(57)【要約】      （修正有）【課題】ミトコンドリアに選択的に抗酸化剤を送達することにより、標的が明確でない抗酸化剤を使用するよりもより効果的でミトコンドリアを標的にできる抗酸化剤の提供。【解決手段】一般式（１）2009298731.tif 000018（式中、Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、及び、Ａｒ４はそれぞれ独立して置換基を有してもよい炭素環式又は複素環式芳香族基を示し、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、及び、Ａｒ４のうちの１個又は２個がＮ，Ｎ’−ジ置換イミダゾール基からなるカチオン性の親水性の基を示し、残りの３個又は２個は置換基を有してもよいフェニル基からなる親油性の基を示す）で表される親水性の基と親油性の基とを有する両親媒性金属ポルフィリン錯体、より詳細にはオクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇＰｏｗの値が−２以上である両親媒性金属ポルフィリン錯体、及びこれを含有してなる医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）
【化１】
2009298731.tif 000017
（式中、Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、及び、Ａｒ４はそれぞれ独立して置換基を有してもよい炭素環式又は複素環式芳香族基を示し、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、及び、Ａｒ４のうちの１個又は２個がＮ，Ｎ’−ジ置換イミダゾール基からなるカチオン性の親水性の基を示し、残りの３個又は２個は置換基を有してもよいフェニル基からなる親油性の基を示す。）
で表される親水性の基と親油性の基を有する両親媒性金属ポルフィリン錯体。
【請求項２】
オクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇ  Ｐｏｗの値が−２以上である請求項１に記載の両親媒性金属ポルフィリン錯体。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の両親媒性金属ポルフィリン錯体の少なくとも１種、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物。
【請求項４】
医薬組成物が、酸化障害による疾患の予防又は治療用である請求項３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇ  Ｐｏｗの値が−２以上であり、親水性の基と親油性の基を有する両親媒性金属ポルフィリン錯体、及びそれを用いた医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの重要な高次機能を司る脳は、全身の酸素消費量の約２０％を消費しており、酸素消費量の最も多い組織である。脳においても他の組織と同様に酸素消費に伴う活性酸素が発生している。活性酸素の約９０％は細胞内のミトコンドリアで発生しており、ミトコンドリアでのエネルギー代謝に伴う酸素消費量の約２〜４％が活性酸素となっているとされている。一方、脳の細胞は、細胞膜成分として多量の多価不飽和脂防酸を含有しており、また脳内にはカテコールアミンなどの酸化に弱い脳内物質が多数存在しており、活性酸素などのフリーラジカルに脆弱であるとされている。このために、脳における活性酸素は主に細胞障害をもたらす因子とされ、パーキンソン病、アルツハイマー症、遅発性ジスキネジア、セロイドリポフステン蓄積症、ダウン症候群などをはじめ、脳卒中や脳梗塞、運動神経疾患などの多くの神経疾患が、活性酸素による細胞障害に関連しているとされてきている。
このように脳の細胞は活性酸素に脆弱であるとされているにもかかわらず、脳の細胞は酸素消費が著しく高く、多量の活性酸素の発生にさらされている。しかし、脳には発生した活性酸素を除去する制御機能が備わっており、脳の細胞が活性酸素による障害を受けないようになっている。例えば、活性酸素の１種であるスーパーオキシド（Ｏ２−・）は、スーパーオキシドジスミターゼ（ＳＯＤ）を多量に含有している脳ホモジネートの添加により、用量依存的に消去されることが報告されている。このように脳内では、脳内の抗酸化機構により速やかに消去され、活性酸素による脳細胞の細胞障害を防御している。しかし、脳内の活性酸素と抗酸化機構とのバランスがひとたび崩壊すれば、脳の細胞は重篤な酸化ストレスにさらされることになり、重篤な中枢神経疾患が発症することになる。
例えば、一過性の脳虚血が発生した場合には、虚血に伴うエネルギー代謝障害による脳細胞の壊死が起こるだけでなく、虚血再灌流後においても虚血に伴う酸化ストレスにより神経細胞が死滅する遅発性神経細胞死（ＤＮＤ）が発生する。これは、虚血部位での活性酸素と抗酸化機構とのバランスが虚血により崩壊し、虚血再灌流後に重篤な酸化ストレスにさらされることになった脳の細胞が、活性酸素による細胞障害に耐えきれず、神経細胞障害を起こすためであると考えられている。
【０００３】
また、一酸化窒素（ＮＯ）は、Ｌ−アルギニンからＮＯ合成酵素（ＮＯＳ）により生成される半減期の極めて短いフリーラジカルである。脳の神経細胞には、神経細胞に特有のＮＯＳがあり、グルタミン酸レセプターの興奮によりＮＯＳが活性化され、大量の一酸化窒素（ＮＯ）が発生する。脳内における一酸化窒素（ＮＯ）は、細胞保護作用や神経情報伝達の補助作用を有しているが、反面、神経細胞障害作用も有している。一酸化窒素（ＮＯ）による神経細胞障害は、一酸化窒素（ＮＯ）が活性酸素の１種であるスーパーオキシド（Ｏ２−・）と反応して、パーオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）を生成し、これがヒドロキシラジカル（ＨＯ・）を発生させ、これらが細胞膜成分の不飽和脂防酸に作用して脂質過酸化反応により神経細胞死を誘導すると考えられている。
このように脳の細胞は活性酸素に脆弱であるにもかかわらず、脳の細胞は大量の酸素を消費し、多量の活性酸素を発生しているのであるが、脳内の抗酸化機構により活性酸素による細胞障害を防御している。しかし、虚血などにより、ひとたび脳内の抗酸化機構が障害を受けると、虚血後に再灌流が始まったとしても、脳内の活性酸素と抗酸化機構とのバランスが崩れ、重篤な神経細胞障害が発生する。従って、脳内の活性酸素などのフリーラジカルを標的とした抗酸化剤は、脳酸化障害を抑制する有効な治療法になると考えられている。
【０００４】
一方、ミトコンドリアは、生体内酸素の９０％以上を消費して生命活動に必要なエネルギーであるＡＴＰを供給し、エネルギー代謝にとって重要な細胞内器官である。したがってミトコンドリアに欠陥が生じると、特に、エネルギーを大量に必要とする神経組織や筋肉組織にダメージがもたらされる。また、ミトコンドリアは、その一方で、消費酸素の数％を活性酸素種（ＲＯＳ）として産生し、過剰に産生したミトコンドリアＲＯＳがアポートシスや組織障害に関係しており、パーキンソン病、糖尿病合併症などの様々な疾病を誘導していることが報告されている。
ミトコンドリアの欠陥は、エネルギー源との機能を失うだけでなく、ほとんどの細胞の内部で酸化ストレスを引き起こすフリーラジカルと反応性酸素種を大量に放出することにもなる。
従来、活性酸素種（ＲＯＳ）による酸化ストレスからのダメージを避けるため、数多くの抗酸化療法が開発されている。しかしそのほとんどは細胞内を標的としていないため、非常に有効であるとは言えない。しかもそのような抗酸化剤の多くは好ましくない物理化学的特性を持っているため、例えば生物学的利用能が制限されたり、標的となる臓器に侵入して治療効果をもたらす能力が制限されたりする。これは、開発されてきた抗酸化剤の多くが、細胞内を標的としていないために非常に有効であるとは言えないからである。しかもそのような抗酸化剤の多くは好ましくない物理化学的特性を持っているため、例えば生物学的利用能が制限されたり、標的となる臓器に侵入して治療効果をもたらす能力が制限されていた。
【０００５】
生体への応用においては、細胞は脂質二重膜などの疎水性を有していることから、親水性の物質は細胞内への取り込みが困難であり、その効果を細胞内で発揮するためには疎水性を有していなければならないことになる。
そして、細胞内に存在するミトコンドリアは、その内膜を横切って１８０ｍＶまでの膜の内側が負となっている実質的な膜電位を有する。この電位により、膜透過性の親油性カチオンは、ミトコンドリアマトリックス内に数百倍も蓄積することが報告されている(非特許文献１及び２参照)。そのようなイオンは、正の電荷を選別するか、または正の電荷を広い表面積にわたって非局在化させるのに十分に親油性である場合、さらには、有効な流出経路が存在せず、カチオンが代謝されないか直ちに細胞にとって有害になる場合に蓄積するとされている。
ミトコンドリアの膜への蓄積については、正電荷と負電荷との電荷の関係により説明されているが、ミトコンドリアの膜の通過に関しては、エンドサイトーシスによらないことが報告されている（非特許文献３参照）。一般に、細胞膜を通過して細胞内に侵入する方法として、エンドサイトーシスが知られているが、ミトコンドリアの膜はエンドサイトーシスによらず、オクタノール−水系における分配係数（ｌｏｇ  Ｐｏｗパラメーター）によることが報告されている（非特許文献３及び４参照）。
このようなことから、ミトキノールとミトキノンというキノン系化合物の抗酸化部分に、親油性カチオンを共有結合させた化合物が、ミトコンドリアに向かうであろうし、そしてそこで抗酸化作用を発現させるであろうことが報告されてきた（特許文献１参照）。
【０００６】
一方、ポルフィリンは、４個のピロール核が４個のメチレン基で結合した環状テトラピロール構造（ポルフィン）の誘導体であり、多くの金属元素と金属錯体を形成する。鉄ポルフィリンはヘムと称されて、ヘモグロビンなどの構成要素となっている。ポリフィリンは光増感作用を有し、光記録装置や光による造影装置などにも応用されている。
ポルフィリン環には２６個のπ電子が含まれる。二重結合が共役した多くの共鳴構造のうち、寄与の大きいものは１８員環の１８π電子系である。これは、ヒュッケル則の４ｎ＋２を満足し、この共役π電子系は強い芳香族性を備えている。Ｘ線構造解析から決められた各Ｃ−Ｃ間の結合距離は、約０．１３５ｎｍで、二重結合と単結合の間にあること、またポルフィリン面がほぼ平面であることも、裏付けである。  
ポルフィリン骨格の共役平面構造は環周囲の置換基によらず保たれている。また、中央に１個の金属イオンが位置している金属ポルフィリンでは、共鳴構造の対称性はポルフィリン環全体にわたる。金属イオンの径がポルフィリンの空孔に合致しているか、上下の第５、６座への結合の有無によって、ポルフィリン環の平面構造は影響を受ける。ヘモグロビンのアロステリック作用と関連して問題となる例としては、５配位構造のヘム（がある。鉄イオンは平面中心から０．０８ｎｍ浮き上がっていて、ポルフィリンもたわんでいる。
ポルフィリンは一種の電子プールとして働き、生体内の電子授受や重要なメディエーターとなるばかりでなく、電磁、光電子機能物質としても興味がもたれている。
ノニオン性金属ポルフィリン錯体では水溶性を得ることが難しく、これまでに開発されてきたイオン性金属ポルフィリン錯体は、そのほとんどが非常に高い親水性を示していた。金属ポルフィリン錯体において、水溶性を示しながら、高い新油性をも兼ね備えることは、生体への応用などにおいて非常に有効であると考えられる。
本発明者らは、既に、金属ポルフィリン錯体がＳＯＤ活性と、パーオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）消去活性を有し、優れた抗酸化剤になりうることを報告してきた（特許文献２及び３参照）。また、これらをカタラーゼと複合体にしたもの（特許文献４参照）、これをリポソームに包埋したもの（特許文献５参照）、ヘモグロビンをＰＥＧで修飾したもの（特許文献６参照）なども報告してきた。さらに、ポルフィリンに４個のピリジン骨格が結合した誘導体（特許文献７参照）、４個のイミダゾール骨格やベンゼン骨格が結合した誘導体（特許文献８及び９参照）が抗酸化作用を有していることも報告されている。
【０００７】
従来の抗酸化剤も生体内で優れた抗酸化活性を示すが、生体内の標的コンパートメントに対する抗酸化機能は少ない抗酸化化合物として、補酵素Ｑ（ＣｏＱ）やイデベノンなどがある。この２つの化合物はどちらも生物学的利用能が小さいため、効果をもたらすには非常に多くの量を投与する必要がある。そのため投与量の割には治療効果が小さい。また、多くの抗酸化剤は自身が選択的にＲＯＳを消去するのではなく、酸化力の大きい無差別的なヒドロキシラジカルやペルオキシナイトライトの生体組織への攻撃の身代わりとなることで、ＲＯＳ障害からの保護効果を得ていたに過ぎない。
これに対して、Ｍｎポルフィリン錯体のような酵素模倣物質は酸化力は弱いが全てのＲＯＳに派生するスーパーオキシドラジカルを選択的に消去することができることから、新規抗酸化剤として、有効であることが期待されている。
【０００８】
【特許文献１】米国特許第６，３３１，５３２号明細書
【特許文献２】特開２０００−２４７９７８号公報
【特許文献３】特願２００７−９５３８１号明細書
【特許文献４】特開２００７−７５０５８号公報
【特許文献５】特開２００５−４１８６９号公報
【特許文献６】特開２００５−２７５１２号公報
【特許文献７】特表２００６−５０１１６３号公報
【特許文献８】特表２００４−５２０３８０号公報
【特許文献９】特表平１１−５０９１８０号公報
【非特許文献１】Rottenberg, et al., Methods in Enzymology, 55, 547-560 (1979).
【非特許文献２】Chen, et al., Ann. Rev. Cell Biol., 4, 155-181 (1988).
【非特許文献３】Horobin, et al., J. Controlled Release, 121 (2007), 125-136.
【非特許文献４】Asin-Cayuela, et al., FEBS Lett., 571 (2004), 9-16.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ミトコンドリアに選択的に抗酸化剤を送達することにより、標的が明確でない抗酸化剤を使用するよりもより効果的な新規な抗酸化剤として、ミトコンドリアを標的にできる抗酸化剤を提供することを目的とする。細胞内に侵入し、ミトコンドリアに集積するだけでなく、ミトコンドリアの膜を通過してミトコンドリアの内部に侵入することができれば、より効果的な抗酸化剤として機能させることが可能となるからである。
本発明は、抗酸化作用を有し、且つミトコンドリアが特別な親油性カチオンを濃縮する能力を利用することにより、そのカチオンと結合した抗酸化剤をミトコンドリアが取り込み、酸化ストレスを引き起こすフリーラジカルと反応性酸素種の主な供給源であるミトコンドリアに送達することができる新規な金属ポルフィリン錯体、及びそれを用いた医薬組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、ある抗酸化化合物がミトコンドリアを標的とした抗酸化化合物として役立つには、その抗酸化化合物が試験管内又は生体外で適切な抗酸化活性を示さねばならないのは事実であるが、さらに生体内で効果を持つためには、ミトコンドリアを標的としたその抗酸化化合物は、他の望ましい物理化学的特性（例えば、適度な生物学的利用能、及び／又は標的とするミトコンドリア内での適度な局在または分布、及び／又は適度な安定性）を示さねばならない。
本発明者らは、ポルフィリン骨格に１個又は２個のカチオン性のイミダゾール基を有し、２個又は３個の置換基を有してもよいフェニル基を有する化合物が、抗酸化活性はピリジニウム体に比べて弱いが、優れたオクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇ  Ｐｏｗの値を有しており、ミトコンドリア集積性のみならず、ミトコンドリアの膜を透過することができ、ミトコンドリアの内部に侵入可能であることを見出した。
ミトコンドリアを標的とした本発明の抗酸化化合物が、望ましい抗酸化機能（例えば、生物学的利用能及び／又はミトコンドリアを標的とすること）を示すだけでなく、その物理化学的特性（例えば、両親媒性、並びに／又は物理的構造及び／若しくは大きさ）が少なくとも理由の１つとなって、生体内に蓄積し、そして疎水性及び／又は分配係数をあまり変化させることなく生体内に存在できると考えている。したがって、このような化合物は、他の抗酸化化合物と比べて低用量で治療に有効となる。
【００１１】
即ち、本発明は、次の一般式（１）
【００１２】
【化２】
2009298731.tif 000002
【００１３】
（式中、Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、及び、Ａｒ４はそれぞれ独立して置換基を有してもよい炭素環式又は複素環式芳香族基を示し、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、及び、Ａｒ４のうちの１個又は２個がＮ，Ｎ’−ジ置換イミダゾール基からなるカチオン性の親水性の基を示し、残りの３個又は２個は置換基を有してもよいフェニル基からなる親油性の基を示す。）
で表される親水性の基と親油性の基を有する両親媒性金属ポルフィリン錯体、より詳細にはオクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇ  Ｐｏｗの値が−２以上である親水性の基と親油性の基を有する両親媒性金属ポルフィリン錯体に関する。
さらに詳細には、本発明は、次の一般式（２）、（３）、又は（４）
【００１４】
【化３】
2009298731.tif 000003
【００１５】
（式中、Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、Ｒ１はそれぞれ独立して炭素数１〜２０のアルキル基、又は基−（Ｒ３−Ｏ）ｎ−ＣＨ３（式中、Ｒ３は炭素数２〜５のアルキレン基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）を示し、Ｒ２はそれぞれ独立して水素原子、炭素数１〜２０のアルキル基、又は炭素数１〜２０のアルコキシ基を示す。）
で表される親水性の基と親油性の基を有する両親媒性金属ポルフィリン錯体、より詳細にはオクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇ  Ｐｏｗの値が−２以上である親水性の基と親油性の基を有する両親媒性金属ポルフィリン錯体に関する。
また、本発明は、前記一般式（１）で表される親水性の基と親油性の基を有する両親媒性金属ポルフィリン錯体、より詳細には、前記一般式（２）、（３）、又は（４）で表される親水性の基と親油性の基を有する両親媒性金属ポルフィリン錯体の少なくとも１種、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物に関する。
【００１６】
本発明をより詳細に説明すれば以下のとおりとなる。
（１）前記一般式（１）で表される親水性の基と親油性の基を有する両親媒性金属ポルフィリン錯体。
（２）前記一般式（２）、（３）、又は（４）で表される親水性の基と親油性の基を有する両親媒性金属ポルフィリン錯体。
（３）前記一般式（１）で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体が、次の一般式（４）、
【００１７】
【化４】
2009298731.tif 000004
【００１８】
（式中、Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、Ｒ１はそれぞれ独立して炭素数１〜２０のアルキル基、又は基−（Ｒ３−Ｏ）ｎ−ＣＨ３（式中、Ｒ３は炭素数２〜５のアルキレン基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）を示し、Ｒ２はそれぞれ独立して水素原子、炭素数１〜２０のアルキル基、又は炭素数１〜２０のアルコキシ基を示す。）
で表される金属ポルフィリン錯体である前記（１）又は（２）に記載の両親媒性金属ポルフィリン錯体。
（４）前記一般式（１）で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体が、次の一般式（２）、
【００１９】
【化５】
2009298731.tif 000005
【００２０】
（式中、Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、Ｒ１はそれぞれ独立して炭素数１〜２０のアルキル基、又は基−（Ｒ３−Ｏ）ｎ−ＣＨ３（式中、Ｒ３は炭素数２〜５のアルキレン基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）を示し、Ｒ２はそれぞれ独立して水素原子、炭素数１〜２０のアルキル基、又は炭素数１〜２０のアルコキシ基を示す。）
で表される金属ポルフィリン錯体である前記（１）又は（２）に記載の両親媒性金属ポルフィリン錯体。
（５）前記一般式（２）〜（４）におけるＲ１が、メチル基であり、Ｒ２が水素原子である前記（２）〜（４）のいずれかに記載の両親媒性金属ポルフィリン錯体。
（６）オクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇ  Ｐｏｗの値が−２以上である前記（１）〜（５）のいずれかに記載の両親媒性金属ポルフィリン錯体。
（７）前記一般式（１）〜（４）におけるＭが、鉄原子、銅原子又はマンガン原子である前記（１）〜（６）のいずれかに記載の両親媒性金属ポルフィリン錯体。
（８）前記（１）〜（７）のいずれかに記載の両親媒性金属ポルフィリン錯体の少なくとも１種、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物。
（９）医薬組成物が、酸化障害による疾患の予防又は治療用である前記（８）に記載の医薬組成物。
（１０）酸化傷害が、脳の細胞における酸化傷害である前記（９）に記載の医薬組成物。
（１１）酸化障害が、スーパーオキシド（Ｏ２−・）及び／又はパーオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）に起因するものである前記（９）又は（１０）に記載の医薬組成物。
（１２）前記（１）〜（７）のいずれかに記載の両親媒性金属ポルフィリン錯体のオクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇ  Ｐｏｗの値が、−２以上である前記（７）〜（１１）のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体は、ＳＯＤ活性、ＯＮＯＯ−消去活性を有するだけでなく、同時に脂質に対する親和性を有し細胞内に容易に取り込まれ、さらにカチオン性でミトコンドリアに集積され、そしてオクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇ  Ｐｏｗの値が−２以上であることからミトコンドリアの内部にも取り込まれ、小用量で顕著な抗酸化作用を有する細胞において従来の金属ポルフィリン錯体に比べて予想外に顕著なＳＯＤ活性、及びＯＮＯＯ−消去活性を示す。また、脂質に対する親和性が大きいことから、脳の細胞に多量に存在する細胞膜成分の不飽和脂防酸に対する脂質過酸化反応を顕著に抑制して脳の細胞の細胞死を防止することができ、また、一過性の脳虚血における酸化ストレス（低酸素傷害）などに対して極めて有効な保護作用を有するものである。
このように、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体は、ミトコンドリアでのＲＯＳ（reactive oxygen species：活性酸素種）を効果的に消去しうるものであり、特に脳内ＲＯＳを効果的に消去しうる脳酸化障害抑制能を有しており、これを有効成分として含有してなる本発明の医薬組成物は、各種の酸化傷害、特に脳の細胞の酸化障害による疾患の予防又は治療に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体は、ポルフィン骨格に４個の芳香族基を有するものであり、かつ、４個の芳香族基のうちの１個又は２個がＮ，Ｎ’−ジ置換イミダゾール基からなるカチオン性の親水性の基であり、残りの２個又は３個は置換基を有してもよいフェニル基からなる親油性の基であることを特徴とするものである。
より詳細には、前記した一般式（２）、（３）、又は（４）で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体が挙げられる。
【００２３】
本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体のフェニル基は、抗酸化作用や細胞、特に脳の細胞に対する親和性に悪影響を与えない置換基を有していてもよい。フェニル基における置換基としては、炭素数１〜２０、好ましくは１〜１０、１〜５の直鎖又は分枝状の低級アルキル基、アミノ基、水酸基、ハロゲン原子、前記した低級アルキル基で置換されているアミノ基、前記した低級アルキル基からなる低級アルコキシ基などが挙げられる。
【００２４】
本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体におけるＮ，Ｎ’−ジ置換イミダゾール基における置換基としては、炭素数１〜２０のアルキル基、又は基−（Ｒ３−Ｏ）ｎ−ＣＨ３（式中、Ｒ３は炭素数２〜５のアルキレン基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）などが挙げられる。これらの置換基は全てが同じであっても異なっていてもよい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基などの炭素数１〜２０、好ましくは１〜１５、１〜１１の直鎖又は分枝状の低級アルキル基が挙げらる。また、基−（Ｒ３−Ｏ）ｎ−ＣＨ３におけるＲ３としては、エチレン基、プロピレン基などの炭素数２〜５、好ましくは２〜３の直鎖又は分枝状の低級アルキレン基が挙げられる。繰り返し数のｎとしては１〜１０、好ましくは１〜５が挙げられる。これらの繰り返し数は必ずしも一定の値である必要はなく、１〜１０の混合物であってもよい。
本発明のカチオン性の親水性の基であるＮ，Ｎ’−ジ置換イミダゾール基は、１位の窒素原子が置換されており、さらに３位の窒素原子が炭素原子により第四級化されてカチオン性になっているものである。
本発明のカチオン性の親水性の基であるＮ，Ｎ’−ジ置換イミダゾール基の好ましい例としては、例えば、１，３−ジメチルイミダゾール−２−イル基、１，３−ジエチルイミダゾール−２−イル基、１，３−ジプロピルイミダゾール−２−イル基などのＮ，Ｎ’−ジ低級アルキル−イミダゾール−２−イル基などが挙げられる。
【００２５】
前記一般式（１）における親油性の基である置換基を有してもよいフェニル基は、細胞膜、特に脳の細胞の細胞膜成分として多量に存在している不飽和脂防酸に親和性を有しているだけでなく、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体のオクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇ  Ｐｏｗの値を−２以上とするものである。このような置換基を有してもよいフェニル基はポルフィリン骨格に少なくとも２個、好ましくは３個が結合している。好ましい置換基を有してもよいフェニル基としては、具体的には、例えば、フェニル基、４−トリル基、４−エチルフェニル基等が挙げられる。
【００２６】
本発明におけるオクタノール−水系における分配係数のパラメーターであるｌｏｇ  Ｐｏｗの値は、オクタノール／水二相溶媒系における分配係数Ｐｏｗの対数としてｌｏｇ  Ｐｏｗ値を決定することができる。分配係数Ｐｏｗの値はshake flask法により測定し、その対数として算出される値である。
本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体は、ｌｏｇ  Ｐｏｗの値が、−２以上好ましくは０以上のものが挙げられる。ｌｏｇ  Ｐｏｗの範囲としては−２〜２０、好ましくは−２〜５、更に好ましくは０〜１０の範囲が挙げられる。
前記した一般式（１）で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体は、ポルフィリン骨格に１個又は２個のカチオン性の親水性のイミダゾール基と、２個又は３個の親油性の置換基を有してもよいフェニル基を有していることを特徴とするものであり、これにより両親媒性となり、ポリフィリン錯体による抗酸化作用と同時に細胞、特に脳の細胞に対する親和性を有し、さらにミトコンドリアへの集積及びミトコンドリアの膜を透過する能力を有することになる。２個の親水性のイミダゾール基は、前記した一般式（１）におけるＡｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、及び、Ａｒ４のうちのいずれの位置であってもよいが、好ましい位置としては、Ａｒ１及びＡｒ２の位置が挙げられる。
本発明における好ましい一般式（１）で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体としては、次の一般式（２）、（３）、又は（４）
【００２７】
【化６】
2009298731.tif 000006
【００２８】
（式中、Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、Ｒ１はそれぞれ独立して炭素数１〜２０のアルキル基、又は基−（Ｒ３−Ｏ）ｎ−ＣＨ３（式中、Ｒ３は炭素数２〜５のアルキレン基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）を示し、Ｒ２はそれぞれ独立して水素原子、炭素数１〜２０のアルキル基、又は炭素数１〜２０のアルコキシ基を示す。）
で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体が挙げられる。さらに、好ましい一般式（１）で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体としては、次の一般式（４）、
【００２９】
【化７】
2009298731.tif 000007
【００３０】
（式中、Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、Ｒ１はそれぞれ独立して炭素数１〜２０のアルキル基、又は基−（Ｒ３−Ｏ）ｎ−ＣＨ３（式中、Ｒ３は炭素数２〜５のアルキレン基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）を示し、Ｒ２はそれぞれ独立して水素原子、炭素数１〜２０のアルキル基、又は炭素数１〜２０のアルコキシ基を示す。）
で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体が挙げられる。
また、次の一般式（２）
【００３１】
【化８】
2009298731.tif 000008
【００３２】
（式中、Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、Ｒ１はそれぞれ独立して炭素数１〜２０のアルキル基、又は基−（Ｒ３−Ｏ）ｎ−ＣＨ３（式中、Ｒ３は炭素数２〜５のアルキレン基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）を示し、Ｒ２はそれぞれ独立して水素原子、炭素数１〜２０のアルキル基、又は炭素数１〜２０のアルコキシ基を示す。）
で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体も、本発明の好ましい金属ポルフィリン錯体のひとつである。
前記した一般式（２）、（３）及び（４）における好ましいＲ１としては、メチル基、エチル基などの炭素数１〜２０、好ましくは１〜１０、１〜５の直鎖状又は分岐状のアルキル基が挙げられる。前記した一般式（２）、（３）及び（４）における好ましいＲ２としては、水素原子、又はメチル基、エチル基などの炭素数１〜２０、好ましくは１〜１０、１〜５の直鎖状又は分岐状のアルキル基が挙げられる。
【００３３】
本発明の前記してきた一般式（１）、一般式（２）、一般式（３）又は一般式（４）で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体の例としては、例えば、金属−５，１５−ビス（Ｎ，Ｎ’−ジメチル−イミダゾール−２−イル）−１０，２０−ジフェニルポルフィリン（以下、金属−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐと表記することがある。）、金属−５−（Ｎ，Ｎ’−ジメチル−イミダゾール−２−イル）−１０，１５，２０−トリフェニルポルフィリン（以下、金属−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐと表記することがある。）、金属−５，１０−ビス（Ｎ，Ｎ’−ジメチル−イミダゾール−２−イル）−１５，２０−ジフェニルポルフィリンなどが挙げられる。
【００３４】
本発明の前記してきた一般式（１）、一般式（２）、一般式（３）又は一般式（４）で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体における中心金属Ｍとしては、抗酸化作用と同時に細胞、特に脳の細胞に対する親和性を示すものであれば特に制限はなく、鉄（Ｆｅ）、マンガン（Ｍｎ）、コバルト（Ｃｏ）、銅（Ｃｕ）、モリブデン（Ｍｏ）、クロム（Ｃｒ）、イリジウム（Ｉｒ）等が挙げられるが、このなかでも鉄原子（Ｆｅ）、銅原子（Ｃｕ）又はマンガン原子（Ｍｎ）などが好ましく、マンガン原子（Ｍｎ）がさらに好ましい。
したがって、本発明の前記してきた一般式（１）、一般式（２）、一般式（３）又は一般式（４）で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体の例としては、前記した金属ポルフィリン錯体の金属部分がマンガンになっている錯体、例えば、マンガン−５，１５−ビス（Ｎ，Ｎ’−ジメチル−イミダゾール−２−イル）−１０，２０−ジフェニルポルフィリン（以下、Ｍｎ−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐと表記することがある。）、マンガン−５−（Ｎ，Ｎ’−ジメチル−イミダゾール−２−イル）−１０，１５，２０−トリフェニルポルフィリン（以下、Ｍｎ−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐと表記することがある。）、マンガン−５，１０−ビス（Ｎ，Ｎ’−ジメチル−イミダゾール−２−イル）−１５，２０−ジフェニルポルフィリンなどが挙げられる。
【００３５】
本発明の前記してきた一般式（１）、一般式（２）、一般式（３）又は一般式（４）で表される両親媒性金属ポルフィリン錯体は、例えば、K. Kalyanasundaram, Inorg. Chem., 23, 2453(1984)、 A. D. Adler et al., J. Inorg. Nucl. Chem., 32, 2443(1970)、 T, Yonetani et al., J. Biol. Chem., 245, 2988(1970)、 P. Hambright, Inorg. Chem., 15, 2314(1976)等に記載の方法に準じて製造することができる。例えば、ピロールとイミダゾリルアルデヒド、及び置換基を有してもよいベンズアルデヒドとを反応させてポリフィリン環部分を製造することができる。しかし、４個の芳香族基が同一の基である従来のポルフィリンでは、原料となる芳香族アルデヒドが１種類であり、単一のポルフィリンを製造することができるが、本発明のポルフィリンでは、２種又は２種以上の芳香族基を有することになるので、原料となる芳香族アルデヒドが２種又は２種以上となり、生成物は混合物となる。この方法で得られた混合物をカラムクロマトグラフィーなどの分離手段により、分離することにより、目的の本発明のポルフィリンを得ることができる。
このようにして製造された目的のポルフィリンを、ハロゲン化低級アルキルや低級アルキルトシレートなどのアルキル化剤でカチオン化し、次いで金属又は金属化合物、例えば金属ハロゲン化物、金属酢酸塩などを用いて金属錯体とする方法により、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体を製造することができる。
代表的な製造方法の具体的な例を、Ｍｎ−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐ及びＭｎ−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐの製造方法として次の化学反応式で示す。
【００３６】
【化９】
2009298731.tif 000009
【００３７】
次に、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体の種々の特性を測定した。
これらの試験においては、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体の例としてＭｎ−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐ及びＭｎ−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐを用い、比較としてＭｎ−ｄＭＩｍ４Ｐ（マンガン−５，１０，１５，２０−テトラキス（Ｎ，Ｎ’−ジメチル−イミダゾール−２−イル）−ポルフィリン）及びＭｎ−ＭＰｙ４Ｐ（マンガン−５，１０，１５，２０−テトラキス（Ｎ−メチル−４−ピリジル）−ポルフィリン）を用いた。これらの試験に用いたＭｎ−ｄＭＩｍ４Ｐの化学構造を次に示しておく。
【００３８】
【化１０】
2009298731.tif 000010
【００３９】
また、比較として用いたＭｎ−ＭＰｙ４Ｐの化学構造を次に示しておく。
【００４０】
【化１１】
2009298731.tif 000011
【００４１】
これらの錯体のスーパーオキシド（Ｏ２−・）消失活性（ＳＯＤ活性）を、オオセらの方法（T.Ohse, et al., Porphyrins, 6, 137 (1997)）に準じたストップトフロー法により評価した。試験物質のＨＥＰＥＳ／ＨＥＰＥＳ・Ｎａ緩衝液（ｐＨ８．１）と、スーパーオキシド（Ｏ２−・）の発生剤としてＫＯ２のＤＭＳＯ（ジメチルスルホキサイド）溶液とを３７℃で反応させ、スーパーオキシド（Ｏ２−・）の極大吸収波長である２４５ｎｍの吸光度の経時変化を測定した。これにより、スーパーオキシド（Ｏ２−・）の不均化反応速度（ｋｃａｔ）を以下の式から算出した。
−Ｉｎ［Ｏ２ − ・］  ＝  ｋｏｂｓ    ×  ｔ
ｋｃａｔ  ＝  ｋｏｂｓ  ×  ［Ｍｎポルフィリン濃度］
結果を次の表１に示す。
【００４２】
【表１】
2009298731.tif 000012
【００４３】
次に、同様のストップトフロー法によりパーオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）消去活性を試験した。試験物質のＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）と、亜硝酸を用いて発生させたパーオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）の水溶液とを、アスコルビン酸の存在下で３７℃で反応させて、パーオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）の極大吸収波長である３０１ｎｍにおける吸光度の経時変化を測定した。これにより、パーオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）の分解反応速度（ｋｃａｔ）を以下の式から算出した。
−Ｉｎ［ＯＮＯＯ−］  ＝  ｋｏｂｓ    ×  ｔ  
ｋｃａｔ    ＝  ｋｏｂｓ    ×  ［Ｍｎポルフィリン濃度］
結果を次の表２に示す。
【００４４】
【表２】
2009298731.tif 000013
【００４５】
これらのストップトフロー方法による抗酸化能評価の結果、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体であるＭｎ−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐ及びＭｎ−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐは、ＳＯＤ活性、及びＯＮＯＯ−消去活性を有していることが明らかとなった（前記した表１及び表２参照）。そのＯＮＯＯ−消去活性は、Ｍｎ（IV）からＭｎ（III）へ還元される速度が律速となり必ずしも高いものではなかったが、アスコルビン酸の存在下では、その還元効果により消去活性は５０倍以上に増大した。脳内ではアスコルビン酸濃度が高く、脳内でのインビボ（in vivo）の評価では本発明のＭｎ−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐ及びＭｎ−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐはフリーラジカル消去能が期待できることが明らかになった。
【００４６】
次に、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体の脂質親和性（疎水性）についての評価を、オクタノール／水二相溶媒系における分配係数Ｐｏｗ及びその対数のｌｏｇ  Ｐｏｗ値を決定した。この値はshake flask法により測定した値から算出した。結果を次の表３に示す。
【００４７】
【表３】
2009298731.tif 000014
【００４８】
このように、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体は、親油性の基が導入されており、オクタノールへの分配が明らかとなったが、親油性の基を有していない従来のＭｎ−ＭＰｙ４ＰやＭｎ−ｄＭＩｍ４Ｐではオクタノールへの分配を検出することができなかった。したがって、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体は、前記してきたようにＳＯＤ活性、及びＯＮＯＯ−消去活性を共に有している（前記した表１及び表２参照）だけでなく、脂質親和性（疎水性）をも同時に有していることが明らかになった。
【００４９】
以上のように、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体は、ＳＯＤ活性、ＯＮＯＯ−消去活性を有するだけでなく、同時に脂質に対する親和性を有し、細胞内に容易に取り込まれるだけでなく、ミトコンドリアの膜を透過できるだけの大きなｌｏｇ  Ｐｏｗの値を有しており、ミトコンドリア内部でのＳＯＤ活性、及びＯＮＯＯ−消去活性を示すだけでなく、脂質に対する親和性が大きいことから、脳の細胞に多量に存在する細胞膜成分の不飽和脂防酸に対する脂質過酸化反応を顕著に抑制して脳の細胞の細胞死を防止することができ、また、一過性の脳虚血における酸化ストレス（低酸素傷害）に対して極めて有効な保護作用を有するものである。
【００５０】
そこで、ヒト神経線維芽細胞を用いた６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）毒性からの細胞保護作用を細胞生存率（％）により評価した。
その結果を次の表４に示す。
【００５１】
【表４】
2009298731.tif 000015
【００５２】
このように、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体は、脳内ＲＯＳ（reactive oxygen species：活性酸素種）を効果的に消去しうる脳酸化障害抑制能を有している。
また、本発明の医薬組成物は、経口又は非経口により投与することができ、その有効投与量は、病態や患者により相違するが、一般的には１μｇ〜１ｇを１日数回に分けて投与するか連続的に投与する。本発明の医薬組成物は公知の方法により、製剤化することができ、投与方法や患者により適宜製剤することができる。例えば、本発明の医薬組成物は、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体の少なくとも１種を有効成分として含有し、これに製薬上許容される担体、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤などと共に公知の方法により製剤化することができる。本発明の医薬組成物は、用量単位の形態、例えば、錠剤、カプセル、または坐剤とすることができる。また、本発明の医薬組成物は、注射または噴霧療法に適する無菌溶液とすることもできる。
本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体、又はこれを有効成分とする本発明の医薬組成物による予防や治療に適する疾患としては、脳の細胞の酸化障害による疾患、特にスーパーオキシド（Ｏ２−・）及び／又はパーオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）に起因する疾患が挙げられる。このような疾患の例としては、例えば、パーキンソン病、アルツハイマー症、遅発性ジスキネジア、セロイドリポフステン蓄積症、ダウン症候群などをはじめ、脳卒中や脳梗塞、運動神経疾患などの多くの神経疾患が挙げられる。
特に本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体は、前出してきた薬理試験からも明らかなように、一過性の脳虚血における酸化ストレス（低酸素傷害）に対して極めて有効な保護作用を有するものであり、脳の虚血再灌流後における酸化障害、例えば、遅発性神経細胞死（ＤＮＤ）などの疾患に対して有効である。
したがって、本発明の医薬組成物は、これらの各種の脳神経疾患の予防や治療に有効である。
【００５３】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００５４】
本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体の製造
１−メチル−イミダゾール−２−イル  カーボアルデヒド  ３．６６ｇ、ベンズアルデヒド  ７．２１ｍｌをプロピオン酸５０ｍｌ中に溶解し、８０℃で３０分加熱・攪拌した。蒸留によって精製したピロール７．２１ｍｌをゆっくり加えて、１１０℃で４時間、還流した。その後、溶媒であるプロピオン酸を留去した。
溶媒を留去後、再度、クロロホルムに溶解し、カラムクロマトグラフィー（固定相Aluminium oxide 90 active basic、移動相クロロホルム）で分離し、第２の紫色の相を回収した。
得られた分画を再度、カラムクロマトグラフィー（固定相シリカゲル６０、移動相クロロホルムで分離し、第１相を回収して、Ｈ２−ＭＩｍＰｈ３Ｐを得た。
得られたＨ２−ＭＩｍＰｈ３Ｐ  ２１０ｍｇをクロロホルム２０ｍｌに溶解し、ヨードメタン２ｍｌを加え、４０℃で２４時間攪拌した。その後、カラムクロマトグラフィー（固定相Aluminium oxide 90 active basic、移動相クロロホルム：メタノール＝１００：１５）で分離し、第２相を回収して、Ｈ２−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐ＋・Ｉ−を得た。
１Ｈ−ＮＭＲのチャートを図１に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ：  δ    -2.64（環内部の２Ｈ）, 4.00(メチル基の６Ｈ), 
7.27(ＣＨＣｌ３), 7.77-8.21(フェニル基の１５Ｈ), 
8.52(イミダゾール基の２Ｈ), 8.71-9.1(β−ピロール)
【００５５】
Ｈ２−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐ４＋４Ｉ−  ３２０ｍｇをメタノール２０ｍｌに溶解し、Ｍｎ酢酸塩を０．１６ｇ加え、４０℃で４８時間攪拌した。溶媒留去後、水に溶解し、リン酸ヘキサフルオルアンモニウム（Ammonium hexafluoro phosphate）を徐々に加えて、ポルフィリン錯体を沈殿させ、ろ過して回収した。回収したポルフィリン錯体ＰＦ６塩を乾燥し、アセトンに溶解後、塩化テトラエチルアンモニウムの飽和アセトン溶液を徐々に加えた。溶液の色が変化した後、アセトンを留去した。
固体を水に溶解し、クロロホルムを加えクロロホルム相へ抽出を行い、クロロホルム層を回収して、Ｍｎ−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐ２＋・２Ｃｌ−を得た。得られたＭｎ−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐ２＋・２Ｃｌ−のＵＶスペクトルを図２に示す。
【実施例２】
【００５６】
実施例１と同様にして、Ｍｎ−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐを得た。
１−メチル−イミダゾール−２−イル  カーボアルデヒド３．６６ｇ、ベンズアルデヒド７．２１ｍｌをプロピオン酸５０ｍｌ中に溶解し、８０℃で３０分加熱・攪拌した。次いで、蒸留によって精製したピロール７．２１ｍｌをゆっくり加えて、１１０℃で４時間、還流した。その後、溶媒であるプロピオン酸を留去した。
溶媒を留去後、再度、クロロホルムに溶解し、カラムクロマトグラフィー（固定相Aluminium oxide 90 active basic、移動相クロロホルム）で分離し、第２の紫色の相を回収した。得られた画分を再度、カラムクロマトグラフィー（固定相シリカゲル６０、移動相クロロホルム／メタノール＝１００：５）で分離し、第２相を回収し、ｔｒａｎｓ−Ｈ２−ＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐを得た。
得られたｔｒａｎｓ−Ｈ２−ＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐ  ２１０ｍｇをクロロホルム２０ｍｌに溶解し、ヨードメタン４ｍｌを加え、４０℃で２４時間攪拌した。その後、溶媒を留去し、水とジクロロメタンを加え、分液し、水相を回収した。ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去し、Ｈ２−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐ２＋・２Ｉ−を得た。
得られたＨ２−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐ２＋・２Ｉ−  ３２０ｍｇをメタノール２０ｍｌに溶解し、Ｍｎ酢酸塩を０．１６ｇ加え、４０℃で４８時間攪拌した。溶媒留去後、水に溶解し、アンモニウム  ヘキサフルオロ  フォスファイト（Ammonium hexafluoro phosphate）を徐々に加えて、ポルフィリン錯体を沈殿させ、ろ過して回収した。回収したポルフィリン錯体のＰＦ６塩を乾燥し、アセトンに溶解後、塩化テトラエチルアンモニウム塩を飽和させたアセトン溶液を徐々に加えた。沈殿物をろ過し、乾燥後回収し、標記のＭｎ−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐ３＋・３Ｃｌ−を得た。
得られたＨ２−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐの１Ｈ−ＮＭＲのチャートを図３に示し、Ｍｎ−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２ＰのＵＶスペクトルを図４に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ：  δ    -2.94（環内部の２Ｈ）, 3.78(メチル基の１２Ｈ), 
7.96(フェニル基のパラ及びメタ位の６Ｈ), 
8.33(イミダゾール基の４Ｈ), 
8.56(フェニル基のオルト位の４Ｈ), 9.12(β−ピロール)
【実施例３】
【００５７】
ＳＯＤ  活性評価
ストップトフロー法による評価は、混合装置にApplied Photophysics SX-18MX stopped-flow装置を用いた。混合装置のシリンダーＡにＨＥＰＥＳ緩衝溶液を用いて調製したＭｎポルフィリン溶液を入れ、シリンダーＢに超酸化カリウム（１ｇ）をＤＭＳＯに分散させて調製した・Ｏ２−飽和溶液を入れた。シリンダーＡおよびＢ内の溶液を体積比２０：１で迅速に混合した後、２４５ｎｍにおける吸光度の経時変化を測定した。これによりＯ２−・の不均化反応速度（ｋｃａｔ）を以下の式から算出した。
−Ｉｎ［Ｏ２−・］  ＝  ｋｏｂｓ    ×  ｔ
ｋｃａｔ  ＝  ｋｏｂｓ  ×  ［Ｍｎポルフィリン濃度］
結果を表１に示した。
【実施例４】
【００５８】
ＯＮＯＯ−分解活性評価  
ストップトフロー法による評価は，混合装置にApplied Photophysics SX-18MX stopped-flow装置を用いた。混合装置のシリンダーＡに１００ｍＭリン酸緩衝溶液を用いて調製したＭｎポルフィリン溶液及びアスコルビン酸を入れ，シリンダーＢに０．８Ｍ  Ｈ２Ｏ２溶液２５ｍｌと０．８Ｍ  ＮａＮＯ２溶液２５ｍｌと１Ｍ  ＨＣｌ，１．５Ｍ  ＮａＯＨ溶液それぞれ２５ｍｌから作成したＯＮＯＯ−溶液を入れ、シリンダーＡおよびＢ内の溶液を体積比１：１で迅速に混合した後，３０１ｎｍにおける吸光度の経時変化を測定した。これによりＯＮＯＯ−の分解反応速度（ｋｃａｔ）を以下の式から算出した。
−Ｉｎ［ＯＮＯＯ−］  ＝  ｋｏｂｓ    ×  ｔ  
ｋｃａｔ    ＝  ｋｏｂｓ    ×  ［Ｍｎポルフィリン濃度］
結果を表２に示した。
【実施例５】
【００５９】
Ｈ２Ｏ２安定性試験
ＵＶ−ｖｉｓ分光光度計による評価は１ｍｌセル中に５μＭポルフィリン溶液８００μｌを加え、０〜６００ｍＭ、Ｈ２Ｏ２  ＰＢＳ溶液を加え、４６２ｎｍの吸光度の減衰２００ｓｅｃ追跡した。これによりＨ２Ｏ２によるポルフィリン錯体の分解反応定数（ｋｄｅｇ）を以下の式から算出した。
−Ｉｎ［ポルフィリン］  ＝  ｋｏｂｓ    ×  ｔ  
ｋｄｅｇ    ＝  ｋｏｂｓ    ×  ［Ｈ２Ｏ２濃度］
結果を次の表５に示す。
【００６０】
【表５】
2009298731.tif 000016
【実施例６】
【００６１】
細胞保護効果
１０％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ中で培養したヒト神経線維芽細胞ＳＨ−ＳＹ５Ｙを１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで９６穴プレートに播種した。翌日、１μＭのＭｎポルフィリン錯体ＰＢＳ溶液を加え、４時間後に、５０μＭ６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）のＰＢＳ溶液を加え、２４時間後、培地を交換し、アラマーブルーを加え、４時間後に５７０ｎｍ、５９５ｎｍの吸光度から、細胞生存率を算出した。
結果を図５のグラフで示す。図５の縦軸は生存率（％）を示し、横軸は左側から、対照の６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）、Ｍｎ−ＭＰｙ４Ｐ、Ｍｎ−ｄＭＩｍ４Ｐ、Ｍｎ−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２Ｐ、及びＭｎ−ｄＭＩｍＰｈ３Ｐの場合をそれぞれ示す。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体は、スーパーオキシド（Ｏ２−・）やパーオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）などの細胞内ＲＯＳ、特に脳内ＲＯＳ（reactive oxygen species：活性酸素種）を効果的に消去しうる脳酸化障害抑制能を有しており、これを有効成分として含有してなる本発明の医薬組成物は、各種の脳の細胞の酸化障害による疾患に有効な医薬品として有用であり、本発明は製薬産業などにおける産業上の利用可能性を有している。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】図１は、本発明のＨ２−ｄＭＩｍＰｈ３ＰのＮＭＲスペクトルのチャートである。
【図２】図２は、本発明のＭｎ−ｄＭＩｍＰｈ３ＰのＵＶスペクトルのチャートである。
【図３】図３は、本発明のＨ２−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２ＰのＮＭＲスペクトルのチャートである。
【図４】図４は、本発明のＭｎ−ｄＭＩｍ２Ｐｈ２ＰのＵＶスペクトルのチャートである。
【図５】図５は、本発明の両親媒性金属ポルフィリン錯体の細胞保護作用の試験の結果を示すグラフである。
【図１】
2009298731.tif 000019
【図２】
2009298731.tif 000020
【図３】
2009298731.tif 000021
【図４】
2009298731.tif 000022
【図５】
2009298731.tif 000023