(57)【要約】【課題】局所的なウイルス感染の治療に有用である薬剤組成物を提供する。【解決手段】抗ウイルス用薬剤組成物であり、前記組成物はグリシルリジン酸（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ  ａｃｉｄ）及びラクトフェリンを含む事を特徴とする、抗ウイルス用薬剤組成物である。ここで、ラクトフェリンはヒト又はウシラクトフェリンである事が好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ウイルス用薬剤組成物であり、前記組成物はグリシルリジン酸（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ  ａｃｉｄ）及びラクトフェリンを含む事を特徴とする、抗ウイルス用薬剤組成物。
【請求項２】
前記ラクトフェリンがヒト又はウシラクトフェリンである事を特徴とする、請求
項１記載の抗ウイルス用薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリシルリジン酸（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ  ａｃｉｄ）及び抗ウイルス活性を有する蛋白質を少なくとも一つ含む、抗ウイルス薬剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘルペスシンプレックスウイルス１型は、顔面及び口腔の病変を引き起こす事が知られている（”「臨床微生物学マニュアル」（Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）”，Ｍｕｒｒａｙ，Ｂａｒｏｎ，Ｐｆａｌｌｅｒ，，Ｔｅｎｏｖｅｒ，Ｙｏｌｋｅｎ，６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅ  ８７６−８８３，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，１９９３）。
【０００３】
過去においては、ヘルペスシンプレックスウイルス１型由来の感染は、ビダラビン（Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ，”Ｌｅ  ｂａｓｉ  ｆａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃｈｅ  ｄｅｌｌａ  ｔｅｒａｐｉａ”，Ｚａｎｉｃｈｅｌｌｉ，Ｂｏｌｏｇｎａ，７ｔｈ  ｅｄ．，ｐａｇｅ１１５６，１１９１）で治療されたが、その毒性のために、これは殆ど完全にアシクロビール（Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ，”「治療の薬学的基礎」（Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）”，ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ  Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，９ｔｈ  ｅｄ．，ｃｈａｐｔｅｒ５０，ｐａｇｅ１１９３，１１９６；”Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．”，７３，Ｓｕｐｐｌ．，１８６−１９２，１９８２  ａｎｄ  Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｋｉｎｅｔ．”８，１８７−２０１，１９８３）に取って替わられて来た。
【０００４】
そのために、アシクロビールは口及び唇の病変（熱による発疹）の治療に現在のところ最も最も使用されている薬物であるが、その局所投与により、粘膜の灼熱感及び炎症がしばしば引き起こされる。更に、アシクロビールは最初の感染の間に投与された時にはかなり有効であるが、再発感染の場合にはそれほど有効ではなく、そのために、ヘルペスシンプレックスウイルス１型による再感染を解決したり防止するものではない。
【０００５】
加えるに、経口的治療は、悪心、下痢、そう痒、頭痛、腎障害及び腎毒性の様な副作用を引き起こすという、欠点がある。
【０００６】
そこで、再発感染の場合でもヘルペスシンプレックスウイルス１型の感染の治療に有効であり、副作用のない薬物が、今でもに本当に必要とされている。
【０００７】
実際に、グリシルリジン酸が、ある抗ウイルス活性を示す事も知られている。抗ウイルス活性を示す用量において、それはウイルスの糖蛋白質の生合成を大きく抑制し、非常に高い用量においてのみ、それは細胞の糖蛋白質の生合成も抑制する。実際に、蛋白質生合成に対するグリシルリジン酸の作用は、正常な細胞と感染した細胞の両者において、４ｍＭの用量でも本当は不適切であるが、正常な細胞と感染した細胞の間において糖蛋白質の生合成は相当な差を示す。実際に、０．５ｍＭの濃度（ウイルス複製の５０％を抑制する）において、グリシルリジン酸は１０％以上のグルコサミン−Ｈ3 の取り込みの抑制を感染細胞において引き起こすが、正常細胞においては抑制を引き起こさない。１ｍＭまでグリシルリジン酸の用量を増加させると、８０％のウイルス抑制を引き起こし、コントロールにおいては糖蛋白質の生合成を抑制を引き起こさず、かつ感染細胞においては糖蛋白質の生合成の２０％の抑制を引き起こす。４ｍＭにおいては、正常細胞における糖蛋白質の生合成も少し変化するが、ウイルスの生成は９９％抑制される（”Ｌ｀ｌｇｉｅｎｅ  Ｍｏｄｅｍａ”，Ｐｏｍｐｅｉ  Ｒ．  ａｎｄ  Ｍａｒｃｉａｌｉｓ  Ｍ．Ａ．，８３，３８５−３９１，１９８５）。
【０００８】
更に、ＨＳＶ１により感染した細胞を、８ｍＭのグリシルリジン酸で処理を行った試験の結果を、表Ａに示す。３７℃で２時間の間、感染した細胞をグリシルリジン酸と接触させ続けた。前記の表の中で与えられる実験結果は、１２、１７及び２２時間において強い感染抑制があり、かつ細胞は完全な状態を保っている事を示している。感染から１２時間においてはその抑制はおよそ２対数であり、感染から２２時間においてはおよそ３対数（９９．９％）である（”Ｎａｔｕｒｅ”，Ｐｏｍｐｅｉ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，２８１，Ｎｏ．５７３３，６８９−６９０，１９７９）。
【０００９】
2009102370.tif 000002
【００１０】
種々の型のリゾチームが、抗ウイルス活性、より特異的には抗ヘルペス（ＨＳＶ１）活性を示す事もまた、文献において知られており、その様なリゾチームには、シチメンチョウリゾチーム、ヒトリソチーム、ニワトリリゾチーム、変性（熱で不活性化した）ニワトリリゾチーム及びトリプシンで消化したニワトリリゾチーム等がある（”Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｃｉｓａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１０，３５−４０，１９８４）。
【００１１】
リゾチーム類は、実際に、自然界において広範囲に広まっている酵素であり、感染因子の分解（即ち溶菌）を引き起こし、又は分解に協力する事により、いくつかの感染因子より生物を防御する事に協力している（”Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．”，Ｊｏｌｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，６３，１６５−１８９，１９８４；”Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．”，Ｓａｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，９，５８３−５９２，１９８９）。
【００１２】
更に、ラクトフェリンの抗ウイルス活性、より特異的には抗ヘルペス（ＨＳＶ１）活性が、文献中に記載されている（Ｆｕｊｉｈａｒａ  Ｔ．  ａｎｄ  Ｈａｙａｓｈｉ  Ｈ．”「ラクトフェリンは、マウス角膜へのヘルペスシンプレックスウイルス１型（ＨＳＶ１）の感染を抑制する」（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ１（ＨＳＶ１）  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｍｏｕｓｅ  ｃｏｒｎｅａ）”，”Ａｒｃｈ．Ｖｉｒｏｌ．”，１４０，１４６９−１４７２，１９９５；Ｈａｒｍｓｅｎ  ＭＣ．ｅｔ  ａｌ．”「血漿および乳蛋白質の抗ウイルス効果：ヒト免疫不全ウイルス及びヒトサイトメガロウイルスの両者のインビトロでの複製に対して、ラクトフェリンは強力な活性を示す」Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ａｎｄ  ｍｉｌｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ：ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ  ｓｈｏｗｓ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｂｏｔｈ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ”，”Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．”，１７２，３８０−３８８，１９９４）。
【００１３】
ここで驚くべき事に、抗ウイルス活性を有する蛋白質に対して、グリシルリジン酸が相乗的な効果を有する事を発見した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
そこで、グリシルリジン酸及び抗ウイルス活性を有する少なくとも一つの蛋白質を含む事を特徴とする、薬剤組成物を提供する事が、本研究の第一の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
好ましくは、前記蛋白質は、リゾチーム及びラクトフェリンよりなる群より選択される。
【００１６】
リゾチームの典型的な例は、シチメンチョウリゾチーム、ヒトリソチーム、ニワトリリゾチーム、熱で不活性化したニワトリリゾチーム及びトリプシンで消化したニワトリリゾチームである。好ましくは、前記リゾチームはニワトリリゾチーム又はヒトリゾチームである。
【００１７】
ラクトフェリンの典型的な例は、ウシ及びヒトラクトフェリンである。
【発明の効果】
【００１８】
典型的には、本発明の薬剤組成物は、局所的なウイルス感染の治療に有用である。好ましくは、前記ウイルスはヘルペス型である。更に好ましくは、それはヘルペスシンプレックスウイルス１型（ＨＳＶ１）である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
好ましくは、本発明の薬剤組成物は、適切な投与形態に調剤される。適切な投与形態の例は、局所投与を行う為のクリーム、軟膏及び薬物硬膏である。
【００２０】
上記投与形態は、他の一般的な成分を含むことがあり、その様な成分には、例えば、保存剤、安定化剤、界面活性剤、緩衝剤、浸透圧を制御する為の塩、乳化剤、甘味剤、着色剤、風味剤及びその様な物がある。
【００２１】
本発明の薬剤組成物中の活性成分の量は、既知の因子に依存して広い範囲で変える事が可能であり、その様な因子として、例えば、感染の段階及び重篤度、患者の体重、投与形態の型、投与経路、一日あたりに投与される投与回数及び活性成分の有効性がある。しかしながら、当業者により、最適量は容易にかつ日常的に決定されるであろう。
【００２２】
好ましくは、本発明の投与形態中における、グリシルリジン酸、リゾチーム及び／又はラクトフェリンの総量は、０．２５−８ｍｇ／ｍｌのグリシルリジン酸、０．５−１０ｍｇ／ｍｌのリゾチーム及び／又は０．１−４ｍｇ／ｍｌのラクトフェリンを１日あたり投与する事を保証する様なものであろう。より好ましくは、０．５−２ｍｇ／ｍｌのグリシルリジン酸、０．５−４ｍｇ／ｍｌのリゾチーム及び／又は０．２５−１ｍｇ／ｍｌのラクトフェリンを１日あたり投与する事を保証する様なものであろう。本発明の薬剤組成物の投与形態は、薬化学者に良く知られ、混合、造粒、圧縮、溶解及びその様なものを含む技術に従って調製されるであろう。
【実施例】
【００２３】
下記の実施例は、本発明を述べる事を意図するものであり、いかなる意味でも本発明を限定するものではない。
【００２４】
実施例中において使用された化合物は以下の物である。
−フルカ株式会社より提供された、グリシルリジン酸（アンモニウム塩として）
−ＮＩＨ（メリーランド州、ロックビル）より提供された、ヘルペスシンプレックスウイルス１型
−シグマより提供された、ニワトリリゾチーム
−シグマより提供された、ラクトフェリン
−ＩＣＮ  ＦＬＯＷ（カリフォルニア州、コスタメサ）より提供された、アフリカミドリザル（ａｆｒｉｃａｎ  ｇｒｅｅｎ  ｍｏｎｋｅｙ）の腎臓由来のベロ細胞
−５６℃で３０分間不活性化したウシ胎児血清を添加し、ＩＣＮ  ＦＬＯＷ（カリフォルニア州、コスタメサ）より提供された、ダルベッコにより改変されたイーグル培地（ＤＭＥＭ）
【００２５】
比較例１
単層の細胞層のベロ細胞を２４ウェルのプレートにまき、およそ１ＨＳＶウイルス感染単位×１００の細胞を用いて、室温で１時間感染させた。その後、ニワトリ、シチメンショウ及びヒトリゾチームを、０から８ｍｇ／ｍｌまで量を変化させて、３７℃のサーモスタットの中で、かつ二酸化炭素（５％）の存在下において添加した。
４８時間後、対照例において細胞変性効果が全体に及んだ時に、細胞の凍結及び解凍を２回行って細胞を破裂させ、それによってウイルスを放出させた。
それぞれのリゾチーム希釈物につき作られた、感染しているウイルス微粒子の濃度を、遠心分離の後に滴定した。それぞれのウェルの含有物を１０-1から１０-7まで希釈し、その希釈液を、６ウェルを有するマルチウェルの中の単層の細胞と、それぞれ室温で１時間接触させる事により、滴定を行った。
一度感染が起こると、細胞は栄養寒天の土壌で覆われて、そして４８時間インキュベーションした後、細胞はくすんだ赤色となり、そして顕微鏡で見る事ができるウイルスのプラークを計測した。それにより、ウイルスのプラークについて得られた、リゾチームによる阻害パーセンテージを、対照例と比較を行って確立した。
この様にして得られた実験データを、表１に示す。
【００２６】
【表１】
2009102370.tif 000003
【００２７】
表１は、以下の事を示す。
１）ニワトリリゾチームは、
i)ベロ細胞上のヘルペスウイルスプラークの形成を、顕著に阻害し；
ii)前記作用は用量依存的であり、
iii)８ｍｇ／ｍｌの用量において、ＨＳＶ１をおよそ９２％抑制し；
iv)５０％阻害用量（ＩＤ５０）はおよそ１ｍｇ／ｍｌであり；
２）シチメンチョウ及びヒトリゾチームは、ニワトリリゾチームと類似した抗ヘルペス活性を示した。
【００２８】
比較例２
０から１ｍｇ／ｍｌまで用量を変化させたグリシルリジン酸を単独で、ＨＳＶ１で感染させた単層のベロ細胞に添加した事を除いて、比較例２は比較例１と同様に行った。実験結果を表２に示す。
【００２９】
【表２】
2009102370.tif 000004
【００３０】
比較例３
０．５ｍｇ／ｍｌのグリシルリジン酸及び０から１ｍｇ／ｍｌまで用量を変化させたニワトリリゾチームを、ＨＳＶ１で感染させた単層のベロ細胞に添加した事を除いて、比較例３は比較例１と同様に行った。
実験結果を表３に示す。
【００３１】
【表３】
2009102370.tif 000005
【００３２】
表３より見られるように、グリシルリジン酸とリゾチームの組み合わせは、顕著な相乗効果を示すという特徴を有する。例えば、別々に測定された活性の合計（表１及び表２）を考えると、０．５ｍｇ／ｍｌのニワトリリゾチームと０．５ｍｇ／ｍｌのグリシルリジン酸より成る組み合わせについて予想される抑制効果（％）は、およそ３５−４０％である。それとは対照的に、表３に示される結果は、この組み合わせによる抑制はおよそ８４％である事を証明している。
【００３３】
相乗性は、ＦＩＣインデックスによっても確認され、この実験の場合においてはＦＩＣインデックスは０．１２５である。
【００３４】
知られている様に、ＦＩＣインデックス（ｆｒａｃｔｉｏｎｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ：分画された抑制濃度）は２つの生成物の混合物の５０％ウイルス抑制濃度を、それぞれの生成物単独の５０％ウイルス抑制濃度で割り算を行う事により得られる。０．５以下のＦＩＣインデックスは、２つの生成物の間に顕著な相乗性がある事を意味している。
【００３５】
実施例１
異なった用量のウシ及びヒトラクトフェリンを、ＨＳＶ１で感染させた単層のベロ細胞に添加した事を除いて、実施例１は比較例１と同様に行った。
この様にして得られた実験データを表４に示す。
【００３６】
【表４】
2009102370.tif 000006
【００３７】
表４は、ラクトフェリンの毒性は強くなく、かつ毒性を示すレベルより明らかに低いレベルにおいて、ラクトフェリンのウイルスに対する作用は、すでに非常に顕著である事を示している。
【００３８】
実施例２
０．５ｍｇ／ｍｌのグリシルリジン酸と、０から１ｍｇ／ｍｌまでの異なった用量のヒトラクトフェリンを、ＨＳＶ１で感染させた単層のベロ細胞に添加した事を除いて、実施例２は比較例１と同様に行った。
実験結果を表５に示す。
【００３９】
【表５】
2009102370.tif 000007
【００４０】
表５より見られるように、グリシルリジン酸とラクトフェリンの組み合わせは、顕著な相乗効果を示すという特徴を有する。例えば、別々に測定された活性の合計（表２及び表４）を考えると、０．２５ｍｇ／ｍｌのラクトフェリンと０．５ｍｇ／ｍｌのグリシルリジン酸より成る組み合わせについて予想される抑制効果（％）は、およそ６５−７５％である。それとは対照的に、表５に示される結果は、この組み合わせによる抑制はおよそ１００％である事を証明している。
【００４１】
相乗性は、ＦＩＣインデックスによっても確認され、ＦＩＣインデックスは０．０６である。
【００４２】
実施例３
０．５ｍｇ／ｍｌのグリシルリジン酸、０．１ｍｇ／ｍｌのヒトラクトフェリン及び０から１ｍｇ／ｍｌまでの異なった用量のニワトリリゾチームを、ＨＳＶ１で感染させた単層のベロ細胞に添加した事を除いて、実施例３は比較例１と同様に行った。
実験結果を表６に示す。
【００４３】
【表６】
2009102370.tif 000008
【００４４】
表６より見られるように、グリシルリジン酸、ラクトフェリン及びリゾチームの組み合わせは、顕著な相乗効果を示すという特徴を有する。例えば、別々に測定された活性の合計を考えると、０．１ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン、０．５ｍｇ／ｍｌのグリシルリジン酸及び０．５ｍｇ／ｍｌのリゾチームより成る組み合わせについて予想される抑制効果（％）は、およそ６５％である。それとは対照的に、表６に示される結果は、この組み合わせによる抑制はおよそ９８％である事を示している。
【外国語明細書】
2009102370000001.pdf