(57)【要約】【課題】アミロイドを標的とした画像診断プローブとして有効な化合物及び該化合物を配合した生体組織に沈着したアミロイドの検出試薬を提供する。【解決手段】下記式にて表される化合物及び該化合物を配合してなる生体組織に沈着したアミロイドの検出試薬。2009120590.tif 000011式中、Ｒ１は炭素数１〜４のアルキル置換基、炭素数１〜４のアルコキシ置換基、及び水酸基からなる群より選ばれる基、Ｒ２は７６Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ又は１３１Ｉからなる群より選択される放射性ハロゲン、ｍは１〜４の整数である。本化合物は、生体組織に沈着したアミロイドへの親和性を有すると共に、正常組織からの良好なクリアランスを有している。本発明により、生体内における良好なアミロイド描出能を有する、新規なアミロイド親和性化合物及び生体組織に沈着したアミロイドの検出試薬を得ることが可能となった。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）：
【化１】
2009120590.tif 000008
（式中、Ｒ１は炭素数１〜４のアルキル置換基、炭素数１〜４のアルコキシ置換基、及び水酸基からなる群より選ばれる基、
Ｒ２は７６Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ又は１３１Ｉからなる群より選択される放射性ハロゲン、
ｍは１〜４の整数である）で表される化合物又はその塩。
【請求項２】
下記式（２）：
【化２】
2009120590.tif 000009
（式中、Ｒ３は炭素数１〜４のアルキル置換基、炭素数１〜４のアルコキシ置換基、及び水酸基からなる群より選ばれる基、
Ｒ４は非放射性ハロゲン置換基、アルキル鎖の炭素数が１〜４のトリアルキルスタニル置換基及びトリフェニルスタニル置換基からなる群より選ばれる基、
ｍは１〜４の整数である）で表される化合物又はその塩。
【請求項３】
下記式（１）：
【化３】
2009120590.tif 000010
（式中、Ｒ１は炭素数１〜４のアルキル置換基、炭素数１〜４のアルコキシ置換基、及び水酸基からなる群より選ばれる基、
Ｒ２は７６Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ又は１３１Ｉからなる群より選択される放射性ハロゲン、
ｍは１〜４の整数である）で表される化合物又はその塩を配合してなる生体組織に沈着したアミロイドの検出試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は頭部変性疾患の診断に用いる化合物に関する。より詳しくは、アルツハイマー病を初めとするアミロイドが蓄積する疾患の診断において、病巣部位におけるアミロイドの検出に有用な化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミロイドと呼ばれる繊維状蛋白質が体内の種々の器官あるいは組織に沈着することにより発症する疾患は、アミロイドーシスと総称されている。アミロイドーシスに共通しているのはアミロイドと呼ばれるβシート構造に富んだ繊維状蛋白質が全身の諸臓器あるいは局所に沈着し、その臓器や組織における機能異常を生じる点である。
【０００３】
アミロイドーシスの代表的疾患であるアルツハイマー病（以下、ＡＤという）は、認知症の原因となる疾患として知られている。この病気は、漸次進行性にアミロイドが脳に沈着して死に至る疾患であるため、他のアミロイドーシスと比較しても社会的関心の高い疾患であるといえる。近年、先進各国では社会の高齢化に伴いＡＤ患者数が急激に増加しており、社会的な問題となっている。
【０００４】
病理組織学的見地によると、ＡＤは、老人斑（senile plaques）の出現、神経原繊維変化（neurofibrillary
tangles）及び広範な神経脱落の３つの脳内病理所見によって特徴付けられる。老人斑はアミロイドを主要構成成分とする構造物であり、ＡＤ発症における最初期、すなわち臨床症状が出現する１０年以上前に出現する脳内の病理所見とされる。
【０００５】
ＡＤの診断は、ＣＴ及びＭＲＩ等の画像診断を補助的に組み合わせた上で、種々の認知機能評価（例えば、長谷川式スケール、ADAS-JCog、MMSE等）を行うことにより実施されている。しかし、このような認知機能評価に基づく方法は、発症初期における診断感度が低く、さらに、各個人が生来有する認識機能により診断結果が影響を受けやすいという欠点がある。また、確定診断には疾患部の生検が不可欠であるため、患者の存命中にＡＤの確定診断を行うことは、現状では事実上不可能である（非特許文献１）。
【０００６】
一方、老人斑を構成するアミロイドはアミロイドβ蛋白質（以下、Ａβという）の凝集体であることが報告されており、さらにＡβの凝集体がβシート構造をとることで神経細胞毒性を示すことが多くの研究より報告されている。これらの知見に基づき、Ａβの脳内への沈着が引き金となり、その下流の現象として神経原繊維変化の形成及び神経脱落が起こるとする、いわゆる「アミロイドカスケード仮説」が提唱されている（非特許文献２）。
【０００７】
このような事実に基づき、近年、アミロイドに高い親和性を有する化合物をマーカーとして用い、ＡＤをインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で検出する試みがなされている。
このような脳内アミロイド画像診断用プローブの多くは、アミロイドに対する親和性が高く、かつ脳移行性の高い疎水性の低分子化合物を、種々の放射性核種、例えば１１Ｃ、１８Ｆ及び１２３Ｉ等で標識した化合物である。具体例として、６−ヨード−２−［４’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］ベンゾチアゾール（以下、ＴＺＤＭという）や６−ヒドロキシ−２−［４’−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル］ベンゾチアゾール（以下、６−ＯＨ−ＢＴＡ−１という）を始めとする種々のチオフラビン誘導体（特許文献１、非特許文献３）、（Ｅ）−４−メチルアミノ−４’―ヒドロキシスチルベン（以下、ＳＢ−１３という）や（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−４’―ヨードスチルベン（以下、ｍ−Ｉ−ＳＢという）を初めとするスチルベン化合物（特許文献２、非特許文献４、非特許文献５）、６−ヨード−２−［４’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］ベンゾオキサゾール（以下、ＩＢＯＸという）、６−［２−（フルオロ）エトキシ］−２−［２−（２−ジメチルアミノチアゾール−５−イル）エテニル］ベンゾオキサゾールを初めとするベンゾオキサゾール誘導体（非特許文献６，非特許文献７）、２−（１−｛６−［（２−フルオロエチル）（メチル）アミノ］−２−ナフチル｝エチリデン）マロノニトリル（以下、ＦＤＤＮＰという）を初めとするＤＤＮＰ誘導体（特許文献４、非特許文献８）及び６−ヨード−２−［４’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（以下、ＩＭＰＹという）を初めとするイミダゾピリジン誘導体（特許文献３、非特許文献９）等を１１Ｃや放射性ハロゲンで標識した化合物が報告されている。さらに、これらの画像診断用プローブの一部については、ヒトイメージング研究が実施され、ＡＤ患者において健常例とは明らかに異なる脳への放射能集積を示すことが報告されている（非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３）。
また、国際公開２００７／００２５４０号パンフレットには、エチレングリコール又はポリエチレングリコールを含む側鎖をアミロイド親和性基に結合させ、脂溶性を増加させた一連の化合物が、開示されている（特許文献５）。
さらに、国際公開２００７／０６３９４６号パンフレットには、脳内での代謝を抑える目的で、５員の芳香族複素環式基を結合させた一連の化合物が、開示されている（特許文献６）。
【０００８】
【特許文献１】特表２００４−５０６７２３号公報
【特許文献２】特表２００５−５０４０５５号公報
【特許文献３】特表２００５−５１２９４５号公報
【特許文献４】特表２００２−５２３３８３号公報
【特許文献５】国際公開第２００７／００２５４０号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００７／０６３９４６号パンフレット
【非特許文献１】J. A.Hardy & G. A. Higgins, “Alzheimer’s Disease: The AmyloidCascade Hypohesis.”, Science, 1992, 256, p.184-185
【非特許文献２】G. McKhann et al., “Clinical diagnosis of Alzheimer’s disease:Report of the NINCDS-ADRDA Work Group under the auspices of Department ofHealth and Human Services Task Force on Alzheimer’s Disease.”, Neurology, 1984,34, p.939-944
【非特許文献３】Z.-P. Zhuang et al., “Radioiodinated Styrylbenzenes and Thioflavins asProbes for Amyloid Aggregates.”, J. Med. Chem., 2001,44, p.1905-1914
【非特許文献４】MasahiroOno et al., “11C-labeled stilbene derivatives as Aβ-aggregate-specific PET imagingagents for Alzheimer’s disease.”, Nuclear Medicine and Biology, 2003, 30,p.565-571
【非特許文献５】H. F.Kung et al., “Novel Stilbenes as Probes for amyloid plaques .”, J. American Chemical Society, 2001,123, p.12740-12741
【非特許文献６】Zhi-Ping Zhuanget al., “IBOX(2-(4’-dimethylaminophenyl)-6- iodobensoxazole):a ligand for imaging amyloidplaques in the brain.”, Nuclear Medicine and Biology, 2001, 28, p.887-894
【非特許文献７】Furumoto Y et al., “[11C]BF-227:A New 11C-Labeled 2-Ethenylbenzoxazole Derivative for Amyloid-β Plaques Imaging.”, European Journal of Nuclear Medicine andMolecular Imaging, 2005, 32, Sup.1, P759
【非特許文献８】EricD. Agdeppa et al.,“2-Dialkylamino-6-Acylmalononitrile Substituted Naphthalenes(DDNP Analogs): Novel Diagnostic and Therapeutic Tools in Alzheimer’sDisease.”, Molecular Imaging and Biology, 2003, 5, p.404-417
【非特許文献９】Zhi-Ping Zhuanget al., “Structure-Activity Relationship of Imidazo[1,2-a]pyridinesas Ligands for Detectingβ-AmyloidPlaques in the Brain.”, J. Med. Chem, 2003, 46,p.237-243
【非特許文献１０】W. E.Klunk et al., “Imaging brain amyloidin Alzheumer’s disease with Pittsburgh Compound-B.”,Ann. Neurol., 2004, 55, p.306-319
【非特許文献１１】Nicolaas P. L. G. Verhoeffet al., “In-Vivo Imaging of Alzheimer Disease β-Amyloid With [11C]SB-13 PET.”, AmericanJournal of Geriatric Psychiatry, 2004, 12, p.584-595
【非特許文献１２】HiroyukiArai et al., "[11C]-BF-227 AND PET to Visualize Amyloidin Alzheimer's Disease Patients", Alzheimer's & Dementia: The Journalof the Alzheimer's Association, 2006, 2, Sup.1, S312
【非特許文献１３】ChristopherM. Clark et al., "Imaging Amyloid with I123 IMPY SPECT", Alzheimer's &Dementia: The Journal of the Alzheimer's Association, 2006, 2, Sup.1, S342
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記の様に、アミロイドを対象とした画像診断プローブとして、種々の化合物が開示され、臨床応用に向けて検討が進められている。
ＴＺＤＭ、ＩＢＯＸ及びｍ−Ｉ−ＳＢのヨードを［１２５Ｉ］で標識した化合物は、正常マウスを用いた実験の結果、投与後２分点において、いずれも脳内への移行が認められている。しかしこれらの化合物は、正常組織からのクリアランスが十分ではなく、投与後の時間経過に伴い、徐々に脳内に集積する傾向を示している（特表２００５−５１２９４５号公報、Zhi-Ping Zhuang et al.,Nuclear Medicine
and Biology, 2001, 28, p.887-894、H. F. Kung et al.,J. Am. Chem. Soc., 2001,
123, p.12740-12741）。正常組織からのクリアランスが十分でないと、アミロイド集積部位において十分なコントラストが得られないといった問題がある。ＳＢ−１３を［１１Ｃ］で標識した化合物については、ラットを用いた実験により正常組織からのクリアランスを有することが示されているが、そのクリアランス速度は十分に速いとはいえない（Masahiro Ono et al., Nuclear Medicine and Biology, 2003, 30,
p.565-571）。
【００１０】
一方、ＩＭＰＹを初めとするイミダゾピリジン骨格を有する化合物は、投与後脳内へ移行してアミロイドに集積するといった性質を有すると共に、上述した化合物とは異なり正常組織からのクリアランスが早いといった優れた性質を有することが、［１２５Ｉ］標識化合物を用いた実験の結果明らかとされている。しかし、ＩＭＰＹは、復帰突然変異試験にて陽性を示す化合物であり、この化合物を画像診断プローブとして用いるには、その投与量や投与形態につき十分な注意が必要となる。（国際公開第０３／１０６４３９号パンフレット）
ＦＤＤＮＰについても、復帰突然変異試験にて陽性を示すことが、報告されている。（国際公開第０３／１０６４３９号パンフレット）
【００１１】
本発明は、アミロイドを標的とした画像診断プローブとして種々の化合物が開示されているものの、臨床使用に耐え得る性能を有することが確認された化合物は未だ存在していないという上記事情に鑑みてなされたものであり、アミロイドを標的とした画像診断プローブとして有効な化合物及び該化合物を配合した生体組織に沈着したアミロイドの検出試薬を得ることを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
発明者等は鋭意検討を重ねた結果、イミダゾピリジン−フェニル骨格を有し、フェニル基の炭素にアルケニルオキシ基を介して放射性ハロゲンを結合させた化合物により、アミロイドを標的とした画像診断プローブとして有効な化合物を提供し得ることを見出し、本発明を完成した。
【００１３】
本発明の一側面によれば、下記式（１）：
【００１４】
【化４】
2009120590.tif 000002
【００１５】
で表される化合物又はその塩、並びに当該化合物を配合してなる、生体組織に沈着したアミロイドの検出試薬が提供される。
【００１６】
ここで、生体組織としては、アミロイドーシスにおいてアミロイドが沈着することが知られている種々の組織とすることができる。このような生体組織の代表例としては、脳、心臓、肺、膵臓、骨、関節等が挙げられ、最も代表的な生体組織としては、脳が挙げられる。脳を対象とした場合における、代表的なアミロイドーシスは、アルツハイマー病及びレビー小体型痴呆である。
【００１７】
式（１）中、Ｒ１は炭素数１〜４のアルキル置換基、炭素数１〜４のアルコキシ置換基、及び水酸基からなる群より選ばれる基、Ｒ２は７６Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ又は１３１Ｉからなる群より選択される放射性ハロゲン、ｍは１〜４の整数である。
【００１８】
本発明の別の一側面によれば、下記式（２）：
【００１９】
【化５】
2009120590.tif 000003
で表される化合物又はその塩が、提供される。
【００２０】
式（２）中、Ｒ３は炭素数１〜４のアルキル置換基、炭素数１〜４のアルコキシ置換基、及び水酸基からなる群より選ばれる基、Ｒ４は非放射性ハロゲン置換基、アルキル鎖の炭素数が１〜４のトリアルキルスタニル置換基又はトリフェニルスタニル置換基、ｍは１〜４の整数である。
【発明の効果】
【００２１】
本発明により、生体内における良好なアミロイド描出能を有する、新規なアミロイド親和性化合物及び生体組織に沈着したアミロイドの検出試薬を得ることが可能となった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
（標識前駆体化合物の合成）
以下、（Ｅ）−２−［４’−（３”−トリブチルスタニル−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを合成する場合を例にとり、本発明に係る化合物の合成方法について説明する。
【００２３】
（Ｅ）−２−［４’−（３”−トリブチルスタニル−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成にあたっては、まず、４’−ヒドロキシアセトフェノンと臭化第二銅とを反応させ、２−ブロモ−４’−ヒドロキシアセトフェノンを得る（図１、工程４）。この反応は、定法、例えば文献（King L. Carroll & Ostrum G. Kenneth,
Journal of Organic Chemistry, 1964, 29(12), p.3459-3461）記載の方法に従って行うことができる。
【００２４】
次に、上記で合成した２−ブロモ−４’−ヒドロキシアセトフェノンを公知の方法（例えば、図１、工程１〜３記載の方法）にて合成した２−アミノ−５−メトキシピリジンと反応させ、２−（４’−ヒドロキシフェニル）−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを合成する（図１、工程５）。この工程は、例えば、下記の要領にて行うことができる。
【００２５】
まず、２−ブロモ−４’−ヒドロキシアセトフェノンと２−アミノ−５−メトキシピリジンとをアセトニトリル等の不活性溶媒に溶解し、還流温度にて２〜６時間反応させると、２−（４’−ヒドロキシフェニル）−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの臭化水素酸塩が生成し、白色沈殿を生じる。このときの溶媒としては、アセトニトリルの他、メタノールやアセトンといった、同様の反応にて通常用いられる溶媒を用いることができる。また、反応温度は還流することができる温度であればよく、例えばアセトニトリルを溶媒とした場合は１０５℃とすることができる。なお、用いる溶媒の量は、反応に十分な量であればよいが、多過ぎると反応物の沈殿を得ることができないため、注意が必要である。例えば、１０ｍｍｏｌ相当の２−ブロモ−４’−ヒドロキシアセトフェノンを用いて反応させる場合は、約４０〜８０ｍＬの溶媒を用いればよい。
【００２６】
次に、反応液をろ過して沈殿物をろ別後、この白色沈殿をメタノール／水混液（１：１）に懸濁し、これに飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を沈殿物に対して大過剰となるように加えると、２−（４’−ヒドロキシフェニル）−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンが遊離して沈殿が生ずる。この新たに生じた沈殿をろ取することによって、本工程の目的物である２−（４’−ヒドロキシフェニル）−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを得ることができる（図１、工程５）。メタノール／水混液の量は、反応させるために十分な量であれば特に限定する必要はないが、多すぎると生成物の析出の妨げとなるため注意が必要である。例えば、１０ｍｍｏｌ相当の２−ブロモ−４’−ヒドロキシアセトフェノンを用いた場合であれば、４０〜１００ｍＬ程度のメタノール／水混液を用いればよい。また、炭酸水素ナトリウムの量は、反応基質である前記沈殿物に対して大過剰であれば特に限定する必要はなく、例えば、前記条件にて反応させる場合であれば、５０ｍＬ程度の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を反応液に添加すればよい。
【００２７】
次いで、合成した２−（４’−ヒドロキシフェニル）−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを十分に乾燥させた後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、炭酸カリウム及びプロパルギルブロミドを添加する。この混合物を室温下で１日程度攪拌後、反応液を水に注いでクロロホルムで抽出し、クロロホルム層を濃縮してクロマトグラム精製を行うことにより、６−メトキシ−２−［４’−（２”−プロピニルオキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを得る（図１、工程６）。炭酸カリウムの量は、反応中に発生する臭化水素酸を中和できる量であれば良く、典型的には副原料であるプロパルギルブロミドと等量以上用いればよい。また、プロパルギルブロミドの量は、反応基質に対して過剰量であれば良く、典型的には反応基質である２−（４’−ヒドロキシフェニル）−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンに対してモル比にして１．５倍程度用いればよい。
【００２８】
得られた６−メトキシ−２−［４’−（２”−プロピニルオキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンをトルエンに溶解して５℃程度まで冷却後、水酸化トリブチルスズ及び触媒量のジクロロビストリフェニルホスフィンパラジウムを添加する。この反応液を５℃に冷却しながら攪拌して反応させた後、室温まで昇温する。この反応液の溶媒を留去し、クロマトグラム精製を行って、目的物である（Ｅ）−２−［４’−（３”−トリブチルスタニル−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを得ることができる（図１、工程７）。このとき、水酸化トリブチルスズの量は、反応基質に対して過剰量となる条件を満たす量であればよく、具体的には反応基質である６−メトキシ−２−［４’−（２”−プロピニルオキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンに対してモル比にして１．５倍程度であれば良い。
【００２９】
なお、イミダゾピリジン環における官能基の結合部位を、６位の炭素以外の炭素とした化合物は、図１の工程５で用いた２−アミノ−５−メトキシピリジンの代わりに、目的化合物に対応させた種々の化合物を用いることによって得ることができる。例えば、イミダゾピリジン環の８位の炭素にメトキシ置換基が結合した化合物を合成する場合は、図１の工程５において、２−アミノ−５−メトキシピリジンの代わりに、２−アミノ−３−メトキシピリジンを用いればよい。
【００３０】
（放射性ハロゲン標識化合物の合成方法）
次に、放射性ヨード標識体化合物を例にとり、本発明の別の一側面に係る、放射性ハロゲン標識化合物の製造方法について説明する。
【００３１】
放射性ヨード標識体化合物の合成は、上記の要領にて合成した標識前駆体化合物を不活性有機溶媒に溶解し、これに公知の方法にて得られた［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム溶液等を加え、酸及び酸化剤を加えて反応させることによって行うことができる。標識前駆体化合物を溶解させる不活性有機溶媒としては標識前駆体及び［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム等との間で反応性を有さない種々の溶媒を用いることができ、好ましくはメタノールを用いることができる。
【００３２】
酸は種々のものを用いることができ、好ましくは塩酸を用いることができる。
酸化剤は、反応液中のヨウ素を酸化させることができるものであれば特に限定する必要はなく、好ましくは過酸化水素又は過酢酸を用いることができる。酸化剤の添加量は、反応溶液中のヨウ素を酸化させるのに十分な量であれば良い。
【００３３】
（本発明に係る診断剤の調製方法及び使用方法）
本発明に係る診断剤は、他の一般に知られている放射性診断剤と同様、本発明に係る放射性ハロゲン標識化合物を所望により適当なｐＨに調整された水又は生理食塩水、あるいはリンゲル液等に配合させた液として調製することができる。この場合における本化合物の濃度は、配合された本化合物の安定性が得られる濃度以下とする必要がある。本化合物の投与量は、投与された薬剤の分布を画像化するために十分な濃度であれば特に限定する必要はない。例えば、ヨウ素−１２３（１２３Ｉ）標識化合物の場合は、体重６０ｋｇの成人一人当り５０〜６００ＭＢｑ程度、静脈投与又は局所投与して使用することができる。投与された薬剤の分布は、公知の方法にて画像化することができ、例えばヨウ素−１２３（１２３Ｉ）標識化合物の場合はＳＰＥＣＴ装置、シュウ素−７６（７６Ｂｒ）標識化合物の場合はＰＥＴ装置を用いて画像化することができる。
【００３４】
以下、実施例、比較例及び参考例を記載して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。
【００３５】
（実施例１）（Ｅ）−２−［４’−（３”−トリブチルスタニル−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成
【００３６】
２−ブロモ−３−ヒドロキシピリジン１００．０ｇ（０．５７５ｍｏｌ相当）をジメチルスルホキシド３１０ｍＬに溶解し、これに１ｍｏｌ／Ｌナトリウムメトキシド−メタノール溶液５７５ｍＬ（０．５７５ｍｏｌ相当）を加えた後、反応液を９０℃に加温しメタノールを留去した。反応液を１０℃以下まで冷却後、ヨウ化メチル９３．９ｇ（０．６６２ｍｏｌ相当）を加え、室温で２０．５時間攪拌した。反応終了後、反応液を氷水に注ぎクロロホルムで２回抽出した。合わせたクロロホルム層は１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウムで洗浄したのち、飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去して、２−ブロモ−３−メトキシピリジン６５．４ｇ（０．３４８ｍｏｌ相当）を得た（図１、工程１）。
【００３７】
濃硫酸２６２ｍＬを−２℃まで冷却し、これに９０％硝酸２６２ｍＬを注意深く加えた後、２−ブロモ−３−メトキシピリジン６５．３ｇ（０．３４７ｍｍｏｌ相当）を注意深く加えた。反応混合物を氷浴下１０分攪拌後、室温で３０分攪拌し、さらに５５℃まで昇温して１．５時間攪拌した。反応液を室温まで冷却後、少量ずつ氷中に注いで沈殿物を生成させ、この沈殿物をろ取して水で洗浄した。これを五酸化二リンの存在下、減圧下乾燥を行い、２−ブロモ−３−メトキシ−６−ニトロピリジン５５．７ｇ（０．２３９ｍｏｌ相当）を得た（図１、工程２）。
【００３８】
２−ブロモ−３−メトキシ−６−ニトロピリジン５５．６ｇ（０．２３９ｍｏｌ相当）をエタノール１７００ｍＬに溶解し、アルゴン気流下１０％パラジウム炭素（５０％ｗｅｔ）３７．３ｇを添加後、ヒドラジン１水和物２８３ｍＬを滴下した。反応混合物を７０分間加熱還流後、反応液を室温まで冷却してパラジウム炭素をろ過し、さらにろ過物をエタノールで洗浄して洗浄液をろ液と合わせた。この液を減圧濃縮後、水１３００ｍＬと濃アンモニア水１３０ｍLを加え、クロロホルムで８回抽出した。合わせたクロロホルム層は、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた粗生成物を減圧蒸留して、２−アミノ−５−メトキシピリジン２６．２ｇ（０．２１１ｍｏｌ相当）を得た（図１、工程３）。
【００３９】
臭化第二銅２８．１７ｇ（１２６ｍｍｏｌ相当）に酢酸エチル５０ｍＬを加えて懸濁させ、これに４’−ヒドロキシアセトフェノン８．１８ｇ（６０．０ｍｍｏｌ相当）を酢酸エチル５０ｍＬ−クロロホルム５０ｍＬ混液に溶解した液を加え、加熱還流した。５時間後、反応液を室温まで冷却してろ過を行い、ろ液を減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、活性炭を加えて脱色操作を行った後、溶液をろ過、濃縮した。得られた粗生成物を、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：クロロホルム／メタノール＝２０／１）で精製し、さらに酢酸エチル−石油エーテルから再結晶を行い、２−ブロモ−４’−ヒドロキシアセトフェノン７．２５ｇ（３３．７ｍｍｏｌ相当）を得た（図１、工程４）。
【００４０】
２−ブロモ−４’−ヒドロキシアセトフェノン１．０８ｇ（５．０ｍｍｏｌ相当）と２−アミノ−５−メトキシピリジン０．６３ｇ（５．１ｍｍｏｌ相当）をアセトニトリル３０ｍＬに溶解し１０５℃の油浴にて４時間加熱還流した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、沈殿物をろ別したのち、アセトニトリルで洗浄し、減圧下乾燥させた。得られた粗結晶は、水２０ｍＬ−メタノール２０ｍＬ混液に懸濁させた後、これに飽和炭酸水素ナトリウム溶液を約１０ｍＬ加え、超音波洗浄器を用いて５分間振とうした。得られた混合物から、沈殿物をろ別して水でよく洗浄し、減圧下乾燥して、２−（４’−ヒドロキシフェニル）−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン１．００ｇ（４．１７ｍｍｏｌ相当）を得た（図１、工程５）。
【００４１】
２−（４’−ヒドロキシフェニル）−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン３８９ｍｇ（１．６２ｍｍｏｌ相当）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５ｍＬ溶液に、炭酸カリウム３３７ｍｇ（２．４３ｍｍｏｌ相当）とプロパルギルブロミド０．１５ｍＬ（２．００ｍｍｏｌ相当）を加え、室温で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を水に注ぎクロロホルムで３回抽出した。合わせたクロロホルム層は飽和食塩水で１回洗浄したのち、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、濃縮した。得られた粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝１／１→２／３）で精製して、６−メトキシ−２−［４’−（２”−プロピニルオキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン３９３ｍｇ（１．４１ｍｍｏｌ相当）を得た（図１、工程６）。
【００４２】
６−メトキシ−２−［４’−（２”−プロピニルオキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン１００ｍｇ（０．３５９ｍｍｏｌ相当）をトルエン２．０ｍＬに溶解し、５℃に冷却したのち、これに水素化トリブチルスズ０．１５ｍＬ（０．５４ｍｍｏｌ相当）とジクロロビストリフェニルホスフィンパラジウム５．０ｍｇ（触媒量）を加え、２０分間攪拌した。反応終了後、室温まで昇温し、減圧濃縮を行った。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）にて精製を行い、（Ｅ）−２−［４’−（３”−トリブチルスタニル−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン８７．８ｍｇ（０．１５４ｍｍｏｌ相当）を得た（図１、工程７）。
【００４３】
得られた（Ｅ）−２−［４’−（３”−トリブチルスタニル−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのＮＭＲ測定結果（内部標準物質：テトラメチルシラン）は、以下の通りであった。
【００４４】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：d 7.83 ( d, J = 8.2 Hz, 2H ), 7.72 ( s, 1H ), 7.64 (
s, 1H ), 7.50 ( d, J = 9.6 Hz, 2H ), 6.99-6.94 ( m, 2H ), 6.12-5.86 ( m,
1H ), 5.43-5.30 ( m, 2H ), 4.73-4.66 ( m, 2H ), 3.83 ( s, 3H ), 1.58-1.45 ( m,
6H ), 1.34-1.27 ( m, 6H ), 1.03-0.86 ( m, 15H )。
【００４５】
（参考例１）（Ｅ）−２−［４’−（３”−ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（非放射性ヨード体）の合成
【００４６】
実施例１で得られた、（Ｅ）−２−［４’−（３”−トリブチルスタニル−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン７６．４ｍｇ（０．１３４ｍｍｏｌ相当）をジクロロメタン１．０ｍＬに溶解し，０℃に冷却した後、ヨウ素１７．０ｍｇ（０．１３４ｍｍｏｌ相当）を加え、５分間攪拌した。反応終了後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和チオ硫酸ナトリウム溶液を加え、ジクロロメタンで３回抽出を行った。合わせたジクロロメタン層を、水及び飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）にて精製を行い、（Ｅ）−２−［４’−（３”−ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン４．７ｍｇ（０．０１１６ｍｍｏｌ相当）を得た（図２、工程１）。
【００４７】
得られた（Ｅ）−２−［４’−（３”−ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのＮＭＲ測定結果（内部標準物質：テトラメチルシラン）は、以下の通りであった。
【００４８】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：d 7.85 ( d, J = 8.2 Hz, 2H ), 7.73 ( s, 1H ), 7.65 (
s, 1H ), 7.51 ( d, J = 9.6 Hz, 1H ), 6.97-6.94 ( m, 3H ), 6.81-6.76 ( m,
1H ), 4.50 ( d, J = 5.5 Hz, 2H ), 3.83 ( s, 3H )。
【００４９】
（実施例２）（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成
【００５０】
（Ｅ）−２−［４’−（３”−トリブチルスタニル−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのメタノール／ジメチルスルホキシド＝９／１混合溶液（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）５０μＬに、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸  ７５μＬ、１ｍｍｏｌ／ｍLヨウ化ナトリウム１０μL、２５４ＭＢｑの［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム５０μＬ、１０％（Ｗ／Ｖ）過酸化水素１０μＬを添加した。当該混合液を５０℃にて１０分間静置した後、下記の条件のＨＰＬＣに付してＥ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン画分を分取した。
【００５１】
ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（商品名、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製、サイズ：４．６×１５０ｍｍ）
移動相：０．１％トリフルオロ酢酸を含む水／０．１％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル＝８０／２０→０／１００（１７分、直線グラジエント）
流速：１．０  ｍＬ／分
検出器：紫外可視吸光光度計（検出波長：２８２ｎｍ）及び放射線検出器（ｒａｙｔｅｓｔ社 ＳＴＥＦＦＩ型）
【００５２】
当該画分に水１０ｍＬを添加した液を逆相カラム（商品名：Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標）Ｌｉｇｈｔ Ｃ１８ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ、Ｗａｔｅｒｓ社製、充填剤の充填量１３０ｍｇ）に通液し、Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを当該カラムに吸着捕集した。このカラムを水１ｍＬで洗浄した後、ジエチルエーテル１ｍＬを通液して（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを溶出させた。得られた放射能量は合成直後において１２０．０ＭＢｑであった。また、下記の条件によるＴＬＣ分析を行ったところ、その放射化学的純度は９８％であった。
【００５３】
ＴＬＣ分析条件：
ＴＬＣプレート：Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（製品名、メルク社製）
展開相：クロロホルム／メタノール／トリエチルアミン＝１００／１／２
検出器：バイオイメージングアナライザー（形式：ＢＡＳ−２５００、富士写真フィルム株式会社製）
【００５４】
（参考例２）［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹの合成
【００５５】
ｌｏｇＰｏｃｔａｎｏｌの測定等における比較例に用いるため、下記の工程に従い、［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを合成した。
【００５６】
文献（Zhi-Ping Zhuang
et al., J. Med. Chem, 2003, 46, p.237-243）記載の方法に従い、６−トリブチルスタニル−２−［４’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを合成し、メタノールに溶解した（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）。当該溶液５３μＬに、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸  ７５μＬ、２２４〜２５３ＭＢｑの［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム６０〜７０μＬ、１ｍｍｏｌ／Ｌ
ヨウ化ナトリウム溶液 １０μＬ、１０％（Ｗ／Ｖ）過酸化水素１５μＬを添加した。当該混合液を５０℃にて１０分間静置した後、実施例２と同様の条件によるＨＰＬＣに付して［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹ画分を分取した。
【００５７】
当該画分に水１０ｍＬを添加した液を逆相カラム（商品名：Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標）Ｌｉｇｈｔ
Ｃ８ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ、Ｗａｔｅｒｓ社製、充填剤の充填量：１４５ｍｇ）に通液し、［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを当該カラムに吸着捕集した。このカラムを水１ｍＬで洗浄した後、ジエチルエーテル１ｍＬを通液して［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを溶出させた。得られた放射能量は合成直後において４１〜５７ＭＢｑであった。また、実施例２と同様の条件にてＴＬＣ分析を行ったところ、その放射化学的純度は９３％であった。
【００５８】
（実施例３、比較例１）オクタノール抽出法を用いた分配係数の測定
【００５９】
化合物の血液脳関門（以下、ＢＢＢという）透過性の指標として一般に知られている、オクタノール抽出法を用いた分配係数（以下、ｌｏｇＰｏｃｔａｎｏｌという）を測定した。
【００６０】
（方法）
（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのジエチルエーテル溶液（実施例３）及び［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹのジエチルエーテル溶液（比較例１）を、それぞれ１０ｍｇ／ｍＬアスコルビン酸含有生理食塩液にて希釈し、放射能濃度２０〜３０ＭＢｑ／ｍＬに調整した。これらの液各１０μＬを、それぞれオクタノール２ｍＬに添加し、さらに１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）２ｍＬを加えて３０秒間攪拌した。それぞれの混合液を低速遠心機（形式：ＣＴＤ４，日立工機株式会社製）で遠心分離（２０００ 回転／分×６０分間）した後、オクタノール層及び水層を各１ｍＬ分取した。それぞれの層の放射能カウントをオートウェル・ガンマシステム（形式：ＡＲＣ−３０１Ｂ、Ａｌｏｋａ社製）にて計測した。得られた放射能カウントを用い、式（１）よりｌｏｇＰｏｃｔａｎｏｌ値を算出した。
【００６１】
【数１】
2009120590.tif 000004
【００６２】
（結果）
結果を表１に示す。この表に示すように、（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのｌｏｇＰｏｃｔａｎｏｌの値は、２．６であった。ＢＢＢを透過可能な化合物においては、ｌｏｇＰｏｃｔａｎｏｌ値は１〜３の間の値の値であることが知られている（Douglas D. Dischino
et al., J.Nucl.Med., (1983), 24, p.1030-1038）。以上の結果より、（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンは、ＩＭＰＹ同様にＢＢＢ透過性を有することが示唆された。
【００６３】
【表１】
2009120590.tif 000005
【００６４】
（実施例４、比較例２）脳内移行性及びクリアランスの測定
【００６５】
（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを用い、雄性のＷｉｓｔaｒ系ラット（７週齢）における脳への放射能集積の経時的変化を測定した。
【００６６】
（方法）
（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを、１０ｍｇ／ｍＬアスコルビン酸含有生理食塩液に溶解した液（放射能濃度４０ＭＢｑ／ｍＬ）０．０５ｍＬを調製し、チオペンタール麻酔下で尾静脈より雄性のＷｉｓｔaｒ系ラット（７週齢）に投与した。投与後２分、５分、３０分、６０分に腹部大動脈より脱血した上で脳を採取し、脳の質量を測定後、脳の放射能をシングルチャネルアナライザー（検出器型番：ＳＰ−２０、応用光研工業株式会社製）を用いて計測した（以下、本実施例にてＡとする）。また、残り全身の放射能量を同様に測定した（以下、本実施例にてＢとする）。これらの測定結果を用い、下記式（２）より、各解剖時間点における、脳への単位重量当たりの放射能集積量（％ＩＤ／ｇ）を算出した（実施例４）。
別に、［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを１０ｍｇ／ｍＬアスコルビン酸含有生理食塩液に溶解した液（放射能濃度３０ＭＢｑ／ｍＬ）を調製し、上記と同様の操作を行って、各解剖時間点における、脳への単位重量当たりの放射能集積量（％ＩＤ／ｇ）を算出した（比較例２）。
なお、実施例４及び比較例２共に、各時間点において、それぞれ３匹の動物を用いて実験を行った。
【００６７】
【数２】
2009120590.tif 000006
【００６８】
（結果）
結果を表２に示す。表２に示すように、（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンは、投与後２分点において、１２３Ｉ−ＩＭＰＹ同様、投与後２分点において高い放射能集積が認められ、その後６０分にかけて速やかに消失する傾向を示していた。この結果より、（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンは、１２３Ｉ−ＩＭＰＹと同様、高い脳移行性及び速やかな脳からのクリアランスを有することが示唆された。
【００６９】
【表２】
2009120590.tif 000007
【００７０】
（実施例５）（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンによる脳内アミロイドの描出の確認
【００７１】
本発明に係る化合物が脳内アミロイドを描出し得るかを評価するため、下記の実験を行った。
【００７２】
（方法）
（１）Ａβ１−４２（和光純薬工業）をリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で溶解して３７℃で７２時間振盪させ、１ｍｇ／ｍＬの凝集Ａβ懸濁液（以下、本実施例にてアミロイド懸濁液という）を得た。
【００７３】
（２）チオペンタール麻酔下、雄性Ｗｉｓｔａｒ系ラット（７週齢）の片側扁桃核へ上記アミロイド懸濁液を２．５μＬ（２５μｇ相当）注入し、対照として、反対側の扁桃核にリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．４）を２．５μＬ注入した。アミロイド懸濁液及びリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．４）注入１日後のラットを、検体とした。
【００７４】
（３）（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを、１０ｍｇ／ｍＬアスコルビン酸含有生理食塩液に溶解した液（放射能濃度４０ＭＢｑ／ｍＬ）を調製し、試料溶液とした。この試料溶液を、チオペンタール麻酔下、上記ラットに尾静脈より投与した（投与量：０．５ｍＬ、投与した放射能：１２〜１５ＭＢｑ相当）。
【００７５】
（４）投与６０分後に脳を摘出して、ミクロトーム（形式：ＣＭ３０５０Ｓ、ＬＥＩＣＡ社製）を用いて厚さ１０μｍの脳切片を作製した。当該脳切片をイメージングプレート上で２０時間露光させた後、バイオイメージングアナライザー（形式：ＢＡＳ−２５００、富士写真フィルム株式会社製）を用いて画像解析を行った。
【００７６】
（５）バイオイメージングアナライザーを用いた上記画像解析の終了後、チオフラビンＴによる病理染色を行って蛍光顕微鏡（株式会社ニコン製、形式：ＴＥ２０００−Ｕ型、励起波長：４００〜４４０ｎｍ、検出波長：４７０ｎｍ）を用いたイメージングを行い、当該切片上にアミロイドが沈着していることを確認した（図３ｂ）。
【００７７】
（結果）
アミロイド脳内注入ラットの脳切片におけるオートラジオグラム及びチオフラビンＴ染色のイメージを図３に示す。この図に示すように、アミロイド懸濁液を注入した側の扁桃核において、明らかな放射能集積が認められた。また、放射能集積部位におけるチオフラビンＴ染色の結果より、当該部位においてアミロイドが存在していることが確認された。一方、生理食塩液を注入した側の扁桃核においては、他の部位と比較した有意な放射能集積は確認されなかった。
この結果より、（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンは、脳内アミロイドに集積する性能を有し、脳内アミロイドの描出能を有することが示唆された。
【００７８】
（実施例６）（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成
【００７９】
（Ｅ）−２−［４’−（３”−トリブチルスタニル−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのメタノール／ジメチルスルホキシド＝９／１混合溶液（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）５０μＬに、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸７５μＬ、１ｍｍｏｌ／ｍLヨウ化ナトリウム１０μL、２４ＭＢｑの［１２５Ｉ］ヨウ化ナトリウム１０μＬ、１０％（Ｗ／Ｖ）過酸化水素１０μＬを添加した。当該混合液を５０℃にて１０分間静置した後、下記の条件のＨＰＬＣに付して（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン画分を分取した。
【００８０】
ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（商品名、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製、サイズ：４．６×１５０ｍｍ）
移動相：０．１％トリフルオロ酢酸／０．１％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル＝８０／２０→０／１００（１７分、直線グラジエント）
流速：１．０  ｍＬ／分
検出器：紫外可視吸光光度計（検出波長：２８２ｎｍ）及び放射線検出器（ｒａｙｔｅｓｔ社 ＳＴＥＦＦＩ型）
【００８１】
当該画分に水１０ｍＬを添加した液を逆相カラム（商品名：Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｌｉｇｈｔ Ｃ１８ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ、Ｗａｔｅｒｓ社製、充填剤の充填量１３０ｍｇ）に通液し、（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを当該カラムに吸着捕集した。このカラムを水１ｍＬで洗浄した後、エタノール１ｍＬを通液して（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを溶出させた。得られた放射能量は合成直後において１６．０ＭＢｑであった。また、下記の条件によるＴＬＣ分析を行ったところ、その放射化学的純度は９２％であった。
【００８２】
ＴＬＣ分析条件：
ＴＬＣプレート：ＴＬＣプレート：Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（製品名、メルク社製）
展開相：クロロホルム／メタノール／トリエチルアミン＝１００／１／２
検出器：バイオイメージングアナライザー（形式：ＢＡＳ−２５００、富士写真フィルム株式会社製）
【００８３】
（実施例７）アミロイド結合性の測定
【００８４】
本発明化合物のアミロイド親和性を、以下のｉｎ ｖｉｔｒｏ結合試験により評価した。
【００８５】
（１）Ａβ１−４２（和光純薬工業）をリン酸緩衝液（ｐＨ ７．４）で溶解して３７℃で７２時間振盪することで、１ｍｇ／ｍＬの凝集した  Ａβ（以下本実施例において、アミロイドとする）懸濁液（以下、本実施例において、アミロイド懸濁液という）を得た。
【００８６】
（２）上記アミロイド懸濁液につき、文献（Naiki, H.ら、Laboratory
Investigation.74、p.374-383(1996)）記載の方法に従ってチオフラビンＴ（Ｆｌｕｋａ社製）を用いた蛍光光度測定による定性実験を行い、（１）で得た凝集化Ａβがアミロイドであることを確認した（測定条件：励起波長４４６ｎｍ、蛍光波長４９０ｎｍ）。
【００８７】
（３）上記実施例６の方法にて合成した（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのエタノール溶液（放射能濃度１６ＭＢｑ／ｍＬ）を調製し、これを１％牛血清アルブミンを含むリン酸緩衝液（ｐＨ ７．４）で希釈して（Ｅ）−２−［４’−（３”−ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン総量として２ｎｍｏｌ／Ｌ相当の溶液を調製した。
（４）９６穴マイクロプレートの各ウェルに、上記（３）で調製した溶液５０μＬ（最終濃度４００ｐＭ）、アミロイド懸濁液を１％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ ７．４）に溶解した液（アミロイドの濃度は、試料溶液中のアミロイド濃度に応じて調整）５０μＬを添加した後、同緩衝液１５０μＬを添加し、アミロイドの最終濃度が２５、６２．５、２５０、６２５、１０００ｎｍｏｌ／Ｌの液を調製した。
【００８８】
（５）当該マイクロプレートを２２℃で３時間、一定速度（４００回転／分）で振盪した後、各ウェルの混合液をグラスファイバーフィルター（ミリポア社、ＭｕｌｕｔｉｓｃｒｅｅｎＴＭ−ＦＣ）にて濾過することによりアミロイドに結合した（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン及び遊離の（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを分離した。
【００８９】
（６）混合液を濾過したグラスファイバーフィルターを１％牛血清アルブミンを含むリン酸緩衝液で洗浄（０．５ｍＬ×５回）した後、グラスファイバーフィルターの放射能をオートウェル・ガンマシステム（Ａｌｏｋａ社、ＡＲＣ−３０１Ｂ）で測定した。
【００９０】
（７）（６）の測定結果より（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのアミロイドへの結合量と添加したアミロイド量との関係を評価した。非特異的結合については上記（４）において（Ｅ）−２−［４’−（３”−ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（非ＲＩ標識化合物）を５μｍｏｌ／Ｌ（最終濃度）となるように添加したサンプルを用いて求めた（実施例７）。
【００９１】
試料溶液中のアミロイド濃度と、上記（６）にて測定したグラスファイバーフィルター上の放射能カウントとの関係を図４に示す。グラスファイバーフィルター上の放射能は、アミロイド濃度（添加量）に比例して増加していた（実施例７）。本実験における条件では、アミロイド及びそれに結合した化合物は、グラスファイバーに保持される。従って、グラスファイバー上の放射能カウントはアミロイドに結合した化合物量を反映した値であるといえる。（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンにおけるグラスファイバーフィルター上の放射能カウントの値が、アミロイド濃度の増加に伴って増加していたことから、（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンはアミロイドに結合する性質を有する化合物であることが示唆された。
以上の結果より、（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２５Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンはアミロイド結合性を有することが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００９２】
本発明に係る化合物及び検出試薬は、診断医薬分野において利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】（Ｅ）−２−［４’−（３”−トリブチルスタニル−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成スキーム
【図２】（Ｅ）−２−［４’−（３”−ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（非放射性ヨード体）の合成スキーム
【図３】（ａ）（Ｅ）−２−［４’−（３”−［１２３Ｉ］ヨード−２”−プロペニルオキシ）フェニル］−６−メトキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン投与後の脳切片におけるオートラジオグラム及び（ｂ）チオフラビンＴ染色試料の蛍光顕微鏡像（アミロイド懸濁液投与部位の拡大表示）。
【図４】試料溶液中のアミロイド濃度と放射能量の関係
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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