(57)【要約】エストロゲン依存性疾患、プロスタグランジンＤ（ＰＧＤ）依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制のための医薬品を提供する。  本発明の医薬品は、エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのための医薬品であって、ヒスタミン放出因子（ＨＲＦ）活性抑制成分を含むことを特徴とする。ＨＲＦ活性を抑制することにより、例えば、ＩＬ−１β受容体及び１７β水酸化ステロイド脱水素酵素（ＨＳＤ）等の遺伝子の発現が抑制されるため、これによりエストロゲン活性が抑制され、エストロゲン依存性疾患を予防、治療又は改善できる。前記ＨＲＦ活性抑制成分として、アルテミシニンを使用することが好ましい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
エストロゲン依存性疾患、プロスタグランジンＤ（ＰＧＤ）依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのための医薬品であって、ヒスタミン放出因子（ＨＲＦ）活性抑制成分を含む医薬品。
【請求項２】
前記ＨＲＦ活性抑制成分が、アルテミシニン及びその誘導体又は合成物からなる群から選択される請求の範囲１記載の医薬品。
【請求項３】
前記ＨＲＦ活性抑制成分が、青蒿である請求の範囲１記載の医薬品。
【請求項４】
前記エストロゲン依存性疾患が、月経困難症、不妊症、流産、子宮内膜症、子宮腺筋症、子宮筋腫、卵巣チョコレート嚢胞、卵巣癌、乳癌、子宮体癌、子宮頸癌、月経前症候群（ＰＭＳ）、冠動脈心疾患、脂質代謝異常及び甲状腺機能異常からなる群から選択される請求の範囲１記載の医薬品。
【請求項５】
前記ＰＧＤ依存性婦人疾患が、不妊症、着床障害及び流産からなる群から選択される請求の範囲１記載の医薬品。
【請求項６】
前記免疫疾患が、食物アレルギー、薬物アレルギー、花粉アレルギー、虫によるアレルギー、喘息、鼻炎、痰麻疹、アナフィラキシー、アレルギー性気管支拡張症、花粉症、寒冷じん麻疹及びアトピー性皮膚炎からなる群から選択される請求の範囲１記載の医薬品。
【請求項７】
ＨＲＦ活性抑制成分又はＨＲＦ活性増強成分をスクリーニングする方法であって、１７β水酸化ステロイド脱水素酵素（ＨＳＤ）遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、Ｗｎｔ遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子、ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）遺伝子、高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）遺伝子、ＫＤＲ遺伝子及びトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現量を測定してＨＲＦ活性抑制成分又はＨＲＦ活性増強成分を選択する工程を含むスクリーニング方法。
【請求項８】
エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのための医薬品、特定保健用食品、栄養機能食品又は一般食品のスクリーニングに使用する請求の範囲７記載のスクリーニング方法。
【請求項９】
請求の範囲８記載のスクリーニング方法に使用するマイクロアレイであって、１７βＨＳＤ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、Ｗｎｔ遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子、ＰＬＣ遺伝子、ＦｃεＲＩ遺伝子、ＫＤＲ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現を検出するためのプローブとして使用可能なポリヌクレオチドのスポットが配置されたマイクロアレイ。
【請求項１０】
請求の範囲８記載のスクリーニング方法に使用するスクリーニングキットであって、前記請求の範囲９記載のマイクロアレイを含むキット。
【請求項１１】
エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのための医薬品、特定保健用食品、栄養機能食品又は一般食品の製造方法であって、請求の範囲７記載のスクリーニング方法によりＨＲＦ活性抑制成分を選択する工程を含む製造方法。
【請求項１２】
エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患及び癌からなる群から選択される疾患の易罹患性を判定する方法であって、被験者の生体試料における１７βＨＳＤ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、Ｗｎｔ遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子、ＰＬＣ遺伝子、ＦｃεＲＩ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現量を測定する測定工程、前記測定値と正常生体試料のそれとを比較し、これによりＨＲＦ依存度を判断する判断工程、及び、前記ＨＲＦ依存度により前記疾患の易罹患性を判定する判定工程を含む判定方法。
【請求項１３】
請求の範囲１２記載の判定方法に使用するマイクロアレイであって、１７βＨＳＤ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、Ｗｎｔ遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子、ＰＬＣ遺伝子、ＦｃεＲＩ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現を検出するためのプローブとして使用可能なポリヌクレオチドのスポットが配置されたマイクロアレイ。
【請求項１４】
請求の範囲１２記載の判定方法に使用するキットであって、前記請求の範囲１３記載のマイクロアレイを含むキット。
【請求項１５】
血管新生の判定方法であって、生体試料におけるＨＲＦ活性を測定し、前記測定値と正常生体試料のそれとを比較することにより血管新生の有無を判断することを含む判定方法。
【請求項１６】
エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患及び癌からなる群から選択される疾患の治療、予防又は改善、又は、血管新生の抑制方法であって、ＨＲＦ活性を抑制することを含む方法。
【請求項１７】
ＨＲＦ活性を抑制するために、アルテミシニン及びその誘導体又は合成物からなる群から選択される少なくとも一つを投与することを含む請求の範囲１６記載の方法。
【請求項１８】
ＨＲＦ活性を抑制するために、青蒿を投与することを含む請求の範囲１６記載の方法。
【請求項１９】
前記疾患が、エストロゲン依存性疾患であって、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、１７βＨＳＤ遺伝子、Ｗｎｔ遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、ＴＧＦ−β遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子及びＫＤＲ遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現量及び／又はアロマターゼ活性を測定することにより、前記測定結果に応じて治療方法を選択することを含む請求の範囲１６記載の方法。
【請求項２０】
さらに、下記（ａ）から（ｄ）の少なくとも一つを阻害することを含む請求の範囲１９記載の方法。
（ａ）ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子及び１７βＨＳＤ遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現。
（ｂ）Ｗｎｔ遺伝子の発現抑制。
（ｃ）ＳＭＡＤ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子の少なくとも一方の発現。
（ｄ）アロマターゼ活性。
【請求項２１】
前記（ａ）が、ＩＬ−１β遺伝子及びＩＬ−１β受容体遺伝子の少なくとも一方の発現ならびに１７βＨＳＤ遺伝子の発現である請求の範囲２０記載の方法。
【請求項２２】
前記（ｃ）が、ＳＭＡＤ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子の双方である請求の範囲２０記載の方法。
【請求項２３】
前記疾患が、ＰＧＤ依存性婦人疾患であって、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子の発現量を測定し、前記発現量に応じて治療方法を選択することを含む請求の範囲１６記載の方法。
【請求項２４】
さらに、プロスタグランジン製剤を投与することを含む請求の範囲２３記載の方法。
【請求項２５】
さらに、ＰＧＤ活性を促進させることを含む請求の範囲２３記載の方法。
【請求項２６】
前記疾患が、免疫疾患であって、ＦｃεＲＩ遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子及びＰＬＣ遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現量を測定し、前記発現量に応じて治療方法を選択することを含む請求の範囲１６記載の方法。
【請求項２７】
さらに、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子及びＦｃεＲＩ遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現を抑制することを含む請求の範囲２６記載の方法。
【請求項２８】
血管新生を抑制する方法であって、さらに、ＫＤＲ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現を抑制することを含む請求の範囲１６記載の方法。
【請求項２９】
エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのための医薬品製造のためのアルテミシニン及びその誘導体又は合成物からなる群から選択される少なくとも一つの使用。
【請求項３０】
前記アルテミシニンが、青蒿由来である請求の範囲２９記載の使用。
【請求項３１】
エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのためのアルテミシニン及びその誘導体又は合成物の使用。
【請求項３２】
前記アルテミシニンが、青蒿由来である請求の範囲３１記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、エストロゲン依存性疾患、プロスタグランジンＤ（ＰＧＤ）依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制のための新規医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】  １９８０年代から開始されたヒトゲノム解読プロジェクトによって、ヒトの遺伝子解読が進み、それに伴い、疾患と遺伝子との関連が明らかになりつつある。これを受け、医学の分野では、疾患の分子メカニズムの解明と、それに基づいた予防法及び治療法の確立が急速に進展している。生体内において、ある分子メカニズム（分子カスケード）が明らかになると、そのカスケードを阻害若しくは増強させることにより、疾患の予防と治療が可能になる。【０００３】  一方、子宮内膜症をはじめとするエストロゲン依存性疾患、不妊症、免疫疾患及び癌は、様々な遺伝子が関与する複合症であると考えられている。したがって、これらの疾患の分子カスケードが明らかになれば、その予防及び治療のための医薬品の開発が可能となる。また、血管新生は、様々な疾患に関係し、その抑制技術や増強技術の開発が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】  そこで、本発明は、エストロゲン依存性疾患、プロスタグランジンＤ（ＰＧＤ）依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制のための医薬品の提供を、その目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】  前記目的を達成するために、本発明の医薬品は、エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのための医薬品であって、ヒスタミン放出因子（ＨＲＦ：ＩｇＥ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｈｉｓｔａｍｉｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ、別名ＴＣＴＰ：Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｌｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ）活性抑制成分を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【０００６】  本発明者等は、下記（Ａ）〜（Ｉ）といったＨＲＦを起点とする分子カスケードを解明した。このカスケードによると、エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患およびある種の癌などの悪性腫瘍は、ＨＲＦを起点として生じることが分かり、このカスケードにおいて、いずれかの段階で、関連する分子の発現を増強若しくは抑制すれば、前述の疾患の予防、改善および治療が可能となる。
（Ａ）ＨＲＦの活性増強によりインターロイキン−１β受容体（ＩＬ−１β受容体、ＩＬ−１βＲ）及び１７β水酸化ステロイド脱水素酵素（１７βＨＳＤ）の少なくとも一方の遺伝子の発現が増強し、これによりエストロゲン活性が増強するカスケード。
（Ｂ）ＨＲＦの活性増強によりＷｎｔ遺伝子の発現が抑制され、これによりアロマターゼ活性が増強し、エストロゲン活性が増強するカスケード。
（Ｃ）ＨＲＦの活性増強により、ＳＭＡＤ遺伝子又はトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）遺伝子の発現が増強するカスケード。
（Ｄ）ＨＲＦの活性増強によりリポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子の発現が抑制するカスケード。
（Ｅ）ＨＲＦの活性増強によりＲａｓ遺伝子の発現が増強するカスケード。
（Ｆ）ＨＲＦの活性増強によりＭＥＫ（ＭＡＰキナーゼ・キナーゼ）遺伝子の発現が増強するカスケード。
（Ｇ）ＨＲＦの活性増強によりＰＬＣ（ホスホリパーゼＣ）遺伝子の発現が増強するカスケード。
（Ｈ）ＨＲＦの活性増強により高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）遺伝子の発現が抑制するカスケード。
（Ｉ）ＨＲＦの活性増強によりＫＤＲ（ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｓｅｒｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）遺伝子の発現が増強するカスケード。【０００７】  すなわち、本発明の医薬品は、ＨＲＦ活性抑制成分を含むため、これにより前記遺伝子の発現が抑制又は増強され、前述の疾患の予防、改善及び治療等が可能となる。また、前記ＨＲＦ活性抑制成分により、例えば、ＫＤＲ、ＴＧＦ−β及びＩＬ−１β等の血管新生に関する遺伝子の発現等が抑制又は増強されるため、血管新生を抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、ＨＲＦを起点とする分子カスケードの説明図である。
【図２】図２は、本発明の実施例において使用したアルテミシニン製剤のＬＣ−ＭＳでの総イオンクロマトグラムである
【図３】図３は、前記アルテミシニン製剤の相対保持時間３．４２分のＭＳパターンである。
【図４】図４は、本発明の実施例において作成した検量線のグラフである。
【図５】図５は、本発明の実施例におけるアルテミシニンを投与することによりＨＲＦの活性が抑制されたことを示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】  前記ＨＲＦを起点とする分子カスケードを、図１に示す。図示のように、ダイオキシン（ＴＣＤＤ）が、ＨＲＦを標的にすることは知られていたが、その下流において、エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患及び血管新生に関与していることを明らかにしたのは、本発明者等が初めてである。【００１０】  図示のように、ＨＲＦ活性を促進させると、ＩＬ−１βＲ遺伝子及び１７βＨＳＤ遺伝子の発現が促進され、これに伴いエストロゲン活性が向上する。ＨＲＦ活性の促進により、Ｗｎｔ遺伝子の発現が抑制され、これに伴いアロマターゼ活性が向上し、エストロゲン活性が向上する。このエストロゲン活性の向上により、エストロゲン依存性疾患が発症する。ＨＲＦ活性の促進により、ＳＭＡＤ遺伝子又はＴＧＦ−β遺伝子の発現が促進する。さらに、ＨＲＦ活性を促進させると、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子の発現が抑制（減弱）され、その結果、不妊症、着床障害及び流産等のＰＧＤ依存性婦人疾患が生じる。また一方で、ＨＲＦ活性の促進は、ＦｃεＲＩ遺伝子の発現の抑制や、ＰＬＣ遺伝子、Ｒａｓ遺伝子及びＭＥＫ遺伝子の発現の促進により、免疫疾患を発生させる。【００１１】  また、ＨＲＦが、エストロゲン依存性疾患の発症に関連するという結果も別途得られている。すなわち、月経血中のＨＲＦ濃度に基づきエストロゲン依存性疾患の罹患を判断したところ、陽性（ＨＲＦ濃度０．１０μｇ／ｍＬ以上）と判断した１５名全てがエストロゲン依存性疾患に罹患しており、陰性（ＨＲＦ濃度０．１０μｇ／ｍＬ未満）と判断した３名のうち、２名がエストロゲン依存性疾患に罹患していなかった。【００１２】  本発明について以下に詳細に説明する。【００１３】  本発明の医薬品は、前述のように、ＨＲＦ抑制成分を含むため、このＨＲＦ抑制成分によりＨＲＦ活性を抑制してＩＬ−１β遺伝子の発現を抑制し、エストロゲン活性を抑制できるため、例えば、子宮内膜症等のエストロゲン依存性疾患を予防、治療又は改善できる。なお、ＩＬ−１βが子宮内膜症等のエストロゲン依存性疾患の関連因子であることは、例えば、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２００２  Ｄｅｃ；８７（１２）：５７８５−９２．、及び、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．２００２  Ｊｕｎ；９６６：１６６−８６．Ｒｅｖｉｅｗ．に記載されている。本発明の医薬品は、同様に、前記ＨＲＦ抑制成分によりＨＲＦ活性を抑制して１７βＨＳＤ遺伝子の発現を抑制し、エストロゲン活性を抑制できるため、例えば、子宮内膜症等のエストロゲン依存性疾患を予防、治療又は改善できる。１７βＨＳＤが子宮内膜症等のエストロゲン依存性疾患の関連因子であることは、例えば、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２０００  Ｓｅｐ；８５（９）：３２９２−６．、及び、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．１９９８  Ｄｅｃ；８３（１２）：４４７４−８０．に記載されている。本発明の医薬品は、前記ＨＲＦ抑制成分によりＨＲＦ活性を抑制してＷｎｔ遺伝子の発現を促進し、これによりアロマターゼ活性を抑制し、エストロゲン活性を抑制できるため、例えば、子宮内膜症等のエストロゲン依存性疾患を予防、治療又は改善できる。Ｗ��ｔがアロマターゼの発現を阻害することは、例えば、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２００２  Ｓｅｐ；８７（９）：４３６９−７７．に記載されている。本発明の医薬品は、前記ＨＲＦ抑制成分によりＨＲＦ活性を抑制してＳＭＡＤ遺伝子又はＴＧＦ−β遺伝子の発現を抑制し、エストロゲン活性を抑制できるため、例えば、子宮内膜症等のエストロゲン依存性疾患を予防、治療又は改善できる。ＳＭＡＤ及びＴＧＦ−βが子宮内膜症等のエストロゲン依存性疾患の関連因子であることは、例えば、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２００３  Ｏｃｔ；８８（１０）：４９６７−７６．に記載されている。【００１４】  また、本発明の医薬品は、前記ＨＲＦ抑制成分によりＨＲＦ活性を抑制してＫＤＲ遺伝子の発現を抑制できるため、例えば、子宮内膜症等を予防、治療若しくは改善でき、又は、血管新生を抑制できる。ＫＤＲが、子宮内膜症等の疾患の関連因子であることは、例えば、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．２００２  Ｍａｒ；９５５：６０−７４；  ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  ８６−８，３９６−４０６．に記載されている。本発明の医薬品は、前記ＨＲＦ抑制成分によりＨＲＦ活性を抑制してリポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子の発現を促進できるため、これによりＰＧＤ依存性疾患を予防、治療又は改善できる。本発明の医薬品は、前記ＨＲＦ抑制成分によりＨＲＦ活性を抑制してＲａｓ遺伝子の発現を抑制し、これにより、子宮内膜症及び卵巣癌等の疾患を予防、治療又は改善できる。Ｒａｓが、子宮内膜症及び卵巣癌等の疾患の関連因子であることは、例えば、Ｍｏｌ  Ｈｕｍ  Ｒｅｐｒｏｄ．２００４  Ｏｃｔ；１０（１０）：７１９−２８．に記載されている。本発明の医薬品は、前記ＨＲＦ抑制成分によりＨＲＦ活性を抑制してＭＥＫ遺伝子の発現を抑制してＭＡＰＫ遺伝子の発現を抑制し、これにより、子宮内膜症等の疾患を予防、治療又は改善できる。【００１５】  さらには、本発明の医薬品は、前記ＨＲＦ抑制成分により、ＨＲＦ活性を抑制してＲａｓ遺伝子及びＭＥＫ遺伝子の発現を抑制し、また、ＰＬＣ遺伝子及びＦｃεＲＩ遺伝子の発現を促進できることから、これらの遺伝子に伴う前記カスケードを阻害し、これにより、免疫疾患を予防、治療又は改善できる。【００１６】  本発明において、「ＨＲＦ活性抑制」は、ＨＲＦを不活化することを意味するだけでなく、その他に、例えば、ＨＲＦ遺伝子の発現阻害又は抑制、ＨＲＦの合成又は分泌抑制等を意味する。【００１７】  また、本発明において、「疾患のための医薬品」とは、疾患を治療、予防又は改善するための医薬品を意味する。【００１８】  本発明の医薬品において、前記ＨＲＦ活性抑制成分としては、例えば、アルテミシニン及びその誘導体又は合成物、青蒿（せいこう、チンハオ、Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ａｐｉａｃｅａ  Ｈａｎｃｅ）等の生薬等があげられる。アルテミシニンは、直接又は間接的にＨＲＦに作用し、ＨＲＦを不活化するからである。前記アルテミシニン誘導体としては、例えば、アルテスネート、ジヒドロアルテミシニン、アルテメター等があげられる。アルテミシニンの化学式を、下記化学式（１）に示す。前記アルテミシニンの合成物としては、例えば、下記の化学式（２）で示すＲＢｘ１１１６０等が挙げられる。前記アルテミシニン等は、例えば、後述する生薬等から単離精製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。なお、アルテミシニン等は、マラリアの治療薬として従来から使用されており、その安全性は実証済みである。
【化１】
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【００１９】  また、本発明の医薬品は、前記ＨＲＦ活性抑制成分に加えて、例えば、１７βＨＳＤ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子、ＭＡＰＫ遺伝子、ＰＬＣ遺伝子、ＫＤＲ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子等の発現を抑制する成分及び阻害剤、Ｗｎｔ遺伝子、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子、ＰＬＣ遺伝子及びＦｃεＲＩ遺伝子等の発現を促進させる成分や、各種添加剤を含んでいてもよい。具体的には、例えば、メトトレキセート（ＰｕｂＭｅｄ  ＩＤ：８２９２６６８）、ＮＯ放出性非ステロイド性消炎鎮痛剤（ＮＯ−ＮＳＡＩＤｓ、ＰｕｂＭｅｄ  ＩＤ：１１０４６０５８）、カスパーゼ治療薬（ＰｕｂＭｅｄ  ＩＤ：８６３０３７２）及びヒアルロン酸（ＰｕｂＭｅｄ  ＩＤ：１２２１３７００）等のＩＬ−１β抑制剤や、１６−ｋｅｔｏｅｓｔｒｏｎｅ（ＰｕｂＭｅｄ  ＩＤ  ：  ６５７２１４６）等の１７βＨＳＤ抑制剤等があげられる。なお、前記ヒアルロン酸は、その濃度によりＩＬ−１β等のサイトカインを促進又は抑制できる。【００２０】  本発明の医薬品において、前記エストロゲン依存性疾患は、例えば、月経困難症、不妊症、流産、子宮内膜症、子宮筋腫、子宮腺筋症、卵巣チョコレート嚢胞、卵巣癌、乳癌、子宮体癌、子宮頸癌、月経前症候群（ＰＭＳ：月経周期に伴い、心身に変調をきたす症候群）、冠動脈心疾患、脂質代謝異常及び甲状腺機能異常等を含む。前記ＰＧＤ依存性婦人疾患は、例えば、不妊症、着床障害及び流産等を含む。前記免疫疾患は、例えば、食物アレルギー、薬物アレルギー、花粉アレルギー、虫によるアレルギー、喘息、鼻炎、痰麻疹、アナフィラキシー、アレルギー性気管支拡張症、花粉症、寒冷じん麻疹及びアトピー性皮膚炎等を含む。【００２１】  次に、本発明の疾患の治療、予防又は改善又は抑制方法（以下、本発明の治療方法という）は、エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患及び癌からなる群から選択される疾患の治療、予防又は改善、又は、血管新生の抑制方法であって、ＨＲＦ活性を抑制することを含む方法である。【００２２】  本発明の治療方法において、ＨＲＦ活性を抑制するために、例えば、アルテミシニン及びその誘導体又は合成物、青蒿等の生薬等を投与することを含むことが好ましい。また、ＨＲＦ活性を抑制するために、前記本発明の医薬品を投与してもよい。前記誘導体及び合成物は、前記本発明の医薬品と同様である。また、前記アルテミシニン等は、市販のアルテミシニン製剤といった市販品を使用してもよいし、公知の方法により生成してもよい。【００２３】  本発明の治療方法において、前記疾患が、エストロゲン依存性疾患であって、例えば、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、１７βＨＳＤ遺伝子、Ｗｎｔ遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、ＴＧＦ−β遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子及びＫＤＲ遺伝子等の発現量及び／又はアロマターゼ活性を測定することにより、前記測定結果に応じて治療方法を選択することを含むことが好ましい。前記測定結果は、いずれか一つの遺伝子の発現量であってもよいし、複数の遺伝子の発現量であってもよい。多面的に判断できることから、複数の遺伝子の発現量に基づくことがより好ましく、前記遺伝子の中でも、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、１７βＨＳＤ遺伝子及びＷｎｔ遺伝子の発現量を利用することがさらに好ましい。前記治療方法の選択としては、例えば、アルテミシニンや本発明の医薬品等の投与量、投与間隔及び投与方法等を変更することがあげられる。前記遺伝子の発現量は、例えば、マイクロアレイを用いて測定することができ、前記アロマターゼ活性の測定方法は、例えば、動物細胞や酵母を用いたインビトロでの測定方法、トリチウム水遊離アッセイ法、蛍光法、液体クロマトグラフィー法及びｍＲＮＡによる測定方法等があげられる。【００２４】  本発明の治療方法において、さらに、下記（ａ）から（ｄ）の少なくとも一つを阻害することを含むことが好ましい。
（ａ）ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子及び１７βＨＳＤ遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現。
（ｂ）Ｗｎｔ遺伝子の発現抑制。
（ｃ）ＳＭＡＤ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子の少なくとも一方の発現。
（ｄ）アロマターゼ活性。【００２５】  本発明の治療方法において、前記（ａ）が、ＩＬ−１β遺伝子及びＩＬ−１β受容体遺伝子の少なくとも一方の発現ならびに１７βＨＳＤ遺伝子の発現であることが好ましい。【００２６】  本発明の治療方法において、前記（ｃ）が、ＳＭＡＤ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子の双方であることが好ましい。【００２７】  本発明の治療方法において、前記疾患が、ＰＧＤ依存性婦人疾患であって、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子の発現量を測定し、前記発現量に応じて治療方法を選択することを含むことが好ましく、さらに、プロスタグランジン製剤を投与することや、ＰＧＤ活性を促進させることを含むことがより好ましい。前記ＰＧＤ活性の促進としては、例えば、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子の発現の促進、ＰＧＤの活性化、ＰＧＤの合成又は分泌を促進させること等があげられる。前記治療方法の選択は、前記エストロゲン依存性疾患の場合と同様にして行うことができる。【００２８】  本発明の治療方法において、前記疾患が、免疫疾患であって、例えば、ＦｃεＲＩ遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子及びＰＬＣ遺伝子等の遺伝子の発現量を測定し、前記発現量に応じて治療方法を選択することを含むことが好ましく、さらに、例えば、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子及びＦｃεＲＩ遺伝子等の発現を抑制することを含むことがより好ましい。前記測定結果は、いずれか一つの遺伝子の発現量であってもよいし、複数の遺伝子の発現量であってもよい。多面的に判断できることから、複数の遺伝子の発現量に基づくことがより好ましい。前記治療方法の選択は、前記エストロゲン依存性疾患の場合と同様にして行うことができる。【００２９】  本発明の治療方法において、血管新生を抑制する方法である場合、さらに、例えば、ＫＤＲ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子等の血管新生に関連する遺伝子の発現を抑制することを含むことが好ましい。また、例えば、ＫＤＲ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子等の遺伝子の発現量を測定し、前記測定結果に基づき治療方法を選択してもよい。前記測定結果は、いずれか一つの遺伝子の発現量であってもよいし、複数の遺伝子の発現量であってもよい。多面的に判断できることから、複数の遺伝子の発現量に基づくことがより好ましい。前記治療方法の選択は、前記エストロゲン依存性疾患の場合と同様にして行うことができる。【００３０】  次に、本発明のスクリーニング方法は、ＨＲＦ活性抑制成分又はＨＲＦ活性増強成分をスクリーニングする方法であって、１７βＨＳＤ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、Ｗｎｔ遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子、ＰＬＣ遺伝子、ＦｃεＲＩ遺伝子、ＫＤＲ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現量を測定してＨＲＦ活性抑制成分又はＨＲＦ活性増強成分を選択する工程を含む。前記遺伝子の発現量の測定方法としては、特に制限されず、従来公知の方法が使用でき、例えば、マイクロアレイを用いる方法及びリアルタイムＰＣＲ法等のＰＣＲを利用する方法等の迅速な測定が可能な方法があげられる。【００３１】  前記マイクロアレイを用いる方法と���ては、前記マーカー転写産物に対応するプローブが配置されたマイクロアレイを準備し、このマイクロアレイに、試料中のＲＮＡを鋳型として調製した標識化ターゲットをハイブリダイズさせ、前記プローブに結合した前記ターゲットの標識シグナルを測定して前記ＲＮＡ鎖を定量する方法が挙げられる。ハイブリダイゼーションの方法及び条件は、特に制限されず、従来公知の方法で行うことができ、当業者であれば、プローブ、ターゲット、ポリヌクレオチドの種類などによって、適宜調節できる。前記プローブとハイブリダイゼーションした前記ターゲットの標識シグナルをそれぞれ検出し測定する方法は、特に制限されず、標識の種類に応じて、従来公知の方法又は装置により測定できる。【００３２】  本発明のスクリーニング方法は、例えば、エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのための医薬品、特定保健用食品、栄養機能食品又は一般食品のスクリーニングに使用することができる。前記一般食品としては、例えば、自然食品、健康機能成分を添加した健康食品及びサプリメント等を含む。【００３３】  次に、本発明のマイクロアレイは、前記本発明のスクリーニング方法に使用するマイクロアレイであって、１７βＨＳＤ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、Ｗｎｔ遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子、ＰＬＣ遺伝子、ＦｃεＲＩ遺伝子、ＫＤＲ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現を検出するためのプローブとして使用可能なポリヌクレオチドのスポットが配置されている。【００３４】  前記マイクロアレイの製造方法は、特に制限されず、例えば、基板表面で直接プローブのポリヌクレオチドを合成する方法（オンチップ法）や、予め調製したプローブを基板表面に固定する方法等の従来公知の方法が挙げられる。前記オンチップ法としては、光照射で選択的に除去される保護基の使用と、半導体製造に利用されるフォトリソグラフィー技術及び固相合成技術とを組合せて、微小なマトリックスの所定の領域で選択的合成を行う方法が挙げられる。また、前記予め調製したプローブを用いる方法としては、プローブ溶解液をインクジェット法により基材に微小滴下して、化学的又は物理的に固定する方法が挙げられる。前記基材としては、特に制限されず、例えば、ガラス、金属、プラスチック等が挙げられる。【００３５】  次に、本発明のスクリーニングキットは、前記本発明のスクリーニング方法に使用するスクリーニングキットであって、前記本発明のマイクロアレイを含むものである。前記キットには、さらに、例えば、試料からトータルＲＮＡを調製するプライマーや試薬、ターゲットを調製するための標識化された本発明のプライマーや試薬等を含んでもいてよい。前記試薬としては、従来公知の試薬が利用でき、例えば、ポリメラーゼ、ヌクレオチド、標識化合物、バッファー等があげられる。【００３６】  次に、本発明の製造方法は、エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのための医薬品、特定保健用食品、��養機能食品又は一般食品の製造方法であって、前記本発明のスクリーニング方法によりＨＲＦ活性抑制成分を選択する工程を含む。前記一般食品は、前述のとおりである。【００３７】  次に、本発明の判定方法は、エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患及び癌からなる群から選択される疾患の易罹患性を判定する方法であって、被験者の生体試料における１７βＨＳＤ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、Ｗｎｔ遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子、ＰＬＣ遺伝子、ＦｃεＲＩ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現量を測定する測定工程、前記測定値と正常生体試料のそれとを比較し、これによりＨＲＦ依存度を判断する判断工程、及び、前記ＨＲＦ依存度により前記疾患の易罹患性を判定する判定工程を含む。前記判定とは、例えば、被験者が前記疾患に羅患しているか否かの判定、将来的に前記疾患に羅患する危険性が存在するか否かの判定、治療後に前記疾患を再発する危険性が存在するか否かの判定、及び、前記疾患の羅患やその危険性がどの程度であるかの判定等を含む。【００３８】  次に、本発明の第２のマイクロアレイは、前記本発明の判定方法に使用するマイクロアレイであって、１７βＨＳＤ遺伝子、ＩＬ−１β遺伝子、ＩＬ−１β受容体遺伝子、Ｗｎｔ遺伝子、ＳＭＡＤ遺伝子、リポカリン型ＰＧＤ合成酵素遺伝子、Ｒａｓ遺伝子、ＭＥＫ遺伝子、ＰＬＣ遺伝子、ＦｃεＲＩ遺伝子及びＴＧＦ−β遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現を検出するためのプローブとして使用可能なポリヌクレオチドのスポットが配置されている。マイクロアレイの製造方法は、前記第１のマイクロアレイと同様である。【００３９】  次に、本発明の第２のキットは、本発明の判定方法に使用するキットであって、前記本発明の第２のマイクロアレイを含み、その他に、前記本発明の第１のキットと同様のものを含むことができる。【００４０】  次に、本発明の血管新生の判定方法は、生体試料におけるＨＲＦ活性を測定し、前記測定値と正常生体試料のそれとを比較することにより血管新生の有無を判断することを含む。ＨＲＦ活性は、例えば、固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）やサンドウィッチＥＬＩＳＡ等のエンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）やラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）等により測定できる。また、本発明の血管新生の判定方法は、例えば、ＫＤＲ遺伝子、ＴＧＦ−β遺伝子及びＩＬ−１β遺伝子等の発現量を測定する測定工程を含んでいてもよく、前記測定工程により、ＨＲＦ活性を判断することもできる。【００４１】  次に、本発明の使用は、エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのための医薬品製造のためのアルテミシニン及びその誘導体又は合成物からなる群から選択される少なくとも一つの使用である。また、本発明の使用のその他の態様は、エストロゲン依存性疾患、ＰＧＤ依存性婦人疾患、免疫疾患、癌及び血管新生抑制からなる群から選択される少なくとも一つのためのアルテミシニン及びその誘導体又は合成物の使用である。本発明の使用において、前記アルテミシニ���が、例えば、青蒿等の生薬由来であることが好ましい。前記誘導体及び合成物は、前記本発明の医薬品と同様である。【００４２】  また、本発明は、その他の態様として、ＨＲＦ活性抑制成分を含む特定保健用食品、栄養機能食品又は一般食品等を含む。前記一般食品及び前記ＨＲＦ活性抑制成分は、前記本発明の医薬品と同様である。【００４３】  さらに、前述のように、ＨＲＦ活性を促進させることにより、血管新生が促進されることから、本発明は、さらにその他の態様として、ＨＲＦ活性増強成分を含む血管新生促進剤、ＨＲＦ活性を促進させることによる血管新生の促進方法等を含む。このような血管新生促進剤は、例えば、循環器系疾患等に有用である。【００４４】  本発明は、さらにその他の態様として、特発性ネフローゼ症候群のための医薬品であってＨＲＦ活性抑制成分を含む医薬品、ＨＲＦ活性抑制成分を投与するか又はＨＲＦ活性を抑制することにより特発性ネフローゼ症候群を治療する方法、ＨＲＦ活性を測定する工程を含む突発性ネフローゼ症候群のための医薬品、特定保健用食品、栄養機能食品又は一般食品のスクリーニング方法、及び、ＨＲＦ活性を測定する工程を含む突発性ネフローゼ症候群の診断方法等を含む。ＨＲＦは、小児の特発性ネフローゼ症候群における疾患特異的遺伝子とされ、コンカナバリンＡで活性化した末梢血の単核球において、ネフローゼの状態でのみ、ｍＲＮＡだけでなく、蛋白質レベルでも特異的に発現が亢進し、同細胞におけるＨＲＦの分泌も高まっていることから、ＨＲＦがネフローゼ症候群の病因に関係していると考えられているからである（Ｔｏｙａｂｅ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５  Ｏｃｔ；１４２（１）：１６２−６．）。【００４５】  本発明は、さらにその他の態様として、アルツハイマー病又はダウン症のための医薬品であってＨＲＦ活性増強成分を含む医薬品、ＨＲＦを活性化することによりアルツハイマー病又はダウン症を治療する方法、ＨＲＦ活性を測定する工程を含むアルツハイマー病又はダウン症のための医薬品、特定保健用食品、栄養機能食品又は一般食品のスクリーニング方法、及び、ＨＲＦをマーカーとしたアルツハイマー病又はダウン症の診断方法等を含む。ＨＲＦは、ダウン症の患者において、例えば、側頭皮質、視床及び尾上核等において顕著に減少し、一方、アルツハイマー病の患者において、例えば、側頭皮質において減少していることから、神経変性における認識機能の低下原因が、ＨＲＦの活性低下であると考えられているため（Ｋｉｍ，ＳＨ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ．２００１  Ｍａｒ  ２；３００（１）：４１−４．）、ＨＲＦを活性化することにより、アルツハイマー病又はダウン症を治療することが可能と考えられる。前記ＨＲＦを活性化する方法は、特に制限されず、例えば、ＨＲＦ自体を投与する方法があげられ、その他には、レトロウィルス等の適当な発現ベクターに、機能するに十分な部分をカバーする範囲のｃＤＮＡを挿入したＤＮＡを、例えば、側頭皮質等といったアルツハイマー病及びダウン症を発症することによりＨＲＦが減少する部域に投与し、当該部域の細胞を形質転換させること等があげられる。【００４６】  以下、本発��について、実施例及び比較例に基づきより詳細に説明する。ただし、本発明は下記の実施例により制限されない。
【実施例１】
【００４７】  マイクロアレイを用い、ＨＲＦを添加して種々遺伝子の発現を増強もしくは抑制した。その結果を、下記の表１、表２及び表３に示す。なお、マイクロアレイによる遺伝子発現の評価は、常法により行った。【００４８】  前記マイクロアレイによる遺伝子発現の評価は、具体的には、以下のようにして行った。つまり、まず、ＨＬ−６０細胞及び、培地として１０％ＦＢＳ−ＲＰＭＩ１６４０を準備した。次に、ＨＲＦを１０μｇ／ｍＬの濃度で前記培地中に加え、２４時間、３７℃で前記ＨＬ−６０細胞を培養し、細胞をＰＢＳで洗浄した後、商品名ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン製）を加えＲＮＡを抽出した。抽出したＲＮＡを２μｇ使用し、商品名ＣｏｄｅＬｉｎｋ  Ｈｕｍａｎ  Ｗｈｏｌｅ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏａｒｒａｙ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）を用いてマイクロアレイを行った。そして、商品名Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｇ２５６５  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ｓｃａｎｎｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）を使用してスキャンし、得られたシグナル（画像）を、商品名ＣｏｄｅＬｉｎｋ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ２（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）にて数値化し、ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ（Ｒ）（Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ製）により解析した。【００４９】
【表１】
2006051987.tif 000003
【００５０】
【表２】
2006051987.tif 000004
【００５１】
【表３】
2006051987.tif 000005
【００５２】  前記表１〜３に示すように、様々な遺伝子の発現量が変動し、中でも、ＭＥＫ、１７βＨＳＤ及びＩＬ−１受容体等の発現量の増加が大きかった。
【実施例２】
【００５３】  本実施例は、アルテミシニンを投与することにより、ＨＲＦが不活性化し、かつ、エストロゲン依存性疾患の症状が改善することを示す例である。【００５４】  （１）アルテミシニン製剤中のアルテミシニンの分析
まず、アルテミシニン製剤８２ｇを１．５ｍＬの精製水に懸濁し、ヘキサン：エーテル（２：１）混合液４ｍＬで２回抽出した後、１０分間振とうし、遠心分離し、溶媒を留去した。次に、アセトニトリルを２ｍＬ添加し、冷蔵保存して不純物を析出させた後、遠心分離し、その上清を留去し、展開溶液１００μＬに溶解して以下の条件でＬＣ−ＭＳにより分析を行った。その結果を図２及び３に示す。【００５５】  （液体クロマトグラフィーの条件）
カラム：  商品名ＸＴｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８（３．５μｍ、内径２．１ｍｍ×長さ１００ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ製）
溶出液：  アセトニトリル：２．５ｍＭ酢酸アンモニア水溶液（６０：４０）
流量：  ０．２ｍＬ／分
注入量：  １０μＬ【００５６】  なお、アルテミシニン分子関連イオン及びジヒドロアルテミシニン分子関連イオンの質量は、以下の通りである。
・アルテミシニン分子関連イオン
分子イオン（Ｍ）：２８２
水素付加イオン：２８３
アンモニア付加イオン：３００
Ｎａ付加イオン：３０５
３分子Ｎａ付加イオン：３５１
・ジヒドロアルテミシニン分子関連イオン
分子イオン（Ｍ）：２８４
水素付加イオン：２８５
アンモニア付加イオン：３０２
Ｎａ付加イオン：３０７【００５７】  図２は、本発明の実施例において使用したアルテミシニン製剤のＬＣ−ＭＳでの総イオンクロマトグラムであり、図３は、前記アルテミシニン製剤の相対保持時間３．４２分のＭＳパターンである。これらの結果から、前記アルテミシニン製剤は、アルテミシニンと微量のジヒドロアルテミシニンとで構成されていた。【００５８】  （２）検量線の作成
まず、ＨＲＦに特異的に反応するＨＲＦ産生細胞を樹立し、この産生細胞をマウス腹腔内に投与した。得られたマウス腹水をプロテインＧカラムで精製し、高純度のモノクローナルＩｇＧ抗体を得た。このＨＲＦに対して特異的に認識するモノクロ−ナル抗体を、予め１０μｌ／ｍｌの濃度となるように炭酸水素ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ９．５）に溶解させ、これをＥＬＩＳＡ用９６穴イムノプレートに１００μＬずつ添加し、４℃で一晩放置して前記抗体をプレート上に結合させた。【００５９】  次に、前記プレートから溶液を捨て、各ウエルを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）を含むＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で３回洗浄した後、２％動物血清を含むＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液２００μＬを加え、室温で１〜２時間静置し、抗体の結合していない部位を動物血清でブロックした。前記プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）含有ＰＢＳで３回洗浄した後、所定の濃度に調整したＨＲＦ標準抗原（バキュロウイルス由来リコンブナント抗原：２０００、１０００、５００、２５０、１２５、６３、３２、１６、８、４、２、１、０ｎｇ／ｍＬ）を１穴あたり１００μＬずつ加えて室温で２時間放置し、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）含有ＰＢＳで３回洗浄した。そして、抗原認識部位の異なる抗ウサギＨＲＦ抗体（ＨＲＦ抗原活性部位を有する合成ペプチド抗原（１５アミノ酸残基）をウサギ皮下に４回免疫して得られたポリクローナル抗体）を、１穴あたり１００μＬずつ加えて室温で１時間放置し、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）含有ＰＢＳで３回洗浄した。西洋ワサビペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（バイオラッド社）を、１穴あたり１００μＬずつ加えて室温で１時間放置し、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）含有ＰＢＳで３回洗浄した。そして、酵素基質液（ＴＭＢ：３−３−５−５’テトラメチルベンチジン）を１穴あたり１００μＬずつ加え、室温３０分間放置し発色させ、１Ｍリン酸を１穴あたり１００μＬずつ加えて反応を停止した。イムノリーダー（ＢＩＯ−ＲＡＤ、Ｍｏｄｅｌ６８０）を用いて波長４９０ｎｍ、副波長６８０ｎｍで吸光度を測定し、検量線を作成した。得られた検量線を図４に示す。【００６０】  （３）月経困難症の判定
月経困難症の程度は、自覚症状及び鎮痛剤の使用に基づき、以下の表４に示すスコア表を用いて判断した。このスコア表は、Ａｎｄｅｒｓｃｈの方法を、Ｂｉｌｅｒｏｇｌｕの方法などを参考にして改変したものである。【００６１】
【表４】
2006051987.tif 000006
【００６２】  （４）アルテミシニンの投与
前記スコアを用いて月経困難症（子宮内膜症を含む）の患者の程度を評価した。評価の結果から、症状が重いと考えられる２名を投与群とし、これらの患者に、１日あたり１００ｍｇ量で、前記アルテミシニン製剤を５ヶ月に渡って投与した。一方、前記投与群と比較して症状が軽い２名を非投与群とし、これらの患者にはアルテミシニン製剤を投与しなかった。前記患者について、１ヶ月ごとにＨＲＦ活性を測定し、かつ、症状を確認した。ＨＲＦ活性の測定結果を図５に示し、スコアの変化を下記表５に示す。なお、前記ＨＲＦ活性の測定は、ＨＲＦ標準抗原に代えて、被験者からの血清又は月経血を使用した以外は、前記（１）検量線の作成と同様にして行い、前記検量線を用いて抗体に結合したＨＲＦの量を決定し、これをＨＲＦ活性とした。【００６３】
【表５】
2006051987.tif 000007
【００６４】  図５及び表５に示すように、アルテミシニンを投与することにより、ＨＲＦが不活化し、それにともない、月経困難症の症状も改善された。したがって、ＨＲＦの活性を抑制することによりエストロゲン依存性疾患を改善できるといえる。
【産業上の利用可能性】
【００６５】  本発明の医薬品は、エストロゲン依存性疾患、不妊症及び免疫疾患の予防、治療又は改善のための医薬品並びに血管新生を抑制するための医薬品として有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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