(57)【要約】  本発明は、脈硬化を予防するかまたは改善するために有効に用いられる抗動脈硬化組成物または動脈硬化進展抑制組成物に関する。本発明の抗動脈硬化組成物（動脈硬化進展抑制組成物）は、酵素処理イソクエルシトリンを有効成分として用いることを特徴とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵素処理イソクエルシトリンを有効成分とする抗動脈硬化用組成物。
【請求項２】
酵素処理イソクエルシトリンを、動脈硬化進展抑制効果を発揮する有効量含有する、請求項１記載の抗動脈硬化用組成物。
【請求項３】
経口投与形態を有する請求項１に記載する抗動脈硬化用組成物。
【請求項４】
酵素処理イソクエルシトリンを、１日投与単位あたり３ｍｇ〜３０ｇの割合で含有する請求項１に記載する抗動脈硬化用組成物。
【請求項５】
酵素処理イソクエルシトリンを、１日投与単位あたり３ｍｇ〜３０ｇ含有するように製剤化されてなる、請求項１に記載する抗動脈硬化用組成物。
【請求項６】
医薬品である、請求項１記載の抗動脈硬化用組成物。
【請求項７】
食品である、請求項１記載の抗動脈硬化用組成物。
【請求項８】
容器に収納された抗動脈硬化用組成物であって、当該容器またはその包装物に、効能として抗動脈硬化作用が記載されてなる、請求項７に記載する抗動脈硬化用組成物。
【請求項９】
動脈硬化予防または改善のための特定保健用食品である、請求項７に記載する抗動脈硬化用組成物。
【請求項１０】
動脈硬化が進行するリスクを有する被験者に、酵素処理イソクエルシトリンを、動脈硬化進展抑制効果を発揮する有効量投与することを含む、当該被験者に対する動脈硬化の予防または改善方法。
【請求項１１】
酵素処理イソクエルシトリンの、抗動脈硬化用組成物の製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動脈硬化を予防するかまたは改善するために有効に用いられる抗動脈硬化組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
血中脂質、特にコレステロール及びトリグリセリドは、動脈硬化症、高脂血症及び脂肪肝などの冠状動脈性心血管疾患と密接に関係していることが知られている。例えば、血中コレステロールの濃度が高いと、血管壁に脂肪とともにマクロファージ及び泡沫細胞が沈着してプラークを形成して動脈硬化症に至ることが報告されている（非特許文献１）。血中コレステロールの量を減らす方法の一つは、コレステロールや脂肪の摂取を減らす食餌療法である。他の方法は、コレステロールの吸収に関わる酵素を阻害することによってコレステロールの吸収を阻止することである。【０００３】
アシルＣｏＡ−コレステロール−O−アシルトランスフェラーゼ（Acyl CoA-cholesterol-O-acyltransferase、以下「ACAT」という）は、血中コレステロールのエステル化を促進する酵素であり、動脈血管壁上での泡沫細胞の形成は当該酵素の作用によって促進されることが知られている。このため、ＡＣＡＴ抑制剤は動脈硬化予防剤となり得る可能性がある。【０００４】
また、コレステロールエステル転移蛋白質の作用を抑制するか、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ還元酵素（以下「HMG-CoA還元酵素」という）の作用を阻害してコレステロール生合成速度を緩めることで、高コレステロール血症を効果的に治療できることが報告されており（非特許文献２）、後者のHMG-CoA還元酵素を阻害する薬物として、米国メルク社のロバスタチン（商標）及びシンバスタチン（商標）、並びに日本の三共のプラバスタチン（商標）が商品化されている（非特許文献３）。【０００５】
一方、ルチンやケルセチンなどの天然抗酸化物質として知られているポリフェノールにも、動脈硬化抑制作用があることが報告されている（非特許文献４、特許文献１）。しかしながら、酵素処理イソクエルシトリンについては報告されていない。
【非特許文献１】Ross R., Nature, 362, 801-809 (1993)
【非特許文献２】Willam, W.P., Cardiovascular Pharmacology, Kanu Chatterjee Ed, Wolfe Pullishing, 8.6-8.7 (1994)
【非特許文献３】C.D.R.Dunn, Stroke: Trends, Treatment and Markets, SCRIPT Report, PJB Publications Ltd., 1995
【非特許文献４】藤本健四郎、現代医療「天然抗酸化物質」、Vol.28, No.8, p.129-134 (1996)
【特許文献１】特表２００２−５２４５２２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、動脈硬化が進展するリスクを有する者（例えば、高脂血症またはその傾向にある者など）に対して、動脈硬化の進展を抑制することのできる抗動脈硬化組成物を提供することを目的とする。より詳細には、本発明は動脈硬化進展抑制作用を有し、しかも安全性が高くて継続的に服用することのできる抗動脈硬化組成物を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねていたところ、遺伝子操作によって高脂血症を発症するように構築された動物（ApoEノックアウト高脂血症マウス、以下、単に「ApoE-KOマウス」ともいう）に、酵素処理イソクエルシトリンを経口投与することによって、動脈硬化の初期病変である胸部〜腹部の大動脈粥状硬化巣の発生が有意に低減して動脈硬化の進展が抑制できることを見いだし、酵素処理イソクエルシトリンが動脈硬化の予防並びに改善に、有効に利用できることを確信した。本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものである。【０００８】
すなわち、本願発明は下記の構成を有するものである：
項１．酵素処理イソクエルシトリンを有効成分とする抗動脈硬化用組成物。
項２．酵素処理イソクエルシトリンを、動脈硬化進展抑制効果を発揮する有効量含有する、項１記載の抗動脈硬化用組成物。
項３．経口投与形態を有する項１または２に記載する抗動脈硬化用組成物。
項４．酵素処理イソクエルシトリンを、１日投与単位あたり３ｍｇ〜３０ｇの割合で含有する項１乃至３のいずれかに記載する抗動脈硬化用組成物。
項５．酵素処理イソクエルシトリンを、１日投与単位あたり３ｍｇ〜３０ｇ含有するように製剤化されてなる、項１乃至４のいずれかに記載する抗動脈硬化用組成物。【０００９】
項６．医薬品である、項１乃至５のいずれかに記載の抗動脈硬化用組成物。
項７．食品である、項１乃至５のいずれかに記載の抗動脈硬化用組成物。
項８．容器に収納された抗動脈硬化用組成物であって、当該容器またはその包装物に、効能として抗動脈硬化作用が記載されてなる、項１乃至７のいずれかに記載する抗動脈硬化用組成物。
項９．動脈硬化予防または改善のための特定保健用食品である、項１〜５および７〜８のいずれかに記載する抗動脈硬化用組成物。
項１０．動脈硬化が進展するリスクを有する被験者に、酵素処理イソクエルシトリンを、動脈硬化進展抑制効果を発揮する有効量投与することを含む、当該被験者に対する動脈硬化の予防または改善方法。
項１１．酵素処理イソクエルシトリンの、抗動脈硬化用組成物の製造のための使用。【００１０】
なお、本発明の「抗動脈硬化組成物」は、試験例で示すように、大動脈粥状硬化巣の発生を抑制する作用、および酸化・低密度リポ蛋白質（酸化ＬＤＬ）の生成を抑制する作用を有し、その結果、動脈硬化の進展を抑制する作用を発揮することから、別の観点から、「大動脈粥状硬化巣発生抑制組成物」、「酸化ＬＤＬ生成抑制組成物」または「動脈硬化進展抑制組成物」ということもできる。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の酵素処理イソクエルシトリンを有効成分とする組成物によれば、酵素処理イソクエルシトリンが有する動脈硬化進展抑制作用に基づいて、動脈硬化の進展リスクを有する、例えば高脂血症またはその傾向にある者に対して、動脈硬化の進展を抑制する効果、動脈硬化性疾患の発症を予防する効果、または動脈硬化性疾患を改善する効果を発揮することができる。ゆえに、本発明の組成物は、動脈硬化性疾患の予防または改善を目的または効能とする医薬組成物（抗動脈硬化剤）として有効に利用することができる。また本発明の組成物は、動脈硬化性疾患の予防または改善を目的または効能とする健康食品（例えば、かかる保健の用途を明記できる特定保健用食品を含む）として有効に利用することができる。【００１２】
さらに本発明の酵素処理イソクエルシトリンを有効成分とする組成物は、動脈硬化の進展を抑制することによって、虚血性心疾患（心筋梗塞や狭心症など）；虚血性脳疾患（脳梗塞など）や脳出血；大動脈瘤や大動脈解離；腎硬化症やそれによる腎不全；および閉塞性動脈硬化症等の動脈（冠動脈、脳動脈、大動脈、腎動脈、末梢動脈など）の硬化に起因する各種疾患（動脈硬化性疾患）の発症予防または改善に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の抗動脈硬化組成物は、酵素処理イソクエルシトリン（以下、単に「ＥＭＩＱ」ともいう）を有効成分とするものである。【００１４】
ここで「酵素処理イソクエルシトリン」は、イソクエルシトリンに糖供与体の存在下、糖転移酵素を作用して得られるもので、下式で示される、イソクエルシトリンと種々の程度にグルコシル化されたα−グリコシルイソクエルシトリンとの混合物をいう。【００１５】
【化１】
2006095675.tif 000002
【００１６】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を示す）
上記式において、具体的には、酵素処理イソクエルシトリンは、α−１，４結合のグルコース残基数（ｎ）が０のイソクエルシトリンと、α−１，４結合のグルコース残基数（ｎ）が１以上、通常１〜１５、好ましくは１〜１０のα−グリコシルイソクエルシトリンとの混合物である。【００１７】
本発明で用いる酵素処理イソクエルシトリンは、異なるグルコース基の結合数（ｎ）を有する種々の酵素処理イソクエルシトリンの混合物であってもよいが，グルコース基の結合数（ｎ）が単一である一種の酵素処理イソクエルシトリンであってもよい。【００１８】
かかる酵素処理イソクエルシトリンは、イソクエルシトリン（以下、単に「ＩＱＣ」ともいう）をグルコース基転移酵素で処理することによって調製することができる。制限されないが、通常、酵素処理イソクエルシトリンは、グルコシダーゼまたはトランスグルコシダーゼ等のグルコース残基転移酵素を用いて、イソクエルシトリンにグルコース残基を等モル以上転移させて配糖化することによって製造することができる。【００１９】
配糖化の際に用いられるグルコース源としては、そのグルコース残基の１分子以上がイソクエルシトリンの１分子に転移されうるものであればよく、例えばグルコース、マルトース、アミロース、アミロペクチン、でん粉、でん粉液化物、でん粉糖化物、及びシクロデキストリンなどを用いることができる。グルコース源の使用量は、反応系に存在するイソクエルシトリン１重量部に対して、通常０.１〜２０重量部の割合、好ましくは０.５〜１５重量部、より好ましくは１〜１０重量部の割合を挙げることができる。【００２０】
グルコシダーゼとしては、例えばα−アミラーゼ（E.C.3.2.1.1）、α−グルコシダーゼ（E.C.3.2.1.20）等を用いることができ、またトランスグルコシダーゼとしては、例えばシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（E.C.2.4.1.19）（以下、ＣＧＴａｓｅと略記する）等を用いることができる。【００２１】
ＣＧＴａｓｅは、バチルス・サーキュランス、バチルス・マセランス、バチルス・ステアロサーモフィルス、バチルス・メガテリウム、バチルス・ポリミキサなどのバチルス属、クレブシーラ・ニューモニアエなどのクレブシーラ属などの細菌によって生産されることが知られており、いずれもこの発明に自由に使用することができる。【００２２】
これらのグルコース残基転移酵素はいずれも商業的に入手できる酵素であり、簡便にはかかる市販の酵素剤（例えば、天野エンザイム（株）製、商品名：コンチザイム）を使用することもできる。当該酵素は、必ずしも精製されている必要はなく、粗精製物であってもよい。例えば、イソクエルシトリンを加えた培地に、当該グルコース残基転移酵素生成菌を植菌し、発酵法により反応を行って酵素処理イソクエルシトリンを生成してもよいし、またグルコース残基転移酵素またはグルコース残基転移酵素生産菌を固定化して、これをバッチ式若しくは連続式に、イソクエルシトリンと反応させて酵素処理イソクエルシトリンを生成してもよい。なお、グルコース残基転移酵素は、グルコシダーゼまたはトランスグルコシダーゼの各々単独を用いて行うこともできるし、また両者を組み合わせて（同時または連続して）使用することもできる。【００２３】
グルコース残基転移酵素の反応条件は、イソクエルシトリン、グルコース残基転移酵素及び上記グルコース源との混合水系で、グルコース残基転移酵素が作用する条件であればよい。グルコース残基転移酵素の使用量はイソクエルシトリン１重量部に対し、グルコース残基転移酵素がＣＧＴａｓｅの場合〔酵素比活性約１００単位（溶性デンプンからβ-シクロデキストリンを1分間あたり１ｍｇ生成する酵素量を１単位とする）〕０．００１〜２０重量部の範囲から適宜選択して使用することができる。好ましくは０．００５〜１０重量部程度、より好ましくは０．０１〜５重量部程度である。【００２４】
なお、反応系中のイソクエルシトリンの量は、特に制限されないが、配糖化を効率よく行う目的からは、反応系１００重量％中に、通常０．１〜３０重量％、好ましくは０．５〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の割合で含まれていることが望ましい。  【００２５】
この反応系の温度は、使用する酵素の種類により変動するが、約８０℃以下の範囲を適宜選択して用いることができる。この範囲内において工業的に有利なのは約２０〜８０℃、好ましくは約４０〜７５℃である。またｐＨ条件は通常ｐＨ３〜１１程度以下、好ましくはｐＨ４〜８である。【００２６】
反応は、静置または攪拌若しくは振盪しながら行うことができる。反応中の酸化を防止するために、反応系のヘッドスペースを窒素等の不活性ガスで置換してもよく、またアスコルビン酸等の酸化防止剤を反応系に添加することも可能である。【００２７】
斯くして、イソクエルシトリンのグルコース残基にグルコース基が結合し、目的の酵素処理イソクエルシトリンが生成される。【００２８】
なお、イソクエルシトリンのグルコース残基へのグルコース基の結合数（上記式（１）においてｎの数）は、特に制限されないものの、通常、前述するように１〜１５、好ましくは１〜１０の範囲になるように任意に調整することができる。かかる調整方法としては、例えば、酵素処理イソクエルシトリン生成後に、各種のアミラーゼ（α-アミラーゼ、β-アミラーゼ、グルコアミラーゼ、α-グルコシダーゼ、マルターゼ等）を単独もしくは複数組み合わせて処理する方法を挙げることができる。こうすることによって、前述する方法で得られた酵素処理イソクエルシトリン分子中のグルコース糖鎖数を減少させて、任意のグルコース糖鎖長を持つ酵素処理イソクエルシトリンを得ることもできる。【００２９】
上記の反応系から酵素処理イソクエルシトリンを単離・精製する方法も特に制限されない。例えば、単離方法として、常法によりゲルろ過樹脂を使用して単離する方法を挙げることができる。酵素処理イソクエルシトリンの精製は、特に制限されず、慣用の方法を任意に組み合わせて実施することができる。具体的には各種の樹脂処理法（吸着法、イオン交換法、ゲルろ過法など）、膜処理法（限外濾過膜処理法、逆浸透膜処理法、イオン交換膜処理法、ゼータ電位膜処理法など）、電気透析法、塩析、酸析、再結晶、溶媒分画法および活性炭処理法等を例示することができる。【００３０】
斯くして得られる酵素処理イソクエルシトリンは、イソクエルシトリン（クエルセチン３−０−モノグルコサイド）のグルコース残基に更にグルコースが等モル量以上結合したα-グリコシルイソクエルシトリンを主成分とするものであって水易溶性である。【００３１】
動脈硬化性疾患は、動脈硬化に起因して発症する疾患を意味する。より詳細には、動脈硬化性疾患は、動脈が、弾力性を失って硬くなったり、内部沈着のため内腔が狭窄または閉塞したり、動脈壁が部分的または全体が拡張したり（動脈瘤、拡張症）、内膜に亀裂が入り中膜が裂けたり（解離）また破裂（出血）することにより、組織や臓器全体に血行障害を起こす疾患の総称である。かかる疾患として、具体的には、脳梗塞や脳出血（脳動脈）、心筋梗塞や狭心症等の虚血性心疾患（冠動脈）、大動脈瘤や大動脈解離（大動脈）、腎硬化症やそれによる腎不全（腎動脈）、および閉塞性動脈硬化症（末梢動脈）を例示することができる。【００３２】
後述する試験例で示すように、酵素処理イソクエルシトリンは、動脈硬化が進展するリスクを有する（例えば、高脂血症またはその傾向にある）ヒトを含む温血動物に対して、動脈硬化の進展を抑制することができるので、動脈硬化性疾患の発症の予防または改善に有効に用いることができる。動脈硬化の中でも、特にアテローム（粥状）硬化に対して優れた進展抑制効果を有する。このため、酵素処理イソクエルシトリンは抗動脈硬化組成物の成分として有効に用いることができる。【００３３】
なお、本発明で「抗動脈硬化組成物」とは、動脈硬化の進展を抑制する作用を有し、動脈硬化の進展ならびに動脈硬化に起因する動脈硬化性疾患の発症予防または改善に有効に使用できる組成物を意味する。より好ましくは、抗動脈硬化、特に動脈硬化の進展抑制または改善を効能とし、その特定の保健用途で使用される組成物である。かかる組成物として、医薬組成物、病者用食品や高齢者用食品等の特別用途食品、栄養機能食品や特定保健用食品等の保健機能食品またはこれに準じる健康食品を挙げることができる。【００３４】
特定保健用食品（条件付き特定保健用食品、規格基準型特定保健用食品や疾病リスク低減表示特定保健用食品を含む）は、その包装容器などに、日本国厚生労働省が承認または認可した機能表示または保健用途の表示をすることが可能な食品である。しかし、これに限らず、食生活において特定の保健の目的で摂取をする者に対し、その摂取により当該保健の目的が期待できる旨の表示を付してなるものであればよい。本発明において特定の保健の目的は、抗動脈硬化、具体的には動脈硬化（好ましくはアテローム硬化）の進展抑制または改善であり、表示の一例として、「動脈硬化を抑制または予防する」、「血液の流れ[血行]を良好にする」、「血管を健康に保つ」、「コレステロールが高めの方に」または、「中性脂肪が高めの方に」などを挙げることができる。特定保健用食品は、こうした機能表示ができる点で、機能表示ができない一般食品と差別化を図ることができるため、本発明でいう食品の好適な態様である。【００３５】
医薬組成物の調製に際して、酵素処理イソクエルシトリンは、水、アルコール（例えば、エタノール）、その他の溶媒に溶解若しくは分散した溶液状態（乳剤状、液剤状またはシロップ状などのドリンク形態）、若しくは公知の方法により調製・成形した固体状態（散剤状、顆粒状、錠剤状、丸剤状、カプセル剤状、チュアブル剤状など）の、各種の経口投与形態を有する製剤とすることができる。【００３６】
これらの製剤は、上記酵素処理イソクエルシトリンに加えて、各種投与形態に応じて、薬学的に許容される担体や添加剤が配合されていてもよい。例えば、固体状態の製剤を調製する場合の賦形剤としては、乳糖、ショ糖、ブドウ糖、コーンスターチ、ゼラチン、澱粉、デキストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成ならびに天然のケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、乾燥酵母が例示される。また、溶液状態の製剤を調製する場合の賦形剤としては、水、グリセリン、プロピレングリコール、単シロップ、エタノール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール等が例示される。また、これらの製剤は、所望によりクエン酸、リン酸、リンゴ酸又はその塩類などの安定化剤；スクラロース、アセスルファムカリウムなどの高甘味度甘味料やショ糖、果糖などの甘味剤；アルコール類、グリセリンなどの防腐剤；粘滑剤、希釈剤、緩衝剤、着香剤及び着色剤のような通常の添加剤と混合されていてもよく、常法又はその他の適切な方法で、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、チュアブル剤、乳剤、液剤またはシロップ剤等の各種の経口投与形態の製剤に製造することができる。【００３７】
かかる医薬品形態の抗動脈硬化組成物は、酵素処理イソクエルシトリンを、一日投与単位あたり３ｍｇ〜３０ｇの範囲で含有するように製剤化されることが好ましい。かかる用量は、酵素処理イソクエルシトリンを服用する人の健康状態、投与方法及び他の剤（または食品成分）との組み合わせなどの種々の因子に応じて適宜調整することができる。好ましくは８ｍｇ〜１０ｇ、より好ましくは１６ｍｇ〜２ｇである。【００３８】
また、酵素処理イソクエルシトリンは、動脈硬化が進展するリスクを有する（例えば、高脂血症またはその傾向にある）ヒトを含む温血動物を対象として、動脈硬化の進展を抑制して、動脈硬化性疾患の発生を予防したり、または動脈硬化性疾患を改善することを目的として用いられる、健康食品や飼料の成分としても有用である。【００３９】
ここで健康食品とは、通常の食品より積極的な意味での保健、健康維持・増進等の目的をもった食品をいう。本発明において、酵素処理イソクエルシトリンは、食品として許容される担体や添加剤を用いて前述するような製剤形態（散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、チュアブル剤、乳剤、液剤またはシロップ剤）に調製して、動脈硬化進展の抑制、動脈硬化性疾患の予防または改善を目的としたサプリメントとして提供することもできるし、また一般の食品に添加することにより（言い換えれば、食品の原材料の一つとして使用することにより）、動脈硬化進展の抑制、動脈硬化性疾患の予防または改善を目的、機能または効能とする健康食品（例えば、機能性食品、特定保健用食品）の調製に用いることができる。【００４０】
食品の種類としては、特に制限されないが、(1)乳飲料、乳酸菌飲料、果汁入り清涼飲料、清涼飲料、炭酸飲料、果汁飲料、野菜飲料、野菜・果実飲料、粉末飲料、コーヒー飲料、紅茶飲料、茶飲料、乳飲料、豆乳飲料、ココア、ゼリー入り飲料、スポーツ飲料、サプリメント飲料、青汁などの飲料；(2)カスタードプリン、ミルクプリン、スフレプリン、果汁入りプリン等のプリン類、ゼリー、及びババロア等のデザート類；(3)アイスクリーム、アイスミルク、ラクトアイス、ミルクアイスクリーム、果汁入りアイスクリーム及びソフトクリーム、アイスキャンディー、シャーベット、氷菓等の冷菓類；(4)チューインガムや風船ガム等のガム類（板ガム、糖衣状粒ガム）；(5)板チョコ、マーブルチョコレート等のコーティングチョコレートの他、イチゴチョコレート、ブルーベリーチョコレート及びメロンチョコレート等の風味を付加したチョコレート等のチョコレート類；（6）ハードキャンディー（ボンボン、バターボール、マーブル等を含む）、ソフトキャンディー（キャラメル、ヌガー、グミキャンディー、マシュマロ等を含む）、ドロップ、タフィ等の飴類；(7)ハードビスケット、クッキー、おかき、煎餅等の焼き菓子類（以上、(2)〜(7)を総合して菓子という）；（8）ケチャップ、ソース、醤油、ドレッシング、みそ、砂糖、塩、マヨネーズ、酢、黒酢等の調味料；（9）ハム、ソーセージ、ベーコン、冷凍ハンバーグ等の畜肉製品類；（10）マウススプレー等の口内薬剤、トローチ、嚥下補助食品、ドリンク剤、顆粒剤、散剤、錠剤等の医薬部外品、健康補助食品類；（11）マーマレード、ジャム、マーガリン、バター、フラワーペースト、ピーナツペーストなどのペースト類；（12）魚肉ハム、魚肉ソーセージ、蒲鉾、ちくわ、はんぺん、てんぷら等の魚介類練り製品類；（13）レトルトカレー、レトルトスープ、レトルトシチュー等のレトルト製品類；（14）うどん、そば、中華そば、スパゲッティ、マカロニ、乾麺、そうめん、インスタントラーメン等の各種麺類；(15)赤ワイン等の果実酒、リキュール、チュウハイ、炭酸アルコール飲料等のアルコール類；（16）豆腐、油揚げ等の大豆加工食品；（17）漬物、チーズ、ヨーグルト、テンペ、納豆等の各種発酵食品；（18）ドッグフード、キャットフード等の各種ペットフードを挙げることができる。【００４１】
中でも、継続的に服用するという観点から、パン、キャンディ、錠菓等の菓子類、その他の固形製品、清涼飲料や栄養飲料などの液体製品、ゼリーのような半固形製品を好適に例示することができる。より好ましくは飲料である。【００４２】
かかる食品形態の抗動脈硬化組成物は、酵素処理イソクエルシトリンを、一日投与単位あたり３ｍｇ〜３０ｇの範囲で含有するように調製されることが好ましい。かかる用量は、酵素処理イソクエルシトリンを摂取する人の健康状態、投与方法及び他の剤（または食品成分）との組み合わせなどの種々の因子に応じて適宜調整することができる。好ましくは８ｍｇ〜１０ｇ、より好ましくは１６ｍｇ〜２ｇである。【００４３】
特に飲料の形態に調製する場合は、制限はされないが、飲料５００ｍＬ容量あたり、
酵素処理イソクエルシトリン量が３ｍｇ〜３０ｇ、好ましくは８ｍｇ〜１０ｇ、より好ましくは１６ｍｇ〜２ｇの割合となるように、酵素処理イソクエルシトリンを配合することが好ましい。
【実施例】
【００４４】
以下に、本発明の構成ならびに効果をより明確にするために、調製例、試験例及び実施例を記載する。但し本発明は、これらの実施例等に何ら影響されるものではない。【００４５】
調製例１  イソクエルシトリンの調製
マメ科植物であるエンジュのつぼみ250gを2500mLの熱水（95℃以上）に2時間浸漬した後、濾別した濾液を「第一抽出液」として取得した。一方、濾別した残渣を更に熱水に浸漬して抽出し、「第二抽出液」を得た。これらの第一および第二抽出液を合わせ、30℃以下に冷却して沈殿した成分を濾別し、沈殿部を水洗、再結晶、乾燥することにより、純度95％以上のルチン22.8gを得た。【００４６】
このルチン20ｇを水400mlに分散し、ｐＨ調整剤を用いてｐＨ4.9に調整した。これにナリンギナーゼ（天野エンザイム（株）、商品名ナリンギナーゼ"アマノ"、3,000U／g）を0.12ｇ添加して反応を開始し、これを72℃で24時間保持した。その後、反応液を20℃に冷却し、冷却によって生じた沈殿物を濾別した。得られた沈殿物（固形分）を水洗した後、乾燥し、イソクエルシトリン（以下、「ＩＱＣ」という）13.4gを回収した。【００４７】
調製例２    酵素処理イソクエルシトリンの調製
上記で得られたＩＱＣ10gに、500mLの水を加えコーンスターチ40gを添加し分散させた。これにシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（CGTase：天野エンザイム（株）、商品名コンチザイム、600U／ml）15gを添加して反応を開始し、これをpH 7.25、60℃の条件下、24時間保持した。得られた反応液を冷却した後、ダイヤイオンHP-20（三菱化成工業（株）製）のカラム（Φ3.0×40cm）に付加し、1000mLの水で洗浄した。次いでカラムに600mLの50%エタノール水溶液を供し、得られた溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥して、酵素処理イソクエルシトリン（以下、「ＥＭＩＱ」という）12.8gを取得した。【００４８】
得られたＥＭＩＱを、下記条件のＨＰＬＣ分析に供して、ＥＭＩＱに含まれる各種のα−グリコシルイソクエルシトリンのモル比（％）を算出した。【００４９】
＜ＨＰＬＣ条件＞
カラム：Inertsil ODS-2  Φ4.6×250mm（GLサイエンス製）
溶離液：水／アセトニトリル／ＴＦＡ＝８５０／１５／２
検出：波長３５１ｎｍにおける吸光度測定
流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ。【００５０】
下記にＥＭＩＱのモル組成比（％）を示す。当該モル組成比は、ＩＱＣからIQCにグルコースがα-1，4結合で７個結合したIQC+Glc7までの８成分の合計を100％として換算した組成比である。なお、ＥＭＩＱは、これらの成分以外に、ＩＱＣにグルコースが８個以上結合したもの（IQC+Glc8以上）を微量含んでいる。【００５１】
【表１】
2006095675.tif 000003
【００５２】
調製例３  クエルセチン（ＱＣ）の調製
調製例１で得られたＩＱＣ10gに500mLの2Ｎ硫酸水溶液を加え、沸騰水浴中2時間加水分解した。得られた反応液を30℃以下まで冷却してクエルセチンを析出させた後、濾別して粗クエルセチンを取得した。得られた粗クエルセチンを水洗、再結晶、乾燥することにより、純度95％以上のクエルセチン（以下、「ＱＣ」という）5ｇを回収した。【００５３】
試験例１  ＥＭＩＱの動脈硬化に対する影響（その１）
調製例２で調製したＥＭＩＱを、遺伝子操作によってアポリポ蛋白Ｅ遺伝子（ApoE）が欠失したApoEノックアウト高脂血症マウス（以下、ApoE-KOマウスとする）に14週間経口投与し、同物質における動脈硬化進展抑制効果を検証した。なお、動脈硬化進展抑制効果は、ApoE-KOマウスの胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率、及び大動脈弁プラーク面積率から評価した。【００５４】
１．試験動物及び飼育条件
試験動物として、Jackson Laboratory（USA）から、B6.129P2-Apoe<tm1Unc>系マウス（ApoE-KOマウス、生後６週齢、雄性）を購入して、4日間環境馴化飼育をした後に試験に供した。試験動物（ApoE-KOマウス）は、ポリカーボネート製ケージ(W182×D260×H128mm)に１ケージあたり３ないしは４匹ずつ収容し、HEPAフィルター除菌空気給気・ハーフリターン方式により室温21〜26℃、湿度40〜70％に制御され、且つ照明時間12時間(7:00〜19:00)に設定された飼育室にて、飼育した。飼料は、馴化飼育期間中はマウス・ラット飼育用MF固形飼料(オリエンタル酵母工業社、東京)を給与し、試験開始後は、マウス動脈硬化誘発飼料〔ミルクカゼイン 20%、グラニュー糖 46.54%、コーンオイル 1%、ココアバター 20%、KCフロック 4.82%、コレステロール0.15％、コール酸 0.06%、ビタミンMix（AIN-76）1%、ミネラルMix（AIN-76）5.0%、塩化コリン 1.0%、DL-αトコフェロール、DL-メチオニン 0.3%：日本配合飼料社，東京〕をベースとした飼料を不断給餌した。飲料水として塩素処理紫外線殺菌井水を用い、給水ボトルにてマウスに自由摂取させた。試験開始時の体重範囲は20〜25gであった。【００５５】
試験に際して、体重を考慮して、群分けシステム（Statlight #11群分け，ユックムス社，東京）を用いた完全無作為化法により、試験動物（ApoE-KOマウス）を、対照群（EMIQ非投与群）、及び酵素処理イソクエルシトリン投与群（EMIQ投与群）の２群に群分けした。【００５６】
２．試験方法
（１）投与検体及びその投与方法
ＥＭＩＱとして、上記調製例２に記載する方法で調製したものを使用した。試験動物のうち、ＥＭＩＱ投与群には、マウス動脈硬化誘発飼料にＥＭＩＱを330μmol/kg（0.026w/w％）濃度となるように混合して、14週間に亘って経口投与した（混餌投与、不断給餌）。また、対照群には、ＥＭＩＱを配合しないマウス動脈硬化誘発飼料だけを14週間に亘って経口投与した（不断給餌）。【００５７】
（２）一般状態観察と体重測定
試験開始後、各群（対照群、EMIQ投与群）のそれぞれの被験動物（各群10匹ずつ）について、毎日１回、体重を測定するとともに、一般的な状態を観察した。【００５８】
（３）剖検
試験開始から14週間目に、各群の試験動物を、ペントバルビタールナトリウム麻酔下（腹腔内投与）におき，無処理注射器にて採血・脱血して安楽死させた。大動脈を、２％中性緩衝ホルマリン液で灌流固定し、胸部〜腹部大動脈を身体に付けたまま正中で縦に切開し、展開してから摘出した。摘出した胸部〜腹部大動脈は、展開した状態で４％パラホルムアルデヒド液に浸漬固定した。次いで、この胸部〜腹部大動脈をOil red-O染色した。また大動脈弓・大動脈弁断面は、常法に従って、HE，Elastica Van Gieson（EVG）染色した。 【００５９】
（４）画像解析
大動脈弁プラーク面積率は、微小計測用タブレット・メジャーユニット VM-30（オリンパス光学社，東京）を用いて、また胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積は、病理画像解析装置 IPAP（住化テクノサービス社，大阪）を用いてそれぞれ解析した。具体的には、大動脈弁の内膜肥厚度（％）、並びに、胸部〜腹部大動脈の粥状硬化巣面積率（％）を、次式にて求めた。【００６０】
(i)  大動脈弁プラーク面積率(%) ＝ 内膜面積÷大動脈弁輪横断総面積×100
(ii) 胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率(%) ＝ 赤色濃染面積÷血管総面積×100。【００６１】
なお、上記実験で得られた数値は、各試験群（対照群、EMIQ投与群）で平均値および標準偏差を算出した。有意差検定は、Ｆ検定による等分散性の検定を行い、等分散の場合はStudentのt検定により、不等分散の場合はAspin-Welchのt検定により行った。なお、有意水準は、Ｆ検定では20%、その他では5%未満を有意とし、5%未満（p<0.05）と1%未満（p<0.01）に分けて表示した。【００６２】
３．試験結果
（１）一般状態および体重
試験期間を通じて、各群（対照群、EMIQ投与群）とも体重は順調に増加し、群間での差異は認められなかった。また各群とも特記すべき一般状態の変化は認めらなかった。【００６３】
（２）画像解析結果（大動脈弁プラーク面積率および胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率）
各群（対照群、EMIQ投与群）の大動脈弁プラーク面積率（％）および胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（％）を表２に示す。また、各群（対照群[n=10]、EMIQ投与群[n=9]）に属する各試験動物の胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（％）を示した結果を図１に示す。【００６４】
【表２】
2006095675.tif 000004
【００６５】
表からわかるように、大動脈弁プラーク面積率（％）は、対照群（n=36）4.45±3.02％（平均±標準偏差）に比べて、EMIQ投与群（n=68）は2.80±2.39％と、有意に低下した（p＜0.05、Student’s t-test）。また胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（％）も、対照群（n=10）9.49±4.11％（平均±標準偏差）に比べて、EMIQ投与群（n=9）は5.61±2.48％と、有意に低下した（p＜0.05、Student’s t-test）。【００６６】
以上の結果から、ＥＭＩＱは、動脈硬化進展抑制作用を有することが明らかになった。ＥＭＩＱは、食経験上、身体に悪影響を及ばさないことから、ＥＭＩＱを継続的に摂取することによって、動脈硬化の予防に有効であると考えられる。【００６７】
試験例２    ＥＭＩＱの動脈硬化に対する影響（その２）
調製例２及び３で調製したＥＭＩＱおよびＱＣを、ApoE-KOマウスに14週間経口投与し、各物質の動脈硬化進展抑制効果を検証した。なお、動脈硬化進展抑制効果は、ApoE-KOマウスの胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（％）から評価した。試験動物及びその飼育条件、並びに試験方法（胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（％）の測定）は、試験例１の記載に従った。【００６８】
具体的には、まず、試験に先だって、被験動物（ApoE-KOマウス）を11日間の環境馴化飼育し、次いで、体重および血清総コレステロール値（T-cho値）を考慮して、群分けシステム（Statlight #11群分け，ユックムス社，東京）を用いた完全無作為化法により、対照群（非投与群、Ｇ1）、クエルセチン33μmol/kg混餌投与群（ＱＣ低用量投与群、Ｇ2）、酵素処理イソクエルシトリン33μmol/kg混餌投与群（ＥＭＩＱ低用量投与群、Ｇ3）、同330μmol/kg混餌投与群（ＥＭＩＱ高用量投与群、Ｇ4）の４群に群分けした（各群８匹ずつ）。上記４群において、各被験物質投与群には各被験物質をマウス動脈硬化誘発食に混ぜて投与し（混餌投与、不断給餌）、対照群（非投与群）にはマウス動脈硬化誘発食だけを投与した（不断給餌）。具体的には、対照群、ＱＣ低用量投与群、ＥＭＩＱ低用量投与群およびＥＭＩＱ高用量投与群にそれぞれマウス動脈硬化誘発食、ＱＣを33μmol/kgの濃度添加したマウス動脈硬化誘発食、、ＥＭＩＱを33μmol/kgの濃度添加したマウス動脈硬化誘発食およびＥＭＩＱを330μmol/kgの濃度添加したマウス動脈硬化誘発食を、１４週間連続給与した後、試験例１の方法に従って、供試動物の全例を部検し、胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（％）を求めた。【００６９】
結果を図２に示す。ここに示す値（％）は、各群のマウス（８匹）の胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（％）の平均値である。図２に示すように、対照群（Ｇ１）と比べ、ＱＣ低用量投与群（Ｇ２）のマウスの胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（％）は相違しなかったのに対し、ＥＭＩＱ低用量投与群（Ｇ３）のマウスの胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（％）は、顕著な減少がみとめられた。また、ＥＭＩＱ高用量投与群（Ｇ４）のマウスの胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（％）は、上記ＥＭＩＱ低用量投与群（Ｇ３）のそれと殆ど変わらなかった。これらのことから、ＥＭＩＱが、低用量で、等モル濃度のＱＣとは有意に異なって、動脈硬化の初期病変である大動脈の粥状硬化を抑制する作用、すなわち動脈硬化進展抑制作用を有していること、がわかる。【００７０】
試験例３ 
試験例１および２で示したＥＭＩＱの動脈硬化進展抑制作用のメカニズムを調べるために、大動脈弁プラーク病変を各種の染色法（4HNE染色、Mac3染色、マッソントリクローム染色、αSM染色）で免疫染色し、染色面積率（％）を求めた。【００７１】
具体的には、試験例２と同様にして、予め11日間にわたり環境馴化飼育をした被験動物（ApoE-KOマウス）を、対照群（非投与群）、クエルセチン330μmol/kg混餌投与群（ＱＣ投与群）および酵素処理イソクエルシトリン330μmol/kg混餌投与群（ＥＭＩＱ投与群）の３群に群分けし（各群８匹ずつ）、各群に、それぞれマウス動脈硬化誘発食、ＱＣを添加したマウス動脈硬化誘発食およびＥＭＩＱを添加したマウス動脈硬化誘発食を１４週間連続給与した（不断給餌）。次いで、試験例１の（３）の記載に従って、安楽死させて、大動脈弁横断切片標本を作製して、定法に従って、ヘマトキシリン染色、４ＨＮＥ染色、Ｍａｃ３染色またはαＳＭの各種の免疫染色、並びに特殊染色としてマッソントリクローム染色を行った。これら標本の大動脈プラークにおける染色面積を、蛍光画像解析システムソフト（「Lumina Vision ver 2.20」、Mitani corporation）を使用して測定した。染色面積率（％）は、下式に従って算出した：
染色面積／プラーク総面積  ｘ  100  ＝  染色面積率（％）。【００７２】
なお、４ＨＮＥ染色、Ｍａｃ３染色またはαＳＭ、およびマッソントリクローム染色は以下の通りである。【００７３】
(1)４ＨＮＥ染色
大動脈弁横断切片標本を、脂質酸化マーカーである4-hydroxy-2-noenal（4HNE）に対する一次抗体（抗4HNEモノクローナル抗体：日研ザイル株式会社、日本老化制御研究所）と反応させた後、VECTASTAIN DAB基質キット（フナコシ）を用いて4HNEを特異的に染色した。この方法により、組織における酸化ストレスの局在と定量を行うことができる。【００７４】
(2)Ｍａｃ３染色
大動脈弁横断切片標本を、マクロファージ特異的表面糖蛋白であるMac-3に対する一次抗体（抗Mac-3モノクローナル抗体：BD Bioscience社）と反応させてマクロファージを特異的に染色した。この方法により、組織におけるマクロファージの局在と定量を行うことができる。【００７５】
(3)αＳＭ染色
大動脈弁横断切片標本を、分化型平滑筋細胞や筋線維芽細胞型線維芽細胞に多く発現しているαSM actinに対する一次抗体（抗α-Smooth Muscle Actin モノクローナル抗体：SIGMA社）と反応させて、分化型平滑筋細胞を特異的に染色した。この方法により組織における分化型血管平滑筋の局在と定量を行うことができる。なお、分化型平滑筋細胞は安定した血管壁の平滑筋細胞に存在し、血管がストレスを受けるとαSM actinの発現が少ない未分化型平滑筋細胞へと形質転換し、それが動脈硬化巣の増殖病変や不安定プラークにつながると言われている。【００７６】
(4) マッソントリクローム染色
大動脈弁横断切片標本を、染色液としてアニリンブルー液を用いて、既報（病理組織染色ハンドブック：医学書院）に従って染色した。この染色により、組織中の膠原線維がアニリンブルーにより青色に染まり、膠原線維の局在と定量を行うことができる。【００７７】
各染色によって得られた染色面積率（％）を図３に示す。ここに示す値（％）は、各群のマウス（８匹）の平均値である。ＥＭＩＱ投与群は、大動脈弁のプラーク病変部位において、脂質酸化マーカーである4ＨＮＥの沈着やマクロファージの浸潤が有意(4HNE:p=0.022, Mac3:p=0.006)に抑制されていた。このことより、動脈硬化実験モデルマウスの血管において、マクロファージが動脈硬化病変部位に浸潤し、酸化ＬＤＬを取り込み病変が進展していく過程で、ＥＭＩＱがこれらに抑制的に働く機序により抗動脈硬化作用を示す可能性があることが推察された。さらにＥＭＩＱ投与群は、対照群に比べ、分化型血管平滑筋細胞に多いαＳＭアクチンの染色率が有意 (p=0.035) に高値で、マッソントリクローム染色においても、コラーゲン線維の染色率が有意（P=0.006）に高値であった。不安定な動脈硬化病変部位では、安定型の分化型血管平滑筋細胞は減少しており、コラーゲン線維の産生は低下し、さらに泡沫細胞などが分泌する細胞外基質分解酵素（ＭＭＰ）により細胞外基質が減少し、破綻しやすい不安定型プラークへと進展していくといわれている。これらの結果より、ＥＭＩＱはプラークの不安定化につながる血管平滑筋の減少や、コラーゲン線維減少に対して保護的に働く作用があることを示唆している。【００７８】
試験例４  酸化・低密度リポ蛋白質（LDL：Low Density Lipoprotein）の生成抑制作用
調製例２で調製したＥＭＩＱを用いて、酸化・低密度リポ蛋白質（酸化LDL）の生成抑制効果を調べた。また、比較のため、調製例１で調製したＩＱＣを用いて、同様に酸化LDLの生成抑制効果を調べた。【００７９】
１．試験方法
下記表３に記載する処方からなる各被験溶液（Control、Blank、EMIQ添加液、IQC添加液）を調製し、各溶液を37℃で4時間インキュベーションした。この試験原理（Blank）は、キサンチンオキシダーゼがヒポキサンチンをキサンチンに変換する際に生じるラジカルを、ADP-Fe3+キレートを介してLDL内部に伝達させて、脂質の酸化反応を連鎖的に誘導するというものである。なお、低密度リポ蛋白質（LDL）（Human Low Density Lipoprotein）(Harbor Bio-Products社製)は、予め10mM HEPES-145mM KCl (pH7.4)で透析し、試薬中に含まれているEDTAを除去して使用した。また、ADP・Fe3＋キレートは、10mM Adenosine 5’-diphosphate disodium salt（和光純薬工業製）、1mM FeCl3（キシダ化学）、及び10mM HEPES-145mM KCl (pH7.4)を混合して、室温で90分間インキュベーションして、調製した。また、EMIQ添加液は、IQC換算濃度でIQC添加液と等モル添加（200μM）で試験を実施した。【００８０】
【表３】
2006095675.tif 000005
【００８１】
インキュベーション４時間後に、各被験溶液について生じた酸化LDLの指標として、波長532nmにおける吸光度をTBARS（Thiobarbituric Acid Reactive Substance）の生成量として測定し、ControlのTBARS値により各被験溶液（Blank、EMIQ添加液、IQC添加液）のTBARS値を補正した。EMIQ及びIQC各添加液のTBARS値をBlankのTBARS値を100％として換算して、EMIQ及びIQC各添加液におけるTBARS生成率（％）を求めた。結果を図４に示す。なお結果は、各被験溶液について３回ずつ試験を行った平均値である。【００８２】
図４からわかるように、IQC添加液に比べてEMIQ添加液では、有意に酸化LDLの生成が抑制されていた（p<0.05、students、t-test）。【００８３】
粥状動脈硬化病変は、脂肪の過酸化に伴って生じる酸化LDLがマクロファージに取りこまれて泡沫細胞化をきたすことによって生じることが知られている。上記の結果からわかるように、ＥＭＩＱは酸化LDLの生成抑制効果に優れているため、粥状動脈効果初期病変の発生の抑制に有効に利用することができる。【００８４】
実施例１  食品組成物（１）
調製例２で調製したＥＭＩＱを、抗動脈硬化作用（動脈硬化進展抑制作用）を有する有効成分として用いて、グレープ果汁20％入り飲料を調製した。具体的には下記の処方に従って材料を混合し、ろ過した後、250mlのビンに充填して、80℃で10分間殺菌してグレープ果汁20％入り飲料を調製した。【００８５】
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【００８６】
実施例２  食品組成物（２）
調製例２で調製したＥＭＩＱを、抗動脈硬化作用（動脈硬化進展抑制作用）を有する有効成分として用いて、ノンシュガーキャンディを調製した。具体的には下記の処方に従って材料を混合し、加熱溶解した後、成型してノンシュガーキャンディを調製した。【００８７】
2006095675.tif 000007
【００８８】
実施例３  食品組成物（３）
調製例２で調製したＥＭＩＱを、抗動脈硬化作用（動脈硬化進展抑制作用）を有する有効成分として用いて、ドリンクゼリーを調製した。具体的には下記の処方に従って材料を混合し、加熱溶解した後、容器に充填して、85℃30分間殺菌してドリンクゼリーを調製した。【００８９】
2006095675.tif 000008
【００９０】
実施例４  食品組成物（４）
調製例２で調製したＥＭＩＱを、抗動脈硬化作用（動脈硬化進展抑制作用）を有する有効成分として用いて、下記の処方で材料を混合し、打錠機により錠剤を調製した。【００９１】
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【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】試験例１で測定した、各群（対照群[n=10]、EMIQ投与群[n=9]）に属する各試験動物（ApoE-KOマウス）の胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（%）を示す結果である。
【図２】試験例２で測定した、各群（非投与群G1、QC低用量投与群G2、EMIQ低用量投与群G3、EMIQ高用量投与群G4）（各群n=8）に属する各試験動物（ApoE-KOマウス）の胸部〜腹部大動脈粥状硬化巣面積率（%）を示す結果である。
【図３】試験例３で測定した、各群（非投与群(NON)、QC投与群(QC)、EMIQ投与群(EMIQ)）（各群n=8）に属する各試験動物（ApoE-KOマウス）の大動脈を免疫染色（4HNE染色、Mac3染色、マッソントリクローム染色、αSM染色）して得られた各免疫染色面積率（%）を示した結果である。
【図４】試験例４において、酸化LDLの指標としてTBARS生成率（％）を、IQC添加液（IQC(200μM)）及びEMIQ添加液（EMIQ(200μM)）について求めた結果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年8月14日(2006.8.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵素処理イソクエルシトリンを有効成分とするプラーク不安定化抑制用医薬組成物。
【請求項２】
酵素処理イソクエルシトリンを有効量含有する、請求項１記載のプラーク不安定化抑制用医薬組成物。
【請求項３】
経口投与形態を有する請求項１に記載するプラーク不安定化抑制用医薬組成物。
【請求項４】
酵素処理イソクエルシトリンを、１日投与単位あたり３ｍｇ〜３０ｇの割合で含有する請求項１に記載するプラーク不安定化抑制用医薬組成物。
【請求項５】
酵素処理イソクエルシトリンを、１日投与単位あたり３ｍｇ〜３０ｇ含有するように製剤化されてなる、請求項１に記載するプラーク不安定化抑制用医薬組成物。
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
（削除）
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
（削除）
【請求項１０】
動脈硬化が進行するリスクを有する被験者に、酵素処理イソクエルシトリンを有効量投与することを含む、当該被験者に対するプラーク不安定化抑制方法。
【請求項１１】
酵素処理イソクエルシトリンの、プラーク不安定化抑制用組成物の製造のための使用。
【国際調査報告】
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