(57)【要約】優れた薬理活性を有し、消化管から吸収され易い比較的低分子量の抗腫瘍成分、ならびに、その成分を有効成分とする抗腫瘍剤、化粧品及び健康食品を提供する。ハナビラタケの子実体又は菌糸体を凍結乾燥の後、微粉末化し、その粉末を溶媒抽出処理し、抽出物を分画処理することにより得られる分子量が５００〜１００００の範囲内の成分を主成分として含有するハナビラタケ抽出物組成物及びそれを有効成分とする抗腫瘍性組成物、化粧品及び健康食品。【特許請求の範囲】
【請求項１】
主成分が分子量５００〜１００００の範囲内の成分であるハナビラタケ溶媒抽出物組成物。
【請求項２】
ハナビラタケの溶媒抽出物から、透析膜を用いて主成分が分子量５００〜１００００の範囲内の成分を分画して得られるハナビラタケ抽出物組成物。
【請求項３】
ハナビラタケの溶媒抽出物から、ゲル濾過法により主成分が分子量５００〜１００００の範囲内の成分を分画して得られるハナビラタケ抽出物組成物。
【請求項４】
ハナビラタケの溶媒抽出物から、エタノール沈澱を行うことにより主成分が分子量５００〜１００００の範囲内の成分を分画して得られるハナビラタケ抽出物組成物。
【請求項５】
ハナビラタケ抽出物組成物の乾燥重量中、分子量５００〜１００００の範囲内の成分が８０重量％〜１００重量％である請求項１〜４のいずれかに記載のハナビラタケ抽出物組成物。
【請求項６】
ハナビラタケ抽出物組成物の乾燥重量中、βグルカンの含有量が５重量％以下である請求項１〜４のいずれかに記載のハナビラタケ抽出物組成物。
【請求項７】
溶媒が熱水である請求項１〜４のいずれかに記載のハナビラタケ抽出物組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載のハナビラタケ抽出物組成物を有効成分として含有する抗腫瘍性組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれかに記載のハナビラタケ抽出物組成物を有効成分として含有する抗腫瘍剤。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれかに記載のハナビラタケ抽出物組成物を有効成分として含有する化粧品組成物。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれかに記載のハナビラタケ抽出物組成物を有効成分として含有する健康食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、ハナビラタケの子実体又は菌糸体から得られる比較的低分子量の成分を主成分とするハナビラタケ抽出物並びにそれを有効成分として含有する抗腫瘍剤、化粧品及び健康食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  キノコ類は古くから食用として利用されているが、近年、その成分の生理活性が明らかにされてきている。なかでも、クレスチン、レンチナン、シゾフィラン（いずれも商品名）等は、医薬品としてその有用性が認められおり、また、アガリクス、メシマコブ、霊芝等は免疫賦活作用や抗腫瘍作用を期待して、子実体や菌糸体の乾燥物あるいは抽出物を健康食品素材として利用することが試みられている。例えば、マンネンタケは、子実体又はその抽出物を健康食品の原料として利用することが試みられている（例えば、特許文献１、２及び３参照）。【０００３】  一方、これらキノコ類に属するハナビラタケ（Ｓｐａｒａｓｓｉｓ  ｃｒｉｓｐａ）は、カラマツ等に生えるキノコであって、歯ごたえが良く、その純白な色合いと葉牡丹のような形態が特徴である、非常に僅少な食用キノコである。これまで、このハナビラタケは成長が遅く人工栽培は非常に困難であるとされてきたが、近年、比較的短期間で栽培可能な新しい栽培方法が確立され、商業規模での供給が可能となっている（例えば、特許文献４及び５参照）。【０００４】  そのハナビラタケの子実体は、抗腫瘍活性を有することがこれまでに明らかになっている（例えば、非特許文献１、２参照）。そして、その有効成分は、ハナビラタケの乾燥重量の４０〜５０％程度を占めるβ−１，３−グルカンであるといわれている（例えば、特許文献６参照）。
【特許文献１】特開２００１−１０９７０号公報
【特許文献２】特開２００１−１３１０８３号公報
【特許文献３】特開２００３−１８３１７６号公報
【特許文献４】特開平１１−５６０９８号公報
【特許文献５】特開２００２−３６９６２１号公報
【非特許文献１】Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２３（７）８６６−８７２（２０００）
【非特許文献２】Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２５（７）９３１−９３９（２００２）
【特許文献６】特開２０００−２１７５４３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  キノコ類の抗腫瘍活性の主体とされていたβグルカンについては、分子量が数百万程度と大きく、一般的には必ずしも消化管からの吸収が良いとはいえない。そこで、より低分子で消化管からの吸収が良好な抗腫瘍成分が強く望まれていた。【０００６】  本発明は、ハナビラタケ子実体又は菌糸体由来の低分子抗腫瘍成分並びにそれを有効成分とする抗腫瘍剤、化粧品及び健康食品を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】  本発明者らは、上記課題を達成するために鋭意検討を重ねた結果、ハナビラタケの子実体又は菌糸体の溶媒抽出物より得られる、βグルカンをほとんど含有しない低分子成分が良好な抗腫瘍活性を有することを見出し、本発明に至った。【０００８】  すなわち、本発明は、ハナビラタケの溶媒抽出物であって、主成分が分子量５００〜１００００の範囲内の成分であるハナビラタケ抽出物を要旨とするものであり、別の発明は、ハナビラタケの溶媒抽出物から、透析膜を用いて主成分が分子量５００〜１００００の範囲内の成分を分画して得られるハナビラタケ抽出物を要旨とするものであり、また別の発明は、ハナビラタケの溶媒抽出物から、ゲル濾過法により主成分が分子量５００〜１００００の範囲内の成分を分画して得られるハナビラタケ抽出物を要旨とするものであり、また別の発明は、ハナビラタケの溶媒抽出物から、エタノール沈澱を行なうことにより主成分が分子量５００〜１００００の範囲内の成分を分画して得られるハナビラタケ抽出物を要旨とするものである。また他の発明は、前記したハナビラタケ抽出物を有効成分として含有する抗腫瘍剤を要旨とするものであり、また別の発明は前記したハナビラタケ抽出物を有効成分として含有する化粧品を要旨とするものであり、さらに別の発明は前記したハナビラタケ抽出物を有効成分として含有する健康食品を要旨とするものである。
本発明は、上記ハナビラタケの溶媒抽出物を対象に投与することによる腫瘍の治療方法または腫瘍細胞の増殖抑制方法も提供し、さらに、抗腫瘍剤の製造のための上記ハナビラタケの溶媒抽出物の使用も提供する。
【発明の効果】
【０００９】  本発明によれば、分子量が５００〜１００００の範囲の低分子成分であるため、経口投与した場合に消化管からの吸収に優れ、その結果抗腫瘍活性が向上するという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明のハナビラタケ子実体抽出物（熱水抽出物と低分子抗腫瘍成分）の分子量分布（ＧＰＣ法による分析結果）を示す図である。
【図２】本発明のハナビラタケ抽出物の経口摂取による腫瘍増殖抑制試験の結果（腫瘍サイズの経時変化）を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】  以下、本発明を詳細に説明する。【００１２】  ハナビラタケは、標高１０００メートル以上のカラマツ等の針葉樹林に特異的に発生するキノコであり、発見することが困難なために「幻のキノコ」と言われてきた。これまで、その栽培は難しく、一般にはあまり知られていなかったが、近年、人工栽培方法が確立され、量産が可能となった。【００１３】  本発明で用いられるハナビラタケ子実体は、その製造方法は特に限定されるものではなく、天然ものでも、人工栽培により得られたものであっても良い。人工栽培の方法としては、従来から知られている人工栽培用の菌床を作製することにより行なうことができる（詳細は、特開平１１−５６０９８号公報、特開２００２−３６９６２１号公報及び特開２００２−１２５４６０号公報、米国特許６，２１２，８２２などを参照）。【００１４】  また、本発明で用いられるハナビラタケ菌糸体は、従来の液体培養法によって得ることができる。培地に使用する炭素源としては、グルコース等の単糖の他、デキストリン、グリセロール等、通常用いられる炭素源が使用できる。窒素源としては無機または有機窒素源が使用できるが、生育速度の観点からは有機窒素源を用いるほうが好ましい。また、必要に応じて微量元素やビタミン等の生育因子を添加することは通常の培養と何ら変わりはない。培養温度は１５℃〜３０℃、ｐＨは２．５〜８．０が好ましい。培地成分には不溶成分を添加することが均一に生育させることができることから好ましい。培養期間は菌株により、数日から数週間程度に設定されうる。【００１５】  このようにして得られたハナビラタケ子実体又は菌糸体は次の抽出工程に移されるが、その際のハナビラタケの形態は特に限定されるものではなく、そのままの状態で、あるいは凍結乾燥物や乾燥物を微粉末化したものであっても良い。なかでも、乾燥物を微粉末化したものが抽出効率の点で好ましい。【００１６】  抽出工程で用いられる抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール、グリセリン、エチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、アセトン、クロロホルム、酢酸エチル、ヘキサン、エーテルなどが使用できる。これらの中で、水が好ましく、中でも熱水がさらに好ましい。熱水による抽出方法は特に限定されるものではなく、例えば、ハナビラタケ子実体又は菌糸体の乾燥粉末に５〜１００倍量の水を添加し、８０〜１００℃（高圧条件下では１００〜１２１℃）で２０分〜３時間、煮沸（加熱）する、あるいは、乾燥粉末に５〜１００倍量の水を添加し、１〜３時間加熱還流する。それら熱水抽出処理を数回繰り返す等、いかなる方法でも構わない。【００１７】  このようにして得られた溶媒抽出物には、分子量が５００〜１００００の範囲内の成分が含有されているので、この低分子量の成分を溶媒抽出物から分画すればよい。分画する方法は特に限定されないが、例えば、透析膜を用いる方法、ゲル濾過法あるいはエタノール沈澱による方法などが挙げられる。具体的には以下のようにして行うことができる。【００１８】  上記のようにして得られた溶媒抽出物を一旦凍結乾燥処理により乾燥物とした後、適当量の水に再溶解し、分画分子量が５，０００〜１��，０００の範囲にある透析膜を用いて透析を行う。透析膜の具体例としては、フナコシ製、スペクトラバイオテックメンブレンシリーズ、スペクトラ／ポアＣＥシリーズ、同ＲＣシリーズ等が挙げられる。透析外液には蒸留水を用いれば良いが、溶媒抽出物の乾燥物より調製する透析内液は、乾燥物の溶解性に応じて酢酸ナトリウム、水酸化ナトリウムや尿素等を適宜添加する。透析外液（蒸留水）を入れた容器に透析外液を満たして、両端を厳重に密封した透析膜（チューブ）を浸漬し、１〜３日静置、あるいは攪拌下で放置する。これにより透析外液中に分子量が５００〜１００００の範囲内の成分が得られる。なお、透析工程を数回繰り返すことにより、透析外液画分の回収量を増やすことも可能である。【００１９】  ゲル濾過法による方法は、上記と同様にして得られた溶媒抽出物の乾燥物を適当な濃度に溶解し、ゲル濾過用の担体を充填したガラスカラムに通すことにより、分子量が５００〜１００００の範囲内の成分を得ることができる。ここで用いるカラム担体としては、アマシャムファルマシアバイオテク社のセファクリルシリーズ、セファデックスシリーズ等が挙げられる。【００２０】  エタノール沈殿の方法は、上記と同様にして得られた溶媒抽出物を、７５％エタノールに溶解し、不溶性の沈殿物を取除くことにより上澄液中に分子量が５００〜１００００の範囲内の成分を得ることができる。【００２１】  このようにして得られた、分子量が５００〜１００００の範囲内、好ましくは分子量が２０００〜８０００の範囲内、さらに好ましくは分子量が４０００〜６０００の範囲内、最も好ましくは分子量が約５０００の成分を主成分とするハナビラタケ溶媒抽出物は、以下の実施例に示すように高い抗腫瘍活性を持つことが明らかになった。これは、本成分が低分子量であるために消化管からの吸収が促進された、あるいは腸管における免疫活性が向上したことによるものと考えられる。
なお、本発明において分子量は、ＧＰＣ法（カラム；ＵｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌＧｕａｒｄ＋１２０＋５００；Ｗａｔｅｒｓ製、移動相；０．５Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ１１）、流速；０．５ｍＬ／分、検出；示差屈折率、推定分子量は各分子量のデキストランの保持時間より算出）により求めたものである。【００２２】  本発明のハナビラタケ抽出物組成物の乾燥重量中、分子量５００〜１００００の範囲内の成分は、好ましくは８０重量％〜１００重量％、さらに好ましくは９０重量％〜１００重量％、最も好ましくは９５重量％〜１００重量％である。
また、本発明のハナビラタケ抽出物組成物は分子量が数百万程度のβグルカンをほとんど含有せず、本発明のハナビラタケ抽出物組成物の乾燥重量中、分子量が数百万程度のβグルカンの含有量は、５重量％以下、好ましくは、１重量％以下である。【００２３】  本発明の抗腫瘍性組成物、抗腫瘍剤、化粧品又は健康食品は、上記のようにして得られたハナビラタケ抽出物を有効成分として含有し、さらに製薬的に許容される担体、化粧用として許容される担体、又は、健康食品として許容される食品及び／または飲料を含有するものである。ハナビラタケ抽出物の含有量としては、ハナビラタケが食経験のある極めて安全なキノコであることから、特に限定されるものではないが、概ね、下限は予防または治療といった目的に応じた効果を発揮する量を、上限は服用のし易さ、経済性等の観点から実際的な量を基準とし、原料であるハナビラタケ子実体又は菌糸体の乾燥重量に換算して、成人１日あたり５ｍｇ〜５００ｇ、好ましくは５０ｍｇ〜５０ｇを摂取できるように含有量及び摂取量を設定すればよい。投与量は、本発明の組成物としては、乾燥重量に換算して、成人１日あたり０．２５ｍｇ〜２．５ｇ、好ましくは２．５ｍｇ〜２．５ｇを摂取できるように含有量及び摂取量を設定すればよい。本発明の抗腫瘍剤、化粧品、又は健康食品は、その形態は特に限定されるものではなく、錠剤状、カプセル状、粉末状、顆粒状、液状、懸濁液状、クリーム状等、あらゆる形態で利用できる。
本発明の抗腫瘍剤には製薬的に許容できる種々の担体を加えることができる。例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、コーティング剤を含むことができるが、これらに限定されない。本発明のハナビラタケ溶媒抽出物組成物を持続性、徐放性のものとしてもよい。
本発明の化粧料は、化粧品、医薬部外品、医薬品に用いられる水性成分、油性成分、植物抽出液、動物抽出液、粉末、界面活性剤、油剤、アルコール、ｐＨ調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することにより調整される。さらに本発明の化粧料は、上記したもののほかに、美白剤、保湿剤、抗炎症剤、紫外線吸収剤等、他の有効成分を含ませるものであってもよい。
本発明の健康食品は、本発明のハナビラタケ溶媒抽出物組成物を飲食品の原材料に前記の配合量となるよう配合することにより、麺類、パン、キャンディー、ゼリー、クッキー、スープの形態とすることができる。さらに、鉄、カルシウム等の無機成分、種々のビタミン類、オリゴ糖、キトサン等の食物繊維、大豆抽出物等のタンパク質、レシチンなどの脂質、ショ糖、乳糖等の糖類を加えることもできる。
本発明の、ハナビラタケ抽出物の投与対象はその効果が発揮される限り特に限定されないが、好ましくは、温血動物であり、さらに好ましくは哺乳類であり、最も好ましくはヒトである。
【実施例】
【００２４】  以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、これらは本発明を何ら限定するものではない。【００２５】製造例１〔ハナビラタケ子実体の製造〕
ハナビラタケ子実体を以下の方法により製造した。
カラマツの大鋸屑、小麦粉、栄養分（バナナ、蜂蜜、エビオス、ペプトン、塩化カルシウム、ハイポネックス）および水を、大鋸屑：小麦粉：栄養分：水＝１００：１１．５：１．９：５１の重量比で含む菌床基材を準備した。この菌床基材（５２０ｇ）を８５０ｃｃのポリプロピレン製の培養瓶に入れ、常法にしたがって培養瓶を滅菌した後、ハナビラタケの種菌（１６ｇ）を接種した。その後、この培養瓶を２３℃の温度下、５６日間培養することによりハナビラタケ子実体を収穫した。子実体の重量は培養瓶１本あたり１４０ｇであった。【００２６】製造例２〔ハナビラタケ菌糸体の製造〕
ハナビラタケ菌糸体を以下の方法により製造した。
イーストエキス０．４％、グルコース２％、りん酸２水素カリウム０．１％、りん酸水素２ナトリウム０．１％となるように水に溶解し、１Ｎの塩化水素でｐＨ５．０に調整した培地を５００ｍＬ容三角フラスコに２００ｍＬ入れ、常法にしたがって滅菌した。ハナビラタケの種菌を生育させた平板培地から径６ｍｍの寒天片を打ち抜き、この液体培地に接種した。２４℃の暗黒下、２１日間振とう培養することによりハナビラタケ菌糸体を収穫した。菌糸体の乾燥重量は三角フラスコ１本あたり２ｇであった。【００２７】実施例１〔ハナビラタケ子実体低分子抗腫瘍成分の調製〕
上記の製造例１で得られたハナビラタケ子実体の乾燥物をブレンダーで粉末とし、そのうち５０ｇに水２Ｌを加え、１００℃、２時間の抽出処理を行なった。遠心分離により上澄みを回収し、沈澱物について同様の抽出操作をさらに２回繰り返した。回収した上澄みを凍結乾燥し、抽出物２３ｇ（ハナビラタケ子実体熱水抽出物；ＳＣＦＨＥｘとする）を得た。抽出物を再び５００ｍＬの水に溶解し、分子量８０００カットの透析膜（フナコシ製、スペクトラバイオテックメンブレン  ポア１．１）により透析を行なった。透析外液を回収し、凍結乾燥によりハナビラタケ子実体低分子抗腫瘍成分２．３ｇ（ＳＣＦＨＬとする）を得た。【００２８】実施例２〔ハナビラタケ菌糸体低分子抗腫瘍成分の調製〕
上記の製造例２で得られたハナビラタケ菌糸体の乾燥物をブレンダーで粉末とし、そのうち５ｇに水２００ｍＬを加え、１００℃、１時間の抽出処理を行なった。遠心分離により回収した上澄みを凍結乾燥し、抽出物１．６ｇ（ハナビラタケ菌糸体熱水抽出物；ＳＣＭＨＥｘとする）を得た。抽出物を再び２００ｍＬの水に溶解し、分子量８０００カットの透析膜（フナコシ製、スペクトラバイオテックメンブレン  ポア１．１）により透析を行なった。透析外液を回収し、凍結乾燥によりハナビラタケ菌糸体低分子抗腫瘍成分０．６２ｇ（ＳＣＭＨＬとする）を得た。【００２９】実施例３〔ハナビラタケ子実体低分子抗腫瘍成分の調製２〕
上記の製造例１で得られたハナビラタケ子実体の乾燥物をブレンダーで粉末とし、そのうち５０ｇに水２Ｌを加え、１００℃、２時間の抽出処理を行なった。遠心分離により上澄みを回収し、沈澱物について同様の抽出操作をさらに２回繰り返した。回収した上澄みを凍結乾燥し、得られた抽出物のうち１ｇを５０ｍＬの水に溶解し、セファデックスＧ−７５のゲル濾過担体を充填したカラム（φ３０ｍｍ×９００ｍｍ、充填量５００ｍＬ）に流速２００ｍｍ／時でアプライし、引き続き蒸留水により展開を行なった。５０ｍＬずつ分画分取しＧＰＣ法（カラム；ＵｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌＧｕａｒｄ＋１２０＋５００；Ｗａｔｅｒｓ製、移動相；０．５Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ１１）、流速；０．５ｍＬ／分、検出；示差屈折率、推定分子量は各分子量のデキストランの保持時間より算出）により分子量を確認し、分子量５００以上、１００００以下の各分を回収し、凍結乾燥によりハナビラタケ子実体低分子抗腫瘍成分０．０７６ｇを得た。【００３０】比較例１〔アガリクスタケ子実体低分子抗腫瘍成分の調製〕
アガリクスタケ子実体の乾燥物をブレンダーで粉末とし、そのうち３６ｇに水２Ｌを加え、１００℃、２時間の抽出処理を行なった。遠心分離により上澄みを回収し、沈澱物について同様の抽出操作をさらに２回繰り返した。回収した上澄みを凍結乾燥し、抽出物２５ｇを得た。抽出物を再び５００ｍＬの水に溶解し、分子量８０００カットの透析膜（フナコシ製、スペクトラバイオテックメンブレン  ポア１．１）により透析を行なった。透析外液を回収し、凍結乾燥によりアガリクスタケ子実体低分子抗腫瘍成分１０．９ｇ（ＡＢＦＨＬ）を得た。【００３１】試験例１〔βグルカンの定量〕
実施例１、２にしたがって調製したハナビラタケ熱水抽出物（ＳＣＦＨＥｘ、ＳＣＭＨＥｘ）、ハナビラタケ低分子抗腫瘍成分（ＳＣＦＨＬ、ＳＣＭＨＬ）について、コンゴーレッド法によるβグルカン量の定量を行なった。それぞれの２％水溶液を調製し、コンゴーレッド試薬を用いてβグルカンの定量を行なったところ、ＳＣＦＥｘは５ｍｇ／ｍＬ（２５％対固形分）、ＳＣＭＥｘは１ｍｇ／ｍＬ（５％対固形分）のβグルカンが検出されたのに対し、分画処理して得られた低分子成分であるＳＣＦＨＬには０．０８ｍｇ／ｍＬ（０．４％対固形分）以下、ＳＣＭＨＬには０．０３ｍｇ／ｍＬ（０．２％対固形分）以下のβグルカンしか検出されなかった。【００３２】  なお、コンゴーレッド法によって定量されるβグルカンは、分子量が１０万以上のものといわれる。【００３３】  このことから、ＳＣＦＥｘ、ＳＣＭＥｘに含まれていたβグルカン（分子量数万〜数十万）は透析膜による分画処理によって９６％以上が除去され、ＳＣＦＨＬ、ＳＣＭＨＬにはほとんど含まれないことが明らかになった。また、コンゴーレッドのメタクロマジー（色調の変化、吸収極大のシフト）（特開２０００−２１７５４３号公報参照）も、ＳＣＦＨＬ、ＳＣＭＨＬでは認められなかった。【００３４】試験例２〔分子量分布の確認１〕
実施例１に従って調製したハナビラタケ子実体熱水抽出物（ＳＣＦＨＥｘ）、ハナビラタケ子実体低分子抗腫瘍成分（ＳＣＦＨＬ）の分子量分布をＧＰＣ法（前記）により確認したところ、熱水抽出物のメインピークは５万前後の分子量を示したのに対し、低分子抗腫瘍成分は５０００前後であった。チャートを図１に示した。【００３５】試験例３〔分子量分布の確認２〕
実施例２に従って調製したハナビラタケ菌糸体熱水抽出物（ＳＣＭＨＥｘ）、ハナビラタケ菌糸体低分子抗腫瘍成分（ＳＣＭＨＬ）の分子量分布をＧＰＣ法（前記）により確認したところ、熱水抽出物のメインピークは５万前後の分子量を示したのに対し、低分子抗腫瘍成分は５０００前後であった。【００３６】試験例４〔がん細胞の増殖抑制試験〕
実施例１、２で調製したハナビラタケ子実体熱水抽出物（ＳＣＦＨＥｘ）、ハナビラタケ菌糸体熱水抽出物（ＳＣＭＨＥｘ）、ハナビラタケ子実体低分子抗腫瘍成分（ＳＣＦＨＬ）、ハナビラタケ菌糸体低分子抗腫瘍成分（ＳＣＭＨＬ）、比較例１で調製したアガリクスタケ子実体低分子抗腫瘍成分（ＡＢＦＨＬ）をりん酸バッファー（ＰＢＳ、ｐＨ７．２）に溶解し、それぞれ１０ｍｇ／ｍＬの濃度に調整した。ヒト大腸がん細胞（Ｃａｃｏ−２）、あるいは、ヒト白血病細胞（ＨＬ−６０）をＲＰＭＩ１６４０−１０％ウシ血清培地（ｐＨ７．２）に６００００個／ｍＬの濃度となるように懸濁し、９０μＬずつ９６穴プレートに分注した。上記試料をそれぞれ１０μＬずつ（ブランクにはＰＢＳのみを１０μＬ、ポジティブコントロールにはアクチノマイシンＤを１μｇ／ｍＬの濃度に調整したものを１０μＬ）分注し、よく混和した後、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で４８〜７２時間培養し、生細胞数をＣｅｌｌＣｏｕｎｔｉｎｇＫｉｔ８（同仁化学研究所製）で計測し、ブランクの細胞増殖量と比較して、細胞増殖抑制率を算出した。【００３７】  結果を表１に示した。【００３８】
【表１】
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【００３９】  表１の結果から明らかなように、本発明のハナビラタケ低分子抗腫瘍成分は、がん細胞の増殖を抑制する効果を示し、その強度は単なる熱水抽出物と比べると有意に高くなっており、透析膜による分画が、がん細胞の増殖抑制効果を発揮するのに有効であることが明らかになった。【００４０】試験例５〔経口摂取による腫瘍増殖抑制試験〕
マウス（ＩＣＲ：Ｊｃｌ、６週齢、メス、１０匹／群）の右上肢腋下部に、Ｅ・ＭＥＭ無血清培地（ｐＨ７．２）に４０００００００個／ｍＬの濃度となるように懸濁したマウス肉腫細胞（Ｓ１８０）を５０μＬずつ移植した。移植日より７日目から１０日間、実施例１，２及び比較例１にしたがって調製したハナビラタケ子実体低分子抗腫瘍成分（ＳＣＦＨＬ）、ハナビラタケ菌糸体低分子抗腫瘍成分（ＳＣＭＨＬ）、アガリクスタケ子実体低分子抗腫瘍成分（ＡＢＦＨＬ）、ならびに、ハナビラタケ熱水抽出物（ＳＣＦＨＥｘ、ＳＣＭＨＥｘ）の水溶液（濃度；１８ｍｇ／ｍＬ）を５０μＬずつ（ブランクには水道水を５０μＬ）経口投与した（体重１Ｋｇあたり３０ｍｇ投与）。移植日より３５日間、３、４日おきに腫瘍サイズの計測を行ない経時変化を観察すると共に、最終日に腫瘍塊を摘出し、その重量より腫瘍増殖抑制率を算出した。腫瘍サイズはその長径×短径×短径÷２の計算式より算出した。【００４１】  結果を図２、表２に示した。【００４２】
【表２】
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【００４３】  図２、表２の結果から明らかなように、本発明のハナビラタケ低分子抗腫瘍成分は、がん細胞の増殖を抑制する効果を示し、その強度は単なる熱水抽出物と比べると、それぞれ１０％程度高くなっており、透析膜による分画が、がん細胞の増殖抑制効果を発揮するのに有効であることが明らかになった。
本発明を詳細にまた特定の実施態様を参照して説明したが、本発明の精神と範囲を逸脱することなく様々な変更や修正を加えることができることは当業者にとって明らかである。
本出願は、２００５年５月２５日出願の日本特許出願（特願２００５−１５２４５４）に基づくものであり、その内容はここに参照として取り込まれる。
【産業上の利用可能性】
【００４４】  本発明は、ハナビラタケの子実体又は菌糸体から得られる比較的低分子量の成分を主成分とするハナビラタケ抽出物並びにそれを有効成分として含有する抗腫瘍剤、化粧品及び健康食品を提供する。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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