(57)【要約】肥満細胞等の脱顆粒反応及び／又はサイトカイン産生を制御し得る薬剤の提供。細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質、具体的には亜鉛イオン、亜鉛イオンキレーター、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質、あるいは亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質を有効成分として含有する脱顆粒反応制御剤並びにサイトカイン産生制御剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、脱顆粒反応制御剤。
【請求項２】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、請求項１記載の脱顆粒反応制御剤。
【請求項３】
亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、請求項２記載の脱顆粒反応制御剤。
【請求項４】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、請求項１記載の脱顆粒反応制御剤。
【請求項５】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項４記載の脱顆粒反応制御剤。
【請求項６】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１記載の脱顆粒反応制御剤。
【請求項７】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項６記載の脱顆粒反応制御剤。
【請求項８】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１記載の脱顆粒反応制御剤。
【請求項９】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項８記載の脱顆粒反応制御剤。
【請求項１０】
細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の脱顆粒反応制御剤。
【請求項１１】
細胞が肥満細胞である、請求項１０記載の脱顆粒反応制御剤。
【請求項１２】
細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、サイトカイン産生制御剤。
【請求項１３】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、請求項１２記載のサイトカイン産生制御剤。
【請求項１４】
亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、請求項１３記載のサイトカイン産生制御剤。
【請求項１５】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、請求項１２記載のサイトカイン産生制御剤。
【請求項１６】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１５記載のサイトカイン産生制御剤。
【請求項１７】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１２記載のサイトカイン産生制御剤。
【請求項１８】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１７記載のサイトカイン産生制御剤。
【請求項１９】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１２記載のサイトカイン産生制御剤。
【請求項２０】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１９記載のサイトカイン産生制御剤。
【請求項２１】
細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１２〜２０のいずれか１項に記載のサイトカイン産生制御剤。
【請求項２２】
細胞が肥満細胞である、請求項２１記載のサイトカイン産生制御剤。
【請求項２３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の脱顆粒反応制御剤又は請求項１２〜２２のいずれか１項に記載のサイトカイン産生制御剤を含む、アレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療薬。
【請求項２４】
細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、アレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療薬。
【請求項２５】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、請求項２４記載の予防・治療薬。
【請求項２６】
亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、請求項２５記載の予防・治療薬。
【請求項２７】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、請求項２４記載の予防・治療薬。
【請求項２８】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項２７記載の予防・治療薬。
【請求項２９】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項２４記載の予防・治療薬。
【請求項３０】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項２９記載の予防・治療薬。
【請求項３１】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項２４記載の予防・治療薬。
【請求項３２】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項３１記載の予防・治療薬。
【請求項３３】
細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項２４〜３２のいずれか１項に記載の予防・治療薬。
【請求項３４】
細胞が肥満細胞である、請求項３３記載の予防・治療薬。
【請求項３５】
インビトロで、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御することを含む、脱顆粒反応を制御する方法。
【請求項３６】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンによって行われるものである、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンキレーターによって行われるものである、請求項３５記載の方法。
【請求項３９】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、請求項３５記載の方法。
【請求項４１】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、請求項３５記載の方法。
【請求項４３】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項３５〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
細胞が肥満細胞である、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
インビトロで、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御することを含む、サイトカイン産生を制御する方法。
【請求項４７】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンによって行われるものである、請求項４６記載の方法。
【請求項４８】
亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンキレーターによって行われるものである、請求項４６記載の方法。
【請求項５０】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、請求項４６記載の方法。
【請求項５２】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項５１記載の方法。
【請求項５３】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、請求項４６記載の方法。
【請求項５４】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項４６〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
細胞が肥満細胞である、請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することを含む、脱顆粒反応制御作用を有する化合物のスクリーニング方法。
【請求項５８】
細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項５７記載のスクリーニング方法。
【請求項５９】
細胞が肥満細胞である、請求項５８記載のスクリーニング方法。
【請求項６０】
細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することを含む、サイトカイン産生制御作用を有する化合物のスクリーニング方法。
【請求項６１】
細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項６０記載のスクリーニング方法。
【請求項６２】
細胞が肥満細胞である、請求項６１記載のスクリーニング方法。
【請求項６３】
有効量の細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を投与することを含む、脱顆粒反応制御方法。
【請求項６４】
脱顆粒反応制御剤を製造するための、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質の使用。
【請求項６５】
有効量の細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を投与することを含む、サイトカイン産生制御方法。
【請求項６６】
サイトカイン産生制御剤を製造するための、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質の使用。
【請求項６７】
有効量の細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を投与することを含む、アレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療方法。
【請求項６８】
アレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療薬を製造するための、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は脱顆粒反応及びサイトカイン産生を制御し得る薬剤に関し、特に肥満細胞等の、化学伝達物質を遊離し得る細胞及び／又はサイトカイン産生能を有する細胞における脱顆粒反応及び／又はサイトカイン産生を制御することによって、該細胞が関与するアレルギー性疾患や各種炎症性疾患を治療し得る薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在のアレルギー治療薬としては、抗ヒスタミン剤や免疫抑制効果のあるステロイド剤等が挙げられる。抗ヒスタミン剤は肥満細胞等のエフェクター細胞より遊離されたヒスタミンが、標的細胞に発現する特異的な受容体との会合を抑制するものである。しかしながら、エフェクター細胞より産生される化学伝達物質にはヒスタミンだけではなくセロトニンやプロスタグランジン等があり、抗ヒスタミン剤はこれらの化学伝達物質には効果が期待できない。一方、ステロイド剤は強力な免疫抑制や抗炎症作用があり、アレルギー治療薬としては頻繁に使用されているが、易感染症等副作用が多く観察されることが知られている。
肥満細胞（マスト細胞）はヒスタミン等の化学伝達物質やサイトカインを含有する顆粒を有し、花粉症や気管支喘息、アトピー性皮膚炎等のアレルギー性疾患や、自己免疫疾患を含む各種炎症性疾患においては、肥満細胞における脱顆粒反応が、重要な役割を有していることが明らかになっている。従って脱顆粒反応を抑制することがこれらの疾患の治療方法として有効である。
肥満細胞の膜を安定化することによって脱顆粒反応による化学伝達物質の放出を抑制する薬剤としてインタール（クロモグリク酸ナトリウム）やリザベン（トラニスト）等が挙げられ、抗アレルギー剤として既に臨床で用いられている。また、脱顆粒はＩｇＥ受容体を介するシグナル伝達によって起こる。かかる過程がカルシウムイオン依存的であることから、細胞内のカルシウム濃度を制御することによっても脱顆粒反応を制御する試みが為されているが、カルシウムイオンは生体内のあらゆる場面で重要な役割を担っており、細胞内カルシウム濃度を制御することは他の生体機能に影響を及ぼす恐れがある。
脱顆粒反応や抗アレルギー剤に関する従来技術はＴｕｒｎｅｒ  Ｈ．＆  Ｋｉｎｅｔ  ＪＰ．Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＩｇＥ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆｃ  ｅｐｓｉｌｏｎＲＩ．Ｎａｔｕｒｅ  ４０２，Ｂ２４−３０（１９９９）及びＢｌａｎｋ  Ｕ，Ｒｉｖｅｒａ  Ｊ．Ｔｈｅ  ｉｎｓ  ａｎｄ  ｏｕｔｓ  ｏｆ  ＩｇＥ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍａｓｔ−ｃｅｌｌ  ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ．ＴＲＥＮＤＳ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２５，２６６−２７３（２００４）を参照することができる。肥満細胞からのサイトカイン産生に関する従来技術はＢｕｒｄ  ＰＲ，Ｒｏｇｅｒｓ  ＨＷ，Ｇｏｒｄｏｎ  ＪＲ，Ｍａｒｔｉｎ  ＣＡ，Ｊａｙａｒａｍａｎ  Ｓ，Ｗｉｌｓｏｎ  ＳＤ，Ｄｖｏｒａｋ  ＡＭ，Ｇａｌｌｉ  ＳＪ，Ｄｏｒｆ  ＭＥ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ３−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎｄ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌｓ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＩｇＥ  ａｎｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７０，２４５−２５７（１９８９）及びＳｏｎｇ  ＪＳ，Ｈａｌｅｅｍ−Ｓｍｉｔｈ  Ｈ，Ａｒｕｄｃｈａｎｄｒａｎ  Ｒ，Ｇｏｍｅｚ  Ｊ，Ｓｃｏｔｔ  ＰＭ，Ｍｉｌｌ  ＪＦ，Ｔａｎ  ＴＨ，Ｒｉｖｅｒａ  Ｊ．Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｖａｖ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ＩＬ−６  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｓｔ  ｃｅｌＩｓ  ｂｙ  ａ  Ｒａｃ／ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｋｉｎａｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６３，８０２−８１０（ｌ９９９）を参照することができる。
【発明の開示】
【０００３】
本発明は、新規な脱顆粒反応制御剤並びにサイトカイン産生制御剤の提供を目的とし、具体的には肥満細胞等からのヒスタミン等の化学伝達物質の放出を制御し得る薬剤及び／又はサイトカイン産生を制御し得る薬剤の提供を目的とする。さらに本発明は、当該脱顆粒反応制御剤及び／又はサイトカイン産生制御剤のアレルギー性疾思や炎症性疾患への適用を目的とする。
本発明者らは、上記課題に鑑み、鋭意検討を行った結果、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御することにより、脱顆粒反応やサイトカイン産生を制御できることを見出した。さらに亜鉛イオン濃度の制御による脱顆粒反応の制御が可逆的であることを確認して本発明を完成するに至った。すなわち本発明は以下の通りである。
〔１〕細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、脱顆粒反応制御剤。
〔２〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、上記〔１〕記載の脱顆粒反応制御剤。
〔３〕亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、上記〔２〕記載の脱顆粒反応制御剤。
〔４〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、上記〔１〕記載の脱顆粒反応制御剤。
〔５〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔４〕記載の脱顆粒反応制御剤。
〔６〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１〕記載の脱顆粒反応制御剤。
〔７〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔６〕記載の脱顆粒反応制御剤。
〔８〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１〕記載の脱顆粒反応制御剤。
〔９〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔８〕記載の脱顆粒反応制御剤。
〔１０〕細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の脱顆粒反応制御剤。
〔１１〕細胞が肥満細胞である、上記〔１０〕記載の脱顆粒反応制御剤。
〔１２〕細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、サイトカイン産生制御剤。
〔１３〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、上記〔１２〕記載のサイトカイン産生制御剤。
〔１４〕亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、上記〔１３〕記載のサイトカイン産生制御剤。
〔１５〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、上記〔１２〕記載のサイトカイン産生制御剤。
〔１６〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔１５〕記載のサイトカイン産生制御剤。
〔１７〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１２〕記載のサイトカイン産生制御剤。
〔１８〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔１７〕記載のサイトカイン産生制御剤。
〔１９〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１２〕記載のサイトカイン産生制御剤。
〔２０〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔ｌ９〕記載のサイトカイン産生制御剤。
〔２１〕細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔１２〕〜〔２０〕のいずれかに記載のサイトカイン産生制御剤。
〔２２〕細胞が肥満細胞である、上記〔２１〕記載のサイトカイン産生制御剤。
〔２３〕上記〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の脱顆粒反応制御剤又は上記〔１２〕〜〔２２〕のいずれかに記載のサイトカイン産生制御剤を含む、アレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療薬。
〔２４〕細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、アレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療薬。
〔２５〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、上記〔２４〕記載の予防・治療薬。
〔２６〕亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、上記〔２５〕記載の予防・治療薬。
〔２７〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、上記〔２４〕記載の予防・治療薬。
〔２８〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔２７〕記載の予防・治療薬。
〔２９〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔２４〕記載の予防・治療薬。
〔３０〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔２９〕記載の予防・治療薬。
〔３１〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔２４〕記載の予防・治療薬。
〔３２〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔３１〕記載の予防・治療薬。
〔３３〕細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔２４〕〜〔３２〕のいずれかに記載の予防・治療薬。
〔３４〕細胞が肥満細胞である、上記〔３３〕記載の予防・治療薬。
〔３５〕インビトロで、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御することを含む、脱顆粒反応を制御する方法。
〔３６〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンによって行われるものである、上記〔３５〕記載の方法。
〔３７〕亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、上記〔３６〕記載の方法。
〔３８〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンキレーターによって行われるものである、上記〔３５〕記載の方法。
〔３９〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔３８〕記載の方法。
〔４０〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、上記〔３５〕記載の方法。
〔４１〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔４０〕記載の方法。
〔４２〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、上記〔３５〕記載の方法。
〔４３〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔４２〕記載の方法。
〔４４〕細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔３５〕〜〔４３〕のいずれかに記載の方法。
〔４５〕細胞が肥満細胞である、上記〔４４〕記載の方法。
〔４６〕インビトロで、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御することを含む、サイトカイン産生を制御する方法。
〔４７〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンによって行われるものである、上記〔４６〕記載の方法。
〔４８〕亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、上記〔４７〕記載の方法。
〔４９〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンキレーターによって行われるものである、上記〔４６〕記載の方法。
〔５０〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔４９〕記載の方法。
〔５１〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、上記〔４６〕記載の方法。
〔５２〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔５１〕記載の方法。
〔５３〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、上記〔４６〕記載の方法。
〔５４〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔５３〕記載の方法。
〔５５〕細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔４６〕〜〔５４〕のいずれかに記載の方法。
〔５６〕細胞が肥満細胞である、上記〔５５〕記載の方法。
〔５７〕細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することを含む、脱顆粒反応制御作用を有する化合物のスクリーニング方法。
〔５８〕細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔５７〕記載のスクリーニング方法。
〔５９〕細胞が肥満細胞である、上記〔５８〕記載のスクリーニング方法。
〔６０〕細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することを含む、サイトカイン産生制御作用を有する化合物のスクリーニング方法。
〔６１〕細胞が、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び血小板からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔６０〕記載のスクリーニング方法。
〔６２〕細胞が肥満細胞である、上記〔６１〕記載のスクリーニング方法。
〔６３〕有効量の細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を投与することを含む、脱顆粒反応制御方法。
〔６４〕脱顆粒反応制御剤を製造するための、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質の使用。
〔６５〕有効量の細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を投与することを含む、サイトカイン産生制御方法。
〔６６〕サイトカイン産生制御剤を製造するための、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質の使用。
〔６７〕有効量の細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を投与することを含む、アレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療方法。
〔６８〕アレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療薬を製造するための、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質の使用。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、肥満細胞からの抗原刺激依存的な化学伝達物質（β−ヘキソアミニダーゼ）の遊離（脱顆粒）に及ぼす亜鉛イオンキレーター（ＴＰＥＮ）の作用を示す図である。
図２は、肥満細胞からの抗原刺激依存的な化学伝達物質（β−へキソアミニダーゼ）の遊離（脱顆粒）に及ぼす亜鉛イオンキレーター（ＴＰＥＮ）の作用が亜鉛イオンの強制導入により回復できることを示す図である。
図３は、肥満細胞のサイトカイン産生に及ぼす亜鉛イオンキレーター（ＴＰＥＮ）の作用を示す図である。上段はＩＬ−６産生に及ぼす影響を、下段はＴＮＦ−α産生に及ぼす影響を示す。
図４は、Ｉ型アレルギー（受動的皮膚アナフィラキシー）応答に及ぼす亜鉛イオンキレーター（ＴＰＥＮ）の作用を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
本発明において「亜鉛イオン濃度の制御」とは亜鉛イオンの細胞内での濃度（量）を増加させる、あるいは減少させるという文言通りの意味に加え、最終的に細胞内で亜鉛イオン濃度が増減することによって生じる現象と同様な現象を誘導することができる作用をも意味し、そのような場合には細胞内での亜鉛イオンの濃度の多少には拘朿されない。本発明において、亜鉛イオン濃度の制御の対象となる細胞は、ヒスタミン等の炎症性の化学伝達物質を遊離し得る細胞及び／又はサイトカイン産生能を有する細胞であって、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞、血小板等が例示される。好ましくは肥満細胞である。本明細書では制御の対象となる細胞を便宜上「対象細胞」と称することもある。
本発明において「サイトカイン」とは、一般に過剰に産生される、あるいは放出されると、種々のアレルギー性疾患や自己免疫疾患を含む各種炎症性疾患を誘導し得るものであって、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、単球遊走促進因子−１（ＭＣＰ−１）、ＭＩＰＩβ、ＭＩＰＩα、白血病阻害因子（ＬＩＦ）等が挙げられる。
「細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質」としては「亜鉛イオン」、「亜鉛イオンキレーター」、「亜鉛イオノフォア」、「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」、「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」等が挙げられるが、「亜鉛イオン」や「亜鉛イオノフォア」はそれを添加することにより対象細胞内の亜鉛イオン濃度を直接増加させることができ、一方、「亜鉛イオンキレーター」はそれを添加することにより対象細胞内の亜鉛イオン濃度を直接低減することができる。「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」や「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」は、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって、あるいは亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって、対象細胞の脱顆粒反応及び／サイトカイン産生において細胞内亜鉛イオン濃度の増減によってもたらされるのと同様な現象を誘導することができる。すなわち、亜鉛イオンの作用を間接的に制御することができる。「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」あるいは「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」において、発現あるいは機能を促進する方向に調節する物質であれば当該細胞の亜鉛イオンに対する応答性をより高め、発現あるいは機能を抑制する方向に調節する物質であれば当該細胞の亜鉛イオンに対する応答性をより抑制することができる。すなわち、本発明において「制御」とは、正及び負のいずれの調節をも意味する。
「亜鉛イオン」は亜鉛イオノフォアによって対象細胞内に導入される。すなわち亜鉛イオンは亜鉛イオノフォアとの錯体の形で対象細胞内に導入される。亜鉛イオノフォアとしては当分野で通常用いられている、好ましくは市販されている種々の化合物が挙げられる。亜鉛ピリチオン、複素環アミン、ジチオカルバメート、ビタミン類等が例示される。
「亜鉛イオンキレーター」とは、対象細胞内で亜鉛イオンと錯体を形成することによって細胞内から亜鉛イオンを除去することができる物質であって、例えば、２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）、Ｎ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）等が挙げられる。いずれも商業的に入手可能である。また、本発明の脱顆粒反応制御剤、サイトカイン産生制御剤、本発明のアレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療薬（以下、単に予防・治療薬と称することもある）に有効成分として含められる亜鉛イオン濃度を制御し得る物質としての亜鉛イオンキレーターの量は、それぞれ細胞内での亜鉛イオン濃度の制御が可能な範囲で適宜決定される。また、含める亜鉛イオンキレーターは１種類であっても２種類以上であってもよい。２種類以上含める場合にはその種類に応じて配合量を適宜設定する。
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」とは亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を結果的に調節することができればその作用機序は特に限定されず、遺伝子レベルでの調節であってもタンパク質レベルでの調節であってもよい。遺伝子レベルでの調節としては、転写調節、遺伝子発現調節等が挙げられる。タンパク質レベルでの調節としては、代謝調節、リン酸化、脱リン酸化、糖付加、脂質付加、亜鉛との配位結合、分解、ユビキチン化、アセチル化等が挙げられる。「亜鉛イオン要求性タンパク質」は、対象細胞の脱顆粒反応及び／又はサイトカイン産生においてその機能発現に亜鉛が必要なタンパク質であって、例えば亜鉛フィンガーを有するタンパク質、ＲＩＮＧフィンガーを有するタンパク質、ＬＩＭドメインを有するタンパク質、ＰＨＤ亜鉛フィンガーを有するタンパク質等が挙げられる。亜鉛フィンガーは、システインやヒスチジンといったアミノ酸が亜鉛と配位することによって初めて高次構造を有することができるユニークな核酸結合能を有するモチーフであり、亜鉛フィンガーを有するタンパク質としては、例えば、上皮−間葉転換と呼ばれる現象（ヒトやその他の生物の初期発生における体の形作りや、傷口の治癒・癌の転移等の際に、通常密に結合している細胞同士が隣の細胞との接着を解除し可動性を獲得し他へ移動する現象）のマスターレギュレーターである転写因子Ｓｎａｉｌ、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１等が例示される。ＲＩＮＧフィンガーは、亜鉛フィンガーの変形ともいえ、タンパク質間の相互作用に関与しているものと示唆されており、ＲＩＮＧフィンガーを有するタンパク質としては、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｇａｓｅ  Ｅ３）活性を有するものや、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅｓ  Ｅ２）、ＴＲＡＦ６（ＴＮＦαのシグナル伝達分子）との結合を示すものが報告されている。ＬＩＭドメインは、６つのシステインと１つのヒスチジンの位置が保存された６０アミノ酸からなり、亜鉛フィンガーとよく似た構造をとるもののＤＮＡ結合能は知られていない。ＰＫＣとの結合に介在するドメインとしても機能する。ＬＩＭドメインを有するタンパク質としては、細胞骨格制御に関与するＰａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ等が例示される。ＰＨＤ亜鉛フィンガーは、クロマチンを媒介した転写調節に関与することが示唆される核タンパクである亜鉛フィンガー様ドメインであり、ＤＮＡ結合能を有するものと予測されている。ＰＨＤ亜鉛フィンガーを有するタンパク質としては、ヒストンのアセチル化に関与するＪａｄｅ−１等が例示される。
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」は、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量３０００未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物およびその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物およびその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量３０００以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、およびこれらを組み合わせたものなどが挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。具体的には、亜鉛イオン要求性タンパク質Ｓｎａｉｌは、ＴＧＦ−β又はＦＧＦを通してＭＡＰＫによりその発現が調節される（Ｐｅｉｎａｄｏ，Ｈ．，Ｑｕｉｎｔａｎｉｌｌａ，Ｍ．＆  Ｃａｎｏ，Ａ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｅｔａ−１  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｓｎａｉｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８，２１１１３−２３（２００３））。また、Ｓｎａｉｌは亜鉛イオントランスポーターであるＬＩＶ１（後述）により活性化される（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｓ．，Ｍｉｙａｇｉ，Ｃ．，Ｆｕｋａｄａ，Ｔ．，Ｋａｇａｒａ，Ｎ．，Ｃｈｅ，Ｙ．−Ｓ．＆  Ｈｉｒａｎｏ，Ｔ．Ｚｉｎｃ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ＬＩＶＩ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｚｅｂｒａｆｉｓｈ  ｇａｓｔｒｕｌａ  ｏｒｇａｎｉｚｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２９，２９８−３０２（２００４））。他の亜鉛イオン要求性タンパク質として例示されるＲａｆ１、ＧＥＦ−Ｈ１、ＰＫＣα、フォスファターゼ、メタロチオネインについてはそれぞれＪｉｒａｋｕｌａｐｏｒｎ  Ｔ，Ｍｕｓｌｉｎ  ＡＪ．Ｃａｔｉｏｎ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  Ｒａｆ−１  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，２７８０７−１５（２００４）、Ｋｒｅｎｄｅｌ  Ｍ，Ｚｅｎｋｅ  ＦＴ，Ｂｏｋｏｃｈ  ＧＭ．Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｆａｃｔｏｒ  ＧＥＦ−Ｈ１  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｎ  ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ４，２９４−３０１（２００２）、Ｋｏｒｉｃｈｎｅｖａ  Ｉ，Ｈｏｙｏｓ  Ｂ，Ｃｈｕａ  Ｒ，Ｌｅｖｉ  Ｅ，Ｈａｍｍｅ���ｌｉｎｇ  Ｕ．Ｚｉｎｃ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｒｏｍ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ａｓ  ｔｈｅ  ｃｏｍｍｏｎ  ｅｖｅｎｔ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｌｉｐｉｄ  ｓｅｃｏｎｄ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｏｒ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，４４３２７−３１（２００２）、Ｈａａｓｅ  Ｈ，Ｍａｒｅｔ  Ｗ．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｚｉｎｃ  ｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｉｎｓｕｌｉｎ／ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−１  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２９１，２８９−２９８（２００３）、生化学辞典（第３版），（株）東京化学同人発行，第１３９３頁（１９９８）に詳細が記載されている。ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ、Ｊａｄｅ−１についてはそれぞれＫｏｂａｙａｓｈｉ  Ｎ，Ｋａｄｏｎｏ  Ｙ，Ｎａｉｔｏ  Ａ，Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ  Ｋ，Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｔ，Ｔａｎａｋａ  Ｓ，Ｉｎｏｕｅ  Ｊ．Ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＲＡＦ６−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｃｌａｒｉｆｉｅｓ  ｉｔｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊ．２０，１２７１−１２８０（２００１）、Ｂｒｏｗｎ  ＭＣ，Ｐｅｒｒｏｔｔａ  ＪＡ，Ｔｕｒｎｅｒ  ＣＥ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＬＩＭ３  ａｓ  ｔｈｅ  ｐｒｉｎｃｉｐａｌ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ  ｏｆ  ｐａｘｉｌｌｉｎ  ｆｏｃａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｔｉｆ  ｏｎ  ｐａｘｉｌｌｉｎ  ｄｉｒｅｃｔｉｎｇ  ｖｉｎｃｕｌｉｎ  ａｎｄ  ｆｏｃａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１３５，１１０９−１１２３（１９９６）、Ｓａｄｌｅｒ  Ｉ，Ｃｒａｗｆｏｒｄ  ＡＷ，ＭｉｃｈｅＩｓｅｎ  ＪＷ，Ｂｅｃｋｅｒｌｅ  ＭＣ．Ｚｙｘｉｎ  ａｎｄ  ｃＣＲＰ：ｔｗｏ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ  ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１１９，１５７３−１５８７（１９９２）、Ｐａｎｃｈｅｎｋｏ  ＭＶ，Ｚｈｏｕ  ＭＩ，Ｃｏｈｅｎ  ＨＴ．ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ  ｐａｒｔｎｅｒ  Ｊａｄｅ−１  ｉｓ  ａ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏ−ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，５６０３２−５６０４１（２００４）に詳細が記載されている。さらにＳＱＳＴＭ１及びＨＤＡＣについてはそれぞれＪｏｕｎｇ  Ｉ，Ｓｔｒｏｍｉｎｇｅｒ  ＪＬ，Ｓｈｉｎ  Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｐｈｏｓｐｈｏｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｌｉｇａｎｄ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐ５６１ｃｋ  ＳＨ２  ｄｏｍａｉｎ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９３，５９９１−５９９５（１９９６）及びＫａｗａｇｕ��ｈｉ  Ｙ，Ｋｏｖａｃｓ  ＪＪ，ＭｃＬａｕｒｉｎ  Ａ，Ｖａｎｃｅ  ＪＭ，Ｉｔｏ  Ａ，Ｙａｏ  ＴＰ．Ｔｈｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ＨＤＡＣ６  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ａｇｇｒｅｓｏｍｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔｒｅｓｓ．Ｃｅｌｌ  １１５，７２７−７３８（２００３）にそれぞれ詳細が記載されている。
「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」とは亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を結果的に調節することができればその作用機序は特に限定されず、遺伝子レベルでの調節であってもタンパク質レベルでの調節であってもよい。遺伝子レベルでの調節としては、転写調節、遺伝子発現調節等が挙げられる。タンパク質レベルでの調節としては、代謝調節、リン酸化、脱リン酸化、糖付加、脂質付加、亜鉛との配位結合、分解、ユビキチン化、アセチル化等が挙げられる。「亜鉛イオントランスポーター」としては、例えば、ＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類（ＢＡＢ７０８４８、ｈＺｉｐ４、ＢＩＧＭ１０３、ＫＩＡＡ００６２、ＫＩＡＡ１２６５、ｈＬｉｖ−１、ＡＡＨ０８８５３、ｈＫＥ４、ＸＰ＿２０８６４９、ｈＺＩＰ１、ｈＺＩＰ２、ｈＺＩＰ３、ＢＡＡ９２１００、ＢＡＣ０４５０４等）、ヒトＣＤＦ類（ｈＺｎｔ−５、ｈＺｎｔ−７、ｈＺｎｔ−１、ｈＺｎｔ−６、ｈＺｎｔ−３、ｈＺｎｔ−２、ｈＺｎｔ−８、ｈＺｎｔ−４、ｈＺｎｔ−３、ｈＺｎｔ−９等）等が挙げられる。ＬＩＶ１は、当初はエストロゲン制御を受ける乳がんタンパク質として同定され、最近になってＬＺＴ（ＺＩＰ亜鉛イオントランスポーターのＬＩＶ−１サブファミリー）と称されるＺＩＰ亜鉛イオントランスポーターサブファミリー（Ｚｒｔ−、Ｉｒｔ様タンパク質）に属し（Ｔａｙｌｏｒ，Ｋ．Ｍ．＆  Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，Ｒ．Ｉ．Ｔｈｅ  ＬＺＴ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ；ｔｈｅ  ＬＩＶ−１  ｓｕｂｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｚｉｎｃ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １６１１，１６−３０（２００３））、亜鉛イオントランスポーターとして機能することが明らかになった（Ｔａｙｌｏｒ，Ｋ．Ｍ．，Ｍｏｒｇａｎ，Ｈ．Ｅ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ａ．，Ｈａｄｌｅｙ，Ｌ．Ｊ．＆  Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，Ｒ．Ｉ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＬＩＶ−１，ｔｈｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈａｔ  ｂｅｌｏｎｇｓ  ｔｏ  ａ  ｎｅｗ  ｓｕｂｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｚｉｎｃ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３７５，５１−９（２００３））。他にＣＤＦ（ｃａｔｉｏｎ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ）等が挙げられる。
例えば、亜鉛イオントランスポーターであるＬＩＶ１は、ＳＴＡＴ３により発現調節を受ける（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｓ．，Ｍｉｙａｇｉ，Ｃ．，Ｆｕｋａｄａ，Ｔ．，Ｋａｇａｒａ，Ｎ．，Ｃｈｅ，Ｙ．−Ｓ．＆  Ｈｉｒａｎｏ，Ｔ．Ｚｉｎｃ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ＬＩＶＩ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｚｅｂｒａｆｉｓｈ  ｇａｓｔｒｕｌａ  ｏｒｇａｎｉｚｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２９，２９８−３０２（２００４））。
「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」は、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量３０００未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物およびその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物およびその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量３０００以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、およびこれらを組み合わせたものなどが挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。
亜鉛イオントランスポーターであるＬＩＶ１は亜鉛イオン要求性タンパク質であるＳｎａｉｌの活性（特にレプレッサー活性）を増強することから（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｓ．，Ｍｉｙａｇｉ，Ｃ．，Ｆｕｋａｄａ，Ｔ．，Ｋａｇａｒａ，Ｎ．，Ｃｈｅ，Ｙ．−Ｓ．＆  Ｈｉｒａｎｏ，Ｔ．Ｚｉｎｃ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ＬＩＶＩ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｚｅｂｒａｆｉｓｈ  ｇａｓｔｒｕｌａ  ｏｒｇａｎｉｚｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２９，２９８−３０２（２００４））、本発明における「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」の一例として以下のものが挙げられる。
（１）下記ａ）〜ｄ）のいずれかに記載のＤＮＡ
ａ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質（ＬＩＶ１タンパク質）をコードするＤＮＡ
ｂ）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ（ＬＩＶ１遺伝子）
ｃ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質（ＬＩＶ１に類似するタンパク質）をコードしたＤＮＡ
ｄ）配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ
（２）下記ａ）〜ｄ）のいずれかに記載のＤＮＡが挿入されたベクター
ａ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするＤＮＡ
ｂ）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ
ｃ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質をコードしたＤＮＡ
ｄ）配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ
（３）下記ａ）〜ｄ）のいずれかに記載のＤＮＡによってコードされたタンパク質
ａ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするＤＮＡ
ｂ）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ
ｃ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質をコードしたＤＮＡ
ｄ）配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ
（４）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡを標的配列としたアンチセンスオリゴヌクレオチド
（５）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡの一部と同一又は類似する配列を有する二本鎖ＲＮＡ
（６）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質に対する抗体
（７）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質と会合し、その機能を調節する物質（天然物、非天然物を含む）
（１）〜（３）は亜鉛イオン要求性タンパク質であるＳｎａｉｌの発現及び／又は機能を正に調節する（発現を増強する、及び／又は機能を活性化する）物質であり、（４）及び（５）はＳｎａｉｌの発現及び／又は機能を負に調節する（発現を減少させる、及び／又は機能を抑制する）物質である。
ＬＩＶ１タンパク質の調製は、当業者に周知の各種方法によって行うことが可能である。例えば、配列番号１、３又は５に記載の塩基配列からなるＤＮＡ（ＬＩＶ１遺伝子）が挿入されたベクターを保持した形質転換体にタンパク質を生産させ、精製することによって調製できる。使用するベクターはタンパク質生産に用いる翻訳系により適宜選択することができる。またＬＩＶ１は、乳房、前立腺、脳下垂体、脳等のホルモン系組織に発現することが知られている（Ｔａｙｌｏｒ，Ｋ．Ｍ．＆  Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，Ｒ．Ｉ．Ｔｈｅ  ＬＺＴ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ；ｔｈｅ  ＬＩＶ−１  ｓｕｂｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｚｉｎｃ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １６１１，１６−３０（２００３））。抗ＬＩＶ１タンパク質抗体を周知方法で調製し、該抗体でアフィニティカラムを作製すれば、ＬＩＶ１を発現する細胞抽出物からＬＩＶ１タンパク質を精製することができる。
ＬＩＶ１に類似するタンパク質は亜鉛イオン要求性タンパク質（例えばＳｎａｉｌ）の活性を調節し得るタンパク質であって、例として、配列番号２、４又は６に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１、３又は５に記載の塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡによってコードされるタンパク質を挙げることができる。
ＬＩＶ１に類似するタンパク質の調製は、例えば、ＬＩＶ１をコードする塩基配列を利用してハイブリダイゼーションを行い、得られた相同性の高いＤＮＡによって形質転換体を作製し、該形質転換体に所望のタンパク質を生産させる方法をとることができる。相同性の高いＤＮＡを得る方法の一例として、配列番号１、３又は５に記載された塩基配列の一部をプローブとし、ヒトやヒト以外の脊椎動物の細胞等からストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする方法を挙げることができる。
上記ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、当業者であれば、適宜選択することができる。一例を示せば２５％ホルムアミド、より厳しい条件では５０％ホルムアミド、４×ＳＳＣ、５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．０、１０×デンハルト溶液、２０μｇ／ｍＬ変性サケ精子ＤＮＡを含むハイブリダイゼーション溶液中、４２℃で一晩プレハイブリダイゼーションを行った後、標識したプローブを添加し、４２℃で一晩保温することによりハイブリダイゼーションを行う。その後の洗浄における洗浄液及び温度条件は「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度で、より厳しい条件としては「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度で、さらに厳しい条件としては「０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度で実施することができる。このようにハイブリダイゼーションの洗浄の条件が厳しくなるほどプローブ配列と高い相同性を有するＤＮＡの単離を期待し得る。但しＳＳＣ、ＳＤＳおよび温度の条件の組み合わせは例示であり、当業者であれば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを決定する上記若しくは他の要素（例えばプローブ濃度、プローブの長さ、ハイブリダイゼーション反応時間等）を適宜組み合わせることにより、上記と同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
このようなハイブリダイゼーション技術を利用して単離されるＤＮＡがコードするポリペプチドは、通常、ＬＩＶ１とアミノ酸配列において高い相同性を有する。高い相同性とは、少なくとも４０％以上、好ましくは６０％以上、さらに好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より一層好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上（例えば９８〜９９％）の配列の相同性を指す。アミノ酸配列の同一性は、例えばＫａｒｌｉｎ  ａｎｄ  ＡｌｔｓｃｈｕｌによるアルゴリズムＢＬＡＳＴ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４−２２６８，１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−５８７７，１９９３）によって決定することができる。このアルゴリズムに基づいてＢＬＡＳＴＸと呼ばれるプログラムが開発されている（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０，１９９０）。ＢＬＡＳＴＸによってアミノ酸配列を解析する場合にはパラメーターは例えばｓｃｏｒｅ＝５０、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３とする。ＢＬＡＳＴとＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具体的な手法は公知である（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．）
ＬＩＶ１に類似するタンパク質の調製は、別の公知手段によることも可能である。例えば、エキソヌクレアーゼを用いるｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｍｕｔａｎｔ作製法、カセット変異法等のｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓによってＬＩＶ１  ＤＮＡを人為的に改変させ、該改変ＬＩＶ１  ＤＮＡを用いて、所望タンパク質を調製することができる。
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」として利用可能な物質の別の好適な例として、配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡを挙げることができる。上記ＤＮＡはタンパク質ＬＩＶ１をコードしており、細胞内に導入されればＬＩＶ１タンパク質発現を通じて間接的に亜鉛イオン要求性タンパク質、例えばＳｎａｉｌの活性を調製し得る物質である。
上記ＤＮＡは、配列番号１、３又は５記載の配列の一部をプローブとし、当業者に周知のハイブリダイゼーション技術によって、ＬＩＶ１が発現している細胞のｃＤＮＡから調製することができる。また、配列番号１、３又は５記載の配列の一部をプライマーとし、ｍＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲを実施して得ることもできる。あるいは市販のＤＮＡ合成機を用いて人工的に合成してもよい。
さらに、上記ＤＮＡに類似するＤＮＡもまた、「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」の一例である。該類似するＤＮＡとして、配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡであって、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質、例えばＳｎａｉｌの活性を調節し得るタンパク質をコードしたＤＮＡを挙げることができる。このＤＮＡの調製法は既に上述したとおりである。
上述した各ＤＮＡを使用するときは、適当なベクターに挿入して用いることができる。ベクターに挿入したものも本発明の態様の一つである。使用するベクターは、目的に応じて適当なベクターを選択することができる。具体的には、哺乳動物由来のベクター（例えば、ｐｃＤＮＡ３（インビトロジェン社製）やｐＥＧＦ−ＢＯＳ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，１８（１７），ｐ．５３２２，１９９０）、ｐＥＦ、ｐＣＤＭ８、ｐＣＸＮ）、昆虫細胞由来のベクター（例えば「Ｂａｃ−ｔｏ−ＢＡＣ  ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ」（インビトロジェン社製）、ｐＢａｃＰＡＫ８）、植物由来の発現ベクター（例えばｐＭＨ１、ｐＭＨ２）、動物ウイルス由来のベクター（例えば、ｐＨＳＶ、ｐＭＶ、ｐＡｄｅｘＬｃｗ）、レトロウイルス由来のベクター（例えば、ｐＺＩＰｎｅｏ）、酵母由来のベクター（例えば「Ｐｉｃｈｉａ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｋｉｔ」（インビトロジェン社製）、ｐＮＶ１１、ＳＰ−Ｑ０１）、枯草菌由来のベクター（例えばｐＰＬ６０８、ｐＫＴＨ５０）、大腸菌ベクター（Ｍ１３系ベクター、ｐＵＣ系ベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ−Ｓｃｒｉｐｔ）等を挙げることができる。本発明において、哺乳動物細胞内で発現可能なベクターを用いることが好ましく、又、発現ベクターを用いることが好ましい。ベクターを細胞へ導入するには、例えば、リン酸カルシウム法（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．５２，ｐ．４５６，１９７３）、ＤＥＡＥデキストラン法、カチオニックリポソームＤＯＴＡＰ（ロッシュ・ダイアグノスティックス社製）を用いた方法、エレクトロポレーション法（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．１５，ｐ．１３１１，１９８７）、リポフェクション法（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｎｕｔｒ．，Ｖｏｌ．７，ｐ．１７５，１９８９）、ウイルスによる感染導入方法（ｐＭＸ、ｐＭＳＣＶ等；Ｓｃｉ．Ａｍ．，ｐ．３４，１９９４）、パーティクルガン等から選択することにより行うことができる。
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」、例えばＳｎａｉｌの活性を抑制する剤の一例として、ＬＩＶ１をコードするＤＮＡ又はｍＲＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを挙げることができる。ＬＩＶ１をコードするＤＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、内在するＬＩＶ１遺伝子の発現を妨げ、Ｓｎａｉｌ活性を負に制御すると考えられる。このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドとして、配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ又は該ＤＮＡから生成されるｍＲＮＡを標的配列とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを挙げることができる。一例としては、配列番号７又は８に記載するオリゴヌクレオチドを挙げることができる。これ以外にも、上記配列番号１、３又は５に記載の配列からなるＤＮＡ等のいずれかの箇所にハイブリダイズしＬＩＶ１の発現を有効に阻害できれば、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれ、上記配列番号１、３又は５に記載の配列からなるＤＮＡ又は対応するｍＲＮＡと完全に相補的でなくてもよい。
上記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、目的に応じ、適当なベクターに挿入して用いることができる。例えば遺伝子治療に応用する目的であれば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター等のウイルスベクターや、カチオニックリポソーム、リガンドＤＮＡ複合体等の非ウイルスベクター等の中から、適宜選択可能である。また、キャリアーを用いずに、裸のプラスミドＤＮＡ（ｎａｋｅｄ  ｐＤＮＡ）として大容量の水溶液とともに投与する方法をとることも考えられる。
別の「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」、特にＳｎａｉｌの活性を抑制する剤の例として、ＬＩＶ１をコードするＤＮＡの一部と同一又は類似する配列を有する二本鎖ＲＮＡを挙げることができる。標的遺伝子配列と同一又は類似した配列を有する二本鎖ＲＮＡは、標的遺伝子の発現を妨げるＲＮＡ干渉（ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ；ＲＮＡｉ）を引き起こし得る。ＲＮＡｉは、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を細胞内に導入した際に、そのＲＮＡ配列に対応する細胞内のｍＲＮＡが特異的に分解され、タンパク質として発現されなくなる現象をいう。二本鎖を形成する領域は、すべての領域において二本鎖を形成していてもよいし、一部の領域（例えば両末端又は片方の末端等）が一本鎖等になっていてもよい。従って、本発明の二本鎖ＲＮＡにおいても、二本鎖でない領域が含まれていてよい。ＲＮＡｉに用いられるオリゴＲＮＡは１０〜１００ｂｐのＲＮＡが用いられることが多く、通常１９〜２３ｂｐのＲＮＡが用いられる。ＲＮＡｉ法は、Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３９１，ｐ．８０６，１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  Ｖｏｌ．９５，ｐ．１５５０２，１９９８、Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３９５，ｐ．８５４，１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ  Ｖｏｌ．９６，ｐ．５０４９，１９９９、Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．９５，ｐ．１０１７，１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  Ｖｏｌ．９６，ｐ．１４５１，１９９９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  Ｖｏｌ．９５，ｐ．１３９５９，１９９８、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．２，ｐ．７０，２０００等の記載に従って行うことができる。
「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」としては、例えば該物質がＬＩＶ１の場合、上記した「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」と同様なものが例示される。
「亜鉛イオントランスポーター」がＬＩＶ１以外の場合、例えば、ｈＺｎｔ−１、ｈＺｎｔ−２、ｈＺｎｔ−５、ｈＺｎｔ−６、ｈＺｎｔ−７、ｈＺＩＰ１、ｈＺＩＰ２、ｈＺＩＰ３、ＢＡＡ９２１００、ＢＡＣ０４５０４、ｈＬｉｖ−１、ｈＫＥ４、ＫＩＡＡ１２６５、ＫＩＡＡ００６２、ｈＺｉｐ４の場合には、該亜鉛イオントランスポーターの既知のアミノ酸配列あるいは塩基配列をもとにして、ＬＩＶ１の場合と同様にして各種の「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」あるいは「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」を調製することができる。
各種アミノ酸配列及び塩基配列の情報は、ＮＣＢＩ等で閲覧可能な種々のデータベースから入手することができる。
本発明の脱顆粒反応制御剤、サイトカイン産生制御剤並びにアレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療薬は、上記した一連の有効成分（亜鉛イオン、亜鉛イオノフォア、亜鉛イオンキレーター、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質）に加え、所望により薬学的に許容される賦形剤、添加剤を含む。薬学的に許容される賦形剤、添加剤としては、担体、結合剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。又、有効成分として異なる種類の「亜鉛イオン濃度を制御する物質」を併用することもできる。
薬学的に許容される担体としては、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオバター等が挙げられる。
さらに、錠剤は必要に応じて通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、腸溶性コーティング錠、フィルムコーティング錠あるいは二層錠、多層錠とすることができる。散剤は、薬学的に許容される散剤の基剤と共に製剤化される。基剤としては、タルク、ラクトース、澱粉等が挙げられる。ドロップは水性又は非水性の基剤と一種またはそれ以上の薬学的に許容される拡散剤、懸濁化剤、溶解剤等と共に製剤化できる。カプセルは、有効成分となる化合物を薬学的に許容される担体と共に中に充填することにより製造できる。当該化合物は薬学的に許容される賦形剤と共に混合し、または賦形剤なしでカプセルの中に充填することができる。カシェ剤も同様の方法で製造できる。本発明を座剤として調製する場合、植物油（ひまし油、オリーブ油、ピーナッツ油等）や鉱物油（ワセリン、白色ワセリン等）、ロウ類、部分合成もしくは全合成グリセリン脂肪酸エステル等の基剤と共に通常用いられる手法によって製剤化される。
注射用液剤としては、溶液、懸濁液、乳剤等が挙げられる。例えば、水溶液、水−プロピレングリコール溶液等が挙げられる。液剤は、水を含んでも良い、ポリエチレングリコールおよび／またはプロピレングリコールの溶液の形で製造することもできる。
経口投与に適切な液剤は、有効成分となる化合物を水に加え、着色剤、香料、安定化剤、甘味剤、溶解剤、増粘剤等を必要に応じて加え製造することができる。また経口投与に適切な液剤は、当該化合物を分散剤とともに水に加え、粘重にすることによっても製造できる。増粘剤としては、例えば、薬学的に許容される天然または合成ガム、レジン、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースまたは公知の懸濁化剤等が挙げられる。
局所投与剤としては、上記の液剤および、クリーム、エアロゾル、スプレー、粉剤、ローション、軟膏等が挙げられる。上記の局所投与剤は、有効成分となる化合物と薬学的に許容される希釈剤および担体と混合することによって製造できる。軟膏およびクリームは、例えば、水性または油性の基剤に増粘剤および／またはゲル化剤を加えて製剤化する。該基剤としては、例えば、水、液体パラフィン、植物油等が挙げられる。増粘剤としては、例えばソフトパラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ラノリン、水素添加ラノリン、蜜蝋等が挙げられる。局所投与剤には、必要に応じて、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、クロロクレゾール、ベンザルコニウムクロリド等の防腐剤、細菌増殖防止剤を添加することもできる。ローションは、水性又は油性の基剤に、一種類またはそれ以上の薬学的に許容される安定剤、懸濁化剤、乳化剤、拡散剤、増粘剤、着色剤、香料等を加えることができる。
かくして得られる本発明の脱顆粒反応制御剤、サイトカイン産生制御剤並びにアレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療薬は、経口または非経口的に投与される。
経口的に投与する場合、通常当分野で用いられる投与形態で投与することができる。非経口的に投与する場合には、局所投与剤（経皮剤等）、直腸投与剤、注射剤、経鼻剤等の投与形態で投与することができる。
経口剤または直腸投与剤としては、例えばカプセル、錠剤、ピル、散剤、ドロップ、カシェ剤、座剤、液剤等が挙げられる。注射剤としては、例えば、無菌の溶液又は懸濁液等が挙げられる。局所投与剤としては、例えば、クリーム、軟膏、ローション、経皮剤（通常のパッチ剤、マトリクス剤）等が挙げられる。
投与量、投与回数は使用する亜鉛イオン濃度を制御し得る物質の種類、患者の症状、年齢、体重、投与形態等によって異なり適宜設定され得る。
「亜鉛イオン」、「亜鉛イオンキレーター」、「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」及び「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」はいずれも、ヒトをはじめウシ、ウマ、イヌ、マウス、ラット等の哺乳動物において、細胞内、具体的には化学伝達物質を脱顆粒し得る細胞及び／又はサイトカイン産生能を有する細胞内で亜鉛イオン濃度を制御すること並びにそれと同様の影響を細胞に与えることが可能であり、従って、化学伝達物質を脱顆粒し得る細胞及び／又はサイトカイン産生能を有する細胞が関与する、各種アレルギー性疾患や自己免疫疾患を含む炎症性疾患を予防・治療することが可能となる。脱顆粒抑制作用を有する場合には当該作用に基づく抗ヒスタミン作用等により、Ｉ型アレルギー反応による血管透過性亢進、平滑筋収縮、腺分泌亢進、血管拡張等の諸症状の発現を抑制し、諸症状を改善する。サイトカイン産生制御作用を有する化合物は、当該サイトカイン産生能を有する細胞における異常、例えばヘルパーＴ細胞の亜集団であるＴｈ１細胞とＴｈ２細胞の機能異常を修復することができる。Ｔｈ１細胞の機能異常は自己免疫疾患をＴｈ２細胞の機能異常はアレルギー性疾患を引き起こすと考えられている。又、肥満細胞におけるサイトカイン産生及び遊離を制御することも可能であり、各種アレルギー性疾患、自己免疫疾患を含む炎症性疾患に有効である。従って、本発明はＩ型アレルギー反応が関与する各疾患、及び／又はＴｈ１細胞とＴｈ２細胞のバランス異常に基づく各疾患、例えば、アナフィラキシーショック、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎等の予防および治療に用いることができる。また、スギ花粉、ハウスダスト、カビ、ダニまたはペットの毛、皮膚もしくは糞等によるアレルギー性鼻炎やアレルギー性炎症、また全身性エリテマトーデス、混合型結合組織病、慢性関節リウマチ、シェーグレン症候群、リウマチ熱、グッドパスチャー症候群、パセドウ病、橋本病、アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、潰瘍性大腸炎、クローン病、交換性眼炎、多発性硬化症、乾癬、肝炎等のアレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防および治療に極めて有用である。
さらに、亜鉛イオン濃度を制御することによって脱顆粒反応及び／又はサイトカイン産生を制御することができる、という本発明者らが得た知見により、細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することによって脱顆粒反応制御作用及び／又はサイトカイン産生制御作用を有する化合物をスクリーニングすることが可能となる。例えば以下の工程により本スクリーニング方法は実施される。
１）脱顆粒制御及び／又はサイトカイン産生制御を所望する細胞を２群に分け一方を試験化合物で処理する工程（未処理の残る一方を対照とする）
２）処理後の細胞、及び未処理の対照細胞についてそれぞれ細胞内の亜鉛イオン濃度を測定する工程
３）対照細胞の亜鉛イオン濃度と比較して有意に亜鉛イオン濃度に変動があったものを選択し脱顆粒反応制御及び／又はサイトカイン産生制御作用を有する化合物と認定する工程。
脱顆粒制御及び／又はサイトカイン産生制御を所望する細胞とは、その脱顆粒反応やサイトカイン産生がアレルギー性疾患や自己免疫疾患を含む炎症性疾患の原因となるような細胞であって、例えば好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞、血小板等が挙げられる。好ましくは肥満細胞である。適当に２群に分け一方を試験化合物で処理する。もう一方は処理せず対照細胞として使用する。さらに亜鉛イオン濃度に影響を及ぼすことが知られている化合物、例えば亜鉛イオンキレーターであるＴＰＥＮ等をポジティブな対照化合物として用いてもよい。試験化合物は、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量３０００未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物およびその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物およびその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量３０００以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、およびこれらを組み合わせたものなどが挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。
細胞の試験化合物での処理時間は、用いる細胞や試験化合物の種類や濃度によって適宜設定される。ＴＰＥＮ等のポジティブな対照化合物を用いる場合にはその対照化合物で処理した場合に亜鉛イオン濃度に変動が確認されることを目安にして行うことができる。細胞を処理する試験化合物の濃度もまた、用いる細胞や試験化合物の種類、処理時間によって適宜設定される。
細胞内の亜鉛イオン濃度の測定は、通常当分野で実施されている方法を利用して、またそれに準じて行うことができる。例えば原子吸光法（フレーム法）による直接測定、特異プローブ（例えば蛍光試薬）を用いた蛍光分光光度計によって測定することができる。
【実施例】
【０００６】
以下、実施例にそって本発明をさらに詳細に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を何ら限定するものではない。本出願全体を通して引用されたすべての刊行物は参照として本明細書に組み入れられる。また、本発明において使用する試薬や装置、材料は特に言及されない限り、商業的に入手可能である。
実施例１
亜鉛イオンキレーターであるＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ；ＳＩＧＭＡ，Ｐ４４１３）を用いて、抗原刺激依存的な肥満細胞の化学伝達物質遊離における亜鉛イオンの役割を検討した。
肥満細胞としては骨髄細胞をインターロイキン３で５週間培養することによって分化誘導させた骨髄由来肥満細胞を用いた。得られた骨髄由来肥満細胞（１×１０７細胞）をＩｇＥ抗体（ＳＰＥ−７クローン；ＳＩＧＭＡより入手）１μｇ／ｍＬで６時間感作を行った。感作終了後、細胞をＴｙｒｏｄｅバッファー（ｐＨ７．４）で再懸濁した。Ｔｙｒｏｄｅバッファーの組成は表１の通り。
【表１】
2006080581.tif 000002
得られた肥満細胞懸濁液に、抗原（ＤＮＰ−ＨＳＡ；ｄｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ；ＳＩＧＭＡより入手）を各濃度（図１中に示す）で３０分間刺激した。また亜鉛イオンの効果を検討するために、亜鉛イオンキレーターであるＴＰＥＮ（０，２，５，１０μＭ）を感作期間中の２時間と刺激時の３０分間共存させた。肥満細胞から放出された化学伝達物質であるβ−ヘキソアミニダーゼを測定した。β−ヘキソアミニダーゼの活性測定は基質として４−ニトロフェニル  Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド（ＳＩＧＭＡより入手）を用い４０５ｎｍの波長を用いて吸光度計にて測定した。細胞内に存在するβ−ヘキソアミニダーゼが全て細胞外に放出された場合を１００％とした。
結果を図１に示す。ＴＰＥＮの添加により濃度依存的に化学伝達物質遊離の抑制効果が観察された。
実施例２
実施例１で確認されたＴＰＥＮによる肥満細胞の化学伝達物質遊離抑制効果が亜鉛イオン依存性かどうかを検討した。
ＩｇＥ抗体で感作した肥満細胞は実施例１と同様に調製したものを用いた。感作終了後の肥満細胞をＴｙｒｏｄｅバッファーで再懸濁した。肥満細胞懸濁液に、抗原（ＤＮＰ−ＨＳＡ）を各濃度（図２中に示す）で３０分間刺激した。亜鉛イオンキレーターであるＴＰＥＮ（１０μＭ）を感作期間中の２時間と刺激時の３０分間共存させた。亜鉛イオンを細胞内に導入するために、刺激時に１μＭのピリチオン（ｐｙｒｉｔｈｉｏｎｅ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｏｂｅｓ，ｐ−２４１９３）で処理し、Ｔｙｒｏｄｅバッファーに各濃度で（図２中に示す）亜鉛イオンを添加した。β−ヘキソアミニダーゼの活性測定は実施例１と同様にして行った。また、ＴＰＥＮ未処理の細胞をコントロール（対照）とし、細胞内に存在するβ−ヘキソアミニダーゼが全て細胞外に放出された場合を１００％とした。
結果を図２に示す。ＴＰＥＮによる化学伝達物質遊離抑制効果は亜鉛イオンを添加することにより回復された。
実施例３
亜鉛イオンキレーターであるＴＰＥＮ（ＳＩＧＭＡ，Ｐ４４１３）を用いて、肥満細胞のサイトカイン産生における亜鉛イオンの役割を検討した。
ＩｇＥ抗体で感作した肥満細胞は実施例１と同様に調製したものを用いた。感作終了後の肥満細胞をＴｙｒｏｄｅバッファーで再懸濁した。肥満細胞懸濁液に、抗原（ＤＮＰ−ＨＳＡ）を１００ｎｇ／ｍＬの濃度で６時間刺激した。亜鉛イオンの効果を検討するために、亜鉛イオンキレーターであるＴＰＥＮ（０，２，５，１０μＭ）を感作期間中の２時間と刺激時の６時間共存させた。
上清のサイトカイン（ＩＬ−６、ＴＮＦ−α）の濃度をＥＬＩＳＡ法（ＢＩＯＳＯＵＲＣＥ）にて決定した。
結果を図３に示す。ＴＰＥＮの添加により濃度依存的にサイトカイン産生抑制効果が観察された。
実施例４
亜鉛イオンキレーターが、マウスアレルギー性疾患モデルにおいて抑制効果を示すかどうか検討した。
マウス（６週齡雌、Ｂａｌｂ／ｃＡＪｃｌ、日本クレア）に受動的皮膚アナフィラキシーを誘発するために、０．５μｇのＩｇＥ抗体（ＳＰＥ−７、ＳＩＧＭＡ）をマウスの耳に皮下投与し感作させた。１２時間後、ＴＰＥＮ（ＳＩＧＭＡ，Ｐ４４１３）を図４中に示す各用量でマウス腹腔に投与した。３０分後、マウス尾部より静脈注射により抗原であるＤＮＰ−ＢＳＡ（コスモバイオ）２５０μｇとエバンスブルー（ＳＩＧＭＡ）１．２５ｍｇとを投与し受動的皮膚アナフィラキシーを誘発させた。エバンスブルーの色素漏出を数値化するために、マウスの耳よりホルムアミドを用いて色素を抽出した。抽出した色素は６２０ｎｍの波長を用いて吸光度にて測定した。既知量のエバンスブルーを用いて検量線を作成し、試験ごとの色素量を算出した。
結果を図４に示す。亜鉛イオンキレーターにより、用量依存的にエバンスブルーの色素漏出が抑制された。従って、亜鉛イオンキレーターはインビボにおいてＩ型アレルギー（受動的皮膚アナフィラキシー）応答を抑制することが示された。
【配列表フリーテキスト】
【０００７】
配列番号７：アンチセンス配列
配列番号８：アンチセンス配列
【産業上の利用可能性】
【０００８】
亜鉛イオンや亜鉛イオンキレーターを用いたり、亜鉛イオン要求性のタンパク質及び亜鉛イオントランスポーターの発現や機能を調節したりすることで細胞内の亜鉛イオン濃度を制御することによって、細胞からの化学伝達物質遊離を制御できる本願発明の脱顆粒反応制御剤、細胞内でのサイトカイン産生を制御できる本願発明のサイトカイン産生制御剤、アレルギー性疾患及び／又は自己免疫疾患を含む炎症性疾患の予防・治療薬、脱顆粒反応制御方法並びにサイトカイン産生制御方法は、放出されたヒスタミン等が標的細胞に作用するのを抑制するという作用機序を有する従来のアレルギー治療薬とは根本的に異なるものであり、肥満細胞等から放出される様々な化学伝達物質、サイトカインを同時に抑制することが可能である。さらにステロイド剤等の従来のアレルギー治療薬や抗炎症剤の有する副作用を回避することが可能となる。
本出願は、日本特許出願、特願２００５−０２３１９６（出願日：２００５年１月３１日）を基礎としており、その内容は全て本明細書に包含される。
［配列表］
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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