(57)【要約】  本発明は、病原体感染や好ましくない副作用（たとえば拒絶反応）が起きるおそれの無い生体材料用複合体を提供することを目的とする。本発明は、式（Ｉ）〜（III）［化１］2006098326.tif 000028〔式中、ｍ、ｐ、ｑ、Ｙ、ｎ、Ｚ、ｒ、Ｒ、ａ、ｂおよびｃは本明細書において定義したとおりである。〕で表されるペプチドユニットを含むポリペプチドおよびリン酸カルシウム系化合物を含んでなる生体材料用複合体を提供する。また、本発明の複合体は生体適合性が高く、かつ耐久性および機械的強度が高いので、特に人工骨に適している。さらに、本発明の複合体の製造方法によれば、機械的特性に優れた複合体を簡便な方法によって製造することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）〜（III）
【化１】
2006098326.tif 000017
〔式中、
ｍは１〜１８の整数であり、
ｐおよびｑは互いに独立して０または１であり、
ａは１〜１００００の整数であり、ｂおよびｃはそれぞれ独立して０〜１００００の整数であり、
Ｙは、それぞれ独立して、Ｐｒｏ、Ｈｙｐまたは式
【化２】
2006098326.tif 000018
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基を表し、
ｎは１〜２０の整数を表し、
Ｚは１〜１０個のアミノ酸で構成されるアミノ酸残基またはペプチド鎖を表し、
ｒは１〜２０の整数を表し、
Ｒは炭素数２〜１２の直鎖状または分岐鎖状アルキレン基を表し、
ａとｂとの割合はａ／ｂ＝１００／０〜３０／７０（モル比）であり、
ｐ＝１およびｑ＝０であるときｃ＝ａであり、
ｐ＝０およびｑ＝１であるときｃ＝ｂであり、
ｐ＝１およびｑ＝１であるときｃ＝ａ＋ｂであり、そして
ｐ＝０およびｑ＝０であるときｃ＝０である。〕
で表されるユニットを含むポリマーとしてのポリペプチドと、リン酸カルシウム系化合物を含んでなる生体材料用複合体。
【請求項２】
少なくとも１個のＹが
【化３】
2006098326.tif 000019
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
である、請求項１に記載の生体材料用複合体。
【請求項３】
ＺがＧｌｙ、Ｓａｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、ＴｙｒおよびＩｌｅから選択された１種またはそれ以上のアミノ酸で構成されるアミノ酸残基またはペプチド鎖である請求項１または２に記載の生体材料用複合体。
【請求項４】
ＺがＧｌｙ、Ｓａｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ、Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ、Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＬｅｕおよびＡｒｇ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓから選択されたアミノ酸残基またはペプチド鎖である、請求項３に記載の生体材料用複合体。
【請求項５】
ｐ＝０、ｑ＝０、およびｃ＝０である、請求項１〜４のいずれかに記載の生体材料用複合体。
【請求項６】
Ｙが、それぞれ独立して、Ｈｙｐまたは式
【化４】
2006098326.tif 000020
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の生体材料用複合体。
【請求項７】
ポリペプチドが式（Ｉ'）
【化５】
2006098326.tif 000021
〔式中、
ｓは１０〜２０００００の整数であり、
Ｙは、それぞれ独立して、Ｈｙｐまたは式
【化６】
2006098326.tif 000022
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基を表す。〕
で表されるペプチド単位を含むものである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の生体材料用複合体。
【請求項８】
Ｙが式
【化７】
2006098326.tif 000023
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で表される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の生体材料用複合体。
【請求項９】
Ｘが−ＣＯＮＨＣＨ２−、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＯＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の成体材料用複合体。
【請求項１０】
２つの異なるペプチドユニット中のＹが一体となって、シロキサン結合を形成していてもよい、請求項８または９に記載の生体材料用複合体。
【請求項１１】
リン酸カルシウム系化合物がＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の生体材料用複合体。
【請求項１２】
ポリペプチド：リン酸カルシウム系化合物の重量比が１：９〜９：１である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の生体材料用複合体。
【請求項１３】
式（Ｉ）〜（III）
【化８】
2006098326.tif 000024
〔式中、
ｍは１〜１８の整数であり、
ｐおよびｑは互いに独立して０または１であり、
ａは１〜１００００の整数であり、ｂおよびｃはそれぞれ独立して０〜１００００の整数であり、
Ｙは、それぞれ独立して、式
【化９】
2006098326.tif 000025
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基を表し、
ｎは１〜２０の整数を表し、
Ｚは１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチド鎖を表し、
ｒは１〜２０の整数を表し、
Ｒは炭素数２〜１２の直鎖状または分岐鎖状アルキレン基を表し、
ａとｂとの割合はａ／ｂ＝１００／０〜３０／７０（モル比）であり、
ｐ＝１およびｑ＝０であるときｃ＝ａであり、
ｐ＝０およびｑ＝１であるときｃ＝ｂであり、
ｐ＝１およびｑ＝１であるときｃ＝ａ＋ｂであり、そして
ｐ＝０およびｑ＝０であるときｃ＝０である。〕
で表されるユニットを含むポリマーとしてのポリペプチド。
【請求項１４】
２つの異なるペプチドユニット中のＹが一体となって、シロキサン結合を形成していてもよい、請求項１３に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
式（Ｉ）〜（III）
【化１０】
2006098326.tif 000026
〔式中、
ｍは１〜１８の整数であり、
ｐおよびｑは互いに独立して０または１であり、
ａは１〜１００００の整数であり、ｂおよびｃはそれぞれ独立して０〜１００００の整数であり、
Ｙは、それぞれ独立して、Ｐｒｏ、Ｈｙｐまたは式
【化１１】
2006098326.tif 000027
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基を表し、
ｎは１〜２０の整数を表し、
Ｚは１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチド鎖を表し、
ｒは１〜２０の整数を表し、
Ｒは炭素数２〜１２の直鎖状または分岐鎖状アルキレン基を表し、
ａとｂとの割合はａ／ｂ＝１００／０〜３０／７０（モル比）であり、
ｐ＝１およびｑ＝０であるときｃ＝ａであり、
ｐ＝０およびｑ＝１であるときｃ＝ｂであり、
ｐ＝１およびｑ＝１であるときｃ＝ａ＋ｂであり、そして
ｐ＝０およびｑ＝０であるときｃ＝０である。〕
で表されるユニットを含むポリペプチドを、ＣａＣｌ２水溶液に浸漬し、次いで擬似体液または濃厚擬似体液に浸漬することにより請求項１に記載の生体材料用複合体を得ることを特徴とする、生体材料用複合体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学合成コラーゲンとリン酸カルシウム系化合物を含む生体材料用複合体、およびその製造方法に関する。このような生体材料用複合体は生体と類似した組成を有し、生体と融和する硬組織材料の成形体であり、人工骨等として用いられる。
【背景技術】
【０００２】
従来の無機素材からなる生体内に植入する生体材料は、骨と直接結合することは可能であるが、もろく、弾性率が骨と比べて高すぎるという欠点があった（たとえば非特許文献１〜４参照）。また、有機材料のみを用いた場合は、骨と直接結合せず、さらに強度が弱いうえに周辺組織との癒着が起こり、組織誘導再生法において骨組織などの生体組織の再建が遅れることになっていた。これを解決するものとして、たとえば、特開平７−１０１７０８号公報には、コラーゲン溶液にリン酸を加えた混合溶液を、水酸化カルシウムの懸濁液中へ徐々に加え、生じた沈澱を濾過、乾燥して加圧成形することによって、生物の骨に近似した物性の成形体（無機物であるアパタイトと有機物であるコラーゲンの複合体）を得る技術が提案されている（特許文献１参照）。さらに、この技術で得られる成形体は、軟らかい生体骨と同程度のヤング率を有する複合体であったため、これを改良して、硬い生体骨と同程度のヤング率を有する複合体を得る技術として、特開平１１−１９９２０９号公報に、コラーゲンを含有するリン酸水溶液とカルシウム塩を含有する水溶液とを、反応容器内に同時滴下し、生じた沈澱物を加圧成形することによって、コラーゲンとリン酸カルシウムとの複合体を得る技術が提案されている（特許文献２参照）。【０００３】
これらのコラーゲン／リン酸カルシウム複合体は、生物の骨に近似した物性を有し、骨置換、組織再建能、強度等の生体材料としての特性に優れる一方で、生体内に植入した場合に、経時的に脆くなり、崩壊してしまうという問題があった。これを解決するため、特開２００１−２７６２０７では、コラーゲン／リン酸カルシウム複合体を得る際、加圧成形時または加圧成形後のいずれかの工程において架橋剤を作用させて、得られる複合体を架橋させることによって、充分な強度を保持させつつ、生体内に植入した場合の耐崩壊性を向上させている（特許文献３参照）。【０００４】
一方、ネオら（M. Neo et al）は、生体活性セラミックス（骨と直接結合可能な無機物を意味する。）と骨の間の反応を研究および報告している。これによると、結晶化ガラスＡ−Ｗをラットの脛骨に２週間埋入した場合、当該ガラスと体液の反応によりガラス表面にヒドロキシアパタイト層が形成され、骨（細胞）は当該ガラス−ヒドロキシアパタイト複合体を異物と認識しないことが報告されている（非特許文献４参照）。
【特許文献１】特開平７−１０１７０８号公報
【特許文献２】特開平１１−１９９２０９号公報
【特許文献３】特開２００１−２７６２０７号公報
【特許文献４】特開２００３−３２１５００号公報
【非特許文献１】エル・エル・ヘンチ（L. L. Hench）およびジェイ・ウィルソン（J. Wilson）著、「アン・イントロダクション・トゥ・バイオセラミクス（An Introduction to Bioceramics）」、シンガポール国、ワールド・サイエンティフィック・パブリッシング（World Scientific Publishing Co. Pte. Ltd.）、１９９３年、ｐ．１−２４
【非特許文献２】エル・エル・ヘンチ（L. L. Hench）、アール・ジェイ・スプリンター（R. J. Splinter）、ダブリュー・シー・アレン（W. C. Allen）およびティー・ケー・グリーンリー（T. K. Greenlee）著、「ジャーナル・オブ・バイオメディカル・マテリアルス・リサーチ（Journal of Biomedical Materials Research）、１９７１年、第２巻、ｐ．１１７−１４１、タイトル「ボンディング・メカニズム・アト・ジ・インターフェイス・オブ・セラミクス・プロステティック・マテリアルス（Bonding mechanism at the interface of ceramics prosthetic materials）」
【非特許文献３】エム・ヤルコ（M. Jarcho）、ジェイ・エル・ケイ（J. L. Kay）、アール・エイチ・グーマー（R. H. Gumaer）およびエイチ・ピー・ドロベック（H. P. Drobeck）著、「ジャーナル・オブ・バイオエナジェティクス（Journal of Bioenergetics）」、１９７７年、第１巻、ｐ．７９−９２、タイトル「ティシュー、セルラー・アンド・サブセルラー・イベンツ・アト・ボーン−セラミック・ハイドロキシアパタイト・インターフェイス（Tissue, cellular and subcellular events at bone-ceramic hydroxyapatite interface）」
【非特許文献４】エム・ネオ（M. Neo）、ティー・ナカムラ（T. Nakamura）、シー・オオツキ（C. Ohtsuki）、ティー・コクボ（T. Kokubo）およびティー・ヤマモト（T. Yamamoto）著、「ジャーナル・オブ・バイオメディカル・マテリアルス・リサーチ（Journal of Biomedical Materials Research）」、１９９３年、第２７巻、ｐ．９９９−１００６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、これらの文献で用いられてきたコラーゲンはいずれもウシやブタなどの動物から採取されたものであり、これらのコラーゲンから合成された人工骨をヒト等に用いた場合、病原体感染や好ましくない副作用（たとえば拒絶反応）が起きるおそれがある（たとえば、谷原正夫著、「アミノ酸を利用したコラーゲンの化学合成について」、FRAGRANCE JOURNAL、２００４年７月号参照）。このおそれを克服するためには、動物から採取した天然コラーゲンに代えて化学合成コラーゲンを使用することが考えられるが、そのような化学合成コラーゲンとリン酸カルシウム系化合物からなる複合体で形成された人工骨が実用化されるためには、生物の骨に近似した物性を有し、骨置換、組織再建能、強度等の生体材料として優れた特性を有するかどうか、生体内に植入した場合に経時的に脆くなり、崩壊してしまうという問題が生じないかどうか、生体内において異物として認識され、何らかの不都合が生じることがないかどうかなどを検討する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、鋭意検討を行った結果、特定の化学合成コラーゲンとリン酸カルシウム系化合物から得られる複合体が、人工骨として実用化可能な優れた諸性質を有している事実を見いだし、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、病原体感染や好ましくない副作用のおそれがない生体材料用複合体が提供される。また、天然には存在しない配列の化学合成コラーゲンを合成し、これとリン酸カルシウム系化合物を含む複合体を作成することにより、天然のコラーゲンから得られる複合体とは異なる熱安定性、分解速度および／または細胞接着性を有する複合体が得られる。また、本発明の複合体は生体適合性が高く、かつ耐久性および機械的強度が高いので、特に人工骨に適している。さらに、本発明の複合体の製造方法によれば、機械的特性に優れた複合体を簡便な方法によって製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】浸漬後フィルムをデジタルマイクロスコープで撮影した写真。
【図２】浸漬後フィルムの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）写真。
【図３】浸漬前および浸漬後フィルムの薄膜Ｘ線回折パターンを示す図。
【図４】浸漬前および浸漬後フィルムのエネルギー分散型Ｘ線（ＥＤＸ）分光装置による元素分析結果を示す図。
【図５】浸漬前多孔体の表面のＳＥＭ写真。
【図６】浸漬前多孔体の表面のＥＤＸスペクトル。
【図７】浸漬後多孔体の表面のＳＥＭ写真。
【図８】浸漬後多孔体の表面のＥＤＸスペクトル。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明は、その一つの態様において、
式（Ｉ）〜（III）
【化１】
2006098326.tif 000002
〔式中、
ｍは１〜１８の整数であり、
ｐおよびｑは互いに独立して０または１であり、
ａは１〜１００００の整数であり、ｂおよびｃはそれぞれ独立して１〜１００００の整数であり、
Ｙは、それぞれ独立して、Ｐｒｏ、Ｈｙｐまたは式
【化２】
2006098326.tif 000003
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基を表し、
ｎは１〜２０の整数を表し、
Ｚは１〜１０個のアミノ酸で構成されるアミノ酸残基またはペプチド鎖を表し、
ｒは１〜２０の整数を表し、
Ｒは炭素数２〜１２の直鎖状または分岐鎖状アルキレン基を表し、
ａとｂとの割合はａ／ｂ＝１００／０〜３０／７０（モル比）であり、
ｐ＝１およびｑ＝０であるときｃ＝ａであり、
ｐ＝０およびｑ＝１であるときｃ＝ｂであり、
ｐ＝１およびｑ＝１であるときｃ＝ａ＋ｂであり、そして
ｐ＝０およびｑ＝０であるときｃ＝０である。〕
で表されるユニットを含むポリペプチド（ランダムポリマー）と、リン酸カルシウム系化合物を含んでなる生体材料用複合体（以下、「本発明の複合体」という。）を提供する。上記において、ａは、たとえば、１〜１００００の整数である。ｂは、たとえば、０〜１００００である。ｃは、たとえば、０〜１００００である。【００１０】
本発明の複合体は、好ましくはＺがＧｌｙ、Ｓａｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、ＴｙｒおよびＩｌｅから選択された１種またはそれ以上のアミノ酸で構成されるアミノ酸残基またはペプチド鎖である。【００１１】
本発明の複合体は、好ましくはｐ＝０、ｑ＝０、およびｃ＝０である。【００１２】
さらに好ましくは、上記において、ＺがＧｌｙ、Ｓａｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ、Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ、Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＬｅｕおよびＡｒｇ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓから選択されたアミノ酸残基またはペプチド鎖であるものである。【００１３】
特に好ましい本発明の複合体は、上記において、Ｙが、それぞれ独立して、Ｈｙｐまたは式
【化３】
2006098326.tif 000004
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基であるものである。【００１４】
さらに非常に好ましい本発明の複合体は、式（Ｉ'）
【化４】
2006098326.tif 000005
〔式中、
ｓは１０以上の整数であり、
Ｙは、それぞれ独立して、Ｈｙｐまたは式
【化５】
2006098326.tif 000006
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基を表す。〕
で表されるペプチドユニットを含むポリペプチドと、リン酸カルシウム系化合物を含んでなるものである。上記において、ｓは、たとえば、１０〜２０００００である。【００１５】
上記において、特にＹが式
【化６】
2006098326.tif 000007
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基を表す場合が好ましい。特に好ましくは、上記において、二価基は、−ＣＯＮＨＣ１−６アルキル−または−Ｃ１−６アルキル（ＯＨ）ＣＨ２ＯＣ１−６アルキル−、さらに好ましくは−ＣＯＮＨＣＨ２−、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。【００１６】
なお、本発明の複合体は、上記において、２つの異なるペプチドユニット中のＹが一体となって、シロキサン結合を形成していてもよい。【００１７】
本発明は、他の態様において、式（Ｉ）〜（III）
【化７】
2006098326.tif 000008
〔式中、
ｍは１〜１８の整数であり、
ｐおよびｑは互いに独立して０または１であり、
ａは１〜１００００の整数であり、ｂおよびｃはそれぞれ独立して１〜１００００の整数であり、
Ｙは式
【化８】
2006098326.tif 000009
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基を表し、
ｎは１〜２０の整数を表し、
Ｚは１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチド鎖を表し、
ｒは１〜２０の整数を表し、
Ｒは炭素数２〜１２の直鎖状または分岐鎖状アルキレン基を表し、
ａとｂとの割合はａ／ｂ＝１００／０〜３０／７０（モル比）であり、
ｐ＝１およびｑ＝０であるときｃ＝ａであり、
ｐ＝０およびｑ＝１であるときｃ＝ｂであり、
ｐ＝１およびｑ＝１であるときｃ＝ａ＋ｂであり、そして
ｐ＝０およびｑ＝０であるときｃ＝０である。〕
で表されるユニットを含むポリペプチドを提供する。当該ポリペプチドの円二色性スペクトルを１０〜８０℃の範囲の温度で測定すると、２２０〜２３０ｎｍに正のコットン効果、１９５〜２０５ｎｍに負のコットン効果が観察され、３重らせん構造を形成していることが確認される。すなわちこれは、３本の当該ポリペプチドがその全体または一部において、コラーゲン様繊維を形成していることを意味する。【００１８】
上記ポリペプチドは、２つの異なるペプチドユニット中のＹが一体となって、シロキサン結合（−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉ−）を形成することができる。シロキサン結合により架橋されたポリペプチドも３重らせん構造を形成していると考えられる。【００１９】
本明細書において、「リン酸カルシウム系化合物」は、ＣａおよびＰＯ４を含む化合物、たとえばＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２、ＣａＨＰＯ４、ＣａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、α−Ｃａ３（ＰＯ４）２、β−Ｃａ３（ＰＯ４）２、Ｃａ５（ＰＯ４）３ＯＨ、Ｃａ４Ｏ（ＰＯ４）２、Ｃａ１０（ＰＯ４）（ＯＨ）２、Ｃａ（ＰＯ３）２、Ｃａ２Ｐ２Ｏ７、Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２、Ｃａ２Ｐ２Ｏ７、Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２・Ｈ２Ｏ、Ｃａ８Ｈ２（ＰＯ４）６・５Ｈ２Ｏである。生体親和性の観点から、リン酸カルシウム系化合物は、好ましくはヒドロキシアパタイト、すなわちＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２であるが、該リン酸カルシウム系化合物は、格子欠陥を有し得る。ここで、格子欠陥とは、Ｃａ、ＰＯ４および／またはＯＨの一部が脱落、置換等していることを意味し、カルシウムが置換され得る化学種として、Ｎａ、Ｋ、Ｍｇなど、ＰＯ４が置換され得る化学種として、ＨＣＯ３、ＣＯ３、ＨＰＯ４など、ＯＨが置換され得る化学種としてＣｌ、ＨＣＯ３、ＣＯ３などが挙げられる。【００２０】
本発明は、さらに他の態様において、式（Ｉ）〜（III）
【化９】
2006098326.tif 000010
〔式中、
ｍは１〜１８の整数であり、
ｐおよびｑは互いに独立して０または１であり、
ａは１〜１００００の整数であり、ｂおよびｃはそれぞれ独立して１〜１００００の整数であり、
Ｙは、それぞれ独立して、Ｐｒｏ、Ｈｙｐまたは式
【化１０】
2006098326.tif 000011
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基を表し、
ｎは１〜２０の整数を表し、
Ｚは１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチド鎖を表し、
ｒは１〜２０の整数を表し、
Ｒは炭素数２〜１２の直鎖状または分岐鎖状アルキレン基を表し、
ａとｂとの割合はａ／ｂ＝１００／０〜３０／７０（モル比）であり、
ｐ＝１およびｑ＝０であるときｃ＝ａであり、
ｐ＝０およびｑ＝１であるときｃ＝ｂであり、
ｐ＝１およびｑ＝１であるときｃ＝ａ＋ｂであり、そして
ｐ＝０およびｑ＝０であるときｃ＝０である。〕
で表されるユニットを含むポリペプチドを、ＣａＣｌ２水溶液、好ましくは０．００１〜５．０Ｍ ＣａＣｌ２水溶液、たとえば１．０Ｍ ＣａＣｌ２水溶液に浸漬し、次いで擬似体液（ＳＢＦ）または濃厚擬似体液に浸漬することによりポリペプチドの表面にリン酸カルシウム系化合物を析出させて、本発明の生体材料用複合体を得ることを特徴とする、本発明の複合体の製造方法を提供する。【００２１】
本明細書において、「擬似体液（simulated body fluid; SBF）」は、以下のモル濃度のイオンを含む溶液を意味する（表１）。かかる擬似体液中のイオン濃度は、ヒトの血漿中のこれらのイオンの濃度とほぼ同じである。ただし、ヒトの血漿は、塩化物イオン（Ｃｌ−）濃度が１０３．０ｍＭであり、そして重炭酸イオン（ＨＣＯ３−）濃度が２７．０ｍＭである点で擬似体液と異なる。合成コラーゲンの表面上でのリン酸カルシウム系化合物の析出を促進するために、前記表１の各イオンの相対比率を維持したまま、各イオンの濃度を１．１〜５．０倍、たとえば１．５倍に高めた溶液（濃厚擬似体液）を使用することもできる。本明細書において、擬似体液の各イオンの濃度を１．５倍に高めた溶液を「１．５ＳＢＦ」と表す。
【表１】
2006098326.tif 000012
【００２２】
上記の複合体の製造方法において、ＣａＣｌ２水溶液に浸漬する場合の温度は、化学合成コラーゲンが変性しない温度であれば特に限定されないが、好ましくは１０〜８０℃、さらに好ましくは２０〜４０℃である。本発明において使用される化学合成ポリペプチドは３重らせん構造を形成しているが、この構造は１０〜８０℃において安定であることが円二色性スペクトルの測定により確認される。また、ＳＢＦ等に浸漬する場合の温度も、特に限定されるわけではないが、好ましくは１０〜８０℃、さらに好ましくは２０〜４０℃である。ＳＢＦ等に浸漬する時間が長いほど、および濃厚擬似体液の濃度が高いほど、析出するリン酸カルシウム系化合物の量は多くなる。さらに、ＳＢＦ等に長時間浸漬した後に、新たなＳＢＦに交換しても析出するリン酸カルシウム系化合物の量は多くなる。所望により、上記のようにして得られた複合体を凍結乾燥などにより多孔体とすることも可能である。【００２３】
上記の複合体の製造方法において、擬似体液または濃厚擬似体液の代わりに、たとえば以下の組成を有する溶液１〜３のいずれかを用いることもできる（表２）。また、擬似体液もしくは濃厚擬似体液、またはこれらの代わりに使用される溶液のｐＨは、ｐＨ５〜９の範囲であり、好ましくはｐＨ７．２〜７．５の範囲である。
【表２】
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【００２４】
本明細書において、「化学合成コラーゲン」とは、化学的に合成されたポリペプチドであって、式（Ｉ）〜（III）
【化１１】
2006098326.tif 000014
〔式中、
ｍは１〜１８の整数であり、
ｐおよびｑは互いに独立して０または１であり、
Ｙは、それぞれ独立して、Ｐｒｏ、Ｈｙｐまたは式
【化１２】
2006098326.tif 000015
［式中、
Ｒ'は水素もしくはＣ１−６アルキルであり、そして
Ｘは二価基である。］
で示される基を表し、
ｎは１〜２０の整数を表し、
Ｚは１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチド鎖を表し、
ｒは１〜２０の整数を表し、
Ｒは直鎖状または分岐鎖状アルキレン基を表し、
ａとｂとの割合はａ／ｂ＝１００／０〜３０／７０（モル比）であり、
ｐ＝１およびｑ＝０であるときｃ＝ａであり、
ｐ＝０およびｑ＝１であるときｃ＝ｂであり、
ｐ＝１およびｑ＝１であるときｃ＝ａ＋ｂであり、そして
ｐ＝０およびｑ＝０であるときｃ＝０である。〕
で表されるペプチドユニットを含むポリペプチドを意味する。ＹがＰｒｏまたはＨｙｐである化学合成コラーゲンの詳細については、特開２００３−３２１５００に記載されている。【００２５】
簡単に記載すると、本明細書に記載の「化学合成コラーゲン」は、
（ｉ）式（Ｉ）〜（III）
【化１３】
2006098326.tif 000016
〔式中、
ｍは１〜１８の整数であり、
ｐおよびｑは互いに独立して０または１であり、
Ｙは、それぞれ独立して、ＰｒｏまたはＨｙｐを表し、
ｎは１〜２０の整数を表し、
Ｚは１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチド鎖を表し、
ｒは１〜２０の整数を表し、
Ｒは直鎖状または分岐鎖状アルキレン基を表し、
ａとｂとの割合はａ／ｂ＝１００／０〜３０／７０（モル比）であり、
ｐ＝１およびｑ＝０であるときｃ＝ａであり、
ｐ＝０およびｑ＝１であるときｃ＝ｂであり、
ｐ＝１およびｑ＝１であるときｃ＝ａ＋ｂであり、そして
ｐ＝０およびｑ＝０であるときｃ＝０である。〕
で表されるペプチドユニットを含むポリペプチドを、通常、溶媒（水および／または有機溶媒）中、脱水縮合剤（たとえば、ジイソプロピルカルボジイミド(DIPC)、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド(EDC=WSCI)、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩(WSCI・HCl)、ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)のようなカルボジイミド系縮合剤、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、ベンゾトリアゾール−１−イル−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩(BOP)のようなフルオロホスフェート系縮合剤、ジフェニルホスホリルアジド等）の存在下で、所望によりさらに縮合助剤（または脱水助剤）（たとえば、Ｎ−ヒドロキシ多価カルボン酸イミド類、Ｎ−ヒドロキシトリアゾール類（たとえば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール等のＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール類等）、トリアジン類、２−ヒドロキシイミノ−２−シアノ酢酸エチルエステル等）の存在下で、式（I）〜（III）のペプチドユニットを縮合させる工程；そして所望により
（ｉｉ）末端にＳｉ(ＯＲ’)３（式中、Ｒ’は上記定義のとおり）を有するシランカップリング剤（たとえば、イソシアナートプロピルトリエトキシシランやグリシドキシプロピルトリメトキシシラン等）を含む有機溶媒（好ましくはシランカップリング剤とも化学合成コラーゲンとも反応しない有機溶媒、たとえばトルエン、ＴＨＦ等）中に、上記縮合したペプチドユニットを浸漬し、次いで加水分解を行う工程
により製造され得る。【００２６】
本明細書において、「Ｃ１−６アルキル」は、１から６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖であり、たとえばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルが挙げられる。【００２７】
本明細書において、Ｓｉ含量は様々な要因、たとえば、これに限るものではないが、リン酸カルシウム系化合物との複合化量、複合体の生体内での分解速度、生体材料の用途および形状、ならびに人工コラーゲンに対する反応率等に依存して、人工コラーゲンの−ＯＨ基に対して０〜１００％、好ましくは５〜８０％、さらに好ましくは１０〜５０％の範囲で変化し得る。【００２８】
本発明の生体材料用複合体は、特に、生体親和性または生体適合性に優れているために、たとえば、人工骨、人工歯根、骨修復剤、骨充填剤、顎骨再建基材および人工関節固定化材などの生体埋植材料として利用できる。本発明の複合体は、顆粒の形態またはバルクの形態で使用され得る。本発明の複合体を顆粒の形態で使用する場合、その粒径の範囲は、約０．１〜約１０ｍｍが好適である。本発明の複合体をバルクの形態で使用する場合、適用部分の大きさとほぼ同じ大きさのバルクが好適である。【００２９】
本発明の生体材料用複合体を人工骨として使用するとき、ポリペプチド：リン酸カルシウム系化合物の重量比が１：９〜９：１、好ましくは２：８〜８：２である生体材料用複合体が好ましい。生体骨は約３０重量％コラーゲンと約７０重量％アパタイトからできているため、生体骨に類似の力学強度を有するように人工骨を製造するとき、ポリペプチド：リン酸カルシウム系化合物の重量比がおよそ３：７である生体材料用複合体が好ましい。また、骨細胞への接着性を有するように人工骨を製造するとき、リン酸カルシウム系化合物の重量％が約１〜９０重量％、好ましくは約１０〜９０重量％、さらに好ましくは２５〜７５重量％である生体材料用複合体が望ましい。【００３０】
本発明の複合体が生体内に埋入された後、当該複合体の表面に新生骨が生長し、そして骨化する。本発明の複合体はリン酸カルシウム系化合物の層を有し、骨に異物として認識されないので、骨と接着しやすく、生体材料、たとえば人工骨として有利である。【００３１】
別の態様において、本発明の複合体は、たとえば１種以上の生理学的または薬理学的に許容される活性成分、担体および／または添加剤等を含んでいてもよい。該活性成分の例として、たとえばこれに限るものではないが、殺菌剤または消毒剤、抗炎症剤、消炎・鎮痛剤、鎮痒剤、抗潰瘍剤、抗アレルギー剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗生物質、皮膚軟化剤、褥瘡・皮膚治療剤、ビタミン剤、漢方薬等が含まれる。また、活性成分として、１種以上の止血成分（血液凝固因子により止血するためのフィブリン等）、または細胞増殖促進作用、血管新生作用および／または細胞接着性作用を有するポリペプチドまたはその塩等を含んでいてもよい。【００３２】
さらに必要により、酸成分（例えば、酢酸、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸など）、塩基成分（アンモニア、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどの無機塩基、トリエチルアミン、エタノールアミン、トリエタノールアミンなどの有機塩基）を含んでいてもよい。【００３３】
また、生体材料または医用材料は、前記ポリペプチド（またはポリペプチドを含む組成物）と有機または無機基材との複合材料であってもよい。基材は、通常、生体親和性、生体適合性を有している場合が多い。【００３４】
無機基材としては、シリカ、ジルコニア、チタニアなどの金属酸化物、ヒドロキシアパタイトなどのリン酸カルシウム、アルミニウム、ステンレススチール、チタンまたはチタン合金などの金属、セラミックスなどが例示できる。【００３５】
有機基材としては、例えば、多糖類またはその誘導体（アルギン酸塩、キチン、キトサン、ヒアルロン酸、ポリガラクトサミン、カードラン、プルラン、キサンタン、デキストランなどの多糖類、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはその塩、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロースエーテル類、セルロースアセテートなどのセルロースエステル類など）、タンパク質（ゼラチン、カゼイン、アルブミンなど）、ポリペプチド（ポリリジン、ポリグルタミン、ポリグルタミン酸など）、ビニルアルコール系樹脂（ポリビニルアルコール系樹脂、エチレン−ビニルアルコール共重合体など）、ポリビニルピロリドン系樹脂、アクリル系樹脂（ポリ（メタ）アクリル酸、（メタ）アクリル酸共重合体などの（メタ）アクリル酸系樹脂など）、ハロゲン含有樹脂（ポリテトラフルオロエチレンなどのフッ素系樹脂、ポリ塩化ビニルなどの塩化ビニル系樹脂など）、ポリウレタン系樹脂、シリコーン系樹脂、ポリエステル系樹脂、ポリアミド系樹脂（ナイロン６，ナイロン６６など）などが挙げられる。【００３６】
基材は非生体内分解性または生体内崩壊性であってもよいが、生体材料として利用する場合、生体内で分解吸収性を有するのが有利である。このような生体内分解性基材は生体内分解性樹脂で構成できる。生体内分解性樹脂としては、種々の樹脂、例えば、前記多糖類またはその誘導体、ポリエステル（グリコール酸、乳酸、３−ヒドロキシ酪酸、４−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシプロピオン酸などのヒドロキシカルボン酸の単独または共重合体（乳酸−グリコール酸コポリエステルなど）、ヒドロキシカルボン酸、プロピオン酸、ラクトン等（ブチロラクトン、カプロラクトンなど）とのコポリエステルなど）が挙げられる。【００３７】
これらの基材用材料は単独でまたは二種以上組み合わせて使用でき、二種以上の材料を用いた複合基材であってもよい。【００３８】
このような基材の少なくとも表面に前記ポリペプチドを適用することにより、本発明の生体材料を調製できる。前記ポリペプチドは、基材のうち生体に対する適用部位（体組織に限らず体液や血液と接触する部位）に適用すればよく、粉粒状や一次元的形状の基材では、基材全体に適用してもよく、二次元的形状の基材では少なくとも一方の面に適用してもよく、三次元的形状の基材では、生体に対する適用部位（全面、内面、外面など）に適用すればよい。例えば、前記ポリペプチドの溶液または懸濁液を、基材の表面に塗布または散布（または含浸）した後、乾燥することにより、基材の表面がポリペプチドで被覆された生体材料を得ることができる。また、多孔質基材にポリペプチドの溶液または懸濁液を含浸させ、ポリペプチドを保持した生体材料を調製してもよい。【００３９】
さらに、ポリペプチドと架橋剤とを含む組成物を用いることにより、基材に担持されたポリペプチドは、必要により、架橋剤（特に、グリオキザール、グルタルアルデヒド、スクシンアルデヒド、マレアルデヒドなどのジアルデヒド類、デキストランジアルデヒド、アルデヒドデンプンなどの生理学的に許容可能な架橋剤）により架橋していてもよい。架橋剤の割合は、前記と同様、ポリペプチド１００重量部に対して１〜２０重量部、好ましくは１〜１０重量部程度であってもよい。【００４０】
基材に対するポリペプチドの適用量は、生体材料の形態により大きく異なり一概に特定できないが、通常、基材１００重量部に対して、約０．１〜５００重量部（例えば、１〜３００重量部）、好ましくは約５〜２００重量部（例えば、１０〜１００重量部）程度であってもよい。【００４１】
本発明の複合体は、そのまま目的とする用途に用いてもよいが、特に、医療用途等に用いる場合には、殺菌または滅菌処理に付してから用いることが好ましい。殺菌または滅菌処理法としては、湿熱蒸気滅菌法、ガンマ線滅菌法、エチレンオキサイドガス滅菌法、薬剤殺菌法および紫外線殺菌法等が例示されるが、湿熱蒸気滅菌法、ガンマ線滅菌法およびエチレンオキサイドガス滅菌法は、滅菌効率が高く、しかも該複合体に与える影響が少ないので好ましい。【００４２】
本発明の複合体は、人工骨材料として適している。特に、気孔率が０〜５０％の複合体は、緻密質で、高強度の骨の欠陥を補填するための材料として適している。一方、気孔率が５０〜９９％の複合体は、軽荷重のかかる骨を補填するための材料として適している。これらの複合体は、角柱状、円柱状、ブロック状など任意の形状に成形して使用される。また、この人工骨と、人骨とをボルト−ナットなどによって接合するために、貫通孔を形成してもよい。さらに、これらの材料において、細胞の進入を促進するために、促進剤（たとえば、骨形成タンパク質、骨形成ペプチドなど）を含浸しておくこともできる。【００４３】
また好ましい態様において、本発明の複合体は、操作性に極めて優れた生体材料、たとえば人工骨を提供する。好ましい態様において、本発明の複合体は、リン酸カルシウム系化合物がコラーゲン表面に析出する前のコラーゲンと比較するとやや硬化しているものの、コラーゲンが有する易変形性は十分に維持される。たとえば、ピンセットで該複合体を挟持したとき該複合体は崩壊せず、かつ、力を加えると崩壊することなく変形した。さらに、かかる複合体に力を加えて変形させたとき、析出したリン酸カルシウム系化合物は剥離しなかった。このような力学的特性から、本発明の複合体を含む生体材料は、たとえば人工骨として使用するとき、骨欠損部の形状に応じて自由に変形させて使用することができる。さらに、得られた材料はハサミ等を使用することで容易に切断され得、したがって、たとえば手術時に、容易に成形することができる。これは、従来のセラミックスの緻密体を含んでなる人工骨が非常に硬く、手術時において該材料を形成すること、または欠損部位の形状に合わせて変形させることが容易でないという技術的な課題を解決し得る、顕著な効果である。【００４４】
本明細書において、各種アミノ酸残基を次の略号で記述する。
Ａｌａ：Ｌ−アラニン残基
Ａｒｇ：Ｌ−アルギニン残基
Ａｓｎ：Ｌ−アスパラギン残基
Ａｓｐ：Ｌ−アスパラギン酸残基
Ｃｙｓ：Ｌ−システイン残基
Ｇｌｎ：Ｌ−グルタミン残基
Ｇｌｕ：Ｌ−グルタミン酸残基
Ｇｌｙ：グリシン残基
Ｈｉｓ：Ｌ−ヒスチジン残基
Ｈｙｐ：Ｌ−ヒドロキシプロリン残基
Ｉｌｅ：Ｌ−イソロイシン残基
Ｌｅｕ：Ｌ−ロイシン残基
Ｌｙｓ：Ｌ−リジン残基
Ｍｅｔ：Ｌ−メチオニン残基
Ｐｈｅ：Ｌ−フェニルアラニン残基
Ｐｒｏ：Ｌ−プロリン残基
Ｓａｒ：サルコシン残基
Ｓｅｒ：Ｌ−セリン残基
Ｔｈｒ：Ｌ−トレオニン残基
Ｔｒｐ：Ｌ−トリプトファン残基
Ｔｙｒ：Ｌ−チロシン残基
Ｖａｌ：Ｌ−バリン残基
また、本明細書においては、常法に従って、Ｎ末端のアミノ酸残基を左側に位置させ、Ｃ末端のアミノ酸残基を右側に位置させて、ペプチド鎖のアミノ酸配列を記述する。
【実施例】
【００４５】
以下に実施例によりさらに詳細に本発明を説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。【００４６】
〔実施例１〕
ポリペプチドの合成
Ｈ−（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）１０−ＯＨ、ジメチルスルホキシド、ジイソプロピルエチルアミン、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ）を用いて、特開２００３−３２１５００の実施例１と同様にポリペプチドを合成した。具体的には、Ｈ−（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）１０−ＯＨで示されるペプチド５ｍｇを２ｍＬのジメチルスルホキシドに懸濁し、２０℃で撹拌した。この混合液に、ジイソプロピルエチルアミンを０．９０ｍＭ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを０．９８ｍＭ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ）を１．８０ｍＭとなるように添加し、さらに２０℃で４８時間撹拌を続けて、当該ポリペプチドを製造した。得られたポリペプチドの分子量は約２．０ｋＤａ以上であった。分子量はアマシャム・バイオサイエンス製のGel Filtration LMW Calibration KitおよびGel Filtration HMW Calibration Kitを標準物質として使用し、算出した。【００４７】
〔実施例２〕
複合体の作成
実施例１で得られたポリペプチドの水溶液を、ポリスチレン製のペトリディッシュ上に１５０μＬとり、これを室温で２４時間風乾し、化学合成コラーゲンのフィルムを作成した（以下「浸漬前フィルム」という）。これに、１ｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）水溶液５ｍＬを添加し、３６．５℃で２４時間保持した。塩化カルシウム水溶液を除去し、２ｍＬの超純水で３回洗浄した後、１０ｍＬの１．５ＳＢＦ（ｐＨ＝７．４０）に７日間浸漬して、アパタイトを当該フィルム表面に析出させた。次いで、１．５ＳＢＦを除去し、風乾すると所望の複合体のフィルムを得た（以下「浸漬後フィルム」という）。当該浸漬後フィルムを、デジタルマイクロスコープＶＨＸ−１００（株式会社キーエンス製、ＶＨ−Ｚ４５０高倍率ズームレンズ使用）で撮影した写真を図１に示す。また、浸漬後フィルムを走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）（Ｓ−３５００Ｎ、日立製作所製）で撮影した写真を図２に示す。【００４８】
浸漬前および浸漬後フィルムについて、薄膜Ｘ線回折パターン（ＲＩＮＴ２２００Ｖ／ＰＣ−ＬＲ、リガク製、Ｘ線発生源：Ｃｕ、エネルギー：４０ｋＶ／３０ｍＡ、Ｘ線入射角１°）を調べた。結果を図３に示す。また、浸漬前および浸漬後フィルムについて、エネルギー分散型Ｘ線（ＥＤＸ）分光装置（ＥＭＡＸ ＥＮＥＲＧＹ ＥＸ−４００、堀場製作所製）により分析した。結果を図４に示す。図１、図２、図３および図４から、化学合成コラーゲン−ヒドロキシアパタイト複合体が生成していることが分かる。【００４９】
〔実施例３〕
シラノール基を有する複合体の合成
実施例２の浸漬前フィルムを凍結乾燥に付し、次いで１ｍＬの１０ｖｏｌ％イソシアナートプロピルトリエトキシシラン（ＩＰＴＳ）のＴＨＦ溶液に浸漬し、３６．５℃で２４時間保持した。ＴＨＦで洗浄した後、２４時間風乾し、多孔体を得た（以下、「浸漬前多孔体」という）。浸漬前多孔体の表面のＳＥＭ写真およびＥＤＸスペクトルを、それぞれ図５および図６に示す。次いで、浸漬前多孔体に、０．１ｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）水溶液１ｍＬを添加し、３６．５℃にて２４時間保持した。塩化カルシウム水溶液を除去した後、超純水で洗浄し、１ｍＬの１．５ＳＢＦ（ｐＨ＝７．２５）に７日間浸漬して、アパタイトを当該フィルム表面に析出させた。次いで、１．５ＳＢＦを除去し、風乾すると所望の生成物（以下、浸漬後多孔体という）を得た。浸漬後多孔体の表面のＳＥＭ写真およびＥＤＸスペクトルを、それぞれ図７および図８に示す。図７および図８から、化学合成コラーゲン−ヒドロキシアパタイト複合体が生成していることが分かる。また、図２と図７を比較することにより、シラノール基を導入した化学合成コラーゲンの方により多くのヒドロキシアパタイトが析出していることが分かる。
【図３】
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【図４】
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【図６】
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【図８】
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【図１】
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【図２】
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【図５】
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【図７】
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【国際調査報告】
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2006098326.tif 000038
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