(57)【要約】      （修正有）【課題】天然由来の新規な化学物質を資源として提供する。【解決手段】アヤメ科植物Ｅｌｅｕｔｈｅｒｉｎｅ  ｐａｌｍｉｆｏｌｉａ鱗茎のメタノール抽出物を精製し、下記式（１）で示されるエレウテリノシドＡ。2009179602.tif 000023該化合物は、癌治療薬として有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で示されるエレウテリノシドＡ。
【化１】
2009179602.tif 000017
【請求項２】
下記式（２）で示されるエレウテリノシドＢ。
【化２】
2009179602.tif 000018
【請求項３】
下記式（３）で示されるエレウテリノシドＣ。
【化３】
2009179602.tif 000019
【請求項４】
下記式（１）で示されるエレウテリノシドＡ及びその塩の少なくともいずれかを有効成分として含有する薬剤。
【化４】
2009179602.tif 000020
【請求項５】
下記式（２）で示されるエレウテリノシドＢ及びその塩の少なくともいずれかを有効成分として含有する薬剤。
【化５】
2009179602.tif 000021
【請求項６】
下記式（３）で示されるエレウテリノシドＣ及びその塩の少なくともいずれかを有効成分として含有する薬剤。
【化６】
2009179602.tif 000022
【請求項７】
癌の治療薬である請求項４、５又は６記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物であるエレウテリノシドＡ、Ｂ及びＣに関し、更には、これらを用いた薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在の我々の生活において、天然の動植物、微生物等の体内に含まれる化学物質（以下「天然物」という。）として見出されたもののうち人体に有用な効果をもたらすものは生薬、医薬品の有効成分として使用されている。また、このようなものは更に有用な医薬品を開発するための研究材料としても様々な役割を有しており、非常に重要なものとなっている。
【０００３】
このように、人体に有益な効果をもたらす天然物の探索に関する報告としては、例えば下記非特許文献１に、変形菌からビスインドール化合物、ナフトキノン化合物、グリセリド化合物等を抽出した報告がある。
【０００４】
【非特許文献１】石橋正己、“未利用菌類の資源化：変形菌からの天然物探索”、有機合成化学協会誌、２００３年、第６１巻、第２号、１５２〜１６３頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら一方で、天然物の探索が多数の者によって行なわれているにもかかわらず、探索の材料として検討、調査されたものは、地球上の全生物種の中で１０％にも満たないといわれている。
【０００６】
本発明は、新規な化学物質を資源として提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一手段に係る化学物質は、下記式（１）で示される。なお本明細書中において下記式（１）で示される化学物質はエレウテリノシドＡと呼ばれる。
【化１】
2009179602.tif 000002
【０００８】
また、本発明の他の一手段に係る化学物質は、下記式（２）で示される。なお本明細書中において下記式（２）で示される化学物質はエレウテリノシドＢと呼ばれる。
【化２】
2009179602.tif 000003
【０００９】
また、本発明の他の一手段に係る化学物質は、下記式（３）で示される。なお本明細書中において下記式（３）で示される化学物質はエレウテリノシドＣと呼ばれる。
【化３】
2009179602.tif 000004
【００１０】
また、本発明の他の一手段に係る薬剤は、下記式（１）で示されるエレウテリノシドＡ及びその塩の少なくともいずれかを有効成分として含有する。
【化４】
2009179602.tif 000005
【００１１】
また、本発明の他の一手段に係る薬剤は、下記式（２）で示されるエレウテリノシドＢ及びその塩の少なくともいずれかを有効成分として含有する。
【化５】
2009179602.tif 000006
【００１２】
また、本発明の他の一手段に係る薬剤は、下記式（３）で示されるエレウテリノシドＣ及びその塩の少なくともいずれかを有効成分として含有する。
【化６】
2009179602.tif 000007
【００１３】
なお、上記の薬剤は、限定されるわけではないが、癌の治療薬として有用であることが期待される。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により、新規な化学物質を資源として提供することができる。特に、本発明に係る化学物質は、癌細胞に対し細胞増殖抑制作用を発揮するため、例えば癌の治療薬として利用が期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明の実施形態について説明するが、本発明は多くの異なる形態による実施が可能であり、以下に示す実施形態についての記載にのみ狭く解釈されるものではない。
【００１６】
本発明の一形態に係るエレウテリノシドＡ、Ｂ及びＣは、下記式（１）乃至（３）によりそれぞれ示される。
【化７】
2009179602.tif 000008
【化８】
2009179602.tif 000009
【化９】
2009179602.tif 000010
【００１７】
本実施形態に係るエレウテリノシドＡ、Ｂ及びＣは、後述の実施例から明らかなように、アヤメ科植物Ｅｌｅｕｔｈｅｒｉｎｅ  ｐａｌｍｉｆｏｌｉａから抽出することができるが、これに限定されず、合成することも可能である。
【００１８】
本実施形態に係るエレウテリノシドＡ、Ｂ及びＣは、癌細胞に対し細胞増殖抑制作用を発揮するため、薬剤、例えば癌の治療薬として利用が期待される。なおエレウテリノシドＡ、Ｂ及びＣを癌の治療薬として利用する場合、エレウテリノシドＡ、Ｂ及びＣ並びにこれらの塩のうち少なくともいずれかを有効成分として含有しておくことが好ましい。
【００１９】
また、本実施形態に係る癌の治療薬は、上記エレウテリノシドＡ、Ｂ及びＣ並びにこれらの塩のうち少なくともいずれかの他、薬学的に許容しうる通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤（例えば蒸留水）、ｐＨ緩衝剤（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤等の各種調剤用配合成分を含有させることができる。
【００２０】
またこの癌の治療薬は、患者の性別、体重、症状に見合った適切な投与量を経口的又は非経口的に投与することができる。経口的な投与としては、通常用いられる投与形態、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁液、油剤、乳化剤等の投与形態を採用することができる。また、非経口的な投与としては、通常用いられる投与形態、例えば上記の液剤、懸濁液等にしたものを直接患部に投与する方法、注射等により投与する形態を採用することができる。
【実施例】
【００２１】
本実施例では、アヤメ科植物Ｅｌｅｕｔｈｅｒｉｎｅ  ｐａｌｍｉｆｏｌｉａからエレウテリノシドＡ、Ｂ及びＣを抽出し、検討した結果を示す。図１に、エレウテリノシドＡ、Ｂ及びＣの単離についてのスキームの概略を示しておく。
【００２２】
まずＥｌｅｕｔｈｅｒｉｎｅ  ｐａｌｍｉｆｏｌｉａの鱗茎のメタノール抽出物１０．３ｇを得て、ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、ブタノールを用いて溶媒分配を行い、各可溶部を得た。
【００２３】
次に、ブタノール可溶部についてＳｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ＰＳＱ  １００Ｂを担体とするカラム（φ２８×５００ｍｍ）に付し、クロロホルム、メタノールを用いて溶出し、溶出順に１ａ〜１ｉの各画分を得た。
【００２４】
そして、１ｃについてメタノールを加え遠心を行い、得られた不溶部をメタノールで洗浄し、エレウテリノシドＡ（４０．０ｍｇ）を単離した。
【００２５】
また、１ｄについて、下記表１に記載のＨＰＬＣ条件による分取用ＨＰＬＣ（ＯＤＳ）に付し、エレウテリノシドＢ（２６．２ｍｇ）、エレウテリノシドＣ（３３．７ｍｇ）をそれぞれ単離した。
【表１】
2009179602.tif 000011
【００２６】
（エレウテリノシドＡ）
エレウテリノシドＡに対して高分解能ＦＡＢＭＳを行い、［Ｍ＋Ｋ］＋と推測されるｍ／ｚ４１９．１３７２のピークを観測した。この結果、分子式をＣ２１Ｈ２３Ｏ９と決定した。
【００２７】
また、エレウテリノシドＡに対して赤外吸収測定（以下「ＩＲ測定」という。）を行い、赤外吸収スペクトル（以下「ＩＲスペクトル」という。）を得た。この結果、３２２５、１６５１ｃｍ−１にそれぞれヒドロキシ基、カルボニル基に由来する吸収をそれぞれ観測した。
【００２８】
また、エレウテリノシドＡに対して紫外吸収測定（以下「ＵＶ測定」という。）を行い、紫外吸収スペクトル（以下「ＵＶスペクトル」という。）を得た。この紫外吸収測定は、メタノールを溶媒として濃度を２．０×１０−５ｍｏｌ／ｌ、セル長を１ｃｍとして行なった。この結果、３５９．０ｎｍ、２６９．０ｎｍ、２３８．０ｎｍにそれぞれ吸収ピークを有しており、芳香族化合物又は共役二重結合化合物であることが推定できた。なお、上記ピークにおけるそれぞれのモル吸収係数（ε）はそれぞれ１０３５０、３９４５０、４９３５０であった。図２に、エレウテリノシドＡにおけるＵＶスペクトルを示しておく。
【００２９】
また、エレウテリノシドＡに対し、旋光角［α］Ｄの測定を行った。この結果、旋光角は−５９．２度であり、光学活性を有することが確認できた。なお下記表２に、旋光角、高分解ＦＡＢＭＳ、ＵＶ測定、ＩＲ測定の結果を示しておく。
【表２】
2009179602.tif 000012
【００３０】
また、エレウテリノシドＡに対し、１Ｈ  ＮＭＲ及び１３Ｃ  ＮＭＲの測定も行った。この結果を下記表３、図３及び図４に示す。この結果、ナフトピロン骨格に由来するシグナル及び糖に由来するシグナルが観察された。
【表３】
2009179602.tif 000013
【００３１】
また、エレウテリノシドＡに対し、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹも求めた。このスペクトルを図５乃至図７に示す。この結果、アグリコンとしてｅｌｅｕｔｅｒｉｏｎｏｌをもち、分子内にグルコースを１分子をもつ配糖体と推定された。またＨＭＢＣスペクトルによると１’位の水素から８位の炭素にＨＭＢＣ相関を認めることができたこと及び８位炭素のケミカルシフト値（δｃ１５８．５）より、グルコースはアグリコンの８位に結合していることが判明した。なおグルコースの立体化学については、ナリンギナーゼを用いた酵素加水分解、糖部のＬ−Ｃｙｓｔｅｉｎ  ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ・ＨＣｌ反応により得られるチアゾリジン誘導体のＨＰＬＣ分析によりＤ体を決定した。また、アノマー位の立体配置に関してはアノマー水素の結合定数が７．８Ｈｚであることから、β配置と決定した。
【００３２】
以上の結果より、エレウテリノシドＡの構造を上記式（１）で示すように決定した。
【００３３】
（エレウテリノシドＢ）
エレウテリノシドＢに対して高分解能ＦＡＢＭＳを行い、［Ｍ＋Ｋ］＋と推測されるｍ／ｚ６１５．２３３６のピークを観測した。この結果、分子式をＣ２８Ｈ３９Ｏ１５と決定した。
【００３４】
また、エレウテリノシドＢに対してＩＲ測定を行い、ＩＲスペクトルを得た。この結果、３３２６ｃｍ−１にヒドロキシ基に由来する吸収をそれぞれ観測した。
【００３５】
また、エレウテリノシドＢに対してＵＶ測定を行い、ＵＶスペクトルを得た。このＵＶ測定は、メタノールを溶媒として濃度を２．０×１０−５ｍｏｌ／ｌ、セル長を１ｃｍとして行なった。この結果、３４０．０ｎｍ、３２６．０ｎｍ、３１１．０ｎｍ、２３４．０ｎｍにそれぞれ吸収ピークを有しており、芳香族化合物又は共役二重結合化合物であることが推定できた。なお、上記ピークにおけるそれぞれのモル吸収係数（ε）はそれぞれ９４５０、９６５０、９８５０、６０５００であった。図８に、エレウテリノシドＢにおけるＵＶスペクトルを示しておく。
【００３６】
また、エレウテリノシドＡに対し、旋光角［α］Ｄの測定を行った。この結果、旋光角は−２．７度であり、光学活性を有することが確認できた。なお下記表４に、旋光角、高分解ＦＡＢＭＳ、ＵＶ測定、ＩＲ測定の結果を示しておく。
【表４】
2009179602.tif 000014
【００３７】
また、エレウテリノシドＢに対し、１Ｈ  ＮＭＲ及び１３Ｃ  ＮＭＲの測定も行った。この結果を上記表３、図９及び図１０に示す。この結果、ピラノナフトキノンと２分子の糖に由来するシグナル及び糖に由来するシグナルが観察された。
【００３８】
また、エレウテリノシドＡに対し、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹも求めた。このスペクトルを図１１乃至図１３に示す。この結果、アグリコンとして４−ｈｙｄｒｏｘｙｌ  ｉｓｏｅｌｅｕｔｈｅｒｉｎの平面構造をもち、分子内にグルコースを２分子をもつ配糖体と推定された。またＨＭＢＣスペクトルによると１’’位の水素から６’位の炭素にＨＭＢＣ相関を認めることができたことから、分子内のグルコース２分子はゲンチオビオースであることが判明した。なおこれは１’位及び１’’位の結合定数がβ配置を示す８．０Ｈｚであることからも支持される。更に、１’位の水素から５位の炭素へＨＭＢＣ相関が観察されたことから、ゲンチオビオースはアグリコンの５位に結合していることが判明した。また差ＮＯＥスペクトルにより、１位のメチル基水素から３位水素、３位メチル基水素から１位水素及び４位水素へそれぞれＮＯＥ相関が観察されたことから、ピラン環の相対立体配置を決定した。
【００３９】
グルコース２分子の立体化学は、エレウテリノシドＡと同様の方法を用いて検討を行い共にＤ体と決定した。
【００４０】
以上の結果より、エレウテリノシドＢの構造を上記式（２）で示すように決定した。
【００４１】
（エレウテリノシドＣ）
エレウテリノシドＣに対して高分解能ＦＡＢＭＳを行い、［Ｍ＋Ｋ］＋と推測されるｍ／ｚ６３７．１８８７のピークを観測した。この結果、分子式をＣ２８Ｈ３８Ｏ１４Ｋと決定した。
【００４２】
また、エレウテリノシドＣに対してＩＲ測定を行い、ＩＲスペクトルを得た。この結果、３３６５ｃｍ−１にヒドロキシ基に由来する吸収をそれぞれ観測した。
【００４３】
また、エレウテリノシドＣに対しＵＶ測定を行い、ＵＶスペクトルを得た。この紫外吸収測定は、メタノールを溶媒として濃度を２．０×１０−５ｍｏｌ／ｌ、セル長を１ｃｍとして行なった。この結果、３３７．０ｎｍ、３２３．５ｎｍ、３１０．０ｎｍ、２３５．５ｎｍにそれぞれ吸収ピークを有しており、芳香族化合物又は共役二重結合化合物であることが推定できた。なお、上記ピークにおけるそれぞれのモル吸収係数（ε）はそれぞれ１０３５０、３９４５０、４９３５０であった。図１４に、エレウテリノシドＣにおけるＵＶスペクトルを示しておく。
【００４４】
また、エレウテリノシドＣに対し、旋光角［α］Ｄの測定を行った。この結果、旋光角は−５．０度であり、光学活性を有することが確認できた。なお下記表５に、旋光角、高分解ＦＡＢＭＳ、ＵＶ測定、ＩＲ測定の結果を示しておく。
【表５】
2009179602.tif 000015
【００４５】
また、エレウテリノシドＣに対し、１Ｈ  ＮＭＲ及び１３Ｃ  ＮＭＲの測定も行った。この結果を上記表３、図１５及び図１６に示す。この結果、ナフトピロン骨格に由来するシグナル及び２分子の糖に由来するシグナルが観察された。
【００４６】
また、酵素加水分解を行い、ＮＭＲ、ＭＳスペクトルデータ及び比旋光度よりアグリコンをｉｓｏｅｌｅｕｔｈｅｒｉｎと同定した。糖部は、Ｌ−Ｃｙｓｔｅｉｎ  ｍｅｔｈｙｌ  ｅｓｔｅｒ・ＨＣｌと反応させることにより得られるチアゾリジン誘導体をＨＰＬＣ分析することによりＤ−グルコースであると判明した。
【００４７】
また、エレウテリノシドＣに対し、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹも求めた。このスペクトルを図１７乃至図１９に示す。この結果、アグリコンとしてｉｓｏｅｌｅｕｔｈｅｒｉｎの平面構造をもち、分子内に糖を２分子をもつ配糖体と推定された。
【００４８】
またＨＭＢＣスペクトルによると１’位の水素から５位の炭素にＨＭＢＣ相関を認めることができたことから、ゲンチオビオースはアグリコンの５位に結合していることが判明した。なお糖のアノマー位の立体配置に関しては、アノマー水素の結合定数（Ｊ１’，２’：７．５Ｈｚ）よりβ配置と決定した。糖鎖の構造及びアグリコンへの結合位置はＨＭＢＣスペクトルより決定した。すなわち１’’位の水素から６’位の炭素に相関が認められたことから、分子内のグルコース２分子はゲンチオビオースであることが判明した。
【００４９】
以上の結果より、エレウテリノシドＣの構造を上記式（３）で示すように決定した。
【００５０】
（細胞増殖阻害活性）
次に、単離したエレウテリノシドＣについて、ヒト大腸がん細胞株３種類（ＨＣＴ１１６、ＤＬＤ１、ＳＷ４８０）及びヒト退治腎上皮細胞株である２９３Ｔ細胞（正常細胞）に対する細胞増殖阻害活性を検討した。この結果を下記表６に示す。この結果、エレウテリノシドＣはヒト大腸がん細胞株３種類に対して細胞増殖阻害活性をもち、特にＨＣＴ１１６に対して強い細胞増殖阻害活性をもつことが判明した。一方、エレウテリノシドＣは正常細胞株である２９３Ｔには細胞増殖阻害活性を有しておらず選択性を有していることが確認できた。
【表６】
2009179602.tif 000016
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明は新規化合物を有効成分とし、薬剤として産業上の利用可能性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】実施例におけるエレウテリノシドＡ、Ｂ及びＣの単離スキームの概略を示す図である。
【図２】実施例におけるエレウテリノシドＡのＵＶスペクトルである。
【図３】実施例におけるエレウテリノシドＡの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図４】実施例におけるエレウテリノシドＡの１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルである。
【図５】実施例におけるエレウテリノシドＡに関するＨＭＱＣスペクトルである。
【図６】実施例におけるエレウテリノシドＡに関するＨＭＢＣスペクトルである。
【図７】実施例におけるエレウテリノシドＡに関する１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトルである。
【図８】実施例におけるエレウテリノシドＢのＵＶスペクトルである。
【図９】実施例におけるエレウテリノシドＢの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図１０】実施例におけるエレウテリノシドＢの１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルである。
【図１１】実施例におけるエレウテリノシドＢに関するＨＭＱＣスペクトルである。
【図１２】実施例におけるエレウテリノシドＢに関するＨＭＢＣスペクトルである。
【図１３】実施例におけるエレウテリノシドＢに関する１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトルである。
【図１４】実施例におけるエレウテリノシドＣのＵＶスペクトルである。
【図１５】実施例におけるエレウテリノシドＣの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図１６】実施例におけるエレウテリノシドＣの１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルである。
【図１７】実施例におけるエレウテリノシドＣに関するＨＭＱＣスペクトルである。
【図１８】実施例におけるエレウテリノシドＣに関するＨＭＢＣスペクトルである。
【図１９】実施例におけるエレウテリノシドＣに関する１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトルである。
【図１】
2009179602.tif 000024
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
2009179602.tif 000035
【図１３】
2009179602.tif 000036
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
2009179602.tif 000039
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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