(57)【要約】【課題】ミセル内に封入される薬物の封入安定性が高く、それでいてミセル内に多量の薬物を封入することができる（すなわち封入効率が高い）、薬物封入ミセル及びそれを形成するためのブロックコポリマーを提供すること。【解決手段】従来の薬物封入ミセルにおける疎水性領域を、疎水性の液晶性の領域とすることにより、薬物封入時には、液晶相と固体結晶相間の相転移温度よりも高い温度で薬物を封入すれば、ミセルの内核を構成する疎水性液晶性領域が液相となって多量の薬物溶液を封入することができ、一方、ミセルの温度を前記相転移温度よりも下げることにより、内核が固体結晶相となり、封入薬物の溶媒が流出して固体状の薬物が封入され、その結果、薬物の封入安定性が高まる。【選択図】図６
2009013124.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式[I]
A-B  [I]
（式中、Ａは親水性領域、Ｂは疎水性液晶性領域を示す）
で表わされる構造を有し、水系媒体中で前記親水性領域を外部シェルとし、前記疎水性液晶性領域を内核とするミセルを生成する、薬物封入ミセル形成用ブロックコポリマー。
【請求項２】
前記疎水性液晶性領域は、液晶相と固体結晶相間の相転移温度が37℃よりも高いものである請求項１記載のブロックコポリマー。
【請求項３】
前記一般式[I]中のＢにより示される疎水性液晶性領域が、下記一般式[II]
【化１】
2009013124.tif 000009
（式中、Ｘは、前記一般式[I]中のＢで表される疎水性液晶性領域の主鎖構造、Ｙはスペーサー構造、Ｚは芳香族性メソゲン基、nは5〜100の整数を示し、ＸとＹの間及びＹとＺの間にはそれらを結合する結合構造が介在していてもよい）
で表される繰返し単位を含む請求項１記載のブロックコポリマー。
【請求項４】
前記結合構造が、エステル結合、エーテル結合及びアミド結合から成る群より選ばれる少なくとも１種である請求項３記載のブロックコポリマー。
【請求項５】
前記一般式[II]中のＺが、
【化２】
2009013124.tif 000010
（ただし、各式中の各芳香環は、ハロゲン、炭素数1〜18のアルキル基、炭素数1〜18のアルコキシ基、ヒドロキシル基、シアノ基、ニトロ基、アミノ基及びカルボキシル基から成る群より選ばれる少なくとも１個の置換基で置換されていてもよい）
から成る群より選ばれる請求項４記載のブロックコポリマー。
【請求項６】
前記一般式[II]中の-(-X-)n-が、ポリメタクリレート基、ポリアクリレート基、ポリエステル基及びポリペプチド基から成る群より選ばれる少なくとも１種である請求項３ないし５のいずれか１項に記載のブロックコポリマー。
【請求項７】
前記ポリエステル基はポリラクチドであり、前記ポリペプチド基はポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸又はポリリジンである請求項６記載のブロックコポリマー。
【請求項８】
前記一般式[II]中のＹが、炭素数1〜18のアルキレン基又は繰り返し数が1〜12のエチレングリコール（ただし、該アルキレン基又はエチレングリコール中の各炭素原子は、ハロゲン、炭素数1〜18のアルキル基、炭素数1〜18のアルコキシ基、ヒドロキシル基、シアノ基、ニトロ基、アミノ基及びカルボキシル基から成る群より選ばれる少なくとも１個の置換基で置換されていてもよい）である請求項３ないし７のいずれか１項に記載のブロックコポリマー。
【請求項９】
前記一般式[II]中のＹが、炭素数1〜18のアルキレン基又は繰り返し数が1〜12のエチレングリコールである請求項８記載のブロックコポリマー。
【請求項１０】
前記一般式[I]中のＡがポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール及びポリビニルピロリドンから成る群より選ばれる少なくとも１種である請求項１ないし９のいずれか１項に記載のブロックコポリマー。
【請求項１１】
請求項１ないし１０のいずれか１項に記載のブロックコポリマーから成るミセル内に薬物が封入されて成る薬物封入ミセル。
【請求項１２】
前記薬物は、３７℃以下の温度下において、固体であるものである請求項１１記載の薬物封入ミセル。
【請求項１３】
前記薬物が抗癌剤である請求項１１又は１２記載の薬物封入ミセル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗癌剤等の薬物の送達に用いられる、抗癌剤等の薬物を封入した薬物封入ミセル及びそれを形成するためのブロックコポリマーに関する。
【背景技術】
【０００２】
親水性領域と疎水性領域を有するブロックコポリマーから成る高分子ミセル中に抗癌剤等の薬物を封入した薬物封入高分子ミセルを用いた薬物送達が公知である（特許文献１〜３）。このような高分子ミセルは、10nm〜100nm程度の直径を有し、一方、癌組織中の血管は正常組織中の血管よりも透過性が高いため、このようなサイズの高分子ミセルは、癌組織中の血管を透過するが正常組織中の血管を透過しない。このため、薬物封入高分子ミセルは、癌組織に選択的に送達され（ターゲティング）、薬物による治療効果を高め、その正常組織への副作用を低減することができる。この抗癌剤封入高分子ミセルを用いた癌治療の有効性は既に確認されており、既に商業化のための臨床試験の段階に入っているものが複数存在する。
【０００３】
【特許文献１】特開2001-226294号公報
【特許文献２】特開2005-336402号公報
【特許文献３】特開2007-023023号公報
【非特許文献１】L. Cui, Y. Zhao, Chem.Mater., 16, 2074-2082 (2004)
【非特許文献２】Y. Mitsukami, M. S. Donovan, A. B. Lowe, C. L. McCormick, Macromolecules, 2001, 34, 2248-2256.
【非特許文献３】D. L. Patton, R. C. Advincula, Macromolecules, 2006, 39, 8674-8683.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
薬物封入高分子ミセルを用いた薬物による治療効果を高めるためには、生体内における薬物封入高分子ミセルの安定性が要求される。すなわち、高い治療効果を発揮するためには、薬物封入高分子ミセルが、少なくとも標的とする癌組織に送達されるまでは安定に保持される、すなわち、内部の薬物がミセル外に出て行かないことが要求される。また、送達後の癌組織においても、抗癌剤の効果を持続させるためには、薬物は少なくともある程度は徐放されることが望ましい。このように、高い治療効果を発揮するためには高分子ミセルの封入安定性、すなわち、封入された薬物が容易にミセルから出て行かないことが求められる。一方、高い治療効果を発揮するためには、高分子ミセルに封入される薬物の量は、多い方が好ましい。しかしながら、薬物封入は、薬物分子のミセル内核内への非平衡移動過程であり、これは上記した封入安定性と相反するものである。すなわち、ミセル内に封入される薬物の量が多くなる場合には、その封入安定性が低く、逆に封入安定性が高い場合には、ミセル内に封入される薬物の量が少なくなる。
【０００５】
従って、本発明の目的は、ミセル内に封入される薬物の封入安定性が高く、それでいてミセル内に多量の薬物を封入することができる（すなわち封入効率が高い）、薬物封入ミセル及びそれを形成するためのブロックコポリマーを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本願発明者らは、鋭意研究の結果、従来の薬物封入ミセルにおける疎水性領域を、疎水性の液晶性の領域とすることにより、薬物封入時には、液晶相と固体結晶相間の相転移温度よりも高い温度で薬物を封入すれば、ミセルの内核を構成する疎水性液晶性領域が液相となって多量の薬物溶液を封入することができ、一方、ミセルの温度を前記相転移温度よりも下げることにより、内核が固体結晶相となり、封入薬物の溶媒が流出して固体状の薬物が封入され、その結果、薬物の封入安定性が高まることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、下記一般式[I]
A-B  [I]
（式中、Ａは親水性領域、Ｂは疎水性液晶性領域を示す）
で表わされる構造を有し、水系媒体中で前記親水性領域を外部シェルとし、前記疎水性液晶性領域を内核とするミセルを生成する、薬物封入ミセル形成用ブロックコポリマーを提供する。また、本発明は、上記本発明のブロックコポリマーから成るミセル内に薬物が封入されて成る薬物封入ミセルを提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、薬物の封入安定性と、封入効率の両者を同時に満足する、新規な薬物封入ミセル及びそれを形成するためのブロックコポリマーが初めて提供された。本発明の薬物封入ミセルでは、薬物の封入安定性が高く、それでいて薬物を多量に封入することができるので、本発明の薬物封入ミセルを用いることにより治療効果を高めることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
上記の通り、本発明の薬物封入ミセル形成用ブロックコポリマーは、上記一般式[I]で表される構造を有する。一般式[I]中、Ａは、親水性領域である。親水性領域は、水系媒体中でミセルを形成することができ、その際に外部シェル、すなわち、外側の殻となる部分を構成することができるものであれば何ら限定されるものではない。従って、Ａは、従来の薬物封入ミセルを構成するブロックコポリマーの親水性領域と同様な構造であってよく、好ましい例として、ポリエチレングリコール(PEG)、ポリビニルアルコール(PVA)及びポリビニルピロリドン(PVP)を挙げることができる。Ａは、これらの単独から成る構造を有していてもよいが、これらの複数の構造が組み合わされたものであってもよい。また、親水性領域の末端（疎水性液晶性領域と反対側の末端）の構造は何ら限定されないが、通常、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１〜６のヒドロキシアルキル基、炭素数１〜６のアルコキシ基、アセタール若しくはケタール化ホルミル-C1-C6アルキル、アミノ-C1-C6アルキル又はベンジル基等である。親水性領域の分子量は、２０００〜２万程度が好ましく、４０００〜１２０００程度がさらに好ましい。
【００１０】
上記一般式[I]中のＢは、疎水性液晶性領域であり、ブロックコポリマーが疎水性液晶性領域を有することが本発明の重要な特徴の１つである。ここで、「液晶性」とは、ある温度（相転移温度）よりも高いと液晶相（液体と同様に流通性を有する）となり、相転移温度よりも低いと固体結晶相となる性質を意味する。この相転移温度は、特に限定されるものではないが、人体内において、高い封入安定性が達成されるように、人体の体温である３７℃よりも高いことが好ましく、さらには３９℃以上が好ましい。一方、後述のように、ミセルの形成は相転移温度よりも高い温度で行なわれるので、相転移温度があまりに高いとミセルが形成されにくくなる。このため、液晶性領域の相転移温度は、８０℃以下が好ましく、さらに好ましくは６０℃以下である。なお、相転移温度は、常法である示差走査熱量分析(DSC)により容易に測定することができる。また、「疎水性液晶性領域」の「疎水性」は、上記した親水性領域とのブロックコポリマーが水系媒体中でミセルを形成する際に、「疎水性液晶性領域」が内核となる性質を満足するものであればよい。
【００１１】
液晶は、ネマティック液晶でもスメクティック液晶でもよく、固体結晶相からスメクティック液晶状態を介してネマティック液晶になるものでもよいが、通常、ネマティック液晶である。疎水性液晶性領域自体は周知の構造でよく、側鎖にメソゲン基を有する側鎖型高分子液晶が好ましい。
【００１２】
側鎖型高分子液晶性領域としては、下記一般式[II]で示されるものを挙げることができる。
【００１３】
【化１】
2009013124.tif 000003
【００１４】
一般式[II]中、Ｘは、前記一般式[I]中のＢで表される疎水性液晶性領域の主鎖構造、Ｙはスペーサー構造、Ｚは芳香族性メソゲン基、nは5〜100の整数を示し、ＸとＹの間及びＹとＺの間にはそれらを結合する結合構造が介在していてもよい。結合構造の例としては、エステル結合、エーテル結合及びアミド結合から成る群より選ばれる少なくとも１種を挙げることができる。
【００１５】
Ｚで表わされる芳香族性メソゲン基は、芳香環を含むメソゲン基（液晶基）であり、好ましい例として、以下のものを挙げることができる。
【００１６】
【化２】
2009013124.tif 000004
【００１７】
ただし、各式中の各芳香環は、ハロゲン、炭素数1〜18のアルキル基、炭素数1〜18のアルコキシ基、ヒドロキシル基、シアノ基、ニトロ基、アミノ基及びカルボキシル基から成る群より選ばれる少なくとも１個の置換基で置換されていてもよい。各繰り返し単位に含まれるメソゲン基は同一であることが液晶の形成性や合成の容易性の観点から好ましいが、液晶相が形成されるのであれば、異なる２種以上のメソゲン基を用いることも可能である。
【００１８】
一般式[II]中の-(-X-)n-は、特に限定されないが、ポリメタクリレート基、ポリアクリレート基、ポリエステル基及びポリペプチド基から成る群より選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。ここで、ポリエステル基としてはポリラクチドが好ましく、ポリペプチド基としては、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸及びポリリジンが好ましい。-(-X-)n-がポリメタクリレート基、ポリアクリレート基、ポリラクチド、ポリアスパラギン酸又はポリグルタミン酸である場合には、これらに含まれるカルボキシル基を利用して後述するスペーサー構造Ｙを結合することができ、ポリリジンである場合には、アミノ基を利用して後述するスペーサー構造Ｙを結合することができる。各繰返し単位中のＸは、同一の構造であることが合成の容易性の観点から好ましいが、２種類以上の構造を組み合わせて用いることも可能である。
【００１９】
前記一般式[II]中のＹは、主鎖構造Ｘとメソゲン基Ｚを結合するスペーサー構造であり、特に限定されるものではないが、好ましい例として、炭素数1〜18のアルキレン基又は繰り返し数が1〜12のエチレングリコールを挙げることができる。ただし、該アルキレン基又はエチレングリコール中の各炭素原子は、ハロゲン、炭素数1〜18のアルキル基、炭素数1〜18のアルコキシ基、ヒドロキシル基、シアノ基、ニトロ基、アミノ基及びカルボキシル基から成る群より選ばれる少なくとも１個の置換基で置換されていてもよいが、このような置換基は不要である。
【００２０】
疎水性液晶性領域の主鎖構造の末端（親水性領域と反対側の末端）の構造は何ら限定されないが、通常、水素原子、ヒドロキシ基、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１〜６のアルコキシ基、フェニル-C1-C4アルキル、フェニル-C1-C4アルキルオキシ、C1-C4アルキルフェニル、C1-C4アルキルフェニルオキシ、C1-C6アルコキシカルボニル、フェニル-C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C6アルキルアミノカルボニル、フェニル-C1-C4アルキルアミノカルボニル基、及び
【００２１】
【化３】
2009013124.tif 000005
等を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。
【００２２】
本発明のブロックコポリマーは、上記した一般式[I]中のＡや、一般式[II]中のX、Y、Zのようなそれ自体周知のセグメントを結合することにより合成することができるので、有機合成化学の技術常識に従い、当業者が容易に製造することができる。下記実施例にもその製造方法の１例が詳述されている。
【００２３】
本発明の薬物封入ミセルは、上記した本発明のブロックコポリマーから成るミセル内に薬物が封入されて成るものである。薬物は、人体内における封入安定性を高めるために、人体の体温である３７℃以下の温度下において固体であるものが好ましく、さらには３９℃以下の温度下において固体であるものが好ましい。また、従来技術の項で述べた通り、薬物封入ミセルは、癌組織に対してターゲティングすることができるので、薬物は抗癌剤であることが好ましい。３７℃以下の温度下において固体である好ましい抗癌剤の例として、アドリアマイシン、カンプトテシン、パクリタキセル、シスプラチン等を例示することができるが、抗癌剤はこれらに限定されるものではない。
【００２４】
本発明の薬物封入ミセルは、ミセル形成を、上記疎水性液晶性領域の相転移温度よりも高い温度下で行なうこと以外は、従来の薬物封入ミセルと同様にして調製することができ、周知のエバポレーション法や透析法により調製することができる。エバポレーション法は、ブロックコポリマー及び薬物をそれぞれ有機溶媒に溶解した溶液を混合し、溶媒を蒸発させた後、残渣に水を加え、超音波処理により水和させる方法である。透析法は、ブロックコポリマー及び薬物を有機溶媒に溶解し、水に対して透析する方法である。いずれの方法でも、生成したミセルは、遠心分離と限外ろ過等により回収することができる。
【００２５】
このように、薬物封入ミセルは、従来と同様、エバポレーション法や透析法のような薬物の溶液又は懸濁液中でミセルを生成させる方法により調製することができるので、薬物の封入効率が高く、多量の薬物を封入することができる。一方、得られたミセルの温度を相転移温度よりも低い温度に下げると、固相結晶相となった疎水性液晶性領域により形成される内核に、固体状の薬物が封入された状態となる。このようなミセルは、内核が固体結晶化するため、封入安定性が高くなる。
【００２６】
なお、ミセルのサイズは、癌組織にターゲティングする観点から、平均粒径（直径、重量基準、湿潤状態）が10nm〜100nm程度が好ましい。ミセルのサイズは、一般式[I]中の親水性領域Aと疎水性液晶領域Bの長さとバランスを調整することにより調整することができる。疎水性液晶領域Bを長くするとサイズが大きくなり、短くすると小さくなる。
【００２７】
本発明の薬物封入ミセルは、公知の薬物封入ミセルと全く同様にして用いることができ、好ましくは、抗癌剤を封入して癌治療に用いることができる。癌治療に用いる場合、薬物封入ミセルは、静脈注射、筋肉内注射、皮下注射等の全身投与や、癌組織への直接注射等により投与することができ、その投与量は、封入される薬物について設定された投与量でよい。
【００２８】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。なお、下記実施例において、「TEA」はトリエチルアミン、「THF」はテトラヒドロフラン、「r.t.」又は「rt」は室温、「h」は時間、「aq」又は「aq solution」は水溶液、「EDC」は水溶性カルボジイミド、「NHS」はN-ヒドロキシスクシンイミド、「DCM」はジクロロメタン、「ADR」はアドリアマイシン、「AIBN」は、アゾビスイソブチロニトリル、「DMSO」はジメチルスルホキシド、「DMF」はジメチルホルムアミドを表わす。
【実施例１】
【００２９】
ブロックコポリマーの合成
1.  疎水性液晶性領域モノマーの合成
【００３０】
【化４】
2009013124.tif 000006
【００３１】
疎水性液晶性領域モノマーとして、Zhaoらが報告した化合物(3)を合成した。合成はZhaoらの報告（非特許文献１）を改良することで行った。
【００３２】
1-1.  4-(4-ヒドロキシフェニルアゾ)ピリジン (1)の合成
フェノール2.5g(27mmol)と亜硝酸ナトリウム2g(29mmol)を10wt% NaOH水溶液10ml中に溶解した。この溶液を、4-アミノピリジン3g(32mmol)を溶解した6N塩酸水溶液中（0℃）に滴下した。1.5時間で滴下しその後20分撹拌した。この反応溶液にNaOH水溶液を加えて、pH6.5に調整しオレンジ色の沈殿を得た。沈殿をろ過し水で洗浄後、メタノール/アセトン混合溶液(1:1)で再結晶した。収量2.4g、収率44%。
【００３３】
1-2.  4-(4-(6-ヒドロキシヘキシルオキシ)フェニルアゾ)ピリジン (2)の合成
化合物(1)2.1g（11mmol）とK2CO3 2.9g（21mmol）を2-ブタノン20mlに加え、加熱溶解した。6-ブロモ-1-ヘキサノール 1.6g（8.8mmol）を5mlの2−ブタノンに溶解し、化合物(1)の溶液に滴下した。48時間還流後、反応溶液をシリカゲルカラムで精製した（溶離液：酢酸エチル）。収量1.3g、収率50%。
【００３４】
1-3.  6-[4-(4-ピリジアゾ)フェニオキシ]ヘキシルメタクリレート (3)の合成
化合物(2)1.29g(4.32mmol)、トリエチルアミン0.48g（4.75mmol）を25mlのTHFに溶解した。5mlのTHFにメタクリロイルクロリド0.50g(4.76mmol)を溶解し、化合物(2)の溶液に室温で滴下した。24時間撹拌後、反応溶液に水200mlを加え、クロロホルムで抽出した。クロロホルム相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ別後ろ液を減圧乾固した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムで精製した（溶離液：酢酸エチル）。収量0.78g、収率47%
【００３５】
２．  活性化PEGの合成
【００３６】
【化５】
2009013124.tif 000007
【００３７】
2-1.  ジチオ安息香酸ナトリウム (4)の合成(非特許文献２）
ナトリウムメトキシド1.37g（25 mmol）と硫黄802 mg(25 mmol)を窒素雰囲気下、脱水メタノール10mlで溶解、撹拌した。この溶液にベンジルクロリド1.44 ml（12.5 mmol）を室温で1時間滴下後、13時間80℃で還流した。反応溶液を冷却後，沈殿をろ別しメタノールで洗浄した。赤紫色のろ液を乾固させ、水に溶解しエーテルで3回抽出精製を行った。この水相に0.1NHClを加え酸性状態にし、エーテルで抽出した。このエーテル相を1.0NNaOH水溶液で再度抽出した。得られた水相をジチオ安息香酸ナトリウム (4)水溶液とし、次の反応へ反応に用いた。
【００３８】
2-2.  ジ(チオベンゾイル)ジスルフィド (5)の合成(非特許文献２）
得られた4の水溶液（すべてが反応したと仮定して，2.2 g（12.5 mmol））に対して、フェリシアン化カリウム(III)4.5  g(13.7 mmol)を水10mlに溶かした溶液を1時間かけ室温中で滴下した。得られた沈殿物をろ過し、ろ液に色がなくなるまで水で洗浄した。得られた化合物を1.4-ジオキサンに溶解し凍結乾燥後、赤紫固体を得た。収量869.0 mg、収率：45.3 %。
【００３９】
2-3.  4-シアノペンタン酸ジチオベンゾエート (6)の合成（非特許文献２、３）
得られた化合物5（401.6 mg (1.3 mmol)）を脱水酢酸エチル8 mlに溶解し、4,4'-アゾビス(4-シアノペンタン酸) 547.2 mg (1.96 mmol)を加え、80℃、20時間還流した。反応溶液をシリカゲルカラムにより精製を行い（ヘキサン→酢酸エチル：ヘキサン=1:5→1:3→2:3）、赤紫の油状物質を得た。収量509.3 mg、収率70.1 %。（図１）
【００４０】
2-4.  PEG ジチオベンゾエート (7)の合成
モノアミノ化ポリエチレングリコール（分子量5197）199.6mg（38.5 mmol）をジクロロメタン2mlに溶解させた。この溶液に6のジクロロメタン溶液632 ml（21.2 mg、75.9 mmol）を加え撹拌した。氷浴中でEDC18.0 mg(93.9 mmol)、NHS10.5 mg(91.1 mmol)、トリエチルアミン11.7mg（16.1 ml，115.5 mmol）を加え、室温で終夜撹拌した。反応溶液を乾固後、メタノールに溶解し、メタノール透析と水透析により精製を行った。透析後、凍結乾燥によりピンク色の固体を得た。収量120.8 mg、収率57.6%、アミド化率32.2 %。（図２）
【００４１】
３．  液晶性高分子と活性化PEGのRAFT重合
【００４２】
【化６】
2009013124.tif 000008
化合物7を112.4mg（活性体36.0mg，6.6 mmol）をDMSO 600 mlに溶解し、化合物3 72.9mg（198 mmol），1mg/ml AIBN DMSO溶液271 mlを順に7の溶液に加えた。酸素脱気後、60℃で22時間撹拌した。得られた反応溶液をジエチルエーテルにより再沈した。得られた白色物質をTHFに再度溶解し、エーテルによる再沈を合計3度繰り返し、白色物質を得た。収量135.7 mg、収率：88.6%、PEG :モノマー単位= 1 : 15.7(mol)。1H-NMRより算出される分子量は11200であった。（図３）
【実施例２】
【００４３】
ブロックコポリマーの物性測定
得られたブロックコポリマーのＤＳＣ（示差走査熱量計）による測定をバルクで行った。結果を図４に示す。分析条件は以下の通りである。
Sample : 2.7mg
Temp. range : 0-120℃
Rate : 5℃/min
【００４４】
昇温の課程でで，40.6℃の小さいピークと57.1℃のピークが確認された。液晶ホモポリマー単体の吸熱ピークは40℃前後に観察されると報告されている（非特許文献１）ことから、この矢印で示したピークは液晶鎖由来の相転移挙動と考えられる。また、57.1℃のピークはPEG単独の際のピークとほぼ同じであるので、ＰＥＧ鎖部分の融点とわかった。なお、後述するように高分子ミセルを形成させ、その水溶液のＤＳＣ測定を行ったが、40℃付近の相転移挙動は観察されなかった。液晶性ホモポリマーの場合と異なり、液晶を形成する単位が高分子ミセルの場合は小さく、その相転移挙動を熱的に観測するのは容易でないためと考えられた。
【実施例３】
【００４５】
ミセルの粒径分布
実施例１で得られたブロックコポリマーを用い、後述する実施例４と同様な、クロロフォルムを溶媒として用いたエバポレーション法によりミセル溶液を得た。その動的光散乱の結果を図５に示す。重量換算で、100nm付近の２次凝集と考えられるものの割合も少なく、平均40nm（100nm付近のピークを含めると平均54nm）の高分子ミセルが得られた。なお、このミセルには、薬物が封入されていないが、薬物を封入した場合でも多少大きくなるものの平均粒径はほとんど同じである。
【実施例４】
【００４６】
薬物封入ミセルの調製と薬物封入効率
以下に記載するエバポレーション法と透析法により、抗癌剤であるアドリアマイシン(ADR)を封入した、薬物封入ミセルを調製した。なお、アドリアマイシンは、融点が204℃〜205℃(Maryadele J. O'Neil, The Merck Index, 13th, p.606, Merck & Co., INC., (2001))であり、ブロックコポリマーの相転移点である約40℃では固体であり、もちろん、39℃以下の温度下においても固体である。
１．  エバポレーション法
5.0mg/mlのブロックコポリマーをクロロホルム1.0mlに溶解し、5.0mg/ml ADRHCl TEA/CHCl3溶液(TEAはADRに対して1.3倍当量)を1ml加えて撹拌後、窒素で溶媒を除去した。このときの温度をそれぞれ、0、45、60℃とした。得られたフィルム状物質に水3.0mlを加え，超音波照射により水和させた。このときの温度も0、45、60℃に設定した。試料を遠心分離後(3900rpm、20℃、10min)、上澄みを回収し限外ろ過により洗浄、濃縮した。
【００４７】
２．  透析法
5.0mgのブロックコポリマーと5.0mgのADRHClをTEA/DMF2ml(TEAはADRに対して1.3倍当量)に溶解させ、水で２回透析した。このときの温度をそれぞれ0℃、45℃とした。得られた水溶液を遠心分離 (3900rpm、20℃、10min)し、上澄みを回収し限外ろ過により洗浄、濃縮した。
【００４８】
３．  薬物封入効率
上記した各温度における薬物封入率を測定した。薬物封入率は、アドリアマイシンの吸収(485nm)をUVで検出することで測定した。薬物封入後のミセル水溶液を3wt%酢酸メタノール溶液中に溶解して、液晶性ポリマーの吸収を差し引いた値を用いて封入率を測定した。
【００４９】
結果を図６に示す。いずれの封入方法においても、０℃より４５℃の方が薬物封入率が高かった。また、エバポレーション法では４５℃から６０℃に温度を上げても封入効率は上昇しなかった。以上の結果は、液晶の相転移点以上の温度で薬物を封入すると、封入率が高いことを示唆する。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】本発明の実施例で合成したブロックコポリマーの中間体である4-シアノペンタン酸ジチオベンゾエートの化学構造と1H-NMRスペクトルを示す図である。
【図２】本発明の実施例で合成したブロックコポリマーの中間体であるポリエチレングリコールジチオベンゾエートの化学構造と1H-NMRスペクトルを示す図である。
【図３】本発明の実施例で合成したブロックコポリマーの化学構造と1H-NMRスペクトルを示す図である。
【図４】本発明の実施例で合成したブロックコポリマーの示差走査熱量分析の結果を示す図である。
【図５】本発明の実施例で調製したミセルの粒径分布を示す図である。
【図６】本発明の実施例において採用した、薬物封入ミセルの各温度での各調製方法における薬物封入率を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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