(57)【要約】【課題】食経験が豊富で安全性が高く、肝臓での過剰な脂質蓄積を抑制する作用を有する脂肪肝の予防及び／又は改善剤の提供。【解決手段】オリーブ又はその抽出物を有効成分とする脂肪肝の予防及び／又は改善剤、並びに肝臓脂肪合成抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オリーブ又はその抽出物を有効成分とする脂肪肝の予防及び／又は改善剤。
【請求項２】
オリーブ又はその抽出物を有効成分とする肝臓脂肪合成抑制剤。
【請求項３】
オリーブ抽出物がオリーブポリフェノールを２０質量％以上含有する請求項１又は２記載の脂肪肝の予防及び／又は改善剤、並びに肝臓脂肪合成抑制剤。
【請求項４】
オリーブ抽出物が、ヒドロキシチロソール、チロソール、オレウロペイン及びこれらの配糖体から選ばれる１種以上を含有する請求項１〜３のいずれか１項記載の脂肪肝の予防及び／又は改善剤、並びに肝臓脂肪合成抑制剤。
【請求項５】
脂肪肝の予防及び／又は改善剤の製造のためのオリーブ又はその抽出物の使用。
【請求項６】
肝臓脂肪合成抑制剤の製造のためのオリーブ又はその抽出物の使用。
【請求項７】
オリーブ又はその抽出物を乾燥物換算で０．０００１〜１０質量％含有する脂肪肝の予防及び／又は改善剤用飲食品。
【請求項８】
オリーブ又はその抽出物を乾燥物換算で０．０００１〜１０質量％含有する肝臓脂肪合成抑制用飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪肝の予防及び／又は改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪肝は、過食や運動不足、アルコールの過剰摂取、ウイルス感染等により発症する疾患で、肝臓に脂質が過剰に蓄積した状態である。日本では、１９８９年から１９９９年までの健診受診者の脂肪肝の発見率は、男性で１６％から３４％、女性で７．６％から１９％へと２倍以上の増加がみられ、２０００年以降も高い発見率が持続していると報告されている（非特許文献１）。つまり、現代社会では多くの人が脂肪肝を発症しやすい環境にあるといえる。
【０００３】
脂肪肝は、ほとんどの場合自覚症状が無く、発症の重要性を認識しにくい。しかし、脂肪肝は、生活習慣病の発症・悪化に関与するだけでなく、肝炎・肝硬変等の肝障害の原因になるため（非特許文献２）、日頃から脂肪肝の予防及び改善に取り組むことは、健康を維持する上で非常に重要であると考えられる。
【０００４】
脂肪肝の予防・改善においては、日常の栄養管理の徹底や、適度な運動を行って、エネルギーの摂取と消費のバランスをとることが第一に考えられる。しかし、忙しい現代社会において、煩雑な栄養管理や、定期的な運動を継続的に実践するには、時間、モチベーションの維持など多くの困難があると考えられる。そのため、十分な効果が期待でき、手軽でかつ安全に実践できる方法が求められる。
【０００５】
この問題を解決する手段の一つとして、脂肪肝の予防・改善作用を有する成分を経口的に摂取する方法が考えられる。前述したように、脂肪肝は肝臓に過剰な脂質が蓄積した状態であるため、肝臓における脂質の合成を抑制することや、脂質の代謝を亢進して蓄積を抑制することは脂肪肝の予防・改善に有効である。実際に、ＰＰＡＲαのリガンドであり、脂質の燃焼反応を促進するフィブラート系薬剤を用いることによる、脂肪肝の改善作用が開示されている（特許文献１）。
しかし、薬剤では多くの人が手軽に使用できないという点や、肝機能障害等の副作用があることから、簡便性及び安全性の面で問題があるといえる。そのため、副作用が少ない安全な食品素材の開発が期待されている。
【０００６】
一方、オリーブは、モクセイ科オリーブ属に属する植物で、地中海地域をはじめとして広く栽培されている。その果実はオリーブ油の製造や、食用として全世界で幅広く利用されており、食経験は非常に豊富である。オリーブの果実には、オレウロペインやヒドロキシチロソール等のポリフェノール成分が含まれていることが知られている（非特許文献３、非特許文献４）。オリーブ抽出物や果実に含まれるポリフェノール成分は、抗動脈硬化作用（非特許文献５）や高血圧抑制作用（非特許文献６）、骨量減少抑制作用（非特許文献７）等を有することが報告されている。また、オリーブ抽出物は、抗酸化作用、美白作用、皮膚の抗老化作用、抗腫瘍作用等を有することが報告されている（特許文献２）。さらに、オレウロペイン及びその誘導体のカテコールアミン誘発作用（特許文献３）が報告されている。
しかし、オリーブやオリーブ抽出物、及びそれらに含まれるポリフェノール成分が、肝臓での脂質の蓄積や脂肪の合成を抑制し、脂肪肝を予防・改善する作用を有することはこれまで全く知られていない。
【特許文献１】特開２００２−２２０３４５号公報
【特許文献２】特開２００２−１８６４５３号公報
【特許文献３】特開２００５−１７９３５３号公報
【非特許文献１】日本消化器病学会雑誌，vol.104, pp492-500
【非特許文献２】Intern Med, Vol.46, No.2:101-103,
【非特許文献３】J Agric Food Chem, vol.34, pp823-826, 1986
【非特許文献４】J Agric Food Chem, vol.52， pp479-484， 2004
【非特許文献５】Atherosclerosis， vol.188， No.1, pp35-42， 2006
【非特許文献６】Int J Food Sci Nutr, vol.56, No.8, 613-620, 2005
【非特許文献７】Clin Nutr, vol.25, No.5, 859-868, 2006
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、食経験が豊富で安全性が高く、肝臓での過剰な脂質蓄積を抑制する作用を有する脂肪肝の予防及び／又は改善剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題に鑑み、食経験が豊富で安全性の高い天然物素材の中から有効成分の検索を行ったところ、オリーブ果実抽出物に肝臓での脂質蓄積及び脂肪合成の抑制作用があり、脂肪肝の予防及び改善に有用であることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、オリーブ又はその抽出物を有効成分とする脂肪肝の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
また、本発明は、オリーブ又はその抽出物を有効成分とする肝臓脂肪合成抑制剤を提供するものである。
また、本発明は、オリーブ又はその抽出物を乾燥物換算で０．０００１〜１０質量％含有する脂肪肝の予防及び／又は改善剤用飲食品を提供するものである。
また、本発明は、オリーブ又はその抽出物を乾燥物換算で０．０００１〜１０質量％含有する肝臓脂肪合成抑制用飲食品を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の脂肪肝の予防及び／又は改善剤、並びに肝臓脂肪合成抑制剤（以下、「脂肪肝改善剤等」とも云う）は、食経験が豊富で安全性が高いオリーブ又はその抽出物を有効成分とするものであり、肝臓での脂質蓄積及び脂肪合成の抑制や脂肪肝を予防及び／又は改善するための医薬品、飲食品として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明において、オリーブとは、モクセイ科（Oleaceae）オリーブ属のオリーブ（Olea  europaea）を意味する。オリーブの品種には、マンザニロ、ラ・タンシュ、ジェンティーレ・ディ・キエーティ、カザリーバ、ピクード、タジャスカ、コロネイキ、ペンドリーノ、ネバディロ・ブランコ、ミッション、ピクアル、オヒブランカ、アルベキナ、コルニカブラ、ゴルダル、フラントイオ、モロイオロ、レッチーノ、コラティーナ、アスコラーナ・テレナ等が知られているが、本発明においてはいずれの品種も使用することができる。
【００１２】
オリーブの使用部位としては、果実、果皮、種子、種皮、葉、茎、芽等が挙げられるが、主として果実を用いるのが好ましい。これらは、そのまま又は乾燥粉砕して用いることができる。
【００１３】
オリーブ抽出物としては、前記の使用部位、好ましくは果実を、そのままあるいは乾燥した後に適当な大きさに切断したり、粉砕加工したりしたものを抽出して得られる抽出エキスや果汁の他、さらに分離精製して得られるより活性の高い画分（成分）が包含される。例えば、オリーブの果実を圧搾し、得られた果汁を遠心分離により油層（オリーブオイル）と水層に分離し、得られた水層を噴霧乾燥することにより得られた粉末エキスを利用することができる。更に、得られた粉末エキスから有機溶剤等によりオリーブポリフェノールを濃縮、精製して用いることも出来る。また、オリーブオイルを抽出溶剤を用いて処理し、オリーブオイル中に含まれる成分を分離精製したものを用いても良い。
【００１４】
前記の使用部位からの抽出は、室温又は加熱した状態で溶剤に含浸させるか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて行われる溶剤抽出の他に、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて抽出する方法、炭酸ガスを超臨界状態にして行う超臨界抽出法、あるいは圧搾して抽出物を得る圧搾法等を用いることができる。果汁等はそのまま噴霧乾燥等の処理をしたものを用いることもできる。
【００１５】
溶剤抽出に用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル等が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用でき、溶剤を変えて繰り返し行うことも可能である。このうち、水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等を用いるのが好ましく、水・エタノール混液を用いるのがより好ましい。
前記の使用部位からの抽出は、例えばオリーブ１質量部に対して１〜５０質量部の溶剤を用い、３〜１００℃で数時間〜数週間浸漬又は加熱還流するのが好ましい。
【００１６】
また、抽出物の分離精製手段としては、例えば、抽出物を活性炭処理、液液分配、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、ゲル濾過、精密蒸留等を挙げることができる。
【００１７】
本発明のオリーブ抽出物は、斯くして得られる抽出液や画分をそのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、或いは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。
【００１８】
オリーブには、ヒドロキシチロソール、オレウロペイン及びこれらの配糖体等のオリーブポリフェノールや、チロソール及びその配糖体等のその他のフェノール化合物が含まれる。
本発明のオリーブ抽出物は、当該化合物を１種以上含有するものが好ましく、また、有効性及び食品配合時の色調、味等の観点から、不純物が少ないオリーブポリフェノールを２０質量％以上、好ましくは３０質量％以上、より好ましくは５０質量％以上、さらに好ましくは５０〜１００質量％含有するものが望ましい。
なお、本発明において、オリーブポリフェノール含有量は、ＯＤ２８０ｎｍを計測することにより求められ（J Chromatogr B Biomed Appl. 24;665(2):383-9.(1995)）、その含量をカテキン相当量として算出したものである。
チロソール、ヒドロキシチロソール、オレウロペイン又はこれらの配糖体を豊富に含むオリーブ抽出物としてはガルドネンク社（フランス）のオリーブポリフェノール(Olivex PHO6)等が挙げられる。
【００１９】
本発明のオリーブ又はその抽出物は、後記実施例に示すように、マウスを用いたオリーブ抽出物含有食の給餌試験において、肝臓での脂質蓄積抑制作用及び脂肪合成抑制作用が確認された。従って、オリーブ又はその抽出物は、脂肪肝を予防及び改善するために使用することができ、さらに脂肪肝の予防及び／又は改善剤を製造するために使用することができる。また、オリーブ又はその抽出物は、肝臓での脂肪合成を抑制するために使用することができ、さらに肝臓脂肪合成抑制剤を製造するために使用することができる。当該脂肪肝改善剤等は、脂肪肝を予防・改善するための、また肝臓での脂肪合成を抑制するための、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品、飲食品として使用可能である。また、当該脂肪肝の予防及び／又は改善剤、並びに肝臓脂肪合成抑制剤は、肝臓での過剰な脂質蓄積抑制や脂肪合成抑制、或いは脂肪肝の予防・改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した医薬部外品等として使用することもできる。
【００２０】
本発明の脂肪肝改善剤等を医薬品、医薬部外品として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。また、このような種々の剤型の製剤を調製するには、オリーブ又はその抽出物を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。また、これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口用液体製剤を調製する場合は、嬌味剤、緩衝剤、安定化剤等を加えて常法により製造することができる。
【００２１】
本発明の脂肪肝改善剤等を飲食品として用いる場合の形態としては、パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、ゼリー類、冷凍食品、アイスクリーム類、乳製品、飲料、スープ類、食用油等の各種食品の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。飲料としては、例えば、果汁飲料、炭酸飲料、茶系飲料、ニアウオーター、スポーツ飲料、乳飲料、アルコール飲料、清涼飲料等が挙げられる。また、飲料は、容器に充填した容器詰飲料とすることができる。
さらには、調理用油や調味料、マヨネーズ、ドレッシング、マーガリン等の油脂加工品類、パスタソース類等が挙げられる。
種々の形態の食品を調製するには、オリーブ又はその抽出物を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて脂肪肝予防及び／又は改善食品、肝臓脂肪合成抑制食品、ペットフード等として用いることが可能である。
【００２２】
これらのものに対するオリーブ又はその抽出物の配合量は、その使用形態により異なるが、飲食品の形態では、オリーブ又はその抽出物（乾燥物換算、以下同じ）は、通常０．０００１〜１０質量％、さらに０．００１〜５質量％、特に０．００２〜２質量％とするのが好ましい。例えば飲料の場合では、飲料中にオリーブ又はその抽出物は０．００１〜０．５質量％、さらに０．００５〜０．２５質量％、特に０．０１〜０．１質量％とするのが好ましい。タブレット等の食品錠剤及び／又はカプセル剤の場合では、オリーブ又はその抽出物を０．１〜９５質量％、さらに1〜９０質量％、特に５〜５０質量％含有しているものが好ましい。パン類やケーキ類等の一般的な食品の場合では、オリーブ又はその抽出物を０．００１〜９５質量％、さらに０．００１〜１０質量％、特に０．０１〜５質量％、殊更０．０２〜３質量％含有しているものが好ましい。調理用油等の食用油や油脂加工品等の場合では、オリーブ抽出物を０．０１〜２質量％、さらに０．０２〜１．０質量％、特に０．０５〜０．５質量％含有しているものが好ましい。尚、オリーブ又はその抽出物は、溶解状態であっても、分散状態であっても良く、その存在状態は問わない。
【００２３】
上記以外の医薬品、例えば錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の場合には、オリーブ又はその抽出物（乾燥物換算）は、通常０．０１〜９５質量％、さらに５〜９０質量％、特に１０〜５０質量％とするのが好ましい。
【００２４】
本発明の脂肪肝改善剤等の投与量（有効摂取量）は、オリーブ又はその抽出物（乾燥物換算）として、一日あたり１〜５０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく、さらに５〜３０００ｍｇ／６０ｋｇ体重、特に１０〜２０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく、５０〜１０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが最も好ましい。
【実施例】
【００２５】
以下に本発明の代表的な試験例と実施例を示す。
【００２６】
試験例  オリーブ抽出物摂取による肝臓での脂質蓄積抑制作用
オリーブ抽出物の肝臓での脂質蓄積抑制作用に対する評価を下記の通り行った。尚、オリーブ抽出物は、ガルドネンク社（フランス）のオリーブ果実ポリフェノールＰＨＯ６（Ｏｌｉｖｅｘ  ＰＨＯ６）を用いた。
２１週齢のＳＡＭ−Ｐ１雄性マウスを、体重に差がないように対照食群、試験食群に群分けした（各群８匹）。
表１に示す配合で調製した対照食及び試験食を用いて１３週間飼育をおこなった。なお、この飼育期間中の餌の摂食量は群間で差は見られなかった。飼育試験の最終日に、体重測定を行った後に解剖を行い、肝臓を採取し、重量の測定を行った。その後、採取した肝臓の一部よりＦｏｌｃｈらの方法に従い肝臓脂質を抽出し、肝臓脂質含量を測定した（Ｆｏｌｃｈ，Ｊ．，Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．，２３，４９７−５０９（１９５７））。また、肝臓よりＲＮＡ抽出試薬を用いてｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出し、リアルタイムＰＣＲ法により脂肪合成関連遺伝子の発現解析を行った。ここでは、脂肪酸合成に関与する、Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ａｌｐｈａ（Ａｃａｃａ），Ｓｔｅａｒｏｙｌ−ＣｏＡ  ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ  １（Ｓｃｄ１），脂肪肝において発現が誘導されるＰｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇａｍｍａ  （Ｐｐａｒｇ）及びその標的遺伝子であるＦａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４  （Ｆａｂｐ４）の発現量の解析を行った。反応に用いたプライマーは表２に示した。なお、各遺伝子の発現量は、ハウスキーピング遺伝子の一種である、ＡＣＩＤＩＣ  ＲＩＢＯＳＯＭＡＬ  ＰＨＯＳＰＨＯＰＲＯＴＥＩＮ  Ｐ０（Ａｒｂｐ）の発現量を基準として補正を行い比較した。
【００２７】
【表１】
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【００２８】
【表２】
2009263257.tif 000003
【００２９】
対照食群と比較して試験食群では、肝臓重量が少なく（図１）、また、肝臓中の脂質含量を測定したところ、試験食群では肝臓脂質含量が有意に低値を示した（図２）。これらの結果から、オリーブ抽出物には、肝臓での脂質蓄積抑制作用があることがわかった。
【００３０】
また、肝臓における脂肪合成系遺伝子の発現解析を行ったところ、脂肪酸合成系遺伝子の発現が試験食群で有意に低いことが確認された（図３）。また、脂肪肝により発現が誘導され、肝臓脂質代謝の調節行う転写因子であるＰｐａｒｇ、及びその標的遺伝子であるＦａｂｐ４の発現も有意に低く、肝臓の脂肪合成系に関与する一連の遺伝子発現が試験食群において有意に抑制されていることが明らかとなった。
【００３１】
これらの結果から、オリーブ抽出物は、肝臓における脂肪合成系を抑制し、肝臓への過剰な脂肪蓄積を抑制できることがわかった。すなわち、オリーブ抽出物は、脂肪肝の予防・改善剤として有用であることが確認された。
【００３２】
実施例
脂肪肝の予防及び／又は改善剤（１）〜（１１）を製造した。
（１）清涼飲料
表３に示した配合で、清涼飲料を製造した。
【００３３】
【表３】
2009263257.tif 000004
【００３４】
（２）清涼飲料
表４に示した配合で、清涼飲料を製造した。
【００３５】
【表４】
2009263257.tif 000005
【００３６】
（３）カプセル剤
表５に示す組成物（３００ｍｇ）をカプセル中に封入し、カプセル剤を製造した。
【００３７】
【表５】
2009263257.tif 000006
【００３８】
（４）錠剤
表６に示す組成物（１錠＝２５０ｍｇ）を打錠し、錠剤を製造した。
【００３９】
【表６】
2009263257.tif 000007
【００４０】
（５）顆粒剤
表７に示す組成物（１袋＝５００ｍｇ）を混合し顆粒剤を製造した。
【００４１】
【表７】
2009263257.tif 000008
【００４２】
（６）食品
表８に示す組成物（１錠＝１０００ｍｇ）を打錠し、チュアブルタイプのタブレット食品を製造した。
【００４３】
【表８】
2009263257.tif 000009
【００４４】
（７）スポーツ飲料
表９に示した配合及び条件で、本発明のスポーツ飲料を調製した。
【００４５】
【表９】
2009263257.tif 000010
【００４６】
（８）食用油
表１０に示した組成で、調理用油を調製した。
【００４７】
【表１０】
2009263257.tif 000011
【００４８】
（９）食用油
表１１に示した組成で、調理用油を調製した。
【００４９】
【表１１】
2009263257.tif 000012
【００５０】
（１０）食用油
表１２に示した組成で、調理用油を調製した。
【００５１】
【表１２】
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【００５２】
（１１）食用油
表１３に示した組成で、調理用油を調製した。
【００５３】
【表１３】
2009263257.tif 000014
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】飼育試験終了後の肝臓重量を示すグラフである。
【図２】肝臓中に含まれる脂質含量を示したグラフである。
【図３】肝臓における脂肪合成系遺伝子の発現量を示したグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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