(57)【要約】【課題】アミロイドベータ（Ａβ）産生機構の解析、Ａβが原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤の作用機序の解析などに有用な試薬、それを用いた解析方法およびそれに用いるキットを提供することを課題とする。【解決手段】下記式2009184924.tif 000078［式中、Ｒ１０は水酸基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、Ａ１は単結合、親和性標識基または親和性標識基、Ａ２は単結合またはリンカー、Ａ３は単結合または開裂可能なリンカー、Ａ４はフィッシングタグ基、標識基または固相担体を示す］で表される生物学的試薬用化合物を使用して、Ａβが原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤の標的タンパクを検索することにより、Ａβ産生機構の解析、神経変性疾患の治療剤または予防剤の作用機序の解析などを行うことができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2009184924.tif 000064
［式中、
Ａｒ１は、下記置換基群Ａ１から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよいイミダゾリル基を示す；
Ａｒ２は、下記置換基群Ａ２から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、ピリジニル基、ピリミジニル基またはフェニル基を示し；
Ｘ１は、−Ｃ≡Ｃ−または
2009184924.tif 000065
（ここにおいて、Ｒ２およびＲ３は、下記置換基群Ａ３から選択される置換基を示し、
2009184924.tif 000066
は単結合または二重結合を示す）を示す；
Ｒ１は、下記置換基群Ａ４から選択される基を示し；
Ｘ２は、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基で置換されてもよい、Ｃ１−６アルキレン基（該Ｃ１−６アルキレン基は、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、水酸基で置換されていてもよく、また、Ｃ１−６アルキレン基上の同一炭素原子に１または２置換することができ、２つの該Ｃ１−６アルキル基は結合する炭素原子と共に環状基（該環状基の環上メチレン基が１の酸素原子で置換されてもよい）を形成することができる）を形成してもよい）、Ｃ１−６アルコキシ基、アミノ基（該アミノ基は、Ｃ１−６アルキル基で置換されてもよい）および置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）を示し；
Ｘ３は、単結合、置換基群Ａ５から選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、−Ｏ−または−Ｓ−を示し；
Ａｒ３は、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員環芳香族炭化水素基または置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員環芳香族複素環基を示し；
あるいは、
Ｒ１および−Ｘ２−Ｘ３−Ａｒ３が、−Ｘ１−ＣＯ−Ｎと一緒になって、下記置換基群Ａ４から選択される１ないし４の置換基で置換されてもよい、式（ＩＩ）
【化２】
2009184924.tif 000067
［式中、Ｒ４は置換基群Ａ３から選択される置換基を示し；
2009184924.tif 000068
は単結合または二重結合を示し；Ｚ１は単結合、−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−（ここにおいて、ｎは、１ないし３の整数を示す）または−ＣＲ５Ｒ６（ここにおいて、Ｒ５およびＲ６は、下記置換基群Ａ４から選択される置換基を示す）を示し；Ｚ２は、単結合、−Ｏ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＣＳＮＲ−、−ＮＲＣＳ−（ここにおいて、Ｒは、下記置換基群Ａ４から選択される置換基を示す）または−Ｓ−を示し；Ｚ３は、単結合、下記置換基群Ａ４から選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、−（ＣＨ２）ｍ−（ここにおいて、ｍは、１ないし３の整数を示す）、−ＣＲ７Ｒ８−（ここにおいて、Ｒ７およびＲ８は、下記置換基群Ａ４から選択される置換基を示す）または−Ｏ−を示し；Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する。］で表される基を形成してもよい；
Ａ１は、単結合、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基を示す；
Ａ２は、単結合またはリンカーを示す；
Ａ３は、単結合または開裂可能なリンカーを示す；
Ａ４は、水素原子、フィッシングタグ基、検出可能なマーカー、固相担体または固相担体と結合させる基を示す；
置換基群Ａ１：ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基およびＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）、タンパク質標識基、タンパク質標識基を含む基、および固相担体と結合させる基；
置換基群Ａ２：ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、Ｃ１−６アルコキシ基（該Ｃ１−６アルコキシ基は、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基およびＣ３−８シクロアルキル基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ２−６アルキニルオキシ基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基；
置換基群Ａ３：ハロゲン原子、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、ホルミル基、ハロゲン原子、水酸基、保護基を有する水酸基、シアノ基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ１−６アルキルスルフィニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、アミノ基（該アミノ基は、１ないし５のハロゲン原子を適宜有するＣ１−６アルキル基で置換されてもよい）、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員非芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基および−Ｘ−Ａ（ここにおいて、Ｘは、イミノ基、−Ｏ−または−Ｓ−を示し、Ａは、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、６ないし１４員芳香族炭化水素環基または５ないし１４員芳香族複素環基を示す）からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基；
置換基群Ａ４：水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルチオ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ１−６アルキルスルフィニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、ヒドロキシイミノ基、Ｃ１−６アルコキシイミノ基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよいＣ１−６アルキル基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよいＣ１−６アルコキシ基、置換基群Ａ５から選択される１ないし２の置換基で置換されてもよいアミノ基、置換基群Ａ５から選択される１ないし２の置換基で置換されてもよいカルバモイル基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員非芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ２−６アルキニルオキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルスルフィニル基、Ｃ３−８シクロアルキルスルホニル基、−Ｘ−Ａ（ここにおいて、ＸおよびＡは、前記の意味を有する）、−ＣＯ−Ａ（ここにおいて、Ａは、前記の意味を有する）、＝ＣＨ−Ａ（ここにおいて、Ａは、前記の意味を有する）、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基；
置換基群Ａ５：水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルチオ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ１−６アルキルスルフィニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、ヒドロキシイミノ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ２−６アルキニルオキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルスルフィニル基、Ｃ３−８シクロアルキルスルホニル基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基。］
で表される生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３により構成される、下記式
【化３】
2009184924.tif 000069
［式中、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する、但し、Ｘ１は、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＲ２＝ＣＲ３−を示すか、あるいはＲ１および−Ｘ２−Ｘ３−Ａｒ３が、−Ｘ１−ＣＯ−Ｎと一緒になって、式（ＩＩ）で表される基を形成する（但し、式（ＩＩ）において、
2009184924.tif 000070
は二重結合を示す］で表される部分は、アミロイドベータ（Ａβ）タンパクの生成を抑制する生物学的活性を発揮する、請求項１の生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項３】
式（ＩＩ）で表される基が、置換基群Ａ５から選択される１ないし４の置換基で置換されてもよい、下記式
【化４】
2009184924.tif 000071
［式中、Ｒ９は、置換基群Ａ４から選択される置換基を示し、Ｒ４、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する。］で表される環状基である、請求項１または２の生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項４】
式（ＩＩ）で表される基が、置換基群Ａ５から選択される１ないし４の置換基で置換されてもよい、下記式
【化５】
2009184924.tif 000072
［式中、Ｒ４、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する。］で表される環状基である、請求項３の生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項５】
Ａｒ２は、置換基群Ａ２から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、フェニル基を示す、請求項１から４のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項６】
下記式
【化６】
2009184924.tif 000073
［式中、Ｒ１０は、水素原子、水酸基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基を示し、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、前記の意味を有する。］で表される生物学的試薬用化合物である、請求項１から５のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項７】
タンパク質標識基が、光親和性標識基である、請求項１から６のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項８】
光親和性標識基が、ベンゾイル基、アジド基、カルボニルアジド基、ジアジリジン基、エノン基、ジアゾ基、およびニトロ基から選ばれる、請求項７の生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項９】
Ａ２のリンカーが、Ｌ４−Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３−（ここにおいて、Ｌ４は置換基を有してもよいヘテロ環、Ｃ１−２０アルキレン基、Ｃ２−２０アルケニレン基、およびＣ２−２０アルキニレン基、Ｌ１およびＬ３はそれぞれ、単結合、−Ｏ−、−Ｓ−、Ｃ１−６アルキル基で置換されてもよい、−ＮＨ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−または
【化７】
2009184924.tif 000074
（ここで、Ｒ１１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基を示す）を示し；Ｌ２は、単結合、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−（ここで、ｐは１から２０の整数を示す）または−（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｑ−（ここで、ｑは１から２０の整数を示す）を示し；Ｌ３は、ハロゲン原子、水酸基、あるいはヘテロ環基であってもよく、Ｌ１およびＬ３は、隣接する基と環を形成していてもよい）である、請求項１から８のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項１０】
Ａ３の開裂可能なリンカーが、−Ｓ−Ｓ−、−Ｏ−Ｓｉ−Ｏ−または−糖残基−である、請求項１から９のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項１１】
Ａ４のフィッシングタグ基が、ビオチン、または３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３Ａ，４Ａ−ジアザ−４−ボラ−Ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル基である、請求項１から１０のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項１２】
Ａ４の検出可能なマーカーが、放射性標識基、蛍光標識基、化学発光基、重金属イオン、アジド基またはビオチン基である、請求項１から１０のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項１３】
下記の化合物からなる群から選ばれる、請求項１から１２のいずれかの生物学的試薬用化合物もしくはその塩。
１）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［２−（（Ｅ）−３−｛４−［４−（（Ｓ）−１−｛３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリロイルアミノ）エチル］アミド、
２）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛１−｛２−｛２−｛２−｛２−｛３−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝−４−ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝エトキシ｝エトキシ｝エトキシ｝エチル｝−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルメチル｝アミド、
３）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛２−｛２−｛６−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシルカルバモイル｝エチルジスルファニル｝エチル｝アミド、
４）１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−［３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル］ピペラジン｝−１−イル｝−３−オキソプロペニル｝ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
５）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛２−｛３−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイル｝ピペラジン−１−イル｝−３−オキソプロピルジスルファニル｝エチル｝アミド、
６）（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−６−｛５−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイル｝ピペラジン−１−イル｝−５−オキソペンチル｝テトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−２−オン、
７）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛１−｛６−｛３−｛４−｛４−｛１−｛３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシル｝−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルメチル｝アミド、
８）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジルアミド、
９）６−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］吉草酸  ４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジルアミド、
１０）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルアミド、
１１）６−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］吉草酸  ｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルアミド、
１２）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝−Ｎ−｛２−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］エチル｝ベンズアミド、
１３）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝−Ｎ−｛２−｛２−｛２−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］エトキシ｝エトキシ｝エチル｝ベンズアミド、
１４）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［２−（３−｛４−［４−（２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［３−（（Ｒ）−メトキシ）−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）］−（Ｅ）−ベンジリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝−（Ｅ）−アクリロイルアミノ）エチル］アミド、
１５）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［５−（３−｛４−［（Ｒ）−４−（２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリロイルアミノ）ペンチル］アミド、
１６）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛１−（２−｛２−［２−（２−エトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミド｝−３−｛４−［４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）―メチリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリルアミド、および
１７）１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛３−［４，４−ジフルオロ−５−（１Ｈ−ピロール−２−イル）−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル］プロピオニル｝ピペラジン｝−１−イル｝−３−オキソプロペニル｝ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン。
【請求項１４】
下記の化合物からなる群から選ばれる、請求項１から１２のいずれかの生物学的試薬用化合物もしくはその塩。
１）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］ピペリジン−２−オン、
２）１−｛（Ｒ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］ピペリジン−２−オン、
３）（Ｅ）−３−｛４−［４−（（Ｓ）−１−｛３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニルアクリル酸  ターシャリブチルエステル、
４）（Ｅ）−Ｎ−｛２−｛２−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル｝−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド、
５）（Ｅ）−Ｎ−（６−アジドヘキシル）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド、
６）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
７）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
８）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−アミノメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
９）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルカルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
１０）３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−メチルアミノメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝ピペリジン−２−オン、
１１）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−アジドメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
１２）４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステル、
１３）４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸、および
１４）（Ｅ）−Ｎ−（２−｛２−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル）−３−｛４−［４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）―メチリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリルアミド。
【請求項１５】
Ａβタンパクの産生機構を解析する方法であって、
ａ）Ａβタンパクの産生機構に関与するタンパクを含むと考えられる細胞もしくは細胞成分と、請求項１から１４のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩とを接触させて、
ｂ）請求項１から１４のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩と、Ａβタンパクの産生機構に関与する標的タンパクとの複合体を形成させ、次いで
ｃ）形成された生物学的試薬用化合物と標的タンパク質の複合体を解析し、標的タンパク質を同定する
ことを含む、Ａβタンパクの産生機構を解析する方法。
【請求項１６】
請求項１から１４のいずれかの生物学的試薬用化合物あってＡβタンパク産生を抑制する作用を有する生物学的試薬用化合物またはその塩とともに、請求項１から１４のいずれかの生物学的試薬用化合物あってＡβタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩とを一緒に用いて、両者の生物学的試薬用化合物またはその塩について同様の方法を行って、両者を比較して、標的タンパク質を同定することを含む、請求項１５の方法。
【請求項１７】
Ａβタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩が、式（ＩＩＩ）
【化８】
2009184924.tif 000075
［式中、Ｒ１０は、水素原子、水酸基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基を示し、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、前記の意味を有する。］で表される生物学的試薬用化合物またはその塩である、請求項１６の方法。
【請求項１８】
式（Ｉ）で表される生物学的試薬用化合物または塩において、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３により構成される、Ａβタンパク産生を抑制する生物学的活性を発揮する部分の標的タンパクを検索して、Ａβタンパク産生の抑制機構を解析する、請求項１５から１７のいずれかの方法。
【請求項１９】
請求項１から１４のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩を含む、Ａβタンパクの産生機構を解析するためのキット。
【請求項２０】
式（Ｉ）において、Ｘ１が、−ＣＲ２−ＣＲ３−を示すか、あるいはＲ１および−Ｘ２−Ｘ３−Ａｒ３が、−Ｘ１−ＣＯ−Ｎと一緒になって、式（ＩＩ）で表される基を形成する（但し、式（ＩＩ）において、
2009184924.tif 000076
は単結合を示す）、生物学的試薬用化合物であってＡβタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項２１】
式（ＩＩＩ）
【化９】
2009184924.tif 000077
［式中、Ｒ１０は、水素原子、水酸基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基を示し、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、前記の意味を有する。］で表される生物学的試薬用化合物またはその塩である、請求項２０の生物学的試薬用化合物またはその塩。
【請求項２２】
下記の化合物である、請求項２０または２１の生物学的試薬用化合物もしくはその塩。
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［２−（３−｛４−［４−（１−｛３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジル］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリロイルアミノ）エチル］アミド、
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学的試薬用化合物に関する。更に詳細には、アミロイドベータタンパク（Ａβタンパク）の生成機構を解明するために有用な生物学的試薬として利用できる生物学的試薬用化合物、該生物学的試薬用化合物を用いたＡβタンパクの生成機構を解明する方法、および該生物学的試薬用化合物を含む、Ａβタンパクの生成機構を解明するキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は、神経細胞の変性や、脱落とともに、老人班の形成および神経原繊維変化を特徴とする疾患である。現在、アルツハイマー病の治療は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に代表される症状改善剤による対症療法に限られていて、病気の進行を抑制する根本療法剤は開発されていない。アルツハイマー病の根本療法剤の創出には、病態の発症原因を制御する方法の開発が必要である。
アルツハイマー病やダウン症等の神経変性疾患はＡβタンパクが原因となって老人班の形成や神経原繊維変化を起こすと考えられている。アミロイド前駆体タンパク（ＡＰＰ）の代謝産物であるＡβタンパクは、神経細胞の変性・脱落、さらには痴呆症状の発現に大きくかかわると考えられている（例えば、非特許文献１、２参照）。Ａβタンパクの主成分は、アミノ酸４０個からなるＡβ４０とＣ末が２アミノ酸増えたＡβ４２である。これらのＡβ４０および４２は、凝集性が高く（例えば、非特許文献３参照）、老人班の主要構成成分であり（例えば、非特許文献３、４、５参照）、さらに、家族性アルツハイマー病で見られるＡＰＰおよびプレセネリン遺伝子の変異は、これらのＡβ４０および４２を増加させることが知られている（例えば、非特許文献６、７、８参照）。したがって、Ａβ４０および４２の産生を低下させる化合物は、アルツハイマー病の進行抑制剤または予防薬として期待されている。
Ａβは、ＡＰＰがベータセクレターゼにより切断され、続いてガンマセクレターゼにより切り出されることにより産生する。このことより、Ａβ産生低下を目的として、ガンマセクレターゼおよびベータセクレターゼの阻害剤の創出が試みられている。既に知られているこれらのセクレターゼ阻害剤の多くは、例えばＬ−６８５，４５８（例えば、非特許文献９参照）、ＬＹ−４１１５７５（例えば、非特許文献１０、１１、１２参照）等、ペプチドまたはペプチドミメティックである。
本発明者らは、Ａβ４０や４２の産生を抑制する新規な低分子化合物としてシンナミド化合物を既に提案している（特許文献１参照）。このシンアミド化合物は、ＡＰＰからＡβ４０や４２の産生を強力に抑制する化合物であり、アルツハイマー病に代表されるＡβに起因する疾患の治療剤または予防剤として期待されている。
【０００３】
他方、最近においては、生化学的手法あるいは分子生物学的手法の代わりに低分子化合物を生体成分であるタンパク質機能の解明に用いるケミカルジェネティクス（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ）的手法が、生物学的研究に重要な役割りを占めると考えられている。ケミカルジェネティクス的手法では、生体機能システムの実行因子であるタンパク質に結合してその機能を阻害あるいは促進する低分子化合物を用いるため、タンパク質の多様な機能を広く評価できると考えられている。
このようなケミカルジェネティクス的手法の試みの一つとして、Ａβタンパクの生成を阻害する薬理活性化合物を構成成分とする生物学的試薬を用いて、標的タンパク質を解明することが提案されている（特許文献２参照）。また、セクレターゼ阻害剤として知られる上記したＬ−６８５，４５８（非特許文献９参照）と、光親和性標識基およびビオチンとからなる生物学的試薬を用いて、Ｌ−６８５，４５８の標的タンパク質を検索したことが報告されている（非特許文献１３参照）。
しかしながら、Ａβ４０や４２の産生を抑制する上記したシンナミド化合物（特許文献１）について、生物学的試薬を用いてその標的タンパク質を検索することは未だなされていない。
【０００４】
【非特許文献１】Ｋｌｅｉｎ  ＷＬ，外７名，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ａｆｆｅｃｔｅｄ  ｂｒａｉｎ：Ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  Ａβ  ｌｉｇａｎｄｓ  （ＡＤＤＬｓ）ｓｕｇｇｅｓｔｓ  ａ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｍｅｍｏｒｙ  ｌｏｓｓ，Ｐｒｏｃｅｄｉｎｇ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＵＳＡ  ２００３，Ｓｅｐ  ２；１００（１８），ｐ．１０４１７−１０４２２．
【非特許文献２】Ｎｉｔｓｃｈ  ＲＭ，外１６名，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  β−ａｍｙｌｏｉｄ  ｓｌｏｗ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｄｅｃｌｉｎｅ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎｅｕｒｏｎ，２００３，Ｍａｙ  ２２；３８，ｐ．５４７−５５４．
【非特許文献３】Ｊａｒｒｅｔｔ  ＪＴ，外２名，Ｔｈｅ  ｃａｒｂｏｘｙ  ｔｅｒｍｉｎｕｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  β  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｓ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｅｅｄｉｎｇ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ’ｄｉｓｅａｓｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３，３２（１８），ｐ．４６９３−４６９７．
【非特許文献４】Ｇｌｅｎｎｅｒ  ＧＧ，外１名，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｉｎｉｔｉａｌ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１９８４，Ｍａｙ  １６，１２０（３），ｐ．８８５−８９０．
【非特許文献５】Ｍａｓｔｅｒｓ  ＣＬ，外５名，Ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｌａｑｕｅ  ｃｏｒｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｄｏｗｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｐｒｏｃｅｄｉｎｇ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＵＳＡ，１９８５，Ｊｕｎ，８２（１２），ｐ．４２４５−４２４９．
【非特許文献６】Ｇｏｕｒａｓ  ＧＫ，外１１名，Ｉｎｔｒａｎｅｕｒｏｎａｌ  Ａβ４２  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒａｉｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０００，Ｊａｎ，１５６（１），ｐ．１５−２０．
【非特許文献７】Ｓｃｈｅｕｎｅｒ  Ｄ，外２０名，Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ａｍｙｌｏｉｄ  β−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｔｈａｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｅｎｉｌｅ  ｐｌａｑｕｅｓ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ‘ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ  １  ａｎｄ  ２  ａｎｄ  ＡＰＰ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｆａｍｉｌｉａｌ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９６，Ａｕｇ，２（８），ｐ．８６４−８７０．
【非特許文献８】Ｆｏｒｍａｎ  ＭＳ，外４名，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｗｅｄｉｓｈ  ｍｕｔａｎｔ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｎ  β−ａｍｙｌｏｉｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ａｎｄ  ｎｏｎｎｅｕｒｏｎａｌ  ｃｅｌｌｓ，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９７，Ｄｅｃ  １９，２７２（５１），ｐ．３２２４７−３２２５３．
【非特許文献９】Ｓｈｅａｒｍａｎ  ＭＳ，外９名，Ｌ−６８５，４５８，ａｎ  Ａｓｐａｒｔｙｌ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  Ｓｔａｔｅ  Ｍｉｍｉｃ，Ｉｓ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  Ａｍｙｌｏｉｄ  β−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  γ−Ｓｅｃｒｅｔａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，Ａｕｇ  １，３９（３０），ｐ．８６９８−８７０４．
【非特許文献１０】Ｓｈｅａｒｍａｎ  ＭＳ，外６名，Ｃａｔａｌｙｔｉｃ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  γ−Ｓｅｃｒｅｔａｓｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  Ｄｏ  Ｎｏｔ  Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ｂｅｔｗｅｅｅｎ  Ｎｏｔｃｈ  Ｓ３  ａｎｄ  β−ＡＰＰ  Ｃｌｅｖａｇｅｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，Ｊｕｎ  ２４，４２（２４），ｐ．７５８０−７５８６．
【非特許文献１１】Ｌａｎｚ  ＴＡ，外３名，Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  Ａβ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ，ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ，ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｉｎ  ｙｏｕｎｇ  （ｐｌａｑｕｅ−ｆｒｅｅ）Ｔｇ２５７６  ｍｉｃｅ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  γ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｎ２−［（２Ｓ）−２−（３，５−ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）−２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈａｎｏｙｌ］−Ｎ１−［（７Ｓ）−５−ｍｅｔｈｙｌ−６−ｏｘｏ−６，７−ｄｉｈｙｄｒｏ−５Ｈ−ｄｉｂｅｎｚｏ［ｂ，ｄ］ａｚｅｐｉｎ−７−ｙｌ］−Ｌ−ａｌａｎｉｎａｍｉｄｅ  （ＬＹ−４１１５７５），Ｔｈｅ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２００４，Ａｐｒ，３０９（１），ｐ．４９−５５．
【非特許文献１２】Ｗｏｎｇ  ＧＴ，外１２名，Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  γ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＬＹ−４１１，５７５  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  β−ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｌｔｅｒｓ  ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，Ｔｈｅ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，Ｍａｒ  ２６，２７９（１３），ｐ．１２８７６−１２８８２．
【非特許文献１３】Ｌｉ  ＹＭ，外１７名、Ｐｈｏｔｏａｃｔｉｖａｔｅｄ  γ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖｅ  ｓｉｔｅ  ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ  ｌａｂｅｌ  ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ  １，Ｎａｔｕｒｅ，２０００，Ｊｕｎ  ８，４０５（６７８７），ｐ．６８９−６９４
【特許文献１】国際公開第ＷＯ２００５／１１５９９０号パンフレット
【特許文献２】国際公開第ＷＯ００／０１９２１０号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、Ａβ４０や４２の産生を抑制する上記したシンナミド化合物を構成成分とする生物学的試薬用化合物を提供することにある。更に本発明の課題は、この生物学的試薬用化合物をケミカルプローブとして用いて、シンナミド化合物の標的タンパクを検索してＡβタンパクの産生機構を解析する方法を提供することにある。更に本発明の課題は、Ａβタンパクの産生機構を解析するためのキットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記の課題を解決することを目的として鋭意検討を行い、シンナミド化合物を構成成分とする生物学的試薬用化合物を構築し、この生物学的試薬用化合物を用いることにより、Ａβタンパクの産生機構を解析できることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、以下の１）から１４）の生物学的試薬用化合物またはその塩に関する。
１）式（Ｉ）
【化１】
2009184924.tif 000002
［式中、
Ａｒ１は、下記置換基群Ａ１から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよいイミダゾリル基を示す；
Ａｒ２は、下記置換基群Ａ２から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、ピリジニル基、ピリミジニル基またはフェニル基を示し；
Ｘ１は、−Ｃ≡Ｃ−または
2009184924.tif 000003
（ここにおいて、Ｒ２およびＲ３は、下記置換基群Ａ３から選択される置換基を示し、
2009184924.tif 000004
は単結合または二重結合を示す）を示す；
Ｒ１は、下記置換基群Ａ４から選択される基を示し；
Ｘ２は、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基で置換されてもよい、Ｃ１−６アルキレン基（該Ｃ１−６アルキレン基は、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、水酸基で置換されていてもよく、また、Ｃ１−６アルキレン基上の同一炭素原子に１または２置換することができ、２つの該Ｃ１−６アルキル基は結合する炭素原子と共に環状基（該環状基の環上メチレン基が１の酸素原子で置換されてもよい）を形成することができる）を形成してもよい）、Ｃ１−６アルコキシ基、アミノ基（該アミノ基は、Ｃ１−６アルキル基で置換されてもよい）および置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）を示し；
Ｘ３は、単結合、置換基群Ａ５から選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、−Ｏ−または−Ｓ−を示し；
Ａｒ３は、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員環芳香族炭化水素基または置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員環芳香族複素環基を示し；
あるいは、
Ｒ１および−Ｘ２−Ｘ３−Ａｒ３が、−Ｘ１−ＣＯ−Ｎと一緒になって、下記置換基群Ａ４から選択される１ないし４の置換基で置換されてもよい、式（ＩＩ）
【化２】
2009184924.tif 000005
［式中、Ｒ４は置換基群Ａ３から選択される置換基を示し；
2009184924.tif 000006
は単結合または二重結合を示し；Ｚ１は単結合、−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−（ここにおいて、ｎは、１ないし３の整数を示す）または−ＣＲ５Ｒ６（ここにおいて、Ｒ５およびＲ６は、下記置換基群Ａ４から選択される置換基を示す）を示し；Ｚ２は、単結合、−Ｏ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＣＳＮＲ−、−ＮＲＣＳ−（ここにおいて、Ｒは、下記置換基群Ａ４から選択される置換基を示す）または−Ｓ−を示し；Ｚ３は、単結合、下記置換基群Ａ４から選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、−（ＣＨ２）ｍ−（ここにおいて、ｍは、１ないし３の整数を示す）、−ＣＲ７Ｒ８−（ここにおいて、Ｒ７およびＲ８は、下記置換基群Ａ４から選択される置換基を示す）または−Ｏ−を示し；Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する。］で表される基を形成してもよい；
Ａ１は、単結合、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基を示す；
Ａ２は、単結合またはリンカーを示す；
Ａ３は、単結合または開裂可能なリンカーを示す；
Ａ４は、水素原子、フィッシングタグ基、検出可能なマーカー、固相担体または固相担体と結合させる基を示す；
置換基群Ａ１：ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基およびＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）、タンパク質標識基、タンパク質標識基を含む基、および固相担体と結合させる基；
置換基群Ａ２：ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、Ｃ１−６アルコキシ基（該Ｃ１−６アルコキシ基は、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基およびＣ３−８シクロアルキル基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ２−６アルキニルオキシ基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基；
置換基群Ａ３：ハロゲン原子、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、ホルミル基、ハロゲン原子、水酸基、保護基を有する水酸基、シアノ基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ１−６アルキルスルフィニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、アミノ基（該アミノ基は、１ないし５のハロゲン原子を適宜有するＣ１−６アルキル基で置換されてもよい）、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員非芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基および−Ｘ−Ａ（ここにおいて、Ｘは、イミノ基、−Ｏ−または−Ｓ−を示し、Ａは、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、６ないし１４員芳香族炭化水素環基または５ないし１４員芳香族複素環基を示す）からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基；
置換基群Ａ４：水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルチオ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ１−６アルキルスルフィニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、ヒドロキシイミノ基、Ｃ１−６アルコキシイミノ基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよいＣ１−６アルキル基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよいＣ１−６アルコキシ基、置換基群Ａ５から選択される１ないし２の置換基で置換されてもよいアミノ基、置換基群Ａ５から選択される１ないし２の置換基で置換されてもよいカルバモイル基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員非芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ２−６アルキニルオキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルスルフィニル基、Ｃ３−８シクロアルキルスルホニル基、−Ｘ−Ａ（ここにおいて、ＸおよびＡは、前記の意味を有する）、−ＣＯ−Ａ（ここにおいて、Ａは、前記の意味を有する）、＝ＣＨ−Ａ（ここにおいて、Ａは、前記の意味を有する）、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基；
置換基群Ａ５：ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルチオ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ１−６アルキルスルフィニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、ヒドロキシイミノ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ２−６アルキニルオキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルスルフィニル基、Ｃ３−８シクロアルキルスルホニル基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基。］
で表される生物学的試薬用化合物またはその塩。
２）式（Ｉ）において、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３により構成される、下記式
【化３】
2009184924.tif 000007
［式中、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する、但し、Ｘ１は、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＲ２＝ＣＲ３−を示すか、あるいはＲ１および−Ｘ２−Ｘ３−Ａｒ３が、−Ｘ１−ＣＯ−Ｎと一緒になって、式（ＩＩ）で表される基を形成する（但し、式（ＩＩ）において、
2009184924.tif 000008
は二重結合を示す］で表される部分は、アミロイドベータ（Ａβ）タンパクの生成を抑制する生物学的活性を発揮する、上記１）の生物学的試薬用化合物またはその塩。
３）式（ＩＩ）で表される基が、置換基群Ａ５から選択される１ないし４の置換基で置換されてもよい、下記式
【化４】
2009184924.tif 000009
［式中、Ｒ９は、置換基群Ａ４から選択される置換基を示し、Ｒ４、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する。］で表される環状基である、上記１）または２）の生物学的試薬用化合物またはその塩。
４）式（ＩＩ）で表される基が、置換基群Ａ５から選択される１ないし４の置換基で置換されてもよい、下記式
【化５】
2009184924.tif 000010
［式中、Ｒ４、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する。］で表される環状基である、上記３）の生物学的試薬用化合物またはその塩。
５）Ａｒ２は、置換基群Ａ２から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、フェニル基を示す、上記１）から４）のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
６）下記式
【化６】
2009184924.tif 000011
［式中、Ｒ１０は、水素原子、水酸基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基を示し、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、前記の意味を有する。］で表される生物学的試薬用化合物である、上記１）から５）のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
７）タンパク質標識基が、光親和性標識基である、上記１）から６）のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
８）光親和性標識基が、ベンゾイル基、オキシラン基、アジド基、カルボニルアジド基、ジアジリジン基、エノン基、ジアゾ基、およびニトロ基から選ばれる、上記７）の生物学的試薬用化合物またはその塩。
９）Ａ２のリンカーが、Ｌ４−Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３−（ここにおいて、Ｌ４は置換基を有してもよいヘテロ環、Ｃ１−２０アルキレン基、Ｃ２−２０アルケニレン基、およびＣ２−２０アルキニレン基、Ｌ１およびＬ３はそれぞれ、単結合、−Ｏ−、−Ｓ−、Ｃ１−６アルキル基で置換されてもよい、−ＮＨ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−または
【化７】
2009184924.tif 000012
（ここで、Ｒ１１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基を示す）を示し；Ｌ２は、単結合、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−（ここで、ｐは１から２０の整数を示す）または−（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｑ−（ここで、ｑは１から２０の整数を示す）を示し；Ｌ３は、ハロゲン原子、水酸基、あるいはヘテロ環基であってもよく、Ｌ１およびＬ３は、隣接する基と環を形成していてもよい）である、上記１）から８）のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
１０）Ａ３の開裂可能なリンカーが、−Ｓ−Ｓ−、−Ｏ−Ｓｉ−Ｏ−または−糖残基−である、上記１）から９）のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
１１）Ａ４のフィッシングタグ基が、ビオチン、または３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３Ａ，４Ａ−ジアザ−４−ボラ−Ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル基である、上記１）から１０）のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
１２）Ａ４の検出可能なマーカーが、放射性標識基、蛍光標識基、化学発光基、重金属イオン、アジド基またはビオチン基である、上記１）から１０）のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
１３）下記の化合物からなる群から選ばれる、上記１）から１２）のいずれかの生物学的試薬用化合物もしくはその塩。
１）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［２−（（Ｅ）−３−｛４−［４−（（Ｓ）−１−｛３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリロイルアミノ）エチル］アミド、
２）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛１−｛２−｛２−｛２−｛２−｛３−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝−４−ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝エトキシ｝エトキシ｝エトキシ｝エチル｝−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルメチル｝アミド、
３）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛２−｛２−｛６−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシルカルバモイル｝エチルジスルファニル｝エチル｝アミド、
４）１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−［３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル］ピペラジン｝−１−イル｝−３−オキソプロペニル｝ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
５）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛２−｛３−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイル｝ピペラジン−１−イル｝−３−オキソプロピルジスルファニル｝エチル｝アミド、
６）（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−６−｛５−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイル｝ピペラジン−１−イル｝−５−オキソペンチル｝テトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−２−オン、
７）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛１−｛６−｛３−｛４−｛４−｛１−｛３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシル｝−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルメチル｝アミド、
８）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジルアミド、
９）６−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］吉草酸  ４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジルアミド、
１０）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルアミド、
１１）６−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］吉草酸  ｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルアミド、
１２）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝−Ｎ−｛２−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］エチル｝ベンズアミド、
１３）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝−Ｎ−｛２−｛２−｛２−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］エトキシ｝エトキシ｝エチル｝ベンズアミド、
１４）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［２−（３−｛４−［４−（２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［３−（（Ｒ）−メトキシ）−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）］−（Ｅ）−ベンジリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝−（Ｅ）−アクリロイルアミノ）エチル］アミド、
１５）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［５−（３−｛４−［（Ｒ）−４−（２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリロイルアミノ）ペンチル］アミド、
１６）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛１−（２−｛２−［２−（２−エトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミド｝−３−｛４−［４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）―メチリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリルアミド、および
１７）１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛３−［４，４−ジフルオロ−５−（１Ｈ−ピロール−２−イル）−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル］プロピオニル｝ピペラジン｝−１−イル｝−３−オキソプロペニル｝ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン。
１４）下記の化合物からなる群から選ばれる、上記１）から１２）のいずれかの生物学的試薬用化合物もしくはその塩。
１）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］ピペリジン−２−オン、
２）１−｛（Ｒ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］ピペリジン−２−オン、
３）（Ｅ）−３−｛４−［４−（（Ｓ）−１−｛３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニルアクリル酸  ターシャリブチルエステル、
４）（Ｅ）−Ｎ−｛２−｛２−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル｝−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド、
５）（Ｅ）−Ｎ−（６−アジドヘキシル）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド、
６）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
７）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
８）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−アミノメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
９）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルカルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
１０）３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−メチルアミノメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝ピペリジン−２−オン、
１１）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−アジドメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
１２）４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステル、
１３）４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸、および
１４）（Ｅ）−Ｎ−（２−｛２−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル）−３−｛４−［４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）―メチリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリルアミド。
【０００８】
更に、本発明は、以下の１５）から１８）のＡβタンパクの産成機構を解析する方法に関する。
１５）Ａβタンパクの産生機構を解析する方法であって、
ａ）Ａβタンパクの産生機構に関与するタンパクを含むと考えられる細胞もしくは細胞成分と、上記１）から１４）のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩とを接触させて、
ｂ）上記１）から１４）のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩と、Ａβタンパクの産生機構に関与する標的タンパクとの複合体を形成させ、次いで
ｃ）形成された生物学的試薬用化合物と標的タンパク質の複合体を解析し、標的タンパク質を同定する
ことを含む、Ａβタンパクの産生機構を解析する方法。
１６）上記１）から１４）のいずれかの生物学的試薬用化合物あってＡβタンパク産生を抑制する作用を有する生物学的試薬用化合物またはその塩とともに、上記１）から１４）のいずれかの生物学的試薬用化合物あってＡβタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩とを一緒に用いて、両者の生物学的試薬用化合物またはその塩について同様の方法を行って、両者を比較して、標的タンパク質を同定することを含む、上記１５）の方法。
１７）Ａβタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩が、式（ＩＩＩ）
【化８】
2009184924.tif 000013
［式中、Ｒ１０は、水素原子、水酸基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基を示し、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、前記の意味を有する。］で表される生物学的試薬用化合物またはその塩である、上記１６）の方法。
１８）式（Ｉ）で表される生物学的試薬用化合物または塩において、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３により構成される、Ａβタンパク産生を抑制する生物学的活性を発揮する部分の標的タンパクを検索して、Ａβタンパク産生の抑制機構を解析する、上記１５）から１７）のいずれかの方法。
【０００９】
更に、本発明は、以下の１９）のキットに関する。
１９）上記１）から１４）のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩を含む、Ａβタンパクの産生機構を解析するためのキット。
【００１０】
更に、本発明は、以下の２０）から２２）Ａβタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩に関する。
２０）式（Ｉ）において、Ｘ１が、−ＣＲ２−ＣＲ３−を示すか、あるいはＲ１および−Ｘ２−Ｘ３−Ａｒ３が、−Ｘ１−ＣＯ−Ｎと一緒になって、式（ＩＩ）で表される基を形成する（但し、式（ＩＩ）において、
2009184924.tif 000014
は単結合を示す）、生物学的試薬用化合物であってＡβタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩。
２１）式（ＩＩＩ）
【化９】
2009184924.tif 000015
［式中、Ｒ１０は、水素原子、水酸基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基を示し、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、前記の意味を有する。］で表される生物学的試薬用化合物またはその塩である、上記２０）の生物学的試薬用化合物またはその塩。
２２）下記の化合物である、上記２０）または２１）の生物学的試薬用化合物もしくはその塩。
５）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［２−（３−｛４−［４−（１−｛３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジル］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリロイルアミノ）エチル］アミド。
【００１１】
以下に、本明細書において用いられている各置換基または基の定義について、また、本発明の生物学的試薬用化合物、Ａβタンパクの産生機構を解析する方法、Ａβタンパクの産生機構を解析するためのキットについて詳細に説明する。
【００１２】
本明細書において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等を示し、好ましくはフッ素原子、塩素原子、臭素原子である。
【００１３】
「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数が１ないし６個のアルキル基を示し、好ましい基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ターシャリーブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、１−エチルプロピル基、１−メチル−２−エチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２−エチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基等の直鎖または分枝状アルキル基が挙げられる。
【００１４】
「Ｃ１−６アルコキシ基」とは、炭素数１ないしは６個のアルキル基の、水素原子が酸素原子に置換された基を示し、好ましい基としては、例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ターシャリーブトキシ基、ｎ−ペントキシ基、ｉ−ペントキシ基、ｓｅｃ−ペントキシ基、ターシャリーペントキシ基、ｎ−ヘキソキシ基、ｉ−ヘキソキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、２−エチルプロポキシ基、１−メチル−２−エチルプロポキシ基、１−エチル−２−メチルプロポキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２−メチルペントキシ基、３−メチルペントキシ基、ヘキシルオキシ基等が挙げられる。
【００１５】
「Ｃ１−６アルキルスルホニル基」とは、炭素数１ないしは６個のアルキル基において一つの水素原子がスルホニル基で置換された基を示し、好ましい基としては、例えばメタンスルホニル基、エタンスルホニル基等が挙げられる。
【００１６】
「アミノ基（該アミノ基は、Ｃ１−６アルキル基で置換されてもよい）」とは炭素数１ないしは６個のアルキル基が置換してもよいアミノ基を示し、好ましい基としては、例えばアミノ基、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ジメチルアミノ基等が挙げられる。
【００１７】
「Ｃ２−６アルケニル基」とは、炭素数が２ないし６個のアルケニル基を示し、好ましい基としては、例えばビニル基、アリル基、１−プロペニル基、イソプロペニル基、１−ブテン−１−イル基、１−ブテン−２−イル基、１−ブテン−３−イル基、２−ブテン−１−イル基、２−ブテン−２−イル基等の直鎖状または分枝鎖状のアルケニル基が挙げられる。
【００１８】
「Ｃ２−６アルキニル基」とは、炭素数が２ないし６個のアルキニル基を示し、好ましい基としては、例えばエチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル基、ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基等の直鎖状または分子鎖状のアルキニル基が挙げられる。
【００１９】
「Ｃ３−８シクロアルキル基」とは、炭素数３ないし８の環状アルキル基を示し、当該基における好ましい基としては、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基等が挙げられる。
【００２０】
「Ｃ１−６アルキルチオ基」とは、炭素数１ないしは６のアルキル基において、１つの水素原子が硫黄原子に置換された基を示し、好ましい基としては、例えばメチルチオ基、エチルチオ基、ｎ−プロピルチオ基、ｉ−プロピルチオ基、ｎ−ブチルチオ基、ｉ−ブチルチオ基、ターシャリーブチルチオ基、ｎ−ペンチルチオ基、ｉ−ペンチルチオ基、ネオペンチルチオ基、ｎ−ヘキシルチオ基、１−メチルプロピルチオ基等が挙げられる。
【００２１】
「Ｃ１−６アルキルスルフィニル基」とは、炭素数１ないしは６のアルキル基において、１つの水素原子がスルフィニル基に置換された基を示し、好ましい基としては、例えばメチルスルフィニル基、エチルメチルスルフィニル基、ｎ−プロピルスルフィニル基、ｉ−プロピルスルフィニル基、ｎ−ブチルスルフィニル基、ｉ−ブチルスルフィニル基、ターシャリーブチルスルフィニル基、ｎ−ペンチルスルフィニル基、ｉ−ペンチルスルフィニル基、ネオペンチルスルフィニル基、ｎ−ヘキシルスルフィニル基、１−メチルプロピルスルフィニル基等が挙げられる。
【００２２】
「Ｃ１−６アルキルカルボニル基」とは、炭素数１ないしは６個のアルキル基において一つの水素原子がカルボニル基で置換された基を示し、好ましい基としては、例えばアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基等が挙げられる。
【００２３】
「Ｃ３−８シクロアルコキシ基」とは、炭素数３ないし８の環状アルキル基において、一つの水素原子が酸素原子に置換された基を示し、当該基における好ましい基としては、例えばシクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペントキシ基、シクロヘキソキシ基、シクロヘプチロキシ基、シクロオクチロキシ基等が挙げられる。
【００２４】
「Ｃ３−８シクロアルキルチオ基」とは、炭素数３ないし８の環状アルキル基において、一つの水素原子が硫黄原子に置換された基を示し、当該基における好ましい基としては、例えばシクロプロピルチオ基、シクロブチルチオ基、シクロペンチルチオ基、シクロヘキシルチオ基、シクロヘプチルチオ基、シクロオクチルチオ基等が挙げられる。
【００２５】
「Ｃ１−６アルコキシイミノ基」とは、イミノ基の水素原子がＣ１−６アルコキシ基で置換された基を示し、好ましい基としては、例えばメトキシイミノ基、エトキシイミノ基等が挙げられる。
【００２６】
「Ｃ２−６アルケニルオキシ基」とは、炭素数が２ないし６個のアルケニル基において、一つの水素原子が酸素原子に置換された基を示し、好ましい基としては、例えばビニルオキシ基、アリルオキシ基、１−プロペニルオキシ基、イソプロペニルオキシ基、１−ブテン−１−イルオキシ基、１−ブテン−２−イルオキシ基、１−ブテン−３−イルオキシ基、２−ブテン−１−イルオキシ基、２−ブテン−２−イルオキシ基等の直鎖状または分枝鎖状のアルケニルオキシ基が挙げられる。
【００２７】
「Ｃ２−６アルキニルオキシ基」とは、炭素数２ないし６のアルキニル基において、一つの水素原子が酸素原子に置換された基を示し、当該基における好ましい基としては、エチニルオキシ基、１−プロピニルオキシ基、２−プロピニルオキシ基、ブチニルオキシ基、ペンチニルオキシ基、ヘキシニルオキシ基等の直鎖状または分岐状アルキニルオキシ基等が挙げられる。
【００２８】
「Ｃ３−８シクロアルキルスルフィニル基」とは、炭素数３ないし８の環状アルキル基において、一つの水素原子がスルフィニル基に置換された基を示し、当該基における好ましい基としては、例えばシクロプロピルスルフィニル基、シクロブチルスルフィニル基、シクロペンチルスルフィニル基、シクロヘキシルスルフィニル基、シクロヘプチルスルフィニル基、シクロオクチルスルフィニル基等が挙げられる。
【００２９】
「Ｃ３−８シクロアルキルスルホニル基」とは、炭素数３ないし８の環状アルキル基において、一つの水素原子がスルホニル基に置換された基を示し、当該基における好ましい基としては、例えばシクロプロピルスルホニル基、シクロブチルスルホニル基、シクロペンチルスルホニル基、シクロヘキシルスルホニル基、シクロヘプチルスルホニル基、シクロオクチルスルホニル基等が挙げられる。
【００３０】
「６ないし１４員環式芳香族炭化水素環基」とは、炭素数６ないし１４の単環式、二環式または三環式芳香族炭化水素環基を示し、当該基における好ましい基としては、例えばフェニル基、インデニル基、ナフチル基、アズレニル基、ヘプタレニル基、ビフェニル基、フルオレニル基、フェナレニル基、フェナントレニル基、アントラセニル基等の単環式、二環式または三環式の６ないし１４員環式芳香族炭化水素環基が挙げられる
【００３１】
「５ないし１４員芳香族複素環基」とは、炭素数５ないし１４の単環式、二環式または三環式芳香族複素環基を示し、当該基における好ましい基としては、例えば、ピロリル基、ピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、ピラゾリニル基、イミダゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、インドリル基、イソインドリル基、インドリジニル基、プリニル基、インダゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、キノリジニル基、フタラジニル基、ナフチリジニル基、キノキサリニル基、キナゾリニル基、シンノリニル基、プテリジニル基、イミダゾトリアジニル基、ピラジノピリダジニル基、アクリジニル基、フェナントリジニル基、カルバゾリル基、ペリミジニル基、フェナントロリニル基、フェナシル基等の含窒素芳香族複素環基；チエニル基、ベンゾチエニル基等の含硫黄芳香族複素環基；フリル基、ピラニル基、シクロペンタピラニル基、ベンゾフラニル基、イソベンゾフラニル基等の含酸素芳香族複素環基；チアゾリル基、イソチアゾリル基、ベンズチアゾリニル基、ベンズチアジアゾリル基、フェノチアジニル基、イソキサゾリル基、フラザニル基、フェノキサジニル基、ピラゾロオキサゾリル基、イミダゾチアゾリル基、チエノフリル基、フロピロリル基、ピリドオキサジニル基等の如く窒素原子、硫黄原子および酸素原子からなる群から選ばれる２個以上の異種原子を含んでなる芳香族複素環基が挙げられる。
【００３２】
「６ないし１４員非芳香族炭化水素環基」とは、６ないしは１４個の環状の脂肪族炭化水素基を示し、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、スピロ［３．４］オクタニル基、デカンニル基、インダニル基、１−アセナフテニル基、シクロペンタシクロオクテニル基、ベンゾシクロオクテニル基、インデニル基、テトラヒドロナフチル基、６，７，８，９−テトラヒドロー５Ｈ−ベンゾシクロヘプテニル基、１，４−ジヒドロナフタレニル基等、６ないし１４個の炭素原子からなる環状の脂肪族炭化水素基を意味する。
【００３３】
「５ないし１４員非芳香族複素環基」とは、１）環を構成する原子の数が５ないし１４であり、２）環を構成する原子中に１ないし５個の、例えば窒素原子、−Ｏ−または−Ｓ−等のヘテロ原子を含有し、３）環中に、一つまたは複数個の、カルボニル基、二重結合または三重結合を含んでいてもよく、５ないし１４員非芳香族複素単環基のみならず、芳香族炭化水素環基と縮合する飽和複素環基、または芳香族複素環基と縮合する飽和炭化水素環基もしくは飽和複素環基を示す。５ないし１４員非芳香族複素環基として具体的には例えばアゼチジニル環、ピロリジニル環、ピペリジニル環、アゼパニル環、アゾカニル環、テトラヒドロフラニル環、テトラヒドロピラニル環、モルホリニル環、チオモルホリニル環、ピペラジニル環、チアゾリジニル環、ジオキサニル環、イミダゾリニル環、チアゾリニル環、１，２−ベンゾピラニル環、イソクロマニル環、クロマニル環、インドリニル環、イソインドリニル環、アザインダニル基、アザテトラヒドロナフチル基、アザクロマニル基、テトラヒドロベンゾフラニル基、テトラヒドロベンゾチエニル基、２，３，４，５−テトラヒドローベンゾ［ｂ］チエニル基、３，４−ジヒドロー２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピニル基、インダンー１−オンイル基、６，７−ジヒドロー５Ｈ−シクロペンタピラジニル基、６，７−ジヒドロー５Ｈ−［１］ピリジニル基、６，７−ジヒドロー５Ｈ−［１］ピリジニル基、５，６−ジヒドロー４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チエニル基、４，５，６，７−テトラヒドローベンゾ［ｂ］チエニル基、３，４−ジヒドロー２Ｈ−ナフタレー１−オンイル基、２，３−ジヒドローイソインドールー１−オンイル基、３，４−ジヒドロー２Ｈ−イソキノリンー１−オンイル基、３，４−ジヒドロー２Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサピニル基等を意味する。
【００３４】
「ヘテロ環基」とは、５ないし１４員芳香族複素環基または５ないし１４員非芳香族複素環基を意味する。
【００３５】
「保護基を有する水酸基」における好ましい基としては、例えばメトキシメチルエーテル基、テトラヒドロピラニルエーテル基、ターシャリーブチルエーテル基、アリルエーテル基、ベンゾエート基、アセテート基、ホルメート基、クロトネート基、ｐ−フェニルベンゾエート基、ピバロエート基、ターシャリーブチルジメチルシリル基、ターシャリーブチルジフェニルシリル基、トリチル基、ベンジル基等が挙げられる。
【００３６】
「タンパク質標識基」とはタンパク質のアミノ酸残基と化学的に不可逆結合する基を意味する。このようなタンパク質標識基としては、例えば、光親和性標識基、化学親和性基などが挙げられる。具体的には、例えば、光親和性標識基としては、ベンゾイル基、ベンゾフェノン基、アジド基、カルボニルアジド基、ジアジリジン基、エノン基、ジアゾ基、ニトロ基等が挙げられる。化学親和性基としては、例えば、ハロゲン原子で置換されたケトン基、カルバモイル基あるいはエステル基、アルキルチオ基、オキシラン基等が挙げられる。なかでも光親和性標識基が好ましく、光親和性標識基としては、特に、ベンゾフェノン基、ベンゾイル基、アジド基、カルボニルアジド基、ジアジリジン基、エノン基、ジアゾ基、ニトロ基などが好ましい。
【００３７】
「タンパク質標識基を含む基」とは、上記したタンパク質標識基が、適当なリンカー（例えば、後述するＡ２ついてのリンカーなど）、６ないし１４員環芳香族炭化水素環基、あるいは５ないし１４員環芳香族複素環基を介して置換された、あるいは直接置換された、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、Ｃ２−Ｃ６アルケニル基、Ｃ２−Ｃ６アルキニル基、フェニル基、ナフチル基、ベンゾイル基などが挙げられる。
【００３８】
「固相担体と結合させる基」とは、官能基を有する固相担体と結合させることができる基を意味する。例えば、固相担体がアミノ基を有する場合には、カルボニル基、エステル基、カルボキシルキ基、イソシナネート基などが、固相担体がカルボキシル基を有する場合は、アミノ基などが、固相担体がアルケニル基あるいはアルキニル基を有する場合は、ハロゲン原子、メタンスルホネート基やアジド基などが、固相担体がハロゲン原子を有する場合は、アミノ基、水酸基、チオール基などが挙げられる。
【００３９】
本明細書において、置換基群Ａ１、置換基群Ａ２、置換基群Ａ３、置換基群Ａ４および置換基群Ａ５とは以下の基を示す。
【００４０】
置換基群Ａ１は、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基およびＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基およびＣ１−６アルキルカルボニル基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）、タンパク質標識基、タンパク質標識基を含む基および固相担体と結合させる基を示す。
【００４１】
置換基群Ａ２は、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、Ｃ１−６アルコキシ基（該Ｃ１−６アルコキシ基は、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基およびＣ３−８シクロアルキル基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基およびＣ２−６アルキニルオキシ基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基を示す。
【００４２】
置換基群Ａ３は、ハロゲン原子、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、ホルミル基、ハロゲン原子、水酸基、保護基を有する水酸基、シアノ基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ１−６アルキルスルフィニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、アミノ基（該アミノ基は、１ないし５のハロゲン原子を適宜有するＣ１−６アルキル基で置換されてもよい）、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員非芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基および−Ｘ−Ａ（ここにおいて、Ｘは、イミノ基、−Ｏ−または−Ｓ−を示し、Ａは、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、６ないし１４員芳香族炭化水素環基または５ないし１４員芳香族複素環基を示す）からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）およびＣ１−６アルコキシ基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基を示す。
【００４３】
置換基群Ａ４は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルチオ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ１−６アルキルスルフィニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、ヒドロキシイミノ基、Ｃ１−６アルコキシイミノ基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよいＣ１−６アルキル基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよいＣ１−６アルコキシ基、置換基群Ａ５から選択される１ないし２の置換基で置換されてもよいアミノ基、置換基群Ａ５から選択される１ないし２の置換基で置換されてもよいカルバモイル基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員非芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ２−６アルキニルオキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルスルフィニル基、Ｃ３−８シクロアルキルスルホニル基、−Ｘ−Ａ（ここにおいて、ＸおよびＡは、前記の意味を有する）、−ＣＯ−Ａ（ここにおいて、Ａは、前記の意味を有する）および＝ＣＨ−Ａ（ここにおいて、Ａは、前記の意味を有する）、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基を示す。
【００４４】
置換基群Ａ５は、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルチオ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ１−６アルキルスルフィニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、ヒドロキシイミノ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ２−６アルキニルオキシ基、Ｃ３−８シクロアルキルスルフィニル基およびＣ３−８シクロアルキルスルホニル基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基を示す。
【００４５】
次に、本発明の式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩について説明する。
【００４６】
式（Ｉ）において、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３により構成される、下記式
【化１０】
2009184924.tif 000016
［式中、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する、但し、Ｘ１は、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＲ２＝ＣＲ３−を示すか、あるいはＲ１および−Ｘ２−Ｘ３−Ａｒ３が、−Ｘ１−ＣＯ−Ｎと一緒になって、式（ＩＩ）で表される基を形成する（但し、式（ＩＩ）において、
2009184924.tif 000017
は二重結合を示す］で表される部分は、アミロイドベータタンパクの生成を抑制する生物学的活性を発揮する部分であり、上記したシンナミド化合物（特許文献１）に由来するものである。本発明においては、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３に、置換基として、タンパク質標識基、タンパク質標識基を含む基または固相担体と結合させる基が置換されていてもよい。
【００４７】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩においては、Ａｒ１は、置換基群Ａ１から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよいイミダゾリル基である。Ａｒ１は、置換基群Ａ１から選択される１ないし２の置換基で置換されてもよいイミダゾリル基が好ましく、Ａｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基およびＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、１ないし３のハロゲン原子で置換されてもよい）から選択される１ないし２の置換基で置換されてもよいイミダゾリル基、または、タンパク質標識基として、アジド基で置換されたイミダゾリル基がより好ましく、Ａｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ３−８シクロアルキル基およびＣ１−６アルキル基から選択される１ないし２の置換基で置換されてもよいイミダゾリル基が更に好ましい。
【００４８】
式（Ｉ）の生物学試薬用化合物またはその塩においては、Ａｒ２は、置換基群Ａ２から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、ピリジニル基、ピリミジニル基またはフェニル基である。Ａｒ２は、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基（該Ｃ１−６アルコキシ基は、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基およびＣ３−８シクロアルキル基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）、Ｃ２−６アルケニルオキシ基およびＣ２−６アルキニルオキシ基から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、ピリジニル基、ピリミジニル基またはフェニル基、または、タンパク質標識基を有する基として、オキシラン基を有するアルコキシ基が置換したピリジニル基、ピリミジニル基またはフェニル基がより好ましく、Ａｒ２が、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基およびＣ１−６アルコキシ基から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、ピリジニル基、ピリミジニル基またはフェニル基が更に好ましい。
また、式（Ｉ）の生物学試薬用化合物においては、Ａｒ２は、上記した置換基で置換されてもよい、ピリジニル基、ピリミジニル基またはフェニル基のうちでも、特に、Ａｒ２が、上記した置換基で置換されてもよい、フェニル基が好ましい。
【００４９】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ｘ１は、−Ｃ≡Ｃ−または−ＣＲ２＝ＣＲ３−（ここにおいて、Ｒ３およびＲ４は、置換基群Ａ３から選択される置換基を示す）である。Ｘ１は、−ＣＲ２１＝ＣＲ３１−（ここにおいて、Ｒ２１は、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基またはＣ１−６アルコキシ基であり、Ｒ３１は、水素原子、ハロゲン原子、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基またはＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、アミノ基（該アミノ基は、１ないし５のハロゲン原子を適宜有するＣ１−６アルキル基で置換されてもよい）、置換基群Ａ５から選択される１ないしは３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないしは３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基および−Ｏ−Ａ１（ここにおいて、Ａ１は、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基または置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基を示す）から選択される置換）がより好ましい。Ｘ１は、−ＣＲ２２＝ＣＲ３２−（ここにおいて、Ｒ２２は、水素原子またはハロゲン原子を示し、Ｒ３２は、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ３−８シクロアルキル基またはフェニル基で置換されてもよい）およびフェニル基からなる群から選択される１の置換基を示す）が更に好ましい。
【００５０】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ｒ１は、置換基群Ａ４から選択される基である。Ｒ１は、水素原子またはＣ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、水酸基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、Ｃ１−６アルキルチオ基、アミノ基（該アミノ基は、１ないし５のハロゲン原子を適宜有するＣ１−６アルキル基で置換されてもよい）、置換基群Ａ６から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員芳香族炭化水素環基、置換基群Ａ６から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員芳香族複素環基および置換基群Ａ６から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）が好ましい。ここで置換基群Ａ６は、
水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、１ないし５のハロゲン原子で置換されてもよい）およびＣ１−６アルコキシ基または６ないし１４員芳香族炭化水素環基を示す。
【００５１】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ｘ２は、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基で置換されていてもよい、Ｃ１−６アルキレン基（該Ｃ１−６アルキレン基は、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、ホルミル基、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、水酸基で置換されていてもよく、また、Ｃ１−６アルキレン基上の同一炭素原子に１または２置換することができ、２つの該Ｃ１−６アルキル基は結合する炭素原子と共に環状基（該環状基の環上メチレン基が１の酸素原子で置換されてもよい）を形成することができる）を形成してもよい）、Ｃ１−６アルコキシ基、アミノ基（該アミノ基は、Ｃ１−６アルキル基で置換されてもよい）および置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員非芳香族複素環基からなる群から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい）である。Ｘ２は、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、水酸基で置換されていてもよく、また、Ｃ１−６アルキレン基上の同一炭素原子に１または２置換することができ、２つの該Ｃ１−６アルキル基は結合する炭素原子と共に環状基（該環状基の環上メチレン基が１の酸素原子で置換されてもよい）を形成することができる）を形成してもよい）、またはタンパク質標識基として、ハロゲン原子で置換されたＣ１−６アルキル基が好ましく、特に、Ｘ２は、Ｃ１−６アルキレン基（該Ｃ１−６アルキレン基は、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、水酸基で置換されてもよい）で置換されてもよい）が好ましい。
【００５２】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ｘ３は、単結合、置換基群Ａ５から選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、−Ｏ−または−Ｓ−を示し、単結合、−Ｏ−が好ましい。
【００５３】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ａｒ３は、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい６ないし１４員環芳香族炭化水素基または置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい５ないし１４員環芳香族複素環基を示し、ここで、該芳香族炭化水素基および該芳香族複素環基は、これらの置換基とともに、または、これらの置換基に代って、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基で置換されていてもよい。Ａｒ３は、置換基群Ａ５から選択される１ないし３の置換基で置換されてもよい、フェニル基、ナフチル基、フルオレニル基、チエニル基、ピリジニル基、キノリニル基、イソキノリニル基、インドリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、フリル基が好ましい。
【００５４】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ｒ１および−Ｘ２−Ｘ３−Ａｒ３が、−Ｘ１−ＣＯ−Ｎと一緒になって、置換基群Ａ４から選択される１ないし４の置換基で置換されてもよい、式（ＩＩ）
【化１１】
2009184924.tif 000018
［式中、Ｒ４は置換基群Ａ３から選択される置換基を示し；
2009184924.tif 000019
は単結合または二重結合を示し；Ｚ１は、単結合、−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−（ここにおいて、ｎは、１ないし３の整数を示す）または−ＣＲ５Ｒ６（ここにおいて、Ｒ５およびＲ６は、下記置換基群Ａ４から選択される置換基を示す）を示し；Ｚ２は、単結合、−Ｏ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＣＳＮＲ−、−ＮＲＣＳ−（ここにおいて、Ｒは、下記置換基群Ａ４から選択される置換基を示す）または−Ｓ−を示し；Ｚ３は、単結合、下記置換基群Ａ４から選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、−（ＣＨ２）ｍ−（ここにおいて、ｍは、１ないし３の整数を示す）、−ＣＲ７Ｒ８−（ここにおいて、Ｒ７およびＲ８は、下記置換基群Ａ４から選択される置換基を示す）または−Ｏ−を示し；Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する。］で表される基を形成してもよく；
【００５５】
式（ＩＩ）は、置換基群Ａ５から選択される１ないし４の置換基で置換されてもよい、下記式
【化１２】
2009184924.tif 000020
［式中、Ｒ９は、置換基群Ａ４から選択される置換基を示し、Ｒ４、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する。］で表される環状基が好ましく、特に、式（ＩＩ）が、置換基群Ａ５から選択される１ないし４の置換基で置換されてもよい、下記式
【化１３】
2009184924.tif 000021
［式中、Ｒ４、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３は、前記の意味を有する。］で表される環状基が好ましい。
【００５６】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３により構成される部分は、下記式
【化１４】
2009184924.tif 000022
［式中、Ｒ１０は、水酸基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基を示し、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、前記の意味を有する。］で表される生物学的試薬用化合物における
対応する構成部分が好ましい。
【００５７】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ａ１は、単結合、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基を示す。
【００５８】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ａ２は単結合またはリンカーを示す。リンカーとは、当該分野でよく知られており、一例として、通常の結合手（例えば、エステル、アミド、カルバメート、エーテル、チオエーテル、ウレア、アミン基等を有するアルキル基、アリケニル基、アルキニル基を意味する。例えば、−Ｌ４−Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３−（ここにおいて、Ｌ４は置換基を有しても良いヘテロ環、Ｃ１−２０アルキル基、Ｃ２−２０アルケニル基、およびＣ２−２０アルキニル基、Ｌ１およびＬ３はそれぞれ、単結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ−、−ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＣ（Ｏ）Ｎ−、−ＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−または
【化１５】
2009184924.tif 000023
（ここで、Ｒ１１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基を示す）を示し；Ｌ２は、Ｃ２−２０アルキレン基、Ｃ２−２０アルケニルン基またはＣ２−２０アルキニレン基、あるいは−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−（ここで、ｐは１から２０の整数を示す）または−（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｑ−（ここで、ｑは１から２０の整数を示す）を示し；Ｌ３は単結合、ハロゲン原子、水酸基、ヘテロ環基であってもよく、Ｌ１およびＬ３は、隣接する基と環を形成していてもよい）で表されるリンカーが好ましく挙げられる。ここで、Ｌ３がヘテロ環基である場合のヘテロ環としては、例えば、トリアゾールなどが挙げられる。Ｌ１およびＬ３が、隣接する基と環を形成していてもよい場合としては、例えば、ピペラジン基などが挙げられる。
【００５９】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ａ３は単結合または開裂可能なリンカーを示す。開裂可能なリンカーとは、当該生物学的試薬用化合物が標的タンパク質と複合体を形成した後、その複合体から、フィッシングタグ基、検出可能なマーカー、あるいは固相担体を含まない部分を、化学反応、酵素反応などによって開裂することができるリンカーを意味する。リンカーを開裂させるための化学反応、酵素反応は、意図する結合の開裂に特異的であって、当該複合体上で意図しない反応が起こらないよう選択する。このような開裂可能なリンカーとしては、例えば、−Ｓ−Ｓ−、−Ｏ−Ｓｉ−Ｏ−、−糖残基−などが挙げられる。ここで、−糖残基−としては、具体的には、グルコース基、ガラクトース基等の単糖、あるいは、ラクトース等の二糖などが挙げられる。
【００６０】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、Ａ４はフィッシングタグ基、検出可能なマーカー、固相担体、または固相担体と結合させる基を示す。フィッシングタグ基とは、当該生物学的試薬用化合物と標的タンパク質との複合体を、複合体を形成していないタンパク質から分離するために用いる基のことを意味する。フィッシングタグ基としては、例えば、ビオチン、３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル基などが挙げられる。検出可能なマーカーとは、放射性標識、蛍光標識、化学発光標識、重金属イオンなどを意味する。検出可能なマーカーとしては、例えば、１２５Ｉ、３２Ｐ、３Ｈ、１４Ｃなどの放射性標識基；フルオレセイン、ローダミン、ダウンシル、ウンベリフェロン、７−ニトロフラザニル、３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル基などの蛍光標識基；ルミフェリン、ルミノールなどの化学発光基；ランタノイド金属イオン、ラジウムイオンなどの重金属イオンなどが挙げられる。固相担体とは、官能基を有するリンカーと結合させることができる固体の担体を意味する。固相担体としては、ガラスビーズ、ガラスベット、マイクロタイタープレート、アガロースビーズ、アガロースベッド、ポリスチレンビーズ、ポリスチレンベッド、ナイロンビーズ、ナイロンベッドなどが挙げられる。
【００６１】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物においては、例えば、Ａ１が単結合で、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３のいずれもが、置換基として、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基を有しない場合には、Ａ４は固相担体または固相担体を結合させる基であるのが、後述するＡβタンパクの生成機構を解明する方法において標的タンパクを検索するのに好ましい。その場合に、Ａ２はリンカーであるのが好ましい。
【００６２】
本発明の式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物は塩の形態であってもよい。具体的には、例えば、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩等のハロゲン化水素酸塩；硫酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩、炭酸塩、重炭酸塩等の無機酸塩；酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩等の有機カルボン酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩等の有機スルホン酸塩；アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等のアミノ酸塩；四級アミン塩；ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩などが挙げられる。
【００６３】
式（１）で表される生物学的試薬用化合物またはその塩としては、Ａ４がフィッシングタグ基として、ビオチンまたは３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル基を有するものが特に好ましく、具体例として以下の化合物を挙げることができる。
【００６４】
１）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［２−（（Ｅ）−３−｛４−［４−（（Ｓ）−１−｛３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリロイルアミノ）エチル］アミド、
２）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛１−｛２−｛２−｛２−｛２−｛３−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝−４−ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝エトキシ｝エトキシ｝エトキシ｝エチル｝−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルメチル｝アミド、
３）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛２−｛２−｛６−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシルカルバモイル｝エチルジスルファニル｝エチル｝アミド、
４）１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−［３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル］ピペラジン｝−１−イル｝−３−オキソプロペニル｝ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
５）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛２−｛３−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイル｝ピペラジン−１−イル｝−３−オキソプロピルジスルファニル｝エチル｝アミド、
６）（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−６−｛５−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイル｝ピペラジン−１−イル｝−５−オキソペンチル｝テトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−２−オン、
７）５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛１−｛６−｛３−｛４−｛４−｛１−｛３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシル｝−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルメチル｝アミド、
８）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジルアミド、
９）６−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］吉草酸  ４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジルアミド、
１０）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルアミド、
１１）６−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］吉草酸  ｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルアミド、
１２）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝−Ｎ−｛２−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］エチル｝ベンズアミド、
１３）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝−Ｎ−｛２−｛２−｛２−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］エトキシ｝エトキシ｝エチル｝ベンズアミド、
１４）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［２−（３−｛４−［４−（２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［３−（（Ｒ）−メトキシ）−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）］−（Ｅ）−ベンジリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝−（Ｅ）−アクリロイルアミノ）エチル］アミド、
１５）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［５−（３−｛４−［（Ｒ）−４−（２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリロイルアミノ）ペンチル］アミド、
１６）５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛１−（２−｛２−［２−（２−エトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミド｝−３−｛４−［４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）―メチリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリルアミド、および
１７）１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛３−［４，４−ジフルオロ−５−（１Ｈ−ピロール−２−イル）−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル］プロピオニル｝ピペラジン｝−１−イル｝−３−オキソプロペニル｝ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン。
【００６５】
式（１）で表される生物学的試薬用化合物またはその塩の、他の好ましい具体例として以下の化合物を挙げることができる。
【００６６】
１）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］ピペリジン−２−オン、
２）１−｛（Ｒ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］ピペリジン−２−オン、
３）（Ｅ）−３−｛４−［４−（（Ｓ）−１−｛３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニルアクリル酸  ターシャリブチルエステル、
４）（Ｅ）−Ｎ−｛２−｛２−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル｝−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド、
５）（Ｅ）−Ｎ−（６−アジドヘキシル）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド、
６）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
７）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
８）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−アミノメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
９）｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルカルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
１０）３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−メチルアミノメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝ピペリジン−２−オン、
１１）１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−アジドメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン、
１２）４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステル、
１３）４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸、および
１４）（Ｅ）−Ｎ−（２−｛２−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル）−３−｛４−［４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）―メチリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリルアミド。
【００６７】
以下に本発明の一般式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物の製造方法について説明する。
一般式（Ｉ）
【００６８】
【化１６】
2009184924.tif 000024
［式中、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｒ１、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は前記と同じ意味を示す。］で表される化合物は、例えば以下の一般的製造法１ないし３の方法に従って合成される。なお、都合よく本発明の化合物を製造するにあたり各工程で好適な当業者に公知の保護基（例えば、Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ．Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９８１年を参照）を選定し適宜保護反応工程及び脱保護反応工程を含むことはいうまでもない。
【００６９】
［一般的製造法１］
本発明に係る一般式（Ｉ）の化合物の代表的な［一般的製造法１］について以下に説明する。
【００７０】
【化１７】
2009184924.tif 000025
［式中、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｒ１、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は前記と同じ意味を有し、またＹ１、Ｙ２は水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子、トリフルオロメタンスルホン酸エステル基、トリメチルすず基等のアルキルすず基、ボロン酸基、ボロン酸エステル基、アセチレン基等のアルキン基、ビニル基等のアルケン基、アジド基、カルボキシル基、アミノ基、水酸基を示す。］
上記［一般的製造法１］は［工程１−３］に従い、化合物（４）と化合物（５）を縮合することにより一般式（Ｉ）の化合物を製造する方法の一例である。
【００７１】
［一般式（Ｉ）の化合物の調製］
一般式（Ｉ）の化合物は、［工程１−３］に従い化合物（４）と化合物（５）を縮合することにより調製することができる。すなわち、［工程１−３］は、出発原料によって異なるが、本反応様の条件であれば特に限定はされず、多くの文献に記載されている公知の手法を用いることができる。例えば、ｉ）カルボン酸化合物を酸ハロゲン化物に変換後、該酸ハロゲン化合物と塩基性条件でアミン化合物とを反応させる手法（例えば「日本化学会編新実験化学講座（第１４巻）有機化合物の合成と反応［ＩＩ］」、丸善株式会社、１９７８年、ｐ１１４２−１１４５に記載）、ｉｉ）縮合剤を使用してカルボン酸化合物とアミン化合物とを反応させる手法（例えば「有機化学実験の手引き［４］」、化学同人、１９９０年、ｐ２７−５２に記載）、ｉｉｉ）溝呂木−Ｈｅｃｋ反応（例えばＲ．Ｆ．Ｈｅｃｋ、「Ｏｒｇ．Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ．」、１９８２年、２７巻、ｐ．３４５を参照）、ｉｖ）鈴木−宮浦反応（例えばＡ．Ｓｕｚｕｋｉ、「Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．」、１９９５年、９５巻、ｐ．２４５７を参照）、ｖ）園頭反応（例えばＫ．Ｓｏｎｏｇａｓｈｉｒａ、「Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、１９９１年、３巻、ｐ．５２１を参照）、ｖｉ）Ｓｔｉｌｌｅカップリング反応（例えばＪ．Ｋ．Ｓｔｉｌｌｅ、「Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．」、１９８６年、２５巻、ｐ．５０８を参照）、ｖｉｉ）アミノ化反応（例えばＳ．Ｌ．Ｂｕｃｋｗａｌｄ、「Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．」、１９９６年、６１巻、ｐ．１１３３−１１３５を参照）及び（例えばＩ．Ａ．Ｐｅｒｉｌｌｏ、「Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．」、２００１年、３１巻、ｐ．６８５−６９５を参照）ｖｉｉｉ）アリールエーテル化反応（例えばＳ．Ｌ．Ｂｕｃｋｗａｌｄ、「Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．」、２００１年、１２３巻、ｐ．１０７７０−１０７７１を参照）等が挙げられる。
【００７２】
ｉ）は酸ハロゲン化反応とそれに続く縮合反応からなる。
酸ハロゲン化反応とは、化合物（４）（ここにおいて、Ｙ１はカルボキシル基を示す。）を酸ハロゲン化物に変換する手法である。本反応で使用される溶媒および反応温度は、出発原料により異なり特に限定されるものではないが、本反応様の条件であれば特に限定はされず、公知の手法を用いることができる。好ましくは、例えば、化合物（４）を、化合物（４）に対し１．０〜１０等量の塩化チオニル、塩化オキサリル等の塩素化剤を用いて溶媒中攪拌する手法が挙げられる。また効率よく反応を進行させるのに、適宜触媒量のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等を添加してもよい。使用する溶媒としては、出発原料により異なり、特に限定されるものではないが、好ましくは、例えば、塩化メチレン、トルエン、テトラヒドロフラン等の不活性溶媒である。反応温度は好ましくない副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは氷冷〜１００℃である。この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
続く縮合反応は、該酸ハロゲン化物を、酸ハロゲン化物に対して１．０〜１０．０等量の塩基存在下、酸ハロゲン化物に対して０．５−２．０等量の化合物（５）（ここにおいて、Ｙ２はアミノ基、水酸基を示す。）とを溶媒中攪拌する方法が挙げられる。使用される塩基は、出発原料により異なり特に限定されるものではないが、好ましくは、例えば、ピリジン、ルチジン、キノリン、イソキノリン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等である。使用される溶媒は、反応を阻害せず出発原料をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、塩化メチレン、トルエン、テトラヒドロフラン、１、４−ジオキサン、水等、または、その混合物である。また、塩基を溶媒として使用する場合もある。反応温度は好ましくない副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは氷冷〜１００℃である。この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、例えば、化合物（４）のＹ１がアミノ基、水酸基で、化合物（５）のＹ２がカルボキシル基の組み合わせであっても、効率よく所望の一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００７３】
ｉｉ）の場合、化合物（４）（ここにおいて、Ｙ１はカルボキシル基を示す。）を、化合物（４）に対して１．０−２．０当量の縮合剤の存在下、化合物（４）に対して、０．５−２．０当量の化合物（５）（ここにおいて、Ｙ２はアミノ基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する縮合剤としては、出発原料により異なり特に限定されるものではないが、好ましくは、例えば、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、または、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロりん酸塩等である。効率よく反応を進行させるために、好ましくは、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール等を、化合物（４）に対して１．０−２．０当量添加する場合もある。使用する溶媒としては、出発原料、使用する縮合剤により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン溶媒またはテトラヒドロフラン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド等の極性溶媒である。反応温度は好ましくない副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは、例えば、氷冷〜１００℃である。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、例えば、化合物（４）のＹ１がアミノ基、化合物（５）のＹ２がカルボキシル基の組み合わせであっても、効率よく所望の一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００７４】
ｉｉｉ）は溝呂木−Ｈｅｃｋ反応を用いた縮合反応である。溝呂木−Ｈｅｃｋ反応の場合、好ましくは、例えば、化合物（４）（ここにおいて、Ｙ１は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、または、トリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物（４）に対して０．０１〜０．２当量の遷移金属触媒存在下、化合物（４）に対して１．０〜５．０等量の化合物（５）（ここにおいて、Ｙ２はアルケン基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原料、使用する遷移金属触媒により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒としては、好ましくは、例えば、パラジウム錯体であり、より好ましくは、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等の公知のパラジウム錯体が挙げられる。また、効率よく反応が進行させるために、燐配位子（好ましくは、例えば、トリフェニルホスフィン、トリ−ｏ−トリールホスフィン、トリ−ターシャリーブチルホスフィン、２−（ジ−ターシャリーブチルホスフィノ）ビフェニル等）等を適宜添加場合がある。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルメチルアミン、テトラブチルアンモニウムクロリド等が挙げられる。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは、例えば、室温〜１５０℃である。本反応は、好ましくは、不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下で行う。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、例えば化合物（４）のＹ１がアルケン基、化合物（５）のＹ２が塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、または、トリフレート基等のスルホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００７５】
ｖｉ）は鈴木―宮浦反応を用いた縮合反応である。鈴木―宮浦反応の場合、好ましくは、例えば、化合物（４）（ここにおいて、Ｙ１は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物（４）に対して０．０１〜０．５当量の遷移金属触媒存在下、化合物（４）に対して１．０−２．０当量の化合物（５）（ここにおいて、Ｙ２はボロン酸またはボロン酸エステル等を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原料、使用する遷移金属触媒により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、水等、またはそれらの混合溶媒が挙げられる。使用する遷移金属触媒としては、好ましくは、例えば、公知のパラジウム錯体であり、より好ましくは、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等の公知のパラジウム錯体が挙げられる。また、効率よく反応を進行させるために、燐配位子（好ましくは例えばトリフェニルホスフィン、トリ−ｏ−トリルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ−ターシャリーブチルホスフィン等）等を適宜添加してもよい。また効率よく反応を進行させるために、例えば、４級アンモニウム塩、好ましくは、例えば、塩化テトラブチルアンモニウム、臭化テトラブチルアンモニウム等を適宜添加してもよい。本反応は塩基の存在下において好ましい結果を得ることができ、この際、使用する塩基としては、出発原料、使用する溶媒等により異なり特に限定されるものではないが、好ましくは、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化バリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム等が挙げられる。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは、例えば、室温〜溶媒の還流である。本反応は、好ましくは、例えば、不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下で行う。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、例えば化合物（４）のＹ１がボロン酸またはボロン酸エステル基であり、化合物（５）のＹ２が塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００７６】
ｖ）は園頭反応を用いた縮合反応である。園頭反応の場合、好ましくは、例えば、化合物（４）（ここにおいて、Ｙ１は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物［４］に対して０．０１〜０．５当量の遷移金属触媒存在下、化合物（４）に対して１．０当量以上の化合物（５）（ここにおいて、Ｙ２はアセチレン基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原料、使用する遷移金属触媒により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等が挙げられ、より好ましくは、例えば、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒としては、好ましくは、例えば、公知のパラジウム錯体であり、より好ましくは、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等の公知のパラジウム錯体が挙げられる。また、効率よく反応を進行させるために、燐配位子（好ましくは例えばトリフェニルホスフィン、トリ−ｏ−トリルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ−ターシャリーブチルホスフィン等）等を適宜添加してもよい。また、本反応は必要に応じて、ハロゲン化金属または四級アンモニウム塩等、好ましくは、例えば、ヨウ化銅（Ｉ）、塩化リチウム、フッ化テトラブチルアンモニウムまたは酸化銀（Ｉ）等を添加することもできる。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えることがあり、この際使用する塩基は、本反応様のカップリング反応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、ジエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピペリジン、ピリジン等が挙げられる。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜溶媒の還流である。本反応は、好ましくは、例えば、不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下で行う。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
【００７７】
ｖｉ）はＳｔｉｌｌｅ反応を用いた縮合反応である。Ｓｔｉｌｌｅ反応の場合、好ましくは、例えば、化合物（４）（ここにおいて、Ｙ１は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物（４）に対して０．０１〜０．５当量の遷移金属触媒存在下、化合物（４）に対して１当量以上の化合物（５）（ここにおいて、Ｙ２はトリアルキルすず基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。また、効率よく反応を進行させるために、化合物（４）に対して０．１〜５．０当量のハロゲン化銅（Ｉ）または／および塩化リチウムを適宜用いることも好ましい。使用する溶媒としては、出発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればとくに限定されないが、好ましくは、例えば、トルエン、キシレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒は、例えば、パラジウム錯体であり、好ましくは、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等の公知のパラジウム錯体が挙げられ、より好ましくは、例えば、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等が挙げられる。本反応は、好ましくは、例えば、不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下で行う。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜溶媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、例えば、化合物（４）のＹ１がトリアルキルすず基、化合物（５）のＹ２が塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００７８】
ｖｉｉ）は、１）遷移金属触媒を用いたアミノ化反応、あるいは、２）求核置換反応によるアミノ化反応が挙げられる。
１）の場合、好ましくは、例えば、化合物（４）（ここにおいて、Ｙ１は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物（４）に対して０．０１〜０．２当量の遷移金属触媒存在下、化合物（４）に対し１当量以上の化合物（５）（ここにおいて、Ｙ２はアミノ基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればとくに限定されないが、好ましくは、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒としては、例えば、パラジウム錯体であり、好ましくは、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等の公知のパラジウム錯体が挙げられ、より好ましくは、例えば、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等が挙げられる。また、効率よく反応を進行させるために、好ましくは、例えば、燐配位子（好ましくは、例えば、トリフェニルホスフィン、トリ−ｏ−トリールホスフィン、トリ−ターシャリーブチルホスフィン、２−（ジ−ターシャリーブチルホスフィノ）ビフェニル、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル、１，２−ビス（ジフェニルホスフィノ）エタンまたは１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン等）等を適宜添加することもある。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化バリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム、ナトリウムターシャリーブトキシド等が挙げられる。本反応は、好ましくは、例えば、不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下で行う。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜溶媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。また、本反応は、例えば、化合物（４）のＹ１がアミノ基、化合物（５）のＹ２が塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
２）の場合、好ましくは、例えば、化合物（４）（ここにおいて、Ｙ１は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物（４）に対して１．０−５．０等量の化合物（５）（ここにおいて、Ｙ２はアミノ基を示す。）を溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればとくに限定されないが、好ましくは、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等が挙げられる。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化バリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム、ナトリウムターシャリーブトキシド等が挙げられる。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜溶媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。また、本反応は、例えば、化合物（４）のＹ１がアミノ基、化合物（５）のＹ２が塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００７９】
ｖｉｉｉ）は、１）遷移金属触媒を用いたアリールエーテル化反応、あるいは、２）求核置換反応によるアリールエーテル化反応が挙げられる。
１）の場合、好ましくは、例えば、化合物（４）（ここにおいて、Ｙ１は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物（４）に対して０．０１〜０．２当量の遷移金属触媒存在下、化合物（４）に対して２当量以上の化合物（５）（ここにおいて、Ｙ２は水酸基を示す。）を溶媒中攪拌する手法が挙げられる、使用する溶媒としては、出発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればとくに限定されないが、好ましくは、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒は、例えば、パラジウム錯体であり、好ましくは、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等の公知のパラジウム錯体が挙げられ、より好ましくは、例えば、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等が挙げられる。また、効率よく反応を進行させるために、例えば、燐配位子（好ましくは、例えば、トリフェニルホスフィン、トリ−ｏ−トリールホスフィン、トリ−ターシャリーブチルホスフィン、２−（ジ−ターシャリーブチルホスフィノ）ビフェニル、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル、１，２−ビス（ジフェニルホスフィノ）エタン、［２’−（ジ−ターシャリブチルホスフィノ）］−２−ジメチルアミノ−１，１‘−ビナフチルまたは１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン等）等を適宜添加することもある。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化バリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム、ナトリウムターシャリーブトキシド等が挙げられる。本反応は、好ましくは、例えば、不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下で行う。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜溶媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。また、本反応は、例えば、化合物（４）のＹ１が水酸基、化合物（５）のＹ２が塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
２）の場合、好ましくは、例えば、化合物（４）（ここにおいて、Ｙ１は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物（４）に対して１．０−５．０等量の化合物（５）（ここにおいて、Ｙ２は水酸基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用される溶媒としては、出発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればとくに限定されないが、好ましくは、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等が挙げられる。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化バリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム、ナトリウムターシャリーブトキシド等があげられる。場合によっては、金属銅あるいはハロゲン化銅（好ましくは、例えば、塩化銅、ヨウ化銅等）を化合物（４）に対して０．１〜１０．０当量添加することで、良い結果を与える。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜溶媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。また、本反応は、例えば、化合物（４）のＹ１が水酸基、化合物（５）のＹ２が塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００８０】
［化合物（４）の調製］
化合物（４）は、国際公開第ＷＯ２００５／１１５９９０号パンフレットに記載の公知の方法によって製造することができる。例えば、下記スキームの方法で製造することができる。
【化１８】
2009184924.tif 000026
［式中、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｙ１およびＲ１は、前記の意味を有し、Ｖはメチル基、エチル基、ベンジル基、アリル基、トリフェニルメチル基、ターシャリーブチル基、メトキシメチル基またはターシャリーブチルジメチルシリル基等のカルボキシル基等の保護基を示す］
上記の反応スキームにおいて、脱保護およびアミド化反応は、それ自体公知の方法であり、国際公開第ＷＯ２００５／１１５９９０号パンフレットに記載の通常の方法により実施できる。
【００８１】
［化合物（５）の調整］
化合物（５）は市販されているか、または、市販されていない場合は、例えば、下記スキームの方法により合成することができる。
【００８２】
【化１９】
2009184924.tif 000027
［式中、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＹ２は前記と同じ意味を有し、Ｙ３ないしＹ８は水素原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、チオール等のスルフィド基、アジド、アセチレン基等のアルキン基、ビニル基等のアルケン基、フッ素原子や塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子、トリフレート基等のスルホネート基等を示す。あるいは、これらの官能基は適宜保護基有してもよい。］
化合物（５）は、化合物（ｄ）と化合物（ｅ）を［工程５−１］に従いカップリングし、化合物（ａ）とした後、化合物（ａ）と化合物（ｃ）を［工程５−２］に従いカップリングするにより調製することができる。あるいは、化合物（ｆ）と化合物（ｃ）を［工程５−２］に従いカップリングし、化合物（ｂ）に導いた後、化合物（ｂ）と化合物（ｄ）を［工程５−１］に従いカップリングすることにより同様に調製することができる。
【００８３】
すなわち、［工程５−１］および［工程５−２］のカップリング反応は、出発原料によって異なるが、本反応様の条件であれば特に限定はされず、多くの文献に記載されている公知の手法を用いることができる。例えば、ｉ）カルボン酸化合物を酸ハロゲン化物に変換後、該酸ハロゲン化合物と塩基性条件でアミン化合物とを反応させる手法（例えば「日本化学会編新実験化学講座（第１４巻）有機化合物の合成と反応［ＩＩ］」、丸善株式会社、１９７８年、ｐ１１４２−１１４５に記載）、ｉｉ）縮合剤を使用してカルボン酸化合物とアミン化合物とを反応させる手法（例えば「有機化学実験の手引き［４］」、化学同人、１９９０年、ｐ２７−５２に記載）、ｉｉｉ）ジスルフィド結合生成反応を用いる手法（例えばＭ．Ｏｈｔａｎｉ、「Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．」、１９９１年、５６巻、ｐ．５４７５を参照）、ｉｖ）Ｈｕｉｓｇｅｎ  １，３−ｄｉｐｏｌａｒ  ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎを用いる手法（例えばＫ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ、「Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．」、２００２年、４１巻、ｐ．２５９６を参照）、ｖ）固相Ｈｅｃｋ反応（例えばＤ．Ｊ．Ｍａｃｑｕａｒｒｉｅ、「Ｊ．Ｍａｔｅｒ．Ｃｈｅｍ．」、１９９７年、７巻、ｐ．２２０１を参照）等が挙げられる。
【００８４】
ｉ）の反応は、酸ハロゲン化反応とそれに続く縮合反応からなる。
酸ハロゲン化反応の場合、好ましくは、例えば、化合物（ｄ）、化合物（ａ）、または、化合物（ｆ）（ここにおいて、Ｙ３、Ｙ５およびＹ８はカルボキシル基を示す。）を化合物（ｄ）、化合物（ａ）あるいは化合物（ｆ）に対して１．０〜１０等量のハロゲン化剤とを溶媒中攪拌する方法が挙げられる。使用するハロゲン化剤は、出発原料により異なり、特に限定されないが、好ましくは、例えば、塩化チオニル、塩化オキサリル等である。使用される溶媒は、出発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればとくに限定されないが、好ましくは、例えば、塩化メチレン、トルエン、テトラヒドロフラン等の不活性溶媒である。効率よく反応を進行させるために、適宜触媒量のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等を添加する場合もある。反応温度は好ましくない副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは、例えば、氷冷〜１００℃である。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
続く縮合反応は、得られた酸ハロゲン化物を、酸ハロゲン化物に対して１．０〜１０．０等量の塩基存在下、酸ハロゲン化物に対して０．５−２．０等量の化合物（ｅ）、化合物（ｃ）あるいは化合物（ｂ）（ここにおいて、Ｙ４、Ｙ６、もしくはＹ７はアミノ基あるいは水酸基を示す。）とを溶媒中攪拌する方法が挙げられる。使用される塩基は、出発原料により異なり、特に限定されないが、好ましくは、例えば、ピリジン、ルチジン、キノリン、イソキノリン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等である。使用される溶媒は、反応を阻害せず出発原料をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、塩化メチレン、トルエン、テトラヒドロフラン、１、４−ジオキサン、水等、または、その混合物である。また、塩基を溶媒として使用する場合もある。反応温度は好ましくない副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは、例えば、氷冷〜１００℃である。この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。また、本反応は、カルボキシル基と、アミノ基または水酸基の組み合わせが逆の場合でも、効率よく所望のカップリング成績体を得ることができる。
【００８５】
ｉｉ）の場合、好ましくは、例えば、化合物（ｄ）、化合物（ａ）、または、化合物（ｆ）（ここにおいて、Ｙ３、Ｙ５およびＹ８はカルボキシル基を示す。）を、化合物（ｄ）、化合物（ａ）あるいは化合物（ｆ）に対して１．０〜２．０等量の縮合剤の存在下、化合物（ｄ）、化合物（ａ）あるいは化合物（ｆ）に対して０．５−２．０等量の化合物（ｅ）、化合物（ｃ）あるいは化合物（ｂ）（ここにおいて、Ｙ４、Ｙ６、もしくはＹ７はアミノ基あるいは水酸基を示す。）とを溶媒中攪拌する方法が挙げられる。使用する縮合剤としては、出発原料により異なり特に限定されるものではないが、好ましくは、例えば、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロりん酸塩等である。効率よく反応を進行させるために、好ましくは、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール等を１．０当量から２．０当量添加する場合もある。使用する溶媒としては、出発原料、使用する縮合剤により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン溶媒またはテトラヒドロフラン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド等の極性溶媒が挙げられる。反応温度は好ましくない副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは、例えば、氷冷〜１００℃である。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、カルボキシル基とアミノ基または水酸基の組み合わせが逆の場合であっても、効率よく所望のカップリング成績体を得ることができる。
【００８６】
ｉｉｉ）の場合、好ましくは、例えば、化合物（ｄ）（ここにおいて、Ｙ３はチオール基を示す。）を、化合物（ｄ）に対して１．０〜３．０当量のビス（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ジスルフィド等と処理し、活性ジスルフィド化合物にした後、得られた活性ジスルフィド化合物を、これに対して１．０〜３．０当量の化合物（ｅ）（ここにおいて、Ｙ４はチオール基を示す。）と反応させる手法を挙げることができる。本反応は、操作性・攪拌能率の観点から溶媒の存在下に行うことが好ましく、使用する溶媒としては、出発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等である。反応温度は好ましくない副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、室温〜１００℃である。好ましい反応条件では、この反応は３０分〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
ｉｉｉ）の反応は、化合物（ｆ）（ここにおいて、Ｙ８はチオール基を示す。）と化合物（ｃ）（ここにおいて、Ｙ６はチオール基を示す。）の組み合わせ、化合物（ａ）（ここにおいて、Ｙ５はチオール基を示す。）と化合物（ｃ）（ここにおいて、Ｙ６はチオール基を示す。）の組み合わせ、あるいは、化合物（ｂ）（ここにおいて、Ｙ４はチオール基を示す。）と化合物（ｄ）（ここにおいて、Ｙ３はチオール基を示す。）の組み合わせにおいても、効率よく所望のカップリング化合物を得ることができる。
【００８７】
ｉｖ）の場合、好ましくは、例えば、化合物（ｄ）（ここにおいて、Ｙ３はアジド基を示す。）を、化合物（ｄ）に対して０．０１〜１当量の金属触媒存在下、化合物（ｄ）に対して１．０〜５．０等量の化合物（ｅ）（ここにおいて、Ｙ４はアルキン基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する金属触媒としては、好ましくは、例えば、硫酸銅（ＩＩ）、ヨウ化銅（Ｉ）、臭化銅（Ｉ）および塩化銅（Ｉ）などが挙げられる。また、効率よく反応を進行させるために、アスコルビン酸やアスコルビン酸ナトリウムを適宜添加することもある。使用する溶媒としては、出発原料、使用する金属触媒により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、水、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、メタノール、ターシャリブチルアルコール、ジクロロメタン、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等が挙げられる。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜１５０℃である。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルメチルアミン、２，６−ルチジン等が挙げられる。好ましい反応条件では、この反応は１〜３６時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、化合物（ｆ）（ここにおいて、Ｙ８はアジド基を示す。）と化合物（ｃ）（ここにおいて、Ｙ６はアルキン基を示す。）の組み合わせ、化合物（ａ）（ここにおいて、Ｙ５はアジド基を示す。）と化合物（ｃ）（ここにおいて、Ｙ６はアルキン基を示す。）の組み合わせ、あるいは、化合物（ｂ）（ここにおいて、Ｙ４はアルキン基を示す。）と化合物（ｄ）（ここにおいて、Ｙ３はアジド基を示す。）の組み合わせにおいても、効率よく所望のカップリング成績体を得ることができる。
また、本反応は、アジド基とアルキン基の組み合わせが逆の場合においても、効率よく所望のカップリング成績体を得ることもできる。
【００８８】
ｖ）の場合、好ましくは、例えば、化合物（ｄ）（ここにおいて、Ｙ３は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物（ｄ）に対して０．１〜１．０当量の遷移金属触媒存在下、化合物（ｄ）に対して１．０〜５．０等量の化合物（ｅ）（ここにおいて、Ｙ４はアルケン基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればとくに限定されないが、好ましくは、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒としては、出発原料により異なり、特に限定されないが、好ましくは、例えば、パラジウム錯体であり、より好ましくは、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）等の公知のパラジウム錯体が挙げられる。また、効率よく反応を進行させるために、好ましくは、例えば、燐配位子（好ましくは、例えば、トリフェニルホスフィン、トリ−ｏ−トリールホスフィン、トリ−ターシャリーブチルホスフィン、２−（ジ−ターシャリーブチルホスフィノ）ビフェニル、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル、１，２−ビス（ジフェニルホスフィノ）エタンまたは１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン等）等を適宜添加することもある。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化バリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム、ナトリウムターシャリーブトキシド等が挙げられる。本反応は、好ましくは、例えば、不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下で行う。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜溶媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は１〜２４時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または／および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
本反応は、化合物（ｆ）（ここにおいて、Ｙ８は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）と化合物（ｃ）（ここにおいて、Ｙ６はアルケン基を示す。）との組み合わせ、化合物（ａ）（ここにおいて、Ｙ５は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）と化合物（ｃ）（ここにおいて、Ｙ６はアルケン基を示す。）の組み合わせ、あるいは、化合物（ｂ）（ここにおいて、Ｙ７は塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）と化合物（ｄ）（ここにおいて、Ｙ３はアルケン基を示す。）の組み合わせにおいても、効率よく所望のカップリング成績体を得ることができる。
また、塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基等の脱離基とアルケン基の逆の組み合わせにおいても、効率よく所望のカップリング成績体を得ることができる。
さらに、Ａ４が固相担体の場合は、反応が完結した後、固相担体を溶媒と混合し、均一化させた後、濾過する操作を繰り返すことにより、簡便に精製操作を行うことができる。
本工程で使用される化合物（ｄ）、化合物（ｃ）、化合物（ｆ）および化合物（ｅ）は市販されているか、市販されている原料を、当業者公知の保護・脱保護反応（例えば、Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ．Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９８１年を参照）に付すことにより調製することができる。
【００８９】
［一般的製造法２］
本発明に係る一般式（Ｉ）の化合物の代表的な［一般的製造法２］について以下に説明する。
【００９０】
【化２０】
2009184924.tif 000028
［式中、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｒ１、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は前記と同じ意味を有し、Ｙ９，Ｙ１０，Ｙ１１，Ｙ１２およびＹ１３は水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子、トリフルオロメタンスルホン酸エステル基、トリメチルすず基等のアルキルすず基、ボロン酸基、ボロン酸エステル基、アセチレン基等のアルキン基、ビニル基等のアルケン基、アジド基、カルボキシル基、アミノ基、水酸基，チオール等のスルフィド基を示す。］
【００９１】
［一般式（Ｉ）の化合物の調製］
上記［一般的製造法２］は別法として一般式（Ｉ）の調製法の一例を示すものである。すなわち、前記［工程１−３］の方法に従い、化合物（４）と化合物（ｇ）を縮合し、化合物（ｈ）に導き、前記［工程５−１］に従い、化合物（ｈ）と化合物（ｉ）を縮合し、化合物（ｊ）とし、前記［工程５−２］に従い、化合物（ｊ）と化合物（ｋ）を縮合することにより一般式（Ｉ）の化合物を製造する方法を示すものである。本工程様の条件であれば特に限定はされず、多くの文献に記載されている公知の手法を用いることができる（例えば、Ｙ．Ｆｅｎｇ、「Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．」、１９９８年、８巻、ｐ８８１−８８４）。
本工程で使用される化合物（ｇ）、化合物（ｉ）、化合物（ｋ）は市販されているか、市販されている原料を、当業者公知の保護・脱保護反応（例えば、Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ．Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９８１年を参照）に付すことにより調製することができる。
【００９２】
［一般的製造法３］
本発明に係る一般式（Ｉ）の化合物の代表的な［一般的製造法３］について以下に説明する。
【００９３】
【化２１】
2009184924.tif 000029
［式中、Ａｒ１、Ａｒ２、Ａｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｒ１、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｙ１０は前記と同じ意味を有し、Ｙ１４、Ｙ１５，およびＹ１６は、水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子、トリフルオロメタンスルホン酸エステル基、トリメチルすず基等のアルキルすず基、ボロン酸基、ボロン酸エステル基、アセチレン基等のアルキン基、ビニル基等のアルケン基、アジド基、カルボキシル基、アミノ基、水酸基，チオール等のスルフィド基を示す。］
【００９４】
［一般式（Ｉ）の化合物の調製］
上記［一般的製造法３］は別法として一般式（Ｉ）の調製法の一例を示すものである。すなわち、前記［工程５−２］に従い、化合物（ｌ）と化合物（ｍ）を縮合し、化合物（ｎ）に変換後、化合物（ｎ）を、前記［工程５−１］に従い、前記化合物（ｈ）と縮合することにより、一般式（Ｉ）の化合物を製造する方法を示すものである。本工程様の条件であれば特に限定はされず、多くの文献に記載されている公知の手法を用いることができる（例えば、Ｐ．Ｊ．ＤｅＬａＬｕｚ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．」、１９９５年、６巻、ｐ５５８−５６６）。
本工程で使用される化合物（ｌ）、および、化合物（ｍ）は市販されているか、市販されている原料を、当業者公知の保護・脱保護反応（例えば、Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ．Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９８１年を参照）に付すことにより調製することができる。
【００９５】
本発明では、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩を利用して、Ａβタンパクの産生機構を解析することができる。すなわち、本発明により、Ａβタンパクの産生機構を解析する方法であって、
ａ）Ａβタンパクの生成機構に関与するタンパクを含むと考えられる細胞もしくは細胞成分と、本発明の式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩とを接触させて、
ｂ）式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物と、Ａβタンパクの生成機構に関与する標的タンパクとの複合体を形成させ、次いで
ｃ）形成された生物学的試薬用化合物と標的タンパクとの複合体を解析し、標的タンパク質を同定する
ことを含む、Ａβタンパクの産成機構を解析する方法が提供される。
この方法により、式（ＩＩＩ）で表される、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３により構成される、Ａβタンパク生成を抑制する生物学的活性を発揮する化合物、すなわち、シンナミド化合物の標的タンパクを検索して、Ａβタンパク産生の抑制機構を解析することができる。
【００９６】
ここで用いる、Ａβタンパクの産生機構に関与するタンパクを含むと考えられる細胞あるいは細胞成分としては、Ａβタンパクを産生することが知られている細胞あるいは細胞成分が挙げられる。具体的には、そのような細胞自体あるいは細胞を破壊して得られる細胞膜の懸濁液を用いるのが好ましい。その細胞あるいは懸濁液と式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩とを混合して、インキュベートすることにより、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩が、Ａβタンパクの生成機構に関与する標的タンパクと可逆的に結合する。そして、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩におけるタンパク質標識基と、可逆結合した標的タンパクとが、更に非可逆な共有結合する。タンパク質標識基として、光親和性標識基を用いた場合には、インキュベートした後に、光照射することにより、可逆的結合した標的タンパク質と光親和性標識基とが光反応によりクロスリンクする。次いで、標的タンパク質が結合した式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩を、例えば、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩におけるＡ４としてビオチンを用いた場合には、アビジン、ストレプトアビジンなどを結合したアガロースゲルと混合して、標的タンパクが結合した式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩を捕捉、採取し、次いで、適当な緩衝液で処理して、アガロースゲルから遊離させ、標的タンパクが結合した式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩をウエスタンブロッティングに付して、標的タンパクの同定を行うことができる。これらの方法の際に、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩におけるＡ３として開裂可能なリンカーを使用した場合には、アフィニティーカラムなどに捕捉、採取された標的タンパクが結合した式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩を、開裂可能なリンカーを開裂させることにより、標的タンパクが結合した部分を遊離させることもできる。
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩におけるＡ４として、ビオチン以外の他のフィッシングタグ基あるいは固相担体と結合させる基を用いた場合も、上記したとほぼ同様にして、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩に結合した標的タンパクの同定や解析などの検索を行うことができる。
【００９７】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩におけるＡ４として、検出可能なマーカーを用いた場合には、Ａβタンパクの生成機構に関与するタンパクを含むと考えられる細胞あるいは細胞成分と、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩とを接触させた後に、標的タンパクが結合した式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩を、例えば、二次元電気泳動に付し、その後に、Ａ４の標識基に基いて、標的タンパクの単離／分離・同定を行うことができる。
【００９８】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩におけるＡ４として、固相担体を用いた場合には、固相担体を含む式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩をアフィニティーカラムとして利用した、アフィニティーカラムクロマトグラフィーにより、標的タンパクが結合した式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩を捕捉、採取して、標的タンパクの同定を行うことができる。この方法は、式（Ｉ）において、Ａ１が単結合で、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ１、Ｒ１、Ｘ２、Ｘ３およびＡｒ３のいずれもが、置換基として、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基を有しない、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩を用いた場合にも、同様に採用できる。あるいは、アビジン、ストレプトアビジンなどを担体に結合したアビジンカラムを用いたアフィニティーカラムクロマトグラフィーに、標的タンパクが結合した式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩を付して、標的タンパクが結合した式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩を捕捉、採取することもできる。
【００９９】
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩におけるＡ４として、固相担体と結合させる基を用いた場合には、例えば、固相担体と結合させる基としてアジド基を用い、固相担体として、アセチレン基を有する固相担体を用いて、それらを反応させて、標的タンパク質と式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩との複合体を固相担体に結合させ、次いで固相担体から単離する方法が挙げられる。アジド基以外の他の固相担体と結合させる基を用いた場合にも、その基と結合する基を有する固相担体とを用いて、同様に、行うことができる。
式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩におけるＡ４が、水素原子である場合には、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩分子中に存在し得る、例えば、分子末端部分のアセチレン基やビニル基などの固相担体と結合する基を利用し、その基と結合する基を有する固相担体とを反応させて、標的タンパク質と式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩との複合体を固相担体に結合させ、次いで固相担体から単離する方法が挙げられる。あるいは、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩における、Ａｒ１の置換基群Ａ１が固相担体と結合する基である場合には、その基と、それに結合する基を有する固相担体とを反応させることによって、同様に、標的タンパク質と式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩との複合体を固相担体に結合させ、次いで固相担体から単離することができる。
【０１００】
上記した本発明のＡβタンパクの産生機構を解析する方法においては、式（１）で表される生物学的試薬用化合物あってＡβタンパク産生を抑制する作用を有する生物学的試薬用化合物またはその塩とともに、式（１）で表される生物学的試薬用化合物あってＡβタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩とを一緒に用いて、両者の生物学的試薬用化合物またはその塩について同様の方法を行って、両者を比較して、標的タンパク質を同定することにより、標的タンパク質をより効率良く、正確に同定できる。
【０１０１】
式（Ｉ）において、Ｘ１が、−ＣＲ２−ＣＲ３−を示すか、あるいはＲ１および−Ｘ２−Ｘ３−Ａｒ３が、−Ｘ１−ＣＯ−Ｎと一緒になって、式（ＩＩ）で表される基を形成する（但し、式（ＩＩ）において、
2009184924.tif 000030
は単結合を示す）化合物が、生物学的試薬用化合物であってＡβタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩である。
Ａβタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩としては、式（ＩＩＩ）
【化２２】
2009184924.tif 000031
［式中、Ｒ１０は、水素原子、水酸基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基を示し、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、前記の意味を有する。］で表される生物学的試薬用化合物またはその塩が好ましい。
このような化合物の好ましい具体例としては、例えば、以下の化合物が挙げられる。
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ［２−（３−｛４−［４−（１−｛３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジル］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル）ベンゾイル］フェニル｝アクリロイルアミノ）エチル］アミド、
【０１０２】
更に、本発明では、式（１）の生物学的試薬用化合物またはその塩を含む、Ａβタンパクの産成機構を解析するためのキットが提供される。このキットには、必要に応じて、標的タンパクを同定や解析するための他の試薬、例えば、ガンマセレクターゼ、ベータセレクターゼなどに対する抗体、それらの構成成分であるプレセニリン、ニカストリンなどに対する抗体を含んでいてもよい。また、アッセイ系に通常用いられる、標識基を検出するための試薬、緩衝液、界面活性剤などを含んでいてもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１０３】
以下、本発明を実施例および試験例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例および試験例によって何ら制限されるものではない。
【０１０４】
以下の実施例においては下記の略号を使用する。
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＥＤＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ＨＯＢＴ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ｔ：ターシャリ
ｓｅｃ：セカンダリ
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
クロマトグラフィーに関して、特に記載のない場合は、担体として冨士シリシア製ＢＷ−３００を用いた。
ＬＣ−ＭＳ：マススペクトルを用いて目的化合物を分取する高圧液体クロマトグラフィー。溶出溶媒として、０．１％トリフルオロ酢酸含有水と０．１％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリルの１０％から９９％のリニアグラジエントシステムを用いた。
【０１０５】
実施例１および実施例２
１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンおよび１−｛（Ｒ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの合成
【０１０６】
【化２３】
2009184924.tif 000032
【０１０７】
１−（４−エチルベンゾイル）−４−ヨードベンゼンの合成
４−ヨード塩化ベンゾイル（２ｇ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液に、トリノルマルブチルホスフィン（２．０６ｍＬ）を−２０℃で滴下した。その反応液を−２０℃で２０分撹拌した後、反応液に４−エチルフェニル臭化マグネシウム（１５ｍＬ：０．５Ｍ  ＴＨＦ溶液）を加え、さらに、反応液を１０分間−２０℃で撹拌した後、反応液を１規定塩酸水溶液とジエチルエーテルの混合液に加え、有機層を分配した。水層にジエチルエーテルを加え、有機層を分配した。有機層を合わせて、飽和炭酸ナトリウム水溶液および飽和食塩水の順で洗浄し、得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）で精製し、標題化合物を２．１１ｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．２９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ），２．７４（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．０Ｈｚ，２Ｈ）．
【０１０８】
［４−（１−アジドエチル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノンの合成
１−（４−エチルベンゾイル）−４−ヨードベンゼン（５００ｍｇ）とＮ−ブロモサクシイミド（２９２ｍｇ）の四塩化炭素（７０ｍＬ）溶液に、２，２′−アゾビスイソブチロニトリル（１４．７ｍｇ）を室温で加え、その反応液を窒素気流下１００℃で１２時間攪拌した。この反応液を室温に戻した後、溶媒を減圧下濃縮した。得られた残渣にＤＭＳＯ（３ｍＬ）とアジ化ナトリウム（１１６ｍｇ）を加え、その混合物を室温で３時間攪拌した。反応液に水とジエチルエーテルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）で精製し、標題化合物を４９０ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．２９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），４．７２（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１．６Ｈｚ，２Ｈ），７．５２（ｄｄ，Ｊ＝６．４，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１．６Ｈｚ，２Ｈ），７．８６（ｄｄ，Ｊ＝６．４，２．０Ｈｚ，２Ｈ）．
【０１０９】
［４−（１−アミノエチル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノンの合成
［４−（１−アジドエチル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノン（４９０ｍｇ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に、トリフェニルホスフィン（５１０ｍｇ）と水（１ｍＬ）を室温で加え、その反応液を６０℃で２時間攪拌した。この反応液を室温まで戻した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム−メタノール系）で精製し、標題化合物を３９８ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．２７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），４．０６（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１．６Ｈｚ，２Ｈ），７．５５（ｄｄ，Ｊ＝６．４，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１．６Ｈｚ，２Ｈ），７．９５（ｄｄ，Ｊ＝６．４，２．０Ｈｚ，２Ｈ）．
【０１１０】
５−クロロ−２−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝吉草酸  ｛１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝アミドの合成
５−クロロ−２−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝吉草酸  トリフルオロ酢酸塩（３００ｍｇ）と［４−（１−アミノエチル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノン（３５２ｍｇ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＥＤＣ（３８４ｍｇ）、ＨＯＢＴ（２７１ｍｇ）およびＩＰＥＡ（０．５８２ｍＬ）を順次加え、その反応溶液を室温で１２時間攪拌した。反応液に酢酸エチルおよび水を加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン：酢酸エチル１：３）で精製することにより、標題化合物を３６６ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．６２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．９７−２．０４（ｍ，２Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），２．７４（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），５．２９（ｄｑ，Ｊ＝８．０，６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．５６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９３−６．９７（ｍ，３Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４７−７．５３（ｍ，４Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．０Ｈｚ，２Ｈ）．
【０１１１】
１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンおよび１−｛（Ｒ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの合成
５−クロロ−２−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝吉草酸  ｛１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝アミド（４１０ｍｇ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、その反応液に水素化ナトリウム（６０％ミネラルオイル含有、３６．８ｍｇ）を加え、その反応液を室温で１時間攪拌した。この反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸エチル）で精製することにより、標題化合物のラセミ体を３２５ｍｇ得た。得られたラセミ体（３２５ｍｇ）をダイセル製ＣＨＩＲＡＬＣＥＬＴＭ  ＯＤ（２ｃｍ×２５ｃｍ：移動相；エタノール）にて分取し、保持時間７．６分の標題光学活性体（１２５ｍｇ；＞９９％ｅｅ）および保持時間１９．２分の標題光学活性体（１１７ｍｇ；＞９９％ｅｅ）を得た。保持時間７．６分の表題光学活性体の物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．６３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．７５（ｍ，１Ｈ），１．８７（ｍ，１Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｍ，１Ｈ），２．８６（ｍ，１Ｈ），２．９９（ｍ，１Ｈ），３．３２（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），６．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５２（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１．６Ｈｚ，２Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１．６Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｓ，１Ｈ）．
保持時間１９．２分の標題光学活性体の物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．６３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．７５（ｍ，１Ｈ），１．８７（ｍ，１Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｍ，１Ｈ），２．８６（ｍ，１Ｈ），２．９９（ｍ，１Ｈ），３．３２（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），６．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５２（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１．６Ｈｚ，２Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１．６Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｓ，１Ｈ）．
【０１１２】
実施例３
（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリル酸  ターシャリブチルエステルの合成
【０１１３】
【化２４】
2009184924.tif 000033
【０１１４】
１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン（３０ｍｇ）とアクリル酸ターシャリブチルエステル（６９．３ｕＬ）およびＴＥＡ（１９．９ｕＬ）のＤＭＦ（７５０ｕＬ）溶液に、酢酸パラジウム（２．１３ｍｇ）およびトリオルトトリルホスフィン（５．７９ｍｇ）を順次加え、その反応液を窒素気流下７０℃で１時間攪拌した。その混合物を室温に戻した後、飽和塩化アンモニア水溶液と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒ヘプタン：酢酸エチル１：１）で精製することにより、標題化合物を２４ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５５（ｓ，９Ｈ），１．６３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．７５（ｍ，１Ｈ），１．８６（ｍ，１Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），２．７９（ｍ，１Ｈ），２．８６（ｍ，１Ｈ），３．０１（ｍ，１Ｈ），３．３１（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），６．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７０−７．８４（ｍ，５Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ）．
【０１１５】
実施例４
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛２−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−［１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝エチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩
【０１１６】
【化２５】
2009184924.tif 000034
【０１１７】
（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリル酸  ターシャリブチルエステル（１５ｍｇ）の塩化メチレン（０．５ｍＬ）溶液に、０℃でトリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得られた残渣のＤＭＦ（０．８ｍＬ）溶液に、ビオチン−エチレンジアミン臭化水素酸塩（１７．４ｍｇ）とＥＤＣ（１８．２ｍｇ）とＨＯＢＴ（１６ｍｇ）およびＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）を順次加え、その反応液を室温で１２時間撹拌した。この反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水および飽和食塩水の順で洗浄し、減圧下濃縮した。残渣をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物を９．２ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．３８−１．４２（ｍ，２Ｈ），１．５１−１．８１（ｍ，４Ｈ），１．６７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．９０（ｍ，１Ｈ），２．２１（ｍ，２Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．６６（ｍ，１Ｈ），２．８５（ｍ，３Ｈ），３．０５−３．２０（ｍ，２Ｈ），３．２９−３．４５（ｍ，６Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．２５（ｍ，１Ｈ），４．４３（ｍ，１Ｈ），６．１６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５２−７．６５（ｍ，６Ｈ），７．７１−７．８２（ｍ，６Ｈ），９．１６（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）．
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ  ８４４［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１１８】
実施例５
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛２−｛３−｛４−｛４−｛１−｛３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジル］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝エチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩
【０１１９】
【化２６】
2009184924.tif 000035
【０１２０】
５−クロロ−２−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジル］吉草酸  トリフルオロ酢酸塩の合成
５−クロロ−２−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝吉草酸  トリフルオロ酢酸塩（５００ｍｇ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に、パラジウム炭素（１１．８ｍｇ）を加え、その混合液を水素気流下室温で２時間攪拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を減圧下濃縮することにより、標題化合物を４８４ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．５９−１．８０（ｍ，４Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．７４（ｍ，１Ｈ），２．８４（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．９３（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ），３．６２−３．６７（ｍ，２Ｈ），６．９９（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ），９．３０（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）．
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ  ３３７［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１２１】
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛２−｛３−｛４−｛４−｛１−｛３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジル］−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝エチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩
実施例１と同様にして５−クロロ−２−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジル］吉草酸  トリフルオロ酢酸塩（１５０ｍｇ）と［４−（１−アミノエチル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノン（１７６ｍｇ）から標題化合物を１７．３ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．３８−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．５１−１．７８（ｍ，６Ｈ），１．６０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．９０（ｍ，１Ｈ），２．２２（ｍ，２Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．６６（ｍ，１Ｈ），２．７４−３．０７（ｍ，４Ｈ），３．１３−３．３０（ｍ，３Ｈ），３．３４−３．４５（ｍ，５Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），４．２４（ｍ，１Ｈ），４．４４（ｍ，１Ｈ），６．１５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），７．４０−７．５４（ｍ，４Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７０−７．８１（ｍ，６Ｈ），９．０９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）．
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ  ８４６［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１２２】
実施例６
（Ｅ）−Ｎ−｛２−｛２−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル｝−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミドの合成
【０１２３】
【化２７】
2009184924.tif 000036
（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニルアクリル酸  ターシャリブチルエステル（３７ｍｇ）の塩化メチレン（１ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で３０分間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得られた残渣のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、１−アミノ−１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデカン（１９ｍｇ）とＩＰＥＡ（０．０６ｍＬ）とＨＯＢＴ（１６ｍｇ）およびＥＤＣ（２３ｍｇ）を加え、その反応液を室温で１１時間撹拌した。この反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：酢酸エチル→酢酸エチル：メタノール  ５：１）で精製し、標題化合物を３３ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ３８９［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．６３（ｄ，ｄ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．６８−１．９２（ｍ，３Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），２．７３−２．９２（ｍ，２Ｈ），２．９６−３．０５（ｍ，１Ｈ），３．２８−３．３６（ｍ、１Ｈ），３．３９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．５９−３．７３（ｍ，１３Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），６．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．４６（ｂｒｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｂｒｓ，１Ｈ），７．０５（ｂｒｓ，１Ｈ），７．０６（ｂｒｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１２４】
実施例７
５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛１−｛２−｛２−｛２−｛２−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝−４−ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝エトキシ｝エトキシ｝エトキシ｝エチル｝−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルメチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１２５】
【化２８】
2009184924.tif 000037
（Ｅ）−Ｎ−｛２−｛２−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル｝−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド（２２ｍｇ）および５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ２−プロピニルアミド（ＣＡＳ＃７７３８８８−４５−２、８ｍｇ）のターシャリブタノール（０．５ｍＬ）と水（０．５ｍＬ）の混合溶液に、アスコルビン酸ナトリウム（１Ｍ水溶液、０．０３ｍＬ）と硫酸銅（１Ｍ水溶液、０．０１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１１時間攪拌した。反応液に濃アンモニア水（１ｍＬ）を加え、その溶液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物を３３ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５２９［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．４０−１．５０（ｍ，２Ｈ），１．５６−１．６５（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．７０−１．９９（ｍ，４Ｈ），２．３０−２．５５（ｂｒｓ，３Ｈ），２．６８−３．２０（ｍ，６Ｈ），３．３３−３．４４（ｍ，４Ｈ），３．５１−３．７０（ｍ，１３Ｈ），３．８８−３．９４（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．２８−４．３５（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．６０（ｍ，３Ｈ），６．２３（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｂｒｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４５−７．５５（ｍ，５Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．７５−７．８９（ｍ，５Ｈ），８．１３（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１２６】
実施例８
５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛２−｛２−｛６−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシルカルバモイル｝エチルジスルファニル｝エチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１２７】
【化２９】
2009184924.tif 000038
｛６−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシル｝カルバミン酸  ターシャリブチルエステルの合成
（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニルアクリル酸  ターシャリブチルエステル（３９ｍｇ）の塩化メチレン（２ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で３０分間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得られた残渣のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、（６−アミノヘキシル）カルバミン酸  ターシャリブチルエステル（２０ｍｇ）とＩＰＥＡ（０．０７ｍＬ）とＨＯＢＴ（１７ｍｇ）およびＥＤＣ（２４ｍｇ）を加え、その反応液を室温で１９時間撹拌した。この反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：酢酸エチル→酢酸エチル：メタノール  ５：１）で精製し、標題化合物を２１ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ７７４［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１２８】
（Ｅ）−Ｎ−（６−アミノヘキシル）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド  二トリフルオロ酢酸塩の合成
｛６−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシル｝カルバミン酸  ターシャリブチルエステル（２１ｍｇ）のクロロホルム（１ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で２時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮することにより、標題化合物を２４ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ３３８［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１２９】
５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛２−｛２−｛６−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシルカルバモイル｝エチルジスルファニル｝エチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
（Ｅ）−Ｎ−（６−アミノヘキシル）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド  二トリフルオロ酢酸塩（２４ｍｇ）と２，５−ジオキソ−１−｛３−｛２−｛５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］ペンタノイルアミノ｝エチルジスルファニル｝プロピオニルオキシ｝ピロリジン−３−スルホネート  ナトリウム塩（１８ｍｇ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、ＩＰＥＡ（０．０２ｍＬ）を加え、その反応液を室温で２０時間攪拌した。反応液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物１３ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５３３［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．３７−１．５０（ｍ，４Ｈ），１．５２−１．６５（ｍ，４Ｈ），１．６８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．７６−１．９８（ｍ，２Ｈ），２．２３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．４７（ｓ，３Ｈ），２．６１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．７３（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．８５−２．８８（ｍ，４Ｈ），３．０４−３．１２（ｍ，１Ｈ），３．１５−３．２４（ｍ，３Ｈ），３．３１−３．３７（ｍ，９Ｈ），３．３８−３．４５（ｍ，１Ｈ），３．５０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），４．３１（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２２（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｂｒｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４４（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７９−７．８６（ｍ，５Ｈ），９．０１（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１３０】
実施例９
１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−［３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル］ピペラジン｝−１−イル｝−３−オキソプロペニル｝ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１３１】
【化３０】
2009184924.tif 000039
【０１３２】
４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイル｝ピペラジン−１−カルボン酸  ターシャリブチルエステルの合成
（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニルアクリル酸  ターシャリブチルエステル（６１ｇ）の塩化メチレン（２ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１．５時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得られた残渣のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、１−ピペラジンカルボン酸  ターシャリブチルエステル（３２ｍｇ）とＩＰＥＡ（０．０９ｍＬ）とＨＯＢＴ（２３ｍｇ）およびＥＤＣ（３３ｍｇ）を加え、その反応液を室温で４時間撹拌した。この反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：ヘプタン・酢酸エチル  １：１→酢酸エチル→酢酸エチル：メタノール  ９：１）で精製し、標題化合物を４２ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ７４４［Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４９（ｓ，９Ｈ），１．６３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．６７−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．８２−１．９２（ｍ，１Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．７２−２．９２（ｍ，２Ｈ），２．９６−３．０４（ｍ，１Ｈ），３．２７−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．４５−３．５６（ｍ，４Ｈ），３．６０−３．７８（ｍ，４Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），６．３０（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），６，９３（ｂｒｓ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｂｒｓ，１Ｈ），７．０５（ｂｒｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．９０（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１３３】
３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−［（Ｅ）−３−オキソ−３−ピペラジン−１−イルプロペニル］ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝ピペリジン−２−オン  二トリフルオロ酢酸塩の合成
４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイル｝ピペラジン−１−カルボン酸  ターシャリブチルエステル（４２ｍｇ）のクロロホルム（１ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え，その反応液を室温で１時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮することにより、標題化合物を５０ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ３２３［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１３４】
１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−［３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル］ピペラジン｝−１−イル｝−３−オキソプロペニル｝ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン  トリフルオロ酢酸塩の合成
３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−［（Ｅ）−３−オキソ−３−ピペラジン−１−イルプロペニル］ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝ピペリジン−２−オン  二トリフルオロ酢酸塩（１２ｍｇ）と３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオン酸  ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル  エステル（５ｍｇ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液に、ＩＰＥＡ（０．０３ｍＬ）を加え、その反応液を室温で２１時間攪拌した。反応液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物５．３ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ９１８［Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．６５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．６９−１．８２（ｍ，１Ｈ），１．８４−１．９５（ｍ，１Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．５３（ｓ，３Ｈ），２．７５−２．８７（ｍ，４Ｈ），３．００−３．１０（ｍ，１Ｈ），３．２４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．３３−３．４２（ｍ，１Ｈ），３．５４−３．７３（ｍ，８Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），６．１５（ｓ，１Ｈ），６．２０（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．２８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｂｒｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｂｒｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｂｒｓ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．３７（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｂｒｓ，１Ｈ），７．７５−７．８３（ｍ，４Ｈ），８．９３（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１３５】
実施例１０
５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛２−｛３−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイル｝ピペラジン−１−イル｝−３−オキソプロピルジスルファニル｝エチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１３６】
【化３１】
2009184924.tif 000040
３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−１−｛１−｛４−｛４−［（Ｅ）−３−オキソ−３−ピペラジン−１−イルプロペニル］ベンゾイル｝フェニル｝エチルピペリジン−２−オン  二トリフルオロ酢酸塩（１２ｍｇ）と２，５−ジオキソ−１−｛３−｛２−｛５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］ペンタノイルアミノ｝エチルジスルファニル｝プロピオニルオキシ｝ピロリジン−３−スルホネート  ナトリウム塩（９ｍｇ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液に、ＩＰＥＡ（０．０３ｍＬ）を加え、その反応液を室温で２１時間攪拌した。反応液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物７ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５１７［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．３９−１．４７（ｍ，２Ｈ），１．５４−１．６５（ｍ，３Ｈ），１．６５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．６７−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．８４−１．９６（ｍ，１Ｈ），２．２０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．７０（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７８−２．９３（ｍ，７Ｈ），２．９７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０２−３．１０（ｍ，１Ｈ），３．１２−３．１９（ｍ，１Ｈ），３．３５−３．４３（ｍ，１Ｈ），３．４８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６１−３．８３（ｍ，８Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），４．２８（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．４Ｈｚ，１Ｈ），６．１９（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｂｒｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４２（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｂｒｓ，１Ｈ），８．９９（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１３７】
実施例１１
（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−６−｛５−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイル｝ピペラジン−１−イル｝−５−オキソペンチル｝テトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−２−オン  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１３８】
【化３２】
2009184924.tif 000041
３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−１−｛１−｛４−｛４−［（Ｅ）−３−オキソ−３−ピペラジン−１−イルプロペニル］ベンゾイル｝フェニル｝エチルピペリジン−２−オン  二トリフルオロ酢酸塩（２５ｍｇ）と５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル  エステル（１０ｍｇ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、ＩＰＥＡ（０．０５ｍＬ）を加え、その反応液を室温で２１時間攪拌した。反応液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物２０ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ４３６［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４６−１．７５（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．６７（ｍ，２Ｈ），１．６９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．７０−１．８３（ｍ，３Ｈ），１．８７−１．９８（ｍ，１Ｈ），２．４４−２．４９（ｍ，５Ｈ），２．７５（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８−２．９０（ｍ，２Ｈ），２．９４（ｄｄ，＝１２．８，５．２Ｈｚ，１Ｈ），３．０５−３．１３（ｍ，１Ｈ），３．１８−３．２４（ｍ，１Ｈ），３．３７−３．４６（ｍ，１Ｈ），３．６２−３．８４（ｍ，８Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），４．３３（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．２２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｂｒｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４４（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｂｒｓ，１Ｈ），９．０１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１３９】
実施例１２
（Ｅ）−Ｎ−（６−アジドヘキシル）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミドの合成
【０１４０】
【化３３】
2009184924.tif 000042
（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニルアクリル酸  ターシャリブチルエステル（５６ｍｇ）の塩化メチレン（１ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１時間間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得られた残渣のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、６−アジドヘキシルアミン（ＣＡＳ  Ｎｏ．３４９５５３−７３−７、２５ｍｇ）とＩＰＥＡ（０．１ｍＬ）とＨＯＢＴ（３６ｍｇ）およびＥＤＣ（５１ｍｇ）を加え、その反応液を室温で３時間撹拌した。この反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：ヘプタン：酢酸エチル  １：１→酢酸エチル→酢酸エチル：メタノール  ９：１）で精製し、標題化合物を４５ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ７００［Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．３６−１．４７（ｍ，４Ｈ），１．５６−１．６２（ｍ，４Ｈ），１．６３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．６７−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．８１−１．９２（ｍ，１Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．７２−２．８２（ｍ，１Ｈ），２．８３−２．９１（ｍ，１Ｈ），２．９７−３．０３（ｍ，１Ｈ），３．２７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．２９−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），５．８０（ｂｒｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．３０（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．０４（ｂｒｓ，１Ｈ），７．０５（ｂｒｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｂｒｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．９０（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１４１】
実施例１３
５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ｛１−｛６−｛３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ヘキシル｝−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルメチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１４２】
【化３４】
2009184924.tif 000043
（Ｅ）−Ｎ−（６−アジドヘキシル）−３−｛４−｛４−｛１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド（１５ｍｇ）および５−［（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル］吉草酸  ２−プロピニルアミド（ＣＡＳ＃７７３８８８−４５−２、６ｍｇ）のＤＭＳＯ（０．９ｍＬ）と水（０．９ｍＬ）の混合溶液に、アスコルビン酸ナトリウム（１Ｍ水溶液、０．２ｍＬ）と硫酸銅（１Ｍ水溶液、０．２ｍＬ）を加え、その反応液を３７℃で３日間攪拌した。反応液に濃アンモニア水（１０ｍＬ）とクロロホルム（１０ｍＬ）およびメタノール（１ｍＬ）を加え、有機層を分配した。得られた有機層を濃縮し、ＤＭＦに希釈後、ＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物を１０ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ４９１［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．３６−１．４８（ｍ，６Ｈ），１．５５−１．６７（ｍ，４Ｈ），１．６９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．７０−１．８５（ｍ，２Ｈ），１．８７−１．９８（ｍ，３Ｈ），２．２４（ｂｒｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ），２．７３（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７７−２．８５（ｍ，３Ｈ），３．０３−３．１３（ｍ，１Ｈ），３．１４−３．２１（ｍ，１Ｈ），３．２８−３．３７（ｍ，３Ｈ），３．３８−３．４６（ｍ，１Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ），４．２７−４．３２（ｍ，１Ｈ），４．３８（ｂｒｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４３（ｓ，２Ｈ），４．４８−４．５２（ｍ，１Ｈ），６．２１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｂｒｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４７−７．５４（ｍ，４Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ）．
【０１４３】
実施例１４
１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの合成
【０１４４】
【化３５】
2009184924.tif 000044
１−（４−ジエトキシメチルフェニル）エタノールの合成
窒素雰囲気下、４−（ジエトキシメチル）ベンズアルデヒド（５ｍＬ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、氷浴下、メチルマグネシウムブロミド（０．９６Ｍ  ＴＨＦ溶液，２８ｍＬ）を加えた。その後、反応液を氷浴から外し、１５分間室温で撹拌を続けた。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで２回抽出した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、標題化合物５．２１ｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ（ｐｐｍ）：１．１０−１．１８（ｍ，６Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），３．４１−３．５８（ｍ，４Ｈ），４．６６−４．７４（ｍ，１Ｈ），５．１４（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４５（ｓ，１Ｈ），７．３０−７．３８（ｍ，４Ｈ）．
【０１４５】
１−（４−ジエトキシメチルフェニル）エタノンの合成
窒素雰囲気下、１−（４−ジエトキシメチルフェニル）エタノール（４．５２ｇ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液に、４−メチルモルホリン−４−オキシド（３．８ｇ）およびテトラプロピルアンモニウム  ペルルテナート（３８０ｍｇ）を順次加え、その反応液を１時間室温で撹拌した。反応液に少量の２−プロピルアルコールを加え、その反応液をしばらく撹拌した。反応液に酢酸エチルを加え、その混合溶液をセライト濾過し、濾液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、標題化合物４．４１ｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ（ｐｐｍ）：１．１０−１．１８（ｍ，６Ｈ），２．５８（ｓ，３Ｈ），３．４２−３．６０（ｍ，４Ｈ），５．５６（ｓ，１Ｈ），７．５２−７．５６（ｍ，２Ｈ），７．９４−７．９８（ｍ，２Ｈ）．
【０１４６】
４−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）ベンズアルデヒドの合成
窒素雰囲気下、１−（４−ジエトキシメチルフェニル）エタノン（４．４１ｇ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、氷冷下、（Ｓ）−２−メチル−ＣＢＳ−オキサザボロリジン（１Ｍ  トルエン溶液、２．２ｍＬ）およびボラン−ＴＨＦ  複合体（１Ｍ  ＴＨＦ溶液，２０ｍＬ）を順次加え、その反応液を５分間撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、氷浴から外し、有機層を分配した。得られた有機層を飽和重曹水と飽和塩化ナトリウム水溶液の混合溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、アルコール体を得た。得られたアルコール体のＴＨＦ（９０ｍＬ）溶液に、水（１０ｍＬ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５００ｍｇ）を順次加え、その反応液を室温で１５時間撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸エチルで３回抽出した。得られた有機層を飽和重曹水と飽和塩化ナトリウム水溶液の混合溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、標題化合物２．７７ｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），５．００（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５２−７．５８（ｍ，２Ｈ），７．８５−７．９１（ｍ，２Ｈ），１０．０１（ｓ，１Ｈ）．
【０１４７】
４−［（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］ベンズアルデヒドの合成
窒素雰囲気下、４−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）ベンズアルデヒド（２．２７ｇ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、イミダゾール（１．６ｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（３．０ｇ）を順次加え、その反応液を１５．５時間室温で撹拌した。その後、イミダゾール（１．０ｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（１．５ｇ）を順次追加し、更に２時間室温で撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸エチルで２回抽出した。得られた有機層を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、標題化合物４．００ｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．００−０．０８（ｍ，６Ｈ），０．９２（ｓ，９Ｈ），１．４４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），４．９４（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），１０．０１（ｓ，１Ｈ）．
【０１４８】
［４−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル］−［４−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシメチル）フェニル］メタノンの合成
窒素雰囲気下、２−（４−ブロモベンジルオキシ）テトラヒドロピラン（ＣＡＳ  Ｎｏ．１７１００−６８−４、２．１ｇ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液に、−７８℃下、ｓｅｃ−ブチルリチウム（１．０１Ｍ  シクロヘキサン−ヘキサン溶液、９．２ｍＬ）を滴下し、その温度で３０分間撹拌した。４−［（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］ベンズアルデヒド（２．０ｇ）のＴＨＦ（７ｍＬ）溶液を反応液に加え、その反応液を−７８℃で２５分間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、反応容器を冷却浴から外し、その混合物を酢酸エチルで３回抽出した。得られた有機層を飽和重曹水と飽和塩化ナトリウム水溶液の混合溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製することによりアルコール体を得た。窒素雰囲気下、上記の操作で得られたアルコール体のジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液に、４−メチルモルホリン−４−オキシド（１．１６ｇ）およびテトラプロピルアンモニウム  ペルルテナート（１３０ｍｇ）を順次加え、その反応液を室温で１３時間撹拌した。反応液に少量の２−プロピルアルコールを加え、その反応液をしばらく撹拌した。反応液に酢酸エチルを加え、その溶液をセライト濾過（酢酸エチルで洗浄）し、濾液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製することにより、ケトン体を得た。上記の操作で得られたケトン体のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオリド（１Ｍ  ＴＨＦ溶液、８ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１．５時間撹拌した。反応液の溶媒を減圧下留去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製することにより、標題化合物２．０５ｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４４−１．９８（ｍ，９Ｈ），３．５３−３．６２（ｍ，１Ｈ），３．８８−３．９８（ｍ，１Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７５（ｔ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８８（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４６−７．５２（ｍ，４Ｈ），７．７６−７．８２（ｍ，４Ｈ）．
【０１４９】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルカルボアルコキシ−４−ニトロベンゼンスルホンアミドの合成
４−ニトロベンゼンスルホンアミド（１０ｇ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（１０．４ｍＬ）と４−ジメチルアミノピリジン（６０５ｍｇ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル  ジカルボキシレート（１３．５ｇ）を順次加え、その反応液を室温で３０分間撹拌した。反応液に酸性になるまで塩酸（１Ｎ  水溶液）を加え、その溶液をジエチルエーテルで４回抽出した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をトリチレーション（使用溶媒：４０％ジエチルエーテル−ヘキサン溶液）を用いて精製し、標題化合物１４．６２ｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４１（ｓ，９Ｈ），８．２１−８．２６（ｍ，２Ｈ），８．３７−８．４２（ｍ，２Ｈ）．
【０１５０】
｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの合成
窒素雰囲気下、［４−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル］−［４−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシメチル）フェニル］メタノン（１．５４ｇ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に、ジクロロメタン（２０ｍＬ）、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルカルボアルコキシ−４−ニトロベンゼンスルホンアミド（２．０ｇ）およびトリフェニルホスフィン（２．４ｇ）を順次加え、反応液を０℃に冷却した。その反応液に、０℃下、ジイソプロピル  アゾジカルボキシラート（１．８５ｍＬ）を５分間で滴下し、反応液を室温で１４時間撹拌した。反応液の溶媒を減圧下留去し、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製することにより、スルホンアミド体を得た。上記の操作で得られたスルホンアミド体のＤＭＦ（３０ｍＬ）溶液に、水酸化リチウム一水和物（７６０ｍｇ）およびメルカプト酢酸（６００μＬ）を順次加え、その反応液を３．５時間室温で撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水、飽和重曹水および飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮することにより、カルバミン酸エステル体を得た。
上記の操作で得られたカルバミン酸体のメタノール（５０ｍＬ）溶液に、（１Ｒ）−（−）−１０−カンファースルホン酸（１１０ｍｇ）を加え、その反応液を室温で終夜撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）、シリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、標題化合物１．００ｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．３０−１．５１（ｍ，１２Ｈ），４．７８−４．９４（ｍ，４Ｈ），７．３８−７．４４（ｍ，２Ｈ），７．４６−７．５１（ｍ，２Ｈ），７．７５−７．８３（ｍ，４Ｈ）．
【０１５１】
｛（Ｓ）−１−｛４−［４−（ｔｅｒｔ−ブチルフェニルシラニルオキシメチル）ベンゾイル］フェニル｝エチル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの合成
｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．００ｇ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液に、イミダゾール（４００ｍｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルジフェニルクロロシラン（９５０μＬ）を順次加え、その反応液を室温で２０時間撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、標題化合物１．４７ｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．１２（ｓ，９Ｈ），１．３６−１．６２（ｍ，１２Ｈ），４．８１−４．９２（ｍ，４Ｈ），７．３６−７．４８（ｍ，１０Ｈ），７．６７−７．７２（ｍ，４Ｈ），７．７６−７．８１（ｍ，４Ｈ）．
【０１５２】
１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの合成
｛（Ｓ）−１−｛４−［４−（ｔｅｒｔ−ブチルフェニルシラニルオキシメチル）ベンゾイル］フェニル｝エチル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５３７ｍｇ）のジクロロメタン（１２ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（４ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１時間撹拌した。反応液にクロロホルムを加え、氷冷下、水酸化ナトリウム（５Ｎ  水溶液，１０ｍＬ）と少量の飽和重曹水を加えた。反応液を室温に戻し、クロロホルムで３回抽出し、得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。窒素雰囲気下、上記の操作で得られた残渣のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、５−クロロ−２−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝吉草酸  トリフルオロ酢酸塩（５００ｍｇ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４８０μＬ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２４５ｍｇ）および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド  塩酸塩（３５０ｍｇ）を加え、その反応液を室温で４時間撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製することにより、シンナミド体を得た。窒素雰囲気下、上記の操作で得られたシンナミド体のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、０℃下、水素化ナトリウム（６０％ミネラルオイル含有，４３ｍｇ）を加え、その反応液を３０分間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液とクロロホルムを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製することにより、カルバミン酸エステル体を得た。上記の操作で得られたカルバミン酸エステル体のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオリド（１Ｍ  ＴＨＦ溶液，８５０μＬ）を加え、その反応液を室温で１０時間撹拌した。反応液を直接シリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル−ＴＨＦ系）を用いて精製し、標題化合物３８６ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５３６［Ｍ＋＋Ｈ］，５５８［Ｍ＋＋Ｎａ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５６−１．９３（ｍ，５Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．９２（ｍ，２Ｈ），２．９４−３．０４（ｍ，１Ｈ），３．２５−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），６．３１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−７．０８（ｍ，３Ｈ），７．２４−７．３０（ｍ，１Ｈ），７．４３−７．５３（ｍ，４Ｈ），７．７５−７．８４（ｍ，５Ｈ），７．８９−７．９３（ｍ，１Ｈ）．
【０１５３】
実施例１５
｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの合成
【０１５４】
【化３６】
2009184924.tif 000045
Ｎ−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝ホルムアミドの合成
窒素雰囲気下、１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン（５３ｍｇ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液に、０℃下、トリエチルアミン（４５μＬ）とメタンスルホニルクロリド（１８μＬ）を順次加え、その反応液を２５分間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、反応容器を氷浴から外した後、クロロホルムを加え、有機層を分配した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮することにより、メシル体を得た。窒素雰囲気下、上記の操作で得られたメシル体のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に、ジホルムイミド  ナトリウム塩（３５ｍｇ）を加え、その反応液を室温で２０時間撹拌した。反応液に飽和重曹水とクロロホルムを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をメタノール（５ｍＬ）に溶解させ、室温で１時間撹拌した。反応液の溶媒を減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：ＴＨＦ）を用いて精製し、標題化合物５０ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５６３［Ｍ＋＋Ｈ］，５８５［Ｍ＋＋Ｎａ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５０−１．９２（ｍ，５Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．７２−２．９２（ｍ，２Ｈ），２．９４−３．０４（ｍ，１Ｈ），３．２６−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），４．５２−４．６３（ｍ，２Ｈ），５．９２（ｂｒｓ，１Ｈ），６．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−７．０８（ｍ，４Ｈ），７．３８−７．５０（ｍ，４Ｈ），７．７０−７．８４（ｍ，５Ｈ），７．８９−７．９３（ｍ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ）．
【０１５５】
｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの合成
Ｎ−｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝ホルムアミド（８ｍｇ）のアセトニトリル（０．５ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（６μＬ）、４−ジメチルアミノピリジン（２ｍｇ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル  ジカルボキシレート（５ｍｇ）を順次加え、その反応液を室温で１．５時間撹拌した。その後、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル  ジカルボキシレート（１０ｍｇ）を追加し、反応液を室温で１６時間撹拌した。反応液に水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。得られた残渣のメタノール（４ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（２５ｍｇ）を加え、その反応液を室温で３０分間撹拌した。反応液に水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；展開溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、標題化合物２．５ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ６３５［Ｍ＋＋Ｈ］，６５７［Ｍ＋＋Ｎａ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４８（ｓ，９Ｈ），１．５４−１．９２（ｍ，５Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．７１−２．９３（ｍ，２Ｈ），２．９３−３．０４（ｍ，１Ｈ），３．２５−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），４．４１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．９６（ｂｒｓ，１Ｈ），６．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９１−７．２９（ｍ，４Ｈ），７．３６−７．５０（ｍ，４Ｈ），７．６８−７．８２（ｍ，５Ｈ），７．８９−７．９３（ｍ，１Ｈ）．
【０１５６】
実施例１６
１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−アミノメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン  二トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１５７】
【化３７】
2009184924.tif 000046
｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１２ｍｇ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１．５時間撹拌した。反応液に少量のクロロホルムとトルエン（９ｍＬ）を加え、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物１０．６ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５３５［Ｍ＋＋Ｈ］，２５９．５［１／２Ｍ＋−ＮＨ２＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．６７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．７０−１．８３（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．９３（ｍ，１Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．７７−２．９４（ｍ，２Ｈ），３．０４−３．１４（ｍ，１Ｈ），３．３９−３．５０（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．２３（ｓ，２Ｈ），６．１５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１８−７．２６（ｍ，１Ｈ），７．２９−７．３４（ｍ，１Ｈ），７．４８−７．６６（ｍ，６Ｈ），７．７４−７．８８（ｍ，５Ｈ），９．１２−９．１８（ｍ，１Ｈ）．
【０１５８】
実施例１７
｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルカルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの合成
【０１５９】
【化３８】
2009184924.tif 000047
｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１１ｍｇ）のＤＭＦ（１．５ｍＬ）溶液に、ヨウ化メチル（６μＬ）を加え、氷冷下、その反応液に水素化ナトリウム（６０％ミネラルオイル含有、１ｍｇ）を加えた。反応液を２０分間撹拌した後、反応液に少量の水素化ナトリウム（６０％ミネラルオイル含有）を追加し、反応液を４５分撹拌した。さらに、反応液にヨウ化メチル（１０μＬ）を追加し、その反応液を４０分間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液とクロロホルムを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；展開溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、標題化合物７．８ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ６４９［Ｍ＋＋Ｈ］，６７１［Ｍ＋＋Ｎａ］．
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．３９−１．５７（ｍ，９Ｈ），１．５７−１．９７（ｍ，５Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），２．７０−３．０５（ｍ，６Ｈ），３．２３−３．３８（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），４．４５−４．５７（ｍ，２Ｈ），６．２７−６．３６（ｍ，１Ｈ），６．９０−７．０９（ｍ，３Ｈ），７．２３−７．２９（ｍ，１Ｈ），７．２９−７．３８（ｍ，２Ｈ），７．４３−７．５２（ｍ，２Ｈ），７．６８−７．８３（ｍ，５Ｈ），７．８９−７．９３（ｍ，１Ｈ）．
【０１６０】
実施例１８
３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−メチルアミノメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝ピペリジン−２−オン  二トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１６１】
【化３９】
2009184924.tif 000048
実施例１６と同様の方法により、４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルカルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８ｍｇ）から、標題化合物１０．５ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ２７５［１／２Ｍ＋＋Ｈ］，５４９［Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．６７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．７０−１．８３（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．９６（ｍ，１Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），２．８０−２．９６（ｍ，２Ｈ），３．０４−３．１５（ｍ，１Ｈ），３．４０−３．５０（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．３０（ｓ，２Ｈ），６．１５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０７−７．３５（ｍ，２Ｈ），７．５０−７．６７（ｍ，６Ｈ），７．７８−７．９１（ｍ，５Ｈ），９．１０−９．１９（ｍ，１Ｈ）．
【０１６２】
実施例１９
１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−アジドメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの合成
【０１６３】
【化４０】
2009184924.tif 000049
｛（Ｓ）−１−［４−（４−アジドメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの合成
窒素雰囲気下、｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２５５ｍｇ）とトリエチルアミン（２００μＬ）のジクロロメタン（７ｍＬ）溶液に、０℃下、メタンスルホニルクロリド（８５μＬ）を加え、その反応液を２０分間撹拌した。反応液に、飽和塩化アンモニウム水溶液とクロロホルムを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。窒素雰囲気下、上記の操作で得られた残渣のＤＭＦ（７ｍＬ）溶液に、アジ化ナトリウム（１００ｍｇ）を加え、その反応液を室温で３．５時間撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、標題化合物２７３ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．３０−１．５２（ｍ，１２Ｈ），４．４６（ｓ，２Ｈ），４．７６−４．９６（ｍ，２Ｈ），７．３９−７．４６（ｍ，４Ｈ），７．７５−７．８４（ｍ，４Ｈ）．
【０１６４】
１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−アジドメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの合成
｛（Ｓ）−１−［４−（４−アジドメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２７３ｍｇ）のジクロロメタン（４．５ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１．５ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１時間撹拌した。反応液にクロロホルム、水酸化ナトリウム（５Ｎ  水溶液，６ｍＬ）および少量の飽和重曹水を加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。窒素雰囲気下、上記の操作で得られた残渣のＤＭＦ（６ｍＬ）溶液に、５−クロロ−２−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝吉草酸  トリフルオロ酢酸塩（３３０ｍｇ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３１０μＬ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１６０ｍｇ）および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド  塩酸塩（２３０ｍｇ）を加え、その反応液を室温で４時間撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製した。これ以上精製することなく次の反応に用いた。
窒素雰囲気下、上記の操作で得られた残渣全量をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解させ、反応容器を氷浴を用いて冷却した。その反応液に水素化ナトリウム（６０％ミネラルオイル含有，３０ｍｇ）を加え、３０分間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、反応容器を氷浴から外し、クロロホルムで４回抽出した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：クロロホルム−メタノール系）、シリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム−メタノール系）およびシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：ヘプタン−ＴＨＦ系）を用いて精製し、標題化合物の精製物１６０ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５６１［Ｍ＋＋Ｈ］，５８３［Ｍ＋＋Ｎａ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５２−１．９４（ｍ，５Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．９４（ｍ，２Ｈ），２．９４−３．０５（ｍ，１Ｈ），３．２６−３．３８（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），４．４６（ｓ，２Ｈ），６．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９１−７．０９（ｍ，３Ｈ），７．２２−７．３２（ｍ，１Ｈ），７．４０−７．５４（ｍ，４Ｈ），７．６９−７．８６（ｍ，５Ｈ），７．８８−７．９５（ｍ，１Ｈ）．
【０１６５】
実施例２０
４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステル  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１６６】
【化４１】
2009184924.tif 000050
４−［４−（（Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）ベンゾイル］安息香酸  メチルエステルの合成
窒素雰囲気下、｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１６７ｍｇ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液に、４−メチルモルホリン−４−オキシド（８５ｍｇ）およびテトラプロピルアンモニウム  ペルルテナート（１０ｍｇ）を順次加え、その反応液を２．５時間室温で撹拌した。反応液に少量の２−プロピルアルコールを加え、しばらく撹拌後、酢酸エチルを加え、セライト濾過（酢酸エチルで洗浄）し、濾液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製することにより、アルデヒド体を得た。上記の操作により得たアルデヒド体のアセトン（５ｍＬ）溶液に、水（３ｍＬ）、２−メチル−２−ブテン（４００μＬ）、リン酸二水素ナトリウム  二水和物（５５ｍｇ）および亜塩素酸ナトリウム（７０ｍｇ）を順次加え、その反応液を室温で１．５時間撹拌した。その後、リン酸二水素ナトリウム  二水和物（３０ｍｇ）および亜塩素酸ナトリウム（３５ｍｇ）を順次追加し、その反応液を更に室温で１１．５時間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液とクロロホルムを加え、有機層を分配した。得られた有機層を塩酸（２Ｎ  水溶液）と飽和塩化ナトリウム水溶液の混合溶液で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。上記の操作により得た残渣のメタノール（４ｍＬ）溶液に、トリメチルシリルジアゾメタン（２Ｍ  ヘキサン溶液，５００μＬ）を加え、その反応液を室温で撹拌した。ＴＬＣで原料の消失を確認するまで、反応液にトリメチルシリルジアゾメタン（２Ｍ  ヘキサン溶液）を追加した（５００μＬ，１ｍＬで計１．５ｍＬ追加した）。反応液に少量の酢酸を加え、反応液が黄色溶液から透明になるのを確認した後、飽和重曹水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和重曹水と飽和塩化ナトリウム水溶液の混合溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）を用いて精製し、標題化合物１１８ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．３４−１．５２（ｍ，１２Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），４．７４−４．９７（ｍ，２Ｈ），７．７８−７．４６（ｍ，２Ｈ），７．７５−７．８７（ｍ，４Ｈ），８．１２−８．１７（ｍ，２Ｈ）．
【０１６７】
４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステルの合成
実施例１９と同様の方法により、４−［４−（（Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）ベンゾイル］安息香酸  メチルエステル（１１８ｍｇ）から、標題化合物１４６ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５０−１．９４（ｍ，５Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），２．６９−２．９０（ｍ，２Ｈ），２．９７−３．０５（ｍ，１Ｈ），３．２８−３．３７（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），６．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９４−７．１１（ｍ，４Ｈ），７．４４−７．５３（ｍ，２Ｈ），７．７６−７．８８（ｍ，４Ｈ），７．８８−８．０６（ｍ，２Ｈ），８．１１−８．１９（ｍ，２Ｈ）．
【０１６８】
４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステル  トリフルオロ酢酸塩の合成
４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステル（９ｍｇ）をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物５．７ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５６４［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１６９】
実施例２１
４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１７０】
【化４２】
2009184924.tif 000051
４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステル（１１ｍｇ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に、水酸化ナトリウム（１Ｎ  水溶液，１００μＬ）を加え、その反応液を室温で２６時間撹拌した。その後、反応液にメタノール（０．５ｍＬ）を加え、その反応液を室温で２４時間撹拌した。反応液の溶媒を減圧下留去し、得られた残渣のメタノール（２ｍＬ）溶液に、水酸化ナトリウム（１Ｎ  水溶液，１００μＬ）を加え、その反応液を室温で６６時間撹拌した。反応液にトリフルオロ酢酸（１６μＬ）を加え、その溶液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物８．２ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５５０［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１７１】
実施例２２
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジルアミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１７２】
【化４３】
2009184924.tif 000052
１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの合成
実施例１４と同様の方法により得られた１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン（２４０ｍｇ）をダイセル製ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＴＭ  ＩＡ（２ｃｍ×２５ｃｍ：移動相；エタノール）にて分取し、保持時間２７分の標題化合物の光学活性体１９４ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５３６［Ｍ＋＋Ｈ］，５５８［Ｍ＋＋Ｎａ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５６−１．９３（ｍ，５Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．９２（ｍ，２Ｈ），２．９４−３．０４（ｍ，１Ｈ），３．２５−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），６．３１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−７．０８（ｍ，３Ｈ），７．２４−７．３０（ｍ，１Ｈ），７．４３−７．５３（ｍ，４Ｈ），７．７５−７．８４（ｍ，５Ｈ），７．８９−７．９３（ｍ，１Ｈ）．
【０１７３】
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジルアミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
実施例１５と同様の方法により、１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの光学活性体（１００ｍｇ）から｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗生成物６１ｍｇを得た。上記の操作によって得られた｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗生成物５ｍｇのジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１時間撹拌した。反応液に少量のクロロホルムとトルエン（５ｍＬ）を加え、減圧下濃縮した。得られた残渣のＤＭＦ（１．５ｍＬ）溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシイミドビオチン（１０ｍｇ）およびトリエチルアミン（１０μＬ）を順次加え、室温で１０時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物４．８ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ３８１［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１７４】
実施例２３
６−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］吉草酸  ４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジルアミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１７５】
【化４４】
2009184924.tif 000053
実施例１５と同様の方法により、１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの光学活性体（１００ｍｇ）から｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗精製物６１ｍｇを得た。上記の操作によって得られた｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗精製物（７ｍｇ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１時間撹拌した。反応液に少量のクロロホルムとトルエン（５ｍＬ）を加え、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣のＤＭＦ（１．５ｍＬ）溶液に、ＰＩＥＲＣＥ製ＮＨＳ−ＬＣ−ＢＩＯＴＩＮ（１５ｍｇ）およびトリエチルアミン（１５μＬ）を順次加え、その反応液を室温で１時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物７．７ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ４３８［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１７６】
実施例２４
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルアミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１７７】
【化４５】
2009184924.tif 000054
実施例１５と同様の方法により、１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチルイ−１Ｈ−ミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの光学活性体（１００ｍｇ）から｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗生成物６１ｍｇを得た。上記の操作によって得られた｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗生成物（５０ｍｇ）から、実施例１７と同様の方法により、４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルカルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗精製物４７ｍｇを得た。上記の操作によって得られた４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルカルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗精製物（１１ｍｇ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１．５時間撹拌した。反応液に少量のクロロホルムとトルエン（５ｍＬ）を加え、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシイミドビオチン（２０ｍｇ）およびトリエチルアミン（２５μＬ）を順次加え、その反応液を室温で１時間撹拌した。さらに、反応液にトリエチルアミン（２５μＬ）を加え、反応液を室温で１２．５時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物８．７ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ３８８［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１７８】
実施例２５
６−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］吉草酸  ｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルアミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１７９】
【化４６】
2009184924.tif 000055
実施例１５と同様の方法により、１−｛（Ｓ）−１−［４−（４−ヒドロキシメチルベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オンの光学活性体（１００ｍｇ）から｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗精製物６１ｍｇを得た。上記の操作によって得られた｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗精製物（５０ｍｇ）から、実施例１７と同様の方法により、４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルカルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗精製物４７ｍｇを得た。上記の操作によって得られた４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝ベンジル｝メチルカルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗精製物（１２ｍｇ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１時間撹拌した。反応液に少量のクロロホルムとトルエン（５ｍＬ）を加え、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、ＰＩＥＲＣＥ製ＮＨＳ−ＬＣ−ＢＩＯＴＩＮ（２６ｍｇ）およびトリエチルアミン（１００μＬ）を順次加え、その反応液を室温で１２時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物７．８ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ４４５［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１８０】
実施例２６
｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝−Ｎ−｛２−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］エチル｝ベンズアミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１８１】
【化４７】
2009184924.tif 000056
実施例２０と同様の方法により、４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステル（１３５ｍｇ）をダイセル製ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＴＭ  ＯＪ−Ｈ（２ｃｍ×２５ｃｍ：移動相；エタノール）にて分取し、保持時間３６分の４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステルの光学活性体の粗精製物５８ｍｇを得た。上記の操作により得られた４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステルの粗精製物（１１ｍｇ）のメタノール（２ｍＬ）溶液に、水酸化ナトリウム（１Ｎ  水溶液，１００μＬ）を加え、その反応液を室温で２６．５時間撹拌した。反応液に水酸化ナトリウム（１Ｎ  水溶液，１００μＬ）を加え、その反応液を室温で更に２３．５時間撹拌した。反応液に塩酸（２Ｎ  水溶液，１００μＬ）を加え、その溶液を減圧下濃縮した。残渣にトルエンを加え、その溶液を減圧下濃縮乾固させる操作を２回行った。得られた残渣のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２００μＬ）、ビオチン−エチレンジアミン  臭化水素酸塩（１７ｍｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（８ｍｇ）および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド  塩酸塩（１２ｍｇ）を順次加え、その反応液を室温で６３．５時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液をＬＣ−ＭＳで精製することにより得られた粗精製物に、少量の飽和重曹水を加え、中和後、その溶液を少量のメタノールを加えたクロロホルムで３回抽出した。得られた有機層を濃縮後、ＬＣ−ＭＳで精製することにより標題化合物１１．９ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ４１０［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１８２】
実施例２７
｛４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝−Ｎ−｛２−｛２−｛２−［５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）ペンタノイルアミノ］エトキシ｝エトキシ｝エチル｝ベンズアミド  の合成
【０１８３】
【化４８】
2009184924.tif 000057
実施例２０と同様の方法により得られた４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステル（１３５ｍｇ）をダイセル製ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＴＭ  ＯＪ−Ｈ（２ｃｍ×２５ｃｍ：移動相；エタノール）にて分取し、保持時間３６分の４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステルの光学活性体の粗精製物５８ｍｇを得た。上記の操作により得られた４−｛４−｛（Ｓ）−１−｛３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝安息香酸  メチルエステルの粗精製物（１３ｍｇ）のメタノール（２ｍＬ）溶液に、水酸化ナトリウム（１Ｎ  水溶液，１００μＬ）を加え、その反応液を室温で５１時間撹拌した。反応液に水酸化ナトリウム（１Ｎ  水溶液，１００μＬ）を加え、その反応液を室温で更に２１．５時間撹拌した。反応液に塩酸（２Ｎ  水溶液，１００μＬ）を加え、減圧下溶媒を留去した。残渣にトルエンを加え、その混合物を減圧下濃縮乾固させた。得られた残渣のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２００μＬ）、ＰＩＥＲＣＥ製ＥＺ−ＬＩＮＫＴＭ  ＢＩＯＴＩＮ  ＰＥＯ−ＡＭＩＮＥ（１８ｍｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１０ｍｇ）および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド  塩酸塩（１４ｍｇ）を順次加え、その反応液を室温で６５時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液をＬＣ−ＭＳで精製した。得られた粗精製物を少量の飽和重曹水で中和し、少量のメタノールを加えたクロロホルムで３回抽出した。得られた有機層を濃縮することにより、標題化合物９．４ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ４５４［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１８４】
実施例２８
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛２−｛３−｛４−｛（Ｒ）−４−｛２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）］−（Ｅ）−ベンジリデン｝−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝−（Ｅ）−アクリロイルアミノ｝エチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩
【０１８５】
【化４９】
2009184924.tif 000058
４−（４−ブロモフェニル）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソランの合成
１−（４−ブロモフェニル）エタン−１，２−ジオール（３．８ｇ；ＣＡＳ９２０９３−２３−７）のＤＭＦ（３０ｍＬ）溶液に、２，２−ジメトキシプロパン（２ｍＬ）とｐ−トルエンスルホン酸１水和物（３０６ｍｇ）を加えた。その反応液を室温で１８時間撹拌した後、反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）で精製し、標題化合物を３．６３ｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４８（ｓ，３Ｈ），１．５４（ｓ，３Ｈ），３．６５（ｄｄ，Ｊ＝８．０，７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｄｄ，Ｊ＝８．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄｄ，Ｊ＝７．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｍ，２Ｈ），７．４７（ｍ，２Ｈ）．
【０１８６】
［４−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノンの合成
マグネシウム（３４０ｍｇ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液に、４−（４−ブロモフェニル）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン（３．６ｇ）のＴＨＦ（１８ｍＬ）溶液を室温で１８分かけて滴下した。その混合液を８０度で２時間加熱還流した後、室温に戻すことにより、約０．５Ｍのグリニア試薬を調整した。次にそのグリニア試薬（２８ｍＬ）ＴＨＦ溶液にビス（２−ジメチルアミノエチル）エーテル（２．６４ｍＬ）を０℃で滴下し、その混合液を０℃で１５分間攪拌した。その混合液に、４−ヨード塩化ベンゾイル（３．５４ｇ）のＴＨＦ（１２ｍＬ）溶液を０℃で２０分かけて滴下し、その反応液を０℃で１時間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン−酢酸エチル系）で粗精製した後、結晶化（ヘプタン−酢酸エチル系）させ、標題化合物を１．５７ｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５１（ｓ，３Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｄｄ，Ｊ＝８．０，６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．１５（ｄｄ，Ｊ＝８．０，６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４６−７．５１（ｍ，４Ｈ），７．７６（ｍ，２Ｈ），７．８４（ｍ，２Ｈ）．
【０１８７】
［４−（１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノンの合成
［４−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノン（１ｇ）のＴＨＦ（１２ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）と水（３ｍＬ）を加えた。その反応液を室温で１２時間撹拌した後、反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を、水および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をヘプタン−酢酸エチル系で結晶化させ、濾別して、標題化合物を８８４．３ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：２．０３（ｂｒｓ，１Ｈ），２．６５（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｍ，１Ｈ），４．９２（ｂｒｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４８−７．５２（ｍ，４Ｈ），７．７８（ｍ，２Ｈ），７．８４（ｍ，２Ｈ）．
【０１８８】
［４−（１−アミノ−２−ヒドロキシエチル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノンの合成
［４−（１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノン（４００ｍｇ）のアセトニトリル（５ｍＬ）溶液に、硫酸（０．５６９ｍＬ）を加え、その反応液を１００度で２時間加熱還流した。反応液を室温に戻し、水（８ｍＬ）を加え、さらに１００度で２時間加熱還流した。反応液を室温に戻した後、アルカリ性になるまで、反応液に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えた。この混合物にジエチルエーテルを加え、有機層を分配した。得られた水層にジクロロメタンを加えて有機層を分配した。集められた有機層（ジクロロメタン）を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮することにより、標題化合物を１４４．９ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９４（ｂｒｓ，２Ｈ），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７９（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｄｄ，Ｊ＝７．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４４−７．５２（ｍ，４Ｈ），７．７５（ｍ，２Ｈ），７．８４（ｍ，２Ｈ）．
【０１８９】
（Ｓ）−５−クロロ−２−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−４−メチル吉草酸  ｛２−ヒドロキシ−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝アミドの合成
（Ｓ）−５−クロロ−２−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−４−吉草酸  塩酸塩（１５０ｍｇ）と［４−（１−アミノ−２−ヒドロキシエチル）フェニル］−（４−ヨードフェニル）メタノン（１４４ｍｇ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に、ＥＤＣ（２２４ｍｇ）、ＨＯＢＴ（１５８ｍｇ）およびＩＰＥＡ（０．３３９ｍＬ）を順次加え、その反応溶液を室温で１２時間攪拌した。反応液に酢酸エチルおよび水を加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸エチル）で精製することにより、標題化合物を２００．１ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ  ６９８［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１９０】
（Ｓ）−１−｛（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−５−メチルピペリジン−２−オンおよび（Ｓ）−１−｛（Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−５−メチルピペリジン−２−オンの合成
（Ｓ）−５−クロロ−２−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−４−メチル吉草酸  ｛２−ヒドロキシ−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝アミド（２００ｍｇ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、その反応液に水素化ナトリウム（６０％ミネラルオイル含有、１７．２ｍｇ）を加え、その反応液を室温で１時間攪拌した。この反応液に水と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：酢酸エチル）で精製することによりラセミ体を１０８ｍｇ得た。得られたラセミ体（１０８ｍｇ）をダイセル製ＣＨＩＲＡＬＣＥＬＴＭ  ＯＤ−Ｈ（２ｃｍ×２５ｃｍ：移動相；エタノール）にて分取し、保持時間１４．７分の表題光学活性体（２８．５ｍｇ；＞９９％ｅｅ）および保持時間２７．１分の標題光学活性体（２３．６ｍｇ；＞９９％ｅｅ）を得た。保持時間１４．７分の表題光学活性体の物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．００（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．９５（ｍ，１Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｄｄｄ，Ｊ＝１５．６，１２．０，２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｄｄ，Ｊ＝１５．６，４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１６（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．００（ｄｄ，Ｊ＝８．４，５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ）．
保持時間２７．１分の表題光学活性体の物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．９５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），２．０６（ｍ，１Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｍ，１Ｈ），２．８２（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．９７（ｄｄ，Ｊ＝１６．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．２８（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．２５（ｍ，２Ｈ），５．８３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ）．
【０１９１】
（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｒ）２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリル酸  ターシャリブチルエステルの合成
（Ｓ）−１−｛（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−［４−（４−ヨードベンゾイル）フェニル］エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−５−メチルピペリジン−２−オン（１０７ｍｇ）、アクリル酸ターシャリブチルエステル（２３６ｕＬ）およびＴＥＡ（６７．８ｕＬ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に、酢酸パラジウム（７．２７ｍｇ）およびトリオルトトリルホスフィン（１９．７ｍｇ）を順次加え、その混合物を窒素気流下７０℃で３時間攪拌した。その混合物を室温に戻した後、飽和塩化アンモニア水溶液と酢酸エチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水および飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（担体：クロマトレックスＮＨ；溶出溶媒：酢酸エチル）で精製することにより、標題化合物を８５．７ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．００（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．５５（ｓ，９Ｈ），１．９４（ｍ，１Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｍ，１Ｈ），２．９８（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．２１（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３１（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．００（ｄｄ，Ｊ＝８．４，４．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），７．７７−７．８１（ｍ，４Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ）．
【０１９２】
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛２−｛３−｛４−｛（Ｒ）−４−｛２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）］−（Ｅ）−ベンジリデン｝−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝−（Ｅ）−アクリロイルアミノ｝エチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩
（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｒ）２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリル酸  ターシャリブチルエステル（１５ｍｇ）の塩化メチレン（０．５ｍＬ）溶液に、０℃でトリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を加え、その反応液を室温で１時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得られた残渣のＤＭＦ（０．８ｍＬ）溶液に、ビオチン−エチレンジアミン臭化水素酸塩（１３．１ｍｇ）、ＥＤＣ（１３．１ｍｇ）、ＨＯＢＴ（９．２ｍｇ）およびＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）を順次加え、その反応液を室温で６時間撹拌した。この反応液をＬＣ−ＭＳ（溶出溶媒：水−アセトニトリル−トリフルオロ酢酸系）で精製することにより、標題化合物を１０．６ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．０３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．４０−１．４６（ｍ，２Ｈ），１．５３−１．７４（ｍ，４Ｈ），１．９３（ｍ，１Ｈ），２．２２（ｍ，２Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｍ，１Ｈ），２．６６（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．８６（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．９７（ｍ，１Ｈ），３．１５（ｍ，１Ｈ），３．２５−３．３１（ｍ，３Ｈ），３．３５−３．３９（ｍ，２Ｈ），３．４３−３．４６（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．１２−４．２４（ｍ，３Ｈ），６．０１（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．５１−７．６４（ｍ，６Ｈ），７．７０−７．８２（ｍ，６Ｈ），９．１５（ｓ，１Ｈ）．
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ  ８７４［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１９３】
実施例２９
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛５−｛３−｛４−｛（Ｒ）−４−｛２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ベンジリデン］−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリロイルアミノ｝ペンチル｝アミド  トリフルオロ酢酸塩
【０１９４】
【化５０】
2009184924.tif 000059
（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリル酸  ターシャリブチルエステル（１５ｍｇ）の塩化メチレン（０．５ｍＬ）溶液に、０℃でトリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を加え、反応液を室温で１時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、残渣にトルエンを加え、その混合物を減圧下濃縮した。残渣のＤＭＦ（０．８ｍＬ）溶液に、５−（ビオチンアミド）ペンチルアミン（１４．９ｍｇ）、ＥＤＣ（１３．１ｍｇ）、ＨＯＢＴ（９．２ｍｇ）およびＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）を順次加え、その反応液を室温で１５時間撹拌した。この反応液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物を１０．１ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．０３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３６−１．４６（ｍ，５Ｈ），１．５２−１．７３（ｍ，９Ｈ），１．９４（ｍ，１Ｈ），２．２０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｍ，１Ｈ），２．６８（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．８６−３．０２（ｍ，３Ｈ），３．１３−３．２３（ｍ，４Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２２（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２２−４．３０（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．４９（ｍ，１Ｈ），６．０１（ｄｄ，Ｊ＝９．２，５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５１−７．６４（ｍ，６Ｈ），７．７０−７．８２（ｍ，６Ｈ），９．１５（ｓ，１Ｈ）．
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ  ９１６［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１９５】
実施例３０
（Ｅ）−Ｎ−｛２−｛２−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル｝−３−｛４−｛４−｛（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）―メチリデン｝−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１９６】
【化５１】
2009184924.tif 000060
（Ｅ）−３−｛４−｛４−｛（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリル酸  ターシャリブチルエステル（２２ｍｇ）の塩化メチレン（０．５ｍＬ）溶液に、０℃でトリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を加え、反応液を室温で１時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、残渣にトルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得られた残渣のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、１−アミノ−１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデカン（１４．５ｍｇ）、ＥＤＣ（１９．２ｍｇ）、ＨＯＢＴ（１３．５ｍｇ）およびＩＰＥＡ（０．２５ｍＬ）を順次加え、その反応液を室温で１２時間撹拌した。この反応液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物を１９．８ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．０３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．９４（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｍ，１Ｈ），２．９８（ｍ，１Ｈ），３．１６（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｍ，３Ｈ），３．４５−３．５５（ｍ，３Ｈ），３．５８−３．７５（ｍ，１２Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２２（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｄｄ，Ｊ＝９．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ＝８．０，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０−７．６５（ｍ，６Ｈ），７．６９−７．８５（ｍ，６Ｈ），９．１５（ｓ，１Ｈ）．
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ  ８０６［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１９７】
実施例３１
５−（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）−２−オキソヘキサヒドロチエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−６−イル）吉草酸  ｛１−｛２−｛２−［２−（２−エトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル｝アミド｝−３−｛４−｛４−｛（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）―メチリデン｝−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド  トリフルオロ酢酸塩
【化５２】
2009184924.tif 000061
（Ｅ）−Ｎ−｛２−｛２−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル｝−３−｛４−｛４−｛（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−｛（Ｓ）−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）―メチリデン｝−５−メチル−２−オキソピペリジン−１−イル｝エチル｝ベンゾイル｝フェニル｝アクリルアミド  トリフルオロ酢酸塩（１３．７ｍｇ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に、室温でトリフェニルホスフィン（５．９ｍｇ）と水（０．１ｍＬ）を加え、その混合物を８０℃で２時間加熱攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、残渣にトルエンを加え、再度その混合物を減圧下濃縮した。得られた残渣のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液に、ＩＰＥＡ（０．０５ｍＬ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドビオチン（１０．２ｍｇ）を加え、その反応液を室温で１時間攪拌した。原料の残存を確認後、再びＮ−ヒドロキシスクシンイミドビオチン（１０．２ｍｇ）を反応液に加え、その反応液を室温で１２時間攪拌した。この反応液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物を５．１ｍｇ得た。このものの物性値は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．０３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．４２−１．４８（ｍ，３Ｈ），１．５５−１．７７（ｍ，５Ｈ），１．９４（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｍ，１Ｈ），２．９６（ｍ，１Ｈ），３．１４（ｍ，１Ｈ），３．３４−３．４４（ｍ，５Ｈ），３．４５−３．５６（ｍ，５Ｈ），３．５８−３．７２（ｍ，１２Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．１５（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｄｄ，Ｊ＝９．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０−７．６１（ｍ，６Ｈ），７．７０−７．８６（ｍ，６Ｈ），９．１５（ｓ，１Ｈ）．
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ  ５０４［１／２Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１９８】
実施例３２
１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−｛（Ｅ）−３−｛４−｛３−［４，４−ジフルオロ−５−（１Ｈ−ピロール−２−イル）−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル］プロピオニル｝ピペラジン｝−１−イル｝−３−オキソプロペニル｝ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝−３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝ピペリジン−２−オン  トリフルオロ酢酸塩の合成
【０１９９】
【化５３】
2009184924.tif 000062
【０２００】
３−｛１−［３−メトキシ−４−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニル］−（Ｅ）−メチリデン｝−１−｛（Ｓ）−１−｛４−｛４−［（Ｅ）−３−オキソ−３−ピペラジン−１−イルプロペニル］ベンゾイル｝フェニル｝エチル｝ピペリジン−２−オン  二トリフルオロ酢酸塩（２０ｍｇ）と３−［４，４−ジフルオロ−５−（１Ｈ−ピロール−２−イル）−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル］プロピオン酸  ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル  エステル（５ｍｇ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液に、ＩＰＥＡ（０．０５ｍＬ）を加え、その反応液を室温で６時間攪拌した。反応液をＬＣ−ＭＳで精製することにより、標題化合物１２ｍｇを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ９５５［Ｍ＋＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．６８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．７２−１．８５（ｍ，１Ｈ），１．８７−２．００（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ），２．７７−２．９１（ｍ，４Ｈ），３．０３−３．１２（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．４４（ｍ，３Ｈ），３．５６−３．７７（ｍ，８Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），６．２２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３１（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３４−６．４２（ｍ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｂｒｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０８−７．２４（ｍ，５Ｈ），７．３９（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），８．９６（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），１０．５（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０２０１】
試験例１  
ラット胎仔脳由来神経細胞培養におけるＡβペプチド定量
（１）ラット初代神経細胞の培養
胎生１８日齢のＷｉｓｔａｒ系ラット（日本チャールス・リバー株式会社，神奈川）より大脳皮質由来神経細胞を単離し培養に供した。具体的には、エーテル麻酔下、妊娠ラットより無菌的に胎仔を摘出した。胎仔より全脳を摘出し、氷冷Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ  Ｌ−１５  ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ，カタログ番号１１４１５−０６４あるいはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ，カタログ番号Ｌ１５１８など）に浸した。その摘出脳から、実体顕微鏡下で大脳皮質を分離した。分離した大脳皮質組織片を、０．２５％  トリプシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号１５０５０−０６５）および１５０ｕｎｉｔ／ｍＬ  ＤＮａｓｅ  Ｉ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社，カタログ番号Ｄ５０２５）を含有する酵素溶液中で、３７℃、３０分間処理することにより、細胞を分散させた。この際、酵素反応は同量の非働化済みウマ血清を加えることにより停止させた。この酵素処理溶液を１，５００ｒｐｍにて５分間遠心分離し、上清を除いた。得られた細胞塊に培地を５〜１０ｍＬ加えた。培地は、ＮｅｕｒｏｂａｓａｌＴＭ  ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号２１１０３−０４９）に２％  Ｂ−２７  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号１７５０４−０４４）と２５μＭ  ２−メルカプトエタノール（以下２−ＭＥ，和光純薬工業株式会社，大阪，カタログ番号１３９−０６８６１）と０．５ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号２５０３０−０８１）および１％  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ―ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号１５２４０−０６２）を添加したもの（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ−２７／２−ＭＥ培地）を用いた。但し、アッセイの際は、２−ＭＥのみを添加しない培地（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ−２７培地）を用いた。培地が加えられた細胞塊を、緩やかにピペッティングすることにより、細胞を再分散させた。この細胞分散液を、４０μｍナイロンメッシュ（セルストレイナー，Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ社，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ，カタログ番号３５−２３４０）でろ過し、細胞塊を除くことにより、神経細胞懸濁液を得た。この神経細胞懸濁液を培地にて希釈し、予めｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅあるいはｐｏｌｙ−Ｄ−ｌｙｓｉｎｅにてコーティングされた９６穴培養プレート（以下の方法で９６穴培養プレート（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ社，カタログ番号３５−３０７５）にｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅコートを施したもの、あるいはＢｉｏｃｏａｔＴＭ  ｃｅｌｌ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ  ｐｏｌｙ−Ｄ−ｌｙｓｉｎｅ  ｃｅｌｌ  ｗａｒｅ  ９６−ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ社，カタログ番号３５−６４６１））に初期細胞密度が５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２になるように１００μＬ／ｗｅｌｌにて播種した。Ｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅコーティングは以下のように行った。１５０ｍＭ  ホウ酸ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ  ８．５）を用いて１００μｇ／ｍＬのｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓ��ｎｅ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社，カタログ番号Ｐ２６３６）溶液を無菌的に調製した。その溶液を１００μＬ／ｗｅｌｌにて９６穴培養プレートに添加し、室温、１時間以上、あるいは４℃、一晩以上、インキュベートした。その後、コーティングした９６穴培養プレートは、滅菌水を用いて４回以上洗浄した後、乾燥させるか、あるいは無菌リン酸緩衝食塩水あるいは培地などを用いてすすいだ後に、細胞播種に用いた。播種した細胞は、３７℃、５％  ＣＯ２インキュベーター中にて１日間培養した後、培養上清全量を新鮮なＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ−２７／２−ＭＥ培地と交換し、引き続き３日間培養した。
【０２０２】
（２）化合物添加
培養４日目に薬物添加を以下の通りに行った。培養上清全量を抜き取り、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ−２７培地を１８０μＬ／ｗｅｌｌ加えた。試験化合物のジメチルスルホキシド（以下ＤＭＳＯ）溶液をＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ−２７培地にて最終濃度の１０倍になるように希釈した。この希釈液を２０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、よく混和した。最終ＤＭＳＯ濃度は１％以下とした。また対照群にはＤＭＳＯのみを添加した。
【０２０３】
（３）サンプリング
化合物添加後３日間培養し、培養上清全量を回収した。得られた培養上清は、Ａβｘ−４２測定用ＥＬＩＳＡサンプルとして、希釈せずにＥＬＩＳＡに供した。
【０２０４】
（４）細胞生存の評価
細胞生存は以下の方法でＭＴＴアッセイにより評価した。培養上清回収後のｗｅｌｌに３７℃に温めた培地を１００μＬ／ｗｅｌｌ加え、さらにＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ（以下Ｄ−ＰＢＳ（−），Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社，カタログ番号Ｄ８５３７）に溶解した８ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社，カタログ番号Ｍ２１２８）溶液を８μＬ／ｗｅｌｌにて添加した。この９６穴培養プレートを、３７℃、５％  ＣＯ２インキュベーター中にて２０分間インキュベートした。そこへＭＴＴ溶解バッファーを１００μＬ／ｗｅｌｌ加え、３７℃、５％  ＣＯ２インキュベーター中にてＭＴＴフォルマザン結晶をよく溶解させた後、各ｗｅｌｌの５５０ｎｍの吸光度を測定した。ＭＴＴ溶解バッファーは以下の通りに調製した。Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（和光純薬工業株式会社，カタログ番号０４５−０２９１６）と蒸留水を２５０ｍＬずつ混合した溶液に、１００ｇ  ドデシル硫酸ナトリウム（ラウリル硫酸ナトリウム，以下ＳＤＳ，和光純薬工業株式会社，カタログ番号１９１−０７１４５）を溶解した。さらに、この溶液に濃塩酸および酢酸をそれぞれ３５０μＬ添加することにより、溶液の最終ｐＨを約４．７に調整した。
測定の際、細胞を播種しないｗｅｌｌに培地とＭＴＴ溶液のみを加えたものをバックグラウンドとして設定した。各測定値は、以下の数式に従い、バックグラウンドを差し引き、対照群（薬物処理しなかった群）に対する比率（％  ｏｆ  ＣＴＲＬ）を算出し、細胞生存活性を比較・評価した。
【０２０５】
％  ｏｆ  ＣＴＲＬ＝（Ａ５５０＿ｓａｍｐｌｅ−Ａ５５０＿ｂｋｇ）／（Ａ５５０＿ＣＴＲＬ−Ａ５５０＿ｂｋｇ）×１００
（Ａ５５０＿ｓａｍｐｌｅ：サンプルｗｅｌｌの５５０ｎｍ吸光度、Ａ５５０＿ｂｋｇ：バックグラウンドｗｅｌｌの５５０ｎｍ吸光度、Ａ５５０＿ＣＴＲＬ：対照群ｗｅｌｌの５５０ｎｍ吸光度）
【０２０６】
（５）Ａβ４２  ＥＬＩＳＡ
Ａβ４２  ＥＬＩＳＡは、株式会社免疫生物研究所（群馬）のＨｕｍａｎ  Ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  （１−４２）Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  （カタログ番号１７７１１または２７７１１）、あるいは和光純薬工業株式会社（大阪）のＨｕｍａｎ／Ｒａｔ  βＡｍｙｌｏｉｄ（４２）ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ  Ｗａｋｏ  （カタログ番号２９０−６２６０１）を用いた。方法はメーカー推奨のプロトコール（添付文書に記載の方法）にて行った。但しＡβ４２検量線は、ラットＡβ１−４２ペプチド（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ，カタログ番号１７１５９６）を用いて作成した。各サンプルについて対照群の培養上清中Ａβ４２濃度に対する百分率（％  ｏｆ  ＣＴＲＬ）を算出し、続いて各試験化合物のＩＣ５０値を算出した。結果は、表１に示す。
【０２０７】
【表１】
2009184924.tif 000063
【０２０８】
（６）表１の結果から分かるように、本発明の生物学的試薬用化合物は、Ａβ４２産生低下作用が確認された。したがって、本発明の式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩は、Ａβ４２産生低下作用を有するので、本発明によれば、Ａβ産生機構の解析に有用な試薬を、さらに特にアルツハイマー病、ダウン症等のＡβが原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤の作用機序の解析に有用な試薬を提供することができる。
【０２０９】
実施例３３
光親和性標識実験による標的分子の同定
（１）ＨＥＫ２９３細胞の培養
ＨＥＫ２９３細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ，カタログ番号ＣＲＬ−１５７３）は、２２５ｃｍ２培養フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ，ＵＳＡ，カタログ番号３００１）を用いて３７℃、５％  ＣＯ２インキュベーター中にて培養した。培地は、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社，カタログ番号Ｄ６４２９）に１０％  非働化済みウシ胎児血清（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，Ｌｅｎｅｘａ，ＫＳ，ＵＳＡ，カタログ番号１２１０３）および１％  ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号１５１４０−１２２）を添加したものを用いた。
【０２１０】
（２）可溶化膜画分の調製
Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００３年５巻４８６頁に記載の方法に準じて、ＨＥＫ２９３細胞からその可溶化膜画分を調製した。具体的には、ＨＥＫ２９３細胞を培養フラスコより回収し、氷冷Ｄ−ＰＢＳ（−）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号１４１９０−１４４）で３回洗浄した後、１フラスコ当たり約１ｍＬの氷冷ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ（１０ｍＭ  ＭＯＰＳ，ｐＨ  ７．０，１０ｍＭ  ＫＣｌ，Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社，Ｐｅｎｚｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ，カタログ番号１６９７４９８））で懸濁した。Ｄｏｕｎｃｅ  ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒを用いてＨＥＫ２９３細胞をホモジナイズした後、１，０００×ｇにて４℃、１５分間遠心分離し、上清を分取した。この上清を１００，０００×ｇにて４℃、１時間遠心分離し、沈渣（膜画分）を分取した。この沈渣に１フラスコ当たり約５０μＬの氷冷ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ（１５０ｍＭ  クエン酸ナトリウム，ｐＨ  ６．４，１％  ＣＨＡＰＳＯ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社，カタログ番号Ｃ４６９５），Ｃｏｍｐｌｅｔｅ）を添加し、４℃、１時間緩やかに回転させて攪拌した。これを１００，０００×ｇにて４℃、１時間遠心分離し、上清（可溶化膜画分）を分取した。
【０２１１】
可溶化膜画分の蛋白定量は、Ｍｉｃｒｏ  ＢＣＡＴＭ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ，カタログ番号２３２３５）を用いて行った。方法はメーカー推奨のプロトコール（添付文書に記載の方法）にて行った。
氷冷ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ中に懸濁させた５０％  ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ａｇａｒｏｓｅ（ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ（登録商標）ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社，カタログ番号２０３４９）を１ｍｇ膜蛋白当たり１０μＬの割合で可溶化膜画分に添加し、４℃、１時間以上穏やかに回転させて攪拌した。これを１２，０００×ｇにて４℃、１分間遠心分離し、上清（前処置済み可溶化膜画分）を分取した。これにｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒを添加して混和し、６ｍｇ膜蛋白／ｍＬの前処置済み可溶化膜画分を調製した。
【０２１２】
（３）光親和性標識実験
試験化合物（実施例４および５の生物学的試薬用化合物）をＤＭＳＯにて溶解し、１０ｍＭ  ＤＭＳＯ溶液を調製した。これに４倍濃度の反応ｂｕｆｆｅｒ（４５０ｍＭ  クエン酸ナトリウム，ｐＨ  ６．４，０．４ｍｇ／ｍＬ  ウシ血清アルブミン，４０ｍＭ  ジチオスレイトール（以下ＤＴＴ），２ｍｇ／ｍＬ  Ｌ−α−ホスファチジルコリン，３×  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ）を６．２５倍量、蒸留水を１７．７５倍量添加して混和し、最終濃度の４倍濃度（４００μＭ）の化合物を含有する反応ｂｕｆｆｅｒ（４倍濃度の化合物溶液）を調製した。媒体として最終濃度の４倍濃度（４％）のＤＭＳＯを含有する反応ｂｕｆｆｅｒを調製した。
６ｍｇ膜蛋白／ｍＬの前処置済み可溶化膜画分に、４倍濃度の反応ｂｕｆｆｅｒを０．７５倍量、蒸留水を１．２５倍量添加して混和し、２ｍｇ膜蛋白／ｍＬの前処置済み可溶化膜画分を含有する反応ｂｕｆｆｅｒを調製した。これに４倍濃度の化合物溶液あるいは媒体を１／３量添加して混和し、これを反応液とした。この反応液は、１．５ｍｇ膜蛋白／ｍＬの前処置済み可溶化膜画分に加えて、１００μＭの化合物あるいは１％  ＤＭＳＯを含有する。
反応液を遮光条件下、３７℃、３０分間インキュベートした。光親和性標識は、Ｓｔｒａｔａｌｉｎｋｅｒ（登録商標）２４００  ＵＶ  ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｒ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ，カタログ番号４００６７６）および５本の紫外線ランプ（１５Ｗ，３６５ｎｍ，ＵＶＰ社，Ｕｐｌａｎｄ，ＣＡ，ＵＳＡ，カタログ番号３４−０００９−０２）を用いて、氷冷条件下、９０分間行った。この際、３０分間毎に反応液を穏やかに攪拌した。
【０２１３】
（４）標的分子の精製
透析チューブ（ＳｎａｋｅＳｋｉｎＴＭ  ｄｉａｌｙｓｉｓ  ｔｕｂｉｎｇ，３．５Ｋ  ＭＷＣＯ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社，カタログ番号６８０３５）を用いて、光親和性標識を行った反応液を透析ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ  ８．０，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１％  ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ−６３０，０．５％  デオキシコール酸ナトリウム，０．１％  ＳＤＳ，１０ｍＭ  ＤＴＴ，ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社，カタログ番号Ｐ２７１４））に対して遮光条件下、４℃、６時間以上、２回透析した。透析済みの反応液に氷冷ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ  ８．０，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１％  ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ−６３０，０．５％  デオキシコール酸ナトリウム，０．１％  ＳＤＳ，５×  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ）を０．２５倍量添加し、混和した。これを１，８８５×ｇにて４℃、１５分間遠心分離し、上清を分取した。この上清に１ｍｇ膜蛋白当たり約２０μＬの５０％  ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ａｇａｒｏｓｅを添加し、これを遮光条件下、４℃、一晩緩やかに回転させて攪拌した。これを１２，０００×ｇにて４℃、２分間で遠心分離し、沈渣（ゲル）を分取した。ゲルを約１０倍量の氷冷ＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ  ８．０，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１％  ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ−６３０，０．５％  デオキシコール酸ナトリウム，０．１％  ＳＤＳ，Ｃｏｍｐｌｅｔｅ）で３回洗浄した。洗浄後、再度１２，０００×ｇにて４℃、２分間遠心分離し、沈渣（ゲル）を分取した。ゲルに同量の溶出ｂｕｆｆｅｒ（１２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ  ６．８，４％  ＳＤＳ，２０％  ｇｌｙｃｅｒｏｌ）を添加し、混和した。これを９８℃、５分間加熱処理し、攪拌した後、１２，０００×ｇにて４℃、２分間遠心分離し、上清（精製物）を分取した。
【０２１４】
（５）Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ解析
ＳＤＳ  ｓａｍｐｌｅ  ｂｕｆｆｅｒ（６２．５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ  ６．８，２％  ＳＤＳ，１０％  グリセロール，０．１％  ブロモフェノールブルー）を用いて調製したＨＥＫ２９３細胞可溶化物（５μｇ蛋白／レーン）、および光親和性標識実験、続いて標的分子の精製で得た精製物（９μＬ／レーン）を９８℃、５分間加熱処理し、電気泳動に供した。電気泳動は、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｎｏｖｅｘ  １２％  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  ｇｅｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号ＮＰ０３４３ＢＯＸ）およびＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ＭＥＳ  ＳＤＳ  ｒｕｎｎｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号ＮＰ０００２）、あるいはＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｎｏｖｅｘ  ４−１２％  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  ｇｅｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号ＮＰ０３２３ＢＯＸ）およびＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ＭＯＰＳ  ＳＤＳ  ｒｕｎｎｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号ＮＰ０００１）を用いた。方法はメーカー推奨のプロトコール（添付文書に記載の方法）にて行った。
【０２１５】
トランスファーは、ニトロセルロースメンブレン（Ｐｒｏｔｒａｎ（登録商標）ＢＡ８５，Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ  ＆  Ｓｃｈｕｅｌｌ社，Ｄａｓｓｅｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ，カタログ番号１０４０１１９１）、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｂｕｆｆｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号ＮＰ０００６−１）およびＸｃｅｌｌ  ＩＩＴＭ  ｂｌｏｔ  ｍｏｄｕｌｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号ＥＩ９０５１）を用いた。方法はメーカー推奨のプロトコール（添付文書に記載の方法）にて行った。
メンブレンのブロッキングは、５％  スキムミルク含有ＴＴＢＳ（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ  ７．６，１３７ｍＭ  ＮａＣｌ，０．１％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）をｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒとして用いて、室温にて振動させながら１時間行った。以下のγ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ構成成分に反応する抗体をｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒにて希釈し、一次抗体溶液として用いて、メンブランを４℃にて振動させながら一晩反応させた。
【０２１６】
Ａ．Ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ  １（以下ＰＳ１）Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｆｒａｇｍｅｎｔ（以下ＮＴＦ）検出用：抗ＰＳ１／Ｎ末端抗体（免疫動物：ウサギ，使用濃度：２μｇ／ｍＬ，Ｚｙｍｅｄ社，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ，カタログ番号７１−１３００）
【０２１７】
Ｂ．ＰＳ１  Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｆｒａｇｍｅｎｔ（以下ＣＴＦ）検出用：抗ＰＳ１／Ｌｏｏｐ抗体（免疫動物：ウサギ，使用濃度：２μｇ／ｍＬ，Ｚｙｍｅｄ社，カタログ番号５１−４２００）
【０２１８】
Ｃ．ＰＳ２  ＣＴＦ検出用：抗ＰＳ２／Ｌｏｏｐ抗体（免疫動物：ウサギ，使用濃度：２μｇ／ｍＬ，Ｚｙｍｅｄ社，カタログ番号３４−４４００）
【０２１９】
Ｄ．Ｎｉｃａｓｔｒｉｎ検出用：抗Ｎｉｃａｓｔｒｉｎ／Ｃ末端抗体（免疫動物：ウサギ，使用濃度：１，０００倍希釈，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社，カタログ番号Ｎ１６６０）
【０２２０】
Ｅ．ＡＰＨ−１ａＬ検出用：抗ＡＰＨ−１ａＬ／Ｃ末端抗体（免疫動物：ウサギ，使用濃度：１，０００倍希釈，Ｃｏｖａｎｃｅ社，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ，ＵＳＡ，カタログ番号ＰＲＢ−５５０Ｐ）
Ｆ．ＰＥＮ−２検出用：抗ＰＥＮ−２／Ｎ末端抗体（免疫動物：ウサギ，使用濃度：１μｇ／ｍＬ，Ｚｙｍｅｄ社，カタログ番号３６−７１００）
【０２２１】
メンブレンをＴＴＢＳで洗浄した後、ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒにて２，０００倍希釈したｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ標識抗ウサギ抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ，カタログ番号ＮＡ９３４）を二次抗体溶液として用いて、メンブレンを室温にて振動させながら１時間反応させた。メンブレンをＴＴＢＳで洗浄した後、ＥＣＬＴＭ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｒｅａｇｅｎｔｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，カタログ番号ＰＲＮ２１０６）あるいはＥＣＬ  ＰｌｕｓＴＭ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｒｅａｇｅｎｔｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，カタログ番号ＰＲＮ２１３２）で化学発光させ、フイルム（ＨｙｐｅｒｆｉｌｍＴＭ  ＥＣＬＴＭ，Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，カタログ番号ＲＰＮ２１０３Ｋ）を感光させた。フイルムを現像した後、カラーイメージスキャナにてバンドをデジタル画像として取り込んだ。
分子量マーカーとしてＭｕｌｔｉＭａｒｋ（登録商標）ｍｕｌｔｉ−ｃｏｌｏｒｅｄ  ｓｔａｎｄａｒｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，カタログ番号ＬＣ５７２５）あるいはＦｕｌｌ  Ｒａｎｇｅ  ＲａｉｎｂｏｗＴＭ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｍａｒｋｅｒｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，カタログ番号ＰＲＮ８００）を用いて、分子量マーカーと比較したゲル移動度から、見かけ上の分子量を見積もり、γ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅの各構成成分に対応するバンドを同定した。
光親和性標識実験による標的分子の同定の結果を図１に示す。
【０２２２】
（６）図１に示す結果から、実施例４の生物学的試薬用化合物が結合するγ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ構成成分として、ＰＳ１  ＮＴＦ（図１Ａ）が同定された。
したがって、本発明の式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩は、標的分子の同定に使用できるので、本発明によれば、Ａβ産生機構の解析に有用な試薬を、さらに特にアルツハイマー病、ダウン症等のＡβが原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤の作用機序の解析に有用な試薬を提供することができる。
【０２２３】
実施例３４
光親和性標識実験における競合阻害試験
（１）実施例６と同様の方法で、ＨＥＫ２９３細胞の培養、可溶化膜画分の調製、光親和性標識実験、標的分子の精製およびＷｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ解析を行った。
但し、光親和性標識実験では実施例４の生物学的試薬用化合物およびγ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ阻害剤Ｌ−６８５，４５８（自社合成品）について、最終濃度の８倍濃度（８００μＭ）の化合物を含有する反応ｂｕｆｆｅｒ（８倍濃度の化合物溶液）を調製した。媒体として最終濃度の８倍濃度（８％）のＤＭＳＯを含有する反応ｂｕｆｆｅｒを調製した。これらを用いて、媒体あるいは１００μＭ  Ｌ−６８５，４５８の存在下、１００μＭの実施例４の生物学的試薬用化合物を用いた光親和性標識実験を行った。Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ解析は、一次抗体として抗ＰＳ１／Ｎ末端抗体を用いて行い、ＰＳ１  ＮＴＦへの実施例４の生物学的試薬用化合物の結合に対するＬ−６８５，４５８の競合阻害作用を評価した。
光親和性標識実験における競合阻害試験の結果を図２に示す。
【０２２４】
（２）図２に示す結果から、実施例４の生物学的試薬用化合物のＰＳ１  ＮＴＦ結合部位はγ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ阻害剤の結合部位とは異なることが判明した。
したがって、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩は、結合部位の解析に使用できるので、本発明によれば、Ａβ産生機構の解析に有用な試薬を、さらに特にアルツハイマー病、ダウン症等のＡβが原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤の作用機序の解析に有用な試薬を提供することができる。
発明の効果
【０２２５】
以上から明らかなとおり、本発明の式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩は、
Ａβタンパクの生成機構に関与する標的タンパク分子の同定に使用できるので、本発明によれば、Ａβ産生機構の解析に有用な試薬を、さらに特にアルツハイマー病、ダウン症等のＡβが原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤の作用機序の解析に有用な試薬を提供することができる。また、式（Ｉ）の生物学的試薬用化合物またはその塩は、アルツハイマー病、ダウン症等のＡβが原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤の結合部位の解析に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【０２２６】
【図１】光親和性標識実験による標的分子の同定の結果を示す図である。Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ解析において、一次抗体として、（Ａ）抗ＰＳ１／Ｎ末端抗体、（Ｂ）抗ＰＳ１／Ｌｏｏｐ抗体、（Ｃ）抗ＰＳ２／Ｌｏｏｐ抗体、（Ｄ）抗Ｎｉｃａｓｔｒｉｎ／Ｃ末端抗体、（Ｅ）抗ＡＰＨ−１ａＬ／Ｃ末端抗体あるいは（Ｆ）抗ＰＥＮ−２／Ｎ末端抗体を用いた。実施例４の生物学的試薬用化合物はＰＳ１  ＮＴＦに結合した。  レーン１：ＨＥＫ２９３細胞可溶化物  レーン２：媒体（精製物）  レーン３：実施例４の生物学的試薬用化合物（１００μＭ）（精製物）  レーン４：実施例５の生物学的試薬用化合物（１００μＭ）（精製物）
【図２】光親和性標識実験における競合阻害試験の結果を示す図である。Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ解析において、一次抗体として抗ＰＳ１／Ｎ末端抗体を用いた。γ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ阻害剤Ｌ−６８５，４５８の存在下、ＰＳ１  ＮＴＦに対する実施例４の生物学的試薬用化合物の結合は、阻害を受けなかった。  レーン１：ＨＥＫ２９３細胞可溶化物  レーン２：−  レーン３：媒体／媒体存在下（精製物）  レーン４：実施例４の生物学的試薬用化合物（１００μＭ）／媒体存在下（精製物）  レーン５：実施例４の生物学的試薬用化合物（１００μＭ）／１００μＭ  Ｌ−６８５，４５８存在下（精製物）
【図１】
2009184924.tif 000079
【図２】
2009184924.tif 000080