(57)【要約】【課題】菌数検査などに用いられ、コンパクトかつ操作が簡便な微生物培養シートおよびその製造方法を提供する。【解決手段】基材シートと前記基材シートの上に形成された培地層と、前記培地層を被覆するカバーシートとからなる微生物培養シートであって、前記基材シートの上に、ＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、前記培地層は、前記枠層内に形成されることを特徴とする。基材シートの上に、ＵＶ発泡インキで枠型を印刷する工程、前記枠型内に、培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程、および前記枠型にＵＶを照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程とによって製造することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
基材シートと前記基材シートの上に形成された培地層と、前記培地層を被覆するカバーシートとからなる微生物培養シートであって、
前記基材シートの上に、ＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、
前記培地層は、前記枠層内に形成されることを特徴とする、微生物培養シート。
【請求項２】
前記カバーシートは、前記基材シートの上に形成された培地層と対向するように、培地層が形成されることを特徴とする、請求項１記載の微生物培養シート。
【請求項３】
前記カバーシートは、前記基材シート上に形成された枠層と対向するように、粘着層が形成されることを特徴とする、請求項１または２記載の微生物培養シート。
【請求項４】
前記カバーシートは、前記基材シートに固設されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の微生物培養シート。
【請求項５】
前記基材シートの上の枠層の外側に粘着層が形成されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の微生物培養シート。
【請求項６】
基材シートと前記基材シートの上に形成された培地層と、前記培地層を被覆するカバーシートとからなる微生物培養シートであって、前記基材シートの上に、ＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、前記培地層は、前記枠層内に形成される微生物培養シートの製造方法であって、
基材シートの上に、培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程、
前記培地層の外周にＵＶ発泡インキで枠型を印刷する工程、および
ＵＶ照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程とを有することを特徴とする、微生物培養シートの製造方法。
【請求項７】
基材シートと前記基材シートの上に形成された培地層と、前記培地層を被覆するカバーシートとからなる微生物培養シートであって、前記基材シートの上に、ＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、前記培地層は、前記枠層内に形成される微生物培養シートの製造方法であって、
基材シートの上に、ＵＶ発泡インキで枠型を印刷する工程、
ＵＶ照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程、および
前記枠層内に、培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程とを有することを特徴とする、微生物培養シートの製造方法。
【請求項８】
基材シートと前記基材シートの上に形成された培地層と、前記培地層を被覆するカバーシートとからなる微生物培養シートであって、前記基材シートの上に、ＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、前記培地層は、前記枠層内に形成される微生物培養シートの製造方法であって、
基材シートの上に、ＵＶ発泡インキで枠型を印刷する工程、
前記枠型内に、培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程、および
前記枠型にＵＶを照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程とを有することを特徴とする、微生物培養シートの製造方法。
【請求項９】
基材シートと前記基材シートの上に形成された培地層と、前記培地層を被覆するカバーシートとからなる微生物培養シートであって、前記基材シートの上に、ＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、前記培地層は、前記枠層内に形成される微生物培養シートの製造方法であって、
基材シートの上に、ＵＶ発泡インキで枠型に印刷する工程、
前記枠型内に、培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程、
前記基材シートにカバーシートを固設する工程、
カバーシートの上部から前記枠型にＵＶを照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程とを有することを特徴とする、微生物培養シートの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、菌数検査などに用いられ、コンパクトかつ操作が簡便な微生物培養シートおよびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物の存在を確認し、または微生物数を測定する方法として、寒天平板混釈法があり、予め滅菌したシャーレに形成した寒天培地が使用される。この方法は、寒天培地を高圧蒸気滅菌するためのオートクレーブや、微生物検査を無菌的に行うことのできる検査室が必要であり、微生物のサンプリングから試料液の調整、分注、培地との混釈、培養、計数に至る微生物検査の操作には熟練を要する。そこで、高度の熟練を必要とすることなく簡便に微生物検査を行える微生物培養シートとして、乾燥培地が開発されている。
【０００３】
例えば、支持体の上部表面上に形成された水ベース接着剤組成物層と上記接着剤組成物層に付着されたゲル化剤を含む冷水溶解性粉体と前記冷水溶解性粉体を被覆するカバーシートとからなる培養基装置がある（特許文献１）。カバーシートを剥がし、水性テストサンプルを、冷水溶解性粉体層の上に置くとゲル化剤が素早く水和し、微生物の増殖を維持する再構築培地を形成し、カバーシートを被覆し所定時間インキュベートすると、コロニーを透明なカバーシートを通して計数することができる、という。
【０００４】
また、１個以上の吸水部を有し、前記吸水部以外の部分が撥水性となっている基材と、前記吸水部を密封するフィルムとからなるシート状培養用容器もある（特許文献２）。培地及び吸水性樹脂が塗布されたシート状の基材と、基材側に吸水性樹脂が形成された透明なフィルムとからなり、培地及び吸水性樹脂に微生物を接種し、その上にフィルムを貼り付けることにより培養することができるため、従来のペトリ皿やシャーレと比較して、軽く、嵩張らないという利点がある、という。フィルムを剥がしてすべての吸水部が漬かるように容器を液体培地に浸漬してから引き上げると、吸水部のみに液体培地が吸収され、吸水部以外の撥水性部分には液体培地が付着しないため、独立した培地が容易にかつ確実に得られ、所望の微生物を培地に接種した後にフィルムで吸水部を密封すれば、この状態で微生物の培養を観察することができる。
【０００５】
また、防水性の基材シートと該基材シート上に被せられるカバーシートとを有し、少なくとも基材シート上には培地混合物の層が設けられてなる微生物の微生物培養シートにおいて、前記培地混合物層の上に、接種する被検液の広がりを一定にするための疎水性インキによる外枠層を設けたことを特徴とする微生物培養シートもある（特許文献３）。実施例では、基材シートとして厚さ１００μｍの透明な２軸延伸ポリエステルフィルムを用い、その上に培地混合物層用塗布液をコンマコーターにより乾燥時の塗布量が３０ｇ／ｍ2となるように塗布し、前記培地混合物層の上に、内径５０ｍｍ、外径７０ｍｍのドーナッツ状パターンを、疎水性インキＲＡＭ（セイコーアドバンス社製）でスクリーン印刷して外枠層を形成している。
【０００６】
更に、方形の粘着シート上に円形の多孔質マトリックス層と水溶性高分子化合物層とを積層し、上部に方形の透明フィルムを配設した微生物培養器もある（特許文献４）。多孔質マトリックス層上に試料液を添加すると、試料液が多孔質マトリックス層に保持され、この保持された水によって多孔質マトリックス層に接した水溶性高分子化合物層が溶解し、生じた水溶性高分子化合物水溶液と生育栄養成分によって微生物の生育しうる環境となる。この微生物培養器では、微生物は水溶性高分子化合物層内部までは侵入せず、更に多孔質マトリックス層の表面まで押し上げられるため、多孔質マトリックス層の表面または表面近傍にコロニーが形成され、透明フィルムが粘着シートと接着することでシート状微生物培養器として利用でき、軽量で嵩が低く取り扱いを容易にできる、という。
【特許文献１】特許公報３３８３３０４号公報
【特許文献２】特開平７−２８９２３５号公報
【特許文献３】特開平８−２８０３７７号公報
【特許文献４】国際公開ＷＯ０１／０４４４３７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
微生物検査では多数の検体を処理する必要があり、簡便な操作が好ましい。しかしながら、前記特許文献１記載の培養基装置は、支持体上の水ベース接着剤組成物層の全面に、キサンタン・ガム、グアー・ガム、コーカスト・ビーン・ガム、カルボキシメチル・セルロース、ヒドロキシエチル・セルロース、アルギンなどゲル化剤を含む冷水溶解性粉体を付着するものであるが、被検液を粉体上に均一に一定面積に広げることが困難であり、このためスプレッダーで被検液を拡げて使用するものである。よって検体ごとのスプレッダーが必要となり、スプレッダーによって検体を前記冷水溶解性粉体の上で拡げる操作も必要となる。したがって、吸水性に優れる培地基材を使用し、より迅速かつ簡便に使用しうる微生物培養シートが望まれる。
【０００８】
また、微生物は、一般に３７℃で２０時間以上の培養を行った後に検出したコロニー数が計数され、上記培養期間内に水分が蒸発すると培養が困難となる場合がある。このため、吸水倍率に優れる培地を使用する必要性が高い。前記特許文献２記載のシート状培養用容器は、撥水性の基材上に円形の吸水部を突出させて形成しているが、被検液が前記突出部から遺漏する場合がある。したがって、被検液を所定範囲に限定しうる微生物培養シートが望まれる。
【０００９】
また、微生物培養シートは、簡易に使用しうる点に特徴があり、安価に製造しうることが好ましい。特許文献３記載の微生物培養シートは、培地混合物層の上に外枠層が設けられるため、被検液の広がりを一定範囲に限定できる利点があるが、外枠層からはみ出す培地混合物が無駄になり不経済である。同様に、特許文献４の微生物培養器も、水溶性高分子化合物層と多孔質マトリックス層との少なくとも２層を必要とし、また、カバーシートで密封するために大型の粘着シートが必要となる。また、菌体が多孔質眞トリックスに入り込んで増殖が進行すると、発生したコロニーが見にくく、特に菌体が接近して増殖した場合、計数が難しくなる場合がある。
【００１０】
本発明は、上記問題点に鑑みて、被検液の広がりを限定し、高価な培地層が前記枠層内に限定して配設される微生物培養シートを提供することを目的とする。
更に、吸水倍率に優れる培地層を使用し、簡便かつ正確に微生物の観測および計数を行うことができる微生物培養シートを提供することを目的とする。
【００１１】
加えて、簡便に上記微生物培養シートを製造する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、微生物培養シートについて詳細に検討した結果、基材シート上にＵＶ発泡インキで枠層を印刷しＵＶ照射することで、接種する被検液の広がりを一定にする枠層を形成し得ること、前記枠層内にのみ培地層を形成すれば、培地層の無駄を回避しうること、このような培地としてカラギーナンを使用すると、吸水量および吸水速度に優れるため、所定範囲に迅速に被検液を吸収させることができ、これによって簡便かつ確実に培養操作を行えること、このような枠層および培地層を共に印刷によって形成することで、容易かつ安価に微生物培養シートを提供しうることを見出し、本発明を完成させた。
【００１３】
すなわち、本発明は、基材シートと前記基材シートの上に形成された培地層と、前記培地層を被覆するカバーシートとからなる微生物培養シートであって、前記基材シートの上に、ＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、前記培地層は、前記枠層内に形成されることを特徴とする、微生物培養シートを提供するものである。
【００１４】
また本発明は、基材シートと前記基材シートの上に形成された培地層と、前記培地層を被覆するカバーシートとからなる微生物培養シートであって、前記基材シートの上に、ＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、前記培地層は、前記枠層内に形成される微生物培養シートの製造方法であって、基材シートの上に、ＵＶ発泡インキで枠型を印刷する工程、ＵＶ照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程、および
前記枠層内に、培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程とを有することを特徴とする、微生物培養シートの製造方法、
前記微生物培養シートの製造方法であって、基材シートの上に、ＵＶ発泡インキで枠型を印刷する工程、前記枠型内に、培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程、および前記枠型にＵＶを照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程とを有することを特徴とする、微生物培養シートの製造方法、および
前記微生物培養シートの製造方法であって、基材シートの上に、ＵＶ発泡インキで枠型に印刷する工程、前記枠型内に、培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程、前記基材シートにカバーシートを固設する工程、カバーシートの上部から前記枠型にＵＶを照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程とを有することを特徴とする、微生物培養シートの製造方法法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、接種した被検液の広がり面積を一定にするための手段としてＵＶ発泡インキからなる枠層が備えられ、ピペットなどを用いて所定量の被検液を滴下し、カバーシートを降ろして、その上から軽く押さえるだけで、特別な器具を使用することなく被検液を枠層で囲まれた領域全体に均一に広げることができ、極めて簡単な操作で効率的かつ正確に菌数測定を行うことができる。
【００１６】
また、本発明では、培地層は前記枠層の内側に限定されるため、省資源、合理化ができ、かつ、生産性に優れる。
また、本発明によれば、培地層を被覆するカバーシートを有するため、培養操作中の落下菌などによる汚染を防止することができ、同時に培地層の水分の蒸発を防止することができる。また、上記カバーシートの内側に、前記培地層と対抗する位置に培地層を形成し、または前記枠層に対向する位置に粘着層をすると、カバーシートによる被覆および水分の蒸発をより確実に防止することができ、培養精度を向上することができる。
【００１７】
本発明の微生物培養シートの製造方法によれば、印刷によって枠層などを形成することができるため、培地層を前記枠層の内側に限定することができ、安価かつ簡便に製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明の第一は、基材シートと前記基材シートの上に形成された培地層と、前記培地層を被覆するカバーシートとからなる微生物培養シートであって、前記基材シートの上に、ＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、前記培地層は、前記枠層内に形成されることを特徴とする、微生物培養シートである。ＵＶ発泡インキからなる枠層を有するため、接種する被検液の広がりを一定にすることができる。また、前記枠層に限定して培地層を形成したため、高価な培地層の無駄を回避することができる。
【００１９】
本発明の微生物培養シートは、前記カバーシートに、前記基材シートの上に形成された培地層と対向するように、培地層が形成されていてもよく、前記基材シート上に形成された枠層と対向するように、粘着層が形成されていてもよい。前記カバーシートは、前記基材シートに固設されていてもよい。また本発明では、前記枠層の外側に粘着層が形成されていてもよく、前記培地層は、カラギーナンを含むものであってもよい。
【００２０】
（１）微生物培養シートの構成
本発明の微生物培養シートの好適な態様の一例を図１（ａ）、（ｂ）に示す。図１（ａ）は部分透視平面図であり、図１（ｂ）は、図１（ａ）のＡ−Ａ’断面図である。図１では、方形の基材シート（１０）に円形の枠層（２０）が形成され、前記枠層（２０）内に培地層（３０）が形成され、少なくとも前記培地層（３０）を被覆するように、カバーシート層（４０）が積層される態様を示す。なお、本発明において、基材シート（１０）の形状は、方形に限定されず、円形、楕円形、多角形、不定形などいずれであってもよい。また、枠層（２０）の形状も円形に限定されるものではないが、培地層に接種した被検液の吸水範囲が所定の面積を確保しうるように枠層が形成されることが好ましい。
【００２１】
本発明の微生物培養シートは、図２の断面図に示すように、前記カバーシート（４０）に、前記基材シート（１０）上に形成した培地層（３０）と対向するように、培地層（３０）が形成されていてもよい。被検液を基材シート（１０）上の培地層（３０）とカバーシート（４０）の培地層（３０’）との間に挟み込むことで、培地層（３０，３０’）の乾燥を防ぐことができ、カバーシート（４０）上の培地層（３０’）内で微生物を培養することで、カバーシート（４０）側からの微生物の検出を容易にすることができる。
【００２２】
更に、図３の断面図に示すように、カバーシート（４０）に、前記基材シート（１０）上に形成された枠層（３０）と対向するように粘着層（５０）を形成してもよい。粘着層（５０）を介して枠層（２０）とカバーシート（４０）とが接着されるため、カバーシート（４０）による培地層（３０）の被覆をより確実にして培地層（３０，３０’）の乾燥や汚染をより効率的に防止することができる。
【００２３】
なお、本発明の微生物培養シートにおいて、「基材シートの上」とは、基材シートに直接接触する場合の他、基材シートを下に、カバーシートを上にした場合に、基材シートの上方も含むものとする。したがって、基材シート（１０）と枠層（２０）との間には、他の層を含んでいてもよい。例えば、図４の断面図に示すように、基材シート（１０）上に粘着層（５０）、保護層（６０）を順次積層し、この保護層（６０）に枠層（２０）と培地層（３０）とを形成してもよい。培地層（３０）に被検液を接種し、カバーシート（４０）でこの培地層(３０)を被覆すると、カバーシート(４０)が基材シート（１０）側に粘着層（５０）によって固着され、培地層（３０）の乾燥と汚染を効率的に防止することができる。また、培地層（３０）の下層に保護層（６０）が積層されるため、被検液の粘着層（５０）への浸出を防止することができ、同時に粘着層に含まれる成分の培地層（３０）への溶出を防止して微生物を生育させることができる。なお、図４は、基材シート（１０）の下方に、更に格子印刷層（７０）を積層する態様を示す。
【００２４】
また、基材シート（１０）や枠層（２０）の形状は、上記に限定されず、例えば、方形の基材シート（１０）に方形の培地層（３０）が形成されるように、枠層（２０）を形成してもよい。基材シート（１９）と培地層（３０）とが共に方形であり、基材シート（１０）の上に、複数の培地層（３０）が形成された態様を図５（ａ）、（ｂ）に示す。図５（ａ）は平面図であり、図５（ｂ）は、図５（ａ）のＢ−Ｂ’断面図である。図５では、カバーシート（４０）が基材シート（１０）の端部に固設され、かつ枠層（２０）に密着できるように、カバーシート（４０）に２つの角部（Ｃ１，Ｃ２）を形成させた態様となっている。なお、図５とは相違するが、カバーシート（４０）に、前記基材シート（１０）上に形成された枠層（３０）と対向するように培地層（３０）や粘着層（５０）を形成してもよい。
【００２５】
（２）基材シート
本発明で使用する基材シートは、防水性を有することが必要であり、培地層を形成する際の乾燥処理に耐える耐熱性を有することが好ましく、例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニルなどのプラスチックシートが使用できる。基材シートは、無着色の透明でもよいが、発泡により白色を呈するものや白色に着色したものは生育させたコロニーを計数し易い点で好ましい。プラスチックシート以外では、耐水加工を施した紙も使用可能であり、例えば、紙基材に合成樹脂を塗布または押し出しコートしたもの、或いは、プラスチックフィルムをラミネートしたものなどを使用することもできる。
【００２６】
基材シートは、カールなどがなく平坦であることが好ましく、その厚さは、特に限定はされないが、通常、２５〜５００μｍ、より好ましくは５０〜２５０μｍである。基材シートには、予め水に不溶性で微生物の生育に影響を与えないインキで枡目印刷柄が印刷されていてもよい。枡目印刷柄によってコロニーの計数を容易にすることができるからである。なお、印刷の版式は、特に限定されず何でもよいが、着色剤、樹脂、溶剤などの選択範囲が広い点でグラビア印刷などが好ましい。枡目の大きさは１ｃｍ角程度が適当である。
【００２７】
本発明の微生物培養シートは、培地層で生育させたコロニーを観察、計数するものであり、カバーシート側から観察および計数することができるが、基材シート側から観察および計数してもよい。この場合には、基材シートは、透明であることが好ましい。
【００２８】
（３）枠層
本発明では、基材シートの上にＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、これにより、接種する被検液の広がりを一定にすることができる。枠層に用いるＵＶ発泡インキは疎水性であるため、培養に際してカバーシートを持ち上げて、基材シートに設けたＵＶ発泡インキからなる枠層で囲まれた培地層の上に、ピペットなどを用いて所定量の被検液を滴下し、カバーシートを降ろしてその上から軽く押さえるだけで、特別な器具を使用することなく被検液をＵＶ発泡インキからなる枠層で囲まれた領域全体に均一に広げることができる。培地層が被検液の水分を吸収し、膨潤・ゲル化し、予め含有させた栄養成分が溶出し、被検液中の微生物は均一に分散してゲルに捕捉されるため、そのまま孵卵器に入れて培養することができ、培養により計数の容易なコロニーが形成できる。
【００２９】
本発明の微生物培養シートでは、枠層は、基材シートの上に形成するが、前記したように基材シートに直接形成するほか、前記図４に示すように、基材シート（１０）の上に粘着層（５０）および保護層（６０）を形成した場合には、保護層（６０）の上に枠層（２０）を形成してもよい。なお、図４とは相違するが、粘着層（５０）の上に枠層（２０）を形成し、枠層（２０）の内側に保護層（６０）と培地層（３０）とを形成してもよい。
【００３０】
本発明において、枠層は、被検液を接種される培地層（３０）の面積を所定範囲に限定するものであり、これによって所定液量に含まれる微生物数の計測を容易かつ正確に行いうる。したがって、枠層の幅は、上記目的を達成できればよく、均一幅に限定されるものではないが、最細部が幅０．５〜５．０ｍｍであることが好ましく、より好ましくは１．０〜３．０ｍｍである。上記範囲であれば、培地層（３０）が吸水した場合でも、培地層（３０）の形状を維持でき、かつ枠層の内側と外側との区切り部として機能することができる。また一般には、枠層の高さは、３０〜５００μｍ、より好ましくは５０〜２００μｍである。３０μｍを下回ると、被検液を広げた際、枠層からはみ出しやすくなり、または被検液を吸水するために必要な培地層（３０）の面積が広くなり微生物数の計数が困難となる場合がある。一方、５００μｍを超えると吸水後の培地層（３０）の上部に空間部が発生するため、カバーシートをした状態での微生物数の計数が困難となる場合があり、製造コストの面でも不利となる。また、枠層の形状が円形である場合、円形の大きさには限定はないが、好ましくは直径３〜７ｃｍである。
【００３１】
使用するＵＶ発泡インクは、培養に際して接種した被検液の広がり面積を枠層で囲まれた一定の面積に保つために設けるもので、被検液が水系であることからこれを反発できる疎水性インキを用いるものである。従って、枠層に用いるインキとしては、ＵＶ発泡するものであれば、水溶性インキとか親水性のインキでない限り、殆どのインキが使用でき着色していてもよく、従来のインクにＵＶ発泡剤および硬化剤を含有させたものを好適に使用することができる。ＵＶ発泡インクは、通常のインキビヒクルの１種ないし２種以上を主成分としＵＶ発泡剤および硬化剤を含有し、必要に応じて、可塑剤、安定剤、酸化防止剤、光安定剤、紫外線吸収剤、架橋剤、滑剤、帯電防止剤、充填剤、その他等の添加剤の１種ないし２種以上を任意に添加し、更に、染料・顔料等の着色剤を添加し、溶媒、希釈剤等で充分に混練してインキ組成物を調整して得たインキ組成物を使用することができる。このようなインキビヒクルとしては、公知のもの、例えば、あまに油、きり油、大豆油、炭化水素油、ロジン、ロジンエステル、ロジン変性樹脂、シェラック、アルキッド樹脂、フェノール系樹脂、マレイン酸樹脂、天然樹脂、炭化水素樹脂、ポリ塩化ビニル系樹脂、ポリ酢酸系樹脂、ポリスチレン系樹脂、ポリビニルブチラール樹脂、アクリルまたはメタクリル系樹脂、ポリアミド系樹脂、ポリエステル系樹脂、ポリウレタン系樹脂、エポキシ系樹脂、尿素樹脂、メラミン樹脂、アミノアルキッド系樹脂、ニトロセルロース、エチルセルロース、塩化ゴム、環化ゴム、その他などの１種または２種以上を併用することができる。
【００３２】
発泡剤は、無機発泡剤、有機発泡剤、液体発泡剤等の公知の各種発泡剤があるが、その中でも、発泡剤を内包する共重合体、例えば、液状ガスを内包したポリマー殻で生成された熱膨張性マイクロカプセルであって、ＵＶ照射の際に生じる熱（約９０〜２００℃）によって発泡するものが好適に用いることができ、例えば、日本フィライト社製のエクスパンセルＤＵ−４６１などをあげることができる。また、発泡剤は、ＵＶ発泡インキ中に、５〜４５質量％程度の範囲で混入することが好ましい。５質量％未満では発泡が十分でなく、また４５％を超える場合はインキの粘度があがり、印刷適性が低下するなど、本来の用途に沿った印刷物を得ることが困難になる場合がある。
【００３３】
また本発明のＵＶ発泡インクとして、反応性希釈剤、光重合性オリゴマー、光重合開始剤を含有する硬化塗膜物性を備えた組成に上記ＵＶ発泡剤を配合したものも好適に使用することができる。反応性希釈剤としては、アクリレート反応性希釈剤またはメタクリレート反応性希釈剤を単独で又はこれらを組み合わせて用いることができ、詳しくは、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、４−ヒドロキシブチルアクリレート、フェノキシエチルアクリレート、２−アクリロイロキシエチル−コハク酸、ジメチルアミノエチルアクリレート、ＥＣＨ変性フェノキシアクリレート、ラウリルアクリレート、ラウリルメタクリレート、ベンジルメタクリレート、ブトキシジエチレングリコールメタクリレート、アクリロイルモルフォリン、グリセリンモノメタクリレート、１，９−ノナンジオールジアクリレート、トリプロピレングリコールジアクリレート、ネオペンチルグリコールジアクリレート、１，６−ヘキサンジオールジアクリレート、ポリエチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、１，６−エチレングリコールジメタクリレート、ポリエチレングリコールジメタクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレートの内の何れか１種又は２種以上を組み合わせて用いることができる。光重合性オリゴマーとしては、ウレタンアクリレート光重合性オリゴマー、ポリエステルアクリレート光重合性オリゴマー、エポキシアクリレート光重合性オリゴマー、アクリル系光重合性オリゴマー、特殊光重合性オリゴマーの内のいずれか１種又は２種以上を組み合わせて用いることができる。また、光重合開始剤としては、紫外線硬化型インキ用として通常用いられる市販の光重合開始剤であれば特に限定されることはない。例えば、２−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−プロパン−１オン、１−ヒドロキシ−シクロヘキシル−フェニル−ケトンなどを用いることができる。紫外線 硬化型インキを着色する場合も特に限定されないが、この場合、２，４，６−トリメチルベンゾイル−ジフェニル−フォスフィンオキサイドなどを用いることが好ましい。このＵＶ発泡インキには、添加剤として、消泡剤、重合禁止剤、顔料分散剤などを添加してもよい。また、通常使用される着色顔料を、１５質量％未満の範囲で含有してもよい１５質量％を超えると、発泡を阻害する虞れがあるため好ましくない。
【００３４】
印刷方法は、スクリーン印刷のほか、グラビア印刷、凸版印刷、転写印刷、フレキソ印刷、その他等の印刷方式であってもよい。
ＵＶ照射による発泡は、発泡剤の種類などにより変化するため、適宜、選択することができるが、紫外線（ＵＶ）照射条件として、８０〜８２Ｗ／ｃｍのＵＶランプで、ライン速度１５〜２５Ｍ／ｍｉｎの照射量での照射を例示することができる。なお、紫外線照射ランプとしては、メタルハライドランプ、水銀ランプなどが使用できる。
【００３５】
本発明において、枠層は、上記ＵＶ発泡インキを用いて基材シートにスクリーン印刷を施した後、該印刷面に前記条件で紫外線を照射すれば、インキの乾燥と共に発泡剤が発泡し、これにより基材表面に発泡印刷層（紫外線硬化塗膜）が形成されて、厚肉状の枠層となる。
【００３６】
本発明では、ＵＶ発泡インクを使用したため、ＵＶ照射によって瞬間に硬化させることができる。
（４）培地層
基材シートおよびカバーシートに設ける培地層（３０、３０’）を構成する培地基材として、本発明では、従来公知の培地基材を好適に使用することができる。例えば、カラギーナン、グアールガム、キサンタムガム、コーカスト・ビーン・ガム、アルギン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウムや澱粉融合ポリアクリル酸ナトリウム−アクリルアミド共重合体などのポリアクリル酸誘導体、でんぷん誘導体、蛋白質、蛋白質誘導体、カルボキシメチル・セルロース、ヒドロキシエチル・セルロースなどのセルロース誘導体を含む多糖類等またはこれらの混合物などが好適に使用できる。カラギーナンは、吸水量と吸水速度とが共に高いため、培地基材として好適である。また、ＰＶＰは吸水倍率に優れかつ粘度が低いために高濃度溶液で塗工することができ、微生物培養シートへの培地層の塗工を容易にすることができる。更に、カラギーナン、グアールガム、キサンタムガム、コーカスト・ビーン・ガム、アルギン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルアルコールなどは水溶性溶媒に溶解して基材シート上に塗工して培地基材層を形成できるため、有機溶媒を使用することなく環境保全に優れる。本発明では、培地基材を水溶液に溶解させて塗工したりまたはスクリーン印刷することで、基材シートに培地基材を均一に形成することができ、これによってスプレッダーを使用することなく被検液を迅速に吸水でき、操作性に優れ、微生物の観察および計数を容易かつ確実に行うことができる。また、粉末状の上記培地基材を使用して基材シート上に粉末培地基材を散布および固着させて培地基材層を形成してもよい。なお、カラギーナンなどの培地基材は高価であるが、本願では培地層を枠層の内側に限定して形成するため、不用な範囲の培地層の形成を回避して、無駄を省くことができる。
【００３７】
本発明の培地層には、微生物の栄養成分としては、例えば、一般細菌検査用としては、酵母エキス・ペプトン・ブドウ糖混合物、肉エキス・ペプトン混合物、ペプトン・大豆ペプトン・ブドウ糖混合物等や、これらにリン酸二カリウム及び／または塩化ナトリウムを加えた混合物が、大腸菌・大腸菌群検査用としては、デソキシコール酸ナトリウム・ペプトン・クエン酸鉄アンモニウム・塩化ナトリウム・リン酸二カリウム・乳糖・ニュートラルレッド混合物、ペプトン・乳糖・リン酸二カリウム・エオジンＹ・メチレンブルー混合物等が、ブドウ球菌用としては、肉エキス・ペプトン・塩化ナトリウム・マンニット・フェノールレッド・卵黄混合物、ペプトン・肉エキス・酵母エキス・ピルビン酸ナトリウム・グリシン・塩化リチウム・亜テルル酸卵黄液混合物等が、ビブリオ用としては酵母エキス・ペプトン・蔗糖・チオ硫酸ナトリウム・クエン酸ナトリウム・コール酸ナトリウム・クエン酸第２鉄・塩化ナトリウム・牛胆汁・ブロムチモールブルー・チモールブルー混合物等が、腸球菌用としては、牛脳エキス・ハートエキス・ペプトン・ブドウ糖・リン酸二カリウム・窒化ナトリウム・ブロムチモールブルー・塩化２，３，５−トリフェニルテトラゾリウム混合物等が、真菌用としては、ペプトン・ブドウ糖混合物、酵母エキス・ブドウ糖混合物、ポテトエキス・ブドウ糖混合物等が用いられる。これらの中から発育させようとする微生物に応じて一種またはそれ以上を選択し、混合して使用することができる。なお、微生物を含有する被検液に、微生物の生育栄養成分を含む水を加えることで、微生物の生育しうる培地としてもよい。
【００３８】
更に、培地層には微生物に代謝され得る染料を添加することができる。このような染料は、培養過程で発育する微生物に代謝され、コロニーが着色されるため、コロニー数の計数を極めて容易にする効果がある。このような染料として具体的には、トリフェニルテトラゾリウムクロライド（以下ＴＴＣと表示）、ｐ−トリルテトラゾリウムレッド、テトラゾリウムバイオレット、ペテトリルテトラゾリウムブルーなどのテトラゾリム塩やｐＨ指示薬がある。微生物の生育に伴い、発色または変色して微生物の生育が見やすくなり、また、特定の微生物が有する酵素の発色または蛍光酵素基質を加えておくことで、特定の微生物が検出できる。
【００３９】
さらに検出目的以外の微生物の生育を抑える選択剤を加えてもよく、また特定の微生物を検出するために発色または蛍光酵素基質を加えてもよい。このような選択剤としては、抗生物質，合成抗菌剤等の抗生剤、色素、界面活性剤、無機塩等が用いられる。抗生物質としては、メチシリン，セフタメタゾール，セフィキシム，セフタジジム，セフスロジン，バシトラシン，ポリミキシンＢ，リファンピシン，ノボビオシン，コリスチン，リンコマイシン，クロラムフェニコール，テトラサイクリン，ストレプトマイシン等が例示でき、合成抗菌剤としては、サルファ剤，ナリジクス酸，オラキンドックス等が例示できる。また、色素としては、静菌または殺菌作用のあるクリスタルバイオレット，ブリリアントグリーン，マラカイトグリーン，メチレンブルー等が例示できる。また、界面活性剤としては、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ７，ドデシル硫酸塩，ラウリル硫酸塩等が例示できる。また、無機塩類としては、亜セレン酸塩，亜テルル酸塩，亜硫酸塩，窒化ナトリウム，塩化リチウム，シュウ酸塩，高濃度の塩化ナトリウム等が例示できる。これら以外にもタウロコール酸塩，グリシン，胆汁末，胆汁酸塩，デオキシコール酸塩等を用いることができる。
【００４０】
培地層は、培地基材であるカラギーナンを水に溶解した培地溶液を基材シートの上に塗工して形成することができる。前記培地溶液には、培地基材としてカラギーナンのほかにポリビニルピロリドンや前記微生物の栄養成分、コロニー検出用の染料、選択剤などを配合してもよい。
【００４１】
本発明において、基材シートおよびカバーシートの上に形成する培地層の厚さは、培地層を構成する培地基材の吸水量や吸水速度、培地層の面積などによって適宜選択することができ、被検液を吸水した後に前記枠層の高さと等しくなるように配設することが好ましい。なお、基材シートとカバーシートとに形成する培地層の組成は同一でも異なっていてもよく、厚さも同一でも異なっていてもよい。
【００４２】
（５）カバーシート
本発明において、カバーシートは、培養中の落下菌などによる汚染を防止すると共に、培地層の水分蒸発を防止する作用を有する。カバーシートは、防水性、水蒸気不透過性を有すると同時に、微生物の培養後、カバーシートを通してコロニーを観察および計数できるように、透明であることが好ましく、例えば、前記基材シートで挙げたようなポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオレフィン、ポリエステル、ポリアミド、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニルなどのプラスチックフィルムを使用することができる。更に、被検液を接種するためにカバーシートを基材シートから持ち上げる際に、適度の柔軟性が確保されることが好ましい。従って、カバーシートの厚さは、１０〜２００μｍ程度が好ましく、２０〜７０μｍ程度が更に好ましい。なお、カバーシートの開け閉め等の作業性を考慮すると、ポリエステルフィルム、ポリオレフィンフィルムまたは易剥離性ポリオレフィンフィルムが特に好ましい。カバーシートは、どのような形状であってもよいが、雑菌の進入を防ぐために、培地層を被覆できるよう、培地層よりも大きいサイズとする必要がある。更に、カバーシートに、培地層（３０’）や粘着層を形成する場合、これらが適度に接着される必要があり、各層の密着性を確保するためにカバーシートの塗布面にコロナ放電処理などの前処理をすることができる。なお、カバーシートは、培養する微生物の種類により、適した気体透過性、主に酸素透過性を有することが好ましく、この点も考慮して選定する。
【００４３】
本発明において、カバーシートは、培地層を被覆できればよく、微生物培養シートに固設されている場合に限定されない。したがって、別個に容易したカバーシートを用いて、被検液を接種した培地層を被覆してもよく、前記図５に示すように、カバーシートを予め基材シートに固設させる態様であってもよい。
【００４４】
（６）粘着層
本発明では、基材シートの枠層の外側などに粘着層を形成することができる。このような粘着剤は、培地層を被覆したカバーシートを固定し、培地層の蒸発や汚染を防止する目的で配設され、基材シートを密封できればいかなる種類のものを用いてもよいが、作業性を考えると粘着シートと透明フィルムとが再接着できる程度に、弱い粘着力を有する粘着剤が好ましい。例えば、ゴム系粘着剤やアクリル系粘着剤が好ましく、特に再剥離タイプ及び微粘着タイプのアクリル系粘着剤が好ましく用いられる。具体的には、ブチルアクリレートや２−エチルヘキシルアクリレート等の炭素数が２〜１２のアクリレート１００質量部に対し、カルボキシル基や水酸基、アミノ基等の官能基を含有するモノマーを２〜１５質量部共重合させたポリマーに、粘着付与剤としてロジン、キシレン樹脂、フェノール樹脂などを加え、メラミン類、イソシアネート類、エポキシなどで架橋したものなどを使用することができる。また、粘着層はどのような形状でもよいが、粘着シートと透明フィルムとの接着部分に隙間がなく接着できる配設されることが好ましい。
【００４５】
なお、本発明では、粘着層によってカバーシートと基材シートに密着させているが、カバーシートで培地層を密封できれば粘着層に限定されず、把持部材を使用したり、重石を配設する方法などであってもよい。
【００４６】
（７）保護層
基材シートの上に粘着層を形成した場合には、粘着層の上に保護層を形成し、この保護層の上に培地層を形成することが好ましい。培地層が被検液を吸水した後に、粘着層へ被検液が吸水性されるのを防止し、粘着層に含まれる成分によって微生物の生育が阻害されるのを防止するためである。
【００４７】
したがって、保護層は上記基材シートやカバーシートと同様に、防水性、水蒸気不透過性を有するものを好適に使用することができる。保護層が透明であれば、基材シート側からコロニーを観察および計数することもできる。
【００４８】
保護層は、あらかじめ形成したフィルムやシートを前記粘着層上に積層する方法でもよいが、上記基材シートやカバーシートを形成しうる樹脂を塗布して形成してもよい。保護層の厚さは、上記目的を達成できれば特に限定はなく、一般には、２５〜１００μｍが好適である。
【００４９】
（８）格子印刷層
本発明に用いられる微生物培養シートには、格子印刷層が形成されていてもよい。このような格子印刷層は、基材シートの下層に升目が印刷された樹脂フィルムや紙基材が積層される態様であってもよいが、前記基材フィルムに格子印刷がなされ、格子印刷層を形成するものであってもよい。また、カバーシートに、格子印刷が形成されていてもよい。
【００５０】
（９）製造方法
本発明の微生物培養シートは、基材シートと前記基材シートの上に形成された培地層と、前記培地層を被覆するカバーシートとからなる微生物培養シートであって、前記基材シートの上に、ＵＶ発泡インキからなる枠層が形成され、前記培地層が、前記枠層内に形成されるものである。製造方法に限定はないが、例えば（ｉ）基材シートの上に、培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程、（ｉｉ）前記培地層の外周にＵＶ発泡インキで枠型を印刷する工程、および（ｉｉｉ）ＵＶ照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程とによって製造することができる。また、予め形成した枠層内に培地層を形成する場合には、（ｉｖ）基材シートの上にＵＶ発泡インキで枠型を印刷する工程、（ｖ）ＵＶ照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程、および（ｖｉ）前記枠層内に、培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程とによって製造することができる。この場合、ＵＶ発泡インキにＵＶを照射する工程は、培地層の形成の前でも後でもよく、したがって、前記（ｉｖ）工程についで（ｖ）前記枠型内に培地溶液層を形成し、前記培地溶液を乾燥して培地層を形成する工程を行い、その後に上記（ｖ）工程をおこなってもよい。また、本発明の微生物培養シートがカバーシートを固設されるものの場合には、（ｉｖ）、（ｖ）に次いで（ｖｉｉ）前記基材シートにカバーシートを固設する工程を行い、その後に、カバーシートの上部から前記枠型にＵＶを照射して前記発泡インキを発泡させて枠層を形成する工程を行ってもよい。
【００５１】
本発明において、培地溶液層の形成が培地溶液は、印刷によって基材シート上に形成することができる。上記培地基材と微生物の栄養成分などを水に溶解若しくは懸濁させ、所定の割合で混合、攪拌した後、印刷する。印刷方法としては、スクリーン印刷のほか、グラビア印刷、凸版印刷、転写印刷、フレキソ印刷、その他等の印刷方式であってもよい。次いで加熱乾燥することにより培地層を形成することができる。
【００５２】
また、基材シート（１０）に上記の方法で培地層（３０）を設け、カバーシート（４０）にはカラギーナンなどの培地基材のみの培地層（３０’）を設けたい場合には、上記カラギーナンの溶液だけをカバーシート（４０）に単独で塗布し、その後、乾燥すればよい。このような培地溶液の塗布量は、乾燥時の塗布量で５〜５０ｇ／ｍ2程度が適当である。塗布量が５ｇ／ｍ2を下回る場合は培養時被検液の水分を吸収する能力が不足する場合があり好ましくない。また、塗布量が５０ｇ／ｍ2を超える場合は、乾燥に時間がかかり不利である。コーティング装置の乾燥能力にもよるが、特に水系の塗布液を使用する場合、１回コートで塗布しきれない場合は数回に分けて塗布することができる。コーティング方式の利点は、塗布量を安定化できること、および材料のロスが少なく生産性の良いことである。
【００５３】
なお、培地層の形成に際し、培地溶液層の形成方法として、培地溶液を印刷によって形成する場合には、枠層と培地層とを印刷によって形成することができる。枠層と培地層との印刷を同時に行うことができ、いずれかを先に行うこともできる。培地層をスクリーン印刷で形成する場合には、先に培地基材を印刷して培地層を形成し、その後に枠層を形成することが好ましい。
【００５４】
本発明の微生物培地シートが、基材シートに粘着層と保護層とが積層され、粘着層または保護層上に枠層が形成され、保護層上に培地層が形成されるものである場合には、基材シートに粘着層、保護層、培地層、枠層の順に形成してもよく、予め粘着層が形成された基材シートの所定範囲に保護層を形成し、次いで培地層および枠層を順次形成してもよい。このような粘着層は、印刷法によって形成することができる。印刷方法としては、スクリーン印刷のほか、グラビア印刷、凸版印刷、転写印刷、フレキソ印刷、その他等の印刷方式であってもよい。
【００５５】
本発明の微生物培養シートは、培地層に被検液を接種した後にカバーシートで培地層を被覆し、これを培養するため、カバーシートの一部が基材シートに固設されていることが操作上、簡便である。ただし、直接スタンプや拭き取り試験などの場合、カバーシートが無いことで作業効率が向上する場合には、カバーシートを取り除いて使用してもよい。
【００５６】
カバーシートと基材シートとが同一部材で構成される場合には、別個に作成したカバーシートを基材シートにヒートシールやラミネート接着、その他によって固設してもよいが、カバーシートと基材シートとを同質の材料を使用し、図６（ａ）の平面図、図６（ｂ）の断面図に示すように基材シート（１０）とカバーシート（４０）とを連設したまま基材シート（１０）に枠層（２０）と培地層（３０）とを形成し、カバーシート（４０）を折り曲げて微生物培養シートを形成してもよい。図６（ｃ）にその断面図を示す。この方法によれば、カバーシートに培地層（３０’）や粘着層（５０）を形成する場合でも、基材シート（１０）とカバーシート（４０）が連設されているため、基材シート（１０）の上の培地層（３０）と対向する位置に正確かつ簡便に培地層（３０’）を形成することができる。
【００５７】
本発明の微生物培養シートは、ガンマ線照射やエチレンオキサイドガス滅菌等の滅菌を施し、本発明の微生物培養シートの製品とする。
本発明の微生物培養シートは、含まれる微生物栄養成分の種類や、使用する基材シート、カバーシートの通気性その他に応じて各種の微生物の培養を行うことできる。
【実施例】
【００５８】
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は何ら本発明を制限するものではない。
（実施例１）
水１００質量部にカラギーナン（新田ゼラチン社製、商品名「ニッタカラギーナンＩ２」）を４質量部、ＴＴＣを０．０１質量部、ペプトン１質量部、酵母エキス０．５質量部、ブドウ糖０．２質量部を溶解して培地溶液を調整し、厚さ１００μｍの透明なポリエステルフィルム（東洋紡社製Ｅ５１００）上に乾燥時の塗布量が１５ｇ／ｍ2となるように直径５０ｍｍの円形にスクリーン印刷し、および乾燥した。次いで、前記培地層の外周にスクリーン印刷方式によりＵＶ発泡インキ（ＡＧＩ社製ＡＲＯＣＯＡＴ  ＵＲ−６１６５）を内径５０ｍｍ、外径７０ｍｍ（１０ｍｍ幅）のドーナツ状になるように印刷した。その後、８０Ｗ／ｃｍのＵＶランプによるライン速度２０Ｍ／ｍｉｎで照射してインキを硬化・発泡させ、厚み５０μｍの枠層を形成した。
【００５９】
一方、カバーシートとして厚さ２５μｍのポリプロピレンフィルム（トーセロ社製、商品名「ＯＰ  Ｕ−１」）を用い、水１００質量部にカラギーナン（新田ゼラチン社製、商品名「ニッタカラギーナンＩ２」）を４質量部溶解した溶液を、乾燥時の塗布量が１５ｇ／ｍ2となるように塗布および乾燥し培地層を形成した。
【００６０】
上記基材シートとカバーシートとをそれぞれγ線で滅菌して実施例１の微生物培養シートとした。
菌株として大腸菌を使用し、液体培地（NUTRIENT BROTH）にて３７℃で２４時間振盪培養を行った菌液を滅菌生理食塩水で菌数が１０2／ｍｌとなるように希釈して、培養試験に用いる菌液を作成した。この菌液を、上記微生物培養シートの培地層の上に滅菌済みのピペットで各１ｍｌ接種し、その上にカバーシートを培地層を設けた面を下にして乗せ、その上から軽く押さえて被検液を培地層全体に広げ、約１分間静置してゲルを形成させた後、孵卵器に入れ、３７℃で４８時間培養した。
【００６１】
培養後に発生したコロニー数をそれぞれ計数した。培養試料数は５個作成した。結果を表１に示す。
（比較例１）
実施例１の菌液１ｍｌを従来の混釈法により、ペトリ皿に準備した標準寒天培地２０ｍｌに混釈して比較用の培養試料を作成した。この培養試料を実施例１と同様に、孵卵器に入れて３７℃で４８時間の培養を行った。培養後に発生したコロニー数をそれぞれ計数した。培養試料数は５個作成した。結果を表１に示す。
【００６２】
【表１】
2009153501.tif 000002
（結果）
実施例１と比較例１との生育菌数を測定比較した。表１に示すように良好な相関性を示した。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明の微生物培養シートは、菌数検査などに用いることができ、コンパクトかつ操作が簡便で有用である。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】本発明に係る、基材シート、枠層、培地層およびカバーシートとからなる微生物培養シートの一例を示す平面図（ａ）および断面図（ｂ）である。
【図２】本発明に係る、基材シート、枠層、培地層およびカバーシートとからなる微生物培養シートであって、カバーシートに培地層が形成された態様の断面図である。
【図３】本発明に係る、基材シート、枠層、培地層およびカバーシートとからなる微生物培養シートであって、カバーシートに培地層と粘着層とが形成された態様の断面図である。
【図４】本発明に係る、基材シート、枠層、培地層およびカバーシートとからなる微生物培養シートであって、基材シートに粘着層と保護層とが形成される態様の断面図である。
【図５】本発明に係る、基材シート、枠層、培地層およびカバーシートとからなる微生物培養シートであって、基材シート上に複数の培地層が形成される態様を示す平面図（ａ）および断面図（ｂ）である。
【図６】本発明に係る、基材シート、枠層、培地層およびカバーシートとからなる微生物培養シートの製造方法を説明する図であって、基材シートとカバーシートとを連設させ、基材シートの上に枠層と培地層とを形成し、カバーシートを折り曲げて微生物培養シートを形成する態様を示す平面図（ａ）および断面図（ｂ）、（ｃ）である。
【符号の説明】
【００６５】
１０・・・基材シート、
２０・・・枠層、
３０・・・培地層、
４０・・・カバーシート、
５０・・・粘着層、
６０・・・保護層、
７０・・・格子印刷層
【図１】
2009153501.tif 000003
【図２】
2009153501.tif 000004
【図３】
2009153501.tif 000005
【図４】
2009153501.tif 000006
【図５】
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【図６】
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