(57)【要約】      （修正有）【課題】装置の簡略化、小型化を図り、かつ、短時間に、高い回収率で細胞を回収する、細胞処理装置を提供する。【解決手段】生体組織を分解して得られた細胞懸濁液を収容する細胞懸濁液容器２と、該細胞懸濁液容器２に接続され、該細胞懸濁液容器２から送られてきた細胞懸濁液を通過させる際に、細胞を選択的に吸着するフィルタ６と、該フィルタ６を加振して該フィルタ６に吸着されている細胞を剥離させる加振手段７と、フィルタ６の下流側に接続され、加振手段７によって加振されることによりフィルタ６から剥離した細胞を回収する細胞回収容器９とを備える細胞処理装置１。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体組織を分解して得られた細胞懸濁液を収容する細胞懸濁液容器と、
該細胞懸濁液容器に接続され、該細胞懸濁液容器から送られてきた細胞懸濁液を通過させる際に、細胞を選択的に吸着するフィルタと、
該フィルタを加振して該フィルタに吸着されている細胞を剥離させる加振手段と、
前記フィルタの下流側に接続され、前記加振手段によって加振されることにより前記フィルタから剥離した細胞を回収する細胞回収容器とを備える細胞処理装置。
【請求項２】
前記フィルタの下流側に、前記細胞回収容器と並列に配置された廃液回収容器と、
前記フィルタからの流路を該廃液回収容器または前記細胞回収容器に択一的に切り替える下流側バルブと、
前記加振手段により前記フィルタが加振される際に、前記下流側バルブを前記細胞回収容器側に切り替える制御部とを備える請求項１に記載の細胞処理装置。
【請求項３】
前記フィルタの上流側に、前記細胞懸濁液容器と並列に配置された洗浄液容器と、
該洗浄液容器から前記フィルタへの流路と前記細胞懸濁液容器から前記フィルタへの流路とを択一的に切り替える上流側バルブと、
前記加振手段により前記フィルタが加振される際に、前記上流側バルブを前記洗浄液容器側に切り替える制御部とを備える請求項１または請求項２に記載の細胞処理装置。
【請求項４】
生体組織を分解して得られた細胞懸濁液をフィルタに通過させることにより細胞を選択的に吸着させるステップと、
前記フィルタを加振して該フィルタに吸着されている細胞を剥離させるステップと、
剥離された細胞を回収するステップとを備える細胞処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞処理装置および細胞処理方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、例えば、脂肪組織から脂肪由来細胞を取り出すためには、脂肪組織を消化酵素液とともに攪拌することにより分解し、得られた脂肪由来細胞の細胞懸濁液を遠心分離機によって濃縮することが行われている（例えば、特許文献１参照。）。また、特許文献１には、粒子の大きさの相違を利用して、フィルタにより粒子径の大きな組織を捕捉し、それより小さい細胞をフィルタに通過させて回収する装置が開示されている。
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２００５／１２４８０号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、遠心分離機を用いて細胞を濃縮する方法では、装置が複雑化、大型化する不都合がある。また、濃縮のための処理手順も複雑であり、処理に時間がかかるという不都合がある。
一方、特許文献１に開示されているフィルタにより細胞を分離回収する方法は、装置の簡略化、小型化を図り、短時間での細胞の回収が可能であるものの、フィルタの目詰まりにより目的とする細胞もフィルタに捕捉され、回収率が低下してしまう不都合がある。
【０００５】
本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、装置の簡略化、小型化を図り、かつ、短時間に、高い回収率で細胞を回収することができる細胞処理装置を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、生体組織を分解して得られた細胞懸濁液を収容する細胞懸濁液容器と、該細胞懸濁液容器に接続され、該細胞懸濁液容器から送られてきた細胞懸濁液を通過させる際に、細胞を選択的に吸着するフィルタと、該フィルタを加振して該フィルタに吸着されている細胞を剥離させる加振手段と、前記フィルタの下流側に接続され、前記加振手段によって加振されることにより前記フィルタから剥離した細胞を回収する細胞回収容器とを備える細胞処理装置を提供する。
【０００７】
細胞懸濁液容器に収容されている細胞懸濁液には、生体組織を分解して得られた生体由来の細胞、生体組織片および赤血球等が含まれている。
本発明によれば、細胞懸濁液が細胞懸濁液容器からフィルタに送られ、フィルタを通過させられる際に、細胞が選択的に吸着される。これにより、フィルタに吸着されなかった細胞以外の成分はフィルタを通過して下流側に流れる。そして、この後に加振手段を作動させてフィルタを振動させることにより、フィルタに吸着されていた細胞を振動により剥離させ、フィルタの下流側に接続されている細胞回収容器に回収することができる。
【０００８】
この場合において、フィルタが粒子径によって細胞を分離するのではなく、選択的に吸着させるフィルタを用いることにより、フィルタを目詰まりさせることなく、細胞のみを抽出することができる。そして、抽出された後に加振して回収するので、高い回収率で細胞を回収することができる。
【０００９】
上記発明においては、前記フィルタの下流側に、前記細胞回収容器と並列に配置された廃液回収容器と、前記フィルタからの流路を該廃液回収容器または前記細胞回収容器に択一的に切り替える下流側バルブと、前記加振手段により前記フィルタが加振される際に、前記下流側バルブを前記細胞回収容器側に切り替える制御部とを備えていてもよい。
【００１０】
このようにすることで、制御部の作動により下流側バルブが廃液回収容器側に切り替えられた状態で、細胞懸濁液容器から細胞懸濁液がフィルタに通過させられて細胞が選択的に吸着され、吸着終了後に、下流側バルブが細胞回収容器側に切り替えられた状態で、加振手段を作動させてフィルタに吸着されていた細胞を剥離させ回収することができる。これにより、細胞を細胞回収容器に効率的に回収することができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記フィルタの上流側に、前記細胞懸濁液容器と並列に配置された洗浄液容器と、該洗浄液容器から前記フィルタへの流路と前記細胞懸濁液容器から前記フィルタへの流路とを択一的に切り替える上流側バルブと、前記加振手段により前記フィルタが加振される際に、前記上流側バルブを前記洗浄液容器側に切り替える制御部とを備えていてもよい。
【００１２】
このようにすることで、制御部の作動により上流側バルブが細胞懸濁液容器側に切り替えられた状態で、細胞懸濁液をフィルタに通過させて細胞をフィルタに選択的に吸着させ、吸着終了後に、上流側バルブが洗浄液容器側に切り替えられた状態で、加振手段を作動させてフィルタに吸着されていた細胞を剥離させることができる。フィルタから剥離された細胞は洗浄液によって流されて高い回収率で効率的に回収されることになる。
【００１３】
また、本発明は、生体組織を分解して得られた細胞懸濁液をフィルタに通過させることにより細胞を選択的に吸着させるステップと、前記フィルタを加振して該フィルタに吸着されている細胞を剥離させるステップと、剥離された細胞を回収するステップとを備える細胞処理方法を提供する。
本発明によれば、フィルタに選択的に吸着させることにより、他の成分から分離された細胞を、フィルタの加振によりフィルタから剥離させ高い回収率で回収することができる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、装置の簡略化、小型化を図り、かつ、短時間に、高い回収率で細胞を回収することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明の一実施形態に係る細胞処理装置１について、図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞処理装置１は、図１に示されるように、例えば、採取された脂肪組織のような生体組織と消化酵素液とを混合し、攪拌することで細胞を単離させた状態に浮遊させる細胞懸濁液Ａを収容する細胞懸濁液容器２と、ライトリンゲル液（洗浄液：以下、ＬＲ液という。）Ｂを収容する洗浄液容器３と、上流側バルブ４と、細胞懸濁液またはＬＲ液に送りをかけるポンプ５と、フィルタ６と、該フィルタ６を加振する加振器７と、下流側バルブ８と、細胞回収容器９と、廃液回収容器１０と、上流側バルブ４、ポンプ５，下流側バルブ８および加振器７を制御する制御部１１とを備えている。
【００１６】
細胞懸濁液容器２と洗浄液容器３とは、上流側バルブ４を介して、配管１２によってフィルタ６に並列に接続されている。すなわち、上流側バルブ４の切り替えと、ポンプ５の駆動によって、細胞懸濁液容器２内の細胞懸濁液Ａまたは洗浄液容器３内のＬＲ液Ｂのいずれかが配管１２を介してフィルタ６に供給されるようになっている。
【００１７】
フィルタ６は、白血球除去フィルタとして実績のあるポリエステルまたはポリプロピレンにヒドロキシエチルメタクリレート・ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体コーティングされた平均繊維径０．０５〜５μｍの不織布フィルタである。これにより、フィルタ６は、細胞懸濁液Ａ内に浮遊する脂肪由来細胞が通過する際にこれを選択的に吸着し、他の成分、例えば、それが脂肪組織片やコラーゲン等、細胞より大きな成分であってもこれを吸着することなく下流側に通過させるようになっている。
【００１８】
また、細胞回収容器９と廃液回収容器１０とは、下流側バルブ８を介して、配管１３によってフィルタ６に並列に接続されている。すなわち、下流側バルブ８の切り替えと、ポンプ５の駆動によって、フィルタ６を通過した細胞以外の成分Ｃを廃液回収容器１０に、フィルタ６の加振によってフィルタ６から剥離した細胞ＤとＬＲ液Ｂとを細胞回収容器９に、それぞれ配管１３を介して供給することができるようになっている。
【００１９】
加振器７は、例えば、フィルタ６を固定する振動板（図示略）と、振動板に所定の振幅の周期的な振動を生じさせる偏心モータ（図示略）により構成されている。これにより、フィルタ６に加速度を付与し、フィルタ６に吸着されている細胞Ｄを剥離させることができるようになっている。
【００２０】
制御部１１は、上流側バルブ４により細胞懸濁液容器２をフィルタ６に接続しているときには、加振器７を作動させることなく、下流側バルブ８を廃液回収容器１０側に接続するようになっている。また、制御部１１は、上流側バルブ４により洗浄液容器３をフィルタ６に接続しているときには、加振器７を作動させ、下流側バルブ８を細胞回収容器９側に接続するようになっている。
【００２１】
このように構成された本実施形態に係る細胞処理装置１を用いた細胞処理方法について、以下に説明する。
本実施形態に係る細胞処理装置１を用いて生体組織から細胞を分離抽出するには、細胞懸濁液容器２内に生体組織と消化酵素液とを導入し、適当に攪拌することにより、細胞を単離させ、消化酵素液中に浮遊する細胞懸濁液Ａを得る。
【００２２】
そして、図２（ａ）に示されるように、制御部１１の作動により、上流側バルブ４を作動させて、細胞懸濁液容器２とフィルタ６とを接続し、ポンプ５を作動させて細胞懸濁液容器２内の細胞懸濁液Ａをフィルタ６に供給する。また、このとき、制御部１１は、下流側バルブ８を作動させて、フィルタ６を廃液回収容器１０側に接続しておく。さらに、制御部１１は、加振器７を停止させておく。
【００２３】
ポンプ５により細胞懸濁液Ａがフィルタ６に供給されると、フィルタ６を構成している繊維が細胞Ｄを選択的に吸着し、他の成分Ｃを吸着することなく下流側に通過させる。フィルタ６の下流側には配管１３を介して廃液回収容器１０が接続されているので、フィルタ６に吸着されなかった細胞以外の成分Ｃは、フィルタ６を通過してそのまま廃液回収容器１０により回収される。
【００２４】
この状態で、図２（ｂ）に示されるように、制御部１１の作動により、上流側バルブ４を作動させて、洗浄液容器３とフィルタ６とを接続し、ポンプ５を作動させてＬＲ液Ｂをフィルタ６に供給する。また、このとき、制御部１１は、下流側バルブ８を作動させて、フィルタ６を細胞回収容器９に接続しておく。さらに、制御部１１は、加振器７を作動させて、フィルタ６を加振する。
【００２５】
フィルタ６を加振器７で加振することにより、その加速度によってフィルタ６に吸着されていた細胞Ｄがフィルタ６から剥離される。また、フィルタ６にはＬＲ液Ｂが流通させられるので、剥離された細胞ＤはＬＲ液Ｂとともにフィルタ６の下流側に押し流され、フィルタ６に接続されている細胞回収容器９に回収される。
【００２６】
このように、本実施形態に係る細胞処理装置１によれば、フィルタ６を用いて細胞Ｄを分離抽出することにより、遠心分離機を用いて濃縮する場合と比較して、装置の小型化、簡略化を図り、また、細胞懸濁液ＡとＬＲ液Ｂとを交互に一方向に流動させるだけで連続的に細胞Ｄを分離抽出でき、処理に要する時間を大幅に短縮することができる。
【００２７】
また、本実施形態に係る細胞処理装置１によれば、細胞Ｄを選択的に吸着するフィルタ６を用いているので、目詰まりによる分離抽出能力の低下を防止して、高い回収率で細胞Ｄを分離抽出することができるという利点がある。
さらに、本実施形態に係る細胞処理方法によれば、細胞懸濁液Ａをフィルタ６に通過させて細胞Ｄを吸着させるステップの後に、フィルタ６を加振して細胞Ｄを剥離させ、ＬＲ液Ｂによって剥離した細胞Ｄを回収するので、高い回収率で細胞Ｄを回収することができる。
【００２８】
なお、本実施形態においては、加振器７として、振動板に周期的な振動を付与する偏心モータを採用したが、これに限定されるものではなく、フィルタ６から細胞Ｄを剥離させる加速度をフィルタ６に付与できるものであれば、任意の装置を採用することができる。
【００２９】
また、フィルタ６の入口側の方に細胞Ｄが多く吸着される傾向にあるため、図３に示されるように、上流側バルブ４により、細胞懸濁液容器２と並列に細胞回収容器９を配置し、下流側バルブ８により廃液回収容器１０と並列に洗浄液容器３を配置することにしてもよい。この場合、細胞回収時には、ポンプ５を逆転させて、下流側の洗浄液容器３から供給したＬＲ液Ｂをフィルタ６に逆方向に流動させ、剥離した細胞Ｄを上流側バルブ４を介して細胞回収容器９に回収することができる。これにより、フィルタ６の入口側に吸着されていた細胞Ｄをより効率よく回収することができる。
また、細胞回収容器９としては、ＬＲ液Ｂとともに流されてきた細胞Ｄを吸引回収するシリンジ（図示略）を採用してもよい。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明の一実施形態に係る細胞処理装置を示す全体構成図である。
【図２】図１の細胞処理装置の作用を示す図であり、（ａ）フィルタに細胞を吸着させるステップ、（ｂ）吸着された細胞をフィルタから剥離させて回収するステップをそれぞれ示す図である。
【図３】図１の細胞処理装置の変形例を示す全体構成図である。
【符号の説明】
【００３１】
Ａ  細胞懸濁液
Ｄ  細胞
１  細胞処理装置
２  細胞懸濁液容器
３  洗浄液容器
４  上流側バルブ
６  フィルタ
７  加振器（加振手段）
８  下流側バルブ
９  細胞回収容器
１０  廃液回収容器
１１  制御部
【図１】
2009136169.tif 000003
【図２】
2009136169.tif 000004
【図３】
2009136169.tif 000005