(57)【要約】本発明は、葛花処理物を含有する外用剤を提供する。本発明の外用剤を皮膚または粘膜に塗布することによって、肌荒れ防止効果やシワ防止効果などの肌質改善効果（美肌効果）、粘膜における弾力性を強化し、歯肉炎および歯周病を予防する効果などが得られる。本発明の外用剤は、葛花の用途の拡大を図り得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
葛花処理物を含有する、外用剤。
【請求項２】
前記葛花処理物が、葛花乾燥物、葛花抽出物、葛花破砕物、および葛花乾燥粉砕物からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の外用剤。
【請求項３】
前記外用剤が、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、粉末剤、または顆粒剤の形態である、請求項１または２に記載の外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、外用剤に関する。
【背景技術】  葛はマメ科の植物であり、古くから、食用、漢方薬などの原料として用いられている。例えば、葛の澱粉は、和菓子の原料に用いられ、葛の根および花は、それぞれ葛根および葛花と称され、解熱、鎮痛、鎮痙、発汗などの症状を改善する漢方薬の原料として用いられている。
これらの中で、葛花は、フラボノイドをはじめとした様々な成分を含有していることが知られている。近年、この葛花が、他のマメ科植物にはみられない肝障害改善効果、二日酔い予防効果、尿窒素代謝改善効果などを有することが明らかになってきている（例えば、特許第３４５４７１８号公報、特公平８−３２６３２号公報、および特開昭６４−６８３１８号公報）。しかし、葛花の機能については、上記のように漢方薬、食用などの経口投与による検討が行われているにすぎず、経皮投与などによる効果については、十分に解明されていない。したがって、葛花の新たな用途（外用剤など）が求められている。
【発明の開示】
本発明者は、葛花の新たな機能を見出すことにより、葛花の用途の拡大を図ることを目的として研究を行った。その結果、葛花処理物を皮膚または粘膜に適用することによって、肌および口腔内の粘膜に対してコラゲナーゼ阻害効果などの有用な効果を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明の外用剤は、葛花処理物を含有する。この外用剤は、皮膚または粘膜に用いられ、肌荒れ、シワ、タルミなどの肌の症状を改善する肌質改善効果（美肌効果）、シミの改善および細胞賦活効果による新陳代謝の向上効果、口腔内などの粘膜の弾力性を増強効果、歯肉炎および歯周病の予防効果などを発揮する。これらの効果は、コラゲナーゼ阻害作用、抗酸化作用、コラーゲン合成促進作用などの皮膚または粘膜に対して有用な作用を有する葛花処理物により得られる。本発明の外用剤に含有される葛花処理物は、特にコラゲナーゼ阻害作用を有し、大豆抽出物などの植物処理物に比べて優れている。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、本発明を詳細に説明する。
（葛花処理物）
本発明の外用剤に用いられる葛花処理物は、マメ科植物に属する葛植物の花部の処理物であれば、特に制限されない。葛花には、蕾から全開した花までの段階で採集した花が含まれる。本発明においては、特に蕾を用いることが好ましい。本明細書において、「葛花処理物」は、葛花に破砕処理、乾燥処理、粉砕処理、および抽出処理のうちの少なくとも１種の処理を行って得られるものをいう。葛花処理物には、葛花破砕物（葛花の搾汁も含む）、葛花乾燥物、葛花乾燥粉砕物（葛花粉末）、および葛花抽出物が含まれる。葛花抽出物には、葛花、葛花破砕物、葛花乾燥物、または葛花粉末から抽出処理を行って得られる抽出物が含まれる。葛花抽出物の形状は問わず、液状、ペースト状、および粉状（葛花抽出エキス末という場合がある）のいずれであってもよい。好ましくは、葛花の搾汁、葛花抽出物、またはこれらの乾燥粉末（搾汁粉末、抽出エキス末など）である。
本発明で用いられる葛花処理物は、イソフラボン類などのフラボノイド、サポニン、トリプトファン配糖体などを含有し、好ましくは、イソフラボン類およびサポニンを含有し得る。これらの成分の含有量は特に制限されない。通常、葛花処理物中にイソフラボン類が乾燥質量換算で０．５質量％以上、好ましくは１質量％〜２０質量％の割合で含有され、サポニンが０．２質量％以上、好ましくは０．５質量％〜２０質量％の割合で含有される。葛花処理物のうち、葛花の搾汁、葛花抽出物、搾汁または抽出物の乾燥粉末などのように、予め不溶性固形分（残渣）を除いた葛花処理物は、イソフラボン類およびサポニンを高含有する葛花処理物として好適に用いられる。このような不溶性固形分を除いた葛花処理物中には、イソフラボン類が好ましくは乾燥質量換算で３質量％以上、より好ましくは５質量％〜９０質量％の割合で含有され、サポニンが好ましくは１質量％以上、より好ましくは２質量％〜５０質量％の割合で含有される。
本発明に用いられる葛花処理物は、皮膚または粘膜に塗布することによって、コラゲナーゼ阻害効果、抗酸化効果、コラーゲン合成促進効果などの種々の優れた効果を発揮する。特に、コラゲナーゼ阻害効果は、例えば、同量のイソフラボン類またはサポニンを含有する大豆抽出物、葛根の抽出物などの植物処理物を塗布する場合に比べて優れている。このような皮膚または粘膜に対して有用な作用を有する葛花処理物は、さらに肌荒れ防止効果、シワ防止効果などの肌質改善効果（美肌効果）、粘膜における弾力性を強化し、歯肉炎および歯周病を予防する効果などを発揮する。
以下、上記葛花処理物である、葛花の乾燥物、葛花粉末、および葛花抽出物の調製方法について説明する。
葛花の乾燥物は、葛花、好ましくは蕾の段階の葛花を、日干し、熱風乾燥などの方法により乾燥して得られる。好ましくは、水分含有量が１０質量％またはそれ以下となるまで行われ得る。
葛花粉末は、上記葛花の乾燥物を粉砕して得られる。粉末化は、当業者が通常用いる方法、例えば、ボールミル、ハンマーミル、ローラーミルなどを用いて行われる。
葛花粉末は、採取した葛花を、マスコロイダー、スライサー、コミトロールなどを用いて破砕して葛花破砕物を得、この葛花破砕物を乾燥することによっても得られる。
葛花抽出物は、例えば、葛花採集物、葛花破砕物、葛花の乾燥物、あるいは葛花粉末（以下、単に抽出原料ということがある）に溶媒を添加して、必要に応じて加温して抽出を行い、遠心分離またはろ過により抽出液を回収することによって得られる。
上記抽出に用いる溶媒としては、例えば、水、有機溶媒、含水有機溶媒などが挙げられる。有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、および１，１，２−トリクロロエテンが挙げられる。好ましくは極性有機溶媒、より好ましくはエタノール、ｎ−ブタノール、メタノール、アセトン、プロピレングリコール、酢酸エチル、特に好ましくはエタノールである。
抽出温度は、使用する溶媒の沸点以下の温度であれば特に制限はない。抽出温度は、用いる溶媒によっても異なり、有効成分の分解などを考慮して、一般に、４℃〜１３０℃である。好ましくは５０℃〜１３０℃、より好ましくは７０℃〜１００℃である。加温して抽出する場合は、例えば、加熱還流などの加温抽出法、超臨界抽出法などが採用され得る。加温する場合、加圧して行ってもよい。
抽出時間は、抽出原料から十分に可溶性成分が抽出される時間であればよく、抽出温度などに応じて適宜設定すればよい。好ましくは３０分〜４８時間である。例えば、抽出温度が５０℃未満の場合は、６時間〜４８時間、５０℃以上の場合は、３０分〜２４時間抽出が行われる。
得られた抽出液を、必要に応じて、減圧濃縮、凍結乾燥などの当業者が用いる方法により濃縮し、液状、ペースト状、あるいは粉末とすることにより、葛花抽出物が得られる。
あるいは、この抽出物を合成吸着剤（ダイアイオンＨＰ２０、セファビースＳＰ８２５、アンバーライトＸＡＤ４、ＭＣＩｇｅｌＣＨＰ２０Ｐなど）またはデキストラン樹脂（セファデックスＬＨ−２０など）を用いてさらに精製し、フラボノイド、サポニンなどの濃度が高い葛花抽出物を得ることができる。
（外用剤）
本発明の外用剤は、葛花処理物を含有する。葛花処理物の含有量については特に制限されず、その形態などによって適宜調整され得る。好ましくは、外用剤中に葛花処理物が乾燥質量換算で０．００００１質量％〜４０質量％、より好ましくは０．００１質量％〜２０質量％の割合で含有される。
本発明の外用剤は、さらに、葛花処理物の有する作用を増強あるいは補強する目的で、種々の薬効成分、油剤、保湿剤、界面活性剤、紫外線吸収剤、紫外線吸収促進剤などの助剤を含有してもよい。これらの助剤は、単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
上記助剤の１種である薬効成分としては、例えば、活性酸素除去剤；ビタミン類、ビタミン様作用因子、およびこれらの塩または誘導体；ポリフェノール；細胞賦活剤；抗炎症剤；リン脂質：ホルモン剤；これらの効能を有する動植物由来の抽出物などが挙げられる。
活性酸素除去剤または抗酸化剤としては、カロテノイド類、Ｌ−システイン、およびこれらの誘導体またはこれらの塩、ＳＯＤ、マンニトール、ハイドロキノン、トリプトファン、ヒスチジン、フラボノイド（ケルセチン、ヘスペリジンなど）、没食子酸およびその誘導体、ＢＨＴ、ＢＨＡ、およびこれらの成分を含有する植物抽出物（ボタンピ抽出物、トマト抽出物、パセリ抽出物、メリッサ抽出物、オウゴン抽出物など）が挙げられる。
ビタミン類としては、レチノール、レチナール、レチノイン酸、３−デヒドロレチノール、３−デヒドロレチナール、３−デヒドロレチノイン酸などのビタミンＡ類；α−カロテン、β−カロテン、γ−カロテン、クリプトキサンチンなどのプロビタミンＡ類；チアミン（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン（以上ビタミンＢ６）、コバラミン（ビタミンＢ１２）、ニコチン酸、ニコチンアミド、パントテン酸、ビオチン（ビタミンＨ）、葉酸（ビタミンＭ）などのビタミンＢ群類；アスコルビン酸（ビタミンＣ）；エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）などのビタミンＤ類；７−デヒドロコレステロール、エルゴステロールなどのプロビタミンＤ類；α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、α−トコトリエノール、β−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、δ−トコトリエノールなどのビタミンＥ類；フィロキノン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）などのビタミンＫ類などが挙げられる。
ビタミン様作用因子としては、ユビキノン、リポ酸（チオクト酸）、必須脂肪酸（ビタミンＦ）類（例えば、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸など）、オロト酸（ビタミンＢ１３）、カルニチン（ビタミンＢＴ）、ミオイノシトール、コリン、ビタミンＰ類（例えば、ルチン、ヘスペリジン、エリオシトルリンなど）、メチオニンメチルスルホニウム（ビタミンＵ）、パントテニルアルコールなどが挙げられる。
これらのビタミン類またはビタミン用作用因子は、光学異性体、立体異性体などに制限されずに使用することができる。例えば、ｃｉｓ型およびｔｒａｎｓ型の混合物、ラセミ体などを用いてもよい。
上記ビタミン類またはビタミン様作用因子の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩などのアルカリ土類金属塩；塩酸塩、硫酸塩などの無機酸塩；アンモニウム塩、乳酸塩、酢酸塩などの有機酸塩、およびトリエタノールアミン塩などのアミン塩が挙げられる。
上記ビタミン類またはビタミン様作用因子の誘導体としては、アルキルエステル、アルケニルエステル、アリールエステル、リン酸エステル、硫酸エステル、ホスファチジルエステル、グルコシド、ガラクトシド、マルトシド、ラクトシドなどの配糖体などが挙げられる。
上記ビタミン類、ビタミン様作用因子、およびこれらの塩または誘導体は、動植物、藻類、微生物などの天然物由来のもの、および化学反応または酵素反応を利用した合成物のいずれも用いることができる。さらに、これらを含有する天然物の抽出物を、そのまま用いてもよい。
ポリフェノールとしては、カテコール、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、ガロカテキンガラート、エピガロカテキンガラート、タンニン酸（ｍ−ガロイル没食子酸）、ハマメリタンニン（１，５−ジガロイルハマメロース）、プロアントシアニジン、カフェー酸誘導体、没食子酸、ピロガロールタンニン、カテコールタンニンなどが挙げられる。これらのポリフェノールを含有する茶抽出物、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、甘藷茎葉抽出物なども、ポリフェノールとして用いることができる。
細胞賦活剤としては、次の材料が挙げられる：酵母抽出物および酵母培養上清；アスパラガス（Ａｓｐａｒａｇｕｓ）属植物、アボカド（Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  Ｍｉｌｌ．）、アロエ（Ａｌｏｅ）属植物、アンズ（Ｐｒｕｎｕｓ  ａｒｍｅｎｉａｃａ  Ｌ．ｖａｒ．ａｎｓｕ  Ｍａｘｉｍ．）、イチョウ（Ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ  Ｌ．）、イヌブナ（Ｆａｇｕｓ  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｍａｘｉｍ．）、オオニンニク（Ａｌｌｉｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ  Ｌ．ｆ．ｐｅｋｉｎｅｎｓｅ  Ｍａｋｉｎｏ）、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ  Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）、カミツレ（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ  Ｌ．）、キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ  Ｒｕｐｒ．）およびＰｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ属植物、キュウリ（Ｃｕｃｕｍｉｓ  ｓａｔｉｖｕｓ  Ｌ．）、キンセンカ（Ｃａｌｅｎｄｕｌａ  ａｒｖｅｎｓｉｓ  Ｌ．）、シイタケ（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ  Ｓｉｎｇ．）、シナサルナシ（キウイ）（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  Ｐｌａｎｃｈ．）、スギナ（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ  ａｒｖｅｎｓｅ  Ｌ．）、セイヨウトチノキ（Ａｅｓｃｕｌｕｓ  ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ  Ｌ．）、セイヨウニンニク（Ａｌｌｉｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ  Ｌ．）、センブリ（Ｓｗｅｒｔｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｍａｋｉｎｏ）、タマサキツヅラフジ（Ｓｔｅｐｈａｎｉａ  ｃｅｐｈａｒａｎｔｈａ  Ｈａｙａｔａ）、チシャ（レタス）（Ｌａｃｔｕｃａ  ｓａｔｉｖａ  Ｌ．）、トウガラシ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ  ａｎｎｕｕｍ  Ｌ．）、トウキンセンカ（Ｃａｌｅｎｄｕｌａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  Ｌ．）、トチノキ（Ａｅｓｃｕｌｕｓ  ｔｕｒｂｉｎａｔａ  Ｂｌｕｍｅ）、ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ  Ｌ．）、ブクリョウ（マツホド）（Ｐｏｒｉａ  ｃｏｃｏｓ  Ｗｏｌｆ）、ブドウ（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ  Ｌ．）、ブナ（Ｆａｇｕｓ  ｃｒｅｎａｔａ  Ｂｌｕｍｅ）、ヘチマ（Ｌｕｆｆａ  ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ  Ｍ．Ｒｏｅｍｅｎ）、ベニバナ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ  ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ  Ｌ．）、マンネンロウ（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  Ｌ．）、ミカン（Ｃｉｔｒｕｓ）属植物、ムクロジ（Ｓａｐｉｎｄｕｓ  ｍｕｋｕｒｏｓｓｉ  Ｇａｅｒｔｎ．）、ムラサキ（Ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ  Ｌ．ｖａｒ．ｅｒｙｔｈｒｏｒｈｉｚｏｎ  Ｍａｘｉｍ．）、ユーカリノキ（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ）属植物、ユリ（Ｌｉｌｉｕｍ）属植物の各抽出物；ヒドロキシ脂肪酸およびその塩またはその誘導体；核酸および核酸関連物質（例えば、デオキシリボ核酸ナトリウム、デオキシリボ核酸カリウムなど）；卵殻膜より抽出されたタンパク質と異性化糖との混合物など。これらの細胞賦活剤は単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
抗炎症剤としては、次の化合物あるいは材料が挙げられる：ステロイド性抗炎症剤（例えば、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、ベクロメタゾン、これらのリン酸塩、プロピオン酸塩、酢酸塩、およびコハク酸塩）；非ステロイド性抗炎症剤（例えば、サリチル酸およびその誘導体（アスピリン、サリチルアミド、エテンザミド、サリチル酸メチルなど）、インドール酢酸誘導体（インドメタシン、スリンダクなど）、ピラゾリジンジオン誘導体（フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾンなど）、アントラニル酸誘導体（メフェナム酸、フルフェナム酸など）、プロピオン酸誘導体（イブプロフェン、ケトプロフェン、ナプロキセンなど）、フェニル酢酸誘導体（ジクロフェナック、フェンブフェン、ブフェキサマクなど）、およびベンゾチアジン誘導体（ピロキシカムなど））；グリチルリチン酸およびその塩またはその誘導体（グリチルリチン酸ジカリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウムなど）；グリチルレチン酸およびその塩またはその誘導体（グリチルレチン酸ステアリル、ステアリン酸グリチルレチニル、３−サクシニルオキシグリチルレチン酸二ナトリウムなど）；アズレン誘導体（グアイアズレン、グアイアズレンスルホン酸エチル、グアイアズレンスルホン酸ナトリウム、カマズレンなど）；アラントイン；アロイン；アロエエモジン；シコニンおよびその誘導体（イソブチルシコニン、アセチルシコニン、イソバレリルシコニンなど）；ギンセノシド（ギンセノシドＲａ１、ギンセノシドＲａ２、ギンセノシドＲｂ１など）およびその誘導体（２０−グルコギンセノシドＲｆなど）；ペオニフロリン；ペオノールおよびその誘導体（ペオノシド、ペオノリドなど）など。種々の抗炎症剤を含有する植物抽出物も抗炎症剤として用いることができ、例えば、オウゴン（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａｅ  Ｒａｄｉｘ）、カンゾウ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ  Ｒａｄｉｘ）、クジン（Ｓｏｐｈｏｒａｅ  Ｒａｄｉｘ）、サイコ（ＢｕｐｌｅｕｒｉＲａｄｉｘ）、シャクヤク（Ｐａｅｏｎｉａｅ  Ｒａｄｉｘ）、ショウマ（Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａｅ  Ｒｈｉｚｏｍａ）、タイソウ（Ｚｉｚｙｐｈｉ  Ｆｒｕｃｔｕｓ）、チモ（Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａｅ  Ｒｈｉｚｏｍａ）、ボタンピ（Ｍｏｕｔａｎ  Ｃｏｒｔｅｘ）、リュウタン（Ｇｅｎｔｉａｎａｅ  Ｓｃａｂｒａｅ  Ｒａｄｉｘ）、レンギョウ（Ｆｏｒｓｙｔｈｉａｅ  Ｆｒｕｃｔｕｓ）などが挙げられる。
リン脂質は、保湿効果および細胞賦活効果を目的として含有され得る。リン脂質としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール（カルジオリピン）、ホスファチジン酸などのグリセロリン脂質；リゾホスファチジルコリン（リゾレシチン）、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルセリン、リゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジン酸などのリゾグリセロリン脂質；スフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質；およびこれらの水素添加物などが挙げられる。これらのリン脂質は、大豆、卵黄などの動植物由来のものでもよく、化学的もしくは酵素的方法により合成されたものでもよい。
ホルモン剤としては、エストラジオールまたはその誘導体；植物性のホルモン様物質（ゲネスチン、ダイゼンなどのイソフラボン類）などが挙げられる。
上記助剤の１種である油剤としては、例えば、リノール酸、リノレン酸、パルミチン酸、ＤＨＡ、ＥＰＡなどの不飽和脂肪酸およびその誘導体；ならびに亜麻仁油、ヤシ油、ホホバ油、オリーブ油、スクワラン、スクワレン、馬油、コメヌカ油、ヒマシ油などの動植物抽出油およびその誘導体が挙げられる。
上記助剤の１種である保湿剤としては、例えば、コラーゲンまたはその分解物、カロットエキスなどに含まれるコラーゲン類似ペプチド、大豆ペプチド、アミノ酸、ヒアルロン酸などのムコ多糖類；コンドロイチンなどのアミノ糖；トレハロースなどの糖類；および海藻類、アルギン酸、グルコマンナン、ペクチンなどの水溶性食物繊維が挙げられる。
上記助剤の１種である界面活性剤としては、例えば、レシチン、脂肪酸エステル、およびアミノ酸誘導体が挙げられる。
上記助剤の１種である紫外線吸収剤としては、例えば、酸化亜鉛および酸化チタンが挙げられる。
本発明の外用剤の形態は、特に制限されない。ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、粉末剤、顆粒剤などの形態であり得る。上記形態に応じて、外観、使用感、および保存安定性をより向上させるために、デキストリンなどの賦形剤；香料；色素；保存剤；アクリル系ポリマー、カルボキシビニル系ポリマーなどの増粘剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクラロースなどの甘味料；メントールなどの清涼剤；フェノキシエタノールなどの防腐防黴剤；およびグリセロール、エタノール、パラベン、ブチレングリコールなどの基剤を適宜配合することが可能である。
本発明の外用剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品、トイレタリー用品などとして利用される。具体的には、化粧水、化粧クリーム、乳液、クリーム、パック、ヘアトニック、ヘアクリーム、シャンプー、ヘアリンス、トリートメント、ボディシャンプー、洗顔剤、石鹸、ファンデーション、白粉、口紅、リップグロス、頬紅、アイシャドー、整髪料、育毛剤、水性軟膏、油性軟膏、目薬、アイウォッシュ、シップ、ジェルなどとして利用される。口腔などに適用する場合は、歯磨剤、マウスウォッシュ、スプレー、ガム、アメ、錠剤、グミなどとすることも可能である。
本発明の外用剤は、皮膚または粘膜に適用、例えば、塗布または噴霧することによって、肌荒れ、シワ、タルミなどの肌の症状を改善する肌質改善効果（美肌効果）、シミの改善および細胞賦活効果による新陳代謝の向上効果、口腔内などの粘膜の弾力性を増強効果、歯肉炎および歯周病の予防効果などの優れた効果を発揮する。これらの効果は、コラゲナーゼ阻害作用、抗酸化作用、コラーゲン合成促進作用などの皮膚または粘膜に対して有用な作用を有する葛花処理物により得られる。
【実施例】  以下、実施例に基づいて本発明を説明する。本実施例は、本発明を制限することを意図しない。
（実施例１：コラゲナーゼ阻害活性）
（１）試験液の調製
葛花抽出物（イソフラボン類を１０質量％およびサポニンを３質量％含有、株式会社太田胃散製）の濃度が１０μＬ／ｍＬとなるように０．０５Ｍトリシン緩衝液（ｐＨ７．５）に添加して、試験液を調製した。
（２）酵素溶液の調製
コラゲナーゼＢ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｄｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ）の濃度が０．１４Ｕ／ｍＬとなるように０．０５Ｍトリシン緩衝液（ｐＨ７．５）で希釈して酵素溶液を調製した。
（３）基質溶液の調製
５ｍｇのＮ−（３−［２−ｆｕｒｙｌ］ａｃｒｙｌｏｙｌ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ（Ｓｉｇｍａ  ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）を３５ｍＬの０．０５Ｍトリシン緩衝液（ｐＨ７．５）に溶解させ、基質溶液を調製した。
（４）コラゲナーゼ阻害活性の測定
試験液１００μＬと酵素溶液１００μＬとを混和し、３７℃にて１時間インキュベートした。この混合液に基質溶液１００μＬを添加して、さらに３７℃にて３分間インキュベートした後、３２４ｎｍにおける吸光度を測定した（測定値Ａとする）。なお、酵素溶液の代わりに０．０５Ｍトリシン緩衝液（ｐＨ７．５）を用いたこと以外は、上記と同様に操作してブランクの吸光度を測定した（測定値ａとする）。他方、対照として、試験液の代わりに０．０５Ｍトリシン緩衝液（ｐＨ７．５）を用いたこと以外は、上記と同様にして、吸光度（測定値Ｂとする）およびブランクの吸光度（測定値ｂとする）を測定した。なお、各測定は３重測定により行った。得られた測定値を用いて、以下の式からコラゲナーゼ阻害率（％）を算出した。結果を表１に示す。
コラゲナーゼ阻害率（％）＝｛１−（Ａ−ａ）／（Ｂ−ｂ）｝×１００
（比較例１）
葛花抽出物の代わりに、大豆抽出物（イソフラボン類を１０質量％含有、不二製油社製）を用いたこと以外は、実施例１と同様に試験液を調製し、コラゲナーゼ阻害活性を測定した。結果を表１に示す。
【表１】
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表１の結果から、葛花抽出物は、優れたコラゲナーゼ阻害効果を有することがわかる（実施例１）。この葛花抽出物から得られるコラゲナーゼ阻害効果は、同量のイソフラボン類を含有する大豆抽出物（比較例１）の阻害効果に比べて非常に優れていた。これらのことは、本発明に用いられる葛花処理物が、従来コラゲナーゼ阻害剤として知られるイソフラボン類、あるいはイソフラボン類を含有する植物処理物に比べて、優れたコラゲナーゼ阻害効果を有することを示す。したがって、肌荒れやシワ、タルミなどといった肌の症状を改善する肌質改善効果（美肌効果）、シミの改善や細胞賦活効果による新陳代謝の向上効果、口腔内などの粘膜の弾力性を増強効果、歯肉炎および歯周病の予防効果などを発揮することが期待される。
（実施例２：肌質改善効果）
（１）化粧料ローションの調製
実施例１で用いた葛花抽出物を用いて、以下の化粧料ローション（化粧料１）を調製した。配合成分および配合量を以下に示す。
＜化粧料ローションの配合成分＞                配合量（質量％）
葛花抽出物                                      ０．００２
エタノール                                    １０．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                  １．０
パラオキシ安息香酸メチル                        ０．１
ジプロピレングリコール                          ５．０
１，３−ブチレングリコール                    １０．０
精製水                                        残量
上記とは別に、葛花抽出物の代わりに比較例１で用いた大豆抽出物を用いたこと以外は上記と同様にして化粧料ローションを調製した（化粧料２とする）。
（２）肌質改善効果の評価
上記化粧料１および２を用いて、皮膚に対する肌質改善効果を検証した。小じわの形成および皮膚弾性の低下の自覚症状を有する３０才代〜５０才代の女性パネラー４０名を被験者とした。このうち２０名の被験者に化粧料１を、残りの２０名の被験者に化粧料２をそれぞれブラインドにて１日２回の割合で１カ月間連続して、顔の皮膚表面に付与することにより使用させた。その後、小じわの形成および皮膚の弾力性について、被験者にアンケート調査を行い、以下の基準で点数をつけた。小じわの形成の点数の合計および皮膚の弾力性の点数の合計のうちのいずれもが２０点未満の場合は肌質改善効果がない（×）、小じわの形成の点数の合計および皮膚の弾力性の点数の合計のうちのいずれかが２０点以上の場合は肌質改善効果はあるが十分でない（△）、そして小じわの形成の点数の合計および皮膚の弾力性の点数の合計のいずれもが２０点以上の場合は肌質改善効果に優れている（◎）として評価した。結果を表２に示す。
（小じわの形成および皮膚の弾性力）
２点：使用前に比べて改善した
１点：使用前に比べてやや改善した
０点：使用前とかわらない
【表２】
2006038721.tif 000003
表２の結果から、葛花抽出物を含有する化粧料１は、小じわの改善を示す点数および皮膚弾力性の改善を示す点数のいずれも２０点を超えており、同量のイソフラボン類を含有する大豆抽出物を含有する化粧料２に比べて、優れた肌質改善効果を有することがわかる。
（実施例３：口腔内組成物の製造）
実施例１で用いた葛花抽出物を用いて、以下の口腔内組成物（１錠当たり１００ｍｇのタブレット）を製造した。配合成分および配合量を以下に示す。
＜口腔内組成物の配合成分＞                    配合量（質量％）
葛花抽出物                                      ０．４
顆粒状糖                                      ５７．０
乳糖                                          ２０．０
還元麦芽糖                                    １９．６
ショ糖脂肪酸エステル                            ２．０
二酸化ケイ素                                    １．０
（実施例４：化粧水の製造）
以下の配合量で混合した実施例１で用いた葛花抽出物を含有する混合物に、総量が１００ｇとなるように精製水を加え、さらに均一になるまで撹拌・混合して化粧水を製造した。
＜化粧水の配合成分＞                            配合量（ｇ）
葛花抽出物                                      ０．００２
グリセリン                                      ６
プロピレングリコール                            ４
オレイルアルコール                              ０．１
ポリオキシエチレンラウリルエーテル              １
エタノール                                      ５
フェノキシエタノール                            ０．１
アスコルビン酸                                  １
（実施例５：Ｗ／Ｏ型エモリエントクリームの製造）
以下の配合量で混合した実施例１で用いた葛花抽出物を含有する混合物に、総量が１００ｇとなるように精製水を加え、さらに均一になるまで撹拌・混合してＷ／Ｏ型エモリエントクリームを製造した。このエモリエントクリームは、保湿効果、角質柔軟効果に加えて、コラゲナーゼ阻害効果を発揮するため、皮膚外用剤として有用であった。
＜Ｗ／Ｏ型エモリエントクリームの配合成分＞      配合量（ｇ）
葛花抽出物                                      ０．０１
マイクロクラスタリンワックス                    ３
ラノリン                                        ３
ワセリン                                        ５
スクワラン                                      ９
オリーブ油                                    １２
セスキオレイン酸ソルビタン                      ３
トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン
（２０Ｅ．Ｏ．）  ０．５
ソルビトール                                    ９
トコフェロール                                  ０．０１
防腐剤                                        適量
香料                                          適量
（実施例６：紫外線起因の活性酸素発生抑制効果の評価）
ＨＦＳＫＦ−ＩＩ細胞（ヒト皮膚線維芽細胞；独立行政法人理化学研究所から入手）を、９６ウェルプレートに２×１０５ｃｅｌｌｓ／ウェルの割合で播種し、０．１ｍＬの標準培地（１５％の牛胎児血清を含むＨａｍ’ｓＦ−１２培地；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を用いて、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で２４時間培養した。次いで、ＰＢＳで培地を３回洗浄し、Ｈｏｎｇ  Ｗａｎｇらの方法（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，１９９９）によって、１００μＭのＤＣＦＨ−ＤＡ（２’，７’−ジクロロフルオレセインジアセテート；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を含む標準培地に置換し、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で１０分間培養した。次いで、ＰＢＳで培地を３回洗浄し、６ウェルを１００μｇ／ｍＬの葛花抽出物（イソフラボン類を１０質量％およびサポニンを３質量％含有；株式会社太田胃散製）と０．０３質量％の過酸化水素とを含む標準培地に置換した（これらを試験群とする）。次いで、ハンディーＵＶランプ（ＬＵＶ−４；アズワン株式会社）を用いて、紫外線Ａ波（λ＝３６５ｎｍ）を４．４Ｊ／ｃｍ２となるように照射した。紫外線Ａ波は、皮膚に対して透過性の高い紫外線であり、皮膚の老化を促進することが知られている。
その後、活性酸素の存在により発光するＤＣＦＨ−ＤＡの蛍光量Ｆを、マルチスペクトロメータ（ヴァリオスキャン；励起波長：４８５±１０ｎｍ、検出波長：５３０±１０ｎｍ；サーモエレクトロン株式会社）で測定し、そして葛花抽出物の紫外線による活性酸素の発生抑制率を、下記の式で算出した。結果を表３に示す。
2006038721.tif 000004
Ｆサンプル：葛花抽出物を含む標準培地に置換し、紫外線Ａ波を照射後に測定した蛍光量。
Ｆコントロール：葛花抽出物を含まない標準培地に置換し、紫外線Ａ波を照射後に測定した蛍光量。
Ｆブランク：葛花抽出物を含まない標準培地に置換し、紫外線Ａ波を照射せずに測定した蛍光量。
比較群としては、試験群で用いた葛花抽出物の代わりにコエンザイムＱ１０（ＤＡＥＷＯＯＮＧ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を用いたこと以外は、試験群と同様の条件で培養し、紫外線による活性酸素の発生抑制率を求めた。結果を表３に示す。
【表３】
2006038721.tif 000005
表３の結果から、葛花抽出物は、近年抗酸化物質として外用剤に用いられることが多いコエンザイムＱ１０と比べ、紫外線による活性酸素の発生を抑制することがわかる。したがって、葛花抽出物は、紫外線による活性酸素の発生を抑制し、紫外線による皮膚の老化を抑制し得ることがわかる。
（実施例７：入浴剤の調製）
葛花抽出物（イソフラボン類を１０質量％およびサポニンを３質量％含有、株式会社太田胃散製）、硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、香料、およびデキストリンを、表４に記載の割合で混合して試験入浴剤および比較入浴剤を調製した。
【表４】
2006038721.tif 000006
（実施例８：入浴剤の香りの評価）
実施例７で調製した試験入浴剤および比較入浴剤の香りの評価を以下のように評価した。
試験入浴剤（０．５ｇ）を、４５℃の湯（５０ｍＬ）に溶解し、試験湯１を調製した。次いで、比較入浴剤（０．５ｇ）を、４５℃の湯（５０ｍＬ）に溶解し、比較湯１を調製した。２０名のパネラーに、試験湯１と比較湯１との香りを嗅がせ、下記の基準で評価させた。
＜評価基準＞
心が落ち着く香りである      ：  １点
香りによる精神的変化はない  ：  ０点
不快な香りである            ：−１点
２０名のパネラーの合計点は、試験湯１が１３点であり、そして比較湯１が９点であった。したがって、葛花抽出物を含有する試験入浴剤は、心を落ち着かせる香りを有する傾向にあることがわかる。
（実施例９：入浴効果の評価）
実施例７で調製した試験入浴剤および比較入浴剤の入浴効果を以下のように評価した。
試験入浴剤（１０ｇ）を、４５℃の湯（１Ｌ）に溶解させて試験湯２を調製した。次いで、比較入浴剤（１０ｇ）を、４５℃の湯（１Ｌ）に溶解し、比較湯２を調製した。次いで、レーザードップラー血流画像化装置（ＰｅｒｉＳｃａｎ  ＰＩＭＩＩ；ＰＥＲＩＭＥＤ社製）で、被験者６名の左手人差し指の血流量を測定した。６名の被験者に、４５℃の試験湯２に左手を１０分間浸漬（浴湯）させ、浸漬直後の左手人差し指の血流量を測定した。次いで、１０℃の冷水に左手を１５秒間浸漬させることにより冷水負荷を行い、冷水負荷１分後の人差し指の血流量を測定した。それぞれの血流量を表５に示す。
比較湯２についても、同様の手順で、血流量を測定した。結果を表５に示す。
【表５】
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表５の結果から、葛花抽出物を含有する試験入浴剤（試験湯２）は、比較入浴剤（比較湯２）と比べて、血流改善作用を有する傾向が見られた。さらに、冷水負荷後の血流量についても、血流量が多いことから、血流改善効果が維持されることがわかる。したがって、葛花抽出物を含有する入浴剤は、優れた入浴効果を発揮することがわかる。
【産業上の利用可能性】  本発明の外用剤は、皮膚または粘膜に塗布することによって、肌荒れ、シワ、タルミなどの肌の症状を改善する肌質改善効果（美肌効果）、シミの改善および細胞賦活効果による新陳代謝の向上効果、口腔内などの粘膜の弾力性を増強効果、歯肉炎および歯周病の予防効果などの優れた効果を発揮する。本発明の外用剤に含有される葛花処理物は、特に大豆抽出物などの植物処理物に比べて優れたコラゲナーゼ阻害作用を有する。本発明の外用剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品、トイレタリー用品などとして利用される。
【国際調査報告】
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