(57)【要約】本発明は、インフルエンザウィルスなどのウィルスに対する、不活化（感染防止）効果を有するプロアントシアニジン系ポリフェノール、特に好ましくはリンゴ未熟果またはホップ苞から得られるポリフェノール、を含むウィルス不活化剤に関する。本発明のウィルス不活化剤によれば、リンゴに由来もしくは含有するポリフェノール、又はホップに由来もしくは含有するポリフェノールの作用により、インフルエンザウィルスの不活化（感染防止）効果が有効に発揮される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウィルスを不活化する有効成分として、プロアントシアニジン系ポリフェノールを含有する、ウィルス不活化剤。
【請求項２】
前記プロアントシアニジン系ポリフェノールがリンゴから得られるポリフェノールである、請求項１記載のウィルス不活化剤。
【請求項３】
前記リンゴがリンゴ未熟果である、請求項２記載のウィルス不活化剤。
【請求項４】
前記プロアントシアニジン系ポリフェノールがホップから得られるポリフェノールである、請求項１記載のウィルス不活化剤。
【請求項５】
前記ホップがホップ苞である、請求項４記載のウィルス不活化剤。
【請求項６】
前記プロアントシアニジン系ポリフェノールを５〜９５重量％含有する、請求項１記載のウィルス不活化剤。
【請求項７】
前記プロアントシアニジン系ポリフェノールが、分画分子量１，０００以上の限外ろ過膜により処理した際に、膜を透過しないプロアントシアニジンである請求項１記載のウィルス不活化剤。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のウィルス不活化剤を、最終濃度１〜１０，０００ｐｐｍの範囲で含むことを特徴とする飲料品。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のウィルス不活化剤を、最終濃度１〜１０，０００ｐｐｍの範囲で含むことを特徴とする食料品。
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のウィルス不活化剤を含むことを特徴とする医薬。
【請求項１１】
請求項１０記載の医薬を、経口剤もしくは非経口剤として、全日量で２ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲で患者に投与する、治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インフルエンザウィルスなどのウィルスに対する、不活化効果を有するプロアントシアニジン系ポリフェノール、特に好ましくはリンゴ未熟果またはホップ苞に由来するポリフェノールであるウィルス不活化剤に関する。
本願は、２００５年４月１９日に、日本に出願された特願２００５−１２１３４３号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【０００２】
これまでに抗ウィルス活性をもつ天然物質の研究が行われてきたが、そのような物質として、プロアントシアニジンポリマーがある（特許文献１参照）。該ポリマーはクロトン・レクレリなる植物から得られる２〜３０のフラボノイド単位を有するプロアントシアニジンポリマーであり、インフルエンザなどの呼吸性ウィルス感染の治療に有効であるとされている。該文献には具体的に、インフルエンザウィルスＡウィルスに対するプロアントシアニジンポリマーＡ（フラボノイド単位数が２〜１１、平均約７の重合度を有する）の治療効果が記載されている。
また、茶ポリフェノールを有効成分とするインフルエンザウィルス感染予防剤がある（特許文献２参照）。この文献には、茶ポリフェノールとして、エピガロカテキンガレートなどの茶カテキンが挙げられている。【０００３】
【特許文献１】特許第３４４８０５２号明細書
【特許文献２】特開平３−１０１６２３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
前述の特許文献１に述べられているプロアントシアニジンポリマーは、呼吸性ウィルス感染の治療に有効とされるが、原料がアマゾンなど特異な環境に生育するクロトン種の樹木であるため、簡便かつ大量生産には不適当であった。また、昨今、このような樹木の持ち出しは遺伝子資源保護の目的で厳しく制限される傾向にある。さらに樹木種の本来の生育場所以外への安易な持ち出しおよび育種は、生態系を乱す恐れがある。
すなわち、クロトン種よりも容易かつ安価に入手できる原料を用いて、従来よりも効果の高い、抗ウィルス活性を有するポリフェノールを提供することができれば、産業上価値あるものとして利用されることが期待される。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記の課題について鋭意検討した結果、ホップ苞またはリンゴ未熟果に由来もしくは含有する、プロアントシアニジン系ポリフェノールが、インフルエンザウィルスに対する効果を有することを見出した。さらに、これらの活性物質が、茶カテキンよりも強力な活性を有することを確認し、本発明を完成するに至った。
ここでいうポリフェノールとは、主に植物体に含まれる分子内に複数のフェノール性水酸基を有する化合物の総称であり、「プロアントシアニジン系ポリフェノール」とは、加水分解により赤色系の色素であるアントシアニジン（シアニジン、デルフィニジンまたはペラルゴニジン）を生じる化合物をいう。【０００６】
すなわち、本発明の第１は、ウィルスを不活化する有効成分として、プロアントシアニジン系ポリフェノールを含有する、ウィルス不活化剤を提供するものである。本発明の第２は、前記プロアントシアニジン系ポリフェノールがリンゴ、特にリンゴ未熟果から得られるポリフェノールであるウィルス不活化剤を提供するものである。本発明の第３は、前記プロアントシアニジン系ポリフェノールがホップ、特にホップ苞から得られるポリフェノールであるウィルス不活化剤を提供するものである。
ここで、本発明のウィルス不活化剤では、前記プロアントシアニジン系ポリフェノールを好ましくは５〜95重量％、より好ましくは20〜95重量％、含有するのがよい。特に、プロアントシアニジン系ポリフェノールがリンゴから得られる（リンゴに由来もしくは含有する）ポリフェノールである場合には、ウィルス不活化剤に好ましくは20〜80重量％、より好ましくは50〜70重量％、前記ポリフェノールを含有する。また、プロアントシアニジン系ポリフェノールがホップから得られる（ホップに由来もしくは含有する）ポリフェノールである場合には、ウィルス不活化剤に好ましくは20〜70重量％、より好ましくは25〜55重量％、前記ポリフェノールを含有する。【０００７】
また、本発明においては、前記プロアントシアニジン系ポリフェノールが、分画分子量１，０００以上の限外ろ過膜により処理した際に、膜を透過しないプロアントシアニジンであることが好ましい。
さらに、本発明は、上記したウィルス不活化剤を好ましくは最終濃度１〜１０，０００ｐｐｍの範囲で含む、飲料品、又は食料品を提供するものである。
加えて、本発明は、上記したウィルス不活化剤を含む医薬とともに、当該医薬を経口剤もしくは非経口剤として、全日量で２ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲で患者に投与する、治療方法をも提供するものである。
なお、本発明により提供されるポリフェノールは、ウィルス増殖阻害活性の強さにおいて、特開平３−１０１６２３号公報に記載のある茶カテキンよりも強力であり、飲料品や食料品などに応用する場合に重要となる呈味性においても、優れている。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のウィルス不活化剤は、抗インフルエンザウィルス活性を有するので、インフルエンザウィルスに有効である。また、インフルエンザウィルスを不活化する成分がホップ、特にホップ苞、またはリンゴ、特にリンゴ未熟果に由来もしくは含有するポリフェノールであるため、原料入手が容易である利点がある。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】実施例１０におけるシンドビスウィルスの増殖の度合いを、ベロ細胞の生存率で評価した図である。縦軸の値が高いほど、多くの細胞が生き残っていることを表す。
【図２】実施例１１におけるインフルエンザウィルスの増殖の度合いを、漿尿液の赤血球凝集活性で評価した図である。縦軸は、赤血球凝集活性を示す最大の希釈倍率を示し、この値が高いほどインフルエンザウィルスが増殖していることを示す。
【図３】実施例１２におけるインフルエンザウィルスのもつ鶏の赤血球凝集活性を評価した図である。縦軸は、赤血球の凝集の度合いをスコア化したものであり、この値が高いほど感染力が強いことを示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の原料となるリンゴ未熟果とは、リンゴの果実が成熟する前に人為的に摘果したもの、あるいは落下などにより自然にリンゴ果樹より脱落したものをいう。
また、本発明の原料となるホップ苞とは、ホップ毬果よりルプリン部分を取り除いて得られるものであり、一般に、ホップ毬果を粉砕後、ふるい分けによってルプリン部分を除くことによってホップ苞を得る。しかし、最近のビール醸造においては、ホップ苞をふるい分けして除去する手間を省くために、ビール醸造に有用でないホップ苞を取り除かずにホップ毬果そのままペレット状に成形し、ホップペレットとして、ビール醸造に利用する傾向にある。従って、本発明の原料としては、ホップ苞を含むものであれば特に限定せず、ホップ苞を含むホップ毬果やホップペレットを原料としてもなんら問題ない。【００１１】
これらの原料を、圧搾により搾汁あるいはアルコール水溶液などで抽出する。抽出した液は、ウィルス不活化成分を含む抽出液である。また必要に応じて、ウィルス不活化成分をポリフェノールに親和性のある粒状の樹脂などを充填したカラムなどを用いて精製し、精製度を上げて用いることもできる。ただしこの過程はあくまでウィルス不活化剤の精製度を上げるための工程であり、必要がなければ省略することもできる。
ウィルス不活化成分をポリフェノールに親和性のある粒状の樹脂（以下「樹脂」という）などを充填したカラム（以下「カラム」という）を用いて精製する工程は、ウィルス不活化成分を含む抽出液を、カラムに通液し、カラムを十分に洗浄した後、カラムに吸着されたウィルス不活化剤を溶出してもよいし、粒状の樹脂を、ウィルス不活化成分を含む抽出液に浸漬し、バッチ処理して行う事も出来る。【００１２】
樹脂にウィルス不活化剤を吸着させる際には、吸着効率を上げるために、必要があれば、ウィルス不活化成分を含む抽出液を５〜３０℃程度まで冷却した後、減圧濃縮などによりあらかじめ抽出液の有機溶媒濃度を下げておくことが望ましい。樹脂の材質としては、ヒドロキシプロピル化デキストラン、親水性ビニルポリマー、スチレン−ジビニルベンゼン重合体などを用いる事が出来る。
次いで樹脂を洗浄し、ウィルス不活化剤の精製度をよりあげることができる。洗浄に用いる溶媒としては、水ないし１〜１０ｗ／ｗ％（重量／重量％）のエタノール水溶液が好適であり、樹脂量の１〜１０倍程度の溶媒量を用い、洗浄することが望ましい。【００１３】
続いて、ポリフェノール類を吸着した樹脂よりウィルス不活化剤を脱離溶出する。溶出に用いる溶媒としては含水アルコール、含水アセトン、含水アセトニトリルなどを用いることができ、特に好適な例としては１０ｗ／ｗ％以上のエタノール水溶液またはエタノールが挙げられる。溶出溶媒の通液量は樹脂量の２〜６倍程度が望ましい。
得られた溶出液より溶媒を濃縮、凍結乾燥、スプレードライなどの通常の方法により除き、ウィルス不活化剤を粉末として得ることができる。また減圧濃縮の際、アルコール、アセトン、アセトニトリルなどを回収し、再利用することもできる。使用した合成樹脂は８０ｖ／ｖ％（容量／容量％）以上のアルコール水溶液、０．０５Ｎ程度の水酸化ナトリウム水溶液などで洗浄した後、繰り返し使用することが可能である。
かくして得られたウィルス不活化剤は、そのまま実用に供する事も出来るが、以下に述べるような限外ろ過膜を用いる方法によって、さらに精製度を上げる事も出来る。ただしこの過程はあくまでウィルス不活化剤の精製度を上げるための工程であり、必要がなければ省略することもできる。【００１４】
ウィルス不活化成分を限外ろ過膜を用いて精製する工程は、上記方法で得られたウィルス不活化剤を含有する溶液を、分画分子量が１，０００以上の限外ろ過膜で処理する。溶液は水、あるいは水と混和する有機溶媒の溶液であることが望ましく。好適な例として５〜５０％のエタノール水溶液が挙げられる。膜の素材としては、セルロース、セルロースアセテート、ポリサルフォン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリエーテルスルホン、ＰＶＤＦなど、通常限外ろ過膜の材質として使用するものであれば、特に制限なく用いることができる。また分画分子量は１，０００以上であれば特に問題なく用いることができるが、あまり分画分子量の大きい膜を用いると、収量が極端に下がり、また分画分子量が小さい場合は、処理に要する時間が長くなるので、分画分子量３，０００〜５０，０００程度の限外ろ過膜が好適である。また処理は、抽出溶媒の種類や抽出溶媒とホップまたはホップ苞の割合にもよるが、およそ上残り液の量が処理開始時の１／１０〜１／１００程度になるまで行うのが望ましい。その際の圧力は、限外ろ過膜やろ過装置にもよるが、およそ０．１〜１０．０kg／cm2であることが望ましい。また必要があれば、一度処理した上残り液を再び水などの適当な溶媒で薄め、同様に再処理して精製度を高めることもできる。【００１５】
得られた上残り液の溶媒を濃縮、凍結乾燥、スプレードライなどの通常の方法により除き、ウィルス不活化剤を粉末として得ることができる。また減圧濃縮の際、アルコール、アセトン、アセトニトリルなどを回収し、再利用することもできる。
このようにして得られたウィルス不活化剤は、かすかに苦味を呈した無臭の肌色、褐色ないし淡黄色の粉末であり、ポリフェノールと親和性を持つ合成樹脂に吸着し、分画分子量が１，０００以上の限外ろ過膜により処理した際に膜を透過しないプロアントシアニジンである。
なお収率は、原料をホップ苞とした場合、ホップ苞重量換算で０．５〜２０．０ｗ／ｗ％、ホップ毬果重量換算で０．５〜１５．０ｗ／ｗ％であり、原料をリンゴ未熟果とした場合リンゴ未熟果重量換算で０．５〜１５．０ｗ／ｗ％である。【００１６】
得られるウィルス不活化剤中の有効成分、プロアントシアニジン系ポリフェノールの含有量（率）は、上記した精製工程の違いによって異なってくるものであり、少量の含有率であっても摂取量や投与量等によっては十分効果が期待できるものであり、何ら限定されるものではない。より具体的には、プロアントシアニジン系ポリフェノールがウィルス不活化剤中2重量％以上含まれるものであれば、有効成分としてその効果が発揮されるが、実用上は精製する工程の処理時間や労力を勘案して、好ましくは5〜95重量％、より好ましくは20〜95重量％の範囲で含有させるのが良い。
特に、プロアントシアニジン系ポリフェノールがリンゴから得られるポリフェノールである場合、ウィルス不活化剤には好ましくは20〜80重量％、より好ましくは50〜70重量％、前記ポリフェノールが含有する。また、プロアントシアニジン系ポリフェノールがホップから得られるポリフェノールである場合には、ウィルス不活化剤に好ましくは20〜70重量％、より好ましくは25〜55重量％、前記ポリフェノールが含有する。【００１７】
なお、ウィルス不活化剤中のプロアントシアニジン系ポリフェノールの含有率（重量％）は、一般的にプロアントシアニジン系ポリフェノールの定量に用いられるPorterらの方法（Porter et al., Phytochemistry 25, 223-230 (1986)）によって比較的容易に測定可能である。この方法は、プロアントシニジン系ポリフェノール特異的なインターフラバン結合をアルコール存在下で加水分解し、生じたペラルゴニジン、シアニジン、デルフィニジンなどの赤色色素を550nmの吸光度で定量する方法である。プロアントシアニジン系ポリフェノールには多様な物質が存在するため、通常は得られた吸光度を、プロシアニジンＢ１などの、比較的構造が単純なプロアントシアニジン系ポリフェノールの吸光度に換算し、プロシアニジンＢ１の含量として示すことができる。
よって、Porterらの方法を用いることにより、ウィルス不活化剤中のプロアントシアニジン系ポリフェノールの含有量を決定することができる。【００１８】
かくして得られたウィルス不活化剤は、一般に使用される担体、助剤、添加剤等とともに製剤化することができ、常法に従って経口、非経口の製品として医薬品として用いることができ、また食品素材と混合して飲食品とすることができる。
医薬品は経口剤として錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シラップ剤などが、非経口剤として軟膏剤、クリーム、水剤などの外用剤、無菌溶液剤や懸濁剤などの注射剤などがある。また、うがい薬などの口中剤にすることもできる。これらの製品を医薬として人体に投与して治療する場合には、２ｍｇ〜５００ｍｇを１日に１ないしは数回、すなわち２ｍｇ〜１０００ｍｇの全日量で投与する。この治療方法を実行することにより、十分にインフルエンザウィルスなどのウィルスに対する不活化（感染防止）効果を奏しうるものである。【００１９】
本発明のウィルス不活化剤を含有する医薬品は、生理的に認めうるベヒクル、担体、賦形剤、統合剤、安定剤、香味剤などとともに要求される単位容量形態をとることができる。錠剤、カプセル剤に混和される佐薬は次のようなものである。トラガント、アラビアゴム、コーンスターチ、ゼラチンのような結合剤、微晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、全ゼラチン化澱粉、アルギン酸のような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、ショ糖、乳糖、サッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油、チェリーのような香味剤など。また、カプセル剤の場合は上記の材料に更に油脂のような液体担体を含有することができ、また、他の材料は被覆剤として、または製剤の物理的形態を別な方法で変化させることができる。例えば、錠剤はシェラック、砂糖で被覆することができる。シロップまたはエリキシル剤は、甘味剤としてショ糖、防腐剤としてメチルまたはプロピルパラベン、色素およびチェリーまたはオレンジ香味のような香味剤を含有することができる。
医薬の形態が錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等の経口剤の場合には、上記したウィルス不活化剤の含有率は好ましくは３〜５０重量％、より好ましくは５〜３０重量％の範囲である。【００２０】
注射剤のための無菌組成物は、注射用水のようなベヒクル中の活性物質、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油のような天然産出植物油、またはエチルオレートのような合成脂肪ベヒクルを溶解または懸濁させる通常の方法によって処方することができる。また、緩衝剤、防腐剤、酸化防止剤などを必要に応じて配合することができる。外用剤としては基材としてワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴールなどを用い、通常の方法によって軟膏剤、クリーム剤などとすることができる。
医薬の形態が注射剤、口中剤等の場合には、上記したウィルス不活化剤の含有率は好ましくは０．２〜１０重量％、より好ましくは０．５〜５重量％の範囲である。【００２１】
本発明のウィルス不活化剤を含有した飲料品又は食料品は、上記製剤の形態でもよいが、あめ、せんべい、クッキー、飲料などの形態でそれぞれの製品原料に所要量を加えて、一般の製造法により加工製造することもできる。健康食品、機能性食品としての摂取は、病気予防、健康維持に用いられるので、経口摂取として１日数回に分けて、全日量として５ｍｇ〜５００ｍｇを含む加工品として摂取される。
これらの飲料品又は食料品にウィルス不活化剤を添加する際には、ウィルス不活化剤を粉末のまま添加してもよいが、好ましくはウィルス不活化剤を１〜２重量％の水溶液またはアルコール水溶液の溶液あるいはアルコール溶液とし、飲料品又は食料品に対し最終濃度が通常１〜１０，０００ｐｐｍ、好ましくは１００〜５０００ｐｐｍとなるように添加することが望ましい。
以下、実施例を示すが本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２２】
（リンゴ未熟果からのウィルス不活化剤の調製）
リンゴ未熟果（平均重量5.03ｇ）400ｇを１％塩酸酸性メタノールと共にホモジナイズした後、加熱還流しながら抽出し（３回）、抽出液を減圧濃縮してメタノールを留去後、クロロホルムを加えて分配し（２回）、水層を回収し、濾過後蒸留水で200mlにメスアップした。さらにSep-pak C18 を用いた固相抽出法により精製し、凍結乾燥してウィルス不活化剤8.9ｇを得た。リンゴ未熟果からの収率は2.2％であった。
なお、本ウィルス不活化剤をサイズ排除クロマトグラフィ（Kurumatani et al., J. Liq. Chromatogr. Realt. Technol. 28, 1971-1983, (2005)）を用いて測定したところ、本ウィルス不活化剤の平均分子量は約1,500と計算された。これは、カテキンに換算すると約5量体に相当する。
また、このウィルス不活化剤をPorterの方法を用いてプロアントシアニジン定量したところ、プロシアニジンB1に換算して６３％であった。
【実施例２】
【００２３】
（ホップ苞からのウィルス不活化剤の調製）
ホップ苞50gを1,000mlの40％エタノール水溶液で、攪拌下、50℃、60分間抽出した。ろ過後、容積が500mlになるまで減圧濃縮し、その濃縮液をスチレン−ジビニルベンゼン樹脂（三菱化学社製セパビーズ70）150mlを充填したカラムに通液し、次いで500mlの水で洗浄した。さらに同カラムに50％エタノール水溶液600mlを通液し、同溶出液を回収し、凍結乾燥して、ウィルス不活化成分1.7ｇを無臭のかすかに苦味を呈した淡黄色の粉末として得た。ホップ苞からの収率は3.4％であった。
また、このウィルス不活化剤をPorterの方法を用いてプロアントシアニジン定量したところ、プロシアニジンB1に換算して３６％であった。
【実施例３】
【００２４】
（限外ろ過膜を用いたウィルス不活化剤のさらなる精製）
実施例２と同様にして得たウィルス不活化成分５ｇを、500mlの20％エタノール水溶液に溶解し、分画分子量が10,000の限外ろ過膜（ミリポア社製YM10）で処理した。この膜を通過しなかった上残り液を濃縮した後凍結乾燥し、さらに精製されたウィルス不活化剤2.2ｇを黄色ないし茶色の粉末として得た。なお、実施例１と同様に、サイズ排除クロマトグラフィを用いて測定したところ、本ウィルス不活化剤の平均分子量は約6,300と計算された。これは、カテキンに換算すると約22量体に相当する。
この粉末をＨＰＬＣ分析すると特徴的なクロマトグラムとなり、一般的なポリフェノール類の定量法のひとつであるカテキン定量（食品公定分析法に記載された方法）を行ったところ、カテキン含量に換算して40.6％の値を得た。（ＨＰＬＣ条件）装置：島津ＬＣ−10Ａシステム、カラム：ODS-80TM（東ソー、4.6mm I.D.×25cm) 、移動相：（Ａ液：Ｂ液）＝(100：０) から同(50：50) まで30分間の直線グラディエント、Ａ液：５％アセトニトリル（0.1% HCl含有) 、Ｂ液：アセトニトリル、流速：1.0ml/min、サンプル注入量：20μg、検出：200〜300nmでの多波長検出。
カテキン定量における食品公定分析法（ＨＰＬＣ法）は、例えば農林水産省野菜・茶業試験場「茶の分析法」茶業研究報告 第７１号（１９９０）記載の方法に従って測定できる。
また、この粉末（ウィルス不活化剤）を前記Porterの方法を用いてプロアントシアニジン定量した結果、プロシアニジンB1に換算して５３％であった。
【実施例４】
【００２５】
（錠剤、カプセル剤）
実施例３に従って得た物質    １０．０ｇ
乳糖                        ７５．０ｇ
ステアリン酸マグネシウム    １５．０ｇ
合  計                    １００．０ｇ
上記の各重量部を均一に混合し、常法に従って錠剤、カプセル剤とした。なお実施例３に従って得た物質の代わりに、それぞれ実施例１、２に従って得た物質を添加した錠剤、カプセル剤も同様に得た。
【実施例５】
【００２６】
（散剤、顆粒剤）
実施例３に従って得た物質    ２０．０ｇ
澱粉                        ３０．０ｇ
乳糖                        ５０．０ｇ
合  計                    １００．０ｇ
上記の各重量部を均一に混合し、常法に従って散剤、顆粒剤とした。なお実施例３に従って得た物質の代わりに、それぞれ実施例１、２に従って得た物質を添加した散剤、顆粒剤も同様に得た。
【実施例６】
【００２７】
（注射剤）
実施例３に従って得た物質      １．０ｇ
界面活性剤                    ９．０ｇ
生理食塩水                  ９０．０ｇ
合  計                    １００．０ｇ
上記の各重量部を加熱混合、滅菌して注射剤とした。なお実施例３に従って得た物質の代わりに、それぞれ実施例１、２に従って得た物質を添加した散剤、顆粒剤も同様に得た。
【実施例７】
【００２８】
（飴）
ショ糖                      ２０．０ｇ
水飴（75％固形分）          ７０．０ｇ
水                          ９．５ｇ
着色料                        ０．４５ｇ
香  料                        ０．０４５ｇ
実施例３に従って得た物質      ０．００５ｇ
合  計                    １００．０ｇ
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従って飴とした。なお実施例３に従って得た物質の代わりに、それぞれ実施例１、２に従って得た物質を添加した飴も同様に得た。
【実施例８】
【００２９】
（ジュース）
濃縮ミカン果汁              １５．０ｇ
果  糖                        ５．０ｇ
クエン酸                      ０．２ｇ
香  料                        ０．１ｇ
色  素                        ０．１５ｇ
アスコルビン酸ナトリウム      ０．０４８ｇ
実施例３に従って得た物質      ０．００２ｇ
水                        ７９．５ｇ
合  計                    １００．０ｇ
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従ってジュースとした。なお実施例３に従って得た物質の代わりに、それぞれ実施例１、２に従って得た物質を添加したジュースも同様に得た。
【実施例９】
【００３０】
（クッキー）
薄力粉                      ３２．０ｇ
全  卵                      １６．０ｇ
バター                      １６．０ｇ
砂  糖                      ２５．０ｇ
水                        １０．８ｇ
ベーキングパウダー            ０．１９８ｇ
実施例３に従って得た物質      ０．００２ｇ
合  計                    １００．０ｇ
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従ってクッキーとした。なお実施例３に従って得た物質の代わりに、それぞれ実施例１、２に従って得た物質を添加したクッキーも同様に得た。【００３１】
比較例１
（呈味性比較）
１１名のパネラーに、実施例１もしくは実施例３で得られたウィルス不活化剤又はエピガロカテキンガレート（市販品：栗田化学）の100ppm水溶液の呈味性（渋み）を、官能により評価させ、集計した。パネラーには、各々の水溶液を、渋さについて１〜５点で評価させた。（渋さの強いものを５点、弱いものを１点とした。）その結果を表１に示す。実施例１および実施例３で得られたウィルス不活化剤は、茶カテキンに比べ呈味性において優れていることを確認した。
【表１】
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【実施例１０】
【００３２】
各種濃度の実施例１、実施例３で得られたウィルス不活化剤およびエピガロカテキンガレート（栗田工業）の各溶液と、シンドビスウィルスとの混合液を、９６穴プレート内に培養したベロ細胞に加え、1時間保温後洗浄し、３７℃で２日間培養した。実施例１、実施例３で得られたウィルス不活化剤の濃度は、サイズ排除クロマトグラフィの平均分子量の結果から、分子量をそれぞれ１５００、６３００として計算した。培養後、細胞の生存率を、セルカウンティングキット(Cell counting kit) （株式会社 同人化学研究所製）で測定した細胞活性（Cell Vability）で評価した。対照として、ポリフェノールおよびウィルスを添加していない細胞を用い、対照の示した細胞活性を１００％とした。その結果を図１に示す。実施例３で得られたウィルス不活化剤は茶カテキンの主成分であるエピガロカテキンガレートに比べ、強いウィルス不活化効果を示した。
【実施例１１】
【００３３】
各種濃度の実施例３で得られたウィルス不活化剤とＡ型インフルエンザウィルス（influenzaA /Beijin /352 /89 (H3N2)）とを、４℃で３０分間インキュベートしたものを発育鶏卵の漿尿膜腔に接種し、３５℃で４８時間インキュベートした。実施例３のウィルス不活化剤の濃度は、サイズ排除クロマトグラフィの結果から、分子量を６３００として計算した。インキュベート後、漿尿液を採取し、インフルエンザウィルスの量を、赤血球凝集活性で評価した。その結果を図２に示す。実施例３のウィルス不活化剤は、濃度依存的にインフルエンザウィルスの増殖を抑制した。
【実施例１２】
【００３４】
各種濃度の実施例１および実施例３で得られたウィルス不活化剤とＡ型インフルエンザウィルス（influenzaA /Beijin /352 /89 (H3N2)）とを混合し、４℃で３０分間インキュベートした後、鶏の赤血球に加え、その凝集活性でウィルスの感染力を評価した。実施例１、実施例３で得られたウィルス不活化剤の濃度は、サイズ排除クロマトグラフィの平均分子量の結果から、分子量をそれぞれ１５００、６３００として計算した。その結果を図３に示す。実施例１および実施例３で得られたウィルス不活化剤は、濃度依存的にＡ型インフルエンザウィルスの赤血球凝集活性を阻害し、ウィルスの感染力を減弱させた。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明のウィルス不活化剤は、ウィルスの増殖を抑制する効果を有するので、ウィルスの宿主への感染を阻害する効果を有する医薬、医薬部外品、又は、飲料品もしくは食料品などとして有効に利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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