(57)【要約】【課題】本発明の課題は、表皮細胞のインボルクリン産生を促進させることにより、皮膚バリアー機能を改善し皮膚に対する諸刺激を抑制することのできる皮膚外用剤を提供することである。【解決手段】 インボルクリン産生促進効果を有するエーデルワイス抽出物を含有することにより、皮膚バリアー機能を改善し皮膚に対する諸刺激を抑制することができる皮膚外用剤の提供が可能となる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キク科レオントポディウム属（Gnaphalium）植物のエーデルワイス（Gnaphalium  uliginosum L.）より得られる抽出物を有効成分とすることを特徴とするインボルクリン産生促進剤。
【請求項２】
キク科レオントポディウム属（Gnaphalium）植物のエーデルワイス（Gnaphalium  uliginosum L.）より得られる抽出物を有効成分とすることを特徴とする皮膚バリアー機能改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物のエーデルワイスの抽出物をインボルクリン産生促進剤として含有することを特徴とする皮膚バリアー機能改善剤に関するものであり、その利用分野としては、例えば、化粧品、医薬部外品、外用医薬品等の皮膚外用剤に用いることができる。さらに詳細には、植物のエーデルワイスの抽出物をインボルクリン産生促進剤として含有することを特徴とする皮膚外用剤である。ケラチノサイトのインボルクリン産生を促進することにより表皮細胞の角化を促進し、角層の形成を促すことにより皮膚バリアー機能を改善することが出来る皮膚外用剤に関するものである。
【従来の技術】
【０００２】
表皮細胞は新生されて剥離するまでの間に、分化誘導を受け、種々のケラチン分子種を合成し、角化に必要なタンパク質を発現する。とくに、表皮細胞の角化過程において、有棘層から顆粒層にかけてインボルクリンやロリクリン等のタンパク質が出現し、トランスグルタミナーゼなどの酵素によって架橋され、周辺帯（コーニファイドエンベロープ）を形成し、角質細胞の細胞膜を裏打ちする強靭な構造体を形成する。さらに、角質細胞間に存在するセラミドなどの細胞間脂質と共に、表皮バリアー機能の基礎を形成することが示唆されている。
【０００３】
周辺帯は角化細胞内のインボルクリン、ロリクリン、SPR、エラフィン、シスタチンA、S-100タンパク質ファミリー、デスモソームタンパク質など多数の分子がスルフヒドリルオキシダーゼとトランスグルタミナーゼによって架橋されることにより形成される。周辺帯は表皮の物理的、化学的および生物学的バリアー機能上、極めて重要なものであり、架橋酵素の欠損による周辺帯異常は重篤な角化異常症をひきおこすことが知られている。
【０００４】
一方、近年では、ストレス、環境汚染などが原因となり、肌に対して変調を訴える人が増加している。このような人の肌では、皮膚のバリアー機能が異常をきたしているために、化学物質、ダニ、ほこり等のアレルゲンや、紫外線等を刺激として感じやすく、皮膚のかぶれ、かゆみ、肌荒れ、炎症等を訴えたり、病的な場合ではアトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎等の疾患に至る。今までに、敏感肌を改善するために様々なアプローチがなされてきた。例えば、皮膚に対する刺激を軽減するために、防腐剤、アルコール等の皮膚の刺激となりうる物質を極力含有しない皮膚外用剤を使用してもらうことや、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等の保湿成分を多く含有する皮膚外用剤を使用したり、各種の抗炎症剤を配合した皮膚外用剤が使用されてきた。
【特許文献１】特開平１０−１８２３３２号公報
【特許文献２】特開２０００−２１２２０３号公報
【非特許文献１】清水  宏，あたらしい皮膚科学，３−９，２００５．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、これらの皮膚外用剤では、一時的に角層表面に水分を補うものや、炎症を抑えるだけで、充分な効果を発揮するものではなく、その改善が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明者らはこの様な問題を解決するべく鋭意検討を行った結果、植物のエーデルワイスの抽出物が周辺帯（コーニファイドエンベロープ）前駆体蛋白質であるインボルクリンの産生を促進し、角層細胞の角化を促進することにより、角層のバリアー機能の改善を促す働きを有することを見出し、本発明を完成した。
【発明の効果】
【０００７】
即ち、本発明は植物のエーデルワイスの抽出物をインボルクリン産生促進剤として含有することを特徴とする皮膚外用剤であり、角層細胞の角化を促進し、角層のバリアー機能を改善することにより、肌荒れ防止効果、刺激緩和効果等が期待できる皮膚外用剤を提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明に用いられるエーデルワイス（Leontopodium  alpinum）はキク科ウスユキソウ属（Leontopodium）に属する高山植物で、ハナウスユキソウとも呼ばれており、標高3,500mまでの日当たりの良い草原や岩場に点在する。ドイツ語でエーデルは「高貴」、ワイスは「白」の意味である。高さは5〜20cmになり6-9月にかけて開花する。
【０００９】
本発明で使用する植物抽出物における植物体の部位は、花、花穂、果皮、果実、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根茎、根皮、根、種子又は全草等から１箇所以上を用いることが出来る。抽出物は、これら各種の抽出部位から溶媒を用いて直接抽出することで得られるものの他、圧搾処理を施した後に得られる圧搾液及び／又は残渣に溶媒を加えて抽出するものでも良い。
【００１０】
本発明で使用する植物抽出物を得るための抽出溶媒としては、供する製品の使用目的、種類、あるいは後に行う加工処理等を考慮した上で選択すれば良いが、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種または２種以上を用いて抽出し、精製して使用することが出来る。
【００１１】
抽出する植物は、使用部位を採取し、乾燥後粉砕したものを、重量比で１〜１０００倍量、特に１０〜１００倍量の溶媒を用い、常温抽出の場合には、０℃以上、特に２０℃〜４０℃で１時間以上、特に３〜７日間行うのが好ましい。また、６０〜１００℃で１時間、加熱抽出しても良い。
【００１２】
以上のような条件で得られる上記各抽出物は、抽出された溶液のまま用いても良いが、さらに必要により精製、濾過等の処理をして、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。
【００１３】
本発明で使用する植物抽出物の形態としては、液状、固形状、粉末状、ペースト状、ゲル状等いずれの形状でも良く、最終的な製品を構成する上で最適な形状を任意に選択することができる。
【００１４】
本発明の皮膚外用剤の剤型は任意であり、カプセル状、粉末状、顆粒状、丸剤、錠剤状、固形状、液状、ゲル状、気泡状、乳液状、クリーム状、軟膏状、シート状、エアゾール状等の形態をとることができる。さらに、医薬品類、医薬部外品類、化粧品類又は飲食品に配合して用いることができる。特に、外皮に適用される医薬品，医薬部外品，化粧品組成物といった外用剤組成物に適用される。
【００１５】
本発明の具体的な使用形態としては、水性成分、油性成分、植物抽出物、動物抽出物、粉末、賦形剤、界面活性剤、油剤、アルコール、ｐＨ調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、甘味剤、色素、香料等を必要に応じて混合して適宜配合することにより外用剤組成物の化粧水、乳液、クリーム、パック、パウダー、スプレー、軟膏、分散液、洗浄料、および液体状、ペースト状、カプセル状、粉末状、錠剤等種々の剤型とすることができる。
【００１６】
本発明の皮膚外用剤へのインボルクリン産生促進剤の配合量は、期待される作用の程度によって若干異なり特に限定しないが、通常、製剤全量中、固形分換算して、0.0001質量％以上、好ましくは0.01〜20.0質量％の濃度範囲とすることが有効である。
【００１７】
以下、本発明によるインボルクリン産生促進剤の効果にかかわる試験実施例を示すと共にその素材を用いた外用剤への応用処方例等について述べるが、ここに記載された実施例に限定されないのは言うまでもない。
【実施例】
【００１８】
〔植物抽出物の調製〕
エーデルワイス の全草を乾燥後粉砕したもの1gに５０mlの精製水を加え、80℃にて一時間加熱抽出した。抽出液をろ過し、４０℃で減圧乾燥した残留物を乾燥した。乾燥物が1%水溶液になるように調製し、試料溶液とした。
【００１９】
〔細胞の培養〕
細胞：NHEK-Neo-Epidermal  Kera（CAMBREX）
培地：Epilife  KG2  （Ca濃度：0.06mM）
D-MEM  （Ca濃度：1.8mM）
正常ヒト表皮細胞であるNHEK-Neo-Epidermal Kera（CAMBREX）をEpilife  KG2（クラボウ）培地で培養した。
細胞を50cm2 plateに50%コンフルーエント程度に植え付け培養した。翌日各種抽出物を添加した。添加後、48時間後に細胞を回収し、ウェスタン・ブロッティングの試料とした。
【００２０】
〔ウエスタン・ブロッティング〕
7.6%アクリルアミドのゲルで電気泳動を行い、PVDF膜に転写後、インボルクリン抗体
としてSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY、INCのInvolucrin（H-120）sc-28557、
Human(rabbit
polyclonal）、二次抗体としてECLTM  Anti-rabbit  IgG、
Horseradish
Peroxidase linked whole antibody（from donkey）NA934V
（Amersham
Bioscience UK Limited）を用いてウェスタン・ブロッティングを
行い、分子量68KDaのインボルクリンタンパク量を確認した。
【００２１】
〔インボルクリンタンパク量の測定〕
ウエスタン・ブロッティングで得られたバンド強度はDolphin-DOC(WEALTEC)により解析を行った。試料未添加区のインボルクリンタンパクのバンド強度の面積を１００として、それぞれの抽出物添加区のインボルクリンのバンド強度面積を比例計算し、インボルクリンタンパク量とした。
【００２２】
【表１】
2009084212.tif 000002
【００２３】
実験結果を表１に示す。バンド強度面積を解析の結果、対照区を100とした場合、エーデルワイス抽出物560ppm添加区では132、280ppm添加区では122のインボルクリン産生量を示し、エーデルワイス抽出物によるインボルクリンの産生促進効果が確認できた。
【００２４】
〔皮膚バリアー機能試験〕
ヒト上腕内側皮膚に2.5%SDS水溶液を一日5分間塗布し、これを10日間繰り返すことにより、バリアー機能が破壊された皮膚モデルとした。その後、防腐剤・酸化防止剤を除いた段落番号００２５に示す乳液組成物１００に対して表２の実施例に示すエーデルワイス抽出物（２％及び５％）を加え、実施例１及び実施例２、比較品１の乳液を作成した。選出した敏感肌パネラー5名にそれぞれの試験品を２週間塗布してもらった後、TEWAメーターTM-210（Courage+Khazaka製）にて皮膚水分蒸散量の測定を行った。この結果を表２に示す。表２より、SDS塗布により皮膚のバリアー機能が破壊され、TEWL値が38まで上昇した。一方、本発明品による添加物の塗布により、エーデルワイス抽出物を２％配合した組成物ではTEWL値が１９まで減少し、また５％配合した組成物では１７にまで減少した。ここで、エーデルワイス抽出物を添加していない乳液組成物を塗布した場合のTEWL値が３１であったことより、エーデルワイス抽出物を添加した乳液組成物を塗布した群が明らかに皮膚バリアー機能の改善が認められた。
【００２５】
〔乳液状組成物〕    
（成分名）           
（重量％）
a)ミツロウ                                         
0.5
b)ワセリン                                         
2.0
c)スクワラン                                        8.0
d)ソルビタンセスキオレエート                        
0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.)         
1.2
f)防腐剤・酸化防止剤                                 適量
g)精製水             
残部
h)1,3-ブチレングリコール                             
7.0
i)カルボキシビニルポリマー                            
0.2
j)水酸化カリウム                                      0.1
k)エタノール               
7.0
製法：a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。g)〜i)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜ｆ)に加えて乳化し、予めｇ）の一部で溶解したj)を加え、均一に混合する。その後、５０℃でk)を加え、40℃まで撹拌しながら冷却する。
【００２６】
【表２】
2009084212.tif 000003
【００２７】
〔各種組成物の製造〕
本発明による各種組成物を製造した。以下にその処方例を示すが、本発明はこれらに限定されるわけではない。
【００２８】
（１）クリーム組成物           
（重量％）
a)ミツロウ          
2.0
b)ステアリルアルコール                              
5.0
c)ステアリン酸                                       8.0
d)スクワラン                                       
10.0
e)自己乳化型グリセリルモノステアレート      
3.0
f)ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.)              
1.0
g)防腐剤・酸化防止剤                               
適量
h)精製水                                          
残部
i)1,3-ブチレングリコール                              
5.0
j)エーデルワイス抽出液                      
0.0001
k)水酸化カリウム                                    
0.3
製法：a)〜g)までを加熱溶解し、80℃に保つ。h)〜k)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜g)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。
【００２９】
（２）乳液状組成物                                 
（重量％）
a)ミツロウ                                          
0.5
b)ワセリン                     
2.0
c)スクワラン                                        
8.0
d)ソルビタンセスキオレエート                          
0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.)            
1.2
f)防腐剤・酸化防止剤                                 
適量
g)精製水                                   
残部
h)1,3-ブチレングリコール                              
7.0
i)カルボキシビニルポリマー                            
0.2
j)エーデルワイス抽出液                                
1.0
k)水酸化カリウム                                     0.1
l)エタノール                                         
7.0
製法：a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。g)〜j)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、予めｇ）の一部で溶解したk)を加え、均一に混合する。その後、５０℃でl)を添加し、40℃まで冷却する。
【００３０】
（３）化粧水様組成物                                   (重量%)
a)エーデルワイス抽出液                               
20.0
b)α-リノレン酸
0.1
c)グリセリン          
5.0
d)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.)        
1.0
e)エタノール                                          
6.0
f)香料                                            
適量
g)防腐剤・酸化防止剤                      
適量
h)精製水                                       
残部
製法：a)〜h)までを混合し、均一に溶解する。
【００３１】
（４）パック剤                                      
(重量%)
a)エーデルワイス抽出液                                  
0.01
b)酢酸ビニル樹脂エマルジョン                        
15.0
c)ポリビニルアルコール                               10.0
d)キュウイシード油                                  
3.0
e)グリセリン                                        
5.0
f)酸化チタン                                        
8.0
g)カオリン                                          
7.0
h)エタノール        
8.0
i)香料                                            
適量
j)防腐剤・酸化防止剤                                適量
k)精製水                                          
残部
製法 a)〜k)までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。
【００３２】
（５）軟膏剤                          
(重量%)
a)流動パラフィン                                                             20.0
b)白色ワセリン                                                               50.0
c)セタノール                                                                   10.0
d)ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油                               18.0
e)エーデルワイス抽出物                                                    0.1
製法：加熱しながらa)〜e)を加え混合し、軟膏剤を調製する。
【００３３】
（６）ゲル剤                                               
(重量%)
a)ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油                                    9.0
b)カーボポール９４１                                                             0.5
c)エタノール                                                                       22.0
d)トリエタノールアミン                                                           1.5
e)エーデルワイス抽出物                                                        5.0
f)精製水                                                                           63.0
製法：加熱しながら、f)にa)、b)、e)を加えて溶解させた後、d)、c)を加えて攪拌しながら冷却し、ゲル剤を調製する。
【００３４】
（７）液剤                                                 
(重量%)
a)ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油                                     10.0
b)エタノール                                                                        20.0
c)エーデルワイス抽出物                                                          10.0
d)精製水                                                                            60.0
製法：a)〜d)を加えて溶解し、液剤を調製する。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明のインボルクリン産生促進効果を有するエーデルワイス抽出物を配合することにより、角層細胞の角化を促進し、角層のバリアー機能を改善することにより、肌荒れ防止効果、刺激緩和効果等が期待でき、広く膚外用剤に応用が可能である。