(57)【要約】【課題】本発明は、液体クロマトグラフ分析技術において、アンモニアの吸着カラムを交換しなくても長期間にわたり高い分析精度を維持させることを目的とする。【解決手段】液体クロマトグラフ分析装置(10)において、溶離液を送液する送液手段(20)と、送液された前記溶離液に含まれるアンモニアを吸着させる吸着カラム(31)と、送液された前記溶離液に液状試料を注入する試料注入手段(40)と、前記液状試料を構成成分毎に分離する分離手段(50)と、分離された前記構成成分を検出する検出手段(70)と、前記吸着カラム(31)の温度を室温よりも低温に設定する温調手段(32)とを、備えることを特徴とする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
溶離液を送液する送液手段と、
送液された前記溶離液に含まれるアンモニアを吸着させる吸着カラムと、
送液された前記溶離液に液状試料を注入する試料注入手段と、
前記液状試料を構成成分毎に分離する分離手段と、
分離された前記構成成分を検出する検出手段とを、備える液体クロマトグラフ分析装置であって、
前記吸着カラムの温度を室温よりも低温に設定する温調手段を備えることを特徴とする液体クロマトグラフ分析装置。
【請求項２】
請求項１に記載の液体クロマトグラフ分析装置において、
前記温調手段は、前記吸着カラムの温度を室温よりも高温に設定する機能も有することを特徴とする液体クロマトグラフ分析装置。
【請求項３】
請求項１又は請求項２に記載の液体クロマトグラフ分析装置において、
前記温調手段は、その内部に前記吸着カラムを収容するものであることを特徴とする液体クロマトグラフ分析装置。
【請求項４】
請求項１又は請求項２に記載の液体クロマトグラフ分析装置において、
前記温調手段は、前記吸着カラムの容体に固定されていることを特徴とする液体クロマトグラフ分析装置。
【請求項５】
液体クロマトグラフ分析の一連の分析動作において送液される溶離液の消費量を算定する段階と、
前記消費量に含まれるアンモニア含有量を算定する段階と、
前記アンモニア含有量を吸着カラムにおいて吸着させることの可能な上限温度が室温よりも低温であるか否かを判断する段階と、
前記判断で低温と判断された場合は、前記吸着カラムを前記上限温度よりも低温に設定する段階とを、含むことを特徴とする液体クロマトグラフ分析方法。
【請求項６】
請求項５に記載の液体クロマトグラフ分析方法において、
試料の成分検出の終了後に室温よりも高温に設定して吸着しているアンモニアを溶出させて前記吸着カラムを再生する段階を含むことを特徴とする液体クロマトグラフ分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メンテナンスフリーで長期間にわたり高い分析精度が維持される液体クロマトグラフ分析の技術分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
代表的な液体クロマトグラフ分析装置として、アミノ酸分析計、グリコヘモグロビン分析計、カテコールアミン分析計などが挙げられる。近年、これら液体クロマトグラフ分析装置は、自動化が推し進められ、一連の分析動作（分析シーケンス）のなかで、複数の試料を連続的に自動測定することができる。そしてこの分析シーケンスは、試料の希釈工程、プレカラム誘導体化反応工程、構成機器の立上工程、カラム平衡化工程、カラム再生工程、流路洗浄終了工程などの所定の前処理工程及び後処理工程も含めてプログラムすることができる。
【０００３】
これにより、液体クロマトグラフ分析装置は、分析シーケンスの開始後そのまま放置した状態で、複数試料の分析が完了し、大量の試料を効率処理できるようになっている。
さらに、対象試料や分析条件や分析項目等の分析目的の変更があっても、ユーザは分析シーケンスのプログラムを変更するだけで、カラムなどの消耗品を含めハードウェア構成を変更せずに対応できる装置の開発がすすめられている（例えば、特許文献１，２参照）。
【０００４】
さらに、液体クロマトグラフ分析において、溶離液に含まれるアンモニアが、アンモニアプラトーと呼ばれるベースラインの不安定要因となることが知られている。よって分析精度を向上させるために、溶離液を吸着カラムに通過させてアンモニアを吸着除去することが行われている（例えば、特許文献３参照）。
【特許文献１】特開平４−１３０２７１号公報
【特許文献２】特開平５−３２２８７０号公報
【特許文献３】特開平９−８００３７号公報（段落００４９，段落００５０）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ところで、液体クロマトグラフ分析がこのように自動化すると、一つの分析シーケンスが長時間化する傾向にあり、これに伴い連続的に送液される溶離液の消費量も増えて、除去すべきアンモニアの量も増加する。このために、ユーザは、分析シーケンスに応じてアンモニアの吸着容量の異なる吸着カラムを準備したり、吸着能力が飽和に達した吸着カラムを新品のものに交換する作業を頻繁に迫られたりすることになる。
このことは、多岐の目的にわたり液体クロマトグラフ分析を、ハードウェアの構成を変更することなく、メンテナンスフリーで高精度測定を実施することを望む市場の要請に反する結果となる。
【０００６】
本発明は、このような問題を解決することを課題とし、アンモニアの吸着カラムを交換しなくても分析精度が長期間にわたり高く維持される液体クロマトグラフ分析技術を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、前記した課題を解決するために、液体クロマトグラフ分析装置において、溶離液を送液する送液手段と、送液された前記溶離液に含まれるアンモニアを吸着させる吸着カラムと、送液された前記溶離液に液状試料を注入する試料注入手段と、前記液状試料を構成成分毎に分離する分離手段と、分離された前記構成成分を検出する検出手段と、前記吸着カラムの温度を室温よりも低温に設定する温調手段とを、備えることを特徴とする。
【０００８】
このように発明が構成されることにより、前記吸着カラムは、前記温調手段により低温に設定されることで溶離液に含まれるアンモニアの吸着容量が向上することになる。これにより、前記吸着カラムを交換することなく、溶離液を大量に消費する液体クロマトグラフ分析を一連の分析動作（分析シーケンス）で実施できる。
【０００９】
さらに本発明の液体クロマトグラフ分析装置は、前記温調手段は、前記吸着カラムの温度を室温よりも高温に設定する機能も有することを特徴とする。
このように発明が構成されることにより、前記吸着カラムを室温よりも高温に設定し、再生液等を通過させ、吸着しているアンモニアを溶出させて前記吸着カラムを再生することができる。そして、このような吸着カラムの再生を一連の分析動作（分析シーケンス）が完了するたびに又はその途中で実施すれば、消耗品である吸着カラムの交換頻度を低く抑えることができる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、アンモニアの吸着カラムを交換しなくても分析精度が長期間にわたり高く維持されるメンテナンスフリーな液体クロマトグラフ分析技術が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、図面を参照して本発明の実施形態について説明する。
図１は、本発明に係る液体クロマトグラフ分析装置の実施形態を示すアミノ酸分析装置の構成ブロック図である。
液体クロマトグラフ分析装置１０（以下、「液クロ装置１０」という）は、一本の流路１１に、送液手段２０と、アンモニア吸着手段３０と、オートサンプラ４０（試料注入手段）と、分離手段５０と、反応化手段６０と、検出手段７０とがこの順番で連結して構成されている。
そして、これら各構成要素（ハードウェア）は、制御部８１に接続され、操作端末８２（コンピュータ）からユーザが入力する分析シーケンスのプログラムに従って自動制御されるものである。
【００１２】
このように構成される液クロ装置１０は、最上流に位置する送液手段２０が機械的に高圧をかけて溶離液ホルダ２１に封入されている溶離液を流路１１に導入する。この流路１１に導入された溶離液は、図中左（上流）から右（下流）に向かって移動し、まず、アンモニア吸着手段３０において、溶存するアンモニアが除去される。
次にオートサンプラ４０において液状試料を注入し溶離液とともに流路１１を移動させる。ここで液状試料とは、液クロ装置１０で例示されるアミノ酸分析装置では、たん白加水分解物アミノ酸、血清、尿などの生体液等に含まれるアミノ酸類縁物等が挙げられる。
そして分離手段５０において、液状試料は、分離カラム５１に対する親和性に依存して滞留時間が相違することに基づいて、その構成成分毎に分離されて通過する。
【００１３】
次に反応化手段６０において、分離した液状試料の構成成分は、下流の検出手段で高感度に検出されるように化学処理される。そして検出手段７０において、順次入力する化学処理された構成成分が鋭いピーク状に検出され（図２参照）、この検出ピークの検出時間及びピーク強度から、液状試料の定性・定量分析の解析が操作端末８２において実行されることになる。
【００１４】
送液手段２０は、溶離液が封入される溶離液ホルダ２１と、この溶離液を設定した流速で送液する溶離液ポンプ２２と、吸着したアンモニアを溶出させて吸着カラム３１を再生する再生液が封入される再生液ホルダ２３とから構成される。
このように構成される送液手段２０は、操作端末８２でプログラムされた分析シーケンスに従って、所定の溶離液を流路１１に送出するとともに、吸着カラム３１の再生処理において再生液を流路１１に送出するものである。
【００１５】
溶離液ホルダ２１に封入されている溶離液は、オートサンプラ４０で注入される液状試料と任意割合で混合する液体であれば、流路１１やカラム５１，６１に悪影響を与えない範囲で各種のものが使用される。
またグラジェント分析とよばれる分析手法においては、イオン濃度の異なる複数（図では６個）の溶離液ホルダ２１を備え、流路１１に送液する溶離液の濃度を連続的に変化させることが可能になっている。
そして、それぞれの溶離液は、図示しない電磁弁の開閉動作により順次切り替わりながら、溶離液ホルダ２１からボンベ９０の加圧窒素ガスにより押し出され、溶離液ポンプ２２によりアンモニア吸着手段３０に送られる。
【００１６】
再生液ホルダ２３は、１つの分析シーケンスが終了した後に、オートサンプラ４０への流路を閉じて開放弁３７を開き、再生液を送液して吸着カラム３１を洗浄し、次の分析シーケンスに備えるものである。もしくは、一つの分析シーケンスの途中においてもそのような洗浄を実行する。
【００１７】
アンモニア吸着手段３０は、送液手段２０の下流に配置されるものであって、溶離液に溶存するアンモニアを吸着する吸着カラム３１と、この吸着カラム３１の温度を制御する温調手段３２と、吸着カラム３１の再生処理を行うときに動作する開放弁３７とから構成される。
このように構成されるアンモニア吸着手段３０は、ベースラインを不安定にして分析精度の低下をもたらす溶離液中のアンモニアを除去するものである。なお、吸着カラム３１、温調手段３２及び開放弁３７の詳細な説明については、後記する。
【００１８】
オートサンプラ４０（試料注入手段）は、流路１１に送液されている前記溶離液に所定量の液状試料を注入するものである。このオートサンプラ４０は、多数（数１０〜１０００種類）の液状試料をセットすることができ、一定時間ごとに内蔵するシリンジにより液状試料を計量し採取して流路１１に注入する。このようなオートサンプラ４０の動作条件は、操作端末８２において、分析シーケンスのプログラムで条件設定されるものである。
【００１９】
分離手段５０は、分離カラム５１と、恒温器５２とから構成され、溶離液と液状試料の混合液を通過させてこの液状試料を構成成分毎に分離するものである。
分離カラム５１は、表面に露出する電荷（有効表面電荷）の特性にしたがってアミノ酸成分を分離するイオン交換分離モードを採用している。つまりグラジェント分析により、分離カラム５１を通過させる溶離液のイオン濃度を連続的又は段階的に変化させて、この分離カラム５１に吸着させたアミノ酸成分を、静電結合の弱い順番で溶出させる分離手法である。
なお分離カラム５１は、このようなイオン交換モード以外に、その他、逆相、順相、サイズ排除等の各種モードのものを採用することができる。
【００２０】
恒温器５２は、その内部に収容した分離カラム５１を加熱又は冷却し、分析シーケンスでプログラムした設定温度に恒温するものである。つまり、分離カラム５１による液状試料の成分分離能は、温度に大きく依存するために、検出データの再現性を向上させる目的で、分離カラム５１の温度が一定になるように厳密な制御をしている。一方で、液状試料の成分分離させる分離条件のパラメータの一つとして分離カラム５１の温度を恒温器５２により積極的に変化させる場合もある。
【００２１】
反応化手段６０は、反応カラム６１と、反応器６２と、ニンヒドリン反応液ホルダ６３と、このニンヒドリン反応液を流路１１に送出するポンプ６４と、洗浄液ホルダ６５と、開放弁６６から構成される。このように構成される反応化手段６０は、分離手段５０で液状試料から分離したアミノ酸成分を発色させるものである。
【００２２】
反応カラム６１は、分離手段５０から順次送られてくるアミノ酸と、ニンヒドリン反応液とを化学反応（呈色反応）させるものである。そして、反応カラム６１はこの呈色反応が高効率で進行するように１２５℃から１４０℃の温度範囲に保持された反応器６２に収容されている。
この呈色反応は、第１段階でニンヒドリンとアミノ酸とが化学反応すると、ニンヒドリンは還元され、アミノ酸はアルデヒドに変化し、さらにアンモニアと二酸化炭素が発生する。次の第２段階で還元ニンヒドリンとニンヒドリンとがアンモニアを介して縮合し、ルーヘマン紫という青紫色の色素と水が生成する。
この呈色反応から明らかなように、反応化手段６０に導入される前の液状試料及び溶離液の混合液が、アンモニアを含むと、反応化手段６０における呈色反応に関与して、検出手段７０の検出データのベースラインを不安定にさせることになる。
【００２３】
ホルダ６５に封入されている洗浄液は、流路１１の洗浄用の蒸留水または５％エタノール水溶液である。１つの試料の分析シーケンスが終了したら、検出手段７０の直前の流路１１を閉鎖するとともに、開放弁６６を開いて洗浄液を流路１１に送液すると、反応カラム６１を洗浄し次の分析シーケンスに備えることができる。
【００２４】
検出手段７０は、可視検出器が例示されており、反応化手段６０で呈色反応によりアミノ酸成分から変化した青紫色の色素が順次送られて、５７０ｎｍ、４４０ｎｍの可視領域の波長における吸光度が検出される。
なお検出手段７０は、可視検出器のように検出対象物の光学的性質（吸光度、屈折率、蛍光等）を利用する他に、電気化学的性質、質量等の各種物性を利用して検出するものも含まれる。
【００２５】
制御部８１は、前記した送液手段２０、アンモニア吸着手段３０、オートサンプラ４０、分離手段５０、反応化手段６０、検出手段７０及びその他図示されない構成要素のうち電子制御されるハードウェア機器からの配線が接続されている。
そして、制御部８１は、操作端末８２で入力された分析シーケンスのプログラムに従って、これら電子制御されるハードウェア機器を動作させ、液クロ装置１０による自動分析を実現させるものである。
【００２６】
操作端末８２は、キーボードやマウス等のユーザによる入力操作手段を備え、分析シーケンスの条件設定をしたり検出手段７０から出力される検出データを解析したりするソフトウェアがインストールされたコンピュータである。
この分析シーケンスは、液状試料の数・種類、その採取量、使用する反応カラム６１の種類、その温度条件、流路１１を流動する溶離液の流速、その流動時間等の分析条件だけでなく、試料の希釈工程、構成機器の立上工程、カラム平衡化工程、カラム再生工程、流路洗浄終了工程などの所定の前処理工程及び後処理工程も含めた条件がプログラムされている。
なお、このような分析シーケンスの設定プログラムは、操作端末８２において保存することが可能であり、新たに分析シーケンスを作成する場合は、新規作成する以外に、既存のものに部分修正を加えて利用することもできる。
【００２７】
図２は、操作端末８２に表示されたアミノ酸のクロマトグラフ分析結果である。なおこの表示結果を図示略の出力装置によりプリントアウトすることができる。ここでクロマトグラムにおけるＸ軸は分離された成分が検出されるまでの時間、Ｙ軸はアミノ酸成分の濃度に対応している。
図２（ａ）はタンパク質の加水分解物分析法による標準試料を分析したクロマトグラムであり約３０分で分析を終了している。一方、図２（ｂ）は生体中に含まれる成分の標準試料を分析した例であり、図２（ａ）と対比して成分数が多く、１００分以上を要している。
【００２８】
一つの分析シーケンスにおいては、図２（ａ）又は図２（ｂ）のいずれか一方のような同種条件での分析を複数の液状試料に対して実施することができ、またそれとは異なる異種条件の分析を、複数混在させて実施することもできる。
これにより、ユーザは、少なくともオートサンプラ４０及び溶離液ホルダ２１をセットすれば、あとは、設定した分析シーケンスを操作端末８２において起動させれば、何十又は何百種類もの液状試料を不休で自動的に分析できる。
【００２９】
ところで、このような液クロ装置１０でセットされた複数の液状試料の分析が最後まで実行されないうちに、アンモニア吸着手段３０の吸着能力が限界に達すると、それ以降に分析された試料のクロマトグラムは、アンモニアプラトーと呼ばれるベースラインの浮き上がりを示すことになる。
そのような検出データは、試料に含まれるアミノ酸成分に対応するピークと浮き上がったベースラインとが重畳して表示されるため、特に定量値の再現性が劣る不安定な分析結果となる。
【００３０】
図３を参照して、アンモニア吸着手段３０を構成する吸着カラム３１及び温調手段３２について詳細な説明をする。また、図３（ａ）はアンモニア吸着手段３０（３０Ａ）の第１実施例であり、図３（ｂ）はアンモニア吸着手段３０（３０Ｂ）の第２実施例を示している。
【００３１】
吸着カラム３１は、ステンレス製の円筒状の容体３３に、イオン交換樹脂が充填されたものであって、その両端がネジ切りされている。そして、流路１１，１１が、容体３３の両端に同軸に配置され、これらの両端部分が互いに締結部材３４，３４により締結されている。そして、吸着カラム３１に高圧の溶離液が入ると、溶存するアンモニアが吸着によりトラップされ、通過した脱アンモニアの溶離液が液漏することなく次段のオートサンプラ４０に導かれる。
【００３２】
温調手段３２は、前記吸着カラム３１の温度を室温よりも低温に設定したり高温に設定したりするものである。
第１実施例における温調手段３２は、その内部空間の温度を自在に制御して、収容する吸着カラム３１を設定温度に保持する加熱・冷却槽３２Ａである（図３（ａ））。
【００３３】
また第２実施例における温調手段３２（３２Ｂ）は、吸着カラム３１の容体３３の側周面に螺旋状に設けられている冷却管３５と、ヒータ線３６とから構成されている（図３（ｂ））。そして、冷却管３５を循環する冷媒と、ヒータ線３６を流れる電流により生じるジュール熱とが協調して吸着カラム３１を設定温度に保持する。
また吸着カラム３１の温度を検出する温度センサや、冷媒の温度を制御しつつ循環させる恒温循環槽や、ヒータ線３６の発熱量を制御するヒータ制御手段等は、公知のものが適用される。
【００３４】
また図示略とするが、第３実施例として、容体３３の側周面にペルチェ素子等の電子冷熱素子を固定して吸着カラム３１を加熱冷却し温度設定を行ってもよい。
そして、吸着カラム３１の内部の温度分布が少なくかつ短時間で温度安定するように、容体３３は、所定の耐圧・耐食性を具備しつつ、熱伝達係数の大きな材料（セラミック、金属）で構成されることが望ましい。
【００３５】
図４は、吸着カラム３１におけるアンモニア吸着量の温度特性を示すグラフである。
一般に吸着カラム３１は、冷却することによりアンモニアの吸着力は増大する。そして、吸着カラム３１に溶離液を通過させると、溶存するアンモニアはその吸着容量を超えない範囲で除去されて、ベースラインの安定した分析結果を導く（図２参照）。
一方、吸着カラム３１におけるアンモニアの吸着容量が飽和点に達すると、溶離液に溶存するアンモニアは除去されず、ベースラインの浮き上り現象が発現し不安定な分析結果となる。
【００３６】
そして、吸着カラム３１の吸着容量が飽和点に達した場合、溶離液（又は洗浄液）を通過させた状態で吸着カラム３１を使用温度Ｔ１から昇温して再生温度Ｔ２に設定すると、各温度における吸着容量の差分ΔＶ（＝Ｖ１−Ｖ２）が溶離液（又は洗浄液）に溶出することになる。このような熱処理により吸着カラム３１のアンモニアの吸着力が回復し、再び使用温度Ｔ１に戻して、溶離液を通過させれば溶存しているアンモニアを除去することが再び可能になる。
【００３７】
ここで、室温Ｔ０とした場合、再生温度Ｔ２で熱処理した直後の吸着カラム３１のアンモニアの吸着容量Ｖは、Ｖ０−Ｖ２で表されることになる。
そして、設定した分析シーケンスで消費される溶離液に溶存しているアンモニアの総量が、吸着カラム３１における吸着容量Ｖ（＝Ｖ０−Ｖ２）未満であるとする。すると、この場合、アンモニア吸着手段３０（図１参照）は、温調手段３２を特に動作させることなく室温に設定されたまま使用しても、安定した分析結果が得られる。
【００３８】
逆に、設定した分析シーケンスで消費される溶離液に溶存するアンモニアの総量が、吸着カラム３１における吸着容量Ｖ（＝Ｖ０−Ｖ２）を超える場合は、その超えた直後に得られる分析結果のベースラインは不安定になる場合がある。
よって、そのような場合は、消費される溶離液に溶存するアンモニアの総量よりも吸着容量Ｖ（＝Ｖ１−Ｖ２）になるような使用温度Ｔ１に吸着カラム３１を温度設定する必要がある。
【００３９】
ところで、吸着カラム３１が大きければ充填されているイオン交換樹脂の量が多くなるためにアンモニアの吸着容量が増加するが、デッドボリュームも増加して、価格上昇と占有容積の上昇に見合う効果が得られない場合がある。
このために、大量の溶離液を消費する分析シーケンスを設定した場合は、アンモニア吸着手段３０の温調手段３２の温度を下限に設定しても、消費される溶離液に溶存するアンモニアの全てを除去することができない場合がある。
そのような場合は、オートサンプラ４０における間欠的な注入動作の切りの良いところで一端分析を停止して、吸着カラム３１の再生処理を分析シーケンスに含ませることができる。つまり、分析シーケンスの途中で、溶離液ホルダ２１からの送液を一端停止して、開放弁３７を開いて再生液ホルダ２３からの送液を開始して、温調手段３２を昇温させて吸着カラム３１に蓄積したアンモニアを溶出させる。そして、再生処理が終了した時点で、溶離液ホルダ２１からの送液に切り替えて、開放弁３７を閉じてオートサンプラ４０を注入動作させて中断した分析シーケンスを再開する。
【００４０】
以上説明したように、アンモニアの吸着カラム３１を冷却することにより、溶離液に含まれるアンモニアの吸着容量を向上させることができる。これにより、吸着カラム３１を交換することなく、液体クロマトグラフ分析において、連続的に送液される溶離液の消費量を増加させることができる。
その結果、図２（ａ）（ｂ）に示されるクロマトグラムのようなアンモニアプラトーがなくベースラインの安定した分析結果を、多数の試料を対象とする場合であっても、一つの分析シーケンスにより得ることができる。
【００４１】
さらに、吸着カラム３１を室温よりも高温に設定し、再生液等を通過させ、吸着しているアンモニアを溶出させて吸着カラム３１を再生することができる。そして、このような吸着カラム３１の再生を一連の分析動作（分析シーケンス）が完了するたびに、又は分析シーケンスの途中で実施すれば、吸着カラム３１にまつわるメンテナンスに割く時間を節約することができる。
【００４２】
図５は、本発明に係る液体クロマトグラフ分析方法の実施形態を示すフローチャートである。なお、このフローチャートにおける動作主体及び判断主体は、特に断らない限り、制御部８１又は操作端末８２に付随する電子処理手段であるとする。
図１を適宜参照しつつ説明を続ける。
まず、液クロ分析を実施するにあたり、分析の目的に応じて、適切な反応カラム６１、吸着カラム３１等の消耗品を選定し液クロ装置１０に装着する（Ｓ１１）。
次に、選定した吸着カラム３１のアンモニアの吸着容量に関する温度特性データを取得する（Ｓ１２）。具体的には、操作端末８２において吸着カラム３１を選択した段階で、各設定温度における吸着カラム３１で除去可能なアンモニア量のデータを入力する。
このデータは、予め操作端末８２に保存されていたデータを呼び出してもよいし、ユーザが手入力してもよく、さらには、これまでの吸着カラム３１の使用状況の履歴を加味したアンモニアの除去可能量を入力する。
【００４３】
次に、分析シーケンスをプログラミングして分析条件を設定する（Ｓ１３）。具体的には、溶離液ポンプ２２の送液速度、オートサンプラ４０にセットした液状試料の数、順番、注入量、注入間隔、検出手段７０の動作条件、アンモニア吸着手段３０の再生のタイミング等をユーザが、操作端末８２に入力することになる。
【００４４】
プログラミングされた分析シーケンスから、トータルの分析時間を決定し（Ｓ１４）、さらに流路１１における溶離液の送液速度をこの分析時間で積分することにより、溶離液の消費量の総量を算定する（Ｓ１５）。さらに、この溶離液に溶存するアンモニアの濃度から消費される溶離液におけるアンモニア含有量を算定する（Ｓ１６）。
【００４５】
ここで算定されたアンモニア含有量を、図４の吸着カラム３１の特性曲線上の吸着容量Ｖ０に対応させて、完全に吸着させることができる吸着カラム３１の上限温度Ｔ０と認定する（Ｓ１７）。
この上限温度Ｔ０が室温ＲＴよりも低温である場合は（Ｓ１８；Ｙｅｓ）、分析シーケンスが終了する前に、吸着カラム３１がアンモニア吸着の飽和点に達してしまうことになる。このため、温調手段３２を動作させて吸着カラム３１の温度をこの上限温度Ｔ０よりも低温の温度Ｔ１に設定し、消費される溶離液のアンモニア含有量の全てが吸着されるようにする（Ｓ１９）。
【００４６】
そして、吸着カラム３１が温度Ｔ１で安定したところで（Ｓ２０；Ｙｅｓ）、溶離液ポンプ２２により溶離液の送液を開始して（Ｓ２１）、オートサンプラ４０で液体試料を注入し、分離手段５０でこの液体試料を成分分離して、反応化手段６０で呈色反応させてから検出手段７０で成分検出をすることになる（Ｓ２２）。
【００４７】
一方、上限温度Ｔ０が室温よりも高温である場合は（Ｓ１８；Ｎｏ）、分析シーケンスを完了させても、吸着カラム３１がアンモニア吸着の飽和点に到達しない。この場合は、温調手段３２を特に動作させることなく溶離液の送液を開始して（Ｓ２１）、成分検出をすることになる（Ｓ２２）。
【００４８】
次に、オートサンプラ４０で注入された液状試料の単位で、成分検出（Ｓ２２）が終了した段階で図２に示されるようなデータ解析の結果を出力することとなる（Ｓ２３）。
このデータ解析とは別フローで、液状試料の成分検出（Ｓ２２）の終了後に室温よりも高温に設定し、吸着カラム３１に吸着しているアンモニアを溶離液（又は再生液）に溶出させ、吸着カラム３１を再生させることができる（Ｓ２４）。
なおここで、液状試料の成分検出（Ｓ２２）の終了後とは、オートサンプラ４０にセットされた全ての液状試料の成分検出が終了した場合に限定されず、分析シーケンスの途中であって未分析の液状試料がまだ存在している切りの良い時点も含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】本発明に係る液体クロマトグラフ分析装置の実施形態を示すアミノ酸分析装置の構成ブロック図である。
【図２】アミノ酸のクロマトグラフ分析結果であって、（ａ）（ｂ）はそれぞれ分析目的の異なる分析結果である。
【図３】アンモニア吸着手段を構成する吸着カラム及び温調手段の説明図であって、（ａ）はアンモニア吸着手段の第１実施例であり、（ｂ）は第２実施例を示している。
【図４】吸着カラムにおけるアンモニア吸着量の温度特性を示すグラフである。
【図５】本発明に係る液体クロマトグラフ分析方法の実施形態を示すフローチャートである。
【符号の説明】
【００５０】
１０    液体クロマトグラフ分析装置（液クロ装置）
１１    流路
２０    送液手段
２３    再生液ホルダ
３０，３０Ａ，３０Ｂ  アンモニア吸着手段
３１    吸着カラム
３２，３２Ａ，３２Ｂ  温調手段
３３    容体
４０    オートサンプラ（試料注入手段）
５０    分離手段
６０    反応化手段
７０    検出手段
８２    操作端末
ＲＴ    室温
Ｔ０    上限温度
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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