(57)【要約】【課題】ピニトールを高含有、高純度に含んだ組成物を効率よく簡便な操作によって得ることができる製造方法を提供する。【解決手段】枝豆莢凍結乾燥粉末に水、エタノールなどの溶剤を導入し、ミキサーで破砕した後、マグネティックスターラーを用い室温下において撹拌しながら、２４時間抽出を行い、得られた処理液を濾過助剤に珪藻土を用い、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ東洋製Ｎｏ．５Ｃ）を用いて吸引濾過を行ない、得られた抽出液を凍結乾燥し、ミルで粉砕して粉末状のピニトール含有組成物とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
枝豆莢を抽出原料として水又は／及びアルコール類を用いてピニトールを抽出することを特徴とするピニトール又はピニトール含有組成物の製造方法。
【請求項２】
請求項１記載の製造方法により得られたピニトール又はピニトール含有組成物を含有することを特徴とする飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピニトール又はピニトール含有組成物の製造方法及びピニトール又はピニトール含有組成物を含有する飲食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ピニトール（D-ピニトール,3-Oメチル-D-カイロイノシトール）は、松やカーネーション、そしてクローバー、レンゲ、大豆などのマメ科の植物に多く存在する天然成分であり、ミオ-イノシトールの光学異性体であるカイロ-イノシトールの3番炭素にメチル基がついているエーテル化合物である。
【０００３】
ピニトールは、カイロイノシトールと同様に、インスリン抵抗性を緩和することによる血糖降下作用を持つことより（例えば、非特許文献１）多くの研究がなされており、インスリン抵抗性を原因とする２型糖尿病とその合併症である肝障害、白内障等の改善効果が報告されている（例えば、非特許文献２及び非特許文献３）。さらに、ピニトールには抗炎症作用やクレアチン蓄積効果等も提唱されている（例えば、非特許文献４及び非特許文献５）。
【０００４】
このようなピニトールの製造方法としては、ブーゲンビリアという植物の葉から抽出する方法（例えば、非特許文献６）、松の内皮から抽出する方法（例えば、非特許文献７）などが報告されている。これらの方法はコストが高いといった問題や抽出が困難であるといった問題があった（非特許文献８）。また、ダイズから抽出する方法も報告されているが、ダイズ中のピニトール含量は少なく、ダイズ中のピニトールはガラクトースと結合したガラクトピニトールの形態で存在しており、酵素等によりガラクトースを分離させる処理が必要である（例えば、非特許文献９）。さらに、イナゴマメの莢から抽出する方法も報告（例えば、非特許文献１０及び非特許文献１１）されているが、酵母による長期間の糖資化工程やクロマト分離といった煩雑な工程を経なければ純度を向上させることが困難であるといった問題があった。また、イナゴマメの栽培は主にヨーロッパで行われており、日本ではイナゴマメの莢が簡単に入手できないといった問題があった。
【非特許文献１】Kim JI et al.，EJCN. 59, 456-458 (2005)
【非特許文献２】孫東煥，圓光大学校薬学大学報告書(2003)
【非特許文献３】金在燦，中央大学校医科大学  研究報告書(2004)
【非特許文献４】Geenwood M et al.，J.Exercise Physiology 4(4),41-47(2001)
【非特許文献５】Singh RK et al.，Fitoterapia72,168-170(2001)
【非特許文献６】Narayan CR et al.，Curr.Sci.56(3),129-141(1987)
【非特許文献７】Anderson A et al.，Ind.Eng.Chem.45(3),593-596(1953)
【非特許文献８】ファインケミカル年鑑2007,397-401
【非特許文献９】Schweizer TF et al.，J.Sci.Fd.Agric.29,148-154(1978)
【非特許文献１０】Food Style21 8(12),90-98(2004)
【非特許文献１１】Stephanie B.，J.Agric.Food Chem. 34,827-829(1986)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、このような状況に鑑みなされたものであり、ピニトールを高含有、高純度に含んだ組成物を効率よく簡便な操作によって得ることができる製造方法を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは上記した課題について鋭意検討した結果、廃棄物として処理されていた枝豆莢を抽出原料とすることで、高含量かつ高純度のピニトール組成物が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明の第一は、枝豆莢を抽出原料として水又は／及びアルコール類を用いてピニトールを抽出することを特徴とするピニトール又はピニトール含有組成物の製造方法を要旨とするものである。
【０００８】
本発明の第二は、前記の製造方法により得られたピニトール又はピニトール含有組成物を含有することを特徴とする飲食品を要旨とするものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ピニトール又はピニトールを含有する組成物を容易に得ることができる。また、本発明のピニトールを含有する組成物を含有した飲食品は、ピニトールの作用により、血糖降下作用、肝機能改善効果、白内障改善効果、抗炎症効果、クレアチン蓄積効果が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１１】
本発明で用いられる枝豆莢は、本発明の効果を損なうものでない限りいかなるものでもよい。産地、品種は特に限定されず、国産でも海外からの輸入品でもよい。枝豆莢はそのまま使用してもよいし、予め細断、破砕、切断、凍結乾燥、脱水などの処理を行った後に使用してもよい。
【００１２】
細断は、物理的に枝豆莢を細かく破砕する方法であり、使用する装置、機器、方法などは本発明の効果を損なわない限りいかなるものでもよい。枝豆莢の細断は包丁やカッターナイフ、ハサミなどを用いて手作業で行っても良いが、大量の枝豆莢を短時間で処理しようとする場合には装置を使用する。そのような装置としては、例えば、ミキサー、ブレンダー、ミル、ハンマー式粉砕機などが挙げられ、また野菜用の細断機を用いてもよい。
【００１３】
細断に供する枝豆莢は室温に置かれていてもよいし、凍結したものでもよいが、冷却機能の無い装置を用いる場合は、有効成分の分解を防ぐため凍結あるいは冷却したものを用いることが好ましい。
【００１４】
細断された枝豆莢の大きさは特に限定されないが、１ｃｍ以下が好ましく、５ｍｍ以下がより好ましい。
【００１５】
本発明の製造方法は、上記した枝豆莢を抽出原料とし、水及び／又はアルコール類を用いて抽出操作を行う。以下、これらの方法について説明する。
【００１６】
水による抽出は、水を加えてそこに成分を溶出させる方法である。加える水の量は、特に限定されないが、枝豆莢に対して０．０１〜１００倍量、好ましくは０．０５〜５０倍量、さらに好ましくは０．５〜１０倍量である。水の量が０．０１倍より少ないと抽出効率が落ち、１００倍より多いと薄い抽出液しか得られず後に濃縮操作が必要になる場合がある。また、使用する水の温度は、０℃〜１００℃、好ましくは５℃〜９０℃、さらに好ましくは１０℃〜８０℃である。水の温度が０℃より低い場合には抽出効率が低下する傾向があり、抽出温度が１００℃より高い場合には有用成分が分解してしまうおそれが生じる。
【００１７】
また、水は蒸留水、脱イオン水、上水などでもよいし、一定量の塩を溶解したもの、緩衝液でもよい。この時の塩の種類としては、食品に添加できるものであり本発明の効果を損なうもので無ければ特に限定されないが、好ましくは塩化ナトリウム、塩化アンモニウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、炭酸アンモニウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酢酸ナトリウム、酢酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、リン酸水素２ナトリウム、リン酸２水素ナトリウム、リン酸水素２カリウム、リン酸２水素カリウム、リン酸水素２アンモニウム、リン酸２水素アンモニウム、安息香酸ナトリウム、クエン酸１カリウム、クエン酸３カリウム、クエン酸３ナトリウム、コハク酸１ナトリウム、コハク酸２ナトリウム、乳酸ナトリウム、リンゴ酸ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、グルタミン酸カリウム、アスパラギン酸ナトリウム、リジン塩酸塩などが挙げられる。緩衝液としては、トリズマ塩基、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、コハク酸緩衝液などが好ましく、調整するｐＨは２．０〜１１．０が好ましく、３．０〜８．０がより好ましい。また、塩、緩衝液の濃度は０．０１％〜５０％が好ましく、０．１％〜２０％がより好ましい。この範囲より低い場合は塩、緩衝液の効果を期待できない可能性があり、この範囲より高い場合は抽出効率の低下、味の低下を招く可能性がある。
【００１８】
アルコール抽出は、アルコール類を加えてそこに成分を溶出させる方法である。使用するアルコールは、特に限定されず、単独で用いてもよいし、二種類以上のアルコールを混合して使用してもよいし、水と混合して使用してもよい。好ましいアルコールの例としては、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノール、が挙げられ、さらに好ましくは、エタノール、メタノールが挙げられる。加えるアルコールの量は種類にもより特に限定されないが、枝豆莢に対して０．０１〜１００倍量が好ましく、０．５倍〜１０倍がより好ましい。アルコールの量が０．０１倍より少ないと抽出効率が落ち、１００倍より多いと薄い抽出液しか得られず後に濃縮操作が必要になる場合がある。また、使用するアルコールの温度は−２０℃〜１００℃が好ましく、０℃〜６０℃がより好ましい。有機溶媒の温度が−２０℃より低い場合には抽出効率が低下する傾向があり、抽出温度が１００℃より高い場合には有効成分が分解してしまうおそれが生じる。
【００１９】
上記の水又はアルコールで抽出を行う時間は、特に限定されず、１分〜４８時間行うことが好ましく、５分〜２４時間行うことがより好ましい。抽出を行う時間がこの範囲より短いと十分にピニトールが抽出できない傾向があり、この範囲より長くしても抽出量の増加は期待できない。
【００２０】
上記のようにしてピニトールの抽出操作を行った後は、固液分離を行わずにそのまま使用することもできるが、従来公知の分離方法で液を分離することができる。分離方法としては、例えば、フィルターろ過、圧搾ろ過、遠心分離、デカンテーションなど従来公知のあらゆる方法が使用できる。清澄な組成物を得る場合には、珪藻土などのろ過助剤を使用したフィルターろ過を行うことが好ましい。また、さらに清澄な液を得る場合や微生物の除去を行う場合には、これをさらに１μｍ未満の孔径のメンブランフィルターろ過を行うことが好ましい。
【００２１】
このようにして得られたピニトールを含有する組成物は、そのまま使用してもよいし、さらに所定の濃度にまで希釈又は濃縮して使用することもできる。希釈するには水に限定されず、アルコール、油などを用いることもでき、このとき必要に応じて乳化剤や塩類を添加することができる。濃縮するには、減圧濃縮、加熱濃縮、濾過膜を用いた濃縮などいかなる方法で行ってもよいが、２０℃〜６０℃の範囲での減圧濃縮を行うことが好ましい。該減圧濃縮には、一般的なエバポレーター装置や（株）大川原製作所製の「エバポール」、関西化学機械製作（株）製の「ウォールウェッター」などを使用することができる。
【００２２】
さらに、ピニトール含有組成物中のピニトールの純度は、精製を行い、向上させることもできる。かかる精製方法としては、糖資化、晶析、限外ろ過、活性炭処理、クロマト分離等が挙げられる。
【００２３】
糖資化の方法としては、ピニトール含有組成物中にピニトール資化能のない微生物菌体を添加すればよい。ピニトール資化能のない微生物菌体の添加濃度は、抽出液１ｍＬ当たり1白金耳〜２ｇ（乾燥重量）程度が適当であり、菌体を添加した糖混合物を処理する条件、例えば温度、時間などについては、不純物として混在する糖質が効率よく消失する条件を適用すればよい。一般的な処理温度としては５〜７０℃、好ましくは１０〜６０℃、さらに好ましくは２０〜５０℃が用いられる。一般的な処理時間としては１〜４８時間、好ましくは２〜２４時間、さらに好ましくは３〜１２時間が好適である。実質的にピニトール資化能のない微生物の具体例としては、酵母あるいは乳酸菌が挙げられる。酵母ではサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、クルベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母が本目的を達成するために最適である。
【００２４】
具体的にはサッカロマイセス セレビジエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス カールスバージェンシィス（Ｓａｃｃｈ．ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス アセチ（Ｓａｃｃｈ．ａｃｅｔｉ）、サッカロマイセス アムルケ（Ｓａｃｃｈ．ａｍｕｒｃａｅ）、サッカロマイセス ベイリー（Ｓａｃｃｈ．ｂａｉｌｉｉ）、サッカロマイセス バヤナス（Ｓａｃｃｈ．ｂａｙａｎｕｓ）、サッカロマイセス ビスポーラス（Ｓａｃｃｈ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ）、サッカロマイセス カペンシス（Ｓａｃｃｈ．ｃａｐｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス チェバリエリー（Ｓａｃｃｈ．ｃｈｅｖａｌｉｅｒｉ）、サッカロマイセス シドリ（Ｓａｃｃｈ．ｃｉｄｒｉ）、サッカロマイセス コレアヌス（Ｓａｃｃｈ．ｃｏｒｅａｎｕｓ）、サッカロマイセス ダイレンシス（Ｓａｃｃｈ．ｄａｉｒｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス デルブルッキー（Ｓａｃｃｈ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、サッカロマイセス ディアスタチカス（Ｓａｃｃｈ．ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）、サッカロマイセス ユーパジカス（Ｓａｃｃｈ．ｅｕｐａｇｙｃｕｓ）、サッカロマイセス エキシグス（Ｓａｃｃｈ．ｅｘｉｇｕｕｓ）、サッカロマイセス ファーメンタティ（Ｓａｃｃｈ．ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉ）、サッカロマイセス フロレンティヌス（Ｓａｃｃｈ．ｆｌｏｒｅｎｔｉｎｕｓ）、サッカロマイセス グロボサス（Ｓａｃｃｈ．ｇｌｏｂｏｓｕｓ）、サッカロマイセス ヘテロジニカス（Ｓａｃｃｈ．ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｉｃｕｓ）、サッカロマイセス ヒーニピエンシス（Ｓａｃｃｈ．ｈｉｅｎｉｐｉｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス インコンスピカス（Ｓａｃｃｈ．ｉｎｃｏｎｓｐｉｃｕｕｓ）、サッカロマイセス イヌシタトゥス（Ｓａｃｃｈ．ｉｎｕｓｉｔａｔｕｓ）、サッカロマイセス イタリカス（Ｓａｃｃｈ．ｉｔａｌｉｃｕｓ）、サッカロマイセス クロッケリアヌス（Ｓａｃｃｈ．ｋｌｏｅｃｋｅｒｉａｎｕｓ）、サッカロマイセス クルイベリ（Ｓａｃｃｈ．ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、サッカロマイセス ミクロエリプソデス（Ｓａｃｃｈ．ｍｉｃｒｏｅｌｌｉｐｓｏｄｅｓ）、サッカロマイセス モンタヌス（Ｓａｃｃｈ．ｍｏｎｔａｎｕｓ）、サッカロマイセス ムラキー（Ｓａｃｃｈ．ｍｒａｋｉｉ）、サッカロマイセス ノルベンシス（Ｓａｃｃｈ．ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス オレアセウス（Ｓａｃｃｈ．ｏｌｅａｃｅｕｓ）、サッカロマイセス オレアジノシス（Ｓａｃｃｈ．ｏｌｅａｇｉｎｏｓｉｓ）、サッカロマイセス プレトリエンシス（Ｓａｃｃｈ．ｐｒｅｔｏｒｉｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス プロストサードビー（Ｓａｃｃｈ．ｐｒｏｓｔｏｓｅｒｄｏｖｉｉ）、サッカロマイセス ロゼイ（Ｓａｃｃｈ．ｒｏｓｅｉ）、サッカロマイセス ロウキシー（Ｓａｃｃｈ．ｒｏｕｘｉｉ）、サッカロマイセス サイトアヌス（Ｓａｃｃｈ．ｓａｉｔｏａｎｕｓ）、サッカロマイセス テルリス（Ｓａｃｃｈ．ｔｅｌｌｕｒｉｓ）、サッカロマイセス トランスバーレンシス（Ｓａｃｃｈ．ｔｒａｎｓｖａａｌｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス ユニスポラス（Ｓａｃｃｈ．ｕｎｉｓｐｏｒｕｓ）、サッカロマイセス ウバルム（Ｓａｃｃｈ．ｕｖａｒｕｍ）、サッカロマイセス ベイ��ァー８Ｓａｃｃｈ．ｖａｆｅｒ）、クルイベロマイセス エスツアリー（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ａｅｓｔｕａｒｉｉ）、クルイベロマイセス アフリカヌス（Ｋ．ａｆｒｉｃａｎｕｓ）、クルイベロマイセス ブルガリカス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、クルイベロマイセス デルフェンシス（Ｋ．ｄｅｌｐｈｅｎｓｉｓ）、クルイベロマイセス ドブザンスキー（Ｋ．ｄｏｂｚｈａｎｓｋｉｉ）、クルイベロマイセス ドロソフィラム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）、クルイベロマイセス ラクティス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）、クルイベロマイセス ロデリ（Ｋ．ｌｏｄｄｅｒｉ）、クルイベロマイセス ファフィー（Ｋ．ｐｈａｆｆｉｉ）、クルイベロマイセス ファゼオロスポラス（Ｋ．ｐｈａｓｅｏｌｏｓｐｏｒｕｓ）、クルイベロマイセス ポリスポラス（Ｋ．ｐｏｌｙｓｐｏｒｕｓ）、クルイベロマイセス バヌデニー（Ｋ．ｖａｎｕｄｅｎｉｉ）、クルイベロマイセス ベロネ（Ｋ．ｖｅｒｏｎａｅ）、クルイベロマイセス ウィッカーハミー（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉｉ）、クルイベロマイセス ウィケニー（Ｋ．ｗｉｋｅｎｉｉ）、カンジダ サルモンチセンティス（Ｃａｎｄｉｄａ ｓａｌｍａｎｔｉｃｅｎｓｉｓ）、カンジダ ベチー（Ｃ．ｂｅｅｃｈｉｉ）、カンジダ カカオイ（Ｃ．ｃａｃａｏｉ）、カンジダ カプスリジェナ（Ｃ．ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎａ）、カンジダ カテヌラタ（Ｃ．ｃａｔｅｎｕｌａｔａ）、カンジダ クローセニー（Ｃ．ｃｌａｕｓｓｅｎｉｉ）、カンジダ ディバーサ（Ｃ．ｄｉｖｅｒｓａ）、カンジダ フレイシュッシー（Ｃ．ｆｒｅｙｓｃｈｕｓｓｉｉ）、カンジダ インターメディア（Ｃ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、カンジダ ケフィア（Ｃ．ｋｅｆｙｒ）、カンジダ クルゼイ（Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ ランビカ（Ｃ．ｌａｍｂｉｃａ）、カンジダ リシタニエ（Ｃ．ｌｉｓｉｔａｎｉａｅ）、カンジダ ノルベンシス（Ｃ．ｎｏｒｖｅｇｅｎｓｉｓ）、カンジダ マリチマ（Ｃ．ｍａｒｉｔｉｍａ）、カンジダ メリビオシカ（Ｃ．ｍｅｌｉｂｉｏｓｉｃａ）、カンジダ モギー（Ｃ．ｍｏｇｉｉ）、カンジダ オブツサ（Ｃ．ｏｂｔｕｓａ）、カンジダ オレゴネンシス（Ｃ．ｏｒｅｇｏｎｅｎｓｉｓ）、カンジダ パラプシロシス（Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ プルチェリマ（Ｃ．ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ）、カンジダ ラギー（Ｃ．ｒｈａｇｉｉ）、カンジダ サルモニコラ（Ｃ．ｓａｌｍｏｎｉｃｏｌａ）、カンジダ ラバウティー（Ｃ．ｒａｖａｕｔｉｉ）、カンジダ ロイカフィー（Ｃ．ｒｅｕｋａｕｆｆｉｉ）、カンジダ サケ（Ｃ．ｓａｋｅ）、カンジダ サンタマリエ（Ｃ．ｓａｎｔａｍａｒｉａｅ）、カンジダ ソラニ（Ｃ．ｓｏｌａｎｉ）、カンジダ ソルボサ（Ｃ．ｓｏｒｂｏｓａ）、カンジダ スロフィー（Ｃ．ｓｌｏｏｆｆｉｉ）、カンジダ ステラトイデア（Ｃ．ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ）、カンジダ テヌイス（Ｃ．ｔｅｎｕｉｓ）、カンジダ トロピカリス（Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ ユーティリス（Ｃ．ｕｔｉｌｉｓ）、カンジダ ビスワナチー（Ｃ．ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ）等を用いることができる。
【００２５】
さらに、シゾサッカロマイセス マリデボランス（Ｓｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｌｉｄｅｖｏｒａｎｓ）、ロデロマイセス エロンジスポラス（Ｌｏｄｄｅｒｏｍｙｃｅｓ ｅｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｓ）、ハンゼニアスポラ オスモフィラ（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ ｏｓｍｏｐｈｉｌａ）、デバロマイセス タマリ（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｔａｍａｒｉｉ）、デッケラ インターメディア（Ｄｅｋｋｅｒａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、エンドマイコプシス プラチポディス（Ｅｎｄｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｐｌａｔｙｐｏｄｉｓ）、ハンゼニアスポラ オスモフィラ（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ ｏｓｍｏｐｈｉｌａ）、リポマイセス コノネンコエ（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｋｏｎｏｎｅｎｋｏａｅ）、ハンゼヌラ アノマラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ａｎｏｍａｌａ）、メチニコウィア プルテェリマ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ）、ナドソニア フルベンセンス（Ｎａｄｓｏｎｉａ ｆｕｌｖｅｓｃｅｎｓ）、ネマトスポラ コリリ（Ｎｅｍａｔｏｓｐｏｒａ ｃｏｒｙｌｉ）、ピチア ファリノサ（Ｐｉｃｈｉａ ｆａｒｉｎｏｓａ）、サッカロマイコーデス ルドウィギー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｄｅｓ ｌｕｄｗｉｇｉｉ）、サッカロマイコプシス グツラタ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｇｕｔｔｕｌａｔａ）、シュワンニオマイセス オシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）、ウィッカーハミア フルオレセンス（Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、ロイコスポリジウム カプスリジェナム（Ｌｅｕｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）、ブレッタノマイセス アノマラス（Ｂｒｅｔｔａｎｏｍｙｃｅｓ ａｎｏｍａｌｕｓ）、クロッケラ ジャバニカ（Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ ｊａｖａｎｉｃａ）、トルロプシス ホルミー（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｈｏｌｍｉｉ）、トリコスポロン ペニシァタム（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｐｅｎｉｃｉｌｌａｔｕｍ）、チゴサッカロマイセス ロウキシー（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ）等のピニトール資化能のない酵母を用いることも可能である。
【００２６】
一方、乳酸菌としてはラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属等のピニトール資化能のない乳酸菌が好適に使用できる。
【００２７】
一例としてはラクトバチルス ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルス ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｂｉｓ）、ラクトバチルス ケフィア（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｋｅｆｉｒ）、ラクトバチルス デルブルッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス アミロフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス アニマリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｉｍａｌｉｓ）、ラクトバチルス ガッセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ロイコノストック メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ロイコノストック ラクティス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｌａｃｔｉｓ）、ロイコノストック オエノス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｏｅｎｏｓ）、ロイコノストック パラメッセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｐａｒａｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ロイコノストック デキストラニカム（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｄｅｘｔｒａｎｉｃｕｍ）、ペディオコッカス ペントーサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ペディオコッカス アシディラクチシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス パービュラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐａｒｖｕｌｕｓ）、ペディオコッカス イノピナツス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｏｐｉｎａｔｕｓ）、ペディオコッカス ダムノーサス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｄａｍｎｏｓｕｓ）、ペディオコッカス デキストリニカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｄｅｘｔｒｉｎｉｃｕｓ）、ペディオコッカス ハロフィルス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ペディオコッカスウリナエキー（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｕｒｉｎａｅｅｑｕｉ）、ラクトバチルス ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス ヘルベチカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトコッカス サーモフィルス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトコッカス ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトコッカス クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトコッカス デアセチラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｅａｃｅｔｉｌａｃｔｉｓ）、ロイコノストック クレモリス（Ｌａｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトバチルス カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、ラクトバチルス アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルス ガリナルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ）、ラクトバチルス ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、エンテロコッカス フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ビフィドバクテリウム ��フィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム ブレイブ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ペディオコッカス ハロフィルス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）などを使用することができる。
【００２８】
上記の実質的にピニトール資化能のない微生物は、ピニトール含有組成物中の組成、すなわち混在する単糖の種類やその割合によって、単独または数種類の微生物を組合わせて作用させることも可能である。また、市販のパン酵母、ビール酵母、乳酸菌製剤を使用することも可能である。
【００２９】
晶析による精製は、従来公知の方法を用いることができ、例えば、濃縮した後に冷却して結晶を析出させる方法や、有機溶媒を加えて結晶を析出させる方法などが挙げられる。中でもピニトールは水への溶解度が非常に高いことから、固形分濃度５０〜９０質量％、好ましくは６０〜９０質量％、さらに好ましくは６５〜８５質量％まで濃縮した水溶液に、有機溶媒を水溶液に対して１０００分の１〜２等量、好ましくは１００分の１〜１等量、さらに好ましくは１０分の１〜２分の１等量導入して、結晶を析出させることができる。かかる有機溶媒のうち好ましい例としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、アセトン、ヘキサン、酢酸エチル、ジメチルスルホキシド等が挙げられ、さらに好ましい例としてはエタノールである。析出した結晶は従来公知の方法で分離すれば良く、例えば遠心ろ過機、ブフナー漏斗、フィルタープレス等を使用することができる。
【００３０】
限外ろ過による精製は、高分子量の成分を除去することができるものであり、目的とするピニトール純度になるように分画分子量を選定することができる。限外ろ過膜の分画分子量は好ましくは１０００〜２０００００であり、さらに好ましくは３０００〜１００００である。この範囲より低ければ精製に時間がかかる問題があり、この範囲より高ければピニトール純度が向上しない問題がある。
【００３１】
活性炭処理による精製は、従来公知の方法を使用でき、活性炭をピニトールを含む抽出液の中に投入して攪拌するバッチ法、活性炭をカラムに充填してその中に抽出液を通液するカラム法のいずれの方法でもよい。
【００３２】
例えば、バッチ法で活性炭処理を行う場合は、活性炭は表面積が大きいものの方が効率が良く、例えば二村化学工業（株）製の太閤ＳＡ１０００、太閤ＫＳ、太閤Ａ、武田薬品（株）製のカルボラフィン、強力白鷺、精製白鷺、特製白鷺、白鷺Ａ、白鷺Ｍ、三菱化学（株）製のダイヤソーブＦ、三井製薬工業（株）製の三井ＰＭ−ＫＩ、三井ＰＭ−ＫＯ、三井ＰＭ−ＳＸ、三井ＰＭ−ＦＺ、三井ＰＭ−ＳＡＹ、クラレケミカル（株）製のクラレコールＰＫ等が挙げられ、これらの中で太閤ＳＡ１０００、カルボラフィン、精製白鷺、三井ＰＭ−ＳＸ、三井ＰＭ−ＦＺが好ましく、太閤ＳＡ１０００、カルボラフィンがより好ましい。活性炭処理後には活性炭を分離するが、この分離にはフィルタープレス、ブフナー漏斗を用いたろ過等従来公知のろ過技術を用いることができる。
【００３３】
また、カラム法で活性炭処理を行う場合は、通液時に圧力がかかる為ある程度粒度が大きい活性炭を使用することが好ましく、例えば、二村化学工業(株)製の太閤ＦＣ、太閤ＦＣＳ、武田薬品(株)製の粒状白鷺ＬＨｃ、粒状白鷺ＫＬ、三菱化学(株)製のダイアホープＳ６０、ダイアホープＳ７０、ダイアソーブＷ、三井製薬工業(株)製の三井ＭＭ−ＣＢＳ、三井ＢＭ−ＷＡ、クラレケミカル(株)製のクラレコールＧＬＣ等が挙げられ、これらの中で太閤ＦＣＳ、粒状白鷺ＫＬ、三井ＢＭ−ＷＡ、クラレコールＧＬＣが好ましく、粒状白鷺ＫＬ、三井ＢＭ−ＷＡがより好ましい。
【００３４】
ここで用いられる活性炭の量は、本発明の効果を損なわない限り限定されないが、バッチ法で活性炭処理を行う場合には、抽出液の固形分に対して、１〜５０質量％であり、５〜３０質量％が好ましく、１０〜２５質量％がさらに好ましい。この範囲より活性炭量が少なければ十分に脱色効果が得られない可能性があり、この範囲より活性炭量が多くてももはや脱色効果が向上するものではなく、攪拌が難しくなり、ろ過時にロスが出る可能性がある。
【００３５】
さらに、カラム法で活性炭処理を行う場合には、抽出液の固形分に対して２０〜５００質量％であり、５０％〜４００質量％が好ましく、１００〜３００質量％がさらに好ましい。この範囲より活性炭量が少なければ十分に脱色効果が得られない可能性があり、この範囲より活性炭量が多くてももはや脱色効果が向上するものではなく、水押し量が多くなったりロスが出る可能性がある。
【００３６】
活性炭処理の時間は、本発明の効果を損なわない限り限定されないが、バッチ法では攪拌しながら１０分〜２４時間であり、２０分〜５時間が好ましく、３０分〜２時間がさらに好ましい。活性炭処理の時間がこの範囲より短いと十分に脱色されない可能性が有り、この範囲より長くてももはや脱色効果が向上するものではない。カラム法での抽出液の流速はＳＶ＝０．１〜１０であり、ＳＶ＝０．３〜５が好ましく、ＳＶ＝１〜３がさらに好ましい。抽出液の流速がこの範囲より大きければ十分に脱色できない可能性が有り、この範囲より小さくとももはや脱色効率が向上するものではない。
【００３７】
イオン交換樹脂により精製は、従来公知の方法を用いることができるが、好ましくはイオン交換樹脂塔を用いた精製である。イオン交換樹脂としては陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂いずれも使用することができる。例えば、酸でＨ型に変換した陽イオン交換樹脂、アルカリでＯＨ型に変換した陰イオン交換樹脂に抽出液を順次通過させて脱塩処理し、目的とする純度にまで精製することができる。
【００３８】
イオン交換樹脂の好ましい例としては、三菱化学「ダイヤイオン」シリーズのＳＫ１Ｂ、ＳＫ１０２、ＳＫ１０４、ＳＫ１０６、ＳＫ１１０、ＳＫ１１２、ＳＫ１１６、ＰＫ２０８、ＰＫ２１２、ＰＫ２１６、ＰＫ２２０、ＰＫ２２８、ＰＡ３０６、ＰＡ３０８、ＰＡ３１２、ＰＡ３１６、ＰＡ３１８、ＰＡ４０６、ＰＡ４０８、ＰＡ４１２、ＰＡ４１６、ＰＡ４１８、ＷＡ１０、ＷＡ１１、ＷＡ２０、ＷＡ３０、室町ケミカル「ダウエックス」シリーズの５０Ｗ×２、５０Ｗ×４、５０Ｗ×８、５０Ｗ×１２、マラソンＣ、マラソンＨＳＣ、モスフィアー６５０Ｃ、ＨＣＲ−Ｗ２、ＨＧＲ−Ｗ２、８８、ＭＡＣ−３、ＨＣＲ−Ｓ、ムロマックＣ１０２Ｎａ、オルガノ「アンバーライト」シリーズのＩＲ１２０Ｂ、ＩＲ１２、２００ＣＴなどが挙げられ、これらの中でも特にダイヤイオンＳＫ１Ｂ、ＰＫ２１６、ＰＡ４１２、ＷＡ３０、ダウエックス５０Ｗ×８、ムロマックＣ１０２Ｎａ、アンバーライトＩＲ１２０Ｂが好ましい。
【００３９】
本発明において好適に使用できるイオン交換樹脂の使用量は、ピニトール含有組成物の固形分量に対して２倍量〜２０倍量、好ましくは３倍量〜１５倍量、さらに好ましくは５倍量〜１０倍量である。この範囲より少なければ充分な脱塩処理が行われない問題があり、この範囲より多くてももはや脱塩効率が向上するものではない。
【００４０】
上記に示す方法で抽出、精製したピニトールを含有する組成物には、ピニトールが０．１〜１００質量％含まれることとなり、使用目的に応じた最適な含有量の組成物を提供することができ、例えば０．２〜５０質量％に調製することができる。ピニトールの含有量がこの範囲より低い場合は、大量の本発明の枝豆莢抽出物を摂取しなければ機能が得られない問題がある。
【００４１】
本発明において、ピニトールは、以下の方法により求められた値である。すなわち、高速液体クロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ法）により以下の条件で測定し、示差屈折検出器を用いて検出した。
ＨＰＬＣ：島津製作所（株）製Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ  ＬＧＥ
カラム：ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ８０
移動相：含水８０％アセトニトリル
流速：１．０ｍｌ／分
温度：６０℃
【００４２】
本発明の製造方法により得られたピニトール又はピニトール含有組成物の形態としては、本発明の効果を損なわない限り限定されないが、例えば、水溶液、クリーム、懸濁液、ゲル、粉末、錠剤、カプセルなどが挙げられる。これらの中でも水溶液、粉末が特に好ましい。水溶液は、固形分を０．０１〜７０質量％含むことが好ましく、枝豆莢から製造されたそのものでも良いし、希釈、濃縮されていても良い。粉末は枝豆莢から製造された液状の組成物をそのまま凍結乾燥、噴霧乾燥、真空乾燥などの方法を用いて粉末化されていても良いし、デキストリン、乳糖などの賦型剤を添加して粉末化されていても良い。また、これらの水溶液、粉末から乳化、打錠、ゲル化などの操作により、クリーム、錠剤、ゲルなどを製造しても良い。また、本発明の製造方法により得られたピニトール又はピニトール含有組成物は、砂糖、果糖、ブドウ糖、オリゴ糖、蜂蜜等の糖類、食塩、にがりなどの塩類、だし、味の素、アミノ酸などで調味されていても良い。
【００４３】
次に、本発明の飲食品について説明する。
【００４４】
本発明の飲食品は、上記したピニトール又はピニトール含有組成物それ自体あるいは既存の飲料又は食品に含ませることにより得ることができる。また、味質の改善等のために、本発明の効果を損なわない範囲で糖類、糖アルコール類、塩類、油脂類、アミノ酸類、有機酸類、果汁、野菜汁、香料、アルコール類、グリセリン等を添加することができる。
【００４５】
本発明の飲食品のベースとなる飲料又は食品としては、特に限定されず、例えば、飲料は清涼飲料水、アルコール類、果汁飲料、野菜汁飲料、乳飲料、炭酸飲料、コーヒー飲料、アルコール類等であることが好ましく、また食品はカプセル、グミ、キャンデー、錠剤、顆粒、ドリンク等の形状をしたサプリメントであってもよいし、通常の食事として摂る食品であってもよい。
【００４６】
本発明の飲食品に含ませるピニトール又はピニトール含有組成物としては、特に限定されないが、１日当たりに摂取する量がピニトールとして１０〜１２００ｍｇになるように配合することが好ましいこの範囲より少ない場合は効果が望めない可能性があり、この範囲より多い場合はもはや効果の増大は見込めない可能性がある。本発明の飲食品に含ませるピニトール又はピニトール含有組成物の形態は特に限定されず、飲料、グミ、キャンデーなどにおいては液体状の物を、錠剤、顆粒、カプセルなどにおいては粉末状の物を使用するなどすればよい。
【実施例】
【００４７】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本実施例中のピニトールの含有量は前記した方法で測定した。
【００４８】
実施例１
枝豆莢凍結乾燥粉末１０ｇに含水５０％エタノール１００ｍｌを導入し、ミキサーで破砕した。マグネティックスターラーを用い室温下において撹拌しながら、２４時間抽出を行い、得られた処理液は濾過助剤に珪藻土を用い、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ東洋製Ｎｏ．５Ｃ）を用いて吸引濾過を行った。得られた抽出液は７４ｇで黄緑色であった。抽出液７４ｇを凍結乾燥し、ミルで粉砕して粉末状のピニトール含有組成物を１．９ｇ得た。このピニトール含有組成物は薄緑色で、１ｇ中に３７３ｍｇのピニトールを含有していた。ピニトール含有組成物のピニトール純度、原料固形物中のピニトール含有量は表１に示したとおりであった。
【００４９】
実施例２
枝豆莢凍結乾燥物１０ｇに水１００ｍｌを導入し、ミキサーで破砕した。マグネティックスターラーを用い室温下において撹拌しながら、２４時間抽出を行い、得られた処理液は濾過助剤に珪藻土を用い、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ東洋製Ｎｏ．５Ｃ）を用いて吸引濾過を行った。得られた抽出液は９０ｇで黄緑色であった。抽出液９０ｇを凍結乾燥し、ミルで粉砕して粉末状のピニトール含有組成物を１．９ｇ得た。このピニトール含有組成物は薄黄緑色で、１ｇ中に３９１ｍｇのピニトールを含有していた。ピニトール含有組成物のピニトール純度、原料固形物中のピニトール含有量は表１に示したとおりであった。
【００５０】
実施例３
実施例２で得られた抽出液を陽イオン交換カラム（カラムサイズ内径１．４ｃｍ×長さ２０ｃｍ、ＳＶ２．０）；ＰＫ２１６（三菱化学製、Ｈ型）、陰イオン交換カラム（カラムサイズ内径１．４ｃｍ×長さ２０ｃｍ、ＳＶ２．０）；ＷＡ３０（同、ＯＨ型）に通し脱塩処理液１０１ｇを得た。脱塩処理液１０１ｇを凍結乾燥し、ミルで粉砕して粉末状のピニトール含有組成物を０．９５ｇ得た。このピニトール含有組成物は黄白色で、０．９５ｇ中に７０５ｍｇのピニトールを含有していた。ピニトール含有組成物のピニトール純度、原料固形物中のピニトール含有量は表１に示したとおりであった。表１に示すように大きく純度が向上した。
【００５１】
比較例１
イナゴマメ乾燥粉末１０ｇに含水５０％エタノール１００ｍｌを導入し、マグネティックスターラーを用い室温下において撹拌しながら、２４時間抽出を行い、得られた処理液は濾過助剤に珪藻土を用い、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ東洋製Ｎｏ．５Ｃ）を用いて吸引濾過を行った。得られた抽出液は６６ｇで焦げ茶色であった。抽出液６６ｇを凍結乾燥し、ミルで粉砕して粉末状のピニトール含有組成物を５．７ｇ得た。このピニトール含有組成物は薄茶色で、１ｇ中に１４１ｍｇのピニトールを含有していた。ピニトール含有組成物のピニトール純度、原料固形物中のピニトール含有量は表１に示したとおりであった。
表１に示すようにピニトール含有量は高いが、純度は非常に悪かった。
【００５２】
比較例２
イナゴマメ乾燥粉末１０ｇに水１００ｍｌを導入し、マグネティックスターラーを用い室温下において撹拌しながら、２４時間抽出を行い、得られた処理液は濾過助剤に珪藻土を用い、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ東洋製Ｎｏ．５Ｃ）を用いて吸引濾過を行った。得られた抽出液は８８ｇで茶色であった。抽出液８８ｇを凍結乾燥し、ミルで粉砕して粉末状のピニトール含有組成物を５．８ｇ得た。このピニトール含有組成物は薄茶色で、１ｇ中に１４１ｍｇのピニトールを含有していた。ピニトール含有組成物のピニトール純度、原料固形物中のピニトール含有量は表１に示したとおりであった。
【００５３】
【表１】
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【００５４】
実施例５
実施例２で得られた粉末状のピニトール組成物１ｇをサントリー(株)製ウーロン茶２００ｍｌに混合した。ウーロン茶の味、色、臭いはほとんど変化せず、ピニトール３９１ｍｇを摂取できる健康ウーロン茶が得られた。