(57)【要約】      （修正有）【課題】優れたＶＤＲ活性化作用を有し且つ安全性の高いＶＤＲの活性化剤の提供。【解決手段】エイジツエキス、ユキノシタエキス、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスから選ばれる１種又は２種以上を含有するビタミンＤ受容体活性化剤。該ビタミンＤ受容体活性化剤を配合した皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品。該皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品は、紫外線により引き起こされるＤＮＡの損傷、あるいはサイトカインの産生を抑えることにより、皮膚の乾燥、肌荒れ、シワ、くすみを予防、改善し、あるいは皮脂腺細胞からの皮脂の分泌を制御することにより、化粧崩れ、毛穴目立ち、ニキビの予防、改善に有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エイジツエキス、ユキノシタエキス、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスから選ばれる１種又は２種以上を含有することを特徴とするビタミンＤ受容体活性化剤。
【請求項２】
請求項１記載のビタミンＤ受容体活性化剤を配合したことを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項３】
請求項１記載のビタミンＤ受容体活性化剤を配合したことを特徴とする化粧料。
【請求項４】
請求項１記載のビタミンＤ受容体活性化剤を配合したことを特徴とする医薬部外品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビタミンＤ受容体を活性化することにより、皮膚における乾燥、肌荒れ、シミ、シワ、乾癬の予防および改善に有効な皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビタミンＤは脂溶性ビタミンの一種であり、栄養面で実用に供されているものとしては、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）とビタミンＤ３（コレカルシフェロール）の二種に分類される。
【０００３】
消化管からのビタミンＤの吸収が低下すると、ビタミンＤ欠乏症を容易に招くことから、経口による摂取は必須であると考えられているが、ヒトの体内においても、コレステロールの代謝により合成されることが知られている。コレステロールの代謝により生成されたプロビタミンＤ３（７−デヒドロコレステロール）は、皮膚の表面で紫外線照射を受けることによりビタミンＤ３へと変化する。また、肝臓、大腸、前立腺、皮膚など多くの組織中で代謝を受けて活性型ビタミンＤ３へと変換される。
【０００４】
このようなビタミンＤ３生合成過程における紫外線の関与は、紫外線の有害性が大きく取り上げられる中で唯一の利点であるともいわれている。近年のアメリカにおける研究により、紫外線の多い地域では、紫外線の少ない地域に比べて、膀胱ガン、食道ガン、腎臓ガン、肺ガン、膵臓ガン、直腸ガン、胃ガンなど、数種のガンの発症率、死亡率が低下することが報告されており、紫外線により生成されるビタミンＤ３がガン発症の抑制に効果がある可能性が示唆されている（非特許文献１、２参照）。
【０００５】
ヒトにおけるビタミンＤ３の主な働きは、骨芽細胞と破骨細胞の活性化を通した骨代謝の促進であると考えられており、これにより健康的な骨の形成が進行する。また、そのような働きを維持するために、腎臓や腸管からのカルシウム、リン酸の再吸収を促進し、血中におけるカルシウム、リン酸の濃度を上昇させる働きも有している。
【０００６】
また、皮膚が紫外線を浴びることにより線維芽細胞や表皮角化細胞から産生されたサイトカインの一種であるインターロイキン−６は、皮膚の炎症や表皮の肥厚化を引き起こすが、活性型ビタミンＤ３はインターロイキン−６の産生を抑制することにより、そのような現象を抑えることが知られている。さらには、最近の研究により、紫外線により表皮の細胞に生じるＤＮＡの損傷をビタミンＤ３が抑制することが明らかにされている（非特許文献３、４参照）。
【０００７】
活性型ビタミンＤ３は、皮脂腺細胞の増殖、機能を制御することが知られている（非特許文献５参照）。このようなビタミンＤ３の作用は、過剰な皮脂の蓄積が一つの原因とされるニキビや、酸化した皮脂による表皮角化細胞への刺激が細胞の過増殖を誘発し、周辺部位がすり鉢状へと変化することによる毛穴の目立ちの発生を抑える効果へと繋がることが期待出来る。また、美容的な観点からも、顔面における過剰な皮脂産生は、化粧料の保持効果を著しく低下させることから、美しい塗布状態を崩壊させる原因となるが、ビタミンＤ３の作用がこのような化粧料の効果低下を予防することが十分に予想される。
【０００８】
ところで、ビタミンＤ３の作用は、核内レセプターの一つであるビタミンＤ受容体（Ｖｉｔａｍｉｎｅ  Ｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、以下ＶＤＲと略す場合もある）を介して現れると考えられている。ＶＤＲは、リガンド誘導型の転写制御因子として働き、リガンドと結合したＶＤＲは、レチノイドＸレセプターとヘテロダイマーを形成し、ＤＮＡ上のＶＤＲ認識配列と作用することにより、遺伝子発現を転写レベルで制御している。
【０００９】
こうしたことが明らかにされたことから、ニキビや皮膚炎等の疾患への効果を目的として、下記特許文献１の様な特許出願が行われており、表皮角化細胞の増殖を抑制する化合物が報告されている。
【００１０】
一方、ビタミンＤ３の長期連用は安全性上の問題があるため、同様の作用をもつ皮膚外用剤を開発するためには、より安全性の高い成分を提供する必要がある。
【００１１】
【非特許文献１】Ｃａｎｃｅｒ，９４，１８６７−１８７５，２００２
【非特許文献２】Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１６，６１８−６２５，２００７
【非特許文献３】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，８９，６６３−６７３，２００３
【非特許文献４】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１２７，７０７−７１５，２００６
【非特許文献５】Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２００４年３月号，１４−１８
【特許文献１】特表２００６−５２４６５９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は上記のような問題点を解決するためになされたもので、優れたＶＤＲ活性化作用を有し且つ安全性の高いＶＤＲの活性化剤を提供するとともに、紫外線により引き起こされるＤＮＡの損傷、あるいはサイトカインの産生を抑えることにより、皮膚の乾燥、肌荒れ、シワ、くすみを予防、改善し、あるいは皮脂腺細胞からの皮脂の分泌を制御することにより、化粧崩れ、毛穴目立ち、ニキビの予防、改善に有用な皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは前記従来技術の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、エイジツエキス、ユキノシタエキス、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスが優れたＶＤＲの活性化作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明は、エイジツエキス、ユキノシタエキス、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスから選ばれる１種又は２種以上を含有することを特徴とするビタミンＤ受容体活性化剤を提供するものである。
【００１５】
また本発明は、上記のようなＶＤＲ活性化剤を有効成分として配合することを特徴とする皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品を提供するものである。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によって、優れたＶＤＲ活性化作用をもつＶＤＲ活性化剤を提供することが可能となった。また、このようなＶＤＲ活性化剤を配合することにより、皮膚の乾燥、肌荒れ、シワ、くすみを改善、予防し、若々しい肌を実現させ、また皮脂分泌の制御により化粧崩れ、ニキビ、毛穴の目立ちを予防、改善し、かつ安全性の高い皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品を提供することが可能となった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明の実施形態について説明する。本発明のＶＤＲ活性化剤は、上述のように、エイジツエキス、ユキノシタエキス、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスから選ばれる１種又は２種以上を含有するものである。ここで「含有する」とは、本発明のＶＤＲ活性化剤が、エイジツエキス、ユキノシタエキス、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスから選ばれる１種又は２種以上からなるものである場合の他、これら以外のものが含有されていてもよいことを意味する。
本発明で用いるエキス等は、ノバラ、ユキノシタ、マジョラムの全草若しくはその葉、茎、根、種子および花のうち一部又は２つ以上の箇所、エイジツ（ノバラの果実の部分）、レイシの子実体、紫根（紫の根の部分）を乾燥し、又は乾燥することなく粉砕した後、低温又は室温ないし加温下に溶媒により抽出するか、又はソックスレー抽出器などの抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液、或いはその乾燥末等のものである。
【００１８】
抽出に用いる溶媒としては、通常の植物の抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができる。たとえば、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、１、３−ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、クロロホルム、ジクロロエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン等の有機溶媒類等であり、それらは単独あるいは組み合わせて用いることができる。
【００１９】
本発明の皮膚外用剤において有効な効果を得るために、エイジツエキス、ユキノシタ、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスの配合量は、通常乾燥固形分として０．０００１〜５０重量％とすることが好ましい。０．０００１重量％未満では本発明の効果が充分に得られない可能性があり、一方、５０重量％を超えても、その増量に見合った効果の向上は認められないからである。この観点から、０．００１〜２０重量％がより好ましい。
【００２０】
本発明の皮膚外用剤中には本発明の効果を損なわない範囲において、一般に化粧料で用いられ、あるいは医薬部外品、医薬品等の皮膚外用剤に用いられる各種任意成分を必要に応じて適宜配合することができる。このような任意成分として、たとえば、精製水、エタノール、油性成分、保湿剤、増粘剤、防腐剤、乳化剤、薬効成分、粉体、紫外線吸収剤、色素、香料、乳化安定剤等を挙げることができる。
【００２１】
本発明の皮膚外用剤の形態は、液状、乳液、軟膏、クリーム、ゲル、エアゾール、石けん等皮膚に適用可能な性状のものであれば問うものではなく、必要に応じて適宜基剤成分等を配合して所望の形態の皮膚外用剤を調製することができる。また、本発明の皮膚外用剤は、医薬品、医薬部外品又は化粧品等の多様な分野において適用可能である。
【００２２】
本発明のＶＤＲ活性化剤は、皮膚の乾燥、肌荒れ、シワ、タルミ、くすみを予防、改善し、若々しい肌を実現させ、また過度の皮脂による化粧崩れ、ニキビ、毛穴の目立ちを予防、改善し、化粧品の効果を保持することが可能であるが、ここに示した効果は例示であり、これらの皮膚症状に本発明のＶＤＲ活性化剤、及びそのＶＤＲ活性化剤を含有する皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品の適用が限定されるものではない。
【実施例】
【００２３】
以下、本発明の実施例について説明する。
【００２４】
（実施例１）
本実施例は、エイジツエキスからなるＶＤＲ活性化剤の実施例である。エイジツエキスの調製は次のようにして行う。すなわち、先ずエイジツの果実を乾燥して細かく砕いたもの１０ｇに、含水濃度５０容量％エタノール１００ｍｌを加える。次に、２５℃にて５日間抽出を行った後、濾過することによって、エイジツエキスを得た。このとき、乾燥固形物量は、１．３４重量％であった。
【００２５】
（実施例２）
本実施例は、ユキノシタエキスからなるＶＤＲ活性化剤の実施例である。ユキノシタエキスの調製は次のようにして行う。すなわち、ユキノシタの茎葉部を乾燥して細かく砕いたもの１０ｇに、含水濃度５０容量％エタノール１００ｍｌを加え、室温にて一晩抽出を行った後、濾過し、ユキノシタエキスを得た。乾燥固形物量は、１．２２重量％であった。
【００２６】
（実施例３）
本実施例は、レイシエキスからなるＶＤＲ活性化剤の実施例である。レイシエキスの調製は次のようにして行う。すなわち、子実体を乾燥して細かく砕いたもの１０ｇに、含水濃度５０容量％エタノール１００ｍｌを加え、室温にて５日間抽出を行った後、濾過し、レイシエキスを得た。乾燥固形物量は、１．２３重量％であった。
【００２７】
（実施例４）
本実施例は、ノバラ油からなるＶＤＲ活性化剤の実施例である。ノバラ油の調製は次のようにして行う。すなわち、ノバラの果実を乾燥して細かく砕いたもの１０ｇに、エタノール１００ｍｌを加え、室温にて５日間抽出を行った後、エタノールを乾燥除去し、ノバラ油を得た。乾燥後重量は、０．５３重量％であった。
【００２８】
（実施例５）
本実施例は、マジョラムエキスからなるＶＤＲ活性化剤の実施例である。マジョラムエキスの調製は次のようにして行う。マジョラムの葉を乾燥して細かく砕いたもの１０ｇに、エタノール１００ｍｌを加え、室温にて５日間抽出を行った後、エタノールを乾燥除去し、
マジョラムエキスを得た。乾燥後重量は、１．４１重量％であった。
【００２９】
（実施例６）
本実施例は、紫根エキスからなるＶＤＲ活性化剤の実施例である。紫根エキスの調製は次のようにして行う。紫根を乾燥して細かく砕いたもの１０ｇに、含水濃度５０容量％エタノール１００ｍｌを加え、室温にて５日間抽出を行った後、濾過し、紫根エキスを得た。乾燥固形物量は、１．４２重量％であった。
【００３０】
（試験例１）ＶＤＲ結合活性試験
核内受容体は、リガンドとの結合によりその立体構造が変化し、転写共役因子と相互作用することが知られている。本試験例は、この原理を利用したＶＤＲ結合活性測定キットＣｏＡ−ＢＡＰ  Ｓｙｓｔｅｍシリーズ−ＶＤＲ（有限会社マイクロシステムズ製）を用いたＶＤＲ結合活性試験である。
【００３１】
９６ｗｅｌｌプレートの各ｗｅｌｌに、ＶＤＲ溶液を１００μｌ分注し、プレートシールを貼った上、アルミホイルで全体を包み、４℃で一晩静置した。ＶＤＲ溶液を除去した後、０．５μＭのＤＴＴを含むリン酸緩衝生理食塩水（１２０μｌ）で３回洗浄した。ＴＩＦ２−ＢＡＰ液  １００μｌを各ｗｅｌｌに添加し、下記実施例１乃至６のＶＤＲ活性化剤を含む試験溶液及びポジティブコントロールの試験溶液をそれぞれ１μｌずつ分注した。４℃で１時間静置した後、リン酸緩衝生理食塩水（１２０μｌ）で３回洗浄した。これに基質液（ＮＰＰを溶解した１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０））を各ｗｅｌｌに１００μｌ分注した。３７℃で３時間反応させた後、０．５Ｎ  ＮａＯＨを各ｗｅｌｌに２５μｌ加えて反応を停止させ、４０５ｎｍの吸光度を測定した。
【００３２】
試験は、上記実施例１のエイジツエキス、実施例２のユキノシタエキス、実施例３のレイシエキス、実施例４のノバラ油、実施例５のマジョラムエキス、実施例６の紫根エキスの濃度（容量％）を変えて行った。具体的には、試験溶液中でのエイジツエキス、ユキノシタエキス、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスの最終濃度が、それぞれ１容量％、０．５容量％、０．２５容量％となるように、予めＤＭＳＯにて調製し、試験に供した。また、ポジティブコントロールには、１α−２５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｏｌｅｃａｌｃｉｆｅｒｏｌを１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭに調製し、測定に用いた。試験結果を表１に示す。
【００３３】
表１からも明らかなように、ポジティブコントロールに比べて実施例１〜６の場合は４０５ｎｍの吸光度が高く、エイジツエキス、ユキノシタエキス、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスはいずれもＶＤＲ活性化作用を有することが明らかとなった。特に、実施例１〜６のそれぞれのエキスの濃度が高くなるほど、４０５ｎｍの吸光度が高くなり、ＶＤＲ活性化作用が高まることがわかった。
【００３４】
【表１】
2009242332.tif 000002
【００３５】
（試験例２）ＩＬ−６産生抑制試験
本試験例は、正常ヒト新生児包皮皮膚表皮角化細胞ＮＨＥＫ（クラボウ社製）を用いた紫外線ＵＶＢによるインターロイキン−６（以下、ＩＬ−６）産生の抑制効果を評価した試験である。
【００３６】
ＮＨＥＫの培養には、ＮＨＥＫ培養用基礎培地（ＫＢ２、クラボウ）をベースとし、ハイドロコーチゾン (０．５μｍｏｌ／ｍl)、インシュリン（５μｇ／ｍl）、ＥＧＦ（上皮細胞成長因子:１０ｎｇ／ｍl）、ＢＰＥ(牛脳下垂体抽出液)、及び抗生物質からなる添加剤セット（クラボウ社製）を添加した表皮細胞培養用培地（ＫＧ２）を用いた。
【００３７】
３５ｍｍ組織培養用ディッシュ（ＩＷＡＫＩ社製）の各ｗｅｌｌに、２．５×１０-5（ｃｅｌｌ／ｍl）の細胞数でＫＧ２に懸濁したＮＨＥＫを２ｍｌ播種した。培養は、ＣＯ2インキュベーター（９５容量％空気、５容量％二酸化炭素）内、３７℃の条件下で行った。
【００３８】
培養２日目に培地を吸引除去し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＨ７．４）２ｍｌで２回洗浄した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＨ７．４）１ｍｌを添加し、ディッシュの蓋を空けた状態で紫外線ＵＶＢ（ランプ：Ｆｉｌｉｐｓ社製、照射強度：０．１ｍＷ／ｃｍ2を２０ｍＪ／ｃｍ2を照射した。ＰＢＳを吸引除去し、下記実施例１乃至６のＶＤＲ活性化剤を混合したＫＧ２を２ｍｌ加え、２４時間培養後の培養上清を採取し、ＥＬＩＳＡ法にて培養上清中のＩＬ−６産生量を測定した。
【００３９】
培養上清中のＩＬ−６産生量の測定は、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６［（ｈ）ＩＬ−６］  Ｈｕｍａｎ，Ｂｉｏｔｒａｋ  ＥＬＩＳＡ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）を用い、同説明書に従って行い、９６ｗｅｌｌマイクロプレート上で行った。
【００４０】
すなわち、ビオチン標識したＩＬ−６抗体を各ｗｅｌｌに５０μｌ分注し、これに上記
実施例１乃至６のＶＤＲ活性化剤を含む培養上清を５０μｌずつ分注するとともに、スタンダードとして上記Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６［（ｈ）ＩＬ−６］  Ｈｕｍａｎ，Ｂｉｏｔｒａｋ  ＥＬＩＳＡ  Ｓｙｓｔｅｍに付属の検量線作成用のＩＬ−６  ｓｔａｎｄａｒｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（標準溶液）を、各ｗｅｌｌに５０μｌ加え、２５℃で静置した。２時間静置後、プレート内の溶液を除去した後、Ｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒ  （２００μＬ）で３回洗浄した。
【００４１】
これにペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン溶液（１００μｌ）を分注し、２５℃で静置した。３０分後、Ｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒ  （２００μｌ）で３回洗浄した。これに、酵素基質溶液（１００μｌ）を分注し、アルミホイルで遮光し、２５℃で静置した。３０分静置後、反応停止液（１００μｌ）を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。スタンダードの各濃度における吸光度から検量線を作成し、それぞれの条件における培養上清中のＩＬ−６産生量を算出した。
【００４２】
ＩＬ−６の定量と同時に細胞数をカウントし、その計測した細胞数と、上記のように算出したＩＬ−６産生量から、細胞あたりのＩＬ−６産生量として評価し、試料を添加していない時の細胞あたりのＩＬ−６産生量を１００とした値で表した。
【００４３】
試験は、上記実施例１のエイジツエキス、実施例２のユキノシタエキス、実施例３のレイシエキス、実施例４のノバラ油、実施例５のマジョラムエキス、実施例６の紫根エキスの濃度（容量％）を変えて行った。具体的には、培養液中でのエイジツエキス、ユキノシタエキス、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスの最終濃度が、それぞれ１容量％、０．１容量％、０．０１容量％となるように、予めＫＧ２を用いて調製し、試験に供した。
【００４４】
また、ポジティブコントロールには、試験溶液の代わりに１α−２５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｏｌｅｃａｌｃｉｆｅｒｏｌを、培養液中での最終濃度が０．２μＭ、０．１μＭ、０．０５μになるように、予めＫＧ２を用いて調製し、測定に用いた。
【００４５】
【表２】
2009242332.tif 000003
【００４６】
試験結果を表２に示す。表２からも明らかなように、ＫＧ２のみで培養した場合のＩＬ−６の産生量に比べて、実施例１〜６のＶＤＲ活性化剤を混合した場合は、ＩＬ−６の産生量が減少しており、エイジツエキス、ユキノシタエキス、レイシエキス、ノバラ油、マジョラムエキス、紫根エキスを、紫外線ＵＶＢ照射後の表皮角化細胞の培養液に添加することにより、細胞からのＩＬ−６の産生が抑制されることが分かった。また、一般に優れたＩＬ−６産生抑制効果を示すと認められている１α−２５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｏｌｅｃａｌｃｉｆｅｒｏｌと比べても、同程度のＩＬ−６産生抑制効果を示した。その一方で、皮膚に対する安全性の確認されていない１α−２５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｏｌｅｃａｌｃｉｆｅｒｏｌに比べると、実施例１〜６のＶＤＲ活性化剤は、植物からの抽出物であるため安全性が高く、ＩＬ−６の産生抑制を目的とした皮膚外用剤等として好適に使用することができるものと認められる。
【００４７】
（試験例３）肌荒れ改善作用試験
本試験例は、モデル動物における肌荒れ改善作用試験である。上記実施例１、２のＶＤＲ活性化剤の肌荒れに対する改善効果を評価するため、肌荒れモデルを作成したモルモットを使用し、試料の適用試験を実施した。尚、試料は実施例１、２にて得られた各抽出物を含水濃度５０容量％エタノールで希釈して、固形分濃度０．１％となるように調製した。また比較例１として含水濃度５０容量％エタノールのみについても同様に試験を行った。
【００４８】
背部を除毛したハートレー系モルモット（雌性、５週齢、１群３匹）に、白色ワセリンにて３重量％に調整したラウリル硫酸ナトリウム（０．２ｇ）を３日間連続解放塗布して肌荒れを作成した。肌荒れ作成部位を４等分し、各試料１．０ｍLを１日３回、３日間連続塗布し、肌荒れの状態を観察した。肌荒れの度合いは定められた判定基準（スコア）に従って判定し、各群の平均スコアで示した。試験結果を表３に示す。
【００４９】
【表３】
2009242332.tif 000004
【００５０】
尚、本試験例における肌荒れ状態の判定基準は次のとおりである。
肌荒れ状態の判定基準          スコア
紅斑、落屑ともほとんどみられない   １
紅斑を伴わない軽度の落屑           ２
紅斑を伴わない中等度の落屑         ３
弱い紅斑を伴った落屑               ４
中等度の紅斑を伴った落屑           ５
著しい紅斑を伴った落屑             ６
【００５１】
表３からも明らかなように、実施例１及び２のＶＤＲ活性化剤ともに、比較例１に比べて平均スコアが小さく、肌荒れ改善作用が優れていることがわかった。
【００５２】
（処方例１）
本処方例は、上記実施例１のＶＤＲ活性化剤であるエイジツエキスを化粧料の一例としてのクリームに配合した場合の処方例である。
【００５３】
クリームの調製は次のようにして行った。すなわち、スクワレン、セチルイソオクタノエートおよびマイクロクリスタリンワックスを加熱溶解後、粘土鉱物およびＰＯＥグリセロールトリイソステアリン酸エステル(界面活性剤)を加え、７０℃に調整し、これらを均一に分散、溶解させて油性ゲルを得た。次に、エイジツエキスを所定濃度精製水に溶解し、油性ゲルの中へ、十分に攪拌しながらゆっくりと添加した。ホモミキサーで均一に混合した後、脱気、ろ過し、３０℃まで冷却し、クリームを得た。得られた処方例１のクリームの組成および配合比は以下の通りである。
【００５４】
組成                                             配合比（重量％）
スクワレン                                        ２０．０％
セチルイソオクタノエート                             ８．５％
マイクロクリスタリンワックス                         １．０％
粘土鉱物                                             １．３％
ＰＯＥグリセロールトリイソステリン酸エステル         ０．２％
エイジツエキス                                       １．０％
水                                                    残量
【００５５】
（処方例２）
本処方例は、上記実施例２のＶＤＲ活性化剤であるユキノシタエキスを化粧料の一例としてのクリームに配合した場合の処方例である。クリームの調製は上記処方例１と同様に行った。得られた処方例２のクリームの組成および配合比は以下の通りである。
【００５６】
組成                                             配合比（重量％）
スクワレン                                         ２０．０％
セチルイソオクタノエート                             ８．５％
マイクロクリスタリンワックス                         １．０％
粘土鉱物                                             １．３％
ＰＯＥグリセロールトリイソステリン酸エステル         ０．２％
ユキノシタエキス                                     １．０％
水                                                    残量
【００５７】
（比較例２）
クリーム基剤の組成および配合比は処方例１及び２と同じであって、ＶＤＲ活性化剤であるエイジツエキス又はユキノシタエキスが配合されていないクリームを調製し、比較例２とした。比較例２のクリームの組成および配合比は以下の通りである。
【００５８】
組成                                            配合比（重量％）
スクワレン                                        ２０．０％
セチルイソオクタノエート                             ８．５％
マイクロクリスタリンワックス                         １．０％
粘土鉱物                                             １．３％
ＰＯＥグリセロールトリイソステリン酸エステル         ０．２％
水                                                    残量
【００５９】
（試験例４）くすみ改善作用試験
上記のように調製した処方例１及び２のクリームを用いて、くすみ改善試験を行った。すなわち、くすみの気になる女性パネル(２２から４７歳)９０名を選抜し、処方例１、処方例２、および比較例２の被験クリーム１品につき３０名を１グループとし、毎日朝と夜の２回、３ヶ月間にわたって適量を顔面に塗布した。塗布によるくすみ改善効果は以下の方法によって評価した。
【００６０】
肌色の明るさ及びくすみの目立ちやすさは下記の評価基準に従って目視判定し、同時に肌色の明るさを色彩色差計（ミノルタ社製）で測定した。評価結果は、比較例２のクリームの試験終了後のＬ*値から試験終了前のＬ*値を差し引いた値を１００として、処方例１および処方例２のクリームのＬ*値の変化を比で示した。尚、値が高いほど明度が高く、より明るい肌になったことを示す。また、各被験者で任意の５カ所を測定してＬ*値の平均を算出したところ、試験前の値が試験後を上回る被験者はいなかった。試験結果を表４に示す。
【００６１】
尚、本試験例における判定基準は次のとおりである。
有効：肌色が明るくなり、くすみが目立たなくなった。
やや有効：肌色が明るくなったが、くすみは変化なし。
無効：使用前と変化なし。
【００６２】
【表４】
2009242332.tif 000005
【００６３】
表４から明らかなように、処方例１及び２は、エイジツエキスもしくはユキノシタエキスを含有しない比較例２に比べて、くすみを改善し、より明るく美しい肌とすることが明らかとなった。
【００６４】
（試験例５）シワ改善試験
試験例４の女性パネル９０名に対して試験終了後にシワの改善に関するアンケートを実施した。シワの改善度は、以下に示す基準で回答してもらい、処方例１、処方例２、及び比較例２毎にシワが「明らかに改善した」、「改善した」と回答した人数を表５に示した。
【００６５】
【表５】
2009242332.tif 000006
【００６６】
尚、本試験例におけるシワの改善に関する評価基準は次のとおりである。
明らかに改善した
改善した
わずかに改善した
変化なし
【００６７】
表５から明らかなように、処方例１及び２では、比較例２と比較して、シワが「明らかに改善した」、「改善した」と回答した人数が明らかに多く、皮膚のシワ改善効果が大きいことがわかった。