(57)【要約】【課題】安全性を兼ね備えつつ、より効果的に脂肪蓄積を抑制する組成物の提供。【解決手段】フォルスコリン及びリンゴ由来ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とする脂肪蓄積抑制用組成物、フォルスコリン及びホップ由来ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とする脂肪蓄積抑制用組成物、及び、前記リンゴ由来ポリフェノールがプロシアニジンであることを特徴とする前記記載の脂肪蓄積抑制用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
フォルスコリン及びリンゴ由来ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とする脂肪蓄積抑制用組成物。
【請求項２】
フォルスコリン及びホップ由来ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とする脂肪蓄積抑制用組成物。
【請求項３】
前記リンゴ由来ポリフェノールがプロシアニジンであることを特徴とする請求項１記載の脂肪蓄積抑制用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フォルスコリンと、リンゴ由来ポリフェノール又はホップ由来ポリフェノールとを有効成分とする脂肪蓄積抑制用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本を含めた経済先進国では、急速な高齢化に伴い疾病構造が変化し、疾病全体に占める虚血性心疾患、脳血管疾患、糖尿病などの生活習慣病の割合が増加している。日本においては、現在、死亡原因に占める生活習慣病の割合は約６割である。生活習慣病の中でも、特に、心疾患、脳血管疾患の発症に対して重要な危険因子である糖尿病、高血圧症、脂質異常症などの有病者やその予備群が増加している。また、これらの生活習慣病の発症前段階であるメタボリックシンドローム（内臓脂肪の蓄積が原因となる肥満に加えて、高血糖、高血圧が重複した状態）の人やその予備群と考えられる人の割合も増加傾向にあり、約９２０万人、その予備軍と考えられる人も含めると約１，０２０万人が、メタボリックシンドロームであると言われている。メタボリックシンドロームの人の割合は、男女とも４０歳以上で高く、４０歳〜７４歳の男性では２人に１人、女性では５人に１人という割合に達しており、健康を維持する上で社会的問題となっている（平成１６年国民健康・栄養調査）。
【０００３】
メタボリックシンドロームの人では、糖尿病、高血圧症、脂質異常症などを発症し、さらには脳血管疾患などを発症するリスクが高くなることから、その該当者及びその予備群において、いかにメタボリックシンドロームを予防、改善するかが重要な課題となっている。メタボリックシンドロームを予防、改善する手段としては、運動療法、食生活の改善に加えて、健康食品、特定保健用食品など機能性食品の摂取が挙げられる。メタボリックシンドロームの予防・改善効果を有する機能性食品として、例えば、緑茶由来カテキン、ウーロン茶由来重合ポリフェノール、コーヒー豆由来マンノオリゴ糖などを有効成分とする特定保健用食品が開発されている（例えば、非特許文献１〜３参照。）。
【０００４】
女性では男性に比べてメタボリックシンドロームの割合は少ないが、一方で皮下脂肪型肥満の割合が高い。また、女性の場合は、美容上の観点から、上腕、太腿、脹脛、顔などの皮下脂肪を低減し、スリム化する要望が強い。皮下脂肪を低減する手段としては、運動、食生活の改善、マッサージ等の物理的刺激などに加えて、化粧品などの皮膚外用剤の適用が挙げられる。皮下脂肪低減効果を有する皮膚外用剤として、例えば、ラズベリーケトン類、グレープフルーツオイルなどを有効成分とする皮膚外用剤が開発されている（例えば、特許文献１及び２参照。）。
【０００５】
フォルスコリン（Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ；ＣＡＳ  Ｎｏ．６４６５７−１８−７）は、シソ科のコレウス・フォルスコリィ（Ｃｏｌｅｕｓ  ｆｏｒｓｋｏｈｌｉｉ）の根から分離された主要な細胞浸透性ジテルペンである。低用量では、心筋収縮力を高める変力薬として作用し、高用量では平滑筋弛緩作用を示すため、血圧降下剤及び血管拡張剤として作用することが知られている。現在のところ、作用量では目立った副作用は認められていない。フォルスコリンの薬理学的作用はアデニル酸シクラーゼ活性化作用によるものであり（ＥＣ５０＝４μＭ）、該作用により細胞内のｃＡＭＰレベルが上昇し、心筋収縮、血圧降下、血管拡張などが促進される。フォルスコリンは脂肪細胞における脂肪蓄積抑制作用を有することが知られており、経口投与により体脂肪を低減することや皮膚外用剤として使用することにより、皮下脂肪を低減することが知られている（例えば、特許文献３及び４参照。）。フォルスコリンの脂肪蓄積抑制作用もアデニル酸シクラーゼ活性化作用に起因しており、細胞内のｃＡＭＰレベルを上昇させることにより、脂肪分解酵素であるＵｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎを活性化すること、脂肪細胞から分泌されるサイトカインであるａｄｉｐｓｉｎの分泌を抑制すること、ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ及びｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅの発現を抑制することが知られている（例えば、非特許文献４及び５参照。）。
【０００６】
植物等から抽出されたポリフェノールには、クロロゲン酸等のカフェ酸誘導体（エステル）やｐ−クマル酸誘導体、フラバン−３−オール類（カテキン類）、ケルセチン配糖体等のフラボノール類、フロレチン配糖体等のカルコン類、プロシアニジン類等の様々な種類のポリフェノール類が含まれている。リンゴの果実から抽出、分離されたリンゴ由来ポリフェノールも、多くのポリフェノール類から構成されているが、プロシアニジンＢ−２等のプロシアニジンを主要成分とする組成であること、抗酸化、血圧上昇抑制、変異原性抑制、アレルギー性抑制、抗う蝕、消臭、生体内脂質代謝制御、内臓脂肪蓄積抑制、インシュリン上昇抑制等の種々の生理機能を有することが明らかになっている（例えば、特許文献５〜７参照。）。
【０００７】
一方、ホップ由来ポリフェノールは、ホップ苞から抽出、分離されたポリフェノールであり、脂質の加水分解酵素であるリパーゼ活性を阻害することや、血中の中性脂肪を低減することが明らかになっている（例えば、特許文献８及び９参照。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０００−１６９３２５号公報
【０００９】
【特許文献２】特開２００５−１９４２５２号公報
【００１０】
【特許文献３】米国特許第５，８０４，５９６号明細書
【００１１】
【特許文献４】特開平１０−１８２４７３号公報
【００１２】
【特許文献５】特開平７−２８５８７６号公報
【００１３】
【特許文献６】特開平１０−３３０２７８号公報
【００１４】
【特許文献７】国際公開第０５／０８２３９０号パンフレット
【００１５】
【特許文献８】特開２００１−３２１１６６号公報
【００１６】
【特許文献９】特開２００６−１５１９４５号公報
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Ｔ．Ｈａｓｅ，ｅｔ．ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ＯｌｅｏＳｃｉｅｎｃｅ、２００１年、第５０巻第７号、第５９９〜６０５ページ。
【００１８】
【非特許文献２】原祐司等、薬理と治療、２００４年、第３２巻第６号、第３３５〜３４２ページ。
【００１９】
【非特許文献３】浅野一朗等、医学と薬学、２００６年、第５５巻第１号、第９３〜１０３ページ。
【００２０】
【非特許文献４】Ｐ．Ｊ．Ｓｃａｒｐａｃｅ，ｅｔ．ａｌ．、Ｐｆｌｕｇｅｒｓ  Ａｒｃｈ−Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、１９９６年、第４３１巻第３号、第３８８〜３９４ページ。
【００２１】
【非特許文献５】Ｊ．Ａｎｔｒａｓ,ｅｔ．ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１９９１年、第８２巻第２〜３号、第１８３〜１９０ページ。
【００２２】
【非特許文献６】Ａ．Ｍ．Ｓａｌｅｅｍ，ｅｔ．ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ、２００６年、第１１０１巻第１〜２号、第３１３〜３１４ページ。
【００２３】
【非特許文献７】Ｔ．Ｓｈｏｊｉ，ｅｔ．ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ、２００６年、第１１０２巻、第２０６〜２１３ページ。
【００２４】
【非特許文献８】Ｔ．Ｓｈｏｊｉ，ｅｔ．ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００３年、第５１巻第３号、第３８０６〜３８１３ページ。
【００２５】
【非特許文献９】Ｔ．Ｓｈｏｊｉ，ｅｔ．ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００６年、第５４巻第３号、第８８４〜８９２ページ。
【００２６】
【非特許文献１０】Ｔ．Ｓｈｏｊｉ，ｅｔ．ａｌ．、Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ、２００４年、第４２巻、第９５９〜９６７ページ。
【００２７】
【非特許文献１１】Ｍ．Ｏｈｎｉｓｈｉ−ｋａｍｅｙａｍａ，ｅｔ．ａｌ．、Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、１９９７年、第１１巻、第３１〜３６ページ。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２８】
これまでに、種々の内臓脂肪蓄積抑制組成物及び皮下脂肪蓄積抑制組成物が提供されてきたが、いずれも、充分に有効な脂肪蓄積抑制効果を奏するものであって、なおかつ安全である組成物ではなかった。
本発明は、安全性を兼ね備えつつ、より効果的に脂肪蓄積を抑制する組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
本発明者等は、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、フォルスコリンと、リンゴ由来ポリフェノール又はホップ由来ポリフェノールとを併用すると、脂肪細胞における脂肪蓄積が相乗的に抑制されることを見出し、本発明を完成させた。
【００３０】
すなわち、本発明は、
（１）フォルスコリン及びリンゴ由来ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とする脂肪蓄積抑制用組成物、
（２）フォルスコリン及びホップ由来ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とする脂肪蓄積抑制用組成物、
（３）前記リンゴ由来ポリフェノールがプロシアニジンであることを特徴とする前記（１）記載の脂肪蓄積抑制用組成物、
を提供するものである。
【発明の効果】
【００３１】
本発明の脂肪蓄積抑制用組成物は、安全に摂取することが可能であり、脂肪細胞における脂肪蓄積を効果的に抑制し得るものである。したがって、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を飲食品として摂取することにより、内臓脂肪の蓄積を抑制し、メタボリックシンドロームを予防、改善し得ることが期待できる。また、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を化粧品等の皮膚外用剤として適用することにより、皮下脂肪の蓄積を抑制し、腹部周囲、上腕、太腿、脹脛、顔などのスリミング効果が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】３Ｔ３Ｌ１脂肪前駆細胞の分化誘導時において、フォルスコリン（ＦＫ）単独、各種ポリフェノール単独及び両者を併用した場合の脂肪蓄積抑制作用を示す図である。
【図２】３Ｔ３Ｌ１脂肪前駆細胞の分化誘導時において、フォルスコリン（ＦＫ）単独、リンゴ由来プロシアニジン（ＡＣＴｓ）単独及び両者を併用した場合の脂肪蓄積抑制作用を示す図である。
【図３】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びリンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の体重の変化を示す図である。
【図４】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びリンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の体重当りの腸間膜周囲の脂肪重量の割合を示す図である。
【図５】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びリンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の体重当りの精巣周囲の脂肪重量の割合を示す図である。
【図６】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びリンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の体重当りの腎臓周囲の脂肪重量の割合を示す図である。
【図７】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びリンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の血漿中のトリグリセリドの濃度を示す図である。
【図８】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びリンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の血漿中のグルコースの濃度を示す図である。
【図９】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びリンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の肝臓中の総コレステロールの濃度を示す図である。
【図１０】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びホップ由来ポリフェノール（ＨＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の体重の変化を示す図である。
【図１１】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びホップ由来ポリフェノール（ＨＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の血漿中のトリグリセリドの濃度を示す図である。
【図１２】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びホップ由来ポリフェノール（ＨＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の血漿中のグルコースの濃度を示す図である。
【図１３】マウスに、高脂肪食と一緒に、フォルスコリン（ＦＫ）及びホップ由来ポリフェノール（ＨＰ）を単独あるいは組み合わせて摂取させた場合の肝臓中の総コレステロールの濃度を示す図である。
【図１４】ＢＭＩ＜２５あるいはＢＭＩ≧２５の男性にフォルスコリン及びリンゴ由来ポリフェノールを含有する錠剤を摂取させた場合の体重の変化を示す図である。
【図１５】ＢＭＩ＜２５あるいはＢＭＩ≧２５の男性にフォルスコリン及びリンゴ由来ポリフェノールを含有する錠剤を摂取させた場合の腹囲の変化を示す図である。
【図１６】ＢＭＩ＜２５あるいはＢＭＩ≧２５の男性にフォルスコリン及びリンゴ由来ポリフェノールを含有する錠剤を摂取させた場合の体脂肪率の変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本発明において用いられるフォルスコリンは、コレウス・フォルスコリィ（Ｃｏｌｅｕｓ  ｆｏｒｓｋｏｈｌｉｉ）の根から抽出したものである。コレウス・フォルスコリィからのフォルスコリンの抽出は、公知のいずれの方法で行っても良い。例えば、非特許文献６には、コレウス・フォルスコリィの根抽出物から簡便、迅速、経済的に高純度のフォルスコリンを分離する方法が開示されている。また、市販されているコレウス・フォルスコリィの根から抽出したものをスプレードライ等により乾燥粉末とした根抽出物等が市販されており、これらの市販品を用いることもできる。
【００３４】
本発明において用いられるリンゴ由来ポリフェノールは、原料であるリンゴ果実から抽出・精製されたポリフェノール画分からなるものである。リンゴの果実等からのポリフェノール画分の抽出・精製は、通常、植物の組織等からポリフェノールを抽出・精製する場合に用いられるいずれの方法で行ってもよい。
【００３５】
本発明では、原料果実としては、成熟果実、未熟果実ともに用いることができるが、より多くのポリフェノールを含有すること、及び広範な生理機能を有する各種成分を多く含有することから、未熟果実から抽出・精製されたリンゴ由来ポリフェノールであることが特に好ましい。
【００３６】
リンゴ由来ポリフェノールは、例えば、以下の方法により得ることができる。まず、原料果実からポリフェノール類を抽出したリンゴ抽出物を得る。該リンゴ抽出物は、常法により得られる原料果実の搾汁果汁であってもよく、水や、エタノール等の有機溶媒を用いて抽出した抽出物であってもよい。有機溶媒を用いて抽出した抽出物は、蒸留法等により有機溶媒を除去した後、搾汁果汁等と同様に次の工程に用いることができる。なお、搾汁果汁や有機溶媒を除去した抽出物は、そのままでも使用することは可能であるが、遠心分離やろ過等の工程を経て、清澄な果汁若しくは抽出物としたものを使用することが好ましい。
【００３７】
リンゴ由来ポリフェノールは、このようにして得られたリンゴ抽出物から、リンゴ由来ポリフェノールを吸着し得る吸着剤に吸着させた後に、該吸着剤から溶出することにより、リンゴ由来ポリフェノール画分として分離精製することができる。該吸着剤として、例えば、イオン交換樹脂や合成吸着樹脂、シリカゲル等の吸着剤、ゲルろ過剤等が挙げられる。吸着剤への吸着や溶出は、常法により行うことができる。例えば、吸着剤を充填したカラムにリンゴ抽出物を通液し、ポリフェノール類を吸着させる。続いて該カラムに純水を通液し、カラム中の非吸着物質（糖類、有機酸類等）を除去した後、１０〜９０％、好ましくは３０〜８０％のエタノールでリンゴ由来ポリフェノールを溶出させることができる。
【００３８】
本発明において用いられるリンゴ由来ポリフェノール画分としては、リンゴから抽出・精製されたポリフェノール類を含むものであれば、含まれるポリフェノール類の種類や組成比等は特に限定されるものではない。例えば、このようにして得られるリンゴ由来ポリフェノール画分は、プロシアニジンＢ−２等のプロシアニジン類等を主要成分とし、その他にも、クロロゲン酸等のカフェ酸誘導体（エステル）やｐ−クマル酸誘導体、フラバン−３−オール類（カテキン類）、ケルセチン配糖体等のフラボノール類、フロレチン配糖体等のカルコン類等のポリフェノール類が含まれている。
【００３９】
プロシアニジンはＦｌａｖａｎ−３−ｏｌが４−８位もしくは４−６位の炭素間で繰り返し縮合した構造の化合物であり、代表的なプロシアニジンは（＋）−カテキンと（−）−エピカテキンが４−８位もしくは４−６位の炭素間で繰り返し縮合した構造をしている（例えば、非特許文献７参照。）。プロシアニジンは、Ｆｌａｖａｎ−３−ｏｌが６位又は８位のどちらに結合するかといった結合位置の違い、どのＦｌａｖａｎ−３−ｏｌが結合するのかといった結合種の違い、さらには結合した単量体の間で生じる立体配座の影響により、複雑な構造をとる。３量体以上の複雑なプロシアニジンの構造については、長らく構造決定は困難であったが、リンゴ未熟果実から順相系カラム及び逆相系カラムを組み合わせることで精製し、−４０℃の低温条件下で立体配座の影響を抑えた状態でＮＭＲ測定を行うことにより、初めてその構造が明らかにされた（例えば、非特許文献８参照。）。
【００４０】
既知の方法によりリンゴ由来のプロシアニジンを約７５重量％まで高含有化した原料（ＡＣＴｓ：Ａｐｐｌｅ  Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ  Ｔａｎｎｉｎｓ）を調製することが可能である（例えば、非特許文献７又は９参照。）。ＡＣＴｓは、プロシアニジンＢ１及びプロシアニジンＢ２などの２量体、プロシアニジンＣ１などの３量体、及び４量体以上のプロシアニジンの複合物である。
後述する実施例から明らかであるように、ＡＣＴｓにはフォルスコリンとの併用による相乗的な脂肪蓄積抑制作用が見られたが、Ｆｌａｖａｎ−３−ｏｌである（＋）−カテキン及び（−）−没食子酸エピガロカテキンにはフォルスコリンとの併用による相乗的な脂肪蓄積抑制作用が見られなかった。すなわち、本発明においては、リンゴ由来ポリフェノールとして、脂肪蓄積抑制効果をより効果的に発揮し得るため、プロシアニジンの含量を高めた原料を使用することがより好ましい。
【００４１】
本発明のリンゴ由来ポリフェノールは、原料が食品に用いられている果実であるため、安全に摂取することができる。実際に、ポリフェノール画分について、急性毒性試験、亜慢性毒性試験、変異原性試験等の各種安全性試験を行ったところ、その安全性が確認できた（例えば、非特許文献１０参照。）。
【００４２】
本発明において用いられるホップ由来ポリフェノールは、原料であるホップ苞を含むホップ毬果やホップペレットから抽出・精製されたポリフェノール画分からなるものである。ホップ原料からのポリフェノール画分の抽出方法としては、特に限定されないが、ホップ原料を、４〜９５℃、好ましくは３０〜６０℃で、０〜５０％、好ましくは１０〜４０％のエタノールと混和することにより、抽出することができる。ホップ原料と抽出溶媒の割合は、１：２０〜１００（重量比）、好ましくは１：３０〜９０（重量比）であり、２０〜６０分間、好ましくは３０〜５０分間、攪拌しながら抽出する。その後、５〜７５℃ 、好ましくは１５〜２５℃で、珪藻土（シリカ３００Ｓ、中央シリカ）ろ過によりさらに清澄化を行い、ホップ苞抽出物を得る。
【００４３】
ホップ由来ポリフェノールは、このようにして得られたホップ苞抽出物から、ホップ由来ポリフェノールを吸着し得る吸着剤に吸着させた後に、該吸着剤から溶出することにより、ホップ由来ポリフェノール画分として分離精製することができる。吸着剤への吸着や溶出は、常法により行うことができる。例えば、０〜４０℃ 、好ましくは１５〜２５℃で、吸着剤を充填したカラムにホップ苞抽出物を通液し、ポリフェノール類を吸着させる。続いて該カラムに純水を通液し、カラム中の非吸着物質（糖類、有機酸類等）を除去した後、１０〜９０％、好ましくは３０〜８０％のエタノールでホップ由来ポリフェノールを溶出させることができる。
【００４４】
該吸着剤としては、ポリフェノール様物質を吸着するものであれば特に限定されないが、例えば親水性ビニルポリマー樹脂（トヨパールＨＷ４０、東ソー社製）、スチレン−ジビニルベンゼン樹脂（セパビーズＳＰ−８２５、三菱化学社製）、ゲル型合成樹脂（ダイヤイオンＨＰ−２０、三菱化学社製）等を挙げることができる。
【００４５】
本発明において用いられるホップ由来ポリフェノール画分としては、ホップから抽出・精製されたポリフェノール類を含むものであれば、含まれるポリフェノール類の種類や組成比等は特に限定されるものではない。本発明においては、特に、ホップ苞又はホップ苞抽出物に含有されているポリフェノール類のうち、分画分子量１，０００以上の限外ろ過膜で処理した際に該限外ろ過膜を透過しないポリフェノール類の含有量が高いホップ由来ポリフェノール画分を用いることが好ましい。分画分子量１，０００以上の限外ろ過膜を透過しないポリフェノール類は、小腸内における生体への吸収を制御する点で好ましいためである。
【００４６】
このような、分画分子量１，０００以上の限外ろ過膜を透過しないポリフェノール類の含有量が高いホップ由来ポリフェノール画分は、例えば、下記の手法により調製することができる。まず、上記の抽出工程又は吸着工程で得られたホップ苞抽出物又はホップ苞由来ポリフェノールを含む処理液を、分画分子量が１，０００以上、好ましくは１０，０００〜５０，０００の限外ろ過膜で処理する。その際必要があれば、ホップ苞由来ポリフェノールを含む処理液を減圧濃縮し、エタノール濃度を下げておくこともできる。また、限外ろ過膜による処理は、抽出溶媒の有機溶媒濃度や抽出溶媒とホップ又はホップ苞の割合にもよるが、およそ上残り液の量が処理開始時の１／１０〜１／１００ 、好ましくは１／２０〜１／１００になるまで行う。その際の圧力は９．８ｋＰａ〜９８１ｋＰａ、好ましくは９８ｋＰａ〜６８６ｋＰａである。なお、分画分子量１，０００以上の限外ろ過膜を透過しないポリフェノール類の含有量が高いホップ由来ポリフェノール画分を得る方法は、上記方法に限定されるものではなく、ホップ苞抽出物を分画分子量１，０００以上の限外ろ過膜で処理した後、限外ろ過膜を透過しない処理液を、ゲル状高分子等の吸着剤を用いて吸着処理をしてもよい。
【００４７】
本発明の脂肪蓄積抑制用組成物の有効成分とするリンゴ由来ポリフェノールやホップ由来ポリフェノールは、上記手法により得られたポリフェノール画分をそのまま用いてもよく、該ポリフェノール画分を濃縮した濃縮液を用いてもよい。例えば、２５〜１００℃ 、好ましくは３５〜９０℃で減圧濃縮することにより、該ポリフェノール画分からエタノール等の溶媒を除去し、濃縮することができる。また、リンゴ由来ポリフェノールやホップ由来ポリフェノールとしては、得られたポリフェノール画分を濃縮後、得られた濃縮液をそのままあるいはデキストリン等の粉末助剤を添加し、噴霧乾燥又は凍結乾燥処理することにより、粉末状としたものを用いてもよい。さらに、粉末状のポリフェノールを、エタノール等の有機溶媒やクエン酸等の有機酸等に溶解させることにより、好ましい溶剤に溶解させたポリフェノールとしたものを用いてもよい。なお、ポリフェノールを溶解させる溶剤としては、例えば、エタノール等の有機溶媒やクエン酸などの有機酸等を用いることができる。
【００４８】
本発明の脂肪蓄積抑制用組成物は、フォルスコリンと、リンゴ由来ポリフェノール又はホップ由来ポリフェノールとを有効成分とするものである。具体的には、フォルスコリン、フォルスコリンの供給源としてのコレウス・フォルスコリィの根又はその抽出物のいずれかと、リンゴ由来ポリフェノール、リンゴ由来ポリフェノールの供給源としてのリンゴ果実又はその抽出物のいずれかと、を有効成分とするものである。また、フォルスコリン、フォルスコリンの供給源としてのコレウス・フォルスコリィの根又はその抽出物のいずれかと、ホップ由来ポリフェノール、ホップ由来ポリフェノールの供給源としてのホップ苞果実又はその抽出物のいずれかと、を有効成分とするものである。
【００４９】
本発明の脂肪蓄積抑制用組成物は、経口摂取されるものであってもよく、経皮摂取されるものであってもよい。例えば、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物は、食品、食品添加物、シップ剤やジェル剤等の皮膚外用剤、及び該皮膚外用剤の成分として用いることができる。
【００５０】
本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を食品等として用いる場合には、例えば、澱粉、乳糖、麦芽糖、植物油脂粉末、カカオ脂末、ステアリン酸等の適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペースト等に成形して健康補助食品、保健機能食品などとすることができる。また、種々の食品、例えば、ハム、ソーセージ等の食肉加工食品、かまぼこ、ちくわ等の水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品等に添加してもよく、水、果汁、牛乳、清涼飲料水等の飲料に添加して使用してもよい。
【００５１】
本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を皮膚外用剤又はその成分として用いる場合には、例えば、脂肪蓄積抑制用組成物に、小麦胚芽油、オリーブ油等の油分を添加して、皮膚外用剤を製造することができる。本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を配合した皮膚外用剤は、皮下脂肪蓄積抑制効果が期待できる外用可能なあらゆる剤形、例えば、ローション、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、軟膏、ハップ剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション等として使用することができ、医薬品、医薬部外品、化粧品のいずれであってもよい。また、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を配合した皮膚外用剤を製造する場合には、その種類、剤形等に応じた公知の成分を配合できる。例えば、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤等の成分を配合することができる。
【００５２】
本発明の脂肪蓄積抑制用組成物は、経口摂取用組成物と経皮摂取用組成物のいずれの場合であっても、さらに、コエザイムＱ１０、α−リポ酸、カルニチン、エラグ酸、ピペリン、カプサイシン、ヒドロキシクエン酸等の脂肪蓄積抑制作用を有する化合物を配合することにより、一層脂肪蓄積抑制作用が増強され、好ましい効果を得ることが期待できる。
【００５３】
本発明の脂肪蓄積抑制用組成物中のフォルスコリン含量、リンゴ由来ポリフェノール含量、及びホップ由来ポリフェノール含量は、フォルスコリンとリンゴ由来ポリフェノールの併用による脂肪蓄積抑制における相乗効果や、フォルスコリンとホップ由来ポリフェノールの併用による脂肪蓄積抑制における相乗効果が奏し得る含量であれば、特に限定されるものではなく、該脂肪蓄積抑制用組成物の摂取方法や、摂取対象者の性別、年齢、体重、健康状況等を考慮して、適宜決定することができる。
【００５４】
本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を食品として用いる場合には、例えば、フォルスコリンの摂取量が乾燥重量として成人１日当たり１０〜３０００ｍｇ、好ましくは３０〜１０００ｍｇであり、リンゴ由来ポリフェノール又はホップ由来ポリフェノールの摂取量が乾燥ポリフェノール画分の重量として成人１日当たり１０〜３０００ｍｇ、好ましくは３０〜１０００ｍｇとなるように、それぞれ含有させることができる。また、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物は、１日に１〜数回に分けて経口摂取してもよい。
【００５５】
本発明の組成物を食品として用いる場合のフォルスコリン（ＦＫ）と、リンゴ由来ポリフェノール又はホップ由来ポリフェノールとの配合比としては、１：１〜１：１００、好ましくは１：１０〜１：３３である。
【００５６】
本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を皮膚外用剤として用いる場合には、例えば、フォルスコリンを０．０１〜２０重量％、より好ましくは０．１〜５重量％、リンゴ由来ポリフェノール又はホップ由来ポリフェノールを０．０１〜２０重量％、より好ましくは０．１〜５重量％となるように、それぞれ配合させることができる。また、ヒトの皮膚への適用量は、対象者の性別、年齢、皮膚状態、貼着する部位等により異なり、特に限定はされないが、上記の量でフォルスコリン等を配合した皮膚外用剤を、所用の患部に１日１〜数回、０．００１〜０．１ｇ／ｃｍ２、好ましくは０．０１〜０．０５ｇ／ｃｍ２塗布する。
【実施例】
【００５７】
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００５８】
［調製例１  フォルスコリンの調製］  
フォルスコリン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）を生化学用試薬グレードのジメチルスルホキシド（和光純薬社製）に溶解させ、最終濃度１０ｍｇ／ｍｌのフォルスコリン溶液を調製した。
【００５９】
［調製例２  リンゴ由来ポリフェノールの調製］  
青森県産リンゴ幼果３００ｋｇを破砕、圧搾し果汁２１０ｋｇを得た。得られた果汁にペクチナーゼを３０ｐｐｍとなるよう加えて清澄化し、遠心分離後、珪藻土（シリカ３００Ｓ、中央シリカ社製）ろ過により、さらに清澄化を行い、清澄果汁を得た。清澄果汁を吸着樹脂（ダイアイオンＳＰ−８５０、三菱化学社製）を充填したカラムに通液し、ポリフェノール類を吸着させた。続いて純水を通液し、カラム中の非吸着物質（糖類、有機酸類等）を除去したのち、４０％アルコールでポリフェノール類を溶出した。得られたポリフェノール画分からアルコールを減圧濃縮し、抽出粉末（リンゴ由来ポリフェノール）約２ｋｇを調製した。抽出粉末中の成分を、逆相高速液体クロマトグラフィーを用いて分析した結果、クロロゲン酸類（約２０重量％）、フロレチレン配糖体類（約５重量％）、フラボノール類（約１５重量％）、プロシアニジン（約５０重量％）及びその他褐変物質（約１０重量％）からなることが確認できた。さらに、このプロシアニジン類は、マトリックス支援レーザーイオン化−飛行時間型質量分析計（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ、アプライドバイオシステム社製）による解析の結果、フラボノール類であるカテキンやエピカテキンから構成される２量体から１５量体までのオリゴマーやポリマーであることが確認された（例えば、非特許文献１１参照。）。
【００６０】
［調製例３  リンゴ由来プロシアニジン分画物（ＡＣＴｓ）の調製］
リンゴ由来ポリフェノールを含む画分液又は抽出粉末の水溶液を、水酸化ナトリウムを用いてｐＨ６.５から７.５の間となるよう調整したのち、吸着樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０、三菱化学社製）を充填したカラムに通液し、リンゴ由来ポリフェノールを吸着させた。続いて純水を通液し、カラム中の非吸着物質（フェノールカルボン酸類やフロレチレン配糖体類）を除去したのち、３０％アルコールでポリフェノール類を溶出した。得られた画分がリンゴ由来プロシアニジン分画物（ＡＣＴｓ：Ａｐｐｌｅ  Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ  Ｔａｎｎｉｎｓ）であり、プロシアニジン含量は約７５重量％まで高められている（例えば、非特許文献７又は９参照。）。
【００６１】
［調製例４  ホップ由来ポリフェノールの調製］
ホップ苞２０ｇを６００ｍＬの５０％エタノール水溶液中で、攪拌しながら、８０℃、４０分間抽出した。ろ過後、容積が３００ｍＬになるまで減圧濃縮し、その濃縮液をスチレン−ジビニルベンゼン樹脂（セパビーズＳＰ−８２５，三菱化学社製）８０ｍＬを充填したカラムに１時間かけて通液し（ＳＶ＝３．７５）、ついで４００ｍＬの水で洗浄した。さらに同カラムに８０％エタノール水溶液４００ｍＬを通液し、同溶出液を回収し、凍結乾燥して無臭、淡黄色の粉末１．６ｇを得た。ホップ苞からの収率は８％であった。このホップ苞からの乾燥粉末０．８ｇを、５００ｍＬの１０％エタノール水溶液に溶解し、分画分子量が１０，０００の限外ろ過膜（ＹＭ１０，アミコン社製）により、９８ｋＰａ、室温下、２０ｍＬになるまで濃縮した。得られた上残り液を凍結乾燥して無臭、淡黄色の粉末（ホップ由来ポリフェノール）０．４ｇを得た。ホップ由来ポリフェノールの測定はポアサイズ０．８μｍのフィルターでろ過した液体のホップ苞抽出物を、高速液体クロマトグラフ（型式Ｌ７０００，日立社製）を用い、逆相液体クロマトグラフ用パックドカラムＯＤＳＣ１８（内径４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、ＧＬサイエンス社製）に装着し、カラム温度３５℃でグラジエント法により分析した。移動相Ａ液はリン酸カリウム１０ｍＭ／Ｌ含有の１０％メタノール水溶液、Ｂ液はリン酸カリウムを１０ｍＭ／Ｌ含有の１０％メタノール水溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。
【００６２】
［調製例５  クロロゲン酸の調製］
クロロゲン酸（和光純薬社製）を生化学用試薬グレードのジメチルスルホキシド（和光純薬）により溶解し、最終濃度１０ｍｇ／ｍｌのクロロゲン酸溶液を調製した。
【００６３】
［調製例６  カテキンの調製］
（＋）−カテキン（栗田工業社製）を生化学用試薬グレードのジメチルスルホキシド（和光純薬）により溶解し、最終濃度１０ｍｇ／ｍｌのカテキン溶液を調製した。
【００６４】
［調製例７  没食子酸エピガロカテキンの調製］
（−）−没食子酸エピガロカテキン（和光純薬社製）を生化学用試薬グレードのジメチルスルホキシド（和光純薬社製）により溶解し、最終濃度１０ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）溶液を調製した。
【００６５】
［調製例８  カカオ由来ポリフェノールの調製］
市販のピュアココアパウダー（森永製菓社製）２０ｇを６００ｍＬの５０％エタノール水溶液中で、攪拌しながら、８０℃、４０分間抽出した。ろ過後、容積が３００ｍＬになるまで減圧濃縮し、その濃縮液をスチレン−ジビニルベンゼン樹脂（セパビーズＳＰ−８２５，三菱化学社製）８０ｍＬを充填したカラムに１時間かけて通液し（ＳＶ＝３．７５）、ついで４００ｍＬの水で洗浄した。さらに同カラムに８０％エタノール水溶液４００ｍＬを通液し、同溶出液を回収し、凍結乾燥して乾燥粉末２．３ｇを得た。この乾燥粉末を生化学用試薬グレードのジメチルスルホキシド（和光純薬社製）により溶解し、最終濃度１０ｍｇ／ｍｌのカカオ由来ポリフェノール溶液を調製した。
【００６６】
［調製例９  松樹皮由来ポリフェノールの調製］
市販の松樹皮２０ｇを細切した後、６００ｍＬの５０％エタノール水溶液中で、攪拌しながら、８０℃、４０分間抽出した。ろ過後、容積が３００ｍＬになるまで減圧濃縮し、その濃縮液をスチレン−ジビニルベンゼン樹脂（セパビーズＳＰ−８２５，三菱化学社製）８０ｍＬを充填したカラムに１時間かけて通液し（ＳＶ＝３．７５）、ついで４００ｍＬの水で洗浄した。さらに同カラムに８０％エタノール水溶液４００ｍＬを通液し、同溶出液を回収し、凍結乾燥して乾燥粉末１．７ｇを得た。この乾燥粉末を生化学用試薬グレードのジメチルスルホキシド（和光純薬社製）により溶解し、最終濃度１０ｍｇ／ｍｌの松樹皮由来ポリフェノール溶液を調製した。
【００６７】
［調製例１０  カシス由来ポリフェノールの調製］
市販のカシス果実２０ｇを細切した後、６００ｍＬの５０％エタノール水溶液中で、攪拌しながら、８０℃、４０分間抽出した。ろ過後、容積が３００ｍＬになるまで減圧濃縮し、その濃縮液をスチレン−ジビニルベンゼン樹脂（セパビーズＳＰ−８２５，三菱化学社製）８０ｍＬを充填したカラムに１時間かけて通液し（ＳＶ＝３．７５）、ついで４００ｍＬの水で洗浄した。さらに同カラムに８０％エタノール水溶液４００ｍＬを通液し、同溶出液を回収し、凍結乾燥して乾燥粉末２．１ｇを得た。この乾燥粉末を生化学用試薬グレードのジメチルスルホキシド（和光純薬社製）により溶解し、最終濃度１０ｍｇ／ｍｌのカシス由来ポリフェノール溶液を調製した。
【００６８】
［調製例１１  オリーブ由来ポリフェノールの調製］
市販のオリーブ果実２０ｇを細切した後、６００ｍＬの５０％エタノール水溶液中で、攪拌しながら、８０℃、４０分間抽出した。ろ過後、容積が３００ｍＬになるまで減圧濃縮し、その濃縮液をスチレン−ジビニルベンゼン樹脂（セパビーズＳＰ−８２５，三菱化学社製）８０ｍＬを充填したカラムに１時間かけて通液し（ＳＶ＝３．７５）、ついで４００ｍＬの水で洗浄した。さらに同カラムに８０％エタノール水溶液４００ｍＬを通液し、同溶出液を回収し、凍結乾燥して乾燥粉末１．９ｇを得た。この乾燥粉末を生化学用試薬グレードのジメチルスルホキシド（和光純薬社製）により溶解し、最終濃度１０ｍｇ／ｍｌのオリーブ由来ポリフェノール溶液を調製した。
【００６９】
［各種抽出物中の総ポリフェノール含量の測定］
Ｆｏｌｉｎ−Ｄｅｎｉｓ法により、上記調製例１、２、４〜１１で調製した各種ポリフェノール抽出物中の総ポリフェノール含量を測定した。試料溶液（０．２ｍＬ）に、蒸留水（０．８ｍＬ）、水で４倍希釈したＦｏｌｉｎ試薬（関東化学社製）（１．０ｍＬ）、及び０．４Ｍ炭酸ナトリウム溶液（５．０ｍＬ）を順に加え、室温で３０分反応させた後、７６０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、１００、５０、２５、１２．５μｇ／ｍＬ濃度に調整したクロロゲン酸（和光純薬社製）を測定し、作成した検量線から、試料中の総ポリフェノール量（クロロゲン酸換算）を算出した。
【００７０】
［フォルスコリン（ＦＫ）及び各種ポリフェノールの脂肪蓄積抑制に対する併用効果］
フォルスコリン（ＦＫ）を単独で添加した場合、上記調製例１、２、４〜１１で調製した各種ポリフェノール抽出物を単独で添加した場合、及びフォルスコリンと各種ポリフェノール抽出物の両方を添加した場合の、脂肪細胞の脂肪蓄積量を測定し、フォルスコリン（ＦＫ）及び９種の各種ポリフェノールの脂肪蓄積抑制に対する併用効果を調べた。
脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１，大日本製薬社製）を１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ＤＭＥＭ培地（高グルコース）で３７℃−５％ＣＯ２インキュベーターにて培養し、増殖させた。４８−ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ（住友ベークライト社製）に３Ｔ３−Ｌ１を３×１０４  ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２で撒き、２４時間培養後、０．２５ｍＭデキサメタゾン、０．５ｍＭ  １−メチル−３−イソブチルキサンチン及び１０ｍｇ／ｍｌインスリンを含む培地に交換して分化を誘導した。分化誘導と同時に、最終濃度が１０μｇ／ｍｌとなるように各種ポリフェノールを、及び／又は最終濃度が５ｎｇ／ｍｌとなるようにフォルスコリンを、それぞれ添加して処理した。なお、各種ポリフェノールは、各抽出物中の総ポリフェノール含量を前述の方法によりクロロゲン酸換算で定量化し、その値を元に各種ポリフェノール量が１０μｇ／ｍｌになるように補正して処理した。その後、１日おきに、０．２５ｍＭデキサメタゾン、０．５ｍＭ  １−メチル−３−イソブチルキサンチン、１０ｍｇ／ｍｌインスリン、１０μｇ／ｍｌ  各種ポリフェノール及び／又は５ｎｇ／ｍｌ  フォルスコリンを含む培地に交換し、１０日間培養した。培養終了後、細胞内の脂肪蓄積量をＡｄｉｐｏＲｅｄ  ａｓｓａｙ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｌｏｎｚａ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ）を用いて評価した。
図１は、測定された脂肪蓄積量を示した図である。図中、「未分化」は分化誘導前の細胞の結果であり、残りは分化誘導後の細胞の結果である。また、「無処理」はフォルスコリンとポリフェノールのいずれも添加しなかった細胞を、「ＦＫ」はフォルスコリンを、「リンゴ」はリンゴ由来ポリフェノールを、「ホップ」はホップ由来ポリフェノールを、「クロロゲン酸」はクロロゲン酸を、「カテキン」はカテキンを、「ＥＧＣＧ」は没食子酸エピガロカテキンを、「カカオ」はカカオ由来ポリフェノールを、「松樹皮」は松樹皮由来ポリフェノールを、「カシス」はカシス由来ポリフェノールを、「オリーブ」はオリーブ由来ポリフェノールを、「ＦＫ＋ポリフェール」はフォルスコリンと各種ポリフェノールの両方を、それぞれ添加した細胞の結果を示している。この結果、リンゴ由来ポリフェノール及びホップ由来ポリフェノールでフォルスコリン（ＦＫ）との併用により、相乗的な脂肪蓄積抑制作用が見られた（図１）。一方、クロロゲン酸、カテキン、没食子酸エピガロカテキン、カカオ由来ポリフェノール、松樹皮由来ポリフェノール、カシス由来ポリフェノール、オリーブ由来ポリフェノールではフォルスコリン（ＦＫ）との併用による相乗効果は見られなかった。
【００７１】
［フォルスコリン（ＦＫ）及びリンゴ由来プロシアニジン分画物（ＡＣＴｓ）の脂肪蓄積抑制に対する併用効果］
調製例３のリンゴ由来プロシアニジン分画物（ＡＣＴｓ）の、フォルスコリン（ＦＫ）と併用した場合の脂肪蓄積抑制効果を調べた。
３Ｔ３−Ｌ１を前述と同様の方法で、分化誘導した。分化誘導と同時に、最終濃度が１０μｇ／ｍｌとなるようにリンゴ由来プロシアニジン分画物（ＡＣＴｓ）を、及び／又は最終濃度が３０ｎｇ／ｍｌとなるようにフォルスコリン（ＦＫ）を、それぞれ添加して処理した。その後、１日おきに、０．２５ｍＭデキサメタゾン、０．５ｍＭ  １−メチル−３−イソブチルキサンチン、１０ｍｇ／ｍｌインスリン、１０μｇ／ｍｌ  リンゴ由来プロシアニジン分画物（ＡＣＴｓ）及び／又は３０ｎｇ／ｍｌ  フォルスコリンを含む培地に交換し、１０日間培養した。培養終了後、細胞内の脂肪蓄積量をＡｄｉｐｏＲｅｄ  ａｓｓａｙ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｌｏｎｚａ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ）を用いて評価した。
図２は、測定された脂肪蓄積量を示した図である。図中、「未分化」、「分化誘導」、「無処理」、「ＦＫ」は図１と同様である。また、図中、「ＡＣＴｓ」はリンゴ由来プロシアニジン分画物（ＡＣＴｓ）を添加した細胞の結果であり、「ＦＫ＋ＡＣＴｓ」はフォルスコリンとリンゴ由来プロシアニジン分画物（ＡＣＴｓ）の両方を添加した細胞の結果である。この結果、フォルスコリン（ＦＫ）単独や、リンゴ由来プロシアニジン分画物（ＡＣＴｓ）単独で添加した細胞よりも、両者を共に添加した細胞において顕著に脂肪蓄積量が少なく、フォルスコリン（ＦＫ）とリンゴ由来プロシアニジン分画物（ＡＣＴｓ）を併用することにより相乗的な脂肪蓄積抑制作用が得られることが確認された。
【００７２】
［調製例１２  コレウス・フォルスコリィエキス（ＦＫエキス）の調製］
コレウス・フォルスコリィの根を含む根茎の天日乾燥物を約５ｍｍ角以下のサイズに破砕し、これをさらに粉砕処理して２００タイラーメッシュ通過の微粉末を調製した。この微粉末１ｋｇをステンレス製容器に入れ、エタノール２０Ｌを加えて室温で７２時間静置して抽出処理を行った後、残渣を濾過して抽出液とした。この抽出液から溶媒を減圧留去して褐色の抽出物９３ｇを得た。この抽出物をＨＰＬＣ分析したところ、２３．０重量％のフォルスコリンを含有していた。この抽出物をマルトデキストリンにより希釈して、１０．０重量％のフォルスコリンになるように調製した。
【００７３】
［調製例１３  マウス試験用フォルスコリン（ＦＫ）、リンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）、ホップ由来ポリフェノール（ＨＰ）含有高脂肪食の調製］
高脂肪食（Ｄ１２４５７、ＲＥＳＥＡＲＣＨ  ＤＩＥＴＳ，ＩＮＣ．）に、フォルスコリン（ＦＫ）、リンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）、ホップ由来ポリフェノール（ＨＰ）を、それぞれ表１に記載の濃度で均一に混合し、調製した。なお、フォルスコリンは調製例１２と、リンゴ由来ポリフェノールは調製例２と、ホップ由来ポリフェノール調製例４と、それぞれ同様にして調製したものを用いた。
【００７４】
【表１】
2009298769.tif 000002
【００７５】
［調製例１４  ヒト試験用フォルスコリン（ＦＫ）及びリンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）含有錠剤の調製］
表２記載の成分を混合し、打錠して錠剤を得た。なお、フォルスコリンは調製例１２と、リンゴ由来ポリフェノールは調製例２と、それぞれ同様にして調製したものを用いた。
【００７６】
【表２】
2009298769.tif 000003
【００７７】
［マウスでのフォルスコリン（ＦＫ）と、リンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）又はホップ由来ポリフェノール（ＨＰ）との肥満に対する併用効果］
６週齢の雄性Ｂ５７ＢＬ６Ｊマウス（日本エスエルシー社より入手）を、普通食（ＡＩＮ９３Ｇ，オリエンタル酵母工業社製）で７日間馴化飼育後、普通食摂取群及び調製例１３で調製した高脂肪食１〜１５の摂取群に分け、５８日間自由摂取させた。各摂取群を構成するマウスは８匹とした。
摂取前と、摂取後毎週１回（摂取開始後７、１４、２１、２８、３５、４２、４９、及び５６日目）と、５８日間の摂取後に、各マウスの体重及び摂餌量をそれぞれ測定した。また、摂取５８日後に、各マウスに対して、腸間膜周囲、精巣周囲、及び腎臓周囲の脂肪量、血漿中のトリグリセリド濃度、血漿中のグルコース濃度、並びに肝臓重量当りの総コレステロール量をそれぞれ測定した。具体的には、腸間膜周囲、精巣周囲、及び腎臓周囲の脂肪量は、各マウスから腸間膜周囲、精巣周囲、及び腎臓周囲の脂肪を採取し、重量を測定後、体重当りの各組織の脂肪重量の割合（ｇ％）を算出した。また、血漿中のトリグリセリド濃度及びグルコース濃度は、各マウスから採血し、血漿を分離後、市販の測定キット（トリグリセリド  Ｅ−テスト  ワコー、和光純薬社製、及びＤ−Ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ、Ｒ−ＢＩＯＰＨＡＲＭ  ＡＧ社製）を用いて測定した。肝臓重量当りの総コレステロール量は、各マウスから肝臓を採取し、重量を測定するとともに、肝臓からコレステロールを抽出し、市販の測定キット（コレステロール  Ｅ−テスト  ワコー、和光純薬社製）を用いて肝臓中の総コレステロール量を測定し、肝臓重量当りの総コレステロール量を算出した。各測定値は平均値±標準誤差で表し、検定は各測定値の変化をｐａｉｒｅｄ  ｔ  ｔｅｓｔを用いて行い、有意水準は両側５％以下とした。
【００７８】
＜フォルスコリン（ＦＫ）とリンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）の併用効果＞
図３は、マウスにＦＫ（０．００３％）及びＡＰ（０．１％又は０．３％）を各々単独又は組み合わせて混合した高脂肪食（高脂肪食２、４、５、８、又は９）を摂取させた場合の体重の変化を示した図である。図中、「高脂肪食」は高脂肪食１、「ＦＫ０．００３％」は高脂肪食２、「ＡＰ０．１％」は高脂肪食４、「ＡＰ０．３％」は高脂肪食５、「ＦＫ０．００３％＋ＡＰ０．１％」は高脂肪食８、及び「ＦＫ０．００３％＋ＡＰ０．３％」は高脂肪食９を、それぞれ摂取させた群の結果である。普通食摂取群に比べて高脂肪食無処理摂取群（高脂肪食１を摂取させた群）では、３５日摂取以降で有意に体重が増加した。また、ＦＫ又はＡＰを単独で混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食２、４、又は５を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意な体重の差は見られなかった。一方、ＦＫ０．００３％とＡＰ０．１％を組み合わせて混合した高脂肪食８摂取群（高脂肪食８を摂取させた群）では、２８日摂取以降で、高脂肪食無処理摂取群よりも有意に体重の増加が少ないことが判明した。ＦＫ０．００３％及びＡＰ０．３％を組み合わせて混合した高脂肪食９摂取群（高脂肪食９を摂取させた群）でも、４２日摂取以降で、同様に、高脂肪食無処理摂取群よりも有意に体重の増加が少ないことが判明した。
【００７９】
図４は、マウスに、普通食、高脂肪食１、２、４、５、８、又は９を５８日間摂取させた後の体重当りの腸間膜周囲の脂肪重量の割合（ｇ％）を示した図である。普通食摂取群に比べて高脂肪食無処理摂取群では、有意に体重当りの腸間膜周囲の脂肪重量の割合が増加していた。また、ＦＫ又はＡＰを単独で混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食２、４、又は５を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて、有意な腸間膜周囲の脂肪重量の割合の差は見られなかった。一方、ＦＫとＡＰとを組み合わせて混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食８又は９を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群よりも有意に体重当りの腸間膜周囲の脂肪重量の割合が小さいことが判明した。
【００８０】
図５及び図６は、図４と同様に、普通食、高脂肪食１、２、４、５、８、又は９を５８日間摂取させた後の、体重当りの精巣周囲の脂肪重量の割合（ｇ％）（図５）及び体重当りの腎臓周囲の脂肪重量の割合（ｇ％）（図６）を示した図である。この結果、腸間膜周囲の脂肪重量と同様に、精巣周囲の脂肪重量の割合と腎臓周囲の脂肪重量の割合のいずれも、ＦＫとＡＰとを組み合わせて混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食８又は９を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群よりも有意に体重当りの脂肪重量の割合が小さいことが判明した。
【００８１】
これらの結果から、ＦＫとＡＰとを併用することにより、高脂肪食を継続的に摂取した場合の体重や内臓脂肪の増加を効果的に抑制し得ることが明らかである。
【００８２】
図７は、マウスにＦＫ（０．００３％又は０．０１％）及びＡＰ（０．１％又は０．３％）を各々単独又は組み合わせて混合した高脂肪食（高脂肪食２〜５、８〜１１）を５８日間摂取させた後の血漿中のトリグリセリド濃度を示した図である。普通食摂取群に比べて高脂肪食無処理摂取群では、血漿中のトリグリセリド濃度が増加する傾向が見られた。ＦＫ又はＡＰをそれぞれ単独で混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食２〜５を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意な血漿中のトリグリセリド濃度の差は見られなかった。一方、ＦＫとＡＰとを組み合わせて混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食８〜１１を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意に血漿中のトリグリセリド濃度が低かった。以上の結果から、ＦＫとＡＰとを併用することにより、血漿中のトリグリセリド濃度の増加を抑制できることが明らかであり、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を摂取することにより、高脂血症の抑制効果が期待できる。
【００８３】
図８は、図７と同様に、普通食又は高脂肪食１〜５、８〜１１を５８日間摂取させた後の、血漿中のグルコース濃度を示した図である。普通食摂取群に比べて高脂肪食無処理摂取群では、血漿中のグルコース濃度が有意に増加した。ＦＫ又はＡＰをそれぞれ単独で混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食２〜５を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意な血漿中のグルコース濃度の差は見られなかった。一方、ＦＫとＡＰとを組み合わせて混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食８〜１１を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意に血漿中のグルコース濃度が低かった。以上の結果から、ＦＫとＡＰとを併用することにより、血漿中のグルコース濃度の増加を抑制できることが明らかであり、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を摂取することにより、糖尿病の抑制効果が期待できる。
【００８４】
図９は、マウスにＦＫ（０．０１％）及びＡＰ（０．１％又は０．３％）を各々単独又は組み合わせて混合した高脂肪食（高脂肪食３〜５、１０、又は１１）を５８日間摂取させた後の肝臓中の総コレステロール濃度を示した図である。普通食摂取群に比べて高脂肪食無処理摂取群では、肝臓中の総コレステロール濃度が増加する傾向が見られた。ＦＫ又はＡＰをそれぞれ単独で混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食３〜５を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意な肝臓中の総コレステロール濃度の差は見られなかった。一方、ＦＫとＡＰとを組み合わせて混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食１０又は１１を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意に肝臓中の総コレステロール濃度が低かった。以上の結果から、ＦＫとＡＰとを併用することにより、肝臓中の総コレステロール濃度の増加を抑制できることが明らかであり、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を摂取することにより、脂肪肝の抑制効果が期待できる。
【００８５】
＜フォルスコリン（ＦＫ）とホップ由来ポリフェノール（ＨＰ）の併用効果＞
図１０は、マウスにＦＫ（０．００３％）及びＨＰ（０．１％）を各々単独又は組み合わせて混合した高脂肪食（高脂肪食２、６、又は１２）を摂取させた場合の体重の変化を示した図である。図中、「高脂肪食」は高脂肪食１、「ＦＫ０．００３％」は高脂肪食２、「ＨＰ０．１％」は高脂肪食６、及び「ＦＫ０．００３％＋ＨＰ０．１％」は高脂肪食１２を、それぞれ摂取させた群の結果である。普通食摂取群に比べて高脂肪食無処理摂取群（高脂肪食１を摂取させた群）では、３５日摂取以降で有意に体重が増加した。また、ＦＫ又はＨＰを単独で混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食２又は６を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意な体重の差は見られなかった。一方、ＦＫとＨＰを組み合わせて混合した高脂肪食１２摂取群（高脂肪食１２を摂取させた群）では、２１日摂取以降で、高脂肪食無処理摂取群よりも有意に体重の増加が少ないことが判明した。
この結果から、ＦＫとＨＰとを併用することにより、高脂肪食を継続的に摂取した場合の体重の増加を効果的に抑制し得ることが明らかである。
【００８６】
図１１は、マウスにＦＫ（０．００３％又は０．０１％）及びＨＰ（０．１％）を各々単独又は組み合わせて混合した高脂肪食（高脂肪食２、３、６、１２、又は１４）を５８日間摂取させた後の血漿中のトリグリセリド濃度を示した図である。普通食摂取群に比べて高脂肪食無処理摂取群では、血漿中のトリグリセリド濃度が増加する傾向が見られた。ＦＫ又はＨＰをそれぞれ単独で混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食２、３、６を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意な血漿中のトリグリセリド濃度の差は見られなかった。一方、ＦＫとＨＰとを組み合わせて混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食１２又は１４を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意に血漿中のトリグリセリド濃度が低かった。以上の結果から、ＦＫとＨＰとを併用することにより、血漿中のトリグリセリド濃度の増加を抑制できることが明らかであり、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を摂取することにより、高脂血症の抑制効果が期待できる。
【００８７】
図１２は、マウスにＦＫ（０．００３％又は０．０１％）及びＨＰ（０．３％）を各々単独又は組み合わせて混合した高脂肪食（高脂肪食２、３、７、１３、又は１５）を５８日間摂取させた後の血漿中のグルコース濃度を示した図である。普通食摂取群に比べて高脂肪食無処理摂取群では、血漿中のグルコース濃度が増加する傾向が見られた。ＦＫ又はＨＰをそれぞれ単独で混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食２、３、７を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意な血漿中のグルコース濃度の差は見られなかった。一方、ＦＫとＨＰとを組み合わせて混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食１３又は１５を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意に血漿中のグルコース濃度が低かった。以上の結果から、ＦＫとＨＰとを併用することにより、血漿中のグルコース濃度の増加を抑制できることが明らかであり、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を摂取することにより、糖尿病の抑制効果が期待できる。
【００８８】
図１３は、マウスにＦＫ（０．００３％）及びＨＰ（０．１％）を各々単独又は組み合わせて混合した高脂肪食（高脂肪食２、６、又は１２）を５８日間摂取させた後の肝臓中の総コレステロール濃度を示した図である。普通食摂取群に比べて高脂肪食無処理摂取群では、肝臓中の総コレステロール濃度が増加する傾向が見られた。ＦＫ又はＨＰをそれぞれ単独で混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食２又は６を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意な肝臓中の総コレステロール濃度の差は見られなかった。一方、ＦＫとＨＰとを組み合わせて混合した高脂肪食摂取群（高脂肪食１２を摂取させた群）では、高脂肪食無処理摂取群に比べて有意に肝臓中の総コレステロール濃度が低かった。以上の結果から、ＦＫとＨＰとを併用することにより、肝臓中の総コレステロール濃度の増加を抑制できることが明らかであり、本発明の脂肪蓄積抑制用組成物を摂取することにより、脂肪肝の抑制効果が期待できる。
【００８９】
［ヒトでのフォルスコリン（ＦＫ）及びリンゴ由来ポリフェノール（ＡＰ）を含有する錠剤の肥満抑制効果］
ヘルシンキ宣言の精神に則して試験内容を口頭及び文書によるインフォームドコンセントを行い、協力の意思が得られた健常成人男性１１名を対象として試験を実施した。１１名の内、５名がＢＭＩが２５未満（ＢＭＩ＜２５）であり、６名がＢＭＩが２５以上（ＢＭＩ≧２５）であった。調製例１４で調製した錠剤を試験食品とし、これを１回２錠、１日４錠、朝夕の１日２回に分けて８週間毎日摂取させた。１日当りのＦＫ及びＡＰの摂取量は、それぞれ５０ｍｇである。摂取前と摂取後毎週１回ずつ、体重、腹囲、体脂肪率を測定した。各測定値は平均値で表し、検定は各測定値の変化をｐａｉｒｅｄ  ｔ  ｔｅｓｔを用いて行い、有意水準は両側５％以下とした。
【００９０】
図１３は、ＢＭＩ＜２５及びＢＭＩ≧２５の被験者の体重の変化を示した図である。ＢＭＩ＜２５の被験者では有意な体重の変化は見られなかったが、ＢＭＩ≧２５の被験者では、摂取前と比較して摂取８週間後では有意に体重が減少した。
図１４は、ＢＭＩ＜２５及びＢＭＩ≧２５の被験者の腹囲の変化を示した図である。ＢＭＩ＜２５の被験者では有意な腹囲の変化は見られなかったが、ＢＭＩ≧２５の被験者では、摂取前と比較して摂取８週間後では有意に腹囲が減少した。
図１５は、ＢＭＩ＜２５及びＢＭＩ≧２５の被験者の体脂肪率の変化を示した図である。ＢＭＩ＜２５の被験者では有意な体脂肪率の変化は見られなかったが、ＢＭＩ≧２５の被験者では、摂取前と比較して摂取８週間後では有意に体脂肪率が減少した。
以上の結果から、ＦＫ及びＡＰを含有する錠剤は、ＢＭＩ≧２５の被験者の肥満に対して有効であることが明らかになった。
【００９１】
［処方例１  カプセル剤］
表３記載の成分を混合し、ゼラチン及びグリセリンを混合したカプセル基剤中に充填し、軟カプセルを得た。なお、フォルスコリン、リンゴ由来ポリフェノール、及びホップ由来ポリフェノールは、上記調製例と同様にして調製したものを用いた。
【００９２】
【表３】
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【００９３】
［処方例２  錠剤］
表４記載の成分を混合し、打錠して錠剤を得た。なお、フォルスコリン、リンゴ由来ポリフェノール、及びホップ由来ポリフェノールは、上記調製例と同様にして調製したものを用いた。
【００９４】
【表４】
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【００９５】
［処方例３  ジュース］
表５記載の成分を混合してジュースを得た。なお、フォルスコリン、リンゴ由来ポリフェノール、及びホップ由来ポリフェノールは、上記調製例と同様にして調製したものを用いた。
【００９６】
【表５】
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【００９７】
［処方例４  ゼリー］
表６記載の成分のうち、（２）〜（７）を８０℃の（８）に溶解し、その後ゼリーエースを加えて攪拌した。型に１０ｇずつ流し入れた後、冷蔵庫で固めた。なお、フォルスコリン、リンゴ由来ポリフェノール、及びホップ由来ポリフェノールは、上記調製例と同様にして調製したものを用いた。
【００９８】
【表６】
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【００９９】
［処方例５  クリーム］
表７記載の成分（１）〜（１４）を８０℃に加熱溶解し油相とした。成分（１５）〜（１９）を７０℃に加熱溶解し水相とした。油相に水相を徐々に加え乳化し、攪拌しながら４０℃まで冷却し、さらに３０℃まで攪拌冷却してクリームを得た。なお、フォルスコリン、リンゴ由来ポリフェノール、及びホップ由来ポリフェノールは、上記調製例と同様にして調製したものを用いた。
【０１００】
【表７】
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【０１０１】
［処方例６  マッサージジェル］
表８記載の成分（１）〜（１０）を８０℃に加熱溶解し油相とした。成分（１１）〜（１７）を７０℃に加熱溶解し水相とした。油相に水相を徐々に加え乳化し、攪拌しながら４０℃まで冷却し、さらに３０℃まで攪拌冷却してマッサージジェルを得た。なお、フォルスコリン、リンゴ由来ポリフェノール、及びホップ由来ポリフェノールは、上記調製例と同様にして調製したものを用いた。
【０１０２】
【表８】
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【０１０３】
［処方例７  浴用剤］
表９記載の成分（１）〜（６）を８０℃に加熱溶解し油相とした。成分（７）〜（１２）を７０℃に加熱溶解し水相とした。油相に水相を徐々に加え乳化し、攪拌しながら４０℃まで冷却し、さらに３０℃まで攪拌冷却して浴用剤を得た。なお、フォルスコリン、リンゴ由来ポリフェノール、及びホップ由来ポリフェノールは、上記調製例と同様にして調製したものを用いた。
【０１０４】
【表９】
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【産業上の利用可能性】
【０１０５】
本発明の経口用組成物は、安全に摂取することが可能であり、優れた脂肪蓄積抑制効果を奏する組成物であるため、特にメタボリックシンドローム等の予防又は治療の分野で利用が可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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