(57)【要約】  検体液又はその希釈液を用いる臨床検査において、希釈検体液や検体濾過液が手に触れる危険性を回避すると共に、フィルターに必要以上の圧力がかからないようにし、濾過所要時間を短縮した検査方法と検査器具の提供する。  一方の先端部の内方にフィルターを装着できる中空の筒状であって、フィルターを装着する方の先端部から有底筒状の検体収容容器に挿入したとき、その先端部の外壁を検体収容容器の底部近くの内壁に密着できるようにしてある検体の免疫学的検査方法に用いるカラム。少なくとも、このカラムと、カラムのフィルターを装着する方の先端部を底部近くの内壁に密着可能である有底筒状の検体収容容器と、カラムの先端部の内方に装着可能なフィルターと、検体収容容器内に挿入可能な検査用ディップスティックとの４部材で構成する診断用キット。希釈検体液を収容してある有底筒状の検体収容容器に、このカラムをフィルターを装着した方の先端部から挿入して検体収容容器の底部近くの内壁に先端部を密着させ、フィルターの挿入によって濾過された希釈検体液を検体収容容器外へ取り出すことなく、検体収容容器内方のカラム内へ検査用ディップスティックを挿入してその反応を観察する方法。インフルエンザウイルスの検査・診断に好適に用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一方の先端部の内方にフィルターを装着できる中空の筒状であって、フィルターを装着する方の先端部から有底筒状の検体収容容器に挿入したとき、その先端部の外壁を検体収容容器の底部近くの内壁に密着できるようにしてある検体の免疫学的検査方法に用いるためのカラム。
【請求項２】
フィルターを装着する方の先端部の外壁に、検体収容容器の底部近くの内壁に密着するためのリブを備えてある請求項１に記載のカラム。
【請求項３】
少なくとも、以下の（１）〜（４）の部材からなり、検体の免疫学的検査方法に用いる診断用キット。
（１）請求項１又は２に記載のカラム
（２）上記カラムのフィルターを装着する方の先端部を、底部近くの内壁に密着可能である有底筒状の検体収容容器
（３）上記カラムの先端部の内方に装着可能なフィルター
（４）上記検体収容容器内に挿入可能な検査用ディップスティック
【請求項４】
インフルエンザウイルスの検査に用いるための請求項３に記載の診断用キット。
【請求項５】
検体液又はその希釈液を収容してある有底筒状の検体収容容器に、一方の先端部にフィルターを装着した請求項１又は２に記載のカラムを、フィルターを装着した方の先端部から挿入して検体収容容器の底部近くの内壁にその先端部の外壁を密着させ、フィルターの挿入によって濾過された検体液又はその希釈液を検体収容容器外へ取り出すことなく、検体収容容器内方のカラム内へ検査用ディップスティックを挿入してその反応を観察し、検体中の抗原の有無や種別を検査・診断することを特徴とする検体の免疫学的検査方法。
【請求項６】
検体中の抗原がインフルエンザウイルスである請求項５に記載の検体の免疫学的検査方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は検体の免疫学的検査方法及びその方法に用いる検査器具に関する。詳しくは、本発明は、ディップスティック式検査方法によって検体中の抗原を検査する免疫学的な方法であり、また、その方法に用いるカラムとそのカラムを構成部材に含む診断用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
臨床検査では、血液、尿、便、鼻汁液、痰或いはスワブ検体として収集された分泌液などの検体について、これら検体に含まれる特定の抗原を抗原抗体反応を利用して検出する免疫学的な検査方法が広く用いられている。その一般的な方法は、およそ以下のとおりである。
（１）上記のような検体液又はその希釈液（以下、これらを併せて「希釈検体液」と称することがある。）を、酵素、金属コロイド、着色ラテックス、色素などの呈色識別物質で抗体を標識した標識抗体と接触させる。
（２）この希釈検体液と標識抗体の接触により、検体中の抗原と標識抗体とを特異的に反応させて、抗原抗体の免疫複合体を形成させる。
（３）その免疫複合体の量を、目視によるか又は光学的な変化として測定し、検体中の抗原の定性測定又は定量測定を行なう。【０００３】
上記の検査方法を応用して、心疾患マーカーの定量、ウイルス感染の有無の確認、妊娠判定、ガン疾患の罹病確認などを、簡便かつ迅速に検査・診断するための種々の簡易診断キットが開発され、市販されている。その一例として、インフルエンザウイルスの感染の有無の診断用キットの状況について説明する。【０００４】
インフルエンザウイルスは、オルソミクソウイルス科に属する直径８０〜１２０ｎｍの球状ウイルスであり、血清学的にはＡ型・Ｂ型・Ｃ型の３つの型に分類される。日本において冬季にインフルエンザが流行する原因となっているのは、主にＡ型とＢ型のインフルエンザウイルスである。【０００５】
インフルエンザに対して、従来は、抗生物質や抗炎症剤などを用いた対症療法が行なわれてきた。しかし、近年、抗ウイルス性の医薬品が適用可能となったことから、その治療や感染防止の観点上、できる限り早期に適切な治療薬を選択し、患者に投与することが必要となっている。こうした背景により、インフルエンザウイルスの感染の有無を検査できる診断用キットの実用化が急速に進み、各社によりＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）をベースにした簡易型の診断用キットが開発され、市販されている。特許文献１や特許文献２には、これら診断用キットの一例が紹介されている。【０００６】
このような診断用キットを用いてインフルエンザウイルスの型を鑑別・診断する際に、測定対象となる検体としては、鼻汁、鼻腔拭い液、咽頭拭い液、痰などがある。これらの検体中には、目的とするウイルスの他に、鼻汁・鼻腔・咽頭に存在するムコ多糖類や糖タンパク質などが含有されており、ウイルスの測定を直接的又は間接的に妨害することがある。そのため、希釈検体液は、標識抗体と反応させる前にフィルターを通して濾過したものを使用することが好ましい。（以下、濾過済みの希釈検体液を「検体濾過液」と称することがある。）【０００７】
また、これら診断用キットには、ディップスティック式やイムノクロマトラテラルフロー式などがあるが、検体の濾過操作など前処理の作業ステップが複数あり、そのため、例えば、開業医が患者から検体を採取して市販の診断用キットを用いて検査するとき、その結果が得られるまでにはかなりの時間（１０分以上）を要している。それ故、できる限り早期に検査・診断結果が得られるように、操作ステップの簡素化や測定時間の短縮が強く望まれている。さらに、従来の検査方法では、標識抗体液と希釈検体液を接触させるとき又は希釈検体液を検体収容容器外へ吐出するときなどに、希釈検体液が検査者の手に触れるおそれがあり、検査器具の操作性に加えて、バイオハザードの面から問題があった。
【特許文献１】特開２００１−１２４７７５号公報
【特許文献２】特開２０００−２３０９３１号公報
【非特許文献１】金澤実・菅谷憲夫「インフルエンザ診療マニュアル」株式会社南江堂２００１年２月２０日第１刷発行の１１０〜１１５頁
【非特許文献２】「臨床化学」３０号の６８〜７１頁（２００１年）
【０００８】
このような状況の下、本発明者らは、希釈検体液と標識抗体を混和させる際の個人差を少なくすると共に、希釈検体液の濾過操作を改善することを志向し、標識抗体を含浸させたフィルターを内蔵しているキャップを希釈検体液を収容した検体収容容器本体に装着してその検体収容容器から標識抗体を含む検体濾過液をテストデバイスに注入し、所定の操作を行なって反応を観察し、検体中の抗原の有無や種別を検査する方法を開発して特許出願をしている（特願２００３−６３８３２）。この検査方法は、濾過操作が簡便であり、かつ、検査者の個人差による影響を少なくするという効果や保存中に標識抗体の凝集が生じにくいという画期的な利点を有するが、標識抗体を含む検体濾過液をテストデバイスに注入するとき、高濃度の標識抗体を含む液が先に出てくることがある。【０００９】
そこで、本発明者らは、標識抗体を含浸させたフィルターを内蔵しているキャップを装着した検体収容容器を注入用容器に嵌合し、フィルターを通った検体濾過液を検体収容容器から一旦注入用容器内へ吐出し、吐出した検体濾過液を注入用容器内で攪拌・混合した後注入用容器からテストデバイスへ吐出・注入し、所定の操作を行なって反応を観察し、検体中の抗原の有無や種別を検査する方法を開発して特許出願している（特願２００４−５５７１０）。この検査方法は、検体濾過液の均一化が図られるため、より正確な診断を行なえる画期的な方法であるが、操作ステップが多くなると共に、必要な容器の数が増えるという問題がある。また、そのような問題の有無に関わらず、抗原抗体反応を応用した免疫学的な検査方法とその方法に用いる器具については、つねに、一層の正確化・簡便化・安全性が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
以上の状況に鑑み、本発明は、抗原抗体反応を応用した検体の免疫学的な検査方法とその方法に用いる検査器具について、さらに正確化、簡便化を図ると共に安全性を向上させた検体の検査方法とその方法に用いる検査器具を提供することを第１の課題とする。具体的には、本発明は、希釈検体液を用いる臨床検査において、希釈検体液や検体濾過液に手を触れる危険性を回避し、安全衛生の面から改善した検体の検査方法とその検査方法に用いる検査器具を提供することを第２の課題とする。さらに、本発明は、フィルターに必要以上の圧力がかからないようにし、濾過に要する操作時間を短縮できる検体の検査方法とその検査方法に用いる検査器具を提供することを第３の課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記の課題を、基本的には、希釈検体液を検体収容容器から吐出しないで濾過する方法を採ることによって解決できることを見いだし、さらに研究の結果、その方法に適応できる構造のカラムを開発することによって、解決した。【００１２】
すなわち、上記の課題を解決するための本発明のうち、請求の範囲・請求項１に記載する発明は、一方の先端部の内方にフィルターを装着できる中空の筒状であって、フィルターを装着する方の先端部から有底筒状の検体収容容器に挿入したとき、その先端部の外壁を検体収容容器の底部近くの内壁に密着できるようにしてある検体の免疫学的検査方法に用いるためのカラムである。【００１３】
請求項１に記載するように、本発明のカラム（セパレートカラムとも称される。）は、一方の先端部の内方にフィルターを装着できる中空筒状のものである。カラムは円筒状であることが好ましいが、必ずしもこれに限るものではない。また、本発明のカラムは、フィルターを装着する方の先端部から有底筒状の検体収容容器に挿入したとき、その先端部の外壁を検体収容容器の底部近くの内壁に密着できるようにしてある。このような構成にすることによって、本発明のカラムは、これを検体収容容器に挿入すると、同時に、カラムに装着してあるフィルターが希釈検体液の中を移動することになるので、カラムを検体収容容器内へ挿入するだけで希釈検体液を濾過することができる。そして、上記のようにカラムの外壁を検体収容容器の内壁に密着することで、カラムが検体収容容器との間に隙き間を生ずることなく固定されるので、漏れのない濾過を行なうことができ、かつ、検体収容容器を傾けたときのカラムの脱落を防止できる。【００１４】
また、同請求項２に記載する発明は、フィルターを装着する方の先端部の外壁に検体収容容器の底部近くの内壁に密着するためのリブを備えてある請求項１に記載のカラムである。【００１５】
請求項２に記載するように、本発明のカラムは、フィルターを装着する方の先端部の外壁に検体収容容器の底部近くの内壁に密着するためのリブを備えていることが好ましい。このような構成にすることによって、本発明のカラムは、検体収容容器の内壁への密着・固定が容易となり、カラムの脱落防止も容易となる。そのため、希釈検体液を漏らすおそれがない状態で濾過が可能となる。このリブは、カラムの外壁に鍔状に出っ張らせた形状にするのが好ましい。また、このリブは、カラム本体と一体成型にすることが好ましい。  【００１６】
また、同請求項３に記載する発明は、少なくとも、以下の（１）〜（４）の部材からなり、検体の免疫学的検査方法に用いる診断用キットである。
（１）請求項１又は２に記載のカラム
（２）上記カラムのフィルターを装着する方の先端部を、底部近くの内壁に密着可能である有底筒状の検体収容容器
（３）上記カラムの先端部の内方に装着可能なフィルター
（４）検体収容容器内に挿入可能な検査用ディップスティック【００１７】
請求項３の診断用キットでは、カラムと検体収容容器とは、ほとんど同じ形状で同じ大きさのものを組み合わせることが好ましい。すなわち、カラムの外径寸法を検体収容容器の内径寸法とをほとんど同じ大きさにすると共に、カラムの長さは検体収容容器の内法の長さに一致させ、検体収容容器へカラムを挿入したとき、カラムの先端が検体収容容器の底面まで挿入され、カラムの先端部の外壁と検体収容容器の底面近傍の内壁が密着すると共に、カラムの全体が検体収容容器の内壁にすっぽり嵌合するような状態になることが好ましい。【００１８】
次に、請求項３の診断用キットに用いるフィルターについて説明する。
本発明において、フィルターは、カラムの内径とぴったり一致するような形状・寸法にすることが好ましい。また、フィルターには、ポリエチレン重合体濾布、ガラス繊維系濾紙、セルロース系濾紙などの一般の濾布又は濾紙として使用されている素材を単独で又は複数枚を重ね合わせて用いることが好ましい。例えば、カラムの頂部の方から見て、ポリエチレン重合体濾布からなるフィルター、ガラス繊維系濾紙からなるフィルター、ポリエチレン重合体濾布からなるフィルターというように、異なる種類の複数のフィルターを適宜組み合わせて多層構造にして装着しても差し支えない。【００１９】
本発明のカラムにフィルターを装着する方法は任意であるが、ずれや脱落が生じないように固定する必要がある。そのため、例えば、カラムの一方の先端からフィルターの厚み分よりやや大きい間隔を空けて、その先端部の内壁に数本の小突起を形成し、カラムの内径・形状にぴったり合わせて成形したフィルターをカラムの底面に嵌め込んで、その小突起に担持させるようにしてもよい。【００２０】
また、同請求項４に記載する発明は、インフルエンザウイルスの検査・診断に用いるための請求項３に記載の診断用キットである。【００２１】
さらに、同請求項５に記載する発明は、検体液又はその希釈液を収容してある有底筒状の検体収容容器に、一方の先端部にフィルターを装着した請求項１又は２に記載のカラムを、フィルターを装着した方の先端部から挿入して検体収容容器の底部近くの内壁にその先端部の外壁を密着させ、フィルターの挿入によって濾過された検体液又はその希釈液を検体収容容器外へ取り出すことなく、検体収容容器内方のカラム内へ検査用ディップスティックを挿入してその反応を観察し、検体中の抗原の有無や種別を検査・診断することを特徴とする検体の免疫学的検査方法である。【００２２】
請求項５に記載するように、請求項１又は２に記載のカラムを、希釈検体液を収容してある有底筒状の検体収容容器に、そのカラムの、フィルターを装着した方の先端部から挿入して検体収容容器の底部近くの内壁にその先端部の外壁を密着させ、フィルターの挿入によって濾過された希釈検体液（すなわち、検体濾過液）を検体収容容器外へ取り出すことなく、検体収容容器内（カラム内）へ検査用ディップスティックを挿入してその反応を観察する方法を採ると、希釈検体液や検体濾過液に手を触れる危険性が回避される上、フィルターに必要以上の圧力がかからないので、従来法に比べて濾過に要する時間を短縮でき、ひいては、検査所要時間を短縮することができる。【００２３】
請求項５に記載する検査方法は、本発明のカラムを構成部材に含む検査器具一式を用いて、ディップスティック式により検体の免疫学的な検査を行なう方法である。なお、ここで用いるディップスティックは、通常、検体の免疫学的検査ないし臨床検査に用いられるものでよく、その検査・診断方法も通常の検体の検査における検査・診断方法と異なるところはない。【００２４】
さらに、同請求項６に記載する発明は、検体中の抗原がインフルエンザウイルスである請求項５に記載の検体の免疫学的検査方法である。
【発明の効果】
【００２５】
本発明の方法は、上記の構成であるから、希釈検体液を収容した検体収容容器内に本発明のカラムを挿入するだけで希釈検体液を濾過することができる。そのため、希釈検体液を収容した検体収容容器を希釈検体液の濾過のために押圧する必要がなく、濾過操作を楽に行なうことができる。その上、フィルターに余分な圧力がかからないので、濾過所要時間を短縮することができ、ひいては、検査に要する時間を短縮できる。また、本発明の検査方法は、希釈検体液を検体収容容器の外へ出さないで濾過できるので、希釈検体液や検体濾過液が検査者の手などに触れるおそれがなく、安全衛生面で不安のない検査を行なうことができる。さらに、本発明に係るカラムと検体収容容器の組み合わせは、ディップスティック式によるあらゆる検査方法に適用できるので、きわめて便利である。そのため、本発明の検査方法は、インフルエンザ感染の有無の検査・診断をはじめ、多くの臨床検査に応用することができ、検査方法のさらなる正確化、簡便化を図ることができると共に検査手法の安全性と衛生面をさらに向上させることができる。【００２６】
本発明のカラムは、上記の構成であるから、使用方法が簡便であり、各種のウイルス感染の有無を検査・診断する診断用キットに組み込んで用いるのに最適である。すなわち、本発明に係る検体の検査方法とその検査方法に用いる本発明のカラムを組み込んだ検査器具は、臨床検体、例えば、血液、尿、便、鼻孔・鼻腔・咽頭・鼻咽頭などを由来とする鼻汁液や鼻汁吸引液、痰或いはスワブ検体として収集された分泌液などの各種の検体を免疫学的に検査するのに有用であり、インフルエンザウイルスなどの感染症の検査や緊急簡易検査などに好適に用いることができる。特に、ヒトインフルエンザＡ型ウイルス又はヒトインフルエンザＢ型ウイルスの存在を短時間のうちに検出し、かつ、鑑別するための検査方法及びそのための検査器具として大いに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は本発明のカラムの一例の説明図である。（実施例１）
【図２】図２は本発明のカラムを検体収容容器に挿入する方法の説明図である。（実施例１・実施例２）
【図３】図３は、本発明のカラムを用いた本発明の検査方法（ディップスティック式検査方法）の一例の説明図である。（実施例２）
【図４】図４は、イムノクロマトラテラルフロー式検査方法の一例の説明図である。（参考例１）
【符号の説明】
【００２８】
１：カラム、  １１：その底側の先端、  １２：その頂側の先端、  １３：小孔
１４：その外壁に設けた鍔状のリブ
２：フィルター
３：検体収容容器、  ３１：そのキャップ装着部、  ３２：その鍔部
３３：その検体収容部
４：検体液を含ませた綿棒
５：先端部突出型のキャップ、  ５１：その小孔、  ５２：そのノズル
ａ：希釈検体液、  ａ’：その検体濾過液
Ｘ：ディップスティック、
Ｙ：ラテラルフロー式テストデバイス
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下、本発明を実施するための最良の形態を実施例と図面に基づいて説明する。
図１は本発明のカラムの一例の説明図、図２は本発明のカラムを検体収容容器に挿入する方法の説明図である。また、図３は、本発明のカラムを用いたを用いた本発明の検査方法（ディップスティック式検査方法）の一例の説明図である。さらに、図４は、参考例として、イムノクロマトラテラルフロー式によるときの検査方法の説明図である。
【実施例１】
【００３０】
＜本発明のカラムとその使用方法の一例＞
図１〜図３に基づいて、本発明のカラムとそれを用いた検体の検査方法の一例を説明する。図１において、１は、ポリエチレンからなる中空円筒状のカラムであり、１１はその底側の先端、１２は頂側の先端である。本実施例のカラム１は、図示のように、頂側の先端１２から底側の先端１１に向かってやや先細り状に成形してあるが、先端１１の外径は検体収容容器３の底面の内径とほとんど同じ大きさで、かつ、カラム１全体の長さも検体収容容器３の内法の長さと同じにしてある。また、カラム１には、先端１１の外壁に鍔状のリブ１４を一体成型的に設けてある。そのため、カラム１は、このリブ１４によって検体収容容器３の底部近くの内壁に容易に密着できる。また、カラム１は、先端１１の近傍の内壁にフィルター２（２枚のポリエチレン重合体濾布の間にガラス繊維系濾紙を挟んだもの）を嵌合してある。なお、１３はカラム１の上方に設けた空気抜きのための小孔である。このように、カラム１の上方に小孔１３を設けておくと、カラム１を検体収容容器３内に挿入するとき、カラム１の頂部１２を覆った状態で挿入することができるので便利である。【００３１】
図２の（イ）において、３は希釈検体液ａを収容してあるポリエチレン製の有底円筒状の検体収容容器であり、３１はそのキャップ装着部、３２は鍔部、３３は希釈検体液の収容部である。本実施例では、まず、あらかじめ希釈用の抽出液を入れてある検体収容容器３の検体収容部３３に検体液を含ませた綿棒４を挿入して検体液を抽出した後、検体収容容器３を指で押して綿球をしごきながら綿棒４を引き抜き、攪拌して検体液と抽出液が混和した希釈検体液ａを作る。【００３２】
次いで、図２の（ロ）（ハ）に示すように、カラム１を、フィルター２を装着した方の先端部から検体収容容器３内へ挿入して、カラム１の先端１１を検体収容容器３の底面まで下ろし、検体収容容器３の内壁にカラム１の外壁に設けたリブ１４を密着させる。このように、カラム１を検体収容容器３へ挿入すると、検体収容容器３内の希釈検体液ａはカラム１に装着されたフィルター２によって自然に濾過される。したがって、カラム１を検体収容容器３の底面まで挿入するだけで、検体収容容器３を押圧することなく、また、希釈検体液ａを検体収容容器３の外へ出さないままで、希釈検体液ａを濾過できる。そのため、希釈検体液ａや検体濾過液ａ’が検査者の手などに触れるおそれがなく、安全衛生面の不安がない検査を行なうことができる。なお、図２の（ハ）は、検体収容容器３内へカラム１を挿入した後の検体収容容器３の状態を示す。【００３３】
本実施例において、カラム１と検体収容容器３は、どちらもポリエチレン製のものを用いたが、本発明のカラムと検体収容容器は、ポリエチレン製に限るものでないことは勿論である。すなわち、本発明のカラムないし診断用キットは、カラムの先端を検体収容容器の底面まで下ろすことにより検体収容容器内の希釈検体液を濾過するためのものであるから、この目的に合うことを限度として、カラムと検体収容容器の材質は適宜選択が可能である。例えば、カラムが非可撓性の材質であっても、検体収容容器の材質が前記態様の濾過を実施できるものであればよい。それぞれの材質の選択の際の具体的な例を挙げると、次のとおりである。カラムについては可撓性の素材が好ましく、例えば、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリプロピレン、ＰＥＴ、ＡＢＳなどのプラスティック系の樹脂素材から適宜選択すればよい。他方、検体収容容器については、綿棒などから検体液をしぼり出す必要があるため、スクイズ性を有すると共に、加圧によって適度に変形させることができるような素材、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、シリコンゴム、熱可塑性エラストマー、塩化ビニルなどの樹脂素材が好ましく用いられる。また、プラスティック材の弾性率は、公知の方法で適宜調整して差し支えない。【００３４】
本実施例のカラム１には、その上方に小孔１３を設けたが、小孔１３は設けてあれば便利であるが、空気抜きとカラム挿入速度の調節が目的で設けるものであるから、必ず必要ということではない。また、検体収容容器３の鍔部３２も、必ず必要なものではない。【００３５】
本実施例のカラム１は、その頂側の先端１２から底側の先端１１に向かってやや先細り状に成形してあり、先端１１の外壁には鍔状のリブ１４をカラム１の本体と一体成型的に設けたものを用いたが、本発明のカラムは、このような形状に限るものではなく、カラムの先端部（フィルターを装着する方）の外壁を任意の手段によって検体収容容器の内壁に密着できるものであればよい。さらに、本実施例では、カラムと検体収容容器は円筒状のものを用いたが、カラムの外壁と検体収容容器の内壁とを密着できる形状であればよく、必ずしも円筒状である必要はない。例えば、カラムと検体収容容器は、角筒状でも半円筒状でも差し支えない。
【実施例２】
【００３６】
＜本発明のカラムを用いたディップスティック式検査方法の一例＞
実施例１のカラム１（実施例１のフィルター２を装着したもの）を用いて、実施例１と同じ方法で検体収容容器３内に挿入し、希釈検体液ａを濾過して検体濾過液ａ’を得た。この検体濾過液ａ’を外方へ取り出すことなく、図３に示すように、検体収容容器３に挿入したカラム１内へディップスティックＸを挿入し、その反応を観察した。
図３の（イ）は、検体濾過液ａ’を収容してある検体収容容器３内方のカラム１内へディップスティックＸを挿入しようとしている状態を示し、図３の（ロ）は、その挿入後の状態を示す。図３の（ロ）に示すように、検体濾過液ａ’は、ディップスティックＸの先端から次第に浸透して、所要のデータを表示することとなる。この操作は、通常のディップスティック式検査方法と異なるところはないが、インフルエンザウイルスの検査方法を例にして、一応以下に説明する。【００３７】
検体収容容器３に収容してある検体濾過液ａ’に検査用ディップスティックＸ（参考例２で作製したもの）を挿入すると、検体濾過液ａ’中の抗原はディップスティックＸのサンプルパッドを通ってコンジュゲートパッドにて金コロイド標識抗体と複合体を形成し、メンブレンに移動して、メンブレン上に固定した抗インフルエンザＡ型抗体、抗インフルエンザＢ型抗体或いは抗マウスＩｇＧに対する抗体に特異的に結合する。余剰の液は、エンドパッドにて吸収される。インフルエンザ抗原があるとディップスティックの所定の部位に赤紫色のラインが観察されるので、抗原の有無や種別を鑑別、診断できる。【００３８】
本実施例は、上記の構成であるから、希釈検体液ａを収容した検体収容容器３内にカラム１を挿入するだけで希釈検体液ａを容易に濾過できる。そのため、希釈検体液ａを収容した検体収容容器３を希釈検体液ａの濾過のために押圧する必要がなく、フィルター２に余分な圧力がかからないので、検査を楽に行なうことができ、また、検査に要する時間を短縮できる。その上、本実施例では、希釈検体液ａを検体収容容器３の外へ出さないで濾過できると共に検体濾過液ａ’も外へ出さないで検体収容容器３内に保持できるので、希釈検体液ａや検体濾過液ａ’が検査者の手などに触れるおそれがなく、安全衛生面の不安がない検査を行なうことができる。【００３９】
《参考例１》
＜イムノクロマトラテラルフロー式検査方法の一例＞
参考までに、イムノクロマトラテラルフロー式検査方法の一例を図２と図４に基づいて説明する。
実施例１と同じ方法により検体収容容器３内に希釈検体液ａを収容する。この希釈検体液ａを収容した検体収容容器３のキャップ装着部に、先端に小孔５１を有するノズル５２を備えた先端部突出型のキャップ５（実施例１で用いたフィルター２を装着してある。）を嵌着し、小孔５１を下にして検体収容容器３を指で押して小孔５１から検体濾過液ａ’をテストデバイスＹへ数滴滴下する。図４の（イ）は、検体収容容器３にキャップ５を装着する状態を示す。また、図４の（ロ）は、検体収容容器３からキャップ５に装着したフィルター２を通して検体濾過液ａ’をテストデバイスＹに滴下する状態を示す。以降の操作は、通常のイムノクロマトラテラルフロー式検査方法におけるテストデバイスの操作と異なるところはないが、インフルエンザウイルスの検査方法を例にして、以下に一通り説明する。【００４０】
本参考例のテストデバイスＹ（参考例２で作製したもの）は、その表面のサンプル滴下用の開口部に検体濾過液ａ’を滴下すると、検体濾過液ａ’中の抗原は、サンプルパッドを通って、コンジュゲートパッドにて金コロイド標識抗インフルエンザＡ型マウス抗体又は金コロイド標識抗インフルエンザＢ型マウス抗体と反応して複合体を形成してメンブレン上を移動する。この複合体は、メンブレン上に固相化された抗インフルエンザＡ型抗体又は抗インフルエンザＢ型抗体に結合すると赤紫色のラインとして観察される。一方、余剰の金コロイド標識抗インフルエンザＡ型マウス抗体又は金コロイド標識抗インフルエンザＢ型マウス抗体は、メンブレン上に固相化された抗マウスＩｇＧ抗体に結合して赤紫色のコントロールラインとして観察される。このようにインフルエンザ抗原があると、テストデバイスの所定の部位に赤紫色のラインが観察されるので、抗原の有無や種別を鑑別・診断できる。【００４１】
《参考例２》
以下、本発明で用いるその他の部材の作り方の一例について説明する。
＜コンジュゲートパッドの作製法の一例＞
広く知られている金コロイド調製法により金コロイドを調製した後、抗インフルエンザＡ型抗体及び抗インフルエンザＢ型抗体を既知の方法で結合させて、それぞれの金コロイド標識抗体が混合している状態の金コロイド標識抗体混合溶液を作成した。すなわち、リン酸水素二ナトリウム２水和物１．０８ｇ、リン酸水素二カリウム０．３７４ｇ、塩化ナトリウム８．７６ｇ、アジ化ナトリウム０．９ｇに精製水７００ｍＬを加えて溶解し、ｐＨ７．４に調整した。さらにＴｗｅｅｎ２０（キシダ化学）２．０ｇ、ショ糖１０ｇ、ウシ血清アルブミン２．０ｇ、金コロイド標識抗Ａ型インフルエンザマウスモノクロナール抗体１４ｍｇ、金コロイド標識抗Ｂ型インフルエンザマウスモノクロナール抗体１０．５ｍｇを加えて溶解し、精製水を加えて全量を１０００ｍＬとした。
この溶液をコンジュゲートパッドに塗布した後、自然乾燥又は凍結乾燥させた。【００４２】
＜ディップスティックの作製例＞
選択された流速条件に合致したメンブランに抗インフルエンザＡ型マウス抗体及び抗インフルエンザＢ型マウス抗体並びに抗マウスＩｇＧに対する抗体のそれぞれ至適量を所定の場所にラインとして塗布する。塗布間隔及び塗布量は、それぞれの抗体の反応後の視認性を考慮して決定すればよい。なお、抗マウスＩｇＧに対する抗体の代わりにヒトインフルエンザＡ型抗原及びＢ型抗原の混合体を選択してもよい。
このメンブランをホワイトビニルのベース型紙上に配置した後、一方の側にコンジュゲートパッドを重ね、さらにサンプルパッドを重ねる。他方の側には余剰の反応物を吸収するエンドパッドを重ねた後、全体をクリアマイラーで被覆し、幅約５ｍｍの短冊状にカットすることで、ディップスティックが完成する。【００４３】
＜イムノクロマトラテラルフロ−式テストデバイスの作製例＞
選択した流速条件に合致するメンブランに抗インフルエンザＡ型マウス抗体及び抗インフルエンザＢ型マウス抗体並びに抗マウスＩｇＧに対する抗体のそれぞれ至適量をテストデバイスの所定の場所にラインとして塗布した。その際、塗布する形状は任意の形状とすることが可能であり、反応後の視認性を考慮して塗布間隔及び塗布量を決定した。また、検体濾過液を滴下する開口部（サンプル滴下部）は、円形、楕円形、長四角形、菱形、台形などいずれでもよい。なお、抗マウスＩｇＧに対する抗体の代わりにヒトインフルエンザＡ型抗原及びＢ型抗原の混合体を選択してもよい。このメンブランをホワイトビニルのベース型紙上に配置した後、一方の側にコンジュゲートパッドを重ね、さらにサンプルパッドを重ねる。他方の側には余剰の反応物を吸収するエンドパッドを重ねた後、所定の幅に切断して、プラスティックカセットに組み込むと、イムノクロマトラテラルフロー式のテストデバイスが完成する。【００４４】
＜検体希釈用の抽出液の調製例＞
緩衝液をベースとして界面活性剤などを添加して調製する。すなわち、リン酸水素二ナトリウム２水和物１．０８ｇ、リン酸水素二カリウム０．３７４ｇ、塩化ナトリウム８．７６ｇ、アジ化ナトリウム０．９ｇに精製水７００ｍＬを加えて溶解し、ｐＨ７．４に調整した。これに、ウシ血清アルブミン２．０ｇを加えて溶解し、精製水を加えて全量を１０００ｍＬとした。【００４５】
以下、試験例をもって本発明の検査方法をさらに説明する。
《試験例１》
＜本発明の検査方法と従来法の検査方法の精度確認試験＞
（１）試験方法
イ．希釈検体液の調製
ボランティアから採取した鼻腔吸引液に浸した綿棒を、あらかじめ一定量の検体希釈用の抽出液（例えば参考例２に示す抽出液）を入れた検体収容容器に入れ、綿球内の鼻腔吸引液をよく抽出して、希釈検体液（前処理検体液）を調製した。
ロ．フィルターの作製
ガラス繊維系の濾紙をポリエチレン重合体濾布の上下に重ねてフィルターとした。
ハ．ディップスティックとテストデバイス
参考例２で作製したディップスティックと同ラテラルフロー式テストデバイスを用い  た。
ニ．試験方法
上記希釈検体液を３分して、Ａ．本発明の検査方法（ディップスティック式）、Ｂ．  カラムを用いないディップスティック式検査方法、Ｃ．イムノクロマトラテラルフロー  式検査方法の３通りの方法によって、希釈検体液の検査を行なった。【００４６】
すなわち、本試験例における検査方法は、以下の３通りである。
Ａ．本発明の検査方法
実施例１で用いたカラム（実施例１のフィルターを装着したもの）を、上記希釈検体液を収容してある検体収容容器（実施例１のもの）内に挿入して、実施例１と同じ方法によって検体収容容器内に検体濾過液を作り、実施例２の検査方法によって検体収容容器内方のカラム内に参考例２で作製したディップスティックを挿入して、反応を観察した。その結果を表１に示す
Ｂ．カラムを用いないディップスティック式検査方法
上記希釈検体液を収容した検体収容容器内へ（カラムを挿入しないで）直接上記ディップスティックを挿入して、反応を観察した。その結果を表２に示す。
Ｃ．イムノクロマトラテラルフロー式検査方法
頂部に小孔を有するキャップ（参考例１で用いたもの）に実施例１で用いたフィルターを装着して、上記希釈検体液を収容した検体収容器に被せ、希釈検体液を濾過しながら、参考例２で作製したテストデバイス上のサンプル滴下部に５滴滴下して反応を観察した。その結果を表３に示す。【００４７】
（２）試験結果
試験結果は表１〜表３に示すとおりである。
表１と表２の比較より、同一のディップスティックを用いた検査にも関わらず、フィルターを用いない場合は、陰性検体４８例中の３例で、誤ってＢ型陽性を示した。
また、表１と表３から、本発明の検査法は、イムノクロマトラテラルフロー式の検査方法とほぼ同じ結果が得られることが確認された。【００４８】
【表１】
2006043387.tif 000002
【００４９】
【表２】
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【００５０】
【表３】
2006043387.tif 000004
【００５１】
（３）所見
上記の試験結果から、本発明の検査方法は、精度が高く、かつ、参考例として示したラテラルフロー式検査方法と同等の精度であることが明らかとなった。【００５２】
《試験例２》
＜本発明の方法とイムノクロマトラテラルフロー式検査方法の検査所要時間比較試験＞
（１）試験方法
試験例１で用いた本発明の検査方法と同じくイムノクロマトラテラルフロー式検査方法について、検査所要時間を計測・比較した。すなわち、本発明の検査方法では、希釈検体液の調製開始からディップスティックを挿入するまでの所要時間を、また、イムノクロマトラテラルフロー式検査方法では、希釈検体液の調製開始からテストデバイスに希釈検体液を５滴滴下し終わるまでの所要時間をそれぞれ計測した。計測方法は、各試験方法ごとに５名のパネラー（全員が検体の免疫学的検査方法の未経験者）を選んで両試験を行なわせ、所要時間を計測した。【００５３】
（２）試験結果
表４に本発明の検査方法による試験結果を、表５にイムノクロマトラテラルフロー式検査方法による試験結果をそれぞれ示す。また、表６にそれぞれの試験方法による平均所要時間を示す。【００５４】
（３）所見
表６から、本発明の検査方法は、イムノクロマトラテラルフロー式検査方法に比べて、検査所要時間を大幅に短縮できることが確認された。【００５５】
【表４】
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【００５６】
【表５】
2006043387.tif 000006
【００５７】
【表６】
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【産業上の利用可能性】
【００５８】
以上、詳細に説明するとおり、本発明に係る検体の検査方法とその方法に用いる検査器具は、臨床検査、例えば、血液、尿、便、鼻孔・鼻腔・咽頭・鼻咽頭などを由来とする鼻汁液や鼻汁吸引液、痰或いはスワブ検体として収集された分泌液などの各種の検体を免疫学的に検査するのに有用であり、例えば、インフルエンザウイルスなどの感染症の検査や緊急簡易検査に用いるのに好適である。特に、ヒトインフルエンザＡ型ウイルス又はヒトインフルエンザＢ型ウイルスの存在を短時間のうちに検出し、かつ、鑑別するための方法及びその方法に用いる検査器具として大いに有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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