(57)【要約】      （修正有）【課題】ＳＯＣＳタンパク質（サイトカインシグナル形成のサプレッサー（ＳＯＣＳ）ファミリー）、その誘導体、それらのホモログ、アナログおよび模倣物並びにＳＯＣＳタンパク質のアゴニストおよびアンタゴニストに基づく治療薬および診断薬の提供。【解決手段】一般的には治療薬および診断薬であり、より具体的には、サイトカインにより媒介されるシグナル伝達、などのシグナル伝達を調節することができる治療効果を有する分子。従って、該分子はサイトカイン、並びに内因性または外因性分子、抗原、微生物および微生物産物、ウイルスまたはその成分、イオン、ホルモンおよび寄生体などのシグナル伝達の他のメディエーターに対する細胞の応答性を調節するのに有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列あるいは低厳格条件下において４２℃でそれとハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、該タンパク質がそのＣ−末端にＳＯＣＳボックスを含むものである核酸分子。
【請求項２】
該タンパク質がタンパク質：分子相互作用領域をさらに含むものである請求項１記載の核酸分子。
【請求項３】
該タンパク質：分子相互作用領域が該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域に位置するものである請求項１記載の核酸分子。
【請求項４】
該タンパク質：分子相互作用領域がタンパク質：ＤＮＡ結合領域またはタンパク質：タンパク質結合領域である請求項２または請求項３記載の核酸分子。
【請求項５】
該タンパク質：分子相互作用領域がＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復またはアンキリン反復の一つ以上である請求項４記載の核酸分子。
【請求項６】
該ＳＯＣＳボックスが下記のアミノ酸配列を含むものである請求項１〜請求項５いずれか１項に記載の核酸分子、
2009060903.tif 000048
上式中、Ｘ1はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi〕nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘiはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj〕nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘjはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、そして
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰである。
【請求項７】
該タンパク質がシグナル伝達を調節するものである請求項６記載の核酸分子。
【請求項８】
該シグナル伝達がサイトカインまたはホルモン、微生物または微生物産物、寄生体、抗原または他のエフェクター分子により媒介されるものである請求項７記載の核酸分子。
【請求項９】
該タンパク質がサイトカインにより媒介されるシグナル伝達を調節するものである請求項８記載の核酸分子。
【請求項１０】
該シグナル伝達がサイトカインであるＥＰＯ、ＴＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１および／またはＭ−ＣＳＦの一つ以上により媒介されるものである請求項９記載の核酸分子。
【請求項１１】
該シグナル伝達がＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＦＮ−γおよび／またはトロンボポエチンの一つ以上により媒介されるものである請求項１０記載の核酸分子。
【請求項１２】
該シグナル伝達がＩＬ−６により媒介されるものである請求項１１記載の核酸分子。
【請求項１３】
該ヌクレオチド配列が、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１８、配列番号：２１、配列番号：２５、配列番号：２９、配列番号：３６、配列番号：４１、配列番号：４４、配列番号：４６または配列番号：４８に実質的に記載されているアミノ酸配列または上にリストした配列の全部または一部に少なくとも約１５％の類似性を有するアミノ酸配列または低厳格条件下において４２℃で該核酸分子とハイブリッドを形成するヌクレオチド配列をコードするものである請求項１記載の核酸分子。
【請求項１４】
該ヌクレオチド配列が、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：２０、配列番号：２２、配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４５または配列番号：４７に実質的に記載されたものであり、または上にリストした配列のすべてまたは一部に少なくとも１５％の類似性を有するヌクレオチド配列、または低厳格条件下において４２℃で上にリストされた配列とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列である請求項１記載の核酸分子。
【請求項１５】
タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列あるいは低厳格条件下において４２℃でそれとハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、該タンパク質が下記の特性を示すものである核酸分子、
（i） そのＣ−末端領域にＳＯＣＳボックスを有し、該ＳＯＣＳボックスが下記のアミノ酸配列を含むこと、
2009060903.tif 000049
上式中、Ｘ1はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi〕nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘiはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj〕nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘjはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、そして
（ii） 該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域に、ＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復または他のタンパク質：分子相互作用ドメインの少なくとも一つを含むこと、そして
（iii） シグナル伝達を調節すること。
【請求項１６】
単離されたタンパク質またはその誘導体、ホモログまたは模倣物であって、そのＣ−末端領域にＳＯＣＳボックスを含むもの。
【請求項１７】
該タンパク質がタンパク質：分子相互作用領域をさらに含むものである請求項１６記載の単離されたタンパク質。
【請求項１８】
該タンパク質：分子相互作用領域が該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域に位置するものである請求項１７記載の単離されたタンパク質。
【請求項１９】
該タンパク質：分子相互作用領域がタンパク質：ＤＮＡ結合領域またはタンパク質：タンパク質結合領域である請求項１６または請求項１７記載の単離されたタンパク質。
【請求項２０】
該タンパク質：分子相互作用領域がＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復またはアンキリン反復の一つ以上である請求項１９記載の単離されたタンパク質。
【請求項２１】
該ＳＯＣＳボックスが下記のアミノ酸配列を含むものである請求項１６〜請求項２０いずれか１項に記載の単離されたタンパク質、
2009060903.tif 000050
上式中、Ｘ1はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi〕nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘiはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj〕nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘjはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、そして
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰである。
【請求項２２】
該タンパク質がシグナル伝達を調節するものである請求項２１記載の単離されたタンパク質。
【請求項２３】
該シグナル伝達がサイトカインまたは他の内因性分子、ホルモン、微生物または微生物産物、寄生体、抗原または他のエフェクター分子により調節されるものである請求項２２記載の単離されたタンパク質。
【請求項２４】
該タンパク質がサイトカインにより媒介されるシグナル伝達を調節するものである請求項２３記載の単離されたタンパク質。
【請求項２５】
該シグナル伝達が、サイトカインであるＥＰＯ、ＴＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１および／またはＭ−ＣＳＦの一つ以上により媒介されるものである請求項２４記載の単離されたタンパク質。
【請求項２６】
該シグナル伝達がＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＦＮ−γおよび／またはトロンボポエチンの一つ以上により媒介されるものである請求項２５記載の単離されたタンパク質。
【請求項２７】
該シグナル伝達がＩＬ−６により媒体されるものである請求項２６記載の単離されたタンパク質。
【請求項２８】
該タンパク質が、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１８、配列番号：２１、配列番号：２５、配列番号：２９、配列番号：３６、配列番号：４１、配列番号：４４、配列番号：４６または配列番号：４８に実質的に記載されているアミノ酸配列または上にリストした配列の全部または一部に少なくとも約１５％の類似性を有するアミノ酸配列を含むものである請求項１６記載の単離されたタンパク質。
【請求項２９】
該タンパク質が、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：２０、配列番号：２２、配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４５または配列番号：４７に実質的に記載されたヌクレオチド配列、または上にリストした配列の全部または一部に少なくとも１５％の類似性を有するヌクレオチド配列、または低厳格条件下において４２℃で上にリストされた配列とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列によりコードされるものである請求項１６記載の単離されたタンパク質。
【請求項３０】
単離されたタンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物てあって、下記の特性を有するもの、
（i） そのＣ−末端にＳＯＣＳボックスを含み、該ＳＯＣＳボックスが下記のアミノ酸配列を含むものであること、
2009060903.tif 000051
上式中、Ｘ1はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi〕nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘiはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj〕nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘjはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、そして
（ii） 該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域にＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復または他のタンパク質：分子相互作用ドメインの少なくとも一つを含むこと、および
（iii） シグナル伝達を調節すること。
【請求項３１】
細胞内でＳＯＣＳタンパク質のレベルを調節する方法であって、ＳＯＣＳ遺伝子を含む細胞を、該ＳＯＣＳタンパク質のレベルを調節するのに十分な時間および条件の下で、ＳＯＣＳ遺伝子発現のまたはＳＯＣＳタンパク質活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含んで成る方法。
【請求項３２】
ＳＯＣＳ遺伝子を含む細胞内でシグナル伝達を調節する方法であって、該細胞をシグナル伝達を調節するのに十分な時間、ＳＯＣＳ遺伝子発現のまたはＳＯＣＳタンパク質活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含んで成る方法。
【請求項３３】
少なくとも一つの細胞がＳＯＣＳ遺伝子を保持する場合の細胞間における相互作用に影響を与える方法であって、該ＳＯＣＳ遺伝子を保持する細胞を、シグナル伝達を調節するのに十分な時間、ＳＯＣＳ遺伝子発現のまたはＳＯＣＳタンパク質活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程含んで成る方法。
【請求項３４】
該シグナル伝達がサイトカイン、ホルモン、微生物または微生物産物、寄生体、抗原または他のエフェクター分子により媒介されるものである請求項３１〜請求項３３いずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
該サイトカインがＥＰＯ、ＴＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１および／またはＭ−ＣＳＦの一つ以上である請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
該サイトカインがＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＦＮ−γおよび／またはトロンボポエチンの一つ以上である請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
該サイトカインがＩＬ−６である請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
該ＳＯＣＳ遺伝子が下記のアミノ酸配列を含むＳＯＣＳボックスを有するタンパク質をコードするものである請求項３１〜３７いずれか１項に記載の方法、
2009060903.tif 000052
上式中、Ｘ1はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi〕nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘiはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj〕nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘjはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、そして
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰである。
【請求項３９】
該ＳＯＣＳ遺伝子が、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：２０、配列番号：２２、配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４５または配列番号：４７から選択されるヌクレオチド配列を含むものである請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
該ＳＯＣＳ遺伝子が、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１８、配列番号：２１、配列番号：２５、配列番号：２９、配列番号：３６、配列番号：４１、配列番号：４４、配列番号：４６または配列番号：４８に実質的に記載されているアミノ酸配列を含むタンパク質をコードするものである請求項３８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は一般的には治療薬および診断薬に関する。より具体的には、本発明はサイトカインに媒介されるシグナル伝達、これに限定されないが、などのシグナル伝達を調節することができる治療効果を有する分子を提供する。本発明の分子は、従って、サイトカイン並びに、内因性または外因性分子、抗原、微生物および微生物産物、ウイルスまたはその成分、イオン、ホルモンおよび寄生体などのシグナル伝達の他のメディエーター、に対する細胞の応答性を調節する場合に有用である。
【０００２】
本発明者らにより本出願書類で参照された文献の詳細は本明細書の末尾に集めてある。本出願書類で参照されたヌクレオチド配列およびアミノ酸配列に対する配列番号（SEQ ID NOs.)は文献の後に定義してある。配列番号の要約は表１に示す。
【０００３】
本明細書および請求の範囲を通じて、論旨から別の意味に解すべき場合を除き、「コンプライズ（comprise) （含む、含んで成る）」という語、あるいは「コンプライジーズ(comprises) 」または「コンプライジング(comprising)」などのその変形は、述べられている実体または実体群の含有を意味するが、他の如何なる実体または実体群の排除をも意味するものではないと理解されるべきである。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
細胞は、次に将来の挙動に影響を与える生理学的および生化学的プロセスを調節するためその環境を連続的に監視する。しばしば、その環境との細胞の最初の相互作用は細胞質膜上に発現する受容体を介して生ずる。これらの受容体の活性化は、内因性リガンド（サイトカインなどの）との結合であろうと外因性リガンド（抗原など）との結合であろうと、その膜から細胞質を通って核に至る生化学的カスケードの引金となる。
【０００５】
内因性リガンドの中では、サイトカインは特に重要な多様なグループを代表する。サイトカインは体内の多様な細胞の生存、増殖、分化および機能を調節するタンパク質である〔ニコラ、1994（非特許文献１）〕。造血に関するサイトカインは共通して４個のα−ヘリックス束構造を持っており、その大部分は細胞表面受容体であるタイプＩおよびタイプIIサイトカイン受容体の構造的に関連するファミリーと相互作用する〔バザン、1990（非特許文献２）、スプラング、1993（非特許文献３）〕。すべての場合に、リガンド−誘導受容体凝集は細胞内のシグナル伝達カスケードを開始させる際の決定的事件であるように見える。例えば、あるサイトカイン、成長ホルモン、エリスロポエチン（Ｅｐｏ）および顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）は、受容体のホモダイマー化の引金となる一方、他のサイトカインでは受容体のヘテロダイマー化またはヘテロトリマー化が最重要である。後者の場合には、幾つかのサイトカインが共通の受容体サブユニットを共有しており、これに基づいて細胞内活性化および類似の生物学的効果の類似のパターンを持つ三つのサブファミリーにグループ分けすることができる〔ヒルトン、1994（非特許文献４）〕。インターロイキン−３（ＩＬ−３）、ＩＬ−５および顆粒球−マクロファージ・コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は共通のβ−受容体サブユニット（βｃ）を使用する。そして各サイトカインは顆粒球およびマクロファージの産生および機能的活性を刺激する。ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、およびＩＬ−１５はそれぞれ共通のγ−鎖（γｃ）を使用するが、ＩＬ−４およびＩＬ−１３はもう一つのγ−鎖（γ’ｃすなわちＩＬ−１３受容体α−鎖）を共有する。これらのサイトカインはそれぞれリンパ系における免疫獲得の調節に重要な役割を果たしている。最後に、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）およびカルジオトロフィン（ＣＴ）は受容体サブユニットｇｐ１３０を共有している。これらのサイトカインはそれぞれ高度に多面的で、造血系の内側および外側の両方で効果を有している〔ニコラ、1994（非特許文献１）〕。
【０００６】
上記の場合のすべてにおいて、各受容体複合体の少なくとも一つのサブユニットはその細胞質テールにボックス１およびボックス２と呼ばれる保存された配列要素を含んでいる〔ムラカミ、1991（非特許文献５）〕。ボックス１は酸性のボックス２要素よりも膜貫通ドメインにより近位に位置するプロリン−リッチなモチーフである。このボックス１領域はＪＡＫ（Janus キナーゼ) と呼ばれる細胞質チロシンキナーゼの一群に対する結合部位として働く。リガンド−誘発受容体ダイマー化は、交差リン酸化により関連するＪＡＫの触媒活性を増加させるのに役立つ。活性化されたＪＡＫは、次いで、受容体それ自体を含む幾つかの基質をチロシン・リン酸化する。次いで、その受容体上の特定のホスホチロシン残基はＳＨ２−含有タンパク質、その中で最も性質が明らかになったものは「シグナル伝達体かつ転写アクチベーター（ＳＴＡＴｓ）」およびアダプタータンパクであるｓｈｃである、に対するドッキング部位として働く。このＳＴＡＴｓは次いで、おそらくＪＡＫにより、チロシン上にリン酸化され、受容体から解離し、そして一つのＳＴＡＴのＳＨ２ドメインと他のＳＴＡＴのホスホチロシン残基との相互作用により、ホモダイマーかまたはヘテロダイマーかを形成する。次いで、ＳＴＡＴダイマーは核に移行し、そこで特定のサイトカイン−応答性のプロモーターに結合しそして転写を活性化する〔ダーネル, 1994（非特許文献６）、イーレ, 1995（非特許文献７）、イーレ, 1995（非特許文献８）〕。別の経路で、チロシンリン酸化されたｓｈｃは別のＳＨ２ドメインを含むタンパク、Ｇｒｂ−２と相互作用し、最後にＭＡＰキナーゼファミリーのメンバーの活性化そして次いでｆｏｓやｊｕｎなどの転写因子の活性化をもたらす〔サトウ, 1993（非特許文献９）、カトラー, 1993（非特許文献１０）〕。受容体チロシンキナーゼに結合するサイトカインはＳＴＡＴｓおよびＭＡＰキナーゼファミリーのメンバーを活性化することもできるから、これらの経路はサイトカイン受容体ファミリーのメンバーに至る唯一のものではない〔デイビッド, 1996（非特許文献１１）、リーマン, 1996、シュアル, 1993（非特許文献１２）、サトー, 1993（非特許文献９）、カトラー, 1993（非特許文献１０）〕。
【０００７】
細胞質チロシンキナーゼのＪＡＫファミリーの４個のメンバーはＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２と記され、それぞれサイトカイン受容体サブユニットの特定のサブセットに結合する。６個のＳＴＡＴｓが記述され（ＳＴＡＴ１からＳＴＡＴ６まで）、そしてこれらも別々のサイトカイン／受容体コンプレックスによって活性化される。例えば、ＳＴＡＴ１はインターフェロン系に機能的に特異的であるように見え、ＳＴＡＴ４はＩＬ−１２に特異的であるように見え、一方ＳＴＡＴ６はＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的であるように見える。こうして、共通の活性化機構にもかかわらず、ある程度のサイトカイン特異性がＪＡＫおよびＳＴＡＴｓの使用により達成することができる〔チーアフェルダー，1996（非特許文献１３）、カプラン,1996（非特許文献１４、１５） 、タケダ,1996（非特許文献１６） 、シモダ,1996（非特許文献１７） 、メラズ,1996（非特許文献１８） 、ダービン,1996（非特許文献１９） 〕。
【０００８】
上記のものに加えて、これらの経路の他の活性化機構が明らかに存在する。例えば、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路はｓｈｃ−誘導経路とは無関係にＭＡＰキナーゼを活性化することができ〔デイビッド，1995（非特許文献２０）〕そしてＳＴＡＴｓそれ自体は受容体に結合することなく、おそらくＪＡＫとの直接の相互作用により、活性化されることが可能である〔グプタ，1996（非特許文献２１）〕。逆に、ＳＴＡＴｓの完全活性化はＪＡＫの作用の他にＭＡＰキナーゼの作用を必要とする〔デイビッド，1995（非特許文献２０）、ウエン, 1995（非特許文献２２）〕。
【０００９】
これらのシグナル形成経路の活性化はより良く理解されるようになっているが、これらの経路の調節は、負または正のフィードバックループの採用を含め、ほとんど知られていない。このことは重要である。なぜなら、細胞が一旦刺激に対し応答を始めれば、その応答の強さや期間を調節することそしてシグナル伝達を切断することが決めてとなるからである。状況が要求するときは、応答の強度を全身的にあるいは局部的ですら増加させることも同様に望まれるのである。
【００１０】
本発明に至る研究において、本発明者らはシグナル伝達の負の調節体を単離しようと努力した。今や、本発明者らはシグナル形成の調節体として作用することができる新規なタンパク質ファミリーを確認するに至った。この新規なタンパク質のファミリーは、最初に確認されたＳＯＣＳ分子がサイトカイン−媒介シグナル形成を抑制する能力を有していたことに基づいて、サイトカインシグナル形成のサプレッサー（ＳＯＣＳ）ファミリーと定義される。しかしながら、ＳＯＣＳファミリーのメンバーすべてがサプレッサー機能を必ずしも共有する必要はなく、またサイトカインに媒介されるシグナル形成のみを標的とする必要もない。ＳＯＣＳファミリーはＳＯＣＳボックスと呼ばれるＣ−末端モチーフのＮ末端に位置するアミノ酸配列モチーフに基づいて少なくとも三つのクラスのタンパク質分子を含んでいる。調節分子のこの新規なファミリーの確認により、シグナル伝達、従ってサイトカインを含むある範囲の分子に対する細胞の応答性、を調節することができるある範囲のエフェクター分子または調節分子の形成が可能となる。従って、本発明はＳＯＣＳタンパク質、誘導体、それらのホモログ、アナログおよび模倣物並びにＳＯＣＳタンパク質のアゴニストおよびアンタゴニストに基づく治療薬および診断薬を提供する。
【非特許文献１】ニコラ，エヌ．エイ．(1994). サイトカインおよびそれらの受容体へのガイドブック、Oxford University Press: Oxford.
【非特許文献２】バザン，ジェイ．エフ．(1990), [Review] Immunology Today 11, 350-4 。
【非特許文献３】スプラング，エス．アール．およびバザン，ジェイ．エフ．(1993) Curr. Opin. Structural Biol. 3, 815-827。
【非特許文献４】ヒルトン, ディー. ジェイ．(1994)  サイトカイン受容体入門、8-16頁、ニコラ編、「サイトカインおよびそれらの受容体へのガイドブック」Oxford University Press 、Oxford。
【非特許文献５】ムラカミ, エム. 、ナラサキ, エム. 、ヒビ, エム. 、ヤワタ，エイチ. ヤスカワ, ケイ. 、ハマグチ, エム. 、タガ, ティー. およびキシモト, ティー. (1991)  Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 11349-11353。
【非特許文献６】ダーネル, ジェイ. ジューニア、カー，アイ．エム．およびスターク，ジー．アール．(1994) Science 264, 1415-21 。
【非特許文献７】イーレ, ジェイ. エヌ. (1995)  Nature 337, 591-4 。
【非特許文献８】イーレ, ジェイ. エヌ. ウイトゥーン，ビー．エイ．、クエレ，エフ．ダブリュー．、ヤマモト，ケイ．およびシルベノイネン，オー． (1995)  Annual Review of Immunology 13, 369-98 。
【非特許文献９】サトー，エヌ．、サカマキ，ケイ．、テラダ，エヌ．、アライ，ケイ．およびミヤジマ，エイ．(1993). Embo Journal 12, 4181-9 。
【非特許文献１０】カトラー，アール．エル．、リュー，エル．、ダーメン，ジェイ．エフ．およびクリスタル，ジー．(1993) Journal of Biological Chemistrty  268, 21463-5 。
【非特許文献１１】デイビッド，エム．、ウオング，エル．、フラベル，アール．、トンプソン，エス．エイ．、ウエルズ，エイ．、ラーナー，エイ．シー．およびジョンソン，ジー．アール．(1996). Journal of Biological Chemistry 271, 9185-8 。
【非特許文献１２】シュアル，ケイ．、ジーミーキー，エイ．、ウイルクス，エイ．エフ．、ハーパー，エイ．ジー．、サドウスキー，エイチ．ビー．、ギルマン，エム．ゼット．およびダーネル，ジェイ．イー．(1993). Nature 366, 580-3 。
【非特許文献１３】チールフェルダー，ダブリュー．イー．、バンドーセン，ジェイ．エム．、ヤマモト，ケイ．、トリップ，アール．エイ．、サラワー，エス．アール．、カールソン、アール．ティー．、サングスター，エム．ワイ．、ビグナリ，ディー．ディー．エイ．、ドハーティ，ピー．シー．、グロスベルド，ジー．シー．およびイーレ，ジェイ．エヌ．(1996). Nature 382, 171-174 。
【非特許文献１４】カプラン，エム．エイチ．、シンドラー，ユー．、スマイリー，エス．ティー．およびグルスビ，エム．ジェイ．(1996a) Immunity 4, 313-9 。
【非特許文献１５】カプラン，エム．エイチ．、ホエイ，ティー．およびグルスビ，エム．ジェイ．(1996b)  Nature 382, 174-179。
【非特許文献１６】タケダ，ケイ．、タナカ，ティー．、シー，ダブリュー．、マツモト，エム．、ミナミ，エム．、カシワラ，エス．、ナカニシ，ケイ．、ヨシダ，エヌ．、キシモト，ティー．およびアキラ，エス．(1996) Nature 380, 627-30 。
【非特許文献１７】シモダ, ケイ. 、バン・デュールセン, ジェイ. 、サングスター, ダブリュー. ワイ. 、サラワー, エス. アール. 、カールソン, アール. ティー. 、トリップ, アール. エイ. 、チュー, シー. 、クエル, エフ. ダブリュー. 、ノサカ, ティー. ビグナリ, ディー. エイ. 、ドハーティ, ピー. シー. 、グロスベルド, ジー. 、ポール, ダブリュー. イー. およびイーレ, ジェイ. エヌ. (1996) Nature 380, 630-3。
【非特許文献１８】メラツ，エム．エイ．、ホワイト，ジェイ．エム．、シーハン，ケイ．シー．、バッハ，イー．エイ．、ロディグ，エス．ジェイ．ディーグ，エイ．エス．、カプラン，ディー．エイチ．、リリー，ジェイ．ケイ．、グリーンルンド，エイ．シー．、キャンベル，ディー．、カーバー−ムア，ケイ．、デゥボイス，アール．エヌ．、クラーク，アール．アグエト，エム．およびシュライバー，アール．ディー．(1996) Cell 84, 431-42。
【非特許文献１９】ダーバン，ジェイ．イー．、ハッケンミラー，アール．、シモン，エム．シーおよびレビ，ディー．イー．(1996). Cell 84, 443-50 。
【非特許文献２０】デイビッド，エム．、ペトリコイン  イー３、ベンジャミン，シー．、パイン，アール．、ウエーバー，エム．ジェイ．およびラーナー，エイ．シー．(1995). Science 269, 1721-3 。
【非特許文献２１】グプタ，エス．、ヤン，エイチ．、ウォング，エル．エイチ．、ラルフ，エス．、クロリュウスキー，ジェイ．およびシンドラー，シー．(1996) Embo Journal 15, 1075-84 。
【非特許文献２２】ウエン，ゼット、ゾング，ゼットおよびダーネル，ジェイ．ジューニア (1995)  Cell 82, 241-50。
【発明の開示】
【００１１】
発明の概要
本発明はとりわけ、ＳＯＣＳファミリータンパク質のメンバーをコードする核酸分子並びにタンパク質それ自体を提供する。本明細書では以下に「ＳＯＣＳ」と言及するときは、ＳＯＣＳファミリーのいずれかまたはすべてのメンバーを指す。特定のＳＯＣＳ分子は、例えば、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２およびＳＯＣＳ３などのように数値で規定する。ＳＯＣＳをそれから取得した種は１文字略号の前書きにより示され、「ｈ」はヒト、「ｍ」はマウスそして「ｒ」はラットである。従って、「ｍＳＯＣＳ１」は動物マウス由来の特定のＳＯＣＳである。本明細書で「ＳＯＣＳ」と言及するときは、このタンパクがサイトカインにより媒介されるシグナル伝達を単に抑制することを意味するのではない。この分子はホルモンまたは他の内因性または外因性分子、抗原、微生物および微生物産物、ウイルスまたはその成分、イオン、ホルモンおよび寄生体などの他のエフェクターにより媒介されるシグナル伝達を調節しうるからである。「調節する」という用語は上位調節、下位調節並びに特定レベルの維持を包含する。
【００１２】
本発明の一つの側面は、タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列または低厳格条件下で４２℃で該タンパク質とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、該タンパク質がそのＣ−末端領域にＳＯＣＳボックスを含むものである核酸分子を提供する。
【００１３】
本発明の別の側面は、タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列または低厳格条件下で４２℃で該タンパク質とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、該タンパク質がそのＣ−末端領域におけるＳＯＣＳボックスおよびタンパク質：分子相互作用領域を含むものである核酸分子を提供する。
【００１４】
本発明のさらに別の側面は、タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列または低厳格条件下で４２℃で該タンパク質とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、該タンパク質がＣ−末端領域およびＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域に位置するタンパク質：分子相互作用領域を含むものである核酸分子に関する。
【００１５】
このタンパク質：分子相互作用領域はタンパク質：ＤＮＡ結合領域またはタンパク質：タンパク質結合領域であることが好ましい。
【００１６】
本発明のさらに別の側面は、タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列または低厳格条件下で４２℃で該タンパク質とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、該タンパク質がＣ−末端領域におけるＳＯＣＳボックスおよび該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端におけるＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復またはアンキリン反復の一つ以上を含むものである核酸分子を提供する。
【００１７】
本発明のさらに一層別の側面は、タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列または低厳格条件下で４２℃で該タンパク質とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、該タンパク質がそのＣ−末端領域にＳＯＣＳボックスを含み、該ＳＯＣＳボックスが下記のアミノ酸配列、
2009060903.tif 000002
上式中、Ｘ1 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2 はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3 はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8 はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9 はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘi はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘj はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
およびＳＯＣＳボックスのＮ−末端のＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復の一つ以上、これらに限定されないが、などのタンパク質：分子相互作用領域を含むものである核酸分子に関する。
【００１８】
本発明の別の側面は、タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列または低厳格条件下で４２℃で該タンパク質とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、該タンパク質が下記の特性を示すものである核酸分子に関する、
(i)   下記のアミノ酸配列を有するＣ−末端領域におけるＳＯＣＳボックスを含むこと、
2009060903.tif 000003
上式中、Ｘ1 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2 はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3 はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8 はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9 はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘi はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘj はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、および
【００１９】
（ii)   ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域にＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復または他のタンパク質：分子相互作用ドメインの少なくとも一つを含むこと。
このＳＯＣＳ分子はサイトカインまたはホルモンまたは他の内因性または外因性分子、微生物または微生物産物、抗原または寄生体からなどのシグナル伝達を調節することが好ましい。
このＳＯＣＳ分子はサイトカインにより媒介されるシグナル伝達を調節することがより一層好ましい。
【００２０】
本発明のさらに別の側面は、タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列または低厳格条件下で４２℃で該タンパク質とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、該タンパク質が下記の特性を示すものである核酸分子に関する、
(i)   シグナル伝達を調節することができること、
(ii)  そのＣ−末端領域に下記のアミノ酸配列を有するＳＯＣＳボックスを含むこと、
2009060903.tif 000004
上式中、Ｘ1 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2 はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3 はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8 はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9 はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘi はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘj はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、および
【００２１】
(iii)   該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域にＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復または他のタンパク質：分子相互作用ドメインの少なくとも一つを含むこと。
このシグナル伝達はＥＰＯ、ＴＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１および／またはＭ−ＣＳＦの一つ以上などのサイトカインによって媒介されるものであることが好ましい。
このシグナル伝達はインターロイキン６（ＩＬ−６）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、インターフェロン（ＩＦＮ）−γおよび／またはトロンボポエチンの一つ以上により媒介されるものであることが好ましい。
このシグナル伝達はＩＬ−６により媒介されるものであることが好ましい。
【００２２】
特に好ましい核酸分子としては、配列番号：３（ｍＳＯＣＳ１）、配列番号：５（ｍＳＯＣＳ２）、配列番号：７（ｍＳＯＣＳ３）、配列番号：９（ｈＳＯＣＳ１）、配列番号：１１（ｒＳＯＣＳ１）、配列番号：１３（ｍＳＯＣＳ４）、配列番号：１５および配列番号：１６（ｈＳＯＣＳ４）、配列番号：１７（ｍＳＯＣＳ５）、配列番号：１９（ｈＳＯＣＳ５）、配列番号：２０（ｍＳＯＣＳ６）、配列番号：２２および配列番号：２３（ｈＳＯＣＳ６）、配列番号：２４（ｍＳＯＣＳ７）、配列番号：２６および配列番号：２７（ｈＳＯＣＳ７）、配列番号：２８（ｍＳＯＣＳ８）、配列番号：３０（ｍＳＯＣＳ９）、配列番号：３１（ｈＳＯＣＳ９）、配列番号：３２（ｍＳＯＣＳ１０）、配列番号：３３および配列番号：３４（ｈＳＯＣＳ１０）、配列番号：３５（ｈＳＯＣＳ１１）、配列番号：３７（ｍＳＯＣＳ１２）、配列番号：３８および配列番号：３９（ｈＳＯＣＳ１２）、配列番号：４０（ｍＳＯＣＳ１３）、配列番号：４２（ｈＳＯＣＳ１３）、配列番号：４３（ｍＳＯＣＳ１４）、配列番号：４５（ｍＳＯＣＳ１５）および配列番号：４７（ｈＳＯＣＳ１５）に実質的に記載されたヌクレオチド配列、または上に列挙された配列のいずれかのすべてまたは一部の領域に少なくとも約１５％の類似性を有するヌクレオチド配列、または低厳格条件下で４２℃で上に列挙された配列のいずれか一つとハイブリッドを形成することができる核酸分子が挙げられる。
【００２３】
本発明の別の側面はそのＣ−末端領域にＳＯＣＳボックスを含むタンパク質または誘導体、それらのホモログ、アナログまたは模倣物に関する。
【００２４】
本発明のさらに別の側面は、そのＣ−末端領域におけるＳＯＣＳボックスおよびタンパク質：分子相互作用領域を含むタンパク質または誘導体、それらのホモログ、アナログまたは模倣物に関する。
【００２５】
本発明のさらに一層別の側面は該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域に位置する相互作用領域を含むタンパク質または誘導体、それらのホモログ、アナログまたは模倣物を提供する。
【００２６】
このタンパク質：分子相互作用領域はタンパク質：ＤＮＡ結合領域またはタンパク質：タンパク質結合領域であることが好ましい。
【００２７】
本発明の別の側面は、そのＣ−末端領域におけるＳＯＣＳボックスおよび該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端にＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復またはアンキリン反復を含むタンパク質または誘導体、それらのホモログ、アナログまたは模倣物に関する。
【００２８】
本発明のさらに別の側面は下記の特性を示すタンパク質または誘導体、それらのホモログ、アナログまたは模倣物を提供する、
(i)   下記のアミノ酸配列を有するＳＯＣＳボックスをそのＣ−末端領域に含むこと、
2009060903.tif 000005
上式中、Ｘ1 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2 はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3 はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8 はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9 はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘi はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘj はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、および
【００２９】
(ii)   該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域にＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復または他のタンパク質：分子相互作用ドメインの少なくとも一つを含むこと。
このタンパク質はサイトカインにより媒介されるシグナル伝達などのシグナル伝達を調節するものであることが好ましい。
好ましいサイトカインとしては、ＥＰＯ、ＴＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１および／またはＭ−ＣＳＦが挙げられる。
特に好ましいサイトカインはＩＬ−６である。
【００３０】
本発明のさらに別の側面は下記の特性を示すタンパク質または誘導体、それらのホモログ、アナログまたは模倣物を提供する、
(i)   サイトカインにより媒介されるシグナル伝達などのシグナル伝達を調節することができること、
(ii)  下記のアミノ酸配列を有するＳＯＣＳボックスをそのＣ−末端領域に含むこと、
2009060903.tif 000006
上式中、Ｘ1 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2 はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3 はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8 はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9 はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘi はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘj はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、および
【００３１】
(iii)   該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域にＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復または他のタンパク質：分子相互作用ドメインの少なくとも一つを含むこと。
特に好ましいＳＯＣＳタンパク質としては、配列番号：４（ｍＳＯＣＳ１）、配列番号：６（ｍＳＯＣＳ２）、配列番号：８（ｍＳＯＣＳ３）、配列番号：１０（ｈＳＯＣＳ１）、配列番号：１２（ｒＳＯＣＳ１）、配列番号：１４（ｍＳＯＣＳ４）、配列番号：１８（ｍＳＯＣＳ５）、配列番号：２１（ｍＳＯＣＳ６）、配列番号：２５（ｍＳＯＣＳ７）、配列番号：２９（ｍＳＯＣＳ８）、配列番号：３６（ｈＳＯＣＳ１１）、配列番号：４１（ｍＳＯＣＳ１３）、配列番号：４４（ｍＳＯＣＳ１４）、配列番号：４６（ｍＳＯＣＳ１５）および配列番号：４８（ｈＳＯＣＳ１５）に実質的に記載されたアミノ酸配列または上に列挙された配列のいずれか一つのすべてまたは一部の領域に少なくとも１５％の類似性を有するアミノ酸配列が挙げられる。
【００３２】
本発明の別の側面は細胞中のＳＯＣＳタンパク質のレベルを調節する方法であって、ＳＯＣＳ遺伝子を含む細胞を該ＳＯＣＳタンパク質のレベルを調節するのに十分な時間および条件の下でＳＯＣＳ遺伝子の発現またはＳＯＣＳタンパク質の活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含む方法に関する。
【００３３】
本発明の関連する側面はＳＯＣＳ遺伝子を含む細胞中でのシグナル伝達を調節する方法であって、シグナル伝達を調節するのに十分な時間、該細胞をＳＯＣＳ遺伝子の発現またはＳＯＣＳタンパク質の活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含む方法を提供する。
【００３４】
本発明のさらに関連する側面は、少なくとも一つの細胞がＳＯＣＳ遺伝子を保持する細胞の間の相互作用に影響を与える方法であって、ＳＯＣＳ遺伝子を保持する該細胞をシグナル伝達を調節するのに十分な時間ＳＯＣＳ遺伝子の発現またはＳＯＣＳタンパク質の活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含んでなる方法に関する。
【００３５】
本発明によれば、〔Ｘi 〕n および〔Ｘj 〕n におけるｎは、１〜５０である場合に加えて、１〜３０、１〜２０、１〜１０および１〜５である場合もあり得る。
本明細書で言及された配列番号の概要は表１に示す。
【００３６】
【表１】
2009060903.tif 000007
2009060903.tif 000008
2009060903.tif 000009
アミノ酸残基を記述するために１文字略号および３文字略号が用いられる。これらは表２に概要を示す。
【００３７】
【表２】
2009060903.tif 000010
【００３８】
好ましい態様の詳細な説明
本明細書はシグナル伝達のモジュレーターの新規なファミリーを提供する。このファミリーの最初のメンバーがサイトカインのシグナル形成を抑制したので、このファミリーは「サイトカインシグナル形成のサプレッサー」、「ＳＯＣＳ」のファミリーと呼ばれる。このＳＯＣＳファミリーは「ＳＯＣＳボックス」と呼ばれるＣ−末端ドメインの存在により定義される。ＳＯＣＳ分子の異なるクラスはＳＯＣＳボックスのＮ−末端に一般に位置するがそこだけではない一つのモチーフであって、タンパク質：ＤＮＡまたはタンパク質：タンパク質の相互作用などのタンパク質：分子相互作用に関与するモチーフにより規定される。特に好ましいモチーフはＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復およびアンキリン反復から選ばれるものである。
【００３９】
ＷＤ−４０反復は元はＧ−プロテインのβ−サブユニット中で認識された。ＷＤ−４０反復はβ−プロペラ−様構造を形成するように見え、タンパク質−タンパク質相互作用に関与することができる。アンキリン反復は元は細胞骨格タンパク質アンキリン中で認識された。
【００４０】
ＳＯＣＳファミリーのメンバーは幾つかの手段によって同定することができる。例えば、ＳＯＣＳ１〜ＳＯＣＳ３はサイトカインにより媒介されるシグナル伝達を抑制するそれらの能力により、従って活性に基づいて同定された。ＳＯＣＳ４〜ＳＯＣＳ１５はＳＯＣＳボックスのレベルで類似性を示すヌクレオチド配列として同定された。
【００４１】
ＳＯＣＳボックスはＳＯＣＳ分子のＣ−末端領域に位置する保存されたモチーフである。本発明によれば、ＳＯＣＳボックスのアミノ酸配列は下記のものである、
2009060903.tif 000011
上式中、Ｘ1 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2 はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3 はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8 はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9 はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘi はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘj はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、および
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰである。
【００４２】
上記のようにそして本発明によれば、ＳＯＣＳタンパク質はＳＯＣＳボックスのＮ−末端に位置するＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復およびアンキリン反復、これらに限定されないが、などのタンパク質：分子相互作用領域の存在に基づいて別々のクラスに分けられる。後者の３ドメインはタンパク質：タンパク質相互作用ドメインである。
【００４３】
ＳＯＣＳタンパク質を含むＳＨ２の例としては、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ９、ＳＯＣＳ１１およびＳＯＣＳ１４が挙げられる。ＷＤ−４０反復を含むＳＯＣＳの例としては、ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ６およびＳＯＣＳ１５が挙げられる。アンキリン反復を含むＳＯＣＳの例としては、ＳＯＣＳ７、ＳＯＣＳ１０およびＳＯＣＳ１２が挙げられる。
【００４４】
本発明はとりわけ、ＳＯＣＳタンパク質、精製された天然に生ずるＳＯＣＳタンパク質およびＳＯＣＳタンパク質の組換え型をコードする核酸分子、並びにＳＯＣＳタンパク質の活性またはＳＯＣＳ遺伝子の発現を調節することによりシグナル伝達を調節する方法を提供する。シグナル伝達はサイトカインにより媒介されるものであることが好ましい。このようなサイトカインの例としては、ＥＰＯ、ＴＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１および／またはＭ−ＣＳＦが挙げられる。特に好ましいサイトカインとしては、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＦＮ−γおよび／またはトロンボポエチンが挙げられる。
【００４５】
従って、本発明の一つの側面は、タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列、または低厳格条件下で４２℃でそれとハイブリッド形成をすることができるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子であって、該タンパク質がそのＣ−末端領域にＳＯＣＳボックスを含み、そしてＳＯＣＳボックスのＮ−末端のタンパク質：分子相互作用ドメインを選択的に含むものである核酸分子を提供する。
【００４６】
このタンパク質：分子相互作用ドメインはタンパク質：ＤＮＡまたはタンパク質：タンパク質相互作用ドメインであることが好ましい。このタンパク質：分子相互作用ドメインはＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復の一つであることが最も好ましい。
【００４７】
上記のように、主体であるＳＯＣＳはサイトカインにより媒介されるシグナル伝達を調節することが好ましい。しかしながら、本発明は他の内因性または外因性分子、抗原、微生物および微生物産物、ウイルスまたはその成分、イオン、ホルモンおよび寄生体により媒介されるなどの他のエフェクターにより媒介されるシグナル伝達を調節するＳＯＣＳ分子にまで及ぶ。この論旨での内因性分子はＳＯＣＳ分子を保持する細胞内で産生される分子である。外因性分子は他の細胞により産生されまたはその身体に導入される。
【００４８】
この核酸分子またはＳＯＣＳタンパク質は単離された形または純粋な形であることが好ましい。「単離された」および「精製された」という用語は、分子が他の材料から取り出され少なくとも１回の精製工程を受けていることを意味する。
【００４９】
この核酸分子は単離された形であり、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡなどのＤＮＡであることが好ましい。このＤＮＡは天然に生ずるＳＯＣＳと同じアミノ酸配列をコードする、あるいはこのＳＯＣＳは一つ以上のアミノ酸の置換、欠失および／または付加を含むことができる。このヌクレオチド配列はゲノムのコード配列（エキソンおよびイントロンを含む）に対応することができ、またはゲノム遺伝子から転写されたｍＲＮＡからのｃＤＮＡのヌクレオチド配列に対応することができ、あるいはそれはそれに対する一つ以上のヌクレオチドの置換、欠失および／または付加を含むことができる。
【００５０】
好ましい態様において、この核酸分子はＳＯＣＳタンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチドの配列を含むものであって、該ＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列が配列番号：４（ｍＳＯＣＳ１）、配列番号：６（ｍＳＯＣＳ２）、配列番号：８（ｍＳＯＣＳ３）、配列番号：１０（ｈＳＯＣＳ１）、配列番号：１２（ｒＳＯＣＳ１）、配列番号：１４（ｍＳＯＣＳ４）、配列番号：１８（ｍＳＯＣＳ５）、配列番号：２１（ｍＳＯＣＳ６）、配列番号：２５（ｍＳＯＣＳ７）、配列番号：２９（ｍＳＯＣＳ８）、配列番号：３６（ｈＳＯＣＳ１１）、配列番号：４１（ｍＳＯＣＳ１３）、配列番号：４４（ｍＳＯＣＳ１４）、配列番号：４６（ｍＳＯＣＳ１５）および配列番号：４８（ｈＳＯＣＳ１５）から選択されるものであり、または該核酸分子はリストされた配列に対する１個または多重のアミノ酸置換、欠失および／または付加を持つアミノ酸をコードするものであり、または低厳格条件下で４２℃でその核酸分子とハイブリッド形成をすることができるヌクレオチド配列である。
【００５１】
より好ましい態様では、本発明はＳＯＣＳタンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチドの配列を含む核酸分子であって、配列番号：３（ｍＳＯＣＳ１）、配列番号：５（ｍＳＯＣＳ２）、配列番号：７（ｍＳＯＣＳ３）、配列番号：９（ｈＳＯＣＳ１）、配列番号：１１（ｒＳＯＣＳ１）、配列番号：１３（ｍＳＯＣＳ４）、配列番号：１５および配列番号：１６（ｈＳＯＣＳ４）、配列番号：１７（ｍＳＯＣＳ５）、配列番号：１９（ｈＳＯＣＳ５）、配列番号：２０（ｍＳＯＣＳ６）、配列番号：２２および配列番号：２３（ｈＳＯＣＳ６）、配列番号：２４（ｍＳＯＣＳ７）、配列番号：２６および配列番号：２７（ｈＳＯＣＳ７）、配列番号：２８（ｍＳＯＣＳ８）、配列番号：３０（ｍＳＯＣＳ９）、配列番号：３１（ｈＳＯＣＳ９）、配列番号：３２（ｍＳＯＣＳ１０）、配列番号：３３および配列番号：３４（ｈＳＯＣＳ１０）、配列番号：３５（ｈＳＯＣＳ１１）、配列番号：３７（ｍＳＯＣＳ１２）、配列番号：３８および配列番号：３９（ｈＳＯＣＳ１２）、配列番号：４０（ｍＳＯＣＳ１３）、配列番号：４２（ｈＳＯＣＳ１３）、配列番号：４３（ｍＳＯＣＳ１４）、配列番号：４５（ｍＳＯＣＳ１５）および配列番号：４７（ｈＳＯＣＳ１５）に実質的に記載されたヌクレオチド配列、または上に列挙された配列のいずれかのすべてまたは一部の領域に少なくとも約１５％の類似性を有するヌクレオチド配列、または低厳格条件下で４２℃で上に列挙された配列のいずれか一つとハイブリッドを形成することができる核酸分子から選択されるヌクレオチド配列を提供する。
【００５２】
本明細書で、低厳格条件下で４２℃でということは、ハイブリッド形成用には少なくとも約１％ｖ／ｖから少なくとも約１５％ｖ／ｖまでのホルムアミドおよび少なくとも約１Ｍから少なくとも約２Ｍまでの塩を含み、そして洗浄用には少なくとも約１Ｍから少なくとも約２Ｍまでの塩を含むことを意味する。必要なときは、別の厳格条件を適用することもできる。例えば、中厳格では、少なくとも約１６％ｖ／ｖから少なくとも約３０％ｖ／ｖまでのホルムアミドおよび少なくとも約０．５Ｍから少なくとも約０．９Ｍまでの塩をハイブリッド形成に用い、そして少なくとも約０．５Ｍから少なくとも約０．９Ｍまでの塩を洗浄条件とする、あるいは高厳格では、少なくとも約約３１％ｖ／ｖから少なくとも約５０％ｖ／ｖまでのホルムアミドおよび少なくとも約０．０１Ｍから少なくとも約０．１５Ｍまでの塩をハイブリッド形成に用い、そして少なくとも約０．０１Ｍから少なくとも約０．１５Ｍまでの塩を洗浄条件とする。
【００５３】
別の態様では、本発明はＳＯＣＳタンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物であって、該ＳＯＣＳタンパク質が下記のように同定されるものに関する、
【００５４】
ヒトＳＯＣＳ４は、ＥＳＴ８１１４９、ＥＳＴ１８０９０９、ＥＳＴ１８２６１９、ｙａ９９Ｈ０９、ｙｅ７０ｃｏ４、ｙｈ５３ｃ０９、ｙｈ７７ｇ１１、ｙｈ８７ｈ０５、ｙｉ４５ｈ０７、ｙｊ０４ｅ０６、ｙｑ１２ｈ０６、ｙｑ５６ａ０６、ｙｑ６０ｅ０２、ｙｑ９２ｇ０３、ｙｑ９７ｈ０６、ｙｒ９０ｆ０１、ｙｔ６９ｃ０３、ｙｖ３０ａ０８、ｙｖ５５ｆ０７、ｙｖ５７ｈ０９、ｙｖ８７ｈ０２、ｙｖ９８ｅ１１、ｙｗ６８ｄ１０、ｙｗ８２ａ０３、ｙｘ０８ａ０７、ｙｘ７２ｈ０６、ｙｘ７６ｂ０９、ｙｙ３７ｈ０８、ｙｙ６６ｂ０２、ｚａ８１ｆ０８、ｚｂ１８ｆ０７、ｚｃ０６ｅ０８、ｚｄ１４ｇ０６、ｚｄ５１ｈ１２、ｚｄ５２ｂ０９、ｚｅ２５ｇ１１、ｚｅ６９ｆ０２、ｚｆ５４ｆ０３、ｚｈ９６ｅ０７、ｚｖ６６ｈ１２、ｚｓ８３ａ０８、およびｚｓ８３ｇ０８により特徴付けられる、
【００５５】
マウスＳＯＣＳ−４は、ｍｃ６５ｆ０４、ｍｆ４２ｅ０６、ｍｐ１０ｃ１０、ｍｒ８１ｇ０９、およびｍｔ１９ｈ１２により特徴付けられる。
【００５６】
ヒトＳＯＣＳ−５は、ＥＳＴ１５Ｂ１０３、ＥＳＴ１５Ｂ１０５、ＥＳＴ２７５３０およびｚｆ５０ｆ０１により特徴付けられる、
【００５７】
マウスＳＯＣＳ−５は、ｍｃ５５ａ０１、ｍｈ９８ｆ０９、ｍｙ２６ｈ１２およびｖｅ２４ｅ０６により特徴付けられる、
【００５８】
ヒトＳＯＣＳ−６は、ｙｆ６１ｅ０８、ｙｆ９３ａ０９、ｙｇ０５ｆ１２、ｙｇ４１ｆ０４、ｙｇ４５ｃ０２、ｙｈ１１ｆ１０、ｙｈ１３ｂ０５、ｚｃ３５ａ１２、ｚｅ０２ｈ０８、ｚｌ０９ａ０３、ｚｌ６９ｅ１０、ｚｎ３９ｄ０８およびｚｏ３９ｅ０６により特徴付けられる、
【００５９】
マウスＳＯＣＳ−６は、ｍｃ０４ｃ０５、ｍｄ４８ａ０３、ｍｆ３１ｄ０３、ｍｈ２６ｂ０７、ｍｈ７８ｅ１１、ｍｈ８８ｈ０９、ｍｈ９４ｈ０７、ｍｉ２７ｈ０４およびｍｊ２９ｃ０５、ｍｐ６６ｇ０４、ｍｗ７５ｇ０３、ｖａ５３ｂ０５、ｖｂ３４ｈ０２、ｖｃ５５ｄ０７、ｖｃ５９ｅ０５、ｖｃ６７ｄ０３、ｖｃ６８ｄ１０、ｖｃ９７ｈ０１、ｖｃ９９ｃ０８、ｖｄ０７ｈ０３、ｖｄ０８ｃ０１、ｖｄ０９ｂ１２、ｖｄ１９ｂ０２、ｖｄ２９ａ０４およびｖｄ４６ｄ０６により特徴付けられる、
【００６０】
ヒトＳＯＣＳ−７は、ＳＴＳ  ＷＩ３０１７１、ＥＳＴ００９３９、ＥＳＴ１２９１３、ｙｃ２９ｂ０５、ｙｐ４９ｆ１０、ｚｔ１０ｆ０３およびｚｘ７３ｇ０４により特徴付けられる、
【００６１】
マウスＳＯＣＳ−７は、ｍｊ３９ａ０１およびｖｉ５２ｈ０７により特徴付けられる、
【００６２】
マウスＳＯＣＳ−８は、ｍｊ６ｅ０９およびｖｊ２７ａ０２９により特徴付けられる、
【００６３】
ヒトＳＯＣＳ−９は、ＣＳＲＬ−８２ｆ２−ｕ、ＥＳＴ１１４０５４、ｙｙ０６ｂ０７、ｙｙ０６ｇ０６、ｚｒ４０ｃ０９、ｚｒ７２ｈ０１、ｙｘ９２ｃ０８、ｙｘ９３ｂ０８およびｈｆｅ０６６２により特徴付けられる、
【００６４】
マウスＳＯＣＳ−９は、ｍｅ６５ｄ０５により特徴付けられる、
【００６５】
ヒトＳＯＣＳ−１０は、ａａ４８ｈ１０、ｚｐ３５ｈ０１、ｚｐ９７ｈ１２、ｚｑ０８ｈ０１、ｚｒ３４ｇ０５、ＥＳＴ７３０００およびＨＳＤＨＥＩ００５により特徴付けられる、
【００６６】
マウスＳＯＣＳ−１０は，ｍｂ１４ｄ１２、ｍｂ４０ｆ０６、ｍｇ８９ｂ１１、ｍｑ８９ｅ１２、ｍｐ０３ｇ１２およびｖｈ５３ｃ１１により特徴付けられる、
【００６７】
ヒトＳＯＣＳ−１１は、ｚｔ２４ｈ０６およびｚｒ４３ｂ０２により特徴付けられる、
【００６８】
ヒトＳＯＣＳ−１３は、ＥＳＴ５９１６１により特徴付けられる、
【００６９】
マウスＳＯＣＳ−１３は、ｍａ３９ａ０９、ｍｅ６０ｃ０５、ｍｉ７８ｇ０５、ｍｋ１０ｃ１１、ｍｏ４８ｇ１２、ｍｐ９４ａ０１、ｖｂ５７ｃ０７およびｖｈ０７ｃ１１により特徴付けられる、そして
【００７０】
ヒトＳＯＣＳ−１４は、ｍｉ７５ｅ０３、ｖｄ２９ｈ１１およびｖｄ５３ｇ０７により特徴付けられる、
または核酸分子により特徴付けられる上記のＥＳＴの誘導体またはホモログは低厳格条件下で４２℃でリストされたＥＳＴのいずれかとハイブリッド形成をすることができる。
別の態様では、このヌクレオチド配列は下記のアミノ酸配列をコードする、
2009060903.tif 000012
上式中、Ｘ1 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2 はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3 はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8 はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9 はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘi はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘj はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、および
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰである。
【００７１】
上記の配列の比較は分子全体に対するものであることが好ましいが、その部分であることもできる。この比較は少なくとも約２１ヌクレオチドまたは少なくとも約５アミノ酸の隣接するシリーズに対してなされることが好ましい。この比較は少なくとも約２１の隣接したヌクレオチドまたは少なくとも７個の隣接したアミノ酸に対してなされることが一層好ましい。比較はＳＯＣＳボックス領域に対してまたはＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復などのタンパク質：分子相互作用領域を包含する領域に対してだけすることもできる。
【００７２】
本発明のさらに別の態様は単離されたポリペプチドまたはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物であって、ＳＯＣＳボックスをそのＣ−末端に含むものに関する。
【００７３】
このポリペプチドはタンパク質：ＤＮＡまたはタンパク質：タンパク質相互作用ドメインなどのタンパク質：分子相互作用ドメインをさらに含むことが好ましい。このドメインはＳＯＣＳボックスのＮ−末端に位置していることが好ましい。タンパク質：分子相互作用ドメインはＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復の少なくとも一つであることが特に好ましい。
【００７４】
シグナル伝達はＥＰＯ、ＴＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１および／またはＭ−ＣＳＦから選択されるサイトカインにより媒介されることが好ましい。好ましいサイトカインはＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＦＮ−γまたはトロンボポエチンである。
このタンパク質は下記のアミノ酸配列を有するＳＯＣＳボックスを含むことがさらに好ましい、
2009060903.tif 000013
上式中、Ｘ1 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ2 はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3 はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6 はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7 はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8 はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9 はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
〔Ｘi 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘi はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
〔Ｘj 〕n はｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘj はいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、および
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰである。
【００７５】
なお別の態様は、配列番号：４（ｍＳＯＣＳ１）、配列番号：６（ｍＳＯＣＳ２）、配列番号：８（ｍＳＯＣＳ３）、配列番号：１０（ｈＳＯＣＳ１）、配列番号：１２（ｒＳＯＣＳ１）、配列番号：１４（ｍＳＯＣＳ４）、配列番号：１８（ｍＳＯＣＳ５）、配列番号：２１（ｍＳＯＣＳ６）、配列番号：２５（ｍＳＯＣＳ７）、配列番号：２９（ｍＳＯＣＳ８）、配列番号：３６（ｈＳＯＣＳ１１）、配列番号：４１（ｍＳＯＣＳ１３）、配列番号：４４（ｍＳＯＣＳ１４）、配列番号：４６（ｍＳＯＣＳ１５）および配列番号：４８（ｈＳＯＣＳ１５）に実質的に記載されたアミノ酸配列またはリストされた配列のいずれかのすべてまたは一部と少なくとも１５％の類似性を有するアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドまたは誘導体、それらのホモログ、アナログまたは模倣物を提供する。
【００７６】
好ましいヌクレオチド類似性のパーセンテージとしては、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％またはそれ以上が、例えば９３％、９５％、９８％または９９％が挙げられる。
【００７７】
好ましいアミノ酸類似性としては、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％または９８％またはそれ以上が挙げられる。
【００７８】
上記のように、類似性は分子全体または少なくとも約２１ヌクレオチドまたは少なくとも約７アミノ酸を含む領域に対して測定される。類似性はＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復、アンキリン反復または他のタンパク質：分子相互作用ドメインまたはＳＯＣＳボックスなどの保存されている領域で測定されることが好ましい。
【００７９】
「類似性」という用語は、配列間の正確な一致、または配列が異なるときは、異なるアミノ酸が構造的、機能的、生化学的および／またはコンホーメーションのレベルで相互に関連していることを含む。
【００８０】
この核酸分子はヒト、霊長類、家畜（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ロバ、ブタ）、実験室テスト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット）、愛玩動物（例えば、犬、猫）または捕獲された野生動物（例えば、鹿、キツネ、カンガルー）などの如何なる動物から単離することもできる。
「誘導体（複数）」またはその単数型「誘導体」という用語は、核酸分子に関する場合であろうとタンパク質に関する場合であろうと、部分、変異体、断片およびアナログ並びにハイブリッド分子または融合分子およびグリコシレーションを受けた変異体が含まれる。特に有用な誘導体としては、ＳＯＣＳアミノ酸配列に対する１個または多重のアミノ酸置換、欠失および／または付加を含むものである。
【００８１】
この誘導体は機能的活性を持ちまたはアンタゴニストまたはアゴニストとして作用することが好ましい。本発明は異なる動物種由来の機能的にまたは構造的に関連する分子を含むＳＯＣＳのホモログにまでさらに拡張する。本発明はアナログおよび模倣物をも包含する。模倣物としては、必ずしも絶対ではないが、一般に非−アミノ酸構造を持つ分子やそれが模倣しているタンパク質、この場合はＳＯＣＳに類似の方法で機能的に作用することができる分子のクラスが挙げられる。模倣物は炭水化物、芳香環、リピドまたは他の複雑な化学構造を含むことができ、あるいは組成的にタンパク性であることもできる。本発明で提供される模倣物並びにアゴニストおよびアンタゴニストは、珊瑚、海水および淡水の河床、植物相および微生物などの環境の系統的探索により特定することが便利である。これはしばしば天然産物スクリーニングと呼ばれる。また、化学合成化合物のライブラリーも潜在的に有用な分子としてスクリーニングすることができる。
【００８２】
上述のように、本発明はＳＯＣＳのアゴニストおよびアンタゴニストを提供する。アンタゴニストの一つの例はアンチセンス・オリゴヌクレオチド配列である。有用なオリゴヌクレオチドはヌクレオチド配列のタンパク質をコードする配列すなわち「センス」配列の少なくとも一部に相補的なヌクレオチド配列を有するものである。これらのアンチ−センスヌクレオチドは遺伝子発現の特異的阻害を行わせるために使用することができる。このアンチセンス・アプローチは、どうやらアンチセンス構築物と標的ｍＲＮＡの間の相補的塩基対合によりアンチ−パラレル２本鎖を形成することにより、遺伝子発現の阻害を惹起することができるのである。おそらく翻訳のハイブリッド形成による逮捕を生ずるのであろう。リボザイムおよびコ−サプレッション分子も使用することができる。アンチセンス分子および他の核酸分子は、細胞膜を透過するためおよび／または血清半減期を増大させるためまたはイン・ビボ投与のため、それ自体をより安定にすべく、まず化学的に修飾される必要がある場合がある。抗体はＳＯＣＳタンパク質の診断的適用または精製により有用であるが、アンタゴニストまたはアゴニストとして作用することもできる。アンタゴニストおよびアゴニストは天然産物のスクリーニングまたは化学的化合物のライブラリーのスクリーニングの結果同定することもでき、またはＳＯＣＳ分子の誘導体またはアナログであることもできる。
【００８３】
従って、本発明は本発明のＳＯＣＳタンパク質のアナログにまで及ぶ。アナログは、例えば、自己免疫、免疫抑制または免疫機能亢進または造血系、内分泌系、肝臓系および神経系における機能不全などの、これに限定する訳ではないが、他の病態などのサイトカインにより媒介される機能不全の治療または予防に使用することができる。ホルモンまたは内因性または外因性分子、抗原、微生物および微生物産物、ウイルスまたはその成分、イオン、ホルモンおよび寄生体などの他のシグナル伝達要素により媒介される機能不全も本発明の対象である。
【００８４】
本明細書で提供されるタンパク質のアナログとしては、これに限定される訳ではないが、側鎖の修飾、ぺプチド、ポリペプチドまたはタンパク質の合成の間における非天然型アミノ酸および／またはそれらの誘導体の取り込みおよび架橋剤やタンパク性分子またはそれらのアナログに対しコンホーメーション上の制約を課す他の方法の使用が挙げられる。
【００８５】
本発明が提供する側鎖の修飾の例としては、アルデヒドとの反応後ＮａＢＨ4 で還元する還元的アルキル化、メチルアセチミデートを用いるアミジン化、無水酢酸を用いるアシル化、シアネートを用いるアミノ基のカルバモイル化、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を用いるアミノ基のトリニトロベンジル化、無水コハク酸および無水テトラヒドロフタル酸を用いるアミノ基のアシル化などのアミノ基の修飾、およびピリドキサル−５−リン酸塩を用いその後ＮａＢＨ4 で還元するリシンのピリドキシル化が挙げられる。
【００８６】
アルギニン残基のグアニジン基は２，３−ブタンジオン、フェニルグリオキサルおよびグリオキサルなどの試薬を用いる複素環縮合産物の形成により修飾することができる。
【００８７】
カルボキシル基はカルボジイミド活性化により、Ｏ−アシルイソウレア形成を経て、その後に続く、例えば対応するアミドへの誘導により、修飾することができる。
【００８８】
スルフヒドリル基はヨード酢酸またはヨードアセトアミドを用いるカルボキシメチル化、システイン酸への過蟻酸酸化、他のチオール化合物との混合ジスルフィドの形成、マレイミド、無水マレイン酸または他の置換マレイミドを用いる反応、４−クロロマーキュリ安息香酸、４−クロロマーキュリフェニルスルホン酸、フェニルマーキュリクロリド、２−クロロマーキュリ−４−ニトロフェノールおよび他の水銀剤を用いる水銀誘導体の形成、アルカリｐＨでシアネートを用いるカルバモイル化などの方法により修飾することができる。
【００８９】
トリプトファン残基は、例えば、Ｎ−ブロモスクシンイミドを用いる酸化または２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジルブロミドまたはスルフェニルハライドを用いるインドール環のアルキル化により修飾することができる。
【００９０】
他方、チロシン残基はテトラニトロメタンでニトロ化して３−ニトロチロシン誘導体を形成することにより変換することができる。
【００９１】
ヒスチジン残基のイミダゾール環の修飾はヨード酢酸誘導体を用いるアルキル化またはジエチルピロカルボネートを用いるＮ−カルベトキシル化を行うことができる。
【００９２】
ぺプチド合成の間に非天然アミノ酸および誘導体を取り込む例としては、ノルロイシン、４−アミノ酪酸、４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンタン酸、６−アミノヘキサン酸、ｔ−ブチルグリシン、ノルバリン、フェニルグリシン、オルニチン、ザルコシン、４−アミノ−３−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン酸、２−チエニルアラニンおよび／またはアミノ酸のＤ−異性体が挙げられる。本発明が予定する非天然型アミノ酸のリストは表３に示してある。
【００９３】
【表３】
2009060903.tif 000014
2009060903.tif 000015
2009060903.tif 000016
2009060903.tif 000017
【００９４】
架橋剤は、例えば、ｎ＝１からｎ＝６までのスペーサー（ＣＨ2）n を持つ２官能性イミドエステル、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド・エステルなどのホモ−２官能性架橋剤およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドなどのアミノ−反応性部分とマレイミドまたはジチオ部分（ＳＨ）またはカルボジイミド（ＣＯＯＨ）などの特異的反応性部分の別の基とを通常含むヘテロ−２官能性試薬を用い、３Ｄコンホーメーションを安定化するために使用することができる。さらに、ぺプチドは、例えば、ＣαおよびＮα−メチルアミノ酸の取り込み、アミノ酸のＣα原子とＣβ原子の間に二重結合の導入およびＮ末端とＣ末端の間、二つの側鎖の間または側鎖とＮまたはＣ末端の間にアミド結合を形成するなどの共有結合の導入による環状ぺプチドまたはアナログの形成によりコンホーメーション的に制約することができる。
これらのタイプの修飾は、個体に投与されあるいは診断試薬として使用されるとき、サイトカイン類を安定化するために重要である。
【００９５】
本発明が予定する他の誘導体は、完全にグリコシル化されていない分子から修飾されグリコシル化された分子までのある範囲のグリコシル化変異体を含む。変更されたグリコシル化パターンは異なる宿主細胞での組換え分子の発現から生じうる。
【００９６】
本発明の別の態様は、哺乳類におけるＳＯＣＳタンパク質の発現を調節する方法であって、ＳＯＣＳ遺伝子の発現の制御に関与するＳＯＣＳをコードする遺伝子または因子／要素を、ＳＯＣＳの発現を高レベルで調節または低レベルで調節またはその他の仕方で調節するのに十分な時間および条件の下で、ＳＯＣＳ発現のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含む方法に関する。モジュレーターの一例はＩＬ−６またはＳＯＣＳ発現の他の転写レギュレーターなどのサイトカインである。
発現は転写または翻訳または両方を含む。
【００９７】
本発明の別の側面はヒトにおけるＳＯＣＳの活性を調節する方法であって、ＳＯＣＳ活性を増加まため減少させるのに十分な時間および条件の下である分子の調節有効量を該ヒトに投与することを含む方法に関する。この分子はタンパク性の分子でも、化学的実体であってもよく、そしてＳＯＣＳの誘導体でもまたは化学的アナログまたは切断変異体であってもよい。
【００９８】
本発明のさらなる側面は、ＳＯＣＳの誘導合成方法またはＳＯＣＳの転写／翻訳方法であって、ＳＯＣＳ遺伝子を含む細胞を該ＳＯＣＳが産生するのに十分な時間および条件の下で該ＳＯＣＳを誘導することができるサイトカインの有効量と接触させる工程を含んでなる方法を提供する。例えば、ＳＯＣＳ１はＩＬ−６により誘導することができる。
【００９９】
本発明のさらなる側面は細胞中のＳＯＣＳタンパク質のレベルを調節する方法であって、ＳＯＣＳ遺伝子を含む細胞を、該ＳＯＣＳタンパク質のレベルを調節するのに十分な時間および条件の下でＳＯＣＳ遺伝子発現またはＳＯＣＳタンパク質活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含んでなる方法に関する。
【０１００】
本発明のさらなる側面は、ＳＯＣＳ遺伝子を含む細胞中でのシグナル伝達を調節する方法であって、該細胞を、シグナル伝達を調節するのに十分な時間、ＳＯＣＳ遺伝子発現またはＳＯＣＳタンパク質活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含んでなる方法に関する。
【０１０１】
本発明のさらなる側面は、少なくともその一方の細胞がＳＯＣＳ遺伝子を保持する細胞間の相互作用に影響を与える方法であって、ＳＯＣＳ遺伝子を保持する細胞を、シグナル伝達を調節するのに十分な時間ＳＯＣＳ遺伝子発現またはＳＯＣＳタンパク質活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含む方法に関する。
【０１０２】
上述のように、本発明はある範囲の模倣物すなわちＳＯＣＳのアゴニストまたはアンタゴニストとして作用することができる小分子に関する。このような分子は珊瑚、土壌、植物または大洋または南極の環境からなどの天然産物スクリーニングから得ることができる。また、ぺプチド、ポリペプチドまたはタンパク質ライブラリーまたは化合物ライブラリーも容易にスクリーニングすることができる。例えば、ＳＯＣＳを発現するＭ１細胞はＩＬ−６の存在下では分化を受けない。この系はＩＬ−６およびＳＯＣＳの存在下に分化させる分子をスクリーニングするために使用することができる。ある範囲のテスト細胞はある範囲のサイトカインに対するアンタゴニストおよびアゴニストをスクリーニングするために調製することができる。このような分子は小分子であることが好ましく、そしてアミノ酸起源または化学起源であることができる。シグナル形成タンパク質（例えば、ＪＡＫＳ）と相互作用するＳＯＣＳ分子はこの相互作用を妨害または増進させる分子を検出するための分子篩を提供する。このようなスクリーニングプロトコルは天然産物スクリーニングを包含する。
【０１０３】
従って、本発明はＳＯＣＳまたはその誘導体またはＳＯＣＳ発現またはＳＯＣＳ活性のモジュレーターおよび一つ以上の薬学的に許容され得る担体および／または希釈剤を含んでなる薬剤組成物に関する。これらの成分は「活性成分」と呼ばれる。本発明のこれらおよびその他の側面はＳＯＣＳ１からＳＯＣＳ１５までの、しかしこれらに限定されないが、どのＳＯＣＳ分子にも当てはまる。
【０１０４】
注射可能な使用に適する活性成分を含む薬剤剤形としては、滅菌水溶液（水溶性の場合）、滅菌注射用溶液の用時調製のための滅菌粉末が挙げられる。それは製造および貯蔵の条件下で安定でなければならずそして細菌やカビなどの微生物の汚染作用から保護されねばならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液状プロピレングリコール、および同種のもの）、適当なそれらの混合物、および植物油を含む溶媒または分散培地であることができる。適当な流動性は、例えばリシチンなどの被覆の使用により、分散剤の場合は要求される粒子サイズの維持によりそして界面活性剤の使用により、維持することができる。微生物の作用の防止は種々の抗細菌剤および抗カビ剤、例えば、パラべン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チルメロサルおよび同種のものにより行うことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖類または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射可能な組成物の長期間吸収は、組成物中における吸収遅延剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの使用により行うことができる。
【０１０５】
滅菌注射可能溶液は、活性化合物の要求される量を、必要なときは上に挙げた様々な他の成分と共に、適当な溶媒に取り込ませ、濾過滅菌することにより調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合には、好ましい調製法は真空乾燥法および凍結乾燥法である。これらの方法はその予め滅菌−濾過された溶液から活性成分プラス付加的な望みの成分の粉末を形成させる。
【０１０６】
活性成分は適当に保護すると、例えば、不活性希釈剤または資化性の消化される担体と共に経口投与することができ、あるいは柔いまたは硬い殻のカプセルの中に封入することができ、あるいは錠剤に圧縮することができる。経口治療投与のためには、活性化合物は賦形剤と共に取り込まれ、消化しうる錠剤、バッカル錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウエハースおよび同種のものの形で使用される。このような組成物および調製物は活性成分を少なくとも１重量％含むべきである。組成物および調製物のこのパーセンテージは、もちろん、変動しうるものであり、その単位の重量の約５％と約８０％の間にあるのが便利である。このような治療上有用な組成物中の活性化合物の量は適当な投与量が得られるようなものである。本発明の好ましい組成物および調製物は経口投与単位剤形が約０．１μｇと２０００ｍｇの間の活性化合物を含むように調製される。
【０１０７】
錠剤、トローチ、ピル、カプセルおよび同種のものは以下にリストされるような成分をも含むことができる。ゴム、アカシアゴム、コーンスターチまたはゼラチンなどのバインダー、リン酸カルシウムなどの賦形剤、コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸および同種のものなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、およびスクロース、乳糖またはサッカリンなどの甘味剤を添加することができ、ペパーミント、ウインターグリーン油またはチェリーフレーバなどの香味剤なども添加できる。投与量単位剤形がカプセルの場合は、それは上記のタイプの物質に加えて液状の担体を含むことができる。被覆剤や投与量単位の物理的剤形を別のものに修飾するための他の様々な物質が存在する。例えば、錠剤、ピル、またはカプセルはセラック、糖または両方で被覆することができる。シロップまたはエリキシルは活性化合物、甘味剤として砂糖、防腐剤としてメチルおよびプロピルパラベン、色素およびチェリーまたはオレンジ香を含むことができる。もちろん、どの投与量単位剤形の調製に使用される物質もすべて薬学的に純粋で使用する量では実質的に無毒であるべきである。さらに、この活性化合物（単数または複数）は放出制御用調製物および製剤に含めることができる。
本発明はクリーム、ローションおよびゲルなどの局所適用に適する剤形をも包含する。
【０１０８】
薬学的に許容され得る担体および／または希釈剤は、溶媒、分散培地、被覆剤、抗細菌および抗カビ剤、等張剤および吸収遅延剤、および同種のもののいずれかおよびすべてを含む。薬学的に活性な物質のためのこのような培地および物質の使用は当技術分野で良く知られている。通常の培地や物質がこの活性成分と不適合である場合を除き、本治療用組成物におけるそれらの使用が予定される。補助的な活性成分をこの組成物に取り込むことも可能である。
【０１０９】
投与の容易さおよび投与量の均一性のため、投与量単位剤形の非経口用組成物を製剤化することは特に有利である。本明細書で使用するとき投与量単位剤形とは、治療対象哺乳類に対し単位投与量として適当化された物理的に別々の単位であって、各単位は必要な薬学的担体と結合させた、要求される治療効果を発揮するように計算された活性物質の予め定められた量を含んでいるものを指す。本発明の新規な投与量単位剤形についての仕様は、（ａ）活性物質のユニークな特性および達成すべき特定の治療効果、および（ｂ）本明細書に詳細に開示されているように身体の健康が害されている疾病状態を持つ生体の疾病を治療するためにこのような活性物質を混合する技術に固有の限界により定まり、そして直接左右される。
【０１１０】
主要な活性成分は、便利かつ有効な投与のために、上に開示されたような投与量単位剤形中に、その有効量が適当な薬学的に許容され得る担体と混合される。単位投与剤形は、例えば、０．５μｇから約２０００ｍｇまでの範囲の量の主活性化合物を含むことができる。比率で表すと、活性化合物は一般に担体のｍｇ当たり約０．５μｇから約２０００ｍｇ存在する。補助的活性成分を含む組成物の場合は、投与量は該成分の通常の投与量および投与方法を参照することにより定められる。有効量も体重ｋｇ当たりの量の用語で表すのが便利である。例えば、体重ｋｇ当たり約０．０１ｎｇから約１０，０００ｍｇまでが投与されうる。
【０１１１】
本薬剤組成物は標的細胞をトランスフェクトすることができるベクターであって、ＳＯＣＳ発現またはＳＯＣＳ活性を調節することができる核酸分子を保持するベクターなどの遺伝分子を含むこともできる。このベクターは、例えば、ウイルスベクターであることができる。これに関して、ある範囲の遺伝子治療であって、ある細胞を単離する工程、遺伝的に操作する工程およびその細胞を同一主体または遺伝的に関連のあるまたは類似の主体に戻す工程を含む遺伝子治療は本発明に含まれる。
【０１１２】
本発明のさらに別の側面はＳＯＣＳおよびその誘導体に対する抗体に関する。このような抗体はモノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよく、ＳＯＣＳに対して天然に生ずる抗体から選択することもでき、あるいはＳＯＣＳまたはその誘導体に対し特異的に誘発させることもできる。後者の場合、ＳＯＣＳまたはその誘導体はキャリア分子とまず結合することが必要である。本発明の抗体および／または組換えＳＯＣＳまたはその誘導体は治療薬または診断薬として特に有用である。
【０１１３】
例えば、ＳＯＣＳおよびその誘導体はＳＯＣＳに対して天然に生ずる抗体をスクリーニングするのに使用することができる。また、特定の抗体はＳＯＣＳをスクリーニングするために使用することができる。このような検定のための技法としては、当技術分野で良く知られており、例えば、サンドイッチ検定およびＥＬＩＳＡが挙げられる。ＳＯＣＳレベルの知識は、ある種の癌または癌に対する素因の診断に、またはサイトカインにより媒介される細胞応答性の監視にまたはある種の治療のプロトコルに重要である。
【０１１４】
本発明のＳＯＣＳに対する抗体はモノクローナルでもポリクローナルでもよい。また、Ｆａｂ断片などの抗体の断片も使用することができる。さらに、本発明は組換えおよび合成抗体および抗体ハイブリッドにも及ぶ。「合成抗体」とは本明細書では抗体の断片およびハイブリッドを含むと考える。本発明のこの側面の抗体は免疫治療に特に有用であり、アポプトシスを評価するためまたは治療計画プログラムを監視するための診断用具としても使用することができる。
【０１１５】
例えば、特定の抗体はＳＯＣＳタンパク質をスクリーニングするために使用することができる。後者は、例えば、細胞抽出物または他の生物体液中のＳＯＣＳレベルをスクリーニングする手段または培養上清から組換え手段により作られたＳＯＣＳを精製する手段として重要となるであろう。本明細書で予定される検定技法は当技術分野でよく知られており、例えば、サンドイッチ検定およびＥＬＩＳＡが挙げられる。
【０１１６】
上述の第１の抗体に対するいかなる第２の抗体（モノクローナル、ポリクローナルまはた抗体の断片または合成抗体）を含めることも本発明の範囲内にある。第１および第２の抗体は両方とも検出検定に使用することができ、あるいは第１の抗体は市販の抗−免疫グロブリン抗体と共に使用することができる。本発明で予定される抗体には、ＳＯＣＳのどの領域に対しても特異的ないかなる抗体も含まれる。
【０１１７】
ポリクローナルおよびモノクローナル抗体は両者とも酵素またはタンパク質で免疫化することにより得ることができ、いずれのタイプも免疫検定に利用可能である。両タイプの血清を得る方法も当技術分野でよく知られている。ポリクローナル血清はあまり好ましくないが、適当な実験室動物にＳＯＣＳまたはその抗原部分の有効量を注射し、該動物から血清を集め、そして既知の免疫吸着技法のいずれかにより特定の血清を単離することにより比較的容易に調製することができる。この方法により作られる抗体は実際にどのタイプの免疫検定にも利用することができるが、この生産物が潜在的に不均一であることから、一般的にはあまり好ましくない。
【０１１８】
免疫検定におけるモノクローナル抗体の使用は、大量にそれを製造することができることおよびその生産物が均一であることから、特に好ましい。不死化細胞系と免疫原調製物に対して感作させたリンパ球を融合させることにより作成されるモノクローナル抗体生産用のハイブリドーマ細胞系の調製は、当技術分野の熟練者によく知られた技法により行うことができる。
【０１１９】
本発明の別の側面は主体からの生物試料の中のＳＯＣＳを検出する方法であって、抗体−ＳＯＣＳ複合体が形成するのに十分な時間および条件の下で該生物試料をＳＯＣＳまたはその誘導体またはホモログに特異的な抗体と接触させる工程および次いで該複合体を検出する工程を含んでなる方法に関する。
【０１２０】
ＳＯＣＳの存在は、ウエスタンブロッティング法およびＥＬＩＳＡ法などの幾つかの方法で行うことができる。米国特許第４，０１６，０４３号、第４，４２４，２７９号および第４，０１８，６５３号を参照すれば見ることができるように、広範囲の免疫検定法が利用可能である。これらは、もちろん、１部位および２部位の両検定法または非競争型の「サンドイッチ」検定法並びに伝統的な競争的結合検定を含む。これらの検定法は標識化抗体の標的への直接結合をも含む。
【０１２１】
サンドイッチ検定法は中でも最も有用であり、普通に使用される検定法であり、本発明でも使用することが好ましい。サンドイッチ法には幾つかの変法が存在し、そのすべてが本発明に包含される。簡単に述べれば、代表的なホワード検定では、未標識抗体が固体基質上に固定化されそしてテストすべき試料が結合した分子と接触させられる。適当な時間、抗体−抗原複合体の形成を行わせるのに十分な時間インキュベートした後、その抗原に特異的な第２の抗体であって、検出可能なシグナルを生じることができるレポーター分子で標識化されたものを添加し、インキュベートして、抗体−抗原−標識化抗体という別の複合体の形成に十分な時間を与える。未反応物質をすべて洗い流し、抗原の存在をレポーター分子が生ずるシグナルの観察により測定する。この結果は可視的シグナルの単なる観察による定性的なものか、ハプテンの既知量を含む対照試料と比較することによる定量的なものとなる。ホワード検定の変法には、同時検定が含まれる。この方法では、試料と標識化抗体の両方が結合した抗体に同時に添加される。これらの方法は当技術分野の熟練者によく知られており、容易に明らかなように、僅かな改良はすべて含まれている。本発明によれば、試料は細胞抽出物、組織生検またはおそらく血清、唾液、粘膜分泌物、リンパ液、組織液および呼吸液などの、ＳＯＣＳを含むかも知れない試料である。従って、試料は一般に生体液を含む生物試料であるが、醗酵液や細胞培養由来の上清なども含まれる。
【０１２２】
典型的なホワードサンドイッチ検定法では、ＳＯＣＳまたはその抗原性部分に対し特異性を有する第１の抗体を固体表面に共有結合的にまたは受動的に結合させる。この固体表面は典型的にはガラスまたはポリマーであり、最も普通に使用されているのはセルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、塩化ポリビニルまたはポリプロピレンである。この固体支持体は管、ビーズ、ミクロプレートのディスクなどの形態あるいは免疫検定を行うのに適する他のどのような表面でもよい。結合法は当技術分野でよく知られており、一般に、架橋的な共有結合または物理的な吸着から成り、ポリマー−抗体複合体はテスト試料の準備として洗浄される。次に、テスト試料の一部を固相の複合体に添加し、十分な時間の間（例えば、２〜４０分間または便利なときは一晩）適当な条件（例えば、室温から３７℃）の下でインキュベートしてこの試料中に存在するサブユニットを結合させる。インキュベーション期間の後、抗体サブユニット固相を洗浄し乾燥し、そしてハプテンのある部分に特異的な第２の抗体と共にインキュベートする。この第２の抗体はレポーター分子と結合しており、これがハプテンと第２の抗体との結合を証明するために用いられる。
【０１２３】
別の方法は、生物試料中に存在する標的分子を固定化することおよびそれに続く固定化標的を特異的抗体（これはレポーター分子で標識していてもしていなくてもよい）に曝露することを含む方法である。標的の量およびレポーター分子のシグナルの強さに依存して、結合した標的はこの抗体による直接標識化により検出することができる。また、第１の抗体に特異的な第２の標識化された抗体を標的−第１抗体複合体に接触させ、標的−第１抗体−第２抗体という三次複合体を形成させる。この複合体はレポーター分子が発するシグナルにより検出される。
【０１２４】
本明細書で用いるとき「レポーター分子」とは、その化学的性質により、抗原−結合抗体の検出を可能とする分析的に確認可能なシグナルを提供する分子を意味する。検出は定性的でも定量的でもよい。このタイプの検定に最も普通に用いられる分子は、酵素、発蛍光団または放射性核種を含む分子（すなわち、放射性同位元素）および化学発光分子である。
【０１２５】
酵素免疫検定法の場合には、酵素は、一般にグルタルアルデヒドまたは過ヨウ素酸塩を用いて第２の抗体に結合させる。しかしながら、容易に分かるように、極めて多様な異種の結合法が存在し、これらは熟練した職人には容易に利用可能である。普通に用いられる酵素は、中でも、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ、グルコース・オキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼおよびアルカリホスファターゼである。特定の酵素と共に用いるべき基質は一般に対応する酵素により加水分解されたときの、検出可能な色変化の発生に基づいて選択される。適当な酵素の例としては、アルカリホスファターゼおよびペルオキシダーゼが挙げられる。蛍光発生基質を選択することも可能である。これは上記の発色性基質とは異なり蛍光性産物を生ずる。すべての場合に、酵素−標識化抗体が第１抗体ハプテン複合体に添加され、結合させられ、ついで過剰の試薬が洗い流される。次に、この抗体−抗原−抗体の複合体に適当な基質を含む溶液を添加する。基質は第２の抗体に結合した酵素と反応し、定性的な可視シグナルを生じ、これはさらに通常分光光学的に定量化され、試料中に存在したハプテンの量の指標を与える。「レポーター分子」は細胞凝縮またはラテックス上の赤血球などの凝集阻害の使用、および同種のものに拡張される。
【０１２６】
また、フルオレセインおよびローダミンなどの蛍光性化合物は抗体の結合能を変えることなく抗体に化学的に結合させることができる。特定波長の光で照射することにより活性化すると、蛍光色素−標識化抗体はその光エネルギーを吸収し、その後に分子中で励起状態を誘発し、光学顕微鏡で可視的に検出可能な特徴的な色の光を放射する。ＥＩＡの場合のように、蛍光標識抗体は第１抗体−ハプテン複合体に結合させられる。結合していない試薬を洗い流した後、残っている三次複合体を次に適当な波長の光に曝露すると、観察される蛍光は目的のハプテンの存在を示す。免疫蛍光法およびＥＩＡ法は両方とも当技術分野で極めてよく確立されており、本方法にとっても特に好ましい。しかしながら、放射性同位元素、化学発光分子または生物発光分子などの他のレポーター分子も採用することができる。
【０１２７】
本発明はＳＯＣＳ遺伝子またはその誘導体を検出するためＰＣＲ分析を含むなどの遺伝子的検定法をも予定する。関連して用いられる別の方法（単数または複数）としては、ヌクレオチド直接配列決定法または一本鎖コンホーメーションポリモルフィズム分析（ＳＳＣＰ）、特異的オリゴヌクレオチドハイブリッド形成、直接タンパク質切断テストなどの方法などのミューテーション・スキャンニングが挙げられる。
【０１２８】
サイトカインはＳＯＣＳ分子の一部の転写に関与しているから、ＳＯＣＳの検出はサイトカインまたはサイトカイン活性に対する代理のマーカーを提供する。これは中でも、自己免疫、慢性関節リューマチ、糖尿病およびスティッフマン症候群などのある範囲の病態を持つ主体を評価する際に有用である。
【０１２９】
本発明の核酸分子はＤＮＡかまたはＲＮＡである。核酸分子がＤＮＡ型であるときは、それはゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡである。本発明の核酸分子のＲＮＡ型は一般にｍＲＮＡである。
【０１３０】
本発明の核酸分子は一般に単離型であるが、それはベクター分子、殊に発現ベクター分子などの他の遺伝的分子に組み込まれ、または連結され、またはべつの仕方で融合され、または結合されることがある。ベクターおよび発現ベクターは一般に複製することができそして適用可能なときは原核細胞または真核細胞の一方または両方で発現することができる。原核細胞としては、好ましくは大腸菌、バチルス種およびシュードモナス種が挙げられる。好ましい真核細胞としては酵母、カビ、哺乳類および昆虫の細胞が挙げられる。
【０１３１】
従って、本発明の別の側面はベクター部分および哺乳類、より具体的にはヒトＳＯＣＳ遺伝子部分を含んでなる遺伝子構築物であって、ＳＯＣＳ遺伝子部分がＳＯＣＳポリペプチドまたはその機能的または免疫学的相互作用のできる誘導体をコードすることができるものである構築物に関する。
【０１３２】
この遺伝子構築物のＳＯＣＳ遺伝子部分はベクター上のプロモーターに機能的にリンクしており、該プロモーターが該ＳＯＣＳ遺伝子部分の適当な細胞中での発現を指令することができるものであることが好ましい。
【０１３３】
さらに、この遺伝子構築物のＳＯＣＳ遺伝子部分はグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列などの別の遺伝子配列に融合した遺伝子の全部または一部を含むことができる。
本発明はこのような遺伝子構築物およびそれを含む原核細胞または真核細胞にも及ぶ。
【０１３４】
本発明は、突然変異体、一部、断片、部分、ホモログおよびアナログを含むＳＯＣＳ誘導体のいずれかまたはすべて、または天然に生ずるヌクレオチド配列またはアミノ酸配列に対する１個または多重のヌクレオチドまたはアミノ酸の置換、付加および／または欠失を含むＳＯＣＳの遺伝配列をコードするものにも及ぶ。本発明はＳＯＣＳの模倣物およびアゴニストおよびアンタゴニストにも及ぶ。
【０１３５】
本発明のＳＯＣＳおよびその遺伝配列はある範囲の治療薬および診断薬の創製に有用であり、そして特定の細胞応答に関与するサイトカインまたはそのサイトカインに対する受容体の検出に特に有用である。例えば、ＳＯＣＳ１遺伝子を発現するＭ１細胞のように、ＳＯＣＳ遺伝子を発現する細胞は特定のサイトカイン、ＳＯＣＳ１の場合はＩＬ−６に対し最早応答性がない。本発明がＳＯＣＳ１からＳＯＣＳ１５までなどの何らかのＳＯＣＳ遺伝子を発現するＭ１細胞などの細胞をさらに含むことは明らかである。さらに、本発明は治療効果のあるサイトカインの能力を調節しまたは高める分子の使用をも提供する。例えば、あるＳＯＣＳ活性を阻害する分子は治療効果のあるサイトカインの活性（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）を増強するように作用しうる。
【０１３６】
可溶性のＳＯＣＳポリペプチドも、免疫過多、免疫抑制、アレルギー、高血圧および同種のものなどのサイトカインに媒介される細胞応答性に関する疾病、障害または異常の治療に特に有用であると期待される。
【０１３７】
本発明のさらなる側面は、サイトカインにより媒介される細胞応答性に関する病態を治療するための薬剤の製造におけるＳＯＣＳまたはその機能的誘導体の使用に関する。
【０１３８】
本発明はさらに、ＳＯＣＳ遺伝子を発現するトランスジェニック哺乳類細胞に関する。このような細胞はサイトカイン機能の抑制を検定するための有用な指標細胞系である。一つの例はＳＯＣＳ遺伝子を発現するＭ１細胞である。このような細胞系はサイトカインのスクリーニングまたはサイトカインのアンタゴニストまたはアゴニストとして作用することができる植物、珊瑚、微生物または生物−有機的に活性な土壌または水由来の天然に生ずる分子などの分子のスクリーニングに有用でありうる。
【０１３９】
本発明はさらに、同一または異なる動物種由来の異種のＳＯＣＳ間のハイブリッドに関する。例えば、ハイブリッドはマウスＳＯＣＳ１とヒトＳＯＣＳ１の全てまたは機能的部分間に形成される。また、このハイブリッドはマウスＳＯＣＳ１とマウスＳＯＣＳ２の全てまたは一部間でもよい。このようなハイブリッドはすべて本発明に関係し、そして多面的分子を開発する場合に特に有用である。
【０１４０】
本発明はさらに、欠陥のあるＳＯＣＳ遺伝子を持つ個体をスクリーニングするある範囲の遺伝子に基づく診断検定をも提供する。
このような突然変異は特定のサイトカインに対する応答性を持たない細胞型あるいはある範囲の病態に至る過剰応答を生ずる。ＳＯＣＳ遺伝子配列は突然変異がこの遺伝子に存在するかどうかを決定するためのある範囲のＰＣＲまたは他の技法を用いて容易に確認することができる。適当な遺伝子治療または他の介入治療（interventionist therapy)が次いで採用されうる。
本発明は下記の非−限定的実施例によりさらに説明される。
【０１４１】
実施例１〜１６は活性に基づいて同定されたＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２およびＳＯＣＳ３に関するものである。実施例１７〜２４は配列類似性に基づいて最初にクローニングされたＳＯＣＳ４〜ＳＯＣＳ１５の様々な側面に関するものである。実施例２５〜３６はそれぞれＳＯＣＳ４〜ＳＯＣＳ１５の特異的側面に関するものである。
【０１４２】
実施例１
細胞培養およびサイトカイン
Ｍ１細胞系はＳＬマウスに自発的に生じた白血病に由来した〔イチカワ，1969] 。本研究に用いた親Ｍ１細胞はウォルター・アンド・イライザ・ホール・インスティチュート・フォー・メディカル・リサーチ、メルボルン、ビクトリア、オーストラリアで約１０年間継代されてきた。Ｍ１細胞は１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含むダルベッコの修正・イーグル培地（ＤＭＥ）中で毎週継代により維持した。組換えサイトカインは一般に市販品から入手可能であり、あるいは公開された方法により調製した。組換えマウスＬＩＦは大腸菌で製造し、既に記述〔ギアリング，1989〕されているように精製した。精製ヒト・オンコスタチンＭはペプロテック・インク（ロッキーヒル、ＮＪ：ＵＳＡ）から購入し、そして精製マウスＩＦＮ−γはゲンザイム・ダイアグノスティクス（ケンブリッジ、ＭＡ、ＵＳＡ）から入手した。組換えマウストロンボポエチンはＣＨＯ細胞中でＦＬＡＧTM−標識融合タンパクとして製造された。
【０１４３】
実施例２
寒天コロニー検定法
サイトカインへの応答としてのＭ１細胞の分化を検定するため、３００細胞をウシ胎児血清（ＦＣＳ）２０％（ｖ／ｖ）、０．３％（ｗ／ｖ）寒天およびＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＦＮ−γ、ｔｐｏまたはデキサメタソン（シグマ・ケミカル・カンパニー、セントルイス、ＭＩ）の連続希釈液０．１ｍｌを補給したＤＭＥ１ｍｌを含む３５ｍｍペトリ皿中で培養した。空気中１０％（ｖ／ｖ）ＣＯ2 を含む完全な加湿雰囲気下で、３７℃での培養７日後に、Ｍ１細胞のコロニーを計測し、そして細胞が分散した細胞から構成されるときまたは固く詰んだ中心の周りに分散した細胞のあるコロナを持つときは分化したと分類した。
【０１４４】
実施例３
レトロウイルス・ライブラリーの形成
ｃＤＮＡ発現ライブラリーは、ほとんど記述された通り〔レイナー，1994〕にして、因子−依存性造血細胞系ＦＤＣ−Ｐ１から構築した。簡単に述べると、ｃＤＮＡをレトロウイルスベクターｐＲＵＦｎｅｏ中にクローン化し、ついで両種性パッケージング細胞系（ＰＡ３１７）中にトランスフェクトした。一過性に形成されたウイルスをトランスフェクションの４８時間後に細胞上清から収穫し、そしてＹ２エコトロピック・パッケージング細胞を感染させるために使用し、高力価のウイルス−産生細胞系を形成させた。
【０１４５】
実施例４
Ｍ１細胞のレトロウイルス感染
１０6 感染Ψ２細胞のプールに照射（３０００ｒａｄ）し、１０6 Ｍ１細胞と共に１０％（ｖ／ｖ）ＦＣＳおよび４μｇ／ｍｌポリブレン（Polybrene)を補充したＤＭＥ中で３７℃で２日間培養した。ＩＬ−６に不応答のクローンを選択するため、レトロウイルス感染Ｍ１細胞をＤＭＥ中で一度洗浄し、そして４００μｇ／ｍｌゲネティシン（geneticin)（ギブコＢＲＬ、Grand Island、NY) および１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６を含む１ｍｌ寒天培養中で約２×１０4 細胞／ｍｌで培養した。Ｍ１細胞の感染効率は、ゲネティシンのみの存在下で感染細胞をアガープレーティングにより評価したとき、１〜２％であった。
【０１４６】
実施例５
ＰＣＲ
レトロウイルス感染Ｍ１細胞由来のゲノムＤＮＡをＳａｃＩで消化し、次いでフェノール／クロロホルム抽出ＤＮＡの１μｇをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により増幅した。組み込まれたレトロウイルス由来のｃＤＮＡ挿入物の増幅に使用されたプライマーは、ベクターｇａｇ配列の多重クローニング部位の５’側約３０ｂｐに相当するＧＡＧ３（５’ＣＡＣＧＣＣＧＣＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＣ３’〔配列番号：１〕）およびｐＭＣ１ｎｅｏ配列の多重クローニング部位の３’側約２００ｂｐに相当するＨＳＶＴＫ（５’ＴＴＣＧＣＣＡＡＴＧＡＣＡＡＧＡＣＧＣＴ３’〔配列番号：２〕）であった。このＰＣＲは９４℃で５分間の初期変性、９４℃で１分間の３５サイクル、５６℃で２分間のアニーリング、および７２℃で３分間の伸長、続いて最後に１０分間の伸長を必要とした。ＰＣＲ産物はゲルで精製し、ついでｐＧＥＭ−Ｔプラスミド（プロメガ、マジソン、ＷＩ）中に連結し、そしてＡＢＩ・ＰＲＩＳＭ・Ｄｙｅターミネーター・サイクル・シーケンシング・キットおよびモデル３７３オートメーティッドＤＮＡシーケンサー（アプライド・バイオシステムズ・インク、フォスターシティー、ＣＡ）を用いて配列決定を行った。
【０１４７】
実施例６
ｃＤＮＡのクローニング
マウスＳＯＣＳ１をコードする独立のｃＤＮＡクローンをマウス胸腺ｃＤＮＡライブラリーからほぼ記述された通りに（ヒルトンら，1994) 単離した。マウスＳＯＣＳ１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および予言されたアミノ酸配列をＢＬＡＳＴＮおよびＴＦＡＳＴＡ（ピアソンおよびリップマン，1988、ピアソン, 1990、アルチクルら, 1990) を用いてデータベースと比較した。オリゴヌクレオチドはヒトＳＯＣＳ１およびマウスＳＯＣＳ１およびＳＯＣＳ３をコードするＥＳＴからデザインし、市販のマウスの胸腺および脾臓のｃＤＮＡライブラリーをプローブするために使用した。配列決定は製造者の説明書に従ってＡＢＩ自動化シーケンサーを用いて行った。
【０１４８】
実施例７
サザンおよびノーザンブロット分析およびＲＴ−ＰＣＲ
32Ｐ標識化プローブ類は、ランダム・デカヌクレオチド標識キット（ブレサテック、エイデルエイド、South Australia)を用い、プラスミドｐＰＧＫｎｅｏ由来のネオマイシン・ホスホトランスフェラーゼをコードする６００ｂｐのＰｓｔＩ断片、１．４ｋｂｐのＰＣＲ産物のＸｈｏＩ消化により得られたＳＯＣＳ１遺伝子の１０７０ｂｐ断片、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＣＩＳおよびニワトリのグリセルアルデヒド３−リン酸・デヒドロゲナーゼ遺伝子の１．２ｋｂｐ断片から作成した〔ズガイチク，1983〕。
【０１４９】
ゲノムＤＮＡはほぼ記述された通りのプロテイナーゼＫ−ドデシル硫酸ナトリウムを用い、細胞から単離した。１５ｍｇのＤＮＡを、ほぼ記述された〔サムブルック，1989〕通り、ＢａｍＨＩかまたはＳａｃＩかで消化し、０．８％（ｗ／ｖ）アガロースゲル上で分画し、ジーンスクリーンプラス膜（デュポンＮＥＮ、ボストン、ＭＡ）に移転させ、プリハイブリッド形成、ランダムプライム化32Ｐ標識ＤＮＡ断片とのハイブリッド形成を行い、そして洗浄した。
【０１５０】
トリゾール試薬を製造者が推奨するように用いて総ＲＮＡを細胞および組織から単離した〔ギブコＢＲＬ、グランドアイランド、ＮＹ〕。必要なときは、ポリＡ＋ｍＲＮＡはほぼ記述された通り精製した〔アレキサンダー，1995〕。ノーザンブロットは、記述されたように、プリハイブリッド形成、ランダム−プライム化32Ｐ標識ＤＮＡ断片とのハイブリッド形成を行い、そして洗浄した。
【０１５１】
ＩＬ−６によるＳＯＣＳ遺伝子の誘導を評価するため、マウス（Ｃ５７ＢＬ６）に５μｇＩＬ−６を静脈注射し、続いて注射後の指示された時点で肝臓を収穫した。Ｍ１細胞を２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６の存在下に培養し、指示された時間に収穫した。ＲＴ−ＰＣＲ分析のため、骨髄細胞を記述された（メタカーフら, 1995）ように収穫し、そしてある範囲のサイトカインの１００ｎｇ／ｍｌと共に３７℃で１時間刺激した。ＲＴ−ＰＣＲは記述された（メタカーフら, 1995）ように総ＲＮＡについて行った。ＰＣＲ産物はアガロースゲル上で分離し、そしてサザンブロットは各ＳＯＣＳファミリーメンバーに対し特異的なプローブとハイブリッド形成を行わせた。β−アクチンの発現は増幅の均一性を確保するために評価した。
【０１５２】
実施例８
ＤＮＡ構築物およびトランスフェクション
エピトープ標識化ＳＯＣＳ１をコードするｃＤＮＡは、ＳＯＣＳ１コード領域の全体をｐＥＦ−ＢＯＳ発現ベクター〔ミズシマ，1990〕中にサブクローニングすることにより作成され、開始メチオニンの下流に同一枠のＦＬＡＧエピトープをコードするように工学処理をされた（ｐＦ−ＳＯＣＳ１）。すでに記述された〔ヒルトン，1994〕電気穿孔法を用い、トロンボポエチン受容体を発現するＭ１細胞（Ｍ１．ｍｐｌ）を、ＡａｔIIで消化したｐＦ−ＳＯＣＳ１発現プラスミドの２０μｇとその中ではピュロマイシンＮ−アセチルトランスフェラーゼをコードするｃＤＮＡの転写がマウスホスホグリセロキナーゼプロモーターにより駆動されるＳｃａＩ−消化プラスミド（ｐＰＧＫＰｕｒｏｐＡ）の２μｇとでトランスフェクトした。培養して４８時間後に、トランスフェクトされた細胞を２０μｇ／ｍｌピュロマイシン（シグマ・ケミカル・カンパニ、セントルイス、ＭＯ）で選択し、そして製造者（イーストマン・コダック、ロチェスター、ＮＹ）の説明に従って、Ｍ２抗−ＦＬＡＧモノクローナル抗体を用い、ウエスタンブロッティングによりＳＯＣＳ１の発現をスクリーニングした。他の実験では、Ｍ１細胞はｐＦ−ＳＯＣＳ１プラスミドだけまたは対照でトランスフェクトし、ＩＬ−６の１００ｎｇ／ｍｌの存在下に寒天中で生育するその能力により選択した。
【０１５３】
実施例９
免疫沈降およびウエスタンブロッティング
免疫沈降かウエスタンブロッティングの前に、１０7 Ｍ１細胞またはその誘導体を２回洗浄し、１ｍｌのＤＭＥに再懸濁し、そして３７℃で３０分間インキュベートした。ついで、この細胞を塩水かまたは１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６で３７℃で４分間刺激した。その後、バナジウム酸ナトリウム（シグマ・ケミカル・コウ．セントルイス、ＭＩ）を１ｍＭの濃度まで添加した。この細胞を氷の上に置き、１ｍＭのバナジウム酸ナトリウムを含む塩水で１回洗浄し、ついで完全プロテアーゼ阻害剤（ベーリンガー・マンハイム、マンハイム、ドイツ）と１ｍＭのバナジウム酸ナトリウムを含む３００μｌの１％（ｖ／ｖ）トリトンＸ−１００、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＥＤＴＡ、５０ｍＭのトリス−塩酸ｐＨ７．４中で氷上で５分間可溶化した。溶解物を遠心分離により澄明にし、クーマシータンパク検定試薬（ピアス、ロックフォード、ＩＬ）を用いて定量した。
【０１５４】
免疫沈降のためには、等濃度のタンパク抽出物（１〜２ｍｇ）を、４μｇの抗−ｇｐ１３０抗体（Ｍ２０，サンタ・クルス・バイオテクノロジー・インク．、サンタ・クルス、ＣＡ）かまたは４μｇの抗−ホスホチロシン抗体（４Ｇ１０，アプステート・バイオテクノロジー・インク．、レイクプラシド、ＮＹ）および１５μｌの包装容量のプロテインＧセファロース（ファルマシア、ウプサラ、スエーデン）と共に４℃で１時間または一晩インキュベートした〔ヒルトンら，1996〕。免疫沈降物は完全プロテアーゼ阻害剤（ベーリンガー・マンハイム、マンハイム、ドイツ）と１ｍＭのバナジウム酸ナトリウムを含む１％（ｖ／ｖ）ＮＰ４０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのトリス−塩酸ｐＨ８．０中で２回洗浄した。この試料をＳＤＳ試料緩衝液（６２５ｍＭのトリス−塩酸ｐＨ６．８、０．０５％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、０．１％（ｖ／ｖ）グリセロール、ブロモフェノール・ブルー、０．１２５％（ｖ／ｖ）の２−メルカプトエタノール）中で９５℃で５分間加熱し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画しそして上記のように免疫ブロットした。
【０１５５】
ウエスタンブロッティングのためには、細胞抽出物からのタンパク質または免疫沈降反応からの物質の１０μｇを４〜１５％のレディゲル（バイオ−ラド・ラボラトリーズ、ハーキュルス、ＣＡ）上に負荷し、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により分離した。タンパク質をＰＶＤＦ膜（ミクロン・セパレーションズ・インク．、ウエストバロ、ＭＡ）に１００Ｖで１時間移転させた。この膜を下記の一次抗体でプローブした。すなわち、抗−チロシンリン酸化ＳＴＡＴ３（１：１０００希釈、ニューイングランド・ビオラブズ、ビーパリ、ＭＡ）、抗−ＳＴＡＴ３（Ｃ−２０，１：１００希釈、サンタ・クルス・バイオテクノロジー・インク．、サンタ・クルス、ＣＡ）、抗−ｇｐ１３０（Ｍ２０，１：１００希釈、サンタ・クルス・バイオテクノロジー・インク．、サンタ・クルス、ＣＡ）、抗−ホスホチロシン（ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ−結合ＲＣ２０，１：５０００希釈、トランスダクション・ラボラトリーズ、レキシントンＫＹ）、抗−チロシンリン酸化ＭＡＰキナーゼおよび抗−ＭＡＰ−キナーゼ抗体（１：１０００希釈，ニューイングランド・ビオラブズ、ビーバリ、ＭＡ）である。ブロットは製造者（ピアス、ロックフォード、ＩＬ）の説明に従ってペルオキシダーゼ−結合二次抗体および化学発光増強（ＥＣＬ）試薬を用いて可視化した。
【０１５６】
実施例１０
電気泳動移動度シフト検定
結合部位ｍ６７に対する高親和性ＳＩＦ（ｃ−シス−誘導因子）〔ワカオ，1994〕を用い、記述されたように検定を行った〔ノバク，1995〕。タンパク質抽出物は塩水か１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６かまたは１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γを含む血清フリーＤＭＥ１０ｍｌ中で、３７℃で４〜１０分間インキュベートされたＭ１細胞から調製した。結合反応は４〜６μｇタンパク質（一つの実験では一定）、５ｎｇの32Ｐ−標識化ｍ６７オリゴヌクレオチド、および８００ｎｇの音波処理鮭精子ＤＮＡを含んでいた。ある実験では、タンパク質試料は、記述された〔ノバク，1995〕ように、過剰の非標識ｍ６７オリゴヌクレオチドまたはＳＴＡＴ１（トランスダクション・ラボラトリーズ、レキシントンＫＹ）かまたはＳＴＡＴ３（サンタ・クルス・バイオテクノロジー・インク．、サンタ・クルス、ＣＡ）に対し特異的な抗体と共にプリインキュベートされた。
【０１５７】
ウエスタンブロットは、記述された（ニコラら，1996）ように、抗−チロシンリン酸化ＳＴＡＴ３または抗−ＳＴＡＴ３（ニューイングランド・ビオラブズ、ビーバリ、ＭＡ）または抗−ｇｐ１３０（サンタ・クルス・バイオテクノロジー・インク．）を用いて行った。ＥＭＳＡは記述された〔ノバク，1995〕ように、ｍ６７オリゴヌクレオチドプローブを用いて行った。
【０１５８】
実施例１１
サイトカインシグナル伝達の新規サプレッサーの発現クローニング
サイトカイン・シグナル伝達を抑制することができるｃＤＮＡを同定するため、発現クローニングのアプローチを採用した。この戦略はＭ１細胞、すなわち、成熟マクロファージに分化しそしてサイトカインＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭおよびＩＦＮ−γ、およびステロイドであるデキサメタソンに応答して増殖を止める単球白血病細胞系に中心を置いた。親のＭ１細胞を、因子−依存性造血細胞系ＦＤＣ−Ｐ１由来のｃＤＮＡがクローニングされているＲＵＦｎｅｏレトロウイルスで感染させた。このレトロウイルスでは、ネオマイシン耐性遺伝子およびクローニングされたｃＤＮＡの転写がレトロウイルスＬＴＲ中に存在する強力な構成プロモーターにより駆動された（図１）。半固体寒天中で培養すると、親のＭ１細胞は大きな硬く詰まったコロニーを形成する。ＩＬ−６で刺激すると、Ｍ１細胞は急速な分化を受け寒天中に唯１個のマクロファージまたは小さな分散した細胞の集団の形成を生ずる。ＩＬ−６に非応答性であったレトロウイルス−感染Ｍ１細胞をＩＬ−６およびゲネティシンの存在下に大きな硬く詰まったコロニーを形成するその能力により半固体寒天中で選択した。１個の安定なＩＬ−６−非応答性クローンである４Ａ２を、１０4 個の感染細胞の検討の後に得た。
【０１５９】
クローン４Ａ２からのゲノムＤＮＡのサザンブロットをプローブするために、ネオマイシン・ホスホトランスフェラーゼの断片（ｎｅｏ）を使用した。そしてこれにより、この細胞系が約１．４ｋｂｐの長さのｃＤＮＡを含む１個のレトロウイルスで感染されたことが明らかにされた（図２）。このｃＤＮＡクローニング部位の両側にあるレトロウイルスベクター由来のプライマーを用いるＰＣＲ増幅により、１．４ｋｂｐｃＤＮＡ挿入物、これをサイトカイン・シグナル形成のサプレッサー−１、すなわち、ＳＯＣＳ−１と命名した、を回収することができた。このＰＣＲ産物を４Ａ２ゲノムＤＮＡの同様なサザンブロットをプローブするために使用し、そして二つの断片、一方は内因性のＳＯＣＳ１遺伝子に相当するもの、他方は組み込まれたレトロウイルス中にクローニングされたＳＯＣＳ１ｃＤＮＡに相当し、ｎｅｏプローブを用いて見られたバンドのサイズと合致していたもの、とハイブリッド形成をさせた（図２）。後者は無関係なｃＤＮＡを含むレトロウイルスで感染させたＭ１細胞クローン中では観察されなかった。同様に、ノーザンブロット分析により、ＳＯＣＳ１ｍＲＮＡがこの細胞系４Ａ２に豊富であるが、対照を感染させたＭ１細胞クローン中ではそうでないことが明らかとなった（図２）。
【０１６０】
実施例１２
ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳはＳＨ２−含有タンパク質の新規なファミリーを規定する
マウス胸腺ｃＤＮＡライブラリーから相同なｃＤＮＡを単離するために、ＳＯＣＳ１ＰＣＲ産物を使用した。このＰＣＲ産物と同一であると証明されたｃＤＮＡの配列は、ＳＯＣＳ１タンパク質の突然変異というより構成的または過剰発現を示唆するが、これはＩＬ−６−非応答性表現型の生成には十分であった。ＳＯＣＳ１ｃＤＮＡの配列をヌクレオチド配列データベースと比較すると、それはマウス染色体１６上に見出されたプロタミン遺伝子群を含むマウスおよびラットのゲノムＤＮＡクローン上に存在していた。より詳細な精査により、１．４ｋｂｐＳＯＣＳ１配列はプロタミン遺伝子類のどれとも相同でなく、むしろこれらのクローンの３’最末端に位置する未だ未同定のオープン・リーディング・フレームを表していることが明らかとなった（図３）。ＳＯＣＳ１ｃＤＮＡの配列とゲノム座の間には不連続の領域はなかった。このことはＳＯＣＳ１が１個のエキソンによりコードされていることを示唆する。プロタミン遺伝子を含むゲノム座に加え、一連のマウスおよびヒトの発現され配列決定されたタグ（ＥＳＴ）もマウスＳＯＣＳ１に対するヌクレオチド配列同定のための大きなブロックを明らかにした。ヒトＥＳＴにより与えられたこの配列情報はヒトＳＯＣＳ１をコードするｃＤＮＡの迅速なクローニングを可能にした。
【０１６１】
マウスおよびラットのＳＯＣＳ１遺伝子は２１２アミノ酸タンパクをコードするが、一方、ヒトＳＯＣＳ１遺伝子は２１１アミノ酸タンパクをコードする。マウス、ラットおよびヒトのＳＯＣＳ１タンパク質は９５〜９９％のアミノ酸同一を共有する（図９）。ＳＯＣＳ１の予言されたアミノ酸配列で翻訳された核酸データベースをサーチすると、最近クローニングされたサイトカイン誘導可能な直前遺伝子産物であるＣＩＳおよびＥＳＴの二つのクラスに最も関係することが明らかとなった。ＥＳＴの二つのクラスから全長ｃＤＮＡを単離し、そしてこれらがＳＯＣＳ１とＣＩＳに類似の長さおよび全体構造を持つタンパク質をコードすることを発見した。これらのクローンをＳＯＣＳ２およびＳＯＣＳ３と名づけた。４個のタンパク質はそれぞれ中央のＳＨ２ドメインとＳＯＣＳモチーフと名づけられたＣ−末端領域を含む。ＳＯＣＳ１タンパク質は異なる種の間でも極めて高いレベルのアミノ酸配列類似性（９５〜９９％同一）を示す。しかしながら、同一動物由来のＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳの形は、明らかにＳＨ２−含有タンパク質の新ファミリーを規定しながらも、より低いアミノ酸同一性を示した。ＳＯＣＳ２とＣＩＳはほぼ３８％のアミノ酸同一性を示し、一方、このファミリーの残りのメンバーはほぼ２５％のアミノ酸同一性を共有する（図９）。ＳＯＣＳ１とＳＯＣＳ３に対する遺伝子のコード領域はイントロンを含まないように見えるが、ＳＯＣＳ２およびＣＩＳに対する遺伝子のコード領域は、それぞれ１個および２個のイントロンを含む。
【０１６２】
本明細書で言及した配列に対するゲンバンク寄託番号は、マウスＳＯＣＳ１ｃＤＮＡ（Ｕ８８３２５）、ヒトＳＯＣＳ１ｃＤＮＡ（Ｕ８８３２６）、マウスＳＯＣＳ２ｃＤＮＡ（Ｕ８８３２７）、マウスＳＯＣＳ３ｃＤＮＡ（Ｕ８８３２８）である。
【０１６３】
実施例１３
ある範囲のサイトカインの作用を抑制するＳＯＣＳ１の構成的発現
【０１６４】
４Ａ２細胞系の表現型がＳＯＣＳ１の発現に直接関係し、そしてこれらの細胞内で独立に起こりうる遺伝的変化とは無関係であることを正式に確立するため、ＥＦＩαプロモーターの制御の下にＳＯＣＳ１のエピトープ−標識型をコードするｃＤＮＡを親のＭ１細胞およびトロンボポエチンの受容体であるｃ−ｍｐｌ（Ｍ１．ｍｐｌ）を発現するＭ１細胞中にトランスフェクトした。両細胞系中へのＳＯＣＳ発現ベクターのトランスフェクションはＩＬ−６に非応答性のＭ１細胞の頻度の増加をもたらした。
【０１６５】
ウエスタンブロットにより検出すると、Ｍ１細胞発現ＳＯＣＳ１の複数の独立クローンが４Ａ２とは識別し得ないサイトカイン−非応答性表現型を発揮した。さらに、トランスフェクタントをピュロマイシン中で維持しなかったときは、ＳＯＣＳ１の発現が時間の経過と共に失われ、細胞はそれらのサイトカイン非応答性を再び獲得した。サイトカインの非存在下では、４Ａ２およびクローンを発現する他のＳＯＣＳ１由来のコロニーは対照Ｍ１細胞により形成されるコロニーよりも小さなサイズに成長する特徴をもっていた（図１０）。
【０１６６】
ある範囲のサイトカインへのＭ１細胞の応答に対する構成的ＳＯＣＳ１発現の影響を、４Ａ２細胞系およびＳＯＣＳ１を発現するＭ１．ｍｐｌ細胞のクローン（Ｍ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）を用いて研究した。親のＭ１細胞およびＭ１．ｍｐｌ細胞と異なり、ＳＯＣＳ１を発現するこの二つの細胞系は増殖を続け、そしてＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＦＮ−γのいずれかまたはＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１細胞系の場合はトロンボポエチンに応答して分化したコロニーを形成することに失敗した（図４）。しかしながら、両細胞系については、デキサメタソンに対する正常な応答が観察され、このことはＳＯＣＳ１が分化そのものよりもサイトカイン・シグナル伝達に特異的に影響を与えたことを示唆する。これらのデータと一致して、親のＭ１細胞およびＭ１．ｍｐｌ細胞はＩＬ−６に応答して大きくなりそして空胞を生じたが、４Ａ２細胞およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１細胞はＩＬ−６または他のサイトカインに応答する形態的な分化の証拠を示さなかった（図５）。
【０１６７】
実施例１４
ＳＯＣＳ１は、ＳＴＡＴ３リン酸化および活性化を含むある範囲のＩＬ−６シグナル伝達プロセスを阻害する
細胞表面受容体成分ｇｐ１３０、細胞質チロシンキナーゼＪＡＫ１および転写因子ＳＴＡＴ３のリン酸化は、ＩＬ−６シグナル伝達における中心的役割を果たすと考えられる。これらの事象を親Ｍ１およびＭ１．ｍｐｌ細胞系およびそれらのＳＯＣＳ１発現タイプ中で比較した。予想されたように、ｇｐ１３０は両方の親系中でＩＬ−６に応答して急速にリン酸化された。しかしながら、ＳＯＣＳ１を発現する細胞系中ではこれは５倍から１０倍減少した（図６）。同様に、ＳＴＡＴ３リン酸化もＳＯＣＳ１を発現するこれらの細胞系中ではＩＬ−６に応答してほぼ１０倍まで減少した（図６）。ＳＴＡＴ３リン酸化における減少と一致して、特異的ＳＴＡＴ・ＤＮＡ結合複合体の活性化も、電気泳動移動度シフト検定により測定すると、減少した。明らかに、ＳＩＦ−Ａ（ＳＴＡＴ３を含む）、ＳＩＦ−Ｂ（ＳＴＡＴ１／ＳＴＡＴ３ヘテロダイマー）およびＳＩＦ−Ｃ（ＳＴＡＴ１を含む）の形成における減少があった（図７）。これら３個のＳＴＡＴ複合体はＩＬ−６で刺激されたＭ１細胞中で誘導されるものであった。同様に、ＳＯＣＳ１の構成的発現はｐ９１ホモダイマーのＩＦＮ−γに刺激される形成をも阻害した（図７）。ｓｈｃやＭＡＰキナーゼを含む他のタンパクのリン酸化も同様な程度まで減少したので、ＳＴＡＴのリン酸化および活性化がＳＯＣＳ１発現によってもたらされた唯一の細胞質プロセスではなかった（図７）。
【０１６８】
実施例１５
ＳＯＣＳ１遺伝子の転写はイン・ビトロおよびイン・ビボでＩＬ−６により刺激される
ＳＯＣＳ１はＭ１細胞中で構成的に発現するときサイトカイン・シグナル伝達を阻害することができるが、これは必ずしもＳＯＣＳ１がＩＬ−６応答を負に調節することを正常な機能としていることを示すものではない。この可能性を研究するため、本発明者らは、ＳＯＣＳ１遺伝子の転写がＩＬ−６に対するＭ１細胞の応答の中で調節されるか否かを決定し、そして傷害や感染に対する緊急の応答の調節においてＩＬ−６が果たす決定的役割の故に、５ｍｇのＩＬ−６の静脈注射に対する肝臓の応答を測定した。ＩＬ−６の非存在下では、ＳＯＣＳ１ｍＲＮＡはＭ１細胞でも肝臓でも検出不可能であった。しかしながら、両細胞タイプについて、ＩＬ−６により、１．４ｋｂＳＯＣＳ１転写物が２０〜４０分内に誘導された（図８）。実験の間中ＩＬ−６が存在していたＭ１細胞では、ＳＯＣＳ１ｍＲＮＡのレベルは高く維持された（図８）。逆に、ＩＬ−６を１回の静脈注射によりイン・ビボに投与すると循環系から急速に消失し、肝臓にＩＬ−６刺激のパルスが生じた。これと一致して、ＳＯＣＳ１ｍＲＮＡの一過性の発現が肝臓で検出可能であった。そのピークは注射後ほぼ４０分であり、４時間以内に基準レベルまで低下した（図８）。
【０１６９】
実施例１６
ＳＯＣＳ遺伝子の調節
ＣＩＳはサイトカイン誘導可能な直前遺伝子としてクローニングされたので、本発明者らはＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２およびＳＯＣＳ３が同様に調節されるか否かを検討した。この４個のＳＯＣＳ遺伝子の発現の基本パターンを雄および雌のＣ５７Ｂ１／６マウスからの多種類の組織由来のｍＲＮＡのノーザンブロット分析で検討した（図１１Ａ）。ＳＯＣＳ１の構成的発現が胸腺で観察され、そしてより少ない程度であるが脾臓および肝臓でも観察された。ＳＯＣＳ２の発現は主として睾丸に限定され、一部の動物では肝臓および肺臓で観察された。ＳＯＣＳ３では、肺臓、脾臓および胸腺で低レベルの発現が観察されたが、ＣＩＳの発現は睾丸、心臓、肺臓、腎臓および一部の動物では肝臓などを含みより広範囲であった。
【０１７０】
本発明者らは４個のＳＯＣＳ遺伝子の発現がＩＬ−６により調節されるか否かを決定した。未処理およびＩＬ−６注射マウスの肝臓から、または未刺激およびＩＬ−６刺激Ｍ１細胞から調製されたｍＲＮＡのノーザンブロットを、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳのｃＤＮＡの標識化断片とハイブリッド形成をさせた（図１１Ｂ）。４個のＳＯＣＳ遺伝子のすべての発現はＩＬ−６注射の後の肝臓で増加した。しかしながら、誘導の動力学は異なるように見えた。ＳＯＣＳ１およびＳＯＣＳ３の発現は肝臓で一過性であり、ｍＲＮＡはＩＬ−６注射の２０分後に検出可能でありそしてＳＯＣＳ１については４時間以内、ＳＯＣＳ３については８時間以内に基準レベルまで減少した。肝臓中のＳＯＣＳ２およびＣＩＳｍＲＮＡの誘導はＳＯＣＳ１の初期動力学に類似の動力学に従ったが、少なくとも２４時間は高いレベルに維持された。明らかに肺臓や脾臓を含む他の器官でも、ＳＯＣＳ遺伝子ｍＲＮＡの同様な誘導が観察された。逆に、Ｍ１細胞では、ＳＯＣＳ１およびＣＩＳｍＲＮＡはＩＬ−６により誘導されたが、ＳＯＣＳ２またはＳＯＣＳ３の発現の誘導はいずれも検出されなかった。この結果は、同一サイトカインに対する応答において、ＳＯＣＳファミリー遺伝子の発現における細胞タイプ特異的な相違を浮き彫りにする。
【０１７１】
ＳＯＣＳ遺伝子ファミリーの種々のメンバーの転写を誘導することができるサイトカインのスペクトルを検討するために、骨髄細胞をある範囲のサイトカインで１時間刺激し、その後ｍＲＮＡを抽出し、そしてｃＤＮＡを合成した。次いで、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳの発現を評価するためＰＣＲを使用した（図１１Ｃ）。刺激が存在しないときは、どのＳＯＣＳ遺伝子の発現も骨髄中ではＰＣＲにより検出することができなかった。広範囲のサイトカインで骨髄細胞を刺激すると、ＳＯＣＳファミリーの一つ以上のメンバーに対するｍＲＮＡを高く調節することができるように見えた。例えば、ＩＦＮγは４個のＳＯＣＳ遺伝子のすべての発現を誘導したが、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球−マクロファージ・コロニー刺激因子およびインターロイキン−３はＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳの発現を誘導した。腫瘍壊死因子α、マクロファージ・コロニー刺激因子およびインターロイキン−１も、これらはタイプＩサイトカイン受容体クラスには属しない受容体を介して作用するが、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳの発現を誘導することができるように見え、このことはＳＯＣＳタンパク質がシグナル伝達を調節する際により広い役割を果たし得ることを示唆する。
【０１７２】
ＳＯＣＳ１の構成的発現はＭ１細胞のある範囲のサイトカインに対する応答を阻害したから、本発明者らはＩＬ−６シグナル伝達で中心的役割を果たすと考えられている細胞表面受容体ｇｐ１３０および転写因子ＳＴＡＴ３のリン酸化が影響されるか否かを検討した。これらの事象は親のＭ１およびＭ１．ｍｐｌ細胞系およびそれらのＳＯＣＳ発現タイプで比較した。予想された通り、ｇｐ１３０は両方の親の系でＩＬ−６に応答して急速にリン酸化された。しかしながら、これはＳＯＣＳ１を発現する細胞系では減少した（図１２Ａ）。同様に、ＩＬ−６に応答するＳＴＡＴ３のリン酸化もＳＯＣＳ１を発現するこれらの細胞系で減少した（図１２Ａ）。ＳＴＡＴ３のリン酸化の減少と一致して、特異的ＳＴＡＴ／ＤＮＡ結合複合体の活性化も、電気泳動移動度シフト検定により測定するとき、減少した。ＩＬ−６で刺激されたＭ１細胞中で誘導される主要なＳＴＡＴ複合体である、ＳＩＦ−Ａ（ＳＴＡＴ３を含む）およびＳＩＦ−Ｂ（ＳＴＡＴ１／ＳＴＡＴ３ヘテロダイマー）の形成に失敗があったことは明らかである（図１２Ｂ）。同様に、ＳＯＣＳ１の構成的発現もＩＦＮγ−刺激によるＳＩＦ−Ｃ（ＳＴＡＴ１ホモダイマー、図１２Ｂ）の形成を阻害した。これらの実験は、ＳＯＣＳ１が受容体の上流のシグナル伝達およびおそらくＪＡＫキナーゼのレベルにおけるＳＴＡＴのリン酸化を阻害するという提案と一致するものである。
【０１７３】
シグナル伝達および最終的にはサイトカインに対する生物学的応答を阻害するＳＯＣＳ１の能力は、ＳＨ２を含むホスファターゼＳＨＰ−１〔イーレ，1994、イーら, 1993〕と同様に、ＳＯＣＳタンパク質が、シグナル伝達プロセスを抑制することにより多様な範囲の細胞外刺激に対する細胞の応答の強さおよび／または期間を制御するのに中心的役割を果たしていることを示唆する。本明細書で提供した証拠は、ＳＯＣＳファミリーがシグナル伝達に対し古典的なネガティブ・フィードバック・ループの中で作用することを示唆する。ＯＳＭなどの他の遺伝子のように、ＳＯＣＳタンパク質をコードする遺伝子の発現はサイトカインによりＳＴＡＴの活性化を通して誘導される。一度発現されると、ＳＯＣＳタンパク質はＪＡＫの活性を阻害しそして受容体およびＳＴＡＴのリン酸化を減少させ、それによりシグナル伝達をそして後に続く生物学的応答をすべて抑制する。ＳＴＡＴの活性化の阻害は、時間が経つと、ＳＯＣＳ遺伝子発現の減少をもたらし、細胞はサイトカインに対する応答性を再び獲得できるようになる。
【０１７４】
実施例１７
データベースの探索
発現された配列タグ（ＥＳＴ）の主要なデータベースおよびヒトの発現された配列タグのＴＩＧＲデータベースを包含するＮＣＢＩの遺伝配列データベース（ゲンバンク）について、ＴＦＡＳＴＡおよびＭＯＴＩＦ／ＰＡＴＴＥＲＮアルゴリズム〔ピアソン，1990、コックウエルおよびガイルス, 1989〕を用いコンセンサスＳＯＣＳボックス配列に類似性を持つ配列を探索した。ソフトウエアパッケージＳＲＳ〔エツォルドら，1996〕を用い、ＳＯＣＳボックス（およびｃＤＮＡの他の末端の配列決定から導かれたそれらのパートナー）に類似性を示したＥＳＴを取ってきて、オートアセンブラー（アプライド・バイオシステムズ、フォスターシティー、ＣＡ）を用いてコンティグに組立てた。重複するＥＳＴから導かれたコンセンサスヌクレオチド配列を次にＢＬＡＳＴＮ〔アルチュールら，1990〕を用いて種々のデータベースを探索するために使用した。再び、陽性のＥＳＴを取ってきてコンティグに加えた。このプロセスはさらなるＥＳＴが回収できなくなるまで繰り返した。次に最終的コンセンサスヌクレオチド配列をシークェンス・ナビゲーター（アプライド・バイオシステムズ、フォスターシティー、ＣＡ）を用いて翻訳した。
【０１７５】
新規なＳＯＣＳタンパク質をコードするＥＳＴは下記のものである。ヒトＳＯＣＳ４（ＥＳＴ８１１４９、ＥＳＴ１８０９０９、ＥＳＴ１８２６１９、ｙａ９９Ｈ０９、ｙｅ７０ｃｏ４、ｙｈ５３ｃ０９、ｙｈ７７ｇ１１、ｙｈ８７ｈ０５、ｙｉ４５ｈ０７、ｙｊ０４ｅ０６、ｙｑ１２ｈ０６、ｙｑ５６ａ０６、ｙｑ６０ｅ０２、ｙｑ９２ｇ０３、ｙｑ９７ｈ０６、ｙｒ９０ｆ０１、ｙｔ６９ｃ０３、ｙｖ３０ａ０８、ｙｖ５５ｆ０７、ｙｖ５７ｈ０９、ｙｖ８７ｈ０２、ｙｖ９８ｅ１１、ｙｗ６８ｄ１０、ｙｗ８２ａ０３、ｙｘ０８ａ０７、ｙｘ７２ｈ０６、ｙｘ７６ｂ０９、ｙｙ３７ｈ０８、ｙｙ６６ｂ０２、ｚａ８１ｆ０８、ｚｂ１８ｆ０７、ｚｃ０６ｅ０８、ｚｄ１４ｇ０６、ｚｄ５１ｈ１２、ｚｄ５２ｂ０９、ｚｅ２５ｇ１１、ｚｅ６９ｆ０２、ｚｆ５４ｆ０３、ｚｈ９６ｅ０７、ｚｖ６６ｈ１２、ｚｓ８３ａ０８およびｚｓ８３ｇ０８）。マウスＳＯＣＳ−４（ｍｃ６５ｆ０４：ｍｆ４２ｅ０６：ｍｐ１０ｃ１０：ｍｒ８１ｇ０９：およびｍｔ１９ｈ１２）。ヒトＳＯＣＳ−５（ＥＳＴ１５Ｂ１０３：ＥＳＴ１５Ｂ１０５：ＥＳＴ２７５３０およびｚｆ５０ｆ０１）。マウスＳＯＣＳ−５（ｍｃ５５ａ０１：ｍｈ９８ｆ０９：ｍｙ２６ｈ１２およびｖｅ２４ｅ０６）。ヒトＳＯＣＳ−６（ｙｆ６１ｅ０８、ｙｆ９３ａ０９、ｙｇ０５ｆ１２、ｙｇ４１ｆ０４、ｙｇ４５ｃ０２、ｙｈ１１ｆ１０、ｙｈ１３ｂ０５、ｚｃ３５ａ１２、ｚｅ０２ｈ０８、ｚｌ０９ａ０３、ｚｌ６９ｅ１０、ｚｎ３９ｄ０８およびｚｏ３９ｅ０６）。マウスＳＯＣＳ−６（ｍｃ０４ｃ０５、ｍｄ４８ａ０３、ｍｆ３１ｄ０３、ｍｈ２６ｂ０７、ｍｈ７８ｅ１１、ｍｈ８８ｈ０９、ｍｈ９４ｈ０７、ｍｉ２７ｈ０４、およびｍｊ２９ｃ０５、ｍｐ６６ｇ０４、ｍｗ７５ｇ０３、ｖａ５３ｂ０５、ｖｂ３４ｈ０２、ｖｃ５５ｄ０７、ｖｃ５９ｅ０５、ｖｃ６７ｄ０３、ｖｃ６８ｄ１０、ｖｃ９７ｈ０１、ｖｃ９９ｃ０８、ｖｄ０７ｈ０３、ｖｄ０８ｃ０１、ｖｄ０９ｂ１２、ｖｄ１９ｂ０２、ｖｄ２９ａ０４およびｖｄ４６ｄ０６）。ヒトＳＯＣＳ−７（ＳＴＳ／ＷＩ３０１７１、ＥＳＴ００９３９、ＥＳＴ１２９１３、ｙｃ２９ｂ０５、ｙｐ４９ｆ１０、ｚｔ１０ｆ０３およびｚｘ７３ｇ０４）。マウスＳＯＣＳ−７（ｍｊ３９ａ０１およびｖｉ５２ｈ０７）。マウスＳＯＣＳ−８（ｍｊ６ｅ０９およびｖｊ２７ａ０２９）。ヒトＳＯＣＳ−９（ＣＳＲＬ−８２ｆ２−ｕ、ＥＳＴ１１４０５４、ｙｙ０６ｂ０７、ｙｙ０６ｇ０６、ｚｒ４０ｃ０９、ｚｒ７２ｈ０１、ｙｘ９２ｃ０８、ｙｘ９３ｂ０８およびｈｆｅ０６６２）。マウスＳＯＣＳ−９（ｍｅ６５ｄ０５）。ヒトＳＯＣＳ−１０（ａａ４８ｈ１０、ｚｐ３５ｈ０１、ｚｐ９７ｈ１２、ｚｑ０８ｈ０１、ｚｒ３４ｇ０５、ＥＳＴ７３０００およびＨＳＤＨＥＩ００５）。マウスＳＯＣＳ−１０（ｍｂ１４ｄ１２、ｍｂ４０ｆ０６、ｍｇ８９ｂ１１、ｍｑ８９ｅ１２、ｍｐ０３ｇ１２およびｖｈ５３ｃ１１）。ヒトＳＯＣＳ−１１（ｚｔ２４ｈ０６およびｚｒ４３ｂ０２）。ヒトＳＯＣＳ−１３（ＥＳＴ５９１６１）。マウスＳＯＣＳ−１３（ｍａ３９ａ０９、ｍｅ６０ｃ０５、ｍｉ７８ｇ０５、ｍｋ１０ｃ１１、ｍｏ４８ｇ１２、ｍｐ９４ａ０１、ｖｂ５７ｃ０７およびｖｈ０７ｃ１１）。ヒトＳＯＣＳ−１４（ｍｉ７５ｅ０３、ｖｄ２９ｈ１１およびｖｄ５３ｇ０７）。
【０１７６】
実施例１８
ｃＤＮＡクローニング
重複ＥＳＴから導かれたコンセンサス配列に基づいて、ＳＯＣＳファミリーの種々のメンバーに特異的なオリゴヌクレオチドを設計した。上述のように、オリゴヌクレオチドを標識化し、λバクテリオファージにクローニングされた市販のゲノムおよびｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用した。マウスＳＯＣＳ−４、マウスＳＯＣＳ５およびマウスＳＯＣＳ６の全コード領域をカバーするゲノムおよび／またはｃＤＮＡクローンが単離された。ＳＯＣＳ１５に対する全遺伝子はヒト１２ｐ１３ＢＡＣ（ゲンバンク寄託番号ＨＳＵ４７９２４）およびマウス染色体６ＢＡＣ（ゲンバンク寄託番号ＡＣ００２３９３）の上にある。マウスＳＯＣＳ７、ＳＯＣＳ９、ＳＯＣＳ１０、ＳＯＣＳ１１、ＳＯＣＳ１２、ＳＯＣＳ１３およびＳＯＣＳ１４に対する部分ｃＤＮＡも単離された。
【０１７７】
実施例１９
ノーザンブロットおよびｒｔＰＣＲ
ノーザンブロットは上述のように行った。ハイブリッド形成プローブの起源は次のものであった。 (i)マウスＳＯＣＳ１ｃＤＮＡの全コード領域、(ii)ＳＨ２ドメインの上流のＳＯＣＳ５のコード領域から誘導される１０５９ｂｐＰＣＲ産物、(iii) マウスＳＯＣＳ6
ｃＤＮＡの全コード領域、(iv)部分的ＳＯＣＳ７ｃＤＮＡのコード領域から誘導される７９０ｂｐＰＣＲ産物、および(v) ニワトリのグリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）ｃＤＮＡの１２００ｂｐのＰｓｔＩ断片。
【０１７８】
実施例２０
ＳＯＣＳファミリーの付加的メンバー
ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２およびＳＯＣＳ３は実施例１〜１６で同定されたＳＯＣＳタンパク質ファミリーのメンバーである。それぞれは中央のＳＨ２ドメインとＳＯＣＳボックスと名付けられたＣ−末端の保存されたモチーフを含む。このタンパク質ファミリーのさらなるメンバーを単離するため、ＳＯＣＳボックスの保存された残基に対応するアミノ酸配列を用いて種々のＤＮＡデータベースを探索した。この探索により、ＳＯＣＳタンパク質ファミリーのさらなる１２のメンバーをコードするヒトおよびマウスＥＳＴの存在が明らかになった（図１３）。この配列情報を用いてＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ６、ＳＯＣＳ７、ＳＯＣＳ９、ＳＯＣＳ１０、ＳＯＣＳ１１、ＳＯＣＳ１２、ＳＯＣＳ１３、ＳＯＣＳ１４およびＳＯＣＳ１５をコードするｃＤＮＡが単離された。ＥＳＴおよびｃＤＮＡから誘導されるコンティグのさらなる解析からＳＯＣＳタンパク質がＳＯＣＳボックスのＮ末端のそれらの予言された構造に従って３グループに分けられることが明らかとなった。この三つのグループとは(i) ＳＨ２ドメインをもつもの、(ii)ＷＤ−４０反復をもつもの、および(iii) アンキリン反復をもつものである。
【０１７９】
実施例２１
ＳＨ２ドメインを持つＳＯＣＳタンパク質
ＳＨ２ドメインをもつ８個のＳＯＣＳタンパク質が同定された。これらはＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２およびＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ９、ＳＯＣＳ１１およびＳＯＣＳ１４である（図１３）。ｃＤＮＡの全長がマウスＳＯＣＳ５およびＳＯＣＳ１４から単離されそしてマウスＳＯＣＳ９およびＳＯＣＳ１４をコードする部分的クローンが単離された。一次アミノ酸配列およびゲノム構造の分析から、これらのタンパクの次の対（ＳＯＣＳ１とＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ２とＣＩＳ、ＳＯＣＳ５とＳＯＣＳ１４、およびＳＯＣＳ９とＳＯＣＳ１１）が最も近縁であることが示唆される（図１３）。実際、ＳＯＣＳ５およびＳＯＣＳ１４のＳＨ２ドメインは最も同一性が高く（図１３Ｂ）、そしてＣＩＳ、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２およびＳＯＣＳ３とは似ていない、ＳＯＣＳ５とＳＯＣＳ１４はそれらのＳＨ２ドメインに先行する広いＮ末端領域、余り保存されていないが、を持っている（図１３Ａ）。
【０１８０】
実施例２２
ＷＤ−４０反復を有するＳＯＣＳタンパク質
ＷＤ−４０反復を有する４個のＳＯＣＳタンパク質が同定された。ＳＨ２ドメインをもつＳＯＣＳタンパク質については、これらのタンパク質の対が近縁であるように見えた。マウスＳＯＣＳ４とＳＯＣＳ６の全長ｃＤＮＡが単離され、ＳＯＣＳボックスのＮ−末端の８個のＷＤ−４０反復を含むタンパク質をコードすることが示され（図１３）そしてＳＯＣＳ４とＳＯＣＳ６は６５％のアミノ酸類似性を共有していた。ＳＯＣＳ１５はヒト染色体１２ｐ１３およびマウス染色体６の合成領域からのＢＡＣｓを配列決定する際のオープン・リーディング・フレームとして認識された〔アンサリ−ラリら，1997〕。ヒト、チンパンジーおよびマウスでは、ＳＯＣＳ１５はトリオース・ホスフェート・イソメラーゼ（ＴＰＩ）遺伝子の３’末端の数１００塩基対以内にある二つのコードエキソンを持つ遺伝子によりコードされるが、それはＴＰＩに対する反対鎖の上にコードされている（９）。Ｃ末端のＳＯＣＳボックスに加えて、ＳＯＣＳ１５タンパク質は４個のＷＤ−４０反復を含んでいる。ＥＳＴデータベース内に、ＳＯＣＳ１５に近縁なセンチュウ、昆虫および魚の配列が存在することは興味深い。ＳＯＣＳ１５はＳＯＣＳ１３に最も近縁であるように見える。
【０１８１】
実施例２３
アンキリン反復を有するＳＯＣＳタンパク質
アンキリン反復を有する３個のＳＯＣＳタンパク質を同定した。マウスＳＯＣＳ７、ＳＯＣＳ１０およびＳＯＣＳ１２の部分ｃＤＮＡの分析より、多数のアンキリン反復の存在が証明された。
【０１８２】
実施例２４
ＳＯＣＳタンパク質の発現パターン
ＳＯＣＳタンパク質のそれぞれのクラスの代表的メンバー、すなわち、ＳＨ２ドメイングループからＳＯＣＳ１およびＳＯＣＳ５、ＷＤ−４０反復グループからＳＯＣＳ６、そしてアンキリン反復グループからＳＯＣＳ７、からのｍＲＮＡの発現を検討した。上に示すように、ＳＯＣＳ１ｍＲＮＡは胸腺中に豊富でありそして他の成熟組織ではより低レベルである。
【０１８３】
ＳＯＣＳ１遺伝子の転写はサイトカインにより誘導されるので、本発明者らはサイトカイン刺激の際にＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ６およびＳＯＣＳ７のｍＲＮＡレベルが増加するか否かを決定しようとした。ＩＬ−６を注射したマウスの肝臓では、ＳＯＣＳ１ｍＲＮＡは２０分後に検出可能であり、そして２時間以内にバックグラウンドレベルに減少した。対照的に、ＳＯＣＳ５ｍＲＮＡ発現の動力学は全く異なり、ＩＬ−６注射の１２〜２４時間後にのみ検出可能であった。ＳＯＣＳ６ｍＲＮＡは構成的に発現するようであるが、ＳＯＣＳ７ｍＲＮＡはＩＬ−６の注射前でも注射後のどの時点でも肝臓では検出されなかった。
【０１８４】
これらの遺伝子の発現は、ｂｃｌ−ｗを発現するように工学処理された因子−依存性細胞系ＦＤＣＰ−１のサイトカイン刺激後でも検討された。ここでも、ＳＯＣＳ６ｍＲＮＡは構成的に発現された。
【０１８５】
実施例２５
ＳＯＣＳ４
マウスおよびヒトのＳＯＣＳ４はＳＯＣＳボックス・コンセンサスを用いてＥＳＴデータベースを探索することにより発見された（図１３）。これらのマウスおよびヒトのＳＯＣＳ４ｃＤＮＡ由来のＥＳＴを以下の表で示す（表４．１および４．２）。マウスＥＳＴからの配列情報を用いて、幾つかのオリゴヌクレオチドを設計し、常法に従って、λ−バクテリオファージ中にクローニングされたマウスの胸腺ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用した。マウスＳＯＣＳ４をコードする二つのｃＤＮＡが単離され、その全体について配列決定がなされた（図１５）、そしてデータベースで同定されたマウスＥＳＴと重なることが証明された（表４．１および図１７）。これらのｃＤＮＡは５’非翻訳領域の一部、マウスＳＯＣＳ４全コード領域、および３’非翻訳領域の一部を含んでいる（図１７）。配列の分析により、ＳＯＣＳ４ｃＤＮＡがそのＣ−末端にあるＳＯＣＳボックス及びＳＯＣＳボックスの前にある一連の８個のＷＤ−４０反復をコードすることが確認される（図１７および１６）。実験的に決定されたマウスＳＯＣＳ４ｃＤＮＡ配列に対するヒトＳＯＣＳ４の二つの配列コンティグ（ｈ4.1 およびｈ4.2 ）の関係は図１７に示される。この二つのヒトコンティグのヌクレオチド配列は図１８にリストする。
配列番号：１３および１４はマウスＳＯＣＳ４のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列を表す。配列番号：１５および１６はそれぞれＳＯＣＳ４ｃＤＮＡヒトコンティグｈ4.1 およびｈ4.2
である。
【０１８６】
実施例２６
ＳＯＣＳ５
マウスおよびヒトＳＯＣＳ５はＳＯＣＳボックス・コンセンサスを用いるＥＳＴデータベースの探索により発見された（図１３）。マウスおよびヒトＳＯＣＳ５ｃＤＮＡ由来のこれらのＥＳＴは以下の表（表５．１および５．２）に示す。マウスおよびヒトＥＳＴからの配列情報を用い、幾つかのオリゴヌクレオチドを設計し、常法に従って、λ−バクテリオファージ中にクローニングしたマウス胸腺ｃＤＮＡライブラリー、マウスゲノムライブラリーおよびヒト胸腺ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用した。１個のゲノムＤＮＡクローン（５７−２）およびマウスＳＯＣＳ５をコードするｃＤＮＡクローン（５−３−２）を単離し、そしてそれらの全体を配列決定し、データベース中で同定されたマウスＥＳＴと重なることが示された（図１９および２０Ａ）。その全体コード領域は、マウスＳＯＣＳ５の５’および３’非翻訳領域の一部に加えて、１個のエキソンの上にコードされているように見える（図１９）。配列の分析（図２０）により、ＳＯＣＳ５のゲノムクローンおよびｃＤＮＡクローンがＳＨ２ドメインに加えそのＣ−末端に一つのＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることが確認される（図１９および２０Ｂ）。ｃＤＮＡクローン５−９４−２およびヒトＳＯＣＳ５・ＥＳＴ（表５．２）の分析から導かれるヒトＳＯＣＳ５コンティグ（ｈ5.1 、図２１）のマウスＳＯＣＳ５ＤＮＡ配列に対する関係は図１９に示す。マウスＳＯＣＳ５のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号：１７および１８に示す。ヒトＳＯＣＳ５ヌクレオチド配列は配列番号：１９に示す。
【０１８７】
実施例２７
ＳＯＣＳ６
マウスおよびヒトのＳＯＣＳ６は、ＳＯＣＳボックス・コンセンサス（図１３）を用いるＥＳＴデータベースの探索により発見された。マウスおよびヒトＳＯＣＳ６ｃＤＮＡから導かれたこれらのＥＳＴは下記の表（表６．１および６．２）に示す。マウスＥＳＴからの配列情報を用いて幾つかのオリゴヌクレオチドを設計し、通常の方法により、マウス胸腺ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用した。マウスＳＯＣＳ６をコードする８個のｃＤＮＡクローンである（６−１Ａ、６−２Ａ、６−５Ｂ、６−４Ｎ、６−１８、６−２９、６−３Ｎ、６−５Ｎ）ｃＤＮＡクローンが単離され、そしてそれらの全体を配列決定し、データベース中で同定されたマウスＥＳＴと重なることが示された（図２２および２３Ａ）。その配列（図２３）の分析により、マウスＳＯＣＳｃＤＮＡクローンが８個のＷＤ−４０反復に加えそのＣ−末端に一つのＳＯＣＳボックスを有するタンパク質をコードすることが確認される（図２２および２３Ｂ）。ヒトＳＯＣＳ６ＥＳＴ（表６．２）の分析から導かれるヒトＳＯＣＳ６コンティグ（ｈ6.1 およびｈ6.2 、図２４）のマウスＳＯＣＳ６ＤＮＡ配列に対する関係は図２２に示す。マウスＳＯＣＳ６のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２０および２１に示す。ＳＯＣＳ６ヒトコンティグｈ6.1 およびｈ6.2 は、それぞれ配列番号：２２および２３に示す。
【０１８８】
実施例２８
ＳＯＣＳ７
マウスおよびヒトＳＯＣＳ７はＳＯＣＳボックス・コンセンサス（図１３）を用いるＥＳＴデータベースの探索により発見された。マウスおよびヒトのＳＯＣＳ−７ｃＤＮＡから導かれたこれらのＥＳＴは下記の表（表７．１および７．２）に示す。マウスＥＳＴから得られる配列情報を用いて幾つかのオリゴヌクレオチドを設計し、通常の方法でマウス胸腺ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用した。マウスＳＯＣＳ７をコードする一つのｃＤＮＡクローンである（７４−１０Ａ−１１）ｃＤＮＡクローンを単離し、その全体を配列決定して、データベース中で同定されたマウスＥＳＴと重なることが示された（図２５および２６Ａ）。この配列（図２６）の分析から、マウスＳＯＣＳ７が、幾つかのアンキリン反復に加えて、そのＣ−末端に一つのＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることが示唆される（図２５および２６Ｂ）。ヒトＳＯＣＳ７ＥＳＴの分析（表７．２）から導かれるヒトＳＯＣＳ７コンティグ（ｈ7.1 およびｈ7.2 、図２７）のマウスＳＯＣＳ７ＤＮＡ配列に対する関係は図２５に示す。マウスＳＯＣＳ７のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号：２４および２５に示す。ＳＯＣＳ７ヒトコンティグｈ7.1 およびｈ7.2 のヌクレオチド配列は、それぞれ、配列番号：２６および２７に示す。
【０１８９】
実施例２９
ＳＯＣＳ８
マウスＳＯＣＳ８ｃＤＮＡから導かれるＥＳＴは下記の表（表８．１）に示す。ＳＯＣＳファミリーの他のメンバーについて記述したように、マウスＥＳＴから得られる配列情報を用いてマウスＳＯＣＳ８に対するｃＤＮＡを単離することが可能である。このＥＳＴのＳＯＣＳ８の予言されたコード領域に対する関係は図２８に示す。図２９Ａに示すＥＳＴから得られるヌクレオチド配列および図２９Ｂに示すＳＯＣＳ８の部分アミノ酸配列を用いて。マウスＳＯＣＳ８に対するヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号：２８および２９に示す。
【０１９０】
実施例３０
ＳＯＣＳ９
マウスおよびヒトＳＯＣＳ−９はＳＯＣＳボックス・コンセンサスを用いてＥＳＴデータベースを探索することにより発見された（図１３）。マウスおよびヒトのＳＯＣＳ９ｃＤＮＡから導かれたこれらのＥＳＴは、下記の表（表９．１および９．２）に示す。マウスＳＯＣＳ９ＥＳＴ（表９．１）の分析から導かれたマウスＳＯＣＳ９コンティグ（ｍ9.1 、図９．２）のヒトＳＯＣＳ９ＥＳＴ（表９．２）の分析から導かれたヒトＳＯＣＳ−９ＤＮＡコンティグ（ｈ9.1 、図３２）に対する関係は、図３１に示す。この配列の分析（図３２）から、ヒトＳＯＣＳ９ｃＤＮＡがＳＨ２ドメインに加えて、Ｃ−末端にＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることが示される（図３０）。マウスＳＯＣＳ９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列は配列番号：３０に示す。ヒトＳＯＣＳ９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列は配列番号：３１に示す。
【０１９１】
実施例３１
ＳＯＣＳ１０
マウスおよびヒトのＳＯＣＳ１０はＳＯＣＳボックス・コンセンサス（図１３）を用いてＥＳＴデータベースを探索することにより発見された。マウスおよびヒトのＳＯＣＳ１０ｃＤＮＡから導かれたこれらのＥＳＴは下記の表（表１０．１および１０．２）に示す。マウスＥＳＴから導かれる配列情報を用いて幾つかのオリゴヌクレオチドを設計し、通常の方法で、マウス胸腺ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用した。マウスＳＯＣＳ１０をコードする４個のｃＤＮＡクローン（１０−９、１０−１２、１０−２３および１０−２４）を単離し、それらの全体の配列決定を行って、データベース中で同定されたマウスおよびヒトのＥＳＴと重なることが示された（図３３および３４）。この配列（図３４）の分析から、マウスＳＯＣＳ１０ｃＤＮＡクローンが完全長ではないが、幾つかのアンキリン反復に加えて、そのＣ−末端に一つのＳＯＣＳボックスを有するタンパク質をコードすることが示される（図３３）。ヒトＳＯＣＳ１０ＥＳＴ（表１０．２）分析から導かれるヒトＳＯＣＳ１０コンティグ（ｈ10.1およびｈ10.2、図３５）のマウスＳＯＣＳ１０ＤＮＡ配列に対する関係は、図３３に示す。マウスｃＤＮＡクローンおよびＥＳＴのヒトＥＳＴとの比較から、マウスＳＯＣＳ１０とヒトＳＯＣＳ１０の３’非翻訳領域が有意に異なっていることが示唆される。マウスＳＯＣＳ１０のヌクレオチド配列は配列番号：３２に示し、そしてＳＯＣＳ１０ヒトコンティグｈ10.1およびｈ10.2のヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号：３３および３４に示す。
【０１９２】
実施例３２
ＳＯＣＳ１１
ヒトＳＯＣＳ１１はＳＯＣＳボックス・コンセンサス（図１３）を用いてＥＳＴデータベースを探索することにより発見された。ヒトＳＯＣＳ１１ｃＤＮＡから導かれるこれらのＥＳＴは下記の表（表11.1および11.2) に示す。ＥＳＴ（表11.2) の分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１１コンティグ（ｈ11.1、図３６Ａ、Ｂ）の予言されたコードされたタンパク質に対する関係は、図３７に示す。この配列の分析により、ヒトＳＯＣＳ１１ｃＤＮＡがＳＨ２ドメインに加えてそのＣ−末端に一つのＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることが示される（図３７および３６Ｂ）。ヒトＳＯＣＳ１１のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：３５および３６に示す。
【０１９３】
実施例３３
ＳＯＣＳ１２
マウスおよびヒトのＳＯＣＳ−１２は、ＳＯＣＳボックス・コンセンサス（図１３）を用いてＥＳＴデータベースを探索することにより発見された。マウスおよびヒトＳＯＣＳ１２ｃＤＮＡから導かれたこれらのＥＳＴは下記の表（表12.1および12.2) に示す。マウスＥＳＴから得た配列情報を用いて、幾つかのオリゴヌクレオチドをデザインし、通常の方法により、マウス胸腺ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用した。マウスＳＯＣＳ１２をコードする４個のｃＤＮＡクローン（１０−９、１０−１２、１０−２３および１０−２４）を単離し、それらの全体の配列を決定し、そしてこれらがデータベース中で同定されたマウスおよびヒトのＥＳＴと重なることが示された（図３８および３９）。この配列の分析（図３９および４０）から、ＳＯＣＳ１２ｃＤＮＡクローンが、幾つかのアンキリン反復に加え、そのＣ−末端に一つのＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることが示される（図３８）。ヒトＳＯＣＳ１２ＥＳＴの分析（表１２．２）から導かれたヒトＳＯＣＳ１２コンティグ（ｈ12.1およびｈ12.2、図４０）のマウスＳＯＣＳ１２ＤＮＡ配列に対する関係は、図３８に示す。マウスのｃＤＮＡクローンおよびＥＳＴのヒトＥＳＴとの比較から、マウスおよびヒトのＳＯＣＳ１２の３’非翻訳領域が有意に異なっていることが示唆される。ＳＯＣＳ１２のヌクレオチド配列は配列番号：３７に示す。ヒトＳＯＣＳ１２コンティグｈ12.1およびｈ12.2は、それぞれ配列番号：３８および３９に示す。
【０１９４】
実施例３４
ＳＯＣＳ１３
マウスおよびヒトのＳＯＣＳ−１３は、ＳＯＣＳボックス・コンセンサス（図１３）を用いるＥＳＴの探索により発見された。マウスおよびヒトのＳＯＣＳ１３ｃＤＮＡから導かれるこれらのＥＳＴは下記の表（表13.1および13.2) に示す。マウスＥＳＴから得た配列情報を用いて、幾つかのオリゴヌクレオチドを設計し、通常の方法で、マウス胸腺およびマウス胚のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用した。マウスＳＯＣＳ１３をコードする３個のｃＤＮＡクローン（６２−１、６２−６−７および６２−１４）を単離し、その全体を配列決定し、そしてこれらがデータベース中で同定されたマウスＥＳＴと重なることが示された（図４１および４２Ａ）。この配列の分析（図４２）から、マウスＳＯＣＳ１３ｃＤＮＡが、おそらくＷＤ−４０反復に加えて、Ｃ−末端に一つのＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることが示される（図４１および４２Ｂ）。ヒトＳＯＣＳ１３ＥＳＴ（表13.2) の分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１３コンティグ（ｈ13.1およびｈ13.2、図４３）のマウスＳＯＣＳ１３ＤＮＡ配列に対する関係は、図４１に示す。マウスＳＯＣＳ１３のヌクレオチド配列おらび対応するアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号：４０および４１に示す。ヒトＳＯＣＳ１３コンティグｈ13.1のヌクレオチド配列は配列番号：４２に示す。
【０１９５】
実施例３５
ＳＯＣＳ１４
マウスおよびヒトのＳＯＣＳ−１４は、ＳＯＣＳボックス・コンセンサス（図１３）を用いるＥＳＴデータベースの探索により発見された。マウスおよびヒトのＳＯＣＳ１４ｃＤＮＡから導かれたこれらのＥＳＴは下記の表（表14.1および14.2) に示す。マウスおよびヒトのＥＳＴから得た配列情報を用い、幾つかのオリゴヌクレオチドを設計し、通常の方法でλ−バクテリオファージにクローニングされたマウス胸腺ｃＤＮＡライブラリー、マウスゲノムＤＮＡライブラリーおよびヒト胸腺ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用した。マウスＳＯＣＳ１４をコードする１個のゲノムＤＮＡクローン（５７−２）および（５−３−２）ｃＤＮＡクローンを単離し、それらの全体の配列決定を行い、そしてそれらがデータベースで同定されたマウスＥＳＴと重なることが示された（図４４および４５Ａ）。マウスＳＯＣＳ１４の全コード領域が、その５’および３’非翻訳領域の一部に加えて、１個のエキソン上にコードされているようである（図４４）。この配列の分析（図４５）によりＳＯＣＳ１４のゲノムクローンおよびｃＤＮＡクローンがＳＨ２ドメインに加えそのＣ−末端に一つのＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることが確認される（図４４および４５Ｂ）。ｃＤＮＡクローン５−９４−２およびヒトＳＯＣＳ１４ＥＳＴの分析（１４．２）から導かれたヒトＳＯＣＳ１４コンティグ（ｈ14.1、図１４．３）のマウスＳＯＣＳ１４ＤＮＡ配列に対する関係は、図４４に示す。
マウスＳＯＣＳ１４のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：４３および４４に示す。
【０１９６】
実施例３６
ＳＯＣＳ１５
マウスおよびヒトＳＯＣＳ１５は、ＳＯＣＳボックス・コンセンサス（図１３）を用いるＤＮＡデータベースの探索により発見された。マウスおよびヒトのＳＯＣＳ１５ｃＤＮＡから導かれたこれらのＥＳＴは、マウスおよびヒトの全ＳＯＣＳ−１５遺伝子を含むマウスおよびヒトのＢＡＣが表にされているように、下記の表（表15.1および15.2) に示す。ＥＳＴおよびＢＡＣから得られる配列情報を用いてＳＯＣＳ１５の全アミノ酸配列を予言することが可能であり、そして他のＳＯＣＳ遺伝子について述べたように、ｃＤＮＡを単離させる特異的オリゴヌクレオチドプローブを設計することが容易である。このＢＡＣのこのＥＳＴに対する関係は図４６に示す。マウスおよびヒトのＢＡＣから導かれたＳＯＣＳ−１５のヌクレオチド配列および予言されたアミノ酸配列は図４７および４８に示す。マウスのＳＯＣＳ１５のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号：４６および４７に示す。ヒトＳＯＣＳ１５のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：４８および４９に示す。
【０１９７】
実施例３７
ＪＡＫ２キナーゼとＳＯＣＳの相互作用
これらの実施例はＳＯＣＳとＪＡＫ２キナーゼとの相互作用を示す。相互作用はＳＯＣＳ１、２、３およびＣＩＳのＳＨ２ドメインを介して媒介される。この相互作用はＳＯＣＳ１によるＪＡＫ２キナーゼの阻害をもたらす（図４９）。ＪＡＫ２とＳＯＣＳ１、２、３およびＣＩＳの間の一般的相互作用は図５０に示す。
下記の方法が採用される。
【０１９８】
免疫沈降：
Ｃｏｓ６細胞を電気穿孔法により一過性にトランスフェクトし、４８時間培養した。次いで、細胞を溶解緩衝液（５０ｍＭトリス／塩酸，ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％ｖ／ｖトリトン−Ｘ−１００、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＮａ3
ＶＯ4 ）中、完全プロテアーゼインヒビター（ベーリンガー・マンハイム）を添加して、氷上で溶解し、４℃で遠心分離し（１４，０００×ｇ、１０分）そして上清を免疫沈降のために取得した。ＪＡＫ２タンパク質は５μｌ抗−ＪＡＫ２抗体（ＵＢＩ）を用いて免疫沈降に付した。抗原−抗体複合体はプロテインＡ−セファロース（５０％スラリーの３０μｌ）を用いて回収した。
【０１９９】
ウエスタン・ブロッティング：
免疫沈降物は還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）により分析した。次いで、タンパク質を電気泳動的にニトロセルロースに移転させ、１０％ｗ／ｖスキムミルク中で一晩ブロックし、０．１％ｖ／ｖトゥイーン−２０（シグマ）（洗浄バッファー）中のＰＢＳ中で洗浄した後、洗浄バッファー／１％ｗ／ｖＢＳＡで希釈した抗−ホスホチロシン抗体（４Ｇ１０）（１：５０００、ＵＢＩ）か、抗−ＦＬＡＧ抗体（１．６μｇ／ｍｌ）か、抗−ＪＡＫ２抗体（１：２０００、ＵＢＩ）と共に２時間インキュベートした。ニトロセルロース・ブロットを洗浄し、１％ｗ／ｖＢＳＡを含む洗浄バッファーで希釈したペルオキシダーゼ結合ヒツジ抗−ラビット免疫グロブリン（１：５０００、シレヌス）かまたはペルオキシダーゼ結合ヒツジ抗−マウス免疫グロブリン（１：５０００、シレヌス）で一次抗体を検出した。ブロットを洗浄しそして抗体結合を増強化学発光（ＥＣＬ）システム（アマシャム、ＵＫ）を用い、製造者の指示に従って可視化した。
【０２００】
イン・ビトロキナーゼ検定：
イン・ビトロキナーゼ検定は、固有のＪＡＫ２キナーゼ触媒活性を評価するために行った。ＪＡＫ２タンパク質を上述のように免疫沈降に付し、キナーゼ検定バッファー（５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ2 、５ｍＭのＭｎＣｌ2 、１ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＮａ3 ＶＯ4 、１０ｍＭのヘペス、ｐＨ７．４）中で２回洗浄し、そして０．２５μＣｉ／ｍｌ（γ−32Ｐ）−ＡＴＰを含む等容量のキナーゼバッファー（３０分、室温）中に懸濁した。過剰の（γ−32Ｐ）−ＡＴＰを除き、そして還元条件下でＳＤＳ／ＰＡＧＥにより免疫沈降物を分析した。ゲルを１ＭのＫＯＨで処理（５５℃、２時間）することにより穏和なアルカリ加水分解に付してホスホセリンおよびホスホスレオニンを除去した。放射活性バンドは、ホスホルイメージ・システム（モレキュラー・ダイナミクス、サニベイル、ＣＡ、ＵＳＡ）上でＩＭＡＧＥＱＵＡＮＴソフトウエアを用いて可視化した。
【０２０１】
実施例３８
ＳＯＣＳ−１ノックアウト構築物の作成
プラスミド構築物およびノックアウト構築物の図式は図５１〜５３に示す。ゲノムＳＯＣＳ−１クローンである９５−１１−１０を制限酵素ＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩで消化して、コード領域（ＳＯＣＳ−１エキソン）の３’側の３．６ｋｂのＤＮＡ断片を得た。これはＳＯＣＳ−１ノックアウトベクターの３’アームとして用いられた。次いで、この断片の末端を平滑にした。次にこの断片を下記のベクター中に連結した。
【０２０２】
ｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏ
および      ｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏＴＫ
これらをユニークなＸｈｏＩ部位で直線化しついで平滑化した。この連結により下記のベクターが形成された。
ｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏ中の３’ＳＯＣＳ−１アーム  およびｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏＴＫ中の３’ＳＯＣＳ−１アーム。
ＳＯＣＳ−１ノックアウトベクターの５’アームはＰＣＲを用いて２．５ＫｂのＰＣＲ産物をＳＯＣＳ−１コード領域（ＳＯＣＳ−１エキソン）の丁度５’側のゲノムＳＯＣＳ−１クローンである９５−１１−１０から生成させることにより構築した。この産物を形成させるために使用したオリゴヌクレオチドは：
５’オリゴ（センス）（２４６５）
ＡＧＣＴ  ＡＧＡ  ＴＣＴ  ＧＧＡ  ＣＣＣ  ＴＡＣ  ＡＡＴ  ＧＧＣ  ＡＧＣ〔配列番号：４９〕
３’オリゴ（アンチセンス）（２４６６）
ＡＧＣＴ  ＡＧ  ＡＴＣ  ＴＧＣ  ＣＡＴ  ＣＣＴ  ＡＣＴ  ＣＧＡ  ＧＧＧ  ＧＣＣ  ＡＧＣ  ＴＧＧ〔配列番号：５０〕である。
次いでＰＣＲ産物を制限酵素ＢｇｌIIで消化してＰＣＲ産物にＢｇｌII末端を形成させた。ＢｇｌII末端を持つこの５’ＳＯＣＳ−１・ＰＣＲ産物は次に下記のように連結された。ｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏ中の３’ＳＯＣＳ−１アーム  およびｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏＴＫ中の３’ＳＯＣＳ−１アーム、これらはユニークな制限酵素ＢａｍＨＩで直線化した。これは下記のベクターを形成させた、
ｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏ中の５’および３’ＳＯＣＳ−１アームおよびｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏＴＫ中の５’および３’ＳＯＣＳ−１アーム。
これらは最終的なＳＯＣＳ−１ノックアウト構築物であった。これらの構築物は両方とも全ＳＯＣＳ−１コード領域（ＳＯＣＳ−１エキソン）を欠いており、βｇａｌ、βグロビンポリＡ、ＰＧＫプロモーター、ネオマイシンおよびＰＧＫポリＡなどの配列の部分で置き換えられている。ｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏＴＫベクター中の５’および３’ＳＯＣＳ−１アームはネオマイシンとＰＧＫポリＡ配列の間にチミジンキナーゼ遺伝子配列をも含んでいた。
【０２０３】
ベクター：ｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏ中の５’および３’ＳＯＣＳ−１アームおよびｐβｆｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏＴＫ中の５’および３’ＳＯＣＳ−１アームを、
ユニーク制限酵素ＮｏｔＩで直線化し、ついで電気穿孔法により胚幹細胞中にトランスフェクトした。ネオマイシンに耐性なクローンを選択し、それらが正確に組み込まれたＳＯＣＳ−１標的化配列を含むか否かを決定するためサザンブロットにより分析した。正確な組み込みが起こったか否かを決定するため、ネオマイシン耐性クローンからのゲノムＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩで消化した。消化されたＤＮＡを次にナイロンフィルター上にブロットし、そして１．５ＫｂのＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄIII ＤＮＡ断片でプローブした。そしてこれはノックアウト構築物に使用された５’アーム配列のさらに５’側であった。正確な組み込みに対する予想されるバンドサイズは
野生型ＳＯＣＳ−１対立遺伝子５．４Ｋｂ
ＳＯＣＳ−１ノックアウト対立遺伝子ｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏ中の５’および３’ＳＯＣＳ−１アームで形質転換された細胞中では８．２Ｋｂ、またはｐβｇａｌｐＡｌｏｘＮｅｏＴＫ中の５’および３’ＳＯＣＳ−１アームで形質転換された細胞中では１１Ｋｂである。
【０２０４】
当技術分野の熟練者は本明細書に記載された本発明が具体的に記載されたもの以外の変更や修正を受けうることを認めるであろう。本発明はこのような変更や修正のすべてを包含すると解すべきである。本発明はまた、本明細書で個別的にあるいは集合的に言及しまたは指摘した工程、特性、組成物および化合物のすべてを含みそしてこれらの工程または特性のいかなる二つ以上の組合せのそれぞれまたはすべてを包含する。
【０２０５】
【表４】
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【０２０６】
【表５】
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【０２０７】
【表６】
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【０２０８】
【表７】
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【０２０９】
【表８】
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【０２１０】
【表９】
2009060903.tif 000028
2009060903.tif 000029
【０２１１】
【表１０】
2009060903.tif 000030
2009060903.tif 000031
【０２１２】
【表１１】
2009060903.tif 000032
【０２１３】
【表１２】
2009060903.tif 000033
2009060903.tif 000034
2009060903.tif 000035
【０２１４】
【表１３】
2009060903.tif 000036
【０２１５】
【表１４】
2009060903.tif 000037
2009060903.tif 000038
【０２１６】
【表１５】
2009060903.tif 000039
【０２１７】
引用文献
2009060903.tif 000040
2009060903.tif 000041
2009060903.tif 000042
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2009060903.tif 000047
【図面の簡単な説明】
【０２１８】
図の一部では、ある結合モチーフを持つＳＯＣＳタンパク質を記すのに略号が用いられる。ＷＤ−４０反復を含むＳＯＣＳタンパク質はＷＳＢ１−ＷＳＢ４と呼ぶ。アンキリン反復う持つＳＯＣＳタンパク質はＡＳＢ１−ＡＳＢ３と呼ぶ。
【図１】図１はレトロウイルス感染によるＩＬ−６不応答Ｍ１クローンの生成を示す図式的表現である。ＲＵＦｎｅｏレトロウイルスは制限エンドヌクレアーゼ切断部位、４Ａ２ｃＤＮＡ挿入物およびＰＣＲプライマー配列の位置を示す。
【図２】図２はサザンおよびノーザン分析の写真である。（左および中央のパネル）クローン４Ａ２由来のゲノムＤＮＡおよび対照の感染したＭ１クローンのサザンブロット分析。ＤＮＡは、各クローンによって保持されるレトロウイルスの数を明らかにするためBamH Iで消化し、そしてレトロウイルスｃＤＮＡ挿入物のサイズを求めるためSac Ｉで消化した。左のパネル：ｎｅｏをプローブとして用いた。右側パネル：XhoＩで消化した４Ａ２ＰＣＲ産物をプローブとして用いた。（右側パネル）クローン４Ａ２由来の総ＲＮＡおよび対照の感染したＭ１クローンのノーザンブロット分析であり、Xho Ｉで消化した４Ａ２ＰＣＲ産物をプローブとして用いた。２本のバンドはレトロウイルスゲノム中のスプライスドナー部位およびアクセプター部位から生ずる未切断および切断されたレトロウイルス転写産物を表す。
【図３Ａ】図３はＳＯＣＳ１遺伝子のヌクレオチド配列および構造を示す。Ａ．マウス染色体上のプロタミン遺伝子群に関するＳＯＣＳ１のゲノムの状況。この遺伝子座の寄託番号はマウスに対しＭＭＰＲＭＧＮＳ（直接提出、ジー．シュリューター，1995）、ラットに対しＢＴＰＲＭＴＮＰ２（直接提出、ジー．シュリューター，1996）である。
【図３Ｂ】図３はＳＯＣＳ１遺伝子のヌクレオチド配列および構造を示す。Ｂ．ＳＯＣＳ１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および推定されたアミノ酸配列。アミノ酸配列に対しては通常の１文字略号が使用されそして星印は停止コドンを示す。ポリアデニル化シグナル配列には下線が付してある。コード領域は上部に示し、そして非翻訳領域は下部に示す。
【図４】図４はサイトカインの存在下における細胞分化のグラフである。親のＭ１細胞（Ｍ１およびＭ１．ｍｐｌ）およびＳＯＣＳ１発現するＭ１細胞（４Ａ２およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）の半固形寒天培養を用い、そして１ｍｇ／ｍｌのＩＬ−６（●）、１００ｎｇ／ｍｌのＬＩＦ（◇）、１ｍｇ／ｍｌのＯＳＭ（□）、１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γ（▲）、５００ｎｇ／ｍｌのＴＰＯ（○）、または３×１０-6Ｍのデキサメタソン（＊）の滴定に応答して分化するコロニーのパーセンテージを測定した。
【図５】図５は、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６または食塩水の存在下に、４日間培養した親のＭ１細胞（Ｍ１およびＭ１．ｍｐｌ）およびＳＯＣＳ１を発現するＭ１細胞（４Ａ２およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）の液体培養物のサイトスピン(cytospins)を表す写真である。ＩＬ−６中で培養するとき、親のＭ１細胞とは異なり、ＳＯＣＳ１を構成的に発現するＭ１細胞（４Ａ２およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）ではマクロファージ分化と一致する形態学的特徴は観察されなかった。
【図６】図６はシグナル形成分子のリン酸化のＳＯＣＳ１による阻害を示す写真である。親のＭ１細胞（Ｍ１およびＭ１．ｍｐｌ）およびＳＯＣＳ１を発現するＭ１細胞（４Ａ２およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）を１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６の存在下（＋）または非存在下（−）に３７℃で４分間インキュベートした。次いで、細胞を溶解し、抽出物を抗−マウスｇｐ１３０抗体を用いて免疫沈降させた後ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかける（上部パネルの二つ）かまたは直接電気泳動にかけた（下方のパネル）。ゲルをブロットし、ついでこのフィルターを抗−ホスホチロシン（上部パネル）、抗−ｇｐ１３０抗体（上から２番目のパネル）、抗−ホスホＳＴＡＴ３（下から２番目のパネル）または抗−ＳＴＡＴ３（下方のパネル）でプローブした。プロットはペルオキシダーゼ−結合二次抗体および化学発光増強（ＥＣＬ）試薬を用いて可視化した。
【図７Ａ】図７は、食塩水または１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６または１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γを含む血清フリーのＤＭＥ１０ｍｌ中、３７℃で１０分間インキュベートした（Ａ）Ｍ１細胞またはＳＯＣＳ１を発現するＭ１細胞（４Ａ２）および（Ｂ）Ｍ１．ｍｐｌ細胞またはＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１細胞、から調製されたタンパク抽出物を表す。結合反応は４〜６μｇのタンパク（一つの実験内では一定）、高親和性ＳＩＦ（ｃ−ｓｉｓ−誘導因子）結合部位をコードする32Ｐ−標識化ｍ６７オリゴヌクレオチドの５ｎｇ、および超音波処理鮭精子ＤＮＡの８００ｎｇを含んでいた。ある実験の場合は、タンパク試料は無標識のｍ６７オリゴヌクレオチドまたはＳＴＡＴ１かまたはＳＴＡＴ３に対し特異的な抗体の過剰とプリインキュベートした。
【図７Ｂ】図７は、食塩水または１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６または１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γを含む血清フリーのＤＭＥ１０ｍｌ中、３７℃で１０分間インキュベートした（Ａ）Ｍ１細胞またはＳＯＣＳ１を発現するＭ１細胞（４Ａ２）および（Ｂ）Ｍ１．ｍｐｌ細胞またはＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１細胞、から調製されたタンパク抽出物を表す。結合反応は４〜６μｇのタンパク（一つの実験内では一定）、高親和性ＳＩＦ（ｃ−ｓｉｓ−誘導因子）結合部位をコードする32Ｐ−標識化ｍ６７オリゴヌクレオチドの５ｎｇ、および超音波処理鮭精子ＤＮＡの８００ｎｇを含んでいた。ある実験の場合は、タンパク試料は無標識のｍ６７オリゴヌクレオチドまたはＳＴＡＴ１かまたはＳＴＡＴ３に対し特異的な抗体の過剰とプリインキュベートした。
【図８】図８はノーザンハイブリッド形成を表す写真である。マウスに２μｇを静脈注射し、種々の期間の後、肝臓を切除し、ポリＡ＋ｍＲＮＡを精製した。Ｍ１細胞を種々の長さの期間５００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６で刺激し、その後ポリＡ＋ｍＲＮＡを単離した。電気泳動によりｍＲＮＡを分画し、ナイロンフィルター上に固定した。ノーザンブロットをプリハイブリッド形成し、ランダム−プライム化32Ｐ−標識化ＳＯＣＳ１またはＧＡＰＤＨ・ＤＮＡ断片でハイブリッド形成を行い、洗浄し、そして一晩フィルムに曝露した。
【図９】図９はＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳのアミノ酸配列の比較を表す図である。マウス（ｍｍ）、ヒト（ｈｓ）およびラット（ｒｒ）のＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳの予言されたアミノ酸配列の整列。影を付けた残基は３個または４個のマウスＳＯＣＳファミリーメンバーで保存されているものである。ＳＨ２ドメインは実線でボックスに囲んでいる。一方、ＳＯＣＳボックスは二重線で囲んでいる。
【図９−１】図９の続きを示す図である。
【図９−２】図９の続きを示す図である。
【図９−３】図９の続きを示す図である。
【図１０】図１０はＩＬ−６に無応答のＭ１細胞クローンである４Ａ２の表現型を示す写真である。食塩水または１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６中で７日間半固形寒天中で培養された親のＭ１細胞（左パネル）およびクローン４Ａ２（右パネル）のコロニー。
【図１１Ａ】図１１はイン・ビトロおよびイン・ビボでのＳＯＣＳファミリーメンバーに対するｍＲＮＡの発現を示す写真である。（Ａ）限られた数の組織中でのＳＯＣＳファミリーメンバーの構成的発現を示す、ある範囲のマウスの器官由来のｍＲＮＡのノーザン分析。
【図１１Ｂ】図１１はイン・ビトロおよびイン・ビボでのＳＯＣＳファミリーメンバーに対するｍＲＮＡの発現を示す写真である。（Ｂ）ＩＬ−６と接触した後の、ＳＯＣＳファミリーメンバーの発現の誘導を示す、肝臓およびＭ１細胞由来のｍＲＮＡのノーザン分析。
【図１１Ｃ】図１１はイン・ビトロおよびイン・ビボでのＳＯＣＳファミリーメンバーに対するｍＲＮＡの発現を示す写真である。（Ｃ）ある範囲のサイトカインによるＳＯＣＳファミリーメンバーの発現の誘導を示す、骨髄由来のｍＲＮＡの逆転写酵素ＰＣＲ分析。
【図１２Ａ】図１２は、ＳＯＣＳ１がｇｐ１３０およびＳＴＡＴ−３のリン酸化および活性化を抑制することを示す写真である。（Ａ）１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６での刺激の有り（＋）または無し（−）の場合の親のＭ１細胞（Ｍ１およびＭ１．ｍｐｌ）およびＳＯＣＳ１を発現するＭ１細胞（４Ａ２およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）由来の抽出物のウエスタンブロット。上部：タンパクの当量負荷を示すため、抗−ｇｐ１３０（αｇｐ１３０）で免疫沈降させ、そして抗−ホスホチロシン（αＰＹ−ＳＴＡＴ３）またはＳＴＡＴ３（αＳＴＡＴ３）で免疫ブロットした抽出物。そのバンドの分子量は右側に示してある。
【図１２Ｂ】図１２は、ＳＯＣＳ１がｇｐ１３０およびＳＴＡＴ−３のリン酸化および活性化を抑制することを示す写真である。（Ｂ）１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６または１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγでの刺激の有り（＋）または無し（−）の場合のＭ１．ｍｐｌ細胞およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１細胞のＥＭＳＡ。そのＤＮＡ−結合複合体ＳＩＦのＡ、ＢおよびＣは左側に示す。
【図１３】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ａ）ＷＤ−４０反復（ＷＳＢ）およびアンキリン反復（ＡＳＢ）を含むタンパク質を含有するＳＯＣＳタンパク質の構造の図式的表現。（Ｂ）ＳＯＣＳタンパク質のＮ−末端領域の整列。（Ｃ）ＣＩＳ、ＳＯＣＳ１、２、３、５、９、１１および１４のＳＨ２ドメインの整列。（Ｄ）ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ６、ＳＯＣＳ１３およびＳＯＣＳ１５のＷＤ−４０反復の整列。（Ｅ）ＳＯＣＳ７およびＳＯＣＳ１０のアンキリン反復の整列。（Ｆ）ＳＨ２、ＷＤ−４０およびアンキリン反復とＳＯＣＳボックスの間の領域の整列。（Ｇ）ＳＯＣＳボックスの整列。それぞれの場合にアミノ酸の慣習的な１文字略号が用いられる。Ｘは確認が不確定な残基を示し、○○○はコンティグの始まりおよび末端を示す。単離されたｃＤＮＡ由来の核酸配列の概念的翻訳から得られたアミノ酸配列は上の箱の中に示され、一方、ＥＳＴの概念的翻訳から得られたアミノ酸配列は下方の箱に示され、そして近似のみである。保存された残基は、（ＬＩＶＭＡ）、（ＦＹＷ）、（ＤＥ）（ＱＮ）、（Ｃ，Ｓ，Ｔ）、（ＫＲＨ）、（ＰＧ）と定義され、ＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復、アンキリン反復およびＳＯＣＳボックスの中で影が付されている。ＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復およびアンキリン反復の整列のために、コンセンサス配列が上部に示してある。それぞれの場合に、これはドメインの大量のそして様々なセットの検討から導かれた（ニールら，1994、ボーク，1993）。
【図１３Ａ−１】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ａ）ＷＤ−４０反復（ＷＳＢ）およびアンキリン反復（ＡＳＢ）を含むタンパク質を含有するＳＯＣＳタンパク質の構造の図式的表現。
【図１３Ａ−２】図１３Ａ−１の続きを示す図である。
【図１３Ｂ−１】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ｂ）ＳＯＣＳタンパク質のＮ−末端領域の整列。
【図１３Ｂ−２】図１３Ｂ−１の続きを示す図である。
【図１３Ｃ−１】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ｃ）ＣＩＳ、ＳＯＣＳ１、２、３、５、９、１１および１４のＳＨ２ドメインの整列。
【図１３Ｃ−２】１３Ｃ−１の続きを示す図である。
【図１３Ｄ】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ｄ）ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ６、ＳＯＣＳ１３およびＳＯＣＳ１５のＷＤ−４０反復の整列。
【図１３Ｅ−１】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ｅ）ＳＯＣＳ７およびＳＯＣＳ１０のアンキリン反復の整列。
【図１３Ｅ−２】図１３Ｅ−１の続きを示す図である。
【図１３Ｆ−１】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ｆ）ＳＨ２、ＷＤ−４０およびアンキリン反復とＳＯＣＳボックスの間の領域の整列。
【図１３Ｆ−２】図１３Ｆ−１の続きを示す図である。
【図１４Ａ】図１４（Ａ）はマウスのＳＯＣＳ１およびＳＯＣＳ５およびＷＤ−４０反復（ＷＳＢ２）およびアンキリン反復（ＡＳＢ１）を含むＳＯＣＳのｍＲＮＡ発現の分析を示す写真である。
【図１４Ｂ】図１４（Ｂ）はマウスのＳＯＣＳ１およびＳＯＣＳ５およびＷＤ−４０反復（ＷＳＢ２）およびアンキリン反復（ＡＳＢ１）を含むＳＯＣＳのｍＲＮＡ発現の分析を示す写真である。
【図１５】図１５はマウスＳＯＣＳ４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す図である。予言されたＡＴＧ「開始」コドンから停止コドンまでの成熟コード領域をコードするヌクレオチドが上の箱の中に示され、一方、予言された５’および３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。マウスｃＤＮＡ配列のマウスおよびヒトＥＳＴコンティグに対する関係は図１７に例示される。
【図１５−１】図１５の続きを示す図である。
【図１５−２】図１５の続きを示す図である。
【図１６】図１６は図１５のヌクレオチド配列由来のマウスＳＯＣＳ４の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは、図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図１８】図１８は表４．１にリストしたＥＳＴの分析から導かれた、ヒトＳＯＣＳ４ｃＤＮＡコンティグｈ4.1およびｈ4.2のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図１７に例示してある。
【図１８−１】図１８の続きを示す図である。
【図１８−２】図１８の続きを示す図である。
【図１８−３】図１８の続きを示す図である。
【図１９】図１９はマウスＥＳＴ（表５．１）およびヒトｃＤＮＡクローン（５−９４−２）およびＥＳＴ（表５．２）の分析から導かれた、マウスＳＯＣＳ５ゲノムクローン（５７−２）およびｃＤＮＡクローン（５−３−２）のコンティグに対する関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ５コンティグのヌクレオチド配列は図２０に示し、ヒトＳＯＣＳ５コンティグ(h5.1)の配列は図２１に示す。マウスＳＯＣＳ５の推定されたアミノ酸配列は図２０Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、ＳＨ２ドメインは括弧で、そしてＳＯＣＳボックスは括弧で示す。仮定的な５’および３’翻訳領域は細い実線で示してある。
【図２０Ａ】図２０ＡはゲノムクローンおよびｃＤＮＡクローンの分析から導かれたマウスＳＯＣＳ５のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたＡＴＧ「開始」コドンから停止コドンまでの成熟コード領域をコードするヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方、予言された５’および３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。マウスｃＤＮＡ配列のマウスおよびヒトＥＳＴコンティグに対する関係は図１９に例示される。
【図２０Ａ−１】図２０Ａの続きを示す図である。
【図２０Ａ−２】図２０Ａの続きを示す図である。
【図２０Ａ−３】図２０Ａの続きを示す図である。
【図２０Ｂ】図２０Ｂは図２０Ａのヌクレオチド配列から導かれたマウスＳＯＣＳ５タンパク質の予言されたアミノ酸配列の図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線が付してある。
【図２１】図２１はｃＤＮＡクローン５−９４−２および表５．２にリストしたＥＳＴの分析から導かれた、ヒトＳＯＣＳ５ｃＤＮＡコンティグｈ5.1のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図１９に例示してある。
【図２２】図２２はマウスＥＳＴ（表６．１）およびヒトＥＳＴ（表６．２）の分析から導かれたコンティグに対するマウスＳＯＣＳ６ｃＤＮＡクローン（６−１Ａ、６−２Ａ、６−５Ｂ、６−４Ｎ、６−１８、６−２９、６−３Ｎおよび６−５Ｎ）の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ−６コンティグのヌクレオチド配列は図２３に示す。ここで、ヒトＳＯＣＳ６コンティグ（ｈ6.1およびｈ6.2）の配列は図２４に示す。マウスＳＯＣＳ６の推定されたアミノ酸配列は図２３Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示すが、ＷＤ−４０反復は括弧で、そしてＳＯＣＳボックスは括弧で示す。仮定的な５’および３’非翻訳領域は細い実線で示してある。
【図２３Ａ】図２３ＡはｃＤＮＡクローン６４−１０Ａ−１１の分析から導かれたマウスＳＯＣＳ６のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域の部分をコードしそして停止コドンで終わるヌクレオチドは上方の箱の中に示す。一方、予言された３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。マウスおよびヒトＥＳＴコンティグに対するマウスｃＤＮＡ配列の関係は図２２に例示される。
【図２３Ａ−１】図２３Ａの続きを示す図である。
【図２３Ａ−２】図２３Ａの続きを示す図である。
【図２３Ａ−３】図２３Ａの続きを示す図である。
【図２３Ｂ】図２３Ｂは図２３Ａのヌクレオチド配列から導かれた、マウスＳＯＣＳ６タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図２４】図２４はｃＤＮＡクローン５−９４−２および表６． ２にリストしたＥＳＴの分析から導かれた、ヒトＳＯＣＳ６ｃＤＮＡコンティグｈ6.1のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図２２に例示してある。
【図２４−１】図２４の続きを示す図である。
【図２４−２】図２４の続きを示す図である。
【図２４−３】図２４の続きを示す図である。
【図２５】図２５はマウスＥＳＴ（表７．１）およびヒトＥＳＴ（表７．２）の分析から導かれたコンティグに対するマウスＳＯＣＳｃＤＮＡクローン（７４−１０Ａ−１１）の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ７コンティグのヌクレオチド配列は図２６に示してあり、ヒトＳＯＣＳ７コンティグ（ｈ7.1およびｈ7.2）の配列は図２７に示す。マウスＳＯＣＳ７の推定されたアミノ酸配列は図２６Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、アンキリン反復は括弧でそしてＳＯＣＳボックスは括弧で示してある。仮定的５’および３’非翻訳領域はマウスの場合細い実線でそしてｈ7.2の場合波線で示してある。今日まで単離されたクローンおよびＥＳＴの分析に基づけば、ｍＳＯＣＳ７とｈＳＯＣＳ７の３’非翻訳領域はほとんど類似性を共有しない。
【図２６Ａ】図２６ＡはｃＤＮＡクローン７４−１０Ａ−１１の分析から導かれたマウスＳＯＣＳ７のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域部分をコードし、停止コドンで終わるヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するマウスｃＤＮＡの関係は図２５に例示してある。
【図２６Ａ−１】図２６Ａの続きを示す図である。
【図２６Ａ−２】図２６Ａの続きを示す図である。
【図２６Ｂ】図２６Ｂは図２６Ａのヌクレオチド配列から導かれたマウスＳＯＣＳ７タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図２７】図２７は表７．２にリストされたＥＳＴの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ７ｃＤＮＡコンティグｈ7.1およびｈ7.2のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図２５に例示してある。
【図２７−１】図２７の続きを示す図である。
【図２７−２】図２７の続きを示す図である。
【図２８】図２８はマウスＳＯＣＳ８ＥＳＴ（表８．１および図２９Ａ）の分析から導かれた配列のマウスＳＯＣＳ８の予言されたタンパク質構造に対する関係の図式的表現である。マウスＳＯＣＳ８の推定された部分アミノ酸配列は図２９Ｂに示してある。このタンパク質の構造はＳＯＣＳボックスを括弧で目立つようにして図式的に示してある。予言された３’非翻訳領域は細い線で示す。
【図２９Ａ】図２９ＡはＥＳＴの分析から導かれたマウスＳＯＣＳ８ｃＤＮＡ（コンティグ8.1）の部分ヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域の部分をコードし、停止コドンで終わるヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。
【図２９Ｂ】図２９Ｂは図２９Ａのヌクレオチド配列から導かれたマウスＳＯＣＳ８タンパク質の予言された部分的アミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図３０】図３０はマウスＳＯＣＳ９ＥＳＴ（表９．１）とヒトＳＯＣＳ９ＥＳＴ（表９．２）の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ９コンティグ(ｍ9.1)のヌクレオチド配列は図３１に示し、ヒトＳＯＣＳ９コンティグ（ｈ9.1）の配列は図３２に示す。ヒトＳＯＣＳ９の推定されたアミノ酸配列は図式的に示してあり、ＳＨ２ドメインは括弧で、そしてＳＯＣＳボックスは括弧で示してある。仮定的３’非翻訳領域は細い実線で示してある。
【図３１】図３１は表９．１にリストしてあるＥＳＴの分析から導かれたマウスＳＯＣＳ９ｃＤＮＡ（コンティグｍ9.1）の部分ヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図３０に例示してある。
【図３２】図３２は表９．２にリストされたＥＳＴの分析から導かれた、ヒトＳＯＣＳ９ｃＤＮＡ(コンティグｈ9.1)の部分ヌクレオチド配列を示す図である。コンティグｈ9.1はＳＨ２ドメインおよびＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることは明らかであるが、この配列の質は１個の曖昧さのないオープンリーディングフレームを導き出すのに十分な程高くはない。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図３０に例示されている。
【図３２−１】図３２の続きを示す図である。
【図３２−２】図３２の続きを示す図である。
【図３２−３】図３２の続きを示す図である。
【図３３】図３３はマウスＥＳＴ（表１０．１）およびヒトＥＳＴ（表１０．２）の分析から導かれたコンティグに対するマウスＳＯＣＳ１０ｃＤＮＡクローン（１０−９、１０−１２、１０−２３および１０−２４）の関係を示す図である。マウスＳＯＣＳ１０コンティグのヌクレオチド配列は図１０．２に示してあり、ヒトＳＯＣＳ１０コンティグ（ｈ10.1およびｈ10.2）の配列は図３５に示してある。このタンパク質の予言された構造は図式的に示してあり、アンキリン反復は括弧によりそしてＳＯＣＳボックスは括弧により示してある。仮定的３’非翻訳領域はマウスでは細い実線で、そしてｈ10.2では波線で示してある。今日まで単離されたクローンおよびＥＳＴの分析に基づけば、ｍＳＯＣＳ−１０およびｈＳＯＣＳ−１０の３’非翻訳領域はほとんど類似性を共有しない。
【図３４】図３４はｃＤＮＡクローン１０−９、１０−１２、１０−２３および１０−２４の分析から導かれたマウスＳＯＣＳ１０のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域の部分をコードし、停止コドンで終わるヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。コンティグｍ10.1が一連のアンキリン反復およびＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることは明らかであるが、この配列の質は１個の曖昧さのないオープンリーディングフレームを導き出す程には十分に高くはない。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するマウスｃＤＮＡ配列の関係は図３３に例示してある。
【図３４−１】図３４の続きを示す図である。
【図３４−２】図３４の続きを示す図である。
【図３４−３】図３４の続きを示す図である。
【図３５】図３５は表１０．２にリストされたＥＳＴの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１０ｃＤＮＡコンティグｈ10.1およびｈ10.2のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図３３に例示する。
【図３５−１】図３５の続きを示す図である。
【図３５−２】図３５の続きを示す図である。
【図３６Ａ】図３６Ａは表１１．１にリストされたＥＳＴの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１１ｃＤＮＡの部分ヌクレオチド配列を示す図である。予言されたＡＴＧ「開始」コドンから停止コドンまでの成熟コード領域をコードするヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’および５’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。ＥＳＴから導かれた部分ｃＤＮＡ配列の予言されタンパク質に対する関係は図３７に示してある。
【図３６Ｂ】図３６Ｂは図３６Ａのヌクレオチド配列から導かれた、ヒトＳＯＣＳ１１タンパク質の予言された部分アミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示すが、下線を付してある。
【図３７】図３７はヒトＳＯＣＳ１１ＥＳＴ（表１１．１および図３６Ａ）の分析から導かれた配列の、ヒトＳＯＣＳ１１の予言されたタンパク質構造に対する関係を示す図式的表現である。ヒトＳＯＣＳ１１の推定された部分アミノ酸配列は図３６Ｂに示してある。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、ＳＨ２ドメインは括弧でそしてＳＯＣＳボックスは括弧で目立つように示してある。予言された３’非翻訳領域は細い実線で示す。
【図３８】図３８はマウスＥＳＴ（表１２．１）およびヒトＥＳＴ（表１２．２）の分析から導かれたコンティグに対するマウスＳＯＣＳ１２ｃＤＮＡクローン（１２−１）の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ１２コンティグのヌクレオチド配列は図１２．２に示し、ヒトＳＯＣＳ１２コンティグ（ｈ12.1およびｈ12.2）の配列は図４０に示す。マウスＳＯＣＳ１２の推定された部分アミノ酸配列は図３９に示す。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、アンキリン反復は括弧によりそしてＳＯＣＳボックスは括弧により示される。仮定的３’非翻訳領域はマウスでは細い実線で示されそしてｈ12.2では波線で示される。今日まで単離されたクローンおよびＥＳＴの分析に基づけば、ｍＳＯＣＳ１２およびｈＳＯＣＳ１２の３’非翻訳領域はほとんど類似性を共有しない。
【図３９】図３９はｃＤＮＡクローン１２−１および表１２．１にリストしたＥＳＴの分析から導かれるマウスＳＯＣＳ１２のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域の部分をコードし、停止コドンを含むヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。ヒトＳＯＣＳ１２との相同性により、コンティグm12.1が一連のアンキリン反復およびＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることは明らかであるが、この配列の質は１個の曖昧さのないオープンリーディングフレームを導き出すには十分に高くない。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するマウスｃＤＮＡ配列の関係は図３８に例示してある。
【図４０】図４０は表１２．２にリストされたＥＳＴの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１２ｃＤＮＡコンティグｈ12.1およびｈ12.2のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図３８に例示してある。
【図４０−１】図４０の続きを示す図である。
【図４０−２】図４０の続きを示す図である。
【図４０−３】図４０の続きを示す図である。
【図４１】図４１はマウスＳＯＣＳ１３ｃＤＮＡクローン（６２−１、６２−６−７、６２−１４）およびマウスＥＳＴ（表１３．１）の分析から導かれたコンティグｍ１３．１の、ヒトＥＳＴ（表１３．２）の分析から導かれたコンティグｈ13.1に対する関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ１３コンティグのヌクレオチド配列は図４２に示し、ヒトＳＯＣＳ１３コンティグ（ｈ13.1）の配列は図４３に示す。マウスＳＯＣＳ１３の推定されたアミノ酸配列は図４２Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、ＷＤ−４０反復は括弧で目立つようにしてあり、ＳＯＣＳボックスは括弧で目立つようにしてある。３’非翻訳領域は細い実線で示してある。
【図４２Ａ】図４２ＡはｃＤＮＡクローン６２−１、６２−６−７および６２−１４の分析から導かれるマウスＳＯＣＳ１３のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域の部分をコードし、停止コドンで終わるヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’非翻訳領域をコードするヌクレオチドは下方の箱の中に示す。マウスｃＤＮＡ配列のマウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対する関係は図４１に例示してある。
【図４２Ａ−１】図４２Ａの続きを示す図である。
【図４２Ａ−２】図４２Ａの続きを示す図である。
【図４２Ｂ】図４２Ｂは図４２Ａのヌクレオチド配列から導かれた、マウスＳＯＣＳ１３タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図４３】図４３は表１３．２にリストされたＥＳＴの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１３ｃＤＮＡコンティグｈ13.1のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図４１に例示されている。
【図４４】図４４はマウスＥＳＴ（表１４．１）の分析から導かれたコンティグに対する部分的マウスＳＯＣＳ１４ｃＤＮＡクローン（１４．１）の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ１４コンティグのヌクレオチド配列は図４５に示す。マウスＳＯＣＳ１４の推定された部分アミノ酸配列は図４５Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、ＳＨ３ドメインは括弧で示し、ＳＯＣＳボックスは括弧で示す。仮定的３’非翻訳領域は細い実線で示してある。
【図４５Ａ】図４５ＡはゲノムクローンおよびｃＤＮＡクローンの分析から導かれたマウスＳＯＣＳ１４のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたＡＴＧ「開始」コドンから停止コドンまでの成熟コード領域をコードするヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された５’および３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するマウスｃＤＮＡ配列の関係は図４４に例示する。
【図４５Ａ−１】図４５Ａの続きを示す図である。
【図４５Ａ−２】図４５Ａの続きを示す図である。
【図４５Ａ−３】図４５Ａの続きを示す図である。
【図４５Ｂ】図４５Ｂは図４５Ａのヌクレオチド配列から導かれた、マウスＳＯＣＳ１４タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図４６】図４６はヒトＢＡＣおよびヒトＥＳＴ（表１５．２）の分析から導かれたコンティグｈ15.1に対する、マウスＢＡＣおよびマウスＥＳＴ（表１５．１）の分析から導かれたコンティグｍ15.1の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ１５コンティグのヌクレオチド配列は図４７に示し、ヒトＳＯＣＳ１５コンティグ(ｈ15.1)の配列は図４７に示してある。マウスＳＯＣＳ１５の推定されたアミノ酸配列は図４７Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示す。ＷＤ−４０反復は括弧で目立たせており、ＳＯＣＳボックスは括弧で目立たせている。５’および３’非翻訳領域は細い実線で示してある。コード領域を中断するイントロンは＾で示してある。
【図４７Ａ】図４７Ａは表１５．１にリストされたマウスＢＡＣの分析から導かれたマウスＳＯＣＳ１５遺伝子を覆うヌクレオチド配列を示す図である。ＡＴＧで始まり停止コドンで終わる予言されたコード領域をコードするヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された５’非翻訳領域、イントロンおよび３’非翻訳領域をコードするヌクレオチドは下方の箱の中に示す。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するマウスＢＡＣの関係は図４６に例示する。
【図４７Ａ−１】図４７Ａの続きを示す図である。
【図４７Ａ−２】図４７Ａの続きを示す図である。
【図４７Ａ−３】図４７Ａの続きを示す図である。
【図４７Ａ−４】図４７Ａの続きを示す図である。
【図４７Ａ−５】図４７Ａの続きを示す図である。
【図４７Ｂ】図４７Ｂは図４７Ａのヌクレオチド配列から導かれた、マウスＳＯＣＳ１５タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図４８Ａ】図４８Ａは表１５．２にリストしたヒトＢＡＣの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１５遺伝子を覆うヌクレオチド配列を示す図である。ＡＴＧで始まりそして停止コドンで終わる予言されたコード領域をコードするヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された５’非翻訳領域、イントロンおよび３’非翻訳領域をコードするヌクレオチドは下方の箱の中に示す。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するヒトＢＡＣの関係は図４６に例示してある。
【図４８Ａ−１】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ａ−２】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ａ−３】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ａ−４】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ａ−５】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ａ−６】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ｂ】図４８Ｂは図４８Ａのヌクレオチド配列から導かれる、ヒトＳＯＣＳ１５タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図４９】図４９はＪＡＫ２キナーゼ活性のＳＯＣＳ１による阻害を示す写真である。（Ａ）上方のパネル。ＣｏｓＭ６細胞を、Ｆｌａｇ−標識化ｍＪＡＫ２およびｍＳＯＣＳ−ＩＤＮＡ（ＳＯＣＳ１）かＦｌａｇ−ｍＪＡＫ２ＤＮＡ単独（−）を用いて一過性にトランスフェクトし、溶解し、抗−ＪＡＫ２抗体を用いてＪＡＫ２タンパクを免疫沈降させ、そしてイン・ビトロのキナーゼ検定に付した。下方のパネル。ＪＡＫ２免疫沈降物の一部を抗−ＪＡＫ２抗体を用いてウエスタンブロットした。（Ｂ）上方のパネル。ＣｏｓＭ６細胞を、Ｆｌａｇ−ｍＪＡＫ２とＦｌａｇ−ｍＳＯＣＳ−１ＤＮＡかまたはＦｌａｇ−ｍＪＡＫ２ＤＮＡ単独で一過性にトランスフェクトし、溶解し、抗−ＪＡＫ２（ＵＢＩ）を用いてＪＡＫ２タンパクを免疫沈降させ、そしてＳＤＳ／ＰＡＧＥゲルにより分離した。ついで、免疫沈降物を抗−ホスホチロシン抗体を用いてウエスタンブロットにより分析した。下方のパネル：ＪＡＫ２の発現。Ｃｏｓ細胞の溶解物をＳＤＳ／ＰＡＧＥゲルにより分離し、コンティグ−ＦＬＡＧ抗体（Ｍ２）を用いてウエスタンブロットにより分析した。
【図５０】図５０はＪＡＫ２とＳＯＣＳタンパクの間の相互作用を示す写真である。（Ａ）．ＣｏｓＭ６細胞を、Ｆｌａｇ−標識化ｍＪＡＫ２と種々のＦｌａｇ−標識化ＳＯＣＳＤＮＡ（ＳＯＣＳ−１；Ｓ１、ＳＯＣＳ−２；Ｓ２、ＳＯＣＳ−３；Ｓ３、ＣＩＳ）か、またはＦｌａｇ−ｍＪＡＫ２単独を用いて一過性にトランスフェクトし、溶解し、抗−ＪＡＫ２（ＵＢＩ）を用いてＪＡＫ２タンパクを免疫沈降させ、そしてＳＤＳ／ＰＡＧＥにより分離した。次いで、免疫沈降物を抗−ＦＬＡＧ抗体（Ｍ２）を用いてウエスタンブロットにより分析した。（Ｂ）．（Ａ）で述べたＣｏｓ細胞溶解物をＳＤＳ／ＰＡＧＥにより分離し、種々のタンパクの発現レベルを抗−ＦＬＡＧ抗体（Ｍ２）を用いてウエスタンブロットにより測定した。（Ｃ）．ＪＡＫ２チロシンリン酸化。（Ａ）で述べたＣｏｓ細胞溶解物をＳＤＳ／ＰＡＧＥにより分離し、タンパクを抗−ホスホチロシン抗体を用いてウエスタンブロットにより分析した。
【図５１】図５１はｐβｇａｌｐＡｌｏｘｎｅｏの図式的表現である。
【図５２】図５２はｐβｇａｌｐＡｌｏｘｎｅｏＴＫの図式的表現である。
【図５３】図５３はＳＯＣＳ１ノックアウト構築物の図式的表現である。
【図１】
2009060903.tif 000053
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
2009060903.tif 000057
【図５】
2009060903.tif 000058
【図６】
2009060903.tif 000059
【図７Ａ】
2009060903.tif 000060
【図７Ｂ】
2009060903.tif 000061
【図８】
2009060903.tif 000062
【図９】
2009060903.tif 000063
【図９−１】
2009060903.tif 000064
【図９−２】
2009060903.tif 000065
【図９−３】
2009060903.tif 000066
【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
2009060903.tif 000069
【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
2009060903.tif 000071
【図１２Ｂ】
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【図１３】
2009060903.tif 000073
【図１３Ａ−１】
2009060903.tif 000074
【図１３Ａ−２】
2009060903.tif 000075
【図１３Ｂ−１】
2009060903.tif 000076
【図１３Ｂ−２】
2009060903.tif 000077
【図１３Ｃ−１】
2009060903.tif 000078
【図１３Ｃ−２】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ−１】
2009060903.tif 000081
【図１３Ｅ−２】
2009060903.tif 000082
【図１３Ｆ−１】
2009060903.tif 000083
【図１３Ｆ−２】
2009060903.tif 000084
【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
2009060903.tif 000086
【図１５】
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【図１５−１】
2009060903.tif 000088
【図１５−２】
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【図１６】
2009060903.tif 000090
【図１７】
2009060903.tif 000091
【図１８】
2009060903.tif 000092
【図１８−１】
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【図１８−２】
2009060903.tif 000094
【図１８−３】
2009060903.tif 000095
【図１９】
2009060903.tif 000096
【図２０Ａ】
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【図２０Ａ−１】
2009060903.tif 000098
【図２０Ａ−２】
2009060903.tif 000099
【図２０Ａ−３】
2009060903.tif 000100
【図２０Ｂ】
2009060903.tif 000101
【図２１】
2009060903.tif 000102
【図２２】
2009060903.tif 000103
【図２３Ａ】
2009060903.tif 000104
【図２３Ａ−１】
2009060903.tif 000105
【図２３Ａ−２】
2009060903.tif 000106
【図２３Ａ−３】
2009060903.tif 000107
【図２３Ｂ】
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【図２４】
2009060903.tif 000109
【図２４−１】
2009060903.tif 000110
【図２４−２】
2009060903.tif 000111
【図２４−３】
2009060903.tif 000112
【図２５】
2009060903.tif 000113
【図２６Ａ】
2009060903.tif 000114
【図２６Ａ−１】
2009060903.tif 000115
【図２６Ａ−２】
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【図２６Ｂ】
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【図２７】
2009060903.tif 000118
【図２７−１】
2009060903.tif 000119
【図２７−２】
2009060903.tif 000120
【図２８】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
2009060903.tif 000126
【図３２−１】
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【図３２−２】
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【図３２−３】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３４−１】
2009060903.tif 000132
【図３４−２】
2009060903.tif 000133
【図３４−３】
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【図３５】
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【図３５−１】
2009060903.tif 000136
【図３５−２】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３７】
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【図３８】
2009060903.tif 000141
【図３９】
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【図４０】
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【図４０−１】
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【図４０−２】
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【図４０−３】
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【図４１】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ａ−１】
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【図４２Ａ−２】
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【図４２Ｂ】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５Ａ】
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【図４５Ａ−１】
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【図４５Ａ−２】
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【図４５Ａ−３】
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【図４５Ｂ】
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【図４６】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ａ−１】
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【図４７Ａ−２】
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【図４７Ａ−３】
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【図４７Ａ−４】
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【図４７Ａ−５】
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【図４７Ｂ】
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【図４８Ａ】
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【図４８Ａ−１】
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【図４８Ａ−２】
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【図４８Ａ−３】
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【図４８Ａ−４】
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【図４８Ａ−５】
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【図４８Ａ−６】
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【図４８Ｂ】
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【図４９】
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【図５０】
2009060903.tif 000176
【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【配列表】
2009060903000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成20年10月17日(2008.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列あるいは低厳格条件下において４２℃でそれとハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、
該タンパク質が、そのＣ−末端領域にＳＯＣＳボックスを含み、且つ  該ＳＯＣＳボックスが、下記のアミノ酸配列を含む、核酸分子：
Ｘ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8Ｘ9Ｘ10Ｘ11Ｘ12Ｘ13Ｘ14Ｘ15Ｘ16[Ｘi]nＸ17Ｘ18Ｘ19Ｘ20Ｘ21Ｘ22Ｘ23[Ｘj]nＸ24Ｘ25Ｘ26Ｘ27Ｘ28
上式中、Ｘ1はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、またはＰであり、
Ｘ2はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
[Ｘi]nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘiはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
[Ｘj]nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは０〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘjはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、そして
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰである。
【請求項２】
該タンパク質がタンパク質：分子相互作用領域をさらに含むものである請求項１記載の核酸分子。
【請求項３】
該タンパク質：分子相互作用領域が該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域に位置するものである請求項１記載の核酸分子。
【請求項４】
該タンパク質：分子相互作用領域がタンパク質：ＤＮＡ結合領域またはタンパク質：タンパク質結合領域である請求項２または請求項３記載の核酸分子。
【請求項５】
該タンパク質：分子相互作用領域がＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復またはアンキリン反復の一つ以上である請求項４記載の核酸分子。
【請求項６】
該タンパク質がシグナル伝達を調節するものである請求項１記載の核酸分子。
【請求項７】
該シグナル伝達がサイトカインまたはホルモン、微生物または微生物産物、寄生体、抗原または他のエフェクター分子により媒介されるものである請求項６記載の核酸分子。
【請求項８】
該タンパク質がサイトカインにより媒介されるシグナル伝達を調節するものである請求項７記載の核酸分子。
【請求項９】
該シグナル伝達がサイトカインであるＥＰＯ、ＴＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１および／またはＭ−ＣＳＦの一つ以上により媒介されるものである請求項８記載の核酸分子。
【請求項１０】
該シグナル伝達がＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＦＮ−γおよび／またはトロンボポエチンの一つ以上により媒介されるものである請求項９記載の核酸分子。
【請求項１１】
該シグナル伝達がＩＬ−６により媒介されるものである請求項１０記載の核酸分子。
【請求項１２】
該ヌクレオチド配列が、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１８、配列番号：２１、配列番号：２５、配列番号：２９、配列番号：３６、配列番号：４１、配列番号：４４、配列番号：４６または配列番号：４８に実質的に記載されているアミノ酸配列または上にリストした配列の全部または一部に少なくとも約１５％の類似性を有するアミノ酸配列または低厳格条件下において４２℃で該核酸分子とハイブリッドを形成するヌクレオチド配列をコードするものである請求項１記載の核酸分子。
【請求項１３】
該ヌクレオチド配列が、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：２０、配列番号：２２、配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４５または配列番号：４７に実質的に記載されたものであり、または上にリストした配列のすべてまたは一部に少なくとも１５％の類似性を有するヌクレオチド配列、または低厳格条件下において４２℃で上にリストされた配列とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列である請求項１記載の核酸分子。
【請求項１４】
タンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物をコードする配列をコードするまたはそれに相補的なヌクレオチド配列あるいは低厳格条件下において４２℃でそれとハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、該タンパク質が下記の特性を示すものである核酸分子、
（i） そのＣ−末端領域にＳＯＣＳボックスを有し、該ＳＯＣＳボックスが下記のアミノ酸配列を含むこと、
Ｘ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8Ｘ9Ｘ10Ｘ11Ｘ12Ｘ13Ｘ14Ｘ15Ｘ16[Ｘi]nＸ17Ｘ18Ｘ19Ｘ20Ｘ21Ｘ22Ｘ23[Ｘj]nＸ24Ｘ25Ｘ26Ｘ27Ｘ28
上式中、Ｘ1はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、またはＰであり、
Ｘ2はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
[Ｘi]nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘiはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
[Ｘj]nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは０〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘjはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、そして
（ii） 該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域に、ＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復または他のタンパク質：分子相互作用ドメインの少なくとも一つを含むこと、そして
（iii） シグナル伝達を調節すること。
【請求項１５】
単離されたタンパク質またはその誘導体、ホモログまたは模倣物であって、そのＣ−末端領域にＳＯＣＳボックスを含み、且つ
該ＳＯＣＳボックスが、下記のアミノ酸配列を含む、単離されたタンパク質またはその誘導体、ホモログまたは模倣物：
Ｘ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8Ｘ9Ｘ10Ｘ11Ｘ12Ｘ13Ｘ14Ｘ15Ｘ16[Ｘi]nＸ17Ｘ18Ｘ19Ｘ20Ｘ21Ｘ22Ｘ23[Ｘj]nＸ24Ｘ25Ｘ26Ｘ27Ｘ28
上式中、Ｘ1はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、またはＰであり、
Ｘ2はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
[Ｘi]nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘiはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
[Ｘj]nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは０〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘjはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、そして
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰである。
【請求項１６】
該タンパク質がタンパク質：分子相互作用領域をさらに含むものである請求項１５記載の単離されたタンパク質。
【請求項１７】
該タンパク質：分子相互作用領域が該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域に位置するものである請求項１６記載の単離されたタンパク質。
【請求項１８】
該タンパク質：分子相互作用領域がタンパク質：ＤＮＡ結合領域またはタンパク質：タンパク質結合領域である請求項１５または１６記載の単離されたタンパク質。
【請求項１９】
該タンパク質：分子相互作用領域がＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復またはアンキリン反復の一つ以上である請求項１８記載の単離されたタンパク質。
【請求項２０】
該タンパク質がシグナル伝達を調節するものである請求項１５記載の単離されたタンパク質。
【請求項２１】
該シグナル伝達がサイトカインまたは他の内因性分子、ホルモン、微生物または微生物産物、寄生体、抗原または他のエフェクター分子により調節されるものである請求項２０記載の単離されたタンパク質。
【請求項２２】
該タンパク質がサイトカインにより媒介されるシグナル伝達を調節するものである請求項２１記載の単離されたタンパク質。
【請求項２３】
該シグナル伝達が、サイトカインであるＥＰＯ、ＴＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１および／またはＭ−ＣＳＦの一つ以上により媒介されるものである請求項２２記載の単離されたタンパク質。
【請求項２４】
該シグナル伝達がＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＦＮ−γおよび／またはトロンボポエチンの一つ以上により媒介されるものである請求項２３記載の単離されたタンパク質。
【請求項２５】
該シグナル伝達がＩＬ−６により媒体されるものである請求項２４記載の単離されたタンパク質。
【請求項２６】
該タンパク質が、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１８、配列番号：２１、配列番号：２５、配列番号：２９、配列番号：３６、配列番号：４１、配列番号：４４、配列番号：４６または配列番号：４８に実質的に記載されているアミノ酸配列または上にリストした配列の全部または一部に少なくとも約１５％の類似性を有するアミノ酸配列を含むものである請求項１５記載の単離されたタンパク質。
【請求項２７】
該タンパク質が、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：２０、配列番号：２２、配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４５または配列番号：４７に実質的に記載されたヌクレオチド配列、または上にリストした配列の全部または一部に少なくとも１５％の類似性を有するヌクレオチド配列、または低厳格条件下において４２℃で上にリストされた配列とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列によりコードされるものである請求項１５記載の単離されたタンパク質。
【請求項２８】
単離されたタンパク質またはその誘導体、ホモログ、アナログまたは模倣物であって、下記の特性を有するもの、
（i） そのＣ−末端領域にＳＯＣＳボックスを含み、該ＳＯＣＳボックスが下記のアミノ酸配列を含むものであること、
Ｘ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8Ｘ9Ｘ10Ｘ11Ｘ12Ｘ13Ｘ14Ｘ15Ｘ16[Ｘi]nＸ17Ｘ18Ｘ19Ｘ20Ｘ21Ｘ22Ｘ23[Ｘj]nＸ24Ｘ25Ｘ26Ｘ27Ｘ28
上式中、Ｘ1はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、またはＰであり、
Ｘ2はいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｘ3はＰ、ＴまたはＳであり、
Ｘ4はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ5はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ6はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｆ、ＹまたはＷであり、
Ｘ8はＣ、ＴまたはＳであり、
Ｘ9はＲ、ＫまたはＨであり、
Ｘ10はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ11はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ12はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ13はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ14はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ15はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ16はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＳであり、
[Ｘi]nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは１〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘiはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ17はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ18はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ19はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ20はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ21はＰであり、
Ｘ22はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＰまたはＧであり、
Ｘ23はＰまたはＮであり、
[Ｘj]nはｎアミノ酸の配列であって、ｎは０〜５０のアミノ酸であり、配列Ｘjはいずれかのアミノ酸残基から選択される同一または異なるアミノ酸を含むことができるものであり、
Ｘ24はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、
Ｘ25はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ26はいずれかのアミノ酸であり、
Ｘ27はＹまたはＦであり、
Ｘ28はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＰであり、そして
（ii） 該ＳＯＣＳボックスのＮ−末端領域にＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復および／またはアンキリン反復または他のタンパク質：分子相互作用ドメインの少なくとも一つを含むこと、および
（iii） シグナル伝達を調節すること。
【請求項２９】
細胞内で請求項１５〜２８のいずれか一項に記載のタンパク質のレベルを調節する方法であって、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の核酸分子を含む細胞を、該タンパク質のレベルを調節するのに十分な時間および条件の下で、該核酸分子発現のまたは該タンパク質活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含んで成る方法。
【請求項３０】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の核酸分子を含む細胞内でシグナル伝達を調節する方法であって、該細胞をシグナル伝達を調節するのに十分な時間、該核酸分子発現のまたは請求項１５〜２８のいずれか一項に記載のタンパク質活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程を含んで成る方法。
【請求項３１】
少なくとも一つの細胞が請求項１〜１４のいずれか一項に記載の核酸分子を保持する場合の細胞間における相互作用に影響を与える方法であって、該核酸分子を保持する細胞を、シグナル伝達を調節するのに十分な時間、該核酸分子発現のまたは請求項１５〜２８のいずれか一項に記載のタンパク質活性のモジュレーターの有効量と接触させる工程含んで成る方法。
【請求項３２】
該シグナル伝達がサイトカイン、ホルモン、微生物または微生物産物、寄生体、抗原または他のエフェクター分子により媒介されるものである請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
該サイトカインがＥＰＯ、ＴＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１および／またはＭ−ＣＳＦの一つ以上である請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
該サイトカインがＩＬ−６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＦＮ−γおよび／またはトロンボポエチンの一つ以上である請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
該サイトカインがＩＬ−６である請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
該核酸分子が、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：２０、配列番号：２２、配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４５または配列番号：４７から選択されるヌクレオチド配列を含むものである請求項２９〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
該核酸分子が、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１８、配列番号：２１、配列番号：２５、配列番号：２９、配列番号：３６、配列番号：４１、配列番号：４４、配列番号：４６または配列番号：４８に実質的に記載されているアミノ酸配列を含むタンパク質をコードするものである請求項２９〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正書】
【提出日】平成20年10月31日(2008.10.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１８】
図の一部では、ある結合モチーフを持つＳＯＣＳタンパク質を記すのに略号が用いられる。ＷＤ−４０反復を含むＳＯＣＳタンパク質はＷＳＢ１−ＷＳＢ４と呼ぶ。アンキリン反復う持つＳＯＣＳタンパク質はＡＳＢ１−ＡＳＢ３と呼ぶ。
【図１】図１はレトロウイルス感染によるＩＬ−６不応答Ｍ１クローンの生成を示す図式的表現である。ＲＵＦｎｅｏレトロウイルスは制限エンドヌクレアーゼ切断部位、４Ａ２ｃＤＮＡ挿入物およびＰＣＲプライマー配列の位置を示す。
【図２】図２はサザンおよびノーザン分析の写真である。（左および中央のパネル）クローン４Ａ２由来のゲノムＤＮＡおよび対照の感染したＭ１クローンのサザンブロット分析。ＤＮＡは、各クローンによって保持されるレトロウイルスの数を明らかにするためBamH Iで消化し、そしてレトロウイルスｃＤＮＡ挿入物のサイズを求めるためSac Ｉで消化した。左のパネル：ｎｅｏをプローブとして用いた。右側パネル：XhoＩで消化した４Ａ２ＰＣＲ産物をプローブとして用いた。（右側パネル）クローン４Ａ２由来の総ＲＮＡおよび対照の感染したＭ１クローンのノーザンブロット分析であり、Xho Ｉで消化した４Ａ２ＰＣＲ産物をプローブとして用いた。２本のバンドはレトロウイルスゲノム中のスプライスドナー部位およびアクセプター部位から生ずる未切断および切断されたレトロウイルス転写産物を表す。
【図３Ａ】図３はＳＯＣＳ１遺伝子のヌクレオチド配列および構造を示す。Ａ．マウス染色体上のプロタミン遺伝子群に関するＳＯＣＳ１のゲノムの状況。この遺伝子座の寄託番号はマウスに対しＭＭＰＲＭＧＮＳ（直接提出、ジー．シュリューター，1995）、ラットに対しＢＴＰＲＭＴＮＰ２（直接提出、ジー．シュリューター，1996）である。
【図３Ｂ】図３はＳＯＣＳ１遺伝子のヌクレオチド配列および構造を示す。Ｂ．ＳＯＣＳ１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および推定されたアミノ酸配列。アミノ酸配列に対しては通常の１文字略号が使用されそして星印は停止コドンを示す。ポリアデニル化シグナル配列には下線が付してある。コード領域は上部に示し、そして非翻訳領域は下部に示す。
【図４】図４はサイトカインの存在下における細胞分化のグラフである。親のＭ１細胞（Ｍ１およびＭ１．ｍｐｌ）およびＳＯＣＳ１発現するＭ１細胞（４Ａ２およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）の半固形寒天培養を用い、そして１ｍｇ／ｍｌのＩＬ−６（●）、１００ｎｇ／ｍｌのＬＩＦ（◇）、１ｍｇ／ｍｌのＯＳＭ（□）、１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γ（▲）、５００ｎｇ／ｍｌのＴＰＯ（○）、または３×１０-6Ｍのデキサメタソン（＊）の滴定に応答して分化するコロニーのパーセンテージを測定した。
【図５】図５は、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６または食塩水の存在下に、４日間培養した親のＭ１細胞（Ｍ１およびＭ１．ｍｐｌ）およびＳＯＣＳ１を発現するＭ１細胞（４Ａ２およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）の液体培養物のサイトスピン(cytospins)を表す写真である。ＩＬ−６中で培養するとき、親のＭ１細胞とは異なり、ＳＯＣＳ１を構成的に発現するＭ１細胞（４Ａ２およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）ではマクロファージ分化と一致する形態学的特徴は観察されなかった。
【図６】図６はシグナル形成分子のリン酸化のＳＯＣＳ１による阻害を示す写真である。親のＭ１細胞（Ｍ１およびＭ１．ｍｐｌ）およびＳＯＣＳ１を発現するＭ１細胞（４Ａ２およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）を１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６の存在下（＋）または非存在下（−）に３７℃で４分間インキュベートした。次いで、細胞を溶解し、抽出物を抗−マウスｇｐ１３０抗体を用いて免疫沈降させた後ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかける（上部パネルの二つ）かまたは直接電気泳動にかけた（下方のパネル）。ゲルをブロットし、ついでこのフィルターを抗−ホスホチロシン（上部パネル）、抗−ｇｐ１３０抗体（上から２番目のパネル）、抗−ホスホＳＴＡＴ３（下から２番目のパネル）または抗−ＳＴＡＴ３（下方のパネル）でプローブした。プロットはペルオキシダーゼ−結合二次抗体および化学発光増強（ＥＣＬ）試薬を用いて可視化した。
【図７Ａ】図７は、食塩水または１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６または１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γを含む血清フリーのＤＭＥ１０ｍｌ中、３７℃で１０分間インキュベートした（Ａ）Ｍ１細胞またはＳＯＣＳ１を発現するＭ１細胞（４Ａ２）および（Ｂ）Ｍ１．ｍｐｌ細胞またはＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１細胞、から調製されたタンパク抽出物を表す。結合反応は４〜６μｇのタンパク（一つの実験内では一定）、高親和性ＳＩＦ（ｃ−ｓｉｓ−誘導因子）結合部位をコードする32Ｐ−標識化ｍ６７オリゴヌクレオチドの５ｎｇ、および超音波処理鮭精子ＤＮＡの８００ｎｇを含んでいた。ある実験の場合は、タンパク試料は無標識のｍ６７オリゴヌクレオチドまたはＳＴＡＴ１かまたはＳＴＡＴ３に対し特異的な抗体の過剰とプリインキュベートした。
【図７Ｂ】図７は、食塩水または１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６または１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γを含む血清フリーのＤＭＥ１０ｍｌ中、３７℃で１０分間インキュベートした（Ａ）Ｍ１細胞またはＳＯＣＳ１を発現するＭ１細胞（４Ａ２）および（Ｂ）Ｍ１．ｍｐｌ細胞またはＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１細胞、から調製されたタンパク抽出物を表す。結合反応は４〜６μｇのタンパク（一つの実験内では一定）、高親和性ＳＩＦ（ｃ−ｓｉｓ−誘導因子）結合部位をコードする32Ｐ−標識化ｍ６７オリゴヌクレオチドの５ｎｇ、および超音波処理鮭精子ＤＮＡの８００ｎｇを含んでいた。ある実験の場合は、タンパク試料は無標識のｍ６７オリゴヌクレオチドまたはＳＴＡＴ１かまたはＳＴＡＴ３に対し特異的な抗体の過剰とプリインキュベートした。
【図８】図８はノーザンハイブリッド形成を表す写真である。マウスに２μｇを静脈注射し、種々の期間の後、肝臓を切除し、ポリＡ＋ｍＲＮＡを精製した。Ｍ１細胞を種々の長さの期間５００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６で刺激し、その後ポリＡ＋ｍＲＮＡを単離した。電気泳動によりｍＲＮＡを分画し、ナイロンフィルター上に固定した。ノーザンブロットをプリハイブリッド形成し、ランダム−プライム化32Ｐ−標識化ＳＯＣＳ１またはＧＡＰＤＨ・ＤＮＡ断片でハイブリッド形成を行い、洗浄し、そして一晩フィルムに曝露した。
【図９】図９はＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳのアミノ酸配列の比較を表す図である。マウス（ｍｍ）、ヒト（ｈｓ）およびラット（ｒｒ）のＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳの予言されたアミノ酸配列の整列。影を付けた残基は３個または４個のマウスＳＯＣＳファミリーメンバーで保存されているものである。ＳＨ２ドメインは実線でボックスに囲んでいる。一方、ＳＯＣＳボックスは二重線で囲んでいる。
【図９−１】図９の続きを示す図である。
【図９−２】図９の続きを示す図である。
【図９−３】図９の続きを示す図である。
【図１０】図１０はＩＬ−６に無応答のＭ１細胞クローンである４Ａ２の表現型を示す写真である。食塩水または１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６中で７日間半固形寒天中で培養された親のＭ１細胞（左パネル）およびクローン４Ａ２（右パネル）のコロニー。
【図１１Ａ】図１１はイン・ビトロおよびイン・ビボでのＳＯＣＳファミリーメンバーに対するｍＲＮＡの発現を示す写真である。（Ａ）限られた数の組織中でのＳＯＣＳファミリーメンバーの構成的発現を示す、ある範囲のマウスの器官由来のｍＲＮＡのノーザン分析。
【図１１Ｂ】図１１はイン・ビトロおよびイン・ビボでのＳＯＣＳファミリーメンバーに対するｍＲＮＡの発現を示す写真である。（Ｂ）ＩＬ−６と接触した後の、ＳＯＣＳファミリーメンバーの発現の誘導を示す、肝臓およびＭ１細胞由来のｍＲＮＡのノーザン分析。
【図１１Ｃ】図１１はイン・ビトロおよびイン・ビボでのＳＯＣＳファミリーメンバーに対するｍＲＮＡの発現を示す写真である。（Ｃ）ある範囲のサイトカインによるＳＯＣＳファミリーメンバーの発現の誘導を示す、骨髄由来のｍＲＮＡの逆転写酵素ＰＣＲ分析。
【図１２Ａ】図１２は、ＳＯＣＳ１がｇｐ１３０およびＳＴＡＴ−３のリン酸化および活性化を抑制することを示す写真である。（Ａ）１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６での刺激の有り（＋）または無し（−）の場合の親のＭ１細胞（Ｍ１およびＭ１．ｍｐｌ）およびＳＯＣＳ１を発現するＭ１細胞（４Ａ２およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１）由来の抽出物のウエスタンブロット。上部：タンパクの当量負荷を示すため、抗−ｇｐ１３０（αｇｐ１３０）で免疫沈降させ、そして抗−ホスホチロシン（αＰＹ−ＳＴＡＴ３）またはＳＴＡＴ３（αＳＴＡＴ３）で免疫ブロットした抽出物。そのバンドの分子量は右側に示してある。
【図１２Ｂ】図１２は、ＳＯＣＳ１がｇｐ１３０およびＳＴＡＴ−３のリン酸化および活性化を抑制することを示す写真である。（Ｂ）１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６または１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγでの刺激の有り（＋）または無し（−）の場合のＭ１．ｍｐｌ細胞およびＭ１．ｍｐｌ．ＳＯＣＳ１細胞のＥＭＳＡ。そのＤＮＡ−結合複合体ＳＩＦのＡ、ＢおよびＣは左側に示す。
【図１３】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ａ）ＷＤ−４０反復（ＷＳＢ）およびアンキリン反復（ＡＳＢ）を含むタンパク質を含有するＳＯＣＳタンパク質の構造の図式的表現。（Ｂ）ＳＯＣＳタンパク質のＮ−末端領域の整列。（Ｃ）ＣＩＳ、ＳＯＣＳ１、２、３、５、９、１１および１４のＳＨ２ドメインの整列。（Ｄ）ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ６、ＳＯＣＳ１３およびＳＯＣＳ１５のＷＤ−４０反復の整列。（Ｅ）ＳＯＣＳ７およびＳＯＣＳ１０のアンキリン反復の整列。（Ｆ）ＳＨ２、ＷＤ−４０およびアンキリン反復とＳＯＣＳボックスの間の領域の整列。（Ｇ）ＳＯＣＳボックスの整列。それぞれの場合にアミノ酸の慣習的な１文字略号が用いられる。Ｘは確認が不確定な残基を示し、○○○はコンティグの始まりおよび末端を示す。単離されたｃＤＮＡ由来の核酸配列の概念的翻訳から得られたアミノ酸配列は上の箱の中に示され、一方、ＥＳＴの概念的翻訳から得られたアミノ酸配列は下方の箱に示され、そして近似のみである。保存された残基は、（ＬＩＶＭＡ）、（ＦＹＷ）、（ＤＥ）（ＱＮ）、（Ｃ，Ｓ，Ｔ）、（ＫＲＨ）、（ＰＧ）と定義され、ＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復、アンキリン反復およびＳＯＣＳボックスの中で影が付されている。ＳＨ２ドメイン、ＷＤ−４０反復およびアンキリン反復の整列のために、コンセンサス配列が上部に示してある。それぞれの場合に、これはドメインの大量のそして様々なセットの検討から導かれた（ニールら，1994、ボーク，1993）。
【図１３Ａ−１】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ａ）ＷＤ−４０反復（ＷＳＢ）およびアンキリン反復（ＡＳＢ）を含むタンパク質を含有するＳＯＣＳタンパク質の構造の図式的表現。
【図１３Ａ−２】図１３Ａ−１の続きを示す図である。
【図１３Ｂ−１】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ｂ）ＳＯＣＳタンパク質のＮ−末端領域の整列。
【図１３Ｂ−２】図１３Ｂ−１の続きを示す図である。
【図１３Ｃ−１】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ｃ）ＣＩＳ、ＳＯＣＳ１、２、３、５、９、１１および１４のＳＨ２ドメインの整列。
【図１３Ｃ−２】１３Ｃ−１の続きを示す図である。
【図１３Ｄ】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ｄ）ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ６、ＳＯＣＳ１３およびＳＯＣＳ１５のＷＤ−４０反復の整列。
【図１３Ｅ−１】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ｅ）ＳＯＣＳ７およびＳＯＣＳ１０のアンキリン反復の整列。
【図１３Ｅ−２】図１３Ｅ−１の続きを示す図である。
【図１３Ｆ−１】図１３はＳＯＣＳタンパク質のアミノ酸配列の比較を表す。（Ｆ）ＳＨ２、ＷＤ−４０およびアンキリン反復とＳＯＣＳボックスの間の領域の整列。
【図１３Ｆ−２】図１３Ｆ−１の続きを示す図である。
【図１４Ａ】図１４（Ａ）はマウスのＳＯＣＳ１およびＳＯＣＳ５およびＷＤ−４０反復（ＷＳＢ２）およびアンキリン反復（ＡＳＢ１）を含むＳＯＣＳのｍＲＮＡ発現の分析を示す写真である。
【図１４Ｂ】図１４（Ｂ）はマウスのＳＯＣＳ１およびＳＯＣＳ５およびＷＤ−４０反復（ＷＳＢ２）およびアンキリン反復（ＡＳＢ１）を含むＳＯＣＳのｍＲＮＡ発現の分析を示す写真である。
【図１５】図１５はマウスＳＯＣＳ４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す図である。予言されたＡＴＧ「開始」コドンから停止コドンまでの成熟コード領域をコードするヌクレオチドが上の箱の中に示され、一方、予言された５’および３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。マウスｃＤＮＡ配列のマウスおよびヒトＥＳＴコンティグに対する関係は図１７に例示される。
【図１５−１】図１５の続きを示す図である。
【図１５−２】図１５の続きを示す図である。
【図１６】図１６は図１５のヌクレオチド配列由来のマウスＳＯＣＳ４の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは、図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図１７】図１７は、マウスＳＯＣＳ４ｃＤＮＡ配列のマウスおよびヒトＥＳＴコンティグに対する関係を示す図である。
【図１８】図１８は表４．１にリストしたＥＳＴの分析から導かれた、ヒトＳＯＣＳ４ｃＤＮＡコンティグｈ4.1およびｈ4.2のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図１７に例示してある。
【図１８−１】図１８の続きを示す図である。
【図１８−２】図１８の続きを示す図である。
【図１８−３】図１８の続きを示す図である。
【図１９】図１９はマウスＥＳＴ（表５．１）およびヒトｃＤＮＡクローン（５−９４−２）およびＥＳＴ（表５．２）の分析から導かれた、マウスＳＯＣＳ５ゲノムクローン（５７−２）およびｃＤＮＡクローン（５−３−２）のコンティグに対する関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ５コンティグのヌクレオチド配列は図２０に示し、ヒトＳＯＣＳ５コンティグ(h5.1)の配列は図２１に示す。マウスＳＯＣＳ５の推定されたアミノ酸配列は図２０Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、ＳＨ２ドメインは括弧で、そしてＳＯＣＳボックスは括弧で示す。仮定的な５’および３’翻訳領域は細い実線で示してある。
【図２０Ａ】図２０ＡはゲノムクローンおよびｃＤＮＡクローンの分析から導かれたマウスＳＯＣＳ５のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたＡＴＧ「開始」コドンから停止コドンまでの成熟コード領域をコードするヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方、予言された５’および３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。マウスｃＤＮＡ配列のマウスおよびヒトＥＳＴコンティグに対する関係は図１９に例示される。
【図２０Ａ−１】図２０Ａの続きを示す図である。
【図２０Ａ−２】図２０Ａの続きを示す図である。
【図２０Ａ−３】図２０Ａの続きを示す図である。
【図２０Ｂ】図２０Ｂは図２０Ａのヌクレオチド配列から導かれたマウスＳＯＣＳ５タンパク質の予言されたアミノ酸配列の図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線が付してある。
【図２１】図２１はｃＤＮＡクローン５−９４−２および表５．２にリストしたＥＳＴの分析から導かれた、ヒトＳＯＣＳ５ｃＤＮＡコンティグｈ5.1のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図１９に例示してある。
【図２２】図２２はマウスＥＳＴ（表６．１）およびヒトＥＳＴ（表６．２）の分析から導かれたコンティグに対するマウスＳＯＣＳ６ｃＤＮＡクローン（６−１Ａ、６−２Ａ、６−５Ｂ、６−４Ｎ、６−１８、６−２９、６−３Ｎおよび６−５Ｎ）の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ−６コンティグのヌクレオチド配列は図２３に示す。ここで、ヒトＳＯＣＳ６コンティグ（ｈ6.1およびｈ6.2）の配列は図２４に示す。マウスＳＯＣＳ６の推定されたアミノ酸配列は図２３Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示すが、ＷＤ−４０反復は括弧で、そしてＳＯＣＳボックスは括弧で示す。仮定的な５’および３’非翻訳領域は細い実線で示してある。
【図２３Ａ】図２３ＡはｃＤＮＡクローン６４−１０Ａ−１１の分析から導かれたマウスＳＯＣＳ６のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域の部分をコードしそして停止コドンで終わるヌクレオチドは上方の箱の中に示す。一方、予言された３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。マウスおよびヒトＥＳＴコンティグに対するマウスｃＤＮＡ配列の関係は図２２に例示される。
【図２３Ａ−１】図２３Ａの続きを示す図である。
【図２３Ａ−２】図２３Ａの続きを示す図である。
【図２３Ａ−３】図２３Ａの続きを示す図である。
【図２３Ｂ】図２３Ｂは図２３Ａのヌクレオチド配列から導かれた、マウスＳＯＣＳ６タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図２４】図２４はｃＤＮＡクローン５−９４−２および表６． ２にリストしたＥＳＴの分析から導かれた、ヒトＳＯＣＳ６ｃＤＮＡコンティグｈ6.1のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図２２に例示してある。
【図２４−１】図２４の続きを示す図である。
【図２４−２】図２４の続きを示す図である。
【図２４−３】図２４の続きを示す図である。
【図２５】図２５はマウスＥＳＴ（表７．１）およびヒトＥＳＴ（表７．２）の分析から導かれたコンティグに対するマウスＳＯＣＳｃＤＮＡクローン（７４−１０Ａ−１１）の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ７コンティグのヌクレオチド配列は図２６に示してあり、ヒトＳＯＣＳ７コンティグ（ｈ7.1およびｈ7.2）の配列は図２７に示す。マウスＳＯＣＳ７の推定されたアミノ酸配列は図２６Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、アンキリン反復は括弧でそしてＳＯＣＳボックスは括弧で示してある。仮定的５’および３’非翻訳領域はマウスの場合細い実線でそしてｈ7.2の場合波線で示してある。今日まで単離されたクローンおよびＥＳＴの分析に基づけば、ｍＳＯＣＳ７とｈＳＯＣＳ７の３’非翻訳領域はほとんど類似性を共有しない。
【図２６Ａ】図２６ＡはｃＤＮＡクローン７４−１０Ａ−１１の分析から導かれたマウスＳＯＣＳ７のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域部分をコードし、停止コドンで終わるヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するマウスｃＤＮＡの関係は図２５に例示してある。
【図２６Ａ−１】図２６Ａの続きを示す図である。
【図２６Ａ−２】図２６Ａの続きを示す図である。
【図２６Ｂ】図２６Ｂは図２６Ａのヌクレオチド配列から導かれたマウスＳＯＣＳ７タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図２７】図２７は表７．２にリストされたＥＳＴの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ７ｃＤＮＡコンティグｈ7.1およびｈ7.2のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図２５に例示してある。
【図２７−１】図２７の続きを示す図である。
【図２７−２】図２７の続きを示す図である。
【図２８】図２８はマウスＳＯＣＳ８ＥＳＴ（表８．１および図２９Ａ）の分析から導かれた配列のマウスＳＯＣＳ８の予言されたタンパク質構造に対する関係の図式的表現である。マウスＳＯＣＳ８の推定された部分アミノ酸配列は図２９Ｂに示してある。このタンパク質の構造はＳＯＣＳボックスを括弧で目立つようにして図式的に示してある。予言された３’非翻訳領域は細い線で示す。
【図２９Ａ】図２９ＡはＥＳＴの分析から導かれたマウスＳＯＣＳ８ｃＤＮＡ（コンティグ8.1）の部分ヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域の部分をコードし、停止コドンで終わるヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。
【図２９Ｂ】図２９Ｂは図２９Ａのヌクレオチド配列から導かれたマウスＳＯＣＳ８タンパク質の予言された部分的アミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図３０】図３０はマウスＳＯＣＳ９ＥＳＴ（表９．１）とヒトＳＯＣＳ９ＥＳＴ（表９．２）の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ９コンティグ(ｍ9.1)のヌクレオチド配列は図３１に示し、ヒトＳＯＣＳ９コンティグ（ｈ9.1）の配列は図３２に示す。ヒトＳＯＣＳ９の推定されたアミノ酸配列は図式的に示してあり、ＳＨ２ドメインは括弧で、そしてＳＯＣＳボックスは括弧で示してある。仮定的３’非翻訳領域は細い実線で示してある。
【図３１】図３１は表９．１にリストしてあるＥＳＴの分析から導かれたマウスＳＯＣＳ９ｃＤＮＡ（コンティグｍ9.1）の部分ヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図３０に例示してある。
【図３２】図３２は表９．２にリストされたＥＳＴの分析から導かれた、ヒトＳＯＣＳ９ｃＤＮＡ(コンティグｈ9.1)の部分ヌクレオチド配列を示す図である。コンティグｈ9.1はＳＨ２ドメインおよびＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることは明らかであるが、この配列の質は１個の曖昧さのないオープンリーディングフレームを導き出すのに十分な程高くはない。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図３０に例示されている。
【図３２−１】図３２の続きを示す図である。
【図３２−２】図３２の続きを示す図である。
【図３２−３】図３２の続きを示す図である。
【図３３】図３３はマウスＥＳＴ（表１０．１）およびヒトＥＳＴ（表１０．２）の分析から導かれたコンティグに対するマウスＳＯＣＳ１０ｃＤＮＡクローン（１０−９、１０−１２、１０−２３および１０−２４）の関係を示す図である。マウスＳＯＣＳ１０コンティグのヌクレオチド配列は図１０．２に示してあり、ヒトＳＯＣＳ１０コンティグ（ｈ10.1およびｈ10.2）の配列は図３５に示してある。このタンパク質の予言された構造は図式的に示してあり、アンキリン反復は括弧によりそしてＳＯＣＳボックスは括弧により示してある。仮定的３’非翻訳領域はマウスでは細い実線で、そしてｈ10.2では波線で示してある。今日まで単離されたクローンおよびＥＳＴの分析に基づけば、ｍＳＯＣＳ−１０およびｈＳＯＣＳ−１０の３’非翻訳領域はほとんど類似性を共有しない。
【図３４】図３４はｃＤＮＡクローン１０−９、１０−１２、１０−２３および１０−２４の分析から導かれたマウスＳＯＣＳ１０のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域の部分をコードし、停止コドンで終わるヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。コンティグｍ10.1が一連のアンキリン反復およびＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることは明らかであるが、この配列の質は１個の曖昧さのないオープンリーディングフレームを導き出す程には十分に高くはない。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するマウスｃＤＮＡ配列の関係は図３３に例示してある。
【図３４−１】図３４の続きを示す図である。
【図３４−２】図３４の続きを示す図である。
【図３４−３】図３４の続きを示す図である。
【図３５】図３５は表１０．２にリストされたＥＳＴの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１０ｃＤＮＡコンティグｈ10.1およびｈ10.2のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図３３に例示する。
【図３５−１】図３５の続きを示す図である。
【図３５−２】図３５の続きを示す図である。
【図３６Ａ】図３６Ａは表１１．１にリストされたＥＳＴの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１１ｃＤＮＡの部分ヌクレオチド配列を示す図である。予言されたＡＴＧ「開始」コドンから停止コドンまでの成熟コード領域をコードするヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’および５’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。ＥＳＴから導かれた部分ｃＤＮＡ配列の予言されタンパク質に対する関係は図３７に示してある。
【図３６Ｂ】図３６Ｂは図３６Ａのヌクレオチド配列から導かれた、ヒトＳＯＣＳ１１タンパク質の予言された部分アミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示すが、下線を付してある。
【図３７】図３７はヒトＳＯＣＳ１１ＥＳＴ（表１１．１および図３６Ａ）の分析から導かれた配列の、ヒトＳＯＣＳ１１の予言されたタンパク質構造に対する関係を示す図式的表現である。ヒトＳＯＣＳ１１の推定された部分アミノ酸配列は図３６Ｂに示してある。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、ＳＨ２ドメインは括弧でそしてＳＯＣＳボックスは括弧で目立つように示してある。予言された３’非翻訳領域は細い実線で示す。
【図３８】図３８はマウスＥＳＴ（表１２．１）およびヒトＥＳＴ（表１２．２）の分析から導かれたコンティグに対するマウスＳＯＣＳ１２ｃＤＮＡクローン（１２−１）の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ１２コンティグのヌクレオチド配列は図１２．２に示し、ヒトＳＯＣＳ１２コンティグ（ｈ12.1およびｈ12.2）の配列は図４０に示す。マウスＳＯＣＳ１２の推定された部分アミノ酸配列は図３９に示す。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、アンキリン反復は括弧によりそしてＳＯＣＳボックスは括弧により示される。仮定的３’非翻訳領域はマウスでは細い実線で示されそしてｈ12.2では波線で示される。今日まで単離されたクローンおよびＥＳＴの分析に基づけば、ｍＳＯＣＳ１２およびｈＳＯＣＳ１２の３’非翻訳領域はほとんど類似性を共有しない。
【図３９】図３９はｃＤＮＡクローン１２−１および表１２．１にリストしたＥＳＴの分析から導かれるマウスＳＯＣＳ１２のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域の部分をコードし、停止コドンを含むヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。ヒトＳＯＣＳ１２との相同性により、コンティグm12.1が一連のアンキリン反復およびＳＯＣＳボックスを持つタンパク質をコードすることは明らかであるが、この配列の質は１個の曖昧さのないオープンリーディングフレームを導き出すには十分に高くない。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するマウスｃＤＮＡ配列の関係は図３８に例示してある。
【図４０】図４０は表１２．２にリストされたＥＳＴの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１２ｃＤＮＡコンティグｈ12.1およびｈ12.2のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図３８に例示してある。
【図４０−１】図４０の続きを示す図である。
【図４０−２】図４０の続きを示す図である。
【図４０−３】図４０の続きを示す図である。
【図４１】図４１はマウスＳＯＣＳ１３ｃＤＮＡクローン（６２−１、６２−６−７、６２−１４）およびマウスＥＳＴ（表１３．１）の分析から導かれたコンティグｍ１３．１の、ヒトＥＳＴ（表１３．２）の分析から導かれたコンティグｈ13.1に対する関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ１３コンティグのヌクレオチド配列は図４２に示し、ヒトＳＯＣＳ１３コンティグ（ｈ13.1）の配列は図４３に示す。マウスＳＯＣＳ１３の推定されたアミノ酸配列は図４２Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、ＷＤ−４０反復は括弧で目立つようにしてあり、ＳＯＣＳボックスは括弧で目立つようにしてある。３’非翻訳領域は細い実線で示してある。
【図４２Ａ】図４２ＡはｃＤＮＡクローン６２−１、６２−６−７および６２−１４の分析から導かれるマウスＳＯＣＳ１３のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたコード領域の部分をコードし、停止コドンで終わるヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された３’非翻訳領域をコードするヌクレオチドは下方の箱の中に示す。マウスｃＤＮＡ配列のマウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対する関係は図４１に例示してある。
【図４２Ａ−１】図４２Ａの続きを示す図である。
【図４２Ａ−２】図４２Ａの続きを示す図である。
【図４２Ｂ】図４２Ｂは図４２Ａのヌクレオチド配列から導かれた、マウスＳＯＣＳ１３タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図４３】図４３は表１３．２にリストされたＥＳＴの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１３ｃＤＮＡコンティグｈ13.1のヌクレオチド配列を示す図である。これらのコンティグのマウスｃＤＮＡ配列に対する関係は図４１に例示されている。
【図４４】図４４はマウスＥＳＴ（表１４．１）の分析から導かれたコンティグに対する部分的マウスＳＯＣＳ１４ｃＤＮＡクローン（１４．１）の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ１４コンティグのヌクレオチド配列は図４５に示す。マウスＳＯＣＳ１４の推定された部分アミノ酸配列は図４５Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示してあり、ＳＨ３ドメインは括弧で示し、ＳＯＣＳボックスは括弧で示す。仮定的３’非翻訳領域は細い実線で示してある。
【図４５Ａ】図４５ＡはゲノムクローンおよびｃＤＮＡクローンの分析から導かれたマウスＳＯＣＳ１４のヌクレオチド配列を示す図である。予言されたＡＴＧ「開始」コドンから停止コドンまでの成熟コード領域をコードするヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された５’および３’非翻訳領域は下方の箱の中に示す。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するマウスｃＤＮＡ配列の関係は図４４に例示する。
【図４５Ａ−１】図４５Ａの続きを示す図である。
【図４５Ａ−２】図４５Ａの続きを示す図である。
【図４５Ａ−３】図４５Ａの続きを示す図である。
【図４５Ｂ】図４５Ｂは図４５Ａのヌクレオチド配列から導かれた、マウスＳＯＣＳ１４タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図４６】図４６はヒトＢＡＣおよびヒトＥＳＴ（表１５．２）の分析から導かれたコンティグｈ15.1に対する、マウスＢＡＣおよびマウスＥＳＴ（表１５．１）の分析から導かれたコンティグｍ15.1の関係を示す図式的表現である。マウスＳＯＣＳ１５コンティグのヌクレオチド配列は図４７に示し、ヒトＳＯＣＳ１５コンティグ(ｈ15.1)の配列は図４７に示してある。マウスＳＯＣＳ１５の推定されたアミノ酸配列は図４７Ｂに示す。このタンパク質の構造は図式的に示す。ＷＤ−４０反復は括弧で目立たせており、ＳＯＣＳボックスは括弧で目立たせている。５’および３’非翻訳領域は細い実線で示してある。コード領域を中断するイントロンは＾で示してある。
【図４７Ａ】図４７Ａは表１５．１にリストされたマウスＢＡＣの分析から導かれたマウスＳＯＣＳ１５遺伝子を覆うヌクレオチド配列を示す図である。ＡＴＧで始まり停止コドンで終わる予言されたコード領域をコードするヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された５’非翻訳領域、イントロンおよび３’非翻訳領域をコードするヌクレオチドは下方の箱の中に示す。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するマウスＢＡＣの関係は図４６に例示する。
【図４７Ａ−１】図４７Ａの続きを示す図である。
【図４７Ａ−２】図４７Ａの続きを示す図である。
【図４７Ａ−３】図４７Ａの続きを示す図である。
【図４７Ａ−４】図４７Ａの続きを示す図である。
【図４７Ａ−５】図４７Ａの続きを示す図である。
【図４７Ｂ】図４７Ｂは図４７Ａのヌクレオチド配列から導かれた、マウスＳＯＣＳ１５タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図４８Ａ】図４８Ａは表１５．２にリストしたヒトＢＡＣの分析から導かれたヒトＳＯＣＳ１５遺伝子を覆うヌクレオチド配列を示す図である。ＡＴＧで始まりそして停止コドンで終わる予言されたコード領域をコードするヌクレオチドは上方の箱の中に示し、一方予言された５’非翻訳領域、イントロンおよび３’非翻訳領域をコードするヌクレオチドは下方の箱の中に示す。マウスおよびヒトのＥＳＴコンティグに対するヒトＢＡＣの関係は図４６に例示してある。
【図４８Ａ−１】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ａ−２】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ａ−３】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ａ−４】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ａ−５】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ａ−６】図４８Ａの続きを示す図である。
【図４８Ｂ】図４８Ｂは図４８Ａのヌクレオチド配列から導かれる、ヒトＳＯＣＳ１５タンパク質の予言されたアミノ酸配列を示す図である。ＳＯＣＳボックスは図１３にも示してあるが、下線を付してある。
【図４９】図４９はＪＡＫ２キナーゼ活性のＳＯＣＳ１による阻害を示す写真である。（Ａ）上方のパネル。ＣｏｓＭ６細胞を、Ｆｌａｇ−標識化ｍＪＡＫ２およびｍＳＯＣＳ−ＩＤＮＡ（ＳＯＣＳ１）かＦｌａｇ−ｍＪＡＫ２ＤＮＡ単独（−）を用いて一過性にトランスフェクトし、溶解し、抗−ＪＡＫ２抗体を用いてＪＡＫ２タンパクを免疫沈降させ、そしてイン・ビトロのキナーゼ検定に付した。下方のパネル。ＪＡＫ２免疫沈降物の一部を抗−ＪＡＫ２抗体を用いてウエスタンブロットした。（Ｂ）上方のパネル。ＣｏｓＭ６細胞を、Ｆｌａｇ−ｍＪＡＫ２とＦｌａｇ−ｍＳＯＣＳ−１ＤＮＡかまたはＦｌａｇ−ｍＪＡＫ２ＤＮＡ単独で一過性にトランスフェクトし、溶解し、抗−ＪＡＫ２（ＵＢＩ）を用いてＪＡＫ２タンパクを免疫沈降させ、そしてＳＤＳ／ＰＡＧＥゲルにより分離した。ついで、免疫沈降物を抗−ホスホチロシン抗体を用いてウエスタンブロットにより分析した。下方のパネル：ＪＡＫ２の発現。Ｃｏｓ細胞の溶解物をＳＤＳ／ＰＡＧＥゲルにより分離し、コンティグ−ＦＬＡＧ抗体（Ｍ２）を用いてウエスタンブロットにより分析した。
【図５０】図５０はＪＡＫ２とＳＯＣＳタンパクの間の相互作用を示す写真である。（Ａ）．ＣｏｓＭ６細胞を、Ｆｌａｇ−標識化ｍＪＡＫ２と種々のＦｌａｇ−標識化ＳＯＣＳＤＮＡ（ＳＯＣＳ−１；Ｓ１、ＳＯＣＳ−２；Ｓ２、ＳＯＣＳ−３；Ｓ３、ＣＩＳ）か、またはＦｌａｇ−ｍＪＡＫ２単独を用いて一過性にトランスフェクトし、溶解し、抗−ＪＡＫ２（ＵＢＩ）を用いてＪＡＫ２タンパクを免疫沈降させ、そしてＳＤＳ／ＰＡＧＥにより分離した。次いで、免疫沈降物を抗−ＦＬＡＧ抗体（Ｍ２）を用いてウエスタンブロットにより分析した。（Ｂ）．（Ａ）で述べたＣｏｓ細胞溶解物をＳＤＳ／ＰＡＧＥにより分離し、種々のタンパクの発現レベルを抗−ＦＬＡＧ抗体（Ｍ２）を用いてウエスタンブロットにより測定した。（Ｃ）．ＪＡＫ２チロシンリン酸化。（Ａ）で述べたＣｏｓ細胞溶解物をＳＤＳ／ＰＡＧＥにより分離し、タンパクを抗−ホスホチロシン抗体を用いてウエスタンブロットにより分析した。
【図５１】図５１はｐβｇａｌｐＡｌｏｘｎｅｏの図式的表現である。
【図５２】図５２はｐβｇａｌｐＡｌｏｘｎｅｏＴＫの図式的表現である。
【図５３】図５３はＳＯＣＳ１ノックアウト構築物の図式的表現である。