(57)【要約】【課題】再生できない活性炭等の廃棄物が低減され、カフェイン等の夾雑物が除去され、苦味が抑制され、かつ色相の改善した、高濃度の非重合体カテキン類を含有する精製緑茶抽出物の製造方法を提供すること。【解決手段】緑茶抽出物を合成吸着剤に吸着させ、合成吸着剤に塩基性水溶液を接触させて非重合体カテキン類を溶出させた後、溶出液のpHを７以下に調整し、次いで非重合体カテキン類濃度が０．１〜４．０質量％に調整した溶出液を微小孔径膜で濾過し、活性炭と接触させる、緑茶抽出物の固形分に対して非重合体カテキン類を２５〜９０質量％含有する精製茶抽出物の製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑茶抽出物を合成吸着剤に吸着させ、合成吸着剤に塩基性水溶液を接触させて非重合体カテキン類を溶出させた後、溶出液のpHを７以下に調整し、次いで非重合体カテキン類濃度が０．１〜４．０質量％に調整した溶出液を微小孔径膜で濾過し、濾液を活性炭と接触させる、緑茶抽出物の固形分に対して非重合体カテキン類を２５〜９０質量％含有する精製茶抽出物を得る、精製茶抽出物の製造方法。
【請求項２】
吸着工程終了後、合成吸着剤を水又は有機溶媒水溶液で洗浄し、次いで合成吸着剤に塩基性水溶液を接触させる請求項１記載の製造法。
【請求項３】
微小孔径膜が限外濾過膜又は逆浸透膜である請求項１又は２記載の製造法。
【請求項４】
溶出液のｐＨ調整終了後、濃縮し、次いで析出懸濁物を固液分離除去した上澄み液を希釈して微小孔径膜の濾過に付す請求項１〜３のいずれか１項記載の製造法。
【請求項５】
緑茶抽出物が、加水分解処理して得られるものである請求項１〜４のいずれか１項記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、色相が改善された精製緑茶抽出物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
カテキンの生理効果としてはαアミラーゼ活性阻害作用などが報告されている（例えば、特許文献１参照）。このような生理効果を発現させるためには、より簡便に大量のカテキンを摂取することが必要であることから、飲料にカテキンを高濃度配合する方法が望まれていた。
【０００３】
この方法の一つとして、緑茶抽出物の濃縮物（特許文献２）などの茶抽出物を利用して、カテキンを飲料に溶解状態で添加する方法が用いられている。しかしながら、この方法によりカテキンを高濃度に配合する対象となる飲料の種類によっては、例えば紅茶抽出液や炭酸飲料にカテキンを添加する場合など、カフェイン及び緑茶由来の苦渋みの残存が飲料の商品価値を大きく損ねることがわかっている。
【０００４】
緑茶抽出物から、カフェイン等の夾雑物を取り除く方法としては、吸着法（特許文献２〜４）、抽出法（特許文献５〜６）等が知られている。
上記方法において、緑茶抽出物中の非重合体カテキン類含有率を上げる場合には、有機溶媒の使用が必要となるが、工業的に見た場合には、回収率が低いという課題があった。また、アルカリ性水溶液を使用する場合には、飲料に配合したときに、茶葉由来の水不溶性成分が残存するという課題があり、これに対する有効な手段が無かった。
【０００５】
緑茶抽出物の色調を改善する方法としては、茶抽出液にサイクロデキストリンの存在下に活性炭を作用させ、着色成分等を活性炭に吸着させ除去してなる抗菌脱臭剤（特許文献７）が知られているが、飲料用のカテキン製剤への使用は、困難であった。また、活性炭処理により、カテキン製剤の精製できるが、活性炭の使用量が増大し、かつ、その廃棄活性炭の使用量が多くなり、産業廃棄物低減の課題が生じていた。
【特許文献１】特開平３−１３３９２８号公報
【特許文献２】特開平５−１５３９１０号公報
【特許文献３】特開平８―１０９１７８号公報
【特許文献４】特開２００２−３３５９１１号公報
【特許文献５】特開平１−２８９４４７号公報
【特許文献６】特開昭５９−２１９３８４号公報
【特許文献７】特開２００１−２９９８８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、カフェイン等の夾雑物が除去され、苦味が抑制され、かつ色相の改善（４５０ｎｍの吸収の低減化）した、高濃度の非重合体カテキンを含有する精製緑茶抽出物の製造方法を提供することにある。
また、第二の目的としては、活性炭量の低減を行うことにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、緑茶抽出物中の非重合体カテキン類精製処理を検討した結果、緑茶抽出物を合成吸着剤に通液し、一旦、合成吸着剤に吸着させ、次いで、吸着した非重合体カテキン類を塩基性水溶液により溶出させた後、溶出液のpHを７以下に調整し、次いで非重合体カテキン類濃度が０．１〜４．０質量％に調整した溶出液を微小孔径膜で濾過し、更に、活性炭と接触させることにより、非重合体カテキン類濃度が高く、カフェイン含量を低減させた呈味と色相の改善された精製緑茶抽出物が得られることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、緑茶抽出物を合成吸着剤に吸着させ、合成吸着剤に塩基性水溶液を接触させて非重合体カテキン類を溶出させた後、溶出液のpHを７以下に調整し、次いで非重合体カテキン類濃度が０．１〜４．０質量％に調整した溶出液を微小孔径膜で濾過し、その後活性炭処理を行うことにより、緑茶抽出物の固形分に対して非重合体カテキン類を２５〜９０質量％含有する精製茶抽出物の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、カフェイン等の夾雑物が除去され、苦味が抑制され、かつ色相の改善した、高濃度の非重合体カテキン類を含有する精製緑茶抽出物が、工業的に有利に得られる。また、後処理で用いる活性炭量が少なく、工業的に特に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明で非重合体カテキン類とは、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレートなどの非エピ体カテキン及びエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレートなどのエピ体カテキンをあわせての総称である。
【００１１】
本発明で非重合体カテキンガレート体とは、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレートなどをあわせての総称である。
【００１２】
本発明で用いる緑茶抽出物としては、緑茶葉から得られた抽出液が挙げられる。使用する茶葉としては、より具体的には、Camellia属、例えばC.sinensis、C.assamica及びやぶきた種又はそれらの雑種等から得られる茶葉から製茶された茶葉が挙げられる。製茶された茶葉には、煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜炒り茶等の緑茶類がある。また、超臨界状態の二酸化炭素接触処理を施した茶葉を用いてもよい。
【００１３】
緑茶葉からの抽出は、抽出溶媒として水又は水溶性有機溶媒又はそれらの混合物を使用し、攪拌抽出等により行われる。抽出の際、水又は水溶性有機溶媒又はそれらの混合物にあらかじめアスコルビン酸ナトリウム等の有機酸塩類又は有機酸を添加してもよい。また、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法を併用してもよい。このようにして得られた抽出液は、そのままでも、乾燥、濃縮しても本発明に使用できる。緑茶抽出物の形態としては、液体、スラリー、半固体、固体の状態が挙げられる。
【００１４】
本発明に使用する緑茶抽出物には、緑茶葉から抽出した抽出液を使用する代わりに、緑茶抽出物の濃縮物を水又は有機溶媒に溶解又は水又は有機溶媒に希釈して用いても、緑茶葉からの抽出液と緑茶抽出物の濃縮物とを併用してもよい。
ここで、緑茶抽出物の濃縮物とは、緑茶葉から熱水又は水溶性有機溶媒により抽出された抽出物を濃縮したものであり、例えば、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載されている方法により調製したものをいう。具体的には、市販の東京フードテクノ社製「ポリフェノン」、伊藤園社製「テアフラン」、太陽化学社製「サンフェノン」等の粗カテキン製剤を固体の緑茶抽出物として用いることもできる。
【００１５】
また、緑茶抽出物は、合成吸着剤に吸着させる前に加水分解処理しておくのが、非重合体カテキン類中のガレート体率を低下させ、苦味を低減する点から好ましい。加水分解による非重合体カテキン類中の非重合体カテキンガレート体の濃度減少は、呈味改善の点から５質量％以上、更に７質量％以上、特に１０質量％以上が好ましい。加水分解の方法は、酵素類による処理、酸処理、アルカリ処理等により行なわれる。酵素類としては、タンナーゼ活性を有する酵素、菌体又は培養液、酸としては、塩酸、硫酸、リン酸、アルカリとしては苛性ソーダなどが好ましい。その中でも反応制御の点から酵素類での加水分解が好ましい。ここでタンナーゼ活性を有するとは、タンニンを分解する活性を有することを意味し、本活性を有すれば任意の酵素、菌体、培養液が使用できる。
【００１６】
具体的には、タンナーゼ活性を有する酵素として市販品では、ペクチナーゼＰＬアマノ（天野エンザイム社製）、ヘミセルラーゼアマノ９０（天野エンザイム社製）、タンナーゼＫＴＦＨ（キッコーマン社製）等が利用できる。その中でもタンナーゼが好ましい。例えば、アスペルギルス属、ペニシリウム属、リゾプス属のタンナーゼ生産菌を培養して得られるタンナーゼが挙げられる。このうちアスペルギルス  オリーゼ由来のものが好ましい。
タンナーゼ活性を有する菌体とは、タンナーゼ活性を有する酵素を産生することができる菌体であり、麹菌等があげられる。例えば、アスペルギルス属、ペニシリウム属等が挙げられ、このうちアスペルギルス  オリーゼが好ましい。
タンナーゼ活性を有する培養液とは、アスペルギルス属、ペニシリウム属、リゾプス属のタンナーゼ生産菌を培養して得られる培養液である。好ましくは、タンニン酸を唯一の炭素源として培養して得られる培養液を挙げることができ、精製品であっても未精製なものであっても用いることができる。
風味劣化の抑制及び生産性の点から加水分解を極力短時間で終了するのが好ましく、それには酵素又は培養液を利用することが好ましい。
本発明で使用するタンナーゼ活性を有する酵素又は培養液は、５００〜１００，０００Ｕ／ｇの酵素活性を有することが好ましく、５００Ｕ／ｇ以上であると工業的に限られた時間内で処理することが可能であり、１００，０００Ｕ／ｇ以下であると酵素反応速度を制御することができる。ここで1Ｕｎｉｔは３０℃の水中においてタンニン酸に含まれるエステル結合を１マイクロモル加水分解する酵素量を示す。
【００１７】
タンナーゼ活性を有する酵素及び培養液による処理を行うときの非重合体カテキン類濃度は、好ましくは０．１〜２２質量％、更に好ましくは０．１〜１５質量％、特に好ましくは０．５〜１０質量％、殊更好ましくは０．５〜３質量％である。０．１質量％以下ではこの後の合成吸着剤への吸着時に吸着量が増加し、２２質量％以下では、加水分解処理が短縮され、生産性及び緑茶抽出物の味の点から好ましい。
呈味を改善した非重合体カテキンガレート体率を得るため、緑茶抽出物中の非重合体カテキン類に対して酵素又は培養液を０．０１〜１０質量％の範囲になるように添加することが好ましい。酵素失活の工程を含め、上記加水分解処理を工業的に最適な酵素反応時間である２時間以内で終了させるためには、酵素又は培養液濃度が０．０１〜７質量％、更に０．０３〜５質量％であることが好ましい。
緑茶抽出物中の非重合体カテキン類に対してタンナーゼ活性を有する酵素又は培養液を、好ましくは１〜３００Ｕｎｉｔ／ｇ−非重合体カテキン、更に好ましくは３〜２００Ｕｎｉｔ／ｇ−非重合体カテキン、特に好ましくは５〜１５０Ｕｎｉｔ／ｇ−非重合体カテキンになるように添加する。
酵素又は培養液による処理の温度は、最適な酵素活性が得られる０〜７０℃が好ましく、更に好ましくは０〜６０℃、特に好ましくは５〜５０℃である。
【００１８】
酵素又は培養液での加水分解反応を終了させるには、酵素を失活させる必要がある。酵素失活は、加熱することにより達成される。酵素失活温度は、７０〜１００℃が好ましく、７０℃未満では酵素を短時間で充分に失活することが困難であるため加水分解反応が進行しる。酵素反応の失活方法は、バッチ式もしくはプレート型熱交換機のような連続式で加熱を行うことで停止することができる。又、タンナーゼの失活終了後、遠心分離などの操作により茶抽出物を清澄化することができる。
【００１９】
菌体として例えば麹菌を利用する場合は、非重合体カテキン類の濃度が、好ましくは０．１〜２２質量％、更に好ましくは０．１〜１５質量％、特に好ましくは０．５〜１５質量％である茶抽出物に麹菌を入れ加水分解処理を行なう。麹菌は、その種類等により大幅に特性が異なるが、茶抽出物中の非重合体カテキン類に対して通常０．５質量％〜１０質量％の範囲内、特に1．０質量％〜５質量％の範囲内で添加される。温度条件としては、４５℃〜７０℃、更に５０〜６０℃が好ましい。醗酵時間は通常１２時間〜２０日間、更に１日〜１０日間で行われることが好ましい。麹菌の酵素活性の失活は、酵素又は培養液での加水分解反応を終了させる時と同様である。
【００２０】
本発明においては、まず、緑茶抽出物を合成吸着剤に吸着させ、次いで塩基性水溶液を接触させて非重合体カテキン類を溶出させる。当該合成吸着剤処理により、カフェインや没食子酸が低減できる。
吸着後、塩基性水溶液を接触させる前に、合成吸着剤を洗浄し、合成吸着剤中の没食子酸や不純物を除去するのが好ましい。
合成吸着剤は、一般に不溶性の三次元架橋構造ポリマーでイオン交換基のような官能基を実質的に持たないものである。好ましくは、イオン交換基が１meq／ｇ未満のものを用いることができる。本発明に用いる合成吸着剤としては、その母体がスチレン系、例えばアンバーライトＸＡＤ４、ＸＡＤ１６ＨＰ、ＸＡＤ１１８０、ＸＡＤ２０００、（米国ローム＆ハース社）；ダイヤイオンＨＰ２０、ＨＰ２１（三菱化学社製）；セパビーズＳＰ８５０、ＳＰ８２５、ＳＰ７００、ＳＰ７０（三菱化学社製）；ＶＰＯＣ１０６２（Ｂａｙｅｒ社製）、臭素原子を核置換して吸着力を強めた修飾スチレン系、例えばセパビーズＳＰ２０５、ＳＰ２０６、ＳＰ２０７（三菱化学社製）、メタクリル系、例えばダイヤイオンＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ（三菱化学社製）、フェノール系、例えばアンバーライトＸＡＤ７６１（ロームアンドハース社製）、アクリル系、例えばアンバーライトＸＡＤ７ＨＰ（ロームアンドハース社製）、ポリビニル系、例えばＴＯＹＯＰＥＡＲＬ、ＨＷ−４０Ｃ（東ソー社製）、デキストラン系、例えばＳＥＰＨＡＤＥＸ、ＬＨ−２０（ファルマシア社製）等が使用できる。
合成吸着剤としては、その母体がスチレン系、メタクリル系、アクリル系、ポリビニル系が好ましく、特にスチレン系がカテキンとカフェインとの分離性の点から好ましい。
【００２１】
緑茶抽出物を合成吸着剤に吸着させる手段としては、緑茶抽出物に合成吸着剤を添加、撹拌し吸着後、ろ過操作により合成吸着剤を回収するバッチ方法又は合成吸着剤を充填したカラムを用いて連続処理により吸着処理を行なうカラム方法が採用されるが、生産性の点からカラムによる連続処理方法が好ましい。
合成吸着剤が充填されたカラムは、予めＳＶ（空間速度）＝０．５〜１０［ｈ-1］、合成吸着剤に対する通液倍数として２〜１０［ｖ／ｖ］の通液条件で９５ｖｏｌ％エタノール水溶液による洗浄を行い、合成吸着剤の原料モノマーや原料モノマー中の不純物等を除去するのが好ましい。そして、その後ＳＶ＝０．５〜１０［ｈ-1］、合成吸着剤に対する通液倍数として１〜６０［ｖ／ｖ］の通液条件により水洗を行い、エタノールを除去して合成吸着剤の含液を水系に置換する方法により非重合体カテキン類の吸着能が向上する。
【００２２】
緑茶抽出物を合成吸着剤に吸着させる手段としては、合成吸着剤が充填されたカラムに当該茶抽出物を通液するのが好ましい。緑茶抽出物を合成吸着剤の充填したカラムに通液する条件としては、ＳＶ（空間速度）＝０．５〜１０［ｈ-1］の通液速度で、合成吸着剤に対する通液倍数として０．５〜２０［ｖ／ｖ］で通液するのが好ましい。１０［ｈ-1］以上の通液速度や２０［ｖ／ｖ］以上の通液量であると非重合体カテキン類の吸着が不充分又は不安定となる場合がある。
【００２３】
更に、緑茶抽出物を合成吸着剤に吸着させた後、水又は有機溶媒水溶液で洗浄して、合成吸着剤に付着した没食子酸や不純物を除去するのが好ましい。洗浄に使用する水溶液としては、カテキンの回収率の点からpH７以下が好ましく、有機溶媒としては水溶性有機溶媒が使用できる。水溶性有機溶媒としては、アセトン、メタノール、エタノールなどが挙げられ、食品への使用の観点から、エタノールが好ましい。含有する有機溶媒の濃度は、０〜２０質量％、好ましくは０．１〜１０質量％、より好ましくは１〜５質量％がカテキンの回収率の点から好ましい。
ＳＶ（空間速度）＝０．５〜１０[ｈ-1]の通液速度で、合成吸着剤に対する通液倍数として１〜１０[ｖ／ｖ]で、合成吸着剤に付着した没食子酸や不純物を除去するのが好ましい。更にＳＶ＝０．５〜５[ｈ-1] の通液速度で、通液倍数として１〜５[ｖ／ｖ] で洗浄することが没食子酸や不純物の除去及び非重合体カテキン類の回収率の点から好ましい。
【００２４】
非重合体カテキン類の溶出に用いる塩基性水溶液としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類のアルカリ水溶液、好ましくは、ナトリウム系のアルカリ性水溶液、例えば水酸化ナトリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液等を好適に用いることができる。また、アルカリ性水溶液のｐＨは７〜１４の範囲が好ましい。非重合体カテキン類回収率の点から９〜１３．８、特に１０〜１３．５が好ましい。ｐＨ７〜１４のナトリウム系水溶液としては、４％以下の水酸化ナトリウム水溶液、４％以下の炭酸ナトリウム水溶液等が挙げられる。塩基性水溶液に、水溶性有機溶媒が含まれていてもよい。有機溶媒の濃度としては、カフェインとカテキンの分離性の点から０〜９０質量％の範囲が好ましく、０．１〜５０質量％がより好ましく、１〜２０質量％が更に好ましい。
【００２５】
溶出工程においては、溶出に用いる塩基性水溶液として互いにｐＨが異なる２種以上の塩基性水溶液を用い、これら塩基性水溶液をｐＨが低い順に合成吸着剤に接触させることができる。それぞれのｐＨ区分で異なる非重合体カテキン類や他の成分を脱着することができる。
【００２６】
本発明で使用される合成吸着剤は本発明実施後に再使用できる。再生処理としては、具体的には、エタノールのような有機溶媒を通液し合成吸着剤上に吸着したカフェイン等の不溶分を脱着させる。又は水酸化ナトリウムのようなアルカリ水溶液を通液・洗浄し、合成吸着剤上に残存する水溶性成分をすべて脱着させるなどの方法が挙げられる。更に水蒸気による洗浄を組み合わせても良い。
【００２７】
非重合体カテキン類の溶出液は、塩基性水溶液で溶出したため塩基性であり、非重合カテキン類の安定性の観点から、溶出液のｐＨを７以下に調整する。具体的には酸による中和、電気透析によるアルカリ金属イオンの除去、又はカチオン交換樹脂によるアルカリ金属イオンの除去が利用できる。イオン交換樹脂としては特にＨ型のカチオン交換樹脂を用いるのが好ましい。プロセスの簡便性からイオン交換樹脂によるｐＨ調整が好ましい。カチオン交換樹脂としては、具体的には、アンバーライト２００ＣＴ、ＩＲ１２０Ｂ、ＩＲ１２４、ＩＲ１１８、ダイヤイオンＳＫ１Ｂ、ＳＫ１ＢＨ、ＳＫ１０２、ＰＫ２０８、ＰＫ２１２等を用いることができる。
【００２８】
pHを７以下に調整された溶出液は、そのまま膜濾過に付してもよいが、溶出液のpH調整終了後、濃縮し、次いで析出懸濁物を固液分離除去した上澄み液を稀釈した後に膜濾過に付すのが好ましい。
ここで、濃縮は、呈味及び析出物の分離性の点から非重合体カテキン類０．１〜７０質量％、更に０．２〜５０質量％、特に０．３〜２５質量％、殊更に０．５〜１０質量％、圧力１．３ｋＰａ〜２０ｋＰａ、温度３０〜６０℃の条件で、非重合体カテキン類は析出せず、不純物が析出するまで行うのが好ましい。かかる濃縮率は、呈味及び析出物の分離性の点から２〜５００倍、更に２〜２５０倍、特に２〜１２５倍が好ましい。得られた析出懸濁物は、通常の手段により固液分離するのが好ましい。ここで固液分離手段としては、粗分離を目的とした精密濾過膜による濾過及び／又は遠心分離処理が挙げられる。固液分離した上澄み液を稀釈した後、微小孔径膜の濾過に付す。ここで稀釈液中の非重合体カテキン類濃度は０．１〜４．０質量％、さらに０．２〜３．５質量％、特に０．３〜３．０質量％、殊更に０．５〜２．０質量％とするのが膜脱色率の改善の点で好ましい。
【００２９】
pH調整後の溶出液の膜濾過に用いる微小孔径膜としては、膜の分画分子量が１００〜５０００００、さらに２００〜１０００００、特に３００〜５００００、殊更に５００〜３００００である膜が好ましく、さらに限外濾過膜又は逆浸透膜を用いるのが好ましい。
用いられる限外濾過膜としては、ＳＥＰ−３０１３、ＡＣＰ−３０１３、ＡＨＰ−３０１３、ＡＣＰ−００１３、ＳＥＰ−００１３（旭化成製）、ＦＥ１０−ＦＵＳ−５０８２（ダイセン・メンブレン・システムズ製）などの一般的な膜が挙げられる。また、逆浸透膜としては、ＮＴＲ−７４１０ＨＧ、ＮＴＲ−７４３０ＨＧ、ＮＴＲ−７４５０ＨＧなどの一般的な膜が挙げられる。用いられる膜としてはスパイラル、中空糸型のような連続処理型の膜が好ましい。当該膜濾過により、色相が改善し、得られる精製緑茶抽出物を、スポーツドリンク、アイソトニック飲料等の飲料に用いる場合に特に好ましい。
【００３０】
膜濾過して得られる精製緑茶抽出物は、そのまま飲料の製造に用いることもできるが、さらに活性炭と接触させることで、色調改善、風味改善の効果が得られる。
【００３１】
用いる活性炭の原料としては、ヤシ殻、木質、石炭があげられるが、木質のものが好ましい。活性炭の賦活方法としては、水蒸気賦活法、ガス賦活法、薬品賦活法があげられるが、薬品賦活法が好ましい。例えば、ＺＮ−５０、Ｙ−１０Ｓ、ＧＳ-１、ＧＳ-Ｂ（味の素ファインテクノ製）、クラレコールＧＬＣ、クラレコールＰＫ−Ｄ、クラレコールＰＷ−Ｄ、クラレコールＧＷ、クラレコールＧＡ、クラレコールＧＡ−Ｄ、クラレコールＲＰ−１５（クラレケミカル社製）、白鷺ＡＷ５０、白鷺Ａ、白鷺Ｐ、白鷺ＫＬ、白鷺Ｍ、白鷺Ｃ、カルボラフィン、ＷＨ２Ｃ（日本エンバイロケミカルズ製）、ＧＭ１３０Ａ、ＣＷ１３０Ａ、ＣＷ１３０ＡＲ、ＣＷ３５０ＡＲ、ＧＬ１３０Ａ、ＳＧ、ＳＧＡ、ＳＧＰ（フタムラ化学製）、ヤシコール、ＭＡＳ印、梅蜂印、梅蜂Ｆ印（太平化学産業製）、ＣＰＧ、ＣＡＬ、Ｓ８０Ａ（三菱化学カルゴン製）等の市販品を用いることができる。
製品の色調を改善する点、活性炭の使用量を低減する点、回収率を向上する点から、活性炭としては以下のものが好ましい。平均細孔径は０.５〜１０ｎｍ（ナノメーター）、さらに、１．０〜９．０ｎｍ、特に２．０〜８．０ｎｍのものが好ましい。細孔容積は０．０１〜２．５ｍＬ／ｇ、さらに０．１〜２．０ｍＬ／ｇ、特に０．５〜１．７ｍＬ／ｇのものが好ましい。また、比表面積は８００〜２０００ｍ2／ｇ、さらに９００〜１６００ｍ2／ｇ、特に１０００〜１５００ｍ2／ｇの範囲のものが好ましい。なお、これらの物性値は窒素吸着法に基づく値である。
【００３２】
活性炭は、微小孔径膜による濾過後の溶出液（非重合体カテキン類４％溶液）１００質量部に対して０．２〜３．０質量部、さらに０．３〜２．５重量部、特に０．５〜２．０質量部添加するのが好ましい。活性炭の添加量が少なすぎると、カフェインや、色相改善効率が悪くなり、また多すぎるとろ過工程におけるケーク抵抗が大きく、廃棄物が多くなり好ましくない。
【００３３】
濾過液と活性炭との接触処理は、バッチ式、カラムによる連続処理等のいずれの方法で行ってもよい。一般には、粉末状の活性炭等を添加、撹拌し、カフェイン等の不純物を選択的に吸着後、ろ過操作により不純物を除去した濾液を得る方法、又は顆粒状の活性炭等を充填したカラムを用いて連続処理により不純物を選択的に吸着する方法等が採用される。活性炭カラムによる連続処理等の方法で行うのがよい。
【００３４】
濾過液と活性炭との接触処理は、一連の精製操作は１０〜６０℃、さらに２０〜４０℃の温度で行うのが好ましい。
【００３５】
本発明によって得られる精製緑茶抽出物は、その固形分中に、非重合体カテキン類を２５〜９０質量％含有するが、４０〜９５質量％、更に５０〜９０質量％、特に５５〜８０質量％含有するのが好ましい。
【００３６】
また、本発明により得られる精製緑茶抽出物中のカテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート及びエピガロカテキンガレートからなるガレート体の全非重合体カテキン類中での割合は、０〜６０質量％、更に５〜５５質量％であるのが、非重合体カテキン類の苦味低減の点で好ましい。
【００３７】
本発明で得られる精製緑茶抽出物中のカフェイン濃度は、非重合体カテキン類に対して、カフェイン／非重合体カテキン類（質量比）＝０〜０．１５、更に０〜０．１、特に０〜０．０５、殊更に０〜０．０３５であるのが呈味改善の点で好ましい。
【００３８】
また、本発明で得られる精製緑茶抽出物中の没食子酸濃度は、苦味、酸味等の呈味の点から、非重合体カテキン類に対して、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）＝０〜０．１、更に好ましくは０〜０．０７、特に０〜０．０５が好ましい。
【００３９】
本発明で得られる精製緑茶抽出物としては、固形分中に非重合体カテキン類を２５〜９０質量％、非重合体カテキンガレート体率０〜６０質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）０〜０．１であり、カフェイン／非重合体カテキン類（質量比）が０〜０．１５であるものが、呈味改善の点で好ましい。
【００４０】
本発明で得られた精製緑茶抽出物はそのままで使用できる。また、減圧濃縮、薄膜濃縮などの方法により溶媒を除去してもよい。また緑茶抽出物の製品形態として粉体が望ましい場合は、噴霧乾燥や凍結乾燥等の方法により粉体化できる。
【００４１】
本発明で得られた精製緑茶抽出物は容器詰飲料（緑茶飲料、スポーツドリンク、アイソトニック飲料等）に配合できる。使用される容器は一般の飲料と同様にポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶などの通常の形態で提供することができる。ここでいう容器詰飲料とは希釈せずに飲用できるものをいう。
【００４２】
また上記の容器詰飲料は、例えば、金属缶のように容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては食品衛生法に定められた殺菌条件で製造される。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器などで高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用される。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。
【実施例】
【００４３】
（カテキン、カフェイン及び没食子酸の測定法）
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、島津製作所製、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ−１０ＡＶＰ）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラムＬ−カラムＴＭ  ＯＤＳ（４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人  化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラジエント法で行った。カテキン類の標準品としては、三井農林製のものを使用し、検量線法で定量した。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有の蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有のアセトニトリル溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。
【００４４】
（タンナーゼ活性の測定法）
試薬Ａ：ｐＨ５．５クエン酸緩衝溶液５０ｍｍｏｌ：蒸留水８００ｍＬにクエン酸１０．５ｇを溶解し、１ＮのＮａＯＨ溶液でｐＨ５．５に調整し、１０００ｍＬに希釈する。
試薬Ｂ：０．３５質量％基質水溶液（タンニン酸）：５０ｍＬクエン酸緩衝溶液（試薬Ａ）にタンニン酸１７５ｍｇを溶解する。
試薬Ｃ：９０ｖｏｌ％エタノール溶液。
測定方法
１．試験管に基質溶液（試薬Ｂ）を１．０ｍＬ採取し、３０℃で５分間保つ。
２．試料溶液０．２５ｍＬ添加し、１５分間３０℃で培養する。ブランク溶液は、試料溶液の代わりにクエン酸緩衝溶液（試薬Ａ）を加える。
３．酵素反応を停止するため試料溶液とブランク溶液に５．０ｍＬのエタノール溶液（試薬Ｃ）を加える。
４．３１０ｎｍの吸光度を測定する［試料：Ａs、ブランク：Ａ0］。
次の計算式により活性を計算する。
体積当たりの活性（Ｕ／ｍＬ）＝（Ａs−Ａ0）×２０．３×１．０（ｍＬ）×１．０４×ｄｆ／（０．７１×０．２５（ｍＬ）×１５（ｍｉｎ））＝ΔＡ×７．９３×ｄｆ
質量当たりの活性（Ｕ／ｇ）＝（Ｕ／ｍＬ）×１／Ｃ
２０．３：基質溶液（試薬Ｂ）の１．０ｍＬ中に含まれるタンニン酸のμｍｏｌ。
０．７１：分析条件下での２０．３μｍｏｌのタンニン酸が完全に加水分解した後の吸光度の変化量、１．０４：換算係数、ｄｆ：希釈係数、Ｃ：サンプル（ｇ／ｍＬ）中のタンナーゼ濃度。
【００４５】
（色調の評価）
ＨＩＴＡＣＨＩの分光光度計（型式Ｕ−２００１型）を用い、ガラスセルにサンプル中の非重合体カテキン類の濃度が０．１７５質量％の水溶液になるようにイオン交換水で希釈して測定した。分析時の分光光度計の測定波長は４５０ｎｍに設定した。
【００４６】
（膜脱色率）
上記色調の評価に基づく方法で測定した「膜濾過後液の色調」を「膜濾過前液の色調（膜未処理液）」で除することにより求める。
【００４７】
（精製物の評価）
各実施例で得られた精製茶抽出物を非重合体カテキン類含有率が０．１７５％［ｗ／ｖ］となるように脱イオン水で希釈し、その４０ｍＬを５０ｍＬの耐圧製ガラス容器に入れた。そこにアスコルビン酸Ｎａを０．１質量％添加し、５％重炭酸Ｎａ水溶液でｐＨを６．４に調整し、窒素置換を行い、オートクレーブで１２１℃、１０分間加熱滅菌した。その後、評価パネラー５名によって後味についての苦味、酸味及び色相の評価を行った。苦味の評価は硫酸キニーネ法にて行った。
【００４８】
（硫酸キニーネ法（等価濃度試験法）による苦味評価）
硫酸キニーネ２水和物を表に記載の苦味強度に対応した濃度に調整した。評価サンプルを試飲した後、標準苦味溶液のどのサンプルと苦味の強さが等しいか判断した。評価パネラー５名によって苦味強度の確認を行った。（参考文献：新版官能検査ハンドブック  日科技連官能検査委員会p448-449、Perception & Psychophysics,5,1696,347-351）
【００４９】
【表１】
2009060823.tif 000002
【００５０】
実施例１
タンナーゼ処理した緑茶抽出物３１６ｇを４７８４ｇのイオン交換水に溶解させ「吸着原料液１」を得る。「吸着原料液１」には非重合体カテキン類１．８７質量％が含まれており、非重合体カテキン類組成物のガレート体率は３１．３質量％であった。又、カフェイン０．３７質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）は０．１０７であった。茶抽出物の固形分中の非重合体カテキン類３０．２質量％であった。
次いで、ステンレスカラム１（内径１１０ｍｍ×高さ２３０ｍｍ、容積２１８５ｍＬ）に合成吸着剤ＳＰ−７０（三菱化学（株）製）を２０３９ｍＬ充填した。ステンレスカラム２（内径３８ｍｍ×高さ７７０ｍｍ、２７８容積ｍＬ）にイオン交換樹脂ＳＫ１ＢＨ（三菱化学（株）製）を８１４ｍＬ充填した。予め両カラム共にＳＶ＝５（ｈ-1）で９５％（ｖ／ｖ）エタノールを４倍容積量（対充填樹脂）通液後、水を１０倍容積量（対充填樹脂）通液して洗浄した。その後、得られた「吸着原料液１」５０９８ｇ（２．５倍容積対合成吸着剤）をＳＶ＝１（ｈ-1）でカラム１に通液し透過液は廃棄した。次いでＳＶ＝１（ｈ-1）で２０３９ｍＬ（１倍容積対合成吸着剤）のイオン交換水で洗浄した。水洗後、０．４質量％水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１１．６）をＳＶ＝３（ｈ-1）で１５２９３ｍＬ通液した（７．５倍容積対合成吸着剤）。溶出液は連続でカラム２に通液して、脱イオンを行い、非重合体カテキン類組成物１４７２０ｇ（ｐＨ３．８）の「樹脂処理品１」を得た。この抽出物中には非重合体カテキン類０．５０質量％（濁度１８ＮＴＵ）が含まれており、非重合体カテキン類組成物のガレート体率は３９．２質量％であった。又、カフェイン０質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）は０．００８、４００ｎｍにおける色調は０．６５であった。茶抽出物の固形分中の非重合体カテキン類６６．１質量％であった。
次いで、「樹脂処理品１」をそのまま限外濾過膜（ＡＣＰ−００１３  分画分子量１３０００）で濾過させ、「膜処理品１」を得た。この液の非重合体カテキン類組成物のガレート体率は３８．４質量％であった。又、カフェイン０質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）は０．００８、４００ｎｍにおける色調は０．４６であった。
次いで、「膜処理品１」をカテキン４.0重量％、溶媒をエタノール２０％に濃縮及び希釈調整した後、３０ｇの調整液に活性炭（フタムラ化学製  ＳＧＰ）０．５０ｇに接触させた後、減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）によりエタノールを留去させ、「精製緑茶抽出物１」を得た。精製物の色調（ＯＤ４５０ｎｍ  ０．０９）は良好で、苦味・酸味が少なかった。
【００５１】
実施例２
緑茶抽出物３２ｋｇを９６８ｋｇの水道水に溶解させ「吸着原料液２」を得る。「吸着原料液２」には非重合体カテキン類０．９９質量％が含まれており、非重合体カテキン類組成物のガレート体率は５４．４質量％であった。又、カフェイン０．１７質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）０．０２２であった。茶抽出物の固形分中の非重合体カテキン類３４．３質量％であった。
次いで、ステンレスカラム３（内径７００ｍｍ×高さ１３５８ｍｍ、容積５２４Ｌ）に合成吸着剤ＳＰ−７０（三菱化学（株）製）を２５０Ｌ充填した。ステンレスカラム４（内径４００ｍｍ×高さ１１６０ｍｍ、容積１３１Ｌ）にイオン交換樹脂ＳＫ１ＢＨ（三菱化学（株）製）を７５Ｌ充填した。予め両カラム共にＳＶ＝１．５（ｈ-1）で水を５倍容積量（対充填樹脂）通液し、９５（ｖ／ｖ）エタノールを１０倍容積量（対充填樹脂）通液後、水を１０倍容積量（対充填樹脂）通液して洗浄した。その後、得られた「吸着原料液２」１０００ｋｇ（４．０倍容積対合成吸着剤）をＳＶ＝１（ｈ-1）でカラム１に通液し透過液は廃棄した。次いでＳＶ＝１（ｈ-1）で２５０Ｌ（１倍容積対合成吸着剤）の水道水で洗浄した。水洗後、０．１質量％水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１２．６）をＳＶ＝３（ｈ-1）で２５００Ｌ通液した（１０倍容積対合成吸着剤）。溶出液は連続でカラム４に通液して、脱イオンを行い、非重合体カテキン類組成物２５００ｋｇ（ｐＨ１．２）の「樹脂処理品２」を得た。この抽出物中には非重合体カテキン類０．４１質量％が含まれており、非重合体カテキン類組成物のガレート体率は５２．７質量％であった。又、カフェイン０質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）は０．００４、茶抽出物の固形分中の非重合体カテキン類６７．６質量％であった。
更に、「樹脂処理品２」を減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）で非重合体カテキン類濃度６．７１重量％（濁度５４２ＮＴＵ）濃縮処理を行い、次いで、遠心分離（８０００ｒｐｍ、１５℃、１５分間）を行い、懸濁物を固液分離（濁度３８ＮＴＵ／ＯＤ４５０ｎｍ  ０．２０）して、「緑茶抽出物清澄液１」を得る。
次いで、「緑茶抽出物清澄液１」をイオン交換水でカテキン濃度を０．４６重量％に希釈を行った後、限外濾過膜（ＡＣＰ−００１３  分画分子量１３０００）で濾過させ、「膜処理品２」を得た。この液の非重合体カテキン類組成物のガレート体率は５０．５質量％であった。又、カフェイン０質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）は０．００４、４５０ｎｍにおける色調は０．１２であった。
次いで、「膜処理品２」をカテキン４．０重量％、溶媒をエタノール２０％に濃縮及び希釈調整した後、３０ｇの調整液に対して活性炭（フタムラ化学製  ＳＧＰ）０．４２ｇに接触させ後、減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）によりエタノールを留去させ、「精製緑茶抽出物２」を得た。精製物の色調（ＯＤ４５０ｎｍ  ０．０７）は良好で、酸味が少なかった。
【００５２】
実施例３
実施例２で得られた「緑茶抽出物清澄液１」をイオン交換水でカテキン濃度を１．８６重量％に希釈を行った後、限外濾過膜（ＡＣＰ−００１３  分画分子量１３０００）で濾過させ、「膜処理品３」を得た。この液の非重合体カテキン類組成物のガレート体率は５０．９質量％であった。又、カフェイン０質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）は０．００３、４５０ｎｍにおける色調は０．１６であった。
次いで、「膜処理品３」をカテキン４．０重量％、溶媒をエタノール２０％に濃縮及び希釈調整した後、３０ｇの調整液に対して活性炭（フタムラ化学製  ＳＧＰ）０．５５ｇに接触させ後、減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）によりエタノールを留去させ、「精製緑茶抽出物３」を得た。精製物の色調（ＯＤ４５０ｎｍ  ０．０７）は良好で、酸味が少なかった。
【００５３】
実施例４
実施例２で得られた「緑茶抽出物清澄液１」をイオン交換水でカテキン濃度を０．４９重量％に希釈を行った後、限外濾過膜（ＳＥＰ−００１３  分画分子量３０００）で濾過させ、「膜処理品４」を得た。この液の非重合体カテキン類組成物のガレート体率は５０．７質量％であった。又、カフェイン０質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）は０．００３、４５０ｎｍにおける色調は０．１４であった。
次いで、「膜処理品４」をカテキン４．０重量％、溶媒をエタノール２０％に濃縮及び希釈調整した後、３０ｇの調整液に対して活性炭（フタムラ化学製  ＳＧＰ）０．４４ｇに接触させ後、減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）によりエタノールを留去させ、「精製緑茶抽出物４」を得た。精製物の色調（ＯＤ４５０ｎｍ  ０．０７）は良好で、酸味が少なかった。
【００５４】
実施例５
実施例２で得られた「緑茶抽出物清澄液１」をイオン交換水でカテキン濃度を０．４９重量％に希釈を行った後、逆浸透膜（ＮＴＲ−７４１０ＨＧ−Ｓ２Ｆ  分画分子量５００）で濾過させ、「膜処理品５」を得た。この液の非重合体カテキン類組成物のガレート体率は４６．７質量％であった。又、カフェイン０質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）は０．００５、４５０ｎｍにおける色調は０．１３であった。
次いで、「膜処理品５」をカテキン４．０重量％、溶媒をエタノール２０％に濃縮及び希釈調整した後、３０ｇの調整液に対して活性炭（フタムラ化学製  ＳＧＰ）０．４５ｇに接触させ後、減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）によりエタノールを留去させ、「精製緑茶抽出物５」を得た。精製物の色調（ＯＤ４５０ｎｍ  ０．０７）は良好で、苦味が若干少なく、酸味が少なかった。
【００５５】
比較例１
実施例２で得られた「緑茶抽出物清澄液１」をカテキン４．０重量％、溶媒をエタノール２０％に濃縮及び希釈調整した後、３０ｇの調整液に対して活性炭（フタムラ化学製  ＳＧＰ）０．７１ｇに接触させ後、減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）によりエタノールを留去させ、「精製緑茶抽出物６」を得た。精製物の色調（ＯＤ４５０ｎｍ  ０．０７）は良好で、酸味が少ないが、活性炭使用量が多く、廃棄物量が増加する。
【００５６】
比較例２
実施例２で得られた「樹脂処理品２」を減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）で非重合体カテキン類濃度５．４１重量％（濁度４３６ＮＴＵ）濃縮処理を行い、次いで、遠心分離（８０００ｒｐｍ、１５℃、１５分間）を行い、懸濁物を固液分離（濁度３８ＮＴＵ／ＯＤ４５０ｎｍ  ０．１９）して、「緑茶抽出物清澄液２」を得る。
次いで、「緑茶抽出物清澄液２」を限外濾過膜（ＡＣＰ−００１３  分画分子量１３０００）で濾過させ、「膜処理品７」を得た。この液の非重合体カテキン類組成物のガレート体率は５１．０質量％であった。又、カフェイン０質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）は０．００３、４５０ｎｍにおける色調は０．１８であった。
次いで、「膜処理品７」をカテキン４．０重量％、溶媒をエタノール２０％に濃縮及び希釈調整した後、３０ｇの調整液に対して活性炭（フタムラ化学製  ＳＧＰ）０．６７ｇに接触させ後、減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）によりエタノールを留去させ、「精製緑茶抽出物７」を得た。精製物の色調（ＯＤ４５０ｎｍ  ０．０７）は良好で、酸味が少ないが、活性炭使用量が多く、廃棄物量が増加する。
【００５７】
比較例３
実施例１で得られた「樹脂処理品１」を減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）で非重合体カテキン類濃度６．５６重量％（濁度３２５ＮＴＵ）濃縮処理を行い、「緑茶抽出物濃縮液」を得る。
次いで、「緑茶抽出物濃縮液」をイオン交換水でカテキン濃度を０．５重量％に希釈を行った後、精密濾過膜（精密濾過膜  平膜孔径０．２μｍ）で濾過させ、「清澄液８」を得た。
この液の非重合体カテキン類組成物のガレート体率は３９．０質量％であった。又、カフェイン０質量％、没食子酸／非重合体カテキン類（質量比）は０．００６、４５０ｎｍにおける色調は０．５２であった。
次いで、「清澄液８」をカテキン４．０重量％、溶媒をエタノール２０％に濃縮及び希釈調整した後、３０ｇの調整液に対して活性炭（フタムラ化学製  ＳＧＰ）０．６０ｇに接触させ後、減圧濃縮（２．６ｋＰａ、４０℃）によりエタノールを留去させ、「精製緑茶抽出物８」を得た。精製物の色調（ＯＤ４５０ｎｍ  ０．０９）は良好で、酸味が少ないが、活性炭使用量が多く、廃棄物量が増加する。
【００５８】
実施例１〜６、比較例１〜３記載の緑茶抽出物を食品衛生法に基づく殺菌処理をし、風味を評価した。その結果も表２に示す。
【００５９】
実施例１〜５では処理前後における非重合体カテキン類の回収率が高く、カフェイン濃度が低減し、かつ色相の改善した緑茶抽出物を少量の活性炭を使用することにより得られ、比較例１では、膜濾過を行わない点から、活性炭処理前の色相が濃く、比較例２では、高濃度のまま微小孔径膜による濾過を行う点から、膜脱色率が低く、比較例３では、膜脱色率が低く、比較例１〜３では活性炭による脱色は可能であるものの、多量の活性炭が必要となり、廃棄物量が多くなる。
【００６０】
【表２】
2009060823.tif 000003