(57)【要約】【課題】マイクロピペットにより捕捉する細胞をダメージを与えることなく確実に捕捉することができる細胞捕捉用ピペット及び細胞捕捉方法、細胞インジェクション方法を提供する。【解決手段】マイクロピペット１０の先端部には、捕捉する細胞の径寸法よりも僅かに小径な吸着口１３を有する内筒管１２と、内筒管１２の周囲を覆うように配置されるとともに、液体中の複数個の細胞を吸入する吸入口１５と、吸入口１５から吸入した液体を収容する中空領域１６とを有する外筒管１４とを備える。【選択図】        図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数個の細胞が存在する液体中から１個の細胞を捕捉する細胞捕捉用ピペットであって、
前記細胞捕捉用ピペットの一端部には、前記細胞を吸引する吸引手段が連結される連結部が設けられ、
前記細胞捕捉用ピペットの他端部には、前記細胞の径寸法よりも小さい径寸法に形成されるとともに、前記吸引手段により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着する吸着口を有する内筒管と、
前記内筒管の周囲を覆うように配置される外筒管とが設けられ、
前記外筒管は、前記細胞の径寸法よりも大きい径寸法に形成された吸入口と、当該吸入口から吸入された細胞を、当該外筒管の内部に複数個収容可能な中空領域とを有することを特徴とする細胞捕捉用ピペット。
【請求項２】
前記外筒管は、縦長状に形成された筒状体であるとともに、当該外筒管の縦寸法は、少なくとも前記細胞２個以上の径寸法よりも大きい寸法となるように形成されていることを特徴とする請求項１に記載の細胞捕捉用ピペット。
【請求項３】
前記外筒管の内部に形成された複数個の細胞を収容可能な中空領域には、当該複数個の細胞とともに、前記外筒管の吸入口から吸引された液体が充填されることを特徴とする請求項１または２に記載の細胞捕捉用ピペット。
【請求項４】
複数個の細胞が存在する液体中から細胞捕捉用ピペットにより１個の細胞を捕捉する細胞捕捉方法であって、
前記細胞捕捉用ピペットの一端部には、前記細胞を吸引する吸引手段が連結される連結部が設けられ、他端部には、前記細胞の径寸法よりも小さい径寸法に形成された吸着口を有する内筒管と、
前記内筒管の周囲に配置され、前記細胞の径寸法よりも大きい径寸法に形成された吸入口を有するとともに、当該細胞を複数個収容可能な中空領域を有する外筒管とが設けられ、
前記吸引手段による吸引により、前記外筒管の前記中空領域内に吸入口を介して、前記液体中に存在する複数の細胞を吸引する細胞吸引工程と、
前記細胞捕捉用ピペットの内筒管の吸着口に、前記細胞吸引工程により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着させる細胞吸着工程と、
前記細胞吸着工程により吸着された細胞を、前記吸引手段の吸引停止により、前記中空領域内に液体とともに保持する細胞保持工程と、
前記細胞保持工程により液体とともに保持された細胞を移動する細胞移動工程と
を含むことを特徴とする細胞捕捉方法。
【請求項５】
細胞捕捉用ピペットにより捕捉した細胞を細胞シャーレ上でインジェクションする細胞インジェクション方法であって、
前記細胞捕捉用ピペットの一端部には、前記細胞を吸引する吸引手段が連結される連結部が設けられ、他端部には、前記細胞の径寸法よりも小さい径寸法に形成された吸着口を有する内筒管と、
前記内筒管の周囲に配置され、前記細胞の径寸法よりも大きい径寸法に形成された吸入口を有するとともに、当該細胞を複数個収容可能な中空領域を有する外筒管とが設けられ、
前記吸引手段による吸引により、前記外筒管の前記中空領域内に吸入口を介して、前記液体中に存在する複数の細胞を吸引する細胞吸引工程と、
前記細胞捕捉用ピペットの内筒管の吸着口に、前記細胞吸引工程により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着させる細胞吸着工程と、
前記細胞吸着工程により吸着された細胞を、前記中空領域内に液体とともに保持する細胞保持工程と、
前記細胞保持工程により液体とともに保持された細胞を、前記細胞シャーレの所定のウェルに移動する細胞移動工程と
前記吸引手段による吸引を停止し、前記外筒管の中空領域内に保持された前記１個の細胞を前記細胞シャーレのウェル上に供給する細胞供給工程と、
前記細胞供給工程により前記ウェル上に供給された細胞にインジェクションを行なう細胞インジェクション工程と
を含むことを特徴とする細胞インジェクション方法。
【請求項６】
前記吸引手段による吸引を再開し、前記細胞インジェクション工程によりインジェクションされた細胞を、前記細胞捕捉用ピペットにより捕捉するとともに、当該捕捉した細胞を、前記細胞シャーレに設けられた回収用ウェルに回収する細胞回収工程と
をさらに含むことを特徴とする請求項５に記載の細胞インジェクション方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、細胞を捕捉する時に使用する細胞捕捉用ピペット及び細胞捕捉方法、細胞インジェクション方法に関し、特に、マイクロピペットによりダメージを与えることなく１個の細胞を確実に捕捉することができる細胞捕捉用ピペット及び細胞捕捉方法、細胞インジェクション方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、ラフサイエンス分野、特に、再生医療やゲノム創薬などの分野において、遺伝子溶液や薬剤溶液といった導入液体を、細胞あるいは細胞様といった微細粒子（以下、「細胞」と記載する）内に針（以下、「インジェクション用針」と記載する）を用いて導入するインジェクション方法が知られている。
【０００３】
このようなインジェクション方法により、細胞のインジェクションを行なう場合、細胞シャーレに設けた分注用ウェル内に溜めた液体中に複数個の細胞を入れ、マイクロピペットを使用して、この液体中の複数個の細胞の中から１個の細胞を捕捉するようにしている。以下、マイクロピペットにより捕捉した細胞は、細胞シャーレに設けられたウェル上でインジェクション用針によるインジェクションが行なわれる。
【０００４】
この種のマイクロピペットにより細胞を捕捉する方法として、特許文献１では、正圧及び負圧（圧力供給源）の発生を自動的に制御するマイクロピペット装置を用いて、マイクロピペットに細胞を吸着させる場合には、圧力を徐々に下げる制御を行ない、マイクロピペットから吸着した細胞を離脱させる場合には、圧力を徐々に上げる制御を行なう技術が開示されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００５】
［従来のマイクロピペット１による細胞の捕捉方法］
ここで、図１０（ａ）〜（ｃ）を参照して、従来のマイクロピペット１による細胞の捕捉方法を説明する。図１０（ａ）は、口径の大きな吸着口２を有するマイクロピペット１を使用して、分注用ウェル２１内の液体中から細胞を吸引して捕捉する細胞捕捉方法を示している。同図に示すように、このマイクロピペット１によれば、吸引装置（図示せず）による吸引により分注用ウェル２１内の液体中から複数の細胞を大径の吸着口２を通じて取り入れることができる。
【０００６】
また、図１０（ｂ）は、口径の小さな吸着口２′を有するマイクロピペット１′を使用する細胞捕捉方法を示している。同図に示すマイクロピペット１′の場合、小径に形成された吸着口２′により複数の細胞の中から１個の細胞のみを確実に捕捉することができる。
【０００７】
【特許文献１】特許第２５１３３５９号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ところが、上述した従来の細胞捕捉方法の場合、以下に示す問題がある。すなわち、図１０（ａ）に示すマイクロピペット１の場合、吸引口２が大径であるため、インジェクション時に必要とされる１個の細胞を捕捉することはできないばかりか、マイクロピペット１の内部に複数個の細胞を取り入れてしまうという問題がある。また、図１０（ｂ）に示すマイクロピペット１′の場合、小径に形成された吸着口２′により複数の細胞の中から１個の細胞のみを確実に捕捉することができるが、常時、細胞に吸引圧がかかるため、細胞に余分なダメージを与えてしまうという問題がある。また、マイクロピペット１′を移動させた時に、液体による水流の影響により、吸着口２′に捕捉（吸着）した細胞が外れてしまうなどの問題がある。
【０００９】
また、同様に、図１０（ｃ）に示すように、マイクロピペット１′を液体中から引き上げて移動する際に、液体による表面張力の抵抗を受けて、吸着口２′に吸着させた細胞が外れて落下する恐れがあるとともに、細胞シャーレのウェルまで移動する間に、吸着口２′に吸着させた細胞が乾燥してしまうなどの問題がある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上述した課題を解決し、目的を達成するため、本発明は、複数個の細胞が存在する液体中から１個の細胞を捕捉する細胞捕捉用ピペットであって、前記細胞捕捉用ピペットの一端部には、前記細胞を吸引する吸引手段が連結される連結部が設けられ、前記細胞捕捉用ピペットの他端部には、前記細胞の径寸法よりも小さい径寸法に形成されるとともに、前記吸引手段により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着する吸着口を有する内筒管と、前記内筒管の周囲を覆うように配置される外筒管とが設けられ、前記外筒管は、前記細胞の径寸法よりも大きい径寸法に形成された吸入口と、当該吸入口から吸入された細胞を、当該外筒管の内部に複数個収容可能な中空領域とを有することを特徴とする。
【００１１】
また、本発明は、上記発明において、前記外筒管は、縦長状に形成された筒状体であるとともに、当該外筒管の縦寸法は、少なくとも前記細胞２個以上の径寸法よりも大きい寸法となるように形成されていることを特徴とする。
【００１２】
また、本発明は、上記発明において、前記外筒管の内部に形成された複数個の細胞を収容可能な中空領域には、当該複数個の細胞とともに、前記外筒管の吸入口から吸引された液体が充填されることを特徴とする。
【００１３】
また、本発明は、複数個の細胞が存在する液体中から細胞捕捉用ピペットにより１個の細胞を捕捉する細胞捕捉方法であって、前記細胞捕捉用ピペットの一端部には、前記細胞を吸引する吸引手段が連結される連結部が設けられ、他端部には、前記細胞の径寸法よりも小さい径寸法に形成された吸着口を有する内筒管と、前記内筒管の周囲に配置され、前記細胞の径寸法よりも大きい径寸法に形成された吸入口を有するとともに、当該細胞を複数個収容可能な中空領域を有する外筒管とが設けられ、前記吸引手段による吸引により、前記外筒管の前記中空領域内に吸入口を介して、前記液体中に存在する複数の細胞を吸引する細胞吸引工程と、前記細胞捕捉用ピペットの内筒管の吸着口に、前記細胞吸引工程により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着させる細胞吸着工程と、前記細胞吸着工程により吸着された細胞を、前記吸引手段の吸引停止により、前記中空領域内に液体とともに保持する細胞保持工程と、前記細胞保持工程により液体とともに保持された細胞を移動する細胞移動工程とを含むことを特徴とする。
【００１４】
また、本発明は、細胞捕捉用ピペットにより捕捉した細胞を細胞シャーレ上でインジェクションする細胞インジェクション方法であって、前記細胞捕捉用ピペットの一端部には、前記細胞を吸引する吸引手段が連結される連結部が設けられ、他端部には、前記細胞の径寸法よりも小さい径寸法に形成された吸着口を有する内筒管と、前記内筒管の周囲に配置され、前記細胞の径寸法よりも大きい径寸法に形成された吸入口を有するとともに、当該細胞を複数個収容可能な中空領域を有する外筒管とが設けられ、前記吸引手段による吸引により、前記外筒管の前記中空領域内に吸入口を介して、前記液体中に存在する複数の細胞を吸引する細胞吸引工程と、前記細胞捕捉用ピペットの内筒管の吸着口に、前記細胞吸引工程により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着させる細胞吸着工程と、前記細胞吸着工程により吸着された細胞を、前記中空領域内に液体とともに保持する細胞保持工程と、前記細胞保持工程により液体とともに保持された細胞を、前記細胞シャーレの所定のウェルに移動する細胞移動工程と、前記吸引手段による吸引を停止し、前記外筒管の中空領域内に保持された前記１個の細胞を前記細胞シャーレのウェル上に供給する細胞供給工程と、前記細胞供給工程により前記ウェル上に供給された細胞にインジェクションを行なう細胞インジェクション工程とを含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、マイクロピペットの先端部には、細胞の径寸法よりも小径な吸着口を有する内筒管と、内筒管の周囲を覆うように配置されるとともに、液体中の複数個の細胞を吸入する吸入口と、吸入口から吸入した液体を収容する中空領域とを有する外筒管とを備える構成としたので、マイクロピペットにより１個の細胞を、ダメージを与えることなく確実に捕捉することができるとともに、外筒管の中空領域内に収容した細胞は、中空領域内に充填された液体中に保持されたまま移動するため、細胞が乾燥するなどの不具合を防止することができる。
【００１６】
また、本発明によれば、外筒管は、縦長状に形成された筒状体であるとともに、当該外筒管の高さ寸法は、少なくとも細胞２個以上の径寸法よりも大きい寸法となるように形成されているので、外筒管の内部に形成された中空領域内により多くの細胞を吸入するとともに、吸入した液体中に細胞を保持することができる。また、中空領域内に充填された液体の毛細管現象を利用して、捕捉した細胞を良好な状態で保持することができる。
【００１７】
また、本発明によれば、外筒管の内部に形成された複数個の細胞を収容可能な中空領域には、当該複数個の細胞とともに、外筒管の吸入口から吸引された液体が充填される構成としたので、外筒管の中空領域内に収容した細胞は、中空領域内に充填された液体中に保持することができ、これによって、細胞が乾燥するなどの不具合を防止することができる。
【００１８】
また、本発明によれば、細胞捕捉方法では、細胞吸引工程により、外筒管の中空領域内に吸入口を介して、液体中に存在する複数の細胞を吸引し、細胞吸着工程により、細胞捕捉用ピペットの内筒管の吸着口に、前記細胞吸引工程により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着させ、細胞保持工程により、細胞吸着工程で吸着された細胞を、中空領域内に液体とともに保持し、細胞移動工程により、前記細胞保持工程で液体とともに保持された細胞を、細胞シャーレの所定のウェルに移動するので、マイクロピペットにより１個の細胞を、ダメージを与えることなく確実に捕捉することができるとともに、外筒管の中空領域内に収容した細胞は、中空領域内に充填された液体中に保持されたまま移動するため、細胞が乾燥するなどの不具合を防止することができる。
【００１９】
また、本発明によれば、細胞インジェクション方法では、細胞吸引工程により、外筒管の中空領域内に吸入口を介して、液体中に存在する複数の細胞を吸引し、細胞吸着工程により、細胞捕捉用ピペットの内筒管の吸着口に、前記細胞吸引工程により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着させ、細胞保持工程により、細胞吸着工程で吸着された細胞を、中空領域内に液体とともに保持し、細胞移動工程により、前記細胞保持工程で液体とともに保持された細胞を、細胞シャーレの所定のウェルに移動し、細胞供給工程により、外筒管の中空領域内に保持された１個の細胞を細胞シャーレのウェル上に供給し、細胞インジェクション工程により細胞供給工程でウェル上に供給された細胞にインジェクションを行なうので、マイクロピペットにより１個の細胞を、ダメージを与えることなく確実に捕捉することができるとともに、この細胞に対して、良好な状態でインジェクションを行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下に添付図面を参照して、本実施例１に係る細胞捕捉用ピペットによる細胞捕捉方法の好適な実施例を詳細に説明する。なお、以下では、本実施例１に係る細胞捕捉方法の概要及び特徴を説明し、これに続いて、細胞捕捉方法と細胞インジェクション方法の詳細を説明する。
【実施例１】
【００２１】
［細胞捕捉用ピペットによる細胞捕捉方法の概要］
図１は、本実施例１に係る細胞捕捉用ピペットによる細胞捕捉方法の概要を説明する図である。ここで、図１では、細胞シャーレ２０（図７）に設けられた分注用ウェル２１の液体の中から１個の細胞をマイクロピペット１０を使用して捕捉する方法を示す。なお、同図に示すように、分注用ウェル２１の内部には、液体が貯留されており、この液体中には複数の細胞が存在する。
【００２２】
すなわち、図１に示すように、本実施例１によるマイクロピペット１０を使用した細胞捕捉方法では、内筒管１２と外筒管１４とを有する二重管構造のマイクロピペット１０を用いて、分注用ウェル２１に貯留された液体中の複数個の細胞を外筒管１４の吸入口１５から吸入し（細胞吸引工程）、この吸入した複数個の細胞の中から１個の細胞を内筒管１２の吸着口１３に吸着させ捕捉するとともに（細胞吸着工程）、外筒管１４の内部に形成された中空領域１６内に充填された液体中に細胞を保持した状態で（細胞保持工程）、マイクロピペット１０をインジェクションを行なう細胞シャーレ２０のウェル２１まで移動（細胞移動工程）することに特徴がある。ここで、図１に示すように、分注用ウェル２１内の液体及び細胞の吸引は、マイクロピペット１０の連結部に連結された吸引装置Ｐの作動による吸引力により行なう。
【００２３】
［マイクロピペット１０の構成］
次に、図１及び図２を参照して、マイクロピペット１０の構成について説明する。図２は、図１に示したマイクロピペット１０のＡ部の拡大断面図を示している。すなわち、図１に示すように、マイクロピペット１０は、全体が長尺の管形状に構成されるとともに、テーパ状に形成された本体部１１を有しており、この本体部１１の先端部（図２の下端部）は内筒管１２として形成されている。
【００２４】
また、この内筒管１２の開口部は、マイクロピペット１０により捕捉する細胞の径寸法ｔ′よりも僅かに小径となるように設定された吸着口１３（例えば、径寸法ｔ＝φ４０μｍ）が形成されている。前述したように吸引装置Ｐの吸引により、このマイクロピペット１０の内筒管１２の吸着口１３に、液体中の複数の細胞個の中から１個の細胞を吸着させることができる。
【００２５】
また、マイクロピペット１０の本体部１１を構成する内筒管１２の周囲（先端部）には、断面が縦長状に形成された外筒管１４が固設されている。この外筒管１４の開口部には、液体中の複数の細胞を吸入するための吸入口１５が形成されている。この吸入口１５の径寸法は、液体中の複数の細胞を吸入し、一度に複数の細胞を吸入できるように、大径の寸法（例えば、φ１５０μｍ）となるように設定されている。
【００２６】
さらに、外筒管１４の内部（下半部）には、空洞となった中空領域１６が形成されており、この中空領域１６は、外筒管１４の吸入口１５から吸入した複数の細胞を含む液体を一時的に収容する収容領域として機能する。外筒管の高さ寸法（縦寸法Ｌ）は、少なくとも前記細胞２個以上の径寸法よりも大きい寸法となるように選定されている。
【００２７】
すなわち、内筒管１２の吸着口１３に吸着された細胞は、マイクロピペット１０の移動時に、一端離隔するが、外筒管１４の中空領域１６に充填された液体中に保持されることとなり、これにより、捕捉された細胞が乾燥するなどの不具合を防止することができる。ここで、外筒管１４の形状は、断面が縦長状に形成された筒状体としているが、この外筒管１４の下端部を末広がり状の形状とした場合には、より効率的に液体内の複数の細胞を外筒管１４内に吸入させることができる。
【００２８】
[マイクロピペット１０を使用した細胞捕捉方法]
次に、図３〜図６を参照して、図１及び図２に示したマイクロピペット１０を使用した細胞捕捉方法について詳細に説明する。図３〜図６は、細胞捕捉方法による細胞の捕捉工程を順に説明する図である。図中、分注用ウェル２１の内部には、複数個の細胞が存在する液体が溜められており、マイクロピペット1０の連結部には、空気吸引を行なうための吸引装置Ｐが接続されている。
【００２９】
すなわち、先ず、図３に示すように、分注用ウェル２１の液体中にマイクロピペット１０の先端部（外筒管１４）を没入させる。次に、図４に示すように、吸引装置Ｐを作動させ、空気の吸引を開始する。これにより、同図に示すように、外筒管１４の吸入口１５を通じて、液体中に存在する複数個（図では、３個）の細胞が外筒管１４の内部（中空領域１６）に吸引され充填される（細胞吸引工程）。ここで、この時、同図に示すように、中空領域１６内に収容された複数の細胞のうち１個の細胞が内筒管１２の吸着口１３に吸着される（細胞吸着工程）。
【００３０】
次に、図５に示すように、吸引装置Ｐを作動させた状態で、内筒管１２の吸着口１３に吸着された１個の細胞以外の細胞（２個の細胞）を外筒管１４の中空領域１６内から落下させ離脱させる処理を行なう。すなわち、インジェクションを行なう場合に必要な細胞は、１個であるため、この１個の細胞以外の複数個の細胞は、必要ないため、これら複数個の細胞（図では、２個の細胞）を外筒管１４内部から液体中に落下させることとなる。この場合、外筒管１４の中空領域１６内にある吸着口１３に吸着されている細胞以外の不要な複数個の細胞（吸着口１３に吸着されていない細胞）は、時間経過にともなって外筒管１４外に落下することとなるが、マイクロピペット１０に多少の振動を与えたりすることで、強制的に外筒管１４外に落下させるようにしてもよい。
【００３１】
次に、図６に示すように、マイクロピペット１０を分注用ウェル２１の液体中から引き上げるとともに、吸引装置Ｐによる空気吸引を停止する。ここで、この時、外筒管１４の吸着口１３に吸着されていた１個の細胞は、吸着口１３から離隔し中空領域１６内に落下することとなるが、中空領域１６に充填されている液体の表面張力により、この吸着口１３から離隔した細胞を外筒管１４内に保持することができる。
【００３２】
そして、以下では、このマイクロピペット１０により捕捉した細胞を、細胞シャーレ２０（図７）の位置までインジェクションを行なうために移動することとなる。すなわち、このように、マイクロピペット１０により捕捉した細胞は、外筒管１４の中空領域１６内に充填された液体内に保持されたまま移動することができるため、細胞がマイクロピペット１０内から外れたり移動時に細胞が乾燥するなどの問題点を解消することができる。
【００３３】
[細胞インジェクション方法]
次に、図７〜図９を参照して、本実施例１で示したマイクロピペット１０を使用したインジェクション装置３０による細胞のインジェクション方法について説明する。図７は、マイクロピペット１０により捕捉した細胞のインジェクションを行なうインジェクション装置３０の概要を示す図である。
【００３４】
同図に示すように、インジェクション装置３０は、全体が矩形状に形成された細胞シャーレ２０を有しており、細胞シャーレ２０の片側（図７の右側）には、ほぼ同形状に形成された分注用ウェル２１と、回収用ウェル２４とを有している。前述したように、分注用ウェル２１の内部には、複数個の細胞が存在する液体が貯留されている。
【００３５】
また、細胞シャーレ２０のほぼ全領域を覆う位置には、細胞を捕捉するための細胞捕捉プレート２２が配設されている。同図に示すように、細胞捕捉プレート２２は、複数（図では、３６個）の円形状に形成されたウェル２３を有しており、このウェル２３に貯留された細胞混濁液内にマイクロピペット１０により捕捉された細胞が移動されて１個づつ供給される。
【００３６】
また、細胞捕捉プレート２２の内部には、格子状に形成された吸引通路２５が設けられている。吸引通路２５の一端は複数のウェル２３の底部に接続され、他端は空気圧を制御する空圧装置（図示せず）に接続されている。すなわち、細胞捕捉プレート２２のウェル２３内に供給された細胞は、空圧装置による吸引（圧力制御）により吸引通路２５を通じて吸引されウェル２３の底部に固定されることとなる。
【００３７】
次に、図８は、マイクロピペット１０による細胞の移動を説明する図を示している。なお、このインジェクション装置３０には、空気圧を制御（圧力制御）する吸引装置Ｐ（図４）とともに、マイクロピペット１０の移動を制御する移動装置（図示せず）が設けられており、この移動装置により、マイクロピペット１０を細胞シャーレ２０に設けられた所定のウェル２３の位置まで移動させることができる。すなわち、図８に示すように、マイクロピペット１０の外筒管１４の中空領域１６内に液体とともに保持された細胞は、移動装置により所定のウェル２３の位置まで移動され、吸引装置Ｐによる吸引の停止、または空圧装置により正圧を付与することでにより、ウェル２３上に供給される。
【００３８】
次に、図９は、インジェクション針２６による細胞のインジェクションを説明する図を示している。２６は、インジェクション針で、このインジェクション針２６は、極細の毛細管として構成され、このインジェクション針２６には、遺伝子／薬液が満たされている。同図に示すように、マイクロピペット１０により分注用ウェル２１から移動された細胞は、細胞捕捉プレート２２のウェル２３内に固定され、以下、インジェクション針２６を細胞に突き刺して遺伝子／薬液を細胞内に注入され、インジェクションが行なわれる。なお、このマイクロインジェクション法による遺伝子／薬液の細胞に対する導入作業は顕微鏡下で行なわれる。
【００３９】
以下、インジェクション針２６により、インジェクションが行なわれた細胞は、マイクロピペット１０により再度、内筒管１２の吸着口１３に吸着させるとともに、移動装置により回収用ウェル２４の位置まで移動し、自然落下または正圧をかけて回収することとなる。
【００４０】
[実施例１の効果]
上述してきたように、マイクロピペット１０を構成するマイクロピペット１０の先端部には、細胞の径寸法よりも僅かに小径な吸着口１３を有する内筒管１２と、内筒管１２の周囲を覆うように配置されるとともに、液体中の複数個の細胞を吸入する吸入口１５と、吸入口１５から吸入した液体を収容する中空領域１６を内部に形成した外筒管１４とを設ける構成としたので、捕捉を行なう細胞にダメージを与えることなく、且つ、確実に１個の細胞を捕捉することができるとともに、良好な状態の細胞を対象とするインジェクションを行なうことができる。
【００４１】
（付記１）複数個の細胞が存在する液体中から１個の細胞を捕捉する細胞捕捉用ピペットであって、
前記細胞捕捉用ピペットの一端部には、前記細胞を吸引する吸引手段が連結される連結部が設けられ、
前記細胞捕捉用ピペットの他端部には、前記細胞の径寸法よりも小さい径寸法に形成されるとともに、前記吸引手段により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着する吸着口を有する内筒管と、
前記内筒管の周囲を覆うように配置される外筒管とが設けられ、
前記外筒管は、前記細胞の径寸法よりも大きい径寸法に形成された吸入口と、当該吸入口から吸入された細胞を、当該外筒管の内部に複数個収容可能な中空領域とを有することを特徴とする細胞捕捉用ピペット。
【００４２】
（付記２）前記内筒管に形成された前記吸着口の径寸法は、前記細胞の径寸法よりも僅かに小さい径寸法として形成されていることを特徴とする付記１に記載の細胞捕捉用ピペット。
【００４３】
（付記３）前記外筒管は、縦長状に形成された筒状体であるとともに、当該外筒管の縦寸法は、少なくとも前記細胞２個以上の径寸法よりも大きい寸法となるように形成されていることを特徴とする付記１に記載の細胞捕捉用ピペット。
【００４４】
（付記４）前記外筒管の内部に形成された複数個の細胞を収容可能な中空領域には、当該複数個の細胞とともに、前記外筒管の吸入口から吸引された液体が充填されることを特徴とする付記１、２または３に記載の細胞捕捉用ピペット。
【００４５】
（付記５）複数個の細胞が存在する液体中から細胞捕捉用ピペットにより１個の細胞を捕捉する細胞捕捉方法であって、
前記細胞捕捉用ピペットの一端部には、前記細胞を吸引する吸引手段が連結される連結部が設けられ、他端部には、前記細胞の径寸法よりも小さい径寸法に形成された吸着口を有する内筒管と、
前記内筒管の周囲に配置され、前記細胞の径寸法よりも大きい径寸法に形成された吸入口を有するとともに、当該細胞を複数個収容可能な中空領域を有する外筒管とが設けられ、
前記吸引手段による吸引により、前記外筒管の前記中空領域内に吸入口を介して、前記液体中に存在する複数の細胞を吸引する細胞吸引工程と、
前記細胞捕捉用ピペットの内筒管の吸着口に、前記細胞吸引工程により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着させる細胞吸着工程と、
前記細胞吸着工程により吸着された細胞を、前記吸引手段の吸引停止により、前記中空領域内に液体とともに保持する細胞保持工程と、
前記細胞保持工程により液体とともに保持された細胞を移動する細胞移動工程と
を含むことを特徴とする細胞捕捉方法。
【００４６】
（付記６）細胞捕捉用ピペットにより捕捉した細胞を細胞シャーレ上でインジェクションする細胞インジェクション方法であって、
前記細胞捕捉用ピペットの一端部には、前記細胞を吸引する吸引手段が連結される連結部が設けられ、他端部には、前記細胞の径寸法よりも小さい径寸法に形成された吸着口を有する内筒管と、
前記内筒管の周囲に配置され、前記細胞の径寸法よりも大きい径寸法に形成された吸入口を有するとともに、当該細胞を複数個収容可能な中空領域を有する外筒管とが設けられ、
前記吸引手段による吸引により、前記外筒管の前記中空領域内に吸入口を介して、前記液体中に存在する複数の細胞を吸引する細胞吸引工程と、
前記細胞捕捉用ピペットの内筒管の吸着口に、前記細胞吸引工程により吸引された複数の細胞の中から少なくとも１個の細胞を吸着させる細胞吸着工程と、
前記細胞吸着工程により吸着された細胞を、前記中空領域内に液体とともに保持する細胞保持工程と、
前記細胞保持工程により液体とともに保持された細胞を、前記細胞シャーレの所定のウェルに移動する細胞移動工程と
前記吸引手段による吸引を停止し、前記外筒管の中空領域内に保持された前記１個の細胞を前記細胞シャーレのウェル上に供給する細胞供給工程と、
前記細胞供給工程により前記ウェル上に供給された細胞にインジェクションを行なう細胞インジェクション工程と
を含むことを特徴とする細胞インジェクション方法。
【００４７】
（付記７）前記吸引手段による吸引を再開し、前記細胞インジェクション工程によりインジェクションされた細胞を、前記細胞捕捉用ピペットにより捕捉するとともに、当該捕捉した細胞を、前記細胞シャーレに設けられた回収用ウェルに回収する細胞回収工程と
をさらに含むことを特徴とする付記６に記載の細胞インジェクション方法。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
以上のように、本発明に係る細胞捕捉用ピペット及び細胞捕捉方法、細胞インジェクション方法は、細胞のインジェクション行なう場合に有用であり、特に、マイクロピペットにより必要とする１個の細胞の捕捉を確実に行なうことのできる細胞捕捉用ピペット及び細胞捕捉方法、細胞インジェクション方法に適している。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】本実施例１に係る細胞捕捉用ピペットによる細胞捕捉方法の概要を説明する説明図である。
【図２】図１に示したマイクロピペットのＡ部を示す拡大断面図である。
【図３】細胞捕捉方法の手順を示す説明図である（その１）。
【図４】細胞捕捉方法の手順を示す説明図である（その２）。
【図５】細胞捕捉方法の手順を示す説明図である（その３）。
【図６】細胞捕捉方法の手順を示す説明図である（その４）。
【図７】インジェクション装置の概要を示す図である。
【図８】マイクロピペットによる細胞の移動を説明する図である。
【図９】インジェクション針による細胞のインジェクションを説明する図である。
【図１０】従来のマイクロピペットによる細胞捕捉方法を示す説明図である。
【符号の説明】
【００５０】
１、１′、１０  マイクロピペット
１１  本体部
１２  内筒管
２′、１３  吸着口
１４  外筒管
１５  吸引口
１６  中空領域
２０  細胞シャーレ
２１  分注用ウェル
２２  細胞捕捉プレート
２３  ウェル
２４  回収用ウェル
２５  吸引通路
２６  インジェクション針
３０  インジェクション装置
Ｐ  吸引装置
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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