(57)【要約】【課題】消化液内において生体組織が塊になるのを防止して、生体組織に消化酵素を効率的に作用させ、短時間で生体組織を分解して、高収率に細胞を得る。【解決手段】生体組織３に消化酵素を作用させて分解する生体組織分解方法であって、タンパク質４を吸着するタンパク質吸着材１ａを容器１内に配置し、該容器１内に、消化酵素を溶媒に混合した消化液２を貯留し、該消化液２内に生体組織３を浸漬させる生体組織分解方法を提供する。【選択図】      図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体組織に消化酵素を作用させて分解する生体組織分解方法であって、
タンパク質を吸着するタンパク質吸着材を容器内に配置し、
該容器内に、消化酵素を溶媒に混合した消化液を貯留し、
該消化液内に生体組織を浸漬させる生体組織分解方法。
【請求項２】
前記タンパク質吸着材が、前記容器の内面にコーティングされている請求項１に記載の生体組織分解方法。
【請求項３】
前記容器が、タンパク質吸着材により構成されている請求項１に記載の生体組織分解方法。
【請求項４】
前記生体組織が浸漬された状態の消化液を攪拌する請求項１から請求項３のいずれかに記載の生体組織分解方法。
【請求項５】
前記容器が、略円筒状に形成され、
前記消化液の攪拌が、容器を、その中心軸線が略水平となるように配置して、該中心軸線回りに回転させる請求項４に記載の生体組織分解方法。
【請求項６】
前記溶媒が、リンゲル液またはリン酸緩衝溶液からなる請求項１から請求項５のいずれかに記載の生体組織分解方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体組織分解方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、消化酵素を含む消化液内に生体組織を浸漬して攪拌することにより生体組織を分解する生体組織分解方法が知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２００５／０１２４８０号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、消化液内に浸漬された生体組織は、消化液内において塊になってしまうことが知られている。このため、塊になった生体組織の内側には消化液内の消化酵素が作用しにくく、分解が遅れて長期化する不都合がある。
【０００５】
本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、消化液内において生体組織が塊になるのを防止して、生体組織に消化酵素を効率的に作用させ、短時間で生体組織を分解して、高収率に細胞を得ることができる生体組織分解方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、生体組織に消化酵素を作用させて分解する生体組織分解方法であって、タンパク質を吸着するタンパク質吸着材を容器内に配置し、該容器内に、消化酵素を溶媒に混合した消化液を貯留し、該消化液内に生体組織を浸漬させる生体組織分解方法を提供する。
【０００７】
本発明によれば、容器内に貯留された消化液内に生体組織を浸漬することにより、生体組織に消化酵素を作用させ、生体組織を分解して細胞を消化液中に分散させる。この場合に、容器内に配置されたタンパク質吸着材に生体組織が吸着されるので、消化液内において生体組織が塊となることが防止される。すなわち、未分解の生体組織が塊の内部に閉じ込められるのを防止して、消化液に接する未分解の生体組織の表面積を大きくすることで、消化酵素が未分解の生体組織に接触する時間を増加させ、効率的に生体組織を分解し、短時間で高収率に細胞を得ることができる。
【０００８】
上記発明においては、前記タンパク質吸着材が、前記容器の内面にコーティングされていることとしてもよい。また、前記容器が、タンパク質吸着材により構成されていることとしてもよい。
このようにすることで、生体組織が容器の内面に吸着され、未分解の生体組織が効率的に消化酵素に作用させられるようにすることができる。
【０００９】
また、上記発明においては、前記生体組織が浸漬された状態の消化液を攪拌することとしてもよい。
このようにすることで、生体組織のタンパク質吸着材への吸着が促進される。
【００１０】
また、上記発明においては、前記容器が、略円筒状に形成され、前記消化液の攪拌が、容器を、その中心軸線が略水平となるように配置して、該中心軸線回りに回転させることとしてもよい。
このようにすることで、容器が中心軸線回りに回転させられる間に、容器内の消化液が攪拌される。そして、回転の間に、消化液が接触する容器内のタンパク質吸着材に生体組織が順次吸着されていく。これにより、未分解の生体組織が効率的に消化酵素に作用させられるようにすることができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記溶媒が、リンゲル液またはリン酸緩衝溶液からなることとしてもよい。
このようにすることで、生体組織をｐＨが中性付近に調整されたリンゲル液またはリン酸緩衝溶液と消化酵素との混合液により分解するので、分解後に得られた細胞の生存率の低下を防止することができる。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、消化液内において生体組織が塊になるのを防止して、生体組織に消化酵素を効率的に作用させ、短時間で生体組織を分解して、高収率に細胞を得ることができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明の一実施形態に係る生体組織分解方法について、図１および図２を参照して説明する。
本実施形態に係る生体組織分解方法は、例えば、脂肪組織の分解方法であって、図１（ａ）に示されるように、タンパク質を吸着するタンパク質吸着材を容器１内に配置し、該容器１内に、消化酵素を溶媒に混合した消化液２を貯留し、該消化液２内に生体組織３を浸漬させ、図１（ｂ）に示されるように、消化液２を攪拌するものである。溶媒は、例えば、リンゲル液または燐酸緩衝溶液である。
【００１４】
タンパク質吸着材は、例えば、容器１自体をポリプロピレンにより構成することにより容器１の内面１ａ全体に配置されるようになっている。これに代えて、容器１の内面１ａにポリプロピレンをコーティングすることにしてもよいし、容器１内面１ａから離れた容器１内にポリプロピレン製の棒材等を配置することにしてもよい。
【００１５】
生体組織３に消化液２内の消化酵素を作用させることにより、細胞同士を連結しているコラーゲン等のタンパク質が分解され、細胞が単離された状態になって消化液２内に流出してくるようになる。生体組織３の表層における分解が進行し、単離された細胞が流出しても、塊の生体組織３内部には消化液が行き届かず、さらに、残ったコラーゲン等のタンパク質は生体組織３の表面に留まりがちである。このため、内側に存在している生体組織３が閉じ込められて、消化液２に接触し難い状態になる。
【００１６】
本実施形態に係る生体組織分解方法によれば、容器１内にタンパク質吸着材（内面１ａ）を配置しているので、塊となっている未分解の生体組織３や、生体組織３の表面に残るタンパク質がタンパク質吸着材１ａに接触することにより、図１（ｃ）に示されるように、該タンパク質吸着材１ａに吸着され、未分解の生体組織３が消化液２に対して露出させられるようになる。すなわち、未分解の生体組織３が消化酵素に接触する接触面積および機会を増加させられ、効率的に分解させられるようになる。
【００１７】
その結果、例えば、タンパク質４を吸着しないポリスチレンのような材料からなる容器内において分解する方法と比較すると、図２に示されるように、分解開始後の細胞の収率を増大させることができ、より短時間で、高収率に細胞を取得することができるという利点がある。
【００１８】
また、本実施形態によれば、溶媒としてｐＨが中性付近に調整されたリンゲル液またはリン酸緩衝液を用いた。これにより、生体組織３中に存在する細胞が分解に際してｐＨによる損傷を受けること無く回収することができる。
なお、生体組織３の分解に使用されるマトリックスメタロプロテアーゼはその活性の維持および向上に金属イオンを必要としており、使用される溶媒に必要な金属イオンを含む塩を加えることで活性を向上し、生体組織３から分離される細胞の収率を向上することができる。
【００１９】
また、本実施形態に係る容器１としては、図３に示されるように、略円筒状に形成され、その中心軸線を略水平に配置して中心軸線回りに回転させられるローラボトル方式の容器を採用してもよい。図中、符号５は、容器１を回転させるローラである。
そして、容器１内において液面を形成するように消化液２を貯留し、該消化液２内に生体組織３を浸漬させて、容器１を回転させることにすればよい。
【００２０】
このようにすることで、容器１が回転されるに連れて、容器１内の消化液２および該消化液２内に浸漬されている生体組織３が接触する容器１の内面が切り替わっていく。したがって、消化液２内に浮遊する分解されたタンパク質４や、生体組織３の表面を覆うタンパク質４や未分解の生体組織３が、容器１の内面に接触することにより吸着され、未分解の生体組織３の表面が多く露出させられる。すなわち、未分解の生体組織３が消化酵素に晒され易くなり、生体組織３の分解が促進されて、早期に多くの細胞を得ることができる。
【００２１】
また、本実施形態においては、容器１内に貯留された消化液２内に生体組織３を浸漬する場合について説明したが、図４に示されるように、タンパク質吸着材１ａがコーティングされた容器１内に、生体組織３を包む袋状のフィルタ６あるいは、フィルタ６で覆われた第２の容器を浸漬させることとしてもよい。この場合には、生体組織３が分解されることで消化液２内に浮遊するタンパク質４が容器１のタンパク質吸着材１ａにより吸着されるので、未分解の生体組織３がタンパク質４で覆われて分解され難くなることを防止し、効率的に分解することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の一実施形態に係る生体組織分解方法を示す概要図である。
【図２】図１の生体組織分解方法により得られる細胞の収率の時間変化を示すグラフである。
【図３】ローラボトル方式を採用した本発明に係る生体組織分解方法の変形例を示す図である。
【図４】フィルタ内に生体組織を配置する場合の本発明に係る生体組織分解方法の他の変形例を示す図である。
【符号の説明】
【００２３】
１  容器
１ａ  内面（タンパク質吸着材）
２  消化液
３  生体組織
４  タンパク質
Ｃ  中心軸線
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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