(57)【要約】【課題】有効性、安全性に優れた過敏性腸症候群（ＩＢＳ）治療剤の提供。【解決手段】ＲＣ-３０９５で代表されるボンベシン２(ＢＢ２)受容体拮抗剤が腹部症状及び便通異常の両方に対して優れた有効性を示す過敏性腸症候群（ＩＢＳ）治療剤であることが示された。従って、本発明によれば、腹部症状及び便通異常の両方に対して優れた有効性を示すボンベシン２(ＢＢ２)受容体拮抗剤を有効成分とする過敏性腸症候群（ＩＢＳ）治療剤の提供が可能となった。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ボンベシン２型（ＢＢ２）受容体拮抗剤を有効成分として含有する過敏性腸症候群（ＩＢＳ）治療剤。
【請求項２】
前記ＩＢＳが下痢型ＩＢＳである請求の範囲１記載の治療剤。
【請求項３】
前記ＩＢＳが交替型ＩＢＳである請求の範囲１記載の治療剤。
【請求項４】
前記ＩＢＳが便秘型ＩＢＳである請求の範囲１記載の治療剤。
【請求項５】
ＢＢ２受容体拮抗剤が、式（I）で示される化合物、
【化５】
2006115135.tif 000007
[式中、Meはメチルを意味する。]
式（II）で示される化合物、
【化６】
2006115135.tif 000008
[式中、Meはメチルを意味する。]
1-エチル-3-[メチレン-(3’,5’-ジ-tert-ブチル-4’-ヒドロキシフェニル)]-5-(2’-カルボキシベンジロキシ)オキシインドール、
1-(3’,4’-ジクロロベンジル)-5-ブロモ-スピロ-[イミダゾリン-4,3’-アザインドリン]-2,2’，5-トリオン、
(S)-3-(1H-インドール-3-イル)-N-[1-(5-メトキシピリジン-2-イル)シクロヘキシルメチル]-2-メチル-2-[3-(4-ニトロフェニル)ウレイド]プロピオナミド、
2-[4-(1-ナフチル)-5-フェニル-1,3-チアゾール-2-イル]ピリジン、
(2E)-3-[5-(4-ニトロフェニル)-2-フリル]-1-フェニル-2-プロペン-1-オン、
2-クロロ-5-ニトロ-N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)ベンザミド、
N-(4-クロロ-2-メチルフェニル)-2-[(3,4-ジメトキシフェニル)フェニルスルホニル]アミノ]アセタミド、及び、
N-[3-(1,3-ベンゾチアゾール-2-イル)-6-イソプロピル-4,5,6,7-テトラヒドロチエノ[2,3-c]ピリジン-2-イル]-3,5-ジメトキシベンザミド
からなる群より選択される化合物、またはその製薬学的に許容される塩である請求の範囲１乃至４のいずれか１項に記載の治療剤。
【請求項６】
ＩＢＳ治療のためのＢＢ２受容体拮抗剤の使用。
【請求項７】
ＩＢＳ治療剤を製造するためのＢＢ２受容体拮抗剤の使用。
【請求項８】
前記ＩＢＳが下痢型ＩＢＳである請求の範囲６または７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記ＩＢＳが交替型ＩＢＳである請求の範囲６または７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記ＩＢＳが便秘型ＩＢＳである請求の範囲６または７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
ＢＢ２受容体拮抗剤が、請求の範囲５記載の式（I）で示される化合物、
請求の範囲５記載の式（II）で示される化合物、
1-エチル-3-[メチレン-(3’,5’-ジ-tert-ブチル-4’-ヒドロキシフェニル)]-5-(2’-カルボキシベンジロキシ)オキシインドール、
1-(3’,4’-ジクロロベンジル)-5-ブロモ-スピロ-[イミダゾリン-4,3’-アザインドリン]-2,2’，5-トリオン、
(S)-3-(1H-インドール-3-イル)-N-[1-(5-メトキシピリジン-2-イル)シクロヘキシルメチル]-2-メチル-2-[3-(4-ニトロフェニル)ウレイド]プロピオナミド、
2-[4-(1-ナフチル)-5-フェニル-1,3-チアゾール-2-イル]ピリジン、
(2E)-3-[5-(4-ニトロフェニル)-2-フリル]-1-フェニル-2-プロペン-1-オン、
2-クロロ-5-ニトロ-N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)ベンザミド、
N-(4-クロロ-2-メチルフェニル)-2-[(3,4-ジメトキシフェニル)フェニルスルホニル]アミノ]アセタミド、及び、
N-[3-(1,3-ベンゾチアゾール-2-イル)-6-イソプロピル-4,5,6,7-テトラヒドロチエノ[2,3-c]ピリジン-2-イル]-3,5-ジメトキシベンザミド
からなる群より選択される化合物、またはその製薬学的に許容される塩である請求の範囲６乃至１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
ＢＢ２受容体拮抗剤の有効量を患者に投与することからなるＩＢＳの治療方法。
【請求項１３】
前記ＩＢＳが下痢型ＩＢＳである請求の範囲１２記載の方法。
【請求項１４】
前記ＩＢＳが交替型ＩＢＳである請求の範囲１２記載の方法。
【請求項１５】
前記ＩＢＳが便秘型ＩＢＳである請求の範囲１２記載の方法。
【請求項１６】
ＢＢ２受容体拮抗剤が、請求の範囲５記載の式（I）で示される化合物、
請求の範囲５記載の式（II）で示される化合物、
1-エチル-3-[メチレン-(3’,5’-ジ-tert-ブチル-4’-ヒドロキシフェニル)]-5-(2’-カルボキシベンジロキシ)オキシインドール、
1-(3’,4’-ジクロロベンジル)-5-ブロモ-スピロ-[イミダゾリン-4,3’-アザインドリン]-2,2’，5-トリオン、
(S)-3-(1H-インドール-3-イル)-N-[1-(5-メトキシピリジン-2-イル)シクロヘキシルメチル]-2-メチル-2-[3-(4-ニトロフェニル)ウレイド]プロピオナミド、
2-[4-(1-ナフチル)-5-フェニル-1,3-チアゾール-2-イル]ピリジン、
(2E)-3-[5-(4-ニトロフェニル)-2-フリル]-1-フェニル-2-プロペン-1-オン、
2-クロロ-5-ニトロ-N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)ベンザミド、
N-(4-クロロ-2-メチルフェニル)-2-[(3,4-ジメトキシフェニル)フェニルスルホニル]アミノ]アセタミド、及び、
N-[3-(1,3-ベンゾチアゾール-2-イル)-6-イソプロピル-4,5,6,7-テトラヒドロチエノ[2,3-c]ピリジン-2-イル]-3,5-ジメトキシベンザミド
からなる群より選択される化合物、またはその製薬学的に許容される塩である請求の範囲１２乃至１５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、過敏性腸症候群の治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
過敏性腸症候群（irritable bowel syndrome（IBS））は、炎症、腫瘍などの器質的疾患がないにもかかわらず、大腸を中心とした下部消化管の機能異常により、腹痛、腹部膨満感などの慢性症状や下痢、便秘などの便通異常、排便困難、排便逼迫などをきたす症候群であり、便通の様子から下痢型、便秘型、および下痢と便秘を交互に繰り返す交替型に分類される。IBSは外来を受診する腸疾患患者の20-50%を占める比較的頻度の高い疾患で、男女比は人種を問わず1:2と女性に優位であり、若年者に有病率が高い。その病態には心理的ストレスが強く関連するため、代表的なストレス性身体病とされ、症状改善にはストレスマネージメントが重要であると言われている。実際に、IBS患者に情動ストレスを負荷すると異常な消化管運動が顕著に亢進し、症状が悪化することが知られている。また、症状が続くことから患者の不安がつのり、さらに症状が悪化するという悪循環を形成しやすい。【０００３】
IBSの薬物療法としては、腹痛には抗コリン薬が、消化管の疼痛閾値低下の改善には三環系抗うつ薬が、便通異常の改善には下痢に対して止寫薬、整腸薬などが、便秘に対しては塩類下剤などが用いられるが対症療法に過ぎず、効果も明白ではない。下痢にも便秘にも効果の期待できる薬剤としてポリカルボフィルカルシウムがあり、腸管内でゲル状になって便の硬さを調整するが、投与初期に腹部膨満感がある上、効果発現に時間がかかり、非常に限られた効果しか発揮しない。抗不安薬や抗うつ薬はストレスにより不安や緊張が極度に増した場合に使用されるが、精神科領域での使用量よりも低用量が投薬されるため、精神症状が改善されない場合や、改善しても便通異常には効果を示さない場合がある。抗不安薬は一般的にIBSの症状のうち、下痢・腹痛には有効である場合があるが、便秘には効果が現れにくい傾向がある。【０００４】
近年注目されている薬剤として、5-HT3受容体拮抗剤であるアロセトロンおよび5-HT4受容体作動薬であるテガセロッドがあり、それぞれ下痢型および便秘型に使用される。これらの薬剤は腸管の運動を調節することで便通を改善し、その効果発現は早い。しかし、アロセトロンは腹部症状と下痢に対して40-60%の比較的高い改善率を示すものの、30-35%の患者で便秘が出現し、重篤な副作用として虚血性大腸炎（死亡例含む）を起こすことから使用に制限が設けられている（非特許文献１）。また、テガセロッドの便秘型への効果は十分とはいえず、タキフィラキシー（薬物を短時間内に反復投与して耐性が生じる現象）の懸念がある。【０００５】
ところで、生体はストレスを受けると視床下部からストレス関連物質を分泌し、下垂体前葉に作用することによって副腎皮質刺激ホルモン(adrenocorticotropic hormone(ACTH))を遊離し、血中に遊離されたACTHが副腎皮質からコルチコステロンを分泌するという視床下部―下垂体―副腎皮質系(hypothalamic-pituitary-adrenal系（HPA系）)反応をおこし、血圧上昇などの様々なストレス応答を示す。ストレス関連物質としてはコルチコトロピン放出ホルモン（corticotropin releasing hormone(CRH)）、ボンベシン(bombesin (BB))/ガストリン放出ペプチド(gastrin releasing peptide(GRP))、バソプレッシン、ニューロペプチドY、サブスタンスP、ニューロテンシンなどが知られている。これらの物質は、動物にストレスを与えると視床下部での分泌が促進される。特にCRHに関しては、IBS患者に投与するとACTH放出と大腸運動亢進を増強することが報告されている(非特許文献２)。【０００６】
ストレス関連物質の1つであるボンベシン/GRPは脳腸ペプチドであり、ボンベシン受容体を介して様々な生理作用を発現する。ボンベシン受容体はBB1、BB2、BB3/BRS3（bombesin receptor subtype-3）の3つのサブタイプに分類され、BB1およびBB2受容体に対する哺乳類の内在性リガンドとして、それぞれニューロメジンBおよびGRPが同定されている。GRPおよびBB2受容体は脳、消化管などにユビキタスに存在するが、動物にストレスを与えると扁桃体や視床下部でGRPが顕著に上昇することが報告されている（非特許文献３）。さらに、拘束ストレスを与えたラットにおいて、脳室内投与したBB2受容体拮抗剤がACTH上昇を抑制することも報告されている（非特許文献４）が、ストレス反応に対する末梢GRPおよびBB2受容体の関与についての報告はない。【０００７】
消化管機能におけるGRP/BB2受容体の役割としては、ヒトおよびウサギ摘出回腸縦走筋標本で収縮促進（非特許文献５及び６）、モルモットにおいてはバソアクティブインテスティナルペプチド(vasoactive intestinal peptide（VIP）)と共存下で水分分泌促進に働くことが報告されている（非特許文献７）。しかしながら、排便に対する作用およびBB2受容体拮抗剤を用いた検討の報告はない。
BB2受容体拮抗剤としては、式（I）で示されるペプチド性化合物（RC-3095）が知られている(非特許文献８及び特許文献１)。
【化１】
2006115135.tif 000002
[式中、Meはメチルを意味する。]【０００８】
ボンベシン/GRPは細胞増殖因子としての作用も有しており、肺癌、前立腺癌などの各種癌細胞でGRP/BB2受容体の発現が上昇していることから、RC-3095については多数の抗腫瘍試験で有効性が報告されている(非特許文献９乃至１１)。現在、各種固形癌を対象にRC-3095の臨床試験が実施されているが、本化合物の消化管機能に対する作用については報告はなく、さらにIBSに対するBB2受容体拮抗剤の有効性や使用可能性についての報告もない。【０００９】
その他のBB2受容体拮抗剤としては、例えば、式（II）で示される化合物（BIM26226、非特許文献１２及び特許文献２）、
【化２】
2006115135.tif 000003
[式中、Meはメチルを意味する。]【００１０】
1-エチル-3-[メチレン-(3’,5’-ジ-tert-ブチル-4’-ヒドロキシフェニル)]-5-(2’-カルボキシベンジロキシ)オキシインドール（CP-70030；非特許文献１３及び特許文献２）、
1-(3’,4’-ジクロロベンジル)-5-ブロモ-スピロ-[イミダゾリン-4,3’-アザインドリン]-2,2’,5-トリオン(CP-75998；非特許文献１３及び特許文献２）、
(S)-3-(1H-インドール-3-イル)-N-[1-(5-メトキシピリジン-2-イル)シクロヘキシルメチル]-2-メチル-2-[3-(4-ニトロフェニル)ウレイド]プロピオナミド（PD176252；非特許文献１４及び特許文献３）や特許文献１〜８等に記載の化合物が報告されている。しかしながら、これらの文献にもIBSに対するBB2受容体拮抗剤の有効性や使用可能性について報告されていない。【００１１】
また、(2E)-3-[5-(4-ニトロフェニル)-2-フリル]-1-フェニル-2-プロペン-1-オン（CAS Registry No.38898-76-9；非特許文献１５）は、抗菌作用を有する化合物の合成中間体として報告されているが、BB2受容体拮抗作用及びIBSに対する有効性や使用可能性について報告されていない。
また、
2-クロロ-5-ニトロ-N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)-ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)ベンズアミド（CAS Registry No.393834-75-8）、
N-(4-クロロ-2-メチルフェニル)-2-[(3,4-ジメトキシフェニル)(フェニルスルホニル)アミノ]アセトアミド（CAS Registry No.335208-47-4）、
、及び、N-[3-(1,3-ベンゾチアゾール-2-イル)-6-イソプロピル-4,5,6,7-テトラヒドロチエノ[2,3-c]ピリジン-2-イル]-3,5-ジメトキシベンザミド（CAS Registry No.486396-92-3）
はカタログ化合物として公知であるが、BB2受容体拮抗作用及びIBSに対する有効性や使用可能性について報告されていない。【００１２】
【非特許文献１】「アメリカン・ジャーナル・オブ・ガストロエンテロロジー(American Journal of Gastroenterology)」、（米国）、2003年、第98巻、p.750-758
【非特許文献２】「ガット(Gut)」、(英国）、1998年、第42巻、p.845-849
【非特許文献３】「ザ・ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス(The Journal of Neuroscience)」、（米国）、1998年、第18巻、p.4758-4766
【非特許文献４】「ライフ・サイエンス（Life Sciences）」、（オランダ）、2002年、第70巻、p.2953-2966
【非特許文献５】「ガストロエンテロロジー(Gastroenterology)」、(米国)、1991年、第100巻、p.980-985
【非特許文献６】「ニューロガストロエンテロロジー・アンド・モティリティ(Neurogastroenterology and Motility)」、(英国）、1997年、第9巻、p.265-270
【非特許文献７】「アナルス・オブ・ザ・ニュー・ヨーク・アカデミー・オブ・サイエンス(Annals of the New York Academy of Science)」、（米国）、2000年、第921巻、p.420-424
【非特許文献８】「ザ・プロステート(The Prostate)」、（米国）、1994年、第25巻、p.29-38
【非特許文献９】「キャンサー(Cancer)」、（米国）、1998年、第83巻、p.1335-1343
【非特許文献１０】「ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キャンサー（British Journal of  Cancer）」、2000年、第83巻、p.906-913,
【非特許文献１１】「キャンサー(Cancer)」、（米国）、2000年、第88巻、p.1384-1392
【非特許文献１２】「レギュラトリー・ペプタイズ(Regulatory Peptides)」、（オランダ）、1994年、第53巻、p.165-173
【非特許文献１３】「バイオオーガニック・アンド・メディシナル・ケミストリー・レターズ(Bioorganic ＆ Medicinal Chemistry Letters)」、（オランダ）、1992年、第2巻、p.333-338
【非特許文献１４】「バイオオーガニック・アンド・メディシナル・ケミストリー・レターズ(Bioorganic ＆ Medicinal Chemistry Letters)」、（オランダ）、1998年、第8巻、p.2589-2594
【非特許文献１５】「イル・ファルマコ(Il Farmaco)」、（オランダ）、2001年、第56巻、第10号、p.919-927
【特許文献１】国際公開第９２／０９６２６号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９１／９１０２７４６号パンフレット
【特許文献３】国際公開第９２／０７８３０号パンフレット
【特許文献４】国際公開第９８／０７７１８号パンフレット
【特許文献５】特開平７−２５８０８１号公報
【特許文献６】国際公開第００／０９１１５号パンフレット
【特許文献７】国際公開第０２／４０４６９号パンフレット
【特許文献８】国際公開第０２／４０４７５号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
上述のように既存のＩＢＳ治療剤は、腹部症状及び便通異常の両方に対して十分な有効性を示さないこと、また、安全性の面でも十分に満足できるものではないことから、有効性、安全性に優れたＩＢＳ治療剤の提供が切望されている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
このような状況下、本発明者等は、腹部症状及び便通異常の両方に対して優れた有効性を示すＩＢＳ治療剤の提供を目的として鋭意研究した。その結果、意外にもＲＣ-３０９５をはじめとするＢＢ２受容体拮抗剤がストレス便排出モデルで便通異常に有効であることを見出した。さらに鋭意研究した結果、ＲＣ-３０９５が腹筋収縮反応を指標とした大腸拡張刺激による腹痛モデルで腹部症状に有効であることを見出し、ＲＣ-３０９５が腹部症状及び便通異常の両方に対して優れた有効性を示すＩＢＳ治療剤であることを知見して本発明を完成した。
即ち、本発明によれば、
（１）ボンベシン２型（ＢＢ２）受容体拮抗剤を有効成分として含有する過敏性腸症候群（ＩＢＳ）治療剤。
（２）前記ＩＢＳが下痢型ＩＢＳである（１）記載の治療剤。
（３）前記ＩＢＳが交替型ＩＢＳである（１）記載の治療剤。
（４）前記ＩＢＳが便秘型ＩＢＳである（１）記載の治療剤。
（５）ＢＢ２受容体拮抗剤が、式（I）で示される化合物、
【化３】
2006115135.tif 000004
[式中、Meはメチルを意味する。]
式（II）で示される化合物、
【化４】
2006115135.tif 000005
[式中、Meはメチルを意味する。]
1-エチル-3-[メチレン-(3’,5’-ジ-tert-ブチル-4’-ヒドロキシフェニル)]-5-(2’-カルボキシベンジロキシ)オキシインドール、
1-(3’,4’-ジクロロベンジル)-5-ブロモ-スピロ-[イミダゾリン-4,3’-アザインドリン]-2,2’，5-トリオン、
(S)-3-(1H-インドール-3-イル)-N-[1-(5-メトキシピリジン-2-イル)シクロヘキシルメチル]-2-メチル-2-[3-(4-ニトロフェニル)ウレイド]プロピオナミド、
2-[4-(1-ナフチル)-5-フェニル-1,3-チアゾール-2-イル]ピリジン、
(2E)-3-[5-(4-ニトロフェニル)-2-フリル]-1-フェニル-2-プロペン-1-オン、
2-クロロ-5-ニトロ-N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)ベンザミド、
N-(4-クロロ-2-メチルフェニル)-2-[(3,4-ジメトキシフェニル)フェニルスルホニル]アミノ]アセタミド、及び、
N-[3-(1,3-ベンゾチアゾール-2-イル)-6-イソプロピル-4,5,6,7-テトラヒドロチエノ[2,3-c]ピリジン-2-イル]-3,5-ジメトキシベンザミド
からなる群より選択される化合物、またはその製薬学的に許容される塩である（１）乃至（４）のいずれか１項に記載の治療剤。
（６）ＩＢＳ治療のためのＢＢ２受容体拮抗剤の使用。
（７）ＩＢＳ治療剤を製造するためのＢＢ２受容体拮抗剤の使用。
（８）前記ＩＢＳが下痢型ＩＢＳである（６）または（７）のいずれか１項に記載の使用。
（９）前記ＩＢＳが交替型ＩＢＳである（６）または（７）のいずれか１項に記載の使用。
（１０）前記ＩＢＳが便秘型ＩＢＳである（６）または（７）のいずれか１項に記載の使用。
（１１）ＢＢ２受容体拮抗剤が、（５）記載の式（I）で示される化合物、
（５）記載の式（II）で示される化合物、
1-エチル-3-[メチレン-(3’,5’-ジ-tert-ブチル-4’-ヒドロキシフェニル)]-5-(2’-カルボキシベンジロキシ)オキシインドール、
1-(3’,4’-ジクロロベンジル)-5-ブロモ-スピロ-[イミダゾリン-4,3’-アザインドリン]-2,2’，5-トリオン、
(S)-3-(1H-インドール-3-イル)-N-[1-(5-メトキシピリジン-2-イル)シクロヘキシルメチル]-2-メチル-2-[3-(4-ニトロフェニル)ウレイド]プロピオナミド、
2-[4-(1-ナフチル)-5-フェニル-1,3-チアゾール-2-イル]ピリジン、
(2E)-3-[5-(4-ニトロフェニル)-2-フリル]-1-フェニル-2-プロペン-1-オン、
2-クロロ-5-ニトロ-N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)ベンザミド、
N-(4-クロロ-2-メチルフェニル)-2-[(3,4-ジメトキシフェニル)フェニルスルホニル]アミノ]アセタミド、及び、
N-[3-(1,3-ベンゾチアゾール-2-イル)-6-イソプロピル-4,5,6,7-テトラヒドロチエノ[2,3-c]ピリジン-2-イル]-3,5-ジメトキシベンザミド
からなる群より選択される化合物、またはその製薬学的に許容される塩である（６）乃至（１０）のいずれか１項に記載の使用。
（１２）ＢＢ２受容体拮抗剤の有効量を患者に投与することからなるＩＢＳの治療方法。
（１３）前記ＩＢＳが下痢型ＩＢＳである（１２）記載の方法。
（１４）前記ＩＢＳが交替型ＩＢＳである（１２）記載の方法。
（１５）前記ＩＢＳが便秘型ＩＢＳである（１２）記載の方法。
（１６）ＢＢ２受容体拮抗剤が、（５）記載の式（I）で示される化合物、
（５）記載の式（II）で示される化合物、
1-エチル-3-[メチレン-(3’,5’-ジ-tert-ブチル-4’-ヒドロキシフェニル)]-5-(2’-カルボキシベンジロキシ)オキシインドール、
1-(3’,4’-ジクロロベンジル)-5-ブロモ-スピロ-[イミダゾリン-4,3’-アザインドリン]-2,2’，5-トリオン、
(S)-3-(1H-インドール-3-イル)-N-[1-(5-メトキシピリジン-2-イル)シクロヘキシルメチル]-2-メチル-2-[3-(4-ニトロフェニル)ウレイド]プロピオナミド、
2-[4-(1-ナフチル)-5-フェニル-1,3-チアゾール-2-イル]ピリジン、
(2E)-3-[5-(4-ニトロフェニル)-2-フリル]-1-フェニル-2-プロペン-1-オン、
2-クロロ-5-ニトロ-N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)ベンザミド、
N-(4-クロロ-2-メチルフェニル)-2-[(3,4-ジメトキシフェニル)フェニルスルホニル]アミノ]アセタミド、及び、
N-[3-(1,3-ベンゾチアゾール-2-イル)-6-イソプロピル-4,5,6,7-テトラヒドロチエノ[2,3-c]ピリジン-2-イル]-3,5-ジメトキシベンザミド
からなる群より選択される化合物、またはその製薬学的に許容される塩である（１２）乃至（１５）のいずれか１項に記載の方法。
が提供される。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のＩＢＳ治療剤は、ＢＢ２受容体に拮抗することにより優れたＩＢＳの治療効果を発揮するものである。既存のＩＢＳ治療剤が腹部症状及び便通異常の両方に対して十分な有効性を示さないのに対し、本発明のＩＢＳ治療剤は腹部症状及び便通異常の両方に対して有効性を示すことから、有効性の高いＩＢＳ治療剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】実施例２における血漿中GRP濃度の結果を示す。
【図２】実施例３におけるRC-3095投与群の結果を示す。
【図３】実施例３における2-[4-(1-ナフチル)-5-フェニル-1,3-チアゾール-2-イル]ピリジン（化合物１）投与群の結果を示す。
【図４】実施例３における(2E)-3-[5-(4-ニトロフェニル)-2-フリル]-1-フェニル-2-プロペン-1-オン（化合物２）投与群の結果を示す。
【図５】実施例３における2-クロロ-5-ニトロ-N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)ベンザミド（化合物３）投与群の結果を示す。
【図６】実施例３におけるN-(4-クロロ-2-メチルフェニル)-2-[(3,4-ジメトキシフェニル)フェニルスルホニル]アミノ]アセタミド（化合物４）投与群の結果を示す。
【図７】実施例３におけるN-[3-(1,3-ベンゾチアゾール-2-イル)-6-イソプロピル-4,5,6,7-テトラヒドロチエノ[2,3-c]ピリジン-2-イル]-3,5-ジメトキシベンザミド・塩酸塩（化合物５）投与群の結果を示す。
【図８】実施例４におけるRC-3095投与群の結果を示す。
【図９】実施例５におけるRC-3095投与群の結果を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明について詳述する。
本明細書において、「過敏性腸症候群」（以下ＩＢＳという）とは下痢型ＩＢＳ、便秘型ＩＢＳ、交替型ＩＢＳを包含する。本発明の治療剤の適応症として好ましくは下痢型ＩＢＳまたは交替型ＩＢＳであり、特に好ましくは下痢型ＩＢＳである。
「便通異常」とは便秘及び／または下痢を意味する。
「腹部症状」とは腹痛、腹部膨満感及び／または腹部不快感を意味する。
「ＢＢ２受容体拮抗剤」とは作動薬であるＧＲＰと拮抗的に作用してＢＢ２受容体を介した作用を阻害する化合物である。このようなＢＢ２受容体拮抗剤としては、ＩＢＳの便通異常及び／または腹部症状等の症状に治療効果を有する化合物であれば特に限定はされない。好ましくは、便通異常及び腹部症状の両方に治療効果を有する化合物である。また、別の態様として、好ましくは、後述の実施例１に記載の試験法によるBB2受容体拮抗活性において、50%結合阻害濃度が１０μＭ以下である化合物であり、より好ましくは３μＭ以下である化合物であり、さらに好ましくは１μＭ以下である化合物である。例えば具体的にはＲＣ-３０９５、ＢＩＭ２６２２６、ＣＰ−７００３０、ＣＰ−７５９９８、ＰＤ１７６２５２やそれらの製薬学的に許容される塩及び前記特許文献１〜８に開示されたＢＢ２受容体拮抗剤、化合物1乃至５等が挙げられ、好ましくはＲＣ-３０９５、化合物1乃至５であり、より好ましくはＲＣ-３０９５である。これらのＢＢ２受容体拮抗剤は購入、または、公知の製法、後述する製造例に記載の方法若しくは当業者により自明な方法により容易に入手可能である。また、本発明は、これらのＢＢ２受容体拮抗剤の１種又は２種以上を併用する治療剤を包含する。【００１８】
上記ＢＢ２受容体拮抗剤は、酸付加塩又は塩基との塩を形成する場合もあり、かかる塩が製薬学的に許容され得る塩である限りにおいて本発明に包含される。具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸や、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マイレン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等の有機酸との酸付加塩、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リジン、オルニチン等の有機塩基との塩やアンモニウム塩等が挙げられる。また上記ＢＢ２受容体拮抗剤またはそれらの製薬学的に許容される塩は、各種の水和物や溶媒和物であってもよく、更に、それらの結晶多形の物質をも包含する。これらのＢＢ２受容体拮抗剤の製薬学的に許容される塩は当業者が通常採用しうる造塩法によって容易に製造することができる。【００１９】
また、上記ＢＢ２受容体拮抗剤には、幾何異性体、互変異性体、光学異性体などの各種の立体異性体の混合物や単離されたものが含まれる。これらの異性体は、公知の方法、例えば、抽出、沈澱、分画クロマトグラフィー、分別結晶化、再結晶等により単離、精製することができる。また、光学異性体は適切な塩と再結晶する分別結晶化やカラムクロマトグラフィー等の常法により分割することができる。【００２０】
また、上記ＢＢ２受容体拮抗剤は、薬理学的に許容されるプロドラッグも含まれる。薬理学的に許容されるプロドラッグとは、加溶媒分解により又は生理学的条件下でBB2受容体拮抗剤へと変換される化合物である。プロドラッグを形成する基としては、「プログレス・イン・メディシン（Progress in Medicine）」1985年、5巻、p.2157-2161や「医薬品の開発」、廣川書店、1990年、第７巻、分子設計、p.163-198に記載の基が挙げられる。これらのＢＢ２受容体拮抗剤のプロドラッグは当業者が通常採用しうる方法により容易に製造することができる。【００２１】
ＢＢ２受容体拮抗剤を有効成分として含有する製剤は通常製剤化に用いられる担体や賦形剤、その他の添加剤を用いて調製される。
投与は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等による経口投与、あるいは静注、筋注等の注射剤、坐剤、経皮剤、経鼻剤、吸入剤等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。投与量は症状、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが、通常、経口投与の場合、成人１日当たり0.001 mg/kg乃至100 mg/kg程度であり、これを１回で、あるいは２〜４回に分けて投与する。また、症状によって静脈内投与される場合は、通常、成人１回当たり0.0001 mg/kg乃至10 mg/kgの範囲で１日に１回乃至複数回投与される。また、吸入の場合は、通常、成人１回当たり0.0001 mg/kg乃至1 mg/kgの範囲で１日に１回乃至複数回投与される。【００２２】
本発明による経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、一つ又はそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な賦形剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な添加剤、例えばステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤やカルボキシメチルスターチナトリウム等の崩壊剤、溶解剤、溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要により糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性コーティング剤で被膜してもよい。【００２３】
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な溶剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な溶剤以外に可溶化剤、湿潤剤、懸濁化剤のような補助剤、甘味剤、矯味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。【００２４】
非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性又は非水性の液剤、懸濁剤、乳剤を含む。水性の溶剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水性の溶剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート80（商品名）等がある。このような組成物は、さらに等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解剤、溶解補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。また、これらは無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解、懸濁して使用することもできる。【００２５】
吸入剤や経鼻剤等の経粘膜剤は固体、液体、半固体状のものが用いられ、従来公知の方法に従って製造することができる。例えば、ラクトースや澱粉のような賦形剤や、更に、pH調整剤、防腐剤、界面活性剤、滑沢剤、安定剤や増粘剤等が適宜添加されていてもよい。投与は、適当な吸入又は吹送のためのデバイスを使用することができる。例えば、計量投与吸入デバイス等の公知のデバイスや噴霧器を使用して、化合物を単独で又は処方された混合物の粉末として、もしくは医薬的に許容し得る担体と組み合わせて溶液又は懸濁液として投与することができる。乾燥粉末吸入器等は、単回又は多数回の投与用のものであってもよく、乾燥粉末又は粉末含有カプセルを利用することができる。あるいは、適当な駆出剤、例えば、クロロフルオロアルカン、ヒドロフルオロアルカン又は二酸化炭素等の好適な気体を使用した加圧エアゾールスプレー等の形態であってもよい。
【実施例】
【００２６】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。【００２７】
（試験方法）
実施例１：BB2受容体拮抗活性
BB2受容体結合実験は、ヒト前立腺癌由来PC-3細胞から調製した膜標品を用いて実施した。PC-3細胞を5%ウシ胎仔血清を含むRPMI-1640培地を用いて培養後、以下の方法で膜標品を調製した。トリプシン処理によってはがした細胞に50 mMトリス-塩酸バッファー（pH 7.4、0.2 mg/mlトリプシンインヒビターおよび0.2 mg/mlベンザミジンを含む）を加え、ポリトロンでホモジナイズした。細胞懸濁液を1,500 rpmで10分間遠心分離し、得られた上清を37,000 rpmで1時間超遠心した。沈殿を上記バッファーで0.4 mg蛋白/mlになるように懸濁し、-80℃で保存した。
BB2受容体結合実験を以下の方法で実施し、被験化合物の受容体拮抗活性を算出した。96穴アッセイプレートに膜標品50 μl、アッセイバッファー（20 mM HEPES-HBSS、0.1% ウシ血清アルブミンおよび0.1 mg/mlバシトラシンを含む、pH 7.4）50 μl、125I[Tyr4]ボンベシン（0.075 nM）およびジメチルスルホキシドに溶解した被験化合物2 μlを添加し、室温で2時間インキュベーションした。非特異的結合は1 μMのボンベシンを用いて測定した。インキュベーション終了後、0.5%ポリエチレンイミンに浸しておいたワットマンGF/Bフィルター上に反応液をフィルトレーションした。フィルター上の放射能活性はマイクロプレートシンチレーションカウンター（トップカウント、パーキンエルマー社）を用いて測定した。その結果、RC-3095、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４および化合物５の50%結合阻害濃度は、それぞれ20、504、1330、342、398および383 nMであった。【００２８】
実施例２：血漿中GRP濃度測定
拘束ストレス負荷時の血漿中GRP濃度を測定するために、非絶食下の雄性ddY系マウスを拘束ストレスケージ（KN-469、夏目製作所）内に挿入し、拘束開始から5、10、15、30、45、60、90、120、180分後に、断頭によって血液を採取した。血漿は血液を3,000 rpmで15分間遠心分離することにより得た。血漿中GRP濃度は、ガストリン放出ペプチド（Gastrin  Releasing Peptide (GRP)） EIA キット（セティカンパニーリミテッド社）を用いて測定した。
その結果、図１に示すようにBB2受容体の内在性リガンドであるGRPの血漿中濃度が、拘束ストレス負荷により上昇することが示された。このことから、ストレス負荷時に末梢で放出されたGRPがIBSの病態に関与することが確認できた。【００２９】
実施例３：拘束ストレス便排出モデル
RC-3095は生理食塩液に、化合物１，化合物３および化合物５は5%エタノール+5%クレモホールを含む生理食塩液に、化合物２および化合物４は20%プロピレングリコール+20% Tween 80を含む注射用水に溶解して使用した。非絶食下の雄性ddY系マウスに被験化合物を腹腔内投与直後、動物を拘束ストレスケージ（商品名：KN-469、夏目製作所）内に挿入した。拘束開始から1時間後までに排泄した便の個数を測定した。正常群は個別ケージに入れ、同様に1時間で排泄した便の個数を測定した。
その結果、図２に示すようにRC-3095は用量依存的な便排出の抑制作用を示し、50%阻害用量は5.2 mg/kgであった。さらに、化合物１は10 mg/kgで約83%の便排出抑制作用を示した（図３）。また、化合物２、化合物３、化合物４および化合物５の拘束ストレス便排出に対する50%阻害用量は、それぞれ34.3、19.0、13.5および15.6 mg/kgであった（図４〜７）。このことから、BB2受容体拮抗剤が下痢型IBSの便通症状改善作用を示すことが確認できた。【００３０】
実施例４：恐怖条件付けストレス（Conditioned-fear stress, CFS）便排出モデル
非絶食下の雄性スプラグ・ダウレー(Sprague-Dawley)ラットを用いた。電極グリッドを床にはめ込んだ電撃装置（17 x 17 x 39 cm、商品名：CB2000型、オーハラ(O'Hara)株式会社）にラットを入れ、3秒間の警告音の後、2.5-mAの電流を1回１分あたり5秒間、計15回加え、電撃時には40 W電球3個による光照射を行い条件付けを行った。正常群は同様のプロトコールで測定装置に入れたものの、電撃は加えなかった。約24時間後、ラットに被験化合物を腹腔内投与した直後、再度電撃装置に入れ、3秒間の警告音および5秒間の光照射を30分間加えるCFS負荷を行った。CFS負荷開始から30分後までに排泄した便の湿重量を測定した。なお、ラットを測定装置に入れた直後の排便は測定値から除外した。
その結果、図８に示すようにRC-3095は用量依存的な便排出の抑制作用を示し、10 mg/kg投与で有意な抑制作用を示した。このことから、BB2受容体拮抗剤が下痢型IBSの便通症状改善作用を示すことが確認できた。【００３１】
実施例５：腹筋収縮反応を指標とした大腸拡張刺激による腹痛モデル
非絶食下の雄性ウィスター(Wistar)系ラットを用いた。ペントバルビタール麻酔下で、筋電図用電極 （商品名：M-1.5I、スターメディカル社) を外腹斜傾筋に縫い付けた。電極コードは皮下を通して後頭部付近から体外に出し、ベルクロを加工して作製した防護ジャケットで保護した。実験は手術後5日以上経過してから実施した。
実験当日、エーテル軽麻酔下で5-6 cm長のラテックスバルーンをラット肛門より挿入し、バルーン終端が肛門から2 cmの位置になるように調節した。バルーンから続くカテーテルは尾根部にテープで固定し、三方活栓を介して圧トランスジューサーおよび水を満たしたプラスチックびんに接続した。プラスチックびんは、モーターを使用した装置を用いて一定の速度で高さを上昇できるようにし、プラスチックびんの高さを上昇させることにより、ラットの結腸−直腸を拡張させた。バルーン内圧信号はひずみ圧力用アンプにて増幅した。ケージ (23.5 × 19 × 19 cm)中でエーテル麻酔から回復させた後、結腸−直腸拡張を実施した。結腸−直腸拡張圧を0 mmHgから連続的に増加させていくことにより、ある時点でラットが腹痛のため腹部を縮める行動を起こす。その結果腹筋が収縮し、筋電図活動が突然大きく増加する。この時の圧力を腹痛反射閾値とした。筋電図活動は生体電気用アンプ （商品名：AB-621G、日本光電）で増幅し、データ記録インターフェイス（商品名：1401plus, ケンブリッジ・エレクトロニック・デザイン社（Cambridge Electronic Design）; ケンブリッジ(Cambridge)、英国）により記録した。結腸−直腸拡張は実験終了まで4分間隔で繰り返し実施した。化合物は投与前値をとり終えてから2分後に投与し、投与後60分まで結腸−直腸拡張を繰り返した。化合物投与前の閾値を100%とし、投与後60分までの閾値の曲線下面積(AUC)を算出した。
その結果、図９に示すようにRC-3095は用量依存的に腹痛閾値上昇作用を示し、３、10 mg/kg投与で有意な上昇作用を示した。このことから、BB2受容体拮抗剤が腹痛改善作用を有することが確認できた。【００３２】
（製造例）
以下、本発明の治療剤の有効成分に係る化合物の製造例を示す。なお、化合物１は新規物質である。また、製造例において使用される原料化合物には新規な物質も含まれており、そのような化合物の製造法を参考製造例として説明する。【００３３】
参考製造例１
3-(ピペリジン-2-イル)ピリジン487 mgのピリジン溶液(10 mL)に氷冷下4-(アセチルアミノ)ベンゼンスルホニルクロリド 842 mgを加え、室温で2時間攪拌した。溶媒を減圧下濃縮して得られた残渣に酢酸エチルを加えた後、水、1Ｍ塩酸、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧下濃縮して得られた残渣をクロロホルム：メタノール(98:2)を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)アセタミドを黄色泡状物として1.00 g得た。
FAB-MS (Pos)： 360 [M+H]+。【００３４】
参考製造例２
N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)アセタミド1.0g のメタノール溶液(10 mL)にメタンスルホン酸1.81 mLを加え、室温で一晩攪拌した。反応液を氷水に注ぎ、炭酸水素ナトリウムで中和後、酢酸エチルを加え分液操作を行った。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮して4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}アニリンを淡黄色結晶として695 mg得た。
FAB-MS (Pos)： 318 [M+H]+。【００３５】
参考製造例３
N-(3,4-ジメトキシフェニル)ベンゼンスルホンアミド1.99 gのN,N-ジメチルホルムアミド溶液(30 mL)に氷冷下水素化ナトリウム296 mgを加え、室温で30分攪拌後、ブロモ酢酸エチル0.75 mLを加えて2時間攪拌した。反応液を氷水に注ぎ、1Ｍ塩酸を加えて酸性にした後酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧下濃縮した。得られた残渣を酢酸エチル：n-ヘキサン (1:2) を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、エチル  [(3,4-ジメトキシフェニル)(フェニルスルホニル)アミノ]アセテートを薄い黄色油状物として2.47 g得た。
FAB-MS (Pos)： 380 [M+H]+。【００３６】
参考製造例４
エチル [(3,4-ジメトキシフェニル)(フェニルスルホニル)アミノ]アセテート  2.48 gのテトラヒドロフラン溶液(20 mL)に1Ｍ水酸化ナトリウム水溶液20 mLを加え、室温で2時間攪拌した。1Ｍ塩酸を加え酸性とした後、クロロホルムを加え分液操作を行い、有機層を飽和食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧下濃縮して[(3,4-ジメトキシフェニル)(フェニルスルホニル)アミノ]酢酸を淡黄色泡状物として2.28 g得た。
FAB-MS (Neg)： 350 [M-H]-。【００３７】
製造例１（化合物１）
2-ブロモ-1-(1-ナフチル)-2-フェニルエタノン 340 mgの2-プロパノール溶液 (20 mL) にピリジン-2-カルボチオアミド塩酸塩183 mgと炭酸カルシウム209 mgを室温で加え、一晩加熱還流した。反応液に1Ｍ塩酸を加えて酸性にした後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧下濃縮した。得られた残渣を酢酸エチル：n-ヘキサン (1:9) を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し2-[4-(1-ナフチル)-5-フェニル-1,3-チアゾール-2-イル]ピリジン227 mg を無色固体として得た。
FAB-MS (Pos)： 365 [M+H]+。【００３８】
製造例２（化合物３）
4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}アニリン318 mgのピリジン溶液(10 mL)に2-クロロ-5-ニトロベンゾイルクロリド220 mgを加え室温で一晩攪拌した。50℃で4時間攪拌した後、さらに2-クロロ-5-ニトロベンゾイルクロリド220 mgを加え、50℃で2時間攪拌した。酢酸エチルと水を加え分液操作を行い、有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮して得られた残渣をクロロホルム：メタノール(98:2) を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム：メタノール＝98:2）にて精製し2-クロロ-5-ニトロ-N-(4-{[2-(ピリジン-3-イル)ピペリジン-1-イル]スルホニル}フェニル)ベンザミドを無色結晶として426 mg得た。
FAB-MS (Pos)： 501 [M+H]+。【００３９】
製造例３（化合物４）
[(3,4-ジメトキシフェニル)(フェニルスルホニル)アミノ]酢酸352 mgのジクロロメタン溶液(10 mL)に4-クロロ-2-メチルアニリン142 mg、1−ヒドロキシベンゾトリアゾール203 mg、1−エチル−3−（3−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩288 mgを加え室温で一晩攪拌した。クロロホルムと水を加え分液操作を行い、有機層を飽和食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧下濃縮した。得られた残渣をクロロホルムを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、N-(4-クロロ-2-メチルフェニル)-2-[(3,4-ジメトキシフェニル)フェニルスルホニル]アミノ]アセタミドを無色結晶として287 mg得た。
FAB-MS (Neg)： 473 [M-H]-。
【００４０】
下記表１に化合物1乃至5の構造式を示す。
尚、表中、Ｍｅはメチルを意味する。また、構造式中にＨＣｌが記載されている場合、その化合物が塩酸塩であることを示す。【００４１】
【表１】
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【産業上の利用可能性】
【００４２】
上述のようにRC-3095で代表されるBB2受容体拮抗剤が腹部症状及び便通異常の両方に対して優れた有効性を示すＩＢＳ治療剤であることが示された。従って、本発明によれば、腹部症状及び便通異常の両方に対して優れた有効性を示すボンベシン２（BB2）受容体拮抗剤を有効成分とするＩＢＳ治療剤の提供が可能となった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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