(57)【要約】【課題】存在する抗ウイルスペプチドおよび／または抗膜融合性ペプチドの半減期を延長すること、および、これらのペプチドのインビボでのより長い期間の作用を提供することを、本発明の課題とする。【解決手段】改変された抗ウイルスペプチドであって、抗ウイルス活性を示すペプチド、および、安定な共有結合を形成するように血液成分上のチオール基と反応性のマレイミド基を含む、改変されたペプチド、そのようなペプチドを含む結合体および組成物を提供することによって、上記課題は解決された。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルブミンおよび改変された抗ウイルスペプチドを含む抗膜融合性結合体であって、該改変された抗ウイルスペプチドは、抗ウイルス活性および抗膜融合性活性を示すペプチドならびにマレイミド含有基を含み、該マレイミド含有基は、連結基を用いずか、または、リジン−［２−（２−アミノ）エトキシ］エトキシ酢酸−マレイミドプロピオン酸が該ペプチドと連結する場合、該マレイミド含有基と該ペプチドとの間の長さと同等もしくはそれよりも短い長さを有する連結基を介してかのいずれかで該ペプチドと連結され、ここで、該改変された抗ウイルスペプチドは、該マレイミド含有基を介して該アルブミン上のチオール基と共有結合する、抗膜融合性結合体。
【請求項２】
請求項１に記載の抗膜融合性結合体であって、前記アルブミンがヒトアルブミンである、抗膜融合性結合体。
【請求項３】
請求項１に記載の抗膜融合性結合体であって、前記マレイミド含有基が、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）またはγ−マレイミド−ブチラールアミド（ＧＭＢＡ）である、抗膜融合性結合体。
【請求項４】
請求項１に記載の抗膜融合性結合体であって、前記マレイミド含有基が、連結基を介して前記ペプチドと結合する、抗膜融合性結合体。
【請求項５】
請求項４に記載の抗膜融合性結合体であって、前記連結基が、ポリエトキシアミノ酸を含む、抗膜融合性結合体。
【請求項６】
請求項５に記載の抗膜融合性結合体であって、前記連結基が、（２−アミノ）エトキシ酢酸（ＡＥＡ）または［２−（２−アミノ）エトキシ］エトキシ酢酸（ＡＥＥＡ）である、抗膜融合性結合体。
【請求項７】
請求項６に記載の抗膜融合性結合体であって、前記連結基がＡＥＡである、抗膜融合性結合体。
【請求項８】
請求項６に記載の抗膜融合性結合体であって、前記連結基がＡＥＥＡである、抗膜融合性結合体。
【請求項９】
請求項１に記載の抗膜融合性結合体であって、前記マレイミド含有基が、連結基なしで前記ペプチドと結合する、抗膜融合性結合体。
【請求項１０】
請求項１に記載の抗膜融合性結合体であって、前記マレイミド含有基が、前記ペプチドのＮ末端と結合する、抗膜融合性結合体。
【請求項１１】
請求項１に記載の抗膜融合性結合体であって、前記マレイミド含有基が、前記ペプチドのリジンと結合する、抗膜融合性結合体。
【請求項１２】
請求項１に記載の抗膜融合性結合体であって、前記マレイミド含有基が、前記ペプチドのＣ末端と結合する、抗膜融合性結合体。
【請求項１３】
請求項１に記載の抗膜融合性結合体であって、前記ペプチドが、前記アルブミンのシステイン３４と共有結合する、抗膜融合性結合体。
【請求項１４】
請求項１に記載の抗膜融合性結合体であって、前記ペプチドが、ｇｐ４１ペプチドである、抗膜融合性結合体。
【請求項１５】
請求項１に記載の抗膜融合性結合体であって、前記ペプチドが、以下のアミノ酸配列：
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ（配列番号９８）；
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ（配列番号１０７）；
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ（配列番号１２８）；
Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ（配列番号１６０）；または
Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ（配列番号１９３）
または、該アミノ酸配列から、１もしくは数個のアミノ酸置換、欠失もしくは付加によって得られるアミノ酸配列を含む、抗膜融合性結合体。
【請求項１６】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する抗膜融合性活性および抗ウイルス活性を有するｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、アルブミンおよび改変されたｇｐ４１ペプチドを含み、該改変されたｇｐ４１ペプチドは、抗ウイルス活性および抗膜融合性活性を示すｇｐ４１ペプチド、ならびに、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）およびγ−マレイミド−ブチラールアミド（ＧＭＢＡ）からなる群より選択されるマレイミド含有基を含み、ここで、該マレイミド含有基は、連結基を用いずか、または、連結基を介してかのいずれかで該ｇｐ４１ペプチドと連結され、ここで、該連結基は、（２−アミノ）エトキシ酢酸（ＡＥＡ）または［２−（２−アミノ）エトキシ］エトキシ酢酸（ＡＥＥＡ）であり、そして、ここで、該改変されたｇｐ４１ペプチドは、該マレイミド含有基を介して該アルブミン上のチオール基と共有結合する、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項１７】
請求項１６に記載のｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、前記アルブミンが、ヒトアルブミンである、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項１８】
請求項１６に記載のｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、前記マレイミド含有基が、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）である、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項１９】
請求項１６に記載のｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、前記マレイミド含有基が、ＡＥＡを介して前記ｇｐ４１ペプチドと結合する、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項２０】
請求項１６に記載のｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、前記マレイミド含有基が、ＡＥＥＡを介して前記ｇｐ４１ペプチドと結合する、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項２１】
請求項１６に記載のｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、前記マレイミド含有基が、前記連結基なしで前記ペプチドと結合する、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項２２】
請求項１６に記載のｇｐ４１ペプチドーアルブミン結合体であって、前記マレイミド含有基が、前記ｇｐ４１ペプチドのＮ末端と結合する、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項２３】
請求項１６に記載のｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、前記マレイミド含有基が、前記ｇｐ４１ペプチドのリジンと結合する、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項２４】
請求項１６に記載のｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、前記マレイミド含有基が、前記ｇｐ４１ペプチドのＣ末端と結合する、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項２５】
請求項１６に記載のｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、前記ペプチドが、前記アルブミンのシステイン３４と共有結合する、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項２６】
請求項１６に記載のｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、前記ｇｐ４１ペプチドが、以下のアミノ酸配列：
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ（配列番号９８）；
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ（配列番号１０７）；
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ（配列番号１２８）；
Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ（配列番号１６０）；または
Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ（配列番号１９３）
または、該アミノ酸配列から、１もしくは数個のアミノ酸置換、欠失もしくは付加をによって得られるアミノ酸配列を含む、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体。
【請求項２７】
請求項１、１５、１６または２６に記載の結合体および生理学的に受容可能な媒体を含む、組成物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の組成物であって、凍結乾燥されている、組成物。
【請求項２９】
請求項２７に記載の組成物であって、液体である、組成物。
【請求項３０】
請求項２７に記載の組成物であって、静脈内投与または皮下投与のために処方される、組成物。
【請求項３１】
請求項２７に記載の組成物であって、経口投与、経鼻投与、エーロゾル投与または経肺投与のために処方される、組成物。
【請求項３２】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する抗ウイルス活性および抗膜融合性活性を有する改変されたｇｐ４１ペプチドであって、抗膜融合性ｇｐ４１ペプチド、ならびに、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）およびγ−マレイミド−ブチラールアミド（ＧＭＢＡ）からなる群より選択されるマレイミド含有基を含み、ここで、該マレイミド含有基は、連結基を用いずか、または、連結基を介してかのいずれかで該ｇｐ４１ペプチドと連結され、ここで、該連結基は、（２−アミノ）エトキシ酢酸（ＡＥＡ）または［２−（２−アミノ）エトキシ］エトキシ酢酸（ＡＥＥＡ）であり、そして、ここで、該改変されたｇｐ４１ペプチドは、該マレイミド含有基を介してアルブミン上のチオール基と共有結合し得る、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項３３】
請求項３２に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドであって、前記アルブミンがヒトアルブミンである、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項３４】
請求項３２に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドであって、前記マレイミド含有基が、前記連結基を介して前記ｇｐ４１ペプチドと結合する、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項３５】
請求項３２に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドであって、前記マレイミド含有基が、前記連結基なしで前記ｇｐ４１ペプチドと結合する、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項３６】
請求項３２に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドであって、前記マレイミド含有基が、前記ペプチドのＮ末端と結合する、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項３７】
請求項３２に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドであって、前記マレイミド含有基が、前記ペプチドのリジンと結合する、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項３８】
請求項３２に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドであって、前記マレイミド含有基が、前記ｇｐ４１ペプチドのＣ末端と結合する、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項３９】
請求項３２に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドであって、抗膜融合性ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体をインビボで形成し得る、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項４０】
請求項３２に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドであって、抗膜融合性ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体をインビトロで形成し得る、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項４１】
請求項３２に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドであって、前記ｇｐ４１ペプチドが、以下のアミノ酸配列：
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ（配列番号９８）；
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ（配列番号１０７）；
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ（配列番号１２８）；
Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ（配列番号１６０）；または
Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ（配列番号１９３）
または、該アミノ酸配列から、１もしくは数個のアミノ酸置換、欠失もしくは付加によって得られるアミノ酸配列を含む、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項４２】
請求項３２に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドであって、前記ｇｐ４１ペプチドが、前記アルブミンのシステイン３４と共有結合し得る、改変されたｇｐ４１ペプチド。
【請求項４３】
請求項３２または４１に記載の改変されたｇｐ４１ペプチドおよび生理学的に受容可能な媒体を含む、組成物。
【請求項４４】
前記請求項４３に記載の組成物であって、凍結乾燥されている、組成物。
【請求項４５】
請求項４３に記載の組成物であって、液体である、組成物。
【請求項４６】
請求項４３に記載の組成物であって、静脈内投与または皮下投与のために処方される、組成物。
【請求項４７】
請求項４３に記載の組成物であって、経口投与、経鼻投与、エーロゾル投与または経肺投与のために処方される、組成物。
【請求項４８】
抗膜融合性結合体を作製する方法であって、
請求項３２または４１の改変されたｇｐ４１ペプチドをアルブミンと接触させて、抗膜融合性ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体を形成する工程
を包含する、方法。
【請求項４９】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）と細胞との間の膜融合を阻害または減少する方法であって、該ＨＩＶウイルスを、請求項１、１５、１６または２６に記載の結合体と接触させる工程を包含する、方法。
【請求項５０】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）と細胞との間の膜融合を阻害または減少する方法であって、該ＨＩＶウイルスを、請求項３２または４１の改変されたｇｐ４１ペプチドと接触させる工程を包含する、方法。
【請求項５１】
被験体におけるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の予防または処置における使用のための組成物であって、
アルブミンおよび改変された抗ウイルスペプチドを含む抗膜融合性結合体であって、該改変された抗ウイルスペプチドは、抗ウイルス活性および抗膜融合性活性を示すペプチドならびにマレイミド含有基を含み、該マレイミド含有基は、連結基を用いずか、または、リジン−［２−（２−アミノ）エトキシ］エトキシ酢酸−マレイミドプロピオン酸が該ペプチドと連結される場合、該マレイミド含有基と該ペプチドとの間の長さと同等もしくはそれよりも短い長さを有する連結基を介してかのいずれかで該ペプチドと連結され、ここで、該改変された抗ウイルスペプチドは、該マレイミド含有基を介して該アルブミン上のチオール基と共有結合する、抗膜融合性結合体
を含む、組成物。
【請求項５２】
請求項５１に記載の組成物であって、前記抗ウイルスペプチドが、以下のアミノ酸配列：
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ（配列番号９８）；
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ（配列番号１０７）；
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ（配列番号１２８）；
Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ（配列番号１６０）；または
Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ（配列番号１９３）
または、該アミノ酸配列から、１もしくは数個のアミノ酸置換、欠失もしくは付加によって得られるアミノ酸配列を含む、組成物。
【請求項５３】
被験体におけるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の予防または処置における使用のための組成物であって、
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する抗膜融合性活性および抗ウイルス活性を有するｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体であって、アルブミンおよび改変されたｇｐ４１ペプチドを含み、該改変されたｇｐ４１ペプチドは、抗ウイルス活性および抗膜融合性活性を示すｇｐ４１ペプチド、ならびに、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）およびγ−マレイミド−ブチラールアミド（ＧＭＢＡ）からなる群より選択されるマレイミド含有基を含み、ここで、該マレイミド含有基は、連結基を用いずか、または、連結基を介してかのいずれかで該ｇｐ４１ペプチドと連結され、ここで、該連結基は、（２−アミノ）エトキシ酢酸（ＡＥＡ）または［２−（２−アミノ）エトキシ］エトキシ酢酸（ＡＥＥＡ）であり、そして、ここで、該改変されたｇｐ４１ペプチドは、該マレイミド含有基を介して該アルブミン上のチオール基と共有結合する、ｇｐ４１ペプチド−アルブミン結合体
を含む、組成物。
【請求項５４】
請求項５３に記載の組成物であって、前記ｇｐ４１ペプチドは、以下のアミノ酸配列：
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ（配列番号９８）；
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ（配列番号１０７）；
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ（配列番号１２８）；
Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ（配列番号１６０）；または
Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ（配列番号１９３）
または、該アミノ酸配列から、１もしくは数個のアミノ酸置換、欠失もしくは付加によって得られるアミノ酸配列を含む、組成物。
【請求項５５】
被験体におけるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の予防または処置における使用のための組成物であって、
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する抗ウイルス活性および抗膜融合性活性を有する改変されたｇｐ４１ペプチドであって、抗膜融合性ｇｐ４１ペプチド、ならびに、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）およびγ−マレイミド−ブチラールアミド（ＧＭＢＡ）からなる群より選択されるマレイミド含有基を含み、ここで、該マレイミド含有基は、連結基を用いずか、または、連結基を介してかのいずれかで、該ｇｐ４１ペプチドと連結され、ここで、該連結基は、（２−アミノ）エトキシ酢酸（ＡＥＡ）または［２−（２−アミノ）エトキシ］エトキシ酢酸（ＡＥＥＡ）であり、そして、ここで、該改変されたｇｐ４１ペプチドは、該マレイミド含有基を介してアルブミン上のチオール基と共有結合し得る、改変されたｇｐ４１ペプチド
を含む、組成物。
【請求項５６】
請求項５５に記載の組成物であって、前記ｇｐ４１ペプチドが、以下のアミノ酸配列：
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ（配列番号９８）；
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ（配列番号１０７）；
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ（配列番号１２８）；
Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ（配列番号１６０）；または
Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ（配列番号１９３）
または、該アミノ酸配列から、１もしくは数個のアミノ酸置換、欠失もしくは付加によって得られるアミノ酸配列を含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ウイルス活性のインヒビターである改変ペプチドおよび／または抗膜融合性
（ａｎｔｉｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）特性を示すポリペプチドに関する。特に、本発明は、ヒ
ト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイ
ルス（ＨＰＶ）、はしかウイルス（ＭｅＶ）およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）の改
変ペプチドインヒビターに関し、この改変ペプチドインヒビターは、各有ウイルス感染の
処置のための長期の作用を有する。本発明はまた、改変ペプチドおよび内在性キャリアの
結合体、特に改変ペプチドおよび種々の流動性血液成分（特に、流動性の内在性タンパク
質）の結合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
正常な細胞において通常の生物学的プロセスの間の膜融合事象はまた、種々の疾患状態
に関与する（例えば、細胞への外被ウイルスの細胞への侵入が挙げられる）。阻害するか
または、さもなければ膜融合関連事象を中断させるペプチドは公知である。これらとして
は、例えば、非感染細胞へのレトロウイルス伝染の阻害が挙げられる。例えば、ヒト免疫
不全ウイルス１型（「ＨＩＶ−１」）膜貫通（「ＴＭ」）糖タンパク質  ｇｐ４１内の別
々のドメイン由来の合成ペプチドＤＰ−１０７およびＤＰ−１７８は、ＨＩＶ−１感染お
よびＨＩＶ誘発細胞−細胞融合の潜在的なインヒビターである。
【０００３】
非特許文献１は、ヒト免疫不全ウイルス１型（「ＨＩＶ−１」）膜貫通（「ＴＭ」）タ
ンパク質（ｇｐ４１）内の別々のドメイン由来の合成ペプチドＤＰ−１０７およびＤＰ−
１７８（Ｔ−２０）がＨＩＶ−１感染および融合の潜在的なインヒビターであることを開
示する。ＤＰ−１０７およびＤＰ−１７８（Ｔ−２０）のペプチド二次構造に基づくコン
ピューター検索ストラテジー（コンピューター抗ウイルス検索技術（Ｃ．Ａ．Ｓ．Ｔ．）
）を使用して、Ｌａｍｂｅｒｔらは、他の膜融合性（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）ウイルスの糖
タンパク質内のＨＩＶ−１  ｇｐ４１のＤＰ−１０７およびＤＰ−１７８領域に対する保
存された７回反復ドメインアナログを同定した。３つの代表的なパラミクソウイルス（Ｒ
Ｓウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス３型（ＨＰＩＶ−３）およびは
しかウイルス（ＶＭ））由来の抗ウイルスペプチドは、相同ウイルス媒介合胞体形成をブ
ロックし、そして０．０１５〜０．２５０μＭの範囲のＥＣ50値を示した。さらに、これ
らのペプチドは、本来のウイルスについて高度に選択的であった。
【０００４】
米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号および同第６，０２０，
４５９号（本明細書中でその全体が援用される）は、同様に、ＨＩＶ−１単離体ＬＡＩ（
ＨＩＶ−１LAI）由来のｇｐ４１のアミノ酸６３８〜６７３に対応する３６アミノ酸ペプ
チド（ＤＰ１７８）、およびＨＩＶ−１LAI由来のｇｐ４１のアミノ酸５５８〜５９５に
対応する３８アミノ酸ペプチド（ＤＰ１０７）の両方が、潜在的なＨＩＶ−１活性を示す
ことを開示する。
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、次のものがある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｌａｍｂｅｒｔら「Ｐｅｐｔｉｄｅ  ｆｒｏｍ  Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ  Ｆｕｓｉｏｎ（Ｆ）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｒｅ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｖｉｒａｌ  Ｆｕｓｉｏｎ」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９６年３月５日，第９３巻（５），２１８６−２１９１頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
当該分野において開示される、抗ウイルスペプチドまたは抗膜融合性ペプチドの多くは
、潜在的な抗ウイルス活性および／または抗膜融合活性を示すが、これらのペプチドは、
主に迅速な血清クリアランスならびにペプチダーゼ活性およびプロテアーゼ活性に起因し
て、インビボでの短い血漿半減期を被る。次いで、このことは、一般に、ペプチドの有効
な抗ウイルス活性を減少する。従って、存在する抗ウイルスペプチドおよび／または抗膜
融合性ペプチドの半減期を延長する方法、ならびにこれらのペプチドのインビボでのより
長い期間の作用を提供するための方法の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
本発明は、これらの必要性および他の必要性を満たし、そして抗ウイルス活性および／
または抗膜融合活性を有する改変ペプチドに関する。これらの改変ペプチドは、インビボ
で増加した安定性を提供し、そしてペプチダーゼ分解またはプロテアーゼ分解に対する感
受性を減少する。従って、これらの改変ペプチドは、例えば、より頻繁な、または連続性
でさえあるペプチドの投与に対する必要性を最小化する。例えば、本発明の様々な実施形
態の生成物は、多くのウイルス（これらとしては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒ
トＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、はしかウイル
ス（ＭｅＶ）およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられる）の感染に対する予防
剤および／またはそれらの処置として使用され得る。ウイルストランスフェクション（例
えば、肝炎ウイルス、エプスタイン−バーウイルスおよび他の関連するウイルス）に関与
する他のペプチドの改変もまた、本発明の範囲内である。
【０００８】
本発明は、抗ウイルス活性および／または抗膜融合活性を示すペプチドの化学反応改変
に関し、その結果、改変ペプチドは血液成分上の利用可能な官能基と反応して安定な共有
結合を形成し得る。本発明の１つの実施形態では、改変ペプチドは、血液成分上のアミノ
基、水酸基またはチオール基と反応し安定な共有結合を形成する反応基を含む。本発明の
他の実施形態では、この反応基はマレイミドであり得、これは、血液タンパク質（これに
は、流動性血液タンパク質（例えば、アルブミン）が挙げられる）上のチオール基と反応
性である。
【０００９】
特に、本発明は、ＤＰ１０７ペプチドおよびＤＰ１７８ペプチドならびにこれらのアナ
ログの、このような化学反応改変に関し、これらとしては、ＤＰ１０７ペプチドおよびＤ
Ｐ１７８ペプチドが誘導されるＨＩＶのｇｐ４１領域に対応する他の（非−ＨＩＶ）ウイ
ルスならびに抗ウイルス活性または抗膜融合活性を示す他の（非−ＨＩＶ）ウイルス由来
のアミノ酸配列からなるペプチドが挙げられる。より具体的には、これらのペプチドは、
とりわけ、ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、
はしかウイルス（ＭｅＶ）およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）に対する抗ウイルス活
性を示し得る。本発明はまた、配列番号１〜配列番号８６のペプチドの、このような化学
反応改変に関する。
【００１０】
本発明はまた、改変された抗ウイルス活性を示すペプチドを含むウイルス感染の予防お
よび／または処置における使用のための組成物に関し、このペプチドは、記載されるよう
な反応基を有する。より具体的には、本発明は、ＡＩＤＳ、ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）
、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、はしかウイルス（ＭｅＶ）およびサル免
疫不全ウイルス（ＳＩＶ）の予防および／または処置における使用のためのこのような組
成物に関する。
本発明は、以下を提供する：
（項目１）  改変された抗ウイルスペプチドであって、
抗ウイルス活性を示すペプチド、および
安定な共有結合を形成するように血液成分上のチオール基と反応性のマレイミド基を含
む、改変されたペプチド。
（項目２）  前記血液成分が血清アルブミンである、項目１に記載の改変されたペプチド
。
（項目３）  前記ペプチドがＤＰ１７８もしくはＤＰ１０７またはそれらのアナログであ
る、項目１に記載の改変されたペプチド。
（項目４）  前記ペプチドが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対して抗ウイルス活性
を示す、項目１に記載の改変されたペプチド。
（項目５）  前記ペプチドが、配列番号１〜配列番号９からなる群から選択される、項目
４に記載の改変されたペプチド。
（項目６）  前記ペプチドがＤＰ１７８またはＤＰ１０７である、項目４に記載の改変さ
れたペプチド。
（項目７）  前記ペプチドが、ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）に対する抗ウイルス活性を示
す、項目１に記載の改変されたペプチド。
（項目８）  前記ペプチドが、配列番号１０〜配列番号３０からなる群から選択される、
項目７に記載の改変されたペプチド。
（項目９）  前記ペプチドが、配列番号１４〜配列番号１７および配列番号２９からなる
群から選択される、項目７に記載の改変されたペプチド。
（項目１０）  前記ペプチドが、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）に対する
抗ウイルス活性を示す、項目１に記載の改変されたペプチド。
（項目１１）  前記ペプチドが、配列番号３１〜配列番号６２からなる群から選択される
、項目１０に記載の改変されたペプチド。
（項目１２）  前記ペプチドが、配列番号３５、配列番号３８〜配列番号４２、配列番号
５２および配列番号５８からなる群から選択される、項目１０に記載の改変されたペプチ
ド。
（項目１３）  前記ペプチドが、はしかウイルス（ＭｅＶ）に対する抗ウイルス活性を示
す、項目１に記載の改変されたペプチド。
（項目１４）  前記ペプチドが、配列番号７４〜配列番号８６からなる群から選択される
、項目１３に記載の改変されたペプチド。
（項目１５）  前記ペプチドが、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１および配列
番号８４からなる群から選択される、項目１３に記載の改変されたペプチド。
（項目１６）  前記ペプチドが、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）に対する抗ウイルス活
性を示す、項目１に記載の改変されたペプチド。
（項目１７）  前記ペプチドが配列番号６３〜配列番号７３からなる群から選択される、
項目１６に記載の改変されたペプチド。
（項目１８）  後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の予防および／または処置における使
用のための組成物であって、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する抗ウイルス活性を
示し、安定な共有結合を形成するように血液成分上のチオール基と反応性のマレイミド基
で改変されたペプチドを含む、組成物。
（項目１９）  前記血液成分が血清アルブミンである、項目１８に記載の組成物。
（項目２０）  前記ペプチドが、ＤＰ１７８もしくはＤＰ１０７またはそれらのアナログ
である、項目１９に記載の組成物。
（項目２１）  ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）感染の予防および／または処置において使用
するための組成物であって、ＲＳＶに対する抗ウイルス活性を示し、安定な共有結合を形
成するように血液成分上のチオール基と反応性であるマレイミド基で改変されたペプチド
を含む、組成物。
（項目２２）  前記血液成分が血清アルブミンである、項目２１に記載の組成物。
（項目２３）  前記ペプチドが、配列番号１４〜配列番号１７および配列番号２９からな
る群から選択される、項目２２に記載の組成物。
（項目２４）  ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）感染の予防および／または
処置において使用するための組成物であって、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩ
Ｖ）に対する抗ウイルス活性を示し、安定な共有結合を形成するように血液成分上のチオ
ール基と反応性であるマレイミド基で改変されたペプチドを含む、組成物。
（項目２５）  前記血液成分が血清アルブミンである、項目２４に記載の組成物。
（項目２６）  前記ペプチドが配列番号３５、配列番号３８〜配列番号４２、配列番号５
２および配列番号５８からなる群から選択される、項目２５に記載の組成物。
（項目２７）  はしかウイルス（ＭｅＶ）感染の予防および／または処置において使用す
るための組成物であって、はしかウイルス（ＭｅＶ）に対する抗ウイルス活性を示し、安
定な共有結合を形成するように血液成分上のチオール基と反応性であるマレイミド基で改
変されたペプチドを含む、組成物。
（項目２８）  前記血液成分が血清アルブミンである、項目２７に記載の組成物。
（項目２９）  前記ペプチドが、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１および配列
番号８４からなる群から選択される、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）  前記マレイミド基が、連結基を介して前記ペプチドに結合される、項目１
に記載の改変されたペプチド。
（項目３１）  前記マレイミド基が、連結基を介して前記ペプチドに結合される、項目１
８に記載の組成物。
（項目３２）  前記マレイミド基が、連結基を介して前記ペプチドに結合される、項目２
１に記載の組成物。
（項目３３）  前記マレイミド基が、連結基を介して前記ペプチドに結合される、項目２
４に記載の組成物。
（項目３４）  前記マレイミド基が、連結基を介して前記ペプチドに結合される、項目２
７に記載の組成物。
【００１１】
（表の簡単な説明）
本発明は、表を参照することにより、より良く理解される。ここで、
表１は、アミノ酸の１文字略語および３文字略語ならびに共通の保護基と併せて、一般
に存在するアミノ酸を列挙する。
【００１２】
表２は、ＤＰ１７８のカルボキシ短縮を示す。
【００１３】
表３は、ＤＰ１７８のアミノ短縮を示す。
【００１４】
表４は、ＤＰ１０７のカルボキシ短縮を示す。
【００１５】
表５は、ＤＰ１０７のアミノ短縮を示す。
【００１６】
表６は、ＨＩＶ−２NIHZＤＰ１７８アナログのカルボキシ短縮を示す。
【００１７】
表７は、ＨＩＶ−２NIHZＤＰ１７８アナログのアミノ短縮を示す。
【００１８】
表８は、ＲＳＶ  Ｆ２領域ＤＰ１０７アナログのカルボキシ短縮を示す。
【００１９】
表９は、ＲＳＶ  Ｆ２領域ＤＰ１０７アナログのアミノ短縮を示す。
【００２０】
表１０は、ＲＳＶ  Ｆ１領域ＤＰ１７８アナログのカルボキシ短縮を示す。
【００２１】
表１１は、ＲＳＶ  Ｆ１領域ＤＰ１７８アナログのアミノ短縮を示す。
【００２２】
表１２は、ＨＰＶ３  Ｆ１領域ＤＰ１７８アナログのカルボキシ短縮を示す。
【００２３】
表１３は、ＨＰＶ３  Ｆ１領域ＤＰ１７８アナログのアミノ短縮を示す。
【００２４】
表１４は、ＨＰＶ３  Ｆ１領域ＤＰ１０７アナログのカルボキシ短縮を示す。
【００２５】
表１５は、ＨＰＶ３  Ｆ１領域ＤＰ１０７アナログのアミノ短縮を示す。
【００２６】
表１６は、代表的な抗ＲＳＶペプチドを示す。
【００２７】
表１７は、代表的な抗ＨＰＶ３ペプチドを示す。
【００２８】
表１８は、代表的な抗ＳＩＶペプチドを示す。
【００２９】
表１９は、代表的な抗ＭｅＶペプチドを示す。
【００３０】
（配列表の簡単な説明）
本発明は、配列表を参照することにより、より良く理解される。ここで、
配列番号１は、ＤＰ１７８のペプチド配列を示す。
【００３１】
配列番号２は、ＤＰ１０７のペプチド配列を示す。
【００３２】
配列番号３〜９は、特定のＤＰ１８７アナログのペプチド配列を示す。
【００３３】
配列番号１０〜３０は、ＤＰ１７８およびＤＰ１０７に対応するＲＳＶ  Ｆ１領域およ
びＲＳＶ  Ｆ２領域のペプチド配列、ならびに代表的な（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｔｉｖｅ）
抗ＲＳＶペプチドを示す。
【００３４】
配列番号３１〜６２は、ＤＰ１７８およびＤＰ１０７に対応するＨＰＩＶ３  Ｆ１領域
ペプチド配列、および代表的な抗ＨＰＩＶ３ペプチドを示す。
【００３５】
配列番号６３〜７３は、ＤＰ１７８に対応するＳＩＶのペプチド配列および代表的な抗
ＳＩＶペプチドを示す。そして、
配列番号７４〜７８は、ＤＰ１７８に対応するＭｅＶのペプチド配列および代表的な抗
ＭｅＶペプチドを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
（発明の詳細な説明）
本発明の完全な理解を確実にするために、以下の定義が提供される：
（抗ウイルスペプチド）：本明細書中で使用される場合、抗ウイルスペプチドは、例え
ば、細胞−細胞融合または遊離ウイルス感染を阻害することにより、細胞のウイルス感染
を阻害するペプチドをいう。感染の経路は、膜融合（外被ウイルスの場合に生じる場合）
またはウイルス構造および細胞構造に関与するいくつかの他の融合事象を含み得る。特定
のウイルスによるウイルス感染を阻害するペプチドは、特定のウイルスに関して言及され
得る（例えば、抗ＨＩＶペプチド、抗ＲＳＶペプチドなど）。
【００３７】
（抗膜融合性ペプチド）：抗膜融合性ペプチドは、ペプチドの非存在下で生じる膜融合
のレベルと比較して、２以上の要素間（例えば、ウイルス−細胞または細胞−細胞）の膜
融合事象のレベルを阻害するか減少する能力を示しているペプチドである。
【００３８】
（ＨＩＶおよび抗ＨＩＶペプチド）：ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）（これは、後天
性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を担う）は、レトロウイルスのレンチウイルファミリーの
メンバーである。ＨＩＶ、ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２の２つの流行のタイプが存在し、
各々の種々の株は、同定されている。ＨＩＶは、ＣＤ−４＋細胞を標的化し、そしてウイ
ルスの進入は、ＨＩＶタンパク質ｇｐ４１のＣＤ−４＋細胞表面レセプターとの結合に依
存する。抗ＨＩＶペプチドは、ＨＩＶに対する抗ウイルス活性（これらには、遊離ウイル
スによるＣＤ−４＋細胞感染を阻害すること、ならびに／または感染ＣＤ−４＋細胞と非
感染ＣＤ−４＋細胞との間のＨＩＶ誘導合胞体形成を阻害することが挙げられる）を示す
ペプチドをいう。
【００３９】
（ＳＩＶおよび抗ＳＩＶペプチド）：サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）は、感受性のサ
ルにおいて後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）様疾患を引き起こすレンチウイルスである
。抗ＳＩＶペプチドは、ＳＩＶに対する抗ウイルス活性（これらには、ＳＩＶウイルスに
よる細胞の感染を阻害すること、および感染細胞と非環腺細胞との間の合胞体形成を阻害
することが挙げられる）を示すペプチドである。
【００４０】
（ＲＳＶおよび抗ＲＳＶペプチド）：ＲＳウイルス（ＲＳＶ）は、呼吸器病原体であり
、特に、このウイルスが細気管支炎（小通気道の炎症）および肺炎を引き起こし得る場合
、乳児および小児において危険である。ＲＳＶはネガティブセンス（一本鎖ＲＮＡウイル
ス）でありかつウイルスのＰａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅファミリーのメンバーである
。ＲＳＶの感染の経路は、典型的には気道（すなわち、鼻、喉頭、気管および気管支なら
びに細気管支）により粘膜を介する。抗ＲＳＶペプチドは、ＲＳＶに対する抗ウイルス活
性（これらには、フリーＲＳＶウイルスによる粘膜細胞感染および感染細胞と非環腺細胞
との間の合胞体形成を阻害することが挙げられる）を示すペプチドである。
【００４１】
（ＨＰＶおよび抗ＨＰＶペプチド）：ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶまた
はＨＰＶ）（ＲＳＶと同様）は、気管疾患の別の主要原因であり、ＲＳＶと同様にネガテ
ィブセンス（ウイルスのＰａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅファミリーのメンバーである一
本鎖ＲＮＡウイルス）である。４種類の認識されたＨＰＩＶの血清型（ＨＰＩＶ−１、Ｈ
ＰＩＶ２、ＨＰＩＶ３およびＨＰＩＶ４）が存在する。ＨＰＩＶ−１は、子どもにおける
クループの主要原因であり、そしてＨＰＩＶ−１およびＨＰＩＶ−２の両方は、上気道疾
患および下気道疾患を引き起こす。ＨＩＰＶ−３は、より頻繁に細気管支炎および肺炎に
関与する。抗ＨＰＶペプチドは、ＨＰＶに対する抗ウイルス活性（これらには、フリーＨ
ＰＶウイルスによる感染および感染細胞と非環腺細胞との間の合胞体形成を阻害すること
が挙げられる）を示すペプチドである。
【００４２】
（Ｍｅｖおよび抗Ｍｅｖペプチド）：はしかウイルス（ＶＭまたはＭｅＶ）は、外被ネ
ガティブ（ウイルスのＰａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅファミリーに属する一本鎖ＲＮＡ
ウイルス）である。ＲＳＶおよびＨＰＶと同様に、ＭｅＶは、呼吸器疾患を引き起こし、
そしてまた、さらなる日和見感染を担う免疫抑制を生じる。いくつかの場合、ＭｅＶは、
脳の感染を確立し、重篤な神経性合併症の原因となる。抗ＭｅＶペプチドは、Ｍｅｖに対
する抗ウイルス活性（これらには、フリーＭｅｖウイルスによる感染および感染細胞と非
環腺細胞との間の合胞体形成を阻害することが挙げられる）を示すペプチドである。
【００４３】
（ＤＰ−１７８およびＤＰ１７８アナログ）：他に明確にまたは文脈により指示のない
限り、ＤＰ−１７８は、以下のアミノ酸配列：
ＹＴＳＬＩＨＳＬＩＥＥＳＱＮＱＱＥＫＮＥＱＥＬＬＥＬＤＫＷＡＳＬＷＮＷＦ（配列番
号１）
を有するＨＩＶ−１単離体ＬＡＩ（ＨＩＶLAI）のｇｐ４１糖タンパク質のアミノ酸残基
６３８―６７３に対応する３６アミノ酸ＤＰ−１７８ペプチド、ならびに、それらの短縮
、欠失および／または挿入を意味する。ＤＰ１７８の短縮は、３〜３６アミノ酸の間のペ
プチドを含み得る。欠失は、ＤＰ１７８ペプチドペプチドからの１以上のアミノ酸残基の
除去からなり、そしてこれは、ペプチド配列の単一の隣接部分または複数の部分の除去を
含み得る。挿入は、１つのアミノ酸残基または残基の伸長を含み得、そしてＤＰ１７８ペ
プチドのカルボキシ末端もしくはアミノ末端、またはペプチド内部の位置において作製さ
れ得る。
【００４４】
ＤＰ１７８ペプチドアナログは、そのアミノ酸配列がＤＰ１７８が由来するｇｐ４１領
域に対応するＨＩＶ−１LAI以外のウイルスのペプチド領域、ならびにそれらの短縮、欠
失または挿入のアミノ酸配列からなるペプチドである。このような他のウイルスとしては
、他のＨＩＶ単離体（例えば、ＨＩＶ−２NIHZ、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパライン
フルエンザウイルス（ＨＰＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）およびはしかウイルス
（ＭｅＶ））が挙げられるがこれらに限定されない。ＤＰ１７８アナログはまた、ＡＬＬ
ＭＯＴＩ５、１０７×１７８×４およびＰＬＺＩＰ検索モチーフ（米国特許第６，０１３
，２６３号、同第６，０１７，５３６号および同第６，０２０，４５９号に記載されそし
て本明細書中で援用される）により同定されるかまたは認識されるこれらのペプチド配列
をいう。これらのモチーフは、ＤＰ１７８に対する構造類似性および／またはアミノ酸モ
チーフ類似性を有する。ＤＰ１７８アナログはさらに、「ＤＰ１７８様」（この用語は、
米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号および同第６，０２０，４
５９号において定義されるので）として記載されるペプチドをいう。
【００４５】
（ＤＰ１０７およびＤＰ１０７アナログ：）他に明白に示されないか、または文脈によ
って示されない限り、ＤＰ１０７は、ＨＩＶ−１単離体ＬＡＩ（ＨＩＶLAI）のｇｐ４１
タンパク質のアミノ酸残基５５８〜５９５に対応する３８アミノ酸ＤＰ１０７ペプチド、
ならびにその短縮、欠失および／または挿入を意味し、そして以下の配列を有する：
【００４６】
【化１】
2009167208.tif 000002
。ＤＰ１０７ペプチドの短縮は、３〜３８アミノ酸の間のペプチドを含み得る。欠失は、
ＤＰ１０７ペプチドからの１以上のアミノ酸残基の除去からなり得、そしてペプチド配列
の１つの近接する部分または複数の部分の除去を含み得る。挿入はまた、１つのアミノ酸
残基または残基のストレッチを含み得、そしてＤＰ１０７ペプチドのカルボキシ末端また
はアミノ末端で、あるいはペプチドに対する内部の位置で作製され得る。
【００４７】
ＤＰ１０７ペプチドアナログは、これらのアミノ酸配列がＨＩＶ−１LA1、ならびにそ
れらの短縮、欠失および／または挿入、以外のウイルスのペプチド領域のアミノ酸配列に
含まれるペプチドでり、このＨＩＶ−１LA1は、ＤＰ１０７が由来したｇｐ４１領域に対
応する。このような他のウイルスとしては、他のＨＩＶ単離体（例えば、ＨＩＶ−２NIHZ
、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、サル免疫不全
ウイルス（ＳＩＶ）、およびはしかウイルス（ＭｅＶ））が挙げられるが、これらに限定
されない。ＤＰ１０７アナログはまた、ＡＬＬＭＯＴＩ５、１０７ｘ１７８ｘ４およびＰ
ＬＺＩＰ検索モチーフによって同定されたか、または認識された、これらのペプチド配列
いい、これらのモチーフは、米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６
号および６，０２０，４５９号に記載され、そして本明細書中に援用され、ＤＰ１０７に
類似の構造モチーフおよび／またはアミノ酸モチーフを有する。ＤＰ１０７アナログは、
さらに、「ＤＰ１０７様」と記載されるペプチドをいい、この用語は、米国特許第６，０
１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号および６，０２０，４５９号に定義される。
【００４８】
（反応性基：）反応性基とは、共有結合を形成し得る実体である。このような反応性基
は、目的の治療用ペプチドに連結または結合される。反応性基は、一般に、水性環境内で
安定であり、そして通常、カルボキシ基、ホスホリル基、または従来のアシル基であり、
エステルまたは混合無水物のいずれか、あるいはイミデートとして存在し、これによって
、移動性の血液成分の標的部位の、アミノ基、ヒドロキシまたはチオールのような官能基
と共有結合を形成し得る。大部分において、これらのエステルは、フェノール性化合物を
含むか、またはチオールエステル、アルキルエステル、リン酸エステルなどである。反応
性基としては、スクシンイミジル（ｓｕｃｃｉｍｉｄｙｌ）基およびマレイミド基が挙げ
られる。
【００４９】
（官能基：）官能基とは、改変された治療用ペプチドの反応性基が反応して共有結合を
形成する、血液成分上の基であり、可動性タンパク質および固定タンパク質を含む。官能
基は、通常、エステル反応性基との結合のためのヒドロキシル基、マレイミド、イミデー
トおよびチオールエステル基との結合のためのチオール基；活性化カルボキシル基、ホス
ホリル基または反応性基上の他の任意のアシル基との結合のためのアミノ基を含む。
【００５０】
（血液成分：）血液成分は、固定されていても可動であってもいずれでもよい。固定さ
れた血液成分は、非可動性の血液成分であり、そして組織、膜レセプター、介在タンパク
質、フィブリンタンパク質、コラーゲン、血小板、内皮細胞、上皮細胞およびこれらが結
合する膜および膜レセプター、身体の細胞（ｓｏｍａｔｉｃ  ｂｏｄｙ  ｃｅｌｌ）、骨
格細胞および平滑筋細胞、神経成分、骨細胞および破骨細胞ならびに全ての身体組織（特
に、循環系およびリンパ系に関連するもの）を含む。可動性血液成分とは、いかなる延長
した期間にわたっても（一般的には５分を超えず、より通常には１分）固定された位置を
有さない、血液成分である。これらの血液成分は、膜結合しておらず、そして延長した期
間にわたって血液中に存在し、そして少なくとも０．１μｇ／ｍｌの最小濃度で存在する
。可動性血液成分としては、血清アルブミン、トランスフェリン、フェリチン、ならびに
ＩｇＭおよびＩｇＧのような免疫グロブリンが挙げられる。可動性血液成分の半減期は、
少なくとも約１２時間である。
【００５１】
（保護基：）保護基とは、ペプチド誘導体をそれ自体と反応しないよう保護するために
利用される、化学部分である。種々の保護基が、米国特許第５，４９３，００７号（これ
は、本明細書中に参考として援用される）に開示される。このような保護基としては、ア
セチル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔ−ブチルオキシカルボニ
ル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）などが挙げられる。特定の保護され
たアミノ酸を、表１に示す。
【００５２】
【表１】
2009167208.tif 000003
（連結基：）連結（スペーサー）基とは、反応性基を治療用ペプチドに連結または接続
する、化学部分である。連結基は、１つ以上のアルキル基、アルコキシ基、アルケニル基
、アルキル基で置換されたアルキニル基またはアミノ基、シクロアルキル基、多環式基、
アリール基、ポリアリール基、置換アリール基、複素環式基、および置換複素環式基を含
み得る。連結基はまた、ＡＥＡ（（２−アミノ）エトキシ酢酸）または好ましい連結基で
あるＡＥＥＡ（［２−（２−アミノ）エトキシ）］エトキシ酢酸）のような、ポリエトキ
シアミノ酸を含み得る。好ましい連結基は、アミノエトキシエトキシ酢酸（ＡＥＥＡ）で
ある。
【００５３】
（感受性官能基）感受性官能基とは、治療用ペプチドに潜在的な反応部位を提供する、
原子の群である。存在する場合には、感受性官能基は、リンカー−反応性基改変のための
付着点として、選択され得る。感受性官能基としては、カルボキシル基、アミノ基、チオ
ール基、およびヒドロキシル基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５４】
（改変されたペプチド）  改変されたペプチドは、抗ウイルスおよび／または抗膜融合
性ペプチドであり、反応性基の付着によって改変されている。反応性基は、連結基を介し
てか、または必要に応じて連結基を使用せずにかのいずれかで、治療用ペプチドに付着さ
れ得る。１つ以上のさらなるアミノ酸が治療用ペプチドに付加されて、反応性基の付着を
容易にし得ることもまた、考慮される。改変されたペプチドは、血液成分との結合体化が
インビボで起こるように、インビボで投与され得るか、またはこれらは、最初に血液成分
とインビトロで結合体化され、そして得られるペプチダーゼに対して安定化されたペプチ
ド（以下に定義されるような）が、インビボで投与され得る。
【００５５】
（結合体化ペプチド）  結合体化ペプチドは、改変されたペプチドであり、改変された
ペプチドの反応性基と機能性の血液成分の官能基との間に形成された（連結基を伴うか、
または伴わないで）共有結合を介して血液成分に結合されている。本出願にわたって使用
される用語「結合体化ペプチド」は、特定の結合体化ペプチド（例えば、「結合体化ＤＰ
１７８」または「結合体化ＤＰ１０７」）をいうように、より特化され得る。
【００５６】
これらの定義を考慮すると、本発明は、存在する抗ウイルスおよび抗膜融合性ペプチド
の特性を利用する。ペプチドによって阻害され得るウイルスとしては、例えば、表Ｖ〜Ｖ
ＩＩおよびＩＸ〜ＸＩＶ中で、米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３
６号および同第６，０２０，４５９号に列挙されるウイルスのすべての種が挙げられるが
、これらに限定されない。これらのウイルスとしては、例えば、ヒトレトロウイルス（Ｈ
ＩＶ−１、ＨＩＶ−２、およびヒトＴリンパ球（ｌｙｍｐｏｃｙｔｅ）ウイルス（ＨＴＬ
Ｖ−ＩおよびＨＴＬＶ−ＩＩ）を含む）、および非ヒトレトロウイルス（ウシ白血症ウイ
ルス、ネコ肉腫ウイルス、ネコ白血症ウイルス、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、サル
肉腫ウイルス、サル白血病、およびヒツジ進行性肺炎ウイルスを含む）が挙げられる。非
レトロウイルスウイルスはまた、本発明のペプチドによって阻害され得、これらのペプチ
ドとしては、以下を含む：ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）、イヌジステンパーウイルス、ニ
ューカッスル病ウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、インフルエン
ザウイルス、はしかウイルス（ＭｅＶ）、エプスタイン−バーウイルス、Ｂ型肝炎ウイル
ス、およびサルマソン−ファイザーウイルス。非エンベロープ化ウイルスはまた、本発明
のペプチドによって阻害され得、そしてそれらのウイルスとしては、ピコルナウイルス（
例えば、ポリオウイルス）、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、エコーウイル、コク
サッキーウイルス、パポバウイルス（例えば、パピローマウイルス）、パルボウイルス、
アデノウイルス、およびレトロウイルスを含むが、これらに限定されない。
【００５７】
例として、本出願の背景の節で議論されたように、ＨＩＶ融合タンパク質の作用のメカ
ニズムが記載され、そしてペプチドの抗ウイルスおよび抗膜融合性特性は十分に確立され
た。カルボキシ末端外部ドメイン配列に対応する合成ペプチド（例えば、ＬＡＩ株の、Ｈ
ＩＶ−１クラスＢのアミノ酸残基６４３〜６７８、または類似の種からの残基６３８〜６
７３、ならびに残基５５８〜５９５）は、低濃度でウイルス媒介性の細胞−細胞融合を完
全に阻害することが示された。融合ペプチドは、ネイティブなウイルスｇｐ４１のロイシ
ンジッパー領域と競合し、従って、ウイルスの細胞内への融合／感染の干渉を生じる。
【００５８】
本発明の焦点は、ＤＡＣ（Ｄｒｕｇ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｃｏｍｐｌｅｘ）技術を用い
て、選択された抗ウイルスおよび／または抗膜融合性ペプチドを改変し、ペプチドキャリ
アへのペプチドの選択的結合を通じて、このペプチドに改善されたバイオアベイラビリテ
ィ、延長した半減期およびより優れた分布を与えるが、ペプチドの抗ウイルス特性の改変
を伴わないことである。本発明の選択されたキャリア（しかし、これに限定されない）は
、マレイミド部分で改変された抗ウイルスおよび／または抗膜融合性ペプチドによるその
遊離のチオールを通じてアルブミン結合体化される。
【００５９】
いくつかのペプチド配列が、ＨＩＶ−１融合／感染の予防に高度に強力であるとして、
文献に記載された。例として、ペプチドＤＰ１７８は、融合に関連するｇｐ４１のコンフ
ォメーションに結合する。従って、本発明の１つの実施形態において、ＤＰ１７８および
ＤＰ１７８様ペプチドは改変される。
【００６０】
同様に、本発明の他の実施形態は、ＨＩＶに対する使用のためのＤＰ１０７およびＤＰ
１０７様ペプチド、ならびにＲＳＶ、ＨＰＶ、ＭｅＶおよびＳＩＶウイルスにおいて見出
されるＤＰ１０７およびＤＰ１７８に類似の（ａｎａｌａｇｏｕｓ）ペプチドの改変を含
む。
【００６１】
（１．ＤＰ１７８およびＤＰ１０７）
（Ａ．ＤＰ１７８ペプチド）
ＤＰ１７８ペプチドは、ＨＩＶ−１LAI単離体からの膜貫通タンパク質ｇｐ４１のアミ
ノ酸残記載６３８〜６７３に対応し、そして３６アミノ酸配列（アミノ末端からカルボキ
シ末端のリーディング）を有する。
【００６２】
【化２】
2009167208.tif 000004
全長ＤＰ１７８の３６マーに加えて、本発明のペプチドは、３アミノ酸残基と３６アミ
ノ酸残基との間のペプチド（すなわち、トリペプチドから３６マーのポリペプチドのサイ
ズに及ぶペプチド）を含むＤＰ１７８ペプチドの短縮を含む。これらの短縮されたペプチ
ドは、表２および３に示される。
【００６３】
さらに、ＤＰ１７８ペプチドのアミノ酸置換はまた、本発明の範囲内である。ＨＩＶ−
１およびＨＩＶ−２エンベロープ化タンパク質は、構造的に異なるが、ＨＩＶ−１および
ＨＩＶ−２のＤＰ１７８に対応する領域内に、著しいアミノ酸保存が存在する。アミノ酸
の保存は、周期性の性質の保存であり、構造および／または機能のいくらかの保存を示唆
する。従って、アミノ酸置換の１つの可能なクラスは、本発明のＤＰ１７８ペプチドの構
造を安定化すると推定さられるこれらのアミノ酸の変化を含む。本明細書中で開示される
ＤＰ１７８およびＤＰ１７８アナログ配列を利用して、当業者は容易にＤＰ１７８コンセ
ンサス配列を
作製し、そして好ましいアミノ酸置換を表す保存されたアミノ酸残基を、これらから確か
め得る。
【００６４】
アミノ酸置換は、保存された性質の置換または保存されていない性質の置換であり得る
。保存されたアミノ酸置換は、類似の電荷、サイズ、および／または疎水性特徴のアミノ
酸での、ＤＰ１７８ペプチド配列の１以上のアミノ酸の置換（例えば、グルタミン酸（Ｅ
）のアスパラギン酸（Ｄ）へのアミノ酸置換）からなる。保存されていない置換は、異な
る電荷、サイズ、および／または疎水性特徴を保有するアミノ酸での、ＤＰ１７８ペプチ
ド配列の１以上のアミノ酸の置換（例えば、グルタミン酸（Ｅ）のバリン（Ｖ）への置換
）からなる。
【００６５】
ＤＰ１７８のアミノ酸の挿入は、１つのアミノ酸残基またはひとつづきの残基からなる
。挿入は、ＤＰ１７８またはＤＰ１７８短縮ポリペプチドのカルボキシ末端またはアミノ
末端、ならびにペプチドに対する内部の位置で作製され得る。
【００６６】
このような挿入は、一般的に２〜１５アミノ酸長にわたる。目的のペプチドのカルボキ
シ末端またはアミノ末端のいずれかで作製された挿入は、好ましい約２〜約５０アミノ酸
を有する、より広いサイズの範囲の挿入であり得ることが意図される。このような挿入が
、上記の１０７ｘ１７８ｘ４、ＡＬＬＭＯＴＩ５またはＰＬＺＩＰ検索モチーフによって
なお認識され得るペプチドを生じる限り、１以上のこのような挿入は、ＤＰ１７８または
ＤＰ１７８短縮に導入され得る。
【００６７】
好ましいアミノ末端挿入物またはカルボキシ末端挿入物は、約２〜約５０のアミノ酸残
基の長さにわたるペプチドであり、実際のＤＰ１７８  ｇｐ４１アミノ酸配列に対して、
それぞれアミノまたはカルボキシのいずれかでｇｐ４１タンパク質領域に対応する。従っ
て、好ましいアミノ末端またはカルボキシ末端のアミノ酸挿入物は、ｇｐ４１タンパク質
のＤＰ１７８領域に対して、すぐ近くのアミノまたはカルボキシで見出されるｇｐ４１ア
ミノ酸配列を含む。
【００６８】
ＤＰ１７８またはＤＰ１７８短縮の欠失はまた、本発明の範囲内である。このような欠
失は、ＤＰ１７８またはＤＰ１７８様ペプチド配列からの１以上のアミノ酸の除去からな
り、生じるペプチド配列の下限の長さは、４〜６のアミノ酸である。
【００６９】
このような欠失は、ペプチド配列の１つの連続する部分またはそれより大きな１つの不
連続の部分を含み得る。このような欠失が、上記の１０７ｘ１７８ｘ４、ＡＬＬＭＯＴＩ
５またはＰＬＺＩＰ検索モチーフによって、なお認識され得るペプチドを生じる限り、１
以上のこのような欠失は、ＤＰ１７８またはＤＰ１７８短縮に導入され得る。
【００７０】
（Ｂ．ＤＰ１０７ペプチド）
ＤＰ１０７は、３８アミノ酸ペプチドであり、これは、強力な抗ウイルス活性を示し、
そし以下に示されるＨＩＶ−１LA1単離体膜貫通（ＴＭ）ｇｐ４１糖タンパク質の残基５
５８〜５９５に対応する
【００７１】
【化３】
2009167208.tif 000005
。
【００７２】
全長ＤＰ１０７の３８マーに加えて、ＤＰ１０７ペプチドは、３アミノ酸残基と３８ア
ミノ酸残基との間のペプチド（すなわち、トリペプチドから３８マーのポリペプチドのサ
イズに及ぶペプチド）を含むＤＰ１０７ペプチドの短縮を示す。これらのペプチドは、表
４および５に示される。
【００７３】
さらに、ＤＰ１７８ペプチドのアミノ酸置換はまた、本発明の範囲内である。ＤＰ１７
８については、ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２のＤＰ１０７に対応する領域内に著しいアミ
ノ酸保存がまた存在し、再び周期性の性質の問題であり、構造および／または機能の保存
を示唆する。従って、アミノ酸置換の１つの可能なクラスは、本発明のＤＰ１０７ペプチ
ドの構造を安定化すると推定されるこれらのアミノ酸の変化を含む。本明細書中で開示さ
れるＤＰ１０７およびＤＰ１０７アナログ配列を利用して、当業者は、容易にＤＰ１０７
コンセンサス配列を作製し、そして好ましいアミノ酸置換を示す保存されたアミノ酸残基
を、これらから確かめ得る。
【００７４】
アミノ酸置換は、保存された性質の置換または保存されていない性質の置換であり得る
。保存されたアミノ酸置換は、類似の電荷、サイズ、および／または疎水性特徴のアミノ
酸での、ＤＰ１０７ペプチド配列の１以上のアミノ酸の置換（例えば、グルタミン酸（Ｅ
）のアスパラギン酸（Ｄ）へのアミノ酸置換）からなる。保存されていない置換は、異な
る電荷、サイズ、および／または疎水性特徴を保有するアミノ酸での、ＤＰ１７８ペプチ
ド配列の１以上のアミノ酸の置換（例えば、グルタミン酸（Ｅ）のバリン（Ｖ）への置換
）からなる。
【００７５】
アミノ酸の挿入は、単一のアミノ酸残基またはひとつづきの残基からなる。挿入は、Ｄ
Ｐ１０７またはＤＰ１０７短縮ペプチドのカルボキシ末端またはアミノ末端、ならびにペ
プチドに対する内部の位置で作製され得る。
【００７６】
このような挿入は、一般的に２〜１５アミノ酸長にわたる。目的のペプチドのカルボキ
シ末端またはアミノ末端のいずれかで作製された挿入は、好ましい約２〜約５０アミノ酸
を有する、より広いサイズの範囲の挿入であり得ることが意図される。このような挿入が
、上記の１０７ｘ１７８ｘ４、ＡＬＬＭＯＴＩ５またはＰＬＺＩＰ検索モチーフによって
なお認識され得るペプチドを生じる限り、１以上のこのような挿入は、ＤＰ１０７または
ＤＰ１０７短縮に導入され得る。
【００７７】
好ましいアミノ末端挿入物またはカルボキシ末端挿入物は、約２〜約５０のアミノ酸残
基の長さにわたるペプチドであり、実際のＤＰ１０７  ｇｐ４１アミノ酸配列に対して、
それぞれアミノまたはカルボキシのいずれかでｇｐ４１タンパク質領域に対応する。従っ
て、好ましいアミノ末端またはカルボキシ末端アミノ酸挿入物は、ｇｐ４１タンパク質の
ＤＰ１０７領域に対する、すぐ近くのアミノまたはカルボキシで見出されるｇｐ４１アミ
ノ酸配列を含む。
【００７８】
ＤＰ１０７またはＤＰ１０７短縮の欠失はまた、本発明の範囲内である。このような欠
失は、ＤＰ１０７またはＤＰ１０７様ペプチド配列からの１以上のアミノ酸の除去からな
り、生じるペプチド配列の下限の長さは、４〜６のアミノ酸である。
【００７９】
このような欠失は、ペプチド配列の１つの連続する部分またはそれより大きな１つの不
連続の部分を含み得る。このような欠失が、上記の１０７ｘ１７８ｘ４、ＡＬＬＭＯＴＩ
５またはＰＬＺＩＰ検索モチーフによって、なお認識され得るペプチドを生じる限り、１
以上のこのような欠失は、ＤＰ１０７またはＤＰ１０７短縮に導入され得る。
【００８０】
ＤＰ１０７およびＤＰ１０７短縮は、米国特許第５，６５６，４８０号に、より十分に
記載され、これは、その全体が参考として本明細書中で援用される。
【００８１】
（２．ＤＰ１０７およびＤＰ１７８アナログ）
上記の本発明のＤＰ１７８、ＤＰ１７８短縮、ＤＰ１０７およびＤＰ１０７短縮配列の
アナログに対応するペプチドは、他のウイルス（例えば、非ＨＩＶ−１エンベロープ化ウ
イルス、非エンベロープ化ウイルスおよび他の非ウイルス性生物を含むが、これらに限定
されない）において見出され得る。
【００８２】
このようなＤＰ１７８アナログおよびＤＰ１０７アナログは、例えば、エンベロープ化
されたウイルスの膜貫通（「ＴＭ」）タンパク質に存在するペプチド配列に対応し得、そ
して非エンベロープ化生物および非ウイルス性生物に存在するペプチド配列に対応し得る
。このようなペプチドは、抗膜融合性活性、抗ウイルス活性、最も具体的にはネイティブ
な配列が見出されるウイルスに特異的である抗ウイルス活性を示し得るか、またはコイル
ドコイルペプチド構造に関連する細胞間プロセスを調節する能力を示し得る。
【００８３】
（Ａ．ＤＰ１７８アナログ）
ＤＰ１７８アナログは、そのアミノ酸配列が、例えば、ＤＰ１７８が誘導されたｇｐ４
１ペプチド領域に対応する他のウイルス（すなわち、ＨＩＶ−１以外）のペプチド領域の
アミノ酸配列からなるペプチドである。そのようなウイルスとしては、他のＨＩＶ−１単
離体およびＨＩＶ−２単離体が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【００８４】
他のＨＩＶ単離体（すなわち、非ＨＩＶ−１ＬＡＩ）の対応するｇｐ４１ペプチド領域
由来のＤＰ１７８アナログとしては、例えば、以下に示されるペプチド配列が挙げられ得
る。
【００８５】
【化４】
2009167208.tif 000006
配列番号３、配列番号４および配列番号５のペプチドは、それぞれ、ＨＩＶ−ｌSF2、
ＨＩＶ−１RFおよびＨＩＶ−１MN由来である。他のＤＰ１７８アナログとしては、ＨＩＶ
−２から誘導されたアナログが挙げられ、これには、配列番号６および配列番号７のペプ
チドが含まれる（これらはそれぞれ、ＨＩＶ−２RODおよびＨＩＶ−２NIHZ由来である）
。さらに別の有用なアナログとしては、配列番号８および配列番号９のペプチドが挙げら
れ、これらは、抗ウイルス活性を示すことが証明されている。
【００８６】
本発明において、ＤＰ１７８アナログは、そのアミノ酸配列がｇｐ４１タンパク質のＤ
Ｐ１７８領域に対応するペプチドを示すことが好ましく、本明細書中に開示されるペプチ
ドがさらに、約２〜約５０アミノ酸残基の長さの範囲で、実際のＤＰ１７８アミノ酸配列
に対するアミノまたはカルボキシのいずれかのｇｐ４１タンパク質領域に対応するアミノ
酸配列を含み得ることがまた意図される。
【００８７】
表６および表７は、ＨＩＶ−２NIHZＤＰ１７８アナログのいくつかの可能な短縮を示し
、これは、３と３６との間のアミノ酸残基のペプチド（すなわち、トリペプチドから３６
マーポリペプチドまでのサイズの範囲のペプチド）を含み得る。これらの表におけるペプ
チド配列を、アミノ末端（左）からカルボキシ末端（右）に列挙する。
【００８８】
（Ｂ．さらなるＤＰ１７８アナログおよびＤＰ１０７アナログ）
ＤＰ１７８およびＤＰ１０７アナログは、例えば、上記の１０７ｘ１７８ｘ４、ＡＬＬ
ＭＯＴＩ５またはＰＬＺＩＰのコンピューター補助の検索戦略のうちの１つ以上を使用す
ることによって、認識されるかまたは同定される。この検索戦略は、ＤＰ１０７および／
またはＤＰ１７８の構造および／またはアミノ酸配列特徴と類似した、構造および／また
はアミノ酸配列特徴を有することが予想されるさらなるペプチド領域を同定する。
【００８９】
検索戦略は、米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号および同第
６，０２０，４５９号の第９節に示される例示に完全に記載される。この検索戦略は、あ
る部分、ＤＰ１０７およびＤＰ１７８から推定される一次アミノ酸モチーフに基づくが、
単に、一次アミノ酸相同性配列に関する検索に基づくものではない。なぜなら、そのよう
なタンパク質配列相同性は存在するが、主要なウイルス群の間ではないからである。例え
ば、一次アミノ酸配列相同性は、ＨＩＶ−１の異なる種のＴＭタンパク質内、またはサル
免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）の異なる単離体のＴＭタンパク質内で高い。
【００９０】
米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号、および同第６，０２０
，４５９号に開示されるコンピューター検索戦略は、ＤＰ１０７またはＤＰ１７８に類似
するタンパク質の領域を首尾良く同定した。この検索戦略は、市販の配列データベースパ
ッケージ、好ましくはＰＣ／Ｇｅｎｅを用いて使用されるように設計された。
【００９１】
米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号、および同第６，０２０
，４５９号において、一連の検索モチーフ（１０７ｘ１７８ｘ４、ＡＬＬＭＯＴＩ５、お
よびＰＬＺＩＰモチーフ）は、好ましい１０７ｘ１７８ｘ４を用いて厳密から幅広い範囲
のストリンジェンシーに対して設計され、そして操作された。配列は、米国特許第６，０
１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号、および同第６，０２０，４５９号のそのよ
うな検索モチーフ（例えば、表Ｖ〜ＸＩＶに列挙されるようなモチーフ）を介して同定さ
れ、そして、本出願に参考として援用して含まれ、強力に抗膜融合性（ｆｕｓｏｇｅｎｉ
ｃ）（例えば、抗ウイルス）活性を示し、抗膜融合性（例えば、抗ウイルス）化合物の同
定においてさらに有用であり得る。
【００９２】
（３．他の抗ウイルスペプチド）
（Ａ．抗ＲＳＶペプチド）
抗ＲＳＶペプチドは、ＲＳＶによるウイルス感染を阻害することがさらに同定されたＲ
ＳＶ中の対応するペプチド配列から単離された、ＤＰ１７８および／またはＤＰ１０７ア
ナログを含む。目的のそのようなペプチドは、表１６のペプチドおよび配列番号１０〜配
列番号３０のペプチドを含む。特に興味深いのは、以下のペプチドである：
【００９３】
【化５】
2009167208.tif 000007
。配列番号１０のペプチドは、ＲＳＶのＦ２領域から誘導され、そして、ＤＰ１０７およ
びＤＰ１７８ペプチドに対応するような記載された検索モチーフ（すなわち、「ＤＰ１０
７／１７８様」）を用いて、米国特許第６，１０３，２３６号、および同第６，０２０，
４５９号で同定された。配列番号１４〜配列番号１６のペプチドは各々、配列番号１０の
ペプチド内に含まれるアミノ酸配列を有し、そして各々は、抗ＲＳＶ活性を示し、特に、
５０μｇ／ｍｌ未満の濃度において、ＲＳＶ感染Ｈｅｐ−２細胞と感染されていないＨｅ
ｐ−２細胞との間の融合および合胞体の形成を阻害することが示された。
【００９４】
配列番号１１のペプチドは、ＲＳＶのＦ１領域から誘導され、そして、ＤＰ１０７に対
応するような記載された検索モチーフ（すなわち、「ＤＰ１０７様」）を用いて、米国特
許第６，１０３，２３６号、および同第６，０２０，４５９号で同定された。配列番号２
９のペプチドは、配列番号１０のペプチド内に含まれるアミノ酸配列を含み、同様に、抗
ＲＳＶ活性を示し、特に、５０μｇ／ｍｌ未満の濃度において、ＲＳＶ感染Ｈｅｐ−２細
胞と感染されていないＨｅｐ−２細胞との間の融合および合胞体の形成を阻害することが
示された。
【００９５】
（Ｂ．抗ＨＰＩＶペプチド）
抗ＨＰＩＶペプチドは、ＨＰＩＶ中の対応するペプチド配列から同定されたＤＰ１７８
および／またはＤＰ１０７アナログを含み、そしてＨＰＩＶによるウイルス感染を示すこ
とがさらに同定された。目的のそのようなペプチドは、表１７および配列番号３１〜配列
番号６２のペプチドを含む。特に興味深いのは、以下のペプチドである：
【００９６】
【化６】
2009167208.tif 000008
。配列番号３１のペプチドは、ＨＰＩＶ−３のＦ１領域から誘導され、そして、ＤＰ１０
７に対応するような記載された検索モチーフ（すなわち、「ＤＰ１０７様」）を用いて、
米国特許第６，１０３，２３６号、および同第６，０２０，４５９号で同定された。配列
番号５２〜配列番号５８のペプチドは各々、配列番号３０のペプチド内に含まれるアミノ
酸配列を有し、そして各々は、抗ＨＰＩＶ−３活性を示し、特に、１μｇ／ｍｌ未満の濃
度において、ＨＰＩＶ−３感染されたＨｅｐ２細胞と感染されていないのＣＶ−１Ｗ細胞
との間の融合および合胞体の形成を阻害することが示された。
【００９７】
配列番号３２のペプチドはまた、ＨＰＩＶ−３のＦ１領域から誘導され、そして、ＤＰ
１７８に対応するような記載された検索モチーフ（すなわち、「ＤＰ１７８様」）を用い
て、米国特許第６，１０３，２３６号、および同第６，０２０，４５９号で同定された。
配列番号３５および配列番号３８〜配列番号４２のペプチドは各々、配列番号３２のペプ
チド内に含まれるアミノ酸配列を有し、そして各々はまた、抗ＨＰＩＶ−３活性を示し、
特に、１μｇ／ｍｌ未満の濃度において、ＨＰＩＶ−３感染されたＨｅｐ２細胞と感染さ
れていないＣＶ−１Ｗ細胞のと間の融合および合胞体の形成を阻害することが示された。
【００９８】
（Ｃ．抗ＭｅＶペプチド）
抗ＭｅＶペプチドは、はしかウイルス（ＭｅＶ）によるウイルス感染を阻害することが
さらに同定されたはしかウイルス中の対応するペプチド配列から同定された、ＤＰ１７８
および／またはＤＰ１０７アナログである。特定の目的のそのようなペプチドは、表１９
のペプチドおよび配列番号７４〜配列番号８６のペプチドを含む。特に興味深いのは、以
下に列挙されるペプチドである：
【００９９】
【化７】
2009167208.tif 000009
。はしかウイルス由来の配列は、ＤＰ１７８に対応するような記載された検索モチーフ（
すなわち、「ＤＰ１７８様」）を用いて、米国特許第６，１０３，２３６号、および同第
６，０２０，４５９号で同定された。配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１および
配列番号８３のペプチド各々は、そのように同定されたアミノ酸配列を有し、そして各々
は、抗ＭｅＶ活性を示し、特に、１μｇ／ｍｌ未満の濃度において、ＭｅＶ感染されたＨ
ｅｐ２と感染されていないＶｅｒｏ細胞との間の融合および合胞体の形成を阻害すること
が示された。
【０１００】
（Ｄ．抗ＳＩＶペプチド）
抗ＳＩＶペプチドは、ＳＩＶによるウイルス感染を阻害することがさらに同定されたＳ
ＩＶ中の対応するペプチド配列から同定されたＤＰ１７８および／またはＤＰ１０７アナ
ログである。目的のそのようなペプチドは、表１８のペプチドおよび配列番号６３〜配列
番号７３までのペプチドを含む。特に興味深いのは、以下のペプチドである：
【０１０１】
【化８】
2009167208.tif 000010
。ＳＶＩ膜貫通融合タンパク質由来の配列は、ＤＰ１７８に対応するような記載された検
索モチーフ（すなわち、「ＤＰ１７８様」）を用いて、米国特許第６，１０３，２３６号
、および同第６，０２０，４５９号で同定された。配列番号６４〜配列番号７３のペプチ
ドは各々、そのように同定されたアミノ酸配列を有し、そして各々は、粗ペプチドとして
強力な抗ＳＩＶ活性を表すことが示された。
【０１０２】
（４．抗ウイルスおよび抗膜融合性ペプチドの改変）
本発明は、抗ウイルスおよび／または抗膜融合性活性を示すペプチドを改変することを
意図し、ＤＰ−１０７およびＤＰ−１７８ならびにそれらのアナログのそのような改変を
含む。そのような改変されたペプチドは、共有結合を介して血液成分上の利用可能な反応
性官能基と反応し得る。本発明はまた、そのような改変、血液成分を用いたそのような組
合せ、およびそれらの使用のための方法に関する。これらの方法は、非結合体化のペプチ
ドを患者に投与することと比較して、結合体化された抗ウイルスペプチド誘導体の有効な
治療剤の寿命を延長する工程を包含する。改変されたペプチドは、ＤＡＣ（薬物親和性複
合体）として設計される型のペプチドであり、これは、抗ウイルスペプチド分子および可
動性の血液タンパク質の反応性官能基と反応し得る化学反応基を伴なう連結基を含む。血
液成分またはタンパク質を用いた反応によって、改変されたペプチド、すなわちＤＡＣは
、血液を介して適切な部位またはレセプターに送達され得る。
【０１０３】
タンパク質上の官能基と共有結合を形成するために、反応性基として広範な種々の活性
なカルボキシル基、特にエステルを使用し得、ここで、ヒドロキシル部分は、ペプチドを
改変するために必要とされるレベルで生理学的に受容可能である。多くの異なるヒドロキ
シル基がこれらの反応性基に使用され得るが、最も簡便なものは、Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミド（すなわち、ＮＨＳ）、Ｎ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（ｓｕｌｆｏ−
ＮＨＳ）である。本発明の好ましい実施形態において、タンパク質上の官能基は、チオー
ル基であり、そして反応性基は、γ−マレイミド−ブチラールアミド（ｇａｍｍａ-ｍａ
ｌｅｉｍｉｄｅ-ｂｕｔｙｒａｌａｍｉｄｅ）（ＧＭＢＡ）またはマレイミドプロピオン
酸（ＭＰＡ）のようなマレイミド含有基である。
【０１０４】
第一級アミンは、ＮＨＳエステルに対する重要な標的である。タンパク質のＮ末端に存
在するアクセス可能なα−アミン基が、ＮＨＳエステルと反応する。しかし、タンパク質
のα−アミノ基は、ＮＨＳカップリングに対して望ましくもなければ、利用可能でもあり
得ない。５個のアミノ酸がその側鎖に窒素を有するが、リジンのε−アミンのみが、有意
にＮＨＳエステルと反応する。以下の模式図に示されるように、ＮＨＳエステルの結合反
応が、第一級アミンと反応してＮ−ヒドロキシスクシンイミドを放出する場合、アミド結
合が形成される。
【０１０５】
【化９】
2009167208.tif 000011
本発明の好ましい実施形態において、このタンパク質の官能基はチオール基であり、化
学反応性基は、ＭＰＡまたはＧＭＢＡ（γ−マレイミド−ブチラールアミド）のようなマ
レイミド含有基である。マレイミド基は、反応混合物のｐＨが６．５と７．４の間で維持
される場合、ペプチド上のスルフヒドリル基について最も選択的である。ｐＨ７．０にお
いて、マレイミド基とスルフヒドリルとの反応速度は、アミンとの反応より１０００倍速
い。以下の模式図に示されるように、マレイミド基とスルフヒドリルとの間の安定なチオ
エーテル結合が形成され、これは、生理学的な条件下では切断され得ない。
【０１０６】
【化１０】
2009167208.tif 000012
（Ａ．特異的標識化）
好ましくは、本発明の改変されたペプチドは、移動性血液タンパク質上のチオール基と
特異的に反応するように設計される。このような反応は、好ましくは、血清アルブミンま
たはＩｇＧのような移動性血液タンパク質上のチオール基へのマレイミド連結（例えば、
ＧＭＢＳ、ＭＰＡまたは他のマレイミドから調製される）を用いて改変されるこのペプチ
ドの共有結合によって確立される。
【０１０７】
特定の条件下において、マレイミドを用いた特異的な標識化は、ＮＨＳおよびｓｕｌｆ
ｏ−ＮＨＳのような基を用いる移動性タンパク質の非特異的な標識化に対して、いくつか
の利点を提供する。チオール基は、インビボにおいてアミノ基よりもあまり豊富ではない
。従って、本発明のマレイミド改変ペプチド（すなわち、マレイミドペプチド）は、より
少ないタンパク質に共有結合する。例えば、アルブミン（最も豊富な血液タンパク質）中
には、１つのチオール基のみが存在する。従って、ペプチド−マレイミド−アルブミン結
合体は、ペプチド対アルブミンを約１：１のモル比で含む傾向がある。アルブミンに加え
て、ＩｇＧ分子（クラスＩＩ）もまた、遊離チオールを有する。ＩｇＧ分子および血清ア
ルブミンが、血液中、可溶タンパク質の大部分を構成するので、これらはまた、マレイミ
ド改変ペプチドに共有結合するのに利用可能な血液中の遊離チオール基の大部分を構成す
る。
【０１０８】
さらに、遊離チオール含有血液タンパク質（ＩｇＧを含む）の間でさえ、アルブミン自
体の独特の特徴に起因して、マレイミドを用いた特異的標識化は、ペプチド−マレイミド
−アルブミン結合体の優先的な形成を導く。アルブミンの単一の遊離チオール基は、種間
において高度に保存され、アミノ酸残基３４（Ｃｙｓ34）に位置する。最近、アルブミン
のＣｙｓ34が、他の遊離チオール含有タンパク質上の遊離チオールと比べて、増加した反
応性を有することが示された。これは、アルブミンのＣｙｓ34に対する非常に低いｐＫ値
（５．５）に一部起因する。これは、一般的にシステイン残基の典型的なｐＫ値（典型的
には約８）よりもずっと低い。この低いｐＫに起因して、正常な生理学的条件下でアルブ
ミンのＣｙｓ34は、主にイオン化された形態であり、これは、その反応性を劇的に増加さ
せる。Ｃｙｓ34の低いｐＫ値に加えて、Ｃｙｓ34の反応性を増強する別の因子はその位置
であり、この位置は、アルブミンのＶ領域の一つのループの表面に近接した間隙中の位置
である。この位置は、Ｃｙｓ34を全ての種類のリガンドに対して極めて利用可能にし、そ
してこの位置は、遊離ラジカルトラップおよび遊離チオールスカベンジャーとしてのＣｙ
ｓ34の生物学的役割において、重要な因子である。これらの特徴は、Ｃｙｓ34をマレイミ
ド−ペプチドに非常に反応性にし、反応速度の加速は、他の遊離チオール含有タンパク質
とのマレイミド−ペプチドの反応速度に比べて、１０００倍であり得る。
【０１０９】
ペプチド−マレイミド−アルブミン結合体の別の利点は、詳細にはＣｙｓ34において、
ペプチド対アルブミンを１:１で含むことに関連する再現性である。他の技術（例えば、
グルタルアルデヒド、ＤＣＣ、ＥＤＣおよび例えば、遊離アミンの他の化学活性化）は、
この選択性を欠いている。例えば、アルブミンは、５２個のリジン残基を含み、このうち
の２５〜３０個は、アルブミンの表面に位置し、そして結合に対してアクセス可能である
。これらのリジン残基の活性化、あるいはこれらのリジン残基を通して結合するペプチド
の改変によって、結合体の不均一な集団が生じる。ペプチド対アルブミンの１：１のモル
比が使用される場合でさえ、生成物は、複数の結合体産物からなり、そのいくつかは、ア
ルブミン当たり０、１、２以上のペプチドを含み、それぞれは、２５〜３０個の利用可能
なリジン部位の１つ以上のいずれかにランダムに結合されるペプチドを有する。多数の可
能な組み合わせが提供される場合、抽出成分および各々の結合体のバッチの性質の特徴付
けが困難になり、バッチ間の再現性はほとんど不可能であり、このような結合体の治療剤
としての望ましさを減少する。さらに、アルブミンのリジン残基を介する結合体化は、１
アルブミン分子当たりより多くの治療剤を送達するということに関する利点を少なくとも
有するようであるが、研究によって、治療剤対アルブミンの１：１の比が好ましいことが
示された。Ｓｔｅｈｌｅらによる論文「Ｔｈｅ  Ｌｏａｄｉｎｇ  Ｒａｔｅ  Ｄｅｔｅｒ
ｍｉｎｅｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｅｔｈ
ｏｔｒｅｘａｔｅ−Ａｌｂｕｍｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ｒａｔｓ」、Ａｎｔ
ｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ，第８巻，６７７−６８５頁（１９８８）（その全体にお
いて本明細書中で援用される）において、著者らは、グルタルアルデヒドを介して結合さ
れる抗癌剤メトトレキサート対アルブミンの１：１の比が最も有望な結果を与えたことを
報告した。これらの結合体は腫瘍細胞によって優先的に取り込まれたが、５：１〜２０：
１のメトトレキサート分子を有する結合体は、変化したＨＰＬＣプロフィールを有し、そ
してインビボで肝臓によって迅速に取り込まれた。これらの高い比において、アルブミン
に対するコンフォメーションの変化は、治療キャリアとしてのその有効性を減少すること
が推論された。
【０１１０】
マレイミド−ペプチドのインビボでの制御された投与を通して、アルブミンおよびＩｇ
Ｇのインビボでの特異的な標識化を制御し得る。典型的な投与において、８０〜９０％の
投与されたマレイミド−ペプチドが、アルブミンを標識し、５％未満がＩｇＧを標識する
。グルタチオンのような遊離チオールの微量標識がまた、生じる。このような特異的な標
識化は、インビボ用途に好ましい。なぜなら、これは、投与された薬剤の見積もられた半
減期の正確な計算を可能にするからである。
【０１１１】
制御された特異的なインビボ標識化を提供することに加えて、マレイミド−ペプチドは
、血清アルブミンおよびＩｇＧのエキソビボでの特異的標識化を提供し得る。このような
エキソビボの標識化は、血清アルブミンおよび／またはＩｇＧを含む血液、血清または生
理食塩水の溶液へのマレイミド−ペプチドの添加を包含する。一旦、結合がマレイミド−
ペプチドを用いてエキソビボで生じると、血液、血清または生理食塩溶液は、インビボ処
置のために患者の血液に再投与され得る。
【０１１２】
ＮＨＳ−ペプチドと対照的に、マレイミド−ペプチドは、一般的に、水性溶液の存在下
および遊離アミンの存在下において、非常に安定である。マレイミド−ペプチドが遊離チ
オールとのみ反応するので、保護基は、一般的にマレイミド−ペプチドがそれ自体と反応
することを防ぐ必要はない。さらに改変されたペプチドの増加した安定性によって、イン
ビボ用途に適切な高度に精製された産物を調製するためのＨＰＬＣのようなさらなる精製
工程の使用を可能になる。最後に、増加した化学的安定性は、より長い有効期限を有する
製品を提供する。
【０１１３】
（Ｂ．非特異的標識）
本発明の抗ウイルスペプチドはまた、血液成分の非特異的標識のために改変され得る。
アミノ基への結合がまた使用され、特に非特異的標識のためのアミド結合の形成を伴う。
そのような結合を形成するために、化学反応基として広範な種々の活性カルボキシル基、
特にエステルを使用し得、ここでそのヒドロキシル部分は、必要とされるレベルにおいて
生理学的に受容可能である。多数の異なるヒドロキシル基がこれらの結合剤において使用
され得るが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）およびＮ−ヒドロキシ−スルホス
クシンイミド（ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ）が最も都合が良い。
【０１１４】
利用され得る他の結合剤は、米国特許第５，６１２，０３４号（これは、本明細書中に
参考として援用される）に記載される。
【０１１５】
改変されたペプチドの化学反応基がインビボで反応し得る種々の部位としては、細胞、
特に赤血球（成熟赤血球）および血小板、ならびにタンパク質（例えば、免疫グロブリン
（ＩｇＧおよびＩｇＭを含む）、血清アルブミン、フェリチン、ステロイド結合タンパク
質、トランスフェリン、サイロキシン結合蛋白、α−２−マクログロブリンなど）が挙げ
られる。改変されたペプチドが反応するそれらのレセプター（これは、長命ではない）は
、一般的に、およそ３日以内にヒト宿主から除去される。上記に示されるタンパク質（細
胞のタンパク質を含む）は、血中濃度に基づいて、特に半減期に関しては、少なくとも３
日間残存し、そして５日間以上残存し得る（一般的に、６０日間を超えず、より一般的に
は３０日間を超えない）。
【０１１６】
ほとんどの部分について、反応は、血液中の移動性成分、詳細には血液タンパク質およ
び細胞、より詳細には血液タンパク質および成熟赤血球を伴う。「移動性」とは、その成
分が、任意の延長された期間（一般的には５分間を超えず、より一般的には１分間である
）一定の場所にいないことを意図するが、いくつかの血液成分は、延長された期間、相対
的に停止し得る。最初は、機能化されたタンパク質および細胞の比較的不均一な集団が存
在する。しかし、ほとんどの部分について、数日以内の集団は、血流中の機能化されたタ
ンパク質の半減期に依存して、最初の集団とは実質的に異なってくる。従って、通常、お
よそ３日以内もしくはそれ以後の期間内に、ＩｇＧは、血流において優勢な機能化された
タンパク質となる。
【０１１７】
通常、投与後５日までに、ＩｇＧ、血清アルブミンおよび成熟赤血球は、血液中の結合
成分の少なくとも約６０モル％、通常は少なくとも約７５モル％となり、ＩｇＧ、ＩｇＭ
（実質的により少ない程度まで）および血清アルブミンは、非細胞性結合成分の少なくと
も約５０モル％、通常は少なくとも約７５モル％、より一般には約８０モル％となる。
【０１１８】
血液成分に対する非特異的な改変されたペプチドの所望の結合体は、患者に直接その改
変されたペプチドを投与することによって、インビボにて調製され得る。この患者は、ヒ
トまたは他の哺乳動物であり得る。その投与は、ボーラス形態でなされるか、または流れ
を計器で調節して注入することなどによって、ゆっくりと長期間で導入され得る。
【０１１９】
所望される場合、対象結合体はまた、血液と本発明の改変されたペプチドとを組み合わ
せることによって、エキソビボで調製され得、血液成分上の反応性官能基への改変された
ペプチドの共有結合を可能にし、次いで、宿主にその結合体化血液を戻すかまたは投与す
る。さらに、上記のことはまた、初めに、個々の血液成分または限られた数の成分（例え
ば、赤血球、免疫グロブリン、血清アルブミンなど）を精製し、そしてその成分または複
数の成分をエキソビボにて化学的に反応性の改変されたペプチドと組み合わせることによ
って達成され得る。次いで、機能化された血液または血液成分は、治療的に有効な結合体
をインビボで被験体に提供するために宿主に戻され得る。その血液はまた、エキソビボで
操作する間の凝固を予防するために処理され得る。
【０１２０】
（５．改変された抗ウイルスペプチドおよび抗膜融合性ペプチドの合成）
（Ａ．ペプチド合成）
本発明に従う抗ウイルスペプチドおよび／または抗膜融合性ペプチドは、当業者に公知
の固相ペプチド化学の標準的な方法によって、合成され得る。例えば、ペプチドは、アプ
ライドバイオシステムシンセサイザー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  ｓｙｎｔ
ｈｅｓｉｚｅｒ）を使用する、ＳｔｅｗａｒｄおよびＹｏｕｎｇ（Ｓｔｅｗａｒｄ，Ｊ．
Ｍ．およびＹｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ，第２版．，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋ
ｆｏｒｄ，ＩＩＩ．，（１９８４））により記載される手順に従がう固相化学技術によっ
て合成され得る。次いで、同様に、複数のペプチドフラグメントが共に結合して合成され
て、より大きなフラグメントを形成する。これらの合成ペプチドはまた、特定の位置にお
けるアミノ酸置換を伴って作製され得る。
【０１２１】
固相ペプチド合成について、多くの技術の概要が、Ｊ．Ｍ．ＳｔｅｗａｒｔおよびＪ．
Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．
Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ），１９６３およびＪ．Ｍｅ
ｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｈｏｒｍｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，
第２巻  ４６頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），１９７３におい
て見出され得る。伝統的な溶液合成については、Ｇ．ＳｃｈｒｏｄｅｒおよびＫ．Ｌｕｐ
ｋｅ，Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，第１巻、Ａｃａｃｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ  Ｙ
ｏｒｋ）を参照のこと。一般的にこれらの方法は、１つ以上のアミノ酸または適切に保護
されたアミノ酸を連続的に付加してペプチド鎖に成長させることを含む。通常、第１のア
ミノ酸のアミノ基またはカルボキシル基のいずれかが、適切な保護基によって保護される
。次いで、その保護されたアミノ酸または誘導体化されたアミノ酸は、不活性固体支持体
に付着されるか、あるいは、アミド結合を形成するために適切な条件下において、適切に
保護されたコンプリメンタリー（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）（アミノもしくはカルボ
キシル）基を有する配列中に次のアミノ酸を付加することによって溶液中で利用される。
次いで、保護基をこの新たに付加されたアミノ酸残基から除去し、そして次のアミノ酸（
適切に保護された）が付加される、など。
【０１２２】
全ての所望のアミノ酸が、適切な配列内に結合された後、任意の残りの保護基（および
任意の固体支持体）が連続的にか、または同時に除去されて、最終的なポリヌクレオチド
ができる。この一般的手順の単純な改変によって、１つよりも多くのアミノ酸を一度に付
加させて、鎖を成長させることが可能となる（例えば、保護されたトリペプチドを適切に
保護されたジペプチドに（キラル中心をラセミ化しない条件下で）結合させることによっ
て脱保護の後、ペンタペプチドを形成させることによる）。
【０１２３】
本発明の化合物を調製する特に好ましい方法は、固相ペプチド合成を含み、ここでアミ
ノ酸α−Ｎ−末端は、酸感受性基または塩基感受性基によって保護される。そのような保
護基は、ペプチド結合形成の条件に対して安定であるという特性を有するべき一方で、成
長するペプチド鎖の破壊またはその中に含まれる任意のキラル中心のラセミ化を伴わずに
容易に除去可能であるという特性も有すべきである。適切な保護基は、９−フルオレニル
メチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジ
ルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミル
オキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメト
キシベンジルオキシカルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブ
チルオキシカルボニルなどである。９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ
）保護基は、本発明のペプチドの合成のために特に好ましい。他の好ましい側鎖保護基は
、リジンおよびアルギニンのような側鎖アミノ基に関しては、２，２，５，７，８−ペン
タメチルクロマン−６−スルホニル（ｐｍｃ）、ニトロ基、ｐ−トルエンスルホニル基、
４−メトキシベンゼン−スルホニル基、Ｃｂｚ基、Ｂｏｃ基、およびアダマンチルオキシ
カルボニル基；チロシンに関しては、ベンジル基、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル
基、２，６−ジクロロベンジル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）基、シクロ
ヘキシル基、シクロペニル基およびアセチル（Ａｃ）基であり；セリンに関しては、ｔ−
ブチル基、ベンジル基およびテトラヒドロピラニル基であり；ヒスチジンに関しては、ト
リチル基、ベンジル基、Ｃｂｚ基、ｐ−トルエンスルホニル基および２，４−ジニトロフ
ェニル基であり；トリプトファンに関しては、ホルミル基であり；アスパラギン酸および
グルタミン酸に関しては、ベンジル基およびｔ−ブチル基ならびにシステインに関しては
、トリフェニルメチル（トリチル）基である。
【０１２４】
固相ペプチド合成方法において、α−Ｃ−末端アミノ酸は、適切な固体支持体または樹
脂に付着される。上記合成のために有用な適切な固体支持体は、段階的な縮合−脱保護反
応の試薬および反応条件に対して不活性であり、ならびに使用される媒体に不溶性である
材料である。α−Ｃ−末端カルボキシペプチドの合成のための好ましい固体支持体は、４
−ヒドロキシメチルフェノキシメチル−コポリ（スチレン−１％ジビニルベンゼン）であ
る。α−Ｃ−末端アミドペプチドのための好ましい固相支持体は、４−（２’，４’−ジ
メトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシアセトアミドエチル樹脂である
（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）から入手可能）。こ
のα−Ｃ−末端アミノ酸は、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１−ヒドロキシ
ベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメ
チルアミノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）またはビス（２−オ
キソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィンクロリド（ＢＯＰＣｌ）を伴うか、または伴わ
ずに、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピ
ルカルボジイミド（ＤＩＣ）またはＯ−ベンゾトリアゾル−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ
’，−テトラメチルウロニウム−ヘキサフロオロホスフェート（ＨＢＴＵ）によって樹脂
に結合され、結合は、ジクロロメタンまたはＤＭＦのような溶媒中で１０℃と５０℃との
間の温度にて約１時間〜２４時間の間媒介される。
【０１２５】
固体支持体が、４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フ
ェノキシ−アセトアミドエチル樹脂である場合、Ｆｍｏｃ基は、上記のα−Ｃ−末端アミ
ノ酸とのカップリングの前に、第二級アミン、好ましくはピペリジンで切断される。脱保
護された４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ
−アセトアミドエチル樹脂へのカップリングのための好ましい方法は、ＤＭＦ中Ｏ−ベン
ゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウム−ヘキサフ
ロオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１当量）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（Ｈ
ＯＢＴ、１当量）である。保護されたアミノ酸の連続的なカップリングは、当該分野にお
いて周知の自動ポリペプチドシンセサイザーにおいて実行され得る。好ましい実施形態に
おいて、成長するペプチド鎖のα−Ｎ−末端アミノ酸は、Ｆｍｏｃで保護される。成長す
るペプチドのα−Ｎ−末端側からのＦｍｏｃ保護基の除去は、第二級アミン、好ましくは
ピペリジンを用いて処理することによって達成される。次いで、各々の保護アミノ酸は、
およそ３倍の過剰なモル濃度で導入され、そして好ましくは、カップリングはＤＭＦ中で
実行される。カップリング剤は、通常、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ
’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウム−ヘキサフロオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１当量
）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、１当量）である。
【０１２６】
固相合成の終点において、このポリペプチドは、連続的にか、または１回の操作でのい
ずれかで、樹脂から取り出されて、そして脱保護される。ポリペプチドの取り出しおよび
脱保護は、チオアニソール、水、エタンジチオールおよびトリフルオロ酢酸を含む切断試
薬（ｃｌｅａｖａｇｅ  ｒｅａｇｅｎｔ）を用いて、樹脂結合ポリペプチドを処理するこ
とにより１回の操作で達成され得る。ポリペプチドのα−Ｃ−末端がアルキルアミドであ
る場合、樹脂は、アルキルアミンを用いるアミノ分解によって切断される。あるいは、ペ
プチドは、例えば、メタノールを用いるエステル交換反応、続いてアミノ分解または直接
的アミド基交換によって取り出され得る。保護ペプチドは、この時点で精製され得るか、
または次の工程に直接使用され得る。側鎖保護基の除去は、上記の切断カクテル（ｃｏｃ
ｋｔａｉｌ）を使用して達成される。完全に脱保護されたペプチドは、任意または全ての
以下の型：弱塩基樹脂上のイオン交換（アセテート形態）；非誘導体化ポリスチレン−ジ
ビニルベンゼン上の疎水性吸着クロマトグラフィー（例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡ
Ｄ）；シリカゲル吸着クロマトグラフィー；カルボキシメチルセルロース上のイオン交換
クロマトグラフィー；分配クロマトグラフィー（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５、
ＬＨ−２０）または向流分配；高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（特に、オクチ
ル−もしくはオクタデシルシリル−シリカ結合相充填剤上の逆相ＨＰＬＣ）を利用する一
連のクロマトグラフィー工程により精製される。
【０１２７】
これらのＩＴＰの分子量は、Ｆａｓｔ  Ａｔｏｍ  Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ（ＦＡＢ）
Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙを使用して決定される。
【０１２８】
（（１）Ｎ−末端保護基）
上記に議論されるように、用語「Ｎ−保護基」とは、アミノ酸もしくはペプチドのα−
Ｎ−末端を保護すること、さもなくばアミノ酸もしくはペプチドのアミノ基を、合成手順
の間の望ましくない反応物に対して保護することが意図されるそれらの基をいう。一般的
に、使用されるＮ−保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  
Ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅ
ｗ  Ｙｏｒｋ（１９８１））（これは、本明細書中に参考として援用される）に開示され
る。さらに、保護基を、例えば、酵素的加水分解によって容易にインビボで切断されるプ
ロドラッグとして使用して、生物学的に活性なペアレント（ｐａｒｅｎｔ）を放出し得る
。α−Ｎ−保護基は、低級アルカノイル基（例えば、ホルミル基、アセチル基（「Ａｃ」
）、プロピオニル基、ピバロイル基、ｔ−ブチルアセチル基など；２−クロロアセチル基
、２−ブロモアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、フタリル基
、ｏ−ニトロフェノキシアセチル基、クロロブチリル基、ベンゾイル基、４−クロロベン
ゾイル基、４−ブロモベンゾイル基、４−ニトロベンゾイル基などを含む他のアシル基；
例えば、ベンゼンスルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基などのようなスルホニル基；
例えば、ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メ
トキシベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、２−ニト
ロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、３，４−ジメ
トキシベンジルオキシカルボニル基、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、
２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、４−エトキシベンジルオキシカルボニ
ル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、３，４，５−トリ
メトキシベンジルオキシカルボニル基、１−（ｐ−ビフェニルイル）−１−メチルエトキ
シカルボニル基、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、
ベンズヒドリルオキシカルボニル基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ジイソ
プロピルメトキシオキシカルボニル基、イソプロピルオキシカルボニル基、エトキシカル
ボニル基、メトキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２−トリクロロ
エトキシカルボニル基、フェノキシカルボニル基、４−ニトロフェノキシカルボニル基、
フルオレニル−９−メトキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基、アダマ
ンチルオキシカルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基、フェニルチオカルボニ
ル基などのカルバメート形成基；例えば、ベンジル基、トリフェニルメチル基、ベンジル
オキシメチル基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）などのような
アリールアルキル基ならびに例えば、トリメチルシリルなどのようなシリル基を含む。
【０１２９】
（（２）カルボキシ保護基）
上記で議論されるように、用語「カルボキシ保護基」とは、化合物の他の官能基部位に
関与する反応が実施されながらカルボン酸官能基をブロックもしくは保護するために使用
されるカルボン酸保護エステル基またはアミド基のことをいう。カルボキシ保護基は、Ｇ
ｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ
ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」１５２〜１８６頁（１９８１）（これは
、本明細書中に参考として援用される）に開示される。さらに、カルボキシ保護基は、プ
ロドラッグとして使用され得、それによってカルボキシ保護基は、例えば、酵素的加水分
解によって容易にインビボで切断され、生物学的に活性なペアレントを放出し得る。その
ようなカルボキシ保護基は、当業者に周知であり、米国特許第３，８４０，５５６号およ
び同第３，７１９，６６７号にて記載されるように、ペニシリンおよびセファロスポリン
の分野におけるカルボキシル基の保護において広範囲に使用されている。これらの開示は
、本明細書中に参考として援用される。代表的なカルボキシ保護基は、Ｃ1−Ｃ8低級アル
キル基（例えば、メチル基、エチル基またはｔ−ブチル基など）；例えば、フェネチル基
またはベンジル基のようなアリールアルキル基ならびに例えば、アルコキシベンジル基ま
たはニトロベンジル基などのようなそれらの置換誘導体；例えば、フェニルエテニル基な
どのアリールアルケニル；アリールおよび例えば、５−インダニル基などのようなその置
換誘導体で；例えば、ジメチルアミノエチル基などのようなジアルキルアミノアルキル基
；例えば、アセトキシメチル基、ブチリルオキシメチル基、バレリルオキシメチル基、イ
ソブチリルオキシメチル基、イソバレリルオキシメチル基、１−（プロピオニルオキシ）
−１−エチル基、１−（ピバロイルオキシ）−１−エチル基、１−メチル−１−（プロピ
オニルオキシ）−１−エチル基、ピバロイルオキシメチル基、プロピオニルオキシメチル
基などのようなアルカノイルオキシアルキル基；例えば、シクロプロピルカルボニルオキ
シメチル基、シクロブチルカルボニルオキシメチル基、シクロペンチルカルボニルオキシ
メチル基、シクロヘキシルカルボニルオキシメチル基などのようなシクロアルカノイルオ
キシアルキル基；例えば、ベンゾイルオキシメチル基、ベンゾイルオキシエチル基などの
ようなアロイルオキシアルキル基；例えば、ベンジルカルボニルオキシメチル基、２−ベ
ンジルカルボニルオキシエチル基などのようなアリールアルキルカルボニルオキシアルキ
ル基；例えば、メトキシカルボニルメチル基、シクロヘキシルオキシカルボニルメチル基
、１−メトキシカルボニル−１−エチル基などのようなアルコキシカルボニルアルキル基
またはシクロアルキルオキシカルボニルアルキル基；例えば、メトキシカルボニルオキシ
メチル基、ｔ−ブチルオキシカルボニルオキシメチル基、１−エトキシカルボニルオキシ
−１−エチル基、１−シクロへキシルオキシカルボニルオキシ−１−エチル基などのよう
なアルコキシカルボニルオキシアルキル基またはシクロアルキルオキシカルボニルアルキ
ル基；例えば、２−（フェノキシカルボニルオキシ）エチル基、２−（５−インダニルオ
キシカルボニルオキシ）エチル基などのようなアリールオキシカルボニルオキシアルキル
基；例えば、２−（１−メトキシ−２−メチルプロパン−２−オイルオキシ）エチル基な
どのようなアルコキシアルキルカルボニルオキシアルキル基；例えば、２−（ベンジルオ
キシカルボニルオキシ）エチル基などのようなアリールアルキルオキシカルボニルオキシ
アルキル基；例えば、２−（３−フェニルプロペン−２−イルオキシカルボニルオキシ）
エチル基などのようなアリールアルケニルオキシカルボニルオキシアルキル基；例えば、
ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノメチル基などのようなアルコキシカルボニルアミノア
ルキル基；例えば、メチルアミノカルボニルアミノメチル基などのようなアルキルアミノ
カルボニルアミノアルキル基；例えば、アセチルアミノメチル基などのようなアルカノイ
ルアミノアルキル基；例えば、４−メチルピペラジニルカルボニルオキシメチル基などの
ような複素環式カルボニルオキシアルキル基；例えば、ジメチルアミノカルボニルメチル
基、ジエチルアミノカルボニルメチル基などのようなジアルキルアミノカルボニルアルキ
ル基；例えば、（５−ｔ−ブチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチ
ル基などのような（５−（低級アルキル）−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イ
ル）アルキル基；ならびに、例えば、（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレ
ン−４−イル）メチル基などのような（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレ
ン−４−イル）アルキル基である。
【０１３０】
代表的なアミドカルボキシ保護基は、アミノカルボニル基および低級アルキルアミノカ
ルボニル基である。
【０１３１】
本発明の好ましいカルボキシ保護化合物には複数の化合物があり、ここでその保護カル
ボキシ基は、低級アルキルエステル、シクロアルキルエステルもしくはアリールアルキル
エステル（例えば、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピル
エステル、ブチルエステル、ｓｅｃ−ブチルエステル、イソブチルエステル、アミルエス
テル、イソアミルエステル、オクチルエステル、シクロヘキシルエステル、フェニルエチ
ルエステルなど）またはアルカノイルオキシアルキルエステル、シクロアルカノイルオキ
シアルキルエステル、アロイルオキシアルキルエステルもしくはアリールアルキルカルボ
ニルオキシアルキルエステルである。好ましいアミドカルボキシ保護基は、低級アルキル
アミノカルボニル基である。例えば、アスパラギン酸は、酸不安定基（例えば、ｔ−ブチ
ル基）によりα−Ｃ−末端にて保護され得、そして水素化不安定基（例えば、ベンジル基
）によりβ−Ｃ−末端にて保護され得、次いで、合成中に選択的に脱保護され得る。
【０１３２】
（Ｂ．ペプチドの改変）
本発明の改変されたペプチドを生成する様式は、そのペプチドを含む種々の要素の性質
に依存して、広範に変動する。合成手順は、単純であるように、高収率を提供するように
、そして高度に精製された安定な生成物を可能とするように、選択される。通常、化学反
応基は、合成の最終段階として、例えば、カルボキシル基を用いて作製され、エステル化
されて活性エステルを形成する。本発明の改変されたペプチドの生成のための特定の方法
を、以下に記載する。
【０１３３】
詳細には、選択されたペプチドは、抗ウイルス活性について最初にアッセイされ、次い
でこのペプチドのＮ末端、Ｃ末端または内側のいずれかのみで、連結基を用いて改変され
る。次いで、この改変されたペプチド連結基の抗ウイルス活性がアッセイされる。抗ウイ
ルス活性が劇的に減少（すなわち、１０分の１未満に減少）されない場合、次いで改変さ
れたペプチド連結基の安定性が、そのインビボ寿命によって測定される。この安定性が所
望のレベルまで向上しない場合、次いでこのペプチドは、代替の部位で改変され、そして
所望のレベルの抗ウイルスおよび安定性が達成されるまでこの手順が繰り返される。
【０１３４】
より詳細には、リンカーおよび反応基での改変を受けさせるために選択された各ペプチ
ドを、以下の基準に従って改変する：末端のカルボン酸基が、ペプチドにおいて利用可能
であり、そしてこの末端のカルボン酸基が抗ウイルス活性の保持に重要ではなく、そして
他の感受性官能基がペプチドに存在しない場合、このカルボン酸を、リンカー反応基改変
のための結合部位として選択する。末端のカルボン酸基が抗ウイルス活性に関与している
場合、またはカルボン酸が利用可能ではない場合、抗ウイルス活性の保持に重要ではない
任意の他の感受性反応基を、リンカー反応要素改変のための結合部位として選択する。い
くつかの感受性官能基がペプチドにおいて利用可能である場合、リンカー／反応要素の付
加および保護されたすべての感受性官能基の脱保護後に、抗ウイルス活性の保持がなお得
られるような様式で、保護基の組み合わせが使用される。感受性官能基がペプチドにおい
て利用可能ではない、またはより単純な改変経路が所望される場合、合成的な試みが、抗
ウイルス活性の保持が維持されるような様式での本来のペプチドの改変を可能にする。こ
の場合、改変は、ペプチドの反対の末端において生じる。
【０１３５】
ＮＨＳ誘導体は、ペプチドにおいて、他の感受性官能基の不在下でカルボン酸から合成
され得る。特に、このようなペプチドは、無水ＣＨ2Ｃｌ2およびＥＤＣ中でＮ−ヒドロキ
シスクシンイミドと反応し、そしてこの生成物は、クロマトグラフィーによって精製され
るか、またはＮＨＳ誘導体を与えるに適切な溶媒系から再結晶化される。
【０１３６】
あるいは、ＮＨＳ誘導体は、アミノ基および／またはチオール基、ならびにカルボン酸
を含むペプチドから合成され得る。分子中に遊離のアミノ基またはチオール基が存在する
場合、ＮＨＳ誘導体の付加を実施する前に、これらの感受性官能基を保護することが好ま
しい。例えば、分子が遊離アミノ基を含む場合、Ｆｍｏｃまたは好ましくはｔＢｏｃ保護
アミンへのアミンの転換が、上記化学を実施する前に必要とされる。アミン官能基（ｆｕ
ｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）は、ＮＨＳ誘導体の調製後に脱保護されない。従って、この方
法は、所望される抗ウイルス効果を誘導するために、アミン基が遊離状態であることが必
要とされない化合物のみに対して適用される。アミノ基が、分子の本来の特性を保持する
ために遊離状態であることが必要とされる場合、以下に記載された別の型の化学が実施さ
れなければならない。
【０１３７】
さらに、ＮＨＳ誘導体は、アミノ基またはチオール基を含み、そしてカルボン酸を含ま
ないペプチドから合成され得る。選択された分子が、カルボン酸を含まない場合、一連の
二官能性リンカーを使用して、その分子を反応性ＮＨＳ誘導体へと変換し得る。例えば、
ＤＭＦ中に溶解され、そして遊離アミノ含有分子に付加されたエチレングリコールビス（
スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）およびトリエチルアミン（ＥＧＳの方が有利
なように、１０：１の比率で）は、モノＮＨＳ誘導体を生成する。チオール誘導体化分子
からＮＨＳ誘導体を生成するためには、ＤＭＦ中のＮ−［−マレイミドブチリルオキシ］
スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）およびトリエチルアミンが使用され得る。マレイミ
ド基は、遊離チオールと反応し、そしてＮＨＳ誘導体は、シリカでのクロマトグラフィー
によってか、またはＨＰＬＣによって反応混合物から精製される。
【０１３８】
ＮＨＳ誘導体はまた、複数の感受性官能基を含むペプチドから合成され得る。各々の場
合に、異なる様式で分析および解明がなされなければならない。しかし、市販されている
多量の保護基および二官能性リンカーのお陰により、本発明は、ペプチドを改変するため
に、好ましくはわずか１つの化学的工程で（上記に記載されるように）、または２工程（
上記に記載され、感受性基の予めの保護を含む）もしくは３工程（保護、活性化、および
脱保護）で、任意のペプチドに適用可能である。例外的な状況下でのみ、ペプチドを活性
ＮＨＳまたはマレイミド誘導体に転換するために、複数の（３工程を超える）合成工程が
必要とされる。
【０１３９】
マレイミド誘導体はまた、遊離アミノ基および遊離カルボン酸を含むペプチドから合成
され得る。アミノ誘導体化分子からマレイミド誘導体を生成するためには、ＤＭＦ中のＮ
−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）およびトリエ
チルアミンが使用され得る。スクシンイミドエステル基は遊離アミノと反応し、そしてマ
レイミド誘導体は、結晶化によってか、またはシリカでのクロマトグラフィーによってか
、またはＨＰＬＣによって、反応混合物から精製される。
【０１４０】
最後に、マレイミド誘導体は、複数の他の感受性官能基を含み、そして遊離カルボン酸
を含まないペプチドから合成され得る。選択された分子が、カルボン酸を含まない場合、
一連の二官能性架橋試薬を使用して、分子を反応性ＮＨＳ誘導体に変換し得る。例えば、
ＤＭＦ中でのＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ活性化を使用して、マレイミドプロピオン酸
（ＭＰＡ）を、遊離アミンにカップリングし、遊離アミンとＭＰＡのカルボン酸基との反
応を通してマレイミド誘導体を生成し得る。
【０１４１】
多くの他の市販されるヘテロ二官能性架橋試薬が、必要とされる場合に代替的に使用さ
れ得る。多数の二官能性化合物が、実体への架橋のために利用可能である。例示的な試薬
としては、以下が挙げられる：アジドベンゾイルヒドラジド、Ｎ−［４−（ｐ−アジドサ
リチルアミノ）ブチル］−３’−［２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）、ビス−
スルホスクシンイミジルスベレート（ｓｕｂｅｒａｔｅ）、ジメチルアジピイミデート（
ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ）、ジスクシンイミジル酒石酸塩、Ｎ−ｙ−マレイミドブチリル
オキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベ
ンゾエート、Ｎ−スクシンイミジル［４−アジドフェニル］−１，３’−ジチオプロピオ
ネート、Ｎ−スクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、グルタルア
ルデヒド、およびスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−
カルボキシレート。
【０１４２】
（６．改変された抗ウイルスペプチドの使用）
本発明の改変された抗ウイルスペプチドは、ウイルス感染を患っている患者の処置にお
いて治療剤として使用され得、そして以下に記載される方法および当該分野において公知
の他の方法に従って患者に投与され得る。改変されたペプチドの有効な治療的投薬量は、
当業者に周知の手順を通して決定され得、そしてこのペプチドの潜在的な毒性に関する任
意の懸念を考慮に入れる。
【０１４３】
改変されたペプチドはまた、以前に感染していない個体に予防的に投与され得る。この
ことは、個体がウイルス伝染の高い危険がある感染した個体と接触した場合に起こり得る
ように、個体がウイルスに曝される高い危険性に供されている場合に有利であり得る。こ
のことは、ウイルス（例えば、ＨＩＶウイルス）に対する公知の治療法がある場合に特に
有利であり得る。例として、改変された抗ＨＩＶペプチドの予防的な投与は、ヘルスケア
労働者がＨＩＶ感染個体由来の血液に曝された状況において、または個体をＨＩＶウイル
スに潜在的に曝す高リスクの活動にその個体が従事する他の状況において有利である。
【０１４４】
（７．改変された抗ウイルスペプチドおよび抗膜融合性ペプチドの投与）
一般的に、改変された治療ペプチドは、生理学的に受容可能な媒体（例えば、脱イオン
水、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水、水性エタノールまたは他のアルコ
ール、血漿、蛋白様溶液、マンニトール、水性グルコース、アルコール、植物油など）中
で投与される。含まれ得る他の添加物としては、緩衝液（この媒体は、約５〜１０の範囲
のｐＨで一般的に緩衝化され、緩衝液は一般に約５０〜２５０ｍＭの濃度の範囲である）
、塩（塩の濃度は、一般に約５〜５００ｍＭの範囲である）、生理的に受容可能な安定剤
などが挙げられる。組成物は、都合の良い保存および輸送のために凍結乾燥され得る。
【０１４５】
対象の改変されたペプチドは、大部分について、非経口的に（例えば、脈管内に（ＩＶ
）、動脈内に（ＩＡ）、筋肉内に（ＩＭ）、皮下に（ＳＣ）など）投与される。投与は、
適切な場合には、輸注により得る。いくつかの場合において（ここで、官能基の反応は比
較的緩慢である）、投与は、経口的、経鼻的、直腸的、経皮的またはエーロゾルであり得
、ここで結合体の性質は、脈管系への移動を可能にする。通常、一回の注入が使用される
が、所望の場合、１回より多い注入が用いられ得る。改変されたペプチドは、任意の都合
のよい手段（注射器、トロカール、カテーテルなどを含む）により投与され得る。
【０１４６】
投与の特定の様式は、投与されるべき量、１回のボーラスであるかまたは継続的な投与
であるかなどに依存して変化する。好ましくは、投与は、脈管内であり（この導入の部位
は、本発明に対して重要なものではない）、好ましくは急速な血流が存在する部位（例え
ば、静脈内、末梢静脈または中心静脈）である。他の経路は、投与が、遅延性放出技術ま
たは保護マトリックスと結びつけられる使用を見出し得る。この意図は、改変されたペプ
チドが血液中で効率的に分布されることであり、その結果、血液成分と反応し得る。結合
体の濃度は、一般的に約１ｐｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌで、広範に変化する。脈管内に投
与される総量は、一般に約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、より通常では、約１ｍ
ｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌの範囲である。
【０１４７】
血液の永続成分（例えば、免疫グロブリン、血清アルブミン、赤血球および血小板）を
結合することにより、多数の利点が結果として生じる。ペプチドの活性は、数日〜数週間
延長される。１回の投与のみ、この期間に与えられる必要がある。活性化合物は、大きい
分子に主に結合されることから（ここでは、他の生理学的プロセスを妨げるように細胞内
に取り込まれる可能性が低い）、より優れた特異性が達成され得る。
【０１４８】
（８．改変されたペプチドの存在のモニタリング）
哺乳動物宿主の血液は、１回以上、改変されたペプチド化合物の存在についてモニター
され得る。宿主の血液の一部分またはサンプルを採取することにより、ペプチドが治療的
に活性であるのに十分な量で永続血液成分に結合されているか否かを決定し得、そしてそ
の後、血液中のペプチド成分のレベルを決定し得る。所望される場合、ペプチドがどの血
液成分に結合されるかもまた決定され得る。これは、非特異的改変ペプチドを使用する場
合に特に重要である。特定のマレイミド改変ペプチドに関して、血清アルブミンおよびＩ
ｇＧの半減期を算出することは、はるかに簡単である。
【０１４９】
（Ａ．免疫アッセイ）
本発明の別の局面は、抗ウイルスペプチドおよび／もしくはアナログ、またはそれらの
誘導体および結合体の、生物学的サンプル（例えば、血液）における濃度を、これらのペ
プチド、ペプチドアナログ、またはそれらの誘導体および結合体に対して特異的な抗体を
用いて決定する方法、ならびにこのようなペプチド、アナログおよび／またはこれらの誘
導体もしくは結合体に強力に結合する、毒性についての処置としてのこのような抗体の使
用に関する。患者におけるインビボでのこのペプチドの増加した安定性および寿命は、処
置の間の新しい問題（毒性に関する増加した可能性を含む）を導き得るので、このことは
有利である。
【０１５０】
特定のペプチド、そのペプチドアナログまたは誘導体に特異性を有する抗治療薬剤抗体
（モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれか）の使用は、任意のこのよう
な問題を仲裁する際に補助し得る。抗体は、特定のペプチド、そのアナログもしくは誘導
体を用いて、またはその因子の免疫原性フラグメント、あるいはこの因子の抗原決定基に
対応する合成された免疫原を用いて免疫された宿主から生成され得るか、またはそれらに
由来し得る。好ましい抗体は、ペプチドまたはペプチドアナログもしくは誘導体のネイテ
ィブな形態、改変形態、および結合体化形態に対して、高い特異性および親和性を有する
。このような抗体はまた、酵素、蛍光色素、または放射性標識を用いて標識され得る。
【０１５１】
改変されたペプチドに特異的な抗体は、ペプチド特異的抗体の誘導のために精製された
ペプチドを使用するすることにより、産生され得る。抗体の誘導により、動物中への注射
による免疫応答の刺激のみならず、合成抗体または他の特異的結合分子の産生における類
似の工程（例えば、組換え免疫グロブリンライブラリーのスクリーニング）も意図される
。モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体の両方が、当該分野で周知の手順により
産生され得る。
【０１５２】
抗ペプチド抗体が、改変されたペプチド、そのアナログまたは誘導体の投与により誘導
された毒性を処置するために使用され得、そしてエキソビボまたはインビボで使用され得
る。エキソビボの方法は、固体支持体に固定された抗治療薬剤抗体を使用する、毒性に対
する免疫透析処置を含む。インビボの方法は、抗体−薬剤複合体のクリアランスを誘導す
るのに有効な量の抗治療薬剤抗体の投与を含む。
【０１５３】
抗体は、無菌条件下で抗体と血液を接触させることにより、エキソビボで患者の血液か
ら、改変されたペプチド、そのアナログまたは誘導体、およびその結合体を除去するため
に使用され得る。例えば、抗体は、カラムマトリックス上に固着（ｆｉｘ）され得るかま
たはさもなくば固定化（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅ）され得、そして患者の血液が、その患者
から取り出され得、そしてそのマトリックスに通過され得る。改変されたペプチド、ペプ
チドアナログ、誘導体または結合体が、抗体に結合しそして低濃度のペプチド、アナログ
、誘導体または結合体を含む血液が、次いで、患者の循環系に戻され得る。除去されるペ
プチド化合物の量は、圧力および流速を調整することにより、制御され得る。
【０１５４】
患者の血液の血漿成分由来のペプチド、アナログ、誘導体および結合体の優先的な除去
は、例えば、半透膜の使用により、またはさもなくば、抗治療抗体を含むマトリックスを
血漿成分が通過する前に、当該分野で公知の方法により細胞成分から血漿成分をまず分離
することにより、もたらされ得る。あるいは、ペプチド結合体化血球（赤血球細胞を含む
）の優先的な除去は、患者の血液中の血球を回収し、そして濃縮し、ならびに患者の血液
の血清成分の排除に対してそれらの細胞を、固着された抗治療抗体と接触させることによ
りもたらされ得る。
【０１５５】
抗治療抗体は、処置のために、ペプチド、アナログ、誘導体または結合体を受容してい
る患者に、インビボで非経口的に投与され得る。抗体は、ペプチド化合物および結合体に
結合する。一旦ペプチドに結合されると、活性は、完全にはブロックされないとしても、
妨げられ、それにより患者の血流中のペプチド化合物の生物学的有効濃度を低減し、そし
て有害な副作用を最少にする。さらに、結合された抗体−ペプチド複合体は、患者の血流
からのペプチド化合物および結合体のクリアランスを容易にする。
【０１５６】
十分に記載されてきた本発明は、以下の非限定的な実施例を参照することにより、さら
に認識および理解され得る。
【実施例】
【０１５７】
（実施例１）
改変されたＤＰ１７８の調製−−
【０１５８】
【化１１】
2009167208.tif 000013
の合成
この実施例において、ＤＰ１７８（配列番号１）を、以下の合成スキームに従って、リ
ンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２
３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、ＤＰ１７８は、ＨＩＶ−１
の強力なインヒビターであり、そしてＨＩＶ−１に感染した細胞と感染していない細胞と
の間の細胞誘導シンチウム形成および無細胞ＨＩＶ−１ウイルスによる感染していない細
胞の感染の両方を阻害する。
【０１５９】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１６０】
【化１２】
2009167208.tif 000014
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。この合成の
終わりに。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５
ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（
ＰＰｈ3）4の溶液で２時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣ
ＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍ
Ｌ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロ
ピオン酸の添加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄
する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェ
ノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（
工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜
５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％
ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕ
ｎａ  １０μフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２
５４ｎｍでＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使
用して、所望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬ
Ｃにより決定）で得る。
【０１６１】
【化１３】
2009167208.tif 000015
（実施例２）
改変されたＤＰ１０７の調製−−
【０１６２】
【化１４】
2009167208.tif 000016
の合成
この実施例において、ＤＰ１０７（配列番号２）を、以下の合成スキームに従って、リ
ンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２
３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、ＤＰ１０７は、ＨＩＶに対
する強力な抗ウイルス活性を示す。
【０１６３】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１６４】
【化１５】
2009167208.tif 000017
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。この合成の
終わりに。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５
ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（
ＰＰｈ3）4の溶液で２時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣ
ＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍ
Ｌ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロ
ピオン酸の添加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄
する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェ
ノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（
工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜
５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％
ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕ
ｎａ  １０μフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２
５４ｎｍでＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使
用して、所望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬ
Ｃにより決定）で得る。
【０１６５】
【化１６】
2009167208.tif 000018
（実施例３）
（改変された抗ＲＳＶペプチド（Ｃ末端）の調製）
この実施例において、ペプチド
【０１６６】
【化１７】
2009167208.tif 000019
（配列番号１６）を、以下の合成スキームに従って、リンカーおよびマレイミド基を含む
ように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６号および同第６，０２０，４
５９号に報告されるように、ネイティブ配列（配列番号  ）は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）
のウイルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細胞と感染していないＨｅｐ−２細胞との間の融
合およびシンチウム形成の阻害を含む）。
【０１６７】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１６８】
【化１８】
2009167208.tif 000020
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０１６９】
【化１９】
2009167208.tif 000021
（実施例４）
（改変された抗ＲＳＶペプチド（Ｔ−Ｎ末端）の調製）
この実施例において、ペプチド
【０１７０】
【化２０】
2009167208.tif 000022
（配列番号１７）（これは，配列番号１６のペプチドに対応するが、ここでメチオニン（
Ｍ）残基は、システイン（Ｃ）残基で置換されている）を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３
，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、ネイティブ配列（配列
番号１６）は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）のウイルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細胞と感
染していないＨｅｐ−２細胞との間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。
【０１７１】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１７２】
【化２１】
2009167208.tif 000023
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０１７３】
【化２２】
2009167208.tif 000024
（実施例５）
（改変された抗ＲＳＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号１４を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号１４は、ＲＳウイルス
（ＲＳＶ）のウイルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細胞と感染していないＨｅｐ−２細胞
との間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。
【０１７４】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１７５】
【化２３】
2009167208.tif 000025
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０１７６】
【化２４】
2009167208.tif 000026
（実施例６（Ｔ−１４３））
（改変された抗ＲＳＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号１５を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号１５は、ＲＳウイルス
（ＲＳＶ）のウイルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細胞と感染していないＨｅｐ−２細胞
との間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。
【０１７７】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１７８】
【化２５】
2009167208.tif 000027
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０１７９】
【化２６】
2009167208.tif 000028
（実施例７）
（改変された抗ＲＳＶペプチドの調製（Ｃ末端））
この実施例において、ペプチド配列番号１７（これは、メチオニン（Ｍ）がシステイン
（Ｃ）で置換された配列番号１６に対応する）を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、ネイティブ配列（配列番号１６
）は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）のウイルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細胞と感染してい
ないＨｅｐ−２細胞との間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。
【０１８０】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１８１】
【化２７】
2009167208.tif 000029
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０１８２】
【化２８】
2009167208.tif 000030
（実施例８）
（改変された抗ＲＳＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号２９を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号２９は、ＲＳウイルス
（ＲＳＶ）のウイルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細胞と感染していないＨｅｐ−２細胞
との間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。
【０１８３】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１８４】
【化２９】
2009167208.tif 000031
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０１８５】
【化３０】
2009167208.tif 000032
（実施例９（Ｔ−１７３））
（改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号５２を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号５２は、ヒトパライン
フルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ
−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む
）。
【０１８６】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１８７】
【化３１】
2009167208.tif 000033
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０１８８】
【化３２】
2009167208.tif 000034
（実施例１０）
（改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号５８を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号５８は、ヒトパライン
フルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ
−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む
）。
【０１８９】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１９０】
【化３３】
2009167208.tif 000035
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０１９１】
【化３４】
2009167208.tif 000036
（実施例１１）
（改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号３５を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号３５は、ヒトパライン
フルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ
−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む
）。
【０１９２】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１９３】
【化３５】
2009167208.tif 000037
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０１９４】
【化３６】
2009167208.tif 000038
（実施例１２）
（改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号３８を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号３８は、ヒトパライン
フルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ
−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む
）。
【０１９５】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１９６】
【化３７】
2009167208.tif 000039
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０１９７】
【化３８】
2009167208.tif 000040
（実施例１３）
（改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号３９を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号３９は、ヒトパライン
フルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ
−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む
）。
【０１９８】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０１９９】
【化３９】
2009167208.tif 000041
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２００】
【化４０】
2009167208.tif 000042
（実施例１４）
（改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号４０を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号  は、ヒトパラインフ
ルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ−
２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）
。
【０２０１】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２０２】
【化４１】
2009167208.tif 000043
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２０３】
【化４２】
2009167208.tif 000044
（実施例１５）
（改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号４１を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号４１は、ヒトパライン
フルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ
−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む
）。
【０２０４】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２０５】
【化４３】
2009167208.tif 000045
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２０６】
【化４４】
2009167208.tif 000046
（実施例１６）
（改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号４２を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号４２は、ヒトパライン
フルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ
−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む
）。
【０２０７】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２０８】
【化４５】
2009167208.tif 000047
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２０９】
【化４６】
2009167208.tif 000048
（実施例１７）
（改変された抗ＭｅＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号７７を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号７７は、はしかウイル
ス（ＭｅＶ）のウイルス感染を阻害する（ＭｅＶ感染細胞と感染していないＶｅｒｏ細胞
の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。
【０２１０】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２１１】
【化４７】
2009167208.tif 000049
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２１２】
【化４８】
2009167208.tif 000050
（実施例１８）
（改変された抗ＭｅＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号７９を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号７９は、はしかウイル
ス（ＭｅＶ）のウイルス感染を阻害する（ＭｅＶ感染細胞と感染していないＶｅｒｏ細胞
の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。
【０２１３】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２１４】
【化４９】
2009167208.tif 000051
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２１５】
【化５０】
2009167208.tif 000052
（実施例１９）
（改変された抗ＭｅＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号８１を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号７９は、はしかウイル
ス（ＭｅＶ）のウイルス感染を阻害する（ＭｅＶ感染細胞と感染していないＶｅｒｏ細胞
の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。
【０２１６】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２１７】
【化５１】
2009167208.tif 000053
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２１８】
【化５２】
2009167208.tif 000054
（実施例２０）
（改変された抗ＭｅＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号８４を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号８４は、はしかウイル
ス（ＭｅＶ）のウイルス感染を阻害する（ＭｅＶ感染細胞と感染していないＶｅｒｏ細胞
の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。
【０２１９】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２２０】
【化５３】
2009167208.tif 000055
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２２１】
【化５４】
2009167208.tif 000056
（実施例２１）
（改変された抗ＳＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号６４を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号６４は、サル免疫不全
ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイルス活性を示す。
【０２２２】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２２３】
【化５５】
2009167208.tif 000057
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２２４】
【化５６】
2009167208.tif 000058
（実施例２２）
（改変された抗ＳＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号６５を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号６５は、サル免疫不全
ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイルス活性を示す。
【０２２５】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２２６】
【化５７】
2009167208.tif 000059
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２２７】
【化５８】
2009167208.tif 000060
（実施例２３）
（改変された抗ＳＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号６６を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号６６は、サル免疫不全
ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイルス活性を示す。
【０２２８】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２２９】
【化５９】
2009167208.tif 000061
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２３０】
【化６０】
2009167208.tif 000062
（実施例２４）
（改変された抗ＳＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号６７を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号６７は、サル免疫不全
ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイルス活性を示す。
【０２３１】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２３２】
【化６１】
2009167208.tif 000063
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２３３】
【化６２】
2009167208.tif 000064
（実施例２５）
（改変された抗ＳＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号６８を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号６８は、サル免疫不全
ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイルス活性を示す。
【０２３４】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２３５】
【化６３】
2009167208.tif 000065
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２３６】
【化６４】
2009167208.tif 000066
（実施例２６）
（改変された抗ＳＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号６９を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号６９は、サル免疫不全
ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイルス活性を示す。
【０２３７】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２３８】
【化６５】
2009167208.tif 000067
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２３９】
【化６６】
2009167208.tif 000068
（実施例２７）
（改変された抗ＳＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号７０を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号７０は、サル免疫不全
ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイルス活性を示す。
【０２４０】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２４１】
【化６７】
2009167208.tif 000069
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２４２】
【化６８】
2009167208.tif 000070
（実施例２８）
（改変された抗ＳＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号７１を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号７１は、サル免疫不全
ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイルス活性を示す。
【０２４３】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２４４】
【化６９】
2009167208.tif 000071
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２４５】
【化７０】
2009167208.tif 000072
（実施例２９）
（改変された抗ＳＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号７２を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号７２は、サル免疫不全
ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイルス活性を示す。
【０２４６】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２４７】
【化７１】
2009167208.tif 000073
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２４８】
【化７２】
2009167208.tif 000074
（実施例３０）
（改変された抗ＳＩＶペプチドの調製）
この実施例において、ペプチド配列番号７３を、以下の合成スキームに従って、リンカ
ーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６
号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列番号７３は、サル免疫不全
ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイルス活性を示す。
【０２４９】
１００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固相合成、
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎ
ｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護されたアミノ酸を順番に樹脂に添
加する：
【０２５０】
【化７３】
2009167208.tif 000075
これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用
して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ3：Ｎ
ＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２
時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加の間、
再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂
から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（
Ｈ2Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１
８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所望の改変さ
れたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る
。
【０２５１】
【化７４】
2009167208.tif 000076
本発明の特定の実施形態が記載されそして例示されてきたが、当業者は、本発明がこれ
らの実施形態のいずれかの特定のものに限定されることを意図されず、添付の特許請求の
範囲によりむしろ規定されるということを理解する。
【０２５２】
【表２】
2009167208.tif 000077
2009167208.tif 000078
【０２５３】
【表３】
2009167208.tif 000079
2009167208.tif 000080
【０２５４】
【表４】
2009167208.tif 000081
2009167208.tif 000082
【０２５５】
【表５】
2009167208.tif 000083
2009167208.tif 000084
【０２５６】
【表６】
2009167208.tif 000085
2009167208.tif 000086
【０２５７】
【表７】
2009167208.tif 000087
2009167208.tif 000088
【０２５８】
【表８】
2009167208.tif 000089
2009167208.tif 000090
【０２５９】
【表９】
2009167208.tif 000091
2009167208.tif 000092
【０２６０】
【表１０】
2009167208.tif 000093
2009167208.tif 000094
【０２６１】
【表１１】
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【０２６２】
【表１２】
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【０２６３】
【表１３】
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【０２６４】
【表１４】
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【０２６５】
【表１５】
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【０２６６】
【表１６】
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【０２６７】
【表１７】
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【０２６８】
【表１８】
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【０２６９】
【表１９】
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【配列表】
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