(57)【要約】本発明は、コア微粒子が分散し、かつ該コア微粒子を被覆するための被覆層を構成する被覆層成分が溶解した極性有機溶媒を含む液（液Ａ）、液Ａと混合可能であり、極性有機溶媒を含まないまたは液Ａより低い割合で極性有機溶媒を含む溶媒（液Ｂ）、および、液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具からなる被覆微粒子の用時調製用キットを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
コア微粒子が分散し、かつ該コア微粒子を被覆するための被覆層を構成する被覆層成分が溶解した極性有機溶媒を含む液（液Ａ）、
液Ａと混合可能であり、極性有機溶媒を含まないまたは液Ａより低い割合で極性有機溶媒を含む溶媒（液Ｂ）、
および、液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具を含む被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項２】
液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、インライン混合手段、該液Ａを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段および該液Ｂを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段を備える器具である請求項１記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項３】
液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するためのシリンジ、液Ｂを収容するためのシリンジおよび該液Ａを収容するためのシリンジと該液Ｂを収容するためのシリンジをそれぞれ接続可能な２つの入口をもつインライン混合手段を備える器具である請求項１記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項４】
液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａおよび液Ｂをそれぞれ収容するための室を並列に備えた多室型シリンジであり、該シリンジの排出口がインライン混合手段になっているシリンジである請求項１記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項５】
インライン混合手段がスタティックミキサーを接続または内蔵しているインライン混合手段である請求項２〜４のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項６】
液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、および液Ｂを収容するための手段から液Ａを収容するための手段中の液Ａに液Ｂを加える手段を備える器具である請求項１記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項７】
液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するためのシリンジおよび液Ｂを収容するためのシリンジであり、該２つのシリンジを接続して液Ａに液Ｂを加えることが可能な請求項１記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項８】
液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａおよび液Ｂをそれぞれ収容するための室を直列に備えた多室型シリンジであり、該シリンジが液Ａに液Ｂを加えることが可能なシリンジである請求項１記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項９】
液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、出口に移注針または混注用コネクタを備える器具である請求項２〜８のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項１０】
被覆層成分が、脂質、界面活性剤および高分子から選ばれる１つ以上の物質である請求項１〜９のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項１１】
被覆層が脂質膜である請求項１〜１０のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項１２】
コア微粒子が薬物、脂質集合体、リポソーム、エマルジョン微粒子、高分子、金属コロイドまたは微粒子製剤を構成成分とする微粒子である請求項１〜１１のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項１３】
コア微粒子が薬物、脂質集合体、リポソーム、エマルジョン微粒子、高分子、金属コロイドまたは微粒子製剤を２つ以上組み合わせた複合体を構成成分とする微粒子である請求項１〜１１のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項１４】
コア微粒子が、薬物とリポソームの複合体を構成成分とする微粒子である請求項１〜１１のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項１５】
極性有機溶媒がアルコール類、グリコール類およびポリアルキレングリコール類から選ばれる１つ以上である請求項１〜１４のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キットによって調製できる被覆微粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、被覆微粒子の用時調製用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】  従来から、医薬品、食品、農薬、動物用薬等において、被覆微粒子の製造方法に関して多くの技術の開示が行われている。微粒子（被覆される微粒子）の被覆層による被覆は、例えば外的因子から受ける影響を抑制するため、外的因子の影響を選択的に受け入れ、それをトリガーとして微粒子に変化を起こすため等、微粒子に機能を付与する目的で行われている。その１つとして、液体中で微粒子を脂質膜で被覆する方法が報告されている（特許文献１参照）。該方法においては、微粒子が分散し、かつ脂質が溶解した極性有機溶媒含有水溶液中の極性有機溶媒の割合を減少させることによって、微粒子が脂質膜で被覆されており、液体中において被覆が行われ、例えば静脈注射用微粒子等に好適な大きさの被覆微粒子が、すぐれた効率で製造されている。【０００３】  一方、被覆によらない方法で製造される微粒子製剤では、用時調製用のキットが知られている（例えば特許文献２および特許文献３参照）。
【特許文献１】国際公開第０２／２８３６７号パンフレット
【特許文献２】特開２０００−２４７８６８号公報
【特許文献３】特許第２６８８２３５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】  本発明の目的は、コア微粒子が被覆層で被覆された被覆微粒子の用時調製用キットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】  本発明は以下の（１）〜（１６）に関する。
（１）コア微粒子が分散し、かつ該コア微粒子を被覆するための被覆層を構成する被覆層成分が溶解した極性有機溶媒を含む液（液Ａ）、
液Ａと混合可能であり、極性有機溶媒を含まないまたは液Ａより低い割合で極性有機溶媒を含む溶媒（液Ｂ）、
および、液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具を含む被覆微粒子の用時調製用キット。
（２）液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、インライン混合手段、該液Ａを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段および該液Ｂを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段を備える器具である前記（１）記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（３）液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するためのシリンジ、液Ｂを収容するためのシリンジおよび該液Ａを収容するためのシリンジと該液Ｂを収容するためのシリンジをそれぞれ接続可能な２つの入口をもつインライン混合手段を備える器具である前記（１）記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（４）液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａおよび液Ｂをそれぞれ収容するための室を並列に備えた多室型シリンジであり、該シリンジの排出口がインライン混合手段になっているシリンジである前記（１）記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（５）インライン混合手段がスタティックミキサーを接続または内蔵しているインライン混合手段である前記（２）〜（４）のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（６）液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、および液Ｂを収容するための手段から液Ａを収容するための手段中の液Ａに液Ｂを加える手段を備える器具である前記（１）記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（７）液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するためのシリンジおよび液Ｂを収容するためのシリンジであり、該２つのシリンジを接続して液Ａに液Ｂを加えることが可能な前記（１）記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（８）液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａおよび液Ｂをそれぞれ収容するための室を直列に備えた多室型シリンジであり、該シリンジが液Ａに液Ｂを加えることが可能なシリンジである前記（１）記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（９）液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、出口に移注針または混注用コネクタを備える器具である前記（２）〜（８）のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（１０）被覆層成分が、脂質、界面活性剤および高分子から選ばれる１つ以上の物質である前記（１）〜（９）のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（１１）被覆層が脂質膜である前記（１）〜（１０）のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（１２）コア微粒子が薬物、脂質集合体、リポソーム、エマルジョン微粒子、高分子、金属コロイドまたは微粒子製剤を構成成分とする微粒子である前記（１）〜（１１）のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（１３）コア微粒子が薬物、脂質集合体、リポソーム、エマルジョン微粒子、高分子、金属コロイドまたは微粒子製剤を２つ以上組み合わせた複合体を構成成分とする微粒子である前記（１）〜（１１）のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（１４）コア微粒子が、薬物とリポソームの複合体を構成成分とする微粒子である前記（１）〜（１１）のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（１５）極性有機溶媒がアルコール類、グリコール類およびポリアルキレングリコール類から選ばれる１つ以上である前記（１）〜（１４）のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キット。
（１６）前記（１）〜（１５）のいずれかに記載の被覆微粒子の用時調製用キットによって調製できる被覆微粒子。
【発明の効果】
【０００６】  本発明により、コア微粒子が被覆層で被覆された被覆微粒子の用時調製用キットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】本発明のキットの１例とその用法の模式図（１）。
【図２】本発明のキットの他の例とその用法の模式図（２）。
【図３】本発明のキットの他の例とその用法の模式図（３）。
【図４】本発明のキットの他の例とその用法の模式図（４）。
【図５】本発明のキットの他の例とその用法の模式図（５）。
【図６】本発明のキットの他の例とその用法の模式図（６）。
【図７】本発明のキットの他の例とその用法の模式図（７）。
【図８】本発明のキットの他の例とその用法の模式図（８）。
【図９】従来の被覆微粒子製造装置の模式図。
【図１０】液Ａおよびコア微粒子を用時に調製する各用時調製用キットが含まれる場合の本発明のキットの１例とその用法の模式図
【符号の説明】
【０００８】１，２  容器
３，４  ポンプ
５  三方継手
６  スタティックミキサー
７，８  輸液ボトル
９  三方継手
１０  スタティックミキサー
１１，１２  シリンジ
１３  三方継手
１４  スタティックミキサー
１５  多室型シリンジ
１６  スタティックミキサー
１７  容器
１８  シリンジ
１９移注針
２０，２１  輸液ボトル
２２混注用チューブ
２３  雌コネクタを備えたシリンジ
２４  雄コネクタを備えたシリンジ
２５  直列多室型シリンジ
２６，２７  容器
２８  ポンプ
２９容器
３０，３１，３２，３３，３４  シリンジおよび移注針
３５  シリンジ
３６  三方継手、スタティックミキサーおよび流路
液Ａ  コア微粒子が分散し、かつ該コア微粒子を被覆するための被覆層を構成する被覆層成分が溶解した極性有機溶媒を含む液
液Ｂ  液Ａと混合可能であり、極性有機溶媒を含まないまたは液Ａより低い割合で極性有機溶媒を含む溶媒
液Ｃ  液Ａと液Ｂを混合して得られる懸濁液
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】  本発明の被覆微粒子の用時調製用キットは、コア微粒子が分散し、かつ該コア微粒子を被覆するための被覆層を構成する被覆層成分が溶解した極性有機溶媒を含む液（液Ａ）、液Ａと混合可能であり、極性有機溶媒を含まないまたは液Ａより低い割合で極性有機溶媒を含む液（液Ｂ）、および、液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具を含むキットである。【００１０】  本発明における被覆微粒子とは、少なくともコア微粒子と被覆層からなり、被覆層を構成する被覆層成分がコア微粒子の外側を被覆して形成される微粒子のことであり、本発明の被覆微粒子は、液Ａと液Ｂを前記器具によって混合することによりコア微粒子が被覆層成分で被覆されることにより製造され、懸濁液（液Ｃ）の形態で得られる。【００１１】  本発明におけるコア微粒子とは、例えば、薬物、脂質集合体、リポソーム、エマルジョン粒子、高分子、金属コロイド、微粒子製剤等を構成成分とする微粒子のことであり、好ましくは、少なくとも薬物を構成成分とする微粒子があげられる。また、本発明におけるコア微粒子は、薬物、脂質集合体、リポソーム、エマルジョン粒子、高分子、金属コロイド、微粒子製剤等を２つ以上組み合わせた複合体を構成成分としていてもよく、薬物、脂質集合体、リポソーム、エマルジョン粒子、高分子、金属コロイド、微粒子製剤等と他の化合物（例えば糖、脂質、無機化合物等）とを組み合わせた複合体を構成成分としていてもよく、好ましくは、薬物とリポソームの複合体を構成成分とする微粒子があげられる。【００１２】  薬物は、液Ａにおける溶媒中で微粒子の形態をとる薬物、コア微粒子を構成する他の構成成分と複合体を形成して液Ａにおける溶媒中で微粒子の形態をとる薬物等を包含し、例えば蛋白質、ペプチド、核酸、低分子化合物、糖類、高分子化合物、脂質性化合物、金属化合物等のうち薬理学的活性を有する物質があげられ、好ましくは、核酸があげられ、より好ましくは、遺伝子、ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、プラスミドおよびｓｉＲＮＡから選ばれる１つ以上の物質があげられる。【００１３】  蛋白質またはペプチドとしては、例えばブラジキニン、アンジオテンシン、オキシトシン、バソプレシン、アドレノコルチコトロピン、カルシトニン、インスリン、グルカゴン、コレシストキニン、β−エンドルフィン、メラノサイト阻害因子、メラノサイト刺激ホルモン、ガストリンアンタゴニスト、ニューロテンシン、ソマトスタチン、ブルシン、シクロスポリン、エンケファリン、トランスフェリン、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）ペプチド、甲状腺ホルモン、成長ホルモン、性腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、ウリカーゼ、カルボキシペプチダーゼ、グルタミナーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ストレプトキナーゼ、インターロイキン、インターフェロン、ムラミルジペプチド、サイモポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、トロンボポエチン、トリプシンインヒビター、リゾチーム、表皮成長因子（ＥＧＦ）、インスリン様成長因子、神経成長因子、血小板由来成長因子、形質転換成長因子、内皮細胞成長因子、フィブロブラスト（繊維芽細胞）成長因子、グリア細胞成長因子、サイモシン、特異抗体（例えば、抗ＥＧＦ受容体抗体等があげられる）等があげられる。【００１４】  核酸としては、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド、センスオリゴヌクレオチド等のオリゴヌクレオチド、遺伝子、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、ｓｉＲＮＡ等があげられ、該核酸は、核酸の構造中のリン酸部、エステル部等に含まれる酸素原子等が、例えば硫黄原子等の他の原子に置換された誘導体を包含する。なお、ｓｉＲＮＡとは、短い二本鎖ＲＮＡのことである。【００１５】  低分子化合物としては、例えばイプシロン−アミノカプロン酸、塩酸アルギニン、Ｌ−アスパラギン酸カリウム、トラネキサム酸、硫酸ブレオマイシン、硫酸ビンクリスチン、セファゾリンナトリウム、セファロチンナトリウム、シチコリン、シタラビン、硫酸ゲンタマイシン、塩酸バンコマイシン、硫酸カナマイシン、硫酸アミカシン等があげられる。【００１６】  糖類としては、例えばコンドロイチン硫酸ナトリウム、ヘパリンナトリウム、デキストランフルオレセイン等があげられる。【００１７】  高分子化合物としては、例えばポリエチレンスルホン酸ナトリウム、ジビニルエーテル−無水マレイン酸共重合体（ＤＩＶＥＭＡ）、スチレン無水マレイン酸共重合体−ネオカルチノスタチン結合体（ＳＭＡＮＣＳ）等があげられる。
脂質性化合物としては、例えばビタミンＤ、ビタミンＥ等があげられる。
金属化合物としては、例えばシスプラチン等があげられる。【００１８】  脂質集合体またはリポソームは、例えば脂質および／または界面活性剤等によって構成され、脂質としては、単純脂質、複合脂質または誘導脂質のいかなるものであってもよく、例えばリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質、スフィンゴイド類、ステロール類等があげられ、好ましくは、リン脂質があげられる。また、脂質としては、例えば界面活性剤（後記の界面活性剤と同義）、高分子（後記の高分子と同義で、具体的にはデキストラン等）、ポリオキシエチレン誘導体（具体的にはポリエチレングリコール等）等の脂質誘導体もあげられ、好ましくは、ポリエチレングリコール化リン脂質があげられる。界面活性剤としては、例えば非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤等があげられる。【００１９】  リン脂質としては、例えばホスファチジルコリン（具体的には大豆ホスファチジルコリン、卵黄ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン等）、ホスファチジルエタノールアミン（具体的にはジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン等）、グリセロリン脂質（具体的にはホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルコリン等）、スフィンゴリン脂質（具体的にはスフィンゴミエリン、セラミドホスホエタノールアミン、セラミドホスホグリセロール、セラミドホスホグリセロリン酸等）、グリセロホスホノ脂質、スフィンゴホスホノ脂質、天然レシチン（具体的には卵黄レシチン、大豆レシチン等）、水素添加リン脂質（具体的には水素添加ホスファチジルコリン等）等の天然または合成のリン脂質があげられる。【００２０】  グリセロ糖脂質としては、例えばスルホキシリボシルグリセリド、ジグリコシルジグリセリド、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド、グリコシルジグリセリド等があげられる。
スフィンゴ糖脂質としては、例えばガラクトシルセレブロシド、ラクトシルセレブロシド、ガングリオシド等があげられる。
スフィンゴイド類としては、例えばスフィンガン、イコサスフィンガン、スフィンゴシン、それらの誘導体等があげられる。誘導体としては、例えばスフィンガン、イコサスフィンガン、スフィンゴシン等の−ＮＨ２を−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｘＣＨ３（式中、ｘは０〜１８の整数を表し、中でも６、１２または１８が好ましい）に変換したもの等があげられる。【００２１】  ステロール類としては、例えばコレステロール、ジヒドロコレステロール、ラノステロール、β−シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴカステロール、フコステロール、３β−［Ｎ−（Ｎ’Ｎ’−ジメチルアミノエチル）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）等があげられる。【００２２】  その他、脂質としては、例えば、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルプロピル）］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル塩化アンモニウム（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルプロピル）］−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシプロピル）］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル塩化アンモニウム（ＤＯＴＭＡ）、２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２−（スペルミンカルボキシアミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパナミニウムトリフルオロ酢酸（ＤＯＳＰＡ）、Ｎ−［１−（２，３−ジテトラデシルオキシプロピル）］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチル臭化アンモニウム（ＤＭＲＩＥ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシプロピル）］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチル臭化アンモニウム（ＤＯＲＩＥ）等の脂質もあげられる。【００２３】  非イオン性界面活性剤としては、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（具体的にはポリソルベート８０等）、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール（具体的にはプルロニックＦ６８等）、ソルビタン脂肪酸（具体的にはソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノオレエート等）、ポリオキシエチレン誘導体（具体的にはポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、ポリオキシエチレンラウリルアルコール等）、グリセリン脂肪酸エステル等があげられる。【００２４】  アニオン性界面活性剤としては、例えばアシルサルコシン、アルキル硫酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホン酸塩、炭素数７〜２２の脂肪酸ナトリウム等があげられる。具体的にはドデシル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム等があげられる。【００２５】  カチオン性界面活性剤としては、例えばアルキルアミン塩、アシルアミン塩、第四級アンモニウム塩、アミン誘導体等があげられる。具体的には塩化ベンザルコニウム、アシルアミノエチルジエチルアミン塩、Ｎ−アルキルポリアルキルポリアミン塩、脂肪酸ポリエチレンポリアミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、アルキルポリオキシエチレンアミン、Ｎ−アルキルアミノプロピルアミン、脂肪酸トリエタノールアミンエステル等があげられる。【００２６】  両性界面活性剤としては、例えば３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロ��ンスルホン酸、Ｎ−テトラデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホン酸等があげられる。【００２７】  リポソームにおいては、これら脂質および界面活性剤は、単独でまたは組み合わせて用いられ、好ましくは、組み合わせて用いられる。組み合わせて用いる場合の組み合わせとしては、例えば水素添加大豆ホスファチジルコリン、ポリエチレングリコール化リン脂質およびコレステロールから選ばれる２成分以上の組み合わせ、ジステアロイルホスファチジルコリン、ポリエチレングリコール化リン脂質およびコレステロールから選ばれる２成分以上の組み合わせ、ＥＰＣとＤＯＴＡＰの組み合わせ、ＥＰＣ、ＤＯＴＡＰおよびポリエチレングリコール化リン脂質の組み合わせ、ＥＰＣ、ＤＯＴＡＰ、コレステロールおよびポリエチレングリコール化リン脂質の組み合わせ等があげられる。【００２８】  また、リポソームは、必要に応じて、例えばコレステロール等のステロール類等の膜安定化剤、例えばトコフェロール等の抗酸化剤等を含有していてもよい。【００２９】  脂質集合体としては、例えば球状ミセル、球状逆ミセル、ソーセージ状ミセル、ソーセージ状逆ミセル、板状ミセル、板状逆ミセル、ヘキサゴナルＩ、ヘキサゴナルＩＩおよび脂質２分子以上からなる会合体等があげられる。【００３０】  エマルジョン粒子としては、例えば脂肪乳剤、非イオン性界面活性剤と大豆油からなるエマルジョン、リピッドエマルジョン、リピッドナノスフェアー等の水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョンや水中油中水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）エマルジョン粒子等があげられる。【００３１】  高分子としては、例えばアルブミン、デキストラン、キトサン、デキストラン硫酸、ＤＮＡ等の天然高分子、例えばポリ−Ｌ−リジン、ポリエチレンイミン、ポリアスパラギン酸、スチレンマレイン酸共重合体、イソプロピルアクリルアミド−アクリルピロリドン共重合体、ポリエチレングリコール修飾デンドリマー、ポリ乳酸、ポリ乳酸ポリグリコール酸、ポリエチレングリコール化ポリ乳酸等の合成高分子、およびそれらの塩等があげられる。【００３２】  ここで、高分子における塩は、例えば金属塩、アンモニウム塩、酸付加塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等を包含する。金属塩としては、例えばリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられ、アンモニウム塩としては、例えばアンモニウム、テトラメチルアンモニウム等の塩があげられ、酸付加塩としては、例えば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、および酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩等の有機酸塩があげられ、有機アミン付加塩としては、例えばモルホリン、ピペリジン等の付加塩があげられ、アミノ酸付加塩としては、例えばグリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン等の付加塩があげられる。【００３３】  金属コロイドとしては、例えば金、銀、白金、銅、ロジウム、シリカ、カルシウム、アルミニウム、鉄、インジウム、カドミウム、バリウム、鉛等を含む金属コロイドがあげられる。【００３４】  微粒子製剤としては、例えばマイクロスフェアー、マイクロ���プセル、ナノクリスタル、リピッドナノパーティクル、高分子ミセル等があげられる。【００３５】  また、コア微粒子が薬物を含むコア微粒子である場合には、好ましくは、コア微粒子は薬物と静電的に逆の電荷をもつ荷電物質を含有し、より好ましくは、薬物と静電的に逆の電荷をもつ脂質（後記のカチオン性脂質またはアニオン性脂質）を含有する。ここで、薬物と静電的に逆の電荷とは、薬物分子内の電荷、分子内分極等に対して静電的引力を生じる電荷、表面分極等を包含する。【００３６】  コア微粒子に含有される荷電物質は、カチオン性を呈するカチオン性物質とアニオン性を呈するアニオン性物質とに分類されるが、カチオン性の基とアニオン性の基の両方をもつ両性の物質であっても、ｐＨや、他の物質との結合等により相対的な陰性度が変化するので、その時々に応じてカチオン性物質またはアニオン性物質に分類され得る。これら荷電物質は、前記コア微粒子の構成成分として用いても、該コア微粒子の構成成分に加えて用いても構わない。【００３７】  カチオン性物質としては、例えば前記のコア微粒子の定義で例示したもののうちのカチオン性物質［具体的には、カチオン性脂質、カチオン性界面活性剤（前記と同義）、カチオン性高分子等］、等電点以下の値のｐＨで、複合体の形成を行える蛋白質またはペプチド等があげられる。【００３８】  カチオン性脂質としては、例えばＤＯＴＡＰ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＳＰＡ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＲＩＥ、ＤＣ−Ｃｈｏｌ等があげられる。【００３９】  カチオン性高分子としては、例えばポリ−Ｌ−リジン、ポリエチレンイミン、ポリフェクト（ｐｏｌｙｆｅｃｔ）、キトサン等があげられる。【００４０】  等電点以下の値のｐＨで、複合体の形成を行える蛋白質またはペプチドとしては、その物質の等電点以下の値のｐＨで、複合体の形成を行える蛋白質またはペプチドであれば、特に限定されない。例えば、アルブミン、オロソムコイド、グロブリン、フィブリノーゲン、ペプシン、リボヌクレアーゼＴ１等があげられる。【００４１】  アニオン性物質としては、例えば前記のコア微粒子の定義で例示したもののうちのアニオン性物質［具体的には、アニオン性脂質、アニオン性界面活性剤（前記と同義）、アニオン性高分子等］、等電点以上の値のｐＨで、複合体の形成を行える蛋白質またはペプチド、核酸等があげられる。【００４２】  アニオン性脂質としては、例えばホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸等があげられる。【００４３】  アニオン性高分子としては、例えばポリアスパラギン酸、スチレンマレイン酸共重合体、イソプロピルアクリルアミド−アクリルピロリドン共重合体、ポリエチレングリコール修飾デンドリマー、ポリ乳酸、ポリ乳酸ポリグリコール酸、ポリエチレングリコール化ポリ乳酸、デキストラン硫酸、デキストラン硫酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸、コンドロイチン、デルタマン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン、ケタラン硫酸、デキストランフルオレセインアニオニック等があげられる。【００４４】  等電点以上の値のｐＨで、複合体の形成を行える蛋白質またはペプチドと��ては、その物質の等電点以上の値のｐＨで、複合体の形成を行える蛋白質またはペプチドであれば、特に限定されない。例えば、アルブミン、オロソムコイド、グロブリン、フィブリノーゲン、ヒストン、プロタミン、リボヌクレアーゼ、リゾチーム等があげられる。【００４５】  アニオン性物質としての核酸としては、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、ｓｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチド等があげられ、生理活性を示さないものであれば、どのような長さ、配列のものであってもよい。【００４６】  コア微粒子は、市販品として得られるか、または公知の方法またはそれに準じて製造することができる。例えば、コア微粒子の１つであるリポソームを構成成分とするコア微粒子の製造には、公知のリポソームの調製方法が適用できる。公知のリポソームの調製方法としては、例えばバンガム（Ｂａｎｇｈａｍ）らのリポソーム調製法［“ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）”，１９６５年，第１３巻，ｐ．２３８−２５２参照］、エタノール注入法［“ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー（Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．）”，１９７５年，第６６巻，ｐ．６２１−６３４参照］、フレンチプレス法［“エフイービーエス・レターズ（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．）”，１９７９年，第９９巻，ｐ．２１０−２１４参照］、凍結融解法［“アーカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス（Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．）”，１９８１年，第２１２巻，ｐ．１８６−１９４参照］、逆相蒸発法［“プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）”，１９７８年，第７５巻，ｐ．４１９４−４１９８参照］、ｐＨ勾配法（例えば特許第２５７２５５４号公報、特許第２６５９１３６号公報等参照）等があげられる。リポソームの製造の際にリポソームを懸濁させる溶液としては、例えば水、酸、アルカリ、種々の緩衝液、生理的食塩液、アミノ酸輸液等を用いることができる。また、リポソームの製造の際には、例えばクエン酸、アスコルビン酸、システイン、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等の抗酸化剤、例えばグリセリン、ブドウ糖、塩化ナトリウム等の等張化剤等の添加も可能である。また、脂質等を例えばエタノール等の有機溶媒に溶解し、溶媒留去した後、生理食塩水等を添加、振とう撹拌し、リポソームを形成させることによってもリポソームを製造することができる。【００４７】  また、例えば非イオン性界面活性剤（前記と同義）、カチオン性界面活性剤（前記と同義）、アニオン性界面活性剤（前記と同義）、高分子、ポリオキシエチレン誘導体等によるリポソーム表面改質も任意に行うことができ、これらの表面改質リポソームも本発明におけるコア微粒子の構成成分として用いられる［ラジック（Ｄ．Ｄ．Ｌａｓｉｃ）、マーティン（Ｆ．Ｍａｒｔｉｎ）編，“ステルス・リポソームズ（Ｓｔｅａｌｔｈ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）”，（米国），シーアールシー・プレス・インク（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ），１９９５年，ｐ．９３−１０２参照］。高分子としては例えばデキストラン、プ���ラン、マンナン、アミロペクチン、ヒドロキシエチルデンプン等があげられる。ポリオキシエチレン誘導体としては、例えばポリソルベート８０、プルロニックＦ６８、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、ポリオキシエチレンラウリルアルコール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）等があげられる。【００４８】  リポソームの平均粒子径は、所望により自由に選択できる。平均粒子径を調節する方法としては、例えばエクストルージョン法、大きな多重膜リポソーム（ＭＬＶ）を機械的に粉砕（具体的にはマントンゴウリン、マイクロフルイダイザー等を使用）する方法［ミュラー（Ｒ．Ｈ．Ｍｕｌｌｅｒ）、ベニタ（Ｓ．Ｂｅｎｉｔａ）、ボーム（Ｂ．Ｂｏｈｍ）編著，“エマルジョン・アンド・ナノサスペンジョンズ・フォー・ザ・フォーミュレーション・オブ・ポアリー・ソラブル・ドラッグズ（Ｅｍｕｌｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｏｒｌｙ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｄｒｕｇｓ）”，ドイツ，サイエンティフィック・パブリッシャーズ・スチュットガルト（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ），１９９８年，ｐ．２６７−２９４参照］等があげられる。【００４９】  また、コア微粒子を構成する例えば薬物、脂質集合体、リポソーム、エマルジョン粒子、高分子、金属コロイド、微粒子製剤等から選ばれる２つ以上を組み合わせた複合体（具体的には、例えばカチオン性脂質を含有するリポソームまたは脂質集合体と核酸との複合体、ポリ−Ｌ−リジン等のカチオン性高分子を含有する高分子と核酸との複合体、ホスファチジン酸等のアニオン性脂質を含有するリポソームまたは脂質集合体と蛋白質との複合体、スチレンマレイン酸等のアニオン性高分子を含有する高分子と蛋白質との複合体、カチオン性脂質を含有するリポソームまたは脂質集合体と蛋白質との複合体、ポリ−Ｌ−リジン等のカチオン性高分子を含有する高分子と蛋白質との複合体等があげられる）の製造方法は例えば水中で薬物と脂質集合体、リポソーム、高分子等とを混合するだけの製造方法でもよく、この際、必要であればさらに整粒工程や無菌化工程等を加えることもできる。また、複合体形成を例えばアセトン、エーテル等種々の溶媒中で行うことも可能である。例えば、核酸と脂質とをエタノール等の有機溶媒に溶解し、溶媒留去した後、生理食塩水等を添加、振とう撹拌し、核酸複合体を形成させることもできる。別の複合体の形成方法としては、例えば、水中でカチオン性物質とポリエチレングリコール化リン脂質（具体的にはポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノールアミン（より具体的には１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）等）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、クレモフォアイーエル（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬ）等）等でリポソームを調製し、その後、例えば核酸を添加し、さらに例えばアニオン性高分子を添加して、多重複合体とすることも可能である。【００５０】  コア微粒子の大きさは、平均粒子径が数ｎｍ〜数百μｍであるのが好ましく、１０ｎｍ〜５μｍであるのがより好ましく、５０ｎｍ〜３００ｎｍであるのがさらに好ましく、５０ｎｍ〜２００ｎｍであるのが最も好ましい。【００５１】  被覆層成分としては、例えば前記コア微粒子の定義の中であげた脂質、界面活性剤、高分子等があげられ、好ましくは、前記コア微粒子の定義の中であげた脂質および界面活性剤から選ばれる１つ以上の物質があげられ、より好ましくは、被覆層が脂質膜となる脂質および界面活性剤から選ばれる１つ以上の物質があげられ、さらに好ましくは、リン脂質があげられる。【００５２】  また、被覆層が脂質膜である場合に用いられる脂質として、例えば合成脂質等もあげられる。合成脂質としては、例えばフッ素添加ホスファチジルコリン、フッ素添加界面活性剤、臭化ジアルキルアンモニウム等があげられ、これらは単独でまたは他の脂質等と組み合わせて用いられてもよい。また、被覆層が脂質膜である場合には、被覆層成分の１つとして水溶性高分子誘導体も使用することが好ましい。水溶性高分子誘導体としては、例えばポリエチレングリコール化脂質［具体的にはポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノールアミン（より具体的には１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）等）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、クレモフォアイーエル（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬ）等］、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル（具体的にはモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン等）、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリグリセリン化脂質（具体的にはポリグリセリン−ホスファチジルエタノールアミン等）、ポリグリセリン脂肪酸エステル等があげられ、好ましくは、ポリエチレングリコール化脂質があげられる。【００５３】  液Ａにおける溶媒は、コア微粒子が溶解せず、被覆層成分が溶解する溶媒であるのが好ましく、液Ａと液Ｂを混合した液Ｃでは、コア微粒子は溶解せず、被覆層成分は溶解しないまたは集合している。また、液Ａは極性有機溶媒を含む液であり、液Ｂは極性有機溶媒以外の溶媒を含む液であるが、液Ａは極性有機溶媒以外の溶媒を液Ｂにおける極性有機溶媒の以外の溶媒の割合よりも低ければ含んでいてもよく、液Ｂも極性有機溶媒を液Ａにおける極性有機溶媒の割合よりも低ければ含んでいてもよい。【００５４】  本発明において、コア微粒子が分散するとは、コア微粒子が懸濁、乳濁またはエマルジョン化、好ましくは、懸濁している状態のことであり、コア微粒子の大部分が分散して、残りの部分が溶解している状態または一部が沈殿している状態も包含するが、コア微粒子のほとんど全部または全部が分散していることが好ましい。また、被覆層成分が溶解するとは、被覆層成分の大部分が溶解して、残りの部分が分散している状態も包含するが、被覆層成分のほとんど全部または全部が溶解していることが好ましい。【００５５】  前記液Ａおよび液Ｂにおける極性有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール等のアルコール類、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ポリエチレングリコール等のポリアルキレングリコール類等があげられ、好ましくは、エタノールがあげられる。また、前記液Ａおよび液Ｂにおける極性有機溶媒以外の溶媒としては、例えば、水、液体二酸化炭素、液体炭化水素、ハロゲン化炭素、ハロゲン化炭化水素等があげられ、好ましくは、水があげられる。また、液Ａおよび液Ｂは、イオン、緩衝成分等を含んでいてもよい。【００５６】  極性有機溶媒と極性有機溶媒以外の溶媒の組み合わせは、相互に混合可能である組み合わせであるのが好ましく、液Ａ〜Ｃ中の溶媒に対する、前記コア微粒子の溶解度、前記被覆層成分の溶解度等を考慮して選択できる。一方、前記コア微粒子については、液Ａ〜Ｃ中の溶媒のいずれに対しての溶解度も低いことが好ましく、また極性有機溶媒および極性有機溶媒以外の溶媒のいずれに対しての溶解度も低いことが好ましく、被覆層成分は、液Ｂおよび液Ｃ中の溶媒に対しての溶解度が低いことが好ましく、液Ａ中の溶媒に対しての溶解度が高いことが好ましく、また極性有機溶媒に対しての溶解度が高いことが好ましく、極性有機溶媒以外の溶媒に対しての溶解度が低いことが好ましい。【００５７】  液Ａ中の溶媒における極性有機溶媒の割合は、前記コア微粒子が溶解せずに存在し、該コア微粒子を被覆する前記被覆層成分が溶解するという条件さえ満たしていれば特に限定されるものではなく、用いる溶媒やコア微粒子、被覆層成分の種類等により異なるが、好ましくは、３０ｖｏｌ％以上、より好ましくは、６０〜９０ｖｏｌ％である。また、液Ｃ中の溶媒における極性有機溶媒の割合は、前記コア微粒子が溶解していた被覆層成分で被覆されうる割合であれば特に限定されるものではないが、好ましくは、５０ｖｏｌ％以下、より好ましくは、３０〜５０ｖｏｌ％である。【００５８】  本発明におけるコア微粒子と被覆層成分の組み合わせは、特に限定されないが、コア微粒子が薬物とリポソームの複合体を構成成分とする微粒子であって、被覆層成分が脂質および／または界面活性剤である組み合わせが好ましい。コア微粒子がリポソームまたは薬物とリポソームの複合体を構成成分とする微粒子であって、被覆層成分が脂質および／または界面活性剤であって、被覆層が脂質膜である被覆微粒子は、その構成から狭義のリポソームと分類され、コア微粒子がリポソームまたは薬物とリポソームの複合体を構成成分とする微粒子以外で、被覆層成分が脂質および／または界面活性剤であって、被覆層が脂質膜である被覆微粒子は、広義のリポソームと分類される。本発明において、被覆微粒子は狭義のリポソームであることがより好ましい。【００５９】  本発明の被覆微粒子の用時調製用キットにおいて用いられるコア微粒子の液Ａおよび液Ｃに対する割合は、コア微粒子を被覆層成分で被覆できれば特に限定されるものではないが、１μｇ／ｍＬ〜１ｇ／ｍＬが好ましく、０．１〜５００ｍｇ／ｍＬがより好ましい。また、用いられる被覆層成分（例えば脂質等）の液Ａおよび液Ｃに対する割合は、前記コア微粒子を被覆できれば特に限定されるものではないが、１μｇ／ｍＬ〜１ｇ／ｍＬが好ましく、０．１〜４００ｍｇ／ｍＬがより好ましい。コア微粒子に対する被覆層成分の割合は、重量比で１：０．１〜１：１０００が好ましく、１：１〜１：１０がより好ましい。【００６０】  本発明の被覆微粒子の用時調製用キットにおける液Ａは、用時に調製されるものであってもよい。液Ａを用時に調製する方法としては、例えば、コア微粒子が分散した液（液Ｄ）を調製し、極性有機溶媒を含む溶媒に被覆層成分を溶解させた液（液Ｅ）を調製し、液Ｄと液Ｅを混合する方法等があげられ、より好ましくは、コア微粒子が分散した液（液Ｄ）、極性有機溶媒を含む溶媒に被覆層成分を溶解させた液（液Ｅ）、および、液Ｄと液Ｅを混合する手段を備える器具からなる用時調製用キットを用いて調製する方法があげられ、ここで液Ｄおよび液Ｅにおける各溶媒は、混合後の液Ａでコア微粒子が分散し、被覆層成分が溶解すればいかなる溶媒でもよい。【００６１】  さらに、前記液Ｄ中のコア微粒子も、用時に調製されるものであってよく、調製する方法としては、例えば、前記コア微粒子の説明の中であげたコア微粒子の製造方法等があげられ、より好ましくは、前記コア微粒子を構成する例えば薬物、脂質集合体、リポソーム、エマルジョン粒子、高分子、金属コロイド、微粒子製剤等から選ばれる２つ以上を組み合わせた複合体の製造方法があげられ、それぞれ用時調製用キットを用いて調製することが好ましい。【００６２】  本発明の被覆微粒子の用時調製用キットは、前記の液Ａの用時調製用キットおよび所望により前記のコア微粒子の用時調製用キットを含んでいてもよい。【００６３】  本発明における液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具としては、例えば、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、インライン混合手段、該液Ａを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段および該液Ｂを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段を備える器具、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、および液Ｂを収容するための手段から液Ａを収容するための手段中の液Ａに液Ｂを加える手段を備える器具等があげられる。該器具には、流路が含まれていてもよく、混合手段が備えてあってもよい。また、該器具の出口には、移注針または混注用コネクタを備えていてもよい。【００６４】  インライン混合手段としては、例えばＴ字管、Ｙ字管、三方継手、三方コック、インラインミキサー、インラインミキサーアセンブリ等があげられ、それぞれスタティックミキサーを接続または内蔵していることが好ましい。【００６５】  液Ａを収容するための手段および液Ｂを収容するための手段としては、例えばバイアル、輸液バッグ、シリンジ等があげられ、それぞれ混合手段を備えていてもよい。【００６６】  送液手段としては、例えばギアポンプ、チューブポンプ、シリンジポンプ、吸引ポンプ、加圧ポンプ、プランジャー式ポンプ等があげられ、手動で押すシリンジや、高低差を利用した自然落下も含まれ、送液手段が流路の機能を兼ねていてもよい。
流路は例えば金属パイプ、樹脂製チューブ等のいかなる流路であってよい。【００６７】  以下に、図を用いて本発明の被覆微粒子の用時調製用キットと該キットを用いた被覆微粒子の製造方法を説明する。ただし、本発明の被覆微粒子の用時調製用キットはこれら図に示したものに限定されるものではない。
図１は、本発明のキットのうち、液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、インライン混合手段、該液Ａを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段および該液Ｂを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段を備える器具であるキットの１例ならびにその用法を示している。該キットは、
Ｉ．液Ａ、
ＩＩ．液Ｂ、ならびに、
ＩＩＩ．液Ａを収容する容器（１）、液Ｂを収容する容器（２）、ポンプ（３）および（４）、三方継手（５）、スタティックミキサー（６）および流路からなる。
該キットを用いて被覆微粒子を調製するには、（１）中の液Ａを（３）によって（５）に送液し、（２）中の液Ｂを（４）によって（５）に送液する。（５）および（６）で液Ａと液Ｂが混合されて、被覆微粒子が懸濁液（液Ｃ）として得られる。【００６８】  図２は、本発明のキットのうち、同じく液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、インライン混合手段、該液Ａを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段および該液Ｂを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段を備える器具であるキットの他の例ならびにその用法を示している。該キットは、
Ｉ．液Ａ、
ＩＩ．液Ｂ、ならびに、
ＩＩＩ．液Ａを収容する輸液ボトル（７）、液Ｂを収容する輸液ボトル（８）、三方継手（９）、スタティックミキサー（１０）および流路からなる。
該キットを用いて被覆微粒子を調製するには、（７）中の液Ａを高低差によって（９）に送液し、（８）中の液Ｂを高低差によって（９）に送液する。（９）および（１０）で液Ａと液Ｂが混合されて、被覆微粒子が懸濁液（液Ｃ）として得られる。【００６９】  図３は、本発明のキットのうち、同じく液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、インライン混合手段、該液Ａを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段および該液Ｂを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段を備える器具であるキットの他の例ならびにその用法を示しており、該器具は、具体的には、液Ａを収容するためのシリンジ、液Ｂを収容するためのシリンジおよび該液Ａを収容するためのシリンジと該液Ｂを収容するためのシリンジをそれぞれ接続可能な２つの入口をもつインライン混合手段を備える器具である。該キットは、
Ｉ．液Ａ、
ＩＩ．液Ｂ、ならびに、
ＩＩＩ．液Ａを収容するシリンジ（１１）、液Ｂを収容するシリンジ（１２）、三方継手（１３）、スタティックミキサー（１４）および流路からなる。
該キットを用いて被覆微粒子を調製するには、（１１）中の液Ａをプランジャーを押すことによって（１３）に送液し、（１２）中の液Ｂをプランジャーを押すことによって（１３）に送液する。（１３）および（１４）で液Ａと液Ｂが混合されて、被覆微粒子が懸濁液（液Ｃ）として得られる。【００７０】  図４は、本発明のキットのうち、同じく液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、インライン混合手段、該液Ａを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段および該液Ｂを収容するための手段から該インライン混合手段の入口への送液手段を備える器具であるキットの他の例ならびにその用法を示しており、該器具は、具体的には、液Ａおよび液Ｂをそれぞれ収容するための室を並列に備えた多室型シリンジであり、該シリンジの排出口がインライン混合手段になっているシリンジである。該キットは、
Ｉ．液Ａ、
ＩＩ．液Ｂ、ならびに、
ＩＩＩ．多室型シリンジ（１５）およびスタティックミキサー（１６）からなる。
該キットを用いて被覆微粒子を調製するには、（１５）の１室中の液Ａと（１５）の他の１室中の液Ｂを、プランジャーを押すことによってそれぞれ（１６）に送液する。（１６）で液Ａと液Ｂが混合されて、被覆微粒子が懸濁液（液Ｃ）として得られる。【００７１】  図５は、本発明のキットのうち、液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、および液Ｂを収容するための手段から液Ａを収容するための手段中の液Ａに液Ｂを加える手段を備える器具であるキットの１例ならびにその用途を示している。該キットは、
Ｉ．液Ａ、
ＩＩ．液Ｂ、ならびに、
ＩＩＩ．液Ａを収容する容器（１７）、液Ｂを収容するシリンジ（１８）および移注針（１９）からなる。
該キットを用いて被覆微粒子を調製するには、（１８）中の液Ｂをプランジャーを押すことによって（１９）を通じて（１７）に送液する。（１７）中の液Ａに送液された液Ｂが加えられ、被覆微粒子が懸濁液として得られる。【００７２】  図６は、本発明のキットのうち、同じく液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、および液Ｂを収容するための手段から液Ａを収容するための手段中の液Ａに液Ｂを加える手段を備える器具であるキットの他の例ならびにその用法を示している。該キットは、
Ｉ．液Ａ、
ＩＩ．液Ｂ、ならびに、
ＩＩＩ．液Ａを収容する輸液ボトル（２０）、液Ｂを収容する輸液ボトル（２１）および混注用チューブ（２２）からなる。
該キットを用いて被覆微粒子を調製するには、（２１）中の液Ｂを高低差によって（２２）を通じて（２０）に送液する。（２０）中の液Ａに送液された液Ｂが加えられ、被覆微粒子が懸濁液として得られる。【００７３】  図７は、本発明のキットのうち、液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、および液Ｂを収容するための手段から液Ａを収容するための手段中の液Ａに液Ｂを加える手段を備える器具であるキットの他の例ならびにその用法を示しており、該器具は、具体的には、液Ａを収容するためのシリンジおよび液Ｂを収容するためのシリンジであり、該２つのシリンジにおいては、お互いを接続して液Ａに液Ｂを加えることが可能である。該キットは、
Ｉ．液Ａ、
ＩＩ．液Ｂ、ならびに、
ＩＩＩ．排出口に雌コネクタを備えた液Ａを収容するシリンジ（２３）および排出口に雄コネクタを備えた液Ｂを収容するシリンジ（２４）からなる。
該キットを用いて被覆微粒子を調製するには、（２３）の雌コネクタと（２４）の雄コネクタを接続し、（２４）中の液Ｂをプランジャーを押すことによって（２３）に送液する。（２３）中の液Ａに送液された液Ｂが加えられ、被覆微粒子が懸濁液として得られる。【００７４】  図８は、本発明のキットのうち、液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、液Ａを収容するための手段、液Ｂを収容するための手段、および液Ｂを収容するための手段から液Ａを収容するための手段中の液Ａに液Ｂを加える手段を備える器具であるキットの他の例ならびにその用法を示しており、該器具は、具体的には、液Ａおよび液Ｂをそれぞれ収容するための室を直列に備え、液Ａに液Ｂを加えることが可能な多室型シリンジである。該キットは、
Ｉ．液Ａ、
ＩＩ．液Ｂ、および、
ＩＩＩ．直列多室型シリンジ（２５）からなる。
該キットを用いて被覆微粒子を調製するには、（２５）のプランジャーを押すことにより室内ガスケット（図中ａ）をバイパス（図中ｂ）まで移動させ、引き続きプランジャーを押すことによりプランジャー側の室の液Ｂをバイパスを通じて出口側の室に送液する。出口側の室中の液Ａに送液された液Ｂが加えられ、被覆微粒子が懸濁液として得られる。【００７５】  一方、図９は、従来技術（特許文献１参照）における被覆微粒子製造装置を表しており、液Ａを収容する容器（２６）、液Ｂを収容する容器（２７）およびポンプ（２８）を備える被覆微粒子製造装置を表している。該製造装置を用いて被覆微粒子を調製するには、（２７）中の液Ｂを（２８）によって（２６）に送液する。（２６）中の液Ａと送液された液Ｂが混合されて、被覆微粒子が懸濁液として得られる。【００７６】  本発明に用いられるシリンジは特別に作成してもよいが、市販のものを用いることもでき、特に限定されない。具体的には、１液型のシリンジ（テルモ社、ニプロ社等より市販）、２液型シリンジ（Ｖｅｔｔｅｒ社（独）、ベクトン・ディッキンソン（米国）等より市販）、２液混合型シリンジ（ＴＡＨ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（米国）、Ｐｌａｓ−Ｐａｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（米国）等より市販）等が挙げられ、プレフィルドシリンジとして液Ａおよび／または液Ｂがあらかじめ充填されていてもよい。また、異なる内径をもつシリンジを組み合わせることで、液Ａおよび液Ｂの混合比を任意に変えることもできる。【００７７】  次に、本発明の被覆微粒子の用時調製用キットに、液Ａおよびコア微粒子を用時に調製する各用時調製用キットが含まれる場合の被覆微粒子の調製方法を、以下にコア微粒子が薬物とリポソームの複合体であり、被覆層成分が脂質である場合の被覆微粒子の用時調製用キットを例にして、具体的に説明する。ただし、本発明の被覆微粒子の用時調製用キットにおける液Ａおよびコア微粒子を用時に調製する各用時調製用キットは、これらに限定されるものではない。
・用時調製用キットの構成（図１０）
コア微粒子の原料；ａ．リポソームまたはリポソームの原料
ｂ．薬物（好ましくは、薬物の水溶液）
液Ｄの溶媒；ａ．水
ｂ．極性有機溶媒
液Ｅ；脂質が溶解した極性有機溶媒を含む液（好ましくは、液Ｄの溶媒ｂと同一または異なった極性有機溶媒を含有する水溶液、さらに好ましくは、同一の極性有機溶媒を含有する水溶液）
液Ｂ；水
器具；ａ．リポソームまたはリポソームの原料が収容され、液Ａを用時調製するための容器（例えばバイアル等）（２９）
ｂ．薬物（好ましくは、薬物の水溶液）が収容されたシリンジおよび移液用針（３０）
ｃ．液Ｄの溶媒ａが収容されたシリンジおよび移液用針（３１）
ｄ．液Ｄの溶媒ｂが収容されたシリンジおよび移液用針（３２）
ｅ．液Ｅが収容されたシリンジおよび移液用針（３３）
ｆ．液Ａを収容するためのシリンジおよび移液用針（３４）
ｇ．液Ｂが収容されたシリンジ（３５）
ｈ．三方継手、スタティックミキサーおよび流路（３６）【００７８】・被覆微粒子の調製方法
（２９）中のリポソームまたはリポソームの原料に、（３１）中の液Ｄの溶媒ａを入れて振とうし、次に（３０）中の薬物を（２９）に入れて振とうして混合し、コア微粒子を調製する。同様に、（３２）中の液Ｄの溶媒ｂ、（３３）中の液Ｆの順に（２９）に入れ、それぞれ振とうして混合し、液Ａを調製する。得られた液Ａを、（３４）に移し、（３６）に図１０に示すように接続する。同様に液Ｂが収容されたシリンジ（３５）も（３６）に図１０に示すように接続し、シリンジのプランジャーをそれぞれ押して液Ａおよび液Ｂを（３６）に送液することにより、液Ａと液Ｂが混合されて、被覆微粒子が懸濁液（液Ｃ）として得られる。【００７９】  本発明の被覆微粒子の大きさは、平均粒子径が３００ｎｍ以下であるのが好ましく、２００ｎｍ以下であるのがより好ましく、具体的には、例えば注射可能な大きさであるのが好ましい。【００８０】  本発明の被覆微粒子は、例えば血液成分等の生体成分、消化管液等に対する薬剤の安定化、副作用の低減、腫瘍等の標的臓器への薬剤集積性の増大、経口や経粘膜での薬剤の吸収の改善等を目的とする製剤として使用できる。本発明の被覆微粒子は、該目的において、生体成分中で薬物を長時間内包しうる堅固に薬物を含有した被覆微粒子であることが好ましい。【００８１】  本発明の被覆微粒子を製剤として使用する場合、上述の方法により調製した被覆微粒子の懸濁液をそのまま例えば注射剤等の形態として用いることも可能であるが、該懸濁液から例えば濾過、遠心分離等によって溶媒を除去して使用することも可能である。【００８２】  注射剤の場合、本発明の被覆微粒子の前記懸濁液、または前記の溶媒を除去した被覆微粒子と、例えば水、酸、アルカリ、種々の緩衝液、生理的食塩液、アミノ酸輸液等を混合して注射剤を調製することが好ましい。また、例えばクエン酸、アスコルビン酸、システイン、ＥＤＴＡ等の抗酸化剤、グリセリン、ブドウ糖、塩化ナトリウム等の等張化剤等を添加して注射剤を調製することも可能である。また、例えばグリセリン等の凍結保存剤を加えて凍結保存することもできる。【００８３】  また、該懸濁液や該注射剤を、例えば生理食塩水のボトル、ダブルバッグキット（ニプロ社）、薬剤バイアル収納型フルキット（ニプロ社）等で、点滴または輸液用の各種溶液と混合することも可能である。この場合、液Ａと液Ｂを混合する手段を備える器具が、出口に移注針または混注用コネクタを備える器具であることが好ましい。【００８４】  次に、実施例により、本発明を具体的に説明する。ただし、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００８５】  下記のキット、液Ａおよび液Ｂを用い、液Ａを５．２ｍＬ／ｈ、液Ｂを１１．１ｍＬ／ｈで混合後の液Ｃ中のエタノール濃度がおよそ２０ｖｏｌ％になるようにそれぞれ送液した。組み立てたキットの液Ｃの出口には予め蒸留水１８．８ｍＬを入れたリザーバーを置き、得られた被覆微粒子の懸濁液が滴下するようにした。２３分間送液した後、リザーバーに蓋をして反転混合し、得られた混合液の超遠心分離（１時間、１１０，０００×ｇ、２５℃）を行った。超遠心分離後の沈殿物に希釈後の総脂質濃度が３０ｍｇ／ｍＬとなるようにリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を添加して再懸濁し、製剤を得た。
キット；
図３に示したキットを用いた。（１３）にＨＰＬＣ配管用三方継手（島津製作所製）を用い、（１４）に２ｃｍのスタティックミキサー［長さ２０ｍｍ×内径１．５ｍｍのフッ素樹脂チューブに２ｍｇのガスクロマトグラフ用石英ウール（島津製作所製）を充填したもの］を用い、（１１）および（１２）にシリンジポンプ（日機装製）に装填した２０ｍＬシリンジ（テルモ製）を用いた。
液Ａ；
デキストランフルオレセインアニオニック（ＦＤ）（モレキュラー・プローブス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）製；以下同様である）３０ｍｇ、ＤＯＴＡＰ（アバンチポーラルリピッズ（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ）社製；以下同様である）１８０ｍｇおよびＰＥＧ−ＤＳＰＥ７２ｍｇに蒸留水９ｍＬを加え、ボルテックスミキサーで振とう攪拌した。得られた懸濁液を室温で０．４μｍのポリカーボネートメンブランフィルターに１０回および０．１μｍのポリカーボネートメンブランフィルターに１０回通し、コア微粒子の懸濁液を得た。得られたコア微粒子の懸濁液７５０μＬとエタノール１ｍＬを混合し、ＥＰＣ  ４８０ｍｇおよびＰＥＧ−ＤＳＰＥ  １００ｍｇにエタノール２ｍＬを加え攪拌して得た溶液２５０μＬを混合した。
液Ｂ；
蒸留水
【実施例２】
【００８６】  実施例１と同じキット、液Ａおよび液Ｂを用い、液Ａを５．２ｍＬ／ｈ、液Ｂを５．６ｍＬ／ｈで混合後の液Ｃ中のエタノール濃度がおよそ３０ｖｏｌ％になるようにそれぞれ送液した。組み立てたキットの液Ｃの出口には予め蒸留水２０．９ｍＬを入れたリザーバーを置き、得られた被覆微粒子の懸濁液が滴下するようにした。２３分間送液した後、実施例１と同様に、混合、超遠心および再懸濁をして製剤を得た。
【実施例３】
【００８７】  実施例１と同じキット、液Ａおよび液Ｂを用い、液Ａを５．２ｍＬ／ｈ、液Ｂを２．９ｍＬ／ｈで混合後の液Ｃ中のエタノール濃度がおよそ４０ｖｏｌ％になるようにそれぞれ送液した。組み立てたキットの液Ｃの出口には予め蒸留水２１．９ｍＬを入れたリザーバーを置き、得られた被覆微粒子の懸濁液が滴下するようにした。２３分間送液した後、実施例１と同様に、混合、超遠心および再懸濁をして製剤を得た。
【実施例４】
【００８８】  実施例１と同じキット、液Ａおよび液Ｂを用い、液Ａを５．２ｍＬ／ｈ、液Ｂを０．７ｍＬ／ｈで混合後の液Ｃ中のエタノール濃度がおよそ５５ｖｏｌ％になるようにそれぞれ送液した。組み立てたキットの液Ｃの出口には予め蒸留水２２．７ｍＬを入れたリザーバーを置き、得られた被覆微粒子の懸濁液が滴下するようにした。２３分間送液した後、実施例１と同様に、混合、超遠心および再懸濁をして製剤を得た。
【実施例５】
【００８９】  実施例１と同じキット、液Ａおよび液Ｂを用い、液Ａを２６．０ｍＬ／ｈ、液Ｂを２８．０ｍＬ／ｈで混合後の液Ｃ中のエタノール濃度がおよそ３０ｖｏｌ％になるようにそれぞれ送液した。組み立てたキットの液Ｃの出口には予め蒸留水２０．９ｍＬを入れたリザーバーを置き、得られた被覆微粒子の懸濁液が滴下するようにした。４．６分間送液した後、実施例１と同様に、混合、超遠心および再懸濁をして製剤を得た。
【実施例６】
【００９０】  実施例１と同じキット、液Ａおよび液Ｂを用い、液Ａを１．０ｍＬ／ｈ、液Ｂを１．１ｍＬ／ｈで混合後の液Ｃ中のエタノール濃度がおよそ３０ｖｏｌ％になるようにそれぞれ送液した。組み立てたキットの液Ｃの出口には予め蒸留水２０．９ｍＬを入れたリザーバーを置き、得られた被覆微粒子の懸濁液が滴下するようにした。１１５分間送液した後、実施例１と同様に、混合、超遠心および再懸濁をして製剤を得た。
【実施例７】
【００９１】  実施例１と同じキットからスタティックミキサーを除いたキットと、実施例１と同じ液Ａおよび液Ｂを用い、液Ａを５．２ｍＬ／ｈ、液Ｂを５．６ｍＬ／ｈで混合後の液Ｃ中のエタノール濃度がおよそ３０ｖｏｌ％になるようにそれぞれ送液した。組み立てたキットの液Ｃの出口には予め蒸留水２０．９ｍＬを入れたリザーバーを置き、得られた被覆微粒子の懸濁液が滴下するようにした。２３分間送液した後、実施例１と同様に、混合、超遠心および再懸濁をして製剤を得た。
【実施例８】
【００９２】  下記のキット、液Ａおよび液Ｂを用い、それぞれを５．２ｍＬ／ｈで送液した。組み立てたキットの液Ｃの出口には、予め蒸留水２１．０ｍＬを入れたリザーバーを置き、得られた被覆微粒子の懸濁液が滴下するようにした。２３分間送液した後、実施例１と同様に、混合、超遠心および再懸濁をして製剤を得た。
キット；
図４に示したキットを用いた。（１５）にシリンジポンプ（日機装製）に装填した２液混合シリンジ（ＴＡＨｐｌｕｓ  ９ｍＬ  Ｍｉｃｒｏ  ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ（ティーエーエイチプラス  ９ミリリットル  マイクロディスペンサー）：米国ティーエーエイチ社製）を用い、（１６）にスタティックミキサー（スパイラルミキサー１９０−２１２：米国ティーエーエイチ社製）を用いた。
液Ａ；
ＦＤ  ３０ｍｇ、ＤＯＴＡＰ  １８０ｍｇおよびＰＥＧ−ＤＳＰＥ  ７２ｍｇに蒸留水９ｍＬを加え、ボルテックスミキサーで振とう攪拌した。得られた懸濁液を室温で０．４μｍのポリカーボネートメンブランフィルターに１０回および０．１μｍのポリカーボネートメンブランフィルターに１０回通し、コア微粒子の懸濁液を得た。得られたコア微粒子の懸濁液１０００μＬとエタノール１．３３３ｍＬを混合し、ＥＰＣ  ４８０ｍｇおよびＰＥＧ−ＤＳＰＥ  １００ｍｇにエタノール２ｍＬを加え攪拌した溶液３３３μＬを混合した。
液Ｂ；
蒸留水【００９３】＜比較例１＞
下記の被覆微粒子製造装置、液Ａおよび液Ｂを用い、液Ａを（２６）に入れ、液Ｂを下記のシリンジポンプに入れ、液Ａに液Ｂを１ｍＬ／ｍｉｎで２３分間（２３ｍＬ）加えた。得られた被覆微粒子の懸濁液の超遠心分離（１時間、１１０，０００×ｇ、２５℃）を行った。超遠心分離後の沈殿物をＰＢＳで希釈し希釈後の総脂質濃度が３０ｍｇ／ｍＬとなるように調整し、製剤を得た。
被覆微粒子製造装置；
図９に示した被覆微粒子製造装置を用いた。（２７）および（２８）をシリンジポンプ（テルフュージョンシリンジポンプＳＴＣ−５２５、テルモ製）に装填した２０ｍＬシリンジ（テルモ製）とし、（２６）に容積約３０ｍＬのガラス容器を用い、該ガラス容器には回転子を入れスターラーで攪拌した。
液Ａ；
ＦＤ  ３０ｍｇ、ＤＯＴＡＰ  １８０ｍｇおよびＰＥＧ−ＤＳＰＥ  ７２ｍｇに蒸留水９ｍＬを加え、ボルテックスミキサーで振とう攪拌した。得られた懸濁液を室温で０．４μｍのポリカーボネートメンブランフィルターに１０回および０．１μｍのポリカーボネートメンブランフィルターに１０回通した。得られた懸濁液７５０μＬを容積約３０ｍＬのガラス容器に入れ、回転子を入れスターラーで攪拌しながらエタノール１ｍＬを混合し、コア微粒子の懸濁液を得た。得られたコア微粒子の懸濁液に、ＥＰＣ  １２００ｍｇおよびＰＥＧ−ＤＳＰＥ  ２５０ｍｇにエタノール５ｍＬを加え攪拌して得た溶液２５０μＬを加え混合した。
液Ｂ；
蒸留水【００９４】＜試験例１＞
実施例１〜８および比較例１で得られた各製剤について、動的光散乱（ＤＬＳ）測定装置（Ａ  ｍｏｄｅｌ  ＥＬＳ−８００、大塚電子）で被覆微粒子の平均粒子径を測定した。結果を表１に示す。【００９５】
【表１】
2005089928.tif 000002
【００９６】＜試験例２＞
実施例１〜８および比較例１で得られた各製剤について、被覆微粒子中におけるＦＤの内包率を以下のように求めた。
各製剤３０μＬをとりそれぞれに精製水２９７０μＬを加え攪拌し超遠心分離して上清を取得した。上記各製剤および上記各上清を１０００倍希釈し、希釈後の各５０μＬに、１０ｗ／ｖ％トライトンエックス−１００（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）５０μＬおよびＰＢＳ  ４００μＬをそれぞれ加え、ボルテックスミキサーで攪拌した。その１００μＬを９６穴マイクロプレートにとり、蛍光プレートリーダー（ワラック（Ｗａｌｌａｃ）社製、アルボエスエックス−４（ＡＲＶＯｓｘ−４））を使用して励起波長４８５ｎｍおよび蛍光波長５３０ｎｍでの蛍光強度を測定した。一方、１、０．５および０．２５μｇ／ｍＬとなる各ＦＤ水溶液の蛍光強度を測定し、検量線を得た。検量線から各製剤中のＦＤ濃度、超遠心分離後の各上清のＦＤ濃度を求め、被覆微粒子中におけるＦＤの内包率を下記式（１）で算出した。結果を表２に示す。【００９７】
【数１】
2005089928.tif 000003
【００９８】
【表２】
2005089928.tif 000004
【００９９】＜試験例３＞
実施例１〜８および比較例１で得られた各製剤における、ＦＤおよびＥＰＣの仕込み量に対する回収率を以下のように求めた。
各製剤を１０００倍希釈し、希釈後の各５０μＬに、１０ｗ／ｖ％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００  ５０μＬおよびＰＢＳ  ４００μＬをそれぞれ加え、ボルテックスミキサーで攪拌した。その１００μＬを９６穴マイクロプレートにとり、蛍光プレートリーダー（ワラック（Ｗａｌｌａｃ）社製、アルボエスエックス−４（ＡＲＶＯｓｘ−４））を使用して励起波長４８５ｎｍおよび蛍光波長５３０ｎｍでの蛍光強度を測定した。一方、１、０．５および０．２５μｇ／ｍＬとなる各ＦＤ水溶液の蛍光強度を測定し、検量線を得た。検量線から各製剤中のＦＤ濃度を求めた。一方、各製剤中のＥＰＣ濃度は、リン脂質Ｃ−テストワコー（和光純薬製）を用いて測定することにより求めた。各製剤におけるＦＤ回収率およびＥＰＣ回収率は、下記式（２）で算出した。結果を表３に示す。【０１００】
【数２】
2005089928.tif 000005
【０１０１】
【表３】
2005089928.tif 000006
【０１０２】＜試験例４＞
実施例１〜８および比較例１で得られた各製剤について、牛胎児血清（ＦＢＳ）中での安定性について検討を行った。
各製剤３０μＬにＦＢＳ  ２９７０μＬを加え混合した。混合直後および３７℃で３時間静置後に各５００μＬを取りゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇｅｌ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＧＰＣ）を行い、そのフラクション（１００滴，１０本）を回収した。各フラクションをボルテックスミキサーで振とう攪拌してサンプルとし、ＦＤを定量するため、各５０μＬに、１０ｗ／ｖ％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００  ５０μＬおよびＰＢＳ  ４００μＬをそれぞれ加え、ボルテックスミキサーで攪拌した。その１００μＬを９６穴マイクロプレートにとり、蛍光プレートリーダー（ワラック（Ｗａｌｌａｃ）社製、アルボエスエックス−４（ＡＲＶＯｓｘ−４））を使用して励起波長４８５ｎｍおよび蛍光波長５３０ｎｍでの蛍光強度を測定した。
０時間後および３時間後のＦＤ回収率を下記式（３）で算出した。結果を表４に示す。【０１０３】
【数３】
2005089928.tif 000007
【０１０４】
【表４】
2005089928.tif 000008
【０１０５】  表１および表２からわかるように、実施例１〜８および比較例１で得られた各製剤における被覆微粒子では、平均粒子径も内包率も同様であり、外見上は同様の品質の被覆微粒子が得られた。また、表３からわかるように、ＦＤおよびＥＰＣの回収率も同様であり、同様の効率で被覆微粒子が得られた。一方、表４からわかるように、実施例１〜８で得られた各製剤では、比較例１で得られた製剤と比べて、ＰＢＳ中におけるＦＤの回収率が高く、ＰＢＳ中での安定性がよい。すなわち、本発明のキットにより、簡便に被覆微粒子を調製できるにもかかわらず、従来法と同程度の大きさと薬物内包率の被覆微粒子を、同程度の効率で、さらに、堅固に薬物を含有させた状態で製造することも可能であった。
【産業上の利用可能性】
【０１０６】  本発明により、コア微粒子が被覆層で被覆された被覆微粒子の用時調製用キットが提供される。
【図１】
2005089928.tif 000009
【図２】
2005089928.tif 000010
【図３】
2005089928.tif 000011
【図４】
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【図５】
2005089928.tif 000013
【図６】
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【図７】
2005089928.tif 000015
【図８】
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【図９】
2005089928.tif 000017
【図１０】
2005089928.tif 000018
【国際調査報告】
2005089928.tif 000019
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