(57)【要約】【課題】  ブナシメジ子実体からの抽出物は、抗腫瘍作用、血中コレステロール低下作用があることが知られている。本発明の課題は、これら以外の種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分として用いる治療剤の提供にある。【解決手段】  ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、リウマチ治療剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、抗糖尿病剤、血圧降下剤、皮膚外用剤、抗疲労剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤。
【請求項２】
ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする高尿酸血症の予防または改善剤。
【請求項３】
ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする抗骨粗鬆症剤。
【請求項４】
ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とするリウマチ治療剤。
【請求項５】
ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする抗鬱・抗ストレス剤。
【請求項６】
ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とするアディポネクチン産生促進剤。
【請求項７】
ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする抗糖尿病剤。
【請求項８】
ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする血圧降下剤。
【請求項９】
ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする皮膚外用剤。
【請求項１０】
ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする抗疲労剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする各種疾病に有用な治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ブナシメジ子実体からの抽出物は、抗腫瘍作用（特許文献１）、血中コレステロール低下作用（特許文献２）を有することが知られている。
しかしながら、ブナシメジ子実体からの抽出物が、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効であるとの見地はない。
【特許文献１】特開２００７−１６６９０３号公報
【特許文献２】国際公開ＷＯ２００５／８７２４７号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
請求項１に記載の発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤である。
請求項２に記載の発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする高尿酸血症の予防または改善剤である。
請求項３に記載の発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする抗骨粗鬆症剤である。
請求項４に記載の発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とするリウマチ治療剤である。
請求項５に記載の発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする抗鬱・抗ストレス剤である。
請求項６に記載の発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とするアディポネクチン産生促進剤である。
請求項７に記載の発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする抗糖尿病剤である。
請求項８に記載の発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする血圧降下剤である。
請求項９に記載の発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする皮膚外用剤である。
請求項１０に記載の発明は、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分とする抗疲労剤である。
【発明の効果】
【０００５】
本発明によれば、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
ブナシメジは特許文献１および２に記載されているように、広く食されており、安全性の高い食品である。本発明に使用されるブナシメジは天然のものでも人工栽培品でもよい。例えば、市販品としては、特許文献１に記載のように、Ｌｙｏｐｈｙｌｌｕｍ ｕｌｍａｒｉｕｍ Ｍ−８１７１（ＦＥＲＭ ＢＰ−１４１５）、又はＬｙｏｐｈｙｌｌｕｍ ｕｌｍａｒｉｕｍ Ｋ−０２５９（ＦＥＲＭ Ｐ−１２９８１）を利用して栽培することができる。
【０００７】
子実体は、好適には乾燥処理後、抽出操作に施される。抽出物は、子実体を常温水、熱水、アルコール含有水性溶媒等で抽出、好ましくは熱水抽出することによって得ることができる。抽出時の温度は、２０〜１３５℃の範囲が好ましく、抽出時間は５〜２４０分が好ましい。そして、熱水抽出等の抽出処理後、不溶性の残渣を取り除いた抽出液を濃縮・乾燥すること等により、本発明における抽出物を得ることができる。なお、本発明の治療剤は、不溶性の残渣を取り除いた後、精製処理を施すことが好ましい。また、上記抽出液の濃縮は公知の濃縮方法であれば特に制限されるものではないが、加熱濃縮法、減圧加熱濃縮法、エタノール沈殿による濃縮方法、活性炭やイオン交換樹脂による濃縮法などを具体的に例示することができる。また、濃縮後の乾燥についても、公知の方法であればどのような方法でもよく、風乾法、加熱乾燥法、スプレードライ法、凍結乾燥法などを具体的に例示することができる。
精製方法としては、公知の各種クロマトグラフィー、限外濾過などを採用し、例えば分子量１０万以下画分を除去してもよい。
【０００８】
本発明の治療剤は、通常、乾燥子実体換算で１００ｍｇ〜１０ｇ/ｋｇ体重・日摂取することによりその効果をもたらすが、症状、性別、年齢等に応じて、摂取量は適宜調整することができる。
【０００９】
本発明の治療剤は、公知の方法により適宜製剤化することができる。即ち、本発明に有用な固形製剤または液状製剤は、ブナシメジ子実体からの抽出物と添加剤とを混合し、従来充分に確立された公知の製剤製法を用いることにより製造される。添加剤としては、例えば賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、希釈剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤または香料などが挙げられる。
【００１０】
上記賦形剤としては、例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール或いはキシリトールなどの糖アルコール、ブドウ糖、白糖、乳糖或いは果糖などの糖類、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、リン酸水素カルシウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、シクロデキストリン、軽質無水ケイ酸、酸化チタン、またはメタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどが挙げられる。
【００１１】
上記ｐＨ調整剤としては、例えばクエン酸、リンゴ酸、リン酸水素ナトリウムまたはリン酸二カリウムなどが挙げられる。
上記清涼化剤としては、例えばｌ−メントールまたはハッカ水などが挙げられる。
上記懸濁化剤としては、例えば、カオリン、カルメロースナトリウム、キサンタンガム、メチルセルロースまたはトラガントなどが挙げられる。
上記希釈剤としては、例えば精製水、エタノール、植物油または乳化剤等が挙げられる。
上記消泡剤としては、例えばジメチルポリシロキサンまたはシリコン消泡剤などが挙げられる。
【００１２】
上記粘稠剤としては、例えばキサンタンガム、トラガント、メチルセルロースまたはデキストリンなどが挙げられる。
上記溶解補助剤としては、例えばエタノール、ショ糖脂肪酸エステルまたはマクロゴールなどが挙げられる。
上記崩壊剤としては、例えば低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチまたは部分アルファー化デンプンなどが挙げられる。
【００１３】
上記結合剤としては、例えばメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニールピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ポリビニルアルコール、プルラン、アルファー化デンプン、カンテン、トラガント、アルギン酸ナトリウムまたはアルギン酸プロピレングリコールエステルなどが挙げられる。
【００１４】
上記滑沢剤としては、例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ポリオキシル、セタノール、タルク、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ジメチルポリシロキサン、ミツロウまたはサラシミツロウなどが挙げられる。
上記抗酸化剤としては、例えばアスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、没食子酸プロピル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、トコフェロール、アスコルビン酸またはクエン酸などが挙げられる。
【００１５】
上記コーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アミノアルキルメタアクリレートコポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、メタアクリル酸コポリマー、ポリビニルアセタートジエチルアミノアセテートまたはセラックなどが挙げられる。
上記着色剤としては、例えばウコン抽出液、リボフラビン、酸化チタンまたはカロチン液などが挙げられる。
【００１６】
上記矯味矯臭剤としては、例えばクエン酸、アジピン酸、アスコルビン酸、果糖、Ｄ−ソルビトール、ブドウ糖、サッカリンナトリウム、単シロップ、白糖、ハチミツ、アマチャ、カンゾウ、クエン酸、アジピン酸、アスコルビン酸、オレンジ油、トウヒチンキ、ウイキョウ油、ハッカまたはメントールなどが挙げられる。
上記界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン、ポリソルベート類、ラウリル硫酸ナトリウム、マクロゴール類またはショ糖脂肪酸エステルなどが挙げられる。
上記可塑剤としては、例えばクエン酸トリエチル、ポリエチレングリコール、トリアセチンまたはセタノールなどが挙げられる。
上記香料としては、例えば、動物性香料或いは植物性香料等の天然香料、または単離香料或いは純合成香料等の合成香料などが挙げられる。
【００１７】
本発明のブナシメジ子実体からの抽出物は、飲食品材料に配合してもよい。このような材料としては、例えば、パン、チューインガム、クッキー、チョコレート、シリアル等の固形食品、ジャム、アイスクリーム、ヨーグルト、ゼリー等のジャム状、クリーム状またはゲル状食品、ジュース、コーヒー、ココア、緑茶、ウーロン茶、紅茶等の飲料等が挙げられる。また、調味料、食品添加物等に配合することもできる。
【００１８】
また、抽出物を皮膚外用剤として用いる場合は、皮膚外用剤として通常使用される公知の材料、例えば色素、香料、防腐剤、界面活性剤、顔料、抗酸化剤、保湿剤、紫外線吸収剤などを適宜配合することができる。
本発明の皮膚外用剤は、クリーム、乳液、化粧水、パック等、公知の形態で使用され得る。
【実施例】
【００１９】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本発明で使用されるブナシメジ子実体からの抽出物は、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、リウマチ治療剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、抗糖尿病剤、血圧降下剤、皮膚外用剤、抗疲労剤としてきわめて有用である。以下、上記各種薬効について実施例でもって説明する。
【００２０】
実施例１（抗アレルギー剤としての有用性）
市販のブナシメジ生鮮子実体を乾燥後、粉砕することにより子実体粉末を得た。該子実体粉末５００ｇに１０Ｌの純水を加えて９５℃、３時間熱水処理を行った。熱水抽出物を室温まで冷却させた後、遠心分離（６５００Ｇ、３０分、室温）を行い、熱水可溶画分と熱水不溶画分を得た。得られた熱水可溶画分はエバポレーターにて濃縮後、凍結乾燥を行うことにより、熱水可溶画分凍結乾燥物２１０ｇを得た。これらの凍結乾燥物は下記実施例に用いる前に粉砕機を用いて粉末状にした。以下、これを粉末１という。
【００２１】
ＲＡＳＴ法による食物アレルゲン陽性の慢性じんま疹の患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に前記粉末１を３００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表１に示す。
【００２２】
【表１】
2009161526.tif 000002
【００２３】
実施例２
ＲＡＳＴ法によるアトピー性皮膚炎患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に実施例１の粉末１を３００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表２に示す。
【００２４】
【表２】
2009161526.tif 000003
【００２５】
実施例３（高尿酸血症の改善効果）
実験方法
供試動物はWistar系ラット雌（８週令、体重約180g）を１群６匹で用いた。
試験飼料に0.75％の濃度でアデニンを加えてラットに給与し、腎臓からの尿中への尿酸排泄阻害を起こさせて高尿酸血症のモデル動物とした。
対照群は、上記の0.75％アデニン飼料のみ、薬剤投与群は、０．７５％アデニンと実施例１の粉末１含有飼料とした。飼料は自由摂取としたが、薬剤投与群の試験飼料中の上記粉末１の濃度を、摂取量が１ｍｇ／ｋｇ体重となるように調整した。試験開始日及び24日目に血中の尿酸値を測定した。
その結果、対照群の試験開始日の血中尿酸濃度は、０．５７ｍｇ／ｍｌであり、２４日目が２．３３ｍｇ／ｍｌであったのに対し、薬剤投与群の２４日目の血中尿酸濃度は０．８１ｍｇ／ｍｌであった。
この結果から明らかなように、対照群では血中尿酸濃度が大幅に増加するのに対し、薬剤投与群ではいずれもその濃度は増加しなかった。したがって、ブナシメジ子実体からの抽出物を有効成分として含有する薬剤は、高尿酸血症の予防または改善剤として有用であることが示された。
【００２６】
実施例４（抗骨粗鬆症効果）
骨粗鬆症改善効果試験
ＳＤ系ラット（２２週齢）メスの卵巣を外科的に取り除き、骨粗鬆症のモデルラットを作成した。卵巣摘出ラットを７匹ずつ６群に分け、３５日間の試験期間中、１日置きに（計１７回）、前記粉末１の摂取量が１ｍｇ／ｋｇとなるように、生理食塩水溶解した液体を２ｍｌ経口投与した。飼料はオリエンタル酵母株式会社のマウス・ラット・ハムスター用固形飼料ＣＲＦ−１を用い、給餌および給水方法は自由摂取とした。試験期間中、各群間で、餌の摂取量に差は認められなかった。試験開始後３５日目にラットの体重を測定した後、大腿骨を取り出した。大腿骨は、接着組織および筋肉を取り除いて分析に使用した。大腿骨の体積を測定した後、エタノールで３回洗浄し、次にアセトンで３回洗浄したのち、一晩乾燥し、その後、重量を測定して大腿骨の乾燥重量を求めた。体積および乾燥重量から、骨密度（乾燥重量ｇ／体積ｍｍ3 ）を測定した。なお対照実験として、前記粉末１を含まない生理食塩水をラットに投与したこと以外は、上記実験を繰り返した例（比較例）も併せて、その結果を表３に示す。
【００２７】
【表３】
2009161526.tif 000004
【００２８】
実施例４と比較例とを対比したところ、実施例４はp＜0.05の危険率で有意差が認められた。
【００２９】
実施例５（抗リウマチ効果）
ヒト慢性リウマチ患者の滑膜から樹立された繊維芽細胞株であるＤＳＥＫ細胞を１０％ＦＢＳ（バイオウイタッカー社製）を含むＩｓｃｏｖ−ＭＥＭ培地（ＩＭＤＭ：ギブコＢＲＬ社製）にて、５％ＣＯ２存在下、３７℃で細胞が培養器に飽和になるまで培養し、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（バイオウイタッカー社製）で細胞を３×１０４細胞／ｍｌとなるように上記培地に懸濁し、９６ウェルマイクロタイタープレート（ＦＡＬＣＯＮ社製）の各ウェルに２００μｌずつ分注した。培養５〜７日後、ほぼ細胞が８０％飽和になった時で培地を交換し、前記粉末１濃度が５００μｇ／ｍｌの濃度である２００μｌの上記培地を加えた。
２４時間、７２時間経過時に１０μｌのプレミックスＷＳＴ−１（宝酒造社製、ＭＫ４００）を加えて３７℃で３．５時間反応させ、４５０ｎｍにおける吸光度（Ａ４５０）から６５０ｎｍにおける吸光度（Ａ６５０）を差し引いた値を細胞増殖度とした。その結果、２４時間後の細胞増殖度は０．７９、７２時間後は０．３６であり、抗リウマチ活性が認められた。なお、前記粉末１を加えない対照区では、２４時間、７２時間経過時の細胞増殖度が３．９０であった。
【００３０】
実施例６（抗鬱・抗ストレス効果）
上記粉末１の治療効果を調べた。
マウス強制水泳試験による精神安定作用の評価
本発明の治療剤の評価は、１９７７年にPorsoltにより開発されたマウス強制水泳試験を採用した。本試験は鬱病の動物モデル実験として最も多用される方法のひとつである。本試験では、マウスをある限られたスペースの中で強制的に泳がせて「無動状態」を惹起させる。この無動状態は、ストレスを負荷された動物が水からの逃避を放棄した一種の「絶望状態」を反映するものと考えられ、ヒトにおける鬱状態、ストレス状態と関連づけられている。事実、抗鬱薬は特異的にこの状況下における無動状態の持続時間を短縮させることがわかっており、この短縮作用は臨床力価との間に有意な相関を有することが認められている。
【００３１】
本試験方法は次のとおりである。
２５℃の水を深さ１５ｃｍまで入れたプラスチック円筒中でマウスを強制水泳させる。５分間の強制水泳後、３０℃の乾燥機中で１５分間乾燥し、ホームケージに戻す。翌日マウスに試験試料を腹腔内投与して、その１時間後に再び５分間の強制水泳を課し、現れた無動状態の持続時間をストップウォッチを用いて測定する。マウスが水に浮かんで静止している状態を無動状態と判定する。無動状態持続時間については有意差検定を行い、統計学的に有意差を検定する。実験には雄のｄｄYマウスを使用し、１群６匹とする。なお、試験は全て午後１時から午後６時の間に行う。また、ポジティブコントロールとして抗鬱薬であるイミプラミンを用いた試験も行う。
【００３２】
その結果、粉末１を３０ｍｇ／ｋｇ投与したマウスの無動状態持続時間は、１７４．４±２．９秒であった。コントロール（生理食塩水のみ）は２２０．０±２．２秒であった。ポジティブコントロール（３０ｍｇ／ｋｇ投与）のマウスの無動状態持続時間は、１７６．５±４．０秒であった。本実施例およびポジティブコントロールの無動状態持続時間は、危険率１％で有意差を有する。なお、粉末１を２〜３倍量使用しても、同様の結果を得た。
【００３３】
実施例７
アディポネクチン産生上昇確認試験
正常ヒト前駆脂肪細胞を使用し、１．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはヒト前駆脂肪細胞基礎培地を用いた。２４時間後に分化誘導添加剤と粉末１を加えた増殖培地に交換し、さらに１週間培養した。その後、培養上清中に産生されたアディポネクチン量をＥＬＩＳＡ法により定量した。各試料の評価結果を、ブランク（試料未添加）のアディポネクチン量を１００とした場合の相対値にて下記に示す。なお、添加した粉末１濃度は、１０μｇ／ｍｌであった。
【００３４】
上記試験結果：相対値＝３７６。この数値は、危険率１％で有意差を有する。
【００３５】
実施例８
６週齢の雄性ＳＤ系ラット（１群６匹）の尾静脈にストレプトゾトシンを１回投与することにより糖尿病を惹起した。
前記粉末１の投与量を５００μｇ／ｋｇとし、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）投与の１時間前に経口投与し、その翌日より１日１回１３日間連続経口投与した。最終投与の翌日に５０％グルコース水溶液（１０ｍｌ／ｋｇ）を経口投与し、経時的に血糖値（ｍｇ／ｄｌ）を測定（ｏ−トルイジン・ホウ酸）した。
【００３６】
なお、正常対照群としてＳＴＺを投与せずに滅菌水のみを投与した群、病態対照群としてＳＴＺを投与して滅菌水を投与した群、および陽性対照群としてＳＴＺを投与してニコチン酸アミド（５０ｍｇ／ｋｇ）を投与した群を設けた。ニコチン酸アミドはＳＴＺ糖尿病モデルに対して有効であることが報告されている（新薬開発のための動物利用集成，４１９−４２２頁，Ｒ＆Ｄプランニング，１９８５年）。
【００３７】
糖尿病は糖代謝能力が低下し高血糖を呈する疾患である。本実施例においてはグルコース投与１時間後に血糖値のピークを認めるが、病態対照群では最高血糖値が３６０ｍｇ／ｄｌであり、正常対照群では最高血糖値は１６４ｍｇ／ｄｌであった。病態対照群の最高血糖値は正常対照群のそれと比較して約２倍を示し、病態対照群では糖代謝能力の低下が認められた。
【００３８】
粉末１の活性は、式１により病態対照群の血糖値に対する抑制率（％）を算出した。
【００３９】
（式１）
抑制率（％）＝〔１−（粉末１投与群または陽性対照群の最高血糖値−正常対照群の最高血糖値）／（病態対照群の最高血糖値−正常対照群の最高血糖値）〕×１００
【００４０】
その結果、粉末１投与群の抑制率は６０．０％であった。陽性対照群の抑制率は４３．０％であった。したがって、粉末１投与群は、病態対照群に比較して、優れた血糖値の低下が認められ、糖代謝能力が改善されていた。
【００４１】
実施例９（血圧降下効果）
実施例１の粉末１を一般市販飼料（船橋農場製、船橋SP）に添加し、脳卒中易発症性高血圧自然発症ラット（SHR−SP）を用いて最高血圧値、体重の変化を比較した。対照区は、粉末１を添加しない一般試料を用いた。Ａ区を対照区、Ｂ区を本発明区とし、それぞれの飼料で５週齢の雄性SHR−SPを各区６匹ずつ７週間飼育し、12週齢に達した時の血圧値と体重の変化について調べた。表３に示すように血圧の変化においては、本発明区に有意な血圧上昇の抑制が認められた。なお、本発明区においては、粉末１の１日あたりの粉末１の摂取量が、５０ｍｇ／ｋｇ体重となるように飼料中の粉末１の濃度を調整した。
【００４２】
【表４】
2009161526.tif 000005
【００４３】
実施例１０（メラニン抑制効果）
メラニンを生成する細胞として、マウス由来の培養B16メラノーマ細胞を用いてウシ胎児血清を終濃度10%になるように添加したイーグルＭＥＭ培地で培養し、該細胞を3×103cell/mlの濃度で6ウェルプレートの各ウェルに6ml播種し、5日間ＣＯ２インキュベーター内で培養後、実施例１の粉末１を添加した培地に交換し、さらに3日間同条件で培養する。細胞を洗浄後、細胞をスクレーパー処理により剥がし、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）により可溶化して475nm、260nmの吸光度を測定し、S475、S260とする。メラニン抑制率は被検試料を添加しない培地で培養した細胞の475nm、260nmにおける吸光度をC475、C260として式１により計算した。ポジティブコントロールとしてコウジ酸（Kojic acid）を用いた。
【００４４】
【数１】
2009161526.tif 000006
【００４５】
その結果、ポジティブコントロール（培地中にコウジ酸３ｍＭ添加）のメラニン抑制率は約５６％であり、実施例１の粉末１を添加した被験試料（培地中に粉末１を５００μｇ／ｍｌ添加）のメラニン抑制率は約５６％であった。
【００４６】
実施例１１（シワ形成抑制効果）
５匹ずつ２群のヘアレスマウスの背部に、ＵＶＢ（長波長紫外線）を１０週間照射してシワ形成モデルを作製した。その後、このシワ形成モデルの１群には上記実施例１で調製した粉末１を０．５質量％の割合で１０％エタノール水溶液に溶解した液体を（実施例）、もう１群には１０％エタノール水溶液のみを（比較例）、シワが形成された背部に１日１回、週に５日の割合で４週間塗布し続けた。４週間の塗布期間終了後、各モデルの背部からレプリカを採取し、得られたレプリカのそれぞれについて、次の基準に従ってシワスコアを付した。
（シワスコア基準）
０：方向性のある構造は認められない。
１：繊維状の細い構造が方向性をもって認められる。
２：方向性をもった繊維状の細い構造とともに太い棒状の構造が認められる。
３：方向性をもった太い棒状の構造が認められる。
【００４７】
上記シワスコアを用いた評価は、レプリカ上の方向性をもった線状の構造をシワとして定義して評価したものである。したがって、上記シワスコア基準に従えば、スコアが高いほどシワ形成が進んだ皮膚状態と評価される。上記で得られたシワスコアについて各群の平均値を算出したところ、実施例１１は０、比較例は１．０であった。両群のシワスコアについて、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定により有意差検定を行ったところ、実施例１１のシワスコアは、比較例のシワスコアに比べ、危険率０．０５以下で有意に小さかった。
【００４８】
実施例１２
実施例１で得た粉末１を含有する下記組成のクリームを常法により調製した。
粉末１ １０重量部
グリセロールソルビタン脂肪酸エステル ６０重量部
微結晶性ワックス １０重量部
オリーブオイル ３０重量部
流動パラフィン １８０重量部
ステアリン酸マグネシウム １０重量部
プロピレングリコール ３７重量部
硫酸マグネシウム ７重量部
精製水 ６５５重量部
【００４９】
実施例１３
上記実施例１２のクリームについて、シワ形成抑制効果をしらべた。即ち、シワに悩むパネラーを用いて、１日朝・晩２回、毎日１カ月間、上記実施例１２のクリームを顔面右側に塗布し、左側に対する右側のシワの改善を、＋＋：非常に改善、＋：明らかに改善、±：僅かに改善、−：改善せずの基準で評価した。その結果、パネラー全員とも、非常に改善、の評価であった。
【００５０】
実施例１４（にきび治療効果）
乳 液：
以下に示す組成及び下記製法で乳液を調製し、にきび予防および改善効果を調べた。
【００５１】
【表５】
2009161526.tif 000007
【００５２】
（ 製 法 ）
Ａ. 成分（１）〜（６）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｂ. 成分（９）と（１１）の一部を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｃ. ＢにＡを加えて混合し、均一に乳化する。
Ｄ. Ｃを冷却後（１１）の残部に溶かした（７）、（８）、（１２）および（１０)に溶かした（１３）を加え、均一に混合して乳液を得た。
【００５３】
（試験方法）
被験乳液１品につき２２歳から４０歳の女性１５名をパネルとし、毎日、朝と夜の２回、洗顔後に被験乳液の適量を顔面に塗布した。１２週間塗布を行い、塗布によるにきび改善効果の有効性を、以下の３ランクで判断し、下記評価基準によって評価した。
【００５４】
（有効性ランク ）
有効 ： にきびが出来にくくなった。にきびが目立たなくなった。
やや有効： にきびがやや出来にくくなった。にきびがあまり目立たなくなった。
無 効： 使用前と変化なし。
【００５５】
その結果、パネラー全員が「有効」と評価した。
【００５６】
実施例１５
ＳＴＤ ＤＤＹ 雄性マウス（５週齢：各群ｎ＝３〜４）に対し、キサントアンゲロール粉末（以下、粉末１という）を経口摂取させた。摂取量は、１０ｍｇ／ｋｇ体重である。摂取は、純水に粉末１を溶解させた溶液を用いて行なった。なお、コントロール群のマウスには、純水のみを摂取させて試験を行った。
【００５７】
摂取から３０分後に、マウスを深さ８０センチの水槽に入れて、無動に至るまでの時間を計測した。各試験群のマウス（各群ｎ＝３〜４）の無動に至るまでの時間の平均値として、コントロール群は約１００秒であったのに対し、粉末１投与群は、約３９０秒であった。
以上から、粉末１に高い抗疲労効果が確認された。