(57)【要約】【課題】観察性能を劣化させずに安価に位置を同定可能とすること。【解決手段】細胞が培養されたガラスベースディッシュ２０の底部を構成する板状ガラス部２２の非培養面に、観察部を形成するための開口部１１が少なくとも１個設けられた被覆部１２を備える観察部形成用シール１０を貼り付け、該ガラスベースディッシュ２０を、顕微鏡のステージ上に載置して、上記開口部１１によって形成される観察部の内、細胞操作を行うための観察部を選定し、その選定した観察部内の細胞に対して、細胞操作装置により細胞操作を行う。そして、上記ガラスベースディッシュ２０を上記顕微鏡のステージ上から取り外して、更に培養を行った後に、再びそのガラスベースディッシュ２０を上記顕微鏡のステージ上に載置して、上記細胞操作した観察部を特定し、上記特定した観察部内の細胞操作された細胞を同定し、上記顕微鏡で観察する。【選択図】      図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養容器の底部に貼り付けられた際に観察部を形成するための開口部が少なくとも１個設けられた被覆部を備えることを特徴とする観察部形成用シール。
【請求項２】
上記観察部を形成するための開口部の内の少なくとも１個が一辺以上の直線部分を有することを特徴とする請求項１に記載の観察部形成用シール。
【請求項３】
当該観察部形成用シールの厚さが１００μｍ以下であることを特徴とする請求項１に記載の観察部形成用シール。
【請求項４】
上記被覆部が遮光性を有することを特徴とする請求項１に記載の観察部形成用シール。
【請求項５】
上記被覆部は上記観察部近傍に識別記号が記されていることを特徴とする請求項１に記載の観察部形成用シール。
【請求項６】
底部を構成するガラス部が少なくとも１個の観察部を残して被覆部により被覆されていることを特徴とする培養容器。
【請求項７】
上記被覆部が塗装膜であることを特徴とする請求項６に記載の培養容器。
【請求項８】
上記観察部の内の少なくとも１個が一辺以上の直線部分を有することを特徴とする請求項６に記載の培養容器。
【請求項９】
上記被腹部は上記観察部近傍に識別記号が記されていることを特徴とする請求項６に記載の培養容器。
【請求項１０】
細胞が培養された培養容器の底部を構成するガラス部の非培養面に、観察部を形成するための開口部が少なくとも１個設けられた被覆部を備える観察部形成用シールを貼り付ける工程と、
上記培養容器を、顕微鏡のステージ上に載置して、上記開口部によって形成される観察部の内、細胞操作を行うための観察部を選定する工程と、
上記選定した観察部内の細胞に対して、細胞操作装置により細胞操作を行う工程と、
上記培養容器を上記顕微鏡のステージ上から取り外して、更に培養を行う工程と、
上記更に培養を行った培養容器を上記顕微鏡のステージ上に載置して、上記細胞操作した観察部を特定する工程と、
上記特定した観察部内の細胞操作された細胞を同定し、上記顕微鏡で観察する工程と、
を有することを特徴とする細胞操作・観察における位置同定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞を培養する培養容器に貼り付ける観察部形成用シール、培養容器、及び細胞操作・観察における位置同定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
培養容器内の細胞を観察する際には、例えばマイクロインジェクションなどにより操作した特定の細胞を観察したり、培養容器内の特に同じ細胞を、幾度か観察装置（顕微鏡）に置き直しながら径時的に繰り返し観察するなど、培養容器内の観察する位置を特定する必要がある場合がある。
【０００３】
特許文献１では、ガラスベースディッシュのガラス部にグリッド座標をレーザまたはエッチングにより形成した培養容器が示されている。この培養容器を用いることにより、グリッドの、どの位置の細胞を観察対象とするのか特定することができる。
【０００４】
また、特許文献２は、スライドガラスチャンバにグリッド座標を形成した培養容器を開示している。
【特許文献１】特許第３６１３５１２号公報
【特許文献２】特許第３９４２１８３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記特許文献１及び２に開示された培養容器では、顕微鏡観察下で、顕微鏡ステージを走査して、番地情報を確認、グリッドの位置を読み取る必要があるが、この作業が繁雑であり、特定位置を顕微鏡視野内に合わせるためには時間を要する。加えて、グリッド上に観察したい細胞が重なり、グリッド自体が観察の邪魔になる場合もある。また、レーザ、エッチングによりガラス部にグリッドを形成するためにコストを要するので、グリッド付きのガラスベースディッシュは、一般のガラスベースディッシュの数倍という高額な価格で販売されている。
【０００６】
一方、安価に培養容器内の観察位置を特定するための手段として、ガラスベースディッシュ等の培養容器に貼り付けて使用するグリッドを配したグリッドシールが市販されている。このグリッドシールでも位置の特定は可能であるが、高倍率の観察、および、蛍光観察等では、観察性能の劣化が生じる。
【０００７】
本発明は、上記の点に鑑みてなされたもので、観察性能を劣化させずに安価に位置を同定可能とする観察部形成用シール、培養容器、及び細胞操作・観察における位置同定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の観察部形成用シールの一態様は、
培養容器の底部に貼り付けられた際に観察部を形成するための開口部が少なくとも１個設けられた被覆部を備えることを特徴とする。
【０００９】
また、本発明の培養容器の一態様は、
底部を構成するガラス部が少なくとも１個の観察部を残して被覆部により被覆されていることを特徴とする。
【００１０】
また、本発明の細胞操作・観察における位置同定方法の一態様は、
細胞が培養された培養容器の底部を構成するガラス部の非培養面に、観察部を形成するための開口部が少なくとも１個設けられた被覆部を備える観察部形成用シールを貼り付ける工程と、
上記培養容器を、顕微鏡のステージ上に載置して、上記開口部によって形成される観察部の内、細胞操作を行うための観察部を選定する工程と、
上記選定した観察部内の細胞に対して、細胞操作装置により細胞操作を行う工程と、
上記培養容器を上記顕微鏡のステージ上から取り外して、更に培養を行う工程と、
上記更に培養を行った培養容器を上記顕微鏡のステージ上に載置して、上記細胞操作した観察部を特定する工程と、
上記特定した観察部内の細胞操作された細胞を同定し、上記顕微鏡で観察する工程と、
を有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、観察性能を劣化させずに安価に位置を同定可能とする観察部形成用シール、培養容器、及び細胞操作・観察における位置同定方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明を実施するための最良の形態を図面を参照して説明する。
【００１３】
［第１実施形態］
図１（Ａ）は、本発明の第１実施形態に係る観察部形成用シール１０を示す図であり、図１（Ｂ）及び（Ｃ）は、該観察部形成用シール１０が貼り付けられた培養容器、この例ではガラスベースディッシュ２０の上面図及び断面図である。
【００１４】
図１（Ａ）に示すように、観察部形成用シール１０は、培養容器の底部に貼り付けられた際に観察部を形成するための開口部１１が少なくとも１個設けられた被覆部１２を備えている。この観察部形成用シール１０は、特に図示はしないが、透明樹脂フィルムからなる支持体の一方の面に粘着剤層を設けたものである。そして、その粘着剤層を剥離紙に貼り付けて、複数枚の観察部形成用シール１０がシールシート１３の形態で提供される。
【００１５】
この観察部形成用シール１０は１枚ずつ該シールシート１３から剥離されて、図１（Ｂ）及び（Ｃ）に示すように、ガラスベースディッシュ２０の底板部２１に配された、細胞（図示せず）を付着させて培養するための透明な板状ガラス部２２に、例えば細胞の非培養面である裏面２２ａに貼り付けて使用される。
【００１６】
ここで、上記ガラスベースディッシュ２０は、ポリスチレンなどの合成樹脂材からなる底板部２１と周側部２３とで円筒状に形成されており、その底板部２１の中心部位には、円形を呈する透孔２４が１個穿設されている。そして、底板部２１には、下面２１ａ側から透孔２４の開口面２４ａを完全に覆うに足る板状ガラス部２２がシリコン系接着剤やアクリレート系接着剤などからなる接着剤Ｓを介して接合されており、該板状ガラス部２２により透孔２４の開口面２４ａの全体が遮蔽されている。こうして、底板部２１と板状ガラス部２２とによって、ガラスベースディッシュ２０の底部が構成される。
【００１７】
なお、上記観察部形成用シール１０の厚さは、１００μｍ以下であることが好ましい。これは、１００μｍ以上の厚さになると、液浸対物レンズを使用する顕微鏡では気泡が入り観察できなくなってしまう虞があるからである。
【００１８】
また、観察部を形成する開口部１１のサイズは、視野サイズ相当であることが好ましい。例えば、４０倍対物用であれば直径５００μｍ、２０倍対物用であれば直径１ｍｍ、１０倍対物用であれば直径２ｍｍ、等である。なお、各開口部１１を判別し易くするため、隣接する開口部１１間は、開口部１１のサイズ以上の間隔を開けて配置することが好ましい。
【００１９】
ここで、本第１実施形態に係る観察部形成用シール１０が貼り付けられたガラスベースディッシュ２０で培養した細胞に対し操作・観察を行うための細胞操作装置及び顕微鏡について、図２を参照して説明する。
【００２０】
本実施形態に係る細胞操作装置３０は、細胞を観察するための倒立型顕微鏡４０に備えられる。
【００２１】
倒立型顕微鏡４０は、上記細胞を収容したガラスベースディッシュ２０等を載置する培養容器ホルダ４１と、該培養容器ホルダ４１上の細胞を照明する照明装置４２と、細胞において反射あるいは透過した光、あるいは細胞から発生した蛍光を観察する観察装置４３と、上記培養容器ホルダ４１をＸ方向及びＹ方向に移動する顕微鏡ＸＹステージ４４と、該顕微鏡ＸＹステージ４４を駆動制御する顕微鏡ＸＹステージコントローラ４５と、上記照明装置４２及び観察装置４３を制御する顕微鏡コントローラ４６と、上記観察装置４３により得られた画像を処理する画像処理装置４７と、該画像処理装置４７により処理された画像を表示するモニタ４８を有し、上記細胞操作装置３０及び該倒立型顕微鏡４０の全体を制御する制御コンピュータ４９と、を備えている。
【００２２】
また、上記照明装置４２には、細胞に対して、上記観察装置４３とは反対側から照明光を照射する透過照明光源４２Ａと、該透過照明光源４２Ａから発せられた照明光を細胞に集光するコンデンサレンズ４２Ｂと、細胞に対して上記観察装置４３と同一方向から照明光を照射する落射照明光源４２Ｃとが備えられている。
【００２３】
一方、上記観察装置４３には、図示しない対物レンズを含む観察光学系と、該観察光学系を介した細胞からの光を撮像して画像を取得するＣＣＤカメラ４３Ａと、細胞からの光を直接観察する接眼レンズ４３Ｂとが備えられている。
【００２４】
そして、細胞操作装置３０は、上記倒立型顕微鏡４０の培養容器ホルダ４１近傍に配置され、細胞に対して挿入される導入針３１と、該導入針３１を保持する導入針保持具３２と、該導入針保持具３２を移動させることで上記導入針３１を移動させる駆動ユニット３３と、該細胞操作装置３０を制御するコントロールボックス３４と、を備えている。ここで、駆動ユニット３３は、Ｘ，Ｙ，Ｚ方向に導入針３１を移動させる、例えば、３軸の直線移動機構を備えている。
【００２５】
上記導入針３１は、図３（Ａ）に示すように、カンチレバー３５の自由端側に、該カンチレバー３５の長手方向に対して交差する方向に延びるように設けられている。カンチレバー３５は取付部材３６に固定され、該取付部材３６は、Ｚ軸アクチュエータ３７を介して導入針保持具３２のアーム３２Ａに固定されている。これにより、カンチレバー３５は斜め下向きに保持され、導入針３１はカンチレバー３５の自由端において、先端を鉛直下方に向けて保持されている。
【００２６】
カンチレバー３５は、図３（Ｂ）に示すように、可撓性を持つシリコンベース部３５Ａと、先端に微細な導入針３１が形成されたレバー部３５Ｂとから構成されており、上記取付部材３６に対して交換可能に固定される。従って、このカンチレバー３５を交換することで、コンタミネーションのおそれなく、該細胞操作装置３０を繰り返し使用することができる。
【００２７】
上記取付部材３６と導入針保持具３２との間に配置されたＺ軸アクチュエータ３７は、例えば、積層された圧電素子により構成され、その印加電圧に応じて伸縮する。図３（Ａ）に示すようにＺ軸アクチュエータ３７は取付部材３６と導入針保持具３２との間に垂直方向に配置されているので、印加電圧を調整することにより導入針保持具３２に対して取付部材３６を垂直方向に微小変位させ、該取付部材３６に鉛直下向きに取り付けられている導入針３１の先端を垂直方向に微小距離、移動させることができるようになっている。
【００２８】
上記コントロールボックス３４は、駆動ユニット３３を制御する駆動ユニット制御回路３４Ａと、Ｚ軸アクチュエータ３７を制御するアクチュエータ制御回路３４Ｂとを備えている。
【００２９】
以下、上記観察部形成用シール１０、上記ガラスベースディッシュ２０、上記細胞操作装置３０及び上記倒立型顕微鏡４０を用いた本発明の第１実施形態に係る細胞操作・観察における位置同定方法を、図４のフローチャートを参照して説明する。ここでは、細胞操作装置３０を用いた細胞操作として、ガラスベースディッシュ２０内の培養液中で培養される細胞に遺伝子を導入する操作を例に説明する。
【００３０】
まず、上記シールシート１３より観察部形成用シール１０を１枚剥がし、それを、細胞培養液中に遺伝子導入物質を分散させたガラスベースディッシュ２０の板状ガラス部２２裏面２２ａに貼り付ける（ステップＳ１）。
【００３１】
その後、その観察部形成用シール１０が貼り付けられたガラスベースディッシュ２０を、倒立型顕微鏡４０の培養容器ホルダ４１上に載置して、観察部形成用シール１０の開口部１１によって形成される観察部の内、細胞操作を行うための観察部を選定する（ステップＳ２）。ここで、上記観察部形成用シール１０は、透明樹脂フィルムからなる支持体で構成されているが、粘着剤層により分解能が損なわれる。そのため、被覆部１２に対応する箇所では、照明装置４２による照明光は透過するとはいえ、細胞の観察には適さない。これに対し、観察部は開口部１１によって形成されているため、分解能を損なうことなく細胞を観察することが可能である。また、上述したように、観察部を形成する開口部１１のサイズは倒立型顕微鏡４０の倍率に基づく視野サイズ相当としている。従って、接眼レンズ４３Ｂ又はモニタ４８により観察しながら、顕微鏡ＸＹステージコントローラ４５及び顕微鏡コントローラ４６の作動により顕微鏡ＸＹステージ４４を作動させて、遺伝子を導入したい細胞を有する観察部を顕微鏡観察下に配置する。
【００３２】
こうして、選定された観察部内の所望の細胞を顕微鏡観察下に配置したならば、その細胞に対する細胞操作として細胞操作装置３０により遺伝子導入の操作を行う（ステップＳ３）。これは、例えば、以下のようにして行われる。
【００３３】
即ち、駆動ユニット制御回路３４Ａの作動により駆動ユニット３３を作動させて、カンチレバー３５の導入針３１を所望細胞の上方から当該細胞に近接移動させる。ガラスベースディッシュ２０の板状ガラス部２２上に播種された細胞は、２μｍ〜１０μｍ程度の厚みしかないため、この近接した位置からの微細な下降は、アクチュエータ制御回路３４Ｂの作動によりＺ軸アクチュエータ３７を作動させることにより行う。
【００３４】
Ｚ軸アクチュエータ３７を作動させることにより、図５（Ａ）に示すように、導入針３１を下降させ板状ガラス部２２へ近づけていく。これにより、導入針３１の先端が下降していく途中において、ガラスベースディッシュ２０内の遺伝子が分散された培養液（以下、ＤＮＡ分散溶液５０）内に進入し、ガラスベースディッシュ２０の板状ガラス部２２上に播種された細胞６０に接触する。ここで、更に導入針３１を下降させていき、細胞膜６１及び核６２に穿孔する。
【００３５】
そして、図５（Ｂ）に示すように、導入針３１の先端が板状ガラス部２２面と接触する位置まで導入針３１を下降させたならば、板状ガラス部２２面との接触位置よりも更に導入針３１を降下させる。これにより、図５（Ｃ）に示すように、導入針３１の先端は板状ガラス部２２面に対して摺動し、この摺動により、底面側も破断し、細胞膜６１の上面側及び底面側の２箇所の破断箇所７０間を貫通する孔が空けられる。
【００３６】
こうして形成された貫通する孔をＤＮＡ分散溶液５０が流通することにより、ＤＮＡ分散溶液５０中に分散した遺伝子が細胞６０内に流入する。
【００３７】
なお、導入針３１を上昇させて導入針３１を細胞６０から引き抜いた後は、ある一定時間が経過すると、細胞膜６１は自己修復により回復し、細胞６０内に遺伝子が取り込まれた状態となる。
【００３８】
このようにして、従来と同様に低侵襲で生存率は高いまま、更に、遺伝子を細胞６０内に確実且つ高い導入効率で導入することができる。
【００３９】
なお、導入針３１の摺動方法は、上記のように板状ガラス部２２面との接触位置よりも更に導入針３１を降下させることにより行う手法に限定されるものではなく、例えば、導入針保持具３２のアーム３２Ａも上記Ｚ軸アクチュエータ３７と同様に積層された圧電素子により構成し、該アーム３２Ａを伸縮させることで、導入針３１の先端が板状ガラス部２２と接触した状態で導入針３１を水平移動させることにより行うこともできる。
【００４０】
あるいは、導入針３１を下降させてその先端がガラスベースディッシュ２０内のＤＮＡ分散溶液５０内に進入したとき、上記アーム３２Ａを作動させることにより、導入針３１の先端を水平方向に振動させながら導入針３１を下降させていくようにしても良い。これにより、導入針３１の先端が下降していく途中において、細胞６０に接触すると、導入針３１の振動によって細胞膜６１に切り込みが形成される。即ち、細胞膜６１は流動性を有し、導入針３１を単に長さ方向に移動させて刺す場合には、細胞膜６１が導入針３１に倣って変形するため細胞膜６１を貫通することができないが、導入針３１をその長手方向に交差する方向に振動させながら長さ方向に移動させることで、細胞膜６１に切り込みを形成し、容易に細胞膜６１を貫通することが可能となる。
【００４１】
その結果、導入針３１を細胞膜６１内の核６２に確実に刺し入れることが可能となる。そして、導入針３１を細胞６０から引き抜き、所定時間にわたって培養することにより、核６２内まで形成された孔にＤＮＡ分散溶液５０中に分散した遺伝子がより確実に導入されることになる。
【００４２】
勿論、駆動ユニット３３で微細なＸＹＺ方向の調整が可能な場合には、Ｚ軸アクチュエータ３７やアーム３２Ａを圧電素子で構成することは不要となる。
【００４３】
以上のようにして、遺伝子の導入操作が行われたならば、ガラスベースディッシュ２０を倒立型顕微鏡４０の培養容器ホルダ４１上から取り外して、更に培養を行うこととなる（ステップＳ４）。
【００４４】
そして所定の期間経過後に、上記遺伝子を導入した細胞６０の経時変化を観察するために、上記更に培養を行ったガラスベースディッシュ２０を倒立型顕微鏡４０の培養容器ホルダ４１上に載置して、上記遺伝子導入操作を行った観察部を視野内に入れる（ステップＳ５）。このとき、ガラスベースディッシュ２０には観察部は、この例では４箇所しかなく、容易に遺伝子導入操作を行った観察部を視野内に入れることができ、また、観察部の周囲は被覆されているため顕微鏡観察下でも観察部の位置を容易に特定できる。従って、遺伝子導入操作を行った細胞を容易に同定できるようになる。
【００４５】
そして、その同定した観察部内の細胞操作された細胞を倒立型顕微鏡４０で観察することとなる（ステップＳ６）。
【００４６】
以上のように、本第１実施形態によれば、観察性能を劣化させずに安価に位置を同定可能とする観察部形成用シールを提供することができ、それによって、観察性能を劣化させずに安価に位置を同定可能な細胞操作・観察における位置同定方法を提供することができる。
【００４７】
［変形例１］
なお、観察部形成用シール１０における観察部を形成するための開口部１１の形状を、図１（Ａ）のような円形とするのではなく、図６（Ａ）又は（Ｂ）に示すように、直線の一辺以上を有するものとしても良い。この場合、それらの図に示すように全ての開口部１１がそうである必要はなく、少なくとも１個が直線の一辺以上を有していれば良い。
【００４８】
これにより、ガラスベースディッシュ２０の配置角度を再現し易くなるので、観察部内の細胞操作（遺伝子導入操作）された細胞の同定をより容易にすることができる。
【００４９】
更に、図６（Ｃ）に示すように、各観察部を形成する各開口部１１の近傍の被覆部上に、各開口部１１を識別するための番号等の識別記号１３を記載することにより、細胞操作（遺伝子導入操作）を行った観察部の位置を容易に特定することができる。
【００５０】
更には、図６（Ｄ）に示すように、各観察部を形成する各開口部１１の配置を方向性を持った配列としても良い。
【００５１】
［変形例２］
また、観察部形成用シール１０における被覆部を、図７に示すように、黒色塗装するなどして、遮光性を有する遮光性被覆部１４とすることができる。
【００５２】
これにより、観察している観察部にのみ照明装置４２による照明光が透過するため、どの観察部を見ているか判別し易い。
【００５３】
［変形例３］
なお、観察部形成用シール１０における観察部つまり開口部１１の個数は上記４個に限定されるものではなく、図８に示すように更に多数であって良い。また逆に、４個よりも少なくても良い。即ち、観察部形成用シール１０は、ガラスベースディッシュ２０の底部を構成する板状ガラス部２２に貼り付けられた際に観察部を形成するための開口部１１が少なくとも１個設けられていれば良い。
【００５４】
［変形例４］
また、観察部形成用シール１０は、ガラスベースディッシュ２０の板状ガラス部２２裏面２２ａに貼り付けるものとしたが、細胞の培養面である表面側に貼り付けることも可能である。
【００５５】
その場合には、まずガラスベースディッシュ２０の板状ガラス部２２の表面に観察部形成用シール１０を貼り付け、その後に、該観察部形成用シール１０が貼り付けられた板状ガラス部２２上の開口面２４ａに対して細胞を撒き、培養液を入れて、細胞を培養することとなる。
【００５６】
［第２実施形態］
図９（Ａ）及び（Ｂ）は、本発明の第２実施形態に係る培養容器としてのガラスベースディッシュ８０の上面図及び断面図である。ここで、上記第１実施形態におけるガラスベースディッシュ２０と同様の構成については、図１（Ｂ）及び（Ｃ）と同様の参照符号を付すことで、その説明を省略する。
【００５７】
本実施形態におけるガラスベースディッシュ８０は、底部を構成する板状ガラス部２２を、少なくとも１個、図では４個の観察部８１を残して被覆部となる塗装膜８２によって被覆している。即ち、上記第１実施形態は、板状ガラス部２２に観察部形成用シール１０を貼り付けることで観察部を形成していたが、本実施形態は、板状ガラス部２２に直接、観察部８１を設けているものである。
【００５８】
ここで、観察部８１のサイズは、視野サイズ相当であることが好ましい。例えば、４０倍対物用であれば直径５００μｍ、２０倍対物用であれば直径１ｍｍ、１０倍対物用であれば直径２ｍｍ、等である。なお、各観察部８１を判別し易くするため、隣接する観察部８１間は、観察部８１のサイズ以上の間隔を開けて配置することが好ましい。
【００５９】
このような構成によれば、観察性能を劣化させずに安価に位置を同定可能とする培養容器を提供することができる。
【００６０】
また、被覆部を、黒色塗装等の遮光性を有する塗装膜８２で形成しているので、観察している観察部８１にのみ照明装置４２による照明光が透過するため、どの観察部８１を見ているか判別し易い。
【００６１】
なお、上記第１実施形態で説明したように、観察部８１の個数は少なくとも１個あれば良く、またその内の少なくとも一つの形状を直線の一辺以上を有するものとしたり、各観察部８１を識別するための識別記号１３を塗装膜８２上に記載したり、各観察部８１を方向性を持った配列で配置するようにしても良い。
【００６２】
また、被覆部を構成する塗装膜８２を細胞の培養面である板状ガラス部２２の表面に形成しているが、板状ガラス部２２の裏面２２ａに設けても良いことは勿論である。
【００６３】
［第３実施形態］
上記第１及び第２実施形態は、培養容器としてガラスベースディッシュを例に説明したが、本発明は、そのようなガラスベースディッシュに限定されるものではなく、カバーガラスチャンバ，スライドガラスチャンバ，ウェルプレートなど、各種、培養容器に適用可能である。
【００６４】
例えば、図１０は、スライドガラスチャンバ９０に上記第１実施形態に係る観察部形成用シール１０を適用した例を示す断面図である。
【００６５】
このスライドガラスチャンバ９０は、１枚の透明なガラス板９１からなる底部９２上にポリスチレンなどの合成樹脂材からなる囲繞隔壁９３を立設して仕切られた複数個の隔室９４を有して形成されている。これにより、各隔室９４の別に底部９２に細胞を付着させるための透明な板状ガラス部９５が構成されることとなる。
【００６６】
そして、その各板状ガラス部９５に、上記観察部形成用シール１０がそれぞれ貼り付けられる。
【００６７】
また、上記観察部形成用シール１０に代えて、上記第２実施形態のような観察部８１を形成するための塗装膜８２による被覆部を各板状ガラス部９５に構成しても良い。
【００６８】
このように、どのような培養容器であっても、上記第１及び第２実施形態と同様の効果を奏することができる。
【００６９】
以上実施形態に基づいて本発明を説明したが、本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨の範囲内で種々の変形や応用が可能なことは勿論である。
【００７０】
（付記）
前記の具体的実施形態から、以下のような構成の発明を抽出することができる。
【００７１】
（１）  培養容器の底部に貼り付けられた際に観察部を形成するための開口部が少なくとも１個設けられた被覆部を備えることを特徴とする観察部形成用シール。
【００７２】
（対応する実施形態）
この（１）に記載の観察部形成用シールに関する実施形態は、第１及び第３実施形態が対応する。それらの実施形態において、例えば、ガラスベースディッシュ２０、スライドガラスチャンバ９０が上記培養容器に、板状ガラス部２２、９５が上記底部に、開口部１１が上記開口部に、被覆部１２が上記被覆部に、観察部形成用シール１０が上記観察部形成用シールに、それぞれ対応する。
【００７３】
（作用効果）
この（１）に記載の観察部形成用シールによれば、観察性能を劣化させずに安価に位置を同定可能とする観察部形成用シールを提供することができる。
【００７４】
（２）  上記観察部を形成するための開口部の内の少なくとも１個が一辺以上の直線部分を有することを特徴とする（１）に記載の観察部形成用シール。
【００７５】
（対応する実施形態）
この（２）に記載の観察部形成用シールに関する実施形態は、第１実施形態の特に変形例１が対応する。
【００７６】
（作用効果）
この（２）に記載の観察部形成用シールによれば、観察部内の細胞操作された細胞の同定をより容易にすることができる。
【００７７】
（３）  当該観察部形成用シールの厚さが１００μｍ以下であることを特徴とする（１）に記載の観察部形成用シール。
【００７８】
（対応する実施形態）
この（３）に記載の観察部形成用シールに関する実施形態は、第１及び第３実施形態が対応する。
【００７９】
（作用効果）
この（３）に記載の観察部形成用シールによれば、液浸対物レンズを使用する顕微鏡においても気泡が入ることなく観察できる。
【００８０】
（４）  上記被覆部が遮光性を有することを特徴とする（１）に記載の観察部形成用シール。
【００８１】
（対応する実施形態）
この（４）に記載の観察部形成用シールに関する実施形態は、第１実施形態の特に変形例２が対応する。その変形例において、例えば、遮光性被覆部１４が上記遮光性を有する被覆部に対応する。
【００８２】
（作用効果）
この（４）に記載の観察部形成用シールによれば、観察している観察部にのみ照明光が透過するため、どの観察部を見ているか判別し易い。
【００８３】
（５）  上記被覆部は上記観察部近傍に識別記号が記されていることを特徴とする（１）に記載の観察部形成用シール。
【００８４】
（対応する実施形態）
この（５）に記載の観察部形成用シールに関する実施形態は、第１実施形態の特に変形例１が対応する。その変形例において、例えば、識別記号１３が上記識別記号に対応する。
【００８５】
（作用効果）
この（５）に記載の観察部形成用シールによれば、細胞操作を行った観察部の位置の特定をより容易にすることができる。
【００８６】
（６）  底部を構成するガラス部が少なくとも１個の観察部を残して被覆部により被覆されていることを特徴とする培養容器。
【００８７】
（対応する実施形態）
この（６）に記載の培養容器に関する実施形態は、第２及び第３実施形態が対応する。それらの実施形態において、例えば、板状ガラス部２２、９５が上記底部を構成するガラス部に、観察部８１が上記観察部に、塗装膜８２が上記被覆部に、ガラスベースディッシュ８０、スライドガラスチャンバ９０が上記培養容器に、それぞれ対応する。
【００８８】
（作用効果）
この（６）に記載の培養容器によれば、観察性能を劣化させずに安価に位置を同定可能とする培養容器を提供することができる。
【００８９】
（７）  上記被覆部が塗装膜であることを特徴とする（６）に記載の培養容器。
【００９０】
（対応する実施形態）
この（７）に記載の培養容器に関する実施形態は、第２及び第３実施形態が対応する。それらの実施形態において、塗装膜８２が上記塗装膜に対応する。
【００９１】
（作用効果）
この（７）に記載の培養容器によれば、観察している観察部にのみ照明光が透過するため、どの観察部を見ているか判別し易い。
【００９２】
（８）  上記観察部の内の少なくとも１個が一辺以上の直線部分を有することを特徴とする（６）に記載の培養容器。
【００９３】
（対応する実施形態）
この（８）に記載の培養容器に関する実施形態は、第２及び第３実施形態が対応する。
【００９４】
（作用効果）
この（８）に記載の培養容器によれば、観察部内の細胞操作された細胞の同定をより容易にすることができる。
【００９５】
（９）  上記被腹部は上記観察部近傍に識別記号が記されていることを特徴とする（６）に記載の培養容器。
【００９６】
（対応する実施形態）
この（９）に記載の培養容器に関する実施形態は、第２及び第３実施形態が対応する。それらの実施形態において、例えば、識別記号１３が上記識別記号に対応する。
【００９７】
（作用効果）
この（９）に記載の培養容器によれば、観察部内の細胞操作された細胞の同定をより容易にすることができる。
【００９８】
（１０）  細胞が培養された培養容器の底部を構成するガラス部の非培養面に、観察部を形成するための開口部が少なくとも１個設けられた被覆部を備える観察部形成用シールを貼り付ける工程と、
上記培養容器を、顕微鏡のステージ上に載置して、上記開口部によって形成される観察部の内、細胞操作を行うための観察部を選定する工程と、
上記選定した観察部内の細胞に対して、細胞操作装置により細胞操作を行う工程と、
上記培養容器を上記顕微鏡のステージ上から取り外して、更に培養を行う工程と、
上記更に培養を行った培養容器を上記顕微鏡のステージ上に載置して、上記細胞操作した観察部を特定する工程と、
上記特定した観察部内の細胞操作された細胞を同定し、上記顕微鏡で観察する工程と、
を有することを特徴とする細胞操作・観察における位置同定方法。
【００９９】
（対応する実施形態）
この（１０）に記載の細胞操作・観察における位置同定方法に関する実施形態は、第１及び第３実施形態が対応する。それらの実施形態において、例えば、ステップＳ１が上記観察部形成用シールを貼り付ける工程に、ステップＳ２が上記観察部を選定する工程に、ステップＳ３が上記細胞操作を行う工程に、ステップＳ４が上記更に培養を行う工程に、ステップＳ５が上記観察部を特定する工程に、ステップＳ５，Ｓ６が上記観察する工程に、それぞれ対応する。
【０１００】
（作用効果）
この（１０）に記載の細胞操作・観察における位置同定方法によれば、観察性能を劣化させずに安価に位置を同定可能な細胞操作・観察における位置同定方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１０１】
【図１】図１（Ａ）は、本発明の第１実施形態に係る観察部形成用シールを示す図であり、図１（Ｂ）及び（Ｃ）は、該観察部形成用シールが貼り付けられた培養容器であるガラスベースディッシュの上面図及び断面図である。
【図２】図２は、ガラスベースディッシュで培養した細胞に対し操作・観察を行うための細胞操作装置及び倒立型顕微鏡の構成を示す図である。
【図３】図３（Ａ）は、カンチレバー近傍の構造を示す拡大図であり、図３（Ｂ）は、カンチレバーの構造を示す拡大図である。
【図４】図４は、本発明の第１実施形態に係る細胞操作・観察における位置同定方法を説明するためのフローチャートを示す図である。
【図５】図５は、細胞操作としての遺伝子導入の方法を説明するための、カンチレバーに設けた導入針の一連の状態を示す図である。
【図６】図６（Ａ）及び（Ｂ）はそれぞれ、直線の一辺以上を有する開口部の例を示す図であり、図６（Ｃ）は、開口部を識別するための識別記号の例を示す図であり、図６（Ｄ）は、方向性を持った開口部の配置の例を示す図である。
【図７】図７は、遮光性被覆部を備える観察部形成用シールを示す図である。
【図８】図８は、１０個の開口部を持つ観察部形成用シールを示す図である。
【図９】図９（Ａ）及び（Ｂ）は、本発明の第２実施形態に係る培養容器としてのガラスベースディッシュの上面図及び断面図である。
【図１０】図１０は、本発明の第３実施形態における培養容器としてのスライドガラスチャンバの断面図である。
【符号の説明】
【０１０２】
１０…観察部形成用シール、  １１…開口部、  １２…被覆部、  １３…シールシート、  １４…遮光性被覆部、  ２０，８０…ガラスベースディッシュ、  ２１…底板部、  ２２，９５…板状ガラス部、  ２３…周側部、  ２４…透孔、  ３０…細胞操作装置、  ３１…導入針、  ４０…倒立型顕微鏡、  ４１…培養容器ホルダ、  ４２…照明装置、  ４３…観察装置、  ４４…ＸＹステージ、  ５０…ＤＮＡ分散溶液、  ６０…細胞、  ８１…観察部、  ８２…塗装膜、  ９０…スライドガラスチャンバ、  ９１…ガラス板、  ９２…底部、  ９３…囲繞隔壁、  ９４…隔室、  Ｓ…接着剤。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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