(57)【要約】      （修正有）【課題】生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用であり、これまでその製造が困難であったポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチド類を製造する際のプライマーとして有用な新規化合物、およびそのプライマーを使用して糖ペプチドを製造する方法を提供する。【解決手段】末端にアルデヒド基またはケトン基を有し、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む新規なポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチド誘導体およびこれをプライマーとして使用するポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドの簡易な製造方法、および、予め合成されたポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖アミノ酸を用いて、所望のペプチド配列を有する糖ペプチドを合成することにより、ポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドを製造する方法による。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３    （Ｉ）
式中、Ｘは、水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を表し；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し、該糖アミノ酸残基または該糖ペプチド残基が、以下の式：
【化１】
2009143809.tif 000121
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）基またはＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）基であり；
Ｒ２およびＲ７は、ガラクトース（Ｇａｌ）基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、Ｎ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはフコース（Ｆｕｃ）基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される糖残基を有する、化合物。
【請求項２】
前記Ａ２は、バシラス  リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ａ３の少なくとも一部が、ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１由来の配列番号１〜６０に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物と、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、が反応して得られる、化合物。
【請求項５】
前記担体は、以下：
ａ）保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有する、ビニル系単量体の重合体もしくは共重合体、または保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するポリエーテル類；
ｂ）保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するシリカ担体、樹脂担体、磁性ビーズまたは金属担体；ならびに
ｃ）以下の式：
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６１）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６２）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６３）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｎ
ＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６４）、
［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６５）、
［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６６）、
【化２】
2009143809.tif 000122
式中、Ｒ３はヒドロキシル基またはアミノ基を表し、Ｌｙｓはリジン残基を表し、Ｃｙｓはシステインを表す、
【化３】
2009143809.tif 000123
式中、ｎは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である、
で表される化合物、からなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
以下の式：
Ａ４−Ｎ＝Ｃ（−Ｘ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３    （ＩＩ）
式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、バシラス  リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基であり；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し、該糖アミノ酸残基または該糖ペプチド残基が、以下の式：
【化４】
2009143809.tif 000124
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される糖残基を有する；
Ａ４は、以下の式：
【化５】
2009143809.tif 000125
式中、ｓは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である）で表される基である、
で表される化合物。
【請求項７】
前記Ａ３の少なくとも一部が、ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１由来の配列番号１〜６０に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
以下の工程：
（Ａ）請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｄ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
【請求項９】
以下の工程：
（Ａ）請求項４〜７のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖
を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
【請求項１０】
以下の工程：
（Ａ）請求項４〜７のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｄ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
【請求項１１】
以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させる工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
【請求項１２】
以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させ、これと同時に工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｆ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
【請求項１３】
前記工程（Ａ）のケト酸またはアルデヒド酸が、以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−ＣＯＯＨ    （ＩＩＩ）
式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、メチレン鎖１〜２０個分の長さを有するリンカーを表す、
で表される化合物である、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
以下の工程：
（Ａ）請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；および
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
【請求項１５】
以下の工程：
（Ａ）請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
【請求項１６】
前記糖ペプチドが、以下の式：
【化６】
2009143809.tif 000126
（配列番号２）
【化７】
2009143809.tif 000127
（配列番号２１）
または
【化８】
2009143809.tif 000128
（配列番号４１）
式中、Ｘ１は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
【化９】
2009143809.tif 000129
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される基を表し、ただし、Ｘ１のすべてが水素原子である場合を除く；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す、
で表される糖ペプチドである、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
以下の式：
【化１０】
2009143809.tif 000130
（配列番号２）
【化１１】
2009143809.tif 000131
（配列番号２１）
または
【化１２】
2009143809.tif 000132
（配列番号４１）
式中、Ｘ１は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
【化１３】
2009143809.tif 000133
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される基を表し、ただし、Ｘ１のすべてが水素原子である場合を除く；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す、
で表される糖ペプチド。
【請求項１８】
所望の糖ペプチドを製造する方法であって、該方法は、以下の工程：
（Ａ）
以下の式：
【化１４】
2009143809.tif 000134
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｒ１１は、水素原子またはメチル基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｐは、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である、
で表される糖アミノ酸の糖鎖を保護基により保護して糖鎖が保護された糖アミノ酸を生成する工程であって、該保護基は、アセチル基、ベンゾイル基、メチル基、メトキシメチル基、トリメチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ジメチルフェニル基およびトリイソプロピルシリル基、ベンジル基、ベンジリデン基、イソプロピリデン基、ジtert-ブチルシリリデン基からなる群より選択される、工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得られた該糖鎖が保護された糖アミノ酸および９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基でＮ−保護されたアミノ酸を用いて、所望のペプチド配列を有する糖鎖が保護された糖ペプチドを合成する工程；ならびに
（Ｃ）工程（Ｂ）で得られた該糖鎖が保護された糖ペプチドを脱保護して該所望の糖ペプチドを生成させる工程、
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖ペプチドを製造する際のプライマーとして有用な新規化合物、およびそのプライマーを使用して糖ペプチドを製造する方法に関する。本発明はまた、その製造方法によって得られる糖ペプチド類に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖鎖は核酸やタンパク質と並んで生体を構成する主要成分であり、生体のエネルギー源としてよく知られているが、近年、生体内の情報伝達、タンパク質の品質管理、構造安定化、タンパク質輸送のための標識など、様々な高次機能を担っていることが明らかとなってきた。しかしながら、糖鎖は核酸やタンパク質に比べ、一般的な調製法が確立されておらず、さらに糖鎖の機能は脂質やタンパク質などと結合した複合糖質として機能していることが多いため、その構造情報を含めた機能の研究は未解明部分が極めて多い。また、タンパク質の研究分野でも糖鎖と共にその機能を果たしていると思われるものが多数見つかっているが、その詳細な機構の研究は現状ではきわめて困難である。
【０００３】
これらの研究を推し進め、さらに医薬などへと活用するためには糖鎖単独ではなく複合糖質の状態で均一な試料を調製する必要がある。特に糖ペプチドに関しては糖鎖とペプチド双方が極めて多様性に富んでいるため、必要となった構造をそのつど天然物から調達することは事実上不可能であり、その迅速な製造法の開発が期待されている。共通の手順で多様な構造を作成するという作業は近年発達したコンビナトリアルケミストリーに代表されるように、化学合成法が得意とする技術である。このような背景に基づき、これまで様々な糖ペプチド製造法が検討されてきたが、いまだに実用的な製造法は報告されていない。その主な理由、原料となる糖アミノ酸の調製が煩雑であり多彩な糖鎖構造を有する糖アミノ酸を揃えることが困難であること、大きい糖鎖構造を有する糖アミノ酸は立体障害が大きいためその収率および反応速度が遅いこと、さらに糖ペプチド構築後に化学合成法で糖鎖を伸張することは反応性および位置・立体制御の点から難しいこと、が挙げられる。すなわち、現在の技術では反応収率が低い上に調製に要する時間が長く、さらに、糖ペプチド合成はその合成原料の調製自体が難しいため、必要な糖鎖構造を迅速に調製するオーダーメードな製造や、糖ペプチドおよび糖タンパク質の網羅的機能解析に必要とされている複雑な糖鎖構造を含む糖ペプチドライブラリーの構築は極めて困難である。
【０００４】
一般に糖ペプチドの合成は、Ｆｍｏｃ−アミノ酸（アミノ基を９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基で保護したアミノ酸、以下９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基をＦｍｏｃと略する）とともにＦｍｏｃグリコシルアミノ酸を用い、ペプチド自動合成装置で基本となるペプチド部分を固相担体上に合成し、固相担体よりペプチド部分を遊離させ、一旦精製した後、有機化学的なまたは酵素的な合成手法によりひとつずつ糖鎖を伸長させていくという方法が用いられる。このため、糖鎖の伸長には煩雑な操作と長い時間が必要である。そこで、ペプチド部分のみならず、オリゴ糖鎖部分も自動合成になれば糖ペプチド合成の迅速化およびライブラリー作成において非常に有用である。核酸やタンパク質については自動合成技術が確立されており、このことによりこれらの分野の研究が著しく進歩したことは誰もが認めるところであり、糖鎖についてもその自動合成技術の確立は切望されている。
【０００５】
これまでに糖ペプチドのライブラリー合成を志向した研究に関しいくつかの報告があり、いずれもペプチド部分の合成はＲ．Ｂ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄの方法に基づいた固相化学合成法で行われている。一方、オリゴ糖鎖側の合成手法は大きく分けて２つある。ひとつは化学合成法によるものであるが、糖残基と糖残基を立体選択的に結合させる方法が十分確立されておらず、さらに保護基を結合させたりあるいは脱離させたりと工程が煩雑であるという問題がある。もうひとつは酵素合成によるものであり、保護基を必要とせず、また糖残基と糖残基を立体選択的に結合させることができるので化学合成に比べ、非常に有利であり、近年いくつかの高分子担体と組み合わせる自動合成可能な方法が提案されるようになって来た。これには、最近各種糖転移酵素の遺伝子が単離され、遺伝子組換え技術による糖転移酵素の大量生産が可能になってきたという背景がある。
【０００６】
そのような例としては、Ｕ．Ｚｅｈａｖｉらは、アミノエチル基またはアミノヘキシル基を結合させたポリアクリルアミドゲルを固相担体とした糖転移酵素による固相合成を報告している（非特許文献１〜４参照）。この方法は適当な単糖を４−カルボキシ−２−ニトロベンジルグリコシドとした後、上記担体のアミノ基と直接またはスペーサーを介して結合させたものをプライマーとして、糖転移酵素により糖鎖伸長反応を行い、その後、光分解により伸長させた糖鎖を遊離させるというものである。しかしながら、糖転移収率は５０％程度であり十分なものとはいえない。また、この方法で得られるのはオリゴ糖であって糖ペプチドではない。
【０００７】
その他の例として、Ｃ．−Ｈ．Ｗｏｎｇらは、アミノ化シリカに糖ペプチドを結合させたものをプライマーとし、糖転移酵素を用いて糖鎖を伸長させた後、α−キモトリプシンの加水分解作用を利用し、伸長させた糖鎖を糖ペプチドの形で切り出す方法を報告している。（非特許文献５参照）。得られる糖ペプチドのペプチド鎖はＡｓｎ（アスパラギン）−Ｇｌｙ（グリシン）−Ｐｈｅ（フェニルアラニン）と短く、さらに、糖転移酵素による糖鎖伸長反応の収率は５５〜６５％であり、とても十分なものとはいえない。
【０００８】
また、Ｃ．−Ｈ．Ｗｏｎｇらは、固相担体であるアミノ化シリカに結合させる基を改良し、糖転移酵素により糖鎖を伸長した後、ヒドラジン分解により糖鎖を遊離させる方法を報告しており、酵素による糖転移反応をほぼ定量的に行うことができたとも報告している（非特許文献６参照）。しかしながら、この方法で得られる糖鎖化合物は糖ペプチドではない。
【０００９】
さらに、Ｃ．−Ｈ．Ｗｏｎｇらは、アミノ化シリカを固相担体とした非特許文献７のプライマーにＦｍｏｃアミノ酸およびＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（βＧｌｃＮＡｃ）−ＯＨを用いてペプチド鎖を伸長させ、次いでペプチド鎖上の保護基を脱離させ、その後上述のＧｌｃＮＡｃ残基に糖転移酵素を用いて糖鎖を伸長させ、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウムで処理することにより固相担体上で合成した糖ペプチドを遊離させる方法を報告している（非特許文献７参照）。この方法で得られる糖ペプチド鎖はアミノ酸残基８つからなっており、ペプチド鎖としては十分な長さを有しているが、得られた糖ペプチドは最初に固相担体に導入したアミノ酸に対する収率が１０％以下であり、十分なものとはいえない。また、ペプチド合成と糖鎖合成を通じて未反応物などの不純物が蓄積するため、ペプチド鎖と糖鎖構造がそれぞれ複雑になると目的物の単離精製が困難になる。さらに、ペプチドの自動合成は通常有機溶媒中で、糖転移酵素による糖鎖合成は通常水溶液中で行われ、それぞれの反応で求められる担体の性質は異なるため、ひとつの担体上でペプチドも糖鎖も自動合成することは困難である。
【００１０】
また、Ｍ．Ｍｅｌｄａｌらは、ジアミノ化ポリエチレングリコールのモノおよびジアクリロイル化体の重合体に、糖ペプチド誘導体を結合させたものをプライマーとし、糖転移酵素を用いて糖鎖を伸長させた後、トリフルオロ酢酸により糖鎖を遊離させる方法を報告している（非特許文献８参照）。しかし、この方法で得られる糖ペプチドのペプチド鎖はＡｓｎ（アスパラギン）−Ｇｌｙ（グリシン）であり、糖ペプチドと呼ぶにはあまりに短い。また、Ｃ末端のグリシン残基はグリシンアミド残基となっており、場合によってはグリシンアミド残基をグリシン残基に変換する必要がある。
【００１１】
Ｓ．Ｒｏｔｈらは、特許文献１に以下のような方法を開示している。まず、糖転移酵素の糖受容体を固相担体に結合させ、これをアフィニティ吸着体とし、この糖受容体と結合することのできる糖転移酵素を含む組織抽出液を接触させることにより、糖転移酵素をアフィニティ吸着体に結合させる。次いで、この糖転移酵素が結合したアフィニティ吸着体をこの糖転移酵素が糖供与体として利用できる糖ヌクレオチドを含む溶液と接触させることにより、糖転移酵素をアフィニティ吸着体から遊離させるとともに糖受容体に糖残基をひとつ伸長させる。さらにこの糖残基がひとつ伸長した糖受容体と結合することのできる糖転移酵素を含む組織抽出液を接触させ、同様のことを繰り返し所望の糖鎖を固相担体上に合成するというものである。しかしながら、この方法の有用性あるいは非天然型の糖ペプチド合成への適用を示す具体的なデータは示されておらず、得られた糖鎖を固相担体から遊離させる方法も開示されていない。
【００１２】
西村らは、糖ペプチドあるいはネオ糖ペプチド（非天然型の糖ペプチド）の合成に利用できるプロテアーゼ切断型プライマーおよびそのプライマーを利用した糖ペプチドの製造方法、ならびにそのプライマーの合成に有用な重合性芳香族アミノ酸誘導体を開示している（特許文献２参照）。しかし、この方法は糖残基を有するペプチドをラジカル重合しているためラジカルに弱い硫黄原子を含む糖ペプチドの調製が難しく、ペプチド合成後にカラム精製、重合操作など煩雑な操作が含まれており、固相ペプチド化学合成から酵素による糖鎖伸長反応への切り替えに時間がかかるという問題を残している。
【００１３】
このように、装置化および精製が簡易で糖ペプチドを迅速かつ収率よく製造するためのプライマーはいまだに存在せず、化学法によるペプチド自動合成と酵素法による糖鎖自動合成を効率的に結びつけることのできる新しい技術は、ポストゲノム、ポストプロテオミクスを担うグライコミクス、グライコプロテオミクスの時代において非常に重要であり、その開発は渇望されている。実際にここに例示した装置化を志向した糖ペプチド合成法では糖ペプチドライブラリーと呼べる多品種合成や複雑な天然型糖鎖または複数の糖鎖を含む糖ペプチド合成例はない。
【００１４】
ムチンは、気管、胃腸などの消化管、生殖腺などの内腔を覆う粘液の主要な糖タンパク質である。ＭＵＣ１は、上皮細胞の膜結合糖タンパク質であり、詳細に検討された最初のムチンである。ＭＵＣ１はＯ−結合型糖鎖の付加しうるセリンおよびスレオニンを含むアミノ酸配列の繰り返しであるタンデムリピート（ＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡ（配列番号４１））という特徴的な構造をもつ巨大な細胞表面分子である。糖鎖の付加はすべてのセリンおよびスレオニンに起こるのではなく、糖鎖の伸張度も多様であることから、同じアミノ酸配列を有していたとしても機能の異なる数多くの糖タンパク質が存在しうる。
【００１５】
ＭＵＣ１は、癌化の進行と共にその発現レベルが変化することが報告されている（非特許文献９：Ｎａｋａｍｏｒｉ，Ｓ．；Ｏｔａ，Ｄ．Ｍ．；Ｋａｒｅｎ，Ｒ．；Ｓｈｉｒｏｔａｎｉ，Ｋ．；Ｉｒｉｍｕｒａ，Ｔ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１９９４，１０６，３５３−３６１．）。例えば結腸直腸癌では進行段階の原発腫瘍や転移病巣でＭＵＣ１の発現上昇が認められている。さらにＭＵＣ１のグリコシレーションの度合い（糖鎖の導入個所）および糖鎖構造が、正常上皮由来のものと癌細胞由来のものとで異なるという報告例（非特許文献１０：Ｌｌｏｙｄ，Ｋ．Ｏ．；Ｂｕｒｃｈｅｌｌ，Ｊ．；Ｋｕｄｒｙａｓｈｏｖ，Ｖ．；Ｙｉｎ，Ｂ．Ｗ．Ｔ．；Ｔａｙｌｏｒ−Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ，Ｊ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，２７１，３３３２５−３３３３４．；特許文献１１：Ｈａｎｉｓｃｈ，Ｆ．−Ｇ．；Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｓ．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，１０，４３９−４４９．）は数多い。例えば、正常細胞ではグリコシル化されているペプチドであっても、癌細胞ではグリコシル化されずに細胞表面に露出する場合がある。そのような場合は露出したペプチド部分がエピトープとなる。これらの露出したエピトープが、肺癌、乳癌、結腸癌、膵癌由来の上皮細胞株の細胞膜に見いだされている。具体的には、乳癌の患者から単離された細胞傷害性Ｔリンパ球はＭＵＣ１タンパク質のグリコシル化を受けていないペプチドを認識する。一方、癌関連糖鎖抗原であるＴｎ、Ｔのような母核構造及びそれらにシアル酸が結合したシアリルＴｎ、シアリルＴ、さらにシアリルルイスＡ抗原、シアリルルイスＸ抗原が癌細胞膜のムチンや癌患者血清中のムチンに見いだされている。
【００１６】
近年、このような癌化に伴うＭＵＣ１の特異的な変化をターゲットとした創薬・診断薬への応用が注目されている（非特許文献１２：Ｋｏｇａｎｔｙ，Ｒ．Ｒ．；Ｒｅｄｄｉｓｈ，Ｍ．Ｒ．；Ｌｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒ，Ｂ．Ｍ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ，１９９６，１，１９０−１９８．）。例えば、Ｂｉｏｍｉｒａ−Ｍｅｒｃｋ  社は、リポソーマル製剤において、ＭＵＣ１癌ムチンの２５アミノ酸のシーケンスを取り入れた合成ＭＵＣ１ペプチドワクチン：「Ｌ−ＢＬＰ２５」を開発中であり、肺癌、前立腺癌をターゲットにＰｈａｓｅＩＩ臨床試験を実施中である。さらにＢｉｏｍｉｒａ−Ｍｅｒｃｋ社は、癌細胞上のムチンに特異的に発現したＳＴｎ（二糖体）をターゲットとした合成ＳＴｎに抗体の産生やＴ−細胞反応を刺激するＫＬＨ（Ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）をキャリアタンパクとして結合させた合成ワクチン：「Ｔｈｅｒａｔｏｐｅ」を乳癌、直腸癌を対象にＰｈａｓｅＩＩＩ臨床開発中である。
【００１７】
西村らは、糖ペプチド合成するための水溶性高分子プライマーを開発した（特許文献３）。特許文献３には、末端にアルデヒド基またはケトン基を有し、ペプチド固相合成用の光切断型リンカーを含む糖ペプチド誘導体を高分子プライマーへと変換し、これを利用して糖ペプチドを製造することが記載されている。西村らはまた、ムチン型ペプチドを合成する方法と、ＭＵＣ１に関連する糖ペプチドを開発した（特許文献４）。特許文献４は、末端にアルデヒド基またはケトン基を有し、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチド誘導体をプライマーへと変換し、これを用いて糖ペプチドを製造することが記載されている。
【特許文献１】特表平５−５００９０５号公報
【特許文献２】特開２００１−２２０３９９号公報
【特許文献３】国際公開第２００５／１０８４１７号パンフレット
【特許文献４】国際公開第２００６／０３０８４０号パンフレット
【非特許文献１】Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，１２４，２３（１９８３）
【非特許文献２】Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，２２８，２５５（１９９２）
【非特許文献３】Ｒｅａｃｔ．Ｐｏｌｙｍ．，２２，１７１（１９９４）
【非特許文献４】Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，２６５，１６１（１９９４）
【非特許文献５】Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１６、１１３６（１９９４）
【非特許文献６】Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１６、１１３１５（１９９４）
【非特許文献７】Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１９、８７６６（１９９７）
【非特許文献８】Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１８４９（１９９４）
【非特許文献９】Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１０６，３５３−３６１（１９９４）
【非特許文献１０】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，３３３２５−３３３３４（１９９６）
【非特許文献１１】Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１０，４３９−４４９（２０００）
【非特許文献１２】Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ，１，１９０−１９８（１９９６）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明の課題は、ポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドを製造する際のプライマーとして有用な新規化合物、およびそのプライマーを使用して、ポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドを製造する方法を提供し、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用な、これまでその製造が困難であったポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチド類を製造することにある。
【００１９】
本発明の別の課題は、予め合成されたポリラクトサミン骨格を有する糖アミノ酸を用いて、所望のペプチド配列を有する糖ペプチドを合成することにより、ポリラクトサミン骨格を有する糖ペプチドを製造する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明者らは鋭意検討した結果、末端にアルデヒド基またはケトン基を有し、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む新規な糖ペプチド誘導体は、そのアルデヒド基またはケトン基を介して所定の担体に強固に結合させることができ、しかもこの結合はプロテアーゼによる加水分解条件下において分解しないため、ポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドの製造に適したプライマーとして機能すること、ならびにこのプライマーを使用することにより、従来は多段階の精製を要していたポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドの精製を簡易にし、ポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドを迅速かつ収率よく製造できることを見出し、上記課題を解決した。
【００２１】
本発明者らはまた、予め合成されたポリラクトサミン骨格を有する糖アミノ酸を保護基により保護し、保護されたアミノ酸を用いて、所望のペプチド配列を有する糖ペプチドを合成することにより、ポリラクトサミン骨格を有する糖ペプチドを製造できることを見出した。本方法は、プロテアーゼにも光切断にも依存しない。従って、本方法により、プロテアーゼまたは光切断により切断されやすい性質を有するアミノ酸残基を含む糖ペプチドを合成することが可能となった。
【００２２】
本発明はまた、上記プライマーを用いた糖ペプチドの製造方法により、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用であり、これまでその製造が困難であったムチン型糖ペプチド類が合成できることを見出し、本発明を完成した。
【００２３】
本発明のＭＵＣ１およびＭＵＣ１ペプチドライブラリーは、ＭＵＣ１の機能解明に有効であり、またそこから得られる知見を基にした新たな創薬の可能性が考えられる。糖ペプチドを用いた研究として、例えば、糖ペプチドライブラリーの固定化・チップ化、抗体反応スクリーニング、特異抗体の探索、抗原−抗体反応における構造活性相関調査、特異性・選択性の高いモノクローナル抗体の作成、さらに抗体医薬、糖ペプチドを用いたワクチン療法等への展開が考えられる。
【００２４】
このように、本発明では以下を提供する。
（項目１）
以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３    （Ｉ）
式中、Ｘは、水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を表し；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し、該糖アミノ酸残基または該糖ペプチド残基が、以下の式：
【化１４−１】
2009143809.tif 000002
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）基またはＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）基であり；
Ｒ２およびＲ７は、ガラクトース（Ｇａｌ）基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、Ｎ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはフコース（Ｆｕｃ）基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される糖残基を有する、化合物。
（項目２）
前記Ａ２は、バシラス  リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基である、項目１に記載の化合物。
（項目３）
前記Ａ３の少なくとも一部が、ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１由来の配列番号１〜６０に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の化合物。
（項目４）
項目１に記載の化合物と、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、が反応して得られる、化合物。
（項目５）
前記担体は、以下：
ａ）保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有する、ビニル系単量体の重合体もしくは共重合体、または保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するポリエーテル類；
ｂ）保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するシリカ担体、樹脂担体、磁性ビーズまたは金属担体；ならびに
ｃ）以下の式：
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６１）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６２）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６３）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｎ
ＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６４）、
［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６５）、
［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６６）、
【化１４−２】
2009143809.tif 000003
式中、Ｒ３はヒドロキシル基またはアミノ基を表し、Ｌｙｓはリジン残基を表し、Ｃｙｓはシステインを表す、
【化１４−３】
2009143809.tif 000004
式中、ｎは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である、
で表される化合物、からなる群から選択される、項目４に記載の化合物。
（項目６）
以下の式：
Ａ４−Ｎ＝Ｃ（−Ｘ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３    （ＩＩ）
式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、バシラス  リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基であり；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し、該糖アミノ酸残基または該糖ペプチド残基が、以下の式：
【化１４−４】
2009143809.tif 000005
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される糖残基を有する；
Ａ４は、以下の式：
【化１４−５】
2009143809.tif 000006
式中、ｓは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である）で表される基である、
で表される化合物。
（項目７）
前記Ａ３の少なくとも一部が、ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１由来の配列番号１〜６０に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、項目６に記載の化合物。
（項目８）
以下の工程：
（Ａ）項目１〜３のいずれか１項に記載の化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｄ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（項目９）
以下の工程：
（Ａ）項目４〜７のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖
を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（項目１０）
以下の工程：
（Ａ）項目４〜７のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｄ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（項目１１）
以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目１〜３のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させる工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（項目１２）
以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目１〜３のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させ、これと同時に工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｆ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（項目１３）
前記工程（Ａ）のケト酸またはアルデヒド酸が、以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−ＣＯＯＨ    （ＩＩＩ）
式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、メチレン鎖１〜２０個分の長さを有するリンカーを表す、
で表される化合物である、項目１１または１２に記載の方法。
（項目１４）
以下の工程：
（Ａ）項目１〜３のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；および
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（項目１５）
以下の工程：
（Ａ）項目１〜３のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびＮｅｕ５Ａｃ基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包含する、糖ペプチドを製造する方法。
（項目１６）
前記糖ペプチドが、以下の式：
【化１４−６】
2009143809.tif 000007
（配列番号２）
【化１４−７】
2009143809.tif 000008
（配列番号２１）
または
【化１４−８】
2009143809.tif 000009
（配列番号４１）
式中、Ｘ１は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
【化１４−９】
2009143809.tif 000010
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される基を表し、ただし、Ｘ１のすべてが水素原子である場合を除く；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す、
で表される糖ペプチドである、項目８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
以下の式：
【化１４−１０】
2009143809.tif 000011
（配列番号２）
【化１４−１１】
2009143809.tif 000012
（配列番号２１）
または
【化１４−１２】
2009143809.tif 000013
（配列番号４１）
式中、Ｘ１は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
【化１４−１３】
2009143809.tif 000014
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される基を表し、ただし、Ｘ１のすべてが水素原子である場合を除く；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す、
で表される糖ペプチド。
（項目１８）
所望の糖ペプチドを製造する方法であって、該方法は、以下の工程：
（Ａ）
以下の式：
【化１４−１４】
2009143809.tif 000015
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｒ１１は、水素原子またはメチル基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｐは、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である、
で表される糖アミノ酸の糖鎖を保護基により保護して糖鎖が保護された糖アミノ酸を生成する工程であって、該保護基は、アセチル基、ベンゾイル基、メチル基、メトキシメチル基、トリメチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ジメチルフェニル基およびトリイソプロピルシリル基、ベンジル基、ベンジリデン基、イソプロピリデン基、ジtert-ブチルシリリデン基からなる群より選択される、工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得られた該糖鎖が保護された糖アミノ酸および９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基でＮ−保護されたアミノ酸を用いて、所望のペプチド配列を有する糖鎖が保護された糖ペプチドを合成する工程；ならびに
（Ｃ）工程（Ｂ）で得られた該糖鎖が保護された糖ペプチドを脱保護して該所望の糖ペプチドを生成させる工程、
を包含する、方法。
【発明の効果】
【００２５】
本発明ではポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチド合成において比較的調製が簡単な１から３糖程度を含む糖アミノ酸を使用し、ペプチド合成後に糖鎖伸長を行うことにより、複雑な糖鎖を有する糖ペプチド合成を可能とすると共に、糖鎖伸長反応の中間体となる各糖鎖構造のライブラリー調製までを可能とする。また、糖鎖伸長反応は水溶性高分子上に糖ペプチドを担持して行うため、反応の加速効果および分子操作の簡素化が可能となり、糖鎖伸長反応の自動化が可能となる。これにより、従来の技術では極めて困難であった簡単な糖鎖構造から複雑な糖鎖構造までを網羅的に有する糖ペプチドのライブラリー調製が可能となる。例えば、本発明により、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用であり、これまでその製造が困難であったムチン型糖ペプチド類を合成することができる。
【００２６】
本発明はまた、予め合成されたポリラクトサミン骨格を有する糖アミノ酸を保護基により保護し、保護されたアミノ酸を用いて、所望のペプチド配列を有する糖ペプチドを合成することにより、ポリラクトサミン骨格を有する糖ペプチドの製造を可能とする。本方法は、プロテアーゼにも光切断にも依存しない。これにより、プロテアーゼまたは光切断により切断されやすい性質を有するアミノ酸残基を含む糖ペプチドを合成することができる。
【００２７】
得られた糖ペプチドライブラリーは構造解析、生化学試験の標準サンプルとして使用可能である。また、この糖ペプチドライブラリーをチップ上に配置し、糖ペプチド認識タンパク質の検出、病理診断、細胞接着配列の検索、細胞増殖・アポトーシスなどに関連する配列解析などを網羅的に行うことが可能になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。
（用語）
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。
【００２９】
本明細書において「糖アミノ酸」とは、糖残基とアミノ酸残基とが結合したものを意味し、「糖アミノ酸残基」と互換可能に用いられる。
【００３０】
本明細書において「実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基」とは、上記項目（４）で表されるような化合物をプロテアーゼで処理しても糖アミノ酸部分がプロテアーゼにより５０％以上切断されない糖アミノ酸残基、好ましくは２０％以上切断されない糖アミノ酸残基を指す。
【００３１】
本明細書において「糖ペプチド残基」とは、少なくとも１個の糖アミノ酸を含むペプチド残基を意味し、「糖ペプチド」と互換可能に用いられる。
【００３２】
上記糖ペプチド残基に含まれる糖アミノ酸を構成する糖残基としては、特に制限はないが、単糖から３糖または単糖から３糖の誘導体が好ましく、単糖または単糖の誘導体がさらに好ましく用いられる。
【００３３】
本明細書において「糖鎖」とは、単位糖（単糖および／またはその誘導体）が１つ以上連なってできた化合物をいう。単位糖が２つ以上連なる場合は、各々の単位糖同士の間は、グリコシド結合による脱水縮合によって結合する。このような糖鎖としては、例えば、生体中に含有される多糖類（グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸ならびにそれらの複合体および誘導体）の他、分解された多糖、糖タンパク質、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、糖脂質などの複合生体分子から分解または誘導された糖鎖など広範囲なものが挙げられるがそれらに限定されない。したがって、本明細書では、糖鎖は、「多糖（ポリサッカリド）」、「糖質」、「炭水化物」と互換可能に使用され得る。また、特に言及しない場合、本明細書において「糖鎖」は、糖鎖および糖鎖含有物質の両方を包含することがある。
【００３４】
本明細書において「単糖」とは、これより簡単な分子に加水分解されず、少なくとも１つの水酸基および少なくとも１つのアルデヒド基またはケトン基を含む、ポリヒドロキシアルデヒドまたはポリヒドロキシケトンならびにその誘導体をいう。通常単糖は、一般式ＣｎＨ２ｎＯｎで表されるがそれらに限定されず、フコース（デオキシヘキソース）、Ｎ−アセチルグルコサミンなども含まれる。ここで、上の式において、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９および１０であるものを、それぞれジオース、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オクトース、ノノースおよびデコースという。一般に鎖式多価アルコールのアルデヒドまたはケトンに相当するもので、前者をアルドース、後者をケトースという。
【００３５】
本発明において糖を記載するために使用する命名法および略称は、通常の命名法に従う。例えば、β−Ｄ−ガラクトース
【００３６】
【化１５】
2009143809.tif 000016
は、Ｇａｌ；
Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン
【００３７】
【化１６】
2009143809.tif 000017
は、ＧｌｃＮＡｃ；
α−Ｌ−フコース
【００３８】
【化１７】
2009143809.tif 000018
は、Ｆｕｃ；
α−Ｎ−アセチルノイラミン酸
【００３９】
【化１８】
2009143809.tif 000019
は、Ｎｅｕ５Ａｃ；
Ｎ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトサミン
【００４０】
【化１８−１】
2009143809.tif 000020
は、ＧａｌＮＡｃにより表す。環状の２つのアノマーは、αおよびβにより表す。表示上の理由により、ａまたはｂと表すことがある。従って、本明細書において、αとａ、βとｂは、アノマー表記については交換可能に使用される。
【００４１】
本明細書において、ガラクトースとは、任意の異性体を指すが、代表的にはβ−Ｄ−ガラクトースであり、特に言及しないときには、β−Ｄ−ガラクトースを指すものとして使用される。
【００４２】
本明細書において、アセチルグルコサミンとは、任意の異性体を指すが、代表的にはＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンであり、特に言及しないときには、Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンを指すものとして使用される。
【００４３】
本明細書において、フコースとは、任意の異性体を指すが、代表的にはα−Ｌ−フコースであり、特に言及しないときには、α−Ｌ−フコースを指すものとして使用される。
【００４４】
本明細書において、シアル酸は、シアリン酸ともいい、ノイラミン酸（ｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）の誘導体の総称である。シアル酸としては、Ｎ−アシル（Ｎ−アセチルまたはＮ−グリコリル）ノイラミン酸およびＮ−アシル−Ｏ−アセチルノイラミン酸が天然に知られている。シアル酸は、まれに遊離状態でも存在するが、大部分は単糖、多糖、糖タンパク質、糖ペプチド、あるいはスフィンゴ糖脂質の分子中に酸に不安定な結合（α−ケトシド結合）で存在する。本明細書において使用されるシアル酸は、好ましくは、Ｎ−アセチルノイラミン酸である。
【００４５】
本明細書において、アセチルガラクトサミンとは、任意の異性体を指すが、代表的にはＮ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトサミンであり、特に言及しないときには、Ｎ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトサミンを指すものとして使用される。
【００４６】
本明細書において、糖の表示記号、呼称、略称（Ｇｌｃなど）などは、単糖を表すときと、糖鎖中で使用されるときとは、異なることに留意する。糖鎖中、単位糖は、結合先の別の単位糖との間に脱水縮合があるので、相方から水素または水酸基を除いた形で存在することになる。従って、これらの糖の略号は、単糖を表すときに使用されるときは、すべての水酸基が存在するが、糖鎖中で使用されるときは、水酸基が結合先の糖の水酸基とが脱水縮合されて酸素のみが残存した状態を示していることが理解される。従って、本明細書において使用される場合、糖について「糖残基」とは、水素が１〜ｎ個とれたものをいい、通常、糖は、他の化学部分と水酸基を介して結合するので、糖残基は糖の水酸基から水素が１〜ｎ個（この場合、ｎは、その糖に存在する水酸基の数）とれたものをいうが、これに限定されず、他に結合可能な基があれば、その基から水素がとれたものを示し得る。従って、糖残基という場合は、使用される状況に応じて、一価、二価、三価〜ｎ価の残基であり得る。本明細書で具体的名称を指すときは、「糖の名称」＋「基」という形式で表し、例えば、ガラクトース基、Ｇａｌ基などと表す。
【００４７】
単糖は一般に、グリコシド結合により結合されて二糖および多糖を形成する。環の平面に関する結合の向きは、αおよびβにより示す。２つの炭素の間の結合を形成する特定の炭素原子も記載する。
【００４８】
本明細書において糖鎖は、
【００４９】
【化１９】
2009143809.tif 000021
により表される。従って、例えば、Ｎ−アセチルグルコサミンのＣ−６とＮ−アセチルグルコサミンのＣ−１とがβグリコシド結合で結合している糖鎖は、ＧｌｃＮＡｃ６−１βＧｌｃＮＡｃにより表される。
【００５０】
糖鎖の分岐は、括弧により表し、結合する単位糖のすぐ右に配置して表記する。例えば、
【００５１】
【化２０】
2009143809.tif 000022
と表され、括弧の中は、
【００５２】
【化２１】
2009143809.tif 000023
と表記される。従って、例えば、Ｎ−アセチルグルコサミンのＣ−６がＮ−アセチルグルコサミンのＣ−１とβグリコシド結合し、さらにこのＮ−アセチルグルコサミンのＣ−３がガラクトースのＣ−１とβグリコシド結合している場合、ＧｌｃＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃと表される。単糖は、（潜在）カルボニル原子団になるだけ小さい番号を付けることを基本にして表される。有機化学命名法の一般基準では（潜在）カルボニル原子団より優位な原子団が分子中に導入されたときでも、通常上記の番号付けで表される。
【００５３】
【化２２】
2009143809.tif 000024
【００５４】
【化２３】
2009143809.tif 000025
本明細書において特に言及するときは、「単糖の誘導体」は、置換されていない単糖上の一つ以上の水酸基が別の置換基に置換され、結果生じる物質をいう。そのような単糖の誘導体としては、カルボキシル基を有する糖（例えば、Ｃ−１位が酸化されてカルボン酸となったアルドン酸（例えば、Ｄ−グルコースが酸化されたＤ−グルコン酸）、末端のＣ原子がカルボン酸となったウロン酸（Ｄ−グルコースが酸化されたＤ−グルクロン酸）、アミノ基またはアミノ基の誘導体（例えば、アセチル化されたアミノ基）を有する糖（例えば、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンなど）、アミノ基およびカルボキシル基を両方とも有する糖（例えば、Ｎｅｕ５Ａｃ（シアル酸）、Ｎ−アセチルムラミン酸など）、デオキシ化された糖（例えば、２−デオキシ−Ｄ−リボース）、硫酸基を含む硫酸化糖、リン酸基を含むリン酸化糖などがあるがそれらに限定されない。本明細書では、単糖という場合は、上記誘導体も包含する。あるいは、ヘミアセタール構造を形成した糖において、アルコールと反応してアセタール構造のグリコシドもまた、単糖の範囲内にある。
【００５５】
本発明の糖ペプチド残基を構成する「アミノ酸残基」は分子内にアミノ基とカルボキシル基を有するものであれば特に制限はなく、Ｇｌｙ（グリシン）残基、Ａｌａ（アラニン）残基、Ｖａｌ（バリン）残基、Ｌｅｕ（ロイシン）残基、Ｉｌｅ（イソロイシン）残基、Ｔｙｒ（チロシン）残基、Ｔｒｐ（トリプトファン）残基、Ｇｌｕ（グルタミン酸）残基、Ａｓｐ（アスパラギン酸）残基、Ｌｙｓ（リジン）残基、Ａｒｇ（アルギニン）残基、Ｈｉｓ（ヒスチジン）残基、Ｃｙｓ（システイン）残基、Ｍｅｔ（メチオニン）残基、Ｓｅｒ（セリン）残基、Ｔｈｒ（トレオニン）残基、Ａｓｎ（アスパラギン）残基、Ｇｌｎ（グルタミン）残基またはＰｒｏ（プロリン）残基などのα−アミノ酸残基あるいはβ−Ａｌａ残基のようなβ−アミノ酸残基などが例示される。また、アミノ酸残基はＤ体、Ｌ体いずれでもよいが、Ｌ体の方が好ましい。糖ペプチド残基としては、上述したアミノ酸残基または２〜３０個からなる糖ペプチド残基が好ましい。４〜２０個からなる糖ペプチド残基がさらに好ましい。本明細書において、構造式中で、Ｇｌｙなどと表記するときは、残基を示すことが明らかな場合、「残基」という表記は省略することがある。例えば、
【００５６】
【化２３−１】
2009143809.tif 000026
は、
【００５７】
【化２３−２】
2009143809.tif 000027
（配列番号２）と表すことができる。
【００５８】
【化２３−３】
2009143809.tif 000028
は、
【００５９】
【化２３−４】
2009143809.tif 000029
（配列番号２１）と表すことができる。
【００６０】
【化２３−６】
2009143809.tif 000030
は、
【００６１】
【化２３−７】
2009143809.tif 000031
（配列番号４１）と表すことができる。
【００６２】
アミノ酸は、一般式：
【００６３】
【化２３−８】
2009143809.tif 000032
（式中、Ｒは側鎖を示す。）と表すことができる。
【００６４】
プロリンは、以下：
【００６５】
【化２３−９】
2009143809.tif 000033
と表される。
【００６６】
アミノ酸がペプチド結合している場合、その構造は、以下：
【００６７】
【化２３−１０】
2009143809.tif 000034
（式中、Ｒは側鎖を示す。）と表すことができる。例えば、ＲがともにＨであれば、
【００６８】
【化２３−１１】
2009143809.tif 000035
と表される。上記の構造は、Ｇｌｙ−Ｇｌｙとも表記される。ここで、ペプチド鎖の端に位置する「Ｇｌｙ−」または「−Ｇｌｙ」は、１価のグリシン残基を示す。例えば、ペプチド鎖を構成するアミノ酸残基にプロリン残基が含まれ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏと表される場合、構造は、以下：
【００６９】
【化２３−１２】
2009143809.tif 000036
とも表される。
【００７０】
アミノ酸が３つ結合したペプチドを示す場合、以下：
【００７１】
【化２３−１３】
2009143809.tif 000037
（式中ＲＡ〜ＲＣは、側鎖を示す。）と表される。例えば、ＲＡがＨであり、ＲＢがＣＨ３であり、ＲＣがＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である場合、ペプチド鎖は、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｖａｌとも表される。ここで、「Ｇｌｙ−」は、１価のグリシン残基を示し、「−Ａｌａ−」は２価のアラニン残基を示し、「−Ｖａｌ」は、１価のバリン残基を示す。
【００７２】
ペプチド鎖にアミノ酸残基としてセリン残基またはトレオニン残基が含まれる場合、セリン残基またはトレオニン残基がペプチド鎖の末端に位置する場合、セリン残基は、「Ｓｅｒ−」または「−Ｓｅｒ」と表され、トレオニン残基は、「Ｔｈｒ−」または「−Ｔｈｒ」と表され、１価のアミノ酸残基である。これらのアミノ酸残基には糖鎖が結合することがある。糖鎖が結合した場合、これらの残基は２価であり、セリン残基、トレオニン残基は、それぞれ、以下：
【００７３】
【化２３−１４】
2009143809.tif 000038
と表される。
【００７４】
セリン残基またはトレオニン残基がペプチド鎖の末端以外の位置に存在する場合、これらの残基は２価であり、それぞれ、「−Ｓｅｒ−」、「−Ｔｈｒ−」と表される。これらのアミノ酸残基には糖鎖が結合することがある。糖鎖が結合した場合、これらの残基は３価であり、セリン残基、トレオニン残基は、それぞれ、以下：
【００７５】
【化２３−１５】
2009143809.tif 000039
と表される。
【００７６】
上で定義した本発明の糖アミノ酸は、上に列挙したアミノ酸残基と糖残基とが理論上結合することができればその組み合わせに特に制限はないが、好ましい組み合わせとして、
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｓｅｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−１βＧｌｃＮＡｃ３−１αＦｕｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
・Ｔｈｒ−１αＧａｌＮＡｃ（３−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｍ３−２αＮｅｕ５Ａｃ）６−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ[３−１βＧｌｃＮＡｃ（３−１αＦｕｃ）４−１βＧａｌ]ｎ３−２αＮｅｕ５Ａｃ
が挙げられる。ここで、ｎは１〜１０の整数を表し、Ｇａｌはガラクトースを表し、Ｇｌｃはグルコースを表し、Ｍａｎはマンノースを表し、Ｘｙｌはキシロースを表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンを表し、ＧａｌＮＡｃはＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンを表す。
【００７７】
本明細書において「Ｎ末端」とは、ペプチド主鎖の末端に位置する置換されていてもよいアミノ基を意味する。
【００７８】
本明細書において「Ｃ末端」とは、ペプチド主鎖の末端に位置する置換されていてもよいカルボキシル基を意味する。
【００７９】
本明細書において「側鎖」とは、ペプチド主鎖の延びる方向と直交する方向にペプチド主鎖から延びた官能基またはその官能基を含む部分を意味する。
【００８０】
本明細書において「プライマー」とは、酵素反応において反応開始のきっかけをつくる作用を有する物質を意味する。
【００８１】
本明細書において「転移酵素」とは、基転移反応を触媒する酵素の総称をいう。本明細書において、「転移酵素」は「トランスフェラーゼ」と互換可能に使用され得る。基転移反応は、以下の式（１）：
Ｘ−Ｙ＋Ｚ−Ｈ  ⇔  Ｘ−Ｈ＋Ｚ−Ｙ          （１）
に示すように、一つの化合物（供与体）から基Ｙが他の化合物（受容体）に転移する形で行われる。
【００８２】
本明細書において「糖転移酵素」とは、糖（上記式（１）の基Ｙに相当；単位糖または糖鎖）をある場所（上記式（１）の化合物Ｘ−Ｙに相当）から別の場所（上記式（１）の化合物Ｚ−Ｈに相当）へと転移させるよう触媒する作用を有する酵素をいう。糖転移酵素としては、例えば、ガラクトース転移酵素、グルコ−ス転移酵素、シアル酸転移酵素、マンノ−ス転移酵素、フコ−ス転移酵素、キシロ−ス転移酵素、Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、およびＮ−アセチルガラクトサミン転移酵素などが挙げられるがそれらに限定されない。糖転移酵素には、特定の結合様式に特異的なものも存在する。例えば、β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素は、例えば、ガラクトースなどの糖の３位とＮ−アセチルグルコサミンの１位とを結合させる糖転移酵素である。本発明で用いる糖転移酵素は、糖ヌクレオチド類を糖供与体として利用できるものであればよく、例えば、β１，４−ガラクトース転移酵素、α−１，３−ガラクトース転移酵素、β１，４−ガラクトース転移酵素、β１，３−ガラクトース転移酵素、β１，６−ガラクトース転移酵素、α２，６−シアル酸転移酵素、α１，４−ガラクトース転移酵素、セラミドガラクトース転移酵素、α１，２−フコース転移酵素、α１，３−フコース転移酵素、α１，４−フコース転移酵素、α１，６−フコース転移酵素、α１，３−Ｎ−アセチルガラクトサミン転移酵素、α１，６−Ｎ−アセチルガラクトサミン転移酵素、β１，４−Ｎ−アセチルガラクトサミン転移酵素、ポリペプチドＮ−アセチルガラクトサミン転移酵素、β１，４−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、β１，２−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、β１，６−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、α１，４−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、β１，４−マンノース転移酵素、α１，２−マンノース転移酵素、α１，３−マンノース転移酵素、α１，４−マンノース転移酵素、α１，６−マンノース転移酵素、α１，２−グルコース転移酵素、α１，３−グルコース転移酵素、α２，３−シアル酸転移酵素、α２，８−シアル酸転移酵素、α１，６−グルコサミン転移酵素、α１，６−キシロース転移酵素、βキシロース転移酵素（プロテオグリカンコア構造合成酵素）、β１，３−グルクロン酸転移酵素、ヒアルロン酸合成酵素、他の糖ヌクレオチドを糖ドナーとして用いる糖転移酵素およびドルコールリン酸型糖ドナーを用いる糖転移酵素が挙げられる。
【００８３】
本発明において「糖鎖伸長反応」とは、上で定義した糖転移酵素の存在下で糖鎖の鎖長が伸長する反応をいう。
【００８４】
本明細書において使用される用語「生体分子」とは、生体に関連する分子をいう。そのような生体分子を含む試料を、本明細書において特に生体試料ということがある。本明細書において「生体」とは、生物学的な有機体をいい、動物、植物、菌類、ウイルスなどを含むがそれらに限定されない。従って、生体分子は、生体から抽出される分子を包含するが、それに限定されず、生体に影響を与え得る分子であれば生体分子の定義に入る。そのような生体分子には、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、糖ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、糖ヌクレオチド、核酸（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡのようなＤＮＡ、ｍＲＮＡのようなＲＮＡを含む）、多糖、オリゴ糖、脂質、低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子など）、これらの複合分子などが包含されるがそれらに限定されない。本明細書では、生体分子は、好ましくは、糖鎖または糖鎖を含む複合分子（例えば、糖タンパク質、糖脂質など）であり得る。
【００８５】
そのような生体分子の供給源としては、生物由来の糖鎖が結合または付属する材料であれば特にその由来に限定はなく、動物、植物、細菌、ウイルスを問わない。より好ましくは動物由来生体試料が挙げられる。好ましくは、例えば、全血、血漿、血清、汗、唾液、尿、膵液、羊水、髄液等が挙げられ、より好ましくは血漿、血清、尿が挙げられる。生体試料には個体から予め分離されていない生体試料も含まれる。例えば外部から試液が接触可能な粘膜組織、あるいは腺組織、好ましくは乳腺、前立腺、膵臓に付属する管組織の上皮が含まれる。
【００８６】
本明細書において使用される用語「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチ
ド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の１または２以上のアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然のアミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。
【００８７】
本明細書において、「糖ヌクレオチド」とは、上で定義した糖残基が結合したヌクレオチドを意味し、本発明で用いる糖ヌクレオチドは、上記酵素が利用できるものであれば特に限定されない。例えば、ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース、ウリジン−５’−二リン酸−Ｎ−アセチルグルコサミン、ウリジン−５’−二リン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン、ウリジン−５’−二リン酸グルクロン酸、ウリジン−５’−二リン酸キシロース、グアノシン−５’−二リン酸フコース、グアノシン−５’−二リン酸マンノース、シチジン−５’−モノリン酸−Ｎ−アセチルノイラミン酸およびこれらのナトリウム塩などが挙げられる。
【００８８】
（有機化学）
有機化学については、例えば、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒ．Ｔ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｒ．Ｎ．Ｂｏｙｄ  ５ｔｈ  ｅｄ．（１９８７年）などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。
【００８９】
本明細書においては、特に言及がない限り、「置換」は、ある有機化合物または置換基中の１または２以上の水素原子を他の原子または原子団で置き換えることをいう。水素原子を１つ除去して１価の置換基に置換することも可能であり、そして水素原子を２つ除去して２価の置換基に置換することも可能である。
【００９０】
本明細書において「アルキル」とは、メタン、エタン、プロパンのような脂肪族炭化水素（アルカン）から水素原子が一つ失われて生ずる１価の基をいい、一般にＣｎＨ２ｎ＋１−で表される（ここで、ｎは正の整数である）。アルキルは、直鎖または分枝鎖であり得る。本明細書において「置換されたアルキル」とは、１つ以上の水素原子が各々独立して以下に規定する置換基によって置換されたアルキルをいう。これらの具体例は、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ９アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１１アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ２５アルキルまたはＣ１〜Ｃ３０アルキルであり得る。ここで、例えばＣ１〜Ｃ１０アルキルとは、炭素原子を１〜１０個有する直鎖または分枝状のアルキルを意味し、メチル（ＣＨ３−）、エチル（Ｃ２Ｈ５−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ヘキシル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ヘプチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−オクチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−ノニル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−デシル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２などが例示される。
【００９１】
本明細書において「アリール」とは、親である芳香環系の１つの炭素原子から１つの水素原子を除去することによって誘導される、６〜３０個の炭素原子の一価芳香族炭化水素ラジカルをいう。代表的なアリール基としては、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９２】
本明細書において「発色団」とは、紫外光または可視光領域に吸収帯を有する官能基、または紫外光または可視光領域の電磁波で励起され可視光領域の放射光を発する官能基をいう。例えば、ニトロ基、ベンジル基、チオフェニル基、パラニトロフェニル基、２，４−ジニトロフェニル基、ダンシル基、２−アミノベンジル基、フルオロセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）基、４−メトキシ−β−ナフチルアミド基などが挙げられるが、これに限定されない。
【００９３】
本明細書において「ケト酸」とは、カルボキシル基とケトンのカルボニル基とをもつ化合物の総称をいう。
【００９４】
本明細書において「アルデヒド酸」とは、カルボキシル基とアルデヒドのカルボニル基とをもつ化合物の総称をいう。
【００９５】
このようなケト酸またはアルデヒド酸は、例えば、Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−ＣＯＯＨ（ＩＩＩ）（式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；ｎは０〜２０の整数を表し；Ａ１は、メチレン鎖１〜２０個分の長さを有するリンカーを表す）で表される化合物である。
【００９６】
本明細書において「保護反応」とは、Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基）のような保護基を、保護が所望される官能基に付加する反応をいう。保護基により官能基を保護することによって、より反応性の高い官能基の反応を抑制し、より反応性の低い官能基のみを反応させることができる。
【００９７】
本明細書において「脱保護反応」とは、Ｂｏｃのような保護基を脱離させる反応をいう。脱保護反応としては、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）による反応およびＰｄ／Ｃを用いる還元反応のような反応が挙げられる。
【００９８】
本明細書において「保護基」としては、例えば、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、アセチル基、ベンジル基、ベンゾイル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブチルジメチル基、シリル基、トリメチルシリルエチル基、Ｎ−フタルイミジル基、トリメチルシリルエチルオキシカルボニル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、カルバメート基、メチル基、メトキシメチル基、トリメチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ジメチルフェニル基、トリイソプロピルシリル基、ベンジリデン基、イソプロピリデン基、ジtert-ブチルシリリデン基などが代表的な保護基として挙げられる。保護基は、例えば、アミノ基、カルボキシル基などの反応性の官能基を保護するために用いることができる。反応の条件や目的に応じ、種々の保護基を使い分けることができる。アミノオキシ基およびＮ−アルキルアミノオキシ基の保護基として、トリメチルシリルエチルオキシカルボニル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基またはそれらの誘導体が好ましい。
【００９９】
本発明の各方法において、目的とする生成物は、反応液から夾雑物（未反応減量、副生成物、溶媒など）を、当該分野で慣用される方法（例えば、抽出、蒸留、洗浄、濃縮、沈澱、濾過、乾燥など）によって除去した後に、当該分野で慣用される後処理方法（例えば、吸着、溶離、蒸留、沈澱、析出、クロマトグラフィーなど）を組み合わせて処理して単離し得る。
【０１００】
（本明細書において用いられる一般技術）
本明細書において使用される技術は、そうではないと具体的に指示しない限り、当該分野の技術範囲内にある、有機化学、生化学、遺伝子工学、分子生物学、微生物学、遺伝学および関連する分野における周知慣用技術を使用する。そのような技術は、例えば、以下に列挙した文献および本明細書において他の場所おいて引用した文献においても十分に説明されている。
【０１０１】
本明細書において用いられる有機化学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒ．Ｔ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｒ．Ｎ．Ｂｏｙｄ  ５ｔｈ  ｅｄ．（１９８７年）などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。
【０１０２】
本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒおよびその３ｒｄ  Ｅｄ．（２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，ＮＹ，１０１５８（２０００）；Ｉｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．（１９９０）．ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｉｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）．ＰＣＲ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｓｎｉｎｓｋｙ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）．ＰＣＲ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９８５）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９９０）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．（１９９１）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃ  ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｄａｍｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）．Ｔｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，Ｃｈａｐｍａｎ  ＆  Ｈａｌｌ；Ｓｈａｂａｒｏｖａ，Ｚ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）．Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ；Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（１９９６）．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｍｅｔｈｏｄ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２３０、２４２、２４７、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９９４；別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、１９９７；畑中、西村ら、糖質の科学と工学、講談社サイエンティフィク、１９９７；糖鎖分子の設計と生理機能  日本化学会編、学会出版センター、２００１などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。
【０１０３】
（好ましい実施形態の説明）
以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は本明細書の記載を参酌して、本発明の範囲内で改変を行うことができるのは明らかである。
【０１０４】
１つの局面において、本発明は、以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３    （Ｉ）
（式中、Ｘは、水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；ｎは０〜２０の整数を表し；Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；Ａ２は、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を表し；Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表す）で表される、化合物を提供する。これをプライマーとして使用することにより、従来は多段階の精製を要していた糖ペプチドの精製が簡易となり、糖ペプチドを迅速かつ収率よく製造できる。本発明の上記式（Ｉ）の化合物は、末端にアルデヒド基またはケトン基を必ず有するため、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と反応させることにより、上記式（Ｉ）の化合物を担体上に担持し、高分子プライマーとして使用することができる。この反応によって得られる結合は、後のプロテアーゼによる加水分解条件下（ｐＨ条件など）で分解しない強固な結合であるため、加水分解の精製が非常に簡易で済むという利点がある。
【０１０５】
本発明における加水分解で用いられるプロテアーゼと、このプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基（Ａ２）との組み合わせは、プロテアーゼによる加水分解が起こり得るｐＨ領域で、上記式（Ｉ）の化合物の少なくとも上記末端アルデヒドまたはケトン基と上記担体との反応によって生じる結合が分解しないような組み合わせであれば何でも良い。Ａ１のポリペプチドの一部または全部およびＡ２のアミノ酸残基からなるペプチドを認識するプロテアーゼも使用し得る。このような組み合わせとしては、例えば、バシラス  リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼ（グルタミニダーゼ）と、このプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基との組み合わせ；アスパラギニルエンドペプチターゼとＡｓｎ（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（アスパラギン（Ａｓｎ）のＣ末端を切断する。）；アルギニルエンドペプチターゼとＡｒｇ（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（アルギニン（Ａｒｇ）のＣ末端を切断する。）；アクロモバクタープロテアーゼ  Ｉとリジン（Ｌｙｓ）（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（リジン（Ｌｙｓ）のＣ末端を切断する。）；トリプシンと、アルギニン（Ａｒｇ）またはリジン（Ｌｙｓ）（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（Ａｒｇを認識した場合アルギニン（Ａｒｇ）のＣ末端を切断し、リジン（Ｌｙｓ）を認識した場合リジン（Ｌｙｓ）のＣ末端を切断する。）；キモトリプシンと、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＴｒｐ（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（Ｐｈｅを認識した場合フェニルアラニン（Ｐｈｅ）のＣ末端を切断し、Ｔｙｒを認識した場合チロシン（Ｔｙｒ）のＣ末端を切断し、Ｔｒｐを認識した場合トリプトファン（Ｔｒｐ）のＣ末端を切断する。）；Ｖ８プロテアーゼとＧｌｕ（認識部位（Ａ２））との組み合わせ（グルタミン酸（Ｇｌｕ）のＣ末端を切断する。）；第Ｘａ因子（ファクターＸａ）と、−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−（認識部位、本明細書の定義に従えば、認識部位（Ａ２）は、アルギニン（Ａｒｇ）であり、−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−はＡ１の末端である；これは、アルギニン（Ａｒｇ）のＣ末端を切断する。）との組み合わせ；ならびにエンテロキナーゼと−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−（認識部位、本明細書の定義に従えば、認識部位（Ａ２）は、リジン（Ｌｙｓ）であり、−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−はＡ１の末端である；これは、リジン（Ｌｙｓ）のＣ末端を切断する。）。このような組み合わせとして、バシラス  リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼ（グルタミニダーゼ（例えば、バシラス  リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のグルタミン酸残基特異的なプロテアーゼ（ＢＬａｓｅ：塩野義製薬社製）））と、このプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基との組み合わせが好ましい。ＢＬａｓｅは、特開平４−１６６０８５（特許第３０４６３４４号）に記載される方法によって、生産することができる。ＢＬａｓｅは、バシラス属菌、特にバシラスリケニホルミスＡＴＣＣ  １４５８０株により生産される。本菌株はアメ��カンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手できる。必要に応じて、バシラス リケニホルミス  ＡＴＣＣ  １４５８０株のゲノムＤＮＡは，該菌株の培養細胞から既知の方法（Ｍ．Ｓｔａｈｌら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１５４，４０６−４１２（１９８３））に従って調製することができる。
【０１０６】
本発明の好ましい実施形態において、上記式（Ｉ）の化合物に含まれるＡ３の少なくとも一部は、以下の配列番号１〜６０：
ＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（配列番号１）、
ＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲ（配列番号２）、
ＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰ（配列番号３）、
ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡ（配列番号４）、
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰ（配列番号５）、
ＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧ（配列番号６）、
ＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳ（配列番号７）、
ＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴ（配列番号８）、
ＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡ（配列番号９）、
ＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰ（配列番号１０）、
ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰ（配列番号１１）、
ＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡ（配列番号１２）、
ＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨ（配列番号１３）、
ＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ（配列番号１４）、
ＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１５）、
ＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号１６）、
ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳ（配列番号１７）、
ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡ（配列番号１８）、
ＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰ（配列番号１９）、
ＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤ（配列番号２０）、
ＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲ（配列番号２１）、
ＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰ（配列番号２２）、
ＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡ（配列番号２３）、
ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰ（配列番号２４）、
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧ（配列番号２５）、
ＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳ（配列番号２６）、
ＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴ（配列番号２７）、
ＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡ（配列番号２８）、
ＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰ（配列番号２９）、
ＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰ（配列番号３０）、
ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡ（配列番号３１）、
ＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨ（配列番号３２）、
ＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ（配列番号３３）、
ＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号３４）、
ＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号３５）、
ＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳ（配列番号３６）、
ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡ（配列番号３７）、
ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰ（配列番号３８）、
ＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤ（配列番号３９）、
ＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（配列番号４０）、
ＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡ（配列番号４１）、
ＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨ（配列番号４２）、
ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ（配列番号４３）、
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号４４）、
ＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号４５）、
ＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳ（配列番号４６）、
ＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡ（配列番号４７）、
ＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰ（配列番号４８）、
ＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤ（配列番号４９）、
ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（配列番号５０）、
ＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲ（配列番号５１）、
ＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰ（配列番号５２）、
ＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡ（配列番号５３）、
ＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰ（配列番号５４）、
ＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧ（配列番号５５）、
ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳ（配列番号５６）、
ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴ（配列番号５７）、
ＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡ（配列番号５８）、
ＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰ（配列番号５９）および
ＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰ（配列番号６０）、
に示されるアミノ酸配列からなる群から選択される、ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１由来のアミノ酸配列を有する。さらに、配列番号４１〜６０のいずれかのアミノ酸配列が２回または３回繰り返した配列を含むムチン型タンパク質由来のアミノ酸配列であってもよい。
【０１０７】
本発明で用いることのできる高分子担体は、式（Ｉ）で表される基を結合させることができ、かつ結合後以下で述べるような糖転移酵素の作用により式（Ｉ）で表される基の糖残基にさらなる糖残基を転移させることのできるものであれば特に制限はなく、例えば、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するビニル系単量体の重合体または共重合体（上記ビニル系単量体としては、アクリルアミド類、メタクリルアミド類、アクリル酸類、メタクリル酸類、スチレン類、脂肪酸ビニルエステル類などが挙げられる）あるいは保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得るポリエーテル類；保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するシリカ担体、樹脂担体、磁性ビーズまたは金属担体（例えば、以下の式：
【０１０８】
【化２４】
2009143809.tif 000040
で表されるシリカ担体、樹脂担体および磁性ビーズ、金属担体［式中、○は、シリカ、樹脂、磁性ビーズ、金属担体を表す］が挙げられる）；ならびにペプチド合成で使用するＭａｐｓ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｓｔｅｍｓ）法と類似した担体；例えば、以下の式：
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３、
［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６１）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ｝２、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６２）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６３）、
｛［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ｝２−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３（配列番号６４）、
［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６５）、
［［［（ＮＨ２ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ］２−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ３］ＣＨ２−Ｓ］２（配列番号６６）、
【０１０９】
【化２５】
2009143809.tif 000041
（式中、Ｒ３はヒドロキシル基またはアミノ基を表し、Ｌｙｓはリジン残基を表し、Ｃｙｓはシステイン残基を表す）
で表される化合物などが挙げられる。
【０１１０】
上記の保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するビニル系単量体の重合体または共重合体は、無置換のビニル系単量体の重合体または共重合体の少なくとも一部を保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基で置換する方法、あるいは保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有するビニル系単量体を重合または共重合する方法によって、調製される。
【０１１１】
上記のアクリルアミド類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、アクリルアミド、Ｎ−エチルアクリルアミドやＮ−イソプロピルアクリルアミドなどのＮ−アルキルアクリルアミドなどが例示される。
【０１１２】
上記のメタクリルアミド類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、メタクリルアミド、Ｎ−メチルメタクリルアミドやＮ−エチルメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルメタクリルアミドなどのＮ−アルキルメタクリルアミドなどが例示される。
【０１１３】
上記のアクリル酸類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、アクリル酸やアクリル酸メチル、アクリル酸エチル、アクリル酸ヒドロキシエチル、アクリル酸ジメチルアミノエチルなどのアクリル酸エステルなどが例示される。
【０１１４】
上記のメタクリル酸類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、メタクリル酸やメタクリル酸メチル、メタクリル酸エチル、メタクリル酸ヒドロキシエチル、メタクリル酸ジメチルアミノエチルなどのメタクリル酸エステルなどが例示される。
【０１１５】
上記のスチレン類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、スチレン、ｐ−ヒドロキシスチレン、ｐ−ヒドロキシメチルスチレンなどが例示される。
【０１１６】
上記の脂肪酸ビニルエステルとしては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得る、酢酸ビニル、酪酸ビニルなどが例示される。また、本発明中の脂肪酸ビニルエステルの重合体あるいは共重合体には、重合反応後アルカリなどによりエステル結合を全部あるいは一部加水分解したものも含まれる。
【０１１７】
上記のポリエーテル類としては、保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得るポリエチレングリコール、あるいは保護されていてもよいアミノオキシ基またはヒドラジド基を有し得るアルキル、アリール基で置換されたポリエチレングリコール等が例示される。
【０１１８】
ここでいう高分子担体は水不溶性、水溶性いずれであってもよいが、水溶性の方が好ましい。一般的な分子量は約１００００〜約５００００００であり、好ましくは２００００〜２００００００、より好ましくは５００００〜１００００００である。その形態は、水不溶性担体の場合、ビーズ状、繊維状、膜状、フィルム状などが挙げられるが、特に制限されない。
【０１１９】
さらに好ましい担体としては、以下の式：
【０１２０】
【化２６】
2009143809.tif 000042
で表される高分子担体が挙げられる。ここで、ｎは１〜１５の整数であり、好ましくは１〜１０であり、より好ましくは１〜５である。ｘ：ｙの比率は１：０〜１：１０００であり、好ましくは１：０〜１：１００である。高分子担体の分子量は、約１００００〜約５００００００であり、好ましくは２００００〜２００００００、より好ましくは５００００〜１００００００である。
【０１２１】
好ましい実施形態おいて、本発明は、以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３    （Ｉ）
式中、Ｘは、水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を表し；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し、該糖アミノ酸残基または該糖ペプチド残基が、以下の式：
【０１２２】
【化２６−１】
2009143809.tif 000043
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される糖残基を有する化合物を提供する。
【０１２３】
別の好ましい実施形態において、本発明は、以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３    （Ｉ）
式中、Ｘは、水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を表し；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し、該糖アミノ酸残基または該糖ペプチド残基が、以下の式：
【０１２４】
【化２６−２】
2009143809.tif 000044
式中、Ｒ１は、水素、シアル酸基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｒ８は、水素またはシアル酸基であり；
Ｒ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎは、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がシアル酸基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、α２，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合である、
で表される糖残基を有する化合物を提供する。
【０１２５】
別の好ましい実施形態において、本発明は、以下の式：
Ａ４−Ｎ＝Ｃ（−Ｘ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３    （ＩＩ）
［式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、バシラス  リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基であり；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し、該糖アミノ酸残基または該糖ペプチド残基が、以下の式：
【０１２６】
【化２６−３】
2009143809.tif 000045
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される糖残基を有し；
Ａ４は、以下の式：
【０１２７】
【化２６−４】
2009143809.tif 000046
（式中、ｓは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である）で表される
基である］で表される化合物を提供する。
【０１２８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、以下の式：
Ａ４−Ｎ＝Ｃ（−Ｘ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−Ａ２−Ａ３    （ＩＩ）
［式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、−（ＣＨ２）０〜２０−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜１０−、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリアクリルアミド、重合度１〜１０のオリゴもしくはポリペプチド、酸素原子またはＮＨを表し；
Ａ２は、バシラス  リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のプロテアーゼで切断可能なグルタミン酸残基またはシステイン残基であり；
Ａ３は、実質的にプロテアーゼにより切断可能な部位を含まない糖アミノ酸残基、またはプロテアーゼにより切断可能な部位を含まず任意の糖アミノ酸を含む糖ペプチド残基を表し、該糖アミノ酸残基または該糖ペプチド残基が、以下の式：
【０１２９】
【化２７】
2009143809.tif 000047
式中、Ｒ１は、水素、シアル酸基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｒ８は、水素またはシアル酸基であり；
Ｒ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎは、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がシアル酸基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、α２，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合である、
で表される糖残基を有し；
Ａ４は、以下の式：
【０１３０】
【化２７−１】
2009143809.tif 000048
（式中、ｓは１〜１５の整数であり、ｘ：ｙは１：０〜１：１０００である）で表される基である］
で表される化合物を提供する。
【０１３１】
本発明において提供されるポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドは、上記式（Ｉ）または（ＩＩ）中、Ａ３において、ｎは０以上の整数であり、好ましくは、ｎは０〜５であり、より好ましくは、ｎは４以下の整数である。さらに、上記式中、Ａ３において、Ｚ１〜Ｚ３は、あってもなくてもよいが、好ましくは、ｍは０〜５であり、好ましくは、ｎが１の場合、Ｚ１およびＺ２はシアル酸基である。さらに好ましくは、糖ペプチドの糖残基は、
【化２７−２】
2009143809.tif 000049
【化２７−３】
2009143809.tif 000050
からなる群より選択される糖残基または糖残基の誘導体であり得る。
【０１３２】
別の局面において、本発明は、上記式（Ｉ）または（ＩＩ）に記載の化合物を含む、糖アミノ酸または糖ペプチドを製造するためのプライマー用組成物を提供する。
【０１３３】
糖ペプチドを製造するためのプライマーとして有用な本発明の化合物の合成および精製は、以下の手順：
１）保護アミノ酸（プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む）、予め合成した保護基を有する糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチド（糖鎖・アミノ酸保護体）を合成する（必要に応じて、アミノ酸カップリング反応の各工程の後にキャッピング反応、すなわちアミノ酸カップリング未反応物を不活化する反応を行う）；
２）酸処理によって、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドを固相担体から遊離させると同時にアミノ酸側鎖の保護基を脱保護する（酸処理によってアミノ酸側鎖の保護基が脱離しない場合は、別途脱保護反応により該保護基を脱保護すればよい）；
３）反応液、もしくはエーテル沈殿法によって得た混合物をＨＰＬＣによって精製し、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチド（糖鎖保護体）を単離する；
４）糖鎖の保護基の脱保護をする；
５）ＨＰＬＣで精製し、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドを単離する
との手順で行われる。この方法は、糖アミノ酸を含まないペプチドの合成においても、適用可能であり、その場合、４）の工程は省かれる。
【０１３４】
このようにして得られた末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドから高分子プライマーの合成および精製は、以下：
６）上記で得られた糖ペプチドと高分子担体とを反応させる；
７）ゲル濾過カラムクロマトグラフィーによって精製し、高分子プライマーを得る、
との手順で行われる。
【０１３５】
本発明の化合物の別の一般的な合成および精製は、以下：
１）保護アミノ酸（プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む）、予め合成した保護基を有する糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチド（糖鎖・アミノ酸保護体）を合成する（必要に応じて、アミノ酸カップリング反応の各工程の後にキャッピング反応、すなわちアミノ酸カップリング未反応物を不活化する反応を行う）；
２）酸処理によって、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドを固相担体から遊離させると同時にアミノ酸側鎖の保護基を脱保護する（酸処理によってアミノ酸側鎖の保護基が脱離しない場合は、別途脱保護反応により該保護基を脱保護すればよい）；
３）糖鎖の保護基の脱保護をする；
４）３）の糖ペプチドを含む反応液に高分子担体を導入して選択的に糖ペプチドと反応させる；
５）担体に結合した糖ペプチドをゲル濾過もしくは透析、限外濾過等によって精製する；
６）担体に結合した糖ペプチドをプロテアーゼにより加水分解し、糖ペプチドを遊離させ、担体を除き、目的の糖ペプチドを単離する、
との手順で行われる。
【０１３６】
この手順によれば、各工程を単離せず、ワンポットで高分子プライマーまで導くこどができる。このようにして得られた末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドから高分子プライマーの合成および精製は、以下：
１）保護アミノ酸（プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む）、予め合成した保護基を有する糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチド（糖鎖・アミノ酸保護体）を合成する（必要に応じて、アミノ酸カップリング反応の各工程の後にキャッピング反応、すなわちアミノ酸カップリング未反応物を不活化する反応を行う）；
２）酸処理によって、末端にケトン残基またはアルデヒド残基を有しプロテアーゼにより切断可能なアミノ酸残基を含む糖ペプチドを固相担体から遊離させると同時にアミノ酸側鎖の保護基を脱保護する（酸処理によってアミノ酸側鎖の保護基が脱離しない場合は、別途脱保護反応により該保護基を脱保護すればよい）；
３）糖鎖の保護基の脱保護をする；
４）３）の糖ペプチドを含む反応液に高分子担体を導入して選択的に糖ペプチドと反応させる；
５）担体に結合した糖ペプチドをゲル濾過もしくは透析、限外濾過等によって精製し、プライマーを得る、
との手順で行われる。
【０１３７】
好ましい実施形態において、上記手順１）で使用されるケト酸またはアルデヒド酸は、
以下の式：
Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ａ１−ＣＯＯＨ    （ＩＩＩ）
（式中、Ｘは水素原子、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ６〜Ｃ３０アリールまたは発色団を表し；
ｎは０〜２０の整数を表し；
Ａ１は、メチレン鎖１〜２０個分の長さを有するリンカーを表す）で表される化合物である。
【０１３８】
１つの好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）上記項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、該糖ヌクレオチドより糖残基を該化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｄ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包む。
【０１３９】
本発明において使用される糖転移酵素は、好ましくは、β１，４−ガラクトース転移酵素、β１，３−ガラクトース転移酵素、α１，３−フコース転移酵素、β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、β１，６−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、α２，３−シアル酸転移酵素、α２，６−シアル酸転移酵素である。
【０１４０】
別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）項目（４）〜（７）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包む。さらに、糖ペプチドを単離する工程を含んでいてもよい。本製造法においては、目的の糖ペプチドと担体を含む糖ペプチド以外の副生成物を容易に分離し得る。
【０１４１】
さらに別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）項目（４）〜（７）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｄ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包む。
【０１４２】
なおさらに別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる、保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させる工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包む。
【０１４３】
他の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させる工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｆ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包む。
【０１４４】
さらに他の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の
化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と反応させ、これと同時に工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；および
（Ｄ）工程（Ｃ）で得た糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を包む。
【０１４５】
なおさらに他の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体とを反応させ、これと同時に工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｆ）複数の糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を包む。
【０１４６】
別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；および
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程、
を含む。
【０１４７】
さらに別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖を伸長させた化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｂ）必要に応じて工程（Ａ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｃ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む担体と、を反応させる工程；
（Ｄ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；および
（Ｅ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、
を含む。
【０１４８】
なおさらに別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む可溶性担体とを反応させ、再沈澱、ゲルろ過、または限外ろ過などにより工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に可溶性結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；
（Ｆ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物を、ケト酸またはアルデヒド酸を表面に結合した非可溶性担体と反応させ、その表面に固定する工程；および
（Ｇ）必要に応じ糖鎖の伸長反応に使用した試薬および酵素を除去する工程、
を含む。
【０１４９】
さらにまた別の好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）プロテアーゼにより切断可能なアミノ酸、糖アミノ酸、およびケト酸またはアルデヒド酸を原料にペプチド固相合成を行い、項目（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物を得る工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得た化合物と、該化合物のケトン残基またはアルデヒド残基と特異的に反応しうる保護されていてもよいアミノオキシ基、Ｎ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基、１，２−ジチオール基およびシステイン残基からなる群から選択される官能基を含む可溶性担体とを反応させ、再沈澱、ゲルろ過、または限外ろ過などにより工程（Ａ）における未反応物を除去する工程；
（Ｃ）工程（Ｂ）で得た担体に可溶性結合した化合物に、糖ヌクレオチドの存在下で糖転移酵素を作用させることにより、上記糖ヌクレオチドより糖残基を上記化合物に転移させ、糖鎖が伸長された化合物を得る工程であって、該糖ヌクレオチドが、Ｇａｌ基、ＧｌｃＮＡｃ基、Ｆｕｃ基およびシアル酸基からなる群より選択される糖残基を有する、工程；
（Ｄ）工程（Ｃ）を１回または２回以上繰り返して糖鎖を伸長させる工程；
（Ｅ）必要に応じて未反応の糖ヌクレオチド類および副生したヌクレオチド類を除去する工程；
（Ｆ）糖残基が転移して糖鎖が伸長した化合物を、ケト酸またはアルデヒド酸を表面に結合した非可溶性担体と反応させ、その表面に固定する工程；
（Ｇ）必要に応じ糖鎖の伸長反応に使用した試薬および酵素を除去する工程；および
（Ｈ）工程（Ｆ）で固定化した糖鎖が伸長した化合物にプロテアーゼを作用させる工程、を含む。
【０１５０】
本発明の糖ペプチドを製造する方法において使用される糖ペプチドは、好ましくは、以下の式：
【０１５１】
【化２８−１】
2009143809.tif 000051
（配列番号２）
【０１５２】
【化２８−２】
2009143809.tif 000052
（配列番号２１）
または
【０１５３】
【化２８−３】
2009143809.tif 000053
（配列番号４１）
式中、Ｘ１は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
【０１５４】
【化２８−４】
2009143809.tif 000054
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される基を表し、ただし、Ｘ１のすべてが水素原子である場合を除く；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す、
で表される糖ペプチドである。
【０１５５】
さらに、好ましくは、上記式中、Ｘ１は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
【０１５６】
【化２８−５】
2009143809.tif 000055
式中、Ｒ１は、水素、シアル酸基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｒ８は、水素またはシアル酸基であり；
Ｒ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎは、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がシアル酸基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、α２，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合である、
で表される糖ペプチドである。
【０１５７】
本発明において提供されるポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドは、上記Ａ２において、ｎは０以上の整数であり、好ましくは、ｎは０〜５であり、より好ましくは、ｎは４以下の整数である。さらに、上記Ａ２において、Ｚ１〜Ｚ３は、あってもなくてもよいが、好ましくは、ｍは０〜５であり、好ましくは、ｎが１の場合、Ｚ１およびＺ２はシアル酸基である。さらに好ましくは、糖ペプチドの糖残基は、
【化２８−６】
2009143809.tif 000056
【化２８−７】
2009143809.tif 000057
からなる群より選択される糖残基または糖残基の誘導体であり得る。
【０１５８】
なおさらに好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の
工程：
（Ａ）
以下の式：
【０１５９】
【化２８−８】
2009143809.tif 000058
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｒ１１は、水素原子またはメチル基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｐは、アミノ酸基の保護基（例えば、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基など）である、
で表される糖アミノ酸の糖鎖を保護基により保護して糖鎖が保護された糖アミノ酸を生成する工程であって、該保護基は、糖アルコール基の保護基（例えば、アセチル基、ベンゾイル基、メチル基、メトキシメチル基、トリメチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ジメチルフェニル基、トリイソプロピルシリル基、ベンジル基、ベンジリデン基、イソプロピリデン基、ジtert-ブチルシリリデン基などからなる群より選択される、工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得られた該糖鎖が保護された糖アミノ酸および９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基でＮ−保護されたアミノ酸を用いて、所望のペプチド配列を有する糖鎖が保護された糖ペプチドを合成する工程；ならびに
（Ｃ）工程（Ｂ）で得られた該糖鎖が保護された糖ペプチドを脱保護して該所望の糖ペプチドを生成させる工程、
を包含する、方法。
【０１６０】
なおさらに好ましい実施形態において、本発明の糖ペプチドを製造する方法は、以下の工程：
（Ａ）
以下の式：
【０１６１】
【化２９】
2009143809.tif 000059
式中、Ｒ１は、水素、シアル酸基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｒ８は、水素またはシアル酸基であり；
Ｒ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ１１は、水素原子またはメチル基であり；
Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎは、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がシアル酸基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、α２，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｐは、アミノ酸基の保護基（例えば、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基など）である、
で表される糖アミノ酸の糖鎖を保護基により保護して糖鎖が保護された糖アミノ酸を生成する工程であって、該保護基は、糖アルコール基の保護基（例えば、アセチル基、ベンゾイル基、メチル基、メトキシメチル基、トリメチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ジメチルフェニル基、トリイソプロピルシリル基、ベンジル基、ベンジリデン基、イソプロピリデン基、ジtert-ブチルシリリデン基などからなる群より選択される、工程；
（Ｂ）工程（Ａ）で得られた該糖鎖が保護された糖アミノ酸および９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基でＮ−保護されたアミノ酸を用いて、所望のペプチド配列を有する糖鎖が保護された糖ペプチドを合成する工程；ならびに
（Ｃ）工程（Ｂ）で得られた該糖鎖が保護された糖ペプチドを脱保護して該所望の糖ペプチドを生成させる工程、
を包含する、方法。
【０１６２】
本発明の糖ペプチドの製造方法において、前述の糖転移酵素を用いた一連の反応は、必要に応じて、反応部の温度制御が可能な分注装置（分注器）等を用いて自動化して行うことができる。
【０１６３】
（ムチン型糖ペプチド）
本発明は、上で説明した新規プライマーおよびこれを使用した糖ペプチドの製造方法により、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用であり、これまでその製造が困難であったムチン型糖ペプチド類を合成することができる。ムチン型糖ペプチド類の例としては、以下の式：
【０１６４】
【化２９−１】
2009143809.tif 000060
（配列番号２）
【０１６５】
【化２９−２】
2009143809.tif 000061
（配列番号２１）
または
【０１６６】
【化２９−３】
2009143809.tif 000062
（配列番号４１）
式中、Ｘ１は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
【０１６７】
【化２９−４】
2009143809.tif 000063
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合である、
で表される基を表し、ただし、Ｘ１のすべてが水素原子である場合を除く；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す、
で表される糖ペプチドが挙げられる。
【０１６８】
本発明のムチン型糖ペプチドは、好ましくは、以下の式：
【０１６９】
【化３０】
2009143809.tif 000064
（配列番号２）
【０１７０】
【化３１】
2009143809.tif 000065
（配列番号２１）
または
【０１７１】
【化３２】
2009143809.tif 000066
（配列番号４１）
式中、Ｘ１は、それぞれ独立して、水素原子または以下の式：
【０１７２】
【化３３】
2009143809.tif 000067
式中、Ｒ１は、水素、シアル酸基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｒ８は、水素またはシアル酸基であり；
Ｒ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎは、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がシアル酸基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、α２，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合である、
で表される基を表し、ただし、Ｘ１のすべてが水素原子である場合を除く；
Ｙ１は、水素原子、アセチル、アシル、アルキルまたはアリールを表し；
Ｙ２は、水酸基、ＮＨ２、アルキルまたはアリールを表す、
で表される糖ペプチドが挙げられる。
【０１７３】
本発明において提供されるポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドは、上記Ｘ１において、ｎは０以上の整数であり、好ましくは、ｎは０〜５であり、より好ましくは、ｎは４以下の整数である。さらに、上記Ｘ１において、Ｚ１〜Ｚ３は、あってもなくてもよいが、好ましくは、ｍは０〜５であり、好ましくは、ｎが１の場合、Ｚ１およびＺ２はシアル酸基である。さらに好ましくは、糖ペプチドの糖残基は、
【化３３−１】
2009143809.tif 000068
【化３３−２】
2009143809.tif 000069
からなる群より選択される糖残基または糖残基の誘導体であり得る。
【０１７４】
（ムチン型糖アミノ酸）
本発明により、ムチン型糖アミノ酸を提供することができる。ムチン型糖アミノ酸の例としては、以下の式（Ｍ１）：
【０１７５】
【化３４】
2009143809.tif 000070
式中、Ｒ１およびＲ６は、それぞれ独立して、水素、Ｎｅｕ５Ａｃ基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２およびＲ７は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３およびＲ８は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４およびＲ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｒ１１は、水素原子またはメチル基であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎおよびｍは、それぞれ独立して、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ６とＲ７との間の結合は、Ｒ６がＮｅｕ５Ａｃ基の場合、α２，３結合であり、Ｒ６がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ７とＲ８との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ３とＲ８との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｐは、アミノ酸基の保護基（例えば、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基など）である、
で表される糖アミノ酸が挙げられる。
【０１７６】
本発明のムチン型糖アミノ酸は、好ましくは、以下の式（Ｍ２）：
【０１７７】
【化３５】
2009143809.tif 000071
式中、Ｒ１は、水素、シアル酸基またはＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ２は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ３は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ４は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ５は、ＧｌｃＮＡｃ基であり；
Ｒ１０は、ＧａｌＮＡｃ基であり；
Ｒ８は、水素またはシアル酸基であり；
Ｒ９は、Ｇａｌ基であり；
Ｒ１１は、水素原子またはメチル基であり；
Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、水素またはＦｕｃ基であり；ならびに
ｎは、０以上の整数であり；
ここで、Ｒ１とＲ２との間の結合は、Ｒ１がシアル酸基の場合、α２，３結合であり、Ｒ１がＧｌｃＮＡｃ基の場合、β１，３結合であり；
Ｒ２とＲ３との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ３とＲ４との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ４とＲ５との間の結合は、β１，４結合であり；
Ｒ８とＲ９との間の結合は、α２，３結合であり；
Ｒ９とＲ１０との間の結合は、β１，３結合であり；
Ｒ５とＲ１０との間の結合は、β１，６結合であり；
Ｚ１とＲ３との間の結合は、α１，３結合であり；
Ｚ２とＲ５との間の結合は、α１，３結合であり；ならびに
Ｐは、アミノ酸基の保護基（例えば、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基など）である、
で表される糖アミノ酸が挙げられる。
【０１７８】
本発明において提供されるポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖アミノ酸は、上記式（Ｍ１）、（Ｍ２）において、ｎは０以上の整数であり、好ましくは、ｎは０〜５であり、より好ましくは、ｎは４以下の整数である。さらに、上記式（Ｍ１）、（Ｍ２）において、Ｚ１〜Ｚ３は、あってもなくてもよいが、好ましくは、ｍは０〜５であり、好ましくは、ｎが１の場合、Ｚ１およびＺ２はシアル酸基である。さらにより好ましくは、上記式（Ｍ１）および（Ｍ２）は、
【化３５−１】
2009143809.tif 000072
【化３５−２】
2009143809.tif 000073
からなる群より選択される糖または糖誘導体を有し得る。
【０１７９】
（医薬およびそれを用いる治療、予防など）
別の局面において、本発明は、本発明の製造方法によって得られた糖ペプチド（例えば、ポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチド）を含む医薬（例えば、ワクチン等の医薬品、健康食品、残さタンパク質又は脂質は抗原性を低減した医薬品）に関する。この医薬は、薬学的に受容可能なキャリアなどをさらに含み得る。本発明の医薬に含まれる薬学的に受容可能なキャリアとしては、当該分野において公知の任意の物質が挙げられる。
【０１８０】
本明細書において、「ポリラクトサミン」とは、オリゴ糖成分としてラクトサミン（例えば、−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−）単位の繰返し構造を含有する糖鎖をいう。ポリラクトサミンは、先天性赤血球生成不全性貧血（ＨＥＭＰＡＳ）、神経細胞の分化、胎児赤血球における免疫不適合な糖鎖抗原への自己免疫反応の低減などに関与していると考えられている。また、ポリラクトサミンは、ラミニン、リソゾーム膜タンパク質（ＬＡＭＰ）のような特定の糖タンパク質の一部を構成しており、これらの分子とレクチンとの相互作用を通して細胞間接着および情報伝達を制御しているという可能性も考えられている。
【０１８１】
本明細書において、「ポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチド」とは、ポリラクトサミンを骨格として含む糖ペプチドをいう。「ポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチド」は、先天性赤血球生成不全性貧血（ＨＥＭＰＡＳ）、神経細胞の分化、胎児赤血球における免疫不適合な糖鎖抗原への自己免疫反応の低減などに関連する。
【０１８２】
従って、「ポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチド」は、先天性赤血球生成不全性貧血（ＨＥＭＰＡＳ）、癌、神経細胞の分化などの制御に関連する医薬として有用である。
【０１８３】
本発明の医薬に適切な処方材料または薬学的に受容可能なキャリアとしては、抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および／または薬学的アジュバント挙げられるがそれらに限定されない。代表的には、本発明の医薬は、単離された多能性幹細胞、またはその改変体もしくは誘導体を、１つ以上の生理的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤とともに含む組成物の形態で投与される。例えば、適切なビヒクルは、注射用水、生理的溶液、または人工脳脊髄液であり得、これらには、非経口送達のための組成物に一般的な他の物質を補充することが可能である。
【０１８４】
本明細書で使用される受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、レシピエントに対して非毒性であり、そして好ましくは、使用される投薬量および濃度において不活性であり、そして以下が挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸；アスコルビン酸、α−トコフェロール；低分子量ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；モノサッカリド、ジサッカリドおよび他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；ならびに／あるいは非イオン性表面活性化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））。
【０１８５】
例示の適切なキャリアとしては、中性緩衝化生理食塩水、または血清アルブミンと混合された生理食塩水が挙げられる。好ましくは、その生成物は、適切な賦形剤（例えば、スクロース）を用いて凍結乾燥剤として処方される。他の標準的なキャリア、希釈剤および賦形剤は所望に応じて含まれ得る。他の例示的な組成物は、ｐＨ７．０−８．５のＴｒｉｓ緩衝剤またはｐＨ４．０−５．５の酢酸緩衝剤を含み、これらは、さらに、ソルビトールまたはその適切な代替物を含み得る。
【０１８６】
本発明の医薬は、経口的または非経口的に投与され得る。あるいは、本発明の医薬は、静脈内または皮下で投与され得る。全身投与されるとき、本発明において使用される医薬は、発熱物質を含まない、薬学的に受容可能な水溶液の形態であり得る。そのような薬学的に受容可能な組成物の調製は、ｐＨ、等張性、安定性などを考慮することにより、当業者は、容易に行うことができる。本明細書において、投与方法は、経口投与、非経口投与（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、粘膜投与、直腸内投与、膣内投与、患部への局所投与、皮膚投与など）であり得る。そのような投与のための処方物は、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤、徐放剤が挙げられる。
【０１８７】
本発明の医薬は、必要に応じて生理学的に受容可能なキャリア、賦型剤または安定化剤（日本薬局方第１４版またはその最新版、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０などを参照）と、本発明の製造方法によって得られた、所望の程度の純度を有する糖ペプチド（例えば、ムチン型糖ペプチド）を含む組成物とを混合することによって、凍結乾燥されたケーキまたは水溶液の形態で調製され保存され得る。
【０１８８】
本発明の処置方法において使用される糖ペプチド（例えば、ポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチド）を含む組成物の量は、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明の処置方法を被検体（または患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。頻度としては、例えば、毎日−数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回−１ヶ月に１回）の投与が挙げられる。１週間−１ヶ月に１回の投与を、経過を見ながら施すことが好ましい。
【０１８９】
以上のように本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明はこの実施形態に限定して理解されるべきものではない。本発明は、特許請求なお範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施できることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきである。
【実施例】
【０１９０】
本明細書で用いられる略語は、以下のような意味を有する。
【０１９１】
以下の実施例より本研究をさらに詳細に説明するが、本研究はこれらに限定されるものではない。以下に記載する実施例の概略を、図１に示す。
【０１９２】
本実施例で用いられる略語は、以下の様な意味を有する。
【０１９３】
ＤＭＦ  ＝  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、
ＤＣＭ  ＝  ジクロロメタン、
ＨＯＢＴ  ＝  Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、
ＨＢＴＵ＝１−（ビス（ジメチルアミノ）メチレン）−ベンゾトリアゾリウム  ３−オキシド  ヘキサフルオロリン酸塩、
ＤＩＥＡ  ＝  ジイソプロピルエチルアミン、
Ｂｏｃ基＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、
Ｆｍｏｃ基＝９−フルオレニルメトキシカルボニル基、
Ｐｂｆ基＝２，２，４，６，７ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル基、
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、
Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アラニン、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グリシン、
Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−プロリン、
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ    ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎγ−（２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル）−Ｌ−アルギニン、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸  β−ｔ−ブチルエステル、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸  β−ｔ−ブチルエステル、
Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン、
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−バリン、
Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ｉｍ−トリチル−Ｌ−ヒスチジン、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−トレオニン、
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−セリン、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−｛Ｏ−（２’，３，’４，’６’−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１’→３）−Ｏ−［２”−アセトアミド−３”，４”，６”−トリ−Ｏ−アセチル−２”−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１”→６）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−Ｌ−スレオニン、
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ  ＝  Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−｛Ｏ−（２’，３，’４，’６’−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１’→３）−Ｏ−［２”−アセトアミド−３”，４”，６”−トリ−Ｏ−アセチル−２”−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１”→６）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−Ｌ−セリン、
（実施例１：Ｎ末端にケトン誘導体を有するＭＵＣ１関連糖ペプチド誘導体（１）〜（８）の合成）
（１．１  化合物（１）〜（２）の合成）
【０１９４】
【化３６】
2009143809.tif 000074
Ｔｅｎｔａｇｅｌ  Ｓ  ＲＡＭ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．２４ｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９５％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（１）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ｔ−ブチルメチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ｔ−ブチルメチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール３．０ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、溶媒を留去して残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３  ２０×２５０ｍｍカラム（ジーエルサイエンス株式会社、東京）、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製して化合物（２）を２７ｍｇ得た（収率２３％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１９９７．０、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１９９６．０）。
【０１９５】
（１．２  化合物（３）〜（４）の合成）
【０１９６】
【化３７】
2009143809.tif 000075
Ｔｅｎｔａｇｅｌ  Ｓ  ＲＡＭ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．６７ｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（３）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ｔ−ブチルメチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ｔ−ブチルメチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール３．０ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、溶媒を留去して残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３  ２０×２５０ｍｍカラム（ジーエルサイエンス株式会社、東京）、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製して化合物（４）を３２ｍｇ得た（収率３６％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１９９７．２、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１９９６．０）。
【０１９７】
（１．３  化合物（５）〜（６）の合成）
【０１９８】
【化３８】
2009143809.tif 000076
Ｔｅｎｔａｇｅｌ  Ｓ  ＲＡＭ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１０ｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（５）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ｔ−ブチルメチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ｔ−ブチルメチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、溶媒を留去して残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３  ２０×２５０ｍｍカラム（ジーエルサイエンス株式会社、東京）、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製して化合物（６）を０．５ｍｇ得た（収率７％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８４４．３、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８４３．０）。
【０１９９】
（１．４  化合物（７）〜（８）の合成）
【０２００】
【化３９】
2009143809.tif 000077
Ｔｅｎｔａｇｅｌ  Ｓ  ＲＡＭ（登録商標）（Ｈｉｐｅｐ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）０．１０ｇ（０．００２５ｍｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸とケト酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチド誘導体を合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、５−ケトヘキサン酸。ペプチド伸長反応後、９０％ＴＦＡ水溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（７）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ｔ−ブチルメチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、上澄みを除き、再度ｔ−ブチルメチルエーテルを添加して沈殿を洗浄した。再び遠心分離を行って上澄みを除き、得られた沈殿をメタノール１．５ｍｌに溶解した。この溶液へ１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを１２〜１２．５へ調節し、１．５時間室温で攪拌して脱Ａｃ保護反応を行った。反応後、１Ｎ酢酸を加えて中和した後、溶媒を留去して残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３  ２０×２５０ｍｍカラム（ジーエルサイエンス株式会社、東京）、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製して化合物（８）を０．６ｍｇ得た（収率６％）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４１２．０、（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３４１１．５）。
【０２０１】
（実施例２：糖ペプチド合成用高分子プライマーの合成）
（２．１  化合物（１０）〜（１１）の合成）
【０２０２】
【化４０】
2009143809.tif 000078
１０ｍＭ  糖ペプチド誘導体（２）、１５ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（９）、５０ｍＭ  酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）の反応液１.５ｍｌを室温で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ  Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＬＣ（ＭＡ，ＵＳＡ）)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１０）とした。高分子（１０）の同定は、高分子（１０）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（１１）が得られることによって行った。
化合物（１１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１６０８．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１６０７．６）。
【０２０３】
（２．２  化合物（１２）〜（１３）の合成）
【０２０４】
【化４１】
2009143809.tif 000079
１０ｍＭ  糖ペプチド誘導体（４）、２０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（９）、５０ｍＭ  酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）の反応液１.０ｍｌを室温で８時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ  Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＬＣ（ＭＡ，ＵＳＡ）)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１．０ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１２）とした。高分子（１２）の同定は、高分子（１２）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（１３）が得られることによって行った。
化合物（１３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１６０９．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１６０８．６）。
【０２０５】
（実施例３：糖ペプチドおよび糖ペプチド合成用高分子プライマーの糖鎖伸長反応）
（３．１  化合物（１４）〜（１５）の合成）
【０２０６】
【化４２】
2009143809.tif 000080
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．６）、０．２Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、９ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、３．３ｍＭ  糖ペプチド誘導体（１０）を含む１ｍｌの反応液を２５℃で９０分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．３３ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１４）とした。高分子（１４）の同定は糖転移反応液を一部分取し、これにＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）を加え、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（１５）を得ることにより行った。化合物（１５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１７７０．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１７６９．８）。
【０２０７】
（３．２  化合物（１６）〜（１７）の合成）
【０２０８】
【化４３】
2009143809.tif 000081
２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、０．０２ｍＵ／ｍｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、４０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、２．５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（１４）を含む１ｍｌの反応液を３７℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．２５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１６）とした。高分子（１６）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（１７）を得ることにより行った。化合物（１７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１９７４．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１９７３．０）。
【０２０９】
（３．３  化合物（１８）〜（１９）の合成）
【０２１０】
【化４４】
2009143809.tif 000082
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．６）、０．４Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、１０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２ｍＭ  糖ペプチド誘導体（１６）を含む１ｍｌの反応液を２５℃で６０分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．２ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（１８）とした。高分子（１８）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（１９）を得ることにより行った。化合物（１９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２１３６．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２１３５．１）。
【０２１１】
（３．４  化合物（２０）〜（２１）の合成）
【０２１２】
【化４５】
2009143809.tif 000083
２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、０．２ｍＵ／ｍｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、４０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、２．５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（１８）を含む１ｍｌの反応液を３７℃で２４間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．２５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２０）とした。高分子（２０）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（２１）を得ることにより行った。化合物（２１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２３３９．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２３３８．３）。
【０２１３】
（３．５  化合物（２２）〜（２３）の合成）
【０２１４】
【化４６】
2009143809.tif 000084
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．４Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、１０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、２．３ｍＭ  糖ペプチド誘導体（２０）を含む１ｍｌの反応液を２５℃で４５分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．２３ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２２）とした。高分子（２２）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（２３）を得ることにより行った。化合物（２３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２５０１．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２５００．４）。
【０２１５】
（３．６  化合物（２４）〜（２５）の合成）
【０２１６】
【化４７】
2009143809.tif 000085
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、０．２Ｕ／ｍｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、４０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、２．０ｍＭ  糖ペプチド誘導体（２２）を含む１ｍｌの反応液を３７℃で１８時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．２ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２４）とした。高分子（２４）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（２５）を得ることにより行った。化合物（２５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２７０４．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２７０３．６）。
【０２１７】
（３．７  化合物（２６）〜（２７）の合成）
【０２１８】
【化４８】
2009143809.tif 000086
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．２Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、９ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、１．８ｍＭ  糖ペプチド誘導体（２４）を含む１ｍｌの反応液を２５℃で４５分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．１８ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２６）とした。高分子（２６）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（２７）を得ることにより行った。化合物（２７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６７．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６５．８）。
【０２１９】
（３．８  化合物（２８）〜（２９）の合成）
【０２２０】
【化４９】
2009143809.tif 000087
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、０．２Ｕ／ｍｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、４０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、１．５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（２６）を含む１ｍｌの反応液を２５℃で４５分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．１５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（２８）とした。高分子（２８）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（２９）を得ることにより行った。化合物（２９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３０７０．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３０６９．０）。
【０２２１】
（３．９  化合物（３０）〜（３１）の合成）
【０２２２】
【化５０】
2009143809.tif 000088
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．２Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、１０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、１ｍＭ  糖ペプチド誘導体（２８）を含む１ｍｌの反応液を２５℃で９０分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．１ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（３０）とした。高分子（３０）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：アセトニトリルの２％から２０％のグラジエント）により精製して化合物（３１）を得ることにより行った。化合物（３１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２３２３２．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２３１．１）。
【０２２３】
（３．１０  化合物（３２）〜（３３）の合成）
【０２２４】
【化５１】
2009143809.tif 000089
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、１ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（１２）を含む１．２ｍｌの反応液を２５℃で６０分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．６ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（３２）とした。高分子（３２）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：１０％１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）含有アセトニトリルの２％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（３３）を得ることにより行った。化合物（３３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１７７０．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１７７０．８）。
【０２２５】
（３．１１  化合物（３４）〜（３５）の合成）
【０２２６】
【化５２】
2009143809.tif 000090
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、０．０１９ｍＵ／ｍｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、４０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、０．５％ＢＳＡ、２．５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（３２）を含む２．０ｍｌの反応液を３７℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（３４）とした。高分子（３４）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：１０％１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）含有アセトニトリルの２％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（３５）を得ることにより行った。化合物（３５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１９７４．３（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝１９７３．０）。
【０２２７】
（３．１２  化合物（３６）〜（３７）の合成）
【０２２８】
【化５３】
2009143809.tif 000091
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、２０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（３４）を含む１．０ｍｌの反応液を２５℃で４５分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（３６）とした。高分子（３６）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：１０％１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）含有アセトニトリルの２％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（３７）を得ることにより行った。化合物（３７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２１３６．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２１３５．１）。
【０２２９】
（３．１３  化合物（３８）〜（３９）の合成）
【０２３０】
【化５４】
2009143809.tif 000092
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、０．０１９ｍＵ／ｍｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、４０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、０．５％ＢＳＡ、２．５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（３６）を含む２．０ｍｌの反応液を３７℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．５ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（３８）とした。高分子（３８）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：１０％１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）含有アセトニトリルの２％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（３９）を得ることにより行った。化合物（３９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｎａ］＋＝２３６０．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２３６１．３）。
【０２３１】
（３．１４  化合物（４０）〜（４１）の合成）
【０２３２】
【化５５】
2009143809.tif 000093
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、２０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（３８）を含む０．８ｍｌの反応液を２５℃で１０５分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．４ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（４０）とした。高分子（４０）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：１０％１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）含有アセトニトリルの２％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（４１）を得ることにより行った。化合物（４１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４９９．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２５００．４）。
【０２３３】
（３．１５  化合物（４２）〜（４３）の合成）
【０２３４】
【化５６】
2009143809.tif 000094
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、０．０１９ｍＵ／ｍｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、４０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、０．５％ＢＳＡ、２．５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（４０）を含む１．６ｍｌの反応液を３７℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．４ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（４２）とした。高分子（４２）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：１０％１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）含有アセトニトリルの２％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（４３）を得ることにより行った。化合物（４３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２７０３．２（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２７０３．６）。
【０２３５】
（３．１６  化合物（４４）〜（４５）の合成）
【０２３６】
【化５７】
2009143809.tif 000095
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、２０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（４２）を含む０．６ｍｌの反応液を２５℃で６０分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．３ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（４４）とした。高分子（４４）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：１０％１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）含有アセトニトリルの２％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（４５）を得ることにより行った。化合物（４５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６５．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８６５．８）。
【０２３７】
（３．１７  化合物（４６）〜（４７）の合成）
【０２３８】
【化５８】
2009143809.tif 000096
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、０．０１９ｍＵ／ｍｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、４０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、０．５％ＢＳＡ、２．５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（４４）を含む０．８ｍｌの反応液を３７℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．２ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（４６）とした。高分子（４６）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：１０％１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）含有アセトニトリルの２％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（４７）を得ることにより行った。化合物（４７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３０６７．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３０６９．０）。
【０２３９】
（３．１８  化合物（４８）〜（４９）の合成）
【０２４０】
【化５９】
2009143809.tif 000097
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、２０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（４６）を含む０．２ｍｌの反応液を２５℃で６０分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が０．１ｍｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（４８）とした。高分子（４８）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対するＢ：１０％１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）含有アセトニトリルの２％から４０％のグラジエント）により精製して化合物（４９）を得ることにより行った。化合物（４９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２３３．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２３１．１）。
【０２４１】
（３．１９  化合物（５０）の合成）
【０２４２】
【化６０】
2009143809.tif 000098
２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．６）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、２．４ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．５％ＢＳＡ、０．０８８ｍＭ  糖ペプチド誘導体（６）を含む２．０ｍｌの反応液を２５℃で１８０分間攪拌した。反応終了後、反応液を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（５０）を得た。化合物（５０）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３００６．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３００５．１）。
【０２４３】
（３．２０  化合物（５１）の合成）
【０２４４】
【化６１】
2009143809.tif 000099
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、４．５５ｍＵ／ｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、４０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、０．１ｍＭ  糖ペプチド誘導体（５０）（化合物（６）から化合物（５０）までの理論収率より見積もった）を含む２００μｌの反応液を３７℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（５１）を得た。化合物（５１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２０９．９（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３２０８．３）。
【０２４５】
（３．２１  化合物（５３）の合成）
【０２４６】
【化６２】
2009143809.tif 000100
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５ｍＵ／ｍｌラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１７５ｍＵ／ｍｌ  ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１０ｍＭ  塩化マンガン、５ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、５ｍＭ  シチジン−５’−リン酸シアル酸（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、０．１％ＢＳＡ、０．０２ｍＭ  糖ペプチド誘導体（５１）（化合物（６）から化合物（５１）までの理論収率より見積もった）を含む１．０ｍｌの反応液を２５℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（５３）を得た。化合物（５３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３９５４．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３９５３．０）。
【０２４７】
（３．２２  化合物（５４）の合成）
【０２４８】
【化６３】
2009143809.tif 000101
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、１０ｍＭ  塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、０．１Ｕ／ｍｌヒト組換えα１，３−フコース酸転移酵素Ｖ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、２ｍＭ  グアノシン−５’−二リン酸フコース（ＧＤＰ−Ｆｕｃ）、０．０８ｍＭ  糖ペプチド誘導体（５３）（化合物（６）から化合物（５３）までの理論収率より見積もった）を含む２００μｌの反応液を２５℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（５４）を得た。化合物（５４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４２４５．４（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４２４５．２）。
【０２４９】
（３．２３  化合物（５５）の合成）
【０２５０】
【化６４】
2009143809.tif 000102
２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．６）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、２．４ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．０８ｍＭ  糖ペプチド誘導体（８）を含む２．０ｍｌの反応液を２５℃で１８０分間攪拌した。反応終了後、反応液を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（５５）を得た。化合物（５５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７３６．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７３５．８）。
【０２５１】
（３．２４  化合物（５６）の合成）
【０２５２】
【化６５】
2009143809.tif 000103
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、３．８５ｍＵ／ｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、４０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、０．５％ＢＳＡ、０．１ｍＭ  糖ペプチド誘導体（５５）を含む５００μｌの反応液を３７℃で６０時間攪拌した。反応終了後、反応液を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（５０）を得た。化合物（５６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１４３．２（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝４１４２．２）。
【０２５３】
（３．２５  化合物（５８）の合成）
【０２５４】
【化６６】
2009143809.tif 000104
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、０．０１８５ｍＵ／ｍｌラット組換えα２，３−（Ｎ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、０．０１６９ｍＵ／ｍｌ  ラット組換えα２，３−（Ｏ）−シアル酸転移酵素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）１０ｍＭ  塩化マンガン、５ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ），５ｍＭ  シチジン−５’−リン酸シアル酸（ＣＭＰ−ＮＡＮＡ）、０．１％ＢＳＡ、０．０５ｍＭ  糖ペプチド誘導体（５６）（化合物（８）から化合物（５６）までの理論収率より見積もった）を含む１．０ｍｌの反応液を２５℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（５８）を得た。化合物（５８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝５６３１．５（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝５６３１．９）。
【０２５５】
（３．２６  化合物（５９）の合成）
【０２５６】
【化６７】
2009143809.tif 000105
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、１０ｍＭ  塩化マンガン、０．１％ＢＳＡ、０．１Ｕ／ｍｌヒト組換えα１，３−フコース酸転移酵素Ｖ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）、２ｍＭ  グアノシン−５’−二リン酸フコース（ＧＤＰ−Ｆｕｃ）、０．０８ｍＭ  糖ペプチド誘導体（５８）を含む６２５μｌの反応液を２５℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（５９）を得た。化合物（５９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝６２１６．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝６２１６．０）。
【０２５７】
（３．２７  化合物（６０）〜（６１）の合成）
【０２５８】
【化６８】
2009143809.tif 000106
１０ｍＭ  糖ペプチド誘導体（６）０．１ｍｌ、１０ｍＭ（オキシアミン残基換算）水溶性高分子（９）０．２ｍｌ、５０ｍＭ  酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．１ｍｌの合計０．４ｍｌを室温で２１時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルター１０Ｋ  Ａｐｏｌｌｏ（登録商標）２０ｍｌ(Ｏｒｂｉｔａｌ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＬＣ（ＭＡ，ＵＳＡ）)によって遠心濃縮し、そこへ２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が９６μｌになるように水を加えることによって１０ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（６０）とした。高分子（６０）の同定は、高分子（６０）の一部をＢＬａｓｅで処理し、生成物（６１）が得られることによって行った。
化合物（６１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４５６．１（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２４５４．６）。
【０２５９】
（３．２８  化合物（６２）〜（６３）の合成）
【０２６０】
【化６９】
2009143809.tif 000107
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、１ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．１％  ＢＳＡ、０．１ｍＭ  糖ペプチド誘導体（６０）を含む５０μｌの反応液を２５℃で４５分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が７μｌになるように水を加えることによって０．７１ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（６２）とした。高分子（６２）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製して化合物（６３）を得ることにより行った。化合物（６３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２６１７．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２６１６．７）。
【０２６１】
（３．２９  化合物（６４）〜（６５）の合成）
【０２６２】
【化７０】
2009143809.tif 000108
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、３．８５ｍＵ／ｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、１０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、０．５％ＢＳＡ、０．１３ｍＭ  糖ペプチド誘導体（６２）を含む４０μｌの反応液を３７℃で４３時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１８μｌになるように水を加えることによって０．２８ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（６４）とした。高分子（６４）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製することにより行った。化合物（６５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８２０．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２８１９．９）。
【０２６３】
（３．３０  化合物（６６）〜（６７）の合成）
【０２６４】
【化７１】
2009143809.tif 000109
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、１．０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．０６ｍＭ  糖ペプチド誘導体（６４）を含む９０μｌの反応液を２５℃で９０分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が２２μｌになるように水を加えることによって０．２３ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（６６）とした。高分子（６６）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製することにより行った。化合物（６７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９８２．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝２９８２．０）。
【０２６５】
（３．３１  化合物（６８）〜（６９）の合成）
【０２６６】
【化７２】
2009143809.tif 000110
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、７．７ｍＵ／ｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、１０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、０．５％ＢＳＡ、０．０６ｍＭ  糖ペプチド誘導体（６６）を含む８０μｌの反応液を３７℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１６μｌになるように水を加えることによって０．３１ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（６８）とした。高分子（６８）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製することにより行った。化合物（６９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８４．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３１８５．２）。
【０２６７】
（３．３２  化合物（７０）〜（７１）の合成）
【０２６８】
【化７３】
2009143809.tif 000111
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、１．０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．０６ｍＭ  糖ペプチド誘導体（６８）を含む８０μｌの反応液を２５℃で６０分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１９．３μｌになるように水を加えることによって０．２６ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（７０）とした。高分子（７０）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製することにより行った。化合物（７１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３３４８．８（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３３４７．４）。
【０２６９】
（３．３３  化合物（７２）〜（７３）の合成）
【０２７０】
【化７４】
2009143809.tif 000112
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、３．８５ｍＵ／ｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、１０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、０．５％ＢＳＡ、０．０７ｍＭ  糖ペプチド誘導体（７０）を含む７０μｌの反応液を３７℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が４２．２μｌになるように水を加えることによって０．１２ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（７２）とした。高分子（７２）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製することにより行った。化合物（７３）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５２．０（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３５５０．６）。
【０２７１】
（３．３４  化合物（７４）〜（７５）の合成）
【０２７２】
【化７５】
2009143809.tif 000113
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、０．０５Ｕ／ｍｌ  ヒト由来β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）、１０ｍＭ  塩化マンガン、１．０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）、０．０９ｍＭ  糖ペプチド誘導体（７２）を含む５５μｌの反応液を２５℃で６０分間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が１２．４μｌになるように水を加えることによって０．４ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（７４）とした。高分子（７４）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製することにより行った。化合物（７５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７１４．６（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３７１２．７）。
【０２７３】
（３．３５  化合物（７６）〜（７７）の合成）
【０２７４】
【化７６】
2009143809.tif 000114
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）、３．８５ｍＵ／ｌ  ブタ由来β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素（東洋紡社製）、２０ｍＭ  塩化マンガン、１０ｍＭ  ウリジン−５’−二リン酸Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）、０．５％ＢＳＡ、０．１１ｍＭ  糖ペプチド誘導体（７４）を含む４５μｌの反応液を３７℃で２４時間攪拌した。反応終了後、反応液を限外濾過フィルターＵＬＴＲＡＦＲＥ−ＭＣ  １０，０００ＮＭＷＬ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）によって遠心濃縮し、そこへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて再度濃縮することによって洗浄し、最終的に容量が３３．７μｌになるように水を加えることによって０．１５ｍＭ（糖ペプチド理論含量）高分子（７６）とした。高分子（７６）の同定は一部をＢＬａｓｅ（塩野義製薬社製）で処理し、反応液を逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６×２５０ｍｍカラム、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液に対するＢ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルの２％から５０％のグラジエント）により精製することにより行った。化合物（７７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３９１７．７（理論値：［Ｍ（ａｖｅｒａｇｅ）＋Ｈ］＋＝３９１５．９）。
【０２７５】
（実施例４：糖アミノ酸（７９）〜（８３）の合成）
（４．１  化合物（７９）の合成）
【０２７６】
【化７７】
2009143809.tif 000115
化合物（７８）６７．６ｍｇを１０ｍＭ水酸化ナトリウムのメタノール溶液１４ｍｌに溶解し、室温で１．５時間攪拌した。反応終了後、反応液を酢酸で中和し、溶媒を減圧留去した。得られた混合物を、炭酸水素ナトリウム１１．８ｍｇを含む６０％アセトン水溶液２．８ｍｌに溶解し、さらにアセトン４．２ｍｌに溶解した炭酸９−フルオレニルメチルスクシンイミジル３５．４ｍｇを加え、室温で２時間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧留去し、得られた混合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（７９）を４５．１ｍｇ得た（収率６７％）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ：［Ｍ＋Ｎａ］＋＝９８８．３８９０、（理論値：［Ｍ＋Ｎａ］＋＝９８８．３９０３）。
【０２７７】
（４．２  化合物（８０）の合成）
【０２７８】
【化７８】
2009143809.tif 000116
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）、β１，４−ガラクトース転移酵素（東洋紡社製）４．７Ｕ、ウリジン−５’−二リン酸ガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）５７ｍｇ、１０ｍＭ  塩化マンガン、０．１％  アジ化ナトリウム、０．１％  牛血清アルブミン、１０ｍＭ  ２，６−ジ−Ｏ−メチル−β−シクロデキストリン、化合物（７９）４５．１ｍｇを含む２３．４ｍｌの反応液を２５℃で１５時間攪拌した。反応終了後、反応液を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（８０）を４５．６ｍｇ得た（収率８７％）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ：［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１１５０．４４４０、（理論値：［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１１５０．４４３１）。
【０２７９】
（４．３  化合物（８１）の合成）
【０２８０】
【化７９】
2009143809.tif 000117
５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）、β１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素６０６ｍＵ、ウリジン−５’−二リン酸−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）６５．８ｍｇ、１０ｍＭ  塩化マンガン、１０ｍＭ  塩化マグネシウム、０．１％  アジ化ナトリウム、０．１％  牛血清アルブミン、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１００ｍＵ／ｍｌアルカリホスファターゼ、化合物（８０）４５．６ｍｇを含む２０．２ｍｌの反応液を２５℃で４８時間攪拌した。反応終了後、反応液を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（８１）を３８．７ｍｇ得た（収率７２％）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ：［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１３５３．５１９９、（理論値：［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１３５３．５２２３）。
【０２８１】
（４．４  化合物（８２）の合成）
【０２８２】
【化８０】
2009143809.tif 000118
化合物（８１）３８．７ｍｇを無水酢酸／ピリジン／酢酸（５／３／２、ｖ／ｖ／ｖ）溶液２９．１ｍｌに溶解し、室温で１９時間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧留去し、得られた混合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（８２）を５１．６ｍｇ得た（収率９４％）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ：［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１８９９．６６３１、（理論値：［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１８９９．６５９８）。
【０２８３】
（４．５  化合物（８３）の合成）
【０２８４】
【化８１】
2009143809.tif 000119
化合物（８２）５１．６ｍｇを９５％ＴＦＡ水溶液１０ｍｌに溶解し、室温で１時間攪拌した。反応終了後、溶媒を揮発留去し、得られた混合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（８３）を３９．２ｍｇ得た（収率７８％）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ：［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１８４３．５９７８、（理論値：［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１８４３．５９７２）。
【０２８５】
（実施例５：糖ペプチド（８４）〜（８５）の合成）
（５．１  化合物（８４）〜（８５）の合成）
【０２８６】
【化８２】
2009143809.tif 000120
Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＰＥＧＡ  ｒｅｓｉｎ（０．０５５ｍｍｏｌ／ｇ）２５０．９ｍｇ（１３．８μｍｏｌ）を担体として以下に示すＮ−保護アミノ酸をＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ法で順次縮合し、目的の糖ペプチドを合成した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ａｃ７ｃｏｒｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、化合物（８３）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ。ペプチド伸長反応後、ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン／水（９５／２．５／２．５、ｖ／ｖ／ｖ）溶液中、室温で２時間反応させることによってペプチド残基上の保護基を脱離させるとともに、固相担体上から化合物（８４）を遊離させた。樹脂を濾別し、ＴＦＡを揮発留去した後、ｔ−ブチルメチルエーテルを加えて生成物を沈殿させた。得られたスラリーを遠心分離後、沈殿を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（８４）の粗精製物を１．２８ｍｇ得た。得られた粗精製物を１０ｍＭ水酸化ナトリウムのメタノール溶液１０ｍｌに溶解し、室温で３時間攪拌した。反応終了後、反応液を酢酸で中和し、溶媒を揮発留去した。得られた混合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して化合物（８５）を１．０ｍｇ得た（収率２．８％）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ：［Ｍ−Ｈ］−＝２６１０．１０５７、（理論値：［Ｍ−Ｈ］−＝２６１０．１０５３）。
【産業上の利用可能性】
【０２８７】
本発明によれば、従来の技術では極めて困難であった簡単な糖鎖構造から複雑な糖鎖構造までを網羅的に有する糖ペプチドのライブラリー調製が可能となる。例えば、本発明により、生化学研究材料、医薬、食品など幅広い分野で有用であり、これまでその製造が困難であったポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチド類を合成することができる。
【０２８８】
得られたポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドライブラリーは構造解析、生化学試験の標準サンプルとして使用可能である。また、このポリラクトサミン骨格を有するムチン型糖ペプチドライブラリーをチップ上に配置し、糖ペプチド認識タンパク質の検出、病理診断、細胞接着配列の検索、細胞増殖・アポトーシスなどに関連する配列解析などを網羅的に行うことが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【０２８９】
【図１】図１は、本発明の糖ペプチドの製造までの手順を示す。示された番号は、実施例における化合物番号を示す。
【配列表フリーテキスト】
【０２９０】
（配列の説明）
配列番号１〜２０：ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１の１０残基の部分アミノ酸配列
配列番号２１〜４０：ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１の１１残基の部分アミノ酸配列
配列番号４１〜６０：ムチン型糖タンパク質ＭＵＣ１の２０残基の部分アミノ酸配列
配列番号６１〜６６：化合物に含まれる担体に含まれるアミノ酸配列の例
【図１】
2009143809.tif 000135
【配列表】
2009143809000001.app