(57)【要約】【課題】本発明は、小麦、大麦などの麦類やトウモロコシ等に発生する、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ等のカビ類に由来する３−アセチルデオキシニバレノール（３ＡＤＯＮ）やデオキシニバレノール（ＤＯＮ）といったトリコテセン系カビ毒の生産を阻害する新システムの開発を解決すべき課題とするものである。【解決手段】カモミールジャーマンエッセンシャルオイルにトリコテセン系カビ毒の生産を阻害する作用があることを見出し、活性物質がプレコセン（クロメン化合物）であることを確認し、ｐｒｅｃｏｃｅｎｅ−１、ｐｒｅｃｏｃｅｎｅ−２、ｐｒｅｃｏｃｅｎｅ−３の少なくともひとつを有効成分とするトリコテセン系カビ毒の生産阻害物質の発明を完成した。３ＡＤＯＮは、ＤＯＮの生合成前駆体であることから、３ＡＤＯＮ生産阻害剤はＤＯＮ生産阻害剤と同義である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
プレコセン（ｐｒｅｃｏｃｅｎｅ）を有効成分として含有すること、を特徴とするトリコテセン系カビ毒生産阻害剤。
【請求項２】
有効成分として更に農園芸用殺菌剤を含有すること、を特徴とする請求項１に記載のトリコテセン系カビ毒生産阻害剤。
【請求項３】
農産物、その種子、農産物を栽培する圃場、栽培している農産物の少なくともひとつを、プレコセン及び所望により農園芸用殺菌剤を使用して、処理すること、を特徴とするトリコテセン系カビ毒の生産を阻害する方法。
【請求項４】
プレコセンがプレコセン−１、プレコセン−２、プレコセン−３の少なくともひとつであること、を特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤又は方法。
【請求項５】
トリコテセン系カビ毒が、３−アセチルデオキシニバレノール（３ＡＤＯＮ）又はデオキシニバレノール（ＤＯＮ）であること、を特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の剤又は方法。
【請求項６】
農産物が、小麦、大麦、トウモロコシ、米、ピーナッツから選ばれる少なくともひとつであること、を特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤又は方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プレコセンを有効成分とするカビ毒、特にトリコテセン系カビ毒の生産を阻害するシステムに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
トリコテセンは、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属菌及び他のカビによって産生される二次代謝物であり、農産物や飼料を通じて摂取されることにより、ヒトや家畜に嘔吐、皮膚炎、出血性敗血症などの深刻な食品汚染問題を引き起こすマイコトキシンの一種である。
【０００３】
トリコテセンは、その生合成経路により、Ａ型トリコテセンとＢ型トリコテセンに分けられる。Ａ型トリコテセンには、例えば、Ｔ−２トキシンが、Ｂ型トリコテセンにはデオキシニバレノール（ＤＯＮ）、及びそのプレカーサーである３−アセチルデオキシニバレノール（３ＡＤＯＮ）などが含まれる。
【０００４】
また、フザリウム属菌の内、例えばフザリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）といったフザリウム属に属する一部のカビは、麦類やとうもろこし類等の農産物の「赤カビ病」の病原菌として知られており、マイコトキシン、例えばニバレノール、デオキシニバレノールなどのトリコテセン系カビ毒を産生する。なお、本明細書において、トリコテセンをトリコテセン系カビ毒あるいは単にカビ毒という場合もある。
【０００５】
トリコテセン系カビ毒が「赤カビ中毒症」とよばれる一連の中毒症状を惹起し、深刻な食品汚染問題を引き起こすことは既述のとおりである。そのため、トリコテセン系カビ毒の防除が希求されているが、有効な実用的防除システムの開発に成功した例は未だ報告されていない。
【０００６】
一方、プレコセン（ｐｒｅｃｏｃｅｎｅ）は、ムラサキカッコウアザミ（Ａｇｅｒａｔｕｍ  ｈｏｕｓｔｉａｎｕｍ）より単離されたクロメン誘導体であって、抗幼若ホルモン（抗ＪＨ：ａｎｔｉ−ＪＨ）活性を有していることは知られているが、実用化には成功していないのが現状である。
【０００７】
天然由来の抗ＪＨ様物質であるプレコセンには例えばプレコセン−１、プレコセン−２、プレコセン−３があることが知られてはいるが、プレコセンが３−アセチルデオキシニバレノール（３ＡＤＯＮ）の生産阻害活性を有することは知られておらず、本発明が最先である。
【特許文献１】特開２０００−３２９８５号公報
【非特許文献１】江藤守総編「農薬の生有機化学と分子設計」昭和６０年５月３０日、（株）ソフトサイエンス社発行、第４１４〜４１５頁。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
フザリウム属のカビが産生するカビ毒（トリコテセン系マイコトキシン）の汚染を防除するのに有効な実用的システムは、既述したように、未だ開発されていない。また、フザリウム属のカビを防除するのに有効な実用的システムも開発されていないのが現状である。
【０００９】
この発明は、農産物がフザリウム属のカビが産生するカビ毒により汚染することを防ぎ、除くことを目的としており、これによりフザリウム属のカビが産生するカビ毒の汚染の心配のない農産物を供することも目的としている。また、このカビ毒を中和、防除することにより、病徴を軽減し、減農薬指向の植物病害制御システムを新たに構築することも、この発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、上記目的を達成するためになされたものであって、各方面から検討の結果、安全性の面から、天然物よりスクリーニングすることとした。そして莫大な数の天然物の内から、エッセンシャルオイル（精油）に着目し、各種エッセンシャルオイルについてスクリーニングを鋭意行った結果、カモミールジャーマンエッセンシャルオイルのみに３ＡＤＯＮ生産阻害活性が見られることをはじめて見出した。
【００１１】
そして、該精油中の有効成分の精製を行った結果、有効成分としてプレコセンを単離し、ひきつづいて研究した結果、プレコセン−１、プレコセン―２、プレコセン−３をそれぞれ単離し、その同定にも成功した。
【００１２】
すなわち、本発明は、これらの有用新知見に基いてなされたものであって、プレコセンを有効成分とするトリコテセン生産阻害物質に関するものである。
【００１３】
本発明の実施態様は、以下のとおりである。
【００１４】
（１）プレコセン（ｐｒｅｃｏｃｅｎｅ）を有効成分とすること、を特徴とするマイコトキシンの１種であるトリコテセン系カビ毒の生産阻害剤。トリコテセン系カビ毒は、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属菌及び他のカビによって生産されるものであって、「赤カビ病」の病原菌として知られるフザリウム・グラミネアラム（Ｆ．ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）等フザリウム属に属する一部のカビが産生するものも包含するものである。
（２）更に、有効成分として農園芸用殺菌剤を併用すること、を特徴とする（１）に記載の剤。
【００１５】
（３）農産物、その種子、農産物を栽培する圃場（土壌も包含する）、栽培している農産物（農園芸用作物）の少なくともひとつを、プレコセン（所望により、農園芸用殺菌剤を更に併用）を用いて処理することにより、トリコテセン系カビ毒の生産を阻害する方法。トリコテセン系カビ毒の生産のみを阻害する方法；トリコテセン系カビ毒を産生するフザリウム属菌（赤カビ病菌を含む）のみを阻害し、もってトリコテセン系カビ毒の生産を阻害する方法；及びフザリウム属菌を阻害するとともにトリコテセン系カビ毒の生産も阻害する方法；を包含する。
【００１６】
（４）プレコセンが、プレコセン−１、プレコセン−２、プレコセン−３の少なくともひとつであること、を特徴とする（１）〜（３）のいずれか１項に記載の剤又は方法。更に、プレコセンは、１、２、３の２又はそれ以上の混合物でもよいし、その含有物（例えば、カモミールジャーマンエッセンシャルオイル、又はその精製物）でもよい。
【００１７】
（５）トリコテセンが、Ｂ型トリコテセンであって、例えばデオキシニバレノール（ＤＯＮ）、その生合成前駆体である３−アセチルデオキシニバレノール（３ＡＤＯＮ）であること、を特徴とする（１）〜（４）のいずれか１項に記載の剤又は方法。
【００１８】
（６）農産物が、小麦、大麦、トウモロコシ、米、ピーナッツから選ばれる少なくともひとつであること、を特徴とする（１）〜（５）のいずれか１項に記載の剤又は方法。
【００１９】
（７）プレコセン−１、プレコセン−２、プレコセン−３の少なくともひとつを有効成分としてなること、を特徴とする３ＡＤＯＮ又はＤＯＮの生産阻害剤。
【発明の効果】
【００２０】
本発明にしたがってプレコセンを用いて農産物を処理することにより、３ＡＤＯＮやＤＯＮといったトリコテセン系カビ毒の生産を阻害することがはじめて可能となった。すなわち、プレコセンを、農産物を植える圃場や土壌、播種する種、圃場に生育している植物体、又は植物体が生育している圃場などに散布したり、収穫後の農産物、或は貯蔵中の農産物に散布、混合したりすることにより、トリコテセン系カビ毒等フザリウム属のカビが産生するカビ毒を防除することが可能となった。
【００２１】
本発明によれば、フザリウム属菌といったカビ毒生産菌自体を防除することができるほか、カビ毒の生産を阻害することができる点で非常に特異的である。これらのカビ毒は食品を製造する際の加工工程では分解、無毒化されにくい物質といわれており、カビ毒生産菌をいくら防除しても、根本的な解決策とならず、カビ毒の生産を阻害してカビ毒の残留を防止しなければ、所期の目的が達成されないが、本発明はこの点を可能とした点で極めて卓越しており、顕著な効果を奏するものである。
【００２２】
また、一部のカビ毒生産菌にあっては、死滅する際に大量のカビ毒を生産、放出する場合もあるが、本発明は、このような場合にも有効に作用してカビ毒を防除するという著効を奏するものである。
【００２３】
しかも、本発明の有効成分であるプレコセンは、精油から分離したのであって天然物由来であることから、安全性に格別の問題もなく、Ａｍｅｓ試験もネガティブであり、植物に対する薬害も認められない。マウスに１日あたり５００ｍｇ、３０日間投与したが、急性毒性も認められなかった。
【００２４】
したがって、本発明は、すぐれた農園芸用殺菌剤（殺カビ剤）、カビ毒防除剤として農薬の分野で有用であるのみでなく、飲食品や飼料、餌料用防カビ剤として飲食品や飼餌料の分野でも有用である。後者の場合、小麦やトウモロコシといった農産物とプレコセンを混合しておけば、たとえこれらの農産物がカビ毒生産菌で汚染されていたとしても、カビ毒で汚染されることはないため、中毒症の発症等の実害は発生しない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
本発明は、カビ毒生産阻害剤に関するものであって、プレコセンを有効成分とするものである。
【００２６】
本発明者らは、カビ毒によって引き起こされる重大な衛生上の問題点を解決するため、カビ毒生産阻害物質を開発する必要性を痛感し、しかもその際、安全性を指向する消費者の立場に立ち、天然物由来物質からスクリーニングすることとした。
【００２７】
そして、各方面から検討の結果、天然物の中からエッセンシャルオイルに着目した。カビ毒生産阻害物質のスクリーニングは次のようにして行った。
【００２８】
被験物質とともに、赤カビ病病原菌であるフザリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）Ｈ３株を液体培養し、培養上清をクロロホルムで抽出し、抽出液を濃縮した後、粗３ＡＤＯＮ画分をＭｅＯＨに溶かし、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）分析を行う。
【００２９】
被験物質として１２０種の市販エッセンシャルオイルをスクリーニングしたところ、カモミールジャーマンエッセンシャルオイルのみに３ＡＤＯＮ生産阻害活性が見られた。そこで、シリカゲル吸着クロマトグラフィーにより、カモミールジャーマンエッセンシャルオイル中の活性物質の精製を行った。その結果、活性物質として、クロメン誘導体であるプレコセン（ｐｒｅｃｏｃｅｎｅ）−１、プレコセン−２とともに、プレコセン−３を単離、構造決定するに至った。
【００３０】
プレコセン−１、プレコセン−２、プレコセン−３の化学構造式を、下記化１、化２、化３に示す。
【００３１】
【化１】
2009167138.tif 000002
【００３２】
【化２】
2009167138.tif 000003
【００３３】
【化３】
2009167138.tif 000004
【００３４】
このようにして、本発明者らにより、はじめて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて公知天然物質のｐｒｅｃｏｃｅｎｅがＦｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍの３−アセチルデオキシニバレノール（３ＡＤＯＮ）生産を特異的に阻害することが、見出された。３ＡＤＯＮはデオキシニバレノール（ＤＯＮ）の生合成前駆体であり、３ＡＤＯＮ（化４）の生産阻害はＤＯＮ（化５）生産阻害と同じ意味を持つものである。
【００３５】
【化４】
2009167138.tif 000005
【００３６】
【化５】
2009167138.tif 000006
【００３７】
このスクリーニングにおいて、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍを固体培養した場合、ＤＯＮが主に生産され、液体培養した場合は３ＡＤＯＮのみが生産される。ＤＯＮはフザリウム・グラミネアラムの成育に影響を与えるために、スクリーニングでは液体培養を利用している。ｐｒｅｃｏｃｅｎｅの作用機構および生合成経路の詳細は今後の研究にまたねばならないが、ＤＯＮのプレカーサーである３ＡＤＯＮの生産を阻害することから、ＤＯＮの生産も阻害することとなる。なお、本明細書において、阻害とは、ＤＯＮ又は３ＡＤＯＮの生産を１００％完全に停止させる場合のほか、完全停止に至るまでの生産を抑制ないし低下させる場合も包含するものである。
【００３８】
上記のようにプレコセンは、トリコテセン系カビ毒に対しては、その生産を阻害する一方、フザリウム・グラミネアラムに対しては、高濃度では抗菌活性を示すが、スクリーニングレベルの濃度では影響を与えない。このようにプレコセンは、カビ毒生産菌は殺菌することなく、当該菌によるカビ毒の生産は阻害する点できわめて特異的である。したがって、カビ毒生産菌が死滅する際に大量にカビ毒を生産し、菌糸体は死滅してもカビ毒が残留することもなく、きわめてすぐれている。
【００３９】
本発明はプレコセンを有効成分とするものであり、プレコセン−１、プレコセン−２、プレコセン−３の１種又は２種以上を使用するものであるが、プレコセンは単離された精製品のほか、粗精製品、これらの含有物も適宜使用可能である。例えば、カモミールジャーマンエッセンシャルオイル自体、その濃縮物等も使用可能である。これらにはプレコセンの他にアフトラキシンの生産阻害活性を有する（Ｅ）−ｓｐｉｒｏｅｔｈｅｒも含まれているため、総合的なカビ毒阻害としても有用である。
【００４０】
プレコセンは、上記のように天然物由来のエッセンシャルオイルやアザミ類から抽出できるほか、化学合成によっても得ることができる。その場合、例えば、Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｃｒｅｍ．，  １９７１，  ２４，  ｐ．２３４７〜５４に記載のように、対応するフェノール、３−クロロ−３−メチル−１−ブチン、炭酸カリウム、ヨウ化カリウムを乾燥アセトン中で２０時間還流攪拌し、塩を濾去した後、アセトンで洗滌し、濾液と洗滌液を合わせ、次いでアセトンを留去する。残渣の油状物をエーテルに溶かし、３規定水酸化ナトリウム、水、ブラインで順次洗った後、乾燥し、エーテルを留去する。得られた残渣を蒸留、又は再結晶することにより、対応するエーテル化合物を得る。
【００４１】
得られたエーテル化合物をジエチルアニリンに溶かし、これを８時間還流した後、冷却、エーテル希釈し、冷やした２規定硫酸、水、ブラインで順次洗った後、乾燥し、エーテルを留去する。得られた残渣から蒸留又は再結晶によって、目的とするクロメン化合物（プレコセン）を得る。
【００４２】
本発明に係るトリコテセン生産阻害剤は、農薬製剤の製造方法の常法にしたがい、有効成分を、必要に応じて界面活性剤、その他の補助剤を加えて製剤化してもよい。具体的に製剤例としては、粒剤、粉剤、水和剤、懸濁製剤、乳剤、塗布剤、油剤等が例示される。
【００４３】
製剤に使用する液体担体としては、例えば、キシレン、トルエン、ベンゼン、アルキルナフタレン等の芳香族炭化水素；クロロベンゼン、クロロエチレン、塩化メチレン等の塩素化芳香族炭化水秦、シクロヘキサン、パラフィン等の脂肪族炭化水素；鉱油留分；エタノール、ブタノール、グリコール等のアルコール及びこれらのエーテル類ならびにエステル；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、水等の極性溶剤が挙げられ、これらの１種又は２種以上を混合して使用することができる。水が溶剤として用いられる場合、純水、または無機塩類（塩化ナトリウム、塩化カリウム等）、糖（グルコース、ショ糖等）若しくは糖アルコール（Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール等）の水溶液を用いることができる。
【００４４】
また、製剤に使用する固体担体としては、例えば、カオリン、粘土、タルク、チョーク、石英、アタパルジャイト、モンモリロナイト、珪藻土等の天然鉱物粉末、ケイ酸、アルミナ、ケイ酸塩等の合成鉱物粉末、高分子性天然物（結晶性セルロース、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸等）が挙げられ、これらの１種又は２種以上を混合して使用することができる。
【００４５】
乳化剤、消泡剤、分散剤等として使用される表面活性剤としては、ポリオキシエチレン−脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン−脂肪アルコールエーテル、アルキルアリールポリグリコールエーテル、アルキルスルホネート、アルキルサルフェート、アリールスルフォネート、アルブミン加水分解物、リグニン−亜硫酸廃液、メチルセルロース、アラビアゴム等が挙げられる。
【００４６】
本発明の有効成分は、プレコセンを用いた場合、乳剤では０．０１〜５０重量％、水和剤では０．０１〜５０重量％、粒剤では０．０１〜１０重量％であるが、使用目的によってはこれらの濃度は適宜変更してもよい。乳剤、水和剤の場合には、使用に際して水で希釈して、製品重量の１００〜５０００倍希釈で使用することができ、好ましくは５００〜１０００倍希釈で使用することができる。
【００４７】
その施用方法としては、噴霧法、ミスト法、ダスト法、散布法、注入法等が適宜利用され、直接植物に施用するほか、土壌に施用してもよい。施用量は、例えば、噴霧法の場合、１０ａ当たり、有効成分量で１〜１０００ｇ噴霧するのが好ましく、他の施用方法の場合はこれに準じて施用量を定めればよい。
【００４８】
本発明に係るトリコテセン系カビ毒生産阻害剤は、上記有効成分のほか更に、他の農園芸用農薬成分と併用してもよい。この農園芸用農薬成分は市販されているか、または農園芸用農薬として知られた成分であり、これらの成分は日本植物防疫協会発行の農薬ハンドブック（２００２年）、日本植物防疫協会発行の農薬要覧（２００５年）、全国農業協同組合連合会発行のクミアイ農薬総覧（２００５年）及び同連合会発行のＳＨＩＢＵＹＡ  ＩＮＤＥＸ（２００５年）などで知られる。
【００４９】
使用できる農園芸用農薬成分には、殺菌成分、殺虫成分、殺ダニ成分、殺線虫成分、除草成分、植物成長調整成分等をあげることができる。殺菌成分の具体例としては、例えばアシベンゾラルＳメチル、アゾキシストロビン、アミスルブロム、イソチアニル、イソプロチオラン、イプコナゾール、イプロジオン、イプロバリカルプ、イプロベンホス、イミノクタジンアルベシル酸塩、イミノクタジン酢酸塩、イミベンコナゾール、エクロメゾール、エジフェンホス、エタボキサム、エディフェンホス、オキサジキシル、オキシテトラサイクリン、オキスポコナゾールフマル酸塩、オキソリニック酸、オリサストロビン、カスガマイシン、カプタホール、カルプロパミド、カルベンダゾール、キノキシフェン、キノメチオネート、キャプタン、キントゼン、グアザチン、クレソキシムメチル、クロロネブ、クロロタロニル、ジアゾファミド、ジエトフエンカルブ、ジクロシメット、ジクロメジン、ジチアノン、ジネブ、ジフェノコナゾール、シフルフェナミド、ジフルメトリム、シプロコナゾール、シプロジニル、シメコナゾール、ジメトモルフ、シモキサニル、ジモキシストロビン、ジラム、ストレプトマイシン、ゾキサミド、ダゾメット、チアジアジン、チアジニル、チアベンダゾール、チウラム、チオファネートメチル、チフルザミド、テクロフタラム、テトラコナゾール、テブコナゾール、トリアジメホン、トリシクラゾール、トリフルミゾール、トリフロキシストロビン、トリホリン、トルクロホスメチル、トルニファニド、バリダマイシン、ピコオキシストロビン、ビテルタノール、ヒドロキシイソキサゾール、ヒメキサゾール、ピリフェノックス、ピリブチカルブ、ピリベンカルブ、ピリメタニル、ピロキロン、ビロクロストロビン、ビンクロゾリン、ファモキサドン、フェナジンオキシド、フェナミドン、フェナリモル、フェノキサニル、フェリムゾン、フェンブコナゾール、フェンヘキサミド、フォルペット、フサライド、ブラストサイジンＳ、フラメトピル、フルアジナム、フルオキサストロビン、フルオピコリド、フルオルイミド、フルジオキソニル、フルスルファミド、フルトラニル、プロキナジド、プロクロラズ、プロシミドン、プロパモカルブ塩酸塩、プロピコナゾール、プロピネブ、プロベナゾール、ヘキサコナゾール、ベノミル、ペフラゾエート、ペンシクロン、ベンチアバリカルブイソプロピル、ベンチオピラド、ボスカリド、ホセチル、ポリオキシン、ポリカーバメート、ホルベット、マンジプロパミド、マンゼブ、マンネブ、ミクロブタニル、メタラキシル、メトミノストロビン、メトラフェノン、メパニピリム、メフェノキサム、メプロニル、銀またはその化合物、無機銅化合物、有機銅化合物、硫黄化合物、有機亜鉛、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウム、脂肪酸グリセリド、シイタケ菌糸体抽出物、微生物農薬のエルビニア属細菌、シュードモナス属細菌、バシルス属細菌、タラロマイセス属菌、トリコデルマ属菌、フザリウム属菌、アグロバクテリウム属細菌、ペニシリウム属菌、フォーマ属菌、アスペルギルス属菌より選ばれるものが使用できる。ここでいう銀またはその化合物としては、例えば金属銀、硝酸銀、塩化銀、弗化銀等をあげることができる。また、無機銅化合物としては、例えば塩基性硫酸銅、無水硫酸銅、水酸化第二銅、塩基性塩化銅等を、有機銅化合物としては、例えば有機銅、グルコン酸銅、テレフタル酸銅、ノニルフェノールスルホン酸銅、ＤＢＥＤＣ等をあげることができる。
【００５０】
また、本発明に係る有効成分は、食品、飼餌料、農産物などに、例えば、浸漬、塗布、噴霧、混合等の方法で添加し得る。その結果、本有効成分は、トリコテセンで汚染された及び／又は汚染が予測される及び／又は汚染されやすい大麦や小麦等のムギ類、トウモロコシ、コメ、ピーナッツ等の農産物、あるいは豆粉、魚粉飼料等の飼料によるマィコトキシン汚染被害を防ぐことができる。例えば有効成分である本発明のプレコセン−２を用いる場合、０．００００１〜１重量％、好ましくは０．０００１〜０．５重量％とすることができる。
【００５１】
また、フザリウム・グラミネアラムなどのフザリウム属に属するかびは、ムギ、特にコムギに感染して赤かび病を引き起こすことが知られている。この場合、赤かび病の発病には、それらの菌が産生するトリコテセン系マイコトキシンが深く関わっている。従って、この毒素を中和することにより、病徴を軽減することができ、減農薬指向の植物病害制御に有用である。以上のことから、本発明の有効成分は、赤かび病に感染しやすい農作物などの赤かび病菌抑制剤としても利用することができる。
【実施例】
【００５２】
以下、本発明の実施例について述べるが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【００５３】
（実施例１）
（１）スクリーニング方法
被験物質及び赤カビ病菌であるフザリウム・グラミネアラムＨ３株の胞子懸濁液（胞子濃度：１×１０6ｓｐｏｒｅｓ／ｍＬ）１００μＬをＳＹＥＰ液体培地（シュークロース  ５％、イーストエキストラクト  ０．１％、ポリペプトン  ０．１％）５ｍＬに加え、２６．５℃で７日間、振とう培養する。
【００５４】
被験物質としては、各種エッセンシャルオイルを試験に供し、それぞれ終濃度３００μｇ／ｍｌになるようにメタノールで希釈したエッセンシャルオイルを添加した。
【００５５】
被験エッセンシャルオイルは、次のとおりである：ブラックペッパー、ブッダウッドオーストラリア、カユブテ、カンファー、キャラウェイ、カルダモン、キャロットシード、シダーウッドアトラス、シダーウッド、カモミールジャーマン、カモミールローマン。
【００５６】
培養上清をクロロホルムで抽出し、クロロホルム層を濃縮、乾固し、粗３ＡＤＯＮ画分をＭｅＯＨに溶かし、ＴＬＣ分析した。シリカゲルプレート（Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０Ｆ254  ，Ｍｅｒｃｋ）を用い、クロロホルム−メタノール（Ｖ／Ｖ＝１０／１．５）で展開した結果、カモミールジャーマンに３ＡＤＯＮ生産阻害活性が認められた。
【００５７】
（２）活性物質の精製
カモミールジャーマンエッセンシャルオイルについて、シリカゲル吸着クロマトグラフィーにより、活性物質の精製を行った。ヘキサン溶出区、ヘキサン−酢酸エチル（９５：５、９０：１０、５０：５０）溶出区の内、ヘキサン−酢酸エチル（９５：５）溶出区にすぐれた３ＡＤＯＮ生産阻害活性が認められた。
【００５８】
（３）活性物質の単離、構造決定
シリカゲル吸着クロマトグラフィーで、ヘキサン−酢酸エチル（９５：５）溶出区を等量ずつ１０に分画し、阻害活性の高い分画３と８について、有効成分化合物の単離、同定を行った。その結果、画分３からプレコセン−１が、画分８からプレコセン−２のほか（Ｅ）−スピロエーテルが活性物質として単離された。
【００５９】
（４）３ＡＤＯＮ生産阻害活性の確認
活性物質を０〜３０μＭ添加し、３ＡＤＯＮの量をＬＣ−ＭＳで測定し（液体クロマトグラフィー：Ｗａｔｅｒｓ  ２６９５  ＨＰＬＣ装置、日本ウォーターズ：カラム；Ｃａｐｃｅｌｌ−Ｐａｋ  Ｃ１８  ２．０ｍｍ×１５０ｍｍ、資生堂（東京）；１０ｍＭ酢酸アンモニムを含有する水溶液にアセトニトリルの含有量を１０から８０％とするグラジエント条件で２０分間溶出後、アセトニトリルを８０％含有する１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有の水溶液のアイソクラティック条件で溶出する。；流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ：３ＡＤＯＮの保持時間：９．４ｍｉｎ；ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ  ｍｉｃｒｏｍａｓｓＺＱ、日本ウォーターズ：イオン化法；ＥＳＩ、ｐｏｓｉｔｉｖｅ、スプレー室のパラメーター：ソース温度１２０℃、脱溶媒温度３５０℃、コーン３０Ｖ、脱溶媒ガス６００Ｌ／ｈｒ、コーンガス５０Ｌ／ｈｒ、キャピラリー電圧２８００Ｖ。ＭＳは、抽出したイオンｍ／ｚ３３９（Ｍ＋Ｈ）+を用いてＳＩＭモードでモニターした。）、３ＡＤＯＮの生産阻害活性を確認した。その結果、プレコセン−２はＩＣ50値が１．２μＭとすぐれた３ＡＤＯＮ生産阻害活性を示した（図１）。同様に、プレコセン−１、プレコセン−３もすぐれた３ＡＤＯＮ生産阻害活性を示すことが確認された。そして、３ＡＤＯＮがＤＯＮのプレカーサーであることから、３ＡＤＯＮ生産阻害はＤＯＮ生産阻害と同じ技術的意義を有するものである。
【００６０】
（５）米培地でのＤＯＮ生産阻害活性
胞子懸濁液（１×１０6ｃｆｕ／ｍｌ）１００μｌにプレコセン−２のメタノール溶液５μｌを混合したものを、米培地（２０ｍｌ容バイアルに三分つき米１ｇと蒸留水３００μｌを入れてオートクレーブしたもの）に添加し、よくかき混ぜた。添加したプレコセン−２の重量は、米培地（約１．３ｇ）に対し０〜７．７ｐｐｍとなるようにした。バイアルにアルミホイルでふたをし、２６．５℃で１４日間静置培養した。
【００６１】
培養後菌の成育がプレコセン−２の添加、無添加にかかわらず同じであることを確認し、各バイアルに５０％アセトニトリル水溶液を１０ｍｌ加えた。２時間静置後、バイアルの中身を乳鉢に移し、乳棒で菌体と米を破砕した。得られた破砕けん濁液を遠心分離し、上清を分離した。上清３ｍｌをとり、含まれるアセトニトリルを減圧濃縮で留去した後、蒸留水を加えて１０ｍｌにフィルアップした溶液を、Ｓｅｐ−Ｐａｋ  Ｃ18カートリッジに吸着させた。カートリッジを水洗後、２ｍｌの５０％メタノールでＤＯＮを溶出した。
【００６２】
得られた５０％メタノール溶出粗ＤＯＮ画分を濃縮後、残渣を５０μｌメタノールに溶かした。その溶液１０μｌを１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液−アセトニトリル（９：１）溶液１９０μｌに添加したものをＬＣ−ＭＳ分析用サンプルとした。ＬＣ−ＭＳ分析は３ＡＤＯＮの場合と同じ条件で行った。
【００６３】
結果を表１に示した。プレコセン−２は菌の成育に全く影響を与えなかったが、８ｐｐｍ程度の添加によりＤＯＮ生産量を無添加の場合の十分の一以下に抑制することが示された。
【００６４】
表１  プレコセン−２のＤＯＮ生産阻害活性
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プレコセン−２濃度（ｐｐｍ*1）      ＤＯＮ生産量*2（ｐｐｍ*1）
――――――――――――――――――――――――――――――――――――
０                                  ５４
０．８                              ３１
２．３                                ７．１
７．７                                ４．５
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＊１  米培地重量（約１．３ｇ）に対する濃度
＊２  ｎ＝２の平均値
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】プレコセン−２添加時の３ＡＤＯＮ生産阻害活性を示す。
【図１】
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