(57)【要約】【課題】抗原又は抗体等の生化学物質を精度良く固相化させることが出来、なお且つ、固相表面に対して特異的に反応させる物質の非特異的な吸着を抑制し、ブロッキング工程を省略しても高いシグナル／ノイズ比が得られる生化学分析用固相の作成方法及び生化学分析容器具を提供する。【解決手段】樹脂材料で構成される分析用器具を用いて生化学分析用固相を作成する方法であって、側鎖に光反応性の官能基を有する水溶性樹脂に抗原又は抗体からなる生化学物質を混合した混合溶液を調製する工程と、前記混合溶液を前記器具内面に付着させ該器具の表面に混合溶液の被覆層を形成する工程と、前記被覆層を光照射により硬化させて生化学物質を含む水不溶性の硬化皮膜を形成する工程と、を含むことを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
樹脂材料で構成される分析用器具を用いて生化学分析用固相を作成する方法であって、
側鎖に光反応性の官能基を有する水溶性樹脂に抗原又は抗体からなる生化学物質を混合した混合溶液を調製する混合溶液調整工程と、
前記混合溶液を前記器具内面に付着させ該器具の表面に混合溶液の被覆層を形成する被覆層形成工程と、
前記被覆層を光照射により硬化させて生化学物質を含む水不溶性の硬化皮膜を形成する硬化皮膜形成工程と、
を含むことを特徴とする生化学分析用固相の作成方法。
【請求項２】
前記側鎖に光反応性の官能基を有する水溶性樹脂は、ポリ酢酸ビニルのけん化物、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールの中から選ばれる１種以上を含むものである請求項１に記載の生化学分析用固相の作成方法。
【請求項３】
前記ポリ酢酸ビニルのけん化物は、該ポリ酢酸ビニル全体の２０〜１００ｍｏｌ％けん化したものである請求項２に記載の生化学分析用固相の作成方法。
【請求項４】
前記光反応性の官能基は、窒素原子を含むものである請求項１ないし３のいずれかに記載の生化学分析用固相の作成方法。
【請求項５】
前記光反応性の官能基は、アジド基を有するものである請求項１ないし４のいずれかに記載の生化学分析用固相の作成方法。
【請求項６】
前記光反応性の官能基を有する水溶性樹脂は、下記式（Ｉ）で表されるものである請求項１ないし５のいずれかに記載の生化学分析用固相の作成方法。
【化１】
2009216613.tif 000005
【請求項７】
前記抗原又は抗体からなる生化学物質が、固相免疫測定法における固相化物質である請求項１ないし６のいずれかに記載の生化学分析用固相の作成方法。
【請求項８】
請求項１ないし７のいずれかに記載の生化学分析用固相の作成方法によって、容器内面に生化学分析用固相を有していることを特徴とする生化学分析用器具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生化学分析用固相の作成方法及び生化学分析用器具に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫分析法に代表される従来の固相法による生化学測定においては、ポリスチレン等のプラスチック基材に非特異的吸着を利用して抗体又は抗原等の免疫物質を固相化し、固相化した分子に対して免疫反応を利用してサンプル溶液中の目的の分子を補足させ、最終的にラジオアイソトープ、酵素、蛍光物質等で標識した分子を目的の分子に特異的に補足させて定量する方法が一般的に行われている。
【０００３】
免疫測定は研究開発の分野に留まらず臨床検査といった医療の分野でも多く用いられており、測定結果が事実と誤った値であった場合、人命にかかわる重篤な事態を引き起こす恐れもあるため、測定感度、再現性については特に重要視すべきところである。
【０００４】
しかしながら、非特異的吸着を利用した方法では固相化する免疫物質の量が少なく充分な測定感度が得られない場合や、固相化量が安定せず最終的に得られるシグナルのばらつきが増大するという問題と、固相化以降の工程において固相表面に対して反応させる物質が基材に吸着してしまうことによりノイズが発生するといった問題を有している。
【０００５】
ノイズ低減を目的とし、固層表面に対して特異的に反応させる物質の非特異的な吸着を防止する対策として、一般的な免疫測定法ではブロッキングと呼ばれる工程が含まれる。ブロッキングとは、固相化後の表面に、吸着し易く系に影響を及ぼさない蛋白質、例えばスキムミルクやアルブミン、を接触させて固相化されていない部分をマスキングする工程である。固相免疫分析法に関する技術が開示されている（例えば、特許文献１、２参照）。又、界面活性剤を添加して非特異的吸着を抑制する技術も開示されている（例えば、特許文献３参照）。
【０００６】
しかしながら、ブロッキングの効果は使用するブロッキング剤の種類、溶媒の種類、溶液のｐＨ、反応温度、反応時間の影響を強く受ける為、期待する効果を得る為には膨大な条件検討が必要であり、一度条件を確立してもそれら要因の僅かな変化が結果に大きく影響する為、再現性を得る事は難しい。
【特許文献１】特表２００２−５０８８４３号公報
【特許文献２】特開２００７−２２５６０３号公報
【特許文献３】特開平０８−２４０５９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、抗原又は抗体等の生化学物質を精度良く固相化させることが出来、なお且つ、固相表面に対して特異的に反応させる物質の非特異的な吸着を抑制し、ブロッキング工程を省略しても高いシグナル／ノイズ比が得られる生化学分析用固相の作成方法及びこの方法によって得られる生化学分析用器具を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
このような課題は、下記（１）〜（８）の本発明によって解決できる。
（１）樹脂材料で構成される分析用器具を用いて生化学分析用固相を作成する方法であって、
側鎖に光反応性の官能基を有する水溶性樹脂に抗原又は抗体からなる生化学物質を混合した混合溶液を調製する混合溶液調整工程と、
前記混合溶液を前記器具内面に付着させ該器具の表面に混合溶液の被覆層を形成する被覆層形成工程と、
前記被覆層を光照射により硬化させて生化学物質を含む水不溶性の硬化皮膜を形成する硬化皮膜形成工程と、
を含むことを特徴とする生化学分析用固相の作成方法。
（２）前記側鎖に光反応性の官能基を有する水溶性樹脂は、ポリ酢酸ビニルのけん化物、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールの中から選ばれる１種以上を含むものである（１）に記載の生化学分析用固相の作成方法。
（３）前記ポリ酢酸ビニルのけん化物は、該ポリ酢酸ビニル全体の２０〜１００ｍｏｌ％けん化したものである（２）に記載の生化学分析用固相の作成方法。
（４）前記光反応性の官能基は、窒素原子を含むものである（１）ないし（３）のいずれかに記載の生化学分析用固相の作成方法。
（５）前記光反応性の官能基は、アジド基を有するものである（１）ないし（４）のいずれかに記載の生化学分析用固相の作成方法。
（６）前記光反応性の官能基を有する水溶性樹脂は、下記式（Ｉ）で表されるものである（１）ないし（５）のいずれかに記載の生化学分析用固相の作成方法。
【化２】
2009216613.tif 000002
（７）前記抗原又は抗体からなる生化学物質が、固相免疫測定法における固相化物質である（１）ないし（６）のいずれかに記載の生化学分析用固相の作成方法。
（８）（１）ないし（７）のいずれかに記載の生化学分析用固相の作成方法によって、容器内面に生化学分析用固相を有していることを特徴とする生化学分析用器具。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、抗原又は抗体等の生化学物質を精度良く固相化させることが出来、なお且つ、固相表面に対して特異的に反応させる物質の非特異的な吸着を抑制し、ブロッキング工程を省略しても高いシグナル／ノイズ比が得られる生化学分析用固相の作成方法及びこの方法によって得られる生化学分析用容器を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明の生化学分析用固相の作成方法（以下、単に「固相の作成方法」ということがある）について詳細に説明する。
【００１１】
先ず、本発明の固相の作成方法において重要となる側鎖に光反応性の官能基を有する水溶性樹脂に生化学物質を混合した混合溶液を調製する混合溶液調製工程について説明する。
【００１２】
生化学分析においては固相化された生化学物質が生化学活性を維持している事が重要であるが、本発明の固相の作成方法においては混合溶液の調製に水溶性樹脂を使用する事で、生化学物質との良好な相溶性を得ると同時に、生化学物質の活性を維持した状態で混合溶液としている点が特徴の一つである。
【００１３】
また、上記の混合溶液、即ち生化学物質と水溶性樹脂とを混合した状態で固相化することによって、非特異的な吸着を利用した従来の方法と比較して生化学物質の固相化量が安定させることができる。
【００１４】
更に、上記混合溶液を水不溶性の硬化皮膜にする工程において光照射を利用する事により、生化学物質の構造変化、即ち生化学活性の低下を抑えて迅速に硬化させる事が出来る点も本発明の特徴の一つとして挙げられる。
【００１５】
また、上記水溶性樹脂が、水不溶性に硬化させた後に蛋白質の非特異的吸着を低減する親水性の皮膜となる為、固相化以降の工程において固相表面に対して反応させる物質が基材に吸着しづらくなり、ブロッキング工程が不要になるという特徴も有する。
【００１６】
上記水溶性樹脂に生化学物質を混合する方法については特に限定するものではなく、水溶性樹脂の溶液を調製した後に任意量の生化学物質を添加するか、若しくは予め調整した生化学物質の溶液に水溶性樹脂を添加しても良い。
【００１７】
上記混合溶液中の生化学物質の量は特に限定するものではなく、使用する生化学物質の抗体力価や目的に応じて必要なシグナルが得られる濃度を選択すれば良いが、一般的な酵素免疫分析法においては０．０１μｇ／ｍＬ以上、１０μｇ／ｍＬ以下の範囲で選択すれば、より高いシグナルが得られるため好ましい。
【００１８】
上記光反応性の官能基としては、窒素原子を含む官能基、硫黄原子を含む官能基、臭素原子を含む官能基、塩素原子を含む官能基またはそれらいずれの原子も含まない官能基等が挙げられる。これらの中でも窒素原子を含む官能基が好ましい。
【００１９】
具体的にはアジド基を含む官能基、ジアゾ基を含む官能基、ジアジド基を含む官能基等が挙げられる。これらの中でもアジド基を含む官能基が好ましい。これにより、実用的な２３０〜５００ｎｍの波長で反応させる事が出来、更に優れた解像性により皮膜の形成性を向上することができる。
【００２０】
より具体的には下記式（ＩＩ）で表されるものを用いることが好ましく、水溶性樹脂への付与が容易であると同時に、前述の実用的な２３０〜５００ｎｍの波長における反応性にも優れるため、良好な生化学分析用固相表面を得る事が出来る。
【化３】
2009216613.tif 000003
【００２１】
水溶性樹脂としては、例えばポリ酢酸ビニルのけん化物、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、ポリメタアクリルアミド、ポリヒドロキシエチルメタアクリレート、ポリペンタエリスリトールトリアクリレート、ポリペンタエリスリトールテトラアクリレート、ポリジエチレングリコールジアクリレート、およびそれらを構成するモノマー同士の共重合体、また２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンと他のモノマー（例えばブチルメタクリレート等）との共重合体等が挙げられる。これらの中でもポリ酢酸ビニルのけん化物、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールの中から選ばれる１種以上と前記反応基からなる構造が好ましい。これにより、生化学物質との相溶性に優れ、なお且つ固相化以降の工程において固相表面に対して生化学反応によって特異的に反応させる物質の非特異的な吸着を抑制する効果に優れた生化学分析用固相表面を構築する事が出来る。
【００２２】
ここで、ポリ酢酸ビニルのけんか物とは、例えばポリビニルアルコールまたはビニルアルコールと他の化合物との共重合体をいう。更に、例えばビニルアルコールと、親水基変性、疎水基変性、アニオン変性、カチオン変性、アミド基変性またはアセトアセチル基のような反応基変性等の変性酢酸ビニルのけん化物等も含まれる。
なお、ここで水溶性樹脂とは、２５℃の水１００ｇに対して１．０ｇ以上溶解可能なものをいう。
【００２３】
上記水溶性樹脂の平均重合度は、特に限定されないが、１００以上、１０，０００以下が好ましく、特に２００以上、５，０００以下が好ましい。平均重合度が１００以上であると、均一は固相化皮膜を成形することができ、また、平均重合度が１０，０００以下であれば作業性に適した混合液の粘度とすることができる。
【００２４】
また、上記ポリ酢酸ビニルのけん化物を用いる場合、上記ポリ酢酸ビニルのけん化物のけん化度は、該ポリ酢酸ビニル全体の２０ｍｏｌ％以上、１００ｍｏｌ％以下が好ましく、特に５０ｍｏｌ％以上、９５ｍｏｌ％以下が好ましい。上記ポリ酢酸ビニルのけん化度が上記範囲内であると、生化学物質との相溶性、及び固相表面に対して特異的に反応させる物質の非特異的な吸着を抑制する効果に特に優れる。
【００２５】
上記水溶性樹脂は、２０℃における粘度が１ｍＰａ・ｓ以上、１０ｍＰａ・ｓ以下に、好ましくは２ｍＰａ・ｓ以上、７ｍＰａ・ｓ以下となるよう溶媒を用いて調製されたものを使用する事が好ましい。その際に使用する溶媒は水が好ましいが、溶解度を高めるために、生化学物質の特性を破壊しないような有機溶媒であれば水と混合して使用することができる。
【００２６】
次に上記被覆層を硬化する工程について詳細に説明する。
【００２７】
生化学分析用器具の表面に形成された水溶性樹脂の被覆層は硬化することによって、固相生化学測定法に必要となる固相表面の耐水性を獲得する。
【００２８】
硬化の方法としては特に限定するものではなく、水溶性樹脂の側鎖に有する官能基を反応させることで達成できる、例えばジアゾ基、アジド基、シンモナイル基のような感光基であれば光照射により硬化させることが出来、ビニル基を有する場合は放射線により硬化させることが出来る。
【００２９】
光照射により硬化させる場合の光源は特に限定するものではなく、照度が５．０ｍＷ／ｃｍ2程度の超高圧水銀灯または０．１ｍＷ／ｃｍ2程度のＵＶランプを使用することも出来る。光照射による硬化は照度と照射時間で制御することが出来るため、照度の低い光源を用いる場合は照射時間を長くすればよく、反応性の高い感光基を選択した場合は蛍光灯下で硬化させることも可能である。
例えば５．０ｍＷ／ｃｍ2の超高圧水銀灯を使用した場合は１ないし１０秒の照射で、０．１ｍＷ／ｃｍ2のＵＶランプを使用した場合は３〜１０分の照射で充分に硬化させることが出来る。
【００３０】
次に本発明の固相の作成方法によって得られる生化学分析用器具（以下、単に「分析用器具」ということがある）について詳細に説明する。
【００３１】
本発明の分析用器具は樹脂材料で構成されており、これによってこの分析用器具をディスポーザルタイプにすることができるのに加え、種々の形状を容易に成形できるものである。
【００３２】
上記樹脂材料としては、例えばポリプロピレン樹脂、ポリエチレン樹脂、エチレン-プロピレン共重合体等のポリオレフィン系樹脂、ポリスチレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン系樹脂等のポリスチレン系樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリメチルメタクリレート樹脂等のメタクリル系樹脂、塩化ビニル樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリアリレート樹脂、ポリサルホン樹脂、ポリエーテルサルホン樹脂、ポリエーテルエーテルケトン樹脂、ポリエーテルイミド樹脂、ポリテトラフルオロエチレン等のフッ素系樹脂、ポリメチルペンテン樹脂、ポリアクリロニトリル等のアクリル系樹脂、プロピオネート樹脂等の繊維素系樹脂等が挙げられる。これらの中でも生化学分析器具に求められる成形性、透明性の点においてポリスチレン樹脂が好ましく、蛍光測定や発光測定等の目的に応じて顔料をコンパウンドすることによって着色されていても良い。
【００３３】
上記樹脂材料の重量平均分子量は、特に限定されないが、１０，０００〜５００，０００が好ましく、特に２０，０００〜１００，０００が好ましい。重量平均分子量が上記範囲内であると、器具の成形性に優れる。
【００３４】
上記重量平均分子量は、例えばＧ．Ｐ．Ｃ．を用いたスチレン換算で求めることができる。
上記樹脂材料には成形性向上、耐候性向上を目的として、本発明の目的を損なわない範囲で炭化水素系、脂肪酸アミド系の滑剤やフェノール系、アミン系の酸化防止剤等の添加剤を添加することができる。
【００３５】
上記樹脂材料から本発明の分析用器具の製造方法は、例えば射出成形、ブロー成形、インジェクションブロー成形を用いることができる。
上記分析用器具の形状としては、例えばマルチウェルプレートおよびキュベット等の容器類が挙げられ、更にシート状の成形品であっても、容器底面等の環境下に設置して使用する事ができる。これらの中でも、免疫分析用として用いられる６〜１５３６穴のマルチウェルプレートが好ましい。これにより、免疫分析を用いた評価、研究の精度を向上させることが出来る。
【００３６】
上記生化学物質としては、例えば天然もしくは合成のペプチド、蛋白質、酵素、糖類、レクチン、ウイルス、細菌、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、免疫物質が挙げられ、
その中でも免疫物質である抗原（例えばリコンビナント抗原も含む）抗体、ＩｇＧ．ＩｇＭ．ＩｇＥなどの免疫グロブリン：補体、ＣＲＰ．フェリチン、α1 マイクログロブリン、β2 マイクログロブリンなどの血漿蛋白およびそれらの抗体：α−フェトプロテイン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺性酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５などの腫瘍マーカおよびそれらの抗体：黄体化ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト繊毛性ゴナドトロビン（ｈＣＧ）、エストロゲン、インスリンなどのホルモン類およびそれらの抗体：ＨＢＶ関連抗原（ＨＢｓ．ＨＢｅ．ＨＢｃ）．ＨＩＶ．ＡＴＬなどウイスル感染関連物質およびそれらの抗体：ジフテリア菌、ボツリヌス菌、マイコプラズマ、梅毒トレポネーマなどのバクテリア類およびそれらの抗体：トキソプラズマ、トリコモナス、リーシュマニア、トリバノゾーマ、マラリア原虫などの原虫類およびそれらの抗体：フェニトイン、フェノバルビタールなどの抗てんかん薬、キニジン、ジゴキシニンなどの心血管薬、テオフィリンなどの抗喘息薬、クロラムフェニコール、ゲンタマイシンなどの抗生物質などの薬物類およびそれらの抗体：その他酵素、菌体外毒素（スチレリジンＯなど）を用いる事で固相免疫測定法を用いた臨床診断や生化学実験に好適に使用できる。
【実施例】
【００３７】
以下、本発明を実施例および比較例に基づいて詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３８】
（実施例）
樹脂材料で構成される分析用器具として市販のポリスチレン製９６穴ＥＬＩＳＡ用プレート（住友ベークライト社製  ＭＳ−８８９６Ｆ）を用いた。
次に、側鎖に光反応性の官能基を有する水溶性樹脂として、側鎖にアジド基を有するポリビニルアルコール（東洋合成工業社製  ＡＷＰ、水溶性樹脂の平均重合度１８００、光反応性の官能基の変性率０．６ｍｏｌ％）をアルミ箔で遮光をしたガラス器具中で純水に溶解し、０．７重量％の溶液を調整した。
上述の溶液に対して１．０μｇ／ｍＬとなるように抗ラットアルブミン抗体（コスモバイオ社製）を溶解し、混合溶液とした。
上述のＥＬＩＳＡ用プレートに、上述の混合溶液を２００μＬ／ウェルで分注した後にＥＬＩＳＡ用プレートを裏返して分注した溶液を充分に廃棄し、室温で一晩乾燥させる事で混合溶液の被覆層を形成した。
更に、ＵＶランプで２５０ｎｍのＵＶ光を０．１ｍＷ／ｃｍ2×３０秒間照射することで水不溶性の硬化皮膜を形成して、本発明の生化学分析用固相を有する容器を得た。
【００３９】
（比較例１）
水溶性樹脂として側鎖に光反応性の官能基を有さないポリビニルアルコール（和光純薬社製  Ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ  Ａｌｃｏｈｏｌ  けん化度７８〜８２ｍｏｌ％  平均重合度１８００）を用いた以外は実施例１と同様にして容器を得た。
【００４０】
（比較例２）
実施例１の工程からＵＶランプによる硬化皮膜形成工程を除いた以外は実施例１と同様にして容器を得た。
【００４１】
（比較例３）
混合溶液に水溶性樹脂を溶解せず、抗ラットアルブミン抗体のみを溶解した以外は実施例１と同様にして容器を得た。
【００４２】
実施例、及び比較例１〜３の容器に対し、以下のＥＬＩＳＡ評価を行なった。得られた結果を表１に示す。
【００４３】
１．ブロッキング工程を入れないＥＬＩＳＡ評価
プレートウォッシャー（バイオテック社製  セラウォッシャー  Ｍｏｄｅｌ  ＭＷ−９６Ｒ）を使用して洗浄液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りｐＨ７．４のリン酸緩衝液）３００μＬ／ウェルで３回洗浄した後に、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液で１μｇ／ｍＬ、０．５μｇ／ｍＬ、０．２５μｇ／ｍＬ、及び０．１２５μｇ／ｍＬの４レベルの濃度系列に希釈したラットアルブミン（コスモバイオ社製）溶液を実施例及び比較例１〜３各々に対して、上記４レベルの濃度毎に２４ウェルづつ１００μＬ／ウェルで分注し、室温で１時間静置した。
【００４４】
その後、プレートウォッシャーを使用して上記洗浄液３００μＬ／ウェルで３回洗浄した後に、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液で２μｇ／ｍＬに希釈したペルオキシターゼ標識抗ラットアルブミン抗体（コスモバイオ社製）を２００μＬ／ウェルで分注し、室温で１時間静置した。
更に、上記と同様に洗浄液３００μＬ／ウェルで３回洗浄した後に、発色キット（住友ベークライト社製  ペルオキシターゼ用発色キットＴ）を使用して発色させ、プレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社製  Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｆｌｕｏｒ）で４５０ｎｍの波長で吸光度を測定した。
【００４５】
２．ブロッキング工程を入れたＥＬＩＳＡ評価
プレートウォッシャー（バイオテック社製  セラウォッシャー  Ｍｏｄｅｌ  ＭＷ−９６Ｒ）を使用して洗浄液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りｐＨ７．４のリン酸緩衝液）３００μＬ／ウェルで３回洗浄した後に、ブロッキング剤（スキムミルクをｐＨ７．４のリン酸緩衝液で５％に調製）を２００μＬ／ウェルで分注し、室温で２時間静置した。
【００４６】
上記と同様に洗浄液３００μＬ／ウェルで３回洗浄した後に、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液で１μｇ／ｍＬ、０．５μｇ／ｍＬ、０．２５μｇ／ｍＬ、０．１２５μｇ／ｍＬの濃度系列に希釈したラットアルブミン（コスモバイオ社製）溶液を実施例及び比較例１−３各々に対して各濃度２４ウェルづつ１００μＬ／ウェルで分注し、室温で１時間静置した。
【００４７】
その後、上記と同様に洗浄液３００μＬ／ウェルで３回洗浄した後に、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液で２μｇ／ｍＬに希釈したペルオキシターゼ標識抗ラットアルブミン抗体（コスモバイオ社製）を２００μＬ／ウェルで分注し、室温で１時間静置した。
【００４８】
更に、上記と同様に洗浄液３００μＬ／ウェルで３回洗浄した後に、発色キット（住友ベークライト社製  ペルオキシターゼ用発色キットＴ）を使用して発色させ、プレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社製  Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｆｌｕｏｒ）で４５０ｎｍの波長で吸光度を測定した。
結果を表１に示す。
【００４９】
【表１】
2009216613.tif 000004
【００５０】
表１の結果から明らかなように、本発明の生化学分析用固相の作成方法を用いた実施例においては、ブロッキング工程の有無に係わらずラットアルブミンの濃度に相関した吸光度が得られ、なお且つ各濃度２４ウェルの値（ＣＶ値）も安定していた。
【００５１】
一方、本発明の生化学分析用固相の作成方法を用いない比較例において、比較例１、比較例２、ではブロッキング工程の有無に係わらずラットアルブミンの濃度との相関性は低く、ブロッキング工程を入れた比較例３では、ＥＬＩＳＡ評価で相関性は得られたものの、実施例と比較すると感度が低く、各濃度における２４ウェルの値（ＣＶ値）のばらつきも大きかった。
【００５２】
この結果から比較例１、比較例２では水溶性樹脂が硬化皮膜を形成しないためにラットアルブミン抗体と一緒に洗浄工程で消失してしまったものと推定され、ブロッキング工程を入れないＥＬＩＳＡ評価で得られたシグナルは、ペルオキシターゼ標識抗ラットアルブミン抗体の非特異的吸着に依るものと推定された。
【００５３】
尚、比較例３のブロッキング工程を入れたＥＬＩＳＡ評価は一般的なＥＬＩＳＡ測定に相当するが、それと比較しても、本発明の生化学分析用固相の作成方法を用いた容器は感度及び精度共に優れており、なお且つブロッキング工程も省略できることが証明された。