(57)【要約】【課題】増大した活性を有する新規細胞増殖抑制剤の提供。【解決手段】2009029770.tif 000029［式中、  Ｒ1は、置換されていてもよいアシルオキシまたは−ＮＨＲ（Ｒは置換されていてもよいアシル）であり、  Ｒ2は、置換されていてもよいアシルであり、  Ｒ3は、置換されていてもよいアシルオキシまたはハロゲンであり、  Ｒ4は、置換されていてもよいアシルオキシおよびハロゲンから選ばれる群から選択される１以上の置換基で置換されたメチルである］で示される化合物を含有する細胞増殖抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式：
【化１】
2009029770.tif 000020
［式中、
Ｒ1は、置換されていてもよいアシルオキシまたは−ＮＨＲ（Ｒは置換されていてもよいアシル）であり、
Ｒ2は、置換されていてもよいアシルであり、
Ｒ3は、置換されていてもよいアシルオキシまたはハロゲンであり、
Ｒ4は、置換されていてもよいアシルオキシおよびハロゲンから選ばれる群から選択される１以上の置換基で置換されたメチルである］
で示される化合物を含有する細胞増殖抑制剤。
【請求項２】
前記化合物が、次式：
【化２】
2009029770.tif 000021
［Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、請求項１と同意義である］
で示される、請求項１記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項３】
前記化合物が、次式：
【化３】
2009029770.tif 000022
［Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、請求項１と同意義である］
で示される、請求項１記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項４】
Ｒ1が置換されていてもよいアシルオキシである、請求項１〜３のいずれかに記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項５】
Ｒ1が−ＮＨＲ（Ｒは置換されていてもよいアシル）である、請求項１〜３のいずれかに記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項６】
Ｒ2が置換されていてもよいアセチルである、請求項１〜５のいずれかに記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項７】
Ｒ3がハロゲンである、請求項１〜６のいずれかに記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項８】
Ｒ3がフッ素である、請求項７に記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項９】
Ｒ3が置換されていてもよいアシルオキシである、請求項１〜６のいずれかに記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項１０】
Ｒ3が置換されていてもよいアセトキシである、請求項９に記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項１１】
Ｒ4がモノフルオロメチルである、請求項１〜１０のいずれかに記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項１２】
Ｒ4がアセトキシメチルである、請求項１〜１０のいずれかに記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項１３】
アシル基の置換基が、以下からなる群：
ハロゲン、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ヒドロキシ低級アルコキシ、低級アルコキシ低級アルコキシ、アシル、アシルオキシ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、アミノ、アシルアミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、ヒドロキシイミノ、低級アルコキシイミノ、低級アルキルチオ、カルバモイル、低級アルキルカルバモイル、ヒドロキシ低級アルキルカルバモイル、スルファモイル、低級アルキルスルファモイル、低級アルキルスルフィニル、シアノ、ニトロ、アジド、炭素環式基および複素環式基
から選択される、請求項１〜１２のいずれかに記載の細胞増殖抑制剤。
【請求項１４】
以下からなる群：
【化４】
2009029770.tif 000023
【化５】
2009029770.tif 000024
［式中、Ａｃはアセチルを示す］
から選択される化合物を含有する細胞増殖抑制剤。
【請求項１５】
以下からなる群：
【化６】
2009029770.tif 000025
【化７】
2009029770.tif 000026
【化８】
2009029770.tif 000027
【化９】
2009029770.tif 000028
［式中、Ａｃはアセチルを示す］
から選択される化合物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の化合物を含有する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖誘導体、具体的には単糖誘導体を含有する細胞増殖抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗癌剤のような、望ましくない細胞増殖の抑制に有効な薬剤として、糖誘導体の研究がなされている。糖の細胞膜への透過性を上げるために疎水性官能基が重要であることは認識されているが、抗癌剤として知られている糖誘導体はいずれも、糖の全ての水酸基をアルキル鎖で修飾したものや、アノマー位の水酸基を嵩高い置換基（例えば多環系芳香族炭化水素基）で修飾したものである（例えば非特許文献１および２）。
【０００３】
５−ＦＵに代表される代謝拮抗薬は、抗癌剤として臨床で用いられている。これらはＧ１期の細胞に特異的に作用するものであるが、毒性が低い一方、癌の種類によっては抗癌効果が著しく低い。また、シスプラチンに代表される白金製剤も抗癌剤として用いられており、これらは細胞周期非特異的ではあるが、毒性が高いうえ、ほとんどの癌がいずれ耐性を持つようになる。
【０００４】
【非特許文献１】Carbohydrate. Res. 1984. 126. 27-43
【非特許文献２】Carbohydrate. Res. 2000. 329. 287-300
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
活性が強く、癌細胞等、増殖が望ましくない細胞に対して広範な増殖抑制効果を有する薬物の開発は依然として要望されている。本発明は、従来の化合物とは異なる作用に基づく優れた細胞増殖抑制効果を有する単糖誘導体、およびそれを有効成分とする新規の細胞増殖抑制剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、単糖誘導体の細胞増殖抑制効果においてアノマー位の水酸基が寄与することを発見した。具体的には、単糖誘導体のアノマー位の水酸基を露出させることにより、意外にも、従来の単糖誘導体より優れた細胞増殖抑制効果が得られることを見出した。
【０００７】
即ち、本発明は、
（１）次式：
【化１】
2009029770.tif 000002
［式中、
Ｒ1は、置換されていてもよいアシルオキシまたは−ＮＨＲ（Ｒは置換されていてもよいアシル）であり、
Ｒ2は、置換されていてもよいアシルであり、
Ｒ3は、置換されていてもよいアシルオキシまたはハロゲンであり、
Ｒ4は、置換されていてもよいアシルオキシおよびハロゲンから選ばれる群から選択される１以上の置換基で置換されたメチルである］
で示される化合物を含有する細胞増殖抑制剤である。
【０００８】
上の構造式に示される通り、本発明において示される単糖誘導体は、糖のアノマー位のみに水酸基を有し、糖の他の全ての水酸基が疎水性官能基またはハロゲン基等によって修飾されていることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の単糖誘導体を含有する細胞増殖抑制剤は、低濃度でより高い細胞増殖抑制効果を有する。また、本発明の単糖誘導体はアノマー位に水酸基を有するので、本発明の細胞増殖抑制剤は増大した水溶性を有する。さらに、本発明の単糖誘導体は、Ｇ２／Ｍ期特異的に細胞周期を停止させ、従来の化合物とは異なるメカニズムで細胞増殖を抑制する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の一態様では、本発明の化合物は、アノマー位のみに水酸基を有するグルコース（Glc）またはＮ−アセチルグルコサミン（GlcNAc）誘導体であり、次式：
【化２】
2009029770.tif 000003
［Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、前記と同意義であり、Ｒは置換されていてもよいアシルを表する］
で示される。
【００１１】
本発明の別の態様では、本発明の化合物は、アノマー位のみに水酸基を有するガラクトース（Gal）またはＮ−アセチルガラクトサミン（GalNAc）誘導体であり、次式：
【化３】
2009029770.tif 000004
［Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、前記と同意義であり、Ｒは置換されていてもよいアシルを表する］
で示される。
【００１２】
本明細書において用いられる「アシル」とは、カルボン酸から水酸基を除いた形の原子団を意味し、例えば、炭素数１〜１２の脂肪族アシル、炭素環カルボニルおよび複素環カルボニルを包含する。具体的には、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、アクリロイル、プロピオロイル、メタクリロイル、クロトノイル、ベンゾイル、シクロヘキサンカルボニル、ピリジンカルボニル、フランカルボニル、チオフェンカルボニル、ベンゾチアゾールカルボニル、ピラジンカルボニル、ピペリジンカルボニル、チオモルホリノ等が例示される。本発明においては特にアセチルが好ましい。
【００１３】
本発明において、上記Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4のアシル部分は置換されていてもよい。本明細書における「置換されていてもよいアシル」は、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4のアシル部分が、以下の置換基群Ａから選択される１以上の置換基で置換されていてもよいことを意味する。また、該アシル部分が、炭素環カルボニルまたは複素環カルボニルである場合は、その環の部分が、低級アルキル、置換基群Ａ、および置換基群Ａから選択される１以上の基により置換された低級アルキルからなる群から選択される１以上の基により置換されていてもよい。
置換基群Ａ：
ハロゲン、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ヒドロキシ低級アルコキシ、低級アルコキシ低級アルコキシ、アシル、アシルオキシ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、アミノ、アシルアミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、ヒドロキシイミノ、低級アルコキシイミノ、低級アルキルチオ、カルバモイル、低級アルキルカルバモイル、ヒドロキシ低級アルキルカルバモイル、スルファモイル、低級アルキルスルファモイル、低級アルキルスルフィニル、シアノ、ニトロ、アジド、炭素環式基および複素環式基。
【００１４】
本明細書における「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。上記Ｒ3およびＲ4におけるハロゲンとしては、フッ素が特に好ましい。
【００１５】
本明細書において用いられる「低級アルキル」は、炭素数１〜１５、好ましくは炭素数１〜１０、より好ましくは炭素数１〜６、さらに好ましくは炭素数１〜３の直鎖または分枝状のアルキルを包含し、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ｎ−へプチル、イソヘプチル、ｎ−オクチル、イソオクチル、ｎ−ノニルおよびｎ−デシル等が挙げられる。
【００１６】
本明細書において用いられる、「低級アルコキシ」、「ヒドロキシ低級アルコキシ」、「低級アルコキシ低級アルコキシ」、「低級アルコキシカルボニル」、「低級アルキルアミノ」、「低級アルコキシイミノ」、「低級アルキルチオ」、「低級アルキルカルバモイル」、「ヒドロキシ低級アルキルカルバモイル」、「低級アルキルスルファモイル」、「低級アルキルスルフィニル」の低級アルキル部分もまた、上記「低級アルキル」と同様である。
【００１７】
本明細書において用いられる「炭素環式基」は、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリールおよび非芳香族縮合炭素環式基等を包含する。
【００１８】
本明細書において用いられる「複素環式基」は、Ｏ、ＳおよびＮから任意に選択されるヘテロ原子を環内に１以上有する複素環式基を包含し、具体的にはピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアゾリル、トリアジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル等の５〜６員のヘテロアリール；
ジオキサニル、チイラニル、オキシラニル、オキセタニル、オキサチオラニル、アゼチジニル、チアニル、チアゾリジニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、モルホリノ、チオモルホリニル、チオモルホリノ、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロチアゾリル、テトラヒドロチアゾリル、テトラヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジニル、ヘキサヒドロアゼピニル、テトラヒドロジアゼピニル、テトラヒドロピリダジニル等の非芳香族複素環式基；
インドリル、イソインドリル、インダゾリル、インドリジニル、インドリニル、イソインドリニル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、プリニル、プテリジニル、ベンゾピラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンズオキサジアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、チエノピリジル、チエノピロリル、チエノピラゾリル、チエノピラジニル、フロピロリル、チエノチエニル、イミダゾピリジル、ピラゾロピリジル、チアゾロピリジル、ピラゾロピリミジニル、ピラゾロトリアニジル、ピリダゾロピリジル、トリアゾロピリジル、イミダゾチアゾリル、ピラジノピリダジニル、キナゾリニル、キノリル、イソキノリル、ナフチリジニル、ジヒドロチアゾロピリミジニル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ジヒドロベンゾフリル、ジヒドロベンズオキサジニル、ジヒドロベンズイミダゾリル、テトラヒドロベンゾチエニル、テトラヒドロベンゾフリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキソニル、クロマニル、クロメニル、オクタヒドロクロメニル、ジヒドロベンゾジオキシニル、ジヒドロベンゾオキセジニル、ジヒドロベンゾジオキセピニル、ジヒドロチエノジオキシニル等の２環の縮合複素環式基；および
カルバゾリル、アクリジニル、キサンテニル、フェノチアジニル、フェノキサチイニル、フェノキサジニル、ジベンゾフリル、イミダゾキノリル、テトラヒドロカルバゾリル等の３環の縮合複素環式基等を包含する。
好ましくは５〜６員のヘテロアリールまたは非芳香族複素環式基である。
【００１９】
上記「炭素環カルボニル」の炭素環部分は上記「炭素環式基」と同様である。また、上記「複素環カルボニル」の複素環部分は上記「複素環式基」と同様である。
【００２０】
本発明の単糖誘導体として、好ましくは以下のものが挙げられるが、これら化合物には限定されない。当業者は、本明細書において開示した、上で定義した置換基の任意の組み合わせが有用であることを認識する。
【化４】
2009029770.tif 000005
【化５】
2009029770.tif 000006
【化６】
2009029770.tif 000007
【化７】
2009029770.tif 000008
式中、Ａｃはアセチルを示す。
【００２１】
さらに好ましくは、本発明の単糖誘導体として以下に示す化合物が挙げられる。
【化８】
2009029770.tif 000009
【化９】
2009029770.tif 000010
式中、Ａｃはアセチルを示す。
【００２２】
本発明の化合物は、当分野において知られている合成法により製造することができる。出発物質は、市販されているか、または当分野において知られている合成法により製造することができる。具体的な反応条件は個々の反応に応じて当業者が適宜選択することができる。本発明の化合物は、例えば、以下の手順にしたがって製造することができる。
【００２３】
反応用ナス型フラスコに出発原料を入れ、ＴＨＦを加えて溶かし、その中にベンジルアミンを滴下し室温で２時間反応させる。反応液をクロロホルムで希釈し、分液した後、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルムのみからクロロホルム：メタノール＝５０：１）で単離精製する（方法１）。
【化１０】
2009029770.tif 000011
【００２４】
あるいは、反応用ナス型フラスコに出発原料を入れ、ＤＭＦを加えて溶かす。氷冷し、その中に、Ｎ2Ｈ4・Ｈ2Ｏ：ＡｃＯＨ＝５：６の混合液を滴下して室温で２時間半反応させる。反応液を酢酸エチルで希釈し、分液した後、シリカゲルカラムで単離精製する（方法２）。
【化１１】
2009029770.tif 000012
【００２５】
本発明はさらに、本発明の化合物を有効成分として含有する医薬組成物を提供する。
【００２６】
本発明の単糖誘導体は、以下の試験例に示されるように、細胞増殖抑制効果を有する。したがって、本発明は、本発明の化合物を有効成分として含有する細胞増殖抑制剤を提供する。
【００２７】
また、本発明の単糖誘導体は細胞周期を停止させる効果を示す。したがって、本発明の医薬組成物は、細胞周期停止剤として用いることができる。
【００２８】
さらに、本発明の単糖誘導体はアポトーシスを誘導する効果も示す。したがって、本発明の医薬組成物は、アポトーシス誘導剤としても用いることができる。
【００２９】
本明細書に開示した本発明のこのような効果に基づき、本発明の医薬組成物は、例えば抗癌剤として用いることができる。また、感染後の菌細胞の増殖抑制を企図した抗感染症薬などにも用いることができる。
【００３０】
さらに、関節リウマチや全身性エリテマトーデスなどの自己免疫疾患は、不要になった自己の細胞や異物化された自己の細胞に由来する分子を抗原とする自己免疫反応よって炎症を引き起こし発症するといわれている。本発明の医薬組成物は、そのような自己細胞を、アポトーシスを誘導することによって排除し得るので、自己免疫疾患の予防および治療にも有用である。
【００３１】
本発明の化合物を治療目的で用いる場合には、本発明の単糖誘導体を含有する医薬組成物を、例えば細胞増殖が望ましくない疾患に罹患しているヒトを含む動物に、有効量投与する。投与経路は経口または非経口のいずれでもよい。そのためには本発明の化合物を、製薬的に許容し得る担体、希釈剤または賦形剤と混合し、カプセルに充填するか、錠剤に打錠する。あるいは、粉剤、顆粒剤等の剤形としてもよい。また、非経口投与のためには、皮下注射、静脈注射、腹腔内注射、筋肉注射等に適した水溶液または懸濁液とする。さらに坐剤、外用剤、点眼剤などとしても利用できる。
【００３２】
経口投与は、通常の方法に従って調製した固形又は液状の用量単位、例えば、錠剤、粉末剤、カプセル剤、顆粒剤、懸濁剤、液剤、シロップ剤、ドロップ剤、舌下錠その他の剤型によって行うことができる。必要に応じて、経口投与のための用量単位処方はマイクロカプセル化してもよい。この処方はまた、被覆をしたり、高分子・ワックス等中に埋めこんだりすることにより作用時間の延長や持続放出をもたらすこともできる。
【００３３】
非経口投与は、通常の方法によって調製された液状用量単位形態、例えば溶液や懸濁液の形態の注射剤を用いることによって行うことができる。これらの投与方法のうち、経口投与、注射による静脈内投与が好ましい。投与に際してはこれらの投与方法に適した剤型で投与されるのはもちろんである。
【００３４】
以下の実施例および試験例により本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例および試験例のみに限定されるものではない。従って、上記の一般的説明および以下の実施例の具体的説明を参照しつつ、出発化合物、反応試薬及び反応条件などを適宜選択し、必要に応じてこれらの方法に適切な修飾ないしは改変を加えることによって、当業者は、本発明の化合物をいずれも製造可能である。
【実施例】
【００３５】
実施例１
Ｎ−アセチル−３，６−ジアセチル−４−フロロ−α−Ｄ−グルコサミン（４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ））
【化１２】
2009029770.tif 000013
１０ｍｌのナス型フラスコにＮ−アセチル−１，３，６−トリアセチル−４−フロロ−α−Ｄ−グルコサミン（１３１ｍｇ、０．３７５ｍｍｏｌ）を入れ、ＴＨＦ１．５ｍｌを加えた。その中に、ベンジルアミン（０．０８１ｍｌ、０．７４ｍｍｏｌ）を滴下した。室温で２時間反応させた。反応液をクロロホルムで希釈し、分液した。シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルムのみからクロロホルム：メタノール＝５０：１）で単離精製した。５０％の収率で白色の結晶５８ｍｇが得られた。
1Ｈ−ＮＭＲ  δ  （ＣＤＣＩ3）（α体）：６．０６  （１Ｈ，ｄ，  Ｊ＝９．３  Ｈｚ）  （ＮＨ），  ５．４２  （１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝９．２，  １０．７，  １４．０  Ｈｚ  ）  （Ｈ−３），  ５．２２  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝２．７  Ｈｚ）  （Ｈ−１），    ４．５２  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝９．３，  ５０．９  Ｈｚ）  （Ｈ−４），  ４．４９〜４．４３  （１Ｈ，  ｍ）  （Ｈ−６ａ），  ４．２６〜４．２０（３Ｈ，  ｍ）  （Ｈ−５，Ｈ−６ｂ，Ｈ−２），    ２．１１  （６Ｈ，  ｓ）  （２ＣＯＣＨ3），１．９８  （３Ｈ，  ｓ）  （ＮＨＣＯＣＨ3）
【００３６】
実施例２
Ｎ−アセチル−３，６−ジアセチル−４−フロロ−α−Ｄ−ガラクトサミン（４Ｆ−Ａｃ2−ＧａｌＮＡｃ（１−ＯＨ））
【化１３】
2009029770.tif 000014
１０ｍｌのナス型フラスコにＮ−アセチル−１，３，６−トリアセチル−４−フロロ−α−Ｄ−ガラクトサミン（５９ｍｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）を入れ、ＴＨＦ１ｍｌを加えた。その中に、ベンジルアミン（０．０２２ｍｌ、０．２１ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃にて１８時間反応させた。反応液を酢酸エチルで希釈し分液した。シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルムのみからクロロホルム：メタノール＝３０：１）で単離精製した。８４％の収率で白色の結晶４３ｍｇが得られた。
1Ｈ−ＮＭＲ  δ  （ＭｅＯＤ）（α体）：５．１９  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ＝２．７，  １１．４，  ２７．６  Ｈｚ）  （Ｈ−３），  ５．１６  （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２  Ｈｚ  ）  （Ｈ−１），  ４．８９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝２．７，  ５１．１  Ｈｚ）  （Ｈ−４），    ４．４３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝３．２，  １１．４  Ｈｚ）  （Ｈ−２），  ４．３３  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．５，  ２９．２  Ｈｚ）  （Ｈ−５），  ４．２３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．５，  １１．２  Ｈｚ）  （Ｈ−６ｂ），  ４．１８  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．５，  １１．２  Ｈｚ）  （Ｈ−６ａ），  ２．０７  （３Ｈ，  ｓ）  （ＣＯＣＨ3），  ２．０５  （３Ｈ，  ｓ）  （ＣＯＣＨ3），１．９４  （３Ｈ，  ｓ）  （ＮＨＣＯＣＨ3）
【００３７】
実施例３
Ｎ−アセチル−３，４−ジアセチル−６−フロロ−α−Ｄ−ガラクトサミン（６Ｆ−Ａｃ2−ＧａｌＮＡｃ（１−ＯＨ））
【化１４】
2009029770.tif 000015
１０ｍｌのナス型フラスコにＮ−アセチル−１，３，４−トリアセチル−６−フロロ−α−Ｄ−ガラクトサミン（３２ｍｇ、０．０９１６ｍｍｏｌ）を入れてＴＨＦ０．５ｍｌを加えた。室温にて、ベンジルアミン（０．０２ｍｌ、０．１８３ｍｍｏｌ）を滴下した。４５℃にて４時間反応させた。反応終了後、反応液を酢酸エチルで希釈し分液した。シリカゲルカラム（展開溶媒ヘキサンのみ→へキサン：酢酸エチル＝１：２から１：４）で単離精製した。３６％の収率で白色の結晶１０ｍｇが得られた。
1Ｈ−ＮＭＲ  δ  （ＣＤＣＩ3）（α体）：５．７０  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１０．９  Ｈｚ）  （ＮＨ−），  ５．４３  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝３．２  Ｈｚ）  （Ｈ−４），  ５．３７  （１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．１  Ｈｚ）  （Ｈ−１），  ５．２７  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝３．２，  １０．９  Ｈｚ）  （Ｈ−３），  ４．６０  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝３．１，  １０．９  Ｈｚ）  （Ｈ−２），  ４．４９〜４．４６  （１Ｈ，  ｍ）  （Ｈ−５），  ４．４４  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．３，９．０，４４．５  Ｈｚ）  （２Ｈ−６），  ３．１８  （１Ｈ，  ｂｒ，  ｓ）  （１−ＯＨ），  ２．１７  （３Ｈ，  ｓ）  （ＣＯＣＨ3），  ２．０２  （３Ｈ，  ｓ）  （ＣＯＣＨ3），  １．９９  （３Ｈ，  ｓ）  （ＮＨＣＯＣＨ3）
【００３８】
実施例４
Ｎ−アセチル−３，４−ジアセチル−６−フロロ−α−Ｄ−グルコサミン（６Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ））
【化１５】
2009029770.tif 000016
出発物質としてＮ−アセチル−１，３，４−トリアセチル−６−フロロ−α−Ｄ−グルコサミンを用いることを除いては実施例３と同様の手順にしたがい、表題化合物を製造した。
1Ｈ−ＮＭＲ  δ  （ＣＤＣＩ3）（α体）：５．８１  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１０．０  Ｈｚ）  （ＮＨ−），  ５．３２  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝１０．０  Ｈｚ）  （Ｈ−３），５．３０  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝３．２  Ｈｚ）  （Ｈ−１），５．０７  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝１０．０  Ｈｚ）  （Ｈ−４），４．４５  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝３．７，４７．２  Ｈｚ）  （Ｈ−６），  ４．３０  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝３．２，  １０．０  Ｈｚ）  （Ｈ−２），  ４．２３  （１Ｈ，  ｄｄｔ，  Ｊ＝３．７，  １０．０，  ２２．０  Ｈｚ）  （Ｈ−５），  ３．４９  （１Ｈ，  ｂｒ，  ｓ）  （１−ＯＨ），  ２．０６  （３Ｈ，  ｓ）  （ＣＯＣＨ3），  ２．０３  （３Ｈ，  ｓ）  （ＣＯＣＨ3），  １．９７  （３Ｈ，  ｓ）  （ＮＨＣＯＣＨ3）
【００３９】
製造例１
Ｎ−レブリノイル−１，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−Ｄ−グルコサミン
Ｄ−グルコサミン塩酸塩７．５ｇ（３４．９ｍｍｏｌ）に、Ｈ2Ｏ ２５ｍｌと、レブリン酸３．５８ｍｌ（３４．９ｍｍｏｌ）、１Ｎ ＮａＯＨ水溶液３５ｍｌを加え、撹拌した。ＤＴＭ−ＭＭ １１．５ｇ（４１．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１日間反応させた。反応をＴＬＣ（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝５：４：１）で確認した後、吸引濾過により沈殿物を除去し、エバポレーターで反応溶液を除去した。ピリジンを１００ｍｌ加え室温で撹拌し、完全に溶かした後、０℃に冷やして、Ａｃ2Ｏ ５０ｍｌを加え、室温で１８時間反応させた。反応をＴＬＣ（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝１０：１）で確認した後、エバポレーターで反応溶液を濃縮した。反応溶液をＣＨＣｌ3で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4で乾燥した。エバポレーターで溶媒を除去し、ＣＨＣｌ3で溶かし、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：ＥｔＯＡｃ＝１：３）で精製して、白色の結晶９．１８ｇを得た（収率５９％）。
1H-NMR （CDCl3）σ： 6.14（1H, d, J=3.6 Hz）（H-1）, 5.94（1H, d, J=9.1 Hz）（NH）, 5.27（1H, t, J=10.3 Hz）（H-3）, 5.19（1H, t, J=10.3 Hz）（H-4）, 4.43（1H, ddd, J2,1=3.6 Hz, J2,NH=9.1 Hz, J2,3=10.3 Hz）（H-2）, 4.26（1H, dd, J6a,5=4.1 Hz, J6a,6b=12.5 Hz）（H-6a）, 4.06（1H, dd, J6b,5=2.2 Hz, J6b,6a=12.5 Hz）（H-6b）, 4.02-3.99（1H, m）（H-5）, 2.80（1H, dt, 3J =6.1 Hz, 2J=18.9 Hz）（CH3CO-CH2-a）, 2.71（1H, dt, 3J =6.1 Hz, 2J=18.9 Hz）（CH3CO-CH2-b）, 2.34（2H, t, J=6.1 Hz）（NHCO-CH2）, 2.22（3H, s）（COCH3）, 2.15（3H, s）（COCH3）, 2.08（3H, s）（COCH3）, 2.08（3H, s）（COCH3）, 2.04（3H,s）（COCH3）
（α体）
【００４０】
実施例５
Ｎ−レブリノイル−３,４,６−Ｏ−トリアセチル−Ｄ−グルコサミン
【化１６】
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製造例１で製造したＮ−レブリノイル−１,３,４,６−Ｏ−テトラアセチル−Ｄ−グルコサミン９．１８ｇ（２０．６ｍｍｏｌ）にＴＨＦ１８０ｍｌを加え、室温で撹拌した。ベンジルアミン４．４９ｍｌ（４１．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で４４時間反応させた。反応をＴＬＣ（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝１０：１）で確認した後、エバポレーターで溶媒を除去した。残留物をＣＨＣｌ3に溶解し、ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、白色の結晶２．８１ｇを得た（収率３４％）。
1H-NMR （CDCl3）σ： 6.01（1H, d, J=9.9 Hz）（NH）, 5.32（1H, t, J=9.9 Hz）（H-3）, 5.25（1H, t, J=3.1 Hz）（H-1）, 5.12（1H, t, J=9.9 Hz）（H-4）, 4.27（1H, dt, J2,1=3.1 Hz, J =9.9 Hz）（H-2）, 4.24-4.11（1H, m）（H-5）, 4.21（1H, dd, J6a,5=5.2 Hz, J6a,6b=13.4 Hz）（H-6a）, 4.13（1H, dd, J6b,5=3.4 Hz, J6b,6a=13.4 Hz）（H-6b）, 3.65（1H, d, J=3.1 Hz）（OH-1）, 2.77（2H, m）（CH3CO-CH2）, 2.39（2H, t, J=6.2 Hz）（NHCO-CH2）, 2.17（3H, s）（COCH3）, 2.10（3H, s）（COCH3）, 2.05（3H, s）（COCH3）, 2.04（3H,s）（COCH3）
（α体）
【００４１】
実施例６
Ｎ−アジドアセチル−３,４,６−Ｏ−トリアセチル−Ｄ−グルコサミン（６）
【化１７】
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メチルアジドアセテート（２）
ブロモ酢酸メチル（１）７．８３ｍｌ（８５ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ１５ｍｌを加え、撹拌した。アジ化ナトリウム４８０ｍｇ（３．９ｍｍｏｌ）を加え、７時間反応させた。反応溶液をＥｔ2Ｏで希釈し、水で３回分液した。エバポレーターで濃縮して無色の液体９．１７ｇを得た（収率９３％）。
【００４２】
ナトリウムアジドアセテート（３）
メチルアジドアセテート（２）９ｇ（７８ｍｍｏｌ）に、１Ｍ ＮａＨＣＯ3６０ｍｌと、ＭｅＯＨ５０ｍｌを加え、室温で１時間反応させた。陽イオン交換樹脂ＤＯＷＥＸ５０で中和し、吸引濾過によりＤＯＷＥＸ５０を除去した。エバポレーターで溶媒を除去し、白色の結晶６．８６ｇを得た（収率６６％）。
【００４３】
Ｎ−アジドアセチル−１,３,４,６−Ｏ−テトラアセチル−Ｄ−グルコサミン（５）
Ｄ−グルコサミン塩酸塩（４）８４２ｍｇ（３．９ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ４ｍｌを加え、撹拌して完全に溶かした。０℃に冷却し、ナトリウムアジドアセテート（３）４８０ｍｇ（３．９ｍｍｏｌ）と、ジフェニルホスホリルアジド０．９１ｍｌ（４．３ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン１．２ｍｌ（６．８ｍｍｏｌ）を加え、１９時間反応させた。反応をＴＬＣ（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝１０：１）で確認した後、エバポレーターで反応溶液を除去した。ピリジン１０ｍｌを加え、室温で撹拌し、完全に溶かした後、０℃に冷却し、Ａｃ2Ｏ４ｍｌを加え、室温で１２時間反応させた。反応をＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝２：３）で確認した後、エバポレーターで反応溶液を濃縮した。反応溶液をＣＨＣｌ3で希釈し、水、１ＮＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4で乾燥した。エバポレーターで溶媒を除去し、ＣＨＣｌ3に溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン→ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１：１）により精製して白色の結晶７８４ｍｇ（収率４７％）を得た。
1H-NMR （CDCl3）σ： 6.43（1H, d, J=8.8 Hz）（NH）, 6.21（1H, d, J=3.6 Hz）（H-1）, 5.30（1H, t, J=10.3 Hz）（H-3）, 5.21（1H, t, J=10.3 Hz）（H-4）, 4.45（1H, ddd, J2,1=3.6 Hz, J2,NH=8.8 Hz, J2,3=10.3 Hz）（H-2）, 4.27（1H, dd, J6a,5=3.8 Hz, J6a,6b=12.5 Hz）（H-6a）, 4.08（1H, dd, J6b,5=2.3 Hz, J6b,6a=12.5 Hz）（H-6b）, 4.03（1H, ddd, J5,6b=2.3 Hz, J5,6a=3.8 Hz, J5,4=10.3 Hz）（H-5）, 3.90（2H, s）（COCH2）, 2.20（3H, s）（COCH3）, 2.09（3H, s）（COCH3）, 2.06（3H, s）（COCH3）, 2.05（3H,s）（COCH3）
（α体）
【００４４】
Ｎ−アジドアセチル−３,４,６−Ｏ−トリアセチル−Ｄ−グルコサミン（６）
Ｎ−アジドアセチル−１,３,４,６−Ｏ−テトラアセチル−Ｄ−グルコサミン（５）１９６ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ２ｍｌを加え、撹拌して完全に溶解した。０℃に冷却し、Ｎ2Ｈ4・Ｈ2Ｏ：ＡｃＯＨ＝５：６の混合液０．０５７ｍｌ（０．５０ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間反応させた。反応をＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝２：３）で確認した後、反応溶液をＣＨＣｌ3で希釈し、水、１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4で乾燥した。エバポレーターで溶媒を除去し、ＣＨＣｌ3に溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝２：３→１：２）により精製して白色の結晶１５７ｍｇ（収率８９％）を得た。
1H-NMR （CDCl3）σ： 6.84（1H, d, J=9.9 Hz）（NH）, 6.12（1H, s）（OH-1）, 5.34（1H, t, J=9.9 Hz）（H-3）, 5.14（1H, d, J=3.1 Hz）（H-1）, 5.13（1H, t, J=9.9 Hz）（H-4）, 4.30（1H, dt, J2,1=3.1 Hz, J =9.9 Hz）（H-2）, 4.17-4.14（2H, m）（H-5, H-6a）, 4.10（1H, d, J6b,6a=10.2 Hz）（H-6b）, 3.92（2H, s）（COCH2）, 2.09（3H, s）（COCH3）, 2.04（3H, s）（COCH3）, 2.02（3H, s）（COCH3）,
（α体）
【００４５】
試験例１
（方法）
ヒト前立腺癌細胞株ＰＣ−３（ヒューマンサイエンス研究資源バンク(HSRRB)より入手：資源番号JCRB9110）またはヒト前立腺上皮細胞ＰｒＥＣ（CAMBREX）を９６ウェルプレートに播種（5000細胞／ウェル／１００μL）し、一晩培養し接着させた後、試験化合物を４８時間接触させ、細胞増殖５０％阻害濃度(IC50)をGraphPad Prismにより算出した。生細胞の測定にはCell Counting Kit-8（同仁化学）を用いた。
（結果）
結果を以下の表に示す。
【表１】
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Ac4-GlcNAc: N-アセチル-1,3,4,6-テトラアセチル-α-D-グルコサミン
Ac3-GlcNAc(1-OH): N-アセチル-3,4,6-トリアセチル-α-D-グルコサミン
4F-Ac3-GlcNAc（β）: N-アセチル-1,3,6-トリアセチル-4-フルオロ−β-D-グルコサミン
4F-Ac2-GlcNAc(1-OH): N-アセチル-3,6-ジアセチル-4-フルオロ−α-D-グルコサミン
6F-Ac2-GlcNAc(6-OH): N-アセチル-3,4-ジアセチル-6-フルオロ−α-D-グルコサミン
ＰＣ−３において、Ａｃ3−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）のＩＣ50は１１３μＭであり、対照（アノマー位アセチル化誘導体：Ａｃ4−ＧｌｃＮＡｃ）のＩＣ50の約１／５であった。さらに４位水酸基をフッ素で置換した本発明の単糖誘導体４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）のＩＣ50は７４μＭを示し、対照（アノマー位アセチル化誘導体：４Ｆ−Ａｃ3−ＧｌｃＮＡｃ）のＩＣ50の約１／８であった。ＩＣ50は細胞の継代数にも依存するが、４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）では５０〜１００μＭの範囲に収束し、アノマー位アセチル化誘導体の約１／１０であった。一方で、６位に水酸基を有するアノマー位アセチル化誘導体（４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（６−ＯＨ））は１ｍＭまでの濃度では全く細胞増殖抑制効果を示さなかったことから、アノマー位の水酸基の効果は大きい。
抗がん剤として多用されている５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびシスプラチンを同様に測定した場合、前者では５０μＭ以上の高濃度でも６０％程度までしか細胞増殖を抑制しなかったが、後者のＩＣ50は８２μＭであった。５−ＦＵおよびシスプラチンと比較しても４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）は抗がん剤として有効である。
また、正常細胞ＰｒＥＣにおけるＩＣ50は、４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）で６７２μＭ、シスプラチンで２１０μＭであり、４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）はシスプラチンよりも癌細胞の増殖を特異的に抑制することから、副作用の小さい抗がん剤としての効果が期待できる。
【００４６】
試験例２
（方法）
ヒト前立腺癌細胞株ＰＣ−３（ヒューマンサイエンス研究資源バンク（HSRRB）より入手：資源番号JCRB9110）を2130細胞／ウェル／１００μLまたはヒト前立腺上皮細胞(PrEC, CAMBREX)を1243細胞／ウェル／１００μLにて９６ウェルプレートに播種し、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン、４Ｆ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、４Ｆ−Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンの完全アセチル化誘導体および本発明のアノマー位水酸基を有する単糖誘導体を、終濃度２〜５００μＭで添加し培養した。糖誘導体添加後２４時間および４８時間の細胞増殖をCell Counting Kit-8（同仁化学）により測定した。グラフは０μＭ、２４時間を１００％としたときの値である。
（結果）
結果を図１〜４に示す。
Ａｃ3−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）に関しては１００μＭ以上で、Ａｃ3−ＧａｌＮＡｃ（１−ＯＨ）では２５０μＭ以上で、特に４８時間接触した場合に正常細胞（ＰｒＥＣ）に比べて癌細胞（ＰＣ−３）の顕著な増殖阻害がみられた。４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）では５０μＭ以上で、４Ｆ−Ａｃ2−ＧａｌＮＡｃ（１−ＯＨ）では２５０μＭ以上で同様の現象を示した。
【００４７】
試験例３：細胞周期解析
１０−ｃｍセルカルチャーディッシュにヒト前立腺癌細胞株ＰＣ−３（ヒューマンサイエンス研究資源バンク（ＨＳＲＲＢ）より入手）を培養し接着させた後、Ｄ−グルコース、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、４Ｆ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの完全アセチル体および１位のみＯＨ基のアセチル体を、対数増殖期にある細胞に対し終濃度５０μＭ（０．５％ＤＭＳＯ含有）で添加し４８時間培養した。０．０５％トリプシン−０．５３ｍＭ ＥＤＴＡ処理により細胞を回収後、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、７０％エタノール／ＰＢＳに懸濁し−２０℃で細胞の固定を行った。エタノール固定により膜透過性を確保した細胞に対しＲＮａｓｅ処理を行った後、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）によりＤＮＡを染色しFACSCanto（BD Biosciences）により細胞周期の解析を行った。
結果を図５に示す。
図５に示されるように、ＰＣ−３の細胞周期分布は、Ａｃ3−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）（化合物Ｅ）および４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）（化合物Ｇ）によって変化を示した。即ち、Ｇ１期の割合の減少に伴ってＧ２期の割合が増加しており、Ｇ２／Ｍ期での細胞周期の停止が認められた。一方、Ａｃ4−Ｇｌｃ（１−ＯＨ）（化合物Ｃ）では細胞周期の停止効果は認められなかった。アノマー位が置換された化合物（化合物Ｂ、Ｄ、Ｆ）との比較から、アノマー位に水酸基を有する本発明の化合物は、細胞周期をＧ２／Ｍ期で停止させることにより、細胞増殖の抑制に寄与していると考えられる。
【００４８】
試験例４：Annexin Vによるアポトーシスの判定
ヒト前立腺癌細胞株ＰＣ−３を６−ウェルマルチウェルプレートに１×１０5細胞／ウェルで播種し一晩培養後、４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）を終濃度５０μＭ、１００μＭ、２００μＭで添加し４８時間培養した。０．０５％トリプシン−０．５３ｍＭ ＥＤＴＡ処理により細胞を回収後、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、ApoScreen（登録商標）Annexin V アポトーシスキット(Southern Biotechnology Associates, Inc., Birmingham, AL)を用い、FITC標識Annexin VおよびPIで二重染色を行い、FACSCanto（登録商標）フローサイトメーター(BD Biosciences)により細胞膜構造の変化を解析した。結果を図６に示す。
図６に示されるように、ＰＣ−３における４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）のＩＣ５０は５０〜８０μＭ程度であるが、１００〜２００μＭの間では、ＦＩＴＣで染色された細胞数の著しい増加が観察された。これは、細胞膜リン脂質の構造に乱れが生じ、ホスファチジルセリン（ＰＳ）が細胞膜外側へ露出してＡｎｎｅｘｉｎＶと結合していることを示している。また、初期のアポトーシス細胞（ＦＩＴＣ＋、ＰＩ−）を経て、さらに細胞膜の破壊が進んだアポトーシス後期の細胞（ＦＩＴＣ＋、ＰＩ＋）が検出された。特に２００μＭで４８時間の処理により、４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）はＰＣ−３細胞の６０％以上にアポトーシスを誘導した。
【産業上の利用可能性】
【００４９】
本発明の細胞増殖抑制剤は、低濃度でより高い細胞増殖抑制効果が得られるので、細胞増殖抑制剤、特に抗癌剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】ヒト前立腺癌細胞株ＰＣ−３およびヒト前立腺上皮細胞ＰｒＥＣに対する試験化合物の細胞増殖抑制効果を示す。上段：Ａｃ4−ＧｌｃＮＡｃ（N-アセチル-1,3,4,6-テトラアセチル-α-D-グルコサミン。下段：Ａｃ3−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）（N-アセチル-3,4,6-トリアセチル-α-D-グルコサミン）。
【図２】ヒト前立腺癌細胞株ＰＣ−３およびヒト前立腺上皮細胞ＰｒＥＣに対する試験化合物の細胞増殖抑制効果を示す。上段：Ａｃ4−ＧａｌＮＡｃ（N-アセチル-1,3,4,6-テトラアセチル-α-D-ガラクトサミン）。下段：Ａｃ3−ＧａｌＮＡｃ（１−ＯＨ）（N-アセチル-3,4,6-トリアセチル-α-D-ガラクトサミン）。
【図３】ヒト前立腺癌細胞株ＰＣ−３およびヒト前立腺上皮細胞ＰｒＥＣに対する試験化合物の細胞増殖抑制効果を示す。上段：４Ｆ−Ａｃ3−ＧｌｃＮＡｃ（N-アセチル-1,3,6-トリアセチル-4-フルオロ−D-グルコサミン）。下段：４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）（N-アセチル-3,6-ジアセチル-4-フルオロ−D-グルコサミン）。
【図４】ヒト前立腺癌細胞株ＰＣ−３およびヒト前立腺上皮細胞ＰｒＥＣに対する試験化合物の細胞増殖抑制効果を示す。上段：４Ｆ−Ａｃ3−ＧａｌＮＡｃ（N-アセチル-1,3,6-トリアセチル-4-フルオロ−D-ガラクトサミン）。下段：４Ｆ−Ａｃ2−ＧａｌＮＡｃ（１−ＯＨ）（N-アセチル-3,6-ジアセチル-4-フルオロ−D-ガラクトサミン）。
【図５】ヒト前立腺癌細胞株ＰＣ−３の細胞周期解析の結果を示す。Ａ：対照（０．５％ＤＭＳＯ）；Ｂ：５０μＭ Ａｃ5−Ｇｌｃ（１，２，３，４，６−ペンタアセチル−Ｄ−グルコース）；Ｃ：５０μＭ Ａｃ4−Ｇｌｃ（１−ＯＨ）（２，３，４，６−テトラアセチル−Ｄ−グルコース）；Ｄ：５０μＭ Ａｃ4−ＧｌｃＮＡｃ（Ｎ−アセチル−１，３，４，６−テトラアセチル−Ｄ−グルコサミン）；Ｅ：５０μＭ Ａｃ3−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）（Ｎ−アセチル−３，４，６−トリアセチル−Ｄ−グルコサミン）；Ｆ：５０μＭ ４Ｆ−Ａｃ3−ＧｌｃＮＡｃ（Ｎ−アセチル−１，３，６−トリアセチル−４−フルオロ−Ｄ−グルコサミン）；Ｇ：５０μＭ ４Ｆ−Ａｃ2−ＧｌｃＮＡｃ（１−ＯＨ）（Ｎ−アセチル−３，６−ジアセチル−４−フルオロ−Ｄ−グルコサミン）全細胞数に対する各細胞周期の細胞数の割合を百分率で示す。* one-way ANOVA, Dunnetの多重比較法; P<0.01
【図６】ヒト前立腺癌細胞株ＰＣ−３のアポトーシス解析の結果を示す。全細胞数に対するアポトーシスが誘導された細胞数の割合を百分率で示す。ＦＩＴＣ＋，ＰＩ−：初期のアポトーシス細胞、ＦＩＴＣ＋，ＰＩ＋：後期のアポトーシス細胞もしくはネクローシス細胞を示す。*one-way ANOVA, Dunnetの多重比較法; P<0.01
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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