(57)【要約】 【課題】ＰＰＡＲγアゴニストとして機能する化合物の角膜上皮のバリア機能に対する薬理作用を検討すること。【解決手段】リボグリタゾン、ＤＲＦ―２５９３、ＧＷ−５４４、ＢＭＳ―２９８５８５などのＰＰＡＲγアゴニストは、角膜上皮のバリア機能亢進試験において、優れた角膜上皮のバリア機能亢進効果を発揮するので、角膜上皮バリア機能低下に起因する眼部感染症や眼不定愁訴などの予防剤または治療剤として有用である。また、ＰＰＡＲγアゴニストは、糖尿病患者、加齢に伴い角膜上皮のバリア機能が低下した患者、ＰＲＫ（photorefractive keratectomy）・ＬＡＳＩＫ（laser in situ keratomileusis）などの屈折矯正手術や白内障手術を行った患者の角膜上皮のバリア機能を亢進させることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＰＡＲγアゴニストを有効成分として含有する角膜上皮バリア機能亢進剤。
【請求項２】
ＰＰＡＲγアゴニストが、５−［４−（６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（リボグリタゾン）、５−［４−［［３−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−２−キナゾリニル］メトキシ］フェニルメチル］チアゾリジン−２，４−ジオン（ＤＲＦ−２５９３）、５−［［４−［２−（５−エチル−２−ピリジニル）エトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（ピオグリタゾン）、５−［ｐ−［２−（メチル−２−ピリジルアミノ）エトキシ］ベンジル］−２，４−チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン）、Ｎ−［１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１（Ｚ）−プロペニル］−Ｏ−［２−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イル）エチル］−Ｌ−チロシン（ＧＷ−５４４）、Ｎ−［（４-メトキシフェノキシ）カルボニル］−Ｎ−［［４−［２−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）エトキシ］フェニル］メチル］グリシン（ＢＭＳ−２９８５８５）およびそれらの塩の少なくとも一種である請求項１記載の角膜上皮バリア機能亢進剤。
【請求項３】
ＰＰＡＲγアゴニストを有効成分として含有する角膜上皮バリア機能低下に起因する眼部感染症の予防剤または治療剤。
【請求項４】
ＰＰＡＲγアゴニストが、５−［４−（６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（リボグリタゾン）、５−［４−［［３−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−２−キナゾリニル］メトキシ］フェニルメチル］チアゾリジン−２，４−ジオン（ＤＲＦ−２５９３）、５−［［４−［２−（５−エチル−２−ピリジニル）エトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（ピオグリタゾン）、５−［ｐ−［２−（メチル−２−ピリジルアミノ）エトキシ］ベンジル］−２，４−チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン）、Ｎ−［１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１（Ｚ）−プロペニル］−Ｏ−［２−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イル）エチル］−Ｌ−チロシン（ＧＷ−５４４）、Ｎ−［（４-メトキシフェノキシ）カルボニル］−Ｎ−［［４−［２−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）エトキシ］フェニル］メチル］グリシン（ＢＭＳ−２９８５８５）およびそれらの塩の少なくとも一種である請求項３記載の角膜上皮バリア機能低下に起因する眼部感染症の予防剤または治療剤。
【請求項５】
ＰＰＡＲγアゴニストを有効成分として含有する角膜上皮バリア機能低下に起因する眼不定愁訴の改善剤。
【請求項６】
ＰＰＡＲγアゴニストが、５−［４−（６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（リボグリタゾン）、５−［４−［［３−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−２−キナゾリニル］メトキシ］フェニルメチル］チアゾリジン−２，４−ジオン（ＤＲＦ−２５９３）、５−［［４−［２−（５−エチル−２−ピリジニル）エトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（ピオグリタゾン）、５−［ｐ−［２−（メチル−２−ピリジルアミノ）エトキシ］ベンジル］−２，４−チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン）、Ｎ−［１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１（Ｚ）−プロペニル］−Ｏ−［２−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イル）エチル］−Ｌ−チロシン（ＧＷ−５４４）、Ｎ−［（４-メトキシフェノキシ）カルボニル］−Ｎ−［［４−［２−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）エトキシ］フェニル］メチル］グリシン（ＢＭＳ−２９８５８５）およびそれらの塩の少なくとも一種である請求項５記載の角膜上皮バリア機能低下に起因する眼不定愁訴の改善剤。
【請求項７】
ＰＰＡＲγアゴニストを有効成分として含有する実用視力回復のための薬剤。
【請求項８】
ＰＰＡＲγアゴニストが、５−［４−（６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（リボグリタゾン）、５−［４−［［３−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−２−キナゾリニル］メトキシ］フェニルメチル］チアゾリジン−２，４−ジオン（ＤＲＦ−２５９３）、５−［［４−［２−（５−エチル−２−ピリジニル）エトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（ピオグリタゾン）、５−［ｐ−［２−（メチル−２−ピリジルアミノ）エトキシ］ベンジル］−２，４−チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン）、Ｎ−［１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１（Ｚ）−プロペニル］−Ｏ−［２−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イル）エチル］−Ｌ−チロシン（ＧＷ−５４４）、Ｎ−［（４-メトキシフェノキシ）カルボニル］−Ｎ−［［４−［２−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）エトキシ］フェニル］メチル］グリシン（ＢＭＳ−２９８５８５）およびそれらの塩の少なくとも一種である請求項７記載の実用視力回復のための薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＰＡＲγアゴニストを有効成分とする角膜上皮バリア機能亢進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
角膜は、直径約１ｃｍ、厚さ約１ｍｍの透明な無血管の組織であり、角膜上皮と角膜実質から構成され、視機能に重大な影響を及ぼすことが知られている。
【０００３】
角膜上皮の重要な機能としては、角膜の外界と角膜実質との間にバリアを形成することが挙げられる。かかる角膜上皮のバリア機能は、涙液中に存在する物質あるいは細菌、真菌等の病原体が角膜上皮から角膜実質へ浸透するのを制御する機能であって、糖尿病患者では角膜上皮のバリア機能が低下しており、また、加齢に伴って角膜上皮のバリア機能も低下することが報告されている（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３）。このバリア機能が低下すると、眼表面に存在する様々な物質が角膜内へ無秩序に浸透するため、角膜の知覚神経が刺激されて眼不定愁訴の原因になると考えられている。
【０００４】
また、ＰＲＫ（photorefractive keratectomy）、ＬＡＳＩＫ（laser in situ keratomileusis）などの屈折矯正手術や白内障手術を行えば、術後に角膜上皮のバリア機能が低下し、各種の病原体が眼内に進入して感染症等の原因となることが報告されている（非特許文献４、非特許文献５）。さらに、角膜上皮のバリア機能が破綻すると、角膜上皮と涙液との相互作用に乱れが生じ、そのため実用視力が低下することも知られている。
【０００５】
一方、ＰＰＡＲγは、白色脂肪組織などのエネルギー蓄積臓器に分布し、脂肪細胞の分化や増殖に作用することが知られている。ＰＰＡＲγアゴニストとしては、チアゾリジンジオン骨格を有する化合物として、例えば５−［４−（６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（リボグリタゾン）、５−［４−［［３−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−２−キナゾリニル］メトキシ］フェニルメチル］チアゾリジン−２，４−ジオン（ＤＲＦ−２５９３）、５−［［４−［２−（５−エチル−２−ピリジニル）エトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（ピオグリタゾン）、５−［ｐ−［２−（メチル−２−ピリジルアミノ）エトキシ］ベンジル］−２，４−チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン）などが知られ、また、非チアゾリジンジオン骨格である化合物として、例えば、Ｎ−［１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１（Ｚ）−プロペニル］−Ｏ−［２−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イル）エチル］−Ｌ−チロシン（ＧＷ−５４４）、Ｎ−［（４-メトキシフェノキシ）カルボニル］−Ｎ−［［４−［２−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）エトキシ］フェニル］メチル］グリシン（ＢＭＳ−２９８５８５）などが知られている。
【０００６】
ＰＰＡＲγアゴニストは、インスリン抵抗性の糖尿病を改善し、糖尿病、高血糖症などのインスリン抵抗性に起因する疾病や骨関節炎、リウマチ性関節炎などの炎症性疾患の治療薬として有効であることが報告されている（特許文献１）。また、最近では、ドライアイ、角膜潰瘍、角膜炎、結膜炎などの角結膜障害の治療剤として有効であることも報告されている（特許文献２、特許文献３、特許文献４）。
【０００７】
しかしながら、上記化合物の角膜上皮バリア機能亢進作用を検討する報告はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第２９７６８８５号公報
【特許文献２】特開２００５−１４５９６１号公報
【特許文献３】特開２００５−１６２７３５号公報
【特許文献４】特開２００５−３５０４５１号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】The Cornea. Scientific Foundations and Clinical Practice. Third Edition. (1994) 25-46
【非特許文献２】Cornea 1993;12(6):493-499
【非特許文献３】Cornea 2004;23(1):35-37
【非特許文献４】Journal of Refractive Surgery 1999;15(2 suppl):S221-S224
【非特許文献５】International Ophthalmology 1995-1996;19(4):225-233
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ＰＰＡＲγアゴニストとして機能する化合物の角膜上皮のバリア機能に対する薬理作用を検討することは非常に興味のある課題である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者等は、ＰＰＡＲγアゴニストの角膜上皮のバリア機能への関与を検討するために、ＰＰＡＲγアゴニストとして機能する化合物を用いて角膜上皮のバリア機能亢進試験を実施したところ、これらの化合物が角膜上皮のバリア機能を顕著に亢進することを見出し、本発明に至った。
【００１２】
すなわち、本発明は、
（１）ＰＰＡＲγアゴニストを有効成分として含有する角膜上皮バリア機能亢進剤、
（２）ＰＰＡＲγアゴニストを有効成分として含有する角膜上皮バリア機能低下に起因する眼部感染症の予防剤または治療剤、
（３）ＰＰＡＲγアゴニストを有効成分として含有する角膜上皮バリア機能低下に起因する眼不定愁訴の改善剤、および
（４）ＰＰＡＲγアゴニストを有効成分として含有する実用視力回復のための薬剤、である。
【００１３】
本発明において、ＰＰＡＲγアゴニストは、ＰＰＡＲγアゴニストとして機能する化合物（以下「本化合物」とする）であれば特に制限はなく、チアゾリジンジオン骨格を有する化合物であっても、非チアゾリジンジオン骨格の化合物であってもよい。チアゾリジンジオン骨格を有する化合物としては、例えば５−［４−（６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（リボグリタゾン）、５−［４−［［３−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−２−キナゾリニル］メトキシ］フェニルメチル］チアゾリジン−２，４−ジオン（ＤＲＦ−２５９３）、５−［［４−［２−（５−エチル−２−ピリジニル）エトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（ピオグリタゾン）、５−［ｐ−［２−（メチル−２−ピリジルアミノ）エトキシ］ベンジル］−２，４−チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン）などが挙げられ、また、非チアゾリジンジオン骨格である化合物としては、例えば、Ｎ−［１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１（Ｚ）−プロペニル］−Ｏ−［２−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イル）エチル］−Ｌ−チロシン（ＧＷ−５４４）、Ｎ−［（４-メトキシフェノキシ）カルボニル］−Ｎ−［［４−［２−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）エトキシ］フェニル］メチル］グリシン（ＢＭＳ−２９８５８５）、Ｅ−４−［４−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリルメトキシ）ベンジルオキシイミノ］−４−フェニル酪酸（ＴＡＫ−５５９）、Ｚ−２−［４−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリルメトキシ）ベンジルオキシイミノ］−２−（４−フェノキシフェニル）酢酸（ＴＡＫ−６６４）、２−［２−プロピル−３−［３−［２−エチル−４−（４−フルオロフェニル）−５−ヒドロキシフェノキシ］プロポキシ］フェノキシ］安息香酸（ＬＹ−２９３１１１）、２（Ｓ）−メトキシ−３−［４−［３−（４−フェノキシフェノキシ）プロポキシ］フェニル］プロピオン酸（ＬＹ−５１９８１８）、（−）−２−（４−クロロフェニル）−２−［３−（トリフルオロメチル）フェノキシ］酢酸  ２−（アセチルアミノ）エチルエステル（ＭＢＸ−１０２）、（−）−２−（４−クロロフェニル）−２−［３−（トリフルオロメチル）フェノキシ］酢酸などが挙げられる。
【００１４】
上記化合物の塩は、医薬として許容される塩であれば特に制限はなく、塩酸、硝酸、硫酸等の無機酸との塩、酢酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸等の有機酸との塩、また、ナトリウム、カリウム、カルシウム等のアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属との塩などが挙げられる。より好ましい塩は、塩酸塩である。また、本化合物の第四級アンモニウム塩も本発明における塩に包含される。さらに、本化合物に幾何異性体または光学異性体が存在する場合には、それらの異性体も本発明の範囲に含まれる。なお、本化合物は水和物および溶媒和物の形態をとっていてもよい。
【００１５】
本発明において、角膜上皮のバリア機能とは、涙液中に存在する物質あるいは細菌、真菌等の病原体が角膜上皮から角膜実質に浸透するのを制御する機能をいう。そして、本発明の角膜上皮バリア機能亢進剤は、糖尿病患者、加齢に伴い角膜上皮のバリア機能が低下した患者、ＰＲＫ（photorefractive keratectomy）・ＬＡＳＩＫ（laser in situ keratomileusis）などの屈折矯正手術や白内障手術を行った患者の角膜上皮のバリア機能を亢進させることができる。
【００１６】
角膜上皮のバリア機能を亢進することにより、例えば角膜上皮バリア機能低下に起因する眼部感染症を予防または治療することをはじめ、角膜上皮バリア機能低下に起因する眼不定愁訴を改善することや角膜上皮と涙液との相互作用の乱れを正して実用視力の低下を防止することができる。
【００１７】
本発明の角膜上皮バリア機能亢進剤は、経口でも、非経口でも投与することができる。投与剤型としては、点眼剤、眼軟膏、注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等が挙げられ、特に点眼剤が好ましい。これらは汎用されている技術を用いて製剤化することができる。例えば、点眼剤の場合は、塩化ナトリウム、濃グリセリン等の等張化剤、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム等の緩衝化剤、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の界面活性剤、クエン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム等の安定化剤、塩化ベンザルコニウム、パラベン等の防腐剤等を必要に応じて用い製剤化することができる。ｐＨは眼科製剤に許容される範囲内にあればよいが、４〜８の範囲が好ましい。
【００１８】
眼軟膏の場合は、白色ワセリン、流動パラフィン等の汎用される基剤を用いて調製することができる。また、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の経口剤の場合は、乳糖、結晶セルロース、デンプン、植物油等の増量剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロース  カルシウム、低置換ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の崩壊剤、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール、シリコン樹脂等のコーティング剤、ゼラチン皮膜等の皮膜剤などを必要に応じて加えればよい。
【００１９】
投与量は症状、年令、剤型等によって適宜選択できるが、点眼剤であれば０．０００１〜１％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．００１〜１％（ｗ／ｖ）のものを１日１〜数回点眼すればよい。また、経口剤であれば通常１日当り０．１〜５０００ｍｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇを１回または数回に分けて投与すればよい。
【発明の効果】
【００２０】
後述するように、角膜上皮のバリア機能亢進試験を実施したところ、本発明のＰＰＡＲγアゴニストとして機能する化合物は、優れたバリア機能の亢進効果を発揮するので、角膜上皮バリア機能低下に起因する眼部感染症を予防または治療することをはじめ、角膜上皮バリア機能低下に起因する眼不定愁訴を改善することや角膜上皮と涙液との相互作用の乱れを正して実用視力の低下を防止することができる。さらに、糖尿病患者、加齢に伴い角膜上皮のバリア機能が低下した患者、ＰＲＫ（photorefractive keratectomy）・ＬＡＳＩＫ（laser in situ keratomileusis）などの屈折矯正手術や白内障手術を行った患者の角膜上皮のバリア機能を亢進させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下に、薬理試験の結果および製剤例を示すが、これらの例は本発明をよりよく理解するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【００２２】
［薬理試験１］ＰＰＡＲγアゴニストによるバリア機能亢進作用
ＰＰＡＲγアゴニストの角膜上皮細胞バリア機能亢進作用を評価した。角膜上皮細胞はＳＶ４０不死化ヒト角膜上皮細胞株を用い、バリア機能の指標として膜電気抵抗値を用いた。角膜上皮細胞のバリア機能が亢進すると膜電気抵抗値は上昇し、逆にバリア機能が減弱すると膜電気抵抗値は減少する。
【００２３】
（実験方法）
理化学研究所・バイオリソースセンターよりＳＶ４０不死化ヒト角膜上皮細胞（ＨＣＥ−Ｔ）を入手した。２４ウェルトランズウェルクリアー（コーニング）のカルチャーインサートに６．４×１０４個のＨＣＥ−Ｔを播種して、３７℃、５％ＣＯ２条件下培養した。培養液は１５％牛胎児血清（ＩＣＮ）と４０μｇ／ｍＬゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１２（ナカライテスク）を用いた。９時間後、２日後、３日後および４日後に培養液を除去し、チアゾリジンジオン骨格のＰＰＡＲγアゴニストとして、５−［４−（６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（リボグリタゾン）、５−［４−［［３−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−２−キナゾリニル］メトキシ］フェニルメチル］チアゾリジン−２，４−ジオン（ＤＲＦ−２５９３）、５−［［４−［２−（５−エチル−２−ピリジニル）エトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（ピオグリタゾン）、５−［ｐ−［２−（メチル−２−ピリジルアミノ）エトキシ］ベンジル］−２，４−チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン）を各１０μＭ含有する培養液で培地交換し、また、非チアゾリジンジオン骨格のＰＰＡＲγアゴニストとして、Ｎ−［１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１（Ｚ）−プロペニル］−Ｏ−［２−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イル）エチル］−Ｌ−チロシン（ＧＷ−５４４）、Ｎ−［（４-メトキシフェノキシ）カルボニル］−Ｎ−［［４−［２−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）エトキシ］フェニル］メチル］グリシン（ＢＭＳ―２９８５８５）をそれぞれ１０μＭ含有する培養液で培地交換して試料を作成した。各試料はＤＭＳＯに溶解し、培養液で１０００倍希釈することにより上記濃度に調製した。また、ＤＭＳＯのみを含有する培養液を基剤培養液とした。
【００２４】
播種５日後に、膜電気抵抗測定装置（Ｗｏｒｌｄ  Pｒｅｃｉｓｉｏｎ  Iｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）にて上皮細胞層の電気抵抗値を測定した。角膜上皮細胞を播種していない、基剤培地のみを添加したウェルをブランクとして測定し、上皮細胞層の電気抵抗値より差し引いた。細胞培養面積（０．３３ｃｍ2）を乗じ、単位面積当りの電気抵抗値（Ω・ｃｍ２）とした。
【００２５】
（結果）
各試料の膜電気抵抗値（例数４の平均値）を表１に示す。
【００２６】
【表１】
2009227668.tif 000002
【００２７】
（考察）
表１から明らかなように、本薬理試験で用いたＰＰＡＲγアゴニストは全て、基剤培養液よりも高い電気抵抗値を示した。すなわち、ＰＰＡＲγアゴニストは、チアゾリジンジオン骨格、非チアゾリジンジオン骨格に関わらず、角膜上皮細胞のバリア機能を亢進することが示された。中でもリボグリタゾン、ＤＲＦ−２５９３、ＢＭＳ−２９８５８５およびＧＷ−５４４は優れたバリア機能亢進作用を有し、とりわけリボグリタゾンは極めて強力なバリア機能亢進作用を有している。
【００２８】
［薬理試験２］ＰＰＡＲγアゴニストのバリア機能亢進作用に対するＰＰＡＲγアンタゴニストの影響
ＰＰＡＲγアゴニストのバリア機能亢進作用に対するＰＰＡＲγアンタゴニストの影響を評価し、バリア機能の亢進作用がＰＰＡＲγアゴニスト活性に基づくものであることを検証した。
【００２９】
（実験方法）
理化学研究所・バイオリソースセンターよりＳＶ４０不死化ヒト角膜上皮細胞（ＨＣＥ−Ｔ）を入手した。２４ウェルトランズウェルクリアー（コーニング）のカルチャーインサートに６．４×１０４個のＨＣＥ−Ｔを播種して、３７℃、５％ＣＯ２条件下培養した。培養液は１５％牛胎児血清（ＩＣＮ）と４０μｇ／ｍＬゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１２（ナカライテスク）を用いた。９時間後、２日後、３日後および４日後に培養液を除去し、ＰＰＡＲγアゴニストとＰＰＡＲγアンタゴニストを含有する培養液で培地交換して試料を作成した。ＰＰＡＲγアゴニストとしてリボグリタゾン［０．１μＭ］、ＰＰＡＲγアンタゴニストとして、２−クロロ−５−ニトロベンゼズアニリド（ＧＷ−９６６２）［０．０３μＭ、０．１μＭ］を用いた。各試料はＤＭＳＯに溶解し、培養液で１０００倍希釈することにより上記濃度に調製した。また、ＤＭＳＯのみを含有する培養液を基剤培養液とした。
【００３０】
播種５日後に、膜電気抵抗測定装置（Ｗｏｒｌｄ  Pｒｅｃｉｓｉｏｎ  Iｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）にて上皮細胞層の電気抵抗値を測定した。角膜上皮細胞を播種していない、基剤培地のみを添加したウェルをブランクとして測定し、上皮細胞層の電気抵抗値より差し引いた。細胞培養面積（０．３３ｃｍ２）を乗じ、単位面積当りの電気抵抗値（Ω・ｃｍ２）とした。
【００３１】
（結果）
各試料の膜電気抵抗値（例数４の平均値）を表２に示す。
【００３２】
【表２】
2009227668.tif 000003
【００３３】
（考察）
表２から明らかなように、リボグリタゾン（ＰＰＡＲγアゴニスト）によって亢進したバリア機能は、ＧＷ−９６６２（ＰＰＡＲγアンタゴニスト）によって濃度依存的に減弱し、０．１μＭで完全に拮抗された。すなわち、リボグリタゾンの角膜上皮細胞バリア機能亢進作用はＰＰＡＲγ依存的であることが示された。そして、上記結果より、ＰＰＡＲγアゴニスト活性を有する化合物であれば、角膜上皮細胞のバリア機能を亢進させることが明瞭となる。
【００３４】
［製剤例］
以下にＰＰＡＲγアゴニストを用いた代表的な製剤例を以下に示す。
【００３５】
処方例１
１００ｍｌ中
リボグリタゾン                       １０ｍｇ
塩化ナトリウム                     ９００ｍｇ
滅菌精製水                               適量
リボグリタゾンの添加量を変えることにより、濃度０．００１％（ｗ／ｖ）、０．０１％（ｗ／ｖ）、０．０３％（ｗ／ｖ）、０．１％（ｗ／ｖ）、０．３％（ｗ／ｖ）、１．０％（ｗ／ｖ）、３．０％（ｗ／ｖ）の点眼剤を調製できる。
【００３６】
処方例２
１００ｍｌ中
ＤＲＦ―２５９３                    １００ｍｇ
塩化ナトリウム                      ８００ｍｇ
リン酸水素二ナトリウム              １００ｍｇ
リン酸二水素ナトリウム                    適量
滅菌精製水                                適量
ＤＲＦ―２５９３の添加量を変えることにより、濃度０．１％（ｗ／ｖ）、０．３％（ｗ／ｖ）、０．５％（ｗ／ｖ）、１．５％（ｗ／ｖ）、３％（ｗ／ｖ）の点眼剤を調製できる。
【００３７】
処方例３
１００ｇ中
リボグリタゾン                        ０．３ｇ
流動パラフィン                      １０．０ｇ
白色ワセリン                              適量
リボグリタゾンの添加量を変えることにより、濃度１％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）の眼軟膏を調製できる。
【００３８】
処方例４
１００ｇ中
ＧＷ−５４４                          ０．３ｇ
流動パラフィン                      １０．０ｇ
白色ワセリン                              適量
ＧＷ−５４４の添加量を変えることにより、濃度１％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）の眼軟膏を調製できる。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
ＰＰＡＲγアゴニストとして機能する化合物は、角膜上皮のバリア機能を顕著に亢進する。そして、角膜上皮のバリア機能を亢進することにより、例えば角膜上皮バリア機能低下に起因する眼部感染症を予防または治療することをはじめ、角膜上皮バリア機能低下に起因する眼不定愁訴を改善することや角膜上皮と涙液との相互作用の乱れを正して実用視力の低下を防止することができる。
【手続補正書】
【提出日】平成21年3月17日(2009.3.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
【表１】
2009227668.tif 000004