(57)【要約】【課題】インボルクリン、トランスグルタミナーゼ−１、及びＥ−カドヘリンの産生を促進する新規な剤、及び毛穴目立ち軽減用皮膚外用剤の提供。【解決手段】バンレイシ（Annona squamosa）の種子の抽出物を有効成分とするインボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、及びＥ−カドヘリン産生促進剤、ならびにバンレイシ種子の抽出物を有効成分として含有する毛穴目立ち軽減用皮膚外用剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
バンレイシ（Annona squamosa）の種子の抽出物を有効成分とするインボルクリン産生促進剤。
【請求項２】
バンレイシ（Annona squamosa）の種子の抽出物を有効成分とするトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤。
【請求項３】
バンレイシ（Annona squamosa）の種子の抽出物を有効成分とするＥ−カドヘリン産生促進剤。
【請求項４】
バンレイシ（Annona squamosa）の種子の抽出物を有効成分として含有する毛穴目立ち軽減用皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、正常な角層形成に関与する、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ−１、及びＥ−カドヘリンの新規な産生促進剤、及び毛穴目立ち軽減用皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
毛穴の目立ちは、女性の肌悩みの上位に常に挙げられている。目立つ毛穴の構造は、毛孔部（漏斗部）が広がっているのではなく、その周囲がすり鉢のように陥没した形状になっていて、その部分が影のようになって目立っている。そのような毛穴構造になる原因の一つとして、毛孔部周囲の角層細胞の不全角化が挙げられる。目立つ毛穴部位では、皮脂分泌量が増加し、皮脂中の不飽和脂肪酸、ならびに皮脂中のトリアシルグリセロール及びアシルグリセロールがリパーゼにより分解することにより生じる不飽和脂肪酸が、炎症を引き起こすことにより、不全角化を引き起こすことが知られている（非特許文献１）。
【０００３】
表皮細胞が角化し、角層細胞になる過程には、関連蛋白・酵素の発現（インボルクリン、トランスグルタミナーゼ−１等）が関与することが知られている。角層細胞は、ケラチン線維を主成分とし、膜の裏打ち蛋白であるコーニファイドエンベロープ（角質肥厚膜、以下ＣＥと略）から構成される。ＣＥは、角化過程に従って細胞内で産生されるインボルクリンを始めとする複数のＣＥ前駆体蛋白質が、酵素トランスグルタミナーゼにより架橋され不溶化されることにより形成される（特許文献１）。
また、近年では、表皮の細胞同士が接着することが皮膚構造保持に重要であることが明らかにされてきている。細胞の接着の態様には様々あるが、その一つに接着帯が知られ、その機能を担う接着分子としてカドヘリンがある。細胞膜上に発現しているカドヘリンは、カルシウム濃度依存的に別の細胞に発現している同種のカドヘリンと結合することで、細胞間接着を行う。カドヘリンはファミリーとして約２０種が知られているが、表皮に存在するカドヘリン種はＥ−カドヘリンである。Ｅ−カドヘリンは、皮膚表皮の構造保持に重要な役割を示すことから、正常な表皮機能に重要であると考えられる。
したがって、角化過程及び細胞間接着に関与しているこれらの蛋白や酵素の産生を促進することにより、正常な角層形成を促し、その結果、毛穴の目立ちが軽減されることが期待できる。
【０００４】
一方、皮膚外用剤は皮膚に直接塗布されることから、有効成分として用いられる薬効剤には高い安全性が求められる。そのため、従来、種々の植物抽出物について、その薬効が検討されている。例えば、バンレイシ科植物由来の抽出物を含んでなる頭部用組成物、及びバンレイシ科植物の水蒸気蒸留水を含有する化粧料組成物が提案されているが（特許文献２及び３）、上記角化過程や細胞間接着に関与する蛋白等に対する作用については、従来知られていない。
【特許文献１】特開２００５−２１３１８７号公報
【特許文献２】特開平６−４０８６１号公報
【特許文献３】特開２００１−２２０３１２号公報
【非特許文献１】フレグランスジャーナル、２００４年３月号  ４１〜４７頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、正常な角層形成に関与するインボルクリン、トランスグルタミナーゼ−１、及びＥ−カドヘリンの産生促進剤を提供すること、及び正常な角層形成を促進することによって、毛穴の目立ちを軽減する皮膚外用剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、前記課題を解決するため種々検討した結果、バンレイシ種子の抽出物には、正常な角層形成に関与するインボルクリン、トランスグルタミナーゼ−１、及びＥ−カドヘリンに対して、優れた産生促進作用を示すこと、及び皮膚外用剤に配合しても、それらの蛋白等に対する産生促進作用が有効に発揮されることを見出し、この知見に基づいて、さらに検討を重ね、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、前記課題を解決するため、バンレイシ（Annona squamosa）の種子の抽出物を有効成分とするインボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、及びＥ−カドヘリン産生促進剤を提供する。
また、別の観点から、本発明によって、バンレイシ種子の抽出物を有効成分として含有する毛穴目立ち軽減用皮膚外用剤；及びバンレイシ種子の抽出物を有効成分として含有する角層正常化用皮膚外用剤；が提供される。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、安全性が良好な、インボルクリン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、及びＥ−カドヘリン産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によれば、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ−１、及びＥ−カドヘリンの産生を促進することにより、正常な角層形成を亢進し、その結果、毛穴の目立ちを軽減可能な新規な皮膚外用剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明について詳細に説明する。なお、本明細書において、「〜」はその前後の数値を含む範囲を意味するものとする。
本発明は、バンレイシ（Annona squamosa）の種子の抽出物を有効成分とする、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ−１及びＥ−カドヘリンの産生促進剤に関する。バンレイシは、バンレイシ科バンレイシ属植物の１種であり、熱帯アメリカ等に分布する半落葉性の低木又は小高木である。果実は食用にされている。本発明に用いる抽出物は、バンレイシの果実中の種子の抽出物である。
【０００９】
本発明に用いられるバンレイシ種子の抽出物は、一般的な方法で調製することができる。抽出溶媒としては特に限定されないが、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級一価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン等のケトン類；エチルエーテル等のエーテル類；酢酸エチル等のエステル類；等の一種又は二種以上を用いることができる。水、又は水と低級アルコールとの混合液を用いるのが好ましい。抽出は、バンレイシの種子を、室温又は加温下で溶媒中に所定の時間浸漬することによって実施できる。また、抽出前に、種子に対して、乾燥、細切、圧搾又は醗酵等の前処理を行うこともできる。
【００１０】
前記バンレイシ種子の抽出物は、調製後、そのまま前記種々の薬効剤として用いることができる。また、所望により、適宜の期間そのまま放置し熟成させた後に、前記薬効剤として用いることもできる。必要ならば、本発明の効果に影響のない範囲で、更に、濾過又はイオン交換樹脂等により、脱臭、脱色等の精製処理を施して用いることもできる。又、液体クロマトグラフィー等の分離手段を用い、活性の高い画分を取り出して用いることもできる。
前記バンレイシ種子の抽出物として、市販品を利用してもよく、例えば、「SMS ANTI-WRINKLE(SILAB社製)」を利用することができる。
【００１１】
前記バンレイシ種子の抽出物は、液状、ペースト状、ゲル状等いずれの形態であってもよい。抽出溶媒を含む液状の抽出物を、減圧乾燥、又は凍結乾燥などにより乾固させて固体状とした後に用いることもできる。また、スプレードライ等により乾燥させて粉末として用いることもできる。
【００１２】
バンレイシ種子の抽出物は、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ−１、及びＥ−カドヘリンの産生を促進する作用を有する。上記した通り、インボルクリン及びトランスグルタミナーゼ−１は、表皮細胞が角化し、角層細胞になる過程に関与する蛋白・酵素であり、また、Ｅ−カドヘリンは、細胞接着に関与し、特に皮膚表皮の構造保持に重要な役割を示す接着分子である。バンレイシ種子の抽出物は、これら全てに対して産生促進作用を有するので、肌に適用することにより、正常な角層形成を促し、その結果、角層細胞の不全角化に起因する毛穴の目立ちを軽減できる。
【００１３】
本発明は、バンレイシ種子の抽出物を有効成分として含有する毛穴目立ち軽減用皮膚外用剤にも関する。本発明の皮膚外用剤中のバンレイシ種子の抽出物の含有量は、固形分として、好ましくは０．０００１〜２０質量％（以下単に「％」で示す）であり、より好ましくは０．００１〜１０％である。この範囲内であれば、前記抽出物を安定に配合することができ、且つ毛穴の目立ちに対して高い軽減効果を発揮することができる。
【００１４】
本発明の皮膚外用剤は、前記バンレイシ種子の抽出物を常法に従い、種々の形態の基剤に配合して製剤化することにより調製できる。更に、前記抽出物を他の薬効剤の一種又は二種以上と組み合わせて配合することによって、その薬効をより高めた、もしくはその薬効とともに他の薬効も奏する皮膚外用剤を調製することができる。他の薬効剤の例には、美白剤、紫外線防御剤、抗菌剤、殺菌剤、皮脂分泌調整剤、抗炎症剤、細胞賦活剤、活性酸素除去剤、及び保湿剤などが含まれるが、これらに限定されることはない。
【００１５】
美白剤の例には、アスコルビン酸又はその誘導体、アルブチン、エラグ酸、リノール酸、ビタミンＥ及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体、トラネキサム酸、胎盤抽出物、カミツレ抽出物、海藻抽出物、ケイケットウ抽出物、ゴカヒ抽出物、コメヌカ抽出物、小麦胚芽抽出物、サイシン抽出物、サンザシ抽出物、サンペンズ抽出物、シラユリ抽出物、シャクヤク抽出物、センプクカ抽出物、大豆抽出物、茶抽出物、糖蜜抽出物、ビャクレン抽出物、ブドウ抽出物、マイカイカ抽出物、モッカ抽出物、ユキノシタ抽出物等が含まれる。
【００１６】
紫外線防御剤としては、例えば、パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−硫酸ナトリウム、４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン、２
−フェニル−ベンズイミダゾール−５−硫酸、酸化チタン、酸化亜鉛等が挙げられる。
【００１７】
抗菌剤としては、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、フェノキシエタノール、等が挙げられる。
【００１８】
殺菌剤としては、例えば、サリチル酸、塩化ベンザルコニウム、イソプロピルメチルフェノール、ヒノキチオール、イオウ及びその誘導体、ユーカリ抽出物、チョウジ抽出物、ドクダミ抽出物等が挙げられる。
【００１９】
皮脂分泌調整剤としては、例えば、シモツケソウ抽出物、カンゾウ抽出物、エイジツ抽出物、オウゴン抽出物、オウバク抽出物、クジン抽出物、ホップ抽出物、クレソン抽出物、ピリドキシン及びその誘導体、オウレン抽出物、タチジャコウソウ抽出物、セイヨウハッカ抽出物、ヨモギ抽出物等が挙げられる。
【００２０】
抗炎症剤としては、例えば、グリチルリチン酸及びその誘導体、グリチルレチン酸及びその誘導体、アルテア抽出物、アシタバ抽出物、アルニカ抽出物、インチンコウ抽出物、イラクサ抽出物、オウバク抽出物、オトギリソウ抽出物、カミツレ抽出物、キンギンカ抽出物、コンフリー抽出物、サルビア抽出物、シコン抽出物、シソ抽出物、シラカバ抽出物、ゲンチアナ抽出物等が挙げられる。
【００２１】
細胞賦活剤の例には、カフェイン、鶏冠抽出物、貝殻抽出物、貝肉抽出物、ローヤルゼリー、シルクプロテイン及びその分解物又はそれらの誘導体、ラクトフェリン又はその分解物、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸等のムコ多糖類またはそれらの塩、コラーゲン、酵母抽出物、乳酸菌抽出物、ビフィズス菌抽出物、醗酵代謝抽出物、イチョウ抽出物、オオムギ抽出物、センブリ抽出物、タイソウ抽出物、ニンジン抽出物、ローズマリー抽出物、グリコール酸、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸等が含まれる。
【００２２】
活性酸素除去剤は、過酸化脂質生成抑制等の作用を有しており、例えば、スーパーオキサイドディスムターゼ、マンニトール、クエルセチン、カテキン及びその誘導体、ルチン及びその誘導体、ボタンピ抽出物、ヤシャジツ抽出物、メリッサ抽出物、羅漢果抽出物、レチノール及びその誘導体、カロチノイド等のビタミンＡ類、チアミンおよびその誘導体、リボフラビンおよびその誘導体、ニコチン酸およびその誘導体等のビタミンＢ類、トコフェロール及びその誘導体等のビタミンＥ類、ジブチルヒドロキシトルエン及びブチルヒドロキシアニソール等が挙げられる。
【００２３】
保湿剤としては、例えば、エラスチン、ケラチン等のタンパク質またはそれらの誘導体、加水分解物並びにそれらの塩、グリシン、セリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、テアニン等のアミノ酸及びそれらの誘導体、ソルビトール、エリスリトール、トレハロース、イノシトール、グルコース、蔗糖およびその誘導体、デキストリン及びその誘導体、ハチミツ等の糖類、Ｄ−パンテノール及びその誘導体、尿素、リン脂質、セラミド、ショウブ抽出物、ジオウ抽出物、センキュウ抽出物、ゼニアオイ抽出物、ドクダミ抽出物、ハマメリス抽出物、ボダイジュ抽出物、マロニエ抽出物、マルメロ抽出物等が挙げられる。
【００２４】
また、本発明の皮膚外用剤には、本発明の薬効剤以外の任意の成分を配合することができる。そのような成分としては、例えば、アミノ酸、脂質、糖、ホルモン、酵素、核酸などの生理活性物質等を挙げることができるが、これらに限定されることはない。また、本発明の効果を損なわない範囲で、化粧料や医薬部外品、皮膚外用剤等の製造に通常使用される成分、例えば、水（精製水、温泉水、深層水等）、油剤、界面活性剤、金属セッケン、ゲル化剤、粉体、アルコール類、水溶性高分子、皮膜形成剤、樹脂、包接化合物、香料、消臭剤、塩類、ｐＨ調整剤、清涼剤、植物・動物・微生物由来の抽出物、血行促進剤、収斂剤、抗脂漏剤、キレート剤、角質溶解剤、酵素、ホルモン類、他のビタミン類等を必要に応じて用いることができる。
【００２５】
本発明の皮膚外用剤は、パウダー、パウダーファンデーション等の粉体；石けん、リップスティック等の固体；クリーム、乳液、クリームファンデーション等の乳化物；化粧水、美容液等の液体；など、種々の形態の化粧料組成物であるのが好ましい。但し、これらに限定されるものではない。
【実施例】
【００２６】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
［例１：バンレイシ種子の抽出液の調製］
バンレイシ種子１００ｇを粉砕した後、精製水１．８Ｌを加え、室温にて７日間抽出を行った後、ろ過してバンレイシ種子抽出液１．２Ｌを得た（抽出液中の乾燥固形分４．０％）。
【００２７】
［例２：インボルクリン及びトランスグルタミナーゼ−１の産生促進作用試験］
ヒト由来ケラチノサイトを播種し、５％ＣＯ2インキュベーターに静置した。３日後に、例１で調製したバンレイシ種子抽出液を０．５（ｖ／ｖ）％の濃度で添加し、再びインキュベーターに静置した。３日後に細胞を回収し、ＲＮＡを抽出した。ＲＮＡ定量ＰＣＲにより、インボルクリン及びトランスグルタミナーゼ−１のｍＲＮＡ量を求めた。下記表に結果を示す。なお、下記表中には、バンレイシ種子抽出液無添加サンプル群のインボルクリン及びトランスグルタミナーゼ−１の産生量を１００％とし、それに対する割合として示した。
【００２８】
［例３：Ｅ−カドヘリンの産生促進作用試験］
ヒト由来ケラチノサイト１×１０6個を１０ｃｍシャーレに播種し、５％ＣＯ2インキュベーターに静置した。３日後に、例１で調製したバンレイシ種子の抽出液を０．５（ｖ／ｖ）％の濃度で添加し、再びインキュベーターに静置した。３日後に細胞を回収し、蛋白粗抽出物を得た。この得られた蛋白粗抽出物を、８％ポリアクリルアミドゲルに供給し、電気泳動を行った後、ウエスタンブロッティングにより検出されたバンドからＥ−カドヘリン蛋白産生量を求めた。下記表に結果を示す。なお、下記表中には、バンレイシ種子抽出液無添加サンプル群のＥ−カドヘリンの産生量を１００％とし、それに対する割合として示した。
【００２９】
【表１】
2009242310.tif 000002
【００３０】
上記表に示す結果から、バンレイシ種子の抽出物は、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ−１、及びＥ−カドヘリンに対して、高い産生促進作用があることが理解できる。従って、バンレイシ種子の抽出物は、皮膚に適用することにより、これらの蛋白等の産生を促進し、正常な角層形成に寄与することが期待できる。
【００３１】
［例４：毛穴目立ち軽減作用の評価］
（化粧水の調製）
以下の組成の化粧水を、以下の方法により調製した。
（処方）                                                          （％）
（１）グリセリン                                                  ５．０
（２）１，３−ブチレングリコール                                  ６．５
（３）ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタンモノラウリン酸エステル              １．２
（４）エチルアルコール                                            ８．０
（５）バンレイシ抽出物*1                                          ４．０
（６）防腐剤                                                        適量
（７）精製水                                                        残量
＊１  例１で調製したもの
【００３２】
（製法）
Ａ．  （３）、（４）及び（６）を混合溶解する。
Ｂ．（１）、（２）、（５）及び（７）を混合溶解する。
Ｃ．ＡとＢを混合して均一にし、化粧水を得た。
【００３３】
また、バンレイシ種子の抽出液を混合しなかった以外は同様にして比較例用化粧水を調製した。
【００３４】
（化粧水の評価）
毛穴の目立ちを気にしているパネル７人に、左右頬部の一方に上記調製したバンレイシ種子の抽出液を配合した化粧水を、他方にバンレイシ種子の抽出液を配合していない比較例用化粧水を、１日に２回、４週間塗布してもらった。左右頬部の毛穴の目立ち具合を以下の４段階の目視評価で判定し、パネル全員の平均を求めた。
（評価基準）
１：毛穴が目立たない
２：毛穴がやや目立つ
３：毛穴が目立つ
４：非常に毛穴が目立つ
(４段階評価に変更致しました)
【００３５】
（評価結果）
バンレイシ種子の抽出液を配合した実施例の化粧水は、平均値は使用前は３．３７５点であり、使用後は２．３７５点であった。一方、比較例の化粧水の平均値は使用前は３．３７５点であり、使用後は３．２５点であった。この結果より、バンレイシ種子の抽出物は、化粧水等の皮膚外用剤に配合されてもその効能を失わず、皮膚に適用されることにより、正常な角層形成に寄与し、実際に毛穴の目立ちを軽減する効果を奏することが理解できる。
【００３６】
［例５：乳液］（処方）                                                  （％）
（１）ポリオキシエチレン（１０Ｅ．Ｏ．）ソルビタンモノステアレート  １．０
（２）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）ソルビットテトラオレエート  ０．５
（３）グリセリルモノステアレート                                    １．０
（４）ステアリン酸                                                  ０．５
（５）ベヘニルアルコール                                            ０．５
（６）スクワラン                                                    ５．０
（７）防腐剤                                                        ０．１
（８）カルボキシビニルポリマー                                      ０．１
（９）水酸化ナトリウム                                              ０．０５
（１０）エチルアルコール                                              ５．０
（１１）精製水                                                          残量
（１２）バンレイシ種子の抽出液＊１                                    １.０
（１３）グリチルリチン酸ジカリウム＊２                                ０.１
（１４）クジン抽出物＊３                                              ０.２
（１５）シモツケソウ抽出物＊４                                        １.０
（１６）香料                                                            適量
＊１  例１で調製したもの
＊２  丸善製薬社製
＊３  丸善製薬社製
＊４  ＳＩＬＡＢ社製
【００３７】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（７）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｂ．成分（９）と（１１）の一部、（１３）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｃ．ＢにＡを加えて混合し、均一に乳化する。
Ｄ．Ｃを冷却後、（１１）の残部に溶かした（１２）、（１４）、（１５）及び（８）、（１０）、（１６）を加え、均一に混合して乳液を得た。
【００３８】
［例６：クリーム］
（処方）                                                                  （％）
（１）ミツロウ                                                        ６．０
（２）セタノール                                                      ５．０
（３）還元ラノリン                                                    ５．０
（４）スクワラン                                                    ３０．０
（５）親油型モノステアリン酸グリセリル                                ４．０
（６）ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．Ｏ）        ２．０
（７）バンレイシ種子の抽出液＊１                                      ０．５
（８）エイジツ抽出物  ＊２                                            ０．５
（９）ホップ抽出物＊３                                                ０．５
（１０）セイヨウハッカ抽出物＊４                                        ０．５
（１１）防腐剤                                                            適量
（１２）香料                                                              適量
（１３）精製水                                                            残量
＊１  参考例１にて調製したもの
＊２  丸善製薬社製
＊３  丸善製薬社製
＊４  丸善製薬社製
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）および（１１）を混合し、加熱して７０℃に保つ。
Ｂ．成分（１３）の一部を加熱して７０℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを加え、（１３）の残部で溶解した（７）〜（１０）及び（１２）を混合した後、冷却してクリームを得た。
【００３９】
［例７：ゲル軟膏］
（処方）                                                      （％）
（１）カルボキシビニルポリマー                              １．０
（２）トリエタノールアミン                                  １．０
（３）１，３ブチレングリコール                            １０．０
（４）バンレイシ種子の抽出液＊１                            ２．０
（５）塩酸ピリドキシン＊２                                  ０．１
（６）ホップ抽出物＊３                                      ０．３
（７）ヨモギ抽出物＊４                                      ０．３
（８）カンゾウ抽出物＊５                                    ０．３
（９）クレソン抽出物＊６                                    ０．３
（１０）精製水                                                残量
＊１  参考例１で製造したもの
＊２  シグマ社製
＊３  丸善製薬社製
＊４  丸善製薬社製
＊５  丸善製薬社製
＊６  丸善製薬社製
【００４０】
（製法）
Ａ．成分（１）及び（３）〜（１０）を混合溶解する。
Ｂ．Ａに成分（２）を加え、混合して均一にし、ゲル軟膏を得た。
【００４１】
例５〜７は、いずれも皮膚に継続的に適用することにより、毛穴の目立ちを軽減する皮膚外用剤であった。