(57)【要約】      （修正有）【課題】口腔関連疾患において特に齲蝕の予防改善のために、グルコシルトランスフェラーゼの阻害に優れた物質であって、渋味や苦味の強いエピガロカテキン−３−Ｏ−ガレートに代わる、風味がよく、かつ人体に対して安全性が極めて高く、低濃度の口腔用組成物の提供。【解決手段】ポリフェノールオキシダーゼ（ラッカーゼ）処理緑茶エキスに含まれるエピテアフラガリンおよび／またはエピテアフラガリン−３−Ｏ−ガレートを有効成分として含有する組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
茶由来重合カテキンを有効成分として含有することを特徴とする、グルコシルトランスフェラーゼ活性阻害作用を有する口腔用組成物。
【請求項２】
請求項１記載の茶由来重合カテキンが、エピテアフラガリン及び／またはエピテアフラガリン  ３−Ｏ−ガレートである請求項１に記載の口腔用組成物。
【請求項３】
請求項２記載のエピテアフラガリン及び／またはエピテアフラガリン  ３−Ｏ−ガレートが、エピガロカテキン及び／またはエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートを含有する茶抽出物に没食子酸を添加し、ポリフェノールオキシダーゼを作用させて得られる、請求項１〜２に記載の口腔用組成物。
【請求項４】
齲蝕改善及び／または予防に用いる請求項１〜３記載の口腔用組成物。
【請求項５】
齲蝕改善及び／または予防に用いる請求項１〜３記載の飲食品、含嗽剤又は口腔洗浄剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エピテアフラガリン類を含有する口腔用組成物及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
口腔の二大疾患である齲蝕（虫歯）と歯周病はともに病原性細菌により引き起こされる感染性疾患であり、性別や年齢に関わらず最も罹患率の高い疾患の一つである。齲蝕は、歯の成分の約９７％を占めるリン酸カルシウムが、ミュータンスレンサ球菌と総称される一連の口腔レンサ球菌の産生する酸により溶解（脱灰）する現象である。一方、歯周病は、歯周組織に原発し、その機能を侵す病的状態で、歯垢（プラーク）中の細菌が原因で生じた炎症性疾患である。歯周病は歯周炎と歯肉炎に分類される。
【０００３】
齲蝕は、まず歯の表面層にミュータンスレンサ球菌などの口腔細菌が定着することにより始まる。このミュータンスレンサ球菌が産生するグルコシルトランスフェラーゼの酵素作用により、歯のエナメル質表面に、食物中のショ糖が変換された粘着性多糖類（グルカン）が生成し、そのグルカンを土台にして、ストレプトコッカスを始めとする様々な口腔内細菌が繁殖すると、グルカンが次第に不溶化し、これと菌の凝集塊とが層となり歯垢（プラーク）が形成される。一方、口腔内細菌が産生する有機酸によって歯の表面のｐＨが５．５以下に低下すると齲蝕が発生、進行する。
【０００４】
このようにして生成したプラークの層が次第に厚くなると、層中の歯により近い部分では細菌の持つ活性酸素除去酵素の働きによりプラーク中の酵素が消費され、酸素の多い好気条件下から酸素の少ない嫌気条件下に移行されていく。
【０００５】
プラークの嫌気条件が進行すると今まで生育不可能であった偏性嫌気性細菌が繁殖できる条件となり、菌数が増加する。こういった状況になるとプラークの層が厚くなり、歯根から歯周ポケットもプラークに覆われてくる。この状態がさらに進展すると歯周病を経て歯槽膿漏になる。
【０００６】
したがって、プラークの形成を抑制することは、齲蝕の予防または改善のためには非常に有効な手段である。
【０００７】
こうした疾病の改善・予防あるいは健康増進に有用な生物や植物が、世界各地で探索されている。しかし生物の乱獲は資源保護、生物多様性条約の観点から好ましいものではなく、また植物についても産地や栽培履歴等のトレーサビリティーが不十分で安全性を担保できない原料を用いた健康食品が市場に出回り、深刻な副作用や社会的混乱を引き起こしている。
【０００８】
茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）はツバキ科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）に属する多年生の木本性常緑樹で、最も長い歴史を持つ飲料原料であり、２００５年には日本では１００，０００トン、世界では３，２０１，０００トン生産されていることから、原料に茶を用いることは安心・信頼できるものがある。
【０００９】
既に緑茶には種々の機能性が明らかにされており、グルコシルトランスフェラーゼ阻害効果（非特許文献１参照）が報告されている。その生理活性の中心は茶カテキンの一種であるエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートである場合が多い(非特許文献２参照)。
【００１０】
食品や飲料でエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートの作用を得るには、高濃度のカテキ
ンを使用する必要があるが、高濃度のカテキンを用いるとカテキン自体の“苦味”と“渋味”が強く、お茶本来の風味を損なってしまう。そこで、“苦味”や“渋味”をマスキングするために、シクロデキストリンを併用する方法が開示されている（特許文献１）。しかし、β-シクロデキストリンには毒性があることが、世界食品添加物合同専門会議（ＪＥＣＦＡ）の安全性評価で確認されたことから、ＥＵ諸国ではその使用量が規制され、“苦味”“渋味”を緩和するための十分なマスキング処理が施せなくなってきている。
【００１１】
このことから、齲蝕を予防改善するための、風味よく、マスキング処理が不要である茶由来重合カテキンが期待されていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開２００４−２５４５１１号公報（第７頁、表１）
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＆  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｂｕｌｌｅｔｉｎ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｊａｐａｎ，１９９０年、３８巻、３冊、ｐ．７１７−７２０
【非特許文献２】Ｖｉｔａｍｉｎｓ  ａｎｄ  Ｈｏｒｍｏｎｅｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、２００１年、６２巻、ｐ．１−９４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
口腔関連疾患のうち、特に齲蝕の予防改善に効果のある組成物であって、渋味や苦味の問題がない、風味がよく、かつ人体に対して安全性が高い口腔用組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ラッカーゼ処理した緑茶エキスに含まれるエピテアフラガリン及びエピテアフラガリン  ３-Ｏ−ガレート（以下、エピテアフラガリン類という）に、齲蝕の原因因子であるグルコシルトランスフェラーゼの阻害効果を見出し、本発明を完成するに至った。
【００１６】
即ち、本願の第１の発明は、茶由来重合カテキンを含有するグルコシルトランスフェラーゼ活性阻害作用を有する口腔用組成物である。
【００１７】
第２の発明は、前記記載の茶由来重合カテキンが、エピテアフラガリン及び／またはエピテアフラガリン  ３−Ｏ−ガレートである口腔用組成物である。
【００１８】
第３の発明は、前記記載のエピテアフラガリン及びまたはエピテアフラガリン  ３−Ｏ−ガレートが、エピガロカテキン及び／またはエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートを含有する茶抽出物に没食子酸を添加し、ポリフェノールオキシダーゼを作用させて得られる口腔用組成物である。
【００１９】
第４の発明は、齲蝕改善及び／または予防に用いる口腔用組成物である。
【００２０】
第５の発明は、齲蝕改善及び／または予防に用いる飲食品、含嗽剤又は口腔洗浄剤である。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、グルコシルトランスフェラーゼ阻害効果を見出したことから、齲蝕に対する高い予防効果を得られる口腔用組成物を提供できた。
【００２２】
更に、“渋味”の強いエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートに代わる成分、即ち、本発明で得られたエピテアフラガリン類により、味をマスキングするための添加物が不要となり、安全性が高く、“苦味”や“渋味”のない剤を提供することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】エピテアフラガリン類のグルコシルトランスフェラーゼに対する阻害効果
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、本発明についてさらに詳細に説明する。
エピテアフラガリン及びエピテアフラガリン  ３−Ｏ−ガレートは下記化学式で表される。
【００２５】
【化１】
2009221191.tif 000002
【化２】
2009221191.tif 000003
【００２６】
そこで、本願発明者が先に見出した製造方法で、エピガロカテキン及び／またはエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートに、没食子酸の存在下、ポリフェノールオキシダーゼを作用させて、エピテアフラガリン類に変換して製造する（特開２０００７−３１９１４０号公報参照）。
【００２７】
上記方法の原料となるエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートは、茶抽出物に含まれることから、エピガロカテキン及び／またはエピガロカテキン ３−Ｏ−ガレートを含有する茶抽出物に没食子酸を添加し、ポリフェノールオキシダーゼを作用させて、エピテアフラガリン類を含有する混合物を製造することができる。茶抽出物としては、例えば、緑茶抽出物、ウーロン茶抽出物、または紅茶抽出物を挙げることができる。
【００２８】
（緑茶抽出物）
緑茶は、ツバキ属（Ｃａｍｅｌｌｉａ）植物の葉の抽出物であり、主にＣａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃａｍｅｌｌｉａ  ａｓｓａｍｉｃａの新芽を原料として、それを乾燥させたものである。緑茶抽出物としては、例えば、ＳＤ緑茶エキスパウダーＮｏ．１６７１４（三栄源エフ・エフ・アイ株式会社）、サンフェノンＢＧ（太陽化学株式会社）などを挙げることができる。また、抽出法としては、原料を熱水、含水アルコール、グリセリン水溶液、酢酸エチル等にて抽出し、精製・濃縮し、噴霧乾燥または凍結乾燥する方法がある。
【００２９】
（ウーロン茶抽出物）
ウーロン茶は、緑茶抽出物と同様の茶葉を一定時間発酵させ、その後加熱して発酵を停止したものである（半発酵茶）。ウーロン茶抽出物としては、例えば、ＦＤウーロン茶エ
キスパウダーＮｏ．１６２９７（三栄源エフ・エフ・アイ株式会社）などを挙げることができる。また、抽出法としては、原料を熱水、含水アルコール、グリセリン水溶液、酢酸エチル等にて抽出し、精製・濃縮し、噴霧乾燥または凍結乾燥する方法がある。
【００３０】
（紅茶抽出物）
紅茶は、緑茶抽出物と同様の茶葉を強発酵させ、その後加熱して発酵を停止したものである（強発酵茶）。紅茶抽出物としては、例えば、ＳＤ紅茶エキスパウダーＮｏ．１６６９１（三栄源エフ・エフ・アイ株式会社）などを挙げることができる。また、抽出法としては、原料を熱水、含水アルコール、グリセリン水溶液、酢酸エチル等にて抽出し、精製・濃縮し、噴霧乾燥または凍結乾燥する方法がある。
【００３１】
茶抽出物の例を以下の表１に示す。但し、これらの茶抽出物は一例であり、これらに限定されるものではない。
【００３２】
【表１】
2009221191.tif 000004
【００３３】
まず、茶抽出物に含まれるエピガロカテキン及びエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートの総量に対して、没食子酸の添加をモル比で１〜１０とする。好ましくはモル比で２〜５とするのが適当である。なぜならば、モル比を６以上にしてもエピテアフラガリン類の生成量増加に対してあまり影響がないからである。
ポリフェノールオキシダーゼは、エピガロカテキンをエピテアフラガリンに変換することができ、かつエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートをエピテアフラガリン  ３−Ｏ−ガレートに変換することができる酵素であれば、特に制限はない。
【００３４】
ポリフェノールオキシダーゼは遊離の酵素または固定化酵素であることができる。ポリフェノールオキシダーゼは遊離の酵素である場合、ポリフェノールオキシダーゼは没食子酸を添加した茶抽出物に所定量添加し、所定時間、所定温度で変換反応を行う。
【００３５】
例えば、ポリフェノールオキシダーゼの所定量は、茶抽出物を０．５〜１５（ｗ／ｖ）％を含む溶液１ｍＬに対して１０〜２００Ｕの範囲である。１０Ｕ以下であると、反応の進行が遅く、エピテアフラビン類生成量が減少し、２００Ｕ以上になると、反応の進行が速すぎて後処理工程の制御が困難になってしまう。
【００３６】
そして変換反応における所定時間は１０分〜１５時間、所定温度は２０〜６０℃の範囲
が望ましい。反応時間が短過ぎるとエピテアフラガリン類の生成が不十分となり、長過ぎると沈殿物が生じ、風味を損ねる。また温度が低すぎると反応が進行しにくく、高過ぎると酵素が失活してしまう。
【００３７】
ポリフェノールオキシダーゼによる変換反応後に、茶抽出物を加熱して酵素を失活させることが必要である。加熱条件は７０〜９０℃で、２〜１０分とすることが適当である。
【００３８】
茶抽出物にどの程度のエピガロカテキン及び／またはエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートが含有されているかは、茶抽出物により異なる。例えば、ＳＤ緑茶エキスパウダーでは、エピガロカテキンが約１０（ｗ／ｗ）％、エピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートが約１３（ｗ／ｗ）％ほど含まれている。従って、例えば茶抽出物を１％含む溶液は、エピガロカテキンが約１ｍｇ／ｍＬ、エピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートが約１．３ｍｇ／ｍＬになる。
【００３９】
上記製造方法により得られるエピテアフラガリン類またはエピテアフラガリン類含有混合物は、そのまま飲食品に加えて、本発明の飲食品とすることができる。本発明の飲食品は、具体的には飲料であり、より具体的には茶飲料である。茶飲料としては、例えば、緑茶飲料、緑茶風飲料、ウーロン茶飲料、ウーロン茶風飲料、紅茶飲料、または紅茶風飲料を挙げることができる。本発明の飲料は、エピテアフラガリン類を、例えば、０．０００１〜０．５質量％含有するものであることができる。
【００４０】
また、上記製造方法により得られるエピテアフラガリン類またはエピテアフラガリン類含有混合物は、そのまま飲食品に添加して利用することもできるが、没食子酸存在下で茶抽出物をポリフェノールオキシダーゼで処理した液を、抽出・精製または濃縮を行い、噴霧乾燥または凍結乾燥し、整粒によりエキス粉末を調製することもできる。こうした濃縮溶液またはエキス粉末を各種形態の食品およびヘルスケア製品の原料として供することもできる。
【００４１】
濃縮溶液またはエキス粉末を適用できる食品としては、例えば、ガム、菓子、キャンディー、サプリメント等を挙げることができる。濃縮溶液またはエキス粉末を適用できるヘルスケア製品としては、例えば、口腔洗浄液、歯磨きペースト等を挙げることができる。
【実施例】
【００４２】
実施例として、エピテアフラガリン類、ラッカーゼ処理緑茶エキス、口腔用飲食品及び含嗽剤を調製した。
【００４３】
（実施例１）エピテアフラガリン
エピガロカテキン２ｇを水１５０ｍＬに加えて攪拌した（氷冷)。フェリシアン化カリウム５ｇ及び炭酸水素ナトリウム３ｇ／水３０ｍＬ、ピロガロール１．４ｇ／水３０ｍＬを滴加した。反応液を酢酸エチル抽出（１００ｍＬ×３)し、減圧下、溶媒留去し、カラムクロマト精製（ポリアミド  Ｃ−２００  １０ｇ（カラム径２ｃｍ)、水／エタノール混液で展開）によりエピテアフラガリン溶出画分を集め、水／メタノ−ルで再結晶し、黄橙色結晶２６０ｍｇを得た。
【００４４】
（実施例２）エピテアフラガリン  ３−Ｏ−ガレート
エピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレート４ｇを水３００ｍＬに加えて攪拌した（氷冷)。フェリシアン化カリウム１０ｇ、炭酸水素ナトリウム６ｇ／水６０ｍＬ、ピロガロール２
．８ｇ／水６０ｍＬを滴加した。反応液を酢酸エチル抽出（１００ｍＬ×３)し、減圧下、溶媒留去し、カラムクロマト精製（ポリアミド  Ｃ−２００  ５０ｇ（カラム径３ｃｍ)、水／エタノール混液で溶出）によりエピテアフラガリン  ３−Ｏ−ガレート溶出画分を集め、水／メタノ−ルで再結晶し橙色結晶８４０ｍｇを得た。
【００４５】
（実施例３）ラッカーゼ処理緑茶エキスの調製
緑茶エキス（カメリアエキス４０Ｒ（太陽化学）)１ｇ及び没食子酸一水和物(純正化学)０．４８ｇを取り、水１００ｍＬに溶解した。ラッカーゼダイワＹ１２０（天野エンザイム、１０８，０００Ｕ／ｇ）０．００９３〜０．０９３ｇを添加し、反応温度４５〜５０℃で、１〜２ｈｒ反応した。反応後、反応液を加熱処理して放冷し凍結乾燥し、得られた乾燥粉末をラッカーゼ処理緑茶エキスとした。当該エキス中には、エピテアフラガリンが０．１〜０．４％(ｗ／ｗ)、エピテアフラガリン  ３−Ｏ−ガレートが０．２〜１．５％（ｗ／ｗ）含まれていた。
【００４６】
（比較例１）エピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレート
太陽化学株式会社製サンフェノンＥＧＣｇを用いた。
【００４７】
（試験例１）グルコシルトランスフェラーゼに対する阻害効果  その1
１）試験方法
（１)使用菌株  口腔由来細菌であるストレプトコッカスに属するストレプトコッカス  ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｏｂｒｉｎｕｓ、ＡＴＣＣ２７３５１）
【００４８】
（２)グルコシルトランスフェラーゼ酵素液の調製
ストレプトコッカス  ソブリヌス  ＡＴＣＣ２７３５１菌株をブレインハートインヒュージョン培地（ＢＨＩ、日水製薬株式会社製）１０ｍＬで３７℃、１８〜２４ｈｒ予備培養した。ブレインハートインヒュージョン培地３０ｍＬを予備培養した培地に加え、３７℃、１８時間前培養した。さらに前培養した培養液を３００ｍＬのブレインハートインヒュージョン培地へ移し、一晩培養後、７０００ｒｐｍで１５分間遠心分離により菌体を除去した上澄液を得た。氷中下、この上澄液に硫酸アンモニウムを５０％飽和になるまで添加して沈殿物を集めた。生じた沈殿物を１０，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して回収し、０．０５ｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５）２ｍＬに溶解し、同一の緩衝液に対して５℃で一晩透析し、グルコシルトランスフェラーゼ酵素液とした。
【００４９】
（３）グルコシルトランスフェラーゼ阻害活性の測定
グルコシルトランスフェラーゼ酵素液６０μＬ、０．０５ｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５)１００μＬ、０．２％アジ化ナトリウム溶液１００μＬ、１０％ショ糖溶液１００μＬ、並びに、実施例で得られた試料溶液１０μＬを加え、さらに全量１０００μＬとなる量の水を加えた。ポリプロピレンチューブ中でこれを30°に傾斜させて、３７℃、２０ｈｒ酵素反応させた。反応後は静かに３回転させ上澄液を除き、不溶性グルカンの付着面を上に向けたまま１ｍＬずつ３回蒸留水を加え、静かに３回転させ上澄液を除いた。さらに１ｍＬずつ３回蒸留水を用いて、ポリプロピレンチューブ内に残る不溶性グルカンを試験管にとり、不溶性グルカンをピペッティングにより分散・懸濁させ、５５０ｎｍの吸光度を測定した。なお、グルコシルトランスフェラーゼ酵素液の添加量は対照ブランクの吸光度が０．９〜１．０を与える量とした。また、試料溶液の代わりに水を用いて同様の操作をしたものを対照ブランクとした。グルコシルトランスフェラーゼ阻害率（％)は、試料反応溶液の吸光度をＡ、対照ブランクの吸光度をＢとしたとき、（1−Ａ／Ｂ）×１００（％)で算出した。また、阻害率が５０％となる試料濃度（μｇ／ｍＬ)を求め、Ｉ
Ｃ５０値とした。
【００５０】
２）試験結果
図１から明らかなように、いずれも濃度依存的にグルコシルトランスフェラーゼを阻害し、ＩＣ５０は表２に示すとおり、比較例１として用いたエピガロカテキン ３−Ｏ−ガレートよりも６〜７倍低濃度でも同程度の効果が得られることが明らかになった。
【００５１】
【表２】
2009221191.tif 000005
【００５２】
（試験例２）グルコシルトランスフェラーゼに対する阻害効果  その２
１）試験方法
（１）使用菌株  口腔由来細菌であるストレプトコッカスに属するストレプトコッカス  ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｏｂｒｉｎｕｓ）ＡＴＣＣ２７３５１
【００５３】
（２）グルコシルトランスフェラーゼ酵素液の調製
ストレプトコッカス  ソブリヌス  ＡＴＣＣ２７３５１菌株をソイビーンカゼインダイジェスト培地（ＳＣＤ培地、ダイゴ−和光純薬工業）１０ｍＬで３７℃、１８〜２４ｈｒ予備培養し、１０．５ＬのＳＣＤ培地へ移し、一晩培養後、７，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離により菌体を除去した上澄液を得た。氷中下、この上澄液に硫酸アンモニウムを５０％飽和になるまで添加して沈殿物を集めた。生じた沈殿物を１０，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して回収し、０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）２０ｍＬに溶解し、同一の緩衝液に対して５℃で一晩透析し、透析液２２ｍＬを得た。
【００５４】
この液を０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム塩緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化したＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ  Ｍ６５０（東ソー）（内径３×高さ２２ｃｍ、充填量９０ｍＬ)に添加し、０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム塩緩衝液（ｐＨ７．０）３００ｍＬで充填剤に非吸着成分を溶出させた。続いて、円筒型密度勾配装置のＡ液に０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）２５０ｍＬ、Ｂ液に１．０ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムを含む０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム塩緩衝（ｐＨ７．０）２５０ｍＬを用いてリニアグラジエントにて吸着部を溶出し、グルコシルトランスフェラーゼ活性のある画分を回収した。その回収した画分５ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム塩緩衝液（ｐＨ７．０）に対して５℃で一晩透析し、凍結乾燥した。この凍結乾燥品に水を加えてグルコシルトランスフェラーゼ粗精製液とした。
【００５５】
（３）グルコシルトランスフェラーゼ阻害活性の測定
グルコシルトランスフェラーゼ粗精製液１５０μＬ、０．０５ｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５）１００μＬ、０．２％アジ化ナトリウム溶液１００μＬ、１０％ショ糖溶液１００μＬ、並びに、実施例３で得られた試料溶液１０μＬを加え、さらに全量１０００μＬとなる量の水を加えた。ポリプロピレンチューブ中でこれを３０°に傾斜させて、３７℃、２４ｈｒ酵素反応させた。反応後は静かに３回転させ上澄液を除き、不溶性グルカンの付着面を上に向けたまま１ｍＬずつ３回蒸留水を加え、静かに３回転させ上澄液を
除いた。さらに１ｍＬずつ３回蒸留水を用いて、ポリプロピレンチューブ内に残る不溶性グルカンを試験管にとり、不溶性グルカンをピペッティングにより分散・懸濁させ、５５０ｎｍの吸光度を測定した。また、試料溶液の代わりに水を用いて同様の操作をしたものを対照ブランクとした。グルコシルトランスフェラーゼ阻害率（％）は、試料反応溶液の吸光度をＡ、対照ブランクの吸光度をＢとしたとき、（１−Ａ／Ｂ）×１００（％）で算出した。また、阻害率が５０％となる試料濃度（μｇ／ｍＬ）を求め、ＩＣ５０値とした。
【００５６】
２）試験結果
ＩＣ５０は表３に示すとおり、比較例１として用いたエピガロカテキン  ３−Ｏ−ガレートよりも２倍低濃度でも同程度の効果が得られることが明らかになった。
【００５７】
【表３】
2009221191.tif 000006
【００５８】
（実施例４）口腔用飲食品
下記組成の各成分を混合し、打錠機を用いて、口腔用飲食品（口腔用清涼剤）１錠あたり２５０ｍｇ）を製した。
ラッカーゼ処理緑茶エキス      ２０％
紅茶抽出物                    １０％
結晶セルロース                ５６％
ショ糖脂肪酸エステル            ４％
微粒二酸化ケイ素                ２％
精製寒天                        ８％
【００５９】
（実施例５）含嗽剤又は口腔洗浄剤
下記組成を撹拌混合し、含嗽剤を得た。
塩酸クロルヘキシジン      ０．０５％
ラウリル硫酸ナトリウム    ５．０％
メチルパラベン            ０．１％
ラッカーゼ処理緑茶エキス  １．０％
香料                      ０．２％
精製水                    適量
【図１】
2009221191.tif 000007