(57)【要約】【課題】  従来、摘出臓器の保存は、低温保存が主流であるが摂氏４度の低温や虚血により細胞膜が傷害を受ける等の問題により４時間から２４時間が保存の限界である。しかしながら現実において、臓器移植は、優れた免疫抑制剤の開発と医療技術の向上により、確立されている。しかし、増加するレシピエントに対して、深刻なドナー不足が大きな問題となっているため臓器の保存期間を延長することが必要とされる。【解決手段】本発明者等は係る課題を解決するために鋭意研究したところ、Ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液、Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液、炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）を用いて哺乳動物の臓器を９６時間乾燥保存し、蘇生させて再度哺乳動物へ移植する技術を開発して、本発明を提供するものである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物から摘出した臓器を乾燥後、９６時間保存し蘇生させる。
【請求項２】
９６時間乾燥保存した臓器を再度哺乳動物に移植する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、哺乳動物の臓器をＰｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液、Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液、炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）を用いて９６時間の乾燥保存後に蘇生し再度哺乳動物に移植するものである。
【背景技術】
【０００２】  従来、摘出臓器の保存は、低温保存が主流であり、４時間から２４時間が保存の限界である。【０００３】  臓器が長時間保存できない理由としては、摂氏４度の低温や虚血により細胞膜が傷害を受ける等の問題点が指摘されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】  しかしながら現実において、臓器移植は、優れた免疫抑制剤の開発と医療技術の向上により、確立されている。しかし、増加するレシピエントに対して、深刻なドナー不足が大きな問題となっているため臓器の保存期間を延長することが必要とされる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】  本発明者等は係る課題を解決するためにラットの心臓を使用して実験研究したところ、Ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液に心臓を浸して保存するに当たり、Ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液に炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）をすかし続けることとＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液を保存中常に毎時０．０５から０．１ｍｌという一定間隔で心臓に注入し、炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）の効果をＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液からも効かせるために、Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液に炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）をあらかじめふかし、ガスが抜けないようにガスタイトシリンジとガスタイトチューブする使用し、血栓防止のために４８時間に１回Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液を新しいものと交換することにより臓器の保存期間の延長と蘇生効率の向上法を開発して、本発明を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】  以上説明したように、本発明によれば摘出したラットの心臓をＰｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液、Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液、炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）を用いると、９６時間の乾燥保存後の蘇生が確認された。【０００７】  また、蘇生した心臓を別のラットに異所性心移植の方法で移植したところ、移植心臓が再び拍動することが確認され心臓に柔軟性があった。【０００８】  すなわち、Ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液、Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液、炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）を臓器の乾燥保存に使用することにより臓器を長時間保存することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】  本発明は、Ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液、Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液、炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）を使用して臓器の保存を行うことである。【００１０】  以下３件のラットの心臓の乾燥保存の実験を行った実施例をもって本発明を詳細に説明するが、本発明の範囲はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
【００１１】  実験実施日２００７年５月２１日（月）、温度２５℃、湿度３８％、実験で使用したラットは、ＬＥＷ／ＳｓＮ  ｓｌｃ（オス）を使用した。【００１２】  １６時１５分にラットにエーテル麻酔かけ、ラット重量が２０４ｇであることを確認しヘパリンナトリウム１．０ｍｇを投与し１６時２４分に心臓摘出手術を開始した。【００１３】  摘出心臓を常温のヘパリン生理食塩水で注射器による脱血（５ｍｌシリンジ）し上大静脈、下大静脈をケッサツ、肺から単離した。【００１４】  単離後に常温の８５％＋１５％Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液（トリス校正７．４）で脱血し、心臓重量を測定し１．１５０ｇであることを確認後４℃の８５％＋１５％ＫＨ液（トリス校正７．４）でさらに脱血した。【００１５】  脱血完了後、１６時４７分に冷やしたＰｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液内に保存し、炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）をＰＦＣ内にふかし続け、普通のシリンジＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液を０．１ｍｌ／ｈの速度（１２ｍｌ）で心臓内に注入しながら４℃で冷蔵保存した。酸素メーターは８０ｍｌ／ｍｉｎとした。【００１６】  ２００７年５月２３日（水）、１２時００分にシリンジ内ＫＨ液を新しいものに変えた。変えたＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液は８５％＋１５％ＫＨ液（トリス校正７．４）【００１７】  ９６時間後の２００７年５月２５日（金）に異所移植実験をおこなった。実験実施日の温度２４℃、湿度６５％であった。【００１８】  １７時１２分に保存した心臓をＰｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液から取り出した。【００１９】  １７時１３分、心臓重量測定を行い１．２９８ｇ（＋１２％）であることを確認し１７時１４分にドナーへの移植手術を開始した。【００２０】    １７時１８分にドナー心臓移植が終了し再灌流開始し縫合した。
【実施例２】
【００２１】  実験実施日２００７年５月２１日（月）、温度２５℃、湿度３８％、実験で使用したラットは、ＬＥＷ／ＳｓＮ  ｓｌｃ（オス）を使用した。【００２２】  １５時０６分にラットにエーテル麻酔かけ、ラット重量が２２１ｇであることを確認しヘパリンナトリウム１．０ｍｇを投与し１５時１４分に心臓摘出手術を開始した。【００２３】  摘出心臓を常温のヘパリン生理食塩水で注射器による脱血（５ｍｌシリンジ）し上大静脈、下大静脈をケッサツ、肺から単離した。【００２４】  単離後に常温の８５％＋１５％ＫＨ液（トリス校正７．４）で脱血し、心臓重量を測定し１．１８５ｇであることを確認後４℃の８５％＋１５％Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液（トリス校正７．４）でさらに脱血した。【００２５】  脱血完了後、１６時４７分に冷やしたＰｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液内に保存し、炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）をＰｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液内にふかし続け、ガスタイトシリンジＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液を０．０５ｍｌ／ｈの速度（６ｍｌ）で心臓内に注入しながら４℃で冷蔵保存した。酸素メーターは８０ｍｌ／ｍｉｎとした。【００２６】  ２００７年５月２３日（水）、１１時５６分にシリンジ内ＫＨ液を新しいものに変えた。変えたＫＨ液は８５％＋１５％Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液（トリス校正７．４）。【００２７】  ９６時間後の２００７年５月２５日（金）に異所移植実験をおこなった。実験実施日の温度２３．９℃、湿度６６％であった。【００２８】  １６時３３分に保存した心臓をＰｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液から取り出した。【００２９】  １６時３５分、心臓重量測定を行い１．３８４ｇ（＋１６％）であることを確認し１７時１４分にドナーへの移植手術を開始した。【００３０】  １６時４１分にドナー心臓移植が終了し再灌流開始し縫合した。【００３１】  再灌流開始後、微弱拍動を計測できた。
【実施例３】
【００３２】  実験実施日２００７年５月２１日（月）、温度２５℃、湿度３２％、実験で使用したラットは、ＬＥＷ／ＳｓＮ  ｓｌｃ（オス）を使用した。【００３３】  １４時２０分にラットにエーテル麻酔かけ、ラット重量が２０５ｇであることを確認しヘパリンナトリウム１．０ｍｇを投与し１４時３６分に心臓摘出手術を開始した。【００３４】  摘出心臓を常温のヘパリン生理食塩水で注射器による脱血（５ｍｌシリンジ）し上大静脈、下大静脈をケッサツ、肺から単離した。【００３５】  単離後に常温の８５％＋１５％Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液（トリス校正７．４）で脱血し、心臓重量を測定し１．２３６ｇであることを確認後４℃の８５％＋１５％ＫＨ液（トリス校正７．４）でさらに脱血した。【００３６】  脱血完了後、１５時０３分に冷やしたＰｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液内に保存し、炭酸ガス（酸素８５％＋二酸化炭素１５％）をＰｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液内にふかし続け、ガスタイトシリンジＫＨ液を０．１ｍｌ／ｈの速度（１２ｍｌ）で心臓内に注入しながら４℃で冷蔵保存した。酸素メーターは８０ｍｌ／ｍｉｎとした。【００３７】  ２００７年５月２３日（水）、１１時５４分にシリンジ内ＫＨ液を新しいものに変えた。変えたＫＨ液は８５％＋１５％Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液（トリス校正７．４）。【００３８】  ９６時間後の２００７年５月２５日（金）に異所移植実験をおこなった。実験実施日の温度２４℃、湿度６５％であった。【００３９】  １６時５８分に保存した心臓をＰｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ（ＰＦＣ）液から取り出した。【００４０】  １６時５９分、心臓重量測定を行い１．４７５ｇ（＋１７％）であることを確認し１７時００分にドナーへの移植手術を開始した。【００４１】  １７時０４分にドナー心臓移植が終了し再灌流開始し縫合した。【００４２】  再灌流開始後、全拍動を計測でき移植した心臓に柔軟性があった。