(57)【要約】  本発明は、機能性物質をその表面に有する細菌およびその製造方法を提供すること。特に、腸吸収性のよいそのような細菌を製造することを課題とする。本発明は、一般式（Ｉ）：【化１】2005095428.tif 000039  （式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｒ４は、Ｈ、置換されていてもよいアセチル基、置換されていてもよいモノホスフェート基、置換されていてもよいジホスフェート基または置換されていてもよいトリホスフェート基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、または−Ｃ≡Ｃ−、あるいは機能性を付与する基であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、−Ｃ≡ＣＨ、または機能性を付与する基である）である）で示される、化合物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2005095428.tif 000033
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｒ４は、Ｈ、置換されていてもよいアセチル基、置換されていてもよいモノホスフェート基、置換されていてもよいジホスフェート基または置換されていてもよいトリホスフェート基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＨ２（Ｚ１）−（式中、Ｚ１は、保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基またはシステイン残基である）であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、−Ｃ≡ＣＨ、または−Ｚ２（Ｚ２は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基もしくはシステイン残基である）である）
で示される、化合物。
【請求項２】
前記Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、すべてアセチル基で保護される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｒ４は、モノホスフェート基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、すべてアセチル基で保護され、前記Ｒ４は、モノホスフェート基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜６の正の整数である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
以下の式：
【化２】
2005095428.tif 000034
（式中、Ａｃはアセチル基である）で表される、化合物。
【請求項８】
以下の式：
【化３】
2005095428.tif 000035
（式中、Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＨ２（Ｚ１）−（式中、−ＣＨ２（Ｚ１）−のＺ１は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基またはシステイン残基である）であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、−Ｃ≡ＣＨ、または−Ｚ２（Ｚ２は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基もしくはシステイン残基である）であり；Ｒ５は、アセチル基またはグリコリル基であり、Ｒ６は、ＨまたはＣＯＯＨである）
で示される基からなる群より選択される基を細胞の細胞壁構成成分として含有する細菌。
【請求項９】
前記化合物が機能性物質を含む請求項８に記載の細菌。
【請求項１０】
前記機能性物質が蛍光剤、シクロデキストリン、金属キレート剤、糖鎖、ペプチド、ポリペプチド、または核酸である請求項９に記載の細菌。
【請求項１１】
前記ＷおよびＹの少なくともいずれか一つがＣ＝Ｏを有し、該Ｃ＝Ｏには、シクロデキストリン、金属キレート剤、糖鎖、ペプチド、ポリペプチド、もしくは核酸糖鎖またはその改変体、あるいは、蛍光色素が結合されている、請求項８に記載の細菌。
【請求項１２】
前記蛍光色素は、
【化４】
2005095428.tif 000036
で示される化合物である、請求項１１に記載の細菌。
【請求項１３】
細菌がグラム陽性菌である請求項８に記載の細菌。
【請求項１４】
グラム陽性菌がラクトバシルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ロイコノストック  （Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、バシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、または  コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｃｔｅｒｉｕｍ）属である請求項１３に記載の細菌。
【請求項１５】
一般式（Ｉ）：
【化５】
2005095428.tif 000037
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｒ４は、Ｈ、置換されていてもよいアセチル基、置換されていてもよいモノホスフェート基、置換されていてもよいジホスフェート基または置換されていてもよいトリホスフェート基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＨ２（Ｚ１）−（式中、−ＣＨ２（Ｚ１）−のＺ１は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基またはシステイン残基である）であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、−Ｃ≡ＣＨ、または−Ｚ２（Ｚ２は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基もしくはシステイン残基である）である）
で示される、化合物を、培地に添加して細菌を培養することにより、一般式：
【化６】
2005095428.tif 000038
（式中、Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＨ２（Ｚ１）−（式中、Ｚ１は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基またはシステイン残基である）であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、−Ｃ≡ＣＨ、または−Ｚ２（Ｚ２は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基もしくはシステイン残基である）であり；Ｒ５は、アセチル基またはグリコリル基であり、Ｒ６は、ＨまたはＣＯＯＨである）で示される基が、細菌の細胞壁成分の一部分として組み込まれることを特徴とする、細菌の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞表面がグルコサミンβ１→４ムラミルペンタペプチド誘導体で改変された改良型細菌およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細菌は非常に微細であるが、その表面に糖や脂質が存在するので非常に多彩な生理活性を有する。その細胞表面を自由に制御できれば目的とする  生理活性を有する微粒子が得られることになる。細胞の表面を修飾する方法として、遺伝子方法と化学的方法がある。遺伝子的方法として細胞表面に提示させたいタンパク質のｃＤＮＡを酵母のＤＮＡに組み込みＧＰＩ（グリコシルホスファチジルイノシトール）アンカーと呼ばれる脂質を支持担体として表面に発現させる植田等の方法（非特許文献１）や、Ｓ．Ｓｔａｈｌ等の細菌の表面にタンパク質を発現させる方法（総説として、非特許文献２）が知られている。また化学的方法としてＮ−アセチルマンノサミンにケトンを導入した化合物を細胞に添加しケトンを表面に提示するＢｅｒｔｏｚｚｉ等の方法（非特許文献３）が知られている。【０００３】
特許文献１は、Ｎ−アセチルムラミルペンタペプチド誘導体を開示する。しかし、このペプチド誘導体は、細胞壁への導入が十分とはいえない。  従って、表面修飾率が改善された、機能改変型細菌を提供することに対して需要がある。
【非特許文献１】現代科学２００１年４月号、Ｎｏ．３６１、４８−５４
【非特許文献２】ＴＩＢＴＥＣＨ，Ｍａｙ  １９９７，ｖｏｌ．１５，１８５−１９２
【非特許文献３】Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９７  Ｍａｙ  １６，２７６，１１２５−１１２８。
【特許文献１】特開２００３−１２５７５８号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、細菌の表面の機能を改変するのに十分な量の機能性物質を導入した細菌を提供すること、およびそのような細菌を効率的に製造する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討を行なった。その結果、新規ＧｌｃＮＡｃ誘導体を用いてＮ−アセチルムラミルウリジン二リン酸ペンタペプチド誘導体を添加した培地で細菌を培養すると、該物質が細菌の細胞壁成分の一部分として取り込まれ、その結果、細菌表面がグルコサミンβ１→４ムラミルペンタペプチド誘導体で修飾されることを見出した。この現象を利用すれば細菌の表面の機能を改変するのに十分な量の機能性物質を導入した細菌を製造することができる。【０００６】
即ち、本発明は、一般式（Ｉ）：【０００７】
【化７】
2005095428.tif 000002
【０００８】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｒ４は、Ｈ、置換されていてもよいアセチル基、置換されていてもよいモノホスフェート基、置換されていてもよいジホスフェート基または置換されていてもよいトリホスフェート基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＨ２（Ｚ１）−（式中、Ｚ１は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基またはシステイン残基である）であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、−Ｃ≡ＣＨ、または−Ｚ２（Ｚ２は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基もしくはシステイン残基である）である）
で示される、化合物を提供する。【０００９】
１つの実施形態において、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたはアセチル基から選択される置換基であり得、好ましくは、すべてアセチル基で保護され得る。【００１０】
１つの実施形態において、上記式中、Ｒ４は、Ｈ、アセチル基または置換されていてもよいモノホスフェート基であってもよく、好ましくは、置換されていてもよいモノホスフェート基であり、さらに好ましくは、モノホスフェート基である。【００１１】
１つの実施形態において、上記式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、すべてアセチル基で保護され、Ｒ４は、モノホスフェート基である。【００１２】
１つの実施形態において、前記Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ３であることが好ましい。【００１３】
１つの実施形態において、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜６の正の整数であることが好ましく、さらに好ましくは、ｎは１〜３であり、最も好ましくはｎは２である。【００１４】
別の実施形態において、本発明は、
以下の式：【００１５】
【化８】
2005095428.tif 000003
【００１６】
（式中、Ａｃはアセチル基である）で表される、化合物を提供する。【００１７】
別の局面において、本発明は、以下の式：【００１８】
【化９】
2005095428.tif 000004
【００１９】
（式中、Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＨ２（Ｚ１）−（式中、Ｚ１は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基またはシステイン残基である）であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、−Ｃ≡ＣＨ、または−Ｚ２（Ｚ２は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基もしくはシステイン残基である）であり；Ｒ５は、アセチル基またはグリコリル基であり、Ｒ６は、ＨまたはＣＯＯＨであり、Ａｃはアセチルである）で示される基からなる群より選択される基を細胞の細胞壁構成成分として含有する細菌を提供する。１つの実施形態では、上記化合物は、機能性物質を含み得る。これらの機能性物質は、蛍光剤、シクロデキストリン、金属キレート剤、糖鎖、ペプチド、ポリペプチド、または核酸であり得る。ＷおよびＹの少なくともいずれか一つがＣ＝Ｏを有し、Ｃ＝Ｏには、シクロデキストリン、金属キレート剤、糖鎖、ペプチド、ポリペプチド、もしくは核酸糖鎖またはその改変体、あるいは、蛍光色素が結合されていてもよい。【００２０】
ここで、シクロデキストリン、金属キレート剤、糖鎖、ペプチド、ポリペプチド、もしくは核酸糖鎖またはその改変体、あるいは、蛍光色素は、ケトン基と反応する基を有することが好ましい。このケトン基と反応する基（シクロデキストリン、金属キレート剤、糖鎖、ペプチド、ポリペプチド、もしくは核酸糖鎖またはその改変体、あるいは、蛍光色素）は、ヒドラジド基であり得る。【００２１】
好ましくは、蛍光色素は、【００２２】
【化１０】
2005095428.tif 000005
【００２３】
で示される構造を有する。【００２４】
好ましい実施形態では、本発明の細菌は、グラム陽性菌であることが有利であり、さらに好ましくは、このグラム陽性菌は、ラクトバシルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ロイコノストック  （Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、スト  レプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、バシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、またはコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｃｔｅｒｉｕｍ）属であり得る。【００２５】
別の局面において、本発明はさらに、  一般式（Ｉ）：【００２６】
【化１１】
2005095428.tif 000006
【００２７】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｒ４は、Ｈ、置換されていてもよいアセチル基、置換されていてもよいモノホスフェート基、置換されていてもよいジホスフェート基または置換されていてもよいトリホスフェート基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＨ２（Ｚ１）−（式中、Ｚ１は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基またはシステイン残基である）であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、−Ｃ≡ＣＨ、または−Ｚ２（Ｚ２は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基もしくはシステイン残基である）である）
で示される、化合物を、培地に添加して細菌を培養することにより、一般式：【００２８】
【化１２】
2005095428.tif 000007
【００２９】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｒ４は、Ｈ、置換されていてもよいアセチル基、置換されていてもよいモノホスフェート基、置換されていてもよいジホスフェート基または置換されていてもよいトリホスフェート基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＨ２（Ｚ１）−（式中、Ｚ１は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基またはシステイン残基である）であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、−Ｃ≡ＣＨ、または−Ｚ２（Ｚ２は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基もしくはシステイン残基であり、Ａｃはアセチル基である）であり；Ｒ５は、アセチル基またはグリコリル基であり、Ｒ６は、ＨまたはＣＯＯＨである）で示される基が、細菌の細胞壁成分の一部分として組み込まれることを特徴とする、細菌の製造方法を提供する。【００３０】
本発明は、医薬品等での応用が期待できる、乳酸菌などの細菌の細胞表層を化学修飾する効率的な手法を提供する。ヨーグルトおよび乳酸菌飲料に含まれる乳酸菌は、腸内バランスを改善し成長作用をもたらすだけでなく、感染の予防、ガンの予防、コレステロール値の低下などにも効果があることが明らかとされている。また既存の薬物では得られなかった食物アレルギーまたはアトピー性皮膚炎などに対しても予防的・治療的効果が確かめられつつあり、近年乳酸菌はプロバイオティクスとして高い注目を浴びている。このように人間にとって有効な機能を有する乳酸菌を化学的な手法により、より高次に機能化し病気の治療法へと応用できることが期待できる。【００３１】
シアル酸を有する動物細胞の化学修飾については、マンノサミン誘導体を利用したＢｅｒｔｏｚｚｉらの手法（非特許文献３）が知られている。またマンノサミン誘導体の水酸基をアセチル基で保護することで、細胞膜の透過効率を高め、より効率的に化学修飾を行ったという報告もされている（Ｃａｒｏｌｙｎ  Ｒ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４０：１２８６４−１２８７４  （２００１））。しかし、シアル酸が必ずしも細胞表層にあるとは限らないので、この手法をそのまま細菌に対して用いることはできない。従って、本発明の方法は、フレキシブルに機能性物質を細菌に導入できるという効果を有する。【００３２】
ほとんどすべての細菌は、細胞壁としてN−アセチルグルコサミンおよびN−アセチルムラミン酸が交互に結合した糖鎖と、それを架橋するペピチドからなる構造を持っている。本発明者らはこれまでに、この細胞壁の生合成経路を利用することで、目的の分子を細胞壁に提示させる技術の基盤を確立してきた（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１２４：９０１８−９０１９（２００２），Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１２６：３７５５−３７６１  （２００４））。細胞壁の前駆体であるパークヌクレオチド（ＵＤＰ−Ｎ−アセチルムラミルペンタペプチド）に目的の分子を導入しておくと、細菌はその前駆体を取り込み細胞表層に提示する。しかし、この手法で用いる細胞壁前駆体パークヌクレオチドは、非常に合成が困難なため高価であり、また分子量が大きいため細胞膜の透過効率が低いことが問題となっている。【００３３】
そこで細胞壁前駆体として、新規グルコサミンホスフェート誘導体を合成した。このグルコサミンホスフェート誘導体を細胞壁に取り込ませることで、細菌の表層を化学修飾する。動物細胞と細菌ではアミノ糖の生合成経路が異なるため、Bertozziらの手法のようにアミノ糖誘導体を直接細胞表層の化学修飾に用いることはできない。しかし本発明では、グルコサミン誘導体にリン酸基を導入することでこの問題を解決した。グルコサミンホスフェート誘導体は、パークヌクレオチドに比べ大幅に合成が容易であり、また分子量が小さく疎水性が強いため細胞膜の透過効率が向上し、より効率的な細胞壁の化学修飾が期待できる。【００３４】
以下に、本発明の好ましい実施形態を示すが、当業者は本発明の説明および当該分野における周知慣用技術からその実施形態などを適宜実施することができ、本発明が奏する作用および効果を容易に理解することが認識されるべきである。
【発明の効果】
【００３５】
細菌において、細胞膜の透過効率が向上し、より効率的な細胞壁の化学修飾が達成される。また、この細菌は、プロバイオティクスおよび効率よい医薬品としても有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】化合物（Ｖ）を用いた場合の細菌の蛍光強度、化合物（ＶＩ）を用いた場合の蛍光強度、及び天然の細菌の蛍光強度の比較を示す。
【図２】化合物（Ｖ）を用いた場合の細菌（Ａ）、及び天然の細菌（Ｂ）の蛍光顕微鏡写真を示す。
【図３】ケトン基をもつＧｌｃＮＡｃ誘導体の合成模式図である。
【図４】ＧｌｃＮＡｃ誘導体の細胞への取り込みアッセイを右に示す。左は、試した化合物を示す。
【図５】図５は、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）による接着性の評価を示す。縦軸は、ＳＰＲのシグナル強度（相対単位）を示す。横軸は時間（秒）を示す。０秒で細菌を注入し、６００秒で解離が始まった。上側の曲線は、糖ポリマーを提示する細菌を示し、ネイティブ細菌は、下側の曲線である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
以下に本発明を、必要に応じて、添付の図面を参照して例示の実施例により記載する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。【００３８】
以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。【００３９】
（用語）
本明細書において「糖鎖」とは、単位糖（単糖および／またはその誘導体）が１つ以上連なってできた化合物をいう。単位糖が２つ以上連なる場合は、各々の単位糖同士の間は、グリコシド結合による脱水縮合によって結合する。このような糖鎖としては、例えば、生体中に含有される多糖類（グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸ならびにそれらの複合体および誘導体）の他、分解された多糖、糖タンパク質、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、糖脂質などの複合生体分子から分解または誘導された糖鎖など広範囲なものが挙げられるがそれらに限定されない。したがって、本明細書では、糖鎖は、「多糖（ポリサッカリド）」、「糖質」、「炭水化物」と互換可能に使用され得る。また、特に言及しない場合、本明細書において「糖鎖」は、糖鎖および糖鎖含有物質の両方を包含することがある。【００４０】
本明細書において「糖」または「単糖」とは、これより簡単な分子に加水分解されず、一般式ＣｎＨ２ｎＯｎで表される化合物をいう。ここで、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９および１０であるものを、それぞれジオース、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オクトース、ノノースおよびデコースという。一般に鎖式多価アルコールのアルデヒドまたはケトンに相当するもので、前者をアルドース，後者をケトースという。【００４１】
本明細書において「単糖の誘導体」とは、単糖上の一つ以上の水酸基が別の置換基に置換され、結果生じる物質が単糖の範囲内にないものをいう。そのような単糖の誘導体としては、カルボキシル基を有する糖（例えば、Ｃ−１位が酸化されてカルボン酸となったアルドン酸（例えば、Ｄ−グルコースが酸化されたＤ−グルコン酸）、末端のＣ原子がカルボン酸となったウロン酸（Ｄ−グルコースが酸化されたＤ−グルクロン酸）、アミノ基またはアミノ基の誘導体（例えば、アセチル化されたアミノ基）を有する糖（例えば、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンなど）、アミノ基およびカルボキシル基を両方とも有する糖（例えば、Ｎ−アセチルノイラミン酸（シアル酸）、Ｎ−アセチルムラミン酸など）、デオキシ化された糖（例えば、２−デオキシ−Ｄ−リボース）、硫酸基を含む硫酸化糖、リン酸基を含むリン酸化糖などがあるがそれらに限定されない。あるいは、ヘミアセタール構造を形成した糖において、アルコールと反応してアセタール構造のグリコシドもまた、単糖の誘導体の範囲内にある。【００４２】
本明細書において「糖鎖含有物質」とは、糖鎖および糖鎖以外の物質を含む物質をいう。このような糖鎖含有物質は、生体内に多く見出され、例えば、生体中に含有される多糖類の他、分解された多糖、糖タンパク質、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、糖脂質などの複合生体分子から分解または誘導された糖鎖など広範囲なものが挙げられるがそれらに限定されない。【００４３】
本明細書において「糖鎖に結合し得る」とは、糖鎖に対して、結合（好ましくは、共有結合）することができる能力をいう。【００４４】
本明細書において「共有結合」とは、当該分野における通常の意味で用いられ、電子対が２つの原子に共有されて形成する化学結合をいう。このような共有結合としては、例えば、オキシム結合、ヒドラゾン結合、チオセミヒドラゾン結合、ペルヒドロチアジン環形成およびチアゾリジン環形成などが挙げられるがそれらに限定されない。【００４５】
本明細書において「糖鎖に結合し得る（官能）基」とは、糖鎖が結合することができる任意の官能基をさす。そのような官能基は、「アルデヒド基と流体中で反応し得る官能基」であり得る。「アルデヒド基と流体中で反応し得る官能基」とは、糖鎖が水溶液などの流体中で形成する環状のヘミアセタール型と非環状のアルデヒド型との平衡において、アルデヒド基と反応して特異的かつ安定な結合をつくることができる性質を有する官能基をいう。このような官能基としては、アミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基およびシステイン残基などが挙げられるがそれらに限定されない。【００４６】
本明細書において、物質（例えば、細胞、核酸またはタンパク質などの生物学的因子）の「単離」とは、その生物学的因子が天然に存在する生物体の細胞内の他の物質（例えば、糖鎖または糖鎖含有物質である場合、糖鎖または糖鎖含有物質以外の因子、あるいは、目的とする糖鎖または糖鎖含有物質以外の糖鎖または糖鎖含有物質；核酸である場合、核酸以外の因子および目的とする核酸以外の核酸配列を含む核酸；タンパク質である場合、タンパク質以外の因子および目的とするタンパク質以外のアミノ酸配列を含むタンパク質など）から実質的に分離または精製されたものをいう。「単離された」、糖鎖または糖鎖含有物質には、本発明の精製方法によって精製された糖鎖または糖鎖含有物質が含まれる。したがって、単離された糖鎖または糖鎖含有物質は、化学的に合成した糖鎖または糖鎖含有物質を包含する。【００４７】
本明細書において、物質（例えば、糖鎖、核酸またはタンパク質などの生物学的因子）の「精製」とは、その物質に天然に随伴する因子の少なくとも一部を除去することをいう。したがって、精製および分離は、その形態が一部重複する。したがって、通常、精製された物質（例えば、糖鎖または糖鎖含有物質のような生物学的因子）におけるその物質の純度は、その物質が通常存在する状態よりも高い（すなわち濃縮されている）が、天然に随伴する因子が低減されている限り、濃縮されていない状態も「精製」の概念に包含される。【００４８】
本明細書において物質（例えば、糖鎖または糖鎖含有物質のような生物学的因子）の「濃縮」とは、その物質が濃縮前に試料に含まれている含有量よりも高い濃度に上昇させる行為をいう。従って、濃縮もまた、精製および分離と、その概念が一部重複する。したがって、通常、濃縮された物質（例えば、糖鎖または糖鎖含有物質のような生物学的因子）は、その物質が通常存在する状態における不純物の含有量は低減されているが、目的とする物質の含有量が増加している限り、ある特定の不純物が増加していてもよく、「精製」されていない状態も「濃縮」の概念に包含される。【００４９】
本発明の細胞は、通常の方法に従って行うことができる。大腸菌等の細菌を培養する培地としては、資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類等を含有し、培養を効率的に行える培地であれば天然培地、合成培地のいずれを用いてもよい。【００５０】
炭素源としては、それぞれの微生物が資化し得るものであればよく、グルコース、フラクトース、スクロース、これらを含有する糖蜜、デンプンあるいはデンプン加水分解物等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸等の有機酸、エタノール、プロパノール等のアルコール類を用いることができる。【００５１】
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の各種無機酸または有機酸のアンモニウム塩、その他含窒素物質、ならびに、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、大豆粕および大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化物等を用いることができる。【００５２】
無機塩としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等を用いることができる。培養は、振盪培養または深部通気攪拌培養等の好気的条件下で行う。【００５３】
培養温度は１５〜４０℃がよく、培養時間は、通常５時間〜７日間である。培養中ｐＨは、３．０〜９．０に保持する。ｐＨの調整は、無機あるいは有機の酸、アルカリ溶液、尿素、炭酸カルシウム、アンモニア等を用いて行う。また培養中必要に応じて、アンピシリンまたはテトラサイクリン等の抗生物質を培地に添加してもよい。【００５４】
培養は、通常ｐＨ６〜８、２５〜４０℃、５〜３０％ＣＯ２存在下等の条件下で１〜７日間行う。また培養中必要に応じて、カナマイシン、ペニシリン、ストレプトマイシン等の抗生物質を培地に添加してもよい。【００５５】
（有機化学）
本明細書で用いる「天然ＧｌｃＮＡｃ」とは、天然に存在するＧｌｃＮＡｃまたはその誘導体を意味し、以下の一般式で表される：【００５６】
【化１３】
2005095428.tif 000008
【００５７】
式中、Ｒ７は、アセチル基である。【００５８】
本明細書で用いる「天然ムラミルペンタペプチド」とは、天然に通常存在するムラミルペンタペプチドをいい、その構造は、以下の様な一般式で表される：【００５９】
【化１４】
2005095428.tif 000009
【００６０】
（式中、Ｒ５は、アセチル基またはグリコリル基であり、Ｒ６は、ＨまたはＣＯＯＨである）。【００６１】
本明細書で用いる「グルコサミンβ１→４ムラミルペンタペプチド誘導体」という用語は、天然ムラミルペンタペプチド（ムラミル−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ）または一般式（Ｉ）で表される化合物から生合成されたムラミルペンタペプチドのリシン残基のε−アミノ基が、アミノ基と結合可能な基を有する化合物と結合して生じた物質を意味する。具体的には、
以下の式：【００６２】
【化１５】
2005095428.tif 000010
【００６３】
（式中、Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＨ２（Ｚ１）−（式中、Ｚ１は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基またはシステイン残基である）であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、−Ｃ≡ＣＨ、または−Ｚ２（Ｚ２は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基もしくはシステイン残基である）であり；Ｒ５は、アセチル基またはグリコリル基であり、Ｒ６は、ＨまたはＣＯＯＨであり、Ａｃはアセチル基である。）
で示される。【００６４】
本明細書において、「ＧｌｃＮＡｃ誘導体」とは、
以下の式：【００６５】
【化１６】
2005095428.tif 000011
【００６６】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立してＨまたは保護基であり、Ｒ４は、Ｈ、置換されていてもよいアセチル基、置換されていてもよいモノホスフェート基、置換されていてもよいジホスフェート基または置換されていてもよいトリホスフェート基であり、Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＨ２（Ｚ１）−（式中、Ｚ１は保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基またはシステイン残基である）であり、Ｘは単結合または−（ＣＨ２）ｎ−であって、ｎは１〜１０の正の整数であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ８（Ｒ８は、アルキル基である）、保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基およびシステイン残基または−Ｃ≡ＣＨである）
で示される構造を有する、化合物をいう。【００６７】
本明細書において「アルキル」とは、メタン、エタン、プロパンのような脂肪族炭化水素（アルカン）から水素原子が一つ失われて生ずる１価の基をいい、一般にＣｎＨ２ｎ＋１−で表される（ここで、ｎは正の整数である）。アルキルは、直鎖または分枝鎖であり得る。本明細書において「置換されたアルキル」とは、以下に規定する置換基によってアルキルのＨが置換されたアルキルをいう。これらの具体例は、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ９アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１１アルキルまたはＣ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ３置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ４置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ５置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ６置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ７置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ８置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ９置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ１０置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ１１置換されたアルキルまたはＣ１〜Ｃ１２置換されたアルキルであり得る。ここで、例えばＣ１〜Ｃ１０アルキルとは、炭素原子を１〜１０個有する直鎖または分枝状のアルキルを意味し、メチル（ＣＨ３−）、エチル（Ｃ２Ｈ５−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ヘキシル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ヘプチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−オクチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ノニル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−デシル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２などが例示される。また、例えば、Ｃ１〜Ｃ１０置換されたアルキルとは、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルであって、そのうち１または複数の水素原子が置換基により置換されているものをいう。【００６８】
本明細書において「置換されていてもよいアルキル」とは、上で定義した「アルキル」または「置換されたアルキル」のいずれであってもよいことを意味する。【００６９】
本明細書において「アルキレン」とは、メチレン、エチレン、プロピレンのような脂肪族炭化水素（アルカン）から水素原子が二つ失われて生ずる２価の基をいい、一般に−ＣｎＨ２ｎ−で表される（ここで、ｎは正の整数である）。アルキレンは、直鎖または分枝鎖であり得る。本明細書において「置換されたアルキレン」とは、以下に規定する置換基によってアルキレンのＨが置換されたアルキレンをいう。これらの具体例は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレン、Ｃ１〜Ｃ３アルキレン、Ｃ１〜Ｃ４アルキレン、Ｃ１〜Ｃ５アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ７アルキレン、Ｃ１〜Ｃ８アルキレン、Ｃ１〜Ｃ９アルキレン、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン、Ｃ１〜Ｃ１１アルキレンまたはＣ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ１〜Ｃ２置換されたアルキレン、Ｃ１〜Ｃ３置換されたアルキレン、Ｃ１〜Ｃ４置換されたアルキレン、Ｃ１〜Ｃ５置換されたアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６置換されたアルキレン、Ｃ１〜Ｃ７置換されたアルキレン、Ｃ１〜Ｃ８置換されたアルキレン、Ｃ１〜Ｃ９置換されたアルキレン、Ｃ１〜Ｃ１０置換されたアルキレン、Ｃ１〜Ｃ１１置換されたアルキレンまたはＣ１〜Ｃ１２置換されたアルキレンであり得る。ここで、例えばＣ１〜Ｃ１０アルキレンとは、炭素原子を１〜１０個有する直鎖または分枝状のアルキレンを意味し、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−Ｃ２Ｈ４−）、ｎ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピレン（−（ＣＨ３）２Ｃ−）、ｎ−ブチレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ペンチレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ヘキシレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ヘプチレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−オクチレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ノニレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−デシレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２−などが例示される。また、例えば、Ｃ１〜Ｃ１０置換されたアルキレンとは、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンであって、そのうち１または複数の水素原子が置換基により置換されているものをいう。本明細書において「アルキレン」は、酸素原子および硫黄原子から選択される原子を１またはそれ以上含んでいてもよい。【００７０】
本明細書において「置換されていてもよいアルキレン」とは、上で定義した「アルキレン」または「置換されたアルキレン」のいずれであってもよいことを意味する。【００７１】
本明細書において「シクロアルキル」とは、環式構造を有するアルキルをいう。「置換されたシクロアルキル」とは、以下に規定する置換基によってシクロアルキルのＨが置換されたシクロアルキルをいう。具体例としては、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ５シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１１シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ４置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ５置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ６置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ７置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１０置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１１置換されたシクロアルキルまたはＣ３〜Ｃ１２置換されたシクロアルキルであり得る。例えば、シクロアルキルとしては、シクロプロピル、シクロヘキシルなどが例示される。【００７２】
本明細書において「置換されていてもよいシクロアルキル」とは、上で定義した「シクロアルキル」または「置換されたシクロアルキル」のいずれであってもよいことを意味する。【００７３】
本明細書において「アルケニル」とは、分子内に二重結合を一つ有する脂肪族炭化水素から水素原子が一つ失われて生ずる１価の基をいい、一般にＣｎＨ２ｎ−１−で表される（ここで、ｎは２以上の正の整数である）。「置換されたアルケニル」とは、以下に規定する置換基によってアルケニルのＨが置換されたアルケニルをいう。具体例としては、Ｃ２〜Ｃ３アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ５アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ７アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ９アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１１アルケニルまたはＣ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ３置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ４置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ５置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ６置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ７置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ９置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ１０置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ１１置換されたアルケニルまたはＣ２〜Ｃ１２置換されたアルケニルであり得る。ここで、例えばＣ２〜Ｃ１０アルキルとは、炭素原子を２〜１０個含む直鎖または分枝状のアルケニルを意味し、ビニル（ＣＨ２＝ＣＨ−）、アリル（ＣＨ２＝ＣＨＣＨ２−）、ＣＨ３ＣＨ＝ＣＨ−などが例示される。また、例えば、Ｃ２〜Ｃ１０置換されたアルケニルとは、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニルであって、そのうち１または複数の水素原子が置換基により置換されているものをいう。【００７４】
本明細書において「置換されていてもよいアルケニル」とは、上で定義した「アルケニル」または「置換されたアルケニル」のいずれであってもよいことを意味する。【００７５】
本明細書において「アルケニレン」とは、分子内に二重結合を一つ有する脂肪族炭化水素から水素原子が二つ失われて生ずる２価の基をいい、一般に−ＣｎＨ２ｎ−２−で表される（ここで、ｎは２以上の正の整数である）。「置換されたアルケニレン」とは、以下に規定する置換基によってアルケニレンのＨが置換されたアルケニレンをいう。具体例としては、Ｃ２〜Ｃ２５アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ２５置換されたアルケニレンが挙げられ、なかでも特にＣ２〜Ｃ３アルケニレン、Ｃ２〜Ｃ４アルケニレン、Ｃ２〜Ｃ５アルケニレン、Ｃ２〜Ｃ６アルケニレン、Ｃ２〜Ｃ７アルケニレン、Ｃ２〜Ｃ８アルケニレン、Ｃ２〜Ｃ９アルケニレン、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニレン、Ｃ２〜Ｃ１１アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルケニレン、Ｃ２〜Ｃ３置換されたアルケニレン、Ｃ２〜Ｃ４置換されたアルケニレン、Ｃ２〜Ｃ５置換されたアルケニレン、Ｃ２〜Ｃ６置換されたアルケニレン、Ｃ２〜Ｃ７置換されたアルケニレン、Ｃ２〜Ｃ８置換されたアルケニレン、Ｃ２〜Ｃ９置換されたアルケニレン、Ｃ２〜Ｃ１０置換されたアルケニレン、Ｃ２〜Ｃ１１置換されたアルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２置換されたアルケニレンが好ましい。ここで、例えばＣ２〜Ｃ１０アルキルとは、炭素原子を２〜１０個含む直鎖または分枝状のアルケニレンを意味し、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−（ＣＨ３）Ｃ＝ＣＨ−などが例示される。また、例えば、Ｃ２〜Ｃ１０置換されたアルケニレンとは、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニレンであって、そのうち１または複数の水素原子が置換基により置換されているものをいう。本明細書において「アルケニレン」は、酸素原子および硫黄原子から選択される原子を１またはそれ以上含んでいてもよい。【００７６】
本明細書において「置換されていてもよいアルケニレン」とは、上で定義した「アルケニレン」または「置換されたアルケニレン」のいずれであってもよいことを意味する。【００７７】
本明細書において「シクロアルケニル」とは、環式構造を有するアルケニルをいう。「置換されたシクロアルケニル」とは、以下に規定する置換基によってシクロアルケニルのＨが置換されたシクロアルケニルをいう。具体例としては、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ５シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ１１シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ４置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ５置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ６置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ７置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ８置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ９置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ１０置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ１１置換されたシクロアルケニルまたはＣ３〜Ｃ１２置換されたシクロアルケニルであり得る。例えば、好ましいシクロアルケニルとしては、１−シクロペンテニル、２−シクロヘキセニルなどが例示される。【００７８】
本明細書において「置換されていてもよいシクロアルケニル」とは、上で定義した「シクロアルケニル」または「置換されたシクロアルケニル」のいずれであってもよいことを意味する。【００７９】
本明細書において「アルキニル」とは、アセチレンのような、分子内に三重結合を一つ有する脂肪族炭化水素から水素原子が一つ失われて生ずる１価の基をいい、一般にＣｎＨ２ｎ−３−で表される（ここで、ｎは２以上の正の整数である）。「置換されたアルキニル」とは、以下に規定する置換基によってアルキニルのＨが置換されたアルキニルをいう。具体例としては、Ｃ２〜Ｃ３アルキニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、Ｃ２〜Ｃ５アルキニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ２〜Ｃ７アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ９アルキニル、Ｃ２〜Ｃ１０アルキニル、Ｃ２〜Ｃ１１アルキニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ２〜Ｃ３置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ４置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ５置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ６置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ７置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ８置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ９置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ１０置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ１１置換されたアルキニルまたはＣ２〜Ｃ１２置換されたアルキニルであり得る。ここで、例えば、Ｃ２〜Ｃ１０アルキニルとは、例えば炭素原子を２〜１０個含む直鎖または分枝状のアルキニルを意味し、エチニル（ＣＨ≡Ｃ−）、１−プロピニル（ＣＨ３Ｃ≡Ｃ−）などが例示される。また、例えば、Ｃ２〜Ｃ１０置換されたアルキニルとは、Ｃ２〜Ｃ１０アルキニルであって、そのうち１または複数の水素原子が置換基により置換されているものをいう。【００８０】
本明細書において「置換されていてもよいアルキニル」とは、上で定義した「アルキニル」または「置換されたアルキニル」のいずれであってもよいことを意味する。【００８１】
本明細書において「アルコキシ」とは、アルコール類のヒドロキシ基の水素原子が失われて生ずる１価の基をいい、一般にＣｎＨ２ｎ＋１Ｏ−で表される（ここで、ｎは１以上の整数である）。「置換されたアルコキシ」とは、以下に規定する置換基によってアルコキシのＨが置換されたアルコキシをいう。具体例としては、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ９アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１０アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１１アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ２置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ５置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ７置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ９置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１０置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１１置換されたアルコキシまたはＣ１〜Ｃ１２置換されたアルコキシであり得る。ここで、例えば、Ｃ１〜Ｃ１０アルコキシとは、炭素原子を１〜１０個含む直鎖または分枝状のアルコキシを意味し、メトキシ（ＣＨ３Ｏ−）、エトキシ（Ｃ２Ｈ５Ｏ−）、ｎ−プロポキシ（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−）などが例示される。【００８２】
本明細書において「置換されていてもよいアルコキシ」とは、上で定義した「アルコキシ」または「置換されたアルコキシ」のいずれであってもよいことを意味する。【００８３】
本明細書において「ヘテロ環（基）」とは、炭素およびヘテロ原子をも含む環状構造を有する基をいう。ここで、ヘテロ原子は、Ｏ、ＳおよびＮからなる群より選択され、同一であっても異なっていてもよく、１つ含まれていても２以上含まれていてもよい。ヘテロ環基は、芳香族系または非芳香族系であり得、そして単環式または多環式であり得る。ヘテロ環基は置換されていてもよい。【００８４】
本明細書において「置換されていてもよいヘテロ環（基）」とは、上で定義した「ヘテロ環（基）」または「置換されたヘテロ環（基）」のいずれであってもよいことを意味する。【００８５】
本明細書において「アルコール」とは、脂肪族炭化水素の１または２以上の水素原子をヒドロキシル基で置換した有機化合物をいう。本明細書においては、ＲＯＨとも表記される。ここで、Ｒは、アルキル基である。好ましくは、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり得る。アルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノールなどが挙げられるがそれらに限定されない。【００８６】
本明細書において「炭素環基」とは、炭素のみを含む環状構造を含む基であって、前記の「シクロアルキル」、「置換されたシクロアルキル」、「シクロアルケニル」、「置換されたシクロアルケニル」以外の基をいう。炭素環基は芳香族系または非芳香族系であり得、そして単環式または多環式であり得る。「置換された炭素環基」とは、以下に規定する置換基によって炭素環基のＨが置換された炭素環基をいう。具体例としては、Ｃ３〜Ｃ４炭素環基、Ｃ３〜Ｃ５炭素環基、Ｃ３〜Ｃ６炭素環基、Ｃ３〜Ｃ７炭素環基、Ｃ３〜Ｃ８炭素環基、Ｃ３〜Ｃ９炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１０炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１１炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１２炭素環基、Ｃ３〜Ｃ４置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ５置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ６置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ７置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ８置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ９置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１０置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１１置換された炭素環基またはＣ３〜Ｃ１２置換された炭素環基であり得る。炭素環基はまた、Ｃ４〜Ｃ７炭素環基またはＣ４〜Ｃ７置換された炭素環基であり得る。炭素環基としては、フェニル基から水素原子が１個欠失したものが例示される。ここで、水素の欠失位置は、化学的に可能な任意の位置であり得、芳香環上であってもよく、非芳香環上であってもよい。【００８７】
本明細書において「置換されていてもよい炭素環基」とは、上で定義した「炭素環基」または「置換された炭素環基」のいずれであってもよいことを意味する。【００８８】
本明細書において「ヘテロ環基」とは、炭素およびヘテロ原子をも含む環状構造を有する基をいう。ここで，ヘテロ原子は、Ｏ、ＳおよびＮからなる群より選択され、同一であっても異なっていてもよく、１つ含まれていても２以上含まれていてもよい。ヘテロ環基は、芳香族系または非芳香族系であり得、そして単環式または多環式であり得る。「置換されたヘテロ環基」とは、以下に規定する置換基によってヘテロ環基のＨが置換されたヘテロ環基をいう。具体例としては、Ｃ３〜Ｃ４炭素環基、Ｃ３〜Ｃ５炭素環基、Ｃ３〜Ｃ６炭素環基、Ｃ３〜Ｃ７炭素環基、Ｃ３〜Ｃ８炭素環基、Ｃ３〜Ｃ９炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１０炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１１炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１２炭素環基、Ｃ３〜Ｃ４置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ５置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ６置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ７置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ８置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ９置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１０置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１１置換された炭素環基またはＣ３〜Ｃ１２置換された炭素環基の１つ以上の炭素原子をヘテロ原子で置換したものであり得る。ヘテロ環基はまた、Ｃ４〜Ｃ７炭素環基またはＣ４〜Ｃ７置換された炭素環基の炭素原子を１つ以上へテロ原子で置換したものであり得る。ヘテロ環基としては、チエニル基、ピロリル基、フリル基、イミダゾリル基、ピリジル基などが例示される。水素の欠失位置は、化学的に可能な任意の位置であり得、芳香環上であってもよく、非芳香環上であってもよい。【００８９】
本明細書において、炭素環基またはヘテロ環基は、下記に定義されるように１価の置換基で置換され得ることに加えて、２価の置換基で置換され得る。そのような二価の置換は、オキソ置換（＝Ｏ）またはチオキソ置換（＝Ｓ）であり得る。【００９０】
本明細書において「ハロゲン」とは、周期表７Ｂ族に属するフッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）、ヨウ素（Ｉ）などの元素の１価の基をいう。【００９１】
本明細書において「ヒドロキシ」とは、−ＯＨで表される基をいう。「置換されたヒドロキシ」とは、ヒドロキシのＨが下記で定義される置換基で置換されているものをいう。【００９２】
本明細書において「チオール」とは、ヒドロキシ基の酸素原子を硫黄原子で置換した基（メルカプト基）であり、−ＳＨで表される。「置換されたチオール」とは、メルカプトのＨが下記で定義される置換基で置換されている基をいう。【００９３】
本明細書において「シアノ」とは、−ＣＮで表される基をいう。「ニトロ」とは、−ＮＯ２で表される基をいう。「アミノ」とは、−ＮＨ２で表される基をいう。「置換されたアミノ」とは、アミノのＨが以下で定義される置換基で置換されたものをいう。【００９４】
本明細書において「カルボキシ」とは、−ＣＯＯＨで表される基をいう。「置換されたカルボキシ」とは、カルボキシのＨが以下に定義される置換基で置換されたものをいう。【００９５】
本明細書において「チオカルボキシ」とは、カルボキシ基の酸素原子を硫黄原子で置換した基をいい、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＨまたは−ＣＳＳＨで表され得る。「置換されたチオカルボキシ」とは、チオカルボキシのＨが以下に定義される置換基で置換されたものをいう。【００９６】
本明細書において「アシル」とは、カルボン酸からＯＨを除いてできる１価の基をいう。アシル基の代表例としては、アセチル（ＣＨ３ＣＯ−）、ベンゾイル（Ｃ６Ｈ５ＣＯ−）などが挙げられる。「置換されたアシル」とは、アシルの水素を以下に定義される置換基で置換したものをいう。【００９７】
本明細書において「アミド」とは、アンモニアの水素を酸基（アシル基）で置換した基であり、好ましくは、−ＣＯＮＨ２で表される。「置換されたアミド」とは、アミドが置換されたものをいう。【００９８】
本明細書において「カルボニル」とは、アルデヒドおよびケトンの特性基である−（Ｃ＝Ｏ）−を含むものを総称したものをいう。「置換されたカルボニル」は、下記において選択される置換基で置換されているカルボニル基を意味する。【００９９】
本明細書において「チオカルボニル」とは、カルボニルにおける酸素原子を硫黄原子に置換した基であり、特性基−（Ｃ＝Ｓ）−を含む。チオカルボニルには、チオケトンおよびチオアルデヒドが含まれる。「置換されたチオカルボニル」とは、下記において選択される置換基で置換されたチオカルボニルを意味する。【０１００】
本明細書において「スルホニル」とは、特性基である−ＳＯ２−を含むものを総称したものをいう。「置換されたスルホニル」とは、下記において選択される置換基で置換されたスルホニルを意味する。【０１０１】
本明細書において「スルフィニル」とは、特性基である−ＳＯ−を含むものを総称したものをいう。「置換されたスルフィニル」とは、下記において選択される置換基で置換されているスルフィニルを意味する。【０１０２】
本明細書において「アリール」とは、芳香族炭化水素の環に結合する水素原子が１個離脱して生ずる基をいい、本明細書において、炭素環基に包含される。【０１０３】
本明細書においては、特に言及がない限り、置換は、ある有機化合物または置換基中の１または２以上の水素原子を他の原子または原子団で置き換えることをいう。水素原子を１つ除去して１価の置換基に置換することも可能であり、そして水素原子を２つ除去して２価の置換基に置換することも可能である。【０１０４】
本明細書においては、特に言及がない限り、置換は、ある有機化合物または置換基中の１または２以上の水素原子を他の原子または原子団で置き換えることをいう。水素原子を１つ除去して１価の置換基に置換することも可能であり、そして水素原子を２つ除去して２価の置換基に置換することも可能である。【０１０５】
本発明における置換基としては、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アルコキシ、炭素環基、ヘテロ環基、ハロゲン、ヒドロキシ、チオール、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、アシル、アシルアミノ、チオカルボキシ、アミド、置換されたカルボニル、置換されたチオカルボニル、置換されたスルホニルまたは置換されたスルフィニルが挙げられるがそれらに限定されない。このような置換基は、本発明において、アミノ酸の設計のときに、適宜利用することができる。【０１０６】
好ましくは、置換基は、複数存在する場合それぞれ独立して、水素原子またはアルキルであり得るが、複数の置換基全てが水素原子であることはない。より好ましくは、独立して、置換基は、複数存在する場合それぞれ独立して、水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群より選択され得る。置換基は、すべてが水素以外の置換基を有していても良いが、好ましくは、少なくとも１つの水素、より好ましくは、２〜ｎ（ここでｎは置換基の個数）の水素を有し得る。置換基のうち水素の数が多いことが好ましくあり得る。大きな置換基または極性のある置換基は本発明の効果（特に、アルデヒド基との相互作用）に障害を有し得るからである。従って、水素以外の置換基としては、好ましくは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、メチルなどであり得る。ただし、本発明の効果を増強し得ることもあることから、大きな置換基を有することもまた好ましくあり得る。【０１０７】
本明細書において、Ｃ１、Ｃ２、、、Ｃｎは、炭素数を表す。従って、Ｃ１は炭素数１個の置換基を表すために使用される。【０１０８】
本明細書において、「光学異性体」とは、結晶または分子の構造が鏡像関係にあって、重ねあわせることのできない一対の化合物の一方またはその組をいう。立体異性体の一形態であり、他の性質は同じであるにもかかわらず、旋光性のみが異なる。【０１０９】
本明細書において「保護反応」とは、Ｂｏｃのような保護基を、保護が所望される官能基に付加する反応をいう。保護基により官能基を保護することによって、より反応性の高い官能基の反応を抑制し、より反応性の低い官能基のみを反応させることができる。保護反応は、例えば、脱水反応により行うことができる。【０１１０】
本明細書において「脱保護反応」とは、Ｂｏｃのような保護基を脱離させる反応をいう。脱保護反応としては、Ｐｄ／Ｃを用いる還元反応のような反応が挙げられる。脱保護反応は、例えば、加水分解により行うことができる。【０１１１】
本明細書において「保護基」としては、例えば、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、アセチル基、ベンジル基、ベンゾイル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブチルジメチル基、シリル基、トリメチルシリルエチル基、Ｎ-フタルイミジル基、トリメチルシリルエチルオキシカルボニル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジル基、２-ニトロ-４，５-ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、カルバメート基などが代表的な保護基として挙げられる。保護基は、例えば、アミノ基、カルボキシル基などの反応性の官能基を保護するために用いることができる。反応の条件や目的に応じ、種々の保護基を使い分けることができる。ヒドロキシ基の保護基にはアセチル基、ベンジル基、シリル基またはそれらの誘導体などが、アミノ基の保護基にはアセチル基のほかベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基またはそれらの誘導体などを使用することができる。アミノオキシ基およびN-アルキルアミノオキシ基の保護基として、トリメチルシリルエチルオキシカルボニル基、２-ニトロ-４，５-ジメトキシベンジルオキシカルボニル基またはそれらの誘導体が好ましい。【０１１２】
本発明の各方法において、目的とする生成物は、反応液から夾雑物（未反応減量、副生成物、溶媒など）を、当該分野で慣用される方法（例えば、抽出、蒸留、洗浄、濃縮、沈澱、濾過、乾燥など）によって除去した後に、当該分野で慣用される後処理方法（例えば、吸着、溶離、蒸留、沈澱、析出、クロマトグラフィーなど）を組み合わせて処理して単離し得る。【０１１３】
本発明に用いる細菌は特に限定されない。グラム陰性菌としてはイー・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）のようなイシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、グラム陽性菌としてはエル・プランテラム（Ｌ．ｐｌａｎｔｅｒｕｍ）、エル・フェルメンタム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）等のラクトバシルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、エル・ラクチス（Ｌ．ｌａｃｔｉｓ）等のラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、エル・クレモリス（Ｌ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ）等のロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ピー・ハロフィルス（Ｐ．ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）等のペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、ピー・フロイデンライチ（Ｐ．ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）等のプロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｔｅｒｉｕｍ）属、エス・サリバリウム（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｍ）等のストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ビー・リィチェニフォルミス（Ｂ．Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ビー・メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、ビー・サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）等のバシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ビー・ビフィダム（Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビー・ブレブ（Ｂ．ｂｒｅｖｅ）等のビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属およびシー・グルタミカム（Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）等のコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属等が挙げられるが、グラム陽性菌が好ましい。【０１１４】
機能性物質には蛍光剤、シクロデキストリン、金属キレート剤、糖鎖、ペプチド、ポリペプチド、核酸を含むがこれに限定されない。蛍光剤としては、フルオレセイン、ローダミン等を挙げることができる。金属キレート剤としては、カリックスピロール、ＥＤＴＡ等を挙げることができる。【０１１５】
機能性物質は次のようにして細菌の表面に導入することができる。【０１１６】
（１）機能性物質自体がケトン基など（保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基およびシステイン残基または−Ｃ≡Ｃ−を含む）と結合可能な基を有する場合。【０１１７】
１）ＧｌｃＮＡｃ誘導体を培地に加えて細菌を培養し、該誘導体が細菌の細胞壁成分の一部分として取り込まれ、細菌表面がこのＧｌｃＮＡｃ誘導体と機能性物質とを含むグルコサミンβ１→４ムラミルペンタペプチド誘導体で修飾された細菌を得る。培地は、それぞれの細菌に適した公知の培地を用いることができる。例えば、ラクトバシルス属の場合にはＭＲＳ培地（市販のラクトバチリＭＲＳブロスを指示通りの濃度で蒸留水に溶解させたもの）が好ましい。この場合には、嫌気性条件下（例えば市販のアネロパック・ケンキを使用する）、３７℃で数時間〜１日培養すればよい。【０１１８】
２）細胞表面に提示させたケトン基（カルボニル基）などと機能性物質とを反応させる。ケトン基などと反応する基としては、例えば、ヒドラジド基などがある。【０１１９】
（２）機能性物質がケトン基などと結合可能な基を有しない場合
本発明のＧｌｃＮＡｃ誘導体および機能性物質と結合可能な基を有する２官能性のリンカーを介して、ＧｌｃＮＡｃ誘導体と機能性物質を結合させる。機能性物質と結合可能な基は、機能性物質の有する基に応じて選択する。例えば、機能性物質がヒドロキシ基を有する場合にはカルボキシル基を、アミノ基を有する場合にはカルボキシ基を、ヒドラジド基またはヒドロキシルアミノを有する場合にはケトン基を、チオール基を有する場合にはジチオ基を選択する。リンカーとしてはその２つの官能基を例えば炭素数２〜１５のメチレン鎖（鎖中にＯまたはＳが介在してもよい）により連結した構造を有するものを例示できる。リンカーの具体的な例はレブリン酸、スクシニルイミジル３−（２−ピリヂルジチオ）プロピオネート等である。【０１２０】
なお、通常、細菌の細胞壁は［（天然ＧｌｃＮＡｃ）−（天然ムラミルペンタペプチド）］誘導体からなるユニットが連なったものからなっていることから、今回の細菌ではその中に上記３種類のユニットが組み込まれている細胞壁を有していることになる
従って、本発明の化合物の存在下で細菌を培養すると、［（本発明のＧｌｃＮＡｃ誘導体））−（天然ムラミルペンタペプチド）］誘導体（１）、［（本発明のＧｌｃＮＡｃ誘導体）−（本発明のＧｌｃＮＡｃ誘導体から生合成されたムラミルペンタペプチド）］誘導体（２）、および／または［（天然ＧｌｃＮＡｃ）−（本発明のＧｌｃＮＡｃ誘導体から生合成されたムラミルペンタペプチド）］誘導体（３）（これら（１）〜（３）は「グルコサミンβ１→４ムラミルペンタペプチド誘導体」の範囲内にある）で細胞表面が修飾された細菌となり得る。なお、ムラミン酸はＧｌｃＮＡｃから生体内で誘導され得ることが知られている。【０１２１】
（医薬・化粧品など、およびそれを用いる治療、予防など）
別の局面において、本発明は、医薬（例えば、ワクチン等の医薬品、健康食品、残さタンパク質又は脂質は抗原性を低減した医薬品）および化粧品に関する。この医薬および化粧品は、薬学的に受容可能なキャリアなどをさらに含み得る。本発明の医薬に含まれる薬学的に受容可能なキャリアとしては、当該分野において公知の任意の物質が挙げられる。【０１２２】
そのような適切な処方材料または薬学的に受容可能なキャリアとしては、抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および／または薬学的アジュバント挙げられるがそれらに限定されない。代表的には、本発明の医薬は、単離された多能性幹細胞、またはその改変体もしくは誘導体を、１つ以上の生理的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤とともに含む組成物の形態で投与される。例えば、適切なビヒクルは、注射用水、生理的溶液、または人工脳脊髄液であり得、これらには、非経口送達のための組成物に一般的な他の物質を補充することが可能である。【０１２３】
本明細書で使用される受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、レシピエントに対して非毒性であり、そして好ましくは、使用される投薬量および濃度において不活性であり、そして以下が挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸；アスコルビン酸、α−トコフェロール；低分子量ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；モノサッカリド、ジサッカリドおよび他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；ならびに／あるいは非イオン性表面活性化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））。【０１２４】
例示の適切なキャリアとしては、中性緩衝化生理食塩水、または血清アルブミンと混合された生理食塩水が挙げられる。好ましくは、その生成物は、適切な賦形剤（例えば、スクロース）を用いて凍結乾燥剤として処方される。他の標準的なキャリア、希釈剤および賦形剤は所望に応じて含まれ得る。他の例示的な組成物は、ｐＨ７．０−８．５のＴｒｉｓ緩衝剤またはｐＨ４．０−５．５の酢酸緩衝剤を含み、これらは、さらに、ソルビトールまたはその適切な代替物を含み得る。【０１２５】
本発明の医薬は、経口的または非経口的に投与され得る。あるいは、本発明の医薬は、静脈内または皮下で投与され得る。全身投与されるとき、本発明において使用される医薬は、発熱物質を含まない、薬学的に受容可能な水溶液の形態であり得る。そのような薬学的に受容可能な組成物の調製は、ｐＨ、等張性、安定性などを考慮することにより、当業者は、容易に行うことができる。本明細書において、投与方法は、経口投与、非経口投与（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、粘膜投与、直腸内投与、膣内投与、患部への局所投与、皮膚投与など）であり得る。そのような投与のための処方物は、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤、徐放剤が挙げられる。【０１２６】
本発明の医薬は、必要に応じて生理学的に受容可能なキャリア、賦型剤または安定化剤（日本薬局方第１４版またはその最新版、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０などを参照）と、所望の程度の純度を有する糖鎖組成物とを混合することによって、凍結乾燥されたケーキまたは水溶液の形態で調製され保存され得る。【０１２７】
本発明の処置方法において使用される糖鎖組成物の量は、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明の処置方法を被検体（または患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。頻度としては、例えば、毎日−数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回−１ヶ月に１回）の投与が挙げられる。１週間−１ヶ月に１回の投与を、経過を見ながら施すことが好ましい。【０１２８】
本発明が化粧品として使用されるときもまた、当局の規定する規制を遵守しながら化粧品を調製することができる。【０１２９】
（農薬）
本発明の組成物は、農薬の成分としても用いることができる。農薬組成物として処方される場合、必要に応じて、農学的に受容可能なキャリア、賦型剤または安定化剤などを含み得る。【０１３０】
本発明の組成物が、農薬として使用される場合は、除草剤（ピラゾレートなど）、殺虫・殺ダニ剤（ダイアジノンなど）、殺菌剤（プロベナゾールなど）、植物成長調整剤（例、パクロブトラゾールなど）、殺線虫剤（例、ベノミルなど）、共力剤（例、ピペロニルブトキサイドなど）、誘引剤（例、オイゲノールなど）、忌避剤（例、クレオソートなど）、色素（例、食用青色１号など）、肥料（例、尿素など）などもまた必要に応じて混合され得る。【０１３１】
（保健・食品）
本発明はまた、保健・食品分野においても利用することができる。このような場合、上述の経口医薬として用いられる場合の留意点を必要に応じて考慮すべきである。特に、特定保健食品のような機能性食品・健康食品などとして使用される場合には、医薬に準じた扱いを行うことが好ましい。好ましくは、本発明の糖鎖組成物は、低アレルゲン食品としても用いることができる。【０１３２】
本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。【０１３３】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、この実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することができることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【実施例】
【０１３４】
以下、実施例により、本発明の構成をより詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。以下において使用した試薬類は、特に言及した場合を除いて、和光純薬などから市販されているものを使用した。【０１３５】
（実施例１：３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミンホスフェート（Ｖ）を用いた細菌細胞表層の化学修飾法）
本実施例で合成したＧｌｃＮａｃ誘導体は、図４に模式図を示す。【０１３６】
（ｉ）３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミンホスフェート（Ｖ）の合成
３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミンホスフェート（Ｖ）の合成は、Ｂｅｒｔｏｚｚｉ等の文献（Ｃａｒｏｌｙｎ  Ｒ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４０：１２８６４−１２８７４（２００１））そしてＷｏｎｇ等の文献（Ｃｈｉ−Ｈｕｅｙ  Ｗｏｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１５，２２６０−２２６７（１９９３））を参考にして次のように行った。【０１３７】
（１）２−Ｎ−レブリノイルグルコサミン（Ｉ）の合成【０１３８】
【化１７】
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【０１３９】
（Ｉ）
２００ｍｌナスフラスコにレブリン酸（５３ｍｌ、１５．０ｍｍｏｌ）を入れ、THF４０ｍｌに溶かした。N,N−ジイソプロピルエチルアミン（２．９６ｍｌ、１７．０ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下、室温で３０分間攪拌した。その後、イソブチルクロロホルメイト（１．８２ｍｌ、１４．０ｍｍｏｌ）を滴下し窒素雰囲気下、室温で５時間攪拌して、レブリン酸イソブチル無水カルボン酸（Ｌｅｖｕｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｓｏｂｕｔｙｌ  ｃａｒｂｏｎｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）を合成した。この混合溶液を直接次の反応に使った。【０１４０】
別途３００ｍｌのナスフラスコにグルコサミン塩酸塩（３．０１ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）を入れ、水とＴＨＦの混合溶媒（水：ＴＨＦ＝４：３）７０ｍｌに溶かした。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．６１ｍｌ、１５．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。上記のレブリン酸イソブチル無水カルボン酸混合溶液４０ｍｌを滴下し、室温で２２時間反応させた。ＴＨＦをエバポレーターで除去し、その後凍結乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５：１）により精製して２−Ｎ−レブリノイルグルコサミン（Ｉ）（ｍｉｘｔｕｒｅ  ｏｆ  ａｎｏｍｅｒｓ、収率２５％）を得た。【０１４１】
１Ｈ−ＮＭＲδ（Ｄ２Ｏ）：５．０６  （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），４．５９  （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），３．７９−３．３１（１２Ｈ，ｍ），２．７８−２．７０  （４Ｈ，ｍ）、２．４５−２．４０（４Ｈ，ｍ），２．１０（６Ｈ，ｓ）。【０１４２】
（２）１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミン（ＩＩ）の合成【０１４３】
【化１８】
2005095428.tif 000013
【０１４４】
（ＩＩ）
１０ｍｌナスフラスコに２−N−レブリノイルグルコサミン（Ｉ）（１１０ｍｇ、０．４８４ｍｍｏｌ）を入れ、ピリジン２ｍｌに溶かした。これを０℃に冷やし、無水酢酸（２７４μｌ、２．９０ｍｍｏｌ）加えた。室温で２２時間攪拌した後、溶媒をエバポレーターで除去し、シリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１）で精製して１，３，４，６−O−アセチル−２−N−レブリノイルグルコサミン（ＩＩ）（α-アノマー、収率９０％）を得た。【０１４５】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）：６．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ），５．１８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），４．４５−４．４１（１Ｈ，ｍ），４．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．１，１２．５Ｈｚ），４．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．２，１２．５Ｈｚ）４．４３−４．３９（１Ｈ，ｍ）２．８３−２．６８（２Ｈ，ｍ），２．３４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），２．２２（３Ｈ，ｓ）２．１５（３Ｈ，ｓ）２．０８（６Ｈ，ｍ）２．０４（３Ｈ，ｓ）。【０１４６】
（３）３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミン（ＩＩＩ）の合成【０１４７】
【化１９】
2005095428.tif 000014
【０１４８】
（ＩＩＩ）
１０ｍｌナスフラスコに１，３，４，６−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミン（ＩＩ）（４４ｍｇ、０．０９８８ｍｍｏｌ）を入れ、ＴＨＦ１ｍｌに溶かした。ベンジルアミン（１６．２μｌ、０．１４８ｍｍｏｌ）加え、室温で２０時間攪拌した。０℃に冷やした１Ｎ塩酸を加えた後、クロロホルムに溶かし分液した。水で洗った後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。ろ過し、エバポレーターで溶媒を取り除いた後、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製して、３，４，６−O−アセチル−２−N−レブリノイルグルコサミン（ＩＩＩ）（α−アノマー、収率７５％）を得た。【０１４９】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）：５．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），５．３２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），５．１１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．９Ｈｚ）４．２９−４．２４（１Ｈ，ｍ），４．２４−４．１９（２Ｈ，ｍ），４．１５−４．１１（１Ｈ，ｍ），３．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ）２．８１−２．７２（２Ｈ，ｍ），２．３８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），２．７１（３Ｈ，ｓ），２．０９（３Ｈ，ｓ）２．０４（３Ｈ，ｓ）２．０３（３Ｈ，ｓ）。【０１５０】
（４）ジベンジル−３，４，６−トリ−O-アセチル−２−N−レブリノイルグルコサミンホスフェート（ＩＶ）の合成【０１５１】
【化２０】
2005095428.tif 000015
【０１５２】
（ＩＶ）
１０ｍｌナスフラスコに３，４，６−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミン（ＩＩＩ）（２８ｍｇ、０．０６９４ｍｍｏｌ）を入れ、ジクロロメタン２ｍｌに溶かした後、１Ｈ−テトラゾール（１９．５ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ）を加えた。−３０℃に冷やしジベンジル−Ｎ，Ｎ−ジエチルホスファミド（４１．６μｌ、０．１３８ｍｍｏｌ）を加え、−３０℃で３０分、室温で１時間攪拌した。その後、−４０℃に冷やしｍ−ＣＰＢＡ（６０ｍｇ、０．３４７ｍｍｏｌ）加え、０℃で３０分、室温で３０分攪拌し、クロロホルムで薄め分液した。１０％亜硫酸ナトリウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、そして水で洗った後、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過しエバポレーターで溶媒を除いた。シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製して３，４，６−Ｏ−トリアセチル−１−Ｏ−ベンジルオキシホスフェニル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミン（ＩＶ）（α−アノマー、収率９５％）を得た。【０１５３】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）：７．３９−７．３４（１０Ｈ，ｍ）５．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．６７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．４，５．７Ｈｚ）５．２０−５．０４（６Ｈ，ｍ），４．３９−４．３３（１Ｈ，ｍ），４．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０，１２．５Ｈｚ），４．０３−３．９７（１Ｈ，ｍ），３．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，１２．５Ｈｚ）２．７３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝５．３，８．５，１８．５Ｈｚ），２．５２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５．８，１８．５Ｈｚ），２．２７−２．１９（１Ｈ，ｍ）２．１９（３Ｈ，ｓ），２．１２−２．０２（１Ｈ，ｍ）２．０５（３Ｈ，ｓ），２．０２（３Ｈ，ｓ）２．００（３Ｈ，ｓ）。【０１５４】
（５）３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミンホスフェート（Ｖ）の合成【０１５５】
【化２１】
2005095428.tif 000016
【０１５６】
（Ｖ）
５０ｍｌナスフラスコにジベンジル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミンホスフェート（ＩＶ）（５０ｍｇ、０．０７５３ｍｍｏｌ）を入れ、メタノール１０ｍｌに溶かした。１０％パラジウムカーボンを加え、水素と１４時間反応させた。その後ろ過し、エバポレーターで乾燥させた。逆層ＨＰＬＣ（水：アセトニトリル＝７０：３０）で精製して３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブリノイルグルコサミンホスフェート（Ｖ）（α−アノマー、収率８０％）を得た。【０１５７】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＭｅＯＤ）：５．４８（１Ｈ，ｍ）５．３２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）５．０７（１Ｈ，ｔ，９．８Ｈｚ）４．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ）４．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．８，１２．４）４．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８）４．１４（  １Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ）２．７８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝７．２，１８．２Ｈｚ）２．６５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．１，１８．２Ｈｚ）２．５２−２．３７（２Ｈ，ｍ）２．１３（３Ｈ，ｓ）２．０３（３Ｈ，ｓ）１．９９（３Ｈ，ｓ）１．９６（３Ｈ，ｓ）。【０１５８】
（ｉｉ）細菌表層への導入
菌株には、ラクトバシルス属のＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＪＣＭ１１４９（独立行政法人  理化学研究所  微生物系統保存施設  （Ｊａｐａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ，  ＪＣＭ）から入手可能；ＡＴＣＣ１４９１７  とも等価であり、アメリカンタイプカルチャーコレクションからも入手可能）を用いた。この細菌を化合物（Ｖ）を含む培地（市販のラクトバチリＭＲＳブロスを指示通りの濃度で蒸留水に溶解させたもの）に添加し、嫌気性条件下（市販のアネロパック・ケンキを使用）３７℃で１晩培養することで表面をレブリン酸で修飾したＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＪＣＭ１１４９  を得た。【０１５９】
（実施例２：蛍光剤の導入）
（ｉｉｉ）蛍光剤の導入
実施例１で製造したＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＪＣＭ１１４９  を、ヒドラジド基を有する蛍光剤の一種である市販のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ヒドラジドナトリウム塩：【０１６０】
【化２２】
2005095428.tif 000017
【０１６１】
を０．１７ｍＭで溶解させた  ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ７．０）（作り方（ＮａＣｌ８ｇ，Ｎａ２ＨＰＯ４  １．１５ｇ，ＫＣｌ  ０．２ｇ，ＫＨ２ＰＯ４  ０．２ｇ  に水を加えて１Ｌにする））に懸濁させた。ヒドラジド基はケトン基と特異的に反応するため、細菌表層に提示させたケトン基と結合させることが出来る。【０１６２】
（ｉｖ）蛍光剤導入の確認
（ｉｉｉ）で得たレブリン酸／蛍光剤で修飾したＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＪＣＭ１１４９  を超音波で破砕し、遠心分離カラム（市販のＭｉｃｒｏｃｏｎ  ＹＭ−１０  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて精製し、細胞壁を含む高分子混合物を得た。これをリゾチーム水溶液に懸濁させ、細胞壁を消化させた。再び遠心分離カラムを用いリゾチームによって消化された細胞壁を精製し、その蛍光強度を測定した（図１）。
化合物（Ｖ）を用いて製造した細菌から最も強い蛍光が観測され、より効率的にレブリン酸／蛍光剤による修飾が確認された。【０１６３】
（ｉｉｉ）で得た蛍光剤で修飾したＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍＪＣＭ１１４９を蛍光顕微鏡で観察した。化合物（Ｖ）を用いて製造した細菌からのみ強い蛍光が観測され（図１Ｂ）、天然の細菌からは蛍光が観測されず（図２Ｂ）、レブリン酸／蛍光剤による修飾が確認された。【０１６４】
蛍光剤を有する細菌はその数や形態の観察に利用できる。シクロデキストリンを有する細菌はコレステロールの除去に、金属キレート剤を有する細菌は重金属除去に用いることができる。また、ペプチド、ポリペプチドを有する細菌はワクチンの製造に、核酸を有する細菌はＤＮＡワクチンの製造に利用できる。【０１６５】
（実施例３：シクロサリジェニル−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブノイル−グルコサミンホスフェートを用いた細菌細胞表層の化学修飾法）
（ｉｖ）シクロサリジェニル−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブノイルグルコサミンホスフェート（ＶＩ）の合成
シクロサリジェニル−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブノイルグルコサミンホスフェート（ＶＩ）の合成は、Ｍｅｉｅｒ等の文献（Ｃｈｒｉｓ  Ｍｅｉｅｒ，ｅｔ，ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１２２８−１２３５（２００４））を参考にして次のように行なった。シクロサリジェニル基は、Ｍｅｉｅｒ等により開発された、細胞質内のような塩基性条件下で加水分解により除去されるリン酸保護基である。この保護基を導入することにより、さらに疎水性を高め、細胞膜の透過性を向上させることができる。【０１６６】
シクロサリジェニル−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブノイルグルコサミンホスフェート（ＶＩ）【０１６７】
【化２３】
2005095428.tif 000018
【０１６８】
３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブノイルグルコサミン（ＩＩＩ）  （８８ｍｇ，０．２１８ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解させ、ＤＩＥＡ（１１３ｍＬ，０．８７３ｍｍｏｌ）を加えた。−３０℃に冷却し、サリチルクロロホスファン（８１．９ｍｇ，０．４３６ｍｍｏｌ）を加え、−３０℃で３０分、室温で３０分攪拌した。その後、−４０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ＢｕＯＯＨ  ５−６Ｍデカン溶液（８０ｍＬ）を加え、０℃で３０分攪拌した。その後、濃縮せずそのままシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝５０：１）で精製することにより、シクロサリジェニル−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｎ−レブノイルグルコサミンホスフェート（ＶＩ）（６８ｍｇ，５５％，ジアステレオマー比１．０：０．６）を得た。【０１６９】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）７．４０−７．３４（２Ｈ，ｍ）（ａｒｏｍａｔｉｃ），７．２３−７．０８（６Ｈ，ｍ）（ａｒｏｍａｔｉｃ），６．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ）（ＮＨ），６．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８）（ＮＨ）５．８５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．２，５．９Ｈｚ）（Ｈ−１）５．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．２，５．７Ｈｚ）（Ｈ−１），５．５０−５．４１（４Ｈ，ｍ）（Ｐｈ−ＣＨ２），５．２６−５．３１（４Ｈ，ｍ）（Ｈ−３，Ｈ−４），４．４６−４．３７（２Ｈ，ｍ）（Ｈ−２），４．２４−４．１５（２Ｈ，ｍ）（Ｈ−６），４．１３−４．０９（１Ｈ，ｍ）（Ｈ−５），４．０７−４．０３（１Ｈ，ｍ）（Ｈ−６），３．９５−３．９０（２Ｈ，ｍ）（Ｈ−５，Ｈ−６），２．９０−２．８１（２Ｈ，ｍ）（ｌｅｖｕｌｉｎｉｃ−ＣＨ２−），２．７２−２．６２（２Ｈ，ｍ（ｌｅｖｕｌｉｎｉｃ−ＣＨ２−），２．４７−２．３０（４Ｈ，ｍ）（ｌｅｖｕｌｉｎｉｃ−ＣＨ２−），２．１７（３Ｈ，ｓ）（ＣＯＣＨ３）２．１５（３Ｈ，ｓ）（ＣＯＣＨ３），２．０７−１．９８（１８Ｈ，ｍ）（ＣＯＣＨ３）．ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ２４Ｈ３０ＮＯ１３ＰＮａ（Ｍ＋Ｎａ＋）  ｃａｌｃｄ  ５９４．１３５２，  ｆｏｕｎｄ  ５９４．１３６５。【０１７０】
（ｖ）細菌表層への導入
菌株には、ラクトバシルス属のＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＪＣＭ１１４９（独立行政法人理化学研究所  微生物系統保存施設（Ｊａｐａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ，ＪＣＭ）から入手可能；ＡＴＣＣ１４９１７とも等価であり、アメリカンタイプカルチャーコレクションからも入手可能）を用いた。この細菌を培地（市販のラクトバチリＭＲＳブロスを指示どおりの濃度で蒸留水に溶解させたもの）に添加し、嫌気性条件下（市販のアネロパック・ケンキを使用）３７℃で１２時間培養した。その後、化合物（ＶＩ）を超音波により別途培地に懸濁させ、細菌を含む培地に加え、さらに３時間培養することで表面をレブリン酸で修飾したＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＪＣＭ１１４９を得た。【０１７１】
（実施例４：細菌細胞表層への糖鎖（グロボトリース）ポリマーの導入）
（ｖｉ）末端にオキシルアミノ基を有する糖鎖（グロボトリオース）ポリマー（ＸＸ）の合成
末端にオキシルアミノ基を有する糖鎖（グロボトリオース）ポリマー（ＸＸ）の合成は、Ｊｏｎｅｓ等の文献（Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．４１，１５３１−１５３３（２０００））、Ｈａｎｓｅｎ等の文献（Ｈａｎｓｅｎ，Ｈ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．３０７，２４３−２５１（１９９８））そしてＡｒｍｅｓ等の文献（Ａｒｍｅｓ，Ｓ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，４，１７４６−１７５８（２００３））（Ａｒｍｓ，Ｓ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３３，６６４０−６６４７（２０００））を参考に合成した。【０１７２】
２−［２−（２−ヨードエトキシ）エトキシ］エタノール  （ＶＩＩ）【０１７３】
【化２４】
2005095428.tif 000019
【０１７４】
２−［２−（２−クロロ）エトキシ］エタノール（８６０μＬ，５．９２ｍｍｏｌ）をＡｃｅｔｏｎｅ（６ｍＬ）に溶かし、ＮａＩ（１０ｇ，６８ｍｍｏｌ）を加え、２３時間還流した。室温に戻し、水を加えジエチルエーテルで抽出した。ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、溶媒をエバポレーターで除去し、化合物（ＶＩＩ）（１．２４ｇ，８０％）を得た。【０１７５】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）３．７７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）（ＣＨ２Ｏ），３．７５−３．７２（２Ｈ，ｍ）（ＣＨ２ＯＨ），３．７０−３．６６（４Ｈ，ｍ）（ＣＨ２Ｏ），３．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．６）（ＣＨ２Ｏ）３．２３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８）（ＣＨ２Ｉ）。【０１７６】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−（２−アミノオキシル−エトキシ）エトキシ］エタノール（ＶＩＩＩ）【０１７７】
【化２５】
2005095428.tif 000020
【０１７８】
化合物（ＶＩＩ）（９７３ｍｇ，３．７４ｍｍｏｌ）にＢｏｃＮＨＯＨ（４９８ｍｇ，３．７４ｍｍｏｌ）を加え、ＤＢＵ（５５９μＬ，３．７４ｍｍｏｌ）を滴下した。７０℃で２４時間攪拌し、ＣＨＣｌ３に希釈し、１ＮＨＣｌ，飽和食塩水で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。ろ過し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝２０：１）で精製することにより、化合物（ＶＩＩＩ）（７１３ｍｇ，７２％）を得た。【０１７９】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）８．００（１Ｈ，ｓ）（ＮＨ），４．０４−４．０１（２Ｈ，ｍ）（ＣＨ２−ＯＮＨ），３．７６−３．７１（４Ｈ，ｍ）（ＣＨ２Ｏ，ＣＨ２ＯＨ），３．７０−３．６７（４Ｈ，ｍ）（ＣＨ２Ｏ），３．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．５）（ＣＨ２Ｏ），１．４８（９Ｈ，ｓ）（ｔ−Ｂｕ）。【０１８０】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−（２−アミノオキシ−エトキシ）エトキシ］エタノール  ２−ブロモイソブチル  エステル（ＩＸ）【０１８１】
【化２６】
2005095428.tif 000021
【０１８２】
化合物（ＶＩＩ）（２２２ｍｇ，０．８６６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解させ、トリエチルアミン（２４１μＬ，１．７３ｍｍｏｌ）を加えた。０℃に冷却し、２−ブロモイソブチルブロミド（１０７μＬ，０．８６６ｍｍｏｌ）を滴下した。室温で８時間攪拌した後、ろ過し沈殿を取り除いた後、エバポレーターで溶媒を除去した。シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１）で精製することにより、化合物（ＩＸ）（２４３ｍｇ，６８％）を得た。【０１８３】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）７．５９（１Ｈ，ｓ）（ＮＨ），４．３４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．８）（ＣＨ２−ＯＣＯ），４．０２（２Ｈ，ｔ）（ＣＨ２ＯＮＨ），３．７６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．８）（ＣＨ２Ｏ），３．７２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．６）（ＣＨ２Ｏ），３．７１−３．６（４Ｈ，ｍ）（ＣＨ２Ｏ），１．９４（６Ｈ，ｓ）（Ｍｅ２ＢｒＣＯ），１．４８（９Ｈ，ｓ）（ｔ−Ｂｕ）．
２−［２−（２−アミノオキシ−エトキシ）エトキシ］エタノール  ２−ブロモイソブチル  エステル（Ｘ）【０１８４】
【化２７】
2005095428.tif 000022
【０１８５】
化合物（ＩＸ）（１４ｍｇ，３３．８μｍｏｌ）をＴＦＡとＣＨ２Ｃｌ２の混合溶媒（ＴＦＡ：ＣＨ２Ｃｌ２＝１：１）（１ｍＬ）に溶解させ０℃で、１時間反応させた。エバポレーターで溶媒を除去し、減圧乾燥したのち、４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（１ｍＬ）に溶解させた。Ｅｔ２Ｏを加え沈殿させ、洗浄した後、減圧乾燥させることで化合物（Ｘ）（９．４ｍｇ，７９％）を得た。【０１８６】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＭｅＯＤ）４．３３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．７）（ＣＨ２−ＯＣＯ），４．１８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．２）（ＣＨ２ＯＮＨ），３．８１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．２）（ＣＨ２Ｏ），３．７５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．７）（ＣＨ２Ｏ），３．７２−３．６６（４Ｈ，ｍ）（ＣＨ２Ｏ），１．９２（６Ｈ，ｓ）（Ｍｅ２ＢｒＣＯ）；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ１０Ｈ２１ＢｒＮＯ５（Ｍ＋Ｈ＋）  ｃａｌｃｄ  ３１４．０６０３，  ｆｏｕｎｄ  ３１４．０６１０。【０１８７】
Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−ヒドロキシエトキシメタクリレート）酢酸（ＸＩ）【０１８８】
【化２８】
2005095428.tif 000023
【０１８９】
２−ヒドロキシエチルメタクリレート（４．８４ｍＬ，４０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍｌ）に溶解させ、ｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテート（５．９ｍＬ，４０ｍｍｏｌ）を加えた。０℃に冷却しＮａＨ  ６０−７２％（油中）（１．７ｇ，４８ｍｍｏｌ）加えた。０℃で１時間攪拌し、１０％クエン酸水溶液を加え反応を止めた。酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、エバポレーターで溶媒を除去した。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）で精製することにより、化合物（ＸＩ）（１．９７ｇ，２０％）を得た。【０１９０】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）６．１２（１Ｈ，ｂｒ）（ＣＨ２＝Ｃ），５．５８（１Ｈ，ｍ）（ＣＨ２＝Ｃ），４．３３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．８）（ＣＨ２−ＯＣＯ），４．０１（２Ｈ，ｓ）（Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯ），３．８１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．８）（ＣＨ２Ｏ），１．９６（３Ｈ，ｓ）（ＣＨ３），１．４８（ｔ−Ｂｕ）。【０１９１】
２−（２−ヒドロキシエトキシメタクリレート）酢酸（ＸＩＩ）【０１９２】
【化２９】
2005095428.tif 000024
【０１９３】
化合物（ＸＩ）（１．９７ｇ，８．１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）とＴＦＡ（３０ｍＬ）に溶解させ、室温で１時間攪拌した。エバポレーターで溶媒を除去し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製することにより化合物（ＸＩＩ）（１．５０ｇ，９９％）を得た。【０１９４】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）６．１７（１Ｈ，ｂｒ）（ＣＨ２＝Ｃ），５．６３（１Ｈ，ｍ）（ＣＨ２＝Ｃ），４．３９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．５）（ＣＨ２−ＯＣＯ），４．２１（２Ｈ，ｓ）（Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ），３．８９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．６）（ＣＨ２Ｏ），１．９９（３Ｈ，ｓ）（ＣＨ３）。【０１９５】
２−（２−ヒドロキシエトキシ  メタクリレート）酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシイミドエステル（ＸＩＩＩ）【０１９６】
【化３０】
2005095428.tif 000025
【０１９７】
化合物（ＸＩＩ）（１．５０ｇ，８．０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）に溶解させ、ＮＨＳ（１．０２ｇ，８．９ｍｍｏｌ）を加えた。０℃に冷却し、ＷＳＣ・ＨＣｌ（１．７０ｇ，８．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４９．３ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）を加え、穏やかに室温に戻しながら、２０時間攪拌した。シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝５０：１）で精製することにより化合物（ＸＩＩＩ）（５５６ｍｇ，２４％）を得た。【０１９８】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）６．１５（１Ｈ，ｂｒ）（ＣＨ２＝Ｃ），５．５９（１Ｈ，ｍ）（ＣＨ２＝Ｃ），４．５０（２Ｈ，ｓ）（Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮ），４．３５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．５）（ＣＨ２−ＯＣＯ），３．８９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．５）（ＣＨ２Ｏ），２．８５（４Ｈ，ｓ）（ＯＣ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯ），１．９６（３Ｈ，ｓ）（ＣＨ３）。【０１９９】
（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２，３，６―トリ―Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチルβ−Ｄ−グルコピラノース  （ＸＩＶ）【０２００】
【化３１】
2005095428.tif 000026
【０２０１】
参考文献（Ｇａｒｇａｎｏ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２３，１２９０９−１２９１０（２００１））を参考に合成した化合物（ＸＶ）【０２０２】
【化３２】
2005095428.tif 000027
【０２０３】
（６０ｍｇ，０．０６２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解させ、ＢｎＮＨ２（１６．７μｌ，０．１５５ｍｍｏｌ）を加え室温で攪拌し、４８時間攪拌した。エバポレーターで溶媒を除去し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１）で精製することにより、化合物（ＸＩＶ）（４９ｍｇ，８５％）を得た。ＭＳ（ＦＡＢ）  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ３８Ｈ５２ＮａＯ２６  （Ｍ＋Ｎａ＋）  ｃａｌｃｄ  ９４７．２６４５，  ｆｏｕｎｄ  ９４７．２６４７。【０２０４】
（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル  トリクロロアセトイミデート  （ＸＶＩ）【０２０５】
【化３３】
2005095428.tif 000028
【０２０６】
化合物（ＸＩＶ）（７６０ｍｇ，０．８２１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却させた。ＣＣｌ３ＣＮ（８２３μｌ，８．２１ｍｍｏｌ）、ＤＢＵ（１２３μｌ，０．８２１ｍｍｏｌ）を加え、０℃で３時間攪拌した。ＴＥＡを加え中性にし、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１）で精製し、化合物（ＸＶＩ）（６５０ｍｇ，７４％）を得た。【０２０７】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）８．６４（１Ｈ，ｓ）（ＮＨ），６．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７）（Ｈ−１），５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４）（Ｈ−４”），５．５６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６）（Ｈ−３），５．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，１１．０）（Ｈ−３”），５．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５，１１．０）（Ｈ−２”），５．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，１０．７）（Ｈ−２’）．５．０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．８，１０．１）（Ｈ−２），５．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５）（Ｈ−１”），４．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．５，１０．８）（Ｈ−３’），４．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７）（Ｈ−１’），４．５３−４．４０（３Ｈｍ）（Ｈ−５”，Ｈ−６，Ｈ−６’），４．２０−４．０５（４Ｈ，ｍ）（Ｈ−５，Ｈ−６，Ｈ−６’，Ｈ−６”）４．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８）（Ｈ−４’），３．８７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．５）（Ｈ−４），３．７７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７）（Ｈ−５’），２．１４（３Ｈ，ｓ）（ＣＯＣＨ３），２．１１−２．０３（２１Ｈ，ｍ）（ＣＯＣＨ３），２．０１（３Ｈ，ｓ）（ＣＯＣＨ３），１．９８（３Ｈ，ｍ）（ＣＯＣＨ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４０Ｈ５２Ｃｌ３ＮＮａＯ２６  （Ｍ＋Ｎａ＋）  ｃａｌｃｄ  １０９０．１７４１，  ｆｏｕｎｄ  １０９０．１７５５。【０２０８】
２−クロロエチル（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド  （ＸＶＩＩ）【０２０９】
【化３４】
2005095428.tif 000029
【０２１０】
化合物（ＸＶＩ）（３４０ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）に溶解させ、２−クロロエタノール（４０μｌ，０．９ｍｍｏｌ）、ＭＳ  ４Åを加え室温で３０分攪拌した。０℃に冷却し、ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（８０μｌ，０．６４ｍｍｏｌ）を加え、０℃で３０分、室温で１時間攪拌した。ＴＥＡを加え中性にした後、セライトろ過し、エバポレーターで溶媒を除去した。シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１）で精製することにより、化合物（ＸＶＩＩ）（２１０ｍｇ，６６％）を得た。【０２１１】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）５．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３）（Ｈ−４”），５．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．２，１１．０）（Ｈ−３”），５．２１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．２）（Ｈ−３），５．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５，１１．１）（Ｈ−２”），５．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，１０．６）（Ｈ−２’），４．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５）（Ｈ−１”）４．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，９．２）（Ｈ−２），４．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．１，１０．８）（Ｈ−３’），４．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９）（Ｈ−１），４．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７）（Ｈ−１’），４．５１−４．４５（２Ｈ，ｍ）（Ｈ−５”，Ｈ−６），４．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．３，１１．１）（Ｈ−６’），４．１９−４．０８（４Ｈ，ｍ）（Ｈ−６，Ｈ−６’，Ｈ−６”），４．０７−３．９９（２Ｈｍ）（Ｈ−４’，ＯＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ），３．８３−３．７３（３Ｈ，ｍ）（Ｈ−４，Ｈ−５’，ＯＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ），３．６７−３．５３（３Ｈ，ｍ）（Ｈ−５，ＣＨ２Ｃｌ），２．１３（３Ｈ，ｓ）（ＣＯＣＨ３）２．１１（３Ｈ，ｓ）（ＣＯＣＨ３），２．０９−２．０３（２１Ｈ，ｍ）（ＣＯＣＨ３），１．９８（３Ｈ，ｍ）（ＣＯＣＨ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４０Ｈ５５ＣｌＮａＯ２６  （Ｍ＋Ｎａ＋）  ｃａｌｃｄ  １００９．２５６８，  ｆｏｕｎｄ  １００９．２５７６。【０２１２】
２−アジドエトキシ  （２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド  （ＸＶＩＩＩ）【０２１３】
【化３５】
2005095428.tif 000030
【０２１４】
化合物（ＸＶＩＩ）（２２６ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解させ、ＮａＮ３（１４９ｍｇ，２．３ｍｍｏｌ）を加えた。５０℃で２日間攪拌した後、ＣＨＣｌ３で希釈し、水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、エバポレーターで溶媒を除去した。シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１）で精製することにより、化合物（ＸＩＩＩ）（２１９ｍｇ，９６％）を得た。【０２１５】
１Ｈ−ＮＭＲδ（ＣＤＣｌ３）５．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４）（Ｈ−４”），５．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，１１．０）（Ｈ−３”），５．２１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．１）（Ｈ−３），５．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５，１１．１）（Ｈ−２”），５．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，１０．７）（Ｈ−２’），４．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５）（Ｈ−１”），４．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，９．１）（Ｈ−２）４．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４，１０．８）（Ｈ−３’），４．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８）（Ｈ−１），４．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９）（Ｈ−１’）４．５４−４．４５（２Ｈ，ｍ）（Ｈ−５”，Ｈ−６），４．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．３，１１．１）（Ｈ−６’），４．２０−４．０６（４Ｈ，ｍ）（Ｈ−６，Ｈ−６’，Ｈ−６”），４．０３−３．９５（２Ｈ，ｍ）（Ｈ−４’，ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ３），３．８２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．４）（Ｈ−４），３．７６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６）（Ｈ−５’）３．７３−３．６１（２Ｈ，ｍ）（Ｈ−５，ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ３），３．４８（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝３．５，８．１，１３．４）（ＣＨ２Ｎ３），３．２８（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝３．５，４．６，１３．４）（ＣＨ２Ｎ３），２．１３（３Ｈ，ｓ）（ＣＯＣＨ３），２．１１（３Ｈ，ｓ）（ＣＯＣＨ３），２．０９−２．０３（２１Ｈ，ｍ）（ＣＯＣＨ３），１．９８（３Ｈ，ｍ）（ＣＯＣＨ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４０Ｈ５５Ｎ３ＮａＯ２６  （Ｍ＋Ｎａ＋）  ｃａｌｃｄ  １０１６．２９７１，  ｆｏｕｎｄ  １０１６．２９６５．
Ｇｂ３糖鎖メタクリレートモノマー（ＸＩＸ）【０２１６】
【化３６】
2005095428.tif 000031
【０２１７】
化合物（ＸＶＩＩＩ）（６６ｍｇ，６６μｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却し、ＮａＯＭｅ（３．６ｍｇ，６６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１２時間攪拌した。Ｄｏｗｅｘカチオン交換樹脂で中和した後、ろ過し、エバポレーターで溶媒を除去した。ＭｅＯＨ（３ｍＬ）に溶解させ、０．１Ｍ  ＨＣｌ（メタノール中）（０．６ｍＬ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（ｃａｔ．）を加え、水素雰囲気下、室温で４時間攪拌した。セライトろ過し、エバポレーターで溶媒を除去した後、減圧乾燥した。１０ｍｌ  ＰＢＳ  ｂｕｆｆｅｒ  ｐＨ８．３（３ｍＬ）に溶解し、化合物（ＸＩＩＩ）（９４ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（３ｍＬ）に溶解させたものを加え、室温で１２時間攪拌した。減圧乾燥し、逆層カラムで精製することにより化合物（ＸＩＸ）（２５ｍｇ，５３％）を得た。【０２１８】
１Ｈ−ＮＭＲδ（Ｄ２Ｏ）６．１４（１Ｈ，ｓ）（ＣＨ２＝Ｃ），５．７２（１Ｈ，ｓ）（ＣＨ２＝Ｃ），４．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８）（Ｈ−１”），４．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９）（Ｈ−１’），４．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２）（Ｈ−１），４．３５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．２）（ＣＨ２−ＯＣＯ），４．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４）（Ｈ−５”），４．１１（２Ｈ，ｓ）（Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮ），４．０３−３．４２（２２Ｈ，ｍ），３．３２−３．２７（１Ｈ，ｍ）（Ｈ−２），１．９２（３Ｈ，ｓ）（ＣＨ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ２８Ｈ４８ＮＯ２０  （Ｍ＋Ｈ＋）ｃａｌｃｄ  ７１８．２７７０，  ｆｏｕｎｄ  ７１８．２７８４。【０２１９】
Ｇｂ３糖鎖メタクリレートポリマー（ＸＸ）【０２２０】
【化３７】
2005095428.tif 000032
【０２２１】
ＣｕＣｌ（０．０６９ｍｇ，０．７μｍｏｌ）とジピリジル（０．２２ｍｇ，１．４μｍｏｌ）をＡｒバブリングにより脱気したＨ２ＯおよびＭｅＯＨ（１：１）の共溶媒２００μｌに溶解させ、化合物（ＩＸ）（０．２ｍｇ，０．７μｍｏｌ）と化合物（ＸＩＸ）（５．０ｍｇ，７．０μｍｏｌ）を加えた。Ａｒ雰囲気下、室温で３時間攪拌した。その後、空気にさらし酸化することで反応をとめ，化合物（ＸＸ）を得た。【０２２２】
（ｖｉｉ）糖鎖ポリマーの導入
実施例３で製造したレブリン酸で修飾したＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＪＣＭ１１４９を、オキシルアミノ基を有する化合物（ＸＸ）を０．５ｍＭ、ＮａＣＮＢＨ３を０．１ｍＭで溶解させた酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）に懸濁させ、室温で１０時間インキュベートした。オキシルアミノ基はケトン基と特異的に反応するため、細胞表層に提示させたケトン基と結合させることができる。【０２２３】
（ｖｉｉｉ）糖鎖ポリマー導入の確認
（ｖｉｉ）で得たレブリン酸／糖鎖ポリマーで修飾したＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＪＣＭ１１４９の接着性の変化を表面プラズモン共鳴法（Ｂｉａｃｏｒｅ）により観測した。まずＳｅｎｓｏｒ  ｃｈｉｐ  ｐｉｏｎｅｅｒ  Ｃ１にアミンカップリング法を用いて、Ｇｂ３  抗体（Ｓｅｉｋａｇａｋｕ  Ｃｏ．Ｊａｐａｎ）を固定化した。固定化には、Ａｍｉｎｅ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｂｉａｃｏｒｅ）とＧｂ３抗体を１０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ．５．５で５０μｇ／ｍｌに調節したものを用い、ランニングバッファーにはＨＢＳ−ＥＰを用いた。流速５μｌ／ｍｉｎ、２５℃で、ＮＨＳＥＤＣ混合溶液５０μｌ、Ｇｂ３抗体溶液５０μｌ，エタノールアミン溶液５０μｌ、の順で添加し行なった。固定化量は約５００ＲＵであった。この基板に対し、乳酸菌をＨＢＳ−ＥＰ緩衝液に懸濁させ、濃度を７ｘ１０８  ｃｆｕ／ｍｌとし、流速５μｌ／ｍｉｎで５０μｌ添加した。ネガティブコントロールとしては、ケトンを提示させていない乳酸菌にオキシルアミノ基持つＧｂ３糖鎖ポリマーを添加し、洗浄したものを用いた。糖鎖ポリマーを提示させていない乳酸菌は、ほとんど接着しないのに対し、糖鎖ポリマーを提示させた乳酸菌を添加した場合は大きなレスポンスが観測され、レブリン酸／糖鎖ポリマーの修飾が確認できた（図５）。【０２２４】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、この実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することができることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【０２２５】
本発明により、医薬、農薬、食品などで使用され得る、機能性細菌が提供される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2005095428.tif 000044
【国際調査報告】
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