(57)【要約】  脂肪組織由来の組織幹細胞を含む細胞を分化誘導し特定の細胞とさせ、その特定の細胞の特性を測定することにより、医薬品のスクリーニング方法、食品のスクリーニング方法等へ応用することが可能となる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪組織から単離した組織幹細胞を含む細胞を分化誘導し特定の細胞とさせ、その特定の細胞の特性を測定することを特徴とする疾病予測方法。
【請求項２】
脂肪組織が幼弱時のものである、請求項１記載の疾病予測方法。
【請求項３】
特定の細胞が成熟脂肪細胞を含む、請求項１、２いずれか１項記載の疾病予測方法。
【請求項４】
成熟脂肪細胞の特性が脂肪滴の貯留量、脂肪滴の分解能、糖代謝能、及び特定の蛋白質の分泌量のいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものである、請求項３記載の疾病予測方法。
【請求項５】
特定の蛋白質がレプチン、アディポネクチン、ＴＮＦ−α、ＶＥＧＦ、ＨＧＦのいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものである、請求項４記載の疾病予測方法。
【請求項６】
成熟脂肪細胞の特性がβ３アドレナリン受容体、ＰＰＡＲγ、アディポネクチン脂肪組織発現遺伝子群の発現プロファイル変化を包括的に解析したものである、請求項３記載の疾病予測方法。
【請求項７】
予測する疾病が生活習慣病、肥満、高脂血症、糖尿病、及び動脈硬化のいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものである、請求項１〜６いずれか１項記載の疾病予測方法。
【請求項８】
特定の細胞が骨細胞、軟骨細胞、神経細胞、筋肉細胞、血管内皮細胞である、請求項１、２いずれか１項記載の疾病予測方法。
【請求項９】
特定の細胞の特性が骨代謝、軟骨機能、神経機能、及び筋機能のいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものである、請求項８記載の疾病予測方法。
【請求項１０】
予測する疾病が骨疾患、軟骨疾患、神経疾患、筋疾患、及び糖尿病合併症のいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものである、請求項１、８、及び９いずれか１項記載の疾病予測方法。
【請求項１１】
脂肪組織がヒト由来のものである、請求項１〜１０いずれか１項記載の疾病予測方法。
【請求項１２】
脂肪組織が疾病を予測される被験者自身のものである、請求項１〜１１記載の疾病予測方法。
【請求項１３】
単離が酵素処理によるものである、請求項１〜１２記載の疾病予測方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３の疾病予測方法に従う疾病予測システム。
【請求項１５】
請求項１〜１３の疾病予測方法に従って多くの個体から得られた結果をデータベース化したものを利用する疾病予測システム。
【請求項１６】
請求項１４、１５のいずれか一つ、もしくは双方からなる予測システムを利用した医薬品のスクリーニング方法。
【請求項１７】
医薬品が抗肥満薬、抗糖尿病薬、抗動脈硬化薬、骨粗鬆症治療薬、及び糖尿病合併症治療薬のいずれか一つである、請求項１６記載の医薬品のスクリーニング方法。
【請求項１８】
請求項１４、１５のいずれか１項に記載された予測システムを利用した食品、及び食品成分のスクリーニング方法。
【請求項１９】
請求項１４、１５のいずれか１項に記載された予測システムを利用した治療方法。
【請求項２０】
治療方法が患者のそれぞれの疾病に合わせたものである、請求項１９の治療方法。
【請求項２１】
脂肪組織由来の組織幹細胞を含む細胞を分化誘導し特定の細胞とさせ、その特定の細胞の特性を測定することを特徴とする細胞特性の測定方法。
【請求項２２】
脂肪組織が幼弱時のものである、請求項２１記載の測定方法。
【請求項２３】
特定の細胞が成熟脂肪細胞を含む、請求項２１、２２いずれか１項記載の測定方法。
【請求項２４】
成熟脂肪細胞の特性が脂肪滴の貯留量、脂肪滴の分解能、糖代謝能、及び特定の蛋白質の分泌量のいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものである、請求項２３記載の測定方法。
【請求項２５】
特定の蛋白質がレプチン、アディポネクチン、ＴＮＦ−α、ＶＥＧＦ、ＨＧＦのいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものである、請求項２４記載の測定方法。
【請求項２６】
成熟脂肪細胞の特性がβ３アドレナリン受容体、ＰＰＡＲγ、アディポネクチン脂肪組織発現遺伝子群の発現プロファイル変化を包括的に解析したものである、請求項２３記載の測定方法。
【請求項２７】
特定の細胞が骨細胞、軟骨細胞、神経細胞、筋肉細胞、血管内皮細胞である、請求項２１、２２いずれか１項記載の測定方法。
【請求項２８】
特定の細胞の特性が骨代謝、軟骨機能、神経機能、及び筋機能のいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものである、請求項２７記載の測定方法。
【請求項２９】
脂肪組織がヒト由来のものである、請求項２１〜２８のいずれか１項記載の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学、医学等の分野における培養細胞を用いた疾病予測方法、並びに培養細胞の特性を測定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
わが国で生活習慣病と呼ばれている、高脂血症、糖尿病、高血圧はそれぞれ非常に頻度が高いため、偶然同一個人に合併することもあり得るが、個々人に別々に発症するよりもお互いに重なり合って、肥満に伴って発症することの多い疾患群であることが明らかにされている。そこでこうした一連の症候群をＷＨＯは「メタボリックシンドローム（代謝異常症候群）」と提唱し、世界的に診断および治療に当たるようになってきた（前田和久：内分泌・糖尿病内科  Ｍａｒ．２００４（Ｖｏｌ１８  Ｎｏ．３）ｐ２３４−２４０）。【０００３】
近年過栄養や運動不足といった環境因子の変化により肥満が増加してきている。欧米諸国に劣らず、わが国においても特に男性肥満者の増加は著しい。最もメタボリックシンドローム易発症群と考えられており、その合併症である動脈硬化性疾患のターゲットにもなる、60歳代男性の肥満者（ＢＭＩ＞２５）が、平成に入ってからの最初の１０年間だけで、２倍近くにも膨れ上がっている。【０００４】
世界的には肥満の増加に伴って特に糖尿病の頻度が増え続けており、他のアジア諸国同様、日本でも重要な危険因子と再認識できる。ヨーロッパ諸国よりむしろ高いぐらいである。しかし、注目すべきはいわゆるＢＭＩ３０を超える肥満の頻度（１１％）は、他諸国に比べてきわめて低いことである。あまり極端な体重の増加がなくても糖尿病を来たし易いのが日本人の持つメタボリックシンドロームの大きな民俗学的特徴とも言える。大体、ＢＭＩ２５以上の肥満者の頻度（３２％）が他諸国のＢＭＩ３０以上に相当する数になる（前田和久  中村正：日本医師会雑誌  １３０巻  第一号（平成１５年７月1日）ｐ３１−ｐ３６）。【０００５】
従って、糖尿病をはじめとする肥満に伴う症候群メタボリックシンドロームの発症予測は、著明な肥満者の多い欧米諸国に比べて日本人の場合極めて困難であるともいえる。つまり個人の疾患予測、あるいは治療薬の効果予測を予め行いうるいわゆるテーラーメード治療、あるいはオーダーメード治療の持つ意義は特に我が国においては非常に大きいと考えられる。【０００６】
そうした中、ポストゲノム研究の中で最も期待されるものの一つが、生活習慣病を中心とした多因子遺伝病の遺伝因子の解明である。その本体は遺伝子異常というより、スニプス（ｓｉｎｇｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ、ＳＮＰ）と呼ばれるゲノムの個人差だといわれている。その研究方法としては、古典的な候補遺伝子アプローチがこれまで主であったが、最近は、より広いジャンルの候補遺伝子を試み、羅患同胞対法および候補領域アプローチ、さらにホールゲノム相関解析などのような解析方法がとられている（前田和久、船橋徹、松沢佑次：細胞  Ｖｏｌ．３５  Ｎｏ．７，２００３  ｐ２５８−２６１）。【０００７】
これまで２型糖尿病関連病体について何らかの相関が報告されたスニプスは数多く発表されているが、報告により必ずしも結果が再現しているとは限らず、またおのおのの効果は弱いものが多くて、まだ糖尿病の遺伝の全体像を説明するにはほど遠い。その中で特に注目されるスニプスがβ３アドレナリン受容体（β３ＡＲ）、ＰＰＡＲγ、アディポネクチンである。【０００８】
β３ＡＲは褐色脂肪組織では脱共益蛋白（ＵＣＰ１）により熱産生を、白色脂肪組織では脂肪分解を促進する。診療の場に還元されうる情報としては、β３ＡＲ多型を持つ場合、基礎代謝が低く多型を持たない個人と同レベルの食事・運動では太りやすい（疾患感受性）、抗肥満薬としてのβ３アゴニストの期待される効果が異なる（薬剤反応性）可能性が考えられる。【０００９】
脂肪組織の分化増殖のマスター遺伝子であるＰＰＡＲγは、インスリン抵抗性改善薬の標的分子でもある。γ２アイソフォーム（脂肪組織特異的）の活性低下型Ｐｒｏ１２Ａｌａ多型について、肥満しにくく、糖尿病になりにくい結果がメタ解析を含めて報告されている。活性低下型Ｐｒｏ１２Ａｌａは特に高脂肪食下で肥満やインスリン抵抗性を生じにくくすると考えられ、実際日本人でもアメリカに移民した集団の方が、Ａｌａ型の糖尿病になりにくくする効果がより顕著に認められている。【００１０】
発明者がヒトゲノムプロジェクトにて発見した脂肪組織から分泌されるアディポネクチンは（Ｍａｅｄａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．：Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２２１（２）：２８６−９，１９９６）、抗動脈硬化作用、耐糖能改善作用をもつホルモンだが、最近イントロンスニプスと血中アディポネクチン濃度および糖代謝異常状態との相関が認められた。将来アディポネクチンおよび関連薬剤が臨床応用される暁には、このスニプスタイピングが患者選択や効果予後の評価に利用される可能性が期待される（前田和久  船橋徹：Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ２００４  内分泌、代謝 ｐ１５−１９）。【００１１】
こうした従来の候補遺伝子アプローチを中心として進められてきた多因子遺伝病の解析に加えて、複数のスニプスの組み合わせであるハプロタイプの国際共同によるデータベース作りや候補領域アプローチなどが行われている。そして日本では重要な国家戦略として平成１２年度よりミレニアムゲノムプロジェクトと総称される省庁連携の大規模なスニプス関連プロジェクトが開始されている。特に平成１４年度より開始された多施設共同研究にてはホールゲノム相関解析が開始され、心筋梗塞や関節リウマチで一定の成果が上がっている。【００１２】
しかしながら、こうした国家的アプローチにても現在得られつつある成果はこれら心筋梗塞や関節リウマチの疾患関連遺伝子が同定・報告されたというのみである（安田和基：Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ２００４  内分泌、代謝 ｐ４９−５８）。加えて最も致命傷的なことにテーラーメードされうるはずの薬剤を実際にスクリーニングして個人に投与する、すなわち効果を投与前に判定するシステムも存在しておらず、革新的な技術が強く望まれていた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、上記のような従来技術の問題点を解決することを意図してなされたものである。すなわち、本発明は、従来技術と全く異なった発想からの新規な疾病予測方法を提供することを目的とする。また、本発明は、その利用方法を提供することを目的とする。更に、本発明は、新規な培養細胞の特性の測定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、上記課題を解決するために、種々の角度から検討を加えて、研究開発を行った。その結果、驚くべくことに、脂肪組織から単離した組織幹細胞を含む細胞を分化誘導し特定の細胞とさせ、その特定の細胞の特性を測定することで疾病を予測できることを見出した。本発明はかかる知見に基づいて完成されたものである。【００１５】
すなわち、本発明は、脂肪組織から単離した組織幹細胞を含む細胞を分化誘導し特定の細胞とさせ、その特定の細胞の特性を測定することを特徴とした疾病予測方法を提供する。【００１６】
また、本発明は、その疾病予測方法を利用した疾病予測システムを提供する。【００１７】
加えて、本発明は、新規な培養細胞の特性の測定方法を提供する。【００１８】
さらに、本発明は、その疾病予測システムを利用した医薬品のスクリーニング方法、食品のスクリーニング方法、及び治療法を提供する。
【発明の効果】
【００１９】
本発明に記載される脂肪組織から単離した組織幹細胞を含む細胞を分化誘導し特定の細胞とさせ、その特定の細胞の特性を測定する方法であれば、効率良く疾病を予測できるようになる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、実施例２でヒト脂肪組織より採取した組織幹細胞が成熟脂肪細胞に分化できることを示す図である。
【図２】図２は、実施例３でマウスＡとマウスＢの脂肪滴貯留能を比較した結果を示す図である。
【図３】図３は、実施例３でマウスＡとマウスＢの糖取り込み能を比較した結果を示す図である。
【図４】図４は、実施例３でマウスＡとマウスＢの遊離脂肪酸分解能を比較した結果を示す図である。
【図５】図５は、実施例３でマウスＡとマウスＢの抗動脈硬化ホルモン分泌能を比較した結果を示す図である。
【図６】図６は、実施例４でマウスＡとマウスＢの負荷前後の体重を比較した結果を示す図である。
【図７】図７は、実施例４でマウスＡとマウスＢの負荷前後の糖代謝能を比較した結果を示す図である。
【図８】図８は、実施例４でマウスＡとマウスＢの負荷前後の脂質代謝を比較した結果を示す図である。
【図９】図９は、実施例４でマウスＡとマウスＢの負荷後の動脈硬化進展度を比較した結果を示す図である。
【図１０】図１０は、実施例５でマウスＡとマウスＢのインスリン負荷有無下で薬剤投与したときの糖取り込み能を比較した結果を示す図である。
【図１１】図１１は、実施例５でマウスＡとマウスＢの薬剤投与下糖代謝を比較した結果を示す図である。
【図１２】図１２は、実施例７で組織幹細胞を含む細胞の脂肪以外の細胞への分化のようすを示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
（用語の定義）
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙しながら、本発明を説明する。【００２２】
本明細書において「脂肪細胞」とは、脂肪の貯蔵組織の総称である。疎性結合組織のうち、特に脂肪の多いもの、皮下脂肪組織などがある。各脂肪細胞は格子繊維によって囲まれ，細胞間に毛細血管が密に分布し、脂肪体を形成することがおおい。本明細書では、どのような脂肪組織も供給源とすることができる。脂肪体は、他の組織から独立してほぼ一定した塊状もしくは房状の脂肪組織であり、脊椎動物では腎臓や生殖腺に接して腹腔内に存在する。白色、黄色または橙色をしていることが多い。【００２３】
各臓器は臓器由来の前駆細胞もしくは体性幹細胞からの分化が可能であるが、組織幹細胞を含む細胞は体内で最も入手しやすい細胞のひとつである。しかも多系統に分化する機能も加えて、各種細胞機能の予測およびテーラーメード治療薬開発に貢献しうる。【００２４】
本明細書において使用される「細胞」は、当該分野において用いられる最も広義の意味と同様に定義され、多細胞生物の組織の構成単位であって、外界を隔離する膜構造に包まれ、内部に自己再生能を備え、遺伝情報およびその発現機構を有する生命体をいう。本発明の方法においては、どのような細胞でも対象とされ得る。本発明で使用される「細胞」の数は、光学顕微鏡を通じて計数することができる。光学顕微鏡を通じて計数する場合は、核の数を数えることにより計数を行う。当該組織を組織切片スライスとし、ヘマトキシリン−エオシン（ＨＥ）染色を行うことにより細胞外マトリクス（例えば、エラスチンまたはコラーゲン）および細胞に由来する核を色素によって染め分ける。この組織片を光学顕微鏡にて検鏡し、特定の面積（例えば、２００μｍ×２００μｍ）あたりの核の数を細胞数と見積って計数することができる。本明細書において使用される細胞は、天然に存在する細胞であっても、人工的に改変された細胞（例えば、融合細胞、遺伝子改変細胞）であってもよい。細胞の供給源としては、例えば、単一の細胞培養物であり得、あるいは、正常に成長したトランスジェニック動物の胚、血液、または体組織、または正常に成長した細胞株由来の細胞のような細胞混合物が挙げられるがそれらに限定されない。また、このような供給源をそのまま細胞として用いることもできる。【００２５】
本発明において使用される細胞は、脂肪細胞またはその対応物がある限り、どの生物由来の細胞（例えば、メクラウナギ類、ヤツメウナギ類、軟骨魚類、硬骨魚類、両生類、爬虫類、鳥類、哺乳動物など）でも用いることができる。好ましくは、そのような細胞は、哺乳動物（例えば、単孔類、有袋類、貧歯類、皮翼類、翼手類、食肉類、食虫類、長鼻類、奇蹄類、偶蹄類、管歯類、有鱗類、海牛類、クジラ目、霊長類、齧歯類、ウサギ目など）由来の細胞が用いられる。１つの実施形態では、霊長類（例えば、チンパンジー、ニホンザル、ヒト）由来の細胞、特にヒト由来の細胞が用いられるがそれに限定されない。【００２６】
本明細書において「幹細胞」とは、自己複製能を有し、多分化能（すなわち多能性）（「ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ」）を有する細胞をいう。幹細胞は通常、組織が傷害を受けたときにその組織を再生することができる。本明細書では幹細胞は、胚性幹（ＥＳ）細胞または組織幹細胞（組織性幹細胞、組織特異的幹細胞または体性幹細胞ともいう）であり得るがそれらに限定されない。また、上述の能力を有している限り、人工的に作製した細胞（たとえば、本明細書において記載される融合細胞、再プログラム化された細胞など）もまた、幹細胞であり得る。胚性幹細胞とは初期胚に由来する多能性幹細胞をいう。胚性幹細胞は、１９８１年に始めて樹立され、１９８９年以降ノックアウトマウス作製にも応用されている。１９９８年にはヒト胚性幹細胞が樹立されており、再生医学にも利用されつつある。組織幹細胞は、胚性幹細胞とは異なり、分化の方向が限定されている細胞であり、組織中の特定の位置に存在し、未分化な細胞内構造をしている。従って、組織幹細胞は多能性のレベルが低い。組織幹細胞は、核／細胞質比が高く、細胞内小器官が乏しい。組織幹細胞は、概して、多分化能を有し、細胞周期が遅く、個体の一生以上に増殖能を維持する。本明細書においては使用される場合は、幹細胞は好ましくは間葉系幹細胞のような組織幹細胞であり得るが、状況に応じて胚性幹細胞も使用され得る。【００２７】
本明細書において幹細胞というときは、幹細胞を少なくとも一定量含む組織集合物をさすことが理解される。したがって、本発明では、幹細胞は、例えば、コラゲナーゼ処理して脂肪細胞から採取した幹細胞（実施例において使用される幹細胞など）を用いることができるがそれらに限定されない。【００２８】
由来する部位により分類すると、組織幹細胞は、例えば、皮膚系、消化器系、骨髄系、神経系などに分けられる。皮膚系の組織幹細胞としては、表皮幹細胞、毛嚢幹細胞などが挙げられる。消化器系の組織幹細胞としては、膵（共通）幹細胞、肝幹細胞などが挙げられる。骨髄系の組織幹細胞としては、造血幹細胞、間葉系幹細胞などが挙げられる。神経系の組織幹細胞としては、神経幹細胞、網膜幹細胞などが挙げられる。【００２９】
本明細書において「脂肪幹細胞」とは、脂肪組織に由来する幹細胞をいう。このような幹細胞の分離方法の一部は公知であり、例えば、ＷＯ００／５３７９５；ＷＯ０３／０２２９８８；ＷＯ０１／６２９０１；Ｚｕｋ，Ｐ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌ．７，２１１−２２８、２００１；Ｚｕｋ，Ｐ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ  Ｖｏｌ．，１３，４２７９−４２９５、２００２などに記載される方法またはその改変を利用して調製することができる。具体的には例えば、（１）脂肪吸引物を分液漏斗を用いて生理食塩水で十分に洗浄し；（２）上層に脂肪吸引物、下層に生理食塩水が十分に分離したのを確認し、下層を捨てる。肉眼で見て生理食塩水がほぼ透明になるまでこれを繰り返し；（３）脂肪吸引物と同量の０．０７５％コラゲナーゼ／PBSを加え、３７℃でよく攪拌しながら３０分間インキュベートし；（４）上記の試料に等量の１０％血清加DMEMを加え；（５）上記の試料を１２００ｇで１０分間遠心分離し；（６）ペレットにPBSを加えて懸濁し、室温で適宜（例えば、１０〜１５分間）インキュベートし；（７）上記の試料を口径１００μｍのメッシュを用いて吸引ろ過し；および（８）ろ過物を１２００ｇで5分間遠心分離することによって調整することができる。ここで、調整量に応じて、上記プロトコールをスケールアップまたはスケールダウンすることは、当業者の技術範囲内である。【００３０】
これら細胞の細胞マーカーとしては、例えば、CD４、CD１３、CD３４、CD３６、CD４９ｄ、CD７１、CD９０、CD１０５、CD１１７、CD１５１；あるいは、CD１０５、CD７３、CD２９、CD４４およびＳｃａ−１からなる群より選択される細胞表面マーカーが挙げられるがそれらに限定されない。あるいは、間葉系幹細胞の表面抗原は、CD105（+）、CD73（+）、CD２９（＋）、CD４４（＋）、CD１４（−）、CD３４（−）、CD４５（−）であるとされており、少なくともこのいずれか一つ、好ましくはその２以上、より好ましくはそのすべての性質を示す細胞が本発明において使用される細胞として好ましいことが理解される。【００３１】
本明細書において「線維芽細胞」とは、支持組織の繊維成分を供給し、繊維性結合組織の重要な成分をなす細胞をいう。組織切片図では、扁平で長目の外形をもち、不規則な突起を示すことが多い。細胞質は、ミトコンドリア、ゴルジ体、中心体、小脂肪球などを含むが、そのほかに特殊な分化は示さない。核は楕円形をしており、しばしば膠原繊維に密接して存在する。脂肪組織から分離された線維芽細胞は、幹細胞をよく含むといわれている。【００３２】
本明細書において「分化（した）細胞」とは、機能および形態が特殊化した細胞（例えば、筋細胞、神経細胞など）をいい、幹細胞とは異なり、多能性はないか、またはほとんどない。分化した細胞としては、例えば、表皮細胞、膵実質細胞、膵管細胞、肝細胞、血液細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、骨芽細胞、骨格筋芽細胞、神経細胞、血管内皮細胞、色素細胞、平滑筋細胞、脂肪細胞、骨細胞、軟骨細胞などが挙げられる。本発明において用いられる場合、分化細胞は、集団または組織の形態であってもよい。【００３３】
本発明の細胞は、細胞の維持または所望の分化細胞へ分化する限り、任意の培養液を用いることができる。そのような培養液としては、例えば、DMEM、P１９９、MEM、HBSS、Haｍ‘ｓ  F１２、BME、RPMI１６４０、MCDB１０４、MCDB１５３（KGM）およびそれらの混合物などが挙げられるがそれらに限定されない。このような培養液には、デキサメタゾンなどの副腎皮質ステロイド、インスリン、グルコース、インドメタシン、イソブチル−メチルキサンチン（IBMX）、アスコルベート−２−ホスフェート、アスコルビン酸およびその誘導体、グリセロホスフェート、エストロゲンおよびその誘導体、プロゲステロンおよびその誘導体、アンドロゲンおよびその誘導体、ａFGF、ｂFGF、EGF、IGF、TGFβ、ECGF、BMP、PDGFなどの増殖因子、下垂体エキス、松果体エキス、レチノイン酸、ビタミンD、甲状腺ホルモン、ウシ胎仔血清、ウマ血清、ヒト血清、ヘパリン、炭酸水素ナトリウム、HEPES、アルブミン、トランスフェリン、セレン酸（亜セレン酸ナトリウムなど）、リノレン酸、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、５−アザンシチジンなどの脱メチル化剤、トリコスタチンなどのヒストン脱アセチル化剤、アクチビン、LIF、IL−２・IL−６などのサイトカイン、ヘキサメチレンビスアセトアミド（HMBA）、ジメチルアセトアミド（DMA）、ジブチルｃAMP（ｄｂｃAMP）、ジメチルスルホキシド（DMSO）、ヨードデオキシウリジン（IｄU）、ヒドロキシウレア（HU）、シトシンアラビノシド（ＡｒａC）、マイトマイシンC（MMC）、酪酸ナトリウム（ＮａＢｕ）、ポリブレン、セレニウム、コレラトキシンなどを１つまたはその組み合わせとして含ませておいてもよい。【００３４】
本明細書において「生体内」または「インビボ」（ｉｎ  ｖｉｖｏ）とは、生体の内部をいう。特定の文脈において、「生体内」は、目的とする組織または器官が配置されるべき位置をいう。【００３５】
本明細書において「インビトロ」（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）とは、種々の研究目的のために生体の一部分が「生体外に」（例えば、試験管内に）摘出または遊離されている状態をいう。インビボと対照をなす用語である。【００３６】
本明細書において「エキソビボ」（ｅｘｏ  ｖｉｖｏ）とは、遺伝子導入を行うための標的細胞を被験体より抽出し、インビトロで治療遺伝子を導入した後に、再び同一被験体に戻す場合、一連の動作をエキソビボという。【００３７】
１つの実施形態において、本発明の再生治療法における培養の条件、および本発明において使用される所望の臓器、組織または細胞の一部またはそれに分化し得る幹細胞の培養の提供の条件は、その細胞、組織または臓器を培養するために通常用いられるものであれば、用いることができる。そのような培養条件の例としては、例えば、培養条件は通常、３７℃、５％ＣＯ2を利用することができる。使用する培地もまた、任意のものを利用することができ、例えば、ＤＭＥＭ／Ｈａｍ１２（１：１）、１０％ＦＣＳ、インスリン・コレトキシンなどを含む培地を利用することができる。また、必要に応じて、分化因子（例えば、ＥＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）を予め含めた培養液を使用してもよいがそれらに限定されない。【００３８】
１つの好ましい実施形態において、本発明の方法における培養のために、分化因子を加えることができる。そのような分化因子としては、例えば、ＤＮＡ脱メチル化剤（５−アザシチジンなど）、ヒストン脱アセチル化剤（トリコスタチンなど）、核内レセプターリガンド（例えば、レチノイン酸（ＡＴＲＡ），ビタミンＤ3、Ｔ３など）、細胞増殖因子（アクチビン、ＩＧＦ−１、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−β、ＢＭＰ２／４など）、サイトカイン（ＬＩＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−６など）ヘキサメチレンビスアセトアミド、ジメチルアセトアミド、ジブチルｃＡＭＰ、ジメチオルスルホキシド、ヨードデオキシウリジン、ヒドロキシル尿素、シトシンアラボノシド、マイトマイシンＣ、酪酸ナトリウム、アフィディコリン、フルオロデオキシウリジン、ポリブレン、セシンなどが挙げられるが、それらに限定されない。角膜への分化には、ＥＧＦという分化因子を加えることができる。他の分化細胞についてもまた、本明細書において記載される任意の分化因子を使用することができる。【００３９】
本発明は、従来技術の課題を打開すべく有機的に関連させて解析してゆく多角的なアプローチの一環として、特に生活習慣病関連の肥満、糖尿病、高脂血症、動脈硬化などについての集約的テーラーメード治療として今回我々が提唱するのが脂肪組織由来幹細胞を用いた生活習慣病の機能評価法である。【００４０】
本法によりマウスを用いた疾患発症予測、テーラーメード治療に我々は成功しているが、何よりもまず、これまで肥満や糖尿病関連遺伝子として報告されている上記β３アドレナリン受容体（β３ＡＲ）、ＰＰＡＲγ、アディポネクチンのいずれもが脂肪組織自身に発現している蛋白質であることに注目したい。これはすなわち、こうした遺伝子蛋白群を総括的に観察しうる本発明の正当性を間接的に証明しうるものである。【００４１】
本発明者は、脂肪組織内の組織幹細胞を含む細胞がスニプスのように環境因子に左右されることなく将来肥満になったり生活習慣病を合併することを予測できる細胞であることを見出した。脂肪組織内の９９．９％以上を占める成熟脂肪細胞は、肥満したヒトでは肥大した細胞であり、やせているヒトではやせた細胞の性格を持ち、既に環境の影響を受けている。一方、組織中のごくわずかを占める組織前駆細胞は、脂肪以外の組織に分化することが近年証明されており、全く環境の影響を受けていない生来その個人に備わっていた遺伝的バックグランドを保ったままの細胞といえる。【００４２】
本発明者は、同細胞を分離、培養分化した後、容易に代謝機能の測定を行うことに成功した。この代謝機能とは個人が生来持っている遺伝的に脂肪組織に備わっている代謝機能である。そこでこのシステムを使えば、１）個人が将来的に肥満になりやすい、或いは糖尿病などの生活習慣病になりやすいなどが定量できる、２）開発中の薬剤や、既に開発された薬剤の効果を生体に投与しないでも効果が判定できる。すなわち、スニプスで目指すところのオーダーメイド治療が可能となる。本発明者はこのことを既に成人マウスになると糖尿病を起こすことが分かっている小児マウスの脂肪組織由来幹細胞を用いて実験的に証明することができた。【００４３】
さらに、本発明を用い、複数の試料のデータベース化により、抗肥満薬や健康食品などを生体外でヒト脂肪組織を用いて効果を検討できるため、多くの候補から容易に的確に判定できるようになる。【００４４】
本発明に用いられる脂肪組織としては、例えば皮下脂肪、腹腔内内臓脂肪がとしてはなどが挙げられるが、特に制約されるものではない。また、その動物種も特に限定されるものではないが、例えばヒト、サル、イヌ、ブタ、モルモット、マウス、ラットなどが挙げられる。本発明であれば、これら動物の幼い時分の脂肪組織を利用すれば、それが成熟したときにかかり易い疾病が分かる。ここで、幼い時分とは、動物種によっても異なるが、生後１２ヶ月以内、好ましくは３ヶ月以内、さらに好ましくは１ヶ月以内のものが良い。ヒトの場合、生後２０年以内、好ましくは１０年以内、さらに好ましくは５年以内のものが良い。ヒトの治療を目的とした場合は、ヒトの幼い時分の脂肪組織を利用することが最も効果的である。本発明であれば、もしヒトの幼い時分の脂肪組織を利用すれば、その者が成人になったときにかかり易い疾病が分かることとなり、発病前に治療を開始し、発病を未然に抑えることが可能となる。さらに仮に発病しても、その患者に最適な治療を施すことができるようになる。【００４５】
本発明では、脂肪組織から組織幹細胞を含む細胞を単離する必要がある。その方法は、常法に従えば特に問題はないが、例えば酵素法を用いて遠心分離する方法、キットを用いて分離する方法などが挙げられる。操作上、後者の方法が効率良く、簡便な方法である。【００４６】
本発明では、脂肪組織から単離した組織幹細胞を含む細胞を分化誘導し特定の細胞とさせ、その特定の細胞の特性を測定する必要がある。その特定の細胞としては、特に限定されるものではないが、例えば成熟脂肪細胞、骨関連細胞、神経関連細胞、筋肉関連細胞、血管内皮細胞などが挙げられる。ここで細胞として成熟脂肪細胞を選んだ場合、その特性としては脂肪滴の貯留量、脂肪滴の分解能、糖代謝能、特定の蛋白質の分泌量等のいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものが挙げられるが、特に制約されるものではない。その際、特定の蛋白質としてはレプチン、アディポネクチン、ＴＮＦ−α、ＶＥＧＦ、ＨＧＦのいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものが挙げられるが、特に制約されるものではない。疾病を予測する際には、生活習慣病、肥満、高脂血症、糖尿病、及び動脈硬化になっていない個体から得られた上記特定の細胞の特性を基準として、予測したい個体の特定の細胞の特性を比較検討すればよい。ここで、脂肪滴の貯留量、ＴＮＦ−α分泌量に関しては、生活習慣病、肥満、高脂血症、糖尿病、及び動脈硬化になっていない個体から得られた上記特定の細胞の特性を基準として少なくとも１０％以上、好ましくは２０％以上、さらに好ましくは３０％以上に増加していると、予測したい個体は生活習慣病、肥満、高脂血症、糖尿病、及び動脈硬化等の疾病にかかり易いことが明確となる。また、脂肪滴の分解能、糖代謝能、レプチン分泌量、アディポネクチン分泌量、ＶＥＧＦ分泌量、ＨＧＦ分泌量に関しては、生活習慣病、肥満、高脂血症、糖尿病、及び動脈硬化になっていない個体から得られた上記特定の細胞の特性を基準として少なくとも１０％以下、好ましくは２０％以下、さらに好ましくは３０％以下に減少していると、予測したい個体は生活習慣病、肥満、高脂血症、糖尿病、及び動脈硬化等の疾病にかかり易いことが明確となる。さらに、環境に影響される前の幼弱時の脂肪組織から単離した組織幹細胞を含む細胞を分化誘導し成熟脂肪細胞とさせれば、その脂肪組織を採取した個体の将来的な代謝能力、すなわち生活習慣病、肥満、高脂血症、糖尿病、及び動脈硬化のいずれか一つ、もしくは二つ以上の疾病へのなり易さを予測できるようになる。血管内皮細胞はＶＥＧＦ，ＨＧＦなどのサイトカインをキットにより測定することが出来、血管新生能力すなわち、動脈硬化の指標となる。骨細胞は骨代謝の計測により骨粗しょう症へのなりやすさが予測できる。神経や筋肉細胞も各臓器機能の予測に用いることが出来る。【００４７】
特定の細胞が骨関連細胞、神経関連細胞、筋肉関連細胞である場合、その特性としては骨代謝機能、神経及び筋細胞機能のいずれか一つ、もしくは二つ以上からなるものが挙げられるが、特に制約されるものではない。特に、環境に影響される前の幼弱時の脂肪組織から単離した組織幹細胞を含む細胞を分化誘導し骨関連細胞とさせれば、その脂肪組織を採取した個体の骨代謝の疾病を予測できるようになる。【００４８】
本発明であれば、もし動物個体の幼い時分の組織を利用することができれば、それが成人になったときにかかり易い疾病が分かるようになる。この幼い時分の脂肪組織から単離した組織幹細胞を含む細胞を分化誘導し特定の細胞とさせ、その特定の細胞の特性を測定することと、その成熟した動物個体を組み合わせることで疾病予測システムとなる。すなわち、この予測システムを利用すれば、効率良く発病する動物個体に対し、何らかの医薬品の投与を続けることで発病しないものを選択する方法で医薬品のスクリーニングができる。本発明の場合、開発できる医薬品としては特に限定されないが、例えば抗肥満薬、抗糖尿病薬、抗動脈硬化薬等が挙げられる。同様な方法で、本発明で示す予測システムであれば、機能性食品をスクリーニングすることもできるようになる。【００４９】
さらに、その動物個体がヒトであれば、その者の幼い時分の脂肪組織をあらかじめ採取し分化させて特定の細胞とし、その特定細胞の機能を測定すれば、その者が成人になったときにかかり易い疾病が分かることとなり、発病前に治療を開始し、発病を未然に抑えることが可能となる。さらに仮に発病しても、その患者に最適な治療を施すことができるようになる。その治療の際には、すでに生活習慣病、肥満、高脂血症、糖尿病、及び動脈硬化になった治療したい個体から得られた上記特定の細胞の特性を基準として、治療中の個体の特定の細胞の特性を比較検討しながら実施すれば良い。ここで、脂肪滴の貯留量、ＴＮＦ−α分泌量に関しては、治療前の個体から得られた上記特定の細胞の特性を基準として少なくとも１０％以下、好ましくは２０％以下、さらに好ましくは３０％以下に減少させれば、個体は生活習慣病、肥満、高脂血症、糖尿病、及び動脈硬化等の疾病から個体が改善されていることが明確となる。また、脂肪滴の分解能、糖代謝能、レプチン分泌量、アディポネクチン分泌量、ＶＥＧＦ分泌量、ＨＧＦ分泌量に関しては、治療前の個体から得られた上記特定の細胞の特性を基準として少なくとも１０％以上、好ましくは２０％以上、さらに好ましくは３０％以上に増加させれば、個体は生活習慣病、肥満、高脂血症、糖尿病、及び動脈硬化等の疾病から個体が改善されていることが明確となる。【００５０】
本発明は、脂肪組織からの供給源を提供することができるという点が有利な点のひとつであるといえる。脂肪組織からの摘出は、ノーストレスで採取可能であるという利点のほか、外来レベルで摘出が可能であり、繰り返し行うことができ。大量に得ることができるなどの利点があることが留意されるべきである。
［実施例］
以下に、本発明を実施例に基づいて更に詳しく説明するが、これらは本発明を何ら限定するものではない。【００５１】
以下に示した実施例において使用した試薬は、特に言及しない限り和光純薬、Ｓｉｇｍａから得た。動物の飼育は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈｇ作成した「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ」およびＩｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅが作成、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈが公表した「Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ」（ＨＩＮ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．８６−２３，１９８５，改訂）に遵って大阪大学医学部において規定される基準に遵い、動物愛護精神に則って行った。ヒトを対象とする場合は、厚生労働省の基準に従い、事前に同意を得た上で実験を行った。
【実施例１】
【００５２】
（組織幹細胞を含む細胞の調整）
本実施例では、まず、本実験に対して同意を示したヒトから細胞を脂肪組織から調整した。脂肪吸引物を生理食塩水で十分に洗浄した。上層に脂肪吸引物、下層に生理食塩水が十分に分離したのを確認し、下層を捨て、肉眼で見て生理食塩水はほぼ透明になるまでこれを繰り返した。この実験例では、７回行った。脂肪組織を４０ｍｌと同量４０ｍｌの０．０７５％コラゲナーゼ/PBS（Ｇｉｂｃｏ）を加え、３７℃でよく攪拌しながら１時間インキュベートした。この試料に、同量の１０％血清加DMEMを加え、1200×ｇで１０分間遠心分離した。【００５３】
遠心分離により得られたペレットに０．１６Ｍ  ＨＮ4Ｃｌ／ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を加え懸濁し、２５℃で２０分間インキュベートした。この試料を口径１００μｍのメッシュ（Ｗｈａｔｍａｎ）を用いて吸引ろ過した。このろ過物を１２００×ｇで５分間遠心分離した。この細胞は線維芽細胞様の細胞であった。
【実施例２】
【００５４】
（組織幹細胞を含む細胞の分化）
次に、実施例１において調整した細胞中の細胞を初代培養し、継代培養した後に成熟脂肪細胞へと分化させた。継代培養する回数は、４代程度までが望ましい。具体的にはコンフルエントまで増殖させた組織幹細胞を含む細胞を脂肪細胞分化用培地で２日おきに処理した。分化開始日と２日目には、０．５ｍＭ  ＩＢＭＸ、1 μM デキサメタゾン、1 μM トリグリタゾン、５μｇ／ｍｌインスリンを含んだ  １０％  CCS−DMEM 培地で処理した。４日目には、トリグリタゾンとインスリンを含んだ  １０％  CCS−DMEM 培地で、６日目以降は、５００ｎｇ／ｍｌインスリンを含んだ １０％  CCS−DMEM 培地で処理した。得られた結果を図１に示す。上記方法により、脂肪組織より採取した組織幹細胞は成熟脂肪細胞に分化誘導されることが分かった。
【実施例３】
【００５５】
（マウス由来分化後脂肪細胞を用いた機能評価）
本実施例では代謝異常を未だ認めていない負荷前６週齢のアポＥノックアウトマウス（以下マウスＡ）と動脈硬化発症型ダブルノックアウトマウス（以下マウスＢ）それぞれ５匹ずつ、上記の方法に従って脂肪組織由来幹細胞を採取し、成熟脂肪細胞に分化させた後、以下の測定を行った。
（脂肪滴貯留能）
分化させた細胞をオイルレッドＯ法にて細胞内脂肪球にて染色した。更に有機溶媒を用いて色素抽出することにより、組織幹細胞を含む細胞と比較することにより脂肪量の定量を行った。オイルレッドＯは和光純薬（株）のリピットアッセイキットを用いた。或いはより簡便な方法として、染色した際の分化脂肪細胞を顕微鏡弱拡大下にて撮影し、視野に占める染色面積を分化能として用いた。得られた結果を図２に示す。図２より、代謝異常を未だ認めていない負荷前６週齢のアポＥノックアウトマウスから得られた成熟脂肪細胞に比べ、動脈硬化発症型ダブルノックアウトマウスのから得られた成熟脂肪細胞の方が脂肪滴の貯留量が高いことが分かる。
（糖取り込み能）
3Ｈ−２−デオキシグルコースをサブストレートとして糖取り込み能の測定を行った。脂肪細胞における糖取り込みのトランスポーターであるＧｌｕｔ４のインヒビターとしてサイトカラシンＢ（３０μＭ）をネガティブコントロールとした。インスリン非添加時の糖取り込みを基準にしてインスリン１００ｎＭをポジティブコントロールとした。得られた結果を図３に示す。図３より、代謝異常を未だ認めていない負荷前６週齢のアポＥノックアウトマウスから得られた成熟脂肪細胞に比べ、動脈硬化発症型ダブルノックアウトマウスのから得られた成熟脂肪細胞の方が糖取り込み量が低いことが分かる。
（脂肪酸分解能）
β３受容体アゴニストであるイソプロテレノール（１μＭ）を加え、中性脂肪分解によって放出される脂肪酸の定量を行った。得られた結果を図４に示す。図４より、代謝異常を未だ認めていない負荷前６週齢のアポＥノックアウトマウスから得られた成熟脂肪細胞に比べ、動脈硬化発症型ダブルノックアウトマウスのから得られた成熟脂肪細胞の方が脂肪酸分解能が高いことが分かる。
（抗動脈硬化ホルモン分泌量）
次に、調整した細胞のもつ抗動脈硬化作用を検討した。アディポネクチンについて、抗アディポネクチン抗体を用いて細胞分泌物をサンプルとして、ＥＬＩＳＡを行った。ＥＬＩＳＡは、Ｏｔｓｋａ社から入手可能なＥＬＩＳＡキットを用いて行った。得られた結果を図５に示す。図５より、代謝異常を未だ認めていない負荷前６週齢のアポＥノックアウトマウスから得られた成熟脂肪細胞に比べ、動脈硬化発症型ダブルノックアウトマウスのから得られた成熟脂肪細胞の方がアディポネクチン分泌量が低いことが分かる。
【実施例４】
【００５６】
マウスに負荷を与えた後、生体の変化を検討した。先の実施例で使用した６週齢のアポＥノックアウトマウス（以下マウスＡ）と動脈硬化発症型ダブルノックアウトマウス（以下マウスＢ）それぞれ５匹ずつ、６週間にわたり、Ｗｅｓｔｅｒｎ−ｔｙｐｅ  ｄｉｅｔ  （２１％粗脂肪、０．１５％コレステロールを含む、オリエンタル酵母）を与えたのち、種々の動態を測定した。体重（図６）、糖代謝能（図７）、脂質代謝（図８）は前日より絶食として、食事時間による影響を取り除いた段階で検討した。代謝能はそれぞれ空腹時血糖値および空腹時中性脂肪値をキットを用いて測定した。【００５７】
動脈硬化（図９）はマウスを麻酔後に解剖後、大動脈３ヵ所を病理組織学的に検査したが大動脈の標本採取部位は近位、中位、遠位の３ヵ所を観察した。染色はＨ−Ｅ染色及びオイル赤Ｏ染色を施した。特徴的な変化は、Ｈ−Ｅ染色では微細な泡沫状の大きい細胞質をもつ細胞で構成される限局性斑であった。オイル赤Ｏ染色では、この細胞の細胞質に諸種大きさの脂質滴が認められた（リポイド斑）。これらの斑は大動脈の管腔側に盛り上がった形でみられ、しばしば表面近くに軽度ながら結合織増生も観察された。【００５８】
大動脈の部位別に見ると、リポイド斑の形成は、近位で全例にみられ、かつ変化も他の部位に比べて明らかに高度であった。リポイド斑が高度な近位の大動脈壁では中膜筋細胞の配列異常を伴う中膜肥厚を伴っていた。これらの変化はリポイド斑の下に位置する中膜で明らかであり、オイル赤Ｏ染色では中膜筋細胞にも微細な脂質滴が観察された。【００５９】
病変の強さ：  0；変化なし    1；ごく軽度    2；軽度    3；中等度    4；高度、（リポイド斑の強さ：  ごく軽度，軽度；管腔に面した血管壁の1/3以下、中等度；管腔に面した血管壁の1/3を占めるが比較的薄い（細胞が3層程度）、高度；管腔に面した血管壁の1/3以上を占め、斑が厚い）としてスコア化した。
【実施例５】
【００６０】
（負荷前のマウス成熟脂肪細胞に対するテーラーメード治療）
実施例３で用いたマウス由来分化後脂肪細胞を用いた機能評価での糖取り込み能を測定した。２４時間前に、ＰＰＡＲγアゴニストであるトログリタゾンで刺激したところ、両細胞とも同程度の糖取り込み能を持つようになった。すなわち、本マウスにおいてはトログリタゾンが糖取り込み能を改善しうる細胞と考えられた（図１０）。
【実施例６】
【００６１】
（マウスに食事および薬剤を投与後の糖代謝を検討）
実施例４で用いたマウス負荷群にともにトログリタゾン０．１％となるように、混餌を与えた。実施例５で予測されとおりに、トログリタゾンがマウスの代謝動態を改善した。すなわち、実施例５および６で本発明によるテーラーメード治療確立の方法が正しいことが証明された（図１１）。
【実施例７】
【００６２】
（組織幹細胞を含む細胞の脂肪以外の細胞への分化）
実施例１で用いた細胞群に対して、脂肪細胞以外の細胞に分化することを確かめた。神経細胞への分化は２０％血清添加したDMEM培地に１ｍＭのベータ・メルカプトエタノールを加えて２４時間培養して、翌日、PBSで二回洗浄した後に血清無添加DMEM培地に５ｍＭのベータ・メルカプトエタノールで培養した（Ｗｏｏｄｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ  ６１；３６４−３７０，２０００）。得られた結果を図１２に示す。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明に記載されている方法であれば、容易にかつ正確に個人の持つ生活習慣病をはじめとする疾病へのなりやすさが定量化できるようになる。そして本システムを用いることにより、ある種の薬に対する各人への効果などを検討することが出来るため、テーラーメード治療が可能となる。更に、例えばこの方法を脂肪採取が容易に出来るキットなどを用いて大量データーベース化すれば、薬や機能性食品の開発スクリーニングへの応用が強く期待される。従って本発明は医学、生物学等の分野におけるきわめて有用な発明である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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