(57)【要約】  本発明は関節リウマチの予防及び／又は治療薬に関する。  ２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びＣＯＸ２阻害剤を含有する関節リウマチの予防及び／又は治療薬。【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びＣＯＸ２阻害剤を含有する関節リウマチの予防及び／又は治療薬。
【請求項２】
ＣＯＸ２阻害剤が、カルボン酸系、エノ−ル酸系、トリサイクリック系のＣＯＸ２阻害剤である請求項１記載の関節リウマチの予防及び／又は治療薬。
【請求項３】
ＣＯＸ２阻害剤が、ジクロフェナク又はその塩、ケトプロフェン又はその塩、メロキシカム及びセレコキシブから選ばれる阻害剤である請求項１記載の関節リウマチの予防及び／又は治療薬。
【請求項４】
関節リウマチが関節の炎症を伴うものである請求項１記載の関節リウマチの予防及び／又は治療薬。
【請求項５】
剤形が経口投与製剤である請求項１記載の関節リウマチの予防及び／又は治療薬。
【請求項６】
２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びＣＯＸ２阻害剤の有効量を投与することを特徴とする関節リウマチの処置方法。
【請求項７】
ＣＯＸ２阻害剤が、カルボン酸系、エノ−ル酸系、トリサイクリック系のＣＯＸ２阻害剤である請求項６記載の処置方法。
【請求項８】
ＣＯＸ２阻害剤が、ジクロフェナク又はその塩、ケトプロフェン又はその塩、メロキシカム及びセレコキシブから選ばれる阻害剤である請求項６記載の処置方法。
【請求項９】
関節リウマチが関節の炎症を伴うものである請求項６記載の処置方法。
【請求項１０】
投与手段が経口投与である請求項６記載の処置方法。
【請求項１１】
２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びＣＯＸ２阻害剤の関節リウマチの予防及び／又は治療薬の製造のための使用。
【請求項１２】
ＣＯＸ２阻害剤が、カルボン酸系、エノ−ル酸系、トリサイクリック系のＣＯＸ２阻害剤である請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
ＣＯＸ２阻害剤が、ジクロフェナク又はその塩、ケトプロフェン又はその塩、メロキシカム及びセレコキシブから選ばれる阻害剤である請求項１１記載の使用。
【請求項１４】
関節リウマチが関節の炎症を伴うものである請求項１１記載の使用。
【請求項１５】
剤形が経口投与製剤である請求項１１記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は関節リウマチの予防及び／又は治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
関節リウマチは、多関節に腫れや痛みを伴う炎症が起き、長期間にわたって症状が進行すると、非可逆的な関節の変形と機能障害による著しい生活の質（Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ：ＱＯＬ）の低下につながる疾患である。日本では人口の０．６％、３０歳以上の人口の１％に相当する患者がおり、特に近年では高齢者社会の進行に伴い、老年者のリウマチ患者が増加する傾向にある。【０００３】
関節リウマチの病期は、（１）初期；関節痛や関節炎の所見は存在するが、関節リウマチの確定診断がいまだ下せない時期、（２）早期；関節リウマチの確定診断が下せるがいまだ非可逆的変化がないか又はあっても軽微な時期（早期関節リウマチは一般に発病から１〜２年を指す）、（３）進行期；非可逆的変化が出現し、疲労、微熱、体重減少等の全身症状が強く現われてくる時期、（４）晩期；関節の炎症はほとんど鎮静化しているが、変形、拘縮等の非可逆的変化が強く残り、疼痛と機能障害が主要症状になる時期の４つに分類することができ、各病期によって治療方法が異なっている。関節リウマチの発症は、遺伝的要因や後天的要因（感染症）等が関与するとの研究報告があるが、依然としてその原因は未解明であって、完全な治癒及び予防もできないのが現状である。現時点での治療目標は、関節リウマチを早期に診断し、関節リウマチの炎症を可及的速やかにかつ最大限に抑制し、非可逆的変化の出現を防止又はその進展を阻止して、患者の身体的、精神的、社会的なＱＯＬの向上を図ることにある。したがって、その治療に際しては、患者に対して疾患や治療法に関する十分な説明を行なった上で、理学療法、運動療法、薬物療法、手術療法等様々な手段が用いられている。【０００４】
薬物療法としては、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤｓ）、ステロイド薬等が臨床の現場で用いられており、最近では炎症性サイトカインをタ−ゲットにした抗体等の生物製剤も用いられている（非特許文献１参照）。【０００５】
ＮＳＡＩＤｓは、Ｃｙｃｌｏｏｘｇｅｎａｓｅ（ＣＯＸ）阻害剤の同義語として用いられており、この範疇に属する薬剤のほとんどがＣＯＸ阻害作用を有している。ＣＯＸには遺伝子レベルでＣＯＸ１、ＣＯＸ２の２つのアイソタイプが知られている。また、近年ＣＯＸ１の変異体としてＣＯＸ３が発見されている（非特許文献２参照）。関節リウマチ患者に対するＣＯＸ阻害剤の処方目的は、主に即効性の鎮痛作用にあり、関節リウマチそのものを寛解する効果はほとんどない。しかしながら、関節リウマチを寛解するために使用されるＤＭＡＲＤｓは遅効性であるため、一般的に、ＤＭＡＲＤｓの効果が現われるまでのＱＯＬ向上を目的に、ＣＯＸ阻害剤が併用されている。このような背景から、ＣＯＸ阻害剤は多くの関節リウマチ患者に処方されているが、ＣＯＸ１及びＣＯＸ２の双方に阻害作用を有する古典的なＣＯＸ阻害剤（例えば、インドメタシン、アスピリン）については、胃における重篤な消化管障害の発症が問題視されている。そこで、近年、消化管障害の少ないＣＯＸ２選択的阻害剤が開発されている（非特許文献３参照）。また、最近になって、ＣＯＸ２選択的阻害剤にも、心血管系疾患の発症リスクを上昇させるという重大な副作用が確認され（非特許文献４参照）、ＣＯＸ阻害剤の高用量使用や長期使用については何らかの制限をかけざるを得ない状況となっている。【０００６】
炎症性サイトカインであるインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）は、多くの疾患、例えば関節リウマチ、変形性関節症、骨粗鬆症、炎症性大腸炎、免疫不全症候群、敗血症、肝炎、腎炎、虚血性疾患、インスリン依存性糖尿病、動脈硬化、パーキンソン病、アルツハイマー病、白血病等において、その産生亢進が認められ、コラーゲナーゼやＣＯＸ及びＰＬＡ２のような炎症に関与すると考えられている酵素の合成を誘導し、また動物において関節内注射をするとリウマチ様関節炎に非常に似た関節破壊をもたらすことが知られている。このことから、炎症性疾患の治療薬としてＩＬ−１β阻害剤が研究・開発されており、ＩＬ−１レセプターアンタゴニスト（非特許文献５参照）等の生体成分由来物質、Ｔ−６１４（非特許文献６参照）、Ｓ−２４７４（非特許文献７参照）、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（特許文献１参照）、ＦＲ１３３６０５（非特許文献８参照）等の低分子化合物が知られている。【０００７】
関節リウマチの病態は、年齢、病期、合併症、副作用、ＱＯＬ等の点で患者毎にかなりの違いがある。また、絶対的な治療薬が存在せず、症状をコントロ−ルできている治療薬が突如効果を失っていく“エスケ−プ現象”と呼ばれる現象も存在する。このような背景から、薬物療法を行なう際には薬剤の切替えや併用がしばしば行なわれており、薬物の使用方法に関する臨床研究も盛んに行なわれている。【０００８】
ＣＯＸ２阻害作用とＩＬ−１β阻害作用の双方を有する薬剤についての報告は存在するが（特許文献２、非特許文献９−１０参照）、ＣＯＸ２阻害作用を有する薬剤とＩＬ−１β阻害剤との併用効果、特に関節リウマチに対する効果については知られていない。
【特許文献１】国際公開第９９／２５６９７号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３／０８４９３６号パンフレット
【非特許文献１】Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４６，ｐｐ３２８−３４６，２００２）
【非特許文献２】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９９，ｐｐ１３９２６−１３９３１，２００２
【非特許文献３】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９６，ｐｐ７５６３−７５６８，１９９９
【非特許文献４】Ｎ．ＥＮＧＬ．Ｊ．ＭＥＤ．３５１，ｐｐ１７０７−１７１１，２００４、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１１，ｐ２４９，２００５
【非特許文献５】Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４２，ｐｐ４９８−５０６，１９９９
【非特許文献６】Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎ．１１，ｐｐ６４９−６５５，１９９２
【非特許文献７】ＹＡＫＵＧＡＫＵ  ＺＡＳＳＨＩ  １２３，ｐｐ３２３−３３０，２００３
【非特許文献８】Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２３，ｐｐ１７７８−１７８３，１９９６
【非特許文献９】Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６７，ｐｐ３０５−３１４，１９９５
【非特許文献１０】Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎ．１５，ｐｐ６４９−６５５，１９９２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、関節リウマチの治療及び予防の効果が優れた薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、斯かる実情に鑑み鋭意研究した結果、ＩＬ−１β阻害剤である２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンとＣＯＸ２阻害作用を有する薬剤（ＣＯＸ２阻害剤）とを併用すると、優れた関節炎抑制効果が得られることを見出し、本発明を完成した。【００１１】
すなわち、本発明は、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びＣＯＸ２阻害剤を含有する関節リウマチの予防及び／又は治療薬を提供するものである。
また、本発明は、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びＣＯＸ２阻害剤の有効量を投与する関節リウマチの処置方法を提供するものである。
また、本発明は、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びＣＯＸ２阻害剤の関節リウマチの予防及び／又は治療薬の製造のための使用を提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬は、経口投与が可能で、副作用が少なく優れた関節炎の抑制作用を示し、関節リウマチの予防及び治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
図は何れも平均値と標準誤差および各例値で示した。
【図１】図１は、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンとジクロフェナクナトリウムとを併用投与した場合のラットコラ−ゲン誘発関節炎モデルのＥｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘ及び抑制率を示す図である。
【図２】図２は、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンとケトプロフェンとを併用投与した場合のラットコラ−ゲン誘発関節炎モデルのＥｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘ及び抑制率を示す図である。
【図３】図３は、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンとメロキシカムとを併用投与した場合のラットコラ−ゲン誘発関節炎モデルのＥｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘ及び抑制率を示す図である。
【図４】図４は、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンとセレコキシブとを併用投与した場合のラットコラ−ゲン誘発関節炎モデルのＥｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘ及び抑制率を示す図である。
【図５】図５は、本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬中のセレコキシブの含有量を変化させたときのラットコラ−ゲン誘発関節炎モデルのＥｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘ及び抑制率を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬で用いる２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（以下、薬剤Ａと記載することもある）は公知物質であって、例えば国際公開第９９／２５６９７号公報に記載の方法又はその類似方法で製造することができる。すなわち、ｐ−クロロフェニル酢酸とチオアニソ−ルとをポリリン酸等の縮合剤を用いて反応させ、２−（４−クロロフェニル）−４’−（メチルチオ）アセトフェノン（化合物ａ）を得る。化合物ａとカリウムｔ−ブトキシド等の塩基とをテトラヒドロフラン中で反応させ、次いでブロモ酢酸エチルを加えて２−（４−クロロフェニル）−４−［４−（メチルチオ）フェニル］−４−オキソブタン酸エチル（化合物ｂ）を得る。化合物ｂとヒドラジン水和物とをエタノ−ル中で反応させ、５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−４，５−ジヒドロ−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（化合物ｃ）を得る。かくして得られた化合物ｃとベンジルブロミドとをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、炭酸カリウム等の塩基を用いて反応させて、薬剤Ａを製造することができる。【００１５】
本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬で用いるＣＯＸ２阻害剤としては、カルボン酸系、エノ−ル酸系、メタンスルホン酸系、トリサイクリック系等のＣＯＸ２阻害剤が挙げられる。カルボン酸系ＣＯＸ２阻害剤としては、アスピリン等のサリチル酸系；メフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸等のアントラニル酸系又はフェナム酸系；ジクロフェナク又はその塩、アルクロフェナク、フェンブフェン、ナブトメン、ルミラコキシブのフェニル酢酸系；インドメタシン、スリンダク、インドメタシンファルネシル、マレイン酸プログルメタシン、アセメタシン、アンフェナク等のインドール酢酸系；トルメチン等のヘテロ環酢酸系；エトドラク等のピラノ酢酸系；イブプロフェン、プラノプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン又はその塩、フルルビプロフェン、チアプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、オキサプロジン、アルミノプロフェン、ザルトプロフェン等のプロピオン酸系のＣＯＸ２阻害剤が挙げられる。
なお、ジクロフェナクの塩、及びケトプロフェンの塩としては、薬学的に許容される塩であれば特に制限されず、例えばナトリウム塩、カリウム塩等の無機塩や有機塩等が挙げられる。
エノール酸系ＣＯＸ２阻害剤としては、フェニルブタゾン、クロフェゾン、フェブラゾン、オキシフェニルブタゾン等のピラゾロン系；ピロキシカム、アンピロキシカム、テルノキシカム、ロルノキシカム、メロキシカム等のオキシカム系のＣＯＸ２阻害剤が挙げられる。メタンスルホン酸系ＣＯＸ２阻害剤としては、ニメスリド、フロスリド、Ｔ−６１４等が挙げられる。トリサイクリック系ＣＯＸ２阻害剤としては、ロフェコキシブ、セレコキシブ、バルデコキシブ、エトリコキシブ等が挙げられる。なお、これらの化合物が光学活性を有する場合にはその光学異性体も含まれる。ＣＯＸ２阻害剤としては、カルボン酸系、エノ−ル酸系、トリサイクリック系のＣＯＸ２阻害剤が好ましく、更にフェニル酢酸系、プロピオン酸系、オキシカム系、トリサイクリック系のＣＯＸ２阻害剤が好ましく、特にジクロフェナク又はその塩、ケトプロフェン又はその塩、メロキシカム、セレコキシブ（以下、薬剤Ｂと記載することもある）が好ましい。これらは、市販品、例えばジクロフェナク、ケトプロフェンは、ＳＩＧＭＡ社製のもの；メロキシカムは、和光純薬社製のもの；セレコキシブは、ＤｅｓｙｎｔｈＳ．Ａ社製のもの等をそれぞれ用いることができる。【００１６】
本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬中の薬剤ＡとＣＯＸ２阻害剤の含有量は、質量比（薬剤Ａ：ＣＯＸ２阻害剤）が１０００：１〜１：３０であるのが好ましい。カルボン酸系ＣＯＸ２阻害剤の場合は、更に３００：１〜１：３、特に１００：１〜１：１であるのが好ましく、また、エノ−ル酸系、トリサイクリック系のＣＯＸ２阻害剤の場合は、特に１０：１〜３：１０であるのが好ましい。【００１７】
本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬の投与形態は、特に限定されず治療目的に応じて適宜選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、フィルムコ−ティング剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤等による非経口投与が挙げられる。経口投与するのが好ましい。【００１８】
本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬は、その有効成分である薬剤Ａ及びＣＯＸ２阻害剤を含有するそれぞれの医薬製剤を調製し、それを同時又は間隔をおいて投与してもよいし、両有効成分を共存させた医薬製剤として投与してもよい。【００１９】
これらの投与形態に適した医薬製剤には、薬学的に許容される担体、例えば、デンプン類、ラクト−ス、ショ糖、マンニト−ル、珪酸等の賦形剤や増量剤；寒天、炭酸カルシウム、バレイショ又はタピオカデンプン、アルギン酸、複合珪酸塩等の崩壊剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖、アラビアゴム等の結合剤；タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコ−ル類、ラウリル硫酸ナトリウム又はその混合物等の滑沢剤；乳糖、トウモロコシデンプン等の希釈剤；クエン酸、リン酸、酒石酸、乳酸等の有機酸、塩酸等の無機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アルカリ、トリエタノ−ルアミン、ジエタノ−ルアミン、ジイソプロパノ−ルアミン等の有機アミン類等の緩衝剤；パラオキシ安息香酸エステル類、塩化ベンザルコニウム等の防腐剤；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム等の陰イオン性界面活性剤、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム等の陽イオン性界面活性剤、モノステアリン酸グリセリル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエ−テル等の非イオン性界面活性剤等の乳化剤；亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソ−ル、エデト酸等の安定化剤のほか、必要に応じて更に矯臭剤、分散剤、保存剤、香料等を適宜組み合わせて用いてもよい。【００２０】
本発明において、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状等によって適宜選択されるが、通常成人の場合、１日当たり２〜３２０ｍｇ、好ましくは４〜１６０ｍｇ投与するのがよい。ＣＯＸ２阻害剤の投与量は、種類により異なるが、成人の場合、１日当たり１〜１５００ｍｇ投与するのがよい。
カルボン酸系、エノール酸系のＣＯＸ２阻害剤の投与量は、種類により異なるが、成人の場合、１日当たり１〜１５００ｍｇ投与するのがよく、例えばジクロフェナクを用いる場合には、１日当たり２５〜３００ｍｇ、好ましくは１００〜１５０ｍｇ投与するのがよい。ケトプロフェンを用いる場合には、１日当たり２５〜４００ｍｇ、好ましくは１００〜３００ｍｇ投与するのがよい。また、メロキシカムを用いる場合には、１日当たり１〜５０ｍｇ、好ましくは５〜２０ｍｇ投与するのがよい。
トリサイクリック系ＣＯＸ２阻害剤の投与量は、種類により異なるが、成人の場合、１日当たり１０〜１５００ｍｇ投与するのがよく、例えばセレコキシブを用いる場合には、１日当たり１００〜８００ｍｇ、好ましくは２００〜４００ｍｇ投与するのがよい。
【実施例】
【００２１】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【００２２】
実施例１
２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（薬剤Ａ）とジクロフェナクナトリウム（薬剤Ｂ−１）の併用投与；薬剤Ａとケトプロフェン（薬剤Ｂ−２）の併用投与；薬剤Ａとメロキシカム（薬剤Ｂ−３）の併用投与；薬剤Ａとセレコキシブ（薬剤Ｂ−４）の併用投与；及びそれぞれの単独投与における両後肢浮腫抑制作用を、以下のラットコラ−ゲン誘発関節炎モデル法で測定した（ＦＤＡ，ＣＢＥＲ，ＣＤＥＲ，ＣＤＲＨ：Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  ｉｎｄｕｓｔｒｙ  −Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｐｒｏｇｒａｍｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇｓ，ｄｅｖｉｃｅｓ，ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ（ＲＡ）−．（１９９９））。【００２３】
試験動物は、雌性Ｌｅｗｉｓラット（ＬＥＷ／Ｃｒｊ）（日本チャールズリバー（株））を使用した。
８週齢ＬＥＷ／Ｃｒｊラットの両後肢の踝より先端部分の容積（両後肢容積）を、小動物用の足容積測定装置（ＴＫ−１０１ＣＭＰ、ユニコム社製）を用いて測定し、試験開始時の両後肢容積（Ｐｒｅ値）とした。このＰｒｅ値を指標として、一変数によるブロック化割付を行なって、各群が均質になるように群分けを行なった。【００２４】
ラットに関節炎を誘発する感作用コラ−ゲンエマルジョンは、タイプIIコラ−ゲン０．３％液（コラ−ゲン技術研修会製）、Ａｄｊｕｖａｎｔ  ｐｅｐｔｉｄｅ  （ペプチド研究所製）及びＡｄｊｕｖａｎｔ  Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｆｒｅｕｎｄ（ＤＩＦＣＯ社製）をＨａｎｄｙ  Ｍｉｃｒｏ  Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ（(株)マイクロテック・ニチオン製）を用い、氷冷下でホモジナイズして調製した。調製したコラ−ゲンエマルジョン０．１ｍＬ／ｓｉｔｅを、ラットの背部の１０ヶ所に皮内投与して初回感作を行なった。更に初回感作の７日後に、同じコラーゲンエマルジョン０．１２ｍＬを尾根部に皮内投与して追加感作を行なった。
薬物投与は、初回感作の翌日から１８日後まで行なった。薬剤Ａ及び薬剤Ｂ−１、Ｂ−２、Ｂ−４は、いずれも朝（９：００−１１：００）及び夕（１５：３０−１７：３０）に２回、経口投与した。また、薬剤Ｂ−３は、昼（１１：３０−１３：３０）に１回、経口投与した。
初回感作の１４日後及び１８日後に、再度両後肢容積を測定し、それぞれについてＰｒｅ値との差を求め、両後肢浮腫容積を算出した。初回感作の１４日後及び１８日後の両後肢浮腫容積の和をＥｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘとして算出して薬剤の効果の指標とした。【００２５】
表１−４及び図１−４に薬剤Ａ  ３又は１０ｍｇ／ｋｇ単独投与群；薬剤Ｂ−１  １ｍｇ／ｋｇ単独投与群；薬剤Ｂ−２  ０．３ｍｇ／ｋｇ単独投与群；薬剤Ｂ−３  ０．２ｍｇ／ｋｇ単独投与群；薬剤Ｂ−４  １ｍｇ／ｋｇ単独投与群；及び両薬物併用投与群のＥｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘを示す。Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘは各群ラット８匹の平均値±標準誤差で表す。また、低下率は、（（Ｘ−Ｙ）／Ｘ）×１００（Ｘ：コントロ−ル群Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘ平均値、Ｙ：各群Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘ平均値）で表す。【００２６】
【表１】
2006104172.tif 000002
【００２７】
薬剤Ａ及び薬剤Ｂ−１  併用投与群は、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘを強力に低下させ、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘの相対指数は、各薬剤単独投与群の相対指数の積よりも小さく、併用による明確な相乗効果が認められた。【００２８】
【表２】
2006104172.tif 000003
【００２９】
薬剤Ａ及び薬剤Ｂ−２  併用投与群は、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘを強力に低下させ、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘの相対指数は、各薬剤単独投与群の相対指数の積よりも小さく、併用による明確な相乗効果が認められた。【００３０】
【表３】
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【００３１】
薬剤Ａ及び薬剤Ｂ−３  併用投与群は、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘを強力に低下させ、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘの相対指数は、各薬剤単独投与群の相対指数の積よりも小さく、併用による明確な相乗効果が認められた。一方、薬物Ａ  ３ｍｇ／ｋｇ単独投与群及び薬物Ｂ  ０．２ｍｇ／ｋｇ単独投与群では、いずれも強力な浮腫抑制作用を示さず、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘがコントロ−ル群の５０％以下まで低下することはなかった。【００３２】
【表４】
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【００３３】
薬剤Ａ及び薬剤Ｂ−４  併用投与群は、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘを強力に低下させ、相乗効果を直接評価する統計学的手法（２元配置分散分析）で交互作用のＦ検定を行なったところ、有意な相乗作用（交互作用）が認められ（ｐ＝０．００８３）、併用による明確な相乗効果が確認された。一方、薬物Ａ単独投与群及び薬物Ｂ単独投与群では、いずれも強力な浮腫抑制作用を示さず、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘがコントロ−ル群の５０％以下まで低下することはなかった。【００３４】
実施例２
薬剤Ａ及び薬剤Ｂ−４の投与量を１ｍｇ／ｋｇから３又は１０ｍｇ／ｋｇに変え、ラット６匹を使用したほかは実施例１と同様にして、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘを測定した結果を、表５及び図５に示す。【００３５】
【表５】
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【００３６】
薬剤Ａ及び薬剤Ｂ−４  併用投与群では、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘが強力に低下し、２元配置分散分析の交互作用のＦ検定で有意な相乗作用（交互作用）が認められ（ｐ＝０．０２４３）、併用による明確な相乗効果が確認された。一方、薬物Ｂ−４を３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇと単独で増量して投与した群では、Ｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｅｘがそれぞれコントロ−ル群の３９％及び５４％までしか低下しなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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