(57)【要約】【課題】粒径が小さい金属ナノ粒子が分散した金属ナノ粒子分散液を製造する方法を提供すること。【解決手段】本発明の金属ナノ粒子分散液製造方法は、金属ナノ粒子を内部に保持するフェリチン蛋白質を、蛋白質分解酵素及び水溶性分散剤を含む水溶液中で分解することで、金属ナノ粒子が水溶液中に分散した水溶性分散液を作成し、さらに、その水溶性分散液と、非水溶性液及び非水溶性分散剤とを混合し、金属ナノ粒子が分散した非水溶性液を分離することで、金属ナノ粒子が非水溶性液中に分散した金属ナノ粒子分散液を製造する。  【選択図】図３
2009019256.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
金属ナノ粒子を内部に保持するフェリチン蛋白質における前記フェリチン蛋白質を、液中で除去することで、金属ナノ粒子分散液を製造する製造方法。
【請求項２】
蛋白質分解酵素及び水溶性分散剤を含む水溶液中で前記フェリチン蛋白質を分解することで、前記金属ナノ粒子が前記水溶液中に分散した金属ナノ粒子分散液を製造することを特徴とする請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
蛋白質分解酵素及び水溶性分散剤を含む水溶液中で前記フェリチン蛋白質を分解することで、前記金属ナノ粒子が前記水溶液中に分散した水溶性分散液を作成し、
さらに、前記水溶性分散液と、非水溶性液及び非水溶性分散剤とを混合し、前記金属ナノ粒子が分散した前記非水溶性液を分離することで、前記金属ナノ粒子が前記非水溶性液中に分散した金属ナノ粒子分散液を製造することを特徴とする請求項１記載の製造方法。
【請求項４】
前記非水溶性分散剤はＳＨ基を有する有機物であることを特徴とする請求項３に記載の製造方法。
【請求項５】
前記ＳＨ基は、ポリペプチドを有することを特徴とする請求項４に記載の製造方法。
【請求項６】
前記ポリペプチドは金属結合ペプチドアプタマーであることを特徴とする請求項５に記載の製造方法。
【請求項７】
前記水溶性分散剤はクエン酸であることを特徴とする請求項２〜６のいずれかに記載の製造方法。
【請求項８】
前記クエン酸の濃度が２０ｍＭ以下であることを特徴とする請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
前記金属ナノ粒子が、金ナノ粒子であることを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば、バイオセンシング技術、低温接合材、金属表面の改質材などに応用可能な金属ナノ粒子分散液の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
金は、金属としては高い分子安定性を有し、その光学特性は金属のプラズモンに基づいているので、退色が少なく、種々の抗体の修飾に耐えることができる。そのような特性を有する金のナノ粒子は、バイオテクノロジー分野や、エレクトロニクス分野において有用材料として注目され、金のプラズモン共鳴による強い発色性を用いた生体や組織への染色に応用されている。
具体的には、金ナノ粒子は、例えば、タンパクやウイルスの検出に利用される免疫学的手法であるイムノクロマト法に用いられる。このイムノクロマト法は、ターゲットに対する２種類の抗体(抗体Ａ、抗体Ｂ)を作成し、抗体Ａを金ナノ粒子に、抗体Ｂをクロマト用紙に結合させる。予め、抗体Ａでターゲットを捕捉した金ナノ粒子を用いて、クロマトグラフィ操作をすると、移動した金ナノ粒子付きのターゲットがクロマト用紙上の抗体Ｂによって捉えられ、金ナノ粒子が次々に抗体Ｂの場所に蓄積していく。この時の発色を検出して、大腸菌Ｏ−１５７、サルモネラ、黄色ブドウ球菌、コレラ毒素などの病原菌が検出でき、他には妊娠検査薬などにも使用されている。
また、金ナノ粒子は、細胞ラベルにも用いられる。従来、目的とする細胞をラベルする際に色素、蛍光など各種の方法も広く試みられているが、抗体修飾による光学的性質への影響が問題となっている。そこで退色の少ない金ナノ粒子を用いれば、抗体による修飾の影響を受けず、光学顕微鏡での安定した観察も可能となる。例えば、抗体結合金ナノ粒子を用いることで、目的タンパク質の可視化が可能となり、退色が著しい蛍光分子と比較して長時間観察が可能となることから、より動的な生体性質を観察することができる。
【０００３】
金のナノ粒子は、通常、水に分散した状態で用いられる。金ナノ粒子を水に分散させる方法としては、様々な手法が用いられ、例えば、金属コロイド分散液およびその製造方法が特許文献１において開示されている。
【特許文献１】特開２００６−２７３９３６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
金ナノ粒子の色は、上述したように、プラズモン共鳴によるものであり、粒径が大きくなると吸収極大が長波長側にシフトすると考えられており、小さなナノ粒子を用いるほど、イムノクロマト法や細胞ラベルに用いた場合の感度と分解能が向上する。従って、金ナノ粒子の粒径は、小さく制御することが必要である。
【０００５】
特許文献１に開示された、液層法を用いた金属コロイド製造方法では、金属コロイドの粒径は概ね５０ｎｍ以下のサイズでしか制御できず、イムノクロマト法や細胞ラベルに用いた場合の感度と分解能が十分でない。
【０００６】
本発明は以上の点に鑑みなされたものであり、粒径が小さい金属ナノ粒子が分散した金属ナノ粒子分散液を製造する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（１）請求項１の発明では、金属ナノ粒子を内部に保持するフェリチン蛋白質におけるフェリチン蛋白質を、液中で除去する。すると、フェリチン蛋白質の内部に存在していた金属ナノ粒子は、液中に分散する。
【０００８】
本発明によれば、小粒径（例えば直径２〜７ｎｍ）の金属ナノ粒子が安定に分散した金属ナノ粒子分散液を製造することができる。
本発明で製造した金属ナノ粒子分散液は、例えば、上述したイムノクロマト法や細胞ラベルに用いることができる。この場合、金属ナノ粒子の粒径が小さいことにより、感度や分解能を高めることができる。
【０００９】
また、本発明で製造した金属ナノ粒子分散液は、例えば、シリコン基板のシリサイド化に用いることができる。すなわち、図１の（ａ）に示すシリコン基板１の表面に、図１の（ｂ）に示すように、金属ナノ粒子分散液３を塗布して、図１の（ｃ）に示すように、金属ナノ粒子５の層を形成し、図１の（ｄ）に示すように熱処理をすることで、図１の（ｅ）に示すように、シリコン基板１の表面に、シリサイド化した面６を形成することができる。この場合、本発明で製造した金属ナノ粒子分散液を用いると、シリサイド化する際の熱処理を従来と比較して低温で行うことが可能となる。さらに本発明で製造される金属ナノ粒子は、予めフェリチン蛋白質の殻が除去されているため、熱処理前の除去工程を簡略化することができる。
【００１０】
さらに、本発明で製造した金属ナノ粒子分散液は、例えば、シリコン基板のシリサイド化とともに、部材の接合に用いることができる。すなわち、図２の（ａ）に示す、Ｎｉメッキが形成されたシリコン基板１の表面に、図２の（ｂ）に示すように、金属ナノ粒子分散液を塗布して金属ナノ粒子５の層を形成し、その上から接合する部材９を重ね合わせる。そして、図２の（ｃ）に示すように、熱処理をすることで、図２の（ｄ）に示すように、シリコン基板１の一部をシリサイド化するとともに、そのシリサイド化した部分６を接合面として、シリコン基板１と接合部材９と接合することができる。この場合も、シリサイド化する際の熱処理を従来と比較して低温にすることが可能となり、熱処理前の除去工程を簡略化することができる。
【００１１】
前記金属ナノ粒子を内部に保持するフェリチン蛋白質は、例えば、フェリチン蛋白質の内部（内腔）で、金属イオンの還元を生じさせ、金属ナノ粒子を形成することにより、製造できる。
（２）請求項２の発明では、蛋白質分解酵素及び水溶性分散剤を含む水溶液中でフェリチン蛋白質を分解する。すると、フェリチン蛋白質内部に存在していた金属ナノ粒子は、水溶液中に出て行き、水溶液に含まれる、金属との親和性の高い水溶性分散剤により、周囲を取り囲まれる。その結果、金属ナノ粒子が水溶液中に分散した分散液が製造される。このとき、水溶性分散剤は、金属ナノ粒子同士の凝集を防ぐ働きをする。
【００１２】
前記フェリチン蛋白質を分解する蛋白質分解酵素としては、例えば、プロナーゼ、トリプシン、ナカラーゼ、ディスパーゼ、ペプシン、パパインなど、一般に用いられる蛋白質分解酵素が挙げられる。
【００１３】
前記水溶性分散剤としては、例えば、水酸基やカルボキシル基、スルホン基、リン酸基、アミノ基、ＳＨ基等を末端に持つ、水溶性の有機分子、例えば、コハク酸、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニールピロール（ＰＶＰ）等を用いることができる。水溶性分散剤の鎖長については、特に限定されるものではない。
【００１４】
なお、フェリチン蛋白質を分解する蛋白質分解酵素として、例えば、プロナーゼなど、蛋白質をアミノ酸あるいは、ポリペプチドのレベルにまで分解できる酵素を用いる場合は、分解物のアミノ酸やポリペプチドが金属ナノ粒子の分散剤となるため、特別な水溶性分散剤を添加しなくても、金属ナノ粒子を分散させられることがある。しかし、その際に、金属ナノ粒子同士の凝集は発生し易いため、濃度０．５ｍＭから２０ｍＭの水溶性分散剤を水溶液に添加することが好ましい。
【００１５】
本発明では、フェリチン蛋白質を分解した後に、分解残渣が生じることがあるが、この分解残渣は、以下のようにして除去することができる。すなわち、金属ナノ粒子の周囲を水溶性分散剤で取り囲むことで水溶液中に分散させた後、非水溶性の溶媒を加えて混合攪拌し、その後、遠心処理等の手段で、水溶性画分と非水溶性画分を分離し、フェリチン蛋白質の分解残渣を層間に不溶化させた上で水溶性画分を回収することにより、金属ナノ粒子と水溶性分散剤とを含むが、分解残渣を含まない金属ナノ粒子分散水溶液を得ることができる。
【００１６】
このとき、蛋白質分解酵素としてペプシンやトリプシンを用いることや、分解時間を短く設定することにより、蛋白質分解残渣を、水溶性画分と非水溶性画分の層間に容易に不溶化させることができる。こうすると、水溶性画分内における蛋白質分解残渣が殆ど残らなくなり、高純度の金属ナノ粒子分散水溶液を作ることが可能となる。用いる非水溶性溶媒は、特に限定されないが、例えば、フェノールやトルエン等を用いることができる。
（３）請求項３の発明では、まず、フェリチン蛋白質を分解する蛋白質分解酵素及び水溶性分散剤を含む水溶液中でフェリチン蛋白質を分解する。すると、フェリチン蛋白質内部に存在していた金属ナノ粒子は、水溶液中に出て行き、水溶液に含まれる、金属との親和性の高い水溶性分散剤により、周囲を取り囲まれる。その結果、金属ナノ粒子が水溶液中に分散した分散液が作成される。このとき、水溶性分散剤は、金属ナノ粒子同士の凝集を防ぐ働きをする。
【００１７】
次に、金属ナノ粒子が水溶液中に分散した分散液に対して、非水溶性分散剤を含む、非水溶性液を加えて混合攪拌し、遠心分離等の手段で、水溶性画分と非水溶性画分とを分離し、非水溶性画分を回収することにより、金属ナノ粒子と非水溶性分散剤とを含む、非水溶性の金属ナノ粒子分散液を製造することができる。このとき、非水溶性分散剤は、水溶性分散剤よりも、金属ナノ粒子との親和性が高いものが好ましい。
【００１８】
金属ナノ粒子が水溶液中に分散した分散液と、非水溶性液とを混合攪拌する手段としては、例えば、超音波や、加熱攪拌などの手段を用いることができるが、特に、４０〜７０℃前後に加熱しながら、スターラー等で攪拌する手段が、金属ナノ粒子の凝集を一層効果的に防ぐことができるので好ましい。
【００１９】
本発明によれば、蛋白質分解酵素により生成したアミノ酸や短いポリペプチドの、金属ナノ粒子分散液への混入を防止することができる。それは、蛋白質分解酵素により生成したアミノ酸や短いポリペプチドは、水溶性画分に溶けた状態で存在し、非水溶性画分に混入しにくいからである。また、本発明によれば、蛋白質分解酵素や、比較的高分子の分解生成有機物の、金属ナノ粒子分散液への混入を防止することができる。それは、比較的高分子の分解生成有機物は、水溶性画分と非水溶性画分との層間に不溶化するため、非水溶性画分に分解生成有機物等が混入しにくいからである。
【００２０】
前記非水溶性液は、特に限定されないが、例えば、フェノール、トルエン等が挙げられる。
前記非水溶性分散剤は、非水溶性液に溶けるものであれば、特に制限されるものではないが、気化温度の低い、短分子の非水溶性分散剤であれば、焼結等の加熱処理で、非水溶性分散剤を飛ばすことができる。このような低分子の分散剤としては、例えば、１・オクタンチオール等が挙げられる。
【００２１】
非水溶性分散剤の添加量は、分散させる金属ナノ粒子の表面積に応じて調整することができる。例えば、表面積が０．２×１０-18ｍ2の非水溶性分散剤を使用した場合、非水溶性分散剤の添加量（金属ナノ粒子１個あたり）は、金属ナノ粒子の径が２ｎｍのときは約６０個、３ｎｍのときは約１４０個、４ｎｍのときは約２５０個、５ｎｍのときは約３９０個、６ｎｍのときは約５６０個、７ｎｍのときは約７６０個以上が好適である。
【００２２】
本発明では、金属ナノ粒子の直径はフェリチン蛋白質の内径に依存し、通常は７ｎｍ以下であり、多くの場合、３ｎｍ〜６ｎｍである。非水溶性分散剤の量が上記の量より少なくても、非水溶性液への金属ナノ粒子の移行は生じるが、上記の量の非水溶性分散剤を添加することで、ほぼ全ての金属ナノ粒子を非水溶性液中に移行させ、分散させることが可能となる。なお、金属ナノ粒子の周囲に付かなかった非水溶性分散剤は、非水溶性液を乾燥させた後に、エタノールやメタノールなどで洗浄することで、容易に取り除くことができる。
（４）請求項４の発明では、非水溶性分散剤は、ＳＨ基を有する有機物である。このＳＨ基を有する有機物は、金属ナノ粒子に対する結合能力が高いので、このＳＨ基を有する有機物を用いれば、金属ナノ粒子を、非水溶性画分に効率的に移動させることができる。
【００２３】
なお、水溶性分散剤としては、ＯＨ基、ＣＯＯＨ基、ＮＨ2基など、ＳＨ基よりも金属ナノ粒子との親和性の低い官能基を有する分散剤を使用することが好ましい。こうすることで、金属ナノ粒子が水溶液中に分散した分散液と、非水溶性分散剤を含む非水溶性液とを混合したとき、親和性の高いＳＨ基を有する非水溶性分散剤を、金属ナノ粒子表面に吸着させることができ、金属ナノ粒子を、非水溶性画分に効率的に移動させることができる。
【００２４】
前記ＳＨ基を有する有機物は、非水溶性液に溶けるものであれば、特に制限されるものではないが、気化温度の低い、短分子の有機物であれば、焼結等の加熱処理で飛ばすことができる。このような低分子の有機物としては、例えば、１・オクタンチオール等が挙げられる。
（５）請求項５の発明では、ＳＨ基は、ポリペプチドを有する。ポリペプチドを有する有機物は、金属ナノ粒子に対する結合能力が高いので、この有機物を用いれば、金属ナノ粒子を、非水溶性画分に効率的に移動させることができる。
（６）請求項６の発明では、ポリペプチドは金属結合ペプチドアプタマーである。金属結合ペプチドアプタマーを有する有機物は、金属ナノ粒子に対する結合能力が高いので、この有機物を用いれば、金属ナノ粒子を、非水溶性画分に効率的に移動させることができる。
【００２５】
無機物材料に対するペプチドアプタマーとしては、酸化鉄や金を標的にしたペプチドアプタマーが創製されている。またファージ提示法等によりチタン結合ペプチドアプタマーも創出されており、予めこれらのアプタマーによって修飾されたＳＨ基を用いることで自己組織化を利用したナノ粒子の積層化、複合金属ナノ粒子を得ることができる。
（７）請求項７の発明では、水溶性分散剤はクエン酸である。クエン酸は分子量が小さく、拡散速度が大きいので、金属ナノ粒子の凝集を防止する効果が高い。
（８）請求項８の発明では、クエン酸の濃度が２０ｍＭ以下（好ましくは１０ｍＭ以下）である。クエン酸濃度が上記範囲内であることにより、フェリチン蛋白質の分解処理行程で、金属ナノ粒子が沈殿する現象が起きにくくなる。
【００２６】
仮に、金属ナノ粒子の沈殿が生じると、請求項３の発明のように、金属ナノ粒子を非水溶性液へ分散させることが困難になってしまい、水溶性画分と非水溶性画分との間に金属ナノ粒子が凝集してしまうが、本発明によれば、金属ナノ粒子の沈殿を生じさせ難くすることにより、この問題を防止できる。
【００２７】
なお、プロナーゼなどの強い分解能力を有する蛋白質分解酵素を用いる場合は、クエン酸を添加しなくても、蛋白質分解の生成物であるアミノ酸等の効果で金属ナノ粒子の凝集による沈殿を防ぐことも可能となる。しかしこの際、金属ナノ粒子同士の凝集は発生し易くなるため、粒径の均一性は悪くなることがある。
（９）請求項９の発明では、金属ナノ粒子が金ナノ粒子である。金ナノ粒子は、その表面活性が高く、高反応性の触媒として働く。本発明で製造した金ナノ粒子分散液を触媒として用いる場合、フェリチン蛋白質の内腔で作製した金ナノ粒子は、その粒径が均一であるため、触媒活性のロット間差異を小さくすることができる。
【００２８】
フェリチン蛋白質内で作製できる金ナノ粒子の粒径は、金イオンの還元による粒子の作製処理を、複数回、繰り返すことで、７ｎｍ以下の範囲で自由に設計することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下に、実施例を挙げてこの発明を具体的に説明する。ただし、下記の実施例はこの発明を例示するだけであって、この発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００３０】
１．金ナノ粒子を内部に保持するフェリチンの作製
（１−１）フェリチン内部からフェロハイドライドを除去する工程
ウマ由来の市販フェリチン（９３ｍｇ／ｍＬ、ＳＩＧＭＡ社製）０．５ｍＬに対し、０．１Ｍの酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）５．５ｍＬを加え、透析膜（ＭＷＣＯ：１５，０００）チューブ中に入れた。なお、フェリチンの内部には、フェロハイドライドが存在する。
透析膜チューブを、１６０ｍＬの酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）中に入れ、窒素パージしながら透析処理を１５ｍｉｎ行った。そして、０．４ｍＬのチオグルコール酸を上記１６０ｍＬの酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）に添加し、窒素パージ下、２ｈ透析処理を実施した。更に、０．２ｍＬのチオグリコール酸を上記１６０ｍＬの酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）に加え、窒素パージ下、１Ｈ透析処理を実施した。引き続き、予め窒素パージしておいた、０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１６０ｍＬ中に、フェリチンを移し、０．４ｍＬのチオグリコール酸を添加し、窒素パージ下で１ｈ、透析処理を実施した。透析チューブ内のフェリチンの色が消えたのを確認した後、４００ｍＬの０．１５Ｍ塩化ナトリウム溶液中に、透析チューブを移し、１ｈ透析処理を実施した。引き続き、５００ｍＬの０．１５Ｍ塩化ナトリウム溶液中に透析チューブを移し、４℃下で一晩、透析処理を実施した。透析チューブ内の溶液を回収し、１０，０００Ｇで８ｍｉｎ、遠心処理を実施し、変性したフェリチンを沈殿として取り除いた。なお、この時点で、フェリチンの総量は２０ｍｇとなっており、フェリチン内部に存在していたフェロハイドライドは完全に取り除かれた。
【００３１】
（１―２）金イオンの還元によりフェリチン内部に金ナノ粒子を生成させる工程
フェリチン濃度を、０．４６５ｍｇ／ｍＬに調整した０．１５Ｍ塩化ナトリウム溶液３０ｍＬを作り、これに４０ｍＭのＫＡｕＣｌ4液を３７５μＬ加え、３０ｍｉｎ攪拌した。そのフェリチン溶液を、透析チューブ（ＭＷＣＯ：１５，０００）内に入れ、５００ｍＬの０．１５Ｍ塩化ナトリウム溶液中で３０ｍｉｎ、透析処理を実施した。透析後、フェリチン溶液を回収し、攪拌しながら、１００μＬの滅菌水で溶解した１１２μｍｏｌのＮａＢＨ4をゆっくりと滴下した。３０ｍｉｎ攪拌を続けた後、そのフェリチン溶液を、透析チューブ（ＭＷＣＯ：１５，０００）内に入れ、５００ｍＬの０．１５Ｍ塩化ナトリウム溶液中で３０ｍｉｎ、透析処理を実施した。この時点で、フェリチン内部には、金ナノ粒子が生成した。
２．金ナノ粒子を内部に保持するフェリチンのカラム精製
上記１で調製したフェリチン溶液を限外ろ過膜で１０ｍＬ程度に濃縮した。得られた濃縮液を、０．１５Ｍ  ＮａＣｌを用いてゲルろ過クロマト（Sephadex  G200  アマシャムバイオサイエンス社製）により精製した。
３．金ナノ粒子分散水溶液の調製（その１）
上記１及び２の方法にて作製した、金ナノ粒子を内腔に含むフェリチンの溶液濃度を、０．１５Ｍ 塩化ナトリウム溶液を用いて、４．２ｍｇ／ｍＬに調整した。このフェリチン溶液、３０μＬに対し、１Ｍ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）を５μＬ、１０ｍｇ／ｍＬのプロナーゼ（蛋白質分解酵素）を２．５μＬ加え、濃度を調整したクエン酸ナトリム（終濃度は、０．０５、１、５、１０、１５、２０、３０、１００ｍＭのうちのいずれか）を含む０．１５Ｍ 塩化ナトリウム溶液を１２．５μＬ加え、３７℃で８ｈｒ、インキュベートした。
その後、インキュベートしたフェリチン溶液を１０,０００Ｇで１０ｍｉｎ、遠心処理し、金ナノ粒子の凝集による沈殿の有無を確認した。その結果を表１に示す。
【００３２】
【表１】
2009019256.tif 000003
表１に示すように、クエン酸濃度が３０ｍＭ以上の場合は、金ナノ粒子の沈殿が起こり、１ｍＭ以上においても、金ナノ粒子の沈殿が少し生じた。一方、クエン酸濃度が１０ｍＭ以下の場合、金ナノ粒子の凝集はほとんど起こらなかった。特に、クエン酸を加えなかった場合においても、金ナノ粒子の沈殿は生じなかった。
４．金ナノ粒子分散水溶液の調製（その２）
上記１、２の方法にて作製した、金ナノ粒子を内腔に含むフェリチン溶液を用い、前記３と基本的には同様の方法であるが、蛋白質分解酵素をプロナーゼからトリプシンに変更した方法で、金ナノ粒子分散水溶液を調製した。
【００３３】
そのように調製した金ナノ粒子分散水溶液を、上記３と同様の方法で評価した。その結果を表２に示す。
【００３４】
【表２】
2009019256.tif 000004
表２に示すように、クエン酸を１〜１０ｍＭ加えたときは、金ナノ粒子の凝集による沈殿が生じなかった。
５．金ナノ粒子が非水溶性溶媒へ分散した分散液の調製（その１）
上記３又は４で調整した、金ナノ粒子分散水溶液に対し、５％の１−オクタンチオールを含むヘキサンを等量加え、６０℃の加温下で２ｈｒ、攪拌を行った。その後、５，０００Ｇで５ｍｉｎ遠心処理を行い、上層画分（ヘキサン溶媒画分）を回収した。ヘキサンをエバポレートにより除去した後、１００％のエタノールで２回洗浄し、余分の１−オクタンチオールを除去した。不溶化した金ナノ粒子を乾燥させた後、１００％ヘキサンを加えて、金ナノ粒子を溶解させることで、金ナノ粒子がヘキサンへ分散した分散液を調製した。
【００３５】
この金ナノ粒子分散液をＴＥＭ観察した結果を図３に示す。この図３に示すように、粒径２〜３ｎｍ前後の均一な金ナノ粒子が分散していた。なお、上記３、４の項で調製した金ナノ粒子分散水溶液は、直接ＴＥＭ観察をしていないが、金ナノ粒子自体に変化はないので、同様に、粒径２〜３ｎｍ前後の均一な金ナノ粒子が分散していると考えられる。
６．金ナノ粒子が非水溶性溶媒へ分散した分散液の調製（その２）
基本的には上記１〜４の方法と同様であるが、金イオンの還元工程（上記１．（１−２）の工程）の実行回数を８回として、金ナノ粒子分散水溶液を調製した。そして、この金ナノ粒子分散水溶液を用いて、上記５と同様の方法で、金ナノ粒子がヘキサンへ分散した分散液を調製した。
【００３６】
この金ナノ粒子分散液をＴＥＭ観察した結果を図４に示す。この場合、粒径３．７ｎｍの金ナノ粒子の分散液ができており、また、自己組織化的に、金ナノ粒子が凝集したものが見られた。これは、金ナノ粒子の粒径が揃っていることが原因で出来たものと考えられる。
【００３７】
尚、本発明は前記実施例になんら限定されるものではなく、本発明を逸脱しない範囲において種々の態様で実施しうることはいうまでもない。
例えば、金ナノ粒子の代わりに、他の金属（例えばニッケル、銀、銅、コバルト、スズ）のナノ粒子が分散した分散液を製造してもよい。この場合は、フェリチンの内腔で、それらの金属（金以外の金属）のイオンを還元して金属ナノ粒子を形成し、次に、フェリチンを分解することで、金属ナノ粒子分散液を製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】シリコン基板のシリサイド化工程を表す説明図である。
【図２】シリコン基板をシリサイド化するとともに他の部材を接合する工程を表す説明図である。
【図３】金ナノ粒子分散液をＴＥＭ観察した結果を表す写真である。
【図４】金ナノ粒子分散液をＴＥＭ観察した結果を表す写真である。
【符号の説明】
【００３９】
１・・・シリコン基板
３・・・金属ナノ粒子分散液
５・・・金属ナノ粒子
７・・・Ｎｉメッキ
９・・・接合部材
【図１】
2009019256.tif 000005
【図２】
2009019256.tif 000006
【図３】
2009019256.tif 000007
【図４】
2009019256.tif 000008