(57)【要約】【課題】本発明は、優れた美白効果を有する美白剤、メラニン産生抑制剤、チロシナーゼ産生抑制剤、チロシナーゼ分解促進剤を提供すること、さらに肌に対して優れた美白効果を発揮する美白化粧料を提供することにある。【解決手段】レチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルが美白効果を有すること、また、これらを配合した美白化粧料は、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝班等の予防及び改善等、肌に対して安全で優れた美白効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
レチノールと炭素数１８〜２４かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルを有効成分とする美白剤。
【請求項２】
請求項1に記載の脂肪酸がリノール酸、リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラコサジエン酸から選ばれるものであることを特徴とする美白剤。
【請求項３】
請求項１又は２のいずれか１項に記載のエステルを有効成分とするメラニン産生抑制剤。
【請求項４】
請求項１又は２のいずれか１項に記載のエステルを有効成分とするチロシナーゼ産生抑制剤。
【請求項５】
請求項１又は２のいずれか１項に記載のエステルを有効成分とするチロシナーゼ分解促進制。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のエステルを１種または２種以上配合することを特徴とする美白化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美白剤、メラニン産生抑制剤、チロシナーゼ産生抑制剤、チロシナーゼ分解促進剤及びこれらを含有する日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝班等の予防及び改善等の肌に対して美白効果を発揮する美白化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚のしみやそばかす等の色素沈着は、紫外線やその他の刺激により引き起こされるメラニンの過剰な産生の亢進の結果とされており、美容上大きな問題となる。メラニンは、メラノサイト内において、必須アミノ酸であるチロシンがチロシナーゼにより酵素的に酸化された後、数段階の反応を経て形成されると考えられている。従って、反応の第１段階であるチロシナーゼをコントロールすることが、メラニンの産生を抑制し、皮膚のしみやそばかす等の発生を抑制する上で重要である。チロシナーゼの活性を阻害する物質として、アルブチン、コウジ酸などが知られており、美白剤の有効成分として広く使用されている。
【０００３】
分子中に不飽和結合を２つ以上もつリノール酸もまた、チロシナーゼにはたらきかけることで、培養メラノーマ細胞のメラニンの産生を抑制し、皮膚に形成された色素沈着の消退を促進することが知られている。このメラニン産生抑制作用には、チロシナーゼ分解促進作用が関与していると考えられている。（特許文献１、非特許文献１参照）しかしながら、リノール酸は単独で使用してもその効果が十分であるとはいえないことから、リノール酸の効果を高める物質として、ビタミンＥ酢酸エステル、抗炎症剤、紫外線吸収剤および／または紫外線散乱剤、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、アスコルビン酸などの活性成分との併用や、（特許文献２〜６参照）リノール酸の誘導体であるリノール酸−ビタミンＣエステルを利用するなどの方法が見出されてきた。（特許文献７参照）
【０００４】
一方、レチノール（ビタミンＡアルコール）は、ほかのビタミンＡ類と同様に、表皮細胞の分化を促進し、表皮の古い角層を取り除き、皮膚を柔軟にする効果や一重項酸素捕捉効果が認められている。しかしながら、レチノールは、空気中で容易に酸化され、特に熱、光によって酸化されやすく不安定であること、また、それ自体が刺激性を有することから、通常パルミチン酸レチノールなどのレチノール誘導体が用いられている。（特許文献８参照）
【０００５】
レチノールと分子中に不飽和結合を２つ以上もつ脂肪酸とのエステルについては、リノール酸レチニル、リノレン酸レチニル、アラキドン酸レチニルなどが報告されている。これらは、炎症をおこさずに皮膚の輝きを促進させ、しわ等の老化現象、並びに、にきび、小胞状および病変丘疹、光線性角化症、オイリースキン等の皮膚疾患を治療するのに有用であることが見出されている。（特許文献９参照）しかしながら、レチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルが極めて優れた美白作用を発揮することは知られていない。
【特許文献１】特開昭６３−２８４１０９号公報
【特許文献２】特開平１−９３５２０号公報
【特許文献３】特開平１−１８６８０９号公報
【特許文献４】特開平１−１８６８１０号公報
【特許文献５】特開平３−２０９３０５号公報
【特許文献６】特開平１−１８６８１１号公報
【特許文献７】特開平１−８５９０７号公報
【特許文献８】特開昭５８−２０８２０７号公報
【特許文献９】特開平１０−４５５３３号公報
【非特許文献１】Ｊ．Ｓｏｃ．Ｃｏｓｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．Ｊａｐａｎ．，３３，３，１９９９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、優れた美白効果を有する美白剤、メラニン産生抑制剤、チロシナーゼ産生抑制、チロシナーゼ分解促進剤を提供すること、さらに肌に対して優れた美白効果を発揮する美白化粧料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、満足できる美白効果を発揮する美白化粧料を提供すべく鋭意研究した。その結果、レチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルが美白効果を有すること、また、これらを配合した美白化粧料は、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝班等の予防及び改善等、肌に対して安全で優れた美白効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００８】
レチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルのヒトメラノサイトを用いたチロシナーゼ産生評価試験及びチロシナーゼ分解促進試験、３Ｄ皮膚モデルを用いたメラニン産生抑制試験、紫外線照射により惹起された色素沈着に対する美白試験を実施したところ、いずれもその効果が顕著であった。これらの成分を配合することで、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝班等の予防及び改善等、肌に対して優れた美白効果を発揮する美白化粧料が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明に用いるレチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルは、公知の方法で合成することができる。
【００１０】
本発明のレチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルの合成で用いられる脂肪酸の代表的なものとしては、リノール酸、リノエライジン酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、リノレン酸、リノレン酸、リノレンエライジン酸、プソイドエレオステリン酸、α−パリナリン酸、β−パリナリン酸、アラキドン酸、ドコサジエン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラコサジエン酸などが挙げられ、これらの1種または２種以上が用いられる。リノール酸、リノレン酸を用いるのが好ましく、さらに好ましくはリノール酸が好適である。
【００１１】
よって、本発明に用いるレチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルとしては、リノール酸レチニル、リノレン酸レチニルを用いるのが好ましく、さらに好ましくはリノール酸レチニルが好適である。リノール酸レチニルは、市販されているものを使用することもでき、例えば、遼東化学工業株式会社のリノール酸レチノールを使用することができる。
【００１２】
レチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルの美白化粧料への配合量は、用途、剤型、配合目的等によって異なり、特に限定されるものではないが、一般的には、美白化粧料中０．００１〜２０．０質量％が好ましく、より好ましくは０．０１〜１０．０質量％である。
【００１３】
本発明においては、レチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルとともに、既存の美白薬剤であるＬ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド、テトラヘキシルデカン酸アスコルビル、コウジ酸、システイン、アルブチン、グルタチオン等を配合することにより、相乗的な美白効果が認められる可能性がある。
【００１４】
美白剤の配合量は，美白化粧料中０．００１〜５質量％が好ましく，さらに好ましくは０．０１〜２質量％である。
【００１５】
本発明の美白剤及びこれを含有する美白化粧料は、レチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステルを必須成分とするが、本発明の効果を損なわない範囲でその他化粧品、医薬部外品等の皮膚美白化粧料に配合される成分を配合することができる。
【００１６】
例えば、油脂類、エステル類、炭化水素類、ロウ類、シリコーン系の油相成分、脂肪酸類、低級アルコール類、高級アルコール類、多価アルコール類、界面活性剤、水溶性高分子類、香料、水、各種溶媒等と併用することができ、さらに、老化防止剤、保湿剤、育毛剤、発毛剤、経皮吸収促進剤、紫外線吸収剤、細胞賦活剤、抗炎症剤、その他生理活性成分、防腐防カビ剤等を配合することができる。
【００１７】
本発明の美白剤及びこれを含有する美白化粧料は、医薬品組成物、化粧料等に好適に応用することができる。美白化粧料の使用形態として任意であり、例えば化粧水、ローション、乳液、クリーム、パック、軟膏、分散液、固形物、ムース、貼付剤等が挙げられる。美白化粧料の基剤としては、公知の外用基剤でよく、特に限定されない。
【００１８】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲がこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００１９】
１．メラニン産生抑制試験
【００２０】
１−１．方法
Ｂ１６マウスメラノーマＦ０株（Ｂ１６Ｆ０）に５％仔牛血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコ変法ＭＥＭ（ＤＭＥＭ／５）を６穴プレートに播種した。培養２４時間後に所定の濃度の試料を含有したＤＭＥＭ／５と交換した。1週間継続培養後細胞ペレットを作成し、目視判定で細胞ペレットの色調をスコア化（５段階スコア：１白−５黒）した。
次にメラニン生成量をアルカリ可溶化法にて測定した。細胞ペレットを５％トリクロロ酢酸、エタノール／ジエチルエーテル溶液、ジエチルエーテルで洗浄した後、１Ｎ水酸化ナトリウムを添加して加熱溶解（１００℃、５分）した。マイクロプレートリーダーを用いて４３０ｎｍの吸光度を測定した。メラニン量は、合成メラニン（シグマ社製）を標準品として作成した検量線から算出した。同時にタンパク量を定量した。全細胞のタンパク質量でメラニン量を除することによって単位タンパク質量あたりのメラニン量を算出し、コントロールとの差を評価した。
【００２１】
１−２．試料
リノール酸レチニル、リノレン酸レチニル、リノール酸
【００２２】
１−３．結果
リノール酸レチニル処理及びリノレン酸レチニル処理により、細胞色調の白色化およびメラニン産生量の減少が認められた（表１）。従って、リノール酸レチニル処理及びリノレン酸レチニルにはメラニン産生抑制作用がある。
【表１】
2009137879.tif 000002
【実施例２】
【００２３】
２．チロシナーゼ産生抑制試験
【００２４】
２−１．方法
リノール酸レチニルのチロシナーゼ産生に対する抑制効果を、ウェスタンブロットを用いたチロシナーゼタンパク質の検出にて評価した。
正常ヒトメラノサイトをＭｅｄｉｕｍ  ２５４（クラボウ製）を用いて９０ｍｍ ディッシュに播種した。一晩培養後に所定の濃度の試料を含有した試験培地と交換した。試料含有培地で４８時間継続培養した後、ＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒで細胞の総タンパク質を抽出した。このときタンパク質濃度を測定し、細胞数の指標とした。各々の試料処理細胞のタンパク質濃度を１０μｇ／ｍＬに調製し、７．５％アクリルアミドゲルを用いてＳＤＳ-ＰＡＧＥを行なった。泳動タンパク質をＰＶＤＦ膜にトランスファーした後、免疫染色を行なった。１次抗体反応は、抗チロシナーゼ抗体、２次抗体反応は西洋ワサビ由来ぺルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ抗体を用いた。検出されたバンドの密度を画像解析にて半定量した。
【００２５】
２−２．試料
リノール酸レチニル、リノレン酸レチニル、リノール酸
【００２６】
２−３．結果
リノール酸レチニル処理及びリノレン酸レチニル処理により、チロシナーゼ産生は有意に抑制された（表２）。従って、リノール酸レチニル処理及びリノレン酸レチニル処理によるメラニン産生抑制作用はチロシナーゼ産生抑制作用によると予想される。
【表２】
2009137879.tif 000003
【実施例３】
【００２７】
３．チロシナーゼ分解促進試験
【００２８】
３−１．方法
リノール酸レチニルのチロシナーゼ産生に対する抑制効果を、ウェスタンブロットを用いたチロシナーゼタンパク質の検出にて評価した。
【００２９】
正常ヒトメラノサイトをＭｅｄｉｕｍ  ２５４（クラボウ製）を用いて９０ｍｍディッシュに播種した。播種２４時間後に所定の濃度の試料およびタンパク質合成阻害剤シクロヘキシミド（ＣＨＸ）を含有した試験培地と交換した。試料含有培地で８時間継続培養した後、ＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒで細胞の総タンパク質を抽出した。このときタンパク質濃度を測定し、細胞数の指標とした。各々の試料処理細胞のタンパク質濃度を１０μｇ／ｍＬに調製し、７．５％アクリルアミドゲルを用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行なった。泳動タンパク質をＰＶＤＦ膜にトランスファーした後、免疫染色を行なった。１次抗体反応は、抗チロシナーゼ抗体、２次抗体反応は西洋ワサビ由来ぺルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ抗体を用いた。検出されたバンドの密度を画像解析にて半定量した。
【００３０】
３−２．試料
リノール酸レチニル、リノレン酸レチニル、リノール酸
【００３１】
３−３．結果
リノール酸レチニル処理及びリノレン酸レチニル処理により、チロシナーゼ分解促進は有意に抑制された（表３）。従って、リノール酸レチニル処理及びリノレン酸レチニル処理によるメラニン産生抑制作用はチロシナーゼ分解促進作用によると予想される。
【表３】
2009137879.tif 000004
【実施例４】
【００３２】
４．美白効果試験
【００３３】
４−１．方法
紫外線照射による色素沈着の作成
被験部位は日常生活で日光暴露されにくい左上腕内側部とし、各被験者の最小紅班量（ＭＥＤ）を右上腕内側部であらかじめ測定後、左上腕内側部に１．５ＭＥＤに相当する紫外線を照射し、直径１ｃｍの色素沈着を作成した。光源としてＭｕｌｔｉｐｏｒｔ  Ｓｏｌａｒ  ＵＶ  Ｓｉｍｕｌａｔｏｒ  Ｍｏｄｅｌ  ６０１(Ｓｏｌａｒ  Ｌｉｇｈｔ  Ｃｏ．Ｉｎｃ．)で波長範囲３００〜４００ｎｍ、ピーク波長３５６ｎｍを用い、その照射強度は多機能計測システム  モデルＰＭＡ２１００（Ｓｏｌａｒ  Ｌｉｇｈｔ  Ｃｏ．Ｉｎｃ．）を用いて測定した。
【００３４】
４−２．被験製剤
以下に示す処方の被験製剤を用いる。水中油型乳化組成物の調製方法の常法に従い被験製剤を得た。
【表４】
2009137879.tif 000005
【００３５】
４−３．塗布方法および塗布期間
被験製剤は各々の紫外線照射部位を含む２×２ｃｍ２に約２０ｍｇを朝夕１日２回紫外線照射直後から３週間塗布した。
【００３６】
４−４．皮膚色測定および評価
観察日に、被験部位を分光測色計ＣＲ−１３（ミノルタ）を用いて測色した。測色パラメーターとしてはＬ＊を用い、色素沈着はΔＬ＊値（＝紫外線照射前のＬ＊値−紫外線照射後のＬ＊値）を用いて評価した。
美白効果の評価は以下の基準で行った。
×：ΔＬ＊値がコントロールの値と同じ
△：ΔＬ＊値が（コントロールの値−１．０）以上
○：ΔＬ＊値が（コントロールの値−１．０）未満
【００３７】
５−５．結果
表５の結果より本発明のリノール酸レチニルはアルブチンより優れた美白効果を有することがわかる。
【表５】
2009137879.tif 000006
【００３８】
以下に、本発明に係る化合物を配合した美白化粧料の実施例を挙げる。配合量は質量％を表す。実施例５〜１３で得られた美白化粧料はいずれも美白効果試験において効果が認められた。
【実施例５】
【００３９】
クリーム１
（処方）                                  質量％
油相
リノール酸レチニル                      ０．５
スクワラン                              ３．０
べヘニルアルコール                      ４．０
ワセリン                                ３．０
流動パラフィン                        １５．０
水相
モノステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン
３．０
１，３−ブチレングリコール              ３．０
防腐剤                                  適量
香料                                    適量
精製水                                  残部
（調製方法）
水中油型乳化組成物の製法の常法に従い調製した。
【実施例６】
【００４０】
美容液
（処方）                                  質量％
リノレン酸レチニル                      ０．１
スクワラン                              １．０
べヘニルアルコール                      ４．０
ワセリン                                ３．０
流動パラフィン                        １５．０
モノラウリン酸デカグリセリル            １．０
モノステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン
３．０
キサンタンガム                          ０．１
１，３−ブチレングリコール            １０．０
防腐剤                                  適量
香料                                    適量
精製水                                  残部
（調製方法）
水中油型乳化組成物の製法の常法に従い調製した。
【実施例７】
【００４１】
化粧水
（処方）                                  質量％
リノール酸レチニル                      ０．０１
スクワラン                              ０．２
モノラウリン酸デカグリセリル            ２．０
ヒアルロン酸ナトリウム                  ０．２
１，３−ブチレングリコール              ３．０
エチルアルコール                      １０．０
防腐剤                                  適量
香料                                    適量
精製水                                  残部
（調製方法）
全ての成分を５０℃で均一になるまで混合し、調製した。
【実施例８】
【００４２】
クリーム２（エモリエントタイプ）
（処方）                                  質量％
油相
リノール酸レチニル                      １．０
スクワラン                            １０．０
ミリスチン酸イソセチル                  ６．０
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル      ３．０
マカデミアナッツ油                      １．０
ジメチルポリシロキサン（６ｃｓ）        ０．２
セタノール                              ５．０
ＰＯＥ（２０）セチルエーテル            １．０
テトラオレイン酸ＰＯＥ（４０）ソルビット
０．５
モノステアリン酸グリセリル              １．０
水相
水素添加大豆レシチン                    ０．２
１，３−ブチレングリコール              ５．０
キサンタンガム                          ０．１
ヒアルロン酸ナトリウム                  ０．０１
クエン酸                                ０．１
クエン酸ナトリウム                      ０．４
防腐剤                                  適量
精製水                                  残部
（調製方法）
水中油型乳化組成物の製造方法の常法に従い調製した。
【実施例９】
【００４３】
美容オイル
（処方）                                  重量％
リノール酸レチニル                      ３．０
ミリスチン酸イソセチル                １０．０
ホホバ油                                ５．０
天然ビタミンＥ                          ０．１
スクワラン                              残部
（調製方法）
全ての成分を５０℃で均一になるまで混合し、調製した。
【実施例１０】
【００４４】
スキンローション
（処方）                                  質量％
油相
リノール酸レチニル                      ０．１
トリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリル
０．１
ＰＯＰ（４）ＰＯＥ（２０）セチルエーテル
０．６
水相
プロピレングリコール                  １０．０
ヒアルロン酸ナトリウム                  ０．１
防腐剤                                  適量
精製水                                  残部
（調製方法）
水中油型乳化組成物の製造方法の常法に従い調製した。
【実施例１１】
【００４５】
乳液
（処方）                                  質量％
油相
リノール酸レチニル                      ０．６
エイコサペンタエン酸レチニル            ０．２
ドコサヘキサエン酸レチニル              ０．２
ｄ−δ−トコフェロール                  ０．１
スクワラン                              ５．０
２−エチルヘキサン酸セチル              ５．０
ジメチルポリシロキサン（１００ｍＰａ・ｓ）
０．５
パルミチン酸セチル                      ０．５
ベヘニルアルコール                      １．５
ステアリン酸                            ０．５
親油型モノステアリン酸グリセリル
１．０
モノステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン
１．０
テトラオレイン酸ＰＯＥ（４０）ソルビタン
１．５
水相
プロピレングリコール                    ７．０
キサンタンガム                          ０．１
防腐剤                                  適量
精製水                                  残部
（調製方法）
水中油型乳化組成物の製造方法の常法に従い調製した。
【実施例１２】
【００４６】
クリーム３（油中水型エモリエントタイプ）
（処方）                                  質量％
油相
リノール酸レチニル                      ０．５
リノレン酸レチニル                      ０．５
ジメチコンコポリオール                  ０．５
デカメチルシクロペンタシロキサン        ５．０
トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル
１５．０
ミツロウ                                ２．０
ペンタヒドロキシ酸デカグリセリル        ２．０
イソステアリン酸                        １．０
水相
グリセリン                              ４．５
ヒアルロン酸ナトリウム                  ０．０１
防腐剤                                  適量
精製水                                  残部
（調製方法）
油中水型乳化組成物の乳化法の常法に従い、乳化組成物を調製した。
【実施例１３】
【００４７】
サンスクリーンクリーム
（処方）                                  質量％
油相
テトラコサジエン酸レチニル              ０．５
流動パラフィン                          ７．０
デカメチルシクロペンタシロキサン        ３．０
セチルアルコール                        ４．０
縮合リシノール酸ヘキサグリセリル        ０．５
ＰＯＥ（２０）セチルエーテル            １．０
パラメトキシ桂皮酸オクチル              ７．０
粉体相
酸化チタン                              ３．０
水相
セチル硫酸ナトリウム                    １．０
ステアロイルメチルタウリンナトリウム    ０．３
１，３−ブチレングリコール              ５．０
キサンタンガム                          ０．３
防腐剤                                  適量
精製水                                  残部
（調製方法）
粉体相を油相中に添加した後、油中水型乳化組成物の乳化法の常法に従い、乳化組成物を調製した。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
従来皮膚の柔軟促進剤、活性酸素消去剤、老化防止剤として用いられてきたレチノールと炭素数１８〜２２かつ分子構造中の不飽和結合数が２以上の脂肪酸とのエステル及び／若しくはこれを配合する美白化粧料を皮膚に塗布することにより、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝班等の予防及び改善等、肌に対して優れた美白効果を有する美白化粧料を得ることができる。