(57)【要約】【課題】  ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物を簡便な方法で、かつ効率よく製造しうる方法を提供することを目的とする。【解決手段】  マメ科の植物の花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上を、アルコール、含水アルコール、水又は温水を抽出溶媒として用いて抽出を行い、当該抽出液を濃縮し、得られた濃縮液又は濃縮物を水に溶解し、当該水溶液を吸着カラムに吸着させ、水及び／又は３０％以下のアルコールにより吸着カラムを洗浄した後、３２〜５０％のアルコールを用いて溶出し回収する、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物の製造方法を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
マメ科の植物の花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上を、アルコール、含水アルコール、水又は温水を抽出溶媒として用いて抽出を行い、当該抽出液を濃縮し、得られた濃縮液又は濃縮物を水に溶解し、当該水溶液を吸着カラムに吸着させ、水及び／又は３０％以下のアルコールにより吸着カラムを洗浄した後、３２〜５０％のアルコールを用いて溶出し回収する、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物の製造方法。
【請求項２】
前記アルコールがエタノールである、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記抽出溶媒がエタノール又は含水エタノールである、請求項１又は２のいずれかに記載の製造方法。
【請求項４】
前記濃縮液又は濃縮物を水に溶解した後、当該水溶液に無極性有機溶媒を添加し、分配した水層画分を前記吸着カラムに吸着させる、請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項５】
前記マメ科の植物が、スイートピーである請求項１〜４のいずれかに記載の製造方法。
【請求項６】
前記スイートピーが、スイートピー品種の舞姫又は歌姫である請求項１〜５のいずれかに記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マメ科の植物、特にスイートピーの花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上から、下記の式で表されるケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物を製造する方法に関する。
【０００２】
【化１】
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【背景技術】
【０００３】
現在、スイートピーは観賞用花卉が中心である。そのうち低品質の観賞用スイートピー、脇芽・撒きひげ・余分な葉については、破棄されているのが現状である。さらに、日本にも花の生産（農薬・肥料など）や流通上の環境負荷の低減や鮮度、品質の管理、社会的に責任に対する様々な取り組みを認証する花きの生産業者と流通業者を対象とする花き産業総合認証プログラム（ＭＰＳ：Milleu Programma Sierteelt）が導入され、２００７年３月末より日本で最初のＭＰＳ参加者認証の花の流通がスタートしており、スイートピー産地においてもＭＰＳが導入されると、今後さらに選別段階で破棄される量が増える可能性がある。
【０００４】
食歴がある花は、色々な治療目的に使用されている。例えば、クチナシの花びらは、心配事やストレスで眠れない場合に、キクは血液の浄化作用、高血圧等に、桜は肝臓病に良いとされている。
ところで、スイートピーの粗ポリフェノールは、抗がん作用や抗酸化能等を有することが知られている（非特許文献１参照）。
【０００５】
現在、産業上利用されているポリフェノールは、原料植物から直接抽出した粗抽出物、若しくはある特定のポリフェノール類を分離、精製したものである。
最近の研究では、ポリフェノール中の各成分ごとの生理機能性が徐々に明らかにされつつある。産業上利用する際にも、特定の成分群のみを利用することによる利点も見い出されてきた。
従来、これらの成分を植物から単離するためには、高価な分取用カラムを装備した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による精製が常法であり、生産量のスケールアップが困難であるのが現状である。加えて、純粋又は非常に高純度な単一成分としての天然物由来ポリフェノールは、一部の低分子成分のみが試薬用として市販されているだけである。
【０００６】
【非特許文献１】倉田裕文ら、スイートピー花弁の生理活性物質に関する研究、園芸学会平成１７年度秋季大会（宮城）講演要旨、p.239(2005)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記従来の問題点を解消し、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物を簡便な方法で、かつ効率よく、換言すれば大量、迅速、かつ容易に、製造しうる方法を提供することを目的とするものである。
本発明者らは、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物の効率的な取得方法について検討を行い、その過程で当該化合物がマメ科植物、特にスイートピーの花蕾、花及び葉に顕著に含有されることを見出した。
従って、本発明の目的は、上記実状に鑑み、バイオリサイクルの観点より、スイートピー花蕾、花弁及び葉に含まれるケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物の製造方法を提供することにある。併せて、商品にならずに破棄されているスイートピー未利用資源について、有効に活用しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行い、マメ科植物、特にスイートピー花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上から吸着カラムによりケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物を大量、迅速、かつ容易に製造できることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
【０００９】
請求項１に係る本発明は、マメ科の植物の花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上を、アルコール、含水アルコール、水又は温水を抽出溶媒として用いて抽出を行い、当該抽出液を濃縮し、得られた濃縮液又は濃縮物を水に溶解し、当該水溶液を吸着カラムに吸着させ、水及び／又は３０％以下のアルコールにより吸着カラムを洗浄した後、３２〜５０％のアルコールを用いて溶出し回収する、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物の製造方法を提供するものである。
請求項２に係る本発明は、前記アルコールがエタノールである、請求項１に記載の製造方法を提供するものである。
請求項３に係る本発明は、前記抽出溶媒がエタノール又は含水エタノールである、請求項１又は２のいずれかに記載の製造方法を提供するものである。
請求項４に係る本発明は、前記濃縮液又は濃縮物を水に溶解した後、当該水溶液に無極性有機溶媒を添加し、分配した水層画分を前記吸着カラムに吸着させる、請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法を提供するものである。
請求項５に係る本発明は、前記マメ科の植物が、スイートピーである請求項１〜４のいずれかに記載の製造方法を提供するものである。
請求項６に係る本発明は、前記スイートピーが、スイートピー品種の舞姫又は歌姫である請求項１〜５のいずれかに記載の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
マメ科の植物、特にスイートピーの粗ポリフェノール含有物は、抗酸化能や抗がん作用等の機能性を有していることが報告されている。
本発明によれば、観賞用のスイートピー花弁はもとより、バイオリサイクルの観点から、現在、商品にならず破棄されているスイートピーの花蕾、開花した花、花弁及び葉からケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物が大量に、しかも迅速、かつ容易に製造可能となり、当該化合物に関する試験研究に貢献できる。
また、本発明によれば、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物の各種薬理効果の探索並びにそれを利用した機能性食品、化粧品、試薬、医薬品等を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物の製造方法に関し、マメ科の植物の花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上を、アルコール、含水アルコール、水又は温水を抽出溶媒として用いて抽出を行い、当該抽出液を濃縮し、得られた濃縮液又は濃縮物を水に溶解し、当該水溶液を吸着カラムに吸着させ、水及び／又は３０％以下のアルコールにより吸着カラムを洗浄した後、３１〜５０％のアルコールを用いて溶出し回収することを特徴とするものである。
【００１２】
本発明における原材料は、マメ科の植物の花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上であり、これを単独で、又はいずれか１以上を組み合わせて用いることができる。必要に応じて、脇芽、撒きひげを用いることもできる。
本発明のケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物は、マメ科の植物の特に花弁に顕著に存在することから、少なくとも花弁を含むことが好ましく、この場合、作業性を考慮して開花前の花蕾、開花した花を用いることができる。
【００１３】
マメ科の植物としては、スイートピー（Lathyrus odoratus）をはじめとして、エンドウや大豆等を挙げることができるが、特にスイートピーが好ましい。
スイートピーの品種としては、舞姫、歌姫など、通常栽培されている品種であれば特に制限はないが、特に舞姫、歌姫が好ましい。
【００１４】
スイートピーなど、マメ科の植物の花蕾、開花した花、花弁及び葉としては、新鮮な花蕾、開花した花、花弁、葉などの他に、これらを凍結又は凍結乾燥したもの、温風、天日若しくは遠赤外線により乾燥したもの、又は蒸煮したものなどを用いることができる。
乾燥粉末化の具体的な手順としては、例えば、食品乾燥機を用いて通風乾燥させ、粉砕機を用いて粉末化し、乾燥粉末を得ることができる。
【００１５】
次に、本発明によるマメ科の植物の花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上からのケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物の取得方法について説明する。
本発明は、上記した如きマメ科の植物の花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上を、アルコール、含水アルコール、水又は温水を抽出溶媒として用いて抽出を行い、当該抽出液を濃縮し、得られた濃縮液又は濃縮物を水に溶解し、当該水溶液を吸着カラムに吸着させ、水及び／又は３０％以下のアルコールにより吸着カラムを洗浄した後、３２〜５０％のアルコールを用いて溶出し回収することを特徴とするものである。
【００１６】
即ち、上記した如きマメ科の植物の花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上を、アルコール、含水アルコール、水又は温水を用いて抽出する。
【００１７】
本発明における抽出工程に用いる抽出溶媒としては、アルコール、含水アルコール、水又は温水を用いることができる。
アルコールを抽出溶媒として用いる場合、エタノール、メタノール等を用いることができるが、特に、エタノールを用いることが好ましい。
抽出溶媒として含水アルコールを用いる場合、アルコールを水と混合して用いるときの含水率は特に制限されない。しかしながら、収率向上の観点から、好ましくは２５〜１００％のアルコール、さらに好ましくは４０〜１００％のアルコールを用いることが望ましい。なお、具体的には、乾燥材料を原材料として用いる場合には８０％のアルコールを用い、生材料を原材料として用いる場合には１００％のアルコールを用いることができる。
アルコール又は含水アルコールによる抽出を行う温度は、１０〜１００℃、好ましくは２０〜８０℃で行うことができる。具体的には、室温である２０〜３０℃で行うことができる。
また、水を抽出溶媒として用いる場合、蒸留水、水道水、脱イオン水、超純水などを用いることができ、温水としては、４０〜１００℃程度の温度の水を用いることができる。
【００１８】
抽出時間については、通常、１〜２４時間であり、好ましくは８〜１２時間である。抽出時間が１時間未満であると、抽出効率が低下するため好ましくない。
また、マメ科の植物の花蕾、開花した花、花弁及び葉よりなる群から選ばれた１以上に対する、アルコール、含水アルコール、水又は温水の使用量は、通常、前者１質量部に対し、後者３〜１０容量部の割合である。
【００１９】
得られた抽出液をろ紙、布などのろ材でろ過し、ろ液を回収する。ろ材としては、市販品を用いればよく、例えばろ紙、ミラクロス、ガーゼなどが挙げられる。当該ろ過は、具体的には、市販品のろ紙を用いることができ、例えば、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、ワットマン社製などのろ紙を用いることができる。
また、残渣に前記抽出溶媒を加えて、上記の抽出条件と同じ条件で再抽出することもできる。得られた再抽出液は、上記と同様にろ過することで、再抽出液のろ液を回収する。
得られた再抽出液のろ液は、上記１回目のろ液と混合し、次の濃縮工程に用いることができる。
【００２０】
次に、上記工程で得られた抽出液に含まれるアルコールや水を気化させ濃縮する。当該濃縮工程では、１／１０程度の体積になるまで濃縮を行う。また、乾固するまで行ってもよい。
本発明における抽出液の濃縮は、エバポレーター、凍結乾燥機、減圧乾燥機、恒温機などを用いることによって行うことができる。具体的には、エバポレーター（ＳＥ−１００Ｅ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ製））を用いることができる。
なお、当該濃縮工程において、濃縮後の抽出液の体積が大きい場合、アルコール濃度が高くなる恐れがあり、当該工程の下流で行う吸着カラムでの精製における、カラムへの吸着効率を減少させてしまう恐れがある。
【００２１】
得られた濃縮液もしくは濃縮物は、適当量の水に溶解する。例えば、濃縮液と同量程度の水に溶解する。また、濃縮液の液量が極端に少ない場合や濃縮物の場合などは、前記用いた抽出溶媒の１／１０倍量程度の水に溶解してもよい。ここで用いる水としては、蒸留水、水道水、脱イオン水、超純水など、如何なる水を用いることもできるが、アルコール分を含む水は好ましくない。例えば、蒸留水を用いることができる。
この水溶液に無極性有機溶媒を加えて分配することができる。無極性有機溶媒の使用量は、特に限定されないが、この水溶液に前記水の１〜２倍量程度、好ましくは等量（１倍）程度の無極性有機溶媒を加えて分配することができる。
本発明で用いる無極性有機溶媒としては、ヘキサン、トルエン、ベンゼン等が挙げられるが、特にヘキサンが好ましい。
当該分配工程において、無極性有機溶媒を添加後の分配操作は、通常の方法で行えばよいが、無極性有機溶媒可溶成分の除去効率の観点から、混和や激しく攪拌するなどの操作を、ローテーター、シェーカー、ボルテックスなどで行ってもよい。
両液層を十分に混和した後は、遠心分離することで、水層画分と無極性有機溶媒画分を分配することができる。また、数時間から数日静置することによって、両液層の比重の違いで自然に分配させることもできる。
なお、花弁のみを用いた場合は、当該無極性有機溶媒による分配工程を省略しても良い。
【００２２】
次いで、前記工程で分配して得た水層画分を、吸着カラムを使用し精製する。
なお、前記したように、花弁のみを用いた場合は、無極性有機溶媒を加えての分配を省略してもよいので、この場合には、前記水溶液を、吸着カラムを使用し精製する。
【００２３】
前記工程で分配して得た水層画分或いは前記水溶液は、まず吸着樹脂である合成吸着剤が充填された吸着カラムにアプライし、吸着させる。
ここで、本発明の精製工程に用いることができる合成吸着剤としては、例えばＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐ［三菱化学（株）製］、ＨＰ２０［三菱化学（株）製］、セパビース ＳＰ８２５［三菱化学（株）製］、アンバーライト ＸＡＤ２０００（オルガノ製）、クロマトレックス ＯＤＳ（フジシリシア製）等が挙げられ、特にＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐが好ましい。
【００２４】
次に、吸着樹脂容量の２〜５倍容量、好ましくは３〜５倍容量程度の、水及び／又は３０％以下のアルコール、好ましくは２５〜３０％のアルコールで、吸着カラムを洗浄することにより、吸着樹脂に吸着しなかった非吸着夾雑物を除去する。即ち、水及び／又は上記濃度の含水アルコールに溶出した非吸着夾雑物を除去する。なお、非吸着夾雑物の除去の観点から、水で洗浄した後、さらに上記濃度の含水アルコールで洗浄を行うことが望ましい。
このカラム洗浄に用いることができるアルコールとしては、エタノール、メタノール等を用いることができる。特に、エタノールを用いることが好ましい。
【００２５】
次に、用いた吸着樹脂容量の２〜５倍容量、好ましくは３〜５倍容量程度の３２〜５０％のアルコール、好ましくは３３〜４５％のアルコールで、さらに好ましくは３３〜４０％のアルコールで溶出し回収することにより、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール溶出画分を得ることができる。
【００２６】
なお、吸着カラムの洗浄に用いるアルコールの濃度が３０％を超える場合、得られるポリフェノール溶出画分に含まれるケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドの純度、収量が減少するので好ましくない。
また、溶出に用いるアルコールの濃度が３２％より低い場合や５０％よりも高い場合も、得られるポリフェノール溶出画分に含まれるケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドの純度、収量が減少するので好ましくない。
【００２７】
上記工程を経て回収したケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分として含むポリフェノール溶出画分は、そのまま、即ち３２〜５０％アルコールに溶解した液体のまま、機能性食品、化粧品、試薬、医薬品等の原料に用いることもできるが、乾燥物もしくは乾燥粉末にしたものを用いることもできる。
ここで、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドの溶出画分乾燥物化もしくは乾燥粉末化は、ロータリーエバポレーター、凍結乾燥機、減圧乾燥機、恒温機などを用いることができるが、具体的には、ロータリーエバポレーターを用いてアルコール及び水を完全に気化し濃縮することができる。
【００２８】
上記工程を経て得られたケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物の回収率は、例えばスイートピーポリフェノール含有物の回収率は、５００ｇの花蕾から０．６５ｇ〜６.１５ｇである。また、５００ｇの葉からは０．０５１５ｇ程度である。さらに、所望により、常法に従って精製することが出来る。
なお、上記の吸着カラムの洗浄および吸着カラムからの溶出における好ましい条件、即ち、吸着カラムの洗浄に２５〜３０％のアルコールを用い、吸着カラムからの溶出に３３〜４０％のアルコールを用いた場合、例えばスイートピーポリフェノール含有物の回収率は、５００ｇの花蕾から０.６５ｇ〜１.１５ｇであるが、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドの純度は９０％〜９５％である。
従って、本発明からは、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドの純度が極めて高いポリフェノール含有物が製造できるといえる。
【００２９】
このようにして得られたケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物、或いはケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドは、機能性食品、化粧品、試薬、医薬品等として利用することができる。
【００３０】
如上の如く、本発明によれば、観賞用のスイートピー花弁はもとより、現在、商品にならず破棄されているスイートピーの花蕾、開花した花、花弁及び葉を有効に利用することができ、バイオリサイクルの観点から好適である。
また、本発明の製造方法における精製工程としては、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を行わずに、上記のように高純度のケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物を回収できるカラムクロマトグラフィの溶出条件を見出すことで、用いた原材料あたりの高い回収率での製造を可能としている。
さらに、カラムクロマトグラフィは、ＨＰＬＣに比べてスケールアップ（大量製造）が安価であり、迅速、且つ容易な方法である。
【実施例】
【００３１】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３２】
実施例１（ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物の製造）
図１に示した概略図のように、本発明のケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物を製造した。
即ち、スイートピーの花（舞姫）５００ｇに、２０００ｍＬの１００％エタノールを加えて室温で一晩室温放置し、抽出した。これをろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）でろ過した後、残渣に２０００ｍＬの１００％エタノールを加え、再び一晩室温で抽出した後、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）でろ過した。得られたろ液を合わせてエバポレーターで濃縮し、２００ｍｌの蒸留水に溶解後、２００ｍｌのヘキサンで分配し、水層画分を得た。
この水層画分をＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィー［三菱化学（株）製］に吸着させた後、樹脂容量の３倍容の蒸留水（０％エタノール）で洗浄することにより、夾雑物を除去した。
次に、樹脂容量の３倍容量の４０％エタノールで溶出し、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物を得た。
【００３３】
このようにして得られたケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物の回収率は、５００ｇの花から３．２４ｇであった。
【００３４】
なお、花弁のみを原料にし、無極性有機溶媒（ヘキサン）による分配工程を省略した場合でも、上記と同様の結果が得られた。
【００３５】
実施例２（ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドの製造）
次に、本発明のケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドの製造法の一具体例について説明する。
スイートピーの花（舞姫）５００ｇに、２０００ｍＬの１００％エタノールを加えて室温で一晩室温放置し、抽出した。これをろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）でろ過した後、残渣に２０００ｍＬの１００％エタノールを加え、再び一晩室温で抽出した後、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）でろ過した。得られたろ液を合わせてエバポレーターで濃縮し、２００ｍｌの蒸留水に溶解後、２００ｍｌのヘキサンで分配し、水層画分を得た。
この水層画分をＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィー［三菱化学（株）製］に吸着させた後、樹脂容量の５倍容の蒸留水で洗浄し、さらに樹脂容量の５倍容の３０％エタノールで洗浄することにより、夾雑物を除去した。
次に、樹脂容量の３倍容量の３３％エタノールで溶出し、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物を得た。
【００３６】
このようにして得られたケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノールの回収率は、５００ｇの花から０.９８ｇ、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドの純度は９０％であった。
【００３７】
実施例２で得られたケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドの精製状況を、高速液体クロマトグラフィーで確認したクロマトグラムを図２に示す。
なお、上記工程により得られた、ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィの３３％エタノール溶出画分を本発明実施品１とした。さらに、上記工程において、ヘキサン分配後の水層画分を比較製造品１とし、ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィの蒸留水洗浄画分を比較製造品２とし、ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィの３０％エタノール洗浄画分を比較製造品３とした。
また、上記工程の後に、さらに樹脂容量の３倍容量の１００％エタノールで溶出した画分も回収し比較製造品４とした。
【００３８】
図２〜６のクロマトグラフの波形パターンが示すように、ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィの３３％エタノール洗浄画分（本発明実施品１）には、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを示すピークがほぼ単一ピークとして検出されることが示された。
即ち、ヘキサン分配後の水層画分（比較製造品１）、ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィの蒸留水洗浄画分（比較製造品２）、ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィの３０％エタノール洗浄画分（比較製造品３）およびＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィの１００％エタノール溶出画分（比較製造品４）で検出される夾雑物が除去できていることが示された。
【００３９】
なお、花弁のみを原料にし、無極性有機溶媒（ヘキサン）による分配工程を省略した場合でも、上記と同様の結果が得られた。
【００４０】
実施例３（葉からのケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物の製造）
次に、葉から本発明のケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物を製造した。
即ち、スイートピーの葉（舞姫）５００ｇに、２０００ｍＬの１００％エタノールを加えて室温で一晩室温放置し、抽出した。これをろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）でろ過した後、残渣に２０００ｍＬの１００％エタノールを加え、再び一晩室温で抽出した後、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）でろ過した。得られたろ液を合わせてエバポレーターで濃縮し、２００ｍｌの蒸留水に溶解後、２００ｍｌのヘキサンで分配し、水層画分を得た。
この水層画分をＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィー［三菱化学（株）製］に吸着させた後、樹脂容量の５倍容の蒸留水で洗浄し、さらに樹脂容量の５倍容の３０％エタノールで洗浄することにより、夾雑物を除去した。次に、樹脂容量の３倍容量の３５％エタノールで溶出し、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物を得た。
【００４１】
このようにして得られた葉からのケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物の回収率は、５００ｇの葉から５１.５ｍｇであった。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明によれば、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物、特にケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物を簡便な方法で、大量、迅速、かつ安価に製造することができる。
ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物、特にスイートピーポリフェノール含有物は、未だその研究報告は少なく、今後各種の薬理効果などが明らかにされることが予想される。特に例えば、抗糖尿病作用、抗アレルギー作用等などが期待される。
今後、ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするスイートピーポリフェノール含有物に関する試験研究の促進に寄与するだけでなく、本化合物を含有する試薬や機能性食品素材、化粧品、医薬品、飲食品、リキュールなどの開発への利用が期待できる。
更に、現在商品にならずに破棄されているスイートピー未利用資源の有効利用の途が開かれることとなった。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】本発明のケルセチン−３−Ｏ−ラムノシドを主成分とするポリフェノール含有物を製造する方法の一例を示すフロー図である。
【図２】実施例２におけるＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィの３３％エタノール溶出画分（本発明実施品１）に含まれる成分を、高速液体クロマトグラフィによるクロマトグラムで示した図である。
【図３】実施例２におけるヘキサン分配後の水層画分（比較製造品１）に含まれる成分を、高速液体クロマトグラフィによるクロマトグラムで示した図である。
【図４】実施例２における蒸留水洗浄画分（比較製造品２）に含まれる成分を、高速液体クロマトグラフィによるクロマトグラムで示した図である。
【図５】実施例２におけるＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィの３０％エタノール洗浄画分（比較製造品３）に含まれる成分を、高速液体クロマトグラフィによるクロマトグラムで示した図である。
【図６】実施例２におけるＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィの１００％エタノール溶出画分（比較製造品４）に含まれる成分を、高速液体クロマトグラフィによるクロマトグラムで示した図である。
【符号の説明】
【００４４】
Ａ：  ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシド
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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