(57)【要約】【課題】電気泳動を用いたヘモグロビン類の測定システムであって、簡便で安価な構成を有し、特に糖尿病の診断指標となる安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を短時間で高精度に行うことが可能なヘモグロビン類の測定システムを提供する。【解決手段】電気泳動法を用いて安定型ヘモグロビンＡ１ｃを測定するためのヘモグロビン類の測定システムであって、内表面にカチオン性官能基が固定化され、かつ、予め内部に緩衝液が充填された泳動路を有するマイクロデバイスと、前記マイクロデバイスを収容する分析部と、前記分析部に接続された電源部と、前記分析部において測定対象物質を検出する検出部とを備えるヘモグロビン類の測定システム。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
電気泳動法を用いて安定型ヘモグロビンＡ１ｃを測定するためのヘモグロビン類の測定システムであって、
内表面にカチオン性官能基が固定化され、かつ、予め内部に緩衝液が充填された泳動路を有するマイクロデバイスと、前記マイクロデバイスを収容する分析部と、前記マイクロデバイスに接続された電源部と、前記マイクロデバイスにおいて測定対象物質を検出する検出部とを備える
ことを特徴とするヘモグロビン類の測定システム。
【請求項２】
緩衝液は、アニオン性ポリマーを含有することを特徴とするヘモグロビン類の測定システム。
【請求項３】
請求項１及び２記載のヘモグロビン類の測定システムを用いることによって、安定型ヘモグロビンＡ１ｃと、異常ヘモグロビン類とを同時に測定することを特徴とする安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及び異常ヘモグロビン類の同時測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、電気泳動を用いたヘモグロビン類の測定システムであって、簡便で安価な構成を有し、特に糖尿病の診断指標となる安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を短時間で高精度に行うことが可能なヘモグロビン類の測定システムである。
【背景技術】
【０００２】
ヘモグロビン（Ｈｂ）類、特に糖化ヘモグロビン類の一種であるヘモグロビンＡ１ｃ（以下、ＨｂＡ１ｃという）は、過去１〜２カ月間の血液中の平均的な糖濃度を反映しているため、糖尿病のスクリーニング検査や糖尿病患者の血糖管理状態を把握するための検査項目として広く利用されている。
従来、ＨｂＡ１ｃの測定方法としては、ＨＰＬＣ法、免疫法、電気泳動法等が用いられている。このうち、臨床検査分野で多く用いられているＨＰＬＣ法では、１試料当たり１〜２分での測定が可能であり、また、同時再現性試験のＣＶ値が１．０％程度の測定精度が実現されている。糖尿病患者の血糖管理状態を把握するための測定方法としては、このレベルの性能が必要とされている。
【０００３】
一方、電気泳動法は、装置構成が簡便なため、マイクロチップ電気泳動のような安価で小型なシステムを作製することが可能な技術であり、電気泳動法におけるＨｂＡ１ｃの高精度測定技術の臨床検査への適用は、コスト面において非常に有益な効果が期待できる。
電気泳動法によるＨｂ類の測定は、通常とは異なるアミノ酸配列を有する異常Ｈｂ類の分離方法として古くから用いられているが、ＨｂＡ１ｃの分離は非常に困難であり、ゲル電気泳動の手法では３０分以上の時間が必要であった。このように電気泳動法は、臨床検査分野に応用した場合、測定時間及び測定精度の点で問題があるため、現在では糖尿病診断への応用はほとんど行われていなかった。
【０００４】
これに対して、１９９０年頃に登場したキャピラリー電気泳動法は、一般的に高分離・高精度測定が可能とされており、例えば、特許文献１には、キャピラリー電気泳動法によってＨｂＡ１ｃを分離する方法が開示されている。
しかしながら、特許文献１に開示された方法を用いた場合、測定時間が長いという問題点は解消されず、加えて、使用する緩衝液のｐＨが９〜１２と高く、Ｈｂが変性してしまう可能性があることから、この方法を臨床検査に適用することは困難であった。
【０００５】
また、特許文献２には、キャピラリー電気泳動法において、キャピラリーにカチオン性ポリマーを通液することによって、キャピラリー内表面にカチオン性ポリマーを動的にコーティングし、硫酸化多糖類を含む緩衝液を用いる方法が開示されている。この方法によれば、１０分間程度で測定することができ、ゲル電気泳動法と比較して短時間で測定することが可能となる。
【０００６】
一般に、糖尿病診断を行う場合は、ＨｂＡ１ｃのなかでも糖尿病の指標となる安定型ＨｂＡ１ｃを分離して、不安定型ＨｂＡ１ｃ、カルバミル化Ｈｂ等の修飾Ｈｂ類の影響を排除しなければならない。しかしながら、特許文献１及び２に開示された方法によって得られるエレクトロフェログラムでは、分離性能及び測定精度が不充分であり、これらの方法の技術範囲では安定型ＨｂＡ１ｃを分離することは困難であった。
【０００７】
また、例えば、特許文献２に開示された方法では、測定条件として動的コーティングを施すことが必須となるが、この動的コーティングは、測定の直前に実施しなければならず、測定の度に泳動路内面へ動的コーティングを行う必要があるため、電気泳動装置には、泳動路内面へのコーティング剤等の充填機構等が必要となっていた。このような充填機構等を備えたマイクロデバイスを用いた電気泳動装置は、例えば、特許文献３をはじめ多数開示されている。
しかしながら、このような電気泳動装置では、充填機構等を備えるために、大型で高価な装置としなければならず、小型化や低価格化が困難となっていた。
【特許文献１】特表平０９−５１０７９２号公報
【特許文献２】特開平０９−１０５７３９号公報
【特許文献３】特開２００２−１３１２７９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記現状に鑑み、電気泳動を用いたヘモグロビン類の測定システムであって、簡便で安価な構成を有し、特に糖尿病の診断指標となる安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を短時間で高精度に行うことが可能なヘモグロビン類の測定システムを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、鋭意検討した結果、電気泳動法による安定型ＨｂＡ１ｃを測定するためのシステムにおいて、内表面にカチオン性官能基が固定化された泳動路を用いることによって、泳動路の内部に緩衝液を充填し保管しても、長期間安定的に緩衝液を保管することができることを見出した。このように内表面にカチオン性官能基が固定化され、かつ、予め内部に緩衝液が充填された泳動路を有するマイクロデバイスを用いることによって、測定の度に緩衝液を泳動路内に充填したり排出したりする必要がなく、充填機構等を備える必要がないことから、該マイクロデバイスと、該マイクロデバイスを収容する分析部と、電源部と、検出部とを有するのみの簡便で安価なヘモグロビン類の測定システムを構築することができる。更に、このような構成を有するヘモグロビン類の測定システムを用いることによって、短時間で高精度なヘモグロビン類の測定を行うことができることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１０】
本発明は、電気泳動法を用いて安定型ヘモグロビンＡ１ｃを測定するためのヘモグロビン類の測定システムであって、内表面にカチオン性官能基が固定化され、かつ、予め内部に緩衝液が充填された泳動路を有するマイクロデバイスと、前記マイクロデバイスを収容する分析部と、前記分析部に接続された電源部と、前記分析部において測定対象物質を検出する検出部とを備えるヘモグロビン類の測定システムである。
以下に本発明を詳述する。
【００１１】
本発明のヘモグロビン類の測定システムは、電気泳動法を用いて安定型ヘモグロビンＡ１ｃを測定するためのシステムであって、少なくともマイクロデバイスと、分析部と、電源部と検出部とを備える。
このように、本発明のヘモグロビン類の測定システムは、測定の度に緩衝液を泳動路内に充填したり排出したりするための充填機構等を備える必要がないことから、簡便で安価な測定システムとすることができる。
【００１２】
図１は、本発明のヘモグロビン類の測定システムの一例を示す模式図である。図１に示すように、本発明のヘモグロビン類の測定システムは、電源部１０と、分析部２０と、検出部３０とを備える。
分析部２０は、マイクロデバイス２２と、マイクロデバイス２２を支持するデバイス支持部２１とを有する。マイクロデバイス２２は、２つの液溜め２５と、各液溜め２５間を接続する流路２４とを有し、液溜め２５内及び流路２４内には緩衝液が充填されている。各液溜め２５では、液溜め２５内の緩衝液に電極２３が接触している。
電源部１０は、電源装置１１からなる。電源部１０における電源装置１１は、電源ケーブル１２によって、分析部２０における電極２３に接続されている。
分析部３０は、検出器３１と、検出器３１に光ファイバーによって接続された受光素子３５と、光源３２と、光源３２に光ファイバーによって接続された入光素子３４とからなる。
入光素子３４と受光素子３５とは、マイクロデバイス２２の流路２４に対して鉛直方向に、流路２４を挟んで対向するように設置されている。入光素子３４は、光源３２からの検出光を流路２４に照射する。また、流路２４を挟んで、入光素子３４と対向するように、検出光を感知する受光素子３５が設置されており、受光素子３５は、検出光を感知し、検出器３１によって検出される。
【００１３】
本発明のヘモグロビン類の測定システムは、マイクロデバイスを備える。
上記マイクロデバイスの素材、形状、大きさとしては特に限定されず、従来公知の素材、形状、大きさ等を有するものを用いることができる。具体的には例えば、数ｃｍ〜数十ｃｍ角程度の大きさを有し、電気泳動を行うための流路を有する基板からなる従来公知のマイクロデバイス等が挙げられ、μ−ＴＡＳ、Ｌａｂ−ｏｎ−ａ−ｃｈｉｐと呼ばれる技術に用いられる従来公知のマイクロチップ等を用いることができる。
【００１４】
上記マイクロデバイスは、泳動路を有する。
本発明のヘモグロビン類の測定システムにおいて、「泳動路」とは、マイクロデバイス内に形成された電気泳動を行うための流路であって、電気泳動において、電圧が負荷され始めるとき、すなわち、実質上、電気泳動が開始されるときに、測定対象物質が位置する部位から、各成分が移動して検出される部位までの流路部分をいう。
【００１５】
上記泳動路としては特に限定されず、例えば、従来公知のマイクロデバイス、すなわち、従来公知の電気泳動用マイクロチップに形成される泳動路や、電気泳動用キャピラリー等が挙げられる。
上記泳動路の素材、形状、大きさとしては特に限定されず、従来公知のものを用いることができる。
【００１６】
上記泳動路を構成する素材としては特に限定されず、従来公知の素材を用いることができるが、例えば、ホウケイ酸ガラス、石英等のガラス系、フューズドシリカ、ポリジメチルシロキサン等のシリカ系、ポリアクリル系樹脂、ポリスチレン系樹脂、ポリ乳酸系樹脂、ポリカーボネート系樹脂、オレフィン系樹脂等の樹脂系等の素材が好ましい。なかでも、ガラス系、シリカ系、アクリル樹脂系の素材が好ましい。
【００１７】
上記泳動路は、長さの好ましい下限が５ｍｍ、好ましい上限が２００ｍｍである。５ｍｍ未満であると、充分に測定対象物質が分離されないため、正確な測定をすることができないことがある。２００ｍｍを超えると、測定時間の延長や得られるエレクトロフェログラムにおいてピーク形状の変形が生じることによって、正確な測定をすることができないことがある。より好ましい下限は１０ｍｍ、より好ましい上限は１５０ｍｍである。
【００１８】
上記泳動路は、幅の好ましい下限が１μｍ、好ましい上限が２００μｍである。１μｍ未満であると、検出器により検出するための光路長が小さく、測定精度が低下することがある。２００μｍを越えると、泳動路内で測定対象物質が拡散することにより得られるエレクトロフェログラムにおいてピークがブロードになり、測定精度が低下することがある。より好ましい下限は５μｍ、より好ましい上限は１５０μｍである。
【００１９】
上記泳動路の長さ方向の形状としては特に限定されず、例えば、直線状、一定の曲率を有する曲線状、又は、渦巻状等が挙げられる。なかでも直線状であることが好ましい。
上記泳動路の断面の形状としては特に限定されず、例えば、矩形、円形等が挙げられる。
本発明のヘモグロビン類の測定システムにおいて、上記マイクロデバイス上に、１つの泳動路が形成されていてもよく、複数の泳動路が形成されていてもよい。
【００２０】
上記泳動路の内表面には、カチオン性官能基が固定化されている。
上記泳動路は、内表面にカチオン性官能基が固定化されており、後述するように該泳動路の内部に緩衝液を充填した状態においてカチオン性を有する。そのため、後述するように、内部に予め緩衝液が充填されていても、長期間安定的に緩衝液を保管することができ、本発明のヘモグロビン類の測定システムは、測定毎に緩衝液を充填したり排出したりする必要がなく、充填機構等の装置を設ける必要がない。従って、簡易で安価なヘモグロビン類の測定システムとすることができる。また、上記泳動路の内表面にカチオン性官能基が固定化されていることから、短時間で高精度にヘモグロビン類の測定を行うことができる。
【００２１】
上記カチオン性官能基としては特に限定されず、例えば、１〜３級アミノ基、４級アンモニウム基、イミド基、グアジニノ基、ホスホニウム基等のオニウム基等の従来公知のカチオン性を有する官能基等が挙げられる。なかでも、１〜３級のアミノ基、４級アンモニウム基、イミド基であることが好ましい。
【００２２】
上記泳動路の内表面にカチオン性官能基を固定化する方法としては、得られる泳動路の内表面にカチオン性官能基が固定化されているものであれば特に限定されず、例えば、カチオン性官能基を有する素材を用いて泳動路の内表面を形成する方法、泳動路を形成した後にカチオン性官能基を付与する方法等が挙げられる。
【００２３】
上記カチオン性官能基を有する素材を用いて泳動路の内表面を形成する方法としては特に限定されないが、カチオン性官能基を有する高分子材料を用いて泳動路の内表面を形成することが好ましい。
【００２４】
上記カチオン性官能基を有する高分子材料としては特に限定されず、例えば、上記カチオン性官能基を有する単量体を重合してなる高分子材料等が挙げられる。
上記カチオン性官能基を有する高分子材料は、親水性材料であることが好ましい。
【００２５】
上記カチオン性基を有する単量体としては特に限定されず、例えば、（メタ）アクリルアミド；メチル（メタ）アクリルアミド、ジメチル（メタ）アクリルアミド、エチル（メタ）アクリルアミド、エチルヘキシル(メタ)アクリルアミド、Ｎ−イソプロピル(メタ)アクリルアミド等のアルキル（メタ）アクリルアミド類；メチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、ジエチルアミノプロピル(メタ)アクリルアミド、ジメチルアミノヒドロキシプロピル(メタ)アクリルアミド、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−(メタ)アクリルアミド等のアルキルアミノアルキル（メタ）アクリルアミド類； メチルアミノ（メタ）アクリレート、エチルアミノ（メタ）アクリレート等のアルキルアミノ（メタ）アクリレート類；ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート、ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリレート等のジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレート類；（メタ）アクリルアミドプロピル塩化トリメチルアンモニウム塩化物、（メタ）アクリロイルオキシエチルトリメチルアンモニウム塩化物、（メタ）アクリロイルオキシ２−ヒドロキシプロピルトリメチルアンモニウム塩化物、（メタ）アクリロイルアミノプロピルトリメチルアンモニウム塩化物等のトリメチルアンモニウム類；アリルアミン、アリルアミンアミド、ジアリルアミン、ジメチルアリルアミン、ジアリルジメチルアンモニウムクロライド、ジアリル(メタ)アクリルアミド、ジアリルアルキル(メタ)アクリルアミド等のアリル化合物、エチレンイミン、トリメチレンイミン、テトラメチレンイミン等のイミン類；ビニルアミン；ビニルピロリドン；オルニチン、リジン等のアミノ酸類；及び、これらの単量体のモノハロゲン化物による４級アンモニウム塩類等が挙げられる。
これらのカチオン性官能基を有する単量体は、単独で用いてもよく、異なる単量体を組み合わせて用いてもよい。また、上記カチオン性官能基を有する単量体と、他のカチオン性官能基を有しない単量体とを組み合わせて共重合体としてもよい。
【００２６】
上記泳動路を形成した後にカチオン性官能基を固定化する方法としては特に限定されず、例えば、予め形成した泳動路の内表面に、従来公知の表面改質処理方法を施す方法等が挙げられる。
上記表面改質処理としては特に限定されず、例えば、紫外線照射、プラズマ処理等の光学的処理、各種化学物質による反応・結合等の化学的処理、各種化合物・ポリマー等によるコーティング処理等、化学的及び／又は物理的変性処理等が挙げられる。
これらの表面改質処理は、単独で用いてもよく、異なる方法を組み合わせて用いてもよい。
【００２７】
なかでも、コーティング処理が好ましい。コーティング処理を施すことによって、分離性能を向上させることができる。
上記コーティング処理としては特に限定されないが、コーティング剤としてカチオン性官能基を有するポリマーであるカチオン性ポリマーを用いたコーティング処理が好ましい。
上記コーティング処理を施すことによって、上記泳動路の内表面に形成されるコーティング層は、単層であってもよく、同一又は異なるコーティング剤からなる多層であってもよい。
【００２８】
上記カチオン性ポリマーとしては特に限定されないが、カチオン性多糖類、カチオン性有機合成ポリマー等が好ましい。
上記カチオン性多糖類としては特に限定されず、例えば、キチン、キトサン等のキトサン誘導体；アミノセルロース、Ｎ−メチルアミノセルロース等のＮ−置換セルロースの誘導体；デキストラン、アガロース、マンナン、デンプン等の中性多糖類及びその誘導体へのアミノ基導入化物等のカチオン性多糖類が挙げられる。
上記カチオン性有機合成ポリマーとしては特に限定されず、例えば、ポリエチレンイミン、ポリブレン、ポリ（２−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート）等のアミノ基含有（メタ）アクリレート、及び、これらの共重合物等のカチオン性基含有有機合成高分子等が挙げられる。
【００２９】
上記カチオン性ポリマーを泳動路にコーティングする方法としては、上記カチオン性ポリマーを上記泳動路の内表面に固定化することができるものであれば特に限定されず、例えば、上記カチオン性ポリマーを泳動路内表面に固定化するコーティング方法（以下、固定化コーティング法ともいう）が挙げられる。
上記固定化コーティング法としては特に限定されず、例えば、上記カチオン性ポリマーを泳動路の内表面に接触させて疎水性的又は静電気的な相互作用等を利用して物理的に吸着させて固定化させる方法、泳動路の内表面及び親水性ポリマーをそれぞれの物質が有する官能基や他の物質等を介して共有結合により結合させて固定化させる方法等が挙げられる。
【００３０】
上記固定化コーティング法を用いる場合、上記物理的に吸着させて固定化させることや共有結合により結合させて固定化させることに加えて、加熱操作、乾燥操作等を行なってもよい。
【００３１】
上記固定化コーティング法としては、具体的には例えば、上記泳動路の内部に上記カチオン性ポリマーを含有するコーティング溶液を通液して加熱し、該泳動路に空気を注入することによって該コーティング溶液を追い出した後、乾燥することを繰り返す方法等、従来公知の手法が挙げられる。
【００３２】
上記泳動路の内表面に上記カチオン性ポリマーを固定化する際、上記泳動路の内表面と上記カチオン性ポリマーからなる層との間に、別種のポリマー層を形成してもよい。すなわち、上記カチオン性ポリマーからなる層は、上記泳動路の最内表面に形成されていればよい。
上記泳動路の内表面と上記カチオン性ポリマーからなる層との間に、別種のポリマー層を形成する方法としては、具体的には例えば、非イオン性の親水性ポリマーでコーティングを行ない上記別種のポリマー層を形成した後、カチオン性ポリマーをコーティングする方法等が挙げられる。
【００３３】
上記非イオン性の親水性ポリマーとしては特に限定されず、例えば、セルロース、デキストラン、アガロース、マンナン、デンプン等の多糖類、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等の親水性の有機合成高分子類、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート、（メタ）アクリルアミド、グリシジル（メタ）アクリレート等のモノマーを重合又は共重合して得られる有機合成高分子類等が挙げられる。
【００３４】
上記泳動路の内表面に上記カチオン性ポリマーを固定化コーティングする際、上記カチオン性ポリマーは、その種類やコーティングの方法にもよるが、上記カチオン性ポリマーを含む溶液としてコーティングに供されることが好ましい。
【００３５】
上記カチオン性ポリマー溶液の濃度としては、好ましい下限が０．０１％、好ましい上限が２０％である。０．０１％未満であると、コーティングが不充分となることがある。２０％を超えると、上記カチオン性ポリマーからなる層を均一に形成することができず、測定の途中で剥離し、再現性低下の原因となることがある。
【００３６】
上記カチオン性化合物としては、アミノ基含有の低分子化合物を用いることもできる。
なかでも、このような化合物としては、分子量２０〜８００であって、共有結合性構造とカチオン性基とを有する親水性化合物であることが好ましい。
上記共有結合性構造とは、従来公知の化学反応によって、上記カチオン性化合物と泳動路の内表面との間に共有結合を生じることのできる構造をいう。
【００３７】
上記共有結合性構造としては特に限定されず、例えば、水酸基、カルボキシル基、スルホン酸基、アミノ基、エステル基、エーテル基、エポキシ基、ハロゲン基、イミノ基、イミダゾール基、シラノール基、トリアルコキシシリル基等の官能基等を有する構造又は物質類等が挙げられる。
上記共有結合性構造を有する物質としては、具体的には例えば、尿素等の尿素誘導体類、塩類、置換体、重合体等；メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、プロピルアミン、ジプロピルアミン、イソプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、トリブチルアミン、メチルアミノプロピルアミン、ジメチルアミノプロピルアミン、グリシジルアミノプロピルアミン、ジエタノールアミノプロピルアミン等のアミノアルカン類及びその誘導体類、塩類、置換体、重合体等；エチレンジアミン、プロピレンジアミン、テトラメチレンジアミン、１，３−プロパンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、ヒドラジノ基プロパンジアミン等のジアミノアルカン類及びその誘導体類、塩類、置換体、重合体等；モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタールアミン、モノイソプロパノールアミン、ジイソプロパノールアミン、トリイソプロパノールアミン、ジメチルメタノールアミン、ジエチルエタノールアミン等のアルカノールアミン類及びその誘導体類、塩類、置換体、重合体等；リジン、アルギニン、グルタミン、オルニチン、γ−アミノ酪酸、３−アミノアラニン等のアミノ酸類及びその誘導体類、塩類、置換体、重合体等；グアニジン、アミノグアニジン、ビグアニド、トリメチレンイミン等のイミン・イミド類及びその誘導体類、塩類、置換体、重合体等；３−アミノプロピルトリエトキシシラン、３−（２−アミノエチル）アミノプロピルトリメトキシシシラン、３−（２−アミノエチル）アミノプロピルメチルジメトキシシシラン、アミノシラン、３−アミノプロピルトリメトキシシラン等のアミノ基含有シランカップリング剤及びその誘導体類、塩類、置換体、重合体等が挙げられる。なかでも、アミノアルカン類、ジアミノアルカン類、シランカップリング剤であることが好ましい。
【００３８】
上記泳動路の内表面に上記カチオン性官能基を固定化する方法としては、更に、加水分解反応、還元反応、転移反応等の従来公知の化学反応によって、カチオン性官能基に変換されうる官能基を有する化合物を泳動路の内表面に固定化コーティング又は結合させた後、該化学反応によりカチオン性官能基に変換することによって、カチオン性官能基を有する泳動路を調製することも可能である。
上記カチオン性官能基に変換されうる官能基を有する化合物としては特に限定されず、例えば、アミド基、イミン基、イソシアネート基等の官能基を有する化合物が挙げられる。これらの官能基を有する化合物を泳動路の内表面に固定化コーティング又は結合させた後、加水分解反応等の化学反応を行うことによって、これらの官能基をアミノ基等のカチオン性官能基に変換し、内表面にカチオン性官能基が固定化された泳動路を得ることができる。
【００３９】
上記泳動路の内表面にカチオン性官能基を固定化することに加えて、別種の化学的表面改質を合わせて行なってもよい。
上記化学的表面改質としては特に限定されないが、例えば、測定試料である血液成分に含まれる夾雑物質の非特異吸着を抑制するため、泳動路の内表面に親水性を付与する処理を行なってもよい。
上記親水性を付与する処理としては特に限定されず、例えば、カチオン性官能基を固定化する前又は固定化した後に、泳動路の内表面にオゾン水を接触させる方法等が挙げられる。
【００４０】
上記マイクロデバイスは、上記カチオン性官能基の固定化方法等にもよるが、繰り返し使用してもよく、また１回のみ使用してもよい。
【００４１】
上記泳動路には、予め内部に緩衝液が充填されている。
上記泳動路は、上記内表面にカチオン性官能基が固定化されていることから、内部に予め緩衝液が充填されていても、長期間安定的に緩衝液を保管することができる。そのため、本発明のヘモグロビン類の測定システムは、測定毎に緩衝液を充填したり排出したりする必要がなく、充填機構等の装置を設ける必要がない。従って、簡易で安価なヘモグロビン類の測定システムとすることができる。また、上記泳動路は、上記内表面にカチオン性官能基が固定化されていることから、短時間で高精度にヘモグロビン類の測定を行うことができる。
【００４２】
上記泳動路には、内部に予め緩衝液が充填された状態で、該泳動路を有する上記マイクロデバイスは、後述するように分析部に設置されヘモグロビン類の測定が行われる。
本発明のヘモグロビン類の測定システムにおいて、「予め緩衝液が充填された状態」とは、測定操作が開始され測定操作が終了するまでの間に、泳動路内に測定対象物質以外の物質が泳動路に添加されることがないこと、すなわち、泳動路内に緩衝液が充填等されることないことを意味する。
従来のヘモグロビン類の測定システムでは、測定を行う直前に、緩衝液をマイクロチップ上の泳動路に充填して測定システムにセットしたり、緩衝液がマイクロチップ上の泳動路に充填されていない状態でマイクロチップを測定システムにセットした後、測定を行う直前に測定システムに設けられた充填機構からマイクロチップ上の泳動路に緩衝液を充填したりしていた。このように、従来のヘモグロビン類の測定システムでは、泳動路に緩衝液が充填されていないマイクロチップを手元に用意することから測定操作を開始していた。
これに対して、本発明のヘモグロビン類の測定システムは、測定の直前に泳動路に緩衝液を充填する必要がなく、予め内部に緩衝液が充填されている泳動路を用いることから、既に緩衝液が泳動路に充填されたチップを、測定システムの構成部品の一部として既に手元にあるところから測定操作を開始することができる。そのため、測定システムに充填機構等を備える必要がない。
【００４３】
上記緩衝液としては、安定型ＨｂＡ１ｃを測定することが可能な成分を含む緩衝液であって、緩衝能を有する従来公知の緩衝能成分を含有する溶液であれば特に限定されず、例えば、クエン酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸等の有機酸、及び、その塩類；グリシン、タウリン、アルギニン等のアミノ酸類；塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、ホウ酸、酢酸等の無機酸、及び、その塩類；又は、緩衝能を有するこれらの誘導体類等の緩衝能成分を含有する溶液等が挙げられる。
これらの緩衝能成分は、単独で用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【００４４】
上記緩衝液は、他に一般に添加される物質、例えば、界面活性剤、カオトロピック化合物、各種ポリマー、親水性の低分子化合物等を適宜添加してもよい。なかでも、添加される各種ポリマーとしては、イオン性ポリマー、特に、アニオン性基を有する水溶性ポリマー（以下、アニオン性ポリマーともいう）を添加することで、分離性能等を向上させることができる。従って、上記緩衝液は、アニオン性ポリマーを含有することが好ましい。
なお、上記アニオン性ポリマーとは、カルボキシル基、リン酸基、スルホン酸基等の従来公知のアニオン性官能基を有する水溶性のポリマーをいう。
【００４５】
上記アニオン性ポリマーとしては、アニオン性官能基を有する従来公知のポリマー類であれば特に限定されないが、アニオン性基を有する多糖類、アニオン性基を有する有機合成高分子等であることが好ましい。
上記アニオン性基を有する多糖類としては特に限定されず、例えば、コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、ヘパリン、ヘパラン、フコイダン等の硫酸基含有多糖類、及び、その塩類；アルギン酸、ヒアルロン酸、ペクチン酸等のカルボキシル基含有多糖類、及び、その塩類；セルロース、デキストラン、アガロース、マンナン、デンプン等の中性多糖類、及び、その誘導体へのイオン性基導入化物、及び、その塩類等のアニオン性多糖類等が挙げられる。
上記アニオン性基を有する有機合成高分子としては特に限定されず、例えば、ポリ（メタ）アクリル酸、リン酸基含有（メタ）アクリル酸エステル重合体、スルホン酸基含有（メタ）アクリル酸重合体、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸重合体、及び、これらの共重合物等の水溶性アニオン性基含有有機合成高分子類等が挙げられる。
【００４６】
上記緩衝液において上記アニオン性ポリマーの含有量の好ましい下限は０．０１重量％、好ましい上限は１０重量％である。０．０１重量％未満であると、アニオン性ポリマーを添加することによる効果を発揮できないことがあり、ヘモグロビン類の測定において、分離性能等が不充分となることがある。１０重量％を超えると、測定時間の延長や分離不良を引き起こすことがある。
【００４７】
本発明のヘモグロビン類の測定システムは、上記マイクロデバイスを収容する分析部を有する。
上記分析部は、上記マイクロデバイス支持部を有することが好ましい。
上記デバイス支持部は、上記マイクロデバイスを収容し、該マイクロデバイスを支持する役割を担う。
【００４８】
上記デバイス支持部の素材、大きさ及び形状としては特に限定されず、従来公知の素材、大きさ及び形状を有するものを用いることができる。
上記マイクロデバイスを支持する機構としては特に限定されないが、上記マイクロデバイスの取り外しが容易な機構であることが好ましい。
【００４９】
上記分析部において、上記マイクロデバイス内の液溜め、又は、上記マイクロデバイス内の泳動路の両端若しくは途上には、２つの電極が設置されていることが好ましい。
上記電極は、電源ケーブルを通じて後述する電源部における電源装置に接続されていて、マイクロデバイス内に形成された泳動路において電気泳動を実施するための電圧を印加する役割を担う。
上記電極としては、上記マイクロデバイス上の泳動路に電圧を印加することができるものであれば、素材、形状、設置位置等の条件は特に限定されず、従来公知の電極を用いることができる。
上記電極の設置位置としては、上記泳動路内において上記緩衝液に接触することができるものであれば特に限定されず、例えば、上記泳動路の両端に設置されてもよく、上記泳動路の途中に設置されてもよい。具体的には例えば、図１では、上記マイクロデバイス内の泳動路の両端に形成された液溜め内に電極が設置されている。
【００５０】
本発明のヘモグロビン類の測定システムは、上記マイクロデバイスと接続された電源部を有する。上記電源部は、上記マイクロデバイスにおいて電気泳動を行うための電圧を印加する役割を担う。
【００５１】
上記電源部は、従来公知の電源装置からなる。
上記電源装置は、上記分析部において、上記マイクロデバイスの流路に電圧を印加することができるように、電源ケーブルによって上記マイクロデバイスの流路上等に設置された電極等に接続されている。
【００５２】
本発明のヘモグロビン類の測定システムにおいて、上記電源装置によって印加される電圧としては特に限定されないが、好ましい下限は１００Ｖ、より好ましい下限は２００、好ましい上限は５０００Ｖ、より好ましい上限は３０００Ｖである。
【００５３】
本発明のヘモグロビン類の測定システムは、上記マイクロデバイスにおいて測定対象物質を検出する検出部を有する。
上記検出部は、上記マイクロデバイスにおいて測定対象物質を検出する役割を担う。
【００５４】
上記検出部は、光源と、該光源に光ファイバーで接続された入光素子と、検出器と、該検出器に光ファイバーで接続された受光素子とからなる。
上記入光素子と、受光素子とは、上記マイクロデバイス内に形成された泳動路を挟んで対向するように設置されていることが好ましい。
上記光源は、検出光を出力する役割を担い、光源から出力された検出光は、光ファイバーを通じて、入光素子から流路へ照射される。入光素子から流路へ照射された検出光は、該流路を挟んで対向するように設置されている受光素子で受光され、光ファイバーを通じて、検出器において検出される。
【００５５】
上記入光素子及び受光素子を設置する位置としては特に限定されず、上記泳動路内で分離された測定対象物質の分画を検出できればよい。
上記光源の種類としては特に限定されず、例えば、分光器を用いて分光したものを用いてもよく、特定波長のみを照射してもよい。
【００５６】
上記検出部における検出方法としては、電気泳動を用いて分離されたヘモグロビン類の各分画を検出できる方法であれば特に限定されないが、可視光による吸光度測定法が好ましい。
上記吸光度測定法において、検出波長は、少なくとも４１５ｎｍ又はその近辺の波長を含む波長とすることが好ましいが、該波長以外の波長をバックグラウンドの波長として同時に検出し、データ処理に用いてもよい。
【００５７】
本発明のヘモグロビン類の測定システムは、更に、制御部及びデータ処理部を有することによって、上記電源部、分析部、検出部の制御や、取得したデータの処理等を行うこと等を、従来公知の技術により自動化することができる。
【００５８】
本発明のヘモグロビン類の側システムを用いることによって、ヘモグロビン類、なかでも安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を行うことができる。
本発明のヘモグロビン類の側システムを用いてヘモグロビン類を測定する方法としては特に限定されないが、例えば、内表面にカチオン性官能基が固定化され、かつ、予め緩衝液が充填された泳動路を有するマイクロデバイスが、該マイクロデバイスを収容する分析部と、電源部と、検出部とからなる構成装置（以下、これらを合わせて測定部ともいう）に設置される。次いで、測定対象物質が上記マイクロデバイス内に形成された泳動路内に添加される。その後、泳動路上に設置された電極間に電圧を印加することによって、測定対象物質が泳動路を移動して分離が行なわれる。分離された測定対象物質中の各分画が、上記泳動路上に設けられた検出部において、順次検出されることによって、ヘモグロビン類の測定を行うことができる。
【００５９】
上記測定対象物質を上記流路内に添加する方法及び条件としては特に限定されないが、溶血された血液を適当な濃度に希釈した溶血希釈液を添加する方法が好ましい。
上記測定対象物質の上記流路内への添加は、上記マイクロデバイスを上記デバイス支持部にセットする前でもよく、上記マイクロデバイスを上記デバイス支持部にセットした後でもよい。
【００６０】
本発明のヘモグロビン類の側システムにおいて、上記マイクロデバイスは、内表面にカチオン性官能基が固定化されている泳動路を用いるため、予めマイクロデバイス内に緩衝液が充填された状態で保管可能である。そのため、電気泳動操作を行う度に、緩衝液を充填して緩衝液充填済みマイクロデバイスを調製する必要はなく、予め緩衝液が泳動路に充填されたマイクロデバイスが構成部品として用意することによって、必要に応じて随時交換してすぐに使用できる状態とすることができる。従って、上記測定部は、マイクロデバイスを収容する分析部と、電源部と、検出部とからなるものであればよく、流路内に緩衝液等を充填したり排出したりするため充填機構等を有する必要がなく、簡易で安価な測定システムとすることができる。また、このようなマイクロデバイス等を有するヘモグロビン類の測定システムを用いることよって、短時間で高精度にヘモグロビン類の測定を行うことができる。
【００６１】
本発明のヘモグロビン類の測定システムを用いることによって、特に安定型ヘモグロビンＡ１ｃを他のヘモグロビン類から分離して測定することができる。
ここで、「安定型ヘモグロビンＡ１ｃを他のヘモグロビン類から分離して測定する」とは、安定型ＨｂＡ１ｃを、不安定型ＨｂＡ１ｃ、カルバミル化Ｈｂ等の修飾Ｈｂ類、その他のＨｂ類、すなわち、ＨｂＡ１ａ、ＨｂＡ１ｂ、ＨｂＦ、ＨｂＡ０から分離して測定することができることを意味し、更に、安定型ＨｂＡ１ｃを他のヘモグロビン類から分離して測定することと同時に、ＨｂＳ、ＨｂＣ、ＨｂＡ２等を分離して測定することができることを意味する。
このような本発明のヘモグロビン類の測定システムを用いることによって、安定型ヘモグロビンＡ１ｃと、異常ヘモグロビン類とを同時に測定するする安定型ヘモグロビンＡ１ｃ及び異常ヘモグロビン類の同時測定方法もまた、本発明の一つである。
なお、本明細書おいて、異常ヘモグロビン類とは、ＨｂＳ、ＨｂＣ等の他に、ＨｂＡ２も含めたヘモグロビン類を意味する。
【発明の効果】
【００６２】
本発明のヘモグロビン類の測定システムによれば、電気泳動に用いる泳動路の内表面にカチオン性官能基を固定化しておくことによって、該泳動路を形成したマイクロデバイスに、予め泳動用緩衝液を充填し、長期間安定的に保管しておくことができる。このように、マイクロデバイスに予め緩衝液を充填しておくことによって、ヘモグロビン類の測定システムに緩衝液を充填するための機構及び排出するための機構が不要となるため、ヘモグロビン類の測定システムの小型化、低価格化を実現し、簡便で安価な構成を有する測定システムとすることができる。更に、本発明のヘモグロビン類の測定システムを用いることによって、安定型ＨｂＡ１ｃを１試料当たり数分という短時間で、同時再現性を示すＣＶ値が１．０％程度という高精度で測定することが可能となることから、従来技術では困難であった糖尿病患者の電気泳動法によるＨｂＡ１ｃ値の管理を好適に行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６３】
（実施例１）
（デバイス支持部等の作製）
図１に示した模式図に基づきヘモグロビン類の測定システムを作製した。
電源装置として多チャンネルハイボルテージシーケンサ電源装置（ラボスミス社製、ＨＶＳ４４８）、光源として５０Ｗハロゲン光源装置（モリテックス社製、ＭＨＦ−Ｖ５０１）を用い、検出器として分光器（Ｂ＆Ｗテック社製、ＣＣＤ分光器、ＢＴＣ１１２）を用いて分光した４１５ｎｍの吸光度を自作プログラムによりデータ処理した。
テフロン（登録商標）製デバイス支持部を後述するマイクロデバイスの大きさに合わせて作製し、得られたデバイス支持部に白金電極（直径１ｍｍ×長さ２０ｍｍ）を取り付けた。白金電極は、電源ケーブルを用いて電源装置に接続した。他の部品は全て自作した。
【００６４】
（マイクロデバイスの作製）
フューズドシリカ製のクロス十字型電気泳動用マイクロデバイス（外観寸法：５０ｍｍ×８０ｍｍ）を作製した。マイクロデバイス内の泳動路は、内径１００μ×長さ５０ｍｍの直線状とした。
得られたマイクロデバイス内の流路に、０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液、蒸留水、０．５Ｎ塩酸水溶液及び蒸留水を順次通液して流路内を洗浄した。その後、０．５重量％のキトサン（キトサン１００、カチオン性ポリマー、和光純薬社製）を含む０．５Ｎ塩酸溶液を流路に充填した。３０分間室温で静置した後、流路に空気を注入してキトサン溶液を流路から追い出した後、４０℃で５時間加温した。
次いで、得られたカチオン性ポリマーコーティング泳動路を有するマイクロデバイスの流路に、２．０重量％のコンドロイチン硫酸（アニオン性ポリマー、ナカライテスク社製）を含むクエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）を充填して、緩衝液充填済みマイクロデバイスを作製した。
実施例１で得られたデバイス支持部等に、得られたマイクロデバイスをセットして、ヘモグロビン類の測定システムを作製した。
【００６５】
（健常人試料の調製と測定）
測定試料として、健常人血よりフッ化ナトリウム採血した血液を健常人全血として用いた。得られた健常人全血７０μＬに、０．５重量％のサポニン（和光純薬社製）を含むクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）２００μＬを添加して溶血希釈したものを健常人試料として用いた。
得られた健常人試料を得られたマイクロデバイスの流路内に注入し、流路の両端に８００Ｖの電圧をかけて電気泳動を行った。流路の途中に４１５ｎｍの可視光を照射し、透過した光の吸光度変化を測定した結果、得られたエレクトロフェログラムを図２に示す。図２中、ピーク１は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク２はＨｂＡ０を示す。
【００６６】
（修飾Ｈｂ分離性能試験）
得られた健常人全血に、グルコース（和光純薬社製）を２０００ｍｇ／ｄＬとなるよう添加して、不安定型ＨｂＡ１ｃを多量に含む試料（Ｌ−Ａ１ｃ試料）、及び、シアン酸ナトリウム（和光純薬社製）を５０ｍｇ／ｄＬとなるように添加してカルバミル化Ｈｂを多量に含む試料（ＣＨｂ試料）をそれぞれ人為的に調製した。
得られたＬ−Ａ１ｃ試料について、上述の健常人試料の電気泳動による測定と同様の測定をした結果、得られたエレクトロフェログラムを図３に示す。図３中、ピーク１は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク２はＨｂＡ０、ピーク３は不安定型ＨｂＡ１ｃを示す。図３に示すように、安定型ＨｂＡ１ｃと修飾Ｈｂである不安定型ＨｂＡ１ｃが良好に分離された。
同様に、ＣＨｂ試料について、上述の健常人試料の電気泳動による測定と同様の測定をした結果、図３と同様のエレクトロフェログラムが得られ、図３のピーク３の位置にカルバミル化Ｈｂが確認された。
【００６７】
（実施例２）
ポリジメチルシロキサン製のダブルＴ型電気泳動用マイクロデバイス（外観寸法：５０ｍｍ×８０ｍｍ）を作製した。マイクロデバイス内の泳動路は、内径１００μ×長さ５０ｍｍの直線状とした。
得られたマイクロデバイスの流路に、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液、蒸留水、０．１Ｎ塩酸水溶液及び蒸留水を順次通液して流路内を洗浄した。その後、０．５重量％のポリビニルアルコール（ゴーセノールＧＨ２０、日本合成化学社製）水溶液を流路に充填した。３０分間室温で静置した後、流路に空気を注入してポリビニルアルコール水溶液を流路から追い出した後、４０℃で５時間加温した。次に４重量％のポリブレン（カチオン性ポリマー、シグマアルドリッチジャパン社製）水溶液を流路に充填した。３０分間室温で静置した後、流路に空気を注入してポリブレン水溶液を流路から追い出した後、４０℃で５時間加温した。ポリブレン水溶液の充填と加温を３回繰り返し行ない、カチオン性ポリマーのコーティングを行なった。
得られたマイクロデバイスの流路に、１．５重量％の硫酸デキストラン（和光純薬社製）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ５．４）を流路に充填して、緩衝液充填済みマイクロデバイスを作製した。
実施例１で得られたデバイス支持部等に、得られたマイクロデバイスをセットして、ヘモグロビン類の測定システムを作製した。
【００６８】
印加電圧を９００Ｖにした以外は、実施例１と同様にして健常人試料、Ｌ−Ａ１ｃ試料、及び、ＣＨｂ試料について測定を行った。健常人試料の測定について得られたエレクトロフェログラムは、図２と同様であり、Ｌ−Ａ１ｃ試料及びＣＨｂ試料の測定について得られたエレクトロフェログラムは、図３と同様であった。
【００６９】
（実施例３）
（ジエチルアミノエチルメタクリレート（カチオン性官能基を有する単量体））−（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）−（メチルメタクリレート）の３元共重合体により、クロス十字型電気泳動用マイクロデバイスを作製した（外観寸法：５０ｍｍ×８０ｍｍ）。マイクロデバイス内の泳動路は、内径１００μ×長さ５０ｍｍの直線状とした。
得られたマイクロデバイスの流路に、１．５重量％のコンドロイチン硫酸（和光純薬社製）を含むリンゴ酸緩衝液（ｐＨ５．０）を流路に充填して、緩衝液充填済みマイクロデバイスを作製した。
実施例１で得られたデバイス支持部等に、得られたマイクロデバイスをセットして、ヘモグロビン類の測定システムを作製した。
【００７０】
印加電圧を９００Ｖにした以外は、実施例１と同様にして健常人試料、Ｌ−Ａ１ｃ試料、及び、ＣＨｂ試料について測定を行った。健常人試料の測定について得られたエレクトロフェログラムは、図２と同様であり、Ｌ−Ａ１ｃ試料及びＣＨｂ試料の測定について得られたエレクトロフェログラムは、図３と同様であった。
【００７１】
（比較例１）
フューズドシリカ製のクロス十字型電気泳動用マイクロデバイス（外観寸法：５０ｍｍ×８０ｍｍ）を作製した。マイクロデバイス内の泳動路は、内径１００μ×長さ５０ｍｍの直線状とした。
得られたマイクロデバイス内の流路に、０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液、蒸留水、０．５Ｎ塩酸水溶液及び蒸留水を順次通液して流路内を洗浄した。その後、０．５重量％のキトサン（キトサン１００、カチオン性ポリマー、和光純薬社製）を含む０．５Ｎ塩酸溶液を流路に２分間通液して動的コーティングした。
次いで、得られたカチオン性ポリマーコーティング泳動路を有するマイクロデバイスの流路に、２．０重量％のコンドロイチン硫酸（アニオン性ポリマー：ナカライテスク製）を含むクエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）を充填して、緩衝液充填済みマイクロデバイスを作製した。
実施例１で得られたデバイス支持部等に、得られたマイクロデバイスをセットして、ヘモグロビン類の測定システムを作製した。
【００７２】
実施例１と同様にして健常人試料、Ｌ−Ａ１ｃ試料、及び、ＣＨｂ試料について測定を行った。健常人試料の測定について得られたエレクトロフェログラムは、図２と同様であり、Ｌ−Ａ１ｃ試料及びＣＨｂ試料の測定について得られたエレクトロフェログラムは、図３と同様であった。
【００７３】
（比較例２）
実施例１で得られたマイクロデバイスについて、泳動路内にカチオン性ポリマーを固定化しなかった以外は、実施例１と同様にして、電気泳動による健常人試料の測定を行った。
得られたエレクトロフェログラムでは、ピークが確認できなかった。
【００７４】
（比較例３）
実施例２で得られたマイクロデバイスについて、泳動路内にカチオン性ポリマーを固定化しなかった以外は、実施例１と同様にして、電気泳動による健常人試料の測定を行った。
得られたエレクトロフェログラムでは、ピークが確認できなかった。
（評価）
【００７５】
実施例１〜３、比較例１で得られたヘモグロビン類の測定システムを用いて、グルコースを添加する前の健常人試料と、同一人を元に調製したＬ−Ａ１ｃ試料の安定型ＨｂＡ１ｃ値の差（ΔＨｂＡ１ｃ）を求めた。同様に、シアン酸ナトリウムを添加する前の健常人試料と、同一人を元に調製したＣＨｂ試料の安定型ＨｂＡ１ｃ値の差（ΔＨｂＡ１ｃ）を求めた。
結果を表１に示す。
【００７６】
【表１】
2009145245.tif 000002
【００７７】
実施例１〜３では、両者は、ほぼ同等の値を示し、不安定型ＨｂＡ１ｃを含むＬ−Ａ１ｃ試料においても、不安定型ＨｂＡ１ｃを含むＣＨｂ試料においても、精度よく安定型ＨｂＡ１ｃを測定できることが確認された。
比較例１では、ΔＨｂＡ１ｃ値が大きく、修飾Ｈｂ類の影響を受けることが分かった。
【００７８】
（同時再現性試験）
実施例１〜３、比較例１で得られたヘモグロビン類の測定システムを用いて、同一健常人試料を１０回連続して測定した際の、安定型ＨｂＡ１ｃ値のＣＶ値を算出した。
なお、ＣＶ値は（標準偏差／平均値）を算出することにより求めた。
結果を表２に示す。
【００７９】
【表２】
2009145245.tif 000003
【００８０】
表２に示すように、実施例１〜３では、同時再現性試験において、バラツキ度合いを示すＣＶ値は１．０％と良好であった。比較例１では、バラツキが大きかった。
【００８１】
（異常Ｈｂ分離試験）
実施例１について、異常Ｈｂ類として、ＨｂＳ及びＨｂＣを含む試料（ＡＦＳＣヘモコントロール、ヘレナ研究所社製）を用いて、上述の健常人試料の電気泳動による測定と同様の測定をした結果、得られたエレクトロフェログラムを図４に示す。図４中、ピーク１は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク２はＨｂＡ０、ピーク３は不安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク４はＨｂＦ（胎児性Ｈｂ）、ピーク５はＨｂＳ、ピーク６はＨｂＣを示す。図４に示すように、安定型ＨｂＡ１ｃと共に、ＨｂＳ及びＨｂＣが良好に分離された。実施例２、３及び比較例１について得られたエレクトロフェログラムも図４と同様であった。
【００８２】
また、実施例１について、ＨｂＡ２を含む試料（Ａ２コントロール  レベル２、バイオラッド社製）を用いて、上述の健常人試料の電気泳動による測定と同様の測定をした結果、得られたエレクトロフェログラムを図５に示す。図５中、ピーク１は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク２はＨｂＡ０、ピーク４はＨｂＦ（胎児性Ｈｂ）、ピーク７はＨｂＡ２を示す。図５に示すように、安定型ＨｂＡ１ｃと共に、ＨｂＡ２が良好に分離された。実施例２、３及び比較例１について得られたエレクトロフェログラムも図５と同様であった。
【００８３】
（保存安定性試験）
実施例１〜３、比較例１で得られたマイクロデバイス内の流路に、上述の２．０重量％のコンドロイチン硫酸（アニオン性ポリマー、ナカライテスク社製）を含むクエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）を充填し、密封して、４０℃で保存した。一定時間経過後に取り出し、上述の健常人試料について電気泳動による測定を行った。得られた安定型ＨｂＡ１ｃ値（％）と保存日数との関係を示すグラフを図６に示す。
図６に示すように、実施例１〜３で得られたマイクロデバイスは２０日後においても、調製直後と同等の測定性能が得られた。一方、比較例１では、安定性が悪く、コーティング直後のみ測定可能であった。本発明のヘモグロビン類の測定システムにおいて、予め緩衝液を充填した泳動路を有するマイクロデバイスは、使用時にコーティング操作が不要であって、緩衝液を充填した後一定期間安定的に保存ができなければならないところ、比較例１のマイクロデバイスは保存安定性が悪いため、予め緩衝液を充填した泳動路を有するマイクロデバイスとして用いることができないことが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明によれば、電気泳動を用いたヘモグロビン類の測定システムであって、簡便で安価な構成を有し、特に糖尿病の診断指標となる安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を短時間で高精度に行うことが可能なヘモグロビン類の測定システムを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】本発明のヘモグロビン類の測定システムの一例を示す模式図である。
【図２】実施例１の測定条件により、健常人試料を測定した場合に得られたエレクトロフェログラムである。
【図３】実施例１の測定条件により、Ｌ−Ａ１ｃ試料を測定した場合に得られたエレクトロフェログラムである。
【図４】実施例１の測定条件により、ＨｂＳ及びＨｂＣを含む試料を測定した場合に得られたエレクトロフェログラムである。
【図５】実施例１の測定条件により、ＨｂＡ２を含む試料を測定した場合に得られたエレクトロフェログラムである。
【図６】安定型ＨｂＡ１ｃ値（％）と保存日数との関係（保存安定性試験）を示すグラフである。
【符号の説明】
【００８６】
１０  電源部
１１  電源装置
１２  電源ケーブル
２０  分析部
２１  デバイス支持部
２２  マイクロデバイス
２３  電極
２４  泳動路
２５  液溜め部
３０  検出部
３１  検出器
３２  光源
３３  光ファイバー
３４  入光部
３５  受光部
１  安定型ＨｂＡ１ｃ
２  ＨｂＡ０
３  修飾Ｈｂ（不安定型ＨｂＡ１ｃ）  
４  ＨｂＦ（胎児性Ｈｂ）
５  ＨｂＳ
６  ＨｂＣ
７  ＨｂＡ２
【図１】
2009145245.tif 000004
【図２】
2009145245.tif 000005
【図３】
2009145245.tif 000006
【図４】
2009145245.tif 000007
【図５】
2009145245.tif 000008
【図６】
2009145245.tif 000009