(57)【要約】【課題】  本発明の課題は、ミネラル成分を強化した乳酸菌の新規用途を開発し、育毛効果、保湿性、美白効果、抗シワ効果等に優れた皮膚外用剤を提供することである。【解決手段】  Ｍｇ，Ｆｅ，Ｍｎ，Ｚｎ，Ｃｕ，Ｓｅ，Ｃｒ，Ｍｏ，ＩおよびＣａからなる群から選択された少なくとも1種のミネラル成分を強化した乳酸菌の抽出物を含有してなる皮膚外用剤は、育毛効果、保湿性、美白効果、抗シワ効果等に優れる。乳酸菌としては、Lactobacillus bulgaricus、Bifidobacterium bifidum、Streptococcus lactis等が挙げられる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミネラル成分を強化した乳酸菌の抽出物を含有してなる皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚外用剤に関し、更に詳しくは、育毛効果、保湿性、美白効果、抗シワ効果等に優れた皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１には、セレン化合物，亜鉛化合物，ゲルマニウム化合物，マグネシウム化合物，コバルト化合物，マンガン化合物の中から選ばれる１種もしくは２種以上の金属化合物を添加した培地で培養したサッカロミセス属(Saccharomyces)酵母、又はその酵母をさらに自己消化させた消化物、あるいは蛋白分解酵素で分解処理した酵素分解物、あるいは酸で分解処理した酸分解物の内の何れかの酵母又は酵母分解物の水性溶媒抽出物を含有することを特徴とする化粧料組成物が開示されている。
しかし、下記で説明する本発明のミネラル成分を強化した乳酸菌に関する記載はない。また、化粧料としての効果についても未だ改善の余地があった。
なお、特許文献２には、ミネラル成分を高濃度で含む乳酸菌を含んでなることを特徴とする水性媒体に分散・溶解して用いる組成物とこれを用いた医薬品が開示されている。しかしながら、当該乳酸菌を皮膚外用剤として用いる旨の具体的な記載は見られない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平９−１２４４３８号公報
【特許文献２】特開２００６−２３０４０４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、ミネラル成分を強化した乳酸菌の新規用途を開発し、育毛効果、保湿性、美白効果、抗シワ効果等に優れた皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、ミネラル成分を強化した乳酸菌の抽出物を含有してなる皮膚外用剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、ミネラル成分を強化した乳酸菌の新規用途を開発し、育毛効果、保湿性、美白効果、抗シワ効果等に優れた皮膚外用剤を提供することができる。本発明の皮膚外用剤は、育毛剤、保湿剤、美白剤、抗シワ剤等に有用である。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
ミネラル成分を強化した乳酸菌は公知であり、例えば上記特許文献２に記載されている。また、乳酸菌のミネラル成分の強化方法についても公知であり、例えば特表平６−５０８５１６号公報、特開昭６２−９１１７７号公報、特開昭６２−１３４０８３号公報等を参考にすれば、当業者であればその実施は容易である。具体的には、含有させたいミネラル成分を含む培地で乳酸菌を培養すればよい。なお、ミネラル成分を強化した乳酸菌は米国Ｇｒｏｗ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｉｎｃ社から市販されてもいる。
【０００８】
本発明でいう「ミネラル成分を強化した」とは、ミネラル成分、例えばＭｇ，Ｆｅ，Ｍｎ，Ｚｎ，Ｃｕ，Ｓｅ，Ｃｒ，Ｍｏ，ＩおよびＣａからなる群から選択された少なくとも1種の元素が、乳酸菌本来の有する含有量に比べて、増加している状態を意味する。
例えば、乳酸菌が、Ｍｇを7質量％以上、Ｆｅを4.5質量％以上、Ｍｎを5質量％以上、Ｚｎを4.5質量％以上、Ｃｕを0.9質量％以上、Ｓｅを0.05質量％以上、Ｃｒを0.1質量％以上、Ｍｏを0.1質量％以上、Ｉを１質量％以上、Ｃａを１０質量％以上含む状態である。また乳酸菌は上記各元素は複数種類同時に含有していてもよい。また、乳酸菌の菌体内における上記各ミネラル成分の上限は、乳酸菌の生育に影響を及ぼさない範囲とすればよいが、概ね、前記元素が上記の３倍量以下、とくに２．５倍量以下である。
【０００９】
本発明で使用する乳酸菌はとくに制限されないが、例えば、Lactobacillus属のLactobacillus bulgaricus 、Lactobacillus casei 、Lactobacillus delbreckii 、Lactobacillus acidophilus等、Bifidobacterium属のBifidobacterium bifidum、Bifidobacterium breve、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium longum、B ifidobacterium adolescentis、Streptococcus属のStreptococcus lactis、Streptococcus thermophilus等が挙げられる。
【００１０】
ミネラル成分を強化した乳酸菌の抽出物は、例えば当該乳酸菌に水、炭素数１〜６程度の低級エタノール、これらの水溶液等の極性溶媒や、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン等の飽和炭化水素、ヘキセン、ヘプテン等の不飽和炭化水素等の非極性溶媒を、菌体に対して10〜100倍量程度添加し、攪拌等の抽出操作を施した後、遠心分離等の操作を行った後に濾過し、その後、溶媒を除去する等して得ることができる。なお、抽出操作時は、超音波処理を施し、菌体を損傷させるのも好ましい形態である。
【００１１】
本発明におけるミネラル成分を強化した乳酸菌の抽出物の皮膚外用剤への配合量は、例えば０．０００１〜１０質量％、好ましくは０．００１〜５質量％である。
【００１２】
本発明の皮膚外用剤には、必要に応じて、皮膚外用剤として通常使用される公知の材料、例えば色素、香料、防腐剤、界面活性剤、顔料、抗酸化剤、保湿剤、紫外線吸収剤などを適宜配合することができる。
本発明の皮膚外用剤は、クリーム、乳液、化粧水、パック等、公知の形態で使用され得る。
【実施例】
【００１３】
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、本発明は下記例に限定されるものではない。
【００１４】
実施例１
上述の公知の方法に従い、次に示す各種のミネラル成分を強化した乳酸菌を調製した。
【００１５】
１．  Mg含有量が乳酸菌１００ｇあたり約１０ｇであるMg強化乳酸菌。
２．  Fe含有量が乳酸菌１００ｇあたり約１０ｇであるFe強化乳酸菌。
３．  Mn含有量が乳酸菌１００ｇあたり約１０ｇであるMn強化乳酸菌。
４．  Zn含有量が乳酸菌１００ｇあたり約１０ｇであるZn強化乳酸菌。
５．  Cu含有量が乳酸菌１００ｇあたり約２ｇであるCu強化乳酸菌。
６．  Se含有量が乳酸菌１００ｇあたり約０．５ｇであるSe強化乳酸菌。
７．  Cr含有量が乳酸菌１００ｇあたり約０．５ｇであるCr強化乳酸菌。
８．  Mo含有量が乳酸菌１００ｇあたり約０．５ｇであるMo強化乳酸菌。
９．  I含有量が乳酸菌１００ｇあたり約２ｇであるI強化乳酸菌。
１０．  Ca含有量が乳酸菌１００ｇあたり約１５ｇであるCa強化乳酸菌。
【００１６】
なお、前記各種乳酸菌１〜１０における乳酸菌とは、Lactobacillus bulgaricus、Bifidobacterium bifidum、Streptococcus lactisの３種である。なお、以下の記載において、３種の乳酸菌それぞれに番号を付した。例えば１のMg強化乳酸菌において、Lactobacillus bulgaricusを使用したものを１−１、Bifidobacterium bifidumを使用したものを１−２、Streptococcus lactisを使用したものを１−３とする。同様に、例えばFe強化乳酸菌において、Lactobacillus bulgaricusを使用したものを２−１、Bifidobacterium bifidumを使用したものを２−２、Streptococcus lactisを使用したものを２−３とする。番号３〜１０の他の強化乳酸菌も同様とする。
なお、比較例としてミネラル成分を強化していないLactobacillus bulgaricus、Bifidobacterium bifidum、Streptococcus lactisについても下記の試験を行なった。この場合、例えば１のMg強化乳酸菌において、Lactobacillus bulgaricusを使用したものを１−１比、Bifidobacterium bifidumを使用したものを１−２比、Streptococcus lactisを使用したものを１−３比のように記す。
【００１７】
続いて、上記各種強化乳酸菌の乾燥粉末菌体５ｇに８０％エタノール水溶液を２５０ｍｌ加え、出力約３５Ｗ相当、周波数２０ｋＨｚ、３０分の条件で超音波処理を行い、攪拌して抽出操作を施した後、遠心分離を行い、上澄み液を採取し、上澄み液の容量が約２０ｍｌになるまでエタノールを除去して濃縮することにより、抽出物を得た。
【００１８】
特許第４０４１４５１号公報に記載の実験手順に従い、ミネラル成分を強化した乳酸菌の抽出物の効果を検証した。
（１）マウスによる試験
Ｃ３Ｈマウス（８週齢、オス、平均体重３５ｇ）の背部皮膚（２ｃｍ×４ｃｍ）を電気バリカン及びシェーバーで刈り、翌日より上記の各種抽出物のいずれかを被験部皮膚に朝夕２回、一匹当り０．２ｍＬを二週間連用塗布した。一試料に対して動物一群１０匹使用した。塗布開始２２日目に各試料の被験部皮膚をビデオカメラに撮影し、画像解析装置にて毛刈り部及び発毛部の面積を測定した。養毛効果の判定は、下記に示す発毛率（％）を算出し、実施例または比較例の各群の発毛率平均値を求めて比較を行った。
発毛率（％）＝（発毛部の面積）／（毛刈り部の面積）×１００
【００１９】
（２）ヒトによる試験
男性型脱毛症患者である被験者１０名の耳上５ｃｍの位置にて、頭髪を左右２ヶ所直径５ｍｍの円形状に剃毛し、実施例及び比較例の各試料を左側の頭髪全体に毎日朝夕２回、約３ｍＬ塗布し、右側は何も塗布せずに、左右の比較を行った。毛成長速度の効果の判定は、試験開始後１ヶ月目に、左右の剃毛した部位の被験部毛髪２０本を抜毛し、下記式で求めた値で毛成長速度を評価した。
毛成長速度＝（左側毛髪２０本の長さの平均）÷（右側毛髪２０本の長さの平均）
【００２０】
また、育毛効果、脱毛効果、ふけ防止効果の判定は、試験開始後３ヶ月目に各項に対し、右側の何も塗布していない被試部位と比較して、「産毛が剛毛化した或いは産毛が増加した」、「抜け毛が少なくなった」、「ふけが少なくなった」と回答した人数で示した。
結果を表１−４に示す。
【００２１】
【表１】
2009215325.tif 000002
【００２２】
【表２】
2009215325.tif 000003
【００２３】
【表３】
2009215325.tif 000004
【００２４】
【表４】
2009215325.tif 000005
【００２５】
実施例２
下記配合のクリームを調製した。
水  ７０．５質量％
水酸化カリウム  ０．５質量％
ステアリン酸  １０質量％
ステアリン酸ブチル  ８質量％
モノステアリン酸グリセリン  ３質量％
上記抽出物１−１〜１０−３、１−１比〜１０−３比のいずれか  ８質量％
【００２６】
上記クリームは、水にヒアルロン酸、水酸化カリウムおよび酵母エキスを加え、７０℃で攪拌・混合し、第１混合液を得、これとは別に、ステアリン酸、ステアリン酸ブチル、およびモノステアリン酸グリセリンを７０℃で加熱融解させ、第２混合液を得、最後に第１混合液および第２混合液を混合して得たものである。
【００２７】
得られた化粧クリームの保湿性の評価を官能試験により行った。得られた化粧クリームを、被験者１０名（女性）に通常するように使用してもらい、しっとり感を５段階で採点し、平均点を算出して、評価した。
５点：かなり優れている。
４点：優れている。
３点：普通。
２点：劣っている。
１点：かなり劣っている。
【００２８】
その結果、評価点は抽出物１−１〜１０−３の化粧クリームにおいて、４．５〜４．８であった。この値は、抽出物１−１比〜１０−３比を使用して上記実験を繰り返した値（３．２〜３．４）と比べ、顕著に優れる値となった。
【００２９】
次に、上記の化粧クリームを前腕部の１２ｃｍ２ の範囲に２４マイクロリットル塗布し、塗布前、塗布後６０分の角質水分量を測定した。角質水分量は、ＳＫＩＣＯＮ−２００（アイ・ビイ・エス株式会社製）を用いた。塗布前の角質水分量を１としたときの相対値として評価したところ、抽出物１−１〜１０−３の化粧クリームの塗布後６０分の角質水分量相対値は１．３〜１．４であった。この値は、抽出物１−１比〜１０−３比を使用して上記実験を繰り返した値（１．０３〜１．０８）と比べ、顕著に優れる値となった。
【００３０】
実施例３
メラニンを生成する細胞として、マウス由来の培養B16メラノーマ細胞を用いてウシ胎児血清を終濃度10%になるように添加したイーグルＭＥＭ培地で培養し、該細胞を103cell/mlの濃度で6ウェルプレートの各ウェルに6ml播種し、5日間ＣＯ２インキュベーター内で培養後、上記抽出物１−１〜１０−３、１−１比〜１０−３比のいずれかを添加した培地に交換し、さらに3日間同条件で培養する。細胞を洗浄後、細胞をスクレーパー処理により剥がし、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）により可溶化して475nm、260nmの吸光度を測定し、S475、S260とする。メラニン抑制率は被検試料を添加しない培地で培養した細胞の475nm、260nmにおける吸光度をC475、C260として式１により計算した。ポジティブコントロールとしてコウジ酸（Kojic acid）を用いた。
【００３１】
【数１】
2009215325.tif 000006
【００３２】
その結果、ポジティブコントロール（培地中にコウジ酸３ｍＭ添加）のメラニン抑制率は約５６％であり、上記抽出物１−１〜１０−３のいずれかを添加した被験試料（培地中に上記抽出物１−１〜１０−３のいずれかを５００μｌ／ｍｌ添加）のメラニン抑制率は約５４〜５８％であった。
この値は、抽出物１−１比〜１０−３比を使用して上記実験を繰り返した値（約３０〜４０％）と比べ、顕著に優れる値となった。
【００３３】
実施例４
５匹ずつ２群のヘアレスマウスの背部に、ＵＶＢ（長波長紫外線）を１０週間照射してシワ形成モデルを作製した。その後、このシワ形成モデルの１群には上記実施例１で調製した抽出物を（上記抽出物１−１〜１０−３のいずれか）、もう１群にはオリーブ油のみを（比較例）、シワが形成された背部に１日１回、週に５日の割合で４週間塗布し続けた。４週間の塗布期間終了後、各モデルの背部からレプリカを採取し、得られたレプリカのそれぞれについて、次の基準に従ってシワスコアを付した。
（シワスコア基準）
０：方向性のある構造は認められない。
１：繊維状の細い構造が方向性をもって認められる。
２：方向性をもった繊維状の細い構造とともに太い棒状の構造が認められる。
３：方向性をもった太い棒状の構造が認められる。
【００３４】
上記シワスコアを用いた評価は、レプリカ上の方向性をもった線状の構造をシワとして定義して評価したものである。したがって、上記シワスコア基準に従えば、スコアが高いほどシワ形成が進んだ皮膚状態と評価される。上記で得られたシワスコアについて各群の平均値を算出したところ、上記抽出物１−１〜１０−３のいずれも０であり、比較例は１．０であった。なお、抽出物１−１比〜１０−３比を用いて上記実験を繰り返したところ、抽出物１−１比〜１０−３比はいずれも、シワスコアは１．０であった。
【００３５】
下記組成のクリームを常法により調製した。
上記抽出物１−１〜１０−３のいずれか １０質量部
グリセロールソルビタン脂肪酸エステル ６０質量部
微結晶性ワックス １０質量部
オリーブオイル ３０質量部
流動パラフィン １８０質量部
ステアリン酸マグネシウム １０質量部
プロピレングリコール ３７質量部
硫酸マグネシウム ７質量部
精製水 ６５５質量部
【００３６】
なお、上記実施例では、乳酸菌としてLactobacillus bulgaricus、Bifidobacterium bifidum、Streptococcus lactisの３種を用いた実験を記載したが、これら以外の各種乳酸菌を使用した場合でも同様の効果が確認された。また、上記では強化乳酸菌の乾燥粉末菌体５ｇの抽出操作の際に８０％エタノール水溶液を使用したが、水、２０〜６０％エタノール水溶液、ヘキサンを用いた場合でも同様の効果が確認された。