(57)【要約】【課題】安全性の高い天然物の中からトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用又はインボルクリン産生促進作用を有する物質を見出し、それを有効成分とするトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤又はインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤を提供する。【解決手段】トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤又はインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤に、グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有せしめる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤。
【請求項２】
グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有することを特徴とするインボルクリン産生促進剤。
【請求項３】
グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤。
【請求項４】
グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有することを特徴とするインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤及びインボルクリン産生促進剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
基底層、有棘層、顆粒層及び角質層から構成されている表皮は、外部刺激を緩和し、水分等の体内成分の逸失を制御する働きをしている。基底層で分裂し、増殖した細胞は、有棘層、顆粒層を通過しながら分化し、強固な架橋結合をもったケラチン蛋白線維で構成された角質層になり、最終的には垢として角質層から脱落する。特に、顆粒層では、細胞膜が肥厚して肥厚細胞膜を形成するとともに、トランスグルタミナーゼ−１の作用により、蛋白分子間がグルタミル−リジン架橋され、強靭なケラチン蛋白線維が形成される。さらに、その一部にセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで、細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能の基礎が形成される。
【０００３】
しかし、加齢とともに表皮におけるトランスグルタミナーゼ−１の産生量が減少すると、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能が低下するため、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を呈したり、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬、乾皮症、座瘡等の皮膚疾患を発症したりするようになる。そのため、表皮におけるトランスグルタミナーゼ−１の産生を促進することにより、皮膚の老化症状や皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができると考えられる。このような考えに基づいて、従来、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有するものとして、ニガリ又はその構成成分である塩化カルシウム等が知られている（特許文献１参照）。
【０００４】
また、角質細胞は、ケラチン線維を主成分とし、それを包む角化外膜細胞（cornified envelope，ＣＥ）から構成される。このＣＥは、表皮角化細胞の分化に従って産生される複数のＣＥ前駆体蛋白質が、酵素トランスグルタミナーゼにより架橋され、不溶化することで形成される。さらに、セラミド等が共有結合して疎水的な構造をとることで、ＣＥの一部に細胞間脂質のラメラ構造の土台が供給され、これにより角層バリア機能の基礎が形成される。
【０００５】
このＣＥ前駆体蛋白質の１つとして、インボルクリンが知られており、かかるインボルクリンの産生を促進することで、角層バリア機能を改善し、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬、乾皮症等の乾燥性皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができると考えられる。このような考えに基づき、従来、インボルクリン産生促進作用を有するものとして、セイロンテツボクの種子抽出物等が知られている（特許文献２参照）。
【特許文献１】特開２００４−５１５９６号公報
【特許文献２】特開２００５−２１３１８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用又はインボルクリン産生促進作用を有する物質を見出し、それを有効成分とするトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤及びインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するため、本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤又はインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤は、グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有するトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤及びインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明について説明する。
本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤又はインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤は、グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有する。
【００１０】
グリチルリチン酸ジカリウムは、グリチルリチン酸と水酸化カリウム（ＫＯＨ）等とを反応させることにより得ることができ、グリチルリチン酸は、グリチルリチン酸を含有する植物抽出物から単離・精製することにより得ることができる。なお、グリチルリチン酸を含有する植物抽出物には、グリチルリチン酸を含有する植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１１】
グリチルリチン酸を含有する植物抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法によって得ることができる。グリチルリチン酸を含有する植物としては、例えば、甘草等が挙げられる。
【００１２】
甘草には、Glychyrrhiza glabra、Glychyrrhiza inflata、Glychyrrhiza uralensis、Glychyrrhiza aspera、Glychyrrhiza eurycarpa、Glychyrrhiza lepidota等、様々な種類のものがあり、これらのうち、いずれの種類の甘草を抽出原料として使用してもよいが、特にGlychyrrhiza glabraを抽出原料として使用することが好ましい。
【００１３】
抽出原料として使用し得る甘草の構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、花部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは根部である。
【００１４】
グリチルリチン酸を含有する植物抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１５】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００１６】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１７】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００１８】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００１９】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００２０】
以上のようにして得られた抽出液、当該抽出液の濃縮物又は当該抽出液の乾燥物からグリチルリチン酸を単離・精製する方法は、特に限定されるものではなく、常法により行うことができる。例えば、植物抽出物を、シリカゲルやアルミナ等の多孔質物質、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体やポリメタクリレート等の多孔性樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーに付して、水、アルコールの順で溶出させ、アルコールで溶出される画分としてグリチルリチン酸を得ることができる。
【００２１】
カラムクロマトグラフィーにて溶出液として使用し得るアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール又はそれらの水溶液等が挙げられるが、特にこれらに限定されるものではない。
【００２２】
さらに、カラムクロマトグラフィーにより得られたアルコール画分を、ＯＤＳを用いた逆相シリカゲルクロマトグラフィー、再結晶、液−液向流抽出、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー等の任意の有機化合物精製手段を用いて精製してもよい。
【００２３】
このようにして得られるグリチルリチン酸を、常法により水酸化カリウム（ＫＯＨ）等と反応させることで、グリチルリチン酸ジカリウムを得ることができる。
【００２４】
以上のようにして得られるグリチルリチン酸ジカリウムは、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びインボルクリン産生促進作用を有しているため、それらの作用を利用してトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤及びインボルクリン産生促進剤の有効成分として使用することができる。
【００２５】
また、グリチルリチン酸ジカリウムは、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有するため、その作用を利用してトランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患（例えば、魚鱗癬、乾癬、アトピー性皮膚炎、乾皮症、座瘡等の皮膚疾患）の予防・治療剤の有効成分としても使用することができる。
【００２６】
さらに、グリチルリチン酸ジカリウムは、インボルクリン産生促進作用を有するため、その作用を利用してインボルクリンの欠乏に起因する疾患（例えば、魚鱗癬、乾癬、アトピー性皮膚炎、乾皮症等の乾燥性皮膚疾患）の予防・治療剤の有効成分としても使用することができる。
【００２７】
本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤又はインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤は、グリチルリチン酸ジカリウムのみからなるものであってもよいし、グリチルリチン酸ジカリウムを製剤化したものであってもよい。
【００２８】
グリチルリチン酸ジカリウムは、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。グリチルリチン酸ジカリウムは、他の組成物（例えば、皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００２９】
なお、本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤又はインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤は、必要に応じて、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用又はインボルクリン産生促進作用を有する他の天然抽出物を配合して有効成分として用いることができる。
【００３０】
本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤又はインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤としては、一般に経皮投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤又はインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００３１】
本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤は、グリチルリチン酸ジカリウムが有するトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を通じて、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状や、魚鱗癬、乾癬、アトピー性皮膚炎、乾皮症、座瘡等の皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤は、これらの用途以外にもトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００３２】
本発明のインボルクリン産生促進剤は、グリチルリチン酸ジカリウムが有するインボルクリン産生促進作用を通じて、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状や、魚鱗癬、乾癬、アトピー性皮膚炎、乾皮症等の乾燥性皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のインボルクリン産生促進剤は、これらの用途以外にもインボルクリン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００３３】
本発明のトランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤は、グリチルリチン酸ジカリウムが有するトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を通じて、魚鱗癬、乾癬、アトピー性皮膚炎、乾皮症、座瘡等の皮膚疾患等を予防又は治療することができる。
【００３４】
本発明のインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤は、グリチルリチン酸ジカリウムが有するインボルクリン産生促進作用を通じて、魚鱗癬、乾癬、アトピー性皮膚炎、乾皮症等の乾燥性皮膚疾患等を予防又は治療することができる。
【００３５】
なお、本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤又はインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３６】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の試験例に何ら制限されるものではない。なお、下記の試験例においては、試料としてグリチルリチン酸ジカリウム（丸善製薬社製）を使用した。
【００３７】
〔試験例１〕トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用試験
グリチルリチン酸ジカリウムについて、以下のようにしてトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を試験した。
【００３８】
正常ヒト皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２のフラスコにて正常ヒト表皮角化細胞培地（ＫＧＭ）を用いて３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２日間培養した。
【００３９】
培養終了後、試料をＫＧＭで溶解した試料溶液（試料濃度は、下記表１を参照）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させ細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ−１の量を、モノクローナル抗ヒトトランスグルタミナーゼ−１抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。得られた測定結果から、下記式に基づいてトランスグルタミナーゼ−１産生促進率（％）を算出した。
【００４０】
トランスグルタミナーゼ−１産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表す。
上記試験の結果を表１に示す。
【００４１】
【表１】
2009114146.tif 000002
【００４２】
表１に示すように、グリチルリチン酸ジカリウムは、優れたトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有することが確認された。
【００４３】
〔試験例２〕インボルクリン産生促進作用試験
グリチルリチン酸ジカリウムについて、以下のようにしてインボルクリン産生促進作用を試験した。
【００４４】
正常ヒト皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２のフラスコにて正常ヒト表皮角化細胞培地（ＫＧＭ）を用いて３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェルあたり２００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。
【００４５】
培養終了後、培地を抜き、試料をＫＧＭで溶解した試料溶液（試料濃度は、下記表２を参照）を各ウェルに２００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で４８時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させ細胞表面に発現したインボルクリンの量を、モノクローナル抗ヒトインボルクリン抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。得られた測定結果から、下記式によりインボルクリン産生促進率（％）を算出した。
【００４６】
インボルクリン産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表す。
上記試験の結果を表２に示す。
【００４７】
【表２】
2009114146.tif 000003
【００４８】
表２に示すように、グリチルリチン酸ジカリウムは、優れたインボルクリン産生促進作用を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００４９】
本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１の欠乏に起因する疾患の予防・治療剤及びインボルクリンの欠乏に起因する疾患の予防・治療剤は、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状、魚鱗癬、乾癬、アトピー性皮膚炎、乾皮症、座瘡等の皮膚疾患等の予防、治療又は改善に大きく貢献できる。