(57)【要約】ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有してなる、ストレスによる腸疾患の予防・治療剤及び該疾患の予防・改善作用を有する飲食品、ならびにストレス誘発時の化学伝達物質の遊離抑制剤及び該物質の遊離抑制作用を有する飲食品を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有してなる、ストレスによる腸疾患の予防・治療剤。
【請求項２】
ストレスによる腸疾患がストレス性下痢である、請求項１記載の予防・治療剤。
【請求項３】
ストレスによる腸疾患が、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群、機能性下痢及びそれらの腸疾患のストレスによる増悪からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１記載の予防・治療剤。
【請求項４】
ストレスによる腸疾患が、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離によって生じる腸疾患である、請求項１記載の予防・治療剤。
【請求項５】
ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離によって生じる腸疾患が、ストレス性下痢である請求項４記載の予防・治療剤。
【請求項６】
化学伝達物質が、カテコールアミン、セロトニン及びヒスタミンから選ばれる少なくとも１種である、請求項４又は５記載の予防・治療剤。
【請求項７】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有してなる、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制剤。
【請求項８】
化学伝達物質が、カテコールアミン、セロトニン及びヒスタミンから選ばれる少なくとも１種である、請求項７記載の遊離抑制剤。
【請求項９】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有してなる、ストレスによる腸疾患の予防・改善用飲食品。
【請求項１０】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を含有し、ストレスによる腸疾患の予防・改善作用を有するものであることを特徴とし、ストレスによる腸疾患の予防・改善のために用いられる旨の表示を付した飲食品。
【請求項１１】
ストレスによる腸疾患がストレス性下痢である、請求項９又は１０記載の飲食品。
【請求項１２】
ストレスによる腸疾患が、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群、機能性下痢及びそれらの腸疾患のストレスによる増悪からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項９又は１０記載の飲食品。
【請求項１３】
ストレスによる腸疾患が、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離によって生じる腸疾患である、請求項９又は１０記載の飲食品。
【請求項１４】
ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離によって生じる腸疾患が、ストレス性下痢である請求項１３記載の飲食品。
【請求項１５】
化学伝達物質が、カテコールアミン、セロトニン及びヒスタミンから選ばれる少なくとも１種である、請求項１３又は１４記載の飲食品。
【請求項１６】
保健機能食品又はダイエタリーサプリメントである、請求項９〜１５にいずれか１項に記載の飲食品。
【請求項１７】
前記保健機能食品が特定保健用食品又は栄養機能食品である、請求項１６記載の飲食品。
【請求項１８】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を含有し、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制作用を有するものであることを特徴とし、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離を抑制するために用いられる旨の表示を付した飲食品。
【請求項１９】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有する組成物、ならびに当該組成物をストレスによる腸疾患の予防・治療に使用することができる、又は使用すべきであることを記載した記載物を含む商業パッケージ。
【請求項２０】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有する組成物、ならびに当該組成物をストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制に使用することができる、又は使用すべきであることを記載した記載物を含む商業パッケージ。
【請求項２１】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を含有する飲食品を、ストレスによる腸疾患の予防・改善のための使用に関する事項を記載した記載物とともに包装した商業パッケージ。
【請求項２２】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を含有する飲食品を、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制のための使用に関する事項を記載した記載物とともに包装した商業パッケージ。
【請求項２３】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の有効量を投与対象に投与することを含む、ストレスによる腸疾患の予防又は治療方法。
【請求項２４】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の有効量を投与対象に投与することを含む、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制方法。
【請求項２５】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の有効量を含む飲食品を摂取することを含む、ストレスによる腸疾患の予防又は改善方法。
【請求項２６】
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の有効量を含む飲食品を摂取することを含む、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制方法。
【請求項２７】
ストレスによる腸疾患の予防・治療剤を製造するための、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体又はそれらの薬理学的に許容可能な塩の使用。
【請求項２８】
ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制剤を製造するための、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体又はそれらの薬理学的に許容可能な塩の使用。
【請求項２９】
ストレスによる腸疾患の予防・改善作用を有するものであることを特徴とし、ストレスによる腸疾患の予防・改善のために用いられる旨の表示を付した飲食品を製造するための、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体又はそれらの薬理学的に許容可能な塩の使用。
【請求項３０】
ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制作用を有するものであることを特徴とし、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離を抑制するために用いられる旨の表示を付した飲食品を製造するための、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体又はそれらの薬理学的に許容可能な塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ストレスによる腸疾患に対する予防・治療剤、詳しくは有効成分としてヒスチジンを含有するストレスによる腸疾患に対する予防・治療剤、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制剤またはこれらを用いる当該疾患に対する予防・治療法に関する。また本発明はヒスチジンを含有するストレスによる腸疾患に対する予防・改善用飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
腸疾患のなかでも、下痢は種々の要因で発症するが、強いストレスや長期のストレスにより発症する下痢も知られている。中枢神経がストレスを感じ交感神経の興奮を生じて、交感神経と拮抗連動する副交感神経の興奮を招き、副交感神経優位である腸管運動が盛んとなり下痢に至ると説明されている。腸管運動亢進ばかりでなく、腸管からの水吸収の抑制あるいは腸管からの水分分泌の亢進も下痢につながる。下痢が関係する腸疾患は表１のように分類されているが、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などは原因不明である。ストレスは種々の腸疾患に関連すると考えられており、すくなくとも疾患の増悪因子としてとらえられている。特に過敏性腸症候群（ＩＢＳ）はストレスが疾患を増悪させることが報告されている（Ｍｉｎｅｒｖａ  Ｍｅｄ．２００４  Ｏｃｔ；９５（５）：４４３−５０，Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｏｎ  ｔｈｅ  ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ；Ｇｕｔ．２００４  Ａｕｇ；５３（８）：１１０２−８．Ａｌｔｅｒｅｄ  ｖｉｓｃｅｒａｌ  ｐｅｒｃｅｐｔｕａｌ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｍｅｎｔａｌ  ｓｔｒｅｓｓ；Ｃｕｒｒ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｒｅｐ．２００４  Ｊｕｎ；６（３）：２１０−５；Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｏｆ  ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ａｎｄ  ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）。このような状況下に、ストレスにより発生する各種腸疾患、特に下痢に対する治療、予防剤として、有効性が高くかつ、安全性の高い薬剤の開発が求められている。
【表１】
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一方ヒスチジンによる腸疾患治療の可能性に関する報告がされている
（１）感染微生物や薬剤による腸の潰瘍損傷を軽減する。これはヒスチジンの過酸化物消去能から由来する抗炎症作用として説明されている。
（２）コレラの下痢の原因である細菌毒素、コレラトキシンによる腸管水分泌作用に対するヒスチジンの抑制作用が報告されている。これは下痢発生の一つのメカニズムである腸管細胞のｃＡＭＰ亢進による腸管水分泌に対してヒスチジンが抑制作用を持つと説明されている。
しかしながら、これらはいずれも外来の物質あるいは微生物が及ぼす腸管への影響を抑制する可能性を示すのみであり、ストレスという中枢から末梢の神経系が関与する原因の下痢に関してのヒスチジンの効果について記載はない（米国特許第５７４１８０７号明細書）。
【発明の開示】
【０００３】
ヒスチジンはその構造上、過酸化物や起炎物質であるプロスタグランジンと結合して、その機能を阻害すると考えられているが、これ以外にも種々の生理作用を持つと思われる。本発明の課題は、ストレスを感じる中枢からの末梢に対するシグナルに対してヒスチジンが抑制作用を有するという新しい生理作用を見出し、ストレスによる腸疾患の予防・治療剤及びストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制剤を提供することである。また、該腸疾患予防・改善用及び該遊離抑制用の飲食品を提供することである。
本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、ヒスチジンが、ストレスによる腸疾患を予防し、また効果的に改善することを見出し、本発明を完成するに到った。
すなわち、本発明は以下の通りである。
（１）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有してなる、ストレスによる腸疾患の予防・治療剤。
（２）ストレスによる腸疾患がストレス性下痢である、（１）記載の予防・治療剤。
（３）ストレスによる腸疾患が、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群、機能性下痢及びそれらの腸疾患のストレスによる増悪からなる群から選ばれる少なくとも１種である、（１）記載の予防・治療剤。
（４）ストレスによる腸疾患が、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離によって生じる腸疾患である、（１）記載の予防・治療剤。
（５）ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離によって生じる腸疾患が、ストレス性下痢である（４）記載の予防・治療剤。
（６）化学伝達物質が、カテコールアミン、セロトニン及びヒスタミンから選ばれる少なくとも１種である、（４）又は（５）記載の予防・治療剤。
（７）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有してなる、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制剤。
（８）化学伝達物質が、カテコールアミン、セロトニン及びヒスタミンから選ばれる少なくとも１種である、（７）記載の遊離抑制剤。
（９）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有してなる、ストレスによる腸疾患の予防・改善用飲食品。
（１０）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を含有し、ストレスによる腸疾患の予防・改善作用を有するものであることを特徴とし、ストレスによる腸疾患の予防・改善のために用いられる旨の表示を付した飲食品。
（１１）ストレスによる腸疾患がストレス性下痢である、（９）又は（１０）記載の飲食品。
（１２）ストレスによる腸疾患が、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群、機能性下痢及びそれらの腸疾患のストレスによる増悪からなる群から選ばれる少なくとも１種である、（９）又は（１０）記載の飲食品。
（１３）ストレスによる腸疾患が、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離によって生じる腸疾患である、（９）又は（１０）記載の飲食品。
（１４）ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離によって生じる腸疾患が、ストレス性下痢である（１３）記載の飲食品。
（１５）化学伝達物質が、カテコールアミン、セロトニン及びヒスタミンから選ばれる少なくとも１種である、（１３）又は（１４）記載の飲食品。
（１６）保健機能食品又はダイエタリーサプリメントである、（９）〜（１５）にいずれか１項に記載の飲食品。
（１７）前記保健機能食品が特定保健用食品又は栄養機能食品である、（１６）記載の飲食品。
（１８）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を含有し、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制作用を有するものであることを特徴とし、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離を抑制するために用いられる旨の表示を付した飲食品。
（１９）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有する組成物、ならびに当該組成物をストレスによる腸疾患の予防・治療に使用することができる、又は使用すべきであることを記載した記載物を含む商業パッケージ。
（２０）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有する組成物、ならびに当該組成物をストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制に使用することができる、又は使用すべきであることを記載した記載物を含む商業パッケージ。
（２１）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を含有する飲食品を、ストレスによる腸疾患の予防・改善のための使用に関する事項を記載した記載物とともに包装した商業パッケージ。
（２２）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を含有する飲食品を、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制のための使用に関する事項を記載した記載物とともに包装した商業パッケージ。
（２３）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の有効量を投与対象に投与することを含む、ストレスによる腸疾患の予防又は治療方法。
（２４）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の有効量を投与対象に投与することを含む、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制方法。
（２５）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の有効量を含む飲食品を摂取することを含む、ストレスによる腸疾患の予防又は改善方法。
（２６）ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の有効量を含む飲食品を摂取することを含む、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制方法。
（２７）ストレスによる腸疾患の予防・治療剤を製造するための、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体又はそれらの薬理学的に許容可能な塩の使用。
（２８）ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制剤を製造するための、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体又はそれらの薬理学的に許容可能な塩の使用。
（２９）ストレスによる腸疾患の予防・改善作用を有するものであることを特徴とし、ストレスによる腸疾患の予防・改善のために用いられる旨の表示を付した飲食品を製造するための、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体又はそれらの薬理学的に許容可能な塩の使用。
（３０）ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制作用を有するものであることを特徴とし、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離を抑制するために用いられる旨の表示を付した飲食品を製造するための、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体又はそれらの薬理学的に許容可能な塩の使用。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００４】
以下に本発明の実施の形態について説明する。
本発明において使用するヒスチジンは、Ｌ−体、Ｄ−体、これらの混合物（例えば、ラセミ体）の何れも使用可能であるが、好ましくは、Ｌ−体が用いられる。
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体は、ペプチド合成や大腸菌による合成によって得られるもののいずれを使用してもよいが、これに限定されない。
本発明におけるヒスチジンを含むペプチドとは、ヒスチジンまたはヒスチジン前駆体となりうるイミダゾール骨格を持つアミノ酸を一つ以上含むペプチドを意味する。該ペプチドは、通常、アミノ酸数が２０個以下のペプチドであり、これらの中でも、アミノ酸数が１０個以下のものが好ましく、３個以下のものがより好ましく、更に好ましくはアミノ酸数が２個である。
ヒスチジン又はヒスチジンを含むペプチドの前駆体とは体内で代謝された後でヒスチジン又はヒスチジンを含むペプチドに変化するもので、Ｌ−ヒスチジン及びβアラニンからなるカルノシンや、βアラニンと１−メチルヒスチジンからなるアンセリン、βアラニンと３−メチルヒスチジンからなるバレニン、ホモカルノシン（γアミノブチリルＬ−ヒスチジン）、Ｎ−アセチルＬ−ヒスチジン、Ｎ−アセチルカルノシン、Ｎ−アセチルアンセリンなどが挙げられる。
本発明において使用するヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド及びそれらの前駆体は、遊離体のみならず、塩の形態で使用することもできる。このような塩としては、無機塩基との塩、無機酸との塩及び有機酸との塩等が挙げられ、医薬又は飲食品として許容される塩を選択することが好ましい。無機塩基との塩としては、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩等が挙げられる。無機酸との塩としては、ハロゲン化水素酸（塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸等）、硫酸、硝酸、リン酸等との塩が挙げられる。有機酸との塩としては、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸との塩が挙げられる。
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有してなる、ストレスによる腸疾患の予防・治療剤において、治療とは、疾患の改善をいい、ここに改善とは疾患の進展（悪化）防止をも含む概念である。
本発明において、「ストレスによる腸疾患」とは、ストレスにより惹起される腸の疾患であれば特に限定されない。具体的には、小腸（十二指腸、空腸、回腸）及び大腸（結腸、直腸）等の腸の疾患であり、好ましくは大腸の疾患である。本発明における腸疾患には、ストレス性下痢、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群、機能性下痢及びそれらの腸疾患のストレスによる増悪が挙げられる。またストレス誘発時における化学伝達物質の遊離によっても腸疾患が生じる
「ストレス」とは、生体において誘起有害作用因子（ストレッサー）に反応する生体内緊張状態をいう。また「ストレス性下痢」とは、感染性微生物、薬剤及び細胞毒素等によって引き起こされるような感染性の下痢ではなく、身体的あるいは精神的に与えられたストレスによって引き起こされた下痢を意味しており、例えば騒音、寒冷、外傷、不安又は緊張などのストレッサーにより引き起こされる蠕動運動亢進及び水あるいは電解質の分泌亢進を特徴とする下痢を意味する。
「ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離によって生じる腸疾患」とは、ストレス負荷条件下において、下記に述べる様な化学伝達物質が、中枢からの神経やホルモンの支配下で、腸管周辺の末梢神経やモノサイトなどの生体防御関連細胞から放出されることにより生じる腸疾患をいう。
ストレス誘発時に遊離される「化学伝達物質」としては、カテコールアミン（ノルアドレナリン、アドレナリン、ドーパミン等）、ヒスタミン、セロトニン、アセチルコリン及びロイコトリエン類、プロスタグランジン類、一酸化窒素（ＮＯ）などが挙げられる。望ましくは、カテコールアミン（ノルアドレナリン、アドレナリン、ドーパミン等）、セロトニン、ヒスタミンなどが挙げられる。またサブスタンスＰ、ＶＩＰや各種ケモカイン、サイトカインなどのポリペプチドも放出される。ストレス誘発時における化学伝達物質の挙動については報告されている（Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００３  Ｄｅｃ  １５；５５３（Ｐｔ  ３）：９５９−６６．Ｅｐｕｂ  ２００３  Ｏｃｔ  １０．Ａｃｕｔｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｈｉｓｔａｍｉｎｅ  ｃｏｎｔｅｎｔ  ｏｆ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ａｎｄ  ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｉｎ  ｒａｔｓ；Ｇｕｔ．２００４  Ａｕｇ；５３（８）：１１０２−８  Ａｌｔｅｒｅｄ  ｖｉｓｃｅｒａｌ  ｐｅｒｃｅｐｔｕａｌ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｍｅｎｔａｌ  ｓｔｒｅｓｓ）。
本発明はストレス誘発時における上記化学伝達物質の遊離抑制剤を提供するものである。さらにヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の有効量を投与対象に投与することを含む、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制方法、ならびにストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制剤を製造するための、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体又はそれらの薬理学的に許容可能な塩の使用を提供するものである。
本発明はストレス誘発時における大腸粘膜の蛋白分解抑制剤を提供するものである。蛋白分解抑制とは、ストレス誘発時に蛋白分解が促進されるのを抑制することを意味する。
本発明において、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル、ヒト等）において、ストレスによる腸疾患に対する優れた予防・治療効果を有し、又、ストレス誘発時における化学伝達物質の遊離抑制効果を有しているので、各種動物のストレスによる腸疾患の予防・治療剤及び予防・改善用飲食品、ならびに化学伝達物質の遊離抑制作用剤及び該遊離抑制作用を有する飲食品として有用である。
本発明の予防・治療剤又は遊離抑制剤の投与形態（又は食品としての摂取形態）には特に制限は無く、経口投与、または点滴投与、注射投与（経静脈投与）等の非経口投与（摂取）でも良く、特に限定しないが、有効成分がアミノ酸であることから経口投与であることが好ましい。経口投与剤としては、顆粒剤、細粒剤、粉剤、被覆錠剤、錠剤、坐剤、散剤、（マイクロ）カプセル剤、チュアブル剤、シロップ、ジュース、液剤、懸濁剤、乳濁液等、また注射剤としては静脈直接注入用、点滴投与用、活性物質の放出を延長する製剤等の医薬製剤一般の剤型を採用することができる。
本発明の予防・治療剤又は遊離抑制剤においては、経口投与の場合、投与量は投与する患者の症状、年齢、性別、投与方法等によって異なるが、成人１日当たり、ヒスチジンとして通常０．１ｇ／ｄａｙから５ｇ／ｄａｙ程度、好ましくは１日２回０．５ｇ／回から２ｇ／回程度、より好ましくは１日２回、１．５ｇ／回程度である。
なおヒスチジンとは、ヒスチジンそのものを含有する場合はそのヒスチジンの重量自体をいい、ヒスチジンを含むペプチド及びその前駆体を含有する場合には、その加水分解等により、ヒスチジンになり得る物質をすべて、ヒスチジンにしたときの、ヒスチジンを意味する。
上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
また、点滴投与、注射投与（経静脈投与）等、非経口投与する場合の投与量については、前記経口投与についての好ましい投与量範囲の１０分の１から２分の１程度を投与することができる。
本発明の予防・治療剤又は遊離抑制剤は、常法により製剤化することによって調製することができる。製剤上の必要に応じて、薬理学的に許容し得る各種の製剤用物質（補助剤等として）を配合することができる。製剤用物質は製剤の剤型により適宜選択することができるが、例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤等が挙げられる。更に、製剤用物質を具体的に例示すると、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトール及びその他の糖類、タルク、牛乳蛋白、ゼラチン、澱粉、セルロース及びその誘導体、動物及び植物油、ポリエチレングリコール、及び溶剤、例えば滅菌水及び一価又は多価アルコール、例えばグリセロール等を挙げることができる。
本発明の予防・治療剤又は遊離抑制剤中のヒスチジンの含有量は、通常１〜２０重量％であり、好ましくは１〜１０重量％、より好ましくは２〜５重量％である。
本発明の予防・治療剤又は遊離抑制剤は常法以外にも、将来開発される様々な医薬製剤の形態によっても製剤化することができる。その製剤には将来開発される方法を適宜採用することができる。
本発明のストレスによる腸疾患の予防・改善用飲食品又は化学伝達物質の遊離抑制用飲食品の場合にも、その形態は特に限定されるものではなく、ストレスによる腸疾患の予防・改善効果又は化学伝達物質の遊離抑制効果を発揮させるのに必要なヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩の量が飲食品に含有されていれば良い。
本発明の飲食品の摂取形態には特に制限は無く、経口摂取または非経口摂取でも良く、特に限定しないが、有効成分がアミノ酸であることから経口摂取であることが好ましい。本発明の飲食品においては、経口摂取の場合、摂取量は摂取対象の症状、年齢、性別、摂取方法等によって異なるが、成人１日当たり、ヒスチジンとして通常０．１ｇ／ｄａｙから１０ｇ／ｄａｙ程度、好ましくは１ｇ／ｄａｙから５ｇ／ｄａｙ程度、より好ましくは２ｇ／ｄａｙから４ｇ／ｄａｙ程度である。
上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて摂取することができる。また摂取期間は特に限定されない。
また、非経口摂取する場合の摂取量については、前記経口摂取についての好ましい摂取量範囲の２０分の１から５分の１程度を投与することができる。
本発明は、有効成分がアミノ酸であるため、安全性に優れており、飲食品の形態でも簡便に使用することができる。飲食品には、栄養を補助する目的で摂取される、健康食品、食品添加物、栄養補助食品等も含まれる。本発明を飲食品に使用するには、特に困難は無く、例えばジュース、牛乳、菓子、ゼリー等に混ぜて飲食することができる。また、健康食品、食品添加物、栄養補助食品等として使用する場合、例えば錠剤、カプセル、散剤、顆粒、懸濁剤、チュアブル剤、シロップ剤等の形態に調製することができる。
本発明の飲食品中のヒスチジンの含有量は、通常１〜２０重量％であり、好ましくは１〜１０重量％、より好ましくは２〜５重量％である。
また、このような食品を、保健機能食品又はダイエタリーサプリメントとして提供することも可能である。この保健機能食品には、ストレスによる腸疾患の予防・改善のために用いるものであるという旨の表示を付した飲食品、特に特定保健用食品、又は栄養機能食品なども含まれる
さらにヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有する組成物、ならびに当該組成物をストレスによる腸疾患の予防・治療に使用することができる、又は使用すべきであることを記載した記載物を含む商業パッケージも本発明に含まれる。
ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体及びそれらの薬理学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の有効量を投与対象に投与することを含む、ストレスによる腸疾患の予防又は治療方法、ならびにストレスによる腸疾患の予防・治療剤を製造するための、ヒスチジン、ヒスチジンを含むペプチド、それらの前駆体又はそれらの薬理学的に許容可能な塩の使用も本発明に含まれる。
【実施例】
【０００５】
次に、実施例により本発明をさらに詳細に述べる。なお、以下の実施例は、本発明を説明するものであって、本発明をこれに限定するものではない。
（実施例１）
Ｗｉｓｔａｒラット（４週令、オス）を通常食（ＣＲＦ−１日本チャールス・リバー株式会社）にて１週間予備飼育後、普通食（対照群）または微粉末としたＬ−ヒスチジン塩酸塩を通常食に対して重量％として２％混合したヒスチジン食（ヒスチジン投与群）を２週間与えた。ヒスチジン食での飼育を開始してから１５日目、１６日目、１７日目の午前中に以下の方法によりストレス負荷を行い、ラットの排出する糞便の重量と性状を測定した。
〈ストレス負荷〉
ラットを小型個別ケージ（１３．５ｘ２７ｘ１２ｃｍ）に約２時間放置後、ラットの身動きが出来ない程度の大きさを持つ拘朿（ストレス）ケージ（５ｘ１７ｘ４ｃｍ）に移して、さらに２時間放置することによりストレス負荷を行った（対照ストレス群、ヒスチジン投与ストレス群）。ラットより放出された糞便性状、糞便個数、糞便重量を測定した。ストレス負荷と糞便測定は同じ個体に対して３日間連続して行った。
結果を表２及び表３に示した。ラットは各群８個体を用いた。ヒスチジン投与群は対照群に比して、糞便総重量の減少、下痢発生個体の減少、軟便発生個体の減少および軟便発生率（普通便個数：軟便個数）の減少を示した。ストレスを連続して負荷すると次第にストレスが減弱することが知られており、本試験もその傾向を示し、ヒスチジン投与群と対照群の差が縮小する傾向が見られた。以上の結果よりヒスチジンの投与による下痢抑制効果が確認された。
【表２】
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【表３】
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註：下痢発生個体は軟便発生個体に重なる。
また、１７日目にストレスを与えたラットの大腸を採取し液体窒素で凍結し、使用するまで−８０℃で保存した。凍結サンプルから下記のプロトコールでノルアドレナリン、ヒスタミン、セロトニン及び３−メチルヒスチジンを抽出し、ＬＣ／ＭＳで定量した。
−８０℃保存ラット凍結組織（大腸）をクライオプレス（マイクロテック・ニチオン社製）で破砕し、１００ｍｇに対し−８０℃のメタノール１ｍＬを添加する。ＦａｓｔＰｒｅｐ（３０ｓｅｃｘ２回）で破砕し、破砕液を０．８ｍＬ回収した。これに１ｍＬの冷クロロホルムを添加し、ボルテックスで１分間撹拌した後、１ｍＬ冷Ｈ２Ｏを添加した。さらにボルテックスで、１分間撹拌した後、３０分間静置した。静置後、１０００ｒｐｍ３分間４℃で遠心分離を行った。Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ層約１．５ｍＬの内１ｍＬを回収。遠心エバポレータで乾固した。１００μＬのＭｉｌｌｉＱ水に溶解後ＡＱＣ誘導体化して、０．１％ギ酸で２倍に希釈しＡＰＩ４０００ＬＣ−ＭＳ／ＭＳで測定した。
ノルアドレナリン、ヒスタミン、セロトニン及び３−メチルヒスチジンの組織含量を表４に示した。
交感神経のシグナル伝達に使われるノルアドレナリンが、ストレス負荷により大腸における組織含量が増加し、ヒスチジンが抑制作用を有することを示唆している。
またストレス負荷により大腸においてヒスタミン及びセロトニンの組織含量が増加し、ヒスチジン投与によりこの増加が抑制される傾向が見られた。ヒスタミン及びセロトニンは中枢からの神経やホルモンの支配下で腸管周辺の末梢神経やモノサイトなどの生体防御関連細胞から放出される。これら大腸のノルアドレナリン、ヒスタミン及びセロトニンの挙動はストレスを感じる中枢からの末梢に対するシグナルに対してヒスチジンが抑制作用を有することを示している。
３−メチルヒスチジンも同様にストレス負荷で増加し、ヒスチジン投与でこの増加が抑制された。ストレス（精神的）で胃や大腸の粘膜の分解が促進することは報告されている（Ｊ  Ｐｉｎｅａｌ  Ｒｅｓ．２００４  Ｓｅｐ；３７（２）：１１３−２１）。３−メチルヒスチジンは蛋白質に含まれ、該分解により放出される。もともと血中に少なく、変動が少ないために蛋白質分解の指標として使われる（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  Ｓｕｐｐｌ．１９８３  Ｄｅｃ；１６：Ｓ２−８、Ｃｉｂａ  Ｆｏｕｎｄ  Ｓｙｍｐ．１９７９；（７５）：３０７−２９）。ストレス負荷による大腸での３−メチルヒスチジンの上昇は大腸の異常を示している。これらのことから、ストレス誘発時に、大腸で蛋白崩壊が生じ、ヒスチジン投与は大腸での蛋白分解を抑制していることは明らかである。
ノルアドレナリン、ヒスタミン、セロトニン及び３−メチルヒスチジンがストレス誘発時に増加するという挙動は大腸で顕著に認められた。よってストレスによる腸管の異常は主として大腸で生じ、症状として下痢が生じるのを、ヒスチジンを投与することにより抑制すると考えられる。
【表４】
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（実施例  ２）
Ｗｉｓｔａｒラット（６週令、オス）を通常食（ＣＲＦ−１日本チャールス・リバー株式会社）にて１週間予備飼育後、予備飼育開始後８日目および９日目に１日２回（朝方および夕方の）の割合で、ラットにヒスチジン強制経口投与を行った。対照群は０．５％メチルセルロース溶液（対照溶液）、ヒスチジン投与群には０．５％メチルセルロース溶液にＬ−ヒスチジン塩酸塩をラットの体重１ｋｇあたり１．５ｇとなるように溶解（一部懸濁）させた投与容量５ｍＬをゾンデにより経口投与した。実施例１と同様にして、ストレスケージを用いてストレス負荷を行った。即ち１０日目の午前中にラットを小型個別ケージ（１３．５ｘ２７ｘ１２ｃｍ）に移し２時間放置後、前日と同様のヒスチジン溶液および対照溶液の経口投与を一回行った。小型個別ケージの中で２時間放置後、ラットを拘束ケージ（５ｘ１７ｘ４ｃｍ）に移し１時間放置し、ストレス負荷を行った。ラットより放出された糞便性状、糞便個数、糞便重量を測定した。
結果を表５及び表６に示した。ラットは各群８個体を用いた。ヒスチジン投与群は対照群に比して、総糞便重量の減少、下痢発生個体の減少を示した。以上の結果よりヒスチジンの投与による下痢抑制効果が確認された。
【表５】
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【表６】
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（実施例３）
Ｗｉｓｔａｒラット（６週令、オス）を通常食（ＣＲＦ−１日本チャールス・リバー株式会社）にて１週間予備飼育後、前述と同じ８日目および９日目に、１日２回（朝方および夕方）の割合で、ラットにヒスチジン強制経口投与を行った。対照群は０．５％メチルセルロース溶液（対照溶液）、ヒスチジン投与群には０．５％メチルセルロース溶液にＬ−ヒスチジン塩酸塩をラットの体重１ｋｇあたり１．５ｇとなるように溶解（一部懸濁）させた投与容量５ｍｌをゾンデにより経口投与した。１０日目の午前中に前日と同様のヒスチジン溶液および対照溶液の経口投与を一回行った。一時間後に軽度エーテル麻酔下で、前足をスコッチブランドテープで拘束しストレス負荷をおこなった。個別ケージの中で１時間放置後、ラットより放出された糞便性状、糞便個数、糞便重量を測定した。
結果を表７及び表８に示した。ラットは各群８個体を用いた。ヒスチジン投与群は対照群に比して、総糞便重量の減少、軟便発生率（普通便個数に対する軟便個数の比率）の減少を示した。以上の結果よりヒスチジンの投与による下痢抑制効果が確認された。
【表７】
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【表８】
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【産業上の利用可能性】
【０００６】
本発明により、ストレスによる腸疾患、特に、ストレス性下痢、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群、機能性下痢及びそれらの腸疾患のストレスによる増悪に対する予防・治療剤を提供することができる。本発明の予防・治療剤は安全性に優れ長期間にわたって投与可能であり、また、有効成分がアミノ酸であることから、安全性が高く、副作用がほとんどないので、飲食品としても使用できる。
以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で様々な修正と変更をなすことは可能である。従って、そのような修正及び変更も、すべて後記の請求の範囲で請求される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。
本出願は、日本で出願された特願２００５−０８００５３を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【国際調査報告】
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