(57)【要約】【課題】病理組織・細胞との密着性を保持しながらＰＡＭ染色時の共染を防止ないし抑制する機能を有するコーティング組成物および当該コーティング組成物を表面に被覆した顕微鏡スライドグラス、ＰＡＭ染色時の共染を防止ないし抑制する機能を有するＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液及びＰＡＭ染色用前処理液を得る。【解決手段】ポリアクリルアミドを顕微鏡スライドグラス用のコーティング組成物に使用することでスライドグラス表面の親水性、病理組織・細胞との密着性を保持しながらＰＡＭ染色時の共染防止ないし抑制する。また、通常のＰＡＭ染色の前にポリアクリルアミドを含有する液に浸漬することで、もしくはポリアクリルアミドをＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液に混合することで、ＰＡＭ染色時の共染を防止ないし抑制する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリアクリルアミドを含有することを特徴とする顕微鏡スライドグラス用コーティング組成物。
【請求項２】
請求項1記載のコーティング組成物を被覆してなることを特徴とする顕微鏡スライドグラス。
【請求項３】
ポリアクリルアミドを含有することを特徴とするＰＡＭ染色用前処理液。
【請求項４】
ポリアクリルアミドを含有することを特徴とするＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、顕微鏡スライドグラス用コーティング組成物、それを用いた顕微鏡スライドグラス、染色用前処理液、及び染色液に関する。特に、PAM染色に有効な顕微鏡スライドグラス用コーティング組成物、それを用いた顕微鏡スライドグラス、ＰＡＭ染色用前処理液、及びＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液に関する。
【背景技術】
【０００２】
顕微鏡スライドグラスは病理組織・細胞などとの親和性、密着性および各種染色液、染色方法によるバックグランド(以下共染という)の発生がないことなど種々の機能が要求される。病理組織、細胞との密着性を要求されるスライドグラスとしては、従来から、アミノシラン、ポリ-Ｌ-リジンなどをコーティングしたスライドグラスが広く使用されているが、いずれもＰＡＭ(過ヨウ素酸メセナミン銀)染色時にメセナミン銀染色液によりスライドグラスに銀粒子が付着して共染が発生し、診断の妨げになるという欠点がある。その対策としてゼラチンをＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液に添加する方法も提案されている（例えば、非特許文献１参照）が、その効果は充分でない。一方非コーティングスライドグラスではＰＡＭ染色時の共染は少ないものの、組織・細胞との密着が不充分である。
【非特許文献１】「実践病理組織細胞診染色法カラー図鑑」  株式会社近代出版  新訂版１９９９年３月１５日  第３１頁〜第３５頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の課題は、上記の従来技術の欠点を克服し病理組織・細胞との密着性を保持しながらＰＡＭ染色時の共染を防止ないし抑制する機能を有するコーティング組成物および当該コーティング組成物を表面に被覆した顕微鏡スライドグラス、さらにＰＡＭ染色時の共染を防止ないし抑制する機能を有するＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液及びＰＡＭ染色用前処理液を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
上記課題を解決するため、ポリアクリルアミドを含有する顕微鏡スライドグラス用コーティング組成物とする。これによって、病理組織・細胞との密着性を保持しながらＰＡＭ染色時の共染を防止ないし抑制する機能を有するコーティング組成物が得られる。
【０００５】
また、上記のコーティング組成物を被覆する顕微鏡スライドグラスとすれば、病理組織・細胞との密着性を保持しながらＰＡＭ染色時の共染を防止ないし抑制する機能を有する顕微鏡スライドグラスが得られる。
【０００６】
また、ポリアクリルアミドを含有するＰＡＭ染色用前処理液は、ＰＡＭ染色時の顕微鏡スライドグラス上の共染を防止ないし抑制することができる。
【０００７】
また、ポリアクリルアミドを含有するＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液は、ＰＡＭ染色時の顕微鏡スライドグラス上の共染を防止ないし抑制することができる。
【発明の効果】
【０００８】
以上説明したように、ポリアクリルアミドを顕微鏡スライドグラス用のコーティング組成物に使用することでスライドグラス表面の親水性、病理組織・細胞との密着性を保持しながらＰＡＭ染色時の共染防止ないし抑制が可能となる。また、ＰＡＭ染色の前にポリアクリルアミド含有液に浸漬することで、もしくはポリアクリルアミドをＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液に混合することで、ＰＡＭ染色時の共染を防止ないし抑制することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本願におけるコーティング組成物とは、ポリ-Ｌ-リジン、アミノシラン、又はこれら両者等を含むコーティング組成物を言う。したがって、本発明における一実施の形態としてのコーティング組成物は、ポリ-Ｌ-リジン又はアミノシランと、又はこれら両者と、ポリアクリルアミドを主成分とする。ポリ-Ｌ-リジンとアミノシランはスライドグラスと病理組織・細胞との密着性を向上させる効果を有する。また、ポリアクリルアミドは、スライドグラスの親水性向上とＰＡＭ染色時の共染を防止ないし抑制するために有効である。ポリ-Ｌ-リジンはその分子量によらず病理組織・細胞との密着性を向上させるのに有効である。
【００１０】
アミノシランはＮ-β(アミノエチル)γ-アミノプロピルトリメトキシシラン、Ｎ-β(アミノエチル)γ-アミノプロピルトリエトキシシラン、γ-アミノプロピルトリメトキシシラン、γ-アミノプロピルトリエトキシシラン、Ｎ-フェニル-γ-アミノプロピルトリメトキシシランなど、およびこれらの加水分解物を使用することができる。
【００１１】
ポリアクリルアミドは、カチオン性、アニオン性および非イオン性のいずれも使用可能である。ポリアクリルアミドの添加量は当該コーティング組成物の固形分換算で２０％〜８５％が好ましく、２０％未満ではＰＡＭ染色時の共染防止ないし抑制効果が不充分であり、８５％超では病理組織・細胞との密着性が低下する。
【００１２】
本発明における実施の形態のコーティング組成物には、種々の添加剤を加えることが可能である。たとえば、ＳｉＯ２，Ａｌ２Ｏ３，ＴｉＯ２，ＺｒＯ２，Ｓｂ２Ｏ４などの金属酸化物、種々のオルガノアルコキシシランおよびその加水分解物、エチルアルコール、イソプロピルアルコール等のアルコール類、グリコール類、ポリビニルアルコール，ポリビニルピロリドン，ポリアクリル酸，アミノ樹脂などの水溶性高分子、糖質、ゼラチンなどのたんぱく質などが挙げられる。
【００１３】
本発明における実施の形態としての顕微鏡スライドグラスは、上記のコーティング組成物をその表面に被覆したものであり、その被覆方法は限定されない。
【００１４】
本発明におけるポリアクリルアミド含有ＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液は通常のＰＡＭ染色に使用されるメセナミン銀染色液にポリアクリルアミドを添加したもので、メセナミン銀染色液１００部（重量）に対してポリアクリルアミド０．０１〜０．１部添加するのが好ましい。０．０１部未満では共染防止ないし抑制効果が不充分であり、０．１部超ではＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液が乳化し、染色も不良になる。本発明における実施の形態としてのＰＡＭ染色用ポリアクリルアミド含有前処理液は、通常のＰＡＭ染色手順中のメセナミン銀染色前に供試スライドを浸漬するもので、ポリアクリルアミドを主成分とする。
【実施例】
【００１５】
以下に本発明における実施例を記すが、この範囲に限定されるものではない。
（１）本発明におけるコーティング組成物および顕微鏡スライドグラスに関する実施例と比較例
実施例１−１  ポリ−L−リジン０．０５％水溶液１００部とポリアクリルアミド１％水溶液２部を混合。
実施例１−２  ポリ−L−リジン０．０５％水溶液１００部とポリアクリルアミド１％水溶液２５部を混合。
実施例１−３  ポリ−L−リジン０．０５％水溶液１００部とコロイダルシリカ1%水分散液100部およびポリアクリルアミド１％水溶液１００部を混合。
実施例１−４  アミノシラン１％水溶液100部とポリアクリルアミド１％水溶液１００部を混合。
実施例１−５  アミノシラン１％水溶液50部とポリアクリルアミド１％水溶液１００部を混合。
比較例１−１  ポリ−L−リジン０．０５％水溶液
比較例１−２  ポリ−L−リジン０．０５％水溶液１００部と１％ゼラチン水溶液１０部を混合
比較例１−３  アミノシラン１％水溶液
比較例１−４  アミノシラン１％水溶液１００部とゼラチン１０部を混合
【００１６】
以下に、評価方法を示す。
各実施例、比較例のコーティング組成物を未コーティンググラス上にコートし乾燥の上、下記の方法で評価を実施した。
１．親水性  水のはじき方を目視観察
○:はじかない  △:部分的にはじく  ×:全面がはじく
２．密着性  病理組織切片を当該スライドグラスに乗せ、乾燥後常法に従いオートクレーブ処理し、エオシン染色してスライドグラスと病理組織との密着性を評価した。
○:剥離が認められない  △:部分的に剥離が認められる  ×:広い範囲で剥離が認められる
３．ＰＡＭ染色  病理組織切片を当該スライドグラスに乗せ乾燥後、下記メセナミン銀染色液を用いてＰＡＭ染色を行い染色状態、共染の有無を評価した。
メセナミン銀染色液  ３％メセナミン水溶液５０ｍｌ,５％硝酸銀水溶液５ｍｌ,５％硼酸ナトリゥム水溶液５ｍｌおよび蒸留水４０ｍｌからなるメセナミン銀染色液
○:共染なしまたはほとんどなし、かつ染色良好
△:やや共染がみられ染色も不充分
×:共染が強くかつ染色不良
【００１７】
上記の評価方法による評価結果を表１に示す。
【表１】
2009031688.tif 000002
【００１８】
（２）本発明におけるポリアクリルアミド含有ＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液の実施例と比較例
実施例２−１  前記メセナミン銀染色液１００ｍｌに１％ポリアクリルアミド水溶液２ｍｌを混合した。このポリアクリルアミド含有ＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液中に病理組織切片をつけた前記比較例１−１,同１−３のスライドグラスを浸漬し、ＰＡＭ染色した。
実施例２−２  上記メセナミン銀染色液１００ｍｌに１％ポリアクリルアミド水溶液４ｍｌを混合して同様に染色した。
実施例２−３  上記メセナミン銀染色液１００ｍｌに１％ポリアクリルアミド水溶液８ｍｌを混合して同様に染色した。
比較例２−１  実施例2-1でポアクリルアミド水溶液を混合しないで染色した。
比較例２−２  実施例2-1でポアクリルアミド水溶液の代りに１％ゼラチン水溶液２ｍｌを混合して染色した。
【００１９】
本発明におけるＰＡＭ染色用ポリアクリルアミド含有前処理液の実施例
実施例３−１  病理組織切片を付けた前記比較例１−１および比較例１−３のスライドグラスを０．１％ポリアクリルアミド水溶液に５分浸漬した後、ポリアクリルアミドを含まない通常のＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液を用いて染色した。
評価方法は、前記（１）の評価方法に準じた。
【００２０】
上記の評価方法による評価結果を表２に示す。
【表２】
2009031688.tif 000003
【００２１】
なお、本発明の実施の形態における顕微鏡スライドグラスはベンタナ社製自動染色装置を使用して染色した際に、良好な染色結果が得られる。アミノシラン等をコーティングしたポリアクリルアミド不含のコーティングスライドでは、ベンタナ社製自動染色装置で染色する際は、予めスキムミルク、イムノブロック(大日本住友製薬株式会社製)などでの前処理を必要とし、この前処理をしないときは染色むらなどを生じ、良好な染色が得られない。しかしながら、本発明の実施の形態おける顕微鏡スライドグラスを使用すると、前記前処理を必要とせず、良好な染色が可能である。
【産業上の利用可能性】
【００２２】
上記のように、ポリアクリルアミドを顕微鏡スライドグラス用のコーティング組成物に使用することでスライドグラス表面の親水性、病理組織・細胞との密着性を保持しながらＰＡＭ染色時の共染防止ないし抑制が可能となる。また、通常のＰＡＭ染色の前にポリアクリルアミド含有液に浸漬することで、もしくはポリアクリルアミドをＰＡＭ染色用メセナミン銀染色液に混合することで、ＰＡＭ染色時の共染を防止ないし抑制することができて、本発明は有用であり、顕微鏡スライドグラスに適用して広く利用できる。