(57)【要約】ヌクレアーゼ耐性、二本鎖形成能力および形成した二本鎖の安定性の３つの特性が優れたオリゴヌクレオチド類似体を製造可能にするヌクレオシド類似体、およびそのヌクレオシド類似体を含むオリゴヌクレオチド類似体の提供を目的とする。下記式（Ｉ）のヌクレオシド類似体またはその塩、および下記式（ＩＩ−１）のヌクレオシド類似体、式（ＩＩ−２）のヌクレオシド類似体、式（ＩＩ−３）のヌクレオシド類似体、式（ＩＩ−４）のヌクレオシド類似体および式（ＩＩ−５）のヌクレオシド類似体からなる群から選択される１以上を含むオリゴヌクレオチド類似体により、解決される。  前記式（Ｉ）中、Ｒ１は明細書中に定義のとおり。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩。
【化１】
2006027862.tif 000041
前記式（Ｉ）中、Ｒ１は、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、および下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり
【化２】
2006027862.tif 000042
Ｒ２は、Ｈまたは保護基であり、
Ｒ３は、Ｈまたは固相合成用活性化リン酸基である。
【請求項２】
Ｒ２が、Ｈ、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）または（９−フェニル）キサンテン−９−イルであり、Ｒ３が、Ｈまたは下記式（１０）で表される基である請求項１に記載のヌクレオシド類似体またはその塩。
【化３】
2006027862.tif 000043
【請求項３】
Ｒ１が前記式（１）で表される基であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体であって、下記式（ＩＩ−１）で表される前記ヌクレオシド類似体か、
Ｒ１が前記式（２）で表される基であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体であって、下記式（ＩＩ−２）で表される前記ヌクレオシド類似体か、
Ｒ１が前記式（２）で表される基であり、Ｒ２がＤＭＴｒであり、Ｒ３が前記式（１０）で表される基である前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体か、
Ｒ１が前記式（３）で表される基であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体であって、下記式（ＩＩ−３）で表される前記ヌクレオシド類似体および
Ｒ１が前記式（３−１）で表される基であり、Ｒ２がＤＭＴｒであり、Ｒ３が前記式（１０）で表される基である前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択される請求項１に記載のヌクレオシド類似体またはその塩。
【化４】
2006027862.tif 000044
【請求項４】
オリゴヌクレオチドを構成する１以上のヌクレオシドが、ヌクレオシド類似体でそれぞれ置き換えられているオリゴヌクレオチド類似体であって、
前記ヌクレオシド類似体が、請求項３に記載の式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、請求項３に記載の式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、請求項３に記載の式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、下記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および下記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかであるオリゴヌクレオチド類似体。
【化５】
2006027862.tif 000045
ただし、前記ヌクレオシド類似体が、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体または前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体であり、かつ前記オリゴヌクレオチドを構成するヌクレオシドの１のみが前記ヌクレオシド類似体で置き換えられている場合、その置き換え位置は、前記オリゴヌクレオチドの３’末端である。
【請求項５】
オリゴヌクレオチドを構成するヌクレオシドの全てが、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるヌクレオシド類似体でそれぞれ置き換えられている請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項６】
置き換えられる前記ヌクレオシドがチミジンであり、前記チミジンと置き換えられるヌクレオシド類似体が、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体であるか、
置き換えられる前記ヌクレオシドがウリジンであり、前記ウリジンと置き換えられるヌクレオシド類似体が、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体であるか、
置き換えられる前記ヌクレオシドがシチジンであり、前記シチジンと置き換えられるヌクレオシド類似体が、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体であるか、
置き換えられる前記ヌクレオシドがアデノシンであり、前記アデノシンと置き換えられるヌクレオシド類似体が、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体であるか、
置き換えられる前記ヌクレオシドがグアノシンであり、前記グアノシンと置き換えられるヌクレオシド類似体が、前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体であるかの、少なくとも１つの条件を満たす請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチド類似体が、二本鎖オリゴヌクレオチドである請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項８】
前記二本鎖オリゴヌクレオチド鎖の少なくとも一方の鎖の３’末端のダングリングエンド配列が、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択される１以上のヌクレオシド類似体を含む配列で置き換えられる請求項７に記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項９】
前記オリゴヌクレオチド類似体が、一本鎖オリゴヌクレオチドである請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項１０】
前記オリゴヌクレオチド類似体が、二本鎖形成能を有する請求項９に記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項１１】
前記オリゴヌクレオチド類似体が、ヌクレアーゼ耐性である請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項１２】
オリゴヌクレオチドを含む遺伝子発現抑制剤であって、前記オリゴヌクレオチドが、請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体である遺伝子発現抑制剤。
【請求項１３】
遺伝子発現に伴う疾患を治療するための医薬組成物であって、
前記医薬組成物が、請求項１２に記載の遺伝子発現抑制剤を含む医薬組成物。
【請求項１４】
請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体を含む検査キットであって、
前記オリゴヌクレオチド類似体が、検体中の遺伝子とハイブリッド形成することにより、前記遺伝子が検査される検査キット。
【請求項１５】
請求項１４に記載の検査キットであり、前記検査キットが、ＤＮＡチップであるキット。
【請求項１６】
オリゴヌクレオチドを用いて遺伝子発現を抑制する方法であって、前記オリゴヌクレオチドが、請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体である方法。
【請求項１７】
前記オリゴヌクレオチドの３’末端のヌクレオシドが、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかのヌクレオシド類似体で置き換えられている請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体の製造方法であって、
下記式（ＩＩＩ）で表される固相合成用ユニット化合物のＲ５を除去して下記式（ＩＶ）で表される固相合成用ユニット化合物を得、
【化６】
2006027862.tif 000046
前記式（ＩＶ）で表される固相合成用ユニット化合物の遊離の水酸基にヌクレオチドを伸長させ、その後、固相担体から切り出して前記オリゴヌクレオチド類似体を得る製造方法。
前記式中、Ｒ４は、それぞれ、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）で表される基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）で表される基、および下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
【化７】
2006027862.tif 000047
Ｒ５は、保護基であり、
Ａは、式−（ＣＨ２）ｎ−で表される基であり、前記式においてｎは１〜６の整数であり、
Ｍは、固相担体である。
【請求項１８】
前記オリゴヌクレオチドの３’末端以外の１以上のヌクレオシドが、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかのヌクレオシド類似体でそれぞれ置き換えられている請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体の製造方法であって、
（Ａ）下記式（Ｖ）で表される固相合成用ユニット化合物を固相担体上に伸長されたヌクレオチドと結合させ、
【化８】
2006027862.tif 000048
前記ヌクレオチド中の前記式（Ｖ）で表される固相合成用ユニット化合物中のＲ６を除去し、
（Ｂ）形成された遊離の水酸基にさらにヌクレオチドを伸長させ、
（Ｃ）前記（Ａ）工程を、前記ヌクレオシド類似体での置き換え数だけ繰り返し、
（Ｄ）その後、固相担体から切り出して前記オリゴヌクレオチド類似体を得る製造方法。
前記式中、Ｒ４は、それぞれ、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）で表される基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）で表される基、および下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
【化９】
2006027862.tif 000049
Ｒ６は、保護基であり、
Ｒ７は、固相合成用活性化リン酸基である。
【請求項１９】
前記オリゴヌクレオチドの３’末端のヌクレオシドと、それ以外の位置の１以上のヌクレオシドが、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかのヌクレオシド類似体でそれぞれ置き換えられている請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体の製造方法であって、
（ａ）下記式（ＩＩＩ）で表される固相合成用ユニット化合物のＲ５を除去して下記式（ＩＶ）で表される固相合成用ユニット化合物を得、
【化１０】
2006027862.tif 000050
（ｂ）前記式（ＩＶ）で表される固相合成用ユニット化合物の遊離の水酸基にヌクレオチドを伸長させ、
（ｃ）下記式（Ｖ）で表される固相合成用ユニット化合物を固相担体上に伸長されたヌクレオチドと結合させ、
【化１１】
2006027862.tif 000051
前記ヌクレオチド中の前記式（Ｖ）で表される固相合成用ユニット化合物中のＲ６を除去し，
（ｄ）形成された遊離の水酸基にさらにヌクレオチドを伸長させ、
（ｅ）前記（ｃ）工程を、前記オリゴヌクレオチドの３’末端以外の位置における前記ヌクレオシド類似体での置き換え数だけ繰り返し、
（ｆ）その後、固相担体から切り出して前記オリゴヌクレオチド類似体を得る製造方法。
前記式中、Ｒ４は、それぞれ、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）で表される基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）で表される基、および下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
【化１２】
2006027862.tif 000052
Ｒ５およびＲ６は、互いに独立して、保護基であり、
Ａは、式−（ＣＨ２）ｎ−で表される基であり、前記式においてｎは１〜６の整数であり、
Ｍは、固相担体であり、
Ｒ７は、固相合成用活性化リン酸基である。
【請求項２０】
請求項４に記載のオリゴヌクレオチド類似体製造のための、下記式（ＩＩＩ）
【化１３】
2006027862.tif 000053
であらわされる固相合成用ユニット化合物。
前記式中、Ｒ４は、それぞれ、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）で表される基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）で表される基、および下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
【化１４】
2006027862.tif 000054
Ｒ５は、保護基であり、
Ａは、式−（ＣＨ２）ｎ−で表される基であり、前記式においてｎは１〜６の整数であり、
Ｍは、固相担体である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、ヌクレオシド類似体、およびそれを含むオリゴヌクレオチド類似体に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  近年、遺伝情報そのものを治療の対象としてとらえるという方法論が普及しつつある。この方法論の一つに、オリゴヌクレオチドを用いたアンチセンス法がある。アンチセンス法とは、化学合成したオリゴヌクレオチド類似体（例えば、１５〜２０の塩基対から成る一本鎖ＤＮＡ）を細胞に加え、標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）とＤＮＡ等／ｍＲＮＡ二本鎖核酸を形成させることにより、標的遺伝子の発現を塩基配列特異的に抑制し、ｍＲＮＡからタンパク質への翻訳過程を阻害する方法である。アンチセンス法では、病因となるウイルスまたは遺伝子の塩基配列が既知の場合、アンチセンス分子を理論的に設計し、それを合成するのが可能であることから、これまで治癒が困難と考えられてきた様々なウイルスを原因とする疾患および遺伝子疾患に対する有効な治療方法の一つとして期待されている。【０００３】  また、ごく最近、オリゴヌクレオチドを用いた遺伝子発現抑制法として、ＲＮＡｉ（ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ、ＲＮＡ干渉）を利用した方法に、注目が集まっている。このＲＮＡｉとは、二本鎖ＲＮＡを細胞に導入することにより、同じ塩基配列を有する細胞の染色体由来のＲＮＡが分解され、切断される現象を指す。このＲＮＡｉの機構は、現在のところ、次のように考えられている。先ず、長鎖二本鎖ＲＮＡが、酵素（Ｄｉｃｅｒと呼ばれる）により３’−ＵＵ型のダングリングエンド構造を持つ２１塩基程度の長さの二本鎖ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ）と呼ばれる）に加水分解される。そのｓｉＲＮＡが、標的ｍＲＮＡとＲＮＡ／ｍＲＮＡ二本鎖核酸を形成し、この二本鎖核酸を認識する細胞内タンパク質（ＲＩＳＣ（ＲＮＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  Ｃｏｍｐｌｅｘ）と呼ばれる）と、この二本鎖核酸とが結合し、この結合体により、標的ｍＲＮＡが切断されるというものである。このＲＮＡｉを利用する方法によると、多くの場合、アンチセンス法と比較して１／１００程度の濃度のＲＮＡを用いて同等の効果が得られている。従って、ＲＮＡｉを利用する方法も、これまで治癒が困難と考えられてきた様々なウイルスを原因とする疾患および遺伝子疾患に対する有効な治療方法の一つとして期待が高まっている。【０００４】  アンチセンス法、ＲＮＡｉを利用する方法等、オリゴヌクレオチド類似体を用いる方法では、一旦細胞内に導入されたオリゴヌクレオチド類似体を、安定に存在させる必要があるが、細胞内外には核酸加水分解酵素（ヌクレアーゼ）が存在し、導入されたオリゴヌクレオチド類似体、特に天然型のオリゴヌクレオチドによく似た構造のオリゴヌクレオチド類似体は容易に分解されてしまうという問題があった。【０００５】  ヌクレアーゼ耐性の向上を目的として、種々のオリゴヌクレオチド類似体が開発されてきた。例えば、ホスホロチオエート型（リン酸ジエステル結合の１つの酸素原子を硫黄原子に置き換えたもの）のオリゴヌクレオチド類似体や、メチルホスホネート型（リン酸ジエステル結合をメチルホスホン酸エステル結合に置き換えたもの）のオリゴヌクレオチド類似体のようなものが知られている。しかし、これらのオリゴヌクレオチド類似体は、そのホスホロチオエート��よびメチルホスホネート中のリン酸原子が不斉中心になるため、オリゴヌクレオチド類似体の構造が天然型オリゴヌクレオチドと非常に異なってしまう。そのため、そのようなオリゴヌクレオチド類似体は、天然型オリゴヌクレオチドとの二本鎖形成能力が低下し、かつ形成した二本鎖の安定性も低下することが知られていた（例えば、非特許文献１参照）。【０００６】  天然型オリゴヌクレオチドとの二本鎖形成能力向上および形成した二本鎖の安定性向上を目的とする、種々のオリゴヌクレオチド類似体も開発されてきた。このようなオリゴヌクレオチド類似体としては、例えば、天然型オリゴヌクレオチドのヌクレオシドのリボースの２’水酸基を、アルコキシ基（例えばメトキシ基）やハロゲン原子（例えばフッ素原子）に置き換えたオリゴヌクレオチド類似体（例えば、非特許文献２参照）や、リボースの５員環にメチレン基を挿入して６員環に環拡大したオリゴヌクレオチド類似体（例えば、非特許文献３参照）等が知られている。これらのオリゴヌクレオチド類似体は、天然型オリゴヌクレオチドとの二本鎖形成能力の向上および形成した二本鎖の安定性の向上が確認されている。しかし、これらのオリゴヌクレオチド類似体は、天然型オリゴヌクレオチドと構造が類似しているため、ヌクレアーゼ耐性の向上は実現されていなかった。【０００７】  このように、優れたヌクレアーゼ耐性という特性と、優れた二本鎖形成能力および形成した二本鎖の優れた安定性という特性は、両立するのが困難であるという問題があった。しかし、ＤＮＡチップ、遺伝子診断薬等にオリゴヌクレオチド類似体を用いる場合、安定した診断結果を得るためにも、これらの特性が優れたオリゴヌクレオチド類似体の提供が望まれていた。
【非特許文献１】Ｊｉｎ  ｙａｎ  Ｔａｎｇ，Ｊａｍａｌ  Ｔｅｍｓａｍａｎｉ  ａｎｄ  Ｓｕｄｈｉｒ  Ａｇｒａｗａｌ，″Ｓｅｌｆ−ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｓ：ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ＨＩＶ  ａｃｔｉｖｉｔｙ″，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９３年、第２１巻、ｐ．２７２９．
【非特許文献２】Ａｎｄｒｅｗ  Ｍ．Ｋａｗａｓａｋｉ，Ｍａｒｔｉｎ  Ｄ．Ｃａｓｐｅｒ，Ｓｕｓａｎ  Ｍ．Ｆｒｅｉｅｒ，Ｅｌｅｎａ  Ａ．Ｌｅｓｎｉｋ，Ｍａｒｙａｎｎ  Ｃ．Ｚｏｕｎｅｓ，Ｌｅｎｄｅｌｌ  Ｌ．Ｃｕｍｍｉｎｓ，Ｃａｒｏｌｙｎ  Ｇｏｎｚａｌｅｚ  ａｎｄ  Ｐ．Ｄａｎ  Ｃｏｏｋ，″Ｕｎｉｆｏｒｍｌｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ２’−ｄｅｏｘｙ−２’−ｆｌｕｏｒｏ  ｐｈｏｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  ｎｕｃｌｅａｓｅ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈｌｙ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｆｏｒ  ＲＮＡ  ｔａｒｇｅｔｓ″，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３年、第３６巻、ｐ．８３１．
【非特許文献３】Ｃｈｒｉｓ  Ｈｅｎｄｒｉｘ，Ｈｅｌｍｕｔ  Ｒｏｓｅｍｙｅｒ，Ｂａｒｔ  Ｄｅ  Ｂｏｕｖｅｒｅ，Ａｒｔｈｕｒ  Ｖａｎ  Ａｅｒｓｃｈｏｔ，Ｆｒａｎｋ  Ｓｅｅｌａ  ａｎｄ  Ｐｉｅｔ  Ｈｅｒｄｅｗｉｊｉｎ，″１’，５’−Ａｎｈｙｄｒｏｈｅｘｉｔｏｌ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｔｒａｎｄ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｏｌｉｇｏｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＲＮａｓｅ  Ｈ  ａｎｄ  ＨＩＶ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ″，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ａ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ，１９９７年、第３巻、ｐ．１５１３．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】  そこで、本発明は、ヌクレアーゼ耐性、二本鎖形成能力および形成した二本鎖の安定性の３つの特性が優れたオリゴヌクレオチド類似体を製造可能にするヌクレオシド類似体、およびそのヌクレオシド類似体を含むオリゴヌクレオチド類似体の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】  本発明は、下記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩である。【００１０】
【化１５】
2006027862.tif 000002
【００１１】前記式（Ｉ）中、Ｒ１は、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、および下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、【００１２】
【化１６】
2006027862.tif 000003
【００１３】Ｒ２は、Ｈまたは保護基であり、
Ｒ３は、Ｈまたは固相合成用活性化リン酸基である。
【発明の効果】
【００１４】  本発明は、従来にはない化学構造を有するヌクレオシド類似体の製造に成功したことに基づき、完成したものである。本発明は、このヌクレオシド類似体により、ヌクレアーゼ耐性、二本鎖形成能力および形成した二本鎖の安定性の３つの特性が優れたオリゴヌクレオチド類似体を提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】  本発明において、「オリゴヌクレオチド」は、例えばヌクレオシドサブユニットのポリマーをいい、そのサブユニット数は特に限定されないが、例えば、３から１００個である。中でも、前記オリゴヌクレオチドがＤＮＡである場合には、それらのサブユニット数は、３〜１００個が好ましく、３〜３０個がより好ましく、ＲＮＡである場合には、３〜５０個が好ましく、３〜３０個がより好ましい。なお、本発明における「オリゴヌクレオチド類似体」は、そのヌクレオシドが、本発明のヌクレオシド類似体で置き換えられていること以外は、特に限定されない。例えば、前記オリゴヌクレオチド中、本発明のヌクレオシド類似体以外のヌクレオシドについては、当業者に公知な、糖部および塩基部分が置換または変換されたヌクレオシド類似体であってもよい。【００１６】  本発明において、Ｒ２について前記保護基としては、従来公知の１級アルコールの保護基を用いることができる。そのような保護基としては、例えば、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、（９−フェニル）キサンテン−９−イル［ピキシル（ｐｉｘｙｌ）］等が、挙げられる。【００１７】  また、Ｒ１について、官能基を保護する保護基は、核酸化学において公知な保護基から選択することができる。例えば、ベンゾイル（Ｂｚ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェノキシアセチル（Ｐａｃ）、アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン等が、そのような保護基として用いられうる。【００１８】  Ｒ１について、式（１）で表された基、式（２）で表された基および式（３）で表された基の官能基が保護基で保護された基としては、例えば、下記式（３−１）【００１９】
【化１７】
2006027862.tif 000004
【００２０】で表される基等が挙げられる。【００２１】  また、Ｒ３について、固相合成用活性化リン酸基としては、固相合成において従来公知のリン酸基を用いることができ、例えば、ホスホロアミダイト、ホスホナート、チオホスファイト等を形成するリン酸基が挙げられる。ホスホロアミダイトを形成する、固相合成用活性化リン酸基としては、例えば、下記式（１０）【００２２】
【化１８】
2006027862.tif 000005
【００２３】で表される基が挙げられる。【００２４】  本発明において、その塩とは、例えば無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩等などが挙げられる。無機塩基との塩の例としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；ならびにアルミニウム塩、アンモニウム塩などが挙げられる。有機塩基との塩の例としては、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩が挙げられる。無機酸との塩の例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などとの塩が挙げられる。有機酸との塩の例としては、例えばギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの塩が挙げられる。本発明において、その塩とは、薬理学的に許容される塩が好ましい。【００２５】  本発明の式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩は、Ｒ１が、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、および下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、Ｒ２がＨ、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）または（９−フェニル）キサンテン−９−イル［ピキシル（ｐｉｘｙｌ）］であり、Ｒ３がＨまたは下記式（１０）【００２６】
【化１９】
2006027862.tif 000006
【００２７】で表される基であるのが好ましい。【００２８】  本発明の式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩は、前記式（Ｉ）中、Ｒ１が、下記式（１）で表される基、下記式（２）で表される基、下記式（３）で表される基、および下記式（３−１）で表される基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
Ｒ２が、Ｈまたは４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）であり、
Ｒ３が、Ｈまたは下記式（１０）で表される基であるのが、より好ましい。
【化２０】
2006027862.tif 000007
【００２９】  本発明の式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩としては、下記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、下記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、下記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、Ｒ１が前記式（２）で表される基であり、Ｒ２がＤＭＴｒであり、Ｒ３が前記式（１０）で表される基である前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、Ｒ１が前記式（３−１）で表される基であり、Ｒ２がＤＭＴｒであり、Ｒ３が前記式（１０）で表される基である前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体またはそれらの塩が、さらに好ましい。なお、下記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体は、Ｒ１が前記式（１）で表される基であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体である。また、下記式（ＩＩ−２）で表わされるヌクレオシド類似体は、Ｒ１が前記式（２）で表される基であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体である。また、下記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体は、Ｒ１が前記式（３）で表される基であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体である。【００３０】
【化２１】
2006027862.tif 000008
【００３１】  なお、本発明のヌクレオシド類似体またはその塩は、本発明のオリゴヌクレオチド製造用に限定されず、他の用途にも適用可能である。【００３２】  本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、オリゴヌクレオチドを構成する１以上のヌクレオシドが、ヌクレオシド類似体でそれぞれ置き換えられているオリゴヌクレオチド類似体であって、前記ヌクレオシド類似体が、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体および前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、ならびに下記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および下記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかであるオリゴヌクレオチド類似体である。【００３３】
【化２２】
2006027862.tif 000009
【００３４】  ただし、前記オリゴヌクレオチド類似体が、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体または前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体であり、かつ前記オリゴヌクレオチドを構成するヌクレオシドの１のみが前記ヌクレオシド類似体で置き換えられている場合、その置き換え位置は、前記オリゴヌクレオチドの３’末端である。【００３５】  本発明のオリゴヌクレオチド類似体において、オリゴヌクレオチドを構成するヌクレオシドの全てが、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるヌクレオシド類似体でそれぞれ置き換えられているのが好ましい。【００３６】  本発明のオリゴヌクレオチド類似体において、置き換えられる前記ヌクレオシドがチミジンであるとき、前記チミジンと置き換えられるヌクレオシド類似体は、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体であるのが好ましい。【００３７】  本発明のオリゴヌクレオチド類似体において、置き換えられる前記ヌクレオシドがウリジンであるとき、前記ウリジンと置き換えられるヌクレオシド類似体は、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体であるのが好ましい。【００３８】  本発明のオリゴヌクレオチド類似体において、置き換えられる前記ヌクレオシドがシチジンであるとき、前記シチジンと置き換えられるヌクレオシド類似体は、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体であるのが好ましい。【００３９】  本発明のオリゴヌクレオチド類似体において、置き換えられる前記ヌクレオシドがアデノシンであるとき、前記アデノシンと置き換えられるヌクレオシド類似体は、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体であるのが好ましい。【００４０】  本発明のオリゴヌクレオチド類似体において、置き換えられる前記ヌクレオシドがグアノシンであるとき、前記グアノシンと置き換えられるヌクレオシド類似体は、前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体であるのが好ましい。【００４１】  本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、一本鎖オリゴヌクレオチド、二本鎖オリゴヌクレオチド等であってもよい。オリゴヌクレオチド類似体が、二本鎖である場合、前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一方または両方の一本鎖オリゴヌクレオチドの３’末端のヌクレオシドが、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかのヌクレオシド類似体に置き換えられているのが好ましい。前記二本鎖オリゴヌクレオチドの両方の一本鎖オリゴヌクレオチドの３’末端のヌクレオシドが、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表さ��るヌクレオシド類似体および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかのヌクレオシド類似体に置き換えられている場合、双方の置き換えられたヌクレオシド類似体は、同一であっても、相違してもよい。【００４２】  前述のようにオリゴヌクレオチド類似体が二本鎖である場合、前記二本鎖オリゴヌクレオチド鎖の少なくとも一方の鎖の３’末端のダングリングエンド配列は、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択される１以上のヌクレオシド類似体を含む配列、好ましくは前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体および前記式（ＩＩ−１）表されるヌクレオシド類似体の少なくとも一方を含む配列、より好ましくは式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体または式（ＩＩ−１）表されるヌクレオシド類似体を含む配列で置き換えられるのが好ましい。このように置き換えられたダングリングエンド配列を有すると、オリゴヌクレオチド類似体の二本鎖のスタッキングが向上するので、好ましい。このような置き換えられたダングリングエンド配列としては、例えば、式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体を２つ有する配列などを用いることができる。【００４３】  前記オリゴヌクレオチド類似体が二本鎖である場合、ＲＮＡｉ（ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）を引き起こすオリゴヌクレオチド類似体であり、前記オリゴヌクレオチド類似体が、エンドヌクレアーゼ等をコードするｍＲＮＡの一部と同じ塩基配列を有するオリゴヌクレオチド類似体が好ましい。このようなオリゴヌクレオチド類似体は、ＲＮＡｉ研究等に有用だからである。前記エンドヌクレアーゼとしては、例えば、ＲＮａｓｅＬ等が挙げられる。【００４４】  前記オリゴヌクレオチド類似体が二本鎖である場合、前記類似体オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ）であり、前記ｍＲＮＡの一部が、スタートコドンから７５塩基以上上流の、最初のＡＡ配列に続く１９塩基配列であって、前記ｍＲＮＡの一部が、前記ｍＲＮＡに対して特異的であり、前記オリゴヌクレオチド類似体が、前記１９塩基配列のセンス鎖とアンチセンス鎖との組み合わせであるのが好ましい。このようなセンス鎖は、例えば、以下のようにして得ることができる。まず、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）、ＥＭＢＬ−ＥＢＩ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ−Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）等の公知遺伝子データベースを用いて、例えばエキソヌクレアーゼのｍＲＮＡ配列を取得する。その遺伝子配列中、スタートコドンから７５塩基以上下流の、最初のＡＡ配列を見つける。そのＡＡ配列に続く１９塩基配列、合計２１塩基配列が、再度、公知の遺伝子データベースを用いて、目的とする遺伝子に対して特異的であることを確認する��なお、この１９塩基配列は、ＧＣ含有量が５０％前後であることも確認する。この２つを確認して、得られた１９塩基配列が、前記のようなセンス鎖である。このようなセンス鎖としては、例えばヒトＲＮａｓｅＬ遺伝子の開始コドンから９４〜１１２番目の塩基配列である後記する配列番号１１が、挙げられる。【００４５】  オリゴヌクレオチド類似体が一本鎖である場合、本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、二本鎖形成能を有するのが好ましい。本発明のオリゴヌクレオチド類似体が、天然型オリゴヌクレオチドと二本鎖形成能を有すれば、アンチセンス、遺伝子検出等のため用いることができるからである。【００４６】  本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、ヌクレアーゼ耐性であるのが好ましい。本発明のオリゴヌクレオチド類似体が、細胞内に取り込まれた際、ヌクレアーゼで分解されるのを防ぐことができ、その結果、オリゴヌクレオチド類似体の細胞内での活性を、持続させることが可能だからである。【００４７】  本発明の遺伝子発現抑制剤は、本発明のオリゴヌクレオチド類似体を含む。このような遺伝子発現抑制剤は、オリゴヌクレオチド類似体が、例えば、ｓｉＲＮＡやアンチセンスとして作用し、標的遺伝子のｍＲＮＡを切断したり、標的遺伝子のｍＲＮＡと二本鎖を形成等して、その結果、遺伝子発現を抑制することができる。【００４８】  本発明の医薬組成物は、遺伝子発現に伴う疾患を治療するためであり、前記遺伝子発現抑制剤を含むものである。遺伝子発現に伴う疾患、例えば、あるタンパク質が発現されることにより疾患が引き起こされる場合、この医薬組成物は、その遺伝子発現を抑制し、その遺伝子発現に伴う疾患を治療するのに用いることが可能である。【００４９】  本発明の検査キットは、本発明のオリゴヌクレオチド類似体を含み、前記オリゴヌクレオチド類似体が、検体中の遺伝子とハイブリッド形成することにより、前記遺伝子が検査されるキットである。このようなキットとしては、例えば、ＤＮＡチップ、ＤＮＡマイクロアレイ等が挙げられる。このキットに含まれるのものには、本発明のオリゴヌクレオチド類似体の他に、ウエルとオリゴヌクレオチド類似体等とが固定されたプレート、ファイバー、バイオチップ等の固定化担体等が挙げられる。このようなキットには、前記オリゴヌクレオチド類似体等のほかに、例えば、薬物、反応して発色する発色試薬、検出を容易にする検出試薬等を含んでもよい。【００５０】  ＤＮＡチップとしては、一般に、ガラス基板上に既知遺伝子配列を用いた本発明のオリゴヌクレオチド類似体を含む溶液をスポットして固定化したものや、ガラス基板上で本発明のオリゴヌクレオチド類似体を合成することによって固定化したもの等がある。前記ＤＮＡチップは、例えば、検体中の遺伝子を、前記オリゴヌクレオチド類似体を固定化した分析部にアプライし、前記遺伝子と基板上のオリゴヌクレオチド類似体とのハイブリッド形成を、例えば、蛍光色素等により検出することによって、目的遺伝子の発現の有無を検出できる。このようなＤＮＡチップによれば、例えば、少量の試料でも有効に分析が可能であり、また、多種のＤＮＡプローブを一つの基板に固定化できるため、一つのＤＮＡチップにおいて同一検体に��き、多項目の分析を行うことができる。【００５１】  本発明の遺伝子発現抑制方法は、オリゴヌクレオチド類似体を用いて、遺伝子の発現を抑制する方法である。この方法では、オリゴヌクレオチド類似体が、例えば、ｓｉＲＮＡやアンチセンスとして作用し、標的遺伝子のｍＲＮＡを切断したり、標的遺伝子のｍＲＮＡと二本鎖を形成等して、その結果、遺伝子発現を抑制することができる。【００５２】  次に、本発明のオリゴヌクレオチド類似体を製造するための製造方法について、例を挙げて説明する。このような製造方法により、従来にはない、本発明のオリゴヌクレオチド類似体の製造が可能になった。【００５３】  まず、オリゴヌクレオチドの３’末端のヌクレオシドが、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかのヌクレオシド類似体で置き換えられているオリゴヌクレオチド類似体の製造方法の一例を説明する。【００５４】  その製造方法は、例えば、下記式（ＩＩＩ）で表される固相合成用ユニット化合物のＲ５を除去して下記式（ＩＶ）で表される固相合成用ユニット化合物を得、【００５５】
【化２３】
2006027862.tif 000010
【００５６】  前記式（ＩＶ）で表される固相合成用ユニット化合物の遊離の水酸基にヌクレオチドを伸長させ、その後、固相担体から切り出して前記オリゴヌクレオチド類似体を得る工程を含む。【００５７】  前記式中、Ｒ４は、それぞれ、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）で表される基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）で表される基、および下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、【００５８】
【化２４】
2006027862.tif 000011
【００５９】Ｒ５は、保護基であり、
Ａは、式−（ＣＨ２）ｎ−で表される基であり、前記式においてｎは１〜６の整数であり、
Ｍは、固相担体である。【００６０】  また、前記オリゴヌクレオチドの３’末端以外の１以上のヌクレオシドが、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかのヌクレオシド類似体でそれぞれ置き換えられているオリゴヌクレオチド類似体の製造方法の一例を説明する。【００６１】  前記製造方法は、
（Ａ）下記式（Ｖ）で表される固相合成用ユニット化合物を固相担体上に伸長されたヌクレオチドと結合させ、【００６２】
【化２５】
2006027862.tif 000012
【００６３】前記ヌクレオチド中の前記式（Ｖ）で表される固相合成用ユニット化合物中のＲ６を除去し、
（Ｂ）形成された遊離の水酸基にさらにヌクレオチドを伸長させ、
（Ｃ）前記（Ａ）工程を、前記ヌクレオシド類似体での置き換え数だけ繰り返し、
（Ｄ）その後、固相担体から切り出して前記オリゴヌクレオチド類似体を得る工程を含む。【００６４】  前記式中、Ｒ４は、それぞれ、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）で表される基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）で表される基、および下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、【００６５】
【化２６】
2006027862.tif 000013
【００６６】Ｒ６は、保護基であり、
Ｒ７は、固相合成用活性化リン酸基である。【００６７】  なお、前記式（Ｖ）で表される固相合成用ユニット化合物は、公知文献を参考に自家製造してもよいし、後記する式（ＩＩ−７）で表されるヌクレオシド類似体の製造方法および式（ＩＩ−８）で表されるヌクレオシド類似体の製造方法を参考に自家製造してもよい。式（ＩＩ−７）に示すヌクレオシド類似体は、Ｒ４が前記式（２）で表される基であり、Ｒ６がＲ１１であり、Ｒ７がＲ１２である前記式（Ｖ）で表されるヌクレオシド類似体に対応する。また、式（ＩＩ−８）で表されるヌクレオシド類似体は、Ｒ４が式（３）で表される基の官能基が保護基で保護された基であり、Ｒ６がＲ１１であり、Ｒ７がＲ１２である前記式（Ｖ）で表されるヌクレオシド類似体に対応する。【００６８】  また、前記オリゴヌクレオチドの３’末端のヌクレオシドと、それ以外の位置の１以上のヌクレオシドが、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかでそれぞれ置き換えられているオリゴヌクレオチド類似体の製造方法の一例を説明する。【００６９】  前記製造方法は、例えば、（ａ）下記式（ＩＩＩ）で表される固相合成用ユニット化合物のＲ５を除去して下記式（ＩＶ）で表される固相合成用ユニット化合物を得、【００７０】
【化２７】
2006027862.tif 000014
【００７１】（ｂ）前記式（ＩＶ）で表される固相合成用ユニット化合物の遊離の水酸基にヌクレオチドを伸長させ、
（ｃ）下記式（Ｖ）で表される固相合成用ユニット化合物を固相担体上に伸長されたヌクレオチドと結合させ、【００７２】
【化２８】
2006027862.tif 000015
【００７３】前記ヌクレオチド中の前記式（Ｖ）で表される固相合成用ユニット化合物中のＲ６を除去し，
（ｄ）形成された遊離の水酸基にさらにヌクレオチドを伸長させ、
（ｅ）前記（ｃ）工程を、前記オリゴヌクレオチドの３’末端以外の位置における前記ヌクレオシド類似体での置き換え数だけ繰り返し、
（ｆ）その後、固相担体から切り出して前記オリゴヌクレオチド類似体を得る工程を含む。【００７４】  前記式中、Ｒ４は、それぞれ、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）で表される基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）で表される基、および下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、【００７５】
【化２９】
2006027862.tif 000016
【００７６】Ｒ５およびＲ６は、互いに独立して、保護基であり、
Ａは、式−（ＣＨ２）ｎ−で表される基であり、前記式においてｎは１〜６の整数であり、
Ｍは、固相担体であり、
Ｒ７は、固相合成用活性化リン酸基である。【００７７】  前記固相担体とは、固相担体でＤＮＡ、ＲＮＡ等を合成するのに適した固相担体であれば限定されず、例えば、ＣＰＧ（コントロール細孔ガラス）、ＨＣＰ（Ｈｉｇｈｌｙ  ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ  ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ）等である。【００７８】  Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１４について前記保護基としては、従来公知の１級アルコ−ルの保護基を用いることができる。そのような保護基としては、例えば、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、（９−フェニル）キサンテン−９−イル［ピキシル（ｐｉｘｙｌ）］等が、挙げられる。【００７９】  また、Ｒ４について、官能基が保護されている保護基は、核酸化学において公知な保護基から選択される。例えば、ベンゾイル（Ｂｚ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェノキシアセチル（Ｐａｃ）、アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン等が、そのような保護基として用いられうる。【００８０】  Ｒ４について、式（１）で表された基の官能基が保護基で保護された基、式（２）で表された基の官能基が保護基で保護された基、式（３）で表された基の官能基が保護基で保護された基、式（４）で表された基の官能基が保護基で保護された基および（５）で表された基の官能基が保護基で保護された基としては、例えば、下記式（３−１）【００８１】
【化３０】
2006027862.tif 000017
【００８２】で表される基等が挙げられる。【００８３】  また、後記するＲ１３について保護基とは、従来公知の１級アミノ基の保護基を用いることができる。そのような保護基としては、例えば、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、フェノキシアセチル（Ｐａｃ）等が、用いられうる。【００８４】  Ｒ８および後記するＲ１５について前記低級アルキル基とは、直鎖状または分岐状のアルキル基であり、例えば１〜６の炭素原子を含むものである。前記低級アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル２−エチルブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ｎ−ヘキシル等が挙げられる。【００８５】  後記するＲ１５についてアリール基とは、芳香族炭化水素残基であり、例えば、６〜３０の炭素原子を含むものである。前記アリール基の例としては、単環式アリール基、例えば、フェニル等および、縮合多環式アリール基、例えば、ナフチル、インデニル、フルオレニル等が挙げられる。【００８６】  後記するＲ１５について、低級アルキルで置換されていてもよいアリール基としては、例えば、前記低級アルキルの１〜５で置換されているアリール基が挙げられる。その具体例としては、例えば、トリイソプロピルフェニル等である。【００８７】  前記および後記するＸ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ６について、前記ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等である。【００８８】  Ｒ７および後記するＲ１２について、固相合成用活性化リン酸基としては、固相合成において従来公知のリン酸基を用いることができ、例えば、ホスホロアミダイト、ホスホナート、チオホスファイト等を形成するリン酸基が挙げられる。ホスホロアミダイトを形成する、固相合成用活性化リン酸基としては、例えば、下記式（１０）【００８９】
【化３１】
2006027862.tif 000018
【００９０】で表される基が挙げられる。【００９１】  前記固相合成用ユニット化合物の遊離の水酸基にヌクレオチドを伸長させるには、オリゴヌクレオチド合成分野で従来公知の技術を用いて、オリゴヌクレオチド類似体の配列に従い、ヌクレオシドを順次カップリングさせて行うことができる。【００９２】  なお、ヌクレオシド、カップリング試薬、脱保護試薬、洗浄試薬等は、通常核酸固相合成に用いられるものを用いる。得られた固相担体上のオリゴヌクレオチド類似体は、固相担体から切り出して、粗オリゴヌクレオチド類似体を得ることができる。オリゴヌクレオチド側鎖の脱保護は、必要であれば、固相担体の切り出しの前、同時および／または後に行ってもよい。切り出しに用いる試薬は、固相担体およびリンカー（固相担体とオリゴヌクレオチド類似体を接続する部分）構造等に応じて、従来公知の試薬から、適宜選択することができる。この粗オリゴヌクレオチド類似体は、必要であれば、ＨＰＬＣ等で精製してもよい。【００９３】  次に、オリゴヌクレオチド類似体が二本鎖である場合の製造について例を挙げて説明する。例えば前記のような方法に従い、一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体をまず製造する。そのオリゴヌクレオチド類似体と相補的な配列を有する、一本鎖の天然オリゴヌクレオチドも別途、従来公知の方法に従い、製造する。次いで、得られた一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体をアニーリング用緩衝液（例えば、１００ｍＭのＫＯＡｃ水溶液、２ｍＭのＭｇＯＡｃ溶液、および３０ｍＭのＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ（ｐＨ７．４）を含む緩衝液）中に溶解させたものと、一本鎖の天然オリゴヌクレオチドをアニーリング用緩衝液中に溶解させたものとを、例えば混合し、９５℃で５分間処理し、その後、徐々に２５℃まで冷却させて、二本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を得ることができる。この二本鎖のオリゴヌクレオチド類似体は、必要に応じて、フェノール／クロロホルム抽出、エタノール沈殿等をさらに行って、単離精製することができる。【００９４】  前記製造方法で用いる固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ）は、例えば、以下のような方法で製造することができ、これを、スキーム１を参照しながら説明する。例えば、式（ＶＩ）で表されるベンゼン誘導体と、式（ＶＩＩ）で表される無水物とを、任意に塩基（例えば、ピリジン、トリエチルアミン等）、触媒（例えば４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）等）等の存在下に縮合させ、式（ＶＩＩＩ）で表されるベンゼン誘導体を得ることができる。式（ＶＩ）で表されるベンゼン誘導体は、公知文献を参考に自家製造してもよい。または、式（ＶＩ）で表されるベンゼン誘導体は、後記する式（ＩＩ−７）で表されるヌクレオシド類似体の製造方法および式（ＩＩ−８）で表されるヌクレオシド類似体の製造方法を参考に、自家製造してもよい。【００９５】  次に、例えば、前記式（ＶＩＩＩ）で表されるベンゼン誘導体と、式（ＩＸ）で表されるアミノ基を有する固相担体とを、カップリング試薬（例えば、ＷＳＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド・塩酸塩））存在下に縮合させ、ユニット化合物（ＩＩＩ）を得ることができる。【００９６】
【化３２】
2006027862.tif 000019
【００９７】前記式（ＩＩＩ）中、Ｒ４は、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）で表される基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）で表される基、および下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり【００９８】
【化３３】
2006027862.tif 000020
【００９９】Ｒ５は、保護基であり、
Ａは、式−（ＣＨ２）ｎ−で表される基であり、前記式においてｎは１〜６の整数であり、
Ｍは、固相担体である。【０１００】  前記固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ）：
【化３４】
2006027862.tif 000021
は、
前記式中、Ｒ４は、それぞれ、下記式（１）で表される基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）で表される基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）で表される基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）で表される基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）で表される基、および下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
【化３５】
2006027862.tif 000022
Ｒ５は、保護基であり、
Ａは、式−（ＣＨ２）ｎ−で表される基であり、前記式においてｎは１〜６の整数であり、
Ｍは、固相担体である化合物である。【０１０１】  前記固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ）としては、
Ｒ４が、それぞれ、下記式（１）で表される基、下記式（２）で表される基、下記式（３）で表される基、下記式（３−１）で表される基、下記式（４）で表される基、下記式（４−１）で表される基、下記式（５）で表される基、および下記式（５−１）で表される基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
【化３６】
2006027862.tif 000023
Ｒ５が、ＤＭＴｒであり、
Ａが、式−（ＣＨ２）２−で表される基であり、
Ｍが、固相担体である化合物が好ましい。【０１０２】  つぎに、本発明のヌクレオシド類似体の製造例について説明する。本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、前記製造方法に用いられる、これらのヌクレオシド類似体製造に成功したため、製造が可能になったものである。【０１０３】  まず、下記式（ＩＩ−２）、（ＩＩ−６）および（ＩＩ−７）で表されるヌクレオシド類似体の製造例について、スキーム２を参照しながら説明する。例えば、式（Ｘ）で表されるα、β−不飽和ケトン誘導体と、ＡｇＯＣＮとを反応させ、その後、式（ＸＩ）で表されるアニリン誘導体とを縮合させて、式（ＸＩＩ）で表されるアニリン誘導体を得ることができる。つぎに、この式（ＸＩＩ）で表されるアニリン誘導体を、アルカリ（例えば、水酸化ナトリウム等）で処理して、式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩を得ることができる。式（Ｘ）のα、β−不飽和ケトン誘導体および式（ＸＩ）のアニリン誘導体は、市販で入手してもよいし、公知文献を利用して自家製造してもよい。【０１０４】  つぎに、例えば、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体と、式（ＸＩＩＩ）で表される化合物とを、任意に塩基（例えば、ピリジン、トリエチルアミン等）等の存在下に縮合させ、式（ＩＩ−６）で表されるヌクレオシド類似体を得ることができる。【０１０５】  さらに、例えば、前記式（ＩＩ−６）で表されるヌクレオシド類似体と、式（ＸＩＶ）で表される化合物とを、任意に塩基（例えば、ジイソプロピルエチレンアミン等）等の存在下に縮合させ、式（ＩＩ−７）で表されるヌクレオシド類似体を得ることができる。式（ＸＩＩＩ）および（ＸＩＶ）で表される化合物は、市販で入手してもよいし、公知文献を利用して自家製造してもよい。【０１０６】
【化３７】
2006027862.tif 000024
【０１０７】  前記式中、Ｒ８は、低級アルキル基であり、
Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、互いに独立して、保護基であり、
Ｒ１２は、固相合成用活性化リン酸基であり、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、ハロゲン原子である。【０１０８】  つぎに、下記式（ＩＩ−８）で表される別のヌクレオシド類似体の製造例について、スキーム３を参照しながら説明する。例えば、式（ＩＩ−６）で表されるヌクレオシド類似体と、式（ＸＶ）で表される化合物とを縮合させ、式（ＸＶＩ）で表される化合物を得ることができる。この式（ＸＶＩ）で表される化合物と、式（ＸＶＩＩ）で表される化合物とを、任意に塩基（例えば、ピリジン、トリエチルアミン等）、触媒（例えば４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）等）等の存在下に縮合させ、次いで、ＮＨ４ＯＨと反応させて、式（ＸＶＩＩＩ）で表される化合物を得ることができる。そして、式（ＸＶＩＩＩ）で表される化合物と、式（ＸＩＸ）で表される化合物とを、任意に塩基（例えば、ピリジン、トリエチルアミン等）、等の存在下に縮合させ、次いで、Ｒ１４を脱保護し、その後、式（ＸＩＶ）で表される化合物と、任意に塩基（例えば、ジイソプロピルエチルアミン等）等の存在下に縮合させて、式（ＩＩ−８）で表されるヌクレオシド類似体を得ることができる。Ｒ１４の脱保護は、基Ｒ１４の種類に応じた条件で行うことができる。例えば、基Ｒ１４がｔ−ブチルジメチルシリル基である場合、脱保護の条件としては、テトラブチルアンモニウムフルオライド（ＴＢＡＦ）を用いる。式（ＸＶ）、（ＸＶＩＩ）、（ＸＩＸ）および（ＸＩＶ）で表される化合物は、市販で入手してもよいし、公知文献を利用して自家製造してもよい。【０１０９】
【化３８】
2006027862.tif 000025
【０１１０】  前記式中、Ｒ１１、Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立して、保護基であり、
Ｒ１２は、固相合成用活性化リン酸基であり、
Ｒ１５は、低級アルキル基または低級アルキルで置換されていてもよいアリール基であり、
Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ６は、互いに独立して、ハロゲン原子である。【０１１１】  なお、前記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、前記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、および前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体は、前記製造方法と同様にして、製造することができる。例えば、前記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体は、前記式（ＸＶＩＩＩ）で表される化合物のＲ１１およびＲ１４を除去することにより、得ることができる。これらの除去は、Ｒ１１およびＲ１４の構造に応じ、従来公知の条件を用いて行うことができる。【０１１２】  なお、スキーム１〜３の各工程において、必要であれば、各官能基に保護基を導入したり、保護基を脱保護したり、保護基を変更してもよい。なお、官能基の種類に応じた保護基の選択、保護基の導入および保護基の除去は、当該分野で公知の方法に従い、行うことができ、例えば、「有機合成における保護基（″Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ″），Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅら著、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．出版」等を参照することができる。
【実施例】
【０１１３】  本明細書の記載において、以下の略語を使用する。
亜リン酸化試薬：２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト
Ａｒ：アルゴン
ＢｚＣｌ：ベンゾイルクロライド（Ｂｅｎｚｏｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）
ＣＰＧ：コントロール細孔ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｐｏｒｅ  ｇｌａｓｓ）
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（Ｎ，Ｎ−Ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン（４−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）
ＤＭＴｒＣｌ：４，４’−ジメトキシトリチルクロライド（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ）
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）
ＦＡＢ：高速原子衝撃（ｆａｓｔ  ａｔｏｍ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）
ＨＲＭＳ：高分解能質量分析（ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）
ｍＲＮＡ：メッセンジャー  リボ核酸（ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）
ＰＡＧＥ：ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ  ｇｅｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）
ＴＢＡＦ：トリブチルアンモニウムフルオライド（ｔｒｉｂｕｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｆｌｕｏｒｉｄｅ）
ＴＢＤＭＳＣｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライド（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ）
ＴＥＡ：トリエチルアミン（Ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）
ＴＥＡＡ：酢酸トリエチルアンモニウム塩（Ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｍｏｉｕｍ  Ａｃｅｔａｔｅ）
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）
ＴＰＳＣｌ：２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロライド（２，４，６−Ｔｒｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｂｅｎｚｅｎｓｕｌｆｏｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）
ＷＳＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド・塩酸塩（１−Ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）−ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ，ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）
ＣＰＧ上の化合物の活性は、以下のようにして算出した。【０１１４】  乾燥させたＣＰＧ６ｍｇをガラスフィルターにのせ、そこへＨＣｌＯ４およびエタノールの混合物（ＨＣｌＯ４：ＥｔＯＨ＝３：２）を流し込んだ。得られたろ液の吸光度（波長４９８ｎｍ（ＤＭＴｒ基の吸収波長））を測定し、その値を以下の式に代入して算出した。【０１１５】
【数１】
2006027862.tif 000026
【０１１６】  前記式中、Ａｂｓ．は、波長４９８ｎｍにおけるＣＰＧの吸光度であり、
Ｖｏｌ．は、測定したろ液の容量であり、
ｗｅｉｇｈｔは、測定したＣＰＧの重量である。【０１１７】  （参考例１）
Ｎ６−ベンゾイル−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−アデニンの製造
（１）１−アミノ−３，５−ビス−ヒドロキシメチルベンゼン（１−ａｍｉｎｏ−３，５−ｂｉｓ−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ）の製造
アルゴン雰囲気下、５−アミノイソフタル酸ジメチル（２．００ｇ，９．５８ｍｍｏｌ）に無水ＴＨＦ（４８ｍｌ）を加え、そこへさらに水素化ホウ素リチウム（１．１３ｇ，５１．８０ｍｍｏｌ，５．４ｅｑ）を加えた。その反応混合物を２０時間撹拌した後、水浴中でその反応混合物へ酢酸を数滴加えて中性にし、反応を停止させた。数分間撹拌した後、その反応混合物から析出した多量の結晶を、ろ取した。その結晶を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１〜酢酸エチルのみ）で精製して白色固体の標題化合物（１．３５ｇ，８．８２ｍｍｏｌ，９２％）を得た。【０１１８】  ｍｐ  ９４．２−９８．３℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：４．３１（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，ＣＨ２），４．９３（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，ＮＨ２およびＯＨ），６．３８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２  ａｎｄ  Ｈ−４およびＨ−６）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１４８．２５，１４２．８２，１１２．４３，１１０．６０，６３．２８．
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：１５３（Ｍ＋），１３４，１２２，１０６，９４．
ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ８Ｈ１１ＮＯ２  １５３．０７９０  Ｆｏｕｎｄ  １５３．０７９７．
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ８Ｈ１１ＮＯ２：Ｃ，６２．７３；Ｈ，７．２４；Ｎ，９．１４．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６２．７３；Ｈ，７．２９；Ｎ，９．０９．【０１１９】  （２）１−（（５−アミノ−４−クロロピリミジニル−６−イル）−アミノ）−３，５−ビス−ヒドロキシメチルベンゼン（１−（（５−ａｍｉｎｏ−４−ｃｈｌｏｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ−６−ｙｌ）−ａｍｉｎｏ）−３，５−ｂｉｓ−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ）の製造
フラスコ中の水（１１．８０ｍｌ）、エタノール（１．８０ｍｌ）および塩酸（０．１８ｍｌ）の混合物に、１−アミノ−３，５−ビス−ヒドロキシメチルベンゼン（０．７２８ｇ，４．７６ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ）、次いで５−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン（０．７０２ｇ，４．２８ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ）を加え、得られた反応混合物を、９０℃の油浴中で７時間還流加熱した。反応混合物に水（９．２０ｍｌ）を加え、数分間撹拌した後、その混合物を冷蔵庫で６０時間放置した。反応混合物から析出した結晶を吸引ろ取して、桃色固体の標題化合物（１．０３０ｇ，３．６７ｍｍｏｌ，８６％）を得た。【０１２０】  ｍｐ  ２４２．５−２４４．５℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：４．４７４（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２），５．１８２（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２），５．４４２（２Ｈ，ｓ，ＯＨ），６．９３０（１Ｈ，ｓ，２Ｈ），７．５５８（２Ｈ，ｓ，ベンゼン環），７．８５６（１Ｈ，ｓ，ベンゼン環），８．５６５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１４８．７９，１４４．７４，１４２．７４，１３９．５０，１３８．３２，１２４．６８，１１８．８８，１１６．８４，６２．９６．
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：２８０（Ｍ＋），２７９，２６１，２３１，２１９．
ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１２Ｈ１３Ｏ２Ｎ４Ｃｌ  ２８０．０７２７  Ｆｏｕｎｄ  ２８０．０７２３．【０１２１】  （３）１−（（５−アミノ−４−クロロピリミジニル−６−イル）−アミノ）−３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチルベンゼン（１−（（５−ａｍｉｎｏ−４−ｃｈｌｏｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ−６−ｙｌ）−ａｍｉｎｏ）−３，５−ｂｉｓ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ）の製造
予め真空乾燥させておいた１−（（５−アミノ−４−クロロピリミジニル−６−イル）−アミノ）−３，５−ビス−ヒドロキシメチルベンゼン（１．０８ｇ，３．８３ｍｍｏｌ）とイミダゾール（１．１４０ｇ，１６．７０ｍｍｏｌ，４．４ｅｑ）とを、アルゴン雰囲気下でＤＭＦ（７．６ｍｌ）に溶解させ、そこへＴＢＤＭＳＣｌ（１．２７ｇ，８．４５ｍｍｏｌ，２．２ｅｑ）を加えた。その反応混合物を２４時間撹拌後、ＴＬＣ（酢酸エチル：メタノール＝１５：１）分析で反応混合物から１−（（５−アミノ−４−クロロピリミジニル−６−イル）−アミノ）−３，５−ビス−ヒドロキシメチルベンゼンの消失を確認した。その反応混合物からＤＭＦを除去した後、得られた残渣に蒸留水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出した酢酸エチル溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。前記酢酸エチル溶液から溶媒を減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１〜１：１）で精製して、薄桃色固体の標題化合物（１．３３ｇ，２．６９ｍｍｏｌ，７０％）を得た。【０１２２】  ｍｐ  １６６．５−１６８．５℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．６４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．８８−７．６１（３Ｈ，ｓ，ベンゼン環），７．０１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），５．５２（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２），４．７５（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２），０．９７（１８Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル），０．１５（１２Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１４９．２１，１４５．０４，１４１．９７，１４０．０５，１３８．９５，１２５．３０，１１８．５１，１１７．１８，６４．８５，２６．３１，１８．５１，４．７８．
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：５０８（Ｍ＋），４９３，４５１，４３５，３７７．
ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２４Ｈ４１Ｏ２Ｎ４ＣｌＳｉ２  ５０８．２４５７  Ｆｏｕｎｄ  ５０８．２４６３．
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２４Ｈ４１ＣｌＮ４Ｏ２Ｓｉ２：Ｃ，５６．６１；Ｈ，８．１２；Ｎ，１１．００．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５６．４８；Ｈ，８．０７；Ｎ，１０．９５．【０１２３】  （４）６−クロロ−９−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−プリン（６−ｃｈｌｏｒｏ−９−（３，５−ｂｉｓ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−ｐｈｅｎｙｌ）−ｐｕｒｉｎｅ）の製造
１−（（５−アミノ−４−クロロピリミジニル−６−イル）−アミノ）−３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチルベンゼン（０．３０３ｇ，０．６１ｍｍｏｌ）にオルトギ酸エチル（１．４ｍｌ）および無水酢酸（１．４ｍｌ）を加え、その反応混合物を約１４０℃の油浴中で６時間還流加熱した。ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）分析により、反応混合物中に生成物の形成を確認した。その反応混合物から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）で精製して、薄桃色固体の標題化合物（０．２４２ｇ，０．４７ｍｍｏｌ，７７％）を得た。【０１２４】  ｍｐ  ９０．５−９２．５℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：８．８０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），８．４１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．５８−７．３４（３Ｈ，ｓ，ベンゼン環），４．８４（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２），０．９６（１８Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル），０．１３（１２Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１５２．５６，１５１．６１，１５１．５０，１４４．１６，１４４．００，１３３．９６，１３２．１６，１２３．４３，１１９．２２，６４．２２，２５．９１，１８．３９，−５．３０．
Ｍａｓｓ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：５１９（Ｍ＋），５１７，４６０，４４３，４０３．
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２４Ｈ３９ＣｌＮ４Ｏ２Ｓｉ２  ５１８．２３００  Ｆｏｕｎｄ  ５１９．２３８８．
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２５Ｈ３９ＣｌＮ４Ｏ２Ｓｉ２：Ｃ，５７．８３；Ｈ，７．５７；Ｎ，１０．７９．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５７．８５；Ｈ，７．５０；Ｎ，１０．６８．【０１２５】  （５）９−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−アデニン（９−（３，５−ｂｉｓ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｄｅｎｉｎｅ）の製造
スチール缶中に６−クロロ−９−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−プリン（０．１０１ｇ，０．１９ｍｍｏｌ）とＭｅＯＨ中１９％ＮＨ３溶液（１０ｍｌ）を加えた。その反応混合物を、９０℃の油浴中で６時間還流加熱した。ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）分析により、反応混合物から６−クロロ−９−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−プリンの消失を確認した後、その反応混合物から溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１〜酢酸エチルのみ）で精製して、薄桃色固体の標題化合物（５９ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ，６３％）を得た。【０１２６】  ｍｐ  １２１．５−１２３．５℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：８．４０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），８．０９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．５５−７．３４（３Ｈ，ｓ，ベンゼン環），５．８６（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２），４．８４（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２），０．９６（１８Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル），０．１３（１２Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１５５．５９，１５３．５９，１５０．０２，１４３．６４，１３９．６９，１３４．７２，１２２．８７，１２０．１４，１１９．２８，６４．３９，２５．９３，１８．４１，−５．２８．
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：４９９（Ｍ＋），４８４，４４２，４２６，３８４．
Ｍａｓｓ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：５００（Ｍ＋），４６１，４５９，４４２，３６９．
ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２５Ｈ４１Ｎ５Ｏ２Ｓｉ２  ４９９．２７９９  Ｆｏｕｎｄ  ４９９．２８０３．
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２５Ｈ４１Ｎ５Ｏ２Ｓｉ２・１／２Ｈ２Ｏ：Ｃ，５９．０１；Ｈ，８．３２；Ｎ，１３．７６．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５９．１９；Ｈ，８．１７；Ｎ，１３．７６．【０１２７】  （６）Ｎ６−ベンゾイル−９−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−アデニン（Ｎ６−ｂｅｎｚｏｙｌ−９−（３，５−ｂｉｓ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｄｅｎｉｎｅ）の製造
予め真空乾燥させておいた９−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−アデニン（０．８７ｇ，１．７３ｍｍｏｌ）をピリジン（５．６ｍｌ）に溶解させた。その溶液に、ベンゾイルクロリド（０．２４ｍｌ，２．０８ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）のピリジン（３．０ｍｌ）溶液を加え、その反応混合物をアルゴン雰囲気下で１．５時間撹拌した。その後、その反応混合物へ、ベンゾイルクロリド（０．０４ｍｌ，０．３５ｍｍｏｌ，０．２ｅｑ）をさらに加えた。ＴＬＣ（酢酸エチルのみ）分析により、反応混合物からＮ６−ベンゾイル−９−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−アデニンの消失を確認した。その反応混合物に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を少量加え、数分間撹拌した後、蒸留水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出した酢酸エチル層を、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その酢酸エチル溶液から溶媒を減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１〜酢酸エチル：メタノール＝１３：１）で精製して、白色固体の標題化合物（０．５０６ｇ，０．８４ｍｍｏｌ，４９％）を得た。【０１２８】  ｍｐ  ２０９．５−２１１．５℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：９．０８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．８７（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），８．３１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．０７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｂｚ），７．６６−７．２７（８Ｈ，ｍＢｚおよびベンゼン環），４．８６（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２），０．９７（１８Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル），０．１５（１２Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１６５．５５，１５４．２５，１５０．７７，１４４．８５，１４３．００，１３５．２９，１３４．６３，１３３．８３，１２９．９１，１２８．８４，１２４．５０，１２４．１３，１２０．２５，６５．３０，２６．９３，１９．４０，−４．２９．
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：６０３（Ｍ＋），５８８，５４６，５３０，４４２．
ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３２Ｈ４５Ｎ５Ｏ３Ｓｉ２  ６０３．３０６１  Ｆｏｕｎｄ  ６０３．３０６８．
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３２Ｈ４５Ｎ５Ｏ３Ｓｉ２・１／２Ｈ２Ｏ：Ｃ，６２．７１；Ｈ，７．５６；Ｎ，１１．４３．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６２．８０；Ｈ，７．５５；Ｎ，１１．３９．【０１２９】  （７）Ｎ６−ベンゾイル−９−（３−ヒドロキシメチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−アデニン（Ｎ６−ｂｅｎｚｏｙｌ−９−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−５−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｄｅｎｉｎｅ）の製造
真空乾燥させておいたＮ６−ベンゾイル−９−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−アデニン（０．２１５ｇ，０．３０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２．８ｍｌ）およびジクロロメタン（２．８ｍｌ）の混合物に溶解させた。氷浴中で冷却しながら、その溶液にＴＢＡＦ（０．１５ｍｌ，０．１５ｍｍｏｌ，０．５ｅｑ）を加えた。その後、常温に戻した後、反応混合物にさらにＴＢＡＦ（０．３ｍｌ，０．３ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ）を加えた。４時間後、その反応混合物をクロロホルムで抽出した。抽出したクロロホルム層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。得られたクロロホルム溶液から溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝４０：１）で精製して、白色固体の標題化合物（９２ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ，５３％）を得た。【０１３０】  ｍｐ  １８３．５−１８５．５℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：９．１０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．８４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），８．２９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．０５−７．３９（８Ｈ，ｍ，Ｂｚおよびベンゼン環），５．４６（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），４．８４（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２），０．９５（９Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル），０．１３（６Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１６４．５７，１５３．３３，１４９．８４，１４４．２８，１４３．１５，１４１．９４，１３４．４９，１３２．８６，１２８．９１，１２７．８６，１２４．０１，１２３．３７，１２０．１０，１１９．９６，６４．５４，６４．１５，２５．９１，１８．４０，−５．２９．
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：４８９（Ｍ＋），４６０，４３２，４１６，３７２．
ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２６Ｈ３１Ｎ５Ｏ３Ｓｉ  ４８９．２１９６  Ｆｏｕｎｄ  ４８９．２２０７．
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２６Ｈ３１Ｎ５Ｏ３Ｓｉ・１／３ＣＨ３ＯＨ・１／３Ｈ２Ｏ：Ｃ，６２．４７；Ｈ，６．５７；Ｎ，１３．８３．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６２．７０；Ｈ，６．４５；Ｎ，１３．５７．【０１３１】  （８）Ｎ６−ベンゾイル−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−ヒドロキシメチル−フェニル）−アデニン（Ｎ６−ｂｅｎｚｏｙｌ−９−（３−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌ−５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｄｅｎｉｎｅ）の製造
予め真空乾燥させておいたＮ６−ベンゾイル−９−（３−ヒドロキシメチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−アデニン（０．３８ｇ，０．７８ｍｍｏｌ）をピリジン（３．４ｍｌ）に溶解させた。その溶液に、ＤＭＡＰ（５．０ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ，０．０５ｅｑ）と４，４’−ジメトキシトリチルクロライド（０．５３ｇ，１．５６ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）を加え、その反応混合物をアルゴン雰囲気下で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチルのみ）分析により反応混合物からＮ６−ベンゾイル−９−（３−ヒドロキシメチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−フェニル）−アデニンの消失を確認した。反応混合物から溶媒を除去し、得られた残渣に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。抽出されたクロロホルム層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。そのクロロホルム溶液から溶媒をトルエンで共沸させて減圧留去し、得られた残渣をＴＨＦ（３．９ｍｌ）に溶解させた。その溶液に、ＴＢＡＦ（１．５６ｍｌ，１．５６ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）を加え、１７時間撹拌した。その混合物に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。抽出されたクロロホルム層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。そのクロロホルム溶液から溶媒を減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１００：１〜５０：１）で精製して、白色固体の標題化合物（０．４５ｇ，０．６６ｍｍｏｌ，８４％（２工程））を得た。【０１３２】  ｍｐ  １１９．８−１２２．５℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：９．０３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．８９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），８．３１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．０６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｂｚ），７．６９〜６．８２（１３Ｈ，ｍ，ＤＭＴｒ），７．６９〜６．８２（３Ｈ，ｍ，Ｂｚ），７．６９〜６．８２（２Ｈ，ｍ，ベンゼン環），４．８４（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２），４．３３（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２），３．７９（６Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１６４．５７，１５３．３３，１４９．８４，１４４．２８，１４３．１５，１４１．９４，１３４．４９，１３２．８６，１２８．９１，１２７．８６，１２４．０１，１２３．３７，１２０．１０，１１９．９６，６４．５４，６４．１５，２５．９１，１８．４０，−５．２９．
Ｍａｓｓ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：６７８（Ｍ＋），６７７，６１２，６１１，５０５．
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ４１Ｈ３５Ｎ５Ｏ５  ６７７．２６３８  Ｆｏｕｎｄ  ６７８．２７１１．【０１３３】  （９）Ｎ６−ベンゾイル−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−アデニン（Ｎ６−ｂｅｎｚｏｙｌ−９−（３−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌ−５−Ｏ−［（２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ）−（Ｎ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ）］−ｐｈｏｓｐｈｉｎｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ａｄｅｎｉｎｅ）の製造
予め真空乾燥させておいたＮ６−ベンゾイル−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−ヒドロキシメチル−フェニル）−アデニン（０．４５ｇ，０．６６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４．４ｍｌ）に溶かした。その溶液に、ＤＩＰＥＡ（０６８ｍｌ，３．９４ｍｍｏｌ，６．０ｅｑ）と亜リン酸化試薬（０．２９ｍｌ，１．３１ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）とを加え、その反応混合物をアルゴン雰囲気下で攪拌した。１時間後ＴＬＣ分析で反応の進行を確認した後、反応混合物をクロロホルムと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で分液した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去し、得られた残渣を中性シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチルのみ）で精製して、白色泡状固体の標題化合物（０．５１ｇ，０．５８ｍｍｏｌ，８８％）を得た。
３１Ｐ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１４９．４１．【０１３４】  （参考例２）
Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン）−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−｛（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）｝−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−グアニンの製造【０１３５】  （１）２−アミノ−４クロロ−６−ヒドロキシ−５−フェニルアゾピリミジン（２−ａｍｉｎｏ−４ｃｈｌｏｒｏ−６−ｈｙｄｒｏｘｙ−５−ｐｈｅｎｙｌａｚｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ）の製造
アニリン（１．３７ｍｌ，１５ｍｍｏｌ）の６Ｎ−ＨＣｌ（６．７ｍｌ，３９．９ｍｍｏｌ）中溶液を０℃に冷却し、そこにＮａＮＯ２（１．１１ｇ，１６．１ｍｍｏｌ）と水（５．６ｍｌ）の混合溶液を滴下して、ジアゾニウム塩溶液を調製した。別途、２−アミノ−４−クロロ−６−ヒドロキシピリミジン（２．１８ｇ，１４．９ｍｍｏｌ）に無水炭酸ナトリウム（３．０ｇ，２８．３ｍｍｏｌ）と０．２Ｎ−ＮａＯＨ（９０ｍｌ，１８．０ｍｍｏｌ）を加えて、０℃に冷却した。この溶液に、先に調製したジアゾニウム塩溶液を氷冷下にて滴下して加えた。１５時間後、反応混合物から析出した赤褐色の結晶を吸引ろ取した。その結晶を水、エタノール、ジエチルエーテルで順次洗浄して、赤褐色結晶の標題化合物（４．８６ｇ，１９．５ｍｍｏｌ）を得た。【０１３６】  （２）１−（（２−アミノ−６−ヒドロキシ−５−フェニルアゾピリミジニル−４−イル）−アミノ）−３，５−ビス−ヒドロキシメチルベンゼン（１−（（２−ａｍｉｎｏ−６−ｈｙｄｒｏｘｙ−５−ｐｈｅｎｙｌａｚｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ−４−ｙｌ）−ａｍｉｎｏ）−３，５−ｂｉｓ−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ）の製造
１−アミノ−３，５−ビス−ヒドロキシメチルベンゼン（０．５ｇ，３．３ｍｍｏｌ）にアルゴン雰囲気下で無水エタノール（８．３ｍｌ）を加え、撹拌した。この反応混合物に、２−アミノ−４クロロ−６−ヒドロキシ−５−フェニルアゾピリミジン（０．８３ｇ，３．３ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ）を加え、約９０℃で還流加熱した。さらに１−アミノ−３，５−ビス−ヒドロキシメチルベンゼン（０．４１ｇ，１．６５ｍｍｏｌ，０．５ｅｑ）を反応混合物へ加え、７時間反応させた。その後、反応混合物に析出している結晶を吸引ろ過し、赤褐色結晶の標題化合物（０．８４ｇ，３．３ｍｍｏｌ，６９％，）を得た。
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：３６６（Ｍ＋），２４２，２１３，１４２，１３５．
ＨＲＭＳ（ＥＩ）ｃａｌｕｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１８Ｈ１８Ｎ６Ｏ３  ３６６．１４４０  ｆｏｕｎｄ  ３６６．１４４９．【０１３７】  （３）１−（（２−アミノ−６−ヒドロキシ−５−フェニルアゾピリミジニル−４−イル）−アミノ）−３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチルベンゼン（１−（（２−ａｍｉｎｏ−６−ｈｙｄｒｏｘｙ−５−ｐｈｅｎｙｌａｚｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ−４−ｙｌ）−ａｍｉｎｏ）−３，５−ｂｉｓ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ）の製造
アルゴン雰囲気下で１−（（２−アミノ−６−ヒドロキシ−５−フェニルアゾピリミジニル−４−イル）−アミノ）−３，５−ビス−ヒドロキシメチルベンゼン（０．５ｇ，１．３７ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（２．８ｍｌ）、イミダゾール（０．５６ｇ，８．２ｍｍｏｌ，６．０ｅｑ）およびＴＢＤＭＳＣｌ（０．６２ｇ，４．１ｍｍｏｌ，３．０ｅｑ）を加えた。その反応混合物を１８時間攪拌後、水と酢酸エチルで分液した。得られた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。得られた有機層から溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝２５：１）で単離精製して、赤色結晶の標題化合物（０．８０４ｇ，１．３５ｍｍｏｌ，９９％）を得た。【０１３８】 １Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｍ  Ｈｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１３．８５（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２），８．４１（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．０２−７．００（８Ｈ，ｍ，ベンゼン環），５．７４（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），４．７８（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ＣＨ２），０．９８（１８Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，ｔ−ブチル），０．１５（１２Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１６６．７７，１４２．７４，１４２．１７，１２９．８１，１２８．８７，１２１．２２，１１９．１１，１１７．４９，１１６．５８，６４．６５，２５．９９，２５．６９，１８．４６，−５．１７．
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：５９４（Ｍ＋），５３７，３００，９３，７５．
ＨＲＭＳ（ＥＩ）ｃａｌｕｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ４６Ｎ６Ｏ３Ｓｉ２  ５９４．３１７０  ｆｏｕｎｄ  ５９４．３１８５．【０１３９】  （４）Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン）−９−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチルフェニル）グアニン（Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅ）−９−（３，５−ｂｉｓ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｇｕａｎｉｎｅ）の製造
１−（（２−アミノ−６−ヒドロキシ−５−フェニルアゾピリミジニル−４−イル）−アミノ）−３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチルベンゼン（５．０５ｇ，８．５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）、水（６３ｍｌ）およびＴＨＦ（７２ｍｌ）を加え、撹拌した。その溶液に、酢酸（６．４ｍｌ）と亜鉛粉末（５．５３ｇ，８４．６ｍｍｏｌ，１０．０ｅｑ）を加え、その反応混合物を７０℃で還流加熱した。１時間後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５：１）分析にて反応混合物中の１−（（２−アミノ−６−ヒドロキシ−５−フェニルアゾピリミジニル−４−イル）−アミノ）−３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチルベンゼンの消失を確認した。その反応混合物を、酢酸エチルと水で分液した。得られた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで食塩水飽和で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去し、得られた残渣を一晩乾燥させた。【０１４０】  その残渣にＤＭＦ（１２５ｍｌ）を加え、アルゴン雰囲気下で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（１４．５ｍｌ，０．１１ｍｍｏｌ，１０．５ｅｑ）を加え、その反応混合物を室温で撹拌した。１５時間後、その反応混合物から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣にアルゴン雰囲気下、オルトギ酸エチル（１９ｍｌ，１１２．９ｍｍｏｌ，１３．３ｅｑ）と無水酢酸（１９ｍｌ，１９７．８ｍｍｏｌ，２３．３ｅｑ）を加え、その反応混合物を室温で撹拌した。７時間後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５：１）分析にて反応混合物中の生成物を確認し、その反応混合物を酢酸エチルと水で分液した。得られた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで食塩水飽和で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝４０：１）で単離精製し、赤色結晶の標題化合物（３．７ｇ，６．５ｍｍｏｌ，７６％（３工程））を得た。【０１４１】 １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：８．６４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．５１（１Ｈ，ｓ，ＣＨ），７．８０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．４２−７．３４（３Ｈ，ｓ，ベンゼン環），４．８１（４Ｈｓ，ＣＨ２），３．１０（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，Ｎ，Ｎ−ジメチル），０．９５（１８Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル），０．１２（１２Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：５７０（Ｍ＋），５１３，４９７，３６６，１９１．
ＨＲＭＳ（ＥＩ）ｃａｌｕｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２８Ｈ４６Ｎ６Ｏ３Ｓｉ２  ５７０．３１７０  ｆｏｕｎｄ  ５７０．３１６４．
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２８Ｈ４６Ｎ６Ｏ３Ｓｉ２・１／２ＣＨ３ＯＨ：Ｃ，５８．３２；Ｈ，８．２４；Ｎ，１４．３２．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５８．３４；Ｈ，８．３３；Ｎ，１４．１５．【０１４２】  （５）Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン）−９−（３−ヒドロキシメチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチルフェニル）グアニン（Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅ）−９−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−５−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｇｕａｎｉｎｅ）の製造
Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン）−９−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチルフェニル）グアニン（２０４ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５．０ｍｌ）中溶液に、アルゴン雰囲気下で、ＴＢＡＦ（０．１７８ｍｌ，０．１７８ｍｍｏｌ，０．５ｅｑ）加え、その反応混合物を３０分間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析にて反応の進行を確認した後、その反応混合物をクロロホルムと水で分液した。得られた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝３０：１〜クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製して、白色結晶の標題化合物（９５．４ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ，５９％）を得た。【０１４３】 １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：８．６１（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．５３（１Ｈ，ｓ，ＣＨ），７．８３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．６１−７．３４（３Ｈ，ｓ，ベンゼン環），４．８１（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２），３．０５（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝７０．４Ｈｚ，Ｎ，Ｎ−ジメチル），０．９５（９Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル），０．１２（６Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１５８．２２，１５６．８７，１５０．１６，１４３．３５，１３７．３５，１３５．１５，１２３．３４，１２０．７５，１１９．４４，６４．３６，４１．４５，３５．０３，２５．９０，２０．２９，１８．３８，１３．６５，−５．２９．
Ｍａｓｓ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：４５７（［Ｍ＋＋Ｈ］），３０７，２８９，１５４，１３６．
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）ｃａｌｕｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２２Ｈ３６Ｎ６Ｏ３Ｓｉ１  ４５７．２３０５  ｆｏｕｎｄ  ４５７．２３９３．【０１４４】  （６）Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン）−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−ヒドロキシメチル−フェニル）−グアニン（Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅ）−９−（３−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌ−５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−ｐｈｅｎｙｌ）−ｇｕａｎｉｎｅ）の製造
Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン）−９−（３−ヒドロキシメチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチルフェニル）グアニン（０．９５ｇ，２．０９ｍｍｏｌ）のピリジン（１０．５ｍｌ）溶液に、アルゴン雰囲気下で、ＤＭＡＰ（１３ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ，０．０５ｅｑ）とＤＭＴｒＣｌ（１．４２ｇ，４．１８ｍｍｏｌ，１．２．０ｅｑ）を加え、その反応混合物を室温で１８時間撹拌した。ＴＬＣ分析にて、反応混合物中からＮ２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン）−９−（３−ヒドロキシメチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチルフェニル）グアニンの消失を確認し、反応混合物をクロロホルムと水で分液した。得られた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去し、得られた残渣をトルエン共沸によりピリジンを除去した。【０１４５】  得られた残渣をＴＨＦ（１０．５ｍｌ）に溶解させた。その溶液に、アルゴン雰囲気下でＴＢＡＦ（４．１８ｍｌ，４．１８ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）を加え、その反応混合物を室温で５時間撹拌した。ＴＬＣ分析にて反応の終了を確認した。その反応混合物をクロロホルムと水で分液し、得られた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄した。その有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、その有機層から溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝３０：１〜クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製し、白色の標題化合物（１．１６ｇ，１．８０ｍｍｏｌ，８６％（２工程））を得た。【０１４６】 １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：８．７８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．４５（１Ｈ，ｓ，ＣＨ），７．８９−６．８２（１６Ｈ，ｍ，ＤＭＴｒ  ａｎｄ  Ｈ−８  ａｎｄベンゼン環），４．７８−４．２４６（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２），３．７８（６Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３），２．９２−２．５３（６Ｈ，ｓ，Ｎ，Ｎ−ジメチル）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１５８．５５，１５８．１２，１５８．０６，１５６．８４，１５０．１６，１４４．９２，１４３．０８，１４１．２０，１３７．３２，１３６．０１，１３５．３６，１２９．９３，１２７．９８，１２６．８６，１２３．９９，１２０．４６，１２０．１１，１１３．２０，８６．５４，６４．８６，６４．４０，５５．２２，４０．６７，３４．９６．
Ｍａｓｓ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：６４５（［Ｍ＋＋Ｈ］），３０７，３０３，１５４，１３６．
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）ｃａｌｕｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３７Ｈ３７Ｎ６Ｏ５Ｓｉ１  ６４５．２７４７  ｆｏｕｎｄ  ６４５．２８１９．【０１４７】  （７）Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン）−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−｛（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）｝−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−グアニン（Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅ）−９−（３−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌ−５−Ｏ−［（２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ）−（Ｎ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ）］−ｐｈｏｓｐｈｉｎｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ｇｕａｎｉｎｅ）の製造
Ａｒ置換したグローブバックを用いて、Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン）−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−ヒドロキシメチル−フェニル）−グアニン（０．２ｇ，０．３１ｍｍｏｌ）にＴＨＦ（１．６ｍｌ）をアルゴン雰囲気下において加えた。その溶液に、さらにＨｕｎｉｇ’ｓ  ｂａｓｅ（０．３１ｍｌ，１．８６ｍｍｏｌ，６．０ｅｑ）および亜リン酸化試薬（０．１４ｍｌ，０．６２ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）の混合物を加え、その反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５：１）分析にて反応の進行を確認した。その反応混合物に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を少量加え、クロロホルムで分液した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、その有機層から溶媒を減圧留去した。得られた残渣を中性シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：アセトン＝１：１）で精製し、標題化合物（０．３２ｇ，０．３８ｍｍｏｌ，１２２％（混合物））を得た。３１ＰＮＭＲにより、標題化合物への亜リン酸基の導入を確認した。
３１ＰＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ［ｐｐｍ］：１４９．２８ｐｐｍ．【０１４８】  （実施例１）
１−（３，５−ビス−ヒドロキシメチルフェニル）−ウラシルの製造
下記スキーム４に従い、標記化合物を製造した。その詳細を以下に説明する。【０１４９】
【化３９】
2006027862.tif 000027
【０１５０】  （１）３−メトキシ−２−プロペン酸（３−Ｍｅｔｈｏｘｙ−２−ｐｒｏｐｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）の製造
２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２１９．４ｍｌ，０．４４ｍｏｌ，１．７ｅｑ）に、３−メトキシアクリル酸メチル（２７．６ｍｌ，０．２６ｍｏｌ，１．０ｅｑ）をゆっくり滴下しながら加えた。その反応混合物を２時間反応させた後、ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）分析にて３−メトキシアクリル酸メチルの消失を確認した。その反応混合物に、２Ｎ  ＨＣｌ水溶液（１９３．６ｍｌ，０．３９ｍｏｌ，１．５ｅｑ）を加え、中和した。反応混合物から析出した結晶を、吸引ろ取して、白色固体の標題化合物を得た。一方、そのろ液を酢酸エチルで抽出し、得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去して、白色固体の標題化合物を得た。得られた標題化合物は、合わせて、１７．６９７ｇ（０．１７ｍｏｌ，６８％）であった。【０１５１】  （２）３−メトキシ−２−プロペン酸ナトリウム塩（Ｓｏｄｉｕｍ  ３−Ｍｅｔｈｏｘｙ−２−ｐｒｏｐｅｎｏａｔｅ）の製造
３−メトキシ−２−プロペン酸（１７．６９７ｇ，０．１７ｍｏｌ，１．０ｅｑ）の水（２５ｍｌ）中懸濁液に、２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（８６ｍｌ，０．１７ｍｏｌ，１．０ｅｑ）を加えた。その反応混合物を約３時間攪拌後、ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）分析にて反応混合物中に生成物の形成を確認した。その反応混合物から溶媒を減圧留去し、薄黄色固体の標題化合物（１０．９ｇ，０．０９ｍｏｌ，５１％）を得た。【０１５２】  （３）３−メトキシ−２−プロペノイルクロライド（３−Ｍｅｔｈｏｘｙ−２−ｐｒｏｐｅｎｏｙｌ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）の製造
３−メトキシ−２−プロペン酸ナトリウム塩（４２．３２３ｇ，０．３４ｍｏｌ，１．０ｅｑ）のＴＨＦ（１８２．５ｍｌ）懸濁液に、塩化チオニル（２８．９ｍｌ，０．４０ｍｏｌ，１．２ｅｑ）のＴＨＦ（１８２．５ｍｌ）溶液を、アルゴン雰囲気下でゆっくりと滴下した。その反応混合物を６０℃の油浴中で３時間撹拌した。その反応混合物を、綿栓ろ過でろ過し、ろ液を減圧留去した。
得られた残渣をフラスコに入れ、１５０℃の油浴中で加熱しながら真空ポンプを用いて減圧蒸留して、無色オイル状の標題化合物（４．８４０ｇ，４０．１０ｍｍｏｌ，１２％）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：７．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，Ｈ−２），５．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，Ｈ−３），３．７１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３Ｏ）．【０１５３】  （４）（±）−ｔｒａｎｓ−Ｎ−１−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）ベンジルカルバモイル−３−メトキシ−２−プロペンアミド（（±）−ｔｒａｎｓ−Ｎ−１−（３，５−ｂｉｓ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｂｅｎｚｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌ−３−ｍｅｔｈｏｘｙ−２−ｐｒｏｐｅｎａｍｉｄｅ）の製造
一晩乾燥させたシアン酸銀塩（１０．３ｇ，６８．９ｍｍｏｌ，２．２ｅｑ）をアルゴン下、ベンゼン（６２．６ｍｌ）に溶解させ、９５℃で３０分間還流加熱した（Ａ）。３−メトキシ−２−プロペノイルクロライド（３．７６ｇ，３１．３ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ）をベンゼン（１５．７ｍｌ）に溶解させ、数分間撹拌した後、上記の（Ａ）の溶液に滴下し、その反応混合物を９５℃で３０分間還流加熱した（Ｂ）。別途、３，５−ビス−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）アニリン（３．７ｇ，９．７１ｍｍｏｌ，０．３ｅｑ）をアルゴン下でＤＭＦ（３７．６ｍｌ）に溶解させ、その溶液に活性化させたモレキュラーシーブス（４Ａ，粉末（約４ｇ））を加え、その溶液を−２０℃で撹拌した（Ｃ）。上記の（Ｂ）の反応混合物溶液の上澄み液のみを、（Ｃ）の溶液へ加え、その反応混合物を−２０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）分析により、反応混合物中の原料の消失を確認し、ろ過して塩とモレキュラーシーブスを除去した。得られたろ液を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：１〜３：１）で精製して、白色固体の標題化合物（４．２２ｇ，８．３ｍｍｏｌ，８６％（２工程））を得た。【０１５４】  ｍｐ  １４９．８−１５０．２℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１０．７８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１），９．０７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−３），７．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，Ｈ−６），７．３６−７．１１（３Ｈ，ｓ，ベンゼン環），５．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，Ｈ−５），４．７１（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２），３．７５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３），０．９４（１８Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，ｔ−ブチル），０．１０（１２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１６８．１５，１６３．５８，１５１．２１，１４２．０８，１３７．４９，１１８．５１，１１５．３９，９７．６７，６４．１１，５８．１９，２５．８０，１７．９８，−５．３３．
Ｍａｓｓ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：５０９（Ｍ＋），５０７，４５１，４１０，３７７．
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２５Ｈ４４Ｎ２Ｏ５Ｓｉ２  ５０９．２７８９  Ｆｏｕｎｄ  ５０９．２８８０．
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２５Ｈ４４Ｎ２Ｏ５Ｓｉ２：Ｃ，５９．０２；Ｈ，８．７２；Ｎ，５．５１．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５８．８１；Ｈ；８．８７，Ｎ，５．５１．【０１５５】  （５）１−（３，５−ビス−ヒドロキシメチルフェニル）−ウラシル（１−（３，５−ｂｉｓ−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ｕｒａｃｉｌ）の製造
（±）−ｔｒａｎｓ−Ｎ−１−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）ベンジルカルバモイル−３−メトキシ−２−プロペンアミド（０．３２２ｇ，０．６３ｍｍｏｌ）に、２Ｎ−ＮａＯＨ水溶液（２．６４ｍｌ）とエタノール（２．６４ｍｌ）とを加え、その反応混合物を６０℃の油浴中で１時間還流加熱した。ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５：１）分析により反応混合物中から（±）−ｔｒａｎｓ−Ｎ−１−（３，５−ビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）ベンジルカルバモイル−３−メトキシ−２−プロペンアミドの消失を確認した。その反応混合物に酢酸を加えて、ｐＨ６〜７にした。その反応混合物から溶媒を減圧留去後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１５：１〜１０：１）で精製して、白色固体の標題化合物（０．０７１ｇ，０．２９ｍｍｏｌ，４５％）を得た。【０１５６】  ｍｐ  ２０１．０−２０３．０℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＣＤＣｌ３）δ：１１．４２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−６），７．３２−７．１７（３Ｈ，ｓ，ベンゼン環），５．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−５），５．３１（２Ｈ，ｓ，ＯＨ），４．５２（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６，ＣＨ２）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１６３．７１，１５０．４１，１４５．５２，１４３．７４，１３８．６５，１２３．９８，１２２．８２，１０１．５５，６２．６５．
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：２４８（Ｍ＋），２４６，２０５，１７４，１４６．
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１２Ｈ１２Ｎ２Ｏ４  ２４８．０７９７  Ｆｏｕｎｄ  ２４８．０７９０．
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１２Ｈ１２Ｎ２Ｏ４：Ｃ，５８．０６；Ｈ，４．８７；Ｎ，１１．２９．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５８．００；Ｈ；４．８７，Ｎ，１１．２４．【０１５７】  （実施例２）
１−（３−ヒドロキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−ウラシル（１−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−５−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ｕｒａｃｉｌ）の製造
下記スキーム５に従い、標記化合物を製造した。その詳細を以下に説明する。【０１５８】
【化４０】
2006027862.tif 000028
【０１５９】  １−（３，５−ビス−ヒドロキシメチルフェニル）−ウラシル（０．２３ｍｇ，０．９３ｍｍｏｌ）のピリジン（４．７ｍｌ）溶液に、ＤＭＴｒＣｌ（０．３８ｇ，１．１２ｍｍｏｌ，１．７ｅｑ）を加え、その反応混合物を室温で撹拌した。４時間後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５：１）分析で反応の進行を確認し、その反応混合物をクロロホルムと水で分液した。得られた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１００：０〜クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製して、白色の標題化合物（０．３０２ｇ，０．５５ｍｍｏｌ，５９％）を得た。【０１６０】 １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１１．４１（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，Ｈ−６），７．６７−６．８９（１６Ｈ，ｍ，ＤＭＴｒ  ａｎｄベンゼン環），５．６４（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，Ｈ−５），５．３２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，ＯＨ），４．５３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，ＣＨ２），４．０９（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２），３．７２（６Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１６３．７０，１５８．１４，１５０．３９，１４５．４９，１４４．８０，１４４．００，１３９．６４，１３８．７５，１３５．５１，１２９．６６，１２７．９６，１２７．６２，１２６．７７，１２４．３３，１２３．４１，１２３．３０，１１３．３６，１０１．５８，８６．０４，７９．１６，６４．５５，６２．２８，５５．０３．
Ｍａｓｓ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：５５１（［Ｍ＋＋Ｈ］），３０３，２８９，２３１．
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）ｃａｌｕｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３３Ｈ３０Ｎ２Ｏ６  ５５１．２１０４  ｆｏｕｎｄ  ５５１．２１７６．【０１６１】  １−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−｛（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）｝−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−ウラシル（１−（３−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌ−５−Ｏ−［（２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ）−（Ｎ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ）］−ｐｈｏｓｐｈｉｎｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ｕｒａｃｉｌ）の製造
下記スキーム６に従い、標記化合物を製造した。その詳細を以下に説明する。【０１６２】
【化４１】
2006027862.tif 000029
【０１６３】  Ａｒ置換したグローブバックを用いて、１−（３−ヒドロキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−ウラシル（０．８ｇ，１．４５ｍｍｏｌ）にＴＨＦ（９．７ｍｌ）アルゴン雰囲気下において加えた。その溶液に、さらにＨｕｎｉｇ’ｓ  ｂａｓｅ（１．４６ｍｌ，８．７２ｍｍｏｌ，６．０ｅｑ）および亜リン酸化試薬（０．６５ｍｌ，２．９ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）の混合物を加え、その反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル）分析にて確認した。その反応混合物に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を少量加え、クロロホルムで分液した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、その有機層から溶媒を減圧留去した。得られた残渣を中性シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、標題化合物（０．８８ｇ，１．１７ｍｍｏｌ，８１％）を得た。３１ＰＮＭＲにより、標題化合物への亜リン酸基の導入を確認した。
３１ＰＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ［ｐｐｍ］：１４８．９０ｐｐｍ．【０１６４】  （実施例５）
Ｎ４−ベンゾイル−１−（３−ヒドロキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−シトシン（Ｎ４−ｂｅｎｚｏｙｌ−１−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−５−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ｃｙｔｏｓｉｎｅ）の製造
下記スキーム７に従い、標記化合物を製造した。その詳細を以下に説明する。【０１６５】
【化４２】
2006027862.tif 000030
【０１６６】  （１）１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−ウラシル（１−（３−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−５−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ｕｒａｃｉｌ）の製造
１−（３−ヒドロキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−ウラシル（０．４４ｇ，０．７９ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下でＤＭＦ（１．６ｍｌ）に溶解させた。その溶液に、イミダゾール（０．１２ｇ，１．７４ｍｍｏｌ，２．２ｅｑ）とＴＢＤＭＳＣｌ（０．１３ｇ，０．８７ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ）を加え、その反応混合物を室温で撹拌した。４０分後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５：１）分析にて反応混合物中に生成物の形成を確認したので、その反応混合物をクロロホルムと水で分液した。得られた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：１）で精製して、標題化合物（０．５０１ｇ，０．７５ｍｍｏｌ，９５％）を得た。【０１６７】 １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１１．３１（１Ｈ，ｓ，３−ＮＨ），７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−６），７．３８−６．７８（１６Ｈ，ｍ，ＤＭＴｒ  ａｎｄベンゼン環），５．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，ＮＨ），４．６５（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２Ｏ−ＴＢＤＭＳ），３．９９（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２Ｏ−ＤＭＴｒ），３．６２（６Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３），０．８０（９Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル），０．０００（６Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００  ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１６３．６８，１５８．１２，１５０．３５，１４５．５６，１４４．８５，１３８．６３，１３５．４７，１２９．６４，１２７．９３，１２７．５４，１２１．６９，１１３．２６，１０１．６０，８５．９８，８３．３１，７９．１６，６３．６６，５５．０２，２７．８３，２５．８１，１７．９９，−５．３１．【０１６８】  （２）１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−シトシン（１−（３−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−５−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ｃｙｔｏｓｉｎｅ）の製造
１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−ウラシル（０．４５ｇ，０．６８ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下でアセトニトリル（３．４ｍｌ）に溶解させた。その溶液に、ＴＥＡ（１８７μｌ，１．３５ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）とＴＰＳＣｌ（０．４１ｇ，１．３５ｍｍｏ１，２．０ｅｑ）、ＤＭＡＰ（０．１７ｇ，１．３５ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）を順次加えた。その反応今後物を１時間攪拌した後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝１５：１）分析にて反応混合物中の生成物の形成を確認した。その反応混合物を０℃に冷却した後、アンモニア水溶液（１．６ｍｌ）を加え、その反応混合物を１９時間室温で攪拌した。ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５：１）分析にて反応混合物中に生成物の形成を確認した。反応混合物からアセトニトリルを減圧留去し、残渣をクロロホルムで抽出した。得られた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧蒸去した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１〜２５：１）で精製し、標題化合物（０．３２ｇ，０．４９ｍｍｏｌ，７２％）を得た。【０１６９】 １Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．４８（１  Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ，Ｈ−６），７．３４−６．７８（１６Ｈ，ｍ，ＤＭＴｒ  ａｎｄベンゼン環），５．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−５），４．６５（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２Ｏ−ＴＢＤＭＳ），３．９８（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２Ｏ−ＤＭＴｒ），３．６２（６Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３），０．８０（９Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル），０．０００（６Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１６６．０９，１５８．１３，１５４．８４，１４５．７０，１４４．９０，１４２．２１，１４１．０６，１３９．４７，１３５．５３，１２９．６４，１２７．９４，１２７．５６，１２６．７７，１２３．２１，１２２．８３，１２２．７８，１１３．２８，９４．０７，８５．９５，６４．５４，６３．７７，５５．０３，２５．８４，１８．０１，−５．２８．【０１７０】  （３）Ｎ４−ベンゾイル−１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−シトシン（Ｎ４−ｂｅｎｚｏｙｌ−１−（３−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−５−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ｃｙｔｏｓｉｎｅ）の製造
１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−シトシン（０．２５ｇ，０．３８ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下でピリジン（２ｍｌ）に溶解させた。その溶液に、ＢｚＣｌ（０．１３ｍｌ，０．７７ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）を室温で加えた。その反応混合物を１時間攪拌後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５０：１）分析にて反応混合物中に生成物の形成を確認した。その反応混合物に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を加え、その混合物を２０分程攪拌して反応を停止させた。その混合物をクロロホルムで抽出し、得られた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１〜０：１）で精製して、標題化合物（０．２７ｇ，０．３５ｍｍｏｌ，９２％）を得た。【０１７１】 １Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１１．２２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６−Ｈ），７．９１−６．７７（２２Ｈ，ｍ，ＤＭＴｒ  ａｎｄ  Ｂｚ  ａｎｄベンゼン環），４．６７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２Ｏ−ＴＢＤＭＳ），３．９０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝ＣＨ２Ｏ−ＤＭＴｒ），３．６１（６Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３），０．８０（９Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル），０．０００（６Ｈ，ｓ，ＴＢＤＭＳ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１５８．１４，１４４．８６，１４２．５５，１３９．９７，１３９．８２，１３５．４９，１３２．７７，１２９．６５，１２８．４８，１２８．４４，１２７．９３，１２７．５６，１２６．７７，１２３．７４，１２３．１６，１２２．６５，１１３．２８，８６．０１，６４．４７，６３．６９，５９．７４，５５．０２，２５．８２，２０．７４１８．００，１４．０６，−５．３０．【０１７２】  （４）Ｎ４−ベンゾイル−１−（３−ヒドロキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−シトシン（Ｎ４−ｂｅｎｚｏｙｌ−１−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−５−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ｃｙｔｏｓｉｎｅ）の製造
Ｎ４−ベンゾイル−１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−シトシン（０．３１ｇ，０．４１ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下でＴＨＦ（２．４ｍｌ）に溶解させた。その溶液に、ＴＢＡＦ（０．８２ｍｌ，０．８２ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）を室温で加え、その反応混合物を１９時間撹拌した。その後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５０：１）分析にて反応混合物中に生成物の形成を確認した。反応混合物から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝７０：１）で精製して、標題化合物（０．２６ｇ，０．３９ｍｍｏｌ，９７％）を得た。【０１７３】 １Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１１．３５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．１７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−６），８．０３−６．９０（２２Ｈ，ｍ，ＤＭＴｒ  ａｎｄ  Ｂｚ  ａｎｄベンゼン環），５．３７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，−ＯＨ），４．５６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＣＨ２），４．１２（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２Ｏ−ＤＭＴｒ），３．７３（６Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨＺ）（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１５８．１４，１４４．８０，１４３．９４，１３９．６１，１３５．５２，１３２．７７，１２９．６７，１２８．４５，１２７．９７，１２７．６３，１２６．７７，１２４．３７，１２３．１１，１２２．９３，１１３．３１，８６．０５，７９．１６，６４．５７，６２．３１，５５．０３．【０１７４】  （実施例５）
Ｎ４−ベンゾイル−１−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−｛（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）｝−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−シトシン（Ｎ４−ｂｅｎｚｏｙｌ−１−（３−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌ−５−Ｏ−［（２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ）−（Ｎ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ）］−ｐｈｏｓｐｈｉｎｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）−ｃｙｔｏｓｉｎｅ）の製造
下記スキーム８に従い、標記化合物を製造した。その詳細を以下に説明する。【０１７５】
【化４３】
2006027862.tif 000031
【０１７６】  Ａｒ置換したグローブバックを用いて、Ｎ４−ベンゾイル−１−（３−ヒドロキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−シトシン（０．２４ｇ，０．３７ｍｍｏｌ）に、ＴＨＦ（２．４ｍｌ）をアルゴン雰囲気下において加えた。その溶液に、さらにＨｕｎｉｇ’ｓ  ｂａｓｅ（０．３７ｍｌ，２．２３ｍｍｏｌ，６．０ｅｑ）および亜リン酸化試薬（０．１７ｍｌ，０．７４ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）の混合物を加え、その反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル）分析にて反応の進行を確認した。その反応混合物に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を少量加え、クロロホルムで分液した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、その有機層から溶媒を減圧留去した。得られた残渣を中性シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、標題化合物（０．３４ｇ，０．４０ｍｍｏｌ，１０７％（混合物））を得た。３１ＰＮＭＲにより、標題化合物への亜リン酸基の導入を確認した。
３１ＰＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ［ｐｐｍ］：１４９．３７５ｐｐｍ．【０１７７】  （実施例６）
アデノシン型の固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ−１）の製造
下記スキーム９に従い、標記化合物を製造した。その詳細を以下に説明する。【０１７８】
【化４４】
2006027862.tif 000032
【０１７９】  Ｎ６−ベンゾイル−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−ヒドロキシメチル−フェニル）−アデニン（０．１５ｇ，０．２２ｍｍｏｌ）のピリジン（２．２ｍｌ）溶液に、ＤＭＡＰ（２６．９ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ）と無水コハク酸（７３．１ｍｇ，０．７３ｍｍｏｌ，３．３ｅｑ）とを加え、その反応混合物を室温にて撹拌した。５日間撹拌した後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５：１）分析にて反応の終結を確認した。その反応混合物をクロロホルムで分液した。得られた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣を真空乾燥させた。その残渣（０．１７ｇ，０．２２ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ）にＤＭＦ（５．６ｍｌ）を加えて溶解させ、その溶液にＣＰＧ（５００ｍｇ，９０．４μｍｏｌ／ｇ）を加えて３０分間静置した。その反応混合物に、ＷＳＣ（４３ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ）をさらに加え、室温で５日間振とうさせた。その反応混合物を減圧ろ取し、ろ取物をピリジンで洗浄した。そのろ取物に０．１Ｍ  ＤＭＡＰのピリジンおよび無水酢酸の混合（ピリジン：無水酢酸＝９：１）溶液（５．６ｍｌ）を加え、１６時間振とうさせた。この反応混合物を減圧ろ取し、ろ取物をメタノール、アセトンで順次洗浄し、乾燥させて、標題化合物（ＣＰＧの化合物の活性＝５３．７μｍｏｌ／ｇ）を得た。【０１８０】  （実施例７）
グアノシン型の固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ−２）の製造
下記スキーム１０に従い、標記化合物を製造した。その詳細を以下に説明する。【０１８１】
【化４５】
2006027862.tif 000033
【０１８２】  Ｎ２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン）−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−ヒドロキシメチル−フェニル）−グアニン（０．１５ｇ，０．２３ｍｍｏｌ）のピリジン（２．３ｍｌ）溶液に、ＤＭＡＰ（２８．５ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ）と無水コハク酸（７６．９ｍｇ，０．７７ｍｍｏｌ，３．３ｅｑ）とを加え、その反応混合物を室温にて撹拌した。４日間撹拌した後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５：１）分析にて反応の終結を確認した。その反応混合物をクロロホルムで分液した。得られた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣を真空乾燥させた。その残渣（０．１８ｇ，０．２４ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ）にＤＭＦ（６．１ｍｌ）を加えて溶解させ、その溶液にＣＰＧ（２７５ｍｇ，２２２μｍｏｌ／ｇ）を加えて３０分間静置した。その反応混合物に、ＷＳＣ（４６．８ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ）をさらに加え、室温で６日間振とうさせた。その反応混合物を減圧ろ取し、ろ取物をピリジンで洗浄した。そのろ取物に０．１Ｍ  ＤＭＡＰのピリジンおよび無水酢酸の混合物（ピリジン：無水酢酸＝９：１）溶液（６．１ｍｌ）を加え、１６時間振とうさせた。この反応混合物を減圧ろ取し、ろ取物をメタノール、アセトンで順次洗浄し、乾燥させて、標題化合物（ＣＰＧの化合物の活性＝７０．０μｍｏｌ／ｇ）を得た。【０１８３】  （実施例８）
ウリジン型の固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ−３）の製造
下記スキーム１１に従い、標記化合物を製造した。その詳細を以下に説明する。【０１８４】
【化４６】
2006027862.tif 000034
【０１８５】  １−（３−ヒドロキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−ウラシル（０．１５ｇ，０．２７ｍｍｏｌ）のピリジン（２．７ｍｌ）溶液に、ＤＭＡＰ（３３．３ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ）と無水コハク酸（９０．０ｍｇ，０．９０ｍｍｏｌ，３．３ｅｑ）を加え、その反応混合物を室温にて撹拌した。３日間撹拌した後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝５：１）分析にて反応の終結を確認した。その反応混合物をクロロホルムで分液した。得られた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣を真空乾燥させた。その残渣（０．２１ｇ，０．３３ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ）にＤＭＦ（８．２ｍｌ）を加え溶解させ、その溶液にＣＰＧ（５００ｍｇ，９０．４μｍｏｌ／ｇ）を加え３０分間静置した。その反応混合物に、ＷＳＣ（６２．５ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ）を加え、室温で３日間振とうさせた。その反応混合物を減圧ろ取し、ろ取物をピリジンで洗浄した。そのろ取物に０．１Ｍ  ＤＭＡＰのピリジンおよび無水酢酸の混合物（ピリジン：無水酢酸＝９：１）溶液（８．２ｍｌ）を加え、１６時間振とうさせた。この反応混合物を減圧ろ取し、ろ取物をメタノール、アセトンで順次洗浄し、乾燥させて、標題化合物（ＣＰＧの化合物の活性＝６６．８μｍｏｌ／ｇ）を得た。【０１８６】  （実施例９）
シチジン型の固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ−４）の製造
下記スキーム１２に従い、標記化合物を製造した。その詳細を以下に説明する。【０１８７】
【化４７】
2006027862.tif 000035
【０１８８】  Ｎ４−ヘンゾイル−１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチルフェニル）−シトシン（０．１３ｇ，０．２ｍｍｏｌ）のピリジン（２．０ｍｌ）溶液に、ＤＭＡＰ（２４．６ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ）と無水コハク酸（６６．５ｍｇ，０．６６ｍｍｏｌ，３．３ｅｑ）を加え、その反応混合物を室温にて撹拌した。１６時間後、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝１０：１）分析にて反応の終結を確認した後、その反応混合物をクロロホルムで分液した。得られた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣を真空乾燥させた。その残渣（０．１３ｇ，０．１７ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ）にＤＭＦ（４．２ｍｌ）を加え溶解させ、その溶液にＣＰＧ（２５０ｍｇ，２２２μｍｏｌ／ｇ）を加え３０分間静置した。その反応混合物に、ＷＳＣ（４５ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ）を加え、室温で６日間振とうさせた。その反応混合物を減圧ろ取し、ろ取物をピリジンで洗浄した。そのろ取物に０．１Ｍ  ＤＭＡＰのピリジンおよび無水酢酸の混合物（ピリジン：無水酢酸＝９：１）溶液（４．２ｍｌ）を加え、１６時間振とうさせた。この反応混合物を減圧ろ取し、ろ取物をメタノール、アセトンで順次洗浄し、乾燥させて、標題化合物（ＣＰＧの化合物の活性＝８２．３μｍｏｌ／ｇ）を得た。【０１８９】  オリゴヌクレオチド類似体の製造
（実施例１０）
塩基配列の中央部に、ヌクレオシド類似体を３つ導入した配列番号１（図１参照）からなる一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体の製造
配列番号１の塩基配列に従い、核酸自動合成機を用いるホスホロアミダイト法によりオリゴヌクレオチド（ＤＮＡタイプ）を製造した。塩基配列中、ＡＢで示す配列には、参考例１で製造したＮ６−ベンゾイル−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−アデニンをヌクレオシドモノマーとして用いて導入した。他の配列には、デオキシリボースタイプのヌクレオシドを用いて導入した。１μｍｏｌの固相合成用ＣＰＧ樹脂を使用し、各縮合時間は１５分とした。【０１９０】  前記ＣＰＧ樹脂に結合した配列番号１のオリゴヌクレオチドは、ベンゾイル基、イソブチリル基およびシアノエチル基で保護された状態で核酸自動合成機による合成を終了した。【０１９１】  前記ＣＰＧ樹脂に結合したオリゴヌクレオチドは、アンモニア水溶液（２ｍＬ）中で５５℃で１２時間反応させた。反応混合物を減圧ろ過し、得られたろ液をエッペンドルフチューブにそれぞれ移し、その後、減圧下で濃縮した。得られた濃縮物を、充填溶液（９０％ホルムアミド中の１×ＴＢＥ溶液）（１００μＬ）にそれぞれ溶解させた。その溶液を、２０％ＰＡＧＥ（２０Ａ，６時間）（泳動用緩衝液は、１×ＴＢＥ緩衝液を用いた）を用いてそれぞれ分離し、目的とするオリゴヌクレオチドのバンドを切り出した。切りだしたバンドに、０．１ＭのＥＤＴＡ水溶液（２０ｍＬ）をそれぞれ加え、一晩放置した。このＥＤＴＡ水溶液の液体部分を、Ｃ−１８逆相カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐ−Ｐａｋ）（溶離液：水中、５０％ＣＨ３ＣＮ（３ｍＬ））によりそれぞれ精製して、目的とする一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を得た。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ計算値：５２２６．５０、実測値：５２２７．７３。【０１９２】  前記実施例１０において用いた、以下の溶液の調製方法について説明する。【０１９３】  ０．１ＭのＴＥＡＡ緩衝液は、以下のようにして調製した。まず、２Ｎの酢酸（１１４．３８ｍＬ）およびトリエチルアミン（２７７．６ｍＬ）の混合物に、水を加えて１Ｌにした。その溶液に酢酸を加えて、ｐＨを７．０に調整し、次いでその溶液を２０倍に希釈することにより調製した。【０１９４】  ２０％ＰＡＧＥは、以下のようにして調製した。まず、４０％アクリルアミド（アクリルアミド：Ｎ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド＝１９：１）溶液（４５ｍＬ）、尿素（３７．８ｇ）および１０×ＴＢＥ緩衝液（９ｍＬ）を混合して溶解させ、その後水を加えて９０ｍＬとした。その溶液に、ＡＰＳ（６２ｍｇ）を加えて溶解させた後、ＴＥＭＥＤ（４５μＬ）を加えて振り混ぜた。その溶液を、１．５ｍｍスペーサーを挟んで固定した２枚ガラス板の間に流し込み、１時間以上静置して固化させて、２０％ＰＡＧＥを得た。【０１９５】  ０．１ＭのＥＤＴＡ水溶液は、ＥＤＴＡ・４Ｎａ（１．８０ｇ）を水（４０ｍＬ）に溶解させることにより調製した。【０１９６】  ４０％アクリルアミド（アクリルアミド：Ｎ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド＝１９：１）溶液は、アクリルアミド（１９０ｇ）およびＮ，Ｎ’−ビスアクリルアミド（１０ｇ）を水に溶解させて、５００ｍＬにすることで調製した。【０１９７】  １０×ＴＢＥ緩衝液は、Ｔｒｉｓ（１０９ｇ）、ホウ酸（５５ｇ）およびＥＤＴＡ・２Ｎａ（７．４３ｇ）を水に溶解させて１Ｌにすることで調製した。【０１９８】  （実施例１１）
塩基配列の中央部に、ヌクレオシド類似体を３つ導入した配列番号２（図１参照）からなる一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体の製造
配列番号１の代わりに配列番号２の塩基配列に従い、ＵＢで示す配列には、実施例２で製造した１−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−｛（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）｝−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−ウラシルをヌクレオシドモノマーとして用いて導入した以外は、実施例１０と同様にして一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を製造した。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ計算値：５２３２．３８、実測値：５２３３．９５。【０１９９】  （実施例１２）
実施例１０で製造した配列番号１からなるオリゴヌクレオチド類似体（１．２ｎｍｏｌ）と、実施例１１で製造した配列番号２からなる一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体（１．２ｎｍｏｌ）とを、アニーリングバッファー（１０ｍＭのリン酸ナトリウム塩（ｐＨ７．０）および１００ｍＭのＮａＣｌ）中に溶解させた。その溶液を９０℃で１分間、次いで３７℃で１時間の間、インキュベートして、図１に示すような、配列番号１からなるオリゴヌクレオチド類似体と配列番号２からなるオリゴヌクレオチド類似体とからなる、二本鎖オリゴヌクレオチド類似体を得た。【０２００】  オリゴヌクレオチド類似体のスタッキング効果
（実施例１３）
配列番号１の代わりに配列番号３（図２参照）の塩基配列に従い、実施例６で製造した固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ−１）を出発原料として用いた以外は、実施例１０と同様にして一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を製造した。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ計算値：２１２６．４４、実測値：２１２８．１７。【０２０１】  （実施例１４）
実施例１３で製造した配列番号３からなるオリゴヌクレオチド類似体（２．４ｎｍｏｌ）を、アニーリングバッファー（１０ｍＭのリン酸ナトリウム塩（ｐＨ７．０）および１ＭのＮａＣｌ）中に溶解させた。その溶液を９０℃で１分間、次いで３７℃で１時間の間、インキュベートして、図２に示すような、配列番号３からなるオリゴヌクレオチド類似体と配列番号３からなるオリゴヌクレオチド類似体とからなる、二本鎖オリゴヌクレオチド類似体を得た。【０２０２】  （実施例１５）
配列番号１の代わりに配列番号４（図２参照）の塩基配列に従い、実施例８で製造した固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ−３）を出発原料として用いた以外は、実施例１０と同様にして一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を製造した。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ計算値：２１０３．４６、実測値：２１０５．５８。【０２０３】  （実施例１６）
実施例１３で製造した配列番号３からなるオリゴヌクレオチド類似体の代わりに、実施例１５で製造した配列番号４からなるオリゴヌクレオチド類似体を用いて、図２に示すような、配列番号４からなるオリゴヌクレオチド類似体と配列番号４からなるオリゴヌクレオチド類似体とからなる、二本鎖オリゴヌクレオチド類似体を得た。【０２０４】  （比較例１）
配列番号１の代わりに配列番号５（図２参照）の塩基配列に従い、実施例１０と同様にして一本鎖のオリゴヌクレオチドを製造した。【０２０５】  （比較例２）
実施例１３で製造した配列番号３からなるオリゴヌクレオチド類似体の代わりに、比較例１で製造した配列番号５からなるオリゴヌクレオチドを用いて、図２に示すような、配列番号５からなるオリゴヌクレオチドと配列番号５からなるオリゴヌクレオチドとからなる、二本鎖オリゴヌクレオチドを得た。【０２０６】  （比較例３）
配列番号１の代わりに配列番号６（図２参照）の塩基配列に従い、実施例１０と同様にして一本鎖のオリゴヌクレオチドを製造した。【０２０７】  （比較例４）
実施例１３で製造した配列番号３からなるオリゴヌクレオチド類似体の代わりに、比較例３で製造した配列番号６からなるオリゴヌクレオチドを用いて、図２に示すような、配列番号６からなるオリゴヌクレオチドと配列番号６からなるオリゴヌクレオチドとからなる、二本鎖オリゴヌクレオチドを得た。【０２０８】  （二本鎖安定性とスタッキング効果）
実施例１４および１５で製造した二本鎖オリゴヌクレオチド類似体ならびに比較例２および４で製造した二本鎖オリゴヌクレオチドについて、測定したそれぞれのＴｍ値および２９８Ｋにおける△Ｇ値を、以下の表１に示す。【０２０９】
【表１】
2006027862.tif 000036
【０２１０】  前記△Ｇ値は、以下のようにして算出した。
今回、二本鎖の形成と解離の平衡がオリゴヌクレオチドの総濃度に依存的に変化することを利用した方法を用いた。オリゴヌクレオチドの濃度を数段階に分けてＴｍを測定し、下記式（Ｂ）に基いて１／Ｔｍ対ｌｎ  Ｃｔ／４（Ｃｔはオリゴヌクレオチド総濃度）のグラフを描き、その傾きと切片から△Ｈ°と△Ｓ°を算出した。そして下記式（Ａ）から△Ｇ°を求めた。
△Ｇ°  ＝△Ｈ°−Ｔ△Ｓ°          （Ａ）
１／Ｔｍ＝（Ｒ／△Ｈ°）ｌｎ（Ｃｔ／４）＋（△Ｓ°／△Ｈ°）      （Ｂ）
前記表１に示すように、ヌクレオシド類似体で置き換えられたオリゴヌクレオチド類似体は、Ｔｍ値が増加していることから二本鎖の安定性の向上が、かつ△Ｇ０２９８の絶対値が増加していることから、オリゴヌクレオチド類似体のスタッキング効果が向上していることが確認できた。【０２１１】  （実施例１７）
配列番号１の代わりに配列番号７（図３参照）の塩基配列に従い、実施例６で製造した固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ−１）を出発原料として用い、かつ３’末端以外の塩基配列中、ＡＢで示す配列には、参考例１で製造したＮ６−ベンゾイル−９−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−アデニンをヌクレオシドモノマーとして用いて導入した以外は、実施例１０と同様にして一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を製造した。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ計算値：３９３６．９１、実測値：３９３８．２０。【０２１２】  （実施例１８）
配列番号１の代わりに配列番号８（図３参照）の塩基配列に従い、実施例８で製造した固相合成用ユニット化合物（ＩＩＩ−３）を出発原料として、ＵＢで示す配列には、実施例２で製造した１−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−｛（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）｝−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−ウラシルをヌクレオシドモノマーとして用いて導入した以外は、実施例１０と同様にして一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を製造した。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ計算値：３６６０．４３、実測値：３６６２．４６。【０２１３】  （比較例５）
配列番号１の代わりに配列番号９（図３参照）の塩基配列に従い、実施例１０と同様にして一本鎖のオリゴヌクレオチドを製造した。【０２１４】  （比較例６）
配列番号１の代わりに配列番号１０（図３参照）の塩基配列に従い、実施例１０と同様にして一本鎖のオリゴヌクレオチドを製造した。【０２１５】  （実施例１９）
実施例１８で製造した配列番号８からなるオリゴヌクレオチド類似体（１．２ｎｍｍｏｌ）と、比較例５で製造した配列番号９からなるオリゴヌクレオチド（１．２ｎｍｏｌ）とを、アニーリングバッファー（１０ｍＭのリン酸ナトリウム塩（ｐＨ７．０）および１ＭのＮａＣｌ）中に溶解させた。その溶液を９０℃で１分間、次いで３７℃で１時間の間、インキュベートして、図３に示すような、配列番号８からなるオリゴヌクレオチド類似体と配列番号９からなるオリゴヌクレオチドとからなる、二本鎖オリゴヌクレオチド類似体を得た。【０２１６】  （実施例２０）
実施例１７で製造した配列番号７からなるオリゴヌクレオチド類似体（１．２ｎｍｏｌ）と、実施例１８で製造した配列番号８からなるオリゴヌクレオチド類似体（１．２ｎｍｏｌ）とを、アニーリングバッファー（１０ｍＭのリン酸ナトリウム塩（ｐＨ７．０）および１ＭのＮａＣｌ）中に溶解させた。その溶液を９０℃で１分間、次いで３７℃で１時間の間、インキュベートして、図３に示すような、配列番号７からなるオリゴヌクレオチド類似体と配列番号８からなるからなるオリゴヌクレオチド類似体とからなる、二本鎖オリゴヌクレオチド類似体を得た。【０２１７】  （比較例７）
比較例５で製造した配列番号９からなるオリゴヌクレオチド（１．２ｎｍｏｌ）と、比較例６で製造した配列番号１０からなるオリゴヌクレオチド（１．２ｎｍｏｌ）とを、アニーリングバッファー（１０ｍＭのリン酸ナトリウム塩（ｐＨ７．０）および１ＭのＮａＣｌ）中に溶解させた。その溶液を９０℃で１分間、次いで３７℃で１時間の間、インキュベートして、図３に示すような、配列番号９からなるオリゴヌクレオチドと配列番号１０からなるオリゴヌクレオチドとからなる、二本鎖オリゴヌクレオチドを得た。【０２１８】  （二本鎖の安定性）
実施例２０で製造した二本鎖オリゴヌクレオチド類似体および比較例７で製造した二本鎖オリゴヌクレオチドについて、測定したそれぞれのＴｍ値を、以下の表２および図４に示す。【０２１９】
【表２】
2006027862.tif 000037
【０２２０】  前記表２に示すように、ヌクレオシド類似体で全て置き換えられたオリゴヌクレオチド類似体は、Ｔｍ値が増加していることから、二本鎖の形成能および二本鎖の安定性が、天然型オリゴヌクレオチドと比較して、向上していることが確認できた。【０２２１】  （二本鎖形成能）
実施例１９で製造した二本鎖オリゴヌクレオチド類似体および比較例７で製造した二本鎖オリゴヌクレオチドについて、ＣＤスペクトルを測定した（温度１０℃）。得られた結果を、図５に示す。【０２２２】  図５に示すように、ヌクレオシド類似体で全て置き換えられた一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体と、天然型の一本鎖のオリゴヌクレオチドとを含む二本鎖オリゴヌクレオチド類似体は、天然型の二本鎖オリゴヌクレオチドと同様のらせん構造を形成していることが確認できた。【０２２３】  （ヌクレーゼ耐性）
二本鎖オリゴヌクレオチド類似体のエキソヌクレアーゼ耐性の評価
実施例１７で得られた配列番号７からなる一本鎖オリゴヌクレオチド類似体、比較例５で得られた配列番号９からなる天然型の一本鎖オリゴヌクレオチドの、エキソヌクレアーゼ耐性を評価した。エキソヌクレアーゼとしては、ヘビ毒ホスホロジエステラーゼ（ＳＶＰ）を使用した。ＳＶＰは、リン酸ジエステル結合を選択的に切断しオリゴヌクレオチドを５’−モノリン酸ヌクレオチドに分解する。【０２２４】  以下に示す組成の反応溶液から、１、３、５、１０、３０、６０分後に各エッペンドルフチューブに反応液（３０μｌ）をサンプリングし、９０℃で５分間加熱して反応を停止させた。なお、０分後のサンプルは、ＳＶＰ水溶液を加えていないものである。得られた各時間におけるサンプルを、ＨＰＬＣ（Ｃ−１８逆相カラムクロマトグラフィー（溶離液：Ａ緩衝液（５％アセトニトリル、０．１Ｍ  ＴＥＡＡ緩衝液）およびＢ緩衝液（５０％アセトニトリル、０．１Ｍ  ＴＥＡＡ緩衝液）。グラジエントサイクルは、０分においてＢ緩衝液０％、２０分後においてＢ緩衝液４０％、２５分後においてＢ緩衝液１００％、３０分後においてＢ緩衝液１０％、４０分後に終了。流速１ｍｌ／分、測定波長２６０ｎｍ、実施例１７のオリゴヌクレオチド類似体の保持時間＝１３．１７８分、比較例５のオリゴヌクレオチドの保持時間＝１０．６１６分）で分析した。その結果を以下の表３に示す。【０２２５】
【表３】
2006027862.tif 000038
【０２２６】
【表４】
2006027862.tif 000039
【０２２７】
【表５】
2006027862.tif 000040
前記表３から、一本鎖オリゴヌクレオチド類似体は、天然型一本鎖オリゴヌクレオチドと比較して、エキソヌクレアーゼ耐性が向上していることが確認された。【０２２８】  （実施例２１）
塩基配列の３’末端の２つのヌクレオシド類似体からなるダングリングエンド配列が、ヌクレオシド類似体で置き換えられている、配列番号１１（図６参照）からなる一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体の製造
配列番号１１の塩基配列に従い、核酸自動合成機（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｏｄｅｌ  ８９０９）を用いるホスホロアミダイト法によりオリゴヌクレオチド（ＲＮＡタイプ）を製造した。図６に示す塩基配列中、ＵＢで示す配列には、実施例２で製造した１−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−｛（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）｝−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−ウラシルをヌクレオシドモノマーとして用いて導入した。他の配列には、リボースタイプのヌクレオシドを用いて導入した。１μｍｏｌの固相合成用ＣＰＧ樹脂を使用し、縮合時間はリボースタイプのヌクレオシドについては３０分、１−（３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）メチル−５−Ｏ−｛（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）｝−ホスフィニルオキシメチルフェニル）−ウラシルについては６０分とした。【０２２９】  前記ＣＰＧ樹脂に結合したオリゴヌクレオチドは、アンモニア水溶液（２ｍＬ）中で５５℃で１２時間反応させた。反応混合物を減圧ろ過し、得られたろ液をエッペンドルフチューブにそれぞれ移し、その後、減圧下で濃縮した。得られた濃縮物を、充填溶液（９０％ホルムアミド中の１×ＴＢＥ溶液）（１００μＬ）にそれぞれ溶解させた。その溶液を、２０％ＰＡＧＥ（２０Ａ，６時間）（泳動用緩衝液は、１×ＴＢＥ緩衝液を用いた）を用いてそれぞれ分離し、目的とするオリゴヌクレオチドのバンドを切り出した。切りだしたバンドに、０．１ＭのＥＤＴＡ水溶液（２０ｍＬ）をそれぞれ加え、一晩放置した。このＥＤＴＡ水溶液の液体部分を、Ｃ−１８逆相カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐ−Ｐａｋ）（溶離液：水中、５０％ＣＨ３ＣＮ（３ｍＬ））によりそれぞれ精製して、目的とする一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を得た。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ計算値：６７２９．１１３２、実測値：６７２５．９４５１。【０２３０】  なお、０．１ＭのＴＥＡＡ緩衝液、２０％ＰＡＧＥ、０．１ＭのＥＤＴＡ水溶液、４０％アクリルアミド（アクリルアミド：Ｎ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド＝１９：１）溶液および１０×ＴＢＥ緩衝液は、実施例１０で調製したもの同じものを用いた。【０２３１】  （実施例２２）
塩基配列の３’末端の２つのヌクレオシド類似体からなるダングリングエンド配列が、ヌクレオシド類似体で置き換えられている、配列番号１２（図６参照）からなる一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体の製造
配列番号１１の代わりに配列番号１２の塩基配列に従った以外は、実施例２１と同様にして一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を製造した。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ計算値：６５７９．９４４７、実測値：６５７６．８５１２。【０２３２】  （実施例２３）
実施例２１で製造した配列番号１１からなるオリゴヌクレオチド類似体（１．２ｎｍｏｌ）と、実施例２２で製造した配列番号１２からなるオリゴヌクレオチド類似体（１．２ｎｍｏｌ）とを、アニーリングバッファー（１０ｍＭのリン酸ナトリウム塩（ｐＨ７．０）および１ＭのＮａＣｌ）中に溶解させた。その溶液を９０℃で１分間、次いで３７℃で１時間の間、インキュベートして、図６に示すような、配列番号１１からなるオリゴヌクレオチド類似体と配列番号１２からなるオリゴヌクレオチド類似体とからなる、二本鎖オリゴヌクレオチド類似体を得た。
【産業上の利用可能性】
【０２３３】  本発明のヌクレオシド類似体は、例えば、ＤＮＡ検査キット用オリゴヌクレオチドを製造するためのヌクレオシドとして有用である。
【図面の簡単な説明】
【０２３４】
【図１】図１は、オリゴヌクレオチド類似体の例を示す図である。
【図２】図２は、オリゴヌクレオチド類似体の別の例を示す図である。
【図３】図３は、オリゴヌクレオチド類似体の別の例を示す図である。
【図４】図４は、オリゴヌクレオチド類似体のＴｍ値を示すグラフである。
【図５】図５は、オリゴヌクレオチド類似体のＣＤスペクトルを示すグラフである。
【図６】図６は、オリゴヌクレオチド類似体の別の例を示す図である。
【配列表フリーテキスト】
【０２３５】配列番号１  オリゴヌクレオチド類似体
配列番号２  オリゴヌクレオチド類似体
配列番号３  オリゴヌクレオチド類似体
配列番号４  オリゴヌクレオチド類似体
配列番号５  配列番号３に対応するオリゴヌクレオチド
配列番号６  配列番号４に対応するオリゴヌクレオチド
配列番号７  ｐｏｌｙＡのオリゴヌクレオチド類似体
配列番号８  ｐｏｌｙＵのオリゴヌクレオチド類似体
配列番号９  ｐｏｌｙＡのオリゴヌクレオチド
配列番号１０  ｐｏｌｙＵのオリゴヌクレオチド
配列番号１１  オリゴヌクレオチド類似体
配列番号１２  オリゴヌクレオチド類似体
【図１】
2006027862.tif 000055
【図２】
2006027862.tif 000056
【図３】
2006027862.tif 000057
【図４】
2006027862.tif 000058
【図５】
2006027862.tif 000059
【図６】
2006027862.tif 000060
【手続補正書】
【提出日】平成18年5月26日(2006.5.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】請求の範囲
【請求項１】（削除）
【請求項２】（削除）
【請求項３】（削除）
【請求項４】（削除）
【請求項５】（削除）
【請求項６】（削除）
【請求項７】（削除）
【請求項８】（削除）
【請求項９】（削除）
【請求項１０】（削除）
【請求項１１】（削除）
【請求項１２】（削除）
【請求項１３】（削除）
【請求項１４】（削除）
【請求項１５】（削除）
【請求項１６】（削除）
【請求項１７】（削除）
【請求項１８】（削除）
【請求項１９】（削除）
【請求項２０】（削除）
【請求項２１】オリゴヌクレオチドを構成する全てのヌクレオシドが、ヌクレオシド類似体でそれぞれ置き換えられているオリゴヌクレオチド類似体であって、
前記ヌクレオシド類似体が、下記式（ＩＩ−１）で表されるヌクレオシド類似体、下記式（ＩＩ−２）で表されるヌクレオシド類似体、下記式（ＩＩ−３）で表されるヌクレオシド類似体、下記式（ＩＩ−４）で表されるヌクレオシド類似体、および下記式（ＩＩ−５）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択されるいずれかであり、
前記オリゴヌクレオチド類似体が、一本鎖オリゴヌクレオチドであり、
前記オリゴヌクレオチド類似体が、天然型のオリゴヌクレオチドと二本鎖を形成する能力を有し、前記二本鎖が、天然型のオリゴヌクレオチド二本で形成された二本鎖と同様のらせん構造を有するオリゴヌクレオチド類似体。
【化１５】
2006027862.tif 000061
【請求項２２】オリゴヌクレオチドを含む遺伝子発現抑制剤であって、前記オリゴヌクレオチドが、請求項２１に記載のオリゴヌクレオチド類似体である遺伝子発現抑制剤。
【請求項２３】遺伝子発現に伴う疾患を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、請求項２２に記載の遺伝子発現抑制剤を含む医薬組成物。
【請求項２４】請求項２１に記載のオリゴヌクレオチド類似体を含む検査キットであって、前記オリゴヌクレオチド類似体が、検体中の遺伝子とハイブリッド形成することにより、前記遺伝子が検査される検査キット。
【請求項２５】請求項２４に記載の検査キットであり、前記検査キットが、ＤＮＡチップであるキット。
【国際調査報告】
2006027862.tif 000062
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