(57)【要約】  本発明によれば、糖新生系の抑制に関わる新規転写因子が提供され、さらに糖尿病などの糖新生に関連する疾病の治療および予防のための医薬等が提供される。詳細には、配列表の配列番号：１に記載の塩基配列を含むＤＮＡおよび配列表の配列番号：２に記載のアミノ酸配列を含む蛋白、ならびにそれらを含有する医薬組成物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列表の配列番号：１に記載のヌクレオチド配列を含むＤＮＡ。
【請求項２】
配列表の配列番号：１に記載のヌクレオチド１６８からヌクレオチド１７２７までの配列を含むＤＮＡ。
【請求項３】
配列表の配列番号：２に記載のアミノ酸１からアミノ酸５１９までのアミノ酸配列を含む蛋白。
【請求項４】
請求項３に記載の蛋白において１個もしくは複数個のアミノ酸が挿入、欠失もしくは置換されており、かつ以下の特性を有する蛋白をコードするＤＮＡ：
（ａ）ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ遺伝子プロモーター上に結合する
（ｂ）ＡＭＰキナーゼ依存的に転写を抑制する。
【請求項５】
請求項２に記載のＤＮＡ分子とストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションし、かつ以下の特性を有する蛋白をコードするＤＮＡ：
（ａ）ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ遺伝子プロモーター上に結合する
（ｂ）ＡＭＰキナーゼ依存的に転写を抑制する。
【請求項６】
請求項２に記載のＤＮＡ分子に対して少なくとも９０％以上の同一性を有し、かつ以下の特性を有する蛋白をコードするＤＮＡ：
（ａ）ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ遺伝子プロモーター上に結合する
（ｂ）ＡＭＰキナーゼ依存的に転写を抑制する。
【請求項７】
請求項４〜６のいずれか１項に記載のＤＮＡによりコードされる蛋白。
【請求項８】
請求項１、２または４〜６のいずれか１項に記載のＤＮＡを含む発現ベクター。
【請求項９】
請求項８に記載の発現ベクターにより形質転換された形質転換体。
【請求項１０】
請求項９に記載の形質転換体を請求項８に記載の発現ベクターの発現可能な条件下で培養することを特徴とする、組み換え蛋白の製造方法。
【請求項１１】
請求項３または７に記載の蛋白あるいは請求項１０に記載の方法により得られた蛋白を含有する、糖新生亢進に関連する疾病を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１、２または４〜６のいずれか１項に記載のＤＮＡあるいは請求項８に記載の発現ベクターを含有する、糖新生亢進に関連する疾病を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項１３】
疾病が糖尿病である請求項１１または１２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規転写因子とその遺伝子に関するものである。詳細には、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）遺伝子プロモーター上に結合し、ＡＭＰプロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）によりリン酸化される新規転写因子とその遺伝子、ならびに糖新生に関連した疾病の治療または予防のためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は主要な成人病の１つであり、特に先進国において罹病率が高く、その治療および予防について、種々検討されているが、未だ決定的な治療および予防法が見出されていないのが現状である。糖尿病患者における糖代謝に関する研究により、糖尿病患者においては血糖値が高いにもかかわらず、肝臓の糖新生が亢進し、さらに血糖値が上昇するという負のループをとることがわかっている。この主な原因は、糖尿病によるインスリン抵抗性のためインスリンによる糖新生系の酵素群の活性抑制がかからないことによるとされている（非特許文献１、２参照）。このように、糖尿病時における糖新生亢進の事実は知られていたが、これを抑制するには、食事療法、運動療法、薬剤投与によってインスリン抵抗性の改善以外に治療法はなかった。【０００３】
一方、インスリン経路とは別に、ＡＭＰキナーゼ活性上昇に伴い、糖新生系の酵素群の遺伝子発現が抑制されることによる糖新生系の抑制が知られていたが、その標的となる転写因子は全く知られていなかった。かかる転写因子を同定することができれば、糖尿病などの糖新生に関連する疾病の、効率的な治療および予防のために新たなアプローチが確立される。
【非特許文献１】Saltiel, A.R. Cell, 104, 517-529, 2001
【非特許文献２】Barthel, A. and Schmoll, D. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 285, E685-E692, 2003
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明が解決しようとする課題は、糖新生系の抑制に関与する新規転写因子を見出し、そのアミノ酸配列および遺伝子配列を決定すること、ならびに糖尿病などの糖新生に関連する疾病の治療および予防に該新規転写因子利用することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題に鑑みて、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、糖新生系の鍵遺伝子であるＰＥＰＣＫ遺伝子プロモーター上に結合し、ＡＭＰＫ依存的に該遺伝子の転写を抑制する新規転写因子を見出し、本発明を完成するに至った。【０００６】
すなわち、本発明は、
（１）配列表の配列番号：１に記載のヌクレオチド配列を含むＤＮＡ、
（２）配列表の配列番号：１に記載のヌクレオチド１６８からヌクレオチド１７２７までの配列を含むＤＮＡ；
（３）配列表の配列番号：２に記載のアミノ酸１からアミノ酸５１９までのアミノ酸配列を含む蛋白
（４）（３）に記載の蛋白において１個もしくは複数個のアミノ酸が挿入、欠失もしくは置換されており、かつ以下の特性を有する蛋白をコードするＤＮＡ：
（ａ）ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ遺伝子プロモーター上に結合する
（ｂ）ＡＭＰキナーゼ依存的に転写を抑制する、
（５）（２）に記載のＤＮＡ分子とストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションし、かつ以下の特性を有する蛋白をコードするＤＮＡ：
（ａ）ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ遺伝子プロモーター上に結合する
（ｂ）ＡＭＰキナーゼ依存的に転写を抑制する、
（６）（２）に記載のＤＮＡ分子に対して少なくとも９０％以上の同一性を有し、かつ以下の特性を有する蛋白をコードするＤＮＡ：
（ａ）ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ遺伝子プロモーター上に結合する
（ｂ）ＡＭＰキナーゼ依存的に転写を抑制する、
（７）（４）〜（６）のいずれかに記載のＤＮＡによりコードされる蛋白、
（８）（１）、（２）または（４）〜（６）のいずれかに記載のＤＮＡを含む発現ベクター、
（９）（８）に記載の発現ベクターにより形質転換された形質転換体、
（１０）（９）に記載の形質転換体を（８）に記載の発現ベクターの発現可能な条件下で培養することを特徴とする、組み換え蛋白の製造方法、
（１１）（３）または（７）に記載の蛋白あるいは（１０）に記載の方法により得られた蛋白を含有する、糖新生亢進に関連する疾病を治療または予防するための医薬組成物、
（１２）（１）、（２）または（４）〜（６）のいずれかに記載のＤＮＡあるいは請求項８に記載の発現ベクターを含有する、糖新生亢進に関連する疾病を治療または予防するための医薬組成物、
（１３）疾病が糖尿病である（１１）または（１２）に記載の医薬組成物
を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、糖新生系の抑制に関わる新規転写因子およびその遺伝子が提供され、糖尿病などの糖新生に関連する疾病の新規かつ効率的な治療および予防のための医薬等が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、ＰＥＰＣＫ遺伝子（ヒト由来）プロモーター上流−４５８ｂｐから＋６５ｂｐ、−５９９ｂｐから＋６５ｂｐ、および−７４２ｂｐから＋６５ｂｐの領域の、ＡＩＣＡＲ添加による転写活性の変動を調べた結果を示す図である。パネルａは、ルシフェラーゼ遺伝子および用いた各領域の配置を示すダイヤグラムである。パネルｂは、ＡＩＣＡＲ添加による転写活性の変動を示す棒グラフである。
【図２】図２は、本発明の転写因子の結合部位を調べた結果を示す図である。ＰＥＰＣＫ遺伝子（ヒト由来）プロモーター上流−７４２ｂｐから＋６５ｂｐの領域を７個のフラグメントＡ〜Ｇに分けた。その配置を図の上部に示す。図の下部はゲルシフトアッセイの結果である。矢印はＤＮＡ−蛋白複合体を示し、アステリスクは非特異的結合を示す。
【図３】図３は、本発明の転写因子の塩基配列とその中の特徴的配列（左パネル）ならびに本発明の転写因子中のセリン、スレオニン部位の検索結果（右パネル）を示す。レーン１はＧＢＰ−１−Ｖ５−Ｈｉｓ（ＧＢＰ−１にＶ５−Ｈｉｓエピトープを連結）、レーン２はＧＢＰ−１（ＧＢＰのみ）を試料とした場合である。
【図４】図４は、ヒト各臓器における本発明の転写因子の発現パターンをノザン法で調べた結果を示す図である。
【図５】図５は、本発明の転写因子のＤＮＡ結合性を調べた結果を示す図である。パネルａは競合物質として用いたオリゴヌクレオチドの配列を示す。パネルｂは実際のゲルシフトの結果を示す。
【図６】図６は、本発明の転写因子のインビトロＡＭＰＫアッセイの結果を示す図である。
【図７】図７は、本発明の転写因子およびその変異体Ｓ４７０ＡのＰＥＰＣＫ遺伝子抑制作用を示す図である。図中、ＷＴは本発明の転写因子、Ｓ４７０Ａは本発明の転写因子中４７０番目のセリンをアラニンに置換した変異体、ＡＭＰＫ３９２Ｔ１７２Ｄは構成的に活性のあるＡＭＰＫ、ＰＧＣ−１はＰＰＡＲ−γ−Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ−１である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の第１の態様は、配列表の配列番号：１に記載のヌクレオチド配列を含むＤＮＡである。該ＤＮＡは本発明の新規転写因子をコードするｃＤＮＡである。該ＤＮＡは、酵母ワン・ハイブリッド（one-hybrid）法のごとき公知方法を用いてクローニングすることができる。また、その性状解析も一般的な遺伝子工学的および分子生物学的手法を用いて行うことができる。これらの詳細は、本明細書の実施例にて具体的に説明する。【００１０】
本発明の第２の態様は、配列表の配列番号：１に記載のヌクレオチド１６８からヌクレオチド１７２７までの配列を含むＤＮＡである。該配列は、配列番号：２に示すアミノ酸１からアミノ酸５１９までのアミノ酸配列からなる本発明の新規転写因子をコードするオープンリーデイングフレームである。この態様のＤＮＡは、配列番号：１のヌクレオチド１６８からヌクレオチド１７２７までのヌクレオチド配列のほかに、他の塩基配列を含んでいてもよい。例えば、マーカー遺伝子や他のペプチドや蛋白をコードする遺伝子またはその一部などを含んでいてもよい。この態様のＤＮＡの典型例は、配列番号：１のヌクレオチド１６８からヌクレオチド１７２７までの配列からなるものである。【００１１】
本発明の第３の態様は、配列表の配列番号：２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸１からアミノ酸５１９までを含む蛋白である。該蛋白は、本発明の新規転写因子であり、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）遺伝子プロモーター上に結合し、かつＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）依存的に転写を抑制するという特性を有する。該蛋白は、それをコードするＤＮＡを発現ベクター中に組み込み、適切な条件下で宿主細胞に形質転換して発現させることにより、得ることができる。該蛋白は、配列番号：２に記載されるアミノ酸配列のほかに、他のアミノ酸配列を含んでいてもよく、例えば、マーカーのアミノ酸配列、他のペプチドや蛋白のアミノ酸配列、あるいはそれらの一部などを含んでいてもよい。この態様の蛋白の典型例は、配列番号：２のアミノ酸１からアミノ酸５１９までからなるものである。【００１２】
本発明の第４の態様は、上記転写因子のアミノ酸配列において１個もしくは複数個のアミノ酸が挿入、欠失もしくは置換された蛋白をコードするＤＮＡである。かかるＤＮＡによりコードされる蛋白は、ＰＥＰＣＫ遺伝子プロモーター上に結合し、かつＡＭＰＫ依存的に転写を抑制するという性質を有する。ここに「複数個」とは、アミノ酸残基１個〜約５０個をいい、好ましくはアミノ酸残基１個〜約２５個、より好ましくは１個〜約１５個、最も好ましくは１０個未満をいう。ここで、１個もしくは複数個のアミノ酸の挿入、欠失もしくは置換は、例えば、部位特異的突然変異誘発法（M.J.Zoller et al. Methods in Enzymology, 100, p.468 (1983)）やＰＣＲ法（Molecular Cloning 2nd Ed. Chapter 15, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)）などの公知の手法により遺伝子工学的に容易に行うことができる。【００１３】
本発明の第５の態様は、本発明の第２の態様のＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションするＤＮＡであって、ＰＥＰＣＫ遺伝子プロモーター上に結合し、ＡＭＰＫ依存的に転写を抑制するという性質を有する蛋白をコードするＤＮＡである。ここにストリンジェントな条件とは、２つのＤＮＡのうち短い方のヌクレオチドの少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、さらに好ましくは少なくとも９８％が塩基対を形成する条件をいう。ストリンジェントな条件の例としては、５ｘＳＳＰＥ、５ｘＤｅｎｈａｒｄｔ’ｓ、０．２％ ＳＤＳ、５０％ホルムアミドを含むハイブリダイゼーション溶液を用い、４２℃で一晩ハイブリダイゼーションする条件などが挙げられる。【００１４】
本発明の第６の態様は、本発明の第２の態様のＤＮＡに対して少なくとも９０％以上の同一性を有するＤＮＡであって、ＰＥＰＣＫ遺伝子プロモーター上に結合し、ＡＭＰＫ依存的に転写を抑制するという性質を有する蛋白をコードするＤＮＡである。より好ましくは、該ＤＮＡは、本発明の第２の態様のＤＮＡに対して少なくとも９５％以上の同一性を有するものであり、さらに好ましくは、本発明の第２の態様のＤＮＡに対して少なくとも９７％以上の同一性を有するものであり、最も好ましくは、本発明の第２の態様のＤＮＡに対して少なくとも９８％以上の同一性を有するものである。【００１５】
本発明の第７の態様は、本発明の第４〜第６の態様のＤＮＡによってコードされる蛋白を提供する。かかる蛋白も、ＰＥＰＣＫ遺伝子プロモーター上に結合し、ＡＭＰＫ依存的に転写を抑制するという性質を有するものである。なお、本明細書において、本発明の第３の態様および第７の態様の蛋白を「本発明の蛋白」、「本発明の転写因子」あるいは「本発明の新規転写因子」と総称することがある。また、本明細書において、本発明の第１の態様、および第４〜第６の態様のＤＮＡを「本発明のＤＮＡ」、「本発明の転写因子をコードするＤＮＡ」あるいは「本発明の新規転写因子をコードするＤＮＡ」と総称することがある。【００１６】
また、本発明は、本発明の新規転写因子をコードするＤＮＡに対して相補的なＲＮＡも包含する。【００１７】
本発明の転写因子は、本発明のＤＮＡを発現ベクターに連結し、これを適切な宿主細胞に導入して形質転換し、得られた形質転換体を、該発現ベクターが発現可能な条件下で培養することにより得ることができる。すなわち、クローニングされた本発明の転写因子をコードするＤＮＡを、ｐｃＤＮＡ３．１（invitrogen）、ｐＧＥＸ−２（Pharmacia）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（＋）（stratagene）などの公知の発現ベクターに連結した後、適当な宿主細胞中に導入し、発現ベクターの発現可能な条件下で培養することにより、本発明の転写因子を得ることができる。所望により、得られた本発明の転写因子を精製してもよい。遺伝子発現の確認を容易化するために、薬物耐性マーカーやＧＳＴタグまたは緑色蛍光蛋白などのタグあるいはルシフェラーゼレポーターを用いてもよい。これらのマーカー、タグあるいはレポーターの遺伝子を組み込んだベクターも種々のものが市販されている。宿主細胞としては、原核生物細胞、真核生物細胞のいずれでもよく、例えば、大腸菌などの細菌株や動物細胞株（例えば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞など）は使用例も多く、入手も容易であり、本発明の転写因子の製造にも容易に利用できる。発現ベクターでの宿主細胞の形質転換も公知の手法が利用できる。例えば、細菌細胞の形質転換には、カルシウム法やエレクトロポレーションなどの手法を用いることができる。また、動物細胞の形質転換にはリポフェクチン法なども使用できる。得られた形質転換体の培養も公知の方法に従って行うことができる。【００１８】
培養上清中に産生された本発明の転写因子は、公知の精製方法、例えばゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィーまたはアフィニティークロマトグラフィーなどの種々のクロマトグラフィー法、限外濾過、クロマトフォーカシングなどを用いて精製あるいは単離することができる。得られた本発明の転写因子のアッセイは、後で実施例にて説明するように、特定のＤＮＡフラグメントへの結合能やインビトロＡＭＰＫアッセイなどにより行うことができる。【００１９】
本発明の転写因子はＰＥＰＣＫ遺伝子プロモーター上に結合し、ＰＥＰＣＫ遺伝子の発現を抑制するものである。ＰＥＰＣＫは糖新生系の鍵酵素で、オキサロ酢酸からホスホエノールピルビン酸への変換を触媒する。したがって、本発明の転写因子によってこの酵素の発現を抑制することにより、糖新生の亢進を抑制することができる。糖新生の亢進に関連した疾病としては、典型的には糖尿病が挙げられるが、糖尿病に起因する疾病もこれに包含される。【００２０】
したがって、本発明は、本発明の転写因子を有効成分として含有する、糖新生の亢進に関連した疾病を治療または予防するための医薬組成物を提供する。また、本発明は、本発明の転写因子を投与することを特徴とする、糖新生の亢進に関連した疾病、例えば糖尿病を治療または予防するための方法も提供する。上記の本発明の転写因子を有効成分として含有する医薬組成物は、公知の方法に従って製造することができる。その剤形も種々のものとすることができる。【００２１】
本発明のＤＮＡあるいはそれを連結した発現ベクターを用いて本発明の転写因子を患者細胞にて発現させることによる治療方法、すなわち遺伝子治療により、糖新生の亢進に関連した疾病、例えば糖尿病を治療または予防することもできる。例えば、患者から得た細胞に本発明のＤＮＡあるいはそれを連結した発現ベクターを導入し、培養し、本発明の転写因子を発現させ、その後、該患者の体内に戻すという手法により、遺伝子治療を行うことができる。それゆえ、本発明は、本発明の転写因子をコードするＤＮＡまたは該ＤＮＡを含む発現ベクターを含有する、糖新生亢進に関連する疾病を治療または予防するための医薬組成物を提供するものである。【００２２】
以下に実施例を示して本発明を具体的に詳説するが、実施例は本発明を説明するものであって、何ら本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００２３】
本発明の新規転写因子のクローニング
糖新生系の鍵酵素遺伝子であるＰＥＰＣＫ遺伝子（ヒト由来）プロモーター上流−４５８ｂｐから＋６５ｂｐ、−５９９ｂｐから＋６５ｂｐ、および−７４２ｂｐから＋６５ｂｐの、それぞれ長さの異なる領域をルシフェラーゼレポーターベクター（ｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃベクター（Promega））のＸｈｏＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ部位に挿入した。これをラット肝初代培養細胞にリポフェクタミン法にて導入し、ＡＭＰＫの活性化剤である５−アミノイミダゾール−４−カルボキサミド−１−β−Ｄ−リボフラノシド（ＡＩＣＡＲ）（最終濃度５００μＭ）を添加し、常法により転写活性を調べた。その結果、−７４２ｂｐから＋６５ｂｐを含む領域はＡＩＣＡＲ添加によって転写活性が約５０％に低下したのに対し、その他の−４５８ｂｐから＋６５ｂｐ、−５９９ｂｐから＋６５ｂｐの領域においてはＡＩＣＡＲ添加による変動は見られなかった（図１）。このことから、ＰＥＰＣＫ遺伝子プロモーター上流−７４２ｂｐから−５９９ｂｐ内に、ＡＩＣＡＲに応答して転写を負に制御する領域が存在することが示唆された。【００２４】
転写因子の結合部位を調べるために、−７４２ｂｐから−５９９ｂｐの領域を７つに分断（フラグメントＡからＧまで、それぞれ配列番号：３〜９）し、プローブとした。上記と同じラット肝初代培養細胞をＡＩＣＡＲ添加（最終濃度５００μＭ）および未添加によって培養し、常法に従って核抽出液を調製した。各プローブと核抽出液を混合し、常法によりゲルシフトアッセイを行った。その結果、フラグメントＧに蛋白−ＤＮＡ複合体を示すバンドが確認された。またこのバンドがＡＩＣＡＲ添加によって消失した（図２）。このことは、フラグメントＧに結合する因子はＡＭＰＫによるリン酸化によってＤＮＡ結合性を調節されるものと推察された。【００２５】
フラグメントＧをベイト（bait）とした酵母ワン・ハイブリッド（one-hybrid）法を用いて、ヒト肝臓由来ｃＤＮＡライブラリーよりスクリーニングし、本発明の新規転写因子をクローニングした。ｃＤＮＡの全長（配列番号：１）を得て、シークエンスにより全塩基配列を決定した（図３および配列番号：１）。これにより本発明の新規転写因子のアミノ酸配列を推定したところ、配列番号：１のヌクレオチド１６８からヌクレオチド１７２７までのオープンリーディングフレームによりコードされる５１９アミノ酸からなるポリペプチド（配列番号：２）であり、分子内に核移行シグナル、グルタミン酸リッチな領域、Ｃ２Ｈ２−タイプのＺｎフィンガー（リングフィンガー）構造などの転写因子に共通の構造を持つことが分かった。このポリペプチド中にはＡＭＰＫによってリン酸化されうるセリン、スレオニン部位が少なくとも６箇所存在した（図３）。【００２６】
ヒト各臓器における本発明の転写因子の発現パターン
ヒト各臓器における本発明の転写因子の発現パターンをノザン法で調べた。その結果、本発明の転写因子は糖新生の主要な臓器である肝臓、腎臓以外にも広く発現が確認された（図４）。【００２７】
本発明の転写因子の調製およびＤＮＡ結合性
ウサギ網状赤血球を用いたインビトロ転写／翻訳によって本発明の転写因子を調製した。次に、ゲルシフト法によりフラグメントＡ〜Ｇに対する結合性を調べたところ、フラグメントＧに特異的に結合した（図５）。【００２８】
本発明の転写因子のインビトロＡＭＰＫアッセイ
以下に説明する手順により、大腸菌を用いてＧＳＴ融合蛋白を調製し、インビトロＡＭＰＫアッセイ（Hardie,G.D., et al., Ann.Rev.Biochem. 67:821-855, 1998; Carling,D., et al., Eur.J.Biochem. 186:129-136, 1989 および Davies,S.P., et al., Eur.J.Biochem. 186:123-128, 1989）を行った。その結果、配列番号：２の４７０番目のセリンがＡＭＰＫによってリン酸化されることが明らかになった（図６）。【００２９】
本発明の転写因子のＰＥＰＣＫ遺伝子抑制作用
以下に説明する手順により、本発明の転写因子遺伝子をＣＭＶプロモーター下流に挿入し、培養細胞に導入して、転写活性を調べた。その手順を簡単に説明すると、ヒトＰＥＰＣＫ遺伝子上流プロモーター（−５９９ｂｐから＋６５ｂｐ）のさらに上流に、フラグメントＧを持つルシフェラーゼレポータープラスミドと共に培養細胞に導入し、ＡＩＣＡＲの存在、および非存在時におけるルシフェラーゼ活性を指標とした転写活性を調べた。その結果、本発明の転写因子は、活性型ＡＭＰＫ存在時にＰＥＰＣＫ遺伝子を負に制御することが明らかになった。一方、リン酸化部位をアラニンに置き換えた変異体（Ｓ４７０Ａ）は、この抑制効果が消失していた（図７）。【００３０】
以上のことから、本発明によって得られた転写因子は、ＡＭＰＫによってリン酸化される新規転写因子であり、糖新生系を調節する重要な機能を有するものであることがわかった。したがって、本発明の新規転写因子の使用により、糖尿病時における糖新生による血糖値の上昇を有効に治療または予防することができる。
【産業上の利用可能性】
【００３１】
本発明は、糖新生に関わる疾病の研究、ならびに糖代謝に関わる医薬品の研究および製造の分野などに幅広く利用できる。
【図１】
2006057389.tif 000002
【図２】
2006057389.tif 000003
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2006057389.tif 000008
【配列表】
2006057389000001.app
【国際調査報告】
2006057389.tif 000009
2006057389.tif 000010