(57)【要約】【課題】反応容器に保持された液体を音波によって非接触で攪拌する分析装置において、分析に要する時間を短縮することが可能な分析装置及び分析方法を提供すること。【解決手段】容器に保持された液体試料を音波によって攪拌して反応させる攪拌機構を備え、反応液の光学的特性を測定して前記液体試料を分析する分析装置１及び分析方法。分析装置１は、光学的特性の測定値をもとに液体試料の攪拌状態をモニタリングするための出力部２４と、攪拌機構による攪拌動作及び光学的特性の測定動作を制御する装置制御部２２とを備えている。【選択図】        図１
2009162585.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
容器に保持された液体試料を音波によって攪拌して反応させる攪拌手段を備え、反応液の光学的特性を測定して前記液体試料を分析する分析装置であって、
前記光学的特性の測定値をもとに前記液体試料の攪拌状態をモニタリングするための出力手段と、
前記攪拌手段による攪拌動作及び前記光学的特性の測定動作を制御する制御手段と、
を備えたことを特徴とする分析装置。
【請求項２】
前記液体試料の撹拌中に測定した前記光学的特性の測定値をもとに前記液体試料の攪拌の良否を判定する判定手段をさらに備え、前記判定手段の判定結果を前記出力手段に出力することを特徴とする請求項１に記載の分析装置。
【請求項３】
前記制御手段は、前記判定手段による判定が攪拌良の場合には前記容器に保持された前記液体試料の分析を継続し、攪拌不良、かつ、前記光学的特性の測定値が許容範囲内の場合には前記攪拌手段による追加攪拌を実行し、攪拌不良、かつ、前記光学的特性の測定値が許容範囲外の場合には当該容器に保持された前記液体試料の分析を中止することを特徴とする請求項１に記載の分析装置。
【請求項４】
前記判定手段は、測定した少なくとも２つの前記光学的特性の測定値に基づいて前記液体試料の攪拌の良否を判定することを特徴とする請求項１に記載の分析装置。
【請求項５】
前記測定値は、前記攪拌手段による攪拌中の測定値及び攪拌終了時の測定値を含むことを特徴とする請求項４に記載の分析装置。
【請求項６】
前記追加攪拌は、前記制御手段が前記攪拌手段に攪拌強度を保持して実行させる攪拌時間の延長又は攪拌強度を増加して実行させる攪拌時間の延長であることを特徴とする請求項３に記載の分析装置。
【請求項７】
前記制御手段は、前記攪拌手段による前記液体試料の攪拌終了タイミングを制御することを特徴とする請求項６に記載の分析装置。
【請求項８】
前記容器を複数保持して回転する容器保持部を備え、
前記容器保持部の回転による前記容器の移動中に前記液体試料の攪拌及び光学的特性の測定を行うことを特徴とする請求項１に記載の分析装置。
【請求項９】
容器に保持された液体試料を音波によって攪拌して反応させ、反応した反応液の光学的特性を測定することで前記液体試料を分析する分析方法であって、
前記液体試料の攪拌中に測定した光学的特性の測定値をもとに前記液体試料の攪拌状態をモニタリングすることを特徴とする分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、容器に保持された液体試料を音波によって攪拌する分析装置及び分析方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、分析装置は、いわゆるキャリーオーバーを回避するため、反応容器に保持された液体を音波発生素子が発生する音波によって非接触で攪拌するものが知られている（例えば、特許文献１参照）。
【０００３】
【特許文献１】特開２０００−３３８１３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ところで、特許文献１に開示された分析装置は、複数の反応容器を保持した反応ディスクの回転に伴って検体、試薬が順次分注され、検体と試薬の反応液を測光機構によって測光することによって検体の所定の成分の濃度を測定している。このため、特許文献１の分析装置は、検体分注、試薬分注及び測光を行う位置が決まっており、これらの順に分析プロセスが進行するようになっていることから、分析に要する時間を短縮することが難しいという問題があった。
【０００５】
本発明は、上記に鑑みてなされたものであって、反応容器に保持された液体を音波によって非接触で攪拌する分析装置において、分析に要する時間を短縮することが可能な分析装置及び分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上述した課題を解決し、目的を達成するために、本発明の分析装置は、容器に保持された液体試料を音波によって攪拌して反応させる攪拌手段を備え、反応液の光学的特性を測定して前記液体試料を分析する分析装置であって、前記光学的特性の測定値をもとに前記液体試料の攪拌状態をモニタリングするための出力手段と、前記攪拌手段による攪拌動作及び前記光学的特性の測定動作を制御する制御手段と、を備えたことを特徴とする。
【０００７】
また、本発明の分析装置は、上記の発明において、前記液体試料の撹拌中に測定した前記光学的特性の測定値をもとに前記液体試料の攪拌の良否を判定する判定手段をさらに備え、前記判定手段の判定結果を前記出力手段に出力することを特徴とする。
【０００８】
また、本発明の分析装置は、上記の発明において、前記制御手段は、前記判定手段による判定が攪拌良の場合には前記容器に保持された前記液体試料の分析を継続し、攪拌不良、かつ、前記光学的特性の測定値が許容範囲内の場合には前記攪拌手段による追加攪拌を実行し、攪拌不良、かつ、前記光学的特性の測定値が許容範囲外の場合には当該容器に保持された前記液体試料の分析を中止することを特徴とする。
【０００９】
また、本発明の分析装置は、上記の発明において、前記判定手段は、測定した少なくとも２つの前記光学的特性の測定値に基づいて前記液体試料の攪拌の良否を判定することを特徴とする。
【００１０】
また、本発明の分析装置は、上記の発明において、前記測定値は、前記攪拌手段による攪拌中の測定値及び攪拌終了時の測定値を含むことを特徴とする。
【００１１】
また、本発明の分析装置は、上記の発明において、前記追加攪拌は、前記制御手段が前記攪拌手段に攪拌強度を保持して実行させる攪拌時間の延長又は攪拌強度を増加して実行させる攪拌時間の延長であることを特徴とする。
【００１２】
また、本発明の分析装置は、上記の発明において、前記制御手段は、前記攪拌手段による前記液体試料の攪拌終了タイミングを制御することを特徴とする。
【００１３】
また、本発明の分析装置は、上記の発明において、前記容器を複数保持して回転する容器保持部を備え、前記容器保持部の回転による前記容器の移動中に前記液体試料の攪拌及び光学的特性の測定を行うことを特徴とする。
【００１４】
また、上述した課題を解決し、目的を達成するために、本発明の分析方法は、容器に保持された液体試料を音波によって攪拌して反応させ、反応した反応液の光学的特性を測定することで前記液体試料を分析する分析方法であって、前記液体試料の攪拌中に測定した光学的特性の測定値をもとに前記液体試料の攪拌状態をモニタリングすることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の分析装置は、光学的特性の測定値をもとに液体試料の攪拌状態をモニタリングするための出力手段と、攪拌手段による攪拌動作及び光学的特性の測定動作を制御する制御手段とを備え、液体試料の攪拌中に測定した光学的特性の測定値をもとに液体試料の攪拌状態をモニタリングすると共に、さらには撹拌の良否を判定し、本発明の分析方法は、液体試料の攪拌中に測定した光学的特性の測定値をもとに液体試料の攪拌状態をモニタリングするので、音波による撹拌の進行状態をリアルタイムに把握でき、ひいては光学的特性の測定に要する時間を攪拌時間に組み込むことができ、分析に要する時間を短縮することが可能になるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
（実施の形態１）
以下、本発明の分析装置及び分析方法にかかる実施の形態１について、図面を参照して詳細に説明する。図１は、本発明の自動分析装置の要部構成を模式的に示す図である。自動分析装置１は、図１に示すように、分析対象の試料である検体及び試薬を反応容器にそれぞれ分注し、その反応容器内で生じる反応を光学的に測定する測定機構１１と、測定機構１１を含む自動分析装置１の制御を行うと共に測定機構１１における測定結果の分析を行う制御分析機構２１とを有し、これら二つの機構が連携することによって複数の検体の成分の生化学的、免疫学的、または遺伝学的な分析を自動的かつ連続的に行う。
【００１７】
測定機構１１は、図１に示すように、血液や体液等の検体を収容する検体容器３１が搭載された複数のラック３２を収納して順次移送する検体移送部１２、試薬容器３４を保持する二つの試薬容器保持部１３ａ，１３ｂ並びに検体と試薬とを収容して反応させる反応容器３６を保持する反応容器保持部１４を備えている。ここで、試薬容器保持部１３ａの試薬容器３４には第１試薬が収容され、試薬容器保持部１３ｂの試薬容器３４には第２試薬が収容されている。また、測定機構１１は、検体移送部１２上の検体容器３１に収容されている検体を反応容器３６に分注する検体分注部１５、試薬容器保持部１３ａ，１３ｂ上の試薬容器３４に収容されている試薬を反応容器３６にそれぞれ分注する試薬分注部１６ａ，１６ｂ、反応容器３６に保持された検体，試薬或いはこれらの反応液を含む液体試料の光学的特性を測定する測光部１７及び反応容器３６の洗浄を行う洗浄部１８を備えている。測光部１７は、測定光の光源Ｌsと、遮光部材Ｓを介して液体試料を透過した測定光を測定する受光器Ｏrとを有しており（図６参照）、測定光の光量から液体試料の光学的特性を測定する。
【００１８】
図１に示すように、検体分注部１５による検体分注位置Ｐ1、試薬分注部１６ａによる試薬分注位置Ｐ2及び試薬分注部１６ｂによる試薬分注位置Ｐ3は、検体分注部１５及び試薬分注部１６ａ，１６ｂの配置に応じて予め決まっており、図示した検体分注位置Ｐ1または試薬分注位置Ｐ2，Ｐ3以外の位置で反応容器３６に検体や試薬を分注することはできない。なお、以後の説明においては、検体の分注、試薬の分注、分注後の攪拌、測光及び洗浄等のタイミングは、全ての分析項目で共通であるとする。これにより、自動分析装置１を用いた検査において、多様な検査項目を検査する際にも一定のスループットを得ることができる。
【００１９】
測定機構１１は、反応容器３６に収容される液体試料を攪拌する攪拌機構１９をさらに備えている。攪拌機構１９は、制御分析機構２１の説明を行った後に説明する。
【００２０】
制御分析機構２１は、自動分析装置１内の各機能または各手段の制御を行うとともに測定機構１１における測定結果を分析する演算を行うためにＣＰＵ（Central Processing Unit）等によって実現される装置制御部２２、検体の分析に必要な情報や自動分析装置１の動作指示信号の入力を受ける入力部２３、分析結果を含む情報を出力する、例えば、表示用ディスプレイからなる出力部２４、自動分析装置１の制御プログラムや自動分析装置１における分析結果を含む情報を記憶する記憶部２５、自動分析装置１の各部に対して駆動するための電源を供給する電源部２６及び判定部２７を備えている。
【００２１】
ここで、装置制御部２２は、入力部２３を介して自動分析装置１の外部（ユーザまたはホストコンピュータ）から分析要求が入力されると、その入力された分析要求に応じて、検査を行う検体や分析項目の順序等の情報を記憶部２５が記憶するテーブルに割り付ける。このテーブルには、分析に必要な試薬の種類や分注量、測光する波長や攪拌条件などに関する分析パラメータが予め分析項目ごとに記録されている。装置制御部２２はそのテーブルを参照し、攪拌条件に関する分析パラメータを記憶部２５から読み出し、この読み出した分析パラメータを制御信号として攪拌機構１９に送出する。また、装置制御部２２は、測光部１７が測定した液体試料及びブランク（対照）の光学的特性をもとに測定値としての吸光度と検体の所定の成分の濃度等を演算する。
【００２２】
特に、装置制御部２２は、攪拌機構１９による液体試料の攪拌の良否を判定する際、液体試料の攪拌中に光学的特性を測定するように攪拌機構１９及び測光部１７の動作を制御し、その測光データを時系列に出力部２４（例えば、表示用ディスプレイ）に表示することにより撹拌状態のモニタリングを可能にすると共に、判定部２７の判定結果をもとに、攪拌機構１９の攪拌動作を制御する。また、出力部２４は、液体試料の攪拌状態をモニタリングするための出力手段である。一方、判定部２７は、反応容器３６に保持された液体試料の光学的特性の測定値に基づいてこの液体試料の攪拌の良否を判定する。判定部２７は、判定結果を出力部２４へ出力する。
【００２３】
続いて、攪拌機構１９について説明する。図２は、攪拌機構１９の物理的な構成を模式的に示す図である。また、図３は、攪拌機構１９の機能構成を示すブロック図である。攪拌機構１９は、電源部２６から送出される直流の電源信号及び装置制御部２２から送出される交流の制御信号を伝送する信号伝送部１９１と、信号伝送部１９１から送出される制御信号に基づいて攪拌動作や反応容器保持部１４の移送動作の駆動制御を行う駆動制御部１９２と、駆動制御部１９２から送出される制御信号に応じて反応容器３６に保持された液体試料を攪拌する駆動信号を各々送出する複数の攪拌駆動部１９３とを有している。
【００２４】
各攪拌駆動部１９３には、電気的な接続状態の切替を行う切替手段である切替部１９４が接続されている。切替部１９４には、反応容器３６に収容される液体を攪拌する攪拌手段であって、音波または超音波を発生する複数の音波発生部１９５が並列に接続されている。なお、各切替部１９４に接続される音波発生部１９５の数は全て同じであってもよいし、異なっていてもよい。
【００２５】
攪拌機構１９は、上記以外の構成として、信号伝送部１９１から送出される電源信号を受信し、攪拌機構１９内の各部に適した電圧値に変換して各々出力する電源部１９６と、装置制御部２２からの制御信号に基づいて反応容器保持部１４を回転し、反応容器３６を所望の位置に移送する移送手段として、ステッピングモータ等を用いて実現される移送部１９７とを備えている。
【００２６】
なお、図２では、切替部１９４が音波発生部１９５と１対１に設けられるスイッチ１９４Ｓによって構成されている場合を図示している。以後の説明においては、スイッチ１９４Ｓによって切替部１９４が構成されている場合を主に説明するが、切替部１９４の構成がそのような場合に限定されるわけではない。
【００２７】
信号伝送部１９１はスリップリングを用いて実現され、固定部１９１ａ及び回転部１９１ｂを有している。回転部１９１ｂの回転軸は、反応容器保持部１４の鉛直方向の中心軸と一致し、移送部１９７の動作によって攪拌機構１９の連動部１９Ｃ（反応容器保持部１４、駆動制御部１９２、攪拌駆動部１９３、切替部１９４及び音波発生部１９５を含む）と連動して回転するように配設される。図３では、この連動部１９Ｃを１点鎖線で包囲して表示している。このような信号伝送部１９１を用いることにより、自動分析装置１は、攪拌機構１９に対して電源信号及び制御信号を常時伝送することができ、特に、反応容器保持部１４の回転中であっても所望位置の反応容器３６を攪拌することができる。
【００２８】
ところで、図２に示す場合には、電源部２６に接続される２本のリード線を電源供給用とし、装置制御部２２に接続される２本のリード線をシリアル通信による制御信号伝送用としている（それぞれ１本はグランド線用）。したがって、この図２に示す場合には、スリップリングの極数が少なくとも４であればよい。
【００２９】
攪拌駆動部１９３は、発振回路及び増幅回路を備え、駆動制御部１９２から送られてきた制御信号に基づいて、閉成状態のスイッチ１９４Ｓを介して接続される音波発生部１９５に対して駆動信号を印加する。この駆動信号は、周波数が数十ＭＨｚ（メガヘルツ）〜数百ＭＨｚ程度の比較的高い周波数を有する交流信号である。このように比較的高い周波数を有する交流信号が伝送される高周波回路では、回路を構成する部位ごとの特性インピーダンスの差に応じて信号の伝送効率が低下する。かかる不具合を回避するため、攪拌駆動部１９３から音波発生部１９５に至る伝送線路の特性インピーダンスと音波発生部１９５内の負荷のインピーダンスとを予め整合しておく（例えば一定値５０Ωに整合）。
【００３０】
音波発生部１９５は、図４に示すように、圧電体から成る基板１９５ａの表面に一対の櫛形電極（ＩＤＴ：Inter Digital Transducers）から成る振動子１９５ｂと、反応容器保持部１４に設けられる電極であってスイッチ１９４Ｓに接続される電極（図示せず）と接触可能であり、振動子１９５ｂに印加する駆動信号を攪拌駆動部１９３から受信する端子１９５ｃと、振動子１９５ｂと端子１９５ｃとを電気的に接続する導線１９５ｄとを有し、反応容器３６の測光用の窓部３６ｂが設けられている側壁３６ａに一体に取り付けられている。音波発生部１９５は、側壁３６ａの下方に設けられた測光用の窓部３６ｂを避けるようにして窓部３６ｂの上方に配置される。基板１９５ａは、反応容器３６の側壁３６ａとの間に両者の音響インピーダンスの整合を図る音響整合層が介在されている。
【００３１】
以上のように構成される自動分析装置１は、装置制御部２２の制御の下に作動し、回転する反応容器保持部１４の回転によって周方向に沿って搬送されてくる各反応容器３６に試薬分注部１６ａによって試薬容器保持部１３ａ上の試薬容器３４から第１試薬が分注された後、検体分注部１５によってラック３２に搭載された検体容器３１から検体が分注される。検体の分注後、再度反応容器保持部１４が回転し、回転している間に、試薬容器３４は、分注された第１試薬と検体が攪拌機構１９によって攪拌され、第１試薬と検体が反応する。
【００３２】
次いで、試薬容器３４は、試薬分注部１６ｂによって試薬容器保持部１３ｂ上の試薬容器３４から第２試薬が分注される。第２試薬の分注後、再度反応容器保持部１４が回転し、回転している間に、試薬容器３４は、第１試薬と検体の反応液が攪拌機構１９によって攪拌され、反応液が第２試薬と反応する。
【００３３】
このようにして、反応容器３６は、攪拌機構１９によって順次攪拌されて試薬と検体とが反応し、反応容器保持部１４の回転中に測光部１７を通過する。このとき、反応容器３６内の試薬と検体とが反応した反応液は、測光部１７において測光され、測光部１７から入力される光信号をもとに装置制御部２２が成分濃度等を分析する。そして、反応液の測光が終了した反応容器３６は、洗浄部１８に移送されて洗浄された後、再度検体の分析に使用される。
【００３４】
このとき、自動分析装置１は、図５に示すタイミングの下に、例えば、第１試薬の分注，攪拌、検体の分注、第１試薬と検体の攪拌及び液体試料の測光が実行される。即ち、図５に示すように、反応容器保持部１４の回転が停止しているタイミングＴR1において第１試薬が分注された後、反応容器保持部１４が回転する。そして、反応容器保持部１４が停止すると、タイミングＴMIX0において第１試薬が攪拌される。
【００３５】
次に、第１試薬の攪拌後、反応容器保持部１４が回転しているタイミングＴ0において測光部１７による測光が実行される。次いで、反応容器保持部１４の回転が停止したタイミングＴSPにおいて検体が分注される。その後、反応容器保持部１４が回転を開始し、回転しているタイミングＴMIX1において第１試薬と検体が攪拌されると共に、攪拌中のタイミングＴ1において測光部１７による測光が実行される。
【００３６】
この後、反応容器保持部１４の停止と回転を経て、反応容器保持部１４が回転し、攪拌中のタイミングＴ2，Ｔ3，Ｔ4………Ｔ27において測光部１７による測光が順次実行されると共に途中で第２試薬が分注され、反応容器３６に分注された検体の分析動作が進行してゆく。なお、上述した第１試薬の分注から第１試薬と検体の攪拌及び測光に至る各工程の間においては、図５に示したように、反応容器保持部１４が回転する。
【００３７】
そして、自動分析装置１は、測定した液体試料の光学的特性の測定値をもとに判定部２７が液体試料の攪拌の良否を判定する。この判定は、液体試料が理想状態で攪拌された場合の光学的特性の測定値である吸光度をもとに予め設定された測定基準値と、混合された液体試料の実際の測定値である吸光度との差分を所定の閾値と比較し、この比較をもとに判定部２７が液体試料の攪拌の良否を判定する。
【００３８】
このとき、測定基準値及び判定基準となる閾値は、測定項目ごとに予め設定され、図６に示すように、予め判定部２７に入力される。この入力作業は、入力部２３を通して行われる。また、図６に示すように、測光部１７の光源Ｌsから出射され、反応容器３６に保持された液体試料を透過した測定光は、遮光部材Ｓの開口Ｈを通って受光器Ｏrで測定され、受光量に対応した光信号が装置制御部２２へ出力され、吸光度が演算される。このようにして装置制御部２２が演算した吸光度は、出力部２４（例えば、表示用ディスプレイ）に時系列に図又は数値により画面表示される一方、判定部２７へ入力される。
【００３９】
この判定に際し、例えば、第１試薬と検体を攪拌する場合の吸光度の時間変化をモデル的に説明すると、第１試薬と検体が理想状態で攪拌された場合、図７に示すように、吸光度は、攪拌開始Ｓtの際の吸光度ＯＤsartから直線的に上昇して飽和値ＯＤmixedとなる実線のように変化したとする。このとき、攪拌中の測光部１７による測光は、吸光度が飽和値ＯＤmixedのときに実行されるように予めタイミングＴ1が設定されている。また、攪拌機構１９は、飽和値ＯＤmixedに確実に達してから攪拌終了Ｅdとなるようにタイミングが設定されている。
【００４０】
これに対して、実際の攪拌状態においては、攪拌状態にばらつきがあるため、図７に点線や１点鎖線で示すように、飽和値ＯＤmixedとなる時間に遅れが生じ、同じタイミングＴ1で測光した際の吸光度ＯＤA，ＯＤBに違いが生じてくる。そこで、例えば、タイミングＴ1において測光した際の吸光度ＯＤAと測定基準値である飽和値ＯＤmixedとの差分の絶対値が所定の閾値Ｔsより小さい場合（Ｔs＞｜ＯＤA−ＯＤmixed｜≧０）には攪拌が良好であり、前記差分の絶対値が閾値Ｔs以上の場合（Ｔs≦｜ＯＤA−ＯＤmixed｜）には攪拌不良と判定することができる。
【００４１】
従って、自動分析装置１は、前記差分の絶対値をもとに判定部２７が閾値Ｔsと比較することによって、液体試料の攪拌の良否を判定する。このとき、検体が理想状態で攪拌された場合における理想的な光学的特性の変化は、試薬毎に異なる。このため、閾値Ｔsは、検体が理想状態で攪拌された場合に測定した理想攪拌状態における吸光度及び経験値等を考慮して測定項目ごとに決定する。
【００４２】
ここで、図４で説明した反応容器３６に分注された試薬と検体を攪拌する場合を例にして攪拌の良否の判定を、図８に示すフローチャートを参照して以下に説明する。先ず、装置制御部２２は、試薬分注部１６ａに反応容器３６へ第１試薬を分注するように指示する（ステップＳ１００）。次に、装置制御部２２は、攪拌機構１９に反応容器３６へ分注された第１試薬の攪拌を指示する（ステップＳ１０２）。このタイミングが図５において説明したタイミングＴMIX0である。
【００４３】
次いで、装置制御部２２は、測光部１７に攪拌された第１試薬の測光を指示する（ステップＳ１０４）。このタイミングが図５において説明したタイミングＴ0である。その後、装置制御部２２は、検体分注部１５に反応容器３６へ検体を分注するように指示する（ステップＳ１０６）。
【００４４】
検体の分注後、装置制御部２２は、攪拌機構１９に反応容器３６へ分注された第１試薬と検体の攪拌を指示すると共に、攪拌中における液体試料、即ち、第１試薬と検体の測光を測光部１７に指示する（ステップＳ１０８）。このタイミングが図５において説明したタイミングＴMIX1，Ｔ1である。この結果、判定部２７には、第１試薬と検体の攪拌中のタイミングＴ1における吸光度が入力される。この吸光度をＯＤAとする。
【００４５】
次に、判定部２７は、吸光度ＯＤAと測定基準値である飽和値ＯＤmixedとの差分の絶対値が閾値Ｔs以下か否かを判定する（ステップＳ１１０）。差分の絶対値が閾値Ｔsよりも小さい場合（ステップＳ１１０，Ｙｅｓ）、攪拌は良好である。この場合、判定部２７は、装置制御部２２を介して表示部２４に攪拌が良好である旨の信号を出力し、表示部２４に攪拌良好と表示する。そして、判定部２７は、その反応容器３６に分注された第１試薬と検体の分析を続行する（ステップＳ１１２）。具体的には、装置制御部２２の制御の下に、タイミングＴ2，Ｔ3，Ｔ4………Ｔ27における測光と、その間における第２試薬の分注が実行され、反応容器３６に分注された検体の分析動作が進行してゆく。
【００４６】
次いで、装置制御部２２は、全分析工程が終了したか否かを判定し（ステップＳ１１４）、全分析工程が終了している場合（ステップＳ１１４，Ｙｅｓ）には、その反応容器３６に係る攪拌の良否の判定作業を終了する。このとき、装置制御部２２は、次の反応容器３６に係る攪拌の良否の判定作業に移行する。一方、全分析工程が終了していない場合（ステップＳ１１４，Ｎｏ）、装置制御部２２は、ステップＳ１１２に戻って反応容器３６に分注された第１試薬と検体の分析を続行する。
【００４７】
これに対して、差分の絶対値が閾値Ｔs以上の場合（ステップＳ１１０，Ｎｏ）、攪拌不良である。この場合、判定部２７は、装置制御部２２を介して表示部２４に攪拌不良である旨の警告信号を出力し、表示部２４に攪拌不良と表示する。そして、判定部２７は、差分の絶対値が許容範囲内か否かを判定する（ステップＳ１１６）。ここで、許容範囲は、前記差分の絶対値に関する閾値Ｔsと同様に、測定項目ごとに決定する。差分の絶対値が許容範囲内でない場合（ステップＳ１１６，Ｎｏ）、装置制御部２２は、その反応容器３６の分析を中止し（ステップＳ１１８）、その反応容器３６に係る攪拌の良否の判定作業を終了する。
【００４８】
一方、差分の絶対値が許容範囲内の場合（ステップＳ１１６，Ｙｅｓ）、装置制御部２２は、ステップＳ１１６における判定回数が１回目か否かを判定する（ステップＳ１２０）。判定回数が１回目でない場合（ステップＳ１２０，ＮＯ）、反応容器３６内の第１試薬と検体は攪拌不良であるうえ、補足攪拌を実行しても差分の絶対値が許容範囲内となることが期待できない。このため、装置制御部２２は、その反応容器３６の分析を中止し（ステップＳ１１８）、その反応容器３６に係る攪拌の良否の判定作業を終了する。
【００４９】
これに対して、判定回数が１回目の場合（ステップＳ１２０，Ｙｅｓ）、反応容器３６内の第１試薬と検体は攪拌不良ではあるが、補足攪拌を実行すれば差分の絶対値が許容範囲内となることが期待できる。このため、装置制御部２２は、攪拌機構１９に追加攪拌と測光を実行させる（ステップＳ１２２）。この追加攪拌は、例えば、図７において、攪拌機構１９の攪拌強度を保持して攪拌終了Ｅdから更に時間Ｌtだけ攪拌時間を延長する態様がある。また、追加攪拌は、攪拌機構１９の攪拌強度を増加して攪拌終了Ｅdから更に時間Ｌtだけ攪拌時間を延長する態様もある。ステップＳ１２２の終了後、装置制御部２２は、ステップＳ１１０に戻る。このとき、ステップＳ１１０の判定の結果、差分の絶対値が閾値Ｔsよりも小さい場合（ステップＳ１１０，Ｙｅｓ）、攪拌が良好のため分析が継続されるが、分析結果には所定のリマークを付して注意を喚起するようにする。
【００５０】
自動分析装置１は、以上のようにして分注された試薬と検体の攪拌中に光学的特性を測定することで、攪拌の良否の判定を反応容器３６ごとに行っており、これにより分析に要する時間を短縮することができる。
【００５１】
（変形例１）
ここで、吸光度ＯＤAと測定基準値である飽和値ＯＤmixedとの差分の絶対値に係る閾値を閾値Ｔs1とし、更に吸光度ＯＤAの飽和値ＯＤmixedから攪拌開始Ｓtの吸光度ＯＤsartを引いた値に対する比｛ＯＤA／（ＯＤmixed−ＯＤsart）｝に係る閾値を閾値Ｔs2とする。そして、例えば、タイミングＴ1において測光した際の吸光度ＯＤAをもとにこの２つの閾値Ｔs1，Ｔs2と比較すると、判定部２７は、攪拌状態をより正確に判定することができる。
【００５２】
（変形例２）
また、攪拌の良否を判定する際、タイミングＴ1において測光した際の吸光度ＯＤAと測定基準値である飽和値ＯＤmixedとの差分の絶対値に代え、タイミングＴ1において測光した際の吸光度ＯＤAと測定基準値である飽和値ＯＤmixedとの比（＝ＯＤA／ＯＤmixed）を所定の閾値Ｔsと比較することで攪拌の良否を判定してもよい。即ち、吸光度ＯＤAと測定基準値である飽和値ＯＤmixedとの比が所定の閾値Ｔsより大きい場合（Ｔs＜ＯＤA／ＯＤmixed≦１）には攪拌が良好であり、前記比が所定の閾値Ｔs以下の場合（Ｔs≧ＯＤA／ＯＤmixed）には攪拌不良と判定することができる。
【００５３】
従って、Ｔs≧ＯＤA／ＯＤmixedとなる攪拌不良の場合に、測定項目ごとに許容範囲を設定すれば、上述の手順に従って攪拌の良否を判定することができる。
【００５４】
（変形例３）
更に、測定基準値である飽和値ＯＤmixedとして、検体に代えて精度管理用試料が試薬と理想状態で攪拌された際の吸光度を飽和値ＯＤmixedとして使用し、１００検体毎に測定する精度管理用試料の吸光度と比較して攪拌の良否を判定してもよい。
【００５５】
この場合、所定数の検体、例えば、１００検体を挟んで測定した２回の精度管理用試料の吸光度が所定の閾値に対して上述の条件を満たしていれば、１００検体の攪拌は良好と判定することができる。但し、１回目の精度管理用試料の吸光度が所定の閾値に対して上述の条件を満たしていたにも拘わらず、１００検体後に測定した２回目の精度管理用試料の吸光度が所定の閾値に対して上述の条件を満たしていない場合があったとする。この場合には、その間の１００検体のいずれかの検体の攪拌中に攪拌機構１９に異常が発生したものと判断される。このため、このような場合、自動分析装置１は、分析を中止するか、分析を続行する場合には、「要再検」のリマークを付して分析結果を出力する。
【００５６】
変形例３は、検体以外によって攪拌の良否を判定することで、攪拌機構１９の異常の有無を発見することができるうえ、自動分析装置１の定期点検時における装置の較正にも利用することができる。
【００５７】
なお、上述の実施の形態１及び変形例１は、第１試薬と検体とを攪拌する場合について説明した。しかし、本発明の自動分析装置１は、第１試薬と検体とを攪拌して反応した反応液と第２試薬とを攪拌する場合にも、上述の手順に従って攪拌状態をモニタリングしたり、更には撹拌の良否を判定することができる。
【００５８】
（実施の形態２）
次に、本発明の分析装置及び分析方法にかかる実施の形態２について、図面を参照して詳細に説明する。実施の形態１の自動分析装置は、反応容器としてキュベットを使用していたのに対し、実施の形態２の自動分析装置はいわゆるラボオンナチップ（Lab-on-a-chip）タイプの透明な容器を使用している。図９は、本発明の分析方法を実行する自動分析装置の構成を反応テーブルを断面にして示すブロック図である。図１０は、図９の自動分析装置で用いる反応容器の概略構成を攪拌部と共に示す斜視図である。
【００５９】
自動分析装置４０は、図９に示すように、検体分注部４１、試薬分注部４２、反応テーブル４３、測光部４８、制御部４９及び攪拌部５０を備えている。
【００６０】
検体分注部４１は、図９に示すように、検体格納部４１ａに収容された検体を検体ノズル４１ｂから反応容器４５に分注する。試薬分注部４２は、試薬格納部４２ａに収容された試薬を試薬ノズル４２ｂから反応容器４５に分注する。検体分注部４１及び試薬分注部４２は、駆動手段によってそれぞれ個別に駆動され、反応容器４５の上方を反応容器４５の表面に沿って２次元方向に移動する。
【００６１】
反応テーブル４３は、図９に示すように、駆動モータ４４によって矢印で示す方向に回転され、外周には周方向に沿って配置される凹状に成形したホルダ４３ａが複数設けられている。各ホルダ４３ａは、底壁の中央に測光窓４３ｂが形成され、反応容器４５が着脱自在に収容される。
【００６２】
反応容器４５は、図１０に示すように、表面弾性波素子４６と保持部材４７とによって液体試料を保持して攪拌、かつ、測光する液体保持部Ｐpを形成している。液体保持部Ｐpは、保持部材４７の両側部分が互いに対向する開口Ｏp（図１１，図１２参照）となり、容量が数ｎＬ〜数十μＬの微量な液体試料を保持する。ここで、反応容器４５は、液体保持部Ｐpへの液体試料の導入が容易になるように、液体保持部Ｐpを形成する表面弾性波素子４６の上面及び保持部材４７の内面に液体に対する親和性を付与する処理が施されている。
【００６３】
表面弾性波素子４６は、音波（表面弾性波）によって液体試料を搬送して液体保持部Ｐpへ導入すると共に、液体試料を攪拌する攪拌手段であり、図１０に示すように、圧電基板４６ａ上に櫛型電極（ＩＤＴ）からなる振動子４６ｂ，４６ｃが保持部材４７を挟んで対向配置され、接触電極及びスイッチ５２を介して接続される駆動部５１によって駆動される。このため、自動分析装置４０は、スイッチ５２を切り替えるだけで、表面弾性波素子４６に対して電源信号及び制御信号を常時伝送することができ、特に、反応テーブル４３の回転中であっても所望位置の反応容器４５、即ち、表面弾性波素子４６を駆動することができる。
【００６４】
ここで、図１０において、保持部材４７の左側に配置される振動子４６ｂが試薬の搬送と攪拌を行い、保持部材４７の右側に配置される振動子４６ｃが検体Ｓpの搬送と試薬と検体の攪拌を行う。圧電基板４６ａは、表面に検体や試薬等の液体試料に対する非親和性処理が施され、水晶，ニオブ酸リチウム（ＬｉＮｂＯ3），タンタル酸リチウム（ＬｉＴａＯ3）等の透明な素材を使用することにより、保持部材４７の点線で示す部分を測光領域Ａpとして使用する。
【００６５】
保持部材４７は、透明素材によってチャンネル状に成形され、図１０に示すように、圧電基板４６ａ表面の振動子４６ｂ，４６ｃの中間に配置される。このため、液体保持部Ｐpは、液体試料の測光時に、保持した液体試料の光の透過方向における厚み、即ち、光路長を一定に規定する。
【００６６】
測光部４８は、図９に示すように、ホルダ４３ａを挟んで上下方向に対向する位置に設けられる測光手段であり、反応容器４５の液体保持部Ｐpに保持された液体試料を分析する光束ＢLを出射する光源４８ａと、液体保持部Ｐpの液体試料を透過してくる光束ＢLを分光して受光する受光器４８ｂを有している。測光部４８は、液体保持部Ｐpに保持された液体試料を透過した光束ＢLの光量から液体試料の光学的特性を測定する。ここで、測光部４８における測光が終了した反応容器４５は、洗浄装置に移送されて洗浄された後、再度、新たな検体の分析に使用される。
【００６７】
制御部４９は、図９に示すように、検体分注部４１、試薬分注部４２、駆動モータ４４、測光部４８及び駆動部５１と接続され、例えば、メモリとタイマを内蔵し、分析結果を記憶するマイクロコンピュータ等が使用される。制御部４９は、自動分析装置４０の各部の作動を制御し、受光器４８ｂから出力される透過光の情報に基づいて液体保持部Ｐpに保持された液体試料の吸光度を演算し、検体の成分濃度等を分析する。制御部４９は、前記吸光度をもとに液体保持部Ｐpに保持された液体試料の攪拌の良否を判定する判定部４９ａを有している。また、制御部４９は、検査項目等を入力する操作を行うキーボードやマウス等の入力部や、実施の形態１で述べたような撹拌状態を示す情報、分析内容、警報等を表示する出力部としてのディスプレイパネル等を備えている。
【００６８】
ここで、制御部４９は、駆動部５１を制御する場合には、例えば、表面弾性波素子４６が発する音波の特性（周波数，強度，位相，波の特性）、波形（正弦波，三角波，矩形波，バースト波等）或いは変調（振幅変調，周波数変調）等を制御する。また、制御部４９は、内蔵したタイマに従って発振器１２ａが発振する発振信号の周波数を切り替えることができる。更に、制御部４９は、スイッチ５２による振動子４６ｂ，４６ｃのオン，オフを切り替える際は、例えば、予め一連の動作に基づいて液体を液滴合体部Ｐuから液体保持部Ｐpに搬送して送り込み、或いは液体を液体保持部Ｐpから排出して液滴合体部Ｐuへ搬送するのに要する時間を計測しておき、この時間に基づいてスイッチ５２のオン，オフを切り替えるようにする。
【００６９】
攪拌部５０は、制御部４９による制御の下に表面弾性波素子４６を駆動して反応容器４５に保持される液体を攪拌する部分であり、図９に示すように、駆動部５１とスイッチ５２を有している。
【００７０】
駆動部５１は、図１０に示すように、制御回路５１ａと発振器５１ｂとを備えている。制御回路５１ａは、制御部４９から入力される制御信号に従って発振器５１ｂを発振させる。発振器５１ｂは、制御回路５１ａから入力される制御信号に基づいて発振周波数をプログラマブルに変更可能な発振回路を有しており、数十ＭＨｚ〜数百ＭＨｚ程度の高周波の発振信号を振動子４６ｂ，４６ｃへ出力する。
【００７１】
スイッチ５２は、複数の反応容器４５と接続されており、駆動部５１を介して制御部４９によって駆動信号の出力タイミングを切り替えることにより、反応テーブル４３の複数のホルダ４３ａのそれぞれに収容された複数の反応容器４５の特定の反応容器４５に駆動信号を出力すると共に、表面弾性波素子４６の振動子４６ｂ，４６ｃのオン，オフを切り替える。このとき、駆動信号の出力先は、制御部４９から駆動部５１を介して出力される制御信号中に含まれている。
【００７２】
以上のように構成される自動分析装置４０は、先ず、図１０に示すように、試薬ノズル４２ｂから圧電基板４６ａ上の振動子４６ｂ近傍の液体保持部Ｐp寄りに第１試薬Ｒ1を分注する。このとき、圧電基板４６ａは、表面に検体や試薬等の液体に対する非親和性処理が施されているので、第１試薬Ｒ1は表面に拡がることなく液滴となる。
【００７３】
次に、表面弾性波素子４６の振動子４６ｂを駆動して表面弾性波を発生させ、この表面弾性波によって第１試薬Ｒ1を保持部材４７に向かって液滴の状態で圧電基板４６ａの表面に沿って搬送する。これにより、第１試薬Ｒ1は、表面弾性波素子４６と保持部材４７とによって形成される液体保持部Ｐpに送り込まれ、保持される。
【００７４】
その後、自動分析装置４０は、制御部４９の制御の下、スイッチ５２を切り替えて振動子４６ｂをオフにし、駆動モータ４４を駆動して反応テーブル４３を回転させ、第１試薬Ｒ1が分注された反応容器４５を測光部４８へ移動させる。これにより、反応容器４５は、光源４８ａから出射された分析光がホルダ４３ａ下部の測光窓４３ｂから照射され、図９に示すように、第１試薬Ｒ1を透過した光束ＢLが保持部材４７から下方へ出射する。
【００７５】
すると、受光器４８ｂが、液体保持部Ｐpを透過してくる光束を受光し、光情報を制御部４９へ出力する。この光情報に基づき、制御部４９は、第１試薬Ｒ1の吸光度を算出し、記憶する。このとき、光路長は、液体保持部Ｐpによって一定に規定される。
【００７６】
このようにして第１試薬Ｒ1に関するブランク測光が終了した後、自動分析装置４０は、制御部４９の制御の下、駆動モータ４４を駆動して反応テーブル４３を回転させ、第１試薬Ｒ1が分注された反応容器４５を検体分注部４１へ移動させる。
【００７７】
次に、自動分析装置４０は、制御部４９の制御の下、図１０に示すように、検体ノズル４１ｂから検体Ｓpを圧電基板４６ａ上の振動子４６ｃと近液体保持部Ｐpとの間に分注する。そして、自動分析装置４０は、制御部４９の制御の下、スイッチ５２を切り替えて振動子４６ｃをオンにし、分注された検体Ｓpを圧電基板４６ａの表面に沿って液体保持部Ｐpへ搬送する。
【００７８】
これにより、図１１に示すように、液体保持部Ｐpにおいて検体Ｓpを第１試薬Ｒ1と合体させる。ここで、図１１は、振動子４６ｂ，４６ｃ及び保持部材４７の中央を通って切断した反応容器４５の断面図である。
【００７９】
検体Ｓpを第１試薬Ｒ1と合体させた後、自動分析装置４０は、制御部４９の制御の下、駆動モータ４４を駆動して反応テーブル４３を回転させ、反応容器４５を測光部４８へ移動させる。そして、自動分析装置４０は、振動子４６ｃを更に駆動し、検体Ｓpと第１試薬Ｒ1とを攪拌して反応させ、図１２に示すように、攪拌中に測光部４８によって検体Ｓpと第１試薬Ｒ1との反応液Ｌrを測光する。このとき、測光部４８は、液体保持部Ｐpを透過してくる光束を受光器４８ｂが受光し、反応液Ｌrの光情報を制御部４９へ出力する。
【００８０】
次いで、自動分析装置４０は、制御部４９の制御の下、駆動モータ４４を駆動して反応テーブル４３を回転させ、反応容器４５を試薬分注部４２へ移動させ、試薬格納部４２ａに収容された第２試薬を試薬ノズル４２ｂから反応容器４５に分注する。このとき、第２試薬は、振動子４６ｂ近傍の液体保持部Ｐp寄りに分注する。そして、自動分析装置４０は、制御部４９の制御の下、振動子４６ｂを駆動して第２試薬を液体保持部Ｐpへ搬送し、反応液Ｌrと合体させる。
【００８１】
その後、自動分析装置４０は、制御部４９の制御の下、駆動モータ４４を駆動して反応テーブル４３を回転させ、反応容器４５を測光部４８へ移動させる。そして、自動分析装置４０は、振動子４６ｂを更に駆動して第２試薬と反応液Ｌrとを攪拌する。そして、第２試薬と反応液Ｌrとの反応液を測光する。このとき、測光部４８は、液体保持部Ｐpを透過してくる光束を受光器４８ｂが受光し、反応液の光情報を制御部４９へ出力する。
【００８２】
制御部４９は、以上のようにして測光部４８から入力される反応液Ｌrや反応液の光情報をもとに液体保持部Ｐpに保持された液体試料の吸光度を演算し、検体の成分濃度等を分析する。
【００８３】
このとき、判定部４９ａは、測定した液体試料の光学的特性の測定値をもとに液体試料の攪拌の良否を判定する。この判定は、実施の形態１において説明したように、液体試料が理想状態で攪拌された場合の光学的特性の測定値である吸光度をもとに予め設定された測定基準値と、混合された液体試料の実際の測定値である吸光度との差分を所定の閾値と比較し、この比較をもとに判定部２７が液体試料の攪拌の良否を判定する。
【００８４】
判定の結果、攪拌不良ではあるが、更なる攪拌を実行すれば差分が所定の許容範囲内となることが期待できる場合がある。このような場合、制御部４９は、検体Ｓpと第１試薬Ｒ1とを攪拌して反応させる振動子４６ｃの攪拌強度を保持した状態で攪拌時間を延長するか、或いは振動子４６ｃの攪拌強度を増加しつつ攪拌時間を延長する追加攪拌を自動分析装置４０に実行させる。
【００８５】
上述の攪拌の良否判定においては、吸光度の差分に代えて、吸光度の比を使用してもよいし、実施の形態１で説明した他の変形例を適用してもよい。
【００８６】
（変形例）
ここで、反応容器４５は、保持部材４７を使用するのに代えて、図１３に示す反応容器５０を使用してもよい。反応容器５０は、表面弾性波素子を使用したものであり、図１３に示すように、圧電基板５０ａ上に導波路５０ｂを介して金薄膜５０ｃ及び振動子５０ｄが形成され、金薄膜５０ｃの部分がプラズモン共鳴を利用した測光領域として使用される。ここで、反応容器５０は、導波路５０ｂ表面の試薬ノズル４２ｂが試薬Ｒを分注する部分が、他の部分よりも試薬Ｒに対する親和性が高くなるように親和性処理が施されて液体保持部Ｐp1が形成されている。また、金薄膜５０ｃの表面は、検体ノズル４１ｂが検体Ｓpを分注する部分が、他の部分よりも検体Ｓpから反応容器４５に分注するに対する親和性が高くなるように親和性処理が施されて液体保持部Ｐp2が形成されている。
【００８７】
このような構成とすることにより、反応容器５０は、液体保持部Ｐp1に試薬ノズル４２ｂによって試薬Ｒが分注され、金薄膜５０ｃ表面の液体保持部Ｐp2に検体ノズル４１ｂによって検体Ｓpが分注される。そして、反応容器５０は、図１４に示すように、振動子５０ｄが発生する表面弾性波Ｗa1によって試薬Ｒを導波路５０ｂ表面に沿って液体保持部Ｐp2に保持された検体Ｓp側へと移動させる。
【００８８】
そして、反応容器５０は、導波路５０ｂ表面に沿って移動する試薬Ｒが検体Ｓpと合体した後、振動子５０ｄに印加する電力を調整し、図１５に示すように、合体した試薬Ｒと検体Ｓpとを液体保持部Ｐp2に保持した状態で振動子５０ｄが発生する表面弾性波Ｗa２によって攪拌し、試薬Ｒと検体Ｓpとが反応した反応液Ｌrとする。この攪拌中に、反応容器５０は、導波路５０ｂに振動子５０ｄ側から所定の測定光を入射させ、プラズモン共鳴を利用して測光を行うことにより検体Ｓpの成分濃度を求めても良い。
【００８９】
なお、実施の形態１，２の自動分析装置は、共に第１試薬と第２試薬の２つの試薬を使用する分析装置について説明したが、本発明の分析装置は、単一の試薬を使用する装置であってもよい。また、本発明において、撹拌状態としてモニタリングする内容には、判定部２７，４９ａにおける判定結果であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００９０】
【図１】本発明の自動分析装置の要部構成を模式的に示す図である。
【図２】攪拌機構の物理的な構成を模式的に示す図である。
【図３】攪拌機構の機能構成を示すブロック図である。
【図４】反応容器および音波発生部の構成を示す図である。
【図５】自動分析装置における第１試薬の分注，攪拌、検体の分注、第１試薬と検体の攪拌及び液体試料の測光に関するタイミングを示す図である。
【図６】測光部の構成と、装置制御部、出力部、判定部及び音波発生部の攪拌駆動部を示すブロック図である。
【図７】第１試薬と検体を攪拌した場合の吸光度の時間変化をモデル的に説明する図である。
【図８】試薬と検体を攪拌する場合における攪拌の良否判定と、判定結果に基づく処理を説明するフローチャートである。
【図９】本発明の分析方法を実行する自動分析装置の構成を反応テーブルを断面にして示すブロック図である。
【図１０】図９の自動分析装置で用いる反応容器の概略構成を攪拌部と共に示す斜視図である。
【図１１】振動子及び保持部材の中央を通って切断した反応容器の断面図である。
【図１２】図１１に示す反応容器において、検体と第１試薬とを攪拌して反応した反応液の測光を説明する断面図である。
【図１３】実施の形態２の自動分析装置で使用する反応容器の変形例を示す断面図である。
【図１４】図１３に示す反応容器において、分注された試薬を検体側へと移動させる様子を示す断面図である。
【図１５】図１４に示す反応容器において、合体した試薬と検体とを振動子が発生する表面弾性波によって攪拌する様子を示す断面図である。
【符号の説明】
【００９１】
１              自動分析装置
１１            測定機構
１２            検体移送部
１３ａ，１３ｂ  試薬容器保持部
１４            反応容器保持部
１５            検体分注部
１６ａ，１６ｂ  試薬分注部
１７            測光部
１８            洗浄部
１９            攪拌機構
２１            制御分析機構
２２            装置制御部
２３            入力部
２４            出力部
２５            記憶部
２６            電源部
２７            判定部
３１            検体容器
３２            ラック
３４            試薬容器
３６            反応容器
４０            自動分析装置
４１            検体分注部
４２            試薬分注部
４３            反応テーブル
４４            駆動モータ
４５            反応容器
４６            表面弾性波素子
４７            保持部材
４８            測光部
４９            制御部
４９ａ          判定部
５０            攪拌部
５１            駆動部
５２            スイッチ
【図１】
2009162585.tif 000003
【図２】
2009162585.tif 000004
【図３】
2009162585.tif 000005
【図４】
2009162585.tif 000006
【図５】
2009162585.tif 000007
【図６】
2009162585.tif 000008
【図７】
2009162585.tif 000009
【図８】
2009162585.tif 000010
【図９】
2009162585.tif 000011
【図１０】
2009162585.tif 000012
【図１１】
2009162585.tif 000013
【図１２】
2009162585.tif 000014
【図１３】
2009162585.tif 000015
【図１４】
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【図１５】
2009162585.tif 000017