(57)【要約】【課題】細胞から容易に抽出することが可能であり、かつ生体が摂取しやすいα−グルコシダーゼ活性阻害剤及びこれを含む食品を提供する。【解決手段】単細胞真核藻類又はその抽出物を含有するα−グルコシダーゼ活性阻害剤。特に、単細胞真核藻類がユーグレナ又はクロレラであることが好ましい。抽出物として、親油性溶媒により抽出された成分、具体的には糖脂質を含有することが好ましい。また、上記α−グルコシダーゼ活性阻害剤を含む高い付加価値を有する食品。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
単細胞真核藻類又はその抽出物を含有することを特徴とするα−グルコシダーゼ活性阻害剤。
【請求項２】
前記単細胞真核藻類がユーグレナ又はクロレラであることを特徴とするα−グルコシダーゼ活性阻害剤。
【請求項３】
前記単細胞真核藻類が光照射下での培養により得られることを特徴とする請求項１に記載のα−グルコシダーゼ活性阻害剤。
【請求項４】
前記抽出物が親油性溶媒により抽出されたことを特徴とする請求項１に記載のα−グルコシダーゼ活性阻害剤。
【請求項５】
前記抽出物が糖脂質を含有することを特徴とする請求項１に記載のα−グルコシダーゼ活性阻害剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のα−グルコシダーゼ活性阻害剤を含むことを特徴とする食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はα−グルコシダーゼ活性阻害剤及びこれを含む食品に関し、特に藻類由来のα−グルコシダーゼ活性阻害剤及びこれを含む食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
α−グルコシダーゼは、ショ糖やスクロースなどの二糖類の非還元末端のα−グルコシド結合を切断し、グルコースなどの単糖類に分解する酵素である。α−グルコシダーゼは、主に小腸上皮に局在して生体内における糖質の消化酵素として重要な役割を有しており、特に血糖値の上昇に関与することが知られている。
したがって、α−グルコシダーゼの活性を抑制することにより血糖値の上昇を抑えることができ、ひいては高血糖状態に起因する糖尿病や肥満などの疾患の予防や治療、症状の改善につながると考えられている。
【０００３】
従来、多細胞真核藻類に由来するα−グルコシダーゼ活性阻害物質として、例えば、海藻のエゾイシゲとヒバマタの双方若しくは一方に含まれるフロロタンニン類を含有するもの（特許文献１）、アマノリ属の硫酸多糖ポルフィランの低分子分解物を含むもの（特許文献２）などが知られている。
【０００４】
ところで、従来、クロレラやユーグレナ（ミドリムシ）などの単細胞真核藻類は、高い栄養価を有していることから、食品や医薬品などとして広く用いられている。
例えばユーグレナ（Ｅｕｇｌｅｎａ）は、動物学と植物学の双方に分類され、動物学上は鞭毛虫綱、植物学上はミドリムシ藻類綱に属するミドリムシ目の微生物である。ユーグレナ属の微生物は、その動物学的、植物学的な特徴を兼ね備えた特徴を有しており、古くから生化学、生理学等の分野で広く研究対象として用いられている。
【０００５】
ユーグレナは、人間が生活するのに必要な栄養素であるビタミン類や脂肪酸などを豊富に含み、またパラミロン（β−１，３−グルカン）等のユーグレナ特有の天然物質を含むことから、高栄養価食品として食糧問題の解決や宇宙食としての利用が期待されている。
同様に、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）についても高い栄養価を有することから、栄養補助食品などの形態で広く一般に提供されている。
【０００６】
【特許文献１】特開２００２−２１２０９５号公報
【特許文献２】特開２００６−１０４１００号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述した多細胞真核藻類は、細胞が群生して生育するため、回収時に細胞間が分離しておらず、α−グルコシダーゼ活性阻害作用を有する有効成分を抽出する際は、細胞壁を破壊して細胞を分離する必要がある。このため、成分抽出に手間がかかったり、単位重量あたりに得られる成分量が少なかったりする問題があった。
【０００８】
一方、単細胞真核藻類は、１つの細胞が１つの個体を構成し、細胞が分離した状態にあるため、回収時にすでに細胞間がばらばらで組織化されていない状態となっている。このため、上述した多細胞真核藻類のように個々の細胞を取り出すために細胞壁の破壊処理を行う必要が無く、多細胞真核藻類と比較して細胞からの有効成分の抽出が容易である。したがって、単細胞真核藻類の有効成分は、外部に抽出されやすく生体に摂取されやすいという性質を有している。
【０００９】
特に、ユーグレナは、細胞壁が無いため、細胞壁のある他の単細胞真核藻類と比較して細胞を容易に破壊することができる。このため、ユーグレナは、細胞内の有効成分の抽出が更に容易であり、例えば消化により細胞壁が容易に破壊されることで細胞内の有効成分が細胞外へ抽出される。したがって、ユーグレナの有効成分は、他の単細胞真核藻類のそれと比較して、より生体に摂取されやすい性質を有している。
しかしながら、このように有効成分の抽出が容易な単細胞真核藻類がα−グルコシダーゼ活性阻害作用を有することは、これまで知られていなかった。
【００１０】
本発明の目的は、細胞から容易に抽出することが可能であり、かつ生体に摂取されやすいα−グルコシダーゼ活性阻害剤を提供することにある。
また、本発明の他の目的は、このように抽出が容易で生体に摂取されやすいα−グルコシダーゼ活性阻害剤を含む、付加価値の高い食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
今回発明者らは、上記目的を達成するために鋭意努力した結果、単細胞真核藻類又はその抽出物にα−グルコシダーゼ活性を阻害する作用があることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１２】
すなわち、上記課題は、本発明のα−グルコシダーゼ活性阻害剤によれば、単細胞真核藻類又はその抽出物を含有することにより解決される。
この場合、前記単細胞真核藻類がユーグレナ又はクロレラであることが好ましい。
また、前記単細胞真核藻類が光照射下での培養により得られることが好ましい。
さらにまた、前記抽出物が親油性溶媒により抽出されると好ましい。
この場合、前記抽出物が糖脂質を含有すると好適である。
【００１３】
また、上記課題は、本発明の食品によれば、上記いずれかに記載のα−グルコシダーゼ活性阻害剤を含むことにより解決される。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のα−グルコシダーゼ活性阻害剤は、個々の細胞が分離した単細胞真核藻類から得られるため、従来の多細胞真核藻類と比較して、成分の抽出が容易であり、生体に摂取されやすい性質を有している。したがって、特別な抽出処理を行わなくても十分にα−グルコシダーゼ活性阻害作用を発揮し、α−グルコシダーゼに由来する糖尿病や肥満等の疾患の治療、改善、予防に高い効果を有する。
また、成分の抽出が容易であるため、高濃度の有効成分を簡単な操作で抽出することができる。したがって、純度の高いα−グルコシダーゼ活性阻害剤を低コストで提供することができる。
本発明の食品は、成分の抽出が容易であり、生体に摂取されやすいα−グルコシダーゼ活性阻害剤を含むため、糖尿病や肥満等の疾患の治療や予防、症状の改善に高い効果を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明の一実施形態について説明する。なお、以下に説明する部材、配置等は、本発明を限定するものではなく、本発明の趣旨に沿って各種改変することができることは勿論である。
【００１６】
本発明の「単細胞真核藻類」とは、単細胞の真核生物であって酸素発生型の光合成を行う植物を意味し、例えば、ユーグレナ属、クロレラ属、ボツリオコッカス属、クラミドモナス属、ヘマトコッカス属、クロロコッカス属などが含まれる。
【００１７】
本発明の「ユーグレナ」とは、動物学や植物学の分類でユーグレナ属（Ｅｕｇｌｅｎａ）に分類される植物、その変種、その変異種のすべてを含み、かつα−グルコシダーゼ活性の阻害作用を有する成分を含むすべての植物を意味する。
ここで、ユーグレナ属（Ｅｕｇｌｅｎａ）の微生物とは、動物学では原生動物門（Ｐｒｏｔｏｚｏａ）の鞭毛虫綱（Ｍａｓｔｉｇｏｐｈｏｒｅａ）、植物鞭毛虫亜綱（Ｐｈｙｔｏｍａｓｔｉｇｏｐｈｏｒｅａ）に属するミドリムシ目（Ｅｕｇｌｅｎｉｄａ）のユーグレノイディナ亜目（Ｅｕｇｌｅｎｏｉｄｉｎａ）に属する微生物である。一方、ユーグレナ属の微生物は、植物学ではミドリムシ植物門（Ｅｕｇｌｅｎｏｐｈｙｔａ）のミドリムシ藻類綱（Ｅｕｇｌｅｎｏｐｈｙｃｅａｅ）に属するミドリムシ目（Ｅｕｇｌｅｎａｌｅｓ）に属している。
【００１８】
ユーグレナ属の微生物としては、具体的には、Ｅｕｇｌｅｎａ  ａｃｕｓ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｃａｕｄａｔａ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｃｈａｄｅｆａｕｄｉｉ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｄｅｓｅｓ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｇｒａｃｉｌｉｓ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｇｒａｎｕｌａｔａ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｍｕｔａｂｉｌｉｓ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｏｘｙｕｒｉｓ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｐｒｏｘｉｍａ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｓｐｉｒｏｇｙｒａ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｖｉｒｉｄｉｓ、Ｅｕｇｌｅｎａ  ｖｅｒｍｉｆｏｒｍｉｓなどが挙げられる。このうち特に、広く研究に利用されているユーグレナ  グラシリス（Ｅｕｇｌｅｎａ  ｇｒａｃｉｌｉｓ）が好適である。
【００１９】
ユーグレナは、Ｃｒａｍｅｒ−Ｍｙｅｒｓ培地、Ｈｕｔｎｅｒ培地、Ｋｏｒｅｎ−Ｈｕｔｎｅｒ培地や、これらの一部組成を変更した改変培地などを用いて培養することができる。培養容器には、坂口フラスコ、三角フラスコ、試薬ビンなどを用いることができる。ユーグレナはＣＯ２を資化するため、１〜５％ＣＯ２を含む空気を培地中に通過させることが好ましい。また、終濃度０．５〜１．０％（容量比）となるように培地中にエタノールを加えると良好な生育となるため好ましい。さらに、葉緑体を十分に発達させるために、培地１リットルあたり１〜５ｇ程度のリン酸アンモニウムを加えるとよい。培養温度は、通常２０〜３４℃で、特に２８〜３０℃が好適である。また、培養条件にもよるが、ユーグレナは通常、培養開始後２〜３日で対数増殖期となり、４〜５日程度で定常期に到達する。
【００２０】
ユーグレナは、光照射下で培養（明培養）されてもよく、無照射で培養（暗培養）されてもよいが、α−グルコシダーゼ活性阻害作用の強さの点からは明培養が好ましい。
明培養を行う場合の光の照度としては、Ｃｒａｍｅｒ−Ｍｙｅｒｓ培地などを用いた光独立栄養培養の場合は５０００〜８０００Ｌｕｘ程度が好ましく、Ｈｕｔｎｅｒ培地やＫｏｒｅｎ−Ｈｕｔｎｅｒ培地などを用いた光従属栄養培養では２０００〜８０００Ｌｕｘ程度が好ましい。
【００２１】
また、光照射は、培養容器の全体に光が照射される条件であれば培養容器のどの方向から行ってもよく、例えば上面と側面の両方から行うとよい。
なお、暗培養を行う場合、培養容器を厚手の黒布などで覆って培養容器内に光が入らないようにするとよい。
【００２２】
本発明の「クロレラ」とは、クロレラ属（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）に分類される植物、その変種、その変異種のすべてを含み、かつα−グルコシダーゼ活性の阻害作用を有する成分を含むすべての植物を意味する。
ここで、クロレラ属の植物とは、緑色植物門（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）、緑藻綱（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、クロロコッカス目（Ｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃａｌｅｓ）、オオシスティス科（Ｏｏｃｙｓｔａｃｅａｅ）に分類される植物である。
【００２３】
クロレラ属の微生物としては、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｒｅｇｕｌａｒｉｓ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａなどが挙げられる。このうち特に、広く研究に利用されているクロレラ  ブルガリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）が好適である。
【００２４】
クロレラは、ＭＢＢＭ培地、ＭＡＭ培地や、これらの一部組成を変更した改変培地を用いて培養することができる。培養容器や培養条件（温度など）については、上述したユーグレナのものと同様とすることができる。
また、クロレラは、ユーグレナと同様に光照射下で培養（明培養）されてもよく、無照射で培養（暗培養）されてもよいが、α−グルコシダーゼ活性阻害作用の強さの点からは明培養が好ましい。この場合の照度としては光従属栄養培養では３０００〜８０００Ｌｕｘ程度が好ましい。
【００２５】
α−グルコシダーゼ活性阻害剤は、単細胞真核藻類自体又はその抽出物を含有している。ここで、単細胞真核藻類自体とは、培養後の単細胞真核藻類に対して抽出処理を行わない状態のものを意味する。具体的には、培養後の単細胞真核藻類を所定の溶液に溶解した微生物溶液、乾燥させた状態の粉末、造粒などで固形化した固形物、超音波処理やスプレードライ等による破砕物などが該当し、溶媒を用いて抽出処理を行わない状態のものをいう。
【００２６】
単細胞真核藻類は、海藻などの強固な細胞壁を有する多細胞真核藻類と異なり、１つの細胞が独立した個体として存在しており、強固な細胞壁を有していない。このため、単細胞真核藻類は、多細胞真核藻類と比較して細胞が壊れやすく、細胞に含まれる成分を抽出しやすい性質を有している。このため、例えば、単細胞真核藻類を経口摂取すると、胃液で溶解されて細胞に含まれる成分が溶出する。このように、単細胞真核藻類は、溶媒で抽出しなくても、それ自体で十分なα−グルコシダーゼ活性阻害作用を発揮する。特に、スプレードライなどで乾燥して細胞構造を破壊した状態だと、細胞内の成分が外部に溶出しやすくなるため、細胞構造を破壊しない場合と比較してα−グルコシダーゼ活性阻害作用がより強くなる。
【００２７】
一方、単細胞真核藻類の抽出物とは、水や親油性溶媒などの溶媒で単細胞真核藻類から抽出し、分離された成分を意味する。このように、単細胞真核藻類の抽出物は、抽出処理に手間を要するが、単細胞真核藻類自体よりも有効成分が濃縮された状態となるため、α−グルコシダーゼ活性阻害作用の強さという点では好適である。
【００２８】
抽出に用いられる親油性溶媒（有機溶媒）としては、メタノール、エタノール、プロパノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ベンゼン、クロロホルム、アセトン、メチルエーテル、エチルエーテル、ジエチルエーテル、フェニルエーテル、酢酸エチルなどから選択される１種類又は２種類以上が挙げられる。
【００２９】
α−グルコシダーゼ活性阻害剤は、単細胞真核藻類から親油性溶媒を用いて抽出した画分のうち、糖脂質やリン脂質を含む画分、特に糖脂質を含む画分中に特に多く含まれる。リン脂質よりも糖脂質の方が、単位重量あたり約２０倍程度α−グルコシダーゼ活性阻害作用が強い。
糖脂質の抽出は、まず親油性溶媒を用いて総脂質を抽出し、この総脂質を同じく親油性溶媒で分画することで行うことができる。
総脂質を抽出するための親油性溶媒としては、上述した有機溶媒のうち２種類以上から選択される混合液が好ましく、具体的にはクロロホルム／メタノール混液が好適である。また、総脂質から糖脂質やリン脂質を分画するための親油性溶媒としては、アセトンが好適である。
【００３０】
糖脂質中に含まれる成分のうち、ジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）、モノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）、スルホキノボシルジアシルグリセロール（ＳＱＤＧ）の３つが、強いα−グルコシダーゼ活性阻害作用を示す。このうち特に、スルホキノボシルジアシルグリセロール（ＳＱＤＧ）は、他の２つの糖脂質と比較して単位重量あたりで約５倍程度と非常に強いα−グルコシダーゼ活性阻害作用を示す。
糖脂質からのこれらの成分の分画は、クロロホルム／メタノール混液の含水率を変化させることで行うことができる。
【００３１】
なお、これら３つの糖脂質のうちＳＱＤＧの阻害作用が強い理由については明らかでないが、ＳＱＤＧの分子構造によるものと推測される。
α−グルコシダーゼは、２つの糖がグルコシド結合により結合した構造の二糖類に結合し、そのグルコシド結合を解離させる機能を有している。ＳＱＤＧの分子構造は、他の２つの糖脂質と比較してα−グルコシダーゼの活性部位に結合しやすい構造をしているか、結合したＳＱＤＧがα−グルコシダーゼから解離しにくい構造をしているか、あるいはどちらにも該当する構造（結合しやすく解離しにくい構造）をしており、基質である二糖類の分解を拮抗阻害するためと考えられる。
【００３２】
抽出法としては、クロマトグラフィー法など公知の方法を用いることができる。クロマトグラフィー法の具体例として、分子排斥クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーなどが挙げられる。
【００３３】
α−グルコシダーゼ活性の阻害作用は、栗原らの方法（Ｋｕｒｉｈａｒａ  ｅｔ．  ａｌ．  "Ｄｉｇａｌａｃｔｏｓｙｌｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ｓｕｌｆｏｑｕｉｎｏｖｏｓｙｌｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｏｆ  ａｌｐｈａ−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ．"、Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、６０（５）、ｐ．９３２−９３３、１９９６）で定量的に評価することができる。
この方法では、酵母のα−グルコシダーゼを酵素として、ｐ−ニトロフェニル  α−Ｄ−グルコピラノシドを基質として用いる。そして、α−グルコシダーゼ活性阻害剤の存在下でα−グルコシダーゼにｐ−ニトロフェニル  α−Ｄ−グルコピラノシドを加え、ｐ−ニトロフェニルを生成させる。α−グルコシダーゼによる酵素反応を炭酸ナトリウムで停止させ、生成したｐ−ニトロフェニルを波長４００ｎｍの吸光度で定量することで、α−グルコシダーゼ活性を定量する。
【００３４】
本発明のα−グルコシダーゼ活性阻害剤は、薬剤として提供することができる。薬剤の具体的形態としては、液剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、ドライシロップ、散剤などが挙げられる。
また、α−グルコシダーゼ活性阻害剤には、その阻害作用を損なわない範囲内で、ビタミン、アミノ酸、ｐＨ調整剤、粘調剤、抗酸化剤、潤沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤、賦形剤、清涼化剤、香料など、他の成分を含有させてもよい。
【００３５】
α−グルコシダーゼ活性阻害剤は、通常経口投与される。投与量としては、年齢、体重、症状の程度にもよるが、１日あたり通常１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｇ／ｋｇ体重程度であり、好ましくは１０〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。
【００３６】
さらに、本発明のα−グルコシダーゼ活性阻害剤は、食品中に含有させて提供することもできる。このような食品としては、一般食品、飲料、調理・調味料、嗜好食品、機能性食品などが挙げられる。
【００３７】
一般食品としては、例えば、ご飯、パン等の穀類、ラーメン、うどん、そば等の麺類、ハム、ソーセージ等の食肉加工食品、かまぼこ、ちくわ、はんぺん等の水産加工食品、バター、粉乳等の乳製品などが挙げられる。飲料としては、例えば、果実ジュース、野菜ジュース、緑茶、麦茶、ほうじ茶、ウーロン茶、コーヒー、紅茶、炭酸飲料、清涼飲料、日本酒、ワイン、焼酎、牛乳、栄養ドリンクなどが挙げられる。調理・調味料としては、例えば、醤油、ソース、マヨネーズ、ケチャップ、砂糖、塩、ラー油、酢、からし、わさびなどが挙げられる。また、嗜好食品としては、例えば、ガム、チョコレート、クッキー、スナック、ゼリー、グミ、キャンディー、せんべい、おかきなどが挙げられる。
【００３８】
機能性食品は、栄養（エネルギー）以外の何らかの生理作用を有する成分を利用した加工食品を意味し、サプリメントなどとして提供される。機能性食品は、例えば液剤、顆粒剤、粉剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、ペースト、フィルムなどの形態で提供される。また、機能性食品としては、α−グルコシダーゼ活性阻害剤を単独の有効成分として含有してもよく、他の成分を更に含有してもよい。
【００３９】
このような他の成分としては、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＢ１，Ｂ２，Ｂ６，Ｂ１２、ビタミンＣ、ビタミンＥ等のビタミン類、鉄、銅、亜鉛、クロム、マグネシウム、カルシウム、ナトリウム、カリウム、ヨウ素等のミネラル類、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、リジン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、チロシン、フェニルアラニン等のアミノ酸類、ブルーベリー、クランベリー、イチョウ、エキナセア、ローズヒップ、キャッツクロー、マカ、バレリアン、ビルベリー、ターメリック、ルテイン、マリアアザミ等のハーブ類などが挙げられる。
【００４０】
α−グルコシダーゼ活性阻害剤は、二糖類の分解を阻害し、血糖値の上昇を抑制する作用を有するため、摂取することにより、血糖値の上昇に起因する様々な疾患、例えば糖尿病、肥満（内臓脂肪型肥満や腹部肥満）などの治療、改善、予防効果を有する。
特に、α−グルコシダーゼ活性阻害剤がユーグレナやその抽出物の場合、α−グルコシダーゼ活性阻害作用を示す成分に加えてユーグレナ由来の他の成分を含むことで、α−グルコシダーゼ活性阻害剤による血糖値上昇の抑制と他の成分による薬効の相乗効果が期待できる。
【００４１】
例えば、ユーグレナはパラミロンという特有の成分を含んでいるが、このパラミロンはコレステロール排出作用があると考えられている。したがって、α−グルコシダーゼ活性阻害剤にパラミロンが含まれることで、α−グルコシダーゼ活性阻害剤による血糖値上昇の抑制作用に加えてパラミロンによるコレステロール排出促進作用も有する。このため、糖尿病や高血圧などのいわゆるメタボリック症候群の要因となる疾患の治療、改善、予防に効果を発揮する。
【実施例】
【００４２】
以下に、本発明のα−グルコシダーゼ活性阻害剤について、具体的な実験例を示して詳細に説明する。
１．実施例１：ユーグレナ（明培養）
（培養・集菌）
培地としてＫＨ培地を用い、５００ｍｌ容振とうフラスコ内でユーグレナ（Ｅｕｇｌｅｎａ  ｇｒａｃｉｌｉｓ  Ｚ）を光照射下（５０００ｌｕｘ）で培養定常期（１．４×１０６個／ｍｌ）に達するまで明培養した。得られた培養液１００ｍｌを冷却遠心分離機（Ｈｉｔａｃｈｉ  ＣＦ７Ｄ２）で３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、ユーグレナ細胞を回収した。
凍結乾燥機（東京理化製  ＦＤ−５Ｎ）を用いて０．１ｔｏｒｒで２４時間凍結乾燥した後、クロロホルム／メタノール混液を用いてＢｌｉｇｈ  ＆  Ｄｙｅｒ法により総脂質を抽出した。得られた総脂質４５０ｍｇから、以下に示すシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより脂質を分画した。
【００４３】
（総脂質の抽出・分画）
２５×３５０ｍｍのガラス製オープンカラムに、カラムクロマト用のシリカゲル（ナカライ製）１５ｇをクロロホルムに懸濁した状態で充填した。次に、クロロホルムに溶解した総脂質４５０ｍｇをシリカゲル充填カラムにアプライし、室温でクロロホルム３００ｍｌ、アセトン６００ｍｌ、メタノール３００ｍｌをこの順に自然滴下し、総脂質を抽出した。抽出後の画分のうち、クロロホルム画分に中性脂質、アセトン画分に糖脂質、メタノール画分にリン脂質が含まれることを確認した。
各脂質の重量を測定した結果、中性脂質  １５０ｍｇ、糖脂質  ２００ｍｇ、リン脂質  ９５ｍｇであった。
【００４４】
（糖脂質の分画）
これら脂質画分のそれぞれ２０ｍｇを、１０％塩化水素メタノール１ｍｌ中で、８０℃、３時間加熱した。放冷後、６ｍｌのイオン交換水を添加し、更にヘキサン１ｍｌを添加して脂肪酸メチルエステルを抽出し、ガスクロマトグラフィー（Ｓｈｉｍａｄｚｕ製  ＧＣ−２０１４）により脂肪酸組成を測定した。さらに、糖脂質画分を以下に示すシリカゲルクロマトグラフィーで分画した。
【００４５】
上述した総脂質の抽出・分画で用いたカラムに同じシリカゲル２０ｇを充填した。次に、糖脂質１００ｍｇをクロロホルム（Ｃ）／メタノール（Ｍ）／水（Ｗ）の混合溶媒（Ｃ：Ｍ：Ｗ（体積比率）＝９０：１０：０．５）に溶解した。カラムのコックをフルオープンにした状態で、糖脂質を溶解した混合溶媒２００ｍｌをカラムに流した。続いて糖脂質を溶解していない混合溶媒（Ｃ：Ｍ：Ｗ＝８０：２０：２）を２００ｍｌ、さらに同じく糖脂質を溶解していない混合溶媒（Ｃ：Ｍ：Ｗ＝７０：３０：３）２００ｍｌをこの順でカラムに流し、糖脂質を抽出した。糖脂質は、モノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）、ジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）、スルホキノボシルジアシルグリセロール（ＳＱＤＧ）の順でカラムから抽出されたことを確認した。
各糖脂質の重量を測定した結果、ＤＧＤＧ  ４５ｍｇ、ＭＧＤＧ  ５３ｍｇ、ＳＱＤＧ  ４８ｍｇであった。
【００４６】
２．実施例２：ユーグレナ（暗培養）
ユーグレナを暗培養（培養定常期：１．４×１０６個／ｍｌ）した以外は実施例１と同じ条件で脂質を分画した。この結果、中性脂質  １９０ｍｇ、糖脂質  ６０ｍｇ、リン脂質  １３９ｍｇを得た。さらに、糖脂質画分を実施例１と同じ条件で分画し、ＤＧＤＧ  ５５ｍｇ、ＭＧＤＧ  ４３ｍｇ、ＳＱＤＧ  ３８ｍｇを得た。
【００４７】
３．実施例３：クロレラ（明培養）
ユーグレナに替えてクロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ  Ｃ−３０（ＯＤ６６０＝１６））を明培養した以外は実施例１と同じ条件で、脂質を分画した。この結果、中性脂質  ９０ｍｇ、糖脂質  ２３０ｍｇ、リン脂質  １２５ｍｇを得た。さらに、糖脂質画分を実施例１と同じ条件で分画し、ＤＧＤＧ  ５２ｍｇ、ＭＧＤＧ  ４３ｍｇ、ＳＱＤＧ  ４８ｍｇを得た。
【００４８】
４．α−グルコシダーゼ活性測定
上記の手順で分画した各脂質（中性脂質、糖脂質、リン脂質、ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧ、ＳＱＤＧ）を１ｍｇ／ｍｌの濃度になるようエタノールに溶解した。各脂質のエタノール溶液０．１ｍｌをそれぞれ試験管に分注し、各試験管に２０ｍＭのｐ−ニトロフェニル  α−Ｄ−グルコピラノシド溶液０．１ｍｌと１０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ  ７．０）２．２ｍｌとを入れ、３７℃のウォーターバスで５分間保温した。次に、各試験管に酵母由来のα−グルコシダーゼ溶液（和光純薬製  ７０ｕｎｉｔｓ／ｍｇ）０．１ｍｌ（５μｇ／ｍｌ）を０．１ｍｌ入れ、３７℃で２分間反応させた。
【００４９】
続いて、０．２５Ｍの炭酸ナトリウム溶液１．５ｍｌを試験管に入れて反応を停止させ、４００ｎｍの吸光度を分光光度計（日本分光製  Ｖ−５３０）で測定し、下記の式１により各脂質によるα−グルコシダーゼ活性の阻害率（％）を算出した。
なお、ブランクとして酵素溶液の代わりに蒸留水を添加した試験管を、コントロールとして脂質溶液の代わりにエタノールを添加した試験管を用意し、上記と同様に吸光度測定を行った。
阻害率（％）＝｛１−（Ａｓａｍ−Ａｂｌ）／（Ｃｓａｍ−Ｃｂｌ）｝×１００・・式１
（Ａｓａｍ：反応後の吸光度（試料添加）、Ａｂｌ：反応後の吸光度（試料添加−ブランク）、Ｃｓａｍ：反応後の吸光度（試料なし）、Ｃｂｌ：反応後の吸光度（試料なし−ブランク））
【００５０】
５．α−グルコシダーゼ活性阻害作用の評価
総脂質分画後のサンプルを用いて脂質の種類（中性脂質、糖脂質、リン脂質）ごとの阻害率を算出し、それぞれの脂質についてα−グルコシダーゼ活性阻害作用を評価した。その結果を表１に示す。
【表１】
2009062337.tif 000002
【００５１】
この表からわかるように、実施例１〜３のいずれにおいても、中性脂質についてはα−グルコシダーゼ活性阻害作用が全く見られなかった。また、リン脂質についてはわずかにα−グルコシダーゼ活性阻害作用が見られた。糖脂質については非常に強いα−グルコシダーゼ活性阻害作用を示すことがわかった。
【００５２】
また、実施例１と実施例２とを比較すると、ユーグレナを明培養したときのほうが暗培養したときよりも糖脂質によるα−グルコシダーゼ活性の阻害率が５倍以上高かった。したがって、光照射下で培養したほうがユーグレナ抽出物のα−グルコシダーゼ活性阻害作用が強いことがわかった。
【００５３】
さらに、実施例１と実施例３とを比較すると、糖脂質によるα−グルコシダーゼ活性の阻害率は、実施例１（ユーグレナ）の方が実施例３（クロレラ）よりも１．４倍程度高いことがわかった。このことから、ユーグレナの糖脂質のほうがクロレラの糖脂質よりもα−グルコシダーゼ活性阻害作用が強いことがわかった。
【００５４】
次に、実施例１（ユーグレナ明培養）と実施例３（クロレラ明培養）の糖脂質を更に分画したサンプル（それぞれ、実施例１−２、実施例３−２）を用いて、糖脂質（ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧ、ＳＱＤＧ）ごとのα−グルコシダーゼ活性の阻害率を算出し、それぞれの糖脂質についてα−グルコシダーゼ活性阻害作用を評価した。その結果を表２に示す。
【表２】
2009062337.tif 000003
【００５５】
この表からわかるように、ユーグレナとクロレラのいずれにおいても、ＭＧＤＧやＤＧＤＧはα−グルコシダーゼ活性の阻害率が低く、これに対してＳＱＤＧはＭＧＤＧやＤＧＤＧよりも阻害率が４倍程度高いことがわかった。このことから、糖脂質中でα−グルコシダーゼ活性阻害作用を有する主要な有効成分は、ＳＱＤＧであることがわかった。一方で、ＭＧＤＧやＤＧＤＧについても、ＳＱＤＧよりも弱いながらもα−グルコシダーゼ活性阻害作用があることがわかった。
【００５６】
なお、クロレラ由来のＳＱＤＧよりもユーグレナ由来のＳＱＤＧの方が、わずかにα−グルコシダーゼ活性の阻害率が高かった。この理由については明らかでないが、クロレラとユーグレナとでＳＱＤＧの分子構造に違いがあることが原因の一つとして考えられる。このような分子構造の違いが生じる理由として、クロレラとユーグレナとでＳＱＤＧの脂肪酸組成が異なることが考えられる。
【手続補正書】
【提出日】平成20年11月12日(2008.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ユーグレナの抽出物のうち糖脂質を有する分画を含有することを特徴とするα−グルコシターゼ活性阻害剤。
【請求項２】
前記糖脂質は、モノガラクトシルジアシルグリセロール、ジガラクトシルジアシルグリセロール、スルホキノボシルジアシルグリセロールから選択される少なくとも一の物質であることを特徴とする請求項１の記載のα−グルコシターゼ活性阻害剤。
【請求項３】
前記糖脂質は、スルホキノボシルジアシルグリセロールであることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載のα−グルコシターゼ活性阻害剤。
【請求項４】
前記抽出物が、親油性溶媒により抽出されたことを特徴とする請求項１に記載のα−グルコシターゼ活性阻害剤。
【請求項５】
前記ユーグレナが、光照射下の培養により得られることを特徴とする請求項１に記載のα−グルコシターゼ活性阻害剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のα−グルコシターゼ活性阻害剤を含むことを特徴とする食品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
すなわち、上記課題は、本発明のα−グルコシターゼ活性阻害剤によれば、ユーグレナの抽出物のうち糖脂質を有する分画を含有することにより解決される。
この場合、前記糖脂質は、モノガラクトシルジアシルグリセロール、ジガラクトシルジアシルグリセロール、スルホキノボシルジアシルグリセロールから選択される少なくとも一の物質であると好ましい。
また、前記糖脂質は、スルホキノボシルジアシルグリセロールであると更に好ましい。
更にまた、前記抽出物が、親油性溶媒により抽出されたものであると好ましい。
また、前記ユーグレナが、光照射下の培養により得られるものであると好ましい。