(57)【要約】【課題】優れたセラミド合成促進作用（セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用等）を有し、かつ、安全性の高いセラミド合成促進剤、並びに、前記セラミド合成促進剤を利用した皮膚外用剤及び飲食品を提供すること。【解決手段】アシタバの抽出物、イラクサの抽出物、インチンコウの抽出物、クマザサの抽出物、ゲンチアナの抽出物、及びトウニンの抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とするセラミド合成促進剤、並びに、前記セラミド合成促進剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤及び飲食品である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アシタバの抽出物、イラクサの抽出物、インチンコウの抽出物、クマザサの抽出物、ゲンチアナの抽出物、及びトウニンの抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とするセラミド合成促進剤。
【請求項２】
セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用を有する請求項１に記載のセラミド合成促進剤。
【請求項３】
請求項１から２のいずれかに記載のセラミド合成促進剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項４】
請求項１から２のいずれかに記載のセラミド合成促進剤を含有することを特徴とする飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物を含有するセラミド合成促進剤、並びに、前記セラミド合成促進剤を利用した皮膚外用剤及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
セラミドは、表皮細胞の角化の過程において、セリンとパルミトイル−ＣｏＡを基に、セラミド合成の律速酵素として知られるセリンパルミトイルトランスフェラーゼをはじめとした酵素の働きにより生成される。セラミドは、皮膚の最外層を覆う角層細胞間脂質の主成分として特異的に存在し、皮膚本来がもつ生体と外界とのバリア膜としての機能維持に重要な役割を果たしている。角層の構造はレンガとモルタルに例えられ、約１５層ほどに積み重なった角層細胞を細胞間脂質が繋ぎ止める形で強固なバリア膜を形成している。角層細胞は、アミノ酸を主成分とする天然保湿因子を細胞内に含有することによって水分を保持し、一方、角質細胞間脂質は、約５０％のセラミドを主成分とし、コレステロール、脂肪酸等の両親媒性脂質から構成されており、疎水性部分と親水性部分が交互に繰り返される層板構造、いわゆるラメラ構造を特徴としている。
【０００３】
様々な内的・外的要因によるバリア機能の低下は、経表皮水分蒸散量を増加させ、皮膚のかさつき、落屑、掻痒感などを惹き起こし、いわゆる乾燥肌に陥る。バリア障害は炎症を増大させ、外界からの様々な刺激に対する防御機能が低下するという悪循環に陥る。最近の研究において、加齢、或いはバリア障害として知られるアトピー性皮膚炎患者で、角層セラミド成分、いわゆる細胞間脂質の減少や組成変化が報告されており（非特許文献１参照）、バリア機能の維持、改善にセラミドが重要であることが広く認識されるようになった。
【０００４】
このような背景から、バリア機能を改善する方法として、セラミドを外部から補う方法（非特許文献２参照）や、皮膚内部においてセラミド産生能を高める方法（非特許文献３参照）が種々検討されている。
皮膚内部におけるセラミドの合成を促進し、セラミドの産生能を高めることのできる方法は、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、乾癬など、様々な皮膚症状の予防・改善に有効であると考えられ、そのため、より効果的で、かつ安全なセラミド合成促進剤の開発が、未だ望まれているのが現状である。
【０００５】
【非特許文献１】Ａｋｉｍｏｔｏ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（１９９３）２０，１
【非特許文献２】Ｋｅｎｙａ  Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，フレグランスジャーナル（２００４）１１；２３−３２
【非特許文献３】Ｔａｎｎｏ  Ｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（２０００）１４３，５２４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れたセラミド合成促進作用（セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用等）を有し、かつ、安全性の高いセラミド合成促進剤、並びに、前記セラミド合成促進剤を利用した皮膚外用剤及び飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、前記課題を解決するために種々検討を行ったところ、アシタバ、イラクサ、インチンコウ、クマザサ、ゲンチアナ、及びトウニンの各植物抽出物が、セラミド合成の律速酵素として知られるセリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用に基づく、優れたセラミド合成促進作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
前記各植物の抽出物を用い、表皮細胞におけるセリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡの発現を促進させることにより、表皮細胞自身のセラミド合成を活発化させることができ、例えば、加齢、乾燥肌、荒れ肌、紫外線曝露、アトピー性皮膚炎などによって減少した角層中のセラミドを増加させ、皮膚のバリア機能及び保湿機能を回復させることが可能となる。したがって、本発明によれば、例えば、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、乾癬など、様々な皮膚症状の予防・改善を、効果的に行えるようになることが期待される。
【０００８】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  アシタバの抽出物、イラクサの抽出物、インチンコウの抽出物、クマザサの抽出物、ゲンチアナの抽出物、及びトウニンの抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とするセラミド合成促進剤である。
＜２＞  セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用を有する前記＜１＞に記載のセラミド合成促進剤である。
＜３＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のセラミド合成促進剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤である。
＜４＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のセラミド合成促進剤を含有することを特徴とする飲食品である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によると、従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れたセラミド合成促進作用（セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用等）を有し、かつ、安全性の高いセラミド合成促進剤、並びに、前記セラミド合成促進剤を利用した皮膚外用剤及び飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
（セラミド合成促進剤）
本発明のセラミド合成促進剤は、アシタバの抽出物、イラクサの抽出物、インチンコウの抽出物、クマザサの抽出物、ゲンチアナの抽出物、及びトウニンの抽出物から選択される少なくとも１種を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００１１】
前記セラミド合成促進剤は、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ（ＳＰＴ）ｍＲＮＡ発現促進作用に基づくセラミド合成促進作用を、少なくとも有するものである。前記アシタバ、イラクサ、インチンコウ、クマザサ、ゲンチアナ、及びトウニン（本明細書中において、単に「植物」と総称することがある）の各抽出物が含有する、セラミド合成促進作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各抽出物がこのような優れた作用を有し、セラミド合成促進剤として有用であることは、従来には全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【００１２】
前記アシタバは、セリ科（Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ）の植物であり、学名はＡｎｇｅｌｉｃａ ｋｅｉｓｋｅｉ  Ｋｏｉｄｚｕｍｉである。抽出に供する部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、葉、茎、花、蕾、果実、果皮、果核、地上部、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉、茎が好ましい。
前記イラクサは、イラクサ科（Ｕｒｔｉｃａｃｅａｅ）の植物であり、学名はＵｒｔｉｃａ ｔｈｕｂｅｒｇｉａｎａ  Ｓｉｅｂｏｌｄ  ｅｔ  Ｚｕｃｃａｒｉｎｉである。抽出に供する部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、葉、茎、花、蕾、果実、果皮、果核、地上部、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記インチンコウは、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）の植物であり、学名はＡｒｔｅｍｉｓｉａ ｃａｐｉｌｌａｒｉｓ  Ｔｈｕｎｂ．である。抽出に供する部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、葉、茎、花、頭花、蕾、果実、果皮、果核、地上部、全草、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、頭花が好ましい。
前記クマザサは、イネ科（Ｇｒａｍｉｎｅａｅ）の植物であり、学名はＳａｓａ ａｌｂｏ−ｍａｒｇｉｎａｔａ  Ｍａｋｉｎｏである。抽出に供する部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、葉、茎、花、根、根皮、地上部、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記ゲンチアナは、リンドウ科（Ｇｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）の植物であり、学名はＧｅｎｔｉａｎａ ｌｕｔｅａ  Ｌ．である。抽出に供する部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、葉、茎、枝、花、蕾、果実、果皮、果核、根、根茎、地上部、全草、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、根、根茎が好ましい。
前記トウニンは、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）の植物であり、学名はＰｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ  Ｂ．である。抽出に供する部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、葉、茎、根、花、種子、地上部、全草、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、種子が好ましい。
【００１３】
抽出原料である前記各植物は、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。中でも、前記抽出原料としては、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記各植物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記各植物の極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００１４】
前記各植物の抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。また、前記各植物の抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記各植物の抽出物には、前記各植物の抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１５】
前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記各植物に含まれるセラミド合成促進作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。
【００１６】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１７】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００１８】
抽出原料である前記各植物から、セラミド合成促進作用を少なくとも有する抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明のセラミド合成促進剤の有効成分として用いることができる。
【００１９】
抽出により得られる前記各植物の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記各植物の抽出液は、そのままでもセラミド合成促進剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記各植物は特有の匂いと味を有しているため、前記各植物の抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば皮膚化粧料に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２０】
以上のようにして得られる前記各植物の抽出物は、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用を少なくとも有し、この作用に基づき、本発明のセラミド合成促進剤の有効成分として好適に利用可能なものである。
なお、前記セラミド合成促進剤中の前記各植物の抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記セラミド合成促進剤は、前記各植物の抽出物そのものであってもよい。
また、前記セラミド合成促進剤中、前記各植物の抽出物は、いずれか１種のみが含まれていてもよいし、２種以上が含まれていてもよい。前記セラミド合成促進剤中に２種以上の植物抽出物が含まれる場合の、各々の含有量比としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２１】
また、前記セラミド合成促進剤中に含まれ得る、前記各植物の抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記各植物の抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記セラミド合成促進剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
また、前記セラミド合成促進剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００２２】
本発明のセラミド合成促進剤は、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用に基づく優れたセラミド合成促進作用を有すると共に、安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の皮膚外用剤、本発明の飲食品などへの利用に好適である。
【００２３】
（皮膚外用剤）
本発明の皮膚外用剤は、前記した本発明のセラミド合成促進剤を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
ここで、前記皮膚外用剤とは、皮膚に適用される各種の薬剤を意味し、その区分としては特に制限されるものではなく、例えば、皮膚化粧料、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものである。
前記皮膚外用剤は、前記各植物の抽出物を、その活性を妨げないように任意の皮膚外用剤に配合したものであってもよいし、前記各植物の抽出物を主成分とした皮膚外用剤であってもよい。また、前記皮膚外用剤は、前記各植物の抽出物そのものであってもよい。
【００２４】
前記皮膚外用剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、美容液、ローション、パック、ファンデーション、リップクリーム、入浴剤、ヘアートニック、ヘアーローション、石鹸、ボディシャンプーなどが挙げられる。
【００２５】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、皮膚外用剤を製造するにあたって通常用いられる成分、例えば、収斂剤、殺菌、抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、抗老化剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などが挙げられる。
【００２６】
前記皮膚外用剤中の、前記セラミド合成促進剤の含有量としては、特に制限はなく、皮膚外用剤の種類などに応じて適宜選択することができるが、例えば、前記各植物の抽出物の量として、０．０００１〜１０質量％が好ましく、０．００１〜５質量％がより好ましい。
【００２７】
（飲食品）
本発明の飲食品は、前記した本発明のセラミド合成促進剤を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
ここで、前記飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
前記飲食品は、前記各植物の抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、前記各植物の抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。また、前記飲食品は、前記各植物の抽出物そのものであってもよい。
【００２８】
前記飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
【００２９】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、飲食品を製造するにあたって通常用いられる、補助的原料又は添加物などが挙げられる。
前記補助的原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
【００３０】
前記飲食品中の、前記セラミド合成促進剤の含有量としては、対象となる飲食品の種類に応じて異なり、一概には規定することができないが、例えば、飲食品本来の味を損なわない範囲で任意の飲食物に配合することを目的とする場合には、有効成分である前記各植物の抽出物の量として、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、例えば、前記各植物の抽出物を主成分とする顆粒、錠剤、カプセル形態等の栄養補助飲食品を製造することを目的とする場合には、有効成分である前記各植物の抽出物の量として、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。
【００３１】
（効果）
本発明のセラミド合成促進剤、並びに皮膚外用剤及び飲食品は、日常的に使用することが可能であり、有効成分である前記各植物の抽出物の働きによって、少なくともセリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用に基づくセラミド合成促進作用を、極めて効果的に発揮させることができるものである。そのため、本発明のセラミド合成促進剤、並びに皮膚外用剤及び飲食品は、表皮細胞自身のセラミド合成を活発化させ、セラミド産生機能を健常に戻すことができ、例えば、加齢、乾燥肌、荒れ肌、紫外線曝露、アトピー性皮膚炎などによって減少した角層中のセラミドを増加させ、高いバリア機能及び保湿機能を有する皮膚を取り戻すことを目的とした皮膚外用剤や飲食品に、好適に利用可能である。このような皮膚外用剤や飲食品を利用することにより、例えば、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、乾癬など、様々な皮膚症状の予防・改善を効果的に行えるようになることが期待される。
なお、本発明のセラミド合成促進剤、並びに皮膚外用剤及び飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することも可能である。また、本発明のセラミド合成促進剤、並びに皮膚外用剤及び飲食品は、天然由来の各植物の抽出物を有効成分としたものであり、安全性に優れる点でも、有利である。
【実施例】
【００３２】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
なお、本実施例では、アシタバの抽出物として、アシタバ抽出液ＢＧ（丸善製薬株式会社製）；イラクサの抽出物として、イラクサ抽出液ＢＧ（丸善製薬株式会社製）；インチコウの抽出物として、インチンコウ抽出液ＢＧ（丸善製薬株式会社製）；クマザサの抽出物として、クマザサ抽出液（丸善製薬株式会社製）；ゲンチアナの抽出物として、ゲンチアナ抽出液ＢＧ−Ｊ（丸善製薬株式会社製）；及び、トウニンの抽出物として、トウニン抽出液−Ｊ（丸善製薬株式会社製）；の各凍結乾燥品を用いた。
【００３３】
（実施例１：セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用試験）
前記各抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりセリンパルミトイルトランスフェラーゼ（ＳＰＴ）ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【００３４】
（１）一本鎖ＤＮＡの調製
ヒト正常新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を３５ｍｍディッシュに播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％空気の条件下にて２４時間培養を行った。培養終了後、所定濃度の被験試料添加培地に交換し、更に２４時間培養した。培養終了後、常法により総ＲＮＡを調製した。また、「被験試料無添加」で培養した細胞に関しても、同様に総ＲＮＡを調製した。総ＲＮＡ調製は下記の方法を用いて行った。細胞を１ｍＬのＲＮＡ抽出用試薬（ＩＳＯＧＥＮ：株式会社ニッポンジーン）で溶解し、クロロホルムを２００μＬ添加後、遠心（１２，０００回転、４℃、１５分間）により上層ＲＮＡ層を単離し、更にイソプロパノールで濃縮を行った。濃縮沈殿させた総ＲＮＡをＴＥ溶液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ／１ｍＭ  ＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）に溶解して総ＲＮＡ標品とし、ＰＣＲ装置（ＴａＫａＲａ  ＰＣＲ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ  ＭＰ：タカラバイオ社）及びリアルタイムＰＣＲキット（ＴａＫａＲａ  ＥｘＳｃｒｉｐｔＴＭ  ＲＴ  ｒｅａｇｅｎｔ  Ｋｉｔ，ＲＲ０３５Ａ：タカラバイオ社）を用いて、ＳＰＴｍＲＮＡ発現量を測定するための鋳型に使用する一本鎖ＤＮＡを合成した。
【００３５】
（２）サイバーグリーン法を用いたリアルタイム−ＰＣＲ反応
ＳＰＴ遺伝子増幅用プライマーとして、下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社）。
ＳＰＴセンスプライマー：５’−ＣＣＡＧＡＣＴＧＴＣＡＧＧＡＧＣＡＡＣＣＡＴＴＡ―３’（配列番号：１）
ＳＰＴアンチセンスプライマー：５’−ＣＧＴＧＴＣＣＧＡＧＧＣＴＧＡＣＣＡＴＡ―３’（配列番号：２）
また、内部標準としてのＧ３ＰＤＨ遺伝子増幅用プライマーとして、下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社）。
Ｇ３ＰＤＨセンスプライマー：５’−ＧＣＡＣＣＧＴＣＡＡＧＧＣＴＧＡＧＡＡＣ−３’（配列番号：３）
Ｇ３ＰＤＨアンチセンスプライマー：５’−ＡＴＧＧＴＧＧＴＧＡＡＧＡＣＧＣＣＡＧＴ−３’（配列番号：４）
「被験試料無添加」、「被験試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基に調製した一本鎖ＤＮＡ、及び検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液を用いて、リアルタイムＰＣＲ装置（Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｓｍａｒｔ  Ｃｙｃｌｅｒ  ＩＩ：Ｃｅｐｈｅｉｄ社）及びリアルタイムＰＣＲキット（ＳＹＢＲ（登録商標）Ｐｒｅｍｉｘ  Ｅｘ  ＴａｑＴＭ，ＲＲ０４１Ａ：タカラバイオ社）でリアルタイムＰＣＲ反応を行った。なお、検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液は、原液濃度の相対値を便宜的に「１００，０００」とし、以降１０倍希釈を繰り返して、濃度値「１００，０００」、「１０，０００」、「１，０００」、「１００」、及び、「１０」の５段階の希釈系列とした。リアルタイムＰＣＲ反応は、９５℃で１０秒間保温の後、９５℃で５秒間、６０℃で２０秒間の反応を４５サイクル繰り返し、１サイクル毎にサイバーグリーン色素の発光量を測定した。
【００３６】
（３）解析
各サイクルのサイバーグリーン色素の発光量を基に、ＳＰＴ及びＧ３ＰＤＨのそれぞれをコードするＤＮＡ断片の増幅曲線を作成した。検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液の希釈系列の増幅曲線から、横軸に濃度、縦軸に増幅曲線の、２次導関数が最大となるサイクル数をとった検量線を作成した。各発現定量用サンプルについては、増幅曲線の２次導関数が最大となるサイクル数を検量線上にプロットし、相対的な発現量を算出した。ＳＰＴの発現量は、同一サンプルにおけるＧ３ＰＤＨの発現量の値で補正を行った後、更に「被験試料無添加」の補正値を１００とした時の「被験試料添加」の補正値を算出した。
ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進率（％）は以下の式により求めた。結果を表１〜６に示す。
ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：「被験試料添加」の補正値
Ｂ：「被験試料無添加（コントロール）」の補正値
【００３７】
【表１】
2009107965.tif 000002
【００３８】
【表２】
2009107965.tif 000003
【００３９】
【表３】
2009107965.tif 000004
【００４０】
【表４】
2009107965.tif 000005
【００４１】
【表５】
2009107965.tif 000006
【００４２】
【表６】
2009107965.tif 000007
【００４３】
表１〜６の結果から、アシタバ、イラクサ、インチンコウ、クマザサ、ゲンチアナ、及びトウニンの各抽出物は、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ（ＳＰＴ）ｍＲＮＡの発現を促進する作用を有することが確認された。
【００４４】
（配合例１）
−乳液−
下記組成に従い、乳液を常法により製造した。
・アシタバ抽出物・・・０．１０ｇ
・ホホバオイル・・・４．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．５０ｇ
・オリーブオイル・・・２．００ｇ
・スクワラン・・・２．００ｇ
・セタノール・・・２．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・黄杞エキス・・・０．１０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１０ｇ
・イチョウ葉エキス・・・０．１０ｇ
・コンキオリン・・・０．１０ｇ
・オウバクエキス・・・０．１０ｇ
・カツミレエキス・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計１００．００ｇ）
【００４５】
（配合例２）
−化粧水−
下記組成に従い、化粧水を常法により製造した。
・イラクサ抽出物・・・０．１０ｇ
・グリセリン・・・３．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・クエン酸・・・０．１０ｇ
・クエン酸ソーダ・・・０．１０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１０ｇ
・海藻エキス・・・０．１０ｇ
・クジンエキス・・・０．１０ｇ
・キシロビオースミクスチャー・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００４６】
（配合例３）
−クリーム−
下記組成に従い、クリームを常法により製造した。
・インチンコウ抽出物・・・０．１０ｇ
・スクワラン・・・１０．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．００ｇ
・流動パラフィン・・・５．００ｇ
・サラシミツロウ・・・４．００ｇ
・セタノール・・・３．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．００ｇ
・ラノリン・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．５０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５０ｇ
・ステアリン酸・・・１．００ｇ
・酵母抽出液・・・０．１０ｇ
・シソ抽出液・・・０．１０ｇ
・シナノキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ジユ抽出液・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．１０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００４７】
（配合例４）
−パック−
下記組成に従い、パックを常法により製造した。
・クマザサ抽出物・・・０．２０ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５．００ｇ
・エタノール・・・１０．００ｇ
・プロピレングリコール・・・７．００ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．００ｇ
・セージ抽出液・・・０．１０ｇ
・トウキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ニンジン抽出液・・・０．１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００４８】
（配合例５）
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・ゲンチアナ抽出物・・・３０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
【００４９】
（配合例６）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、顆粒状栄養補助食品を製造した。
・トウニン抽出物・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【産業上の利用可能性】
【００５０】
本発明のセラミド合成促進剤、並びに皮膚外用剤及び飲食品は、表皮細胞自身のセラミド合成を活発化させ、セラミド産生機能を健常に戻すことができるので、例えば、加齢、乾燥肌、荒れ肌、紫外線曝露、アトピー性皮膚炎などによって減少した角層中のセラミドを増加させ、高いバリア機能及び保湿機能を有する皮膚を取り戻すことを目的とした皮膚外用剤や飲食品に、好適に利用可能である。
【配列表】
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