(57)【要約】【課題】カルボニル化合物の除去性能およびそれに伴うＡＧＥｓの形成阻害効果が高いカルボニル化合物除去材、および該除去材にビタミンＢ６を捕捉しない特性を付与した除去材、該除去材を体液、輸液および透析液と接触させるカルボニル化合物除去方法を提供すること。【解決手段】下記構造式（Ｉ）または（ＩＩ）で示される含窒素複素環構造を有する１種以上の化合物が担体に固定化されてなるカルボニル化合物除去材。2006129524.tif 000013
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式（Ｉ）または（ＩＩ）
【化１】
2006129524.tif 000011
【化２】
2006129524.tif 000012
（式中、実線と破線で示す結合部位は単結合または二重結合を表し、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアラルキル基またはビタミンＢ６分子の結合を妨げる基を表す。ただし、Ｒ３が結合している窒素原子において、実線と破線で示す結合が二重結合のときＲ３は存在しない。
Ｘは、Ｘに結合する実線と破線で示す結合が二重結合の場合は、酸素原子、硫黄原子または置換基を有している窒素原子を表し、実線と破線で示す結合が単結合の場合は、水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアラルキル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基または置換基を有していてもよいアミノ基を表す。）
で示される含窒素複素環構造を有する１種以上の化合物が担体に固定化されてなるカルボニル化合物除去材。
【請求項２】
含窒素複素環構造を有する化合物のうち少なくとも１種が、ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基を有する請求項１記載のカルボニル化合物除去材。
【請求項３】
含窒素複素環構造を有する１種以上の化合物が、スペーサー分子を介して担体に固定化されてなる請求項１記載のカルボニル化合物除去材。
【請求項４】
担体が多孔質成形体である請求項１記載のカルボニル化合物除去材。
【請求項５】
請求項１〜４いずれか記載のカルボニル化合物除去材を、カルボニル化合物を含む被処理液と接触させることを特徴とするカルボニル化合物除去方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、血液、血清、血漿などの体液、輸液および透析液などに含まれ、様々な疾患の要因ともなるカルボニル化合物に対して高い結合能力を示す含窒素複素環構造を有する１種以上の化合物が固定化されてなるカルボニル化合物除去材、および該カルボニル化合物除去材をカルボニル化合物を含む被処理液と接触させるカルボニル化合物の除去方法に関する。
【背景技術】
【０００２】  血液透析は慢性腎不全患者に対して一般的に行われる治療であり、半透膜を介して血液と透析液が接触することにより、血中の老廃物や毒性物質が除去される。しかし、腎不全の病態は、透析により完全に食い止められるものではない。そのような病態として、透析合併症である透析アミロイドーシス、動脈硬化に由来する脳血管障害や心臓血管障害などがあり、これらはしばしば致命的な問題に発展する。【０００３】  このような透析合併症の原因として、蛋白修飾物である糖化最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（以下、ＡＧＥｓと略称することがある））および脂質過酸化最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｌｉｐｏｘｉｄａｔｉｏｎ  Ｅｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（以下、ＡＬＥｓと略称することがある））、並びにＡＧＥｓおよびＡＬＥｓの前駆体であるカルボニル化合物が挙げられ、透析患者では健常人に比べ、その体内濃度レベル（以下、レベルと略称することがある）が上昇していることが知られている（例えば、非特許文献１、２、３参照）。【０００４】  ＡＧＥｓやＡＬＥｓの前駆体であるカルボニル化合物は生体内に豊富に存在する糖および脂質から生成するとされる。具体的には、糖および脂質は、慢性腎不全などの代謝異常や酸化ストレス状態において反応性の高いカルボニル化合物に変化し、生体内の蛋白質のアミノ基などと非酵素的に反応し、蛋白修飾物であるＡＧＥｓやＡＬＥｓが生成するというメカニズムが提唱されている（例えば、非特許文献４、５参照）。【０００５】  このようにして生成したＡＧＥｓやＡＬＥｓなどの蛋白修飾物は、いわば蛋白質が構造的に修飾されたものとなっており、蛋白質本来の機能を果たさなくなる。そればかりか細胞のＡＧＥｓ受容体（ＲＡＧＥなど（非特許文献６））に作用し、細胞内で活性酸素などの産生を亢進させ酸化ストレス状態を悪化させたり（非特許文献７）、血管障害関連因子の発現を誘導したり（非特許文献８）、血管周皮細胞に対して毒性を発現したりする（非特許文献９）ことなどによって、透析合併症などをさらに悪化させることとなる。【０００６】  腎不全では血漿中にグリオキサール（以下、ＧＯと略称することがある）、メチルグリオキサール（以下、ＭＧＯと略称することがある）、３−デオキシグルコソン（以下、３−ＤＧと略称することがある）、アラビノースなど（例えば、非特許文献４、１０、１１、１２参照）のカルボニル中間体が蓄積すること（いわゆるカルボニルストレス（非特許文献１３））により、生体内のＡＧＥｓレベルが上昇することが明らかにされている。腎不全患者における、これらＡＧＥｓやカルボニル中間体のレベルの上昇、すなわち、カルボニルストレスは、現行の血液透析では有効に改善することはできない。【０００７】  また透析患者の合併症以外の様々な疾患にカルボニルストレス、すなわちＡＧＥｓなどの蛋白修飾物やカルボニル化合物が関与していることが明らかとなっている。例えば、１）糖尿病合併症である腎症（非特許文献１４）、網膜症（非特許文献１５）および神経障害（非特許文献１６）など、２）動脈硬化（非特許文献１７）、３）腹膜透析患者における腹膜硬化症、４）アルツハイマー病（非特許文献１８）、５）リュウマチ性関節炎（非特許文献１９）、６）腎不全（非特許文献２０）などである。【０００８】  ところで腹膜透析患者の場合には、腹膜透析に使用される高浸透圧の腹膜透析液（グルコース、イコデキストリンまたはアミノ酸などを含有する）の滅菌や保存中に、反応性の高いカルボニル化合物（ＧＯ、ＭＧＯ、３−ＤＧ、５−ヒドロキシメチルフルフラール、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、レプリン酸、フルフラール、アラビノースなど）が生成し（非特許文献２１）、これを腹腔内に導入することとなる。そのため、腹膜などでＡＧＥｓなどの蛋白修飾物の生成が亢進し、その結果、腹膜の機能が低下する。これは除水能の低下や腹膜硬化症に発展し、ついには腹膜透析が困難となる（非特許文献２２）。【０００９】  このように体内だけではなく、人工的に調製される透析液や輸液などにもカルボニル化合物が存在し、それらを未処理で体内に導入することは上述したカルボニルストレスと同様の影響を生体にもたらす。【００１０】  以上のようにカルボニル化合物蓄積がＡＧＥｓなど蛋白修飾物の産生亢進の原因のひとつであると考えられ（非特許文献２３）、カルボニル化合物の反応性を抑制したり、除去したりしてＡＧＥｓの産生を抑制することが、ＡＧＥｓが関連する疾患に対し有効であると考えられる。【００１１】  その一つの方法はＡＧＥｓ形成阻害剤を医薬品として生体に投与することである。代表的なＡＧＥｓ形成阻害剤（カルボニル化合物トラップ剤）としてアミノグアニジンが例示できる。アミノグアニジンはグルコース、シッフ塩基やアマドリ生成物から生成される３−ＤＧなどのジカルボニル化合物と反応してチアゾリンを形成することによってＡＧＥｓ生成を阻害すると考えられている。糖尿病モデル動物を用いた解析では、糖尿病性腎症（非特許文献２４）、網膜症（非特許文献２５）および白内障（非特許文献２６）の進展を遅延させる効果が確認されている。【００１２】  他に、この種に属する化合物としてピリドキサミン誘導体（ピリドリン）がある。また、ＯＰＢ−９１９５（（±）２−イソプロピリデンヒドラゾノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イルアセトアニリド）はヒドラジンの窒素原子がカルボニル基と反応して安定な構造を形成し、遊離または蛋白に結合した反応性カルボニル化合物を捕捉することにより（非特許文献２７）、モデル試験系でＡＧＥｓのみならずＡＬＥｓの生成も抑制する。メトホルミンなどのビグアナイド化合物もカルボニル化合物を捕捉できるため（非特許文献２８）、ＡＧＥｓ生成阻害薬として利用できる可能性がある。また、最近、本発明者らは含窒素複素環構造の一つとして３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン（以下、エダラボンと略称することがある）がカルボニル化合物のトラップ剤およびＡＧＥｓ形成阻害剤として有用であることを明らかにした（特許文献１）。【００１３】  また、体外においてカルボニル化合物除去材により体液を処理し、体液中のカルボニル化合物を体外へ除去し、ＡＧＥｓの形成を抑制するという方法も公知である。この方法によれば、医薬品とは異なり体内へＡＧＥｓ形成阻害剤を導入しないため、（１）副作用の発生率の程度が低い、（２）高い濃度のカルボ���ル化合物トラップ剤を使用できるため、カルボニル化合物の捕捉効果が高い、などの利点があると考えられる。【００１４】  体液や輸液中のカルボニル化合物を除去する技術として、本発明者らは、ヒドラジン誘導体やグアニジン誘導体などのカルボニル化合物トラップ剤を固定化した担体をカルボニル化合物除去材として使用する概念を提案している（例えば、特許文献２、３および非特許文献２９参照）。この概念に従うことによりＡＧＥｓの前駆物質であるカルボニル化合物が除去されることによって、ＡＧＥｓの形成を阻害することが可能である。
【特許文献１】特開２００４−３００１５３号公報
【特許文献２】国際公開第００／６９４６６号
【特許文献３】国際公開第００／１０６０６号
【非特許文献１】Ｔ．Ｍｉｙａｔａ，Ｏ．Ｏｄａ，Ｒ．Ｉｎａｇｉ，Ｙ．Ｉｉｄａ，Ｎ．Ａｒａｋｉ，Ｎ．Ｙａｍａｄａ，Ｓ．Ｈｏｒｉｕｃｈｉ，Ｎ．Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｋ．Ｍａｅｄａ，Ｔ．Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９２，１２４３−１２５２（１９９３）
【非特許文献２】Ｔ．Ｍｉｙａｔａ，Ｒ．Ｉｎａｇｉ，Ｙ．Ｉｉｄａ，Ｍ．Ｓａｔｏ，Ｎ．Ｙａｍａｄａ，Ｏ．Ｏｄａ，Ｋ．Ｍａｅｄａ，Ｈ．Ｓｅｏ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９３，５２１−５２８（１９９４）
【非特許文献３】Ｔ．Ｍｉｙａｔａ，Ｓ．Ｔａｎｅｄａ，Ｒ．Ｋａｗａｉ，Ｙ．Ｕｅｄａ，Ｓ．Ｈｏｒｉｕｃｈｉ，Ｍ．Ｈａｒａ，Ｋ．Ｍａｅｄａ，ＶＭ．Ｍｏｎｎｉｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３，２３５３−２３５８（１９９６）
【非特許文献４】Ｔ．Ｍｉｙａｔａ，Ｃ．ｖａｎ  Ｙｐｅｒｓｅｌｅ  ｄｅ  Ｓｔｒｉｈｏｕ，Ｋ．Ｋｕｒｏｋａｗａ，ＪＷ．Ｂａｙｎｅｓ，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．，５５，３８９−３９９（１９９９）
【非特許文献５】Ｈ．Ｅｓｔｅｒｂａｕｅｒ，ＲＪ．Ｓｃｈａｕｒ，Ｈ．Ｚｏｌｌｎｅｒ，Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，１１，８１−１２８（１９９１）
【非特許文献６】Ｍ．Ｎｅｅｐｅｒ，ＡＭ．Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｊ．Ｂｒｅｔｔ，ＳＤ．Ｙａｎ，Ｆ．Ｗａｎｇ，ＹＣ．Ｐａｎ，Ｋ．Ｅｌｌｉｓｔｏｎ，Ｄ．Ｓｔｅｒｎ，Ａ．Ｓｈａｗ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７，１４９９８−１５００４（１９９２）
【非特許文献７】ＨＭＬａｎｄｅｒ，ＪＭ．Ｔａｕｒａｓ，ＪＳ．Ｏｇｉｓｔｅ，Ｏ．Ｈｏｒｉ，ＲＡ．Ｍｏｓｓ，ＡＭ．Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２，１７８１０−１７８１４（１９９７）
【非特許文献８】Ｏ．Ｃｈａｐｐｅｙ，Ｃ．Ｄｏｓｑｕｅｔ，ＭＰ．Ｗａｕｔｉｅｒ，ＪＬ．Ｗａｕｔｉｅｒ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，２７，９７−１０８（１９９７）
【非特許文献９】Ｓ．Ｙａｍａｇｉｓｈｉ，ＣＣ．Ｈｓｕ，Ｍ．Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｓ．Ｈａｒａｄａ，Ｙ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｋ．Ｏｈｓａｗａ，Ｋ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２１３，６８１−６８７（１９９５）
【非特許文献１０】Ｈ．Ｏｄａｎｉ，Ｔ．Ｓｈｉｎｚａｔｏ，Ｙ．Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｊ．Ｕｓａｍｉ，Ｋ．Ｍａｅｄａ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２５６，８９−９３（１９９９）
【非特許文献１１】Ｔ．Ｎｉｗａ，Ｎ．Ｔａｋｅｄａ，Ｔ．Ｍｉｙａｚａｋｉ，Ｈ．Ｙｏｓｈｉｚｕｍｉ，Ａ．Ｔａｋｅｍａｔｓｕ，Ｋ．Ｍａｅｄａ，Ｍ．Ｏｈａｒａ，Ｓ．Ｔｏｍｉｙａｍａ，Ｋ．Ｎｉｉｍｕｒａ，Ｎｅｐｈｒｏｎ，６９，４３８−４４３（１９９５）
【非特許文献１２】Ｔ．Ｍｉｙａｔａ，Ｙ．Ｕｅｄａ，Ｙ．Ｙａｍａｄａ，Ｙ．Ｉｚｕｈａｒａ，Ｔ．Ｗａｄａ，Ｍ．Ｊａｄｏｕｌ，Ａ．Ｓａｉｔｏ，Ｋ．Ｋｕｒｏｋａｗａ，Ｃ．ｖａｎ  Ｙｐｅｒｓｅｌｅ  ｄｅ  Ｓｔｒｉｈｏｕ，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．，９，２３４９−２３５６（１９９８）
【非特許文献１３】Ｔ．Ｍｉｙａｔａ，Ｋ．Ｋｕｒｏｋａｗａ，Ｃ．ｖａｎ  Ｙｐｅｒｓｅｌｅ  ｄｅ  Ｓｔｒｉｈｏｕ，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．，１１，１７４４−１７５２（２０００）
【非特許文献１４】Ｈ．Ｍａｋｉｎｏ，Ｋ．Ｓｈｉｋａｔａ，Ｋ．Ｈｉｒｏｎａｋａ，Ｍ．Ｋｕｓｈｉｒｏ，Ｙ．Ｙａｍａｓａｋｉ，Ｈ．Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，Ｚ．Ｏｔａ，Ｎ．Ａｒａｋｉ，Ｓ．Ｈｏｒｉｕｃｈｉ，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．，４８，５１７−５２６（１９９５）
【非特許文献１５】Ｔ．Ｍｕｒａｔａ，Ｒ．Ｎａｇａｉ，Ｔ．Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ，Ｈ．Ｉｎｏｍｕｔａ，Ｋ．Ｉｋｅｄａ，Ｓ．Ｈｏｒｉｕｃｈｉ，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，４０，７６４−７６９（１９９７）
【非特許文献１６】Ｋ．Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，Ｙ．Ｎｉｓｈｉｚａｗａ，Ｓ．Ｈｏｒｉｕｃｈｉ，Ｓ．Ｙａｇｉｈａｓｈｉ，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，４０，１３８０−１３８７（１９９７）
【非特許文献１７】Ｌ．Ｐａｒｋ，ＫＧ．Ｒａｍａｎ，ＫＪ．Ｌｅｅ，Ｙ．Ｌｕ，ＬＪ．Ｆｅｒｒａｎ，ＷＳ．Ｃｈｏｗ，Ｄ．Ｓｔｅｒｎ，ＡＭ．Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，４，１０２５−１０３１（１９９８）
【非特許文献１８】ＭＡ．Ｓｍｉｔｈ，Ｓ．Ｔａｎｅｄａ，ＰＬ．Ｒｉｃｈｅｙ，Ｓ．Ｍｉｙａｔａ，ＳＤ．Ｙａｎ，Ｄ．Ｓｔｅｒｎ，ＬＭ．Ｓａｙｒｅ，ＶＭ．Ｍｏｎｎｉｅｒ，Ｇ．Ｐｅｒｒｙ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１，５７１０−５７１４（１９９４）
【非特許文献１９】Ｔ．Ｍｉｙａｔａ，Ｎ．Ｉｓｈｉｇｕｒｏ，Ｙ．Ｙａｓｕｄａ，Ｔ．Ｉｔｏ，Ｍ．Ｎａｎｇａｋｕ，Ｈ．Ｉｗａｔａ，Ｋ．Ｋｕｒｏｋａｗａ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２４４，４５−４９（１９９８）
【非特許文献２０】Ｚ．Ｍａｋｉｔａ，Ｓ．Ｒａｄｏｆｆ，ＥＪ．Ｒａｙｆｉｅｌｄ，Ｚ．Ｙａｎｇ，Ｅ．Ｓｋｏｌｎｉｋ，Ｖ．Ｄｅｌａｎｅｙ，ＥＡ．Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ａ．Ｃｅｒａｍｉ，Ｈ．Ｖｌａｓｓａｒａ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２５，８３６−８４２（１９９１）
【非特許文献２１】ＲＪ．Ｕｌｂｒｉｃｈｔ，ＳＪ．Ｎｏｒｔｈｕｐ，ＪＡ．Ｔｈｏｍａｓ，Ｆｕｎｄａｍ．Ａｐｐｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４，８４３−８５３（１９８４）
【非特許文献２２】Ｔ．Ｍｉｙａｔａ，Ｋ．Ｈｏｒｉｅ，Ｙ．Ｕｅｄａ，Ｙ．Ｆｕｊｉｔａ，Ｙ．Ｉｚｕｈａｒａ，Ｈ．Ｈｉｒａｎｏ，Ｋ．Ｕｃｈｉｄａ，Ａ．Ｓａｉｔｏ，Ｃ．ｖａｎ  Ｙｐｅｒｓｅｌｅ  ｄｅ  Ｓｔｒｉｈｉｏｕ，Ｋ．Ｋｕｒｏｋａｗａ，Ｋｉｄｎｅｙ．Ｉｎｔ．，５８，４２５−４３５（２０００）
【非特許文献２３】Ｔ．Ｍｉｙａｔａ，Ｋ．Ｍａｅｄａ，Ｋ．Ｋｕｒｏｋａｗａ，Ｃ．ｖａｎ  Ｙｐｅｒｓｅｌｅ  ｄｅ  Ｓｔｒｉｈｏｕ，Ｎａｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．，１２，２５５−２５８（１９９７）
【非特許文献２４】Ｄ．Ｅｄｅｌｓｔｅｉｎ，Ｍ．Ｂｒｏｗｎｌｅｅ，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，３５，９６−１０１（１９９２）
【非特許文献２５】ＨＰ．Ｈａｍｍｅｓ，Ｓ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｋ．Ｆｅｄｅｒｌｉｎ，Ｋ．Ｇｅｉｓｅｎ，Ｍ．Ｂｒｏｗｎｌｅｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８，１１５５５−１１５６１（１９９１）
【非特許文献２６】Ｋ．Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｋ．Ｉｋｅｄａ，Ｓ．Ｈｏｒｉｕｃｈｉ，Ｈ．Ｚｈａｏ，ＥＣ．Ａｂｒａｈａｍ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２４１，３５２−３５４（１９９７）
【非特許文献２７】Ｓ．Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｚ．Ｍａｋｉｔａ，Ｓ．Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｋ．Ｙａｓｕｍｕｒａ，Ｗ．Ｆｕｊｉｉ，Ｋ．Ｙａｎａｇｉｓａｗａ，Ｔ．Ｋａｗａｔａ，Ｔ．Ｋｏｉｋｅ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４６，８９５−８９９（１９９７）
【非特許文献２８】ＰＪ．Ｂｅｉｓｓｗｅｎｇｅｒ，ＳＫ．Ｈｏｗｅｌｌ，ＡＤ．Ｔｏｕｃｈｅｔｔｅ，Ｓ．Ｌａｌ，ＢＳ．Ｓｚｗｅｒｇｏｌｄ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４８，１９８−２０２（１９９９）
【非特許文献２９】Ｎ．Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｔ．Ｍｉｙａｔａ，Ｙ．Ｕｅｄａ，Ｒ．Ｉｎａｇｉ，Ｙ．Ｉｚｕｈａｒａ，ｈ．Ｙｕｚａｗａ，ｈ．Ｏｎｏｇｉ，ｍ．Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，ｍ．Ｎａｎｇａｋｕ，Ｃ．ｖａｎ  Ｙｐｅｒｓｅｌｅ  ｄｅ  Ｓｔｒｉｈｏｕ，Ｋ．Ｋｕｒｏｋａｗａ，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．，６３，３３１−３３９（２００３）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】  前記のＡＧＥｓ形成阻害剤のように、ＡＧＥｓおよびＡＬＥｓの生成を阻害することが、これらに関連する病態を予防または治療できる方法であるが、医薬品の場合は副作用の問題があってこれまで実用化されたものがないのも実情である。特に体内において有用なカルボニル化合物であるビタミンＢ６（ピリドキサール）をも非特異的に不活性化してしまうため、ＡＧＥｓ形成阻害剤を投与された患者はビタミンＢ６欠乏症に陥ることがある。また、これまでのＡＧＥｓ形成阻害剤はＡＧＥｓ前駆体（代表的なものは上記したようなカルボニル化合物である）を捕捉する能力もそれほど高くなく、ＡＧＥｓ形成阻害作用も限定的であった。【００１６】  また、透析患者や糖尿病患者の合併症を予防、治療する目的から、体液、輸液および透析液などからＡＧＥｓの前駆体であるカルボニル化合物などを除去する技術、ならびにカルボニル化合物を除去する方法として担体にカルボニル化合物トラップ剤を固定化してなるカルボニル化合物除去材が知られている。【００１７】  しかし、従来技術によるカルボニル化合物除去材では、カルボニル化合物、特にかさ高いカルボニル化合物であるＭＧＯや３−ＤＧなどについては十分な除去性能を示していない。そのため十分なＡＧＥｓ形成阻害作用が得られないという問題点があり、改善の余地が残されている。【００１８】  特に、体液を処理する場合においては、医薬品と同様に体液中のビタミンＢ６（ピリドキサール）を除去してしまうため、ビタミンＢ６欠乏症に陥る懸念もある。【００１９】  従って本発明の目的は、カルボニル化合物の除去性能およびそれに伴うＡＧＥｓの形成阻害効果が高いカルボニル化合物除去材、および該除去材にビタミンＢ６を捕捉しない特性を付与した除去材、該除去材を体液、輸液および透析液と接触させるカルボニル化合物除去方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２０】  本発明者らは前記課題を解決すべく鋭意検討した結果、ある特定の含窒素複素環構造を有する化合物をカルボニル化合物トラップ剤として担体に固定化してなるカルボニル化合物除去材、および該化合物がビタミンＢ６分子の結合を妨げる基（ビタミンＢ６分子自体に由来するものを含む）を有するカルボニル化合物除去材を用いることにより、前記課題を解決できることを見出し、本発明を完成させるに至った。【００２１】  最近、本発明者らが見出した上述のエダラボンとカルボニル化合物およびＡＧＥｓとの反応機構を詳細に検討した結果、エダラボンのピラゾロン環の４位が活性メチレン基としてカルボニル化合物を補足するという全く新しいカルボニル化合物の捕捉形態であることを解明した。本発明は以上のような活性メチレン基を含有するカルボニル化合物トラップ剤に関する新たな知見を加えつつ、完成されたものである。【００２２】  すなわち、本発明は、
［１］下記構造式（Ｉ）または（ＩＩ）【００２３】
【化１】
2006129524.tif 000002
【００２４】
【化２】
2006129524.tif 000003
【００２５】（式中、実線と破線で示す結合部位は単結合または二重結合を表し、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアラルキル基またはビタミンＢ６分子の結合を妨げる基を表す。ただし、Ｒ３が結合している窒素原子において、実線と破線で示す結合が二重結合のときＲ３は存在しない。
Ｘは、Ｘに結合する実線と破線で示す結合が二重結合の場合は、酸素原子、硫黄原子または置換基を有している窒素原子を表し、実線と破線で示す結合が単結合の場合は、水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアラルキル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基または置換基を有していてもよいアミノ基を表す。）
で示される含窒素複素環構造を有する１種以上の化合物が担体に固定化されてなるカルボニル化合物除去材、および
［２］前記［１］記載のカルボニル化合物除去材を、カルボニル化合物を含む被処理液と接触させることを特徴とするカルボニル化合物除去方法
に関する。
【発明の効果】
【００２６】  本発明のカルボニル化合物除去材は、例えば、体液、輸液または透析液等の被処理液に含まれるカルボニル化合物の除去およびＡＧＥｓ形成阻害において、かさ高いＭＧＯや３−ＤＧなど広範なカルボニル化合物についても高い除去性能を有し、それに伴って種々の疾患の原因となるＡＧＥｓ形成阻害効果も高いという効果が奏される。また、本発明のカルボニル化合物除去材は、該カルボニル化合物除去材に固定化された構造式（Ｉ）または（ＩＩ）で示される含窒素複素環構造を有する１種類以上の化合物のうち少なくとも１種がビタミンＢ６分子の結合を妨げる基を有することで、体内の有用カルボニル化合物成分であるビタミンＢ６（ピリドキサール）の捕捉を低減する一方、ＡＧＥｓの前駆体である不要なカルボニル化合物を捕捉し、ＡＧＥｓの形成を抑制できるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】  本発明は、構造式（Ｉ）または（ＩＩ）で示される含窒素複素環構造を有する１種以上の化合物が担体に固定化されてなるカルボニル化合物除去材に関する。かかる構成を有することにより、本発明のカルボニル化合物除去材は、かさ高いＭＧＯや３−ＤＧなどを含む種々のカルボニル化合物についても高い除去性能を有し、それに伴って種々の疾患の原因となるＡＧＥｓ形成阻害効果も高いという効果が奏される。【００２８】  また、本発明のカルボニル化合物除去材は、担体に固定化される含窒素複素環構造を有する化合物のうち少なくとも１種がビタミンＢ６分子の結合を妨げる基を有することで、体内の有用カルボニル化合物成分であるビタミンＢ６（ピリドキサール）の捕捉を低減する一方、ＡＧＥｓ前駆体となる不要なカルボニル化合物を捕捉し、ＡＧＥｓの形成を抑制できるという効果を奏する。【００２９】  本発明において使用する含窒素複素環構造を有する化合物は、構造式（Ｉ）または（ＩＩ）【００３０】
【化３】
2006129524.tif 000004
【００３１】
【化４】
2006129524.tif 000005
【００３２】（式中、実線と破線で示す結合部位は単結合または二重結合を表し、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアラルキル基またはビタミンＢ６分子の結合を妨げる基を表す。ただし、Ｒ３が結合している窒素原子において、実線と破線で示す結合が二重結合のときＲ３は存在しない。
Ｘは、Ｘに結合する実線と破線で示す結合が二重結合の場合は、酸素原子、硫黄原子または置換基を有している窒素原子を表し、実線と破線で示す結合が単結合の場合は、水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアラルキル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基または置換基を有していてもよいアミノ基を表す。）
で示される２種類の異性体の平衡混合物として存在する含窒素複素環構造を有する化合物である。【００３３】  一般式において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＸが表すアルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基などが挙げられる。また、アルキル基が有していてもよい置換基としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などのハロゲン原子；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基などのアルコキシル基；水酸基；ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ基などの三置換シリルオキシ基；ニトロ基；置換基を有していても良いピリジル基、キノリル基などの芳香族複素環基などが挙げられる。【００３４】  Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＸが表すアリール基としては、例えばフェニル基、４−メチルフェニル基、４−クロロフェニル基、３−クロロフェニル基、３−メトキシフェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基などが挙げられる。また、アリール基が有していてもよい置換基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ヘキシル基などのアルキル基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などのハロゲン原子；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基などのアルコキシル基；水酸基；ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ基などの三置換シリルオキシ基などが挙げられる。【００３５】  Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＸが表すアラルキル基としては、例えばベンジル基、ジフェニルメチル基、トリフェニルメチル基、フェニルエチル基などが挙げられる。これらのアラルキル基は、例えばそのアリール基上に置換基を有していてもよく、かかる置換基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ヘキシル基などのアルキル基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などのハロゲン原子；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基などのアルコキシル基；水酸基；ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ基などの三置換シリルオキシ基などが挙げられる。【００３６】  また、これらのアラルキル基は、例えばそのアルキル基上に置換基を有していてもよく、かかる置換基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ヘキシル基などのアルキル基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などのハロゲン原子；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基などのアルコキシル基；ベンジルオキシ基、フェニルエチルオキシ基などのアラルキルオキシ基；水酸基；ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ基などの三置換シリルオキシ基などが挙げられる。【００３７】  また、Ｘが置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基である場合、かかるアルコキシカルボニル基としては、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポ��シカルボニル基、ブトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル基、ヘキシルオキシカルボニル基などが挙げられる。【００３８】  また、Ｘが置換基を有していてもよいアミノ基である場合、かかるアミノ基としては、例えば、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、エチルアミノ基、ジエチルアミノ基、プロピルアミノ基、ブチルアミノ基、ペンチルアミノ基、ヘキシルアミノ基などが挙げられる。【００３９】  また、Ｘが置換基を有している窒素原子である場合、かかる置換基としては水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアラルキル基などが挙げられる。【００４０】  Ｘが置換基を有している窒素原子である場合、該置換基になり得るアルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基などが挙げられる。かかるアルキル基が有していてもよい置換基としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などのハロゲン原子；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基などのアルコキシル基；水酸基；ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ基などの三置換シリルオキシ基；ニトロ基などが挙げられる。【００４１】  Ｘが置換基を有している窒素原子である場合、該置換基になり得るアリール基としては、例えばフェニル基、４−メチルフェニル基、４−クロロフェニル基、３−クロロフェニル基、３−メトキシフェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基などが挙げられる。かかるアリール基が有していてもよい置換基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ヘキシル基などのアルキル基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などのハロゲン原子；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基などのアルコキシル基；水酸基；ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ基などの三置換シリルオキシ基などが挙げられる。【００４２】  Ｘが置換基を有している窒素原子である場合、該置換基になり得るアラルキル基としては、例えばベンジル基、ジフェニルメチル基、トリフェニルメチル基、フェニルエチル基などが挙げられる。これらのアラルキル基はそのアリール基上に置換基を有していてもよく、かかる置換基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ヘキシル基などのアルキル基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などのハロゲン原子；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基などのアルコキシル基；水酸基；ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ基などの三置換シリルオキシ基などが挙げられる。【００４３】  また、これらのアラルキル基はそのアルキル基上に置換基を有していてもよく、かかる置換基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ヘキシル基などのアルキル基；フッ素原子、塩素原子、臭素��子、ヨウ素原子などのハロゲン原子；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基などのアルコキシル基；ベンジルオキシ基、フェニルエチルオキシ基などのアラルキルオキシ基；水酸基；ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ基などの三置換シリルオキシ基などが挙げられる。【００４４】  以上のように定義される含窒素複素環構造を有する化合物で体液を処理する場合、体液中のビタミンＢ６（ピリドキサール）を除去する可能性もあるため、含窒素複素環構造を有する化合物のうち少なくとも１種が、ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基を有するものが好ましい。【００４５】  本発明において、ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基としては、該置換基がビタミンＢ６分子の結合を妨げる限り、特に限定はなく、ビタミンＢ６分子自体に由来するものでもよい。かかる置換基となりうる化合物としては、例えば、ピリドキサール、ベンズアルデヒド、サリチルアルデヒド、３−ヒドロキシベンズアルデヒド、４−ヒドロキシベンズアルデヒド、ｐ−クロロベンズアルデヒド、３−ヒドロキシ−２，４−ジメトキシベンズアルデヒド、４−ヒドロキシ−３−メトキシベンズアルデヒド、４−ジメチルアミノ−ベンズアルデヒドなどが挙げられる。【００４６】  即ち、ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基としては、例えば７−ヒドロキシ−６−メチル−１，３−ジヒドロ−フロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−イル基、ベンジリデニル基、２−ヒドロキシ−ベンジリデニル基、３−ヒドロキシ−ベンジリデニル基、４−ヒドロキシ−ベンジリデニル基、ｐ−クロロ−ベンジリデニル基、３−ヒドロキシ−２，４−ジメトキシベジリデニル基、４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジリデニル基、４−ジメチルアミノ−ベンジリデニル基などが挙げられる。【００４７】  なお、ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基は、含窒素複素環構造を有する化合物において、前記構造式（Ｉ）または（ＩＩ）のＲ１、Ｒ２およびＲ３のうち１つ以上に導入されてもよいが、ビタミンＢ６分子の結合を効率的に抑制するという観点から、Ｒ２に導入されていることが好ましい。【００４８】  中でも、生体にとって有用物質であるビタミンＢ６の結合を抑制するという観点から、Ｒ１としては置換基を有していてもよいアリール基、中でもヒドロキシカルボニル置換フェニル基が好ましく、Ｒ２としてはビタミンＢ６分子の結合を妨げる基、中でも７−ヒドロキシ−６−メチル−１，３−ジヒドロ−フロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−イル基が好ましく、Ｒ３が結合している窒素原子において、実線と破線で示す結合が二重結合であることが好ましく、Ｘとしては置換基を有していてもよいアルキル基、中でもメチル基、エチル基、またはメトキシカルボニルメチル基が好ましい。【００４９】  本発明のカルボニル化合物除去材において、担体に固定化された１種以上の含窒素複素環構造を有する化合物のうち少なくとも１種が、ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基を有する化合物であれば、体内で有用なビタミンＢ６分子の結合を妨げつつ不要なカルボニル化合物を除去できるという効果を奏する。ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基がＲ１、Ｒ２、Ｒ３の少なくとも一部に導入される場��、ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基と含窒素複素環化合物との間に解離平衡が存在する点、および体内で有用なビタミンＢ６分子の結合を妨げつつ不要なカルボニル化合物の除去能を有するという点を考慮し、担体に固定化された含窒素複素環化合物を有する化合物全体量に対してビタミンＢ６分子の結合を妨げる基で置換された含窒素複素環構造を有する化合物の割合は、通常１０〜１００ｍｏｌ％の範囲であることが好ましい。【００５０】  上記のような含窒素複素環構造を有する化合物の一般的な合成法としては、特に限定はなく、公知の方法に従えばよい。例えば、ヒドラジン誘導体、およびβ−ケトエステルの混合溶液を還流して行う方法が挙げられる。ヒドラジン誘導体に対するβ−ケトエステルの使用量は特に制限されないが、ヒドラジン誘導体１モルに対し、β−ケトエステルを０．５モル〜５モルの範囲で使用することが好ましい。また、反応温度は、５０℃〜２００℃の範囲が好ましく、８０℃〜１５０℃の範囲がより好ましい。【００５１】  また、ヒドラジン誘導体、およびβ−ケトエステルの混合溶液を還流して行う方法では、通常、溶媒の存在下に行われる。使用する溶媒としては、反応に悪影響を与えない限り、特に限定されるものではないが、例えばヘキサン、ヘプタン、オクタン、石油エーテルなどの脂肪族炭化水素；ベンゼン、トルエン、キシレン、クメンなどの芳香族炭化水素；テトラヒドロフラン、ジイソプロピルエーテル、ジメトキシエタン、ジブチルエーテルなどのエーテル；アセトニトリル、プロピオニトリル、ベンゾニトリルなどのニトリル；クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、トリクロロエタンなどの含ハロゲン化炭化水素；ジメチルスルホキシド；酢酸、プロピオン酸などの有機カルボン酸；またはこれらの混合溶媒などが挙げられる。溶媒の使用量は、ヒドラジン誘導体に対し、１〜２００倍重量の範囲が好ましく、４〜２０倍重量の範囲がより好ましい。【００５２】  上記の含窒素複素環構造を有する化合物の合成方法によって得られる化合物として、例えば３−オキソブタン酸エステルとフェニルヒドラジン誘導体を反応させることにより得ることができる１−フェニル−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン誘導体が挙げられる（製造例参照）。【００５３】  このようにして得られた含窒素複素環構造を有する化合物は、通常の有機化合物の単離・精製に用いられる方法により単離・精製することができる。例えば、反応混合物を濃縮、冷却することによって再結晶により精製することができる。また、反応混合物をそのまま濃縮し、得られる粗生成物を必要に応じて蒸留、クロマトグラフィーなどにより精製することができる。【００５４】  また、含窒素複素環構造を有する化合物にビタミンＢ６分子の結合を妨げる基を導入する方法として、例えば、（１）含窒素複素環構造を有する化合物と前記ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基となりうる化合物とを反応させ、必要に応じて精製操作を行った後、担体に固定化する方法、（２）担体に固定化された含窒素複素環構造を有する化合物に前記ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基となりうる化合物を反応させる方法等が挙げられるが、より効率的にビタミンＢ６分子の結合を妨げる基を導入でき��という観点から、（１）の方法が好ましい。【００５５】  以上のように例示される、Ｒ２がビタミンＢ６分子の結合を妨げる基である化合物等の含窒素複素環構造を有する化合物は、活性メチレン基および／または活性メチン基を含む。これは本発明者らが発明したカルボニル化合物除去材に好適な新しいカルボニル化合物トラップ剤を開示するものであり、活性メチレン基または活性メチン基を含むカルボニル化合物トラップ剤を総称して、活性メチレン型トラップ剤と以後略称することがある。【００５６】  本発明における活性メチレン型トラップ剤を固定化する担体としては、体液、輸液ならびに透析液などの被処理液中の成分と非特異的な相互作用（目的外成分との相互作用）の少ない材料で構成されており、被処理液に対して不溶性であれば特に限定されるものではなく、例えば、合成高分子や多糖類からなる有機担体、ガラスビーズ、シリカゲル、アルミナ、ヒドロキシアパタイトなどの無機担体、さらにはこれらの組み合わせによって得られる有機−有機、有機−無機などの複合担体などが挙げられる。【００５７】  合成高分子として例えば、ポリビニルアルコール、エチレン・ビニルアルコール共重合体、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリエステル、ポリ塩化ビニル、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、ポリプロピレン、ポリアリルエーテルスルフォン、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、ポリカーボネートおよびこれらの誘導体などが挙げられる。【００５８】  多糖類として例えば、アルギン酸、スターチ、ヒアルロン酸、セルロース、アガロース、デキストラン、キチン、キトサンおよびこれらの誘導体などが挙げられる。【００５９】  これらの合成高分子や多糖類は単独、あるいは２種以上を組み合わせて使用され得る。２種以上組み合わせる場合は、そのうち少なくとも１種に活性メチレン型トラップ剤が固定化される。固定化される活性メチレン型トラップ剤は、単独で固定化するほか、２種類以上を固定化してもよい。【００６０】  担体の形状に制限はなく、例えば膜状、繊維状、粒状、中空系状、不織布状、多孔形状、ハニカム形状などやそれらの組み合わせが挙げられる。これらの担体は、厚さ、表面積、太さ、長さ、形状、および／または大きさを種々変えることにより、体液や輸液との接触面積を制御することができる。本発明における担体は、被処理液との接触面積を大きくするという観点から、多孔質成形体であることが好ましい。【００６１】  次に本発明のカルボニル化合物除去材の調製法における各工程の内容について詳しく説明する。【００６２】  本発明のカルボニル化合物除去材は、前記の活性メチレン型トラップ剤を前記の担体に固定化して得られるが、その固定化の方法としては、含窒素複素環構造を有する化合物や担体が分解したり、意図しない部位どうしで非特異的に固定化反応が起こらなければ、共有結合を用いる方法と物理結合を用いる方法のどちらも選択できる。【００６３】  共有結合を用いる方法の場合、担体表面上に必要な官能基としては、例えば、水酸基、アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオール基、シラノール基、エポキシ基、ハロゲン基、マレイミド基、酸無水物基などが挙げられる。【��０６４】  含窒素複素環構造を有する化合物を担体に固定化するためには、担体側の官能基に対して反応性を有する官能基を、含窒素複素環構造を有する化合物側に予め導入しておく必要があり、例えば、Ｒ１またはＸに直接、またはかかる置換基上に導入しておくことが好ましい。そのような官能基としては、例えば、水酸基、アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオール基、シラノール基、エポキシ基、ハロゲン基、マレイミド基、酸無水物基などが挙げられる。【００６５】  共有結合による固定化反応としては、例えば、アミド結合形成反応（カルボジイミドなどの縮合剤を用いてアミノ基とカルボキシル基を縮合させるか、またはアミノ基と予めＮ−ヒドロキシスクシンイミドなどにより活性化されたカルボキシル基活性エステルを反応させる方法などが例示できる）、マイケル付加反応（マレイミド基とチオール基の組み合わせなど）、エーテル形成反応（ハロゲン化アルキル基やエポキシ基などと水酸基の組み合わせなど）、チオエーテル形成反応（ハロゲン化アルキル基やエポキシ基などとチオール基の組み合わせなど）、アミノ化反応（ハロゲン化アルキル基やエポキシ基などへのアミノ基による求核攻撃反応など）、シッフベース形成反応（アルデヒド基とアミノ基の組み合わせなど、但し形成されるシッフベース基は適切な還元剤で還元されていてもよい）などが挙げられる。これらは目的に応じて最適な組み合わせを選択できる。【００６６】  また、含窒素複素環構造を有する化合物は、担体側に導入した官能基に対して、スペーサー分子を介して固定化されることが好ましい。スペーサー分子の導入には、含窒素複素環構造を有する化合物と担体主鎖との距離を確保し、立体障害などを低減させる目的や、担体側に導入した官能基からさらに分岐させることにより、より高密度に含窒素複素環構造を有する化合物を導入し、カルボニル化合物との反応効率を高める目的がある。また、スペーサー分子を導入することによって、含窒素複素環構造を有する化合物周囲の局所的な環境、例えば荷電やｐＨなどが変化することで、反応効率を制御することも可能である。【００６７】  スペーサー分子としては、生体に対して毒性などを示さない物質であれば特に限定なく利用できる。スペーサー分子は、担体と含窒素複素環構造を有する化合物の両方に共有結合により結合することから、少なくとも二つ以上の官能基を有するものが好ましく、前記官能基としては、例えば、水酸基、アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオール基、シラノール基、エポキシ基、ハロゲン基、マレイミド基、酸無水物基などが挙げられる。【００６８】  スペーサー分子としては、例えば、エチレンジアミン、１，３−ジアミノプロパン、１，１３−ジアミノ−４，７，１０−トリオキサトリデカン、両末端にアミノ基を有するポリエチレングリコールなどのアルキル鎖やオキシエチレン（オキシプロピレン）鎖を有するジアミン類；ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、スペルミジン、スペルミン、ポリエチレンイミン、ポリアリルアミンなどの１分子中に３個以上のアミノ基を含有するポリアミン類；システイン、リジン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、サ���コシン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノエート、１１−アミノ−３，６，９−トリオキサウンデカノエート、末端にアミノ基とカルボキシル基を有するポリエチレングリコールなどの天然または非天然型のアミノ酸類；アルギン酸、スターチ、ヒアルロン酸、セルロース、アガロース、デキストラン、キチン、キトサンなどの多糖類等が挙げられる。なお、例示したジアミン類については、官能基としてアミノ基のみ例示したが、他の官能基についても同様のスペーサー分子として利用することができる。【００６９】  スペーサー分子の分子量には特に制限なく目的により最適な分子量が選択できるが、担体への固定化の際の反応性の観点から、スペーサー分子の分子量は７０，０００以下が好ましく、２５，０００以下であることがより好ましい。【００７０】  これらのスペーサー分子は分岐していてもよい。分岐とは、スペーサー分子の分岐点の原子あるいは置換基から先が少なくとも２本以上になっている状態を指す。分岐点は１つのスペーサー分子中に複数個含まれていてもよく、分岐したスペーサー分子はスペーサー分子が有してもよい官能基を通常３つ以上有する。例えば、オキシエチレン（オキシプロピレン）鎖などは重合開始剤としてペンタエリスリトール、ヘキサグリセリンを用いればそれぞれ４つ、８つに分岐したオキシエチレン（オキシプロピレン）鎖を調製でき、それぞれの末端に官能基を導入することで４つ、８つの官能基を有する分岐したスペーサーが調製できる。さらに高度に分岐したスペーサー分子としては、末端官能基がアミノ基またはカルボキシル基などとなったポリアミドアミンデンドリマーなどのデンドリマー類なども本発明のスペーサー分子として用いることができる。【００７１】  本発明に好適な分岐したスペーサー分子には特に制限なく、目的により自由に選択することができる。上述したように１分子中に含まれる分岐点の数や分岐点の原子あるいは置換基から先の鎖数により、分岐したスペーサーが有する官能基の数を自由に制御することができる。但し、官能基の立体障害などの観点から、分岐したスペーサーが含む官能基は１分子中に３から１万が好ましく、３から１０００程度であることがより好ましい。【００７２】  スペーサー分子を含むカルボニル化合物除去材を製造する方法としては、（１）スペーサー分子と担体を共有結合により結合させた後、スペーサー分子に含まれる残りの官能基に含窒素複素環構造を有する化合物を導入させる方法と、（２）スペーサー分子と含窒素複素環構造を有する化合物を共有結合により結合させた後、スペーサー分子に含まれる残りの官能基により担体に結合させる方法が挙げられ、いずれもが好適に利用できる。【００７３】  スペーサー分子と担体、スペーサー分子と含窒素複素環構造を有する化合物との共有結合による結合反応としては、例えば、アミド結合形成反応（カルボジイミドなどの縮合剤を用いてアミノ基とカルボキシル基を縮合させるか、またはアミノ基と予めＮ−ヒドロキシスクシンイミドなどにより活性化されたカルボキシル基活性エステルを反応させる方法などが例示できる）、マイケル付加反応（マレイミド基とチオール基の組み合わせなど）、エーテル形成反応（ハロゲン化アルキル基やエポキシ基などと水酸基の組み合わせなど）、チオエーテル形成反応（ハロゲン化アルキル基やエポキシ基などとチオール基の組み合わせなど）、アミノ化反応（ハロゲン化アルキル基やエポキシ基などとアミノ基の組み合わせなど）、シッフベース形成反応（アルデヒド基とアミノ基の組み合わせなど、但し、形成されるシッフベース基は適切な還元剤で還元されていてもよい）などが挙げられる。これらは目的に応じて最適な組み合わせを選択できる。【００７４】  また、本発明のスペーサー分子は、スペーサー分子と担体、スペーサー分子と含窒素複素環構造を有する化合物との結合反応の際には反応に関与する少なくとも１つの官能基が保護基により適切に保護されていてもよい。保護基としては、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｔｈｅｏｄｒａ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ  Ｅｄ．，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−３ｒｄ  ｅｄ．”Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９９９）などに記載されているものが利用できる。【００７５】  これらのスペーサー分子は単独でまたは組み合わされて複数個が結合されたものを用いてもよい。例えば、アミノ酸類の場合、結合反応を複数回繰返すことで複数個のアミノ酸が連なったペプチド鎖を有するスペーサー分子を調製することが可能である。ペプチド鎖を合成する方法としては、例えば、泉谷信夫、加藤哲夫、青柳東彦、脇道典  著、「ペプチド合成の基礎と実験」丸善（１９８５）などに記載された方法が参考にできる。前記方法は、スペーサー分子としてアミノ酸だけでなく、他の例示したスペーサー分子にも適用できる。【００７６】  物理結合を用いる方法としては、例えば、静電的な相互作用により結合する方法、疎水的な相互作用により結合する方法などが挙げられる。物理結合を用いる方法においても上述したようなスペーサー分子を用いることができる。【００７７】  本発明のカルボニル化合物除去材は、体外循環治療に供せられる場合における、滅菌時あるいは治療時の固定化した化合物の脱離、溶出を抑えるという観点から、共有結合によって固定化して調製することが好ましい。【００７８】  含窒素複素環構造を有する化合物を担体に固定化する密度はカルボニル化合物除去材の使用目的によって適宜選択できる。例えば、カルボニル化合物の除去速度を得るという観点から、自然に沈降させた担体体積１ｍＬあたりに固定化されるカルボニル化合物は２μｍｏｌ以上が好ましく、体液成分との非特異的相互作用を回避するという観点から１０ｍｍｏｌ以下が好ましい。【００７９】  以上のようにして調製され得る本発明のカルボニル化合物除去材を、カルボニル化合物を含む被処理液と接触させることにより、該試料中のカルボニル化合物を除去することができる。従って、本発明はまた、カルボニル化合物の除去方法にも関する。【００８０】  本発明において被処理液とは、カルボニル化合物を含有している限り、特に限定はなく、例えば、体液、輸液または透析液が挙げられる。本発明において体液とは、血液、血漿、血清、腹水、リンパ液、関節内液およびこれらから得られた分画成分、ならびにその他の生体由来の液性成分をいう。また、本発明において輸液とは、例えば、ブドウ糖液、アルブミン製剤、血漿増量剤などの液性成分をいう。さらに、本発明における透析液とは、血液透析液や腹膜透析液などの液性成分のことをいう。【００８１】  本発明においてカルボニル化合物とは、生体由来または非生体由来に関係なく、カルボニル基を有する化合物であればよく、ジカルボニル化合物なども含まれる。カルボニル化合物には、例えば、アラビノース、グリオキサール（ＧＯ）、メチルグリオキサール（ＭＧＯ）、３−デオキシグルコソン（３−ＤＧ）、グリコールアルデヒド、グリセルアルデヒド、デヒドロアスコルビン酸、ヒドロキシノネナール、マロンジアルデヒド、アクロレイン、５−ヒドロキシメチルフルフラール、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、レプリン酸、フルフラールなどが挙げられる。【００８２】  本発明におけるカルボニル化合物は、上で例示したような低分子のカルボニル化合物に限らず、それらが生体内の蛋白質などと反応し蛋白質上にカルボニル基が生成したものや、蛋白質に糖が付加して非酵素的に変性し蛋白質上にカルボニル基が生成したものも含まれる。【００８３】  本発明における接触の態様としては、カルボニル化合物除去材と被処理液とを直接的に接した状態に一定時間置く態様が好ましいが、被処理液からカルボニル化合物が除去される範囲内でカルボニル化合物除去材と被処理液とが透析膜などを介して接する態様であってもよい。本発明のカルボニル化合物除去材と被処理液との接触は、種々の態様が考えられる。例えば、被処理液が体液である場合、カルボニル化合物除去材が充填された容器（例えば血液バッグなど）に採取した患者の体液を入れ、この中で患者体液のカルボニル化合物をトラップする方法、粒状または繊維状などのカルボニル化合物除去材をカラムに充填したものに体液を通過または循環させる方法などが挙げられる。体液として血液を用いる場合は、全血でなくても全血から分離した血漿を用いてもよい。【００８４】  処理された体液は患者に戻されるか、必要に応じて容器中などに保存することもできる。保存する場合、容器内にカルボニル化合物除去材を含めておくことにより、保存中に生成・蓄積するカルボニル化合物をトラップすることも可能である。【００８５】  本発明のカルボニル化合物除去材と体液、特に血液との接触は、血液透析や血液濾過、血液濾過透析、血液吸着、血漿分離を含む血液浄化の過程で行うこともできる。例えば、血液透析患者に対しては、血液透析回路内にカルボニル化合物除去材を配置させることにより、血液透析とカルボニル化合物のトラップとを同時に行うことができる。【００８６】  この場合、血液透析膜を担体として利用し、活性メチレン型トラップ剤を血液透析膜に固定化しておくこともできる。担体として用いられる透析膜は公知のものを使用することができる。例えば、再生セルロース、セルローストリアセテートなどのセルロース誘導体、ポリメチルメタクリレート、ポリオレフィン、ポリスルフォン、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、ポリアミド、ポリイミド、ポリエーテルナイロン、シリコン、ポリエステル系共重合体などが挙げられる。また、該活性メチレン型トラップ剤の固定化方法は、上述の通りである。【００８７】  また、透析膜を担体として利用せず���カルボニル化合物除去材を充填したカラムを血液透析回路中に配置させてもよい。このように患者体液を、カルボニル化合物除去材に接触させることにより、体液由来のカルボニル化合物が捕捉され、その生体に対する障害活性が低減したり、または無害化させたりすることができる。【００８８】  本発明のカルボニル化合物除去材と輸液または透析液との接触においても、種々の態様が考えられ、例えば、（１）カルボニル化合物除去材が充填された容器（例えば輸液バッグなど）に輸液または透析液を入れ、この中で輸液または透析液中のカルボニル化合物をトラップする方法、（２）粒状または繊維状などのカルボニル化合物除去材をカラムに充填したものに輸液または透析液を通過または循環させる方法などが挙げられる。【００８９】  処理された輸液または透析液は、必要に応じて容器中などに保存することもできる。保存する場合、容器内にカルボニル化合物除去材を含めておくことにより、保存中に生成・蓄積するカルボニル化合物をトラップすることも可能である。【００９０】  血液との接触時に用いるカルボニル化合物除去材が少ないと、透析時に患者血中のカルボニル化合物を処理することができなくなるケースが予想される。特に患者血中のカルボニル化合物の量をあらかじめ予測することは困難なので、患者に対する安全性を保障できる範囲内でできるだけ多量のカルボニル化合物除去材が活性を維持できるようにするのが効果的である。カルボニル化合物除去材の使用量は、担体への活性メチレン型トラップ剤の固定化量、または活性メチレン型トラップ剤が固定化された担体の使用量を変更して調整することができる。【００９１】  本発明のカルボニル化合物除去材は滅菌して用いることができる。滅菌方法としては、公知の滅菌法から、活性メチレン型トラップ剤や担体などの種類に適した滅菌法が選択される。滅菌法としては、例えば、高圧蒸気滅菌、ガンマ線照射滅菌、電子線照射滅菌、エチレンオキサイドガス滅菌などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。【００９２】  本発明のカルボニル化合物除去材は、体液、輸液または透析液などの被処理液に含まれるカルボニル化合物の高い除去性能を有するため、例えば、透析患者の動脈硬化症、脳血管障害および透析アミロイド症などの治療および予防、糖尿病患者の動脈硬化症、腎症、神経障害、網膜症および白内障などの治療および予防、腹膜透析患者の腹膜硬化症などの治療および予防、中枢神経疾患であるアルツハイマー病などの治療および予防などに有用である。
【実施例】
【００９３】  以下、実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。【００９４】〔含窒素複素環構造を有する化合物（活性メチレン型トラップ剤）の製造〕
（製造例１）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｐ−ヒドラジノ安息香酸２．２８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を酢酸１０ｍＬに懸濁させた。ここに、３−オキソブタン酸エチル１．９５ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を加え、内温１１８℃に昇温、５時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、５℃以下に冷却したジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で２時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン２．８４ｇ（１３．０ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率８７％）。【００９５】１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン
融点：＞２５０℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：２．２０（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，０．４Ｈ），５．５２（ｓ，０．８Ｈ），７．７５（ｂｒ，０．８Ｈ），８．００−８．３０（ｍ，４Ｈ）【００９６】（製造例２）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｐ−ヒドラジノ安息香酸２．２８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を酢酸１０ｍＬに懸濁させた。ここに、３−オキソペンタン酸メチル１．９５ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を加え、内温１１８℃に昇温、１１時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、５℃以下に冷却したジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で２時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−エチル−２−ピラゾリン−５−オン３．１０ｇ（１３．４ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率８９％）。【００９７】１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−エチル−２−ピラゾリン−５−オン
融点：２４５〜２４６℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：１．１８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），２．５２（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｓ，０．４Ｈ），５．４３（ｓ，０．８Ｈ），７．６０−８．３２（ｍ，４Ｈ），１１．９（ｂｒ，０．８Ｈ），１２，９（ｂｒ，１Ｈ）【００９８】（製造例３）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｐ−ヒドラジノ安息香酸２．２８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を酢酸１０ｍＬに懸濁させた。ここに、４−メチル−３−オキソペンタン酸エチル２．３７ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を加え、内温１１８℃に昇温、１５時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、５℃以下に冷却したジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で２時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−イソプロピル−２−ピラゾリン−５−オン２．６３ｇ（１０．７ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率７１％）。【００９９】１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−イソプロピル−２−ピラゾリン−５−オン
融点：２１８〜２２０℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：１．２２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ），２．８０（ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｓ，０．４Ｈ），５．４２（ｓ，０．８Ｈ），７．６９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．９０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），１１．９（ｂｒ，０．８Ｈ），１２，８（ｂｒ，１Ｈ）【０１００】（製造例４）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｐ−ヒドラジノ安息香酸２．２８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を酢酸１０ｍＬに懸濁させた。ここに、４，４−ジメチル−３−オキソペンタン酸エチル２．５８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を加え、内温１１８℃に昇温、１５時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、５℃以下に冷却したジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で２時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−ｔ−ブチル−２−ピラゾリン−５−オン２．７９ｇ（１０．９ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率７２％）。【０１０１】１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−ｔ−ブチル−２−ピラゾリン−５−オン
融点：＞２５０℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：２．２０（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，０．４Ｈ），５．５２（ｓ，０．６Ｈ），７．６９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ）、７．８９（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），１１．８（ｂｒ，１Ｈ）【０１０２】（製造例５）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｐ−ヒドラジノ安息香酸２．２８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）をエタノール１５ｍＬに懸濁させた。ここに、アセチレンジカルボン酸エチル２．５５ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸・１水和物０．４０ｇ（２．１ｍｍｏｌ）を加え、内温７８℃に昇温、１２時間撹拌した。この混合溶液を５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、５℃以下に冷却したジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で２時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−エトキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オン２．１７ｇ（７．９ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率５３％）。【０１０３】１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−エトキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オン
融点：２３８〜２４３℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：１．３３（ｔ，３Ｈ、Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．８８（ｓ，１．２Ｈ），４．３３（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），５．９７（ｓ，０．８Ｈ），７．９２（ｄ，２Ｈ、Ｊ＝８．９Ｈｚ），８．０５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），１２．５（ｂｒ，１Ｈ）【０１０４】（製造例６）
温度計、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに１−フェニル−３−エトキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オン０．９１ｇ（３．９ｍｍｏｌ）を水１０ｍＬに懸濁させた。ここに、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液２ｍＬを加え、内温１０℃以下で、２時間撹拌した。この混合溶液を内温１５℃に保ちながら濃塩酸でｐＨ１に調整した。生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、５℃以下に冷却したジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で２時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−フェニル−３−ヒドロキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オン０．７０ｇ（３．４ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率８８％）。【０１０５】１−フェニル−３−ヒドロキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オン
融点：２４６〜２４８℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：３．５６（ｓ，０．４Ｈ），５．９３（ｓ，０．６Ｈ），７．３２−７．７５（ｍ，５Ｈ），１２．１（ｂｒ，１Ｈ）【０１０６】（製造例７）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｐ−ヒドラジノ安息香酸１．６２ｇ（１０．８ｍｍｏｌ）をメタノール１５ｍＬに懸濁させた。ここに、プロピオール酸メチル１．５１ｇｇ（１８．０ｍｍｏｌ）を加え、内温６８℃に昇温、２時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、湿重量２．２１ｇの白色結晶を得た。続いて、この白色結晶を酢酸１５ｍＬに懸濁し、内温１１８℃に昇温、５時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン１．７８ｇ（８．７ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、ｐ−ヒドラジノ安息香酸基準の収率８１％）。【０１０７】１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン
融点：＞２５０℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：５．８９（ｓ，１Ｈ），７．５０−８．１２（ｂｒ，７Ｈ）【０１０８】（製造例８）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｍ−ヒドラジノ安息香酸２．２８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を酢酸１０ｍＬに懸濁させた。ここに、３−オキソブタン酸エチル１．９５ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を加え、内温１１８℃に昇温、５時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、５℃以下に冷却したジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で３時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（３−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン２．５６ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率７８％）。【０１０９】１−（３−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン
融点：２２０〜２２２℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：２．１４（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｓ，０．３Ｈ），５．３９（ｓ，１．１Ｈ），７．５２−８．０１（ｍ，３Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），１１．７（ｂｒ，０．６Ｈ），１３．１（ｂｒ，１Ｈ）【０１１０】（製造例９）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｏ−ヒドラジノ安息香酸塩酸塩２．１７ｇ（１１．５ｍｍｏｌ）を酢酸１０ｍＬに懸濁させた。ここに、３−オキソブタン酸エチル１．５０ｇ（１１．５ｍｍｏｌ）を加え、内温１１８℃に昇温、１９時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、５℃以下に冷却したジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で３時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（２−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン２．２５ｇ（１０．３ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率９０％）。【０１１１】１−（２−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン
融点：１５９〜１６０℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：２．１４（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｓ，０．３Ｈ），５．７４（ｓ，１．１Ｈ），７．３０−８．０１（ｍ，４Ｈ）【０１１２】（製造例１０）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｐ−ヒドラジノ安息香酸メチル１．００ｇ（６．０ｍｍｏｌ）をｏ−キシレン９０ｍＬに懸濁させた。ここに、マロン酸ジエチル１．０９ｇ（６．８ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホン酸・１水和物５．８ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加え、内温１４０℃に昇温、１５時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、ｏ−キシレン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で３時間乾燥し、白色の結晶を得た。続いて、得られた白色結晶０．８２ｇ（３．５ｍｍｏｌ）を水１０ｍＬに懸濁させた。ここに、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液２ｍＬを加え、内温１０℃以下で、２時間撹拌した。この混合溶液を内温１５℃に保ちながら濃塩酸でｐＨ１に調整した。生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、５℃以下に冷却したジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で２時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−ピラゾリジン−３，５−ジオン０．４３ｇ（２．０ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率３３％）。【０１１３】１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−ピラゾリジン−３，５−ジオン
融点：＞２５０℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：３．６７（ｓ，１．４Ｈ），６．７（ｓ，０．４Ｈ），７．７０−８．００（ｍ，４Ｈ），１０．１（ｓ，０．２Ｈ）【０１１４】（製造例１１）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｐ−ヒドラジノ安息香酸メチル２．２８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を酢酸１０ｍＬに懸濁させた。ここに、アセトンジカルボン酸メチル２．６１ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を加え、内温１０℃に昇温、１０時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、ジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で３時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メトキシカルボニルメチル−２−ピラゾリン−５−オン２．５１ｇ（７．８ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率５２％）。【０１１５】１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メトキシカルボニルメチル−２−ピラゾリン−５−オン
融点：１８５〜１８８℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：３．５９（ｓ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），５．４１（ｓ，１．４Ｈ），７．８９（ｄ，２Ｈ、Ｊ＝８．９Ｈｚ），８．３４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），１２．０（ｂｒ，０．６Ｈ），１２．８（ｂｒ，１Ｈ）【０１１６】（製造例１２）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｍ−ヒドラジノ安息香酸メチル２．２８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を酢酸１０ｍＬに懸濁させた。ここに、アセトンジカルボン酸メチル２．６１ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を加え、内温１０℃に昇温、１０時間撹拌した。この混合溶液を１５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、ジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で３時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する１−（３−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メトキシカルボニルメチル−２−ピラゾリン−５−オン２．８１ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率６８％）。【０１１７】１−（３−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メトキシカルボニルメチル−２−ピラゾリン−５−オン
融点：１８６〜１８９℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：３．５９（ｓ，２Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），５．５４（ｓ，１．１Ｈ），７．５３（ｍ，１Ｈ），７．７８（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），８．３２（ｍ，１Ｈ），１１．９（ｂｒ，０．９Ｈ），１３．０（ｂｒ，１Ｈ）【０１１８】（製造例１３）
温度計、滴下ロート、および、マグネチックスターラを装備した内容積５０ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例１で合成した１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン１．２２ｇ（５．６ｍｍｏｌ）を０．２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液５６ｍＬに懸濁させた。ここに、４．７％ピリドキサール塩酸塩水溶液２９ｍＬ（７．７ｍｍｏｌ）を加え、ｐＨ９．５を保ちながら２５℃で、３０分間撹拌した。この混合溶液に６Ｎ塩酸を滴下し、ｐＨ＜１とし、５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、ジクロロメタン１０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で３時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する４−（７−ヒドロキシ−６−メチル−１，３−ジヒドロ−フロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−イル）−５−ヒドロキシ−３−メチル−１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）ピラゾール塩酸塩２．２０ｇ（５．６ｍｍｏｌ）を得た（純度９９％、収率９９％）。【０１１９】４−（７−ヒドロキシ−６−メチル−１，３−ジヒドロ−フロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−イル）−５−ヒドロキシ−３−メチル−１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）ピラゾール塩酸塩
融点：＞２５０℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：２．２０（ｓ，３Ｈ），２．４７（ｓ，３Ｈ），５．１６（ｓ，１Ｈ），５．３２（ｍ，２Ｈ），７．９０−８．１１（ｍ，５Ｈ）【０１２０】〔担体の前処理〕
（製造例１４）
温度計、ジムロート冷却管、およびメカニカルスターラを装備した内容積２００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、セルロース系多孔質硬質ゲルであるセルロファインＣＰＢ−６０ｕｃ（チッソ製）を湿重量５０ｇ、および、５０％ジオキサン水６５ｍＬを加え、２Ｍ水酸化ナトリウム３３ｍＬを加え４０℃とした。これにエピクロロヒドリン１３ｍＬを加え、４０℃で撹拌（２５０ｒｐｍ）下、２時間反応させた。反応終了後、充分に水洗し、エポキシ化セルロースビーズを得た。エポキシ基の導入量は１６．１μｍｏｌ／ｍＬであった。なお、エポキシ基の量の測定は、１．３Ｎチオ硫酸ナトリウムで処理し、常法にしたがい、担体１ｍＬに対して希塩酸（０．０１Ｎ）で滴定により算出した。【０１２１】（製造例１５）
温度計、ジムロート冷却管、およびメカニカルスターラを装備した内容積２００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、製造例１４で調製したエポキシ化セルロースビーズ５０ｇ、および、２５％アンモニア水４２ｍＬを加え、４０℃で撹拌（２５０ｒｐｍ）下、２．５時間反応させた。反応終了後、充分に水洗し、アミノ基含有セルロースビーズを得た。アミノ基の導入量は、１５．０μｍｏｌ／ｍＬであった。なお、アミノ基の量の測定は常法にしたがい、吸着体５０ｍｇ（湿重量）に対してフェノール／エチルアルコール溶液（濃度７６％、５０μＬ）、シアン化カリウム／ピリジン溶液（０．２ｍＭ、１００μＬ）、ニンヒドリン／エチルアルコール溶液（０．２８Ｍ、５０μＬ）を添加して、１００℃、７分加熱後、５７０ｎｍの吸光度から算出した。【０１２２】（製造例１６）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに無水コハク酸３．６２ｇ（３．６ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン３６ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量２２．６ｇ（アミノ基含量：３３９μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で２４時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、１，４−ジオキサン５０ｍＬで５回洗浄し、カルボキシル基含有セルロースビーズ２２．６ｇ（湿重量）を得た。【０１２３】〔カルボニル化合物除去材の製造〕
（実施例１）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例１で得られた１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン６７８ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１００ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量５０ｇ（アミノ基含量：７５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド７１５ｍｇ（３．６０ｍｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド１００ｍＬで５回、メタノール１００ｍＬで５回、水１００ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ５０ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、１２．１μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１２４】（実施例２）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例２で得られた１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−エチル−２−ピラゾリン−５−オン１３８ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−エチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−エチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、１２．１μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１２５】（実施例３）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例３で得られた１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−イソプロピル−２−ピラゾリン−５−オン１４６ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−イソプロピル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−イソプロピル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、１１．３μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１２６】（実施例４）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例４で得られた１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−ｔ−ブチル−２−ピラゾリン−５−オン１５６ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−ｔ−ブチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−ｔ−ブチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、１２．０μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１２７】（実施例５）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例５で得られた１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−エトキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オン１６６ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−エトキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−エトキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、１０．９μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１２８】（実施例６）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例６で得られた１−フェニル−３−ヒドロキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オン１２２ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−フェニル−３−ヒドロキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−フェニル−３−ヒドロキシカルボニル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、１２μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１２９】（実施例７）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例７で得られた１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン１２２ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、９．６μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１３０】（実施例８）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例８で得られた１−（３−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン１３１ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（３−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−（３−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、１２．７μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１３１】（実施例９）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例９で得られた１−（２−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン１３１ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（２−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−（２−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、７．３μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１３２】（実施例１０）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例１０で得られた１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−ピラゾリジン−３，５−ジオン１３２ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−ピラゾリジン−３，５−ジオンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−ピラゾリジン−３，５−ジオンの固定化量は元素分析値より、７．３μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１３３】（実施例１１）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例１で得られた１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン５６６ｍｇ（２．６ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド５０ｍＬに溶解させた。ここに、アミノ基含有ビーズ（トヨパールＡＦ−Ａｍｉｎｏ−６５０Ｍ（東ソー製））を湿重量７．０ｇ（アミノ基含量：４６０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド６６０ｍｇ（３．２０ｍｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド５０ｍＬで５回、メタノール５０ｍＬで５回、水５０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたビーズ７．０ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、２３．３μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１３４】（実施例１２）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例１１で得られた１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メトキシカルボニルメチル−２−ピラゾリン−５−オン１６６ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メトキシカルボニルメチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メトキシカルボニルメチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、１２．３μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１３５】（実施例１３）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例１２で得られた１−（３−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メトキシカルボニルメチル−２−ピラゾリン−５−オン１６６ｍｇ（６００μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１４８ｍｇ（７２０μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（３−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メトキシカルボニルメチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。１−（３−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メトキシカルボニルメチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より、１２．３μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１３６】（実施例１４）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例１３で得られた４−（７−ヒドロキシ−６−メチル−１，３−ジヒドロ−フロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−イル）−５−ヒドロキシ−３−メチル−１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）ピラゾール塩酸塩１５８ｍｇ（３８８μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量１０ｇ（アミノ基含量：１５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド９６ｍｇ（４６６μｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、活性化メチレン型トラップ剤４−（７−ヒドロキシ−６−メチル−１，３−ジヒドロ−フロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−イル）−５−ヒドロキシ−３−メチル−１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）ピラゾールが固定されたセルロースビーズ１０ｇ（湿重量）を得た。前記活性メチレン型トラップ剤の固定化量は元素分析値より、２．８μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１３７】  なお、ビタミンＢ６分子の結合を妨げる基に相当するピリドキサールは、前記活性メチレン型トラップ剤を固定化した担体から溶出してきたピリドキサールの量から換算した結果、担体に結合している前記活性メチレン型トラップ剤のうち、９８ｍｏｌ％が結合したもの〔すなわち、４−（７−ヒドロキシ−６−メチル−１，３−ジヒドロ−フロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−イル）−５−ヒドロキシ−３−メチル−１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）ピラゾール〕であった。【０１３８】〔試験例１〜８〕
グリオキサールのＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４、５０μＭ）１ｍＬに実施例１、３、５、６、１０、１２、１３または１４で調製したビーズを湿重量１００ｍｇ添加し、３７℃で１時間振盪した。振盪後、上清１００μＬに２，３−ブタンジオン水溶液（５０μＭ）１００μＬ、過塩素酸水溶液（２ｍＭ）８０μＬおよびｏ−フェニレンジアミン水溶液（１％）４０μＬを加え、室温で１時間振盪した。本液を下記分析条件（高速液体クロマトグラフィー）により分析し、グリオキサールの除去率を算出した。結果を表１に示す。【０１３９】（分析条件）
使用カラム：ＯＤＳ−８０ＴＭ（東ソー製、カラム径４．６ｍｍ、カラム長２５０ｍｍ）
検出波長  ：ＵＶ  ３１５ｎｍ
移動相    ：Ｂ液初期濃度１５％を３０分掛けてＢ液濃度３０％へ変化
Ａ液：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液
Ｂ液：８０％アセトニトリルＡ液溶液
流速      ：１．０ｍＬ／分
温度      ：４０℃【０１４０】
【表１】
2006129524.tif 000006
【０１４１】〔試験例９〜１４〕
メチルグリオキサールのＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４、５０μＭ）１ｍＬに実施例１，２，１１，１２，１３または１４で調製したビーズを湿重量１００ｍｇ添加し、３７℃で１時間振盪した。振盪後、上清１００μＬに２，３−ブタンジオン水溶液（５０μＭ）１００μＬ、過塩素酸水溶液（２ｍＭ）８０μＬおよびｏ−フェニレンジアミン水溶液（１％）４０μＬを加え、室温で１時間振盪した。本液を上述した分析条件（高速液体クロマトグラフィー）により分析し、メチルグリオキサールの除去率を算出した。結果を表２に示す。【０１４２】
【表２】
2006129524.tif 000007
【０１４３】〔試験例１５〜２０および比較試験例１〜６〕
３−デオキシグルコソンのＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４、５０μＭ）１ｍＬに実施例１、２、３、６、８、１１で調製したビーズ、製造例１５および以下に示す比較例１〜５で調製したビーズを湿重量１００ｍｇ添加し、３７℃で１時間振盪した。振盪後、上清１００μＬに２，３−ブタンジオン水溶液（５０μＭ）１００μＬ、過塩素酸水溶液（２ｍＭ）８０μＬおよびｏ−フェニレンジアミン水溶液（１％）４０μＬを加え、室温で１時間振盪した。本液を上述した分析条件（高速液体クロマトグラフィー）により分析し、３−デオキシグルコソンの除去率を算出した。結果を表３に示す。【０１４４】（比較例１）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにアセトン−チオセミカルバジド１．０４ｇ（７．９４ｍｍｏｌ）、無水マレイン酸０．７８ｇ（７．９４ｍｍｏｌ）をトルエン３２ｍＬに懸濁させた。内温１１０℃に昇温、２．５時間撹拌した。この混合溶液を５℃まで冷却し、生成した結晶をグラスフィルターで濾別し、５℃以下に冷却したトルエン３０ｍＬで２回洗浄後、減圧下で２時間乾燥し、白色の結晶として、下記の物性を有する５−カルボキシメチル−２−イソプロピリデンヒドラゾノチアゾリジン−４−オン１．８１ｇ（７．９０ｍｍｏｌ）を得た（純度＞９９％、収率９９％）。【０１４５】５−カルボキシメチル−２−イソプロピリデンヒドラゾノチアゾリジン−４−オン
融点：１７８〜１７９℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）δ：１．９９（ｓ，３Ｈ），１２．１８（ｂｒ，１Ｈ）【０１４６】  次に、温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積５００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに５−カルボキシメチル−２−イソプロピリデンヒドラゾノチアゾリジン−４−オン７４０ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１００ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量５０ｇ（アミノ基含量：７５０μｍｏｌ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド７１５ｍｇ（３．６０ｍｍｏｌ）を加え、内温２８℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド１００ｍＬで５回、メタノール１００ｍＬで５回、水１００ｍＬで５回洗浄し、５−カルボキシメチル−２−イソプロピリデンヒドラゾノチアゾリジン−４−オンが固定されたセルロースビーズ５０ｇ（湿重量）を得た。官能基の導入量は元素分析値より、１０．２μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１４７】（比較例２）
温度計、およびメカニカルスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにヒドラジン１水和物３０ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１３ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１６で調製したカルボキシル基含有セルロースビーズを湿重量６．１ｇ、およびジシクロヘキシルカルボジイミド７１５ｍｇ（３．６０ｍｍｏｌ）を加え、内温２８℃で２４時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド５０ｍＬで５回、メタノール５０ｍＬで５回、水５０ｍＬで５回洗浄し、ヒドラジノカルボニル基が固定されたセルロースビーズ６．１ｇ（湿重量）を得た。官能基の導入量は元素分析値より、１０．８μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１４８】（比較例３）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにジアミノグアニジン塩酸塩１８９ｍｇ（１．５０ｍｍｏｌ）を水１０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１４で調製したエポキシ化セルロースビーズを湿重量１０．１ｇ（エポキシ基含量：１５２μｍｏｌ）、および２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液２０ｍＬを加え、内温４０℃で２４時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、水５０ｍＬで５回洗浄し、ジアミノグアニジンが固定されたセルロースビーズ１０．１ｇ（湿重量）を得た。官能基の導入量は元素分析値より、１１．９μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１４９】（比較例４）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにジアミノグアニジン塩酸塩６２．９ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ５０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１６で調製したカルボキシル基含有セルロースビーズを湿重量５０ｇ、およびジシクロヘキシルカルボジイミド１２４ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）を加え、内温４０℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド５０ｍＬで５回、メタノール５０ｍＬで５回、水５０ｍＬで５回洗浄し、ジアミノグアニジンが固定されたセルロースビーズ５０ｇ（湿重量）を得た。官能基の導入量は元素分析値より、１０．６μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１５０】（比較例５）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここにｔ−ブトキシアミノオキシ酢酸Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル１．０１ｇ（３．６９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ５０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズ湿重量５０ｇを加え、内温２８℃で２４時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ＤＭＦ５０ｍＬで５回、１，４−ジオキサン５０ｍＬで５回、水５０ｍＬで５回洗浄し、ｔ−ブトキシアミノオキシ基が固定されたセルロースビーズ５０ｇ（湿重量）を得た。【０１５１】  続いて、温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積１００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに上記により得られたｔ−ブトキシアミノオキシ基が固定されたセルロースビーズ５０ｇ（湿重量）を入れ、トリフルオロ酢酸５０ｍＬに懸濁し、内温２８℃で２４時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、水５０ｍＬで５回洗浄し、２−アミノオキシ基が固定されたセルロースビーズ５０ｇ（湿重量）を得た。官能基の導入量は元素分析値より、１２．３μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１５２】
【表３】
2006129524.tif 000008
【０１５３】〔スペーサー分子を有するカルボニル化合物除去材の製造〕
（実施例１５）
温度計、ジムロート冷却管、およびマグネチックスターラを装備した内容積２５ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、ここに製造例１で得られた１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン１５３ｍｇ（０．７ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１５ｍＬに溶解させた。ここに、ジシクロヘキシルカルボジイミド１７３ｍｇ（０．８４ｍｍｏｌ）、および１−アミノ−１３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，７，１０−トリオキサトリデカン２５０ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）を加え、室温で、２４時間撹拌した。この混合溶液をグラスフィルターで濾別、濃縮、真空ポンプにより減圧乾燥した。残渣にトリフルオロ酢酸１５ｍＬ加え、室温で１２時間撹拌し、濃縮、真空ポンプにより減圧乾燥し、ＤＭＦ１０ｍＬに溶解した。ここに製造例１４で調製したエポキシ化セルロースビーズ６９０ｍｇを加え、４０℃で撹拌（２５０ｒｐｍ）下、１２時間反応させた。反応終了した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定された１，１３−ジアミノ−４，７，１０−トリオキサトリデカンスペーサーを含有するセルロースビーズ６９０ｍｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より１１．３μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１５４】（実施例１６）
内容積２０ｍＬのフィルター付チューブを窒素置換し、ここにＮ−α，ε−ジフルオレニルメトキシカルボニル−Ｌ−リジン（ノババイオケム製）４９０ｍｇ（０．８３ｍｍｏｌ）を入れ、ジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量５．５ｇ（アミノ基含量：８３μｍｏｌ）、および２−（１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（島津製作所製）３１５ｍｇ（０．８３ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ペプチド研究所製）１０９ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン２０６ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド５ｍＬで５回洗浄した。脱保護のため、３０％となるようにピペリジンを溶解したジメチルホルムアミド５ｍＬにセルロースビーズを１５分間浸漬する操作を２回繰返し、ジメチルホルムアミド５ｍＬで５回洗浄した。リジンスペーサーを含有するセルロースビーズを得た。得られたビーズと１−（２−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン３６２ｍｇ（１．６ｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド３２０ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１１ｍＬに溶解させたものとを混合し、３７℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド１０ｍＬで５回、メタノール１０ｍＬで５回、水１０ｍＬで５回洗浄し、１−（２−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたリジンスペーサーを含有するセルロースビーズ５．２ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より１９．８μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１５５】（実施例１７）
内容積２０ｍＬのフィルター付チューブを窒素置換し、ここにＮ−α−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ−ε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン（ノババイオケム製）９４ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）を入れ、ジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量３．０ｇ（アミノ基含量：４５μｍｏｌ）、および２−（１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（島津製作所製）７６ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ペプチド研究所製）２６ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン５２ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ）を加え、この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド５ｍＬで５回洗浄した。脱保護のため、３０％となるようにピペリジンを溶解したジメチルホルムアミド５ｍＬにセルロースビーズを１５分間浸漬する操作を２回繰返し、ジメチルホルムアミド５ｍＬで５回洗浄した。こうして得られたビーズに対してさらに３回同様の操作を実施し、合計４個のリジンを導入した。得られたセルロースビーズを５％の水を含むトリフルオロ酢酸１７ｍＬに浸漬し、５時間室温で攪拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド１０ｍＬで５回洗浄し、４量体のポリリジンスペーサーを含有するセルロースビーズを得た。得られたビーズと１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン５２０ｍｇ（２．３ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド４５７ｍｇ（２．３ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶解させたものとを混合し、３７℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド１０ｍＬで５回、メタノール１０ｍＬで５回、水１０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたポリリジンスペーサーを含有するセルロースビーズ２．６ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より４３．２μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１５６】（実施例１８）
内容積１０ｍＬのフィルター付チューブを窒素置換し、ここに８−フルオレニルメトキシカルボニルアミノ−３，６−ジオキサオクタノエート（ペプチド研究所製）１０６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）を入れ、ジメチルホルムアミド４ｍＬに溶解させた。ここに、製造例１５で調製したアミノ基含有セルロースビーズを湿重量２．０ｇ（アミノ基含量：３０μｍｏｌ）、および２−（１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（島津製作所製）１０６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ペプチド研究所製）３７ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン７２ｍｇ（０．５６ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド５ｍＬで５回洗浄した。脱保護のため、３０％となるようにピペリジンを溶解したジメチルホルムアミド５ｍＬにセルロースビーズを１５分間浸漬する操作を２回繰返し、ジメチルホルムアミド５ｍＬで５回洗浄した。８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノエートスペーサーを含有するセルロースビーズを得た。得られたビーズと１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン６８ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド７２ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド４ｍＬに溶解させたものとを混合し、３７℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド１０ｍＬで５回、メタノール１０ｍＬで５回、水１０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定された８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノエートスペーサーを含有するセルロースビーズ１．９ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より１０．５μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１５７】（実施例１９）
温度計、ジムロート冷却管、およびメカニカルスターラを装備した内容積１０ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、製造例１４で調製したエポキシ化セルロースビーズ１．３８ｇ、および、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマー（末端官能基アミノ基、ジェネレーション４、アルドリッチ製）３．１７ｇを加え、４０℃で撹拌（２５０ｒｐｍ）下、３．５時間反応させた。反応終了後、充分にメタノール、水で洗浄し、ポリアミドアミンデンドリマースペーサーを含有するセルロースビーズを得た。得られたビーズと１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン８５ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド８８ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド７．５ｍＬに溶解させたものとを混合し、３７℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたポリアミドアミンスペーサーを含有するセルロースビーズ１．３８ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より２４．３μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１５８】（実施例２０）
温度計、ジムロート冷却管、およびメカニカルスターラを装備した内容積５００ｍＬの３口フラスコの内部を窒素置換し、製造例１４で調製したエポキシ化セルロースビーズ２０ｇ、および、１７％ポリエチレンイミン水溶液２６５ｍＬを加え、４０℃で撹拌（２５０ｒｐｍ）下、４８時間反応させた。反応終了後、充分に水洗し、ポリエチレンイミンスペーサーを含有するセルロースビーズを得た。得られたビーズと１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン７２０ｍｇ（３．３０ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド８１６ｍｇ（３．９６ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド４０ｍＬに溶解させたものとを混合し、３７℃で４８時間撹拌した。この混合溶液からセルロースビーズをグラスフィルターで濾別し、ジメチルホルムアミド２０ｍＬで５回、メタノール２０ｍＬで５回、水２０ｍＬで５回洗浄し、１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンが固定されたポリエチレンイミンスペーサーを含有するセルロースビーズ２０ｇ（湿重量）を得た。１−（４−ヒドロキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの固定化量は元素分析値より５３．０μｍｏｌ／ｍＬであった。【０１５９】〔試験例２１〜２７〕
３−デオキシグルコソンのＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４、５０μＭ）１ｍＬに実施例１、実施例１５〜２０で調製したビーズを添加し、３７℃で３０分間振盪した。添加したビーズは実施例１、１５〜１８については湿重量１００ｍｇ、実施例１９、２０については湿潤量１０ｍｇで行った。振盪後、上清１００μＬに２，３−ブタンジオン水溶液（５０μＭ）１００μＬ、過塩素酸水溶液（２ｍＭ）８０μＬおよびｏ−フェニレンジアミン水溶液（１％）４０μＬを加え、室温で１時間振盪した。本液を上述した分析条件（高速液体クロマトグラフィー）により分析し、３−デオキシグルコソンの除去率を算出した。結果を表４に示す。【０１６０】
【表４】
2006129524.tif 000009
【０１６１】〔試験例２８〕
実施例１および実施例１４で調製したそれぞれ２５０ｍｇのビーズに、濾過滅菌した透析患者の透析前の血漿５００μＬを加え、３７℃で１時間インキュベートした。インキュベート終了後、遠心式限外濾過膜（分画分子量５，０００）を使用して除蛋白した血漿２００μＬに０．０２５％ジニトロフェニルヒドラジン（ＤＮＰＨ）の０．５ＮＨＣｌ溶液を２００μＬ添加し、３７℃で３０分インキュベーションした。２０μＬの１Ｍアセトン水溶液を加え、３７℃で１０分インキュベーションし、その後、２００μＬヘキサンで３回洗浄した。２００μＬのオクタノールでＤＮＰＨと血漿中に含まれるカルボニル化合物との反応物を抽出し、吸光度（３６０ｎｍ）を測定することで血漿中のカルボニル化合物の残存濃度を求め、図１に示した。【０１６２】  また、別途に該血漿中のグルコース濃度（和光純薬製、グルコースＣＩＩ−テストワコーを用いた）を測定し、グルコースに由来する吸光分を差し引いたものを、該除蛋白した血漿中のカルボニル化合物の残存濃度とし図１に示した。なお、カルボニル残存率（％）とは、以下の式により規定される。
カルボニル残存率＝カルボニル化合物の残存濃度（ビーズ添加系）／カルボニル化合物の残存濃度（ビーズ無添加系）×１００【０１６３】  なお、図中のコントロールは、「カルボニル化合物の残存濃度（ビーズ無添加系）」の値のことを指す。「カルボニル化合物の残存濃度（ビーズ無添加系）」とは、ビーズを加えていない血漿のインキュベート後のカルボニル化合物の残存濃度である。【０１６４】〔試験例２９〕
実施例１および１４で調製したそれぞれ５００ｍｇのビーズに、濾過滅菌した透析患者の透析前の血漿１ｍＬを加え、３７℃で１週間インキュベートした。インキュベート終了後、遠心後の上清５０μＬに、１２Ｎ  ＨＣｌを５０μＬ添加し、１１０℃で１６時間加熱し、加水分解した後、下記分析条件（高速液体クロマトグラフィー）にてＡＧＥｓの一種であるペントシジンを定量した。３７℃でインキュベートしたときに生成するペントシジン量を図２に示した。なお、ペントシジンの形成率（％）とは、以下の式により規定される。
ペントシジン形成率＝Δペントシジン（ビーズ添加系）／Δペントシジン（ビーズ無添加系）×１００
但し、ここでいう「Δペントシジン（ビーズ添加系）」とは、実施例１および１４で調製したビーズを加えた血漿のインキュベート後のペントシジン濃度からインキュベート前のペントシジン濃度を減じた値であり、コントロールの場合は、便宜上「Δペントシジン（ビーズ無添加系）」の値のことを指す。「Δペントシジン（ビーズ無添加系）」とは、ビーズを加えていない血漿のインキュベート後のペントシジン濃度からインキュベート前のペントシジン濃度を減じた値である。【０１６５】（分析条件）
使用カラム：ＯＤＳ−８０ＴＭ（東ソー製、カラム径４．６ｍｍ、カラム長２５０ｍｍ）
励起波長  ：３３５ｎｍ
検出波長  ：３８５ｎｍ
移動相    ：Ｂ液初期濃度０％を０．５分掛けてＢ液濃度２％、１５分でＢ液濃度７％、１９分でＢ液濃度１３％、３３分でＢ液濃度３２％に変化
Ａ液：１４０ｍＭ酢酸ナトリウム水溶液（ｐＨ５．０５）
Ｂ液：６０％アセトニトリル溶液
流速      ：１．０ｍＬ／分
温度      ：４０℃【０１６６】〔試験例３０〕
腹膜透析液（ダイアニールＰＤ−４  ４．２５（バクスター製））１ｍＬに実施例１で調製したビーズを湿重量５００ｍｇ添加し、３７℃で１時間振盪した。振盪後、上清１００μＬに２，３−ブタンジオン水溶液（５０μＭ）１００μＬ、過塩素酸水溶液（２ｍＭ）８０μＬおよびｏ−フェニレンジアミン水溶液（１％）４０μＬを加え、室温で１時間振盪した。本液を試験例１〜８と同じ分析条件（高速液体クロマトグラフィー）により分析し、グリオキサール、メチルグリオキサールおよび３−デオキシグルコソンの除去率を算出した。結果を表５に示す。【０１６７】
【表５】
2006129524.tif 000010
【０１６８】  以上の結果より、本発明の除去材は、カルボニル化合物、特にかさ高いカルボニル化合物であるメチルグリオキサールや３−デオキシグルコソンについても、除去する能力が高く、含窒素複素環構造を有する化合物がスペーサー分子を介して担体に固定化されている場合においても、カルボニル化合物の除去能が高かった。また、本発明の除去材は、カルボニル化合物を含む被処理液として体液以外の輸液や透析液にも適用でき、カルボニル化合物を除去し、かつ、蛋白修飾物の生成を抑制できることが分かった。
【産業上の利用可能性】
【０１６９】  本発明により、かさ高いカルボニル化合物を効率的に除去し、優れたＡＧＥｓ形成阻害効果を発揮するカルボニル化合物除去材、ビタミンＢ６分子の結合を妨げつつ、カルボニル化合物を除去し、ＡＧＥｓ形成阻害効果を発揮するカルボニル化合物除去材、およびそれらのカルボニル化合物除去材を体液、輸液または透析液と接触させることによるカルボニル化合物の除去方法が提供される。本発明は、例えば、透析患者の動脈硬化症、脳血管障害および透析アミロイド症などの治療および予防、糖尿病患者の動脈硬化症、腎症、神経障害、網膜症および白内障などの治療および予防、腹膜透析患者の腹膜硬化症などの治療および予防、中枢神経疾患であるアルツハイマー病などの治療および予防など、医療の分野に大きく寄与するものである。
【図面の簡単な説明】
【０１７０】
【図１】濾過滅菌した透析患者の透析前の血漿を各カルボニル化合物除去材で処理したサンプルおよび処理していないサンプル（コントロール）中のカルボニル化合物の残存濃度を示す。
【図２】濾過滅菌した透析患者の透析前の血漿を各カルボニル化合物除去材で処理したサンプルおよび処理していないサンプル（コントロール）中のペントシジン形成率（％）を示す。
【図１】
2006129524.tif 000014
【図２】
2006129524.tif 000015
【国際調査報告】
2006129524.tif 000016
2006129524.tif 000017
2006129524.tif 000018
2006129524.tif 000019
2006129524.tif 000020
2006129524.tif 000021
2006129524.tif 000022