(57)【要約】      （修正有）【課題】Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）分子を介して仲介される免疫刺激を抑制して、免疫機能を改変するための化合物及び方法の提供。【解決手段】式Ｉで示される化合物。2009029780.tif 000021全身性紅斑性狼瘡、インスリン依存性糖尿病、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、強直性脊髄炎、自己免疫溶血性貧血、ベーチェット症候群、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少症、重症筋無力症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発筋炎／皮膚筋炎、原発性胆管硬化症、サルコイドーシス、硬化性胆管炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、及びウェジナー肉芽腫症等の自己免疫疾患に用いられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2009029780.tif 000017
の化合物とその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
請求項１の化合物の治療有効量と医薬的に許容される担体を含んでなる組成物。
【請求項３】
経口投与用に製剤化した、請求項２の組成物。
【請求項４】
式Ｉ：
【化２】
2009029780.tif 000018
の化合物又はその医薬的に許容される塩の有効量を被検者へ投与することを含んでなる、被検者において免疫応答を阻害する方法。
【請求項５】
自己免疫疾患を有する被検者を治療する方法であって、自己免疫疾患を治療するのに有効な量の式Ｉ：
【化３】
2009029780.tif 000019
の化合物又はその医薬的に許容される塩を該被検者へ投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項６】
自己免疫疾患が、全身性紅斑性狼瘡、インスリン依存性糖尿病、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、強直性脊髄炎、自己免疫溶血性貧血、ベーチェット症候群、グッドパスチャー症候群、グレイブス病、ギラン・バレ症候群、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少症、重症筋無力症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発筋炎／皮膚筋炎、原発性胆管硬化症（primary biliary sclerosis）、サルコイドーシス、硬化性胆管炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症（強皮症及びＣＲＥＳＴ症候群）、高安動脈炎、側頭動脈炎、及びウェジナー肉芽腫症より選択される、請求項５の方法。
【請求項７】
自己免疫疾患が全身性紅斑性狼瘡である、請求項５の方法。
【請求項８】
自己免疫疾患が炎症性腸疾患である、請求項５の方法。
【請求項９】
被検者がヒトである、請求項５〜８のいずれか１項の方法。
【請求項１０】
移植拒絶を有するか又は有するリスク状態にある被検者を治療する方法であって、移植拒絶を治療するのに有効な量の式Ｉ：
【化４】
2009029780.tif 000020
の化合物又はその医薬的に許容される塩を該被検者へ投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項１１】
被検者がヒトである、請求項１０の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明は、免疫学の分野に概して関する。より特別には、本発明は、免疫機能を改変するための組成物及び方法に関する。より具体的には、本発明は、ある種のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）分子を介して仲介される免疫刺激を抑制するための組成物及び方法に関する。
【０００２】
背景技術
自然免疫と適応免疫の片方又は両方の刺激が含まれる免疫系の刺激は、宿主にとって保護的な又は有害な生理学的アウトカムのいずれかをもたらす可能性がある複雑な現象である。近年、適応免疫を始動させて支援すると考えられている、自然免疫の根底にある機序への関心が高まっている。この関心は、一部は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）への受容体として自然免疫に関与していると考えられている、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）として知られる高度に保存されたパターン認識受容体タンパク質のファミリーの最近の発見により触発されてきた。故に、自然免疫を変調させるのに有用な組成物及び方法は、自己免疫、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、感染、癌、及び免疫不全が関与する状態への治療アプローチに影響を及ぼす可能性があるので、大変興味深い。
【０００３】
最近、ＣｐＧ核酸と二本鎖ＲＮＡが含まれる、ある種の核酸分子の免疫刺激効果について記載するいくつかの報告がある。注目されるのは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）が細菌ＤＮＡとＣｐＧ  ＤＮＡを認識すると最近報告されたことである。Hemmi H et al. (2000) Nature 408:740-5; Bauer S et al. (2001) Proc Natl Acad Sci U S A 98:9237-42。また、ＩｇＧ及び核酸を含有する免疫複合体がある種の自己免疫疾患においてＴＬＲ９を刺激してＢ細胞活性化に参画することができることも最近報告された。Leadbetter EA et al. (2002) Nature 416: 595-8。
【０００４】
クロロキンは、抗マラリア剤としてだけでなく抗炎症剤としても有用であると認められてきた。その作用機序は十分には理解されていないが、クロロキンは、慢性関節リウマチ（ＲＡ）及び全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）が含まれる様々な自己免疫疾患の治療に有効に使用されている。概説としては、Wallace DJ (1996) Lupus 5 Suppl 1: S59-64 を参照のこと。最近、Macfarlane と共同研究者は、伝えるところでは免疫系の刺激を阻害する、クロロキン（４−アミノキノリン）及びキナクリン（９−アミノアクリジン）の多数の低分子類似体及び誘導体について記載した。米国特許第６，２２１，８８２号；米国特許第６，４７９，５０４；米国特許第６，５２１，６３７号；ＰＣＴ公開公報特許出願ＰＣＴ／ＵＳ００／１６７２３（ＷＯ００／７６９８２）；及びＰＣＴ公開公報特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／１３８２０（ＷＯ９９／０１１５４）。Macfarlane と共同研究者は、免疫応答のこれらの低分子阻害剤が、ナノモル濃度で使用するときでも、免疫刺激性ＤＮＡの作用を妨げることができると報告した。米国特許第６，２２１，８８２  Ｂ１号。Macfarlane と共同作業者は、クロロキン及びキナクリンに関連する、限定数の４−アミノキノリン及び９−アミノアクリジンのコア構造上で置換基を変化させることによって多数の化合物を研究した。
【０００５】
発明の要約
本発明は、ＴＬＲアンタゴニスト、ＴＬＲアンタゴニストが含まれる組成物、及び本発明のＴＬＲアンタゴニスト及び組成物の使用の方法を提供する。本明細書においてＣＰＧ５２３６４と呼ぶ、本発明のＴＬＲアンタゴニストは、式Ｉとして提供される構造式を有する。
【０００６】
１つの側面において、本発明は、式Ｉ：
【０００７】
【化１】
2009029780.tif 000002
【０００８】
の化合物とその医薬的に許容される塩である。式Ｉ中のＭｅＯは、メトキシ基、ＣＨ３Ｏ−を表す。
１つの側面において、本発明は、式Ｉの化合物の治療有効量と医薬的に許容される担体が含まれる組成物である。組成物には、１つの態様において、式Ｉのように示されるＣＰＧ５２３６４の遊離塩基（free base）型が含まれる。組成物には、１つの態様において、ＣＰＧ５２３６４の医薬的に許容される塩が含まれる。１つの態様において、組成物は、経口投与用に製剤化する。
【０００９】
１つの側面において、本発明は、被検者において免疫応答を阻害する方法である。この側面による方法には、式Ｉ：
【００１０】
【化２】
2009029780.tif 000003
【００１１】
の化合物又はその医薬的に許容される塩の有効量を被検者へ投与する工程が含まれる。
１つの側面において、本発明は、自己免疫疾患を有する被検者を治療する方法である。この側面による方法には、自己免疫疾患を治療するのに有効な量の式Ｉ
【００１２】
【化３】
2009029780.tif 000004
【００１３】
の化合物又はその医薬的に許容される塩を被検者へ投与する工程が含まれる。１つの態様において、自己免疫疾患は、全身性紅斑性狼瘡、インスリン依存性糖尿病、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、強直性脊髄炎、自己免疫溶血性貧血、ベーチェット症候群、グッドパスチャー症候群、グレイブス病、ギラン・バレ症候群、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少症、重症筋無力症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発筋炎／皮膚筋炎、原発性胆管硬化症、サルコイドーシス、硬化性胆管炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症（強皮症及びＣＲＥＳＴ症候群）、高安動脈炎、側頭動脈炎、及びウェジナー肉芽腫症より選択される、特別な態様において、自己免疫疾患は、全身性紅斑性狼瘡である。特別な態様において、自己免疫疾患は、炎症性腸疾患である。１つの態様において、被検者は、ヒトである。
【００１４】
１つの側面において、本発明は、移植拒絶を有するか又は有するリスク状態にある被検者を治療する方法である。この側面による方法には、移植拒絶を治療するのに有効な量の式Ｉ：
【００１５】
【化４】
2009029780.tif 000005
【００１６】
の化合物又はその医薬的に許容される塩を被検者へ投与する工程が含まれる。１つの態様において、被検者は、ヒトである。
発明の詳細な説明
本発明は、式Ｉ：
【００１７】
【化５】
2009029780.tif 000006
【００１８】
として提供される構造を有する特別な２−アミノアリール−４−（ω−アミノアルキル）アミノ−キナゾリン化合物、即ち、本明細書においてＣＰＧ５２３６４と呼ぶ２−［４−（４−メチル−１−ピペラジニル）フェニル］−Ｎ−［２−（４−モルホリニル）エチル］−４−（６，７−ジメトキシ−キナゾリンアミン）、ＣＰＧ５２３６４の医薬的に許容される塩、ＣＰＧ５２３６４を含有する組成物、及び治療用免疫抑制剤としてのＣＰＧ５２３６４の使用の方法を提供する。本発明により、ＣＰＧ５２３６４がＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９（ある種類の核酸、特にＣｐＧ  ＤＮＡと一本鎖ＲＮＡを認識するＴＬＲのサブファミリー）を選択的に阻害するＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アンタゴニストであることを発見した。従って、ＣＰＧ５２３６４は、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９の任意の１つ又は組合せによるシグナル伝達を阻害するために使用することができる。これらＴＬＲの任意の１つ又は組合せによるシグナル伝達の阻害は、望まれない免疫活性を抑えることができる。従って、ＣＰＧ５２３６４は、望まれない免疫活性を抑えるために、例えば、望まれない免疫活性を特徴とする状態を有する被検者を治療するために、単独で、又は他の薬剤又は治療モダリティと組み合わせて使用することができる。そのような状態には、限定なしに、炎症、自己免疫疾患、急性及び慢性の移植拒絶、急性及び慢性の移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、アレルギー、喘息、及び敗血症が含まれる。
【００１９】
本発明は、１つの側面において、式Ｉに提供される構造を有する化合物を提供する。１つの態様において、本発明は、式Ｉに提供される構造を有する遊離塩基としてＣＰＧ５２３６４を提供する。ＣＰＧ５２３６４を製造する方法を以下の実施例１に開示する。ＣＰＧ５２３６４は、４９２．６ダルトンの分子量を有して、オフホワイト〜黄褐色の固体の外観を有する。この遊離塩基の水溶液中の溶解性はｐＨに依存して、１．２２と５．９０のｐＨの間で３５０ｍｇ／ｍＬを超える。６．９０より高いｐＨでは、水溶液中の溶解性は１．０ｍｇ／ｍＬ未満である。ＣＰＧ５２３６４は、クロロホルム、塩化メチレン、及びジメチルホルムアミドに溶ける。
【００２０】
１つの態様において、本発明は、ＣＰＧ５２３６４の医薬的に許容される塩を提供する。句「医薬的に許容される塩（複数）」には、本明細書に使用するように、他に示さなければ、本発明の化合物中に存在し得る酸性又は塩基性の基の塩が含まれる。
【００２１】
従って、１つの態様において、ＣＰＧ５２３６４の医薬的に許容される酸付加塩を製造するために使用し得る酸は、無毒の酸付加塩、即ち、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酸クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩［１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート）］のような薬理学的に許容されるアニオンを含有する塩を形成するものである。少なくとも以下の酸付加塩をすでに製造した：塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、及びｐ−トルエンスルホン酸塩。重硫酸塩の製造について、以下の実施例１に記載する。
【００２２】
本発明は、ＣＰＧ５２３６４の塩基付加塩にも関する。ＣＰＧ５２３６４の医薬的に許容される塩基性塩を製造するための試薬として使用し得る化学塩基は、無毒の塩基性塩、即ち、アルカリ金属カチオン（例、カリウム及びナトリウム）とアルカリ土類金属カチオン（例、カルシウム、マグネシウム、及びリチウム）のような薬理学的に許容されるカチオンを含有する塩を形成するものである。
【００２３】
本発明には、式Ｉの化合物のプロドラッグを含有する医薬組成物も含まれる。遊離アミノ又はアミド基を有する式Ｉの化合物は、プロドラッグへ変換することができる。プロドラッグには、アミノ酸残基、又は２以上（例、２、３、又は４）のアミノ酸残基のポリペプチド鎖が式Ｉの化合物の遊離アミノ基へペプチド結合を介して共有結合している化合物が含まれる。アミノ酸残基には、一般的に３文字又は１文字の記号により明記される２０の天然に存在するアミノ酸が含まれて、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、デモシン、イソデモシン、３−メチルヒスチジン、ノルバリン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、シトルリン、ホモシステイン、ホモセリン、オルニチン、及びメチオニンスルホンも含まれる。プロドラッグには、炭酸エステル（carbonates）、カルバミン酸エステル（carbamates）、アミド、及びアルキルエステルが式Ｉの上記置換基へカルボニル炭素プロドラッグ側鎖を介して共有結合している化合物も含まれる。
【００２４】
本発明は、ＣＰＧ５２３６４のプロドラッグの医薬的に許容される塩をさらに意図する。
本発明はまた、ＣＰＧ５２３６４の医薬的に許容される塩の水和物、ＣＰＧ５２３６４のプロドラッグの水和物、及びＣＰＧ５２３６４のプロドラッグの医薬的に許容される塩の水和物を意図する。様々な個別の態様において、水和物には、ＣＰＧ５２３６４塩又はＣＰＧ５２３６４プロドラッグの分子につき様々な整数又は整数＋１／２の数の水分子（例えば、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、又は６の水分子）を含めてよい。
【００２５】
本発明には、保護基を含有する式Ｉの化合物も含まれる。当業者はまた、本発明の化合物が精製又は保存に有用であり、患者への投与前に外すことができるある種の保護基とともに製造することもできることを理解されよう。官能基の保護及び脱保護については、J. W. F. McOmie 監修「有機化学の保護基（Protective Groups in Organic Chemistry）」プレナムプレス（1973）と「有機合成の保護基（Protective Groups in Organic Synthesis）」第３版、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, ウィリー・インターサイエンス（1999）に記載されている。
【００２６】
本発明の化合物、塩、及びプロドラッグは、エノール及びイミン型、ケト及びエナミン型、並びにこれらの幾何異性体及び混合物が含まれる、いくつかの互変異性型で存在することができる。そのようなすべての互変異性型が本発明の範囲内に含まれる。互変異性体は、溶液中の互変異性セットの混合物として存在する。固体形態では、通常１つの互変異性型が優勢である。１つの互変異性体について記載される場合であっても、本発明には、化合物のすべての互変異性体が含まれる。
【００２７】
本発明には、本発明のアトロプ異性体も含まれる。アトロプ異性体は、回転的に束縛される異性体へ分離することができる式Ｉの化合物に関連する。
本発明には、天然において通常見出される原子量又は質量数と異なる原子量又は質量数を有する原子に１以上の原子が置き換わっていること以外は式Ｉに引用される化合物と同一である、同位体標識化合物も含まれる。本発明の化合物へ取り込むことができる同位体の例には、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、及び１７Ｏのような、それぞれ水素、炭素、窒素、及び酸素の同位体が含まれる。上記の同位体及び／又は他の原子の他の同位体を含有する、本発明の化合物、そのプロドラッグ、及び前記化合物又は前記プロドラッグの医薬的に許容される塩は、本発明の範囲内にある。本発明のある種の同位体標識化合物、例えば、３Ｈや１４Ｃのような放射活性同位体が取り込まれているものは、薬物及び／又は基質の組織分布アッセイに有用である。トリチウム化、即ち３Ｈと炭素−１４、即ち１４Ｃは、その製造の容易さと検出可能性のために特に好ましい。さらに、重水素、即ち２Ｈのようなより重い同位体での置換は、より大きな代謝安定性より生じるある種の治療上の利点（例えば、in vivo 半減期の増加、又は投与必要量の低下）を提供し得るので、ある状況では好ましい場合がある。本発明の同位体標識された式Ｉの化合物とそのプロドラッグは、一般に、以下の実施例に開示する手順を行なうことによって、非同位体標識試薬を容易に利用可能な同位体標識試薬に置き換えることによって製造することができる。
【００２８】
本発明は、１つの側面において、遊離塩基として、又はその医薬的に許容される塩としてのいずれかのＣＰＧ５２３６４の治療有効量と医薬的に許容される担体が含まれる組成物を提供する。本発明の組成物には、少なくとも１つの追加の治療薬剤をさらに含めてもよい。１つの態様において、追加の治療薬剤は、別のＴＬＲアンタゴニストである。
【００２９】
本発明は、医薬組成物を作製する方法をさらに提供する。この方法には、遊離塩基として、又はその医薬的に許容される塩としてのいずれかのＣＰＧ５２３６４の治療有効量を医薬的に許容される担体に入れる工程が含まれる。
【００３０】
本明細書に使用するように、「有効量」は、望まれる生物学的効果を実現するのに必要であるか又は十分であるあらゆる量を意味する。いくつかの事例において、有効量は、治療有効量である。「治療有効量」は、被検者において望まれる生物学的効果を実現するのに必要であるか又は十分であるあらゆる量を意味する。１つの態様において、有効量は、自己免疫疾患を治療するのに十分な量である。本明細書に提供する教示と合わせて、様々な活性化合物と、力価、相対バイオアベイラビリティ、患者の体重、有害な副作用の重症度、及び好ましい投与形式のような重大因子を選択することによって、実質的な毒性を引き起こさないが、特別な被検者を治療するには有効である、有効な予防又は療法の治療方式を設計することができる。どの特別な適用への有効量も、治療される疾患又は状態、投与される特別な薬剤、被検者のサイズ、疾患又は状態の重症度のような因子に依存して変動する可能性がある。当業者は、過度の実験を必要とすることなく、特別な薬剤の有効量を経験的に決定することができる。化合物の適正な全身レベルを達成するには、１日頻回の用量を考慮してよい。適正な全身レベルは、例えば、化合物の患者のピーク又は持続血漿レベルの測定によって決定することができる。
【００３１】
本明細書に使用するように、「医薬的に許容される担体」は、ヒトや他の脊椎動物への投与に適している、１以上の適合可能な固体又は液体の充填剤、希釈剤、又は被包化物質を意味する。用語「担体」は、有効成分と組み合わせて適用を促進させる、有機又は無機の天然又は合成成分を意味する。医薬組成物の成分はまた、望まれる医薬品の効率を実質的に損なう相互作用がないようなやり方で、本発明の化合物と、そして互いに混じり合うことが可能である。本発明には、経口及び非経口の投与に適したものが含まれる、様々な製剤が考慮される。本発明により考慮されるこれらの製剤と他の製剤については以下により詳しく記載する。
【００３２】
上記に述べたように、ＣＰＧ５２３６４は、ある種のＴＬＲのアンタゴニストである。哺乳動物のＴＬＲは、インターロイキン（ＩＬ）−１及びＩＬ−１８の受容体に相同である細胞内ドメインを有する、最初はショウジョウバエで発見された、高度に保存された膜貫通タンパク質のファミリーのオーソログである（Krieg AM. (2002) Ann Rev Immunol. 20: 709-760; Takeda K et al. (2005) Int Immunol. 17(1): 1-14）。哺乳動物において、ＴＬＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識するパターン認識受容体であり、自然免疫における重要なシグナル伝達要素として作用する。１１種の哺乳動物ＴＬＲが同定されていて、このうち１０種（ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０）だけがヒトにおいて活性があり、９種（ＴＬＲ１〜ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、及びＴＬＲ１１）だけがマウスにおいて活性がある。これらを非機能的にするのは、マウスＴｌｒ１０遺伝子とヒトＴｌｒ１１遺伝子にある停止コドンである（Takeda K et al. (2005) Int Immunol. 17(1): 1-14）。ＴＬＲのサブセットは、自然免疫系において異なる役割を担う。
【００３３】
ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ５、及びＴＬＲ６は、細胞表面で発現されて核酸以外の微生物構造の成分を認識する。対照的に、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９は、細胞内コンパートメントに位置していて、ウイルス又は細菌由来の核酸を認識する：ＴＬＲ３によるｄｓＲＮＡ、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８によるｓｓＲＮＡ（但し、マウスでは、ＴＬＲ８は非機能性であるらしい［Hemmi H et al. (2002) Nature Immunol. 3(2):196-200; Jurk M et al. (2002) Nature Immunol. 3(6):499])、ＴＬＲ９による非メチル化ＣｐＧモチーフ（Heil F et al. (2004) Science 303(5663):1526-1529; Means TK et al. (2005) Ann NY Acad Sci. 1062:242-251; Subramanian S et al. (2006) Proc Natl Acad Sci USA. 103(26):9970-9975）。齧歯動物においては発現されていないＴＬＲ１０の天然リガンドは、知られていない（Hasan U et al. (2005) J. Immunol. 174(5):2942-2950）。ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、又はＴＬＲ９（このいずれもエンドソームに位置する）への核酸の結合後、細胞内シグナル伝達は、活性化ＩＬ−１受容体に類似して、細胞内アダプターとシグナル伝達分子の動員に依存する（Hemmi H et al. (2002) Nature Immunol. 3(2):196-200; Leadbetter EA et al. (2002) Nature. 416(6881):603-607）。
【００３４】
ＴＬＲ７とＴＬＲ８はまた、イミダゾキノリン化合物、Ｒ−８３７（イミキモド；ＡｌｄａｒａＴＭ（３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ミネソタ州セントポール）；１−イソブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）及びＲ−８４８（レジキモド；４−アミノ−□，□−ジメチル−２−エトキシメチル−ｌＨ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール）、並びに、ある種の置換イミダゾキノリンアミンが含まれるイミダゾキノリン化合物の様々な誘導体が含まれる、ある種の合成低分子へ応答してシグナル伝達する。例えば、Hemmi H et al. (2002) Nature Immunol. 3(2):196-200; Jurk M et al. (2002) Nature Immunol. 3(6):499; 米国特許第６，３３１，５３９号を参照のこと。
【００３５】
ＴＬＲ９は、ＣｐＧ  ＤＮＡへ応答してシグナル伝達する。本明細書に使用するように、用語「ＣｐＧ  ＤＮＡ」は、シトシン−グアニン（ＣＧ）ジヌクレオチド（このＣ残基は、非メチル化である）を含有する免疫刺激性のデオキシリボ核酸を意味する。免疫刺激性の核酸は、全体が非メチル化であっても、一部が非メチル化でもよいが、５’−ＣＧ−３’の少なくともＣは、非メチル化でなければならない。ＣｐＧ  ＤＮＡの例と免疫変調に対するＣｐＧ核酸の効果については、米国特許第６，１９４，３８８；６，２０７，６４６；６，２３９，１１６；及び６，２１８，３７１号のような米国特許と、ＷＯ９８／３７９１９、ＷＯ９８／４０１００、ＷＯ９８／５２５８１、及びＷＯ９９／５６７５５のような公開中の国際特許出願に詳しく記載されている。
【００３６】
ＣｐＧ  ＤＮＡには、細菌ＤＮＡ及びプラスミドに見出されるような天然に存在する免疫刺激性の核酸だけでなく、合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）も含まれる。
１つの態様において、ＣｐＧ  ＤＮＡは、ＣｐＧ  ＯＤＮである。１つの態様において、ＣｐＧ  ＯＤＮは、５’−ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ−３’（ＯＤＮ２００６；配列番号１）により提供される塩基配列を有する。
【００３７】
１つの側面において、本発明は、被検者において免疫応答を阻害する方法を提供する。この方法には、式Ｉの化合物又はその医薬的に許容される塩の有効量を被検者へ投与する工程が含まれる。
【００３８】
本明細書に使用するように、「被検者」は、生きている哺乳動物を意味する。様々な非限定的な個別の態様において、被検者は、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ウシ、又は非ヒト霊長動物である。１つの態様において、被検者は、ヒトである。
【００３９】
１つの態様において、免疫応答は、抗原特異的な免疫応答である。この種類の免疫応答は、適応免疫応答としても知られている。抗原特異的な免疫応答は、特別な抗原との接触に応答して活性化されるＴリンパ球又はＢリンパ球が関与する免疫応答である。抗原特異的な免疫応答は、特別な抗原への記憶の発達を特徴とする場合があるので、抗原特異的な免疫応答には、一次と想起（recall）の抗原特異的な免疫応答がともに含まれる。この態様での免疫応答は、細胞性免疫応答、体液性免疫応答、又は細胞性免疫応答と体液性応答の組合せであり得る。抗原特異的な免疫応答には、ある種のサイトカイン、ケモカイン、及び抗体の合成（elaboration）が含まれる場合がある。抗原特異的な免疫応答に関連するサイトカインには、限定なしに、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、及びインターロイキン−５（ＩＬ−５）が含まれる。インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）は、抗原特異的な免疫応答と抗原非特異的な免疫応答のいずれにも関連するサイトカインである。抗原特異的な免疫応答に関連するケモカインには、限定なしに、インターフェロン−γ−誘導性タンパク質−１０（ＩＰ−１０）が含まれる。抗体には、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及びＩｇＤが含まれる、様々なクラス及びアイソタイプの抗体が含まれる。
【００４０】
１つの態様において、免疫応答は、抗原非特異的な免疫応答である。この種の免疫応答自然免疫応答としても知られている。抗原非特異的な免疫応答は、危険又は非自己をシグナル伝達するある種の分子パターンとの接触に応答して、ある特別な抗原への特異性を伴わずに、そして記憶の発達を伴わずに活性化される食細胞（マクロファージ及び好中球）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が関与する免疫応答である。１つの態様において、抗原非特異的な免疫応答は、炎症応答である。抗原非特異的な免疫応答には、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のようなある種のサイトカイン及びケモカインの合成が含まれる場合があるが、抗体は含まれない。抗原非特異的な免疫応答に関連するケモカインには、限定なしに、インターロイキン−８（ＩＬ−８）が含まれる。
【００４１】
免疫応答を阻害することは、免疫応答の少なくとも１つの測定可能な側面を抑制することを意味する。この阻害は、例えば、特別なサイトカイン又はケモカインに特異的な酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）、免疫細胞活性化を示す細胞表面マーカーを定量するフローサイトメトリー、混合リンパ球反応、及び細胞溶解アッセイが含まれる、どの好適な技術を使用して測定してもよい。上記の方法は当業者によく知られていて、上記の方法の実施に使用する試薬は、一般に、市販の供給元より容易に入手可能である。免疫応答は、免疫応答の少なくとも１つの測定可能な側面が同様の条件下で測定される対照の免疫応答に比較して少なくとも５パーセント抑制されるならば、阻害されたとみなされる。様々な態様において、阻害は、同様の条件下で測定される対照の免疫応答の少なくとも：５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５、又は９９パーセント抑制に対応する。
【００４２】
形質細胞様樹状細胞とＢ細胞は、ＴＬＲ７及びＴＬＲ９を発現して、微生物の核酸への免疫学的応答を始動させる用意ができている。これら受容体の細胞内位置とその好ましいリガンドのレパートリーは、これらの細胞中のＴＬＲ受容体が微生物の核酸への自然応答に関与している可能性があることを示唆するが、間接的な証拠は、これらの同じ受容体が、ＳＬＥが含まれる自己免疫疾患を特徴づける、自己抗原への異常な応答を始動させることに役立つ場合があることを示唆する。
【００４３】
以下の実施例に開示するように、ＣＰＧ５２３６４は、１０ｎＭ未満の濃度で、ＴＬＲ９又はＴＬＲ８発現ベクターでトランスフェクトされたヒト細胞において in vitro でＴＬＲシグナル伝達に有効に拮抗することが示された。ＣＰＧ５２３６４は、ＴＬＲ９シグナル伝達の阻害剤としては、ヒドロキシクロロキンより１オーダー強の大きさでより強力であり、ＴＬＲ８シグナル伝達の阻害剤としては、ヒドロキシクロロキンよりほぼ２オーダーの大きさでより強力であることが見出された。
【００４４】
また、以下の実施例に開示するように、ＣＰＧ５２３６４は、ナノモル濃度で、ヒト末梢血単核細胞において in vitro でＴＬＲシグナル伝達に有効に拮抗することが示された。結果は、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９で同様であった。
【００４５】
in vitro で実証された効果に加えて、以下の実施例はまた、ＣＰＧ５２３６４がＴＬＲ９刺激ケモカイン産生を in vivo で有効に阻害することを示す。マウスでは、例えば、１ｍｇ／ｋｇ（体重）未満の経口用量がＴＬＲ９刺激ＩＰ−１０産生の５０パーセント減少をもたらすことが見出された。このことは、この系では、クロロキンより３７倍強の効力とヒドロキシクロロキンより２００倍強の効力を表す。
【００４６】
重要にも、以下の実施例５は、狼瘡のマウスモデルにおいてＣＰＧ５２３６４が抗ｄｓＤＮＡ力価を有効に抑制することを示す。抗ｄｓＤＮＡ力価については、全身性紅斑性狼瘡（臨床疾患の再発及び寛解のパターンを伴う自己免疫疾患）の臨床重症度だけでなく臨床活性のマーカーとして役立つと文献に記載されてきた。自発性狼瘡を発症するＭＲＬｌ  ｐｒ／ｌｐｒマウスをＣＰＧ５２３６４又は陰性対照（リン酸緩衝化生理食塩水、ＰＢＳ）で１２週間処置してから、抗ｄｓＤＮＡ抗体力価を評価した。ＣＰＧ５２３６４で処置したマウスは、ＰＢＳで処置したマウスの対応する力価の約１／４〜１／３にすぎない力価を有した。
【００４７】
１つの側面において、本発明は、自己免疫疾患を有する被検者を治療する方法を提供する。一般に、本明細書に使用する用語「治療する」は、望ましい薬理学及び／又は生理学上の効果を得ることを意味する。この効果は、特別な状態又は疾患、又はその徴候又は症状を完全又は部分的に予防することの意味で予防的であり得る、及び／又は、状態又は疾患、及び／又はその状態又は疾患に起因し得る有害効果への部分的又は完全な治癒の意味で療法的であり得る。本明細書に使用する「治療する」には、哺乳動物のような非ヒト、又はより特別にはヒトにおける状態又は疾患のあらゆる治療（例えば、完全又は部分的な）又はその予防が含まれて、（ａ）状態又は疾患を発症するリスク状態にあるか又はそれを有する素因があり得るが、まだそれを有すると診断されてはいない被検者においてその状態又は疾患が起こることを防ぐこと；（ｂ）その状態又は疾患を阻害すること、即ちその進展を阻止すること；又は（ｃ）その状態又は疾患を緩和するか又は改善すること、即ち、その状態又は疾患の退縮を引き起こすことが含まれる。
【００４８】
１つの態様において、用語「治療する」は、疾患又は状態を有する被検者において、その疾患又は状態の少なくとも１つの客観的な顕示（manifestations）を抑制することを意味する。１つの態様において、「治療する」は、疾患又は状態を有する被検者においてその疾患又は状態を消失させることを意味する。
【００４９】
１つの態様において、用語「治療する」は、疾患又は状態を発症するリスク状態にある被検者においてその疾患又は状態が発症することを防ぐことを意味する。被検者は、疾患又は状態を発症する遺伝的素因のためにその疾患又は状態を有するリスク状態にあり得る。あるいは、又は追加的に、被検者は、疾患又は状態を発症することに関連する作用体への被検者の確認又は予測される曝露、又はそれと被検者の接触により疾患又は状態を有するリスク状態にあり得る。
【００５０】
本明細書に使用するように、「疾患又は状態を有する被検者」は、その疾患又は状態の少なくとも１つの客観的な顕示を有する被検者を意味する。例えば、自己免疫疾患を有する被検者は、自己免疫疾患の少なくとも１つの客観的な顕示を有する被検者を意味する。
【００５１】
本明細書に使用するように、「疾患又は状態を有するリスク状態にある被検者」は、その疾患又は状態の少なくとも１つの客観的な顕示を伴わないが、それでもやはり、その疾患又は状態を保有又は発症するリスク状態にある被検者を意味する。例えば、移植拒絶を有するリスク状態にある被検者は、移植拒絶の少なくとも１つの客観的な顕示を伴わないが、それでもやはり移植拒絶を発症するリスク状態にある被検者を意味する。そのような被検者は、１つの態様において、組織又は臓器の移植を受けることが予期されている被検者である。別の態様において、そのような被検者は、組織又は臓器の移植をすでに受けた被検者である。
【００５２】
本明細書に使用するように、「自己免疫疾患」は、宿主起源の組織又は臓器への免疫学的に仲介される急性又は慢性の損傷を意味する。この用語には、細胞性と抗体仲介性の両方の自己免疫現象、並びに臓器特異的及び臓器非特異的な自己免疫が含まれる。自己免疫疾患には、具体的に、限定なしに、全身性紅斑性狼瘡（単に狼瘡としても知られている；本明細書では、ＳＬＥとも呼ぶ）、インスリン依存性糖尿病、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、強直性脊髄炎、自己免疫溶血性貧血、ベーチェット症候群、グッドパスチャー症候群、グレイブス病、ギラン・バレ症候群、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少症、重症筋無力症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発筋炎／皮膚筋炎、原発性胆管硬化症、サルコイドーシス、硬化性胆管炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症（強皮症及びＣＲＥＳＴ症候群）、高安動脈炎、側頭動脈炎、及びウェジナー肉芽腫症が含まれる。炎症性腸疾患には、具体的に、クローン病と潰瘍性大腸炎が含まれる。自己免疫疾患には、ある種の免疫複合体関連疾患も含まれる。
【００５３】
１つの態様において、本発明は、ＳＬＥを有する被検者を治療する方法を提供する。全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）は、不均質な臨床提示を伴う、複雑、多因子性で、寛解しては再発する、慢性の自己免疫疾患である。ＳＬＥの顕示を伴うＳＬＥ患者は、若年（２歳ほどの若さ）又は高齢（８０歳以上）であり得るが、ＳＬＥに最もよく罹患するのは、出産年齢の女性である。この年齢範囲では、女性対男性の比がほぼ１２：１〜１０：１と推定されている（Danchenko N et al. (2006) Lupus. 15(5):308-315; Manson JJ et al. (2006) Orphanet J Rare Dis. 1(1):6）。ＳＬＥの正確な全体の発症率又は罹患率は、方法、患者の民族性、及び人口統計の違いとともに、この疾患の原因病理発生（etiopathogenesis）の複雑性［この疾患は、遺伝的特質と、日光、ホルモンの影響、薬物、及び感染症（特に、エプスタイン・バーウイルスでの感染症）といった環境の引き金により影響される］により、得ることが困難である（Manson JJ et al. (2006) Orphanet J Rare Dis. 1(1):6）。それでも、ＳＬＥの発症率（年間１００，０００人あたり）の推定値は、白人男性で０．３〜０．９；アフリカ系アメリカ人男性で０．７〜２．５；白人女性で２．５〜３．９；そしてアフリカ系アメリカ人女性で８．１〜１１．４に及んでいる（Manzi S. (2001) Am J Manag Care. 16 Suppl:S474-S479）。ＳＬＥの罹患率（１００，０００人あたり）の推定値は、白人男性で３〜１９；アフリカ系アメリカ人男性で３〜５３；白人女性で１７〜７１；そしてアフリカ系アメリカ人女性で５６〜２８３に及んでいる（Manzi S. (2001) Am J Manag Care. 16 Suppl:S474-S479）。
【００５４】
ＳＬＥは、自己免疫寛容の喪失と、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び関連核タンパク質に対する自己抗体の産生をもたらすある種の自己抗原へのＢ細胞自己反応性の発達、並びに生じる炎症からの組織及び臓器の傷害を特徴とする。ＳＬＥの臨床特徴は多様であり、体質症状、皮膚学上又は筋骨格系の徴候、及び／又は血液系、心臓血管系、腎臓、そして時に神経系（ＣＮＳ）の所見が含まれ得る、一群の潜在的な臨床症状を伴う。ＳＬＥ患者の間で疾患の臨床徴候及び重症度のスペクトルに格差があるにもかかわらず、患者の間では、２つの所見が一致している：インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）と循環自己抗体の血清濃度の上昇である（Means TK et al. (2005) Ann NY Acad Sci. 1062:242-251; Baechler EC et al. (2004) Curr Opin Immunol. 16:801-807; Croker JA et al. (2005) TRENDS Immunol. 26(11):580-586）。狼瘡のヒトモデルとマウスモデルの両方で、ＩＦＮ−αの主要な供給源は、微生物の侵入者の成分を同定して免疫応答を始動させるように設計された自然免疫系の必須部分である、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）である（Baechler EC et al. (2004) Curr Opin Immunol. 16:801-807）。
【００５５】
ＳＬＥの病理発生及び進展におけるＩＦＮ−αの役割は、ＳＬＥ患者における一連の観察事実、悪性腫瘍又は肝炎の患者におけるＩＦＮ−α療法の後遺症、及びＳＬＥ患者由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における遺伝子転写のマイクロアレイ分析により裏付けられている。ＳＬＥ患者の血清におけるＩＦＮ−α濃度の上昇は、特に患者の疾患の早期には、疾患の活動及び重症度と相関する（Ronnblom L et al. (2006) Arthritis Rheum. 54(2):408-420）。ＩＦＮ−αの役割についての他の証拠は、カルチノイド腫瘍、膵臓腫瘍、又は肝炎を有してＩＦＮ−αで治療された患者が体験する後遺症の研究よりもたらされた。これらの患者のほぼ２２％が血清学的な異常（抗ｄｓＤＮＡ又はＡＮＡへの血清力価の上昇）を発症して、ほぼ１９％が何らかの形態の自己免疫疾患を発症した。ＳＬＥを発症したのは、ほぼ０．７％である（Baechler EC et al. (2004) Curr Opin Immunol. 16:801-807）。
【００５６】
ＳＬＥ患者より採取したＰＢＭＣより単離したＲＮＡのマイクロアレイ分析より、ＳＬＥにおけるＩＦＮ−αの役割を裏付ける興味深い最近の知見がもたらされた。何人かの研究者は、ＳＬＥ患者の亜集合において、ＩＦＮ−αにより誘導されるある遺伝子パターンのアップレギュレーション（ＩＦＮ−αサインとして知られている）を実証した。４８名の患者由来のＰＢＭＣ  ＲＮＡの研究では、ほぼ半数がＩＦＮ−αサインを有していたのである。しかしながら、この試験には、寛解状態にあるか又は軽微な疾患の形態を有して、ＩＦＮ−αの上昇血清濃度も、おそらくはＩＦＮ−αサインも有することが決して予測されなかった患者も含まれた。それでもやはり、ＩＦＮ−αサインは、重篤な顕示（即ち、ＣＮＳ又は腎臓の関与）又は血液学的所見（特に、白血球減少症、リンパ球減少症、又は血小板減少症）のある患者と関連していた（Baechler EC et al. (2004) Curr Opin Immunol. 16:801-807; Ronnblom L et al. (2006) Arthritis Rheum. 54(2):408-420）。
【００５７】
ＳＬＥにおけるＩＦＮ−αの不適切な産生は、ｐＤＣによる。これらの細胞は、通常は、微生物の核酸の検出に応答してＩＦＮ−αを産生する（Krieg AM. (2002) Ann Rev Immunol. 20:709-760; Baechler EC et al. (2004) Curr Opin Immunol. 16:801-807; Croker JA et al. (2005) TRENDS Immunol. 26(11):580-586）。ＳＬＥでは、これらの細胞が、やはり自己反応性Ｂ細胞を活性化することができる、クロマチン−ＤＮＡ又はＲＮＡ含有免疫複合体に応答してＩＦＮ−αを産生する（Leadbetter EA et al. (2002) Nature. 416(6881): 603-607; Lau CM et al. (2005) J Exp Med. 202(9):1171-1177; Barrat RJ et al. (2005) J Exp Med. 202(8):1131-1139; Vollmer et al. (2005) J Exp Med. 202 (11): 1575-1585; Pisitkun P et al. (2006) Science. 312(5780): 1669-1672; Subramanian S et al. (2006) Proc Natl Acad Sci USA. 103(26): 9970-9975; Savarese E et al. (2006) Blood. 107(8): 3229-3234）。微生物の核酸と自己抗原免疫複合体は、これらの細胞において、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８（ＲＮＡと関連タンパク質）とＴＬＲ９（ＤＮＡと関連タンパク質）により認識されるので、これらがＳＬＥへの潜在的な治療標的になる。
【００５８】
自己抗原への自己免疫応答におけるＢ細胞ＴＬＲの関与の証拠は、狼瘡傾向（lupus-prone）マウス系統における研究よりもたらされた。これらの研究は、自己反応性Ｂ細胞の表面にあるＢ細胞受容体のＩｇ部分により認識されるヌクレオソームＤＮＡ又はＲＮＡ免疫複合体が内部化され、エンドソームへ送達されて、そこで核酸がＴＬＲへ結合する（ｓｓＲＮＡはＴＬＲ７へ結合して、非メチル化ＤＮＡはＴＬＲ９へ結合する）モデルを示唆する。一本鎖核酸は、ヒトＴＬＲ８により認識されるが、マウスのＴＬＲ８は欠けている。これらＴＬＲ受容体へ上記の核酸が結合すると、抗体分泌とＢ細胞の増殖をともに刺激する。
【００５９】
ＳＬＥ患者が体験する特徴及び疾患不均質性の多くを共有する狼瘡傾向マウスの研究は、狼瘡の病理発生への重要な洞察をもたらしてきた。これらのマウスモデル（ＭＲＬ  ｌｐｒ／ｌｐｒ、ＮＺＷｘＮＺＢ  Ｆ１、及びＢＸＳＢマウス）は、Ｂ細胞の過剰活性、循環自己抗体（抗ｄｓＤＮＡ抗体及びＡＮＡ）、循環免疫複合体、及び糸球体腎炎の発症が含まれる、ヒト狼瘡の血清学的及び臨床上の特徴の多くを共有する（Andrews et al., 1978）。このマウスモデルは同一ではなく、不均質であるために、狼瘡の異なる側面の研究を可能にしている。マウスモデル間の違いには、特異的自己抗体の種類又は量（ＭＲＬ  ｌｐｒ／ｌｐｒマウスにおけるＲＦ及び抗Ｓｍ）、ＭＲＬ  ｌｐｒ／ｌｐｒマウスにおける顕著なリンパ増殖、及び性ごとの発症率（ＢＸＳＢマウスでは雄が優勢であるが、ＮＺＢｘＮＺＷ  Ｆ１マウスでは雌が優勢）が含まれる。これらのマウスモデルを用いた研究は、ＳＬＥの病理発生においてＴＬＲ９とＴＬＲ７が重要な機序上の役割を有することを示した。
【００６０】
ＴＬＲ９関与の証拠は、ＲＦ特異的な自己反応性Ｂ細胞を発現するＭＲＬ  ｌｐｒ／ｌｐｒマウスを産生する交雑実験よりもたらされた（Leadbetter et al., 2002）。これらのマウスを特定のＲＦ抗原へ曝露すると、予期される応答：自己反応性Ｂ細胞の増殖とそれによる自己抗体分泌の増加が誘発される。しかしながら、この細胞応答は、ＴＬＲ９の薬理阻害剤の存在下では in vitro で見られず、ＴＬＲ９シグナル伝達にも欠陥がある類似のマウスでも見られなかった。これらの結果は、２種のＴ細胞非依存性受容体：自己抗原に特異的なＢ細胞受容体とＴＬＲ９がＢ細胞の応答に必須であることを示した（Leadbetter EA et al. (2002) Nature. 416(6881):603-607; Krieg AM. (2002) Nature Immunol. 3(5):423-424）。
【００６１】
狼瘡様症候群が雄においてのみ発症して刺激性及び阻害性の遺伝子座と関連しているＢＸＳＢマウスモデルにおいて、ＴＬＲ７の役割が実証されている。このＹ連鎖自己免疫促進因子（ｙａａ）の座は、Ｔｌｒ７遺伝子の複製とＴＬＲ７の２倍過剰発現をもたらすＸからＹへの染色体転座であることが最近示された（Subramanian S et al. (2006) Proc Natl Acad Sci USA. 103(26):9970-9975; Pisitkun P et al. (2006) Science. 312(5780):1669-1672）。ＴＬＲ７の過剰発現は、狼瘡傾向マウスにおいてのみ狼瘡の促進と関連していた。
【００６２】
遺伝学的試験と突然変異体マウスを用いた in vitro 研究からの証拠は、ＴＬＲ７とＴＬＲ９、そしてヒトではおそらくはＴＬＲ８の活性化が、ＳＬＥの病理発生に重要である、自己抗原への免疫学的応答の始動においてある役割を担うモデルを提起する。これらの受容体への役割は、クロロキンやヒドロキシクロロキンのような抗マラリア剤が慢性関節リウマチ又はＳＬＥの患者の自己免疫症状を改善したという、数十年前になされた偶然の発見を説明することに役立つかもしれない。最近の研究は、これらの薬物が臨床的に意義のある濃度でＴＬＲアンタゴニストであることを明らかにして、これがそれらの治療上の作用機序であり得ることを示唆している（Vollmer et al. (2005) J Exp Med. 202(11):1575-1585）。
【００６３】
答えられていない疑問は、微生物のＤＮＡであって哺乳動物のＤＮＡではないことが特徴である非メチル化ＤＮＡに限定されるリガンドレパートリーを通常は有するＴＬＲ９が、何故自己ＤＮＡによって活性化されるのかということである。ＤＮＡメチル化における変化により自己ＤＮＡのＴＬＲ９による認識がもたらされる可能性があるとする間接的な状況証拠が２つの観察事実よりもたらされている：狼瘡患者からのＤＮＡがしばしば低メチル化状態にあること、そしてＤＮＡメチル化を阻害する薬物（プロカインアミド及びヒドラジン）が素因のある個体において狼瘡を引き起こす可能性があることである（Lu Q et al. (2005) J Immunol. 174(10): 6212-6219）。さらに、ｐＤＣによりＦｃ受容体（ＦｃＲ）を介して取り上げられる免疫複合体におけるＤＮＡの存在は、自己ＤＮＡ中の相対的に低いレベルの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドの特性を非刺激性から免疫刺激性へ変化させるように見える（Boule MW et al. (2004) J Exp Med. 199(12): 1631-40）TLR9-dependent and TLR9-independent dendritic cell activation by chromatin-immunoglobulin G complexes［クロマチン−免疫グロブリンＧ複合体によるＴＬＲ９依存性及びＴＬＲ９非依存性の樹状細胞活性化］）。
【００６４】
ＳＬＥ患者への現行の治療目標は、急性のエピソード又は症状若しくは後遺症の増悪を管理すること、疾患拡大（flares）を最小化すること、及び慢性の疾患症状を制御又は管理することである。標準療法には、軽度疾患へのヒドロキシクロロキンと低用量グルココルチコイド、そしてより重篤な疾患又は症状の患者への高用量グルココルチコイドとクロロホスファミド又はアザチオプリンのようなより強力な免疫抑制薬の組合せが含まれる（Manson JJ et al. (2006) Orphanet J Rare Dis. 1(1):6）。抗リンパ腫療法に現在使用されて、慢性関節リウマチの治療に承認された抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（リツキシマブ）の投与による、狼瘡患者におけるＢ細胞枯渇の治療上の安全性及び効力について評価する初期フェーズ１治験が実施された（Eisenberg R. (2003) Arthritis Res Ther. 5(4):157-159; Browning J. (2006) Nat Rev Drug Discov. 5(7):564-576）。しかしながら、これらの検討中の療法のいずれも、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９のような、ＳＬＥの多数の潜在的な分子標的を選択的に阻害するものではない。
【００６５】
本発明は、１つの側面において、移植拒絶を有するか又はそれを有するリスク状態にある被検者を治療する方法を提供する。本発明のこの側面による方法には、移植拒絶を治療するのに有効な量の式Ｉの化合物又はその医薬的に許容される塩を該被検者へ投与する工程が含まれる。
【００６６】
本明細書に使用するように、「移植拒絶」は、ある個体から別の個体へ、即ちドナーからレシピエントへ移植された細胞、組織、又は臓器への急性又は慢性の免疫仲介性傷害を意味する。この拒絶は、限定されないが、身体的な検査；移植された細胞、組織、又は臓器の機能減少に一致した少なくとも１つの臨床徴候又は症状の存在に注目すること；コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）又は磁気共鳴造影（ＭＲＩ）のような医学造影法；及び、移植された組織又は臓器の生検が含まれる、どの好適な方法によっても診断することができる。移植組織には、具体的に、限定なしに、腎臓、心臓、肝臓、膵臓、膵臓の島、肺、小腸、膀胱、骨、骨髄、動脈、静脈、筋肉、肢、及びこれらのあらゆる組合せが含まれる。
【００６７】
ＣＰＧ５２３６４は、単独で、又は少なくとも１つの他の治療薬剤と組み合わせて、炎症状態、アレルギー、喘息、及び敗血症が含まれる、望まれない免疫活性を特徴とする他の状態を有する被検者を治療するために使用することができる。
【００６８】
炎症状態には、限定されないが、副腎炎、歯槽骨炎、血管胆嚢炎、盲腸炎、亀頭炎、眼瞼炎、気管支炎、滑液嚢炎、心臓炎、蜂巣炎、子宮頚炎、胆嚢炎、声帯炎、蝸牛炎、大腸炎、結膜炎、膀胱炎、皮膚炎、憩室炎、脳炎、心内膜炎、食道炎、耳管炎（eustachitis）、結合組織炎、毛包炎、胃炎、胃腸炎、歯肉炎、舌炎、肝脾炎、角膜炎、迷路炎、喉頭炎、リンパ管炎、乳腺炎、髄膜炎、子宮筋層炎、粘膜炎、心筋炎、筋炎、鼓膜炎、腎炎、神経炎、睾丸炎、骨軟骨炎、中耳炎、心膜炎、腱鞘炎、腹膜炎、咽頭炎、静脈炎、前立腺炎、歯髄炎、網膜炎、鼻炎、卵管炎、強膜炎、強膜脈絡膜炎、陰嚢炎、副鼻腔炎、脊椎炎、脂肪組織炎、口内炎、滑膜炎、耳管炎(syringitis)、腱炎、扁桃炎、尿道炎、及び膣炎が含まれる。
【００６９】
「アレルギー」は、物質（アレルゲン）への獲得性の過敏症を意味する。アレルゲンは、感受性のある被検者においてアレルギー又は喘息の応答を引き起こし得る物質（抗原）を意味する。アレルゲンのリストは厖大であり、花粉、昆虫毒、動物の鱗屑粉、真菌胞子、及び薬物（例、ペニシリン）を含めることができる。天然の動物及び植物アレルゲンの例には、限定されないが、以下の属に特異的なタンパク質が含まれる：Agropyron［カモジグサ属］（例、Agropyron repens）；Agrostis［コヌカグサ属］（例、Agrostis alba）；Alder［ハンノキ属］；Alnus［ハンノキ属］（Alnus gultinoasa）；Alternaria［アルテルナリア属］（Alternaria alternata）；Ambrosia［ブタクサ属］（Ambrosia artemiisfolia；Anthoxanthum［ハルガヤ属］（例、Anthoxanthum odoratum）；Apis［ミツバチ属］（例、Apis multiflorum）；Arrhenatherum［オオカニツリ属］（例、Arrhenatherum elatius）；Artemisia［ヨモギ属］（Artemisia vulgaris）；Avena［カラスムギ属］（例、Avena sativa）；Betula［カバノキ属］（Betula verrucosa）；Blattella［チャバネゴキブリ属］（例、Blattella germanica）；Bromus［スズメノチャヒキ属］（例、Bromus inermis）；Canine［イヌ属］（Canis familiaris）；Chamaecyparis［ヒノキ属］（例、Chamaecyparis obtusa）；Cryptomeria［スギ属］（Cryptomeria japonica）；Cupressus［イトスギ属］（例、Cupressus sempervirens、Cupressus arizonica、及び Cupressus macrocarpa）；Dactylis［カモガヤ属］（例、Dactylis glomerata）；Dermatophagoides［ヒョウダニ属］（例、Dermatophagoide sfarinae）；Felis［ネコ属］（Felis domesticus）；Festuca［ウシノケグサ属］（例、Festuca elatior）；Holcus［シラゲガヤ属］（例、Holcus lanatus）；Juniperus［ビャクシン属］（例、Juniperus sabinoides、Juniperus virginiana、Juniperus communis、及び Juniperus ashei）；Lolium［ドクムギ属］（例、Lolium perenne 又は Lolium multiflorum）；Olea［オリーブ属］（Olea europa）；Parietaria［ヒカゲミズ属］（例、Parietaria officinalis 又は Parietaria judaica）；Paspalum［スズメノヒエ属］（例、Paspalum notatum）；Periplaneta［ゴキブリ属］（例、Periplaneta americana）；Phalaris［クサヨシ属］（例、Phalaris arundinacea）；Phleum［アワガエリ属］（例、Phleum pratense）；Plantago［オオバコ属］（例、Plantago lanceolata）；Poa［ナガハグサ属］（例、Poa pratensis 又は Poa compressa）；Quercus［コナラ属］（Quercus alba）；Secale［ライムギ属］（例、Secale cereale）；Sorghum［モロコシ属］（例、Sorghum halepensis）；Thuya［クロベ属］（例、Thuya orientalis）；及び、Triticum［コムギ属］（例、Triticum aestivum）。
【００７０】
本明細書に使用する用語「喘息」は、炎症、気道の狭隘化、及び吸入される作用体への気道の反応亢進を特徴とする、気道の疾患を意味する。喘息は、しばしば、必ずしも排他的ではないが、アトピー又はアレルギーの症状に関連する。１つの態様において、喘息は、アレルギー喘息である。喘息は、典型的には、急性増悪の間に無症状期間を伴う、エピソード疾患である。
【００７１】
用語「敗血症」は、感染に関連した全身性の炎症応答を意味する。敗血症は、発熱又は低温症、頻呼吸、頻脈、白血球数の上昇又は下降の２以上の特徴を、そして進行症例では、心臓血管系の破綻（ショック）、臓器の機能低下又は不全、及び播種性血管内凝固を特徴とする。微生物シグナルと宿主免疫応答もともに敗血症に寄与すると考えられている。
【００７２】
ＣＰＧ５２３６４は、単独で、又は少なくとも１つの抗マラリア剤と組み合わせて、マラリアを治療するために使用し得ると考えられている。抗マラリア剤には、限定なしに、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、プリマキン、キニーネ、アモジアキン、メフロキンが含まれる、様々なキノリンベースの薬剤が含まれる。
【００７３】
ＣＰＧ５２３６４は、他の治療薬剤と組み合わせることができる。ＣＰＧ５２３６４と他の治療薬剤は、同時に投与しても、別々に投与してもよい。他の治療薬剤を同時に投与する場合、それらは、同じ又は別の製剤で投与し得るが、同時に投与する。他の治療薬剤とＣＰＧ５２３６４の投与が時間的に離れている場合、他の治療薬剤は、互いとＣＰＧ５２３６４とともに連続的に投与する。これらの化合物の投与の間の時間における分離は、数分のことであっても、より長くてもよい。他の治療薬剤には、限定されないが、抗炎症薬、グルココルチコイド、他の免疫抑制剤、サイトカイン、抗体、抗微生物剤、等が含まれる。
【００７４】
ＣＰＧ５２３６４は、被検者へ抗微生物剤とともに投与してよい。抗微生物剤は、本明細書に使用するように、感染性の微生物を殺傷するか又は阻害することが可能である天然に存在するか又は合成の化合物を意味する。本発明による有用な抗微生物剤の種類は、被検者が感染されているか又は感染されるリスク状態にある微生物の種類に依るものである。抗微生物剤には、限定されないが、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、及び抗寄生虫剤が含まれる。「抗感染剤」、「抗菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「抗寄生虫剤」及び「殺寄生虫剤」のような句は、当業者には十分に確立された意味を有して、標準の医学テキストに定義されている。簡潔に言えば、抗菌剤は細菌を殺傷又は阻害して、抗生物質、並びに類似の機能を有する他の合成又は天然の化合物が含まれる。抗生物質は、微生物のような細胞による二次代謝産物として産生される低分子量の分子である。一般に、抗生物質は、微生物に特異的であり、宿主細胞には存在しない１以上の細菌の機能又は構造に干渉する。抗ウイルス剤は、天然の供給源より単離するか、又は合成することができて、ウイルスを殺傷又は阻害するのに有用である。抗真菌剤は、日和見及び初期の全身性真菌感染症だけでなく表在性真菌感染症を治療するのに使用される。抗寄生虫剤は、寄生虫を殺傷又は阻害する。
【００７５】
ヒトへの投与に有用な抗寄生虫剤（殺寄生虫剤とも呼ばれる）の例には、限定されないが、アルベンダゾール、アンホテリシンＢ、ベンズニダゾール、ビチオノール、クロロキンＨＣｌ、リン酸クロロキン、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、ジロキサニドフロエート、エフロルニチン、フラゾリダオン、グルココルチコイド、ハロファントリン、ヨードキノール、イベルメクチン、メベンダゾール、メフロキン、アンチモン酸メグルミン、メラルソプロール、メトリフォネート、メトロニダドール、ニクロサミド、ニフルチモクス、オキサムニキン、パロモマイシン、イセチオン酸ペンタミジン、ピペラジン、プラジクアンテル、リン酸プリマキン、プログアニル、ピランテルパモエート、ピリメタンミン−スルホンアミド、ピリメンタミン−スルファドキシン、キナクリンＨＣｌ、硫酸キニーネ、グルコン酸キニジン、スピラマイシン、スチボグルコン酸ナトリウム（アンチモングルコン酸ナトリウム）、スラミン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、チアベンダゾール、チニダゾール、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、及びトリパルサミド（このうちのいくつかは、単独で、又は他剤と組み合わせて使用する）が含まれる。
【００７６】
抗菌剤は、細菌を殺傷するか又はその増殖若しくは機能を阻害する。抗菌剤の主たるクラスは、抗生物質である。広範囲の細菌を殺傷又は阻害するのに有効である抗生物質は、広域スペクトル抗生物質と呼ばれる。他の種類の抗生物質は、グラム陽性菌又はグラム陰性菌の群に抗して主に有効である。これらの種類の抗生物質は、狭域スペクトル抗生物質と呼ばれる。単一の微生物又は疾患に抗して有効であるが、他の種類の細菌に抗しては有効でない他の抗生物質は、限定（limited）スペクトル抗生物質と呼ばれる。抗菌剤は、その主たる作用様式に基づいて分類されるときがある。一般に、抗菌剤は、細胞壁合成阻害剤、細胞膜阻害剤、タンパク合成阻害剤、核酸合成又は機能阻害剤、及び競合阻害剤である。
【００７７】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞の感染又はウイルスの細胞内での複製を妨げる化合物である。ウイルス複製のプロセスが宿主細胞内部のＤＮＡ複製に密接に関連していて、非特異的な抗ウイルス剤はしばしば宿主にとって有害であるために、抗ウイルス薬は抗菌薬よりずっと少ない。ウイルス感染のプロセス内には、抗ウイルス剤により妨害又は阻害され得るいくつかの段階がある。これらの段階には、ウイルスの宿主細胞への付着（免疫グロブリン又は結合ペプチド）、ウイルスの脱皮（uncoating）（例、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成又は翻訳（例、インターフェロン）、ウイルスＲＮＡ又はＤＮＡの複製（例、ヌクレオチド類似体）、新たなウイルスタンパク質の成熟化（例、プロテアーゼ阻害剤）、及びウイルスの出芽と遊離が含まれる。
【００７８】
ヌクレオチド類似体は、ヌクレオチドに類似しているが、不完全又は異常なデオキシリボース又はリボース基を有する合成化合物である。ヌクレオチド類似体が細胞中にあると、それらはリン酸化されて、ウイルスのＤＮＡ又はＲＮＡへの取込みについて正常なヌクレオチドと競合する、三リン酸型を産生する。このヌクレオチド類似体の三リン酸型が成長中の核酸鎖へ取り込まれると、それはウイルスポリメラーゼとの不可逆な会合と、それ故の鎖終止を引き起こす。ヌクレオチド類似体には、限定されないが、アシクロビル（ヘルペス単純ウイルス及び帯状疱疹ウイルスの治療に使用される）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの治療に有用）、イドクスウリジン、リバビリン（呼吸器合胞体ウイルスの治療に有用）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、ジドブジン（アジドチミジン）、イミキモド、及びレジミキモド（resimiquimod）が含まれる。
【００７９】
インターフェロンは、免疫細胞だけでなく、ウイルス被感染細胞によっても分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、被感染細胞に隣接する細胞上の特異受容体へ結合して、それをウイルスによる感染より防ぐ細胞中の変化を引き起こすことによって機能する。α及びβ−インターフェロンも、被感染細胞の表面上のクラスＩ及びクラスＩＩ  ＭＨＣ分子の発現を誘導して、宿主免疫細胞認識への抗原提示の増加をもたらす。α及びβ−インターフェロンは、組換え型として入手可能であり、慢性Ｂ型及びＣ型肝炎感染症の治療に使用されてきた。抗ウイルス療法に有効である投与量で、インターフェロンには、発熱、倦怠感、及び体重損失のような重篤な副作用がある。
【００８０】
本発明に有用な抗ウイルス剤には、限定されないが、免疫グロブリン、アマンタジン、インターフェロン、ヌクレオチド類似体、及びプロテアーゼ阻害剤が含まれる。抗ウイルス剤の具体的な例には、限定されないが、アセマンナン；アシクロビル；アシクロビルナトリウム；アデフォビル；アロブジン；アルビルセプト・スドトクス（Alvircept Sudotox）；塩酸アマンタジン；アラノチン；アリドン；メシル酸アテビルジン；アブリジン；シドフォビル；シパムフィリン；塩酸シタラビン；メシル酸デラビルジン；デシクロビル；ジダノシン；ジソキサリル；エドクスジン；エンビラデン；エンビロキシム；ファムシクロビル；塩酸ファモチン；フィアシタビン；フィアルリジン；フォサリレート（Fosarilate）；ホスカルネットナトリウム；ホスホネット（Fosfonet）・ナトリウム；ガンシクロビル；ガンシクロビル・ナトリウム；イドクスウリジン；ケトキサール；ラミブジン；ロブカビル；塩酸メモチン；メチサゾン；ネビラピン；ペンシクロビル；ピロダビル；リバビリン；塩酸リマンタジン；メシル酸サキナビル；塩酸ソマンタジン；ソリブジン；スタトロン；スタブジン；塩酸チロロン；トリフルリジン；塩酸バラシクロビル；ビダラビン；リン酸ビダラビン；リン酸ビダラビンナトリウム；ビロキシム；ザルシタビン；ジドブジン；及び、ジンビロキシムが含まれる。
【００８１】
抗真菌剤は、感染性真菌の治療及び予防に有用である。抗真菌剤は、それらの作用機序により分類されるときがある。ある抗真菌剤は、グルコースシンターゼを阻害することによって、細胞壁阻害剤として機能する。これらには、限定されないが、バシウンジン（basiungin）／ＥＣＢが含まれる。他の抗真菌剤は、膜完全性を不安定化させることによって機能する。これらには、限定されないが、クロトリマゾール、セルタコナゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、及びボリコナゾールのようなインミダゾール類、並びに、ＦＫ４６３、アンホテリシンＢ、ＢＡＹ３８−９５０２、ＭＫ９９１、プラジマイシン、ＵＫ２９２、ブテナフィン、及びテルビナフィンが含まれる。他の抗真菌剤は、キチンを分解すること（例、キチナーゼ）又は免疫抑制（５０１クリーム）によって機能する。
【００８２】
ＣＰＧ５２３６４は、抗癌療法と組み合わせて投与してもよい。抗癌療法には、癌治療薬、放射線、及び外科の手法が含まれる。本明細書に使用するように、「癌治療薬」は、癌を治療する目的で被検者へ投与される薬剤を意味する。本明細書に使用するように、「癌を治療すること」には、癌の発症を防ぐこと、癌の症状を抑えること、及び／又は成立した癌の増殖を阻害することが含まれる。他の側面では、癌を発症するリスクを抑える目的で、癌を発症するリスク状態にある被検者へ癌治療薬を投与する。癌の治療用の様々な種類の薬剤を本明細書に記載する。本明細書の目的のために、癌治療薬を化学療法剤、免疫療法剤、癌ワクチン、ホルモン療法、及び生物学的応答調節剤へ分類する。
【００８３】
化学療法剤は、メトトレキセート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、糖を含有しないクロロエチルニトロソ尿素、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラジリン、メグラミンＧＬＡ、バルルビシン、カルムスタイン（carmustaine）及びポリフェルポサン（poliferposan）、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ１２−９５６６、ＲＡＳファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール、グラモレク（Glamolec）、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、バルスポダール／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトロキサントロン（Mitroxantrone）、メタレット（Metaret）／スラミン、バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、インセル／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８、ＴＡ２５１６／マルミスタット、ＢＢ２５１６／マルミスタット、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナール／ＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニール／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロミド、エバセット／リポソームドキソルビシン、Yewtaxan／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、Xeload／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパクス（Cyclopax）／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ１２７５／フラボピリドール、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳ腫瘍遺伝子阻害剤、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金、ＵＦＴ（テガフール／ウラシル）、エルガミゾール／レバミゾール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト（Campto）／レバミゾール、カンプトサール／イリノテカン、ツモデクス（Tumodex）／ラリトレキセド（Ralitrexed）、ロイスタチン／クラドリビン、パキセクス（Paxex）／パクリタキセル、ドキシル（Doxil）／リポソームドキソルビシン、カエリクス（Caelyx）／リポソームドキソルビシン、フルダラ（Fludara）／フルダラビン、ファルマルビシン（Pharmarubicin）／エピルビシン、ＤｅｐｏＣｙｔ、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／ビス−ナフタリミド、ＬＵ１０３７９３／ドラスタイン、カエチクス（Caetyx）／リポソームドキソルビシン、ジェムザール（Gemzar）／ゲムシタビン、ＺＤ０４７３／アノルメド（Anormed）、ＹＭ１１６、ヨウ素シード、ＣＤＫ４及びＣＤＫ２阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｄ４８０９／デキシフォサミド（Dexifosamide）、イフェス（Ifes）／メスネクス（Mesnex）／イフォサミド（ifosamide）、ブモン（Vumon）／テニポシド、パラプラチン（Paraplatin）／カルボプラチン、プランチノール（Plantinol）／シスプラチン、ベプシド（Vepeside）／エトポシド、ＺＤ９３３１、タキソテール／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサン類似体、ニトロソ尿素、メルファラン及びシクロホスファミドのようなアルキル化剤、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カ��ボプラチン、クロラムブシル、シタラビンＨＣＩ、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、リン酸エストラムスチンナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、イホスファミド、インターフェロンα−２ａ、α−２ｂ、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ放出因子類似体）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロルエタミンＨＣｌ（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトタン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミトザントロンＨＣｌ、オクトレオチド、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エリスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、ミトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサール・ビス−グアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、及び硫酸ビンデシンからなる群より選択され得るが、このように限定されるわけではない。
【００８４】
免疫療法剤は、リブタキシン（Ributaxin）、ハーセプチン（Herceptin）、クアドラメット（Quadramet）、パノレクス（Panorex）、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム（Oncolym）、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレクス（Ovarex）、ベキサール（Bexxar）、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパクス（Zenapax）、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット（Pretarget）、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ、ＣＭＡ６７６、Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ  １０Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  Ａｂ、及びＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡからなる群より選択され得るが、このように限定されるわけではない。
【００８５】
癌ワクチンは、ＥＧＦ、抗イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫメラノーマワクチン、ＭＧＶガングリオシドコンジュゲートワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレクス（Ovarex）、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬセラトープ、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソーム・イディオタイプワクチン、メラシン（Melacine）、ペプチド抗原ワクチン、毒素／抗原ワクチン、ＭＶＡベースのワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣウイルス、及びＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓからなる群より選択され得るが、このように限定されるわけではない。
【００８６】
ＣＰＧ５２３６４は、被検者へ免疫抑制剤とともに投与してよい。本明細書に使用するように、「免疫抑制剤」は、免疫応答をダウンレギュレートする目的で被検者へ投与される薬剤を意味する。これらの薬剤は、移植片拒絶、移植片対宿主病、及び自己免疫疾患の治療に使用し得る。免疫抑制剤には、具体的に、限定されないが、プレドニゾン及びメチルプレドニゾロンのようなコルチコステロイド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、タクロリムス、ミコフェノレート・モフェチル、ラパマイシン、ポリクローナル抗体（例、抗胸腺細胞グロブリン）、及びモノクローナル抗体（例、ＯＫＴ３、バシリキシマブ、及びダクリズマブ）が含まれる。
【００８７】
ＣＰＧ５２３６４は、被検者へ抗炎症剤とともに投与してよい。本明細書に使用するように、「抗炎症剤」は、炎症応答をダウンレギュレートする目的で被検者へ投与される薬剤を意味する。抗炎症剤は、一般に、免疫抑制剤より強力ではなくて、それらには、具体的に、限定なしに、非ステロイド性抗炎症剤、プロスタグランジン阻害剤、金製剤、コルヒチン、及びメトトレキセートが含まれる。
【００８８】
ＣＰＧ５２３６４は、被検者へアレルギーの治療に有用な薬剤とともに投与してよい。アレルギーの治療に有用な薬剤には、限定されないが、抗ヒスタミン剤、コルチコステロイド、及びプロスタグランジンインデューサーが含まれる。抗ヒスタミン剤は、肥満細胞又は好塩基球により放出されるヒスタミンに妨害する化合物である。これらの化合物は、当該技術分野でよく知られていて、通常はアレルギーの治療に使用される。抗ヒスタミン剤には、限定されないが、アクリバスチン、アステミゾール、アザタジン、アゼラスチン、ベタタスチン、ブロムフェニラミン、ブクリジン、セチリジン、セチリジン類似体、クロルフェニラミン、クレマスチン、ＣＳ５６０、シプロヘプタジン、デスロラタジン、デクスクロルフェニラミン、エバスチン、エピナスチン、フェキソフェナジン、ＨＳＲ６０９、ヒドロキシジン、レボカルバスチン、ロラタジン、メトスコポラミン、ミゾラスチン、ノラステミゾール、フェニンダミン、プロメタジン、ピリラミン、テルフェナジン、及びトラニラストが含まれる。
【００８９】
コルチコステロイドには、限定されないが、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン、及びトリアムシノロンが含まれる。デキサメタゾンは抗炎症作用を有するコルチコステロイドであるが、それは、きわめてよく吸収されて、有効量で長期抑制的な副作用を有するので、標準的には、アレルギー又は喘息の治療に吸入型で使用されない。しかしながら、デキサメタゾンは、本発明の組成物と組み合わせて投与されるときは、低用量で投与されて副作用を抑えることができるので、本発明によりアレルギー又は喘息を治療するのに使用することができる。コルチコステロイド使用に関連するいくつかの副作用には、空咳、発声障害、口腔鵞口瘡（カンジダ症）と、高用量では、副腎抑制、グルコース不耐性、骨粗鬆症、骨の無菌性壊死、白内障形成、成長抑制、高血圧、筋脆弱化、皮膚の希薄化、及び挫傷の容易化が含まれる。Barnes & Peterson (1993) Am Rev Respir Dis 148:S1-S26; 及び Kamada AK et al. (1996) Am J Respir Crit Care Med 153:1739-48。
【００９０】
ＣＰＧ５２３６４は、被検者へ喘息の治療に有用な薬剤とともに投与してよい。喘息の治療に有用な薬剤は、一般に、２つのカテゴリー（早期緩和薬剤と長期制御薬剤）へ分けられる。喘息患者は、持続性の喘息の制御を達成して維持するために、長期制御薬剤を連日のベースで服用する。長期制御薬剤には、コルチコステロイド、クロモリンナトリウム、及びネドクロミルのような抗炎症剤；長期作用型β２アゴニスト及びメチルキサンチンのような長期作用型気管支拡張薬；及び、ロイコトリエン調節剤（modifiers）が含まれる。早期緩和薬剤には、短期作用型β２アゴニスト、抗コリン作動薬、及び全身性コルチコステロイドが含まれる。これら薬物のそれぞれに関連した多くの副作用があり、これら薬物のいずれも、単独で、又は組み合わせて喘息を予防することも完全に治療することも可能でない。
【００９１】
喘息の薬剤には、限定されないが、ＰＤＥ−４阻害剤、気管支拡張薬／β−２アゴニスト、Ｋ＋チャネルオープナー、ＶＬＡ−４アンタゴニスト、ニューロキンアンタゴニスト、トロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）合成阻害剤、キサンチン、アラキドン酸アンタゴニスト、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、ＴＸＡ２受容体アンタゴニスト、ＴＸＡ２アンタゴニスト、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質の阻害剤、及びプロテアーゼ阻害剤が含まれる。
【００９２】
気管支拡張薬／β２アゴニストは、気管支拡張又は平滑筋緩和を引き起こす化合物の群である。気管支拡張薬／β２アゴニストには、限定されないが、サルメテロール、サルブタモール、アルブテロール、テルブタリン、Ｄ２５２２／ホルモテロール、フェノテロール、ビトルテロール、ピルブエロール、メチルキサンチン、及びオルシプレナリンが含まれる。長期作用型β２アゴニストと気管支拡張薬は、抗炎症療法に加えて、症状の長期予防のために使用される化合物である。長期作用型β２アゴニストには、限定されないが、サルメテロールとアルブテロールが含まれる。これらの化合物は、通常、コルチコステロイドと組み合わせて使用されて、一般に、炎症療法なしでは使用されない。これらは、極量での頻脈、骨格筋振戦、低カリウム血症、及びＱＴｃ間隔の延長化のような副作用と関連付けられている。
【００９３】
例えばテオフィリンが含まれるメチルキサンチンは、症状の長期の制御及び予防に使用されてきた。これらの化合物は、ホスホジエステラーゼ阻害とおそらくはアデノシン拮抗作用より生じる気管支拡張を引き起こす。これらの種類の化合物では、用量関連性の急性毒性が特別な問題である。結果として、代謝クリアランスにおける個体差より生じる毒性と狭い治療範囲に対処するためには、血清濃度を定期的にモニタリングしなければならない。副作用には、頻脈、頻拍性不整脈、悪心及び嘔吐、中枢神経系の刺激、頭痛、発作、吐血、高血糖症、及び低カリウム血症が含まれる。短期作用型β２アゴニストには、限定されないが、アルブテロール、ビトルテロール、ピルブテロール、及びテルブタリンが含まれる。短期作用型β２アゴニストの投与に関連した副作用の中には、頻脈、骨格筋振戦、低カリウム血症、乳酸増加、頭痛、及び高血糖症が含まれる。
【００９４】
クロモリンナトリウム及びネドクロミルは、運動より生じる喘息症状とアレルゲンより生じるアレルギー症状を主に予防するために、長期制御薬剤として使用される。これらの化合物は、塩化物チャネル機能に干渉することによってアレルゲンに対する初期及び後期の反応を阻止すると考えられている。それらはまた、肥満細胞膜を安定化させて、メディエーターの活性化と好イノシン細胞（inosineophils）及び上皮細胞からの放出を阻害する。一般に、最大の利益を達成するには、４〜６週の投与期間が必要とされる。
【００９５】
一般に、抗コリン作動薬は、急性気管支痙攣の緩和に使用する。これらの化合物は、ムスカリン性コリン作動性受容体の競合阻害によって機能すると考えられている。抗コリン作動薬には、限定されないが、臭化イプラトロピウムが含まれる。これらの化合物は、コリン作動的に仲介される気管支痙攣のみを逆転させて、抗原への反応には変化させない。副作用には、口渇と呼吸分泌物の乾燥化、ある個体での喘鳴増加、及び眼にスプレーされた場合の視覚のかすみが含まれる。
【００９６】
一般に、ＣＰＧ５２３６４の１日経口用量は、１日につき約０．０１ミリグラム／ｋｇ〜１日につき１０００ミリグラム／ｋｇであろう。５〜５００ミリグラム／ｋｇの範囲の経口用量は、１日につき１回又は数回の投与において、望ましい結果をもたらすと予期される。投与量は、投与の形式に依存して、局部又は全身での望ましい薬物レベルを達成するために適宜調整してよい。例えば、静脈内投与は、１オーダー〜数オーダーの大きさでより低い１日用量であろうと予期される。被検者における応答がそのような用量では不十分であるイベントでは、より高い用量（又は、異なる、より局在化した送達経路による有効なより高い用量）を、患者の耐性が許容する程度まで利用してよい。化合物の適正な全身レベルを達成するには、１日につき数回の投薬を考慮する。
【００９７】
以下の実施例において開示するように、ＣＰＧ５２３６４の約８ｍｇ／ｋｇの単回静脈内用量と４０〜５０ｍｇ／ｋｇの単回経口用量は、５００〜１０００ｎｇ／ｍｌのオーダーの治療上意味のある血液レベルをもたらした。
【００９８】
本明細書に記載のどの化合物でも、治療有効量は、最初は動物モデルより決定することができる。治療有効量はまた、ヒトにおいて試験したＣＰＧ５２３６４と、類似の薬理活性を明示することが知られている、他の関連する活性剤のような化合物についてのヒトデータより決定することができる。非経口投与には、より高い用量が必要とされる場合がある。適用量は、投与する化合物の相対的なバイオアベイラビリティ及び効力に基づいて調整することができる。本明細書に記載の方法と当該技術分野でよく知られている他の方法に基づいて最大効力を達成するために用量を調整することは、当業者の能力内に十分にある。
【００９９】
本発明の製剤は、医薬的に許容される濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適合性のある担体、及び任意選択的に他の治療成分を定型的に含有し得る、医薬的に許容される溶液剤において投与する。
【０１００】
療法における使用では、有効量のＣＰＧ５２３６４を、単独で、又は少なくとも１つの他の治療薬剤とともに製剤化して、被検者へＣＰＧ５２３６４を望ましい表面へ送達するあらゆる形式により投与することができる。本発明の医薬組成物を投与することは、当業者に知られたどの手段により達成してもよい。好ましい投与の経路には、限定されないが、経口、非経口（限定なしに、静脈内、腹腔内、筋肉内が含まれる）、鼻腔内、舌下、気管内、吸入、眼、膣、及び直腸が含まれる。
【０１０１】
経口投与では、化合物（即ち、ＣＰＧ５２３６４と他の治療薬剤）は、当該技術分野でよく知られた医薬的に許容される担体と活性化合物（複数）を組み合わせることによって容易に製剤化することができる。そのような担体により、本発明の化合物を、治療される被検者が経口摂取するための錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液剤、等として製剤化することが可能になる。経口使用のための医薬調製物は、望まれるならば、錠剤又は糖衣剤の芯を得るために、好適な助剤を加えた後で、生じる混合物を任意選択的に粉砕して、顆粒の混合物を加工して、固体賦形剤として入手することができる。好適な賦形剤は、特に、糖類（乳糖、ショ糖、マンニトール、又はソルビトールが含まれる）；例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースのようなセルロース調製物、及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のような充填剤である。望まれるならば、架橋連結ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸又はアルギン酸ナトリウムのようなその塩といった、崩壊剤を加えてよい。任意選択的に、経口製剤は、内部の酸状態を中和するために生理食塩水又は緩衝液（即ち、ＥＤＴＡ）において製剤化しても、担体なしで投与してもよい。
【０１０２】
また具体的に考慮するのは、上記の成分（単数又は複数）の経口剤形である。成分（単数又は複数）は、誘導体の経口送達が有効になるように、化学的に修飾してよい。一般に、考慮される化学修飾は、成分分子そのものへの少なくとも１つの部分（moiety）の付加であり、ここで前記部分は、（ａ）加水分解の阻害；及び（ｂ）胃又は腸から血流への取込みを可能にする。また望ましいのは、成分（単数又は複数）の全体的な安定性の増加と体内での循環時間の増加である。そのような部分の例には：ポリエチレングリコール、エチレングリコール及びプロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、及びポリプロリンが含まれる。「薬物としての酵素（Enzymes as Drugs）」Hocenberg and Roberts, 監修（ウィリー・インターサイエンス、ニューヨーク州ニューヨーク）中、367-383頁、Abuchowski and Davis, 1981,「可溶性ポリマー酵素付加物（Soluble Polymer-Enzyme Adducts）」; Newmark, et al., 1982, J. Appl. Biochem. 4:185-189。使用し得る他のポリマーは、ポリ−１，３−ジオキソランとポリ−１，３，６−チオキソカンである。上記に示すような医薬使用に好ましいのは、ポリエチレングリコール部分である。
【０１０３】
成分（又は誘導体）にとって、放出の場所は、胃、小腸（十二指腸、空腸、又は回腸）、又は大腸であり得る。当業者は、胃では溶けないが、十二指腸や腸の他所で材料を放出する利用可能な製剤を有する。好ましくは、放出は、ＣＰＧ５２３６４（又は誘導体）の保護によるか又は生物学的に有効な材料を胃環境から先での（腸におけるような）放出により、胃環境の有害効果を回避する。
【０１０４】
完全な胃抵抗性を確実にするには、少なくともｐＨ５．０まで非透過性のコーティング剤が必須である。腸溶コーティング剤として使用される、より一般的な不活性成分の例は、セルロースアセテートトリメリテート（ＣＡＴ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート（ＨＰＭＣＰ）、ＨＰＭＣＰ５０、ＨＰＭＣＰ５５、ポリビニルアセテートフタラート（ＰＶＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０Ｄ、Ａｑｕａｔｅｒｉｃ、セルロースアセテートフタラート（ＣＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ、及びＳｈｅｌｌａｃである。これらのコーティング剤は、混合フィルム剤として使用してよい。
【０１０５】
コーティング剤又はコーティング剤の混合物は、胃に対する保護を企図していない錠剤上でも使用し得る。これには、糖コーティング剤、又は錠剤を飲み込みやすくするコーティング剤を含めることができる。カプセル剤は、乾燥治療剤（即ち、粉末）の送達用には、硬い殻（ゼラチンのような）からなり得るが、液体型では、軟ゼラチンの殻を使用してよい。カシェ剤の殻材料は、厚いデンプンでも他の食用ペーパーでもよい。丸剤、トローチ剤、成型錠剤、又は錠剤散薬では、湿式マッシング（moist massing）技術を使用し得る。
【０１０６】
治療薬は、粒径約１ｍｍの顆粒剤又はペレット剤の形態の微細な多粒子剤として製剤に含めることができる。カプセル投与用の材料の製剤は、散剤、軽度圧縮プラグ剤として、又は錠剤であってもよい。治療薬は、圧縮により調製し得る。
【０１０７】
着色剤と芳香剤もすべて含めてよい。例えば、ＣＰＧ５２３６４（又は誘導体）は、（リポソーム又はマイクロスフェア被包化によるように）製剤化してから、着色剤と芳香剤を含有する冷蔵飲料のように、食用品の内部にさらに含めてよい。
【０１０８】
治療薬の容量は、不活性材料で希釈又は増加させてよい。これらの希釈剤には、炭水化物、特に、マンニトール、ａ−ラクトース、無水乳糖、セルロース、ショ糖、修飾デキストラン及びデンプンを含めることができる。三リン酸カルシウム、炭酸マグネシウム、及び塩化ナトリウムが含まれる、ある種の無機塩も充填剤として使用してよい。いくつかの市販の希釈剤は、Ｆａｓｔ−Ｆｌｏ、Ｅｍｄｅｘ、ＳＴＡ−Ｒｘ  １５００、Ｅｍｃｏｍｐｒｅｓｓ、及びＡｖｉｃｅｌｌである。
【０１０９】
治療薬の製剤には、固体剤形中へ崩壊剤を含めてよい。崩壊剤として使用する材料には、限定されないが、デンプン（デンプンベースの市販の崩壊剤、Ｅｘｐｌｏｔａｂが含まれる）が含まれる。デンプングリコール酸ナトリウム、アンバーライト（Amberlite）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、超長鎖アミロペクチン（ultramylopectin）、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジピール、酸カルボキシメチルセルロース、天然スポンジ、及びベントナイトもすべて使用してよい。別の形態の崩壊剤は、不溶性のカチオン交換樹脂である。粉末化ゴムを崩壊剤として、そして結合剤として使用してよく、これらには、寒天、カラヤ、又はトラガカントのような粉末化ゴムを含めることができる。アルギン酸とそのナトリウム塩も、崩壊剤として有用である。
【０１１０】
治療剤をまとめて硬い錠剤を生成するために結合剤を使用してよく、それには、アカシア、トラガカント、デンプン、及びゼラチンのような天然産物由来の材料が含まれる。他には、メチルセルロース（ＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）、及びカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）が含まれる。ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）とヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）は、いずれもアルコール溶液剤において治療薬を造粒するために使用し得る。
【０１１１】
製剤化プロセスの間の膠着を防ぐために、治療薬の製剤に抗摩擦剤を含めてよい。治療薬と金型の間の層として滑沢剤を使用してよく、これらには、限定されないが、ステアリン酸（そのマグネシウム及びカルシウム塩が含まれる）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、流動パラフィン、植物オイル、及びワックスを含めることができる。ラウリル硫酸ナトリウム、ラルリル硫酸マグネシウム、様々な分子量のポリエチレングリコール、Ｃａｒｂｏｗａｘ  ４０００及び６０００のような可溶性の滑沢剤も使用してよい。
【０１１２】
製剤化の間に薬物の流動特性を改善して、圧縮の間に再構成を支援する流動促進剤（glidants）を加えてよい。流動促進剤には、デンプン、タルク、発熱性シリカ、及び水和珪素アルミン酸塩を含めてよい。
【０１１３】
治療薬の水性環境への溶解を促進するために、界面活性剤を湿潤剤として加えてよい。界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、及びスルホン酸ジオクチルナトリウムのようなアニオン性洗浄剤を含めてよい。カチオン性洗浄剤も使用してよく、塩化ベンズアルコニウム又は塩化ベンゼトミウムを含めてよい。製剤に界面活性剤として含め得る潜在的な非イオン性洗浄剤のリストは、ラウロマクロゴール４００、ポリオキシル４０ステアレート、ポリオキシエチレン水素添加ヒマシ油１０、５０、及び６０、グリセロールモノステアレート、ポリソルベート４０、６０、６５、及び８０、ショ糖脂肪酸エステル、メチルセルロース、及びカルボキシメチルセルロースである。これらの界面活性剤は、ＣＰＧ５２３６４又は誘導体の製剤に、単独で、又は異なる比の混合物として存在し得る。
【０１１４】
経口で使用し得る医薬調製物には、ゼラチンより作られるプッシュ式（push-fit）カプセル剤、並びにゼラチンとグリセロール又はソルビトールのような可塑剤で作られる密封の軟カプセル剤が含まれる。プッシュ式カプセル剤は、乳糖のような充填剤、デンプンのような結合剤、及び／又はタルク又はステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、並びに、任意選択的に安定化剤と混合して、有効成分を含有し得る。軟カプセル剤では、脂肪オイル、流動パラフィン、又は液体ポリエチレングリコールのような好適な液剤に活性化合物を溶解又は懸濁させてよい。さらに、安定化剤を加えてよい。経口投与用に製剤化されるミクロスフェア剤も使用してよい。そのようなミクロスフェア剤は、当該技術分野で十分に定義されている。経口投与用の製剤は、いずれもそのような投与に適した投与量であるべきである。
【０１１５】
頬内投与では、組成物は、慣用のやり方で製剤化される錠剤又はトローチ剤の形態を取ってよい。
吸入による投与では、本発明による使用の化合物を、簡便には、エアゾールスプレー提示物（presentation）の形態で、加圧パック又はネブライザーより、好適な推進剤（例、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、又は他の好適なガス）の使用により送達してよい。加圧エアゾール剤の場合、目盛量を送達するための栓を提供することによって、投与量単位を決定してよい。化合物の粉末ミクスと乳糖又はデンプンのような好適な粉末基剤を含有する、吸入器又は通気器に使用の例えばゼラチンのカプセル剤及びカートリッジ剤を製剤化することができる。
【０１１６】
本明細書にまた考慮するのは、ＣＰＧ５２３６４（又はその誘導体）の肺送達である。ＣＰＧ５２３６４（又は誘導体）は、吸入の間に哺乳動物の肺へ送達されて、肺の上皮層を通って血流へ移行する。吸入分子についての他の報告には、Adjei et al., 1990, Pharmaceutical Research, 7: 565-569; Adjei et al., 1990, International Journal of Pharmaceutics, 63:135-144 (酢酸ロイプロリド); Braquet et al., 1989, Journal of Cardiovascular Pharmacology, 13 (suppl. 5):143-146 (エンドセリン−１); Hubbard et al., 1989, Annals of Internal Medicine, Vol. III, 206-212頁(ａ１−アンチトリプシン); Smith et al., 1989, J. Clin. Invest. 84: 1145-1146 (ａ−１−プロテイナーゼ); Oswein et al., 1990,「タンパク質のエアゾール化（Aerosolization of Proteins）」第２回呼吸系薬物送達シンポジウム抄録（Proceedings of Symposium on Respiratory Drug Delivery II）、コロラド州キーストン（３月）、(組換えヒト成長ホルモン); Debs et al., 1988, J. Immunol. 140: 3482-3488 (インターフェロンγと腫瘍壊死因子α) 、及び Platz et al., 米国特許第５，２８４，６５６号（顆粒球コロニー刺激因子）が含まれる。薬物の全身効果への肺送達の方法及び組成物については、Wong et al への米国特許第５，４５１，５６９号（１９９５年９月１９日発行）に記載されている。
【０１１７】
本発明の実施における使用に考慮されるのは、治療用製品の肺送達用に設計された広範囲の機械デバイスであり、限定されないが、ネブライザー、目盛量付き吸入器、及び粉末吸入器が含まれ、これらはいずれも当業者に馴染みがある。
【０１１８】
本発明の実施に適した市販デバイスのいくつかの具体例は、Ｕｌｔｒａｖｅｎｔネブライザー（製造元、マリンクロット社、ミズーリ州セントルイス）；Ａｃｏｒｎ  ＩＩネブライザー（製造元、Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，コロラド州エングルウッド；Ｖｅｎｔｏｌｉｎ目盛量付き吸入器（製造元、グラクソ社、ノースカロライナ州リサーチトライアングルパーク；及び、Ｓｐｉｎｈａｌｅｒ粉末吸入器（製造元、ファイソンズ社、マサチューセッツ州ベドフォード）である。
【０１１９】
このようなデバイスは、いずれもＣＰＧ５２３６４（又は誘導体）の調剤に適した製剤の使用を必要とする。典型的には、各製剤は、利用するデバイスの種類に特定であり、療法に有用な通常の希釈剤、アジュバント、及び／又は担体に加えて、適正な推進材料の使用を伴ってよい。また、リポソーム、マイクロカプセル剤又はミクロスフェア剤、封入複合体、又は他の種類の担体の使用を考慮する。
【０１２０】
ジェット又は超音波のいずれかのネブライザーでの使用に適した製剤は、典型的には、１ｍＬの溶液につき約０．１〜２５ｍｇの生物学的に活性なＣＰＧ５２３６４の濃度で水に溶けたＣＰＧ５２３６４（又は誘導体）を含む。この製剤には、緩衝液と単純な糖も（例えば、ＣＰＧ５２３６４安定化と浸透圧の調節のために）含めてよい。ネブライザー製剤は、エアゾール剤を生成時の溶液の微粉化により引き起こされるＣＰＧ５２３６４の表面誘発性の凝集を抑えるか又は防ぐために、界面活性剤も含んでよい。
【０１２１】
目盛量の吸入器デバイスでの使用のための製剤は、一般に、界面活性剤の助力で推進剤に懸濁したＣＰＧ５２３６４（又は誘導体）を含有する微細化粉末を含む。推進剤は、この目的に利用される、クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、又は炭化水素（トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール、及び１，１，１，２−テトラフルオロエタン、又はこれらの組合せが含まれる）のような、どの慣用の材料でもよい。好適な界面活性剤には、ソルビタントリオレエートと大豆レシチンが含まれる。オレイン酸も界面活性剤として有用であり得る。
【０１２２】
粉末吸入デバイスより調剤するための製剤は、ＣＰＧ５２３６４（又は誘導体）を含有する微細化した乾燥粉末を含み、乳糖、ソルビトール、ショ糖、又はマンニトールのような増嵩剤も、粉末のデバイスからの分散を促進する量（例えば、製剤の５０〜９０重量％）で含めてよい。ＣＰＧ５２３６４（又は誘導体）は、遠位の肺への最も有効な送達には、最も有利には１０マイクロメートル（μｍ）未満、最も好ましくは０．５〜５μｍの平均粒径での粒子型で製造すべきである。
【０１２３】
本発明の医薬組成物の経鼻送達も考慮される。経鼻送達は、治療生成物の鼻への投与後に、生成物の肺における沈積を必要とせずに、本発明の医薬組成物の血流への直接通過を可能にする。経鼻送達用の製剤には、デキストラン又はシクロデキストリンとの製剤が含まれる。
【０１２４】
経鼻投与に有用なデバイスは、目盛量のスプレー装置が付いた小さな硬いボトルである。１つの態様では、本発明の医薬組成物の溶液を一定量のチャンバへ吸引することによって目盛量を送達する（このチャンバには、チャンバ中の液剤が圧縮されるときにスプレーを形成することによってエアゾール製剤をエアゾール化する大きさにした空孔部がある）。本発明の医薬組成物を投与するには、チャンバを圧縮する。特定の態様において、チャンバは、ピストン配置である。そのようなデバイスが市販されている。
【０１２５】
あるいは、圧搾を使用するときにスプレーを形成することによってエアゾール製剤をエアゾール化する大きさにした空孔部又は開口部の付いたプラスチックの圧搾ボトルを使用する。開口部は、通常、ボトルの先端に見出されて、先端は、一般に、エアゾール製剤の効率的な投与のために鼻腔通路に一部適合するように先細りになっている。好ましくは、経鼻吸入器は、目盛量の薬物の投与のために、目盛量のエアゾール製剤を提供する。
【０１２６】
本化合物は、それらを全身に送達することが望ましい場合、注射による（例えば、ボーラス注射又は連続注入による）非経口投与用に製剤化してよい。注射用の製剤は、単位剤形において（例えば、アンプル剤において、又は多用量容器において）追加の保存剤とともに提示してよい。組成物は、油性又は水性担体中の懸濁液剤、溶液剤、又は乳剤のような形態をとってよく、懸濁剤、安定化剤、及び／又は分散剤のような製剤用剤を含有してよい。
【０１２７】
非経口投与用の医薬製剤には、水溶型の活性化合物の水溶液剤が含まれる。付言すると、活性化合物の懸濁液剤は、適正な油性の注射懸濁液剤として調製してよい。好適な親油性の溶媒又は担体には、ゴマ油のような脂肪オイル、又はオレイン酸エチル又はトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、又はリポソームが含まれる。水性の注射懸濁液剤は、懸濁液剤の粘度を高める、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、又はデキストランのような物質を含有してよい。任意選択的に、懸濁液剤は、好適な安定化剤、又は高濃度溶液剤の調製を可能にする、化合物の溶解性を高める薬剤も含有してよい。
【０１２８】
あるいは、活性化合物は、好適な担体（例えば、無菌のパイロジェンフリー水）で使用前に構成用の粉末型であってよい。
本化合物は、例えば、ココア脂又は他のグリセリドのような慣用の坐剤基剤を含有する、坐剤又は貯留浣腸剤のような、直腸又は膣用の組成物に製剤化してもよい。
【０１２９】
上記に記載の製剤に加えて、本化合物は、デポー調製物として製剤化してもよい。そのような長期作用型の製剤は、好適なポリマー材料又は疎水性材料（例えば、許容されるオイル中の乳剤として）又はイオン交換樹脂とともに、又はほとんど水に溶けない誘導体として（例えば、ほとんど水に溶けない塩として）製剤化してよい。
【０１３０】
本医薬組成物は、好適な固相又はゲル相の担体又は賦形剤も含んでよい。そのような担体又は賦形剤の例には、限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリエチレングリコールのようなポリマーが含まれる。
【０１３１】
好適な液体又は固体の医薬調製物の形態は、例えば、吸入用の水又は生理食塩水の溶液剤、被包化、渦巻状化（encochleated）、微視的な金粒子上へコートされ、リポソームに含有され、噴霧状にされるエアゾール剤、皮膚への移植用か、又は皮膚へ傷つけるための鋭利な物体上で乾燥されるペレット剤である。医薬組成物には、顆粒剤、散剤、錠剤、コート錠剤、（マイクロ）カプセル剤、坐剤、シロップ剤、乳剤、懸濁液剤、クリーム剤、滴剤、又は活性化合物の遅延放出を伴う調製物も含まれ、これらの調製物において、賦形剤と添加剤、及び／又は崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨潤剤、滑沢剤、芳香剤、甘味剤、又は可溶化剤のような助剤は、上記に記載のように慣例的に使用する。医薬組成物は、多様な医薬送達系における使用に適している。薬物送達の方法の簡略な概論については、参照により本明細書に組み込まれる、Langer, Science 249: 1527-1533, 1990 を参照のこと。
【０１３２】
ＣＰＧ５２３６４と任意選択的に他の治療薬剤は、そのまま（希釈せずに）投与しても、医薬的に許容される塩の形態で投与してもよい。医薬品で使用する場合、その塩は、医薬的に許容されるべきであるが、医薬的に許容されない塩も、簡便には、その医薬的に許容される塩を製造するために使用してよい。
【０１３３】
好適な緩衝剤には、酢酸と塩（１〜２％  ｗ／ｖ）；クエン酸と塩（１〜３％  ｗ／ｖ）；ホウ酸と塩（０．５〜２．５％  ｗ／ｖ）；及び、リン酸と塩（０．８〜２％  ｗ／ｖ）が含まれる。好適な保存剤には、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％  ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３〜０．９％  ｗ／ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％  ｗ／ｖ）、及びチメロサール（０．００４〜０．０２％  ｗ／ｖ）が含まれる。
【０１３４】
本発明の医薬組成物は、有効量のＣＰＧ５２３６４と任意選択的に治療薬剤を医薬的に許容される担体に含まれて含有する。
具体的には、限定されないがＣＰＧ５２３６４が含まれる治療薬剤（複数）は、粒子で提供してよい。本明細書に使用する粒子は、全部又は一部が本明細書に記載するＣＰＧ５２３６４又は他の治療薬剤（複数）より構成され得る、ナノ又はミクロ粒子（又は、ある場合はより大きい粒子）を意味する。粒子は、限定されないが、腸溶コーティング剤が含まれるコーティング剤により囲まれる芯の中に治療薬剤（複数）を含有してよい。治療薬剤（複数）は、粒子全体に分散してもよい。治療薬剤（複数）は、粒子中へ吸着されてもよい。粒子は、０次放出、一次放出、二次放出、遅延放出、持続放出、即時放出、及びこれらのあらゆる組合せ、等が含まれる、あらゆるオーダーの放出動態であってよい。粒子には、治療薬剤（複数）に加えて、限定されないが、侵食性、非侵食性、生物分解性、又は非生物分解性の材料又はこれらの組合せが含まれる、調剤及び医薬品の技術分野で定型的に使用されるどの材料も含めてよい。粒子は、ＣＰＧ５２３６４を溶液又は半固体の状態において含有するマイクロカプセル剤であってよい。粒子は、ほとんどどの形状であってもよい。
【０１３５】
治療薬剤（複数）を送達する粒子の製造には、非生物分解性と生物分解性の両方のポリマー材料を使用し得る。そのようなポリマーは、天然又は合成のポリマーであってよい。ポリマーは、放出が望まれる時間の期間に基づいて選択される。特に興味深い生体吸着性ポリマーには、その教示が参照により本明細書に組み込まれる、Macromolecules, (1993) 26: 581-587 において H. S. Sawhney, C. P. Pathak and J. A. Hubell により記載される生体侵食性ヒドロゲルが含まれる。これらには、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギン酸塩、キトサン、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、及びポリ（オクタデシルアクリレート）が含まれる。
【０１３６】
治療薬剤（複数）は、制御放出システムに含有されてよい。用語「制御放出」は、製剤からの薬物放出の方式及びプロフィールが制御される、あらゆる薬物含有製剤に言及すると企図される。これは、即時放出、並びに非即時放出の製剤に関連して、非即時放出製剤には、限定されないが、持続放出製剤と遅延放出製剤が含まれる。用語「持続放出」（「延長放出」とも呼ばれる）は、その慣用の意味において、延長された時間の期間にわたる薬物の漸次放出を提供して、好ましくは（必ずではないが）、延長された時間の期間にわたって薬物の実質的に一定した血液レベルをもたらす薬物製剤に言及するために使用される。用語「遅延放出」は、その慣用の意味において、製剤の投与と薬物のそこからの放出の間に時間の遅れがある薬物製剤に言及するために使用される。「遅延放出」は、延長された時間の期間にわたる薬物の漸次放出を伴っても伴わなくてもよいので、「持続放出」であってもなくてもよい。
【０１３７】
長期持続放出インプラントの使用は、慢性状態の治療に特に適している場合がある。本明細書に使用する「長期」放出は、インプラントが有効成分の治療レベルを少なくとも７日間、そして好ましくは３０〜６０日間送達するように構築及び配置されていることを意味する。長期持続放出インプラントは当業者によく知られていて、上記に記載の放出システムのいくつかが含まれる。
【０１３８】
本発明を以下の実施例によりさらに例示するが、これらは、さらに限定するものと解釈してはならない。本出願を通して引用されるすべての参考文献（論文の文献、発行特許、公開特許出願、及び同時出願中の特許出願が含まれる）の内容全体は、参照により明確に本明細書に組み込まれる。
【０１３９】
実施例
実施例１
ＣＰＧ５２３６４の合成
本実施例は、遊離塩基として（工程１〜６）、そして重硫酸塩として（工程７）のＣＰＧ５２３６４の合成について記載する。
【０１４０】
工程１
【０１４１】
【化６】
2009029780.tif 000007
【０１４２】
炭酸ナトリウム（６３．０グラム、０．６０モル）を含有する水（４００ｍＬ）中の４−フルオロベンズアルデヒド（４９．６グラム、０．４０モル）及びＮ−メチルピペラジン（６９．５グラム、０．６９５モル）の混合物を環流で２１時間撹拌した。冷却後、この混合物を、水（１０００ｍＬ）を含有する分液漏斗へ注いで、油性の生成物を塩化メチレン（３Ｘ２００ｍＬ）へ抽出した。合わせた抽出物を水で洗浄してから、溶媒を真空でストリッピングして、アルデヒドを、冷却時に固化するオイルとして得た。この固形物をヘキサンに摩砕してから、濾過により単離した。乾燥後、７５グラム（９２％）のＮ−メチル−Ｎ’−（４−ホルミル）フェニル−ピペラジンを黄褐色の固形物として得た。
【０１４３】
工程２
【０１４４】
【化７】
2009029780.tif 000008
【０１４５】
塩化メチレン（７５０ｍＬ）中の２−ニトロ−４，５−ジメトキシ安息香酸（１００グラム、０．４４モル）の撹拌スラリーへ塩化チオニル（ＳＯＣｌ２，５２．４グラム、０．４４モル）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（０．５ｍＬ）を加えた。このスラリーを３０〜３５℃で澄明な溶液が生じるまで加熱してから、加熱をさらに３０分間続けた。全体の時間は、約２時間であった。室温へ冷却後、この溶液を、２０℃の水浴に冷やした塩化メチレン（２００ｍＬ）及び濃アンモニア（ＮＨ４ＯＨ，２００ｍＬ）の激しく撹拌する混合物へ滴下した。この酸塩化物溶液の完全な添加の後で、混合物をさらに３０分間撹拌した。固体生成物を濾過により単離し、水に続いて塩化メチレンにより、さらに水で再び洗浄してから、乾燥させた。２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンズアミドの収量は、薄黄色い固形物として９１グラム（９１．４％）であった。任意選択的に、生成物は、水性エタノールより再結晶させることができる。
【０１４６】
この工程において、ＤＭＦの触媒としての使用は、必須でない。酸塩化物は、触媒を使用することなく、以下のように生成することができる。トルエン（１００ｍＬ）中の２−ニトロ−４，５−ジメトキシ安息香酸（１１．４グラム，０．０５モル）の撹拌スラリーへ塩化チオニル（６．０グラム、０．５０４モル）を加えた。このスラリーを撹拌して、塩化チオニルの環流を引き起こす１００℃に設定した油浴において加熱した。この溶液を、澄明な溶液が生じるまで環流に保ってから、加熱をさらに３０分続けると、この時までに、塩化チオニルのほとんどが消費されて、環流は１分あたり数滴の遅さになっていた。全体の時間は、約２時間であった。室温へ冷却後、この溶液を、２０℃の水浴に冷やしたトルエン（１００ｍＬ）及び濃アンモニア（１００ｍＬ）の激しく撹拌する混合物へ滴下した。この酸塩化物溶液の完全な添加の後で、混合物をさらに３０分間撹拌した。固体生成物を濾過により単離し、トルエンに次いで水で洗浄して、乾燥させた。２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンズアミドの収量は、薄黄色い固形物として１０．４グラム（９２％）であった。
【０１４７】
工程３
【０１４８】
【化８】
2009029780.tif 000009
【０１４９】
エタノール（７００ｍＬ）中の２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンズアミド（９１グラム，０．４０モル）のスラリーを窒素下に撹拌しながら、１０％パラジウム担持カーボン（Ｐｄ／Ｃ，１．０グラム）を加えた。このスラリーを撹拌及び加熱して還流させながら、水（５０ｍＬ）に溶かしたギ酸アンモニウム（７６．１グラム，１．２０モル）の溶液を滴下漏斗より４時間の期間にわたり少量ずつ加えた。還元が進行するにつれて炭酸アンモニウムが冷却器に生成するので、大口径の冷却器を使用した。周期的に冷却器を外し、水で洗浄して、炭酸アンモニウムを除去した。添加が完了した後で、反応物を環流でさらに３０分間加熱した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ；シリカ、塩化メチレン中１０％メタノール）は、アントラニルアミドへの完全な変換を示した。この溶液を濾過して触媒を除いてから、真空下にストリッピングした。固体残渣を水より再結晶させて、生成物をオフホワイトの固形物として得た。収量は、６６グラム（８４．１％）であった。
【０１５０】
工程４
【０１５１】
【化９】
2009029780.tif 000010
【０１５２】
４，５−ジメトキシアントラニルアミド（６６．０グラム、０．３３６モル）とＮ−メチル−Ｎ’−（４−ホルミルフェニル）ピペラジン（６８．７グラム、０．３３６モル）をジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ，５００ｍＬ）中のメタ重亜硫酸ナトリウム（ＮａＨＳＯ３，４７．９グラム、０．２５１モル）及び水（４．５３ｍＬ，０．２５１モル）と一緒にした。この混合物を１５０〜１５５℃で９０分間撹拌した。沈殿生成物を含有するこのスラリーを９０℃へ冷やして、水と氷（１０００ｍＬ）へ注ぐと、生成物が結晶することを引き起こした。この混合物を氷上で３０分間撹拌してから、濾過して、キナゾリノンを黄褐色の粉末として単離して、これを水でよく洗浄した。乾燥後、１１３グラム（８８．４％）のジメトキシキナゾリノンを得た。ＴＬＣ（シリカ、塩化メチレン中１０％メタノール）は、生成物が推定により９５％より高い純度であることを示した。これをさらに精製せずに次の工程に使用した。精製が必要であれば、キナゾリノンは、ＤＭＦ又は１，２−ジクロロベンゼンより再結晶させる。
【０１５３】
工程５
【０１５４】
【化１０】
2009029780.tif 000011
【０１５５】
上記のジメトキシキナゾリノン（１１３グラム、０．２９７モル）を１０００ｍＬ丸底フラスコに入れて、オキシ塩化リン（５００ｍＬ）を加えた。この混合物を撹拌し、８時間環流させて、橙色のスラリーを得た。あるいは、環流に先立って、ジメトキシキナゾリノンをオキシ塩化リンへ、後者を撹拌させながら、ゆっくり加えてよい。冷却後、このスラリーを濾過して、ジエチルエーテルで洗浄した。この橙色の固形のクロロキナゾリン塩を塩化メチレン（１０００ｍＬ）及び水（５００ｍＬ）の混合物において、炭酸カリウムの２０％溶液を慎重に加えながら撹拌した。１５分間の撹拌後、塩化メチレン溶液を単離し、濾過して、少量の不溶性材料を除去した。この塩化メチレン溶液を約２００ｍＬの容量まで真空で濃縮して、この溶液を氷上で冷やした。この混合物を濾過し、固形物を少量の冷塩化メチレンで洗浄して、このクロロキナゾリンを固形のオフホワイトの遊離塩基として８４．７グラム（７１．５％）の収量で得た。このクロロキナゾリンは、トルエンより再結晶させる。
【０１５６】
工程５（別法）
ジメトキシキナゾリノン（６４．４グラム、０．１６９モル）を１，２−ジクロロベンゼン（２５０ｍＬ）とともに２０００ｍＬ丸底フラスコに入れて、この混合物を撹拌して、１３０℃まで加熱した。この温度でオキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３，５７．９グラム、０．３３９モル、３１．６ｍＬ）を滴下漏斗よりゆっくり加えた。オキシ塩化リンを加えたとき、最初のスラリーは、橙色の溶液になった。この溶液を１３０℃で１時間撹拌及び加熱して、橙色のスラリーを得た。冷却後、このスラリーをジクロロメタン（５００ｍＬ）で希釈して、この混合物を氷浴中で撹拌した。この冷たい混合物へ水（２５０ｍＬ）を滴下漏斗より加えた。１５分間の撹拌後、水（１２５ｍＬ）に溶かした水酸化ナトリウム（６７．８グラム、１．７０モル）の溶液を、温度を２０℃未満に保つ速度で、滴下漏斗より加えた。水酸化ナトリウムを加えたときに、濃厚なスラリーが生じて、色が橙色から黄褐色へ変化した。クロロキナゾリンの可溶性遊離塩基を生成するには、全５モルの塩基が必要である。この混合物を１５分間撹拌した後で、塩化メチレン溶液を単離した。この塩化メチレン溶液を真空でストリッピングして、１，２−ジクロロベンゼンのスラリーをヘキサン（２５０ｍＬ）で希釈した。この混合物を氷上で冷やした。この混合物を濾過し、固形物を少量のへキサンで洗浄して、クロロキナゾリンを固形のオフホワイトの遊離塩基として５２．４グラム（７７．７％）の収量で得た。
【０１５７】
工程６
【０１５８】
【化１１】
2009029780.tif 000012
【０１５９】
クロロキナゾリン（８４．７グラム、０．２１２モル）を２−モルホリノエチルアミン（５５．３グラム、０．４２４モル）及びｎ−ブタノール（３００ｍＬ）と合わせた。このスラリーを環流で１時間撹拌及び加熱して、黄色い溶液を得た。この加熱を止めて、この溶液を１００℃未満に冷やした後で、水（１５ｍＬ）を加えた。この熱い溶液にＣＰＧ５２３６４を種入れして、結晶化を引き起こした。室温で一晩撹拌及び冷却した後で、微結晶性の固形物として生成したＣＰＧ５２３６４の遊離塩基を濾過により単離し、２−プロパノールで洗浄して、１００℃で一定重量になるまで乾燥させた。ＣＰＧ５２３６４の収量は、黄褐色の結晶として（９６．０７グラム、９２．０％）であった。この遊離塩基は、アニソールより容易に再結晶させることができる。
【０１６０】
工程７
【０１６１】
【化１２】
2009029780.tif 000013
【０１６２】
ＣＰＧ５２３６４（５９．１グラム、０．１２モル）を沸騰メタノール（６００ｍＬ）において撹拌して、この熱いスラリーを硫酸（３５．３グラム、０．３６モル）のメタノール（２００ｍＬ）溶液で速やかに処理すると、黄色い溶液の形成を引き起こした。この酸をすべて加えてすぐに、溶液を氷上に冷やすと、重硫酸塩が結晶することを引き起こした。このスラリーを氷の温度で３０分間撹拌してから濾過して、生成物を単離した。この黄色い固形物をメタノールで、次いでジエチルエーテルで洗浄した。１００℃で一定重量まで乾燥後、８４．５グラム（遊離塩基に基づけば８９．５％）の重硫酸塩を黄色い粉末として得た。
【０１６３】
実施例２
ＣＰＧ５２３６４は、トランスフェクトされたヒト細胞におけるＴＬＲシグナル伝達に in vitro で拮抗する
レポーターベクター（ＮＦκＢ−ルシフェラーゼ）と組換えヒトＴＬＲ９（ｈＴＬＲ９）又はＴＬＲ８（ｈＴＬＲ８）のいずれかで同時トランスフェクトしたヒト胚性腎臓（ＨＥＫ２９３）細胞において、アゴニスト刺激ヒトＴＬＲ９及びＴＬＲ８シグナル伝達を阻害するのに必要なヒドロキシクロロキン及びＣＰＧ５２３６４の濃度を評価した。様々な濃度のＣＰＧ５２３６４又はヒドロキシクロロキンとともに細胞を１時間インキュベートした後で、特異的なアゴニスト（ｈＴＬＲ９には非メチル化ＣｐＧ  ＤＮＡ；ｈＴＬＲ８にはＲＮＡ；又は、レポーターベクター単独でトランスフェクトした対照細胞にはＩＬ−１）を加えた。１６時間後、細胞を採取して、ルシフェラーゼ活性をルミノメーターにより測定した。これらの測定値より阻害濃度（５０％）値を計算した。表１に示すように、３〜１０回の独立した実験からの結果は、ヒドロキシクロロキンと比較して、ＣＰＧ５２３６４が、ｈＴＬＲ９のほぼ１４倍強力なアンタゴニストであり、ｈＴＬＲ８の７１倍強力なアンタゴニストであることを示した。
【０１６４】
表１：トランスフェクトされたＨＥＫ細胞における、ＣＰＧ５２３６４及びヒドロキシクロロキンによるヒトＴＬＲ９及びＴＬＲ８の拮抗作用
【０１６５】
【表１】
2009029780.tif 000014
【０１６６】
実施例３
ＣＰＧ５２３６４は、トランスフェクトされたヒト細胞と単離ヒトＰＢＭＣにおけるＴＬＲシグナル伝達に in vitro で拮抗する
ＣＰＧ５２３６４のＴＬＲ７／８／９拮抗作用について、単離したヒト末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）においても評価した。ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、又はＴＬＲ９アゴニストにより in vitro で刺激したヒトＰＢＭＣは、様々なサイトカインを培養基へ合成して、これをＥＬＩＳＡにより検出することができる。アゴニスト刺激サイトカイン分泌の阻害を、ＴＬＲアンタゴニストを比較する別のアッセイとして使用した。トランスフェクトしたＨＥＫ細胞と単離ＰＢＭＣの両方におけるＴＬＲ８及びＴＬＲ９拮抗作用の結果の同等性のために、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９拮抗作用の結果をプールした（ＴＬＲ８及びＴＬＲ９拮抗作用は、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞又は単離ＰＢＭＣを用いるアッセイより、ＴＬＲ７拮抗作用は、ヒトＰＢＭＣより）。
【０１６７】
ヒトＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９のアゴニスト刺激応答の、抗マラリア参照化合物（これは、ＳＬＥを治療するために使用されてきた）とＣＰＧ５２３６４によるアンタゴニストアッセイからプールした結果を表２に要約する。プールした結果からの平均ＩＣ５０に加えて、ＴＬＲ８／ＴＬＲ９及びＴＬＲ７／ＴＬＲ９拮抗作用の応答比を計算して、交差ファミリー拮抗作用を比較した。これらの比は、あるＴＬＲと別のＴＬＲについての化合物の相対的な拮抗作用として解釈することができる；比が小さいほど、受容体間で交差拮抗作用が大きいことを表す。
【０１６８】
これらのプールした結果においてヒドロキシクロロキンと比較すると、ＣＰＧ５２３６４は、１８ｎＭ（約９ｎｇ／ｍＬ）のＩＣ５０を有する６倍強力なＴＬＲ９アンタゴニスト；３５ｎＭ（約１７ｎｇ／ｍＬ）のＩＣ５０を有する５２倍強力なＴＬＲ８アンタゴニスト；そして、１３ｎＭ（約６ｎｇ／ｍＬ）のＩＣ５０を有する６２倍強力なＴＬＲ７アンタゴニストである。ＴＬＲ９により特異的であるように見えるヒドロキシクロロキンとは対照的に、ＣＰＧ５２３６４は、ＴＬＲ７／８／９ファミリーの３つのメンバー：ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９のすべてに対して強力なアンタゴニストである。従って、ＣＰＧ５２３６４は、ＴＬＲ７／８／９拮抗作用の効力においてだけでなく、交差ファミリー拮抗作用においてもヒドロキシクロロキンに優るものであるように見える。
【０１６９】
表２：参照の抗マラリア化合物と比較したＣＰＧ５２３６４のアンタゴニスト効力（プールしたデータ）
【０１７０】
【表２】
2009029780.tif 000015
【０１７１】
実施例４
ＣＰＧ５２３６４は、ＴＬＲ９刺激ＩＰ−１０産生を in vivo で阻害する
ＣＰＧ５２３６４と抗マラリア剤の阻害効果を、マウスにおけるＴＬＲ９及びＴＬＲ７刺激ＩＰ−１０産生に対するこれら薬剤の５０％阻害用量（ＩＤ５０）の評価によって in vivo で比較した。マウスに、様々な用量のＣＰＧ５２３６４又は抗マラリア剤、又はＰＢＳ（担体対照）を腹腔内（ＩＰ）注射又は経口ガバージュのいずれかにより、ＴＬＲ９又はＴＬＲ７アゴニストの投与前に加えた。アゴニスト投与後３時間での血漿ＩＰ−１０濃度の測定によりアゴニスト活性を評価した。
【０１７２】
ＴＬＲ９刺激ＩＰ−１０産生の拮抗作用の比較は、ＣＰＧ−５２３６４がＩＰ又は経口経路のいずれの投与にもかかわらず、抗マラリア剤のいずれよりも強力なアンタゴニストであることを示した（表３）。ＩＰ投与後、ＣＰＧ５２３６４は、抗マラリア剤よりほぼ６倍〜４３倍強力であった。経口投与後、ＣＰＧ５２３６４は、クロロキンよりほぼ３７倍強力で、ヒドロキシクロロキンより２００倍以上強力であった。
【０１７３】
表３：マウスにおけるＴＬＲ９刺激ＩＰ−１０産生のＩＰ又は経口投与後の拮抗作用
【０１７４】
【表３】
2009029780.tif 000016
【０１７５】
実施例５
ＣＰＧ５２３６４は、ＳＬＥのマウス自己免疫モデルにおいて抗ｄｓＤＮＡ力価を低下させる
狼瘡のよく研究されたマウスモデル、ヒトＳＬＥに類似した多くの疾患後遺症を有する狼瘡傾向ＭＲＬ  ｌｐｒ／ｌｐｒマウスにおいて、ＣＰＧ５２３６４の活性をヒドロキシクロロキンのそれと比較した。Andrews BS et al., J Exp Med. 1978; Nov 1; 148(5): 1198-1215。罹患したマウスは、ヒトＳＬＥに類似した分子（ＩＦＮサイン）と臨床（自己抗体産生と糸球体腎炎）の両方の特徴がある自発的な全身性の自己免疫を発症する。このｌｐｒ（リンパ増殖）突然変異は、ＭＲＬ遺伝バックグラウンドでの自発的な突然変異として生じて、プログラム化された細胞死に関与する腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーの受容体のメンバーである、Ｆａｓ（ＣＤ９５）のヌル対立遺伝子であることが見出された。マウスは、６週齢までに血清自己抗体を、そして１２週齢までにリンパ節障害の証拠を発現する。これらの動物で観察される大量のリンパ節障害は、Ｂ２２０＋ＣＤ４−ＣＤ８−（二重陰性）Ｔ細胞の稀な集団の蓄積（ヒト狼瘡においては見出されない状態）によるものであることが示されている。動物は、１６週齢までに進行性の腎疾患と顕著なタンパク尿症を発症する。死亡率は、２０週齢までにほぼ５０％である。故に、これらの動物は、攻撃的な疾患へ寄与する固有の遺伝突然変異を有する。ＴＬＲは、おそらくは、この遺伝的に推進される疾患の病因に直接的な役割を担うわけではないが、疾患増悪へは寄与する可能性がある（Leadbetter EA et al., Nature. 2002; Apr 11; 416(6881): 603-607; Krieg AM, Nature Immunology. 2002; 3(5): 423-424）ので、あらゆる潜在的なＴＬＲの寄与をモニタリングすることが可能になる。
【０１７６】
ＭＲＬ  ｌｐｒ／ｌｐｒ  マウスにおいて、疾患発症を阻害するか又は抑制するＣＰＧ５２３６４とヒドロキシクロロキンの能力を評価した。雌性ＭＲＬ  ｌｐｒ／ｌｐｒマウス（ｎ＝１０／群；プラセボ群はｎ＝２０）をＣＰＧ５２３６４（５１又は１５４μｇ；ほぼ２．５５又は７．７ｍｇ／ｋｇ）又は硫酸ヒドロキシクロロキン（５００μｇ；ほぼ２５ｍｇ／ｋｇ）の連日ＩＰ注射で、４週齢より始めて１２週間処置した。この処置の最後に、動物を安楽死させて、血清について抗ｄｓＤＮＡ抗体を分析した（Crithidia luciliae アッセイ）。抗ｄｓＤＮＡ抗体は、ヒトヒトＳＬＥと相関して、抗ｄｓＤＮＡ抗体の低下は、潜在的に臨床上有益であると考えられている。
【０１７７】
ＣＰＧ５２３６４で処置したマウスでは、平均抗ｄｓＤＮＡ力価の有意な低下があった（図１）。図１のデータは、群平均（±ＳＤ）として提示されている。スコア付けは、２１週齢でのＭＲＬ−ｌｐｒマウス由来の陽性対照血清（３．０のスコアを与える）とＢＡＬＢ／ｃマウス由来の陰性対照血清（０のスコアを与える）に対して実施した。ヒドロキシクロロキンは、連日５００μｇの最大耐薬量で無効であった。
【０１７８】
実施例６
単回用量の経口投与後のラットにおけるＣＰＧ５２３６４の吸収及び薬物動態
単回用量投与（４１ｍｇ／ｋｇ）後のラット（３匹／性／用量）において、ＣＰＧ５２３６４の全血での薬物動態と経口バイオアベイラビリティを評価した（図２）。経口投与後、ＣＰＧ５２３６４は速やかに血液に吸収されて、平均Ｔｍａｘは、雄で２．３時間、そして雌で３．３時間であり、雄では１３．１時間、そして雌では１１．４時間の平均見かけ半減期で血液よりゆっくり消失した。ＣＰＧ５２３６４の平均経口バイオアベイラビリティ（用量について正規化して、ＡＵＣ０−２４ｈに基づいて計算した）は、雄でほぼ５２％、そして雌で４２％であった。
【０１７９】
実施例７
単回用量の静脈内投与後のラットにおけるＣＰＧ５２３６４の吸収及び薬物動態
ラットへの単回ＩＶ投薬（８．２ｍｇ／ｋｇ）の後で、ＣＰＧ５２３６４は、雄で２２．１時間、そして雌で１８．４時間の平均消失半減期で血液よりゆっくり消失した。しかしながら、これらの数値は、注射後２４時間までしか試料を採取しなかったので、過小評価であるかもしれない。定常状態での平均分布量（Ｖｄｓｓ）は、ラット中の体内水全体の容量より３０倍以上大きく（Foy JM et al., J. Physiol. 1960 Nov.; 154: 169-176）、ＣＰＧ５２３６４が血液の外側に広く分布することを示唆する。
【０１８０】
実施例８
単回用量の静脈内投与後のイヌにおけるＣＰＧ５２３６４の吸収及び薬物動態
ＣＰＧ５２３６４を単回ＩＶ用量（８．２ｍｇ／ｋｇ）として受けたビーグル犬において、血液薬物動態変数を測定した。ＩＶ投与後、ＣＰＧ５２３６４は、ほぼ２２〜２４時間の平均消失半減期で血液よりゆっくり消失した。７２００ｍＬ／ｋｇ（これは、雌性ビーグル犬の体内水全体の推定範囲：ほぼ５３７〜５８９ｍＬ／ｋｇを超える）より大きい定常状態での平均分布量（Ｖｄｓｓ）に基づけば、ＣＰＧ５２３６４は、血液コンパートメントの外側に十分分布しているように見えた。Wamberg S et al., JNutr. 2002; 132 (6 Suppl. 2): 1711S-1713S。性差は明らかでなかった。
【０１８１】
実施例９
単回用量の経口投与後のサルにおけるＣＰＧ５２３６４の吸収及び薬物動態
単回用量の経口投与（４１又は５０ｍｇ／ｋｇ）後のカニクイザル（cynomolgus monkeys）（３匹／性／用量）において、ＣＰＧ５２３６４の全血での薬物動態変数と経口バイオアベイラビリティについて特性決定した。経口投与（４１ｍｇ／ｋｇ）後、ＣＰＧ５２３６４は雄と雌の両方について７．３時間の平均Ｔｍａｘでゆっくり吸収された（図３）。ＣＰＧ５２３６４は、血液よりゆっくり消失するように見えて、２４時間の最終測定時点でも血中に存在していた。ＣＰＧ５２３６４の平均経口バイオアベイラビリティ（用量について正規化する）は、ＡＵＣ０−２４ｈに基づいて計算するとき、雄でほぼ３１．０％、そして雌で３５．８％であった。注目すべき性差は明らかでなかった。この試験では、不十分な時間点のために消失相を正確に計算することができなかったので、３匹のサル／性／群に５０ｍｇ／ｋｇを経口投与する第二の試験を行って、投薬後３３６時間まで試料を採取した。この試験において、ＣＰＧ５２３６４は、雄で９．３時間、そして雌で１０．７時間の平均Ｔｍａｘで血中へゆっくり吸収された（図４）。ＣＰＧ５２３６４は、雄で１４５．４時間、そして雌で１６１．４時間の平均見かけ半減期で血液よりゆっくり消失した。
【０１８２】
実施例１０
単回用量の静脈内投与後のサルにおけるＣＰＧ５２３６４の吸収及び薬物動態
４１ｍｇ／ｋｇの経口投与と８．２ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ投与の間に７日間のウォッシュアウト期間を設けて、実施例９と同じサルにおいて薬物動態変数を評価した。実施例９において述べたように、単回用量のＩＶ投与（８．２ｍｇ／ｋｇ）後のカニクイザル（３匹／性／用量）において、ＣＰＧ５２３６４の全血における薬物動態変数と静脈内バイオアベイラビリティについて特性決定した。ＩＶ投与後、ＣＰＧ５２３６４は、２１６１ｍＬ／ｋｇ（これは、カニクイザルの体内水全体の推定量：ほぼ５５８ｍＬ／ｋｇより大きい）より大きい定常状態での平均分布量（Ｖｄｓｓ）のために、血液コンパートメントの外側に十分分布しているように見えた。Sweet AY et al., Am J Physiol. 1961; 201(6): 975-979。
【０１８３】
同等物
上記の明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分であるとみなされる。実施例は、本発明の１つの側面の単一の例示と企図されて、他の機能的に同等な態様も本発明の範囲内にあるので、本発明は、提供する実施例によりその範囲を制限されるものではない。当業者には、先述の記載より、本明細書に示して記載したものに加えて本発明の様々な修飾が明らかになるが、それらも付帯の特許請求項の範囲内にある。本発明の利点及び目的は、本発明の各態様に必ずしも含まれるものではない。
【図面の簡単な説明】
【０１８４】
図面は、例示にすぎず、本明細書に開示する発明の可能性のために求められるものではない。
【図１】図１は、ＣＰＧ５２３６４で１２週間処置したＭＲＬ  ｌｐｒ／ｌｐｒマウスにおける平均抗ｄｓＤＮＡ抗体レベルを図示する棒グラフである。Ｙ軸は、Crithidia luciliae アッセイにおける１：１００の血清希釈でのキネトプラスト染色の強度を表す。
【図２】図２は、ラットへの単回用量投与後のＣＰＧ５２３６４の血中薬物動態を図示するグラフである。丸印：８．２ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ。三角形：４１．０ｍｇ／ｋｇ経口。
【図３】図３は、カニクイザルへの単回用量投与後のＣＰＧ５２３６４の血中薬物動態を図示するグラフである。丸印：８．２ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ。三角形：４１．０ｍｇ／ｋｇ経口。
【図４】図４は、カニクイザルへの単回用量経口投与（５０ｍｇ／ｋｇ）後のＣＰＧ５２３６４の血中薬物動態を図示するグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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