(57)【要約】【課題】Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ由来の抗原に対して惹起される免疫応答を増強する代替的な改善された方法を提供すること。特に、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ由来の抗原に対して惹起される免疫応答を増強する代替的な改善された方法を提供すること。【解決手段】Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原および無毒化されたＡＤＰ−リボシル化トキシンを含有する組成物。上記ナイセリア性抗原が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原である、組成物。上記ナイセリア性抗原が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂタンパク質抗原である、組成物【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載されるような方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中に引用される全ての文書は、その全体が参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、ワクチン、特にＮｅｉｓｓｅｒｉａ属（例えば、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａ
ｅまたは好ましくはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来の細菌に対するワクチンの分野
にある。
【背景技術】
【０００３】
参考文献１〜６は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ細菌（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、およびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群（ｓｅｒｏｇｒｏｕｐ）ＡおよびＢを含む）由来の抗原、タンパク質及びオープンリーディングフレームを開示する。参考文献７〜９は、これらのタンパク質を発現する種々の方法を開示する。特許文献１（参考文献１０）は、ＣｐＧアジュバントが、アジュバントとして使用される場合、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原の免疫原性の増強を開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第００／５００７５パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ（特に、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ）由来の抗原に対
して惹起される免疫応答を増強する代替的方法および改善された方法を提供することが、
本発明の課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原および無毒化されたＡＤＰ−リボシル化トキシンを
含有する組成物を提供する。これらの組成物は、粘膜免疫のために有用であることが見出
された。
【０００７】
組成物は、好ましくは、免疫原性組成物であり、より好ましくはワクチンである。
【０００８】
（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ性抗原）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ性抗原は、好ましくは、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原であり
、より好ましくは、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ抗原である。血清群Ｂ内の好
ましい株は、２９９６、ＭＣ５８、９５Ｎ４７７、または３９４／９８である。
【０００９】
ナイセリア抗原は、好ましくは、タンパク質抗原である。より好ましくは、タンパク質
抗原は、以下からなる群から選択される：
（ａ）参考文献１に開示される４４６の偶数配列番号（すなわち、２、４、６、・・・
、８９０、８９２）の１つ以上を含むタンパク質；
（ｂ）参考文献２に開示される４５の偶数配列番号（すなわち、２、４、６、・・・、
８８、９０）の１つ以上を含むタンパク質；
（ｃ）参考文献３に開示される１６７４の偶数配列番号２〜３０２０、偶数配列番号３
０４０〜３１１４、および配列番号３１１５〜３２４１の全ての１つ以上を含むタンパク
質；
（ｄ）参考文献５に開示される２１６０のアミノ酸配列（ＮＭＢ０００１〜ＮＭＢ２１
６０）の１つ以上を含むタンパク質；
（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）に特定されるアミノ酸配列と同一の配列を
有するアミノ酸配列を含むタンパク質；
（ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）に特定されるアミノ酸配列のフラグメント
を含むタンパク質；
（ｇ）参考文献７、参考文献８または参考文献９に開示されるアミノ酸配列の１つ以上
を含むタンパク質；あるいは
（ｈ）式ＮＨ２−Ａ−［−Ｘ−Ｌ−］ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨを有するタンパク質であって、
ここで、Ｘが、アミノ酸配列であり、Ｌが、任意のリンカーアミノ酸配列であり、Ａが、
任意のＮ−末端アミノ酸配列であり、Ｂが、任意のＣ−末端アミノ酸配列であり、そして
ｎが、１より大きい整数である、タンパク質。
【００１０】
（ｅ）において言及される「配列同一性」の程度は、好ましくは、５０％よりも高い（
例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上、１００％ま
でである）。これは、変異体、ホモログ、オルソログ、対立遺伝子改変体などを含む（例
えば、参考文献１１を参照のこと）。同一性は、好ましくは、アフィンギャップ（ａｆｆ
ｉｎｅ  ｇａｐ）検索（ギャップオープンペナルティ＝１２、およびギャップ伸長ペナル
ティ＝１のパラメーターを有する）を使用するＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ  
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）において実行されるようなＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検
索アルゴリズムによって、決定される。代表的には、２つのタンパク質間の５０％以上の
同一性が、機能的等価の指標であるとみなされる。
【００１１】
（ｆ）において言及される「フラグメント」は、（ａ）（ｂ）（ｃ）（ｄ）または（ｅ
）由来でありかつ特定の配列に依存するアミノ酸配列由来の、少なくともｍ個連続したア
ミノ酸からなるべきであり、ｍは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８
、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２
００またはそれ以上）である。好ましくは、このフラグメントは、（ａ）（ｂ）（ｃ）ま
たは（ｄ）由来のアミノ酸配列由来のエピトープを含む。
【００１２】
好ましいフラグメントは、参考文献１２および参考文献１３において開示されるフラグ
メントである。他の好ましいフラグメントは、Ｃ末端切断および／またはＮ末端切断（例
えば、Δ１−２８７、Δ２−２８７など）である。他の好ましいフラグメントは、全長配
列からポリ−グリシン配列が除外されている。これは、発現を補助することが見出されて
いる（参考文献８）。ポリ−グリシン配列は、（Ｇｌｙ）ｇとして表され得、ここで、ｇ
≧３（例えば、４、５、６、７、８、９またはそれ以上）である。（ｈ）における−Ｘ−
部分が、その野生型形態においてポリ−グリシン配列を含む場合、本発明のハイブリッド
タンパク質においてこの配列を除外することが好ましい。これは、欠失（例えば、ＣＧＧ
ＧＧＳ→ＣＧＧＧＳ、ＣＧＧＳ、ＣＧＳまたはＣＳ）、置換（例えば、ＣＧＧＧＧＳ→Ｃ
ＧＸＧＧＳ、ＣＧＸＸＧＳ、ＣＧＸＧＸＳなど）、および／または挿入（例えば、ＣＧＧ
ＧＧＳ→ＣＧＧＸＧＧＳ、ＣＧＸＧＧＧＳなど）によって、（Ｇｌｙ）ｇ−を破壊または
除去することにより得る。（Ｇｌｙ）ｇの欠失、特に、（Ｇｌｙ）ｇまでおよび（Ｇｌｙ
）ｇを含む全体的なＮ末端の欠失が好ましく、この欠失は、本明細書中で「ΔＧ」として
参照される。ポリ−グリシンの除外は、タンパク質２８７、７４１、９８３およびＴｂｐ
２（ΔＧ２８７、ΔＧ７４１、ΔＧ９８３およびΔＧＴｂｐ２（参考文献８））について
特に有用である。
【００１３】
他の好ましいフラグメントは、全長野生型タンパク質からリーダーペプチド配列を除外
する。これは、特に、（ｈ）群のタンパク質について有用である。（ｈ）群の好ましいタ
ンパク質において、−Ｘ−部分における全てのリーダー配列は、Ｎ末端にて位置される−
Ｘ−部分の配列を除いて、欠失している（すなわち、Ｘ１のリーダーペプチドは、保持さ
れるが、Ｘ２．．．Ｘｎのリーダーペプチドは、削除される）。このことは、全てのペプ
チドを欠失しかつ−Ａ−部分としてＸ１のリーダーペプチドを使用することと同等である
。
【００１４】
他の好ましいフラグメントは、完全なタンパク質ドメインを除外する。これは、タンパ
ク質９６１（「ＮａｄＡ」）、２８７、およびＯＲＦ４６．１にとって特に有用である。
一旦タンパク質をドメインで概念的に分けると、（ｃ）フラグメントおよび（ｊ）フラグ
メントは、これらのドメイン（例えば、２８７Ｂ、２８７Ｃ、２８７ＢＣ、ＯＲＦ４６１
〜４３３、ＯＲＦ４６４３３〜６０８、ＯＲＦ４６，９６１ｃ−参考文献８；参考文献９
の図８および図９）の１つ以上を除外し得る。２８７タンパク質は、３つのドメイン（Ａ
、ＢおよびＣと称される）に概念的に分けられる（参考文献８の図５を参照のこと）。ド
メインＢはＩｇＡプロテアーゼと強く整合し、ドメインＣはトランスフェリン結合タンパ
ク質と強く整合し、そしてドメインＡはデータベース配列との強い整合を示さない。２８
７の多型形態の整合は、参考文献１１に開示されている。ＯＲＦ４６．１は、２つのドメ
インに概念的に分けられる−第１ドメイン（アミノ酸１〜４３３）は種と血清群との間で
十分に保存されており、第２ドメイン（アミノ酸４３３〜６０８）は、十分に保存されて
いない。第２ドメインは、好ましくは除去される。ＯＲＦ４６．１の多型形態の整合は、
参考文献１１に開示されている。９６１タンパク質は、いくつかのドメインに概念的に分
けられる（参考文献９の図８）。
【００１５】
群（ａ）〜群（ｄ）において特に好ましいタンパク質は、以下のアミノ酸配列（参考文
献１〜９の命名法を使用する）を含む：ｏｒｆｌ、ｏｒｆ４、ｏｒｆ２５、ｏｒｆ４０、
ｏｒｆ４６．１、ｏｒｆ８３、ＮＭＢ１３４３、２３０、２３３、２８７、２９２、５９
４、６８７、７３６、７４１、９０７、９１９、９３６、９５３、９６１または９８３。
これらの好ましいサブセットは以下である：ｏｒｆ４６．１、２３０、２８７、７４１、
９１９、９３６、９５３、９６１および９８３。より好ましいサブセットは以下である：
ｏｒｆ４６．１、２８７、７４１および９６１。
【００１６】
群（ｈ）に関して、ｎの値は２〜ｘであり、ｘの値は代表的に３、４、５、６、７、８
、９または１０である。好ましくは、ｎは、２、３または４であり；より好ましくは２ま
たは３であり；最も好ましくは、ｎは２である。−Ｘ−部分の各々は、（ａ）、（ｂ）、
（ｃ）または（ｄ）に特定されるようなアミノ酸配列である。
【００１７】
ｎが２である場合、−Ｘ−部分の好ましい対は、以下である：ΔＧ２８７と２３０；Δ
Ｇ２８７と９３６；ΔＧ２８７と７４１；９６１ｃと２８７；９６１ｃと２３０；９６１
ｃと９３６；９６１ｃＬと２８７；９６１ｃＬと２３０；９６１ｃＬと９３６；ＯＲＦ４
６．１と９３６；ＯＲＦ４６．１と２３０；２３０と９６１；２３０と７４１；９３６と
９６１；９３６と７４１；ΔＧ７４１と７４１；ΔＧ２８７と２８７。特に好ましいタン
パク質は、参考文献１４および１５に開示されている。
【００１８】
２８７は全長形態で使用される場合、これは、最終の−Ｘｎ−部分であり；これがＮ末
端で使用される場合（すなわち、−Ｘ１−として）、これは、２８７のΔＧ形態を使用す
るために好ましい。
【００１９】
［−Ｘ−Ｌ−］の各ｎの例について、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、存在しても存在
しなくてもよい。例えば、ｎが２である場合、そのハイブリッドは、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌｌ
−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌｌ−Ｘ２−
ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨなどであり得る。
【００２０】
リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、代表的には、短い（例えば、２０個以下のアミノ酸、
すなわち、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個
、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個）。例としては、ク
ローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリグリシンリンカー（すなわち、Ｇｌｙｎ
、ここで、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上である）、およびヒスチジン
タグ（すなわち、Ｈｉｓｎ、ここで、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０以上である
）が挙げられる。他の適切なリンカーアミノ酸配列が、当業者に明らかである。
【００２１】
Ｘｎ＋１がΔＧタンパク質でありかつＬｎがグリシンリンカーである場合、これは、Δ
Ｇタンパク質ではなくＬｎが存在しないＸｎ＋１と等価であり得る。
【００２２】
−Ａ−は、必要に応じたＮ末端アミノ酸配列である。これは、代表的には、短いアミノ
酸（例えば、４０個以下のアミノ酸、すなわち、３９個、３８個、３７個、３６個、３５
個、３４個、３３個、３２個、３１個、３０個、２９個、２８個、２７個、２６個、２５
個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５
個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、
３個、２個、１個）である。例としては、タンパク質輸送を指向するリーダー配列、また
はクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ、
すなわち、Ｈｉｓｎ、ここで、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０以上である）が挙
げられる。他の適切なＮ末端アミノ酸配列が、当業者に明らかである。
【００２３】
−Ｂ−は、必要に応じたＣ末端アミノ酸配列である。これは、代表的には、短いアミノ
酸（例えば、４０個以下のアミノ酸、すなわち、３９個、３８個、３７個、３６個、３５
個、３４個、３３個、３２個、３１個、３０個、２９個、２８個、２７個、２６個、２５
個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５
個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、
３個、２個、１個）である。例としては、タンパク質輸送を指向する配列、クローニング
もしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Ｈｉ
ｓｎ、ここで、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０以上である）、またはタンパク質
の安定性を増強する配列が挙げられる。他の適切なＣ末端アミノ酸配列が、当業者に明ら
かである。他の適切なＣ末端アミノ酸配列が、当業者にとって明らかである。
【００２４】
本発明は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの任意の株由来のアミノ酸配列を使用し得る
。従って、特定のタンパク質（例えば、「２８７」または「ＯＲＦ４６．１」）に対する
言及は、任意の株由来のタンパク質を包含する。株間の配列変化は、（ｅ）および（ｆ）
に含まれる。
【００２５】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ  Ｂ血清群由来の原型配列としては、以下が挙げられる
：
【００２６】
【表１−１】
2009155344.tif 000002
参考文献１１は、タンパク質ＯＲＦ４、ＯＲＦ４０、ＯＲＦ４６、２２５、２３５、２
８７、５１９、７２６、９１９および９５３の多型形態を開示する。９６１の多型形態は
、参考文献１６および１７に開示される。参考文献９は、７４１、９６１およびＮＭＢ１
３４３の多型形態を開示する。参考文献１５は、７４１の多型形態を開示する。任意のこ
れらの多型形態が、本発明に従って使用され得る。
【００２７】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａのタンパク質抗原は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａにおいて発現されるが、
本発明は、好ましくは、異種宿主を利用して、抗原を発現する。この異種宿主は、原核生
物細胞（例えば、細菌）または真核生物細胞であり得る。好ましくは、この異種宿主は、
Ｅ．ｃｏｌｉであるが、他の適切な宿主としては、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ
、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅ
ｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓ
ｓｅｒｉａ  ｃｉｎｅｒｅａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕ
ｌｏｓｉｓ）、酵母などが挙げられる。
【００２８】
（無毒化されたＡＤＰ−リボシル化トキシン）
ＡＤＰリボシル化細菌体外トキシンは、広く知られている。例としては、ジフテリアト
キシン（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、体外トキシンＡ
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、コレラトキシン（ＣＴ；Ｖｉｂｒ
ｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａ）、易熱性エンテロトキシン（ＬＴ；Ｅ．ｃｏｌｉ）および百日咳
トキシン（ＰＴ）が挙げられる。
【００２９】
トキシンは、ＮＡＤ＋から標的タンパク質へのＡＤＰ−リボースユニットの移動を触媒
する。
【００３０】
このトキシンは、代表的には、機能的に異なる２つのドメインＡおよびドメインＢに分
けられる。Ａサブユニットは、毒性の酵素活性を担うのに対して、Ｂサブユニットは、細
胞結合を担う。これらのサブユニットは、同じポリペプチド鎖上にあるドメインであって
もよいし、別個のポリペプチド鎖であってもよい。これらのサブユニットは、それら自体
オリゴマーであり得る。例えば、ＣＴのＡサブユニットは、Ａ１およびＡ２からなり、こ
れらは、ジスルフィド結合によって連結され、そのＢサブユニットは、ホモペンタマーで
ある。代表的には、標的細胞との最初の接触は、Ｂサブユニットによって媒介され、次い
で、サブユニットＡ単独が細胞に入る。
【００３１】
これらのトキシンは、代表的には、免疫原性であるが、それらの毒性により、ワクチン
にこれらを含めることが妨害されている。
【００３２】
免疫原性は除去することなく、毒性を除去するために、これらのトキシンは、化学物質
（例えば、グルタルアルデヒドまたはホルムアルデヒド）で処理されている。より合理的
なアプローチは、免疫原性を維持しながら、毒性酵素活性を除去するための、重要な活性
部位残基の部位特異的変異誘発に依存する［例えば、参考文献１８（ＣＴおよびＬＴ）、
１９（ＰＴ）、２０など］。現在の無細胞百日咳ワクチンは、２つのアミノ酸置換を有す
る百日咳トキシンの形態を含む（Ａｒｇ９→ＬｙｓおよびＧｌｕ１２９→Ｇｌｙ；「ＰＴ
−９Ｋ／１２９Ｇ」［２１］）。
【００３３】
それらの免疫原性特性と同様に、それらのトキシンは、アジュバントとして使用されて
きた。非経口アジュバンド作用性は、１９７２年に最初に認められ［２２］、粘膜アジュ
バント作用性は、１９８４年に認められた［２３］。驚くべきことに、１９９３年には、
無毒化された形態のトキシンが、アジュバント作用性を維持していることが見いだされた
［２４］。
【００３４】
本発明の組成物は、無毒化ＡＤＰリボシル化トキシンを含む。このトキシンは、ジフテ
リアトキシン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外トキシンＡまたは百日咳トキシンであり得る
が、好ましくはコレラトキシン（ＣＴ）であるか、またはより好ましくは、Ｅ．ｃｏｌｉ
熱不安定性エンテロトキシン（ＬＴ）である。使用され得る他のトキシンは、参考文献２
５に開示されるトキシン（参考文献２５中の配列番号１〜７）である。
【００３５】
免疫原性活性および／またはアジュバント活性の損失を伴わないこれらのトキシンの無
毒化は、任意の適切な手段によって達成され得、変異誘発が好ましい。変異誘発は、１つ
以上の置換、欠失および／または挿入を含み得る。
【００３６】
好ましい無毒化変異体は、以下である：残基Ａｒｇ−７における変異（例えば、Ｌｙｓ
置換）を有するＬＴ；残基Ａｒｇ−７における変異（例えば、Ｌｙｓ置換）を有するＣＴ
；残基Ａｒｇ−１１における変異（例えば、Ｌｙｓ置換）を有するＣＴ；Ｖａｌ−５３に
おける変異を有するＬＴ；Ｖａｌ−５３における変異を有するＣＴ；残基Ｓｅｒ−６１に
おいて変異（例えば、Ｐｈｅ置換）を有するＣＴ；残基Ｓｅｒ−６３における変異（例え
ば、Ｌｙｓ置換またはＴｙｒ置換）を有するＣＴ［例えば、参考文献２６−Ｋ６３の第５
章］；残基Ｓｅｒ−６３における変異（例えば、Ｌｙｓ置換またはＴｙｒ置換）を有する
ＣＴ；残基Ａｌａ−７２における変異（例えば、Ａｒｇ置換）を有するＬＴ［２７〜Ｒ７
２］；Ｖａｌ−９７における変異を有するＬＴ；Ｖａｌ−９７における変異を有するＣＴ
；Ｔｙｒ−１０４における変異を有するＬＴ；Ｔｙｒ−１０４における変異を有するＣＴ
；残基Ｐｒｏ−１０６における変異（例えば、Ｓｅｒ置換）を有する変異；残基Ｐｒｏ−
１０６における変異（例えば、Ｓｅｒ置換）を有するＣＴ；Ｇｌｕ−１１２における変異
（例えば、Ｌｙｓ置換）を有するＬＴ；Ｇｌｕ−１１２における変異（例えば、Ｌｙｓ置
換）を有するＣＴ；残基Ａｒｇ−１９２における変異（例えば、Ｇｌｙ置換）を有するＣ
Ｔ；残基Ａｒｇ−９における変異（例えば、Ｌｙｓ置換）を有するＬＴ；Ｇｌｕ−１２９
における置換（例えば、Ｇｌｙ置換）を有するＰＴ；および参考文献１８に開示される変
異体のいずれか。
【００３７】
これらの変異は、組み合わされ得る（例えば、ＰＴにおけるＡｒｇ−９−Ｌｙｓ＋Ｇｌ
ｕ−１２９）。
【００３８】
残基６３または７２における変異を有するＬＴは、好ましい無毒化トキシンである。
【００３９】
これらの残基の番号付けは、プロトタイプ配列に基づき、そして例えば、Ｓｅｒ−６３
は、実際は、所定のＬＴ改変体中の６３番目のアミノ酸ではあり得ないが、アミノ酸配列
の整列が、Ｓｅｒ−６３に対応する位置を示すことが、理解される。
【００４０】
無毒化トキシンは、活性に適切なように、Ａサブユニットおよび／またはＢサブユニッ
トの形態であり得る。
【００４１】
（粘膜投与）
本発明の組成物は、特に粘膜免疫に適しているが、非経口免疫もまた可能である。粘膜
投与の適切な経路としては、経口経路、鼻腔内経路、胃内経路、肺経路、腸管経路、直腸
経路、眼内経路、および膣内経路が挙げられる。経口投与または鼻腔内投与が好ましい。
【００４２】
組成物は、好ましくは、粘膜投与のために適合される（例えば、参考文献２８、２９お
よび３０を参照のこと）。組成物が経口投与用である場合、例えば、これは、錠剤または
カプセル剤（必要に応じて腸溶性である）、液剤、トランスジェニック植物などの形態で
あり得る（参考文献３１、および参考文献３２の１７章もまた参照のこと）。
【００４３】
この組成物が鼻腔内投与用である場合、これは、経鼻スプレー剤、点鼻薬、ゲル剤また
は粉剤などの形態であり得る（例えば、参考文献３３を参照のこと）。
【００４４】
（組成物のさらなる成分）
本発明の組成物は、代表的には、上記の抗原およびトキシン成分に加えて、１つ以上の
薬学的に受容可能なキャリアを含み、このようなキャリアとしては、組成物を受容する個
体に対して有害な抗体の産生をそれ自体が誘発しない任意のキャリアが挙げられる。適切
なキャリアは、代表的には、大きな緩慢に代謝される巨大分子であり、例えば、タンパク
質、ポリサッカリド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマー性アミノ酸、アミノ酸コポ
リマー、トレハロース、および脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）が挙げられ
る。このようなキャリアは当業者に周知である。ワクチンはまた、希釈剤（例えば、水、
生理食塩水、グリセロールなど）を含み得る。さらに、補助物質（例えば、湿潤剤または
乳化剤、ｐＨ緩衝化物質など）が存在し得る。薬学的に受容可能な賦形剤の徹底した考察
は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓにおい
て有用である。
【００４５】
ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫有効量の抗原、ならびに必要に応じ
て上記成分の任意の他の成分を含む。「免疫有効量」とは、単一用量で、または一連の投
与の一部としてのいずれかでの個体へのその量の投与が、処置または予防に有効であるこ
とを意味する。この量は、処置されるべき個体の健康状態および身体状態、年齢、処置さ
れるべき個体の分類学上の群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系の抗
体合成能、所望される保護の程度、ワクチンの処方、医療状態についての治療医の評価、
および他の関連した要因に依存して変動する。この量は、慣用の試験を通して決定され得
る比較的広い範囲内にあることが期待される。投薬処置は、単一投薬スケジュールまたは
複数投薬スケジュール（例えば、ブースター投薬を含む）であり得る。ワクチンは、他の
免疫調節剤と共に投与され得る。
【００４６】
この組成物は、無毒化トキシンに加えて他のアジュバントを含み得る。この組成物の効
果を増強するのに好ましいアジュバントとしては、以下が挙げられるがこれらに限定され
ない：（１）オイルインウォーターエマルジョン処方物（他の特定の免疫刺激因子（例え
ば、ムラミルペプチド（以下を参照のこと）または細菌細胞壁成分）を含むものまたは含
まないもの）、例えば、（ａ）マイクロフルイダイザーを用いてミクロン未満粒子に処方
された、５％スクアレン（Ｓｑｕａｌｅｎｅ）、０．５％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、および０
．５％  Ｓｐａｎ  ８５（必要に応じてＭＴＰ−ＰＥを含む）を含む、ＭＦ５９ＴＭ（Ｗ
Ｏ９１／１４８３７；参考文献３２の第１０章）、（ｂ）ミクロン未満エマルジョンに微
流体化されたかまたは大粒子サイズのエマルジョンを生成するためボルテックスされたか
いずれかの、１０％スクアレン、０．４％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、５％  プルロニックブロ
ックポリマー（ｐｌｕｒｏｎｉｃ−ｂｌｏｃｋｅｄ  ｐｏｌｙｍｅｒ）  Ｌ１２１、およ
びｔｈｒ−ＭＤＰを含むＳＡＦ、ならびに（ｃ）２％スクアレン、０．２％  Ｔｗｅｅｎ
８０、ならびにモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤ
Ｍ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群からの１つ以上の細菌細胞壁成分（好まし
くは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ））を含むＲｉｂｉＴＭアジュバント系（ＲＡＳ
）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）；（２）サポニンアジ
ュバント（例えば、ＱＳ２１またはＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏ
ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ））が使用され得るかまたはそれらから生成
される粒子（例えば、ＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体、ＩＳＣＯＭは、さらなる界面活性剤
を欠く、例えば、ＷＯ００／０７６２１））；（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦ
Ａ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）；（４）サイトカイン（例えば、イ
ンターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−
７、ＩＬ−１２（ＷＯ９９／４４６３６）など））、インターフェロン（例えば、γイン
ターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮ
Ｆ）など）；（５）モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）または３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ
（３ｄＭＰＬ）（例えば、ＧＢ２２２０２２１、ＥＰ−Ａ−０６８９４５４）；（６）３
ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／またはオイルインウォーターエマルジョンの組み
合わせ（例えば、ＥＰ−Ａ−０８３５３１８、ＥＰ−Ａ−０７３５８９８、ＥＰ−Ａ−０
７６１２３１）；（７）ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド（Ｋｒｉｅｇ  Ｖａｃ
ｃｉｎｅ  ２０００，１９，６１８−６２２；Ｋｒｉｅｇ  Ｃｕｒｒ  ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ
Ｔｈｅｒ  ２００１  ３：１５−２４；Ｒｏｍａｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１９９７，
３，８４９−８５４；Ｗｅｉｎｅｒら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，１９９７，９４，１０８３３
−１０８３７；Ｄａｖｉｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６０，８７０−８７
６；Ｃｈｕら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９７，１８６，１６２３−１６３１；Ｌｉｐ
ｆｏｒｄら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９７，２７，２３４０−２３４４；Ｍ
ｏｌｄｏｖｅａｎｕら，Ｖａｃｃｉｎｅ，１９８８，１６，１２１６−１２２４，Ｋｒｉ
ｅｇら，Ｎａｔｕｒｅ，１９９５，３７４，５４６−５４９；Ｋｌｉｎｍａｎら，ＰＮＡ
Ｓ  ＵＳＡ，１９９６，９３，２８７９−２８８３；Ｂａｌｌａｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１９９６，１５７，１８４０−１８４５；Ｃｏｗｄｅｒｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．，１９９６，１５６，４５７０−４５７５；Ｈａｌｐｅｒｎら，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．，１９９６，１６７，７２−７８；Ｙａｍａｍｏｔｏら，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅ
ｒ  Ｒｅｓ．，１９８８，７９，８６６−８７３；Ｓｔａｃｅｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．，１９９６，１５７，２１１６−２１２２；Ｍｅｓｓｉｎａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
，１９９１，１４７，１７５９−１７６４；Ｙｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，
１５７，４９１８−４９２５；Ｙｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５７，５３
９４−５４０２；Ｙｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６０，４７５５−４７６
１；およびＹｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６０，５８９８−５９０６；国
際特許出願ＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９８／１６２４７、ＷＯ９８／１８８１０、ＷＯ
９８／４０１００、ＷＯ９８／５５４９５、ＷＯ９８／３７９１９、およびＷＯ９８／５
２５８１）、すなわち、少なくとも１つのＣＧ二ヌクレオチドを含み、シトシンの代わり
に必要に応じて５−メチルシトシンが使用される；（８）ポリオキシエチレンエーテルま
たはポリオキシエチレンエステル（例えば、ＷＯ９９／５２５４９）；（９）ポリオキシ
エチレンソルビタンエステル界面活性剤とオクトキシノールとの組み合わせ（例えば、Ｗ
Ｏ０１／２１２０７）またはポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活
性剤と少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（例えば、オクトキシノール）の
組み合わせ（例えば、ＷＯ０１／２１１５２）；（１０）免疫刺激性オリゴヌクレオチド
（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）およびサポニン（例えば、ＷＯ００／６２８００
）；（１１）免疫刺激因子および金属塩の粒子（例えば、ＷＯ００／２３１０５）；（１
２）サポニンおよびオイルインウォーターエマルジョン（例えば、ＷＯ９９／１１２４１
）；（１３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて、
＋ステロール）（例えば、ＷＯ９８／５７６５９）；（１４）ＰＬＧ微粒子；（１５）免
疫刺激因子として作用し組成物の効果を増強する他の物質。
【００４７】
ムラミルペプチドとしては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグル
タミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグル
タミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニ
ル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキ
シホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）、などが挙げられる。
【００４８】
本発明の組成物は好ましくは、緩衝液を含む。本発明の組成物は好ましくは、ｐＨ６と
ｐＨ８との間で（例えば、約ｐＨ７で）緩衝化される。
【００４９】
本発明の組成物は好ましくは、無菌および／または発熱物質を含まない。
【００５０】
（さらなる抗原）
本発明の組成物中に含まれ得るさらなる抗原としては、以下が挙げられる：
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ  血清群Ｂ由来の外膜ベシクル（ＯＭＶ）調製物（例え
ば、参考文献３４、３５、３６、３７などに開示される外膜ベシクル（ＯＭＶ）調製物）
。
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ由来のサッカ
リド抗原（例えば、血清群Ｃ由来の、参考文献３８に開示されるオリゴサッカリド）［参
考文献３９も参照のこと］。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来のサッカリド抗原［例えば、
参考文献４０、４１、４２］。
−Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ由来のタンパク質抗原（例えば、ＣａｇＡ［
例えば、４３］、ＶａｃＡ［例えば、４３］、ＮＡＰ［例えば、４４］、ＨｏｐＸ［例え
ば、４５］、ＨｏｐＹ［例えば、４５］および／またはウレアーゼ）。
−Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、不活化ウイルス）［例えば、４６、４７］。
−Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、表面抗原および／またはコア抗原）［例えば、
４７、４８］。
−Ｃ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば、４９］。
−Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原（例えば、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓ
ｉｓ由来の百日咳ホロトキシン（ＰＴ）および線状ヘマグルチニン（ＦＨＡ））（必要に
応じて、ペルタクチンおよび／または凝集原２および凝集原３とも組み合わされる）［例
えば、参考文献５０および５１］。
−ジフテリア抗原（例えば、ジフテリアトキソイド［例えば、参考文献５２の第３章］、
例えば、ＣＲＭ１９７変異体［例えば、２６］）。
−破傷風抗原（例えば、破傷風トキソイド）［例えば、参考文献５２の第４章］。
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ由来のサッカリド抗原［例えば、
３９］。
−Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ由来の抗原［例えば、１、２、３］。
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の抗原［例えば、５３、５４、５５、
５６、５７、５８、５９］。
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ由来の抗原［例えば、６０］。
−Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来の抗原［例えば、６１］。
−ポリオ抗原［例えば、６２、６３］（例えば、ＩＰＶまたはＯＰＶ）。
−狂犬病抗原［例えば、６４］（例えば、凍結乾燥不活化ウイルス）［例えば、６５、Ｒ
ａｂＡｖｅｒｔＴＭ］。
−麻疹抗原、ムンプスおよび／または風疹抗原［例えば、参考文献５２の第９章、第１０
章および第１１章］。
−インフルエンザ抗原［例えば、参考文献５２の第１９章］（例えば、ヘマグルチニンお
よび／またはノイラミニダーゼ表面タンパク質）。
−Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ由来の抗原［例えば、６６］。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ由来の抗原（Ｂ群ｓｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ）［例えば、６７、６８］。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の抗原（Ａ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ）［例えば、６８、６９、７０］。
−Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ由来の抗原［例えば、７１］。
【００５１】
この組成物は、これらのさらなる抗原のうちの１以上を含み得る。
【００５２】
サッカリド抗原または糖抗原が使用される場合、この抗原は、好ましくは、免疫原性を
増強する目的で、キャリアタンパク質に結合体化される［例えば、参考文献７２〜８１］
。好ましいキャリアタンパク質は、細菌トキシンまたはトキソイド（例えば、ジフテリア
トキソイドまたは破傷風トキソイド）である。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドが、特
に好ましい。他の適切なキャリアタンパク質としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外
膜タンパク質［例えば、参考文献８２］、合成ペプチド［例えば、８３、８４］、熱ショ
ックタンパク質［例えば、８５］、百日咳タンパク質［例えば、８６、８７］、Ｈ．ｉｎ
ｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤ［例えば、８８］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の
トキシンＡまたはトキシンＢ［例えば、８９］などが挙げられる。混合物が、血清群Ａ由
来の莢膜サッカリドと血清群Ｃ由来の莢膜サッカリドとの両方を含む場合、ＭｅｎＡサッ
カリド：ＭｅｎＣサッカリドの比（ｗ／ｗ）が１より大きい（例えば、２：１、３：１、
４：１、５：１、１０：１、またはこれらより大きい）ことが好ましい。Ｎ．ｍｅｎｉｎ
ｇｉｔｉｄｉｓの異なる血清群由来のサッカリドは、同じかまたは異なるキャリアタンパ
ク質に結合体化され得る。
【００５３】
任意の適切な結合体化反応が、必要であれば任意の適切なリンカーを用いて、使用され
得る。
【００５４】
毒性タンパク質抗原は、必要であれば、無毒化され得る（例えば、化学的手段および／
または遺伝的手段による、百日咳トキシンの無毒化［５１］）。
【００５５】
ジフテリア抗原が組成物に含まれる場合、破傷風抗原および百日咳抗原をまた含むこと
が好ましい。同様に、破傷風抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および百日咳抗原をま
た含むことが好ましい。同様に、百日咳抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および破傷
風抗原をまた含むことが好ましい。
【００５６】
抗原は、好ましくは、アルミニウム塩（例えば、リン酸塩、水酸化物、ヒドロキシリン
酸塩、オキシ水酸化物、オルトリン酸塩、硫酸塩）と混合される（そしてより好ましくは
、アルミニウム塩に吸着される）。この塩は、任意の適切な形態をとり得る（例えば、ゲ
ル、結晶、アモルファスなど）。
【００５７】
組成物中の抗原は、代表的に、各々少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。一般に
、任意の所定の抗原の濃度は、その抗原に対して免疫応答を引き起こすために十分である
。
【００５８】
本発明の組成物においてタンパク質抗原を使用することの代替として、この抗原をコー
ドする核酸が使用され得る［例えば、参考文献９０〜９８］。従って、本発明の組成物の
タンパク質成分は、そのタンパク質をコードする核酸（好ましくは、ＤＮＡ（例えば、プ
ラスミドの形態））によって置き換えられ得る。このような核酸は、多くの様式（例えば
、化学合成によって、ゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリーから、生物自体か
らなど）で調製され得、そして種々の形態（例えば、一本鎖、二本鎖、ベクター、プロー
ブなど）をとり得る。用語「核酸」は、ＤＮＡおよびＲＮＡを包含し、そしてまた、これ
らのアナログ（例えば、改変された骨格を含むもの）、ならびにまた、ペプチド核酸（Ｐ
ＮＡ）などを包含する。
【００５９】
（医薬）
本発明の組成物は、代表的に、ワクチン組成物である。
【００６０】
本発明は、医薬として使用するための上記定義の組成物を提供する。この医薬は、好ま
しくは、哺乳動物において抗原に対する免疫応答を惹起し得（すなわち、これは、免疫原
性組成物である）、そしてより好ましくはワクチンである。
【００６１】
本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ細菌（好ましくは、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に
起因する感染を処置または予防するための医薬の製造における、上記定義の組成物の使用
を提供する。
【００６２】
本発明は、動物（例えば、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト））において免疫応答
を惹起する方法を提供し、この方法は、本発明の組成物をこの動物に投与する工程を包含
する。この免疫応答は、好ましくは保護的である。この動物は、好ましくは０〜３歳であ
る。
【００６３】
本発明は、患者を処置する方法を提供し、この方法は、治療有効量の本発明の組成物を
患者に投与する工程を包含する。
【００６４】
本発明に従うワクチンは、予防的（すなわち、感染を予防するため）または治療的（す
なわち、感染後の疾患を処置するため）のいずれかであり得るが、代表的には予防的であ
る。
【００６５】
これらの使用および方法などは、好ましくは、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ（例えば、ｍｅｎｉ
ｎｇｉｔｉｓ、ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ、ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａなど）によって引き起こ
される疾患の予防および／または処置のためのものである。細菌性髄膜炎の予防および／
または処置が好ましい。
【００６６】
免疫原性組成物の効力は、この組成物の投与後に動物において惹起された抗原特異的免
疫応答（例えば、Ｔ細胞または抗体応答）をモニタリングすることによって、評価され得
る。
【００６７】
本発明の組成物の投与後の動物における殺細菌性抗体の生成もまた、効力を示す。
・本発明はさらに、以下を提供し得る：
・（項目１）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原および無毒化されたＡＤＰ−リボシル化トキシンを含む、組成物。
・（項目２）
項目１に記載の組成物であって、上記Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原である、組成物。
・（項目３）
項目２に記載の組成物であって、上記Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂタンパク質抗原である、組成物。
・（項目４）
項目３に記載の組成物であって、上記抗原が、以下：
（ａ）ＷＯ９９／２４５７８に開示される４４６個の偶数の配列番号（すなわち、２、４、６、．．．、８９０、８９２）のうちの１つ以上を含むタンパク質；
（ｂ）参考文献ＷＯ９９／３６５４４に開示される４５個の偶数の配列番号（すなわち、２、４、６、．．．、８８、９０）のうちの１つ以上を含むタンパク質；
（ｃ）参考文献ＷＯ９９／５７２８０に開示される１６７４個の偶数の配列番号２〜３０２０、偶数の配列番号３０４０〜３１１４、および全ての配列番号３１１５〜３２４１のうちの１つ以上を含むタンパク質；
（ｄ）２１６０個のアミノ酸配列ＮＭＢ０００１〜ＮＭＢ２１６０のうちの１つ以上を含むタンパク質；
（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）に特定されるアミノ酸配列に対して、少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、タンパク質；
（ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）に特定されるアミノ酸配列の少なくとも７アミノ酸のフラグメントを含む、タンパク質；
（ｇ）ＷＯ０１／６４９２０またはＷＯ０１／６４９２２またはＰＣＴ／ＩＢ０２／０３９０４に開示されるアミノ酸配列の１つ以上を含む、タンパク質；あるいは
（ｈ）式ＮＨ２−Ａ−［−Ｘ−Ｌ−］ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨを有するタンパク質であって、ここで、Ｘが、アミノ酸配列であり、Ｌが、任意のリンカーアミノ酸配列であり、Ａが、任意のＮ末端アミノ酸配列であり、Ｂが、任意のＣ末端アミノ酸配列であり、そしてｎが、１より大きな整数である、タンパク質、
からなる群より選択される、組成物。
・（項目５）
項目３または項目４に記載の組成物であって、上記抗原が、ｏｒｆ１、ｏｒｆ４、ｏｒｆ２５、ｏｒｆ４０、ｏｒｆ４６．１、ｏｒｆ８３、ＮＭＢ１３４３、２３０、２３３、２８７、２９２、５９４、６８７、７３６、７４１、９０７、９１９、９３６、９５３、ＮａｄＡまたは９８３のアミノ酸配列を含む、組成物。
・（項目６）
項目５に記載の組成物であって、上記抗原が、ｏｒｆ４６．１、２３０、２８７、７４１、９１９、９３６、９５３、ＮａｄＡまたは９８３のアミノ酸配列を含む、組成物。
・（項目７）
上記抗原が、ｏｒｆ４６．１、２８７、７４１またはＮａｄＡのアミノ酸配列を含む、項目６に記載の組成物。
・（項目８）
上記抗原が、式ＮＨ２−Ａ−［−Ｘ−Ｌ−］ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨを有するタンパク質であって、ここで、Ｘが、アミノ酸配列であり、Ｌが、任意のリンカーアミノ酸配列であり、Ａが、任意のＮ−末端アミノ酸配列であり、Ｂが、任意のＣ−末端アミノ酸配列であり、そしてｎが、１より大きい整数である、項目４に記載の組成物。
・（項目９）
上記ｎの値が、２〜１０の間である、項目８に記載の組成物。
・（項目１０）
各Ｘ部分が、ΔＧ２８７；２３０；９３６；７４１；９６１ｃ；２８７；９６１ｃＬ；ＯＲＦ４６．１；ΔＧ７４１からなる群より選択される、項目８または９に記載の組成物。
・（項目１１）
−Ｌ−が、２０未満のアミノ酸を有する、項目８〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
・（項目１２）
−Ａ−が、４０未満のアミノ酸を有し、そして／または−Ｂ−が、４０未満のアミノ酸を有する、項目８〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
・（項目１３）
上記ＡＤＰ−リボシル化トキシンが、コレラトキシンおよび／またはＥ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロトキシンである、項目１〜１２のいずれかに記載の組成物。
・（項目１４）
上記トキシンが、残基Ｓｅｒ−６３またはＡｌａ−７２において変異を有するＬＴである、項目１３に記載の組成物。
・（項目１５）
上記トキシンが、ＬＴ−Ｋ６３またはＬＴ−Ｒ７２である、項目１４に記載の組成物。
・（項目１６）
上記組成物が、粘膜投与に適合される、項目１〜１５のいずれかに記載の組成物。
・（項目１７）
上記組成物が、鼻腔内投与に適合される、項目１６に記載の組成物。
・（項目１８）
上記組成物が、以下の抗原：
−Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来の外膜小胞（ＯＭＶ）調製物；
−Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来のサッカリド抗原；
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来のサッカリド抗原；
−Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスまたはＣ型肝炎ウイルス由来の抗原；
−Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原；
−ジフテリア抗原；
−破傷風抗原；
−Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ由来のタンパク質抗原；
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のサッカリド抗原；
−Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ由来の抗原；
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の抗原；
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ由来の抗原；
−Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来の抗原；
−ポリオ抗原；
−狂犬病抗原；
−麻疹、ムンプスおよび／または風疹抗原；
−インフルエンザ抗原；
−Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ由来の抗原；
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ由来の抗原；
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の抗原；ならびに／または
−Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ由来の抗原、
の１つ以上をさらに含む、項目１〜１７のいずれかに記載の組成物。
・（項目１９）
緩衝液をさらに含む、項目１〜１８のいずれかに記載の組成物。
・（項目２０）
６〜８の間のｐＨを有する、項目１〜１９のいずれかに記載の組成物。
・（項目２１）
上記組成物が、滅菌されており、そして／または発熱物質を含まない、項目１〜２０のいずれかに記載の組成物。
・（項目２２）
医薬としての使用のための、項目１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
・（項目２３）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ細菌に起因する感染を処置または予防するための医薬の製造における、項目１〜２１のいずれか１項に記載の組成物の使用。
・（項目２４）
項目１〜２１のいずれか１項に記載の組成物を動物に投与する工程を包含する、動物において免疫応答を惹起する方法。
・（項目２５）
治療有効量の項目１〜２１のいずれか１項に記載の組成物を患者に投与する工程を包含する、患者を処置する方法。
・（項目２６）
上記組成物が、免疫原性組成物である、項目１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
・（項目２７）
上記組成物が、ワクチンである、項目１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
・（項目２８）
上記ナイセリア性抗原が、ｏｒｆ１またはｏｒｆ４０である、項目１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【００６８】
（定義）
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「
からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を意味する。例えば、Ｘを「含む」組成物は、排他
的にＸからなっても、さらなるものを含んでもよい（例えば、Ｘ＋Ｙ）。
【００６９】
数的値ｘに関して用語「約（およそ）」とは、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】図１は、ｏｒｆ１により誘導されたＩＦＮ−γ（ｎｇ／ｍｌ）のレベルを示す。図１について、Ｘ軸上に４つのデータセット（左から右に：ＰＢＳ；ｏｒｆ１；ｏｒｆ１＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｋ６３；ｏｒｆ１＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｒ７２）があり、その各々は、異なる抗原濃度についての３つの値（左から右に：０．１μｇ／ｍｌ；１０μｇ／ｍｌ；１００μｇ／ｍｌ）を有する。
【図２】図２は、ｏｒｆ１により誘導されたＩＬ−５（ｐｇ／ｍｌ）のレベルを示す。図２に対について、Ｘ軸上に４つのデータセット（左から右に：ＰＢＳ；ｏｒｆ１；ｏｒｆ１＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｋ６３；ｏｒｆ１＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｒ７２）があり、その各々は、異なる抗原濃度についての３つの値（左から右に：０．１μｇ／ｍｌ；１０μｇ／ｍｌ；１００μｇ／ｍｌ）を有する。
【図３】図３は、ｏｒｆ４０により誘導されたＩＦＮ−γ（ｎｇ／ｍｌ）のレベルを示す。図３について、Ｘ軸上に５つのデータセット（左から右に：ＰＢＳ；ｏｒｆ４０；ｏｒｆ４０＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｋ６３；ｏｒｆ４０＋１０μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｋ６３；ｏｒｆ４０＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｒ７２）があり、その各々は、異なる抗原濃度についての３つの値（左から右に：０．１μｇ／ｍｌ；１０μｇ／ｍｌ；１００μｇ／ｍｌ）を有する。
【図４】図４は、ｏｒｆ４０により誘導されたＩＬ−５（ｐｇ／ｍｌ）のレベルを示す。図４について、Ｘ軸上に５つのデータセット（左から右に：ＰＢＳ；ｏｒｆ４０；ｏｒｆ４０＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｋ６３；ｏｒｆ４０＋１０μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｋ６３；ｏｒｆ４０＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｒ７２）があり、その各々は、異なる抗原濃度についての３つの値（左から右に：０．１μｇ／ｍｌ；１０μｇ／ｍｌ；１００μｇ／ｍｌ）を有する。
【図５】図５は、ｏｒｆ１およびｏｒｆ４０により誘導されたＩｇＧの力価（ｌｏｇ１０）を示す。７つの柱は、左から右に：ｏｒｆ１；ｏｒｆ１＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｋ６３；ｏｒｆ１＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｒ７２；ｏｒｆ４０；ｏｒｆ４０＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｋ６３；ｏｒｆ４０＋１０μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｋ６３；ｏｒｆ４０＋１μｇ／ｍｌ  ＬＴ−Ｒ７２である。
【図６】図６は、ＯＲＦ４０に対して応答するＩｇＧ抗体サブクラスを示す。４つのデータセットは、図５における右側の４つのセットと同じである。各々のデータセットにおいて、左側の柱はＩｇＧ１を示し、右側のカラムはＩｇＧ２ａを示す。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
（発明を実施するための様態）
（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓタンパク質抗原を用いた経鼻的な免疫）
５匹の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスの群を、０日目、２１日目および４２日目に、エーテル
麻酔下で、以下を含む組成物を用いて経鼻的に免疫した：（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉ
ｄｉｓ（血清型Ｂ）抗原ｏｒｆ１またはｏｒｆ４０；および（ｂ）Ｅ．ｃｏｌｉの熱標識
トキシン変異体Ｒ７２またはＫ６３。ネガティブコントロールマウスは、ＬＴアジュバン
ドなしで、ＰＢＳまたは抗原のいずれかを受けた。この群は、以下の通りであった：
【００７２】
【表１−２】
2009155344.tif 000003
抗原（マウス１匹あたり５μｇ）およびアジュバンドを、マウス１匹あたり２０μｌの用
量で送達した。
【００７３】
最後の免疫の２週間後に、動物を屠殺し、そして血液、脾臓および頚部リンパ節をマウ
スより取り出した。血清を回収し、そしてＥＬＩＳＡを用いたｏｒｆ１／ｏｒｆ４０特異
的ＩｇＧ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの分析のために保存した。単個細胞浮遊液を脾臓お
よび頚部リンパ節から調製した。細胞を０μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍ
ｌおよび１００μｇ／ｍｌのｏｒｆ１またはｏｒｆ４０を用いて、９６ウェルプレート中
に配置した。ポジティブコントロールとして、細胞をＰＭＡおよび抗ＣＤ３とともにイン
キュベートした。細胞を３７℃で、５％のＣＯ２とともに、３日間インキュベートした。
３日目に、上清をＩＬ４、ＩＬ５およびインターフェロンγ（ＩＦＮγ）の分析のために
回収した。３Ｈ−チミジンを細胞に添加し、そしてプレートを４時間さらにインキュベー
トして抗原特異的増殖の評価を可能にした（データ示さず）。
【００７４】
ｏｒｆｌで免疫したマウス由来の再刺激脾細胞は、ＩＦＮγおよび少量のＩＬ−５を産
生した（図１および２）。マウスをｏｒｆｌおよびＬＴＫ６３で免疫した場合、そして特
にＬＴＲ７２で免疫した場合、このサイトカイン応答は、かなり強かった。
【００７５】
対照的に、抗原単独での免疫またはＬＴ変異体と合わせた免疫は、有意なレベルの特異
的抗体の産生を引き起こさなかった（図５）。
【００７６】
ｏｒｆ４０単独での免疫は、特異的抗体応答（図５）を誘発した。これは、主にＩｇＧ
１サブクラスであった（図６）。これらのマウス由来の再刺激された脾細胞は、有意な量
のＩＬ−５またはＩＦＮγを産生しなかった（図３および図４）。ｏｒｆ４０およびＬＴ
Ｋ６３（ｌμｇ）での免疫化は、結果としてＩＬ−５産生を大きく増大し、そしてＩＦＮ
γを増大した。ｏｒｆ４０およびｌ０μｇのＬＴＫ６３での免疫は、上清中のＩＦＮγ濃
度をより高めた。ｏｒｆ４０およびＬＴＲ７２（ｌμｇ）で免疫されたマウス由来の再刺
激された脾細胞は、より高い用量のＬＴＫ６３で免疫されたマウス由来の再刺激された脾
細胞に匹敵する濃度で、ＩＬ−５またはＩＦＮγを分泌した。これらのマウス由来の血清
は、高い力価の特異的ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａを含んだ。対照的に、ｏｒｆ４０および
ＬＴＫ６３で免疫されたマウス由来の血清は、抗原単独での免疫よりも高い力価の特異的
ＩｇＧ１を含んだ。しかし、特異的ＩｇＧ２ａの力価は向上しなかった。１０μｇ用量の
ＬＴＫ６３での免疫は、より高い力価の特異的ＩｇＧ２ａをもたらした。このより高い力
価は、この群においてより高いＩＦＮγ産生と相関した。ｏｒｆ４０特異的ＩｇＧＩおよ
びｏｒｆ４０特異的ＩｇＧ２ａの個々の力価を、表１に示す。これらは、殺菌性の抗体力
価のためのアッセイを設定するのに必要である。
（表１）ｏｒｆ４０単独またはＬＴＫ６３／ＬＴＲ７２と共に免疫されたマウス由来の個
々のＩｇＧ１サブクラス力価およびＩｇＧ２ａサブクラス力価
【００７７】
【表１】
2009155344.tif 000004
本発明は、例のみによって記載され、本発明の範囲内および精神内にある限り、改変が
なされ得ると理解される。
【００７８】
（参考文献（この内容は本明細書中で参考として援用される））
１−国際特許出願ＷＯ９９／２４５７８
２−国際特許出願ＷＯ９９／３６５４４
３−国際特許出願ＷＯ９９／５７２８０
４−国際特許出願ＷＯ００／２２４３０
５−Ｔｅｔｔｅｌｉｎら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：１８０９−１８１５
６−Ｐｉｚｚａら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：１８１６−１８２０
７−国際特許出願ＷＯ０１／６４９２０
８−国際特許出願ＷＯ０１／６４９２２
９−国際特許出願ＰＣＴ／ＩＢ０２／０３９０４
１０−国際特許出願ＷＯ００／５００７５
１１−国際特許出願ＷＯ００／６６７４１
１２−国際特許出願ＷＯ００／７１５７４
１３−国際特許出願ＷＯ０１／０４３１６
１４−英国特許出願０２２３７４１．０
１５−英国特許出願０２２７３４６．４
１６−国際特許出願ＰＣＴ／ＩＢ０２／０３３９６［１７］Ｃｏｍａｎｄｕｃｃｉら（２００２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９５：１４４５−１４５４
１８−国際特許出願ＷＯ９３／１３２０２
１９−欧州特許出願０３０６６１８、０３２２５３３および０３２２１１５
２０−Ｄｅｌ  ＧｉｕｄｉｃｅおよびＲａｐｐｕｏｌｉ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９９９  １７  補遺２：Ｓ４４−５２
２１−欧州特許０３９６９６４
２２−ＮｏｒｔｈｒｕｐおよびＦａｕｃｉ（１９７２）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１２５：６７２ｆｆ
２３−ＥｌｓｏｎおよびＥａｌｄｉｎｇ（１９８４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：２８９２ｆｆおよび１３２：２７３６ｆｆ
２４−国際特許出願ＷＯ９５／１７２１１
２５−国際特許出願ＷＯ０２／０７９２４２
２６−Ｄｅｌ  Ｇｉｕｄｉｃｅら（１９９８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９巻，１号
２７−国際特許出願ＷＯ９８／１８９２８
２８−Ｗａｌｋｅｒ（１９９４）Ｖａｃｃｉｎｅ  １２：３８７−４００
２９−Ｃｌｅｍｅｎｔｓ（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：６２２−６２３
３０−ＭｃＧｈｅｅら（１９９２）Ｖａｃｃｉｎｅ  １０：７５−８８
３１−Ｍｉｃｈｅｔｔｉ（１９９８）Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．［補遺Ｘ］：６６−６８
３２−Ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｅｓｉｇｎ：ｔｈｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ａｐｐｒｏａｃｈ編、ＰｏｗｅｌｌおよびＮｅｗｍａｎ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ  １９９５（ＩＳＢＮ  ０−３０６−４４８６７−Ｘ
３３−ＡｌｍｅｉｄａおよびＡｌｐａｒ（１９９６）Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ
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３４−国際特許出願ＷＯ０１／５２８８５
３５−Ｂｊｕｎｅら（１９９１）Ｌａｎｃｅｔ  ３３８（８７７５）：１０９３−１０９６
３６−Ｆｕｋａｓａｗａら（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ  １７：２９５１−２９５８
３７−Ｒｏｓｅｎｑｖｉｓｔら（１９９８）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．９２：３２３−３３３
３８−Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏら（１９９２）Ｖａｃｃｉｎｅ  １０：６９１−６９８
３９−Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏら（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ  １７：１２５１−１２６３
４０−Ｗａｔｓｏｎ（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  Ｊ  １９：３３１−３３２
４１−Ｒｕｂｉｎ（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  ４７：２６９−２８５、ｖ
４２−Ｊｅｄｒｚｅｊａｓ（２００１）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｖ６５：１８７−２０７
４３−国際特許出願ＷＯ９３／１８１５０
４４−国際特許出願ＷＯ９９／５３３１０
４５−国際特許出願ＷＯ９８／０４７０２
４６−Ｂｅｌｌ（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  Ｊ  １９：１１８７−１１８８
４７−Ｉｗａｒｓｏｎ（１９９５）ＡＰＭＩＳ  １０３：３２１−３２６
４８−Ｇｅｒｌｉｃｈら（１９９０）Ｖａｃｃｉｎｅ  ８  補遺：Ｓ６３−６８および７９−８０
４９−Ｈｓｕら（１９９９）Ｃｌｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ  ３：９０１−９１５
５０−Ｇｕｓｔａｆｓｓｏｎら（１９９６）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３４：３４９−３５５．
５１−Ｒａｐｐｕｏｌｉら（１９９１）ＴＩＢＴＥＣＨ  ９：２３２−２３８．
５２−Ｖａｃｃｉｎｅｓ（１９８８）編  Ｐｌｏｔｋｉｎ＆Ｍｏｒｔｉｍｅｒ．ＩＳＢＮ  ０−７２１６−１９４６−０
５３−国際特許出願ＷＯ０２／０２６０６
５４−Ｋａｌｍａｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２１：３８５−３８９
５５−Ｒｅａｄら（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２８：１３９７−４０６
５６−Ｓｈｉｒａｉら（２０００）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８１（補遺３）：Ｓ５２４−Ｓ５２７
５７−国際特許出願ＷＯ９９／２７１０５
５８−国際特許出願ＷＯ００／２７９９４
５９−国際特許出願ＷＯ００／３７４９４
６０−国際特許出願ＷＯ９９／２８４７５
６１−Ｒｏｓｓら（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：４１３５−４１４２
６２−Ｓｕｔｔｅｒら（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  ４７：２８７−３０８
６３−ＺｉｍｍｅｒｍａｎおよびＳｐａｎｎ（１９９９）Ａｍ  Ｆａｍ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ  ５９：１１３−１１８，１２５−１２６
６４−Ｄｒｅｅｓｅｎ（１９９７）Ｖａｃｃｉｎｅ  １５  補遺：Ｓ２−６
６５−ＭＭＷＲ  Ｍｏｒｂ  Ｍｏｒｔａｌ  Ｗｋｌｙ  Ｒｅｐ  １９９８  Ｊａｎ  １６；４７（１）：１２，１９
６６−ＭｃＭｉｃｈａｅｌ（２０００）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９  補遺１：Ｓ１０１−１０７
６７−Ｓｃｈｕｃｈａｔ（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ  ３５３（９１４６）：５１−６
６８−国際特許出願ＷＯ０２／３４７７１
６９−Ｄａｌｅ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  １３：２２７−４３，ｖｉｉｉ
７０−Ｆｅｒｒｅｔｔｉら（２００１）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９８：４６５８−４６６３
７１−Ｋｕｒｏｄａら（２００１）Ｌａｎｃｅｔ  ３５７（９２６４）：１２２５−１２４０；１２１８−１２１９頁もまた参照のこと。
７２−Ｒａｍｓａｙら（２００１）Ｌａｎｃｅｔ  ３５７（９２５１）：１９５−１９６
７３−Ｌｉｎｄｂｅｒｇ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ  １７  補遺２：Ｓ２８−３６
７４−ＢｕｔｔｅｒｙおよびＭｏｘｏｎ（２０００）ＪＲ  Ｃｏｌｌ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｌｏｎｄ  ３４：１６３−１６８
７５−ＡｈｍａｄおよびＣｈａｐｎｉｃｋ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  １３：１１３−１３３，ｖｉｉ
７６−Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４７：５６３−５６７
７７−欧州特許  ０  ４７７  ５０８
７８−米国特許第５，３０６，４９２号
７９−国際特許出願ＷＯ９８／４２７２１
８０−Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ（Ｃｒｕｓｅら編）ＩＳＢＮ  ３８０５５４９３２６，特にｖｏｌ．１０：４８−１１４
８１−Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ＩＳＢＮ：０１２３４２３３６８または０１２３４２３３５Ｘ
８２−欧州特許出願  ０３７２５０１
８３−欧州特許出願  ０３７８８８１
８４−欧州特許出願  ０４２７３４７
８５−国際特許出願  ＷＯ９３／１７７１２
８６−国際特許出願  ＷＯ９８／５８６６８
８７−欧州特許出願  ０４７１１７７
８８−国際特許出願  ＷＯ００／５６３６０
８９−国際特許出願  ＷＯ００／６１７６１
９０−ＲｏｂｉｎｓｏｎおよびＴｏｒｒｅｓ（１９９７）Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９：２７１−２８３
９１−Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（１９９７）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５：６１７−６４８
９２−Ｓｃｏｔｔ−ＴａｙｌｏｒおよびＤａｌｇｌｅｉｓｈ（２０００）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ  ９：４７１−４８０
９３−ＡｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓおよびＰｌｅｂａｎｓｋｉ（２０００）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２：４４１−４４７
９４−Ｉｌａｎ（１９９９）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １：１１６−１２０
９５−Ｄｕｂｅｎｓｋｙら（２０００）Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ６：７２３−７３２
９６−ＲｏｂｉｎｓｏｎおよびＰｅｒｍｔｅｒ（２０００）Ａｄｖ  Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ  ５５：１−７４
９７−Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（２０００）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６２（４  Ｐｔ  ２）：Ｓ１９０−１９３
９８−Ｄａｖｉｓ（１９９９）Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ  Ｊ．Ｍｅｄ．  ６６：８４−９０
【図１】
2009155344.tif 000005
【図２】
2009155344.tif 000006
【図３】
2009155344.tif 000007
【図４】
2009155344.tif 000008
【図５】
2009155344.tif 000009
【図６】
2009155344.tif 000010