(57)【要約】【課題】骨粗鬆症治療剤として有用な新規ビタミンＤ３誘導体を提供する。【解決手段】下記式（１）で表されるプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物。【化１】2009209085.tif 000011［式中、Ｒは水素原子もしくは炭素数１〜４のアルキル基を表す。］【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表されるプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物。
【化１】
2009209085.tif 000010
［式中、Ｒは水素原子もしくは炭素数１〜４のアルキル基を表す。］
【請求項２】
前記式（１）のＲが水素原子である請求項１に記載のプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物。
【請求項３】
前記式（１）のＲがメチル基である請求項１に記載のプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物。
【請求項４】
請求項１から請求項３のいずれかに記載のビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物と、製薬学的に許容される担体とからなる医薬組成物。
【請求項５】
請求項１から請求項３のいずれかに記載のビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物を有効成分として含有する、骨粗鬆症、悪性腫瘍、乾癬症、副甲状腺機能亢進症、炎症性呼吸器疾患、関節リウマチ、真性糖尿病、高血圧症、脱毛症、アクネ、および皮膚炎からなる群から選ばれる一つ以上の疾患の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品として有用な４−置換−１４−エピ−プレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物、およびそれらを用いた骨粗鬆症治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性型ビタミンＤ３誘導体は、小腸でのカルシウム吸収促進作用を有し、骨では骨吸収、骨形成を調節する等の作用を有し、骨粗鬆症の治療剤として使用されている。また、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の分泌抑制作用を有し、ＰＴＨの亢進した二次性副甲状腺機能亢進症の治療に用いられている。さらに、これらの作用に加えて免疫調節作用、細胞増殖抑制作用や細胞分化誘導作用が見いだされ、例えば、癌、乾癬、関節リウマチ、真性糖尿病、高血圧症、アクネ、湿疹、皮膚炎等の疾患治療剤への適応が検討されている。
【０００３】
一般にビタミンＤ３誘導体（２）は、下記スキーム１に示すようにプレ体（３）との平衡状態で存在する。なお、下記スキーム１は代表的な活性型ビタミンＤ３である１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の場合を示している。
【０００４】
【化１】
2009209085.tif 000002
【０００５】
この平衡におけるプレ体の存在比は一般に小さいことから、プレ体の医薬品への適用可能性は詳しく研究されていない。
ところで、ビタミンＤ３誘導体の１４位をエピ化させた１４−エピ体は、平衡がプレ体に偏り、これが安定に存在することがオカムラらにより報告されている（下記スキーム２、非特許文献１参照）。
【０００６】
【化２】
2009209085.tif 000003
【０００７】
しかしながら、これまでにプレ体（５）についてビタミンＤレセプターへの親和性やｉｎ  ｖｉｖｏでの小腸カルシウム吸収、骨カルシウム動員などが報告されているものの（非特許文献１、特許文献１参照）、これらの活性は活性型ビタミンＤ３誘導体に比較して非常に弱く、プレ体（５）についてはビタミンＤ様作用を利用したさまざまな疾患に対する治療剤としての効果は期待できなかった。また、プレ体（５）以外に安定に存在するプレビタミンＤ３誘導体は報告されておらず、プレビタミンＤ３誘導体の疾患治療剤としての有用性は未だ確認されていない。すなわち、プレビタミンＤ３誘導体についての技術的知見、特に生理活性に関する知見は、ほとんど蓄積されていなかった。
【０００８】
一方、ビタミンＤ３骨格の４位への化学修飾は、メチル置換体（非特許文献２参照）、ジメチル置換体（非特許文献３参照）、フッ素置換体（非特許文献４参照）などが知られている。しかしながら、これらの活性は報告されていないか、されていても非常に弱いものであった。さらに同様の効果がプレビタミンＤ３誘導体に適用できるか否かは、その分子構造がプレビタミンＤ３骨格と全く異なることから予測不可能である。
【０００９】
【特許文献１】国際公開第９５／０１７１９７号パンフレット
【非特許文献１】ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）、３７巻、２３８７−２３９３頁、１９９４年
【非特許文献２】ポシッシュ・ジャーナル・オブ・ケミストリー（Ｐｏｌｉｓｈ  Ｊ．  Ｃｈｅｍ。）、７１巻、１３２１−１３２８頁、１９９７年
【非特許文献３】アメリカン・ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイエティ（Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．）、１００巻、５６２６−５６３４頁、１９７８年
【非特許文献４】テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ．  Ｌｅｔｔ．）、４０巻、１６９７−１７００頁、１９９９年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、ビタミンＤ様作用を有するビタミンＤ３誘導体を提供することである。
また、本発明の目的は、それらビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物を有効成分として含有する骨粗鬆症、悪性腫瘍、乾癬症、副甲状腺機能亢進症、炎症性呼吸器疾患、関節リウマチ、真性糖尿病、高血圧症、脱毛症、アクネ、または皮膚炎の治療剤を提供することである。
さらに、本発明の目的は、それらビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物を含んでなる医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは上記目的で鋭意研究した結果、以下の発明に到達した。
すなわち、本発明は下記式（１）で表されるプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物である。
【００１２】
【化３】
2009209085.tif 000004
【００１３】
ここで式（１）中のＲは、水素原子もしくは炭素数１〜４のアルキル基を表す。
また、本発明は、上記式（１）で表されるビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物と、製薬学的に許容される担体とからなる医薬組成物である。
【００１４】
また、本発明は、上記式（１）で表されるビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物を有効成分として含有する、骨粗鬆症、悪性腫瘍、乾癬症、副甲状腺機能亢進症、炎症性呼吸器疾患、関節リウマチ、真性糖尿病、高血圧症、脱毛症、アクネ、および皮膚炎からなる群から選ばれる一つ以上の疾患の治療剤である。
【００１５】
なお、上記式（１）で表されるプレビタミンＤ３誘導体は、溶液中ではそれに対応する少量のビタミンＤ３誘導体と平衡状態にあるが、かかるビタミンＤ３誘導体やその医薬上許容される溶媒和物も本発明の範囲に含まれる。また、かかるビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物と、製薬学的に許容される担体とからなる医薬組成物も本発明の範囲に含まれる。さらに、かかるビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物を有効成分として含有する骨粗鬆症、悪性腫瘍、乾癬症、副甲状腺機能亢進症、炎症性呼吸器疾患、関節リウマチ、真性糖尿病、高血圧症、脱毛症、アクネ、および皮膚炎からなる群から選ばれる一つ以上の疾患の治療剤も本発明の範囲に含まれる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、骨粗鬆症、悪性腫瘍、乾癬症、副甲状腺機能亢進症、炎症性呼吸器疾患、関節リウマチ、真性糖尿病、高血圧症、脱毛症、アクネ、皮膚炎などに代表される様々な疾患の治療に有効なプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明における用語の定義は以下の通りである。
アルキル基とは、直鎖、分岐鎖、あるいは環状の脂肪族炭化水素基をいう。Ｃ１−Ｃ４のアルキル基とは、炭素数１から４のアルキル基を意味し、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基を具体的な基として挙げることができる。
【００１８】
上記式（１）中、Ｒは水素原子もしくは炭素数１〜４のアルキル基を表す。これらの中でも、水素原子、メチル基が好ましい。
なお、上記式（１）中、４位の立体配置は、Ｒ配置、Ｓ配置のいずれでもよい。
【００１９】
本発明のプレビタミンＤ３誘導体は、必要に応じてその医薬上許容される溶媒和物に変換することができる。そのような溶媒としては、水、メタノ−ル、エタノ−ル、１−プロパノール、２−プロパノール、ブタノ−ル、ｔ−ブタノ−ル、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエ−テル、ｔ−ブチルメチルエ−テル、ベンゼン、トルエン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ等を挙げることができる。特に、水、メタノ−ル、エタノ−ル、１−プロパノール、２−プロパノール、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチルを好ましいものとして挙げることができる。
【００２０】
本発明のプレビタミンＤ３誘導体の具体例としては、以下のものが挙げられる。
化合物（１ａ）：  ４（Ｒ）−ヒドロキシ−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３
化合物（１ｂ）：  ４（Ｓ）−ヒドロキシ−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３
化合物（１ｃ）：  ４（Ｒ）−メトキシ−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３
化合物（１ｄ）：  ４（Ｓ）−メトキシ−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３
化合物（１ｅ）：  ４（Ｒ）−エトキシ−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３
化合物（１ｆ）：  ４（Ｓ）−エトキシ−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３
【００２１】
上記式（１）で表されるプレビタミンＤ３誘導体の製造はいかなる方法で行ってもよいが、例えば下記スキ−ム３のように行うことができる。すなわち、文献既知の化合物（６）（ウーら（Ｙ．Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．）、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、３７７９−３８１８頁、２００１年）と、化合物（７）をカップリングした後、水酸基の保護基を脱保護し、化合物（９）と目的物（１）の混合物を得る。これを熱異性化させて目的物（１）に平衡を偏らせた後、分離精製を行うことで目的物（１）を得ることができる。
【００２２】
【化４】
2009209085.tif 000005
【００２３】
（スキーム中、Ｒ’は、水酸基の保護基あるいは炭素数１〜４のアルキル基を表す。ＴＢＳはｔ−ブチルジメチルシリル基を表す。）
上記式（１）で表されるプレビタミンＤ３誘導体のうち、Ｒが水酸基である化合物は、上記スキーム３において、化合物（７）のＲ’が水酸基の保護基である化合物を用いることにより製造できる。この水酸基の保護基のうち、保護基がＴＢＳである化合物は、例えば、エンイン化合物（１０）から下記スキーム４記載の方法に従って製造することができる。すなわち、文献既知の化合物（１０）（ウィギンス（Ｗｉｇｇｉｎｓ）、メソッズ・カルボハイドレート・ケミストリー（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．  Ｃｈｅｍ．）、２巻、１８８−１９１頁、１９６３年）を還元し、生成した水酸基をＴＢＳで保護して化合物（１２）を得る。これをブロモ化、亜鉛還元により開環して化合物（１４）を得る。これに対してアセチレンパーツを導入し、ベンゾイル基の除去、ＴＢＳ保護により化合物（１７）を得る。これにヒドロキシメチルパーツを導入し、引き続き還元的にヨード化して化合物（１９）を得る。次にパラジウムにより閉環して化合物（２０）を得、その一級水酸基をホスフィンオキシドに変換することにより化合物（７）（Ｒ’＝ＴＢＳ）を合成することができる。
【００２４】
【化５】
2009209085.tif 000006
【００２５】
なお、上記スキーム４中、化合物（１５）の生成反応において、４位の立体配置は単一のものが得られるが、化合物（１５）を光延反応に付す、水酸基を酸化・還元する、などの処理により４位の立体配置が反転した化合物を得、以降上記と同様に反応させることにより、４位の立体配置が上述のものとは逆である化合物（１）を得ることができる。
【００２６】
上記式（１）で表されるプレビタミンＤ３誘導体のうち、Ｒが炭素数１〜４のアルキル基である化合物は、上記スキーム３において、化合物（７）のＲ’が炭素数１〜４のアルキル基である化合物を用いることにより製造できる。このような化合物は、例えば、上記スキーム４中の化合物（１５）の水酸基を炭素数１〜４のアルキル基でエーテル化し、以降はスキーム４記載の方法と同様にして製造することができる。４位の立体配置については上記と同様にして（Ｒ）体、（Ｓ）体両方を製造することができる。
【００２７】
以上のようにして得られるプレビタミンＤ３誘導体は、必要に応じて前述のような医薬上許容される溶媒和物に変換することができる。
かかる溶媒和物は、フリーの化合物（１）を該溶媒、あるいは該溶媒を含有する混合溶媒より再結晶することにより、得ることができる。
【００２８】
本発明のプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物を有効成分として含有する骨粗鬆症等の治療剤は、通常製剤化に用いられる担体や賦形剤、その他の添加剤を用いて調製される。製剤用の担体や賦形剤としては、固体または液体いずれでもよく、例えば乳糖、ステアリン酸マグネシウム、スターチ、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコールや、その他常用のものが挙げられる。投与は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等による経口投与、あるいは静注、筋注等の注射剤、坐剤、経皮等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。
【００２９】
本発明の有効成分の治療有効量は、投与経路、患者の年齢、性別、疾患の程度によって異なるが、通常０．００１〜１００００μｇ／日程度であり、投与回数は通常１〜３回／日ないし１〜３回／週であり、このような条件を満足するように製剤を調製するのが好ましい。
なお、本発明の疾患治療剤は、既存の薬剤と併用することも可能である。
【実施例】
【００３０】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。
【００３１】
［実施例１］
４（Ｒ）−ヒドロキシ−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３（化合物（１ａ））または４（Ｓ）−ヒドロキシ−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３（化合物（１ｂ））の製造
【００３２】
【化６】
2009209085.tif 000007
【化７】
2009209085.tif 000008
【００３３】
（Ａ）文献既知の化合物（１０）（ウィギンス（Ｗｉｇｇｉｎｓ）、メソッズ・カルボハイドレート・ケミストリー（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．  Ｃｈｅｍ．）、２巻、１８８−１９１頁、１９６３年）（６８９ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦの溶液（８．５ｍＬ）にＬｉＡｌＨ４（２９３ｍｇ、７．８ｍｍｏｌ）を０℃で加え、一晩室温で攪拌した。その溶液に０℃でＨ２Ｏ（０．３ｍＬ）を加えた。次いで２０％ＮａＯＨ水溶液（０．３ｍＬ）を加え、さらにＨ２Ｏ（０．９ｍＬ）を加えた。セライトろ過し、濃縮したところ、化合物（１１）（６７３ｍｇ、２．５３ｍｍｏｌ、９７％）が無色油状物質として得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 2.00-2.09 (m, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.70-3.85 (m, 3H), 3.92-3.98 (m, 2H), 4.22 (ddd, J = 2.7, 3.9, 5.6 Hz, 1H), 4.54 (s, 1H), 5.55 (s, 1H), 7.31-7.36 (m, 3H), 7.43-7.47 (m, 2H); EI-HRMS calcd for C14H18O5(M+Na)+ calcd 289.1014, found 289.1052.
【００３４】
（Ｂ）上記で得られた化合物（１１）（１．８８ｇ、７．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタンの溶液（７０ｍＬ）にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．７ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。そしてＴＢＳＯＴｆ（２．４ｍＬ、９．８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。１時間室温で攪拌した。その溶液に０℃でＨ２Ｏを加えた。それを酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝３０／１）で精製したところ、化合物（１２）（２．５ｇ、６．５５ｍｍｏｌ、９３％）が無色油状物質として得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 0.06 (s, 3H), 0.07 (s, 3H), 0.90 (s, 9H), 1.92-1.99 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.75-3.77 (m, 2H), 3.92-3.93 (m, 1H), 3.96 (ddd, J = 5.4, 9.0, 10.0 Hz, 1H), 4.20 (ddd, J = 2.7, 2.7, 5.4 Hz, 1H), 4.40 (s, 1H), 5.50 (s, 1H), 7.29-7.36 (m, 3H), 7.45-7.48 (m, 2H); EI-HRMS calcd for C20H32O5Si (M+Na)+ calcd 381.2106, found 381.2097.
【００３５】
（Ｃ）上記で得られた化合物（１２）（８４２ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４の溶液（２２ｍＬ）にＮＢＳ（４０９ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。そしてＢａＣＯ３（５３５ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ）を室温で加えた。９０℃で１時間攪拌した。その溶液に０℃で飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液を加えた。それをジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して、残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝３０／１）で精製したところ、化合物（１３）（８７６ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ、８６％）が無色油状物質として得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 0.06 (s, 3H), 0.1 (s, 3H), 0.91 (s, 9H), 1.95 (ddd, J = 2.3, 10.4, 12.9 Hz, 1H), 2.18 (ddd, J = 4.6, 4.6, 12.9 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 8.3, 10.9 Hz, 1H ), 3.46 (s, 3H), 3.57 (dd, J = 2.5, 10.9 Hz, 1H), 3.87 (br d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.03 (ddd, J = 2.5, 8.3, 10.0 Hz, 1H), 4.51 (s, 1H), 5.23 (ddd, J = 4.6, 10.0, 10.4 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.53-7.57 (m, 1H), 7.99 (dd, J = 1.3, 7.8 Hz, 2H); EI-HRMS calcd for C20H31O5SiBr (M+Na)+ calcd 481.1018, found 481.1022.
【００３６】
（Ｄ）上記で得られた化合物（１３）（２．４９ｇ、５．２８ｍｍｏｌ）のＰｒＯＨ／Ｈ２Ｏ＝５／１の溶液（３２．５ｍＬ）に活性Ｚｎ末（７．０７ｇ、１１０ｍｍｏｌ）を室温で加え、９０℃で２０分間攪拌した。その溶液に活性Ｚｎ末（７．１ｇ、１１０ｍｍｏｌ）を室温で加え、９０℃でさらに２０分間攪拌した。同じ作業をあと５回繰り返した。吸引ろ過でＺｎ末を取り除き、濃縮した。それを酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝３０／１）で精製したところ、化合物（１４）（１．６７ｇ、４．７８ｍｍｏｌ、９１％）が無色油状物質として得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 0.00 (s, 3H), 0.03 (s, 3H) 0.89 (s, 9H), 1.92 (ddd, J = 3.8, 9.1, 14.3 Hz, 1H), 2.17 (ddd, J = 3.7, 9.9, 14.3 Hz, 1H), 4.15 (ddd, J = 1.5, 3.7, 9.1 Hz, 1H), 5.21 (dt, J = 1.0, 10.5 Hz, 1H), 5.33 (dt, J = 1.0, 17.3 Hz, 1H), 5.57-5.62 (m, 1H), 5.88 (ddd, J = 6.4, 10.5, 17.3 Hz, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.52-7.56 (m, 1H), 8.01-8.03 (m, 2H), 9.63 (d, J = 1.5 Hz, 1H), EI-HRMS calcd for C19H28O4Si (M+Na)+ calcd 371.1652, found 371.1655.
【００３７】
（Ｅ）ＴＭＳ−アセチレン（０．３ｍＬ、２．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（７．３ｍＬ）にｎ−ＢｕＬｉヘキサン溶液（１．６Ｍ、１．２ｍＬ、１．８３ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、３０分間攪拌した。その溶液に上記で得られた化合物（１４）（２５６ｍｇ、０．７３５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を加え、４５分間攪拌した。室温に戻し、０℃で飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝３０／１）で精製したところ、化合物（１５）（３２０ｍｇ、０．７１２ｍｍｏｌ、９７％）が無色油状物質として得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 0.02 (s, 3H), 0.04 (s, 3H), 0.21 (s, 9H), 0.90 (s, 9H), 1.98 (ddd, J = 3.2, 8.9, 14.7 Hz, 1H), 2.04 (s, 1H), 2.27 (ddd, J = 3.2, 10.3, 14.7 Hz, 1H), 3.95 (ddd, J = 3.2, 3.2, 8.9 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.21 (dt, J = 1.0, 10.5 Hz, 1H), 5.33 (dt, J = 1.0, 17.3 Hz, 1H), 5.50-5.55 (m, 1H), 5.92 (ddd, J = 6.2, 10.5, 17.3 Hz, 1H), 7.44 (t, J = 8.0 Hz, 2H) 7.54-7.58 (m, 1H), 8.05 (dd, J = 1.0, 8.0 Hz, 2H), EI-HRMS calcd for C24H38O4Si2 (M+Na)+calcd 469.2206, found 469.2206.
【００３８】
（Ｆ）上記で得られた化合物（１５）（７２７ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１６ｍＬ）に炭酸カリウム（６７４ｍｇ、４．８６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、４時間攪拌した。その溶液に０℃で飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル＝５０／１）で精製したところ、化合物（１６）（３８６ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ、８８％）が無水油状物質として得られた。なお、このサンプルには下記誘導体（１６’）が２５％含まれる。
【００３９】
【化８】
2009209085.tif 000009
【００４０】
1H NMR major: (400 MHz, CDCl3) δ = 0.11 (s, 3H), 0.14 (s, 3H), 0.88 (s, 9H), 1.73 (ddd, J = 2.9, 7.9, 14.5 Hz, 1H), 1.84 (ddd, J = 3.4, 9.5, 14.5 Hz, 1H), 2.42 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 2.61 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.92 (dt, J = 2.9, 5.3 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 2.2, 4.3 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 5.12 (dt, J = 1.5, 10.5 Hz, 1H), 5.28 (dt, J = 1.5, 17.2 Hz, 1H), 5.91 (ddd, J = 5.3, 10.5, 17.2 Hz, 1H), EI-HRMS calcd for C14H26O3Si (M+Na)+ calcd 293.1529, found 293.1549.
【００４１】
（Ｇ）上記で得られた化合物（１６）（３１ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１．２ｍＬ）にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１２ｍＬ、０．３４５ｍｍｏｌ）を０℃で加え、次いでＴＢＳＯＴｆ（０．０８ｍＬ、０．１６ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。その溶液に０℃でＨ２Ｏを加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）で精製したところ、化合物（１７）（５９ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ、１００％）が無水油状物質として得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 0.01 (s, 3H), 0.03 (s, 3H), 0.06 (s, 3H), 0.08 (s, 3H), 0.11 (s, 3H), 0.12 (s, 3H), 0.88 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 0.90 (s, 9H), 1.60 (ddd, J = 4.4, 7.1, 13.9 Hz, 1H), 1.84 (ddd, J = 4.4, 8.1, 13.9 Hz, 1H), 2.04 (s, 1H), 2.33 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.89 (ddd, J = 2.9, 4.4, 7.1 Hz, 1H), 4.25-4.30 (m, 2H), 5.03 (dt, J = 0.9, 10.3 Hz, 1H), 5.14 (dt, J = 0.9, 17.3 Hz, 1H), 5.82 (ddd, J = 7.1, 10.3, 17.3 Hz, 1H), EI-HRMS calcd for C26H54O3Si3(M+Na)+ calcd 521.3260, found 521.3278.
【００４２】
（Ｈ）上記で得られた化合物（１７）（７６４ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５．０ｍＬ）溶液にｎ−ＢｕＬｉヘキサン溶液（２．６Ｍ、０．８８３ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、同温で１．５時間攪拌した。その溶液にパラホルムアルデヒド（１４０ｍｇ、４．６ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、同温で３０分間攪拌した後、室温まで３０分かけて昇温し、さらに同温で２時間攪拌した。その溶液に０℃で飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、水層をエーテルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）で精製したところ、化合物（１８）（７１９ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ、８９％）が無色油状物質として得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 0.01 (s, 3H), 0.04 (s, 3H), 0.06 (s, 3H), 0.08 (s, 3H), 0.08 (s, 3H), 0.10 (s, 3H), 0.86 (s, 9H), 0.87 (s, 9H), 0.87 (s, 9H), 1.57 (ddd, J = 4.2, 7.9, 13.9 Hz, 1H), 1.80 (ddd, J = 3.7, 8.3, 13.9 Hz, 1H), 2.02 (s, 1H), 3.85 (ddd, J = 3.7, 3.9, 7.9 Hz, 1H), 4.26 (m, 4H), 5.01 (dt, J = 1.0, 10.3 Hz, 1H), 5.11 (dt, J = 1.0, 17.1 Hz, 1H), 5.79 (ddd, J = 7.1, 10.3, 17.1 Hz, 1H), EI-HRMS calcd for C27H56O4Si3(M+Na)+ calcd 551.3383, found 551.3384.
【００４３】
（Ｉ）上記で得られた化合物（１８）（５７０ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）のＥｔ２Ｏ（１０ｍＬ）溶液にＲｅｄ−Ａｌ（６５％トルエン溶液、０．８３７ｍＬ、２．６７ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で２５分間攪拌した。その溶液に酢酸エチル（０．１６８ｍＬ、１．７１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた後、ヨウ素（１．０８ｇ、４．２８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４．０ｍＬ）溶液を−７８℃で加え、同温で１時間攪拌した。その溶液を３０分かけ室温まで昇温し、さらに同温で３０分間攪拌した。反応溶液をエーテルで希釈した後、０℃で１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、水層をエーテルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）で精製したところ、化合物（１９）（０．３９７ｇ、０．６０４ｍｍｏｌ、５６％）が無色油状物質として得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 0.00 (s, 3H), 0.03 (s, 3H), 0.03 (s, 3H), 0.06 (s, 3H), 0.09 (s, 3H), 0.11 (s, 3H), 0.85 (s, 9H), 0.86 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 1.18-1.28 (m, 1H), 1.44 (ddd, J = 3.5, 7.1, 14.2 Hz, 1H), 1.92 (ddd, J = 3.2, 8.8, 14.2 Hz, 1H), 3.88 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 4.01 (ddd, J = 3.5, 4.1, 7.1 Hz, 1H), 4.16-4.23 (m, 3H), 5.00 (dt, J = 1.0, 10.3 Hz, 1H), 5.09 (dt, J = 1.0, 17.0 Hz, 1H), 5.77 (ddd, J = 7.6, 10.3, 17.0 Hz, 1H), 6.24 (td, J = 1.1, 5.6 Hz, 1H), EI-HRMS calcd for C27H57O4Si2I (M+Na)+ calcd 679.2513, found 679.2507.
【００４４】
（Ｊ）上記で得られた化合物（１９）（３９７ｍｇ、０．６０４ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（１５ｍＬ）溶液にＰｄ（ＰＰｈ３）４（６９．７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．８４２ｍＬ、６．０４ｍｍｏｌ）を加えた後、９０℃で１時間加熱還流した。その溶液を室温まで冷却した後、減圧下溶媒を留去して得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）で精製したところ、化合物（２０）（２８７ｍｇ、９０％）が無色油状物質として得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 0.02 (s, 3H), 0.04 (s, 6H), 0.05 (s, 3H), 0.06 (s, 6H), 0.84 (s, 9H), 0.88 (s, 9H), 0.88 (s, 9H), 1.56-1.62 (m, 2H), 2.04 (s, 1H), 4.05-4.09 (m, 2H), 4.21 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 4.37 (dd, J = 4.4, 6.3 Hz, 1H), 4.75 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 5.20 (s, 1H), 5.72 (td, J = 1.0, 6.8 Hz, 1H),EI-HRMS calcd for C27H56O4Si3(M+Na)+ calcd 551.3385, found 551.3384.
【００４５】
（Ｋ）ＮＣＳ（３６５ｍｇ、２．７１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．５ｍＬ）溶液に、０℃でジメチルスルフィド（０．２２ｍＬ、２．９８ｍｍｏｌ）を加え、同温で３０分間攪拌した。その溶液に上記で得られた化合物（２０）（２８７ｍｇ、０．５４２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．５ｍＬ）溶液を−４０℃で加えた後、同温で２時間攪拌した。１時間かけて反応溶液を室温まで昇温した後、０℃で水を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物を中性シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）で精製し、対応する塩素化合物を粗生成物として得た。ＨＰＰｈ２（０．１６６ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．６ｍＬ）溶液にｎ−ＢｕＬｉ  ヘキサン溶液（２．６Ｍ、０．３ｍＬ、０．８１３ｍｍｏｌ）を０℃で加えた後、同温で１５分間攪拌した。その溶液を、上記の塩素化合物のＴＨＦ（０．６ｍＬ）溶液に−７８℃で加え、同温で１０分間攪拌した。室温まで徐々に昇温した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物をジクロロメタン（０．５ｍＬ）に溶解した後、その溶液に０℃で３５％過酸化水素水（０．４６ｍＬ）を加え、同温で１５分間攪拌した。その溶液に水を加えた後、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を１Ｍ亜硫酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）で精製したところ、化合物（７）（Ｒ’＝ＴＢＳ）（３０５ｍｇ、０．４２７ｍｍｏｌ、３工程６７％）が無色非結晶性固体として得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = -0.14 (s, 3H), -0.07 (s, 3H), -0.03 (s, 3H), 0.00 (s, 3H), 0.01 (s, 3H), 0.03 (s, 3H), 0.74 (s, 9H), 0.81 (s, 9H), 0.86 (s, 9H), 1.52 (ddd, J = 2.4, 8.5, 12.5 Hz, 1H), 1.99-2.05 (m, 1H), 3.26 (dd, J = 7.6, 15.6 Hz, 2H), 3.96 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 3.99 (s, 1H), 4.33 (dd, J = 2.4, 8.3 Hz, 1H), 4.68 (s, 1H), 5.13 (s, 1H), 5.50 (dd, J = 6.6, 14.2 Hz, 1H), 7.40-7.50 (m, 6H), 7.65-7.75 (m, 4H), EI-HRMS calcd for C39H65O4Si3P (M+Na)+ calcd 713.4002, found 713.4007.
【００４６】
（Ｌ）上記で得られた化合物（７）（Ｒ’＝ＴＢＳ）（１２４ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．４ｍＬ）溶液に−７８℃でｎ−ＢｕＬｉヘキサン溶液（１．６Ｍ、０．１ｍＬ、０．１５２ｍｍｏｌ）を加え、同温で１５分間攪拌した。その溶液に−７８℃で文献既知の化合物（６）（ウーら（Ｙ．Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．）、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、３７７９−３８１８頁、２００１年）（３６ｍｇ、０．０９２８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．３ｍＬ）溶液を加えた後、同温で１時間攪拌した。その溶液を室温まで徐々に昇温した後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物を中性シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン）で精製し対応するカップリング体を粗生成物として得た。それをＴＨＦ（０．１ｍＬ）に溶かし、ＴＢＡＦ（１．０Ｍ、０．１ｍＬ、０．０８９ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で１時間攪拌した。その後さらにＴＨＦ（０．３ｍＬ）を加え、８０℃で２時間加熱還流した。その溶液を室温にまで冷却した後、０℃で水を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残留物をシリカゲルプレート（ヘキサン／酢酸エチル＝１／５）で精製したところ、化合物（１ａ）または（１ｂ）（１．０ｍｇ、２工程１．６％）が得られた。このサンプルには、化合物（９）が５％含まれる。純粋な化合物（１ａ）または（１ｂ）はリサイクル逆層ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＝８０／２０）で精製した。
1H NMR (400  MHz, CDCl3) δ= 0.96-2.18 (m, 38H), 3.84 (s, 1H), 4.00-4.03 (m, 1H), 4.12 (s, 1H), 5.91-5.93 (m, 2H), 6.10 (d, J = 12.1 Hz, 1H), EI-HRMS calcd for C27H44O4 (M+Na)+calcd 455.3144, found 455.3137.
【００４７】
［実施例２］
ニワトリ小腸粘膜細胞質内１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ３リセプタ−（ＶＤＲ）に対する結合親和性
文献記載の方法（石塚ら、ステロイズ（Ｓｔｅｒｏｉｄｓ）、１９８２年、３７巻、ｐ．３３−ｐ．４３）に従った。すなわち、１２×７５ｍｍのポリプロピレンチュ−ブに、ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社から購入した［２６、２７−メチル−３Ｈ］１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（１７６Ｃｉ／ｍｍｏｌ）２０ｐｇと各被験化合物を５０μｌのエタノ−ルに溶解した。これに、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）１ｍｌにニワトリ小腸粘膜細胞よりステロイド、３７巻３３から４３頁、１９８２年に記載の方法で調製したＶＤＲ０．１ｍｇとゲラチン２ｍｇを溶解した溶液を加え、２５℃で１時間反応させた。反応後、４０％ポリエチレングリコ−ル６０００溶液１ｍｌを各チュ−ブに加え、激しく撹拌後、４℃、２２６０×ｇで６０分間遠心分離した。沈殿部分のチュ−ブをカッタ−ナイフで切り取り、液体シンチレ−ション用バイアルに入れ、１０ｍｌのジオキサンシンチレ−タ−を加え、放射能をベックマンＬＳ６５００型液体シンチレ−ションカウンタ−で測定した。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明のプレビタミンＤ３誘導体は、骨粗鬆症の治療剤の有効成分として用いられる。