(57)【要約】腎炎および腎不全などの腎臓機能障害の予防および／又は治療に有用な医薬品の開発。  一般式（１）2006107059.tif 000010〔式中、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって水素原子、ニトロ基又は塩素原子を表し、Ｒ３は、水素原子、塩素原子又はフッソ原子を表し、ｎは６〜８の整数を表す。〕で示されるジヒドロピリジン化合物もしくはそれらの光学異性体を有効成分として含有することを特徴とする腎灌流障害用薬。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）
2006107059.tif 000009
〔式中、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって水素原子、ニトロ基又は塩素原子を表し、Ｒ３は、水素原子、塩素原子又はフッソ原子を表し、ｎは６〜８の整数を表す。〕で示されるジヒドロピリジン化合物もしくはそれらの光学異性体を有効成分として含有することを特徴とする腎灌流障害用薬。
【請求項２】
１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−メトキカルボニルピリジン−５−カルボン酸６−（５−フェニル−３−ピラゾリルオキシ）ヘキシルエステルを有効成分として含有することを特徴とする腎不全用薬。
【請求項３】
１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−メトキカルボニルピリジン−５−カルボン酸６−（５−フェニル−３−ピラゾリルオキシ）ヘキシルエステルを有効成分として含有することを特徴とする腎炎用薬。
【請求項４】
１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−メトキカルボニルピリジン−５−カルボン酸６−（５−フェニル−３−ピラゾリルオキシ）ヘキシルエステルを有効成分として含有することを特徴とする透析合併症用薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カルシウム／カルモジュリン（Ｃａ２＋／ＣａＭ）拮抗作用を併せ持つジヒドロピリジン化合物を有効成分として含有する臓器障害、とりわけ腎炎および腎不全などの腎臓機能障害の予防および／又は治療用薬ならびに透析合併症用薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管拡張薬は、それぞれの作用選択性に応じて腎性高血圧を含む高血圧症、本態性高血圧症および狭心症などの治療に使用されているが、我が国では腎炎および腎不全など腎臓障害および透析合併症の予防と治療に対する薬効適応はなされていない。
現在、市販のジヒドロピリジン系カルシウム拮抗薬、例えば、ニフェジピン、ニトレンジピン、ニカルジピン、ニルバジピン、ベニジピン、アムロジピン、エホニジピンおよびアゼニルジピンなどは、カルシウム拮抗作用を薬理学的な作用機序とする強力な血管拡張作用を有する。これらのカルシウム拮抗薬は、血管作用選択性および臓器選択性に基づき、高血圧症および狭心症などを適応症として開発され、汎用されている。
日本において開発されたニカルジピンは、まず脳循環代謝改善薬（１９８１年）として、次いで降圧薬（１９８２年）として発売された。降圧剤ニルバジピン（１９８９年発売）は、適応症の追加により脳循環代謝改善作用が一時期は認められていたが、厚生省による１９９９年の第二次脳循環代謝改善薬の再評価において、本剤の適応症は本態性高血圧症のみに変更された。このように市販のジヒドロピリジン系カルシウム拮抗薬は、脳卒中、脳梗塞、脳浮腫などの予防と治療に対する薬物、および／又は各種の腎臓障害、透析合併症に関わる病態の治療と予防に対する薬物として臨床使用は認可されていない。
一方、腎臓障害に対する市販のカルシウム拮抗薬の研究例としては、ニフェジピン、ニトレンジピン、ニカルジピン（Ｍｉｋｏｄａ  Ｎ．ｅｔ  ａｌ，．日本薬理学雑誌  Ｖｏｌ．１１４  ３７３−３８２（１９９９）、猿田亨男：循環器科  Ｖｏｌ．３７  ３７９−３８３（１９９５）、山田薫ほか：治療学  Ｖｏｌ．３２  ２０２−２１０（１９９８）、ニルバジピン、アムロジン、ベニジピン（Ｙａｏ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．５２  ５６１−５６８（２０００）、Ｙｕｅ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ．２４  ４２９−４３６（２００１））、エホニジピン（Ｙｏｋｏｙａｍａ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ，．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．１９  ８５１−８５６（１９９２）、Ｓｈｕｄｏ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．２５  １４５１−１４５８（１９９４））、ニトレンジピン（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．９  Ｓ５７−Ｓ５９（１９８７）およびアゼニルジピン（藤本壮八ほか：Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｖｏｌ．２  ４２６７０−２６７５（２００４））などがある。しかしながら、腎臓障害に対する予防法、および／または治療法、とりわけ血圧に対する影響が少ない投与量において、腎炎および腎不全などの腎臓疾患および透析合併症などの病態に対して奏功し得るジヒドロピリジン系化合物は知られていない。
近年、生体内における活性酸素種、一酸化窒素（Ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ：ＮＯ）などのラジカル種の過剰産生、即ち、臓器障害を起こす酸化ストレスあるいはカルボニルストレスが、主要臓器、例えば、脳、心臓、消化管および腎臓などにおける各種病態の発症と進展、組織の蛋白変性と機能障害および細胞死などに関与することが明らかになってきた。
ジヒドロピリジン系カルシウム拮抗薬の抗酸化能に関する研究は、例えば、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．３８  ３６０１−３６１０（１９８９）、Ｊａｎｅｒｏ  Ｄ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．３８  ４３４４−４３４８（１９８９）、Ｒｏｊｓｔａｃｚｅｒ．Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．５１  １４１−１５０（１９８９）、Ｍａｋ  Ｉ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ．７０  １０９９−１１０３（１９９２）、Ｌｕｐｏ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｖｏｌ．２０３  １８０３−１８０８（１９９４）、Ｓｕｇａｗａｒａ  Ｈ．ｅｔ  ａｌ，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ．１９  ２２３−２２８（１９９８）、Ｍａｓｏｎ  Ｒ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．３１  ２７５−２８１（１９９９）、Ｙａｏ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  Ｖｏｌ．２３  ７６６−７６９（２０００）、Ｃｏｍｉｎａｃｉｎｉ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｖｏｌ．３０２  ６７９−６８４（２００３））などが知られている。
電子スピン共鳴法（ＥＳＲ）を用い、ジヒドロピリジン系カルシウム拮抗薬の抗酸化活性を測定した報告例は、例えば、Ｍａｔｕｃｃｉ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．１２２  １３５３−１３６０（１９９７）、Ｆｕｊｉｉ  Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｖｏｌ．４２  ６９１−６７４（１９９９）などがある。
ＥＳＲを用いて測定された既知のジヒドロピリジン系カルシウム拮抗薬の抗酸化活性は、ぞれぞれの薬物のカルシウム拮抗作用（Ｙｏｕｓｉｆ  Ｆ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．６４  ２７３−２８３（１９８６）、Ｍａｓｏｎ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｖｏｌ．２７５  １１５７−１１６６（１９９５）など）と比較して弱く、それぞれの作用強度の間に乖離がみられる。
現在、市販ジヒドロピリジン系カルシウム拮抗薬において、病態の発症と進展過程においてラジカル種の関与が指摘されている腎臓疾患、とりわけ腎炎と腎不全などの腎臓障害および透析合併症などの予防および／又は治療に対して奏功する薬物は知られていない。
【発明の開示】
【０００３】
近年、基礎医学の研究の進展とともに、生体内における活性酸素種、一酸化窒素（ＮＯ）などの各種ラジカルおよびこれらの代謝物は、生体の恒常性の維持に重要な役割を有するのみならず、ひとたび過剰産生された場合には、組織に対する酸化ストレスあるいはカルボニルストレスとして作用して、例えば、脳、心臓、消化管および腎臓などの主要臓器における各種病態の発症と進展、組織の蛋白変性と機能障害および細胞死などの臓器障害に関与することが知られている。また、酸化ストレスは、臓器移植においても発生することが知られている。即ち、摘出臓器に生ずる虚血性障害のみならず、臓器移植後の血液再開通で生じる虚血再灌流障害などを挙げることができる。
腎疾患において活性酸素種などの各種ラジカルおよびＮＯを含むＮＯｘ類の体内動態と病態との関連を論じた報告例としては、佐仲  孜：臨牀透析  Ｖｏｌ．１４  ３９７〜４０４（１９９８）、大湊政之ほか：腎不全  Ｖｏｌ．１０  １１〜１４（１９９８）、白井小百合：聖マリアンナ医科大学雑誌  Ｖｏｌ．５４  ６１５〜６２４（２０００）、宮田敏夫ほか：腎と透析  Ｖｏｌ．５３  ４８５〜４９０（２００２）、青柳一正：腎と透析  Ｖｏｌ．５４  ７２４〜７２７（２００３）、大和田  滋：腎と透析  Ｖｏｌ．５４  ７５９〜７６４（２００３）、杉浦和秀ほか：東京女子医科大学雑誌  Ｖｏｌ．７４  ３１４〜３２０（２００４）、Ｏｋｕｍｕｒａ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．２８８  Ｆ１８１〜Ｆ１８７（２００５）などがあり、病態の改善法の一つとして生体におけるラジカルコントールの重要性を指摘している。
日本では末期腎不全患者の増加に伴い、人工透析患者は２００３年度の集計で約２３万人に達し、治療が患者の社会生活に与える影響が大であるのみならず、国家財政を脅かす医療費増大の一因となっている。腎臓疾患は、例えば、糸球体疾患（急性糸球体腎炎症候群、急性進行性糸球体腎炎症候群、反復性あるいは持続性血尿症候群、ネフロ−ゼ症候群など）、腎循環障害（腎梗塞、腎硬化症、腎血管性高血圧、腎皮質壊死、腎乳頭壊死、腎血管血栓症など）、尿細管・間質性疾患（腎盂腎炎、間質性腎炎）、全身疾患に伴う腎疾患（糖尿病性腎症、アミロイドドーシス、痛風腎、肝疾患に伴う腎障害、溶血性尿毒症症候群、紫斑病性腎炎、膠原病に伴う腎障害）、腎不全（急性腎不全、慢性腎不全）などがある。また、透析療法の合併症として低血圧、発癌、易感染症或いは動脈硬化症などがある。このような腎臓障害における進展予防法および根本的な治療法の早期の開発が求められている。
本発明者らは、上記期待に答えるためカルシウム／カルモジュリン拮抗作用を有する薬物による臓器障害の抑制および治療を目標として鋭意研究を行った結果、一般式（１）で表されるジヒドロピリジン系化合物が腎臓機能障害に対し、血圧に影響が少ない投与量において、すぐれた抑制効果を示し、且つ、抗ラジカル作用などを有することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、下記一般式（１）
2006107059.tif 000002
〔式中、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって水素原子、ニトロ基又は塩素原子を表し、Ｒ３は水素原子、塩素原子又はフッソ原子を表し、ｎは６〜８の整数を表す。〕で示されるジヒドロピリジン化合物もしくはそれらの光学異性体を有効成分として含有することを特徴とする腎臓機能障害用薬を提供するものである。本発明は、上記一般式（１）で示されるジヒドロピリジン化合物もしくはそれらの光学異性体の有効量を患者などの対象者に投与することを特徴とする腎臓機能障害治療及び／又は予防法をも提供する。
［発明の効果］
本発明の一般式（１）で表されるエステル側鎖にピラゾール構造が結合したジヒドロピリジン化合物は、腎再灌流モデルを用いた実験の結果、血圧に影響を殆ど与えない投与量において、腎虚血を機転とする腎臓障害に優れた抑制効果と利尿作用を併せ持ち、且つ、虚血下の腎臓内部で発生するラジカル種を生成阻害することにより、組織障害時における抗酸化能の低下を抑制する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００４】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、一般式（１）の中の好適なＲ１およびＲ２の組み合せ例としては、Ｒ１がニトロ基でＲ２が水素原子、Ｒ１が水素原子でＲ２が塩素原子、Ｒ１とＲ２が塩素原子を挙げることができる。好適なＲ３としては、水素原子、塩素原子、フッソ原子を挙げることができる。Ｒ１とＲ２が塩素原子のときは、他に比し長持続性が期待できる。ｎは実験腎臓障害に対する抑制効果とラジカル消去作用の特徴からみて６が好ましい。
本発明において、一般式（１）の非対称性ジヒドロピリジン化合物は、１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジエステルの合成に汎用される文献記載の方法、又は置換ベンジリデンアセト酢酸メチルとアミノクロトン酸誘導体を用いる方法〔Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｖｏｌ．１４（３）２０６−２１０（１９８９）〕に準じて合成することができる。
また、一般式（１）で表される化合物は、特公昭６３−２３１９３号公報において血管拡張作用、カルシウム拮抗作用、血圧降下作用を示す化合物Ａとして一部公知である。そのうち、式中のＲ１がニトロ基、Ｒ２及びＲ３が水素原子で、ｎが６である化合物の薬理学的特性の概要については、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｖｏｌ．１４  ２０６−２１０（１９８９）にＣＶ−１５９として記載され、抗高血圧薬として有用であることが示唆されている。また、ＣＶ−１５９における新規な作用効果は、特許第３３６５７３２号公報に脳再灌流治療薬として開示されているが、虚血性臓器不全、とりわけ腎臓障害の予防および／又は治療に関して何ら言及されていない。
本発明の好適な化合物例を以下に示すが、目的に応じてこれらから適宜選択して使用することができる。
１）１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−メトキシカルボニルピリジン−５−カルボン酸６−（５−フェニル−３−ピラゾリルオキシ）ヘキシルエステル（ＣＶ−１５９と称す）
２）１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−メトキシカルボニルピリジン−５−カルボン酸６−（５−フェニル−３−ピラゾリルオキシ）ヘプチルエステル
３）１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−メトキシカルボニルピリジン−５−カルボン酸６−（５−フェニル−３−ピラゾリルオキシ）オクチルエステル
４）１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−メトキシカルボニルピリジン−５−カルボン酸６−（５−オルトフルオロフェニル−３−ピラゾリルオキシ）ヘキシルエステル
５）１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−メトキシカルボニルピリジン−５−カルボン酸６−（５−オルトクロロフェニル−３−ピラゾリルオキシ）ヘキシルエステル
６）１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（２，３−ジクロロフェニル）−３−メトキシカルボニルピリジン−５−カルボン酸６−（５−フェニル−３−ピラゾリルオキシ）ヘキシルエステル
本発明の一般式（１）で表されるジヒドロピリジン化合物は、公知の製剤技術によって錠剤、顆粒剤、散剤、硬カプセル剤、エマルジョン、軟カプセル剤、リピッドマイロスフェア、リポゾーム、もしくは坐剤などの任意の製剤形態をとることができ、経口投与法もしくは舌下投与法、坐剤などの非経口投与から使用目的に応じて投与することができる。本発明化合物を製剤化する場合には、投与形態に応じて主薬に賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、被覆剤、着色料、緩衝剤、付湿剤、ｐＨ調整剤、溶解補助剤、溶剤、海面活性剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、界面活性剤、保存剤、荷電リポゾーム担体、水溶性又は水分散剤の高分子化合物などから適宜選択して製剤構成成分として使用することができる。本発明の予防又は治療用製剤は、剤形に応じて混和、混合、混練、造粒、打錠成形、コーティング、溶解、乳化、高周波加熱、高圧蒸気加熱、滅菌処理、遠心分離、などの公知の慣用される製剤化方法により調製することができる。
具体的な製剤担体としては、でんぷん類、白糖、乳糖、結晶化セルロース、カルボキシメチルセルロース、Ｄ−マンニトール、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシメチルセルロース、無水ケイ酸、リン酸水素カルシウム、合成ケイ酸アルミニウムおよびメタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどの賦形剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび架橋ポリビニルピロリドンなどの崩壊剤、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、セルロースアセテートフタレート、メタアクリル酸コーポリマー、メタアクリル酸メチルコーポリマー、ポリエチレングリコール等の水溶性又は水分散性の高分子化合物、精製タルクおよびステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなどの滑沢剤、トリアタノールアミン、トリスアミノメタン、コレステロール、クエン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムなどの溶解補助剤、注射用水、エチルアルコール、プロピレングリゴール、ごま油、トウモロコシ油などの溶媒、レシチン（フォスファチジルコリン）、フォスファチジン酸、フォスファチジルグリセロール、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジルイノシトール、ポリオキシエチレンセチールエーテル、蔗糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ソルビタンモノオレエートおよびグリセリンモノテアレートなどの乳化剤、ウイテブゾールおよびカカオ脂などの基剤、Ｌ−システイン、グルタチオン、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリム、アスコルビン酸２−グルコシド、アスコルビン酸２，６−ジブチレート、アスコルビン酸リン酸２−リン酸エステルマグネシウム塩、アスコルビン酸リン酸２，６−ジパルミチン酸エステル、アスコルビン酸リン酸２，６−ジラウリル酸エステル、アスコルビン酸２−硫酸エステル、トコフェロール、フェルラ酸、フェルラ酸アルギニン塩、紫根エキス、アミノ安息香酸エチル、塩酸ジブカイン、塩酸ジフェンヒドラミン、セトリド、クロモグリク酸ナトリウム、塩酸セチリジン、医療用活性炭、酸化チタン、酸化鉄、酸化亜鉛、フラーレンなどのナノカーボン類、Ｌ−アルギニン、Ｌ−カルノシン、尿素などを挙げることができる。
本発明化合物の投与量は、投与経路、治療対象となる病態の種類と程度、患者の年齢と性別、体重、投与薬物に対する感受性、投与時期と投与間隔などによって異なるが、通常成人１日当たり約１ｐｇ〜４０ｍｇ、静脈内投与法においては、好ましくは約１ｐｇ〜２ｍｇである。皮下投与法においては、好ましくは約２ｐｇ〜４ｍｇある。経口投与法においては、好ましくは約０．１〜５０ｍｇである。坐剤の場合には、好ましくは約０．１〜２０ｍｇである。バイオアバイラビリティーの高い経口投与製剤に好適な薬剤組成物の例として、本発明化合物と前記高分子化合物とからなる易溶性固体分散体などを挙げることができる。
本発明者らは、前記一般式（１）で表される、エステル側鎖にピラゾール構造が結合したジヒドロピリジン化合物について、腎不全状態における薬物の効果を明らかにするために、腎再灌流モデルを用いて実験を行った結果、なかでも、後述の実施例に示すように１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−メトキシカルボニルピリジン−５−カルボン酸６−（５−フェニル−３−ピラゾリルオキシ）ヘキシルエステル（ＣＶ−１５９）化合物が、特に血圧に影響を殆ど与えない投与量において、腎虚血を機転とする腎臓障害に優れた抑制効果と利尿作用を併せ持ち、且つ、虚血下の腎臓内部で発生するラジカル種を生成阻害することにより、組織障害時における抗酸化能の低下を抑制するという作用において特に優れている。
【実施例】
【０００５】
次に、実施例によって本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
なお、薬理実験において、実験動物は、ＳＤ雄性ラットを、薬物非投与のＳｈａｍ群（ｎ＝４）、薬物非投与の虚血性急性腎不全モデル群（ｎ＝６）：ＡＲＦ（−）、薬物投与した虚血性急性腎不全モデル群（ｎ＝６）：ＡＲＦ（＋）の３群とした。
実施例１
〔薬理実験１〕虚血性急性腎不全モデルによる薬効評価系の作製：
１腎性再灌流モデルは、常法により作製した。即ち、体重２５０ｇ前後のＳＤ雄性ラットの右腎を摘出した。虚血再灌流障害は、腎門部にて血流と尿管を遮断し、４５分経過後に臓器血流の再開（再灌流）と尿流を再開させる方法を用いた。
実験動物は、尿検査用の尿を採取するために、麻酔から覚醒後に代謝ゲージに移して水分と食餌を自由摂取させた。薬物投与群は、上記の虚血性再灌流障害実験の開始１時間前にＣＶ−１５９を３０μｇ／ｋｇを皮下投与した。
（１）血圧測定：各動物群に対し、非観血式自動血圧計（（株）理研開発製）を用い、ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法により収縮期圧、拡張期圧および心拍数を、上記のＳｈａｍ群、虚血再灌流実験の開始実験前および虚血性急性腎不全モデル実験終了後の翌日に測定した。表１に示すように血圧には殆んど影響を与えなかった。
（２）尿量および尿検査：尿は、各群において蓄尿量の測定と潜血、蛋白を検査した後に蛋白定量、Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、Ｃａ、Ｐｉ（無機リン）、ＮＡＧ（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）、Ｃｒ（クレアチニン）、Ｃｃｒ（クレアチニンクリアランス）ＵＮ（尿素窒素）、ＵＡ（尿酸）を常法にて検査した。測定の結果、無処置群とＡＲＦ群間において差がみられた測定値について表１に示す。
（３）血液検査：薬理実験１において虚血性急性腎不全モデル実験の終了後直ちに腹部大動脈からヘパリン採血した。該血液を遠心分離し、得られた血漿を２分し、一方は、血漿中総蛋白量、Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、Ｃａ、Ｐｉ、Ｃｒ、ＵＮ、ＵＡを検査した。測定した結果、無処置群とＡＲＦ群間に差がみられた各測定値を表１に示す。
虚血性急性腎不全ラットにおける各種検査項目に対する薬物の評価結果を表１に示す。表中、Ｓｙｓは収縮期圧、Ｄｉａｓは拡張期圧、ＦＥＮａ（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｄｉｕｍ：尿濃縮能）を表す。本発明の化合物ＣＶ−１５９は、血圧に影響が殆んどない投与量において、腎臓障害の指標である血清Ｃｒ、血清ＵＮ、ＣｃｒおよびＦＥＮａの増悪を著明に改善した。
【表１】
2006107059.tif 000003
実施例２
Ｘ−ｂａｎｄ  ＥＳＲによる腎臓組織の抗酸化能の測定（抗ラジカル作用の評価）
実施例１における虚血再灌流実験を終了後にＥＳＲ測定用の血液を採取し、次いで２０〜３０ｍｌの冷生理食塩水で灌流、脱血した後に右腎を摘出し、左腎上極の一部を切除して秤量後に病理組織検査用の検体としてホルマリン液に保存した。前記左腎の残部は秤量後、液体窒素中にて凍結保存した。その後、１０倍量のホモジナイズ溶液（０．２５ｍｏｌ蔗糖を含む５０ｍｍＭｏｌリン酸緩衝液、ｐＨ７．４）中にてホモジナイズした後に遠心分離し、細胞質画分とミトコンドリア画分とに分けてラジカル計測試料として調製した。測定結果を表２（腎臓スパーオキサイド消去活性抑制率（％））及び表３（腎臓ハイドロキシルラジカル消去活性抑制率（％））に示す。
【表２】
2006107059.tif 000004
【表３】
2006107059.tif 000005
〔実験例２〕
３００ＭＨｚ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＥＳＲ装置（日本電子（株）製）による虚血性急性腎不全モデルラットの腎臓における抗酸化能の評価：
薬物非投与群と薬物投与群において、腎虚血再灌流実験における１時間後の左腎を中心とする抗酸化能をスピントラップ剤３−ｃａｒｂａｍｏｙｌ  ｐｒｏｘｙｌ（３ＣＰ）を用いてｉｎ  ｖｉｖｏ  ＥＳＲ法により評価した。即ち、体重２５０ｇ前後のＳＤ雄性ラットを用い、虚血性急性腎不全モデル（ＡＲＦ）を作製し、４５分間の虚血再灌流障害を加えた後、３ＣＰを静脈内投与して、左腎部における３ＣＰの減衰速度定数（ｋ：−／ｍｉｎ）についてＡＲＦ薬物非投与群を対照としてＡＲＦ薬物投与群間と比較した。薬物は、ＣＶ−１５９  ３０μｇ／Ｋｇを腎虚血再灌流実験を開始する１時間前に腹腔内投与した。測定結果を表４に示す。
【表４】
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上記の各ＥＳＲ測定の結果から本発明の化合物であるＣＶ−１５９は、抗ラジカル作用を有し、臓器障害の進展と増悪を防止する優れた効果が認められた。
実施例３
腎皮質内のＮＯ／酸素濃度の同時測定：
ＮＯおよび酸素の測定は、一酸化窒素測定装置（ＭＯＤＥＬ  ＮＯ−５０２：栄行科学（有）製）とＮＯ電極、酸素分圧測定装置（ＭＯＤＥＬ  ＰＯ２−１５０Ｄ）と酸素電極を使用した。即ち、各群の動物において背部に露出させた左腎の皮質内にＮＯ電極と酸素電極を刺入し、対極は切開した皮部内に装着して測定した。虚血再灌流障害を行わないｓｈａｍ群では、薬物非投与対照群と薬物投与群について前記と同様にＮＯ／酸素濃度を、偽手術時とその１６時間後に測定した。その結果を表５に示す。虚血再灌流実験群において、ＡＲＦ（−）とＡＲＦ（＋）について比較し、その測定値を表６に示す。虚血再灌流障害を実施した群は、それぞれ虚血実験前、腎虚血４５分経過後の血流再開時および血流再開直１６時間後の各時点において腎皮質内のＮＯ／酸素分圧の推移を測定した。ＮＯ／酸素分圧の測定結果を表５に例示する。表中、酸素分圧（ＰＯ２）の単位はｍｍＨｇにより表し、ＮＯは電流値ｐＡ（ピコアンペア）により表示した。
【表５】
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【表６】
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前記の腎再灌流実験を行わないＳｈａｍ群の測定例は、薬物投与により、血圧に殆んど影響することなく、組織酸素濃度が上昇した結果、ＮＯ濃度は薬物非投与群に比し低い値を示した。一方、再灌流実験群（ＡＲＦ）においての同様に、薬物投与群は、血圧の低下を殆んど来たすことなく、薬物物非投与は対照群に比し、虚血再開の１６時間後の酸素濃度の上昇が著明であり、ＮＯ濃度は低値であった。測定結果から対照群に比し、薬物投与群は、血圧の低下を殆んど来たすことなく腎臓組織における酸素濃度を著明に改善した。また、ＮＯは、組織に高濃度に存在する場合には組織障害を起こすことが指摘されているが、薬物投与群においては組織ＮＯ濃度が抑制された。
【産業上の利用可能性】
【０００６】
以上、詳細に説明したように、本発明に係る一般式（１）で表されるジヒドロピリジン化合物は、腎臓組織の変性障害に伴って発生する腎不全、腎炎などの腎臓疾患および透析合併症の治療と予防及び／又は腎移植時における虚血性再灌流障害の軽減予防に使用する新しい活性化合物として極めて有用である。
【国際調査報告】
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