(57)【要約】【課題】７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸（７，１０−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−８（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ，以下，ＤＯＤ）を有効成分として含む抗菌活性製剤を提供する。【解決手段】シュードモナスエルギノーサ菌株を培養培地で５〜４８時間培養する工程、前記工程の培養液に天然植物性オイルを０．０１〜１０重量％で添加する工程、前記工程の培養液を１〜７日間さらに培養した後、細胞を除去する工程を含む７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を含む培養液の製造方法を提供する。  本発明の方法で生産されたＤＯＤは、広い範囲の多様な微生物に対して高い程度の抗菌活性を示していて抗菌活性製剤として使用することができる。【選択図】図２
2009034097.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１）シュードモナスエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）菌株を培養培地で  ５〜４８時間培養する工程、
２）工程１）の培養液に天然植物性オイルを０．０１〜１０重量％で添加する工程、
３）工程２）の培養液を１〜７日間さらに培養した後、細胞を除去する工程を含む下記化学式（１）の７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸（７，１０−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−８（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ；以下，ＤＯＤ）を含む培養液の製造方法。
【化１】
2009034097.tif 000005
【請求項２】
前記培養培地が、ＹＰＤ培地（１％酵母抽出物、２％ペプトン、２％デキストロース）であること特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記ＹＰＤ培地が、デキストロースの代りにブドウ糖（ｇｌｕｃｏｓｅ）、果糖（ｆｒｕｃｔｏｓｅ）、砂糖（ｓｕｃｒｏｓｅ）、グリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）、キシロース（ｘｙｌｏｓｅ）、ガラクトース（ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、マルトース（ｍａｌｔｏｓｅ）、ラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）などを単独でまたは混合して炭素源として含むことができることを特徴とする、請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】
前記ＹＰＤ培地が、酵母抽出物（ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔ）代りに麦芽エキス（ｍａｌｔ  ｅｘｔｒａｃｔ）、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）、硝酸アンモニウム、ペプトン（ｐｅｐｔｏｎｅ）、トリプトン（ｔｒｙｐｔｏｎｅ）、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、尿素（ｕｒｅａ）などを単独で、または混合して窒素源として含むことができることを特徴とする、請求項２に記載の製造方法。
【請求項５】
工程２）の天然植物性オイルが、オレイン酸を含むことを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
【請求項６】
工程２）の天然植物性オイルが、オリーブ油、紅花種油、大豆油、とうもろこし油、胡麻種子油、荏胡麻種子油、ブドウ種油、唐辛子種油、キャノーラ油、ひまわり種油、まくわ瓜種油、菜種油、米油、トリオレインなどを単独でまたは混合して使用することができることを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法によって製造されたＤＯＤを含む培養液。
【請求項８】
請求項７に記載のＤＯＤを含んだ培養液から有機溶媒を使用して７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を回収する工程を含む、７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸の生産方法。
【請求項９】
前記有機溶媒が、エチルアセテート、ジエチルエーテル、ブタノールまたはＮ−ヘキサンであることを特徴とする、請求項８に記載の生産方法。
【請求項１０】
追加的にクロマトグラフィーを使用して回収液から７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を純粋分離する工程を含むことを特徴とする、請求項８に記載の生産方法。
【請求項１１】
化学式（１）の７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を有効成分として含む抗菌活性製剤。
【化２】
2009034097.tif 000006
【請求項１２】
前記抗菌活性製剤が、グラム陽性あるいはグラム陰性バクテリアに対して抗菌活性を示すことを特徴とする、請求項１１に記載の抗菌活性製剤。
【請求項１３】
下記化学式（１）の７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を食品に添加する工程を含む、食品内の有害微生物の生長抑制方法。
【化３】
2009034097.tif 000007
【請求項１４】
前記有害微生物が、グラム陽性及びグラム陰性バクテリアであることを特徴とする、請求項１３に記載の生長抑制方法。
【請求項１５】
前記有害微生物が、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、スタフィロコッカス・エピダーミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・セサミ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｅｓａｍｉ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・アクチニダエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄａｅ）、エルビニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｓｐ．）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・シリンガ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、ラルストニア・ソラナセラム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、ゲオトリクム・キャンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ）、リゾクトニア ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、コレトトリチューム・カプシシ（Ｃｏｌｌｅｃｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｐｓｉｃｉ）、フザリウム・オキスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フィトフトラ・カプシシ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｏｒａ  ｃａｐｓｉｃｉ）、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、エルニシア・シュードツベクロシス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、アルカノバクテリウム・ヘモリチカム（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、エンテロバクター・インターメディウス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、アグロバクテリウム・トゥメファシエンス（Ａｇｒｏｂｃａｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、クラビバクター・ミシガネンシス（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ）、エルウィニア・クリサンテミ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、エルウィニア・カロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、エルウィニア・アロイデアエ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｒｏｉｄｅａｅ）、シュードモナス・コラプタ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｐｔａ）、シュードモナス・ソラナセアルム（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｏｌａｎａｓｅａｒｕｍ）、シュードモナス・グラディオリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・プラニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉ  ｐｖ．ｐｒａｎｉ）、ボトリオスファエリア・ドチデア（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｄｏｔｈｉｄｅａ）、コ��トリカム・グロエスポリオデス（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｄｅｓ）、コレトリカム・アクツアツム（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ａｃｕｔｕａｔｕｍ）、アシドボラ・アンスリー・スペキエス・ノヴァ・アグロバクテリウム属（Ａｃｉｄｏｖｏｒａ  ａｎｔｈｕｒｉｉ  ｓｐ．Ｎｏｖ  Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、マレセチア・フルフル（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ）、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）、トリコフィートン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィートン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ）、エピデルモフィトン フロコサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・コルガタ（Ｐｓｅｏｄｕｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ）、キサントモナス・アリソノボティス・パソバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、カンジダ・アスビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｒｕｂｒａ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、トリコスポロン・ベイゲリ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、ピチア・メメブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｅｂｒａｎｅｆａｃｉｅｎｓ）及びコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１３に記載の生長抑制方法。
【請求項１６】
請求項７に記載の培養液または下記化学式（１）の７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を、微生物の成長を抑制することができる濃度で土壌または植物体に処理する工程を含む、有害微生物の生長抑制方法。
【化４】
2009034097.tif 000008
【請求項１７】
前記濃度が、土壌または植物体の表面積ｍ２当たり０．０００１ｍｇ〜５０，０００ｍｇであることを特徴とする、請求項１６に記載の有害微生物の生長抑制方法。
【請求項１８】
前記有害微生物が、グラム陽性及びグラム陰性バクテリアであることを特徴とする、請求項１６に記載の生長抑制方法。
【請求項１９】
前記有害微生物が、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、スタフィロコッカス・エピダーミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・セサミ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｅｓａｍｉ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・アクチニダエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄａｅ）、エルビニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｓｐ．）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・シリンガ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、ラルストニア・ソラナセラム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、ゲオトリクム・キャンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ）、リゾクトニア ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、コレトトリチューム・カプシシ（Ｃｏｌｌｅｃｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｐｓｉｃｉ）、フザリウム・オキスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フィトフトラ・カプシシ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｏｒａ  ｃａｐｓｉｃｉ）、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、エルニシア・シュードツベクロシス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、アルカノバクテリウム・ヘモリチカム（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、エンテロバクター・インターメディウス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、アグロバクテリウム・トゥメファシエンス（Ａｇｒｏｂｃａｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、クラビバクター・ミシガネンシス（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ）、エルウィニア・クリサンテミ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、エルウィニア・カロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、エルウィニア・アロイデアエ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｒｏｉｄｅａｅ）、シュードモナス・コラプタ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｐｔａ）、シュードモナス・ソラナセアルム（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｏｌａｎａｓｅａｒｕｍ）、シュードモナス・グラディオリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・プラニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉ  ｐｖ．ｐｒａｎｉ）、ボトリオスファエリア・ドチデア（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｄｏｔｈｉｄｅａ）、コ��トリカム・グロエスポリオデス（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｄｅｓ）、コレトリカム・アクツアツム（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ａｃｕｔｕａｔｕｍ）、アシドボラ・アンスリー・スペキエス・ノヴァ・アグロバクテリウム属（Ａｃｉｄｏｖｏｒａ  ａｎｔｈｕｒｉｉ  ｓｐ．Ｎｏｖ  Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、マレセチア・フルフル（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ）、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）、トリコフィートン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィートン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ）、エピデルモフィトン フロコサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・コルガタ（Ｐｓｅｏｄｕｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ）、キサントモナス・アリソノボティス・パソバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、カンジダ・アスビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｒｕｂｒａ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、トリコスポロン・ベイゲリ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、ピチア・メメブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｅｂｒａｎｅｆａｃｉｅｎｓ）及びコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１６に記載の生長抑制方法。
【請求項２０】
化学式（１）の７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を病原性微生物に感染された個体に、前記病原性微生物を殺菌することができる程度の量で投与する工程を含む、前記個体で前記病原性微生物による感染症を治療する方法。
【化５】
2009034097.tif 000009
【請求項２１】
投与量が、体重１ｋｇ当たり０．０００１ｍｇ〜５０，０００ｍｇであることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記対象微生物が、グラム陽性及びグラム陰性バクテリアであることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記病原性微生物が、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、スタフィロコッカス・エピダーミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・セサミ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｅｓａｍｉ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・アクチニダエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄａｅ）、エルビニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｓｐ．）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・シリンガ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、ラルストニア・ソラナセラム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、ゲオトリクム・キャンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ）、リゾクトニア ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、コレトトリチューム・カプシシ（Ｃｏｌｌｅｃｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｐｓｉｃｉ）、フザリウム・オキスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フィトフトラ・カプシシ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｏｒａ  ｃａｐｓｉｃｉ）、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、エルニシア・シュードツベクロシス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、アルカノバクテリウム・ヘモリチカム（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、エンテロバクター・インターメディウス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、アグロバクテリウム・トゥメファシエンス（Ａｇｒｏｂｃａｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、クラビバクター・ミシガネンシス（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ）、エルウィニア・クリサンテミ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、エルウィニア・カロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、エルウィニア・アロイデアエ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｒｏｉｄｅａｅ）、シュードモナス・コラプタ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｐｔａ）、シュードモナス・ソラナセアルム（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｏｌａｎａｓｅａｒｕｍ）、シュードモナス・グラディオリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・プラニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉ  ｐｖ．ｐｒａｎｉ）、ボトリオスファエリア・ドチデア（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｄｏｔｈｉｄｅａ）、��レトリカム・グロエスポリオデス（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｄｅｓ）、コレトリカム・アクツアツム（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ａｃｕｔｕａｔｕｍ）、アシドボラ・アンスリー・スペキエス・ノヴァ・アグロバクテリウム属（Ａｃｉｄｏｖｏｒａ  ａｎｔｈｕｒｉｉ  ｓｐ．Ｎｏｖ  Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、マレセチア・フルフル（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ）、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）、トリコフィートン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィートン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ）、エピデルモフィトン フロコサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・コルガタ（Ｐｓｅｏｄｕｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ）、キサントモナス・アリソノボティス・パソバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、カンジダ・アスビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｒｕｂｒａ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、トリコスポロン・ベイゲリ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、ピチア・メメブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｅｂｒａｎｅｆａｃｉｅｎｓ）及びコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
化学式（１）の７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を個体に、病原性微生物の増殖を抑制することができる量で投与する工程を含む、前記個体で前記病原性微生物による感染症を予防する方法。
【化６】
2009034097.tif 000010
【請求項２５】
投与量が、体重１ｋｇ当たり０．０００１ｍｇ〜５０，０００ｍｇであることを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象微生物が、グラム陽性及びグラム陰性バクテリアであることを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記病原性微生物が、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、スタフィロコッカス・エピダーミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・セサミ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｅｓａｍｉ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・アクチニダエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄａｅ）、エルビニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｓｐ．）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・シリンガ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、ラルストニア・ソラナセラム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、ゲオトリクム・キャンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ）、リゾクトニア ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、コレトトリチューム・カプシシ（Ｃｏｌｌｅｃｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｐｓｉｃｉ）、フザリウム・オキスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フィトフトラ・カプシシ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｏｒａ  ｃａｐｓｉｃｉ）、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、エルニシア・シュードツベクロシス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、アルカノバクテリウム・ヘモリチカム（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、エンテロバクター・インターメディウス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、アグロバクテリウム・トゥメファシエンス（Ａｇｒｏｂｃａｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、クラビバクター・ミシガネンシス（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ）、エルウィニア・クリサンテミ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、エルウィニア・カロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、エルウィニア・アロイデアエ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｒｏｉｄｅａｅ）、シュードモナス・コラプタ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｐｔａ）、シュードモナス・ソラナセアルム（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｏｌａｎａｓｅａｒｕｍ）、シュードモナス・グラディオリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・プラニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉ  ｐｖ．ｐｒａｎｉ）、ボトリオスファエリア・ドチデア（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｄｏｔｈｉｄｅａ）、��レトリカム・グロエスポリオデス（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｄｅｓ）、コレトリカム・アクツアツム（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ａｃｕｔｕａｔｕｍ）、アシドボラ・アンスリー・スペキエス・ノヴァ・アグロバクテリウム属（Ａｃｉｄｏｖｏｒａ  ａｎｔｈｕｒｉｉ  ｓｐ．Ｎｏｖ  Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、マレセチア・フルフル（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ）、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）、トリコフィートン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィートン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ）、エピデルモフィトン フロコサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・コルガタ（Ｐｓｅｏｄｕｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ）、キサントモナス・アリソノボティス・パソバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、カンジダ・アスビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｒｕｂｒａ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、トリコスポロン・ベイゲリ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、ピチア・メメブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｅｂｒａｎｅｆａｃｉｅｎｓ）及びコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を有効成分として含む抗菌活性製剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ヒドロキシ脂肪酸（Ｈｙｄｒｏｘｙ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ、ＨＦＡ）は、脂肪酸の中心鎖に一つ以上のヒドロキシル基を連結した形態の化合物で、前記ヒドロキシル基によって脂肪酸が高い粘性または反応性などの特異な性質を有するようにする。前記特異な性質によってＨＦＡは、多様な生理活性機能を有することができ、その結果、新農薬、新医薬、高機能性レジン及び繊維素材、生分解性プラスチック素材、滑剤、化粧品、ペイントなどの産業全般に幅広く応用され得る。従来、キャスターオイル（ヒマシ油）の誘導体であるリシノール酸やセバシン酸などが、新機能性、高効率ポリマーの合成素材として一部使用されており、これは米政府によって産業的必須物質に分類されている。前記ＨＦＡは、連結されているヒドロキシル基の数によって、モノ−、ジ−、トリ−ヒドロキシ脂肪酸に分類されて、ヒドロキシル基以外に別途の構造を含むエポキシヒドロキシ脂肪酸やオキソヒドロキシ脂肪酸なども含まれる。
【０００３】
ヒドロキシ脂肪酸の多くの機能性が知られているが、自然界に存在するヒドロキシ脂肪酸は、植物体内に微量存在することが知られている。したがって、微生物を使用してヒドロキシ脂肪酸を生産しようとする研究が試みられている。フラボバクテリウム属ＤＳ５（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ  ＤＳ５）は、オレイン酸から１０−ヒドロキシ−オクタデカジエン酸を生産することができることが報告された。これは、前記微生物の１０−特異的ヒドラターゼ（１０−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｈｙｄｒａｔａｓｅ）によって成り立つと推測される。シュードモナスエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＲ３の場合は、もう少し広い範囲の基質を使用してモノ−、ジ−、トリ−ヒドロキシ脂肪酸を生産することができることが知られている（非特許文献１）。
【０００４】
最近、ＨＦＡ等が多様な生理活性を示していることが報告されている。ＨＦＡの中で三個のヒドロキシ基を有する１２，１３，１７−トリヒドロキシ−９（Ｚ）−オクタデセン酸は、植物病原性カビに対して生長阻害能力を有することが報告された（非特許文献２）。脂肪酸とその誘導体の抗菌活性も知られていて、生変換したＥＰＡ（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）とＤＨＡ（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）の場合、食中毒菌に対する抗菌活性が報告されていて（非特許文献３）、活性物質の正体は知られていないが、シュードモナスによって生変換したリノール酸やリシノール酸の抽出物が様々な細菌に対する抗菌活性を示すことが報告された（非特許文献４、非特許文献５）。
【０００５】
以上のことに鑑みて本発明者等は、天然植物性オイルを基質に使用して、微生物によって生産された物質が７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸であることと、前記化合物が抗菌活性を示すことを確認することにより本発明を完成した。
【非特許文献１】Ｃｈａｎｇ，Ｉ．Ａ．等，Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００７年，第７４卷，３０１−３０６頁
【非特許文献２】Ｈｏｕ，Ｃ．Ｔ．＆  Ｆｏｒｍａｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｊ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０００年，第２４卷，２７５−２７６頁
【非特許文献３】Ｓｈｉｎ，Ｓ．Ｙ．等，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００７年，第１１３卷，２３３−２３６頁
【非特許文献４】Ｓｈｉｎ，Ｓ．Ｙ．等，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５年，第４８卷，１６７−１６９頁
【非特許文献５】Ｓｈｉｎ，Ｓ．Ｙ．等，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００４年，第４７卷，２０５−２０８頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、天然植物性オイルを基質にして、微生物によって生産された抗菌活性を有する７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸及びそれを含む培養液の製造方法を提供することである。
【０００７】
また、本発明の目的は、前記製造方法によって製造されたＤＯＤを含む培養液を提供することである。
【０００８】
また、本発明の目的は、前記培養液から有機溶媒を使用して、７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を生産する方法を提供することである。
【０００９】
また、本発明の目的は、前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を有効成分として含む抗菌活性製剤を提供することである。
【００１０】
また、本発明の目的は、前記培養液または前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を使用した食品、または環境の有害微生物の生長抑制方法を提供することである。
【００１１】
さらに、本発明の目的は、前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を使用した個体で前記病原性微生物による感染症を治療または予防する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
前記目的を達成するために、本発明は、
１）シュードモナスエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）菌株を培養培地で５〜４８時間培養する工程、
２）工程１）の培養液に天然植物性オイルを０．０１〜１０重量％で添加する工程、
３）工程２）の培養液を１〜７日間さらに培養した後、細胞を除去する工程を含む下記化学式（１）の７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸（７，１０−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−８（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）を含む培養液の製造方法を提供する。
【００１３】
【化１】
2009034097.tif 000003
【００１４】
また、本発明は、前記製造方法によって製造されたＤＯＤを含む培養液を提供する。
【００１５】
また、本発明は前記ＤＯＤを含んだ培養液から有機溶媒を使用して７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を回収する工程を含む  ７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸の生産方法を提供する。
【００１６】
また、本発明は前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を有効成分として含む抗菌活性製剤を提供する。
【００１７】
また、本発明は前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を食品に添加する工程を含む食品内の有害微生物の生長抑制方法を提供する。
【００１８】
また、本発明は、前記培養液または前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を微生物の成長を抑制することができる濃度で土壌または植物体に処理する工程を含む、有害微生物の生長抑制方法を提供する。
【００１９】
また、本発明は、前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を病原性微生物に感染した個体に、前記病原性微生物を殺菌することができる程度の量で投与する工程を含む、前記個体で前記病原性微生物による感染症を治療する方法を提供する。
【００２０】
同時に、本発明は、個体に前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を病原性微生物の増殖を抑制することができる量で投与する工程を含む、前記個体で前記病原性微生物による感染症を予防する方法を提供する。
【００２１】
以下、本発明を詳しく説明する。
【００２２】
前記目的を達成するために、本発明は、
１）シュードモナスエルギノーサ菌株を培養培地で５〜４８時間培養する工程、
２）工程１）の培養液に天然植物性オイルを０．０１〜１０重量％で添加する工程、
３）工程２）の培養液を１〜７日間さらに培養した後、細胞を除去する工程を含む下記の化学式（１）の７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸（７，１０−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−８（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ；以下、ＤＯＤ）を含む培養液の製造方法を提供する。
【００２３】
【化２】
2009034097.tif 000004
【００２４】
前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸（ＤＯＤ）は、化学的に合成したり微生物によって生産したりすることもできるが、好ましくはオレイン酸、トリオレインまたはオレイン酸を含む天然植物性オイルを基質に使用してシュードモナスエルギノーサ微生物によって生産することを特徴とする。
【００２５】
本発明の好ましい実施例で、紅花種油、ごま油、オリーブ油またはオリーブとぶどう種油混合物を基質にしてシュードモナスエルギノーサＰＲ３を培養した結果、天然植物性オイルと培養抽出物から差を示すスポット（矢印）が確認され（図１参照）、前記スポットにあたる物質のみを回収することができた（図４参照）。前記物質をガスクロマトグラフィー／質量分析器を通じてＤＯＤであることを確認し、前記ＤＯＤは、ヒドロキシ脂肪酸の一種で炭素数１８個の脂肪酸鎖上に７番炭素と１０番炭素に各々１個ずつ総２個のヒドロキシル基を有し、８番炭素と９番炭素との間に１個のトランス二重結合を含んでいる構造を特徴とする（図２及び図３参照）。
【００２６】
工程１）のシュードモナスエルギノーサ菌株は、シュードモナスエルギノーサＰＲ３（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＲ３）（ＮＲＲＬ  Ｂ−１８６０２）であることが好ましい。前記菌株は、米国農産部研究所微生物保管所（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，米国）に受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−１８６０２で寄託されている。
【００２７】
工程１）のシュードモナスエルギノーサの培養時間は５〜４８時間で、好ましくは２４時間である。また、培養温度は１０℃〜４５℃で、好ましくは２８℃で、培地のｐＨは４．０〜１０．０で、好ましくはｐＨ７．０である。また、前記培養培地は好ましくはＹＰＤ培地（１％酵母抽出物，２％ペプトン，２％デキストロース）で、前記ＹＰＤ培地はデキストロースの代りにブドウ糖、果糖、砂糖、グリセロール、キシロース、ガラクトース、マルトース、ラクトースなどを単独で、または混合して炭素源の代わりとして含むことができ、酵母抽出物の代りに、麦芽エキス、グルタミン、硝酸アンモニウム、ペプトン、トリプトン、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、尿素などを単独で、または混合して窒素源として含むことができる。
【００２８】
工程２）の天然植物性オイルは、オレイン酸、トリオレイン酸またはオレイン酸を含むいかなる天然植物性オイルであってもよく、好ましくはオリーブ油、紅花種油、大豆油、とうもろこし油、ごま種子油、えごま種子油、ぶどう種油、唐辛子種油、キャノーラ油、ひまわり種油、まくわ瓜種油、菜種油、米油、トリオレインなどを単独でまたは混合して使用することができるが、これらに限定されるものではない。前記天然植物性オイルは、従来天然植物の種子や実からオイルを抽出するのに多く使用されてきた溶媒抽出法や加圧抽出法など、様々な方法でも準備することができ、市販のものを手軽に購入することもできる。前記天然植物性オイルは、０．０１〜１０重量％で工程１）の培養液に添加することができ、好ましくは１重量％で添加することができる。
【００２９】
工程３）の培養期間は、１〜７日で、好ましくは３日である。
【００３０】
また、本発明は、前記製造方法によって製造されたＤＯＤを含む培養液を提供する。
【００３１】
本発明の培養液は、グラム陽性またはグラム陰性のすべてのバクテリアに対して抗菌活性を示すことを特徴とする。本発明の実施例で前記培養液の粗抽出物の多様な微生物に対する抗菌活性を固体アガー培地または液体培地を使用して調査した結果、３ｍｇ程度を処理した時、高い抗菌活性を示した（図５参照）。また、前記培養液から分離した７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸は、多様な微生物に対して高い抗菌活性を示し、グラム陽性とグラム陰性の両方の場合に抗菌活性を示していて、グラム染色による別途の特異性は示されないことを確認した（図７及び図８参照）。すなわち、本発明の培養液に含有されるＤＯＤの多様な微生物に対する抗菌活性を確認したので、本発明のＤＯＤは、これら微生物によって誘発される人体、動物体及び植物体の感染症の治療または予防または食品の腐敗予防にも非常に効果的である。
【００３２】
また、本発明は、前記ＤＯＤを含んだ培養液から有機溶媒を使用して７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を回収する工程を含む、７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸生産方法を提供する。
【００３３】
前記有機溶媒は、エチルアセテート、ジエチルエーテル、ブタノール、Ｎ−ヘキサンなどを単独でまたは混合して使用することができるが、それらに限定されるものではない。本発明の具体的な実施例では、培養液と同量のエチルアセテートとジエチルエーテルに各々２回にわたって順次に抽出した後、抽出物を回転蒸発器で濃縮する方法によって遂行した。
【００３４】
また、本発明の生産方法は、さらにクロマトグラフィーを使用して前記回収液から７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を純粋分離する工程を含むことができる。前記純粋分離は、前記クロマトグラフィー外にも溶融点の差を使用した結晶化方法、分留を使用する方法、カラムクロマトグラフィー法を使用することができるが、それらに限定されるものではない。本発明の具体的な実施例では、薄層クロマトグラフィーを使用して純粋分離した（図１参照）。
【００３５】
また、本発明は、前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を有効成分として含む抗菌活性製剤を提供する。
【００３６】
本発明の抗菌活性製剤は、グラム陽性またはグラム陰性のすべてのバクテリアに対して抗菌活性を示すことを特徴とする。本発明の実施例で前記抗菌活性製剤の多様な微生物に対する抗菌活性を、固体アガー培地または液体培地を使用して調査した結果、５ｍｇ程度を処理した時に非常に高い抗菌活性を示していて、これは市販されている抗菌軟膏であるムピロシン（ｍｕｐｉｒｏｃｉｎ）を有効成分として含有するバクトロバン（商品名）の抗菌活性と類似の程度を示した（図５参照）。また、多様な微生物に対して高い抗菌活性を示し、グラム陽性とグラム陰性の両方の場合に抗菌活性を示して、グラム染色による別途の特異性は示さないことを確認した（図７及び図８参照）。すなわち、本発明の抗菌活性製剤に有効成分として含まれるＤＯＤの抗菌活性を確認したので、産業上、抗菌製剤として非常に有用に使用されることが期待される。また、本発明のＤＯＤは、多様な微生物に対して力強い抗菌活性を示すので、これら微生物によって誘発される人体、動物体及び植物体の感染症の治療または予防または食品の腐敗予防にも非常に効果的である。
【００３７】
本発明の抗菌活性製剤における、有効成分であるＤＯＤの含有量は、製剤方法及び使用目的によって異なるが、普通は個体１ｋｇ当たり０．０００１〜２０００ｍｇの範囲で決定することができる。
【００３８】
本発明の抗菌活性製剤は、通常の製剤化方法を使用して散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、軟質カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアゾールなどの経口投与用製剤、外用剤、座薬及び滅菌注射溶液などの非経口投与用製剤に剤形化して使用することができる。経口投与のための固形製剤は、さらに少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、カルシュムカーボネート、スクロースまたはラクトース、ゼラチンなどを混ぜて調剤される。また単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウム、タルクのような滑剤も使用される。経口のための液状製剤では、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当し、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味料、芳香剤、保存剤などを含むことができる。また、非経口投与のための製剤は、滅菌水溶液、液剤、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、座薬などが含まれる。懸濁剤では、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレイン酸のような注射可能なエステルなどが使用できる。座薬の基剤では、ハードファット（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴ−ル、ツイーン６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使用できる。
【００３９】
非経口投与は、全身投与または局所投与が可能だが、全身投与がより好ましい。具体的には、硬皮内、筋肉内、静脈内または腸を通過するように投与される。非経口投与のために注射器や滴注法（ｄｒｉｐ法）、座薬を使用して投与したり軟膏剤の形態で皮膚に塗布したりして使用することができる。
【００４０】
本発明の抗菌活性製剤の投与量は、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路及び期間によって異なるが、当業者によって適切に選択され得る。しかし、好ましい効果のため、本発明の抗菌活性製剤は、１日に０．０００１〜１０００ｍｇ／ｋｇで、１００〜２００ｍｇ／ｋｇで投与するのが好ましい。投与は、一日に一度投与することもでき、数回に分けて投与することもできる。前記投与量と投与方法は、いかなる面においても本発明の範囲を限定するものではない。
【００４１】
本発明の抗菌活性製剤は、食品の腐敗予防のために前記抗菌活性製剤の浸漬液に食品を浸漬して使用し、必要によって食品に噴霧して使用することもでき、そのまま添加したり他の食品または食品成分とともに使用したりすることができ、通常的な方法によって適切に一般的な食品すべてに適用することができる。食品を浸漬する場合、抗菌活性製剤の濃度と浸漬時間は、抗菌活性があまり低くない濃度で食品に影響を与えない範囲で使用することが好ましい。一般的に、食品または飲料の製造に使用される場合には、本発明の抗菌活性製剤は原料に対して１５重量部以下で、１０重量部以下の量で添加するのが好ましい。
【００４２】
本発明の抗菌活性製剤は、植物病原性細菌の殺菌及び予防のために植物体の種子及び植物体自体に使用することができ、必要によって噴霧して使用したり浸漬して使用したりすることもでき、そのまま噴霧したり他の剤形製剤とともに使用したりすることができ、通常的な方法によって適切に一般的な植物体すべてに適用することができる。噴霧の形態で使用する場合、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤などの形態に製剤化した後、必要な程度にしたがって水溶液に希釈して使用することができる。植物体種子を浸漬する場合、抗菌活性製剤の濃度と浸漬時間は、抗菌活性があまり低くない濃度で種子に影響を与えない範囲で使用することが好ましい。
【００４３】
また、本発明は、前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を食品に添加する工程を含む、食品内有害微生物の生長抑制方法を提供する。
【００４４】
本発明の前記ＤＯＤは、食品の腐敗予防のために前記ＤＯＤの浸漬液に食品を浸漬して使用し、必要によって食品に噴霧して使用することもでき、そのまま添加したり他の食品または食品成分とともに使用したりすることができ、通常的な方法によって適切に一般的な食品すべてに適用することができる。食品を浸漬する場合、ＤＯＤの濃度と浸漬時間は、抗菌活性があまり低くない濃度で食品に影響を与えない範囲で使用することが好ましい。一般的に、食品または飲料の製造に使用する場合には、本発明のＤＯＤは原料に対して１５重量部以下で、１０重量部以下の量で添加するのが好ましい。
【００４５】
本発明の好ましい実施例で前記ＤＯＤの量を変えて多くの微生物に対する抗菌活性を確認した結果、ある程度のＤＯＤ処理濃度以上では微生物が成長しなくて、ＤＯＤが液体培地上でも微生物の成長を抑制して抗菌活性を示していることを確認することができ（図６参照）、前記結果を基に多くの微生物に対する微生物が成長しないＤＯＤ濃度を最小制限濃度として決定した（図７及び図８参照）。
【００４６】
前記有害微生物は、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、スタフィロコッカス・エピダーミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・セサミ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｅｓａｍｉ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・アクチニダエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄａｅ）、エルビニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｓｐ．）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・シリンガ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、ラルストニア・ソラナセラム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、ゲオトリクム・キャンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ）、リゾクトニア ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、コレトトリチューム・カプシシ（Ｃｏｌｌｅｃｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｐｓｉｃｉ）、フザリウム・オキスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フィトフトラ・カプシシ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｏｒａ  ｃａｐｓｉｃｉ）、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、エルニシア・シュードツベクロシス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、アルカノバクテリウム・ヘモリチカム（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、エンテロバクター・インターメディウス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、アグロバクテリウム・トゥメファシエンス（Ａｇｒｏｂｃａｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、クラビバクター・ミシガネンシス（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ）、エルウィニア・クリサンテミ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、エルウィニア・カロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、エルウィニア・アロイデアエ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｒｏｉｄｅａｅ）、シュードモナス・コラプタ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｐｔａ）、シュードモナス・ソラナセアルム（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｏｌａｎａｓｅａｒｕｍ）、シュードモナス・グラディオリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・プラニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉ  ｐｖ．ｐｒａｎｉ）、ボトリオスファエリア・ドチデア（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｄｏｔｈｉｄｅａ）、コ��トリカム・グロエスポリオデス（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｄｅｓ）、コレトリカム・アクツアツム（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ａｃｕｔｕａｔｕｍ）、アシドボラ・アンスリー・スペキエス・ノヴァ・アグロバクテリウム属（Ａｃｉｄｏｖｏｒａ  ａｎｔｈｕｒｉｉ  ｓｐ．Ｎｏｖ  Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、マレセチア・フルフル（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ）、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）、トリコフィートン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィートン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ）、エピデルモフィトン フロコサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・コルガタ（Ｐｓｅｏｄｕｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ）、キサントモナス・アリソノボティス・パソバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、カンジダ・アスビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｒｕｂｒａ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、トリコスポロン・ベイゲリ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、ピチア・メメブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｅｂｒａｎｅｆａｃｉｅｎｓ）及びコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）からなる群から選択されるが、それに制限されるものではなく、グラム陽性及びグラム陰性に分類されるどんな微生物も該当し得る。
【００４７】
また、本発明は、前記培養液または前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を微生物の成長を抑制することができる濃度で土壌または植物体に処理する工程を含む、有害微生物の生長抑制方法を提供する。
【００４８】
本発明の培養液またはＤＯＤは、植物病原性細菌の殺菌及び予防のために植物体の種子及び植物体自体に使用することができ、必要に応じて噴霧して使用したり浸漬して使用したりすることもでき、そのまま噴霧したり他の剤形製剤とともに使用したりすることができ、通常的な方法によって適切に一般的な植物体すべてに適用することができる。噴霧の形態で使用する場合、液剤、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤などの形態に製剤化した後、必要な程度にしたがって水溶液に希釈して使用することができる。植物体種子を浸漬する場合、培養液またはＤＯＤの濃度と浸漬時間は、抗菌活性があまり低くない濃度で種子に影響を与えない範囲で使用するのが好ましい。
【００４９】
前記濃度は、有害微生物によって変化し得るので特定の濃度に制限されないが、好ましくは土壌または植物体の表面積ｍ２当たり０．０００１ｍｇ〜５０，０００ｍｇであることを特徴とする。
【００５０】
また、本発明は、前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を病原性微生物に感染した個体に前記病原性微生物を殺菌することができる程度の量で投与する工程を含む、前記個体で前記病原性微生物による感染症を治療する方法を提供する。
【００５１】
同時に、本発明は、前記７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸を個体に病原性微生物の増殖を抑制することができる量で投与する工程を含む、前記個体で前記病原性微生物による感染症を予防する方法を提供する。
【００５２】
前記投与量は、有害微生物によって変化し得るので特定量に制限されないが、好ましくは体重１ｋｇ当たり０．０００１ｍｇ〜５０，０００ｍｇであることを特徴とする。
【００５３】
前記病原性微生物は、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、スタフィロコッカス・エピダーミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・セサミ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｅｓａｍｉ）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・アクチニダエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄａｅ）、エルビニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｓｐ．）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・シリンガ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、ラルストニア・ソラナセラム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、ゲオトリクム・キャンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ）、リゾクトニア ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、コレトトリチューム・カプシシ（Ｃｏｌｌｅｃｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｐｓｉｃｉ）、フザリウム・オキスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フィトフトラ・カプシシ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｏｒａ  ｃａｐｓｉｃｉ）、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、エルニシア・シュードツベクロシス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、アルカノバクテリウム・ヘモリチカム（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、エンテロバクター・インターメディウス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、アグロバクテリウム・トゥメファシエンス（Ａｇｒｏｂｃａｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、クラビバクター・ミシガネンシス（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ）、エルウィニア・クリサンテミ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、エルウィニア・カロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、エルウィニア・アロイデアエ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｒｏｉｄｅａｅ）、シュードモナス・コラプタ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｐｔａ）、シュードモナス・ソラナセアルム（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｏｌａｎａｓｅａｒｕｍ）、シュードモナス・グラディオリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス・パスバー・プラニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉ  ｐｖ．ｐｒａｎｉ）、ボトリオスファエリア・ドチデア（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｄｏｔｈｉｄｅａ）、��レトリカム・グロエスポリオデス（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｄｅｓ）、コレトリカム・アクツアツム（Ｃｏｌｌｅｔｏｒｉｃｕｍ  ａｃｕｔｕａｔｕｍ）、アシドボラ・アンスリー・スペキエス・ノヴァ・アグロバクテリウム属（Ａｃｉｄｏｖｏｒａ  ａｎｔｈｕｒｉｉ  ｓｐ．Ｎｏｖ  Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、マレセチア・フルフル（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ）、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）、トリコフィートン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィートン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ）、エピデルモフィトン フロコサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・コルガタ（Ｐｓｅｏｄｕｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ）、キサントモナス・アリソノボティス・パソバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、カンジダ・アスビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｒｕｂｒａ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、トリコスポロン・ベイゲリ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、ピチア・メメブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｅｂｒａｎｅｆａｃｉｅｎｓ）及びコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）からなる群から選択されるが、これに制限されるものではなく、グラム陽性及びグラム陰性に分類されるいかなる微生物も該当し得る。
【００５４】
また、前記方法が適用され得る個体は、動物及び植物で、動物個体は脊椎動物で好ましくは哺乳動物であり、さらに好ましくはヒトを除いた哺乳動物であり、それより好ましくはネズミ、ウサギ、ギニアピーク、ハムスター、犬、猫のような実験動物で、チンパンジー、ゴリラのような類人猿類動物が最も好ましい。また、前記方法が適用され得る植物個体は、種子植物と胞子植物に分類されるすべての植物体、被子植物と裸子植物に分類されるすべての植物体、双子葉植物と単子葉植物に分類されるすべての植物体が該当する。
【発明の効果】
【００５５】
本発明のＤＯＤは、多様な微生物に対して力強い抗菌活性を示すので、これら微生物によって誘発される人体、動物体及び植物体の感染症の治療または予防または食品の腐敗予防にも非常に効果的である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５６】
以下、実施例を通じて本発明をさらに詳しく説明する。これらの実施例は単に本発明を例示するためだけのものであって、本発明の範囲がこれら実施例によって制限されるものではない。
【実施例】
【００５７】
実施例１：天然植物性オイルとともにシュードモナスエルギノーサＰＲ３培養
１−１：シュードモナスエルギノーサＰＲ３の培養
シュードモナスエルギノーサ（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，米国；ＮＲＲＬ  Ｂ−１８６０２）をＹＰＤ培地（１％酵母抽出物、２％ペプトン、２％デキストロース；ｐＨ７．０）を使用して２４時間、２８℃、２００ｒｐｍの条件下で培養した。
１−２：天然植物性オイル添加
市販されている紅花種油、ごま油、オリーブ油またはブドウ種油を購入して実施例１−１の培養液に１％濃度で各々または混合して添加した後、３日間実施例１−１の方法で追加に培養した後、６Ｎ  ＨＣｌを加えて培地ｐＨを２．０以下に下げて培養を終了した。
１−３：培養産物抽出
培養終了後、直ちに培養液と同量の酢酸エチルとジエチルエーテルで各々２回にわたって順次に抽出した後、上澄み液抽出物を集めて回転蒸発器（Ｈａｎｈｎ  Ｓｈｉｎ  Ｃｏ，韓国）で濃縮することによって培養産物を抽出した。
実施例２：薄層クロマトグラフィーを使用した分析
２−１：培養抽出物の分析
実施例１の方法で収得した培養抽出物及び様々な天然植物性オイルを下記のように薄層クロマトグラフィーを遂行した。
【００５８】
レーン１：紅花種油
レーン２：紅花種油の微生物培養抽出物
レーン３：ごま油
レーン４：ごま油の微生物培養抽出物
レーン５：オリーブ油
レーン６：オリーブ油の微生物培養抽出物
レーン７：ブドウ種油とオリーブ油の１：１混合物、及び、
レーン８：ブドウ種油とオリーブ油の１：１混合物の微生物培養抽出物。
【００５９】
具体的に、シリカゲルでコーティングされたガラス基板上に前記抽出物１ｍｇを点滴した後、トルエン：ジオキサン：酢酸（７９：１４：７、ｖ／ｖ／ｖ）の混合溶液を使用して前記抽出物を分離した。分離後、５０％硫酸溶液を基板上に噴霧した後、１００℃で１０分以上加熱して現れたスポットを確認した。
【００６０】
その結果、図１に示されたように天然植物性オイルと培養抽出物で差を示すスポット（矢印）が確認された。
２−２：スポットの分析
実施例２−１の方法で確認された差を示すスポットに対して、分離精製と構造確認を実施した。
２−２−１：分離精製
実施例２−１の方法と同一な方法で主抽出物を薄層クロマトグラフィー基板上に展開させた後、分離精製しようとする目標スポット（矢印）と同一位置にある分離物を薄層クロマトグラフィー基板から掻き出した後、回収されたシリカゲル及び対象物質の混合物からクロロホルムで２回抽出して対象物質を分離した。
【００６１】
前記分離物及び精製過程中で除去された他の産物を下記のように実施例２−１の薄層クロマトグラフィー方法で分析した。
【００６２】
レーン１：トリオレイン
レーン２：精製する前の粗抽出物
レーン３：分離精製産物、及び、
レーン４：精製後残留物。
【００６３】
その結果、図４に示されたようにレーン３で単一スポット（矢印）で現れて精製がよくできたことを確認した。
２−２−２：構造分析
実施例２−２−１の方法で精製した産物の構造をガスクロマトグラフィー及びガスクロマトグラフィー／質量分析器で分析した。
ガスクロマトグラフィー分析
試料１０ｍｇにジアゾメタン［ジアザルド（Ｄｉａｚａｌｄ；Ｓｉｇｍａ  Ｃｏ，米国）から製造］１ｍｌを入れた後、５分間室温に放置した。以後、窒素ガスを使用してジアゾメタンを除去した後、ＴＭＳＩ＋ピリジン（１：４、ｖ／ｖ）を１ｍｌ入れて４０分間放置した。再び、窒素ガスを使用して残留溶媒を飛ばした後、ガスクロマトグラフィーのための溶液（ジクロロメタン：メタノール＝９５：５、ｖ／ｖ）を２００μｌ入れた。前記方法で修得した最終試料１μｌをガスクロマトグラフィー分析器（Ｓｈｉｍａｄｚｕ、日本）に注入した後、分析した。ここで使用されたカラムは、疎水性カラム（Ｓｕｐｅｌｃｏ，米国）を使用し、分析温度条件は、１００℃〜３００℃の範囲で施行し、分析時間は１時間以内にした。
ガスクロマトグラフィー／質量分析器分析
前記ガスクロマトグラフィー方法に準じて実施し、長さが３０ｍ以上のカラム（ＳＰＢ−１，Ｓｕｐｅｌｃｏ，米国）を使用して分離した分子のディテクター（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）に質量分析器（Ａｇｉｌｅｎｔ，米国）を設置して遂行した。
【００６４】
その結果、図２及び図３に示されたように炭素数１８個の脂肪酸鎖上に７番炭素と１０番炭素に各々１個ずつ総２個のヒドロキシル基を有して、８番炭素と９番炭素との間に１個のトランス二重結合を含む７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸（７，１０−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−８（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ，以下，ＤＯＤ）の構造を確認した。
実施例３：前記ＤＯＤの抗菌活性確認
３−１：固体アガー培地を使用した確認１
ネズミチフス菌ＫＣＴＣ２５１５と黄色ブドウ球菌ＫＣＴＣ１６２１に対するＤＯＤの抗菌活性を固体アガー培地を使用して調査した。アガープレート上にクリアーゾーンが示される程度によって抗菌活性を確認することができ、クリアーゾーンが大きいほど抗菌活性程度が高いと判断する。
【００６５】
スポットＡ：微生物によってトリオレインから生変換された生成物の粗抽出物（３ｍｇ）
スポットＢ：オレイン酸（５ｍｇ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｏ，米国）
スポットＣ：バクトロバン（３ｍｇ  Ｍｕｐｉｒｏｃｉｎ）（Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）
スポットＤ：ＤＯＤ（１ｍｇ）
スポットＥ：ＤＯＤ（５ｍｇ）
スポットＦ：ＤＭＳＯ（２０μｌ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｏ，米国）及び、
スポットＧ：ＤＯＤを除外した粗抽出物の残余物。
【００６６】
具体的に、ＹＰＤ培地に１．５％のポテトアガー（Ｄｉｆｃｏ，米国）を添加して滅菌した後、プラスチックペトリ皿に２０ｍｌ程度を注いで固めた固体アガー培地を作った。前記ＫＣＴＣ２５１５とＫＣＴＣ１６２１を１０７細胞／ｍｌ程度にＹＰＤ培地に希釈した後、５００μｌ程度を前記固体アガー培地に均一に分散させて接種した。前記固体アガー培地上に滅菌した直径５ｍｍ程度のフィルターペーパー（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｃｏ，米国）を載せた後、前記記述のとおりスポット  Ａ〜Ｆの物質を注入した。ここで、ＤＯＤはＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｏ，米国）溶媒に溶解して適正濃度に希釈して、各処理当り２０μｌずつを注入した。追加で  ２〜３日間、３０℃で培養した後、フィルターペーパー周囲のクリアーゾーンの大きさを測定して抗菌活性程度を確認した。
【００６７】
その結果、図５に示されたようにＤＯＤの場合、５ｍｇ程度を処理した時、非常に高い抗菌活性を示している。これは市販されている抗菌軟膏であるバクトロバンの抗菌活性と類似の程度を示した。
３−２：液体培地を使用した確認１
バチルス・スブティリスＡＴＣＣ６５０１と青枯病菌ＫＡＣＣ１０４７５に対してＤＯＤの微生物成長抑制程度を液体培地を使用して確認した。
【００６８】
具体的に、２４ウェルプレートにＹＤＰ培地を１ｍｌ位ずつ分注した後、確認しようとする０．１２５ｍｇ／ｍｌ〜１６ｍｇ／ｍｌの濃度でＤＭＳＯに希釈されたＤＯＤを１００μｌ以下の体積で各ウェルに添加した。前記バチルス・スブティリスＡＴＣＣ６５０１と青枯病菌ＫＡＣＣ１０４７５をＹＰＤ培地に希釈した後、１００μｌ程度を注入して接種した。培養開始後２時間ごとに２４時間後まで、各ウェルから培養液を回収して遠心分離を通じて培地成分は除去して蒸溜水を使用して２回洗浄した後、５４０ｎｍで吸光度を測定して微生物成長程度を測定した。測定された微生物の量をグラフで示して、微生物が成長しないＤＯＤ濃度を最小制限濃度に決定した。
【００６９】
その結果、図６に示されたように、ある程度のＤＯＤ処理濃度以上では微生物が成長しなくて、ＤＯＤが液体培地上でも微生物の成長を抑制して抗菌活性を示していることを確認することができる。また、前記菌に対する最小制限濃度は、各々＜１２５μｇ／ｍｌであった（図８参照）。
３−３：固体アガー培地を使用した確認２
グラム陽性またはグラム陰性菌である大腸菌ＡＴＣＣ８７３９（−）、表皮ブドウ球菌ＫＣＴＣ１９１７（＋）、ネズミチフス菌ＫＣＴＣ２５１５（−）、リステリア・モノサイトゲネスＡＴＣＣ１９１１１（＋）、黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ  ６５３８（＋）、バチルス・スブティリスＡＴＣＣ６５０１（＋）に対するＤＯＤの微生物成長抑制程度を実施例３−１の方法で固体アガー培地を使用して確認した（−：グラム陰性、＋：グラム陽性）。
【００７０】
その結果、図７に示されたようにグラム陽性とグラム陰性すべての場合で、抗菌活性を示していて、グラム染色による別途の特異性は現れていない。
３−４：液体培地を使用した確認２
多様な微生物に対するＤＯＤの抗菌活性程度を実施例３−２の方法で液体培地を使用して確認した。
【００７１】
具体的には、シュードモナス・シリンガ・パソバー・セサミ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｅｓａｍｉ）ＫＡＣＣ１０６４９（−）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・アクチニダエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄａｅ）ＫＡＣＣ１０６５９（−）、エルビニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｓｐ．）ＫＡＣＣ１０２０７（−）、シュードモナス・シリンガ・パソバー・シリンガ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）ＫＡＣＣ１０３６１（−）、青枯病菌ＫＡＣＣ１０４７５（−）、コリネバクテリウム・グルタミカムＫＡＣＣ１０７８４（＋）、シュードモナス・コルガタＫＡＣＣ１０１４１（−）、キサントモナス・アリソノボディス・パソバー・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）ＫＡＣＣ１０４４３（−）、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）ＫＡＣＣ１０４９０（−）及びクラビバクター・ミシガネンシス亜属ミシガネンシス（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｓｉｓ  ｓｕｂｓｐ．Ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ）ＫＡＣＣ２０１２２（＋）に対するＤＯＤの微生物成長抑制程度を、実施例３−２の方法で液体培地を使用して確認した。
【００７２】
その結果、図８に示されたように、Ｐｓｕｅｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔｅ  ＫＡＣＣ１０１４１及びＣｌａｖｉｂａｃｔｅｒ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｓｉｓ  ｓｕｂｓｐ．Ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ  ＫＡＣＣ２０１２２を除いた多様な微生物に対して、高い程度の微生物生長抑制効果を示している。また、グラム染色による別途の特異性は現れていないことが分かる。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】本発明の多様な天然植物性オイルからシュードモナスエルギノーサＰＲ３を使用して３日間培養して生産した産物の薄層クロマトグラフィー分析写真である。
【図２】本発明の多様な基質からシュードモナスエルギノーサＰＲ３を使用して生産された７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸の化学構造を示した図である。
【図３】本発明の多様な基質からシュードモナスエルギノーサＰＲ３を使用して生産された７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸の構造をガスクロマトグラフィー／質量分析器で分析した図である。
【図４】本発明の図１で示した３日目に生産された産物中で矢印で指摘された産物のみを分離精製した後、薄層クロマトグラフィーで分析した写真である。
【図５】本発明の７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸の抗菌活性を固体アガー培地を使用して確認した写真である。
【図６】本発明の７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸の処理濃度による微生物生長阻害効果を示した図である。
【図７】本発明の多様な微生物に対する７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸の抗菌活性を固体アガー培地を使用して確認した結果を示した表である。
【図８】本発明の多様な微生物に対する７，１０−ジヒドロキシ−８（Ｅ）−オクタデセン酸の抗菌活性を液体培地を使用して最小制限濃度を確認した結果を示した表である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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