(57)【要約】      （修正有）【課題】澱粉に対するα−アミラーゼ阻害作用およびショ糖に対するグルコシダーゼ阻害作用およびスクラーゼ阻害作用によって血液中グルコース上昇を確実に抑制する、血糖上昇抑制作用物質の提供。【解決手段】ヤマグワまたはマグワの桑幹および枝を４月から１０月にかけ伐採後樹皮を剥離３ヶ月間陰干して乾燥せしめた乾燥樹皮を水に浸漬、圧縮加熱して得られる抽出エキスを噴霧乾燥して得られる活性物質１−デオキシノジリマイシンおよびポリフェノールを含有するエキス。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤマグワまたはマグワの桑幹および枝を４月から１０月にかけ伐採後樹皮を剥離３ヶ月間陰干して乾燥せしめた乾燥樹皮を水に浸漬、圧縮加熱して得られる抽出エキスを噴霧乾燥して得られる活性物質１−デオキシノジリマイシンおよびポリフェノールの含有量。
【請求項２】
マルターゼ活性阻害活性を示す請求項１に記載の１−デオキシンノジリマイシンおよびポリフェノール含有エキス
【請求項３】
スクラーゼ活性阻害活性を示す請求項１に記載の１−デオキシンノジリマイシンおよびポリフェノール含有エキス
【請求項４】
α−アミラーゼ活性阻害活性を示す請求項１に記載の１−デオキシンノジリマイシンおよびポリフェノール含有エキス
【請求項５】
正常ラットを用いた澱粉およびショ糖を含む人工飼料投与による血糖上昇を確実に抑制した成績から桑樹皮抽出エキスは澱粉に対するα−アミラーゼ阻害作用およびショ糖に対するグルコシダーゼ阻害作用およびスクラーゼ阻害作用によって特異的に血液中グルコース上昇を確実に抑制することを明らかにした請求項１に記載の１−デオキシノジリマシンおよびポリフェノール含有エキス。
【発明の詳細な説明】
【実施例１】栽培された桑マグワの幹を８月に伐採し剥離した樹皮を約３ヶ月室内乾燥せしめた２．０キログラムを水２６ｌに浸漬した。浸漬後の抽出したエキスを加熱抽出、圧濃縮液約１５０ｍｌを乾燥せしめ粉末５００ｇ、収率２５％を得た。桑幹チップ抽出エキスの約１７８倍の高収率。
【実施例２】１−デオキシノジリマイシンの定量法
浸漬圧縮エキスおよび濃縮エキス０．５ミリリットルを正確にキャップ付ネジ口試験管にとり、３０ｍＭほう酸緩衝液２．４ｍｌ、４−Ｆｌｕｒｏ−７−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｚａｎ５．０ミリグラムをエタノール１ミリリットルに溶解した溶液１００マイクロリッツターを正確に加えて混合する。混合溶液を６０℃４０分間加温後、直ちに冷却し、１Ｎ塩酸２ミリリットルを正確に加えた。２０マイクロリッターをＨＰＬＣ分析に持用いた。分析にはＬＣ−１０ＡのＨＰＬＣシステムを用い、カラムはＯＤＳカラム（ＹＭＣ−ｐａｃｋ  ＤＯＳ−Ａ  Ａ−３０２）を、移動層はＡ液；０．０５％リン酸、Ｂ液；メタノール：５％リン酸（９９：１）を用い、０分（Ａ１００％）−４５分（９５％、Ｂ５％）のグラジエント系（流速１ミリリットｌ／分、温度４０℃）により分析し、Ｅｘ４７０ｎｍ，Ｅｍ５３０ｎｍで蛍光強度を測定し求めた。
【実施例３】総ポリフェノールの定量法
総ポリフェノールの定量はフェノール発色試験錠（和光純薬工業株式会社）を用い比色法で行った。試験溶液１０ミリリットリにフェノール発色試験錠一錠を加え室温で２０分間放置後、５１０ｎｍにおける吸光度を測定しコーヒー酸として算出した。
【実施例４】マルターゼ阻害活性の測定
反応液は、試験溶液に２％マルトース液、５倍希釈した粗酵素液と５６ｍＭマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を各５０ｍｌ加え、３７℃、３０分間反応させた。反応は、上記反応液に水０．８ｍｌを加えた後、１０分間加熱して停止させた。その後、グルコースＢテストワコーを用いてグルコースを測定した。
【実施例５】α−アミラーゼ阻害測定
市販アミラーゼＢテストワコー（和光純薬工業株式会社）を用いて行った。試料（桑樹皮エキスまたは試薬）５０μｌにキット中のヒト唾液由来α−アミラーゼ調整液１０ｍｌおよび水４０μｌを加えた後、１．０ｍＭ  Ｎ，Ｎ−ジエチル−３，５−キシリジン含１０ｍＭグッド緩衝液（ＰＨ６．０）にグルコースオキシダーゼ（５６単位／ｍｌ）、グルコアミラーゼ（２６単位／ｍｌ）、ムタローゼ（０．３単位／ｍｌ）、カタラーゼ（０．３単位／ｍｌ）、アスコルビン酸オキシダーゼ（０．３単位／ｍｌ）を溶解した酵素液１．０ｍｌを加えて３７℃で５分間加温後、さらにカルボキシメチルアミロース（５．８ｍｇ／ｍｌ）と４−アミノアンチピリン（０．９５ｍｍｏｌ／ｌ）およびペルオキシダーゼ（５．７単位／ｍｌ）を含む基質混合液１．０ｍｌを加えて３７℃（７．４）２．０ｍｌを加え、反応を停止させた後、カルボキシメチルアミロースの分解により生成したグルコース量の測定を行った。
【実施例６】スクラーゼ阻害測定
試料溶液５０μｌに２％マルトース溶液、５倍希釈した粗酵素液と５６ｍＭｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を各５０μｌを加え、３７℃で３０分間反応させた後、蒸留水３００μｌを加え１０分間加熱し反応を停止させた。その後、実施例４と同様にグルコース量の測定を行った。
【実施例７】桑樹皮エキスの１−デオキシノジリマイシンおよび総ポリフェノールの含有量
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桑樹皮抽出エキス中の１−デオキシノジリマイシンの含量は阿武らによって報告されている（日本食品保蔵科学会雑誌ＶＯＬ．３０ＮＯ５．２００４）桑葉エキスの含量に約１０倍以上勝る結果が得られた。また、総ポリフェノール含量も桑葉エキスの報告内容を約７倍上回る成績が得られた。この成績は、桑幹抽出エキス（出願番号Ｈ１７−４０００１７６）の含量を遥かに勝る成績を示した。
【実施例８】桑樹皮エキスの糖質分解酵素の阻害活性
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桑樹皮抽出エキス中の糖質分解酵素阻害活性はマルターゼ、スクラーゼおよびα−アミラーゼ活性のいずれも阿武らによって報告されている（日本食品保蔵科学会雑誌ＶＯＬ．３０ＮＯ５．２００４）桑葉エキスの阻害活性を１００倍以上の強い作用を示した。
【実施例９】桑樹皮１−デオキシノジリマイシンおよびポリフェノール成分含有エキスの経口投与による血糖上昇抑抑制作用
Ｗｉｓｔｅｒ系雄性ラツトを用い、澱粉及びショ糖を含む人工飼料投与前に桑幹浸漬抽出エキスおよび加熱濃縮エキスを経口投与し、経時的に各群の血糖上昇抑制率を測定し、エキス非投与群と比較した。血糖の変化率（％）は下式より求めた。
検体投与後の血糖値（ｍｇ／ｄｌ）
血糖の変化（％）
検体投与前の血糖値（ｍｇ／ｄｌ）
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桑樹皮エキスは投与１０分後から１００％以上上昇する無処置群に対してほとんど上昇せず１００分後まで検体投与前の血糖値とほぼ同じ値で推移した。桑樹皮エキスの作用は、桑幹浸漬エキスの１００倍、濃縮エキスの５倍の効果を示した。（出願番号Ｈ１７−４０００１７６）
【発明の背景と効果】
わが国の生活習慣病の代表格である糖尿病は欧米化の食生活によるものとされているが、日常の食生活の中心である米や穀物の過剰摂取に起因してる可能性が高いと言われている。桑の根は「桑白皮」として医薬品の原料として用いられているが、桑の糖尿病予防、治療薬としての歴史は古く、約８００年前わが国へ禅宗を紹介広めた栄西によって記載されている「喫茶養生記」に桑の効用が紹介されている。その内容の多くは桑の血糖上昇抑制作用と二次障害に関する予防と治療法である。近年、桑白皮に血糖上昇抑制作用を見出し、その有効物質が１−デオキシノジリマイシンによるα−グルコシダーゼ阻害作（ＹＯＳＩＫＵＮＩ，Ｙ．Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，５２，１９８８）によることが明らかにされた。また、桑葉に関しては、α−アミラーゼ阻害作用、マルターゼ、スクラーゼ阻害作用が見出されその作用物質が１−デオキシノジリマイシン以外のポリフェノール成分にもあることが報告されている。（日本食品保蔵科学会雑誌ＶＯＬ．３０ＮＯ５．２００４）（日本食品保蔵科学会雑誌ＶＯＬ．３０ＮＯ５．２００４）。１−デオキシノジリマイシンは桑以外に中南米産のザコビニア属の植物と放線菌の培養液にしか見出されていない物質で桑には他の植物に見られない特異的な血糖上昇抑制物質が存在することが明らかにされた。桑樹皮エキスにも従来報告されている桑白皮や桑葉同様の血糖上昇抑制物質が存在することを本発明で明らかにした。本発明は、桑樹皮エキスが糖尿病患者はもとより血糖値の上昇が懸念される二次性糖尿病の改善と発症の予防に効果のある機能性健康食品として開発可能であることを示唆した。特に桑樹皮エキスの１−デオキシノジリマイシンおよびポリフェノールの含量は桑の葉や桑幹抽出エキスを遥かに凌駕すると共に、その含量は両者の数百倍で、桑樹皮エキスは、桑幹エキスに比し、栽培後の乾燥時間、チップ加工等に大変な手間が必要で有効物質の含量が少なく高効率が望めない。（出願番号Ｈ１７−４０００１７６）さらに、桑樹皮エキスに含有する１−デオキシノジリマイシンをはじめポリフェノールは水溶性であることから有効成分の濃度調整が容易であり飲料水は基より日常の食品に至るまで機能性食品として使用が可能である。
【発展性】
桑樹皮エキスに認められた多量のポリフェノール成分はクロロゲン酸、コーヒー酸、アストラガリン等が葉の抽出エキス認められα−アミラーゼ阻害作用が報告されている。特にクロロゲン酸は、葉のエキス中で含量が多くα−アミラーゼ阻害活性に関与していることが認められている。桑樹皮エキスに見とめられた強力なα−アミラーゼ阻害作用は、クロロゲン酸に由来していることが窺われる。また、マルターゼおよびスクラーゼ阻害作用のほとんどは、１−デオキシノジリマイシンに由来していることが窺われる。肝臓における過剰な糖新生の抑制に関与するグルコース−６−フォスファターゼ阻害作用やインスリン分泌促進作用を示すとの報告があり、抗糖尿病作用以外の血管障害予防作用等の発展的な作用が期待できる。近年、１−デオキシオジリマシンの構造から、抗エイズ作用の報告もあり思わぬ方向への展開が可能である。