(57)【要約】【課題】微小粒子を変質させることなく、送液ポンプと前記流路との連結解除時における微小粒子の逆流を防止することができる微小粒子の回収方法及び回収装置を提供する。【解決手段】基板１に形成された流路に、微小粒子１０ａ，１０ｂを含む液を通流させ、目的とする微小粒子１０ａを分離・回収する際に、光学的検出部１２での判別結果に基づいて、微小粒子分取部１３において微小粒子１０ａ及び微小粒子１０ｂを、それぞれ回収液貯留部４及び廃液貯留部５に分離した後、送液ポンプと流路との連結を解除する前に、回収液貯留部４の通じる流路の一部にレーザ光を照射して、流路を変形させて、流路の径を狭める。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
基板に形成された流路に微小粒子を含む液を通流させた後、送液ポンプと前記流路との連結を解除する前に、
前記流路の一部にレーザ光を照射して前記流路を変形させる微小粒子の回収方法。
【請求項２】
前記レーザ光によって、前記流路の径を前記微小粒子の直径よりも小さくすることを特徴とする請求項１に記載の微小粒子の回収方法。
【請求項３】
前記液には複数の微小粒子が含まれており、その中から目的とする微小粒子を分離して回収することを特徴とする請求項２に記載の微小粒子の回収方法。
【請求項４】
前記基板には、前記流路の端部に目的とする微小粒子を貯留するための液溜部が設けられており、少なくともこの液溜部に連設された流路に前記レーザ光を照射することを特徴とする請求項３に記載の微小粒子の回収方法。
【請求項５】
前記基板が高分子材料で形成されていることを特徴とする請求項１に記載の微小粒子の回収方法。
【請求項６】
流路が形成された基板と、
前記流路に連結され、前記流路に微小粒子を含む液を給送する送液ポンプと、
前記流路の一部にレーザ光を照射し、前記流路を変形させるためのレーザ光照射部と、を有し、
前記流路に前記液を通流させた後、前記送液ポンプと前記流路との連結を解除する前に、前記レーザ光照射部から前記流路の一部にレーザ光を照射し、前記流路を変形させる微小粒子の回収装置。
【請求項７】
変形後の流路の径が、前記微小粒子の直径よりも小さいことを特徴とする請求項６に記載の微小粒子の回収装置。
【請求項８】
前記基板が、脱着可能に配設されていることを特徴とする請求項７に記載の微小粒子の回収装置。
【請求項９】
前記液は複数の微小粒子を含有し、その中から目的とする微小粒子を分離して回収することを特徴とする請求項８に記載の微小粒子の回収装置。
【請求項１０】
前記基板には、前記流路の端部に目的とする微小粒子を貯留するための液溜部が設けられており、前記レーザ光は少なくとも前記液溜部に連設された流路に照射されることを特徴とする請求項９に記載の微小粒子の回収装置。
【請求項１１】
前記基板は、高分子材料で形成されていることを特徴とする請求項６に記載の微小粒子の回収装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞及びマイクロビーズ等の微小粒子を回収する方法及びこの回収方法に使用される装置に関する。より詳しくは、複数の微小粒子が混在している溶液中から、目的とする微小粒子を分離して回収する技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
フローサイトメトリー（フローサイトメーター）は、サンプル液中に複数の微小粒子が含まれている場合でも、必要なものだけを迅速にかつ確実に分取することができるため、細胞及び微生物等の生体関連微小粒子の研究だけでなく、病院での臨床検査においても広く使用されている（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００３】
フローサイトメトリーにおいては、流路内を１列になって通流する微小粒子に特定波長のレーザ光を照射し、各微小粒子から発せられた蛍光及び／又は散乱光を検出することで、個々の微小粒子の種類、大きさ及び構造等を判定している。そして、その判定結果に基づいて、目的とする微小粒子を他の微小粒子から分離し、回収する。
【０００４】
その際の分取方式としては、一般に、微小粒子を含む液滴を帯電させて分離する液滴荷電方式、及びチューブにより微小粒子を水流ごと回収するセルキャプチャー方式が利用されている。しかし、これらの方式を適用した装置は、大型で高価となるため、汎用性が低いという問題点がある。
【０００５】
そこで、近時、シリコン及びガラス等の無機材料又はプラスチック等の高分子材料からなる基板内に微細な流路を形成したマイクロチップを使用する方法が提案されている（例えば、特許文献１及び２参照。）。特許文献１及び２に記載されているような従来のマイクロチップにおいては、基板にサンプル液導入流路が形成されており、その両側に２本のシース流形成流路が形成されている。これらの流路は一旦合流した後、２以上の流路に分岐しており、合流部分が計測部となり、分岐した各流路が微量粒子を分離・回収するための微小粒子分別流路となる。
【０００６】
そして、特許文献１に記載のマイクロチップでは、電極により各微小粒子分別流路の流入口付近に電界を発生させることで、微小粒子を所定の流路に誘導している。一方、特許文献２に記載の細胞分析分離装置では、超音波又は静電力により、微小粒子を所定の分岐流路に誘導し、分離している。
【０００７】
上述したマイクロチップは、少量の試料で測定可能であり、また、低コストで作製することができ、使い捨ても可能であるため、フローサイトメトリーだけでなく、液体クロマトグラフィーの電気化学検出器及び医療現場における小型の電気化学センサー等、様々な分野で利用され始めている。
【０００８】
一方、マイクロチップを使用した従来の微小粒子の回収方法においては、サンプル液を流し終えた後、分取した微小粒子及び廃液を回収する際に、液が逆流することがある。このため、従来、このような逆流を防止するために、微細流路を閉鎖する機構についての検討がなされている（例えば、特許文献３参照。）。図６は特許文献３に記載のマイクロ全分析システムの構成を示すブロック図である。また、図７（ａ）及び（ｂ）は図６に示す微細流路の一部を示す断面図であり、図７（ａ）は流路を閉鎖する前の状態を示し、図７（ｂ）は流路が閉鎖された状態を示す。
【０００９】
図６及び図７に示す特許文献３に記載のマイクロ全分析システム１００では、上部基板１０１及び下部基板１０２との間に、試料貯留槽１０３、試薬貯留槽１０４及び反応液貯留槽１０５と、マイクロポンプ１０６ａ〜１０６ｃ、混合槽１０７、検出部１０８、廃液貯留槽１０９が設けられている。そして、これらの槽は微細流路１１０を介して連結されている。
【００１０】
また、図７（ａ）に示すように、このマイクロ全分析システム１００においては、検出部１０８の入口付近の上部基板１０１に透明な光線透過窓１１１が形成されており、その直下の微細通路１１０には、熱又は光線によりガスを発生するガス発生性樹脂組成物１１３が封入された袋体１１２が接着されている。そして、図７（ｂ）に示すように、光線透過窓１１１から熱又は光線を袋体１１２に照射することにより、ガス発生性樹脂組成物１１３からガスが発生して袋体１１２が膨張し、微細通路１１０が閉鎖されるようになっている。
【００１１】
【特許文献１】特開２００３−１０７０９９号公報
【特許文献２】特開２００４−８５３２３号公報
【特許文献３】特開２００６−１０３４０号公報
【非特許文献１】中内啓光監修，「細胞工学別冊  実験プロトコルシリーズ  フローサイトメトリー自由自在」，第２版，株式会社秀潤社，２００６年８月３１日発行
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
前述したように、マイクロチップを使用した従来の微小粒子の回収方法及び回収装置には、測定終了後に流路内の圧力が低下して、流路の終端に設けられた液溜部から目的とする微小粒子が逆流してしまい、収率及び回収液中の微小粒子濃度が低下するという問題点がある。
【００１３】
この問題点は、サンプル液を流し終えた後、目的とする微小粒子を貯留するための液溜部の手前の微細流路を、何らかの手段で閉鎖すれば解決できるが、前述した特許文献３に記載された技術のように、ガス発生性樹脂組成物が封入された袋体により微細流路を閉鎖した場合、発生したガスと微小粒子とが反応してしまい、細胞の生存率が低下したり、微小粒子の表面の化学的特性が変化したりする等の問題が生じる。
【００１４】
そこで、本発明は、微小粒子を変質させることなく、送液ポンプと前記流路との連結解除時における微小粒子の逆流を防止することができる微小粒子の回収方法及び回収装置を提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の微小粒子の回収方法は、基板に形成された流路に微小粒子を含む液を通流させた後、送液ポンプと前記流路との連結を解除する前に、前記流路の一部にレーザ光を照射して前記流路を変形させる。
本発明においては、流路の一部を変形させて前記流路の径を狭めた後、流路と送液ポンプとの連結を解除しているため、流路内の圧力低下により分離回収した微小粒子が逆流することを防止することができる。また、ガスの発生等もないため、微小粒子には影響しない。これにより、従来の回収方法に比べて、微小粒子の回収効率及び回収精度が向上する。
この回収方法では、前記レーザ光によって、前記流路の径を前記微小粒子の直径よりも小さくすることが好ましい。
また、前記液に複数の微小粒子が含まれている場合は、その中から目的とする微小粒子を分離して回収することもできる。
更に、前記基板に前記流路の端部に目的とする微小粒子を貯留するための液溜部が設けられている場合は、少なくとも前記液溜部に連設された流路に前記レーザ光を照射することが望ましい。
更にまた、前記基板は、例えば高分子材料で形成することができる。
【００１６】
一方、本発明の微小粒子の回収装置は、流路が形成された基板と、前記流路に連結され、前記流路に微小粒子を含む液を給送する送液ポンプと、前記流路の一部にレーザ光を照射し、前記流路を変形させるためのレーザ光照射部と、を有し、前記流路に前記液を通流させた後、前記送液ポンプと前記流路との連結を解除する前に、前記レーザ光照射部から前記流路の一部にレーザ光を照射し、前記流路を変形させるものである。
この回収装置においては、変形後の流路の径が、前記微小粒子の直径よりも小さくてもよい。
また、前記基板を脱着可能に配設することもできる。
更に、前記液が複数の微小粒子を含有している場合は、その中から目的とする微小粒子を分離して回収することもできる。
そして、その場合、前記基板の前記流路の端部に目的とする微小粒子を貯留するための液溜部が設けられ、前記レーザ光は少なくとも前記液溜部に連設された流路に照射される。
更にまた、前記基板は、高分子材料で形成されていてもよい。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、送液ポンプと前記流路との連結を解除する前に、レーザ光により微細流路を変形させて、流路径を狭めているため、微小粒子を変質させることなく、その逆流を防止することができるため、目的とする微小粒子の回収効率を高めることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下、本発明を実施するための最良の形態について、フローサイトメトリーに適用した場合を例に、添付の図面を参照して詳細に説明する。なお、本発明は、以下に示す実施形態に限定されるものではない。
【００１９】
先ず、本発明の第１の実施形態に係る微小粒子の回収方法（以下、単に回収方法ともいう。）について説明する。本実施形態の回収方法においては、表面又は内部に微細流路が形成された基板を使用し、複数の微小粒子を含む液から、目的とする微小粒子を分離して回収する。図１は本実施形態の微小粒子の回収方法で使用する基板の一部を示す平面図である。図１に示すように、本実施形態の回収方法で使用する基板１には、微小粒子１０ａ，１０ｂが分散されたサンプル液６が導入されるサンプル液導入流路２が形成されており、その両側には、シース（鞘）液７を導入するためのシース液導入流路３ａ，３ｂが形成されている。
【００２０】
また、サンプル液導入流路２及びシース液導入経路３ａ，３ｂは、一旦合流し、その後、２本の流路に分岐している。そして、各分岐流路の端部にはそれぞれ液溜部が形成されており、その一方が目的とする微小粒子１０ａが貯留される回収液貯留部４となり、他方が他の微小粒子１０ｂを含む廃液が貯留される廃液貯留部５となる。
【００２１】
この基板１を形成する材料としては、ポリカーボネート、シクロオレフィンポリマー、ポリプロピレン、ＰＤＭＳ（polydimethylsiloxane）、ガラス及びシリコン等が挙げられるが、加工性に優れ、成形装置を使用して安価に複製することができることから、ポリカーボネート、シクロオレフィンポリマー、ポリプロピレン等の高分子材料で形成することが好ましい。
【００２２】
次に、上述した基板１を使用して、複数の微小粒子１０ａ，１０ｂを含むサンプル液６から、微小粒子１０ａを回収する方法について説明する。先ず、サンプル液導入流路２及びシース液導入経路３ａ，３ｂを、それぞれ送液ポンプ（図示せず）に連結する。そして、この送液ポンプを介してサンプル液導入流路２にサンプル液６が、シース液導入経路３ａ，３ｂにはシース液７がそれぞれ供給される。これにより、各流路が合流する部分（層流形成部１１）で層流８が形成され、更に、サンプル液６とシース液７との間にわずかな圧力差を生じさせることにより、サンプル液６中に含まれる複数の微小粒子１０ａ，１０ｂが１列に並ぶ。
【００２３】
その状態で層流８に光学的検出部１２において励起光となるレーザ光を照射すると、微小粒子１０ａ，１０ｂがレーザービームを横切るように１個ずつ通過する。このとき、レーザ光により励起されて各微小粒子から発せられた蛍光及び／又は散乱光を、検出することで各微小粒子の種類等を判別することができる。そして、その判別結果に基づいて、微小粒子分取部１３において、微小粒子１０ａ及び微小粒子１０ｂを、それぞれ回収液貯留部４及び廃液貯留部５に誘導する。
【００２４】
その後、全てのサンプル液６を流し終えたことを確認し、回収液貯留部４に貯留された微小粒子１０ａを含む液を回収する。このとき、本実施形態の微小粒子の回収方法においては、前述した分取工程が完了した後、流路と送液ポンプとの連結を解除する前に、回収液貯留部４に連設された流路の一部、好ましくは回収液貯留部４の流入口近傍の部分に、レーザ光を照射して流路を変形させる。なお、レーザ光照射による流路の変形は、流路の径が微小粒子１０ａの直径よりも小さくなるようにすることが望ましい。これにより、微小粒子１０ａの流出を確実に防止することができる。
【００２５】
図２（ａ）はレーザ光を照射せずに連結を解除した場合の回収液貯留部の状態を示す横断面図であり、図２（ｂ）はレーザ光照射後に連結を解除した場合の回収液貯留部の状態を示す横断面図である。図２（ａ）に示すように、基板１の各流路と送液ポンプとの連結を単純に解除すると、流路内の圧力が低下して液が逆流し、回収液貯留部４から目的とする微小粒子１０ａが流出してしまう。
【００２６】
これに対して、本実施形態の回収方法では、図２（ｂ）に示すように、レーザ光９を照射することにより流路を変形させて、その径を狭めているため、流路と送液ポンプとの連結を解除することにより、流路内の圧力が低下しても、液が逆流するだけで、微小粒子１０ａは流出しない。その結果、微小粒子１０ａの回収効率の低下を防止することができる。また、本実施形態の回収方法では、ガスの発生等はないため、微小粒子を変質させることもない。更に、液が逆流することにより濃縮効果が得られるため、回収液中の微小粒子１０ａの濃度を高めることもできる。
【００２７】
本実施形態の回収方法におけるレーザ光９の強度は、流路を構成する材料に応じて適宜設定することができるが、例えば流路がポリカーボネート樹脂で形成されていた場合は、例えば波長が２６６ｎｍのレーザ光を数ｍＷ〜数十ｍＷの強度で照射することが望ましい。具体的には、ポリカーボネート樹脂で形成された幅２００μｍ、深さ２００μｍの流路に、波長２６６ｎｍのＵＶレーザ光を、照射パワーを８ｍＷ、スポット形状を２０μｍ×４００μｍとし、１秒間照射した場合、流路の幅を１０μｍ程度まで狭小化することができる。また、特に、使用する基板材料に対して、非透過波長のレーザ光を照射することで、比較的低いパワーで基板を変形させることが可能となる。
【００２８】
更に、レーザ光照射により流路の変形は、熱変形に限らず、例えば、流路を形成する材料中に光又は熱膨張性物質を配合し、レーザ光を照射することにより流路を膨張させてもよい。更に、流路の表面に光吸収膜を成膜すると、レーザ光の吸収効率が高まるため、流路の変形に必要なレーザ光のパワーを低減することができる。
【００２９】
なお、図２（ｂ）では流路の両側を、微小粒子１０ａが通り抜けない程度の径になるまで変形させているが、本発明はこれに限定されるものではない。図３（ａ）及び（ｂ）はレーザ光照射後の流路を示す横断面図である。例えば、図３（ａ）に示すように、流路の一方の側にのみレーザ光９を照射して、流路の片側の側面のみを変形させてもよい。
【００３０】
また、図３（ｂ）に示すように、流路を完全に封止することもできる。この場合は、回収液を濃縮する効果は得られないが、流路を完全に封止しているため、細胞と薬液とのコンタミネーション防止、及び回収液貯留部４内の圧力変化による細胞の生存率低下抑制等の効果を向上させることができる。更に、回収液貯留部４に回収用のチューブ又はシリンジ等を取り付けて吸引作業を行う際の作業性が向上するため、微小粒子１０ａを容易に回収することが可能となる。
【００３１】
また、本実施形態の回収方法においては、レーザ光により、回収液貯留部４の手前の流路を変形する場合を例に説明しているが、本発明はこれに限定されるものではなく、廃液貯留部５及びその他の液溜部に連設された流路を変形させてもよい。これにより、これらに通じる流路を狭小化又は封止することができるため、廃液貯留部５及びその他の液溜部から貯留物の逆流を防止することができる。
【００３２】
上述の如く、本実施形態の微小粒子の回収方法においては、レーザ光を照射することにより流路の一部を変形させて、その径を狭めた後、流路と送液ポンプとの連結を解除しているため、微小粒子を変質させることなく、流路内の圧力低下により分離回収した微小粒子が逆流することを防止することができる。その結果、従来の回収方法に比べて、微小粒子の回収効率及び回収精度を向上させることができる。
【００３３】
また、流路の一部を狭小化又は封止しているため、一度使用した基板を誤って再使用することも防止できる。
【００３４】
なお、本実施形態の回収方法は、例えば、表面又は内部に流路が形成された基板１と、複数の微小粒子１０ａ，１０ｂを含むサンプル液を給送する送液ポンプ、及び基板１の流路を変形させるためのレーザ光照射部と備えた回収装置により実施することができる。その場合、回収装置に基板１を脱着可能に配設し、この基板１のサンプル液導入流路２に送液ポンプを連結し、前述した方法で微小粒子１０ａを回収液貯留部４に分離する。そして、送液ポンプとサンプル液導入流路２との連結を解除する前に、レーザ光照射部から流路の一部にレーザ光を照射し、流路を変形することにより、その径を狭める。その際、前述したように、流路の径を微小粒子１０ａの径よりも小さくすることが望ましい。
【００３５】
次に、本発明の第２の実施形態に係る微小粒子の回収方法について説明する。図４は本実施形態の微小粒子の回収方法で使用する基板の一部を示す平面図である。前述した第１の実施形態の回収方法では、２本の分岐流路の端部に廃液貯留部又は回収液貯留部が形成された基板を使用し、目的とする微小粒子をシース液ごと回収液貯留部に流しているが、本発明はこれに限定されるものではなく、図４に示す基板２０を使用して、回収液貯留部２４の手前でシース液７を分離してもよい。
【００３６】
図４に示すように、本実施形態の回収方法で使用する基板２０は、微小粒子分取部１３において流路２１がＹ字状に分岐し、その一方の分岐流路２３の端部に廃液貯留部２５となる液溜部が形成されている。また、他方の分岐流路２２は、更に３本に分岐しており、そのうちの１本が微小粒子回収用流路となり、他の２本はシース液７を分離するためのシース液分離用流路となる。そして、微小粒子回収用流路の端部には、回収液貯留部２４となる液溜部が形成されている。一方、シース液分離用流路は、その端部にシース液貯留部２６ａ，２６ｂとなる液溜部が形成されているか、又は別途設けられた廃液流路（図示せず）に連結されている。
【００３７】
次に、上述した基板２０を使用して、複数の微小粒子１０ａ，１０ｂを含むサンプル液６から、微小粒子１０ａを回収する方法について説明する。本実施形態の回収方法においては、前述した第１の実施形態の回収方法と同様に、流形成部１１で層流８を形成し、サンプル液６中に含まれる複数の微小粒子１０ａ，１０ｂを１列に並べる。その後、光学的検出部において各微小粒子の種類等を判別し、その判別結果に基づいて、微小粒子分取部１３において、微小粒子１０ａ及び微小粒子１０ｂを、それぞれ回収液貯留部４に連通する分岐流路２２又は廃液貯留部２５に連通する分岐流路２３に誘導する。
【００３８】
その際、本実施形態の回収方法で使用する基板２０にはシース液分離用流路が設けられているため、目的とする微小粒子１０ａを含む層流８部分の周囲を流れる不要なシース液７を、シース液貯留部２６ａ，２６ｂに分離することができる。これにより、回収液貯留部２４に流れ込む液中の微小粒子１０ａの濃度高めることができるため、分離回収後の液（回収液）を遠心分離等により再濃縮する処理が不要となる。
【００３９】
次に、前述した分取工程が完了した後、流路と送液ポンプとの連結を解除する前に、回収液貯留部２４に連設された流路の一部にレーザ光を照射して、流路を変形させる。このとき、本実施形態の回収方法においては、分岐流路２２から分岐した微小粒子回収用流路を変形すればよいため、第１の実施形態の回収方法よりも照射するレーザ光のスポット径を小さくすることができる。その結果、レーザ光のパワー密度が上がるため、レーザパワーを低減することができる。
【００４０】
従来の回収方法では、回収液貯留部及び廃液貯留部に連設された流路には常時水流が流れているため、回収液中の微小粒子濃度が薄くなり、分取後に再濃縮する処理が必要であった。これに対して、本実施形態の回収方法においては、基板２０にシース液分離用流路を設け、回収液貯留部２４に流入する液からシース液を除いているため、微小粒子１０ａを高濃度で含む液が得られる。これにより、分取後の回収液を再濃縮する処理が不要となる。また、流路を変形する際も、流路幅が狭い微量粒子回収用流路にレーザ光を照射すればよいため、より小さいレーザパワーで回収液の逆流を防止することができる。
【００４１】
なお、本実施形態の回収方法における上記以外の構成及び効果は、前述した第１の実施形態の回収方法と同様である。
【００４２】
また、本発明の微小粒子の回収方法は、細胞、微生物及び生体高分子物質等の生体関連微小粒子、並びに各種合成微小粒子等を回収する際に適用することができる。例えば、細胞としては、血球系細胞等の動物細胞及び植物細胞が挙げられる。また、微生物としては、大腸菌等の細菌類、タバコモザイクウイルス等のウイルス類、イースト菌等の菌類等が挙げられる。更に、生体高分子物質としては、各種細胞を構成する染色体、リポソーム、ミトコンドリア、オルガネラ（細胞小器官）等が挙げられる。
【００４３】
一方、合成微小粒子としては、ポリスチレン、スチレン・ジビニルベンゼン、ポリメチルメタクリレート等の有機高分子材料からなる微小粒子、ガラス、シリカ、磁性材料等の無機材料からなる微小粒子、金コロイド、アルミニウム等の金属材料からなる微小粒子等が挙げられる。なお、一般に、これらの微小粒子の形状は球形であるが、本発明の微小粒子の回収方法は、非球形のものにも適用可能であり、その大きさ及び質量も特に限定されるものではない。
【実施例】
【００４４】
以下、本発明の実施例及び比較例を挙げて、基板にシース液分離液流路を設けた場合の回収液濃縮効果について説明する。図５（ａ）は従来の流路モデルを示す図であり、図５（ｂ）は本発明の実施例の流路モデルを示す図である。本実施例においては、図５（ａ）及び（ｂ）に示す流路モデルを使用し、直径１０μｍの細胞３０を１×１０８個含有する細胞液５ｍｌ（細胞濃度：２×１０７個／ｍｌ）を、１０本の流路が形成された基板で、３時間処理したときの回収液中の細胞濃度を計算により求めた。その際、細胞の直径を１０μｍ、流路幅ｗ１を１００μｍ、細胞流（層流）幅ｗ２を１０μｍ、分取率を１％とした。
【００４５】
先ず、図５（ａ）に示す従来の流路モデル（比較例）の場合、流路１本あたりの細胞流量Ｑ３は０．１６６７ｍｌ／時間（＝５ｍｌ／１０本／３時間）、シース液流量Ｑ１，Ｑ２はそれぞれ０．７５ｍｌ／時間となる。その結果、３時間処理後に回収液貯留部３１に貯留される回収液の容量Ｖａは２．２５５ｍｌ（＝（Ｑ１×３時間）＋（０．５ｍｌ×１％））となり、廃液貯留部３２に貯留される廃液の容量Ｖｂは２．７４５ｍｌ（＝｛Ｑ２＋（Ｑ３×９９％）｝×３時間）となる。
【００４６】
そして、分取した細胞３０の数は１×１０６個であるため、分取後の回収液中の細胞濃度は１×１０６個／２．２５５ｍｌ＝４．４３×１０５個／ｍｌとなる。
【００４７】
一方、図５（ｂ）に示す本実施例の流路モデルの場合、シース液をシース液貯留部３４ａ，３４ｂに分離し、層流部分だけを選択的に分取するため、例えば微小粒子回収用流路及びシース液分離用流路の幅が等しく、全ての流路幅が分岐流路の１／３であった場合、微小粒子回収用流路における流量Ｑ４はＱ／３となる。よって、３時間処理した後に回収液貯留部３３に貯留される回収液の容量Ｖａ’は、０．７５５ｍｌ（＝｛Ｑ１×３時間×（１／３）｝＋（０．５ｍｌ×１％））となる。これにより、本実施例では、前述した比較例よりも分取容量を約６７％程度低減することができることが確認された。
【００４８】
また、分取後の回収液中の細胞濃度は１×１０６個／０．７５５ｍｌ＝１．３３×１０６個／ｍｌとなり、前述した比較例の約３倍の高濃度の細胞液を分離回収できることが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】本発明の第１の実施形態に係る微小粒子の回収方法で使用する基板の一部を示す平面図である。
【図２】（ａ）はレーザ光を照射せずに連結を解除した場合の回収液貯留部の状態を示す横断面図であり、（ｂ）はレーザ光照射後に連結を解除した場合の回収液貯留部の状態を示す横断面図である。
【図３】（ａ）及び（ｂ）はレーザ光照射後の流路を示す横断面図である。
【図４】本発明の第２の実施形態に係る微小粒子の回収方法で使用する基板の一部を示す平面図である。
【図５】（ａ）は従来の流路モデルを示す図であり、（ｂ）は本発明の実施例の流路モデルを示す図である。
【図６】特許文献３に記載のマイクロ全分析システムの構成を示すブロック図である。
【図７】（ａ）及び（ｂ）は図６に示す微細流路の一部を示す断面図であり、（ａ）は流路を閉鎖する前の状態を示し、（ｂ）は流路が閉鎖された状態を示す。
【符号の説明】
【００５０】
１、２０、１０１、１０２  基板
２  サンプル液導入流路
３ａ、３ｂ  シース液導入流路
４、２４、３１、３３  回収液貯留部
５、２５、３２  廃液貯留部
６  サンプル液
７  シース液
８  層流
９  レーザ光
１０ａ、１０ｂ  微小粒子
１１  層流形成部
１２  光学的検出部
１３  微小粒子分取部
２１  流路
２２、２３  分岐流路
２６ａ、２６ｂ、３４ａ、３４ｂ  シース液貯留部
３０  細胞
１０３  試料貯留槽
１０４  試薬貯留槽
１０５  反応液貯留槽
１０６ａ〜１０６ｃ  マイクロポンプ
１０７  混合槽
１０８  検出部
１０９  廃液貯留槽
１１０  微細流路
１１１  光線透過窓
１１２  袋体
１１３  ガス発生性樹脂
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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