(57)【要約】【課題】天然抽出物を含有したヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進剤及びラミニン５産生促進剤を提供する。【解決手段】ヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進剤及びラミニン５産生促進剤に、スターフルーツ（Averrhoa carambola L.）の葉部からの抽出物を有効成分として含有せしめる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スターフルーツの葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進剤。
【請求項２】
スターフルーツの葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤。
【請求項３】
スターフルーツの葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするセリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進剤。
【請求項４】
スターフルーツの葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするラミニン５産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進剤及びラミニン５産生促進剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロン酸は、皮膚の水分保持や粘弾性に深く関与する主要な細胞外マトリックスの一つであり、真皮線維芽細胞に加え表皮角化細胞からも合成されることが知られている。また、表皮のヒアルロン酸の機能として、免疫系や分化調節等、皮膚の恒常性維持にも関与していることも知られている。
【０００３】
しかし、生理的老化に伴い皮膚内のヒアルロン酸含量は減少することが知られており、皮膚内のヒアルロン酸含量の減少が、皮膚の乾燥・萎縮、弾力性の低下、小じわの形成等の老化に関与している可能性が推察されている（非特許文献１参照）。
【０００４】
したがって、表皮ヒアルロン酸の合成促進に関与するヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）の発現を促進することで、皮膚の老化を予防・改善することができるものと考えられる。このような考えに基づき、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）発現促進作用を有するものとして、例えば、トコフェリルレチノエート（特許文献１参照）等が知られている。
【０００５】
皮膚細胞では、水チャンネルとして知られるアクアポリンが、細胞膜上に発現して、細胞間隙の水をはじめとする低分子物質を細胞内へ取り込む役割を担っていることが知られている。
【０００６】
ヒトでは、１３種類のアクアポリン（ＡＱＰ０〜ＡＱＰ１２）の存在が知られている。表皮細胞においては、主としてＡＱＰ３が存在しており、水に加えて、水分保持作用に関与するグリセロールや尿素等の低分子化合物をも取り込む役割を担っていると考えられている。
【０００７】
しかしながら、ＡＱＰ３は加齢とともに減少し、このことが水分保持機能の低下の一因であることが示唆されているため、ＡＱＰ３の発現を促進することにより、加齢による水分保持能やバリア機能等を制御することが可能であると考えられる（非特許文献２参照）。このような考えに基づき、ＡＱＰ３発現促進作用を有するものとして、例えば、トコフェリルレチノエート（特許文献１参照）、ノウゼンハレン科植物より得られる抽出物（特許文献２参照）等が知られている。
【０００８】
セラミドは、表皮細胞の角化の過程においてセリンとパルミトイル−ＣｏＡとを基に、セラミド合成の律速酵素として知られるセリンパルミトイルトランスフェラーゼ（ＳＰＴ）をはじめとする酵素の働きにより生成される。セラミドは、皮膚最外層を覆う角質細胞間脂質の主成分として特異的に存在し、皮膚本来が持つ生体と外界とのバリア膜としての機能維持に重要な役割を果たしている。
【０００９】
角層の構造は、レンガとモルタルとに例えられ、１５層ほどに積み重なった角層細胞を細胞間脂質が繋ぎ止める形で強固なバリア膜を形成している。角層細胞は、アミノ酸を主成分とする天然保湿因子を細胞内に含有することによって水分を保持し、一方、角質細胞間脂質は、約５０％のセラミドを主成分とし、コレステロール、脂肪酸等の両親媒性脂質から構成されており、疎水性部分と親水性部分とが交互に繰り返される層板構造、いわゆるラメラ構造を特徴としている。
【００１０】
様々な内的・外的要因による皮膚のバリア機能の低下は、経表皮水分蒸散量を増加させ、皮膚のかさつき、落屑、掻痒感等を惹き起こし、いわゆる乾燥肌に陥る。また、皮膚のバリア機能の低下は、皮膚の炎症を増大させ、外界からの様々な刺激に対する防御機能が低下するという悪循環に陥る。最近の研究において、加齢により、又はバリア障害として知られるアトピー性皮膚炎患者において、角層セラミド成分（いわゆる細胞間脂質）の減少や組成変化が報告されており（非特許文献３参照）、皮膚のバリア機能の維持、改善にセラミドが重要であることが広く知られるようになっている。このような考え方に基づいて、皮膚のバリア機能を改善する方法として、セラミドを外部から補う方法（非特許文献４参照）や皮膚内部においてセラミド産生能を高める方法（非特許文献５参照）等が知られている。
【００１１】
皮膚は角層、表皮、基底膜及び真皮から構成されている。基底膜は表皮真皮境界部に存在し、表皮と真皮を繋ぎ止めるだけでなく、皮膚機能の維持に重要な役割を果たしている（非特許文献６参照）。基底膜の主要骨格はＩＶ型コラーゲンからなる網目構造をしている。基底膜と表皮の境界に存在し、基底膜と表皮を繋ぎとめているのがラミニン５を主成分とする各種糖蛋白質である。若い皮膚においては、基底膜の働きにより表皮、真皮の相互作用が恒常性を保つことで水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【００１２】
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、基底膜の主要構成成分であるＩＶ型コラーゲンや、ラミニン５は分解・変質を起こし、基底膜構造が破壊される（非特許文献７参照）。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるから、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、基底膜成分の減少、基底膜の構造変化が関与しており、ラミニン５の産生を促進することにより、皮膚の老化症状を予防・改善することができると考えられる。
【００１３】
ラミニンは、α鎖、β鎖及びγ鎖の種々の組合せからなり、現在のところ１５種類のもの（ラミニン１〜１５）が知られている。これらのα鎖、β鎖及びγ鎖が長鎖（long arm）と呼ばれる部位で３本鎖構造を形成することで、巨大なラミニン分子が構成されている。その中でラミニン５（α３β３γ２）は、皮膚、消化器、腎臓、肺等の上皮組織の基底膜に多量に存在する。ラミニン５の各鎖をコードする遺伝子の先天的な異常に起因する遺伝子疾患（致死型先天性表皮水疱症，Herlitz junctional epidermolysis bullosa）においては、全身の表皮が剥離する致死性の症状を示すことが知られている。そして、ラミニン５は、他の細胞外マトリックス分子と比べ、強度に細胞を接着させ（細胞接着活性が高く）、細胞運動を強く促進する（細胞運動活性が高い）ことが知られている（非特許文献８参照）。
【００１４】
このように、ラミニン５は、細胞運動活性が高いことから、損傷皮膚中の細胞移動を促進し、皮膚の損傷治癒を促すことが知られている（特許文献３参照）。すなわち、ラミニン５の産生を促進することは、基底膜の構造が破壊されるような皮膚損傷の治癒を促す上で重要である。
【００１５】
従来、ラミニン５を含有する皮膚外用剤（特許文献４参照）が知られており、また、ラミニン５産生促進作用を有するものとして、大豆抽出物（特許文献５参照）、フェニルプロパノイド類（特許文献６参照）、パントテン酸（特許文献７参照）、リゾホスファチジルコリン又はリゾホスファチジン酸（特許文献８参照）、コエンザイムＱ１０（特許文献９参照）等が知られている。
【特許文献１】特開２００６−２９０８７３号公報
【特許文献２】特開２００４−１６８７３２号公報
【特許文献３】特開２００６−６３０３３号公報
【特許文献４】特開平１０−１４７５１５号公報
【特許文献５】特開２００４−２１７６１８号公報
【特許文献６】特開２００７−７７１６９号公報
【特許文献７】特開２００５−１７９２４３号公報
【特許文献８】特開２０００−２２６３０８号公報
【特許文献９】特開２００７−６３１６０号公報
【非特許文献１】"コスメティックステージ"，2007，Vol.1，No.3，p.45-46
【非特許文献２】"フレグランスジャーナル"，2006，Vol.34，No.10，p.19-23
【非特許文献３】Akimoto K et al.，"J. Dermatol."，1993，Vol.20，p.1
【非特許文献４】Kenya I et al.，"フレグランスジャーナル"，2004，Vol.11，p.23-32
【非特許文献５】Tanno O et al.，"Br. J. Dermatol."，2000，Vol.143，p.524
【非特許文献６】Marinkovich MP et al.，"J. Cell. Biol."，1992，Vol.199，p.695-703
【非特許文献７】Lavker et al.，"J. Invest. Dermatol."，1979，Vol.73，p.59-66
【非特許文献８】宮崎  香，「細胞接着分子ラミニン５の機能解析と応用」，［on line］，横浜市立大学第３回産学連携セミナー，［平成１９年８月１日検索］，インターネット＜URL:http://www.yokohama-cu.ac.jp/sangaku/seminar3/summary_miyazaki.pdf＞
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明は、安全性の高い天然物の中からヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進作用、又はラミニン５産生促進作用を有するものを見出し、それを有効成分とするヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進剤、又はラミニン５産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
上記課題を解決するため、本発明のヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進剤及びラミニン５産生促進剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、天然物であるスターフルーツの葉部からの抽出物を有効成分として含有し、安全性に優れたヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進剤又はラミニン５産生促進剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明について説明する。
〔ヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進剤，アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤，セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進剤，ラミニン５産生促進剤〕
本発明のヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進剤又はラミニン５産生促進剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物を有効成分として含有する。
【００２０】
ここで本発明において「スターフルーツの葉部からの抽出物」には、スターフルーツの葉部を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２１】
本発明において使用する抽出原料は、スターフルーツ（学名：Averrhoa carambola L.，別名：五斂子）である。
【００２２】
スターフルーツ（Averrhoa carambola L.）は、カタバミ科ゴレンシ属に属し、新鮮な果実は食用にされる。スターフルーツは、中国では紀元前から文献に記載され、果実の断面が星形であることからスターフルーツと呼ばれている。スターフルーツは、沖縄、中国東南部や雲南その他熱帯各地で栽培されており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、葉部である。
【００２３】
スターフルーツの葉部からの抽出物に含有されるＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用又はラミニン５産生促進作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、スターフルーツの葉部からこれらの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００２４】
例えば、上記植物を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、ＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用又はラミニン５産生促進作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、スターフルーツの葉部の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２５】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００２６】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２７】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２８】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００２９】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００３０】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進剤又はラミニン５産生促進剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００３１】
スターフルーツの葉部からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料又は飲食品に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００３２】
以上のようにして得られるスターフルーツの葉部からの抽出物は、ＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用又はラミニン５産生促進作用を有しているため、それぞれの作用を利用してＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進剤又はラミニン５産生促進剤の有効成分として用いることができる。
【００３３】
また、スターフルーツの葉部からの抽出物は、上記ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用を通じて、セラミドの合成を促進し、皮膚バリア機能を改善することができるため、皮膚バリア機能改善剤の有効成分としても用いることができる。具体的にはアトピー性皮膚炎等の炎症性疾患による皮膚バリア機能障害の予防、治療又は改善剤等の有効成分として用いることができる。さらに、スターフルーツの葉部からの抽出物は、上記ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用を通じて、セラミドの合成を促進することができるため、セラミドの合成障害に起因する疾患（例えば、アトピー性皮膚炎等）の予防又は治療剤の有効成分としても用いることができる。
【００３４】
さらにまた、スターフルーツの葉部からの抽出物は、上記ラミニン５産生促進作用を通じて、皮膚の基底膜の再構築を誘導し、皮膚の基底膜の構造を正常化することができ、また皮膚の損傷の回復を促進することができるため、皮膚基底膜正常化剤又は皮膚損傷回復促進剤の有効成分としても用いることができる。また、かかるラミニン５産生促進作用を通じて、ラミニン５の欠乏（欠損）に起因する疾患（表皮水疱症等）の予防又は治療剤の有効成分としても用いることができる。
【００３５】
本発明のＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進剤又はラミニン５産生促進剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物のみからなるものであってもよいし、上記抽出物を製剤化したものであってもよい。
【００３６】
スターフルーツの葉部からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。スターフルーツの葉部からの抽出物は、他の組成物（例えば、皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００３７】
なお、本発明のＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進剤又はラミニン５産生促進剤は、必要に応じて、ＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用又はラミニン５産生促進作用を有する他の天然抽出物を配合して有効成分として用いることができる。
【００３８】
本発明のＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進剤又はラミニン５産生促進剤の投与方法としては、一般に経皮投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本発明のＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進剤又はラミニン５産生促進剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００３９】
本発明のＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物が有するＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進作用を通じて、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）の発現を促進することができるため、それによりヒアルロン酸の生成が促進され、皮膚の乾燥・萎縮、弾力性の低下、小じわの形成等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明のＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進剤は、これらの用途以外にもＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４０】
本発明のＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物が有するＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用を通じて、アクアポリン３（ＡＱＰ３）の発現を促進することができるため、皮膚の水分保持能やバリア機能を改善することができ、それにより皮膚の乾燥、しわの形成、弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明のＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進剤は、これらの用途以外にもＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４１】
本発明のＳＰＴｍＲＮＡ発現促進剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物が有するＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用を通じて、セラミドの合成を促進することができ、これにより、しわ、弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができるとともに、アトピー性皮膚炎等の炎症性疾患による皮膚バリア機能障害やアトピー性皮膚炎等のセラミド合成障害に起因する疾患を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のＳＰＴｍＲＮＡ発現促進剤は、これらの用途以外にもＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４２】
本発明のラミニン５産生促進剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物が有するラミニン５産生促進作用を通じて、ラミニン５の産生を促進することができる。これにより、基底膜構造の再構築を誘導し、しわ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防又は改善したり、表皮水疱症等のラミニン５の欠乏（欠損）に起因する疾患を予防、治療又は改善したりすることができる。ただし、本発明のラミニン５産生促進剤は、これらの用途以外にもラミニン５産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４３】
なお、本発明のＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進剤、ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進剤又はラミニン５産生促進剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００４４】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。なお、下記試験例において、試料としてスターフルーツ葉部抽出物（丸善製薬社製，商品名：スターフルーツ葉抽出液，試料１）を使用した。
【００４５】
〔試験例１〕ＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進作用試験
上記スターフルーツ葉部抽出物（試料１）について、以下のようにしてＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【００４６】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（normal human epidermal keratinocyte；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（Epilife-KG2）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。
【００４７】
回収した細胞を３５ｍｍシャーレ（FALCON社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で、Epilife-KG2を用いて一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、Epilife-KG2で溶解した試料溶液（試料１，試料濃度：１２．５μｇ／ｍＬ）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製，Cat. No. 311-02501）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００μｇ／ｍＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００４８】
この総ＲＮＡを鋳型とし、ＨＡＳ３（Hyaluronan Synthase 3）及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart cycler（Cepheid社製）を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit（Perfect Real Time，code No. RR063A）によるリアルタイム２Step RT-PCR反応により行った。ＨＡＳ３の発現量は、「試料無添加」で及び「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに「試料無添加」の補正値を１００としたときの「試料添加」の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。
【００４９】
ＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
上記式において、Ａは「試料添加時の補正値」を表し、Ｂは「試料無添加時の補正値」を表す。
【００５０】
上記試験の結果、スターフルーツ葉部抽出物（試料１）のＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進率は、１０８．９％であった。このように、スターフルーツ葉部抽出物は、優れたＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【００５１】
〔試験例２〕ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用試験
上記スターフルーツ葉部抽出物（試料１）について、以下のようにしてＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【００５２】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（Epilife-KG2）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。
【００５３】
回収した細胞を３５ｍｍシャーレ（FALCON社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で、Epilife-KG2を用いて一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、Epilife-KG2で溶解した試料溶液（試料１，試料濃度：１２．５μｇ／ｍＬ）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製，Cat. No. 311-02501）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００μｇ／ｍＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００５４】
この総ＲＮＡを鋳型とし、ＡＱＰ３（aquaporin 3）及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社製）を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit（Perfect Real Time，code No. RR063A）によるリアルタイム２Step RT-PCR反応により行った。ＡＱＰ３の発現量は、「試料無添加」で及び「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに「試料無添加」の補正値を１００としたときの「試料添加」の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。
【００５５】
ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
上記式において、Ａは「試料添加時の補正値」を表し、Ｂは「試料無添加時の補正値」を表す。
【００５６】
上記試験の結果、スターフルーツ葉部抽出物（試料１）のＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進率は、１２６．３％であった。このように、スターフルーツ葉部抽出物は、優れたＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【００５７】
〔試験例３〕ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用試験
上記スターフルーツ葉部抽出物（試料１）について、以下のようにしてＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【００５８】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を３５ｍｍのｄｉｓｈに播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて２４時間培養を行った。培養終了後、培地を所定濃度の試料添加培地（試料１，試料濃度：１２．５μｇ／ｍＬ）に交換し、さらに２４時間培養した。培養終了後、下記方法により総ＲＮＡを調製した。また、「試料無添加」で培養した細胞についても、同様にして総ＲＮＡを調製した。
【００５９】
細胞を１ｍＬのＲＮＡ抽出用試薬（ＩＳＯＧＥＮ，ニッポンジーン社製）で溶解し、クロロホルムを２００μＬ添加後、遠心（１２０００回転，４℃，１５分間）にて上層ＲＮＡ層を単離し、さらにイソプロパノールで濃縮した。濃縮沈殿させた総ＲＮＡをＴＥ溶液（１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ／１ｍＭのＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）に溶解して総ＲＮＡ標品とし、ＰＣＲ装置（TaKaRa PCR Thermal Cycler MP，タカラバイオ社製）及びリアルタイムＰＣＲキット（TaKaRa ExScript RT reagent Kit，RR035A，タカラバイオ社製）を用いてＳＰＴｍＲＮＡ発現量を測定するための鋳型に使用する一本鎖ＤＮＡを合成した。
【００６０】
これを鋳型とし、ＳＰＴ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社製）を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit（Perfect Real Time，code No. RR063A）によるリアルタイム２Step RT-PCR反応により行った。ＳＰＴの発現量は、「試料無添加」で及び「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに「試料無添加」の補正値を１００としたときの「試料添加」の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりＳＰＴｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。
【００６１】
ＳＰＴｍＲＮＡ発現促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
上記式において、Ａは「試料添加時の補正値」を表し、Ｂは「試料無添加時の補正値」を表す。
【００６２】
上記試験の結果、スターフルーツ葉部抽出物（試料１）のＳＰＴｍＲＮＡ発現促進率は、１１０．３％であった。このように、スターフルーツ葉部抽出物は、優れたＳＰＴｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【００６３】
〔試験例４〕ラミニン５産生促進作用試験
上記スターフルーツ葉部抽出物（試料１）について、以下のようにしてラミニン５産生促進作用を試験した。
【００６４】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞培地（ＫＧＭ）を用いて３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５個／ｍＬの細胞密度となるようにＫＧＭからＢＰＥを除いた培地（ＫＧＭ−ＢＰＥ）で希釈した後、２４ウェルプレートに１ウェルあたり５００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。
【００６５】
培養終了後、培地を抜き、ＫＧＭ−ＢＰＥで溶解した試料溶液（試料１，試料濃度１２．５μｇ／ｍＬ）を各ウェルに５００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で４８時間培養した。培養終了後、上清１００μＬをＥＬＩＳＡプレートに移し換え、３７℃で２時間プレートに吸着させた後、溶液を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて洗浄を行った。
【００６６】
その後、１％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて洗浄を行い、抗ヒトラミニン５抗体（マウスＩｇＧ，ケミコン社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて洗浄を行い、ビオチン化抗マウスＩｇ抗体（ヒツジＩｇＧ，アマシャム社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて洗浄を行い、ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼ複合体と反応させた後、溶液を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて洗浄を行い、発色反応を行った。得られた測定結果から、下記式によりラミニン５産生促進率（％）を算出した。
【００６７】
ラミニン５産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表す。
【００６８】
上記試験の結果、スターフルーツ葉部抽出物（試料１）のラミニン５産生促進率は、１１３．０％であった。このように、スターフルーツ葉部抽出物は、優れたラミニン５産生促進作用を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明のヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼｍＲＮＡ発現促進剤及びラミニン５産生促進剤は、皮膚の老化症状等の予防又は改善に大きく貢献できる。