(57)【要約】本発明の目的は、ヒトおよび動物の健康維持に優れた効果が期待できる補酵素Ｑの効果をより確実に得るために、高い血中濃度と長い血中持続性が得られる組成物を提供することである。本発明は、補酵素Ｑが還元型補酵素Ｑおよび酸化型補酵素Ｑの混合物からなる組成物で、還元型補酵素Ｑの総補酵素Ｑに対する割合が９５重量％を超える組成物を用いることにより、補酵素Ｑの高い最高血中濃度が得られるだけではなく、血中濃度が高い濃度で持続し、血中濃度の曲線下面積（ＡＵＣ）を大きくすることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑおよび下記式（２）（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑを有効成分とする組成物であって、補酵素Ｑ中の還元型補酵素Ｑの割合が９５重量％を超える割合である血中持続性補酵素Ｑ組成物。
【化１】
2005089740.tif 000007
【化２】
2005089740.tif 000008
【請求項２】
補酵素Ｑが補酵素Ｑ１０である請求項１に記載の血中持続性補酵素Ｑ組成物。
【請求項３】
更に、抗酸化物質および／または抗酸化酵素を含有する請求項１または２に記載の血中持続性補酵素Ｑ組成物。
【請求項４】
抗酸化物質がビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、ピロロキノリンキノン、ピクノジェノール、フラバジェノール、セレン、リポ酸及びリポ酸誘導体からなる群より選択される少なくとも一種である請求項３記載の血中持続性補酵素Ｑ組成物。
【請求項５】
抗酸化酵素がスーパーオキサイドディスムターゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ及びアスコルビン酸ペルオキシダーゼからなる群より選択される少なくとも一種である請求項３記載の血中持続性補酵素Ｑ組成物。
【請求項６】
下記式（１）（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑおよび下記式（２）（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑを含有し、補酵素Ｑ中の還元型補酵素Ｑの割合が９５重量％を超える割合である組成物を投与することにより、補酵素Ｑの血中濃度を持続させる方法。
【化３】
2005089740.tif 000009
【化４】
2005089740.tif 000010
【請求項７】
投与形態が経口製剤であることを特徴とする請求項６記載の方法。
【請求項８】
経口製剤がカプセル製剤、錠剤、散剤又は液剤である請求項７記載の方法。
【請求項９】
補酵素Ｑが補酵素Ｑ１０である請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
血中の補酵素Ｑを、組成物を投与した後に示す最大血中濃度の半分以上の濃度で８時間以上維持できることを特徴とする請求項６〜９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、下記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび下記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑを有効成分とする組成物であって、補酵素Ｑの血中濃度を長時間、高濃度で持続する組成物に関する（式中ｎは１〜１２の整数を表す）。【０００２】
【化１】
2005089740.tif 000002
【０００３】
【化２】
2005089740.tif 000003
【背景技術】
【０００４】
補酵素Ｑは、細菌から哺乳動物まで広く生体に分布する必須成分である。ヒトでは、補酵素Ｑの側鎖が繰り返し構造を１０個持つ、補酵素Ｑ１０が主成分であることが知られている。補酵素Ｑ１０は、生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分として存在する生理学的成分であり、生体内において酸化と還元を繰り返すことで電子伝達系における伝達成分としての機能を担っている。補酵素Ｑは生体において、エネルギー生産、膜安定化および抗酸化活性を示すことが知られており、その有用性は広い。補酵素Ｑ１０のうち、酸化型補酵素Ｑ１０（ユビキノンまたはユビデカレノン）は、鬱血性心不全薬として医薬用途に用いられているように、心臓に対して効果的に働くことが知られている。その効果としては、心筋での酸素利用効率の改善、心筋でのＡＴＰの産生賦活、心機能の改善などが報告されている。医薬用途以外では、ビタミン類と同様に、栄養剤、栄養補助剤としての効果が報告されている。また、ユビキノンと乾燥酵母粉末の混合物による組織代謝活性化組成物（特許文献１）、ユビキノンを含有する組成物による重症筋無力症の症状の改善（特許文献２）、ユビキノンを含有する組成物による赤血球増加効果（特許文献３）なども報告されている。更には、疲労に対する回復効果についても報告がある（特許文献４、特許文献５、特許文献６）。【０００５】
還元型補酵素Ｑ１０については、酸化型のように有用性の報告はない。これは還元型補酵素Ｑ１０が空気酸化を受けやすいため、有用性の評価が行えなかったことによる。また、一般に、酸化型補酵素Ｑ１０の投与によっても生体内で還元を受けて還元型補酵素Ｑ１０が増加する事が知られていた事から、酸化型補酵素Ｑ１０と還元型補酵素Ｑ１０の生体への効果は同等であると考えられていたことも、還元型補酵素Ｑ１０の有用性評価が行われてこなかった理由の一つである。我々は、以前に、酸化型補酵素Ｑ単独に比較して、還元型補酵素Ｑが共に存在することで補酵素Ｑの経口吸収性が高まることを開示し（特許文献７）、還元型補酵素Ｑの利用が経口吸収性を上げるために効果的であることを示した。しかし、この組成物は、血漿中の最大濃度（Ｃｍａｘ）が、酸化型補酵素Ｑ単独に比較して、約２倍に上昇したものの、その消失は早く、血中での持続性においての改善は認められなかった。
補酵素Ｑのような疎水性物質の場合、生体内で有効にその効果を発現させるためには、それがどのような効果であれ、一般的にＣｍａｘの増加に加えて血中持続性（ＡＵＣ）の向上が望ましいことは、医薬品の開発研究などからよく知られていることである。このように、補酵素Ｑのように決して効果の強くない物質を有効に用いるためには、Ｃｍａｘの上昇も確かに重要な要素ではあるが、高い血中濃度を維持させることにより、種々の効果が期待できる。例えば、血中の酸化ストレスに起因する動脈硬化、糖尿病合併症、脳疾患、腎疾患などは補酵素Ｑがより長く血中に存在することで高い抗酸化活性が維持され、効率的にその発生頻度の減少が期待できる。更に、補酵素Ｑ１０は、各組織、臓器へ移行して、それぞれの器官でエネルギー産生の活発化あるいは抗酸化活性を高めることにより、種々の生物学的な有効性を現すと考えられるが、各組織および臓器へは血中を介して移動していくことから、補酵素Ｑ１０が血中に長時間存在することにより、各組織、臓器への移行の確率も高まることが期待できる。従って、補酵素Ｑ１０の多くの有用性の発現確率を高めるためには、血中での高い濃度での持続性が必要である。
【特許文献１】特開昭６２−５９２０８号公報
【特許文献２】特開昭５２−９９２２０号公報
【特許文献３】特開昭５２−９９２２２号公報
【特許文献４】特開平７−３３０５８４号公報
【特許文献５】特開平７−３３０５９３号公報
【特許文献６】特開平１０−２８７５６０号公報
【特許文献７】特開平１０−１０９９３３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
補酵素Ｑの有用性を更に高めるために、投与後の最大血中濃度が高く、かつ血中持続性のある血中持続性補酵素Ｑ組成物及び補酵素Ｑの高い血中濃度を持続する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは上記課題を解決すべく、還元型補酵素Ｑを含有する組成物について鋭意研究を重ね、補酵素Ｑ全体に対する還元型補酵素Ｑの割合が９５重量％を超えることにより、従来の組成物に比較して、長い血中持続性が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００８】
即ち本発明は、下記式（１）（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑおよび下記式（２）（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑを有効成分とする組成物であって、補酵素Ｑ中の還元型補酵素Ｑの割合が９５重量％を超える割合である血中持続性補酵素Ｑ組成物に関する。【０００９】
【化３】
2005089740.tif 000004
【００１０】
【化４】
2005089740.tif 000005
【００１１】
また、本発明は、前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑおよび前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑを含有し、補酵素Ｑ中の還元型補酵素Ｑの割合が９５重量％を超える割合である組成物を投与することにより、補酵素Ｑの血中濃度を持続させる方法に関する。【００１２】
本発明における血中持続性補酵素Ｑ組成物は、補酵素Ｑの血中濃度（還元型補酵素Ｑおよび酸化型補酵素Ｑの血中濃度の和）を長時間高濃度で維持できる組成物である。補酵素Ｑは、生体内においては通常４０〜９０％程度が還元型で存在することが知られている。還元型補酵素Ｑを得る方法としては特に限定されず、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により補酵素Ｑを得た後、クロマトグラフィーにより流出液中の還元型補酵素Ｑ区分を濃縮する方法などを採用することが出来る。この場合においては、必要に応じて上記抽出等で得られた補酵素Ｑに対し、水素化ほう素ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム（ハイドロサルファイトナトリウム）等の一般的な還元剤を添加し、常法により上記補酵素Ｑ中に含まれる酸化型補酵素Ｑを還元して還元型補酵素Ｑとした後にクロマトグラフィーによる濃縮を行っても良い。また、既存の高純度補酵素Ｑに上記還元剤を作用させる方法によっても得ることが出来る。あるいは、還元型補酵素Ｑを含有する菌体等を使用することも可能である。これらの方法で得られた還元型補酵素Ｑについては、酸化型補酵素Ｑの割合が５重量％未満であることが重要である。【００１３】
補酵素Ｑ中の還元型の割合は、通常、ＵＶ検出器を用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）システムにより、試料中の酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑを定量し、その量比をもって算出する方法と、ＨＰＬＣに電気化学的検出器を組み込んだシステムにより、酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの割合をピーク面積から算出する方法とがある。電気化学的検出器を組み込んだシステムでは、酸化還元物質を特異的に測れることと感度が高いことから、生体あるいは試料に微量に存在する還元型の割合を測定する場合は、有用性が高い。本発明で示す還元型補酵素Ｑの割合は全て、電気化学的検出器を組み込んだＨＰＬＣシステムによって定量したものである。【００１４】
前述のように、還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑを共に含有する組成物を経口投与することで、酸化型補酵素Ｑ単独の投与に比較して、血漿中の補酵素Ｑ量をより増加させることが出来ることを我々は見出したが、この組成物は、Ｃｍａｘこそ酸化型補酵素Ｑ１０単独に比較して約２倍に増加できたものの、血中での持続性の指標である血中濃度の曲線下面積（ＡＵＣ）は、約１．３倍と血中での持続性に対しては、大きな効果は認められなかった。我々は、補酵素Ｑの生理作用を十分に発揮させるためには、最高血中濃度だけではなく、血中持続性をも向上させることが重要であると考え、両方を満足する組成物の検討を実施した。補酵素Ｑは、腸管からリンパ管を経て体内に吸収されると考えられている。血中持続性を高めるためには、リンパ吸収に適合した組成とし、リンパから血液への供給を長時間に渡って維持することが必要と考えられる。今回、我々は、検討の結果、補酵素Ｑ中の還元型補酵素Ｑの割合が９５重量％を超えて高められた組成物を用いることで、高い血中濃度と、長い持続性が得られることを見出した。特開平１０−１０９９３３号公報（特許文献７）では、還元型補酵素Ｑ１０の割合が９５％以下の組成物について、実施例を報告している。当時の還元型補酵素Ｑ１０の製造方法および保存方法では、９５％を超える割合の組成物を維持することは困難であったが、我々はその後の検討により、９５％を超える割合の組成物を維持する技術を確立した（特開２００３−１１３１２９）。この高純度の組成物を本検討に用いたところ、還元型補酵素Ｑ１０の割合が９５％以下の従来の組成物に比較して、血中濃度の持続性が飛躍的に高まることを我々は見出した。【００１５】
本発明における血中持続性補酵素Ｑ組成物は、還元型補酵素Ｑおよび酸化型補酵素Ｑを含有する組成物であって、補酵素Ｑ全量に対して還元型補酵素Ｑの割合が９５重量％を超えるものであり、９７重量％以上であることがさらに好ましい。補酵素Ｑ中の還元型補酵素Ｑの割合は、１００重量％未満であれば上限は特に制限されないが、好ましくは９９．９９９重量％以下であり、さらに好ましくは９９．９重量％以下である。【００１６】
本発明で使用出来る還元型補酵素Ｑは前記式（１）で表されるように側鎖の繰り返し単位（式中ｎ）が１〜１２のものを使用することが出来るが、中でも側鎖の繰り返し単位が１０のもの、すなわち還元型補酵素Ｑ１０が特に好適に使用出来る。【００１７】
本発明で使用出来る酸化型補酵素Ｑは前記式（２）で表されるように側鎖の繰り返し単位（式中ｎ）が１〜１２のものを使用することが出来るが、中でも側鎖の繰り返し単位が１０のもの、すなわち酸化型補酵素Ｑ１０が特に好適に使用出来る。【００１８】
本発明の血中持続性補酵素Ｑ組成物における補酵素Ｑ（還元型補酵素Ｑ及び酸化型補酵素Ｑの合計）の割合は、好ましくは０．０１〜７０重量％であり、より好ましくは１〜５０重量％である。【００１９】
本発明の血中持続性補酵素Ｑ組成物には、抗酸化物質及び／又は抗酸化酵素を含有する事ができる。抗酸化物質としては特に限定はされないが、例えば、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、ピロロキノリンキノン、ピクノジェノール、フラバジェノール、セレン、リポ酸、リポ酸誘導体などが適している。上記抗酸化物質は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。
また、抗酸化酵素としては、特に限定はされないが、例えば、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、アスコルビン酸ペルオキシダーゼなどが適している。上記抗酸化酵素は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。【００２０】
本発明の血中持続性補酵素Ｑ組成物は、他の滋養強壮成分を共に含む事ができる。滋養強壮成分としては、特に限定はされないが、例えば、クレアチン、カルニチン、タウリン、ビタミンＢ１、ビタミンＢ誘導体、又はアミノ酸などが適している。上記滋養強壮成分は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。【００２１】
本発明の血中持続性補酵素Ｑ組成物は、栄養補助成分を共に含む事ができる。栄養補助成分としては、特に限定はされないが、アミノ酸、金属イオン、糖類、蛋白質類、脂肪酸類、ビタミンなどが挙げられる。上記栄養補助成分は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。【００２２】
本発明によれば、還元型補酵素Ｑおよび酸化型補酵素Ｑを含有し、補酵素Ｑ中の還元型補酵素Ｑの割合が９５重量％を超える割合である組成物を投与することにより、補酵素Ｑの血中濃度を持続させることができる。【００２３】
本発明における血中持続性補酵素Ｑ組成物は、例えばラットに対し、補酵素Ｑの量に換算して１００ｍｇ／ｋｇ体重投与すれば、補酵素Ｑの血中濃度を１．０μｇ／ｍｌ以上で４時間〜８時間、好ましくは、４時間〜１２時間持続させることができる。さらに、本発明による還元型補酵素Ｑおよび酸化型補酵素Ｑを含有する組成物を投与することにより、血中の補酵素Ｑ量の半減期を好ましくは７時間以上、より好ましくは８時間以上、さらに好ましくは１０時間以上にすることができる。
本発明の方法を用いると、血中の補酵素Ｑを、組成物を投与した後に示した最大血中濃度の半分以上の濃度で好ましくは８時間以上維持することでき、より好ましくは１０時間以上維持することできる。【００２４】
補酵素Ｑの血中濃度を長時間持続させるための本発明における血中持続性補酵素Ｑ組成物の投与量としては、特に制限されないが、補酵素Ｑの量に換算して成人一人当たり１日に３０ｍｇ／ｄａｙ〜２００ｍｇ／ｄａｙが好ましい。【００２５】
これにより、還元型補酵素Ｑの有する種々の効果効能を効果的に発現させることができる。還元型補酵素Ｑの有する効果効能としては、例えば、老化、疲労、糖尿病および糖尿病の合併症、動脈硬化、高脂血、高血圧、低血圧、更年期障害、めまい、腎炎、感染症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、ミトコンドリア異常症、クローン病、潰瘍性大腸炎、癌、筋無力症、肥満、皮膚疾患、シワ、日焼け、かぶれ、歯周病、ストレス、アレルギー、偏頭痛、記憶障害、不妊等の予防・改善や延命などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。【００２６】
投与形態としては特に制限されず、経口投与でも良いし、注射薬、点滴薬、坐剤、経粘膜剤、吸入剤などによる投与形態でも良い。好ましくは経口製剤を用いた経口投与である。【００２７】
本発明の血中持続性補酵素Ｑ組成物の経口製剤としての剤形は特に限定されないが、例えば粉末剤であってもよく、結合剤を加えて顆粒剤としてもよく、粉末剤あるいは顆粒剤をカプセルに充填してカプセル剤としてもよい。また、天然油、油状の高級脂肪酸、高級脂肪酸モノグリセライド、界面活性剤またはこれらの混合物などを加え、油状のまま又はスラリーとして充填してソフトカプセル剤とすることもできる。この場合においては、ゼラチンを主体としたものまたはその他の水溶性高分子物質を主体としたもの等を使用することもできる。また、このようなカプセルにはマイクロカプセルも含まれる。あるいは、液状にしてドリンク剤としてもよい。最も好適な剤形として、油脂、界面活性剤などと共に油状のまま又はスラリーとして充填したソフトカプセルが挙げられるが、これに限定されるものではない。
好ましくは、カプセル製剤、錠剤、散剤、液剤である。【００２８】
本発明の血中持続性補酵素Ｑ組成物には、更に、上記還元型補酵素Ｑ及び酸化型補酵素Ｑの他に薬剤学的に許容される他の製剤素材を、常法により適宜添加混合してもよい。このようなものとしては特に限定されず、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などが挙げられる。【００２９】
上記賦形剤としては特に限定されず、例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ（トウモロコシ澱粉）、マンニト−ル、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、などが挙げられる。
上記崩壊剤としては特に限定されず、例えば、澱粉、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガント等が挙げられる。【００３０】
上記滑沢剤としては特に限定されず、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等が挙げられる。
上記結合剤としては特に限定されず、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トラガント、シェラック、ゼラチン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ソルビトール等が挙げられる。【００３１】
上記酸化防止剤としては特に限定されず、例えば、アスコルビン酸、トコフェロール、ビタミンＡ、β−カロチン、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸およびこれらの誘導体などが挙げられる。【００３２】
上記着色剤としては特に限定されず、例えば、医薬品に添加することが許可されているものなどを使用することができる。【００３３】
上記凝集防止剤としては特に限定されず、例えばステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸などが挙げられる。【００３４】
上記吸収促進剤としては特に限定されず、例えば高級アルコール類、高級脂肪酸類、グリセリン脂肪酸エステルなどの界面活性剤などが挙げられる。【００３５】
上記溶解補助剤としては特に限定されず、例えばフマル酸、コハク酸、りんご酸などの有機酸などが挙げられる。
上記安定化剤としては特に限定されず、例えば安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチルなどが挙げられる。【００３６】
本発明の血中持続性補酵素Ｑ組成物を一般食品とする場合の形態は、特には限定されないが、食用油脂組成物、調理油類、スプレー油類、バター類、マーガリン類、ショートニング類、ホイップクリーム類、濃縮乳類、ホワイトナー類、ドレッシング類、ピックルス液類、パン類、ケーキ類、パイ類、クッキー類、和菓子類、スナック菓子類、油菓子類、チョコレート及びチョコレート菓子類、米菓類、ルウ類、ソース類、たれ類、トッピング類、氷菓類、麺類、ベーカリーミックス類、フライ食品類、加工肉製品類、水産練り製品類、冷凍アントレ類、畜産冷凍食品、農産冷凍食品などの冷凍食品類、米飯類、ジャム類、チーズ、チーズフード、チーズ様食品、ガム類、キャンディー類、発酵乳類、缶詰類、飲料類などが挙げられる。これらの食品に加工する際には、還元型補酵素Ｑの酸化を抑制するために、低温化あるいは脱酸素状態での加工が望ましい。
【発明の効果】
【００３７】
本発明の組成物は補酵素Ｑの効果的な摂取に適している。高い血中濃度が維持されることは、補酵素Ｑによる種々の効果の効率的な発現に重要であり、本組成物により効率的に補酵素Ｑの効果が期待できる。また、本発明記載の方法により、補酵素Ｑの血中濃度を長時間高濃度で持続させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３８】
以下に実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
なお、本実施例において、補酵素Ｑ全体に対する還元型補酵素Ｑの割合は、クーロケム（ｅｓａ社製電気化学的検出器）を組み込んだＨＰＬＣシステムを用いて測定した。【００３９】
（製造例１）還元型補酵素Ｑ１０の製造１
１０００ｇのエタノール中に、１００ｇの酸化型補酵素Ｑ１０（純度９９．４％）、６０ｇのＬ−アスコルビン酸を加え、７８℃にて攪拌し、還元反応を行った。３０時間後、５０℃まで冷却し、同温を保持しながらエタノール３３０ｇと水７０ｇ添加した。このエタノール溶液（還元型補酵素Ｑ１０を１００ｇを含む）を攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却し、白色のスラリーを得た。得られたスラリーを減圧濾過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノールで順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶９７ｇを得た。減圧乾燥を除く全ての操作は窒素雰囲気下で実施した。【００４０】
（製造例２）還元型補酵素Ｑ１０の製造２
１００ｇの酸化型補酵素Ｑ１０を２５℃で１０００ｇのヘプタン溶液に溶解させた。攪拌しながら、還元剤として次亜硫酸ナトリウム（純度７５％以上）１００ｇに１０００ｍｌの水を加えて溶解させた水溶液を徐々に添加し、２５℃、ｐＨ４〜６で還元反応を行った。２時間後、反応液から水相を除去し、脱気した飽和食塩水１０００ｇでヘプタン相を６回水洗した。以上、すべての操作は窒素雰囲気下で実施した。このヘプタン相を減圧下にて溶媒置換し、５０℃の還元型補酵素Ｑ１０の７％（ｗ／ｗ）エタノール溶液を調製した（還元型補酵素Ｑ１０を１００ｇ含む）。このエタノール溶液に水５０ｇを添加し、攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却して結晶を析出させた。全ての操作は窒素雰囲気下で実施した。得られたスラリーを減圧濾過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノールで順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに、湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶９７ｇを得た。【００４１】
（実施例１）
ＳＤ系雄性ラット（６週齢）に還元型補酵素Ｑ１０（但し、１重量％の酸化型補酵素Ｑ１０を含む）の大豆油溶液（還元型補酵素Ｑ１０／大豆油溶液＝２０ｍｇ／ｍｌ）を還元型補酵素Ｑ１０（但し、１重量％の酸化型補酵素Ｑ１０を含む）１００ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与し、投与０．５、１、２、３、４、５、６、８、１２、および２４時間後に採血し、血漿中の補酵素Ｑ１０（還元型補酵素Ｑ１０と酸化型補酵素Ｑ１０）の定量を行った（ｎ＝４）。血漿中の補酵素Ｑ１０の定量は、ＨＰＬＣを用いて実施した。即ち、採取したラット血漿（０．２ｍｌ）に対して、補酵素Ｑ７（０．００３ｍｇ）、エタノール（１ｍｌ）、蒸留水（１ｍｌ）および塩化第二鉄（０．０１％）を添加し、混合した後、ヘキサン（３ｍｌ）を添加、振盪して補酵素Ｑ１０を抽出した。この抽出操作を２回繰り返した後、ヘキサンを蒸発乾固、０．２５ｍｌのエタノールに再溶解してＨＰＬＣに注入した。ＨＰＬＣの条件は、カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ（ＯＤＳ−Ａ３０３）、検出波長：２７５ｎｍ、移動相：メタノール（８８％）、ヘキサン（１２％）、流速：１ｍｌ／ｍｉｎである（還元型補酵素Ｑ１０の保持時間２５．７分、酸化型補酵素Ｑ１０の保持時間１９．３分）。【００４２】
（実施例２）
実施例１と同様に還元型補酵素Ｑ１０（但し、３重量％の酸化型補酵素Ｑ１０を含む）を投与し、血漿中の補酵素Ｑ１０量を定量した。【００４３】
（比較例１）
実施例１と同様に酸化型補酵素Ｑ１０を投与し、血漿中の補酵素Ｑ１０量を定量した。【００４４】
（比較例２）
実施例１と同様に還元型補酵素Ｑ１０（但し、５重量％の酸化型補酵素Ｑ１０を含む）を投与し、血漿中の補酵素Ｑ１０量を定量した。【００４５】
実施例１および比較例２での血漿中の補酵素Ｑ１０量の経時変化を図１に示した。比較例２の試料を投与した場合の血漿中の補酵素Ｑ１０（ＣｏＱ１０）量に比較して、実施例１の試料では、血中持続性が長いことが判る。【００４６】
【表１】
2005089740.tif 000006
【００４７】
実施例１〜２及び比較例１〜２の測定結果に基づき、表１に最大血中濃度（Ｃｍａｘ）と曲線下面積（ＡＵＣ）を纏めた。比較例２の組成物に比べ、実施例１および実施例２の組成物は、Ｃｍａｘでは大きな差はないものの、ＡＵＣでは、共に約３倍の値を示し、血中での持続性が有意に高いことが判った。【００４８】
以上の結果、還元型補酵素Ｑの酸化型補酵素Ｑに対する比（還元型補酵素Ｑ：酸化型補酵素Ｑ）が９５：５を超える組成物を用いることにより、血漿中の補酵素Ｑ濃度を高めるだけではなく、血中での持続性をも長くすることが出来ることが判った。【００４９】
（実施例３）散剤
還元型補酵素Ｑ１０（但し、２重量％の酸化型補酵素Ｑ１０を含む）をプロパノールに溶解し、次いでこれを微結晶セルロースに吸着させた後、減圧下で乾燥した。これを窒素気流下でトウモロコシ澱粉と混合し、散剤とした。
還元型補酵素Ｑ１０      ９．８重量部
酸化型補酵素Ｑ１０      ０．２重量部
微結晶セルロース        ４０重量部
トウモロコシ澱粉          ５５重量部【００５０】
（実施例４）カプセル剤
以下の組成で実施例３と同様に散剤を作製した後、常法によりゼラチンカプセルに充填した。充填したカプセルはシールをした後、窒素雰囲気下でパッキングし、冷蔵保存した。
還元型補酵素Ｑ１０      １９．６重量部
酸化型補酵素Ｑ１０        ０．４重量部
微結晶セルロース          ４０重量部
トウモロコシ澱粉            ２０重量部
乳糖                          ６５重量部
ステアリン酸マグネシウム    ３重量部
ポリビニルピロリドン          ２重量部【００５１】
（実施例５）ソフトカプセル剤
コーン油を５０℃に加温し、同温度で溶融した還元型補酵素Ｑ１０（但し、２重量％の酸化型補酵素Ｑ１０を含む）を加えて溶解した。これを常法によりソフトカプセル化した。
還元型補酵素Ｑ１０      ４９重量部
酸化型補酵素Ｑ１０        １重量部
コーン油                ３５０重量部【００５２】
（実施例６）錠剤
還元型補酵素Ｑ１０（但し、２重量％の酸化型補酵素Ｑ１０を含む）をプロパノールに溶解し、これを微結晶セルロースに吸着させた後、減圧下で乾燥した。これに窒素雰囲気下でトウモロコシ澱粉、乳糖、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウムを混合し、次いでポリビニルピロリドンの水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤としてタルクを加えて混合した後、錠剤に打錠した。
錠剤は窒素雰囲気下でパッキングし、冷蔵保存とした。
還元型補酵素Ｑ１０                      １９．６重量部
酸化型補酵素Ｑ１０                        ０．４重量部
トウモロコシ澱粉                            ２５重量部
乳糖                                          １５重量部
カルボキシメチルセルロースカルシウム      １０重量部
微結晶セルロース                            ４０重量部
ポリビニルピロリドン                          ５重量部
ステアリン酸マグネシウム                      ３重量部
タルク                                    １０重量部
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】実施例１及び比較例２におけるラット血漿中の補酵素Ｑ１０（ＣｏＱ１０）量の経時的変化を示す。縦軸は、血漿中のＣｏＱ１０濃度であり、横軸は、ラットに還元型補酵素Ｑ１０を投与してからの時間（ｈ）を表す。●は還元型補酵素Ｑ１０を９５重量％含む比較例２、○は還元型補酵素Ｑ１０９９重量％含む実施例１の値を表す。
【図１】
2005089740.tif 000011
【国際調査報告】
2005089740.tif 000012
2005089740.tif 000013
2005089740.tif 000014
2005089740.tif 000015
2005089740.tif 000016
2005089740.tif 000017
2005089740.tif 000018