(57)【要約】【課題】  従来、プロアントシアニジンポリマーを含有する植物原料またはその抽出物と、フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有する物質、それらを含有する植物またはその抽出物とを酸性溶液中で加熱して得られる、末端にフロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有する物質が結合し低分子化したプロアントシアニジンオリゴマーは、活性酸素生成に起因する各種疾病に効果があるとされている。本発明の課題は、これら以外の種々の疾病に有効である治療剤の提供にある。【解決手段】  フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とする高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、抗アレルギー剤、リウマチ治療剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とする高尿酸血症の予防または改善剤。
【請求項２】
フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とする抗骨粗鬆症剤。
【請求項３】
フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とする抗鬱・抗ストレス剤。
【請求項４】
フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とする抗アレルギー剤。
【請求項５】
フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とするリウマチ治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とする各種疾病に有用な治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１には、プロアントシアニジンポリマーを含有する植物原料またはその抽出物と、フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有する物質、それらを含有する植物またはその抽出物とを酸性溶液中で加熱して得られる、末端にフロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有する物質が結合し低分子化したプロアントシアニジンオリゴマーを主成分として含有する組成物が開示され、このようなプロアントシアニジンオリゴマーは、活性酸素生成に起因する各種疾病に効果があると記載されている。
しかしながら、上記プロアントシアニジンオリゴマーが、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、顕著な効果でもって有効であるとの見地はない。
【特許文献１】国際公開ＷＯ２００６／０９０８３０号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
請求項１に記載の発明は、フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とする高尿酸血症の予防または改善剤である。
請求項２に記載の発明は、フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とする抗骨粗鬆症剤である。
請求項３に記載の発明は、フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とする抗鬱・抗ストレス剤である。
請求項４に記載の発明は、フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とする抗アレルギー剤である。
請求項５に記載の発明は、フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有するプロアントシアニジンオリゴマーを有効成分とするリウマチ治療剤である。
【発明の効果】
【０００５】
本発明によれば、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
【０００７】
本発明で用いられるプロアントシアニジンオリゴマーは、公知の化合物であり、その調製法は、例えば前記特許文献１に記載されている。
すなわち、本発明で用いられるプロアントシアニジンオリゴマーは、プロアントシアニジンポリマーを含有する植物原料またはその抽出物と、フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有する物質、それらを含有する植物またはその抽出物とを酸性溶液中で加熱して得られる。
【０００８】
プロアントシアニジンポリマーを含有する植物原料としては、カキ、ナシ、バナナ、リンゴ、ライチ、ソバ、ブドウ、イチゴ、緑茶、紅茶、ウーロン茶、マツ樹皮等が挙げられる。またその抽出物としては、搾汁、水または低級アルコール等の有機溶媒による抽出物等が挙げられる。
【０００９】
フロログルシノール環またはレゾルシノール環構造を有する物質としては、レスベラトロール、フロログルシノール、フラボノイド、フラバノイド等が挙げられ、例えば、緑茶やブドウ種子等から抽出することにより得ることができる。
【００１０】
酸性溶液としては、塩酸、硫酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸等の、０．１Ｎ〜１．０Ｎの水溶液が好ましい。
【００１１】
反応条件は、所望のプロアントシアニジンオリゴマーを得るに十分な反応原料を用い、好ましくは加熱条件下、例えば５０〜１００℃、１〜５時間で行なうことができる。
【００１２】
反応後は、特許文献１に記載の方法により精製処理を行うことにより目的とするプロアントシアニジンオリゴマーを得ることができる。精製処理としては、膜処理、吸着剤による処理、カラムクロマトグラフィーによる分画処理等が挙げられる。プロアントシアニジンオリゴマーは、濃縮液、乾燥粉末、ゲル状物等、所望の形態として利用することができる。
【００１３】
このようにして得られたプロアントシアニジンオリゴマーの構造としては、好ましくは、以下の一般式（１）または（２）で表される構造が挙げられる。
【００１４】
【化１】
2009108026.tif 000002
【００１５】
【化２】
2009108026.tif 000003
【００１６】
なお、一般式（１）、（２）中、Ｒ１はそれぞれ独立してＨまたはＯＨを表し、Ｒ２はそれぞれ独立してＯＨまたはガロイル基を表し、ｎは０〜３、好ましくは１〜３の整数を表す。
【００１７】
プロアントシアニジンオリゴマーの投与量は、患者の年令、体重、適応症状などによって異なるが、例えば、凍結乾燥粉末として、成人１日約５ｍｇ〜１ｇ、好ましくは５０ｍｇ〜１ｇ、さらに好ましくは２００ｍｇ〜１ｇ程度投与するのがよい。
【００１８】
本発明の治療剤は、錠剤、ピル、カプセル、顆粒、粉末、散剤、液剤等の固形または溶液の形態（以下、製剤ともいう）に公知の方法により適宜調製することができる。即ち、本発明に有用な固形製剤または液状製剤は、従来充分に確立された公知の製剤製法を用いることにより製造される。添加剤としては、例えば賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、希釈剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤または香料などが挙げられる。
【００１９】
また本発明の治療剤は、各種健康食品および機能性食品として摂取可能である。これらの例としては、各種のものをあげることができるが、健康食品および機能性食品の製造に関しては、通常用いられる、食品素材、食品添加物に加え、賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、分散剤、保存剤、湿潤化剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化材、カプセル基剤等の補助剤を用いた飲食品製剤形態で利用することができる。該補助剤の具体的な例示をすれば、乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、またはその塩、アラビアガム、ポリエチレングルコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウム、プルラン、カラギーナン、デキストリン、還元パラチノース、ソルビトール、キシリトール、ステビア、合成甘味料、クエン酸、アスコルビン酸、酸味料、重曹、ショ糖エステル、植物硬化油脂、塩化カリウム、サフラワー油、ミツロウ、大豆レシチン、香料等が配合できる。このような健康食品、機能性食品の製造に関しては、医薬品製剤の参考書、例えば「日本薬局方解説書（製剤総則）」（廣川書店）等を参考にすることができる。
【００２０】
上記以外にも本発明の治療剤は飲食品として摂取することができる。具体的には、納豆、厚揚げ、豆腐、こんにゃく、団子、漬物、佃煮、コロッケ、サンドイッチ、ピザ、ハンバーガー、餃子、シューマイ、サラダ等の各種総菜や、各種粉末（ビーフ、ポーク、チキン等畜産物、海老、帆立、蜆、昆布等水産物、野菜・果実類、植物、酵母、藻類等）や、プリン、クッキー、クラッカー、パン、ケーキ、チョコレート、ポテトチップス、ビスケット、ドーナツ、ゼリーなどの洋菓子、煎餅、羊羹、大福、おはぎ、その他の饅頭、カステラなどの和菓子、冷菓（飴等）、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば、きしめん等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、ハム、ソーセージ、ハンバーグ、コーンビーフ等の畜肉製品や、塩、胡椒、みそ、しょう油、ソース、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、甘味料、辛味料等の調味類や、明石焼き、たこ焼き、もんじゃ焼き、お好み焼き、焼きそば、焼きうどん等の鉄板焼き食品や、チーズ、ハードタイプのヨーグルト等の乳製品や、油脂類・香料類（バニラ、柑橘類、かつお等）を粉末固形化したものや、粉末飲食品（インスタントコーヒー、インスタント紅茶、インスタントミルク、インスタントスープ、味噌汁等）等の各種食品が挙げることができるが、これらに特に制限されない。
【００２１】
さらに本発明においては、例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、葉酸、パントテン酸、ビオチン、これらの誘導体等）、ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛等）、セレン、レシチン、カロテノイド（リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン等）、サポニン（ギムネマ酸、大豆サポニン、人参サポニン等）、脂肪酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチン等）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖等）、リン脂質及びその誘導体（フォスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、セラミド等）、含硫化合物（アリイン、セパエン、タウリン、グルタチオン、メチルスルホニルメタン等）、糖アルコール、リグナン類（セサミン等）、これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ウコン、ショウガ等）、などを併用することもできる。
【実施例】
【００２２】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本発明の治療剤は、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、抗アレルギー剤、リウマチ治療剤としてきわめて有用である。以下、上記各種薬効について実施例でもって説明する。
【００２３】
調製例
上記特許文献１に記載の方法にしたがって、プロアントシアニジンオリゴマーを調製した。方法を以下に示す。
市販のライチ果実ポリフェノールポリマー１ｇと、レスベラトロール１ｇと、５００ｍｇのクエン酸を１００ｍｌの水に分散・溶解させ、約９０℃で３時間反応させた。その後、室温まで冷却させた後、カラム精製し、凍結乾燥し、一般式（１）で表される構造を含むプロアオントシアニジンオリゴマーの粉末１を得た。
これとは別に、市販のライチ果実ポリフェノールポリマー１ｇと、フロログルシノール１ｇと、５００ｍｇのクエン酸を１００ｍｌの水に分散・溶解させ、約９０℃で３時間反応させた。その後、室温まで冷却させた後、カラム精製し、凍結乾燥し、一般式（２）で表される構造を含むプロアオントシアニジンオリゴマーの粉末２を得た。
このようにして得られるプロアオントシアニジンオリゴマーは、上記一般式（１）または（２）で表される構造を有する（ｎ＝０〜３の混合物）であることが確認されている。
【００２４】
実施例１（高尿酸血症の改善効果）
実験方法
供試動物はWistar系ラット雌（８週令、体重約180g）を１群６匹で用いた。
試験飼料に0.75％の濃度でアデニンを加えてラットに給与し、腎臓からの尿中への尿酸排泄阻害を起こさせて高尿酸血症のモデル動物とした。
対照群は、上記の0.75％アデニン飼料のみ、薬剤投与群は、０．７５％アデニンと上記粉末１含有飼料とした。飼料は自由摂取としたが、薬剤投与群の試験飼料中の上記粉末１の濃度を、摂取量が１ｍｇ／ｋｇ体重となるように調整した。試験開始日及び24日目に血中の尿酸値を測定した。
その結果、対照群の試験開始日の血中尿酸濃度は、０．５７ｍｇ／ｍｌであり、２４日目が２．３３ｍｇ／ｍｌであったのに対し、薬剤投与群の２４日目の血中尿酸濃度は０．７０ｍｇ／ｍｌであった。
この結果から明らかなように、対照群では血中尿酸濃度が大幅に増加するのに対し、薬剤投与群ではいずれもその濃度は増加しなかった。したがって、プロアントシアニジンオリゴマーは、高尿酸血症の予防または改善剤として有用であることが示された。なお、前記粉末１の替わりに粉末２を用いても同様の結果を得た。
【００２５】
実施例２（抗骨粗鬆症効果）
骨粗鬆症改善効果試験
ＳＤ系ラット（２２週齢）メスの卵巣を外科的に取り除き、骨粗鬆症のモデルラットを作成した。卵巣摘出ラットを７匹ずつ６群に分け、３５日間の試験期間中、１日置きに（計１７回）、前記粉末１の摂取量が１ｍｇ／ｋｇとなるように、生理食塩水溶解した液体を２ｍｌ経口投与した。飼料はオリエンタル酵母株式会社のマウス・ラット・ハムスター用固形飼料ＣＲＦ−１を用い、給餌および給水方法は自由摂取とした。試験期間中、各群間で、餌の摂取量に差は認められなかった。試験開始後３５日目にラットの体重を測定した後、大腿骨を取り出した。大腿骨は、接着組織および筋肉を取り除いて分析に使用した。大腿骨の体積を測定した後、エタノールで３回洗浄し、次にアセトンで３回洗浄したのち、一晩乾燥し、その後、重量を測定して大腿骨の乾燥重量を求めた。体積および乾燥重量から、骨密度（乾燥重量ｇ／体積ｍｍ3 ）を測定した。なお対照実験として、前記粉末１を含まない生理食塩水をラットに投与したこと以外は、上記実験を繰り返した例（比較例）も行なった。その結果、比較例の骨密度が１．００９ｍｇ／ｍｍ３であったのに対し、本実施例２では、骨密度が１．０９７ｍｇ／ｍｍ３であった。なお、前記粉末１の替わりに粉末２を用いても同様の結果を得た。
【００２６】
実施例３（抗鬱・抗ストレス効果）
上記粉末１の治療効果を調べた。
マウス強制水泳試験による精神安定作用の評価
本発明の治療剤の評価は、１９７７年にPorsoltにより開発されたマウス強制水泳試験を採用した。本試験は鬱病の動物モデル実験として最も多用される方法のひとつである。本試験では、マウスをある限られたスペースの中で強制的に泳がせて「無動状態」を惹起させる。この無動状態は、ストレスを負荷された動物が水からの逃避を放棄した一種の「絶望状態」を反映するものと考えられ、ヒトにおける鬱状態、ストレス状態と関連づけられている。事実、抗鬱薬は特異的にこの状況下における無動状態の持続時間を短縮させることがわかっており、この短縮作用は臨床力価との間に有意な相関を有することが認められている。
【００２７】
本試験方法は次のとおりである。
２５℃の水を深さ１５ｃｍまで入れたプラスチック円筒中でマウスを強制水泳させる。５分間の強制水泳後、３０℃の乾燥機中で１５分間乾燥し、ホームケージに戻す。翌日マウスに試験試料を腹腔内投与して、その１時間後に再び５分間の強制水泳を課し、現れた無動状態の持続時間をストップウォッチを用いて測定する。マウスが水に浮かんで静止している状態を無動状態と判定する。無動状態持続時間については有意差検定を行い、統計学的に有意差を検定する。実験には雄のｄｄYマウスを使用し、１群６匹とする。なお、試験は全て午後１時から午後６時の間に行う。また、ポジティブコントロールとして抗鬱薬であるイミプラミンを用いた試験も行う。
【００２８】
その結果、粉末１を３０ｍｇ／ｋｇ投与したマウスの無動状態持続時間は、１６０．１±２．９秒であった。コントロール（生理食塩水のみ）は２２０．０±２．２秒であった。ポジティブコントロール（３０ｍｇ／ｋｇ投与）のマウスの無動状態持続時間は、１７６．５±４．０秒であった。本実施例およびポジティブコントロールの無動状態持続時間は、危険率１％で有意差を有する。なお、粉末１を２〜３倍量使用しても、同様の結果を得た。また、前記粉末１の替わりに粉末２を用いても同様の結果を得た。
【００２９】
実施例４（抗アレルギー効果）
ＲＡＳＴ法による食物アレルゲン陽性の慢性じんま疹の患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に前記粉末１を５００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表１に示す。
【００３０】
【表１】
2009108026.tif 000004
【００３１】
実施例５
ＲＡＳＴ法によるアトピー性皮膚炎患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に前記粉末１を５００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表４に示す。
【００３２】
【表２】
2009108026.tif 000005
【００３３】
なお、上記各例において、前記粉末１の替わりに粉末２を用いても同様の結果を得た。
【００３４】
実施例６（抗リウマチ効果）
ヒト慢性リウマチ患者の滑膜から樹立された繊維芽細胞株であるＤＳＥＫ細胞を１０％ＦＢＳ（バイオウイタッカー社製）を含むＩｓｃｏｖ−ＭＥＭ培地（ＩＭＤＭ：ギブコＢＲＬ社製）にて、５％ＣＯ２存在下、３７℃で細胞が培養器に飽和になるまで培養し、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（バイオウイタッカー社製）で細胞を３×１０４細胞／ｍｌとなるように上記培地に懸濁し、９６ウェルマイクロタイタープレート（ＦＡＬＣＯＮ社製）の各ウェルに２００μｌずつ分注した。培養５〜７日後、ほぼ細胞が８０％飽和になった時で培地を交換し、前記粉末１濃度が５００μｇ／ｍｌの濃度である２００μｌの上記培地を加えた。
２４時間、７２時間経過時に１０μｌのプレミックスＷＳＴ−１（宝酒造社製、ＭＫ４００）を加えて３７℃で３．５時間反応させ、４５０ｎｍにおける吸光度（Ａ４５０）から６５０ｎｍにおける吸光度（Ａ６５０）を差し引いた値を細胞増殖度とした。その結果、２４時間後の細胞増殖度は０．７７、７２時間後は０．３３であり、抗リウマチ活性が認められた。なお、前記粉末１を加えない対照区では、２４時間、７２時間経過時の細胞増殖度が３．９０であった。
なお、前記粉末１の替わりに粉末２を用いても同様の結果を得た。