(57)【要約】  本発明は、有効成分としてピロロキノリンキノン、好ましくはピロロキノリンキノンと補酵素Ｑ（特に還元型補酵素Ｑ）、を含有するミトコンドリア賦活剤を提供する。また、本発明は、有効成分としてクエン酸、好ましくはクエン酸と補酵素Ｑ（特に還元型補酵素Ｑ）、を含有するミトコンドリア賦活剤を提供する。  ピロロキノリンキノンまたはクエン酸は、補酵素Ｑ（特に還元型補酵素Ｑ）と相乗的なミトコンドリア活性化効果を発揮し、低用量でも高い効果を得ることができる。従って、本発明によれば、より安全で実用的なミトコンドリア賦活剤が提供される。  本発明はさらに、ミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピロロキノリンキノンまたはその誘導体を含むミトコンドリア賦活剤。
【請求項２】
（ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体並びに、
（ｂ）下記式（１）;
【化１】
2006025247.tif 000010
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑまたは
（ｃ）下記式（２）；
【化２】
2006025247.tif 000011
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑ、
を含む請求項１記載のミトコンドリア賦活剤。
【請求項３】
少なくとも（ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体並びに、
（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑ
を含む請求項２記載のミトコンドリア賦活剤。
【請求項４】
補酵素Ｑが補酵素Ｑ10である、請求項２記載のミトコンドリア賦活剤。
【請求項５】
請求項１から４のいずれかに記載のミトコンドリア賦活剤および抗酸化剤を含む組成物。
【請求項６】
抗酸化剤が、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、セレン、チオ硫酸ナトリウム、ビタミンＥ，ビタミンＥ誘導体、ピクノジェノール、フラバンジェノール、クエン酸、クエン酸誘導体、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼおよびアスコルビン酸ペルオキシダーゼからなる群より選択される少なくとも１種の化合物である請求項５の組成物。
【請求項７】
請求項１から４のいずれかに記載のミトコンドリア賦活剤、および、医薬または食品に許容される担体を含む、医薬または食品組成物。
【請求項８】
ミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置用の組成物であって、請求項１から４のいずれかに記載のミトコンドリア賦活剤の有効量を含む組成物。
【請求項９】
疾患が、糖尿病、ミトコンドリア病および脳疾患からなる群より選択される疾患である、請求項８記載の予防または処置用の組成物。
【請求項１０】
ミトコンドリアの機能不全に起因する疾患を予防または処置する方法であって、請求項１から４のいずれかに記載のミトコンドリア賦活剤の有効量を、哺乳動物対象に投与することを含む方法。
【請求項１１】
疾患が、糖尿病、ミトコンドリア病および脳疾患からなる群より選択される疾患である、請求項１０記載の予防または処置方法。
【請求項１２】
請求項１から４のいずれかに記載のミトコンドリア賦活剤の製造方法であって：
（ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体、並びに
（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、
を混合することを含む方法。
【請求項１３】
請求項８記載のミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置用の組成物の製造方法であって：
（ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体、並びに
（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、
を混合することを含む方法。
【請求項１４】
（ｂ）下記式（１）;
【化３】
2006025247.tif 000012
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑまたは
（ｃ）下記式（２）；
【化４】
2006025247.tif 000013
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑ、並びに
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を含むミトコンドリア賦活剤。
【請求項１５】
少なくとも（ｂ）前記式（１）還元型補酵素Ｑおよび
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を含む請求項１４記載のミトコンドリア賦活剤。
【請求項１６】
補酵素Ｑが補酵素Ｑ10である請求項１４記載のミトコンドリア賦活剤。
【請求項１７】
請求項１４から１６のいずれかに記載のミトコンドリア賦活剤、および医薬または食品として許容される担体を含む、医薬または食品用の組成物。
【請求項１８】
さらに抗酸化物質を含む請求項１７記載の組成物。
【請求項１９】
抗酸化剤が、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、セレン、チオ硫酸ナトリウム、ビタミンＥ，ビタミンＥ誘導体、ピクノジェノール、フラバンジェノール、ピロロキノリンキノン、ピロロキノリンキノン誘導体、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、およびアスコルビン酸ペルオキシダーゼからなる群より選択される１種以上の化合物である請求項１８記載の組成物。
【請求項２０】
哺乳動物のミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置剤であって、請求項１４から１６のいずれかに記載のミトコンドリア賦活剤の有効量を含む組成物。
【請求項２１】
疾患が、糖尿病、ミトコンドリア病および脳疾患からなる群より選択される疾患である、請求項２０記載の予防または処置用の組成物。
【請求項２２】
哺乳動物対象の、ミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置する方法であって、請求項１４から１６のいずれかに記載のミトコンドリア賦活剤の有効量を、該哺乳動物対象に、投与することを含む方法。
【請求項２３】
疾患が、糖尿病、ミトコンドリア病および脳疾患からなる群より選択される疾患である、請求項２２記載の予防または処置方法。
【請求項２４】
請求項１４から１６のいずれかに記載のミトコンドリア賦活剤の製造方法であって、
（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、並びに
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を混合すること含む方法。
【請求項２５】
請求項２０記載のミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置用の組成物の製造方法であって、
（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、並びに
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を混合すること含む方法。
【請求項２６】
クエン酸またはその誘導体を含むミトコンドリア賦活剤。
【請求項２７】
（ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体並びに、
（ｂ）下記式（１）;
【化５】
2006025247.tif 000014
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）下記式（２）；
【化６】
2006025247.tif 000015
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑ、並びに
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を含むミトコンドリア賦活剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピロロキノリンキノン誘導体を有効成分とするミトコンドリア賦活剤に関する。また、本発明は、還元型補酵素Ｑおよび／または酸化型補酵素Ｑ、並びにクエン酸誘導体を有効成分とするミトコンドリア賦活剤にも関する。ここでいうミトコンドリア賦活剤とは、ミトコンドリア機能の減弱あるいは不全に関係する各種疾患、例えば糖尿病、ミトコンドリア病および脳疾患の予防あるいは症状を改善できる組成物である。
【背景技術】
【０００２】
ミトコンドリアは、細胞内の小器官であり、種々の代謝およびエネルギー産生を行っていることが知られている。特に生体エネルギーとして重要なアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）は、ミトコンドリアの重要な生成物である。ミトコンドリアの活性低下は、即、ＡＴＰの枯渇を導き、ＡＴＰの枯渇により種々の疾患が発生する。例えば、心疾患、筋無力症、糖尿病、肝疾患、ミトコンドリア病（ミトコンドリア機能不全症）、脳疾患（例えば、パーキンソン病、ハンティントン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症等の神経変性症など）が挙げられるが、特に、重要なのが糖尿病である。【０００３】
糖尿病は最も一般的で重大な生活習慣病であり、全世界で１００万人以上の患者が知られている。更には、血糖値がやや高めである糖尿病予備軍といわれる人々の数は患者の数を遥かに上回る。このように糖尿病は、全世界的に重大な疾患である。糖尿病には、インスリンの分泌不全によるＩ型糖尿病（インスリン依存性糖尿病）とインスリンに対する感受性の低下によるII型糖尿病（インスリン非依存性糖尿病）が知られている。糖尿病患者の多くはII型糖尿病であり、このタイプの糖尿病は過食など不適当な生活習慣によって発症することが多い。このII型糖尿病は、すい臓ランゲルハンス島のインスリン分泌不全と各組織のインスリン感受性の低下があいまって起こると考えられている。すい臓ランゲルハンス島からのインスリン分泌は、血糖値の上昇に反応したＡＴＰの生合成が引き金となる。従って、ミトコンドリアの機能不全は、インスリン分泌を抑制し、糖尿病の一因となることが知られている。近年、ミトコンドリアの遺伝子異常により糖尿病が発生することが明らかになってきている。【０００４】
補酵素Ｑは、細菌から哺乳動物まで広く生体に分布する必須成分であり、生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分であることが知られている。補酵素Ｑは、ミトコンドリア内において酸化と還元を繰り返すことで電子伝達系における伝達成分としての機能を担っているほか、還元型補酵素Ｑは抗酸化作用を示すことが知られている。ヒトでは、補酵素Ｑの側鎖が繰り返し構造を１０個持つ、補酵素Ｑ10が主成分である。【０００５】
補酵素Ｑ10の重要な特徴として、その安全性が高いことが挙げられる。ラットに対する慢性毒性試験では、１２００ｍｇ／Ｋｇ／日、５２週間の連日投与でも、毒性的影響はなかったことが報告されている（非特許文献１）。【０００６】
補酵素Ｑ10は、酸化型補酵素Ｑ10が、日本ではうっ血性心不全薬として、欧米では健康食品として広く用いられている。酸化型補酵素Ｑ10と糖尿病との関係では、効果を示唆する報告がなされているものの（非特許文献２）、実際に、健康食品としての使用による糖尿病患者に対する有効性は知られていない。還元型補酵素Ｑ10は、酸化型補酵素Ｑ10の活性型であるが、空気中の酸素により容易に酸化を受け、酸化型補酵素Ｑ10に変換されるために製品としての使用は、従来行われてこなかった。我々は、以前に酸化型補酵素Ｑ10単独に比較して、還元型補酵素Ｑ10が糖尿病に対して強い有効性を持つことを示した（特許文献１）が、他の化合物との組み合わせにより、より強い効果が得られるということは全く判っていなかった。【０００７】
ピロロキノリンキノンは、２００３年に新しいビタミンとしての可能性が示された物質であり、強い抗酸化活性を示すことが知られており、その用途としては、神経成長因子産生促進（特許文献２）、糖尿病合併症治療（特許文献３）、メラニン産生抑制（特許文献４）などで有用性が報告されている。しかしながら、腎臓に対する強い毒性も報告されており（特許文献５）、所謂、安全域が狭いという問題点がある。ピロロキノリンキノンとミトコンドリアの関係については、マウスをピロロキノリンキノン欠乏食で飼育すると、ミトコンドリアの機能不全が起こる事が報告されているが（非特許文献２）、ピロロキノリンキノンによるミトコンドリア機能の賦活活性については知られていない。また、補酵素Ｑとピロロキノリンキノンは、共に抗酸化活性を示すという点とキノン骨格を持つ点が類似しているが、これらの相乗作用については、全く知見がない。
【特許文献１】ＷＯ０３／０７７８９５公報
【特許文献２】特開平０６−２１１６６０号公報
【特許文献３】特開平０６−２５６１９１号公報
【特許文献４】特開平０８−０２０５１２号公報
【特許文献５】特開平０５−７８２４７号公報
【非特許文献１】Ｋ．Ｄ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ、ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．４７  ３７５６−３７６３、１９９９
【引用文献２】
【０００８】
Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ、Ｙ．ｅｔ  ａｌ． 臨床と研究  ５８  １３４９−１３５２、１９８１
【非特許文献２】Ｒ．Ｒｕｃｋｅｒ、ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｂ−６  ａｎｄ  ＰＱＱ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ６１−６６、２０００
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ミトコンドリア賦活活性に関して高い効果が得られ、種々の疾患（特に糖尿病）の処置あるいは予防効果が期待できる組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
我々は、ミトコンドリア賦活活性を示す組成物を鋭意研究した結果、ピロロキノリン誘導体がミトコンドリア賦活活性を有することを見出した。さらに還元型補酵素Ｑとピロロキノリンキノン誘導体を組み合わせることにより、相乗的なミトコンドリア賦活活性が発現することを見出した。また、我々は、酸化型および／または還元型補酵素Ｑとクエン酸誘導体を組み合わせることにより、相乗的なミトコンドリア賦活活性が発現することも見出した。【００１１】
即ち、本発明が提供するのは以下の通りである：
[1]  ピロロキノリンキノンまたはその誘導体を含むミトコンドリア賦活剤。
[2]  （ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体並びに、
（ｂ）下記式（１）;【００１２】
【化１】
2006025247.tif 000002
【００１３】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑまたは
（ｃ）下記式（２）；【００１４】
【化２】
2006025247.tif 000003
【００１５】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑ、
を含む前記[1]のミトコンドリア賦活剤である。
[3]  少なくとも（ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体並びに、
（ｂ）下前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑ
を含むミトコンドリア賦活剤。
[4]  補酵素Ｑが補酵素Ｑ10である、[2]または[3]のミトコンドリア賦活剤。
[5]  [1]から[4]のいずれかのミトコンドリア賦活剤および抗酸化剤を含む組成物。
[6]  抗酸化剤が、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、セレン、チオ硫酸ナトリウム、ビタミンＥ，ビタミンＥ誘導体、ピクノジェノール、フラバンジェノール、クエン酸、クエン酸誘導体、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼおよびアスコルビン酸ペルオキシダーゼからなる群より選択される少なくとも１種の化合物である、[5]の組成物。
[7]  [1]から[4]のいずれかのミトコンドリア賦活剤および、医薬または食品に許容される担体を含む、医薬または食品組成物。
[8]  ミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置用の組成物であって、[1]から[4]のいずれかのミトコンドリア賦活剤の有効量を含む組成物。
[9]  疾患が、糖尿病、ミトコンドリア病および脳疾患からなる群より選択される疾患である、[8]の予防または処置用の組成物。
[10]  ミトコンドリアの機能不全に起因する疾患を予防または処置する方法であって、[1]から[4]のいずれかのミトコンドリア賦活剤の有効量を、哺乳動物対象に投与することを含む方法。
[11]  疾患が、糖尿病、ミトコンドリア病および脳疾患からなる群より選択される疾患である、[10]の予防または処置方法。
[12]  前記[1]から[4]のいずれかのミトコンドリア賦活剤の製造方法であって：
（ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体、並びに
（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、
を混合することを含む方法。
[13]  前記[8]のミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置用の組成物の製造方法であって：
（ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体、並びに
（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、
を混合することを含む方法。
[14]  （ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑまたは
（ｃ）前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、並びに
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を含むミトコンドリア賦活剤。
[15]  少なくとも（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を含む前記[14]のミトコンドリア賦活剤。
[16]  補酵素Ｑが補酵素Ｑ10である[14]または[15]のミトコンドリア賦活剤。
[17]  [14]から[16]いずれかのミトコンドリア賦活剤、および医薬または食品として許容される担体を含む、医薬または食品用の組成物。
[18]  さらに抗酸化物質を含む[17]の組成物。
[19]  抗酸化剤が、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、セレン、チオ硫酸ナトリウム、ビタミンＥ，ビタミンＥ誘導体、ピクノジェノール、フラバンジェノール、ピロロキノリンキノン、ピロロキノリンキノン誘導体、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、およびアスコルビン酸ペルオキシダーゼからなる群より選択される１種以上の化合物である[18]の組成物。
[20]  哺乳動物のミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置剤であって[14]から[16]いずれかのミトコンドリア賦活剤の有効量を含む組成物。
[21]  疾患が、糖尿病、ミトコンドリア病および脳疾患からなる群より選択される疾患である、[20]の予防または処置用の組成物。
[22]  哺乳動物対象の、ミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置する方法であって、[14]から[16]いずれかのミトコンドリア賦活剤の有効量を、該哺乳動物対象に、投与することを含む方法。
[23]  疾患が、糖尿病、ミトコンドリア病および脳疾患からなる群より選択される疾患である、[22]の予防または処置方法。
[24]  前記[14]から[16]のいずれかのミトコンドリア賦活剤の製造方法であって、
（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、並びに
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を混合すること含む方法。
[25]  前記[20]のミトコンドリアの機能不全に起因する疾患の予防または処置用の組成物の製造方法であって、
（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、並びに
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を混合すること含む方法。
[26]  クエン酸またはその誘導体を含むミトコンドリア賦活剤。
[27]   （ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体並びに、
（ｂ）前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、並びに
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を含むミトコンドリア賦活剤。
【発明の効果】
【００１６】
生体エネルギーを産生する重要なオルガネラであるミトコンドリアの活性低下は、種々の疾患の原因となっていることから、ミトコンドリア活性の賦活は、健康のために有用性が高い。本発明において、ピロロキノリンキノン誘導体そのものにミトコンドリア賦活活性があること、さらに、還元型補酵素Ｑとピロロキノリンキノン誘導体を組み合わせることで、相乗的なミトコンドリア賦活活性が得られることが判った。また、還元型補酵素Ｑおよび／または酸化型補酵素Ｑとクエン酸誘導体を組み合わせることで、相乗的なミトコンドリア賦活活性が得られることも判った。ピロロキノリンキノン誘導体は、安全性に問題があるため、クエン酸は、その酸味の強さにより、充分な量を服用することに問題があるため、これら化合物がそれぞれ低用量で相乗効果が認められたことにより、より安全で有用性の高い組成物が提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明におけるミトコンドリア賦活は、ミトコンドリア活性化を意味し得る。具体的には、ある化合物を、被検対象に投与する場合、該対象のミトコンドリアの活性が、コントロール対象のそれと比較して上昇するならば、該化合物は、ミトコンドリア賦活活性を有する。ミトコンドリアの活性は、例えばＡＴＰ生産能力を測定することによって、評価しうる。【００１８】
本発明の第１は、ピロロキノリンキノンまたはその誘導体を有効成分とするミトコンドリア賦活剤である。【００１９】
ピロロキノリンキノンは、２，７，９−トリカルボキシ−１Ｈ−ピロロ[２，３−ｆ]キノリン−４，５−ジオンである。本明細書におけるある化合物の誘導体は、ある化合物それ自体を含み、該化合物に小部分の構造上の変化があってできる化合物である。化合物中の水素原子あるいは特定の原子団が、他の原子あるいは原子団によって置換された化合物は、該化合物の誘導体であると理解される。【００２０】
ピロロキノリンキノン誘導体としては、例えば、ピロロキノリンキノール、イミダゾールピロロキノリンキノン、イミダゾールピロロキノリンキノン誘導体、ピロロキノリンキノンラクトン酸塩などがあげられる。言うまでもなくピロロキノリンキノンそのものでも良い。なかでも、ピロロキノリンキノン、ピロロキノリンキノンラクトン酸塩、ピロロキノリンキノールなどが好ましく、ピロロキノリンキノンがさらに好ましい。これらピロロキノリンキノン誘導体は、市販されている製品をそのまま用いても良いし、ピロロキノリンキノン誘導体を高度に含有した酵母、菌乾燥物、食品を用いることも出来る。本明細書では、ピロロキノリンキノンまたはその誘導体は、ピロロキノリンキノン類ということもある。【００２１】
本発明におけるミトコンドリア賦活剤は、有効成分として、上記ピロロキノリンキノンまたはその誘導体の他に、下記式（１）；【００２２】
【化３】
2006025247.tif 000004
【００２３】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または下記式（２）；【００２４】
【化４】
2006025247.tif 000005
【００２５】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑを含有してもよい。【００２６】
補酵素Ｑは、生体内においては通常約４０〜９０％程度が還元型で存在することが知られている。【００２７】
補酵素Ｑを得る方法としては特に限定されず、例えば、発酵、化学合成、天然物からの抽出等の従来公知の方法により得ることが出来る。このようにして得られる補酵素Ｑはそのほとんどが酸化型であり、酸化型補酵素Ｑとしてはこのようにして得られた補酵素Ｑをそのまま利用することも出来るし、さらに精製を行ってもよい。還元型補酵素Ｑを得る方法としては特に限定されず、例えば、上記公知の方法により補酵素Ｑを得た後、クロマトグラフィーにより流出液中の還元型補酵素Ｑ区分を濃縮する方法などを採用することが出来る。この場合においては、必要に応じて上記補酵素Ｑに対し、水素化ホウ素ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム(ハイドロサルファイトナトリウム)等の一般的な還元剤を添加し、常法により上記補酵素Ｑ中に含まれる酸化型補酵素Ｑを還元して還元型補酵素Ｑとした後にクロマトグラフィーによる濃縮を行っても良い。また、既存の高純度補酵素Ｑ（酸化型補酵素Ｑ）に上記還元剤を作用させる方法によっても得ることが出来る。あるいは、還元型補酵素Ｑを含有する菌体等を使用することも可能である。【００２８】
補酵素Ｑ中の還元型の割合は、通常、ＵＶ検出器を用いたＨＰＬＣシステムにより、試料中の酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑを定量し、その量比をもって算出する方法とＨＰＬＣに電気化学的検出器を組み込んだシステムにより酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの割合をピーク面積から算出する方法とがある。電気化学的検出器を組み込んだシステムでは、酸化還元物質を特異的に測れることと感度が高いことから、生体あるいは試料に微量に存在する還元型の割合を測定する場合は、有用性が高い。具体的には、島津社製のＨＰＬＣ分析装置に資生堂社製の電気化学的検出器を組み込み、以下のＨＰＬＣの条件で測定した。即ち、カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ（ＯＤＳ−Ａ３０３）、検出波長：２７５ｎｍ、移動相：メタノール（８８％）、ヘキサン（１２％）、流速：１ｍｌ／ｍｉｎである。【００２９】
本明細書において、単に「補酵素Ｑ」と記載した場合には、上記酸化型補酵素Ｑ、還元型補酵素Ｑ、酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの混合物のいずれをも意味する。【００３０】
本発明の第１のミトコンドリア賦活剤においては、補酵素Ｑおよびピロロキノリンキノン誘導体の含有量は特に制限されず、その製品コンセプトなどにより適宜決定できる。補酵素Ｑ中での還元型補酵素Ｑの割合を高める事は、その安定化対策などでコストが高まる可能性があるが、ピロロキノリンキノン誘導体とのより高い相乗効果を有し得る。【００３１】
２以上の作用物質を組み合わせた場合、それらの単独またはそれらの足しあわせ（すなわち相加効果）を越える効果を有するとき、それらの作用物質は、相乗効果を有すると、理解される。相乗効果を有する作用物質の２以上の組み合わせは、相乗効果を有し得る組み合わせ剤を形成し得る。本明細書で使用する「相乗性」の語は、第一の作用成分と第二の作用成分（存在する場合、さらに第三の作用成分）との相互作用によって、それらを別々に適用した場合に観察される作用を基にして予想される活性よりも大きな活性が示されることを意味する。従って、共適用により個々の作用成分の効果を加えたよりも有意により高い活性が得られる。従って、本発明は相乗性組成物にも関する。本発明の相乗性組成物は、それぞれ単独の作用成分の有効量よりも低い用量、すなわち相乗性有効量で、それぞれの作用成分単独を適用した場合の効果と同等以上の効果を達成しえる。【００３２】
あるいは、本発明において、ピロロキノリンキノン誘導体は、還元型補酵素Ｑおよび／または酸化型補酵素Ｑと組み合わせる場合、該補酵素Ｑのミトコンドリア賦活活性を増強する（そしてその逆）ものと理解される。したがって、ピロロキノリンキノン誘導体を含む、補酵素Ｑのミトコンドリア賦活剤の増強剤もまた、本発明の１側面である。逆に、補酵素Ｑを含む、ピロロキノリンキノン誘導体のミトコンドリア賦活剤の増強剤もまた、本発明の１側面である。ピロロキノリンキノン誘導体を高度に含有した酵母、菌乾燥物、食品を用いることも出来る。【００３３】
本発明の還元型補酵素Ｑまたは酸化型補酵素Ｑと、ピロロキノリンキノン誘導体の重量比は、特に限定されない。例えば、１重量部のピロロキノリンキノン誘導体に対して、約１００ないし１０、約１０ないし１、約１ないし０．１、または約０．１ないし０．０１重量部の補酵素Ｑを、使用し得る。望ましくは、重量比約１０：１ないし１：１０である。重量比約１：１が最も望ましい。また、ピロロキノリンキノン誘導体のみを有効成分として使用してもかまわない。【００３４】
本発明における第２のミトコンドリア賦活剤は、有効成分としてクエン酸誘導体を含む。有効成分としてクエン酸誘導体のみを含む賦活剤であってもよく、また、前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または、前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑ、並びにクエン酸誘導体を含有する組成物であってもよい。相乗的なミトコンドリア賦活活性が得られることから、クエン酸誘導体と補酵素Ｑを有効成分として含むことが好ましい。【００３５】
本発明の第２のミトコンドリア賦活剤に用いられる、還元型補酵素Ｑおよび酸化型補酵素Ｑについては、上述の第１のミトコンドリア賦活剤に用いられる還元型補酵素Ｑおよび酸化型補酵素Ｑの説明と同じである。【００３６】
本発明の第２のミトコンドリア賦活剤において、クエン酸およびクエン酸誘導体は市販されている製品をそのまま用いることが可能である。【００３７】
本明細書における誘導体は、ある化合物に小部分の構造上の変化があってできる化合物である。化合物中の水素原子あるいは特定の原子団が、他の原子あるいは原子団によって置換された化合物は、該化合物の誘導体であると理解される。本明細書では、該化合物それ自体をまた、その誘導体に含むものとする。クエン酸誘導体は、具体的には、クエン酸、クエン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カルシウム、クエン酸イソプロピル、クエン酸鉄などが用いられる。好ましくは、クエン酸誘導体は、クエン酸ナトリウムである。【００３８】
本発明の第２のミトコンドリア賦活剤においては、補酵素Ｑおよびクエン酸誘導体の含有量は特に制限されず、その製品コンセプトなどにより適宜決定できる。補酵素Ｑ中での還元型補酵素Ｑの割合を高める事は、その安定化対策などでコストが高まる可能性があるが、クエン酸誘導体とのより高い相乗効果を有し得る。
ここでいう相乗効果とは、上記本発明の第１のミトコンドリア賦活剤における説明と同じである。【００３９】
あるいは、本発明において、クエン酸誘導体は、還元型補酵素Ｑおよび／または酸化型補酵素Ｑと組み合わせる場合、該補酵素Ｑのミトコンドリア賦活活性を増強するものと理解される。したがって、クエン酸誘導体を含む、補酵素Ｑのミトコンドリア賦活剤の増強剤もまた、本発明の１側面である。逆に、補酵素Ｑを含む、クエン酸誘導体のミトコンドリア賦活剤の増強剤もまた、本発明の１側面である。クエン酸誘導体を高度に含有した酵母、菌乾燥物、食品を用いることも出来る。
本発明の補酵素Ｑとクエン酸誘導体の重量比は、例えば１：１００ないし１０：１であり得る。量比は例えば、約１：１が望ましく、約１：１０が更に望ましいが、特に限定されるものではない。【００４０】
さらに本発明は、
（ａ）ピロロキノリンキノンまたはその誘導体並びに、
（ｂ）下記式（１）;【００４１】
【化５】
2006025247.tif 000006
【００４２】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑおよび／または
（ｃ）下記式（２）；【００４３】
【化６】
2006025247.tif 000007
【００４４】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑ、並びに
（ｄ）クエン酸またはその誘導体、
を含むミトコンドリア賦活用の組成物も提供する。これら各種成分については、既に説明したとおりである。【００４５】
以下は、本発明の第１のミトコンドリア賦活剤および第２のミトコンドリア賦活剤に共通する説明である。単に「有効成分」と記載した場合、第１のミトコンドリア賦活剤においては、ピロロキノリンキノン誘導体、好ましくはピロロキノリンキノン誘導体と補酵素Ｑを示し、第２のミトコンドリア賦活剤においてはクエン酸誘導体、好ましくはクエン酸誘導体および補酵素Ｑを示す。
本発明のミトコンドリア賦活剤においては、補酵素Ｑは酸化型補酵素Ｑあるいは還元型補酵素Ｑのみを有効成分としても良いし、還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑの混合物を有効成分としても良い。ピロロキノリンキノンまたはクエン酸誘導体とより高い相乗効果が得られることから、補酵素Ｑとしては少なくとも還元型補酵素Ｑを含有することが好ましい。還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑの割合は特に制限はないが、補酵素Ｑ全体に対して還元型補酵素Ｑの割合が、約６０重量％以上、約１００重量％以下であるのが好ましく、約８０重量％以上、約９９重量％以下であるのがより好ましい。【００４６】
本発明で使用出来る還元型補酵素Ｑは前記式（１）で表されるように側鎖の繰り返し単位（式中ｎ）が１〜１２のものを使用することが出来るが、中でも側鎖繰り返し単位が１０のもの、すなわち還元型補酵素Ｑ10が特に好適に使用出来る。前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑについても同様に酸化型補酵素Ｑ10が好適に使用出来る。【００４７】
本発明のミトコンドリア賦活剤は、所望の形態に製剤化してもよい。本発明のミトコンドリア賦活剤は、本発明の有効成分（2種以上であることもある）を、約０．１ないし１００重量％、好ましくは約１ないし９９重量％、より好ましくは約１０ないし９０重量％含み得る。本発明のミトコンドリア賦活剤の剤形としては特に限定されず、経口剤であってもよく、あるいは皮膚に直接塗布するものであってもよい。経口剤としては、例えば粉末剤であってもよく、結合剤を加えて顆粒剤としてもよく、粉末剤あるいは顆粒剤をカプセルに充填してカプセル剤としてもよい。また、天然油、油状の高級脂肪酸、高級脂肪酸モノグリセライド、界面活性剤またはこれらの混合物などを加え、油状のまま充填してソフトカプセル剤とすることもできる。この場合においては、ゼラチンを主体としたものまたはその他の水溶性高分子物質を主体としたもの等を使用することもできる。また、このようなカプセルにはマイクロカプセルも含まれる。あるいは、液状にしてドリンク剤としてもよい。【００４８】
本発明のミトコンドリア賦活剤には、更に、上記有効成分の他に、薬剤学的にまたは食品工学上許容される他の製剤担体を、常法により適宜添加混合してもよい。このようなものとしては特に限定されず、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などが挙げられる。【００４９】
上記賦形剤としては特に限定されず、例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ（トウモロコシ澱粉）、マンニト−ル、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、などが挙げられる。上記崩壊剤としては特に限定されず、例えば、澱粉、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガント等が挙げられる。【００５０】
上記滑沢剤としては特に限定されず、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等が挙げられる。上記結合剤としては特に限定されず、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トラガント、シェラック、ゼラチン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ソルビトール等が挙げられる。【００５１】
上記酸化防止剤としては特に限定されず、例えば、アスコルビン酸、トコフェロール、ビタミンＡ、β−カロチン、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸などが挙げられる。【００５２】
上記着色剤としては特に限定されず、例えば、医薬品に添加することが許可されているものなどを使用することができる。【００５３】
上記凝集防止剤としては特に限定されず、例えばステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸などが挙げられる。【００５４】
上記吸収促進剤としては特に限定されず、例えば高級アルコール類、高級脂肪酸類、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステルなどの界面活性剤などが挙げられる。【００５５】
上記溶解補助剤としては特に限定されず、例えばフマル酸、コハク酸、りんご酸などの有機酸などが挙げられる。上記安定化剤としては特に限定されず、例えば安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチルなどが挙げられる。皮膚に直接塗布する場合は、剤型は、特に限定されるものではなく、例えば、適当な基剤中に上記薬物を溶解または混合分散させてクリーム状、ペースト状、ジェリー状、ゲル状、乳液状、液状の形状になされたもの(軟膏剤、リニメント剤、ローション剤、クリーム剤、スプレー剤など)、基剤中に上記薬物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（パップ剤など）、粘着剤中に上記薬物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（プラスター剤、テープ剤など）などが挙げられる。基材、粘着剤としては必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲で、医薬品、化粧品などに通常用いられている基材が使用出来る。【００５６】
本発明のミトコンドリア賦活剤には、抗酸化剤、例えば抗酸化物質あるいは抗酸化酵素を共に含有する事ができる。抗酸化物質としては特に限定はされないが、例えば、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、ピクノジェノール、フラバンジェノール、クエン酸、クエン酸誘導体、ピロロキノリンキノン、ピロロキノリンキノン誘導体又はセレンなどが適している。上記は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。また、抗酸化酵素としては、特に限定はされないが、例えば、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、又はアスコルビン酸ペルオキシダーゼなどが適している。上記は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。【００５７】
本発明のミトコンドリア賦活剤は、他の滋養強壮成分を共に含む事ができる。滋養強壮成分としては、特に限定はされないが、例えば、クレアチン、タウリン、ビタミンＢ1、ビタミンＢ誘導体、又はアミノ酸などが適している。上記は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。本発明の有効成分とこれらの成分を混合する事により、相加的あるいは相乗的な効果が更に期待できる。【００５８】
本発明のミトコンドリア賦活剤は、栄養補助成分を共に含む事ができる。栄養補助成分としては、特に限定はされないが、アミノ酸、金属イオン、糖類、蛋白質類、脂肪酸類、ビタミンなどが挙げられる。【００５９】
本発明のミトコンドリア賦活剤を一般食品とする場合の形態は、特には限定されないが、食用油脂組成物、調理油類、スプレー油類、バター類、マーガリン類、ショートニング類、ホイップクリーム類、濃縮乳類、ホワイトナー類、ドレッシング類、ピックル液類、パン類、ケーキ類、パイ類、クッキー類、和菓子類、スナック菓子類、油菓子類、チョコレート及びチョコレート菓子類、米菓類、ルウ類、ソース類、たれ類、トッピング類、氷菓類、麺類、ベーカリーミックス類、フライ食品類、加工肉製品類、水産練り製品類、冷凍アントレ類、畜産冷凍食品、農産冷凍食品などの冷凍食品類、米飯類、ジャム類、チーズ、チーズフード、チーズ様食品、ガム類、キャンデイー類、発酵乳類、缶詰類、飲料類などが挙げられる。【００６０】
本発明のミトコンドリア賦活剤は、皮膚に直接塗布することにより、皮膚中のミトコンドリア活性を改善することができる。この場合、皮膚細胞の活性化により、皮膚の張り、保水性、シワ、くすみ、シミなどの改善効果が可能である。更には、上記のスキンケア効果を目的とした成分を共に含有させることも可能である。【００６１】
本発明のミトコンドリア賦活剤を作製する際の、各種有効成分の含有量、製品形態、製品の保存方法および保存形態は、そのミトコンドリア賦活剤の商品設計および用途などに応じて適宜決定される。【００６２】
本発明のミトコンドリア賦活剤により、ミトコンドリアが関与する疾患、体調不良あるいはスキンケアに対する改善効果が可能である。ミトコンドリアの機能不全に起因する疾患は、ミトコンドリア機能の減弱あるいは不全に関係する各種疾患を含む。該疾患は、例えば糖尿病、皮膚障害、例えば肌荒れ、疲労、例えば慢性疲労症候群、心臓病、ミトコンドリア病および脳疾患を含む。本発明のミトコンドリア賦活剤は、上記疾患または状態の処置、予防、治療または改善用の組成物として利用しうる。【００６３】
哺乳動物対象は、ヒト以外の哺乳動物を含むが、ヒトが好ましい。
「有効量」は、処置される対象への予防または治療効果を付与する化合物の量を意味する。治療効果は、客観的（すなわち、何らかの試験またはマーカーによって測定可能）または主観的（すなわち対象が効果を指摘または感じる）であり得る。前記の化合物の用量レベルおよび、組み合わせの投与の頻度は、それぞれの使用される化合物の能力、その化合物の代謝的安定性および作用の長さ、患者の年齢、体重、一般健康、性別、食餌、投与の様式および時間、排出の割合、薬物組み合わせ、処置すべき状態の重度、および患者が経験する処置または予防に依存して変化する。好適な有効量の決定は当業者の通常の技術範囲内であり、当業者は経験的または実験的に決定し得る。【００６４】
一日用量は、有効成分として還元型および／または酸化型補酵素Ｑに着目した場合、例えば、ヒト１日あたり約１０ｍｇないし約５００ｍｇ、好ましくはヒト１日あたり約３０ｍｇないし約３００ｍｇ、特にヒト１日あたり約５０ないし約１００ｍｇであり得、単回または多回投与で投与されるものである。他の有効成分であるピロロキノリンキノン誘導体またはクエン酸誘導体の１日用量としては、上記還元型および／または酸化型補酵素Ｑの１日用量に準ずる。通常は、そのような投与は、経口的に実施されるが、例えば経皮、経粘膜、経腸投与、または血管への直接的な注入などの注射による投与もまた選択しうる。【００６５】
本発明は、相乗性有効量の第一の作用成分と第二の作用成分を、別個の単位、例えばカプセル、錠剤または丸薬に製剤化し、そして組み合わせた、組み合わせ剤を提供する。本発明はまた、該組み合わせ剤を、必要により同時的または逐次的に適用すべき旨の指示書とともに含む、またはその旨の表示を付した包装とともに含む、商業的製品を提供する。【００６６】
本発明の第１のミトコンドリア賦活剤の製造方法は、ピロロキノリンキノン誘導体に加えて、還元型補酵素Ｑおよび／又は酸化型補酵素Ｑを混合することを含む。所望により、抗酸化剤及び上述した製剤担体などを混合してもよい。製薬的にまたは食品工学的に適用可能な製造方法を組み合わせ得る。同様にして医薬または食品用の組成物を製造できる。【００６７】
本発明の第２のミトコンドリア賦活剤の製造方法は、クエン酸誘導体に加えて、還元型補酵素Ｑおよび／又は酸化型補酵素Ｑを混合することを含む。所望により、抗酸化剤及び上述した製剤担体などを混合してもよい。同様にして医薬または食品用の組成物を製造できる。製薬的にまたは食品工学的に適用可能な製造方法を組み合わせ得る。
【実施例】
【００６８】
以下に実施例及び製剤例を挙げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例および製剤例のみに限定されるものではない。【００６９】
（製造例１）還元型補酵素Ｑ10の製造
１０００ｇのエタノール中に、１００ｇの酸化型補酵素Ｑ10（純度９９．４％）、６０ｇのＬ−アスコルビン酸を加え、７８℃にて攪拌し、還元反応を行った。３０時間後、５０℃まで冷却し、同温を保持しながらエタノール３３０ｇと水７０ｇ添加した。このエタノール溶液（還元型補酵素Ｑ10を１００ｇ含む）を攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却し、白色のスラリーを得た。得られたスラリーを減圧濾過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノールで順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶９７ｇを得た。減圧乾燥を除く全ての操作は窒素雰囲気下で実施した。【００７０】
（製造例２）還元型補酵素Ｑ10の製造
１００ｇの酸化型補酵素Ｑ10を２５℃で１０００ｇのヘプタン溶液に溶解させた。攪拌しながら、還元剤として次亜硫酸ナトリウム（純度７５％以上）１００ｇに１０００ｍｌの水を加えて溶解させた水溶液を徐々に添加し、２５℃、ｐＨ４〜６で還元反応を行った。２時間後、反応液から水相を除去し、脱気した飽和食塩水１０００ｇでヘプタン相を６回水洗した。以上、すべての操作は窒素雰囲気下で実施した。このヘプタン相を減圧下にて溶媒置換し、５０℃の還元型補酵素Ｑ10の７％（ｗ／ｗ）エタノール溶液を調製した（還元型補酵素Ｑ10を１００ｇ含む）。このエタノール溶液に水５０ｇを添加し、攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却して結晶を析出させた。全ての操作は窒素雰囲気下で実施した。得られたスラリーを減圧濾過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノールで順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに、湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶９７ｇを得た。【００７１】
（実施例１）  本発明の第１のミトコンドリア賦活剤のインスリン分泌活性への影響
被験物質のミトコンドリア賦活活性を評価する際に、ミトコンドリア活性の指標であるＡＴＰは細胞内で生産と消費がほぼ同時に進行するために、ＡＴＰ生産量の変化が把握しにくいという問題点があった。そこでＡＴＰに反応して、インスリンを分泌する膵臓ランゲルハンス島組織を用い、インスリン分泌を指標として被験物質のミトコンドリア賦活活性を評価した。【００７２】
膵臓ランゲルハンス島組織は、ラットから調整された培養キット（ホクドー社製）を用いた。ランゲルハンス島組織をＣＯ2インキュベーターで２４時間、前培養した後、被験物質（酸化型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ10およびピロロキノリンキノン）を単独あるいは混合して含有する培地に交換、１時間の培養後、培地中に分泌されたインスリンをＥＬＩＳＡ法で定量することによって、被験物質のＡＴＰ産生に対する効果を評価した。その結果を表１に示す。【００７３】
【表１】
2006025247.tif 000008
【００７４】
酸化型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ10およびピロロキノリンキノンは、０．１μｇ／ｍｌの添加量で培地中のインスリン濃度をそれぞれ７．７倍、８．３倍および５．１倍に増加させ、膵臓ランゲルハンス島組織でのＡＴＰ産生を賦活している事が明らかになった。更には、ピロロキノリンキノンと酸化型または還元型補酵素Ｑ10の併用により、インスリン量は、それぞれ３５倍および４３倍に増加し、これらの化合物がＡＴＰの生合成に対して相乗的に働くことが明らかになった。【００７５】
（実施例２）  本発明の第２のミトコンドリア賦活剤のインスリン分泌活性への影響
実施例１と同様に、膵臓ランゲルハンス島組織を用い、インスリン分泌活性を指標とした比肩物質のミトコンドリア賦活活性を評価した。膵臓ランゲルハンス島組織は、ラットから調整された培養キット（ホクドー社製）を用いた。ランゲルハンス島組織をＣＯ2インキュベーターで２４時間、前培養した後、被験物質（酸化型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ10およびクエン酸）を単独あるいは混合して含有する培地に交換、１時間の培養後、培地中に分泌されたインスリンをＥＬＩＳＡ法で定量することによって、被験物質のＡＴＰ産生に対する効果を評価した。その結果を表２に示す。【００７６】
【表２】
2006025247.tif 000009
【００７７】
酸化型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ10およびクエン酸は、０．１μｇ／ｍｌの添加量で培地中のインスリン濃度をそれぞれ７．７倍、８．３倍および４７倍に増加させ、膵臓ランゲルハンス島組織でのＡＴＰ産生を賦活している事が明らかになった。更には、クエン酸と酸化型または還元型補酵素Ｑ10の併用により、インスリン量は、それぞれ６９倍および７７倍に増加し、これらの化合物がＡＴＰの生合成に対して相乗的に働くことが明らかになった。【００７８】
（製剤例１）
オリーブオイルを６０℃に加温し、同様に６０℃で溶融した補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）およびピロロキノリンキノンを加えた。これにビタミンＥを少しずつ加えて均質とし、常法によりソフトカプセル化した。１カプセル中に補酵素Ｑ10として２０ｍｇ、ピロロキノリンキノンとして２０ｍｇを含有するソフトカプセル製剤を得た。【００７９】
補酵素Ｑ10             ２０重量部
ピロロキノリンキノン    ２０重量部
ビタミンＥ             １５重量部
オリーブ油           ３５０重量部【００８０】
（製剤例２）
補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）及びピロロキノリンキノンをアセトンに加え、次いでこれを結晶セルロース（微粉末）に吸着させた後、乾燥した。これをコーンスターチと混合し、常法により散剤とした。【００８１】
補酵素Ｑ10             １０重量部
ピロロキノリンキノン    １０重量部
結晶セルロース          ４０重量部
コーンスターチ          ５５重量部【００８２】
（製剤例３）
補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）及びピロロキノリンキノンをアセトンに加え、次いでこれを結晶セルロース（微粉末）に吸着させた後、乾燥した。これにコーンスターチ、乳糖、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウムを混合し、次いでポリビニルピロリドンの水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤としてタルクを加えて混合した後、１錠に補酵素Ｑ10を２０ｍｇ、ピロロキノリンキノンを２０ｍｇ含有する錠剤に打錠した。【００８３】
補酵素Ｑ10                               ２０重量部
ピロロキノリンキノン                      ２０重量部
コーンスターチ                            ２５重量部
乳糖                                      １５重量部
カルボキシメチルセルロースカルシウム      １０重量部
結晶セルロース                            ４０重量部
ポリビニルピロリドン                        ５重量部
ステアリン酸マグネシウム                    ３重量部
タルク                                    １０重量部【００８４】
（製剤例４）
下記成分を常法により顆粒化した後、ゼラチン硬カプセルに充填した。１カプセル中に補酵素Ｑ10を２０ｍｇ、ピロロキノリンキノンを２０ｍｇ含有するカプセル剤を得た。【００８５】
補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）    ２０重量部
ピロロキノリンキノン                                          ２０重量部
結晶セルロース                                                ４０重量部
コーンスターチ                                                ２０重量部
乳糖                                                          ６２重量部
ステアリン酸マグネシウム                                        ２重量部
ポリビニルピロリドン                                            ３重量部【００８６】
（製剤例５）
オリーブオイルを６０℃に加温し、同様に６０℃で溶融した補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）およびクエン酸を加えた。これにビタミンＥを少しずつ加えて均質とし、常法によりソフトカプセル化した。１カプセル中に補酵素Ｑ10として２０ｍｇ、クエン酸として２０ｍｇを含有するソフトカプセル製剤を得た。【００８７】
補酵素Ｑ10             ２０重量部
クエン酸                ２０重量部
ビタミンＥ             １５重量部
オリーブ油           ３５０重量部【００８８】
（製剤例６）
補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）及びクエン酸をアセトンに加え、次いでこれを結晶セルロース（微粉末）に吸着させた後、乾燥した。これをコーンスターチと混合し、常法により散剤とした。【００８９】
補酵素Ｑ10             １０重量部
クエン酸                １０重量部
結晶セルロース          ４０重量部
コーンスターチ          ５５重量部【００９０】
（製剤例７）
補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）及びクエン酸をアセトンに加え、次いでこれを結晶セルロース（微粉末）に吸着させた後、乾燥した。これにコーンスターチ、乳糖、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウムを混合し、次いでポリビニルピロリドンの水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤としてタルクを加えて混合した後、１錠に補酵素Ｑ10を２０ｍｇ、クエン酸を２０ｍｇ含有する錠剤に打錠した。【００９１】
補酵素Ｑ10                               ２０重量部
クエン酸                                  ２０重量部
コーンスターチ                            ２５重量部
乳糖                                      １５重量部
カルボキシメチルセルロースカルシウム      １０重量部
結晶セルロース                            ４０重量部
ポリビニルピロリドン                        ５重量部
ステアリン酸マグネシウム                    ３重量部
タルク                                    １０重量部【００９２】
（製剤例８）
下記成分を常法により顆粒化した後、ゼラチン硬カプセルに充填した。１カプセル中に補酵素Ｑ10を２０ｍｇ、クエン酸を２０ｍｇ含有するカプセル剤を得た。【００９３】
補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）    ２０重量部
クエン酸                                                      ２０重量部
結晶セルロース                                                ４０重量部
コーンスターチ                                                ２０重量部
乳糖                                                          ６２重量部
ステアリン酸マグネシウム                                        ２重量部
ポリビニルピロリドン                                            ３重量部
【国際調査報告】
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