(57)【要約】      （修正有）【課題】歯を喪失するリスクを評価する方法の提供。【解決手段】ＮＦκＢ遺伝子の遺伝子多型を検出することを特徴とする歯の喪失リスク評価方法、及びこれに用いられるキット。ＮＦκＢ遺伝子の遺伝子多型が、特定の塩基配列を有するrs2281583又はrs2295587である、歯を喪失するリスク評価方法。ＮＦκＢ遺伝子の遺伝子多型の検出は、被験者から得た試料から抽出したＤＮＡをもとにして、ＡＳＰ−ＰＣＲ（Ａｌｌｅｌｅ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＰＣＲ）法等の公知の方法により行うことができる。被験者から得る試料としては、好ましくは顎粘膜である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＦκＢ遺伝子の遺伝子多型を検出することを特徴とする歯の喪失リスク評価方法。
【請求項２】
ＮＦκＢ遺伝子の遺伝子多型が、rs2281583又はrs2295587である請求項１記載のリスク評価方法。
【請求項３】
請求項１又は２記載のリスク評価方法に用いられるキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯を喪失するリスクの評価方法、及びこれに用いられるキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
う蝕や歯周疾患により歯を喪失することは少なくないが、多数の歯を失った場合には、咀嚼機能が低下するほか会話も困難になって生活の質（ＱＯＬ）が低下しやすく、その防止が求められる。歯周疾患対策や歯の喪失防止を目標に掲げる運動として、１９８９年には、成人歯科保健対策検討会が「８０２０運動」を提唱している。８０２０とは、８０歳で２０本の健康な歯が残っていることである。
【０００３】
う蝕は、成人の９５％が経験しているといわれるが、全う蝕経験歯数のうちの６０％以上が、わずか２０％程度の人々によって保有されていることが示されており、効果的に予防を行うためには、罹患する危険性の高い、少数のハイリスク者を見出す方法が効果的である。同時に、ローリスク者を見出すことも、不必要な予防処置や医療費を抑制する点で、有意義である。
【０００４】
２００１年にほぼ終了したヒトゲノムプロジェクトにより、ヒトのゲノムの塩基配列が明らかになった。その後、ゲノムに存在する塩基配列の多型は、データベースへの公開が進んでおり、骨粗しょう症や変形関節症などについては、これらの多型を用いた遺伝子解析も行われている。
【０００５】
しかしながら、う蝕や歯周疾患のような、一般集団中に高い頻度で起こるcommon diseaseは、食生活などの生活習慣や環境要因との関係が重点的に検証されており、遺伝子解析はほとんど行われていない。歯科の分野では、歯周疾患と関連があるといわれているサイトカインに対する遺伝子解析がわずかに散見されるにすぎない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、歯を喪失するリスクを評価する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、歯の喪失リスクと遺伝子多型の発現頻度との関係について検討を行ったところ、ＮＦκＢ遺伝子の遺伝子多型は、８０２０達成者と無歯顎者との間で発現頻度が異なり、したがって、これを検出することにより歯の喪失リスクを評価することができることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、ＮＦκＢ遺伝子の遺伝子多型を検出することを特徴とする歯の喪失リスク評価方法、及びこれに用いられるキットを提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、歯を喪失するリスクを評価することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明において多型を検出する遺伝子は、NFκB遺伝子である。NFκB遺伝子についての詳細は、NCBIに、NW_924884として開示されている（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?val=NW_924884.1&from=14899168&to=14905979&dopt=gb）。配列番号１で示される塩基配列は、ＮＦκＢ遺伝子の塩基配列である。  
【００１１】
検出する遺伝子多型としては、rs2281583及びrs2295587が挙げられる。これらは、一塩基多型（ＳＮＰｓ）であり、rs2281583は、NCBIの（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp_ref.cgi?searchType=adhoc_search&type=rs&rs=rs2281583）に開示されており、rs2295587は、同じく（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp_ref.cgi?rs=2295587）に開示されている。配列番号１で示される塩基配列を用いて説明するならば、rs2295587は、塩基番号2805における多型である。この部位においてＣのものとＴのものが知られている。rs2281583は、塩基番号7160における多型である。この部位においてＧのものとＡのものが知られている。配列番号１のなかのこれらの部位を、周辺部位とあわせて表１に示す。
【００１２】
【表１】
2009077633.tif 000002
【００１３】
後記実施例に示すとおり、ＮＦκＢ遺伝子の多型の発現頻度は、無歯顎者と８０２０達成者との間で差があることが見出された。したがって、ＮＦκＢ遺伝子の多型を検出することにより、歯の喪失リスクを評価することができる。特に、rs2281583の多型の発現は、被験者のうち８０２０達成者にしか認められなかったことから、これの検出により、極めて高い確度でリスクを評価できる。
【００１４】
ＮＦκＢ遺伝子の遺伝子多型の検出は、被験者から得た試料から抽出したＤＮＡをもとにして、ASP-PCR（Allele Specific PCR）法等の公知の方法により行うことができる。被験者から得る試料としては、好ましくは顎粘膜である。
【００１５】
本発明においてrs2295587の遺伝子多型を検出する場合には、多型部位における塩基がTCである被験者は、歯の喪失リスクが高いと評価すればよい。また、rs2281583の遺伝子多型を検出する場合には、多型部位における塩基がAGあるいはAAである被験者は、歯を喪失するリスクが低いと評価すればよい。
【００１６】
本発明のリスク評価方法は、プライマー等を含むキットを用いて行ってもよい。
【実施例】
【００１７】
以下、実施例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００１８】
実施例１
[１]実施対象
８０２０達成者（８０歳で歯が２０歯以上残っている者）１４３人及び８０歳以上の無歯顎者６１人を実施対象者とした。
[２]実施方法
（１）試料採取
被験者の顎粘膜を綿棒で軽く擦過して細胞試料を採取した（Buccal Swab法）。
（２）DNA抽出
採取した試料からシリカビーズ吸着法（QIAamp DNA Mini Kit）によってＤＮＡを抽出した。
（３）SNPs解析
抽出したDNAにつき、化学発光による検出方法であるASP（Allels Specific Primer）-PCR法によって、遺伝子多型の発現頻度を調べた。調べた遺伝子多型は、インターロイキンIL-1β遺伝子のrs1799916、rs1133555の２箇所、ミトコンドリア遺伝子のAC10398GT、MT5178Aの２箇所、及びNFκB遺伝子のrs2281583、rs2295587の２箇所である。
[３]結果
結果を、表２〜表７、及び図１〜図６に示す。表において、たとえば、AAとは、アレルの発現がAAであることを示す。AGはアレルの発現がAGであることを示す。
【００１９】
【表２】
2009077633.tif 000003
【００２０】
【表３】
2009077633.tif 000004
【００２１】
【表４】
2009077633.tif 000005
【００２２】
【表５】
2009077633.tif 000006
【００２３】
【表６】
2009077633.tif 000007
【００２４】
【表７】
2009077633.tif 000008
【００２５】
これらに示されるように、ＮＦκＢ遺伝子のrs2295587における多型の発現頻度は、無歯顎者と８０２０達成者との間で１．６３倍の差があった。また、rs228153の多型の発現は、無歯顎者には認められず、８０２０達成者にしか認められなかった。このことから、ＮＦκＢ遺伝子多型を調べることによって、歯の喪失リスクを評価できることがわかった。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】ミトコンドリア遺伝子のAT10398GTにおける多型の発現頻度を示す図である。
【図２】ミトコンドリア遺伝子のMT5178Aにおける多型の発現頻度を示す図である。
【図３】インターロイキンIL-1β遺伝子のrs1799916における多型の発現頻度を示す図である。
【図４】インターロイキンIL-1β遺伝子のrs1133555における多型の発現頻度を示す図である。
【図５】NFκB遺伝子のrs2295587における多型の発現頻度を示す図である。
【図６】NFκB遺伝子のrs2281583における多型の発現頻度を示す図である。
【図１】
2009077633.tif 000009
【図２】
2009077633.tif 000010
【図３】
2009077633.tif 000011
【図４】
2009077633.tif 000012
【図５】
2009077633.tif 000013
【図６】
2009077633.tif 000014
【配列表】
2009077633000001.app