(57)【要約】【課題】安全性の高い天然物の中からテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有する物質を見出し、それを有効成分とする抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤及び頭髪化粧料を提供する。【解決手段】抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤及び頭髪化粧料に、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを有効成分として含有せしめる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを有効成分として含有することを特徴とする抗男性ホルモン剤。
【請求項２】
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
【請求項３】
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを有効成分として含有することを特徴とするテストステロン５α−レダクターゼ阻害剤。
【請求項４】
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを有効成分として含有することを特徴とするアンドロゲン受容体結合阻害剤。
【請求項５】
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを配合したことを特徴とする頭髪化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤及び頭髪化粧料に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えば、テストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−レダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。
【０００３】
アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等、さまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、従来から、これらの各種症状を改善するために過剰のアンドロゲンの作用を抑制する方法、具体的には、テストステロンを活性型５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−レダクターゼの作用を阻害することにより、活性な５α−ＤＨＴが生じるのを抑制する方法や、テストステロンから生じた５α−ＤＨＴが受容体と結合するのを阻害することによりアンドロゲン活性を発現させない方法などが知られている。
【０００４】
テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有するものとしては、例えば、コエロスポンディアス（Choerospondias）属に属する植物からの抽出物（特許文献１参照）、マジト及び／又はカチュアからの抽出物（特許文献２参照）、五斂子からの抽出物（特許文献３参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓及び穿心蓮からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物からの抽出物（特許文献４参照）等が知られている。
【０００５】
また、アンドロゲン受容体結合阻害作用を有するものとしては、例えば、ワンピ属ミカン科黄皮の葉の抽出物（特許文献５参照）、マジト及び／又はカチュアの抽出物（特許文献２参照）、五斂子からの抽出物（特許文献３参照）、藤茶の枝葉からの抽出物（特許文献６参照）等が知られている。
【特許文献１】特開２００３−５５１６２号公報
【特許文献２】特開２００２−２４１２９７号公報
【特許文献３】特開２００２−２４１２９６号公報
【特許文献４】特開２００２−８７９７６号公報
【特許文献５】特開２００１−２２６２７８号公報
【特許文献６】特開２００２−３０８７９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有する物質を見出し、それを有効成分とする抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤及び頭髪化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するため、本発明の抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤及びアンドロゲン受容体結合阻害剤は、リクイリチゲニン（liquiritigenin）及び／又はイソリクイリチゲニン（isoliquiritigenin）を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００８】
また、本発明の頭髪化粧料は、リクイリチゲニン（liquiritigenin）及び／又はイソリクイリチゲニン（isoliquiritigenin）を配合したことを特徴とする。
【０００９】
ここで、本明細書において「アンドロゲン受容体結合阻害」とは、５α−ＤＨＴとアンドロゲン受容体との結合の阻害を意味し、その阻害様式は特に限定されるものではなく、例えば、競合的拮抗薬、非競合的拮抗薬といったアンタゴニストとしての阻害が考えられる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、リクイリチゲニン（liquiritigenin）及び／又はイソリクイリチゲニン（isoliquiritigenin）を有効成分として含有する抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤及び頭髪化粧料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明について説明する。
〔抗男性ホルモン剤，育毛剤，テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤，アンドロゲン受容体結合阻害剤〕
本発明の抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤及びアンドロゲン受容体結合阻害剤は、リクイリチゲニン（liquiritigenin）及び／又はイソリクイリチゲニン（isoliquiritigenin）を有効成分として含有する。
【００１２】
リクイリチゲニン（liquiritigenin）は、下記式（Ｉ）で表される化学構造を有するフラボノイド誘導体の一種である。
【００１３】
【化１】
2009001523.tif 000002
【００１４】
また、イソリクイリチゲニン（isoliquiritigenin）は、下記式（II）で表される化学構造を有するフラボノイド誘導体の一種である。
【００１５】
【化２】
2009001523.tif 000003
【００１６】
リクイリチゲニン又はイソリクイリチゲニンは、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを含有する植物抽出物から単離・精製することにより製造することができる。
【００１７】
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを含有する植物抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法によって得ることができる。リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを含有する植物としては、例えば、甘草等が挙げられる。
【００１８】
甘草には、Glychyrrhiza glabra、Glychyrrhiza inflata、Glychyrrhiza uralensis、Glychyrrhiza aspera、Glychyrrhiza eurycarpa、Glychyrrhiza pallidiflora、Glychyrrhiza yunnanensis、Glychyrrhiza lepidota、Glychyrrhiza echinata、Glychyrrhiza acanthocarpa等、様々な種類のものがあり、これらのうち、いずれの種類の甘草を抽出原料として使用してもよいが、特にGlychyrrhiza glabraを抽出原料として使用することが好ましい。
【００１９】
抽出原料として使用し得る甘草の構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、花部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは根部である。
【００２０】
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを含有する植物抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２１】
抽出溶媒としては、極性溶媒を用いるのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００２２】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２３】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２４】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０質量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して多価アルコール１０〜９０質量部を混合することが好ましい。
【００２５】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００２６】
以上のようにして得られた抽出液、当該抽出液の濃縮物又は当該抽出液の乾燥物からリクイリチゲニン又はイソリクイリチゲニンを単離・精製する方法は、特に限定されるものではなく、常法により行うことができる。例えば、植物抽出物を、シリカゲルやアルミナ等の多孔質物質、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体やポリメタクリレート等の多孔性樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーに付して、水、アルコールの順で溶出させ、アルコールで溶出される画分として得ることができる。カラムクロマトグラフィーにて溶出液として用いられるアルコールは、特に限定されるものではなく、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール又はそれらの水溶液等が挙げられる。さらに、カラムクロマトグラフィーにより得られたアルコール画分を、ＯＤＳを用いた逆相シリカゲルクロマトグラフィー、再結晶、液−液向流抽出、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー等の任意の有機化合物精製手段を用いて精製してもよい。
【００２７】
以上のようにして得られるリクイリチゲニン、イソリクイリチゲニンは、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及びアンドロゲン受容体結合阻害作用を有しているため、それらの作用を利用して抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤及びアンドロゲン受容体結合阻害剤の有効成分として使用することができる。この場合、抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤及びアンドロゲン受容体結合阻害剤は、リクイリチゲニン、イソリクイリチゲニンをそれぞれ単独で含有していてもよいし、それらを混合して含有していてもよい。リクイリチゲニン及びイソリクイリチゲニンを混合して、抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤又はアンドロゲン受容体結合阻害剤に含有させる場合、それらの配合割合は、リクイリチゲニン及びイソリクイリチゲニンの抗男性ホルモン作用又は育毛作用（テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用）の程度に応じて適宜決定すればよい。
【００２８】
なお、抽出処理により得られた植物抽出物はリクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを含有しており、そのまま抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤及びアンドロゲン受容体結合阻害剤の有効成分として使用し得るが、精製してリクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンの純度を高めたものを使用することが好ましい。リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンの純度を高めたものを有効成分として使用することによって、より一層使用効果に優れた抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤又はアンドロゲン受容体結合阻害剤を得ることができる。なお、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを含有する植物抽出物には、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを含有する植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２９】
ここで、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンが有する抗男性ホルモン作用又は育毛作用は、例えば、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用に基づいて発揮される。ただし、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンが有する抗男性ホルモン作用又は育毛作用は、上記作用に基づいて発揮される抗男性ホルモン作用又は育毛作用に限定されるものではない。
【００３０】
本発明の抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤又はアンドロゲン受容体結合阻害剤は、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンのみからなるものであってもよいし、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを製剤化したものであってもよい。
【００３１】
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンは、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンは、他の組成物（例えば、後述する頭髪化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００３２】
なお、本発明の抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤又はアンドロゲン受容体結合阻害剤は、必要に応じて、抗男性ホルモン作用、育毛作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有する他の天然抽出物を配合して有効成分として用いることができる。
【００３３】
本発明の抗男性ホルモン剤は、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンが有するテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を通じて、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビ等）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗男性ホルモン剤は、これらの用途以外にもテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００３４】
本発明の育毛剤は、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンが有するテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を通じて、男性型脱毛症等を予防、治療又は改善することができ、特に男性型脱毛症の予防、治療又は改善に好適である。ただし、本発明の育毛剤は、これらの用途以外にもテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００３５】
本発明のテストステロン５α−レダクターゼ阻害剤は、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンが有するテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を通じて、テストステロン５α−レダクターゼの活性を阻害することができる。これにより、アンドロゲンの作用を抑制することができ、男性ホルモンが関与している各種疾患、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のテストステロン５α−レダクターゼ阻害剤は、これらの用途以外にもテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００３６】
本発明のアンドロゲン受容体結合阻害剤は、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンが有するアンドロゲン受容体結合阻害作用を通じて、５α−ＤＨＴとアンドロゲン受容体との結合を阻害することができ、アンドロゲンの作用を抑制することができる。これにより、男性ホルモンが関与している各種疾患、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のアンドロゲン受容体結合阻害剤は、これらの用途以外にも、５α−ＤＨＴとアンドロゲン受容体との結合を阻害することに意義あるすべての用途に用いることが可能である。
【００３７】
〔頭髪化粧料〕
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンは、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及びアンドロゲン受容体結合阻害作用を有しており、頭髪又は頭皮に適用した場合の使用感と安全性とに優れているため、頭髪化粧料に配合するのに好適である。この場合、頭髪化粧料には、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンが配合されていてもよいし、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンから製剤化した抗男性ホルモン剤又は育毛剤が配合されていてもよい。リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニン、抗男性ホルモン剤、育毛剤を頭髪化粧料に配合することによって、頭髪化粧料にテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を付与することができる。
【００３８】
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを配合し得る頭髪化粧料の種類は、特に限定されるものではなく、例えば、ヘアートニック、ヘアーローション、ヘアークリーム、整髪剤、シャンプー、リンス、トリートメント等が挙げられる。
【００３９】
リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンを頭髪化粧料に配合する場合、その配合量は、頭髪化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％であり、特に好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１質量％である。
【００４０】
本発明の頭髪化粧料は、リクイリチゲニン及び／又はイソリクイリチゲニンが有するテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を妨げない限り、通常の頭髪化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された上記成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。
【００４１】
なお、本発明の抗男性ホルモン剤、育毛剤又は頭髪化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００４２】
以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００４３】
〔製造例１〕リクイリチゲニン及びイソリクイリチゲニンの製造
甘草の根部の粗粉砕物５００ｇに５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比＝１：１）５０００ｍＬを加え、穏やかに攪拌しながら８０℃にて２時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を４０℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して甘草根部５０質量％エタノール抽出物（１２４ｇ）を得た。
【００４４】
このようにして得られた甘草５０質量％エタノール抽出物１００ｇに水１Ｌを加えて懸濁させ、多孔性樹脂（商品名：ＤＡＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０，和光純薬社製）１Ｌ上に付し、水２０００ｍＬ、３０質量％エタノール２０００ｍＬ、７０質量％エタノール２０００ｍＬ、及び９９質量％エタノール２０００ｍＬの順で溶出させた。
【００４５】
このようにして得られた９９質量％エタノール画分（固形分：２．８ｇ）を６０質量％メタノール（水とメタノールとの質量比＝４：６）に溶解し、ＯＤＳカラム（商品名：クロマトレックスＯＤＳ ＤＭ１０２０Ｔ，富士シリシア化学社製）に付し、移動相として６０質量％メタノール（水とメタノールとの質量比＝４：６）を用いて溶出させ、分離することにより、画分１及び画分２を得た。得られた画分１及び画分２を減圧下で濃縮し、画分１の濃縮物（２００ｍｇ）及び画分２の濃縮物（３００ｍｇ）を得た。
【００４６】
得られた画分１の濃縮物及び画分２の濃縮物のそれぞれに、メタノール１０ｍＬと水１０ｍＬとを加えて一晩放置し、再結晶させることで、それぞれの精製物（１２５ｍｇ，１８７ｍｇ）を得た。得られた各精製物（試料１，２）を１３Ｃ−ＮＭＲにより分析した結果を下記に示す。
【００４７】
＜試料１の１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）：＞
43.1（3-C），78.8（2-C），102.4（8-C），110.3（6-C），113.4（10-C），114.9（3',5'-C），127.9（2',6'-C），128.1（5-C），129.1（1'-C），157.3（4'-C），162.9（9-C），164.3（7-C），189.7（4-C）
【００４８】
＜試料２の１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）：＞
102.4（3'-C），107.9（5'-C），112.8（1'-C），115.6（3,5-C），117.3（α-C），125.6（1-C），130.9（2,6-C），132.5（6'-C），143.9（β-C），160.0（4-C），164.6（2'-C），165.4（4'-C），191.2（C=O）
【００４９】
以上の結果から、得られた各精製物のそれぞれが、下記式（Ｉ）で表されるリクイリチゲニン（試料１）、及び下記式（II）で表されるイソリクイリチゲニン（試料２）であることが確認された。
【００５０】
【化３】
2009001523.tif 000004
【００５１】
【化４】
2009001523.tif 000005
【００５２】
〔試験例１〕テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用試験
製造例１により得られたリクイリチゲニン（試料１）及びイソリクイリチゲニン（試料２）について、以下のようにしてテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を試験した。
【００５３】
蓋付Ｖ底試験管にて、テストステロン（東京化成社製）４．２ｍｇをプロピレングリコール１ｍＬに溶解し、その２０μＬと、１ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨを含有する５ｍｍｏｌ／ｍＬのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．２）８２５μＬとを混合した。
【００５４】
さらに、各試料のエタノール水溶液８０μＬ及びＳ−９（ラット肝臓ホモジネート，オリエンタル酵母工業社製）７５μＬを加えて混合し、３７℃にて３０分間インキュベートした。その後、塩化メチレン１ｍＬを加えて反応を停止させた。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、塩化メチレン層を分取して、分取した塩化メチレン層について、下記の条件にてガスクロマトグラフィー分析をし、３α−アンドロスタンジオール、５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）及びテストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）を定量した。コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶媒を同量（８０μＬ）用いて同様に処理し、ガスクロマトグラフィー分析をした。
【００５５】
＜ガスクロマトグラフィー条件＞
使用装置：Shimadzu GC-7A（島津製作所社製）
カラム：ＤＢ−１７０１（内径：０．５３ｍｍ，長さ：３０ｍ，膜厚：１．０μｍ，J&W Scientific社製）
カラム温度：２４０℃
注入口温度：３００℃
検出器：ＦＩＤ
試料注入量：１μＬ
スプリット比：１：２
キャリアガス：窒素ガス
キャリアガス流速：３ｍＬ／ｍｉｎ
【００５６】
３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンの濃度の定量は、下記の方法により行った。
３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンの標準品を塩化メチレンに溶解し、当該溶液についてガスクロマトグラフィー分析をし、これらの化合物の濃度（μｇ／ｍＬ）及びピーク面積から、ピーク面積と化合物の濃度との対応関係を予め求めておいた。そして、テストステロンとＳ−９との反応後の３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンそれぞれのピーク面積あたりの濃度を、予め求めておいた対応関係を利用して、次式（１）に基づき、算出した。
【００５７】
Ａ＝Ｂ×Ｃ／Ｄ・・・（１）
式中、Ａは「３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ又はテストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｂは「３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ又はテストステロンのピーク面積」を表し、Ｃは「標準品の濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｄは「標準品のピーク面積」を表す。
【００５８】
式（１）に基づいて算出された化合物濃度を用いて、次式（２）に基づき、変換率（テストステロン５α−リダクターゼによりテストステロンが還元されて生成した３α−アンドロスタンジオール及び５α−ＤＨＴの濃度と、テストステロンの初期濃度との濃度比）を算出した。
【００５９】
変換率(％)＝(Ｅ＋Ｆ)／(Ｅ＋Ｆ＋Ｇ)・・・（２）
式中、Ｅは「３α−アンドロスタンジオールの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｆは「５α−ＤＨＴの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｇは「テストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表す。
【００６０】
式（２）に基づいて算出された変換率を用いて、次式（３）に基づき、テストステロン５α−リダクターゼ阻害率（％）を算出した。
【００６１】
阻害率(％)＝(１−Ｈ／Ｉ)×１００・・・（３）
式中、Ｈは「試料添加時の変換率」を表し、Ｉは「コントロールの変換率」を表す。
【００６２】
試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、テストステロン５α−リダクターゼの阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
上記試験結果を表１に示す。
【００６３】
［表１］
試  料     ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１            ６８．５
２            １７．３
【００６４】
表１に示すように、リクイリチゲニン及びイソリクイリチゲニンは、優れたテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有することが確認された。また、リクイリチゲニン又はイソリクイリチゲニンのテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用の程度は、リクイリチゲニン又はイソリクイリチゲニンの濃度により調節可能であることが確認された。
【００６５】
〔試験例２〕アンドロゲン受容体結合阻害作用試験
製造例１により得られたリクイリチゲニン（試料１）及びイソリクイリチゲニン（試料２）について、以下のようにしてアンドロゲン受容体結合阻害作用を試験した。
【００６６】
マウス自然発生乳がん（シオノギ癌，ＳＣ−１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を、２％ＤＣＣ−ＦＢＳ及び１０−８ｍｏｌ／Ｌテストステロンを含有するＭＥＭ培地（ＭＥＭ−２培地）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように２％ＤＣＣ−ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地で希釈し、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００６７】
培養終了後、培地を抜き、１０−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴを含む０．５％ＢＳＡ含有ＨａｍＦ１２＋ＭＥＭ培地（ＨＭＢ培地）に溶解した試料（試料濃度；５０μｇ／ｍＬ）を１００μＬ添加し、４８時間培養した。その後、終濃度０．４ｇ／ｍＬでテストステロンを含有しないＭＥＭ−２培地に溶解したＭＴＴを各ウェルに１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出したブルーホルマザンを含有する２−プロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。
【００６８】
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記結合阻害率の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。
【００６９】
上記と並行して、試料単独でＳＣ−３細胞に及ぼす影響をみるため、ＨＭＢ培地にＤＨＴを添加せず試料のみを添加して、同様の培養と測定を行った。さらに、コントロールとして、試料及びＤＨＴを添加しないＨＭＢ培地で培養した場合、及び試料を添加せず１０−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴのみを添加したＨＭＢ培地で培養した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、下記式に基づき、アンドロゲン受容体結合阻害率（％）を算出した。
【００７０】
アンドロゲン受容体結合阻害率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「ＤＨＴ添加・試料無添加の場合の吸光度」を表し、Ｂは「ＤＨＴ無添加・試料無添加の場合の吸光度」を表し、Ｃは「ＤＨＴ添加・試料添加の場合の吸光度」を表し、Ｄは「ＤＨＴ無添加・試料添加の場合の吸光度」を表す。
上記試験結果を表２に示す
【００７１】
［表２］
試  料     ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１            １８．６
２              ５．６
【００７２】
表２に示すように、リクイリチゲニン及びイソリクイリチゲニンは、優れたアンドロゲン受容体結合阻害作用を有することが確認された。また、リクイリチゲニン又はイソリクイリチゲニンのアンドロゲン受容体結合阻害作用の程度は、リクイリチゲニン又はイソリクイリチゲニンの濃度により調節可能であることが確認された。
【００７３】
〔配合例１〕
下記組成の養毛ヘアートニックを常法により製造した。
リクイリチゲニン（製造例１）                            ０．４ｇ
塩酸ピリドキシン                                        ０．１ｇ
レゾルシン                                              ０．０１ｇ
Ｄ−パントテニルアルコール                              ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                              ０．１ｇ
Ｌ−メントール                                          ０．０５ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ４．０ｇ
ニンジンエキス                                          ０．５ｇ
エタノール                                            ２５．０ｇ
香料                                                    ０．０１ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【００７４】
〔配合例２〕
下記組成の養毛ヘアートニックを常法により製造した。
イソリクイリチゲニン（製造例１）                        ０．２ｇ
塩酸ピリドキシン                                        ０．１ｇ
レゾルシン                                              ０．０１ｇ
Ｄ−パントテニルアルコール                              ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                              ０．１ｇ
Ｌ−メントール                                          ０．０５ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ４．０ｇ
ニンジンエキス                                          ０．５ｇ
エタノール                                            ２５．０ｇ
香料                                                    ０．０１ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【００７５】
〔配合例３〕
下記組成の養毛ヘアートニックを常法により製造した。
リクイリチゲニン（製造例１）                            ０．０５ｇ
イソリクイリチゲニン（製造例１）                        ０．１５ｇ
塩酸ピリドキシン                                        ０．１ｇ
レゾルシン                                              ０．０１ｇ
Ｄ−パントテニルアルコール                              ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                              ０．１ｇ
Ｌ−メントール                                          ０．０５ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ４．０ｇ
ニンジンエキス                                          ０．５ｇ
エタノール                                            ２５．０ｇ
香料                                                    ０．０１ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【００７６】
〔配合例４〕
下記組成のシャンプー（クリームシャンプー）を常法により製造した。
リクイリチゲニン（製造例１）                            ０．４ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム      ３０．０ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム    ２０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                      ６．０ｇ
ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド                        ４．０ｇ
ジステアリン酸エチレングリコール                        ２．０ｇ
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）                      ０．１５ｇ
ムクロジエキス                                          ０．２ｇ
黄杞エキス                                              ０．５ｇ
オウバクエキス                                          ０．３ｇ
ローズマリーエキス                                      ０．５ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ３．０ｇ
香料                                                    ０．０１ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【００７７】
〔配合例５〕
下記組成のシャンプー（クリームシャンプー）を常法により製造した。
イソリクイリチゲニン（製造例１）                        ０．２ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム      ３０．０ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム    ２０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                      ６．０ｇ
ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド                        ４．０ｇ
ジステアリン酸エチレングリコール                        ２．０ｇ
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）                      ０．１５ｇ
ムクロジエキス                                          ０．２ｇ
黄杞エキス                                              ０．５ｇ
オウバクエキス                                          ０．３ｇ
ローズマリーエキス                                      ０．５ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ３．０ｇ
香料                                                    ０．０１ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【００７８】
〔配合例６〕
下記組成のシャンプー（クリームシャンプー）を常法により製造した。
リクイリチゲニン（製造例１）                            ０．０５ｇ
イソリクイリチゲニン（製造例１）                        ０．１５ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム      ３０．０ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム    ２０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                      ６．０ｇ
ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド                        ４．０ｇ
ジステアリン酸エチレングリコール                        ２．０ｇ
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）                      ０．１５ｇ
ムクロジエキス                                          ０．２ｇ
黄杞エキス                                              ０．５ｇ
オウバクエキス                                          ０．３ｇ
ローズマリーエキス                                      ０．５ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ３．０ｇ
香料                                                    ０．０１ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【００７９】
〔配合例７〕
下記組成のリンスを常法により製造した。
リクイリチゲニン（製造例１）                            ０．４ｇ
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム                    １．５ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル                        １．０ｇ
セチルアルコール                                        ２．０ｇ
オクチルドデカノール                                    １．０ｇ
カチオン化セルロース                                    ０．５ｇ
プロピレングリコール                                    ５．０ｇ
ムクロジエキス                                          ０．２ｇ
黄杞エキス                                              ０．５ｇ
オウバクエキス                                          ０．３ｇ
ローズマリーエキス                                      ０．５ｇ
香料                                                    ３．０ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【００８０】
〔配合例８〕
下記組成のリンスを常法により製造した。
イソリクイリチゲニン（製造例１）                        ０．２ｇ
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム                    １．５ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル                        １．０ｇ
セチルアルコール                                        ２．０ｇ
オクチルドデカノール                                    １．０ｇ
カチオン化セルロース                                    ０．５ｇ
プロピレングリコール                                    ５．０ｇ
ムクロジエキス                                          ０．２ｇ
黄杞エキス                                              ０．５ｇ
オウバクエキス                                          ０．３ｇ
ローズマリーエキス                                      ０．５ｇ
香料                                                    ３．０ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【００８１】
〔配合例９〕
下記組成のリンスを常法により製造した。
リクイリチゲニン（製造例１）                            ０．０５ｇ
イソリクイリチゲニン（製造例１）                        ０．１５ｇ
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム                    １．５ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル                        １．０ｇ
セチルアルコール                                        ２．０ｇ
オクチルドデカノール                                    １．０ｇ
カチオン化セルロース                                    ０．５ｇ
プロピレングリコール                                    ５．０ｇ
ムクロジエキス                                          ０．２ｇ
黄杞エキス                                              ０．５ｇ
オウバクエキス                                          ０．３ｇ
ローズマリーエキス                                      ０．５ｇ
香料                                                    ３．０ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明の抗男性ホルモン剤、育毛剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤又は頭髪化粧料は、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等の予防、治療又は改善に貢献でき、特に男性型脱毛症の予防、治療又は改善に大きく貢献できる。