(57)【要約】【課題】従来の技術では、困難であった梨果実の「みつ症」の発生予察を行う。【解決手段】「みつ症」が発生した果実で特異的に発現する遺伝子またはその遺伝子産物であるタンパク質をマーカーとして利用することによって、「みつ症」が発生する際の果実の生理状態を収穫までまだ期日のある未熟な果実においても的確にモニタリングする。調査対象樹の果実における、マーカーとするDNAまたはタンパク質の相対的な発現量または合成量を「みつ症」発生果実の値と比較することによって、「みつ症」の発生を予察する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
梨果実のみつ症の発生予察方法であって
梨果実の全ＲＮＡ（または全タンパク質）を抽出する抽出ステップと、
抽出したＲＮＡ（またはタンパク質）についてメタロチオネイン遺伝子（またはタンパク質）またはリンゴ酸加水分解酵素遺伝子（またはタンパク質）の発現量（または合成量）を測定する測定ステップと、
前記測定ステップの測定結果を表示装置に表示するステップと、からなる梨果実のみつ症の発生予察方法。
【請求項２】
梨果実のみつ症の発生予察装置であって、
梨果実の全ＲＮＡ（または全タンパク質）を抽出する抽出手段と、
抽出したＲＮＡ（またはタンパク質）についてメタロチオネイン遺伝子（またはタンパク質）またはリンゴ酸加水分解酵素遺伝子（またはタンパク質）の発現量（または合成量）を測定する測定手段と、
前記測定手段の測定結果を表示する表示手段からなる梨果実のみつ症の発生予察装置。
【請求項３】
梨果実のみつ症の発生予察方法であって
梨果実の全ＲＮＡ（または全タンパク質）を抽出する抽出ステップと、
抽出したＲＮＡ（またはタンパク質）について次のＲＮＡ（またはタンパク質）の少なくとも一つの発現量を測定する測定ステップと、
カゼインキナーゼ、
伸長因子１のαサブユニット、
アルコールアシル基転移酵素、
アスパラギン酸プロテナーゼ、
真核生物由来翻訳開始因子、
液胞関連アネキシン、
Sec24様COPIIタンパク質、 
アスパラギン合成酵素、
リブロース1, 5, 2リン酸カルボキシラーゼ、
前記測定ステップの測定結果を表示装置に表示するステップと、からなる梨果実のみつ症の発生予察方法。
【請求項４】
梨果実のみつ症の発生予察装置であって
梨果実の全ＲＮＡ（または全タンパク質）を抽出する抽出手段と、
抽出したＲＮＡ（またはタンパク質）について次のＲＮＡ（またはタンパク質）の少なくとも一つの発現量を測定する測定手段と、
カゼインキナーゼ、
伸長因子１のαサブユニット、
アルコールアシル基転移酵素、
アスパラギン酸プロテナーゼ、
真核生物由来翻訳開始因子、
液胞関連アネキシン、
Sec24様COPIIタンパク質、 
アスパラギン合成酵素、
リブロース1, 5, 2リン酸カルボキシラーゼ、
前記測定手段の測定結果を表示する表示装置と、からなる梨果実のみつ症の発生予察装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定の遺伝子またはその産物であるタンパク質をマーカーとして利用することによる、梨栽培におけるみつ症果実の発生の予察に関する。
【背景技術】
【０００２】
梨栽培においては、主要な中生品種の豊水において「みつ症」が多発し、生産物である果実の品質を落とすことが問題となっている。このような問題を解決する手法については、従来、「みつ症」の抑制に関わる薬剤（特許文献１参照）や、果実袋（特許文献２参照）が知られている。
【０００３】
また、「みつ症」の程度を測定する方法としては、果実を切断して目視により果実内部を調査する方法（例えば、非特許文献１参照）や光を照射して果実内部の品質を評価する装置（例えば、特許文献３参照）を用いる方法がある。
【０００４】
しかし、これらの方法は既に「みつ症」が発生している果実における症状を評価するものであり、みつ症の発生してない段階でみつ症の発生を予察できるような方法は発明されていない。
【０００５】
「みつ症」の発生原因に関しては、栽培温度などの環境要因、袋掛けや剪定などの栽培要因、カルシウム剤およびエチレンやジベレリンなど植物ホルモンの影響についての試験研究が行われてきた（非特許文献１）。しかしながら、みつ症の発生に関する生理状態を左右するような因子、例えば特異的に発現する遺伝子はこれまで発見されていない。
【０００６】
「みつ症」の多発年では、早期収穫することによって、被害を最小限に食い止められるが、「みつ症」は、気象条件や栽培条件など、種々の要因による樹体の生理状態の変化の結果として誘発されるため、前にも述べたように従来の技術では、その発生予察は困難であった。
【０００７】
【特許文献１】特開2006-316046
【特許文献２】特開2006-304752
【特許文献３】特開平9-243560
【非特許文献１】佐久間文雄（2002）−ニホンナシ‘豊水’におけるみつ症発生に係わる栽培要因の解明に関する研究−茨城県農業総合センター園芸研究所特別研究報告第2号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
解決しようとする問題点は、「みつ症」の発生予察において、従来は収穫間際に果実を解体して目視により「みつ症」の発生を確認するしか方法が無く、すなわち、予察不可能であった。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、「みつ症」が発生した果実で特異的に発現する遺伝子またはその遺伝子産物であるタンパク質をマーカーとして利用することによって、「みつ症」が発生する際の果実の生理状態を収穫までまだ期日のある未熟な果実においても的確にモニタリングできることを最も主要な特徴とする。
【００１０】
本発明で、「みつ症」が発生した果実で特異的に発現する遺伝子をcDNAサブトラクションによってはじめて発見しており（第１、２表参照）、これらの遺伝子またはその産物であるタンパク質をマーカーとして用いることができる。
【００１１】
【表１】
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【００１２】
【表２】
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【発明の効果】
【００１３】
本発明の「みつ症」マーカーを用いることにより、「みつ症」の発生予察が可能となり、大発生が予察される場合には早期収穫を行うなどの対策を講じることが可能となるため、高品質な梨果実の安定供給できるという利点がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明の実施の形態を図1に基づいて説明する。図１は、本発明の実施例をまとめた組織図である。
【実施例１】
【００１５】
調査対象樹から果実を採取し、全RNAまたは全タンパク質を抽出する。  
【００１６】
DNAマーカー法では、このRNAからcDNAを合成し、DNA定量法（例えば、リアルタイム定量PCR法）により、マーカーとする遺伝子（第３、４表参照）、すなわち「メタロチオネイン様タンパク質遺伝子」および「リンゴ酸加水分解酵素遺伝子」の相対的な発現量を測定する。
【００１７】
タンパク質マーカー法では、この全タンパク質に含まれるマーカーとするタンパク質（第３、４表参照）、すなわち「メタロチオネイン様タンパク質」および「リンゴ酸加水分解酵素」の相対的な合成量をそれらのタンパク質の抗体を用いた定量法（例えば、ウエスタンブロッティング法）により測定できると考えられる。
【００１８】
【表３】
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【００１９】
【表４】
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【００２０】
DNAまたはタンパク質の測定結果は、相対的な発現量比として数値化および標準化する。相対的に定量する際の基準としては、ハウスキーピングなタンパク質（例えばユビキチン）またはそれをコードするDNAとする。
【００２１】
それぞれの方法において、DNAまたはタンパク質の相対的な発現量または合成量を「みつ症」発生果実の値と比較する。
【００２２】
調査対象果実が健全果実と比較して、概ね１０倍以上の発現量比の増加を示すことをもって「みつ症」の発生を予察する。
【００２３】
但し、発生予察における発現量比の閾値については、対象とする遺伝子型（例えば品種など）および目標とする予察的中率を考慮して、妥当な値を設定すれば良い。
【００２４】
予察結果を表示する方法としては、パーソナルコンピューターで稼動するソフトウエアによる予察結果の数値化またはその視覚化による。
【００２５】
また、簡易試験紙などの定量法を用いれば、梨栽培の現場においても実施可能であると考えられる。
【００２６】
簡易試験紙とは、特定のタンパク質を簡易に検定することによる生理診断キット（例えば、妊娠検査キットなど）でみられるような、特定のタンパク質を抗原抗体反応により迅速簡便に視覚化し検出するものである。
【実施例２】
【００２７】
調査対象樹から果実を採取し、全RNAまたは全タンパク質を抽出する。  
【００２８】
DNAマーカー法では、このRNAからcDNAを合成し、DNA定量法（例えば、リアルタイム定量PCR法）により、マーカーとする遺伝子（第５、６表参照）、すなわち「カゼインキナーゼ遺伝子」、「伸長因子１のαサブユニット遺伝子」、「アルコールアシル基転移酵素遺伝子」、「アスパラギン酸プロテナーゼ遺伝子」、「真核生物由来翻訳開始因子遺伝子」、「液胞関連アネキシンタンパク質遺伝子」、「Sec24様 COPIIタンパク質遺伝子」、「アスパラギン合成酵素遺伝子」、および「リブロース1, 5, 2リン酸カルボキシラーゼ遺伝子」の相対的な発現量を測定する。
【００２９】
タンパク質マーカー法では、この全タンパク質に含まれるマーカーとするタンパク質（第５、６表参照）、すなわち「カゼインキナーゼ」、「伸長因子１のαサブユニット」、「アルコールアシル基転移酵素」、「アスパラギン酸プロテナーゼ」、「真核生物由来翻訳開始因子タンパク質」、「液胞関連アネキシンタンパク質」、「Sec24様 COPIIタンパク質」、「アスパラギン合成酵素」、および「リブロース1, 5, 2リン酸カルボキシラーゼ」の相対的な合成量をそれらのタンパク質の抗体を用いた定量法（例えば、ウエスタンブロッティング法）により測定できると考えられる。
【００３０】
【表５】
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【００３１】
【表６】
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【００３２】
DNAまたはタンパク質の測定結果は、相対的な発現量比として数値化および標準化する。相対的に定量する際の基準としては、ハウスキーピングなタンパク質（例えばユビキチン）またはそれをコードするDNAとする。
【００３３】
それぞれの方法において、DNAまたはタンパク質の相対的な発現量または合成量を「みつ症」発生果実の値と比較する。
【００３４】
調査対象果実が健全果実と比較して、概ね１０分の１以下に発現量比が減少を示すことをもって「みつ症」の発生を予察する。
【００３５】
但し、発生予察における発現量比の閾値については、対象とする遺伝子型（例えば品種など）および目標とする予察的中率を考慮して、妥当な値を設定すれば良い。
【００３６】
予察結果を表示する方法としては、パーソナルコンピューターで稼動するソフトウエアによる予察結果の数値化またはその視覚化による。
【００３７】
また、簡易試験紙などの定量法を用いれば、梨栽培の現場においても実施可能であると考えられる。
【００３８】
簡易試験紙とは、特定のタンパク質を簡易に検定することによる生理診断キット（例えば、妊娠検査キットなど）でみられるような、特定のタンパク質を抗原抗体反応により迅速簡便に視覚化し検出するものである。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明は、「みつ症」の発生予察をはじめて可能とするものであるため、梨栽培において広く利用される可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】本発明の実施例をまとめた組織図である。（実施例）
【図１】
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