(57)【要約】【課題】  天然由来の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）として、メタボリックシンドロームなどの予防、及びＰＰＡＲγアゴニストの副作用である肥満を抑制するために有用な組成物を提供すること【解決手段】  アスタキサンチン及び／又はそのエステルを有効成分とする、細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）である。脂肪細胞においてＰＰＡＲγアンタゴニストとして働き、脂肪蓄積を抑制する。糖尿病薬として用いられているＰＰＡＲγアゴニストとの併用で、ＰＰＡＲγアゴニストの副作用である肥満を抑制する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスタキサンチン及び／又はそのエステルを有効成分とする細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
【請求項２】
ＰＰＡＲγアンタゴニストとして働き脂肪蓄積を抑制する請求項１に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
【請求項３】
ＰＰＡＲγを介し、ＳＲＣ−１と複合体を形成する請求項１または２記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
【請求項４】
ＰＰＡＲγアゴニストの副作用である肥満を抑制する請求項１〜３のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
【請求項５】
ＰＰＡＲγアゴニストが、１５−デオキシ−Δ１２，１４−プロスタグランジンＪ２、Δ１２−プロスタグランジンＪ２などのアラキドン酸代謝物、ω−３多価不飽和脂肪酸、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの不飽和脂肪酸、９−ヒドロキシオクタデカジエン酸、１３−ヒドロキシオクタデカジエン酸などのエイコサノイド類、又はトログリタゾン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾンのチアゾリジン誘導体の糖尿病治療薬の副作用である肥満を抑制する請求項１〜４のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
【請求項６】
ＰＰＡＲγを介し、ｍＲＮＡの発現を調節する請求項１〜５のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
【請求項７】
ＰＰＡＲγを介し、ｍＲＮＡであるＣＤ３６を抑制する請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
【請求項８】
ＰＰＡＲγを介し、ｍＲＮＡであるａＰ２、ＬＰＬ、及びアディポネクチンの発現を上昇させる請求項１〜７のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
【請求項９】
ＰＰＡＲγを介し、白色脂肪細胞として卵巣周囲脂肪組織重量を減少させる請求項１〜８のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）を含有する飲食物、機能性食品、外用剤、化粧品、医薬部外品及び医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アスタキサンチン及び／又はそのエステルを含有する有効成分が、細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）、特に脂肪細胞においてＰＰＡＲγアンタゴニストとして作用する事によりアスタキサンチン及び／又はそのエステル自身は脂肪蓄積を阻害しメタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、動脈硬化などの予防に繋がる事、並びにＰＰＡＲγアゴニストと併用することでＰＰＡＲγアゴニストの副作用である肥満を抑制する飲食物、機能性食品、外用剤、化粧品、医薬部外品及び医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代社会の、交通手段の進歩による運動不足、食事の高脂肪食化により肥満、糖尿病、高脂血症が引き起こり、これは１９９８年にＷＨＯが診断基準とともにメタボリックシンドロームという名称で統一化され、一つの病態として概念化された。
【０００３】
糖尿病の治療において、インスリン分泌を促進させるスルホニル尿素剤、糖吸収を阻害するα−グリコシダーゼ阻害剤が、血糖値をコントロールする目的としたものであるのに対し、ピオグリダゾン及びロシグリタゾンなどチアゾリジン誘導体は、核内レセプターperoxisome proliferator-activated receptor γ（ＰＰＡＲγ）のアゴニストして作用機序が解明されている。
【０００４】
これらチアゾリジン誘導体は、ＴＮＦ-αの発現を抑制しインスリン抵抗性を改善、アディポネクチンを増加させ、インスリン感受性を高める一方で、ＰＰＡＲγアゴニストとして脂肪細胞の分化を促進し、副作用として体重増加、呼吸困難、浮腫、心不全など複数の副作用が報告されている。従って、ＰＰＡＲγアンタゴニストとして作用させる事が出来れば、脂肪細胞の分化を抑制し、糖尿病、肥満にも有用である。
【０００５】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（peroxisome
proliferator-activated receptor：ＰＰＡＲ）は、脂質代謝を維持する遺伝子群の発現制御を担う転写制御因子として同定された核内受容体ファミリーに属するリガンド依存性転写制御因子である。哺乳動物ではＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ（ＰＰＡＲβ、ＮＵＣ−１、ＦＡＡＲ）、ＰＰＡＲγの３種のサブタイプの存在が知られており、ＰＰＡＲαは主に肝臓で、ＰＰＡＲδは普遍的に発現している。ＰＰＡＲγにはＰＰＡＲγ１とＰＰＡＲγ２の２種のアイソフォームが存在しており、ＰＰＡＲγ１は脂肪組織の他に免疫系臓器や副腎、小腸で発現している。ＰＰＡＲγ２は脂肪組織で特異的に発現しており、脂肪細胞の分化・成熟を制御するマスターレギュレーターである。
【０００６】
ＰＰＡＲγリガンドとしては、１５−デオキシ−Δ１２，１４−プロスタグランジンＪ２やΔ１２−プロスタグランジンＪ２などのアラキドン酸代謝物、ω−３多価不飽和脂肪酸、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの不飽和脂肪酸、９−ヒドロキシオクタデカジエン酸や１３−ヒドロキシオクタデカジエン酸などのエイコサノイド類などが知られている。また、共役トリエン構造又は共役テトラエン構造を有する炭素数１０〜２６の共役不飽和脂肪酸などがＰＰＡＲγリガンドであることが開示されている（特許文献１）。
【０００７】
これまで天然物由来のＰＰＡＲγリガンドとしてクルクミン又はその誘導体（特許文献２）、クローブ抽出物や生薬として知られる厚朴抽出物（特許文献３）、アマチャヅルの疎水性抽出物（特許文献４）が知られている。
【０００８】
一方、天然に存在するキサントフィルの中でもアスタキサンチンが特異的にＰＰＡＲγリガンド活性を有し、ＨＥＫ２９３細胞ではＰＰＲＥ上で転写活性を示さないアンタゴニスト様に働くこと、マクロファージではコレステロールの排出を促進するｍＲＮＡであるＡＢＣトランスポーターを活性化するアゴニスト様に働くことが発表されている（非特許文献１）。
【０００９】
キサントフィルとは、カロテイドの中で酸素原子を含み、例えばアスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン、クリプトキサンチン、ツナキサンチン、サルモキサンチン、パラシロキサンチン、ビオラキサンチン、アンテラキサンチン、ククルビタキサンチン、ディアトキサンチン、アロキサンチン、ペクテノール、ペクテノロン、マクトラキサンチン、カプサンチン、カプサンチノール、フコキサンチン、フコキサンチノール、ペリジニン、ハロシンチアキサンチン、アマロウシアキサンチン、カンタキサンチン、エキネノン、ロドキサンチン、ビキシン、ノルビキシンなどであり、好ましくはアスタキサンチン、クリプトキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン、カンタキサンチン、カプサンチン、フコキサンチンが挙げられる。
【００１０】
アスタキサンチンは、エビ、カニ等の甲殻類、サケ、タイ等の魚類、緑藻ヘマトコッカス等の藻類、赤色酵母ファフィア等の酵母類等、天然、特に海洋に広く分布する食経験豊かな赤色色素である。近年、アスタキサンチンが活性酸素種に対して強力な抗酸化作用を有することが見いだされ（ビタミンＥの１００〜１，０００倍、β−カロテンの約４０倍）、健康食品の素材として注目されている。アスタキサンチンの有するその他の機能特性として、抗炎症作用、抗動脈硬化作用、糖尿病に対する作用、光障害に対する網膜保護作用、抗ストレス作用、精子の質向上作用等数多くの報告がなされている。特に、筋肉に関しては哺乳類の筋肉機能の持続時間を予防的及び／もしくは治療的に改善、ウマの労作性横紋筋融解症治療するための方法が知られている。
【００１１】
ＰＰＡＲγのリガンドである、１５−デオキシ−Δ１２，１４−プロスタグランジンＪ２やΔ１２−プロスタグランジンＪ２などのアラキドン酸代謝物、ω−３多価不飽和脂肪酸、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの不飽和脂肪酸、９−ヒドロキシオクタデカジエン酸や１３−ヒドロキシオクタデカジエン酸などのエイコサノイド類、又はトログリタゾン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン等のチアゾリジン誘導体などはＰＰＡＲγアゴニストとして作動する一方で、脂肪細胞の蓄積を抑制し、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、動脈硬化を改善するＰＰＡＲγアンタゴニスト作用を持つ食品、いわゆる健康食品、医薬部外品及び医薬品に関する報告は知られていない。
【００１２】
また、ＰＰＡＲγアゴニストの中でも、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン等のチアゾリジン誘導体はＰＰＡＲγアゴニストとして糖尿病治療薬として使用されて、その強力なＰＰＡＲγアゴニスト作用により肥満が重大な副作用となっており、この副作用を抑制する食品、いわゆる健康食品、医薬部外品及び医薬品に関する報告は知られていない。
【特許文献１】特開２０００−３５５５３８号公報
【特許文献２】特開２００３−１２８５３９号公報
【特許文献３】特開２００５−９７２１６号公報
【特許文献４】特開２００６−２４１０９７号公報
【非特許文献１】「第１６回天然薬物の開発と応用シンポジウム」講演要旨集，頁１６２，２００６年１１月１日
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、天然由来の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）として、メタボリックシンドロームなどの予防、及びＰＰＡＲγアゴニストの副作用である肥満を抑制するために有用な組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者は、上記目的を達成すべく鋭意研究を行った結果、アスタキサンチン及び／又はそのエステルを含有する有効成分が、細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）であり、特に脂肪細胞においてＰＰＡＲγアンタゴニストとして働き脂肪蓄積を抑制すること、更に糖尿病薬として用いられているＰＰＡＲγアゴニストとの併用で副作用である肥満を抑制したことを見出し、これらの知見に基づいて、本発明を完成するに至った。
【００１５】
すなわち、本発明は、次の（１）〜（１０）よりなる。
（１）  アスタキサンチン及び／又はそのエステルを有効成分とする細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
（２）  ＰＰＡＲγアンタゴニストとして働き脂肪蓄積を抑制する（１）に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
（３）  ＰＰＡＲγを介し、ＳＲＣ−１と複合体を形成する項（１）〜（２）のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
（４）  ＰＰＡＲγアゴニストの副作用である肥満を抑制する（１）〜（３）のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
（５）  ＰＰＡＲγアゴニストが、１５−デオキシ−Δ１２，１４−プロスタグランジンＪ２、Δ１２−プロスタグランジンＪ２などのアラキドン酸代謝物、ω−３多価不飽和脂肪酸、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの不飽和脂肪酸、９−ヒドロキシオクタデカジエン酸、１３−ヒドロキシオクタデカジエン酸などのエイコサノイド類、又はトログリタゾン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾンのチアゾリジン誘導体の糖尿病治療薬の副作用である肥満を抑制する（１）〜（４）のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
（６）  ＰＰＡＲγを介し、ｍＲＮＡの発現を調節する（１）〜（５）のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
（７）  ＰＰＡＲγを介し、ｍＲＮＡであるＣＤ３６を抑制する（１）〜（６）のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
（８）  ＰＰＡＲγを介し、ｍＲＮＡであるａＰ２、ＬＰＬ、及びアディポネクチンの発現を上昇させる（１）〜（７）のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
（９）  ＰＰＡＲγを介し、白色脂肪細胞として卵巣周囲脂肪組織重量を減少させる（１）〜（８）のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）。
（１０）  （１）〜（９）のいずれか１項に記載の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）を含有する飲食物、機能性食品、外用剤、化粧品、医薬部外品及び医薬品。
【発明の効果】
【００１６】
アスタキサンチン及び／又はそのエステルを有効成分とする組成物を医薬品や飲食品の形で投与・摂取することによって、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、動脈硬化を予防すること、並びにＰＰＡＲγアゴニスト糖尿病薬の副作用である肥満を抑制することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
アスタキサンチンとは、天然物由来のもの又は合成により得られるものを意味する。天然物由来のものとしては、例えば、緑藻ヘマトコッカスなどの微細藻類、赤色酵母ファフィアなどの酵母類、エビ、オキアミ、カニなどの甲殻類の甲殻、イカ、タコなどの頭足類の内臓、種々の魚介類の皮やヒレ、ナツザキフクジュソウなどのAdonis属植物の花弁、Paracoccus
sp. N81106、Brevundimonas sp. SD212、Erythrobacter sp. PC6などのα−プロテオバクテリア類、Gordonia sp. KANMONKAZ-1129などの放線菌、Schizochytriuym sp. KH105などのラビリンチュラ類（特にヤブレツボカビ科）やアスタキサンチン産生遺伝子組み換え生物体などから得られるものをあげることができる。天然からの抽出物及び化学合成品は市販されており、入手は容易である。
【００１８】
アスタキサンチンは、３、３'−ジヒドロキシ−β、β−カロテン−４、４'−ジオンであり、立体異性体を有する。具体的には、（３Ｒ、３'Ｒ）−アスタキサンチン、（３Ｒ、３'Ｓ）−アスタキサンチン及び（３Ｓ、３'Ｓ）−アスタキサンチンの３種の立体異性体が知られているが、本発明にはそのいずれも用いることができる。本発明はこれらアスタキサンチン異性体のモノエステル及びジエステルを含む。
【００１９】
本発明において、アスタキサンチンの脂肪酸エステルは、天然物由来のもの又は合成により得られるもののいずれも用いることができるが、体内での吸収からアスタキサンチンエステルが各種の油脂に溶解した天然物由来が好ましい。天然物由来には、例えば、オキアミ抽出物、ファフィア酵母抽出物、ヘマトコッカス藻抽出物があるが、特に好ましいのはアスタキサンチンの安定性の良さとアスタキサンチンのエステルの種類によりヘマトコッカス藻抽出物である。
【００２０】
アスタキサンチンの脂肪酸エステルは突然変異原性が観察されず、安全性が高い化合物であることが知られて、食品添加物として広く用いられている。
【００２１】
ヘマトコッカス藻は、ボルボックス目クラミドモナス科に属する緑藻類であり、通常は緑藻であるためクロロフィル含量が高く緑色であり、２本の鞭毛によって水中を遊泳しているが、栄養源欠乏や温度変化等の飢餓条件では休眠胞子を形成し、アスタキサンチン含量が高くなり赤い球形となる。本発明においては、いずれの状態でのヘマトコッカス藻を用いることができるが、アスタキサンチンを多く含有した休眠胞子となったヘマトコッカス藻を用いるのが好ましい。また、ヘマトコッカス属に属する緑藻類では、例えば、ヘマトコッカス・プルビイアリス（Haematococcus  pluvialis）が好ましい。
【００２２】
ヘマトコッカス緑藻類の培養方法としては、異種微生物の混入・繁殖がなく、その他の夾雑物の混入が少ない密閉型の培養方法が好ましく、例えば、一部解放型のドーム形状、円錐形状又は円筒形状の培養装置と装置内で移動自在のガス吐出装置を有する培養基を用いて培養する方法や、密閉型の培養装置に光源を入れ内部から光を照射して培養する方法、平板状の培養槽やチューブ型の培養層を用いる方法が適している。
【００２３】
本発明のヘマトコッカス藻から抽出物を得る方法としては、ヘマトコッカス藻を乾燥粉砕した後アセトンやアルコールなどの有機溶媒で抽出する方法、ヘマトコッカス藻を有機溶媒に懸濁させて粉砕し同時に抽出する方法、二酸化炭素などを用いる超臨界抽出する方法などで行うことができる。
【００２４】
前記培養物又は前記甲殻類から有機溶媒を用いて抽出及び精製する方法については種々の方法が知られている。例えば、アスタキサンチン及びそのエステルは油溶性物質であることから、アスタキサンチンを含有する天然物からアセトン、アルコール、酢酸エチル、ベンゼン、クロロホルムなどの油溶性有機溶媒でアスタキサンチン含有成分を抽出することができる。また、二酸化炭素や水などを用い超臨界抽出を行うこともできる。抽出後、常法に従って溶媒を除去してモノエステル型のアスタキサンチンとジエステル型のアスタキサンチンの混合濃縮物を得ることができる。得られた濃縮物は、所望により分離カラムやリパーゼ分解によりさらに精製することができる。
【００２５】
前記のドーム型培養装置や密閉型の培養装置で培養したヘマトコッカス藻を乾燥させ、粉砕後にアセトンで抽出又は、アセトン中で粉砕と抽出を同時に行ったのち、アセトンを除去してアスタキサンチン抽出する製法が、又は超臨界抽出を行い、精製したものは、空気に触れることがないことからアスタキサンチンの酸化がほとんどなく、夾雑物が少なく、すなわち本発明の効果を阻害する物質が少なく、アスタキサンチンと中性脂肪を純度良く多く含むことができ好適である。
【００２６】
次に、本発明における細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）について説明する。
【００２７】
ＰＰＡＲとはペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（peroxisome proliferator-activated receptor）であり、脂質代謝を維持する遺伝子群の発現制御を担う転写制御因子として同定された核内受容体ファミリーに属するリガンド依存性転写制御因子である。哺乳動物ではＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ（ＰＰＡＲβ、ＮＵＣ−１、ＦＡＡＲ）、ＰＰＡＲγの３種のサブタイプの存在が知られており、ＰＰＡＲαは主に肝臓で、ＰＰＡＲδは普遍的に発現している。ＰＰＡＲγにはＰＰＡＲγ１とＰＰＡＲγ２の２種のアイソフォームが存在しており、ＰＰＡＲγ１は脂肪組織の他に免疫系臓器や副腎、小腸で発現している。ＰＰＡＲγ２は脂肪組織で特異的に発現しており、脂肪細胞の分化・成熟を制御するマスターレギュレーターである。
【００２８】
ＰＰＡＲの３種のサブタイプとしてＰＰＡＲαは脂質代謝調節において脂肪酸酸化系関連遺伝子の転写の主要因子と位置づけられ、ＰＰＡＲδは脂肪酸酸化促進と、酸化によるエネルギーを熱に変換する標的遺伝子として近年注目され、ＰＰＡＲγは脂肪細胞の分化に必須であり、余剰エネルギーをＴＧとして蓄える過程にも必須の役割を果たしている。
【００２９】
本発明において、ＰＰＡＲとしてはＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ（ＰＰＡＲβ、ＮＵＣ−１、ＦＡＡＲ）、ＰＰＡＲγの中でも、好ましくはＰＰＡＲδ（ＰＰＡＲβ、ＮＵＣ−１、ＦＡＡＲ）及び／又はＰＰＡＲγである。
【００３０】
セレクティブＰＰＡＲモジュレーターとは、ＰＰＡＲの多彩な転写共役因子をリクルートすることで、病態の改善にとって望ましい作用のみを発現させることであり、更に細胞選択的セレクティブＰＰＡＲモジュレーターとは、各種細胞においてアドニスト様に働いたり、アンタゴニスト様に働くことを意味する。
【００３１】
本発明者らは、ＣｏＡ−ＢＡＰ法において、アスタキサンチンがキサントフィルの中でもコアクチベーターであるＴＩＦ−２を用いた実験でＰＰＡＲγに対しリガンド活性を持つこと（複合体形成）を見出している。
【００３２】
ここでコアクチベーターとは、ＰＰＡＲの転写活性を亢進するコファクターとして多数報告され、大別して、Ａ）クロマチンの再構成を促進する分子複合体、Ｂ）ヒストンに共有結合型の修飾を付加する分子、Ｃ）転写調節因子を集積させる足場として機能する分子、Ｄ）基本転写装置との橋渡しを仲介する分子に分けられるが、本発明でのコアクチベーターとしては上記４種類に特に限定を受けない。
【００３３】
本発明者らは、アスタキサンチンがＰＰＡＲγと、ＤＮＡ鎖をほどき結果的に脂肪細胞肥大化に繋がるコアクチベーターであるＣＢＰと複合体を形成しないことを報告し、今回の検討で脂肪細胞肥大化を抑制するコアクチベーターであるＳＲＣ−１とリガンド活性を持つことを見出した。
【００３４】
この結果は、アスタキサンチンが病態の改善にとって望ましい作用のみを発現させるセレクティブＰＰＡＲγモジュレーターであることを支持している。
【００３５】
一方、本発明者らは、ＨＥＫ２９３細胞上でアスタキサンチンをリガンドとしたＰＰＡＲγ複合体がＰＰＲＥ上で転写活性を示さないアンタゴニストとして働くこと、及びマクロファージ中ではｍＲＮＡであるＡＢＣトランスポーターを活性化することを見出しており、今回更に脂肪細胞中では脂肪蓄積を抑制するアンタゴニストとして働くことを証明し、すなわちアスタキサンチンがＳＰＰＡＲＭの中でも細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーターである事を見出した。
【００３６】
マウス線維芽細胞である３Ｔ３−Ｌ１細胞を使用した脂肪細胞における実験内容について詳しく説明するが、脂肪細胞であれば特に限定を受けない。
【００３７】
脂肪細胞の脂肪蓄積を検証するために、マウス線維芽細胞である３Ｔ３−Ｌ１細胞を脂肪細胞へ分化誘導した後、インスリンとＰＰＡＲγアゴニスト又はアスタキサンチンを培養し、細胞内への脂肪蓄積をｏｉｌ  ｒｅｄ  Ｏ染色で解析した。
【００３８】
ここでＰＰＡＲγアゴニストとしては、１５−Δ１２，１４−デオキシプロスタグランジンＪ２、９−ヒドロキシオクタデカジエン酸、１３−トログリタゾンヒドロキシオクタデカジエン酸、又はトログリタゾン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン等のチアゾリジン誘導体の糖尿病治療薬いずれでもよく、好ましくはトログリタゾン、ロシグリタゾン及びピオグリタゾン、より好ましくはロシグリタゾンである。
【００３９】
染色結果、アスタキサンチンは、ＰＰＡＲγアゴニストであるロシグリタゾンと比較して、明らかに赤く染まった脂肪滴が小さく、脂肪の蓄積が抑えられたことが示唆された。
【００４０】
また同様の条件で、ロシグリタゾン単独、アスタキサンチン単独、ロシグリタゾン及びアスタキサンチン混合物、及びＰＰＡＲγアンタゴニストであるＧＷ９６６２及びアスタキサンチンをそれぞれ培養し、脂肪の蓄積をＡｄｉｐｏＲｅｄ（商標）で解析したところ、ロシグリタゾン単独では濃度依存的に脂肪を蓄積したのに対し、アスタキサンチン単独、ロシグリタゾン及びアスタキサンチン混合物、及びＰＰＡＲγアンタゴニストであるＧＷ９６６２及びアスタキサンチン群は濃度依存的な脂肪の蓄積を抑制した。
【００４１】
この結果、アスタキサンチンは脂肪蓄積を抑制するＰＰＡＲγアンタゴニストとして働くことが判明し、更にＰＰＡＲγアゴニストである糖尿病薬ロシグリタゾンの脂肪蓄積を阻害したことから、ＰＰＡＲγアゴニストの脂肪細胞の分化〜肥大化促進、すなわち副作用である肥満を抑制することが明らかとなった。
【００４２】
更に、これらの結果を検証するため、同条件でアスタキサンチンとロシグリタゾン共培養し、ＰＰＡＲγの標的遺伝子であるａＰ２、ＬＰＬ、ＣＤ３６及びアディポネクチンのｍＲＮＡ発現をＲＴ−ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＰＣＲで解析した結果、ＣＤ３６は減少し、ａＰ２、ＬＰＬ及びアディポネクチンは上昇した。
【００４３】
ここで、ａＰ２は前駆脂肪細胞から脂肪細胞になる過程において必要な脂肪酸結合タンパクで、ＬＰＬはＶＬＤＬをＬＤＬへ、中性脂肪を脂肪酸へ変換するリポプロテインリパーゼ、ＣＤ３６は脂肪酸を取り込むトランスポーター、アディポネクチンは抗動脈硬化作用を示すアディポカインであることが知られている。
【００４４】
すなわち、このｍＲＮＡ発現の結果は、前駆脂肪細胞〜小型脂肪細胞〜肥大脂肪細胞に至るＰＰＡＲγアゴニストであるロシグリタゾンの副作用である肥満において、ａＰ２の上昇により前駆脂肪細胞〜小型脂肪細胞へは促進され、さらに、ＬＰＬの上昇により中性脂肪からの脂肪酸放出を促進されるが、ＣＤ３６減少により脂肪酸の取り込みは阻害され小型脂肪細胞〜肥大脂肪細胞へは抑制されることを意味し、アスタキサンチンがＰＰＡＲγアゴニスト系糖尿病薬の副作用である肥満を抑制していることを示唆している。
【００４５】
以上のｉｎ  ｖｉｔｒｏの結果を更に検証するため、マウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでアスタキサンチンの作用を解析した。
【００４６】
アスタキサンチンとしてアスタキサンチン２％パウダー（アスタリールパウダー（商標）：富士化学工業）を飼料とし、糖尿病モデルマウス（ｄｂ／ｄｂマウス）を使用した実験において、白色脂肪細胞として卵巣周囲脂肪組織重量、血糖値、及び中性脂肪を減少させ、アディポネクチンレベルを上昇させた。
【００４７】
卵巣周囲脂肪組織重量が減少したことは、脂肪細胞において脂肪細胞蓄積を抑制したＰＰＡＲγアンタゴニストであること、並びに脂肪細胞肥大化を抑制したｍＲＮＡデータを支持している。
【００４８】
血糖値が減少したことは、アスタキサンチンがアディポネクチンレベルを上昇させることにより肝臓における糖新生を抑制し、骨格筋における糖の取り込み・糖代謝が促進し、空腹時血糖値が低下したと考えられ、すなわち脂肪細胞におけるＰＰＡＲγアンタゴニストとして働き、アディポネクチンのｍＲＮＡレベルが上昇したことを支持している。
【００４９】
中性脂肪が減少したことは、血中アディポネクチンレベルの上昇によって、骨格筋でのエネルギー代謝に血中中性脂肪が利用されることで血中中性脂肪が減少したと考えられた。
【００５０】
以上、ｉｎ  ｖｉｖｏの試験結果からも、アスタキサンチン及び／又はそのエステルが、脂肪細胞においてＰＰＡＲγアンタゴニストであることが証明され、メタボリックシンドロームを予防すること、並びにＰＰＡＲγアゴニスト糖尿病薬の副作用である肥満を抑制する細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）であることを見出した。
【００５１】
アスタキサンチンを含有する組成物の形態としては、医薬品、特定保健食品、いわゆる健康食品、一般の食品の形態のいずれもとることができる。
【００５２】
本発明の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）含有組成物に用いられるアスタキサンチンの量は、アスタキサンチン遊離体換算量で、成人では１日あたり、０．５〜１００ｍｇ、好ましくは１〜３０ｍｇの服用量で経口投与又は非経口投与で行う。投与量は、投与される患者の年齢、体重、症状の程度、投与形態によって異なる。本発明の医薬品におけるアスタキサンチン量は０．０１〜９９重量％、好ましくは０．１〜９０重量％の量で含有させることができる。
【００５３】
本発明の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）の効果を補助するため、本発明の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）含有組成物に補助効果を有する物質を添加することができる。例えば、フラボノイド、セサミン、クルクミノイド、フラボノイド、没食子酸、ピロガロール、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、エピガロカテキン、グルコガリン、プロアントシアニジン及びそのポリマー、エラグ酸、タンニンなどのポリフェノール、ＳＯＤ様物質、コエンザイムＱ１０、α−リポ酸、デオキシリボ核酸及びその塩、アデノシン三リン酸、アデノシン一リン酸などのアデニル酸誘導体及びそれらの塩、リボ核酸及びその塩、グアニン、キサンチン及びそれらの誘導体並びにそれらの塩などの核酸関連物質、血清除蛋白抽出物、脾臓抽出物、胎盤抽出物、鶏冠抽出物、ローヤルゼリーなどの動物由来の抽出物；酵母抽出物、乳酸菌抽出物、ビフィズス菌抽出物、霊芝抽出物などの微生物由来の抽出物、ヘチマ抽出物、センキュウ抽出物、パパイヤ末、高麗人参抽出物、ブルーベリー抽出物、ビルベリー抽出物、カシツ抽出物、イチョウ葉抽出物、ニンジン抽出物、センブリ抽出物、ローズマリー抽出物、オウバク抽出物、ニンニク抽出物、ヒノキチオール、セファランチンなどの植物由来の抽出物、α−又はγ−リノレイン酸、エイコサペンタエン酸及びそれらの誘導体、コハク酸及びその誘導体並びにそれらの塩、エストラジオール及びその誘導体並びにそれらの塩、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、クエン酸、サリチル酸などのα−ヒドロキシ酸及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、メフェナム酸、フェニルブタゾン、インドメタシン、イブプロフェン、ケトプロフェン、アラントイン、グアイアズレン及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、ε−アミノカプロン酸、ジクロフェナクナトリウム、ヒアルロン酸、コンドロイチン、コラーゲン、アロエ抽出物、サルビア抽出物、アルニカ抽出物、カミツレ抽出物、シラカバ抽出物、オトギリソウ抽出物、ユーカリ抽出物及びムクロジ抽出、チロシナーゼ活性阻害剤が、システイン及びその誘導体並びにその塩、センプクカ抽出物、ケイケットウ抽出物、サンペンズ抽出物、ソウハクヒ抽出物、トウキ抽出物、イブキトラノオ抽出物、クララ抽出物、サンザシ抽出物、シラユリ抽出物、ホップ抽出物、ノイバラ抽出物及びヨクイニン抽出物、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン及びケラタン硫酸並びにこれらの塩類、コラーゲン、エラスチン、ケラチン及びこれらの誘導体並びにその塩類、グルタチオン、ビタミンＢ、Ｄ−アスコルビン酸、海洋深層水、ＤＨＡ、漢方薬類、海草類、無機物など、並びにそれらの混合物からなる群から１種又は２種以上選択することができる。また、これらを含んだ果実や葉芽、表皮、藻類、菌類などの乾燥粉体を配合することによっても、同様の効果を得ることができる。これらの成分は、医薬品全量に対して一般には０.０１〜９０重量％、好ましくは０.１〜５０重量％配合され、一種以上組み合わ��て用いることができる。
【００５４】
本発明の組成物を医薬品の形態で用いる場合、経口又は非経口で投与することがでる。経口用の剤形としては、例えば、錠剤、口腔内速崩壊錠、カプセル、顆粒、細粒などの固形投薬形態、シロップ及び懸濁液のような液体投薬形態で投与される。非経口の剤形としては、点鼻剤、貼付剤、軟膏剤、坐剤の形態で投与される。なお、ここで医薬品には医薬部外品もふくまれる。
【００５５】
本発明の組成物を医薬品の形態で用いる場合、一般製剤の製造に用いられる種々の添加剤を適当量含んでいてもよい。このような添加剤として、例えば賦形剤、結合剤、酸味料、発泡剤、人工甘味料、香料、滑沢剤、着色剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤などが挙げられる。賦形剤としては、例えばトウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、コムギコデンプン、コメデンプン、部分アルファー化デンプン、アルファー化デンプン、有孔デンプン等のデンプン類、乳糖、ショ糖、ブドウ糖などの糖、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、ソルビトール、マルチトールなどの糖アルコール、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、ハイドロタルサイト、無水リン酸カルシウム、沈降炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、軽質無水ケイ酸などの無機化合物などがあげられる。結合剤としては、例えばヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム末、ゼラチン、プルランなどが挙げられる。崩壊剤としては、例えばデンプン、寒天、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、結晶セルロース、Ｆ−ＭＥＬＴ（商標、富士化学工業（株）製）などがあげられる。酸味剤としては、例えばクエン酸、酒石酸、リンゴ酸、アスコルビン酸などがあげられる。発泡剤としては、例えば炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウムなどが挙げられる。甘味料としては、例えばサッカリンナトリウム、グリチルリチン二カリウム、アスパルテーム、ステビア、ソーマチンなどが挙げられる。香料としては、例えばレモン油、オレンジ油、メントールなどが挙げられる。滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、タルク、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウムなどが挙げられる。着色剤としては、例えば食用黄色５号、食用赤色２号、食用青色２号などの食用色素、食用レーキ色素、三二酸化鉄などが挙げられる。安定化剤としては、エデト酸ナトリウム、トコフェロール、シクロデキストリン等が挙げられる。ｐＨ調整剤としては、クエン酸塩、リン酸塩、炭酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、酢酸塩、アミノ酸塩などが挙げられる。界面活性剤として、ポリソルベート８０、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ナトリウムカルボキシルメチルセルロース、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、アラビアガム、粉末トラガントなどがあげられる。アスタキサンチンやトコトリエノールの吸収や製剤化を良くするためには粉末状態にすることができる。
【００５６】
シロップ、ドリンク剤、懸濁液などの液剤は、有効成分を必要に応じてｐＨ調製剤、緩衝剤、溶解剤、懸濁剤等、張化剤、安定化剤、防腐剤などの存在下、常法により製剤化することができる。懸濁剤としては、例えば、ポリソルベート８０、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ナトリウムカルボキシルメチルセルロース、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、アラビアガム、粉末トラガントなどを挙げることができる。溶解剤としては、例えば、ポリソルベート８０、水添ポリオキシエチレンヒマシ油、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マクロゴール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステルなどを挙げることができる。安定化剤としては、例えば亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウムなどを挙げることができる。防腐剤としては、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロクレゾールなどを挙げることができる。
【００５７】
皮膚外用剤の形態には、特に限定されず、例えば、乳液、クリーム、化粧水、パック、分散液、洗浄料、メーキャップ化粧料、頭皮・毛髪用品等の化粧品や、軟膏剤、クリーム剤、外用液剤等の医薬品などとすることができる。上記成分以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、美白剤、保湿剤、各種皮膚栄養成分、紫外線吸収剤、酸化防止剤、油性成分、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、色剤、水、防腐剤、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００５８】
飲食品としては、サプリメント、健康食品、栄養機能食品や特定保健用食品などの保健機能食、特別用途食品、一般食品、医薬部外品さらにはスポーツ用のサプリメントとして用いることができ、摂取のしやすさや摂取量が決めやすいことから、サプリメント、スポーツ用のサプリメント、保健機能食、特別用途食品が好ましく、前述医薬品と同様の形態、錠剤、口腔内速崩壊錠、カプセル、顆粒、細粒などの固形投与形態、液剤、ドリンク、シロップ及び懸濁液のような液体投与形態で摂取することができる。上記医薬品用製剤で用いる成分のうち、食品で使用可能なものを選択でき、その他に乳蛋白質、大豆蛋白質、卵アルブミン蛋白質など、又は、これらの分解物である卵白オリゴペプチド、大豆加水分解物、アミノ酸単体の混合物を併用することもできる。また、ドリンク形態で提供する場合は、栄養バランス、摂取時の風味を良くするためにアミノ酸、ビタミン類、ミネラル類などの栄養的添加物、甘味料、香辛料、香料及び色素などを配合してもよい。本発明の飲食物の形態は、これらに限定されるものではない。
【００５９】
一般食品、すなわち飲食物の形態例としては、マーガリン、バター、バターソース、チーズ、生クリーム、ショートニング、ラード、アイスクリーム、ヨーグルト、乳製品、ソース肉製品、魚製品、漬け物、フライドポテト、ポテトチップス、スナック菓子、かきもち、ポップコーン、ふりかけ、チューインガム、チョコレート、プリン、ゼリー、グミキャンディー、キャンディー、ドロップ、キャラメル、パン、カステラ、ケーキ、ドーナッツ、ビスケット、クッキー、クラッカー、マカロニ、パスタ、ラーメン、蕎麦、うどん、サラダ油、インスタントスープ、ドレッシング、卵、マヨネーズ、みそなど、又は果汁飲料、清涼飲料、スポーツ飲料などの炭酸系飲料又は非炭酸系飲料など、茶、コーヒー、ココアなどの非アルコール又はリキュール、薬用酒などのアルコール飲料などの一般食品への添加例を挙げることができる。
【００６０】
飲食品では、アスタキサンチンを一般食品の原料と共に配合し、常法に従って加工製造することにより製造される。アスタキサンチンの配合量は食品の形態などにより異なり特に限定されるものではないが、一般にはアスタキサンチンの使用量は当業者が飲食物の種類に応じて適宜選択でき、前述の医薬品と同様の量を配合することができる。
【００６１】
本発明の細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）を飼料に配合した場合も、医薬品や飲食品と同様の効果を得ることができ、例えば、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、サル、犬、猫、ハムスター、豚、牛、羊、馬、ワニ、ヘビ、トカゲ、鳥に投与することができる。
【実施例】
【００６２】
本発明を以下の実施例及び製剤例にて詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００６３】
［使用薬物］
アスタキサンチン（ロッシュ社製）、ロシグリタゾン（Ａｌｅｘａｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ製）、ＧＷ９６６２（Ｓｉｇｍａ社製）はすべて適当な濃度でジメチルスルホキシド：ＤＭＳＯ（ｗａｋｏ）に溶かし、−８０℃で保存した。
【００６４】
［実施例１］  核内レセプター活性実験（ＣｏＡ−ＢＡＰ法）
ＮｕＬｉｇａｎｄ  Ｋｉｔ（商標、Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行った。まず、ＧＳＴと核内レセプターＬＢＤのキメラタンパク溶液１００μｌを０．１Ｍの炭酸緩衝液に溶解させた後、１００ｍｌずつ９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに分注しし４℃で一晩静置しｐｌａｔｅに核内レセプターＬＢＤを接着させた。ＷｅｌｌをＤＴＴを含む緩衝液Ａで３回ほど洗浄した後、アルカリフォスフォターゼと融合させたＳＲＣ−１キメラタンパク溶液を１０ｍｌの緩衝液で稀釈し１００μｌずつｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに分注した。１００倍濃度サンプルのＤＭＳＯ溶液を１μｌずつ加えて４℃で１時間静置し、反応させた。Ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅを緩衝液Ｂで３〜５回洗浄後、ＮＰＰ基質液を１００μｌずつ加え、３０℃で静置して反応させた。適当な黄色を呈したところで０．５ＭのＮａＯＨを２５ｍｌ加えて反応を停止させ。４０５ｎｍの吸光度を測定した。
【００６５】
アスタキサンチンがＰＰＡＲγと、ＤＮＡ鎖をほどき結果的に脂肪細胞肥大化に繋がるコアクチベーターであるＣＢＰと複合体を形成しないこと、脂肪細胞肥大化を抑制するコアクチベーターであるＳＲＣ−１とリガンド活性を持つことが判明した。結果を表１及びグラフを図１に示す。
【００６６】
【表１】
2009215184.tif 000002
【００６７】
［実施例２］  脂肪細胞の脂肪蓄積に及ぼす影響
３Ｔ３−Ｌ１細胞は１０％ＦＢＳ、５０Ｕ／ｍｌ  ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ、５０ｍｇ／ｍｌ  ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ入りＤＭＥＭ  ｈｉｇｈ  ｇｕｌｃｏｓｅ培地（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコンフルエントにならないように注意して培養した。Ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅはすべてＳＤ  ＳＩＯＣＯＡＴ（商標、ＢＥＣＴＯＮ  ＢＩＣＫＩＮＳＯＮ）を用いて行った。３．０×１０４ｃｅｌｌ／ｃｍ２になるように６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ、２４ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ、９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅそれぞれのｐｌａｔｅに細胞を撒き込んだ。２４時間後にほぼコンフルエントになっていることを確かめた後、もう２日間培養し、十分細胞を休止期に誘導させた。まず、培地を分化誘導培地に交換し、２日間培養した後、維持培地に交換し、２日間培養した。分化誘導後、それぞれサンプルを１μｇ／ｍｌ  ｉｎｓｕｌｉｎを含むサンプル培地で培養した。６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅは２４時間後にＲＮＡ抽出に用いた。２４ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ、９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅは２日間ごとに新しいサンプル入りの維持培地に交換し、４日間培養して、Ｏｉｌ  ｒｅｄ  Ｏ染色及びＡｄｉｐｏＲｅｄ（商標）ａｓｓａｙに用いた。
【００６８】
（試験方法）
１．Ｏｉｌ  ｒｅｄ  Ｏ染色
３Ｔ３−Ｌ１細胞から脂肪細胞への分化誘導を行った２４ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅの培地を捨てて１０％ホルムアルデヒドのＰＢＳ溶液を５００μｌずつ加え室温で２０分間放置した後、新しく１０％ホルムアルデヒドのＰＢＳ溶液を５００μｌずつ加え１時間から４℃で一晩放置し細胞を固定した。ミリＱで２〜３回洗浄した後、Ｏｉｌ  ｒｅｄ  Ｏ溶液を１ｍｌずつ加えて、１時間室温で放置した。Ｏｉｌ  ｒｅｄ  Ｏ溶液を捨てて、ミリＱで２〜３回洗浄した後、よく乾燥させた。
２．ＡｄｉｐｏＲｅｄ（商標）ａｓｓａｙ
３Ｔ３−Ｌ１から脂肪細胞への分化誘導を行った９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅを１００ｍｌずつＰＢＳで１回洗浄した。ＰＢＳを２００μｌずつｗｅｌｌに分注しＡｄｉｐｏＲｅｄ（商標）を５μｌずつ加えて１０分間遮光して室温で放置した。マルチラベルカウンターでｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ４８５ｎｍ／ｅｍｉｓｓｉｏｎ５３５又は５７２ｎｍに設定し蛍光を測定した。
【００６９】
脂肪細胞をＯｉｌ  ｒｅｄ  Ｏ染色すると脂肪滴は赤く染色される。分化誘導前の３Ｔ３−Ｌ１細胞は脂肪滴が全く観測されず、分化誘導したコントロールで比較すると、ロシグリタゾン（１０μＭ）は脂肪滴が大きく広範囲に観測され、アスタキサンチン（１０μＭ）は脂肪滴が小さく、範囲も狭かった。結果を表２、写真を図２に示す。
【００７０】
【表２】
2009215184.tif 000003
【００７１】
ＡｄｉｐｏＲｅｄ（商標）ａｓｓａｙにより、ロシグリタゾン単独では濃度依存的に脂肪を蓄積したのに対し、アスタキサンチン単独、ロシグリタゾン及びアスタキサンチン混合物、及びＰＰＡＲγアンタゴニストであるＧＷ９６６２及びアスタキサンチン群は濃度依存的な脂肪の蓄積を抑制した。結果を表３及びグラフを図３に示す。
【００７２】
【表３】
2009215184.tif 000004
【００７３】
［実施例３］  脂肪細胞のｍＲＮＡ発現に及ぼす影響（ＲＴ−ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＰＣＲ法）
Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  ５００ｎｇをもとにＲｉｖｅｒＴｒａ−α−（ＴＯＹＯＢＯ）を用いてｃＤＮＡを作成した。反応液の組成を表４に示す。ａＰ２、ＬＰＬ、ＣＤ３６は表４の配列でプライマーを作成し、Ｓｙｂｅｒ  Ｇｒｅｅｎ（商標）ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して行った。反応組成、条件は表５に示す。各ｍＲＮＡの数値はβ-アクチンを内部標準とし、各ｍＲＮＡとコントロールの蛍光強度比で求めた。
【表４】
2009215184.tif 000005
【表５】
2009215184.tif 000006
【００７４】
脂肪細胞において、ａＰ２の上昇により前駆脂肪細胞〜小型脂肪細胞へは促進され、ＬＰＬの上昇により中性脂肪を取り込み脂肪酸を排出させる一方で、ＣＤ３６減少により脂肪酸の取り込みは阻害され小型脂肪細胞〜肥大脂肪細胞へは抑制されることを意味し、アスタキサンチンがＰＰＡＲγアゴニスト系糖尿病薬の副作用である肥満を抑制していることを示唆している。結果を表６及びグラフを図４に示す。
【００７５】
【表６】
2009215184.tif 000007
【００７６】
［実施例４］  肥満・糖尿病モデルマウスに及ぼす影響
１．使用動物
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（チャールズリバー）は２０〜２６℃、１２時間ごとの点灯、消灯を行う環境下で飼育した。ＢＫＳ．Ｃｇ−ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊｃｌマウス（ｄｂ／ｍマウス）（日本クレア）も同様の条件で飼育し、交配によって、ＢＫＳ．Ｃｇ−＋Ｌｅｐｒｄｂ／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊｃｌマウス（ｄｂ／ｄｂマウス）を作成し実験に用いた。
２．動物実験
コントロールオイルパウダー、２％アスタキサンチンパウダー（アスタリールパウダー（商標）富士化学工業）をＣＭＦ粉末飼料に混合したものを飼料とした。前日絶食下、４週ごとの体重測定を行い、眼底静脈層から採血を行った。３０００ｇで２０分遠心分離し、血清中の血糖、中性脂肪をグルコースＣII−テストワコー（ｗａｋｏ）、トリグリセライドＥ−テストワコー（ｗａｋｏ）によって９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅを用いた１／５スケール（測定試薬２００μｌに５倍希釈血清を１５μｌ加える。）
の実験系で測定した。また、血中アディポネクチンレベルはマウス／アディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬）によって測定した。
【００７７】
卵巣周囲脂肪組織重量、血糖値、及び中性脂肪を減少させ、アディポネクチンレベルを上昇させた。結果を表７及びグラフを図５に示す。
【００７８】
【表７】
2009215184.tif 000008
【００７９】
本発明において、アスタキサンチン及び／又はそのエステルを含有する有効成分が、脂肪細胞においてＰＰＡＲγアンタゴニストとして働き脂肪蓄積を抑制する細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）でありメタボリックシンドロームなどの予防に繋がる事、更に糖尿病薬として用いられているＰＰＡＲγアゴニストとの併用で副作用である肥満を抑制したことを見出した。
【産業上の利用可能性】
【００８０】
本発明により、アスタキサンチンを含有する有効成分が、細胞選択的セレクティブＰＰＡＲγモジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）として働くことで、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、動脈硬化などを改善、及び／又はＰＰＡＲγアゴニストの副作用である肥満を軽減する飲食物、機能性食品、外用剤、化粧品、医薬部外品及び医薬品を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】ＰＰＡＲγとＳＲＣ−１、及びＣＢＰとの複合体形成に及ぼすアスタキサンチンの作用を示すグラフである。
【図２】脂肪細胞の脂肪蓄積に及ぼすアスタキサンチンの作用（Ｏｉｌ  ｒｅｄ  Ｏ染色）を表す顕微鏡写真である。
【図３】脂肪細胞の脂肪蓄積に及ぼすアスタキサンチンの作用（ＡｄｉｐｏＲｅｄ（商標）試験）を示すグラフである。
【図４】脂肪細胞でのｍＲＮＡ発現に及ぼすアスタキサンチンの作用を示すグラフである。
【図５】ｄｂ／ｄｂマウスのアスタキサンチン投与における作用を示すグラフである。
【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図２】
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