(57)【要約】      （修正有）【課題】脂肪細胞の肥大に伴い脂肪細胞より分泌されるアディポサイトカインであるレプチンの優れた産生促進剤の提供。【解決手段】カルコン類、すなわちベンザルアセトフェノンオキシ誘導体を有効成分とするレプチン産生促進剤。カルコン類としてアシタバ黄汁を用いることが特に好ましい。該剤は、生活習慣病などの疾患、例えば、糖尿病、肥満、動脈硬化症、およびこれらに起因する症状（糖尿合併症、脳梗塞、心筋梗塞、高脂血症、腎硬化症など）の改善、治療、または予防に有効である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルコン類を有効成分とする、レプチン産生促進剤。
【請求項２】
カルコン類を含有するアシタバ黄汁を有効成分とする、レプチン産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レプチン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
レプチンは、脂肪細胞の肥大に伴い脂肪細胞より分泌されるアディポサイトカインである。レプチンは、視床下部のレプチン受容体に作用することにより、強力な摂食抑制作用およびエネルギー消費亢進作用を発揮する抗肥満ホルモンとして知られている。さらにレプチンは、糖脂質代謝改善作用、生理機能の調整作用（例えば、交感神経系の活性化を介した血圧上昇作用、神経内分泌調節作用など）などに広く関与していることが明らかになってきている。
【０００３】
このような状況下、種々のレプチン産生促進剤が報告されている。例えば、特許文献１には、トリカルボン酸回路関連有機酸、その誘導体またはそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする、レプチン分泌促進剤が開示されている。特許文献２には、グループＢのソヤサポニン類がレプチン遺伝子の発現を促進することが開示されている。そして、特許文献３には、アブラナ科植物由来の成分が生体内のレプチンの増加を促進することが開示されている。
【０００４】
しかしながら、これら以外にもレプチン産生促進作用を有する物質が望まれている。
【特許文献１】特開２００１−１８７７３２号公報
【特許文献２】特開２００６−２７３７８６号公報
【特許文献３】特開２００６−３２８０５６号公報
【非特許文献１】藤波綾ら、“アシタバ由来カルコン類は脂肪組織と3T3-L1細胞からのadiponectin分泌を促進する”、日本薬学会第１２６年会（仙台）、講演要旨予稿集、２００６年２月１日発行、P30「R」am-205
【非特許文献２】藤波綾ら、“マウス血清および脂肪組織中アディポサイトカイン量に及ぼすカルコン摂取の影響”、日本薬学会第１２７年会（富山）、講演要旨予稿集、２００７年、30P1-am198
【非特許文献３】馬場きみ江ら、Foods & Food Ingredients Journal of Japan, １９９８年、Ｎｏ．１７８、ｐ．５２−６０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、優れたレプチン産生促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、優れたレプチン産生促進作用を有する物質について鋭意検討した結果、カルコン類、特にアシタバに由来するカルコン類が、レプチン産生促進作用に優れることを見出して、本発明を完成するに至った。
【０００７】
本発明のレプチン産生促進剤は、カルコン類を有効成分とする。
【０００８】
本発明のレプチン産生促進剤はまた、カルコン類を含有するアシタバ黄汁を有効成分とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のレプチン産生促進剤は、カルコン類を有効成分とし、優れたレプチン産生促進作用を有する。本発明レプチン産生促進剤は、生活習慣病などの疾患、例えば、糖尿病、肥満、動脈硬化症、およびこれらに起因する症状（糖尿合併症、脳梗塞、心筋梗塞、高脂血症、腎硬化症など）の改善、治療、または予防に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明のレプチン産生促進剤は、カルコン類を有効成分とする。本発明者らは、以前に、カルコン類が、アディポサイトカインの１種であるアディポネクチンの産生を促進させる作用があることを見出している（非特許文献１および２）。しかし、レプチンは、上述のように、脂肪細胞の肥大に伴い脂肪細胞より分泌され、脳（視床下部）の食欲中枢に作用し、食欲を抑制する、あるいは体内の基礎代謝を上昇させる。他方、アディポネクチンは、非肥満者の脂肪組織の小型脂肪細胞より分泌されるが、脂肪細胞が肥大すると分泌が抑制される。また、アディポネクチンは、肝臓、骨格筋に作用し、蓄積した中性脂肪を燃焼させる。このように、レプチンとアディポネクチンとは、その機能が全く異なっている。
【００１１】
カルコン類とは、植物に含有される天然色素であって、ベンザルアセトフェノンオキシ誘導体に属する黄色色素である。カルコン類としては、キサントアンゲロールまたは４−ヒドロキシデリシンが特に好適に用いられる。カルコン類は、単独で用いてもよく、２以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１２】
カルコン類は、カルコン類を含有する植物、例えばアシタバから上記キサントアンゲロール、４−ヒドロキシデリシンなどのカルコン類を単離し、またはこのような化合物を合成して用いられる。あるいは、カルコン類を含有する植物、この植物からの樹液、抽出液、それらの加工品などをそのまま利用してもよい。カルコン類を含有する植物として、キサントアンゲロールおよび４−ヒドロキシデリシンを多く含む点から、アシタバが好適に用いられる。アシタバの樹液（特にアシタバ黄汁）を用いることが特に好ましい。
【００１３】
アシタバ（Angelica keiskei）は、わが国固有のセリ科の植物であり、房総半島、伊豆半島、三浦半島、伊豆諸島、大島、八丈島などに自生している。アシタバは、大きな羽状の三つ葉を有し、茎は太く、栽培を開始してから３年目の白い花が咲く頃には、１５０ｃｍほどの高さに成長する。なお、本明細書および特許請求の範囲において、「アシタバ」というときは、セリ科Angelica属に属し、上記形質および性質を有しており、「明日葉」、「あしたば」、「あした葉」などと標記される植物も含む。
【００１４】
本発明において、アシタバ黄汁とは、発芽してから開花前までのアシタバの根、茎、葉などから滲出してくる黄色の樹液をいう。この色は上記カルコン類に由来する。アシタバ黄汁は、例えば、開花前のアシタバの茎を切断し、その破切面から滲出した樹液を回収することによって得られる。このアシタバ黄汁には、キサントアンゲロール、４−ヒドロキシデリシンなどの約１０種類のカルコン類が約０．５〜１１質量％含まれている。特にキサントアンゲロールおよび４−ヒドロキシデリシンが合計で０．５〜１０質量％含まれている。これらのアシタバ黄汁由来のカルコン類（特にキサントアンゲロールおよび４−ヒドロキシデリシン）は、抗菌作用、抗潰瘍・胃酸分泌抑制作用、トロンボプラスチンＡ２生成阻害作用、抗アレルギー作用などを有することが報告されている（非特許文献３）。
【００１５】
上記アシタバ黄汁は、必要に応じて、濾過、加熱殺菌などの処理を行ってもよい。加熱殺菌処理としては、当業者が通常行う方法が適用される。例えば、熱湯中に樹液が入った容器を浸漬し、容器内の樹液の温度が熱湯の温度と同じになってから数時間放置してもよく、あるいはオートクレーブで処理してもよい。加熱処理によりレプチン産生促進作用は低下しないので、保存を考慮すると、加熱殺菌処理は有用である。
【００１６】
本発明のレプチン産生促進剤は、上記カルコン類、特にカルコン類を含有するアシタバ黄汁を有効成分とし、必要に応じて種々の添加剤を含有する。本発明のレプチン産生促進剤は、医薬品、食品、飼料などとして利用される。
【００１７】
本発明のレプチン産生促進剤を医薬品として用いる場合、その形態は特に制限されない。経口投与剤（経口固形製剤および経口液状製剤）および非経口投与剤のいずれにおいても利用可能である。
【００１８】
上記経口固形製剤としては、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、除放剤などが挙げられる。このような経口固形製剤は、例えば、賦形剤（デキストリン、乳糖、結晶セルロース、二酸化ケイ素、環状オリゴ糖、デンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなど）、滑沢剤（ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸カルシウムなど)、崩壊剤（カルボキシメチルセルロース、タルクなど）などと混合して常法により調製することができる。例えば、アシタバ黄汁と賦形剤とを、好適には、質量比で７：３〜５：５の割合で混合し、乾燥することによりカルコン類含有粉末（散剤）を得ることができる。混合には、均一な混合を行うために、エタノールなどの適当な溶媒を加えることも可能である。さらに、必要に応じて、オートクレーブ中で１２０℃程度の温度で２０分程度殺菌してもよい。
【００１９】
上記経口液状製剤としては、乳化剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤などが挙げられる。この経口液状製剤は、例えば、カルコン類、アシタバ黄汁、上記カルコン類含有粉末などを、水または水以外の薬学的に許容し得る溶媒に溶解または分散させ、必要に応じて、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤などを添加し、通常の方法により調製される。
【００２０】
上記非経口投与剤としては、注射剤、経皮吸収製剤、坐剤などが挙げられる。例えば、注射剤の場合、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（オリーブ油）、アルコール類（エチルアルコール）、ポリソルベート８０などで希釈し、必要に応じて、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤などを添加して調製される。
【００２１】
本発明のレプチン産生促進剤を医薬品として利用する場合の投与量は、その目的、投与対象者により適宜設定される。例えば、成人の体重１ｋｇに対して、カルコン類が、好ましくは０．０００１〜３００ｍｇ／日、より好ましくは０．０００１〜１００ｍｇ／日、さらに好ましくは０．０１〜１００ｍｇ／日の割合となるように設定される。特に経口投与剤の場合は０．０００１〜１００ｍｇ／日、非経口投与剤の場合は０．０１〜１００ｍｇ／日の割合となるように設定することが好ましい。
【００２２】
本発明のレプチン産生促進剤を食品として利用する場合、その形態は、溶液、懸濁物、粉末、固体成形物などの経口摂取可能であればよく、特に制限されない。具体的には、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ用食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類；清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料などの飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、唐揚げ粉、パン粉などの小麦粉製品；飴、キャラメル、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子などの菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレーシチューなどの調味料；加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズなどの油脂類；乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類などの乳製品；冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品などの水産加工品；畜肉ハム・ソーセージなどの畜産加工品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆、シリアルなどの農産加工品；栄養食品；錠剤；カプセル剤などが挙げられる。
【００２３】
食品の調製は、例えば、上記カルコン類またはアシタバの樹液（特にアシタバ黄汁）を飲料に含有させるか、あるいはビスケットのような固形の食品に含有させて健康食品あるいは機能性食品などとすることにより行われる。必要に応じて、栄養成分、希釈剤（油脂、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンなど）、バインダー（アラビアガム、デキストリンなど）、安定剤、保存料などが用いられる。
【００２４】
上記栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸などのビタミン類；リジン、スレオニン、トリプトファンなどの必須アミノ酸；カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅などのミネラル類；α−リノレン酸；ＥＰＡ；ＤＨＡ；月見草油；オクタコサノール；カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）；カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）；水溶性食物繊維；不溶性食物繊維；オリゴ糖などが挙げられる。栄養成分は単独で用いてもよく、２以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２５】
本発明のレプチン産生促進剤を食品として利用する場合の摂取量は、例えば、成人の体重１ｋｇに対して、カルコン類が、０．０００１〜３００ｍｇ／日の割合となるように設定することが好ましい。上記摂取量は、体調および食品の形態に応じて、１日当たり１回の割合で摂取してもよいし、あるいは数回にわけて摂取してもよい。
【００２６】
本発明のレプチン産生促進剤は、抗肥満ホルモンとして知られるレプチンの分泌を促進させ、特に各内臓脂肪組織（腎周囲、腹部、腸間膜など）からのレプチン分泌量を増加させる。本発明のレプチン産生促進剤は、糖尿病、肥満、動脈硬化症、およびこれらに起因する症状、例えば、糖尿合併症（糖尿病網膜症、糖尿病神経障害、糖尿病性腎症など）、脳梗塞、心筋梗塞、高脂血症、腎硬化症などの改善、治療、または予防に有効である。本発明のレプチン産生促進剤は、医薬品、食品などとして利用される。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこの実施例に制限されることはない。なお、本実施例および比較例において、「洗浄緩衝液」は、５０ｍＭトリス塩酸塩、２００ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭ塩化カルシウム、および０．２質量／容量％（Ｗ／Ｖ％）トリトンＸ１００を含有する緩衝液（ｐＨ７．０）をいう。「ブロッキング緩衝液」は、１０ｍＭ炭酸水素ナトリウム、１０ｍＭ炭酸ナトリウム、および０．５Ｗ／Ｖ％ＢＳＡを含有する緩衝液（ｐＨ９．３）をいう。そして「試料緩衝液」は、ＢＳＡを１Ｗ／Ｖ％含む洗浄緩衝液をいう。
【００２８】
（実施例１）
（１）飼料の調製
基本飼料ＣＲＦ−１（株式会社ＫＢＴオリエンタル社製）９９．２５質量部と、あした葉カルコンパウダー（株式会社日本生物科学研究所社製）０．７５質量部とを混合してカルコン類含有飼料を調製した。なお、あした葉カルコンパウダーは、アシタバ黄汁と賦形剤とを質量比で７：３〜５：５の割合で調製したものである。
【００２９】
（２）レプチン産生促進作用の検討
カルコン類含有飼料を、C57BL/6雄マウス１３匹に５週間自由摂取させた。コントロールとして、C57BL/6雄マウス１３匹に、カルコン類含有飼料の代わりに基本飼料を摂取させた。その後、各マウスの内臓脂肪組織（腎周囲、腹部、および腸間膜の各内臓脂肪組織）を摘出した。さらに、各内臓脂肪組織を試料緩衝液で希釈し、この希釈液をホモジネイトした後、遠心分離して上清を得た。これらの上清を検体とする。
【００３０】
次いで、９６穴マイクロタイタープレートの各ウェルに、固相化抗レプチンＩｇＧ抗体溶液（Ｒ＆Ｄ社）を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて、室温にて緩やかに振盪させながら２時間保持して吸着させた。ウェルをブロッキング緩衝液２００μＬ／ｗｅｌｌで２回洗浄した後、さらにブロッキング緩衝液２００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて室温にて緩やかに振盪させながら１時間保持して非特異的結合部分をブロックした。ブロッキング緩衝液を捨て、上記検体（上清）を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて、室温にて緩やかに振盪させながら２時間反応させた。ウェルを洗浄緩衝液で４回洗浄した後、ビオチン標識抗体希釈溶液（Ｒ＆Ｄ社）を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて、室温にて緩やかに振盪させながら１時間反応させた。ウェルを洗浄緩衝液で４回洗浄した後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ希釈溶液（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社）を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて、室温にて緩やかに振盪させながら１時間反応させた。そしてウェルを洗浄緩衝液で４回洗浄した後、ＴＭＢ発色液（Kirkegaad & Perry Laboratories社）を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて約２０分間反応させた。その後、１．７Ｍリン酸を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて反応を停止させ、プレートリーダーを用いて４５０ｎｍおよび６２０ｎｍ（ブランク用）の波長にて吸光度を測定した。
【００３１】
得られた希釈検体の吸光度からレプチン量を算出した。なお、算出に際して、上記希釈検体の代わりに、スタンダード溶液（Ｒ＆Ｄ社、レプチン０〜４０００ｐｇ／ｍＬ）を用いて吸光度を測定し、これらの吸光度から作成した検量線を用いた。上記測定を４回行い、雄マウスカルコン類摂取群および雄マウスコントロール群について、レプチン量の平均値および標準偏差を求めた。さらに、雄マウスカルコン類摂取群と雄マウスコントロール群との間でMann-WhiteneyのＵ検定を行った。結果を図１に示す。図１において、ｐ＜０．０５を＊で示す。
【００３２】
図１から明らかなように、雄マウスカルコン類摂取群は、カルコン類を摂取しない場合（雄マウスコントロール群）に比べて、各内臓脂肪組織（腎周囲、腹部、および腸間膜の各内臓脂肪組織）におけるレプチン産生量が有意に増加した。
【００３３】
（実施例２）
実施例１で用いたC57BL/6雄マウスの代わりに、C57BL/6雌マウスを用いたこと以外は、実施例１と同様にして、レプチン量の平均値および標準偏差を求めた（雌マウスカルコン類摂取群および雌マウスコントロール群）。結果を図２に示す。
【００３４】
図２から明らかなように、雌マウスについても雄マウスと同様の結果が得られた。これらのことは、カルコン類が優れたレプチン産生促進作用を有すること示す。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明のレプチン産生促進剤は、カルコン類を有効成分とし、優れたレプチン産生促進作用を有する。本発明レプチン産生促進剤は、生活習慣病などの疾患、例えば、糖尿病、肥満、動脈硬化症、およびこれらに起因する症状（糖尿合併症、脳梗塞、心筋梗塞、高脂血症、腎硬化症など）の改善、治療、または予防に有効である。本発明のレプチン産生促進剤は、医薬品、食品などとして利用される。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】C57BL/6雄マウスの内臓脂肪組織中のレプチン量を示すグラフである。
【図２】C57BL/6雌マウスの内臓脂肪組織中のレプチン量を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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