(57)【要約】      （修正有）【課題】抗腫瘍剤として有用なアントラサイクリンプロドラッグ及び該アントラサイクリンプロドラッグの効率的な調製法を提供する。【解決手段】プロドラッグ合成の最終工程（即ち、親薬物分子へのグルクロニドスペーサー部分のカップリング）において、糖ヒドロキシルの保護を必要としない方法、及び該方法を用いた水溶性を有するアントラサイクリングルクロニドプロドラッグのいくつかの新規エステル合成と、腫瘍選択的化学療法における該アントラサイクリングルクロニドプロドラッグの使用。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１
【化１】
2009215295.tif 000033
（式中、
Ｒ１＝Ｈ又はＯＣＨ３；
Ｒ２＝Ｈ又はＯＨ；
Ｒ＝ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−；
ＣＨ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｘ−；
ＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−；
ＣＨ３Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−；又は式
【化２】
2009215295.tif 000034
（ｎは、１〜４０、好ましくは１〜１０、より好ましくは２〜６の整数であり；
ｐは、１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２の整数であり；
ｘは、１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２の整数であり；
アルキルは、１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜３個の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖のアルキル残基である）を有する残基）を有する、アントラサイクリンプロドラッグエステル。
【請求項２】
式１
【化３】
2009215295.tif 000035
（式中、
Ｒ１＝Ｈ又はＯＣＨ３；
Ｒ２＝Ｈ又はＯＨ；
Ｒ＝ＣＨ３；
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−；又は
ＣＨ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｘ−）を有するアントラサイクリンプロドラッグエステルの調製プロセスであって、
それぞれ式１１ａ、１１ｂ又は１１ｃを有する化合物：
【化４】
2009215295.tif 000036
を得るための、保護されていない糖ヒドロキシル基を有する式１０ａ、１０ｂ又は１０ｃの化合物：
【化５】
2009215295.tif 000037
（式中、ｐは、１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２の整数である）の、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメートとの反応と、その後の、
式１を有するアントラサイクリンプロドラッグエステル（式中、Ｒは、ＣＨ３、アリル又は（ＣＨ２）ｘ−Ｃ≡ＣＨである）を得るための、式２１のアントラサイクリン：
【化６】
2009215295.tif 000038
（式中、Ｒ１及びＲ２は上記の通りである）との反応とを含む、プロセス。
【請求項３】
式１０ａ又は１０ｂを有する化合物（式中ｐは１である）が、それぞれ式１３ａ又は１３ｂを有する化合物：
【化７】
2009215295.tif 000039
を得るための、式３を有するイソシアネート：
【化８】
2009215295.tif 000040
（式中、ＴＢＤＭＳはｔ−ブチルジメチルシリル保護基を示す）
の、それぞれ式９ａ又は９ｂを有する全く保護されていないグルクロン酸エステル：
【化９】
2009215295.tif 000041
との反応と、その後の、
それぞれ式１０ａ又は１０ｂの化合物を得るための、シリル保護基の脱保護と、
によって調製される、請求項２記載のプロセス。
【請求項４】
式１０ｃを有する化合物（式中ｐは１である）：
【化１０】
2009215295.tif 000042
が、式１３ａ又は１３ｂを有する化合物：
【化１１】
2009215295.tif 000043
の、式ＣＨ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｘ−ＯＨのアルコール（式中、ｘは請求項１で規定した通りである）との、塩基の存在下での反応と、その後の、
式１０ｃの化合物を得るための、シリル保護基の酸性除去と、
によって調製される、請求項２記載のプロセス。
【請求項５】
塩基存在下での、式１４ａ又は１４ｂを有する化合物：
【化１２】
2009215295.tif 000044
の、アルコールＲＯＨ（式中、Ｒは、Ｍｅ、アリル又は（ＣＨ２）ｘ−Ｃ≡ＣＨである）との反応と、その後の、
それぞれ式１５ａ、１５ｂ又は１５ｃの化合物を得るための、シリル保護基の除去と、
による、式１５ａ、１５ｂ又は１５ｃを有する化合物：
【化１３】
2009215295.tif 000045
の調製プロセス。
【請求項６】
対応する式１のモノ−アルコキシ−ポリエチレングリコールトリアジルエステル（式中、Ｒ１、Ｒ２、ｐ、ｘ及びアルキルは上記規定の通りであり、アルコキシは上記規定のアルキルを含む）を得るための、請求項２記載のプロセスによって得られる式１を有する化合物（式中、ＲはＣＨ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｘ−であり、Ｒ１、Ｒ２、ｐ及びｘは上記規定の通りである）の、銅触媒の存在下でのＮ３−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−アルキルとの反応による、式１を有するアントラサイクリンプロドラッグエステル：
【化１４】
2009215295.tif 000046
（式中、
Ｒ１＝Ｈ、ＯＣＨ３；
Ｒ２＝Ｈ、ＯＨ；
Ｒは、式：
【化１５】
2009215295.tif 000047
（ｎは、１〜４０、好ましくは１〜１０、より好ましくは２〜６の整数であり；
Ｐは、１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２の整数であり；
ｘは、１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２の整数であり；
アルキルは、１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜３個の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖のアルキル残基である）を有する残基である）の調製プロセス。
【請求項７】
式２を有するプロドラッグエステル（式中、それぞれＲ＝ＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ２ＯＨ又はＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＣＨ３）を得るための、塩基存在下での、請求項２記載のプロセスによって得られる式１を有するプロドラッグ（式中Ｒ＝ＣＨ３）の、それぞれ式ＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ２ＯＨ又はＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＣＨ３のアルコールとの反応による、式１を有するアントラサイクリンプロドラッグエステル：
【化１６】
2009215295.tif 000048
（式中、
Ｒ１＝Ｈ又はＯＣＨ３；
Ｒ２＝Ｈ又はＯＨ；
Ｒ＝ＣＨ２−ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２−ＣＨ２−ＯＣＨ３）の調製プロセス。
【請求項８】
標的組織治療で使用するための医薬の製造における、請求項２〜７のいずれか１項記載のプロセスによって得られる式１を有するアントラサイクリンプロドラッグエステル（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲは、請求項２〜７に規定の通りである）の使用であって、該エステルは加水分解され、その後、標的組織に特異的な抗体にカップリングされた酵素によって選択的に活性化される、使用。
【請求項９】
加水分解されたプロドラッグエステルが内因性酵素によって活性化される、請求項８記載の使用。
【請求項１０】
加水分解されたプロドラッグエステルが外因性酵素によって活性化される、請求項８記載の使用。
【請求項１１】
酵素がβ−グルクロニダーゼである、請求項８〜１０記載の使用。
【請求項１２】
抗体が癌細胞に対する特異性を有する、請求項８〜１１記載の使用。
【請求項１３】
有効成分としての式１のアントラサイクリン誘導体：
【化１７】
2009215295.tif 000049
（式中、
Ｒ１＝Ｈ、ＯＣＨ３；
Ｒ２＝Ｈ、ＯＨ；
Ｒ＝ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−；
ＣＨ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｘ−；
ＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−；
ＣＨ３Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−；又は式：
【化１８】
2009215295.tif 000050
（式中、ｎは、１〜４０、好ましくは１〜１０、より好ましくは１〜６の整数であり；
Ｐは、１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２の整数であり；
ｘは、１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２の整数であり；
アルキルは、１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜３個の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖のアルキル残基である）を有する残基）；及び所望に応じて医薬的に許容される担体を含む、経口投与、局所投与又は注射による投与のための、抗腫瘍組成物。
【請求項１４】
式２０を有するアミノカンプトテシンプロドラッグエステル：
【化１９】
2009215295.tif 000051
（式中、
Ｒ＝ＣＨ３；
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−；
ＣＨ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｘ−；
ＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−；
ＣＨ３Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−；又は式：
【化２０】
2009215295.tif 000052
（式中、ｎは、１〜４０、好ましくは１〜１０、より好ましくは１〜６の整数であり；
Ｐは、１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２の整数であり；
ｘは、１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２の整数であり；
アルキルは、１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜３個の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖のアルキル残基である）を有する残基）。
【請求項１５】
請求項１４記載のアミノカンプトテシンプロドラッグエステル（式中、Ｒは、Ｍｅ、アリル又は（ＣＨ２）ｘ−Ｃ≡ＣＨである）の調製プロセスであって、
式２０ａ又は２０ｂのアミノカンプトテシンプロドラッグエステル：
【化２１】
2009215295.tif 000053
（式中、Ｒは、Ｍｅ、アリル又は（ＣＨ２）ｘ−Ｃ≡ＣＨであり、ｐは１又は２である）を得るための、請求項２に記載のプロセスによって得られた式１１ａ、１１ｂ、１１ｃ又は１６ａ、１６ｂ及び１６ｃの化合物：
【化２２】
2009215295.tif 000054
の、式１９の９−アミノカンプトテシン：
【化２３】
2009215295.tif 000055
との反応を含む、プロセス。
【請求項１６】
有効成分としての式２０ａ又は２０ｂのアミノカンプトテシンプロドラッグエステル（式中、Ｒ、ｎ、ｘ、ｐ及びアルキルは、請求項１４で規定した通りである）、及び所望に応じて医薬的に許容される担体を含む、経口投与、局所投与又は注射による投与のための、抗腫瘍組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規エステル、特にアントラサイクリンのグルクロニドプロドラッグのいくつかの新規水溶性エステル、それらの合成及び腫瘍選択的化学療法における使用に関する。
【０００２】
より具体的には、本発明は、アントラサイクリン誘導体１：
【０００３】
【化１】
2009215295.tif 000002
【０００４】
に関し、式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、ｐ、ｘ及びアルキルは、請求項１で規定した通りである。
【背景技術】
【０００５】
驚くべきことに、これらのエステルは、調製プロセスのいずれの工程においても、糖ヒドロキシル基の保護を必要とせずに調製できることがここで見出された。
【０００６】
当業者には通常、副反応を防ぐために糖ヒドロキシル基を合成工程の間保護することが必要であると考えられているため、これは全く予測されなかったことである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明はまた、いくつかの特定のアントラサイクリンプロドラッグエステルの調製プロセスに関し、このプロセスは、アントラサイクリンを、保護されていない糖ヒドロキシル基及び活性化ベンジルヒドロキシル（ｂｅｎｚｙｌｉｃ  ｈｙｄｒｏｘｙｌ）基を有するグルクロニドスペーサー部分にカップリングすることを含む。さらに、このスペーサー部分は単一の部分に限定されず、必要に応じて、当業者に公知の数種の部分の組み合わせからなってもよい。
【０００８】
本発明者らは、プロドラッグが例えば鎖長の異なるモノ−メトキシ−ポリエチレングリコール基を有する場合、本発明のエステルの水溶性が「調整（ｔｕｎｅ）」され得ることをさらに見出した。これに関して、「調整（ｔｕｎｉｎｇ）」とは、保護されていない糖部分のエステル部分に存在するポリエチレングリコール基の鎖長の適切な選択によって、水溶性が、低い水溶性から良好な水溶性まで変化し得ることを示す意味である。高い収率で化合物を提供する、このような「調整可能な（ｔｕｎａｂｌｅ）」エステルの非常に効率的な調製プロセスもまた、開示される。
【０００９】
別の態様において、本発明はさらに、保護されていない糖ヒドロキシル基及び活性化ベンジルヒドロキシル基を有する上記グルクロニドスペーサー部分の調製に関する。
【００１０】
別の態様において、本発明はさらに、保護されていない糖ヒドロキシル基及び活性化ベンジルヒドロキシル基を有する上記グルクロニドスペーサー部分にカップリングされた、以下に規定するアミノカンプトテシン（ａｍｉｎｏｃａｍｐｔｈｏｔｅｃｉｎ）プロドラッグエステルに関する。
【００１１】
より具体的には、本発明は、式１：
【００１２】
【化２】
2009215295.tif 000003
【００１３】
（式中、
Ｒ１＝Ｈ又はＯＣＨ３；
Ｒ２＝Ｈ又はＯＨ；
Ｒ＝ＣＨ３；
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−；又は
ＣＨ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｘ−）を有するアントラサイクリンのグルクロニドプロドラッグのエステルの調製プロセスに関し、このプロセスは、それぞれ式１１ａ、１１ｂ又は１１ｃを有する化合物：
【００１４】
【化３】
2009215295.tif 000004
【００１５】
を得るための、保護されていない糖ヒドロキシル基を有する式１０ａ、１０ｂ又は１０ｃの化合物：
【００１６】
【化４】
2009215295.tif 000005
【００１７】
（式中、ｐは、１〜５、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２の整数である）の、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメートとの反応と、その後の、
式１を有するアントラサイクリンプロドラッグエステル（式中、Ｒは、ＣＨ３、アリル又は（ＣＨ２）ｘ−Ｃ≡ＣＨである）を得るための、式２１のアントラサイクリン：
【００１８】
【化５】
2009215295.tif 000006
【００１９】
（式中、Ｒ１及びＲ２は上記規定の通りである）との反応とを含む。Ｒ＝（ＣＨ２）ｘＣ≡ＣＨであるプロドラッグは、所望に応じて、対応するモノメトキシポリエチレングリコールトリアジルエステル（その水溶性が調整され得る）を得るための、メトキシポリエチレングリコールアジドとの反応による、特定の水溶性エステルの調製のために使用され得る。
【００２０】
本発明のプロドラッグの調製における第１の重要な工程は、式１０ａ又は１０ｂの化合物の調製であり、これは、それぞれ式１３ａ又は１３ｂの化合物：
【００２１】
【化６】
2009215295.tif 000007
【００２２】
を得るための、式３のイソシアネート：
【００２３】
【化７】
2009215295.tif 000008
【００２４】
（式中、ＴＢＤＭＳはｔ−ブチルジメチルシリル保護基を示す）
の、それぞれ式９ａ又は９ｂの全く保護されていないグルクロン酸エステル：
【００２５】
【化８】
2009215295.tif 000009
【００２６】
との反応と、その後の、
それぞれ式１０ａ又は１０ｂ：
【００２７】
【化９】
2009215295.tif 000010
【００２８】
の化合物を得るための、シリル保護基の脱保護と、による。
【００２９】
本発明のプロドラッグの調製における第２の重要な工程は、式１０ｃ：
【００３０】
【化１０】
2009215295.tif 000011
【００３１】
を有する化合物の調製であり、これは、式１３ａ又は１３ｂの化合物：
【００３２】
【化１１】
2009215295.tif 000012
【００３３】
の、式ＣＨ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｘ−ＯＨのアルコール（式中、ｘは、好ましくは１〜５の整数である）との、塩基の存在下での反応と、その後の、
式１０ｃの化合物を得るための、シリル保護基の酸性除去と、による。
【００３４】
さらに、上記のような式１（式中、Ｒは式：
【００３５】
【化１２】
2009215295.tif 000013
【００３６】
（式中、ｘ、ｎ及びアルキルは請求項１で規定した通りである）を有する残基である）を有するアントラサイクリン誘導体の調製プロセスが提供され、これは、式１の対応するモノ−アルコキシ−ポリエチレングリコールトリアゾールエステルを得るための、式１の化合物（式中、ＲはＣＨ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｘ−である）の、銅触媒の存在下でのＮ３−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−アルキルとの反応による。
【００３７】
アントラサイクリンの１例は、以下の式：
【００３８】
【化１３】
2009215295.tif 000014
【００３９】
（式中、Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ）を有するドキソルビシンであり、以下、ＤＯＸと示す。以下で議論するＤＯＸのいくつかの誘導体は、以下の通りである：
【００４０】
【化１４】
2009215295.tif 000015
【００４１】
ＤＯＸ−ＧＡ３            （Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝Ｎａ、Ｈ）
ＤＯＸ−ｍＧＡ３          （Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝Ｍｅ）
ＤＯＸ−ａｌＧＡ３        （Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝アリル）
ＤＯＸ−ｐｒｏｐａｒＧＡ３（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝プロパルギル）
ＤＯＸ−ｍＰＥＧｎ−ＧＡ３（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒは、
【００４２】
【化１５】
2009215295.tif 000016
【００４３】
（式中、ｘ＝１；ｎ＝４、７、１２；アルキル＝ＯＭｅ）である）
【００４４】
アントラサイクリンは、プロドラッグの開発に広く使用されている抗癌剤のクラスに相当する（総説：Ｆ．Ｋｒａｔｚら、Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００６，１３，４７７−５２３）。
【００４５】
アントラサイクリンのグルクロニドプロドラッグ（例えば、ＤＯＸ−ＧＡ３（式１））は、細胞外ヒトβ−グルクロニダーゼによって、腫瘍において選択的に活性化されて、親薬物ドキソルビシンよりも良好な治療係数を生じ得る（総説：Ｍ．ｄｅ  Ｇｒａａｆら、Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ  ２００２，８，１３９１−１４０３）。１０％の体重減少に基づく腫瘍保持マウスにおけるＤＯＸ−ＧＡ３の最大耐用量（ＭＴＤ）は、ドキソルビシンの８ｍｇ／ｋｇと比較して、約５００ｍｇ／ｋｇ（静脈内）であった（Ｐ．Ｈ．Ｈｏｕｂａら、Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０００，８４，１−８）。腫瘍保持マウスへのＭＴＤの半分の投与は、血漿中のドキソルビン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｎｅ）濃度の有意な低下を生じたが、一方で腫瘍組織中の濃度は、ドキソルビンの投与後よりも高かった（Ｐ．Ｈ．Ｈｏｕｂａら、Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０００，８４，１−８）。ＤＯＸ−ＧＡ３などの親水性プロドラッグの不利な点は、腎臓による迅速な排泄である。腫瘍保持ヌードマウスにおける初期の実験では、ＤＯＸ−ＧＡ３は、２５０ｍｇ／ｋｇのこのプロドラッグの投与後４時間以内に血漿から完全に消失することが示された。これは、非常に高い用量が必要であることを意味するので、これは癌治療における使用に関する主要な問題を提起している（Ｐ．Ｈ．Ｈｏｕｂａら、Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０００，８４，１−８）。最近、ＤＯＸ−ＧＡ３のメチルエステル（以下ＤＯＸ−ｍＧＡ３で示す）が検討された。ＤＯＸ−ＧＡ３のメチルエステルはより脂溶性が高く、従って酵素プロドラッグ治療においてよりよく使用されるであろうとの仮説が立てられた。他のメチル化グルクロニドプロドラッグのメチルエステルは、カルボキシルエステラーゼによって加水分解されることが報告されている。ＤＯＸ−ｍＧＡ３投与後のＤＯＸ−ＧＡ３の徐放がこの方法で生じるであろうと予測された。実際、ＤＯＸ−ｍＧＡ３は酵素的にＤＯＸ−ＧＡ３に変換されるが、ヒト血漿中の２．５時間に対して、マウス血漿中約０５分の半減期であった。マウス血漿におけるＤＯＸ−ＧＡ３へのその速い変換にもかかわらず、ＤＯＸ−ｍＧＡ３は、マウスにおいて改善された薬物動態を示した（Ｍ．ｄｅ  Ｇｒａａｆら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００４，６８，２２７３−２２８１）。しかし、水中での溶解性が非常に低いことは依然不利なままである。つまり、ＤＯＸ−ｍＧＡ３は、ある種の過敏感反応を引き起こすと考えられているＣｒｅｍｏｐｈｏｒｅ  ＥＬを含むビヒクル中で投与しなければならない（Ａ．Ｓｈａｒｍａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １９９６，１０７，２６５−２７２）。
【００４６】
上記の不利な点は、アントラサイクリンの特定のグループのグルクロニドプロドラッグによって回避できることが、今回見出された。例えば、本発明者らは、例えばモノ−メトキシ−ポリエチレングリコール基とコンジュゲート化され得るＤＯＸ−ＧＡ３のプロパルギルエステルを調製して、水溶性ＤＯＸ−ＧＡ３エステルを得るための新規経路を見出した。異なる鎖長を有するモノ−メトキシ−ポリエチレングリコール基を導入することによって、溶解性が調整できる。さらに、これらのエステルは、酵素によってより緩徐に加水分解される。
【００４７】
本発明は、活性アミノ基を有する薬物の例としてアントラサイクリン  ドキソルビシン（ＤＯＸ）によって以後説明するが、本発明はアントラサイクリンに限定されず、以下に説明するように、活性アミノ基を有する他の薬物（例えば、アミノカンプトテシンなど）、或いはより一般的に、保護されていない糖ヒドロキシル基を有するグルクロニドスペーサー部分のベンジルヒドロキシル基にカップリングされ得る化合物にも、適用可能である。
【００４８】
従って、対応するアミノカンプトテシンプロドラッグは、親薬物分子にカップリングされた同じ脱離基に起因して、アントラサイクリンプロドラッグに匹敵する溶解性及び加水分解プロフィールを有する。
【００４９】
単純化のために、以下の反応スキームの説明におけるｐの値は、ほとんどの化合物で１に等しいが、本発明がｐ＝１の化合物に限定されるべきでないことは明らかであろう。
【００５０】
実験の節
先験的に（Ａ  ｐｒｉｏｒｙ）。アントラサイクリン−ＧＡ３エステルは、スキーム１に概説したＤＯＸ−ｍＧＡ３の調製と同様に調製され得るが、ここでは、適切なエステル基を有するグルクロン酸エステル前駆体を使用する（Ｍ．ｄｅ  Ｇｒａａｆら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００４，６８，２２７３−２２８１）。しかし、最後の工程においてアセテート基を選択的に除去することが非常に困難であることが証明された。これは、メタノール中の塩基により最も良好に達成されるが、メトキシ基によるグルクロン酸エステル基の交換もまた引き起こす。エステル基に対応するアルコール中の塩基の使用を含む種々の他の方法は、収率が低く、副反応が多かった。
【００５１】
【化１６】
2009215295.tif 000017
【００５２】
しかし、本発明者らは、塩基の存在下でＤＯＸ−ｍＧＡ３を大過剰のアルコールで処理することによって、種々のアルコールを用いてＤＯＸ−ｍＧＡ３からのトランスエステル化が可能であることを見出した（スキーム２）。変換及びシリカを用いた中和の後、過剰のアルコールは、真空内での蒸発又はエーテルでの抽出によって除去する必要がある。残念ながら、出発メチルエステルを含まない単離されたエステルを得ることは困難なようであった。
【００５３】
【化１７】
2009215295.tif 000018
【００５４】
この方法は、モノ−メトキシ−ポリエチレングリコールなどのより大きいアルコールを使用すると、さらに効率が低くなる。収率は非常に低く、この問題を全て回避できるポリエチレングリコールエステル基の導入のための新規且つ一般的な方法を本発明者らが探索することは非常に困難であると、精製により証明された。次いで、本発明者らは、ポリエチレングリコール基が、プロパルギルエステルについてスキーム３に概説した通り、プロパルギル又はより長い鎖の末端アルキンエステルで開始するクリック反応（この手順は、Ｈ．Ｃ．Ｋｏｌｂら、Ｄｒｕｇｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ２００３，８，１１２８−１１３７；Ｊ．Ａ．Ｏｐｓｔｅｅｎら、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．２００５，５７−５９から自体公知である）を介して導入できることを見出した。
【００５５】
【化１８】
2009215295.tif 000019
【００５６】
実際、プロパルギルエステル１（Ｒ＝プロパルギル）を銅触媒の存在下でモノ−メトキシ−ポリエチレングリコールアジドで処理することによって、対応するモノ−メトキシ−ポリエチレングリコールトリアジルエステル１（ｘ＝１）が、中程度〜良好な収率で得られた。
【００５７】
これらの結果は、アントラサイクリンアルキニルエステル１（Ｒは（ＣＨ２）ｘＣ≡ＣＨである）のより効率的な合成について研究する刺激を本発明者らに与えた。なぜなら、スキーム２に記載した交換反応では、４０％を上回る収率を得ることは決してできず、また、メチルエステル１を含まない純粋な生成物を生じなかったからである。
【００５８】
合成の改善を達成するために、本発明者らは、この交換反応の出発化合物としてメチルエステルの代わりにアリルエステルを選択した。通常、アリルオキシ基は、メトキシ基よりも良い脱離基である。さらに、ここで出発物質として使用したグルクロン酸アリルは、グルクロン酸メチルよりもより簡便に良好な収率で入手可能である。
【００５９】
最後に、最後の工程における糖保護基（通常はアセテート基）の除去がもはや必要でない合成を見出す必要があった。
【００６０】
驚くべきことに、本発明者らは、スキーム４に記載したように、ＤＯＸ−ＧＡ３アリルエステル又はＤＯＸ−ｍＧＡ３エステルの合成において糖ヒドロキシル基の保護が実際必要ないことを見出した。
【００６１】
【化１９】
2009215295.tif 000020
【００６２】
本発明者らは、驚くべきことに、アノマーヒドロキシル基、及びより低い程度までならベンジルヒドロキシル基も、二次糖ヒドロキシル基よりも十分に反応性が高いようであり、その結果、糖ヒドロキシル基の保護が回避できることを見出した。しかし、最も重要なことは、グルクロニドスペーサー部分の最終的な変換（例えば、１１の１への変換）において、糖ヒドロキシルの保護はもはや必要ないという点である。
【００６３】
残念ながら、グルクロン酸プロパルギルは、グルクロン酸から、グルクロン酸アリルと同じ方法では調製できず（Ａ．Ａｂｄｅｓｓａｍａｍａ  Ｅｌら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００６，７１，９６２８−３６）、ｄ（＋）−グルクロン−３，６−ラクトンからグルクロン酸メチルと同じ方法で調製することもできない（Ｂｏｌｌｅｎｂａｃｋら；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５５，７７，３３１０−１５）。
【００６４】
本発明者らは、スキーム５及び６に概説したように、メチルエステル５ａ及び１３ａ又はアリルエステル５ｂ及び１３ｂからの、プロパルギルアルコールを用いたトランスエステル化によって、この問題を解決した。
【００６５】
【化２０】
2009215295.tif 000021
【００６６】
【化２１】
2009215295.tif 000022
【００６７】
スキーム５の反応シーケンスは、スキーム６のシーケンスよりも工程が多いが、化合物１３ａ、ｂ中の水の存在におそらくは起因して、スキーム５の後の全体的な収率はかなり高かった。これは、塩基性トランスエステル化の間のエステル基の部分的加水分解を導く。従って、１３ａ、ｂからのより効率的な水の除去は、スキーム６による収率を増加させ得る。
【００６８】
化合物１１ｃは、メチル誘導体（１１ａ）又はアリル誘導体（１１ｂ）についてスキーム４で記載したのと同じ方法で、良好な収率でアントラサイクリンとカップリングされた。
【００６９】
本特許に記載した知見は、この分野における種々の関連した反応に強力な影響を与える。今日まで、一般的な手順では、ＴＢＤＭＳ基が選択的に除去され、ベンジルＯＨがカップリング反応のために活性化される前に、１３などの化合物が糖部分で保護される必要があった。アノマー糖ヒドロキシルとのカップリングの関連する多数の場合において、他の糖ヒドロキシルの保護は、もはや必要でない可能性がある。本発明者らは、二重スペーサーを有するプロドラッグの合成についても、二重スペーサー部分を有するプロドラッグ１の合成についてスキーム８で示したように、二重スペーサー−糖部分をアントラサイクリンとカップリングさせる前に糖ヒドロキシルの保護が必要ないこともまた見出した。
【００７０】
二重スペーサー−糖部分１５ａ、ｂ、ｃの合成をスキーム７に記載する。
【００７１】
【化２２】
2009215295.tif 000023
【００７２】
【化２３】
2009215295.tif 000024
【００７３】
スキーム３に示したクリックケミストリーによる本発明者らの結果は、分岐ポリエチレングリコールのアジド若しくは実にアジド官能基を含むデンドリマー（例えば、Ｅ．Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｍｅｇｉａら、Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００６，７，３１０４−３１１１を参照のこと）を用いたクリック反応において１（Ｒは（ＣＨ２）ｘＣ≡ＣＨである）にも、又は対応するトシレートから容易に入手可能であり得る（Ｊｉａｎ−Ｓｅｎ  Ｌｉら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０００，４８５−４９０）化合物１７及び１８にも、適用できる。
【００７４】
【化２４】
2009215295.tif 000025
【００７５】
ベンジルスペーサーに連結されたグルクロン酸エステル（例えば、化合物１１及び１６）はまた、アントラサイクリン以外のアミノ基含有薬物（例えば、９−アミノカンプトテシン（１９））とカップリングされて、それぞれ化合物２０ａ及び２０ｂを生じ得る。
【００７６】
【化２５】
2009215295.tif 000026
【００７７】
緩衝液中及び血漿中でのプロドラッグエステル１の加水分解（スキーム９）。
本特許に記載したエステルは、実際、β−グルクロニダーゼにより活性化されるグルクロニドプロドラッグの前駆体である。より高い（かつ調整可能な）その脂溶性に起因して、これらは、エステルＤＯＸ−ｍＧＡ３について既に実証されたように、腫瘍組織における対応するグルクロニドプロドラッグのより良好な分布を引き起こし得る（Ｍ．ｄｅ  Ｇｒａａｆら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００４，６８，２２７３−２２８１）。
【００７８】
プロドラッグエステル１（式中、Ｒは
【００７９】
【化２６】
2009215295.tif 000027
【００８０】
である）は、１のエステル基のよりよい脱離能に起因して、ＤＯＸ−ｍＧＡ３などのアルキルエステルよりも速く加水分解されると予測できる。これは、トリアゾール官能基の電子求引特性によって引き起こされる。実際、ｐＨ＝７．３３のリン酸塩緩衝液中で、ＤＯＸ−ｍＧＡ３が完全に加水分解されるには、室温で２４時間を要した。それにもかかわらず、１のＤＯＸ誘導体（ＤＯＸ−ｍＰＥＧ７ＧＡ３及びＤＯＸ−ｍＰＥＧ１２ＧＡ３（式中、ｎ＝７又は１２、ｘ＝１））は、これらの状況下で４時間以内に既に加水分解された。
【００８１】
トリアゾール基の電子求引能の影響は、トリアゾール基を保有するアルキルテイルを伸長させることにより低減され、その結果、この基の電子求引効果は、ｘ＞１のときに弱まる。このように、本発明のエステルの水溶性は、所望により、プロドラッグの要求される（即ち所望される）溶解性プロフィールに基づいて、改変（調整）され得る。
【００８２】
これらのトリアゾールは、対応するエステル１（それぞれ、Ｒは３−ブチニル及び４−ペンチニルである）から調製できる。
【００８３】
実験により、エステラーゼの添加は、ＤＯＸ−トリアゾールエステル１の加水分解に対して弱い影響だけしか与えなかったことが示された。
【００８４】
【化２７】
2009215295.tif 000028
【００８５】
１の水中での溶解性
ＤＯＸ−ｍＧＡ３は水中で完全に不溶性であるが、対応するＤＯＸ−トリアゾールエステル１は、ｎが増加するにつれて増分で十分溶解するようになる。ＤＯＸ−トリアゾールエステル１（ＤＯＸ−ｍＰＥＧ４ＧＡ３）について、約０．６ｍｇのプロドラッグが１ｍｌの水中に溶解するが、ＤＯＸ−ｍＰＥＧ７ＧＡ３については、既に２．５ｍｇが１ｍｌの水中に溶解し、ＤＯＸ−ｍＰＥＧ１２ＧＡ３については、１ｍｌの水中に１５ｍｇより多くが溶解した。
【００８６】
ＯＶＣＡＲ−３細胞におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗増殖効果
プロドラッグの毒性を、ＯＶＣＡＲ−３細胞で試験した。細胞を、種々のプロドラッグＤＯＸ−ａｌＧＡ３、ＤＯＸ−ｍＰＥＧ４−ＧＡ３、ＤＯＸ−ｍＰＥＧ７−ＧＡ３と共に、また比較のためにドキソルビシンと共に、ウシβ−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）の存在下又は非存在下で、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）中で３日間インキュベートした。プロドラッグについて使用した濃度は、０．００１μＭ〜５０μＭの範囲であった。
【００８７】
ＩＣ５０値を以下の表に示す：
【００８８】
【表１】
2009215295.tif 000029
【００８９】
この表の結果は、ＧＵＳなしのとき、このプロドラッグがドキソルビシンと比較して１５０〜３００分の１の毒性であったことを実証している。ＧＵＳの存在下では、プロドラッグＤＯＸ−ａｌＧＡ３及びＤＯＸ−ｍＰＥＧ４−ＧＡ３はドキソルビシンに匹敵する毒性を有し、ＤＯＸ−ｍＰＥＧ７−ＧＡ３は僅かに毒性が低かった。
【実施例】
【００９０】
本発明を、以下の実施例においてさらに説明する。
【００９１】
一般的言及：Ｈ１−ＮＭＲは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＣ−３００で記録した。ＮＭＲスペクトルは、示されたとおりの溶媒を使用して、２９８Ｋで記録した。化学シフトは、テトラメチルシランに対するｐｐｍ低磁場で記録した。結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で示す。質量スペクトルは、ａＶＧ７０７０Ｅダブルフォーカス質量分析計で記録した。
【００９２】
アントラサイクリンプロドラッグのＮＭＲピークの帰属のために、以下の図中の番号付けを使用している。
【００９３】
【化２８】
2009215295.tif 000030
【００９４】
実施例１．
プロパルギルアルコールを用いたＤＯＸ−ｍＧＡ３の、ＤＯＸ−ｐｒｏｐＧＡ３  １（Ｒ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝プロパルギル）への変換。
【００９５】
フレーム乾燥した反応容器中、５ｍｌの乾燥ＴＨＦ及び３０ｍｌのプロパルギルアルコール中にＤＯＸ−ｍＧＡ３（１００ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）を溶解し、減圧下で炭酸カリウムから蒸留した。この混合物に、１２ｍｇのＮａ及び５ｍｌのプロパルギルアルコールから調製した溶液１．５ｍｌを添加した。この混合物を１．５時間室温で維持し、次いで２ｇのシリカを添加することによって中和した。室温で真空内での溶媒除去後、反応化合物が吸着した残留シリカをシリカカラムに添加する。クロマトグラフィー（溶離液：１０％メタノール／ジクロロメタン、その後１５％メタノール／ジクロロメタン）。収率：７０ｍｇ（５８％）のＤＯＸ−ｐｒｏｐＧＡ３  １（Ｒ＝プロパルギル）。ＮＭＲにより、得られたプロパルギルエステルが、約１５％の出発化合物ＤＯＸ−ｍＧＡ３をなお含有していることが示された。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌｃ＝９７３．２４９０７
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝９７３．２４９０
【００９６】
同じ方法で、Ｒ＝ＣＨ２ＣＨ２ＯＭｅのＤＯＸ−ＧＡ３エステルを調製した。
収率：５３％（約１５％の出発化合物を含む）
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝９９３．２７５２９
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝９９３．２８２５５
また、Ｒ３＝ＣＨ２ＣＨ２ＯＨのＤＯＸ−ＧＡ３エステルを調製した。
塩基としてＬｉＯ−Ｃ−Ｃ−ＯＨを用いる。
収率：５０％（約１０％の出発化合物を含む）
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝９７９．２５９６４
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝９７９．２６５３５
【００９７】
実施例２．
メチル  ３，４，５，６−テトラヒドロキシ−テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート９ａからの、メチル  ６−（［４−（［１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，１−ジメチルシリル］オキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１３ａの合成（スキーム６）。
フレーム乾燥した反応容器中、最初に４−（［１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，１−ジメチルシリル］オキシメチル）フェニルイソシアネート３を、４０ｍｌの乾燥トルエン中に２ｇ（７．５２ｍｍｏｌ）のＨＯＯＣ−Ｐｈ−ＣＨ２ＯＴＢＤＭＳを溶解し、０．９ｇ（８．９ｍｍｏｌ）のＥｔ３Ｎ及び２．４５ｇ（８．９ｍｍｏｌ）の（ＤＰＰＡ）ジフェニルホスホリルアジドを添加することによって調製した。この混合物を一晩アルゴン雰囲気下で維持し、その後油浴中８５度で２．５時間加熱した。
反応混合物を室温まで冷却した後、１５ｍｌのアセトニトリル中に溶解した１．３２ｇの９ａ（４．８ｍｍｏｌ）を添加し、この反応混合物を一晩室温に置いた。真空内での溶媒の蒸発（３５度／０．８ｍｍ）後、残渣をカラムクロマトグラフィー（１０％メタノール／ジクロロメタン）で精製した。
収率：０．８５ｇ（３８％）の１３ａ。
質量：４９４（Ｍ＋Ｎａ）；９６５（２Ｍ＋Ｎａ）
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤ３ＯＤ；δ０．０９（ｓ，６Ｈ，Ｓｉ−Ｍｅ２），０．９３（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ−ｔＢｕｔ），３．３８−３．６０（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＣＨ３），３．９６（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．６８（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），４．８３（ｓ，Ｇｌｕ  ２，３，４−ＯＨ），５．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｇｌｕ  １−Ｈ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ａｒ），７．４０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ａｒ）
【００９８】
同じ方法で、アリル  ６−（［４−（［１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，１−ジメチルシリル］オキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１３ｂを、アリル  ３，４，５，６−テトラヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート９ｂから調製した。
フラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル／メタノール＝７０／３０／２）による精製。
収率：４０％の１３ｂ。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝５２０．１９７８８
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝５２０．１９７８０
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤ３ＯＤ；δ０．１０（ｓ，６Ｈ，Ｓｉ−Ｍｅ２），０．９４（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ−ｔＢｕｔ），３．４０−３．６２（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），４．００（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．６６−４．７０（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２−Ｃ＝Ｃ及びＡｒＣＨ２），４．８（ｓ，Ｇｌｕ  ２，３，４−ＯＨ），５．２０−５．２５（ｍ，１Ｈ，アリル），５．３３−５．４０（ｍ，１Ｈ，アリル），５．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｇｌｕ−１Ｈ），５．８９−６．０２（ｍ，１Ｈ，アリル），７．２５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，Ａｒ），７．４１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，Ａｒ）
【００９９】
実施例３．
アリル  ３，４，５，６−テトラヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート９ｂからの、アリル  ３，４，５−トリヒドロキシ−６−（［４−（ヒドロキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１０ｂの合成（スキーム４）。
２ｇ（７．５２ｍｍｏｌ）のＨＯＯＣ−Ｐｈ−ＣＨ２−ＯＴＢＤＭＳから実施例２に記載したように調製した４−（［１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，１−ジメチルシリル］オキシメチル）フェニルイソシアネート３に、１５ｍｌのアセトニトリル中に溶解した１．３２ｇ（５．６５ｍｍｏｌ）の９ｂを添加した。この混合物を一晩撹拌し、次いで０．５ＮのＫＨＳＯ４溶液で酸性化した。真空内での溶媒除去後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（３％メタノール／酢酸エチル、その後５％メタノール／酢酸エチル）で精製した。
収率：０．６ｇ（３１％）の１０ｂ。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝４０６．１１１４０
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝４０６．１１０１８
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤ３ＯＤ；δ３．４０−３．４７（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），３．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．５４（ｓ，２Ｈ，２Ｈ，Ａｒ−ＣＨ２），４．６７−４．７０（ｍ，２Ｈ，−ＯＣＨ２−Ｃ＝Ｃ），４．８４（ｓ，Ｇｌｕ  ２，３，４−ＯＨ，ＡｒＣ−ＯＨ），５．２０−５．２５（ｍ，１Ｈ，アリル），５．３３−５．４４（ｍ，１Ｈ，アリル），５．４９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｇｌｕ  １−Ｈ），５．９１−６．００（ｍ，１Ｈ，アリル），７．２７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ａｒ），７．４２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４，Ａｒ）
【０１００】
実施例４．
アリル  ３，４，５，６−テトラヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１０ｂからの、ＤＯＸ−ａｌＧＡ３  １（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝アリル）の合成（スキーム４）。
フレーム乾燥した反応容器中で、５ｍｌのアセトニトリル中に１００ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）の１０ｂを溶解した。この溶液に、５６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）の４−ニトロフェニルクロロホルメート及び２５ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）のピリジンを添加した。室温で３０分後、再度２８ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）の４−ニトロフェニル−クロロホルメート及び１３ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）のピリジンを添加した。室温で１時間後、ＴＬＣにより、出発化合物がほぼ消失したことが示された。この反応混合物を真空内で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（８％メタノール／ジクロロメタン）で精製した。
収率：５８ｍｇのアリル  ６−（［４−（［（４−クロロフェノキシ）カルボニル］オキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１１ｂ（４１％）。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝５７１．１１７６１
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝５７１．１１７２８
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤ３ＯＤ；δ３．４０−３．６１（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），３．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．６７−４．７０（ｍ，２Ｈ，−ＯＣＨ２−Ｃ＝Ｃ），４．８４（ｓ，４Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−ＯＨ，ＡｒＣ−ＯＨ），５．２０−５．２５（ｍ，３Ｈ，アリル及びＡｒＣＨ２），５．３３−５．４０（ｍ，１Ｈ，アリル），５．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｇｌｕ  １−Ｈ），５．８９−６．０２（ｍ，１Ｈ，アリル），７．３８−７．５２（ｍ，６Ｈ，Ａｒ），８．３０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−ＮＯ２）
【０１０１】
フレーム乾燥した反応容器中で、３ｍｌの乾燥ＤＭＦ中に５５ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）の１１ｂを溶解した。この溶液に、５８ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）のＤＯＸ．ＨＣｌ及び１０．１ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを添加した。この反応混合物をアルゴン雰囲気下で一晩撹拌し、その後溶媒を真空内で除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー（１０％メタノール／ジクロロメタン、その後１５％メタノール／ジクロロメタン）で精製した。
収率：７２ｍｇ（７５％）のＤＯＸ−ａｌＧＡ３  １（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝アリル）。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝９７５．２６４７２
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝９７５．２６７８５
Ｈ１ＮＭＲ：（ＣＤ３）２ＳＯ；δ１．１２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６，６Ｈｚ，５’−ＣＨ３），１．４７（ｂｄｄ，１Ｈ，２’ｅｑ−Ｈ），１．７８−１．８８（ｍ，１Ｈ，２’ａｘ−Ｈ），２．０８−２．２３（ｍ，２Ｈ，８ａｘ−及び８ｅｑ−Ｈ），２．９０−３．０４（ｂＡＢパターン，２Ｈ，１０ｅｑ−及び１０ａｘ−Ｈ），３．１５−３．５０（ｍ，４Ｈ，４’−Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），３．６４−３．７８（ｍ，１Ｈ，３’−Ｈ），３．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ，４−ＯＭｅ），４．１５（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，５’−Ｈ），４．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１４−ＣＨ２），４．６１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，−ＯＣＨ２−Ｃ＝Ｃ），４．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，４’−ＯＨ），４．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１４−ＯＨ），４．８８（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），４．９４（ｂｔ，１Ｈ，７−Ｈ），５．１８−５．４５（ｍ，８Ｈ，１’−Ｈ，Ｇｌｕ１−Ｈ，２ｘアリル，９−ＯＨ，Ｇｌｕ  ２，３，４−ＯＨ），５．８６−５．９２（ｍ，１Ｈ，アリル），６．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，３’−ＮＨ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ３，５−Ｈ），７．４２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ２，６−Ｈ），７．６２−７．６６（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），７．９０−７．９２（ｍ，２Ｈ，１，２−Ｈ），９．９７（ｓ，１Ｈ，Ａｒ  Ｎ−Ｈ），１３．２５（ｂｓ，１Ｈ，１１−ＯＨ），１４．０９（ｂｓ，１Ｈ，６−ＯＨ）
【０１０２】
実施例５．
アリル  ３，４，５，６−テトラヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート９ｂからの、プロパルギルグルクロニドスペーサー部分であるアリル  ３，４，５−トリ（アセチルオキシ）−６−（［４−（［１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，１−ジメチルシリル］オキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート５ｂの合成（スキーム５）。
２５ｍｌのピリジン中に２ｇ（８．５５ｍｍｏｌ）の９ｂを溶解し、この溶液に、２５ｍｌの無水酢酸を添加した。この混合物を冷蔵庫に一晩置き、次いで３０℃／０．８ｍｍで濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル＝７／３）で精製した。
収率：３ｇ（８７％）のアリル  ３，４，５，６−テトラ（アセチルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１２ｂ。
【０１０３】
α異性体とβ異性体との混合物、β異性体のＮＭＲは文献と同一（Ｍ．Ｔｏｓｉｎら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００５，７０，４０９６−４１０６）。
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤＣｌ３  α−異性体；δ４．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｇｌｕ  １−Ｈ），６．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｇｌｕ  １−Ｈ）
【０１０４】
乾燥ＤＭＦ中に３ｇ（７．４６ｍｍｏｌ）の１２ｂを溶解し、この溶液に０．７ｇの炭酸アンモニウムを添加した。室温で４０時間撹拌した後、この混合物を２０ｍｌの０．５Ｎ  ＫＨＳＯ４溶液で酸性化し、２０ｍｌの水を添加した。この混合物を３０ｍｌのジクロロメタンで３回抽出し、引き続いてそのジクロロメタン層を３０ｍｌのＫＨＳＯ４溶液で３回洗浄し、その後３０ｍｌのブラインで２回洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒の蒸発後、残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル＝３／２）で精製した。
収率：１．５６ｇ（５８％）のアリル  ３，４，５−トリ（アセチルオキシ）−６−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート４ｂ。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝３８３．０９５４２
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝３８３．０９４４８
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤＣｌ３；δ２．０１（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．０３（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．０８（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），３．９８（ｂｓ，１Ｈ，１−ＯＨ），４．５５−４．６９（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ，−ＯＣＨ２−Ｃ＝Ｃ），４．９１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，３．６Ｈｚ，Ｇｌｕ  ２−Ｈ），５．１６−５．３９（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  ４−Ｈ，アリル），５．５４−５．６２（ｍ，２Ｈ，Ｇｌｕ  １，３−Ｈ），５．８２−５．９６（ｍ，１Ｈ，アリル）
【０１０５】
４．６５ｇ（１７．５ｍｍｏｌ）のＨＯＯＣ−Ｐｈ−ＣＨ２−ＯＴＢＤＭＳから実施例２に記載したように調製した４−（［１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，１−ジメチルシリル］オキシメチル）フェニルイソシアネート３に、４．７２ｇ（３１．１ｍｍｏｌ）の４ｂを添加した。１８時間の撹拌後、この混合物を３００ｍｌのジエチルエーテルで希釈し、６０ｍｌの０．５Ｎ  ＫＨＳＯ４で３回洗浄し、その後６０ｍｌのＮａＨＣＯ３飽和溶液（３回）及びブライン（２回）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで真空内で除去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル＝５／２）で精製した。
収率：６．２９ｇ（７７％）の５ｂ。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝６４６．２２９５７
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝６４６．２２６３９
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤＣｌ３；δ０．０８（ｓ，６Ｈ，Ｓｉ−Ｍｅ２），０．９３（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ−ｔＢｕｔ），２．０２（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．０４（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．０６（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），４．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．５３−４．６７（ｍ，２Ｈ，−ＯＣＨ２−Ｃ＝Ｃ），４．７０（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），５．１７−５．３６（ｍ，５Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ，アリル），５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｇｌｕ  １−Ｈ），５．８１−５．９４（ｍ，１Ｈ，アリル），６．８３（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．２５−７．３７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）
【０１０６】
実施例６．
アリル  ３，４，５−トリ（アセチルオキシ）−６−（［４−（［１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，１−ジメチルシリル］オキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート５ｂからの、プロパルギルグルクロニドスペーサー部分である２−プロピニル  ３，４，５−トリヒドロキシ−６−（［４−（ヒドロキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１０ｃの合成。
フレーム乾燥した容器中の乾燥プロパルギルアルコール２５ｍｌに、２０ｍｇ（０．０８７ｍｍｏｌ）のナトリウムを添加した。このアルコラート溶液に、０．５ｇ（０．８ｍｍｏｌ）の５ｂを添加し、この混合物を１．５時間撹拌した後、８ｍｌの水中０．１６ｇ（１．２ｍｍｏｌ）のＫＨＳＯ４で酸性化した。３５℃／０．８ｍｍでの溶媒の蒸発後、残渣をカラムクロマトグラフィー（６％メタノール／ジクロロメタン、その後１２％メタノール／ジクロロメタン）で精製した。
収率：１５６ｍｇ（５１％）の１０ｃ。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌｃ＝４０４．０９５７５
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝４０４．０９４４９
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤ３ＯＤ；δ２．９４（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，−Ｃ≡ＣＨ），３．４０−３．６１（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），４．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．５４（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），４．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，−ＯＣＨ２−Ｃ≡Ｃ），４．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，−ＯＣＨ２−Ｃ≡Ｃ），４．８５（ｓ，Ｇｌｕ  ２，３，４−ＯＨ，Ａｒ−ＯＨ），５．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｇｌｕ−１Ｈ），７．２９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ａｒ），７．４２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ａｒ）
【０１０７】
実施例７．
２−プロピニル  ３，４，５−トリヒドロキシ−６−（［４−（ヒドロキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１０ｃからの、ＤＯＸ−ｐｒｏｐＧＡ３  １（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝プロパルギル）の合成。
化合物１０ｃを、アセトニトリル／トルエン中に繰り返し溶解し、溶媒を真空内で除去することによって乾燥させた。５ｍｌの乾燥アセトニトリル中に溶解した１００ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）の乾燥１０ｃに、５６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）の４−ニトロフェニルクロロホルメート及び２５ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）のピリジンを添加した。室温で３０分間撹拌した後、再度２８ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）の４−ニトロフェニルクロロホルメート及び１３ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）のピリジンを添加した。撹拌を室温で１時間続けた後、この混合物を真空内で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（８％メタノール／ジクロロメタン）で精製した。
収率：７４ｍｇ（５２％）の２−プロピニル  ６−（［４−（［（４−ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１１ｃ。
Ｍｃａｌ＝５６９．１０１９６
Ｍｆｎｄ＝５６９．１０１７３
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤ３ＯＤ；δ２．９５（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，−Ｃ≡ＣＨ），３．４０−３．６１（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），４．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．５４（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），４．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，−ＯＣＨ２−Ｃ≡Ｃ），４．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，−ＯＣＨ２−Ｃ≡Ｃ），４．８４（ｓ，Ｇｌｕ  ２，３，４−ＯＨ，Ａｒ−ＯＨ），５．２５（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），５．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｇｌｕ−１Ｈ），７．３９−７．５２（ｍ，６Ｈ，Ａｒ），８．２７−８．３３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−ＮＯ２）
【０１０８】
ＤＯＸ−ｐｒｏｐａｒＧＡ３  １（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝プロパルギル）：
５ｍｌの乾燥ＤＭＦ中７０ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）の１１ｃに、７４ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）のＤＯＸ．ＨＣｌ及び１２．９ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを添加した。この混合物をアルゴン雰囲気下室温で一晩撹拌し、次いで真空内で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（１０％メタノール／ジクロロメタン、その後１５％メタノール／ジクロロメタン）で精製した。
収率：９６ｍｇ（７９％）のＤＯＸ−ｐｒｏｐａｒＧＡ３  １（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝プロパルギル）。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝９７３．２４９０７
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝９７３．２４８８５
Ｈ１ＮＭＲ：（ＣＤ３）２ＳＯ；δ１．１１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６，６Ｈｚ，５’−ＣＨ３），１．４７（ｂｄｄ，１Ｈ，２’ｅｑ−Ｈ），１．７８−１．９０（ｍ，１Ｈ，２’ａｘ−Ｈ），２．０５−２．２６（ｍ，２Ｈ，８ａｘ−及び８ｅｑ−Ｈ），２．９０−３．０４（ｂＡＢパターン，２Ｈ，１０ｅｑ−及び１０ａｘ−Ｈ），３．１５−３．５０（ｍ，４Ｈ，４’−Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），３．５７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，−Ｃ≡ＣＨ），３．６４−３．７８（ｍ，１Ｈ，３’−Ｈ），３．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ，４−ＯＭｅ），４．１５（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，５’−Ｈ），４．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１４−ＣＨ２），４．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，４’−ＯＨ），４．７５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，−ＯＣＨ２−Ｃ≡Ｃ，４．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１４−ＯＨ），４．８８（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），４．９４（ｂｔ，１Ｈ，７−Ｈ），５．２０（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１’−Ｈ），５．３２（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．４０−５．４７（ｍ，４Ｈ，Ｇｌｕ１−Ｈ，９−ＯＨ，２ｘＧｌｕ  ＯＨ），６．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，３’−ＮＨ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ３，５−Ｈ），７．４２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ２，６−Ｈ），７．６２−７．６６（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），７．９０−７．９２（ｍ，２Ｈ，１，２−Ｈ），９．９７（ｓ，１Ｈ，Ａｒ  Ｎ−Ｈ），１３．２５（ｂｓ，１Ｈ，１１−ＯＨ），１４．０９（ｂｓ，１Ｈ，６−ＯＨ）
【０１０９】
同じ方法で、ＤＡＵ−ｐｒｏｐａｒＧＡ３  １（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ＝プロパルギル）を、１１ｃ及びＤＡＵ．ＨＣｌから調製した。
溶離液（１０％メタノール／ジクロロメタン）。
収率：７４％のＤＡＵ−ｐｒｏｐａｒＧＡ３  １（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ＝プロパルギル）。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝９５７．２５４１６
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝９５７．２５３４２
Ｈ１ＮＭＲ：（ＣＤ３）２ＳＯ；δ１．１２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６，６Ｈｚ，５’−ＣＨ３），１．４７（ｂｄｄ，１Ｈ，２’ｅｑ−Ｈ），１．７８−１．９０（ｍ，１Ｈ，２’ａｘ−Ｈ），２．０５−２．２６（ｍ，２Ｈ，８ａｘ−及び８ｅｑ−Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ，１３−ＣＨ３），２．８９−３．０２（ｂＡＢパターン，２Ｈ，１０ｅｑ−及び１０ａｘ−Ｈ），３．１５−３．５０（ｍ，４Ｈ，４’−Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），３．５７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，−Ｃ≡ＣＨ），３．６４−３．７８（ｍ，１Ｈ，３’−Ｈ），３．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ，４−ＯＭｅ），４．１５（ｂｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，５’−Ｈ），４．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，４’−ＯＨ），４．７５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，−ＯＣＨ２−Ｃ≡Ｃ），４．８８（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），４．９４（ｂｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，７−Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１’−Ｈ），５．３２（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．３９−５．４７（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  １−Ｈ，２ｘＧｌｕ−ＯＨ），５．５３（ｓ，１Ｈ，９−ＯＨ），６．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，３’−ＮＨ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ３，５−Ｈ），７．４２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ２，６−Ｈ），７．６２−７．６６（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），７．９０−７．９２（ｍ，２Ｈ，１，２−Ｈ），９．９７（ｓ，１Ｈ，Ａｒ  Ｎ−Ｈ），１３．２９（ｓ，１Ｈ，１１−ＯＨ），１４．０３（ｓ，１Ｈ，６−ＯＨ）
【０１１０】
実施例８．
プロパルギルエステル１（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝プロパルギル）の、対応するトリアゾールエステル１（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、ｎ＝４及び７、ｘ＝１）への変換（スキーム３）。
【０１１１】
Ｍｅ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨのＭｅ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＮ３への変換
メトキシポリエチレングリコールは純粋化合物としては手に入らず、通常はｎ＋（１−３）誘導体及びｎ−（１−３）誘導体の混合が伴う。
従って、本発明者らは、ｎ＝７について市販の化合物を蒸留し、９０％より多くの主要化合物を含むｎ＝４及びｎ＝７の画分を単離した。ｎ＝１２の化合物を市販混合物として使用した。
【０１１２】
一般手順：２ｍｌのピリジン中に溶解した８ｍｍｏｌの乾燥Ｍｅ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨに、３．８ｇ（２０ｍｍｏｌ）の塩化トシルを添加した。この混合物を一晩撹拌し、その後氷中に注いだ。全体をジクロロメタンで抽出し、このジクロロメタン溶液を６Ｎ  ＨＣｌ及び水で２回洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥した後、ジクロロメタンを蒸発させ、残渣をさらに精製することなく使用した。この方法で、ｎ＝４、７及び１２のＭｅ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＮ３を調製した。
【０１１３】
２．５ｍｌのＴＨＦ／水（４／１）中に溶解した７０ｍｇ（０．０７４ｍｍｏｌ）のＤＯＸ−ｐｒｏｐａｒＧＡ３に、７０ｍｇ（４ｅｑ）のＭｅ（ＯＣＨ２ＣＨ２）４Ｎ３、３ｍｇ（２５ｍｏｌ％）のＣｕＳＯ４及び７．３ｍｇ（５０ｍｏｌ％）のアスコルビン酸ナトリウムを添加した。アルゴン雰囲気下で一晩撹拌した後、この混合物を３５度／０．８ｍｍで濃縮し、残渣をジエチルエーテルで数回洗浄して、過剰のアジドを除去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（溶離液：１０％メタノール／ジクロロメタン、その後１５％メタノール／ジクロロメタン）で精製した。
収率：６５ｍｇ（７３％）のトリアゾールエステル１（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、ｎ＝４、ｘ＝１）
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌｃ＝１２０６．３８６６３
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝１２０６．３８００８
Ｈ１ＮＭＲ：（ＣＤ３）２ＳＯ；δ１．１２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６，６Ｈｚ，５’−ＣＨ３），１．４７（ｂｄｄ，１Ｈ，２’ｅｑ−Ｈ），１．７８−１．８８（ｍ，１Ｈ，２’ａｘ−Ｈ），２．０８−２．２３（ｍ，２Ｈ，８ａｘ−及び８ｅｑ−Ｈ），２．９０−３．０４（ｂＡＢパターン，２Ｈ，１０ｅｑ−及び１０ａｘ−Ｈ），３．１７−３．５２（ｍ，１８Ｈ，４’−Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ，（Ｏ−Ｃ−Ｃ）４），３．３１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．６４−３．７８（ｍ，１Ｈ，３’−Ｈ），３．７９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，ＣＨ２  トリアジル），３．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ，４−ＯＭｅ），４．１５（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，５’−Ｈ），４．５１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ２），４．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１４−ＣＨ２），４．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，４’−ＯＨ），４．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１４−ＯＨ），４．８７（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），４．９３−４．９８（ｍ，１Ｈ，７−Ｈ），５．１７−５．２４（ｍ，２Ｈ，１’−Ｈ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．３７−５．４８（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ１−Ｈ，９−ＯＨ，Ｇｌｕ−ＯＨ），６．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３’−ＮＨ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ３，５−Ｈ），７．４１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ２，６−Ｈ），７．６２−７．６６（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），７．８９−７．９５（ｍ，２Ｈ，１，２−Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ，トリアジル），９．９６（ｓ，１Ｈ，Ａｒ  Ｎ−Ｈ），１３．２８（ｂｓ，１Ｈ，１１−ＯＨ），１４．０４（ｂｓ，１Ｈ，６−ＯＨ）
【０１１４】
同じ方法で以下を調製した：
トリアゾールエステル１（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、ｎ＝７、ｘ＝１）
溶離液（５％メタノール／ジクロロメタン、その後１２％メタノール／ジクロロメタン）。
収率：５１％
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌｃ＝１３３８．４６２７
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝１３３８．４５６５
Ｈ１ＮＭＲ：（ＣＤ３）２ＳＯ；δ１．１１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６，６Ｈｚ，５’−ＣＨ３），１．４７（ｂｄｄ，１Ｈ，２’ｅｑ−Ｈ），１．７７−１．９０（ｍ，１Ｈ，２’ａｘ−Ｈ），２．０８−２．２３（ｍ，２Ｈ，８ａｘ−及び８ｅｑ−Ｈ），２．９０−３．０４（ｂＡＢパターン，２Ｈ，１０ｅｑ−及び１０ａｘ−Ｈ），３．１８−３．５２（ｍ，３０Ｈ，４’−Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ，（−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２）７），３．６４−３．７８（ｍ，１Ｈ，３’−Ｈ），３．７９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，ＣＨ２  トリアジル），３．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ，４−ＯＭｅ），４．１５（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，５’−Ｈ），４．５１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ２），４．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１４−ＣＨ２），４．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，４’−ＯＨ），４．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１４−ＯＨ），４．８７（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），４．９５（ｔ，１Ｈ，７−Ｈ），５．１７−５．２４（ｍ，２Ｈ  １’−Ｈ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．３７−５．４８（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ１−Ｈ，Ｇｌｕ−ＯＨ，９−ＯＨ），６．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，３’−ＮＨ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ３，５−Ｈ），７．４１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ａｒ  ２，６−Ｈ），７．６２−７．６８（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），７．８９−７．９５（ｍ，２Ｈ，１，２−Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ，トリアジル），９．９６（ｓ，１Ｈ，Ａｒ  Ｎ−Ｈ），１３．２８（ｂｓ，１Ｈ，１１−ＯＨ），１４．０４（ｂｓ，１Ｈ，６−ＯＨ）
【０１１５】
トリアゾールエステル１（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝Ｈ、ｎ＝４、ｘ＝１）
溶離液（１０％メタノール／ジクロロメタン）。
収率：６９％
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌｃ＝１１９０．３９１７２
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝１１９０．４００９１
Ｈ１ＮＭＲ：（ＣＤ３）２ＳＯ；δ１．１２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６，６Ｈｚ，５’−ＣＨ３），１．４５（ｂｄｄ，１Ｈ，２’ｅｑ−Ｈ），１．７８−１．９０（ｍ，１Ｈ，２’ａｘ−Ｈ），２．０５−２．２６（ｍ，２Ｈ，８ａｘ−及び８ｅｑ−Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ，１３−ＣＨ３），２．８９−３．０２（ｂＡＢパターン，２Ｈ，１０ｅｑ−及び１０ａｘ−Ｈ），３．１７−３．５２（ｍ，１８Ｈ，４’−Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ，（Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２）４），３．６６−３．７８（ｍ，１Ｈ，３’−Ｈ），３．７９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，ＣＨ２  トリアジル），３．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ，４−ＯＭｅ），４．１６（ｂｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，５’−Ｈ），４．５１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ２），４．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，４’−ＯＨ），４．８８（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），４．９４（ｂｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，７−Ｈ），５．１２−５．２５（ｍ，２Ｈ，１’−Ｈ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．２８−５．３６（ｍ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．３９−５．４７（ｍ，２Ｈ，Ｇｌｕ−１Ｈ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．５３（ｓ，１Ｈ，９−ＯＨ），６．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，３’−ＮＨ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ３，５−Ｈ），７．４２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ２，６−Ｈ），７．６２−７．６６（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），７．９０−７．９２（ｍ，２Ｈ，１，２−Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ，トリアジル），９．９７（ｓ，１Ｈ，Ａｒ  Ｎ−Ｈ），１３．２９（ｂｓ，１Ｈ，１１−ＯＨ），１４．０３（ｂｓ，１Ｈ，６−ＯＨ）
【０１１６】
トリアゾールエステル１（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝Ｈ、ｎ＝７、ｘ＝１）
溶離液（１０％メタノール／ジクロロメタン）。
収率：５２％
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌｃ＝１３２２．４７０３６
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝１３２２．４６１５０
Ｈ１ＮＭＲ：（ＣＤ３）２ＳＯ；δ１．１２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６，６Ｈｚ，５’−ＣＨ３），１．４５（ｂｄｄ，１Ｈ，２’ｅｑ−Ｈ），１．７８−１．９０（ｍ，１Ｈ，２’ａｘ−Ｈ），２．０５−２．２６（ｍ，２Ｈ，８ａｘ−及び８ｅｑ−Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ，１３−ＣＨ３），２．８９−３．０２（ｂＡＢパターン，２Ｈ，１０ｅｑ−及び１０ａｘ−Ｈ），３．１８−３．５２（ｍ，３０Ｈ，４’−Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ，（−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２）７），３．６６−３．７８（ｍ，１Ｈ，３’−Ｈ），３．７９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，ＣＨ２  トリアジル），３．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ，４−ＯＭｅ），４．１６（ｂｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，５’−Ｈ），４．５１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ２），４．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，４’−ＯＨ），４．８８（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），４．９３（ｂｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，７−Ｈ），５．１２−５．２５（ｍ，２Ｈ，１’−Ｈ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．３２（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．３８−５．４７（ｍ，２Ｈ，Ｇｌｕ  １−Ｈ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．５３（ｓ，１Ｈ，Ｇｌｕ−ＯＨ），６．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，３’−ＮＨ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ３，５−Ｈ），７．４２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ａｒ  ２，６−Ｈ），７．６２−７．６６（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），７．９０−７．９２（ｍ，２Ｈ，１，２−Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ，トリアジル），９．９７（ｓ，１Ｈ，Ａｒ  Ｎ−Ｈ），１３．２９（ｂｓ，１Ｈ，１１−ＯＨ），１４．０３（ｂｓ，１Ｈ，６−ＯＨ）
【０１１７】
トリアゾールエステル１（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、ｎ＝１２、ｘ＝１）
ｎ＝１２の誘導体は約６０％だけ含まれた。
溶離液（１０％メタノール／ジクロロメタン、その後１５％メタノール／ジクロロメタン）。
収率：４６％
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌｃ＝１５５８．５９６３５
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝１５５８．５９６３０
【０１１８】
実施例９．
アリル  ３，４，５−トリ（アセチルオキシ）−６−（［４−（ヒドロキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート６ｂからの、プロパルギルグルクロニドジ−スペーサー部分である２−プロピニル  ３，４，５−トリヒドロキシ−６−［（４−［（［４−（ヒドロキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）メチル］アニリノカルボニル）オキシ］テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１５ｃの合成。
２ｇ（３．２ｍｍｏｌ）のアリル  ３，４，５−トリ（アセチルオキシ）−６−（［４−（［１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，１−ジメチルシリル］オキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート５ｂを、９０ｍｌのテトラヒドロフラン／水／酢酸＝１／１／１中で加水分解した。４時間後、反応混合物を５０ｍｌのジクロロメタンで抽出した（３回）。ジクロロメタン層を、引き続いて３０ｍｌの水（２回）、その後３０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２回）及び３０ｍｌのブライン（２回）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで真空内で除去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル＝１／１）で精製した。
収率：１．４５ｇｒ（８９％）の６ｂ
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝５３２．１４３０９
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝５３２．１４１４２
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤＣｌ３；δ２．０２（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．０４（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．０５（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），４．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．５３−４．６７（ｍ，４Ｈ，−ＯＣＨ２−Ｃ＝Ｃ，ＡｒＣＨ２），５．１３−５．３７（ｍ，５Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ，アリル），５．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｇｌｕ  １−Ｈ），５．８１−５．９１（ｍ，１Ｈ，アリル），７．０５（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．２６−７．３９（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）
【０１１９】
０．８ｇ（３ｍｍｏｌ）のＨＯＯＣ−Ｐｈ−ＣＨ２−ＯＴＢＤＭＳから実施例２に記載したように調製した４−（［１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，１−ジメチルシリル］オキシメチル）フェニルイソシアネート３に、１ｇ（２ｍｍｏｌ）の６ｂを添加した。１８時間の撹拌後、この混合物を真空内で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル＝２／１）で精製した。
収率：１ｇ（６６％）のアリル  ３，４，５−トリ（アセチルオキシ）−６−（［４−（［１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，１−ジメチルシリル］オキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１４ｂ。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝７９５．２７７２５
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝７９５．２７２８５
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤＣｌ３；δ０．０８（ｓ，６Ｈ，Ｓｉ−Ｍｅ２），０．９３（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ−ｔＢｕｔ），２．０２（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．０４（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．０５（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），４．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．５３−４．６３（ｍ，２Ｈ，−ＯＣＨ２−Ｃ＝Ｃ），４．６８（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），５．１３（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），５．１３−５．３９（ｍ，５Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ，アリル），５．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｇｌｕ  １−Ｈ），５．８２−５．９４（ｍ，１Ｈ，アリル），６．６９（ｂｓ，１Ｈ，ＡｒＮＨ），７．０２（ｂｓ，１Ｈ，ＡｒＮＨ），７．２５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ａｒ），７．３１−７．４０（ｍ，６Ｈ，Ａｒ）
【０１２０】
フレーム乾燥した容器中の２５ｍｌの乾燥プロパルギルアルコールに、２４ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）のナトリウムを添加した。このアルコラート溶液に、０．７５ｇ（０．９７ｍｍｏｌ）の１４ｂを添加し、この混合物を１．５時間撹拌した後、１０ｍｌの水中０．１７ｇ（１．２ｍｍｏｌ）のＫＨＳＯ４で酸性化した。３５℃／０．８ｍｍでの溶媒除去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（２％メタノール／酢酸エチル）で精製した。
収率：２３０ｍｇ（４４％）の１５ｃ。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌｃ＝４０４．０９５７５
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝４０４．０９４４９
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤ３ＯＤ；δ２．９３（ｔ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，−Ｃ≡ＣＨ），３．３９−３．６０（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），４．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２−ＯＨ），４．７６−４．７９（ｍ，２Ｈ，−ＯＣＨ２−Ｃ≡Ｃ），４．８３（ｓ，Ｇｌｕ  ２，３，４−ＯＨ，Ａｒ−ＯＨ），５．１１（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），５．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｇｌｕ−１Ｈ），７．２５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，ＡｒＣＨ２），７．２４−７．４２（ｍ，６Ｈ，Ａｒ）
【０１２１】
実施例１０．
２−プロピニル  ３，４，５−トリヒドロキシ−６−［（４−［（［４−（ヒドロキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）メチル］アニリノカルボニル）オキシ］テトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１５ｃからの、１（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝プロパルギル、ｐ＝２）の合成。
まず、２−プロピニル  ６−［（４−［（［４−（［（４−ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシメチル）アニリノ］カルボニルオキシ）メチル］アニリノカルボニル）オキシ］−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピランカルボキシレート１６ｃを、１０ｃの１１ｃへの変換について記載したのと同様にして、１５ｃから調製した。
溶離液：（メタノール／酢酸エチル＝１／９９）。
収率：５０％の１６ｃ。
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌ＝７１８．１４９６４
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝７１８．１４８２０
Ｈ１ＮＭＲ：ＣＤ３ＯＤ；δ２．９３（ｔ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ，−Ｃ≡ＣＨ），３．４５（ｍ，３Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），４．００（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），４．７５−４．８０（ｍ，２Ｈ，ＣＯＯＣＨ２），４．８５（ｓ，Ｇｌｕ  ２，３，４−ＯＨ），５．１２（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），５．２２（ｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），５．５０（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｇｌｕ  １−Ｈ），７．２７−７．４８（ｍ，１０Ｈ，Ａｒ），８．２６−８．３２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−ＮＯ２）
【０１２２】
１６ｃの１（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝プロパルギル、ｐ＝２）への変換を、１１ｃのＤＯＸ−ｐｒｏｐａｒＧＡ３  １への変換と同様に実施した。
溶離液：（１０％メタノール／ジクロロメタン、その後１５％メタノール／ジクロロメタン）。
収率：７４％の１（Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ＝プロパルギル、ｐ＝２）
（Ｍ＋Ｎａ）ｃａｌｃ＝１１２２．２９６７５
（Ｍ＋Ｎａ）ｆｎｄ＝１１２２．２９０７５
Ｈ１ＮＭＲ：（ＣＤ３）２ＳＯ；δ１．１１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６，２Ｈｚ，５’−ＣＨ３），１．４７（ｂｄｄ，１Ｈ，２’ｅｑ−Ｈ），１．７８−１．９０（ｍ，１Ｈ，２’ａｘ−Ｈ），２．０５−２．２６（ｍ，２Ｈ，８ａｘ−及び８ｅｑ−Ｈ），２．９０−３．０４（ｂＡＢパターン，２Ｈ，１０ｅｑ−及び１０ａｘ−Ｈ），３．１５−３．５０（ｍ，４Ｈ，４’−Ｈ，Ｇｌｕ  ２，３，４−Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ，−Ｃ≡ＣＨ），３．６４−３．７５（ｍ，１Ｈ，３’−Ｈ），３．９６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｇｌｕ  ５−Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ，４−ＯＭｅ），４．１２（ｂｑ，１Ｈ，５’−Ｈ），４．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１４−ＣＨ２），４．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，４’−ＯＨ），４．７６（ｔ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，２Ｈ，−ＯＣＨ２−Ｃ≡Ｃ，４．７８−４．８８（ｍ，３Ｈ，１４−ＯＨ，ＡｒＣＨ２），４．９２（ｂｔ，１Ｈ，７−Ｈ），５．０２（ｂｓ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２），５．１８（ｂｄ，１’−Ｈ），５．３０（ｂｄ，Ｇｌｕ−ＯＨ），５．３９−５．４７（ｍ，４Ｈ，Ｇｌｕ１−Ｈ，９−ＯＨ，２ｘＧｌｕ  ＯＨ），６．８１（ｂｄ，１Ｈ，３’−ＮＨ），７．２１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ），７．３３−７．４４（ｍ，４Ｈ，Ａｒ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ），７．６２−７．６６（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ，１，２−Ｈ），９．９７（ｓ，１Ｈ，Ａｒ  Ｎ−Ｈ），１３．２７（ｂｓ，１Ｈ，１１−ＯＨ），１４．０２（ｂｓ，１Ｈ，６−ＯＨ）
【０１２３】
実施例１１．
ＤＯＸ−ｍＧＡ３及びＤＯＸ−トリアゾールエステル１（ｎ＝、７及び１２、ｘ＝１）の加水分解。
ＤＯＸエステルの加水分解を、逆相ＴＬＣ（ＲＰ１８）で定性的に追跡した。ｐＨ＝７．３３のリン酸塩緩衝液（ＫＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４）中、アセトニトリル／水：４２／５８の溶離液を用いた。
０．２９ｍｇのＤＯＸ−ｍＧＡ３を、ＤＯＸ−ｍＧＡ３を溶解したままにしておくために数滴のＤＭＳＯと共に、１ｍｌの緩衝液中に溶解した。出発化合物が消失するまで２４時間かかった。この水溶液の濃縮後、残留化合物はその質量スペクトルからしてＤＯＸ−ＧＡ３と思われた。
同じ方法で、ＤＯＸ−トリアゾールエステル１（ｎ＝、７及び１２、ｘ＝１）の加水分解を、緩衝液１ｍｌ中、０．３５ｍｇ及び０．４５ｍｇについて追跡した。両方のエステルが、４時間以内に完全に加水分解された。
【０１２４】
実施例１２
ＧＵＳ及びＦＢＳによるプロドラッグの活性化
ウシβ−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）の存在下又は非存在下で、種々の（プロ）−ドラッグＤＯＸ、ＤＯＸ−ａｌＧＡ３、ＤＯＸ−ｍＰＥＧ４−ＧＡ３及びＤＯＸ−ｍＰＥＧ７−ＧＡ３と共に３日間インキュベーションした後の、ＯＶＣＡＲ−３細胞におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗増殖効果。
【０１２５】
【表２】
2009215295.tif 000031
【０１２６】
プロドラッグについて使用した濃度は０．００１μＭから５０μＭの範囲であり、ＧＵＳ酵素は１０単位／μｌの最終濃度になるよう添加した。この隣で、プロドラッグで処理した細胞をＧＵＳなしでインキュベートした。インキュベーションは、加湿５％ＣＯ２インキュベータ中で３日間３７℃で実施した。細胞増殖をクリスタルバイオレットアッセイによって測定する。未処理の細胞を１００％とする。これらの実験で見出されたＩＣ５０値を以下の表に示す。
【０１２７】
【表３】
2009215295.tif 000032
【０１２８】
実験条件は以下の通りであった：
材料
ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、トリプシン及びペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）は、ＰＡＡ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。ウシ肝臓由来のβ−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）は、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。クリスタルバイオレットは、Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｋａから購入した。アセトニトリル及びメタノールはＢｉｏｓｏｌｖｅから購入し、エタノールはＭｅｒｃｋから購入した。
【０１２９】
細胞ベースの抗増殖効果
ヒト卵巣癌（ＯＶＣＡＲ３）細胞株を、１０％の熱非働化ＦＢＳ及び１％のＰ／Ｓを補充したＤＭＥＭ中で維持した。ドキソルビシンプロドラッグＤｏｘ−アリル、Ｄｏｘ−ｍＧＡ３、Ｄｏｘ−ｍＰＥＧ４及びＤｏｘ−ｍＰＥＧ７によるＯＶＣＡＲ細胞株の増殖の阻害を、クリスタルバイオレットアッセイを使用して決定した。このアッセイは９６ウェルプレートで実施した。トリプシン処理により回収した細胞を、１ウェル当たり１００μｌの培地中５．０００細胞で播種した。この９６ウェルプレートを、加湿５％ＣＯ２インキュベータ中３７℃で一晩インキュベートした。種々のプロドラッグを、０．００１μＭ〜５０μＭの濃度で添加した。その後、１０単位／μｌの最終濃度になるようにＧＵＳ酵素を添加した。この混合物を加湿５％ＣＯ２インキュベータ中３７℃で３日間インキュベートした。その後、７０％エタノール中１％のクリスタルバイオレット（５０μｌ）で細胞を染色し、固定した。細胞を水で洗浄し、１００μｌの１％ＳＤＳ中に再度可溶化した。この後、吸光度を５５０ｎｍで読み取った。ブランク吸光値を、細胞を播種していないウェルに対して決定し、シグナルから差し引いた。阻害濃度５０％（ＩＣ５０）は、種々の濃度のプロドラッグで細胞増殖の阻害をプロットし、非線形曲線フィッティングすることから導き出された。
【０１３０】
プロドラッグの活性化
プロドラッグがドキソルビン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｎ）に変換される速度を、ＨＰＬＣ解析によって決定した。プロドラッグ及びＧＵＳ酵素を、プロドラッグについて１０μＭ、酵素について１０単位／μｌの最終濃度でＦＢＳ中に混合した。ＦＢＳ中に存在するエステラーゼによるプロドラッグの加水分解もまた研究した。この場合において、プロドラッグ（１０μＭ）を１００μＬのＦＢＳ中に希釈し、３７℃でインキュベートした。反応を、３００μＬの氷冷メタノールを添加することによって、種々の時点（５時間以下）で停止させた。サンプルを１６．１  ＲＣＦで５分間遠心分離した。サンプルをさらに使用するまで−２０℃で保存した。上清をＨＰＬＣで解析した。
【０１３１】
ＨＰＬＣ
ＨＰＬＣ装置は、オートサンプラー、ポンプ及び蛍光検出器（励起：４５０、発光：５５０）から構成された。１０μｌのサンプルを注入し、逆相カラム（Ｗａｔｅｒｓ  ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８、粒径：５μｍ、４．６ｍｍ×１５０ｍｍカラム）上にロードした。使用した移動相は、６６：３４のリン酸塩緩衝液（ｐＨ７、０．０１Ｍ）：アセトニトリルであった。
β−グルクロニダーゼ
【外国語明細書】
2009215295000001.pdf
2009215295000002.pdf
2009215295000003.pdf