルコール類としては、炭素数１〜５の低級アルコールが好ましく、メタノール、エタノール、プロパノールおよびイソプロパノールがさらに好ましい。飽和炭化水素類としては、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、石油エーテル、ケロセンなどが挙げられる。芳香族系炭化水素類としては、トルエン、キシレンなどが挙げられる。エーテル類としては、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどが挙げられる。エステル類としては、酢酸メチル、酢酸エチルなどが挙げられる。ハロゲン化炭化水素類としては、ジクロロエタン、四塩化炭素などが挙げられる。ケトン類としては、アセトン、メチルエチルケトンなどが挙げられる。
【００４０】
キサントフィル類が油性物質に溶解している場合、そのまま樹脂と接触させて、キサントフィル類を吸着させてもよい。あるいは、予め、上記のアルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類、またはケトン類にキサントフィル類を含む油性物質を溶解あるいは希釈した後、樹脂と接触させてもよい。上記有機溶媒は、単独で用いてもよく、組み合わせて用いてもよい。吸着に際して、油性物質に対して添加するアルコールなどの溶媒は、キサントフィル類を含有する油性物質の等倍〜３００倍量（容積比）添加することが好ましく、２倍〜１００倍量添加することがさらに好ましい。
【００４１】
C-2：洗浄工程
洗浄工程は、必須でないが、行う方が好ましい。洗浄工程は、特にキサントフィル類が油性物質中に溶解しているときには有用である。中性脂質などの油性物質を、アルコール類、飽和炭化水素類、芳香族系炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類、ケトン類などの有機溶媒で溶解し、洗浄することにより、不純物を除去することができる。洗浄に用いる有機溶媒としては、アルコール類、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、石油エーテル、ケロセン、トルエン、キシレン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジクロロエタン、四塩化炭素、アセトン、メチルエチルケトンなどが挙げられる。なお、アセトン、メチルエチルケトンのような脱着能力の高い溶媒を用いた場合、夾雑物とともに目的とするキサントフィルの脱着が起こり、夾雑物と目的物との分離が難しくなる場合がある。キサントフィル類の吸着樹脂への保持性を考慮すると、アルコール類または飽和炭化水素類を使用することが好ましい。アルコール類としては、メタノール、エタノール、プロパノールおよびイソプロパノールが好ましく、飽和炭化水素類としては、ペンタン、ヘキサン、およびヘプタンが好適に用いられる。洗浄に用いる有機溶媒は、単独で用いてもよく、組み合わせて用いてもよい。洗浄に使用する有機溶媒の量は特に制限はないが、使用する樹脂の容量の等倍〜２０倍量、好ましくは２倍〜１０倍量である。洗浄工程で使用する溶媒は、吸着工程で用いた溶媒と同じであってもよく、異なっていてもよい。例えば、キサントフィル類を含む油性物質をアルコールあるいはヘキサンに溶解した場合、洗浄工程では、アルコールを用いてもよく、ヘキサンを用いてもよい。
【００４２】
C-3：脱着工程
脱着工程は、親水性樹脂に吸着したキサントフィル類を極性溶媒で溶出させる工程である。用いる極性溶媒に特に制限はないが、アルコール類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類、ケトン類などが好ましく用いられる。アルコール類としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールが挙げられる。エーテル類としては、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどが挙げられる。エステル類としては、酢酸メチル、酢酸エチルなどが挙げられる。ハロゲン化炭化水素類としては、二塩化エチレンなどが挙げられる。ケトン類としては、アセトン、メチルエチルケトンなどが挙げられる。これらの有機溶媒は単独で用いてもよく、組み合わせて用いてもよい。脱着に使用する極性有機溶媒の量は特に制限はないが、使用する樹脂の容量の等倍〜５０倍量、好ましくは２倍〜１０倍量である。
【００４３】
C-4：吸着−洗浄−脱着工程
キサントフィル類の樹脂への吸着方法に特に制限はない。バッチ式で撹拌しながら吸着−洗浄−脱着を行ってもよいし、樹脂をカラムに充填し、吸着−洗浄−脱着を行ってもよい。工程管理上からは、カラムを用いて行うことが好ましい。
【００４４】
C-5：各工程に用いる有機溶媒の組合せ
各工程に用いる有機溶媒は、全ての工程において同一であってもよいし、異なってもよい。例えば、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒を全てエタノールとしてもよいし、メタノール−エタノール−エタノールとしてもよい。
【００４５】
しかしながら、各工程における使用溶媒を同じ溶媒、例えば、エタノールとすることによって、１種類の溶媒にて高濃度のキサントフィル類を回収することも可能である。その結果、溶媒の回収が容易になり、溶媒のリサイクルが可能となる。さらに、キサントフィル類含有濃縮物を食品、医薬品などに用いる場合、毒性の化学物質を含まないことが必要とされるが、残留エタノールがあったとしても、エタノールは毒性が非常に低いため、問題とならない。このように、すべての工程においてエタノールを用いることは、キサントフィル類の製造の点および得られるキサントフィル類の品質の点において、非常に有利である。
【００４６】
一方、例えば、メタクリル酸共重合体樹脂を用い、洗浄工程にエタノールを使用する場合、この洗浄工程において、目的とするキサントフィル類の脱着が徐々に起こり得る。そのため、溶出液の回収を開始する時点によって、キサントフィル類の濃度および回収率に大きな差が生じる。したがって、このような溶媒を選択した場合、回収開始時点については、濃度と回収率とのどちらを優先するかを考慮して決定する必要がある。
【００４７】
Ｄ：キサントフィル濃縮物
上記方法により、キサントフィル類の濃縮物が製造される。この濃縮物中には、キサントフィル脂肪酸エステルを主成分とし、かつ遊離のキサントフィルに換算したときにキサントフィル含量が３０質量％以上のキサントフィル類が含有される。
【００４８】
キサントフィル含量が３０質量％の場合、キサントフィル脂肪酸エステルとしての濃度は、推定で、約４５質量％となる。緑藻、例えばヘマトコッカス属の藻類を用いた濃縮物の場合、キサントフィルはほとんどがアスタキサンチンである。市販のヘマトコッカス由来のアスタキサンチン含有物の分析から、アスタキサンチンに結合している脂肪酸の平均分子量が約２９０であり、そしてモノエステルが７５％およびジエステルが２５％の割合であると仮定される。したがって、本発明の方法によれば、遊離のアスタキサンチンに換算したときに、アスタキサンチン含量が３０質量％以上の濃縮物が得られた場合、アスタキサンチン脂肪酸エステル濃度として少なくとも約４３質量％のアスタキサンチン脂肪酸エステルが回収される。
【実施例】
【００４９】
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこの実施例に制限されるものではない。なお、本実施例では、キサントフィル類を含む油性物質の例として緑藻であるヘマトコッカス  プルビアリスから抽出したヘマトコッカス抽出物を用いた。このヘマトコッカス抽出物中のキサントフィル類のほとんどはアスタキサンチン類である。このキサントフィル類を含有するヘマトコッカス抽出物は、食品添加物ヘマトコッカス藻色素として食品添加物協会から入手可能である。
【００５０】
また、キサントフィルの濃度（キサントフィル類を遊離のキサントフィルに換算した濃度）は、以下の計算式から求めた。
【００５１】
総キサントフィル濃度(質量％)＝(Ａ＊１００＊Ｆ)／(Ｗ＊２０８５)
ここで、Ａは、試料の４７８ｎｍにおける吸光度（光路長１ｃｍ）、
Ｆは、試料の希釈倍率、および
Ｗは、試料の質量（ｇ）である。
【００５２】
キサントフィル類の組成は、高速液体クロマトグラフィーにより、分析した。
【００５３】
（実施例１）
メタクリル酸共重合体樹脂（商品名：ＨＰ２ＭＧ、三菱化学株式会社製）を３０ｍｌ充填した直径２０ｍｍのカラムを準備した。キサントフィル類を含有するヘマトコッカス抽出物２０１ｍｇ（キサントフィル濃度９．６質量％）をエタノール溶液（１２ｍｌ）に溶解したものを、このカラムに通液し、キサントフィル類を吸着させた。ついで、このカラムにエタノール６０ｍｌを通液し、樹脂を洗浄した。この洗浄画分を分取し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）およびリンモリブデン酸法による発色で分析した。展開溶媒（石油エーテル：アセトン（４：１（容量比））で展開したところ、トリアシルグリセリド（ＴＧ）などを主成分とする油脂分、および少量のキサントフィル類が検出された。エタノール洗浄後、さらにエタノール１６０ｍｌを、ＳＶ＝１．５で通液して、キサントフィル類を回収した。回収に際して、溶出液は１０ｍｌずつ分取した。各画分について、溶出溶媒（エタノール）で１０倍に希釈し、４７８ｎｍにおける吸光度を測定した。吸光度が１．０以上であり、かつＴＬＣによる観察でキサントフィル類以外の物質がほぼ検出されない画分を集め、エタノールを留去して、４３質量％のキサントフィルを含む濃縮物が１９．８ｍｇ得られた。キサントフィル類は、約４．５倍に濃縮され、キサントフィル類の回収率は４４％であった。実施例１における吸着工程の使用溶媒−洗浄工程の使用溶媒−脱着工程の使用溶媒の組合せは、エタノール−エタノール−エタノールである。これらの結果をまとめて、表１に示す。
【００５４】
（実施例２）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を１９６ｍｇ用い  吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、エタノール−エタノール−アセトンとし、アセトンを６０ｍｌ使用したこと以外は実施例１と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。
【００５５】
（実施例３）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を２０５ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、ヘキサン−ヘキサン−エタノールとし、洗浄工程のヘキサンを１６５ｍｌ使用したこと以外は実施例１と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。この実施例３では、ヘキサン洗浄によってはＴＧなどの油性成分が十分に洗浄されずに残り、脱着溶媒のエタノールで油性成分が溶出した。ＴＬＣ分析では、エタノールを通液することにより、まず、油性成分が溶出し、次いでキサントフィル類が溶出する傾向が見られた。
【００５６】
（実施例４）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を２１１ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、ヘキサン−ヘキサン−アセトンとしたこと以外は実施例３と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。この実施例４では、ヘキサン洗浄によっては、ＴＧなどの油性成分が十分に洗浄されずに残り、脱着溶媒のアセトンで油性成分が溶出した。ＴＬＣ分析では、アセトンを通液することにより、まず、油性成分が溶出し、次いで、キサントフィル類が溶出する傾向が見られた。
【００５７】
（実施例５）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を２０７ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、ヘキサン−エタノール−エタノールとしたこと以外は実施例１と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。
【００５８】
（実施例６）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を１９９ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、ヘキサン−エタノール−アセトンとし、エタノールを６０ｍｌ用いたこと以外は実施例４と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。この実施例６では、エタノール洗浄によってＴＧなどの油性成分がほぼ洗浄され、洗浄によるキサントフィル類の溶出はほとんど認められなかった。
【００５９】
（実施例７）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を２０６ｍｇ用い、樹脂として、メタクリル酸共重合体樹脂（商品名：ＸＡＤ７ＨＰ、オルガノ株式会社製）を用いたこと以外は実施例２と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表１に示す。
【００６０】
（比較例１）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を２０２ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、エタノール−エタノール−ヘキサンとしたこと以外は実施例１と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表２に示す。
【００６１】
（比較例２）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度１１質量％）を２００ｍｇ用い、樹脂として、スチレン系樹脂（商品名：ＨＰ２０、三菱化学株式会社製）を用いたこと以外は実施例２と同様にして、すなわち、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、エタノール−エタノール−アセトンとして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表２に示す。
【００６２】
（比較例３）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度１１質量％）を１８９ｍｇ用い、樹脂として修飾スチレン系樹脂（商品名：ＳＰ２０７、三菱化学株式会社製）を用いたこと以外は比較例２と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表２に示す。
【００６３】
（比較例４）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度１１質量％）を２１０ｍｇ用い、樹脂としてフェノール系樹脂（商品名：ＸＡＤ７６１、オルガノ株式会社製）を用いたこと以外は比較例２と同様にして、キサントフィル濃縮物を得た。結果を表２に示す。
【００６４】
【表１】
2006090871.tif 000004
【００６５】
【表２】
2006090871.tif 000005
【００６６】
表１および２からわかるように、メタクリル系共重合体樹脂などの親水性樹脂を用い、脱着工程における溶出溶媒としてエタノール、アセトンなどの極性溶媒を用いると、キサントフィル類は３．３倍以上、好ましくは４倍以上に濃縮され、そして、遊離のキサントフィルに換算したキサントフィル濃度も高かった。脂肪酸エステルとしての濃度に換算すると、遊離キサントフィル濃度（質量％）の約１．５倍高い濃度となる。
【００６７】
これに対して、比較例１のように、溶出溶媒として疎水性のヘキサンを用いると、濃縮倍率は上がるものの、キサントフィル類の収率は極めて悪くなることがわかる。また、カロチンの精製に使用される疎水性のスチレン系樹脂を用いた比較例２〜４では、キサントフィル類の回収率は高いものの、キサントフィルの濃度はほとんど向上せず、精製できなかった。
【００６８】
（比較例５）
ヘマトコッカス抽出物（キサントフィル濃度９．６質量％）を１９６ｍｇ用い、吸着工程−洗浄工程−脱着工程の使用溶媒をそれぞれ、ヘキサン−ヘキサン−ヘキサンとしたこと以外は実施例１と同様にして、キサントフィル濃縮を試みた。しかし、目的とするキサントフィル類は樹脂に吸着したままであり、キサントフィル類を含む濃縮物は得られなかった（データは示さず）。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明の方法は、キサントフィル類、特に油性物質中に溶解しているキサントフィル類を回収するために優れた方法であり、親水性樹脂と、毒性の少ない１種類の溶媒を組み合わせて用いるだけで、キサントフィル類を高濃度に濃縮できるので、キサントフィル類の製造において、非常に有用である。そして、本発明の方法によって提供される脂肪酸と結合したキサントフィル類の濃縮物は、安定性と安全性に優れかつ高濃度であるため、食品、医薬品などの製造に有用である。
【国際調査報告】
2006090871.tif 000006
2006090871.tif 000007
2006090871.tif 000008
2006090871.tif 000009