(57)【要約】  乳酸菌を、カゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴とする抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法が開示される。本発明はまた、本発明の方法を用いて培養した乳酸菌を有効成分として含む抗アレルギー剤、ならびに本発明の方法を用いて培養した乳酸菌を有効成分として含む抗アレルギー効果を有する飲食品を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸菌を、カゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴とする抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法。
【請求項２】
乳酸菌を、カゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴とするIL-12産生促進効果を有する乳酸菌の製造法。
【請求項３】
前記カゼイン加水分解物がパンクレアチン加水分解物である、請求項１または２に記載の製造法。
【請求項４】
前記加水分解物がペプトンである、請求項１−３のいずれかに記載の製造法。
【請求項５】
前記培地は、カゼイン加水分解物を0.01〜10質量％含有せしめたものである、請求項１〜４のいずれかに記載の製造法。
【請求項６】
前記乳酸菌がラクトバチルス属に属する乳酸菌である、請求項１〜５のいずれかに記載の製造法。
【請求項７】
前記ラクトバチルス属に属する乳酸菌が、ラクトバチルス.アシドフィラス（Lactobacillus  acidophilus)、ラクトバチルス.ファーメンタム（Lactobacillus  fermentum）、ラクトバチルス.カゼイ(Lactobacillus  casei)、ラクトバチルス.パラカゼイ(Lactobacillus  paracasei)、又はラクトバチルス.ガッセリ(Lactobacillus  gasseri)である、請求項６に記載の製造法。
【請求項８】
前記ラクトバチルス.アシドフィラスが、ラクトバチルス.アシドフィラスL-92株（FERM  BP-4981）である、請求項７に記載の製造法。
【請求項９】
前記培養を行った培養物から乳酸菌の菌体を採取し乾燥する、請求項１〜８のいずれかに記載の製造法。
【請求項１０】
前記培地は、カゼイン加水分解物と畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源とを含有する、請求項１〜９のいずれかに記載の製造法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめた抗アレルギー剤。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれかに記載の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめた抗アレルギー効果を有する飲食品。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれかに記載の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめたIL-12産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口摂取することにより、生体におけるサイトカインの産生量を高め、優れた抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法、この乳酸菌を有効成分とする抗アレルギー剤及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
乳酸菌は、腸内フローラのバランスを改善して腸内腐敗産物の低減や糞便性状を改善する効果のほか、生体の免疫活性を向上させる効果を有することが知られており、抗アレルギー剤の有効成分等として利用されている（例えば、特開2004-26729号公報（特許文献1）参照）。一般に、乳酸菌による前記のような生理効果を得るためには、菌体を比較的大量に摂取する必要があると言われている。【０００３】
一方、乳酸菌の培養には、市販の研究用ＭＲＳ培地等を用いることが知られているが、乳酸菌の生育を良好にするための添加物として、酵母エキス、牛肉エキス等の栄養分が用いられている。【０００４】
乳酸菌の栄養要求を満たす培地を用いれば、乳酸菌が通常通り増殖することは容易に考えられるが、乳酸菌を工業的に大量に培養しようとした場合に、前記のような乳酸菌の栄養要求を満たす培地を用いても、必ずしも抗アレルギー活性を有する菌体が、安価に大量に得られる訳ではないという問題があった。【０００５】
また、ＭＲＳ培地は研究用であるため、この培地により培養された乳酸菌を飲食品等に用いるには問題があった。その為、食品及び食品添加物として認められる成分のみからなる培地の開発が望まれていた。【０００６】
また、培地の栄養源の一つとして、タンパク質加水分解物であるペプトン（硫酸アンモニウムで沈殿しない、部分加水分解されたタンパク質。微生物培地の成分として用いられる二次タンパク質誘導体）等の成分を用いられることが知られているが、ペプトンの種類が乳酸菌の抗アレルギー効果と関係があることについては何ら知られていなかった。特に、乳酸菌の菌数自体が増加するにも関わらず、十分な抗アレルギー活性が得られない場合があるということについては、全く知られていなかった。【０００７】
このように、乳酸菌の抗アレルギー効果と培地組成との関係については、これまでに研究されたことがなく、乳酸菌の増殖特性だけに着眼して培地組成が選択されていたのが現状である。
【特許文献１】特開2004-26729号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで、本発明は、飲食品に利用できる培地組成を選択することにより、抗アレルギー効果の高い乳酸菌を製造する方法、及び該方法によって得られた乳酸菌を有効性成分として含有せしめた抗アレルギー剤及びこの乳酸菌を有効成分として含有せしめて抗アレルギー効果を有する飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、前記目的を達成するために鋭意研究した結果、カゼイン加水分解物（カゼインペプトン）を添加した培地を用いることにより、抗アレルギー効果の高い乳酸菌が、得られることを見出し、本発明を完成するに至った。【００１０】
本発明の１つの観点においては、乳酸菌を、カゼイン加水分解物を0.01質量％以上、好ましくは0.01〜10質量％含有せしめた培地を用いて培養することを特徴とする、抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法が提供される。【００１１】
本発明によれば、カゼイン加水分解物を添加した培地を用いて乳酸菌を培養することにより、抗アレルギー効果の高い乳酸菌を得ることができる。更に、カゼイン加水分解物に加えて、畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源を添加した培地を用いる事により、より大量の乳酸菌を得ることができる。【００１２】
また、前記培地は、カゼイン加水分解物を0.01〜10質量％含有せしめることが好ましい。これによって、抗アレルギー効果がより高い乳酸菌を得ることができる。更に、菌体の増殖を促進する目的で、畜肉又は魚介肉を起源とする窯素源を0.01〜10質量％含有する培地を用いてもよい。畜肉又は魚介肉の窒素源としては、ウシ、マグロ、カツオ等を起源とする窒素源が用いられる。【００１３】
更にまた、前記乳酸菌がラクトバチルス.アシドフィラス(Lactobacillus  acidophilus)、又はラクトバチルス.ファーメンタム（Lactobacillus  fermentum）、ラクトバチルス.カゼイ(Lactobacillus  casei)、ラクトバチルス.パラカゼイ(Lactobacillus  paracasei)、ラクトバチルス  ガッセリ(Lactobacillus  gasseri)であることが好ましい。特に、ラクトバチルス.アシドフィルスL-92株（特許生物寄託センター寄託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−４９８１、寄託日１９９４年３月４日）であることが好ましい。加えて、前記培養物から乳酸菌の菌体を採取し、乾燥することが好ましい。これによれば、抗アレルギー効果の高い乳酸菌を得ることができると共に、食品、医薬品の原料として用いる場合の安全性をより高めることができる。従って、前記の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめる抗アレルギー剤を得ることができ、またこの乳酸菌を用いて抗アレルギー効果の高い飲食品を得ることができる。【００１４】
本発明によれば、カゼイン加水分解物を添加した培地を用いて乳酸菌を培養することにより、抗アレルギー効果の高い乳酸菌をより多く得ることができる。【００１５】
本発明は、乳酸菌をカゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴とする抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法を提供する。本発明はまた、乳酸菌をカゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴とするIL-12産生促進効果を有する乳酸菌の製造法を提供する。【００１６】
好ましい態様においては、カゼイン加水分解物はパンクレアチン加水分解物である。また好ましくは、加水分解物はペプトンである。また好ましくは、培地は、カゼイン加水分解物を0.01〜10質量％含有する。【００１７】
別の態様においては、乳酸菌はラクトバチルス属に属する乳酸菌である。好ましくは、ラクトバチルス属に属する乳酸菌は、ラクトバチルス.アシドフィラス（Lactobacillus  acidophilus)、ラクトバチルス.ファーメンタム（Lactobacillus  fermentum）、ラクトバチルス.カゼイ(Lactobacillus  casei)、ラクトバチルス.パラカゼイ(Lactobacillus  paracasei)、又はラクトバチルス.ガッセリ(Lactobacillus  gasseri)である。より好ましくは、ラクトバチルス.アシドフィラスは、ラクトバチルス.アシドフィラスL-92株（FERM  BP-4981）である。【００１８】
別の態様においては、培養を行った培養物から乳酸菌の菌体を採取し乾燥する。【００１９】
また別の態様においては、培地は、カゼイン加水分解物と畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源とを含有する。【００２０】
本発明はまた、本発明の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめた抗アレルギー剤ならびにIL-12産生促進剤を提供する。【００２１】
本発明はまた、本発明の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめた抗アレルギー効果を有する飲食品を提供する。【００２２】
なお、本発明の抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法は、同時に、抗アレルギー剤の製造法としても使用でき、本方法により得られた乳酸菌の培養物を抗アレルギー剤として使用することもできる。【００２３】
本発明の方法にしたがえば、IL-12産生促進効果の高い乳酸菌を製造することができる。本発明の抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法は、本乳酸菌を有効成分として含有せしめたIL-12産生促進剤の製造法としても使用でき、さらに、本発明の抗アレルギー剤は、同時に、乳酸菌を有効成分として含有せしめたIL-12産生促進剤として使用することもできる。IL-12がIgE産生を抑制し、アレルギーを抑制する作用を有することは広く知られている。
【発明の効果】
【００２４】
本発明によれば、カゼイン加水分解物、及び、更に必要に応じ畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源を添加した培地を用いて乳酸菌を培養することにより、優れた抗アレルギー効果を有する乳酸菌を得ることができる。また、該培地は、非常に安価に調製でき、かつ効率的に乳酸菌の増殖を促進することができるので、乳酸菌の培養コストを低くすることができる。更にこうして得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめることにより、安全性が高く、優れた抗アレルギー効果を有する抗アレルギー剤及び飲食品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】実施例１の培地（１）から（７）を用いて培養した乳酸菌から生産されるIL-12の生産量を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
まず、本発明の乳酸菌の培養に用いる培地について説明する。カゼイン加水分解物は、一般にカゼインペプトン、乳ペプチド等として知られ、カゼインに由来するペプチド、アミノ酸等の窒素化合物を多く含む。カゼイン加水分解物は、食品原料、培地成分として一般に用いられており、市販のものを用いることができる。【００２７】
また、菌体の増殖を促進する目的で用いる、畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源の例としては、水畜産缶詰、水畜産加工品製造の際に得られる煮汁を濃縮したものであり、獣肉、魚介肉から溶出するタンパク質、ペプチド、アミノ酸等の窒素化合物及び無機成分を含み、安価である。畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源は、市販のものを用いてもよく、畜肉又は魚介肉のエキスをそのまま濃縮しても、また酵素分解又は酸加水分解して調製してもよい。畜肉としては、ウシ、魚介肉としては、マグロ、カツオを用いることが好ましい。【００２８】
前記カゼイン加水分解物としては、飲食品の製造に使用可能な衛生性・安全性を有する原料であれば特に制限なく用いることができ、例えば、商品名「BACTO  CASITONE」、商品名「BACTOTRYPTONE」(いずれもDifco製)、商品名「パティケースペプトン」（極東製薬製)、商品名「カゼインペプトンプラス」（Organotechnie製）等を用いることができる。【００２９】
また、菌体の増殖を促進する目的で用いる、畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源としては、食品製造に使用可能な衛生性・安全性を有する原料であれば特に制限なく用いることができ、例えば、商品名「BACTO  BEEF  EXTRACT」（Difco製)、商品名「Bacterio-N-KS(B)」（マルハ製）、商品名「カルチベータＴ」（焼津水産製)等を用いることができる。【００３０】
本発明においては、カゼイン加水分解物を0.01質量％以上、好ましくは、カゼイン加水分解物を0.01〜10質量％含有せしめた培地を用いることが好ましく、カゼイン加水分解物の含有量が少な過ぎると、乳酸菌の良好な生育が期待できず、また、十分な抗アレルギー効果、即ち、IL-12誘導能を有する乳酸菌を大量に得ることができない。【００３１】
更に好ましくは、畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源を0.01〜10質量％、より好ましくは畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源を0.01〜1質量％含有せしめた培地を用いることにより、抗アレルギー効果を有する菌体の増殖が良好となる。【００３２】
また、前記基本的成分の他に、必要に応じて、乳糖、グルコース、蔗糖、デキストリン等の糖源、有機又は無機塩類、畜肉、魚介肉、カゼイン以外の蛋白を起源とする窒素源（その加水分解物も含む）等を添加してもよい。前記成分の中でも、糖源を1〜10  質量％、有機又は無機塩類を0.5〜2質量％添加することが好ましい。なお必要に応じて、酵母エキス、その他のペプトン類、肉エキス等も添加してもよい。【００３３】
本発明で用いられる培地は、前記各成分を用いて常法に従って調製することができ、例えば、水（好ましくは蒸留水又はイオン交換水）に所定量の畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源及びカゼイン加水分解物を添加し、必要に応じて前記の他の成分を更に加えて均一に溶解した後、pHを6.5〜7.0に調整して公知の方法（例えばオートクレーブ等）により滅菌すればよい。【００３４】
本発明の方法においては、前記のようにして調製した培地を用いて常法に従って乳酸菌の培養を行なえばよく、例えば、前記培地に、乳酸菌の前培養液（又は寒天培地で培養した乳酸菌のコロニー）を接種し、好気性、微好気性又は嫌気性の条件下で、30〜45℃、12〜72時間培養すればよい。なお、培養中に、乳酸菌の代謝産物（例えば乳酸等）により培地のpHが低下するため、適宜培地のpHを測定し、アルカリ水溶液（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、アンモニア等の水溶液）を添加して、培地のpHを6.5〜7.5(より好ましくはpH6.8〜7.2)に保持しながら培養を行なうこともできる。このように培地のpHを中性付近に保持して培養を行なうことにより、乳酸菌の生育を良好にすることができ、菌体収量を向上させることができる場合もある。【００３５】
本発明の培養方法において用いられる乳酸菌としては、例えば、ラクトバチルス.デルブリュッキィ  ブルガリカス（Lactobacillus  delbrueckii  bulgaricus）、ラクトバチルス.デルブリュッキィ  ラクティス（Lactobacillu  delbrueckii  lactis）、ラクトバチルス.ヘルベティカス（Lactobacillus  helveticus）、ラクトバチルス.アシドフィラス（Lactobacillus  acidophilus）、ラクトバチルス.クリスパタス（Lactobacillus  crispatus）、ラクトバチルス.アミロボラス（Lactobacillus  amylovorus）、ラクトバチルス.ガリナラム（Lactobacillus  gallinarum）、ラクトバチルス.ガッセリ(Lactobacillus  gasseri)、ラクトバチルス.ジョンソニ（Lactobacillus  johnsonii）、ラクトバチルス.カゼイ(Lactobacillus  casei)、ラクトバチルス.パラカゼイ(Lactobacillus    paracasei)、ラクトバチルス.ゼアエ（Lactobacillus  zeae）、ラクトバチルス.プランタラム（Lactobacillus  plantarum）、ラクトバチルス.ラムノーサス（Lactobacillus  rhamnosus）、ラクトバチルス.ブレビス（Lactobacillus  brevis）、ラクトバチルス.ケフィール（Lactobacillus  kefir）、ラクトバチルス.ファーメンタム（Lactobacillus  fermentum）、ラクトバチルス.ロイテリ（Lactobacillus  reuteri）、ビフィドバクテリウム.ロンガム（Bifidobacterium.  longum）、ビフィドバクテリウム.ラクティス（Bifidobacterium.lactis）、ビフィドバクテリウム.カテニュラータム（Bifidobacterium.catenulatum）等が好ましく挙げられるが、より強い抗アレルギー効果を有するラクトバチルス.アシドフィラス（Lactobacillus  acidophilus）L-0062株（FERM  BP-4980）、L-92株（FERM  BP-4981)、ラクトバチルス.ファーメンタム（Lactobacillus  fermentum）CP34株(FERM  BP-8383)等が特に好ましい。【００３６】
本発明においては、乳酸菌の培養終了後、得られた培養物から乳酸菌の菌体を例えばろ過、遠心分離等の方法によって採取し、この菌体を乾燥することが好ましい。これによって、飲料・食品や医薬品の原料として、より安定性の高い乳酸菌を提供することができる。しかも乾燥前に加熱殺菌により死菌体としても、抗アレルギー効果を保持することができる。なお、乾燥した菌体は、粉末化して飲料・食品や医薬品の原料として製品化することが好ましい。【００３７】
本発明の抗アレルギー剤は、前記乳酸菌を有効成分として含有せしめたものである。このような抗アレルギー剤は、  前記乳酸菌に、必要により、賦形剤、甘味料、酸味料、ビタミン類、ミネラル類、色素、香料、増粘多糖類等を添加し、粉末、穎粒、錠剤、カプセル剤、ペースト状、ゼリー状、及び各種の固形食品、又は液状の飲料として調製することができる。【００３８】
本発明の抗アレルギー剤は、免疫賦活効果を有し、免疫賦活剤として用いられる。その有効摂取量は、前記乳酸菌体換算で成人1日当り1mg〜10gであり、より好ましくは10〜200mgである。【００３９】
また、本発明の抗アレルギー剤は、例えば、飲料、ゼリー、キャンディー、ガム、レトルト食品、インスタント食品等に添加して摂取することもできる。この場合、前記乳酸菌を１日当たり1〜1,000mg、より好ましくは10〜500mg採取できるように前記各食品中に添加することが好ましい。【００４０】
本明細書において明示的に引用される全ての特許および参考文献の内容は全て本明細書の一部としてここに引用する。また，本出願が有する優先権主張の基礎となる出願である日本特許出願２００５−２４２０４号の明細書および図面に記載の内容は全て本明細書の一部としてここに引用する。【００４１】
以下に実施例により本発明をより詳細に説明する。
【実施例１】
【００４２】
カゼインペプトンプラスを用いた培地の調製
魚肉エキス（商品名：エルリッヒ肉エキス、極東製薬工業製）10g、酵母エキス（商品名：ミーストP2G、アサヒフードアンドヘルスケア製）5g、グルコース  20g、デカグリセリンモノオレイン酸エステル（商品名：ポリグリセリンエステル  ポエム  J-0381V、理研ビタミン製）1g、酢酸ナトリウム結晶(食品添加物規格準拠)5g、硫酸マグネシウム結晶(食品添加物規格準拠)0.1g及びリン酸水素二カリウム(食品添加物規格準拠)2gに対し、カゼインペプトン（商品名：カゼインペプトンプラス、Organotechnie製）10gを加え、精製水を加えて1Lにメスアップし、水酸化ナトリウムでpH6.8に調整した後、121℃で20分間オードクレーブ滅菌して培地1)を調製した。【００４３】
［比較例１］
対照として、前記培地成分のうちカゼインペプトンプラス（商品名、Organotechnie製）10gに代えて、次のペプトンをそれぞれ加え、前記実施例１と同様の処理を行い、培地(2)〜(7)を調製した。
培地(2)小麦ペプトン（商品名：小麦ペプトンE1、Organotechnie製）10g、
培地(3)大豆ペプトン（商品名：大豆ペプトンA2、Organotechnie製）10g、
培地(4)大豆ペプトン（商品名：大豆ペプトンA3、Organotechnie製）10g、
培地(5)大豆ペプトン（商品名：大豆ペプトンAX、Organotechnie製）10g、
培地(6)植物ペプトン（商品名：植物ペプトンE1、Organotechnie製）10g、
培地(7)カゼインペプトン（商品名：トリプトンN1、Organotechnie製）10g。【００４４】
［試験例１］
１．乳酸菌の調製
前記実施例１及び比較例１にて調製した培地1)〜7)に、ラクトバチルス.アシドフィラス(Lactobacillus  acidophilus)  L-92株（FERM  BP-4981）の前培養液をそれぞれ3.5%接種し、35℃で18時間培養を行なった。【００４５】
培養終了後、培養液を遠心して菌体を回収して滅菌水で３回洗浄した後、凍結乾燥装置（東京理化器機製FDU-830）で凍結乾燥して乳酸菌粉末を得た。乳酸菌粉末を全量回収し、重量を測定した。得られた乳酸菌粉末を滅菌水に懸濁後、100℃、10分殺菌処理を行い、乳酸菌懸濁液を得た。以下の方法によりIL-12誘導能を指標として抗アレルギー効果の測定を行った。【００４６】
２．IL-12誘導能の測定
（１）  脾臓細胞の調整
6週齢のBALB/cマウス(雌)の腹腔内に、50μg/0.1mL濃度のOVA溶液（等量のAlumを含む）をマウスに注射して10日間飼育した後、頚椎脱臼によりマウスを屠殺し、脾臓を摘出した。脾臓細胞をRPMI1640培地（10％FBS、25mM  HEPES含有）に懸濁し、70μmセルストレーナー（FALCON製）に通し単細胞化した。この細胞懸濁液にRPMI1640培地（10％FBS、25mM  HEPES含有）を加えて生細胞数が5×106/mlとなるように調整して脾臓細胞懸濁液を得た。なお、生細胞数の測定方法は、細胞懸濁液にトリパンブルー染色液を加えて混合し、赤血球計算盤にて生細胞数を数えることで行った。【００４７】
試薬
１）FBS(Fetal  Bovine  Serum)
冷凍保存してあるFBSを56℃ウォーターバスに30分間入れ非働化して、滅菌容器に入れて冷凍保存した。
２）PBS
NaCl  80g、Na2HPO4・12H2O  29g、KCl  2g、KH2PO4  2gを蒸留水に溶解して1Ｌとし、オートクレーブで滅菌した。
３）RPMI  1640  Medium
RPMI  1640培地「ニッスイ」（２）（商品名、日水製薬製）10.2gを蒸留水１Lに溶解して121℃、20分蒸気滅菌し、10％NaHCO3、L-グルタミン0.3g、ペニシリン10万単位、ストレプトマイシン0.1g（GIBCO製）を無菌的に加えた。【００４８】
(２)  脾臓細胞と乳酸菌粉末の共培養（IL-12の誘導）
96穴平底プレート（FALCON製）に、前記脾臓細胞懸濁液を200μL/穴、乳酸菌粉末懸濁液を0.01〜1μg/穴、OVAを20μg/穴ずつ入れ、37℃、5％CO2で24時間培養した。【００４９】
(３)  抗アレルギー活性指標IL-12測定
IL-12の測定は、培養上清をマウスIL-12p70測定キット（商品名「OptEIA  Mouse  IL-12（p70）Set」、BD  Phar  Mingen製）及び96穴イムノアッセイ用プレート（NUNC製）を用いて行った。その結果を図１に示す。【００５０】
(４)  結果
図１から、カゼインペプトンプラスを用いた培地1)が非常にIL-12産生誘導能が高く、他のペプトンを用いた培地ではIL-12産生誘導能が低かった。カゼインペプトンプラスを用いた培地1)は市販のＭＲＳ培地を用いた場合と比較して、同等又はそれ以上のIL-12産生誘導能を有することが確認された。
【実施例２】
【００５１】
タブレットの製造
カゼインペプトン（商品名：カゼインペプトンプラス、Organotechnie製）1kg、酵母エキス（商品名：イーストペプトン  スタンダード  タイプＦ、Organotechnie製）0.5kg、蔗糖2.25kg、デカグリセリンモノオレイン酸エステル（商品名：サンソフトQ-17S、太陽化学製）0.1kg、酢酸ナトリウム結晶（食品添加物規格準拠）0.5kg、リン酸水素二カリウム（食品添加物規格準拠）0.5kg、硫酸マグネシウム結晶（食品添加物規格準拠）0.1kg、魚肉エキス（商品名：Bacterio-N-KS(B)、マルハ製)  1kgをそれぞれ加え、精製水を加えて100Lにメスアップし、50％程度に溶解した水酸化ナトリウム(食品添加物規格準拠)でpH6.8に調整して、121℃、20分間常法に従って滅菌した後、培養温度である35℃まで冷却して培地を調製した。【００５２】
同培地を用いて35℃で培養したスターターを無菌的に1〜5％接種し、15分間攪拌の後に攪拌翼を停止し、pHが4.2以下になるまで(18時間程度)培養した。培養終了後、培養液を遠心分離機SC-1型（ウェストファリア製）を用いて処理し、不溶性固形分と液相に分離した。得られた不溶性固形分を培地の容量と等倍まで精製水で稀釈した後、同様に遠心分離機SC-1型（ウェストファリア製）を用いて処理し、不溶性固形分と液相に分離することによって、菌体を洗浄した。更に得られた不溶性固形分を精製水で培地の容量と等倍まで稀釈して、100℃、10分間加熱して殺菌し、60℃以下まで冷却した後に、遠心分離機SC-1型（ウェストファリア製）を用いて処理し、不溶性固形分と液相に分離することにより、洗浄され、殺菌され、濃縮された菌体の分散液を得た。【００５３】
菌体の分散液を凍結乾燥用バットに1cm厚に流し込み、-38℃に保持された冷凍庫に収容して、品温が-35℃以下となるまで冷凍した。凍結された菌体の分散液を、初期加熱温度を40℃に設定した凍結乾燥機TFD-50LF2（東洋技研製）に速やかに収容し、常法に従い、得られた乾燥物の乾燥減量が3％以下になるまで乾燥した。得られた乾燥物をM-4型奈良式自由粉砕機（奈良機械製）で粉砕し、22メッシュのスクリーンで篩別し、粒度の揃った菌体末を得た。【００５４】
得られた菌体末3.2kgに対し、パーテックSI150（昭和興産製）55kg、粉末還元パラチノースPNP（三井物産製）20kg、精製乾燥殺菌タピオカ（松谷化学製）10kg、グルコース（JAS規格準拠）9.8kg、DKエステルF-20W（三栄源エフ・エフ・アイ製）2kgをUV-1型Vブレンダー（内田工業所製）で、常法に従って5分間混合し、菌体末を含有せしめた打錠用粉末を得た。打錠用粉末をペガサス1024HUK-AWC型打錠機（菊水製作所製）を使用し、9mmφ標準R型臼杵を用いて、常法に従って、1粒当り350mgのタブレットに整形した。【００５５】
得られたタブレットを1日当り2粒摂取する事により、花粉症及び通年性アレルギー性鼻炎の方を対象とした臨床試験に供した発酵乳に含まれるものと同量の乳酸菌を摂取できる。本発明により、継続して摂取することが容易で、かつ安価な抗アレルギー剤を製造することができる。
【実施例３】
【００５６】
飲料の製造
カゼインペプトン（商品名：カゼインペプトンプラス、Organotechnie製）1kg、酵母エキス（商品名：イーストペプトン  スタンダード  タイプＦ、Organotechnie製）0.5kg、蔗糖2.25kg、デカグリセリンモノオレイン酸エステル（商品名：サンソフトQ-17S、太陽化学製）0.1kg、酢酸ナトリウム結晶（食品添加物規格準拠）0.5kg、リン酸水素二カリウム（食品添加物規格準拠）0.5kg、硫酸マグネシウム結晶（食品添加物規格準拠）0.1kg、魚肉エキス（商品名：Bacterio-N-KS(B)、マルハ製)  1kgをそれぞれ加え、精製水を加えて100Lにメスアップし、50％程度に溶解した水酸化ナトリウムでpH6.8に調整して、121℃、20分間常法に従って滅菌した後、培養温度である35℃まで冷却して培地を調整した。【００５７】
同培地を用いて35℃で培養したスターターを無菌的に1〜5％接種し、15分間攪拌の後に攪拌翼を停止し、OD600が5.0に達するまで(18時間程度)培養した。培養終了後、培養液を遠心分離機SC-1型（ウェストファリア製）を用いて処理し、不溶性固形分と液相に分離した。得られた不溶性固形分を培地の容量と等倍まで精製水で稀釈した後、同様に遠心分離機SC-1型（ウェストファリア製）を用いて処理し、不溶性固形分と液相に分離することによって、菌体を洗浄した。更に得られた不溶性固形分を精製水で培地の容量と等倍まで稀釈して、105℃、3分間加熱して殺菌し、60℃以下まで冷却した後に、遠心分離機SC-1型（ウェストファリア製）を用いて処理し、不溶性固形分と液相に分離することにより、洗浄され、殺菌され、濃縮された菌体の分散液を得た。【００５８】
菌体の分散液を凍結乾燥用バットに1cm厚に流し込み、-38℃に保持された冷凍庫に収容して、品温が-35℃以下まで冷凍とした。凍結された菌体の分散液を初期加熱温度を40℃に設定した凍結乾燥機TFD-50LF2（東洋技研製）に速やか収容し、常法に従い、得られた乾燥物の乾燥減量が3％以下になるまで乾燥した。得られた乾燥物をM-4型奈良式自由粉砕機（奈良機械製）で粉砕し、22メッシュのスクリーンで篩別し、粒度の揃った菌体末を得た。【００５９】
常法に従って調製したSNF3％程度の乳製品乳酸菌飲料1ｔに対し、0.2kgの菌体末を添加し、H-50型可変式高圧均質化機（三和機械製）を使用し、15MPaで均質化した原液を常法に従い、飲料製造用のプレートヒーターを用いて96℃30秒殺菌した後に、85℃で100ml壜に充填し、常法に従ってPPキャップの巻締めを行い、転倒して蓋部を殺菌し、殺菌乳酸菌飲料とした。【００６０】
得られた殺菌乳酸菌飲料は、一日当り1本を摂取することにより、花粉症及び通年性アレルギー性鼻炎の方を対象とした臨床試験に供した発酵乳に含まれるものと同量の乳酸菌を摂取できる。本発明により、継続して摂取することが容易で、かつ安価な抗アレルギー効果を有する飲料を製造することができる。
【図１】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年11月2日(2006.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸菌を、カゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴とする、乳酸菌の抗アレルギー効果を高める方法。
【請求項２】
乳酸菌を、カゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴とする、乳酸菌のＩＬ−１２産生促進効果を高める方法。
【請求項３】
前記カゼイン加水分解物がパンクレアチン加水分解物である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記加水分解物がペプトンである、請求項１−３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記培地は、カゼイン加水分解物を０．０１〜１０質量％含有せしめたものである、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記乳酸菌がラクトバチルス属に属する乳酸菌である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記ラクトバチルス属に属する乳酸菌が、ラクトバチルス．アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス．ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルス．カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス．パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、又はラクトバチルス．ガッセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ラクトバチルス．アシドフィラスが、ラクトバチルス．アシドフィラスＬ−９２株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４９８１）である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記培養を行った培養物から乳酸菌の菌体を採取し乾燥する、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記培地は、カゼイン加水分解物と畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源とを含有する、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめた抗アレルギー剤。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれかに記載の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめた抗アレルギー効果を有する飲食品。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれかに記載の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめたＩＬ−１２産生促進剤。
【国際調査報告】
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