(57)【要約】【課題】飲食品分野でも使用できる溶媒のみを用いてプラズマローゲン含有脂質を抽出する方法を提供する。【解決手段】凍結乾燥した水産無脊椎動物及びその内臓などの廃棄物、さらに魚介類およびその内臓などの廃棄物を加工・粉砕し、エタノール／水の混合溶媒（水が１０容量％以下）を加えて撹拌し、濾液を回収する。抽出温度は４５〜６０℃が好ましい。この抽出操作を繰り返すことで、プラズマローゲン含有脂質の収率を上げることができる。続いて、回収した濾液に１〜４倍容量の水を加えて撹拌し、静置又は遠心分離して沈殿するプラズマローゲン含有脂質を回収する。続いて、回収した上プラズマローゲン含有脂質を順相系カラムクロマトグラフィにて分画する。展開液はエタノール／水の混合溶媒（水が３〜１０容量％）が好ましい。全工程を経ることで約３０％の純度のプラズマローゲン含有脂質が得られる。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
水産無脊椎動物の乾燥物にエタノール及び水の混合溶媒を加えて撹拌し、濾液を回収する抽出工程と、
上記抽出工程にて回収された濾液に水を加えてエタノール及び水の混合溶媒の溶媒比を変化させ、沈殿するプラズマローゲン含有脂質を回収する液液分離工程と、
上記液液分離工程にて回収した上記脂質を順相系充填材を充填したカラムクロマトグラフィにてエタノール及び水の混合溶媒でプラズマローゲン含有脂質を分離する分離工程と
を有することを特徴とするプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項２】
上記抽出工程において、濾液を回収した後の残渣に上記エタノール及び水の混合溶媒をさらに加えて撹拌し、濾液を回収することを特徴とする請求項１記載のプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項３】
上記抽出工程は、２０〜７５℃の温度に制御されて行われることを特徴とする請求項１記載のプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項４】
上記抽出工程及び液液分離工程のいずれかの工程で加えられる上記エタノール及び水の混合溶媒における水の割合は６０容量％以下であることを特徴とする請求項１記載のプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項５】
水産無脊椎動物の乾燥物にエタノール及び水の混合溶媒を加えて撹拌し、濾液を回収する抽出工程と、
上記抽出工程で回収したエタノール及び水の混合溶媒の濾液に水を添加し、プラズマローゲン含有脂質を析出させる液液分離工程と
を有するプラズマローゲン含有脂質の分離方法。
【請求項６】
上記液液分離工程にて添加する水の量は、上記抽出工程で回収した濾液の０．１〜１０．０倍容量であることを特徴とする請求項５記載のプラズマローゲン含有脂質の分離方法。
【請求項７】
さらに、上記液液分離工程にて回収したプラズマローゲン含有脂質を、順相系充填材を充填したカラムクロマトグラフィにてエタノール及び水の混合溶媒でプラズマローゲン含有脂質を分離工程を有することを特徴とする請求項５記載のプラズマローゲン含有脂質の分離方法。
【請求項８】
上記液液分離工程にて回収したプラズマローゲン含有脂質を、順相系充填材を充填したカラムクロマトグラフィにてエタノール及び水の混合溶媒でプラズマローゲン含有脂質を分離工程を複数回行うことを特徴とする請求項５記載のプラズマローゲン含有脂質の分離方法。
【請求項９】
上記分離工程にて使用するエタノール及び水の混合溶媒における水の割合は１〜３０容量％であることを特徴とする請求項５記載のプラズマローゲン含有脂質の分離方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水産無脊椎動物、例えばホヤ、ヒトデ等の水産動物やその内臓等の廃棄物からプラズマローゲン含有脂質を抽出する方法、及びその分離方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
プラズマローゲンは、脳神経細胞に特徴的に多く含まれるリン脂質である。その化学構造は、エタノールアミン型のものが多く、グリセロール骨格のｓｎ−１位にビニルエーテル結合を持ち、ｓｎ−２位にドコサヘキサエン酸やアラキドン酸等の高度不飽和脂肪酸を有する。この特徴的な構造から、プラズマローゲンは、脳のシグナル伝達への関与や、脳内における抗酸化物質としての機能を有することが予見されてきた。
【０００３】
近年、このプラズマローゲンの抗酸化作用について、数多くの報告がなされている（非特許文献１参照）。また、アルツハイマー病疾患の脳は、健常者の脳に比べてプラズマローゲン量が３０％近く減少していることも報告されている（非特許文献２参照）。
【０００４】
そこで、最近では、このプラズマローゲンを飲食品や医薬品に含有させることにより、アルツハイマー病等の疾患を改善し、予防することも提案されている（特許文献１、２参照）。
【非特許文献１】T. Broscheet al.,“The biological significance of plasmalogensin defence against oxidative damage.”, Exp. Gerontol., 1998; 33(5): p.363-369
【非特許文献２】L. Ginsberg et al.,“Disease and anatomic specificity of ethanolamine plasmanogendeficiency in Alzheimer's disease brain.”, Brain Res., 1995; 698: p.223-226
【特許文献１】特開２００３−３１９０号公報
【特許文献２】特開２００３−１２５２０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、特許文献１，２に記載されているようなプラズマローゲン含有脂質の抽出方法では、クロロホルムやメタノール等の溶媒を用いるため、抽出されたプラズマローゲン含有脂質を飲食品に含有させて摂取するには安全性に問題があった。
【０００６】
本発明は、このような従来の実情に鑑みて提案されたものであり、飲食品分野でも使用できる溶媒のみを用いてプラズマローゲン含有脂質を抽出する方法、及びその分離方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上述したような目的を達成するために提案される本発明に係るプラズマローゲン含有脂質の抽出方法は、水産無脊椎動物の乾燥物、具体的には、水産動物及びその内臓などの廃棄物から得た乾燥物にエタノール及び水の混合溶媒を加えて撹拌し、濾液を回収する抽出工程と、上記抽出工程にて回収された濾液に水を加えてエタノール及び水の混合溶媒の溶媒比を変化させ、沈殿するプラズマローゲン含有脂質を回収する液液分離工程と、上記液液分離工程にて回収した脂質を順相系充填材を充填したカラムクロマトグラフィにてエタノール及び水の混合溶媒でプラズマローゲン含有脂質を分離する分離工程とを有することを特徴とする。
【０００８】
ここで、上記抽出工程では、濾液を回収した後の残渣にエタノール及び水の混合溶媒をさらに加えて撹拌し、濾液を回収することが好ましい。
【０００９】
また、上記抽出工程における温度は、２０〜７５℃の範囲にあることが好ましく、さらに好ましくは、４５〜６０℃の範囲にあることが好ましい。
【００１０】
また、上記抽出工程及び液液分離工程のいずれかの工程で加えられるエタノール及び水の混合溶媒における水の割合は、６０％容量以下であることが好ましく、より好ましくは、３〜１０容量％であることが好ましい。
【００１１】
さらに、本発明は、プラズマローゲン含有脂質の分離方法であって、具体的には、水産動物及びその内臓などの廃棄物から得た乾燥物にエタノール及び水の混合溶媒を加えて撹拌し、濾液を回収する抽出工程と、上記抽出工程で回収したエタノール及び水の混合溶媒の濾液に水を添加し、プラズマローゲン含有脂質を析出させる液液分離工程とを有することを特徴とする。
【００１２】
この分離方法において採用される液液分離工程にて添加する水の量は、上記抽出工程で回収した濾液の０．１〜１０．０倍容量であることが好ましく、より好ましくは、１〜４倍容量であることが好ましい。
【００１３】
また、上記液液分離工程にて回収したプラズマローゲン含有脂質をカラムクロマトグラフィにて分離する際に使用する充填材はシリカゲルが好ましく、展開液として使用するエタノール及び水の混合溶媒における水の割合は、１〜３０容量％であることが好ましく、より好ましくは、３〜１０容量％であることが好ましい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明方法は、飲食品分野でも使用できる溶媒のみを用いて、水産無脊椎動物である水産動物及びその内臓などの廃棄物から、機能性食品などの人の飲食物として供し得る食品に含有させることができるプラズマローゲン含有脂質を抽出することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明を適用した具体的な実施の形態について、図面を参照しながら詳細に説明する。この実施の形態は、飲食品分野でも使用できる溶媒のみを用いて、水産動物及びその内臓などの廃棄物からプラズマローゲン含有脂質を抽出若しくは分離する方法である。
【００１６】
ここで、プラズマローゲンの化学的な構造を示すと、通常、下記の一般式（Ｉ）で表される。
【００１７】
【化１】
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【００１８】
この式において、Ｒ１は好ましくは炭素数１〜２０のアルキル基であり、具体的にはドデシル基、テトラデシル基、ヘキサデシル基、オクタデシル基、イコサニル基等が挙げられる。また、Ｒ２は高度不飽和脂肪酸残基であり、具体的にはオクタデカジエノイル基、オクタデカトリエノイル基、イコサテトラエノイル基、イコサペンタエノイル基、ドコサテトラエノイル基、ドコサペンタエノイル基、ドコサヘキサエノイル基等が挙げられる。また、Ｘはエタノールアミン、コリン、セリン、イノシトール、グリセロールから選ばれる極性基である。
【００１９】
本実施の形態では、このような構造式で表されるプラズマローゲンのうち、一般式中のＸがエタノールアミンであるエタノールアミン型プラズマローゲンを含有するリン脂質を抽出する。以下の説明では、エタノールアミン型プラズマローゲンのことを単にプラズマローゲンという。
【００２０】
プラズマローゲン含有脂質の抽出に用いる水産動物及びその内臓などの廃棄物は、特に制限されないが、例えばマボヤ（Halocynthia roretzi）、キヒトデ（Asterias amurensis）、イトマキヒトデ（Asteriaspectinifera）、キタムラサキウニ（Strongylocentrotus nudus）、バフンウニ（Hemicentrotus pulcherrimus）、マナマコ（Stichopus japonicus）、ミドリイソギンチャク（Anthopleura midori）、ヨロイイソギンチャク（Anthopleura japonica）、ヒザラガイ（Acantbopleura japonica）、レイシガイ（Thais bronni）、チヂミボラ（Nucella heyseana）、クボガイ（Chlorostoma argyrostoma）、サルアワビ（Tugali gigas）、ムラサキイガイ（Mytilusgalloprovincialis）、ムラサキインコガイ（Septifervirgatus）、マガキ（Crassostera gaigas）、レイシガイ（Thaisbronni）、クロマグロ（Thunnus thynnus）、サケ（Oncorhynchus keta）、サンマ（Cololabis saira）、カツオ（Katsuwonus pelamis）等を用いることができる。
【００２１】
特に、上述の水産無脊椎動物のうちでは、キヒトデ、イトマキヒトデ、キタムラサキウニ、ミドリイソギンチャク、ヨロイイソギンチャク、レイシガイ、ムラサキイガイ、マガキは、ホスファチジルエタノールアミン（以下、ＰＥと記す場合もある。）画分のうち９０％以上がアルケニルアシル型、すなわちプラズマローゲンであることが本件発明者らによって確認されている。他の水産無脊椎動物も、ホスファチジルエタノールアミン画分のうち８０％以上がプラズマローゲンである。これらの水産動物及びその内臓などの廃棄物は、プラズマローゲン含有脂質の抽出に先立って凍結乾燥等によって乾燥させておくことが好ましい。
【００２２】
以下、プラズマローゲン含有脂質の抽出方法について、図１の工程図を参照しながら水産無脊椎動物を例に説明する。
【００２３】
先ず、凍結乾燥等により乾燥させた水産無脊椎動物を粉砕し、この粉砕物の約２〜６倍容量のエタノール及び水の混合溶媒を加えて３０〜６０分間撹拌する。撹拌後、吸引濾過によって濾液を回収する。混合溶媒の組成は、回収効率を考慮して、水の容量が６０％以下であることが好ましく、より好ましくは３〜１０容量％以下であることが好ましい。これら混合溶媒の粉砕物に対する割合及び攪拌時間は、吸引濾過による濾液の回収効率を実験により実証して得られたものである。また、混合溶媒の上記組成も、吸引濾過による濾液の回収効率を実験により実証して得られたものである。ここで得られる濾液には、後の工程において抽出されに足るプラズマローゲン含有脂質を含む濾液が得られた。
【００２４】
また、抽出温度は、２０〜７５℃の範囲にあることが好ましく、より好ましくは、４５〜６０℃の範囲あることが好ましい。この抽出温度の範囲は、濾液を効率よく回収するため、実験において確認されたものである。すなわち、抽出工程を短時間で効率よく実行するため、実験において確認されたものである。
【００２５】
なお、濾液を回収後の残渣に対して再度エタノール及び水の混合溶媒を加え、同様の抽出操作を繰り返すことで、プラズマローゲン含有脂質の回収率を上げることができる。
【００２６】
続いて、回収した濾液に、この濾液に対し０．１〜１０．０倍容量、より好ましくは、１〜４倍容量の水を加えて撹拌し、静置又は遠心分離して沈殿するプラズマローゲン含有脂質を回収する。ここで加えられる水は、濾液の希釈化を図り、効率の良い抽出工程を実行するためであって、その加えられる量は、実験において確認されたものである。
【００２７】
続いて、回収したプラズマローゲン含有脂質を減圧乾燥し、このプラズマローゲン含有脂質に含まれる溶媒を除去する。
【００２８】
次に、濾液又は沈殿物、あるいは残渣として回収したプラズマローゲン含有脂質をシリカゲルを充填したカラムクロマトグラフィにて分画する。なお、ここで用いる展開液は、エタノール及び水の混合溶媒であり、その混合溶媒の組成は、水が１〜３０容量％であることが好ましく、より好ましくは、３〜１０容量％であることが好ましい。この展開液として用いる混合溶媒の組成も、濾液の希釈化を図り、効率の良い抽出工程を実行するためであって、その組成は実験において確認されたものである。
【００２９】
そして、ここで得られたプラズマローゲン含有脂質をさらに減圧乾燥し、このプラズマローゲン含有脂質に含まれる溶媒を除去する。この工程は、必ずしも採用する必要はなく、前記工程で得られたプラズマローゲン含有脂質の状態に応じて繰り返される。
【００３０】
すなわち、本発明においては、凍結乾燥した水産無脊椎動物及びその内臓などの廃棄物、さらに魚介類及びその内臓などの廃棄物を凍結乾燥し、それを粉砕し、エタノール／水の混合溶媒を加えて撹拌し、濾液を回収する。
【００３１】
本発明方法では、この抽出操作を繰り返すことで、プラズマローゲン含有脂質の収率を上げることができる。続いて、回収した濾液に１〜４倍容量の水を加えて撹拌し、静置又は遠心分離して沈殿するプラズマローゲン含有脂質を回収する。続いて、回収した上プラズマローゲン含有脂質を順相系カラムクロマトグラフィにて分画する。展開液は、エタノール及び水の混合溶媒を用いる。エタノール及び水の混合溶媒としては、回収効率を考慮して、水を３〜１０容量％含有するものを用いることが望ましい。そして、上述の全工程を経ることで、約３０％の純度のプラズマローゲン含有脂質を得ることがで得きる。
【００３２】
以上のようにして抽出されたプラズマローゲン含有脂質は、ソフトカプセル、飲食品に含有させることができる。飲料としては、例えば、スポーツ飲料、果汁飲料、乳酸飲料、アルコール飲料、豆乳などを挙げることができる。また、食品としては、パン、ビスケット、キャンディー、ゼリーなどの菓子類、ヨーグルトなどの乳加工品、ハムなどの肉加工食品、マーガリン、ショートニングなどの油脂加工食品などを挙げることができる。
【実施例１】
【００３３】
以下、本発明の具体的な実施例を説明する。本実施例１は、水産無脊椎動物としてマボヤの可食部分を用いてプラズマローゲン含有脂質を抽出する例である。
【００３４】
本実施例では、マボヤの可食部分を凍結乾燥し、この凍結乾燥物を用いた。まず、マボヤの可食部分の凍結乾燥物１００ｇに３００ｍｌのエタノール及び水の混合溶媒を加えて４５℃の温度で６０分間撹拌する。ここで用いるエタノール及び水の混合溶媒は、水の混合割合を５容量％とするものである。
【００３５】
次に、上述のとおりの撹拌後、吸引濾過によって濾液を回収する。さらに、濾液を回収した後の残渣に対して、再度エタノール及び水の混合溶媒を加え、同様の抽出操作を繰り返した。
【００３６】
続いて、回収した濾液に等量の水を加えて撹拌し、遠心分離して沈殿するプラズマローゲン含有脂質を回収した。回収したプラズマローゲン含有脂質から減圧乾燥にて溶媒を除去した。
【００３７】
ここで約４．５％のホスファチジルエタノールアミンを含むプラズマローゲン含有脂質が約１０．５ｇ得られた。
【００３８】
さらに、得られたプラズマローゲン含有脂質を、シリカゲルを充填したカラムクロマトグラフィに供し、水を５容量％含むエタノール及び水の混合溶媒で展開したところ、約４０．７％のホスファチジルエタノールアミンを含むプラズマローゲン含有脂質が約１．１ｇの画分が得られた。
【実施例２】
【００３９】
次に、本発明の実施例２を説明する。この実施例２も、前述した実施例１と同様に、水産無脊椎動物からプラズマローゲン含有脂質を抽出するものであって、プラズマローゲン含有脂質の抽出には、マボヤの可食部分の凍結乾燥物を用いた。
【００４０】
本実施例２においては、マボヤの可食部分の凍結乾燥物１００ｇに３００ｍｌのエタノール及び水の混合溶媒を加えて４５℃の温度で６０分間撹拌する。ここで用いるエタノール及び水の混合溶媒は、水の混合割合を５容量％とするものである。
【００４１】
次に、上述のとおりの撹拌後、吸引濾過によって濾液を回収する。さらに、濾液を回収した後の残渣に対して再度エタノール及び水の混合溶媒を加え、同様の抽出操作を繰り返した。ここで用いるエタノール及び水の混合溶媒も、水の混合割合を５容量％とするものである。
【００４２】
続いて、回収した濾液に等量の水を加えて撹拌し、遠心分離して沈殿するプラズマローゲン含有脂質を回収した。回収したプラズマローゲン含有脂質から減圧乾燥にて溶媒を除去した。
【００４３】
ここで約４．５％のホスファチジルエタノールアミンを含むプラズマローゲン含有脂質が約１０．５ｇ得られた。
【００４４】
さらに、得られたプラズマローゲン含有脂質を、シリカゲルを充填したカラムクロマトグラフィに供し、水を１０容量％含むエタノール及び水の混合溶媒で展開したところ、約２８．５％のホスファチジルエタノールアミンを含むプラズマローゲン含有脂質が約１．５ｇの画分が得られた。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明方法により得られたプラズマローゲン含有脂質は、飲食品分野において使用できないような溶媒等を含むことがないので、飲食品に含有して摂取することができる。そのため、広く食品業界において用いることを可能とするものである。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】プラズマローゲン含有脂質の抽出方法を説明する工程図である。
【図１】
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