(57)【要約】【課題】増幅用容器内の生体試料を検出用容器へ移し替える際に生じる生体試料の取り間違い等の人為的ミスを防止すること。【解決手段】遺伝子検出検査用容器１は、増幅工程で使用される増幅用容器１０と、検出工程で使用される検出用容器２０とを備え、この増幅用容器１０および検出用容器２０は、折り曲げ可能であり、かつ切り離すことで増幅用容器１０と検出用容器２０とを分離可能な２本のミシン目３１，３３を配した接続部材３０によって一体的に形成されている。具体的には、接続部材３０は、ミシン目３１，３３に沿って接続部材３０が折り曲げられたときに増幅用容器１０の開口部と検出用容器２０の開口部が対向するように、各容器１０，２０を離間させた状態で増幅用容器１０と検出用容器２０とを接続している。【選択図】図１
2009095267.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子検出検査の増幅工程で使用され、生体試料を収容する増幅用容器と、
前記増幅工程の後段の検出工程で使用され、前記増幅工程で増幅処理された生体試料を収容する検出用容器と、
前記増幅用容器と前記検出用容器とを一体的に形成する接続部材と、
を備え、前記接続部材は、折り曲げ可能な曲折部を有し、前記曲折部で折り曲げることによって前記増幅用容器の開口部と前記検出用容器の開口部とが対向可能に形成されていることを特徴とする遺伝子検出検査用容器。
【請求項２】
前記曲折部が分離可能に形成されていることを特徴とする請求項１に記載の遺伝子検出検査用容器。
【請求項３】
遺伝子検出検査の増幅工程で使用され、生体試料を収容する増幅用容器と、
前記増幅工程の後段の検出工程で使用され、前記増幅工程で増幅処理された生体試料を収容する検出用容器と、
前記増幅用容器と前記検出用容器とを一体的に形成する接続部材と、
を備え、前記接続部材は、前記増幅用容器と前記検出用容器とを分離可能な分離部を有することを特徴とする遺伝子検出検査用容器。
【請求項４】
前記検出用容器の開口部が、前記増幅用容器の開口部より大きいことを特徴とする請求項１〜３のいずれか一つに記載の遺伝子検出検査用容器。
【請求項５】
前記増幅用容器の開口部と前記検出用容器の開口部とが相互に接続可能であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一つに記載の遺伝子検出検査用容器。
【請求項６】
前記増幅用容器の開口部と前記検出用容器の開口部とが相互に嵌合可能であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一つに記載の遺伝子検出検査用容器。
【請求項７】
内部に収容される生体試料に関する情報が記録され、前記検出用容器の外側面に装着された記録媒体を備えることを特徴とする請求項１〜６のいずれか一つに記載の遺伝子検出検査用容器。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一つに記載の遺伝子検出検査用容器を備え、
前記増幅用容器内に、遺伝子検出検査の検出方法に応じた修飾物質を有し、検出対象の核酸に対応したプライマーと、緩衝液と、ｄＮＴＰと、増幅用酵素とが注入されていることを特徴とする遺伝子検出検査用試薬キット。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一つに記載の遺伝子検出検査用容器を備え、
前記検出用容器内に、緩衝液と、前記増幅処理時に生体試料と反応させたプライマーの修飾物質と特異的に結合する抗体が標識された粒子とが注入されていることを特徴とする遺伝子検出検査用試薬キット。
【請求項１０】
遺伝子検出検査の増幅工程で使用され、生体試料を収容する増幅用容器と、前記増幅工程の後段の検出工程で使用され、前記増幅工程で増幅処理された生体試料を収容する検出用容器と、前記増幅用容器と前記検出用容器とを一体的に形成する接続部材とを備え、前記接続部材は、折り曲げ可能な曲折部を有し、前記曲折部で折り曲げることによって前記増幅用容器の開口部と前記検出用容器の開口部とが対向可能に形成された遺伝子検出検査用容器を用いて生体試料中に含まれる検出対象の核酸を検出する遺伝子検出検査方法であって、
前記増幅用容器内に生体試料を分注する分注工程と、
前記遺伝子検出検査用容器を増幅装置に設置して前記増幅用容器内の生体試料を増幅処理する増幅工程と、
前記接続部材を前記折曲部で折り曲げて前記増幅用容器の開口部と前記検出用容器の開口部とを対向させ、前記増幅工程で増幅処理された前記増幅用容器内の生体試料を前記検出用容器へ移し替える移替工程と、
前記検出用容器を分析装置に設置して前記検出用容器内の生体試料の検出処理を行い、前記検出対象の核酸を検出する検出工程と、
を含むことを特徴とする遺伝子検出検査方法。
【請求項１１】
前記曲折部が分離可能に形成されており、
前記移替工程の後、前記曲折部を切り離して前記増幅用容器と前記検出用容器とを分離する分離工程を含むことを特徴とする請求項１０に記載の遺伝子検出検査方法。
【請求項１２】
遺伝子検出検査の増幅工程で使用され、生体試料を収容する増幅用容器と、前記増幅工程の後段の検出工程で使用され、前記増幅工程で増幅処理された生体試料を収容する検出用容器と、前記増幅用容器と前記検出用容器とを一体的に形成する接続部材とを備え、前記接続部材は、前記増幅用容器と前記検出用容器とを分離可能な分離部を有する遺伝子検出検査用容器を用いて生体試料中に含まれる検出対象の核酸を検出する遺伝子検出検査方法であって、
前記増幅用容器内に生体試料を分注する分注工程と、
前記遺伝子検出検査用容器を増幅装置に設置して前記増幅用容器内の生体試料を増幅処理する増幅工程と、
前記分離部を切り離して前記増幅用容器と前記検出用容器とを分離する分離工程と、
前記分離工程で分離された前記増幅用容器内の生体試料を前記検出用容器へ移し替える移替工程と、
前記検出用容器を分析装置に設置して前記検出用容器内の生体試料の検出処理を行い、前記検出対象の核酸を検出する検出工程と、
を含むことを特徴とする遺伝子検出検査方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体試料中に含まれる検出対象の核酸を検出する遺伝子検出検査に用いる遺伝子検出検査用容器、遺伝子検出検査用試薬キットおよび遺伝子検出検査方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来から、免疫検査や生化学検査等のさまざまな分野で分析装置が用いられている。この分析装置は、試料と試薬とを反応させた反応液に所定波長の分析光を照射して反応液の特性を光学的に測定し、測定した特性をもとに試料の分析を行う装置であり、多試料を同時に検出処理することができ、かつ高精度で分析できる。
【０００３】
また、分析装置は、例えばＳＮＰ（一塩基多型）検査等、生体試料中に含まれる所定の塩基配列を有するＤＮＡ（デオキシリボ核酸）からなる遺伝子を検出する検査にも適している。ＳＮＰ検査等で用いる生体試料は、例えばＰＣＲ増幅装置等によって所定の塩基配列を有するＤＮＡを増幅させる処理を行ったＤＮＡ増幅液であり、抽出工程と増幅工程とを経て得られ、検出工程にて分析装置によって検出される。このような遺伝子検出に適用された場合には、分析装置は、増幅処理後の生体試料を試薬と反応させて反応液の特性を光学的に測定し、測定した特性をもとに試料中に含まれる所定の塩基配列を有するＤＮＡ等の検出を行う（例えば特許文献１，２を参照）。
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−９５１３４号公報
【特許文献２】特許第３５４５１５８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ところで、増幅工程から検出工程に移行する際、増幅処理用の容器（増幅用容器）に保持されている生体試料を、検出処理用の容器（検出用容器）へ移し替える必要があった。これは、増幅処理を行うＰＣＲ増幅装置で使用される増幅用容器の形状と、検出処理を行う分析装置で使用される検出用容器の形状とが異なるためである。このため従来は、例えばバーコード等の記録媒体を増幅用容器および検出用容器のそれぞれに付してこれらのバーコードを読み取り、読み取ったデータを管理することによって容器間での生体試料の移し替えを管理していた。しかしながら、この生体試料を移し替える作業は手作業で行われるため、生体試料を取り間違えてしまう等の人為的ミスが生じる恐れがあった。
【０００６】
本発明は、上記に鑑みなされたものであって、増幅用容器内の生体試料を検出用容器へ移し替える際に生じる生体試料の取り間違い等の人為的ミスを防止することができる遺伝子検出検査用容器、遺伝子検出検査用試薬キットおよび遺伝子検出検査方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上述した課題を解決し、目的を達成するため、本発明にかかる遺伝子検出検査用容器は、遺伝子検出検査の増幅工程で使用され、生体試料を収容する増幅用容器と、前記増幅工程の後段の検出工程で使用され、前記増幅工程で増幅処理された生体試料を収容する検出用容器と、前記増幅用容器と前記検出用容器とを一体的に形成する接続部材と、を備え、前記接続部材は、折り曲げ可能な曲折部を有し、前記曲折部で折り曲げることによって前記増幅用容器の開口部と前記検出用容器の開口部とが対向可能に形成されていることを特徴とする。
【０００８】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査用容器は、上記の発明において、前記曲折部が分離可能に形成されていることを特徴とする。
【０００９】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査用容器は、上記の発明において、遺伝子検出検査の増幅工程で使用され、生体試料を収容する増幅用容器と、前記増幅工程の後段の検出工程で使用され、前記増幅工程で増幅処理された生体試料を収容する検出用容器と、前記増幅用容器と前記検出用容器とを一体的に形成する接続部材と、を備え、前記接続部材は、前記増幅用容器と前記検出用容器とを分離可能な分離部を有することを特徴とする。
【００１０】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査用容器は、上記の発明において、前記検出用容器の開口部が、前記増幅用容器の開口部より大きいことを特徴とする。
【００１１】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査用容器は、上記の発明において、前記増幅用容器の開口部と前記検出用容器の開口部とが相互に接続可能であることを特徴とする。
【００１２】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査用容器は、上記の発明において、前記増幅用容器の開口部と前記検出用容器の開口部とが相互に嵌合可能であることを特徴とする。
【００１３】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査用容器は、上記の発明において、内部に収容される生体試料に関する情報が記録され、前記検出用容器の外側面に装着された記録媒体を備えることを特徴とする。
【００１４】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査用試薬キットは、上記構成の遺伝子検出検査用容器を備え、前記増幅用容器内に、遺伝子検出検査の検出方法に応じた修飾物質を有し、検出対象の核酸に対応したプライマーと、緩衝液と、ｄＮＴＰと、増幅用酵素とが注入されていることを特徴とする。
【００１５】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査用試薬キットは、上記構成の遺伝子検出検査用容器を備え、前記検出用容器内に、緩衝液と、前記増幅処理時に生体試料と反応させたプライマーの修飾物質と特異的に結合する抗体が標識された粒子とが注入されていることを特徴とする。
【００１６】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査方法は、遺伝子検出検査の増幅工程で使用され、生体試料を収容する増幅用容器と、前記増幅工程の後段の検出工程で使用され、前記増幅工程で増幅処理された生体試料を収容する検出用容器と、前記増幅用容器と前記検出用容器とを一体的に形成する接続部材とを備え、前記接続部材は、折り曲げ可能な曲折部を有し、前記曲折部で折り曲げることによって前記増幅用容器の開口部と前記検出用容器の開口部とが対向可能に形成された遺伝子検出検査用容器を用いて生体試料中に含まれる検出対象の核酸を検出する遺伝子検出検査方法であって、前記増幅用容器内に生体試料を分注する分注工程と、前記遺伝子検出検査用容器を増幅装置に設置して前記増幅用容器内の生体試料を増幅処理する増幅工程と、前記接続部材を前記折曲部で折り曲げて前記増幅用容器の開口部と前記検出用容器の開口部とを対向させ、前記増幅工程で増幅処理された前記増幅用容器内の生体試料を前記検出用容器へ移し替える移替工程と、前記検出用容器を分析装置に設置して前記検出用容器内の生体試料の検出処理を行い、前記検出対象の核酸を検出する検出工程と、を含むことを特徴とする。
【００１７】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査方法は、上記の発明において、前記曲折部が分離可能に形成されており、前記移替工程の後、前記曲折部を切り離して前記増幅用容器と前記検出用容器とを分離する分離工程を含むことを特徴とする。
【００１８】
また、本発明にかかる遺伝子検出検査方法は、遺伝子検出検査の増幅工程で使用され、生体試料を収容する増幅用容器と、前記増幅工程の後段の検出工程で使用され、前記増幅工程で増幅処理された生体試料を収容する検出用容器と、前記増幅用容器と前記検出用容器とを一体的に形成する接続部材とを備え、前記接続部材は、前記増幅用容器と前記検出用容器とを分離可能な分離部を有する遺伝子検出検査用容器を用いて生体試料中に含まれる検出対象の核酸を検出する遺伝子検出検査方法であって、前記増幅用容器内に生体試料を分注する分注工程と、前記遺伝子検出検査用容器を増幅装置に設置して前記増幅用容器内の生体試料を増幅処理する増幅工程と、前記分離部を切り離して前記増幅用容器と前記検出用容器とを分離する分離工程と、前記分離工程で分離された前記増幅用容器内の生体試料を前記検出用容器へ移し替える移替工程と、前記検出用容器を分析装置に設置して前記検出用容器内の生体試料の検出処理を行い、前記検出対象の核酸を検出する検出工程と、を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、接続部材の曲折部を折り曲げることによって増幅用容器の開口部と検出用容器の開口部とを対向させ、増幅用容器内の生体試料を検出用容器へ移し替えることができる。したがって、増幅処理後の増幅用容器内の生体試料を検出用容器へ移し替える際に生じる生体試料の取り間違い等の人為的ミスを防止することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、図面を参照し、本発明の好適な実施の形態について詳細に説明する。なお、本実施の形態により本発明が限定されるものではない。図１は、本実施の形態の遺伝子検出検査用容器１の一例を示す図である。本実施の形態の遺伝子検出検査では、例えば全血検体等の生体試料からＤＮＡを抽出する抽出工程と、抽出したＤＮＡのうちの所定の塩基配列を有するＤＮＡの一部（以下、適宜「特定部分」と呼ぶ。）を増幅する増幅工程と、増幅したＤＮＡを検出する検出工程とがこの順番で行われるが、遺伝子検出検査用容器１は、増幅工程および検出工程で用いられる。
【００２１】
図１に示すように、遺伝子検出検査用容器１は、増幅工程で使用される増幅用容器１０と、検出工程で使用される検出用容器２０とを備え、この増幅用容器１０および検出用容器２０は、折り曲げ可能であり、かつ切り離すことで増幅用容器１０と検出用容器２０とを分離可能な曲折部である２本のミシン目３１，３３を配した接続部材３０によって一体的に形成されている。具体的には、接続部材３０は、ミシン目３１，３３に沿って接続部材３０が折り曲げられたときに増幅用容器１０の開口部と検出用容器２０の開口部が対向するように、各容器１０，２０を離間させた状態で増幅用容器１０と検出用容器２０とを接続している。
【００２２】
増幅工程では、増幅用容器１０内に抽出工程を経た生体試料であるＤＮＡ溶出液を分注し、遺伝子検出検査用容器１のままＰＣＲ増幅装置（増幅装置）に設置してＤＮＡ溶出液の増幅処理を行う。増幅用容器１０は、このＰＣＲ増幅装置で使用可能な形状を有する。例えば、容量が１〜２ｍＬ程度の略円筒形状を有し、底部が逆円錐形状に形成される。開口部は、口径が１０ｍｍ程度に成形され、検出用容器２０の開口部と相互に嵌合可能な形状に形成される。
【００２３】
一方検出工程では、増幅工程で増幅処理された増幅用容器１０内の生体試料であるＤＮＡ増幅液を検出用容器２０へ移し替える作業を行う。そして、増幅用容器１０と切り離して検出用容器２０のみを分析装置に設置し、ＤＮＡ増幅液の検出処理を行う。検出用容器２０は、この分析装置で使用可能な形状を有する。例えば、容量が２〜３ｍＬ程度の略円筒形状を有する。開口部は、口径が増幅用容器１０と比較して大きい１２〜１３ｍｍ程度に成形され、増幅用容器１０の開口部と相互に嵌合可能な形状に形成される。また、検出用容器２０の外側面には、内部に収容される生体試料に関する情報を所定の規格に従ってコード化したバーコードが印刷（記録）された記録媒体であるバーコードラベル２３が貼付される。例えば、全血検体を提供した被験者の識別ＩＤ等がバーコードに記録される。
【００２４】
この遺伝子検出検査用容器１は、例えば遺伝子検出検査用の検査キットとして提供される。すなわち、予め増幅用容器１０には増幅用試薬１５が、検出用容器２０には希釈液２５がそれぞれ適当量注入されており、増幅用容器１０はキャップ１１によって密封され、検出用容器２０はキャップ２１によって密封されている。
【００２５】
増幅用容器１０に注入される増幅用試薬は、例えばプライマーと、核酸の伸長反応のための基質であるｄＮＴＰと、増幅用酵素と、酵素を活性化させるためのマグネシウム塩とを緩衝液中に添加したものであり、例えば３０μＬ注入される。ここで、プライマーは、遺伝子検出検査の検出方法に応じた修飾物質を有するものであり、検出対象の核酸（ＤＮＡ）を増幅するための人工的な配列を有するものが適宜用いられる。本実施の形態は、凝集による濁度を検出して遺伝子検出検査を行う場合の実施の形態であり、例えば抗原であるハプテンが修飾物質として用いられる。また、増幅用酵素とは、ＤＮＡを増幅させるための酵素であり、例えばＰＣＲ反応や等温増幅反応用のポリメラーゼである。具体的には、Ｔａｑ，ＫＯＤ，Ｔｆｉ由来のポリメラーゼが挙げられる。
【００２６】
検出用容器２０に注入される希釈液は、緩衝液中にプライマーの修飾物質と特異的に結合する抗体が標識された粒子が添加されたものであり、例えば２００μＬ注入される。本実施の形態では、ハプテンに対する抗体が表面に標識されたラテックス粒子が用いられ、この抗体結合ラテックス粒子の凝集を検出することによって検出対象のＤＮＡの有無が判定される。この希釈液は、例えば次のようにして得ることができる。すなわち先ず、濃度１ＭのＭＯＰＳＯ：２０ｍＬ、ＰＥＧ２０００：２２．４ｇ、濃度５ＭのＮａＣｌ：４０ｍＬを純水に溶解して１Ｌの水溶液とし、スターラーで混合して緩衝液を作製する。続いて、抗体ラテックス粒子溶液を作製する。先ず、濃度１ＭのＭＯＰＳＯ：２０ｍＬ、サリチル酸ナトリウム：４８ｇ、フィッシュスキンゼラチン（ＦＳＧ）の４５％溶液：４４．４ｍＬを純水に溶解して１Ｌの水溶液とし、スターラーで混合する。次いで、濃度５００ｍＭのＭＥＳ：１ｍＬを純水で９ｍＬにし、ラテックス粒子の１０％溶液１ｍＬと、所定濃度（Ｘｍｇ／ｍＬ）の抗体：所定量ＹｍＬとを添加し、抗体結合ラテックス粒子を調整する。抗体については、その種類に応じた濃度のものを添加する。そして、この抗体を結合させた抗体ラテックス粒子溶液を０．０５％の濃度でソニケーターにて懸濁する。
【００２７】
ここで、所定の塩基配列（特定部分）を有するＤＮＡの検出原理について、図２を参照して説明する。増幅工程では、抽出工程を経て得られたＤＮＡ溶出液が、ハプテンで修飾されたプライマーを含む増幅用試薬が予め注入された増幅用容器１０に分注される。これにより、図２（ａ）に示すように、ＤＮＡ４０（４０−１，２）を含むＤＮＡ溶出液がハプテンで修飾されたプライマー５０ａ，５０ｂを含む増幅用試薬と混合され、増幅処理される。増幅処理では、抽出工程で抽出されたＤＮＡが特定部分を有する場合のみ増幅するような操作を行う。このため、被験者が特定部分を有するＤＮＡを持つ場合、図２（ｂ）に示すように、この増幅工程を経たＤＮＡ増幅液中には末端にハプテン５１ａ，５１ｂが結合した多量のＤＮＡ６０が含まれることとなる。被験者等が特定部分を有するＤＮＡを持たなければ、この増幅工程を経てもＤＮＡ増幅液中にはＤＮＡは含まれない。続く検出工程では、増幅工程を経て得られた増幅用容器１０内のＤＮＡ増幅液が検出用容器２０へと移し替えられる。検出用容器２０には、予めプライマーの修飾物質であるハプテンに対する抗体が表面に標識されたラテックス粒子を含む希釈液が注入されている。これにより、ＤＮＡ増幅液が希釈液によって希釈される。そして、図２（ｃ）に示すように、ＤＮＡ増幅液中にハプテン５１ａ，５１ｂが結合したＤＮＡ６０があれば、このＤＮＡ６０に結合したハプテン５１ａ，５１ｂと、ラテックス粒子７３の表面に標識されたハプテン５１ａ，５１ｂに対する抗体７１とが抗原抗体反応を起こして結合する。この結合によって、抗体結合ラテックス粒子７０の間をＤＮＡ６０が架橋し、抗体結合ラテックス粒子７０とＤＮＡ６０とは凝集物８０をつくる。凝集物８０がつくられると反応液は懸濁するため、この反応液の濁度をもとに検出対象のＤＮＡの有無を判定することができる。
【００２８】
図３は、遺伝子検出検査を構成する抽出工程、増幅工程および検出工程の各工程を説明するフローチャートである。抽出工程では、全血検体からＤＮＡを抽出する。すなわち先ず、核酸抽出装置で使用可能な抽出用容器に全血検体を注入する（ステップＳ１１）。この抽出用容器には、被験者の識別ＩＤ等を記録したバーコードが印刷されたバーコードラベルが添付されており、次のステップＳ１３で抽出用容器に付されたバーコードを読み取る。そして、核酸抽出装置によって抽出用容器内の全血検体の抽出処理を行う（ステップＳ１５）。具体的には先ず、全血検体を溶解液に溶解する。続いて、例えばシリカビーズ等の磁性粒子にＤＮＡを吸着させる。続いて、洗浄液を用いてＢ／Ｆ分離を行い、不要物を除去する。そして、例えばＩ-等のカイトロピックイオンを含む溶出液でＤＮＡを溶出させ、このＤＮＡを溶出させた溶出液からシリカビーズを除去してＤＮＡ溶出液を得る。
【００２９】
増幅工程では、抽出工程で抽出したＤＮＡのうち、所定の塩基配列を有するＤＮＡの一部（特定部分）を増幅させる。すなわち先ず、抽出用容器内のＤＮＡ溶出液を遺伝子検出検査用容器１の増幅用容器１０に分注する（ステップＳ１７）。図４は、この分注作業について説明する図である。増幅工程では、図１に示して説明した増幅用容器１０と検出用容器２０が一体的に構成された遺伝子検出検査用容器１を用意する（図４（ａ））。そして、核酸抽出装置によって全血検体を抽出処理して得た抽出用容器９０内のＤＮＡ溶出液を、例えば使い捨てタイプのチップ１００を用いたピペット等で１０μＬ分取する（図４（ｂ））。続いて、遺伝子検出検査用容器１の増幅用容器１０のキャップ１１を外し、分取したＤＮＡ溶出液を増幅用容器１０に分注する（図４（ｃ））。続いて、増幅用容器１０にキャップを被せて密封し（図４（ｄ））、遺伝子検出検査用容器１をＰＣＲ増幅装置に設置する。ここで、ＰＣＲ増幅装置は、温度制御を行うことによって増幅用容器１０内の試料のＰＣＲ増幅を行う装置であるが、検出用容器２０内に注入されている希釈液は温度変化による影響を受けないため、ＰＣＲ増幅装置内に設置しても問題ない。ＰＣＲ増幅装置側の容器の設置部分は、遺伝子検出検査用容器１の載置が可能に構成されているものとする。
【００３０】
遺伝子検出検査用容器１をＰＣＲ増幅装置に設置したならば、図３に示すように、ＰＣＲ増幅装置によって増幅用容器１０内のＤＮＡ溶出液の増幅処理を行う（ステップＳ１９）。例えば、ＰＣＲ増幅装置は、ＰＣＲ法による増幅処理を行う。ＰＣＲ法とは、例えばＤＮＡ中の特定部分の合成を繰り返し行うことによって検出対象のＤＮＡを検出する手法のことである。具体的には、ＰＣＲ増幅装置は、増幅用容器１０内のＤＮＡ溶出液と増幅用試薬の混合液を先ず高温下で熱変性させ、次いで温度を下げてプライマーとＤＮＡとを結合（アニーリング）させる。この熱変性とアニーリングを繰り返し行うことによって、ＤＮＡ中の特定部分を合成・増幅させる。このＰＣＲ増幅の反応条件は、例えば、増幅用容器１０を２分間９４℃に保って反応を開始させた後、９４℃で３０秒間、６４℃で１５秒間を１サイクルとして３０サイクル行う。なお、反応条件は、これに限定されるものではなく、使用する増幅用酵素の種類等によって適宜設定できる。例えば、アニーリングの後に７２℃で２分間伸張反応させる工程を追加することとしてもよい。
【００３１】
検出工程では、増幅工程で増幅させた特定部分を有するＤＮＡを検出する。すなわち、先ずＰＣＲ増幅装置で増幅処理された増幅用容器１０内のＤＮＡ増幅液を検出用容器２０へ移し替える（ステップＳ２１）。図５は、増幅用容器１０から検出用容器２０にＤＮＡ増幅液を移し替える作業について説明する図である。検出工程では、ＰＣＲ増幅装置から遺伝子検出検査用容器１を取り外し、遺伝子検出検査用容器１の増幅用容器１０のキャップ１１および検出用容器２０のキャップ２１を外す（図５（ａ））。そして、ミシン目３１，３３に沿って接続部材３０を折り曲げて増幅用容器１０の開口部と検出用容器２０の開口部とを対向させ、嵌合させることによって増幅用容器１０内のＤＮＡ増幅液を検出用容器２０へ移し替える（図５（ｂ））。遺伝子検出検査は、検出対象のＤＮＡの有無を判定できればよく、定量の必要はない。このため、増幅用容器１０内のＤＮＡ増幅液が希釈液が注入されている検出用容器２０へ移し替えられればよい。続いて、検出用容器２０側のミシン目３１を切り離して増幅用容器１０と検出用容器２０とを分離し、検出用容器２０を分析装置に設置する（図５（ｃ））。一方、増幅用容器１０については廃棄する（図５（ｄ））。なお、増幅用容器１０と検出用容器２０とを分離した後、検出用容器２０に再度キャップ２１を被せて密封し、振とう作業をする等して攪拌した後で、キャップ２１を外して分析装置に設置することとしてもよい。
【００３２】
検出用容器２０を分析装置に設置したならば、図３に示すように、分析装置によって検出用容器２０に付されたバーコードの読取処理を行い（ステップＳ２３）、検出処理を行う（ステップＳ２５）。ここで、分析装置は、反応容器内に検体（ここでは検出用容器２０内のＤＮＡ増幅液）を分注する検体分注部や、反応容器内に第１試薬を分注する第１試薬分注部、反応容器内に第２試薬を分注する第２試薬分注部、反応容器内に分注されたＤＮＡ増幅液と第１試薬および第２試薬とを攪拌させる攪拌部、反応容器に所定波長の分析光を照射し、透過した光を受光して吸光度測定を行う測定部等を備える。
【００３３】
図６は、分析装置が行う検出処理の処理手順の一例を示すフローチャートである。本実施の形態では、第１試薬を緩衝液とし、第２試薬を抗体ラテックス粒子溶液とする。図６に示すように、分析装置では、先ず、反応容器内に緩衝液である第１試薬を８０μＬ分注する（ステップＳ２５１）。そして、この第１試薬が分注された反応容器内に、分析装置内の所定位置に設置された検出用容器２０内のＤＮＡ増幅液を２０μＬ分注する（ステップＳ２５２）。さらに、反応容器内に抗体ラテックス粒子溶液である第２試薬を１００μＬ分注する（ステップＳ２５３）。そして、反応容器内に分注された第１試薬、ＤＮＡ増幅液および第２試薬を攪拌して反応させた後（ステップＳ２５４）、反応容器に例えば８００ｎｍ付近の近赤外光を照射して、反応液を光学的に測定する（ステップＳ２５５）。反応容器内に抗体結合ラテックス粒子とＤＮＡの凝集物ができ、反応液が懸濁している場合、反応液に照射された分析光は散乱されるので吸光度が上昇する。これを利用し、例えば第２試薬を分注した直後の吸光度と、第２試薬を分注してから所定時間が経過した時点での吸光度とを測定する。そして、測定した吸光度の吸光度差をもとに検出対象のＤＮＡの有無を判定する（ステップＳ２５６）。吸光度差から反応液が懸濁していると判定した場合には、被験者の全血検体から抽出したＤＮＡが、所定の塩基配列である特定部分を有するＤＮＡを持つと判定する。
【００３４】
以上説明したように、本実施の形態によれば、抽出工程で得たＤＮＡ溶出液を増幅用容器１０内に分注し、遺伝子検出検査用容器１のままＰＣＲ増幅装置に設置してＤＮＡ溶出液の増幅処理を行うことができる。そして、増幅処理の後、接続部材３０をミシン目３１，３３に沿って接続部材３０を折り曲げて増幅用容器１０の開口部と検出用容器２０の開口部とを対向させ、嵌合させることによって増幅用容器１０内のＤＮＡ増幅液を検出用容器２０へ移し替えることができる。そして、移し替えた後、ミシン目３１を切り離して増幅用容器１０と検出用容器２０とを分離し、検出用容器２０のみを分析装置に設置し、ＤＮＡ増幅液の検出処理を行うことができる。したがって、増幅処理後の増幅用容器内の生体試料を検出用容器へ移し替える際に生じる、例えば異なる被験者の識別ＩＤが記録されたバーコードのバーコードラベルが貼付された容器間で移し替えを行ってしまうといった生体試料の取り間違い等の人為的ミスを防止することができる。
【００３５】
また、従来は、増幅工程で使用する増幅用容器および検出工程で使用する検出用容器にそれぞれバーコードを付し、増幅処理時および検出処理時にその都度バーコードの読み取りを行っていたが、本実施の形態によれば、増幅用容器１０と検出用容器２０とが一体的に形成されているため、検出用容器２０にのみバーコード等の記録媒体を付しておき、分析処理時にバーコードを読み取れば済む。このため、ＰＣＲ増幅装置側にバーコード等の記録媒体を読み取る読取装置を設ける必要もない。また、ＰＣＲ増幅装置では、増幅処理した増幅用容器１０からバーコードを読み取って被験者の識別ＩＤ等を管理する必要がない。あるいは、識別ＩＤを管理するための外部装置と通信接続する必要もないため、情報漏えいのリスクを低減できる。
【００３６】
また、増幅用容器１０から検出用容器２０へＤＮＡ増幅液を移し替える際にチップ等を用いないため生体試料間のコンタミネーションを防止できる。また、増幅処理によって得られるＤＮＡ増幅液は１０〜１００μＬ程度と少量であり、分析装置で検出処理を行うためには、検出処理の前にＤＮＡ増幅液を適当量に希釈する必要があるが、本実施の形態によれば、検出用容器内に予め希釈液が注入されているため、希釈に際してＤＮＡ増幅液が汚染されることがない。
【００３７】
以上、この発明の好適な実施の形態について説明したが、この発明は、上記したものに限らず、発明の趣旨を逸脱しない限りにおいて適宜変更可能である。
【００３８】
例えば、上記した実施の形態では、増幅用容器１０から検出用容器２０へのＤＮＡ増幅液の移し替えを、接続部材３０をミシン目３１，３３の部分で折り曲げることにより行う場合について説明したが、これに限定されるものではない。図７は、ＤＮＡ増幅液を移し替える作業の変形例について説明する図である。図７（ａ）に示すように、本変形例の遺伝子検出検査用容器１ｂは、増幅用容器１０ｂと検出用容器２０ｂとを備え、これらを分離可能な分離部である１本のミシン目３５ｂを配した接続部材３０ｂによって一体的に形成されている。増幅用容器１０ｂから検出用容器２０ｂにＤＮＡ増幅液を移し替える際には、先ず、ミシン目３５ｂを切り離して増幅用容器１０ｂと検出用容器２０ｂとを分離する（図７（ｂ））。そして、増幅用容器１０ｂのキャップ１１ｂおよび検出用容器２０ｂのキャップ２１ｂを外して増幅用容器１０ｂの開口部を検出用容器２０ｂの開口部に嵌合させることによって増幅用容器１０ｂ内のＤＮＡ増幅液を検出用容器２０ｂへ移し替える（図７（ｃ））。続いて、検出用容器２０ｂを分析装置に設置する（図７（ｄ））。一方、増幅用容器１０ｂについては廃棄する（図７（ｅ））。なお、本変形例は、上記した実施の形態の構成の遺伝子検出検査用容器１ｂでも実現できるが、事前にミシン目３５ｂに沿って増幅用容器１０ｂと検出用容器２０ｂとを分離した後でＤＮＡ増幅液の移し替え作業を行うため、各容器１０ｂ，２０ｂが分離可能であればよく、接続部材３０ｂによって接続される各容器１０ｂ，２０ｂの位置関係は特に限定されない。本変形例によれば、上記した実施の形態と同様の効果を奏することができる。すなわち、増幅処理後の増幅用容器内の生体試料を検出用容器へ移し替える際に生じる生体試料の取り間違い等の人為的ミスを防止することができる。また、検出用容器２０ｂにのみバーコード等の記録媒体を付しておき、分析処理時にバーコードを読み取れば済む。また、増幅用容器１０ｂから検出用容器２０ｂへＤＮＡ増幅液を移し替える際にチップ等を用いないため生体試料間のコンタミネーションを防止できる。さらに、検出用容器内に予め希釈液が注入されているため、ＤＮＡ増幅液の希釈に際して汚染の心配がない。
【００３９】
図８は、ＤＮＡ増幅液を移し替える作業の他の変形例について説明する図である。図８（ａ）に示すように、本変形例の遺伝子検出検査用容器１ｃは、図７に示した遺伝子検出検査用容器１０ｂと同様のものであり、増幅用容器１０ｃと検出用容器２０ｃとを備え、これらを分離可能な１本のミシン目３５ｃを配した接続部材３０ｃによって一体的に形成されている。増幅用容器１０ｃから検出用容器２０ｃにＤＮＡ増幅液を移し替える際には、先ず、増幅用容器１０ｃのキャップ１１ｃおよび検出用容器２０ｃのキャップ２１ｃを外す。そして、例えば使い捨てのチップ１１０を用いたピペット等で増幅用容器１０ｃ内のＤＮＡ増幅液を分取し、検出用容器２０ｃに分注することによって移し替える。続いて、ミシン目３５ｃを切り離して増幅用容器１０ｃと検出用容器２０ｃとを分離し（図８（ｂ））、検出用容器２０ｃを分析装置に設置する（図８（ｃ））。一方、増幅用容器１０ｃについては廃棄する（図８（ｄ））。なお、本変形例についても、上記した実施の形態の構成の遺伝子検出検査用容器１ｃでも実現できるが、チップ１１０を用いてＤＮＡ増幅液の移し替え作業を行うため、各容器１０ｃ，２０ｃが分離可能であればよい。本変形例によれば、増幅処理後の増幅用容器内の生体試料を検出用容器へ移し替える際に生じる生体試料の取り間違い等の人為的ミスを防止することができる。また、検出用容器２０ｃにのみバーコード等の記録媒体を付しておき、分析処理時にバーコードを読み取れば済む。また、検出用容器内に予め希釈液が注入されているため、ＤＮＡ増幅液の希釈に際して汚染の心配がない。
【００４０】
また、上記した実施の形態では、増幅用容器１０と検出用容器２０とを分離するためのミシン目３１，３３が接続部材３０の略中央に形成された場合について説明したが、ミシン目の位置はこれに限定されるものではない。図９は、遺伝子検出検査用容器１ｄの変形例を示す図である。図９（ａ）に示すように、本変形例の遺伝子検出検査用容器１ｄは、増幅用容器１０ｄと検出用容器２０ｄとが接続部材３０ｄによって一体的に形成されるとともに、接続部材３０ｄには、検出用容器２０ｄの外壁に沿うようにミシン目３７ｄが形成されている。本変形例の遺伝子検出検査用容器１ｄでは、増幅用容器１０ｄ内のＤＮＡ増幅液を検出用容器２０ｄへ移し替える直前または直後に、図９（ｂ）に示すように、接続部材３０ｄから検出用容器２０ｄのみを分離させることができる。
【００４１】
また、上記した実施の形態では、抗体結合ラテックス粒子の凝集を検出して検出対象の核酸（ＤＮＡ）の有無を判定する場合について説明したが、本発明の遺伝子検出用容器が適用可能な検出方法はこれに限定されるものではない。例えば、蛍光による検出を行う場合に適用できる。この場合には、蛍光色素等の蛍光物質を修飾物質として用い、検出対象の核酸を増幅する。修飾物質としては、例えばＦＩＴＣ，Ｃｙ３，Ｃｙ５等が挙げられる。続いて、得られた増幅液を、蛍光物質に対する抗体が標識された磁性粒子を用い、攪拌を行って蛍光物質と磁性粒子とを結合させる。そして、磁石によって磁性粒子を回収して洗浄した後、蛍光分析を行って検出対象の核酸の有無を判定する。あるいは、化学発光による検出を行う場合に適用できる。この場合には、化学発光のための基質を修飾物質として用い、検出対象の核酸を増幅する。修飾物質としては、例えばルシフェリンが挙げられる。続いて、得られた増幅液を、化学発光のための基質に対する抗体が標識された磁性粒子を用い、攪拌を行って基質と磁性粒子とを結合させる。そして、磁石によって磁性粒子を回収して洗浄した後、ホスファターゼ等の酵素溶液を添加し、蛍光分析を行って検出対象の核酸の有無を判定する。基質を含んだ第２試薬を供給すると化学発光の有無により検出対象の核酸の有無を判定することが可能となる。
【００４２】
また、上記した実施の形態では、抽出工程において全血検体からＤＮＡを抽出する抽出処理を行い、この抽出工程で得られたＤＮＡ溶出液を増幅用容器１０に分注して増幅処理を行うこととしたが、抽出工程については適宜省略できる。従来から、ＤＮＡを精製して溶出させることなく、血液試料をそのままＰＣＲ増幅可能な前処理試薬が知られており、この前処理試薬を添加する場合には、抽出工程を省略することができる。この場合には、増幅用試薬が予め注入された増幅用容器内に、全血検体と前処理試薬とを分注する。そして、ＰＣＲ増幅装置によって増幅処理を行う。
【００４３】
また、接続部材に増幅用容器と検出用容器とを分離するためのミシン目を形成する場合について説明したが、増幅用容器と検出用容器とを分離できればミシン目でなくても構わない。例えば、断続的なミシン目にかえて、接続部材に切り目のない切取線を形成してもよい。あるいは、例えば上記した実施の形態でミシン目３１，３３が形成された帯状の部分を分離し易い素材で形成してもよいし、分離し易いように他の部分よりも肉薄にして溝を形成することとしてもよい。
【００４４】
また、上記した実施の形態では、分離可能なミシン目を配した接続部材によって増幅用容器と検出用容器とを一体的に形成し、増幅処理後に増幅用容器と検出用容器とを分離して検出用容器のみを分析装置に設置する場合について説明したが、分析装置に増幅用容器を設置するスペースが確保できる場合等、増幅用容器と検出用容器とが接続されたまま分析装置に設置可能な場合には、これらを分離する必要はない。例えば、折り曲げ可能な曲折部を有し、この曲折部で折り曲げることによって増幅用容器の開口部と検出用容器の開口部とが対向可能に形成された接続部材によって増幅用容器と検出用容器とを一体的に形成することとしてもよい。この場合には、増幅処理後、増幅用容器と検出用容器とが接続されたままの状態で分析装置に設置する。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】本実施の形態の遺伝子検出検査用容器の一例を示す図である。
【図２】所定の塩基配列を有するＤＮＡの検出原理を説明する図である。
【図３】遺伝子検出検査を構成する抽出工程、増幅工程および検出工程の各工程を説明するフローチャートである。
【図４】増幅用容器にＤＮＡ溶出液を分注する作業について説明する図である。
【図５】増幅用容器から検出用容器にＤＮＡ増幅液を移し替える作業について説明する図である。
【図６】検出処理の処理手順の一例を示すフローチャートである。
【図７】増幅用容器から検出用容器にＤＮＡ増幅液を移し替える作業の変形例について説明する図である。
【図８】増幅用容器から検出用容器にＤＮＡ増幅液を移し替える作業の他の変形例について説明する図である。
【図９】遺伝子検出検査用容器の変形例を示す図である。
【符号の説明】
【００４６】
１      遺伝子検出検査用容器
１０      増幅用容器
１１      キャップ
１５      増幅用試薬
２０      検出用容器
２１      キャップ
２３      バーコードラベル
２５      希釈液
３０      接続部材
３１，３３      ミシン目
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2009095267.tif 000008
【図７】
2009095267.tif 000009
【図８】
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【図９】
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