(57)【要約】シスチンとテアニンとを組み合わせてなる効果的な老化防止剤。シスチンとテアニンとを組み合わせてなる老化防止用の食品または飼料の提供。【特許請求の範囲】
【請求項１】
シスチンとテアニンとを組み合わせてなる老化防止剤。
【請求項２】
老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、請求項１記載の老化防止剤。
【請求項３】
シスチンとテアニンとを組み合わせてなる老化防止用の食品または飼料。
【請求項４】
老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、請求項３記載の食品または飼料。
【請求項５】
シスチンとテアニンとを組み合わせてなる併用剤、および該併用剤を老化防止用途に使用することができる、または使用すべきであることを記載した、該併用剤に関する記載物を含む商業パッケージ。
【請求項６】
老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、請求項５記載の商業パッケージ。
【請求項７】
シスチンとテアニンとの組合せの割合が、重量比率として１００：１〜１：１００である請求項１または２記載の老化防止剤。
【請求項８】
シスチンとテアニンの投与量が両方あわせて１日あたり１００μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である請求項１または２記載の老化防止剤。
【請求項９】
シスチンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である請求項１または２記載の老化防止剤。
【請求項１０】
テアニンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である請求項１または２記載の老化防止剤。
【請求項１１】
シスチンとテアニンとを組み合わせてなる老化防止剤を製造するためのシスチンとテアニンの使用。
【請求項１２】
老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
シスチンとテアニンとを組み合わせてなる老化防止用の食品または飼料を製造するためのシスチンとテアニンの使用。
【請求項１４】
老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、請求項１３記載の使用。
【請求項１５】
シスチンとテアニンとの組合せの割合が、重量比率として１００：１〜１：１００である老化防止剤を製造するための請求項１１または１２記載の使用。
【請求項１６】
シスチンとテアニンの投与量が両方あわせて１日あたり１００μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である老化防止剤を製造するための請求項１１または１２記載の使用。
【請求項１７】
シスチンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である老化防止剤を製造するための請求項１１または１２記載の使用。
【請求項１８】
テアニンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である老化防止剤を製造するための請求項１１または１２記載の使用。
【請求項１９】
シスチンとテアニンとを組み合わせて投与対象に投与することを含む老化防止方法。
【請求項２０】
老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、請求項１９記載の老化防止方法。
【請求項２１】
シスチンとテアニンとを組み合わせてなる食品または飼料を投与対象に投与することを含む老化防止方法。
【請求項２２】
老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、請求項２１記載の老化防止方法。
【請求項２３】
シスチンとテアニンとの組合せの割合が、重量比率として１００：１〜１：１００である請求項１９または２０記載の老化防止方法。
【請求項２４】
シスチンとテアニンの投与量が両方あわせて１日あたり１００μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である請求項１９または２０記載の老化防止方法。
【請求項２５】
シスチンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である請求項１９または２０記載の老化防止方法。
【請求項２６】
テアニンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である請求項１９または２０記載の老化防止方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、シスチンとテアニンとを組み合わせてなる老化防止剤、老化防止用の食品および飼料に関する。
【背景技術】  老化は、一般に加齢に伴う生理機能の低下と定義されている。加齢に伴って低下する生理機能の具体例として、基礎代謝、肺活量、最大呼吸量、心係数、細胞内の水分量、神経伝導速度、腎糸球体ろ過率、腎血漿流量、免疫機能などが挙げられる（今堀和友著、「老化とは何か」、岩波新書、岩波書店、２００１）。また、加齢に伴い、特に高齢者では、臓器の実質細胞が減少しその結果臓器が萎縮したり、高齢者では一般に身体活動量が低下し、運動を行なわないために骨格筋が萎縮したりといった、内臓や筋肉の形態変化も認められる。その結果、高齢者では、精神系、神経系、循環器系、呼吸器系、消化器系、内分泌代謝系、血液系、腎泌尿器系、運動系、皮膚を含めた感覚器系などの全身の器官に慢性疾患が出現する（佐藤和人、本間健、小松龍史編、「エッセンシャル臨床栄養学」、医歯薬出版、２００３）。
これらの慢性疾患は、老後のクオリティーオブライフ（生活の質、ＱＯＬ）を低下させることから、老後のＱＯＬ向上のためには、生理機能の低下、身体活動量の低下、内臓や筋肉の形態変化などの加齢に伴う全身状態の悪化を改善または予防することが重要である。
脳神経系、内分泌系、免疫系が複雑に関連するホメオスタシス（生体恒常性維持）のスーパーシステムが高齢化（加齢）に伴い衰えることが、身心の機能の低下、即ち老化の原因であり、脳神経、内分泌、免疫の機能の低下をどれほど抑えられるかが老化防止のポイントであると記載されている。しかし、老化防止に「栄養」と「運動」が有効であることが記載されているのみで、具体的な老化防止剤は開示されていない（今堀和友著、「老化とは何か」、岩波新書、岩波書店、２００１）。
ここで、テアニンは緑茶中に多く含まれるアミノ酸であるが、テアニンが摂取された後に産生されるエチルアミンが、Ｔ細胞の一種γδＴ細胞に作用してサイトカインであるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）の産生を促進することが開示されている（Ａ．Ｂ．Ｋａｍａｔｈら、ＰＮＡＳ、２００３、ｖｏｌ．１００（１０）、６００９−６０１４）。また、ヒト末梢血Ｔ細胞の４％がγδタイプのＴ細胞であり、摂取したテアニンが体内で代謝されて産生されるエチルアミンが、γδＴ細胞に作用しサイトカインであるインターロイキン−２（ＩＬ−２）の産生を促進することが開示されている（Ｊ．Ｆ．Ｂｕｋｏｗｓｋｉら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９９９、ｖｏｌ．１１、５７−６５）。しかし、これらの作用は、試験管内で観察された作用であり、生体内において実際に抗体産生に結びつくという報告はない。また、テアニン摂取が、生体内において実際に抗体産生を亢進させるという知見はない。
さらに、テアニンや、含硫アミノ酸であるシスチン、又、それらを組み合わせた場合の、老化防止作用、就中加齢に伴う生理機能低下、免疫低下の改善または予防作用について開示したものはない。
【発明の開示】
本発明は、効果的な老化防止剤、老化防止用の食品および飼料を提供することを目的とする。ここに、本明細書において「老化防止」とは、加齢に伴う全身状態の悪化の改善または予防を意味し、加齢に伴う全身状態の悪化には、加齢に伴う生理機能の低下（例えば免疫機能の低下）、身体活動量の低下、臓器や筋肉の形態変化等が含まれる。
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、シスチンとテアニンとを組み合わせて投与することにより、老齢マウスに対して優れた免疫増強作用があること、並びに老齢マウスに対して優れた全身状態の悪化の改善作用があることを見出し、この知見をもとに本発明を完成させるに至った。
本発明は以下の項目を包含する。
（１）シスチンとテアニンとを組み合わせてなる老化防止剤。
（２）老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、上記（１）記載の老化防止剤。
（３）シスチンとテアニンとを組み合わせてなる老化防止用の食品または飼料。
（４）老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、上記（３）記載の食品または飼料。
（５）シスチンとテアニンとを組み合わせてなる併用剤、および該併用剤を老化防止用途に使用することができる、または使用すべきであることを記載した、該併用剤に関する記載物を含む商業パッケージ。
（６）老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、上記（５）記載の商業パッケージ。
（７）シスチンとテアニンとの組合せの割合が、重量比率として１００：１〜１：１００である上記（１）または（２）記載の老化防止剤。
（８）シスチンとテアニンの投与量が両方あわせて１日あたり１００μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である上記（１）または（２）記載の老化防止剤。
（９）シスチンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である上記（１）または（２）記載の老化防止剤。
（１０）テアニンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である上記（１）または（２）記載の老化防止剤。
（１１）シスチンとテアニンとを組み合わせてなる老化防止剤を製造するためのシスチンとテアニンの使用。
（１２）老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、（１１）記載の使用。
（１３）シスチンとテアニンとを組み合わせてなる老化防止用の食品または飼料を製造するためのシスチンとテアニンの使用。
（１４）老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、（１３）記載の使用。
（１５）シスチンとテアニンとの組合せの割合が、重量比率として１００：１〜１：１００である老化防止剤を製造するための（１１）または（１２）記載の使用。
（１６）シスチンとテアニンの投与量が両方あわせて１日あたり１００μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である老化防止剤を製造するための（１１）または（１２）記載の使用。
（１７）シスチンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である老化防止剤を製造するための（１１）または（１２）記載の使用。
（１８）テアニンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である老化防止剤を製造するための（１１）または（１２）記載の使用。
（１９）シスチンとテアニンとを組み合わせて投与対象に投与することを含む老化防止方法。
（２０）老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、（１９）記載の老化防止方法。
（２１）シスチンとテアニンとを組み合わせてなる食品または飼料を投与対象に投与することを含む老化防止方法。
（２２）老化が、加齢に伴う運動量の低下、運動機能の低下、筋力の低下、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、および免疫機能の低下から選ばれる少なくとも１つである、（２１）記載の老化防止方法。
（２３）シスチンとテアニンとの組合せの割合が、重量比率として１００：１〜１：１００である（１９）または（２０）記載の老化防止方法。
（２４）シスチンとテアニンの投与量が両方あわせて１日あたり１００μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である（１９）または（２０）記載の老化防止方法。
（２５）シスチンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である（１９）または（２０）記載の老化防止方法。
（２６）テアニンの投与量が１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である（１９）または（２０）記載の老化防止方法。
本発明の老化防止剤、老化防止用の食品および飼料は、加齢に伴う全身状態の悪化（例えば、生理機能の低下、臓器や筋肉の形態変化、身体活動量の低下等、具体的には例えば、運動量の低下、運動機能（例えば、歩行時や走行時の速さ、跳躍力、持久力、瞬発力等）の低下、筋力の低下（特に筋肉の締まり感の減少）、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪・体毛・羽毛の保湿機能の低下（例えば、皮膚や毛髪・体毛・羽毛の乾燥、皮膚の弾力性の低下、皮膚や毛髪・体毛・羽毛のつやの減少等）、免疫機能の低下、日常的な活動低下等）を改善し、または予防することができる。
【発明を実施するための最良の形態】  本発明で使用されるシスチンは、Ｌ−シスチンであることが好ましい。
シスチンは塩の態様であってもよく、本明細書における「シスチン」なる用語は塩をも包含する概念である。
かかる塩としては、薬理学的に許容されるものであれば、特に制限はなく、例えば、無機酸または有機酸との塩が挙げられる。無機酸としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等が挙げられ、有機酸としてはギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、マロン酸、メタンスルホン酸等が挙げられる。また、塩基との塩とすることもできる。塩基との塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩等が挙げられる。
本発明で使用されるテアニンは、Ｌ−テアニンが好ましい。
テアニンは塩の態様であってもよく、本明細書における「テアニン」なる用語は塩をも包含する概念である。
かかる塩としては、薬理学的に許容されるものであれば、特に制限はなく、例えば、無機酸または有機酸との塩が挙げられる。無機酸としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等が挙げられ、有機酸としてはギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、マロン酸、メタンスルホン酸等が挙げられる。また、塩基との塩とすることもできる。塩基との塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩等が挙げられる。
本発明の老化防止剤は、ヒト、ヒト以外の動物〔例えば、ヒト以外の哺乳類（ブタ、ウシ、ウマ、イヌ等の家畜および愛玩動物）、鳥類（シチメンチョウ、ニワトリ等の家禽および愛玩動物）等〕等に適用することが有用である。
本発明の老化防止剤は、シスチンとテアニンとを組み合わせてなるもの（即ち、併用剤）であり、投与時にシスチンとテアニンとを組み合わすことができるものであればよい。従って、本発明の老化防止剤は、投与時にシスチンとテアニンとを組み合わすことができるものであれば、シスチンとテアニンとを同時に製剤化して得られる単一の製剤であっても、シスチンとテアニンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤を組み合わせたものであってもよい。投与形態は、特に限定されず、例えば、（１）シスチンとテアニンとを含有する組成物、即ち、単一の製剤としての投与、（２）シスチンとテアニンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での同時投与、（３）シスチンとテアニンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与（例えばシスチン、テアニンの順序での投与、あるいは逆の順序での投与）、（４）シスチンとテアニンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での同時投与、（５）シスチンとテアニンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与（例えばシスチン、テアニンの順序での投与、あるいは逆の順序での投与）等が挙げられる。
なお、時間差をおいての投与の場合、両者が体内で共存していることが必要である。
本発明の老化防止剤において、シスチンとテアニンとの組合せの割合は、両者が単一製剤とされる場合、別個の製剤とされる場合のいずれにおいても、重量比率として、通常１００：１〜１：１００の範囲であり、２０：１〜１：２の範囲が好ましい。
本発明の老化防止剤において、投与量はシスチンとテアニンとをあわせて１日あたり通常１００μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、５００μｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲が好ましい。但し、シスチンの投与量は１日あたり通常１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、１００μｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲が好ましい。また、テアニンの投与量は、１日あたり通常１μｇ／ｋｇ体重〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、２０μｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲が好ましい。
本発明の老化防止剤において、上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。また投与期間は特に限定されない。
本発明の老化防止剤はその剤型に格別の制限はなく、経口製剤、非経口製剤のいずれでもよい。その剤型としては、例えば錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤、マイクロカプセル剤あるいは懸濁液剤等の剤型が挙げられる。本発明の老化防止剤は経口的または非経口的に適用することができる。
非経口的に投与する場合には、例えば、シスチンおよびテアニンを含有する溶液を点鼻噴霧することや注射剤として投与すること等ができる。経口的に投与する場合には、食前、食後、食間を問わない。
本発明の老化防止剤は、必要に応じて、担体、賦形剤、結合剤、膨化剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤、防腐剤、乳化剤、被覆剤等を含有することができ、これらとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で用いることができる。これらの組成物または製剤におけるシスチンおよびテアニンの量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにすればよい。
本発明の老化防止剤において、含有することができる具体的な成分としては、例えばトラガント、アラビアゴム、コーンスターチおよびゼラチンのような結合剤；微晶性セルロース、結晶セルロースのような賦形剤；コーンスターチ、前ゼラチン化デンプン、アルギン酸、デキストリンのような膨化剤；ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤；微粒二酸化ケイ素、メチルセルロースのような流動性改善剤；グリセリン脂肪酸エステルのような滑沢剤；ショ糖、乳糖およびアスパルテームのような甘味剤；ペパーミント、ワニラ香料およびチェリーまたはオレンジのような香味剤；モノグリセリド、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、レシチンなどの乳化剤等が挙げられる。
調剤単位形態がカプセル剤である場合には上記のタイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。
また、種々の他の材料を、調剤単位の物理的形態を変化させるために含有させることができる。錠剤の被覆剤としては、例えば、シェラック、砂糖またはその両方などが挙げられる。シロップ剤またはエリキシル剤は、例えば、甘味剤としてショ糖、防腐剤としてメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素およびチェリーまたはオレンジ香味等などを含有することができる。その他、各種ビタミン類、各種アミノ酸類を含有しても良い。
腸溶製剤とするときは、例えばヒドロキシルフェニルメチルセルロースの水溶液を被覆前処理剤とし、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートの水溶液およびポリアセチンの水溶液を被覆剤として常法により腸溶製剤とすればよい。
本発明の老化防止剤は、加齢に伴う全身状態の悪化（例えば、生理機能の低下、臓器や筋肉の形態変化、身体活動量の低下等、具体的には例えば、運動量の低下、運動機能（例えば、歩行時や走行時の速さ、跳躍力、持久力、瞬発力等）の低下、筋力の低下（特に筋肉の締まり感の減少）、臓器や骨格筋の萎縮、皮膚や毛髪・体毛・羽毛の保湿機能の低下（例えば、皮膚や毛髪・体毛・羽毛の乾燥、皮膚の弾力性の低下、皮膚や毛髪・体毛・羽毛のつやの減少等）、免疫機能の低下、日常的な活動低下等）の改善または予防に用いることができる。
本発明においては、シスチンとテアニンとを組み合わせてなる併用剤、および該併用剤を老化防止用途に使用することができる、または使用すべきであることを記載した、該併用剤に関する記載物を含む商業パッケージが含まれる。
本発明の老化防止用の食品は、シスチンとテアニンとを組み合わせてなる食品であり、飲食時にシスチンとテアニンとを組み合わすことができるものであればよい。本発明の老化防止用の食品に含まれるシスチンおよびテアニンの量は、特に限定されないが、１日あたりの飲食量が本発明の老化防止剤における上記の投与量と同様の範囲となるようにするのが好ましい。本発明の老化防止用の食品の形態は、特に限定されないが、例えば、シスチンおよびテアニンを粉ミルク等の粉末飲料や飲料、菓子等の食品の中に添加したものが挙げられる。
本発明の老化防止用の「食品」は、食品全般を意味するが、いわゆる健康食品を含む一般食品の他、厚生労働省の保健機能食品制度に規定される特定保健用食品や栄養機能食品をも含むものであり、さらにダイエタリーサプリメントも包含される。また、本発明の老化防止剤は、飼料用途にも適用することができ、家禽や家畜等には、通常の飼料に添加して投与することができる。
【実施例】  以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
実施例１
２年齢である老齢マウス（Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ、雌性）に対し、シスチンとテアニンの１０：４（重量比）混合物を、１６ｍｇ／ｋｇ体重（ヒト成人投与量９８０ｍｇ／６０ｋｇ体重／ｄａｙより換算）および３２ｍｇ／ｋｇ体重となるように蒸留水に溶解し、１日１回、２週間胃ゾンデを用いて経口投与した。１回の投与液量は、体重２５ｇ当り０．１ｍＬとした。なお、対照群には、脱イオン水を投与した。
最終投与の翌日に、抗原としてＤＮＰ−Ｄｅｘｔｒａｎを１匹当たり２００μｇを尾静脈より投与して抗原刺激した。抗原刺激４、６、１０日後に鎖骨下静脈から採血し、血清中の抗ＤＮＰ−ＩｇＭ抗体産生量をＥＬＩＳＡ法を用いて測定し、シスチン／テアニンのＩｇＭ抗体産生に及ぼす効果を検討した。
ＥＬＩＳＡ法による抗体量の測定方法は、以下の通りである。
９６穴マイクロプレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ製Ｉｍｍｕｌｏｎ２）にＤＮＰ−ＢＳＡ（２μｇ／ｍＬ）１００μＬ／ｗｅｌｌを分注し、３７℃で２〜３時間インキュベーションしてコートした。
０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳによる洗浄後、検体を１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、４℃で約１８時間静置した。その後、洗浄し、酵素標識抗体（ＨＲＰ−ウサギ抗マウスＩｇＭ）を１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃で６０分間インキュベーションした。洗浄後、基質液１００μＬ／ｗｅｌｌを添加し、遮光して室温で約１０分間反応させた後、２Ｎ硫酸１００μＬ／ｗｅｌｌを加えて反応停止した。マイクロプレートリーダーを用いてＯＤ値を測定した（波長４９０ｎｍ）。ＯＤ値０．５を示す検体の希釈倍率を抗体量とした。
各個体の抗体量を表１に示す。表１より、対照群（５例）では抗原投与後４、６、１０日後の抗体量が概ね１０，０００〜２１，０００の間に分布しているのに対し、シスチン／テアニン１６ｍｇ／ｋｇ体重投与群では５例中３例において、３２ｍｇ／ｋｇ体重投与群では４例中３例において最高値２３，０００〜３０，０００の抗体量を示しており、シスチン／テアニン投与により老齢マウスにおける明らかなＩｇＭ抗体産生量の増加が確認された。
【表１】
2005123058.tif 000002
各群のＩｇＭ値（抗体量）の平均値を表２に示した。この結果より、シスチン／テアニン投与群は抗原投与４日後という初期からＩｇＭ抗体産生を増強することが明らかとなり、加齢に伴う免疫機能の低下に対し、シスチン／テアニンが有用であることが示された。
なお、老齢マウス（約２年齢）においては、成熟マウス（繁殖適齢期で、約３ヶ月齢）に比べ、ＩｇＭ抗体産生能が約３５％に低下することが報告されている（高木康博ら、和漢医薬雑誌  １３、９４、１９９６）。
【表２】
2005123058.tif 000003
実施例２
２年齢である老齢マウスに対し、実施例１の場合と同様にシスチンとテアニンの混合物及び対照として脱イオン水を投与した。その後、一次抗原刺激としてＤＮＰ−ＫＬＨの１００μｇとフロイント不完全アジュバント（ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  ａｄｊｕｖａｎｔ）を混合し、油中水（ｗａｔｅｒ  ｉｎ  ｏｉｌ）状にした懸濁液を腹腔内注射した。４週後の二次抗原刺激として５０μｇのＤＮＰ−ＫＬＨ（ＰＢＳ溶液）を腹腔内注射した。二次抗原刺激後、１０日後にマウスの頸静脈から採血を行った。血液サンプルから血清を分離し、実施例１のＥＬＩＳＡ法と同様の方法により血清中の抗ＤＮＰ−ＩｇＧ抗体量を測定した。この場合、酵素標識抗体としてＨＲＰ−ウサギ抗マウスＩｇＧ抗体を用いた。また、ＯＤ値０．５を示す検体の希釈倍率を抗体量とした。各個体の抗体量を表３に示す。
【表３】
2005123058.tif 000004
表３より、各群のＩｇＧ値（抗体量）の平均値は、対照群３８．８（×１０４）、シスチン／テアニン１６ｍｇ／ｋｇ体重投与群７０．２（×１０４）、シスチン／テアニン３２ｍｇ／ｋｇ体重投与群６１．２（×１０４）となり、シスチン／テアニン投与群は、一次抗原刺激前の投与により、ＩｇＧ抗体産生を増強することが明らかになった。対照群を１００％とすると、シスチン／テアニン１６ｍｇ／ｋｇ体重投与群で１８１％、３２ｍｇ／ｋｇ体重投与群で１５８％の増強を示しており、加齢に伴う免疫機能の低下に対し、シスチン／テアニンが有用であることが示された。
高木らによると、成熟マウス（繁殖適齢期、約３ヶ月齢）のＩｇＧ抗体価を１００とすると、６ヶ月齢で５６、１年齢で３８というようにＩｇＧ抗体産生能が加齢に伴い次第に低下することが明らかになっている（高木康博ら、大阪府立公衛研所報、４０号、１９頁、２００２年）。
実施例３
シスチン／テアニン投与が、加齢に伴う全身状態の悪化に対し、どのような効果を示すかを明らかにするために、老齢マウスを用いて検討を行なった。
実施例１と同様に、２年齢である老齢マウス（Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ、雌性）に対し、シスチンとテアニンの１０：４（重量比）混合物を、１６ｍｇ／ｋｇ体重（ヒト成人投与量  ９８０ｍｇ／６０ｋｇ体重／ｄａｙより換算）および３２ｍｇ／ｋｇ体重となるように蒸留水に溶解し、１日１回、２週間胃ゾンデを用いて経口投与した。１回の投与液量は、体重２５ｇ当り０．１ｍＬとした。なお、対照群には、脱イオン水を投与した。
投与３日後以降に観察された結果を表４に示す。表４中「−」は、成熟マウス（繁殖適齢期で、約３ヶ月齢）に比較して運動量が少ない、筋肉の締まり感がない、体毛のつやがない、皮膚の保湿性が低いまたは皮膚の弾力性が低いことを示し、「＋」は、対照群（投与３日後以降）に比較して運動量が多い、筋肉の締まり感がある、体毛のつやがある、皮膚の保湿性が高いまたは皮膚の弾力性が高いことを示す。なお、表４中「−」は当該群の全例が当該項目について「−」であったことを示し、「＋」は当該群の半数例以上が当該項目について「＋」であったことを示す。
表４から明らかなように、シスチン／テアニン１６ｍｇ／ｋｇ体重投与および３２ｍｇ／ｋｇ体重投与により、投与後３日目から運動量の増加、筋肉の締まり感の増加、体毛のつやの増加、皮膚の保湿性の増加、皮膚の弾力性の増加等、老齢マウスに対する明らかな体調改善作用が認められた。
【表４】
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以上の結果より、実施例１および実施例２で認められた免疫増強作用と併せ、シスチン／テアニンが、加齢に伴う全身状態の悪化（運動量の低下、筋力の低下、皮膚や毛髪の保湿機能の低下、免疫機能の低下等）に対し有用であることが示された。
【産業上の利用可能性】  本発明の老化防止剤における有効成分であるシスチン、テアニンは安全性の確立した物質であることから、本発明の老化防止剤は安全性が高く、したがって、医薬用途に限らず、食品、飼料への利用が可能である。
以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で様々な修正と変更をなすことは可能である。従って、そのような修正及び変更も、すべて後記の請求の範囲で請求される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。
本出願は、日本で出願された特願２００４−１７７５４４（出願日：２００４年６月１５日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【国際調査報告】
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