(57)【要約】【課題】  ＨＭＢ（３−ヒドロキシ−３−メチル酪酸）は、例えば、血中コレステロールを低下させる作用、ヒトにおける窒素保持を改善する作用等が知られ、公知の化合物である。本発明の課題は、これら以外の疾病に有効である治療剤の提供にある。【解決手段】  ＨＭＢ（３−ヒドロキシ−３−メチル酪酸）またはその塩を有効成分とする抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、血圧降下剤、抗糖尿病剤、抗アレルギー剤、抗疲労剤、皮膚外用剤、養毛・育毛剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗骨粗鬆症剤
【請求項２】
ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗鬱・抗ストレス剤。
【請求項３】
ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする血圧降下剤。
【請求項４】
ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗糖尿病剤。
【請求項５】
ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗アレルギー剤。
【請求項６】
ＨＭＢまたはその塩を含有する抗疲労剤。
【請求項７】
ＨＭＢまたはその塩を含有する皮膚外用剤。
【請求項８】
ＨＭＢまたはその塩を含有する養毛・育毛剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする各種疾病に有用な治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＭＢは、例えば、血中コレステロールを低下させる作用（特許文献１）、ヒトにおける窒素保持を改善する作用（特許文献２）等が知られている。
しかしながら、ＨＭＢまたはその塩が、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、顕著な効果でもって有効であるとの見地はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開ＷＯ９４／０６４１７号パンフレット
【特許文献２】国際公開ＷＯ９４／１４４２９号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
請求項１に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗骨粗鬆症剤である。
請求項２に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗鬱・抗ストレス剤である。
請求項３に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする血圧降下剤である。
請求項４に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗糖尿病剤である。
請求項５に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を有効成分とする抗アレルギー剤である。
請求項６に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を含有する抗疲労剤である。
請求項７に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を含有する皮膚外用剤である。
請求項８に記載の発明は、ＨＭＢまたはその塩を含有する養毛・育毛剤である。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤が提供される。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
【０００８】
ＨＭＢ（３−ヒドロキシ−３−メチル酪酸；ビス（３−ヒドロキシ−３−メチルブチレート）モノハイドレート）は、上記の特許文献１，２に記載されているように、広く知られている化合物である。
ＨＭＢの塩としては、特に制限されないが、薬学的に許容可能な塩が挙げられ、例えば、ナトリウム塩、カルシウム塩、カリウム塩等が挙げられる。
ＨＭＢまたはその塩は、公知の化学合成法により製造可能であり、また市販されているものを利用することもできる。
【０００９】
ＨＭＢまたはその塩の投与量は、患者の年令、体重、適応症状などによって異なるが、例えば、成人１日１〜数回、１日あたり０．００１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは０．１ｍｇ〜５００ｍｇ程度投与するのがよい。
【００１０】
本発明の治療剤は、錠剤、ピル、カプセル、顆粒、粉末、散剤、液剤等の固形または溶液の形態（以下、製剤ともいう）に公知の方法により適宜調製することができる。即ち、本発明に有用な固形製剤または液状製剤は、従来充分に確立された公知の製剤製法を用いることにより製造される。添加剤としては、例えば賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、希釈剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤または香料などが挙げられる。
【００１１】
また本発明の治療剤は、各種健康食品および機能性食品として摂取可能である。これらの例としては、各種のものをあげることができるが、健康食品および機能性食品の製造に関しては、通常用いられる、食品素材、食品添加物に加え、賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、分散剤、保存剤、湿潤化剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化材、カプセル基剤等の補助剤を用いた飲食品製剤形態で利用することができる。該補助剤の具体的な例示をすれば、乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、またはその塩、アラビアガム、ポリエチレングルコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウム、プルラン、カラギーナン、デキストリン、還元パラチノース、ソルビトール、キシリトール、ステビア、合成甘味料、クエン酸、アスコルビン酸、酸味料、重曹、ショ糖エステル、植物硬化油脂、塩化カリウム、サフラワー油、ミツロウ、大豆レシチン、香料等が配合できる。このような健康食品、機能性食品の製造に関しては、医薬品製剤の参考書、例えば「日本薬局方解説書（製剤総則）」（廣川書店）等を参考にすることができる。
【００１２】
上記以外にも本発明の治療剤は飲食品として摂取することができる。具体的には、納豆、厚揚げ、豆腐、こんにゃく、団子、漬物、佃煮、コロッケ、サンドイッチ、ピザ、ハンバーガー、餃子、シューマイ、サラダ等の各種総菜や、各種粉末（ビーフ、ポーク、チキン等畜産物、海老、帆立、蜆、昆布等水産物、野菜・果実類、植物、酵母、藻類等）や、プリン、クッキー、クラッカー、パン、ケーキ、チョコレート、ポテトチップス、ビスケット、ドーナツ、ゼリーなどの洋菓子、煎餅、羊羹、大福、おはぎ、その他の饅頭、カステラなどの和菓子、冷菓（飴等）、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば、きしめん等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、ハム、ソーセージ、ハンバーグ、コーンビーフ等の畜肉製品や、塩、胡椒、みそ、しょう油、ソース、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、甘味料、辛味料等の調味類や、明石焼き、たこ焼き、もんじゃ焼き、お好み焼き、焼きそば、焼きうどん等の鉄板焼き食品や、チーズ、ハードタイプのヨーグルト等の乳製品や、油脂類・香料類（バニラ、柑橘類、かつお等）を粉末固形化したものや、粉末飲食品（インスタントコーヒー、インスタント紅茶、インスタントミルク、インスタントスープ、味噌汁等）等の各種食品が挙げることができるが、これらに特に制限されない。
【００１３】
さらに本発明においては、例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、葉酸、パントテン酸、ビオチン、これらの誘導体等）、ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛等）、セレン、レシチン、カロテノイド（リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン等）、サポニン（ギムネマ酸、大豆サポニン、人参サポニン等）、脂肪酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチン等）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖等）、リン脂質及びその誘導体（フォスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、セラミド等）、含硫化合物（アリイン、セパエン、タウリン、グルタチオン、メチルスルホニルメタン等）、糖アルコール、リグナン類（セサミン等）、これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ウコン、ショウガ等）、などを併用することもできる。
【００１４】
また、ＨＭＢまたはその塩を皮膚外用剤として用いる場合は、皮膚外用剤として通常使用される公知の材料、例えば色素、香料、防腐剤、界面活性剤、顔料、抗酸化剤、保湿剤、紫外線吸収剤などを適宜配合することができる。
本発明の皮膚外用剤は、クリーム、乳液、化粧水、パック等、公知の形態で使用され得る。ＨＭＢまたはその塩の配合割合はとくに制限されないが、皮膚外用剤中、例えば０．０００１質量％〜５質量％、好ましくは０．００１質量％〜１質量％である。
【実施例】
【００１５】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本発明の治療剤は、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、血圧降下剤、抗糖尿病剤、抗アレルギー剤、抗疲労剤、皮膚外用剤、養毛・育毛剤としてきわめて有用である。以下、上記各種薬効について実施例でもって説明する。
【００１６】
実施例１（抗骨粗鬆症効果）
骨粗鬆症改善効果試験
ＳＤ系ラット（２２週齢）メスの卵巣を外科的に取り除き、骨粗鬆症のモデルラットを作成した。卵巣摘出ラットを７匹ずつ６群に分け、３５日間の試験期間中、１日置きに（計１７回）、ＨＭＢが３０ｍｇ／ｋｇとなるように、生理食塩水溶解した液体を経口投与した。飼料はオリエンタル酵母株式会社のマウス・ラット・ハムスター用固形飼料ＣＲＦ−１を用い、給餌および給水方法は自由摂取とした。試験期間中、各群間で、餌の摂取量に差は認められなかった。試験開始後３５日目にラットの体重を測定した後、大腿骨を取り出した。大腿骨は、接着組織および筋肉を取り除いて分析に使用した。大腿骨の体積を測定した後、エタノールで３回洗浄し、次にアセトンで３回洗浄したのち、一晩乾燥し、その後、重量を測定して大腿骨の乾燥重量を求めた。体積および乾燥重量から、骨密度（乾燥重量ｇ／体積ｍｍ3 ）を測定した。なお対照実験として、ＨＭＢを含まない生理食塩水をラットに投与したこと以外は、上記実験を繰り返した例（比較例）も行なった。その結果、比較例の骨密度が１．０１０ｍｇ／ｍｍ３であったのに対し、実施例１の骨密度は１．０９５ｍｇ／ｍｍ３であった。
【００１７】
実施例２（抗鬱・抗ストレス効果）
ＨＭＢの治療効果を調べた。
マウス強制水泳試験による精神安定作用の評価
本発明の治療剤の評価は、１９７７年にPorsoltにより開発されたマウス強制水泳試験を採用した。本試験は鬱病の動物モデル実験として最も多用される方法のひとつである。本試験では、マウスをある限られたスペースの中で強制的に泳がせて「無動状態」を惹起させる。この無動状態は、ストレスを負荷された動物が水からの逃避を放棄した一種の「絶望状態」を反映するものと考えられ、ヒトにおける鬱状態、ストレス状態と関連づけられている。事実、抗鬱薬は特異的にこの状況下における無動状態の持続時間を短縮させることがわかっており、この短縮作用は臨床力価との間に有意な相関を有することが認められている。
【００１８】
本試験方法は次のとおりである。
２５℃の水を深さ１５ｃｍまで入れたプラスチック円筒中でマウスを強制水泳させる。５分間の強制水泳後、３０℃の乾燥機中で１５分間乾燥し、ホームケージに戻す。翌日マウスに試験試料を腹腔内投与して、その１時間後に再び５分間の強制水泳を課し、現れた無動状態の持続時間をストップウォッチを用いて測定する。マウスが水に浮かんで静止している状態を無動状態と判定する。無動状態持続時間については有意差検定を行い、統計学的に有意差を検定する。実験には雄のｄｄYマウスを使用し、１群６匹とする。なお、試験は全て午後１時から午後６時の間に行う。また、ポジティブコントロールとして抗鬱薬であるイミプラミンを用いた試験も行う。
【００１９】
その結果、ＨＭＢのＣａ塩を３０ｍｇ／ｋｇ投与したマウスの無動状態持続時間は、１７８．８±２．８秒であった。コントロール（生理食塩水のみ）は２０９．０±３．２秒であった。ポジティブコントロール（３０ｍｇ／ｋｇ投与）のマウスの無動状態持続時間は、１８１．２±４．６秒であった。本実施例およびポジティブコントロールの無動状態持続時間は、危険率１％で有意差を有する。
【００２０】
実施例３（血圧降下効果）
ＨＭＢカルシウム塩を一般市販飼料（船橋農場製、船橋SP）に添加し、脳卒中易発症性高血圧自然発症ラット（SHR−SP）を用いて最高血圧値、体重の変化を比較した。対照区は、ＨＭＢカルシウム塩を添加しない一般試料を用いた。Ａ区を対照区、Ｂ区を本発明区とし、それぞれの飼料で５週齢の雄性SHR−SPを各区６匹ずつ７週間飼育し、12週齢に達した時の血圧値と体重の変化について調べた。表１に示すように血圧の変化においては、本発明区に有意な血圧上昇の抑制が認められた。なお、本発明区においては、ＨＭＢカルシウム塩の１日あたりの摂取量が、５０ｍｇ／ｋｇ体重となるように飼料中のＨＭＢカルシウム塩の濃度を調整した。
【００２１】
【表１】
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【００２２】
実施例４（抗糖尿病効果）
６週齢の雄性ＳＤ系ラット（１群６匹）の尾静脈にストレプトゾトシンを１回投与することにより糖尿病を惹起した。
ＨＭＢの投与量を３０ｍｇ／ｋｇとし、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）投与の１時間前に経口投与し、その翌日より１日１回１３日間連続経口投与した。最終投与の翌日に５０％グルコース水溶液（１０ｍｌ／ｋｇ）を経口投与し、経時的に血糖値（ｍｇ／ｄｌ）を測定（ｏ−トルイジン・ホウ酸）した。
【００２３】
なお、正常対照群としてＳＴＺを投与せずに滅菌水のみを投与した群、病態対照群としてＳＴＺを投与して滅菌水を投与した群、および陽性対照群としてＳＴＺを投与してニコチン酸アミド（５０ｍｇ／ｋｇ）を投与した群を設けた。ニコチン酸アミドはＳＴＺ糖尿病モデルに対して有効であることが報告されている（新薬開発のための動物利用集成，４１９−４２２頁，Ｒ＆Ｄプランニング，１９８５年）。
【００２４】
糖尿病は糖代謝能力が低下し高血糖を呈する疾患である。本実施例においてはグルコース投与１時間後に血糖値のピークを認めるが、病態対照群では最高血糖値が３３８ｍｇ／ｄｌであり、正常対照群では最高血糖値は１６５ｍｇ／ｄｌであった。病態対照群の最高血糖値は正常対照群のそれと比較して約２倍を示し、病態対照群では糖代謝能力の低下が認められた。
【００２５】
ＨＭＢの活性は、式１により病態対照群の血糖値に対する抑制率（％）を算出した。
【００２６】
（式１）
抑制率（％）＝〔１−（ＨＭＢ投与群または陽性対照群の最高血糖値−正常対照群の最高血糖値）／（病態対照群の最高血糖値−正常対照群の最高血糖値）〕×１００
【００２７】
その結果、ＨＭＢ投与群の抑制率は５８．２％であった。陽性対照群の抑制率は４３．０％であった。したがって、ＨＭＢ投与群は、病態対照群に比較して、優れた血糖値の低下が認められ、糖代謝能力が改善されていた。
【００２８】
実施例５（抗アレルギー効果）
ＲＡＳＴ法による食物アレルゲン陽性の慢性じんま疹の患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共にＨＭＢカルシウム塩を５００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表２に示す。
【００２９】
【表２】
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【００３０】
実施例６
ＲＡＳＴ法によるアトピー性皮膚炎患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共にＨＭＢを５００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表３に示す。
【００３１】
【表３】
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【００３２】
実施例７（抗疲労効果）
ＳＴＤ ＤＤＹ 雄性マウス（５週齢：各群ｎ＝３〜４）に対し、ＨＭＢを経口摂取させた。摂取量は、３０ｍｇ／ｋｇ体重である。摂取は、純水にＨＭＢを溶解させた溶液を用いて行なった。なお、コントロール群のマウスには、純水のみを摂取させて試験を行った。
【００３３】
摂取から３０分後に、マウスを深さ８０センチの水槽に入れて、無動に至るまでの時間を計測した。各試験群のマウス（各群ｎ＝３〜４）の無動に至るまでの時間の平均値として、コントロール群は約１１２秒であったのに対し、ＨＭＢ投与群は、約２５６秒であった。
以上から、ＨＭＢに高い抗疲労効果が確認された。
【００３４】
実施例８（メラニン抑制効果）
メラニンを生成する細胞として、マウス由来の培養B16メラノーマ細胞を用いてウシ胎児血清を終濃度10%になるように添加したイーグルＭＥＭ培地で培養し、該細胞を3×103cell/mlの濃度で6ウェルプレートの各ウェルに6ml播種し、5日間ＣＯ２インキュベーター内で培養後、ＨＭＢのＣａ塩を添加した培地に交換し、さらに3日間同条件で培養する。細胞を洗浄後、細胞をスクレーパー処理により剥がし、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）により可溶化して475nm、260nmの吸光度を測定し、S475、S260とする。メラニン抑制率は被検試料を添加しない培地で培養した細胞の475nm、260nmにおける吸光度をC475、C260として式１により計算した。ポジティブコントロールとしてコウジ酸（Kojic acid）を用いた。
【００３５】
【数１】
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【００３６】
その結果、ポジティブコントロール（培地中にコウジ酸３ｍＭ添加）のメラニン抑制率は約５６％であり、ＨＭＢのＣａ塩を添加した被験試料（培地中にＨＭＢのＣａ塩を５００μｇ／ｍｌ添加）のメラニン抑制率は約５８％であった。
【００３７】
実施例９（シワ形成抑制効果）
５匹ずつ２群のヘアレスマウスの背部に、ＵＶＢ（長波長紫外線）を１０週間照射してシワ形成モデルを作製した。その後、このシワ形成モデルの１群にはＨＭＢを０．５質量％の割合で１０％エタノール水溶液に溶解した液体を（実施例１）、もう１群には１０％エタノール水溶液のみを（比較例）、シワが形成された背部に１日１回、週に５日の割合で４週間塗布し続けた。４週間の塗布期間終了後、各モデルの背部からレプリカを採取し、得られたレプリカのそれぞれについて、次の基準に従ってシワスコアを付した。
（シワスコア基準）
０：方向性のある構造は認められない。
１：繊維状の細い構造が方向性をもって認められる。
２：方向性をもった繊維状の細い構造とともに太い棒状の構造が認められる。
３：方向性をもった太い棒状の構造が認められる。
【００３８】
上記シワスコアを用いた評価は、レプリカ上の方向性をもった線状の構造をシワとして定義して評価したものである。したがって、上記シワスコア基準に従えば、スコアが高いほどシワ形成が進んだ皮膚状態と評価される。上記で得られたシワスコアについて各群の平均値を算出したところ、実施例９は０、比較例は１．０であった。両群のシワスコアについて、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定により有意差検定を行ったところ、実施例９のシワスコアは、比較例のシワスコアに比べ、危険率０．０５以下で有意に小さかった。
【００３９】
実施例１０
ＨＭＢのＮａ塩を含有する下記組成のクリームを常法により調製した。
ＨＭＢのＮａ塩 １０重量部
グリセロールソルビタン脂肪酸エステル ６０重量部
微結晶性ワックス １０重量部
オリーブオイル ３０重量部
流動パラフィン １８０重量部
ステアリン酸マグネシウム １０重量部
プロピレングリコール ３７重量部
硫酸マグネシウム ７重量部
精製水 ６５５重量部
【００４０】
実施例１１
上記実施例１０のクリームについて、シワ形成抑制効果をしらべた。即ち、シワに悩むパネラーを用いて、１日朝・晩２回、毎日１カ月間、上記実施例１０のクリームを顔面右側に塗布し、左側に対する右側のシワの改善を、＋＋：非常に改善、＋：明らかに改善、±：僅かに改善、−：改善せずの基準で評価した。その結果、パネラー全員とも、非常に改善、の評価であった。
【００４１】
実施例１２（養毛・育毛効果）
特許第４０４１４５１号公報に記載の実験手順に従い、ＨＭＢの効果を検証した。
（１）マウスによる試験
Ｃ３Ｈマウス（８週齢、オス、平均体重３５ｇ）の背部皮膚（２ｃｍ×４ｃｍ）を電気バリカン及びシェーバーで刈り、翌日より実施例の各試料を被験部皮膚に朝夕２回、一匹当り０．２ｍＬを二週間連用塗布した。一試料に対して動物一群１０匹使用した。塗布開始２２日目に各試料の被験部皮膚をビデオカメラに撮影し、画像解析装置にて毛刈り部及び発毛部の面積を測定した。養毛効果の判定は、下記に示す発毛率（％）を算出し、実施例の各群の発毛率平均値を求めて比較を行った。
発毛率（％）＝（発毛部の面積）／（毛刈り部の面積）×１００
【００４２】
（２）ヒトによる試験
男性型脱毛症患者である被験者１０名の耳上５ｃｍの位置にて、頭髪を左右２ヶ所直径５ｍｍの円形状に剃毛し、実施例の各試料を左側の頭髪全体に毎日朝夕２回、約３ｍＬ塗布し、右側は何も塗布せずに、左右の比較を行った。毛成長速度の効果の判定は、試験開始後１ヶ月目に、左右の剃毛した部位の被験部毛髪２０本を抜毛し、下記式で求めた値で毛成長速度を評価した。
毛成長速度＝（左側毛髪２０本の長さの平均）÷（右側毛髪２０本の長さの平均）
【００４３】
また、育毛効果、痒み防止効果、脱毛効果、ふけ防止効果の判定は、試験開始後３ヶ月目に各項に対し、右側の何も塗布していない被試部位と比較して、「産毛が剛毛化した或いは産毛が増加した」、「痒みをそれほど感じない」、「抜け毛が少なくなった」、「ふけが少なくなった」と回答した人数で示した。
【００４４】
表６に示す処方の養毛・育毛剤を常法に従って作成し、前記の諸試験を実施して評価を行った。なお、ＨＭＢの試料中の濃度は、表６に示されるとおりである。その結果を併せて表６に示す。
【００４５】
【表４】
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【００４６】
なお本発明品の養毛・育毛剤の長期間の使用中及び使用後においても、皮膚の状態に特に異常は認められなかった。