(57)【要約】【課題】ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）分泌促進因子を同定するための方法を提供すること。【解決手段】上記方法は、  （ａ）試験化合物と、宿主細胞または該Ｇタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、該Ｇタンパク質共役レセプターは、    （ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；    （ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；ならびに    （ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；などからなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに  （ｂ）該レセプターの機能性を刺激する該試験化合物の能力を決定する工程であって、  該レセプターの機能性を刺激する該試験化合物の能力は、該試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、工程；を包含する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）分泌促進因子を方法において同定するためのＧタンパク質共役レセプターの使用であって、該方法は、
（ａ）試験化合物と、宿主細胞または該Ｇタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、該Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）該レセプターの機能性を刺激する該試験化合物の能力を決定する工程であって、
該レセプターの機能性を刺激する該試験化合物の能力は、該試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、使用。
【請求項２】
（ｃ）工程（ｂ）において前記レセプターの機能性を刺激する化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｄ）該化合物が該脊椎動物の腸内分泌細胞または該ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
該脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する該試験化合物の能力は、さらに、該試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
（ｃ）前記化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、該サンプルは、工程（ｂ）において前記レセプターの機能性を刺激する化合物を予め投与された非ヒト脊椎動物から得られており、
該非ヒト脊椎動物におけるＰＹＹレベルを増大させる該試験化合物の能力は、さらに、該試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
（ｃ）工程（ｂ）において前記レセプターの機能性を刺激する化合物を、非ヒト脊椎動物に投与する工程；および
（ｄ）該化合物が該非ヒト脊椎動物におけるＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
該非ヒト脊椎動物におけるＰＹＹレベルを増大させる該試験化合物の能力は、さらに、該試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記レセプターは、組換え体である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
前記宿主細胞は、発現ベクターを含み、該発現ベクターは、前記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
前記決定する工程は、第２メッセンジャーのレベルの測定によるものである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記第２メッセンジャーは、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、サイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣａ２＋からなる群より選択される、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
ｃＡＭＰのレベルが、増大する、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記決定する工程は、黒色素胞アッセイの使用、前記ＧＰＣＲを含む膜に対するＧＴＰγＳ結合の測定、またはレポーターアッセイによるものである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記宿主細胞は哺乳動物宿主細胞であるか、または前記宿主細胞は酵母宿主細胞であるか、前記宿主細胞は黒色素胞宿主細胞である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記試験化合物は、低分子である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
前記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストと脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｂ）該ＧＰＲ１１９アゴニストが該脊椎動物の腸内分泌細胞または該ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
該脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する該ＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、該ＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【請求項１６】
（ａ）化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、該サンプルは、ＧＰＲ１１９アゴニストを予め投与された非ヒト脊椎動物から得られており、
該非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる該ＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、該ＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【請求項１７】
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストを非ヒト脊椎動物に投与する工程；および
（ｂ）該ＧＰＲ１１９アゴニストが該非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
該非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる該ＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、該ＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【請求項１８】
ＰＹＹ分泌促進因子を方法において同定するためのＧタンパク質共役レセプターの使用であって、該方法は、
（ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、該レセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、該レセプターに対するリガンドは、ＧＰＲ１１９に対するリガンドであり、そして該Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）該公知のリガンドと該レセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ない該複合体が該試験化合物の非存在下よりも該試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
該決定は、該試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、使用。
【請求項１９】
前記方法が、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない前記複合体が工程（ｃ）で形成されるという該化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｅ）該化合物が該脊椎動物の腸内分泌細胞または該ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
該脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する該試験化合物の能力は、さらに、該試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記方法は、
（ｄ）前記化合物が非ヒト脊椎動物から得られるサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、該非ヒト脊椎動物は、化合物の存在下においてより少ない前記複合体が工程（ｃ）で形成されるという該化合物を投与されており、
該非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる該試験化合物の能力は、さらに、該試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、請求項１８に記載の使用。
【請求項２１】
前記方法は、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない前記複合体が工程（ｃ）で形成されるという該化合物を非ヒト脊椎動物に投与する工程；および
（ｅ）該化合物が該非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
該非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる該試験化合物の能力は、さらに、該試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、請求項１８に記載の使用。
【請求項２２】
前記レセプターは、組換え体である、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２３】
前記宿主細胞は、発現ベクターを含み、該発現ベクターは、前記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２４】
ＧＰＲ１１９に対する前記リガンドは、ＧＰＲ１１９アゴニストである、請求項１８〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、請求項１５〜１７または請求項２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭからなる群より選択される値未満のＥＣ５０を有する、請求項１５〜１７または請求項２５または請求項２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である、請求項１５〜１７または請求項２５〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは、経口で生物学的に利用可能である、請求項１５〜１７または請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである、請求項２４に記載の使用。
【請求項３１】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、請求項２４または請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭからなる群より選択される値未満のＥＣ５０を有する、請求項２４または請求項３０または請求項３１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３３】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である、請求項２４または請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは、経口で生物学的に利用可能である、請求項２４または請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３５】
前記試験化合物は、低分子である、請求項１８〜２４または請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３６】
前記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、請求項１８〜２４または請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
前記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１８〜２４または請求項３０〜３６のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）分泌促進因子およびＰＹＹによってモジュレートされる状態（例えば、ＮＰＹ  Ｙ２レセプター（Ｙ２Ｒ）の刺激によってモジュレートされる状態）の処置に有用な化合物を同定するためにＧＰＲ１１９レセプターを使用する方法に関する。ＧＰＲ１１９レセプターのアゴニストは、ＰＹＹによってモジュレートされる状態（例えば、Ｙ２Ｒの刺激によってモジュレートされる状態）を処置または予防するための治療剤として有用である。Ｙ２Ｒの刺激によってモジュレートされる状態であり得るようなＰＹＹによってモジュレートされる状態としては、骨に関連する状態、代謝障害、新脈管形成に関連する状態、虚血に関連する状態、痙攣性障害、吸収不良障害、癌、および炎症性障害が挙げられる。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
以下の考察は、本発明の理解を容易にすることが意図されるが、本発明に対する先行技術であることが意図されるものでも、認められるものでもない。
【０００３】
（Ａ．骨疎しょう症）
骨疎しょう症は、脆弱性の骨折の危険性の増大に対する素因を患者に与える、骨量の損失および不足した骨の強度をもたらす骨格構造の微小構造の変質によって特徴付けられる身体障害性疾患（ｄｉｓａｂｌｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）である。骨疎しょう症は、欧州、日本および米国において７５００万人よりも多くの者に影響を及ぼし、そして欧州および米国のみにおいて２３０万件よりも多くの骨折を引き起こす。米国において、骨粗しょう症は、全ての閉経後の白人女性のうちの少なくとも２５％に影響を及ぼし、そしてその割合は、８０歳よりも高齢の女性において７０％まで上昇する。５０歳よりも高齢の女性の３人に１人は、社会におけるかなりの社会的負担および財政的負担を引き起こす骨疎しょう症の骨折を有する。その疾患は、女性に限定されず；より高齢の男性もまた、罹患し得る。２０５０年までに、股関節部骨折の世界的発生数は、男性においては３１０％および女性においては２４０％に増大すると推定される。臨床的に現れる股関節部、前腕、および脊椎骨の骨折の人生における合わせた危険性は、約４０％であり、これは、心臓血管疾患の危険性と等しい。したがって、骨疎しょう症の骨折は、実質的な死亡率、罹病率、および経済的コストを引き起こす。老齢化集団によって、骨疎しょう症の骨折の数およびそれらのコストは、有効な予防ストラテジーが開発されない限り、次の５０年間で少なくとも２倍になる（例えば、非特許文献１；非特許文献２；および非特許文献３を参照のこと）
（Ｂ．肥満症および糖尿病）
肥満症は、その増大する有病率および関連する健康上の危険性に起因して、主要な公衆衛生上の懸案事項である。さらに、肥満症は、制限された運動性および減少した身体的持久力、ならびに社会的差別、学業的差別および職業的差別を介して人々の生活の質に影響を及ぼし得る。
【０００４】
肥満症および体重超過であることは、一般に、ボディマス指数（ＢＭＩ）によって定義され、ボディマス指数は、全体脂肪と相関し、そして特定の疾患の危険性の尺度として機能する。ＢＭＩは、２乗したメートルの身長で除算したキログラムの体重（ｋｇ／ｍ２）によって算出される。体重超過は、代表的に、２５〜２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩとして定義され、そして肥満症は、代表的に、３０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩとして定義される。例えば、非特許文献４を参照のこと。
【０００５】
最近の研究は、肥満症およびその関連する健康上の危険性が成人に限定されず、小児および青年にも驚くべき程度で影響を及ぼすことを見出している。Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌによると、体重超過と定義された小児および青年の％は、１９７０年代初頭から２倍を超えて増加し、そして現在、小児および青年のうちの約１５％が、体重超過である。心疾患の危険因子（例えば、高コレステロールおよび高血圧）は、同様の年齢の標準体重の被験体と比較して、体重超過の小児および青年において増加した頻度で生じる。また、先に成人病と見なされた２型糖尿病は、小児および青年において劇的に増加している。体重超過の状態および肥満症は、２型糖尿病と密接に関連している。最近、体重超過の青年は体重超過または肥満の成人になる７０％の可能性を有することが、推定されている。少なくとも一方の親が体重超過または肥満である場合、その確率は、約８０％まで上昇する。小児自身によって認識される体重超過であることの最も即時的な結果は、社会的差別である。
【０００６】
体重超過または肥満の個体は、病気（例えば、高血圧症、脂質異常症、２型（非インスリン依存性）糖尿病、インスリン抵抗性、グルコース不耐症、高インスリン血症、冠状動脈心疾患、狭心症、うっ血性心不全、脳卒中、胆石、胆嚢炎、胆石症、痛風、変形性関節症、閉塞性睡眠時無呼吸および呼吸性の問題、胆嚢疾患、特定の形態の癌（例えば、子宮内膜、乳癌、前立腺癌、および結腸癌）ならびに心理学的障害（例えば、うつ病、摂食障害、歪曲した身体像および低い自尊心））の増大した危険性にある。肥満症のネガティブな健康上の結果は、肥満症を米国における予防可能な死亡の第２の主原因にし、そして社会における重要な経済的効果および心理社会的効果を損なう。例えば、非特許文献５を参照のこと。
【０００７】
肥満症は、現在、その関連する健康上の危険性を減少させるために処置を必要とする慢性疾患として認識される。体重減少は、重要な処置の帰結であるが、肥満症管理の主要な目的の１つは、肥満症に関連する罹病率および死亡率を減少させるために、心臓血管および代謝の数値を改善することである。体重の５〜１０％の減少は代謝の数値（例えば、血液グルコース、血圧、および脂質濃度）を実質的に改善し得ることが、示されている。したがって、体重の５〜１０％の減少は罹病率および死亡率を減少させ得ることが、考えられる。
【０００８】
肥満症を管理するための現在利用可能な処方薬は、一般に、オーリスタットによるように、食事の脂質吸収を低下させることによってか、あるいはシブトラミンによって見られるように、食物摂取を減少させることおよび／またはエネルギー消費を増大させることでエネルギーの欠乏をもたらすことによって、体重を減少させる。現在利用可能な抗肥満剤の代替物についての研究は、いくつかの経路を採っており、その経路のうちの１つは、満腹感（ｓａｔｉｅｔｙ）をモジュレートすることに関与する特定の消化管ペプチド（例えば、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）（非特許文献６））に集中している。
【０００９】
（Ｃ．アテローム硬化症）
アテローム硬化症は、炎症、脂質蓄積、細胞死および線維症によって特徴付けられる複合疾患である。アテローム硬化症は、泡沫細胞形成をもたらす、内皮下の空間へのコレステロール沈着および単球浸潤によって特徴付けられる。アテローム硬化症後の血栓症は、心筋梗塞および脳卒中をもたらす。アテローム硬化症は、米国を含む多くの国における死亡率の主原因である（例えば、非特許文献７；Ａｒｅｈａｒｔら、Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ、２００８年３月６日、Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔを参照のこと）
（Ｄ．炎症性腸疾患（ＩＢＤ））
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、腸管における炎症を引き起こす疾患についての総称であり、そして炎症性腸疾患としては、例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、潰瘍性直腸炎が挙げられる。１９９０年の炎症性腸疾患の米国の医療コストは、＄１４億〜＄１８億であると推定されている。失われた生産性は、さらに＄４億〜＄８億を追加すると推定されており、炎症性腸疾患の推定されるコストを＄１８億〜＄２６億にする（例えば、非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０を参照のこと）。
【００１０】
腸炎（ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ）とは、任意の多くの異なる原因を有し得る一般的な状態である、腸管（特に、小腸）の炎症をいう。全腸炎（ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ）とは、小腸および結腸の炎症をいう。
【００１１】
クローン病（ＣＤ）は、消化管の任意の部分に影響を及ぼし得るが、小腸の最終部分（他に、（末端の）回腸および盲腸と称される）において最も一般的に見られる、炎症性プロセスである。この領域は、まとめて、回盲領域としても公知である。他の症例は、以下の１つ以上に影響を及ぼし得る：結腸のみ、小腸のみ（十二指腸、空腸および／または回腸）、肛門、胃または食道。潰瘍性大腸炎とは対照的に、ＣＤは、通常、直腸に影響を及ぼさないが、その代わり、頻繁に肛門に影響を及ぼす。その炎症は、罹患した組織の管壁（ｌｉｎｉｎｇ）の深部に拡大する。その炎症は、疼痛を引き起こし得、そしてその炎症は、頻繁に腸管を空にし、下痢をもたらし得る。クローン病はまた、腸炎と称され得る。肉芽腫性大腸炎は、結腸に影響を及ぼすクローン病の別名である。回腸炎は、小腸の第三部である回腸のＣＤである。クローン大腸炎（Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｃｏｌｉｔｉｓ）は、結腸の部分または全てに影響を及ぼすＣＤである。
【００１２】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は、大腸（一般的に、結腸と称される）の炎症性疾患である。ＵＣは、結腸および直腸の内部管壁の炎症および潰瘍形成を引き起こす。ＵＣの炎症は、通常、直腸領域において最も重篤であり、その重篤度は、大腸および小腸が連結する盲腸に向かって（患者間で変化する割合で）減少する。その直腸の炎症は、直腸炎と称される。Ｓ状結腸（直腸の直上に位置する）の炎症は、Ｓ字結腸炎と称される。結腸全体を含む炎症は、全大腸炎と称される。その炎症は、結腸を頻繁に空にし、下痢をもたらす。結腸の管壁が破壊される場合、潰瘍は、粘液、膿および血液の放出を形成する。潰瘍性直腸炎は、直腸のみに影響を及ぼすＵＣの形態である。
【００１３】
（Ｅ．ペプチドＹＹ（ＰＹＹ））
ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）は、１９８０年にブタの腸から初めて単離された３６アミノ酸のペプチドである（非特許文献１１）。ＰＹＹは、大腸および小腸の両方における腸内分泌Ｌ細胞から分泌される。免疫反応性ＰＹＹのラットおよびヒトの消化管濃度は、十二指腸および空腸において低く、回腸および結腸において高く、そして直腸において最も高いことが、示されている（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）。（ラットにおけるＰＹＹ発現は、ランゲルハンス島のアルファ細胞および延髄中の細胞にも拡大することが報告されている（非特許文献１４）；ＰＹＹは、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６として循環中へと放出される（非特許文献１６））。ＰＹＹ３−３６は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶによるＮ末端のＴｙｒ残基およびＰｒｏ残基の切断によってＰＹＹ１−３６から産生される。ＰＹＹ３−３６は、食後のヒト血漿におけるＰＹＹの優勢形態である（非特許文献１７）。ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６は、ＮＰＹ  Ｙ２レセプター（Ｙ２Ｒ）（Ｇタンパク質共役レセプター）において匹敵するアゴニスト活性を有することが報告されている（非特許文献１８）；しかし、ＰＹＹ３−３６は、高親和性のＹ２Ｒ選択的アゴニストであることが報告されている（非特許文献１９）。その後、ＰＹＹは、末梢投与後にラットにおいて高脂肪食の摂取を減少させること（非特許文献２０）、および末梢投与後にマウスにおいて体重減少を引き起こすこと（非特許文献２１）が、報告された。
【００１４】
ＰＹＹ３−３６の末梢投与は、ラットにおいて食物摂取および体重増加を顕著に減少させること、ヒトにおいて食欲および食物摂取を低下させること、ならびにマウスにおいて食物摂取を低下させるが、Ｙ２Ｒヌルマウスにおいては食物摂取を低下させないこと（このことは、食物摂取作用がＹ２Ｒを必要とすることを示唆するといわれる）が、報告されている。ヒト研究において、ＰＹＹ３−３６の注入は、食欲を顕著に低下させ、そして食物摂取を２４時間にわたって３３％減少させることが、見出された。上記ペプチドの食後の正常な循環濃度に到達するＰＹＹ３−３６の注入は、１５分以内にＰＹＹ３−３６のピーク血清レベルをもたらし、次いで３０分以内に基礎レベルまで減衰する。食物摂取の顕著な阻害はＰＹＹ３−３６注入後の１２時間において存在したが、食物摂取に対する効果はその後の１２時間〜２４時間において本質的に存在しなかったことが、報告された。ラット研究において、腹腔内へのＰＹＹ３−３６の反復投与（７日間にわたる１日２回の注射）は、累積食物摂取（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ｆｏｏｄ  ｉｎｔａｋｅ）を減少させた（非特許文献２２；非特許文献２３）。
【００１５】
ＰＹＹ３−３６の末梢投与は、両方の性別の代謝病の様々なげっ歯類モデルにおいて食物摂取、体重増加および血糖上昇指数を減少させることが報告されている（非特許文献２４）。特異的アンタゴニストＢＩＩＥ−２４６によるＹ２Ｒの遮断は食物摂取を減少させるために末梢投与された内因性ＰＹＹ３−３６および外因性ＰＹＹ３−３６の効果を弱めることが、報告されている（非特許文献２５）。げっ歯類において、新規の長時間作用する選択的Ｙ２Ｒポリエチレングリコール結合体化ペプチドアゴニストの末梢投与は食物摂取を減少させ、そしてその末梢投与はグルコース代謝（グルコース処理（ｇｌｕｃｏｓｅ  ｄｉｓｐｏｓａｌ）、血漿インスリンおよび血漿グルコース）を改選することが、報告されている（非特許文献２６；非特許文献２７）。マウスにおけるＰＹＹの除去は高インスリン血症および肥満症の発症をもたらすことが、報告されている（非特許文献２８）。マウスにおいて、長時間作用し、強力であり、かつ高度に選択的なＹ２Ｒアゴニストの末梢投与は食物摂取を阻害し、そしてその末梢投与は脂肪代謝を促進することが、報告されている（非特許文献２９）。
【００１６】
インビボでＰＹＹ合成を刺激する因子は食事誘導性および遺伝性の肥満症に対する防御を提供することができ、そしてその因子は耐糖能を改善し得るという証拠が、存在する（非特許文献３０）。
【００１７】
Ｙ２Ｒアゴニスト（例えば、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６）は癲癇発作（例えば、カイニン酸誘発性痙攣（ｋａｉｎａｔｅ  ｓｅｉｚｕｒｅ））に対する防御を提供しうることが、報告されている（非特許文献３１；非特許文献３２）。
【００１８】
Ｙ２Ｒアゴニスト（例えば、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６）は静脈内投与の際に腸の種々の部分において水およびナトリウムの両方の吸収を増大させる吸収誘発性（ｐｒｏａｂｓｏｒｂｔｉｖｅ）（または抗分泌性）のホルモンとして作用することが、報告されている（非特許文献３３；非特許文献３４；非特許文献３５；非特許文献３６；非特許文献３７）。Ｙ２Ｒアゴニスト（例えば、ＰＹＹアナログ）は腸管上皮における分泌を阻害し、そしてそのＹ２Ｒアゴニストは腸管上皮における吸収および増殖を促進することが、報告されている（非特許文献３７）。ＰＹＹは正常なラットにおいて腸管の増殖を促進することが、報告されている（非特許文献３８）。Ｙ２Ｒアゴニスト（例えば、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６）は腸の運動を阻害し、そしてそのＹ２Ｒアゴニストは下痢を予防するように作用することが、報告されている（特許文献１；非特許文献３９もまた参照のこと）。
【００１９】
Ｙ２Ｒアゴニスト（例えば、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６）は炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎およびクローン病）に対する防御を提供し得ることが、報告されている（特許文献２）。ＰＹＹ欠損マウスはオステオペニアの表現型を示すこと（すなわち、ＰＹＹは、骨量を増大させ得、そして／または骨量の損失に対する防御（例えば、骨量の損失を減少させること）を提供し得ること）が、報告されている（非特許文献４０）。ＰＹＹ３−３６は膵炎のげっ歯類モデルにおいて防御を提供し得ることが、報告されている（非特許文献４１）。
【００２０】
新脈管形成はＹ２Ｒ欠損マウスにおいて損なわれること（すなわち、Ｙ２Ｒのアゴニスト（例えば、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６）は新脈管形成を促進すること）が、報告されている（非特許文献４２）。創傷治癒はＹ２Ｒ欠損マウスにおいて損なわれること（すなわち、Ｙ２Ｒのアゴニスト（例えば、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６）は創傷治癒を促進すること）が、報告されている（非特許文献４３）。虚血性の新脈管形成はＹ２Ｒ欠損マウスにおいて損なわれること（すなわち、Ｙ２Ｒのアゴニスト（例えば、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６）は虚血性組織の脈管再生および虚血性組織の機能の修復を促進すること）が、報告されている（非特許文献４４）。Ｙ２Ｒのアゴニスト（例えば、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６）は末梢動脈疾患のラットモデルにおいて側副枝依存性の血流の増大を媒介することが、報告されている（非特許文献４５）。
【００２１】
ＰＹＹおよびＹ２Ｒアゴニスト（例えば、ＰＹＹ３−３６）は、例えば、膵臓癌（例えば、膵管腺癌）、乳癌（例えば、浸潤性乳管腺癌（ｂｒｅａｓｔ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｖｅ  ｄｕｃｔａｌ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ））、結腸癌（例えば、結腸腺癌およびバレット腺癌）の症例において腫瘍増殖を抑制し得ることが、報告されている（非特許文献４６；非特許文献４７；非特許文献４８；非特許文献４９；非特許文献５０）。
【００２２】
ＰＹＹ３−３６などによるＹ２Ｒの刺激は血漿アディポネクチンの増加をもたらすことが、報告されている（非特許文献２６）。アディポネクチンは、強力な抗炎症特性を有するアディポカインである（非特許文献５１；非特許文献５２）。アディポネクチンは、筋肉および肝臓において優勢に、血管内皮細胞およびマクロファージを標的することによる抗アテローム発生効果、およびインスリン感作効果を発揮する（非特許文献５３；非特許文献５４）。低いアディポネクチンレベルは、脂質異常症（高いトリグリセリド、低密なＬＤＬコレステロール、低いＨＤＬコレステロール）におけるアテローム発生性のリポタンパク質に関連することが報告されている（Ｍａｒｓｏら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ、２００８年２月５日、Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ）。アディポネクチンは、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の構築に関与している（非特許文献５５）。アディポネクチンは、アディポネクチンレベルの低下に関連する肥満症関連メタボリックシンドロームのマウスモデルにおいて、メタボリックシンドローム（インスリン抵抗性、高血糖症、および脂質異常症が挙げられる）の異常を改善することが見出されている（非特許文献５６）。アディポネクチンは、組織の虚血に応答して新脈管形成を刺激することが報告されている（非特許文献５７）。アディポネクチンは、内皮の一酸化窒素シンターゼ依存性の機構によって脳虚血損傷を予防することが報告されている（非特許文献５８）。アディポネクチンは、心筋虚血−再灌流傷害に対する防御を提供することが報告されている（非特許文献５９；非特許文献６０）。アディポネクチンは、ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ、Ａｋｔ、および一酸化窒素を介して心筋虚血−再灌流傷害に対する防御を提供することが報告されている（非特許文献６１）。アディポネクチンは、心肥大および間質性線維症を抑制するその能力によって心筋梗塞後における収縮期の機能不全の発症に対する防御を提供し、そして筋細胞および毛細管の損失から保護することが報告されている（非特許文献６２）。アディポネクチンは、炎症性肺疾患に対する防御を提供することが報告されている；アディポネクチン欠損マウスは、気腫様の表現型を示す（Ｓｕｍｍｅｒら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、２００８年３月７日）。アディポネクチンは、喘息と関連し得るようなアレルギー性の気道炎症および気道過敏に対する防御を提供することが報告されている（非特許文献６３）。アディポネクチンは、そのインスリン感作効果によって肺動脈性肺高血圧症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）に対する防御を提供することが示唆されている（非特許文献６４）。アディポネクチンは、肥満症に関連する高血圧症を改善することが報告されており、その高血圧症の改善は、アップレギュレートされたプロスタサイクリン発現に部分的に関連している（非特許文献６５）。アディポネクチンは、ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡＥＣ）における接着分子ＶＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチンおよびＩＣＡＭ−１の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α誘導性の発現を減少させること（非特許文献６６）、およびマクロファージ���おけるＴＮＦ−αの産生を阻害すること（非特許文献６７）が報告されている。アディポネクチンは、血管の介入後における再狭窄に対する防御を提供することが報告されている（非特許文献６８）。炎症におけるＴＮＦ−αの中心的役割は、ＴＮＦ−αの作用をブロックする因子が炎症状態の範囲を処置する能力によって示された。ＴＮＦ−α媒介性の炎症状態は、関節リウマチ、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、強直性脊椎炎、乾癬、虚血性の脳損傷、心臓の同種移植拒絶、喘息などを包含する（非特許文献６９）。例えば、非特許文献７０；非特許文献７１；非特許文献７２；非特許文献１８を参照のこと。
【００２３】
（Ｆ．ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置）
ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置のための魅力的な代替的アプローチは、消化管の腸内分泌細胞におけるＰＹＹ分泌の刺激などによって個体におけるＰＹＹの内因性レベル（例えば、血漿ＰＹＹの内因性レベル）を増大させるために経口的に活性な組成物を開発することである。
【００２４】
（Ｇ．ＧＰＲ１１９）
ＧＰＲ１１９は、Ｇタンパク質共役レセプターである（ＧＰＲ１１９；例えば、ヒトＧＰＲ１１９、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号ＡＡＰ７２１２５およびその対立遺伝子；例えば、マウスＧＰＲ１１９、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号ＡＹ２８８４２３およびその対立遺伝子）。アゴニストによるようなＧＰＲ１１９の刺激は、細胞内ｃＡＭＰのレベルの上昇をもたらし、このことは、Ｇｓに結合しているＧＰＲ１１９と一致する。特許文献において、ＧＰＲ１１９は、ＲＵＰ３と称されている（例えば、特許文献３）；ＧＰＲ１１９はまた、グルコース依存性インスリン分泌促進レセプター（Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（ＧＤＩＲ）と称されている。
【００２５】
（Ｈ．Ｇタンパク質共役レセプター）
多くのレセプタークラスが、ヒトにおいて存在するが、圧倒的に豊富であり、かつ治療に関連するものは、Ｇタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）クラスによって代表される。約３０，０００〜４０，０００の遺伝子がヒトゲノム内に存在することが、推定され、これらの遺伝子のうち、約２％が、ＧＰＣＲをコードすると推定される。
【００２６】
ＧＰＣＲは、薬学的製品の開発についての重要な領域を示す。ＧＰＣＲにおいて活性な薬物は、疼痛、認知機能不全、高血圧症、消化性潰瘍、鼻炎、および喘息と同程度に多様な広範囲のヒト疾患にわたって治療的利点を有する。約５００種の臨床的に市販されている薬物のうち、３０％よりも多くが、ＧＰＣＲ機能のモジュレーターである。これらの薬物は、それらの活性を約３０種の十分に特徴付けられたＧＰＣＲにおいて発揮する（例えば、非特許文献７３）。
【００２７】
ＧＰＣＲは、７個のαへリックスを形成する、２２個〜２４個の間の疎水性アミノ酸の７個の配列を有する共通の構造モチーフを共有する、それらのαへリックスの各々は、膜を貫通（ｓｐａｎ）する（各々の貫通は、数字によって同定される（すなわち、膜貫通−１（ＴＭ−１）、膜貫通−２（ＴＭ−２）など））。上記膜貫通ヘリックスは、細胞膜の細胞膜の外部もしくは「細胞外」側で、膜貫通−２と膜貫通−３との間、膜貫通−４と膜貫通−５との間、および膜貫通−６と膜貫通−７との間においてアミノ酸の鎖によって連結されている（これらは、それぞれ、「細胞外」領域１、２および３（ＥＣ−１、ＥＣ−２およびＥＣ−３）と称される）。上記膜貫通ヘリックスはまた、細胞膜の内部もしくは「細胞内」側で、膜貫通−１と膜貫通−２との間、膜貫通−３と膜貫通−４との間、および膜貫通−５と膜貫通−６との間においてもアミノ酸の鎖によって連結されている（これらは、それぞれ、「細胞内」領域１、２および３（ＩＣ−１、ＩＣ−２およびＩＣ−３）と称される）。上記レセプターの「カルボキシ」（「Ｃ」）末端は、細胞内の細胞内空隙中にあり、そして上記レセプターの「アミノ」（「Ｎ」）末端は、細胞の外側の細胞外空隙中にある。
【００２８】
一般に、リガンドが上記レセプターと結合する場合（しばしば、レセプターの「活性化」と称される）、そのレセプターのコンホメーションの変化が存在し、それは細胞内領域と細胞内の「Ｇタンパク質」との間の共役（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）を容易にする。ＧＰＣＲはＧタンパク質に関して「雑多（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）」であること（すなわち、ＧＰＣＲは１種以上のＧタンパク質と相互作用し得ること）が、報告されている。非特許文献７４を参照のこと。他のＧタンパク質が存在するが、現在、Ｇｑ、Ｇｓ、Ｇｉ、ＧｚおよびＧｏが、同定されたＧタンパク質である。Ｇタンパク質との内在性リガンドで活性化されたＧＰＣＲの共役が、シグナリングカスケードプロセス（「シグナル伝達」と称される）を開始する。正常な条件下では、シグナル伝達は、最終的に、細胞の活性化もしくは細胞の阻害をもたらす。理論に拘束されるされることは望まないが、上記レセプターのＩＣ−３ループならびにカルボキシ末端が、Ｇタンパク質と相互作用すると考えられている。
【００２９】
ホスホリパーゼＣ経路に対するいくつかのクラスのＧＰＣＲに結合するようである雑多なＧタンパク質（例えば、Ｇ１５またはＧ１６）（非特許文献７５）または同一の経路（例えば、ホスホリパーゼＣ）に対する多数の異なるＧＰＣＲに結合するように設計されたキメラＧタンパク質（非特許文献７６）もまた、存在する。
【００３０】
生理学的条件下において、ＧＰＣＲは、２種の異なるコンホメーション：「不活性」状態と「活性状態」との間の平衡で細胞膜中に存在する。不活性状態のレセプターは、細胞内のシグナル伝達経路に連結して、生物学的応答をもたらすシグナル伝達を開始できない。レセプターのコンホメーションの活性状態への変化は、（Ｇタンパク質を介する）伝達経路への連鎖を可能にし、そして生物学的応答を生じさせる。
【００３１】
レセプターは、リガンドまたは化合物（例えば、薬物）によって活性状態で安定化され得る。最近の発見（上記レセプターのアミノ酸配列に対する改変が挙げられるが、専らこれに限定されない）は、活性状態のコンホメーションで上記レセプターを促進および安定化するためのリガンドまたは薬物以外の手段を提供する。これらの手段は、上記レセプターへのリガンドの結合の効果を刺激することによって活性状態でそのレセプターを有効に安定化する。このようなリガンド非依存性の手段による安定化は、「構成的なレセプター活性化」と称される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３２】
【特許文献１】欧州特許第１９０２７３０号明細書
【特許文献２】国際公開第０３／１０５７６３号パンフレット
【特許文献３】国際公開第００／３１２５８号パンフレット
【非特許文献】
【００３３】
【非特許文献１】Ａｔｉｋら、Ｃｌｉｎ  Ｏｒｔｈｏｐ  Ｒｅｌａｔ  Ｒｅｓ、２００６年、第４４３巻、ｐ．１９−２４
【非特許文献２】Ｒａｉｓｚ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、２００５年、第１１５巻、ｐ．３３１８−３３２５
【非特許文献３】Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  ９２１、２００３年、Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ
【非特許文献４】Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓ，Ｔｈｅ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  Ｒｅｐｏｒｔ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９９８年，ＮＩＨ公報番号９８−４０８３
【非特許文献５】ＭｃＧｉｎｎｉｓら、ＪＡＭＡ、１９９３年、第２７０巻、ｐ．２２０７−２２１２
【非特許文献６】Ｃｈａｕｄｈｒｉら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、２００８年、第７０巻、ｐ．２３９−２５５
【非特許文献７】Ｒｕｇｇｅｒｉ、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、２００２年、第８巻、ｐ．１２２７−１２３４
【非特許文献８】Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｎｕｒｓｉｎｇ  Ｔｉｍｅｓ、２００４年、第１００巻、ｐ．８６−９０
【非特許文献９】Ｈａｙら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ、１９９２年、第１４巻、ｐ．３０９−３１７
【非特許文献１０】Ｋｅｉｇｈｌｅｙら、Ａｉｌｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ、２００３年、第１８巻、ｐ．６６−７０
【非特許文献１１】Ｔａｔｅｍｏｔｏら、Ｎａｔｕｒｅ、１９８０年、第２８５巻、ｐ．４１７−４１８
【非特許文献１２】Ｌｕｎｄｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、１９８２年、第７９巻、ｐ．４４７１−４４７５
【非特許文献１３】Ａｄｒｉａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ、１９８５年、第８９巻、ｐ．１０７０−１０７７
【非特許文献１４】Ｅｋｂｌａｄら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２００２年、第２３巻、ｐ．２５１−２６１
【非特許文献１５】Ｕｅｎｏら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ、２００８年、第１４５巻、ｐ．１２−１６
【非特許文献１６】Ｅｂｅｒｌｅｉｎら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１９８９年、第１０巻、ｐ．７９７−８０３
【非特許文献１７】Ｇｒａｎｄｔら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ、１９９４年、第５１巻、ｐ．１５１−１５９
【非特許文献１８】Ｐａｒｋｅｒら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００８年、第１５３巻、ｐ．４２０−４３１
【非特許文献１９】Ｋｅｉｒｅら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、２０００年、第２７９巻、ｐ．Ｇ１２６−Ｇ１３１
【非特許文献２０】Ｏｋａｄａら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ、１９９３年、第１８０巻
【非特許文献２１】Ｍｏｒｌｅｙら、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９８７年、第４１巻、ｐ．２１５７−２１６５
【非特許文献２２】Ｂａｔｔｅｒｈａｍら、Ｎａｔｕｒｅ、２００２年、第４１８巻、ｐ．６５０−６５４
【非特許文献２３】Ｒｅｎｓｈａｗら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ、２００５年、第６巻、ｐ．１７１−１７９
【非特許文献２４】Ｐｉｔｔｎｅｒら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ  Ｒｅｌａｔ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓｏｒｄ、２００４年、第２８巻、ｐ．９６３−９７１
【非特許文献２５】Ａｂｂｏｔｔら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ、２００５年、第１０４３巻、ｐ．１３９−１４４
【非特許文献２６】Ｏｒｔｉｚら、ＪＰＥＴ、２００７年、第３２３巻、ｐ．６９２−７００
【非特許文献２７】Ｌａｍｂら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、２００７年、第５０巻、ｐ．２２６４−２２６８
【非特許文献２８】Ｂｏｅｙら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ、２００６年、第４９巻、ｐ．１３６０−１３７０
【非特許文献２９】Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｍら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２００７年、第２８巻、ｐ．２３５−２４０
【非特許文献３０】Ｂｏｅｙら、Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ、２００８年、第４２巻、ｐ．１９−３０
【非特許文献３１】Ｅｌ  Ｂａｈｈら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２００５年、第２２巻、ｐ．１４１７−１４３０
【非特許文献３２】Ｗｏｌｄｂｙｅら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅ、２００５年、第２０巻、ｐ．７６０−７７２
【非特許文献３３】Ｂｉｌｃｈｉｋら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ、１９９３年、第１０５巻、ｐ．１４４１−１４４８
【非特許文献３４】Ｌｉｕら、Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ、１９９５年、第５８巻、ｐ．６−１１
【非特許文献３５】Ｎｉｇｈｔｉｎｇａｌｅら、Ｇｕｔ、１９９６年、第３９巻、ｐ．２６７−２７２
【非特許文献３６】Ｌｉｕら、Ａｍ  Ｓｕｒｇ、１９９６年、第６２巻、ｐ．２３２−２３６
【非特許文献３７】Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｍら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、２０００年、第４３巻、ｐ．３４２０−３４２７
【非特許文献３８】Ｇｏｍｅｚら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、１９９５年、第２６８巻、ｐ．Ｇ７１−Ｇ８１
【非特許文献３９】Ｃｏｘ、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２００７年、第２８巻、ｐ．３４５−３５１
【非特許文献４０】Ｗｏｒｔｌｅｙら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ、２００７年、第１３３巻、ｐ．１５３４−１５４３
【非特許文献４１】Ｖｏｎａ−Ｄａｖｉｓら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２００７年、第２８巻、ｐ．３３４−３３８
【非特許文献４２】Ｌｅｅら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２００３年、第２４巻、ｐ．９９−１０６
【非特許文献４３】Ｅｋｓｔｒａｎｄら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、２００３年、第１００巻、ｐ．６０３３−６０３８
【非特許文献４４】Ｌｅｅら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、２００３年、第１１１巻、ｐ．１８５３−１８６２
【非特許文献４５】Ｃｒｕｚｅら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２００７年、第２８巻、ｐ．２６９−２８０
【非特許文献４６】Ｌｉｕら、Ｓｕｒｇｅｒｙ、１９９５年、第１１８巻、ｐ．２２９−２３６
【非特許文献４７】Ｌｉｕら、Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ、１９９５年、第５８巻、ｐ．７０７−７１２
【非特許文献４８】Ｇｒｉｓｅら、Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ、１９９９年、第８２巻、ｐ．１５１−１５５
【非特許文献４９】Ｔｓｅｎｇら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２００２年、第２３巻、ｐ．３８９−３９５
【非特許文献５０】ＭｃＦａｄｄｅｎら、Ａｍ  Ｊ  Ｓｕｒｇ、２００４年、第１８８巻、ｐ．５１６−５１９
【非特許文献５１】Ｏｕｃｈｉら、Ｃｌｉｎ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ、２００７年、第３８０巻、ｐ．２４−３０
【非特許文献５２】Ｔｉｌｇら、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００６年、第６巻、ｐ．７７２−７８３
【非特許文献５３】Ｋｕｂｏｔａら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２００２年、第２７７巻、ｐ．２５８６３−２５８６６
【非特許文献５４】Ｍａｅｄａら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、２００２年、第８巻、ｐ．７３１−７３７
【非特許文献５５】Ｏｋｕら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００７年、第５８１巻、ｐ．５０２９−５０３３
【非特許文献５６】Ｈａｒａら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ、２００６年、第２９巻、ｐ．１３５７−１３６２
【非特許文献５７】Ｓｈｉｂａｔａら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２００４年、第２７９巻、ｐ．２８６７０−２８６７４
【非特許文献５８】Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、２００８年、第１１７巻、ｐ．２１６−２２３
【非特許文献５９】Ｓｈｉｂａｔａら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、２００５年、第１１巻、ｐ．１０９６−１１０３
【非特許文献６０】Ｔａｏら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、２００７年、第１１５巻、ｐ．１４０８−１４１６
【非特許文献６１】Ｇｏｎｏｎら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ、２００８年、第７８巻、ｐ．１１６−１２２
【非特許文献６２】Ｓｈｉｂａｔａら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ、２００７年、第４２巻、ｐ．１０６５−１０７４
【非特許文献６３】Ｓｈｏｒｅら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００６年、第１１８巻、ｐ．３８９−３９５
【非特許文献６４】Ｈａｎｓｍａｎｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、２００７年、第１１５巻、ｐ．１２７５−１２８４
【非特許文献６５】Ｏｈａｓｈｉら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、２００６年、第４７巻、ｐ．１１０８−１１１６
【非特許文献６６】Ｏｕｃｈｉら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９９９年、第１００巻、２４７３−２４７６
【非特許文献６７】Ｙｏｋｏｔａら、Ｂｌｏｏｄ、２０００年、第９６巻、ｐ．１７２３−１７３２
【非特許文献６８】Ｍａｔｓｕｄａら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２００２年、第２７７巻、ｐ．３７４８７−３７４９１
【非特許文献６９】Ｂｒａｄｌｅｙ、Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２００８年、第２１４巻、ｐ．１４９−１６０
【非特許文献７０】Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００２年、第１０３巻、ｐ．１３７−１４２
【非特許文献７１】Ｂｅｈｒｅ、Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ、２００７年、第６７巻、ｐ．４４９−４５８
【非特許文献７２】Ｇｕｅｒｒｅ−Ｍｉｌｌｏ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ＆  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、２００８年、第３４巻、ｐ．１２−１８
【非特許文献７３】Ｗｉｓｅら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ、２００４年、第４４巻、ｐ．４３−６６
【非特許文献７４】Ｋｅｎａｋｉｎ、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９８８年、第４３巻、ｐ．１０９５−１１０１
【非特許文献７５】ＯｆｆｅｒｍａｎｎｓおよびＳｉｍｏｎ、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、１９９５年、第２７０巻、ｐ．１５１７５−８０
【非特許文献７６】ＭｉｌｌｉｇａｎおよびＲｅｅｓ、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９９９年、第２０巻、ｐ．１１８−２４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００３４】
（発明の要旨）
本発明は、経口投与などによる個体に対するＧＰＲ１１９アゴニストの投与が個体における血漿の全ＰＹＹを増大させるように作用し得るという、本出願人による予期せぬ発見に関する。本発明は、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、および個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するためのＧＰＲ１１９に関する方法を特徴とする。ＧＰＲ１１９アゴニストは、個体における血漿の全ＰＹＹを増大させるために有用である。特定の実施形態において、上記個体は、ヒトである。
【００３５】
ヒトＧＰＲ１１９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、配列番号１に与えられる。そのコードされたヒトＧＰＲ１１９ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号２に与えられる。
【００３６】
第１の局面において、本発明は、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）試験化合物と、宿主細胞またはＧタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程：ならびに
（ｂ）上記Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記試験化合物の能力を決定する工程であって、
上記Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記試験化合物の能力は、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【００３７】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む。
【００３８】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【００３９】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の対立遺伝子である。
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の哺乳動物オルソログである。
【００４０】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、組換え体である。
【００４１】
特定の実施形態において、上記方法は、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法である。
【００４２】
特定の実施形態において、上記方法は、上記レセプターのアゴニストを同定する工程を包含する。
【００４３】
特定の実施形態において、上記方法は、上記レセプターの部分アゴニストを同定する工程を包含する。
【００４４】
特定の実施形態において、上記方法は、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物を同定するための方法である。
【００４５】
特定の実施形態において、上記方法は、個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法である。
【００４６】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第１の局面の工程（ａ）および工程（ｂ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｃ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を必要に応じて合成する工程；
（ｄ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｅ）上記化合物が上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【００４７】
特定の実施形態において、上記脊椎動物の腸内分泌細胞は、哺乳動物の腸内分泌細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、Ｌ細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に含まれるか、あるいは十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に由来する（例えば、Ｌｕｎｄｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（１９８２）７９：４４７１−４４７５；Ａｄｒｉａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ（１９８５）８９：１０７０−１０７７；Ｅｋｂｌａｄら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００２）２３：２５１−２６１；Ｕｅｎｏら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ（２００８）１４５：１２−１６を参照のこと）。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、腸内分泌細胞株である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ランゲルハンス島に含まれる細胞、またはランゲルハンス島に由来する細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、神経細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ＰＹＹを分泌できるように設計された組換え体細胞である。
【００４８】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第１の局面の工程（ａ）および工程（ｂ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｃ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を必要に応じて合成する工程；
（ｄ）脊椎動物に対して、工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を投与する工程；および
（ｅ）上記化合物が上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【００４９】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、全ＰＹＹの血液濃度または血漿濃度である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、ＰＹＹ３−３６の血液濃度または血漿濃度である。
【００５０】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【００５１】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【００５２】
特定の実施形態において、上記ヒトは、臨床試験に登録された個体または患者あるいは臨床試験において処置を受けている個体または患者である。
【００５３】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第１の局面の工程（ａ）および工程（ｂ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｃ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を必要に応じて合成する工程；および
（ｄ）上記化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、上記サンプルは、工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を予め投与された脊椎動物から得られており、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【００５４】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【００５５】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第１の局面の工程（ａ）および工程（ｂ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｃ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を必要に応じて合成する工程；
（ｄ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を必要に応じて提供する工程；
（ｅ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｆ）上記化合物が上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【００５６】
特定の実施形態において、上記脊椎動物の腸内分泌細胞は、哺乳動物の腸内分泌細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、Ｌ細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に含まれるか、あるいは十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に由来する（例えば、Ｌｕｎｄｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（１９８２）７９：４４７１−４４７５；Ａｄｒｉａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ（１９８５）８９：１０７０−１０７７；Ｅｋｂｌａｄら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００２）２３：２５１−２６１；Ｕｅｎｏら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ（２００８）１４５：１２−１６を参照のこと）。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、腸内分泌細胞株である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ランゲルハンス島に含まれる細胞、またはランゲルハンス島に由来する細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、神経細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ＰＹＹを分泌できるように設計された組換え体細胞である。
【００５７】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第１の局面の工程（ａ）および工程（ｂ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｃ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を必要に応じて合成する工程；
（ｄ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を必要に応じて提供する工程；
（ｅ）脊椎動物に対して、工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を投与する工程；および
（ｆ）上記化合物が上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【００５８】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、全ＰＹＹの血液濃度または血漿濃度である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、ＰＹＹ３−３６の血液濃度または血漿濃度である。
【００５９】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【００６０】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第１の局面の工程（ａ）および工程（ｂ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｃ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を必要に応じて合成する工程；
（ｄ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を必要に応じて提供する工程；および
（ｅ）上記化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、上記サンプルは、工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を予め投与された脊椎動物から得られており、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【００６１】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【００６２】
特定の実施形態において、上記同定されたＰＹＹ分泌促進因子、あるいはＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記同定された化合物、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記同定された化合物は、上記レセプターのアゴニストである。いくつかの実施形態において、上記同定されたＰＹＹ分泌促進因子、あるいはＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記同定された化合物、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記同定された化合物は、上記レセプターの部分アゴニストである。
【００６３】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、Ｇタンパク質に結合される。特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターの刺激は、細胞内ｃＡＭＰ蓄積のレベルを増大させる。特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質は、Ｇｓである。
【００６４】
いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２またはその対立遺伝子である。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。
【００６５】
いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合するＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがリガンドであるＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰ蓄積のレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞（ｍｅｌａｎｏｐｈｏｒｅ）細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【００６６】
特定の実施形態において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５０％のホルムアミドと、５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）と、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）と、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液と、１０％の硫酸デキストランと、２０μｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡとを含む溶液中での４２℃におけるハイブリダイゼーション、ならびにその後の０．１×ＳＳＣを含む溶液中での６５℃における洗浄を含む。ハイブリダイゼーション技術は、当業者に周知である。
【００６７】
特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２またはその対立遺伝子である。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰ蓄積のレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【００６８】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターである配列番号２の改変体は、内因性Ｇタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターである配列番号２の改変体は、非内因性Ｇタンパク質共役レセプターである。
【００６９】
特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２またはその対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【００７０】
特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２または配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【００７１】
いくつかの実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、Ｇタンパク質を含む融合タンパク質の部分である。ＧＰＣＲ：Ｇ融合構築物を作製するための技術は、当業者に周知である（例えば、国際出願ＷＯ  ０２／４２４６１を参照のこと）。
【００７２】
特定の実施形態において、上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、上記発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードしているポリヌクレオチドを含む。例示の適切な発現ベクターは、ｐＣＭＶである。他の適切な発現ベクターは、当業者にとって容易に明らかであり、そして広範な種々の発現ベクターは、市販されている（例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ；Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ；およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）。
【００７３】
いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、脊椎動物細胞である。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、上記哺乳動物宿主細胞は、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、ＣＨＯ細胞、ＭＣＢ３９０１細胞、およびＣＯＳ−７細胞からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、酵母細胞である。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、黒色素胞細胞である。他の適切な宿主細胞は、当業者にとって容易に明らかであり、そして広範な種々の細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０−２２０９から入手可能である。
【００７４】
特定の実施形態において、上記決定する工程は、Ｇタンパク質共役レセプターがＧｓ共役レセプターであることと一致する。
【００７５】
いくつかの実施形態において、上記決定する工程は、Ｇタンパク質共役レセプターが雑多なＧタンパク質（例えば、Ｇα１５またはＧα１６）を介してホスホリパーゼＣ経路に共役することと一致する。不規則なＧタンパク質は、当業者に周知である（例えば、Ｏｆｆｅｒｍａｎｎｓら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（１９９５）２７０：１５１７５−１５１８０を参照のこと）。いくつかの実施形態において、上記決定する工程は、上記Ｇタンパク質共役レセプターがキメラＧタンパク質を介して、例えば、ホスホリパーゼＣ経路に共役することと一致する。キメラＧタンパク質は、当業者に周知である（例えば、Ｍｉｌｌｉｇａｎら，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９９）２０：１１８−１２４；およびＷＯ  ０２／４２４６１を参照のこと）。
【００７６】
いくつかの実施形態において、上記決定する工程は、第２メッセンジャーのレベルの測定によるものである。
【００７７】
いくつかの実施形態において、上記決定する工程は、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、サイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰ  キナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣａ２＋からなる群より選択される第２メッセンジャーのレベルの測定によるものである。いくつかの好ましい実施形態において、上記第２メッセンジャーは、ｃＡＭＰである。特定の実施形態において、細胞内ｃＡＭＰのレベルは、増大する。
【００７８】
特定の実施形態において、上記決定する工程は、Ｇタンパク質共役レセプターを含む単離された膜を用いて実施される。
【００７９】
特定の実施形態において、上記決定する工程は、黒色素胞アッセイの使用によるものである。特定の実施形態において、色素散乱のレベルは、増大する。
【００８０】
いくつかの実施形態において、上記決定する工程は、レポーターアッセイによるものである。いくつかの実施形態において、上記レポーターアッセイは、ＣＲＥ−Ｌｕｃレポーターアッセイである。
【００８１】
いくつかの実施形態において、上記決定する工程は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることによって媒介される活性の測定によるものである。
【００８２】
いくつかの実施形態において、上記決定する工程は、ＣＲＥ−Ｌｕｃレポーターアッセイによるものである。特定の実施形態において、ルシフェラーゼ活性のレベルは、増大する。
【００８３】
いくつかの実施形態において、上記決定する工程は、Ｇタンパク質共役レセプターを含む膜へのＧＴＰγＳ結合の測定によるものである。特定の実施形態において、上記ＧＴＰγＳは、［３５Ｓ］で標識される。特定の実施形態において、上記ＧＰＣＲを含む膜へのＧＴＰγＳ結合は、増大する。
【００８４】
いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子である。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、ポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、脂質ではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、ポリペプチドまたは脂質ではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、ポリペプチドであるが、但し、そのポリペプチドは、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、脂質である。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【００８５】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の構造を必要に応じて決定する工程をさらに包含する。
【００８６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の名称または構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の名称または構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の名称または構造を必要に応じて提供する工程をさらに包含する。
【００８７】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を必要に応じて生成または合成する工程をさらに包含する。
【００８８】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を製薬として処方する工程をさらに包含する。
【００８９】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子のバイオアベイラビリティー、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物のバイオアベイラビリティー、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物のバイオアベイラビリティーを評価する工程をさらに包含する。
【００９０】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を薬学的組成物へと処方する工程をさらに包含する。
【００９１】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、骨に関連する状態である。
【００９２】
特定の実施形態において、上記骨に関連する状態は、低い骨量によって特徴付けられる状態である。特定の実施形態において、上記低い骨量によって特徴付けられる状態は、オステオペニア、骨粗しょう症、関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、歯槽骨損失、骨切り術による骨損失、小児期の特発性骨損失、パジェット病、転移性癌に起因する骨損失、骨溶解性病変、脊椎の弯曲、および身長の減少からなる群より選択される。
【００９３】
特定の実施形態において、上記骨に関連する状態は、骨折である。特定の実施形態において、上記骨折は、外傷性の骨折、長期の骨折、および骨粗しょう症性の骨折からなる群より選択される。
【００９４】
特定の実施形態において、上記骨に関連する状態は、骨疾患である。特定の実施形態において、上記骨疾患は、オステオペニア、骨粗しょう症、関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、歯槽骨損失、骨切り術による骨損失、小児期の特発性骨損失、パジェット病、転移性癌に起因する骨損失、骨溶解性病変、脊椎の弯曲、および身長の減少からなる群より選択される。
【００９５】
特定の実施形態において、上記骨に関連する状態は、増強された骨治癒または骨成長であり、その増強された骨治癒または骨成長は、顔面の再建、上顎の再建、下顎の再建、歯周疾患または抜歯後の増強された骨治癒、増強された長骨伸長、増強された補綴内殖（ｐｒｏｓｔｈｅｔｉｃ  ｉｎｇｒｏｗｔｈ）、および増大された骨癒合からなる群より選択される。
【００９６】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、代謝障害である。
【００９７】
特定の実施形態において、上記代謝障害は、体重超過、肥満症、過食症、糖尿病（１型糖尿病および２型糖尿病を含む）、２型糖尿病、グルコース寛容減損、インスリン抵抗性、高インスリン血症、脂質異常症、高血圧症およびメタボリックシンドロームからなる群より選択される。
【００９８】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、新脈管形成に関連する状態である。
【００９９】
特定の実施形態において、上記新脈管形成に関連する状態は、末梢動脈疾患、創傷治癒および虚血からなる群より選択される。
【０１００】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、虚血に関連する状態である。
【０１０１】
特定の実施形態において、上記虚血に関連する状態は、虚血性脳卒中、虚血性心疾患、心筋梗塞、虚血−再灌流傷害、心筋梗塞後のリモデリング、心不全、およびうっ血性心不全からなる群より選択される。
【０１０２】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、吸収不良障害である。
【０１０３】
特定の実施形態において、上記吸収不良障害は、短腸症候群、全腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、コレラ、および下痢を伴う障害からなる群より選択される。
【０１０４】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、痙攣性障害である。
【０１０５】
特定の実施形態において、上記痙攣性障害は、癲癇である。
【０１０６】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、癌である。
【０１０７】
特定の実施形態において、上記癌は、膵臓癌、乳癌、結腸癌、およびバレット腺癌からなる群より選択される。
【０１０８】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、炎症性障害である。
【０１０９】
特定の実施形態において、上記炎症性障害は、アテローム硬化症、アテローム血栓症、インスリン抵抗性、糖尿病（１型糖尿病および２型糖尿病を含む）、１型糖尿病、虚血性脳卒中、膵炎、再狭窄、炎症性肺疾患、および炎症性腸疾患からなる群より選択される。特定の実施形態において、上記炎症性肺疾患は、喘息、気腫、および肺動脈性肺高血圧症からなる群より選択される。特定の実施形態において、上記炎症性腸疾患は、腸炎、全腸炎、クローン病、肉芽腫性大腸炎、回腸炎、クローン大腸炎、潰瘍性大腸炎、Ｓ字結腸炎、全大腸炎、および潰瘍性直腸炎からなる群より選択される。
【０１１０】
特定の実施形態において、ＰＹＹ関連活性の上記モジュレーションは、
（ａ）血漿ＰＹＹを増大させること；
（ｂ）骨量を増大させること；
（ｃ）骨量の損失を減少させること；
（ｄ）骨形成を増大させること；
（ｅ）食物摂取を減少させること；
（ｆ）体重を減少させること；
（ｇ）満腹感を増大させること；
（ｈ）グルコース処理を増大させること；
（ｉ）血漿グルコースを減少させること；
（ｊ）新脈管形成を増大させること；
（ｋ）腸管上皮における分泌を減少させること；
（ｌ）腸管上皮における吸収を増大させること；および
（ｍ）血漿アディポネクチンを増大させること；
からなる群より選択される
本発明は、さらに、この第１の局面による方法を行う工程を包含するプロセスを特徴とする。
【０１１１】
第２の局面において、本発明は、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）化合物と脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程であって、上記化合物は、上記第１の局面による方法によって同定された、工程；および
（ｂ）上記化合物が上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹに関連する状態の処置または予防に有用な化合物、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１１２】
特定の実施形態において、上記脊椎動物の腸内分泌細胞は、哺乳動物の腸内分泌細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、Ｌ細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に含まれるか、あるいは十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に由来する（例えば、Ｌｕｎｄｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（１９８２）７９：４４７１−４４７５；Ａｄｒｉａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ（１９８５）８９：１０７０−１０７７；Ｅｋｂｌａｄら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００２）２３：２５１−２６１；Ｕｅｎｏら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ（２００８）１４５：１２−１６を参照のこと）。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、腸内分泌細胞株である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ランゲルハンス島に含まれる細胞、またはランゲルハンス島に由来する細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、神経細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ＰＹＹを分泌できるように設計された組換え体細胞である。
【０１１３】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）化合物を脊椎動物に投与する工程であって、上記化合物は、上記第１の局面による方法によって同定された、工程；および
（ｂ）上記化合物が上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹに関連する状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１１４】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、全ＰＹＹの血液濃度または血漿濃度である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、ＰＹＹ３−３６の血液濃度または血漿濃度である。
【０１１５】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０１１６】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０１１７】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）上記化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、上記サンプルは、工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を予め投与された脊椎動物から得られており、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１１８】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、全ＰＹＹの血液濃度または血漿濃度である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、ＰＹＹ３−３６の血液濃度または血漿濃度である。
【０１１９】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０１２０】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。
【０１２１】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子である。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、ポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、脂質ではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、ポリペプチドまたは脂質ではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、ポリペプチドであるが、但し、そのポリペプチドは、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、脂質である。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の構造を必要に応じて決定する工程をさらに包含する。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の名称または構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の名称または構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の名称または構造を必要に応じて提供する工程をさらに包含する。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を必要に応じて生成または合成する工程をさらに包含する。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を製薬として処方する工程をさらに包含する。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子のバイオアベイラビリティー、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物のバイオアベイラビリティー、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物のバイオアベイラビリティーを評価する工程をさらに包含する。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を薬学的組成物へと処方する工程をさらに包含する。
【０１２９】
本発明は、さらに、この第２の局面による方法を行う工程を包含するプロセスを特徴とする。
【０１３０】
第３の局面において、本発明は、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストと脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｂ）上記ＧＰＲ１１９アゴニストが脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する上記ＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、上記ＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１３１】
特定の実施形態において、上記脊椎動物の腸内分泌細胞は、哺乳動物の腸内分泌細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、Ｌ細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に含まれるか、あるいは十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に由来する（例えば、Ｌｕｎｄｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（１９８２）７９：４４７１−４４７５；Ａｄｒｉａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ（１９８５）８９：１０７０−１０７７；Ｅｋｂｌａｄら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００２）２３：２５１−２６１；Ｕｅｎｏら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ（２００８）１４５：１２−１６を参照のこと）。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、腸内分泌細胞株である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ランゲルハンス島に含まれる細胞、またはランゲルハンス島に由来する細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、神経細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ＰＹＹを分泌できるように設計された組換え体細胞である。
【０１３２】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストを脊椎動物に投与する工程；および
（ｂ）上記ＧＰＲ１１９アゴニストが上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記ＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、上記ＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１３３】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、全ＰＹＹの血液濃度または血漿濃度である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、ＰＹＹ３−３６の血液濃度または血漿濃度である。
【０１３４】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０１３５】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０１３６】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）上記化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、上記サンプルは、ＧＰＲ１１９アゴニストを予め投与された脊椎動物から得られた、工程；
（ｂ）上記ＧＰＲ１１９アゴニストを脊椎動物に投与する工程；
を包含し、上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記ＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、上記ＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す。
【０１３７】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、全ＰＹＹの血液濃度または血漿濃度である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、ＰＹＹ３−３６の血液濃度または血漿濃度である。
【０１３８】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０１３９】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０１４０】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、内因性ＧＰＲ１１９のアゴニストである。
【０１４１】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである。
【０１４２】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ＧＰＲ１１９部分アゴニストである。
【０１４３】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである。
【０１４４】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である。いくつかの実施形態において、上記低分子は、ポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、上記低分子は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、上記低分子は、脂質ではない。いくつかの実施形態において、上記低分子は、ポリペプチドまたは脂質ではない。
【０１４５】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、経口的に利用可能である。
【０１４６】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約７５ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。特定の実施形態では、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、配列番号２を有するヒトＧＰＲ１１９にて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約７５ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。特定の実施形態では、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、アデニリルシクラーゼアッセイ（例示のアデニリルシクラーゼアッセイは、実施例９、実施例１０および実施例１１において提供される、後述）における配列番号２を有するヒトＧＰＲ１１９にて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約７５ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。特定の実施形態にて、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、黒色素胞アッセイ（例示の黒色素胞アッセイは、実施例１２において提供される、後述）における配列番号２を有するヒトＧＰＲ１１９にて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約７５ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ、または約１ｎＭのＥＣ５０値を有する。
【０１４７】
例示のＧＰＲ１１９アゴニストは、例えば、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１２６７（ＷＯ  ０４／０６５３８０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００５５５５（ＷＯ  ０４／０７６４１３として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２２３２７（ＷＯ  ０５／００７６４７として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２２４１７（ＷＯ  ０５／００７６５８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１９３１８（ＷＯ  ２００５／１２１１２１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００４／０５００４６（ＷＯ  ２００５／０６１４８９として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０６／００５６７（ＷＯ  ２００６／０８３４９１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６４（ＷＯ  ２００６／０６７５３１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６５（ＷＯ  ２００６／０６７５３２として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６６（ＷＯ  ２００６／０７０２０８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ０２／０９３５０（ＷＯ  ０３／０２６６６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１８４１２（ＷＯ  ０６／０４０９６６として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１９０００（ＷＯ  ２００６／０４３４９０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７６（ＷＯ  ２００７／００３９６０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７７（ＷＯ  ２００７／００３９６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７８（ＷＯ  ２００７／００３９６２として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１８２（ＷＯ  ２００７／００３９６４として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ０２／０９３５０（ＷＯ  ０３／０２６６６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００７／０５０１８３（ＷＯ  ２００７／１１６２２９として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００７／０５０１９０（ＷＯ  ２００７／１１６２３０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７３３６４（ＷＯ  ２００８／００８８９５として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９１（ＷＯ  ２００８／０２５７９８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９３（ＷＯ  ２００８／０２５７９９として公開された）；および国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９５（ＷＯ  ２００８／０２５８００として公開された）に開示される。
【０１４８】
特定の実施形態において、上記方法は、上記ＧＰＲ１１９アゴニストを提供する工程を包含する。
【０１４９】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、上記第１の局面による方法によって同定可能である。
【０１５０】
特定の実施形態において、上記方法は、上記ＧＰＲ１１９アゴニストを同定するために上記第１の局面による方法を実施する工程を包含する。
【０１５１】
特定の実施形態において、上記方法は、上記第１の局面による方法によって上記ＧＰＲ１１９アゴニストを同定する工程を包含する。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の構造を必要に応じて決定する工程をさらに包含する。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の名称または構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の名称または構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の名称または構造を必要に応じて提供する工程をさらに包含する。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を必要に応じて生成または合成する工程をさらに包含する。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を製薬として処方する工程をさらに包含する。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子のバイオアベイラビリティー、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物のバイオアベイラビリティー、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物のバイオアベイラビリティーを評価する工程をさらに包含する。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を薬学的組成物へと処方する工程をさらに包含する。
【０１５８】
本発明は、さらに、この第３の局面による方法を行う工程を包含するプロセスを特徴とする。
【０１５９】
第４の局面において、本発明は、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、上記レセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、上記レセプターに対するリガンドは、ＧＰＲ１１９に対するリガンドであり、そして上記Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；
（ｂ）上記公知のリガンドと上記レセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ない上記複合体が上記試験化合物の非存在下よりも上記試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
上記決定は、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１６０】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を包含する。
【０１６１】
特定の実施形態において、上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０１６２】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の対立遺伝子である。
【０１６３】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の哺乳動物オルソログである。
【０１６４】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、組換え体である。
【０１６５】
特定の実施形態において、上記方法は、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法である。
【０１６６】
特定の実施形態において、上記方法は、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物を同定するための方法である。
【０１６７】
特定の実施形態において、上記方法は、個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法である。
【０１６８】
特定の実施形態において、ＧＰＲ１１９に対する上記リガンドは、ＧＰＲ１１９アゴニストである。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９に対するリガンドまたは上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、内因性脊椎動物ＧＰＲ１１９レセプター、内因性哺乳動物ＧＰＲ１１９レセプターまたは内因性ヒトＧＰＲ１１９レセプターのリガンドまたはアゴニストである。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９に対するリガンドまたは上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、内因性ヒトＧＰＲ１１９レセプターのリガンドまたはアゴニストである。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９に対するリガンドまたは上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、例えば、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１２６７（ＷＯ  ０４／０６５３８０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００５５５５（ＷＯ  ０４／０７６４１３として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２２３２７（ＷＯ  ０５／００７６４７として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２２４１７（ＷＯ  ０５／００７６５８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１９３１８（ＷＯ  ２００５／１２１１２１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００４／０５００４６（ＷＯ  ２００５／０６１４８９として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０６／００５６７（ＷＯ  ２００６／０８３４９１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６４（ＷＯ  ２００６／０６７５３１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６５（ＷＯ  ２００６／０６７５３２として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６６（ＷＯ  ２００６／０７０２０８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ０２／０９３５０（ＷＯ  ０３／０２６６６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１８４１２（ＷＯ  ０６／０４０９６６として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１９０００（ＷＯ  ２００６／０４３４９０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７６（ＷＯ  ２００７／００３９６０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７７（ＷＯ  ２００７／００３９６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７８（ＷＯ  ２００７／００３９６２として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１８２（ＷＯ  ２００７／００３９６４として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ０２／０９３５０（ＷＯ  ０３／０２６６６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００７／０５０１８３（ＷＯ  ２００７／１１６２２９として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００７／０５０１９０（ＷＯ  ２００７／１１６２３０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７３３６４（ＷＯ  ２００８／００８８９５として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９１（ＷＯ  ２００８／０２５７９８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９３（ＷＯ  ２００８／０２５７９９として公開された��；または国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９５（ＷＯ  ２００８／０２５８００として公開された）に開示される化合物と同一である。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９に対するリガンドまたは上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンである。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９に対するリガンドは、内因性脊椎動物ＧＰＲ１１９レセプターの内因性リガンド、内因性哺乳動物ＧＰＲ１１９レセプターの内因性リガンド、または内因性ヒトＧＰＲ１１９レセプターの内因性リガンドである。
【０１６９】
特定の実施形態において、上記必要に応じて標識された公知のリガンドは、標識された公知のリガンドである。特定の実施形態において、上記標識された公知のリガンドは、放射性標識された公知のリガンドである。化合物を放射性標識するため（例えば、本発明のＧタンパク質共役レセプターの公知のリガンドを標識するため）の技術は、当業者に周知である。例えば、国際出願ＷＯ  ０４／０６５３８０を参照のこと。例えば、実施例１４、後述もまた参照のこと。
【０１７０】
Ｇタンパク質共役レセプターとそのＧタンパク質共役レセプターに対するリガンドであることが公知の化合物との間の複合体を検出するための技術は、当業者に周知である。例えば、国際出願ＷＯ  ０４／０６５３８０を参照のこと。例えば、実施例１５、後述もまた参照のこと。
【０１７１】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第４の局面の工程（ａ）〜工程（ｃ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというその化合物を必要に応じて合成する工程；
（ｅ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというその化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｆ）上記化合物が上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１７２】
特定の実施形態において、上記脊椎動物の腸内分泌細胞は、哺乳動物の腸内分泌細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、Ｌ細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に含まれるか、あるいは十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に由来する（例えば、Ｌｕｎｄｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（１９８２）７９：４４７１−４４７５；Ａｄｒｉａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ（１９８５）８９：１０７０−１０７７；Ｅｋｂｌａｄら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００２）２３：２５１−２６１；Ｕｅｎｏら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ（２００８）１４５：１２−１６を参照のこと）。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、腸内分泌細胞株である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ランゲルハンス島に含まれる細胞、またはランゲルハンス島に由来する細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、神経細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ＰＹＹを分泌できるように設計された組換え体細胞である。
【０１７３】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第４の局面の工程（ａ）〜工程（ｃ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというその化合物を必要に応じて合成する工程；
（ｅ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというその化合物を脊椎動物に投与する工程；および
（ｆ）上記化合物が上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１７４】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０１７５】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０１７６】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第４の局面の工程（ａ）〜工程（ｃ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというその化合物を必要に応じて合成する工程；および
（ｅ）上記化合物が脊椎動物から得られたサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、上記脊椎動物は、化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというその化合物を投与されており、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１７７】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０１７８】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０１７９】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第４の局面の工程（ａ）〜工程（ｃ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）によって形成されるというその化合物を必要に応じて合成する工程；
（ｅ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）によって形成されるというその化合物を必要に応じて提供する工程；
（ｆ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）によって形成されるというその化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｇ）上記化合物が上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１８０】
特定の実施形態において、上記脊椎動物の腸内分泌細胞は、哺乳動物の腸内分泌細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、Ｌ細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に含まれるか、あるいは十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に由来する（例えば、Ｌｕｎｄｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（１９８２）７９：４４７１−４４７５；Ａｄｒｉａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ（１９８５）８９：１０７０−１０７７；Ｅｋｂｌａｄら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００２）２３：２５１−２６１；Ｕｅｎｏら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ（２００８）１４５：１２−１６を参照のこと）。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、腸内分泌細胞株である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ランゲルハンス島に含まれる細胞、またはランゲルハンス島に由来する細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、神経細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ＰＹＹを分泌できるように設計された組換え体細胞である。
【０１８１】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第４の局面の工程（ａ）〜工程（ｃ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）によって形成されるというその化合物を必要に応じて合成する工程；
（ｅ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）によって形成されるというその化合物を必要に応じて提供する工程；
（ｆ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというその化合物を脊椎動物に投与する工程；および
（ｇ）上記化合物が上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１８２】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０１８３】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０１８４】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、この第４の局面の工程（ａ）〜工程（ｃ）を包含し、そしてその方法は、さらに、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）によって形成されるというその化合物を必要に応じて合成する工程；
（ｅ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）によって形成されるというその化合物を必要に応じて提供する工程；および
（ｆ）上記化合物が脊椎動物から得られたサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、上記脊椎動物は、化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというその化合物を投与されており、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０１８５】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０１８６】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２またはその対立遺伝子である。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合するＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがリガンドであるＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰ蓄積のレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０１８９】
特定の実施形態において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５０％のホルムアミドと、５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）と、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）と、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液と、１０％の硫酸デキストランと、２０μｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡとを含む溶液中での４２℃におけるハイブリダイゼーション、ならびにその後の０．１×ＳＳＣを含む溶液中での６５℃における洗浄を含む。ハイブリダイゼーション技術は、当業者に周知である。
【０１９０】
特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２またはその対立遺伝子である。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがリガンドであるレセプターである。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０１９１】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターである配列番号２の改変体は、内因性Ｇタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターである配列番号２の改変体は、非内因性Ｇタンパク質共役レセプターである。
【０１９２】
特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２またはその対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０１９３】
特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２または配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、Ｇタンパク質を含む融合タンパク質の部分である。ＧＰＣＲ：Ｇ融合構築物を作製するための技術は、当業者に周知である（例えば、国際出願ＷＯ  ０２／４２４６１を参照のこと）。
【０１９５】
特定の実施形態において、上記決定する工程は、上記Ｇタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞を使用して実施される。特定の実施形態において、上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、上記発現ベクターは、上記ＧＰＣＲをコードしているポリヌクレオチドを含む。例示の適切な発現ベクターは、ｐＣＭＶである。他の適切な発現ベクターは、当業者にとって容易に明らかであり、そして広範な種々の発現ベクターは、市販されている（例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ；Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ；ａｎｄ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、脊椎動物細胞である。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、上記哺乳動物宿主細胞は、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、ＣＨＯ細胞、ＭＣＢ３９０１細胞、およびＣＯＳ−７細胞からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、酵母細胞である。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、黒色素胞細胞である。他の適切な宿主細胞は、当業者にとって容易に明らかであり、そして広範な種々の細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０−２２０９から入手可能である。
【０１９７】
特定の実施形態において、上記決定する工程は、上記Ｇタンパク質共役レセプターを含む膜を使用して実施される。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子である。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、ポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、脂質ではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、ポリペプチドまたは脂質ではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、ポリペプチドであるが、但し、そのポリペプチドは、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、脂質である。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の構造を必要に応じて決定する工程をさらに包含する。
【０２００】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の名称または構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の名称または構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の名称または構造を必要に応じて提供する工程をさらに包含する。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を必要に応じて生成または合成する工程をさらに包含する。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の構造を必要に応じて決定する工程をさらに包含する。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の名称または構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の名称または構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の名称または構造を必要に応じて提供する工程をさらに包含する。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を必要に応じて生成または合成する工程をさらに包含する。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を製薬として処方する工程をさらに包含する。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子のバイオアベイラビリティー、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物のバイオアベイラビリティー、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物のバイオアベイラビリティーを評価する工程をさらに包含する。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を薬学的組成物へと処方する工程をさらに包含する。
【０２０８】
本発明は、さらに、この第４の局面による方法を行う工程を包含するプロセスを特徴とする。
【０２０９】
第５の局面において、本発明は、
（ａ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｃ）（ａ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ａ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｄ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｅ）（ｉ）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｉｉ）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体；
（ｆ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｇ）（ａ）〜（ｆ）のいずれか１つのうちのいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＧタンパク質共役レセプターを使用することによって特徴付けられる、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防のための化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションのための化合物を同定するために試験化合物をスクリーニングする方法を特徴とする。
【０２１０】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む。
【０２１１】
特定の実施形態において、上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０２１２】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の対立遺伝子である。
【０２１３】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の哺乳動物オルソログである。
【０２１４】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、組換え体である。
【０２１５】
特定の実施形態において、上記方法は、上記レセプターのアゴニストを同定する工程を包含する。
【０２１６】
特定の実施形態において、上記方法は、上記レセプターの部分アゴニストを同定する工程を包含する。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を製薬として処方する工程をさらに包含する。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子のバイオアベイラビリティー、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物のバイオアベイラビリティー、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物のバイオアベイラビリティーを評価する工程をさらに包含する。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を薬学的組成物へと処方する工程をさらに包含する。
【０２２０】
本発明は、さらに、この第５の局面による方法を行う工程を包含するプロセスを特徴とする。
【０２２１】
第６の局面において、本発明は、上記第１の局面、上記第２の局面、上記第３の局面、上記第４の局面または上記第５の局面によってＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防のための化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションのための化合物を同定する工程、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防のための上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションのための上記化合物を薬学的組成物へと処方する工程を包含する方法を特徴とする。
【０２２２】
第７の局面において、本発明は、試験化合物をＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防のための化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションのための化合物としてスクリーニングするためのＧタンパク質共役レセプターの使用を特徴とし、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ａ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｃ）（ａ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ａ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｄ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｅ）（ｉ）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｉｉ）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体；
（ｆ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｇ）（ａ）〜（ｆ）のいずれか１つのうちのいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２２３】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む。
【０２２４】
特定の実施形態において、上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０２２５】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の対立遺伝子である。
【０２２６】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の哺乳動物オルソログである。
【０２２７】
特定の実施形態において、上記レセプターは、組換え体である。
【０２２８】
特定の実施形態において、上記試験化合物は、低分子である。
【０２２９】
特定の実施形態において、上記試験化合物は、ＧＰＲ１１９アゴニストである。
【０２３０】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、内因性ＧＰＲ１１９のアゴニストである。
【０２３１】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである。
【０２３２】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ＧＰＲ１１９部分アゴニストである。
【０２３３】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである。
【０２３４】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である。
【０２３５】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、経口的に利用可能である。
【０２３６】
特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約７５ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。特定の実施形態では、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、配列番号２を有するヒトＧＰＲ１１９にて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約７５ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。特定の実施形態では、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、アデニリルシクラーゼアッセイ（例示のアデニリルシクラーゼアッセイは、実施例９、実施例１０および実施例１１において提供される、後述）における配列番号２を有するヒトＧＰＲ１１９にて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約７５ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。特定の実施形態にでは、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、黒色素胞アッセイ（例示の黒色素胞アッセイは、実施例１２において提供される、後述）における配列番号２を有するヒトＧＰＲ１１９にて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約７５ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。
【０２３７】
例示のＧＰＲ１１９アゴニストは、例えば、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１２６７（ＷＯ  ０４／０６５３８０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００５５５５（ＷＯ  ０４／０７６４１３として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２２３２７（ＷＯ  ０５／００７６４７として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２２４１７（ＷＯ  ０５／００７６５８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１９３１８（ＷＯ  ２００５／１２１１２１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００４／０５００４６（ＷＯ  ２００５／０６１４８９として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０６／００５６７（ＷＯ  ２００６／０８３４９１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６４（ＷＯ  ２００６／０６７５３１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６５（ＷＯ  ２００６／０６７５３２として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６６（ＷＯ  ２００６／０７０２０８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ０２／０９３５０（ＷＯ  ０３／０２６６６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１８４１２（ＷＯ  ０６／０４０９６６として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１９０００（ＷＯ  ２００６／０４３４９０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７６（ＷＯ  ２００７／００３９６０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７７（ＷＯ  ２００７／００３９６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７８（ＷＯ  ２００７／００３９６２として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１８２（ＷＯ  ２００７／００３９６４として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ０２／０９３５０（ＷＯ  ０３／０２６６６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００７／０５０１８３（ＷＯ  ２００７／１１６２２９として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００７／０５０１９０（ＷＯ  ２００７／１１６２３０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７３３６４（ＷＯ  ２００８／００８８９５として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９１（ＷＯ  ２００８／０２５７９８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９３（ＷＯ  ２００８／０２５７９９として公開された）；および国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９５（ＷＯ  ２００８／０２５８００として公開された）に開示される。
【０２３８】
第８の局面において、本発明は、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）  Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程であって、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、上記化合物は、上記第１の局面による方法によって決定または同定された、工程；ならびに
（ｂ）上記化合物が上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０２３９】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む。
【０２４０】
特定の実施形態において、上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０２４１】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の対立遺伝子である。
【０２４２】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の哺乳動物オルソログである。
【０２４３】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、組換え体である。
【０２４４】
特定の実施形態において、上記脊椎動物の腸内分泌細胞は、哺乳動物の腸内分泌細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、Ｌ細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に含まれるか、あるいは十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に由来する（例えば、Ｌｕｎｄｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（１９８２）７９：４４７１−４４７５；Ａｄｒｉａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ（１９８５）８９：１０７０−１０７７；Ｅｋｂｌａｄら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００２）２３：２５１−２６１；Ｕｅｎｏら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ（２００８）１４５：１２−１６を参照のこと）。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、腸内分泌細胞株である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ランゲルハンス島に含まれる細胞、またはランゲルハンス島に由来する細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、神経細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ＰＹＹを分泌できるように設計された組換え体細胞である。
【０２４５】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）脊椎動物にＧタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する化合物を投与する工程であって、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、上記化合物は、上記第１の局面による方法によって決定または同定された、工程；ならびに
（ｂ）上記化合物が上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０２４６】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む。
【０２４７】
特定の実施形態において、上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０２４８】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の対立遺伝子である。
【０２４９】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の哺乳動物オルソログである。
【０２５０】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、組換え体である。
【０２５１】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、全ＰＹＹの血液濃度または血漿濃度である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、ＰＹＹ３−３６の血液濃度または血漿濃度である。
【０２５２】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０２５３】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０２５４】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）上記化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、上記サンプルは、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する化合物を予め投与された脊椎動物から得られており、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、上記化合物は、上記第１の局面による方法によって決定または同定された、工程；
を包含し、そして上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す。
【０２５５】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む。
【０２５６】
特定の実施形態において、上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０２５７】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の対立遺伝子である。
【０２５８】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の哺乳動物オルソログである。
【０２５９】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、組換え体である。
【０２６０】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０２６１】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２またはその対立遺伝子である。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。
【０２６３】
いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合するＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがリガンドであるＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰ蓄積のレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０２６４】
特定の実施形態において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５０％のホルムアミドと、５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）と、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）と、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液と、１０％の硫酸デキストランと、２０μｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡとを含む溶液中での４２℃におけるハイブリダイゼーション、ならびにその後の０．１×ＳＳＣを含む溶液中での６５℃における洗浄を含む。ハイブリダイゼーション技術は、当業者に周知である。
【０２６５】
特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２またはその対立遺伝子である。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがリガンドであるレセプターである。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０２６６】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターである配列番号２の改変体は、内因性Ｇタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターである配列番号２の改変体は、非内因性Ｇタンパク質共役レセプターである。
【０２６７】
特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２またはその対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０２６８】
特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２または配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０２６９】
いくつかの実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、Ｇタンパク質を含む融合タンパク質の部分である。ＧＰＣＲ：Ｇ融合構築物を作製するための技術は、当業者に周知である（例えば、国際出願ＷＯ  ０２／４２４６１を参照のこと）。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記化合物は、低分子である。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記化合物は、低分子であるが、但し、上記低分子は、ポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記化合物は、低分子であるが、但し、上記低分子は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記化合物は、低分子であるが、但し、上記低分子は、脂質ではない。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記化合物は、低分子であるが、但し、上記低分子は、ポリペプチドまたは脂質ではない。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記化合物は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記化合物は、ポリペプチドであるが、但し、上記ポリペプチドは、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記化合物は、脂質である。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記化合物は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターの機能性を刺激する上記化合物は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の構造を必要に応じて決定する工程をさらに包含する。
【０２７２】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の名称または構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の名称または構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の名称または構造を必要に応じて提供する工程をさらに包含する。
【０２７３】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を必要に応じて生成または合成する工程をさらに包含する。
【０２７４】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を製薬として処方する工程をさらに包含する。
【０２７５】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子のバイオアベイラビリティー、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物のバイオアベイラビリティー、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物のバイオアベイラビリティーを評価する工程をさらに包含する。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を薬学的組成物へと処方する工程をさらに包含する。
【０２７７】
本発明は、さらに、この第８の局面による方法を行う工程を包含するプロセスを特徴とする。
【０２７８】
第９の局面において、本発明は、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が化合物の非存在下よりもその化合物の存在下において形成されるという化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程であって、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、上記化合物は、上記第４の局面による方法によって決定または同定された、工程；ならびに
（ｂ）上記化合物が上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物の腸内分泌細胞または上記ＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激する上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０２７９】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む。
【０２８０】
特定の実施形態において、上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０２８１】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の対立遺伝子である。
【０２８２】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の哺乳動物オルソログである。
【０２８３】
特定の実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、組換え体である。
【０２８４】
特定の実施形態において、上記脊椎動物の腸内分泌細胞は、哺乳動物の腸内分泌細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、Ｌ細胞である。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に含まれるか、あるいは小腸または大腸のＬ細胞含有領域から得られた組織に由来する。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に含まれるか、あるいは十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織に由来する（例えば、Ｌｕｎｄｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（１９８２）７９：４４７１−４４７５；Ａｄｒｉａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ（１９８５）８９：１０７０−１０７７；Ｅｋｂｌａｄら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００２）２３：２５１−２６１；Ｕｅｎｏら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ（２００８）１４５：１２−１６を参照のこと）。特定の実施形態において、上記腸内分泌細胞は、腸内分泌細胞株である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ランゲルハンス島に含まれる細胞、またはランゲルハンス島に由来する細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、神経細胞である。特定の実施形態において、上記ＰＹＹを分泌し得る細胞は、ＰＹＹを分泌できるように設計された組換え体細胞である。
【０２８５】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）化合物を脊椎動物に投与する工程であって、Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が、その化合物の非存在下よりもその化合物の存在下において形成され、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）のアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、上記化合物は、上記第４の局面による方法によって決定または同定された、工程；ならびに
（ｂ）上記化合物が上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する。
【０２８６】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０２８７】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０２８８】
本発明は、さらに、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法を特徴とし、その方法は、
（ａ）上記化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程、上記サンプルは、化合物（Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が、その化合物の非存在下よりもその化合物の存在下において形成される）を予め投与された脊椎動物から得られており、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にストリンジェントにハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、上記化合物は、上記第４の局面による方法によって決定または同定された、工程；
を包含し、そして上記脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させる上記試験化合物の能力は、さらに、上記試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す。
【０２８９】
特定の実施形態において、上記脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記脊椎動物は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記哺乳類は、非ヒト哺乳類である。
【０２９０】
特定の実施形態において、上記脊椎動物または上記哺乳類は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、薬物についての製造販売承認を担当している政府機関によって精査される研究における参加者である。特定の実施形態において、上記研究は、臨床試験である。特定の実施形態において、上記政府機関は、米国のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎである。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２またはその対立遺伝子である。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。
【０２９２】
いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合するＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがリガンドであるＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰ蓄積のレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０２９３】
特定の実施形態において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５０％のホルムアミドと、５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）と、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）と、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液と、１０％の硫酸デキストランと、２０μｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡとを含む溶液中での４２℃におけるハイブリダイゼーション、ならびにその後の０．１×ＳＳＣを含む溶液中での６５℃における洗浄を含む。ハイブリダイゼーション技術は、当業者に周知である。
【０２９４】
特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２またはその対立遺伝子である。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがリガンドであるレセプターである。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０２９５】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターである配列番号２の改変体は、内因性Ｇタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターである配列番号２の改変体は、非内因性Ｇタンパク質共役レセプターである。
【０２９６】
特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２またはその対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０２９７】
特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２または配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターである。いくつかの実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、上記Ｇタンパク質共役レセプターは、Ｇタンパク質を含む融合タンパク質の部分である。ＧＰＣＲ：Ｇ融合構築物を作製するための技術は、当業者に周知である（例えば、国際出願ＷＯ  ０２／４２４６１を参照のこと）。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が上記化合物の非存在下よりも上記化合物の存在下において形成されるという上記化合物は、低分子である。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が上記化合物の非存在下よりも上記化合物の存在下において形成されるという上記化合物は、低分子であるが、但し、上記低分子は、ポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が上記化合物の非存在下よりも上記化合物の存在下において形成されるという上記化合物は、低分子であるが、但し、上記低分子は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が上記化合物の非存在下よりも上記化合物の存在下において形成されるという上記化合物は、低分子であるが、但し、上記低分子は、脂質ではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、低分子であるが、但し、その低分子は、ポリペプチドまたは脂質ではない。いくつかの実施形態において、上記試験化合物は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が上記化合物の非存在下よりも上記化合物の存在下において形成されるという上記化合物は、ポリペプチドであるが、但し、上記ポリペプチドは、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が上記化合物の非存在下よりも上記化合物の存在下において形成されるという上記化合物は、脂質である。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が上記化合物の非存在下よりも上記化合物の存在下において形成されるという上記化合物は、抗体またはその抗原結合フラグメントではない。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役レセプターとそのレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとの間におけるより少ない複合体が上記化合物の非存在下よりも上記化合物の存在下において形成されるという上記化合物は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０３００】
特定の実施形態において、上記方法は、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法である。
【０３０１】
特定の実施形態において、上記方法は、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物を同定するための方法である。
【０３０２】
特定の実施形態において、上記方法は、個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法である。
【０３０３】
特定の実施形態において、ＧＰＲ１１９に対する上記リガンドは、ＧＰＲ１１９アゴニストである。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９に対するリガンドまたは上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、内因性脊椎動物ＧＰＲ１１９レセプター、内因性哺乳動物ＧＰＲ１１９レセプターまたは内因性ヒトＧＰＲ１１９レセプターのリガンドまたはアゴニストである。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９に対するリガンドまたは上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、内因性ヒトＧＰＲ１１９レセプターのリガンドまたはアゴニストである。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９に対するリガンドまたは上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、例えば、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１２６７（ＷＯ  ０４／０６５３８０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００５５５５（ＷＯ  ０４／０７６４１３として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２２３２７（ＷＯ  ０５／００７６４７として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２２４１７（ＷＯ  ０５／００７６５８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１９３１８（ＷＯ  ２００５／１２１１２１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００４／０５００４６（ＷＯ  ２００５／０６１４８９として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０６／００５６７（ＷＯ  ２００６／０８３４９１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６４（ＷＯ  ２００６／０６７５３１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６５（ＷＯ  ２００６／０６７５３２として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５０２６６（ＷＯ  ２００６／０７０２０８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ０２／０９３５０（ＷＯ  ０３／０２６６６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１８４１２（ＷＯ  ０６／０４０９６６として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１９０００（ＷＯ  ２００６／０４３４９０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７６（ＷＯ  ２００７／００３９６０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７７（ＷＯ  ２００７／００３９６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１７８（ＷＯ  ２００７／００３９６２として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００６／０５０１８２（ＷＯ  ２００７／００３９６４として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ０２／０９３５０（ＷＯ  ０３／０２６６６１として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００７／０５０１８３（ＷＯ  ２００７／１１６２２９として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００７／０５０１９０（ＷＯ  ２００７／１１６２３０として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７３３６４（ＷＯ  ２００８／００８８９５として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９１（ＷＯ  ２００８／０２５７９８として公開された）；国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９３（ＷＯ  ２００８／０２５７９９として公開された��；または国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８９９５（ＷＯ  ２００８／０２５８００として公開された）に開示された化合物と同一である。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９に対するリガンドまたは上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンである。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９に対するリガンドは、内因性脊椎動物ＧＰＲ１１９レセプターの内因性リガンド、内因性哺乳動物ＧＰＲ１１９レセプターの内因性リガンド、または内因性ヒトＧＰＲ１１９レセプターの内因性リガンドである。
【０３０４】
特定の実施形態において、上記必要に応じて標識された公知のリガンドは、標識された公知のリガンドである。特定の実施形態において、上記標識された公知のリガンドは、放射性標識された公知のリガンドである。化合物を放射性標識するため（例えば、本発明のＧタンパク質共役レセプターの公知のリガンドを標識するため）の技術は、当業者に周知である。例えば、国際出願ＷＯ  ０４／０６５３８０を参照のこと。例えば、実施例１４、後述もまた参照のこと。
【０３０５】
Ｇタンパク質共役レセプターとそのＧタンパク質共役レセプターのリガンドであることが公知の化合物との間における複合体を検出するための技術は、当業者に周知である。例えば、国際出願ＷＯ  ０４／０６５３８０を参照のこと。例えば、実施例１５、後述もまた参照のこと。
【０３０６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の構造を必要に応じて決定する工程をさらに包含する。
【０３０７】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子の名称または構造、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物の名称または構造、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物の名称または構造を必要に応じて提供する工程をさらに包含する。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を必要に応じて生成または合成する工程をさらに包含する。
【０３０９】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を製薬として処方する工程をさらに包含する。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子のバイオアベイラビリティー、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物のバイオアベイラビリティー、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物のバイオアベイラビリティーを評価する工程をさらに包含する。
【０３１１】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物を薬学的組成物へと処方する工程をさらに包含する。
【０３１２】
本発明は、さらに、この第９の局面による方法を行う工程を包含するプロセスを特徴とする。
【０３１３】
本出願人は、任意の１つ以上の候補化合物を本発明の任意の実施形態から除外する権利を保有する。本出願人は、任意の１つ以上のモジュレーターを本発明の任意の実施形態から除外する権利を保有する。例として、かつ限定ではなく、本出願人は、任意の１つ以上のアゴニストを本発明の任意の実施形態から除外する権利を保有する。本出願人は、任意のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを本発明の任意の実施形態から除外する権利を保有する。本出願人は、さらに、任意のＰＹＹによってモジュレートされる状態、任意の骨に関連する状態、骨に関連する状態が低い骨量によって特徴付けられる状態である任意の骨に関連する状態、骨に関連する状態が骨折である任意の骨に関連する状態、骨に関連する状態が骨疾患である任意の骨に関連する状態、骨に関連する状態が増強された骨治癒または骨成長である任意の骨に関連する状態、任意の代謝障害、任意の新脈管形成に関連する状態、任意の虚血に関連する状態、任意の吸収不良障害、任意の痙攣性障害、任意の癌、任意の炎症性障害、任意の炎症性肺疾患、任意の炎症性腸疾患、個体におけるＰＹＹ関連活性の任意のモジュレーションを本発明の任意の実施形態から除外する権利を保有する。ＰＹＹによってモジュレートされる状態、骨に関連する状態、骨に関連する状態が低い骨量によって特徴付けられる状態である骨に関連する状態、骨に関連する状態が骨折である骨に関連する状態、骨に関連する状態が骨疾患である骨に関連する状態、骨に関連する状態が増強された骨治癒または骨成長である骨に関連する状態、代謝障害、新脈管形成に関連する状態、虚血に関連する状態、吸収不良障害、痙攣性障害、癌、炎症性障害、炎症性肺疾患、炎症性腸疾患、および本発明の個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションが個別かまたは任意の組合せかのいずれかで実施形態に含まれ得ることもまた、明確に企図される。
【０３１４】
本発明は、本明細書に添付された図面と組み合わせて例示される。
【０３１５】
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）分泌促進因子を方法において同定するためのＧタンパク質共役レセプターの使用であって、この方法は、
（ａ）試験化合物と、宿主細胞またはこのＧタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力を決定する工程であって、
このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力は、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、使用。
【０３１６】
（項目２）  （ｃ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｄ）この化合物がこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目１に記載の使用。
【０３１７】
（項目３）  （ｃ）上記化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、このサンプルは、工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を予め投与された非ヒト脊椎動物から得られており、
この非ヒト脊椎動物におけるＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目１に記載の使用。
【０３１８】
（項目４）  （ｃ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を、非ヒト脊椎動物に投与する工程；および
（ｄ）この化合物がこの非ヒト脊椎動物におけるＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この非ヒト脊椎動物におけるＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目１に記載の使用。
【０３１９】
（項目５）  上記レセプターは、組換え体である、項目１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【０３２０】
（項目６）  上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、この発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、項目１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【０３２１】
（項目７）  上記決定する工程は、第２メッセンジャーのレベルの測定によるものである、項目１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【０３２２】
（項目８）  上記第２メッセンジャーは、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、サイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣａ２＋からなる群より選択される、項目７に記載の使用。
【０３２３】
（項目９）  ｃＡＭＰのレベルが、増大する、項目８に記載の使用。
【０３２４】
（項目１０）  上記決定する工程は、黒色素胞アッセイの使用、上記ＧＰＣＲを含む膜に対するＧＴＰγＳ結合の測定、またはレポーターアッセイによるものである、項目１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【０３２５】
（項目１１）  上記宿主細胞は哺乳動物宿主細胞であるか、または上記宿主細胞は酵母宿主細胞であるか、上記宿主細胞は黒色素胞宿主細胞である、項目１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【０３２６】
（項目１２）  上記試験化合物は、低分子である、項目１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【０３２７】
（項目１３）  上記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、項目１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【０３２８】
（項目１４）  上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【０３２９】
（項目１５）  （ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストと脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｂ）このＧＰＲ１１９アゴニストがこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこのＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、このＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０３３０】
（項目１６）  （ａ）化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、このサンプルは、ＧＰＲ１１９アゴニストを予め投与された非ヒト脊椎動物から得られており、
この非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこのＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、このＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０３３１】
（項目１７）  （ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストを非ヒト脊椎動物に投与する工程；および
（ｂ）このＧＰＲ１１９アゴニストがこの非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこのＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、このＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０３３２】
（項目１８）  ＰＹＹ分泌促進因子を方法において同定するためのＧタンパク質共役レセプターの使用であって、この方法は、
（ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、このレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、このレセプターに対するリガンドは、ＧＰＲ１１９に対するリガンドであり、そしてこのＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）この公知のリガンドとこのレセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ないこの複合体がこの試験化合物の非存在下よりもこの試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
この決定は、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、使用。
【０３３３】
（項目１９）  上記方法が、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｅ）この化合物がこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目１８に記載の使用。
【０３３４】
（項目２０）  上記方法は、
（ｄ）上記化合物が非ヒト脊椎動物から得られるサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、この非ヒト脊椎動物は、化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物を投与されており、
この非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目１８に記載の使用。
【０３３５】
（項目２１）  上記方法は、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物を非ヒト脊椎動物に投与する工程；および
（ｅ）この化合物がこの非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この非ヒト脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目１８に記載の使用。
【０３３６】
（項目２２）  上記レセプターは、組換え体である、項目１８〜２１のいずれか１項に記載の使用。
【０３３７】
（項目２３）  上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、この発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、項目１８〜２２のいずれか１項に記載の使用。
【０３３８】
（項目２４）  ＧＰＲ１１９に対する上記リガンドは、ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目１８〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【０３３９】
（項目２５）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである、項目１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【０３４０】
（項目２６）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目１５〜１７または項目２５のいずれか一項に記載の方法。
【０３４１】
（項目２７）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭからなる群より選択される値未満のＥＣ５０を有する、項目１５〜１７または項目２５または項目２６のいずれか一項に記載の方法。
【０３４２】
（項目２８）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である、項目１５〜１７または項目２５〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【０３４３】
（項目２９）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、経口で生物学的に利用可能である、項目１５〜１７または項目２５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【０３４４】
（項目３０）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである、項目２４に記載の使用。
【０３４５】
（項目３１）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目２４または項目３０に記載の使用。
【０３４６】
（項目３２）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭからなる群より選択される値未満のＥＣ５０を有する、項目２４または項目３０または項目３１のいずれか一項に記載の使用。
【０３４７】
（項目３３）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である、項目２４または項目３０〜３２のいずれか一項に記載の使用。
【０３４８】
（項目３４）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、経口で生物学的に利用可能である、項目２４または項目３０〜３３のいずれか一項に記載の使用。
【０３４９】
（項目３５）  上記試験化合物は、低分子である、項目１８〜２４または項目３０〜３４のいずれか一項に記載の使用。
【０３５０】
（項目３６）  上記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、項目１８〜２４または項目３０〜３５のいずれか一項に記載の使用。
【０３５１】
（項目３７）  上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目１８〜２４または項目３０〜３６のいずれか一項に記載の使用。
【０３５２】
本発明はさらに以下の項目も提供する：
（項目ａ１）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）分泌促進因子を方法において同定するためのＧタンパク質共役レセプターの使用であって、この方法は、
（ａ）試験化合物と、宿主細胞またはこのＧタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力を決定する工程であって、
このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力は、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、使用。
【０３５３】
（項目ａ２）  （ｃ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｄ）この化合物がこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ１に記載の使用。
【０３５４】
（項目ａ３）  （ｃ）上記化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、このサンプルは、工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を予め投与された脊椎動物から得られており、
この脊椎動物におけるＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ１に記載の使用。
【０３５５】
（項目ａ４）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ３に記載の使用。
【０３５６】
（項目ａ５）  （ｃ）工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を、脊椎動物に投与する工程；および
（ｄ）この化合物がこの脊椎動物におけるＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物におけるＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ１に記載の使用。
【０３５７】
（項目ａ６）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ５に記載の使用。
【０３５８】
（項目ａ７）  上記レセプターは、組換え体である、項目ａ１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【０３５９】
（項目ａ８）  上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、この発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、項目ａ１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【０３６０】
（項目ａ９）  上記決定する工程は、第２メッセンジャーのレベルの測定によるものである、項目ａ１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【０３６１】
（項目ａ１０）  上記第２メッセンジャーは、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、サイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣａ２＋からなる群より選択される、項目ａ９に記載の使用。
【０３６２】
（項目ａ１１）  ｃＡＭＰのレベルが、増大する、項目ａ１０に記載の使用。
【０３６３】
（項目ａ１２）  上記決定する工程は、黒色素胞アッセイの使用、上記Ｇタンパク質共役レセプターを含む膜に対するＧＴＰγＳ結合の測定、またはレポーターアッセイによるものである、項目ａ１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【０３６４】
（項目ａ１３）  上記宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞である、項目ａ１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【０３６５】
（項目ａ１４）  上記宿主細胞は、酵母宿主細胞である、項目ａ１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【０３６６】
（項目ａ１５）  上記宿主細胞は、黒色素胞宿主細胞である、項目ａ１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【０３６７】
（項目ａ１６）  上記試験化合物は、低分子である、項目ａ１〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【０３６８】
（項目ａ１７）  上記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、項目ａ１〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【０３６９】
（項目ａ１８）  上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目ａ１〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【０３７０】
（項目ａ１９）  （ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストと脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｂ）このＧＰＲ１１９アゴニストがこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこのＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、このＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０３７１】
（項目ａ２０）  （ａ）化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、このサンプルは、ＧＰＲ１１９アゴニストを予め投与された脊椎動物から得られており、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこのＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、このＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０３７２】
（項目ａ２１）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ２０に記載の方法。
【０３７３】
（項目ａ２２）  （ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストを脊椎動物に投与する工程；および
（ｂ）このＧＰＲ１１９アゴニストがこの脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこのＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、このＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０３７４】
（項目ａ２３）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ２２に記載の方法。
【０３７５】
（項目ａ２４）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である、項目ａ１９〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【０３７６】
（項目ａ２５）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである、項目ａ１９〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【０３７７】
（項目ａ２６）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目ａ１９〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【０３７８】
（項目ａ２７）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭからなる群より選択される値未満のＥＣ５０を有する、項目ａ１９〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【０３７９】
（項目ａ２８）  （ａ）試験化合物と、宿主細胞またはＧタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力を決定する工程であって、
このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力は、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
（ｃ）工程（ｂ）においてこのレセプターの機能性を刺激する化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；ならびに
（ｄ）この化合物がこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０３８０】
（項目ａ２９）  （ａ）試験化合物と、宿主細胞またはＧタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力を決定する工程であって、
このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
（ｃ）この化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、このサンプルは、工程（ｂ）においてこのレセプターの機能性を刺激する化合物を予め投与された脊椎動物から得られており、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０３８１】
（項目ａ３０）  （ａ）試験化合物と、宿主細胞またはＧタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列：
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力を決定する工程であって、
このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力は、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
（ｃ）工程（ｂ）においてこのレセプターの機能性を刺激する化合物を、脊椎動物に投与する工程；ならびに
（ｄ）この化合物がこの脊椎動物におけるＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０３８２】
（項目ａ３１）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ２９または項目ａ３０に記載の方法。
【０３８３】
（項目ａ３２）  上記レセプターは、組換え体である項目ａ２８〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【０３８４】
（項目ａ３３）  上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、この発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、項目ａ２８〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【０３８５】
（項目ａ３４）  上記決定する工程は、第２メッセンジャーのレベルの測定によるものである、項目ａ２８〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【０３８６】
（項目ａ３５）  上記第２メッセンジャーは、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、サイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣａ２＋からなる群より選択される、項目ａ３４に記載の方法。
【０３８７】
（項目ａ３６）  ｃＡＭＰのレベルは、増大する、項目ａ３５に記載の方法。
【０３８８】
（項目ａ３７）  上記決定する工程は、黒色素胞アッセイの使用、上記Ｇタンパク質共役レセプターを含む膜に対するＧＴＰγＳ結合の測定、またはレポーターアッセイによるものである、項目ａ２８〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【０３８９】
（項目ａ３８）  上記宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞である、項目ａ２８〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【０３９０】
（項目ａ３９）  上記宿主細胞は、酵母宿主細胞である、項目ａ２８〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【０３９１】
（項目ａ４０）  上記宿主細胞は、黒色素胞宿主細胞である、項目ａ２８〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【０３９２】
（項目ａ４１）  上記試験化合物は、低分子である、項目ａ２８〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【０３９３】
（項目ａ４２）  上記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、項目ａ２８〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【０３９４】
（項目ａ４３）  上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目ａ２８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【０３９５】
（項目ａ４４）  ＰＹＹ分泌促進因子を方法において同定するためのＧタンパク質共役レセプターの使用であって、この方法は、
（ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、このレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、このレセプターに対するリガンドは、ＧＰＲ１１９に対するリガンドであり、そしてこのＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）この公知のリガンドとこのレセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ないこの複合体がこの試験化合物の非存在下よりもこの試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
この決定は、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、使用。
【０３９６】
（項目ａ４５）  上記方法が、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｅ）この化合物がこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ４４に記載の使用。
【０３９７】
（項目ａ４６）  上記方法は、
（ｄ）上記化合物が脊椎動物から得られるサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、この脊椎動物は、化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物を投与されており、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ４４に記載の使用。
【０３９８】
（項目ａ４７）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ４６に記載の使用。
【０３９９】
（項目ａ４８）  上記方法は、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物を脊椎動物に投与する工程；および
（ｅ）この化合物がこの脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ４４に記載の使用。
【０４００】
（項目ａ４９）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ４８に記載の使用。
【０４０１】
（項目ａ５０）  上記レセプターは、組換え体である、項目ａ４４〜４９のいずれか１項に記載の使用。
【０４０２】
（項目ａ５１）  上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、この発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、項目ａ４４〜５０のいずれか１項に記載の使用。
【０４０３】
（項目ａ５２）  ＧＰＲ１１９に対する上記リガンドは、ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目ａ４４〜５１のいずれか１項に記載の使用。
【０４０４】
（項目ａ５３）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである、項目ａ５２に記載の使用。
【０４０５】
（項目ａ５４）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目ａ５２または項目ａ５３に記載の使用。
【０４０６】
（項目ａ５５）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭからなる群より選択される値未満のＥＣ５０を有する、項目ａ５２〜５４のいずれか１項に記載の使用。
【０４０７】
（項目ａ５６）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である、項目ａ５２〜５５のいずれか１項に記載の使用。
【０４０８】
（項目ａ５７）  上記試験化合物は、低分子である、項目ａ４４〜５６のいずれか１項に記載の使用。
【０４０９】
（項目ａ５８）  上記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、項目ａ４４〜５７のいずれか１項に記載の使用。
【０４１０】
（項目ａ５９）  上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目ａ４４〜５８のいずれか１項に記載の使用。
【０４１１】
（項目ａ６０）  （ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、このレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、このレセプターに対するリガンドは、ＧＰＲ１１９に対するリガンドであり、そしてこのＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）この公知のリガンドとこのレセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ないこの複合体がこの試験化合物の非存在下よりもこの試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
この決定は、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
（ｄ）化合物の存在下においてより少ないこの複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；ならびに
（ｅ）この化合物がこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０４１２】
（項目ａ６１）  （ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、このレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）この公知のリガンドとこのレセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ないこの複合体がこの試験化合物の非存在下よりもこの試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
この決定は、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
（ｄ）この化合物が脊椎動物から得られたサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、この脊椎動物は、化合物の存在下においてより少ないこの複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物を投与されており、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０４１３】
（項目ａ６２）  （ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、このレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、このレセプターに対するリガンドは、ＧＰＲ１１９に対するリガンドであり、そしてこのＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程：ならびに
（ｂ）この公知のリガンドとこのレセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ないこの複合体がこの試験化合物の非存在下よりもこの試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
この決定は、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
（ｄ）化合物の存在下においてより少ないこの複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物を脊椎動物に投与する工程；ならびに
（ｅ）この化合物がこの脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹ分泌促進因子であることを示す、
工程；
を包含する、ＰＹＹ分泌促進因子を同定するための方法。
【０４１４】
（項目ａ６３）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ６１または項目ａ６２に記載の方法。
【０４１５】
（項目ａ６４）  上記レセプターは、組換え体である、項目ａ６０〜６３のいずれか１項に記載の方法。
【０４１６】
（項目ａ６５）  上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、この発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、項目ａ６０〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【０４１７】
（項目ａ６６）  ＧＰＲ１１９に対する上記リガンドは、ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目ａ６０〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【０４１８】
（項目ａ６７）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである、項目ａ６６に記載の方法。
【０４１９】
（項目ａ６８）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的アゴニストである、項目ａ６６または項目ａ６７に記載の方法。
【０４２０】
（項目ａ６９）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭからなる群より選択される値未満のＥＣ５０を有する、項目ａ６６〜６８のいずれか１項に記載の方法。
【０４２１】
（項目ａ７０）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である、項目ａ６６〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【０４２２】
（項目ａ７１）  上記試験化合物は、低分子である、項目ａ６０〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【０４２３】
（項目ａ７２）  上記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、項目ａ６０〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【０４２４】
（項目ａ７３）  上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目ａ６０〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【０４２５】
（項目ａ７４）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を方法において同定するためのＧタンパク質共役レセプターの使用であって、この方法は、
（ａ）試験化合物と、宿主細胞またはこのＧタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力を決定する工程であって、
このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力は、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、使用。
【０４２６】
（項目ａ７５）  （ｃ）工程（ｂ）においてインビトロで上記レセプターの機能性を刺激する化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とを接触させる工程；および
（ｄ）この化合物がこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ７４に記載の使用。
【０４２７】
（項目ａ７６）  （ｃ）上記化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、このサンプルは、工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を予め投与された脊椎動物から得られており、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ７４に記載の使用。
【０４２８】
（項目ａ７７）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ７６に記載の使用。
【０４２９】
（項目ａ７８）  （ｃ）脊椎動物に対して、工程（ｂ）において上記レセプターの機能性を刺激する化合物を投与する工程；および
（ｄ）この化合物がこの脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ７４に記載の使用。
【０４３０】
（項目ａ７９）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ７８に記載の使用。
【０４３１】
（項目ａ８０）  上記レセプターは、組換え体である、項目ａ７４〜７９のいずれか１項に記載の使用。
【０４３２】
（項目ａ８１）  上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、この発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、項目ａ７４〜８０のいずれか１項に記載の使用。
【０４３３】
（項目ａ８２）  上記決定する工程は、第２メッセンジャーのレベルの測定によるものである、項目ａ７４〜８１のいずれか１項に記載の使用。
【０４３４】
（項目ａ８３）  上記第２メッセンジャーは、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、サイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣａ２＋からなる群より選択される、項目ａ８２に記載の使用。
【０４３５】
（項目ａ８４）  ｃＡＭＰのレベルは、増大する、項目ａ８３に記載の使用。
【０４３６】
（項目ａ８５）  上記決定する工程は、黒色素胞アッセイの使用、上記Ｇタンパク質共役レセプターを含む膜に対するＧＴＰγＳ結合の測定、またはレポーターアッセイによるものである、項目ａ７４〜８１のいずれか１項に記載の使用。
【０４３７】
（項目ａ８６）  上記宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞である、項目ａ７４〜８５のいずれか１項に記載の使用。
【０４３８】
（項目ａ８７）  上記宿主細胞は、酵母宿主細胞である、項目ａ７４〜８５のいずれか１項に記載の使用。
【０４３９】
（項目ａ８８）  上記宿主細胞は、黒色素胞宿主細胞である、項目ａ７４〜８５のいずれか１項に記載の使用。
【０４４０】
（項目ａ８９）  上記試験化合物は、低分子である、項目ａ７４〜８８のいずれか１項に記載の使用。
【０４４１】
（項目ａ９０）  上記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、項目ａ７４〜８９のいずれか１項に記載の使用。
【０４４２】
（項目ａ９１）  上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目ａ７４〜９０のいずれか１項に記載の使用。
【０４４３】
（項目ａ９２）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法であって、
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストと脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｂ）このＧＰＲ１１９アゴニストがこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこのＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、このＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、方法。
【０４４４】
（項目ａ９３）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法であって、
（ａ）この化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、このサンプルは、ＧＰＲ１１９アゴニストを予め投与された脊椎動物から得られており、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこのＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、このＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、方法。
【０４４５】
（項目ａ９４）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ９３に記載の方法。
【０４４６】
（項目ａ９５）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法であって、
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストを脊椎動物に投与する工程；および
（ｂ）このＧＰＲ１１９アゴニストがこの脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこのＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、このＧＰＲ１１９アゴニストがＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、方法。
【０４４７】
（項目ａ９６）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ９５に記載の方法。
【０４４８】
（項目ａ９７）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である、項目ａ９２〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【０４４９】
（項目ａ９８）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである、項目ａ９２〜９７のいずれか１項に記載の方法。
【０４５０】
（項目ａ９９）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目ａ９２〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【０４５１】
（項目ａ１００）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭからなる群より選択される値未満のＥＣ５０を有する、項目ａ９２〜９９のいずれか１項に記載の方法。
【０４５２】
（項目ａ１０１）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法であって、
（ａ）試験化合物と、宿主細胞またはＧタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程：ならびに
（ｂ）このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力を決定する工程であって、
このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力は、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
（ｃ）工程（ｂ）においてこのレセプターの機能性を刺激する化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；ならびに
（ｄ）この化合物がこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、方法。
【０４５３】
（項目ａ１０２）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法であって、
（ａ）試験化合物と、宿主細胞またはＧタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程：
（ｂ）このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力を決定する工程であって、
このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力は、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
（ｃ）この化合物がサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、このサンプルは、工程（ｂ）においてこのレセプターの機能性を刺激する化合物を予め投与された脊椎動物から得られており、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、方法。
【０４５４】
（項目ａ１０３）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法であって、
（ａ）試験化合物と、宿主細胞またはＧタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞の膜とを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力を決定する工程であって、
このレセプターの機能性を刺激するこの試験化合物の能力は、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
（ｃ）脊椎動物に対して、工程（ｂ）においてこのレセプターの機能性を刺激する化合物を投与する工程；ならびに
（ｄ）この化合物がこの脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、方法。
【０４５５】
（項目ａ１０４）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ１０２または項目ａ１０３に記載の方法。
【０４５６】
（項目ａ１０５）  上記レセプターは、組換え体である、項目ａ１０１〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【０４５７】
（項目ａ１０６）  上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、この発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、項目ａ１０１〜１０５のいずれか１項に記載の方法。
【０４５８】
（項目ａ１０７）  上記決定する工程は、第２メッセンジャーのレベルの測定によるものである、項目ａ１０１〜１０６のいずれか１項に記載の方法。
【０４５９】
（項目ａ１０８）  上記第２メッセンジャーは、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、サイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣａ２＋からなる群より選択される、項目ａ１０７に記載の方法。
【０４６０】
（項目ａ１０９）  ｃＡＭＰのレベルは、増大する、項目ａ１０８に記載の方法。
【０４６１】
（項目ａ１１０）  上記決定する工程は、黒色素胞アッセイの使用、上記Ｇタンパク質共役レセプターを含む膜に対するＧＴＰγＳ結合の測定、またはレポーターアッセイによるものである、項目ａ１０１〜１０６のいずれか１項に記載の方法。
【０４６２】
（項目ａ１１１）  上記宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞である、項目ａ１０１〜１１０のいずれか１項に記載の方法。
【０４６３】
（項目ａ１１２）  上記宿主細胞は、酵母宿主細胞である、項目ａ１０１〜１１０のいずれか１項に記載の方法。
【０４６４】
（項目ａ１１３）  上記宿主細胞は、黒色素胞宿主細胞である、項目ａ１０１〜１１０のいずれか１項に記載の方法。
【０４６５】
（項目ａ１１４）  上記試験化合物は、低分子である、項目ａ１０１〜１１３のいずれか１項に記載の方法。
【０４６６】
（項目ａ１１５）  上記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、項目ａ１０１〜１１４のいずれか１項に記載の方法。
【０４６７】
（項目ａ１１６）  上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目ａ１０１〜１１５のいずれか１項に記載の方法。
【０４６８】
（項目ａ１１７）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を方法において同定するためのＧタンパク質共役レセプターの使用であって、この方法は、
（ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、このレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、このレセプターに対するリガンドは、ＧＰＲ１１９に対するリガンドであり、そしてこのＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）この公知のリガンドとこのレセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ないこの複合体がこの試験化合物の非存在下よりもこの試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
この決定は、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、使用。
【０４６９】
（項目ａ１１８）  上記方法は、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；および
（ｅ）この化合物がこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ１１７に記載の使用。
【０４７０】
（項目ａ１１９）  上記方法は、
（ｄ）上記化合物が脊椎動物から得られたサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、この脊椎動物は、化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物を投与されており、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ１１７に記載の使用。
【０４７１】
（項目ａ１２０）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ１１９に記載の使用。
【０４７２】
（項目ａ１２１）  上記方法は、
（ｄ）化合物の存在下においてより少ない上記複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物を脊椎動物に投与する工程；および
（ｅ）この化合物がこの脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
をさらに包含する、項目ａ１１７に記載の使用。
【０４７３】
（項目ａ１２２）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ１２１に記載の使用。
【０４７４】
（項目ａ１２３）  上記レセプターは、組換え体である、項目ａ１１７〜１２２のいずれか１項に記載の使用。
【０４７５】
（項目ａ１２４）  上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、この発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、項目ａ１１７〜１２３のいずれか１項に記載の使用。
【０４７６】
（項目ａ１２５）  ＧＰＲ１１９に対する上記リガンドは、ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目ａ１１７〜１２４のいずれか１項に記載の使用。
【０４７７】
（項目ａ１２６）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである、項目ａ１２５に記載の使用。
【０４７８】
（項目ａ１２７）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目ａ１２５または項目ａ１２６に記載の使用。
【０４７９】
（項目ａ１２８）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭからなる群より選択される値未満のＥＣ５０を有する、項目ａ１２５〜１２７のいずれか１項に記載の使用。
【０４８０】
（項目ａ１２９）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である、項目ａ１２５〜１２８のいずれか１項に記載の使用。
【０４８１】
（項目ａ１３０）  上記試験化合物は、低分子である、項目ａ１１７〜１２９のいずれか１項に記載の使用。
【０４８２】
（項目ａ１３１）  上記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、項目ａ１１７〜１３０のいずれか１項に記載の使用。
【０４８３】
（項目ａ１３２）  上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目ａ１１７〜１３１のいずれか１項に記載の使用。
【０４８４】
（項目ａ１３３）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法であって、
（ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、このレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、このレセプターに対するリガンドは、ＧＰＲ１１９に対するリガンドであり、そしてこのＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）この公知のリガンドとこのレセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ないこの複合体がこの試験化合物の非存在下よりもこの試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
この決定は、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
（ｄ）化合物の存在下においてより少ないこの複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物と、脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞とをインビトロで接触させる工程；ならびに
（ｅ）この化合物がこの脊椎動物の腸内分泌細胞またはこのＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物の腸内分泌細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞からのＰＹＹ分泌を刺激するこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、方法。
【０４８５】
（項目ａ１３４）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法であって、
（ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、このレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、このＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）この公知のリガンドとこのレセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ないこの複合体がこの試験化合物の非存在下よりもこの試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
この決定は、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
（ｄ）この化合物が脊椎動物から得られたサンプル中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、この脊椎動物は、化合物の存在下においてより少ないこの複合体が工程（ｃ）で形成されるという化合物を投与されており、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、方法。
【０４８６】
（項目ａ１３５）  ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）によってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するための方法であって、
（ａ）試験化合物の存在下または非存在下において、Ｇタンパク質共役レセプターと、このレセプターに対する必要に応じて標識された公知のリガンドとを接触させる工程であって、このレセプターに対するリガンドは、ＧＰＲ１１９に対するリガンドであり、そしてこのＧタンパク質共役レセプターは、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）（ｉ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ｉ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｖ）（ａ’）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｖｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）この公知のリガンドとこのレセプターとの間の複合体を検出する工程；ならびに
（ｃ）より少ないこの複合体がこの試験化合物の非存在下よりもこの試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定する工程であって、
この決定は、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
（ｄ）化合物の存在下においてより少ないこの複合体が工程（ｃ）で形成されるというこの化合物を脊椎動物に投与する工程；ならびに
（ｅ）この化合物がこの脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるか否かを決定する工程であって、
この脊椎動物中のＰＹＹレベルを増大させるこの試験化合物の能力は、さらに、この試験化合物がＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物であることを示す、
工程；
を包含する、方法。
【０４８７】
（項目ａ１３６）  上記脊椎動物は、非ヒト脊椎動物である、項目ａ１３４または項目ａ１３５に記載の方法。
【０４８８】
（項目ａ１３７）  上記レセプターは、組換え体である、項目ａ１３３〜１３６のいずれか１項に記載の方法。
【０４８９】
（項目ａ１３８）  上記宿主細胞は、発現ベクターを含み、この発現ベクターは、上記Ｇタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、項目ａ１３３〜１３７のいずれか１項に記載の方法。
【０４９０】
（項目ａ１３９）  ＧＰＲ１１９に対する上記リガンドは、ＧＰＲ１１９アゴニストである、項目ａ１３３〜１３８のいずれか１項に記載の方法。
【０４９１】
（項目ａ１４０）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである、項目ａ１３９に記載の方法。
【０４９２】
（項目ａ１４１）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、選択的アゴニストである、項目ａ１３９または項目ａ１４０に記載の方法。
【０４９３】
（項目ａ１４２）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭからなる群より選択される値未満のＥＣ５０を有する、項目ａ１３９〜１４１のいずれか１項に記載の方法。
【０４９４】
（項目ａ１４３）  上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低分子である、項目ａ１３９〜１４２のいずれか１項に記載の方法。
【０４９５】
（項目ａ１４４）  上記試験化合物は、低分子である、項目ａ１３３〜１４３のいずれか１項に記載の方法。
【０４９６】
（項目ａ１４５）  上記レセプターは、配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列を含む、項目ａ１３３〜１４４のいずれか１項に記載の方法。
【０４９７】
（項目ａ１４６）  上記レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目ａ１３３〜１４５のいずれか１項に記載の方法。
【０４９８】
（項目ａ１４７）  上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、骨に関連する状態である、項目ａ７４〜９１および項目ａ１１７〜１３２のいずれか１項に記載の使用または項目ａ９２〜１１６および項目ａ１３３〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【０４９９】
（項目ａ１４８）  上記骨に関連する状態は、低い骨量によって特徴付けられる状態である、項目ａ１４７に記載の使用または項目ａ１４７に記載の方法。
【０５００】
（項目ａ１４９）  上記低い骨量によって特徴付けられる状態は、オステオペニア、骨粗しょう症、関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、歯槽骨損失、骨切り術による骨損失、小児期の特発性骨損失、パジェット病、転移性癌に起因する骨損失、骨溶解性病変、脊椎の弯曲、および身長の減少からなる群より選択される、項目ａ１４８に記載の使用または項目ａ１４８に記載の方法。
【０５０１】
（項目ａ１５０）  上記骨に関連する状態は、骨折である、項目ａ１４７に記載の使用または項目ａ１４７に記載の方法。
【０５０２】
（項目ａ１５１）  上記骨折は、外傷性の骨折、長期の骨折、および骨粗しょう症性の骨折からなる群より選択される、項目ａ１５０に記載の使用または項目ａ１５０に記載の方法。
【０５０３】
（項目ａ１５２）  上記骨に関連する状態は、骨疾患である、項目ａ１４７に記載の使用または項目ａ１４７に記載の方法。
【０５０４】
（項目ａ１５３）  上記骨疾患は、オステオペニア、骨粗しょう症、関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、歯槽骨損失、骨切り術による骨損失、小児期の特発性骨損失、パジェット病、転移性癌に起因する骨損失、骨溶解性病変、脊椎の弯曲、および身長の減少からなる群より選択される、項目ａ１５２に記載の使用または項目ａ１５２に記載の方法。
【０５０５】
（項目ａ１５４）  上記骨に関連する状態は、増強された骨治癒または骨成長であり、この増強された骨治癒または骨成長は、顔面の再建、上顎の再建、下顎の再建、歯周疾患または抜歯後の増強された骨治癒、増強された長骨伸長、増強された補綴内殖、および増大された骨癒合からなる群より選択される、項目ａ１４７に記載の使用または項目ａ１４７に記載の方法。
【０５０６】
（項目ａ１５５）  上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、代謝障害である、項目ａ７４〜９１および項目ａ１１７〜１３２のいずれか１項に記載の使用または項目ａ９２〜１１６および項目ａ１３３〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【０５０７】
（項目ａ１５６）  上記代謝障害は、体重超過、肥満症、過食症、２型糖尿病、グルコース寛容減損、インスリン抵抗性、高インスリン血症、脂質異常症、高血圧症およびメタボリックシンドロームからなる群より選択される、項目ａ１５５に記載の使用または項目ａ１５５に記載の方法。
【０５０８】
（項目ａ１５７）  上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、新脈管形成に関連する状態である、項目ａ７４〜９１および項目ａ１１７〜１３２のいずれか１項に記載の使用または項目ａ９２〜１１６および項目ａ１３３〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【０５０９】
（項目ａ１５８）  上記新脈管形成に関連する状態は、末梢動脈疾患、創傷治癒および虚血からなる群より選択される、項目ａ１５７に記載の使用または項目ａ１５７に記載の方法。
【０５１０】
（項目ａ１５９）  上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、虚血に関連する状態である、項目ａ７４〜９１および項目ａ１１７〜１３２のいずれか１項に記載の使用または項目ａ９２〜１１６および項目ａ１３３〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【０５１１】
（項目ａ１６０）  上記虚血に関連する状態は、脳卒中、心筋梗塞、虚血−再灌流傷害、心筋梗塞後のリモデリング、およびうっ血性心不全からなる群より選択される、項目ａ１５９に記載の使用または項目ａ１５９に記載の方法。
【０５１２】
（項目ａ１６１）  上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、吸収不良障害である、項目ａ７４〜９１および項目ａ１１７〜１３２のいずれか１項に記載の使用または項目ａ９２〜１１６および項目ａ１３３〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【０５１３】
（項目ａ１６２）  上記吸収不良障害は、短腸症候群、全腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、コレラ、および下痢を伴う障害からなる群より選択される、項目ａ１６１に記載の使用または項目ａ１６１に記載の方法。
【０５１４】
（項目ａ１６３）  上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、痙攣性障害である、項目ａ７４〜９１および項目ａ１１７〜１３２のいずれか１項に記載の使用または項目ａ９２〜１１６および項目ａ１３３〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【０５１５】
（項目ａ１６４）  上記痙攣性障害は、癲癇である、項目ａ１６３に記載の使用または項目ａ１６３に記載の方法。
【０５１６】
（項目ａ１６５）  上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、癌である、項目ａ７４〜９１および項目ａ１１７〜１３２のいずれか１項に記載の使用または項目ａ９２〜１１６および項目ａ１３３〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【０５１７】
（項目ａ１６６）  上記癌は、膵臓癌、乳癌、結腸癌、およびバレット腺癌からなる群より選択される、項目ａ１６５に記載の使用または項目ａ１６５に記載の方法。
【０５１８】
（項目ａ１６７）  上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、炎症性障害である、項目ａ７４〜９１および項目ａ１１７〜１３２のいずれか１項に記載の使用または項目ａ９２〜１１６および項目ａ１３３〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【０５１９】
（項目ａ１６８）  上記炎症性障害は、アテローム硬化症、アテローム血栓症、インスリン抵抗性、膵炎、再狭窄、炎症性肺疾患、および炎症性腸疾患からなる群より選択される、項目ａ１６７に記載の使用または項目ａ１６７に記載の方法。
【０５２０】
（項目ａ１６９）  上記炎症性肺疾患は、喘息、気腫、および肺動脈性肺高血圧症からなる群より選択される、項目ａ１６８に記載の使用または項目ａ１６８に記載の方法。
【０５２１】
（項目ａ１７０）  上記炎症性腸疾患は、腸炎、全腸炎、クローン病、肉芽腫性大腸炎、回腸炎、クローン大腸炎、潰瘍性大腸炎、Ｓ字結腸炎、全大腸炎、および潰瘍性直腸炎からなる群より選択される、項目ａ１６８に記載の使用または項目ａ１６８に記載の方法。
【０５２２】
（項目ａ１７１）  ＰＹＹ関連活性の上記モジュレーションは、
（ａ）血漿ＰＹＹを増大させること；
（ｂ）骨量を増大させること；
（ｃ）骨量の損失を減少させること；
（ｄ）骨形成を増大させること；
（ｅ）食物摂取を減少させること；
（ｆ）体重を減少させること；
（ｇ）満腹感を増大させること；
（ｈ）グルコース処理を増大させること；
（ｉ）血漿グルコースを減少させること；
（ｊ）新脈管形成を増大させること；
（ｋ）腸管上皮における分泌を減少させること；
（ｌ）腸管上皮における吸収を増大させること；および
（ｍ）血漿アディポネクチンを増大させること
からなる群より選択される、項目ａ７４〜９１および項目ａ１１７〜１３２のいずれか１項に記載の使用または項目ａ９２〜１１６および項目ａ１３３〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０５２３】
【図１】図１は、ＧＰＲ１１９レセプターがトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞においてｃＡＭＰの蓄積を増大させる構成的活性を示すことを示す。
【図２】図２は、化合物１がＧＰＲ１１９レセプターのアゴニストであることを示す。
【図３】図３は、野生型マウスにおける血漿の全ＰＹＹに対するＧＰＲ１１９アゴニストの投与の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【０５２４】
（発明の詳細な説明）
本発明は、少なくとも部分的に、経口投与などによる個体に対するＧＰＲ１１９アゴニストの投与が個体における血漿の全ＰＹＹを増大させるように作用し得るという、本出願人による驚くべき発見に基づく。本発明は、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、および個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物を同定するためのＧＰＲ１１９に関する方法を特徴とする。ＧＰＲ１１９アゴニストは、個体における血漿の全ＰＹＹを増大させるために有用である。特定の実施形態において、上記個体は、ヒトである。ＧＰＲ１１９アゴニストは、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防のための医薬品および個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションのための医薬品として有用である。
【０５２５】
用語「リガンド」は、本明細書中で使用される場合、ＧＰＲ１１９などのポリペプチドに特異的に結合する分子（例えば、試験化合物）を意味する。リガンドは、例えば、ポリペプチド、脂質、低分子、抗体であり得る。化合物１は、ＧＰＲ１１９レセプターポリペプチドの例示のリガンドである（化合物１の化学構造および化学名を示す表Ａを参照のこと）。化合物１は、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１２６７（ＷＯ  ２００４／０６５３８０として公開された）に開示された化合物と同一である。（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミン（表Ａを参照のこと）は、ＧＰＲ１１９レセプターポリペプチドの例示のリガンドである。内因性リガンドは、ネイティブなポリペプチド（例えば、ＧＰＲ１１９）に対する内因性の天然リガンドであるリガンドである。リガンドは、「アンタゴニスト」、「アゴニスト」、「部分アゴニスト」、または「インバースアゴニスト」などであり得る。
【０５２６】
【表１】
2009250977.tif 000002
本明細書中で使用される場合、用語「アゴニスト」は、ＧＰＣＲへの結合によってそのＧＰＣＲを活性化（例えば、刺激）してそのＧＰＣＲによって媒介される細胞内応答を誘発する因子（例えば、リガンド、試験化合物）を意味する。
【０５２７】
本明細書中で使用される場合、用語「部分アゴニスト」は、ＧＰＣＲへの結合によってそのＧＰＣＲを活性化（例えば、刺激）してそのＧＰＣＲによって媒介される細胞内応答を誘発するが、完全なアゴニストよりはその範囲または程度が小さい因子（例えば、リガンド、試験化合物）を意味する。
【０５２８】
用語「アンタゴニスト」は、アゴニストまたは部分アゴニストとほぼ同一の部位でＧＰＣＲに結合する（好ましくは競合的に結合する）が、そのＧＰＣＲの活性形態によって開始される細胞内応答を活性化せず、それにより、アゴニストまたは部分アゴニストによる細胞内応答を阻害することができる因子（例えば、リガンド、試験化合物）を意味する。アンタゴニストは、代表的には、アゴニストまたは部分アゴニストの非存在下でベースラインの細胞内応答を減少させない。
【０５２９】
用語「インバースアゴニスト」は、ＧＰＣＲに結合し、レセプターの活性形態によって開始されるベースラインの細胞内応答を、アゴニストまたは部分アゴニストの非存在下で観察される通常のベースレベルの活性未満に阻害する因子（例えば、リガンド、試験化合物）を意味する。
【０５３０】
本明細書中で使用される場合、用語「ＧＰＲ１１９アゴニスト」は、ＧＰＲ１１９レセプターに結合してアゴニストとして作用する化合物をいう。化合物１は、例示のＧＰＲ１１９アゴニストである（化合物１の化学構造および化学名を示す表Ａを参照のこと）。化合物１は、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１２６７（ＷＯ  ２００４／０６５３８０として公開された）に開示された化合物と同一である。（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンは、例示のＧＰＲ１１９アゴニストである。
【０５３１】
本明細書中で使用される場合、用語「選択的ＧＰＲ１１９アゴニスト」は、１つ以上の密接に関連するレセプター（副腎皮質刺激ホルモン放出因子１（ＣＲＦ−１）レセプターなど）よりも高いＧＰＲ１１９レセプターの選択性を有するＧＰＲ１１９アゴニストをいう。化合物１は、例示の選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである（化合物１の化学構造および化学名を示す表Ａを参照のこと）。化合物１は、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１２６７（ＷＯ  ２００４／０６５３８０として公開された）に開示された化合物と同一である。（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンは、例示の選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである。
【０５３２】
用語「ＰＹＹ分泌促進因子」は、個体（例えば、脊椎動物または哺乳類）への投与において細胞（例えば、腸内分泌細胞）におけるＰＹＹの分泌を促進（例えば、刺激）するか、あるいは全ＰＹＹのレベル（例えば、血液または血漿の全ＰＹＹのレベル）を増大させる因子（例えば、リガンド、試験化合物）を意味する。特定の実施形態において、ＰＹＹ分泌促進因子は、個体における全ＰＹＹのレベル（例えば、血液または血漿の全ＰＹＹのレベル）を増大させるために適切な化合物である。
【０５３３】
本明細書中で使用される場合、用語「ＰＹＹによってモジュレートされる状態」は、Ｇタンパク質共役レセプターをモジュレートし得るＰＹＹ１−３６またはそのフラグメントによってモジュレートされる状態をいう。特定の実施形態において、用語「ＰＹＹによってモジュレートされる状態」は、ＰＹＹ３−３６によってモジュレートされる状態をいう。特定の実施形態において、用語「ＰＹＹによってモジュレートされる状態」は、ＮＰＹ  Ｙ２レセプター（Ｙ２Ｒ）アゴニストによってモジュレートされる状態をいう。特定の実施形態において、用語「ＰＹＹによってモジュレートされる状態」は、Ｙ２Ｒの刺激によってモジュレートされる状態をいう。特定の実施形態において、用語「ＰＹＹ３−３６によってモジュレートされる状態」は、Ｙ２Ｒアゴニストによってモジュレートされる状態をいう。特定の実施形態において、用語「ＰＹＹ３−３６によってモジュレートされる状態」は、Ｙ２Ｒの刺激によってモジュレートされる状態をいう。
【０５３４】
本明細書中で使用される場合、用語「ＰＹＹ関連活性」は、ＰＹＹのレベルをモジュレートするための活性またはＰＹＹに関連した活性をいう。特定の実施形態において、用語「ＰＹＹ関連活性」は、ＰＹＹのレベルを増大させるための活性またはＰＹＹに関連した活性をいう。
【０５３５】
本明細書中で使用される場合、用語「個体」は、脊椎動物をいい、脊椎動物としては、魚類（例えば、商業的に養殖された魚類、ペットの魚類など）、両生類（例えば、カエル、ヒキガエル、ペットの両生類など）、爬虫類（例えば、ヘビ、トカゲ、カメ、ペットの爬虫類など）、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、ペットの鳥類など）および哺乳類（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ブタ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、非ヒト霊長類、非ヒト哺乳類、ペットの非ヒト哺乳類、ヒトなど）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、上記個体は、魚類である。特定の実施形態において、上記個体は、両生類である。特定の実施形態において、上記個体は、爬虫類である。特定の実施形態において、上記個体は、鳥類である。特定の実施形態において、上記個体は、シチメンチョウである。過去２５年間にわたって、より大きい胸筋の量を有するシチメンチョウに対する商業的な淘汰圧は、骨格の完全性に対する要求の増大をもたらした。しかし、増大した胸筋の量は、骨格における代償性変化によって達成されず、シチメンチョウ産業が脚の懸案事項の増加に直面するという結果を生じた。若い成体の雄シチメンチョウにおける長骨の骨折が、報告されている（例えば、Ｃｒｅｓｐｏら、Ｐｏｕｌｔ  Ｓｃｉ（２０００）７９：６０２−６０８を参照のこと）。特定の実施形態において、上記個体は、哺乳類である。特定の実施形態において、上記個体は、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ブタ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、非ヒト霊長類またはヒト（それらは、個別かまたは任意の組合せで本発明の実施形態に含まれ得る）である。特定の実施形態において、上記個体は、ウマである。レーシング（ｒａｃｉｎｇ）、ペーシング（ｐａｃｉｎｇ）および他の競争的事象などの活動に関与するウマである競走馬（ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｈｏｒｓｅ）は、骨折に陥り易い。特定の実施形態において、上記個体は、イヌまたはネコである。特定の実施形態において、上記個体は、ヒトのコンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ニワトリなど）、スポーツ用の動物（例えば、ウマ、イヌなど）、荷物運搬用の動物（例えば、ラバ、ラクダなど）または珍しい動物（例えば、動物園において見出される動物など）であり、それらは、個別かまたは任意の組合せで本発明の実施形態に含まれ得る。特定の実施形態において、上記個体は、非ヒト脊椎動物である。特定の実施形態において、上記個体は、非ヒト哺乳類である。特定の実施形態において、上記個体は、非ヒト霊長類（例えば、アカゲザル、チンパンジーなど）である。特定の実施形態において、上記個体は、ヒトである。
【０５３６】
本明細書中で使用される場合、用語「予防または処置を必要とする」は、介護者（例えば、ヒトの場合における医師、看護師、ナースプラクティショナー；非ヒト脊椎動物の場合および非ヒト哺乳類の特定の実施形態における獣医師）によって行われる、個体が処置を必要とするか、または処置から利益を受けるという判断をいう。
【０５３７】
本明細書中で使用される場合、用語「治療有効量」または「治療有効用量」は、研究者、獣医師、医師または他の臨床家によって模索されるべき組織、系、動物、個体またはヒトにおける生物学的応答または医薬応答を誘導する活性化合物または医薬品の量をいい、それらの応答としては、以下のうちの１つ以上が挙げられる：
（１）疾患を予防すること；例えば、疾患、状態または障害に対する素因を有し得るが、その疾患の病理または総体的症状を依然として経験または提示していない個体において、その疾患、状態または障害を予防すること；
（２）疾患を阻害すること；例えば、疾患、状態または障害の病理または総体的症状を経験または提示している個体において、その疾患、状態または障害を阻害すること（すなわち、その病理および／または総体的症状のさらなる発症を阻止すること）；ならびに
（３）疾患を寛解させること；例えば、疾患、状態または障害の病理または総体的症状を経験または提示している個体において、その疾患、状態または障害を寛解させること（すなわち、その病理および／または総体的症状を逆転させること）。
【０５３８】
本明細書中で使用される場合、用語「治療効力」は、研究者、獣医師、医師または他の臨床家によって模索されるべき組織、系、動物、個体またはヒトにおける生物学的応答または医薬応答の誘発をいい、それらの応答としては、以下のうちの１つ以上が挙げられる：
（１）疾患を予防すること；例えば、疾患、状態または障害に対する素因を有し得るが、その疾患の病理または総体的症状を依然として経験または提示していない個体において、その疾患、状態または障害を予防すること；
（２）疾患を阻害すること；例えば、疾患、状態または障害の病理または総体的症状を経験または提示している個体において、その疾患、状態または障害を阻害すること（すなわち、その病理および／または総体的症状のさらなる発症を阻止すること）；ならびに
（３）疾患を寛解させること；例えば、疾患、状態または障害の病理または総体的症状を経験または提示している個体において、その疾患、状態または障害を寛解させること（すなわち、その病理および／または総体的症状を逆転させること）。
【０５３９】
用語「予防するために有効である量」は、予防されることが模索される生物学的事象または医学的事象の発生の危険性を予防するか、または減少させる薬物の量をいう。多くの場合において、予防するために有効である量は、治療有効量と同じである。
【０５４０】
用語「末梢投与」は、中枢神経系の外における投与を意味する。末梢投与は、脳への直接投与を含まない。末梢投与としては、血管内投与、筋肉内投与、皮下投与、吸入投与、経口投与、舌下投与、腸内投与、直腸投与、経皮投与、または鼻腔内投与が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５４１】
用語「組成物」は、少なくとも１種の成分を含む材料を意味する。
【０５４２】
用語「活性成分」は、疾患の診断、治癒、緩和、処置、または予防における薬理学的活性または他の直接的効果を提供する任意の成分を意味する。
【０５４３】
用語「薬学的組成物」は、少なくとも１種の活性成分を含み、それによって哺乳類において検査および処置に従う組成物を意味する。
【０５４４】
「薬学的に受容可能な」によって、キャリア、ビヒクル、希釈剤、賦形剤、および／または塩がその処方物の他の成分と適合性である必要があり、そしてそのレシピエントに有害であってはならないことが、意味される。
【０５４５】
用語「投薬形態」は、薬物が生成および調剤される物理的形態（例えば、錠剤、カプセル、または注射可能物質）を意味する。
【０５４６】
「骨」によって、高密度な有機性マトリックスおよび無機性のミネラル成分を含む、ほとんどの脊椎動物の骨格の大部分を形成する、高密度な、半硬性の、多孔性である、石灰化した結合組織が、意図される。骨は、脊椎動物の骨格を構成する任意の多数の解剖学的に異なる構造である。
【０５４７】
用語「骨量」および「骨塩量（ＢＭＤ）」は、本明細書中で交換可能に使用される。ヒトにおけるＢＭＤは、通常、標準的なＸ線撮影技術（二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＸＡ））によって測定される。ＢＭＤを評価するために開発された多数の技術のうちで、ＤＸＡは、技術的に最も高度に発達したものであり、そして生物学的に最も徹底的に検証されたものである。適切に適合したソフトウェアを含むＤＸＡ科学技術もまた、動物研究においてＢＭＤを容易に評価するために使用され得る。ＤＸＡは、骨粗しょう症の診断、予後（骨折の予測）、障害の自然経過をモニタリングすること、および処置に対する応答を評価することにおいて使用される。
【０５４８】
本明細書中で使用される場合、用語「低い骨量」は、個体における骨塩量（ＢＭＤ）の任意の減少（ｄｅｃｒｅａｓｅ）または減少（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）をいい、そしてＷｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）による提案において定義されるような骨粗しょう症およびオステオペニアの両方を含む。ＷＨＯは、若年成人の参照平均の１の標準偏差（Ｔスコア＝−１）内のＢＭＤの値として正常を定義した。ＷＨＯは、若年成人の平均を下回る１より大きい標準偏差であるが、この値を下回る２．５未満の標準偏差（Ｔスコアは、＜−１かつ＞−２．５である）のＢＭＤの値としてオステオペニアを定義した。ＷＨＯは、骨粗しょう症をオステオペニアのより重篤な形態として特徴付け、そして２．５の標準偏差またはより低い（ｍｏｒｅ  ｂｌｏｗ）若年成人の平均（Ｔスコア＝−２．５）のＢＭＤの値によってそれを定義した（例えば、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  ９２１（２００３）、Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ（その開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。さらに一般的に、オステオペニアは、−１未満でありかつ−２よりも大きいＴスコアとして定義され、そして骨粗しょう症は、−２以下のＴスコアとして定義される。本発明の特定の実施形態において、上記Ｔスコアは、ＤＸＡを用いて股関節部にて測定される。
【０５４９】
本明細書中で使用される場合、用語「骨粗しょう症」は、２の標準偏差またはより低い若年成人の参照平均（Ｔスコア＝−２）のＢＭＤの値によって定義されるか、あるいは介護者（例えば、ヒトの場合における医師、看護師、ナースプラクティショナー；非ヒト脊椎動物の場合における獣医師）によって行われる診断をいう。
【０５５０】
骨粗しょう症は、原発性または続発性のいずれかとして分類され得る（例えば、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  ９２１（２００３）、Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓを参照のこと）。本明細書中で使用される場合、用語「骨粗しょう症」は、原発性骨粗しょう症および続発性骨粗しょう症を包含する。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、原発性骨粗しょう症である。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、続発性骨粗しょう症である。
【０５５１】
本明細書中で使用される場合、「原発性骨粗しょう症」は、閉経（自然閉経、早発閉経、または外科的閉経）、加齢、またはその両方に関連する。閉経（自然閉経、早発閉経、または外科的閉経）に関連する原発性骨粗しょう症、加齢に関連する原発性骨粗しょう症、ならびに閉経および加齢に関連する原発性骨粗しょう症は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５５２】
本明細書中で使用される場合、「続発性骨粗しょう症」は、閉経または加齢に関連しないが、むしろ医学的状態あるいは薬物適用または薬物の使用に関連する骨粗しょう症をいう。骨粗しょう症の増大した危険性は、医学的状態（内分泌障害および代謝障害、ならびに悪性疾患が挙げられるが、これらに限定されない）の宿主に関連し、そしてその増大した危険性は、特定の薬物適用および薬物の使用（それらの例は、当業者に周知である（例えば、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  ９２１（２００３）、Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、第１０版；それらの開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に関連する。続発性骨粗しょう症はまた、運動抑止（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）に関連し得る。医学的状態、薬物適用または薬物の使用、あるいは運動抑止に続発する骨粗しょう症の診断は、介護者（例えば、ヒトの場合における医師、看護師、ナースプラクティショナー；非ヒト脊椎動物の場合における獣医師）によって行われ得る。
【０５５３】
「骨折」によって、骨の完全または不完全な、破壊、断裂または亀裂が、意図される。骨折の診断は、通常、臨床検査および放射線学的知見に依存する。本発明において、骨折としては、外傷性の骨折、長期の骨折、および病理学的な骨折が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５５４】
本明細書中で使用される場合、「外傷性の骨折」は、骨の自然な弾性を上回る程度の局所的な暴力（ｖｉｏｌｅｎｃｅ）による閾値上の外傷を伴う即時の骨折をいう。その骨折は、軟部組織に対する同時の損傷、そして頻繁に、皮膚に対する同時の損傷によって達成され得る。外傷性の骨折は、閉鎖され得る（隣接する軟部組織は、損傷を受け得るが、被覆する軟部は、広く保存される）。外傷性の骨折は、開放され得る（骨折端は、広範囲な軟部組織の損傷によって供給されて、外部からの病原体が、創傷に直接進入し得る）。
【０５５５】
本明細書中で使用される場合、「長期の骨折」は、慢性骨折（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｆｒａｃｔｕｒｅ）、疲労骨折、ストレス骨折または特発性骨折Ｉ型をいう。
【０５５６】
本明細書中で使用される場合、「病理学的な骨折」は、特発性骨折ＩＩ型をいう。病理学的な骨折は、骨折を担うのに十分な外傷を伴わずに自然発生的に発生する。その骨は、全身性疾患（例えば、骨粗しょう症、骨形成異常、またはパジェット変形性骨炎）または局所骨病変（例えば、転移、放射線性骨壊死、または骨腫瘍）のいずれかによって先に損傷を受けていた可能性がある。Ａｄｌｅｒ、Ｃｌａｕｓ−Ｐｅｔｅｒ、ＢＯＮＥ  ＤＩＳＥＡＳＥＳ、ｐ．１１４（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ  ２０００）を参照のこと。
【０５５７】
骨折としてはまた、斜方捻転骨折（ｏｂｌｉｑｕｅ  ｔｏｒｓｉｏｎ  ｆｒａｃｔｕｒｅ）、横骨折、粉砕骨折、圧迫骨折、肋骨骨折、クリーピング骨折（ｃｒｅｅｐｉｎｇ  ｆｒａｃｔｕｒｅ）、および大腿骨頚部骨折（Ａｄｌｅｒ、Ｃｌａｕｓ−Ｐｅｔｅｒ、ＢＯＮＥ  ＤＩＳＥＡＳＥＳ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ（２０００））が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５５８】
本明細書中で使用される場合、「骨に関連する状態」は、本発明による処置からの利益、骨量または骨成長を増大させることによる利益、あるいは骨量の損失を減少させることによる利益を得る状態をいい、そしてその状態としては、低い骨量によって特徴付けられる状態、骨折、骨疾患、および骨治癒または骨成長を増強することが挙げられるが、これらに限定されない。本発明によって処置され得る骨に関連する状態は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５５９】
本明細書中で使用される場合、用語「低い骨量によって特徴付けられる状態」としては、オステオペニア、骨粗しょう症、関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、歯槽骨損失、骨切り術による骨損失、小児期の特発性骨損失、脊椎の弯曲および身長の減少が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、原発性骨粗しょう症である。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、続発性骨粗しょう症である。特定の実施形態において、続発性骨粗しょう症は、医学的状態に関連する。特定の実施形態において、続発性骨粗しょう症は、薬物適用または薬物の使用に関連する。特定の実施形態において、続発性骨粗しょう症は、運動抑止に関連する。低い骨量によって特徴付けられる状態としてはまた、パジェット病、転移性癌に起因する骨損失、および骨溶解性病変（例えば、腫瘍性疾患、放射線療法、または化学療法によって引き起こされるもの）が挙げられるが、これらに限定されない。低い骨量によって特徴付けられる状態としてはまた、骨粗しょう症の長期合併症（例えば、脊椎の弯曲、身長の減少および補綴手術）が挙げられるが、これらに限定されない。低い骨量によって特徴付けられる状態は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが理解される（例えば、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  ９２１（２００３）、Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｌａｒｓｅｎら編（２００２）、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ；ならびにＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、第４版、Ｆｅｌｉｇら編（２００１）、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ；それらの各々の開示は、その全体が本明細書中に参考として援用されるを参照のこと）。
【０５６０】
本明細書中で使用される場合、「骨疾患」は、骨の異常に関連する障害または状態をいう。本発明によって処置され得るか、骨量または骨成長を増大させることによって処置され得るか、あるいは骨量の損失を減少させることによって処置され得る骨疾患としては、オステオペニア、骨粗しょう症、関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、歯槽骨損失、骨切り術による骨損失、小児期の特発性骨損失、脊椎の弯曲、および身長の減少が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、原発性骨粗しょう症である。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、続発性骨粗しょう症である。特定の実施形態において、続発性骨粗しょう症は、医学的状態に関連する。特定の実施形態において、続発性骨粗しょう症は、薬物適用または薬物の使用に関連する。特定の実施形態において、続発性骨粗しょう症は、運動抑止に関連する。本発明によって処置され得るか、骨量または骨成長を増大させることによって処置され得る骨疾患としてはまた、パジェット病、および転移性癌に起因する骨損失が挙げられるが、これらに限定されない。本発明によってかによって処置され得るか、骨量または骨成長を増大させることによって処置され得る破壊性骨障害としては、骨粗しょう症、変形性関節症、および骨溶解性病変（腫瘍性疾患、放射線療法、または化学療法によって引き起こされるもの）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明によってかによって処置され得るか、骨量または骨成長を増大させることによって処置され得る骨疾患は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される（例えば、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  ９２１（２００３）、Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｌａｒｓｅｎら編（２００２）、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ；ならびにＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、第４版、Ｆｅｌｉｇら編（２００１）、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ；それらの各々の開示は、その全体が本明細書中に参考として援用されるを参照のこと）。
【０５６１】
本発明はまた、本発明による処置からの利益、骨量または骨成長を増大させることによる利益、あるいは骨量の損失を減少させることによる利益を得る他の状態に関連し、その状態としては、顔面の再建、上顎の再建、下顎の再建、歯周疾患または抜歯後の増強された骨治癒、増強された長骨伸長、増強された補綴内殖および増大された骨癒合が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５６２】
本明細書中で使用される場合、「代謝障害」は、代謝の異常に関連する障害をいう。本発明によって処置され得る代謝障害としては、体重超過、肥満症、過食症、糖尿病（１型糖尿病および２型糖尿病を含む）、２型糖尿病、グルコース寛容減損、インスリン抵抗性、高インスリン血症、脂質異常症、高血圧症およびメタボリックシンドロームが挙げられるが、これらに限定されない。本発明によって処置され得る代謝障害は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５６３】
本明細書中で定義される場合、用語「メタボリックシンドローム」は、Ａｄｕｌｔ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｐａｎｅｌ  ＩＩＩ（ＡＴＰ  ＩＩＩ；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ：Ｔｈｉｒｄ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｇｒａｍ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｐａｎｅｌ  ｏｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｉｇｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓ（Ａｄｕｌｔ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｐａｎｅｌ  ＩＩＩ），Ｅｘｅｃｕｔｉｖｅ  Ｓｕｍｍａｒｙ；Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２００１（ＮＩＨ  ｐｕｂ．Ｎｏ  ０１−３６７０）によれば、肥満症、高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール、高血圧、および空腹時高血糖に関連する５つの基準のうちの３つまたはそれ以上を満たす場合に起こる。
【０５６４】
本明細書中で使用される場合、用語「肥満症」は、ＷＨＯの体重分類によって３０．０またはそれを超えるボディマス指数（ＢＭＩ）と定義される（Ｋｏｐｅｌｍａｎ，Ｎａｔｕｒｅ（２０００）４０４：６３５−６４３（その開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される））。
【０５６５】
本明細書中で使用される場合、「グルコール寛容減損」（ＩＧＴ）は、明白な２型糖尿病と正常耐糖能（ＮＧＴ）との間の中間であるインスリン抵抗性を伴う状態を示すことが意図される。ＩＧＴは、罹患したヒトの食後グルコース応答が食後２時間の血漿グルコースレベルによって評価される場合に異常であると決定される手順によって診断される。この試験において、グルコースの測定された量は、患者に与えられ、そして血液グルコースレベルは、規則的な間隔（通常は、最初の２時間にわたっては３０分毎、そしてその後は１時間毎）で測定される。「正常」または非ＩＧＴの個体において、グルコースレベルは、最初の２時間の間に１４０ｍｇ／ｄｌ未満のレベルまで上昇し、次いで迅速に低下する。ＩＧＴの個体において、血液グルコースレベルは、より高く、そして減少レベルは、より緩徐な速度である。
【０５６６】
本明細書中で使用される場合、「インスリン抵抗性」は、任意の多くの方法によって行われるインスリン抵抗性の通常の診断を包含することが意図され、その方法としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：静脈内グルコース負荷試験または空腹時インスリンレベルの測定。空腹時インスリンレベルの高さとインスリン抵抗性の程度との間に優れた相関が存在することは、周知である。したがって、正常耐糖能（ＮＧＴ）の個体がインスリン抵抗性を有することを同定する目的のために、インスリン抵抗性についての代用マーカーとして高い空腹時インスリンレベルを使用し得る。インスリン抵抗性の診断はまた、正常血糖グルコースクランプ試験（ｅｕｇｌｙｃｅｍｉｃ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｃｌａｍｐ  ｔｅｓｔ）を使用して行われ得る。
【０５６７】
「脂質異常症」は、高いレベルの血漿遊離脂肪酸、高いレベルの血漿コレステロール、高いレベルのＬＤＬコレステロール、減少したレベルのＨＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロールに対する総コレステロールの高い比率、および高いレベルの血漿トリグリセリドのいずれか１つを含む障害を包含することが、本明細書中で意図される。
【０５６８】
本明細書中で使用される場合、「新脈管形成に関連する状態」は、増大された新脈管形成からの利益を得る状態をいう。本発明によって、新脈管形成を増大させることによって処置され得る新脈管形成に関連する状態としては、末梢動脈疾患、創傷治癒、および虚血が挙げられるが、これらに限定されない。本発明によって処置され得る新脈管形成に関連する状態は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５６９】
本明細書中で使用される場合、「虚血」は、組織の酸素枯渇または酸素機能不全の状態をいう。
【０５７０】
本明細書中で使用される場合、「虚血に関連する状態」は、虚血に関連する状態をいう。本発明によって処置され得る虚血に関連する状態としては、脳虚血、脳卒中、虚血性心疾患、心筋梗塞、虚血−再灌流傷害、心筋梗塞後のリモデリング、心不全、およびうっ血性心不全が挙げられるが、これらに限定されない。本発明によって処置され得る虚血に関連する状態は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５７１】
「脳卒中」は、脳に血液を供給する血管に影響を及ぼす心臓血管疾患であり、そして脳血栓症（脳卒中も最も一般的な型）を含むことが意図される。脳血栓症は、血餅（血栓）が形成され、そしてその血餅が血液を脳の部分にもたらす動脈において血流をブロックする場合に起こる。血餅は、通常、アテローム硬化症によって損傷を受けた動脈において形成する。
【０５７２】
本明細書中で使用される場合、「虚血性心疾患」は、心臓の組織に対する酸素の欠如によって引き起こされる障害をいい、この障害において、心臓の筋肉が、影響を受け、そして心臓が、適切にポンピングできない。虚血性心疾患は、米国における最も一般的な心筋症である。
【０５７３】
ここで使用される場合、「心筋梗塞」は、心筋梗塞である心臓の筋肉の領域への酸素の不適当な供給に起因する心臓の筋肉の領域の損傷または死をいう。心筋梗塞は、しばしば、冠動脈（心臓の筋肉に酸素をもたらす血管）の１つをブロックする血餅によって引き起こされる。その血餅は、心臓のその領域に血液および酸素が到達すること妨げ、その領域における心臓細胞の死をもたらす。
【０５７４】
心筋梗塞に起因する心筋組織の損失は、心室に課せられる持続性の過剰な血流力学的な負荷をもたらす。心室肥大は、心臓が増大した負荷を代償する原理機構の１つに寄与する。しかし、血流力学的な過負荷に直面して心臓の機能を持続するこの適応についての能力は、有限であり、そして慢性的に維持された場合、不適応になる。次第に、適応可能な肥大性の表現型は、肥大した心室が進行性に拡張し、そして収縮機能が弱くなるような明確な心不全に移行する。心臓における適応応答および不適応応答の心筋梗塞への自然経過は、「心筋梗塞後のリモデリング」と称される。
【０５７５】
「うっ血性心不全」は、心臓が効率的に血液をポンピングするその能力を失う障害をいう。うっ血性心不全は、加齢と共により優勢になる。虚血性心疾患は、全ての症例の６０〜７０％を占めるうっ血性心不全の最も一般的な原因である。２５秒間よりも大きい循環時間と等価である心拍出量の減少であるような１２ｍｍＨｇよりも大きい増大した静脈圧は、うっ血性心不全についての主要なＦｒａｍｉｎｇｈａｍ診断基準の１つである。
【０５７６】
本明細書中で使用される場合、「吸収不良障害」は、腸管上皮における分泌および／または吸収の異常に関連する障害をいう。本発明によって処置され得る吸収不良障害としては、短腸症候群、全腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、コレラおよび下痢を伴う障害が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中で使用される場合、「下痢を伴う障害」は、それが下痢を伴う疾患または症状であり、そしてそれが急性疾患であるか慢性疾患を問題としない限り、特に限定されない。このような疾患または症状の例としては、下痢（寄生虫、細菌、ウイルス、物理刺激、消化不良、精神障害、胃腸炎またはアレルギーなどによって引き起こされる）、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎などが挙げられる。それぞれの下痢を伴う障害は本発明の範囲内の別個の実施形態であることが、明確に企図される。本発明によって処置され得る吸収不良障害は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５７７】
本明細書中で使用される場合、「痙攣性障害」は、被験体が痙攣（例えば、癲癇発作に起因する痙攣）に罹患する個体の障害をいう。本発明によって処置され得る痙攣性障害としては、癲癇発作および非癲癇発作（例えば、痙攣剤の個体への投与に起因する痙攣）が挙げられる。本発明によって処置され得る痙攣性障害は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５７８】
本明細書中で使用される場合、「癌」は、悪性新生物をいう。本発明によって処置され得る癌としては、膵臓癌、乳癌、結腸癌、およびバレット腺癌が挙げられるが、これらに限定されない。本発明によって処置され得る癌は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５７９】
本明細書中で使用される場合、「炎症性障害」は、炎症の異常に関連する障害をいう。本発明によって処置され得る炎症性障害としては、アテローム硬化症、アテローム血栓症、インスリン抵抗性、膵炎、再狭窄、炎症性肺疾患、および炎症性腸疾患が挙げられるが、これらに限定されない。本発明によって処置され得る炎症性障害は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５８０】
本明細書中で使用される場合、「アテローム血栓症」は、アテローム硬化性の血管における血栓形成をいう。
【０５８１】
本明細書中で使用される場合、「炎症性肺疾患」は、肺における炎症の異常に関連する状態をいう。本発明によって処置され得る炎症性肺疾患としては、喘息、気腫および肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＡＨは、右室肥大をもたらす進行性の肺脈管障害によって特徴付けられる生命を危うくする疾患である；未処置のまま放置した場合、右心不全が生じる。ＰＡＨは、肺動脈性肺高血圧症の２００３  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）臨床分類に記載される肺動脈性肺高血圧症の以下の形態を包含することが理解される：特発性ＰＡＨ、家族性ＰＡＨ、他の状態に関連するＰＡＨ、および顕著な静脈または毛細管の合併症（ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）に関連するＰＡＨ。本発明によって処置され得る炎症性肺疾患は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５８２】
本明細書中で使用される場合、「炎症性腸疾患」は、腸における炎症の異常に関連する状態をいう。本発明によって処置され得る炎症性腸疾患としては、全腸炎であり得るようなクローン病、全腸炎、クローン病、肉芽腫性大腸炎、回腸炎またはクローン大腸炎ならびに潰瘍性大腸炎、Ｓ字結腸炎、全大腸炎および潰瘍性直腸炎であり得るような潰瘍性大腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。本発明によって処置され得る炎症性腸疾患は、本発明において、個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。
【０５８３】
本明細書中で使用される場合、用語「アテローム硬化症」は、大動脈および中動脈の壁の最も内側の層におけるコレステロールおよび脂質を含むアテローム斑の沈着によって特徴付けられる血管疾患の形態をいう。
【０５８４】
「アルツハイマー病」は、１つより多くの認知領域の機能の著しい損失によって特徴付けられ、そしてしばしば行動または人格の変化を伴う進行性の神経変性疾患である。アルツハイマー病は、認知症の最も一般的な原因である。β−アミロイドペプチド（Ａβ）は、アルツハイマー病の病理において中心的な役割を果たすと考えられる。
【０５８５】
「軽度認知障害」（ＭＣＩ）は、記憶のみの場合が最も多く、職業的機能または社会的機能に著しい影響を与えるほど重篤ではない認知障害の状態である。しかし、ＭＣＩを有する多くの者は、１年あたり１０〜１５％、そして５年以内に６０％までの割合でアルツハイマー病へと進行する。増加する証拠は、アルツハイマー病の病理がアルツハイマーの判断基準の診断を可能にするほど重篤な症状の発症よりもずっと早期に始まることを示す。２００１年において、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（ＡＡＮ）は、ＭＣＩおよび軽度のアルツハイマー病の両方の認識、診断、および処置を増大させるＭＣＩの検出のための臨床診療パラメータを公開した。
【０５８６】
本明細書中で使用される場合、「プリオンに関連する疾患」は、ウシ海綿状脳症、クロイツフェルト−ヤーコプ病、クールー、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー症候群、および致死性家族性不眠症（Ｃｏｌｌｉｎｓら、Ｌａｎｃｅｔ（２００４）３６３：５１−６１）が挙げられるが、これらに限定されないことが意図される。
【０５８７】
本明細書中で使用される場合、「興奮毒性損傷（ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃ  ｉｎｊｕｒｙ）」は、物質誘導性の発作性過活動（ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ  ｏｖｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ）（例えば、グルタミン酸誘導性の発作性活動（ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ））から引き起こされる神経細胞損傷または神経細胞死をいう。
【０５８８】
「パーキンソン病」は、運動症状によって特徴付けられる慢性の、進行性の神経変性障害（例えば、振戦、運動緩徐、筋硬直、歩行機能障害、および姿勢の不安定）である。研究者は、黒質におけるドーパミン作動性神経の変性をパーキンソン病の主要な病態生理学的機構として同定した。
【０５８９】
「アディポネクチン」は、脂肪細胞によって分泌される血漿タンパク質であり、そしてアディポネクチンは、Ｎ末端に配置されたコラーゲン様領域およびＣ末端の球状領域から構成される。減少したレベルのアディポネクチンは、多くの代謝関連障害に関連し、その代謝関連障害としては、アテローム硬化症、冠動脈心疾患、脳卒中、インスリン抵抗性および２型糖尿病が挙げられる。女性の血清アディポネクチンレベルは、男性の血清アディポネクチンレベルよりも高いことが報告されている（例えば、１つの研究において１３．５μｇ／ｍｌ対７．２μｇ／ｍｌ（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ（Ｌｏｎｄｏｎ）（２００２）１０３：１３７−１４２））。
【０５９０】
用語「内因性」は、個体（例えば、ヒトであるが、これに限定されない）が天然に産生する物質を意味する。対照的に、「非内因性」は、個体（例えば、ヒトであるが、これに限定されない）によって天然に産生されない物質を意味する。
【０５９１】
Ｇタンパク質共役レセプターの用語「生物学的に活性なフラグメント」は、天然に存在するＧＰＣＲの構造的機能および生物化学的機能を有するＧＰＣＲのフラグメントを意味する。特定の実施形態において、上記生物学的に活性なフラグメントは、Ｇタンパク質に結合する。特定の実施形態において、上記生物学的に活性なフラグメントは、上記ＧＰＣＲの公知のリガンドに結合する。
【０５９２】
用語「プライマー」は、本明細書中で、標的ヌクレオチド配列に相補的であり、標的ヌクレオチド配列とハイブリダイズするために使用される特異的オリゴヌクレオチド配列を示すために使用される。プライマーは、ＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ、または逆転写酵素によって触媒されるヌクレオチド重合の開始点として機能する。
【０５９３】
用語「発現ベクター」は、発現ベクターのための組換えに適切な宿主細胞中でクローニングされたＤＮＡの転写および転写されたｍＲＮＡの翻訳に必要なＤＮＡ配列を意味する。適切に構築された発現ベクターは、宿主細胞中での自律複製のための複製起点、選択可能なマーカー、少数の有用な制限酵素部位、高コピー数を得る能力（ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）、および活性プロモーターを含むべきである。転写されるべきクローニングされたＤＮＡは、発現ベクター内で構成性または条件付きで活性なプロモーターに作動可能に連結される。
【０５９４】
用語「宿主細胞」は、その中に組み込まれたベクターを有し得る細胞を意味する。本文脈において、上記ベクターは、代表的に、上記ＧＰＣＲまたはＧＰＣＲ融合タンパク質の発現を起こさせるために適切なプロモーター配列と作動可能に連結したＧＰＣＲまたはＧＰＣＲ融合タンパク質をコードする核酸を含む。特定の実施形態において、上記宿主細胞は、真核生物宿主細胞である。特定の実施形態において、上記真核生物宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞である。特定の実施形態において、上記真核生物宿主細胞は、酵母宿主細胞である。特定の実施形態において、上記真核生物宿主細胞は、黒色素胞宿主細胞である。
【０５９５】
用語「接触させる」または「接触させること」は、少なくとも２つの部分を一緒にさせることを意味する。
【０５９６】
用語「モジュレートする」または「改変する」は、特定の活性、機能、または分子の量、質、または効果の増減をいうと解釈されるか、あるいは状態に関する場合、その状態の状況の変化をいうと解釈される。例として、Ｇタンパク質共役レセプターのアゴニスト、部分アゴニスト、インバースアゴニスト、およびアンタゴニスト（これらに限定されない）は、そのレセプターのモジュレーターである。
【０５９７】
用語「低分子」は、１モルあたり約１０，０００グラム未満の分子量を有する化合物（ペプチド、ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）、アミノ酸、アミノ酸アナログ、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドアナログ、ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、有機化合物または無機化合物（すなわち、ヘテロオーガニック（ｈｅｔｅｒｏｒｇａｎｉｃ）化合物または有機金属化合物）、ならびにその塩、エステル、および他の薬学的に受容可能な形態が含まれる）を意味すると解釈される。特定の実施形態において、低分子は、１モルあたり約５，０００グラム未満の分子量を有する有機化合物または無機化合物である。特定の実施形態において、低分子は、１モルあたり約１，０００グラム未満の分子量を有する有機化合物または無機化合物である。特定の実施形態において、低分子は、１モルあたり約８００グラム未満の分子量を有する有機化合物または無機化合物である。特定の実施形態において、低分子は、１モルあたり約６００グラム未満の分子量を有する有機化合物または無機化合物である。特定の実施形態において、低分子は、１モルあたり約５００グラム未満の分子量を有する有機化合物または無機化合物である。
【０５９８】
本明細書中で使用されるアミノ酸の略語は、表Ｂに示される：
【０５９９】
【表２】
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用語「ポリペプチド」は、ポリマーの長さに無関係のアミノ酸のポリマーをいう。したがって、ペプチド、オリゴペプチド、およびタンパク質は、ポリペプチドの定義内に含まれる。この用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾を特定も排除もしない。例えば、グリコシル基、アセチル基、リン酸基、および脂質基などの共有結合を含むポリペプチドは、用語「ポリペプチド」に明確に含まれる。
【０６００】
用語「ポリヌクレオチド」は、一本鎖または二重鎖のいずれかの形態の１つを超えるヌクレオチドのＲＮＡ、ＤＮＡ、またはＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッド配列をいう。本発明のポリヌクレオチドは、任意の公知の方法（合成、組換え、エキソビボ生成、またはその組み合わせ、ならびに当該分野で公知の任意の精製方法の使用が含まれる）によって調製され得る。
【０６０１】
用語「抗体」は、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含むことが本明細書中で意図される。
【０６０２】
用語「第２メッセンジャー」は、レセプター活性化の結果としてもたらされる細胞内応答を意味する。第２メッセンジャーとしては、例えば、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、サイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣａ２＋が挙げられ得る。第２メッセンジャー応答は、レセプター活性化の決定のために測定され得る。
【０６０３】
用語「レセプター機能性」は、細胞中での刺激を受けて効果をモジュレートするためのレセプターの通常の作用をいい、それらの作用としては、遺伝子転写の調節、イオンの流入または流出の調節、触媒反応の実施、および／またはＧタンパク質を介した活性のモジュレート（第２メッセンジャー応答の誘発など）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０６０４】
用語「応答」または「レセプターの機能性」に関する用語「刺激する」または「刺激すること」は、化合物の非存在下とは対照的に化合物の存在下で応答またはレセプターの機能性が増加することを意味する。
【０６０５】
用語「応答」または「レセプターの機能性」に関する用語「阻害する」または「阻害すること」は、化合物の非存在下とは対照的に化合物の存在下で応答またはレセプターの機能性が減少または妨げられることを意味する。
【０６０６】
用語「化合物の効力」は、レセプター結合親和性とは対照的に、レセプター機能性を阻害または刺激する化合物の能力の尺度を意味する。
【０６０７】
本明細書中で「候補化合物」と交換可能に使用される用語「試験化合物」は、スクリーニング技術に従う分子（例えば、化学物質（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）であるが、これに限定されない）を意味する。
【０６０８】
Ｇタンパク質共役レセプターに関する用語「構成的に活性な」は、Ｇタンパク質共役レセプターがアゴニスト非依存性の活性を示すことを意味する。
【０６０９】
語句「試験化合物」に関する用語「直接的に同定すること」または「直接的に同定される」は、Ｇタンパク質共役レセプターに対する公知のリガンド（例えば、公知のアゴニスト）の非存在下におけるそのＧタンパク質共役レセプターに対する化合物のスクリーニングを意味する。
【０６１０】
一定範囲の値が与えられる場合、その範囲の上限と下限との間のそれぞれの介在する値（ｉｎｔｅｒｖｅｎｉｎｇ  ｖａｌｕｅ）（他で明確に示さない限り、下限の１／１０まで）および記載の範囲の任意の他で記載した値またはその介在する値が本発明の範囲内に含まれると理解される。これらのより狭い範囲の上限および下限は、独立して、より狭い範囲内に含めることができ、記載の範囲の任意の特に排除された限度を条件として、これらも本発明の範囲内に含まれる。記載の範囲が一方または両方の限度を含む場合、限度を含む範囲のいずれかまたは両方を排除した範囲も本発明に含まれる。
【０６１１】
（Ａ．導入）
以下のセクションの順序は、提示上の効果のために示されており、以下の開示または特許請求の範囲の限定として意図されてはおらず、解釈もされるべきでない。
【０６１２】
（Ｂ．レセプター発現）
（１．目的のＧＰＣＲポリペプチド）
本発明のＧＰＣＲは、
（ａ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｃ）（ａ）に規定されたアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって（ａ）から得られるポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；
（ｄ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；
（ｅ）（ｉ）配列番号２と少なくとも約８０％の同一性を有するＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；および（ｉｉ）配列番号２の少なくとも２０個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターのアミノ酸配列；からなる群より選択される、配列番号２の改変体；
（ｆ）配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；ならびに
（ｇ）（ａ）〜（ｆ）のいずれか１つのうちのいずれか１つの生物学的に活性なフラグメント；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み得る。
【０６１３】
特定の実施形態において、本発明のＧＰＣＲは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは、配列番号２の対立遺伝子である。いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは、配列番号２のオルソログである。
【０６１４】
いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは、組換え体である。いくつかの実施形態において、上記組換えＧＰＣＲは、組換えヒトＧＰＲ１１９である。
【０６１５】
特定の実施形態において、本方法において使用され得るＧＰＣＲは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。
【０６１６】
いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは、内因性である。いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは、哺乳動物ＧＰＲ１１９である。いくつかの実施形態において、内因性である本発明のＧＰＣＲは、哺乳動物ＧＰＲ１１９である。
【０６１７】
例として、Ｎ末端メチオニン残基の欠失（これに限定されない）は、本発明において使用され得る生物学的に活性なフラグメントを提供することが想定される。特定の実施形態において、本発明の生物学的に活性なフラグメントは、そのフラグメントのＮ末端にて、Ｎ末端メチオニン残基とＨＡエピトープタグ（インフルエンザウイルスの赤血球凝集素由来）とを含むペプチドに必要に応じて融合されたフラグメントであり、そのフラグメントは、化合物１に特異的に結合する。特定の実施形態において、本発明の生物学的に活性なフラグメントは、そのフラグメントのＮ末端にて、Ｎ末端メチオニン残基とＨＡエピトープタグ（インフルエンザウイルスの赤血球凝集素由来）とを含むペプチドに必要に応じて融合されたフラグメントであり、そのフラグメントは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、本発明の生物学的に活性なフラグメントは、そのフラグメントのＮ末端にて、Ｎ末端メチオニン残基とＨＡエピトープタグとを含むペプチドに必要に応じて融合されたフラグメントであり、そのフラグメントは、実施例１５、後述に従うレセプター結合アッセイにおいて約５０μＭ未満、約２５μＭ未満、約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約５０ｎＭ未満のＩＣ５０値で、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、本発明の生物学的に活性なフラグメントは、そのフラグメントのＮ末端にて、Ｎ末端メチオニン残基とＨＡエピトープタグとを含むペプチドに必要に応じて融合されたフラグメントであり、そのフラグメントは、実施例１５、後述に従うレセプター結合アッセイにおいて約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約５０ｎＭ未満のＩＣ５０値で、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、本発明の生物学的に活性なフラグメントは、そのフラグメントのＮ末端にて、Ｎ末端メチオニン残基とＨＡエピトープタグとを含むペプチドに必要に応じて融合されたフラグメントであり、そのフラグメントに関して、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンは、実施例１０に従う全細胞アデニリルシクラーゼアッセイまたは実施例１１、後述に従うＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいてそのＮ末端でそのペプチドに必要に応じて融合されたフラグメントにて、約５μＭ未満、約１μ���未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有するアゴニストである。特定の実施形態において、本発明の生物学的に活性なフラグメントは、そのフラグメントのＮ末端にて、Ｎ末端メチオニン残基とＨＡエピトープタグとを含むペプチドに必要に応じて融合されたフラグメントであり、そのフラグメントに関して、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンは、実施例１０に従う全細胞アデニリルシクラーゼアッセイまたは実施例１１、後述に従うＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいてそのＮ末端でそのペプチドに必要に応じて融合されたフラグメントにて、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有するアゴニストである。いくつかの実施形態において、本発明の生物学的に活性なフラグメントは、そのフラグメントのＮ末端にて、Ｎ末端メチオニン残基とＨＡエピトープタグとを含むペプチドに必要に応じて融合されたフラグメントであり、そのフラグメントは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。特定の実施形態において、上記フラグメントは、そのＮ末端にて、本質的にＮ末端メチオニン残基およびＨＡエピトープタグからなるペプチドに融合されている。Ｎ末端メチオニン残基とＨＡエピトープタグとを含むか、または本質的にＮ末端メチオニン残基およびＨＡエピトープタグからなるペプチドを、ポリペプチドフラグメントのＮ末端に融合するための技術は、当該分野において周知であり、その技術は、商業的に得ることができる（例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）。
【０６１８】
配列番号２のヒトＧＰＲ１１９の対立遺伝子改変体は、本発明の範囲内であることが想定される。ヒトＧＰＲ１１９は、本発明の範囲内であることが想定される。
【０６１９】
配列番号２のヒトＧＰＲ１１９の脊椎動物オルソログである改変体は、本発明の範囲内であることが想定される。配列番号２のヒトＧＰＲ１１９の哺乳動物オルソログである改変体は、本発明の範囲内であることが想定される。例として、マウスＧＰＲ１１９（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号ＡＹ２８８４２３）、ラットＧＰＲ１１９（ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号ＡＡＮ９５１９５）、ハムスターＧＰＲ１１９、イヌＧＰＲ１１９、および非ヒト霊長類ＧＰＲ１１９（これらに限定されない）は、本発明の範囲内であることが想定される。
【０６２０】
特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、ＧＰＣＲである。
【０６２１】
配列番号２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有する配列番号２の改変体は、本発明の範囲内であることが想定される。特定の実施形態において、配列番号２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有する配列番号２の改変体は、ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、配列番号２の改変体は、内因性ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、配列番号２の改変体は、非内因性ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、内因性ＧＰＣＲである配列番号２の改変体は、哺乳動物ＧＰＣＲである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、化合物１に特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、実施例１５、後述に従うレセプター結合アッセイにおいて約５０μＭ未満、約２５μＭ未満、約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ、または約５０ｎＭ未満のＩＣ５０値で、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、実施例１５、後述に従うレセプター結合アッセイにおいて約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約５０ｎＭ未満のＩＣ５０値で、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターであり、そのアゴニストは、実施例１０に従う全細胞アデニリルシクラーゼアッセイまたは実施例１１、後述に従うＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいて、そのレセプターにて、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニ���ロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターであり、そのアゴニストは、実施例１０に従う全細胞アデニリルシクラーゼアッセイまたは実施例１１、後述に従うＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいて、そのレセプターにて、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。いくつかの実施形態において、配列番号２の改変体は、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。％同一性は、公知のコンピュータプログラムを使用して慣習的に決定され得る。
【０６２２】
特定の実施形態において、本方法において使用され得る改変体ＧＰＣＲは、配列番号２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。例えば、配列番号２と９５％の「同一性」を有する改変体ＧＰＣＲによって、上記改変体のアミノ酸配列は、それが配列番号２の１００個のアミノ酸あたり５個までのアミノ酸変化を含み得ることを除いて配列番号２のアミノ酸１〜３３５と同一であることが意味される。したがって、例えば、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を得るために、その配列中のアミノ酸残基のうちの５％（１００個のうちの５個）までが、配列番号２のアミノ酸１〜３３５と比較して、挿入され得るか、欠失し得るか、または別のアミノ酸によって置換され得る。これらの変化は、アミノ末端またはカルボキシ末端、あるいはそれらの末端位置の間の任意の位置において起こり得、それらの変化は、配列中の残基の間または配列内の１つ以上の隣接するグループ中のいずれかに意図的（ｓｕｂｊｅｃｔｌｙ）に散在する。
【０６２３】
特定の実施形態において、本方法において使用され得る改変体Ｇタンパク質共役レセプターは、１個または数個のアミノ酸の欠失、置換、および／または付加によって配列番号２から得られるアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、本方法において使用され得る改変体Ｇタンパク質共役レセプターは、配列番号２のアミノ酸配列における１０個以下の保存的アミノ酸置換および／または３個以下の非保存的アミノ酸置換によって配列番号２から得られるアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、アルギニン、リジンおよびヒスチジンは、互いを保存的に置換でき；グルタミン酸およびアスパラギン酸は、互いを保存的に置換でき；グルタミンおよびアスパラギンは、互いを保存的に置換でき；ロイシン、イソロイシンおよびバリンは、互いを保存的に置換でき；フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは、互いを保存的に置換でき；そしてグリシン、アラニン、セリン、トレオニンおよびメチオニンは、互いを保存的に置換できる。上記アミノ酸置換、アミノ酸欠失、およびアミノ酸付加は、任意の位置（例えば、Ｃ末端またはＮ末端、または内部位置）におけるものであり得る。いくつかの実施形態において、上記改変体は、内因性Ｇタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、上記改変体は、内因性脊椎動物Ｇタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、上記改変体は、内因性哺乳動物Ｇタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、上記改変体は、内因性ヒトＧタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、上記改変体は、非内因性Ｇタンパク質共役レセプターである。いくつかの実施形態において、上記改変体は、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。特定の実施形態において、配列番号２に由来するアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役レセプターは、化合物１がリガンドであるＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、配列番号２に由来するアミノ酸配列を有する上記Ｇタンパク質共役レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがリガンドであるＧタンパク質共役レセプターであり、そのリガンドは、実施例１５、後述に従うレセプター結合アッセイにおいて約５０μＭ未満、約２５μＭ未満、約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約５０ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。特定の実施形態において、配列番号２に由来するアミノ酸配列を有する上記Ｇタンパク質共役レセプターは、化合物１がアゴニストであるＧタンパク質共役レセプターである。特定の実施形態において、配列番号２に由来するアミノ酸配列を有する上記Ｇタンパク質共��レセプターは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるＧタンパク質共役レセプターであり、そのアンタゴニストは、実施例１０に従う全細胞アデニリルシクラーゼアッセイまたは実施例１１、後述に従うＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいて約５μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。
【０６２４】
配列番号２の少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも７５個、または少なくとも１００個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターである配列番号２の改変体は、本発明の範囲内であることが想定される。特定の実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも７５個、または少なくとも１００個の隣接したアミノ酸を含む配列番号２の改変体は、ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、配列番号２の改変体は、内因性ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、配列番号２の改変体は、非内因性ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、内因性ＧＰＣＲである配列番号２の改変体は、哺乳動物ＧＰＣＲである。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、化合物１に特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、実施例１５、後述に従うレセプター結合アッセイにおいて約５０μＭ未満、約２５μＭ未満、約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ、または約５０ｎＭ未満のＩＣ５０値で、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、実施例１５、後述に従うレセプター結合アッセイにおいて約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約５０ｎＭ未満のＩＣ５０値で、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターであり、そのアゴニストは、実施例１０に従う全細胞アデニリルシクラーゼアッセイまたは実施例１１、後述に従うＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいてそのレセプターにて、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。特定の実施形態において、配列番号２の改変体は、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストである���セプターであり、そのアゴニストは、実施例１０に従う全細胞アデニリルシクラーゼアッセイまたは実施例１１、後述に従うＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいてそのレセプターにて、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。いくつかの実施形態において、配列番号２の改変体は、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。いくつかの実施形態において、配列番号２の少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも７５個、または少なくとも１００個の隣接したアミノ酸を含むＧタンパク質共役レセプターは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０６２５】
いくつかの実施形態において、本方法において使用され得る改変体ＧＰＣＲは、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、内因性ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、非内因性ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲ、および内因性ＧＰＣＲであるＧＰＣＲは、哺乳動物内因性ＧＰＣＲである。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２またはその対立遺伝子である。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２の対立遺伝子である。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、配列番号２のオルソログである。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、化合物１に特異的に結合する。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、実施例１５、後述に従うレセプター結合アッセイにおいて約５０μＭ未満、約２５μＭ未満、約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ、または約５０ｎＭ未満のＩＣ５０値で、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、実施例１５、後述に従うレセプター結合アッセイにおいて約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約５０ｎＭ未満のＩＣ５０値で、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジ��ゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンに特異的に結合する。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターであり、そのアゴニストは、実施例１０に従う全細胞アデニリルシクラーゼアッセイまたは実施例１１、後述に従うＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいてそのレセプターにて、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。特定の実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミンがアゴニストであるレセプターであり、そのアゴニストは、実施例１０に従う全細胞アデニリルシクラーゼアッセイまたは実施例１１、後述に従うＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいてそのレセプターにて、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。いくつかの実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされているＧＰＣＲは、検出可能なレベルの構成的活性を示す。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０６２６】
ハイブリダイゼーション技術は、当業者に周知である。いくつかの実施形態において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５０％のホルムアミドと、５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）と、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）と、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液と、１０％の硫酸デキストランと、２０μｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での４２℃における一晩のインキュベーション、ならびにその後の０．１×ＳＳＣ中での６５℃におけるフィルターの洗浄を含む。いくつかの実施形態において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５０％のホルムアミドと、５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）と、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）と、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液と、１０％の硫酸デキストランと、２０μｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での４２℃における一晩のインキュベーション、ならびに０．１×ＳＳＣ／０．１％のＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）または０．２ｘＳＳＣ／０．１％のＳＤＳ中での約５０℃、約５５℃、約６０℃または約６５℃における洗浄を含む。いくつかの実施形態において、上記ストリンジェントな条件は、６５℃にて０．１×ＳＳＣを用いた洗浄を含む。いくつかの実施形態において、上記ストリンジェントな条件は、約５０℃、約５５℃、約６０℃、または約６５℃にて０．１×ＳＳＣ／０．１％のＳＤＳまたは０．２×ＳＳＣ／０．１％のＳＤＳを用いた洗浄を含む。
【０６２７】
いくつかの実施形態において、本方法において使用され得るＧＰＣＲは、配列番号２のアミノ酸配列を含む非内因性の構成的に活性化されたレセプターであり、配列番号２のアミノ酸位置２２４におけるロイシンは、ロイシン以外のアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態において、ロイシン以外のアミノ酸は、リジンである。いくつかの実施形態において、ロイシン以外のアミノ酸は、アラニンである。いくつかの実施形態において、ロイシン以外のアミノ酸は、アルギニンである。いくつかの実施形態において、ロイシン以外のアミノ酸は、ヒスチジンである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０６２８】
特定の実施形態において、本発明のＧＰＣＲは、配列番号２を有するＧタンパク質共役レセプターの構成的に活性なバージョンを含む。いくつかの実施形態において、上記レセプターの構成的に活性なバージョンは、配列番号２を有する内因性の構成的に活性なバージョンである。いくつかの実施形態において、上記レセプターの構成的に活性なバージョンは、配列番号２のアミノ酸位置２２４に位置する変異を有する非内因性の構成的に活性なバージョンである。いくつかの実施形態において、上記変異した残基は、ロイシン以外の残基に変異している。いくつかの実施形態において、上記変異した残基は、リジン残基以外の残基に変異している。いくつかの実施形態において、上記変異した残基は、アラニン残基以外の残基に変異している。いくつかの実施形態において、上記変異した残基は、アルギニン残基以外の残基に変異している。いくつかの実施形態において、上記変異した残基は、ヒスチジン残基以外の残基に変異している。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増大させることについてのものである。いくつかの実施形態において、上記構成的活性は、黒色素胞細胞に色素散乱を起こさせることについてのものである。
【０６２９】
特定の実施形態において、本発明のＧＰＣＲは、Ｇタンパク質を有する融合タンパク質の部分を形成する。
【０６３０】
（ａ．配列同一性）
特定の実施形態において、％同一性は、当該分野において周知であるＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（「ＢＬＡＳＴ」）［例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９９０）８７：２２６４−２２６８；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（１９９０）２１５：４０３−４１０；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９３）３：２６６−２７２；ならびにＡｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ（１９９７）２５：３３８９−３４０２；それらの各々の開示は、その全体が本明細書中で参考として援用されるを参照のこと］を使用して評価される。上記ＢＬＡＳＴプログラムは、初期設定のパラメータまたは使用者によって与えられた改変されたパラメータを用いて使用され得る。好ましくは、上記パラメータは、初期設定のパラメータである。
【０６３１】
特定の実施形態において、クエリ配列（例えば、配列番号２のアミノ酸配列）と検索（ｉｎｔｅｒｒｏｇａｔｅ）されるべき配列との間の最も良好に重複したマッチを決定するための好ましい方法はまた、グローバル配列アラインメントと称され、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ  Ａｐｐ  Ｂｉｏｓｃｉ（１９９０）６：２３７−２４５；それらの開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータプログラムを使用して決定され得る。配列アラインメントにおいて、クエリ配列および検索配列は、両方ともアミノ酸配列である。このグローバル配列アラインメントの結果は、％同一性である。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸アラインメントで使用される好ましいパラメータは、以下である：マトリックス＝ＰＡＭ  ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、ミスマッチペナルティ＝１、連結ペナルティ＝２０、ランダム化グループ＝２５、長さ＝０、カットオフスコア＝１、ウインドウサイズ＝配列長、ギャップペナルティ＝５、ギャップサイズペナルティ＝０．０５、ウインドウサイズ＝２４７または検索アミノ酸配列の長さ（短いほう）。内部の欠失ではなくＮ末端もしくはＣ末端の欠失に起因して検索配列がクエリ配列よりも短い場合、結果（％同一性）は手動で補正されなければならない。なぜなら、ＦＡＳＴＤＢプログラムは、グローバル％同一性を計算する場合、検索配列のＮ末端およびＣ末端の短縮を把握しないからである。Ｎ末端およびＣ末端で短縮された検索配列に関しては、クエリ配列に対して、％同一性は、検索配列のＮ末端およびＣ末端である対応する検索配列残基にマッチ／アラインメントしないクエリ配列の残基の数を、クエリ配列の全塩基の％として計算することによって、補正される。残基がマッチ／アラインメントするか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列アラインメントの結果によって決定される。次いで、このパーセンテージは、特定のパラメータを使用して上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算される％同一性から減算されて、最終の％同一性スコアを達成する。この最終の％同一性スコアは、本発明の目的のために使用されるものである。クエリ配列とマッチ／アラインメントしない検索配列のＮ末端およびＣ末端に対する残基のみが、％同一性スコアを手動で調節するために考慮される。つまり、検索配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基の外側にあるクエリアミノ酸残基のみである。
【０６３２】
例えば、９０アミノ酸残基の検索配列が、１００残基のクエリ配列とアラインメントされて、％同一性を決定する。検索配列のＮ末端に欠失が生じ、したがって、ＦＡＳＴＤＢアラインメントは、Ｎ末端の最初の残基をマッチ／アラインメントしない。１０個の対形成しない残基は、配列の１０％（マッチしないＮ末端およびＣ末端における残基数／クエリ配列の残基の総数）を表し、したがって、１０％がＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算された％同一性スコアから減算される。残りの９０残基が完全にマッチした場合、最終の％同一性は、９０％である。別の例では、９０残基の検索配列が、１００残基のクエリ配列と比較される。このときに、欠失は内部であり、したがって検索配列のＮ末端もしくはＣ末端に、クエリとマッチ／アラインメントしない残基は存在しない。この場合において、ＦＡＳＴＤＢによって計算された％同一性は、手動で補正されない。やはり、目的配列のＮ末端およびＣ末端の外部の残基の位置のみが、ＦＡＳＴＤＢアラインメントで表示され、クエリ配列とマッチ／アラインメントしない場合、手動で補正される。他の補正は、本発明の目的のために行われない。
【０６３３】
（ｂ．融合タンパク質）
特定の実施形態において、目的のポリペプチドは、融合タンパク質であり、例えば、親和性タグドメインまたはレポータードメインを含み得る。適切な親和性タグとしては、別の部分（通常、別のポリペプチド、最も通常には、抗体）に特異的に結合され得る任意のアミノ酸配列が挙げられる。適切な親和性タグとしては、当該分野で公知であるように、エピトープタグ（例えば、Ｖ５タグ、ＦＬＡＧタグ、ＨＡタグ（インフルエンザウイルスの血球凝集素由来）、ｍｙｃタグなど）が挙げられる。適切な親和性タグとしてはまた、当該分野で公知であるように、結合する基質が知られているドメイン（例えば、ＨＩＳタグ、ＧＳＴタグおよびＭＢＰタグ）、ならびに特定の結合パートナー（例えば、抗体、特にモノクローナル抗体）が利用可能な他のタンパク質由来のドメインが挙げられる。適切な親和性タグとしてはまた、適切な結合パートナー（例えば、ＩｇＧ  Ｆｃレセプター）を使用して特異的に結合されて検出され得る、任意のタンパク質−タンパク質相互作用ドメイン（例えば、ＩｇＧ  Ｆｃ領域）が挙げられる。このような融合タンパク質が、欠失もしくは代替的アミノ酸で置換されたＮ末端メチオニン残基を有していたＧＰＣＲとインフレームで融合した異種Ｎ末端ドメイン（例えば、エピトープタグ）を含み得ることが、明らかに企図される。
【０６３４】
適切なレポータードメインとしては、ポリペプチドの存在を報告し得る任意のドメインが挙げられる。例えば、タグに特異的に結合する標識抗体を使用してポリペプチドの存在を報告するために、親和性タグが使用され得ることが認識されるが、発光レポータードメインが、より一般的に使用され得る。適切な発光レポータードメインとしては、ルシフェラーゼ（例えば、ホタル、ウミホタル属、Ｒｅｎｉｌｌａ  ｒｅｎｉｆｏｒｍｉｓもしくはＲｅｎｉｌｌａ  ｍｕｅｌｌｅｒｉ由来）、またはそれらの発光改変体が挙げられる。他の適切なレポータードメインとしては、蛍光タンパク質（例えば、クラゲ、サンゴおよび他の腔腸動物由来のもの、例えば、Ａｅｑｕｏｒｉａ、Ｒｅｎｉｌｌａ、Ｐｔｉｌｏｓａｒｃｕｓ、Ｓｔｙｌａｔｕｌａ種に由来するもの）、またはそれらの発光改変体が挙げられる。これらのレポータータンパク質の発光改変体は、当該分野で非常に周知であり、ネイティブレポータータンパク質と比較して、より明るくても、より暗くても、または異なる励起および／もしくは放射スペクトルを有してもよい。例えば、いくつかの改変体は、変更されて、もはや緑色には見えず、青色、藍色、黄色、増強された黄赤色に見えてもよく（それぞれ、ＢＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰ、ｅＹＦＰおよびＲＦＰと称される）、当該分野で公知であるような他の放射スペクトルを有してもよい。他の適切なレポータードメインとしては、生物化学的変化または色の変化を介してポリペプチドの存在を報告し得るドメインが挙げられ得る（例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、および分泌された胚アルカリホスファターゼ）。
【０６３５】
また、当該分野で公知であるように、親和性タグまたはレポータードメインは、目的のポリペプチドの任意の位置に存在し得る。しかし、ほとんどの実施形態において、これらは、目的のポリペプチドのＣ末端もしくはＮ末端に存在する。
【０６３６】
（２．目的のＧＰＣＲポリペプチドをコードする核酸）
遺伝暗号および核酸を操作するための組換え技術は公知であり、そして目的のＧＰＣＲポリペプチドのアミノ酸配列が上記されているので、目的のＧＰＣＲポリペプチドをコードする核酸の設計および生成は、十分当業者の技術範囲内である。特定の実施形態において、標準的な組換えＤＮＡ技術法（Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第３版，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９５；Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版，（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）が使用される。例えば、ＧＰＣＲをコードする配列は、ＧＰＣＲをコードする配列のライブラリから、種々の組換え法（本明細書において記載する必要はない）のいずれか１つまたはその組み合わせを使用して、単離され得る。その後、タンパク質をコードする核酸配列におけるヌクレオチドの置換、欠失および／もしくは付加が、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用してまた行われ得る。例えば、位置指定突然変異誘発およびサブクローニングが、目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド中の核酸残基を導入／欠失／置換するために使用され得る。他の実施形態において、ＰＣＲが使用され得る。目的のポリペプチドをコードする核酸はまた、化学合成によって、オリゴヌクレオチドから全体的に生成され得る（例えば、Ｃｅｌｌｏら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００２）２９７：１０１６−８）。いくつかの実施形態において、目的のポリペプチドをコードする核酸のコドンは、特定の種の細胞、特に、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、非ヒト霊長類、またはヒト種）の細胞における発現について、最適化される。いくつかの実施形態において、目的のポリペプチドをコードする核酸のコドンは、特定の種（特に、両生類の種）の細胞における発現について、最適化される。
【０６３７】
（ａ．ベクター）
本発明は、本発明の核酸を含むベクター（「構築物」とも称される）をさらに提供する。本発明の多くの実施形態において、本発明の核酸配列は、その配列が発現制御配列（例えば、プロモーターが挙げられる）に作動可能に連結された後、宿主細胞中で発現される。本発明の核酸はまた、代表的に、エピソームとしてかまたは宿主の染色体ＤＮＡの組み込まれた一部としてのいずれかで宿主細胞中で複製され得る、発現ベクター中に配置される。一般的に、発現ベクターは、選択マーカー（例えば、テトラサイクリンもしくはネオマイシン）を含んで、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能にする（例えば、米国特許第４，７０４，３６２号（それは、本明細書において参考として援用される）を参照のこと）。ベクター（単一発現カセットベクターおよび二重発現カセットベクターが挙げられる）は、当該分野で周知である（Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第３版，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９５；Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版，（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）。適切なベクターとしては、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、人工染色体（ヒト人工染色体、細菌人工染色体、酵母人工染色体など）、小型染色体などが挙げられる。レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルスベクターが使用され得る。
【０６３８】
種々の発現ベクターが、細胞で目的のポリペプチドを生成するために、当業者に利用可能であり、そしてそのベクターとしては、市販されている発現ベクターが挙げられる（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ；Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）。市販の発現ベクターとしては、ＣＭＶプロモーターベースのベクターが挙げられるが、これに限定されない。１つの適切なベクターは、ｐＣＭＶである。上記発現ベクターは、アデノウイルスベクターであり得る。例示のアデノウイルスベクターは、ＱｂｉｏｇｅｎｅからＡｄＥａｓｙＴＭとして購入できる（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）（Ｈｅ  ＴＣら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９９８）９５：２５０９−２５１４；および米国特許第５，９２２，５７６号；それらの各々の開示は、その全体が本明細書中で参考として援用される）。他の適切な発現ベクターは、当業者にとって容易に明らかである。
【０６３９】
本発明の核酸は、通常、目的の本発明のポリペプチドをコードする単一のオープンリーディングフレームを含むが、しかし、特定の実施形態において、目的のポリペプチドの発現のための宿主細胞は真核生物細胞（例えば、ヒト細胞のような哺乳動物細胞）であり得るので、オープンリーディングフレームは、イントロンによって中断され得る。本発明の核酸は、代表的に、ＲＮＡ安定性、翻訳効率などに関与し得る本発明の核酸の３’未翻訳領域（ＵＴＲ）および５’未翻訳領域（ＵＴＲ）に加えて含み得る、転写単位の一部である。本発明の核酸はまた、本発明の核酸に加えて、目的のポリペプチドの転写および発現に関するプロモーター、ならびに転写ターミネーターを含む、発現カセットの一部であり得る。
【０６４０】
真核生物プロモーターは、ウイルスプロモーターおよび真核生物遺伝子由来のプロモーターを含む、真核生物宿主細胞で機能性である任意のプロモーターであり得る。例示的な真核生物プロモーターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：マウスメタロチオネインＩ遺伝子配列のプロモーター（Ｈａｍｅｒら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎ．１：２７３−２８８，１９８２）；ヘルペスウイルスのＴＫプロモーター（ＭｃＫｎｉｇｈｔ，Ｃｅｌｌ  ３１：３５５−３６５，１９８２）；ＳＶ４０初期プロモーター（Ｂｅｎｏｉｓｔら，Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）２９０：３０４−３１０，１９８１）；酵母ｇａｌｌ遺伝子配列プロモーター（Ｊｏｈｎｓｔｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７９：６９７１−６９７５，１９８２）；Ｓｉｌｖｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８１：５９５１−５９ＳＳ，１９８４）、ＣＭＶプロモーター、ＥＦ−１プロモーター、エクジソン反応性プロモーター、テトラサイクリン反応性プロモーターなど。ウイルスプロモーターは、特に関心のあるものであり得る。なぜならば、これらは、一般的に特に強力なプロモーターであるからである。特定の実施形態において、標的病原体のプロモーターであるプロモーターが使用される。本発明において使用するためのプロモーターは、それらが導入される細胞型（および／もしくは動物）において機能性であるように選択される。特定の実施形態において、上記プロモーターは、ＣＭＶプロモーターである。
【０６４１】
特定の実施形態において、本発明のベクターはまた、選択可能なマーカーの発現を提供し得る。適切なベクターおよび選択可能なマーカーは、当該分野で周知であり、そして以下において考察されている：Ａｕｓｕｂｅｌら（Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第３版，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９５）およびＳａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第３版，（２００１）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）。種々の異なる遺伝子が選択可能なマーカーとして利用されており、本発明のベクターにおいて選択可能なマーカーとして利用される特定の遺伝子は、主に便宜的に選択される。公知の選択可能なマーカー遺伝子としては、以下が挙げられる：チミジンキナーゼ遺伝子、ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＣＡＤ、アデノシンデアミナーゼ遺伝子、アスパラギンシンテターゼ遺伝子、抗生物質耐性遺伝子（例えば、ｔｅｔｒ、ａｍｐｒ、Ｃｍｒもしくはｃａｔ、ｋａｎｒまたはｎｅｏｒ（アミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子）、ハイグロマイシンＢホスホトランスフェラーゼ遺伝子など。上述のように、目的のポリペプチドは、親和性ドメインおよび／またはレポータードメインを含む融合タンパク質であり得る。レポーターもしくはタグとＧＰＣＲ（例えば、ＧＰＣＲのＣ末端もしくはＮ末端）との間に融合を作製するための方法は、十分に当業者の技術範囲内であり（例えば、ＭｃＬｅａｎら，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａ．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９  ５６：１１８２−９１；Ｒａｍｓａｙら，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００１，３１５−３２３）、これ以上記載しない。このような融合タンパク質は、そのＮ末端メチオニン残基が欠失されたかまたは代替的アミノ酸で置換されたかのいずれかであるＧＰＣＲとインフレームで融合した、異種Ｎ末端ドメイン（例えば、エピトープタグ）を含み得ることが明確に企図される。目的のポリペプチドがネイティブポリペプチドから最初に作製され得、次いで、上記のような適切なレポーター／タグに作動可能に連結されることが理解される。
【０６４２】
本発明の核酸はまた、通常、目的のポリペプチドをコードする核酸の構築を促進するために、制限酵素認識部位、複数のクローニング部位、プライマー結合部位、ライゲーション末端、組換え部位などを含み得る。
【０６４３】
（ｂ．宿主細胞）
本発明はさらに、本発明の核酸を含むベクターを含む宿主細胞を提供する。適切な宿主細胞としては、原核生物（例えば、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ））ならびに真核生物細胞（例えば、動物細胞（例えば、昆虫、哺乳類、魚類、両生類、鳥類、もしくは爬虫類の細胞）、植物細胞（例えば、トウモロコシもしくはシロイヌナズナ細胞）、または真菌細胞（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞））が挙げられる。特定の実施形態において、目的のポリペプチドをコードする核酸の発現に適切な任意の細胞が、宿主細胞として使用され得る。通常、動物宿主細胞株が使用され、その動物宿主細胞株の例は、以下である：サル腎臓細胞（ＣＯＳ細胞）、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶＩ細胞（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５  １）；ヒト胚腎臓細胞（ＨＥＫ−２９３［「２９３」］）、Ｇｒａｈａｍら，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））；ＨＥＫ−２９３Ｔ［「２９３Ｔ」］）細胞；新生仔ハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ，ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７７：４２１６，（１９８０）；シリアンゴールデンハムスター細胞ＭＣＢ３９０１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−９５９５）；マウスセルトーリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶＩ  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ３８３：４４−６８（１９８２））；ＮＩＨ／３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５８）；およびマウスＬ細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１）。特定の実施形態において、黒色素胞が使用される。黒色素胞は、下等脊椎動物に見出される皮膚細胞である。関連する材料および方法は、米国特許第５，４６２，８５６号および同第６，０５１，３８６号の開示に従う。これらの特許の開示は、本明細書中にその全体が参考として援用される。
【０６４４】
さらなる細胞株は、当業者に明らかであり、広範な種々の細胞株が、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．２０１１０−２２０９）から利用可能である。
【０６４５】
（Ｃ．候補化合物のスクリーニング）
（１．一般的ＧＰＣＲスクリーニングアッセイ技術）
Ｇタンパク質レセプターが活性になる場合、そのＧタンパク質レセプターは、Ｇタンパク質（例えば、Ｇｑ，Ｇｓ，Ｇｉ，Ｇｚ，Ｇｏ）に結合して、ＧＴＰのＧタンパク質への結合を刺激する。次いで、Ｇタンパク質は、ＧＴＰａｓｅとして作用し、ＧＴＰをＧＤＰへとゆっくりと加水分解する。これによって、そのレセプターは、通常の条件下で、脱活性化される。しかし、活性化したレセプターは、ＧＤＰをＧＴＰへと変換し続ける。ＧＴＰの非加水分解性アナログである［３５Ｓ］ＧＴＰγＳは、活性化されたレセプターを発現する膜への増強された結合をモニタリングするために使用され得る。リガンドの非存在下および存在下での膜へのＧタンパク質共役をモニタリングするために、［３５Ｓ］ＧＴＰγＳが使用され得ることが報告されている。とりわけ当業者に周知であり、当該分野において利用可能であるモニタリングの例は、ＴｒａｙｎｏｒおよびＮａｈｏｒｓｋｉによって１９９５年に報告された。このアッセイ系の好ましい使用は、候補化合物の初期スクリーニングのための使用である。なぜならば、この系は、特定のＧタンパク質にかかわらず、レセプターの細胞内ドメインと相互作用するあらゆるＧタンパク質共役レセプターに対して、一般的に適用可能だからである。
【０６４６】
（２．特異的ＧＰＣＲスクリーニングアッセイ技術）
一旦候補化合物が「一般的」Ｇタンパク質共役レセプターアッセイ（すなわち、アゴニストもしくはインバースアゴニストである化合物を選択するためのアッセイ）を使用して同定された場合、いくつかの実施形態において、その化合物がレセプター部位で相互作用することを確認するためのさらなるスクリーニングが、好ましい。例えば、「一般的」アッセイによって同定される化合物はレセプターに結合していなくともよいが、代わりに、細胞内ドメイン由来のＧタンパク質に「結合しない」だけでもよい。
【０６４７】
（ａ．Ｇｓ、ＧｚおよびＧｉ）
Ｇｓは、酵素アデニリルシクラーゼを刺激する。Ｇｉ（およびＧｚおよびＧｏ）は、一方で、アデニリルシクラーゼを阻害する。アデニリルシクラーゼは、ＡＴＰからｃＡＭＰへの変換を触媒する。したがって、Ｇｓタンパク質に結合する活性化されたＧＰＣＲは、ｃＡＭＰの細胞レベルの増加に関連する。一方で、Ｇｉ（またはＧｚ，Ｇｏ）タンパク質に結合する活性化されたＧＰＣＲは、ｃＡＭＰの細胞レベルの減少に関連する。一般的に、「Ｉｎｄｉｒｅｃｔ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｓｙｎａｐｔｉｃ  Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ」，第８章，Ｆｒｏｍ  Ｎｅｕｒｏｎ  Ｔｏ  Ｂｒａｉｎ（第３版）Ｎｉｃｈｏｌｓ，Ｊ．Ｇ．ら編、Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．（１９９２）を参照のこと。したがって、ｃＡＭＰを検出するアッセイは、候補化合物（例えば、インバースアゴニスト）がレセプターに対する（すなわち、このような化合物は、ｃＡＭＰレベルを減少させる）ものか否かを決定するために利用され得る。ｃＡＭＰを測定するための当該分野で公知である種々のアプローチが、利用され得る；いくつかの実施形態において、好ましいアプローチは、ＥＬＩＳＡベースの形式における抗ｃＡＭＰ抗体の使用に依存する。使用され得る別の型のアッセイは、全細胞第２メッセンジャーレポーターシステムアッセイである。遺伝子上のプロモーターは、特定の遺伝子がコードするタンパク質の発現を駆動する。サイクリックＡＭＰは、ｃＡＭＰ反応性ＤＮＡ結合タンパク質、またはｃＡＭＰ反応性エレメントと呼ばれる特定の部位でプロモーターに結合してその遺伝子の発現を駆動する転写因子（ＣＲＥＢ）への結合を促進することによって、遺伝子発現を駆動する。レポーター遺伝子の前に複数のｃＡＭＰ反応性エレメントを含むプロモーターを有するレポーターシステム（例えば、β−ガラクトシダーゼもしくはルシフェラーゼ）が、構築され得る。したがって、活性化されたＧｓ結合レセプターは、次に遺伝子およびレポータータンパク質の発現を活性化させるｃＡＭＰの蓄積を引き起こす。レポータータンパク質（例えば、β−ガラクトシダーゼまたはルシフェラーゼ）は、次いで、標準的な生物化学的アッセイを使用して検出され得る（Ｃｈｅｎら、１９９５）。
【０６４８】
（ｂ．ＧｏおよびＧｑ）
ＧｑおよびＧｏは、酵素ホスホリパーゼＣの活性化に関与する。この酵素ホスホリパーゼＣは次に、リン脂質ＰＩＰ２を加水分解し、２つの細胞内メッセンジャー（ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）およびイノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３））を放出する。ＩＰ３の蓄積の増加は、Ｇｑ関連レセプターおよびＧｏ関連レセプターの活性化に関する。一般的に、「Ｉｎｄｉｒｅｃｔ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｓｙｎａｐｔｉｃ  Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ」，第８章，Ｆｒｏｍ  Ｎｅｕｒｏｎ  Ｔｏ  Ｂｒａｉｎ（第３版）Ｎｉｃｈｏｌｓ，Ｊ．Ｇ．ら編，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．（１９９２）を参照のこと。ＩＰ３蓄積を検出するアッセイは、候補化合物が、例えば、Ｇｑ関連レセプターおよびＧｏ関連レセプターのインバースアゴニストである（すなわち、このような化合物は、ＩＰ３のレベルを減少させる）か否かを決定するために使用され得る。Ｇｑ関連レセプターはまた、ＡＰＩレポーターアッセイを使用して調べられ得る。このアッセイにおいては、Ｇｑ依存性ホスホリパーゼＣは、ＡＰＩエレメントを含む遺伝子の活性化を引き起こし、したがって、活性化されたＧｑ関連レセプターは、このような遺伝子の発現の増加を証明し、それによってそのレセプターに対するインバースアゴニストは、このような発現の減少を証明し、そしてアゴニストは、このような発現の増加を証明する。このような検出のための市販のアッセイが、利用可能である。
【０６４９】
（３．ＧＰＣＲ融合タンパク質）
インバースアゴニストもしくはアゴニストの直接同定のための候補化合物のスクリーニングに使用するための、内因性であり、構成的に活性なＧＰＣＲまたは非内因性であり、構成的に活性化されたＧＰＣＲの使用は、興味深いスクリーニングの課題を提供する。ここで、定義によると、レセプターは、それに結合する内因性リガンドの非存在下でもなお活性である。したがって、このような化合物がインバースアゴニストもしくはアゴニストであり得るか、またはこのようなレセプターに何の影響も有さないか否かについて理解することを可能にするために、例えば、候補化合物の存在下での非内因性レセプターと、その化合物の非存在下での非内因性レセプターとを区別するため、いくつかの実施形態において、利用されるアプローチがそのような区別を増強し得ることが好ましい。いくつかの実施形態において、好ましいアプローチは、ＧＰＣＲ融合タンパク質の使用である。
【０６５０】
一般的に、上記のアッセイ技術（および当業者に公知の他の技術）を使用して非内因性ＧＰＣＲが構成的に活性化されたことが一旦決定されると、内因性ＧＰＣＲに結合する優勢なＧタンパク質を決定することが可能である。Ｇタンパク質のＧＰＣＲへの結合は、評価され得るシグナリング経路を提供する。いくつかの実施形態において、哺乳動物発現系または黒色素胞発現系を使用してスクリーニングを行うことが、好ましい。なぜならば、このような系は、その中に内因性Ｇタンパク質を有することが予想されるからである。したがって、定義されるように、このような系においては、非内因性であり、構成的に活性化されたＧＰＣＲは、継続的にシグナル伝達される。いくつかの実施形態において、このシグナルが、例えばレセプターに対するインバースアゴニストの存在下において、レセプターがそのインバースアゴニストと接触する場合にそのレセプター間で、（特に、スクリーニングの状況下において）より容易に区別できる可能性が高まるように、増強されることが好ましい。
【０６５１】
上記ＧＰＣＲ融合タンパク質は、上記ＧＰＣＲとのＧタンパク質の結合の効力を増強することが意図される。上記ＧＰＣＲ融合タンパク質は、内因性であり、構成的に活性なＧＰＣＲまたは非内因性であり、構成的に活性化されたＧＰＣＲのいずれかによってスクリーニングするために好まれ得る。なぜならば、このようなアプローチは、このようなスクリーニング技術において生成されるシグナルを増大させるからである。これは、顕著な「信号対雑音」比を促進するために重要である。このような顕著な比は、本明細書において開示される候補化合物のスクリーニングのために好ましい。
【０６５２】
ＧＰＣＲ融合タンパク質の発現に有用な構築物の構築は、当業者の範囲内である。市販の発現ベクターおよび発現系は、研究者の特定の必要性に適合し得る種々のアプローチを提供する。このようなＧＰＣＲ融合タンパク質構築物の構築における重要な基準としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＧＰＣＲ配列およびＧタンパク質配列の両方がインフレームであること（好ましくは、内因性ＧＰＣＲについての配列は、Ｇタンパク質配列の上流である）、およびＧＰＣＲの「停止」コドンが、ＧＰＣＲの発現の際にＧタンパク質もまた発現され得るように、削除もしくは置き換えられていること。上記ＧＰＣＲは、Ｇタンパク質に直接的に結合され得るか、または２つの間にスペーサー残基が存在し得る（好ましくは、約１２以下であるが、この数は当業者によって容易に確認され得る）。便宜上、スペーサーを使用することが好ましい。いくつかの実施形態において、上記非内因性ＧＰＣＲに結合するＧタンパク質は上記ＧＰＣＲ融合タンパク質構築物の作製前に同定されることが、好ましい。
【０６５３】
上記のように、Ｇｉ、ＧｚおよびＧｏに結合する活性化されたＧＰＣＲは、ｃＡＭＰの形成を阻害することが予測され、このことは、これらの型のＧＰＣＲ曝露（ｃｈａｌｌｅｎｇｉｎｇ）に基づくアッセイを作製する（すなわち、ｃＡＭＰシグナルは、活性化の際に減少し、したがって、例えばアゴニスト（これは、さらにこのシグナルを減少させる）曝露の直接的同定を行わせる）。本明細書において開示されるように、これらの型のレセプターに関して、存続可能なシクラーゼベースのアッセイを確立する目的で、ＧＰＣＲの内因性Ｇタンパク質に基づくことなくＧＰＣＲ融合タンパク質を生成する可能性があることが確認された。したがって、例えば、内因性Ｇｉ結合レセプターは、Ｇｓタンパク質に融合され得る。このような融合構築物は、発現の際に、内因性ＧＰＣＲが、例えば、「天然の」Ｇｉタンパク質よりもＧｓに結合することを、「駆動」または「強制」して、シクラーゼベースのアッセイが確立され得る。したがって、Ｇｉ結合レセプター、Ｇｚ結合レセプターおよびＧｏ結合レセプターに関しては、いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲ融合タンパク質が使用されて、アッセイがアデニリルシクラーゼ活性の検出に基づく場合に、上記融合構築物は、Ｇｓ（または、酵素アデニリルシクラーゼの形成を刺激する等価なＧタンパク質）により確立されることが、好ましい。
【０６５４】
【表３】
2009250977.tif 000004
同等に有効であるのは、Ｇｓタンパク質、Ｇｉタンパク質、Ｇｚタンパク質またはＧｏタンパク質に融合されたＧｑタンパク質を使用するＧタンパク質融合構築物である。いくつかの実施形態において、好ましい融合構築物は、Ｇタンパク質のαサブユニット（「Ｇαｑ」）の最初の６アミノ酸が欠失されており、ＧαｑのＣ末端における最後の５アミノ酸が目的のＧタンパク質のＧαの対応するアミノ酸に置き換えられている、Ｇｑタンパク質によって達成され得る。例えば、融合構築物は、Ｇｉタンパク質に融合されたＧｑ（６アミノ酸欠失）を有し、これによって「Ｇｑ／Ｇｉ融合構築物」を得ることができる。この融合構築物は、第２メッセンジャー（例えば、イノシトール三リン酸もしくはジアシルグリセロール）がｃＡＭＰ産生の代わりに測定され得るように内因性Ｇｉ結合レセプターをその非内因性Ｇタンパク質（Ｇｑ）に結合させる。
【０６５５】
（４．標的Ｇｉ結合ＧＰＣＲとシグナルエンハンサーＧｓ結合ＧＰＣＲとの同時トランスフェクション（ｃＡＭＰベースのアッセイ））
Ｇｉ結合レセプターは、アデニリルシクラーゼを阻害し、それによってｃＡＭＰ産生のレベルを減少させることが知られている。このことは、ｃＡＭＰレベルの評価をやりがいのあるものにし得る。特定の実施形態において、活性化の際に優勢にＧｉに結合するレセプターの活性化の指標としてのｃＡＭＰの産生の減少の測定に有効な技術は、シグナルエンハンサー（例えば、活性化の際にＧｓに優勢に結合する非内因性の、構成的に活性化されたレセプター（例えば、ＴＳＨＲ−Ａ６２３Ｉ；下記参照））とＧｉ結合ＧＰＣＲとの同時トランスフェクションによって達成され得る。明らかであるように、Ｇｓ結合レセプターの活性化は、ｃＡＭＰの産生の増大に基づいて決定され得る。Ｇｉ結合レセプターの活性化は、ｃＡＭＰの産生の減少をもたらす。したがって、これらの「対照的」影響を有利に活用する同時トランスフェクションアプローチが意図される。例えば、非内因性の、構成的に活性化されたＧｓ結合レセプター（「シグナルエンハンサー」）と発現ベクター単独との同時トランスフェクションは、ベースラインのｃＡＭＰシグナルを提供する（すなわち、Ｇｉ結合レセプターはｃＡＭＰレベルを減少させるが、この「減少」は、構成的に活性化されたＧｓ結合シグナルエンハンサーによって確立されたｃＡＭＰレベルの実質的な増大と関連する）。次いで、上記シグナルエンハンサーと「標的レセプター」との同時トランスフェクションによって、Ｇｉ結合標的レセプターのインバースアゴニストは、測定されたｃＡＭＰシグナルを増大させるが、Ｇｉ結合標的レセプターのアゴニストは、このシグナルを減少させる。
【０６５６】
このアプローチを使用して直接的に同定される候補化合物は、これらの化合物がシグナル増強レセプターを標的しないことを確実にするために、独立に評価されるべきである（これは、同時トランスフェクションされたレセプターに対してスクリーニングする前もしくはスクリーニングした後に行われ得る）。
【０６５７】
（組成物／処方物および処置の方法）
本発明の化合物（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物）は、本発明によって使用するための薬学的組成物および医薬へと、当該分野で周知の技術を使用して処方され得る。適切な処方物は、選択された投与経路に依存する。特定の実施形態において、その投与は、非ヒト脊椎動物または非ヒト哺乳類に対するものである。
【０６５８】
本発明の治療（すなわち、ＧＰＲ１１９アゴニストに関連する治療）に関する場合、本発明による化合物は、任意の適切な方法で投与され得る。適切な投与経路は、経口投与、鼻投与、直腸投与、経粘膜投与、経皮投与、または腸投与、非経口送達（筋肉内注入、皮下注入、脊髄内注入を含む）、ならびに鞘内注入、直接脳室内注入、静脈内注入、腹腔内注入、鼻腔内注入、肺内（吸入）注入、または眼内注入を含む。他の適切な投与経路は、エアロゾルまたはデポー処方物である。本発明の医薬の徐放性処方物（特に、デポー）が、明確に意図される。特定の好ましい実施形態において、本発明による化合物は、経口投与される。本発明による化合物は、固体形態または液体形態（錠剤、カプセル、粉末、シロップ、エリキシル、エアロゾル、滅菌溶液、懸濁液、またはエマルションなど）で作製され得る。特定の実施形態において、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、経口投与される。
【０６５９】
特定の好ましい実施形態において、本発明による化合物（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト）は、経口投与される。特定の好ましい実施形態において、本発明による化合物（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト）は、消化管の腸内分泌細胞におけるＰＹＹ分泌の刺激を可能にする様式で投与される。特定の好ましい実施形態において、本発明による化合物（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト）は、消化管の腸内分泌細胞におけるＰＹＹ分泌の刺激を可能にする様式で経口投与される。
【０６６０】
特定の好ましい実施形態において、本発明による化合物（例えば、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物）は、経口投与される。特定の好ましい実施形態において、本発明による化合物（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト）は、消化管の腸内分泌細胞におけるＰＹＹ分泌の刺激を可能にする様式で投与される。特定の好ましい実施形態において、本発明による化合物（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト）は、消化管の腸内分泌細胞におけるＰＹＹ分泌の刺激を可能にする様式で経口投与される。
【０６６１】
経口投与のための処方物は、固体の錠剤およびカプセル処方物に加えて、水溶液および懸濁液の形態であり得る。水溶液および懸濁液は、無菌の粉末また顆粒から調製され得る。上記化合物は、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トウモロコシ油、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム、および／または種々の緩衝液に溶解され得る。他の佐剤は、当該分野で十分かつ広範に知られている。
【０６６２】
上記ＧＰＲ１１９アゴニストの薬学的組成物は、当該分野で周知の方法（例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠作製、すりつぶし、乳化、封入、捕捉、凍結乾燥プロセス、または噴霧乾燥の手段）によって調製され得る。
【０６６３】
本発明によって使用するための薬学的組成物は、薬学的に使用され得る調製物への活性化合物の加工を容易にする賦形剤および助剤を含む１つ以上の生理学的に受容可能なキャリアを使用した従来の様式で処方され得る。適切な薬学的に受容可能なキャリアは、当業者にとって利用可能である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，（Ｇｅｎｎａｒｏら編），第２０版，２０００，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（Ｒｏｗｅら編），第４版，２００３，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ；それらの各々の開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。適切な処方物は、選択された投与経路に依存する。用語「キャリア」物質または「賦形剤」物質は、本明細書中で、キャリアおよび／もしくは希釈剤および／もしくは佐剤、または被験体への治療剤の送達のためのビヒクルとして使用されるか、あるいはその取り扱いもしくは保存の特性を改善するためか、または組成物の投与単位を、経口投与に適切なカプセルもしくは錠剤などの個別の物品へと形成することを可能もしくは容易にするために薬学的組成物に添加される、治療剤自体ではない任意の物質を意味する。賦形剤としては、例えば、希釈剤、崩壊剤、結合剤、接着剤、湿潤剤、ポリマー、滑沢剤、流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔ）、不快な味または臭いを遮蔽または中和するために添加される物質、嬌味嬌臭剤、色素、香料、および組成物の外観を改善するために添加される物質が含まれ得るが、これらに限定されない。受容可能な賦形剤としては、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、炭酸マグネシウム、タルク、ゼラチン、アカシアゴム、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、デキストリン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、スクロース、デンプン、ゼラチン、セルロース系材料（例えば、アルカン酸のセルロースエステルおよびセルロースアルキルエステル）、低融点ワックス、カカオバター、カカオ粉末、ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、およびポリエチレングリコール）、および他の薬学的に受容可能な材料が挙げられる。上記薬学的組成物の成分は、都合のよい投与のために封入または打錠され得る。
【０６６４】
「薬学的に受容可能な」は、薬理学的／毒物学的観点から患者に受容可能であり、かつ組成、処方、安定性、患者の受容性、およびバイオアベイラビリティーに関する物理的／化学的関連から製造する薬剤師に許容される、特性および／または物質をいう。
【０６６５】
糖衣錠コアは、適切なコーティングが行われる。この目的のために、必要に応じて、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含み得る濃縮糖溶液が、使用され得る。同定または活性化合物の用量の異なる組み合わせを特徴づけるために、染料または色素が、錠剤または糖衣錠コーティングに添加され得る。
【０６６６】
経口で使用され得る薬学的組成物は、ゼラチンから作製された押し込み型カプセルならびにゼラチンおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）から作製された密閉軟カプセルを含む。押し込み型カプセルは、充填剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば、デンプン）、および／または滑沢剤（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウム）、および必要に応じて安定剤を用いた混合物中に活性成分を含み得る。軟カプセルでは、活性化合物は、適切な液体（例えば、脂肪油、流動パラフィン、液体ポリエチレングリコール、クレモフォア（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、キャプムル（ｃａｐｍｕｌ）、中鎖または長鎖のモノトリグリセリド、ジトリグリセリド、またはトリグリセリド）に溶解または懸濁され得る。これらの処方物中に安定剤を添加することもできる。
【０６６７】
さらに、ＧＰＲ１１９アゴニストは、徐放系を使用して送達され得る。種々の徐放性材料が確立されており、その徐放性材料は、当業者に周知である。徐放性の錠剤またはカプセルが、特に好ましい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料が、使用され得る。投薬形態はまた、米国特許第４，２５６，１０８号、同第４，１６６，４５２号、および同第４，２６５，８７４号に記載の技術によってコーティングされて、制御放出のための浸透性治療錠剤を形成し得る。
【０６６８】
本発明の治療（すなわち、ＧＰＲ１１９アゴニストに関する治療）は、単独か、または１つ以上の他の薬学的もしくは生理学的に受容可能な化合物と組み合わせて適用または提供され得ることが、明確に企図される。本発明の１つの局面において、上記他の薬学的もしくは生理学的に受容可能な化合物は、ＧＰＲ１１９アゴニストではない。本発明の１つの局面において、上記他の薬学的もしくは生理学的に受容可能な化合物は、カルシウム、ビタミンＤ、エストロゲン、チボロン、選択的エストロゲンレセプターモジュレーター（ＳＥＲＭ；例えば、ラロキシフェン、タモキシフェン）、ビスホスホネート（ｂｉｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）（例えば、エチドロネート、アレンドロネート、リセドロネート）、カルシトニン、ビタミンＤの１α−ヒドロキシル化代謝産物、フッ化物、チアジド、タンパク質同化ステロイド、イプリフラボン、ビタミンＫ、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、ストロンチウム、スタチン、オステオプロテジェリン（ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｒｅｒｉｎ）、ＥＰ４レセプター選択的アゴニスト、カンナビノイド２型レセプター（ＣＢ２）選択的アゴニスト、およびｐ３８  ＭＡＰキナーゼインヒビターからなる群より選択される医薬品である（例えば、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  ９２１（２００３）、Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓを参照のこと）。
【０６６９】
１つの局面において、本発明は、ある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストを含むか、または本質的にある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストからなる組成物を特徴とする。１つの局面において、本発明は、ある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストと少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含むか、または本質的にある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストおよび少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアからなる薬学的組成物を特徴とする。
【０６７０】
１つの局面において、本発明は、ある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストを含むか、または本質的にある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストからなる組成物を特徴とする。１つの局面において、本発明は、ある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストと少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含むか、または本質的にある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストおよび少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアからなる薬学的組成物を特徴とする。本発明はまた、上記組成物または上記薬学的組成物の投薬形態に関連し、上記ＧＰＲ１１９アゴニスト、上記ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な上記化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な上記化合物は、個体におけるＰＹＹレベル（例えば、血漿の全ＰＹＹレベルまたは血漿のＰＹＹ３−３６レベル）を増大させるために十分な量である。本発明はまた、上記組成物または上記薬学的組成物の投薬形態に関連し、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、低い骨量によって特徴付けられる状態（例えば、骨粗しょう症）を処置もしくは予防する効果および／または個体における骨量を増大させる効果を与えるために十分な量である。
【０６７１】
１つの局面において、本発明は、ある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストを含むか、または本質的にある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストからなる組成物を特徴とする。１つの局面において、本発明は、ある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストと少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含むか、または本質的にある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストおよび少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアからなる薬学的組成物を特徴とする。本発明はまた、上記組成物または上記薬学的組成物の投薬形態に関連し、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、個体におけるＰＹＹレベルを増大させる効果を与えるために十分な量である。本発明はまた、上記組成物または上記薬学的組成物の投薬形態に関連し、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、個体における全ＰＹＹ（ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６を含む）レベルを増大させる効果を与えるために十分な量である。本発明はまた、上記組成物または上記薬学的組成物の投薬形態に関連し、上記ＧＰＲ１１９アゴニストは、個体におけるＰＹＹ３−３６レベルを増大させる効果を与えるために十分な量である。
【０６７２】
本発明において使用するのに適した薬学的組成物は、上記活性成分がそれらの意図された目的を達成する量で含まれる組成物を含む。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防のために有用であることが理解される。ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、本発明に従うものである。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、個体におけるＰＹＹレベルを増大させるために有用であることが理解される。本発明に関する場合、本発明による意図された目的を達成するために十分なＧＰＲ１１９アゴニストの量の決定は、特に、本明細書中に提供された詳細な開示を考慮して、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０６７３】
動物研究（マウス、ラット、ウサギ、ブタ、および非ヒト霊長類が含まれるが、これらに限定されない）から得たデータは、ヒトで使用する投薬量範囲の処方で使用され得る。一般に、当業者は、どのようにして動物モデル系で得られたインビボデータを別の動物（例えば、ヒト）に当てはめるのかを理解している。いくつかの環境では、これらの推定は、単に、別の動物（例えば、ヒト）と比較した動物モデルの体重に基づき得；他の環境では、これらの推定は、単に体重に基づくのではなく、むしろ種々の要因を組み込む。代表的な要因は、患者の型、年齢、体重、性別、食事、および医学的状態、疾患の重篤度、投与経路、薬理学的検討材料（例えば、使用した特定の化合物の活性、効力、薬物動態学的プロフィールおよび毒物学的プロフィール）、薬物送達系を使用するか否か、急性または慢性の病態が処置または予防されているか否か、あるいはさらなる活性化合物が本発明の化合物に追加するか薬物の組合せの一部として投与されるか否かを含む。本発明の化合物および／または組成物を用いて疾患状態を処置するための投薬レジメンは、上記で引用した種々の要因に従って選択される。したがって、使用した実際の投薬レジメンは、非常にばらつきがあり、それによって、好ましい投薬レジメンから逸脱する可能性があり、そして当業者は、これらの代表的な範囲を逸脱した投薬量および投薬レジメンが試験され得、必要に応じて、その投薬量および投薬レジメンが本発明の方法で使用され得ることを認識する。
【０６７４】
例示の動物モデル系は、ラット卵巣摘出（ＯＶＸ）骨量減少モデルである。卵巣切除したラットは、エストロゲンが枯渇したヒトの骨格および治療剤の応答の重要な臨床的特徴を正しく模倣する優れた前臨床動物モデルである。このモデルにおいて、卵巣摘出に関連する骨量減少が部分的か、または完全に予防される場合に、治療効力は、達成される（例えば、Ｂｏｌｌａｇら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ（２００１）１７７：３５−４１；ａｎｄ  Ｊｅｅら、Ｊ  Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌ  Ｎｅｕｒｏｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔ（２００１）１：１９３−２０７を参照のこと）。特定の実施形態において、卵巣摘出に関連する骨量減少が、少なくとも約１０％予防されるか、少なくとも約２０％予防されるか、少なくとも約３０％予防されるか、少なくとも約４０％予防されるか、少なくとも約５０％予防されるか、少なくとも約６０％予防されるか、少なくとも約７０％予防されるか、少なくとも約７５％予防されるか、少なくとも約８０％予防されるか、少なくとも約８５％予防されるか、少なくとも約９０％予防されるか、少なくとも約９５％予防されるか、または１００％予防される場合、治療効力は、達成される。
【０６７５】
さらなる例示の動物モデル系は、マウスにおけるグルコースチャレンジ（ｇｌｕｃｏｓｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）後の血液ＰＹＹレベルの増大である。特定の実施形態において、上記血液ＰＹＹレベルは、血漿ＰＹＹレベルである。特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、グルコース非依存性のＰＹＹレベルである。特定の実施形態において、上記ＰＹＹレベルは、グルコース依存性のＰＹＹレベルである。特定の実施形態において、上記ＰＹＹは、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６を含むＰＹＹである。特定の実施形態において、上記ＰＹＹは、ＰＹＹ３−３６である。げっ歯類またはヒトにおける全ＰＹＹまたはＰＹＹ３−３６を測定するためのキットは、Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）などから市販されている。また、ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６は、独立して、生物化学的手段によって測定され得る（Ｅｂｅｒｌｅｉｎら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（１９８９）１０：７９７−８０３；Ｇｒａｎｄｔら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ（１９９４）５１：１５１−１５９；Ｃｒｕｚｅら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００７）２８：２６９−２８０）。特定の実施形態において、本発明のＰＹＹ関連活性は、ＰＹＹ３−３６関連活性である。特定の実施形態において、血液ＰＹＹレベルまたは血漿ＰＹＹレベルが、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、少なくとも約６００％、少なくとも約７００％、少なくとも約８００％、少なくとも約９００％、または少なくとも約１０００％増大する場合、治療効力は、達成される。
【０６７６】
ＧＰＲ１１９アゴニストは個体における増大したレベルのＰＹＹを達成するために毎日かまたは定期的に投与され得ることが、明確に企図される。特定の実施形態において、ＧＰＲ１１９アゴニストは、個体における増大した血液（例えば、血漿）レベルのＰＹＹを達成するために、毎日かまたは定期的に投与される。特定の実施形態において、ＧＰＲ１１９アゴニストは、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、少なくとも約６００％、少なくとも約７００％、少なくとも約８００％、少なくとも約９００％、または少なくとも約１０００％である個体における増大した血液（例えば、血漿）レベルのＰＹＹ、個体における正常な血液（例えば、血漿）レベルのＰＹＹ（例えば、正常な食前血漿ＰＹＹレベル（例えば、血漿の全ＰＹＹレベル）または正常な食前血漿ＰＹＹレベルと正常な食後血漿ＰＹＹレベルとの間の血漿ＰＹＹレベル（例えば、血漿の全ＰＹＹレベル））または処置前の個体における血液（例えば、血漿）レベルのＰＹＹ（例えば、血漿の全ＰＹＹ）を達成するために、毎日かまたは定期的に投与される。ＰＹＹ（例えば、血漿の全ＰＹＹ）の増大した血液（例えば、血漿）レベルのこれらの範囲は例示の範囲であり、そして本発明の限定であることが意味されないことに、留意する。
【０６７７】
ＧＰＲ１１９アゴニストは個体における増大したレベルのＰＹＹを達成するために毎日かまたは定期的に投与され得ることが、明確に企図される。特定の実施形態において、ＧＰＲ１１９アゴニストは、個体における増大した血液（例えば、血漿）レベルのＰＹＹを達成するために、毎日かまたは定期的に投与される。特定の実施形態において、ＧＰＲ１１９アゴニストは、０．１ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、０．２ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、０．３ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、０．４ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、０．５ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、０．６ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、０．７ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、０．８ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、０．９ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、２ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、３ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌ、あるいは５ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌの濃度範囲内の個体における増大した血液（例えば、血漿）レベルのＰＹＹを達成するために、毎日かまたは定期的に投与される。血液（例えば、血漿）ＰＹＹ濃度（例えば、血漿の全ＰＹＹ濃度）のこれらの範囲は例示の範囲であり、そして本発明の限定であることが意味されないことに、留意する。
【０６７８】
投薬量および投薬間隔は、意図された治療効果を提供するために調整され得る。本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストの正確な投薬量はそのＧＰＲ１１９アゴニスト、そのＧＰＲ１１９アゴニストの効力、投与様式、患者の年齢および体重、ならびに処置されるべき状態の重篤度に依存して変動することが、認識される。正確な処方、投与経路および投薬量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択され得る。例えば、本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストの量は、体重１ｋｇあたり約０．００１ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり約０．００５ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり約０．５ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり約１ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり約５ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり約１０ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり約５０ｍｇ未満または体重１ｋｇあたり約１００ｍｇ未満の量であるが、これらに限定されない。
【０６７９】
所望の結果を達成するために毎日かまたは定期的に投与され得る、本発明の化合物（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいは個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物）の量についての好ましい投薬量の範囲は、体重１ｋｇあたり０．１〜１００ｍｇである。他の好ましい投薬量の範囲は、体重１ｋｇあたり０．１〜３０ｍｇである。他の好ましい投薬量の範囲は、体重１ｋｇあたり０．１〜１０ｍｇである。他の好ましい投薬量の範囲は、体重１ｋｇあたり０．１〜３．０ｍｇである。例示の好ましい投薬量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。当然に、これらの１日投薬量は、１日の経過の間に定期的に少量で送達または投与され得る。これらの投薬量の範囲は単なる好ましい範囲であり、そして本発明の限定であることが意味されないことに、留意する。これらの投薬量は単なる好ましい投薬量であり、そして本発明の限定であることが意味されないことに、留意する。
【０６８０】
投薬量および投薬間隔は、個別に調節されて、意図された治療効果を達成する本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストの血漿レベルを提供し得る。投薬間隔はまた、意図された治療効果を達成するためにＧＰＲ１１９アゴニスト濃度の選択された範囲の値を使用して、決定され得る。ＧＰＲ１１９アゴニストは、時間の１０〜９０％の間、好ましくは３０〜９９％の間、そして最も好ましくは５０〜９０％の間にわたってＧＰＲ１１９アゴニスト濃度の選択された範囲内に血漿レベルを維持するレジメンを使用して、投与されるべきである。局所投与または選択的取り込みの場合において、意図された治療効果を提供するＧＰＲ１１９アゴニスト濃度の範囲は、血漿濃度に関連しなくてもよい。
【０６８１】
投与される組成物の量は、当然ながら、処置される個体、個体の体重、苦痛の重篤度、投与様式、および処方医の判断に依存する。
【０６８２】
したがって、１つの局面において、本発明は、低い骨量によって特徴付けられる状態（例えば、骨粗しょう症）を処置または予防する方法、あるいは骨量を増大させる方法を特徴とし、それらの方法は、それらを必要とする個体に、ある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストを含むか、または本質的にある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストからなる組成物の治療有効量を投与する工程を包含する。特定の実施形態において、上記組成物は、薬学的組成物である。
【０６８３】
１つの局面において、本発明は、低い骨量によって特徴付けられる状態（例えば、骨粗しょう症）を処置または予防する方法、あるいは骨量を増大させる方法に関連し、それらの方法は、それらを必要とする個体に、ある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストを含むか、または本質的にある量の本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストからなる組成物の治療有効量を投与する工程を包含する。関連する局面において、本発明は、上記ＧＰＲ１１９アゴニストが個体におけるＰＹＹレベルを増大させる効果を与えるために十分な量で投与されるその方法を特徴とする。特定の実施形態において、上記組成物は、薬学的組成物である。
【０６８４】
本発明の治療（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニストに関する治療）は、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用である。
【０６８５】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、骨に関連する状態である。
【０６８６】
特定の実施形態において、上記骨に関連する状態は、低い骨量によって特徴付けられる状態である。特定の実施形態において、上記低い骨量によって特徴付けられる状態は、オステオペニア、骨粗しょう症、関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、歯槽骨損失、骨切り術による骨損失、小児期の特発性骨損失、パジェット病、転移性癌に起因する骨損失、骨溶解性病変、脊椎の弯曲、および身長の減少からなる群より選択される。
【０６８７】
特定の実施形態において、上記骨に関連する状態は、骨折である。特定の実施形態において、上記骨折は、外傷性の骨折、長期の骨折、および骨粗しょう症性の骨折からなる群より選択される。
【０６８８】
特定の実施形態において、上記骨に関連する状態は、骨疾患である。特定の実施形態において、上記骨疾患は、オステオペニア、骨粗しょう症、関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、歯槽骨損失、骨切り術による骨損失、小児期の特発性骨損失、パジェット病、転移性癌に起因する骨損失、骨溶解性病変、脊椎の弯曲、および身長の減少からなる群より選択される。
【０６８９】
特定の実施形態において、上記骨に関連する状態は、増強された骨治癒または骨成長であり、上記増強された骨治癒または骨成長は、顔面の再建、上顎の再建、下顎の再建、歯周疾患または抜歯後の増強された骨治癒、増強された長骨伸長、増強された補綴内殖、および増大された骨癒合からなる群より選択される。
【０６９０】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、代謝障害である。
【０６９１】
特定の実施形態において、上記代謝障害は、体重超過、肥満症、過食症、糖尿病（１型糖尿病および２型糖尿病を含む）、１型糖尿病、２型糖尿病、グルコース寛容減損、インスリン抵抗性、高インスリン血症、脂質異常症、高血圧症およびメタボリックシンドロームからなる群より選択される。
【０６９２】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、新脈管形成に関連する状態である。
【０６９３】
特定の実施形態において、上記新脈管形成に関連する状態は、末梢動脈疾患、創傷治癒および虚血からなる群より選択される。
【０６９４】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、虚血に関連する状態である。
【０６９５】
特定の実施形態において、上記虚血に関連する状態は、脳虚血、脳卒中、虚血性心疾患、心筋梗塞、虚血−再灌流傷害、心筋梗塞後のリモデリング、心不全、およびうっ血性心不全からなる群より選択される。
【０６９６】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、吸収不良障害である。
【０６９７】
特定の実施形態において、上記吸収不良障害は、短腸症候群、全腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、コレラ、および下痢を伴う障害からなる群より選択される。
【０６９８】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、痙攣性障害である。
【０６９９】
特定の実施形態において、上記痙攣性障害は、癲癇である。
【０７００】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、癌である。
【０７０１】
特定の実施形態において、上記癌は、膵臓癌、乳癌、結腸癌、およびバレット腺癌からなる群より選択される。
【０７０２】
特定の実施形態において、上記ＰＹＹによってモジュレートされる状態は、炎症性障害である。
【０７０３】
特定の実施形態において、上記炎症性障害は、アテローム硬化症、アテローム血栓症、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、変形性関節症、インスリン抵抗性、糖尿病（１型糖尿病および２型糖尿病を含む）、１型糖尿病、２型糖尿病、メタボリックシンドローム、肥満症、正常よりも低いＨＤＬ−コレステロール、高血圧症、高脂血症、虚血性心疾患、心筋梗塞、うっ血性心不全、骨粗しょう症、正常よりも高い破骨細胞形成、膵炎、間質性腎炎、急性移植片拒絶、慢性肝炎、脂肪肝、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、再狭窄、虚血−再灌流傷害、アレルギー性炎症、パーキンソン病、プリオンに関連する疾患、興奮毒性損傷、アルツハイマー病、軽度認知障害（ＭＣＩ）、播種性血管内凝固症候群、敗血症性ショック、炎症性肺疾患、および炎症性腸疾患からなる群より選択される。特定の実施形態において、上記炎症性肺疾患は、喘息、気腫、間質性肺疾患、特発性肺線維症、閉塞性気管支炎症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、および肺動脈性肺高血圧症からなる群より選択される。特定の実施形態において、上記炎症性腸疾患は、腸炎、全腸炎、クローン病、肉芽腫性大腸炎、回腸炎、クローン大腸炎、潰瘍性大腸炎、Ｓ字結腸炎、全大腸炎、および潰瘍性直腸炎からなる群より選択される。
【０７０４】
特定の実施形態において、上記炎症性障害は、アテローム硬化症、アテローム血栓症、インスリン抵抗性、膵炎、再狭窄、炎症性肺疾患、および炎症性腸疾患からなる群より選択される。特定の実施形態において、上記炎症性肺疾患は、喘息、気腫、および肺動脈性肺高血圧症からなる群より選択される。特定の実施形態において、上記炎症性腸疾患は、腸炎、全腸炎、クローン病、肉芽腫性大腸炎、回腸炎、クローン大腸炎、潰瘍性大腸炎、Ｓ字結腸炎、全大腸炎、および潰瘍性直腸炎からなる群より選択される。
【０７０５】
低い骨量によって特徴付けられる状態としては、オステオペニア、骨粗しょう症、関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、歯槽骨損失、骨切り術による骨損失、小児期の特発性骨損失、パジェット病、転移性癌に起因する骨損失、骨溶解性病変、脊椎の弯曲、および身長の減少が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、上記低い骨量によって特徴付けられる状態は、骨粗しょう症である。特定の実施形態において、上記低い骨量によって特徴付けられる状態は、骨粗しょう症である。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、原発性骨粗しょう症である。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、続発性骨粗しょう症である。低い骨量によって特徴付けられる状態としてはまた、骨粗しょう症の長期合併症（例えば、脊椎の弯曲）、身長の減少および補綴手術が挙げられるが、これらに限定されない。低い骨量によって特徴付けられる状態は個別かまたは任意の組合せで実施形態に含まれ得ることが、理解される。特定の実施形態において、上記低い骨量によって特徴付けられる状態は、原発性骨粗しょう症である。
【０７０６】
特定の実施形態において、骨量の増大を必要とする個体は、若年成人の参照平均を下回る、１よりも大きい（Ｔスコア＜−１）か、１．５以上（Ｔスコア＝−１．５）であるか、２以上（Ｔスコア＝−２）であるか、または２．５以上（Ｔスコア＝−２．５）である標準偏差の骨塩量（ＢＭＤ）を有する。特定の実施形態において、上記骨量の増大を必要とする個体は、骨折の処置を必要とする。特定の実施形態において、上記骨折の処置を必要とする個体は、外傷性の骨折、長期の骨折、または骨粗しょう症性の骨折を有する。特定の実施形態において、上記個体は、骨疾患についての処置を必要とする。特定の実施形態において、上記骨疾患についての処置を必要とする個体は、オステオペニア、骨粗しょう症、関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、歯槽骨損失、骨切り術による骨損失、小児期の特発性骨損失、パジェット病、転移性癌に起因する骨損失、骨溶解性病変、脊椎の弯曲、または身長の減少を有する。特定の実施形態において、上記骨疾患についての処置を必要とする個体は、骨粗しょう症を有する。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、原発性骨粗しょう症である。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、続発性骨粗しょう症である。本発明によって処置され得る破壊性骨障害としては、骨粗しょう症、変形性関節症、および骨溶解性病変（例えば、腫瘍性疾患、放射線療法、または化学療法などによって引き起こされるもの）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、原発性骨粗しょう症である。特定の実施形態において、骨粗しょう症は、続発性骨粗しょう症である。
【０７０７】
本発明の治療（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニストに関連する治療）はさらに、個体において、顔面の再建、上顎の再建、下顎の再建、歯周疾患または抜歯後の骨治癒を増強すること、長骨伸長を増強すること、補綴内殖を増強することあるいは骨癒合を増大させることに有用である。
【０７０８】
本発明の治療（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニストに関連する治療）は、個体におけるＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用である。特定の実施形態において、ＰＹＹ関連活性の上記モジュレーションは、
（ａ）血漿ＰＹＹを増大させること；
（ｂ）骨量を増大させること；
（ｃ）骨量の損失を減少させること；
（ｄ）骨形成を増大させること；
（ｅ）食物摂取を減少させること；
（ｆ）体重を減少させること；
（ｇ）満腹感を増大させること；
（ｈ）グルコース処理を増大させること；
（ｉ）血漿グルコースを減少させること；
（ｊ）新脈管形成を増大させること；
（ｋ）腸管上皮における分泌を減少させること；
（ｌ）腸管上皮における吸収を増大させること；および
（ｍ）血漿アディポネクチンを増大させること；
からなる群より選択される。
【０７０９】
特定の実施形態において、上記個体は、脊椎動物である。特定の実施形態において、脊椎動物である上記個体は、魚類、両生類、爬虫類、鳥類または哺乳類である。特定の実施形態において、上記個体または脊椎動物は、哺乳類である。特定の実施形態において、哺乳類である上記個体または脊椎動物は、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ブタ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、非ヒト哺乳類、非ヒト霊長類またはヒトである。特定の実施形態において、上記個体は、ヒトである。特定の実施形態において、上記ヒトは、閉経後の女性または５０歳を上回る男性である。
【０７１０】
さらに詳述することなく、前記説明を使用して当業者はその最も広い範囲で本発明を実施することができると考えられる。上記詳細な説明は、明確に理解することのみを目的として記載し、本発明の範囲内の改変形態が当業者に明らかとなり得るので、その説明から本発明を不必要に制限すると理解すべきではない。
【０７１１】
本出願を通して、種々の刊行物、特許、および特許出願が、引用される。本出願で参照されたこれらの刊行物、特許、および特許出願の開示は、本開示中にその全体が本明細書中で参考として援用される。刊行物、特許、または特許出願の本出願人による本明細書中の引用は、上記の刊行物、特許、または特許出願を先行技術として認めていない。
【実施例】
【０７１２】
さらに詳述することなく、前記説明を使用して当業者はその最も広い範囲で本発明を実施することができると考えられる。以下の詳細な実施例は、単なる例示にすぎないと解釈され、前記開示を決して限定しない。当業者は、手順から適切なバリエーションを即座に認識する。
【０７１３】
（実施例１）
（ＧＰＲ１１９レセプターは、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞においてｃＡＭＰ蓄積を増大させる構成的活性を示す）
ＧＰＲ１１９レセプターは、ｃＡＭＰアッセイにおいて構成的活性を示すことが示された。ｃＡＭＰの測定を、供給業者のプロトコルに従ってＦｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅアデニリルシクラーゼキット（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）を用いて行った。簡単にいうと、ＨＥＫ２９３細胞を、リポフェクタミン（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して空ベクターＤＮＡ（「Ｖｅｃｔｏｒ」）またはヒトＧＰＲ１１９レセプター発現プラスミドＤＮＡ（「ＧＰＲ１１９」）のいずれかによってトランスフェクトした。２４時間後、トランスフェクトされた細胞を、ＧＩＢＣＯ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）細胞解離緩衝液（カタログ番号１３１５１−０１４）に回収し、そしてその細胞を、アッセイ緩衝液（５０％の１×ＰＢＳ／５０％の刺激緩衝液）に再懸濁した。インキュベーションを、１ウェルあたり１０５個の細胞と一緒に６０分間にわたって室温にて行った。検出緩衝液中のトレーサと一緒にさらに２時間インキュベーションした後、プレートを、Ｗａｌｌａｃ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）ＭｉｃｒｏＢｅｔａシンチレーションカウンターにおいてカウントした。１ウェルあたりのｃＡＭＰの値を、各アッセイプレートに対して含まれたｃＡＭＰ検量線から外挿した。結果を、図１に提示する。図１に示した結果から、ＧＰＲ１１９レセプターがトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞においてｃＡＭＰ蓄積を増大させる構成的活性を示すことは、明らかである。
【０７１４】
（実施例２）
（化合物１は、例えば、ＧＰＲ１１９トランスフェクトＨＥＫ２９３細胞におけるｃＡＭＰ蓄積の刺激によって証明される通り、ＧＰＲ１１９レセプターのアゴニストである）
化合物１（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミン）は、ｃＡＭＰアッセイにおいてＧＰＲ１１９レセプターのアゴニストであることを示した。ｃＡＭＰの測定を、供給業者のプロトコルに従ってＦｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅアデニリルシクラーゼキット（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）を用いて行った。簡単にいうと、ＨＥＫ２９３細胞を、リポフェクタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して空ベクターＤＮＡ（「ベクター」）またはヒトＧＰＲ１１９レセプター発現プラスミドＤＮＡ（「ＧＰＲ１１９」）のいずれかによってトランスフェクトした。２４時間後、トランスフェクトされた細胞を、ＧＩＢＣＯ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）細胞解離緩衝液（カタログ番号１３１５１−０１４）に回収し、そしてその細胞を、アッセイ緩衝液（５０％の１×ＰＢＳ／５０％の刺激緩衝液）に再懸濁した。化合物１を、１ウェルあたり１０５個の細胞と一緒に６０分間にわたって室温にてインキュベートした。検出緩衝液中のトレーサと一緒にさらに２時間インキュベーションした後、プレートを、Ｗａｌｌａｃ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）ＭｉｃｒｏＢｅｔａシンチレーションカウンターにおいてカウントした。１ウェルあたりのｃＡＭＰの値を、各アッセイプレートに対して含まれたｃＡＭＰ検量線から外挿した。結果を、図２に提示する。図２に示した結果から、化合物１がＧＰＲ１１９レセプターのアゴニストであることは、明らかである。
【０７１５】
（実施例３）
（野生型マウスにおける血漿ＰＹＹに対するＧＰＲ１１９アゴニストの投与の効果）
Ｃ５７ＢＬ／６雄マウス（約８週齢；Ｈａｒｌａｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮから得た）を、１８時間にわたって絶食させ、そしてそのマウスを、各群についてｎ＝６で８つの群へと無作為に割り当てた。マウスに、図３に示した通り、１０ｍｇ／ｋｇにてビヒクル（８０％のポリエチレングリコール４００／１０％のＴｗｅｅｎ  ８０／１０％のエタノール）またはＧＰＲ１１９アゴニスト（化合物１；（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミン）を経口投与した。処置の３０分後、３ｇ／ｋｇにおけるグルコースのボーラスを、経口送達し、そして血液を、０分（グルコースのボーラスなし）、グルコースのボーラスの２分後、５分後、および１０分後に回収した。血漿の全ＰＹＹ（ＰＹＹ１−３６およびＰＹＹ３−３６を含む）レベルを、Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から購入したＰＹＹ  ＥＩＡキット（ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）（ラット、マウス、ブタ、イヌ）ＥＩＡキット、カタログ番号ＥＫ−０５９−０３）をそのキット中に提供された説明書に従って使用することによって決定した。図３に示した結果から、上記ＧＰＲ１１９アゴニスト（化合物１）の投与が上記マウスにおける血漿の全ＰＹＹを増大させたことは、明らかである。図３に示した結果から、上記ＧＰＲ１１９アゴニスト（化合物１）が上記マウスにおける血漿の全ＰＹＹを刺激したことは、明らかである。化合物１は、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１２６７（ＷＯ  ２００４／０６５３８０として公開された）に開示された化合物と同一である。
【０７１６】
（実施例４）
（野生型マウスと比較した、ＧＰＲ１１９欠損（ノックアウト）マウスにおける血漿ＰＹＹに対するＧＰＲ１１９アゴニストの投与の効果）
ＧＰＲ１１９欠損雄マウス（Ｃｈｕら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（２００７）１４８：２６０１−２６０９）および野生型同腹仔を、１８時間にわたって絶食させる。マウスに、２０ｍｇ／ｋｇにてビヒクル（８０％のポリエチレングリコール４００／１０％のエタノール／１０％のＴｗｅｅｎ  ８０）または本発明によるＧＰＲ１１９アゴニスト（化合物１；（２−フルオロ−４−メタンスルホニル−フェニル）−｛６−［４−（３−イソプロピル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−ニトロ−ピリミジン−４−イル｝−アミン）を経口投与する。処置の３０分後、血液（１００マイクロリットル）を、眼の後眼窩静脈を介して回収（時間０分）し、次いで３ｇ／ｋｇにてグルコースのボーラス（経口）を行う。グルコースを送達した５分後、さらなる血液サンプル（１００マイクロリットル）を、回収（時間５分）する。血漿を、遠心分離後に回収し、そして血漿の全ＰＹＹレベルを、Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から購入したＰＹＹ  ＥＩＡキット（ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）（ラット、マウス、ブタ、イヌ）ＥＩＡキット、カタログ番号ＥＫ−０５９−０３）をそのキット中に提供された説明書に従って使用することによって決定する。機能性ＧＰＲ１１９レセプターは、上記マウスにおける血漿の全ＰＹＹを増大させるために、投与したＧＰＲ１１９アゴニストに必要であることが、さらに示され得る。化合物１は、野生型マウスにおいて血漿の全ＰＹＹを刺激するが、ＧＰＲ１１９欠損マウスにおいて血漿の全ＰＹＹを刺激しないことが示され得る。化合物１は、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１２６７（ＷＯ  ２００４／０６５３８０として公開された）に開示された化合物と同一である。
【０７１７】
（実施例５）
（卵巣切除ラットにおける骨量に対するＧＰＲ１１９アゴニストの投与の効果）
本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストは、低い骨量によって特徴付けられる状態（例えば、骨粗しょう症）を処置または予防すること、および／あるいは個体における骨量を増大させることにおいて有効であることが、下記のインビボ卵巣切除（ＯＶＸ）ラットモデル（例えば、Ｂｏｌｌａｇら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ（２００１）１７７：３５−４１を参照のこと）を使用して示され得る。
【０７１８】
８週齢である、２０匹の未交尾雌ＯＶＸ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットおよび２０匹の未交尾非ＯＶＸ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（１５０〜１７５ｇ）を、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）から購入する。動物に、自由に得られる水と共に、通常の市販のペレット食餌であるＴｅｋｌａｂ  Ｒｏｄｅｎｔ食餌（１．４６％のカルシウム）を無制限に供給する。上記ラットを、体重がマッチした４つの実験群へと無作為に分割し、そしてビヒクルまたは本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストを経口で受容させるために選択する。処置を、６週間にわたって毎日継続する。
１．コントロール。１０匹の非ＯＶＸラットに、ビヒクルを経口投与する。
２．コントロール＋処置。１０匹の非ＯＶＸラットに、ＧＰＲ１１９アゴニストを経口投与する。
３．ＯＶＸ。１０匹のＯＶＸラットに、ビヒクルを経口投与する。
４．ＯＶＸ＋処置。１０匹のＯＶＸラットに、ＧＰＲ１１９アゴニストを経口投与する。
上記ラットを、毎日秤量し、そしてベースラインにて、体長を測定し、そして６週間目にて、再び体長を測定する。Ｈｏｌｏｇｉｃ  ＱＤＲ  １０００／Ｗ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用した二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＸＡ）を、処置の開始前および６週間目に全ての動物に対して行い、そしてデータを、ソフトウェアＲａｔ  Ｗｈｏｌｅ  Ｂｏｄｙバージョン５．５３を使用して分析する。骨塩量（ＢＭＤ）を、脊椎において決定する。
【０７１９】
処置の６週間後における脊椎骨の骨密度の％変化を、決定する。ＧＰＲ１１９アゴニストの投与は脊椎骨の骨密度に対する卵巣摘出のネガティブな効果を弱めることが、示される。脊椎骨の骨密度に対する卵巣摘出のネガティブな効果の減弱は、上記処置が、低い骨量によって特徴付けられる状態（例えば、骨粗しょう症）を処置または予防することおよび／あるいは個体における骨量を増大させることにおいて効力を有することを示す。
【０７２０】
（実施例６）
（骨折治癒に対するＧＰＲ１１９アゴニストの投与の効果）
本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストは、骨折の処置に有効であることが、下記のインビボアッセイを使用して示され得る。
【０７２１】
（骨折の手法）
３ヶ月齢におけるＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、ケタミンによって麻酔する。１ｃｍの切開を、右脛骨または右大腿骨の近位部分の前内側面において行う。以下に、脛骨の外科的手法を、記載する。上記切開を、骨に達するまで行い、そして１ｍｍの穴を、前縁（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｒｉｄｇｅ）に対して２ｍｍ内側の脛骨結節の遠位側面の近位４ｍｍにおいて穿孔する。髄内釘固定法は、０．８ｍｍのステンレス鋼チューブ（最大荷重３６．３Ｎ、最大剛性６１．８Ｎ／ｍｍ、骨と同じ条件下で試験した）を用いて行う。髄管のリーミングを、行わない。標準化された閉鎖骨折を、特別に設計された平らな顎部を有する調整可能な鉗子を使用した３点曲げ（ｔｈｒｅｅ−ｐｏｉｎｔ  ｂｅｎｄｉｎｇ）によって脛腓関節よりも２ｍｍ上にもたらした。軟部組織の損傷を最小化するために、上記骨折を動かさないように介護をする。皮膚を、モノフィラメントのナイロン縫合糸を用いて閉じた。上記手術を、無菌条件下で行う。全ての骨折のＸ線写真を、釘固定法の直後に収集し、そして特定の骨幹領域以外に骨折を有するか、または移動した釘を有するラットを、除外する。残りの動物を、骨折治癒を試験するために時点あたりの部分群毎に、１０〜１２匹の動物を含む以下の群へと無作為に分割する。上記ラットに、ビヒクルまたはＧＰＲ１１９アゴニストを毎日経口投与する。上記ＧＰＲ１１９アゴニストを、体重１ｋｇあたり０．００１ｍｇと体重１ｋｇあたり１００ｍｇとの間の量にて使用する。処置を、１０日間、２０日間、４０日間および８０日間にわたって継続する。
【０７２２】
１０日目、２０日目、４０日目および８０日目において、各グループからの１０〜１２匹のラットを、ケタミンによって麻酔し、そして瀉血によって屠殺する。脛骨および腓骨の両方を、切開によって除去し、そして全ての軟部組織を、取り除く。各群について５〜６匹のラットからの骨を、組織学的分析のために７０％のエタノール中に保存し、そして各群についてさらに５〜６匹のラットからの骨を、行われるＸ線写真および生物化学的試験のために緩衝化Ｒｉｎｇｅｒ溶液（４℃、ｐＨ７．４）中に保存する。
【０７２３】
（組織化学的分析）
骨折した骨の組織学的分析のための方法は、ＭｏｓｅｋｉｌｄｅおよびＢａｋ（Ｂｏｎｅ（１９９３）１４：１９−２７）によって先に公開されている。簡単にいうと、上記骨折部位を、骨折線の両側から８ｍｍで切断し、メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ）中で包理し、脱灰し、そしてＲｅｉｃｈｅｒｔ−Ｊｕｎｇ  Ｐｏｌｙｃｕｔミトクロームにおいて８μｍの厚さで前頭断を切断する。Ｍａｓｓｏｎ−Ｔｒｉｃｈｏｍｅ染色した中間の前頭断切片（ｍｉｄ−ｆｒｏｎｔａｌ  ｓｅｃｔｉｏｎ）（脛骨および腓骨の両方を含む）を、処置を伴う場合および処置を伴わない場合の骨折治癒に対する細胞応答および組織応答の可視化のために使用する。シリウスレッド（ｓｉｒｉｕｓ  ｒｅｄ）染色切片を、仮骨構造の特徴を示すため、および骨折部位における網状骨と層板骨との間を区別するために使用する。以下の測定を、行う：（１）骨折の間隙-骨折における皮質骨端の間の最も短い距離として測定される、（２）仮骨の長さおよび仮骨の直径、（３）仮骨の総体積、（４）仮骨領域の内側の組織領域あたりの骨組織、（５）仮骨中の線維組織、および（６）仮骨中の軟骨領域。
【０７２４】
（生物化学的分析）
生物化学的分析のための方法は、ＢａｋおよびＡｎｄｒｅａｓｓｅｎによって先に開示されている（Ｃａｌｃｉｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｉｎｔ（１９８９）４５：２９２−２９７）。簡単にいうと、全ての骨折のＸ線写真は、生物化学的試験の前に採取される。骨折の治癒の機構的特性を、破壊的な３点曲げ手順または４点曲げ手順によって分析する。最大負荷、剛性、最大負荷におけるエネルギー、最大荷重における反屈、および最大応力を、決定する。
【０７２５】
（実施例７）
（内因性ヒトＧＰＲ１１９の全長クローニング）
内因性ヒトＧＰＲ１１９をコードするポリヌクレオチドを、ＧＰＲ１１９特異的プライマー：
５’−ＧＴＣＣＴＧＣＣＡＣＴＴＣＧＡＧＡＣＡＴＧＧ−３’（配列番号３；センス、開始コドンとしてＡＴＧ）；
５’−ＧＡＡＡＣＴＴＣＴＣＴＧＣＣＣＴＴＡＣＣＧＴＣ−３’（配列番号４；アンチセンス、停止コドンの３’）；
およびテンプレートとしてヒトゲノムＤＮＡを使用したＰＣＲによってクローニングした。ＴａｑＰｌｕｓ  ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＴＭ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を、工程２〜工程４を３５回繰り返す以下のサイクルによる増殖のために使用した：
９４℃、３分間；９４℃、１分間；５８℃、１分間；７２℃、２分間；７２℃、１０分間。
予測されたサイズの１．０Ｋｂ  ＰＣＲフラグメントを、単離し、ｐＣＲＩＩ−ＴＯＰＯＴＭベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、そしてＴ７  ＤＮＡ  ｓｅｑｕｅｎａｓｅキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用して完全に配列決定した。核酸配列についての配列番号１および推定されるアミノ酸配列についての配列番号２を参照のこと。
【０７２６】
（実施例８）
（レセプター発現）
種々の細胞が、Ｇタンパク質共役レセプターの発現のために当該分野において利用可能であるが、真核生物細胞を利用することが、最も好ましい。特定の実施形態において、哺乳動物細胞または黒色素胞を、利用する。以下に示すものは、例である；当業者は、当業者のニーズにとって優先的に有益である技術を決定する能力を有すると考えられる。例えば、それが黒色素胞に関する場合、実施例１２、後述を参照のこと。
【０７２７】
（ａ．一過性トランスフェクション）
１日目において、１０ｃｍディッシュあたり６×１０６個の２９３細胞を、プレーとする。２日目において、２つの反応チューブを、調製する（各チューブについて以下の割合が、１プレートあたりのものである）：チューブＡを、４μｇのＤＮＡ（例えば、ｐＣＭＶベクター；レセプターｃＤＮＡを有するｐＣＭＶベクターなど）を０．５ｍｌの無血清ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）において混合することによって調製する；チューブＢを、２４μｌのリポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を０．５ｍｌ無血清ＤＭＥＭにおいて混合することによって調製する。チューブＡおよびチューブＢを、反転（数回）によって混合し、次いで室温にて３０〜４５分間にわたってインキュベーションを行う。その混合物を、「トランスフェクション混合物」と称する。蒔いた２９３細胞を、１×ＰＢＳによって洗浄し、次いで５ｍｌの無血清ＤＭＥＭの添加を行う。１ｍｌの上記トランスフェクション混合物を、その細胞に添加し、次いで４時間にわたって３７℃／５％のＣＯ２にてインキュベーションを行う。上記トランスフェクション混合物を、吸引によって除去し、次いで１０ｍｌのＤＭＥＭ／１０％ウシ胎仔血清の添加を行う。細胞を、３７℃／５％のＣＯ２にてインキュベートする。４８時間のインキュベーション後、細胞を、回収し、そしてその細胞を、分析に利用する。
【０７２８】
（ｂ．安定細胞株）
約１２×１０６個の２９３細胞を、１５ｃｍの組織培養プレートに蒔く。１０％のウシ胎仔血清と、１％のピルビン酸ナトリウムと、Ｌ−グルタミンと、抗生物質とを含むＤＭＥ高グルコース培地（ＤＭＥ  Ｈｉｇｈ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）において増殖させる。２９３細胞のプレーティングの２４時間後（または約８０％の集密度（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ））において、細胞を、１２μｇのＤＮＡ（例えば、レセプターｃＤＮＡを有するｐＣＭＶ−ｎｅｏｒベクター）を使用してトランスフェクトする。上記１２mｇのＤＮＡを、６０mｌのリポフェクタミンおよび血清を含まない２ｍｌのＤＭＥ高グルコース培地と混合する。上記培地を、上記プレートから吸引し、そして細胞を、血清を含まない培地によって１回洗浄する。上記ＤＮＡと、リポフェクタミンと、培地との混合物を、血清を含まない１０ｍｌの培地と一緒に上記プレートに添加する。３７℃にて４〜５時間にわたるインキュベーション後に、上記培地を、吸引し、そして血清を含む２５ｍｌの培地を、添加する。２４時間のトランスフェクション後に、上記培地を、再び吸引し、そして血清を含む新鮮な培地を、添加する。４８時間のトランスフェクション後に、上記培地を、吸引し、そしてジェネティシン（Ｇ４１８薬物）を含み、血清を含む培地を、添加し、約１２×１０６個の最終濃度の２９３細胞を、１５ｃｍの組織培養プレートに蒔く。１０％のウシ胎仔血清と、１％のピルビン酸ナトリウムと、Ｌ−グルタミンと、抗生物質とを含むＤＭＥ高グルコース培地において増殖させる。２９３細胞のプレーティングの２４時間後（または約８０％の集密度）において、細胞を、１２μｇのＤＮＡ（例えば、レセプターｃＤＮＡを有するｐＣＭＶベクター）を使用してトランスフェクトする。上記１２μｇのＤＮＡを、６０μｌのリポフェクタミンおよび血清を含まない２ｍｌのＤＭＥ高グルコース培地と混合する。上記培地を、上記プレートから吸引し、そして細胞を、血清を含まない培地によって１回洗浄する。上記ＤＮＡと、リポフェクタミンと、培地との混合物を、血清を含まない１０ｍｌの培地と一緒に上記プレートに添加する。３７℃にて４〜５時間にわたるインキュベーション後に、上記培地を、吸引し、そして血清を含む２５ｍｌの培地を、添加する。２４時間のトランスフェクション後に、上記培地を、再び吸引し、そして血清を含む新鮮な培地を、添加する。４８時間のトランスフェクション後に、上記培地を、吸引し、そして５００μｇ／ｍｌの最終濃度でジェネティシン（Ｇ４１８薬物）を含み、血清を含む培地を、添加する。ここで、トランスフェクトされた細胞は、Ｇ４１８耐性遺伝子を含むポジティブにトランスフェクトされた細胞についての選択を受ける。選択が生じる場合、上記培地を、４〜５日毎に置換する。選択の間、細胞を、安定なプールを形成するために増殖させるか、または安定なクローンの選択のために分割する。
【０７２９】
（実施例９）
（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニストとしての候補化合物を、スクリーニングするためのアッセイ）
種々のアプローチが、例えば、ＧＰＲ１１９アゴニストとしての候補化合物をスクリーニングするために利用可能である。以下に示すものは、例である；当業者は、当業者のニーズにとって優先的に有益である技術を決定する能力を有すると考えられる。化合物をＧタンパク質共役レセプターのアゴニストとしてスクリーニングするためのアッセイは、当業者に周知である（例えば、国際出願ＷＯ  ０２／４２４６１を参照のこと）。
【０７３０】
（１．膜結合アッセイ：［３５Ｓ］ＧＴＰγＳアッセイ）
リガンドの結合または構成的活性化のいずれかの結果としてＧタンパク質共役レセプターがその活性状態にある場合、上記レセプターは、Ｇタンパク質に結合し、そしてそのレセプターは、ＧＤＰの放出およびその後のＧタンパク質へのＧＴＰの結合を刺激する。Ｇタンパク質−レセプター複合体のαサブユニットは、ＧＴＰａｓｅとして作用し、そしてＧＴＰをＧＤＰへとゆっくりと加水分解し、その時点において、そのレセプターは、通常、非活性化される。活性化されたレセプターは、ＧＤＰをＧＴＰと交換し続ける。非加水分解性ＧＴＰアナログ（［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ）を、活性化されたレセプターを発現する膜への［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの増強された結合を示すために利用できる。活性化を測定するために［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの結合を使用する利点は、以下である：（ａ）その結合は、一般的に、全てのＧタンパク質共役レセプターに適用可能であること；（ｂ）その結合は、その結合が細胞内カスケードに影響を及ぼす分子を取り出す可能性が低くなる膜表面の近位に存在すること。
【０７３１】
上記アッセイは、関連するレセプターを発現する膜への［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの結合を刺激するＧタンパク質共役レセプターの能力を利用する。上記アッセイは、一般的であり、そして全てのＧタンパク質共役レセプターにおける薬物の発見に対する適用を有する。
【０７３２】
（膜の調製）
いくつかの実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターを含み、そして例えば、そのレセプターのアゴニストとしての候補化合物の同定に使用するための膜を、好ましくは、以下の通りに調製する：
（ａ．材料）
「膜掻き取り緩衝液（Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｓｃｒａｐｅ  Ｂｕｆｆｅｒ）」は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび１０ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）から構成される；「膜洗浄緩衝液」は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび０．１ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）から構成される；「結合緩衝液」は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００ｍＭのＮａＣｌ、および１０ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）から構成される。
【０７３３】
（ｂ．手順）
全ての材料を、手順全体を通して氷上に保持する。第１に、培地を、細胞のコンフルエント（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）な単層から吸引し、次いでその単層を、１０ｍｌの冷ＰＢＳによってリンスし、次いでその冷ＰＢＳを、吸引する。その後、５ｍｌの膜掻き取り緩衝液を添加して、細胞を掻き取る；この後、細胞抽出物を、５０ｍｌの遠心チューブに移す（４℃にて２０，０００ｒｐｍで１７分間にわたって遠心分離する）。その後、上清を、吸引し、そしてペレットを、３０ｍｌの膜洗浄緩衝液に再懸濁し、次いで２０，０００ｒｐｍで１７分間にわたって４℃にて遠心分離する。次いで、上清を、吸引し、そしてペレットを、結合緩衝液に再懸濁する。次いで、これを、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ＰｏｌｙｔｒｏｎＴＭホモジナイザーを使用して均質化する（全ての材料が懸濁するまで、１５〜２０秒間バーストする）。これを、本明細書中で「膜タンパク質」と称する。
【０７３４】
（ブラッドフォード（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）タンパク質アッセイ）
均質化の後、膜のタンパク質濃度を、ブラッドフォードタンパク質アッセイ（タンパク質を、約１．５ｍｇ／ｍｌに希釈し、アリコートし、そしてその後の使用のために凍結（−８０℃）し得る；凍結した場合、使用のためのプロトコルは、以下の通りである：そのアッセイの日において、凍結した膜タンパク質を、室温にて解凍し、次いでボルテックスし、その後、ポリトロンを用いて約１２×１，０００ｒｐｍで約５〜１０秒間にわたって均質化する；複数の調製物に関して、ホモジナイザーを、異なる調製物の均質化の間に完全に洗浄するべきことに留意する）を使用して決定する。
【０７３５】
（ａ．材料）
結合緩衝液（上記のとおり）；ブラッドフォード色素試薬；ブラッドフォードタンパク質標準を、製造者の説明書に従って利用する（Ｂｉｏｒａｄ、カタログ番号５００−０００６）。
【０７３６】
（ｂ．手順）
一方が膜を含み、そしてもう一方がコントロール「ブランク」である、２連のチューブを、調製する。各々は、８００μｌの結合緩衝液を含んでいた。その後、１０μｌのブラッドフォードタンパク質標準（１ｍｇ／ｍｌ）を、各チューブに添加し、次いで１０μｌの膜タンパク質を、一方のチューブのみ（ブランクではない）に添加する。その後、２００μｌのブラッドフォード色素試薬を、各チューブに添加し、次いで各々をボルテックスする。５分後、チューブを、再度ボルテックスし、チューブ中の材料を、キュベットに移す。次いで、キュベットを、ＣＥＣＩＬ  ３０４１分光光度計を使用して５９５ｎｍの波長を読み取る。
【０７３７】
（同定アッセイ）
（ａ．材料）
ＧＤＰ緩衝液は、３７．５ｍｌの結合緩衝液および２ｍｇのＧＤＰ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｇ−７１２７）からなり、次いで、結合緩衝液で系列希釈して、０．２μＭのＧＤＰ（各ウェル中のＧＤＰの最終濃度は、０．１μＭのＧＤＰであった）を得る；候補化合物を含む各ウェルは、１００μｌのＧＤＰ緩衝液（最終濃度、０．１μＭのＧＤＰ）、５０μｌの結合緩衝液中の膜タンパク質、および５０μｌの結合緩衝液中の［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（０．６ｎＭ）（１０ｍｌの結合緩衝液あたり２．５μｌの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ）からなる２００μｌの最終容量を有する。
【０７３８】
（ｂ．手順）
候補化合物を、好ましくは、９６ウェルプレート形式（これらを、−８０℃で凍結し得る）を使用してスクリーニングする。膜タンパク質（またはコントロールとして標的ＧＰＣＲを除いた発現ベクターを含む膜）を、懸濁するまで簡潔に均質化する。次いで、タンパク質濃度を、上記のブラッドフォードタンパク質アッセイを使用して決定する。次いで、膜タンパク質（およびコントロール）を、結合緩衝液で０．２５ｍｇ／ｍｌに希釈する（最終アッセイ濃度、１２．５μｇ／ウェル）。その後、１００μｌのＧＤＰ緩衝液を、Ｗａｌｌａｃ  ＳｃｉｎｔｉｓｔｒｉｐＴＭ（Ｗａｌｌａｃ）の各ウェルに添加した。次いで、５μｌのピンツールを使用して、５μｌの候補化合物をこのようなウェルに移す（すなわち、５μｌの２００μｌの総アッセイ容量中の５μｌは、候補化合物の最終スクリーニング濃度が１０μＭであるような１：４０の比率である）。さらに、汚染を回避するために、各移動工程後、ピンツールを、水（１回）、エタノール（１回）、および水（２回）を含むレザバ中でリンスすべきである。過剰な液体を、各リンス後にツールから振り落とし、紙およびキムワイプで乾燥させるべきである。その後、５０μｌの膜タンパク質を、各ウェル（標的ＧＰＣＲを有さない膜を含むコントロールウェルも、使用した）に添加し、室温で５〜１０分間にわたってプレインキュベートする。その後、５０μｌの結合緩衝液中の［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（０．６ｎＭ）を、各ウェルに添加し、次いで撹拌機上にて室温で６０分間にわたってインキュベートする（再度、本実施例では、プレートをホイルで被覆した）。次いで、アッセイを、４０００ＲＰＭにて１５分間にわたる２２℃でのプレートのスピンによって停止する。次いで、プレートを、８チャネルの多岐管を使用して吸引し、プレートカバーで密封する。次いで、プレートを、「Ｐｒｏｔ．＃３７」設定を使用したＷａｌｌａｃ  １４５０で読み取る（製造者の説明書による）。
【０７３９】
（２．アデニリルシクラーゼアッセイ）
細胞ベースのアッセイのために設計されたＦｌａｓｈ  ＰｌａｔｅＴＭアデニリルシクラーゼキット（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ；カタログ番号ＳＭＰ００４Ａ）を、粗原形質膜と使用するために改変することができる。Ｆｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅウェルは、ｃＡＭＰを認識する特異的抗体も含む光沢のあるコーティング（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ  ｃｏａｔｉｎｇ）を含み得る。ウェル中に生成されたｃＡＭＰを、ｃＡＭＰ抗体への放射性ｃＡＭＰトレーサーの結合についての直接競合によって定量することができる。以下は、上記レセプターを発現する細胞中のｃＡＭＰレベルの変化の測定のための簡単な測定プロトコルとして機能する。
【０７４０】
特定の実施形態において、改変Ｆｌａｓｈ  ＰｌａｔｅＴＭアデニリルシクラーゼキット（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ；カタログ番号ＳＭＰ００４Ａ）を、以下のプロトコルに従って、例えば、ＧＰＲ１１９アゴニストとしての候補化合物の同定のために利用する。
【０７４１】
本発明のＧタンパク質共役レセプターでトランスフェクトした細胞を、トランスフェクションの約３日後に回収する。膜を、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）と１０ｍＭのＭｇＣｌ２とを含む緩衝液中での懸濁した細胞の均質化によって調製する。均質化を、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ＰｏｌｙｔｒｏｎＴＭを使用して氷上で約１０秒間にわたって行う。得られたホモジネートを、４９，０００×ｇで１５分間にわたって４℃にて遠心分離する。次いで、得られたペレットを、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）と０．１ｍＭのＥＤＴＡとを含む緩衝液に再懸濁し、１０秒間にわたって均質化し、次いで４９，０００×ｇで１５分間にわたって４℃にて遠心分離する。次いで、得られたペレットを、使用するまで−８０℃で保存する。直接同定スクリーニングの日に、膜ペレットを室温でゆっくり解凍し、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）と１０ｍＭのＭｇＣｌ２とを含む緩衝液中で再懸濁して、０．６０ｍｇ／ｍｌの最終タンパク質濃度を得る（再懸濁した膜を、使用するまで氷上に置く）。
【０７４２】
製造者の説明書に従って、ｃＡＭＰ標準および検出緩衝液（１１ｍｌの検出緩衝液に対して２μＣｉのトレーサー（［１２５Ｉ］ｃＡＭＰ（１００μｌ）を含む）を調製し、維持する。アッセイ緩衝液を、スクリーニングのために新たに調製し、そのアッセイ緩衝液は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２０ｍＭのホスホクレアチン（Ｓｉｇｍａ）、０．１ユニット／ｍｌのクレアチンホスホキナーゼ、５０μＭのＧＴＰ（Ｓｉｇｍａ）、および０．２ｍＭのＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ）を含んでいた；次いで、アッセイ緩衝液を、使用するまで氷上で保存した。
【０７４３】
候補化合物を、好ましくは、４０μｌの膜タンパク質（３０μｇ／ウェル）および５０μｌのアッセイ緩衝液と一緒に、例えば、９６ウェルプレートのウェル（３μｌ／ウェル；１２μＭの最終アッセイ濃度）に添加する。次いで、この混合物を、穏やかに振盪しながら３０分間にわたって室温でインキュベートした。
【０７４４】
インキュベーション後、１００μｌの検出緩衝液を、各ウェルに添加し、次いで２〜２４時間にわたってインキュベートする。次いで、プレートを、「Ｐｒｏｔ．＃３１」を使用したＷａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａＴＭプレートリーダーでカウントする（製造者の説明書による）。
【０７４５】
（３．ＣＲＥ−Ｌｕｃレポーターアッセイ）
２９３細胞および２９３Ｔ細胞を、１ウェルあたり２×１０４個の細胞の密度で９６ウェルプレートに蒔き、翌日に製造者の説明書に従ってリポフェクタミン試薬（ＢＲＬ）を使用してトランスフェクトする。ＤＮＡ／脂質混合物を、各６ウェルトランスフェクションのために以下の通りに調製する：２６０ｎｇのプラスミドＤＮＡを含む１００μｌのＤＭＥＭを、２μｌの脂質を含む１００μｌのＤＭＥＭと穏やかに混合する（その２６０ｎｇのプラスミドＤＮＡは、２００ｍｇの８ｘＣＲＥ−Ｌｕｃレポータープラスミド、５０ｎｇの本発明のＧタンパク質共役レセプターを含むｐＣＭＶまたは５０ｎｇのｐＣＭＶのみ、および１０ｎｇのＧＰＲＳ発現プラスミド（ＧＰＲＳを含むｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からなる）。８ＸＣＲＥ−Ｌｕｃレポータープラスミドを以下の通りに調製した：ベクターＳＲＩＦ−β−ｇａｌを、ｐβｇａｌ−Ｂａｓｉｃベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中のＢｇｌＶ−ＨｉｎｄＩＩＩ部位でのラットソマトスタチンプロモーター（−７１／＋５１）のクローニングによって得た。８コピーのｃＡＭＰ応答エレメントを、ＰＣＲによってアデノウイルステンプレートＡｄｐＣＦ１２６ＣＣＲＥ８から得て（Ｓｕｚｕｋｉら、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ（１９９６）７：１８８３−１８９３（それらの開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）、ＳＲＩＦ−β−ｇａｌベクターのＫｐｎ−ＢｇｌＶ部位にクローニングして８ｘＣＲＥ−β−ｇａｌレポーターベクターを得た。８ｘＣＲＥ−Ｌｕｃレポータープラスミドを、８ｘＣＲＥ−β−ｇａｌレポーターベクター中のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子をｐＧＬ３−ｂａｓｉｃベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＨｉｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩ部位から得たルシフェラーゼ遺伝子で置換することによって産生した。室温で３０分間のインキュベーション後、ＤＮＡ／脂質混合物を、４００μｌのＤＭＥＭで希釈し、１００μｌの希釈した混合物を、各ウェルに添加する。細胞培養インキュベーター中での４時間のインキュベーション後、１０％のＦＣＳを含む１００μｌのＤＭＥＭを、各ウェルに添加する。翌日、トランスフェクトされた細胞に、１０％ＦＣＳを含む２００μｌ／ウェルのＤＭＥＭを負荷（ｃｈａｎｇｅ）する。８時間後、ＰＢＳによる１回の洗浄後に、ウェルを、フェノールレッドを含まない１００μｌ／ウェルのＤＭＥＭに交換する。ルシフェラーゼ活性を、翌日、製造者の説明書に従ってＬｕｃＬｉｔｅＴＭレポーター遺伝子アッセイキット（Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して測定し、１４５０  ＭｉｃｒｏＢｅｔａＴＭシンチレーションおよび発光カウンター（Ｗａｌｌａｃ）で読み取る。
【０７４６】
（実施例１０）
（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト活性についての全細胞アデニリルシクラーゼアッセイ）
サイクリックＡＭＰの測定を、供給業者のプロトコルに従ってＦｌａｓｈ  ＰｌａｔｅＴＭアデニリルシクラーゼキット（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ）を用いて行う。ＨＥＫ２９３細胞を、標準的な増殖培地（ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ）において、１５ｃｍの組織培養ディッシュに１ディッシュあたり１２×１０６個の細胞にて蒔く。翌日、空ベクターＤＮＡおよび発現プラスミドＤＮＡのいずれか１０μｇを、製造業者のプロトコルに従ってリポフェクタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いて細胞にトランスフェクトする。２４時間の培養後、トランスフェクトされた細胞を、ＧＩＢＣＯ細胞解離緩衝液（カタログ番号１３１５１−０１４）中に回収し、１，１００ｒｐｍで５分間にわたる遠心分離によってペレットにし、そして適切な容量のアッセイ緩衝液（５０％の１×ＰＢＳおよび５０％の刺激緩衝液）中に慎重に再懸濁して、１ｍｌあたり２×１０６個の最終的な細胞数を得る。試験化合物を、５０μｌのアッセイ緩衝液において示される所望のアッセイ濃度で調製し、そして９６ウェルＦｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅのウェル中にピペッティングする。次いで、上記の調製した細胞懸濁物を、添加した（１ウェルあたり５０μｌ）。室温にて６０分間のインキュベーション後に、次いで、トレーサー［１２５Ｉ］−ｃＡＭＰを含む１００μｌの検出混合物を、上記ウェルに添加する。プレートを、さらに２時間にわたってインキュベートし、次いでＷａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａシンチレーションカウンターにおいてカウントする。ｃＡＭＰ／ウェルの値を、各アッセイプレートに対して含まれるｃＡＭＰ検量線から外挿する。
【０７４７】
空ベクターによってトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を上回るＧＰＲ１１９トランスフェクトＨＥＫ２９３細胞のｃＡＭＰレベルの増大は、試験化合物がＧＰＲ１１９レセプター機能性を刺激する化合物であることを示す。
【０７４８】
（実施例１１）
（直接的なｃＡＭＰの測定のための均一時間分解蛍光（Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｔｉｍｅ−Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）（ＨＴＲＦ（登録商標））アッセイ）
化合物を、直接的なｃＡＭＰの測定のためのＨＴＲＦ（登録商標）アッセイ（Ｇａｂｒｉｅｌら、ＡＳＳＡＹ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１：２９１−３０３、２００３）およびＧＰＲ１１９レセプターによって安定にトランスフェクトされた組換えＣＨＯ−Ｋ１細胞を使用して、ＧＰＲ１１９レセプターを刺激する化合物（例えば、ＧＰＲ１１９レセプターのアゴニスト）についてスクリーニングする。化合物を、直接的なｃＡＭＰの測定のためのＨＴＲＦ（登録商標）アッセイ（Ｇａｂｒｉｅｌら、ＡＳＳＡＹ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１：２９１−３０３、２００３）およびＧＰＲ１１９レセプターによって安定にトランスフェクトされた組換えＣＨＯ−Ｋ１細胞を使用して、ＧＰＲ１１９レセプターのアゴニストについてスクリーニングする。ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、ＡＴＣＣ（登録商標）（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；カタログ番号ＣＣＬ−６１）から得る。ＧＰＲ１１９レセプターのアゴニストを、直接的なｃＡＭＰの測定のためのＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいて、ｃＡＭＰ濃度を増大させる化合物として検出する。ＨＴＲＦ（登録商標）アッセイをまた、ＧＰＲ１１９レセプターアゴニストについてのＥＣ５０値を決定するために使用する。
【０７４９】
上記アッセイの原理：ＨＴＲＦ（登録商標）アッセイキットを、Ｃｉｓｂｉｏ−ＵＳ，Ｉｎｃ．から購入する（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ；カタログ番号６２ＡＭ４ＰＥＣ）。上記キットによって支援されるＨＴＲＦ（登録商標）アッセイは、上記ＣＨＯ−Ｋ１細胞によって生成された内因性ｃＡＭＰと、色素ｄ２を用いて標識したトレーサーｃＡＭＰとの間での競合的イムノアッセイである。上記トレーサーの結合を、クリプテートを用いて標識したモノクローナル抗ｃＡＭＰ抗体によって可視化する。特定のシグナル（すなわち、蛍光共鳴エネルギー転移、ＦＲＥＴ）は、標準またはサンプル中の標識されていないｃＡＭＰの濃度に反比例する。
【０７５０】
検量線：キット製造業者の説明書に従って、上記アッセイに含まれる標準（７１２ｎＭのｃＡＭＰに対して０．１７）の蛍光比（６６５ｎｍ／６２０ｎｍ）を、算出し、そしてｃＡＭＰ検量線を作成するために使用する。サンプル（試験化合物または化合物緩衝液）の蛍光比を、算出し、そして上記ｃＡＭＰ検量線を参照することによってそれぞれのｃＡＭＰ濃度を推定するために使用する。
【０７５１】
上記アッセイの設定：ＨＴＲＦ（登録商標）アッセイを、３８４ウェルプレート様式（ＰｒｏｘｉＰｌａｔｅｓ；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ；カタログ番号６００８２８０）において１ウェルあたり２０μｌの総容量で、本質的にキット製造業者の説明書に従って２工程のプロトコルを使用して行う。ＩＢＭＸ（１００μＭ）とロリプラム（１０μＭ）（ホスホジエステラーゼインヒビター；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；それぞれ、カタログ番号Ｉ５８７９およびカタログ番号Ｒ６５２０）と０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）フラクションＶ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；カタログ番号Ａ３０５９））とを補充した５μｌのアッセイ緩衝液（塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムを含むリン酸緩衝化生理食塩水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ；カタログ番号１４０４０））中の３０００個の組換えＣＨＯ−Ｋ１細胞を、実験のウェルの各々に移し、次いで、５μｌのアッセイ緩衝液中の試験化合物または５μｌのアッセイ緩衝液を、そのウェルに移す。次いで、プレートを、室温にて１時間にわたってインキュベートする。次いで、キット製造業者の説明書に従って、各ウェルに、５μｌの溶解緩衝液中のｃＡＭＰ−ｄ２結合体および５μｌの溶解緩衝液中のクリプテート結合体を添加する。次いで、プレートを、室温にて１時間にわたってさらにインキュベートし、その後、アッセイプレートを、読む。
【０７５２】
アッセイの読み取り：ＨＴＲＦ（登録商標）の読み取りを、ＰＨＥＲＡｓｔａｒ（ＢＭＧ  ＬＡＢＴＥＣＨ  Ｉｎｃ．、Ｄｕｒｈａｍ、ＮＣ）またはＥｎＶｉｓｉｏｎＴＭ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｆｒｅｍｏｎｔ  ＣＡ）マイクロプレートリーダーを使用して達成する。
【０７５３】
（実施例１２）
（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト活性についての黒色素胞アッセイ）
黒色素胞を、Ｐｏｔｅｎｚａら［Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９２）５：３７２−３７８］によって報告される通りに培養において維持し、そしてエレクトロポレーションを使用してＧＰＲ１１９レセプター（ＧＰＲ１１９；例えば、ヒトＧＰＲ１１９、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号ＡＡＰ７２１２５およびその対立遺伝子）をコードする発現ベクターを用いてトランスフェクトする。エレクトロポレーション後に、トランスフェクトされた細胞を、上記アッセイのために９６ウェルプレートに蒔く。次いで、細胞を、エレクトロポレーション手順からの回復および最大のレセプター発現レベルの達成の両方のために、放置して４８時間にわたって増殖させる。
【０７５４】
上記アッセイの日に、細胞に対する増殖培地を、１０ｎＭのメラトニンを含む無血清緩衝液によって置換する。メラトニンは、黒色素胞中の内因性Ｇｉ結合ＧＰＣＲを介して作用し、細胞内ｃＡＭＰレベルを低下させる。低下したｃＡＭＰレベルに対する応答において、上記黒色素胞は、それらの色素をその細胞の中心に輸送する。これの正味の効果は、６００〜６５０ｎＭにて測定される上記ウェルにおける細胞単層の吸光度の読み取りの顕著な減少である。
【０７５５】
メラトニンにおける１時間のインキュベーション後に、上記細胞は、完全に色素が集合した状態になる。この時点において、ベースラインの吸光度の読み取りを、収集する。次いで、試験化合物の系列希釈物を、プレートに添加し、そしてＧＰＲ１１９アゴニスト活性を有する化合物は、細胞内ｃＡＭＰレベルの増大をもたらす。増大したｃＡＭＰレベルの応答において、上記黒色素胞は、それらの色素を輸送して細胞の末梢に戻す。１時間後に、刺激した細胞は、十分に色素が分散している。その分散した状態における細胞単層は、６００〜６５０ｎｍの範囲においてずっと多くの光を吸収する。ベースラインの読み取りと比較した場合の吸光度の測定された増大は、レセプター刺激の程度を定量し、そして用量−反応曲線をプロットすることを可能にする。
【０７５６】
黒色素胞アッセイに関する材料および方法は、米国特許第５，４６２，８５６号および同第６，０５１，３８６号（それらの各々の開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に見出される。
【０７５７】
空ベクターを用いてトランスフェクトした黒色素胞における色素散乱を上回るＧＰＲ１１９トランスフェクト黒色素胞における色素散乱の増大は、試験化合物がＧＰＲ１１９レセプター機能性を刺激する化合物であることを示す。
【０７５８】
化合物をＧＰＲ１１９アゴニストとして同定するための他のアッセイは、当業者にとって容易に明らかである（例えば、実施例９、前出を参照のこと）。
【０７５９】
（実施例１３）
（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト活性についての酵母レポーターアッセイ）
酵母細胞ベースのレポーターアッセイは、文献において先に記載されている（例えば、Ｍｉｒｅｔら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（２００２）２７７：６８８１−６８８７；Ｃａｍｐｂｅｌｌら、Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ（１９９９）９：２４１３−２４１８；Ｋｉｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０）２５０：１２１−１２３；ＷＯ  ９９／１４３４４；ＷＯ  ００／１２７０４；および米国特許第６，１００，０４２号を参照のこと）。簡単にいうと、酵母細胞は、内因性酵母Ｇ−α（ＧＰＡ１）が、欠失し、そして複数の技術を使用して構築されたＧタンパク質キメラによって置換されているように操作されている。さらに、上記内因性酵母α−細胞ＧＰＣＲ（Ｓｔｅ３）は、選択した哺乳動物ＧＰＣＲの同種発現を可能にするために欠失している。上記酵母において、真核生物細胞において保存されているフェロモンシグナル伝達経路のエレメント（例えば、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ経路）は、Ｆｕｓ１の発現を駆動する。β−ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）をＦｕｓ１プロモーター（Ｆｕｓ１ｐ）の制御下におくことによって、レセプター活性化が酵素的読み出しをもたらす系が、開発された。
【０７６０】
酵母細胞を、Ａｇａｔｅｐら（Ａｇａｔｅｐら、１９９８、Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｌｉｔｈｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ／ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ  ｃａｒｒｉｅｒ  ＤＮＡ／ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ（ＬｉＡｃ／ｓｓ−ＤＮＡ／ＰＥＧ）ｐｒｏｔｏｃｏｌ．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｔｉｐｓ  Ｏｎｌｉｎｅ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｊｏｕｒｎａｌｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）によって記載される酢酸リチウム法の適応によって形質転換する。簡単にいうと、酵母細胞を、酵母トリプトンプレート（ＹＴ）上で一晩増殖させる。キャリアの一本鎖ＤＮＡ（１０μｇ）、各々２μｇの２つのＦｕｓ１ｐ−ＬａｃＺレポータープラスミド（一方は、ＵＲＡ選択マーカーを有し、そして他方は、ＴＲＰを有する）、２μｇの酵母発現ベクター（２μｇ、複製起点）中のＧＰＲ１１９（例えば、ヒトレセプター）および酢酸リチウム／ポリエチレングリコール／ＴＥ緩衝液を、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ中にピペッティングする。レセプター／レセプターなしのコントロールを含む酵母発現プラスミドは、ＬＥＵマーカーを有する。酵母細胞を、この混合物中に接種し、そして反応を、３０℃にて６０分間にわたって進行させる。次いで、酵母細胞を、４２℃にて１５分間にわたって熱ショックする。次いで、その細胞を、洗浄し、そして選択プレート上に拡散させる。その選択プレートは、規定された酵母培地からＬＥＵ、ＵＲＡおよびＴＲＰを除いた、合成のものである（ＳＤ−ＬＵＴ）。３０℃にて２〜３日間にわたってインキュベートした後、次いで、選択プレート上で増殖するコロニーを、ＬａｃＺアッセイにおいて試験する。
【０７６１】
β−ガラクトシダーゼについての蛍光光度的酵素アッセイを行うために、対象のＧＰＲ１１９レセプターを有する酵母細胞を、液体ＳＤ−ＬＵＴ培地において、不飽和濃度（すなわち、細胞は、依然として分裂しており、そして依然として定常期に到達していない）まで一晩増殖させる。その細胞を、最適なアッセイ濃度になるまで新鮮な培地において希釈し、そして９０μｌの酵母細胞を、黒色の９６ウェルポリスチレンプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に添加する。ＤＭＳＯに溶解し、そして１０分の１の濃度になるまで１０％のＤＭＳＯ溶液において希釈した試験化合物を、上記プレートに添加し、そしてそのプレートを、３０℃にて４時間にわたって放置する。４時間後に、β−ガラクトシダーゼに対する基質を、各ウェルに添加する。これらの実験において、フルオレセインを放出させる酵素に対する基質であるフルオレセイン  ジ（β−Ｄ−ガラクトピラノシド）（ＦＤＧ）を、使用し、蛍光光度の読み出しを可能にする。１ウェルあたり２０μｌの５００μＭ  ＦＤＧ／２．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００を、添加する（この洗浄剤は、細胞を透過性にするために必要である）。上記細胞を上記基質と一緒に６０分間にわたってインキュベートした後、１ウェルあたり２０μｌの１Ｍ炭酸ナトリウムを、反応を停止させ、そして蛍光シグナルを増強するために添加する。次いで、プレートを、蛍光計において４８５／５３５ｎｍで読み取る。
【０７６２】
空ベクターを用いて形質転換した酵母細胞における蛍光シグナルを上回るＧＰＲ１１９形質転換酵母細胞における蛍光シグナルの増大は、試験化合物がＧＰＲ１１９レセプター機能性を刺激する化合物（例えば、ＧＰＲ１１９のアゴニストまたは部分アゴニストである化合物）であることを示す。特定の実施形態において、本発明の化合物は、バックグラウンドシグナル（ビヒクルのみの存在下で得られたシグナル）の蛍光シグナルを上回る蛍光シグナルの増大を与える。
【０７６３】
（実施例１４）
（放射性標識化合物）
特定の実施形態において、本発明のＧタンパク質共役レセプターのリガンドであることが公知の化合物を、放射性標識する。本明細書中に記載の放射性標識化合物を、スクリーニングアッセイにおいて使用して、化合物を同定／評価することができる。一般論として、新規に合成または同定した化合物（すなわち、試験化合物）を、上記放射性標識された公知のリガンドと上記レセプターとの間の複合体の形成を減少させるその化合物の能力によって、その放射性標識された公知のリガンドのそのレセプターへの結合を減少させるその化合物の能力について評価することができる。本発明の化合物に組み込むことができる適切な放射性核種としては、３Ｈ（Ｔとも表記される）、１１Ｃ、１４Ｃ、１８Ｆ、１２５Ｉ、８２Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、１５Ｏ、１３Ｎ、３５Ｓおよび７７Ｂｒが挙げられるが、これらに限定されない。３Ｈ、１４Ｃ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは８２Ｂｒを組み込む化合物が、一般に、最も有用である。
【０７６４】
「放射性標識」化合物は、少なくとも１つの放射性核種が組み込まれた化合物であると理解される。いくつかの実施形態において、上記放射性核種は、３Ｈ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３５Ｓ、および８２Ｂｒからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記放射性核種は、３Ｈまたは１４Ｃである。さらに、本発明のＧタンパク質共役レセプターのリガンドであることが公知の化合物中に示された原子の全てがこのような原子の最も一般的に存在する同位体またはより稀な放射性同位体または非放射性同位体のいずれかであり得ると理解されるべきである。
【０７６５】
有機化合物への放射性同位体の組み込みのための合成方法（本発明のＧタンパク質共役レセプターのリガンドであることが公知の化合物に適用可能な方法を含む）は、当該分野において周知であり、標的分子への活量レベルのトリチウムの組み込みとしては、以下が挙げられる：Ａ．トリチウムガスによる触媒還元−この手順は、通常、比放射能の高い生成物を生成し、ハロゲン化前駆体または不飽和前駆体を必要とする。Ｂ．水素化ホウ素ナトリウム［３Ｈ］による還元−この手順は、非常に安価であり、還元性官能基（例えば、アルデヒド、ケトン、ラクトン、およびエステルなど）を含む前駆体を必要とする。Ｃ．水素化アルミニウムリチウム［３Ｈ］による還元−この手順は、多くとも理論上の比放射能を有する生成物を提供する。この手順は、還元性官能基（例えば、アルデヒド、ケトン、ラクトン、およびエステルなど）を含む前駆体を必要とする。Ｄ．トリチウムガス曝露標識化−この手順は、適切な触媒の存在下でのトリチウムガスへの交換可能なプロトンを含む前駆体の曝露を含む。Ｅ．ヨウ化メチル［３Ｈ］を使用したＮ−メチル化−この手順は、通常、高い比放射能のヨウ化メチル（３Ｈ）を用いて適切な前駆体を処理することよってＯ−メチルまたはＮ−メチル（３Ｈ）生成物を調製するために使用される。この方法は、一般に、約８０〜８７Ｃｉ／ｍｍｏｌの高い比放射能を可能にする。
【０７６６】
活量レベルの１２５Ｉを標的分子へ組み込むための合成方法としては、以下が挙げられる：Ａ．サンドマイヤー反応およびサンドマイヤー様反応−この手順は、アリールアミンまたはヘテロアリールアミンをジアゾニウム塩（例えば、テトラフルオロホウ酸塩）に変換し、次いで、Ｎａ１２５Ｉを使用して１２５Ｉ標識化合物にする。示した手順は、Ｚｈｕ，Ｄ．−Ｇ．および共同研究者ら（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００２，６７，９４３−９４８）によって報告されている。Ｂ．フェノールのオルト１２５ヨード化−Ｃｏｌｌｉｅｒ，Ｔ．Ｌ．および共同研究者ら（Ｊ．Ｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｍｐｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．１９９９，４２，Ｓ２６４−Ｓ２６６）によって報告されるように、この手順は、フェノールのオルト位での１２５Ｉの組み込みを可能にする。Ｃ．臭化アリールおよび臭化ヘテロアリールの１２５Ｉによる交換−この方法は、一般に、２工程のプロセスである。第１の工程は、例えば、Ｐｄ触媒反応（すなわち、Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４）を使用した臭化アリールもしくは臭化ヘテロアリールの対応するトリアルキルスズ中間体への変換、またはトリアルキルスズハライドもしくはヘキサアルキルジスズ（例えば、（ＣＨ３）３ＳｎＳｎ（ＣＨ３）３）の存在下におけるアリールリチウムもしくはヘテロアリールリチウムを介した変換である。示した手順は、Ｂａｓ，Ｍ．−Ｄ．および共同研究者ら（Ｊ．Ｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｍｐｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２００１，４４，Ｓ２８０−Ｓ２８２）によって報告されている。
【０７６７】
上記技術は、例示を意図し、限定を意図しない。本発明のＧタンパク質共役レセプターのリガンドであることが公知の化合物を放射性標識するための他の技術は、当業者に周知である。
【０７６８】
（実施例１５）
（レセプター結合アッセイ）
試験化合物を、本発明のＧタンパク質共役レセプターのリガンドであることが公知の化合物とそのレセプターとの間の複合体の形成を減少させる能力について評価することができる。特定の実施形態において、公知のリガンドは、放射性標識される。放射性標識された公知のリガンドを、スクリーニングアッセイにおいて使用して、化合物を同定／評価することができる。一般論として、新規に合成または同定した化合物（すなわち、試験化合物）を、上記放射性標識された公知のリガンドと上記レセプターとの間の複合体の形成を減少させるその化合物の能力によって、その放射性標識された公知のリガンドのそのレセプターへの結合を減少させるその化合物の能力について評価することができる。
【０７６９】
試験化合物の非存在下における放射性標識された公知のリガンドの特異的結合のレベルよりも低い、試験化合物の存在下における放射性標識された公知のリガンドの特異的結合のレベルは、その放射性標識された公知のリガンドとそのレセプターとの間におけるより少ない複合体が試験化合物の非存在下よりも試験化合物の存在下において形成されることを示す。
【０７７０】
（本発明のＧタンパク質共役レセプターのリガンドであることが公知の化合物とそのレセプターとの間の複合体を検出するためのアッセイプロトコル）
（Ａ．レセプターの調製）
６０μｌのリポフェクタミン（１５ｃｍのディッシュあたり）を使用して、本発明のＧタンパク質共役レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む１０μｇの発現ベクターによって、２９３細胞を一過性にトランスフェクトする。一過性にトランスフェクトした細胞を、ディッシュ中で２４時間（７５％の集密度）増殖させ、培地を１０ｍｌ／ディッシュのＨｅｐｅｓ−ＥＤＴＡ緩衝液（２０ｍＭのＨｅｐｅｓ＋１０ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．４））と交換し、そして取り出す。次いで、細胞を、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ遠心分離機にて１７，０００ｒｐｍで２０分間にわたって遠心分離する（ＪＡ−２５．５０ローター）。その後、ペレットを、２０ｍＭのＨｅｐｅｓ＋１ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）に再懸濁し、５０ｍｌのＤｏｕｎｃｅホモジナイザーで均質化し、そして再度遠心分離する。上清の除去後、ペレットを、結合アッセイにおいて使用するまで−８０℃で保存する。このアッセイで使用する場合、膜を、氷上で２０分間にわたって解凍し、次いで、１０ｍｌのインキュベーション緩衝液（２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１００ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．４））を添加する。次いで、膜を、ボルテックスして粗膜ペレットを懸濁し、そしてＢｒｉｎｋｍａｎｎ  ＰＴ−３１００  Ｐｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーを設定６で用いて１５秒間にわたって均質化する。膜タンパク質の濃度を、ＢＲＬブラッドフォードタンパク質アッセイを使用して決定する。
【０７７１】
（Ｂ．結合アッセイ）
総結合のために、総容量が５０μｌの適切に希釈した膜（５０ｍＭのＴｒｉｓ  ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、および１ｍＭのＥＤＴＡを含むアッセイ緩衝液で希釈した、５〜５０μｇのタンパク質）を、９６ウェルポリプロピレンマイクロタイタープレートに添加し、その後、１００μｌのアッセイ緩衝液および５０μｌの放射性標識された公知のリガンドを添加する。非特異的結合のために、１００μｌの代わりに５０μｌのアッセイ緩衝液を添加し、５０μｌの放射性標識されたその公知のリガンドを添加する前にさらなる５０μｌの１０μＭの放射性標識されないその公知のリガンドを添加する。次いで、プレートを、室温で６０〜１２０分間にわたってインキュベートする。Ｂｒａｎｄｅｌｌの９６ウェルプレート回収機を備えるＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＧＦ／Ｃ  Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ濾過プレートによりアッセイプレートを濾過することによって結合反応を停止させ、その後、０．９％のＮａＣｌを含む５０ｍＭの冷ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ７．４）で洗浄する。次いで、濾過プレートの底を密封し、５０μｌのＯｐｔｉｐｈａｓｅ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘを各ウェルに添加し、プレートの上部を密封し、そしてプレートをＴｒｉｌｕｘ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａシンチレーションカウンターでカウントする。放射性標識された公知のリガンドとレセプターとの間におけるより少ない複合体が試験化合物の存在下において形成されるか否かを決定するために、１００μｌのアッセイ緩衝液を添加する代わりに１００μｌの適切に希釈した試験化合物を、適切なウェルに添加し、その後、５０μｌのその放射性標識された公知のリガンドを添加する。
【０７７２】
（Ｃ．計算）
上記試験化合物を、最初に、１０μＭ、１μＭおよび０．１μＭにてアッセイし、次いで、中間用量が放射性標識された公知のリガンドの結合の約５０％の阻害（すなわち、ＩＣ５０）をもたらすように、濃度の範囲を選択する。試験化合物の非存在下における特異的結合（ＢＯ）は、総結合（ＢＴ）から非特異的結合（ＮＳＢ）を減算した差であり、そして同様の特異的結合（試験化合物の存在下）（Ｂ）は、置換結合（ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ）（ＢＤ）から非特異的結合（ＮＳＢ）を減算した差である。ＩＣ５０を、阻害反応曲線（％  Ｂ／ＢＯ  対  試験化合物の濃度のロジット−対数プロット）から決定する。
【０７７３】
Ｋｉを、ＣｈｅｎｇおよびＰｒｕｓｔｏｆｆの変換によって計算する：
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［Ｌ］／ＫＤ）
ここで、［Ｌ］は、上記アッセイにおいて使用した放射性標識された公知のリガンドの濃度であり、そしてＫＤは、同じ結合条件において独立して決定したその放射性標識された公知のリガンドの解離定数である。
【０７７４】
（実施例１６）
（腸内分泌細胞または腸管のＬ細胞含有領域に由来する組織中の細胞またはＰＹＹを分泌し得る細胞におけるＰＹＹ分泌に対する、ＧＰＲ１１９アゴニストの効果）
本発明によるＧＰＲ１１９アゴニストは、腸内分泌細胞（例えば、腸内分泌細胞株）、または腸管のＬ細胞含有領域に由来する組織［例えば、十二指腸組織、空腸組織、回腸組織、結腸組織または直腸組織；例えば、Ｌｕｎｄｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（１９８２）７９：４４７１−４４７５；Ａｄｒｉａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ（１９８５）８９：１０７０−１０７７；Ｅｋｂｌａｄら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００２）２３：２５１−２６１；Ｕｅｎｏら、Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ（２００８）１４５：１２−１６）を参照のこと］中の腸内分泌細胞などの細胞、またはＰＹＹを分泌し得る細胞におけるＰＹＹ分泌を刺激することが、ここに記載するインビトロアッセイを使用して示され得る。腸内分泌細胞、または腸管のＬ細胞含有領域に由来する組織中の腸内分泌細胞などの細胞を、完全培地（ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ）において１日目に２４ウェルプレートに蒔く。２日目において、上記培地を、低グルコース培地（ＤＭＥＭ／３ｍＭグルコース／１０％ＦＢＳ）に置き換える。３日目に、細胞を、１×ＰＢＳによって２回洗浄する。洗浄した細胞を、無血清ＤＭＥＭ組織培養インキュベーター中で３７℃かつ５％のＣＯ２にて１時間にわたって１５ｍＭのグルコースと一緒に、種々の濃度（例えば、１ｎＭ〜２０μＭの範囲）のビヒクルまたはＧＰＲ１１９アゴニスト、あるいはポジティブコントロールとしてのフォルスコリン（１μＭ）によって刺激する。次いで、上清を、回収し、そして５００ｇにて４℃で５分間にわたって遠心分離することによって清澄化する。上清中に放出された全ＰＹＹを、Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＹＹ（ＰＹＹ）（Ｒａｔ、Ｍｏｕｓｅ、Ｐｏｒｃｉｎｅ、Ｃａｎｉｎｅ）ＥＩＡ  ｋｉｔ、Ｃａｔａｌｏｇ  Ｎｏ．ＥＫ−０５９−０３）から購入したＰＹＹ  ＥＩＡキットを使用し、そのキット中に提供された説明書に従って測定する。
【０７７５】
ＰＹＹを分泌し得る細胞としては、腸管分泌細胞株であり得るような腸内分泌細胞、腸管のＬ細胞含有領域に由来する組織中の腸内分泌細胞であり得るような細胞、ランゲルハンス島のアルファ細胞、ランゲルハンス島に由来する細胞株（例えば、ＲＩＮｍ５Ｆであり得る（Ｂａｒｇｓｔｅｎ、Ａｒｃｈ  Ｈｉｓｔｏｌ  Ｃｙｔｏｌ（２００４）６７：７９−９４））、延髄由来の組織にあり得るような神経細胞などの細胞、神経細胞株、および組換え体細胞が挙げられるが、これらに限定されないことが、明確に企図される。
【０７７６】
（実施例１７）
（マウスにおけるアテローム発生に対するＧＰＲ１１９アゴニストのインビボ効果）
雄ａｐｏＥ−／−マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）に、通常の食餌を供給する。アポリポタンパク質Ｅ欠損（ａｐｏＥ−／−）マウスは、食事性の餌（ｃｈｏｗ  ｄｉｅｔ）において広範なアテローム硬化性病変を発症する、アテローム硬化症の確立された動物モデルである［Ｚｈａｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９２）２５８：４６８−４７１］。１２週齢において、ＧＰＲ１１９アゴニストまたはビヒクルのみを、毎日の経口投与によって投与する。ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０７７７】
上記マウスは、ペントバルビタールの腹腔内注射（５０ｍｇ／ｋｇ）によって麻酔し、および大動脈洞および大動脈弓を含む心臓を、ＧＰＲ１１９アゴニストの投与の１４日後に回収する。心臓をまた、操作していないマウスからその実験の開始時に回収する。１０匹のマウスを、３つの実験群の各々について使用する。
【０７７８】
１０％のホルマリンに一晩固定した後に最適切断温度（Ｏｐｔｉｍａｌ  Ｃｕｔｔｉｎｇ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）（ＯＣＴ；Ｓａｋｕｒａ  Ｆｉｎｅｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）化合物中に包理した大動脈洞の凍結切片（１０μＭの厚さ）を、スライドガラス上に載せる。プラークの大きさの分析のために、各マウス由来の３個の切片（１００μＭ間隔）を、Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏによって染色する。病変における病変の大きさおよび脂質小滴の直径を、画像分析するコンピューターソフトウェアによって定量し、そしてその平均値を、決定する。ＧＰＲ１１９アゴニストを投与した群の平均値を、ビヒクルのみを投与した群の平均値と比較する。
【０７７９】
データを、平均±ＳＥＭとして提供し、そしてそれらのデータの分布パターンに依存してスチューデントｔ検定またはマン−ホイットニーＵ検定によって分析する。Ｐ＜０．０５の値を、統計的に有意であると見なす。例えば、Ｏｋａｍｏｔｏら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（２００２）１０６：２７６７−２７７０を参照のこと。
【０７８０】
これらの結果は、上記ＧＰＲ１１９アゴニストがアテローム発生のインヒビターであることを示し得る。
【０７８１】
ＧＰＲ１１９アゴニストは、他の実施形態において、ＡｐｏＥ−／−マウスにおけるアテローム発生のインヒビターであるということが示され得ることが、明確に企図され、このことは、非侵襲性のインビボ技術［例えば、Ｆａｙａｄら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（１９９８）９８：１５４１−１５４７を参照のこと］を使用して示され得る。上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、そのアゴニストの投与は腹腔内または静脈内である）ことが、明確に企図される。処置は、他の実施形態において、１２週齢以外（１２週齢よりも早いかまたは遅いかのいずれか）であることが、明確に企図される。処置は、他の実施形態において、１４日間よりも短くかまたは長く継続することが、明確に企図される。投与は毎日ではない可能性があることが、明確に企図される。
【０７８２】
（実施例１８）
（マウスにおける慢性炎症性関節炎に対するＧＰＲ１１９アゴニストのインビボ効果）
雄ＭＲＬ−ｌｐｒマウスおよび雌ＭＲＬ−ｌｐｒマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）の両方を、１３〜１４週齢にて使用する。ＭＲＬ−ｌｐｒマウスは、ヒト関節リウマチと同様の特徴（細胞浸潤、パンヌス形成、骨および軟骨の破損、ならびに血清リウマチ因子の存在を含む）を有する慢性炎症性関節炎を自然発生的に発症する。上記疾患は、通常、動物の寿命の終末において発症する；しかし、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）を伴う注射は、早期の発症を起こし、そして関節炎の重篤度を増大させる［Ｒａｋａｙら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９３）１５１：５０８１−５０８７］。
【０７８３】
各々の実験の０日目において、全ての群のマウスに、ＣＦＡ（熱不活化Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｈ３７  Ｒａ（Ｄｉｆｃｏ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ）を１０ｍｇ／ｍｌまで補充した０．０５ｍｌのＣＦＡ）を胸部および鼡径部において皮内注射する。直ちに、ＧＰＲ１１９アゴニストまたはビヒクルのみを、毎日の経口投与によって投与する。上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０７８４】
処置を、３０日間にわたって継続する。腫脹を定量するために、足根関節幅を、マイクロメータを用いて測定する。対応するセットの足根関節幅の測定の統計学的比較を、スチューデントｔ検定を使用して行った。
【０７８５】
（組織病理学的分析）
ＣＦＡ初回免疫の３０日後に、後肢を、緩衝化したホルマリンにおいて固定する。１０％のギ酸における４８時間にわたる脱灰の後に、組織を、パラフィン包理のために処理する。足根中足関節の連続切片を、５ｍｍの厚さに切断し、そしてヘマトキシリンおよびエオシンによって染色する。切片は、実験プロトコルの知見を有さない個体によって調べられる。最低限である１０個の切片／関節を、評価し、そして滑膜下の炎症（０、正常；１、限局性の炎症性浸潤物；２、細胞の組織像を支配する炎症性浸潤物）、滑膜の過形成（０、正常；１、１つの関節において見られる、持続性の、最低で３層の厚い滑膜内層；２、いくつかの関節において検出される、最低で３層の厚い滑膜内膜）、パンヌス形成および軟骨の侵食（０、正常；１、明白な軟骨損失を伴わない、軟骨表面を部分的に覆うパンヌス；２、明白な軟骨損失に関連したパンヌス）、骨破壊（０、正常；１、パンヌスまたは破骨細胞活性による骨の検出可能な破壊；２、パンヌスまたは破骨細胞活性が骨の顕著な部分を破壊した）の半定量的測定を提供するために評点し、そして最終的に、全体的な病理は、これらの判定基準の値の総和によって得られる総合的な評価［例えば、Ｇｏｎｇら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ（１９９７）１８６：１３１−１３７を参照のこと］である。組織病理学指数の統計分析を、スチューデントｔ検定を使用して行う。
【０７８６】
これらの結果は、ＧＰＲ１１９アゴニストが慢性炎症性関節炎のインヒビターであること（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニストが関節リウマチのインヒビターであること）を示し得る。
【０７８７】
上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、そのアゴニストの投与は腹腔内または静脈内である）ことが、明確に企図される。処置は、他の実施形態において、１３〜１４週齢以外（１３〜１４週齢よりも早いかまたは遅いかのいずれか）であることが、明確に企図される。処置は、他の実施形態において、３０日間よりも短くかまたは長く継続することが、明確に企図される。投与は毎日ではない可能性があることが、明確に企図される。
【０７８８】
（実施例１９）
（炎症性腸疾患についての動物モデルの結腸損傷の減少）
ＧＰＲ１１９アゴニストは、本質的にＷＯ  ０３／１０５７６３に記載されるように、炎症性腸疾患からの防御を提供することが動物モデルを使用して示され得る。
【０７８９】
（方法）
動物の準備：
１０〜１１週齢の雄ＨＳＤラット（２５０〜３００グラムの範囲）を、１２：１２の明：暗周期において収容し、そして標準的なげっ歯類の食餌（Ｔａｋｌａｄ  Ｌ  Ｍ  ４８５、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）および水の無制限な摂取を許容する。その動物を、実験前の２４時間にわたって絶食させる。
【０７９０】
手順：
慢性的な結腸の炎症の単純かつ再現可能なラットモデルは、先にＭｏｒｒｉｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ（１９８９）９６：７９５−８０３）によって記載されている。それは、特異的に制御された様式で慢性炎症性疾患の病態生理学を研究する機会、およびヒトにおける炎症性腸疾患に潜在的に適用可能な新規の処置を評価する機会を与える、炎症および潰瘍の比較的長い持続期間を示す。
【０７９１】
ラットを、３％のイソフルオランによって麻酔し、そして３７℃に調節した加温パッドセット上においた。給餌針（ｇａｖａｇｅ  ｎｅｅｄｌｅ）を、直腸から結腸に７ｃｍ挿入する。５０％のエタノール（ｖ／ｖ）に溶解したハプテンのトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を、０．４〜０．６ｍＬの総容量において３０ｍｇ／ｋｇの用量にて給餌針によって結腸の管腔に送達する。コントロール群は、食塩水（ＮａＣｌ  ０．９％）を結腸内に受容する。
【０７９２】
大腸炎の誘導の４日後、上記結腸を、麻酔し、次いで断頭によって安楽死させたラットから切除する。切除した結腸および脾臓の重量を、測定し、そしてその結腸を、３分割する前に、肉眼で見える形態学的な損傷の評点のために評価尺度（０＝損傷なし、１＝限局性の充血を有するが、潰瘍を有さない、２＝顕著な炎症を伴わない線状潰瘍、３＝１つの部位での炎症を伴う線状潰瘍、４＝２つ以上の部位の潰瘍形成および／または炎症、５＝２つ以上の大きい部位の炎症および結腸の長さに沿って１ｃｍを超えて広がる潰瘍形成または１つの大きい部位の炎症および潰瘍形成）に従って評点するために写真撮影する。盲腸由来の１ｃｍの結腸の分節を、１０％のホルマリン中に固定する。他の分節を、ドライアイス上で直ちに凍結する。
【０７９３】
炎症を、充血の領域および腸管壁の肥厚として定義する。結腸を、独立して、実験処置について伏せられた（ｂｌｉｎｄ）数人の観察者によって観察する。
【０７９４】
このアッセイのために、５個の処置群を、以下の通りに設定する：
群Ａ（ｎ＝３）。生理食塩水の経口処置による結腸内の生理食塩水；
群Ｂ（ｎ＝８）。３０ｍｇ／ｋｇのＴＮＢＳによる大腸炎の誘導前の生理食塩水の経口処置；
群Ｃ（ｎ＝１０）。実験群-３０ｍｇ／ｋｇのＴＮＢＳによる大腸炎の誘導前の２日間、その誘導後の２日間にわたる１日２回のＧＰＲ１１９アゴニスト（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量）の経口処置、およびその誘導の３０分前における１日２回のＧＰＲ１１９アゴニスト（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量）の経口処置；
群Ｄ（ｎ＝９）。ポジティブコントロール-３０ｍｇ／ｋｇのＴＮＢＳによる大腸炎の誘導の６０分前におけるＤｅｐｏ−Ｍｅｄｒｏｌ  ６００μｇ／ｋｇの筋肉内注射；
群Ｅ（ｎ＝１０）。ポジティブコントロール−大腸炎の誘導の６０分前およびその後の毎日における、０．５ｍＬの生理食塩水での２００ｍｇ／ｋｇの結腸内投与における５−アミノサリチル酸（Ｓｉｇｍａ）懸濁物。
【０７９５】
上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０７９６】
上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、アゴニストの投与は皮下または静脈内である）ことが、明確に企図される。
【０７９７】
（実施例２０）
（マウスにおけるカイニン酸誘発性痙攣に対するＧＰＲ１１９アゴニストの効果）
ＧＰＲ１１９アゴニストは、本質的にＷｏｌｄｂｙｅら（Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅ（２００５）２０：７６０−７７２）に記載されるように、マウスにおいてカイニン酸誘発性痙攣からの防御を提供することが動物モデルを使用して示され得る。
【０７９８】
雄ＮＭＲＩマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｍ＆Ｂ、ＤＫ；２３〜３０ｇ）に、１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ、０．１３ＭのＮａＣｌ、７ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、３ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４）中の０．０５％のウシ血清アルブミンを含むビヒクルにおける、例えば、０．２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７〜８）の用量のＧＰＲ１１９アゴニストを経口投与する。コントロール群は、経口投与によってビヒクルのみを受容する（ｎ＝２８）。５分後に、全ての動物は、等張の生理食塩水中に溶解されかつｐＨ７．４に調整されたカイニン酸塩（３０ｍｇ／ｋｇ；＃２０２０、Ｏｃｅａｎ  Ｐｒｏｄｕｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｃａｎａｄａ）の皮下注射を受ける；痙攣の重篤度を、以下のＭａｒｓｈら（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（１９９９）９６：１３５１８−１３５２３）の改変した評価尺度に従って評点する：０＝痙攣活動なし、１＝凝視または顔面の運動、２＝頭部の点頭痙攣または孤立性の攣縮、３＝前肢のクローヌス（ｃｏｌｏｎｕｓ）を伴う運動発作、４＝立ち上がりを伴う運動発作、５＝姿勢の損失または痙攣重積状態（少なくとも１０分間の持続的な運動発作活動）を伴う運動発作、６＝死亡。痙攣のスコアならびに最初の運動発作（少なくとも３として評点される場合）および姿勢の損失までの潜伏時間を、上記マウスの正体について伏せた観察によって各処置群について決定する。
【０７９９】
上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０８００】
上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、アゴニストの投与は腹腔内または静脈内である）ことが、明確に企図される。カイニン酸塩の皮下注射を、代替的に、５分間よりも長い上記ＧＰＲ１１９アゴニストの投与後の時間において行うことができることが、明確に企図される。
【０８０１】
（実施例２１）
（痩せたマウスにおける食物摂取に対するＧＰＲ１１９アゴニストの効果）
ＧＰＲ１１９アゴニストは、本質的にＯｒｔｉｚら（ＪＰＥＴ（２００７）３２３：６９２−７００）に記載されるように、食物摂取を減少させることが痩せた絶食−食餌再供給マウスを使用して示され得る。
【０８０２】
痩せたＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ、Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹ）を、１２時間の明／暗周期において制御した温度および湿度に、最低で１週間にわたって順化させる。マウスを、連続的に入手可能な食物および水（標準的な食事性のペレット食餌）と一緒に、格子床を備えるケージに対で収容する。研究は、１処置群あたり２０匹のマウスを含む。上記マウスを、暗期の間に利用可能な水を用いて一晩（１８時間）絶食させ、そしてそれらのマウスに、ＵＳＰ生理食塩水中のＧＰＲ１１９アゴニスト（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量）またはビヒクルのみを経口的に投薬する。予め秤量した食物を、投薬の３０分後に与え、そして累積食物摂取を、７２時間にわたって（例えば、１時間、２時間、４時間、２４時間、４８時間、および７２時間にて）測定する。
【０８０３】
上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０８０４】
上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、そのアゴニストの投与は腹腔内または静脈内である）ことが、明確に企図される。
【０８０５】
（実施例２２）
（食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスにおける体重および血漿アディポネクチンに対するＧＰＲ１１９アゴニスト効果）
ＧＰＲ１１９アゴニストは、本質的にＯｒｔｉｚら（ＪＰＥＴ（２００７）３２３：６９２−７００）に記載されるように、体重の減少および血漿アディポネクチンの増大を提供することが食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスを使用して示され得る。
【０８０６】
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ）に、カロリーの４５％が脂質に由来するカロリーを含む高脂肪食（げっ歯類の食餌Ｄ１２４５１；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）を、２０〜２２週間にわたって供給し、そしてそれらのマウスは、標準的な食事性のペレット食餌（カロリーの５％が脂質由来）を供給したマウスよりも約５ＳＤを上回って重い平均体重を有する。研究は、１処置群あたり１０匹のマウスを含む。マウスを、制御した温度および湿度ならびに１２時間／１２時間の明暗周期において、標準的な動物室中に保つ。水および食物は、連続的に入手可能である。動物を、４日間にわたって格子床に適応させ、そしてベースラインの体重ならびに２４時間における食物および水の消費を２日間記録する前に、それらのマウスに、さらに４日間にわたってビヒクル（ＵＳＰ生理食塩水）を投薬する。マウスを、体重の初期平均（ｉｎｔｉａｌ  ｍｅａｎ）および標準誤差が同様であるようにそれらの体重に基づいて処置群に割り当てる。動物に、毎日、暗期の前にＵＳＰ生理食塩水中のＧＰＲ１１９アゴニスト（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量）またはビヒクルのみを経口投与し、そして体重ならびに食物および水の消費を、測定する。動物に、４０日間にわたって毎日投薬する。
【０８０７】
血液を、アディポネクチンの分析のために後眼窩の採血によって４０日目に回収する；血漿アディポネクチンを、製造業者の説明書にしたがってＭｏｕｓｅ  Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ  ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＥＺＭＡＤＰ−６０Ｋ；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）を使用して測定する。
【０８０８】
上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０８０９】
上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、そのアゴニストの投与は皮下または静脈内である）ことが、明確に企図される。
【０８１０】
（実施例２３）
（食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスにおける血漿グルコース、血漿インスリン、およびグルコース処理に対するＧＰＲ１１９アゴニストの効果）
ＧＰＲ１１９アゴニストは、本質的にＯｒｔｉｚら（ＪＰＥＴ（２００７）３２３：６９２−７００）に記載されるように、２型糖尿病についての危険性を伴う食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスの代謝パラメータにおける好ましい改善（例えば、グルコース処理（絶食させたマウスにおけるグルコース処理（例えば、ＯＧＴＴ後のグルコース処理）を増大させる）、血漿グルコースレベル（食餌を与えたマウスにおける血液グルコースを減少させる）、および血漿インスリンレベル（絶食させたマウスにおける血漿インスリンを増大させる））を提供することが示され得る。
【０８１１】
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ）を、カロリーの４５％が脂質に由来するカロリーを含む高脂肪食（げっ歯類の食餌Ｄ１２４５１；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）を２０〜２２週間にわたって供給し、そしてそれらのマウスは、標準的な食事性のペレット食餌（カロリーの５％が脂質由来）を供給したマウスよりも約５ＳＤを上回って重い平均体重を有する。研究は、１処置群あたり１０匹のマウスを含む。マウスを、制御した温度および湿度ならびに１２時間／１２時間の明暗周期において、標準的な動物室中に保つ。水および食物は、連続的に入手可能である。動物を、４日間にわたって格子床に適応させ、そしてベースラインの体重ならびに２４時間における食物および水の消費を２日間記録する前に、それらのマウスに、さらに４日間にわたってビヒクル（ＵＳＰ生理食塩水）を投薬する。マウスを、体重の初期平均および標準誤差が同様であるようにそれらの体重に基づいて処置群に割り当てる。
【０８１２】
動物に、毎日、暗期の前にＵＳＰ生理食塩水中のＧＰＲ１１９アゴニスト（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量）またはビヒクルのみを経口投与する。動物に、１１日間にわたって毎日投薬する。処置の１０日目に、血液サンプルを、食餌を与えたマウスの尾から回収し、かつその血液サンプルを、Ａｓｃｅｎｓｉａグルコースメーター（Ｂａｙｅｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、ＮＹ）を用いて分析する。食物を、給食期間に入って５時間で取り除き、そしてその動物を、インスリンの分析のための後眼窩の採血を使用した血液回収の前に、１４時間絶食させる。経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）を、２ｇ／ｋｇのグルコースの経口投与後の２時間後に後眼窩の採血を行い、そして尾の血液グルコースを、３０分間隔で３時間にわたって測定する。インスリンを、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＩＡ）（Ａｌｐｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｗｉｎｄｈａｍ、ＮＨ）によって測定する。
【０８１３】
上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０８１４】
上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、そのアゴニストの投与は皮下または静脈内である）ことが、明確に企図される。腹腔内グルコース負荷試験（ＩＰＧＴＴ）を、他の実施形態において、２ｇ／ｋｇのグルコースの腹腔内投与に続く後眼窩の採血の２時間後にを行うことが、明確に企図される。
【０８１５】
（実施例２４）
（末梢動脈機能不全のラットモデルにおける側副枝依存性の血流に対するＧＰＲ１１９アゴニストの効果）
ＧＰＲ１１９アゴニストは、本質的にＣｒｕｚｅら（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００７）２８：２６９−２８０）に記載されるように、側副枝依存性の血流を増大させることが急性発症性の末梢動脈機能不全のラットモデルを使用して示され得、その急性発症性の末梢動脈機能不全は、しばしば間欠跛行の症状を与える大血管閉塞症（ｌａｒｇｅ  ｖｅｓｓｅｌ  ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）を特徴とする。
【０８１６】
末梢動脈機能不全を、鼡径靭帯に対して遠位の大腿動脈の両側性閉塞を有する成体の雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（３２５〜３５０ｇ；Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ，Ｉｎｃ．）において確立する。同じ外科的手順において、１４日用の浸透圧ポンプ（Ａｌｚｅｔ（登録商標））に接続したカテーテルを、１５μｇ／ｋｇ／日の用量での血管増殖因子（血管内皮増殖因子（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ））−Ａ（残基１〜１６５）（ＶＥＧＦ１６５）の全身送達のための側副枝伸長の部位の近傍への注入のために腸管動脈中に挿入する；ＧＰＲ１１９アゴニスト（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量）およびビヒクル単独（リン酸緩衝化生理食塩水、１０％のクエン酸ナトリウム、１．６％のグリセロール、０．００８％のＴｗｅｅｎ  ２０）を、経口投与で毎日投与する。全ての薬剤を、研究者に条件を伏せた様式で供給および投与する。血流を、血流に対するＧＰＲ１１９アゴニストまたはＶＥＧＦ１６５のあらゆる急性作用を排除するために、１６日目において測定する。筋肉の血流を、Ｙａｎｇら（Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓ（２０００）２７８：Ｈ１９６６−Ｈ１９７３）に記載されるように、放射性標識したマクロファージを使用して、条件を伏せた様式でトレッドミルでの走行の間に決定する。使用したＶＥＧＦ１６５の用量（１５μｇ／ｋｇ／日）は、このモデル（Ｃｒｕｚｅら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（２００７）２８：２６９−２８０）における側副枝依存性の血流のほぼ最大の増大をもたらす。
【０８１７】
上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０８１８】
上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、そのアゴニストの投与はある用量（例えば、３０ｍｇ／ｋｇ／日）での静脈内注入によるものである）ことが、明確に企図される。上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい注入用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日である。他の好ましい注入用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、１．０ｍｇ／ｋｇ／日、３．０ｍｇ／ｋｇ／日、１０ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日および１００ｍｇ／ｋｇ／日からなる群より選択される。
【０８１９】
（実施例２５）
（インビボのラットモデルにおける血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）誘導性の空腸分泌に対するＧＰＲ１１９アゴニストの効果）
ＧＰＲ１１９アゴニストは、本質的にＢａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｍら（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２０００）４３：３４２０−３４２７）およびＳｏｕｌｉら（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（１９９７）１８：５５１−５５７）に記載されるように、腸管上皮における分泌を減少させることが、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）誘導性の空腸分泌のインビボのラットモデルを使用して示され得る。Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｍら（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２０００）４３：３４２０−３４２７）はまた、このアッセイにおいて活性を有するＰＹＹのアナログを記載する。
【０８２０】
雄Ｗｉｓｔａｒラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）を、麻酔し、そして伏在静脈に、薬物を注入するためにカニューレ挿入する。そのラットの腹部を、開き、空腸ループ（約２０ｃｍの長さ）を、２つの結紮糸によって区切る。０時間において、３７℃まで予め温めた２ｍＬの０．９％生理食塩水を、空腸ループ中に点滴注入する。次いで上記ループを、上記腹部に戻し、そしてその腹部を閉じる。ＶＩＰ（３０μｇ／ｋｇ／時間）を、０時間から３０分間にわたって２．５ｍＬ／時間の速度で上記伏在静脈を介して注入する。ＧＰＲ１１９アゴニスト（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量）または生理食塩水（コントロール）を、ＶＩＰの注入を始める前に１５分間にわたってボーラス投薬として経口投与する。実験終了時において、ラットを、屠殺し、そしてその空腸ループを、切除する。次いでそのループを、点滴注入した流体の除去の前後において測定および秤量する。３０分間あたりのμＬ／ｃｍとして示される水の正味の流れを、式（Ｆ−Ｅ−２０００）／Ｌを使用して計算し、ＦおよびＥは、残りの流体を空にする前および残りの流体を空にした後における上記ループの重量（ｍｇ）であり、Ｌは、上記ループの長さ（ｃｍ）であり、そして２０００は、最初に点滴注入した流体の容量（μＬ）である。正味の吸収を、負の値によって示し、そして正味の分泌を、正の値によって示す。各用量を、６〜８個体の動物において調査する。
【０８２１】
上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０８２２】
上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、そのアゴニストの投与は皮下または静脈内である）ことが、明確に企図される。
【０８２３】
（実施例２６）
（インビボイヌモデルにおける腸管吸収に対するＧＰＲ１１９アゴニストの効果）
ＧＰＲ１１９アゴニストは、本質的にＢａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｍら（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２０００）４３：３４２０−３４２７）によって記載されるように、腸管上皮における吸収を増大させることがインビボのイヌモデルを使用して示され得る。Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｍら（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２０００）４３：３４２０−３４２７）はまた、このアッセイにおいて活性を有するＰＹＹのアナログを記載する。
【０８２４】
基礎的な状態における空腸、回腸、および結腸による水および電解質の吸収に対するＧＰＲ１１９アゴニストのインビボでの効果を、本質的にＢｉｌｃｈｉｋら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ（１９９３）１０５：１４４１−１４４８）およびＢｉｌｃｈｉｋら（Ａｍ  Ｊ  Ｓｕｒｇ（１９９４）１６７：５７０−５７４）においてより詳細に記載される通りに、空腸、回腸および／または結腸のチリー−ヴェラ環を有する目覚めているイヌにおいて調査する。それぞれの実験は、９０分間の基礎期間、およびその後の１５０分間の実験期間からなる。小腸の分節を、ローラーポンプを使用して２ｍＬ／分で近位のカニューレを介して灌流する。３７℃に維持したその灌流液（ｐＨ７．４）は、１４０ｎｍｏｌ／ＬのＮａ＋、５．２ｎｍｏｌ／ＬのＫ＋、１１９．８ｎｍｏｌ／ＬのＣｌ−、２５ｎｍｏｌ／ＬのＨＣＯ３、１．２ｎｍｏｌ／ＬのＣａ２＋、１．２ｎｍｏｌ／ＬのＭｇ２＋、２．４ｎｍｏｌ／ＬのＨＰＯ２４−、０．４ｎｍｏｌ／ＬのＨ２ＰＯ４−、１０ｎｍｏｌ／Ｌのグルコースおよび５ｇ／Ｌのポリ（エチレングリコール）中に１０μＣの［１４Ｃ］ポリ（エチレングリコール）を含んだ。２０分間の洗い流し期間後に、灌流液を、Ｎａ＋、Ｃｌ−および水の含量の決定のために１５分間毎に回収する。
【０８２５】
ＧＰＲ１１９アゴニストを、０時間において、例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与する。
【０８２６】
上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０８２７】
上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、そのアゴニストの経口投与は、０時間において始まる、例えば、３０ｍｇ／ｋｇ／時間の用量での管腔内注入によるものである）ことが、明確に企図される。上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい注入用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ／時間である。他の好ましい注入用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ／時間、０．３ｍｇ／ｋｇ／時間、１．０ｍｇ／ｋｇ／時間、３．０ｍｇ／ｋｇ／時間、１０ｍｇ／ｋｇ／時間、３０ｍｇ／ｋｇ／時間および１００ｍｇ／ｋｇ／時間からなる群より選択される。
【０８２８】
（実施例２７）
（マウスにおけるヒマシ油誘導性の排便および下痢症状の下痢の阻害）
ＧＰＲ１１９アゴニストは、欧州特許１９０２７３０号に記載されるように、下痢症状を阻害することがヒマシ油誘導性の排便および下痢症状のマウスモデルを使用して示され得る。
【０８２９】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、使用する。マウスを、自由に得られるげっ歯類の食餌（ＣＥ−２、Ｎｉｐｐｏｎ  ＣＬＥＡ）および飲み水と共に制御した条件（温度：２３℃、相対湿度：５５％、明るい時間：７：００〜１９：００）で、動物室中のフロアマットを備えたケージに個別に収容する。
【０８３０】
ＧＰＲ１１９アゴニスト（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量）、従来の下痢止めの薬剤であるロペラミド（１ｍｇ／ｋｇ）、従来の下痢止めの薬剤であるアトロピン（１０ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクルのみを、それぞれ、経口投与、腹腔内投与、腹腔内投与および経口投与によって上記マウスに投与し、そしてその投与の１５分後に、ヒマシ油（０．３ｍｌ／動物）を、そのマウスに経口投与する。糞便の重量および下痢のスコア（正常：０、軟便：１、水様便：２）を、時間依存性の様式（投与の１時間後、２時間後、および４時間後）で測定する。同じ時間において、同じ測定を、ビヒクルのみが投与され、かつヒマシ油が投与されないマウスに対して行った。
【０８３１】
上記ＧＰＲ１１９アゴニストの好ましい用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。他の好ましい用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。
【０８３２】
上記アゴニストの投与は、他の実施形態において、経口以外である（例えば、そのアゴニストの投与は腹腔内または静脈内である）ことが、明確に企図される。
【０８３３】
（実施例２８）
（経口バイオアベイラビリティー）
本発明の化合物（例えば、ＧＰＲ１１９アゴニスト、ＰＹＹ分泌促進因子、ＰＹＹによってモジュレートされる状態の処置または予防に有用な化合物、あるいはＰＹＹ関連活性のモジュレーションに有用な化合物）の経口バイオアベイラビリティーを直接評価するための物理化学的分析アプローチは、当業者に周知であり、そしてそのアプローチを、使用することができる（例えば、限定ではないが：Ｗｏｎｇ  ＰＣら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖ（２００２）２０：１３７−５２；およびＢｕｃｈａｎ  Ｐら、Ｈｅａｄａｃｈｅ（２００２）、第２補遺：Ｓ５４−６２；それらの各々の開示は、その全体が参考として本明細書に援用されるを参照のこと）。さらなる例示のためであって、限定ではなく、その代替的な分析アプローチは、液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析を含み得る（Ｃｈａｖｅｚ−Ｅｎｇ  ＣＭら、Ｊ  ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＢ  Ａｎａｌｙｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ（２００２）７６７：１１７−２９；Ｊｅｔｔｅｒ  Ａら、Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ（２００２）７１：２１−９；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  ＪＪら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（１９９９）３９：１１５５−６１；およびＢａｒｒｉｓｈ  Ａら、Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｍｍｕｎ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ（１９９６）１０：１０３３−７；それらの各々の開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）。最近、陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）は、薬物の経口投与後の哺乳動物の身体における経口バイオアベイラビリティーを含む薬物分布の直接的な測定を得るために首尾よく使用されている（Ｇｕｌｙａｓら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｍｏｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ（２００２）２９：１０３１−８；その開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）。
【０８３４】
上記明細書は、例示の目的で実施例を用いて本発明の原理を教示しているが、添付の特許請求の範囲およびその等価物の範囲内にある場合、本発明の実施が通常のバリエーション、適合形態、または改変形態の全てを包含すると理解される。
【０８３５】
概要
本発明は、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）分泌促進因子およびＰＹＹによってモジュレートされる状態（例えば、ＮＰＹ  Ｙ２レセプター（Ｙ２Ｒ）の刺激によってモジュレートされる状態）の処置に有用な化合物を同定するためにＧＰＲ１１９レセプターを使用する方法に関する。ＧＰＲ１１９レセプターのアゴニストは、ＰＹＹによってモジュレートされる状態（例えば、Ｙ２Ｒの刺激によってモジュレートされる状態）を処置または予防するための治療剤として有用である。Ｙ２Ｒの刺激によってモジュレートされる状態であり得るようなＰＹＹによってモジュレートされる状態としては、骨に関連する状態、代謝障害、新脈管形成に関連する状態、虚血に関連する状態、痙攣性障害、吸収不良障害、癌、および炎症性障害が挙げられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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