(57)【要約】【課題】  生体内ではＴｈ１とＴｈ２のバランスがとれていることにより生体のホメオスタシスが維持されているが、何らかの要因によりバランスが崩れて病気となるので、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス調整を示し、常食にしている安全な食品由来であって通常の食事形態をとりながら摂取できる免疫賦活剤及び飲食品を提供する。【解決手段】  ＩＬ−２及びＩＦＮ−γ産生の上昇作用により細胞性免疫が活性化されてＴｈ１／Ｔｈ２バランスの改善をもたらすグネツムのエキスを有効成分として免疫賦活剤及び飲食品に含有させる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
グネツムのエキスを有効成分とすることを特徴とする免疫賦活剤
【請求項２】
前記有効成分がインターロイキン２産生上昇作用を有することを特徴とする請求項１記載の免疫賦活剤
【請求項３】
前記有効成分がインターフェロンγ産生上昇作用を有することを特徴とする請求項１記載の免疫賦活剤
【請求項４】
グネツムのエキスを含有し、免疫賦活作用を有することを特徴とする飲食品
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン２及びインターフェロンγ産生上昇作用を有する新規な免疫賦活剤及び飲食品に関する。即ち、タイプ１ヘルパーＴ細胞のサイトカインであるインターロイキン２及びインターフェロンγ産生上昇による細胞性免疫の活性化により腫瘍、感染症、アレルギー症状、自己免疫疾患などの予防及び治療するための新規な免疫賦活剤及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
正常細胞が腫瘍化する発ガンはガン遺伝子の活性化、ガン抑制遺伝子の不活性化、化学物質やウイルスなどが関与していることが知られている。腫瘍細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬと略す）によって破壊される。ガン細胞はインターフェロンγ（ＩＦＮ−γと略す）によってＣＴＬに対する感受性が高められる。また、ＩＦＮ−γはマクロファージを活性化してガン細胞を破壊する。ＣＴＬの攻撃を免れたガン細胞はナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞と略す）の標的となる。ＮＫ細胞はインターロイキン（ＩＬと略す）−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γなどのサイトカインによって亢進される（非特許文献１）。このことからＩＬ−２やＩＦＮ−γなどのサイトカインを用いた免疫療法が試みられている。そのためサイトカインに関する出願が多くなされている。中でもタイプ２ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２と略す）の機能亢進に寄与するものが多い。近年これらを産生するタイプ１ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１と略す）の活性化が重要視され、特許文献１にＴｈ１／Ｔｈ２バランスに関して開示されている。
【０００３】
花粉、ダニ、食品などによるアトピー性皮膚炎や蕁麻疹などのアレルギー性疾患、喘息などは免疫系の過剰反応によることが知られている。アレルギーは免疫グロブリンＥ（ＩｇＥと略す）産生の亢進によると考えられ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３などの関連が指摘されている（非特許文献１）。これらはＴｈ２などで産生され、ＩＬ−４の産生はＴｈ１が産生するＩＦＮ−γによって抑制される。そこで、Ｔｈ１への分化を促進するＩＬ−１２の利用が試みられたが、強力な効果を示したものの強い副作用により治療に用いるには至っていない。それ故前記のごとくＴｈ１／Ｔｈ２バランスに関して特許文献２に開示されている。
【０００４】
本発明者らは、グネツムグネモン（学名Ｇｎｅｔｕｍ  ｇｎｅｍｏｎ  Ｌ．）の果実に初めて着目し、その利用として日持ち向上及びラジカル消去作用を有するグネツム食品（特許文献３）、グネツムエキス（特許文献４）、発酵食品（特許文献５）、メリンジョ茶（特許文献６）及び健康保持剤（特許文献７）の発明を行っている。
【０００５】
グネツムグネモンは、インドネシアでは若葉、花、未熟果実を野菜として、種子を潰して乾燥後油で揚げた食品（ウンピン；ｅｍｐｉｎｇ）として利用されているにすぎず、生物作用を積極的に活用する機能性食品への利用は未だ行われていないのが現状である。
【０００６】
グネツム科グネツム属植物の生理作用に関する例として、バイマイトウ（学名：Ｇｎｅｔｕｍｕ  ｍｏｎｔａｎｕｍ）の養毛作用（特許文献８）、グネツム科植物の根から得られる抽出物に含まれるレスベラトロール重合体の抗菌作用（特許文献９）、グネツムエキスのコラーゲン産生促進作用・ヒアルロン酸産生促進作用・エラスターゼ阻害作用・ヒアルロニダーゼ阻害作用（特許文献１０）が開示されている。また、グネツム種子の主たる有用成分は、ポリフェノールの一種であるスチルベノイド類のレスベラトロール２量体のグネチンＣ、グネモノシドＡ、グネモノシドＣ及びグネモノシドＤであり、抗菌作用・抗酸化作用（ラジカル消去作用）を有することが記載されている（特許文献４）。
【０００７】
【特許文献１】特開２００３−１４４０８９号公報、ＷＯ２００３／１０１４６４号公報、ＷＯ０１／０５４７２４号公報
【特許文献２】特開２００３−６３９７２、特開２００３−８１８４１、特開２００４−７５６１９、特開２００６−５０４６７６、特開２００７−１５３７６８、ＷＯ２００３／１０１４６４
【特許文献３】特開２００６−８１４０５号公報
【特許文献４】国際特願ＰＣＴ／ＪＰ２００５−０１６８２４
【特許文献５】特願２００６−１９６２９３
【特許文献６】特願２００７−１５９９０４
【特許文献７】特願２００７−１７７９６７
【特許文献８】特開平１１−６０４５０号公報
【特許文献９】特開２００５−２３０００号公報
【特許文献１０】特開２００６−１６９２２５号公報
【非特許文献１】標準免疫学第２版、医学書院出版
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、生体内ではＴｈ１とＴｈ２のバランスがとれていることにより生体のホメオスタシスが維持されているが、何らかの要因によりバランスが崩れて未病乃至病気となるので、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス調整を示し、常食にしている安全な食品由来であって通常の食事形態をとりながら摂取できる免疫賦活剤及び飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、グネツム果実の利用の一環として上記課題を解決するために鋭意研究を続けた結果、グネツムのエキスにＴｈ２サイトカインであるＩＬ−４及びＩＬ−５産生の上昇を伴わずにＴｈ１サイトカインであるＩＬ−２及びＩＦＮ−γ産生の上昇作用を見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、ＩＬ−２及びＩＦＮ−γ産生の上昇作用により細胞性免疫が活性化されてＴｈ１／Ｔｈ２バランスの改善をもたらすグネツムのエキスを有効成分とする免疫賦活剤及び飲食品に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によると、東南アジアで量が豊富で常食にしているグネツムのエキスは安全であり、抗菌作用、ラジカル消去作用、リパーゼ阻害作用、α−アミラーゼ阻害作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用だけでなくＴｈ２サイトカインであるＩＬ−４及びＩＬ−５産生に影響を与えず、Ｔｈ１サイトカインであるＩＬ−２及びＩＦＮ−γ産生の上昇作用を有するので、免疫賦活剤を服用することにより細胞性免疫が活性化されて腫瘍及び感染症などの予防及び治療並びにタイプ１ヘルパーＴ細胞とタイプ２ヘルパーＴ細胞の不均衡からもたらされるアレルギー性疾患や自己免疫疾患などの予防及び治療が期待される。また、このような作用を有するグネツムのエキスを含有する飲食品を摂取して日常生活の中で腫瘍、感染症、アレルギー症状、自己免疫疾患などを改善あるいは予防するのに貢献できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明で言うグネツムはグネツム科に属する植物のことであり、その中のグネモン（別名メリンジョ、学名Ｇｎｅｔｕｍ  ｇｎｅｍｏｎ  Ｌ．、英名Ｇｎｅｍｏｎ  ｔｒｅｅ、インドネシア名Ｍｅｌｉｎｊｏ、Ｂｅｌｉｎｊｏ）は、東南アジアで広く栽培され、インドネシアでは若葉、花、果実を野菜として食され、その種子は潰してから乾燥し、油で揚げて（ウンピン；ｅｍｐｉｎｇ）食されており好適である。本発明には可食部である果実、種子、葉及び花を用いる。必要ならば根も混合することができる。使用する果実及び種子は、未熟又は完熟を問わず、そのままでもよく、果皮及び種皮を剥離した中身の仁、即ち胚及び胚乳（内乳）が好ましく、乾燥及び未乾燥（生）のいずれでも好適であり、裁断機や破砕機で破砕してもよく、粉砕機で粉砕してもよい。
【００１２】
本発明で言うグネツムのエキスとは、前記のように処理したものを一般的方法により溶媒抽出して得られるエキスを指し、特許文献２におけるエキスが好適である。また、本発明の前記グネツムをそのまま或いはエキスと混合して使用することもできる。更に、特許文献２で残留した破砕内乳及び油で揚げていないウンピンも同様に使用することができる。エキスは主要成分としてスチルベノイドに属するレスベラトロールが２分子結合した化合物のレスベラトロール２量体、即ちグネチンＣ及びその配糖体であるグネモノシドＡ、グネモノシドＣ及びグネモノシドＤを含有する。
【００１３】
本発明で言う免疫賦活剤は，グネツムのエキスを主要成分とし、これに任意の助剤、賦形剤などを配合して固形剤化、或いは水または有機溶媒などを適宜配合して液剤化したものである。本発明の免疫賦活剤を、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの改善による腫瘍、感染症、アレルギー性疾患や自己免疫疾患などの改善あるいは予防のために経口剤として用いる場合の服用（投与）量は、服用の目的や服用者の状況（性別、年齢、体重、肥満度、総合的健康度合いなど）により異なるが、通常、１日の服用量として、グネツムのエキス（抽出物量として）を重量換算で、１〜５００ｍｇ／体重ｋｇの範囲で服用することができる。常食にしているので５００ｍｇ／体重ｋｇを超える服用も何ら問題はない。
【００１４】
本発明におけるインターロイキン２（ＩＬ−２と略）は、ＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞、Ｔｈ１、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）より産生され、細胞性免疫に関与し、Ｔ細胞増殖因子（ＴＣＧＦ）とも呼ばれ、キラーＴ細胞増殖・分化の促進、Ｂ細胞の増殖、ＮＫ細胞の増殖及び活性の増強、ＬＡＫ細胞、マクロファージ、好中球の細胞周期促進、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−３産生増強などの作用があり、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの維持に重要な働きをしている。
【００１５】
本発明におけるインターフェロンγ（ＩＮＦ−γと略）は、Ｔｈ１、ＣＤ８Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞より産生され、その産生はＩＬ−２やＩＬ−１２により亢進する。ＩＮＦ−γはマクロファージの一酸化窒素の産生を高めて細胞傷害活性を惹起し、Ｔ細胞の分化を促進してＴｈ１の生成を選択的に亢進してＴｈ２の生成を抑制する作用を有している。また、好中球を活性化してＮＫ細胞の細胞傷害活性を高める働きがある。
【００１６】
本発明で言う飲食品は、グネツムのエキスを有効成分として含有又は配合する飲食物であり、特定保健用食品とすることができ、そのまま、或いは従来食品に使用されている各種成分と共に配合することにより製造される。食品の形態としては、固形食品、クリームやジャム状の半流動食品、ゲル状食品、飲料等のあらゆる食品形態とすることができ、例えば、顆粒、錠剤、カプセル、ドリンク剤などの製剤、常用されている任意の基材を配合する清涼飲料、ジュース、コーヒー、紅茶、リキュール、牛乳、乳清飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト、飴（キャンデー）、キャラメル、チューインガム、チョコレート、グミ、アイスクリーム、プディング、卵製品、羊羹、水羊羹、おかき、餅、団子、煎餅、クレープ、お好み焼き、パン、クッキー、麺類、ハンバーグ、水練製品、てんぷら、発酵食品などの飲食物が挙げられる。
【００１７】
必要ならば、明日葉、甘茶、アマチャヅル、アロエ、イチョウ葉、ウーロン茶、ウコン、ウラジロガシ、エゾウコギ、エゾウコギ、オオバコ、カキオドシ、柿、カミツレ、カモミール、カリン、ガルシニア、河原決明、菊花、クチナシ、桑、クコ、月桂樹、紅茶、紅豆杉、コンフリー、昆布、桜、サフラン、シイタケ、シソ、ショウガ、しょうが、スギナ、スワンギ、セキショウ、センダングサ、センブリ、ソバ、タマリン度、タラノキ、タンポポ、チコリ、杜仲、ナタマメ、ニワトコ、ネズミモチ、ハトムギ、ハブ、松葉、マテ、麦茶、メグスリノキ、ユーカリ、ヨモギ、羅漢果、緑茶、ルイボス、霊芝、ガランガル、ギムネマ、グァバ葉、ゲンノショウコ、玄米、ゴボウ、ドクダミ、バナバ、ビワの葉、紅花などのいわゆる生薬・健康茶及びそれらの抽出物などを添加配合してもよい。
【００１８】
必要に応じてエリスリトール、ソルビトール、マルチトール、キシリトールなどの糖アルコール、ブドウ糖、果糖、ショ糖、乳糖、デキストリン、サイクロデキストリンなどを混合して苦味や渋みをマスクすることができる。
【００１９】
本発明の飲食品を、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの改善による腫瘍、感染症、アレルギー性疾患や自己免疫疾患などの改善あるいは予防のために用いるにあたり、飲食品としての風味や色調を考慮すると，グネツムそのまま及び／又はそのエキスの配合量は乾燥重量換算で０．０１〜９０％の範囲、好ましくは、０．０５〜８０％の範囲である。本発明の飲食品は、その種類に応じてブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖などの甘味料、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸などの酸味料、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌーα−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウムなどの酸化防止剤、グリセリン、プロピレングリコールなどの品質改良剤、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルなどの乳化剤、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天などの糊料（増粘剤、安定剤、ゲル化剤）、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウムなどの強化剤、アミノ酸などの調味料、カルシウム塩類、着色料、膨張剤、着香料、保存料など、一般的飲食品原料として使用されているものを適宜配合して製造することができる。
【００２０】
また、目的に応じて通常動物飼料に用いられている各種成分を適宜配合して粉末、顆粒、ペースト、カプセル、シロップ、固形状、ゲル状、液状、懸濁液、乳液などの形態とすることにより家畜用飼料やキャットフード、ドッグフードやウサギ用フードなどのペットフードなどの動物飼料とすることができる。
【実施例】
【００２１】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００２２】
実施例１（粉末の製造）
グネモンの乾燥内乳１０ｋｇを粉砕機で粉砕してグネツム粉末９．７ｋｇを得た。
【００２３】
実施礼２（エキスの製造及び成分の単離）
グネモンの乾燥果実１６．２ｋｇの粉砕物を５０％エタノール８０Ｌに２日間浸漬し、抽出液を減圧濃縮乾固してグネツムのエキスを１３００ｇ（収率８％）得た。
【００２４】
実施例３（Ｔ細胞免疫賦活活性試験）
実施例２で得られたエキスを精製水及び２％エタノールに溶解懸濁させて５０ｍｇ／ｋｇ（Ｍ−５０）及び１００ｍｇ／ｋｇ（Ｍ−１００）の用量に調製して被検体とした。試験動物にはマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、５週齢、雄；日本チャールズリバー）を使用した。飼育は、飼育用の木材チップを敷いたプラスチックケージに３匹ずつに分けて２５±２〜３℃の室温で行った。飼料にはオリエンタル酵母製実験動物用（ＣＲＦ−１）ガンマ線照射飼料を用いた。７日間馴化させたマウス（一群２匹）に経口用マウスゾンデを用いて午前１０時に、マウス１０ｇ当たり０．１ｍＬの用量となるように経口投与した。試験期間は１週間とし、４日間の連続投与とした。なお、検体は用時調製して使用した。試験終了後にマウスをエーテル麻酔下に断頭遮血し、幽門から虫垂までの小腸を切り取り、パイエル板を採取した。本パイエル板をコラゲナーゼ（７５０Ｕ／ｍＬ）処理後、細胞を集めた。最終細胞数を３×１０6ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製し、９６ｗｅｌｌプレートに蒔き、Ｔ細胞を活性化させるためのＣｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡ（ＣｏｎＡ、５μｇ／ｍＬ）を加え（ＣｏｎＡ(+)）、別にＣｏｎＡ未刺激（ＣｏｎＡ(-)）の培養条件を設定した上で３７℃、５％ＣＯ2インキュベーター内で７２時間培養した。培養終了後、培養液を遠心して上清を回収し、サイトカイン測定まで８０℃に保存した。本保存液のサイトカイン量は、ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いて測定した。
【００２５】
その結果、図１〜４に示すとおりＴｈ１サイトカインであるＩＬ−２及びＩＦＮ−γレベルは、ＣｏｎＡ未刺激及び刺激条件下、Ｍ−１００において有意に上昇したのに対し、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ−４及び５産生はＣｏｎＡ刺激及び未刺激の何れの条件においても変動が見られなかった。即ち、グネツムのエキスはＩＬ−４及び５産生に影響を及ぼすことなくＩＬ−２及びＩＦＮ−γ産生を上昇させる効果を示し、Ｔｈ１免疫賦活活性を有している。
【００２６】
実施例４（エキス成分の単離）
実施例２で得られたエキス６５ｇをセパビーズＳＰ８２５（ダイヤイオン）カラムクロマトグラフィーにより溶出順にまとめて分画１、２及び３とした。分画２をセファーデックスＬＨ２０カラムクロマトグラフィーにより分離精製して［α］546  ＋６８．３°（ｃ＝０．７、メタノール、２３）の淡褐色無定形固体としてグネモノシドＡを２．７ｇ（収率０．３４％）を得た。分画３をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離精製してｍｐ２７５−６℃（分解）の白色微細柱状晶としてトランス−レスベラトロール０．１６ｇ（収率０．０２％）、［α］546  −２３．２°（ｃ＝０．５，メタノール，２３）の淡黄色無定形固体としてグネチンＣを３．６６ｇ（収率０．４５％）及びｍｐ２０５−６°、［α］546  −６５．６°（ｃ＝０．６，メタノール，３４）の微褐色針状晶としてグネモノシドＤを４．３６ｇ（収率０．５４％）得た。
【００２７】
実施例５（錠剤の製造）
実施例２のグネツムのエキス５００ｇ、デキストリン（マックス１０００、松谷化学製）５００ｇ、乳糖１０００ｇ及びステアリン酸マグネシウム１０ｇを混合し、本混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤（グネツムエキス５０ｍｇ含有）を製造した。
【００２８】
実施例６（キャンディー）
実施例２のグネツムのエキス１部、グラニュー糖２８０部、水 飴２１０部、ク エ ン酸５部、香料１部及び色素１部を配合してキャンディーを製造した。本キャンディーは苦みもなく、味は良好であった。
【００２９】
実施例７（ジュース）
実施例２のグネツムのエキス１部、冷凍濃縮温州みかん果汁２５部、果糖ブドウ糖液糖５５部、クエン酸１部、Ｌ−アスコルビン酸０．１部、香料１部、色素０．５部及び水４００部を配合してジュースを製造した。本ジュースはみかんの風味や色に変化がなかった。
【００３０】
実施例８（チューインガム）
実施例２のグネツムのエキス１部、チューインガムベース３００部、ショ糖８００部、水飴３００部、軟化剤６０、香料１３部及び色素１部を配合してチューインガムを製造した。本チューインガムは苦みもなく、味は良好であった。
【００３１】
実施例９（チョコレート）
実施例２のグネツムのエキス１部、チョコレート２２０部、ショ糖７５、カカオバター１００部及び全脂粉乳１００部を配合してチョコレートを製造した。配合されたグネツムエキスがチョコレートの風味や色に影響を与えることはなく、美味しいものであった。
【００３２】
実施例１０（クッキー）
実施例１のグネツム粉末１部、薄力粉２．３部、全卵１．６部、マーガリン１．９部、上白糖２．５部、ベーキングパウダー０．０２及び水 ０．７３部を配合してクッキーを製造した。本クッキーは風味がよくて苦みもなく、味は良好であった。
【００３３】
実施例１１（おかき））
実施例１のグネツム粉末１部、餅粉１部、食塩０．０２部及び水２部を配合しておかきを製造した。本おかきは風味が良く、良好な味であった。
【００３４】
実施例１２（クレープ）
実施例１のグネツム粉末１部、薄力粉０．４部、全卵０．２部、牛乳０．２部、食塩０．０１部、バニラエッセンス適量及び水１．２部を配合してクレープを製造した。本クレープは良好な風味と味を有していた。
【００３５】
実施例１３（固形ドッグフード）
実施例１のグネツム粉末１部、ミートミール１．９部、チキンエキス０．２５部、植物油脂０．２５部、炭水化物０．９部、炭酸カルシウム０．０２５部、食塩０．０１部、複合ビタミン剤０．０５部及び水０．５部を配合してドッグフードを製造した。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明によると、東南アジアで量が豊富で常食としているグネツムのエキスは、抗菌作用、ラジカル消去作用、リパーゼ阻害作用、α−アミラーゼ阻害作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用だけでなくＴｈ１サイトカインであるＩＬ−２及びＩＮＦ−γ産生上昇によるＴｈ１免疫賦活活性作用を有するので、細胞性免疫が亢進（免疫力強化）されて腫瘍、感染症、アレルギー症状、自己免疫疾患などの予防あるいは改善・治療に免疫賦活剤として貢献できる。したがって、グネツムのエキスを含有する飲食品としても有用である。更に、本発明の免疫賦活剤及び飲食品を飼料として使用することはペットや家畜などの動物の腫瘍、感染症、アレルギー症状などの予防あるいは改善・治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】グネツムのエキスのＩＬ−２産生上昇作用を示した図である。
【図２】グネツムのエキスのＩＦＮ−γ産生上昇作用を示した図である。
【図３】グネツムのエキスのＩＬ−４産生に及ぼす影響を示した図である。
【図４】グネツムのエキスのＩＬ−５産生に及ぼす影響を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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