(57)【要約】【課題】基材を浸漬している水溶液のリムルス試験への干渉が少ない医療用材料を提供することにある。【解決手段】基材をカチオン性水溶性ポリマーおよびラジカル生成に伴う不安定化エネルギーが９９．５ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下の化合物を０．０００８ｍｏｌ／Ｌ以上、０．００８ｍｏｌ／Ｌ以下の濃度で含有する水溶液に、基材を浸漬して、放射線照射することで得られる医療用材料。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カチオン性水溶性ポリマー水溶液およびラジカル生成に伴う不安定化エネルギーが９９．５ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下の化合物を０．０００８ｍｏｌ／Ｌ以上、０．００８ｍｏｌ／Ｌ以下の濃度で含有する水溶液に、基材を浸漬して、放射線照射することを特徴とする医療用材料の製造方法。
【請求項２】
前記化合物が、２級の水酸基を含有することを特徴とする請求項１に記載の医療用材料の製造方法。
【請求項３】
前記化合物が、イソプロピルアルコール、２−ブタノール、グリセリンのいずれか１つまたはその組み合わせであることを特徴する請求項１または２に記載の医療用材料の製造方法。
【請求項４】
前記カチオン性水溶性ポリマーが、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基、４級アミノ基、ピロール基、ピラゾール基、イミダゾール基、インドール基、ピリジン基、ピリダジン基、キノリン基、ピペリジン基、ピロリジン基、チアゾール基、プリン基のうちのいずれか１つ以上を含有していることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の医療用材料の製造方法。
【請求項５】
基材がポリスルホン系ポリマーを含有していることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の医療用材料の製造方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の医療用材料の製造方法によって製造される、放射線照射後の水溶液のリムルス試験におけるエンドトキシン添加回収率が４８時間経過時点で５０％以上、２００％以下であることを特徴とする医療用材料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、基材を浸漬している水溶液のリムルス反応への干渉が少ない医療用材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、医療用材料の基材を改質する方法として、ポリマー水溶液に浸漬して放射線照射し、基材にポリマーを化学結合させる方法が、基材とポリマーとの結合力が強く溶出しにくい点や、放射線滅菌と同時に行える点から優れており、広く用いられている。
【０００３】
カチオン性ポリマーは抗菌作用を示すことが広く一般に知られており、医療用材料などに抗菌作用を付与するためには、カチオン性水溶性ポリマーを基材に化学結合させることが有効である。しかしながら、放射線によるカチオン性水溶性ポリマーの変性、溶出物の増加、基材へのダメージといった懸念がある。そこで、放射線照射する際にポリマー水溶液に抗酸化剤を添加し、ポリマーおよび基材に対する放射線の影響を減少させる技術が開示されている（特許文献１）。
【０００４】
医療用材料は発熱やショックを引き起こす成分であるエンドトキシンの混入を防ぐ目的で、充填液などに含まれるエンドトキシン活性を測定する必要がある。エンドトキシン活性の測定法としては、簡便に多量のサンプルを測定できることから、リムルス試験が広く用いられている。
【０００５】
しかしながら、リムルス試験は試験液に含まれる成分によって阻害や活性といった干渉をうけやすい。特に、基材を浸漬している水溶液が放射線照射されると、放射線照射による変性や劣化によってリムルス試験への干渉が変化し、エンドトキシン活性を正確に測定できなくなる場合が多い。
【０００６】
特許文献１で開示されている技術は、このようなリムルス試験への干渉に関しては考慮されていない。
【０００７】
リムルス試験以外のエンドトキシン活性測定法としてウサギの発熱試験があるが、結果を得るまでに長時間を要するうえに、信頼性の高い結果を維持することは難しい。また、動物愛護の面からも好ましくない。
【０００８】
すなわち、放射線照射によってカチオン性水溶性ポリマーを基材に化学結合させた医療用材料において、基材を浸漬している水溶液のエンドトキシン活性を簡便に測定できるようなものはこれまでに存在していなかった。
【特許文献１】特開２００５−２３９７６１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、基材を浸漬している水溶液のリムルス試験への干渉が少ない、抗菌作用を有した医療用材料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は上記課題を達成するため、以下の構成を有する。
１．カチオン性水溶性ポリマー水溶液およびラジカル生成に伴う不安定化エネルギーが９９．５ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下の化合物を０．０００８ｍｏｌ／Ｌ以上、０．００８ｍｏｌ／Ｌ以下の濃度で含有する水溶液に、基材を浸漬して、放射線照射することを特徴とする医療用材料の製造方法。
２．前記化合物が、２級の水酸基を含有することを特徴とする前記１に記載の医療用材料の製造方法。
３．前記化合物が、イソプロピルアルコール、２−ブタノール、グリセリンのいずれか１つまたはその組み合わせであることを特徴する前記１または２に記載の医療用材料の製造方法。
４．前記カチオン性水溶性ポリマーが、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基、４級アミノ基、ピロール基、ピラゾール基、イミダゾール基、インドール基、ピリジン基、ピリダジン基、キノリン基、ピペリジン基、ピロリジン基、チアゾール基、プリン基のうちのいずれか１つ以上を含有していることを特徴とする前記１〜３のいずれかに記載の医療用材料の製造方法。
５．基材がポリスルホン系ポリマーを含有していることを特徴とする前記１〜４のいずれかに記載の医療用材料の製造方法。
６．前記１〜５のいずれかに記載の医療用材料の製造方法によって製造される、放射線照射後の水溶液のリムルス試験におけるエンドトキシン添加回収率が４８時間経過時点で５０％以上、２００％以下であることを特徴とする医療用材料。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、以下に説明するとおり、医療用材料がカチオン性水溶性ポリマーを含有する水溶液に浸漬されて放射線照射されても、浸漬している水溶液に対してリムルス試験によるエンドトキシン活性の測定を行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
１．基材をカチオン性水溶性ポリマーを含有する水溶液に浸漬して放射線照射すると、カチオン性水溶性ポリマーが基材の表面に化学結合する。カチオン性水溶性ポリマーは抗菌作用を有しており、基材の表面に化学結合させることで、基材に抗菌作用を付与することができる。抗菌作用が付与されることで、医療用材料として活用することができる。
【００１３】
２．本発明でいうところの医療用材料としては、人工血管、カテーテル、血液バッグ、コンタクトレンズ、眼内レンズおよび手術用補助器具等に用いられる材料が挙げられ、生体成分分離用モジュールや血液浄化用モジュールなどに内蔵され用いられる分離膜なども含まれる。生体成分分離用の分離膜とは、濾過もしくは透析により生体物質を分離し、一部を回収する膜のことをいう。血液浄化用モジュールとは、血液を体外に循環させる際に、吸着や濾過、拡散によって血中の老廃物や有害物質を取り除く機能を有したモジュールのことをいい、具体的には人工腎臓や外毒素吸着カラムなどがある。
【００１４】
３．医療用材料はエンドトキシンの混入を防ぐ目的で、基材が浸漬している水溶液のエンドトキシン活性の有無を測定する必要がある。しかしながら、上記水溶液に放射線が照射されると、水溶液中の成分がリムルス試験に干渉して、材料のエンドトキシン活性を測定することができない。リムルス試験への干渉としては、エンドトキシンのミセル構造の破壊や、試薬に直接作用してゲル化を抑制または亢進するものがある。リムルス試験に干渉がおこると、経時的にエンドトキシン活性の検出が低下していくことが多い。
【００１５】
４．そこで、本発明において、鋭意検討の結果、基材をカチオン性水溶性ポリマー水溶液に浸漬して放射線照射することで得られる医療用材料において、基材にラジカル生成に伴う不安定化エネルギーが９９．５ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下の化合物（以下、化合物Ａという）を含有し、該化合物の放射線照射前の濃度が０．０００８ｍｏｌ／Ｌ以上、０．００８ｍｏｌ／Ｌ以下の範囲の水溶液を浸漬させることで、基材を浸漬しているカチオン性水溶性ポリマー水溶液のリムルス試験への干渉を抑制できることを見いだした。
【００１６】
５．ここで用いられる化合物Ａは、放射線に対する保護効果によって、カチオン性水溶性ポリマーの変性によるリムルス試験への干渉を抑制する目的で添加される。しかしながら、上記化合物Ａ自体がリムルス試薬に干渉するという相反する作用を有している。そのため、放射線に対する保護効果が高い化合物Ａを低濃度で含有させることがリムルス試験への干渉を抑えるのに有効である。
【００１７】
６．本発明において、化合物Ａのラジカル不安定化エネルギーが低い方がカチオン性水溶性ポリマーの変性によるリムルス試験への干渉が抑制されるため、９９．５ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下が必要であり、ラジカル生成に伴う不安定化エネルギーが低い方が放射線に対する保護効果が高いことから、９９．０ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下がより好ましい。
【００１８】
７．上記化合物Ａの濃度が低いと放射線保護効果が低下してしまい、一方で濃度が高いと、化合物Ａのリムルス試験への干渉が問題となる。そのため、化合物Ａの濃度は０．０００８ｍｏｌ／Ｌ以上、０．００８ｍｏｌ／Ｌ以下の範囲であることが必要であり、０．００１ｍｏｌ／以上がより好ましく、一方で０．００５ｍｏｌ／Ｌ以下がより好ましい。
【００１９】
８．また、上記化合物Ａの放射線保護効果によって、放射線照射の影響を弱め、カチオン性水溶性ポリマーの変性や基材へのダメージを抑制することができる。
【００２０】
本発明でいうところのラジカル生成に伴う不安定化エネルギーとは、（１）式で求められる値である。
【００２１】
ＥＩ＝ＥＨ＋ＥＭ−ＥＮ      （１）
（１）式において、ＥＩはラジカル生成に伴う不安定化エネルギー、ＥＨは水素ラジカルの全エネルギー、ＥＭは分子ラジカルの全エネルギー、ＥＮは中性分子の全エネルギーの量子化学計算値であり、それぞれ化合物特有の値である。ラジカル生成に伴う不安定化エネルギーが小さい程、放射線照射された時に安定なラジカルを生成するため、放射線に対する保護効果が高い。
【００２２】
量子化学計算には，有償または無償で入手可能な種々の量子化学計算プログラムパッケージを利用することができるが，本発明ではガウシアン03（Gaussian03）〔ガウシアン03（B.05改訂版）（Gaussian 03 (Revision B.05)）, エム・ジェー・フリッシュ（M. J. Frisch）他, ガウシアン社（Gaussian, Inc.）, ペンシルベニア州ピッツバーグ（Pittsburgh PA）, 2003.〕を用いて計算を実行した。
【００２３】
計算手法としては，分子構造および全エネルギーの計算精度の観点から，密度汎関数法と非経験的分子軌道法とのハイブリッド法を用いるのが良く，本発明においてはB3LYP法〔エー・ディー・ベッケ（A. D. Becke）, ジャーナル  オブ  ケミカル  フィジックス（J. Chem. Phys.）, 1993, 98, p.5648／シー・リー（C. Lee）, ダブリュー・ヤン（W. Yang）, アール・ジー・パール（R. G. Parr）, フィジカル  レビュー（Phys. Rev.）B, 1988, 37, p.785／ビー・ミーリッヒ（B. Miehlich）, エー・サヴィン（A. Savin）, エッチ・ストール（H. Stoll）, エッチ・プロイス（H. Preuss）, ケミカル  フィジクス  レターズ（Chem. Phys. Lett.）, 1989, 157, p.200.〕を用いた。
【００２４】
また，１電子軌道を展開する基底関数としては，分子構造および全エネルギーについて十分な計算精度を得るため，ポープルらによる二重価電子軌道基底関数〔ダブリュー・ジェー・ヘーレ（W. J. Hehre）, アール・ディッチフィールド（R. Ditchfield）, ジェー・エー・ポープル（J. A. Pople）, ジャーナル  オブ  ケミカル  フィジックス（J. Chem. Phys.） 1972, 56, p.2257.〕と分極関数〔ピー・シー・ハリハラン（P. C. Hariharan）, ジェー・エー・ポープル（J. A. Pople）, テオレティカ  キミカ  アクタ（Theoret. Chimica Acta）1973, 28, p.213.〕との組み合わせである6-31G(d,p)基底関数を用いた。
【００２５】
９．本発明では、特に２級の水酸基を有する化合物が、ラジカル生成に伴う不安定かエネルギーが低く、かつ非イオン性の官能基であり強い表面電荷を有する化合物との相互作用が小さく、かつ酸化還元力も小さいことから、カチオン性水溶性ポリマーの変性も少ないため、好ましく用いられる。２級の水酸基を有する化合物としては、例えば、グリセリンや２−ブタノール、イソプロパノール等が挙げられる。これらの化合物は単独で用いてもよく、２種類以上を混合して用いてもよい。また、医療用材料は安全性を考慮する必要があるため、毒性の低いものが好適である。
【００２６】
１０．本発明で用いられる放射線とは、高エネルギーの粒子線および電磁波のことであり、例えば、α線、β線、γ線、Ｘ線、紫外線、電子線および中性子線などが挙げられる。これらのうちγ線と電子線はエネルギーが特に高く効率よく改質ができるので、より好ましく用いられる。また、γ線、Ｘ 線および電子線は線量をコントロールすることで滅菌も同時に行うことができるので好適である。
【００２７】
基材に対して放射線照射する場合、放射線の線量が少ないと基材中の吸収線量にばらつきが生じるなど、線量のコントロールが困難となるので、放射線の線量は１ｋＧｙ以上の線量であることが好ましく、より好ましくは５ｋＧｙ以上である。また、同時に医療用材料の滅菌も行う場合、放射線の線量は１５ｋＧｙ以上であることが好ましく、より好ましくは２５ｋＧｙ以上である。ただし、過剰な放射線の照射は基材自身を劣化させるので、放射線の線量は５０００ｋＧｙ以下であることが好ましく、より好ましくは１０００ｋＧｙ以下であり、さらに好ましくは１００ｋＧｙ以下である。
【００２８】
１１．本発明で用いられるカチオン性水溶性ポリマーとは、ｐＨ４．５において電荷が１ｍｅｑ／ｇ以上であり、かつ水への溶解度が１０ｇ／Ｌ以上であり、かつ分子量が５万以上の物質のことを指す。なかでも、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基、４級アミノ基、ピロール基、ピラゾール基、イミダゾール基、インドール基、ピリジン基、ピリダジン基、キノリン基、ピペリジン基、ピロリジン基、チアゾール基、プリン基、などの官能基を有している物質が好適に用いられる。入手のしやすさから、ポリエチレンイミン、ポリビニルアミン、ポリアリルアミン、ジエチルアミノエチルデキストラン、ポリリジン、ポリジアリルジメチルアンモニウムクロリド、ビニルイミダゾリウムメトクロライドとビニルピロリドンとの共重合体などが好適に用いられる。また、２種類以上のカチオン性水溶性ポリマーを併用して用いても良い。
【００２９】
基材を浸漬するカチオン性水溶性ポリマーの水溶液中の濃度の範囲としては、カチオン性水溶性ポリマーの種類にもよるが、一般的には、１ｐｐｍ以上が好ましく、１０ｐｐｍ以上がより好ましい。また、５０ｗｔ％以下が好ましく、１０ｗｔ％以下がより好ましい。カチオン性水溶性ポリマーの濃度が高いと、コストに見合った表面への固定化量が得られない。また、余剰物質の残留が問題となり、洗浄を強化する必要が生じる。一方で、カチオン性水溶性ポリマーの濃度が低いと、基材の表面に化学結合するカチオン性水溶性ポリマーが少なく、充分な抗菌作用を得られない。
【００３０】
１２．本発明で用いられる基材としては、高分子化合物材料が好ましく用いられる。高分子化合物材料を構成する高分子化合物の例としては、例えば、ポリメチルメタクリレート、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリフッ化ビニリデン、ポリ酢酸ビニル、ポリカーボネート、セルロース、セルロースアセテート、セルローストリアセテート、ポリアクリロニトリル、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリスチレンおよびポリウレタンなどが挙げられが、これらに限定されるものではない。なかでも、放射線に対する耐性が高いポリスルホン系高分子が好適に用いられる。
【００３１】
１３．リムルス試験によってエンドトキシンの活性を正確に測定するためには、エンドトキシン添加回収率がエンドトキシン添加から４８時間経過時点で５０％以上、好ましくは７０％以上であり、一方で２００％以下、好ましくは１５０％以下であることが必要となる。この範囲外では、エンドトキシン活性を正確に測定できず、測定の誤りによってエンドトキシンが混入してしまう危険性があり好ましくない。
【００３２】
エンドトキシン添加回収率とは、水溶液に既知量のエンドトキシンを添加してリムルス試験を行い、試験結果として得られたエンドトキシン活性と、添加したエンドトキシンの活性との百分率であり、（２）式で求められる。
【００３３】
Ｐ＝（Ｕ１／Ｕ０）×１００        （２）
（２）式において、Ｐ＝エンドトキシン添加回収率（％）、Ｕ１＝試料のエンドトキシン活性（ＥＵ）、Ｕ０＝添加したエンドトキシンの活性（ＥＵ）である。
【実施例】
【００３４】
以下実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの例によって限定されるものではない。
１．リムルス試験によるエンドトキシン添加回収率測定
測定試料にエンドトキシン標準品（ 日本薬局方標準品１００００ＥＵ／バイアル） を、パイロジェンフリーの注射用水（ 日本薬局方注射用水： 大塚製薬、以下同じ）に溶解したものを順次パイロジェンフリーの注射用水で希釈し、０．１２ＥＵ／ｍｌの濃度のエンドトキシン水溶液を調製した。エンドトキシン水溶液と試験液を１：１（ 容量比）でポリスチレン製テストチューブ２０５４（ ファルコン社製）にて混合して、エンドトキシンの活性が０．０６ＥＵ／ｍｌである試料液を調製した。
【００３５】
上記試料液を調製後、速やかにリムルステスト用チューブ（ 透析液用リムルス試薬０．２ｍｌ用：和光純薬）に０．２ｍｌ添加し、卓上ラボミキサーにて５秒間撹拌して試薬を溶解後、速やか（１０秒以内）にトキシノメーター（ ＥＴ―３０１：和光純薬）にセットし、比濁時間分析法にてエンドトキシン活性の測定を行った。試料に添加したエンドトキシンの活性を測るために、エンドトキシン標準品を、パイロジェンフリーの注射用水に溶解したものを、順次パイロジェンフリーの注射用水で希釈し、エンドトキシンの活性が０．０６ＥＵ／ｍｌであるコントロールの試料液を調製した。
【００３６】
上記の試料液およびコントロールの試料液を調製後４８時間室温にて放置し、同様にトキシノメーターでエンドトキシン活性を測定した。
【００３７】
上記（２）式より、エンドトキシン添加直後のエンドトキシン添加回収率と、エンドトキシン添加から４８時間経過時点でのエンドトキシン添加回収率を求めた。（２）式において、Ｕ１が測定試料のエンドトキシン活性、Ｕ０がコントロールのエンドトキシン活性、である。
（実施例１）
ポリエチレンイミン（シグマ社ＭＷ７５万）１０００ｐｐｍ水溶液を、中空糸型人工腎臓である東レ株式会社製「トレスルホンＢＳ−１．６Ｌ」（登録商標）のモジュールの血液導出口から導入し、中空糸膜に濾過をかけつつ透析液導出口から排出させて、ポリエチレンイミンの全量を中空糸膜に導入固定した。このとき、血液導入口および透析液の導入口には栓をした。また、水溶液の流速は５００ｍＬ／分で、通液量は１Ｌとした。つづいて、イソプロパノール０．００１６ｍｏｌ／Ｌ水溶液を血液導出口から導入し、中空糸膜に濾過をかけつつ透析液導出口から排出させた。このとき、血液導入口および透析液の導入口には栓をした。流速は５００ｍＬ／分で、通液量は２Ｌとした。つづいて、イソプロパノール０．００１６ｍｏｌ／Ｌ水溶液を血液導出口から導入し、血液導出口から排出させた。このとき、透析液導入口および透析液導出口には栓をした。流速は５００ｍＬ／分で、通液量は０．５Ｌとした。充填は室温で行い、ポリエチレンイミン水溶液、イソプロパノール水溶液は２０±５℃の液温とした。この後、モジュールにγ線を照射した。γ線照射量は２７ｋＧｙであった。血液側充填液を抜き出し、エンドトキシン添加回収率試験を行った。その結果、エンドトキシン添加直後で１０７．８％、４８時間経過時点で７０．１％であり、リムルス試験への干渉が少なかった。
【００３８】
イソプロパノールのラジカル不安定化エネルギーは、量子化学計算を用いて、以下の手順に従って求めた。なお，全ての量子化学計算は，Itanium2（登録商標）プロセッサを搭載したLinuxサーバ上で実行した。
【００３９】
（１）水素ラジカルの全エネルギー
ガウシアン03（Gaussian03）プログラムを用いて水素原子の全エネルギーを計算した。電荷はゼロ，スピン多重度は２に設定し，計算キーワードは B3LYP/6-31G** を用いた。得られた全エネルギーは -0.500272784191 Hartree（1 Hartree ＝ 627.5095 kcal/mol）であった。
【００４０】
（２）分子ラジカルの全エネルギー
イソプロパノールの２級水素原子を引き抜いた分子モデルを作成し，ガウシアン03を用いてイソプロパノール２級ラジカルの構造最適化および全エネルギー計算を実施した。電荷はゼロ，スピン多重度は２に設定し，計算キーワードは B3LYP/6-31G** FOpt を用いた。最適化された構造に対して得られた全エネルギーは -193.712006644 Hartree であった。
【００４１】
（３）中性分子の全エネルギー
イソプロパノールの分子モデルを作成し，ガウシアン03を用いて構造最適化および全エネルギー計算を実施した。電荷はゼロ，スピン多重度は１に設定し，計算キーワードは B3LYP/6-31G** FOpt を用いた。最適化された構造に対して得られた全エネルギーは -194.368606865 Hartree であった。
【００４２】
（４）ラジカル不安定化エネルギー
上記の全エネルギーから（１）式に従ってラジカル不安定化エネルギーを計算すると，0.156327437 Hartree ＝ 98.10 kcal/mol であった。
（比較例１）
イソプロパノール０．００１６ｍｏｌ／Ｌ水溶液に代えてエタノール０．００１６ｍｏｌ／Ｌ水溶液を中空糸膜に導入した以外は実施例１と同一の条件にて実験を行った。エンドトキシン添加回収率試験の結果、エンドトキシン添加直後で１３６．８％、４８時間経過時点で１６．０％であり、時間経過でリムルス試験によるエンドトキシン活性を正確に測定できなくなった。
【００４３】
エタノールのラジカル不安定化エネルギーは、以下の手順に従って計算した。
【００４４】
（１）水素ラジカルの全エネルギー
実施例１と全く同様の方法により、-0.500272784191 Hartree を得た。
【００４５】
（２）分子ラジカルの全エネルギー
エタノールのヒドロキシ基に隣接する水素原子１個を引き抜いた分子モデルを作成した他は，実施例１と同様の方法でエタノールラジカルの構造最適化および全エネルギー計算を実施した。最適化された構造に対して得られた全エネルギーは -154.386809202 Hartree であった。
【００４６】
（３）中性分子の全エネルギー
エタノールの分子モデルを作成し，実施例１と同様の方法で構造最適化および全エネルギー計算を実施した。最適化された構造に対して得られた全エネルギーは -155.046209287 Hartree であった。
【００４７】
（４）ラジカル不安定化エネルギー
上記の全エネルギーから（１）式に従ってラジカル不安定化エネルギーを計算すると，0.159127301 Hartree ＝ 99.85 kcal/mol であった。
（比較例２）
イソプロパノール水溶液濃度を０．０１６ｍｏｌ／Ｌとした以外は実施例１と同一の条件にて実験を行った。エンドトキシン添加回収率試験の結果、エンドトキシン添加直後で９６．３％、４８時間経過時点で３３．１％であり、時間経過でリムルス試験によるエンドトキシン活性を正確に測定できなくなった。イソプロパノールのラジカル不安定化エネルギーを実施例１と同様の方法で計算すると、９８．１０ｋｃａｌ／ｍｏｌであった。
【００４８】
【表１】
2009077877.tif 000002