(57)【要約】【課題】従来技術の欠点を有しない、適当な水溶性を有する非常に効果的なＰＡＲＰ阻害剤を提供する。【解決手段】一般式Ｉの置換された２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドール。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2009120609.tif 000009
[式中、
Ａは、ＮまたはＣＨであり、
Ｒ１は、水素、分枝鎖または直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキルであり、この際、アルキル基の１つの炭素原子がさらにＯＲ１１を有していてよく、ここで
Ｒ１１は、水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであり、
Ｒ２は、水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、分枝鎖または直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、ニトロ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＲ２１Ｒ２２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ２３、ＯＲ２１であり、ここで
Ｒ２１およびＲ２２は相互に独立して水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであり、
Ｒ２３は、水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルまたはフェニルであり、
Ｒ３は、−ＮＲ３１Ｒ３２、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ３３Ｒ３４であり、この際ｑは１、２または３であってよく、
Ｒ３１は、水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、（ＣＨ２）ｒＮＲ３３Ｎ３４であり、
Ｒ３２は、（ＣＨ２）ｒＮＲ３３Ｒ３４であり、
ここで、ｒは、２、３、４、５または６であり、Ｒ３３およびＲ３４は、相互に独立して水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、窒素原子といっしょになった付加的にＯ、Ｎ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｎ−Ｃ０〜Ｃ２−フェニルまたはＮＨから選択されるヘテロ原子を有していてよい３〜８個の原子から成る環、フェニル−Ｃ１〜Ｃ４−アルキルであり、この際、フェニル環はＣ１〜Ｃ６−アルキル、ハロゲン、ニトロ、ＳＯ２ＮＲ３５Ｒ３６（Ｒ３５，Ｒ３６は相互に独立して水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルまたは窒素原子といっしょになった付加的にＯ、Ｓ、ＳＯ２、Ｎ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｎ−Ｃ０〜Ｃ２−フェニルまたはＮＨから選択されるヘテロ原子を有していてよい３〜８個の原子から成る環である）、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ、Ｓ（Ｏ）０〜２−Ｒ３７（Ｒ３７は、水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである）、ＣＦ３、（ＣＨ２）０〜４−ＣＯＲ３７、（ＣＨ２）０〜４−ＮＲ３５Ｒ３６、（ＣＨ２）０〜４ＣＯＮＲ３５Ｒ３６、（ＣＨ２）０〜４ＯＲ３７−ＣＨ２ＣＯＯＲ３７から成る群より選択される３つまでの同一のまたは異なる置換基により置換されていてよく、
Ｒ４は、水素、分枝鎖または直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、塩素、臭素、フッ素、ニトロ、シアノ、ＮＲ４１Ｒ４２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ４３、ＯＲ４１であり、ここで
Ｒ４１およびＲ４２は相互に独立して水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであり、
Ｒ４３は、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルまたはフェニルである]の化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の、ＰＡＲＰ活性の異常な上昇を生じる疾患の治療薬を製造するための有効成分としての使用。
【請求項２】
Ｒ２がベンズイミダゾール環に対して３位でありかつＲ３が４位であるか、またはＲ２が４位でありかつＲ３が３位である、請求項１記載の化合物の使用。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ４が水素である、請求項１または２記載の化合物の使用。
【請求項４】
Ｒ２が水素、分枝鎖または直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、ニトロ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである、請求項１から３までのいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項５】
Ｒ３が、（ＣＨ２）１〜２ＮＲ３５Ｒ３６またはＮ（Ｒ３７）−（ＣＨ２）２〜３ＮＲ３５Ｒ３であり、ここでＲ３７は水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであってよく、Ｒ３５およびＲ３６は、相互に独立して水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであるか、またはいっしょになったＮＲ３５Ｒ３６はピペリジン、ピロリジン、アゼピンおよびピペラジンであってもよく、ここで２級Ｎ原子上のピペラジンは付加的に水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルで置換されていてよい、請求項１から４までのいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項６】
Ｒ２が水素でありＡが窒素である、請求項１から５までのいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項７】
神経変性疾患および神経性障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から６までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項８】
疾患が、虚血、外傷または塊状出血により起こる神経変性疾患および神経性障害である、請求項７記載の使用。
【請求項９】
疾患が、卒中または頭部外傷である、請求項８記載の使用。
【請求項１０】
疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病またはハンチントン病である、請求項８記載の使用。
【請求項１１】
虚血による障害の治療または予防のための薬剤を製造するための有効成分としての、請求項１から６までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１２】
てんかんの治療薬、特に全身性のてんかん発作および局所性のてんかん発作の治療薬の製造のための有効成分としての、請求項１から６までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１３】
全身性のてんかん発作が小発作および強直間代発作であり、局所性のてんかん発作が側頭葉てんかんおよび複雑部分発作である、請求項１２記載の使用。
【請求項１４】
腎虚血後の腎臓の障害の治療薬および腎移植時ならびに腎移植後の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から６までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１５】
虚血性心疾患後の心臓の障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から６までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１６】
心臓弁置換術、動脈瘤切除および心臓移植の間および後の微小梗塞の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から６までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１７】
重篤な狭窄冠状動脈あるいは重篤な狭窄末梢動脈、特に脚の動脈の血管再生における治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から６までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１８】
重篤な狭窄冠状動脈の血管再生がＰＴＣＡおよびバイパス手術である、請求項１７記載の使用。
【請求項１９】
急性心筋梗塞およびその薬剤的消散および機械的消散時および消散後の障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から６までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２０】
腫瘍およびその転移の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から６までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２１】
多組織不全の敗血症および"急性呼吸窮迫症候群"の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項６記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２２】
多組織不全の敗血症が敗血症ショックである、請求項２１記載の使用。
【請求項２３】
免疫不全およびリウマチ障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から６までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２４】
免疫不全が炎症であり、リウマチ障害がリウマチ様関節炎である、請求項２３記載の使用。
【請求項２５】
糖尿病の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項６記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２６】
２−（４−（Ｎ,Ｎ−２−（Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ）エチ−１−イルメチルアミノ）フェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド、２−（４−（Ｎ,Ｎ−２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）−エチ−１−イルメチルアミノ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド、２−（３−（２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エチ−１−イル）−４−ニトロフェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボキサミドまたはその塩から成る群より選択される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドール、その製法および薬剤製造のための酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼまたはＰＡＲＰ（ＥＣ２.４.２.３０）阻害剤としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）またはポリ（ＡＤＰ−リボース）シンターゼ（ＰＡＲＳ）は、公知のように、細胞核中に見出される調節酵素である（K. Ikai等、J. Histochem. Cytochem. 1983、31、1261〜1264）。ＰＡＲＰはＤＮＡブリッジの修復に重要な役割を果たすと考えられている（M. S. Satho等、Nature 1992、356、356〜358）。ＤＮＡ鎖の損傷または破壊は酵素ＰＡＲＰを活性化し、ＰＡＲＰは活性時にＮＡＤからＡＤＰ−リボースへの変換を触媒する（S. Shaw、 Adv. Radiat. Biol.、1984、11、1〜69）。この過程の間に、ＮＡＤからニコチンアミドが放出される。他の酵素のエネルギーキャリアーＡＴＰが滅失すると、ニコチンアミドは再度ＮＡＤに変換される。ＰＡＲＰが過剰に活性化されると非生理学的にＡＴＰが多量消費され、極端な場合にはこれにより細胞損傷および細胞死が誘導される。
【０００３】
スーパーオキシドアニオン、ＮＯおよび過酸化水素のようなフリーラジカルが細胞中でのＤＮＡ損傷を誘発しＰＡＲＰを活性化することは公知である。様々な異常生理条件において多量のフリーラジカル形成が見られ、このことから、フリーラジカルの蓄積が観察細胞および組織の損傷を誘導したりその原因となったりすると考えられる。例えばこれには、組織の虚血状態、例えば卒中、心筋梗塞（C. Thiemermann等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1997、94、679〜683）または腎臓の虚血だけでなく、例えば 心筋梗塞の消散後に生じるような再灌流損傷も含まれる（前記参照：C. Thiemermann等）。従って、酵素ＰＡＲＰの阻害は、このような障害を少なくとも部分的に予防または緩和することを意味すると言える。ＰＡＲＰ阻害剤は、多くの疾患の治療のための新規治療手段となり得る。
【０００４】
酵素ＰＡＲＰはＤＮＡ損傷の修復に影響を及ぼし、細胞増殖抑制作用物質との組合せが腫瘍組織に対してより高い作用能力を発揮することから、癌性疾患の治療に重要な役割を果たすことができる（G. Chen等、Cancer Chemo. Pharmacol. 1988, 22, 303）。
【０００５】
腫瘍の例は、白血病、神経膠芽腫、リンパ腫、メラノーマ、乳癌および子宮頚癌であるが、これに限定するものではない。
【０００６】
さらに、ＰＡＲＰが免疫抑制作用を示すことが見出された（D. Weltin等、Int. J. Immunopharmacol. 1995, 17, 265〜271）。
【０００７】
ＰＡＲＰが、免疫不全またはリウマチ様関節炎および敗血症ショックのような免疫系が重要な役割を担う疾患に関連し、ＰＡＲＰ阻害剤が、疾患の経過に好ましい影響を及ぼすことが見出された（H. Kroeger等、Inflammation 1996, 20, 203〜215；W. Ehrlich等、Rheumatol. Int. 1995, 15, 171〜172；C. Szabo等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998、95、3867〜3872；S. Cuzzocrea等、Eur. J. Pharmacol. 1998, 342, 67〜76）。
【０００８】
本発明の意味する範囲で、ＰＡＲＰは前記ＰＡＲＰ酵素のイソ酵素をも意味するものと理解される。
【０００９】
さらに、ＰＡＲＰ阻害剤３−アミノベンズアミドは、循環ショックのためのモデルにおいて防護効果を示した（S. Cuzzocrea等、Br. J. Pharmacol. 1997, 121, 1065〜1074）。
【００１０】
同様に、酵素ＰＡＲＰの阻害剤が糖尿病治療薬として有用であるという試験的示唆もある（V. Burkart等、Nature Med. 1999, 5, 314〜319）。
【００１１】
２−フェニルベンズイミダゾールは広く記載されている。従ってＤＥ３８３００６０には、赤血球凝集阻害剤としてアルキル化誘導体が記載されている。ＤＥ３５２２２３０には、２−フェニルベンズイミダゾールのエステル誘導体が血小板凝集阻害剤として記載されている。フェニル環上に置換されたアミン基を有するハロゲン−置換２−フェニルベンズイミダゾールがＭＣＰ−１拮抗剤として、ＷＯ９８０６７０３に記載されている。
【００１２】
ベンズイミダゾール基がアミド基により置換された２−フェニルベンズイミダゾールも公知である。ＷＯ９４１２４６１には、フェニル環にアルキルオキシ基を有する２−フェニルベンズイミダゾールの５−アミド誘導体が、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼの阻害剤として記載されている。類似誘導体がＤＥ３５４６５７５に記載され（例、実施例１５）、これらの化合物は陽性の変力作用を有する。３位にピリジル基を有する４−アミド誘導体もｃＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤として、ＷＯ９７４８６９７に記載されている。
【００１３】
２−フェニルベンズイミダジル−４−アミドの合成が、J. Chem. Soc. Perkin Trans 1, 1979, 2303〜2307に記載されている。アミド基上に別の置換されたアルキル鎖を有しかつ細胞毒性作用を有すると言われる類似化合物が、J. Med. Chem. 1990, 33, 814〜819に記載されている。ＷＯ９７０４７７１には、しかしながら、ＰＡＲＳを阻害するベンズイミダゾール−４−アミドが記載される。特に、２位にフェニル環を有する誘導体が活性であると記載され、フェニル環は付加的に簡単な置換基、例えばニトロ、メトキシおよびＣＦ３で置換されていてもよい。これらの物質が酵素ＰＡＲＰに対して優れた阻害作用を示す場合であっても、記載される誘導体は水溶液に僅かしかまたは全く溶解せず、従って水溶液として投与することができないという欠点を有する。
【００１４】
卒中のような様々な治療において、有効化合物を輸液として静脈投与する。このとき有効物質、ここではＰＡＲＰ阻害剤が、生理学的なｐＨまたはその近隣のｐＨ（例、ｐＨ５〜８）において十分な水溶性を示さなければならず、そうであれば輸液を製造できる。しかし、記載した多くのＰＡＲＰ阻害剤、特に活性の高いＰＡＲＰ阻害剤は、これらのｐＨで低い水溶性しか示さないかまたは全く水に溶解しないという欠点を有し、従って、静脈投与には不向きである。この種の有効化合物は、水溶性の改善を目的とする助剤を併用して投与することだけが可能である（ＷＯ９７０４７７１参照）。これらの助剤は例えば、ポリエチレングリコールおよびジメチルスルホキシドであるが、しばしば副作用を誘発し不耐性でさえある。適当な水溶性を有する非常に効果的なＰＡＲＰ阻害剤は、これまで記載されていない。
【特許文献１】ＤＥ３８３００６０
【特許文献２】ＤＥ３５２２２３０
【特許文献３】ＷＯ９８０６７０３
【特許文献４】ＷＯ９４１２４６１
【特許文献５】ＤＥ３５４６５７５
【特許文献６】ＷＯ９７４８６９７
【特許文献７】ＷＯ９７０４７７１
【非特許文献１】K. Ikai等、J. Histochem. Cytochem. 1983、31、1261〜1264
【非特許文献２】M. S. Satho等、Nature 1992、356、356〜358
【非特許文献３】S. Shaw、 Adv. Radiat. Biol.、1984、11、1〜69
【非特許文献４】C. Thiemermann等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1997、94、679〜683
【非特許文献５】G. Chen等、Cancer Chemo. Pharmacol. 1988, 22, 303
【非特許文献６】D. Weltin等、Int. J. Immunopharmacol. 1995, 17, 265〜271
【非特許文献７】H. Kroeger等、Inflammation 1996, 20, 203〜215
【非特許文献８】W. Ehrlich等、Rheumatol. Int. 1995, 15, 171〜172
【非特許文献９】C. Szabo等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998、95、3867〜3872
【非特許文献１０】S. Cuzzocrea等、Eur. J. Pharmacol. 1998, 342, 67〜76
【非特許文献１１】S. Cuzzocrea等、Br. J. Pharmacol. 1997, 121, 1065〜1074
【非特許文献１２】V. Burkart等、Nature Med. 1999, 5, 314〜319
【非特許文献１３】J. Chem. Soc. Perkin Trans 1, 1979, 2303〜2307
【非特許文献１４】J. Med. Chem. 1990, 33, 814〜819
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
従って、本発明の課題は、従来技術の欠点を有しない、適当な水溶性を有する非常に効果的なＰＡＲＰ阻害剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
意外にも、フェニル環に付加的にアミン基を有する２−フェニルベンズイミダゾールが大変有効な阻害剤であることが見出され、この阻害剤は、脂肪族アミン基が組み込まれることにより酸との塩形成が可能となって、結果的に水溶性が著しく増大している。
【００１７】
本発明では、式Ｉの新規２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドール誘導体が記載され、これはすでに記載された化合物と比較して利点を有しかつ潜在的なＰＡＲＰ阻害剤であると同時に適当な水溶性を示し、輸液としての投与が可能である。
【００１８】
本発明は、一般式Ｉ：
【化１】
2009120609.tif 000002
[式中、
Ａは、ＮまたはＣＨであり、
Ｒ１は、水素、分枝鎖および直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキルであり、この際、アルキル基の１つの炭素原子がさらにＯＲ１１または基Ｒ５をを有していてよく、ここで
Ｒ１１は、水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであり、
Ｒ２は、水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、分枝鎖および直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、ニトロ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＲ２１Ｒ２２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ２３、ＯＲ２１であり、ここで
Ｒ２１およびＲ２２は相互に独立して水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであり、
Ｒ２３は、水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルまたはフェニルであり、
Ｒ３は、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ３１Ｒ３２、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ３３Ｒ３４であり、この際ｑは０、１、２または３であってよく、
Ｒ３１は、水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、（ＣＨ２）４ＮＲ３３Ｒ３４であり、
Ｒ３２は、（ＣＨ２）ｒＮＲ３３Ｒ３４であり、
ここで、Ｒ３１およびＲ３２が相互に独立している場合には、ｒは、２、３、４、５または６であり、Ｒ３３およびＲ３４は、相互に独立して水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、窒素原子といっしょになった付加的にＯ、Ｎ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｎ−Ｃ０〜Ｃ２−フェニルまたはＮＨから選択されるヘテロ原子を有する３〜８個の原子から成る環であり、フェニル−Ｃ１〜Ｃ４−アルキルであり、この際、フェニル環はＣ１〜Ｃ６−アルキル、ハロゲン、ニトロ、ＳＯ２ＮＲ３５Ｒ３６（Ｒ３５、Ｒ３６は相互に独立して水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルまたは窒素原子といっしょになった付加的にＯ、Ｓ、ＳＯ２、Ｎ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｎ−Ｃ０〜Ｃ２−フェニルまたはＮＨから選択されるヘテロ原子を有する３〜８個の原子から成る環である）、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ、Ｓ（Ｏ）０〜２−Ｒ３７（Ｒ３７は、水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである）、ＣＦ３、（ＣＨ２）０〜４−ＣＯＲ３７、（ＣＨ２）０〜４−ＮＲ３５Ｒ３６、（ＣＨ２）０〜４ＣＯＮＲ３５Ｒ３６、（ＣＨ２）０〜４ＯＲ３７−ＣＨ２ＣＯＯＲ３７から成る群より選択される３個までの同一または異なる置換基で置換されていてよく、
Ｒ４は、水素、分枝鎖および直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、塩素、臭素、フッ素、ニトロ、シアノ、ＮＲ４１Ｒ４２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ４３、ＯＲ４１であり、ここで
Ｒ４１およびＲ４２は相互に独立して水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであり、
Ｒ４３は、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルまたはフェニルである]の置換された２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドールに関する。
【００１９】
一般式Ｉ中の基Ｒ２の有利な位置は、ベンズイミダゾール環に対して３位または４位である。基Ｒ３も同様に、ベンズイミダゾール環に対して３位または４位が有利である。
【００２０】
有利なＡは窒素である。
【００２１】
有利なＲ１は水素である。
【００２２】
有利なＲ２は、水素、分枝鎖または直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、ニトロ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである。Ｒ２は、特に有利に水素である。
【００２３】
有利なＲ３は、（ＣＨ２）１〜２ＮＲ３５Ｒ３６およびＮ（Ｒ３７）−（ＣＨ２）２〜３ＮＲ３５Ｒ３であり、ここでＲ３７は水素およびＣ１〜Ｃ４−アルキルであってよく、Ｒ３５およびＲ３６は、相互に独立して水素およびＣ１〜Ｃ４−アルキルおよびいっしょになったＮＲ３５Ｒ３６として、ピペリジン、ピロリジン、アゼピンおよびピペラジンのような脂環式アミンであってもよく、ここで２級Ｎ原子上のピペラジンは付加的に水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルで置換されていてよい。
【００２４】
有利なＲ４は水素である。
【００２５】
前記の有利な内容を個々に組み合わせたものが特に有利である。
【００２６】
式Ｉの化合物はラセミ化合物として、エナンチオマーの純化合物またはジアステレオマーとして使用できる。エナンチオマーの純化合物が所望される場合、これを、例えば旋光性を有する好適な塩基または酸を用いて式Ｉの化合物またはその中間体を古典的に分割することにより獲得する。
【００２７】
本発明は、式Ｉの化合物のメソメリーまたは互変異性化合物にも関する。
【００２８】
本発明はさらに、式Ｉの化合物の生理学的に認容性の塩に関し、これは式Ｉの化合物を好適な酸または塩基と反応させることにより獲得できる。好適な酸および塩基は、例えばFortscheitte der Arzneimittelforschung, 1996, Birkhaeuser Verlag, Vol. 10, 224〜285に列挙される。これらには、例えば塩酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、リン酸、メタンスルホン酸、酢酸、ギ酸、マレイン酸、フマル酸等、および水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化カリウムおよびトリスがある。
【００２９】
プロドラッグは、ｉｎ  ｖｉｖｏで一般式Ｉの化合物に代謝される化合物を意味すると理解される。典型的なプロドラッグは、アミノ酸のホスフェート、カルバメート、エステルおよびその他である。
【００３０】
本発明の物質Ｉは、ＷＯ９８０６７０３に概要されるベンズイミダゾールおよびインドールの製法、および合成スキーム１〜３に類似する様々な方法で製造できる。
【００３１】
【数１】
2009120609.tif 000003
【００３２】
ベンズイミダゾールＶＩＩはベンズアルデヒドをフェニレンジアミンと縮合することにより得られ、反応は有利に極性溶媒、例えばエタノールまたはジメチルホルムアミド中で、酢酸のような酸を添加し、原則的に８０〜１２０℃の高温で実施する。水溶液として添加される銅（ＩＩ）塩のような弱酸を添加するのがこの反応には好適である。
【００３３】
【数２】
2009120609.tif 000004
【００３４】
フェニレンジアミンＶＩＩ中でＲ＝ＮＨ２であれば、本発明のＩの化合物は縮合により直接形成される。同様に、Ｒ＝Ｏ−アルキルの場合、このエステルは場合により高温高圧でアンモニアと反応させてアミドＩを得る。さらに、エステルＶＩＩＩは、アルコール、ブタノールおよびエタノールまたは別のジメチルホルムアミドのような極性溶媒中で、有利には８０〜１３０℃の高温でヒドラジンと反応でき、ヒドラジドＶＩＩＩ（Ｒ＝ＮＨ２ＮＨ２）を付加的に、還流下でアルコール中のラネーニッケルのような還元条件下で還元し、アミドＩを得ることができる。
【００３５】
Ｉ（Ｒ１＝Ｈ）中のベンズイミダゾール基への基Ｒ１の導入は、前記のようなアルキル化条件で実施するが（Ｖ〜ＶＩ参照）、反応成分Ｒ１−Ｌ（Ｌ＝前記の脱離基）を使用しなければならない（スキーム１参照）。
【００３６】
【数３】
2009120609.tif 000005
【００３７】
スキーム１のベンズアルデヒドＶＩに代わり、ＸＩ（スキーム２参照）の安息香酸またはＸＩＶ（スキーム３参照）のベンゾニトリルを、ベンズアルデヒドの代わりに使用できる。これらの誘導体の製造は、置換ベンズアルデヒドＶの製造に類似して実施される。ＸＩから出発し、二段階で縮合してＶＩＩを得る。最初に、安息香酸ＸＩをアニリンＶＩとペプチド様結合により反応させてアミドＸＩＩを得る。この反応を、Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie（Methods of Organic Chemistry）、４th Ed. E5, Chap. VまたはC.R. Larock, Comprehensive Organic Trasformations, VCH Publisher, 1989, 972に列挙されるような慣用の条件で実施する。ベンズイミダゾールを得るための閉環を、６０〜１８０℃のような高温で、ジメチルホルムアミドのような溶剤の存在または不在下に、酢酸のような酸を添加してまたは酢酸中で直接実施する。
【００３８】
フェニレンジアミンＶＩＩとベンゾニトリルＸＩＶとの反応を同様に慣用の条件下に実施する。この場合の反応を、ジメチルホルムアミドのような溶剤中で酸を添加して、またはポリホスホン酸中で、６０〜２００℃の高温で実施する。しかし、ベンゾニトリルからアミジンを製造する慣用の方法、例えばHouben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, E5, 1304、f. J. Amer. Chem. Soc. 1957, 427およびJ. Org. Chem. 1987, 1017に記載される方法を利用してもよい。
【００３９】
本発明の置換した２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドールＩは、酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼまたはＰＡＲＰ（ＥＣ２.４.２.３０）の阻害剤である。
【００４０】
本発明の置換した２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドールＩの阻害作用を、文献公知の酵素試験を利用して測定し、活性標準としてＫｉ値を測定した。２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドールＩを、酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼまたはＰＡＲＰ（ＥＣ２.４.２.３０）の阻害作用に関する方法により測定した。
【００４１】
一般式Ｉの置換された２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドールは、いわゆるポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）またはポリ（ＡＤＰ−リボース）シンターゼ（ＰＡＲＳ）の阻害剤であり、従って、これらの酵素の酵素活性の上昇に関連する疾患の治療および予防に利用できる。
【００４２】
式Ｉの化合物は、虚血後の障害の治療薬の製造および様々な組織で虚血が予測される場合の予防に使用できる。
【００４３】
本発明の一般式Ｉの２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドールは従って、虚血、外傷（頭部外傷）、塊状出血、くも膜下出血および卒中の後に起こる神経変性疾患の治療および予防、多梗塞性痴呆（muotiple infarct dementia）のような神経変性疾患、アルツハイマー病、ハンチントン病およびてんかん、特に全身性のてんかん発作、例えば小発作および強直間代発作および局所性のてんかん発作、例えば側頭葉てんかんおよび複雑部分発作の治療および予防、さらに、虚血性心疾患後の心臓の障害および腎性虚血後の腎臓の障害、例えば急性腎臓機能不全、急性腎不全または腎移植中および後に起こる障害の治療および予防のために使用できる。一般式Ｉの化合物は、さらに、急性心筋梗塞およびその医薬による（例えばＴＰＡ、レテプラーゼ、ストレプトキナーゼによる、もしくはレーザーまたはロタブレーター（Rotablator）を用いた機械的な手段による）消散時および消散後に生じる障害および心臓弁置換術、動脈瘤切除および心臓移植時および後の微小梗塞の治療のために使用できる。同様に、本発明の２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドールＩを、重篤な狭窄冠状動脈、例えばＰＴＣＡおよびバイパス手術ならびに重篤な狭窄末梢動脈、特に脚の動脈の血管再生における治療に使用できる。さらに、２−フェニルベンズイミダゾールおよび２−フェニルインドールＩは、腫瘍およびその転移の化学療法にとって有益であり、炎症およびリウマチ様関節炎のようなリウマチ障害の治療に使用できる。
【００４４】
慣用の医薬助剤に加えて、本発明の医薬品は治療有効量の化合物Ｉを含有する。
【００４５】
粉剤、軟膏またはスプレーのような局所的な外用のために、有効化合物を慣用の濃度で含有してよい。原則的に、有効化合物は０.００１〜１質量％、有利に０.００１〜０.１質量％の量で含有される。
【００４６】
内用の場合、製造物は個体量で投与される。個体量では、体重１ｋｇに対して０.１〜１００ｍｇで提供される。製造物は疾患の特性および程度に応じて、一日に一回以上の量で投与される。
【００４７】
所望の投与形態に応じて、本発明の医薬品は、有効化合物に加え慣用の担体および希釈剤を含有する。局所外用の場合には、工業的な医薬助剤、例えばエタノール、イソプロパノール、エトキシル化ヒマシ油、エトキシル化水素化ヒマシ油、ポリアクリル酸、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコステアリン酸、エトキシル化脂肪族アルコール、パラフィン油、ワセリンおよび羊毛脂を使用できる。内用には、例えば乳糖、プロピレングリコール、エタノール、デンプン、タルクおよびポリビニルピロリドンが好適である。
【００４８】
抗酸化剤、例えばトコフェロールおよびブチル化ヒドロキシアニソールならびにブチル化ヒドロキシトルエン、調味添加物、安定化剤、乳化剤および滑沢剤をさらに含有していてよい。
【００４９】
製造物中に有効化合物の他に含有される物質および医薬品製造に使用される物質は毒性に関して認容性であり、各有効化合物と混和性である。医薬品の製造は、慣用の方法、例えば有効化合物を多の慣用の担体および希釈剤と混合することにより実施される。
【００５０】
医薬品は種々の投与方法、例えば経口投与、非経口投与、例えば輸液の静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与および局所投与により投与できる。従って、製造物の形、例えば錠剤、乳剤、輸液および注射溶液、ペースト、軟膏、ジェル、クリーム、ローション、粉剤およびスプレーが可能である。
【実施例】
【００５１】
例１
２−（４−（Ｎ,Ｎ−２−（Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ）エチ−１−イルメチルアミノ）フェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
ａ）エチル２−（４−Ｎ,Ｎ−２−（Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ）エチ−１−イルメチル−アミノ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキシレート
エチル２,３−ジアミノベンゾエート２.０ｇ（１２ｍｍｏｌ）をメタノール１００ｍｌ中に溶解し、酢酸１.７ｍｌ（２７.７ｍｍｏｌ）と混合した。４−（２−（Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ）−エチ−１−イルメチルアミノ）ベンズアルデヒド２.４ｇ（１０.１ｍｍｏｌ）をメタノール１００ｍｌ中に溶解し、次いで３０分かけて滴加した。水（３０ｍｌ）中の酢酸銅（ＩＩ）１.７ｇ（８.５ｍｍｏｌ）溶液を次いで滴加し、さらに全体を還流下に５０分加熱した。反応溶液を５０℃まで冷却し、３２％濃度の塩酸２０ｍｌを注意深く添加した。水２０ｍｌ中の硫化ナトリウム水和物３.９ｇ（１６.２ｍｍｏｌ）も滴加し、全体を１０分間攪拌した。沈殿物を吸引濾過し、濾液を炭酸水素ナトリウム水溶液の添加によりアルカリ性にした。水相を酢酸エチルで抽出し、有機相を分離し、乾燥し、真空中で濃縮した。生成物２.６ｇを得た。
ｂ）２−（４−（Ｎ,Ｎ−２−（Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ）エチ−１−イルメチルアミノ）フェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボヒドラジド
中間体１  ２.６ｇ（６.８ｍｍｏｌ）およびヒドラジン水化物３.４ｇ（６８.３ｍｍｏｌ）をｎ−ブタノール７０ｍｌへ添加し、混合物を１２０℃で１２時間加熱した。ブタノールを真空中で除去した。得られた残留物を水と酢酸エチルとに分配した。有機相を分離し、乾燥し、真空中で濃縮した。生成物１.１ｇを得た。
ｃ）２−（４−（Ｎ,Ｎ−２−（Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ）エチ−１−イルメチルアミノ）フェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
ラネーニッケル１ｇを、ジメチルホルムアミド３０ｍｌ中の中間体１ｂ  １.１ｇ（２.９ｍｍｏｌ）へ添加し、全体を１２０℃で８時間加熱した。反応混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。得られた残留物を水と酢酸エチルとに分配した。有機相を分離し、乾燥し、真空中で濃縮した。生成物０.９ｇを得た。
【００５２】
2009120609.tif 000006
【００５３】
例２
２−（４−（Ｎ,Ｎ−２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エチ−１−イルメチルアミノ）フェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
化合物を例１の方法と同様にして製造した。
【００５４】
2009120609.tif 000007
【００５５】
例３
２−（３−（２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エチ−１−イル）−４−ニトロフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
ａ）メチル３−（Ｅ−２−Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノエテン−１−イル）−４−ニトロベンゾエート
エチル３−メチル−４−ニトロベンゾエート１０ｇ（４７.８ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール３０ｍｌをジメチルホルムアミド１００ｍｌ中で８時間還流した。次いで混合物を真空中で濃縮した。残留物をトルエン１００ｍｌ中に溶解し、石油エーテルの添加により生成物を沈殿させた。生成物７.５ｇを得た。
ｂ）３−（２−Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノエチ−１−イル）−４−ニトロベンジルアルコール
水素化ホウ素ナトリウム２.０ｇ（５３ｍｍｏｌ）を少量ずつ、エタノール７０ｍｌ中の中間体３ａ  ７ｇ（２６.５ｍｍｏｌ）へ添加した。次いで、全体を還流下に３０分間加熱した。反応溶液を次に、真空中で濃縮した。得られた残留物を水と酢酸エチルとに分配した。有機相を分離し、水および塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥し、真空中で濃縮した。得られた油をエタノール中に溶解し、エーテル性塩化水素溶液で処理した。生成物を塩酸塩として結晶化した。２.５ｇを得た。
ｃ）３−（２−Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノエチ−１−イル）−４−ニトロベンズアルデヒド
中間体３ｂ  ２.３５ｇ（９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン６.３ｍｌ（４５ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド５０ｍｌ中に溶解した。次いで、ピリジン−三酸化硫黄アダクト２.９ｇ（１８ｍｍｏｌ）を少量づつ添加し、全体を６０分間攪拌した。混合物を真空中で濃縮し、残留物を水と酢酸エチルとに分配した。有機相を水で洗浄し、さらに２回洗浄し、乾燥し、真空中で濃縮した。生成物１.８ｇを得た。
ｄ）２−（３−（２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エチ−１−イル）−４−ニトロフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
例２９ａ、ｂおよびｃの方法と同様にして中間体５１ｃを反応させ、生成物を得た。
【００５６】
2009120609.tif 000008
【００５７】
以下の例をＷＯ９８０６７０３に記載される方法またはこの明細書に記載される方法と同様にして製造してよい。
１.  ２−（４−（ジメチルアミノ）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２.  ２−（４−（ジメチルアミノ）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３.  ２−（４−（ピロリジン−１−イル）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
４.  ２−（４−（ピペリジン−１−イル）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
５.  ２−（４−アミノメチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
６.  ２−（４−（メチルアミノ）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
７.  ２−（４−（プロピルアミノ）メチルフェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
８.  ２−（４−（２−（ジエチルアミノ）エチ−１−イル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
９.  ２−（４−（２−（ジメチルアミノ）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
１０.  ２−（４−（２−アミノエチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
１１.  １−（２−（２−（メチルアミノ）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
１２.  ２−（４−（２−（エチルアミノ）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
１３.  ２−（４−（２−ピロリジン−１−イル）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
１４.  ２−（４−（２−（ピペリジン−１−イル）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
１５.  ２−（３−（ジエチルアミノ）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
１６.  ２−（３−（ジメチルアミノ）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
１７.  ２−（３−（ピロリジン−１−イル）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
１８.  ２−（３−ピペリジン−１−イル）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
１９.  ２−（３−アミノメチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２０.  ２−（３−（メチルアミノ）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２１.  ２−（３−（ｎ−プロピルアミノ）メチル）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２２.  ２−（３−（２−（ジエチルアミノ）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２３.  ２−（３−（２−（ジメチルアミノ）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２４.  ２−（３−（２−アミノエチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２５.  ２−（３−（２−（Ｎ−メチルアミノ）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２６.  ２−（３−（２−Ｎ−メチルアミノ）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２７.  ２−（３−（２−（ピロリジン−１−イル）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２８.  ２−（３−（２−（ピペリジン−１−イル）エチ−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
２９.  ２−（４−Ｎ,Ｎ−（２−アミノエチ−１−イル）メチルアミノ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３０.  ２−（４−Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチ−１−イル）アミノ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３１.  ２−（４−Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチ−１−イル）アミノ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３２.  ２−（４−Ｎ−（２−アミノエチ−１−イル）アミノ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３３.  ２−（３−Ｎ,Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチ−１−イル）メチルアミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３４.  ２−（３−Ｎ,Ｎ−（２−アミノエチ−１−イル）メチルアミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３５.  ２−（３−Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチ−１−イル）アミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３６.  ２−（３−Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチ−１−イル）アミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３７.  ２−（３−Ｎ−（２−アミノエチ−１−イル）アミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３８.  ２−（３−Ｎ,Ｎ−（ｄ−（ジエチルアミノ）プロプ−１−イル）メチルアミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
３９.  ２−（３−Ｎ,Ｎ−（Ｄ−（ジメチルアミノ）プロプ−１−イル）メチルアミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
４０.  ２−（３−Ｎ,Ｎ−（３−アミノプロプ−１−イル）メチルアミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
４１.  ２−（３−Ｎ−（Ｄ−（ジメチルアミノ）プロプ−１−イル）メチルアミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
４２.  ２−（３−Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロプ−１−イル）アミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
４３.  ２−（３−Ｎ−（３−アミノプロプ−１−イル）アミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
４４.  ２−（３−Ｎ,Ｎ−（２−ピロリジオン−１−イル−エチ−１−イル）メチルアミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
４５.  ２−（３−Ｎ−（２−（ピロリジオン−１−イル）アミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
４６.  ２−（３−Ｎ,Ｎ−（３−（ピロリジン−１−イル）プロプ−１−イル）メチルアミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
４７.  ２−（３−Ｎ,Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロプ−１−イル）メチルアミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
４８.  ２−（３−Ｎ,Ｎ−（２−（ピペリジン−１−イル）エチ−１−イル）メチルアミノ）フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
【００５８】
例Ａ：酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼまたはＰＡＲＰ（ＥＣ２.４.２.３０）の阻害
９６穴マイクロタイタープレート（Falcon）をヒストン（タイプＩＩ−ＡＳ；SIGMA  Ｈ７７５５）で被覆した。このために、ヒストンを炭酸バッファー（０.０５Ｍ  ＮａＨＣＯ３；ｐＨ９.４）に溶解して５０μｇ／ｍｌの濃度にした。マイクロタイタープレートの各ウェルにそれぞれこのヒストン溶液１００μｌを入れて一晩インキュベートした。ヒストン溶液を除去し、各ウェルに炭酸バッファー中の１％濃度ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）２００μｌを入れて、室温で２時間インキュベートした。次いで、洗浄バッファー（ＰＢＳ中の０.０５％のＴｗｅｅｎ１０）で３回洗浄した。酵素反応は、酵素反応溶液（反応バッファー（１Ｍ  ｔｒｉｓＨＣｌ  ｐＨ８.０、１００ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＤＴＴ）５μｌ、ＰＡＲＰ０.５μｌ（ｃ＝０.２２μｇ／μｌ）、活性化ＤＮＡ（SIGMA  Ｄ−４５２２、水中の１ｍｇ／ｍｌ）４μｌ、Ｈ２Ｏ  ４０.５μｌ）５０μｌを各ウェルに入れ、阻害剤溶液１０μｌと共に１０分間プレインキュベートする。酵素反応を、基質溶液（反応バッファー（前記参照）４μｌ、ＮＡＤ溶液８μｌ（水中の１００μＭ）、Ｈ２Ｏ２８μｌ）４０μｌの添加により開始する。反応時間は室温で２０分である。反応は、洗浄バッファー（前記参照）で３回洗浄することにより停止する。特異的な抗−ポリ−ＡＤＰ−リボース抗体を入れて、室温で１時間インキュベートする。使用した抗体はモノクローナル抗−ポリ−ＡＤＰ−リボース抗体"１０Ｈ"であった（Kawamaitsu H等（1984）Monoclonal antibodies to poly (adenosine diphosphate ribose）recognize different structures. Biochemistry 23, 3771〜3777）。ポリクローナル抗体を使用してもよい。
【００５９】
抗体は抗体バッファー（ＰＢＳ中の１％ＢＳＡ；０.０５％Ｔｗｅｅｎ２０）中で１：５０００に希釈して使用した。洗浄バッファーで３回洗浄した後、二次抗体を用いて室温で１時間インキュベートした。ここで、モノクローナル抗体は、ペルオキシダーゼに結合した抗マウスＩｇＧ（Boehringer Mannheim）であり、ウサギ抗体は、ペルオキシダーゼに結合した抗−ウサギＩｇＧ（ＳＩＧＭＡ  Ａ−６１５４）であり、それぞれ抗体バッファー中で１：１００００に希釈して使用した。洗浄バッファーで３回洗浄した後、色試薬（SIGMA、ＴＭＢレディーミックスＴ８５４０）１００μ／ウェルを用いて、室温で約１５分色反応（color reaction）を実施した。色反応は、２ＭのＨ２ＳＯ４  １００μｌを添加することにより停止される。直ちにこれを測定した（４５０ｎｍ対６２０ｎｍ；ＥＬＩＳＡプレート読み取り装置"イージーリーダー（Easy Reader）"ＥＡＲ３４０ＡＴ、ＳＬＴLabinstruments、Austria）。測定した阻害剤のＩＣ５０値は、阻害剤の濃度で示され、最大色濃度変化の半分を示す位置である。Ｋｉ値は阻害定数（inhibition constant）に相当する。以下のＫｉ値が測定された：
例１：  １６ｎＭ
例２：  １０ｎＭ
例３：  ４ｎＭ
【００６０】
例Ｂ：  水溶性の測定
測定対象の化合物を特定の体積の水に直接溶解し、得られた溶液を酢酸ナトリウム溶液を用いてｐＨ５〜６に調節し、試験有効化合物の濃度を得る。測定物質が水溶性塩として存在しない場合、これをできる限り少量のジメチルスルホキシド中に溶解し、水で希釈し（ジメチルスルホキシドの終濃度≦１％）、その後ｐＨをさらにここでも調節した。潜在的なＰＡＲＰ阻害剤ＮＵ１０７６（ＷＯ９７０４７７１）はここで＜０.０１％の溶解度を示し、これに比較して本発明の例では＞０.５％の溶解度を示した。
【００６１】
例Ｃ：  細胞アッセイにおけるＰＡＲＰ阻害剤の試験
ＰＡＲＰ阻害剤の作用を試験するために、真核細胞系を化学物質で処理し、それにより細胞系のＤＮＡは損傷を受け、結果的に細胞中に存在するＰＡＲＰ酵素が活性化される。酵素の活性により、ポリ−ＡＤＰ−リボース（ＰＡＲ）の鎖がタンパク質上に形成される。これらの鎖は特異的な抗体により結合する。これはさらに蛍光標識された二次抗体により結合する。蛍光を蛍光スキャナーを用いて測定すると、酵素ＰＡＲＰの活性に比例する。ＰＡＲＰ阻害剤は蛍光シグナルの減弱により認識される。細胞の計数が異なることが原因で結果が改変されるのを避けるために、細胞のＤＮＡをさらに染料で標識し、その蛍光を同様に蛍光スキャナーで測定する。
【００６２】
ヒト細胞系Ｃ４Ｉを、２４穴の細胞培養プレート中のＲＰＭＩ培地中で、３７℃、５％ＣＯ２で、１０％ウシ胎児血清を用いて、厚い細胞ローン（cell lawn）が得られるまでインキュベートした。細胞をＤＭＥＭで洗浄し、ＤＭＥＭ中の試験ＰＡＲＰ阻害剤を様々な濃度で添加した。３７℃で２０分インキュベートした後、過酸化水素で濃度を１ｍＭにし、混合物を３７℃でさらに１０分インキュベートした。コントロールとして、いくつかの穴の細胞は過酸化水素を処理しないか（ＰＡＲＰ活性なし）または阻害剤を添加しない（ＰＡＲＰの最大活性）。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、予め−２０℃に冷却しておいたメタノール／アセトン混合物（メタノール７質量部、アセトン３質量部）の添加により−２０℃で１０分間固定した。次いで、細胞を乾燥し、室温で１０分間かけてＰＢＳの添加により細胞を再度含水させ、０.０５％のＴｗｅｅｎ２０および５％の粉乳を含むＰＢＳ中で、室温で３０分かけて非特異的結合部位を遮断する。マウス−抗ＰＡＲ抗体を、０.０５％のＴｗｅｅｎ２０および５％の粉乳を含むＰＢＳ中の２０μｇ／ｍｌ濃度で添加し、混合物を３７℃で１時間インキュベートする。結合していない抗体をＰＢＳで５分づつ５回洗浄して除去する。混合物を、希釈した抗−マウスＦＩＴＣ結合二次抗体（希釈は１：５０、０.０５％のＴｗｅｅｎ２０、５％の粉乳、ＤＡＰＩ（４’,６−ジアミジノ−２−フェニルインドール）１μｇ／ｍｌを含むＰＢＳ中）と共に３７℃で３０分インキュベートする。結合していない抗体を、ＰＢＳで５分づつ５回洗浄して除去する。ＦＩＴＣおよびＤＡＰＩ蛍光を、蛍光スキャナーを用いて穴の様々な場所で測定する。分析時、ＦＩＴＣシグナルをＤＡＰＩシグナルに標準化する。種々の阻害剤濃度の標準値を片対数プロットすることにより、ＩＣ５０値を算出する。以下のＩＣ５０値が測定された：
例１：  １１５ｎＭ
例２：  １１９ｎＭ
例３：  １１８ｎＭ
【手続補正書】
【提出日】平成20年12月4日(2008.12.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2009120609.tif 000010
[式中、
Ａは、ＮまたはＣＨであり、
Ｒ１は、水素であり、
Ｒ２は、水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、分枝鎖または直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、ニトロ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＲ２１Ｒ２２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ２３、ＯＲ２１であり、ここで
Ｒ２１およびＲ２２は相互に独立して水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであり、
Ｒ２３は、水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルまたはフェニルであり、
Ｒ３は、−ＮＲ３１Ｒ３２、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ３３Ｒ３４であり、この際ｑは１、２または３であってよく、
Ｒ３１は、水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、（ＣＨ２）ｒＮＲ３３Ｎ３４であり、
Ｒ３２は、（ＣＨ２）ｒＮＲ３３Ｒ３４であり、
ここで、ｒは、２、３、４、５または６であり、Ｒ３３およびＲ３４は、相互に独立して水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、窒素原子といっしょになった付加的にＯ、Ｎ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｎ−Ｃ０〜Ｃ２−フェニルまたはＮＨから選択されるヘテロ原子を有していてよい３〜８個の原子から成る環、フェニル−Ｃ１〜Ｃ４−アルキルであり、この際、フェニル環はＣ１〜Ｃ６−アルキル、ハロゲン、ニトロ、ＳＯ２ＮＲ３５Ｒ３６（Ｒ３５，Ｒ３６は相互に独立して水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルまたは窒素原子といっしょになった付加的にＯ、Ｓ、ＳＯ２、Ｎ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｎ−Ｃ０〜Ｃ２−フェニルまたはＮＨから選択されるヘテロ原子を有していてよい３〜８個の原子から成る環である）、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ、Ｓ（Ｏ）０〜２−Ｒ３７（Ｒ３７は、水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである）、ＣＦ３、（ＣＨ２）０〜４−ＣＯＲ３７、（ＣＨ２）０〜４−ＮＲ３５Ｒ３６、（ＣＨ２）０〜４ＣＯＮＲ３５Ｒ３６、（ＣＨ２）０〜４ＯＲ３７−ＣＨ２ＣＯＯＲ３７から成る群より選択される３つまでの同一のまたは異なる置換基により置換されていてよく、
Ｒ４は、水素である]の化合物の使用。
【請求項２】
Ｒ２が水素、分枝鎖または直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、ニトロ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである、請求項１記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項３】
Ｒ３が、（ＣＨ２）１〜２ＮＲ３５Ｒ３６またはＮ（Ｒ３７）−（ＣＨ２）２〜３ＮＲ３５Ｒ３であり、ここでＲ３７は水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであってよく、Ｒ３５およびＲ３６は、相互に独立して水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであるか、またはいっしょになったＮＲ３５Ｒ３６はピペリジン、ピロリジン、アゼピンおよびピペラジンであってもよく、ここで２級Ｎ原子上のピペラジンは付加的に水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルで置換されていてよい、請求項１又は２記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項４】
Ｒ２が水素でありＡが窒素である、請求項１から３までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項５】
神経変性疾患および神経性障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項６】
疾患が、虚血、外傷または塊状出血により起こる神経変性疾患および神経性障害である、請求項５記載の使用。
【請求項７】
疾患が、卒中または頭部外傷である、請求項６記載の使用。
【請求項８】
疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病またはハンチントン病である、請求項６記載の使用。
【請求項９】
虚血による障害の治療または予防のための薬剤を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１０】
てんかんの治療薬、特に全身性のてんかん発作および局所性のてんかん発作の治療薬の製造のための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１１】
全身性のてんかん発作が小発作および強直間代発作であり、局所性のてんかん発作が側頭葉てんかんおよび複雑部分発作である、請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
腎虚血後の腎臓の障害の治療薬および腎移植時ならびに腎移植後の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１３】
虚血性心疾患後の心臓の障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１４】
心臓弁置換術、動脈瘤切除および心臓移植の間および後の微小梗塞の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１５】
重篤な狭窄冠状動脈あるいは重篤な狭窄末梢動脈、特に脚の動脈の血管再生における治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１６】
重篤な狭窄冠状動脈の血管再生がＰＴＣＡおよびバイパス手術である、請求項１５記載の使用。
【請求項１７】
急性心筋梗塞およびその薬剤的消散および機械的消散時および消散後の障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１８】
腫瘍およびその転移の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１９】
多組織不全の敗血症および"急性呼吸窮迫症候群"の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項４記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２０】
多組織不全の敗血症が敗血症ショックである、請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
免疫不全およびリウマチ障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２２】
免疫不全が炎症であり、リウマチ障害がリウマチ様関節炎である、請求項２１記載の使用。
【請求項２３】
糖尿病の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項４記載の式Ｉの化合物の使用。
【手続補正書】
【提出日】平成20年12月5日(2008.12.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2009120609.tif 000011
[式中、
Ａは、ＮまたはＣＨであり、
Ｒ１は、水素であり、
Ｒ２は、水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、分枝鎖または直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、ニトロ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＲ２１Ｒ２２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ２３、ＯＲ２１であり、ここで
Ｒ２１およびＲ２２は相互に独立して水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであり、
Ｒ２３は、水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルまたはフェニルであり、
Ｒ３は、−ＮＲ３１Ｒ３２、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ３３Ｒ３４であり、この際ｑは１、２または３であってよく、
Ｒ３１は、水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、（ＣＨ２）ｒＮＲ３３Ｎ３４であり、
Ｒ３２は、（ＣＨ２）ｒＮＲ３３Ｒ３４であり、
ここで、ｒは、２、３、４、５または６であり、Ｒ３３およびＲ３４は、相互に独立して水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、窒素原子といっしょになった付加的にＯ、Ｎ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｎ−Ｃ０〜Ｃ２−フェニルまたはＮＨから選択されるヘテロ原子を有していてよい３〜８個の原子から成る環、フェニル−Ｃ１〜Ｃ４−アルキルであり、この際、フェニル環はＣ１〜Ｃ６−アルキル、ハロゲン、ニトロ、ＳＯ２ＮＲ３５Ｒ３６（Ｒ３５，Ｒ３６は相互に独立して水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルまたは窒素原子といっしょになった付加的にＯ、Ｓ、ＳＯ２、Ｎ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｎ−Ｃ０〜Ｃ２−フェニルまたはＮＨから選択されるヘテロ原子を有していてよい３〜８個の原子から成る環である）、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ、Ｓ（Ｏ）０〜２−Ｒ３７（Ｒ３７は、水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである）、ＣＦ３、（ＣＨ２）０〜４−ＣＯＲ３７、（ＣＨ２）０〜４−ＮＲ３５Ｒ３６、（ＣＨ２）０〜４ＣＯＮＲ３５Ｒ３６、（ＣＨ２）０〜４ＯＲ３７−ＣＨ２ＣＯＯＲ３７から成る群より選択される３つまでの同一のまたは異なる置換基により置換されていてよく、
Ｒ４は、水素である]の化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の、ＰＡＲＰ活性の異常な上昇を生じる疾患の治療薬を製造するための有効成分としての使用。
【請求項２】
Ｒ２が水素、分枝鎖または直鎖Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、ニトロ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである、請求項１記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項３】
Ｒ３が、（ＣＨ２）１〜２ＮＲ３５Ｒ３６またはＮ（Ｒ３７）−（ＣＨ２）２〜３ＮＲ３５Ｒ３であり、ここでＲ３７は水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであってよく、Ｒ３５およびＲ３６は、相互に独立して水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルであるか、またはいっしょになったＮＲ３５Ｒ３６はピペリジン、ピロリジン、アゼピンおよびピペラジンであってもよく、ここで２級Ｎ原子上のピペラジンは付加的に水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルで置換されていてよい、請求項１又は２記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項４】
Ｒ２が水素でありＡが窒素である、請求項１から３までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項５】
神経変性疾患および神経性障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項６】
疾患が、虚血、外傷または塊状出血により起こる神経変性疾患および神経性障害である、請求項５記載の使用。
【請求項７】
疾患が、卒中または頭部外傷である、請求項６記載の使用。
【請求項８】
疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病またはハンチントン病である、請求項６記載の使用。
【請求項９】
虚血による障害の治療または予防のための薬剤を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項１０】
てんかんの治療薬、特に全身性のてんかん発作および局所性のてんかん発作の治療薬の製造のための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項１１】
全身性のてんかん発作が小発作および強直間代発作であり、局所性のてんかん発作が側頭葉てんかんおよび複雑部分発作である、請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
腎虚血後の腎臓の障害の治療薬および腎移植時ならびに腎移植後の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項１３】
虚血性心疾患後の心臓の障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項１４】
心臓弁置換術、動脈瘤切除および心臓移植の間および後の微小梗塞の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項１５】
重篤な狭窄冠状動脈あるいは重篤な狭窄末梢動脈、特に脚の動脈の血管再生における治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項１６】
重篤な狭窄冠状動脈の血管再生がＰＴＣＡおよびバイパス手術である、請求項１５記載の使用。
【請求項１７】
急性心筋梗塞およびその薬剤的消散および機械的消散時および消散後の障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項１８】
腫瘍およびその転移の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項１９】
多組織不全の敗血症および"急性呼吸窮迫症候群"の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項４記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項２０】
多組織不全の敗血症が敗血症ショックである、請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
免疫不全およびリウマチ障害の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項１から４までのいずれか１項記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。
【請求項２２】
免疫不全が炎症であり、リウマチ障害がリウマチ様関節炎である、請求項２１記載の使用。
【請求項２３】
糖尿病の治療薬を製造するための有効成分としての、請求項４記載の式Ｉの化合物またはその互変異性形、可能なエナンチオマーまたはジアステレオマー形または可能な生理学的に認容性の塩の使用。