(57)【要約】【課題】新規な骨格を有し、S1P受容体アゴニスト活性を有し、免疫抑制剤として優れた効果を発揮し、副作用が少なく、かつ経口投与が可能な化合物、その塩またはそれらの溶媒和物を提供すること。【解決手段】  一般式（Ｉ）：【化１】2009263261.tif 000025で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2009263261.tif 000024
（式中、
R1は、水素原子、C1〜C3アルキル基、ハロゲノC1〜C3アルキル基またはシクロプロピル基であり、
R2は、水素原子、ハロゲン原子、C1〜C3アルキル基、ハロゲノC1〜C3アルキル基、C1〜C3アルコキシ基またはハロゲノC1〜C3アルコキシ基であり、
R3は、同一または異なって、ハロゲン原子；C3〜C8シクロアルキル基を置換基として１個有していてもよいC1〜C6アルキル基；ハロゲノC1〜C6アルキル基；C1〜C3アルキル基を置換基として１個有していてもよいC3〜C8シクロアルキル基；C1〜C6アルコキシ基；ハロゲノC1〜C6アルコキシ基；C3〜C8シクロアルコキシ基；シアノ基；フェニルオキシ基；ピペリジニル基またはピロリジニル基であり、
nは、2または3の整数である）
で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
R1が水素原子またはC1〜C3アルキル基である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項３】
R1がメチル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
R2が水素原子またはC1〜C3アルキル基である、請求項１〜３いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項５】
R2が水素原子である、請求項１〜３いずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
R3が、同一または異なって、C1〜C6アルキル基、ハロゲノC1〜C6アルキル基、C3〜C8シクロアルキル基またはハロゲノC1〜C6アルコキシ基である、請求項１〜５いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項７】
R3が、同一または異なって、イソプロピル基、イソブチル基、トリフルオロメチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、トリフルオロメトキシ基またはジフルオロメトキシ基である、請求項１〜５いずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
nが2である、請求項１〜７いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項９】
以下：
(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸；
(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸；
(2S,5S)-1-シクロプロピル-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸；
(2S,5S)-5-[5-[(4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸；
(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチル-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸；
(2S,5S)-5-[5-[(4-イソプロポキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸；
(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチルオキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸；
(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[[4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシフェニル]メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸；および
(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[[4-(ピロリジン-1-イル)-3-トリフルオロメチルフェニル]メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸；
からなる群より選択される化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項１１】
免疫を抑制するため、移植に対する拒絶反応を抑制するため、あるいは、自己免疫性疾患もしくはアレルギー性疾患を予防および／または治療するために用いられる、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
免疫抑制剤、免疫抑制に用いる抗体、拒絶反応治療薬、抗生物質およびステロイド薬から選択される１種または２種以上をさらに含有する、請求項１０または１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
免疫を抑制するため、移植に対する拒絶反応を抑制するため、あるいは、自己免疫性疾患もしくはアレルギー性疾患を予防および／または治療するための医薬組成物を製造するための、請求項１〜９いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩の使用。
【請求項１４】
免疫抑制剤、免疫抑制に用いる抗体、拒絶反応治療薬、抗生物質およびステロイド薬から選択される１種または２種以上をさらに含有する医薬組成物を製造するための、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
請求項１〜９いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩の治療有効量を、哺乳動物に投与することを含む、疾患の予防および／または治療方法。
【請求項１６】
疾患が移植に対する拒絶反応、自己免疫性疾患またはアレルギー性疾患である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
免疫抑制剤、免疫抑制に用いる抗体、拒絶反応治療薬、抗生物質およびステロイド薬から選択される１種または２種以上の治療有効量を、さらに投与することを含む、請求項１５または１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スフィンゴシン-1-リン酸（以下、S1Pという）受容体アゴニスト活性を有し、免疫抑制剤として用いることができる新規なピロリジン誘導体、その薬学的に許容され得る塩またはこれらの溶媒和物、あるいはこれらを有効成分として含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
S1P受容体は、G蛋白共役型受容体であるEndothelial Differentiation Gene（EDG）ファミリーに属し、S1P1、S1P2、S1P3、S1P4およびS1P5の５種類のサブタイプからなり、それぞれEDG-1、EDG-5、EDG-3、EDG-6およびEDG-8とも呼ばれている。
【０００３】
スフィンゴシン類似構造を持つFTY720（2-アミノ-2-〔2-(4-オクチルフェニル)エチル〕-1,3-プロパンジオール塩酸塩）は、以前より免疫抑制作用を有することが知られていた（例えば、特許文献１参照）。FTY720はin vitroではIL-2などのサイトカインの産生を抑制する作用を示さず、既存の免疫抑制剤であるFK506やサイクロスポリンとは異なる作用機作で免疫抑制作用を示すと考えられていた。最近になって、FTY720は生体内でリン酸化され、S1P受容体アゴニストとして作用し、血中のリンパ球数減少を誘導することにより、免疫抑制作用を示すことが明らかとなった（例えば、非特許文献１参照）。FTY720は、移植および多発性硬化症を対象として臨床試験が行なわれているが、副作用として徐脈が起きることが報告されている（例えば、非特許文献２参照）。そこでかかる問題点を克服し、かつ高い効果を示す新しい免疫抑制剤の開発が望まれている。
【０００４】
また、S1P1（EDG-1）受容体アゴニスト作用を有するカルボン酸誘導体、プロピオン酸誘導体など、S1P4（EDG-6）受容体結合能を有するカルボン酸誘導体などが免疫抑制作用を発現することが知られているが（例えば、特許文献２〜８参照）、優れた効果を発揮し、副作用が少なく、かつ経口投与可能な新規な低分子S1P受容体アゴニスト化合物が望まれている。また、上記特許文献にはピロリジン誘導体については何ら開示されていない。
【特許文献１】国際公開第94/008943号パンフレット
【特許文献２】国際公開第05/000833号パンフレット
【特許文献３】国際公開第05/020882号パンフレット
【特許文献４】国際公開第04/058149号パンフレット
【特許文献５】国際公開第07/091396号パンフレット
【特許文献６】国際公開第07/120473号パンフレット
【特許文献７】国際公開第07/129745号パンフレット
【特許文献８】特開2007-262009号公報
【非特許文献１】Science, 296, 346-349(2002)
【非特許文献２】Journal of the American Society of Nephrology, 13(4), 1073-1083(2002)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、新規な骨格を有し、S1P受容体アゴニスト活性を有し、免疫抑制剤として優れた効果を発揮し、副作用が少なく、かつ経口投与が可能な化合物、その塩またはそれらの溶媒和物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、
（１）一般式（Ｉ）：
【０００７】
【化１】
2009263261.tif 000002
【０００８】
（式中、
R1は、水素原子、C1〜C3アルキル基、ハロゲノC1〜C3アルキル基またはシクロプロピル基であり、
R2は、水素原子、ハロゲン原子、C1〜C3アルキル基、ハロゲノC1〜C3アルキル基、C1〜C3アルコキシ基またはハロゲノC1〜C3アルコキシ基であり、
R3は、同一または異なって、ハロゲン原子；C3〜C8シクロアルキル基を置換基として１個有していてもよいC1〜C6アルキル基；ハロゲノC1〜C6アルキル基；C1〜C3アルキル基を置換基として１個有していてもよいC3〜C8シクロアルキル基；C1〜C6アルコキシ基；ハロゲノC1〜C6アルコキシ基；C3〜C8シクロアルコキシ基；シアノ基；フェニルオキシ基；ピペリジニル基またはピロリジニル基であり、
nは、2または3の整数である）
で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、
（２）R1が水素原子またはC1〜C3アルキル基である、前記（１）に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、
（３）R1がメチル基である、前記（１）に記載の化合物、
（４）R2が水素原子またはC1〜C3アルキル基である、前記（１）〜（３）いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、
（５）R2が水素原子である、前記（１）〜（３）いずれか１項に記載の化合物、
（６）R3が、同一または異なって、C1〜C6アルキル基、ハロゲノC1〜C6アルキル基、C3〜C8シクロアルキル基またはハロゲノC1〜C6アルコキシ基である、請求項１〜５いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、
（７）R3が、同一または異なって、イソプロピル基、イソブチル基、トリフルオロメチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、トリフルオロメトキシ基またはジフルオロメトキシ基である、前記（１）〜（５）いずれか１項に記載の化合物、
（８）nが2である、前記（１）〜（７）いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、
（９）以下：
(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸、(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸、(2S,5S)-1-シクロプロピル-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸、(2S,5S)-5-[5-[(4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸、(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチル-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸、(2S,5S)-5-[5-[(4-イソプロポキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸、(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチルオキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸、(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[[4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシフェニル]メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸および(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[[4-(ピロリジン-1-イル)-3-トリフルオロメチルフェニル]メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸からなる群より選択される化合物、
（１０）前記（１）〜（９）いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を有効成分として含有する医薬組成物、
（１１）免疫を抑制するため、移植に対する拒絶反応を抑制するため、あるいは、自己免疫性疾患もしくはアレルギー性疾患を予防および／または治療するために用いられる、前記（１０）に記載の医薬組成物、
（１２）免疫抑制剤、免疫抑制に用いる抗体、拒絶反応治療薬、抗生物質およびステロイド薬から選択される１種または２種以上をさらに含有する、前記（１０）または（１１）に記載の医薬組成物、
（１３）免疫を抑制するため、移植に対する拒絶反応を抑制するため、あるいは、自己免疫性疾患もしくはアレルギー性疾患を予防および／または治療するための医薬組成物を製造するための、前記（１）〜（９）いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩の使用、
（１４）免疫抑制剤、免疫抑制に用いる抗体、拒絶反応治療薬、抗生物質およびステロイド薬から選択される１種または２種以上をさらに含有する医薬組成物を製造するための、前記（１３）に記載の使用、
（１５）前記（１）〜（９）いずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩の治療有効量を、哺乳動物に投与することを含む、疾患の予防および／または治療方法、ならびに
（１６）疾患が移植に対する拒絶反応、自己免疫性疾患またはアレルギー性疾患である、前記（１５）に記載の方法、
（１７）免疫抑制剤、免疫抑制に用いる抗体、拒絶反応治療薬、抗生物質およびステロイド薬から選択される１種または２種以上の治療有効量を、さらに投与することを含む、前記（１４）または（１５）に記載の方法
を提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、S1P受容体アゴニスト活性を有し、ラットin vivoモデルにおいて経口投与で末梢血中リンパ球数を減少させ、膜透過性に優れた新規なピロリジン誘導体を提供することができる。また、本発明により、哺乳動物、特にヒトにおける移植に対する拒絶反応、自己免疫性疾患、アレルギー性疾患を治療するためおよび／または予防するための医薬組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本明細書において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子をいう。
【００１１】
本明細書において、「C1〜C3アルキル基」とは、メチル基、エチル基、プロピル基またはイソプロピル基をいい、「C1〜C6アルキル基」とは、炭素数1〜6の直鎖状または分岐鎖状の飽和炭化水素基をいいう。
【００１２】
「C1〜C6アルキル基」としては、前記「C1〜C3アルキル基」に加え、例えば、n-ブチル基、イソブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、1-エチルプロピル基、2,2-ジメチルプロピル基などが挙げられる。
【００１３】
本明細書において、「ハロゲノC1〜C3アルキル基」とは、ハロゲン原子を置換基として有する前記C1〜C3アルキル基をいい、「ハロゲノC1〜C6アルキル基」とは、ハロゲン原子を置換基として有する前記C1〜C6アルキル基をいう。アルキル基に置換されるハロゲン原子の数は1個であっても2個以上であってもよく、2個以上である場合の各ハロゲン原子の種類は同じであってもよいし、異なっていてもよい。
【００１４】
「ハロゲノC1〜C3アルキル基」としては、例えば、クロロメチル基、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、2-クロロエチル基、2-フルオロエチル基、2,2-ジフルオロエチル基、2,2,2-トリフルオロエチル基、1,1,2,2-テトラフルオロエチル基、ペンタフルオロエチル基などが挙げられ、「ハロゲノC1〜C6アルキル基」としては、前記「ハロゲノC1〜C3アルキル基」の例示に加え、例えば、4-フルオロブチル基、1,1-ジフルオロ-2-メチルプロピル基、6-ヨードヘキシル基などが挙げられる。
【００１５】
本明細書において、「C1〜C3アルコキシ基」とは、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基またはイソプロポキシ基をいい、「C1〜C6アルコキシ基」とは、C1〜C6アルキル基が酸素原子に結合した基をいう。
【００１６】
「C1〜C6アルコキシ基」としては、前記「C1〜C3アルコキシ基」に加え、例えば、n-ブトキシ基、イソブトキシ基、tert-ブトキシ基、n-ペンチルオキシ基、1-エチルプロポキシ基、2,2-ジメチルプロポキシ基などが挙げられる。
【００１７】
本明細書において、「ハロゲノC1〜C3アルコキシ基」とは、ハロゲン原子を置換基として有する前記C1〜C3アルコキシ基をいい、「ハロゲノC1〜C6アルコキシ基」とは、ハロゲン原子を置換基として有する前記C1〜C6アルコキシ基という。アルコキシ基に置換されるハロゲン原子の数は1個であっても2個以上であってもよく、2個以上である場合の各ハロゲン原子の種類は同じであってもよいし、異なっていてもよい。
【００１８】
「ハロゲノC1〜C3アルコキシ基」としては、例えば、クロロメトキシ基、フルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基、2-クロロエトキシ基、2,2,2-トリフルオロエトキシ基、1,1,2,2-テトラフルオロエトキシ基、ペンタフルオロエトキシ基、1,1-ジフルオロ-2-メチルプロポキシ基などが挙げられ、「ハロゲノC1〜C6アルコキシ基」としては、前記「ハロゲノC1〜C3アルコキシ基」の例示に加え、例えば、クロロメトキシ基、フルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基、2-クロロエトキシ基、2,2,2-トリフルオロエトキシ基、1,1,2,2-テトラフルオロエトキシ基、ペンタフルオロエトキシ基、1,1-ジフルオロ-2-メチルプロポキシ基などが挙げられる。
【００１９】
本明細書において「C3〜C8シクロアルキル基」とは、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基またはシクロオクチル基をいう。
【００２０】
本明細書において、「ハロゲノC3〜C8シクロアルキル基」とは、ハロゲン原子を置換基として有する前記C3〜C8シクロアルキル基をいう。シクロアルキル基に置換されるハロゲン原子の数は1個であっても2個以上であってもよく、2個以上である場合の各ハロゲン原子の種類は同じであってもよいし、異なっていてもよい。
【００２１】
「ハロゲノC3〜C8シクロアルキル基」としては、例えば、2-フルオロシクロプロピル基、2,2-ジフルオロシクロプロピル基、3-フルオロシクロブチル基、3,3-ジフルオロシクロブチル基、4-フルオロシクロヘキシル基、4,4-ジフルオロシクロヘキシル基などが挙げられる。
【００２２】
本明細書において「C3〜C8シクロアルコキシ基」とは、シクロプロピルオキシ基、シクロブチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロヘプチルオキシ基またはシクロオクチルオキシ基をいう。
【００２３】
「薬学的に許容され得る塩」とは、本発明の化合物と酸または塩基とを反応させることにより形成される塩をいう。
【００２４】
塩としては、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩；塩酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩などの低級アルカンスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩などのアリールスルホン酸塩；酢酸塩、りんご酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩；ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩などの金属塩；アンモニウム塩などの無機塩；t-オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、N-メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、N,N’-ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、N-ベンジルフェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル)アミノメタン塩などの有機塩などのアミン塩；グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸塩などが挙げられる。
【００２５】
一般式（Ｉ）で表される本発明の化合物は、大気中に放置したり、または、再結晶したりすることにより、水分を吸収して吸着水が付き、水和物となる場合があり、そのような水和物も本発明の塩に包含される。
【００２６】
一般式（Ｉ）で表される本発明の化合物は、その分子内に不斉炭素原子を有する場合があるので、光学異性体が存在する。これらの異性体、およびこれらの異性体の混合物がすべて単一の式、すなわち一般式（Ｉ）で表されている。従って、一般式（Ｉ）で表される本発明の化合物は光学異性体および光学異性体の任意の割合の混合物をもすべて含むものである。
【００２７】
R1は、好ましくは、水素原子またはC1〜C3アルキル基であり、より好ましくは、メチル基である。
【００２８】
R2は、好ましくは、水素原子またはC1〜C3アルキル基であり、より好ましくは、水素原子である。
【００２９】
R3は、好ましくは、同一または異なって、C1〜C6アルキル基、ハロゲノC1〜C6アルキル基、C3〜C8シクロアルキル基またはハロゲノC1〜C6アルコキシ基であり、より好ましくは、イソプロピル基、イソブチル基、トリフルオロメチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、トリフルオロメトキシ基またはジフルオロメトキシ基である。
【００３０】
一般式（Ｉ）における各置換基の好ましい組み合わせは、R1が水素原子またはC1〜C3アルキル基であり、R2が水素原子またはC1〜C3アルキル基であり、かつ、R3が、同一または異なって、C1〜C6アルキル基、ハロゲノC1〜C6アルキル基、C3〜C8シクロアルキル基またはハロゲノC1〜C6アルコキシ基であり、より好ましい組み合わせは、R1がメチル基であり、R2が水素原子であり、かつ、R3が、同一または異なって、イソプロピル基、イソブチル基、トリフルオロメチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、トリフルオロメトキシ基またはジフルオロメトキシ基である。
【００３１】
一般式（Ｉ）で表される本発明の化合物の具体例を表１に示す。
【００３２】
【表１】
2009263261.tif 000003
2009263261.tif 000004
2009263261.tif 000005
2009263261.tif 000006
2009263261.tif 000007
上記化合物の中で、1、23、27、33、38、40、43、45または95の化合物が好ましい。
【００３３】
本発明の化合物は、例えば、以下の方法により製造することができる。
【００３４】
【化２】
2009263261.tif 000008
【００３５】
（式中、R7は水素原子またはC1〜C6アルキル基であり、Xは水酸基または脱離基であり、P1およびP2は保護基であり、R1、R2、R3およびnは前記同様である。）
【００３６】
保護基P1としては、ベンジル基、4-メトキシベンジル基などのベンジルエーテル系保護基、メトキシメチル基、ベンジルオキシメチル基、（2-トリメチルシリルエトキシ）メチル基などのアルキルオキシメチルエーテル系保護基などが挙げられ、ベンジル基が好ましい。
【００３７】
保護基P2としては、tert-ブトキシカルボニル基（以下、Boc基という場合がある。）、ベンジルオキシカルボニル基などのカルバメート系保護基、ベンゼンスルホニル基、p-トルエンスルホニル基などのアリールスルホニル系保護基、メトキシメチル基、（2-トリメチルシリルエトキシ）メチル基などのアルキル系窒素原子保護基などが挙げられ、Boc基が好ましい。
【００３８】
脱離基Xとしては、ハロゲン原子、メタンスルホニルオキシ基、p-トルエンスルホニルオキシ基、ベンゼンスルホニルオキシ基などが挙げられる。
【００３９】
以下、各工程について説明する。
【００４０】
Ａ工程は、化合物（１）またはそれらの塩類（例えば塩酸塩）と化合物（２）との反応でアミド結合を形成することにより化合物（３）を製造する工程である。
【００４１】
ペプチドの製造に用いられる一般的な縮合剤を使用して、化合物（２）と化合物（１）またはその塩類（例えば塩酸塩）とを縮合させればよい。
【００４２】
一般的な縮合剤としては、DCC（N,N-ジシクロヘキシルカルボジイミド）、N,N-カルボニルジイミダゾール、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩（以下、EDC・HClという場合がある。）などの水溶性カルボジイミドなどが挙げられ、DCCおよびEDC塩酸塩が好ましい。縮合剤の使用量としては、化合物（１）に対して、通常等モル〜2倍モル量の範囲を用いればよい。
【００４３】
反応溶媒としては、ジクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素系溶媒、トルエンなどの炭化水素系溶媒、テトラヒドロフラン（以下、THFという場合がある。）などのエーテル系溶媒、N,N-ジメチルホルムアミド（以下、DMFという場合がある。）などの非プロトン性極性溶媒などが挙げられ、ジクロロメタン、THFおよびDMFが好ましい。
【００４４】
反応温度は、-20℃〜溶媒の沸点であり、0℃〜室温が好ましい。反応時間は、通常1〜24時間程度である。
【００４５】
本工程において、TEA、ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、ピリジン、4-(N,N-ジメチルアミノ)ピリジンなどの有機アミン系塩基を化合物（１）に対して、通常0.2〜10倍モル量で用いることが好ましい。
【００４６】
化合物（１）の塩を使用する場合には、その塩を中和するために、等モル量以上の上記塩基を用いる必要がある。
【００４７】
本工程において、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（以下、HOBtという場合がある。）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（以下、HOAtという場合がある。）などの活性エステル化試薬を化合物（２）に対して、通常0.2〜2倍モル量で用いることが好ましい。
【００４８】
本工程において使用される化合物（１）は、市販の化合物を使用してもよく、市販の原料から当該分野で公知の方法（例えば、下記（ａ）〜（ｈ）を参照のこと）を準用してインドール誘導体を製造した後、当該分野で公知の方法（例えば、下記（ｉ）〜（ｌ）を参照のこと）を用いてインドリン環に還元し、必要に応じてインドリン環１位の保護基を除去することにより製造してもよく、または下記（ｍ）を準用して製造することもできる。
【００４９】
（ａ）Organic Letters, 5, 1899-1902(2003)；（ｂ）Journal of Medicinal Chemistry, 22, 63-69(1979)；（ｃ）Journal of Heterocyclic Chemistry, 27, 2093-2095(1990)；（ｄ）Helvetica Chimica Acta, 51, 1203-1213(1968)；（ｅ）国際公開第95/23141号パンフレット；（ｆ）Organic Letters, 8, 3117-3120(2006)；（ｇ）Organic Syntheses Collective, 7, 34-41；（ｈ）Tetrahedron Letters, 47, 969-972(2006)；（ｉ）The Journal of Organic Chemistry, 65, 3227-3230(2000)；（ｊ）Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 49, 563-571(2001)；（ｋ）Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 48, 1689-1697(2000)；（ｌ）Synthesis, 12, 859-860(1977)；（ｍ）The Journal of Organic Chemistry, 64, 3595-3607(1999)。
【００５０】
化合物（２）におけるP2がBoc基である化合物（２ａ）は、以下の方法で製造することができる。
【００５１】
【化３】
2009263261.tif 000009
【００５２】
（式中、R7は前記と同じものを表す。）
【００５３】
化合物（２ａ）は、例えば、市販の2,5-ジブロモアジピン酸  ジアルキル  エステルから、当該分野で周知の方法（例えば、Synthesis, 3, 298-302(1993)、特開2005-343835号などを参照のこと）を用いて製造可能な化合物（８）をBoc2O共存下に接触還元を行って化合物（９）とし、次いで一方のエステル基を選択的にアルカリ加水分解（例えば、Tetrahedron Letters, 29, 4931-4934(1988)、The Journal of Organic Chemistry, 56, 6672-6682(1991)を参照のこと）してカルボキシル基にすることにより製造することができる。
【００５４】
接触還元の触媒としては、パラジウム／炭素（以下、Pd/Cという場合がある。）、水酸化パラジウム／炭素（以下、Pd(OH)2/Cという場合がある。）、白金（Pt）などが挙げられ、溶媒としては、酢酸エチルなどのエステル系溶媒、THF、ジオキサンなどのエーテル系溶媒などが挙げられる。
【００５５】
Boc2Oの使用量は、化合物（８）に対して、通常等モル〜３倍モル量が好ましい。
【００５６】
反応温度は、0℃〜溶媒の沸点であり、室温〜80℃が好ましい。反応時間は、通常1〜48時間程度である。
【００５７】
化合物（２）におけるP2がBoc基以外の保護基である場合にも、化合物（８）のフェネチル基を接触還元反応により除去した後、他の保護基を導入し、化合物（２ａ）の場合と同様に加水分解を行うことによって化合物（２）を製造することができる。
【００５８】
Ｂ工程について説明する。Ｂ工程は、化合物（３）のP2を除去して化合物（４）を製造する工程である。
【００５９】
化合物（３）のP2が、Boc基である場合は、塩酸、硫酸などの無機酸、トリフルオロ酢酸などを作用させることにより脱保護を行うことができる。
【００６０】
反応溶媒としては、ジクロロメタン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素系溶媒、THF、1,4-ジオキサンなどのエーテル系溶媒、酢酸エチルなどのエステル系溶媒、アセトニトリルなどの非プロトン性極性溶媒、メタノール（以下、MeOHという場合がある。）、エタノール（以下、EtOHという場合がある。）などのアルコール系溶媒などを挙げることができる。
【００６１】
反応温度は、0℃〜溶媒の沸点であり、室温〜80℃が好ましい。反応時間は、通常1〜24時間程度である。
【００６２】
化合物（４）は上記反応で用いた酸の塩として得られるが、反応終了後、炭酸水素ナトリウムなどのアルカリ金属の重炭酸塩、炭酸ナトリウムなどのアルカリ金属の炭酸塩、水酸化ナトリウムなどのアルカリ金属の水酸化物を用いて弱塩基性にすることにより、遊離アミン体である化合物（４）を得ることができる。
【００６３】
化合物（３）のP2が、Boc基以外の保護基である場合の脱保護条件は、例えばProtective Groups in Organic Synthesis（T.W.Green and P.G.Wuts,John Wiley & Sons,Inc.,New York,1991）を参考にすればよい。
【００６４】
Ｃ工程について説明する。Ｃ工程は、反応溶媒中で、化合物（４）の窒素原子にR1を導入して化合物（５）を製造する工程である。
【００６５】
化合物（５）は、化合物（４）と市販のアルデヒド、ケトン、またはそれらの化学的等価体を、還元剤共存下に還元的アミノ化反応を行わせることにより製造することができる。
【００６６】
還元剤としては、水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、シアン化水素化ホウ素ナトリウムなどを挙げることができる。還元剤の使用量は、化合物（４）に対して、通常等モル〜5倍モル量が好ましい。
【００６７】
反応溶媒としては、トルエンなどの炭化水素系溶媒、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン系炭化水素系溶媒、ジエチルエーテル、THFなどのエーテル系溶媒、MeOH、EtOHなどのアルコール系溶媒、酢酸、これら溶媒を適宜組み合わせた混合溶媒などが挙げられる。
【００６８】
反応温度は、0℃〜溶媒の沸点であり、反応時間は、通常1〜48時間程度である。
【００６９】
Ｄ工程について説明する。Ｄ工程は、化合物（５）のP1を除去して化合物（６）を製造する工程である。
【００７０】
化合物（５）のP1が、ベンジル基である場合は、反応溶媒中で、接触還元により脱保護を行って化合物（６）を製造することができる。
【００７１】
接触還元の触媒としては、Pd/C、Pd(OH)2/C、白金（Pt）などが挙げられる。
【００７２】
反応溶媒としては、MeOH、EtOHなどのアルコール系溶媒、DMFなどの非プロトン性極性溶媒、酢酸エチルなどのエステル系溶媒、THF、ジオキサンなどのエーテル系溶媒、酢酸などを挙げることができる。
【００７３】
反応温度は、0℃〜溶媒の沸点であり、室温〜80℃が好ましい。反応時間は、通常1〜48時間程度である。
【００７４】
化合物（５）のP1が、ベンジル基以外の保護基である場合の脱保護条件は、例えばProtective Groups in Organic Synthesis（T.W.Green and P.G.Wuts,John Wiley & Sons,Inc.,New York,1991）を参考にすればよい。
【００７５】
Ｅ工程について説明する。Ｅ工程は、化合物（６）と化合物（７）を反応させてエーテル結合を形成させ、化合物（Ｉａ）を製造する工程である。
【００７６】
Ｅ工程は、大別して下記の２つに分けることができる。
【００７７】
（１）Xが水酸基の場合
化合物（Ｉａ）は、化合物（６）と化合物（７）を、反応溶媒中、アゾ試薬およびホスフィン化合物で処理（光延反応）することにより製造することができる。
【００７８】
アゾ試薬としては、アゾジカルボン酸  ジエチル  エステル、アゾジカルボン酸  ジイソプロピル  エステル、1,1’-(アゾジカルボニル)ジピペリジン（以下、ADDPという場合がある。）および１，１’−アゾビス(N,N-ジメチルホルムアミド)などを挙げることができる。アゾ試薬の使用量は、化合物（６）に対して、通常等モル〜２倍モル量が好ましい。
【００７９】
ホスフィン化合物としては、トリフェニルホスフィン、トリ−ｎ−ブチルホスフィン（以下、Bu3Pという場合がある。）およびトリメチルホスフィンなどが挙げられる。ホスフィン化合物の使用量は、化合物（６）に対して、通常等モル〜2倍モル量が好ましい。
【００８０】
反応溶媒としては、DHF、ジエチルエーテルなどのエーテル系溶媒、アセトニトリルなどの非プロトン性極性溶媒、トルエン、ベンゼンなどの炭化水素系溶媒、ジクロロメタン、1,2-ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素系溶媒などが挙げられる。
【００８１】
反応温度とは、0℃〜溶媒の沸点であり、0〜80℃が好ましい。反応時間は、通常1〜24時間程度である。
【００８２】
（２）Xが脱離基の場合
化合物（Ｉａ）は、反応溶媒中、塩基の存在下に化合物（６）を化合物（７）でアルキル化することによって製造することができる。
【００８３】
塩基としては、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムなどのアルカリ金属の炭酸塩などを挙げることができる。塩基の使用量は、化合物（６）に対して、通常等モル〜2倍モル量である。
【００８４】
反応溶媒としては、TMF、ジメチルスルホキシド、N-メチルピロリドン、アセトニトリルなどの不活性極性溶媒、THF、ジエチルエーテルなどのエーテル系溶媒を挙げることができる。
【００８５】
反応温度は、-20℃〜溶媒の沸点であり、0〜100℃が好ましい。反応時間は、通常1〜48時間程度である。
【００８６】
化合物（７）中で、Xが水酸基である化合物（７ａ）とXが脱離基である化合物（７ｂ）は、市販の化合物を用いても良いし、以下の方法で製造できる。
【００８７】
【化４】
2009263261.tif 000010
【００８８】
（式中、R4は水素原子またはアルコキシ基であり、R5は脱離基であり、R3およびnは前記同様である。）
【００８９】
化合物（７ａ）は、当該分野で公知の方法（例えば、実験化学講座（第四版、Vol.26.日本化学会編、丸善株式会社）「有機合成VIII：不斉合成・還元・糖・標識化合物、P185〜248」を参照のこと）を用いて、化合物（１０）を還元することにより製造することができる。
【００９０】
化合物（７ｂ）は、当該分野で公知の方法（例えば、実験化学講座（第四版、Vol.19.日本化学会編、丸善株式会社）「有機合成I：炭化水素・ハロゲン化合物、P438〜446およびP465〜470」を参照のこと）を用いて、アルコール体（７ａ）の水酸基をアルキルスルホニルオキシ基、アリールスルホニルオキシ基、ハロゲン原子などの脱離基に変換することにより製造することができる。
【００９１】
化合物（１０）は、市販の化合物を用いても良いし、市販の原料に、当該分野で公知の方法（例えば、下記文献を参照のこと）を準用して置換基を導入することにより製造することができる。
【００９２】
Organic & Biomolecular Chemistry, 2(19), 2728-2734(2004)、Journal of the Chemical Society, Chemical Communications, 11, 705-706(1989)、Journal of Organometallic Chemistry, 489, 137-143(1995)、The Journal of Organic Chemistry, 44(16), 2907-2910(1979)、Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 17(4), 916-920(2007)、Journal of Heterocyclic Chemistry, 26, 1141-1145(1989)、Angewandte Chemie International Edition, 44, 4442-4489(2005)、Organometallics, 24(6), 1145-1155(2005)、Tetrahedron:Asymmetry, 17(1), 161-166(2006)、Synlett, 8, 1203-1206(2007).など。
【００９３】
化合物（７ｂ）におけるR5が、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子である化合物（７ｃ）は、例えば、以下の方法でも製造できる。
【００９４】
【化５】
2009263261.tif 000011
【００９５】
（式中、R6は塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子であり、R3およびnは前記同様である。）
【００９６】
化合物（７ｃ）は、化合物（１１）を塩素、臭素、塩化スルフリル、N-ブロモコハク酸イミド、N-クロロコハク酸イミド、N-ヨードコハク酸イミド、ジ亜塩素酸  tert-ブチルなどのハロゲン化試薬を用いるハロゲン化反応で製造することができる。本ハロゲン化反応は光照射下、または過安息香酸などの触媒の存在下で実施することもできる。ハロゲン化反応の参考文献としては、実験化学講座（第四版、Vol.19.日本化学会編、丸善株式会社）「有機合成I：炭化水素・ハロゲン化合物、P427〜429」を挙げることができる。
【００９７】
上記の化合物（１１）は、市販の化合物を使用してもよいし、上記の化合物（１０）の製造法を準用することにより製造することもできる。
【００９８】
Ｆ工程について説明する。Ｆ工程は、含水溶媒中で化合物（Ｉａ）に塩基を作用させて加水分解して本発明の化合物（Ｉ）を製造する工程である。
【００９９】
加水分解の参考文献としては、実験化学講座（第四版、Vol.22.日本化学会編、丸善株式会社）「有機合成IV：酸・アミド・ペプチド、P7〜11」を挙げることができる。
【０１００】
塩基としては、例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ金属水酸化物、水酸化炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、リチウムメトキシド、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムtert-ブトキシドなどの金属アルコキシドなどを挙げることができる。
【０１０１】
含水溶媒としては、MeOH、EtOH、イソプロパノール、tert-ブタノール、エチングリコールなどのアルコール系溶媒、ジエチルエーテル、THF、1,2-ジメトキシエタン（以下、DMEという場合がある。）、1,4-ジオキサンなどのエーテル系溶媒が挙げられる。
【０１０２】
反応温度は、0℃〜溶媒の沸点であり、室温〜60℃が好ましい。反応時間は、通常1〜24時間である。
【０１０３】
上記方法で製造された本発明の化合物は、公知の方法、例えば、抽出、沈殿、分画、クロマトグラフィー、分別再結晶、再結晶等により単離、精製することができる。
【０１０４】
また、本発明の化合物は不斉炭素を有するので光学異性体が存在する。これらの光学異性体は、適切な塩と再結晶する分別再結晶（塩分割）やカラムクロマトグラフィーなどの常法によって、それぞれの異性体を単離、精製することができる。
【０１０５】
上記方法で得られる本発明の化合物は、後述の試験例に示すようにS1P受容体（特にS1P1受容体）に対してアゴニスト作用を有し、末梢血中リンパ球数を減少させ、優れた膜透過性を有する。Journal of Pharmaceutical Sciences, 88(1), 28-33(1999)およびClinical Pharmacology & Therapeutics, 69(6), 601-607(1996)に記載されるように、化合物の膜透過性を向上させると、バイオアベイラビリティーが向上し、ヒトにおける薬効のばらつきを抑制することができる。従って、本発明の化合物は、ヒトにおける薬効のばらつきを抑制することができると考えられる。
【０１０６】
本発明の化合物は、S1P受容体（特にS1P1受容体）に対してアゴニスト作用を有することから、免疫を抑制するため、あるいは、移植に対する拒絶反応、自己免疫性疾患、アレルギー性疾患などを治療および／または予防するために使用され得る医薬組成物の有効成分として有用である。
【０１０７】
移植に対する拒絶反応とは、肝臓、腎臓、心臓、肺、小腸、皮膚、角膜、骨、胎児組織、骨髄細胞、造血幹細胞、末梢血幹細胞、臍帯血幹細胞、膵島細胞、肝細胞、神経細胞、腸管上皮細胞などの移植片を移植後、３ヶ月以内に起こる急性拒絶反応およびそれ以降に起こる慢性拒絶反応、ならびに移植片対宿主病をいう。
【０１０８】
自己免疫性疾患としては、例えば、膠原病、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、多発性硬化症、ネフローゼ症候群、ループス腎炎、シューグレン症候群、強皮症、多発性筋炎、乾癬、炎症性腸疾患、クローン病、混合型結合組織病、原発性粘液水腫、アジソン病、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性糖尿病、ブドウ膜炎、抗受容体病、重症筋無力症、甲状腺中毒症、甲状腺炎、橋本病などが挙げられる。
【０１０９】
アレルギー性疾患としては、例えば、アトピー性皮膚炎、喘息、鼻炎、結膜炎、花粉症などが挙げられる。
【０１１０】
本発明の化合物は、哺乳動物（例えば、ヒト、ウマ、ウシ、ブタなど、好ましくはヒト）に投与される場合には、全身的または局所的に、経口または非経口、好ましくは経口で投与され得る。
【０１１１】
本発明の医薬組成物は、投与方法に応じて適切な形態を選択し、通常用いられている各種製剤の調製法によって調製できる。
【０１１２】
経口用の医薬組成物の形態としては、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤などが挙げられる。かかる形態の医薬組成物の調製は、添加剤として通常用いられる賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、膨潤剤、膨潤補助剤、コーティング剤、可塑剤、安定剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、保存剤、緩衝剤、希釈剤、湿潤剤などを必要に応じて適宜選択し、常法に従って製造され得る。
【０１１３】
非経口用の医薬組成物の形態としては、注射剤、軟膏剤、ゲル剤、クリーム剤、湿布剤、貼付剤、噴霧剤、吸入剤、スプレー剤、点眼剤、点鼻剤、座剤、吸入剤などが挙げられる。かかる形態の医薬組成物の調製は、添加剤として通常用いられる安定化剤、防腐剤、溶解補助剤、保湿剤、保存剤、抗酸化剤、着香剤、ゲル化剤、中和剤、溶解補助剤、緩衝剤、等張剤、界面活性剤、着色剤、緩衝化剤、増粘剤、湿潤剤、充填剤、吸収促進剤、懸濁化剤、結合剤などを必要に応じて適宜選択し、常法に従って製造され得る。
【０１１４】
本発明の医薬組成物は、一般式（Ｉ）で表される化合物に加え、さらに、免疫抑制剤、免疫抑制に用いる抗体、拒絶反応治療薬、抗生物質およびステロイド薬から選択される１種または２種以上を含有してもよい。
【０１１５】
本発明の化合物は、免疫抑制剤、免疫抑制に用いる抗体、拒絶反応治療薬、抗生物質、ステロイド薬などの１種または２種以上の薬剤と組み合わせて、哺乳動物に投与され得る。この場合、１つの製剤中に両成分が配合された合剤として投与されてもよいし、別々の製剤として投与されてもよい。別々の製剤として投与される場合、それぞれの製剤は同時に投与されてもよく、時間差をおいて投与されてもよい。また、それぞれの製剤の投与方法は同じであっても異なっていてもよい。これらの医薬組成物は、本発明の化合物と、免疫抑制剤、免疫抑制に用いる抗体、拒絶反応治療薬、抗生物質およびステロイド薬から選択される１種または２種以上の剤とを組み合わせたキットであってもよい。
【０１１６】
免疫抑制剤、免疫抑制に用いる抗体、拒絶反応治療薬としては、例えば、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、アザチオプリン、ミゾリビン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、シクロホスファミド、シロリムス、エベロリムス、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、オルソクローンOKT3、抗ヒトリンパ球グロブリン、デオキシスパーガリンなどが挙げられる。
【０１１７】
抗生物質としては例えばセフロキシムナトリウム、メロペネム三水和物、硫酸ネチルマイシン、硫酸シソマイシン、セフチブテン、PA-1806、IB-367、トブラマイシン、PA-1420、ドキソルビシン、硫酸アストロマイシン、塩酸セフェタメトピボキシルなどが挙げられる。
【０１１８】
ステロイド薬としては、例えば、プロピオン酸クロベタゾール、酢酸ジフロラゾン、フルオシノニド、フランカルボン酸モメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、酪酸プロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ジフルプレドナート、ブデソニド、吉草酸ジフルコルトロン、アムシノニド、ハルシノニド、デキサメタゾン、プロピオン酸デキサメタゾン、吉草酸デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、酪酸プロピオン酸ヒドロコルチゾン、プロピオン酸デプロドン、吉草酸酢酸プレドニゾロン、フルオシノロンアセトニド、プロピオン酸ベクロメタゾン、トリアムシノロンアセトニド、ピバル酸フルメタゾン、プロピオン酸アルクロメタゾン、酪酸クロベタゾン、プレドニゾロン、プロピオン酸ペクロメタゾン、フルドロキシコルチド、酢酸コルチゾン、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸プレドニゾロン、コハク酸プレドニゾロンナトリウム、ブチル酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、酢酸ハロプレドン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロン、酢酸トリアムシノロン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、パルミチン酸デキサメタゾン、酢酸パラメサゾン、ベタメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、フルニソリド、ST-126P、シクレソニド、デキサメタゾンパロミチオネート、モメタゾンフランカルボネート、プラステロンスルホネート、デフラザコート、メチルプレドニゾロンスレプタネート、メチルプレドニゾロンナトリウムスクシネートなどが挙げられる。
【０１１９】
本発明の化合物の投与量は、症状、年齢、体重、組み合わせて投与される薬剤などにより異なるが、経口投与の場合には、1日1〜数回、成人一人一回当たり、0.00002〜20mg/kg、好ましくは0.005〜10mg/kgであり、非経口投与の場合には、１日１〜数回、成人一人一回当たり、0.00001〜10mg/kg、好ましくは0.0025〜5mg/kgである。
【実施例】
【０１２０】
（実施例１）(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸
【０１２１】
【化６】
2009263261.tif 000012
【０１２２】
（１）2-ジフルオロメトキシ-4-ヨード安息香酸  メチル  エステル
4-ヨードサリチル酸  メチル  エステル（10.0g）とクロロジフルオロ酢酸ナトリウム（16.5g）、炭酸セシウム（7.46g）、ＤＭＦ（100ml）を混合し、100℃で1時間半撹拌した。反応混合物を室温に放冷後、酢酸エチル（200ml）で希釈し、飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下に留去した後、得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム５Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル/ヘキサン＝0％→10％）で精製し、標記化合物（2.50g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 3.91 (3H, s), 6.56 (1H, t, J = 73.9 Hz), 7.70-7.59 (3H, m).。
【０１２３】
（２）2-ジフルオロメトキシ-4-(2-プロペニル)安息香酸  メチル  エステル
2-ジフルオロメトキシ-4-ヨード安息香酸  メチル  エステル（15.6g）をトルエン（340ml）に溶解し、次いで、イソプロペニルボラン酸  ピナコール  エステル（11.6ml）、炭酸セシウム（77.5g）、水（340ml）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（以下、Pd(PPh3)4という場合がある）（5.50g）を加え、100℃で12時間撹拌した。反応混合物を室温に放冷後、セライトろ過にて不溶物を除去し、ろ液を酢酸エチルで抽出した。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧下に留去して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム５Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル/ヘキサン＝0％→20％）にて精製し、標記化合物（9.76g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 2.16 (3H, s), 3.92 (3H, s), 5.23-5.25 (1H, m), 5.49 (1H, s), 6.58 (1H, t, J = 74.7 Hz), 7.31-7.33 (1H, m), 7.40 (1H, dd, J = 8.7, 2.3 Hz), 7.88 (1H, d, J = 8.3 Hz).。
【０１２４】
（３）2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピル安息香酸  メチル  エステル
2-ジフルオロメトキシ-4-(2-プロペニル)安息香酸  メチル  エステル（15.1g）をEtOH（150ml）に溶解し、5％Pd/C（8.0g）共存下に撹拌しながら12時間接触水素化を行った。反応容器内を窒素置換後、触媒をろ別し、ろ液を減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム４Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル/ヘキサン＝0％→10％）にて精製し、標記化合物（13.7g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.26 (6H, d, J = 6.9 Hz), 2.89-3.01 (1H, m), 3.91 (3H, s), 6.57 (1H, t, J = 74.7 Hz), 7.10 (1H, s), 7.15-7.19 (1H, m), 7.84 (1H, d, J = 7.8 Hz).
MS (ESI) m/z: 245 [(M+H)+].。
【０１２５】
（４）(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メタノール
2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピル安息香酸  メチル  エステル（13.7g）をTHF（60ml）に溶解し、撹拌下に2M  水素化ホウ素リチウム／THF（56.0ml）を滴下した後、3時間加熱還流した。反応混合物を室温まで放冷後、1N塩酸を加えて反応を終了させ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下に留去して標記化合物（13.1g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.25 (6H, d, J = 7.3 Hz), 1.80 (1H, br s), 2.85-2.97 (1H, m), 4.71 (2H, s), 6.56 (1H, t, J= 74.7 Hz), 6.97 (1H, s), 7.10 (1H, dd, J= 7.8, 1.8 Hz), 7.36 (1H, d, J= 8.3 Hz).
MS (ESI) m/z: 199 [(M-OH)+].。
【０１２６】
（５）2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルベンジル  クロリド
(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メタノール（3.31g）を1,2-ジクロロエタン（30ml）に溶解し、撹拌下に塩化チオニル（5.52ml）とDMF（0.1ml）を加え、50℃で4時間撹拌した。反応混合物を室温に放冷後、減圧下に濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム３Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル/ヘキサン＝0％→5％）にて精製し、標記化合物（3.20g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.25 (6H, d, J = 7.1 Hz), 2.85-2.97 (1H, m), 4.63 (2H, s), 6.55 (1H, t, J = 73.4 Hz), 7.00 (1H, s), 7.09 (1H, dd, J= 7.8, 1.7 Hz), 7.37 (1H, d, J= 8.0 Hz).。
【０１２７】
（６）(2S,5S)-5-(5-ベンジルオキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-(tert-ブトキシカルボニル)ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
5-ベンジルオキシインドリン（20.0g）と(2S,5S)-1-(tert-ブトキシカルボニル)-5-メトキシカルボニルピロリジン-2-カルボン酸（24.3g）をDMF（200ml）に溶解し、撹拌下にEDC・HCl（25.5g）、HOBt（18.0g）、TEA（18.6ml）を加え、18時間撹拌を続けた。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水で２回洗浄後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下に留去した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム５Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル/ヘキサン＝30％→80％）にて精製し、標記化合物（26.3g、62％）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.34-1.41 (9H, m), 1.91-2.05 (2H, m), 2.25-2.41 (1H, m), 2.49-2.70 (1H, m), 3.10-3.27 (2H, m), 3.74-3.77 (3H, m), 4.01-4.46 (2H, m), 4.53-4.83 (2H, m), 5.02-5.05 (2H, m), 6.76-6.86 (2H, m), 7.29-7.45 (5H, m), 8.17-8.10 (1H, m).
MS (ESI) m/z: 481 [(M+H)+].。
【０１２８】
（７）(2S,5S)-5-(5-ベンジルオキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
(2S,5S)-5-(5-ベンジルオキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-(tert-ブトキシカルボニル)ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（28.3g）と4N塩酸／1,4-ジオキサン溶液（250ml）を混合し、4時間撹拌した。反応液を濃縮後、1,2-ジクロロエタン（250ml）で溶解し、37％HCHO水溶液（44.4ml）を加えて10分間撹拌後、次いでトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（36.6g）を少量ずつ加え、さらに3時間撹拌を続けた。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて、反応を終了させるとともに塩基性とし、塩化メチレンで２回抽出した。合わせた抽出液は無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧下に留去し、得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム５Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル/ヘキサン＝50％→100％）にて精製し、標記化合物（21.5g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.90-2.01 (2H, m), 2.31-2.49 (2H, m), 2.53 (3H, s), 3.17 (2H, t, J= 8.3 Hz), 3.73 (3H, s), 3.97-4.20 (4H, m), 5.04 (2H, s), 6.84-6.79 (2H, m), 7.44-7.29 (5H, m), 8.19 (1H, d, J= 8.7 Hz).
MS (ESI) m/z: 395 [(M+H)+].。
【０１２９】
（８）(2S,5S)-5-(5-ヒドロキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
(2S,5S)-5-(5-ベンジルオキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（21.5g）をMeOH（250ml）に溶解し、20％Pd(OH)2/C（20.0g）共存下に、撹拌しながら6時間接触水素化を行った。反応容器内を窒素置換した後、触媒をろ別し、ろ液を減圧下に濃縮して標記化合物（12.8g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.90-2.01 (2H, m), 2.31-2.50 (2H, m), 2.52 (3H, s), 3.15 (2H, t, J= 8.4 Hz), 3.73 (3H, s), 3.96-4.08 (3H, m), 4.12-4.21 (1H, m), 5.18 (1H, br s), 6.73-6.64 (2H, m), 8.14 (1H, d, J= 8.5 Hz).
MS (ESI) m/z: 305 [(M+H)+].。
【０１３０】
（９）(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルシベンジル  クロリド（4.92g）および(2S,5S)-5-(5-ヒドロキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（6.38g）のDMF溶液（60ml）に、炭酸カリウム（4.35g）を加え、90℃にて12時間攪拌した。反応液を室温に放冷後、酢酸エチル（200ml）で希釈し、飽和食塩水で２回洗浄した。次いで、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下に留去して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム４Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル/ヘキサン＝50％→100％）にて精製し、標記化合物（9.80g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.25 (6H, d, J = 6.8 Hz), 1.90-2.02 (2H, m), 2.30-2.50 (2H, m), 2.53 (3H, s), 2.86-2.97 (1H, m), 3.18 (2H, t, J = 8.4 Hz), 3.73 (3H, s), 3.97-4.21 (4H, m), 5.05 (2H, s), 6.54 (1H, t, J= 73.9 Hz), 6.85-6.78 (2H, m), 7.01 (1H, s), 7.11 (1H, dd, J = 8.0, 1.5 Hz), 7.44 (1H, d, J = 7.8 Hz), 8.19 (1H, d, J = 8.5 Hz).
MS (ESI) m/z: 503 [(M+H)+].。
【０１３１】
（１０）(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸
(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（735mg）をTHF（12ml）に溶解し、撹拌下に1N水酸化ナトリウム水溶液（2.92ml）および水（9ml）を加え、2時間撹拌を続けた。反応液に1N塩酸を加えて中和し、飽和食塩水で希釈した後、20％MeOH／クロロホルムにて２回抽出した。合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下に留去して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラムＬ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（MeOH／クロロホルム＝0％→50％→90％）にて精製し、1,4-ジオキサンを用いて凍結乾燥して標記化合物（590mg）を無色アモルファスとして得た。
IR (KCl) cm-1: 3412, 2963, 2873, 1652, 1621, 1490, 1386, 1321, 1269, 1179, 1125, 1040.  
1H-NMR (DMSO-D6) δ: 1.21 (6H, d, J = 6.8 Hz), 1.77-1.91 (2H, m), 2.12-2.27 (2H, m), 2.40 (3H, s), 2.87-2.98 (1H, m), 3.12 (2H, t, J = 8.4 Hz), 3.68 (1H, dd, J = 8.5, 3.7 Hz), 3.98-4.09 (2H, m), 4.14-4.23 (1H, m), 5.01 (2H, s), 6.78 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 6.91-6.94 (1H, m), 7.11 (1H, s), 7.15-7.18 (1H, m), 7.23 (1H, t, J = 74.4 Hz), 7.46 (1H, d, J = 8.0 Hz), 8.02 (1H, d, J = 8.8 Hz), 12.21 (1H, br s).
MS (ESI) 489 [(M+H)+].  
Anal. Calcd for C26H30F2N2O5・0.5H2O: C, 62.77; H, 6.28; F, 7.64; N, 5.63.  Found: C, 62.64; H, 6.04; F, 7.84; N, 5.73.。
【０１３２】
（実施例２）(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  塩酸塩
【０１３３】
【化７】
2009263261.tif 000013
【０１３４】
（１）(2S,5S)-1-(tert-ブトキシカルボニル)-5-(5-ヒドロキシインドリン-1-イルカルボニル)ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
(2S,5S)-5-(5-ベンジルオキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-(tert-ブトキシカルボニル)ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（3.66g）をEtOH（100ml）に溶解し、5％Pd/C（3.5g）共存下に撹拌しながら１日間接触水素化を行った。反応容器内を窒素置換後、触媒をろ別し、ろ液を減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム３Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（MeOH／クロロホルム＝10％）にて精製し、標記化合物（2.97g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.33-1.46 (9H, m), 1.90-2.05 (2H, m), 2.26-2.42 (1H, m), 2.45-2.61 (1H, m), 2.88-3.20 (2H, m), 3.73-3.77 (3H, m), 3.80-4.32 (2H, m), 4.56-4.79 (2H, m), 6.41-6.75 (2H, m), 8.08-7.72 (2H, m).
MS (ESI) m/z: 391 [(M+H)+].。
【０１３５】
（２）(2S,5S)-1-(tert-ブトキシカルボニル)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルベンジル  クロリド（1.38g）および(2S,5S)-1-(tert-ブトキシカルボニル)-5-(5-ヒドロキシインドリン-1-イルカルボニル)ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（2.30g）のDMF溶液（10ml）に、炭酸カリウム（1.22g）を加え、90℃にて12時間攪拌した。反応液を室温まで放冷後、酢酸エチル（200ml）で希釈し、飽和食塩水で２回洗浄した。次いで、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下に留去して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム４Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝55％→90％）にて精製し、標記化合物（3.16g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.24-1.27 (6H, m), 1.34-1.41 (9H, m), 1.92-2.05 (2H, m), 2.25-2.71 (2H, m), 2.87-2.97 (1H, m), 3.11-3.28 (2H, m), 3.74-3.76 (3H, m), 4.01-4.47 (2H, m), 4.53-4.83 (2H, m), 5.03-5.06 (2H, m), 6.35-6.73 (1H, m), 6.76-6.86 (2H, m), 6.99-7.02 (1H, m), 7.09-7.14 (1H, m), 7.42-7.46 (1H, m), 8.17-8.10 (1H, m).
MS (ESI) m/z: 589 [(M+H)+].。
【０１３６】
（３）(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  塩酸塩
(2S,5S)-1-(tert-ブトキシカルボニル)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（267mg）をTHF（5ml）に溶解し、撹拌下に1N水酸化ナトリウム水溶液（900μl）および水（3ml）を加え、6時間撹拌を続けた。反応液に1N塩酸を加えて中和し、飽和食塩水で希釈した後、10％MeOH／クロロホルムにて２回抽出した。合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下に留去して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラムＬ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（MeOH／クロロホルム＝5％→16％）にて精製し、カルボン酸を淡黄色油状物質として得た。次いで、得られたカルボン酸を4N塩酸／1,4-ジオキサン（10ml）と混合し、1.5時間撹拌を続けた。反応液を減圧濃縮した後、ジエチルエーテルとヘキサンを用いて粉末化し、ろ取、乾燥して標記化合物（176mg）を得た。
IR (KCl) cm-1: 3394, 2962, 2931, 1731, 1656, 1619, 1597, 1579, 1491, 1468, 1427, 1375, 1326, 1266, 1245, 1181, 1123, 1039.  
1H-NMR (DMSO-D6) δ: 1.20 (6H, d, J = 6.8 Hz), 1.95-2.17 (2H, m), 2.32-2.55 (2H, m), 2.86-2.97 (1H, m), 3.14-3.21 (2H, m), 4.03-4.24 (2H, m), 4.46 (1H, t, J = 7.8 Hz), 4.66 (1H, t, J = 7.8 Hz), 5.02 (2H, s), 6.86 (1H, dd, J = 8.9, 2.6 Hz), 6.99 (1H, d, J = 2.7 Hz), 7.11 (1H, s), 7.16 (1H, dd, J = 7.9, 1.3 Hz), 7.23 (1H, t, J = 74.2 Hz), 7.45 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.97 (1H, d, J = 8.8 Hz). 
MS (ESI) m/z: 475 [(M+H)+].
HRMS (ESI) Calcd for C25H29F2N2O5475.2056. Found: 475.2045.  
Anal. Calcd for C25H28F2N2O5・HCl・0.8H2O: C, 57.15; H, 5.87; F, 7.23; N, 5.33; Cl, 6.75.  Found: C, 57.02; H, 5.92; F, 7.01; N, 5.32; Cl, 7.05.。
【０１３７】
（実施例３）(2S,5S)-1-シクロプロピル-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸
【０１３８】
【化８】
2009263261.tif 000014
【０１３９】
（１）(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル  塩酸塩
(2S,5S)-1-(tert-ブトキシカルボニル)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（2.80g）を4N塩酸／1,4-ジオキサン（10ml）と混合し、2.5時間撹拌を続けた後、減圧下に濃縮して標記化合物（2.41g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.23 (6H, d, J = 7.1 Hz), 2.08-2.19 (1H, m), 2.32-2.57 (2H, m), 2.60-2.72 (1H, m), 2.84-2.94 (1H, m), 3.00-3.20 (2H, m), 3.75 (3H, s), 3.89-3.99 (1H, m), 4.37-4.46 (1H, m), 4.84-4.90 (1H, m), 4.98 (2H, s), 5.22 (1H, t, J = 7.6 Hz), 6.51 (1H, t, J = 74.4 Hz), 6.67-6.72 (1H, m), 6.76 (1H, d, J= 2.4 Hz), 6.98 (1H, s), 7.07 (1H, dd, J= 8.0, 1.5 Hz), 7.38 (1H, d, J= 7.8 Hz), 8.01 (1H, d, J = 8.8 Hz), 9.41 (1H, br s), 10.85 (1H, br s).
MS (ESI) m/z: 489 [(M+H)+].。
【０１４０】
（２）(2S,5S)-1-シクロプロピル-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
(2S,5S)-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル  塩酸塩（259mg）、[(1-エトキシシクロプロピル)オキシ]トリメチルシラン（150μl）をMeOH（10ml）に溶解し、撹拌下に酢酸（28μl）、次いでシアン化水素化ホウ素ナトリウム（47mg）を加え、１日間加熱還流した。反応混合物を室温に放冷後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を終了させるとともに塩基性とし、酢酸エチルで抽出した。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧下に留去して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム２Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝5％→50％）で精製し、標記化合物（213mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.31-0.43 (2H, m), 0.48-0.61 (2H, m), 1.25 (6H, d, J = 7.1 Hz), 1.87-2.02 (2H, m), 2.23-2.34 (2H, m), 2.40-2.52 (1H, m), 2.87-2.96 (1H, m), 3.19 (2H, t, J = 8.5 Hz), 3.73 (3H, s), 4.07-4.31 (4H, m), 5.05 (2H, s), 6.54 (1H, t, J = 74.5 Hz), 6.79-6.85 (2H, m), 7.01 (1H, s), 7.11 (1H, dd, J = 7.8, 1.5 Hz), 7.44 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.20 (1H, d, J = 8.8 Hz).
MS (ESI) m/z: 529 [(M+H)+].。
【０１４１】
（３）(2S,5S)-1-シクロプロピル-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸
(2S,5S)-1-シクロプロピル-5-[5-[(2-ジフルオロメトキシ-4-イソプロピルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（213mg）をTHF（5ml）に溶解し、1N水酸化ナトリウム水溶液（800μl）および水（2.4ml）を加え、４日間撹拌を続けた。反応液に1N塩酸を加えて中和し、飽和食塩水で希釈した後、20％MeOH／クロロホルムにて２回抽出した。合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下に留去して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム２Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（MeOH／クロロホルム＝0％→20％）にて精製し、標記化合物（207mg）を得た。
IR (KCl) cm-1: 3423, 2962, 2929, 2873, 1727, 1654, 1620, 1597, 1489, 1469, 1410, 1384, 1323, 1267, 1180, 1124, 1038.  
1H-NMR (DMSO-D6) δ: 0.27-0.45 (2H, m), 1.15-1.26 (8H, m), 1.74-2.02 (2H, m), 2.06-2.35 (3H, m), 2.88-2.98 (1H, m), 3.14 (2H, q, J = 9.1 Hz), 3.79-3.88 (1H, m), 4.04-4.46 (3H, m), 5.02 (2H, d, J= 3.4 Hz), 6.81 (1H, ddd, J = 20.0, 8.9, 2.6 Hz), 6.95 (1H, dd, J= 16.6, 2.4 Hz), 7.11 (1H, s), 7.17 (1H, dd, J = 7.9, 1.3 Hz), 7.23 (1H, t, J = 74.2 Hz), 7.46 (1H, d, J = 7.8 Hz), 8.01 (1H, dd, J = 22.5, 8.8 Hz).
MS (ESI) 515 [(M+H)+].
HRMS (ESI) Calcd for C28H33F2N2O5515.2355. Found: 515.2358.。
【０１４２】
（実施例４）(2S,5S)-5-[5-[(4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸
【０１４３】
【化９】
2009263261.tif 000015
【０１４４】
（１）4-ブロモ-2-トリフルオロメトキシ安息香酸
米国特許出願公開第２００５／８００７４号明細書に従い合成した。窒素雰囲気下、4-ブロモ-1-ヨード-2-トリフルオロメトキシベンゼン（5.00g）のTHF溶液（150ml）に、撹拌下-78℃にて2.77M  n-ブチルリチウムのヘキサン溶液（9.86ml）を加え、同温度で1時間半攪拌した。次いで、反応液に細かく砕いたドライアイス（85g）を加え、同温度でさらに1.5時間攪拌した後、徐々に室温まで昇温した。反応液に1N塩酸を加えて反応を終了させ、酢酸エチルで３回抽出し、合わせた抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。最後に溶媒を減圧下に留去して標記化合物（3.90g）を得た。
【０１４５】
（２）4-ブロモ-2-トリフルオロメトキシ安息香酸  メチル  エステル
4-ブロモ-2-トリフルオロメトキシ安息香酸（3.90g）のMeOH溶液（200ml）に、塩化チオニル（4.95ml）を加え、加熱還流下で終夜攪拌した。反応液を室温まで放冷後、減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム３Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→15％）で精製し、標記化合物（3.32g）を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:3.93 (3H, s), 7.51-7.55 (2H, m), 7.85(1H, d, J = 8.3 Hz).。
【０１４６】
（３）4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシ安息香酸  メチル  エステル
4-ブロモ-2-トリフルオロメトキシ安息香酸  メチル  エステル（598mg）のトルエン溶液（20ml）に、水（10ml）、イソブチルボロン酸（612mg）、炭酸セシウム（3.26g）、Pd(PPh3)4（231mg）を加え、100℃で終夜攪拌した。反応液を室温に放冷後、反応液に飽和重曹水を加え、ヘキサンで３回抽出し、合わせた抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下に濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラムＬ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム/ヘキサン=0％→54％）で精製し、標記化合物（514mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.91 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1.84-1.94 (1H, m), 2.54 (2H, d, J = 7.3 Hz), 3.92 (3H, s), 7.10-7.16 (2H, m), 7.87 (1H, d, J = 7.8 Hz).。
MS (ESI) m/z: 277 [(M+H)+].
【０１４７】
（４）(4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシフェニル)メタノール
4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシ安息香酸  メチル  エステル（505mg）のTHF溶液（20ml）に、水素化ホウ素リチウム（119mg）を加え、加熱還流下、5時間攪拌した。反応液を室温まで放冷後、1N塩酸を加え、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下に濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラムＬ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→21％）で精製し、標記化合物（426mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.90 (6H, d, J = 7.3 Hz), 1.75 (1H, t, J = 6.0 Hz), 1.80-1.91 (1H, m), 2.49 (2H, d, J = 6.9 Hz), 4.74 (2H, d, J = 6.0 Hz), 7.02 (1H, s), 7.09 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.42 (1H, d, J = 7.8 Hz).
MS (ESI) m/z: 231 [(M-OH)+].。
【０１４８】
（５）4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシベンジル  クロリド
(4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシフェニル)メタノール（420mg）の1,2-ジクロロエタン溶液（20ml）に、塩化チオニル（613μl）、DMF（パスツールピペットで１滴）を加え、50℃で終夜攪拌した。反応液を室温まで放冷後、減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラムＬ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサンのみ）で精製し、標記化合物（418mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.91 (6H, d, J = 6.9 Hz), 1.79-1.93 (1H, m), 2.49 (2H, d, J = 7.3 Hz), 4.63 (2H, s), 7.04-7.09 (2H, m), 7.40 (1H, d, J = 7.8 Hz).。
【０１４９】
（６）(2S,5S)-5-[5-[(4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
(2S,5S)-5-(5-ヒドロキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（91mg）のDMF溶液（5ml）に、4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシベンジル  クロリド（88mg）、炭酸カリウム（62mg）を加えて60℃で終夜攪拌した。反応液を室温まで放冷後、反応液に飽和重曹水を加え、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラムＬ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝49％→70％）で精製し、標記化合物（155mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.91 (6H, d, J = 6.4 Hz), 1.81-2.01 (3H, m), 2.31-2.53 (7H, m), 3.13-3.22 (2H, m), 3.73 (3H, s), 3.98-4.20 (4H, m), 5.07 (2H, s), 6.79-6.83 (2H, m), 7.05-7.10 (2H, m), 7.46 (1H, d, J = 7.8 Hz), 8.19 (1H, d, J = 8.7 Hz).
MS (ESI) m/z: 535 [(M+H)+].。
【０１５０】
（７）(2S,5S)-5-[5-[(4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸
(2S,5S)-5-[5-[(4-イソブチル-2-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（150mg）のTHF溶液（5ml）に、MeOH（560μl）、1N水酸化ナトリウム水溶液（560μl）を加えて室温で終夜攪拌した。反応液に1N塩酸を加えて中和し、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラムＬ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（MeOH／クロロホルム＝0％→20％）で精製した。さらに、得られたアモルファスをジエチルエーテルに溶解した後、ヘキサンを加えて固体を析出させ、この固体をろ取、乾燥し、標記化合物（99mg）を得た。
IR (KCl) cm-1: 3425, 2959, 1650, 1489, 1259, 1216, 1163.
1H-NMR (DMSO-D6) δ: 0.84 (6H, d, J = 6.4 Hz), 1.77-1.87 (3H, m), 2.11-2.24 (2H, m), 2.38 (3H, s), 2.49-2.51 (2H, m), 3.10 (2H, t, J = 8.3 Hz), 3.65-3.68 (1H, m), 3.98-4.06 (2H, m), 4.14-4.21 (1H, m), 5.03 (2H, s), 6.77 (1H, dd, J = 2.5, 8.9 Hz), 6.91 (1H, d, J = 2.5 Hz), 7.17-7.22 (2H, m), 7.52 (1H, d, J = 7.8 Hz), 8.01 (1H, d, J = 8.9 Hz).
MS (ESI) m/z: 521 [(M+H)+].
HRMS (ESI) calcd for C27H32F3N2O5(M+H)+: 521.22633; found 521.22679.
Anal.Calcd for C27H31F3N2O5・0.5H2O: C, 61.24; H, 6.09; F, 10.76; N, 5.29. Found: C, 61.38; H, 5.89; F, 10.76; N, 5.40.。
【０１５１】
（実施例５）(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチル-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  塩酸塩
【０１５２】
【化１０】
2009263261.tif 000016
【０１５３】
（１）4-(シクロペンテン-1-イル)-3-トリフルオロメトキシ安息香酸  メチル  エステル
4-ブロモ-3-トリフルオロメトキシ安息香酸  メチル  エステル（3.82g）と2-(シクロペンテン-1-イル)-4,4,5,5,-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン（2.59g）をDME（30ml）に溶解し室温で攪拌した。そこへ炭酸ナトリウム（4.06g）水溶液（30ml）および[1,1’-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム  ジクロロメタン付加体（以下、PdCl2(dppf)CH2Cl2という場合がある。）（521mg）を順次加え、60℃で2.5時間攪拌した。反応混合物を室温まで放冷後、反応液に水を加え、酢酸エチル／へキサン(1/2、v/v)で３回抽出を行った。合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン／ヘキサン＝0％→20％）にて精製し、標記化合物（2.85g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.96-2.04 (2H, m), 2.54-2.59 (2H, m), 2.73-2.78 (2H, m), 3.93 (3H, s), 6.38-6.41 (1H, m), 7.44 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.90-7.91 (2H, m)．
MS(EI+) m/z: 286 (M+)．。
【０１５４】
（２）4-シクロペンチル-3-トリフルオロメトキシ安息香酸  メチル  エステル
4-(シクロペンテン-1-イル)-3-トリフルオロメトキシ安息香酸  メチル  エステル（2.84g）のEtOH（100ml）溶液に5％Pd/C(1.0g)を添加し、水素雰囲気下、室温で3時間攪拌した。反応液をろ過後、ろ液を減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン／ヘキサン＝0％→20％）を用いて精製し、標記化合物（2.65g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.54-1.55 (1H, m), 1.58-1.59 (1H, m), 1.71-1.76 (2H, m), 1.81-1.86 (2H, m), 2.05-2.10 (2H, m), 3.34-3.39 (1H, m), 3.92 (3H, s), 7.42 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.86 (1H, t, J = 1.6 Hz), 7.91 (1H, dd, J = 8.3, 1.6 Hz)．
MS(EI+) m/z: 288 (M+)．。
【０１５５】
（３）(4-シクロペンチル-3-トリフルオロメトキシフェニル)メタノール
水素化リチウムアルミニウム（698mg）のTHF（50ml）懸濁液を氷冷下攪拌し、そこへ4-シクロヘキシル-3-トリフルオロメトキシ安息香酸  メチル  エステル（2.65g）のTHF（15ml）溶液を10分かけて滴下し、同温で2.5時間攪拌した。反応液にTHF（200ml）を加え、氷冷下、硫酸ナトリウム十水和物（15g）を少量ずつ添加し、室温にて1時間攪拌した。不溶物をろ去し、ろ液を減圧濃縮後、残渣に水を加えジクロロメタンで３回抽出を行った。合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→40％）で精製し、標記化合物（2.14g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.50-1.59 (2H, m), 1.68-1.76 (3H, m), 1.78-1.85 (2H, m), 2.02-2.09 (2H, m), 3.27-3.36 (1H, m), 4.68 (2H, d, J = 6.0 Hz), 7.22-7.25 (2H, m), 7.33 (1H, d, J = 8.3 Hz)．
MS(EI+) m/z: 260 (M+)．。
【０１５６】
（４）(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチル-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
(4-シクロペンチル-3-トリフルオロメトキシフェニル)メタノール（300mg）および(2S,5S)-5-(5-ヒドロキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（270mg）のトルエン（30ml）溶液を室温で攪拌し、ADDP（336mg）およびBu3P（332μl）を順次加え、室温にて2.5時間激しく撹拌した。さらに、ADDP（112mg）およびBu3P（110μl）を加え、室温にて一晩はげしく撹拌した。不溶物をろ去後、ろ液を減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→80％）で精製し、標記化合物（483mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.50-1.55 (2H, m), 1.67-1.76 (2H, m), 1.81-1.83 (2H, m), 1.95-1.99 (2H, m), 2.01-2.09 (2H, m), 2.34-2.47 (2H, m), 2.54 (3H, s), 3.17 (2H, t, J = 8.5 Hz), 3.27-3.36 (1H, m), 3.74 (3H, s), 3.99-4.09 (3H, m), 4.17 (1H, q, J = 8.3 Hz), 5.00 (2H, s), 6.79 (1H, dd, J = 8.7, 2.8 Hz), 6.82 (1H, s), 7.28-7.30 (2H, m), 7.34 (1H, d, J = 7.8 Hz), 8.19 (1H, d, J = 8.7 Hz).
MS (ESI) m/z: 547 [(M+H)+]．。
【０１５７】
（５）(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチル-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  塩酸塩
(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチル-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（480mg）をTHF（4ml）／MeOH（4ml）／水（2ml）溶液に溶解し、室温にて攪拌した。反応液に1N水酸化ナトリウム水溶液（2.63ml）を加え、室温にて6時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた残渣に水および飽和食塩水を加え、次いで1N塩酸を加えpHを7から5とし、2-プロパノール／クロロホルム（1/3、v/v）混合溶液にて３回抽出した。合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮することでアモルファスを得た。得られたアモルファスをジクロロメタンに溶解し、氷冷下4N塩酸／1,4-ジオキサン溶液（0.2ml）を加えた。溶媒を留去し、得られたアモルファスをジエチルエーテル／酢酸エチル（2/3、v/v）に溶解後、へキサンを加えることで沈殿を生成させた。上澄みを除去し、乾固させることで、標記化合物（354mg）を得た。
1H-NMR (CD3OD) δ: 1.54-1.62 (2H, m), 1.68-1.77 (2H, m), 1.81-1.89 (2H, m), 2.00-2.07 (2H, m), 2.24-2.30 (1H, m), 2.39-2.50 (2H, m), 2.69-2.76 (1H, m), 3.11 (3H, s), 3.24 (2H, t, J = 8.3 Hz), 3.27-3.33 (1H, m), 4.02-4.09 (1H, m), 4.23-4.30 (1H, m), 4.62 (1H, br s), 4.81-4.85 (1H, m), 5.07 (2H, s), 6.84 (1H, dd, J = 8.9, 2.5 Hz), 6.95 (1H, d, J = 2.3 Hz), 7.29 (1H, s), 7.36 (1H, dd, J = 8.0, 1.6 Hz), 7.42 (1H, d, J = 7.8 Hz), 8.07 (1H, d, J = 8.7 Hz).
IR (KBr) cm-1: 3388, 2956, 2870, 1733, 1651, 1598, 1491, 1422, 1255, 1215, 1156, 1103, 1023, 824.
MS (ESI) m/z: 533 [(M+H)+].
Anal.Calcd for C28H31F3N2O5・H2O・HCl: C, 57.29; H, 5.84; F, 9.71; N, 4.77; Cl, 6.04. Found: C, 57.26; H, 6.11; F, 9.57; N, 4.96; Cl, 6.04.。
【０１５８】
（実施例６）(2S,5S)-5-[5-[(4-イソプロポキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  塩酸塩
【０１５９】
【化１１】
2009263261.tif 000017
【０１６０】
（１）4-イソプロポキシ-3-トリフルオロメトキシベンズアルデヒド
4-ヒドロキシ-3-トリフルオロメトキシベンズアルデヒド（400mg）をDMF（5ml）に溶解し、攪拌下に2-ブロモプロパン（477mg）および炭酸カリウム（536mg）を添加し、60℃にて15時間攪拌した。反応液を室温に放冷後に水を加え、ヘキサン／酢酸エチル（10/1、v/v）の混合溶媒で３回抽出を行い、合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後セライトろ過し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン／ヘキサン＝0％→60％）にて精製し、標記化合物（452mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.41 (6H, d, J = 6.4 Hz), 4.67-4.76 (1H, m), 7.09 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.80 (2H, m), 9.87 (1H, s).。
【０１６１】
（２）(4-イソプロポキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メタノール
4-イソプロポキシ-3-トリフルオロメトキシベンズアルデヒド（450mg）をMeOH（5ml）に溶解し、氷冷下水素化ホウ素ナトリウム（137mg）を添加した。氷冷下２時間攪拌後、水（0.5ml）を加えた後溶媒を減圧下留去した。残渣に水を加え、ジクロロメタンで３回抽出し、合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後セライトろ過し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→20％）で精製し、標記化合物（432mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.35 (6H, d, J = 5.7 Hz), 1.65 (1H, t, J = 6.0 Hz), 4.53-4.58 (1H, m), 4.63 (2H, d, J = 5.7 Hz), 6.98 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.22 (1H, dd, J = 8.3, 2.0), 7.25 (1H, s).。
【０１６２】
（３）(2S,5S)-5-[5-[(4-イソプロポキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
(4-イソプロポキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メタノール（150mg）および(2S,5S)-5-(5-ヒドロキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（182mg）のトルエン（15ml）溶液を室温で攪拌し、ADDP（227mg）およびBu3P（224μl）を順次加え、室温にて1時間は激しく撹拌した。さらに、ADDP（45mg）およびBu3P（45μl）を加え、室温にて一晩激しく撹拌した。不溶物をろ去後、ろ液を濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→100％）を用いて精製し、標記化合物（297mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.36 (6H, d, J = 5.5 Hz), 1.92-2.01 (2H, m), 2.32-2.49 (2H, m), 2.53 (3H, s), 3.16-3.20 (2H, m), 3.74 (3H, s), 3.96-4.09 (3H, m), 4.14-4.21 (1H, m), 4.53-4.61 (1H, m), 4.95 (2H, s), 6.77-6.82 (2H, m), 6.99 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.28-7.29 (2H, m), 8.19 (1H, d, J = 8.7 Hz).
MS (ESI) m/z: 537 [(M+H)+]．。
【０１６３】
（４）(2S,5S)-5-[5-[(4-イソプロポキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  塩酸塩
(2S,5S)-5-[5-[(4-イソプロポキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（295mg）をTHF（3ml）／MeOH（3ml）／水（2ml）溶液に溶解し、1N水酸化ナトリウム水溶液（1.65ml）を加え、13時間攪拌した。反応液を減圧濃縮して得られた残渣に、水および飽和食塩水を加えた。そこへ1N塩酸を加えpHを3から4とし、2-プロパノール／クロロホルム（1/3、v/v）混合溶液にて３回抽出した。合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮することでアモルファスを得た。それを逆相HPLC分取（野村化学社製  Combi-RP-5）にて精製し、得られたアモルファスをジクロロメタンに溶解させ、氷冷下4N塩酸／1,4-ジオキサン溶液（0.2ml）を加えた。溶媒を減圧下に留去し、得られたアモルファスをジクロロメタンに溶解後、へキサンを加えることで沈殿を生成させた。上澄みを除去し、乾固させることで、標記化合物（220mg）を得た。
IR (KBr) cm-1: 3387, 2980, 2765, 2512, 1733, 1653, 1514, 1491, 1428, 1387, 1258, 1213, 1168, 1126, 1108, 1021, 949, 818.
1H-NMR (CD3OD) δ: 1.33 (6H, d, J = 5.5 Hz), 2.24-2.30 (1H, m), 2.37-2.55 (2H, m), 2.68-2.75 (1H, m), 3.11 (3H, s), 3.24 (2H, t, J = 8.5 Hz), 4.02-4.09 (1H, m), 4.24-4.30 (1H, m), 4.62-4.68 (2H, m), 4.83 (1H, dd, J = 9.9, 4.8 Hz), 5.00 (2H, s), 6.84 (1H, dd, J = 8.7, 2.8 Hz), 6.95 (1H, d, J = 2.3 Hz), 7.13 (1H, d, J = 8.7 Hz), 7.31 (1H, s), 7.35 (1H, dd, J = 8.7, 2.3 Hz), 8.07 (1H, d, J = 8.7 Hz).
MS (ESI) m/z: 523 [(M+H)+].
Anal.Calcd for C26H29F3N2O6・0.5H2O・HCl: C, 54.98; H, 5.50; F, 10.03; N, 4.93; Cl, 6.24. Found: C, 54.82; H, 5.43; F, 10.54; N, 4.87; Cl, 6.50.。
【０１６４】
（実施例７）(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチルオキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  塩酸塩
【０１６５】
【化１２】
2009263261.tif 000018
【０１６６】
（１）4-シクロペンチルオキシ-3-トリフルオロメトキシベンズアルデヒド
4-ヒドロキシ-3-トリフルオロメトキシベンズアルデヒド（400mg）をDMF（5ml）に溶解し、ブロモシクロペンタン（578mg）および炭酸カリウム（536mg）を添加し、60℃に昇温して15時間攪拌した。反応液を室温に放冷後、水を加え、ヘキサン／酢酸エチル（10/1、v/v）の混合溶媒で３回抽出を行い、合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後セライトろ過し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン／ヘキサン＝0％→60％）で精製し、標記化合物（517mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.63-1.71 (2H, m), 1.81-1.85 (2H, m), 1.89-1.97 (4H, m), 4.90-4.93 (1H, m), 7.09 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.75 (1H, m), 7.78 (1H, dd, J = 8.5, 2.0 Hz), 9.86 (1H, s).。
【０１６７】
（２）（4-シクロペンチルオキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル）メタノール
4-シクロペンチルオキシ-3-トリフルオロメトキシベンズアルデヒド（510mg）をMeOH（5ml）に溶解し、氷冷撹拌下水素化ホウ素ナトリウム（141mg）を添加した。同温で2時間攪拌後、水（0.5ml）を加えた後、溶媒を減圧下に留去した。残渣に水を加え、ジクロロメタンで３回抽出を行い、合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、セライトろ過し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→15％）を用いて精製し、標記化合物（473mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.60-1.65 (3H, m), 1.78-1.91 (6H, m), 4.63 (2H, d, J = 6.0 Hz), 4.78-4.83 (1H, m), 6.96 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.21-7.24 (2H, m).。
【０１６８】
（３）(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチルオキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
(4-シクロペンチルオキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メタノール（150mg）および(2S,5S)-5-(5-ヒドロキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（165mg）のトルエン（15ml）溶液を室温で攪拌し、ADDP（206mg）およびBu3P（203μl）を順次加え、室温にて2時間激しく撹拌した。さらに、ADDP（41mg）およびBu3P（41μl）を加え、室温にて1時間激しく撹拌した。不溶物をろ去後、ろ液を減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→100％）で精製し、標記化合物（250mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.60-1.67 (2H, m), 1.79-2.01 (8H, m), 2.34-2.44 (2H, m), 2.53 (3H, s), 3.17 (2H, t, J = 8.5 Hz), 3.74 (3H, s), 3.96-4.08 (3H, m), 4.14-4.21 (1H, m), 4.79-4.82 (1H, m), 4.94 (2H, s), 6.77-6.81 (2H, m), 6.97 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.25-7.28 (2H, m), 8.19 (1H, d, J = 8.7 Hz).
MS (ESI) m/z: 563 [(M+H)+]．。
【０１６９】
（４）(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチルオキシ-3-トリフルオロメトキシ)フェニル]メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  塩酸塩
(2S,5S)-5-[5-[(4-シクロペンチルオキシ-3-トリフルオロメトキシフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（245mg）をTHF（4ml）／MeOH（4ml）／水（2ml）溶液に溶解し、撹拌下に1N水酸化ナトリウム水溶液（1.31ml）を加え、7.5時間攪拌した。反応液を減圧濃縮して得られた残渣に、水および飽和食塩水を加えた。そこへ1N塩酸を加えpHを3から4とし、2-プロパノール／クロロホルム（1/3、v/v）混合溶液にて３回抽出した。合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣を逆相HPLC分取（野村化学  Combi-RP-5）にて精製して、油状物質を得た。次いで、この油状物質をジクロロメタンに溶解させ、氷冷下4N塩酸／1,4-ジオキサン溶液（0.2ml）を加えた後、溶媒を留去し、さらに、ジクロロメタンに再度溶解後、へキサンを加えることで沈殿を生成させ、上澄みを除去し、乾固させることで、標記化合物（66mg）を得た。
IR (KBr) cm-1: 3393, 2962, 2873, 2766, 2513, 1733, 1652, 1515, 1491, 1430, 1257, 1212, 1164, 1125, 1022, 985, 816.
1H-NMR (CD3OD) δ: 1.63-1.68 (2H, m), 1.74-1.98 (6H, m), 2.23-2.28 (1H, m), 2.39-2.49 (2H, m), 2.68-2.72 (1H, m), 3.10 (3H, s), 3.22-3.24 (2H, m), 4.02-4.08 (1H, m), 4.23-4.30 (1H, m), 4.57-4.60 (1H, m), 4.80-4.90 (2H, m), 5.00 (2H, s), 6.83 (1H, dd, J = 8.9, 2.5 Hz), 6.94 (1H, d, J = 2.8 Hz), 7.11 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.29 (1H, s), 7.34 (1H, dd, J = 8.5, 2.0 Hz), 8.07 (1H, d, J = 9.2 Hz).
MS (ESI) m/z: 549 [(M+H)+].
Anal.Calcd for C28H31F3N2O6・H2O・HCl: C, 55.77; H, 5.68; F, 9.45; N, 4.72; Cl, 5.88. Found: C, 56.05; H, 5.67; F, 9.42; N, 4.72; Cl, 5.76.。
【０１７０】
（実施例８）(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[[4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシフェニル]メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸
【０１７１】
【化１３】
2009263261.tif 000019
【０１７２】
（１）4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシベンズアルデヒド
4-フルオロ-3-トリフルオロメトキシベンズアルデヒド（1.08g）および2,2,2-トリフルオロエタノール（1.90ml）のDMF溶液（10ml）に、室温にて炭酸カリウム（2.16g）を加え60℃に加温にして2日間攪拌した。反応液を室温に戻した後に不溶物をろ去し、ろ液を減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→20％）にて精製し、標記化合物（1.20g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 4.51 (2H, q, J = 8.0 Hz), 7.14 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.82-7.88 (2H, m), 9.93 (1H, s).。
【０１７３】
（２）[4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシフェニル]メタノール
4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシベンズアルデヒド（1.15g）のEtOH溶液（50ml）に、室温にて水素化ホウ素ナトリウム（150mg）を加え14時間攪拌した。反応液に水を加えしばらく攪拌し、減圧濃縮した。得られた残渣を酢酸エチルにて２回抽出し、合わせた抽出液を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。減圧下に溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH40+M、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→50％）にて精製し、標記化合物（1.16g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.77 (1H, t, J = 5.9 Hz), 4.39 (2H, q, J = 8.0 Hz), 4.68 (2H, d, J = 5.9 Hz), 7.02 (1H, d, J = 7.2 Hz), 7.32-7.23 (2H, m).
MS (ESI) m/z: 273 [(M-OH)+].。
【０１７４】
（３）4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシベンジル  クロリド
[4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシフェニル]メタノール（1.16g）に塩化チオニル（20ml）を加え60℃に加温して3時間攪拌した。反応液を減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH25+S、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→20％）にて精製し、標記化合物（1.02g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 4.40 (2H, q, J = 8.0 Hz), 4.55 (2H, s), 7.01 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.36-7.28 (2H, m).。
【０１７５】
（４）(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[[4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシフェニル]メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシベンジル  クロリド（203mg）および(2S,5S)-5-(5-ヒドロキシインドリン-1-イルカルボニル)-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（200mg）のDMF溶液（5ml）に、室温にて炭酸カリウム（272mg）を加え、70℃に加温して1日間攪拌した。反応液を室温に戻した後、不溶物をろ去し、ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：FLASH25+S、Biotage社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝50％→100％）にて精製し、標記化合物（337mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.87-2.05 (2H, m), 2.31-2.54 (5H, m), 3.08-3.21 (2H, m), 3.73 (3H, s), 3.91-4.21 (4H, m), 4.40 (2H, q, J = 8.0 Hz), 4.98 (2H, s), 6.83-6.71 (2H, m), 7.03 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.38-7.29 (2H, m), 8.20 (1H, d, J= 8.8 Hz).
MS (ESI) m/z: 577 [(M+H)+].。
【０１７６】
（５）(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[[4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメトキシフェニル]メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸
(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[[4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-(トリフルオロメトキシ)フェニル]メトキシ]インドリン-1-カルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（339mg）のMeOH／THF溶液（1ml／2ml）に、1N水酸化ナトリウム水溶液（1.2ml）を加え22時間攪拌した。この反応液に1N塩酸（1.2ml）を加え減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラシュカラムＭ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（MeOH／クロロホルム＝0％→40％）にて精製し、標記化合物（144mg）を得た。
IR（KBr）cm-1: 3416, 3050, 2963, 2895, 1654, 1519, 1492, 1461, 1429, 1413, 1385, 1317, 1268, 1209, 1166, 1067, 1049, 1021.
1H NMR (DMSO-D6) δ: 1.74-1.91 (2H, m), 2.11-2.26 (2H, m), 2.40 (3H, s), 3.06-3.15 (2H, m), 3.69 (1H, dd, J = 8.7, 3.7 Hz), 3.96-4.23 (3H, m), 4.90 (2H, q, J = 9.2 Hz), 5.05 (2H, s), 6.79 (1H, dd, J = 8.7, 2.8 Hz), 6.93 (1H, d, J = 2.3 Hz), 7.38 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.48 (2H, dd, J = 11.2, 2.5 Hz), 8.02 (1H, d, J = 8.7 Hz).
MS (ESI) m/z: 563 [(M+H)+].。
【０１７７】
（実施例９）(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[[4-(ピロリジン-1-イル)-3-トリフルオロメチルフェニル]メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸
【０１７８】
【化１４】
2009263261.tif 000020
【０１７９】
（１）[4-(ピロリジン-1-イル)-3-トリフルオロメチルフェニル]メタノール
4-(ピロリジン-1-イル)-3-トリフルオロメチルベンズアルデヒド（122mg）のTHF溶液（5.0ml）に、氷冷撹拌下、水素化アルミニウムリチウム（61.9mg）を加え、室温で30分間攪拌を続けた。反応混合物に水（65μl）、1N水酸化ナトリウム水溶液（65μl）、水（195μl）の順で加え、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、ろ液を減圧濃縮し、標記化合物（123mg）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.57 (1H, s), 1.92-1.98 (4H, m), 3.32-3.35 (4H, m), 4.61 (2H, s), 6.96 (1H, d, J = 8.7 Hz), 7.37 (1H, dd, J = 2.3, 8.7 Hz), 7.57 (1H, d, J = 2.3 Hz).
MS (ESI) m/z: 246 [(M+H)+].。
【０１８０】
（２）(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[[4-(ピロリジン-1-イル)-3-トリフルオロメチルフェニル]メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル
窒素雰囲気下、[4-(ピロリジン-1-イル)-3-トリフルオロメチルフェニル]メタノール（123mg）のトルエン溶液（10ml）に、(2S,5S)-5-(5-ヒドロキシインドリン-1-カルボニル)-1-メチルピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（152mg）、ADDP（328mg）、Bu3P（407μl）を加えて60℃で3時間半攪拌した。反応液を室温まで放冷後、反応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。得られた残渣を塩基性シリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラムＬ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝0％→30％）、シリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム２Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝43％→64％）、塩基性シリカゲルカラム（商品名：ウルトラパックＢ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝25％→75％）の順で精製し、標記化合物（129mg）を得た。
MS (ESI) m/z: 532 [(M+H)+].。
【０１８１】
（３）(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[(4-ピロリジン-1-イル-3-トリフルオロメチルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸
(2S,5S)-1-メチル-5-[5-[(4-ピロリジン-1-イル-3-トリフルオロメチルフェニル)メトキシ]インドリン-1-イルカルボニル]ピロリジン-2-カルボン酸  メチル  エステル（125mg）のTHF溶液（5ml）に、水（470μl）、1N水酸化ナトリウム水溶液（470μl）を加えて終夜攪拌した。反応液に10％クエン酸水溶液を加えて中和し、酢酸エチルで３回抽出し、合わせた抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラムＬ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（MeOH／クロロホルム＝0％→17％）で精製し、さらに逆相分取HPLC（野村化学  Combi-RP-5）で精製し、凍結乾燥後、標記化合物（40mg）を得た。
1H-NMR (DMSO-D6) δ: 1.77-1.90 (6H, m), 2.12-2.25 (2H, m), 2.38 (3H, s), 3.09 (2H, t, J = 8.3 Hz), 3.24-3.28 (4H, m), 3.65-3.68 (1H, m), 3.98-4.20 (3H, m), 4.98 (2H, s), 6.76-6.78 (1H, m), 6.91 (1H, s), 7.07 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.48-7.50 (1H, m), 7.61 (1H, d, J = 2.0 Hz), 8.00 (1H, d, J = 8.8 Hz).
MS (ESI) m/z: 518 [(M+H)+].
HRMS (ESI) calcd for C24H31F3N3O4 [(M+H)+]: 518.22667; found 518.22249.。
【０１８２】
（製剤例）
実施例で得られた化合物5g、乳糖90g、トウモロコシデンプン34g、結晶セルロース20gおよびステアリン酸マグネシウム1gをブレンダーで混合した後、打錠機で打錠することにより、錠剤が得られる。
【０１８３】
（試験例）
１．被験物質のin vitro評価
国際公開第07/129745号パンフレットと同様の方法により、S1P1（EDG-1）受容体に対するアゴニスト活性として、EC50値を算出した。
【０１８４】
２．被検物質のin vivo評価（化合物投与後のラット末梢血中リンパ球数減少評価）
国際公開第07/129745号パンフレットと同様の方法により、コントロール（溶媒投与）群に対する被検物質投与群の平均末梢血リンパ球数の比（T/C（％））を判定した。
【０１８５】
【表２】
2009263261.tif 000021
【０１８６】
【表３】
2009263261.tif 000022
【０１８７】
経口投与２４時間後における末梢血中リンパ球数減少作用は良好であった。
【０１８８】
３．被検物質の膜透過性評価
【０１８９】
Journal of pharmaceutical sciences, 97(2), 712-725(2008)に準じて、以下のように評価を行う。
【０１９０】
被検物質の膜透過性評価はMadin-Darby canine kidney（American Type Culture Collectionから入手）細胞（以下、MDCK細胞という）を用いて測定する。MDCK細胞を、10％（v/v）ウシ胎児血清（GIBCO社製）、ペニシリン−ストレプトマイシン混合物（GIBCO社製）およびL-グルタミンを含有するMinimum Essential Medium（GIBCO社製）中で培養する。
【０１９１】
単層を形成するように細胞を播種した後、HTS-24穴のトランスウェル（Costar社製）に1.65×105cells/mlとなるように播種し、6日間培養する。10×Hanks’ Balanced Salt Solution（GIBCO社製）にNaHCO3（最終濃度：0.35g/l）、D-グルコース（最終濃度：3.5g/l）、HEPES（Sigma社製、最終濃度：10mM）、CaCl2（最終濃度0.14g/l）およびMgSO4（最終濃度：0.098g/l）を加えて、1M HClまたは1M NaOHを用いてpHを6.0または7.4に調整して、Transport Bufferを調製する。
【０１９２】
次に、10μMの各被検物質のTransport Buffer（pH=6.0）（100μl）溶液を細胞のApical側に加え、Basolateral側には4％（w/v）ウシ血清アルブミンを含むTransport Buffer（pH 7.4）(600μl)を加える。陽性対照としてはメトプロロールを用いる。
【０１９３】
37℃で1時間インキュベーションした後、Alliance 2790 HPLC（Waters社製）、Atlantis dC18カラム（2.1mm×20mm、3μm、Waters社製)およびTSQ7000 mass spectrometer（ThermoQuest社製）から成るLC/MS/MSシステム（10mM HCO2NH4/アセトニトリル、100/0→20/80→100/0）を用いてBasolateral側を分析する。Basolateral側の各被検物質濃度は各検量線に対するピーク面積から算出する。各被検物質のApical側からBasolateral側への透過係数（Papp）は、LC/MS/MSで測定したBasolateral側の被検物質濃度（Cb（μM））とApical側の10μMの初期濃度から下記数式を用いて算出する。下記数式で、3600秒は化合物の還流時間を示し、0.33cm2はトランスウェルフィルターの面積を示す。
【０１９４】
【数１】
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【産業上の利用可能性】
【０１９５】
本発明化合物は、高いS1P受容体アゴニスト活性を有するので、自己免疫性疾患などを治療及び／又は予防するための医薬組成物の有効成分として利用され得る。