(57)【要約】【課題】  カボチャ種子抽出物には、メイラード反応阻害効果、発毛抑制効果、泌尿器系疾患予防効果、排尿障害治療効果などの種々の活性があることが知られている。本発明の課題は、これら以外の種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である、カボチャ種子抽出物を有効成分とする治療剤の提供にある。【解決手段】  カボチャ種子抽出物を有効成分とする、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、リウマチ治療剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、コレステロール低下剤、抗糖尿病剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項２】
カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とする高尿酸血症の予防または改善剤。
【請求項３】
カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗骨粗鬆症剤。
【請求項４】
カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とするリウマチ治療剤。
【請求項５】
カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗鬱・抗ストレス剤。
【請求項６】
カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とするアディポネクチン産生促進剤。
【請求項７】
カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とするコレステロール低下剤。
【請求項８】
カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗糖尿病剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カボチャ種子抽出物を有効成分とする各種疾病に有用な治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
カボチャ種子抽出物には、メイラード反応阻害効果（特許文献１）、発毛抑制効果（特許文献２）、泌尿器系疾患予防効果（特許文献３）、排尿障害治療効果（特許文献４）などの種々の活性があることが知られている。
しかしながら、カボチャ種子抽出物が、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効であるとの見地はない。
【特許文献１】特開２００７−２５４３４５号公報
【特許文献２】特開２００５−１５４０９号公報
【特許文献３】特開２００１−３４２１４２号公報
【特許文献４】特開２０００−２９０１９２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
請求項１に記載の発明は、カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤である。
請求項２に記載の発明は、カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とする高尿酸血症の予防または改善剤である。
請求項３に記載の発明は、カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗骨粗鬆症剤である。
請求項４に記載の発明は、カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とするリウマチ治療剤である。
請求項５に記載の発明は、カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗鬱・抗ストレス剤である。
請求項６に記載の発明は、カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とするアディポネクチン産生促進剤である。
請求項７に記載の発明は、カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とするコレステロール低下剤である。
請求項８に記載の発明は、カボチャ種子抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗糖尿病剤である。
【発明の効果】
【０００５】
本発明によれば、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
【０００７】
本発明で用いられるカボチャは、ウリ科カボチャ属に属する種であればとくに制限されないが、入手の容易性から、例えば西洋カボチャ、東洋カボチャ、ペポ種などが挙げられる。
【０００８】
カボチャ種子抽出物の調製方法としては、カボチャ種子を好ましくは乾燥後、粉砕し、これを常温、冷却下または加温下において、溶剤を用いて抽出することができる。得られた抽出液は、そのまま、希釈液、濃縮液、乾燥粉末として使用可能である。これら各種形態は、公知技術に従い、常法により調製できる。
【０００９】
抽出に用いる溶剤としては、水、有機溶剤、含水有機溶剤などが挙げられ、最も好ましくはエタノールを有機溶剤として用いる形態である。この場合、エタノールの水溶液が好ましく、エタノール濃度としては、２０〜８０容量％、好ましくは３０〜６０容量％、さらに好ましくは４０〜６０容量％である。
【００１０】
抽出温度は、使用する溶剤の沸点以下の温度であれば特に制限はない。抽出温度は、用いる溶媒によっても異なるが、一般に、４℃以上沸点未満である。加温して抽出する場合は、例えば、加熱還流などの加温抽出法、超臨界抽出法などが採用され得る。加温する場合、加圧して行ってもよい。
【００１１】
抽出時間は、抽出原料から十分に可溶性成分が抽出される時間であればよく、抽出温度などに応じて適宜設定すればよい。好ましくは３０分〜４８時間である。例えば、抽出温度が５０℃未満の場合は、抽出時間は６時間〜４８時間、５０℃以上の場合は、３０分〜２４時間である。
【００１２】
カボチャ種子抽出物の摂取量は、乾燥粉末として、成人１日１〜数回、１回量約１〜５００ｍｇ、好ましくは３〜３００ｍｇ程度投与するのがよい。
【００１３】
本発明の治療剤は、公知の方法により適宜製剤化することができる。即ち、本発明に有用な固形製剤または液状製剤は、カボチャ種子抽出物と添加剤とを混合し、従来充分に確立された公知の製剤製法を用いることにより製造される。添加剤としては、例えば賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、希釈剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤または香料などが挙げられる。
【００１４】
上記賦形剤としては、例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール或いはキシリトールなどの糖アルコール、ブドウ糖、白糖、乳糖或いは果糖などの糖類、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、リン酸水素カルシウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、βーシクロデキストリン、軽質無水ケイ酸、酸化チタン、またはメタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどが挙げられる。
【００１５】
上記ｐＨ調整剤としては、例えばクエン酸、リンゴ酸、リン酸水素ナトリウムまたはリン酸二カリウムなどが挙げられる。
上記清涼化剤としては、例えばｌ−メントールまたはハッカ水などが挙げられる。
上記懸濁化剤としては、例えば、カオリン、カルメロースナトリウム、キサンタンガム、メチルセルロースまたはトラガントなどが挙げられる。
上記希釈剤としては、例えば精製水、エタノール、植物油または乳化剤等が挙げられる。
上記消泡剤としては、例えばジメチルポリシロキサンまたはシリコン消泡剤などが挙げられる。
【００１６】
上記粘稠剤としては、例えばキサンタンガム、トラガント、メチルセルロースまたはデキストリンなどが挙げられる。
上記溶解補助剤としては、例えばエタノール、ショ糖脂肪酸エステルまたはマクロゴールなどが挙げられる。
上記崩壊剤としては、例えば低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチまたは部分アルファー化デンプンなどが挙げられる。
【００１７】
上記結合剤としては、例えばメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニールピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ポリビニルアルコール、プルラン、アルファー化デンプン、カンテン、トラガント、アルギン酸ナトリウムまたはアルギン酸プロピレングリコールエステルなどが挙げられる。
【００１８】
上記滑沢剤としては、例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ポリオキシル、セタノール、タルク、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ジメチルポリシロキサン、ミツロウまたはサラシミツロウなどが挙げられる。
上記抗酸化剤としては、例えばアスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、没食子酸プロピル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、トコフェロール、アスコルビン酸またはクエン酸などが挙げられる。
【００１９】
上記コーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アミノアルキルメタアクリレートコポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、メタアクリル酸コポリマー、ポリビニルアセタートジエチルアミノアセテートまたはセラックなどが挙げられる。
上記着色剤としては、例えばウコン抽出液、リボフラビン、酸化チタンまたはカロチン液などが挙げられる。
【００２０】
上記矯味矯臭剤としては、例えばクエン酸、アジピン酸、アスコルビン酸、果糖、Ｄ−ソルビトール、ブドウ糖、サッカリンナトリウム、単シロップ、白糖、ハチミツ、アマチャ、カンゾウ、クエン酸、アジピン酸、アスコルビン酸、オレンジ油、トウヒチンキ、ウイキョウ油、ハッカまたはメントールなどが挙げられる。
上記界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン、ポリソルベート類、ラウリル硫酸ナトリウム、マクロゴール類またはショ糖脂肪酸エステルなどが挙げられる。
上記可塑剤としては、例えばクエン酸トリエチル、ポリエチレングリコール、トリアセチンまたはセタノールなどが挙げられる。
上記香料としては、例えば、動物性香料或いは植物性香料等の天然香料、または単離香料或いは純合成香料等の合成香料などが挙げられる。
【００２１】
本発明のカボチャ種子抽出物は、飲食品材料に配合してもよい。このような材料としては、例えば、パン、チューインガム、クッキー、チョコレート、シリアル等の固形食品、ジャム、アイスクリーム、ヨーグルト、ゼリー等のジャム状、クリーム状またはゲル状食品、ジュース、コーヒー、ココア、緑茶、ウーロン茶、紅茶等の飲料等が挙げられる。また、調味料、食品添加物等に配合することもできる。
【実施例】
【００２２】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本発明で使用されるカボチャ種子抽出物は、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、リウマチ治療剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、コレステロール低下剤、抗糖尿病剤としてきわめて有用である。以下、上記各種薬効について実施例でもって説明する。
【００２３】
実施例１（抗アレルギー剤としての有用性）
西洋カボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｅ ｐｅｐｏ Ｌｉｎｎｅ）の種子を４０℃の乾燥炉にて２０時間乾燥後、粉砕し、５倍量の４０容量％エタノール水溶液を加え、５時間攪拌し、抽出物１を得た。該抽出物１を減圧濃縮および凍結乾燥し、粉末を得た。
【００２４】
ＲＡＳＴ法による食物アレルゲン陽性の慢性じんま疹の患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に前記粉末を３００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表１に示す。
【００２５】
【表１】
2009184940.tif 000002
【００２６】
実施例２
ＲＡＳＴ法によるアトピー性皮膚炎患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に実施例１の粉末を３００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表２に示す。
【００２７】
【表２】
2009184940.tif 000003
【００２８】
実施例３（高尿酸血症の改善効果）
実験方法
供試動物はWistar系ラット雌（８週令、体重約180g）を１群６匹で用いた。
試験飼料に0.75％の濃度でアデニンを加えてラットに給与し、腎臓からの尿中への尿酸排泄阻害を起こさせて高尿酸血症のモデル動物とした。
対照群は、上記の0.75％アデニン飼料のみ、薬剤投与群は、０．７５％アデニンと実施例１の抽出物１由来の粉末含有飼料とした。飼料は自由摂取としたが、薬剤投与群の試験飼料中の上記抽出物１の乾燥粉末の濃度を、摂取量が１ｍｇ／ｋｇ体重となるように調整した。試験開始日及び24日目に血中の尿酸値を測定した。
その結果、対照群の試験開始日の血中尿酸濃度は、０．５７ｍｇ／ｍｌであり、２４日目が２．３３ｍｇ／ｍｌであったのに対し、薬剤投与群の２４日目の血中尿酸濃度は０．８２ｍｇ／ｍｌであった。
この結果から明らかなように、対照群では血中尿酸濃度が大幅に増加するのに対し、薬剤投与群ではいずれもその濃度は増加しなかった。したがって、カボチャ種子抽出物を有効成分として含有する薬剤は、高尿酸血症の予防または改善剤として有用であることが示された。
【００２９】
実施例４（抗骨粗鬆症効果）
骨粗鬆症改善効果試験
ＳＤ系ラット（２２週齢）メスの卵巣を外科的に取り除き、骨粗鬆症のモデルラットを作成した。卵巣摘出ラットを７匹ずつ６群に分け、３５日間の試験期間中、１日置きに（計１７回）、前記抽出物１の粉末の摂取量が１ｍｇ／ｋｇとなるように、生理食塩水溶解した液体を２ｍｌ経口投与した。飼料はオリエンタル酵母株式会社のマウス・ラット・ハムスター用固形飼料ＣＲＦ−１を用い、給餌および給水方法は自由摂取とした。試験期間中、各群間で、餌の摂取量に差は認められなかった。試験開始後３５日目にラットの体重を測定した後、大腿骨を取り出した。大腿骨は、接着組織および筋肉を取り除いて分析に使用した。大腿骨の体積を測定した後、エタノールで３回洗浄し、次にアセトンで３回洗浄したのち、一晩乾燥し、その後、重量を測定して大腿骨の乾燥重量を求めた。体積および乾燥重量から、骨密度（乾燥重量ｇ／体積ｍｍ3 ）を測定した。なお対照実験として、前記抽出物１の粉末を含まない生理食塩水をラットに投与したこと以外は、上記実験を繰り返した例（比較例）も併せて、その結果を表３に示す。
【００３０】
【表３】
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【００３１】
実施例４と比較例とを対比したところ、実施例４はp＜0.05の危険率で有意差が認められた。
【００３２】
実施例５（抗リウマチ効果）
ヒト慢性リウマチ患者の滑膜から樹立された繊維芽細胞株であるＤＳＥＫ細胞を１０％ＦＢＳ（バイオウイタッカー社製）を含むＩｓｃｏｖ−ＭＥＭ培地（ＩＭＤＭ：ギブコＢＲＬ社製）にて、５％ＣＯ２存在下、３７℃で細胞が培養器に飽和になるまで培養し、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（バイオウイタッカー社製）で細胞を３×１０４細胞／ｍｌとなるように上記培地に懸濁し、９６ウェルマイクロタイタープレート（ＦＡＬＣＯＮ社製）の各ウェルに２００μｌずつ分注した。培養５〜７日後、ほぼ細胞が８０％飽和になった時で培地を交換し、前記抽出物１の粉末濃度が５００μｇ／ｍｌの濃度である２００μｌの上記培地を加えた。
２４時間、７２時間経過時に１０μｌのプレミックスＷＳＴ−１（宝酒造社製、ＭＫ４００）を加えて３７℃で３．５時間反応させ、４５０ｎｍにおける吸光度（Ａ４５０）から６５０ｎｍにおける吸光度（Ａ６５０）を差し引いた値を細胞増殖度とした。その結果、２４時間後の細胞増殖度は０．７８、７２時間後は０．３４であり、抗リウマチ活性が認められた。なお、前記抽出物１の粉末を加えない対照区では、２４時間、７２時間経過時の細胞増殖度が３．９０であった。
【００３３】
実施例６（抗鬱・抗ストレス効果）
上記抽出物１の粉末の治療効果を調べた。
マウス強制水泳試験による精神安定作用の評価
本発明の治療剤の評価は、１９７７年にPorsoltにより開発されたマウス強制水泳試験を採用した。本試験は鬱病の動物モデル実験として最も多用される方法のひとつである。本試験では、マウスをある限られたスペースの中で強制的に泳がせて「無動状態」を惹起させる。この無動状態は、ストレスを負荷された動物が水からの逃避を放棄した一種の「絶望状態」を反映するものと考えられ、ヒトにおける鬱状態、ストレス状態と関連づけられている。事実、抗鬱薬は特異的にこの状況下における無動状態の持続時間を短縮させることがわかっており、この短縮作用は臨床力価との間に有意な相関を有することが認められている。
【００３４】
本試験方法は次のとおりである。
２５℃の水を深さ１５ｃｍまで入れたプラスチック円筒中でマウスを強制水泳させる。５分間の強制水泳後、３０℃の乾燥機中で１５分間乾燥し、ホームケージに戻す。翌日マウスに試験試料を腹腔内投与して、その１時間後に再び５分間の強制水泳を課し、現れた無動状態の持続時間をストップウォッチを用いて測定する。マウスが水に浮かんで静止している状態を無動状態と判定する。無動状態持続時間については有意差検定を行い、統計学的に有意差を検定する。実験には雄のｄｄYマウスを使用し、１群６匹とする。なお、試験は全て午後１時から午後６時の間に行う。また、ポジティブコントロールとして抗鬱薬であるイミプラミンを用いた試験も行う。
【００３５】
その結果、抽出物１の粉末を３０ｍｇ／ｋｇ投与したマウスの無動状態持続時間は、１７７．７±５．９秒であった。コントロール（生理食塩水のみ）は２２０．０±２．２秒であった。ポジティブコントロール（３０ｍｇ／ｋｇ投与）のマウスの無動状態持続時間は、１７６．５±４．０秒であった。本実施例およびポジティブコントロールの無動状態持続時間は、危険率１％で有意差を有する。なお、抽出物１の粉末を２〜３倍量使用しても、同様の結果を得た。
【００３６】
実施例７
アディポネクチン産生上昇確認試験
正常ヒト前駆脂肪細胞を使用し、１．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはヒト前駆脂肪細胞基礎培地を用いた。２４時間後に分化誘導添加剤と抽出物１の粉末を加えた増殖培地に交換し、さらに１週間培養した。その後、培養上清中に産生されたアディポネクチン量をＥＬＩＳＡ法により定量した。各試料の評価結果を、ブランク（試料未添加）のアディポネクチン量を１００とした場合の相対値にて下記に示す。なお、添加した抽出物１の粉末濃度は、１０μｇ／ｍｌであった。
【００３７】
上記試験結果：相対値＝３７４。この数値は、危険率１％で有意差を有する。
【００３８】
実施例８（コレステロール低下作用）
体重２０ｇ前後のＩＣＲ系雄性マウス（１群５匹）に、高コレステロール−コール酸食餌（７１．９％標準餌、１５％ショ糖、２％食塩、１０％ココナッツオイル、０．６％コレステロール、０．２％コール酸、０．３％塩化コリン）を試験第１日目から第７日目まで給餌（自由摂取）した。試験第６日目と第７日目に、上記抽出物１の粉末５ｍｇを蒸留水に溶解し、経口投与した。その後、２４時間の絶食を行い、試験第８日目にマウスから血液を採取し、血清を分離した。
【００３９】
また、採取した血清の一部にヘパリンを添加し沈降させ、低比重リポタンパク（ＬＤＬ）としてヘパリン沈降リポタンパクを得た。血清中の総コレステロール値及びＬＤＬ中のコレステロール値を、シー・シー・アライン（Ｃ．Ｃ．Ａｌｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．）らの報告（クリニカル ケミストリイ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１９７４年、２０巻、４７０−４７５頁）に従って、測定した。
【００４０】
血清中の総コレステロール値からＬＤＬコレステロール値を引いた値を、高比重リポタンパク（ＨＤＬ）コレステロール値として算出した。なお対照群は、上記抽出物１の粉末を投与していない群である。
【００４１】
その結果を表４に示した。表４から明らかなように、血清中総コレステロールを低下させる明らかな作用が認められた。
【００４２】
【表４】
2009184940.tif 000005
【００４３】
実施例９
６週齢の雄性ＳＤ系ラット（１群６匹）の尾静脈にストレプトゾトシンを１回投与することにより糖尿病を惹起した。
前記抽出物１の投与量を５００μｇ／ｋｇとし、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）投与の１時間前に経口投与し、その翌日より１日１回１３日間連続経口投与した。最終投与の翌日に５０％グルコース水溶液（１０ｍｌ／ｋｇ）を経口投与し、経時的に血糖値（ｍｇ／ｄｌ）を測定（ｏ−トルイジン・ホウ酸）した。
【００４４】
なお、正常対照群としてＳＴＺを投与せずに滅菌水のみを投与した群、病態対照群としてＳＴＺを投与して滅菌水を投与した群、および陽性対照群としてＳＴＺを投与してニコチン酸アミド（５０ｍｇ／ｋｇ）を投与した群を設けた。ニコチン酸アミドはＳＴＺ糖尿病モデルに対して有効であることが報告されている（新薬開発のための動物利用集成，４１９−４２２頁，Ｒ＆Ｄプランニング，１９８５年）。
【００４５】
糖尿病は糖代謝能力が低下し高血糖を呈する疾患である。本実施例においてはグルコース投与１時間後に血糖値のピークを認めるが、病態対照群では最高血糖値が３６０ｍｇ／ｄｌであり、正常対照群では最高血糖値は１６４ｍｇ／ｄｌであった。病態対照群の最高血糖値は正常対照群のそれと比較して約２倍を示し、病態対照群では糖代謝能力の低下が認められた。
【００４６】
抽出物１の活性は、式１により病態対照群の血糖値に対する抑制率（％）を算出した。
【００４７】
（式１）
抑制率（％）＝〔１−（抽出物１投与群または陽性対照群の最高血糖値−正常対照群の最高血糖値）／（病態対照群の最高血糖値−正常対照群の最高血糖値）〕×１００
【００４８】
その結果、抽出物１投与群の抑制率は６１．０％であった。陽性対照群の抑制率は４３．０％であった。したがって、抽出物１投与群は、病態対照群に比較して、優れた血糖値の低下が認められ、糖代謝能力が改善されていた。
【産業上の利用可能性】
【００４９】
本発明の治療剤は、医薬、食品、飼料の形態として有用である。なお、上記各例において、実施例１の抽出物１の調製の際に、６０容量％エタノール水溶液を用いて抽出物を調製した場合においても、上記と同様の結果を得た。