(57)【要約】【課題】再灌流障害を起した心臓組織の機能破綻による心筋壊死の進展を抑制する、或いは心臓組織に対する保護作用を有する、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤を提供する。【解決手段】ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物を有効成分として含有する、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤。2006051757.tif 000008
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物を有効成分として含有する、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤。
【請求項２】
前記ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物が、下記式（I）：
2006051757.tif 000007
（式中、ＸはＣＨまたは窒素であり；
Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素またはＣ１-６アルキルであり；
Ｒ３は置換されてもよいフェニル、置換されてもよいピリジル、置換されてもよいキノリル、置換されてもよいイソキノリル、置換されてもよいピリダジニル、置換されてもよいピリミジニル、置換されてもよいピラジニル、置換されてもよいピラニル、置換されてもよいフリル、置換されてもよいベンゾフリル、置換されてもよいジベンゾフリル、置換されてもよいチエニル、置換されてもよいベンゾチエニル、置換されてもよいインドリル、置換されてもよいインダゾリル、置換されてもよいイミダゾリル、置換されてもよいベンズイミダゾリル、置換されてもよいオキサジアゾリル、置換されてもよいチアジアゾリルまたは置換されてもよいＣ３−７シクロアルキルであり；
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１-６アルキル、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ニトロ、−ＯＲ７、−ＳＲ７、−ＳＯ２Ｒ７、−ＳＯＲ７、−ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８、−ＮＲ７Ｒ８、−ＮＲ７ＳＯ２Ｒ８、−ＣＯＲ７、−ＣＯ２Ｒ７または−ＣＯＮＲ７Ｒ８であり；
Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して、水素またはＣ１−６アルキルである。）で表される化合物またはその塩である、請求項１に記載の治療剤又は予防剤。
【請求項３】
Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニル、Ｙで置換されてもよいピリジル、Ｙで置換されてもよいキノリル、Ｙで置換されてもよいイソキノリル、Ｙで置換されてもよいピリダジニル、Ｙで置換されてもよいピリミジニル、Ｙで置換されてもよいピラジニル、Ｙで置換されてもよいピラニル、Ｙで置換されてもよいフリル、Ｙで置換されてもよいベンゾフリル、Ｙで置換されてもよいジベンゾフリル、Ｙで置換されてもよいチエニル、Ｙで置換されてもよいベンゾチエニル、Ｙで置換されてもよいインドリル、Ｙで置換されてもよいインダゾリル、Ｙで置換されてもよいイミダゾリル、Ｙで置換されてもよいベンズイミダゾリル、Ｙで置換されてもよいオキサジアゾリル、Ｙで置換されてもよいチアジアゾリルまたはＹで置換されてもよいＣ３−７シクロアルキルであり、ＹがＣ１−６アルキル、フェニル、フェノキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、−ＯＲ９、−ＳＲ９、−ＳＯ２Ｒ９、−ＳＯＲ９、−ＳＯ２ＮＲ９Ｒ10、−ＮＲ９Ｒ10、−ＮＲ９ＳＯ２Ｒ10、−ＣＯＲ９、−ＣＯ２Ｒ９および−ＣＯＮＲ９Ｒ10からなる群より選択される少なくとも１つの置換基であり、Ｒ９およびＲ10は、それぞれ独立して、水素またはＣ１−６アルキルである、請求項２に記載の治療剤又は予防剤。
【請求項４】
Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニル、Ｙで置換されてもよいピリジル、Ｙで置換されてもよいイソキノリル、Ｙで置換されてもよいチエニルまたはＹで置換されてもよいＣ３−７シクロアルキルである、請求項２または３に記載の治療剤又は予防剤。
【請求項５】
Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニルである、請求項２〜４のいずれかに記載の治療剤又は予防剤。
【請求項６】
Ｘが窒素である、請求項２〜５のいずれかに記載の治療剤又は予防剤。
【請求項７】
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジンまたはその塩を有効成分とする請求項１〜６のいずれかに記載の治療剤又は予防剤。
【請求項８】
ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物の有効量を患者に投与することからなる虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療または予防方法。
【請求項９】
虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤の製造のためのＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物の使用。
【請求項１０】
以下の（ａ）〜（ｃ）のいずれかに記載の物質を有効成分として含有する、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤；
（ａ）NAIPタンパク質
（ｂ）NAIPタンパク質のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列を含むNAIPタンパク質変異体であって、NAIPタンパク質と機能的に同等なタンパク質
（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）に記載のタンパク質をコードするDNA、または該タンパク質を発現するベクター。
【請求項１１】
以下の（ａ）〜（ｃ）のいずれかに記載の物質の有効量を患者に投与することからなる虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療または予防方法；
（ａ）NAIPタンパク質
（ｂ）NAIPタンパク質のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列を含むNAIPタンパク質変異体であって、NAIPタンパク質と機能的に同等なタンパク質
（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）に記載のタンパク質をコードするDNA、または該タンパク質を発現するベクター。
【請求項１２】
虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤の製造のための以下の（ａ）〜（ｃ）のいずれかに記載の物質の使用；
（ａ）NAIPタンパク質
（ｂ）NAIPタンパク質のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列を含むNAIPタンパク質変異体であって、NAIPタンパク質と機能的に同等なタンパク質
（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）に記載のタンパク質をコードするDNA、または該タンパク質を発現するベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物、たとえば特定の３−置換（アザ）インドール化合物を有効成分とする虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、循環器系疾患において心筋梗塞等の虚血性心疾患の患者が急速に増加している。この心筋梗塞に対する治療方法として、閉塞した冠動脈を積極的に再開する治療法、例えば、冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）または、冠動脈内血栓溶解療法が広く行われるようになった。しかしながら、これらの治療法は虚血から心筋を回復させる必須の治療法ではあるが、血流再開に伴い、心室細動などの心室性不整脈、出血性梗塞あるいは再灌流不良現象（no‐reflow phenomenon）等の新しい障害が発現し、かえって悪化する場合のあることが知られるようになり、再灌流障害と称されるようになった。このような障害を起した心臓組織では、細胞膜機能の破綻が誘導され、心筋壊死が進展すると考えられている。
したがって、この再灌流障害発生への対応が虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療において重要な課題の一つとなっている。【０００３】
特許文献１には、置換ピロロ［2，3‐b］−ピリジン誘導体が脳内においてドーパミンD4受容体サブタイプに選択的なアフィニティを示し、したがって、精神疾患の治療及び予防に有用であるとされている。【０００４】
特許文献２には、ピロロ−ピリジン誘導体が開示され、メナジオン誘導細胞死抑制、スナネズミ虚血灌流海馬組織における神経細胞の変形・脱落の抑制、筋萎縮性側索硬化症（ALS）モデルマウスの延命効果を示すとされており、神経変性疾患の治療及び予防に有用であるとされている。【０００５】
特許文献３には、ピペラジン誘導体が開示され、自律神経系、心血管系及び骨格筋系に対し抑制効果を有し、精神安定剤、沈静剤、抗アドレナリン剤、低温症剤、抗痙攣剤、低血圧剤及び心血管作用薬として有用であるとされている。【０００６】
特許文献４には、ピペラジン誘導体が開示され、自律神経系、心血管系及び骨格筋系に対し抑制効果を有し、精神安定剤、沈静剤、骨格筋弛緩薬、抗アドレナリン剤、低温症剤、抗痙攣剤、低血圧剤及び心血管作用薬として有用であるとされている。【０００７】
特許文献５には、ピロロ−ピリジン誘導体が開示され、これらの化合物はドーパミン受容体サブタイプのリガンドであるので、ドーパミン系の疾患、特に統合失調症の治療及び予防に有用であるとされている。なお、この文献ではラットのドーパミン受容体mRNAが心臓及び大血管に局在していることから、ドーパミン受容体リガンドが心臓及び平滑筋の収縮性に影響を与え、または血管作用性の物質の分泌を調節することによって、心臓血管機能を制御し、高血圧症や鬱血性心不全（congestive heart failure）の予防及び治療に有用であるかもしれないとしている。【０００８】
非特許文献１には、神経細胞アポトーシス抑制蛋白質（ＮＡＩＰ）遺伝子が記載され、非特許文献２には、ＮＡＩＰ遺伝子を種々の培養細胞に導入し、アポトーシスを誘起させる刺激を細胞に与えたところ、その細胞死が抑制されることが記載され、特許文献６には、ＮＡＩＰ遺伝子の完全ｃＤＮＡおよびｃＤＮＡにコードされている蛋白質について記載がある。【０００９】
以上のとおり、これらの先行技術は、本願で用いられる化合物が虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療または予防に有用であることを開示するものでも示唆するものでもない。
【特許文献１】国際公開公報  WO 94/20497
【特許文献２】国際公開公報  WO2004/028540
【特許文献３】米国特許公報  US3362956
【特許文献４】米国特許公報  US3511841
【特許文献５】国際公開公報  WO 94/20459
【特許文献６】特開平１１−１１６５９９号公報
【非特許文献１】Roy et al., Cell vol.80:p167-178,1995
【非特許文献２】Liston et al., Nature vol.379:p349-353,1996
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、再灌流障害を起した心臓組織の機能破綻による心筋壊死の進展を抑制する、或いは心臓組織に対する保護作用を有する、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、前記問題点を解決すべく研究した結果、ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物を含有する組成物が、心臓虚血再灌流動物モデルにおいて、患部組織に対する保護作用を持つことを見出し本発明を完成した。【００１２】
（１）本発明は、ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物を有効成分として含有する、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤である。
（２）前記ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物としては、より具体的には、下記式（I）で表される化合物またはその塩が挙げられる。
2006051757.tif 000002
（式中、ＸはＣＨまたは窒素であり；
Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素またはＣ１-６アルキルであり；
Ｒ３は置換されてもよいフェニル、置換されてもよいピリジル、置換されてもよいキノリル、置換されてもよいイソキノリル、置換されてもよいピリダジニル、置換されてもよいピリミジニル、置換されてもよいピラジニル、置換されてもよいピラニル、置換されてもよいフリル、置換されてもよいベンゾフリル、置換されてもよいジベンゾフリル、置換されてもよいチエニル、置換されてもよいベンゾチエニル、置換されてもよいインドリル、置換されてもよいインダゾリル、置換されてもよいイミダゾリル、置換されてもよいベンズイミダゾリル、置換されてもよいオキサジアゾリル、置換されてもよいチアジアゾリルまたは置換されてもよいＣ３−７シクロアルキルであり；
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１-６アルキル、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ニトロ、−ＯＲ７、−ＳＲ７、−ＳＯ２Ｒ７、−ＳＯＲ７、−ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８、−ＮＲ７Ｒ８、−ＮＲ７ＳＯ２Ｒ８、−ＣＯＲ７、−ＣＯ２Ｒ７または−ＣＯＮＲ７Ｒ８であり；、
Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して、水素またはＣ１−６アルキルである）で表される化合物。
（３）前記式（I）中、Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニル、Ｙで置換されてもよいピリジル、Ｙで置換されてもよいキノリル、Ｙで置換されてもよいイソキノリル、Ｙで置換されてもよいピリダジニル、Ｙで置換されてもよいピリミジニル、Ｙで置換されてもよいピラジニル、Ｙで置換されてもよいピラニル、Ｙで置換されてもよいフリル、Ｙで置換されてもよいベンゾフリル、Ｙで置換されてもよいジベンゾフリル、Ｙで置換されてもよいチエニル、Ｙで置換されてもよいベンゾチエニル、Ｙで置換されてもよいインドリル、Ｙで置換されてもよいインダゾリル、Ｙで置換されてもよいイミダゾリル、Ｙで置換されてもよいベンズイミダゾリル、Ｙで置換されてもよいオキサジアゾリル、Ｙで置換されてもよいチアジアゾリルまたはＹで置換されてもよいＣ３−７シクロアルキルであり、ＹがＣ１−６アルキル、フェニル、フェノキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、−ＯＲ９、−ＳＲ９、−ＳＯ２Ｒ９、−ＳＯＲ９、−ＳＯ２ＮＲ９Ｒ10、−ＮＲ９Ｒ10、−ＮＲ９ＳＯ２Ｒ10、−ＣＯＲ９、−ＣＯ２Ｒ９および−ＣＯＮＲ９Ｒ10からなる群より選択される少なくとも１つの置換基であり、Ｒ９およびＲ10は、それぞれ独立して、水素またはＣ１−６アルキルである、前記（２）に記載の治療剤又は予防剤。
（４）前記式（I）中、Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニル、Ｙで置換されてもよいピリジル、Ｙで置換されてもよいイソキノリル、Ｙで置換されてもよいチエニルまたはＹで置換されてもよいＣ３-７シクロアルキルである、前記（２）または（３）に記載の治療剤又は予防剤。
（５）前記式（I）中、Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニルである、前記（２）〜（４）のいずれかに記載の治療剤又は予防剤。
（６）前記式（I）中、Ｘが窒素である前記（２）から（５）のいずれかに記載の治療剤又は予防剤。
（７）3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジンまたはその塩を有効成分とする前記（１）〜（６）のいずれかに記載の治療剤又は予防剤。【００１３】
（８）ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物の有効量を患者に投与することからなる、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療または予防方法。
（９）ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物が前記式（I）の化合物またはその塩である、（８）に記載の治療または予防方法。
（１０）前記式（I）中、Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニル、Ｙで置換されてもよいピリジル、Ｙで置換されてもよいキノリル、Ｙで置換されてもよいイソキノリル、Ｙで置換されてもよいピリダジニル、Ｙで置換されてもよいピリミジニル、Ｙで置換されてもよいピラジニル、Ｙで置換されてもよいピラニル、Ｙで置換されてもよいフリル、Ｙで置換されてもよいベンゾフリル、Ｙで置換されてもよいジベンゾフリル、Ｙで置換されてもよいチエニル、Ｙで置換されてもよいベンゾチエニル、Ｙで置換されてもよいインドリル、Ｙで置換されてもよいインダゾリル、Ｙで置換されてもよいイミダゾリル、Ｙで置換されてもよいベンズイミダゾリル、Ｙで置換されてもよいオキサジアゾリル、Ｙで置換されてもよいチアジアゾリルまたはＹで置換されてもよいＣ３−７シクロアルキルであり、ＹがＣ１−６アルキル、フェニル、フェノキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、−ＯＲ９、−ＳＲ９、−ＳＯ２Ｒ９、−ＳＯＲ９、−ＳＯ２ＮＲ９Ｒ10、−ＮＲ９Ｒ10、−ＮＲ９ＳＯ２Ｒ10、−ＣＯＲ９、−ＣＯ２Ｒ９および−ＣＯＮＲ９Ｒ10からなる群より選択される少なくとも１つの置換基であり、Ｒ９およびＲ10は、それぞれ独立して、水素またはＣ１−６アルキルである化合物またはその塩を投与する前記（９）に記載の方法。
（１１）前記式（I）中、Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニル、Ｙで置換されてもよいピリジル、Ｙで置換されてもよいイソキノリル、Ｙで置換されてもよいチエニル、Ｙで置換されてもよいＣ３-７シクロアルキルである化合物またはその塩を投与する前記（９）または（１０）に記載の方法。
（１２）前記式（I）中、Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニルである化合物またはその塩を投与する前記（９）〜（１１）のいずれかに記載の方法。
（１３）前記式（I）中、Ｘが窒素である化合物またはその塩を投与する前記（９）〜（１２）のいずれかに記載の方法。
（１４）3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、またはその塩を投与する前記（８）〜（１３）のいずれかに記載の方法。【００１４】
（１５）虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤の製造のためのＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物の使用。
（１６）ＮＡＩＰ遺伝子のアップレギュレーター化合物が前記式（I）の化合物またはその塩である、（１５）に記載の使用。
（１７）前記式（I）中、Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニル、Ｙで置換されてもよいピリジル、Ｙで置換されてもよいキノリル、Ｙで置換されてもよいイソキノリル、Ｙで置換されてもよいピリダジニル、Ｙで置換されてもよいピリミジニル、Ｙで置換されてもよいピラジニル、Ｙで置換されてもよいピラニル、Ｙで置換されてもよいフリル、Ｙで置換されてもよいベンゾフリル、Ｙで置換されてもよいジベンゾフリル、Ｙで置換されてもよいチエニル、Ｙで置換されてもよいベンゾチエニル、Ｙで置換されてもよいインドリル、Ｙで置換されてもよいインダゾリル、Ｙで置換されてもよいイミダゾリル、Ｙで置換されてもよいベンズイミダゾリル、Ｙで置換されてもよいオキサジアゾリル、Ｙで置換されてもよいチアジアゾリルまたはＹで置換されてもよいＣ３−７シクロアルキルであり、ＹがＣ１−６アルキル、フェニル、フェノキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、−ＯＲ９、−ＳＲ９、−ＳＯ２Ｒ９、−ＳＯＲ９、−ＳＯ２ＮＲ９Ｒ10、−ＮＲ９Ｒ10、−ＮＲ９ＳＯ２Ｒ10、−ＣＯＲ９、−ＣＯ２Ｒ９および−ＣＯＮＲ９Ｒ10からなる群より選択される少なくとも１つの置換基であり、Ｒ９およびＲ10は、それぞれ独立して、水素またはＣ１−６アルキルである、前記（１６）に記載の使用。
（１８）前記式（I）中、Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニル、Ｙで置換されてもよいピリジル、Ｙで置換されてもよいイソキノリル、Ｙで置換されてもよいチエニル、またはＹで置換されてもよいＣ３-７シクロアルキルである前記（１６）または（１７）に記載の使用。
（１９）前記式（I）中、Ｒ３がＹで置換されてもよいフェニルである前記（１６）〜（１８）のいずれかに記載の使用。
（２０）前記式（I）中、Ｘが窒素である前記（１６）〜（１９）のいずれかに記載の使用。
（２１）3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジンまたはその塩を使用する前記（１５）〜（２０）いずれかに記載の使用。
（２２）以下の（ａ）〜（ｃ）のいずれかに記載の物質を有効成分として含有する、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤；
（ａ）NAIPタンパク質
（ｂ）NAIPタンパク質のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列を含むNAIPタンパク質変異体であって、NAIPタンパク質と機能的に同等なタンパク質
（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）に記載のタンパク質をコードするDNA、または該タンパク質を発現するベクター。
（２３）以下の（ａ）〜（ｃ）のいずれかに記載の物質の有効量を患者に投与することからなる虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療または予防方法；
（ａ）NAIPタンパク質
（ｂ）NAIPタンパク質のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列を含むNAIPタンパク質変異体であって、NAIPタンパク質と機能的に同等なタンパク質
（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）に記載のタンパク質をコードするDNA、または該タンパク質を発現するベクター。
（２４）虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤の製造のための以下の（ａ）〜（ｃ）のいずれかに記載の物質の使用；
（ａ）NAIPタンパク質
（ｂ）NAIPタンパク質のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列を含むNAIPタンパク質変異体であって、NAIPタンパク質と機能的に同等なタンパク質
（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）に記載のタンパク質をコードするDNA、または該タンパク質を発現するベクター。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の治療剤または予防剤は、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の患者、または冠動脈形成術もしくは冠動脈内血栓溶解などの血流再開措置を施された患者に投与することで、虚血・再灌流により生じる再灌流障害を抑制することができる。特に、心臓組織における水腫の抑制、充鬱血の抑制、出血の抑制、好中球浸潤の抑制が可能である。また、それらの心臓組織に生じる、水腫変性、線維波状化、収縮帯壊死などの心筋変性性変化の程度または発生頻度を軽減することが可能である。更には、凝固壊死、類壊死の程度または発生頻度を軽減することが可能である。また、それらの心臓組織におけるアポトーシスの程度または発生頻度を軽減することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】試験例の各群の左心室壁に見られた病変毎の病理組織学的変化のスコアを示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明者によって、NAIP（神経細胞アポトーシス抑制タンパク質；Neuronal Apoptosis Inhibitory Protein）遺伝子の発現をアップレギュレート（活性化）させることにより、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症を治療または予防することが可能であることが見出された。即ち、NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物（発現亢進物質）は、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤又は予防剤として有用である。【００１８】
本発明は、NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物を有効成分として含有する、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤を提供する。
本発明における「アップレギュレーター化合物」には、NAIP遺伝子の転写を活性化させる化合物、および／または該遺伝子の転写産物からの翻訳を活性化させる化合物が含まれる。【００１９】
本発明のアップレギュレーター化合物には、例えば、NAIP遺伝子の転写調節領域（プロモーター等）に作用し、該遺伝子の転写活性を上昇させる機能を有する物質が含まれる。例えば、NAIP遺伝子の転写因子（転写活性化因子）は、本発明のアップレギュレーター化合物として好適に示すことができる。【００２０】
また、本発明においてNAIP遺伝子の発現活性の測定は、当業者においては周知の方法、例えば、ノーザンブロット法、ウェスタンブロット法等により、適宜実施することができる。【００２１】
本発明者は、NAIP遺伝子の発現亢進（アップレギュレート）作用を有する化合物が、酸化ストレス・ラジカル誘起剤によるアポトーシスを効果的に抑制し、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症に対し治療効果を有することを見出した。即ち、細胞におけるNAIPタンパク質の存在量を上昇させることによって、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症に対する効果的な治療を行うことが可能である。【００２２】
従って、NAIPタンパク質自体、あるいは、該タンパク質の機能を活性化させる物質（機能亢進物質）は、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤又は予防剤として有用である。【００２３】
本発明のNAIPタンパク質の機能亢進物質としては、例えば、以下の（ａ）〜（ｃ）を挙げることができる。
（ａ）NAIPタンパク質
（ｂ）NAIPタンパク質のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列を含む、NAIPタンパク質変異体であって、NAIPタンパク質と機能的に同等なタンパク質
（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）に記載のタンパク質をコードするDNA、または該タンパク質を発現するベクター【００２４】
本発明におけるNAIPタンパク質は通常、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療または予防を行うべき生物種に由来する（内在性の）タンパク質である。本発明のNAIPタンパク質は、ヒトNAIPタンパク質であることが好ましいが、その由来する生物種は特に制限されず、マウス等の哺乳動物のNAIPタンパク質を挙げることができる。一例として、NAIPタンパク質のアミノ酸配列および該タンパク質をコードするDNA配列は、たとえば国際公開公報ＷＯ９６／１２０１６に記載がある。【００２５】
本発明における「NAIPタンパク質」は、天然のタンパク質の他、遺伝子組換え技術を利用した組換えタンパク質として調製することができる。天然のタンパク質は、例えば、NAIPタンパク質が発現していると考えられる細胞（組織）の抽出液に対し、NAIPタンパク質に対する抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィーを用いる方法により調製することが可能である。一方、組換えタンパク質は、NAIPタンパク質をコードするDNAで形質転換した細胞を培養することにより調製することが可能である。【００２６】
本発明において、「機能的に同等なタンパク質」とは、NAIPタンパク質において明らかにされている活性と同様の活性を備えたタンパク質である。上記「活性」とは、例えば、酸化ストレス誘起化合物によるアポトーシスを抑制する活性を挙げることができる。【００２７】
また、本発明におけるNAIPタンパク質には、NAIPタンパク質のアミノ酸配列に対して、例えば７０%以上、好ましくは９０%以上、より好ましくは９５%以上、さらに好ましくは９８％以上の相同性を有するタンパク質であって、NAIPタンパク質と機能的に同等なタンパク質が含まれる。また、本発明におけるアミノ酸の改変は、通常、５０アミノ酸以内であり、好ましくは３０アミノ酸以内であり、さらに好ましくは１０アミノ酸以内であり、さらに好ましくは３アミノ酸以内である。【００２８】
上記の機能的に同等なタンパク質とは、例えば、ヒトNAIPタンパク質変異体、ヒトNAIPタンパク質のヒト以外の生物におけるホモログ等を挙げることができる。【００２９】
また、本発明におけるNAIPタンパク質をコードするDNAは、染色体DNAであっても、cDNAであってもよい。NAIPタンパク質をコードする染色体DNAは、例えば、細胞等から染色体DNAのライブラリーを調製し、NAIPタンパク質をコードするDNAにハイブリダイズするプローブを用いた、該ライブラリーのスクリーニングにより取得することができる。またNAIPタンパク質をコードするcDNAは、NAIPタンパク質が発現していると考えられる細胞（組織）からRNA試料を抽出し、NAIPタンパク質をコードするDNAにハイブリダイズするプライマーを用いたRT-PCR法等の遺伝子増幅技術により取得することができる。【００３０】
本発明におけるNAIPタンパク質または該タンパク質をコードするDNAは、NAIPタンパク質と機能的に同等であれば、その塩基配列やアミノ配列が改変された変異体であってもよい。このような変異体は、天然のものでも人工のものでもよい。人工的に変異体を調製するための方法は当業者に公知である。例えば、Kunkel法（Kunkel, T. A. et al., Methods Enzymol. 154, 367-382 (1987)）、ダブルプライマー法（Zoller, M. J. and Smith, M., Methods Enzymol. 154, 329-350 (1987)）、カセット変異法（Wells, et al., Gene 34, 315-23 (1985)）、メガプライマー法（Sarkar, G. and Sommer, S. S., Biotechniques 8, 404-407 (1990)）などが知られている。【００３１】
本発明のNAIPタンパク質をコードするDNAは、効率的な発現のために機能的にプロモーターと結合していることが好ましい。これらプロモーターとしては、本来のNAIP遺伝子プロモーターを利用することができるが、これ以外にも、公知の種々のプロモーター、例えばCMVプロモーター等を用いることができる。また、当業者であれば、公知の種々の発現ベクターを用いて、容易に上記タンパク質を発現するベクターを作製することができる。【００３２】
上記ベクターは、遺伝子治療用に使用することも可能である。遺伝子治療とは、機能を有するタンパク質をコードするDNAを含むベクターを患者に投与し、治療または予防することをいう。遺伝子治療に使用することができるベクターには、例えば、アデノウイルスベクターやレトロウイルスベクター等が挙げられるが、これらに特に制限されない。ベクターへの上記タンパク質をコードするDNAの挿入などの一般的な遺伝子操作は、常法に従って行うことができる。
本発明の上記「アップレギュレーター化合物」の好ましい態様としては、上記式（I）で示される化合物を挙げることができる。【００３３】
上記式（I）において、Ｃ１‐６アルキルは直鎖状及び分枝鎖状のアルキルを含み、その具体例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、tert−ブチル、ペンチル、ヘキシルなどが含まれる。【００３４】
Ｃ３-７シクロアルキルの具体例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル、シクロヘプチルが挙げられる。【００３５】
Ｒ３に含まれるフェニル、ピリジル、キノリル、イソキノリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラニル、フリル、ベンゾフリル、ジベンゾフリル、チエニル、ベンゾチエニル、インドリル、インダゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリルまたはＣ３-７シクロアルキルは、Ｙで置換されてもよい。【００３６】
前記Ｙとしては、好ましくはＣ１‐６アルキル、フェニル、フェノキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、−ＯＲ９、−ＳＲ９、−ＳＯ２Ｒ９、−ＳＯＲ９、−ＳＯ２ＮＲ９Ｒ10、−ＮＲ９Ｒ10、−ＮＲ９ＳＯ２Ｒ10、−ＣＯＲ９、−ＣＯ２Ｒ９、−ＣＯＮＲ９Ｒ10などが挙げられる。【００３７】
前記Ｙとしては、さらに好ましくは、Ｃ1‐6アルキル、フェニル、フェノキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、シアノ、−ＯＲ９、−ＳＲ９、−ＳＯ２Ｒ９、−ＮＲ９Ｒ10または−ＮＲ９ＳＯ２Ｒ10が挙げられる。【００３８】
置換基Ｙの数は、１または２以上であってよく、望ましくは１または２である。２以上の場合、それらは同一であっても異なっていてもよい。また、その置換位置はいずれの位置であってもよい。【００３９】
前記Ｒ９およびＲ10は、それぞれ独立して、水素またはＣ１‐６アルキルである。【００４０】
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６またはＹに含まれるハロゲンの具体例としては、弗素、塩素、臭素または沃素が挙げられる。【００４１】
Ｒ４、Ｒ５またはＲ６は前述の通りであるが、さらに好ましくは、水素、Ｃ１-６アルキル、ハロゲン、シアノ、−ＯＲ７、−ＳＯ２Ｒ７、−ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８、−ＮＲ７Ｒ８または−ＮＲ７ＳＯ２Ｒ８である。【００４２】
Ｒ１またはＲ２は前述の通りであるが、さらに好ましくは、水素またはメチル基であり、より好ましくは水素である。【００４３】
前記式（Ｉ）で表される化合物としては、具体的には、たとえば下記の化合物が挙げられる。但し、本発明はこれらに限定されるものではない。【００４４】
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-フルオロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-ブロモフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-ヨードフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-トリフルオロメチルフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-メチルフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-メトキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-クロロ-3-フルオロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(2-フルオロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(2-メトキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(3-メトキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-クロロ-2-フルオロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-クロロ-2-メトキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-クロロ-2-メチルフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-(4-フェニルピペラジン-1-イル)メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(5-トリフルオロメチル-2-ピリジル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(3-クロロ-5-トリフルオロメチル-2-ピリジル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(6-クロロ-4-トリフルオロメチル-2-ピリジル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-2-メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1-メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-エチルフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-エトキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-メタンスルホニルフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(5-クロロ-2-ピリジル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(5-クロロ-2-チエニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(3-イソキノリル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-ジメチルアミノフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(フェノキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(シクロヘキシル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(ベンジルフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(ビフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(ベンジルオキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4,4-ジメチルシクロヘキシル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-メチルチオフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(2-メチルチオフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(4-ブロモフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(4-ヨードフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(4-クロロ-2-フルオロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-4-メチルインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-5-フルオロインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-6-フルオロインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-6-メトキシインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-5-メトキシインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-4-フルオロインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-5-シアノインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-4-メトキシインドール、
5-クロロ-3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-5-メチルインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-5,6-ジメトキシインドール、
3-[4-(5-トリフルオロメチル-2-ピリジル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(3-クロロ-5-トリフルオロメチル-2-ピリジル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(6-クロロ-4-トリフルオロメチル-2-ピリジル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(5-クロロ-2-チエニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-2-メチルインドール、
3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1-メチルインドール、
3-[4-(4-メチルチオフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(2-メチルチオフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール。【００４５】
また、次に挙げる化合物も使用し得る。
3-[4-(4-クロロ-3-メトキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
N-{2-クロロ-5-[4-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-3-イルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}メタンスルホンアミド、
3-[4-(4-クロロ-3-ジメチルアミノフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-クロロ-2,5-ジメトキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
N-{4-[4-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-3-イルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}メタンスルホンアミド、
N-{4-[4-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-3-イルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}エタンスルホンアミド、
N-{3-[4-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-3-イルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}メタンスルホンアミド、
N-{3-[4-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-3-イルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}エタンスルホンアミド、
3-[4-(4-ジエチルアミノフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(3-ジメチルアミノフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-クロロ-3-メトキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
N-{2-クロロ-5-[4-(インドール-3-イルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}メタンスルホンアミド、
3-[4-(4-クロロ-3-ジメチルアミノフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(4-クロロ-2,5-ジメトキシフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
N-{4-[4-(インドール-3-イルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}メタンスルホンアミド、
N-{4-[4-(インドール-3-イルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}エタンスルホンアミド、
N-{3-[4-(インドール-3-イルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}メタンスルホンアミド、
N-{3-[4-(インドール-3-イルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}エタンスルホンアミド、
3-[4-(4-ジエチルアミノフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
3-[4-(3-ジメチルアミノフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
5-ジメチルアミノ-3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
5-メタンスルホニル-3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
N-{3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イルメチル]インドール-5-イル}メタンスルホンアミド、
6-メタンスルホニル-3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
N-{3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イルメチル]インドール-6-イル}メタンスルホンアミド、
6-ジメチルアミノ-3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
6-ヒドロキシ-3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチルインドール、
N-メチル-3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イルメチル]-5-インドールスルホンアミド。【００４６】
本発明はその範囲内に、前記式（I）の化合物のプロドラッグの使用も含む。通常、このようなプロドラッグは、式（I）の化合物にインビボ（in vivo）で容易に転換し得る式（I）の化合物の誘導体である。インビボで容易に転換し得るか否かは通常の酵素試験または動物実験によって決定できる。【００４７】
医薬品として使用する場合、前記式（I）の化合物の塩は好ましくは医薬的に許容可能な塩である。本発明の化合物の適切な医薬的に許容可能な塩には、例えば本発明の化合物の溶液を、医薬的に許容可能な酸（例えば塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、琥珀酸、酢酸、安息香酸、蓚酸、クエン酸、酒石酸、炭酸又はリン酸）の溶液と混合して生成され得る酸付加塩が含まれる。更には、本発明の化合物が酸性部分を有する場合、その適切な医薬的に許容可能な塩には、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩又はカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム塩又はマグネシウム塩）、及び適切な有機リガンドで生成される塩（例えば第四級アンモニウム塩）が含まれ得る。しかしながら、医薬的に許容可能でない塩も本発明で用いる化合物又はその医薬的に許容可能な塩の製造においては有用であり得ることからこれらの塩も本発明の範囲に含まれる。【００４８】
本発明で使用する化合物が少なくとも１個の不斉中心を持つ場合、これらはエナンチオマーとして存在することができる。本発明で使用する化合物が２個の不斉中心を持つ場合、これらはさらにジアステレオマーとして存在することができる。このような全ての異性体及びそれらの混合物は、本発明の範囲内に含まれる。【００４９】
式（I）の化合物は、例えば前記特許文献１（WO94/20497）に記載の方法またはそれに準じた方法により製造することができる。即ち、式（I）の化合物は、式（II）：【００５０】
2006051757.tif 000003
（式中Ｘ、Ｒ２、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は前記定義の通りであり、ＲPは前記Ｒ１に対応するか、または好適な保護基である）で表される化合物と式（III）：【００５１】
2006051757.tif 000004
（式中R３は前記定義の通りである）で表される化合物とを実質的に当モル量のホルムアルデヒドの存在下で反応させ、次いで必要により保護基RPを除去し、続いて必要によりR１を導入するために標準法によりN−アルキル化を実施する段階を含む方法により製造し得る。【００５２】
この反応は、酢酸水溶液中、理想的には緩衝液（例えば、酢酸ナトリウム三水和物）の存在化、望ましくは室温で反応混合物を撹拌することにより実施される。ホルムアルデヒドは、パラホルムアルデヒドの形、または不活性溶媒（例えば、37％ホルムアルデヒド水溶液）中のホルムアルデヒド溶液として使用し得る。【００５３】
保護基ＲPは特に限定されないが、望ましくはアシル基（例えば、アセチル）であり、これは強塩基性条件（例えば、メタノール中のナトリウムメトキシド）の存在下で処理することにより除去し得る。あるいは、保護基ＲPはカルバモイル基、tert−ブトキシカルボニル基（BOC）であってもよく、この場合、保護基は温和な酸性条件下で処理することにより除去し得る。【００５４】
また、前記式（I）の化合物は、式（IV）：【００５５】
2006051757.tif 000005
（式中Ｘ、Ｒ２、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲPは前記定義の通りであり、Ｌは好適な脱離基である）で表される化合物と前記式（III）の化合物とを反応させ、次いで必要により、保護基ＲPを除去し、続いて必要に応じ標準法によりN−アルキル化してＲ１を導入することを含む方法により製造し得る。【００５６】
脱離基Ｌは、望ましくはハロゲン原子（例えば、塩素または臭素）または、ジアルキルアミノ（例えば、ジメチルアミノ）である。Ｌがハロゲン原子である場合、式（IV）の化合物と式（III）の化合物との反応は、好適な溶媒中の塩基性条件下（例えば、N，N−ジメチルホルムアミド中の炭酸カリウム、またはテトラヒドロフランもしくはアセトニトリル中のトリエチルアミン）で反応混合物を撹拌することにより実施する。脱離基Lがジアルキルアミノである場合、反応は不活性溶媒（例えば、トルエン）中、通常、溶媒の還流温度で反応混合物を加熱することにより実施することができる。【００５７】
本発明の治療剤または予防剤は、虚血性心疾患または虚血性心筋症に有効であり、冠動脈疾患、狭心症、心筋梗塞が含まれる。冠動脈疾患としてはアテローム性冠動脈疾患、非アテローム性冠動脈疾患が挙げられ、さらに詳しくは狭心症としては、労作性狭心症、労作時狭心症、安静狭心症、無症候性心筋虚血、無症候性狭心症が挙げられ、心筋梗塞としては、急性心筋梗塞が含まれる。また、本発明の治療剤または予防剤は特にこれらの疾患に伴う虚血・再潅流直後に発生する再灌流障害、例えば、出血性梗塞あるいは再灌流不良現象（no−reflow phenomenon）等の治療または予防に有効である。【００５８】
本発明の治療剤または予防剤は、通常用いられる製剤用担体、賦形剤、またはその他の添加剤を含んでも良い。それらを用いて、錠剤、顆粒剤、散剤、懸濁剤、カプセル剤、シロップ剤等の経口投与剤、または注射剤、座剤、輸液用等張液等の非経口投与剤として本発明の治療剤または予防剤を投与できる。投与形態は患者の状態によっては静脈内投与が望ましく、適当なｐＨの調節により水溶化が可能である。投与量は、投与ル−ト、患者の体重、年齢、症状等により適時調整される。例えば、心筋梗塞発症患者においては、緊急入院直後より、閉塞冠動脈再開通の術前、術中及び術後数時間にわたり、連続的に静脈内に持続注入し、緊急度に応じて頻回の単回投与を組合せることが好ましい。単回投与は、成人１回当り、０.０１〜５００ｍｇ、持続投与は毎分０.０１〜１００ｍｇの割合で投与することが好ましい。【００５９】
錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、トローチのような固型組成物は、微結晶セルロース、アラビアゴム、トラガントゴム、ゼラチン、ポリビニルピロリドンのようなバインダー；澱粉、乳糖、カルボキシメチルセルロースのような賦形剤；アルギン酸、コーンスターチ、カルボキシメチルセルロースのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、軽質無水珪酸、コロイド二酸化ケイ素のような潤滑剤；スクロースのような甘味剤；ペパーミント、サリチル酸メチルのようなフレーバー剤；などを含有できる。シロップ、懸濁液のような液状組成物は、ソルビトール、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、落花生油のような植物油、レシチンのような乳化剤、その他必要があれば、甘味剤、保存剤、着色剤およびフレーバー剤などを含有でき、これらは、乾燥製剤としても提供できる。これらの製剤は、有効成分化合物を１〜９５重量％含むことが望ましい。【００６０】
注射剤としては、たとえば塩の形で通常の注射用水などに溶かしてもよいし、懸濁液またはエマルジョン（医学上許容しうる油又は液体の混合物中）の注射しうる形にすることができる。この場合、抗菌剤のベンジルアルコールなど、抗酸化剤のアスコルビン酸など、医学上許される緩衝液又は浸透圧調節のための試薬を含有してもよい。この注射剤は有効成分化合物を０．１〜８重量％含むことが望ましい。
なお本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
【実施例】
【００６１】
次に本発明の実施例を記載するが、本発明はこれらに限定されるものではない。まず、本発明の治療剤又は予防剤の具体的製剤例を挙げるが、本発明の製剤はこれらに限定されるものではない。【００６２】
〔製剤例１〕（錠剤）
（１）有効成分 ２０ｍｇ （２）乳糖 １５０ｍｇ （３）デンプン ３０ｍｇ （４）ステアリン酸マグネシウム ６ｍｇ。以上（１）〜（４）の成分を１錠として、錠剤に成型する。【００６３】
〔製剤例２〕（散剤・細粒剤・顆粒剤）
（１）有効成分 ２０ｍｇ （２）シュガーエステル（第一工業製薬社製、商品名： ＤＫエステルＦ−１６０） １８０ｍｇ （３）界面活性剤（日光ケミカルズ社製、商品名： デカグリーン１−Ｌ） １５ｍｇ （４）軽質無水珪酸 ２５ｍｇ。前記（１）〜（４）を混合し、散剤、更に造粒により細粒剤或いは顆粒剤とする。又、これらをカプセルに封入し、カプセル剤とすることも可能である。【００６４】
〔製剤例３〕（硬ゼラチンカプセル剤）
（１）有効成分 ２５ｍｇ （２）デンプン ２００ｍｇ （３）ステアリン酸マグネシウム １０ｍｇ。以上（１）〜（３）の成分を、１錠として硬ゼラチンカプセルにつめ、硬ゼラチンカプセル剤とする。【００６５】
〔製剤例４〕（注射剤）
（１）有効成分 １ｍｇ （２）ブドウ糖 １０ｍｇ （３）トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン ２．１６ｍｇ。以上（１）〜（３）の成分を含むトリス緩衝液を凍結乾燥して注射剤とする。【００６６】
〔試験例１〕（ラット心臓虚血再灌流モデルに対する薬効試験）
ラットの心冠動脈を虚血・再灌流処置して作製したモデルに、3-[4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル]メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジンを投与し、病理組織学的に心臓病変の軽減効果を評価した。群構成は以下の4群で構成され、偽手術群（開胸手術まで行った）、非治療群（開胸手術、虚血再灌流を行い治療を行わなかった）、40 mg群および80 mg群（開胸手術、虚血再灌流を行い該化合物を40または80 mg/kg投与した）、各群に5匹ずつラットを配分した。【００６７】
ラット（Crj IGS、9-10週齢、雄、日本チャールス・リバー株式会社）は、ハロセン・笑気麻酔下および人工呼吸器装着の下、開胸にて心臓左冠状動脈下行枝に対して、ポリプロピレン結紮糸（PROLENE M-8806、ETHICON）を用いて、1サイクルで1分の虚血および3分の再灌流を8サイクル繰り返し、閉胸後、60分の後再灌流を施された。供試化合物の投与は、化合物約1 gに対して1N HCl 7-8 mlを添加して蒸留水に溶解し、モデル作製4時間前から6時間前になるように単回経口投与した。評価のための病理組織標本は、後再灌流完了後、エーテル麻酔下で心臓を摘出し、燐酸緩衝中性ホルマリン水溶液で浸漬固定し、常法に従ってヘマトキシリン・エオジン重染色（HE）染色およびTunel染色標本を作製した。【００６８】
病理組織学的検査による評価は、HE標本で病変程度の比較を行い、Tunel標本でTunel陽性細胞（アポトーシス細胞）の出現頻度を観察した。観察では各病変程度およびアポトーシス出現頻度について、「認めず」、「軽微」、「軽度」、「中等度」または「高度」の5段階に分類した。5段階分類は各々0、0.5、1.0、2.0または3.0にスコア化して、病変毎の群平均値を算出して比較した。各群の左心室壁に見られた病変毎の病理組織学的変化のスコアを示す。結果を表１に示す。【００６９】
【表１】
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【００７０】
上記のとおり本発明の化合物は、ラット心臓虚血再灌流モデルにおいて、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の病変について抑制効果を示した。心臓組織における水腫の抑制、充鬱血の抑制、出血の抑制、好中球浸潤の抑制に効果を示した。また、心臓組織に生じる、水腫変性、線維波状化、収縮帯壊死などの心筋変性性変化の程度または発生頻度を軽減した。さらに凝固壊死、類壊死の程度または発生頻度を軽減した。また、心臓組織におけるアポトーシスの程度または発生頻度を軽減した。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明の化合物は虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤として有用である。
【図１】
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【国際調査報告】
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