(57)【要約】【課題】  コレステロール上昇抑制効果を有しており、なおかつ安全性の高いコレステロール上昇抑制剤を提供すること。【解決手段】  本発明は、カンレンソウを、有機溶媒または濃度６０容量％以上の有機溶媒の水溶液で抽出して得られるカンレンソウ抽出物を有効成分とするコレステロール上昇抑制剤、ＶＬＤＬ分泌抑制剤、およびそれらを含有する組成物を提供する。本発明の組成物は、安全であり、高脂血症とりわけ高コレステロール血症の予防及び／又は改善・処置に有効である。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カンレンソウを、有機溶媒または濃度６０容量％以上の有機溶媒の水溶液で抽出して得られる、カンレンソウ抽出物を有効成分とするコレステロール上昇抑制剤。
【請求項２】
カンレンソウ抽出物が、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出して得られるカンレンソウ抽出物である請求項１記載のコレステロール上昇抑制剤。
【請求項３】
カンレンソウを、有機溶媒または濃度６０容量％以上の有機溶媒の水溶液で抽出して得られる、カンレンソウ抽出物を有効成分とするＶＬＤＬ分泌抑制剤。
【請求項４】
カンレンソウ抽出物が、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出して得られるカンレンソウ抽出物である請求項３記載のＶＬＤＬ分泌抑制剤。
【請求項５】
カンレンソウを、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出して得られるカンレンソウ抽出物。
【請求項６】
請求項１もしくは２記載のコレステロール上昇抑制剤、請求項３もしくは４記載のＶＬＤＬ分泌抑制剤、または請求項５記載のカンレンソウ抽出物を含有する組成物。
【請求項７】
医薬用または動物薬用である請求項６記載の組成物。
【請求項８】
飲食用である請求項６記載の組成物。
【請求項９】
医薬部外品用である請求項６記載の組成物。
【請求項１０】
カンレンソウを、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出することを特徴とする、コレステロール上昇抑制剤の製造方法。
【請求項１１】
カンレンソウを、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出することを特徴とする、ＶＬＤＬ分泌抑制剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カンレンソウ抽出物を有効成分とするコレステロール上昇抑制剤またはＶＬＤＬ分泌抑制剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、総カロリー摂取量および脂肪摂取量の急激な増加や、医療技術の進歩による長寿化により、高脂血症などの循環器障害が増加している。また、これらの現象は、脂肪摂取量の増加が特に著しい若年層においても、顕著である。上記循環器障害の増加とこの若年化が、社会問題の一つとなっている。
【０００３】
高脂血症は、動物性食品の過剰な摂取と運動不足やストレスなどが要因となっている疾患であるといわれている。高脂血症が進行により中性脂肪やコレステロールが血管壁に沈着して動脈硬化、高血圧、心筋梗塞、脳血管障害などの疾病につながることが知られている。
【０００４】
一般に、血中の中性脂肪値が１５０ｍｇ／ｄＬ以上、または、総コレステロール値が２２０ｍｇ／ｄＬ以上になった状態を高脂血症と呼ぶ。また、高脂血症は、血中コレステロール値の高い高コレステロール血症、血中中性脂肪値の高い高中性脂肪血症、そのどちらの値も高い複合型高脂血症の３つのタイプに分けることができる。なお、日本人における高コレステロール血症患者は、約３０００万人とも推定されている。このため、高脂血症から誘発される動脈硬化といった疾患を予防する上でも、血中コレステロール値を低減させることは非常に重要である。
【０００５】
また、アポリポプロテインは、リポタンパクを構成する血漿タンパク質であり、脂質を血液中に可溶化して各臓器へ運搬する機能を有している。アポリポプロテインのうち、アポリポプロテインＢ（以下、アポＢと略称する）は、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、カイロミクロンといったリポタンパクの主要な構成タンパク質である。ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、カイロミクロンといったリポタンパクには１粒子あたり１分子のアポＢが含まれ、リポタンパク粒子の構造維持あるいはＬＤＬ受容体への結合に重要な機能を果たしている（非特許文献１）。そして、肝臓または小腸のミクロソーム画分の内腔に存在するＭＴＰ（ミクロソームトリグリセリド転送タンパク質；microsomal triglyceride transfer protein）が、アポＢにトリグリセリドやコレステロールエステルを組み込むことによって、ＶＬＤＬおよびカイロミクロンが形成され、血液中に分泌される（非特許文献２）。
【０００６】
従って、アポＢ分泌が抑制されると、ＶＬＤＬやカイロミクロンの形成・分泌が抑制されることから、アポＢ分泌抑制を介したＶＬＤＬ分泌抑制剤は、血中のコレステロールや中性脂肪を低減し、動脈硬化を予防する効果が期待できる。
【０００７】
従来、高コレステロール血症など血中脂質のバランスが崩れた病態を改善する薬剤として、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤であるスタチンなどが用いられている。しかしながら、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤には横紋筋融解症といった筋肉への副作用があるといった問題があった（非特許文献３）。そこで、血中の総コレステロールを低減させ血中脂質のバランスの崩れを改善する作用に優れ、かつ安全性が高く長期間投与が可能なコレステロール低減剤の開発が望まれていた。
【０００８】
カンレンソウ（旱蓮草）は、キク科植物タカサブロウ（Ｅｃｌｉｐｔａ  ｐｒｏｓｔｒａｔａ  Ｌ．）の地上の全草を乾燥したものであり生薬として用いられている。漢方では清熱涼血・止血の効能がありさまざまな出血に用いられるが、とくに血尿には効果があると言われている。また、カンレンソウ抽出物にテストステロン−５α−レダクターゼ阻害活性があること（特許文献１）、タカサブロウから抽出されたウェデロラクトンに育毛効果があること（特許文献２）が開示されている。
【特許文献１】特開２００１−１８７７４２
【特許文献２】特開２０００−３４４６３０
【非特許文献１】日本臨牀、２００１年、５９巻  増刊号２、１０９−１１３頁
【非特許文献２】日本臨牀、２００１年、５９巻  増刊号２、２２６−２３５頁
【非特許文献３】日本臨牀、２００１年、５９巻  増刊号３、５７８−５８６頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は上記を鑑み、コレステロール上昇抑制効果を有しており、なおかつ安全性の高いコレステロール上昇抑制剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記実情に鑑み鋭意研究を行った結果、特定条件で抽出したカンレンソウ抽出物に、ＶＬＤＬの分泌を抑制し、コレステロール上昇抑制効果があることを見出し、本発明を完成させた。
【００１１】
すなわち本発明は以下のとおりである。
［１］  カンレンソウを、有機溶媒または濃度６０容量％以上の有機溶媒の水溶液で抽出して得られるカンレンソウ抽出物を有効成分とするコレステロール上昇抑制剤。
［２］  カンレンソウ抽出物が、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出して得られるカンレンソウ抽出物である［１］記載のコレステロール上昇抑制剤。
［３］  ［１］または［２］記載のカンレンソウ抽出物を有効成分とするＶＬＤＬ分泌抑制剤。
［４］  カンレンソウ抽出物が、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出して得られるカンレンソウ抽出物である［３］記載のＶＬＤＬ分泌抑制剤。
［５］  カンレンソウを、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出して得られるカンレンソウ抽出物。
［６］  ［１］もしくは［２］記載のコレステロール上昇抑制剤、［３］もしくは［４］記載のＶＬＤＬ分泌抑制剤または［５］記載のカンレンソウ抽出物を含有する組成物。
［７］  医薬用または動物薬用である［６］記載の組成物。
［８］  飲食用である［６］記載の組成物。
［９］  医薬部外品用である［６］記載の組成物。
［１０］  カンレンソウを、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出することを特徴とする、コレステロール上昇抑制剤の製造方法。
［１１］  カンレンソウを、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出することを特徴とする、ＶＬＤＬ分泌抑制剤の製造方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明は、カンレンソウを有機溶媒または濃度６０容量％以上の有機溶媒の水溶液で抽出して得られるカンレンソウ抽出物を有効成分とするコレステロール上昇抑制剤及びＶＬＤＬ分泌抑制剤を提供する。本発明のコレステロール上昇抑制剤及びＶＬＤＬ分泌抑制剤は、明確なコレステロール上昇抑制効果およびＶＬＤＬ分泌抑制効果を有しており、安全性の高いコレステロール上昇抑制剤であり、高脂血症とりわけ高コレステロール血症の予防及び／又は改善・処置に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。
【００１４】
本発明におけるコレステロール上昇抑制効果とは、血中脂質のバランスの崩れを改善する効果、特に血中コレステロールの上昇を抑制する効果である。本発明のコレステロール上昇抑制剤は、血中コレステロールの上昇を抑制することで、高脂血症、とりわけ高コレステロール血症を、予防、緩和、または改善することができる。本発明のコレステロール上昇抑制剤は、そのなかでも、高脂血症とりわけ高コレステロール血症を予防するために有用である。また、本発明のコレステロール上昇抑制剤は、コレステロールの適正なコントロールに有用である。本発明において、高脂血症の予防とは、日本動脈硬化学会が動脈硬化性疾患診療ガイドライン（２００２年９月発行）にて定義している高脂血症の状態（例えば、血中総コレステロール値が２２０ｍｇ／ｄＬ以上、または血中中性脂肪値が１５０ｍｇ／ｄＬ以上の状態）又は境界域の状態（例えば、血中総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬ以上、または血中中性脂肪値が１３０ｍｇ／ｄＬ以上の状態）になるのを防ぐ又は遅らせる（そのリスクを軽減する）ことを指す。本発明でいう高脂血症の改善とは、上記に示す高脂血症の状態又は境界域の状態から、血中総コレステロール値や血中中性脂肪値を低減して、正常な状態（例えば、血中総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬ未満、かつ、血中中性脂肪値が１３０ｍｇ／ｄＬ未満の状態）とするあるいはその状態に近づけることを指す。
【００１５】
また、本発明におけるＶＬＤＬ分泌抑制効果とは、肝臓から分泌されるＶＬＤＬの分泌を抑制する効果である。本発明のＶＬＤＬ分泌抑制剤は、ＶＬＤＬの分泌を抑制することで高脂血症や動脈硬化性疾患の原因であるＬＤＬの生成を抑制することができる。
【００１６】
本発明において、ＶＬＤＬ分泌抑制効果は、被験物質のＶＬＤＬ分泌抑制剤を哺乳動物に投与或いは摂取させる方法、或いは培養肝細胞に被験物質を作用させる事により評価可能であるが、培養肝細胞を用いた方法が、感度、再現性、簡便性において優れており、通常この方法が用いられる。培養肝細胞を用いる方法の場合、例えば、予めヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）を２４穴プレート中に植え込み２４時間培養し、更に被験物質を含む１％牛血清アルブミン含有ＤＭＥＭ培地に交換し２４時間培養を行った後、培養液を採取し、培養液中に含有されるアポＢをサンドイッチ法ＥＬＩＳＡ（エンザイムリンクドイムノソーベントアッセイ）により定量することができる（T.Yanagita et.al., Current Therapeutic Reserch., 60(8), 423,1999）。またアポＢの抗体を用いてウエスタンブロッティング法で定量することも可能である。これらの評価系において、溶媒対照と比較して２０％以上アポＢの分泌量が減少したサンプルを「ＶＬＤＬ分泌抑制活性あり」と判定する。
【００１７】
本発明で用いられるカンレンソウは、キク科植物のタカサブロウ（Ｅｃｌｉｐｔａ  ｐｒｏｓｔｒａｔａ  Ｌ．）の地上の全草を乾燥させた生薬である。本発明では、カンレンソウを用いることもできるし、カンレンソウの原料であるタカサブロウの部位の全てまたは、葉、茎、根茎、花などの一部をそのまま用いることができる。また、これらの使用形態は特に限定されないが、乾燥した後、粉砕して粉末状にして用いることもできる。
【００１８】
本発明のコレステロール上昇抑制剤およびＶＬＤＬ分泌抑制剤は、上記カンレンソウの有機溶媒または濃度６０容量％以上の有機溶媒の水溶液で抽出して得られる抽出物を有効成分とする。該抽出物は例えば、上記のカンレンソウを抽出溶媒に浸し、常圧下で攪拌又は放置し、静置分離、濾過又は遠心分離などを行うことにより、得ることができる。本発明において、抽出に用いられる有機溶媒は特に限定されないが、例えばエタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、メタノールなどが挙げられる。また、水と混合して用いる場合は水溶性の有機溶媒が好ましい。このなかでも、得られる抽出物を食品や医薬品用途に安全に適用する観点からは、抽出に使用する有機溶媒として、エタノールを選択するのが好ましく、強いコレステロール上昇抑制効果を発揮するためには、抽出溶媒として、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液を使用するのがより好ましい。すなわち、本発明のコレステロール上昇抑制剤およびＶＬＤＬ分泌抑制剤は、好ましくは、カンレンソウを濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出して得られるカンレンソウ抽出物を有効成分とする。
【００１９】
また、抽出温度は、一般に−２０〜１００℃、普通１〜９０℃、好ましくは１〜７０℃で好適に実施できる。抽出時間は、普通０．１時間〜１ヶ月、好ましくは０．５時間〜７日間で好適に実施できる。また、抽出溶媒の使用量はカンレンソウ１重量部に対して１倍量以上５０倍量以下が好ましく、３倍量以上２０倍量以下がより好ましい。１倍量未満ではカンレンソウが充分に溶媒に浸らず抽出物の回収率が低くなる。また、５０倍量以上では抽出に用いる抽出タンク等の容器が大きくなり、溶媒除去に必要となるエネルギーが極めて大きく製造コストが高くなる傾向がある。
【００２０】
本発明において、カンレンソウ抽出物の形態は、抽出液の形態でもよいし、溶媒を除去したものでもよい。さらに、他の適切な溶媒に溶解、懸濁した形態であってもよい。また、これらのカンレンソウ抽出物には、コレステロール上昇抑制剤として、その活性を失わない範囲内で脱臭、精製などの操作を加えることができる。さらに、当該カンレンソウ抽出物は、飲食品や医薬品として不適当な不純物を含有しない限り、抽出液のまま、又は粗抽出物あるいは半精製抽出物として本発明に使用できる。
【００２１】
上記本発明のカンレンソウ抽出物、本発明のコレステロール上昇抑制剤、及び本発明のＶＬＤＬ分泌抑制剤は、単独であるいはこれを含有する組成物として、そのまま直接摂取することもできるし、また、公知の担体や助剤などの添加剤を使用して、カプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態に成型して摂取することもできる。また、栄養強化を目的として、ビタミンA、C、D、Eなどの各種ビタミン類を添加、併用することもできる。これらの成型剤におけるカンレンソウ抽出物の含有量は、好ましくは０．１〜１００重量％、より好ましくは１０〜９０重量％である。
【００２２】
さらに、本発明のカンレンソウ抽出物、本発明のコレステロール上昇抑制剤、及び本発明のＶＬＤＬ分泌抑制剤は、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、はんぺんなどの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類；パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる他、製剤化して、特定保健用食品などの機能性食品やサプリメントとすることもできる。これら飲食用の組成物を摂取する場合、その摂取量は有効成分であるカンレンソウ抽出物の量に換算して成人一人一日当たり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／Ｋｇ体重、より好ましくは１〜３００ｍｇ／Ｋｇ体重である。
【００２３】
本発明のカンレンソウ抽出物、本発明のコレステロール上昇抑制剤、及び本発明のＶＬＤＬ分泌抑制剤を、医薬品、動物薬品または医薬部外品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、座薬、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。これら製剤の投与量としては、カンレンソウ抽出物の量に換算して、成人一人一日当たり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／Ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／Ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。
【実施例】
【００２４】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００２５】
（実施例１）
カンレンソウ（新和物産株式会社より購入）１０００ｇを、それぞれ酢酸エチル、濃度９９．５、８０、６０、４０、２０、０容量％エタノール水溶液５Ｌに浸し、常圧下、４５℃にて６時間、撹拌抽出した後、濾過により抽出液を得た。その抽出液を減圧濃縮および凍結乾燥により溶媒を除去し、カンレンソウ抽出物を得た。得られたカンレンソウ抽出物の量を表１に示す。
【００２６】
【表１】
2009114138.tif 000002
（実施例２）
実施例１で得られたカンレンソウ９９．５容量％エタノール抽出物２０ｇを濃度９９．５容量％エタノール水溶液１００ｍｌに再溶解し、再溶解液に４０ｇの中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）と４０ｇのジグリセリンモノオレイン酸エステル（ＤＯ−１００Ｖ、理研ビタミン社製）を添加し良く混合した後、減圧濃縮によりエタノールを除去し、カンレンソウ９９．５容量％エタノール抽出物のＭＣＴ溶液を得た。
【００２７】
（実施例３）
６週齢の雄性ＫＫ−Ａｙマウス（各群６匹）に、高脂肪・高糖分食（オリエンタル酵母株式会社、表１）を基本飼料として与え、さらに対照群にはＭＣＴ・ＤＯ−１００Ｖ混液（ＭＣＴ／ＤＯ−１００Ｖ＝１／１（重量比））を５０００ｍｇ／Ｋｇ、被検物質群には実施例２で得られたカンレンソウ９９．５容量％エタノール抽出物のＭＣＴ溶液を、５０００ｍｇ／Ｋｇ（抽出物の量として１０００ｍｇ／Ｋｇ）となるように、１日に１回２週間経口投与した。試験終了後、頸動脈より採血を行い、血漿を得た。その後、血漿中の総コレステロール量を測定した。その結果を表２に示す。
【００２８】
【表２】
2009114138.tif 000003
表２から明らかなように、カンレンソウの９９．５容量％エタノール抽出物のＭＣＴ溶液は、血中の総コレステロール値の上昇を抑制した。
【００２９】
（実施例４）
Ｈｅｐ−Ｇ２細胞（ヒト肝癌由来培養細胞）を２４穴培養プレートに１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように植え込み、３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間培養した。培地には、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、１０ｍL／Lペニシリン・ストレプトマイシン溶液（それぞれ５０００ＩＵ／ｍＬ、５０００μｇ／ｍＬ、Invitrogen社）、３７ｍｇ／Ｌアスコルビン酸（和光純薬工業株式会社）を含むＤＭＥＭ（Dulbecco’s Modified Eagle Medium、Invitrogen社）を用いた。被検物質を含む１％ウシ血清アルブミン（Sigma社）含有DMEMに交換し、２４時間培養した。溶媒対照（コントロール）としてはＤＭＳＯを用い、０．１％となるように添加した。コントロールおよび被検物質で処理した際に培地中の分泌されたアポＢ量は、ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（CaldioCHEK社）にて測定した。コントロールのアポＢ分泌量を１００％として被検物質のアポＢ分泌量を算出した。
【００３０】
被検物質として、実施例１で得られた各カンレンソウ抽出物（それぞれ添加濃度は５０μg/mL）で処理した際のアポＢ分泌量を表３に示す。
【００３１】
【表３】
2009114138.tif 000004
表３から明らかなように、濃度９９．５、８０、６０容量％のエタノール水溶液で抽出されたカンレンソウ抽出物にＡｐｏＢ分泌抑制活性をみとめた。このことから、これらのカンレンソウ抽出物はＶＬＤＬ分泌抑制活性を有していることが示された。