(57)【要約】【課題】  新規なＯＡの検査方法を提供する。【解決手段】被検体から得られたＣ２Ｃ、ＣＴＸ−ＩＩ、ＣＰＩＩ、ＮＴｘ、及びヒアルロン酸の測定値、ならびにＣ２Ｃ／ＣＰＩＩ比をそれぞれ変数として用いて判別分析を行うことを特徴とする、変形性関節症の検査方法；ならびに被検体から得られたＣ２Ｃ、ＣＴＸ−ＩＩ、ＣＰＩＩ、ＮＴｘ、及びヒアルロン酸の測定値、ならびにＣ２Ｃ／ＣＰＩＩ比をそれぞれ変数として用いて判別分析を行うことを特徴とする、変形性関節症診断用キット。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検体から得られたＣ２Ｃ、ＣＴＸ−ＩＩ、ＣＰＩＩ、ＮＴｘ、及びヒアルロン酸の測定値、ならびにＣ２Ｃ／ＣＰＩＩ比をそれぞれ変数として用いて判別分析を行うことを特徴とする、変形性関節症の検査方法。
【請求項２】
変形性関節症が変形性膝関節症、変形性股関節症、又は変形性腰椎症である請求項１記載の方法。
【請求項３】
被検体から得られたＣ２Ｃ、ＣＴＸ−ＩＩ、ＣＰＩＩ、ＮＴｘ、及びヒアルロン酸の測定値、ならびにＣ２Ｃ／ＣＰＩＩ比をそれぞれ変数として用いて判別分析を行うことを特徴とする、変形性関節症診断用キット。
【請求項４】
変形性関節症が変形性膝関節症、変形性股関節症、又は変形性腰椎症である請求項３記載の診断用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、変形性関節症の検査方法及び診断用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
変形性関節症（以下「ＯＡ」ともいう）は慢性の関節炎を伴う関節疾患であり、関節の構成要素の退行変性により、軟骨の破壊と、骨及び軟骨の増殖性変化を来す病気である。患者数は年令とともに増加し、６０才以上になると膝、肘、股関節、及び脊椎で、８０％以上の人に程度の差こそあれ、ＯＡの症状が認められるといわれている。
現在、ＯＡの治療は痛みを抑制する対処療法が中心であることから、関節の退行性変化を抑制する治療方法の開発が求められており、また一方で早期診断の観点から種々の診断方法が検討されている。
【０００３】
関節の状態を把握する方法としては、問診の他、視診やＸ線検査等の形態学的診断が一般的であるが、これらは病気がある程度進行しないと判断できないため、他の診断方法が提案されている。例えば、軟骨基質の分解に伴って関節液中に遊出した軟骨基質成分に着目し、ヒアルロン酸との結合能を有する正常アグリカンを定量して、その他のプロテオグリカンとの関係から正常関節と病態関節を識別する方法（特許文献１）、変形性関節症の軟骨において発現が顕著に増加する遺伝子に注目して、そのタンパク質又はＤＮＡを関節炎の診断マーカーとする方法（特許文献２）、Ｒｕｎｘ３遺伝子及びタンパク質の発現を解析することによりＯＡなどの骨・関節関連疾患の診断法又は診断薬（特許文献３）、関節軟骨のＮ−結合型糖タンパク質糖鎖を分析する工程を含む関節疾患の診断及び／又は治療における有用な情報を提供する方法（特許文献４）が提案されている。
【特許文献１】ＰＣＴ国際公開公報ＷＯ９５／２２７６５号公報
【特許文献２】特開２００４−１８７６８０号公報
【特許文献３】特開２００５−２０４５５７号公報
【特許文献４】特開２００７−２０５７７７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ＯＡの病態評価は、通常、ＪＯＡ、ＶＡＳ、ＷＯＭＡＣなどのスコアを用いて行われている。これらのスコアは疼痛や症状を評価するには優れているが、患者の主観に左右される可能性がある。一方、ＯＡの病態を客観的に評価するための指標としてヒアルロン酸やアグリカンなどが用いられているが、これらの物質は軟骨以外の組織からも分泌されるため必ずしも軟骨代謝を反映していない。
【０００５】
本発明は、ＯＡの研究過程で知見を得たものであり、特定の複数の生体マーカーをそれぞれ変数として用いる判別分析を行うことを特徴とする、新規なＯＡの検査方法及び診断用キットを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、被検体から得られた生体マーカー６項目：Ｃ２Ｃ、ＣＴＸ−ＩＩ、ＣＰＩＩ、ＮＴｘ、ヒアルロン酸、及びＣ２Ｃ／ＣＰＩＩ比をそれぞれ変数として用いて判別分析を行うことによって、良好な精度で簡便かつ客観的にＯＡの病態評価ができることを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、
（１）被検体から得られたＣ２Ｃ、ＣＴＸ−ＩＩ、ＣＰＩＩ、ＮＴｘ、及びヒアルロン酸の測定値、ならびにＣ２Ｃ／ＣＰＩＩ比をそれぞれ変数として用いて判別分析を行うことを特徴とする、変形性関節症の検査方法；及び
（２）被検体から得られたＣ２Ｃ、ＣＴＸ−ＩＩ、ＣＰＩＩ、ＮＴｘ、及びヒアルロン酸の測定値、ならびにＣ２Ｃ／ＣＰＩＩ比をそれぞれ変数として用いて判別分析を行うことを特徴とする、変形性関節症診断用キットに関する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、疼痛やＸ線所見を使用した従来の病態評価と比べて、簡便かつ客観的に、しかも良好な精度でＯＡの病態評価ができる。すなわち、ＯＡに罹患しているか否かの決定の他に、ＯＡの病期分類や悪性度分類などの病態評価に使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本願発明で使用される生体マーカーは、軟骨破壊マーカーであるＣ２Ｃ及びＣＴＸ−ＩＩ、軟骨合成マーカーであるＣＰＩＩ、骨代謝マーカーであるＩ型コラーゲン架橋Ｎ末端ペプチド（ＮＴｘ）、及びヒアルロンの測定値、ならびにＣ２Ｃ／ＣＰＩＩ比の６項目である。
本発明では、例えば、被検体から慣用の手法で生体試料（血清、尿など）を採取し、この生体試料に存在する生体マーカー：Ｃ２Ｃ、ＣＴＸ−ＩＩ、ＣＰＩＩ、ＮＴｘ、及びヒアルロン酸を、慣用の手法、例えば、酵素抗体法（Enzyme Linked immunosorbent Assay）などの免疫学的方法で測定することにより、これら生体マーカーを得てもよい。そして、このようにして得られたＣ２Ｃ及びＣＰＩＩの測定値から計算によりＣ２Ｃ／ＣＰＩＩ比を得る。
【０００９】
本発明では、上述のとおりにして被検体から得られた生体マーカー６項目をそれぞれ変数として用いて判別分析を行う。判別分析は、与えられた個体の持つ複数個の情報をいくつかの要素に分解し、その要素に重み付けをすることによって、その個体がどのグループに属するかを分析する多変量解析の手法であり、広く用いられている。本発明では、この判別分析を用いて、被検体のＯＡを検査する。
【００１０】
本発明の検査は、例えば以下のように行ってもよい。
先ず、ＯＡの病態が評価された、例えば病期分類又は悪性度分類などでグループ分けされた被検体について、前掲生体マーカー６項目を取得し、これに基づき当該グループ間を識別するルールを構築する。次に、そのルールを、新たな被検体に適用して、当該被検体が属するグループを判定する。これによって、従来は、複雑な手法で行っていた被検体の病期分類又は悪性度分類といったＯＡの病態の評価を、前傾６項目の生体マーカーを用いた判別分析によって容易にかつ良好な精度で行うことができる。
【００１１】
本発明において、被検体とは、ＯＡの病態が評価されるヒト又は哺乳類動物などをいう。哺乳類動物として、イヌ及びネコなどの愛玩動物ならびにウシ及びウマなどの家畜が例示される。被検体は、上記ルールを構築する際に使用した動物種と同一種であるべきで、例えば、被検体がヒトである場合、上記ルールはヒトで構築されるべきである。
【００１２】
本発明で検査又は診断等される変形性関節症は、その発症部位は特に制限されず、膝関節、股関節、肘関節、指関節、足関節、頚椎、脊椎、腰椎などで発症し得る。発症部位は一つと限らず、複数部位で発症し得る。変形性関節症として、変形性膝関節症、変形性腰椎症、変形性股関節症、及び変形性肘関節症などが例示される。本発明の方法で良好な精度でＯＡの病態を評価ができる点から、変形性膝関節症、変形性腰椎症、及び変形性股関節症が好ましく、特に変形性膝関節症が好ましい。
【００１３】
本発明に係る診断用キットは、前述の測定方法による生体マーカー測定用の試薬を含む。本発明の診断用キットは、生体試料の採取用具や調製用具、生体マーカー測定用具、例えば、カラムカートリッジなどを含んでもよい。また、本発明の診断用キットは、判別分析手段、例えば、判別分析の手順を記載した書面や説明書、判別分析の手順をコンピューターに実行させるためのプログラム、当該プログラムリスト、当該プログラムを記録した、コンピューターに読み取り可能な記録媒体（例えば、フレキシブルディスク、光ディスク、ＣＤ−ＲＯＭ、ＣＤ−Ｒ、及びＣＤ−ＲＷなど）、判別分析を実行する装置又はシステム（コンピューターなど）を含んでもよい。
【実施例】
【００１４】
以下、実施例などを挙げて本発明を更に詳しく具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１５】
１．試験目的
被検体を、医師の診断により、ＯＡ患者（膝に痛みがあり、Ｘ線で明らかな変形がみられる）、Pre-OA(1)（膝に痛みがあり、Ｘ線で変形がみられない）、Pre-OA(2)（膝に痛みがない、Ｘ線で明らかな変形がみられる）、及び健常者（膝に痛みがなく、Ｘ線で変形がみられない）の４グループに分け（表１）、各グループについて生体マーカーを用いた判別分析を行った。膝の痛みの有無は被検体の自己申告によった。
【００１６】
【表１】
2009257842.tif 000002
【００１７】
２．試験に使用した生体マーカーの種類とマークする項目
測定されるべき生体マーカーを表２に示した。先ず、被検体から採血及び採尿により血清及び尿をそれぞれ得た。得られた血清中の、Ｃ２Ｃを生化学バイオビジネス株式会社販売の測定キットで、ＣＰＩＩを生化学バイオビジネス株式会社販売の測定キットで、ＮＴｘを持田製薬株式会社販売の測定キット（オステオマークNTx血清、製造：WAMPOLE）で、及びヒアルロン酸を富士レビオ株式会社販売の測定キット（エルピアエースHA、製造：三菱化学ヤトロン）で、それぞれ測定した。得られた尿中の、ＣＴＸ−ＩＩを住商ファーマ株式会社販売の測定キットで、クレアチニンを第一化学薬品株式会社製造販売の測定キット（ピュアオートS CRE-L）で、それぞれ測定し、そしてクレアチニン補正してＣＴＸ−ＩＩ測定値を得た。このようにして得られたＣ２Ｃ及びＣＰＩＩの測定値からＣ２Ｃ／ＣＰＩＩ比を計算した（表２）。
【００１８】
【表２】
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【００１９】
３．判別分析（１）
（ア）被検体
ＯＡが出現しやすい年齢のヒトを被検体として選択した。健常者は年齢５８〜８０歳（平均６８．６±５．８歳）の男性１０名と女性１５名、膝に痛みはあるが変形がない者（Pre-OA(1)）は年齢４０〜７６歳（平均６２．２±１０．４歳）の男性４名と女性７名、膝に痛みはないが変形がある者（Pre-OA(2)）は年齢５９〜８１歳（平均６８．２±７．４歳）の男性１名と女性５名、ＯＡ患者は年齢４８〜８７歳（平均７４．３±９．８歳）の男性７名と女性１４名であった（表３）。
【００２０】
【表３】
2009257842.tif 000004
【００２１】
（イ）結果
４グループの被検体に、生体マーカー６項目「Ｃ２Ｃ、ＣＰＩＩ、Ｃ２Ｃ／ＣＰＩＩ比、ＣＴＸ−ＩＩ、ＮＴｘ、ヒアルロン酸」を変数として用いて判別分析を行った。判別分析はＳＰＳＳの判別分析プログラムを用いて実行した。具体的には「ＳＰＳＳによる統計データ解析」（柳井晴夫・緒方裕光編著、２００７年７月３日第２刷発行、現代数学社、京都）に記載の解析例１（２４８〜２５７頁）に準じて行った。
分類結果は表４に示した。被検体の痛みの申告及び変形の有無とマーカーからみた判別分析の結果、７１．４％が正しく分類できたが、２８．６％が正しく分類できなかった。その理由は図１の正準判別関数に示した通り、膝に痛みはないが変形がある者（Pre-OA(2)）と健常者がほぼ一致していたためであった。そこで、この２者を同一グループとして再度、判別解析を行った。
【００２２】
【表４】
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【００２３】
４．判別分析（２）
（ア）グループ分け
上述のとおり、４グループの被検体を３グループに変更した。Pre-OA(2)（膝に痛みがない、Ｘ線で明らかな変形がみられる）と健常者（膝に痛みがなく、Ｘ線で変形がみられない）とを同一グループとした。すなわち、ＯＡ患者（膝に痛みがあり、Ｘ線で明らかな変形がみられる）、Pre-OA（膝に痛みがあり、Ｘ線で変形がみられない）、及び痛みがない者（膝に痛みがなく、Ｘ線での変形の有無に係わらない）の３グループに分けた（表５）。
【００２４】
【表５】
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【００２５】
（イ）被検体
膝に痛みを持たない者は年齢５８〜８１歳（平均６８．５±６．０歳）の男性１１名と女性２０名、膝に痛みはあるが変形がない者（Pre-OA）は年齢４０〜７６歳（平均６２．２±１０．４歳）の男性４名と女性７名、ＯＡ患者は年齢４８〜８７歳（平均７４．３±９．８歳）の男性７名と女性１４名であった（表６）。
【００２６】
【表６】
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【００２７】
（ウ）判別分析の結果
３グループの被検体に、生体マーカー６項目「Ｃ２Ｃ、ＣＰＩＩ、Ｃ２Ｃ／ＣＰＩＩ比、ＣＴＸ−ＩＩ、ＮＴｘ、ヒアルロン酸」を変数として用いて、前述の判別分析（１）のとおりに、判別分析を行った。その結果、被検体の痛みの申告及び変形の有無とマーカーからみた判別分析の結果、９２．１％が正しく分類されることが分かった（表７、図２）。
【００２８】
【表７】
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【産業上の利用可能性】
【００２９】
本発明の方法及び診断用キットは、ＯＡの鑑別、病態などの評価、及び診断に利用できる。
また、本発明の方法は変形性関節症の治療又は予防薬のスクリーニングにも利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】正準判別関数を示す図である。
【図２】正準判別関数を示す図である。
【図１】
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【図２】
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