(57)【要約】【課題】  新規なＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果の増強剤を提供すること。【解決手段】  本発明のＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果の増強剤は、アルギン酸プロピレングリコールエステルを有効成分とすることを特徴とする。アルギン酸プロピレングリコールエステルは、アルギン酸ナトリウムのように酸性領域で析出してゲル化する性質を有さない。従って、アルギン酸プロピレングリコールエステルには、酸性領域で安定化が図られるＧ−ＣＳＦが安定に保たれた液状組成物を調製するのに適しているという利点もある。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルギン酸プロピレングリコールエステルを有効成分とするＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果の増強剤。
【請求項２】
Ｇ−ＣＳＦとアルギン酸プロピレングリコールエステルを少なくとも含んでなる創傷治療のための外用液状組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｇ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果の増強剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｇ−ＣＳＦ（顆粒球コロニー形成刺激因子）が外用において創傷治療効果を有することは既に公知であり、例えば、特許文献１では、創傷の１つとして位置付けられる難治性皮膚潰瘍に対するＧ−ＣＳＦの外用での治療効果が示されている。また、特許文献１には、Ｇ−ＣＳＦとともにアルギン酸またはその塩を創傷部位に塗布すると、これらはＧ−ＣＳＦの一定期間における血中存在量を増加したり血中減衰量を抑制したりし、また、患者の血流量を増加するなどして難治性皮膚潰瘍に対する治療効果の向上に寄与することが記載されている。
【特許文献１】国際公開第２００７／１１９４８６号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、Ｇ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果に対して優れた増強作用を有する新たな物質の探索は、難治性皮膚潰瘍をはじめとする各種の創傷の優れた治療方法を確立する上で意義深いことである。
そこで本発明は、新規なＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果の増強剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は、上記の点に鑑みて鋭意研究を重ねた結果、アルギン酸の多価アルコールエステルの１つであるアルギン酸プロピレングリコールエステルが、Ｇ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果に対して優れた増強作用を有することを見出した。
【０００５】
上記の知見に基づいてなされた本発明のＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果の増強剤は、請求項１記載の通り、アルギン酸プロピレングリコールエステルを有効成分とすることを特徴とする。
また、本発明の創傷治療のための外用液状組成物は、請求項２記載の通り、Ｇ−ＣＳＦとアルギン酸プロピレングリコールエステルを少なくとも含んでなることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、新規なＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果の増強剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明において、Ｇ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果の増強剤の有効成分であるアルギン酸プロピレングリコールエステルは、アルギン酸のカルボキシル基の少なくとも一部がプロピレングリコールとエステル結合した公知の物質であり、医薬品添加物（ゲル化剤や増粘剤など）などとして既に利用されている安全性が高いものである。
【０００８】
本発明において、アルギン酸プロピレングリコールエステルによる外用での創傷治療効果の増強対象となるＧ−ＣＳＦは、顆粒球を分化増殖させる作用を有するなど、当業者にＧ−ＣＳＦとして認識されうるものであれば、既知のアミノ酸配列を持つヒト由来の天然体に限らず、その遺伝子工学的手法による産生体や、そのアミノ酸配列に対して１以上のアミノ酸が置換・欠失・付加・挿入した類縁体であってもよい。Ｇ−ＣＳＦの創傷治癒における主作用は、骨髄からの好中球、線維芽細胞に分化誘導される筋線維芽細胞、血小板に分化誘導される巨核球などの組織修復に必要な細胞全般の動員を助けることである。この作用は、他の血管内皮細胞の増殖因子、例えば、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）などを併用することで、増強されることが期待でき、肉芽形成能をさらに増幅させうる。また、Ｇ−ＣＳＦの創傷部位への適用による効果としては、創傷部位近傍に浸潤した幹細胞などの分化程度の低い骨髄由来細胞の分化促進作用も考えられる。
【０００９】
アルギン酸プロピレングリコールエステルによるＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果に対する増強作用は、例えば、Ｇ−ＣＳＦを創傷部位に適用する際、アルギン酸プロピレングリコールエステルも同時に創傷部位に適用することで発揮させることができる。ここで、「適用」という用語は、塗布や噴霧といった創傷部位への局所投与方法を意味する。このような態様は、Ｇ−ＣＳＦとアルギン酸プロピレングリコールエステルを少なくとも含んでなる創傷治療のための外用液状組成物を用いることで容易に実現することができる。
【００１０】
Ｇ−ＣＳＦとアルギン酸プロピレングリコールエステルを少なくとも含んでなる創傷治療のための外用液状組成物は、例えば、Ｇ−ＣＳＦとアルギン酸プロピレングリコールエステルを、精製水や生理食塩水や燐酸緩衝液や塩酸溶液などの溶媒に溶解して調製することができる。なお、必要に応じてポリソルベートなどの界面活性剤やマンニトールなどの安定化剤などを添加剤として添加してもよい。液状組成物中のＧ−ＣＳＦの濃度は１μｇ／ｍＬ〜２ｍｇ／ｍＬが望ましく、５μｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬがより望ましいが、さらに望ましくは創傷治療効果に濃度依存性が見られる７．５μｇ／ｍＬ〜２５０μｇ／ｍＬである。濃度が低すぎるとＧ−ＣＳＦの創傷治癒効果が発揮されなくなる一方、濃度を高くしすぎてもそれほど効果は向上しない。また、液状組成物に含有せしめるアルギン酸プロピレングリコールエステルの濃度は０．００１％〜５％が望ましく、０．０１％〜３％がより望ましく、０．０５％〜１％がさらに望ましい（重量％濃度）。濃度が高すぎると液状組成物の粘度が高くなって噴霧が困難になるといった取り扱い上の問題が生じる一方、濃度が低すぎるとＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果に対する増強作用が十分に得られないといった問題や、液状組成物の粘度が低くなって創傷表面に対するＧ−ＣＳＦの保持が十分に行えないといった問題がある（従って液状組成物の粘度は１．５ｍＰａ・ｓ〜２０ｍＰａ・ｓが望ましく５ｍＰａ・ｓ〜１０ｍＰａ・ｓがより望ましい）。液状組成物のｐＨは、組成物中でＧ−ＣＳＦを安定に保つためには２．５〜５．０であることが望ましく、３．０〜４．５であることがより望ましく、３．５〜４．３であることがさらに望ましい。液状組成物のｐＨは、必要に応じて無機酸（塩酸など）や有機酸（クエン酸や酢酸など）をｐＨ調整剤として用いて調整することができる。なお、アルギン酸ナトリウムを溶媒に溶解すると、溶液のｐＨは約７である。従って、Ｇ−ＣＳＦとアルギン酸ナトリウムを含有する液状組成物を調製する場合、組成物中でＧ−ＣＳＦを安定に保つためにはｐＨ調整剤を用いてｐＨを酸性領域に移行させる必要があるが、アルギン酸ナトリウムは酸性領域で析出してゲル化しやすい性質を有する（特にｐＨが４．３以下でその傾向が顕著である）。よって、Ｇ−ＣＳＦが安定に保たれた液状組成物を調製する場合、アルギン酸ナトリウムには取り扱いが困難であるという問題がある。これに対し、アルギン酸プロピレングリコールエステルを溶媒に溶解すると、溶液のｐＨは約４である。アルギン酸プロピレングリコールエステルは、アルギン酸ナトリウムのように、酸性領域で析出してゲル化する性質を有さない。また、アルギン酸プロピレングリコールエステルは、アルギン酸ナトリウムよりもＧ−ＣＳＦの安定性に及ぼす影響が少ない。従って、アルギン酸プロピレングリコールエステルには、Ｇ−ＣＳＦが安定に保たれた液状組成物を調製するのに都合がよいという利点もある。
【００１１】
Ｇ−ＣＳＦとアルギン酸プロピレングリコールエステルを少なくとも含んでなる創傷治療のための外用液状組成物は、通常行われる方法に従って、液剤やローション剤や噴霧剤（スプレー剤）などに製剤化することができる。製剤化に際しては、自体公知の安定化剤、増粘剤、溶解補助剤、保存剤、増量剤、等張化剤、殺菌剤、防腐剤、ゲル化剤などの各種成分を添加してもよいことは言うまでもない。この外用液状組成物は、例えば、１日１回〜数回や１回／１日〜７日で１週間〜１ヶ月間、Ｇ−ＣＳＦを望ましくは０．１μｇ／ｃｍ２〜５００μｇ／ｃｍ２の割合で、より望ましくは０．５μｇ／ｃｍ２〜１００μｇ／ｃｍ２の割合で、さらに望ましくは１μｇ／ｃｍ２〜１０μｇ／ｃｍ２の割合で創傷部位に塗布したり噴霧したりすることで、優れた創傷治療効果を期待することができる。また、この外用液状組成物は、コラーゲンシート（コラーゲンを綿線維状に紡糸加工したもの）やアルギン酸塩シート（アルギン酸塩を線維状にして不織布にしたもの）などの基材シートに浸潤させてシート剤に製剤化して用いてもよい。このようにして用いることで、基材シートが有する保湿性や創傷治癒促進効果などとの相乗乃至相加効果を期待することができる（創傷部位へのＧ−ＣＳＦの投与量は上記と同様）。
【００１２】
なお、本発明において、「創傷」という用語は、皮膚や粘膜といった体表の損傷を意味し、具体的には、外傷や熱傷の他、褥瘡（床ずれ）、糖尿病性皮膚潰瘍、虚血性皮膚潰瘍などの難治性皮膚潰瘍をはじめとする皮膚潰瘍などが例示される。
【実施例】
【００１３】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００１４】
実験例１：アルギン酸プロピレングリコールエステルによるＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果に対する増強作用の評価（その１）
（Ａ）サンプルとした液状組成物について
麒麟麦酒株式会社の遺伝子組換えヒトＧ−ＣＳＦ製剤（商品名：グラン注射液１５０）、アルギン酸ナトリウム（株式会社キミカ）、アルギン酸プロピレングリコールエステル（株式会社キミカ）、生理食塩水、ｐＨ調整剤として１０ｍＭ酢酸緩衝液を用い、以下の３種類の液状組成物を準備した。それぞれの液状組成物のｐＨと粘度を表１に示す。
（１）Ｇ−ＣＳＦ１５０μｇ／０．６ｍＬ（商品名：グラン注射液１５０）
（２）Ｇ−ＣＳＦ１５０μｇ／０．５％アルギン酸ナトリウム溶液１．７５ｍＬ
（３）Ｇ−ＣＳＦ１５０μｇ／０．５％アルギン酸プロピレングリコールエステル溶液１．７５ｍＬ
【００１５】
【表１】
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【００１６】
（Ｂ）創傷モデルの作製とこのモデルを用いたサンプルの創傷治療効果の評価について
ラット（ＳＰＦ）、Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）系統（日本チャールズリバー株式会社より購入）を用いて、創傷モデルとして皮膚切創モデルの作製を行った。具体的には、ペントバルビタールナトリウム（大日本住友製薬株式会社）を用いてラットに麻酔をかけた後（４０ｍｇ／０．８ｍＬ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）、背部を電気バリカンにて剃毛し、剃毛した部位の皮膚をアルコール綿で消毒してから外科用メスで正中線上に３．４ｃｍの切創を作製した。切開部の中央部と、中央部から頭部側および尾部側にそれぞれ１ｃｍの位置の計３箇所をミヘル（ミッヘル縫合鋲：大３．０×１４ｍｍ、株式会社夏目製作所）で縫合した。切創作製日を１日目として、１日目に切創部位あたり５０μｇのＧ−ＣＳＦが投与されるように各サンプルを切創部位に塗布した。４日目にジエチルエーテル麻酔下でミヘルを除去した。５日目にラットの体重を測定し、ジエチルエーテル過麻酔で致死させた後、創傷部位周辺の皮膚を剥離して創傷部位を中央とした短冊形の皮膚片（短片約２ｃｍ×長片約３ｃｍ）を作製し、短片の一方を端から約０．５ｃｍの位置で固定して、創耐張力（切創が開裂するのに要する荷重）を創傷治癒測定用引張試験機（ＴＫ−２５１、有限会社ユニコム）にて測定し、各サンプルの平均創耐張力のコントロール（無処置）の平均創耐張力からの増加比率を算出した（ｎ＝１０）。結果を表２に示す。
【００１７】
【表２】
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【００１８】
表２から明らかなように、Ｇ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果は、アルギン酸ナトリウムまたはアルギン酸プロピレングリコールエステルの共存により増強されたが、増強の程度は、アルギン酸ナトリウムよりもアルギン酸プロピレングリコールエステルの方が遥かに優れていることがわかった。
【００１９】
実験例２：アルギン酸プロピレングリコールエステルによるＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果に対する増強作用の評価（その２）
実験例１と同様にして、切創部位あたり０．２ｍＬ塗布することで１．５μｇ，５μｇ，１５μｇ，５０μｇのＧ−ＣＳＦが投与される４種類の液状組成物（Ｇ−ＣＳＦ含有０．５％アルギン酸プロピレングリコールエステル溶液）を準備し、実施例１と同様にして、各サンプルの平均創耐張力のコントロール（無処置）の平均創耐張力からの増加比率を算出した（ｎ＝１０）。結果を表３に示す。
【００２０】
【表３】
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【００２１】
表３から明らかなように、アルギン酸プロピレングリコールエステルの共存により、Ｇ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果は、少なくとも１．５μｇ〜５０μｇの投与範囲において濃度依存的に増強されることがわかった。
【００２２】
実験例３：アルギン酸プロピレングリコールエステルのＧ−ＣＳＦの安定性に及ぼす影響の評価
実験例１と同様にして、Ｇ−ＣＳＦ濃度が８６μｇ／ｍＬの０．５％アルギン酸プロピレングリコールエステル溶液と、Ｇ−ＣＳＦ濃度が８６μｇ／ｍＬの０．５％アルギン酸ナトリウム溶液を準備し、４℃での３週間保存後と４週間保存後のＧ−ＣＳＦの安定性をＳＤＳ電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）にて評価した。結果を図１に示す（レーンの詳細は以下の通り）。
１：コントロール（保存試験開始前のＧ−ＣＳＦ）
２：４週間保存後のアルギン酸プロピレングリコールエステル溶液中のＧ−ＣＳＦ
３：３週間保存後のアルギン酸プロピレングリコールエステル溶液中のＧ−ＣＳＦ
４：４週間保存後のアルギン酸ナトリウム溶液中のＧ−ＣＳＦ
５：３週間保存後のアルギン酸ナトリウム溶液中のＧ−ＣＳＦ
図１から明らかなように、アルギン酸プロピレングリコールエステル溶液中のＧ−ＣＳＦは、アルギン酸ナトリウム溶液中のＧ−ＣＳＦに比較して劣化が生じにくいことがわかった。
【００２３】
製剤例１：ローション剤（その１）
（ｇ／１００ｍＬ）
グリセリン                                        １０
エタノール                                        １０
１，３−ブチレングリコール                          ５
ヒドロキシエチルセルロース                          １
セタノール                                          １
Ｇ−ＣＳＦ                                          ０．０２
アテロコラーゲン                                    ０．３
アルギン酸プロピレングリコールエステル              ０．２５
クエン酸一水和物                                    ０．６６
クエン酸三ナトリウム二水和物                        ０．２７
パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１
燐酸二水素ナトリウム                                ３
精製水                                            ６８．４
自体公知のローション剤の製造方法により、以上の成分組成を有する皮膚潰瘍治療用ローション剤を製造した。
【００２４】
製剤例２：ローション剤（その２）
（ｇ／１００ｍＬ）
グリセリン                                        １０
エタノール                                        １０
１，３−ブチレングリコール                          ５
ヒドロキシエチルセルロース                          １
セタノール                                          １
Ｇ−ＣＳＦ                                          ０．０２
アルギン酸プロピレングリコールエステル              ０．２５
クエン酸一水和物                                    ０．６６
クエン酸三ナトリウム二水和物                        ０．２７
パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１
燐酸二水素ナトリウム                                ３
精製水                                            ６８．７
自体公知のローション剤の製造方法により、以上の成分組成を有する皮膚潰瘍治療用ローション剤を製造した。
【００２５】
製剤例３：シート剤（その１）
（ｇ／１００ｍＬ）
グリセリン                                          ７
１，３−ブチレングリコール                          ３
ペンチレングリコール                                ５
フェノキシエタノール                                ０．５
メチルパラベン                                      ０．１
Ｇ−ＣＳＦ                                          ０．０２
アルギン酸プロピレングリコールエステル              ０．５
燐酸二水素ナトリウム                                ３
精製水                                            ８０．８８
アテロコラーゲン（タンパク質分解酵素によって抗原性発現部位を除去したコラーゲン）を綿線維状に紡糸加工した低抗原性のコラーゲンシート（日本臓器製薬株式会社）に以上の成分組成を有する薬用原液を浸潤させることで、皮膚潰瘍治療用シート剤を製造した。
【００２６】
製剤例４：シート剤（その２）
製剤例３におけるコラーゲンシートのかわりにアルギン酸塩シート（アルギン酸のカルシウム塩とナトリウム塩の混合塩を線維状にして不織布にしたＣｏｎｖａｔｅｃ社の商品名：カルトスタット）を用いたこと以外は製剤例３と同様にして皮膚潰瘍治療用シート剤を製造した。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明は、新規なＧ−ＣＳＦの外用での創傷治療効果の増強剤を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】実験例３におけるアルギン酸プロピレングリコールエステルのＧ−ＣＳＦの安定性に及ぼす影響を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果である。
【図１】
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