(57)【要約】【課題】プロテオグリカン、特にヘパラン硫酸タイプのプロテオグリカンの生合成を選択的に促進する化合物、および該化合物を有効成分とする創傷治癒促進剤を提供する。【解決手段】式（Ｉ）2009274954.tif 000028（式中、Ｒ1は水素原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリールまたは天然若しくは非天然のアミノ酸からなるペプチド残基を表し、Ｒ2はハロゲン原子またはアルコキシを表す）で表される化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2009274954.tif 000026
（式中、Ｒ1は水素原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリールまたは天然若しくは非天然のアミノ酸からなるペプチド残基を表し、Ｒ2はハロゲン原子またはアルコキシを表す。）
で表される化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｒ1が天然若しくは非天然のアミノ酸からなるペプチド残基を表す、請求項１記載の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
【請求項３】
式（Ｉ）において、−ＯＲ1がセリンおよび／またはトレオニン含有オリゴペプチドであって、−ＯＲ1の酸素原子とセリンおよび／またはトレオニンが結合し、さらに該アミノ酸に二糖ユニットが結合した、式（Ｉ）の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
【請求項４】
式（Ｉ）において、−ＯＲ1が次式
【化２】
2009274954.tif 000027
（式中、ＦＩＴＣはアミノ基がフルオレッセインイソチオシアネートで蛍光標識化されていることを表す。）
で表されるグリシルセリン誘導体である、式（Ｉ）の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物、その製薬上許容される塩、またはそららの溶媒和物を有効成分とする、医薬。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物を有効成分とする、ヘパラン硫酸プロテオグリカン生成促進剤。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物を有効成分とする、創傷治癒促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンの選択的生合成に有用なフッ素含有糖鎖および糖ペプチドの新規誘導体に関する。さらに、本発明は、該誘導体を有効成分とする医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロテオグリカン（ＰＧ）は、コアタンパク質と呼ばれるタンパク質に１本以上のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖が結合している構造を有する分子であり、そのＧＡＧ鎖を構成する糖の違いによりコンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＣＳＰＧ）とヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）とに大きく分類される。
【０００３】
これまでに、天然から単離されたＰＧの構造をもとに、ＰＧのＧＡＧ鎖生合成の仕分けに関するメカニズムについて、研究がなされ、以下の二つの仮説が提唱されている。Ｊ．Ｄ．Ｅｓｋｏらは、ＨＳＰＧには、ＧＡＧに直結するコアペプチド領域は疎水性アミノ酸が多く、またその両側もしくは片側に酸性クラスターペプチド領域が存在することを報告し（非特許文献１）、ＨＳＰＧタイプへの糖鎖伸長を決定付ける５番目のα−ＧｌｃＮAｃ転移酵素がコアペプチドを認識する部位を有していることを示唆している。菅原らは、ＣＳＰＧの共通結合４糖領域のＧａｌが硫酸化されているものは存在するが、その領域が硫酸化されたＨＳＰＧは見つかっていないことを報告し（非特許文献２〜６）、このことから、共通結合４糖上の硫酸基の有無がこの仕分け制御機構に深く関与していると推定している。しかしながら、これらの仮説はいずれも、証明されるまでに至っておらず、ＨＳＰＧ／ＣＳＰＧ生合成の仕分け制御機構のメカニズムはいまだに不明である。
【０００４】
一方で、ＰＧの生成促進剤が新しい治療剤として着目されている。西村等は、ＰＧの構造を模倣したＧＡＧ鎖伸張の開始剤（イニシエーター）となりうるポリ糖ペプチドを提案し、リウマチ性関節炎や変形性関節炎治療剤としての有用性を示唆している（特許文献１）。しかしながら、このポリ糖ペプチドよりなるイニシエーターはＨＳＰＧ／ＣＳＰＧ生合成についてその選択性が確認されるまでに至っていない。
【０００５】
ＨＳＰＧは、線維芽細胞成長因子（FGF）、血管内皮細胞成長因子、ヘパリン結合性上皮細胞成長因子、肝細胞成長因子（HGF）などの様々な成長因子のシグナル伝達に関与し、創傷治癒などに関わる各種細胞の増殖・分化に関与していることが知られている。創傷治癒の促進のためには、ＨＳＰＧの生成促進が重要であるところ、上述のように、ＨＳＰＧ／ＣＳＰＧ生合成の仕分け制御機構に関するメカニズムはいまだ不明であり、ＨＳＰＧ／ＣＳＰＧ生合成の仕分け制御に使用可能な化合物に関する報告もない。
【特許文献１】ＷＯ２００４／０７６４７６号公報
【非特許文献１】J. D. EskoおよびL. Zhang, Curr. Opin. Struct. Biol., 6, 663-670 (1996)
【非特許文献２】K. Sugahara, Y. Ohkita, Y. Shibata, K. Yoshida, およびK. Ikegami, J. Biol. Chem., 271, 7204-7212 (1995)
【非特許文献３】H. Kitagawa, M. Oyama, K. Masayama, Y. Yamaguchi, およびK. Sugahara, Glycobiology., 7, 1175-1180 (1997)
【非特許文献４】S. Yamada, M. Oyama, H. Kinugasa. T. Nakagawa, T. Kawasaki, S. Nagasawa, H. R. Morris, A. Dell, およびK. Sugahara, Glycobiology., 5, 335-341 (1995)
【非特許文献５】S. Yamada, M. Oyama, Y. Yuki, K. Kato, およびK. Sugahara, Eur. J. Biochem., 233, 687-693 (1995)
【非特許文献６】K. Sugahara, R. Tohno-oka, S. Yamada, K.H. Khoo, H. R. Morris, およびA. Dell, Glycobiology., 4, 535-544 (1994)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、プロテオグリカンの生成促進機能を有し、特に、ＨＳＰＧの生合成を選択的に促進させる化合物を提供することである。
【０００７】
プロテオグリカンのＧＡＧ鎖はウロン酸とアミノ糖の２糖を繰り返し単位とする特徴的な構造を持ち、GlcA-Gal-Gal-Xylという共通四糖を介して、コアタンパク質中のセリン残基に結合している。
【化１】
2009274954.tif 000002
【０００８】
ＧＡＧ鎖を構成する糖の違いによりＣＳＰＧおよびＨＳＰＧという二つのタイプに分類されることは上述の通りであるが、これら両タイプのＰＧの生合成分岐点にあたる共通四糖へのヘキソサミン転移メカニズムは未だ不明であった。
【０００９】
本発明者等は、共通四糖上の硫酸基の有無がＣＳＰＧ／ＨＳＰＧの仕分け制御に深く関与しているとの洞察から、当該硫酸エステル化が観測される水酸基をフッ素原子で置換した類縁体を合成した。そして、式（Ｉ）で表される化合物群が、ＨＳＰＧ伸張のイニシエーターとなることを見出し、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は以下のものを提供する。
（１）式（Ｉ）
【化２】
2009274954.tif 000003
（式中、Ｒ1は水素原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリールまたは天然若しくは非天然のアミノ酸からなるペプチド残基を表し、Ｒ2はハロゲン原子またはアルコキシを表す。）
で表される、化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
（２）Ｒ1が天然若しくは非天然のアミノ酸からなるペプチド残基を表す、式（Ｉ）の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
（３）−ＯＲ1がセリンおよび／またはトレオニン含有オリゴペプチドであって、−ＯＲ1の酸素原子とセリンおよび／またはトレオニンが結合し、さらに該アミノ酸に二糖ユニットが結合した、式（Ｉ）の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
（４）−ＯＲ1が下式
【化３】
2009274954.tif 000004
（式中、ＦＩＴＣはアミノ基がフルオレッセインイソチオシアネートで蛍光標識化されていることを表す。）
で表されるグリシルセリン誘導体である、式（Ｉ）の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
（５）上記（１）から（４）のいずれかに記載された式（Ｉ）の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物を有効成分とする医薬。
（６）上記（１）から（４）のいずれかに記載された式（Ｉ）の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物を有効成分とする、ヘパラン硫酸プロテオグリカン生成促進剤。
（７）上記（１）から（４）のいずれかに記載された式（Ｉ）の化合物、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物を有効成分とする、創傷治癒促進剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の化合物は、プロテオグリカンの生成促進機能を有し、特にＨＳＰＧの生合成を選択的に促進するので、創傷治癒の促進に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の化合物は、式（Ｉ）
【化４】
2009274954.tif 000005
（式中、Ｒ1は水素原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリールまたは天然若しくは非天然のアミノ酸からなるペプチド残基を表し、Ｒ2はハロゲン原子またはアルコキシを表す。）
で表される、糖鎖誘導体、その製薬上許容される塩、またはそれらの溶媒和物である。
式（Ｉ）で表される化合物のすべての水酸基は、通常用いられる水酸基の保護基により保護されていても良い。好ましくは保護されていない水酸基である。
【００１３】
ここで、「アルキル」とは、炭素数１〜１０、好ましくは炭素数１〜６、さらに好ましくは炭素数１〜３までの直鎖状または分岐状のアルキルを包含し、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ｎ−へプチル、イソヘプチル、ｎ−オクチル、イソオクチル、ｎ−ノニルおよびｎ−デシル等が例示される。
【００１４】
「置換されていてもよいアルキル」の置換基としては、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アシル等が挙げられる。
【００１５】
「ハロゲン」とはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩを包含する。
【００１６】
「アルコキシ」および「アルコキシカルボニル」のアルキル部分は前記「アルキル」と同意であって、いずれも、炭素数１〜６、さらに好ましくは炭素数１〜３までの直鎖状または分岐状のアルキルを包含し、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシル等が例示される。特に好ましくはメチルまたはエチルである。
【００１７】
「アシル」とは、炭素数１〜７の脂肪族アシルおよびアロイルを包含する。具体的には、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、アクリロイル、プロピオロイル、メタクリロイル、クロトノイルおよびベンゾイル等が例示される。
【００１８】
「ヘテロアリール」とは、Ｏ、ＳおよびＮから任意に選択されるヘテロ原子を環内に１個以上有する芳香族複素環式基を包含し、具体的にはピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアゾリル、トリアジニル、テトラゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、フリルおよびチエニル等の５〜６員環のヘテロアリール；インドリル、イソインドリル、インダゾリル、インドリジニル、インドリニル、イソインドリニル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、プリニル、プテリジニル、ベンゾピラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンズオキサジアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イミダゾピリジル、ピラゾロピリジン、トリアゾロピリジル、イミダゾチアゾリル、ピラジノピリダジニル、キナゾリニル、キノリル、イソキノリル、ナフチリジニル、ジヒドロベンゾフリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ジヒドロベンズオキサジン、テトラヒドロベンゾチエニル等の２環の縮合複素環式基；カルバゾリル、アクリジニル、キサンテニル、フェノチアジニル、フェノキサチイニル、フェノキサジニル、ジベンゾフリル、イミダゾキノリル等の３環の縮合複素環式基を包含する。好ましくは５〜６員環のヘテロアリールである。
【００１９】
「アリール」とは、炭素数６から１６の単環性、二環性若しくは三環性の芳香族炭素環を示し、例えばフェニル、ナフチル、アントリルおよびフェナントリル等を包含し、特にフェニルが好ましい。
【００２０】
「置換されていてもよいアリール」および「置換されていてもよいヘテロアリール」の置換基は「置換されていてもよいアルキル」の場合と同様である。
【００２１】
「天然アミノ酸」は生物が普遍的に利用する２０種類のＬ−α−アミノ酸を意味し、また「非天然アミノ酸」は天然アミノ酸の光学異性体（Ｄ-体）の他、天然アミノ酸に存在しない側鎖を有するＬ−体若しくはＤ−体のアミノ酸誘導体を包含する。天然アミノ酸の光学異性体（Ｄ-体）が好ましい。
【００２２】
「ペプチド残基」はこれら天然および／または非天然アミノ酸が１個から１０個ペプチド結合でつながったオリゴペプチドを包含し、１個の天然または非天然アミノ酸を包含する。１個から６個のペプチドが好ましく、さらに１個から３個のペプチドが好ましい。また、このペプチド残基は、ペプチド合成のための保護基および／または当業者に一般的に使用される標識で適宜、修飾されていてもよい。
【００２３】
製薬上許容される塩としては、酸付加塩の場合、例えば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、過塩素酸塩等の無機酸塩；例えばシュウ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマール酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩等の有機酸塩；例えばメタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩等のスルホン酸塩；例えばアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等の酸性アミノ酸等を挙げることができる。また、塩基付加塩の場合、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アルギニン、リシン等の塩基性アミノ酸塩等を挙げることができる。
【００２４】
化合物（Ｉ）は、水、アセトニトリル、酢酸エチル、メタノール、エタノール等の溶媒和物であってもよい。又本発明化合物の溶媒和物の溶媒和数は通常、合成方法、精製方法または結晶化条件等によって変化し得るが、例えば、化合物１分子当り１〜５分子の範囲である。
【００２５】
本発明化合物は以下のようにして製造できる。
（１）三糖ユニットの合成スキーム
フッ素置換されたグリコシルドナーは、その電子求引性のため反応性が悪く、アノマー位活性化基としてイミデートを用いた時のみ反応が進行した。また、グリコシルアクセプターとして４，６−ベンジリデン化Ｇａｌを用いた時には３位の水酸基の反応性が悪く反応が進行しなかったため、この水酸基の反応性を高める４，６−シリレン化Galをグリコシルアクセプターとして用いた時のみ反応が進行した。これらのことより、グリコシルドナーのアノマー位活性化基としてはイミデート、鍵フラグメントとなる真ん中のGalは４，６−シリレン化Galを用いる合成ルートを計画した。
【００２６】
フッ素化三糖ユニット(３９)は以下のスキームに従って合成される。
【化５】
2009274954.tif 000006
鍵化合物であるシリレン化ガラクトースアクセプター（１７）に対し、６位フッ素化ドナー（５）をグリコシル化して二糖ユニットとした後、シリレン基をＨＦで脱保護し、そのままベンジル化して（２２）とした。次いで、二糖ユニット（２２）のＭＰ（ｐ−メトキシフェニル）基を、後述の通りイミデート体に変換し、これを、既知化合物であるキシロシルアクセプター(３６)とグリコシル化して、三糖ユニット(３９）とした。この際、アノマー位の選択比は約α：β（１：５）（ＮＭＲ比）となるが、β体のみフラッシュカラムクロマトグラフィーにより分離精製することができる。
【００２７】
（２）単糖誘導体の合成
６−Ｆフラグメント(５)の合成
【化６】
2009274954.tif 000007
反応条件：
ａ）アリルアルコール、Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ×８［Ｈ＋］
ｂ）（１）ＰｈＣＨ（ＯＭｅ）2、ＣＳＡ、ＤＭＦ、（２）ＢｚＣｌ、Ｐｙｒ、ＤＭＡＰ、ＣＨ2Ｃｌ2、（３）ＣＳＡ、ＭｅＯＨ
ｃ）（１）ＤＡＳＴ、ＣＨ2Ｃｌ2、（２）ＢｚＣｌ、ピリジン、ＤＭＡＰ、ＣＨ2Ｃｌ2
ｄ）（１）Ｉr cat、Ｈ2、ＴＨＦ、次いでＴｓＯＨ水溶液、（２）ＣＣｌ3ＣＮ、ＤＢＵ
Ｄ−ガラクトース（１）をフィッシャー法によりアノマー位をアリル化して（２）とした。４,６位にベンジリデンアセタールをかけ、そのまま２位をベンゾイル化した後、未精製のままベンジリデンアセタールを脱保護して既知化合物（３）とした。これを、ＤＡＳＴで６位を選択的にフッ素化した後、簡易精製の後そのまま４位をベンゾイル化して（４）とした。アノマー位のアリル基を脱保護した後、イミデート化して６Ｆフラグメント（５）とした。
【００２８】
４,６−シリレン化ガラクトース（１７）の合成
【化７】
2009274954.tif 000008
反応条件：
ａ）（１）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、（２）ｎ−Ｂｕ2ＳｎＯ、トルエン、還流、その後臭化アリル、臭化テトラブチルアンモニウム
ｂ）（１）ＤＴＢＰ、２,６−ルチジン、（２）ＢｚＣｌ、ピリジン、ＤＭＡＰ
ｃ）［Ｉｒ（ＣＯＤ）（ＰＭｅＰｈ2）2ＰＦ6］、Ｈ2、その後ＴｓＯＨＨ2Ｏ
市販の（１４）から既知化合物（１５）へと導いた後、４,６−位を選択的にシリレン化した。これをそのまま２位をベンゾイル化して（１６）とした。（１６）のアリル基を脱保護して、シリレン化ガラクトースアクセプター（１７）とした。
【００２９】
（３）化合物（Ｉ）の合成
こうして得られた三糖ユニットをそのまま脱保護すれば、Ｒがp-メトキシフェニルである本発明化合物（Ｉ)となる。
また、常法に従ってイミデート体に変換した後、ＨＯＲとカップリングさせ、ベンゾイル基を脱保護すれば種々の化合物（Ｉ）に誘導することができる。
【００３０】
Ｒとしては、天然アミノ酸２個から４個のオリゴペプチドが好ましく、特にセリン若しくはスレオニンの側鎖ＯＨ基とカップリングさせたものが好ましい。また、そのＨＳＰＧ生成促進作用を損なわない範囲で、標識化した誘導体が好適に利用される。
【００３１】
本発明の化合物は、例えば創傷治癒の促進に有効である。好ましくは創傷治癒剤として経口または非経口投与用に処方され得る。
【００３２】
経口投与による場合、本剤は通常の製剤、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤等の固形剤；水剤；油性懸濁剤；またはシロップ剤もしくはエリキシル剤等の液剤のいずれかの剤形としても用いることができる。非経口投与による場合、水性または油性懸濁注射剤、点鼻液として用いることができる。その調製に際しては、慣用の賦形剤、結合剤、滑沢剤、水性溶剤、油性溶剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、安定剤等を任意に用いることができる。
【００３３】
本発明の製剤は、治療有効量の化合物を製薬上許容される担体または希釈剤とともに組み合わせる（例えば混合する）ことによって製造され、その場合、周知の、容易に入手できる成分を用いて既知の方法により製造される。
【００３４】
本発明の医薬組成物を製造する際、活性成分は担体と混合されるかまたは担体で希釈されるか、カプセル、サッシェー、紙、あるいは他の容器の形態をしている担体中に入れられる。担体が希釈剤として働く時、担体は媒体として働く固体、半固体、または液体の材料であり、それらは錠剤、丸剤、粉末剤、口中剤、エリキシル剤、懸濁剤、エマルジョン剤、溶液剤、シロップ剤、エアロゾル剤（液体媒質中の固体）、軟膏にすることができ、例えば、１０％までの活性化合物を含む。
【００３５】
当業者には公知の適当な担体はいずれもこの製剤のために使用できる。このような製剤では担体は、固体、液体、または固体と液体の混合物である。例えば、静脈注射のために有効成分の化合物を４％デキストロース／０．５％クエン酸ナトリウム水溶液中に溶解する。固形の製剤は粉末、錠剤およびカプセルを包含する。固形担体は、香料、滑沢剤、溶解剤、懸濁剤、結合剤、錠剤崩壊剤、カプセル剤にする材料としても役立つ１またはそれ以上の物質である。経口投与のための錠剤は、トウモロコシデンプン、アルギン酸などの崩壊剤、および／またはゼラチン、アカシアなどの結合剤、およびステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、滑石などの滑沢剤とともに炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムなどの適当な賦形剤を含む。
【００３６】
粉末剤では担体は細かく粉砕された活性成分と混合された、細かく粉砕された固体である。錠剤では活性成分は、適当な比率で、必要な結合性を持った担体と混合されており、所望の形と大きさに固められている。粉末剤および錠剤は約１〜約９９重量％の本発明の新規化合物である活性成分を含んでいる。適当な固形担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、滑石、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、ココアバターである。
【００３７】
液体製剤は懸濁剤、エマルジョン剤、シロップ剤、およびエリキシル剤を含む。活性成分は、滅菌水、滅菌有機溶媒、または両者の混合物などの製薬上許容し得る担体中に溶解または懸濁することができる。活性成分はしばしば適切な有機溶媒、例えばプロピレングリコール水溶液中に溶解することができる。水性デンプン、ナトリウムカルボキシメチルセルロース溶液、または適切な油中に細かく砕いた活性成分を散布することによってその他の組成物を製造することもできる。
【００３８】
本発明における化合物の投与量は、投与方法、患者の年齢、体重、状態および疾患の種類によっても異なるが、通常、経口投与の場合、成人１日あたり約０．１ｍｇ〜７０００ｍｇ、好ましくは、約０．５ｍｇ〜２０００ｍｇを、要すれば分割して投与すればよい。また、非経口投与の場合、成人１日あたり約０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは、約０．５ｍｇ〜５００ｍｇを投与する。
【実施例】
【００３９】
製造例１
６-Ｆフラグメント(５)の合成
（ａ）化合物(３)の合成
【化８】
2009274954.tif 000009
市販のＤ−ガラクトース（１）を既知化合物（２）へと導いた後、これをＤＭＦに溶かしベンズアルデヒドジメチルアセタール、ＣＳＡを加えて８０℃で３時間攪拌した。これをトルエン共沸してＤＭＦを除いた後、ＣＨ2Ｃｌ2に溶かした。ピリジン、ＢｚＣｌ、ＤＭＡＰを加えて一晩攪拌した。水を加えて反応を止め、有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4乾燥した。ろ過、濃縮後フラッシュクロマトグラフィーで精製し、（３）を得た。
化合物（３）: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 5.85 (1H, m, H8), 5.74 (1H, dd, J = 10.8, 3.0 Hz, H2), 5.71 (1H, dd, J = 10.8, 1.2 Hz, H3), 5.36 (1H, d, J = 3.0 Hz, H1), 5.30 (1H, dd, J = 16.8, 1.2 Hz, H9), 5.15 (1H, dd, J = 10.8, 1.2 Hz, H9), 4.24 (1H, dd, J = 13.2, 4.8 Hz, H7), 4.12 (1H, dd, J = 5.4, 4.2 Hz, H5), 4.07 (1H, dd, J = 13.2, 7.2 Hz, H7), 4.02 (1H, dd, J = 12.0, 5.4 Hz, H6), 3.94 (1H, dd, J = 12.0, 4.2 Hz, H6)
【００４０】
（ｂ）化合物（４）の合成
【化９】
2009274954.tif 000010
化合物（３）をＣＨ2Ｃｌ2に溶かし、−１５℃に冷却した。これにＤＡＳＴを加えた後、徐々に室温まで昇温しながら１２時間攪拌した。ＭｅＯＨを１滴加えて反応を止めた後、有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄してＭｇＳＯ4乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィーで簡易精製を行った。副生成物との分離が困難であるため、さらなる精製は行わず次の反応に進んだ。粗生成物をＣＨ2Ｃｌ2に溶かした後、ピリジン、ＢｚＣｌ、ＤＭＡＰを加え５０℃に加熱し、６時間攪拌した。室温まで冷却後、水を加えて反応を止め、有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4乾燥した。ろ過、濃縮後フラッシュクロマトグラフィーで精製し、化合物（４）を得た。
化合物（４）: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.07-7.22 (15H, Ph), 6.00 (1H, dd, J = 10.6, 3.0 Hz, H3), 5.97 (1H, d, J = 3.0 Hz, H4), 5.87 (1H, m, H9), 5.71 (1H, dd, J = 10.6, 3.3 Hz, H2), 5.47 (1H, d, J = 3.3 Hz, H1), 5.33 (1H, dd, J = 17.2, 1.3 Hz, H9), 5.19 (1H, dd, J = 10.3, 1.3, H9), 4.60-4.52 (3H, m, H5, H6, H6), 4.31 (1H, dd, J = 13.1, 5.1 Hz, H7), 4.11 (1H, dd, J = 13.1, 7.0 Hz, H7)
【００４１】
（ｃ）６-Ｆフラグメント(５)の合成
【化１０】
2009274954.tif 000011
Ｉｒ触媒をＴＨＦに溶かし、水素雰囲気下で２時間攪拌した。フラスコ内を窒素置換した後、ＴＨＦに溶かした化合物（４）を加え室温で２時間攪拌した。ＴＬＣでアリル基の異性化を確かめた後、飽和重曹水、Ｉ2を加えて１時間攪拌した。有機層を飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和重曹水、ブラインで洗浄後、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュクロマトグラフィーで簡易精製し、そのまま次の反応に進んだ。この粗生成物をＣＨ2Ｃｌ2に溶かした後、０℃に冷却し、ＣＣｌ3ＣＮ、ＤＢＵを加え１時間攪拌した。これをそのまま濃縮しフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物（５）を得た。
化合物（５）：1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.68 (1H, s, NH), 8.08-7.23 (15H, Ph), 6.92 (1H, d, J = 3.5 Hz, H1), 6.09 (1H, d, J = 3.0 Hz, H4), 6.05 (1H, dd, J = 10.6 Hz, 3.0 Hz, H3), 5.96 (1H, dd, J = 10.6, 3.5 Hz, H2), 4.77 (1H, qi, J = 5.8 Hz, H5), 4.66-4.52 (2H, m, H6, H6)
【００４２】
参考例１
４Ｆフラグメント（１３）の合成
【化１１】
2009274954.tif 000012
（ａ）８の合成
市販の６を既知化合物７へと導いた後、ＭｅＯＨに懸濁させた。これにＮａＯＭｅを入れ１時間攪拌した後、ＤＯＷＥＸ５０Ｗ×８［Ｈ+］を加えて反応を止めた。ろ過、濃縮後、これをＤＭＦに溶かした。この溶液にベンズアルデヒドジメチルアセタール、ＣＳＡを加え８０℃で３時間攪拌した。トルエン共沸して溶媒を飛ばし、そのままピリジンに溶かした。０℃に冷却して無水酢酸をゆっくりと加え、室温で１２時間攪拌した。溶液を濃縮後ＥｔＯＡｃに溶かして、有機層を水、飽和重曹水、ブラインで洗浄後、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、８を得た。
８: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 7.47-7.10 (5H, Ph), 6.97 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.85 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 5.55 (1H, s, PhCH), 5.41 (1H, t, J = 7.8 Hz, H3), 5.27 (1H, t, J = 7.8 Hz, H2), 5.08 (1H, d, J = 7.8 Hz, H1), 4.42 (1H, dd, J = 10.3, 5.0 Hz, H6), 3.87 (1H, t, J = 10.3 Hz, H6), 3.83 (1H, dd, J = 9.6, 7.8 Hz, H4), 3.82 (3H, s, OMe), 3.64 (1H, ddd, J = 10.3, 9.6, 5.0 Hz, H5), 2.10 (6H, Ac)
【００４３】
（ｂ）９の合成
８をＴＨＦに溶かした後、この溶液を０℃に冷却し、ＭＳ４Ａ、ＮａＢＨ3ＣＮを加えて１０分間攪拌した。この溶液にｐＨチェックしながら酸性になるまで２ＨＣｌ／Ｅｔ2Ｏ溶液を加え、室温に昇温し３時間攪拌した。セライトでＭＳ４Ａをろ過した後、有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し９を得た。
９: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 7.35-7.26 (5H, Ph), 6.95 (2H, d, J = 3.8 Hz, MP), 6.78 (2H, d, J = 3.8 Hz, MP), 5.16 (1H, dd, J = 9.6, 7.8, Hz, H2), 5.11 (1H, t, J = 9.6 Hz, H3), 4.93 (1H, d, J = 7.8 Hz, H1), 4.60 (1H, d, J = 11.9 Hz, ベンジル), 4.56 (1H, d, J = 11.9 Hz, ベンジル), 3.83-3.77 (3H, m, H4, H6, H6), 3.63 (1H, m, H5), 2.10 (3H, s, Ac), 2.06 (3H, s, Ac)
【００４４】
（ｃ）１０の合成
９をＣＨ2Ｃｌ2にとかした後、−１５℃に冷却しピリジン、Ｔｆ2Ｏを加えた。１時間攪拌した後ＴＢＡＦを加え室温に昇温後、さらに１２時間攪拌した。有機層を水、飽和重曹水、ブラインで洗浄後、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、１０を得た。
１０: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 7.38-7.28 (5H, ベンジル), 6.99 (2H, d, J = 9.6 Hz, MP), 6.82 (2H, d, J = 9.6 Hz, MP), 5.53 (1H, dd, J = 10.1, 8.3 Hz, H2), 5.06 (1H, ddd, J = 26.4, 10.1, 2.2 Hz, H3), 4.97 (1H, dd, J = 49.9, 2.2 Hz, H4), 4.96 (1H, d, J = 8.3 Hz, H1), 4.59 (2H, s, ベンジル), 3.88 (1H, td, J = 26.4, 6.6 Hz, H5), 3.81-3.74 (5H, m, H6, H6, OMe), 2.07 (6H, Ac)
【００４５】
（ｄ）１１の合成
１０をＭｅＯＨに溶かし、ＮａＯＭｅを加え１時間攪拌した。ＤＯＷＥＸ５０Ｗ×８［Ｈ+］を加えて反応をとめた後、ろ過、濃縮した。これをトルエンに懸濁させ、ｎ−Ｂｕ2Ｏを加え１時間リフラックスした。０℃に冷却後、ピリジン、モノクロロアセチルクロライドを加え、室温まで昇温しながら６時間攪拌した。有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄後、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィーで簡易精製し粗生成物を得た。この際、Ｂｚが二つかかったものが副生成物として得られ分離が困難であったためそのまま次の反応へ進んだ。この混合物をＭｅＯＨ、Ｅｔ3Ｎに溶かし、６０℃で３時間攪拌した。これにクロロホルムを加えた後、１ＮＨＣｌ、飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、１１を得た。
１１: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.09-7.28 (10H, Ph), 6.98 (2H, d, J = 8.9 Hz, MP), 6.79 (2H, d, J = 8.9 Hz, MP), 5.50 (1H, dd, J = 8.6, 7.9 Hz, H2), 5.07 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1), 4.95 (1H, d, J = 49.4 Hz, H4), 4.63 (1H, s, ベンジル), 3.95-3.81 (4H, m, H3, H5, H6, H6), 3.77 (3H, s, OMe)
【００４６】
（ｅ）１２の合成
１０をＭｅＯＨに溶かし、Ｐｄカーボンを加え水素雰囲気下で３時間攪拌した。セライトろ過、濃縮後ＭｅＯＨに溶かしＮａＯＭｅを加え１時間攪拌した。ＤＯＷＥＸ５０Ｗ×８［Ｈ+］を加えて反応をとめた後、ろ過、濃縮した。これをＣＨ2Ｃｌ2に溶かし、ピリジン、ＢｚＣｌ、ＤＭＡＰを加えて１２時間攪拌した。水を加えて反応をとめた後、１ＮＨＣｌ、飽和重曹水、ブラインで洗浄しＭｇＳＯ4乾燥した。ろ過、濃縮後フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、１２を得た。
１２: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.15-7.39 (15H, Ph), 6.98 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.71 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.05 (1H, dd, J = 9.4, 8.0 Hz, H2), 5.49 (1H, dd, J = 26.9, 9.4 Hz, H3), 5.21 (1H, d, J = 52.0 Hz, H4), 5.21 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1), 4.75 (1H, dd, J = 11.4, 7.4 Hz, H6), 4.69 (1H, dd, J = 11.4, 5.8, Hz, H6), 4.27, (1H, ddd, J = 25.8, 7.4, 5.8 Hz, H5), 3.73 (3H, s, OMe)
【００４７】
（ｆ）１３の合成
１２をトルエン：ＣＨ3ＣＮ：水＝１．５：１：１に溶かし、ＣＡＮを加え１時間攪拌した。有機層を水、飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後フラッシュカラムクロマトグラフィーで簡易精製した。不純物が混ざるため、この粗生成物をそのまま次の反応に用いた。粗生成物をＣＨ2Ｃｌ2に溶かした後、０℃に冷却しＣＣｌ3ＣＮ、ＤＢＵを加え１時間攪拌した。これをそのまま濃縮しフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、１３を得た。
１３: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.65 (1H, s, NH), 8.06-7.17 (15H, Ph), 6.84 (1H, d, J = 3.5 Hz, H1), 5.96 (1H, dd, J = 10.4, 3.8 Hz, H2), 5.88 (1H, ddd, J = 28.6, 10.4, 2.3 Hz, H3), 5.31 (1H, dd, J = 52.4, 2.3 Hz, H4), 4.69-4.60 (3H, m, H5, H6, H6)
【００４８】
製造例２
シリレン化Ｇａｌ（１７）の合成
【化１２】
2009274954.tif 000013
市販の（１４）から既知化合物（１５）へ文献に従い導いた。（１５）をＣＨ2Ｃｌ2に溶かし、ｔ−Ｂｕ2Ｓｉ（ＯＴｆ）2、ピリジンを加え３時間攪拌した。有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄後、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後、この粗生成物をＣＨ2Ｃｌ2に溶かし、ピリジン、ＢｚＣｌ、ＤＭＡＰを入れ、６０℃で５時間攪拌した。水を加えて反応をとめた後、有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、（１６）を得た。
化合物(１６) : 1H-NMR(600MHz, CDCl3, δ) 8.19-7.46(5H, Ph), 6.94(2H, d, J=8.4Hz, MP), 6.76(2H, d, J=8.4Hz, MP), 5.85(1H, m, H8), 5.83(1H, dd, J=10.1, 8.0Hz, H2), 5.26(1H, dd, J=17.3, 1.5Hz, H9), 5.12(1H, dd, J=10.3, 1.5Hz, H9), 5.01(1H, d, J=8.0Hz, H1), 4.64(1H, d, J=2.7Hz, H4), 4.33(1H, m, H6, H6), 4.22(1H, dd, J=13.3, 5.2Hz, H7), 4.12(1H, dd, J=13.3, 5.9Hz, H7), 3.74(3H, s, OMe), 3.66(1H, dd, J=10.1, 2.7Hz, H3), 3.53(1H, m, H5), 1.11(9H, s, t-Bu), 1.03(9H, s, t-Bu).
次いで、Ｉｒ触媒をＴＨＦに溶かし、水素雰囲気下で２時間攪拌した。フラスコ内を窒素置換した後、ＴＨＦに溶かした（１６）を加え室温で２時間攪拌した。ＴＬＣでアリル基の異性化を確かめた後、ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏを加えて１時間攪拌した。有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄後、ＭｇＳＯ４で乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュクロマトグラフィーで精製し、（１７）を得た。
化合物（１７) : 1H-NMR(600MHz, CDCl3, δ) 8.03-7.43(5H, Ph), 6.93(2H, d, J=9.0Hz, MP), 6.76(2H, d, J=9.0Hz, MP), 5.59(1H, dd, J=9.6, 8.4Hz, H2), 4.97(1H, d, J=8.4Hz, H1), 4.49(1H, d, J=3.0Hz, H4), 4.34(1H, dd, J=12.4, 2.0Hz, H6), 4.30(1H, dd, J=12.4, 1.2Hz, H6), 3.78(1H, td, J=9.6, 3.0Hz, H3), 3.74(3H, s, OMe), 3.58(1H, m, H5), 2.78(1H, d, J=9.6 Hz, OH), 1.14(9H, s, t-Bu), 1.08(9H, s, t-Bu).
【００４９】
製造例３
二糖ユニットの合成
【化１３】
2009274954.tif 000014
２Ｇａｌ−６Ｆ２糖の合成
製造例１で得たグリコシルドナー（５）、製造例２で得たグリコシルアクセプター（１７）、およびＭＳＡＷ３００をＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＣＮ（１：１）に溶かし、窒素雰囲気下、室温で３０分攪拌した。０℃に冷却した後、ＣＨ2Ｃｌ2に溶かしたＴＭＳＯＴｆをゆっくりと加え１時間攪拌した。この溶液に飽和重曹水を加えて反応をとめた後、セライトろ過し、有機層をブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物（１９）を得た。
化合物（１９）: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.03-7.01 (20H, Ph), 6.83 (2H, d, J = 9.1 Hz, MP), 6.69 (2H, d, J = 9.1 Hz, MP), 5.84-5.78 (3H, m, H2, H2’, H4’), 5.43 (1H, dd, J = 10.4, 3.4 Hz, H3’), 5.12 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1’), 4.91 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1), 4.86 (1H, d, J = 2.7 Hz, H4), 4.54 (2H, ddd, J = 46.4, 7.4, 3.0 Hz, H6', H6'), 4.31 (1H, d, J = 12.0 Hz, H6), 4.28 (1H, d, J = 12.0 Hz, H6), 4.21 (1H, m, H5'), 3.99 (1H, dd, J = 10.0, 2.8 Hz, H3), 3.71 (3H, s, OMe), 3.56 (1H, s, H5), 1.14 (9H, s, t-Bu), 1.10 (9H, s, t-Bu)
次いで、化合物（１９）をＴＨＦに溶かし０℃に冷却した後、（ＨＦ）ｘ・ピリジン（７．０ｍｌ,９．０ｍｍｏｌ）を加え６時間攪拌した。飽和重曹水を加えて反応をとめた後、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮した。これをそのままＣＨ2Ｃｌ2に溶かし、ピリジン（５ｍｌ,２．９５ｍｍｏｌ）、ＢｚＣｌ（８．７ｍｌ,１．０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（触媒量）を入れ、６０℃で５時間攪拌した。水を加えて反応をとめた後、有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（２２）を得た。
化合物（２２）：1Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ,ＣＤＣｌ3,δ）8.27-7.06 (30H, m, Ph), 6.83 (2H, d, J = 9.1 Hz, MP), 6.55 (2H, d, J = 9.1 Hz, MP), 6.02 (1H, d, J = 3.1 Hz, H4), 5.86 (1H, dd, J = 9.8, 7.9 Hz, H2), 5.79 (1H, d, J = 2.7 Hz, H4’), 5.59 (1H, dd, J = 10.3, 7.8 Hz, H2’), 5.37 (1H, dd, J = 10.3, 2.7 Hz, H3'), 5.05 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1), 5.03 (1H, d, J = 7.8 Hz, H1'), 4.66 (1H, dd, J = 12.0, 4.5 Hz, H6), 4.61 (1H, ddd, J = 46.9, 9.7, 6.8 Hz, H6'), 4.51 (1H, dd, J = 12.0, 8.3 Hz, H6), 4.46 (1H, ddd, J = 46.9, 9.7, 5.0 Hz, H6'), 4.39 (1H, dd, J = 9.8, 3.1 Hz, H3), 4.30 (1H, m, H5), 4.18 (1H, m, H5')
【００５０】
参考例２
２Ｇａｌ−４Ｆ２糖（２３）の合成
【化１４】
2009274954.tif 000015
グリコシルドナー１３、グリコシルアクセプター１７、ＭＳＡＷ３００をＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＣＮ（１：１）に溶かし、窒素雰囲気下、室温で３０分攪拌した。０℃に冷却した後、ＣＨ2Ｃｌ2に溶かしたＴＭＳＯＴｆをゆっくりと加え１時間攪拌した。この溶液に飽和重曹水を加えて反応をとめた後、セライトろ過し、有機層をブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、２０を得た。
２０: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.06-7.07 (20H, Ph), 6.83 (2H, d, J = 8.8 Hz, MP), 6.71 (2H, d, J = 8.8 Hz, MP), 5.81 (1H, dd, J = 10.5, 7.9 Hz, H2’), 5.77 (1H, dd, J = 8.3, 7.9 Hz, H2), 5.26 (1H, dd, J = 27.0, 10.5 Hz, H3’), 5.09 (1H, d, J = 38.5 Hz, H4’), 5.08 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1'), 4.87 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1), 4.78 (1H, s, H4), 4.69 (1H, dd, J = 11.2, 7.1 Hz, H6'), 4.51 (1H, dd, J = 11.2, 6.3 Hz, H6'), 4.22 (1H, d, J = 12.1 Hz, H6), 4.16 (1H, d, J = 12.1 Hz, H6), 4.09 (1H, ddd, J = 25.8, 7.1, 6.3 Hz, H5’), 3.98 (1H, d, J = 8.3 Hz, H3), 3.73 (3H, s, OMe), 3.42 (1H, s, H5)  
次いで、２０をＴＨＦに溶かし０℃に冷却した後、（ＨＦ）ｘ・ピリジン（７．０ｍｌ,９．０ｍｍｏｌ）を加え６時間攪拌した。飽和重曹水を加えて反応をとめた後、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮した。これをそのままＣＨ2Ｃｌ2に溶かし、ピリジン（５ｍｌ,２．９５ｍｍｏｌ）、ＢｚＣｌ（８．７ｍｌ,１．０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（触媒量）を入れ、６０℃で５時間攪拌した。水を加えて反応をとめた後、有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、２３を得た。
２３: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 5.25-7.16 (30H, m, Ph), 6.88 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.56 (2H, d, 9.0 Hz, MP), 5.95 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4), 5.85 (1H, dd, J = 9.5, 8.0 Hz, H2), 5.62 (1H, dd, J = 10.3, 8.0, H2’), 5.20 (1H, ddd, J = 27.0, 10.5, 2.4 Hz, H3’), 5.04 (1H, dd, J = 50.3, 2.4 Hz, H4'), 5.00 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1), 4.98 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1'), 4.71 (1H, ddd, J = 11.3, 6.4, H6'), 4.64 (1H, dd, J = 11.8, 4.2 Hz, H6), 4.50 (1H, dd, J = 11.8, 8.3 Hz, H6), 4.47 (1H, dd, J = 11.3, 7.0 Hz, H6'), 4.38 (1H, dd, J = 9.5, 3.2 Hz, H3), 4.21 (1H, m, H5), 4.08 (1H, m, H5’)  
【００５１】
参考例３
フッ素無置換コントロール２糖（２４）の合成
【化１５】
2009274954.tif 000016
参考例２と同様、既知化合物であるグリコシルドナー１８、グリコシルアクセプター１７、ＭＳＡＷ３００をＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＣＮ（１：１）に溶かし、窒素雰囲気下、室温で３０分攪拌した。０℃に冷却した後、ＣＨ2Ｃｌ2に溶かしたＴＭＳＯＴｆをゆっくりと加え１時間攪拌した。この溶液に飽和重曹水を加えて反応をとめた後、セライトろ過し、有機層をブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、２１を得た。
２１: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.09-7.01 (25H, Ph), 6.83 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.71 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 5.95 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4’), 5.85 (1H, dd, J = 10.3, 7.9 Hz, H2’), 5.78 (1H, dd, J = 9.7, 7.9 Hz, H2), 5.51 (1H, dd, J = 10.3, 3.2 Hz, H3’), 5.14 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1'), 4.88 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1), 4.88 (1H, s, H4), 4.68 (1H, dd, J = 11.1, 7.1 Hz, H6'), 4.37 (1H, dd, J = 11.1, 5.9 Hz, H6'), 4.33 (1H, dd, J = 7.1, 5.9 Hz, H5'), 4.21 (1H, d, J = 12.1 Hz, H6), 4.10 (1H, d, J = 12.1, H6), 3.95 (1H, d, J = 9.7 Hz, H3), 3.40 (1H, s, H5), 1.11 (9H, t-Bu×2)
次いで、２１をＴＨＦに溶かし０℃に冷却した後、（ＨＦ）ｘ・ピリジン（７．０ｍｌ,９．０ｍｍｏｌ）を加え６時間攪拌した。飽和重曹水を加えて反応をとめた後、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮した。これをそのままＣＨ2Ｃｌ2に溶かし、ピリジン（５ｍｌ,２．９５ｍｍｏｌ）、ＢｚＣｌ（８．７ｍｌ,１．０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（触媒量）を入れ、６０℃で５時間攪拌した。水を加えて反応をとめた後、有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、２４を得た。
２４: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.24-7.07 (35H, Ph), 6.82 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.55 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.02 (1H, d, J = 3.6 Hz, H4), 5.87 (1H, d, J = 3.4 Hz, H4’), 5.84 (1H, dd, J = 9.6 Hz, 7.9 Hz, H2), 5.60 (1H, dd, J = 10.4, 7.8 Hz, H2’), 5.40 (1H, dd, J = 10.4, 3.4 Hz, H3'), 5.02 (1H, d, J = 7.8 Hz, H1'), 4.98 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1), 4.71 (1H, dd, J = 11.2, 6.2 Hz, H6'), 4.61 (1H, dd, J = 11.8, 4.1 Hz, H6), 4.50 (1H, dd, J = 11.8, 8.3 Hz, H6), 4.34-4.30 (2H, m, H6', H3), 4.27 (1H, t, J = 6.2 Hz, H5'), 4.18 (1H, dd, J = 8.3, 4.1 Hz, H5), 3.66 (1H, s, OMe)
【００５２】
参考例４
１Ｇａｌ−６Ｆ２糖（２６）の合成
【化１６】
2009274954.tif 000017
上記参考例３の中間体２１をＴＨＦに溶かし０℃に冷却した後、（ＨＦ）ｘ・ピリジン（７．０ｍｌ,９．０ｍｍｏｌ）を加え６時間攪拌した。飽和重曹水を加えて反応をとめた後、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮した。これをフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、２５を得た。
２５: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.10-7.06 (25H, Ph), 6.80 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.68 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 5.94 (1H, d, J = 3.5 Hz, H4), 5.79 (1H, dd, J = 10.4, 8.0 Hz, H2’), 5.71 (1H, dd, J = 9.8, 8.0 Hz, H2), 5.51 (1H, dd, J = 10.4, 3.5 Hz, H3’), 5.00 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1'), 4.91 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1), 4.62 (1H, dd, J = 11.7, 7.5 Hz, H6'), 4.54 (1H, dd, J = 11.7, 5.0 Hz, H5'), 4.23 (1H, d, J = 3.0, H4), 4.00 (1H, dd, J = 9.8, 3.0 Hz, H3), 3.93 (1H, m, H6), 3.70 (3H, s, OMe), 3.63-3.61 (2H, m, H5, H6), 3.11 (1H, s, OH)
次いで、２５をＣＨ2Ｃｌ2に溶かし、−１５℃に冷却した。これにＤＡＳＴ（２０ｕｌ,６７ｍｍｏｌ）を加えた後、徐々に室温まで昇温しながら１２時間攪拌した。ＭｅＯＨを１滴加えて反応を止めた後、有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄してＭｇＳＯ4乾燥した。ろ過、濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィーで簡易精製を行った。副生成物との分離が困難であるため、さらなる精製は行わず次の反応に進んだ。粗生成物をＣＨ2Ｃｌ2に溶かした後、ピリジン、ＢｚＣｌ、ＤＭＡＰを加え５０℃に加熱し、６時間攪拌した。室温まで冷却後、水を加えて反応を止め、有機層を飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4乾燥した。ろ過、濃縮後フラッシュクロマトグラフィーで精製し、２６を得た。
２６: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.20-7.15 (30H, Ph), 6.85 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.71 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 5.90 (1H, d, J = 3.4 Hz, H4), 5.86 (1H, d, J = 3.3 Hz, H4’), 5.81 (1H, dd, J = 9.7, 7.9 Hz, H2), 5.59 (1H, dd, J = 10.9, 7.7 Hz, H2’), 5.40 (1H, dd, J = 10.4, 3.3 Hz, H3'), 5.01 (1H, d, J = 7.7 Hz, H1'), 5.00 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1), 4.69 (1H, dd, J = 10.9, 6.1 Hz, H6), 4.63 (1H, ddd, J = 39.4, 10.1, 3.5 Hz, H6), 4.53 (1H, ddd, J = 47.7, 10.1, 7.6 Hz, H6), 4.32-4.25 (3H, m, H3, H5', H6'), 4.05 (1H, m, H5), 3.71 (3H, s, OMe)
【００５３】
参考例５
１Ｇａｌ−４Ｆ２糖（２７）の合成
【化１７】
2009274954.tif 000018
既知化合物であるグリコシルドナー１８、グリコシルアクセプター１１、ＭＳＡＷ３００をＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＣＮ（１：１）に溶かし、窒素雰囲気下、室温で３０分攪拌した。０℃に冷却した後、ＣＨ2Ｃｌ2に溶かしたＴＭＳＯＴｆをゆっくりと加え１時間攪拌した。この溶液に飽和重曹水を加えて反応をとめた後、セライトろ過し、有機層をブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、２７を得た。
２７: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.09-7.08 (30H, Ph), 6.80 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.68 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 5.94 (1H, d, J = 3.4 Hz, H4’), 5.82 (1H, dd, J = 10.3, 7.9 Hz, H2’), 5.69 (1H, dd, J = 9.7, 7.9 Hz, H2), 5.45 (1H, dd, J = 10.3, 3.4 Hz, H3’), 5.10 (1H, dd, J = 49.0, 2.3 Hz, H4), 5.03 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1'), 4.90 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1), 4.66 (1H, dd, J = 11.3, 6.3 Hz, H6'), 4.56 (2H, s, Bn), 4.43 (1H, dd, J = 11.3, 6.3 Hz, H6'), 4.30 (1H, t, J = 6.3 Hz, H5'), 4.08 (1H, ddd, J = 27.0, 10.3, 2.3 Hz, H3), 3.79-3.70 (3H, m, H5, H6×2), 3.69 (3H, s, OMe)
【００５４】
製造例４
ジペプチドの合成
【化１８】
2009274954.tif 000019
市販のＺ−グリシン（２８）とセリンベンジルエステル（２９）をＣＨ2Ｃｌ2に溶かし、ＤＰＰＡ、Ｅｔ3Ｎ、およびＤＭＡＰを加え、３時間攪拌した。有機層を５％クエン酸水溶液、飽和重曹水、ブラインで洗浄後、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後、ＥｔＯＡｃから結晶化しＺ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（ＯＨ）−ＯＢｎ（３０）を得た。
【００５５】
実施例１
ｐ-メトキシフェノール体（３９）の合成
【化１９】
2009274954.tif 000020
化合物（２２）をトルエン：ＣＨ3ＣＮ：水＝１．５：１：１に溶かし、ＣＡＮを加え１時間攪拌した。有機層を水、飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後フラッシュカラムクロマトグラフィーで簡易精製した。不純物が混ざるため、この粗生成物をそのまま次の反応に用いた。粗生成物をＣＨ2Ｃｌ2に溶かした後、０℃に冷却しＣＣｌ3ＣＮ、ＤＢＵを加え１時間攪拌した。これをそのまま濃縮しフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物（３３）を得た。
化合物（３３）: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.52 (1H, s, NH), 8.17-7.00 (30H, Ph), 6.77 (1H, d, J = 3.7 Hz, H1), 6.17 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4), 5.86 (1H, d, J = 3.0 Hz, H4’), 5.80 (1H, dd, J = 10.2, 3.7 Hz, H2), 5.61 (1H, dd, J = 10.3, 7.7 Hz, H2’), 5.44 (1H, dd, J = 10.3, 3.0 Hz, H3'), 5.16 (1H, d, J = 7.7 Hz, H1'), 4.75-4.71 (2H, m, H3, H5'), 4.69 (1H, m, H6'), 4.56 (1H, dd, J = 11.7, 4.8 Hz, H6), 4.55 (1H, m, H6'), 4.47 (1H, dd, J = 11.7, 7.3 Hz, H6), 4.29 (1H, m, H5)
次に、グリコシルドナー（３３）、既知化合物であるグリコシルアクセプター（３６）、ＭＳＡＷ３００をＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＣＮ（１：１）に溶かし、窒素雰囲気下、室温で３０分攪拌した。０℃に冷却した後、ＣＨ2Ｃｌ2に溶かしたＴＭＳＯＴｆをゆっくりと加え１時間攪拌した。この溶液に飽和重曹水を加えて反応をとめた後、セライトろ過し、有機層をブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物（３９）を得た。
化合物３９: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.07-7.10 (40H, Ph), 6.88 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.76 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 5.87 (1H, d, J = 3.1 Hz, H4’), 5.79 (1H, d, J = 3.0 Hz, H4’’), 5.68 (1H, dd, J = 6.4, 5.5 Hz, H3), 5.58 (1H, dd, J = 10.0, 8.0 Hz, H2’), 5.56 (1H, dd, J = 10.1, 7.7 Hz, H2''), 5.41 (1H, t, J = 5.5 Hz, H2), 5.36 (1H, dd, J = 10.1, 3.0 Hz, H3''), 5.20 (1H, d, J = 5.5 Hz, H1), 4.97 (1H, d, J = 7.7 Hz, H1''), 4.87 (1H, d. J = 8.0 Hz, H1'), 4.67 (1H, ddd, J = 46.0, 9.5, 7.1 Hz, H6''), 4.44 (1H, ddd, J = 46.0, 9.5, 5.0 Hz, H6''), 4.31 (1H, dd, J = 10.0, 3.1 Hz, H3'), 4.21 (1H, dd, J = 11.5, 5.0 Hz, H6'), 4.17-4.11 (2H, m, H5'', H6'), 4.02 (1H, dd, J = 12.4, 3.8 Hz, H5), 3.97 (1H, dd, J = 6.4, 3.8 Hz, H4), 3.81 (1H, dd, J = 11.5, 7.5 Hz, H5'), 3.74 (3H, s, OMe), 3.41 (1H, dd, J = 12.4, 6.4 Hz, H5)
【００５６】
実施例２
糖ペプチドの合成（１）
【化２０】
2009274954.tif 000021
実施例１で得た化合物（３９）をトルエン：ＣＨ3ＣＮ：水＝１．５：１：１に溶かし、ＣＡＮを加え１時間攪拌した。有機層を水、飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後フラッシュカラムクロマトグラフィーで簡易精製した。不純物が混ざるため、この粗生成物をそのまま次の反応に用いた。粗生成物をＣＨ2Ｃｌ2に溶かした後、０℃に冷却しＣＣｌ3ＣＮ、ＤＢＵを加え１時間攪拌した。これをそのまま濃縮しフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、グリコシルドナー（４４）を得た。
４４: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.45 (1H, s, NH), 8.05-7.05 (40H, Ph), 6.53 (1H, s, H1), 5.91 (1H, t, J = 9.9 Hz, H3), 5.89 (1H, s, H4’), 5.76 (1H, s, H4’’), 5.52 (1H, t, J = 8.0 Hz, H2’’), 5.46 (1H, t, J = H2’), 5.36-5.31 (2H, m, H2, H3’’), 4.93 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1''), 4.76 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1'), 4.55 (1H, dt, 47.0, 9.7 Hz, H6''), 4.43 (1H, ddd, J = 47.0, 9.7, 4.8 Hz, H6''), 4.26 (1H, d, J = 10.0, H3'), 4.18-4.15 (2H, m, H4, H5''), 4.00 (1H, dd, J = 10.6, 6.2 Hz, H6'), 3.96 (1H, t, J = 6.2 Hz, H5'), 3.85 (1H, dd, J = 10.6, 6.2 Hz, H6'), 3.73 (1H, m, H5), 3.65 (1H, t, J = 11.5 Hz, H5)
グリコシルドナー（４４）、ペプチドアクセプター（３０）、ＭＳＡＷ３００をＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＣＮ（１：１）に溶かし、窒素雰囲気下、室温で３０分攪拌した。０℃に冷却した後、ＣＨ2Ｃｌ2に溶かしたＴＭＳＯＴｆをゆっくりと加え１時間攪拌した。この溶液に飽和重曹水を加えて反応をとめた後、セライトろ過し、有機層をブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物（４９）を得た。
化合物（４９）: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.16-7.05 (50H, Ph), 6.69 (1H, brs, NH), 5.84 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4’), 5.76 (1H, d, J = 2.3 Hz, H4’’), 5.55-5.52 (3H, m, H3, H2’, H2’’), 5.35 (1H, dd, J = 10.4, 2.3 Hz, H3’’), 5.10-4.98 (5H, m, H2, Bn×4), 4.96 (1H, d, J = 7.4 Hz, H1’’), 4.79 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1’’), 4.70 (1H, brs, Ser−α−H), 4.55 (1H, ddd, J = 45.9, 9.8, 6.8 Hz, H6’’), 4.53 (1H, m, H1), 4.43 (1H, ddd, J = 45.9, 9.8, 5.0 Hz, H6’’), 4.29 (1H, dd, J = 10.0, 3.2 Hz, H3’), 4.17-4.09 (3H, m, H5’’, H6’ ×2), 3.77 (1H, dd, J = 6.8, 5.0 Hz, H5’), 3.73-3.67 (5H, m, H4, Gly−α−H×2, Ser-β-H×2), 3.57 (1H, dd, J = 8.9, 3.4 Hz, H5), 3.09 (1H, m, H5)
【００５７】
実施例３
糖ペプチドの合成（２）
【化２１】
2009274954.tif 000022
実施例２で得た化合物（４９）をＭｅＯＨに溶かし、Ｐｄカーボンを加え水素雰囲気下で３時間攪拌した。セライトろ過、濃縮後ＭｅＯＨに溶かしＮａＯＭｅを加え１時間攪拌した。ＤＯＷＥＸ５０Ｗ×８［Ｈ+］を加えて反応をとめた後、ろ過してファルコンチューブにうつした。これにＭｅＯＨの１０倍量のＥｔ2Ｏを加えて生成物を析出させ、遠心分離（３５００ｒｐｍ,１０分間）し上澄みを取り除いた。沈殿物をゲルろ過クロマトグラフィー（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−１０）により精製し、化合物（５４）を得た。
化合物（５４）: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 5.24-5.01 (2H, m, H6’’×2), 4.51 (1H, d, J = 7.3 Hz, H1’’), 4.42 (1H, d, J = 7.4 Hz, H1’), 4.30 (1H, brs, Ser−α−H), 4.27 (1H, d, J = 3.1 Hz, H4’), 4.01-3.43 (17H, m), 3.30-3.10 (2H, m, H2, H5)
次いで、化合物（５４）をＤＭＦに縣濁させ、ＦＩＴＣ、飽和重曹水を加え室温で３時間攪拌した。この溶液をファルコンチューブに移してＥｔＯＨ／Ｅｔ2Ｏ（１：１０）を加え、沈殿を析出させた。遠心分離（３５００ｒｐｍ,１０分間）し、上澄みを取り除いた後、沈殿物をゲルろ過クロマトグラフィー（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−１０）により精製し、化合物（５９）を得た。生成物はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＡＳＳにより分子量を確認した。質量分析の結果を図６に示す。
【００５８】
参考例６
３糖２ペプチドユニットの合成
ｐ-メトキシフェノール体の合成
【化２２】
2009274954.tif 000023
２６をトルエン：ＣＨ3ＣＮ：水＝１．５：１：１に溶かし、ＣＡＮを加え１時間攪拌した。有機層を水、飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後フラッシュカラムクロマトグラフィーで簡易精製した。不純物が混ざるため、この粗生成物をそのまま次の反応に用いた。粗生成物をＣＨ2Ｃｌ2に溶かした後、０℃に冷却しＣＣｌ3ＣＮ、ＤＢＵを加え１時間攪拌した。これをそのまま濃縮しフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、グリコシルドナー３１を得た。また、２７、２３、２４も同様の条件で反応を行い、３２、３４、３５を得た。
３１: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.55 (1H, s, NH), 8.17-6.72 (30H, Ph), 6.73 (1H, d, J = 3.7 Hz, H1), 6.08 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4), 5.91 (1H, d, J = 3.1 Hz, H4), 5.73 (1H, dd, J = 10.3, 3.7 Hz, H2), 5.59 (1H, dd, J = 10.3, 7.9 Hz, H2’), 5.47 (1H, dd, J = 10.3, 3.1 Hz, H3'), 5.13 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1'), 4.76 (1H, d, J = 9.2 Hz, H6'), 4.74 (1H, d, J = 9.2 Hz, H6'), 4.58 (1H, dd, J = 10.3, 3.1 Hz, H3), 4.62-4.44 (3H, m, H5, H6×2), 4.40 (1H, m, H5')
３２: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.49 (1H, s, NH), 8.13-6.96 (30H, Ph), 6.62 (1H, d, J = 3.5 Hz, H1), 5.99 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4’), 5.85 (1H, dd, J = 10.3, 8.0 Hz, H2’), 5.59 (1H, dd, J = 10.5, 3.5 Hz, H2), 5.54 (1H, dd, J = 10.3, 3.5 Hz, H3’), 5.27 (1H, d, J = 49.0 Hz, H4), 5.16 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1'), 4.69 (1H, dd, J = 11.4, 7.1 Hz, H6'), 4.59 (2H, m, Bn), 4.49 (1H, dd, J = 11.4, 6.0 Hz, H6'), 4.44 (1H, m, H5'), 4.41 (1H, dd, J = 27.7, 10.5 Hz, H3), 4.24 (1H, dt, J = 28.4, 6.4 Hz, H5), 3.79-3.71 (2H, m, H6×2)
３４: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.50 (1H, s, H1), 8.14-7.02 (30H, Ph), 6.74 (1H, d, J = 3.6 Hz, H1), 6.10 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4), 5.74 (1H, dd, J = 10.3, 3.6 Hz, H2), 5.62 (1H, dd, J = 10.3, 7.8 Hz, H2’), 5.26 (1H, ddd, J = 26.9, 10.3, 2.5 Hz, H3’), 5.09 (1H, d, J = 7.8 Hz, H1'), 5.06 (1H, dd, J = 50.0, 2.5 Hz, H4'), 4.77 (1H, dd, J = 11.3, 6.6 Hz, H6'), 4.65-4.62 (2H, m, H3, H5'), 4.56 (1H, dd, J = 11.3, 6.6 Hz, H6'), 4.48 (1H, ddd, J = 44.6, 11.8, 7.6 Hz, H6), 4.48 (1H, ddd, J = 44.6, 11.8, 4.4 Hz, H6), 4.20 (1H, ddd, J = 26.0, 7.6, 4.4 Hz, H5)
３５: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.51 (1H, s, H1), 8.16-7.07 (35H, Ph), 6.75 (1H, d, J = 3.6 Hz, H1), 6.10 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4), 5.90 (1H, d, J = 3.4 Hz, H4’), 5.74 (1H, dd, J = 10.3, 3.6 Hz, H2), 5.62 (1H, dd, J = 10.3, 7.9 Hz, H2’), 5.09 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1'), 5.55 (1H, dd, J = 10.3, 3.4 Hz, H3'), 5.02 (1H, d, J = 7.8 Hz, H1'), 4.71 (1H, dd, J = 11.2, 6.2 Hz, H6'), 4.61 (1H, dd, J = 12.0, 4.0 Hz, H6), 4.44 (1H, dd, J = 12.0, 8.3 Hz, H6), 4.34-4.30 (2H, m, H6', H3), 4.35 (1H, t, J = 6.2 Hz, H5'), 4.20 (1H, dd, J = 8.3, 4.0 Hz, H5)
次いで、グリコシルドナー３１、既知化合物であるグリコシルアクセプター３６、ＭＳＡＷ３００をＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＣＮ（１：１）に溶かし、窒素雰囲気下、室温で３０分攪拌した。０℃に冷却した後、ＣＨ2Ｃｌ2に溶かしたＴＭＳＯＴｆをゆっくりと加え１時間攪拌した。この溶液に飽和重曹水を加えて反応をとめた後、セライトろ過し、有機層をブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、３７を得た。また、３２、３４、３５も同様の条件で反応を行い、３８、４０、４１を得た。
３７: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ)
３８: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ)
４０: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.05-7.16 (40H, Ph), 6.86 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 6.73 (2H, d, J = 9.0 Hz, MP), 5.75 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4), 5.64 (1H, t, J = 6.2 Hz, H3), 5.55 (2H, m, H2’, H2’’), 5.37 (1H, dd, J = 6.2, 4.7 Hz, H1), 5.13 (1H, ddd, J = 27.0, 10.5, 2.2 Hz, H4''), 4.87 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1''), 4.77 (1H, d, 8.0 Hz, H1'), 4.63 (1H, dd, J = 11.3, 6.2 Hz, H6''), 4.43 (1H, dd, J = 11.3, 7.0 Hz, H6''), 4.25 (1H, dd, J = 10.5, 3.2 Hz, H3'), 4.17 (1H, dd, J = 11.6, 4.7 Hz, H6'), 4.12-3.97 (3H, m, H5, H5'', H6'), 3.91 (1H, dd, J = 10.4, 6.4 Hz, H4), 3.73 (1H, dd, J = 11.6, 7.8 Hz, H5'), 3.71 (3H, s, OMe), 3.36 (1H, dd, J = 12.5, 6.4 Hz, H5)
４１: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.10-7.09 (45H, Ph), 6.89 (2H, d, J = 9.1 Hz, MP), 6.76 (2H, d, J = 9.1 Hz, MP) 5.88 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4’), 5.87 (1H, d, J = 3.0 Hz, H4), 5.68-5.56 (2H, m, H2’’, H2’), 5.41-5.38 (2H, m, H3’’, H2), 5.20 (1H, d, J = 4.9 Hz, H1), 4.97 (1H, d, J = 7.7 Hz, H1''), 4.81 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1'), 4.68 (1H, dd, J = 11.2, 6.3 Hz, H6'), 4.32-4.24 (3H, m, H3, H5', H6'), 4.20 (1H, dd, J = 11.6, 4.6 Hz, H6''), 4.05 (1H, m, H6''), 4.01 (1H, dd, J = 12.4, 3.9 Hz, H5), 3.97 (1H, m, H4), 3.77 (1H, m, H5''), 3.76 (3H, s, OMe), 3.40 (1H, dd, J = 12.4, 6.4 Hz, H5)
【００５９】
参考例７
糖ペプチドの合成（１）
【化２３】
2009274954.tif 000024
３７をトルエン：ＣＨ3ＣＮ：水＝１．５：１：１に溶かし、ＣＡＮを加え１時間攪拌した。有機層を水、飽和重曹水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過、濃縮後フラッシュカラムクロマトグラフィーで簡易精製した。不純物が混ざるため、この粗生成物をそのまま次の反応に用いた。粗生成物をＣＨ2Ｃｌ2に溶かした後、０℃に冷却しＣＣｌ3ＣＮ、ＤＢＵを加え１時間攪拌した。これをそのまま濃縮しフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、グリコシルドナー４２を得た。また、３８、４０、４１も同様の条件で反応を行い、４３、４５、４６を得た。
４５: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.47 (1H, s, NH), 8.05-7.09 (40H, Ph), 6.52 (1H, d, J = 3.6 Hz, H1), 5.88 (1H, t, J = 9.7 Hz, H3), 5.78 (1H, d, J = 3.1 Hz, H4’), 5.53 (1H, dd, J = 10.4, 7.9 Hz, H2’’), 5.44 (1H, dd, J = 9.9, 8.0 Hz, H2’), 5.31 (1H, dd, J = 9.7, 3.6 Hz, H2), 5.12 (1H, ddd, J = 27.1, 10.4, 2.6 Hz, H3''), 4.97 (1H, dd, J = 50.1, 2.6 Hz, H4''), 4.84 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1''), 4.68 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1'), 4.64 (1H, dd, J = 11.3, 6.2 Hz, H6''), 4.45 (1H, dd, J = 11.3, 7.2 Hz, H6''), 4.25 (1H, dd, J = 9.9, 3.1 Hz, H3'), 4.13 (1H, m, H4), 4.10-3.93 (2H, m, H5'', H6'), 3.88 (1H, t, J = 6.2 Hz, H5'), 3.82 (1H, dd, J = 11.2, 6.2 Hz, H6'), 3.71 (1H, dd, J = 11.3, 5.8 Hz, H5), 3.62 (1H, t, J = 11.3 Hz, H5)
次いで、グリコシルドナー４２、ペプチドアクセプター３０、ＭＳＡＷ３００をＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＣＮ（１：１）に溶かし、窒素雰囲気下、室温で３０分攪拌した。０℃に冷却した後、ＣＨ2Ｃｌ2に溶かしたＴＭＳＯＴｆをゆっくりと加え１時間攪拌した。この溶液に飽和重曹水を加えて反応をとめた後、セライトろ過し、有機層をブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ4で乾燥後、ろ過、濃縮してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、４７を得た。また、４３、４５、４６も同様の条件で反応を行い、４８、５０、５１を得た。
４７: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.10-7.05 (50H, Ph), 6.67 (1H, d, J = 7.6 Hz, NH), 5.87 (1H, d, J = 2.9 Hz, H4’’), 5.77 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4’), 5.57 (1H, dd, J = 10.1, 8.0 Hz, H2’’), 5.53-5.50 (2H, m, H2’, H3), 5.41 (1H, dd, J = 10.4, 2.9 Hz, H3’’), 5.35 (1H, m, Ser−α−H), 5.15 (1H, m, H2), 5.12-5.02 (4H, Bn), 4.97 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1’’), 4.73 (1H, d, J = 7.9 Hz, H1’), 4.72 (1H, m, H1), 4.69 (1H, dd, J = 11.3, 6.5 Hz, H6’’), 4.32-4.25 (2H, m, H5’’, H6’’), 4.22-4.18 (2H, m, H3’, H6’), 3.85-3.79 (3H, m, H5’, H6’, H4), 3.76-3.70 (4H, m, Gly−α−H×2, Ser-β-H×2), 3.67 (1H, m, H5), 3.13 (1H, m, H5)
４８: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.06-7.09 (50H, Ph), 6.60 (1H, m, NH), 5.92 (1H, 1H, d, J = 3.3 Hz, H4’’), 5.77 (1H, dd, J = 10.4, 7.9 Hz, H2’’), 5.56-5.49 (3H, m, H3, H2, H2’), 5.41 (1H, dd, J = 10.3, 3.3 Hz, H3’’), 5.24 (1H, m, NH), 5.19 (1H, ddd, J = 27.0, 10.4, 2.2 Hz, H3’), 5.17-4.85 (6H, m, H1’’, H4’, Bn×4), 4.72 (1H, d, J = 7.8 Hz, H1’), 4.69 (1H, brs, Ser−α−H), 4.65-4.50 (2H, m, H1, H6’), 4.39 (1H, m, H6’), 4.20 (1H, dd, J = 10.2, 2.2 Hz, H3’), 4.25-3.89 (4H, m, H5’, H5’’, H6’’×2), 3.82-3.70 (5H, m, H4, Gly−α−H×2, Ser-β-H×2), 3.35 (1H, dd, J = 8.9, 3.4 Hz, H5), 3.08 (1H, m, H5)
５０: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.05-7.16 (50H, Ph), 6.56 (1H, d, J = 7.4 Hz, NH), 5.74 (1H, d, J = 3.6 Hz, H4’), 5.53 (1H, dd, J = 10.2, 7.8 Hz, H2’), 5.53-5.49 (2H, m, H3, H2’’), 5.24 (1H, m, NH), 5.15 (1H, ddd, J = 26.9, 10.4, 2.7 Hz, H3’’), 5.09 (2H, d, J = 12.6 Hz, Bn×2), 5.04 (1H, dd, J = 6.0, 4.9 Hz, H2), 4.98 (2H, d, J = 12.6 Hz, Bn×2), 4.97 (1H, dd, J = 50.4, 2.7 Hz, H4’’), 4.86 (1H, d, J = 7.8 Hz, H1’’), 4.73 (1H, d, J = 7.8 Hz, H1’), 4.71 (1H, m, Ser−α−H), 4.63 (1H, dd, J = 11.4, 6.6 Hz, H6’’), 4.51 (1H, m, H1), 4.43 (1H, dd, J = 11.4, 7.2 Hz, H6’’), 4.25 (1H, dd, J = 10.2, 3.6 Hz, H3’), 4.13 (1H, m, H6’), 4.01-3.96 (2H, m, H6’, H5’’), 3.75-3.70 (5H, m, H5’, Gly−α−H×2, Ser-β-H×2), 3.65 (1H, m, H4), 3.55 (1H, dd, J = 12.2, 3.4 Hz, H5), 3.08 (1H, m, H5)
５１: 1H-NMR (600MHz, CDCl3, δ) 8.16-7.05 (50H, Ph), 6.72 (1H, m, NH), 5.88 (2H, s, H4’, H4’’), 5.60-5.55 (3H, m, H2’, H2’’, H3), 5.41 (1H, dd, J = 10.5, 3.2 Hz, H3’’), 5.20-4.78 (4H, Bn×4), 5.08 (1H, m, H2), 4.79 (1H, d, J = 8.0 Hz, H1’), 4.73 (1H, m, Ser−α−H), 4.68 (1H, dd, J = 11.0, 6.1 Hz, H6’’), 4.57 (1H, brs, H1), 4.32-4.25 (4H, m, H3’, H6’, H5’’, H6’’), 4.15 (1H, m, H6’), 4.06 (1H, m, H5’), 3.77-3.74 (4H, m, Gly−α−H×2, Ser-β-H×2), 3.69 (1H, m, H4), 3.55 (1H, m, H5), 3.09 (1H, m, H5)
【００６０】
参考例８
糖ペプチドの合成（２）
【化２４】
2009274954.tif 000025
４７をＭｅＯＨに溶かし、Ｐｄカーボンを加え水素雰囲気下で３時間攪拌した。セライトろ過、濃縮後ＭｅＯＨに溶かしＮａＯＭｅを加え１時間攪拌した。ＤＯＷＥＸ５０Ｗ×８［Ｈ+］を加えて反応をとめた後、ろ過してファルコンチューブにうつした。これにＭｅＯＨの１０倍量のＥｔ2Ｏを加えて生成物を析出させ、遠心分離（３５００ｒｐｍ,１０分間）し上澄みを取り除いた。沈殿物をゲルろ過クロマトグラフィー（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−１０）により精製し、５２を得た。また、４８、５０、５１も同様の条件で反応を行い、５３、５５、５６を得た。
５２: 1H-NMR (600MHz, D2O, δ) 5.10-4.98 (2H, m, H6’ ×2), 4.48 (1H, d, J = 7.2 Hz, H1’’), 4.41 (1H, d, J = 7.4 Hz, H1’), 4.27 (1H, brs, Ser−α−H), 4.34 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4’’), 4.12-3.45 (17H, m), 3.29-3.15 (2H, m, H2, H5)
５３: 1H-NMR (600MHz, D2O, δ) 5.04 (1H, d, J = 50.0 Hz, H4’), 4.81 (1H, d, J = 7.2 Hz, H1’ ’), 4.72 (1H, d, J = 7.3 Hz, H1’), 4.70 (1H, d, J = 7.2 Hz, H1), 4.40 (1H, m, H5), 4.29 (1H, brs, Ser−α−H), 4.02 (1H, s, H4’’),  4.30-3.80 (17H, m), 3.72 (1H, m, H2)
５５: 1H-NMR (600MHz, D2O, δ) 4.68 (1H, d, J = 50.0 Hz, H4’’), 4.57 (1H, d, J = 7.4 Hz, H1’’), 4.35 (1H, d, J = 7.4 Hz, H1’), 4.29 (1H, brs, Ser−α−H), 4.25 (1H, d, J = 7.3 Hz, H1), 4.08 (1H, m, Ser-β-H), 4.02 (1H, s, H4’),  3.95 (1H, m, H5), 3.78-3.41 (15H, m), 3.28-3.15 (2H, m, H2, H5)
５６: 1H-NMR (600MHz, D2O, δ) 4.47 (1H, d, J = 7.4 Hz, H1’’), 4.38 (1H, d, J = 7.3 Hz, H1’), 4.32 (1H, brs, Ser−α−H), 4.29 (1H, d, J = 7.2 Hz, H1), 4.05 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4’), 4.04 (1H, m, Ser-β-H), 3.94 (1H, dd, J = 11.8, 5.3 Hz, H5), 3.76 (1H, d, J = 3.2 Hz, H4''), 3.71-3.42 (15H, m), 3.28-3.15 (2H, m, H2, H5)
次いで、５２をＤＭＦに縣濁させ、ＦＩＴＣ、飽和重曹水を加え室温で３時間攪拌した。この溶液をファルコンチューブに移してＥｔＯＨ／Ｅｔ2Ｏ（１：１０）を加え、沈殿を析出させた。遠心分離（３５００ｒｐｍ、１０分間）し、上澄みを取り除いた後、沈殿物をゲルろ過クロマトグラフィー（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−１０）により精製し、５７を得た。また、５３、５５、５６も同様の条件で反応を行い、５８、６０、６１を得た。生成物はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＡＳＳにより分子量を確認した。質量分析の比較結果を図６に示す。
【００６１】
本発明化合物の効果を下記の方法により試験した。
試験例１
ＣＳ／ＨＳ生成比の検証試験
アッセイはＣＨＯ−Ｋ１細胞で行った。まず、ＣＨＯ−Ｋ１細胞を２４ウェルプレート上にまき、これに実施例にて合成したフッ素置換体（化合物５９)（30ｍＭに調整）を１０μＬ加えた。これを３７℃で４８時間培養後、培養上清をフィルターろ過し、さらに上清をゲルろ過（Sephadex G-10）して脱塩等の簡易精製を行った。これを、ゲルろ過クロマトグッラフィー（TSK-GEL SuperSW3000）により分析した。ＧＡＧ鎖が伸長したかどうかは、イニシエーターがゲルろ過カラムの排除体積領域から溶離するかどうかを調べることにより判断した。比較のため、上記参考例で合成した１Ｇａｌ−６Ｆ置換体（５７）、１Ｇａｌ−４Ｆ置換体（５８）、２Ｇａｌ−４Ｆ置換体（６０）およびフッ素無置換コントロール（６１）を用いて同様に試験した。
【００６２】
続いて、この排除体積領域から溶出した分画をコンドロイチナーゼＡＢＣで酵素分解し、得られる生成物をＨＰＬＣで分析した。酵素分解の条件は次の通りである。
コンドロイチナーゼＡＢＣ酵素  １０ｍＵ
０．４Ｍトリス塩酸緩衝液（pＨ８．０）
０．４Ｍ酢酸ナトリウム
０．１％ＢＳＡ
３７℃,１２時間
コンドロイチナーゼＡＢＣにより消化されなかったピーク（ＨＳ）およびＣＳの酵素消化生成物のピークの比からＨＳ／ＣＳを推定した。
【００６３】
本発明の化合物（５９）は、ＧＡＧ鎖が伸長し、コンドロイチナーゼＡＢＣで全く消化されないことから、ＨＳＰＧを選択的に生成することが示された（図１）。一方、１Ｇａｌ−６Ｆ置換体（５７）、１Ｇａｌ−４Ｆ置換体（５８）、２Ｇａｌ−４Ｆ置換体（６０）およびフッ素無置換コントロール（６１）はいずれも、ＣＳ鎖の伸張を示した（図２〜５）。これらの結果をふまえると、明らかに３糖目のＧａｌの６位水酸基（２Ｇａｌ−６Ｆ）の硫酸化がＣＳＰＧ／ＨＳＰＧ生合成の仕分け制御に深く関与していることが示唆される。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明の化合物は、ＨＳＰＧの生合成を選択的に促進することができるので、医薬、特に創傷治癒促進剤または再生医療用材料として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】本発明化合物（２Ｇａｌ−６Ｆ置換体（５９））を添加してCHO-K1細胞の培養を行い、その上澄をゲル濾過クロマトグラフィーに付した結果を示す（Ａ）。溶出した分画をコンドロイチナーゼＡＢＣで消化した後のクロマトグラフィーの結果を示す（Ｂ）。
【図２】上記参考例で合成した１Ｇａｌ−６Ｆ置換体（５７）を添加してCHO-K1細胞の培養を行い、その上澄をゲル濾過クロマトグラフィーに付した結果を示す（Ａ）。溶出した分画をコンドロイチナーゼＡＢＣで消化した後のクロマトグラフィーの結果を示す（Ｂ）。
【図３】１Ｇａｌ−４Ｆ置換体（５８）を添加してCHO-K1細胞の培養を行い、その上澄をゲル濾過クロマトグラフィーに付した結果を示す（Ａ）。溶出した分画をコンドロイチナーゼＡＢＣで消化した後のクロマトグラフィーの結果を示す（Ｂ）。
【図４】２Ｇａｌ−４Ｆ置換体（６０）を添加してCHO-K1細胞の培養を行い、その上澄をゲル濾過クロマトグラフィーに付した結果を示す（Ａ）。溶出した分画をコンドロイチナーゼＡＢＣで消化した後のクロマトグラフィーの結果を示す（Ｂ）。
【図５】フッ素無置換コントロール（６１）を添加してCHO-K1細胞の培養を行い、その上澄をゲル濾過クロマトグラフィーに付した結果を示す（Ａ）。溶出した分画をコンドロイチナーゼＡＢＣで消化した後のクロマトグラフィーの結果を示す（Ｂ）。
【図６】本発明化合物（２Ｇａｌ−６Ｆ置換体（５９））、および上記参考例で合成した１Ｇａｌ−６Ｆ置換体（５７）、１Ｇａｌ−４Ｆ置換体（５８）、２Ｇａｌ−４Ｆ置換体（６０）、およびフッ素無置換コントロール（６１）の質量分析スペクトルの結果を示す。
【図１】
2009274954.tif 000029
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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