(57)【要約】【課題】  純度の低いＬ−カルニチンから混在する化合物を高い効率で除去し、Ｌ−カルニチンを効率的に精製する方法を開示する。特には、Ｌ−カルニチンの混合物を、ブタノールを含む溶媒を用い晶析する方法、又はＬ−カルニチンの混合物を、ブタノールを含む溶媒と接触させることで、Ｌ−カルニチンとＬ−カルニチンの混合物中に含まれる化合物を分離し、精製されたＬ−カルニチンを得る方法に関する。【解決手段】  不純物を一種類以上含む、Ｌ−カルニチンの混合物を、ブタノールを含む溶媒で処理することを含む、Ｌ−カルニチンの精製方法。特にL-カルニチンが溶解しているブタノールを含む溶液に含まれる水の量が、0.6％未満となるように精製操作を行う。  【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
不純物を一種類以上含む、Ｌ−カルニチンの混合物を、ブタノールを含む溶媒で処理することを含む、Ｌ−カルニチンの精製方法。
【請求項２】
処理をする時の温度が８０℃以下である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ブタノールを含む溶媒が、ｎ−ブタノール、ｉｓｏ−ブタノールのいずれかの単一溶媒又はｎ−ブタノール及びｉｓｏ−ブタノールのいずれかの溶媒に、水、メタノール、エタノール及びアセトンから選択される一種類以上の溶媒を含む混合溶媒である請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
L-カルニチンが溶解しているブタノールを含む溶液に含まれる水の量が、0.6％未満となる、請求項1〜３のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、純度の低いＬ−カルニチンから混在する化合物を高い効率で除去し、Ｌ−カルニチンを効率的に精製する方法を開示する。
【０００２】
特には、Ｌ−カルニチンの混合物を、ブタノールを含む溶媒を用い晶析する方法、又はＬ−カルニチンの混合物を、ブタノールを含む溶媒と接触させることで、Ｌ−カルニチンとＬ−カルニチンの混合物中に含まれる化合物を分離し、精製されたＬ−カルニチンを得る方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
従来、カルニチンの合成法としては、カルニチンニトリルクロライドに塩基性物質と過酸化水素水を作用させカルニチンを得る方法（特許文献１）、シュウ酸を用いてカルニチンアミドクロライドをカルニチンクロライドに変換する方法（特許文献２）などが知られている。
【０００４】
また、生化学的な合成法としては、微生物の酵素活性を利用しカルニチンアミドを加水分解して光学活性なＬ−カルニチンを得る方法（特許文献３、特許文献４）、γ‐ブチロベタイン、クロトノベタインを原料としてＬ−カルニチンを合成させる方法（特許文献５、特許文献６、特許文献７）などが知られている。しかし、いずれも原料が最終反応液に残留し、Ｌ−カルニチンと分離する必要があった。加えて、化学的合成法ではＬ−カルニチンを得るためにＤ体を除去する必要があった。
【０００５】
これらの原料及び不純物の一般的な分離法としては、カルニチンとカルニチンアミドを含有する水溶液をｐＨ５〜１２に平衡化した陽イオン交換樹脂に通し、カルニチンアミドを特異的に吸着させカルニチンを回収する方法（特許文献８）、カルニチンニトリルを含有するカルニチン水溶液を陽イオン交換樹脂に接触させ、カルニチンとカルニチンニトリルを分離する方法（特許文献９）、カチオン交換クロマトグラフィーを用いてＬ−カルニチンとＬ−クロトノベタインを分離する方法（非特許文献１）などが知られている。しかし、上記のいずれの方法でもイオン交換樹脂を用いており、精製にかかるコストが高く、イオン交換樹脂に替わる安価な精製方法が望まれていた。
【０００６】
一方、晶析でＬ−カルニチンを分離する方法としては、Ｌ−カルニチンとクロトノベタインの分離が知られている（特許文献６）。しかし、特許文献１０では、電気透析等と晶析操作を組み合わせた、L-カルニチンの精製方法が開示されており、晶析操作のみで不純物の除去が充分可能かは不明である。
【０００７】
Ｌ−カルニチンとＤ−カルニチンの分離に関しては、９５％エタノールからの冷却晶析及び無水エタノール又はイソプロパノールとアセトンからの晶析により分離できることが知られている（特許文献１０）。しかし、精製に供される対象物のＬ体とＤ体の比率は、９９．５：  ０．５（９９％ｅｅ）でありＤ体の比率が極めて低い。また、特許文献１０の課題は、吸湿性が低く、粒径の大きいカルニチン結晶の取得を目的としており、本発明とはその課題を異にする。また、L体が大過剰な混合物に対する精製法の開示であって実用的とは言えない。
【０００８】
一方、ＤＬ−カルニチンにＤ−マンデル酸又はＬ−マンデル酸を作用させ得られるジアステレオマー混合物の分別晶析による光学分割する方法も知られている（特許文献１１）。しかし、充分な光学純度を得るためには、数回の分別晶析が必要となる。また、光学分割剤の除去などの過程が必要となり、著量の収率損失があった。
【特許文献１】特開平１−２８７０６５号公報
【特許文献２】特開昭５５−１３２９９号公報
【特許文献３】特願昭６１−１９８１７３号公報
【特許文献４】特公平６−３０６２２号公報
【特許文献５】特開昭６０−２２４４８８号公報
【特許文献６】特開昭６１−１９９７９３号公報
【特許文献７】特開平３−７６５９１号公報
【特許文献８】特開平１−２１３２５９号公報
【特許文献９】特開平２−６７２５６号公報
【特許文献１０】ＷＯ２００６／０２８０６８
【特許文献１１】特開昭５９−２３１０４８
【非特許文献１】Appl. Environ. Microbiol. 39. 327 (1980)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、従来のイオン交換、光学分割剤を用いる方法と比べて、煩雑な操作を行う必要はない、簡便で効率的なＬ−カルニチンの精製方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、Ｌ−カルニチンの混合物を、ブタノールを含む溶媒を用いて晶析する、又はブタノールを含む溶媒とＬ−カルニチンの混合物を接触させることにより、簡便に精製されたＬ−カルニチンが得られることを見出し、本発明を完成させた。
【００１１】
すなわち、本発明は、不純物を一種類以上含む、Ｌ−カルニチンの混合物を、ブタノールを含む溶媒で処理することを含む、Ｌ−カルニチンの精製方法、である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、イオン交換樹脂や高価な光学分割剤などを用いることなく簡略で安価な方法を用いて、高い純度のＬ−カルニチン結晶を得ることが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明は、「不純物を一種類以上含む、Ｌ−カルニチンの混合物を、ブタノールを含む溶媒で処理することを含む、Ｌ−カルニチンの精製方法。」である。
【００１４】
ここで不純物とは、下記一般式（I）で示される化合物をいう。
【化１】
2009102258.tif 000002
【００１５】
〔式中、Ｒ１はヒドロキシル基、カルボキシル基、シアノ基、アミド基、四級アミン又はハロゲンを示す。Ｒ２はヒドロキシル基又は隣接する炭素と二重結合を形成することができる。Ｒ３はヒドロキシル基、カルボキシル基、シアノ基、アミド基、四級アミン、カルボン酸塩又はハロゲンを示す。ハロゲンはフッ素、塩素、臭素、ヨウ素である。〕
「処理」とは、ブタノールを含む溶媒からの晶析又はブタノールを含む溶媒とＬ−カルニチンの混合物を接触させることを示す。
【００１６】
処理に供されるカルニチンの混合物は、例えば、以下の公知の方法により調製される。
【００１７】
１）ラセミのカルニチン又はカルニチンニトリル、カルニチンアミド、カルニチンアルキルエステルなどのカルニチンの誘導体を反応させたもの。
【００１８】
２）カルニチン誘導体から不斉合成して得られたもの。
【００１９】
３）微生物によって、クロトノベタイン、γ‐ブチロベタインから生産したもの。
【００２０】
上記の公知の方法で調製されたＬ−カルニチンの混合物は、反応液そのまま又はそれを乾固したものを用いることができる。また、それらＬ−カルニチンを合成する過程で生じる無機塩又は有機酸塩（合成工程で添加されたものを含む）を、例えば、予めイオン交換クロマトグラフィー、電気透析等を用いて除去したものも用いることができる。
【００２１】
前記反応液、又は乾固した結晶を水に溶解させたもののｐＨは、特に限定されないが、好ましくはｐＨ６〜９である。
【００２２】
前記処理に供されるＬ−カルニチンの混合物中の不純物は、一般式（Ｉ）で示される化合物である。
【００２３】
具体的には、１、３−ジクロロ−２−プロパノール、２、３−ジクロロ−１−プロパノール、３−ヒドロキシグルタロニトリル、４−クロロ−３−ヒドロキシ−ブチロニトリル、カルニチンニトリル、４−ヒドロキシ−２−ブテンニトリル、３−ヒドロキシ−４−シアノブタンアミド、３、４−ジヒドロキシブタンアミド、３、４−ジヒドロキシブタン酸、カルニチンアミド、４−ヒドロキシ−２−ブテンアミド、３−ヒドロキシ−４−カルボキシブタンアミド、３−ヒドロキシペンタンジアミド、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸、３−カルバモイル−２−プロペニルトリメチルアンモニウム、クロトノベタイン、３‐ヒドロキシグルタル酸、４−シアノ−３−ヒドロキシブタン酸、３‐クロロ−２−オキシ−プロピルトリメチルアンモニウム、２、３−ジヒドロキシ−Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリメチル−１−プロパンアミニウム、２−ヒドロキシ−Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−ヘキサメチル−１、３−プロパンジアミニウム又はＤ−カルニチンである。
【００２４】
好ましくは、カルニチンアミド、クロトノベタイン、４−ヒドロキシ−２−ブテンアミド、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸、３−ヒドロキシグルタル酸、２−ヒドロキシ−Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−ヘキサメチル−１、３−プロパンジアミニウム、３−ヒドロキシ−４−カルボキシブタンアミド、３‐ヒドロキシグルタロニトリル、Ｄ−カルニチンから選択される一種類以上の化合物である。
【００２５】
また、前記不純物の総量は、Ｌ−カルニチンに対して、０．００１〜２０質量％の範囲であることが好ましい。また、０．００１〜１５質量％であれば、該化合物を効率的にＬ−カルニチンから分離することができるため、さらに好ましい。
【００２６】
各不純物のＬ−カルニチンに対する混入量は、カルニチンアミドが０．００５〜２質量％、クロトノベタインが０．００１〜３質量％、４−ヒドロキシ−２−ブテンアミドが０．００１〜０．２質量％、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸が０．００１〜６質量％、３−ヒドロキシグルタル酸が０．５〜１質量％、２−ヒドロキシ−Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−ヘキサメチル−１、３−プロパンジアミニウムが０．５〜３質量％、３−ヒドロキシ−４−カルボキシブタンアミドが０．２〜０．４質量％、３‐ヒドロキシグルタロニトリルが０．００１〜０．２質量％、Ｄ−カルニチンが０．５〜１０質量％であれば、充分に精製されたＬ−カルニチンを得ることができる。
【００２７】
処理に使用するブタノールを含む溶媒とは、ｎ−ブタノール、ｉｓｏ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールの群から選択される一種類以上の溶媒をいう。
【００２８】
また、上述の溶媒と、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、２−ブタノール、アセトン、酢酸エチル、イソブチルメチルケトン、アセトニトリル及びトルエンからの群から選択される一種類以上溶媒との混合溶媒をいう。
【００２９】
好ましくは、ｎ−ブタノール又はｉｓｏ−ブタノールの単一溶媒、ｎ−ブタノール及びｉｓｏ−ブタノールと、水、メタノール、エタノール及びアセトンの群から選択される一種類以上の溶媒である。
【００３０】
より好ましくは、2成分混合であれば、水／ｎ−ブタノール、水／ｉｓｏ−ブタノール、メタノール／ｎ−ブタノール、メタノール／ｉｓｏ−ブタノール、エタノール／ｎ−ブタノール、エタノール／ｉｓｏ−ブタノール、ｎ−ブタノール／アセトン、ｉｓｏ−ブタノール／アセトン、３成分混合であれば、水／メタノール／ｎ−ブタノール、水／メタノール／ｉｓｏ−ブタノール、水／エタノール／ｎ−ブタノール、又は水／エタノール／ｉｓｏ−ブタノールである。
【００３１】
この時の溶媒の比率は特に限定はされないが、一種類以上の混合溶媒であれば、水、メタノール又はエタノール：ブタノールが、１：１〜１：１００００、アセトン：ブタノールが、１：１〜１００００：１の間であれば効率よく結晶を得ることができる。
【００３２】
好ましくは、水：ｎ−ブタノール＝１：４〜１００００、水：ｉｓｏ−ブタノール＝１：４〜１００００、メタノール：ｎ−ブタノール＝１：１〜１０００、メタノール：ｉｓｏ−ブタノール＝１：１〜１０００、エタノール：ｎ−ブタノール＝１：１〜１０００、エタノール：ｉｓｏ−ブタノール＝１：１〜１０００、ｎ−ブタノール：アセトン＝１：０．５〜２及びｉｓｏ−ブタノール：アセトン＝１：０．５〜２、の質量比で用いられるが、さらに好ましくは水：ｎ−ブタノール＝１：１０〜２０００、水：ｉｓｏ−ブタノール＝１：１０〜２０００、メタノール：ｎ−ブタノール＝１：３〜１０００、  メタノール：ｉｓｏ−ブタノール＝１：３〜１０００、  エタノール：ｎ−ブタノール＝１：３〜１０００及び  エタノール：ｉｓｏ−ブタノール＝１：３〜１０００の質量比であればＬ−カルニチンを収率良く得ることができる。
【００３３】
本発明において、L-カルニチンが析出しているブタノールを含む溶液中に水が多く含まれる場合、L-カルニチンの収率低下およびL-カルニチンの精製効果の低下が生じることが判明している。したがって、処理を終えた時点でのブタノールを含む溶液中の水の濃度が、１.0％以下であることが好ましい。さらに高い精製効率を得るには、より好適にはブタノール含む溶液中の水の濃度が0.6％未満にすることが好ましい。
【００３４】
また、これらの溶媒は処理に供されるＬ−カルニチンの混合物に対して、該混合物：該溶媒＝１：１〜２０の比率で添加されることが好ましい。
【００３５】
処理の温度は、８０℃より高温では、カルニチンの変質によると推定されるＬ−カルニチン収率の低下又はＬ−カルニチン純度の低下が起こる恐れがある。
【００３６】
特に限定されないが、０〜８０℃の範囲で用いることで品質の低下なくかつ効率的に処理することができる。
【００３７】
処理に供されるＬ−カルニチンの混合物は、上記のブタノールを含む溶媒で完全に又は一部溶解させ、温度を維持したまま又は加熱後、温度を下げ、結晶を得ることができる。
【００３８】
上記結晶化を行う際、溶媒を二種類以上、使用する場合は、複数の溶媒を予め混合したものを用いて、Ｌ−カルニチンの混合物を完全に又は一部溶解させることもできる。また、水、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノール、ｉｓｏ−ブタノールに完全に又は一部溶解させた後、温度を維持又は冷却後にｎ−ブタノール、ｉｓｏ−ブタノール、アセトンを添加することもできる。更に、Ｌ−カルニチンの混合物を溶解後又は上記の方法でＬ−カルニチン結晶を得た後、常圧又は減圧しながら濃縮することでＬ−カルニチン結晶を収率良く得ることができる。
【００３９】
なお、本発明において、上記結晶化操作の途中に、ブタノールとブタノール以外の被混合溶媒の量比が好ましい範囲を外れる場合あるが、最終的な結晶化操作完了時、すなわち処理終了時において、その量比を前記好ましい範囲にコントロールすることで、効率的に精製できることが明らかとなっている。
【００４０】
特に、処理に使用するブタノールを含む溶媒が水を含む場合、上記の比率の範囲内であれば特に制限はないが、L-カルニチンが溶解しているブタノールを含む溶液中の水の比率が、1.0％以上である場合には、懸濁後又は懸濁の途中で濃縮等の操作を行い最終的な水の比率を1.0％以下まで低減させることが好ましく、また、より好適には0.6％未満まで低減させることで精製効率の向上が期待される。
【００４１】
またＬ−カルニチンの混合物が結晶であれば、結晶をブタノールを含む溶媒に接触させることで精製されたＬ−カルニチンを得ることができる。接触の方法は特に限定されないが、結晶にブタノールを含む溶媒をスプレーする方法、Ｌ−カルニチンの混合物をブタノールを含む溶媒に懸濁させた後、結晶を回収する又は懸濁後加熱、冷却等の操作を経て結晶を回収する方法などがある。
【００４２】
これらの操作は一回でも充分であるが、同一の操作を繰り返すか他の操作と組み合わせることもできる。
【００４３】
得られたＬ−カルニチンの結晶は特に限定されないが例えば、遠心分離、濾過等の方法で分離することで純度の向上したＬ−カルニチンの結晶と溶媒を分離することができる。
【００４４】
また、得られた結晶は８０℃以下で加熱しながら、特に限定されないがアスピレーターや真空ポンプ等の減圧が可能な装置を用いて減圧することで、残留する溶媒を除去することができる。
【００４５】
これらの操作を行うことで、Ｌ−カルニチンの混合物から高純度に精製されたＬ−カルニチンを得ることが可能である。
【００４６】
なお、Ｌ−カルニチンの混合物中の、不純物の量は、以下に示す高速液体クロマトグラフィー条件により容易に測定することができる。
【００４７】
＜測定条件１＞
・カラム：Nucleosil 100-N(CH3)2 GL science社製  4.6×250mm
・移動相：５０ｍＭ  リン酸カリウム（ｐＨ４．７）：ＡＴＮ＝３５：６５
・流速：１．０ｍｌ：ｍｉｎ
・検出：ＵＶ２０５ｎｍ
・リテンションタイム：
カルニチンアミド                                ７−８  ｍｉｎ
クロトノベタイン                                １２−１３  ｍｉｎ
４−ヒドロキシ−２−ブテンアミド                ３．８−４．０  ｍｉｎ
４−ヒドロキシ−２−ブテン酸                    ５．０−５．２  ｍｉｎ
３−ヒドロキシグルタル酸                        １４−１６  ｍｉｎ
2-ヒドロキシ-N、N、N、N、N、N-ヘキサメチル-1、3-プロパンジアミニウム
４．２−４．４  ｍｉｎ
カルニチン  １０−１１ｍｉｎ
＜測定条件２＞
・カラム：ＯＤＳ−３Ｖ  ＧＬ  ｓｃｉｅｎｃｅ社製  ４．６×２５０ｍｍ
・移動相：０．０５％ＣＦ３ＣＯＯＨ
・流速：１．０ｍｌ：ｍｉｎ
・検出：ＲＩ
・リテンションタイム：
１、３−ジクロロ−２−プロパノール            ３３  ｍｉｎ
４−ハロゲノ−３−ヒドロキシ−ブチロニトリル  １１−１２  ｍｉｎ
３−ヒドロキシ−４−カルボキシブタンアミド    ６．５  ｍｉｎ
３‐ヒドロキシグルタロニトリル                  ５．２ｍｉｎ
また、Ｌ−カルニチン中のＤ−カルニチン量の測定は、９−アントロイルシアニドを用いてそのエステル誘導体とすることで、高速液体クロマトグラフィ−による分析を行うことができる。
【００４８】
＜分析条件３＞
・カラム：  Ｕｌｔｒｏｎ  ＥＳ−ＯＶＭ、  信和化工社製、２×１５０  ｍｍ
・移動相：  アセトニトリル：２０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ４．５）＝１７：８３
・流速：０．２  ｍＬ：ｍｉｎ
・検出：ＵＶ  ２５４ｎｍ
・リテンションタイム：Ｄ−カルニチンエステル誘導体    ６−６．５  ｍｉｎ
Ｌ−カルニチンエステル誘導体    ７．５−８．５  ｍｉｎ
また、この他の化合物に関してはＮＭＲ分析を用いて、Ｌ−カルニチン中の質量を求めることができる。
【実施例】
【００４９】
以下、実施例により詳細に本発明を説明する。
【００５０】
＜実施例１＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物として、クロトノベタインが０．６％、カルニチンアミドが０．５％、４−ヒドロキシ−２−ブテンアミドが０．１％、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸が０．２％、Ｄ−カルニチンが５．３％含まれるＬ−カルニチンの混合物１５．０ｇが溶解している水溶液を、６０℃に加熱し、減圧下で混合物：水が１：１の質量比となるまで濃縮した。
【００５１】
次に、濃縮液に混合物：水及びｎ−ブタノールが１：５となるように、ｎ−ブタノールを添加した。５０℃にて減圧下で濃縮したところ、結晶が発生した。その時の溶媒比は水：ｎ−ブタノールが３：１００であった。
【００５２】
さらに５０℃で減圧を続け、ｎ−ブタノールを溜出させた。ブタノールを含む溶液中の水の濃度が0.2％となるまで濃縮したのち、液温が２０℃となるまで冷却した。
【００５３】
得られた溶液から濾過により結晶と溶液を分離したところ、水：ブタノール混合溶液を２６％含有したＬ−カルニチンの結晶が１７．１ｇ得られた。
【００５４】
カルニチン結晶の収率は８４％であった。また、結晶中の不純物は、Ｌ−カルニチンに対してクロトノベタインが０．１％、カルニチンアミドが０．２％、４−ヒドロキシ−２−ブテンアミドが０．０２％、Ｄ−カルニチンが１．７％であった。４−ヒドロキシ−２−ブテン酸は検出されなかった。
【００５５】
次に、得られた結晶１１．０ｇに、メタノールを結晶：メタノールが１：１となるように添加し、６０℃で結晶を溶解させた。その後、２０℃まで徐々に冷却し結晶を発生させ、次いでｎ−ブタノールをメタノール：ｎ−ブタノールが１：３となるまでゆっくり添加した。
【００５６】
得られた結晶溶液を４５℃に加熱しながら減圧下で濃縮した後、濾過により結晶と溶液を分離したところ、メタノール：ブタノール混合溶液を２０％含有したＬ−カルニチンの結晶が６．６ｇ得られた。
【００５７】
カルニチン結晶の収率は６５％であった。また結晶中の不純物は、Ｌ−カルニチンに対して、クロトノベタインが０．０１％、カルニチンアミドが０．１％、Ｄ−カルニチンが０．３％であった。４−ヒドロキシ−２−ブテンアミド、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸は検出されなかった。
【００５８】
＜実施例２＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物として、クロトノベタインが０．５％、カルニチンアミドが０．０１％、４−ヒドロキシ−２−ブテンアミドが０．１％、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸が５．４％、Ｄ−カルニチンが５．３％含まれる混合物６．２ｇが溶解している水溶液を、６０℃に加熱し、減圧下で混合物：水が１：１の質量比となるまで濃縮した。
【００５９】
次に、濃縮液に混合物：水及びｎ−ブタノールが１：５となるようｎ−ブタノールを添加した。６０℃にて減圧下で濃縮したところ、結晶が発生した。その時の溶媒比は水：ｎ−ブタノールが３：１００であった。
【００６０】
さらに６０℃で減圧を続け、ｎ−ブタノールを溜出させた。ブタノールを含む溶液中の水の濃度が0.2％となるまで濃縮したのち、液温が２０℃となるまで冷却した。
【００６１】
得られた結晶溶液から濾過により結晶と溶液を分離したところ、水：ブタノール混合溶液を２５％含有したＬ−カルニチンの結晶が７．３ｇ得られた。
【００６２】
カルニチン結晶の収率は８１％であった。また結晶中の不純物は、Ｌ−カルニチンに対して、クロトノベタインが０．１％、カルニチンアミドが０．０１％、４−ヒドロキシ−２−ブテンアミドが０．０２％、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸が０．８％、Ｄ−カルニチンが１．４％であった。
【００６３】
＜実施例３＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物として、クロトノベタインが０．７％、４−ヒドロキシ−２−ブテンアミドが０．１％、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸が０．０２％、３−ヒドロキシグルタル酸が１．０％、Ｄ−カルニチンが４．２％含まれる混合物２７３．６ｇが溶解している水溶液を、６０℃に加熱し、減圧下で混合物：水が１：１の質量比となるまで濃縮した。
【００６４】
次に、濃縮液中の水に対して、数回に分けて４．５倍量のｎ−ブタノールを添加し、実施例１と同様の方法で結晶を得たところ、Ｌ−カルニチンの結晶が２２４．６ｇ得られた。
【００６５】
カルニチン結晶の収率は８２％であった。また結晶中の不純物は、Ｌ−カルニチンに対して、クロトノベタインが０．１％、４−ヒドロキシ−２−ブテンアミドが０．０１％、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸が０．００５％、Ｄ−カルニチンが１．０％であった。
【００６６】
得られた結晶２１８．７ｇを実施例１と同様の方法で再結晶したところ、カルニチンの結晶が１４８．９ｇ得られた。カルニチンの結晶の収率は６８％であった。また結晶中の不純物は、Ｌ−カルニチンに対して、クロトノベタインが０．０２％、Ｄ−カルニチンが０．２％であった。４−ヒドロキシ−２−ブテンアミド、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸は検出されなかった。
【００６７】
＜実施例４＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物として、クロトノベタインが０．５％、カルニチンアミドが０．５％、４−ヒドロキシ−２−ブテンアミドが０．１％、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸が０．０３％、Ｄ−カルニチンが４．２％を含む混合物４１．９ｇが溶解している水溶液を、６０℃に加熱し、減圧下で混合物：水が１：１の質量比となるまで濃縮した。
【００６８】
次に濃縮液中の水に対して、数回に分けて４．５倍量のｎ−ブタノールを添加し、６０℃にて減圧下で濃縮したところ、結晶が発生した。
【００６９】
さらに６０℃で減圧を続け、ｎ−ブタノールを溜出させた。ブタノールを含む溶液中の水の濃度が0.2％となるまで濃縮したのち、液温が２０℃となるまで冷却した。冷却後、ｎ−ブタノールを追添加し、得られた結晶溶液から濾過により結晶と溶液を分離したところ、カルニチンの結晶が３７．３ｇ得られた。
【００７０】
カルニチン結晶の収率は８９％であった。また、結晶中の不純物は、Ｌ−カルニチンに対して、クロトノベタインが０．０２％、カルニチンアミドが０．０２％、Ｄ−カルニチンが１．０％であった。４−ヒドロキシ−２−ブテンアミド、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸は検出されなかった。
【００７１】
得られた結晶３０．４ｇを、実施例１と同様の方法で再結晶したところ、カルニチンの結晶が２４．０ｇ得られた。カルニチンの結晶の収率は７９％であった。また、結晶中の不純物は、Ｌ−カルニチンに対して、クロトノベタインが０．００１％、Ｄ−カルニチンが０．２％であった。４−ヒドロキシ−２−ブテンアミド、４−ヒドロキシ−２−ブテン酸は検出されなかった。
【００７２】
＜実施例５＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物として、２−ヒドロキシ−Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−ヘキサメチル−１、３−プロパンジアミニウムが２．７％、Ｄ−カルニチンが５．３％含む混合物１１．５ｇが溶解している水溶液を、６０℃に加熱し、減圧下で混合物：水が１：１の質量比となるまで濃縮した。
【００７３】
次に、濃縮液中の水に対して４倍量のｎ−ブタノールを添加し、６０℃にて減圧下で濃縮したところ、結晶が発生した。さらに６０℃で減圧を続け、ｎ−ブタノールを溜出させた。ブタノールを含む溶液中の水の濃度が0.1％となるまで濃縮したのち、液温が２０℃となるまで冷却した。冷却後、ｎ−ブタノールを追添加し、得られた結晶溶液から濾過により結晶と溶液を分離したところ、カルニチンの結晶が８．６ｇ得られた。カルニチン結晶の収率は７５％であった。また結晶中の不純物は、Ｌ−カルニチンに対して、２−ヒドロキシ−Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−ヘキサメチル−１、３−プロパンジアミニウムが０．４％、Ｄ−カルニチンが０．５％であった
得られた結晶を、実施例１と同様の方法で再結晶したところ、カルニチンの結晶が７．７ｇ得られた。カルニチンの結晶の収率は８９％であった。また結晶中には２−ヒドロキシ−Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−ヘキサメチル−１、３−プロパンジアミニウム、Ｄ−カルニチン共に検出されなかった。
【００７４】
＜実施例６＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物としてカルニチンアミドが０．８％含む混合物１０．０ｇが溶解している水溶液を、実施例４と同様の操作を行ったところ、カルニチンの結晶が１６．５ｇ得られた。カルニチン結晶の収率は８９％であった。また結晶中の不純物は、Ｌ−カルニチンに対して、カルニチンアミドが０．０４％であった。
【００７５】
＜実施例７＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物として５．３％のＤ−カルニチンを含む混合物２９．６ｇが溶解している水溶液を、実施例２と同様の方法で結晶を得たところ、２６．６ｇの結晶が得られ収率は９０％であった。また結晶中の不純物は、Ｌ−カルニチンに対して、Ｄ−カルニチンが１．５％であった。
【００７６】
＜実施例８＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物として、５．３％のＤ−カルニチンを含む混合物１２．８ｇが溶解している水溶液を、加熱、減圧下で混合物：水が１：１の質量比となるまで濃縮した。
【００７７】
次に、該濃縮液にiso-ブタノールを水に対して６倍量添加し、６０℃にて減圧下、濃縮したところ、結晶が発生した。その時のブタノール溶液中の水の濃度は1.0%であった。そこで、液温を20℃となるように冷却し、ブタノール溶液中の水の濃度が0.4%となるようにiso-ブタノールを追加し、撹拌させた。
【００７８】
得られた結晶溶液を濾過により溶液を除去し、発生した結晶を回収し乾燥したところ、９．８ｇの結晶が得られ収率は７６％であった。結晶中のＬ−カルニチンに対するＤ−カルニチンが０．５％と精製されたＬ−カルニチンを得た。
【００７９】
＜実施例９＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物としてＤ−カルニチンが１％含まれる混合物１．０ｇを、６０℃で該混合物：メタノール＝１：１の質量比で溶解させ、徐々に冷却すると４０℃でカルニチンの結晶が発生した。
【００８０】
次にその溶液を４０℃に維持して、ｎ−ブタノールを添加した後、６０℃に加熱し、減圧しながらメタノールを留去し、溶液中の混合溶媒比をメタノール：ｎ−ブタノール＝１：５００に調整した。溶液温度を２０℃となるよう冷却し、得られた結晶を濾取したところ０．６０ｇで収率６０％であった。また、結晶中にはＤ−カルニチンが０．１％含まれていた。
【００８１】
＜実施例１０＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物としてＤ−カルニチンが０．５％含まれる混合物１．０ｇを、４０℃で該混合物結晶：ｎ−ブタノール＝１：４の比率で懸濁させ、１時間マグネチックスターラーで攪拌させた後２０℃まで冷却し、結晶を濾取した。このとき、得られた結晶は０．８３ｇで収率８１％であった。また、該結晶中にはＤ−カルニチンが０．１％含まれていた。
【００８２】
＜実施例１１＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物としてＤ−カルニチンが５．３％含まれる混合物１０．０ｇを、６０℃で該混合物結晶：ｉｓｏ−ブタノール＝１：４の比率で懸濁させ、６０℃を維持しながら、３時間マグネチックスターラーで攪拌させた後結晶を濾取した。このとき、得られた結晶は６．８ｇで収率６８％であった。また、該結晶中にはＤ−カルニチンが０．２％含まれていた。
【００８３】
＜実施例１２＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物としてＤ−カルニチンが５．３％含まれる混合物２．５ｇを、４０℃で該混合物結晶：ｉｓｏ−ブタノール＝１：４の比率で懸濁させ、４０℃を維持しながら１時間マグネチックスターラーで攪拌させた後、冷却し結晶を濾取した。  
このとき、得られた結晶は２．２ｇで収率８６％であった。また、該結晶中には、Ｌ−カルニチンが２．０％含まれていた。
【００８４】
＜実施例１３＞
Ｌ−カルニチンに対して、不純物としてＤ−カルニチンが５．３％含まれる混合物６．０ｇを、６０℃で該混合物結晶：ｎ−ブタノール＝１：１６の比率で懸濁させ、１時間マグネチックスターラーで攪拌させた後２０℃まで冷却し、結晶を濾取した。このとき、得られた結晶は２．８ｇで収率４７％であった。また、該結晶中には、Ｄ−カルニチンが０．５％含まれていた。
【００８５】
＜実施例１３〜１６＞
結晶中に不純物としてＤ−カルニチンが０．５％含まれる混合物１．０ｇを、４０℃〜１３０℃で該混合物結晶：ｎ−ブタノール＝１：４の比率で懸濁させ、３時間マグネチックスターラーで攪拌させた後、２０℃まで冷却し、結晶を濾取した。
【００８６】
この時、得られた結晶と該結晶中のD-カルニチンの量を表１に示す。
【表１】
2009102258.tif 000003
【００８７】
＜実施例１７〜２２＞
結晶中にＤ−カルニチンが５．０％含まれる混合物３．０ｇを、４０℃で該混合物結晶：水を含むｎ−ブタノール溶媒＝１：2の比率で懸濁させ、３時間マグネチックスターラーで攪拌させた後、２０℃まで冷却し、結晶を濾取した。
【００８８】
この時、ブタノール溶液中の水分量、得られた結晶収率及び該結晶中のD-カルニチンの量を表２に示す。
【表２】
2009102258.tif 000004
【００８９】
＜実施例２３〜２６＞
結晶中にＤ−カルニチンが５．０％含まれる混合物３．０ｇを、４０℃で該混合物結晶：水を含むiso−ブタノール溶媒＝１：2の比率で懸濁させ、３時間マグネチックスターラーで攪拌させた後、２０℃まで冷却し、結晶を濾取した。
【００９０】
この時ブタノール溶液中の水分量、得られた結晶収率及び該結晶中のD-カルニチンの量を表３に示す。
【表３】
2009102258.tif 000005