(57)【要約】      （修正有）【課題】生体親和性、任意の場所での分子放出機構、観察・追跡可能な発光中心を同時に兼ね備えた微細構造複合体及びそれを用いた被放出分子を生体内に輸送する方法を提供する。【解決手段】被放出分子Ｐ５と結合した切断部位を有するリンカー分子Ｐ３と、当該リンカー分子Ｐ３と結合したナノダイヤモンド微粒子Ｐ１とからなる微細構造複合体及びそれを用いた被放出分子Ｐ５を生体内に輸送する方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
被放出分子と結合した切断部位を有するリンカー分子と、当該リンカー分子と結合したナノダイヤモンド微粒子とからなる微細構造複合体。
【請求項２】
さらに、ナノダイヤモンド微粒子に、生体内の任意の場所で結合することができるアンカー分子を結合した請求項１に記載した微細構造複合体。
【請求項３】
該ナノダイヤモンド微粒子の直径が１ｎｍ〜１０００ｎｍであることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の微細構造複合体。
【請求項４】
ナノダイヤモンドの発光中心の発光波長が、５５０〜１０００ｎｍであることを特徴とする請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の微細構造複合体。
【請求項５】
ナノダイヤモンドの発光中心がＮ−ＶセンターおよびNi−Nセンターであることを特徴とする請求項４に記載の微細構造複合体。
【請求項６】
リンカー分子の切断部位が、共有結合、キレート結合、水素結合、イオン結合、静電気的結合、疎水結合のうち少なくともひとつであることを特徴とする請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の微細構造複合体。
【請求項７】
被放出分子が蛍光部位を有することを特徴とする請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の微細構造複合体。
【請求項８】
被放出分子と結合した切断部位を有するリンカー分子と、当該リンカー分子と結合したナノダイヤモンド微粒子とからなる微細構造複合体を細胞内又は細胞間に挿入し、細胞内若しくは細胞表面の任意の場所で、リンカー分子の切断部位の化学結合を切断して、被放出分子を生体内に輸送する方法。
【請求項９】
リンカー分子の切断部位の化学結合を切断するのが、イオンによるもの、ラジカルによるもの、光によるもの、酵素によるもの、置換によるもの、ｐＨの変化によるもの電界の変化によるもの、磁界の変化によるもののうち少なくともひとつを用いる請求項８の被放出分子を生体内に輸送する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被放出分子と結合した切断部位を有するリンカー分子と、当該リンカー分子と結合したナノダイヤモンド微粒子とからなる微細構造複合体及び当該微細構造複合体を用いて、細胞内若しくは細胞表面の任意の場所でリンカー分子の化学結合を切断して目的分子を放出する被放出分子を生体内に輸送する方法に関する。本発明の被放出分子を生体内に輸送する方法は、生物学的・医学的・薬学的な計測、医療分野での診断、医薬品開発等に応用可能である。
【背景技術】
【０００２】
ダイヤモンドは、化学的安定性、生体適合性、半導体特性、硬度、熱伝導性等の物性の高さから、バイオデバイスへの応用が期待されている。生体内でのイメージングや診断に応用する目的で、ＣｄＳｅに代表される量子ドット用いた研究が数多く行われている（非特許文献１）。４００〜１４００ｎｍの領域で蛍光を持つＩＩ−ＶＩ族、ＩＩＩ−Ｖ族、ＩＶ−ＶＩ族の化合物を用いて、実際に細胞内や生体内に取り込まれた量子ドットからの蛍光が観察されており、研究分野は大きな広がりを見せている。しかし、量子ドットの化学的安定性および発光センターの特性が原因で、細胞毒性および蛍光の消光、また、蛍光色素と比較して量子効率が低いという問題があった。一般にドラッグデリバリーシステムでは、基体に、脂質や高分子を用いていることが多い（特許文献１）。これらは生体に対して低侵襲性もしくは非侵襲性であり、かつ分子放出機構を有するものであるが、現象を追跡するための発光中心を持たないという問題があった。ドラッグデリバリーシステムでは、これまで、カーボンナノチューブ等の炭素繊維を基体として用いる方法が報告されている（特許文献２〜４）。しかし、カーボンナノチューブ自体の生体に対する影響は最近研究が始められたばかりで、まだ完全に解明されてはいないという問題がある。また、カーボンナノチューブ自体に発光中心は持たないという問題があった。
【０００３】
また、酸化チタンを基体として用いる方法が報告されている（特許文献５）。酸化チタンは生体親和性が高く、中空状に加工して分子放出機構を持たせることが可能であるが、発光中心は持たないという問題があった。また、メゾポーラスなシリコン酸化物を基体として用いる方法が報告されている（特許文献６）。しかし、シリコン酸化物表面は強い固体酸性を持つため、生体親和性が低いという問題がある。特許文献７では、良好な分散性を示すナノダイヤモンドの製造方法を提供している。この中で、カルボキシル基で修飾したナノダイヤモンドがドラッグデリバリーシステムに利用可能である旨が記述されている。しかし、これは、カルボキシル基で修飾したナノダイヤモンドが分散性に優れていることをもって、一般的に、ドラッグデリバリーシステムに利用可能であると述べているに過ぎず、ナノダイヤモンドをドラッグデリバリーシステムに利用するためになんら具体的な発明はなされていない。
【０００４】
一方、生物学的・医学的・薬学的に細胞内および細胞間での現象を追跡・観察するために、蛍光を発する色素を被導入分子に結合させた分子が用いられている。しかし、このような色素は、色素を励起するための光を照射することにより、観察中に、色素自体の発光が減衰する、もしくは消光してしまうという問題があった（非特許文献２）。
このように、生体適合性を持ち、低侵襲性もしくは非侵襲性であり、かつ分子放出機構を有し、かつ基体に安定な発光中心を有する物質輸送方法はこれまで存在しない。したがって、生体に対して親和性をもたない物質を用いざるを得ないという問題があった。また、安定な発光中心を持たないため、細胞および細胞間で起こる現象を観察・追跡することが困難であるという問題があった。
【０００５】
【特許文献１】再表９７−３０７３０号公報
【特許文献２】特開２００７−２２８７３号公報
【特許文献３】特開２００６−３６６３８号公報
【特許文献４】特開２００４−１６９０９号公報
【特許文献５】特開２００６−１０４０８１号公報
【特許文献６】特開２００２−１７３３１９号公報
【特許文献７】特開２００６−２３９５１１号公報
【非特許文献１】Ｘ．Ｍｉｃｈａｌｅｔ，Ｆ．Ｆ．Ｐｉｎａｕｄ，Ｌ．Ａ．Ｂｅｎｔｏｌｉｌａ，Ｊ．Ｍ．Ｔｓａｙ，Ｓ．Ｄｏｏｓｅ，Ｊ．Ｊ．Ｌｉ，Ｇ．Ｓｕｎｄａｒｅｓａｎ，Ａ．Ｍ．Ｗｕ，Ｓ．Ｓ．Ｇａｍｂｈｉｒ，Ｓ．Ｗｅｉｓｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ３０７（２００５）５３８．
【非特許文献２】Ｓ．−Ｊ．Ｙｕ，Ｍ．−Ｗ．Ｋａｎｇ，Ｈ．−Ｃ．ＣｈａｎｇＫ．−Ｍ．Ｃｈｅｎ，Ｙ．−Ｃ．Ｙｕ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２７（２００５）１７６０４．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記問題を解決するためになされたものであり、生体適合性の高いダイヤモンドを基体として用い、細胞等に侵入可能なナノダイヤモンド微粒子を用い、該ナノダイヤモンド微粒子は、任意の場所で切断可能な化学結合を持つリンカー分子で修飾されており、被放出分子がリンカー分子と結合しており、追跡可能で消光しない安定な発光センターを有しているため、生体に安全で、生物・医学・薬学的に観察・計測・追跡可能な微細構造複合体及び被放出分子を生体内に輸送する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の物質輸送方法は、基体にナノダイヤモンド微粒子を用い、ナノダイヤモンド微粒子は、任意の場所で切断可能な化学結合を有するリンカー分子で修飾されており、被輸送分子はリンカー分子と結合しており、ナノダイヤモンド微粒子内に追跡可能で消光しない発光センターを有することを特徴とするものである。
すなわち、本発明は、被放出分子と結合した切断部位を有するリンカー分子と、当該リンカー分子と結合したナノダイヤモンド微粒子とからなる微細構造複合体である。
また、本発明の微細構造複合体においては、さらに、ナノダイヤモンド微粒子に、生体内の任意の場所で結合することができるアンカー分子を結合させることができる。
さらに、本発明の微細構造複合体においては、該ナノダイヤモンド微粒子の直径は１ｎｍ〜１０００ｎｍの範囲が好適であり、より好ましくは１ｎｍ〜１００ｎｍの範囲が好適であり、さらに望ましくは４ｎｍ〜５０ｎｍとすることができる。
また、本発明においては、発光波長を、５５０〜１０００ｎｍとすることができる。
また、本発明においては、ナノダイヤモンドの発光中心を、窒素原子とこれに隣り合う空孔からなるＮ−Ｖセンターおよびニッケル原子とそれを取り囲む窒素原子からなるNi−Nセンターとすることができる。
さらに本発明は、リンカー分子の切断部位を、共有結合、キレート結合、水素結合、イオン結合、静電気的結合、疎水結合からなる群れより選ばれる少なくともひとつとすることができる。
また、さらに本発明においては、被放出分子が蛍光部位を有することができる。
また、本発明は、被放出分子と結合した切断部位を有するリンカー分子と、当該リンカー分子と結合したナノダイヤモンド微粒子とからなる微細構造複合体を細胞内又は細胞間に挿入し、細胞内若しくは細胞表面の任意の場所で、リンカー分子の切断部位の化学結合を切断して、被放出分子を生体内に輸送する方法である。
本発明の被放出分子を生体内に輸送する方法においては、リンカー分子の切断部位の化学結合を切断するのが、イオンによるもの、ラジカルによるもの、光によるもの、酵素によるもの、置換によるもの、ｐＨの変化によるもの電界の変化によるもの、磁界の変化によるもののうち少なくともひとつを用いることができる。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、ナノダイヤモンド微粒子とともにナノダイヤモンド上に固定化されている被輸送分子を、細胞内および細胞間に輸送することが可能であり、任意の場所でリンカー分子の化学結合を切断することにより、被放出分子を、細胞内および細胞間に放出することが可能な、生体に対して低侵襲性な被放出分子輸送方法を提供することができる。
また、本発明によれば、ナノダイヤモンド内に安定で消光しない発光センターを有するため、切り離される前の微細構造複合体若しくは切り離されたナノダイヤモンド部位について、光学的に位置の追跡が可能な物質輸送方法を提供することができる。このため、生物学、医学、薬学的に基礎的な観察および計測に応用することが可能であるだけでなく、医療現場や新薬創成における診断にも応用可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、図面を参照して本発明の実施の形態を説明する。
図１から図３は、本発明の物質輸送方法を示したものである。Ｐ１は、ナノダイヤモンド微粒子であり、その直径は１〜１０００ｎｍの範囲であることが望ましい。さらに望ましくは、１〜１００ｎｍの範囲であり、より望ましくは、４〜５０ｎｍの範囲である。また、該ナノダイヤモンド微粒子は５５０〜１０００ｎｍの範囲の発光中心を持つ。発光中心は１個のナノダイヤモンド対して１個であっても良いし、複数個あってもかまわない。ナノダイヤモンドの代表的な発光中心として、Ｎ−Ｖセンターおよび、Ｎｉ−Ｎセンターが挙げられる。５５０〜１０００ｎｍの赤色光および赤外光は生体に対する透過率が高く、発光中心の観察・追跡が外部から可能である。たとえば、パルスオキシメトリ法で動脈血酸素飽和度（ＳｐＯ２）を測定する場合、６６５ｎｍおよび８８０ｎｍの赤色光および赤外光を体外から照射し、体外にて観測することで酸化ヘモグロビン（ＨｂＯ２）と還元ヘモグロビン（Ｈｂ）の吸収特性を測定している。本発明におけるナノダイヤモンドの発光中心は、５５０〜１０００ｎｍに中心を持つ１種類の発光中心であっても良く、さらに、複数の異なる波長領域に中心を持つ発光中心であっても良い。
【００１０】
Ｐ３は、切断可能な化学結合Ｐ７を持つリンカー分子であり、ナノダイヤモンドＰ１と化学結合にて結合している。切断可能な化学結合Ｐ７としては、共有結合、キレート結合、水素結合、イオン結合、静電気的結合、疎水結合のうち少なくともひとつを用いることができる。また、刺激による化学結合Ｐ７の切断方法が、光によるもの、酵素によるもの、置換によるもの、ｐＨの変化によるもののうち少なくともひとつを用いることができる。たとえば、共有結合であるジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ結合）は２５４ｎｍの紫外線により切断可能である。また、たとえば、ニトロベンジル基を用いれば、やはり紫外線照射により結合が解裂する。また、キレート結合を用いれば、細胞内および細胞間に存在する他の配位子によって置換されることにより、元の結合が切断される。また、ポリオール部位のエステル結合は細胞内に存在するエステラーゼ等の酵素が分解可能である。また、シクロデキストリンやカリックスレーン等の包摂能力を有する分子を用いることも可能である。包摂されうる分子と被放出分子を化学結合で接続しておけば、ｐＨ等の環境変化により、包摂能力を変化させ、被放出分子を放出することが可能である。
Ｐ５は被放出分子であり、たとえば、ＤＮＡやタンパク質等の物質が挙げられる。本発明において、たとえば、化学修飾されたナノダイヤモンド微粒子の分散液に細胞等を浸漬することにより、ナノダイヤモンド微粒子は、修飾分子と共に、細胞内および細胞間に侵入することができる。図２では、細胞内および細胞間の環境Ｐ１１において、化学結合を切断しうる刺激Ｐ１１を与えることにより、被放出分子を任意の場所に放出することが可能である。
【００１１】
また、図１に示すように、本発明のナノダイヤモンドは、細胞内および細胞間の特定の部位や、細胞内および細胞間に存在する特定の化学物質と結合もしくは会合体を作るアンカー分子Ｐ９で修飾されていても良い。図３に示すようにアンカー分子Ｐ９は、細胞内および細胞間に存在するアンカー分子と、結合もしくは会合体をつくる部位もしくは物質Ｐ１５で任意の場所に固定される。そこで刺激Ｐ１１を与えることにより、任意の場所に高濃度の被放出分子を放出することが可能である。
本発明は、本実施形態に開示された特定の構成になんら限定されるものではなく、したがって、本発明の要旨を逸脱しない範囲において種々の態様で実施しうることはいうまでもない。
【産業上の利用可能性】
【００１２】
本発明の物質輸送法は、生物学、医学、薬学的に基礎的な観察および計測に応用することが可能であるだけでなく、医療現場や新薬創成における診断にも応用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明に係る化学修飾微細構造複合体を示す図。
【図２】本発明に係る被放出分子を生体内に輸送する方法を示す図。
【図３】アンカー分子を有するナノダイヤモンドを用いた被放出分子を生体内に輸送する方法を示す図。
【符号の説明】
【００１４】
Ｐ１・・・ナノダイヤモンド微粒子、
Ｐ３・・・切断部位を持つリンカー分子、
Ｐ５・・・被放出分子、
Ｐ７・・・切断部位、
Ｐ９・・・アンカー分子、
Ｐ１１・・細胞内および細胞間環境、
Ｐ１３・・切断に用いる刺激、
Ｐ１５・・細胞内および細胞間に存在するアンカー分子と結合もしくは会合体をつくる部位もしくは物質。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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