(57)【要約】  【課題】水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤を簡便な方法でスクリーニングする方法を提供すること。  【解決手段】グリコプロテインＢを含む第１組成物とＭＡＧを含む第２組成物との相互作用に対して被験物質が示す調節作用を検定することを特徴とする水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤のスクリーニング方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリコプロテインＢを含む第１組成物とＭＡＧを含む第２組成物との相互作用に対して被験物質が示す調節作用を検定することを特徴とする水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤のスクリーニング方法。
【請求項２】
下記工程を含む請求項１に記載のスクリーニング方法。
（ａ）被験物質の存在下および非存在下に、グリコプロテインＢを含む第１組成物とＭＡＧを含む第２組成物とを接触させる工程、
（ｂ）当該被験物質の存在下および非存在下で、グリコプロテインＢとＭＡＧとの相互作用を測定する工程、および
（ｃ）当該被験物質の非存在下に対して当該被験物質の存在下で、グリコプロテインＢとＭＡＧとの相互作用が低減することを、当該被験物質が水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤であるとの指標として、水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤を同定する工程。
【請求項３】
グリコプロテインＢを含む第１組成物が、水痘帯状疱疹ウィルスを含む請求項２に記載のスクリーニング方法。
【請求項４】
ＭＡＧを含む第２組成物が、ＭＡＧとヒトＩｇＧとの融合タンパクを含む請求項２または３に記載のスクリーニング方法。
【請求項５】
ＭＡＧとヒトＩｇＧとの融合タンパクが、固定化された融合タンパクである請求項４に記載のスクリーニング方法。
【請求項６】
ＭＡＧを含む第２組成物が、ＭＡＧを表面に発現している細胞を含む請求項２または３に記載のスクリーニング方法。
【請求項７】
ＭＡＧを表面に発現している細胞が、ＭＡＧを強制発現させたオリゴデンドログリア細胞である請求項６に記載のスクリーニング方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のスクリーニング方法により同定された水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
水痘帯状疱疹ウィルス（Varicella Zoster virus：ＶＺＶ）は、ＤＮＡウイルスのヘルペスウィルス科に属するウィルスの一種であり、ヒトに感染すると初期感染時に水痘（Varicella）を引き起こし、治癒後の非活動期には神経細胞周囲の外套細胞に潜伏し、何らかの原因で免疫力が低下するとウィルスが再び活性化し、帯状疱疹（Zoster）を引き起こす。
【０００３】
従来、水痘の予防剤としては、例えば分離された水痘ウィルス（岡株）を弱毒化して得られるワクチンが知られている。また、水痘・帯状疱疹の治療剤としては、アシクロビル（Aciclovir）が知られている。しかしながら、前記ワクチンはその製造に水痘ウィルスを使用しなければならず、取り扱いが面倒である。また、アシクロビルはウイルス感染細胞にしか作用しないため、新たなウィルスの感染を防ぐことはできないという難点がある。このため、新たな水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤の開発が望まれているが、該阻害剤をスクリーニングする適切な方法が知られていない。
【０００４】
一方、グルコプロテインＢ（ｇＢと略記する。）はウィルスエンベロープの糖タンパク質の一つであり、ウィルスが細胞に感染する際に関与しているものと考えられている（非特許文献１）。また、ミエリン付随糖タンパク質（Myelin Associated Glycoprotein: ＭＡＧ）は、シグレック−４とも呼ばれ、約１００ｋＤａで５個の免疫グロブリン様ドメインを持ち、神経軸策周囲の髄鞘に分布しており（中枢ではオリゴデンドログリア細胞、抹消ではシュワン細胞）、軸策伸長の阻害に関与していることが知られている（非特許文献２）。
【０００５】
しかしながら、グルコプロテインＢとＭＡＧとの相互作用と水痘帯状疱疹ウィルス感染との関係については何も知られていない。
【非特許文献１】Rev. Med., Virol., 13, pp.207-222(2003)
【非特許文献２】Journal Neurochemistry, 100, pp.1431-1448(2007)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記現状に鑑み、水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤をスクリーニングできる簡便な方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、ＭＡＧが水痘帯状疱疹ウィルス（ＶＺＶ）感染細胞に結合すること、ＭＡＧがＶＺＶのグルコプロテインＢ（ｇＢ）に結合すること、ＭＡＧがＶＺＶ感染細胞のｇＢと会合すること、抗ＭＡＧ抗体によりＶＺＶ感染が阻害されることなどの知見を得、さらに検討を重ねて本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、
［１］  グリコプロテインＢを含む第１組成物とＭＡＧを含む第２組成物との相互作用に対して被験物質が示す調節作用を検定することを特徴とする水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤のスクリーニング方法、
［２］  下記工程を含む前記［１］に記載のスクリーニング方法。
（ａ）被験物質の存在下および非存在下に、グリコプロテインＢを含む第１組成物とＭＡＧを含む第２組成物とを接触させる工程、
（ｂ）当該被験物質の存在下および非存在下で、グリコプロテインＢとＭＡＧとの相互作用を測定する工程、および
（ｃ）当該被験物質の非存在下に対して当該被験物質の存在下で、グリコプロテインＢとＭＡＧとの相互作用が低減することを、当該被験物質が水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤であるとの指標として、水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤を同定する工程、
［３］  グリコプロテインＢを含む第１組成物が、水痘帯状疱疹ウィルスを含む前記［２］に記載のスクリーニング方法、
［４］  ＭＡＧを含む第２組成物が、ＭＡＧとヒトＩｇＧとの融合タンパクを含む前記［２］または［３］に記載のスクリーニング方法、
［５］  ＭＡＧとヒトＩｇＧとの融合タンパクが、固定化された融合タンパクである前記［４］に記載のスクリーニング方法、
［６］  ＭＡＧを含む第２組成物が、ＭＡＧを表面に発現している細胞を含む前記［２］または［３］に記載のスクリーニング方法、
［７］  ＭＡＧを表面に発現している細胞が、ＭＡＧを強制発現させたオリゴデンドログリア細胞である前記［６］に記載のスクリーニング方法、および
［８］前記［１］〜［７］のいずれか１項に記載のスクリーニング方法により同定された水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤、
に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の方法によれば、水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤を簡便な方法でスクリーニングすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明に係る“水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤のスクリーニング方法”は、グリコプロテインＢを含む第１組成物とＭＡＧを含む第２組成物との相互作用に対して被験物質が示す調節作用を検定することを特徴とする。
【００１１】
上記本発明を実施するに当たっては、次の（ａ）〜（ｃ）の工程により行うのが好ましい。
（ａ）被験物質の存在下および非存在下に、グリコプロテインＢを含む第１組成物とＭＡＧを含む第２組成物とを接触させる工程、
（ｂ）当該被験物質の存在下および非存在下で、グリコプロテインＢとＭＡＧとの相互作用を測定する工程、および
（ｃ）当該被験物質の非存在下に対して当該被験物質の存在下で、グリコプロテインＢとＭＡＧとの相互作用が低減することを、当該被験物質が水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤であるとの指標として、水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤を同定する工程。
以下、各工程について説明する。
【００１２】
（ａ）工程について
（ａ）工程で用いる“グリコプロテインＢを含む第１組成物”としては、水痘帯状疱疹ウィルス（ＶＺＶ）がそのウィルスエンベロープにグリコプロテインＢを有しているため、ＶＺＶをそのまま用いてもよく、ＶＺＶを感染させた細胞（例えば、ＭｅＷｏ細胞）であってもよい。前者のＶＺＶはＶＺＶ感染細胞を例えば超音波破砕処理し、処理液を遠心分離して得られるＶＺＶウィルス含有上清の形態で得られる。
【００１３】
なお、ＶＺＶ感染細胞を用いる場合はＶＺＶとグリコプロテインＢとの相互作用を検出し易くするため、標識物質発現遺伝子改変ＶＺＶ株または該改変ＶＺＶ株から調製される標識化されたＶＺＶウィルス含有上清を用いるのが好ましい。標識物質としては、ＧＦＰなどこの分野で使用されている公知の標識物質を用いることができる。標識物質発現遺伝子改変ＶＺＶ株の調製は、例えばViology 270, pp278-285(2000)に記載の方法により行うことができる。
【００１４】
一方、（ａ）工程で用いる“ＭＡＧを含む第２組成物”としては、ＭＡＧ発現細胞であってもよく、可溶型ＭＡＧ（例えば、ＭＡＧ−ヒトＩｇＧ融合タンパク）であってもよい。ＭＡＧ発現細胞はＭＡＧｃＤＮＡ（ＮＣＢＩ Gene Bank Accession No.M29273.1参照、配列番号１）をレトロウィルスベクター（例えば、ｐＭｘｓ  ｐｕｒｏ）に組み込み、適当な宿主細胞に遺伝子導入することにより調製できる。宿主細胞としては、例えばＯＬ細胞（Journal of Virology, 74(10), pp.4601-4611(2000)参照）が好適に挙げられるが、必ずしもこれに限られない。また、可溶型ＭＡＧであるＭＡＧ−ヒトＩｇＧ融合タンパクは、ＭＡＧ遺伝子の細胞外領域を適当なプライマーを用いてヒト脳ｃＤＮＡよりＰＣＲにて増幅し、適当なＩｇＧ発現ベクターに組み込み、このプラスミドを例えばアフリカミドリザル腎細胞（ＣＯＳ７細胞）に遺伝子導入し、その培養上清中にＭＡＧ-ＩｇＧを産生させることにより調製できる。発現ベクターとしては特に限定されないが、例えば、ｐＭＥ１８Ｓ−ＩｇＧ発現ベクター（The Journal of Experimental Medicine, Vol.16, No.4, pp.525-533(2004)参照）が好適に挙げられる。
なお、ＭＡＧの遺伝子配列およびアミノ酸配列は配列番号１に記載の通りであるが、可溶化ＭＡＧを調製する際には、細胞内領域および細胞貫通領域を除いたＭＡＧｃＤＮＡ（１２１番目のＡから１６５９番目のＧまでが細胞外領域である）を利用することができる。
【００１５】
本工程に適用される“被験物質”は低分子化合物であってもよく、ペプチドであってもよく、さらには天然産物（例えば、植物の抽出物）などであってもよい。また、複数の被験物質の混合物を用いることもできる。
【００１６】
前記第１組成物と前記第２組成物との接触は、被験物質の存在下または非存在下に両組成物を混合し、必要によりインキュベートすることにより容易に実施できる。この接触処理は氷上〜室温で行うのが好ましい。
【００１７】
（ｂ）工程について
（ｂ）工程は、グリコプロテインＢとＭＡＧとの相互作用を測定する工程である。前記相互作用の測定は、（ａ）工程で用いた第１組成物と第２組成物の種類によって常法に従って実施することができる。例えば、第１組成物としてＶＺＶ感染細胞を用い、第２組成物として可溶性ＭＡＧ（例えば、ＭＡＧ-ＩｇＧ融合タンパク）を用いる場合は、接触処理後に蛍光標識抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃフラグメント抗体を作用させたのち、もしくは可溶性ＭＡＧと蛍光標識抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃフラグメント抗体を作用させた後、ＶＺＶ感染細胞と接触処理を行ったのち、例えばフローサイトメトリー法にて蛍光強度を解析することにより、前記相互作用を測定することができる。蛍光標識としては、この分野で使用されている蛍光タンパク質であればよく、例えばＦＩＴＣ、ＰＥ、ＡＰＣなどが挙げられる。また、蛍光標識の代わりに、β−ガラクトシダーゼ、グルコシダーゼ、ルシフェラーゼなど、この技術分野でよく知られているタンパク質マーカーを用いることもできる。
【００１８】
また、第１組成物としてＶＺＶウィルス上清液を用い、第２組成物として可溶性ＭＡＧ（例えば、ＭＡＧ−ＩｇＧ融合タンパク）を用いる場合は、接触処理後に抗ＩｇＧ抗体を作用させたのちプロテインＡを混合して免疫沈降させ、沈降物を電気泳動後に抗ＶＺＶ  ｇＢ抗体およびホースラディッシュぺルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体を作用させ、酵素法により解析することにより、前記相互作用を測定することができる。
【００１９】
あるいは更に、第１組成物として蛍光物質（例えば、ＧＦＰ）で標識したＶＺＶウィルス液を用い、第２組成物としてＭＡＧ発現細胞を用いる場合は、接触処理後、感染細胞（例えば、蛍光発色細胞）の数をフローサイトメトリー法にて解析することにより、前記相互作用を測定することができる。
【００２０】
（ｃ）工程について
上記（ｂ）工程の相互作用の測定結果に基づき、水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤を同定する。すなわち、当該被験物質の非存在下に対して当該被験物質の存在下で、前記相互作用が低減すれば、ウィルスによる感染が阻害されたことを意味するので、当該被験物質を水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤であると同定することができる。
【００２１】
かくして同定された水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤は、それ自体医薬物質として使用することもできる。したがって、本発明の他の態様は、前記スクリーニング方法で同定された水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤である。
本発明の水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤は、薬理的に許容しうる担体と共にヒトに経口的にもしくは非経口的に投与することにより、水痘帯状疱疹ウィルスに起因する疾患（水痘・帯状疱疹）の予防・治療することができる。薬理的に許容しうる担体としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質が用いられ、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤；液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤などとして適宜適量配合される。また必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤などの製剤添加物を適宜適量用いることもできる。
【００２２】
なお、上記スクリーニング方法で同定された水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤は、医薬物質としてさらに優れた性質（例えば阻害作用が強い、溶解性がよい、副作用が少ないなど）を有する水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤を見出すためのシード化合物もしくはリード化合物として利用することもできる。
【実施例】
【００２３】
以下に実験例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。実験例で用いた材料は下記のようにして調製ないし入手した。
（材料の調整）
１）ＭＡＧ  ｃＤＮＡ：
プライマーとして、
プライマー５’：  aatgaattcaccATGATATTCCTCACGGCACT（配列番号２）および
プライマー３’：  aataatgcggccgCTTCACTTGACCCGGATT  （配列番号３）
を用いてヒト脳ｃＤＮＡよりＰＣＲにて増幅し、ｐＭＸｓ  ｐｕｒｏレトロウィルスベクター（The EMBO Journal Vol.18 No.17 pp.4754-4765(1999)およびMolecular and Cellular Biology, Vol.8, No.7, p.3871-3879(July 1998)参照）のＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩサイトに組み込んだ。
【００２４】
２）ＶＺＶ  Ｏｋａ株：
高橋理明博士が樹立した水痘ウィルスＯｋａ株を用いた。
【００２５】
３）ＧＦＰ発現遺伝子改変ＶＺＶ株：
スタンフォード（Stanford）大学ＡＭ  Ａｒｖｉｎ博士の樹立したＧＦＰ発現遺伝子改変ＶＺＶ株（ＧＦＰ−ＶＺＶと略称、Viology, 270, pp278-285(2000)参照）を用いた。ＧＦＰ−ＶＺＶは感染細胞がＧＦＰを発現するため、感染細胞を容易に検出することが可能である。
【００２６】
４）ＧＦＰ−ＶＺＶウィルス液：
１〜２×１０７個のＭｅＷｏ細胞（１９７４年にY. KoderaとM. Beanにより樹立された細胞であり、ＡＴＣＣに寄託番号ＨＴＣ-６５として寄託されており、同寄託機関から購入可能である。）を１〜２×１０７個のＧＦＰ−ＶＺＶで感染させ、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間〜４８時間培養し、これを１ｍｌのＳＰＧＡ緩衝液（ｐＨ８．０；２１８ｍＭシュクロース、３．８ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、４．９ｍＭグルタミン酸ナトリウム、１％［ｗｔ／ｖｏｌ］ウシ血清アルブミン）に懸濁し、超音波破砕機（YAMATO社製）３ＷＡＴＴＳにて氷上で１５秒２回処理した。処理液を４℃、１５０００回転で５分間遠心処理し、上清のみを分離し、０．４５μｍのフィルター(旭テクノグラス社製)を通し、ＧＦＰ−ＶＺＶウィルス液原液とした。
【００２７】
５）ＭＡＧ発現ＯＬ細胞：
ＭＡＧｃＤＮＡをレトロウィルスベクターｐＭｘｓ  ｐｕｒｏのＥｃｏＲ１／ＮｏｔＩサイトに組み込んだ組み換えベクターを、希突起神経膠細胞株（oligodendroglial cell line）として確立されたＯＬ細胞（Journal of Virology, 74(10), pp.4601-4611(2000)参照）にトランスフェクトしてＭＡＧ発現ＯＬ細胞を調製した。
【００２８】
６）可溶化ＭＡＧ（ＭＡＧ−ヒトＩｇＧ融合タンパク：ＭＡＧ−Ｉｇと略称する）
ＭＡＧ遺伝子の細胞外領域（配列番号１において１７８番〜１０９６番のＤＮＡ）を
プライマー５’：    aataatctcgagGGTCACTGGGGTGCCTGGAT    （配列番号４）、
プライマー３’：    aataatctcgagTGCATACATGACACTGAGCCCCAC    （配列番号５）
を用いてヒト脳ｃＤＮＡよりＰＣＲにて増幅し、ｐＭＥ１８Ｓ−ＩｇＧ発現ベクター（The Journal of Experimental Medicine, Vol.16, No.4, pp.525-533(2004)参照）のＸｈｏＩサイトに組み込んだ。このプラスミドをアフリカミドリザル腎細胞（ＣＯＳ７細胞）に遺伝子導入し、その培養上清中にＭＡＧ−Ｉｇを産生させた。
【００２９】
７）抗ＭＡＧ抗体：
プロテインＡセファロース（ＧＥヘルスケア社）にて精製したＭＡＧ−Ｉｇ融合タンパクを、ラットに免疫し、一般的な手法を用いて抗ＭＡＧモノクローナル抗体を作製した。なお、ケミコン  インターナショナル（Chemicon international）社より市販品（ＭＡＢ１５６７）を入手することも可能である。
【００３０】
（実験例１）ＭＡＧ−ＩｇのＶＺＶへの結合
１〜２×１０５個のＶＺＶ感染もしくは非感染ＭｅＷｏ細胞と可溶化ＭＡＧ（ＭＡＧ−Ｉｇ）１０〜２０μｌを氷上〜室温でで混合し、その後、ＡＰＣ標識抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃフラグメント抗体（Jackson ImmunoResearch laboratories社）を加え、フローサイトメトリーにて解析した。
結果は図１の通りである。この図１から、ＶＺＶ感染ＭｅＷｏ細胞の場合は、非感染ＭｅＷｏ細胞の場合に較べて、染色強度の強い細胞の数が多いことが分かり、このことからＶＺＶ感染ＭｅＷｏ細胞にＭＡＧ−Ｉｇが結合したことを確認した。
【００３１】
（実験例２）ＭＡＧ−ＩｇのＶＺＶグリコプロテインＢ（ｇＢ）への結合
１〜２×１０７個のＶＺＶ感染ＭｅＷｏ細胞を細胞溶解液（１％Brij９８，５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５），１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，２ｍＭ  ＥＤＴＡ）で可溶化後、１０μｇのＭＡＧ−Ｉｇと４℃で１晩混合後、プロテインＡを混合し、免疫沈降を行った。沈降物を還元条件で電気泳動後、ポリビニリデンジフルオライド（polyvinylidene difluoride：ＰＶＤＦ）膜（Millipore社）に転写し、抗ＶＺＶ  ｇＢ抗体（Ｇｅｎｅｔｅｘ社：ＧＴＸ４０２６７）及びホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Amersham社）にて検出した。
結果は図２の通りである。この図２から、ＶＺＶ感染ＭｅＷｏ細胞の細胞溶解液にＭＡＧ−Ｉｇを作用させたとき、グリコプロテインＢのバンド２種（ＳＨ体とＳ−Ｓ体）が検出されたことが分かり、このことからＭＡＧ−ＩｇとＶＺＶグリコプロテインＢ（ｇＢ）とが結合したことを確認した。
【００３２】
（実験例３）ＶＺＶ感染実験
２×１０４個のＭＡＧ発現もしくはコントロールＯＬ細胞懸濁液５０μｌに、ＧＦＰ−ＶＺＶウィルス原液を各倍率で希釈したウィルス液を５０μｌ混合し、ファルコン社製９６穴平底細胞培養プレート上で、３７℃で２４時間培養した後、感染細胞（ＧＦＰ陽性細胞）をフローサイトメトリーにて解析した。
結果は図３の通りである。この図３から、ＭＡＧ発現細胞はＶＺＶに感染したが、コントロールは感染しなかったことがわかる。
【００３３】
（実験例４）抗ＭＡＧ抗体によるＶＺＶ感染阻害
２×１０４個のＭＡＧ発現ＯＬ細胞２５μｌに、ＭＡＧ抗体希釈液を２５μｌ混合し、ファルコン社製９６穴平底細胞培養プレート上で、３７℃で培養した。１時間後、ＧＦＰ−ＶＺＶウィルス原液を１０倍希釈したものを５０μｌ混合し、３７℃で２４時間培養した後、ＧＦＰ陽性細胞をフローサイトメトリーにて解析した。
結果は図４の通りである。この図４より、ＭＡＧ抗体はＭＡＧ発現ＯＬ細胞にＶＺＶウィルスが感染するのを阻害したことが分かる。
【００３４】
以上の実験から、グリコプロテインＢを含む第１組成物とＭＡＧを含む第２組成物との相互作用に対して被験物質が示す調節作用を検定することにより水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤のスクリーニングが可能であることが分かる。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明の方法は、水痘帯状疱疹ウィルス感染阻害剤を容易にスクリーニングすることができるため、医薬品産業において有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】ＶＺＶ感染または非感染ＭｅＷｏ細胞にＭＡＧ−Ｉｇを作用させたときの、ＭＡＧ-Iｇが結合した細胞の数を示す図である。
【図２】ＶＺＶ感染ＭｅＷｏ細胞の細胞溶解液にＭＡＧ−Ｉｇを作用させたときに生じるタンパク質のバンドを示す図である。
【図３】ＭＡＧ発現細胞を各種濃度のセルフリーＶＺＶウィルスで感染させたときの感染細胞の数を示す図である。
【図４】ＭＡＧ抗体の存在下にＭＡＧ発現ＯＬ細胞と蛍光標識ＶＺＶウィルスとを作用させたときの、ＭＡＧ抗体濃度と蛍光強度との関係を示す図である。
【図１】
2009168753.tif 000002
【図３】
2009168753.tif 000003
【図４】
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【図２】
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【配列表】
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