(57)【要約】【課題】  多硫酸化コンドロイチン硫酸の新たな用途を提供することである。【解決手段】    角層細胞間脂質の主要な構成成分を混合することにより得られる人工的な細胞間脂質のフィルムを作製した後に、被験物質を含有した注射用水を添加して、被験物質を含有した角層細胞間脂質由来リポソームを作製した。  偏光顕微鏡でマルターゼクロス像を評価することにより、被験物質として多硫酸化コンドロイチン硫酸を用いたとき、規則正しくラメラ構造を構築した。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
多硫酸化コンドロイチン硫酸を含有するバリア機能回復促進剤。
【請求項２】
多硫酸化コンドロイチン硫酸がヘパリン類似物質である請求項１記載のバリア機能回復促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は多硫酸化コンドロイチン硫酸を有効成分とするバリア機能回復促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
角層は表皮の最外層に位置し、水分保持機能だけでなく、外部からの様々な刺激や化学物質、抗原の侵入に対する生体防御、あるいは水分蒸散を防止し、バリア機能の役割を果たしている。
【０００３】
バリア機能の主体を担っているのは角層細胞間脂質であり、これは疎水層と親水層を繰り返すラメラ構造を形成していることが特徴である。
【０００４】
ラメラ構造とは、脂質と水分がシート状に重なり合った構造のことで、もともと混じりにくい水と油が互いに重なり合うための特殊な構造である。角層では、表皮細胞由来の脂質成分（角質細胞間脂質）と、天然保湿因子（NMF）と呼ばれる皮膚本来が持つ天然の保湿成分が、水に溶けた状態で何層も重なり合ってラメラ構造を作っている。
【０００５】
しかし、皮膚において炎症等が発生するとラメラ構造が崩壊して、角層のバリア機能が低下する。そのため、刺激因子、アレルゲンや病原微生物が皮膚に容易に侵入するだけでなく、温熱、発汗、衣服などに対して、過敏に反応する。この易刺激性（敏感肌）が掻痒、掻破を誘発し、皮膚炎の再発を助長している。そのため、角層のバリア機能を向上させることは非常に重要である。
【０００６】
バリア機能の低下は角質細胞間脂質の減少が原因であるといわれている。角質細胞間脂質の成分の約半数はセラミドであり、セラミドの減少がバリア機能の低下の原因である。このことから、セラミドを補充すればバリア機能が回復すると考えられる。しかし、セラミドは非常に高価であり、バリア機能回復に有効な量を用いることは困難である。
【０００７】
一方、多硫酸化コンドロイチン硫酸（ヘパリン類似物質）は、血液凝固抑制作用、末梢血液循環促進作用、繊維芽細胞増殖抑制作用を有することが知られている。また、多硫酸化コンドロイチン硫酸は、保湿能を有している皮脂欠乏症の治療薬として用いられているが、バリア機能には影響を与えない旨の報告がある（非特許文献１）。
【０００８】
バリア機能とは、体内の水分の蒸散を防ぎ、外界から体内への異物の侵入を防ぐ機能のことである。一方、保湿能とは、低湿度環境でも蒸発してしまわない水分を角層に抱える力のことであり、バリア機能と保湿能の概念は本質的に異なる。
【非特許文献１】日本臨床皮膚科医学会雑誌, 56：87-96, 1998
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明者らは、多硫酸化コンドロイチン硫酸に着目して、その新たな用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、多硫酸化コンドロイチン硫酸の作用メカニズムについて鋭意研究した結果、多硫酸化コンドロイチン硫酸が角層ラメラ構造の回復を促進させ、バリア機能を向上させる作用があることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は多硫酸化コンドロイチン硫酸を含有するバリア機能回復促進剤を提供するものである。好ましい態様として、多硫酸化コンドロイチン硫酸がヘパリン類似物質であるバリア機能回復促進剤を提供する。
【００１１】
本発明に用いることができる多硫酸化コンドロイチン硫酸とは、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンとＤ−グルクロン酸の二糖の繰り返し単位を有する長鎖多糖類に、硫酸基が繰り返し単位当たり平均１．５から４分子、好ましくは平均１．５〜３分子を含有するものを意味する。
【００１２】
また、多硫酸化コンドロイチン硫酸は塩の形態で存在していてもよく、塩としては、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩等が挙げられ、さらにこれらの複数の塩であってもよい。
【００１３】
本発明の多硫酸化コンドロイチン硫酸またはその塩の平均分子量は、1,000〜10,000,000程度であることが望ましく、好ましくは5,000〜1,000,000程度、より好ましくは10,000〜100,000程度であることが望ましい。
【００１４】
多硫酸化コンドロイチン硫酸の原料であるコンドロイチン硫酸は天然に存在し、特に動物組織中に存在する。硫酸基の結合位置により、コンドロイチン硫酸Ａ（コンドロイチン-4-硫酸）、コンドロイチン硫酸Ｃ（コンドロイチン-6-硫酸）およびコンドロイチン硫酸Ｅ（コンドロイチン-4,6-硫酸）に分類されるが、いずれのコンドロイチン硫酸を用いることができる。
【００１５】
これらのコンドロイチン硫酸を人為的に多硫酸化したものが本発明に使用することができる多硫酸化コンドロイチン硫酸である。このうち、日本薬局方外規格に収載しているヘパリン類似物質が好ましい。
【００１６】
コンドロイチン硫酸は、試薬として入手することができ、このコンドロイチン硫酸を多硫酸化する方法としては、特開昭62-27402、特開平11-166001、WO03/020735などに記載した方法を用いることができる。
【００１７】
本発明のバリア機能回復促進剤は、多硫酸化コンドロイチン硫酸を含有することを特徴とするものであり、本発明の効果を損なわない限り、通常使用しうる生理学的または薬学的に許容されうる添加剤、つまり、炭化水素油、液体油脂、固体油脂、ロウ類、高級脂肪酸、高級アルコール、界面活性剤、低級アルコール、多価アルコール、溶解補助剤、緩衝剤、増粘剤、保存剤、防腐剤、安定化剤等を配合することもできる。
【００１８】
また、本発明のバリア機能回復促進剤は、外用剤が好ましく、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、液剤、懸濁剤、硬膏剤等の形態を治療目的に応じて選択できる。これらの製剤は公知の方法、例えば日本薬局方に記載の方法等により製造することができる。
【００１９】
本発明のバリア機能回復促進剤は、皮膚のバリア機能が低下した疾患、例えばアトピックドライスキンの予防・治療剤として適している。また、肌荒れ防止・改善剤として使用することもできる。
【００２０】
本発明のバリア機能回復促進剤の投与量は、患者の年齢、性別、疾病の種類、疾病の程度、剤形および投与形式により、適宜決定されるが、例えば、軟膏剤等の外用剤であるときは、適量を１日１〜数回塗布することができる。
【００２１】
また、外用剤における多硫酸化コンドロイチン硫酸の濃度は、０．０１重量％〜１０重量％、好ましくは０．０５重量％〜５．０重量％であり、より好ましくは０．１重量％〜１．０重量％である。
【発明の効果】
【００２２】
本発明により、多硫酸化コンドロイチン硫酸を有効成分とするバリア機能回復促進剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【実施例】
【００２４】
［実施例１］  ヘパリン類似物質添加角層細胞間脂質由来リポソーム
１）脂質フィルムの作製
鈴木らの方法（J. Soc. Cosmet. Chem. Jpn., 27(3), 193-205, 1993）を用いて、角層細胞間脂質の主要な構成成分を混合することにより人工的な細胞間脂質のフィルムを作製した。
すなわち、Ceramide II（高砂香料工業株式会社製：N-ステアロイルジヒドロスフィンゴシン）、Ceramide III（コスモファーム社製：N-ステアロイルフィトスフィンゴシン）、Ceramide IV（コスモファーム社製：N-2-ヒドロキシステアロイルフィトスフィンゴシン）、コレステロール（和光純薬工業株式会社製）、ステアリン酸（和光純薬工業株式会社製）および硫酸コレステロールナトリム（Shigma社製：Cholesterol-3-sulfate Sodium Salt）を２：２：２：４：４：１（重量％比）となるように秤量し、各々をクロロホルム／メタノール＝２：１（容量比）混液に溶解させておき，ナス型フラスコに入れて混合する。ロータリーエバポレーターによってクロロホルム／メタノールを留去後、真空下にて乾燥させて脂質フィルムを作製した。
【００２５】
２）ヘパリン類似物質含有角層細胞間脂質由来リポソームの作成
リポソームの作製法はBanghamらの方法（J. Mol. Biol., 13(1), 238-252, 1965）及びPhilipらの方法（J. Invest. Dermatol., 87, 582-584, 1986）を参考にして行った。
すなわち、脂質フィルム（30重量％）にヘパリン類似物質（被験物質）の最終濃度が１重量％になるように調製した注射用水（70重量％）を加えて相転移以上（約80℃）にて振盪してフィルムを剥がした後、約10℃で水浴型超音波照射器にて10分間処理して、ヘパリン類似物質含有角層細胞間脂質由来リポソームを作製した。
【００２６】
［比較例１］  尿素配合角層細胞間脂質由来リポソーム
ヘパリン類似物質（被験物質）を尿素に変更した以外は、実施例１と同様に操作して尿素添加角層細胞間脂質由来リポソームを作成した。
【００２７】
［比較例２］  被験物質未添加（コントロール）の角層細胞間脂質由来リポソーム
ヘパリン類似物質（被験物質）を除外した以外は、実施例１と同様に操作して被験物質未添加細胞間脂質由来リポソームを作成した。
【００２８】
［試験例１］  ラメラ液晶構造の形成促進作用の評価（１）
実施例１、比較例１および比較例２の角層細胞間脂質由来リポソームのラメラ液晶構造の形成を偏光顕微鏡（600倍）下で観察されるマルターゼクロス（Maltese Cross）像の形成状態を評価した。
【００２９】
偏光顕微鏡観察画像の全領域に対して無作為抽出領域を１視野あたり３部位（１部位は５０μｍ×５０μｍ）設定し、画像解析（ソフト名：Image Pro、Media Cybernetics社製）により算定されたマルターゼクロス形成部分の総面積を、全体に対する占有率として算出した。被験物質毎に１０視野で占有率を算出し、その結果を図１に示した。
また、実施例１、比較例１および比較例２の角層細胞間脂質由来リポソームの偏光顕微鏡写真を図２に示した。
【００３０】
図１に示したグラフから尿素を添加した角層細胞間脂質由来リポソームはコントロールとラメラ液晶占有率に差がほとんどないのに対し、ヘパリン類似物質を添加した角層細胞間脂質由来リポソームのラメラ液晶占有率は明らかに高い結果であった。
【００３１】
［試験例２］  ラメラ液晶構造の形成促進作用の評価（２）
実施例１および比較例２で作成した角層細胞間脂質由来リポソームを37℃の恒温槽で１週間保存した後のラメラ液晶構造の形成を試験例１と同様に偏光顕微鏡下で観察した。
偏光顕微鏡写真を図３に示した。
【００３２】
ヘパリン類似物質を添加した角層細胞間脂質由来リポソームは規則正しくラメラ構造を構築した。
このことから、ヘパリン類似物質はラメラ構造の回復促進作用があることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】ラメラ構造形成能をラメラ液晶占有率で示したグラフである。
【図２】実施例１、比較例１および比較例２で作成した角層細胞間脂質由来リポソームの偏光顕微鏡写真である。
【図３】実施例１および比較例２で作成した角層細胞間脂質由来リポソームを37℃で1週間保存した後の偏光顕微鏡写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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