(57)【要約】【課題】  本願は、リファマイシン誘導体を、傷害部位特異的にデリバリーできる製剤を提供することを課題とする。【解決手段】  上記課題は、リファマイシン誘導体含有組成物をマイクロ粒子またはナノ粒子に封入することにより解決される。これにより、リファマイシン誘導体含有組成物が、正常組織と比較して、傷害組織に選択的にデリバリーされることとなる。その結果、傷害組織でのリファマイシン誘導体の効果の増強、及び正常組織における副作用の軽減あるいは抑制が期待される。【選択図】    図３
2009137922.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リファマイシン誘導体含有組成物がマイクロ粒子またはナノ粒子に封入された、正常組織に比べ傷害組織に当該組成物を選択的にデリバリーすることを特徴とする製剤。
【請求項２】
前記リファマイシン誘導体が、下記式（Ｉ）
【化１】
2009137922.tif 000014
（式（Ｉ）中、Ｘ1は酸素原子または硫黄原子を示し、Ｒ1はアセチル基または水素原子を示し、Ｒ2はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ3、Ｒ4は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、下記（II）式で表される基、または、下記式（IV）で表される基を示す）で表されることを特徴とする請求項１に記載の製剤。
【化２】
2009137922.tif 000015
【化３】
2009137922.tif 000016
上記式（II）中、Ｒ5、Ｒ6は同一または相異なり、炭素数１から３のアルキル基、または式（III）で表される基を示す。
【化４】
2009137922.tif 000017
（式（III）中、ｊは１から３の整数を示す）
上記式（IV）中、Ｒ7、Ｒ8は同一または相異なり、水素原子または炭素数１から３のアルキル基を示し、Ｘ2は酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、下記式（V）で表される基、または、下記式（VI）で表される基を示す。
【化５】
2009137922.tif 000018
【化６】
2009137922.tif 000019
上記式（V）中、Ｒ9、Ｒ10は同一または相異なり、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、またはＲ9とＲ10が結合して下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ2）k−
（式中、ｋは１から４の整数を示す）
上記式（VI）中、ｍは０または１を示し、Ｒ11は水素原子、炭素数１から７のアルキル基、または下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ2）nＸ3
（式中、ｎは１から４の整数を示し、Ｘ3は炭素数１から３のアルコキシ基、ビニル基、エチニル基、または下記式（VII）で表される基を示す。）
【化７】
2009137922.tif 000020
【請求項３】
前記リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ1が酸素原子であり、Ｒ1がアセチル基または水素原子を示し、Ｒ2はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ3、Ｒ4は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、または式（VIII）：
【化８】
2009137922.tif 000021
（式中、Ｒ12は水素原子、または炭素数１から７のアルキル基を示す）で表されるリファマイシン誘導体またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
前記リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ1が酸素原子であり、Ｒ1がアセチル基であり、Ｒ2がメチル基であり、Ｒ3が水酸基であり、Ｒ4が式（IX）：
【化９】
2009137922.tif 000022
で表されるリファラジル｛Ｒｉｆａｌａｚｉｌ、３'-Ｈｙｄｒｏｘｙ−５’−（４−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）ｂｅｎｚｏｘａｚｉｎｏｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＫＲＭ１６４８｝またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項３に記載の製剤。
【請求項５】
前記リファマイシン誘導体含有組成物を封入する粒子の平均粒径が５０から１００００ｎｍの範囲にあることを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載の製剤。
【請求項６】
前記リファマイシン誘導体含有組成物を封入する粒子が、平均粒径５０〜４００ｎｍに分級されたナノ粒子であることを特徴とする請求項５に記載の製剤。
【請求項７】
前記リファマイシン誘導体含有組成物を封入するナノ粒子が、平均粒径２５０ｎｍ以下であることを特徴とする請求項６に記載の製剤。
【請求項８】
前記マイクロ粒子またはナノ粒子が生分解性ポリマーで構成され、表面改質剤を当該粒子表面に有することを特徴とする請求項１から７のいずれかに記載の製剤。
【請求項９】
前記生分解性ポリマーがポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸とグリコール酸との共重合体、レシチン、コラーゲン、ゼラチン、キチン、キトサン、ヒアルロン酸、ポリアミノ酸、澱粉、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリエチレンサクシネート、ポリ−β−ヒドロキシアルカノエートからなる群から選択される少なくとも１つであることを特徴とする請求項８に記載の製剤。
【請求項１０】
前記生分解性粒子が乳酸とグリコール酸との共重合体からなることを特徴とする請求項９に記載の製剤。
【請求項１１】
前記表面改質剤が、カルボキシメチルセルロース、セルロース、酢酸セルロース、フタル酸セルロース、レシチン、キトサン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩又はカルシウム塩、非晶質セルロース、ポラキソマー、ポロキサミン、デキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリスチレン、ドデシル硫酸ナトリウム、及びケイ酸からなる群から少なくとも１つ以上選択されることを特徴とする請求項１から１０のいずれかに記載の製剤。
【請求項１２】
前記傷害組織が、疾患により細胞間の構築性が悪化している組織であることを特徴とする請求項１から１１のいずれかに記載の製剤。
【請求項１３】
前記疾患が炎症性疾患、感染症、悪性腫瘍から選択される少なくとも１つであることを特徴とする請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
前記炎症性疾患が血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症から選択されるものであることを特徴とする請求項１３に記載の製剤。
【請求項１５】
前記血管性疾患が動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、および経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞から選択されるいずれかであることを特徴とする請求項１４に記載の製剤。
【請求項１６】
前記感染症が肺炎、上気道および下気道感染症、皮膚および軟部組織感染症、骨および関節感染症、院内肺感染症、急性細菌性中耳炎、細菌性肺炎、複雑性感染症、非複雑性感染症、腎盂腎炎、腹腔内感染症、深部膿瘍、細菌性敗血症、中枢神経系の感染症、菌血症、創傷感染、腹膜炎、髄膜炎、火傷の後の感染症、尿生殖路感染症、消化管感染症、骨盤炎症性疾病、心内膜炎または血管内感染症から選択されることを特徴とする請求項１３に記載の製剤。
【請求項１７】
前記悪性腫瘍が、脊髄腫瘍、褐色細胞腫、進行悪性疾患、アミロイド症、神経芽細胞腫、髄膜腫、血管外皮細胞腫、多発性脳転移、多形性膠芽細胞腫、膠芽細胞腫、脳幹神経膠腫、予後不良の悪性脳腫瘍、悪性神経膠腫、未分化星細胞腫、未分化乏突起神経膠腫、神経内分泌腫瘍、直腸腺癌、デュークスＣ＆Ｄ結腸直腸癌、切除不能な結腸直腸癌、転移性肝細胞癌、カポジ肉腫、カロタイプ急性骨髄芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度濾胞性リンパ腫、局在性もしくは転移性黒色腫、腹膜癌、漿液性乳頭癌、婦人科肉腫、軟組織肉腫、セルロデルマ、皮膚血管炎、ランゲルハンス細胞組織球症、平滑筋肉腫、進行性骨化性線維形成異常症、ホルモン抵抗性前立腺癌、切除したハイリスク軟組織肉腫、切除不能な肝細胞癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、くすぶり型骨髄腫、無痛無症候性骨髄腫、輸卵管癌、アンドロゲン非依存性前立腺癌、アンドロゲン依存性ＩＶ期非転移性前立腺癌、ホルモン非感受性前立腺癌、化学療法非感受性前立腺癌、乳頭甲状腺癌、濾胞性甲状腺癌、甲状腺髄様癌、または平滑筋腫から選択されることを特徴とする請求項１３に記載の製剤。
【請求項１８】
血中への徐放が、経口投与、あるいは、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与からなる群より選択されるいずれかの方法により行われることを特徴とする請求項１から１７のいずれかに記載の製剤。
【請求項１９】
前記インプラントが、ステント、ステントグラフト、人工血管、カテーテル、バルーンカテーテル、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸であることを特徴とする請求項１８に記載の製剤。
【請求項２０】
リファマイシン誘導体含有組成物を球形晶析法によりマイクロ粒子またはナノ粒子に封入することを特徴とする、正常組織に比べ傷害組織に選択的にデリバリーする製剤の製造方法。
【請求項２１】
リファマイシン誘導体含有組成物を前記表面改質剤と混合粉砕することによりマイクロ粒子またはナノ粒子に封入することを特徴とする、正常組織に比べ傷害組織に選択的にデリバリーする製剤の製造方法。
【請求項２２】
リファマイシン誘導体含有組成物を生分解性ポリマーから構成される粒子に封入することを特徴とする請求項２０または２１に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リファマイシン誘導体を含有する製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
リファマイシン誘導体は、肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）等に対して極めて強い抗菌活性を有する抗生物質であるが、本発明者らは、最近、リファマイシン誘導体が血管性疾患等にも有効に作用することを見出している。
【０００３】
血管疾患、悪性腫瘍、感染症などの局所疾患を治療するためには、薬物の投与は、一般的には、全身投与により行われる場合が多い。しかし、全身投与により部位特異的に薬物をデリバリーすることは困難であり、例えば、経口投与、あるいは静脈内投与された薬物は、患者の体全体に分布し、代謝される。多くの場合、所望の部位に到達する薬物の量は投与量に対して大きく減少する。それ故に、全身投与の場合、大量の薬物を投与する必要があり、その結果、不快で望ましくない全身性の副作用が生じる。また、経済的にも非効率となる。したがって、副作用や効率性の点から、局所での使用が可能な薬物デリバリーシステムが必要とされる。
【０００４】
しかし、これまでに報告された部位特異的に薬物をデリバリーする方法の多くはは、組織移行性のあまりよくない薬剤に対して、組織移行性を改善するために行われたものであった（特許文献１〜３）。
【特許文献１】米国特許第４，６５２，４４１号
【特許文献２】特開平１０−５１１９５７号
【特許文献３】特開平８−２１７６９１号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許文献１〜３においては、薬物の組織移行性を改善するために薬物を粒子に封入している。しかし、リファマイシン誘導体のように組織移行性が比較的良好な薬物に対して同様の手法を採用した場合、薬物が正常組織にも移行し、望ましくない副作用を招くおそれがある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、組織移行性の高いリファマイシン誘導体であっても、リファマイシン誘導体をマイクロ粒子またはナノ粒子に封入することにより、正常組織に比べ傷害組織に選択的に移行して、血管疾患等を治療することが可能なことを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、リファマイシン誘導体含有組成物がマイクロ粒子またはナノ粒子に封入された、正常組織に比べ傷害組織に当該組成物を選択的にデリバリーすることを特徴とする製剤に関する。
【０００８】
前記リファマイシン誘導体は、下記式（Ｉ）：
【０００９】
【化１０】
2009137922.tif 000003
で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であるのが好ましい。このうち、リファマイシン誘導体は、リファラジル｛Ｒｉｆａｌａｚｉｌ、３'-Ｈｙｄｒｏｘｙ−５’−（４−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）ｂｅｎｚｏｘａｚｉｎｏｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＫＲＭ１６４８｝またはそれらの生理学的に許容される塩であるのが好ましい。なお、リファラジルの化学式は、後述の実施形態の項目で説明する。
【００１０】
また、前記リファマイシン誘導体含有組成物を封入する粒子の平均粒径は５０から１００００ｎｍの範囲にあるのが好ましく、粒子が平均粒径５０〜４００ｎｍに分級されたナノ粒子であるのがさらに好ましい。
【００１１】
また、前記粒子が生分解性ポリマーからなり、表面改質剤を当該粒子表面に持つことを特徴とする製剤であるのが好ましい。
【００１２】
また、前記生分解性ポリマーがポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸とグリコール酸との共重合体、レシチン、コラーゲン、ゼラチン、キチン、キトサン、ヒアルロン酸、ポリアミノ酸、澱粉、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリエチレンサクシネート、ポリ−β−ヒドロキシアルカノエートからなる群から少なくとも１つ以上選択されることが好ましく、このうち、乳酸‐グリコール酸共重合体であるのが好ましい。
【００１３】
また、前記表面改質剤が、カルボキシメチルセルロース、セルロース、酢酸セルロース、フタル酸セルロース、レシチン、キトサン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩又はカルシウム塩、非晶質セルロース、ポラキソマー、ポロキサミン、デキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリスチレン、ドデシル硫酸ナトリウム、及びケイ酸からなる群から少なくとも１つ以上選択されるのが好ましい。
【００１４】
また、前記傷害組織が疾患により細胞間の構築性が悪化している組織であることを特徴とする製剤であるのが好ましい。
【００１５】
また、前記疾患が炎症性疾患、感染症、悪性腫瘍から選択される少なくとも１つであることを特徴とする製剤であるのが好ましい。
【００１６】
また、前記炎症性疾患が血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症から選択されることを特徴とする製剤であるのが好ましい。
【００１７】
また、前記血管性疾患が動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、および経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞である製剤であるのが好ましい。
【００１８】
また、前記感染症が肺炎、上気道および下気道感染症、皮膚および軟部組織感染症、骨および関節感染症、院内肺感染症、急性細菌性中耳炎、細菌性肺炎、複雑性感染症、非複雑性感染症、腎盂腎炎、腹腔内感染症、深部膿瘍、細菌性敗血症、中枢神経系の感染症、菌血症、創傷感染、腹膜炎、髄膜炎、火傷の後の感染症、尿生殖路感染症、消化管感染症、骨盤炎症性疾病、心内膜炎または血管内感染症から選択されることを特徴とする製剤であるのが好ましい。
【００１９】
また、前記悪性腫瘍が、脊髄腫瘍、褐色細胞腫、進行悪性疾患、アミロイド症、神経芽細胞腫、髄膜腫、血管外皮細胞腫、多発性脳転移、多形性膠芽細胞腫、膠芽細胞腫、脳幹神経膠腫、予後不良の悪性脳腫瘍、悪性神経膠腫、未分化星細胞腫、未分化乏突起神経膠腫、神経内分泌腫瘍、直腸腺癌、デュークスＣ＆Ｄ結腸直腸癌、切除不能な結腸直腸癌、転移性肝細胞癌、カポジ肉腫、カロタイプ急性骨髄芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度濾胞性リンパ腫、局在性もしくは転移性黒色腫、腹膜癌、漿液性乳頭癌、婦人科肉腫、軟組織肉腫、セルロデルマ、皮膚血管炎、ランゲルハンス細胞組織球症、平滑筋肉腫、進行性骨化性線維形成異常症、ホルモン抵抗性前立腺癌、切除したハイリスク軟組織肉腫、切除不能な肝細胞癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、くすぶり型骨髄腫、無痛無症候性骨髄腫、輸卵管癌、アンドロゲン非依存性前立腺癌、アンドロゲン依存性ＩＶ期非転移性前立腺癌、ホルモン非感受性前立腺癌、化学療法非感受性前立腺癌、乳頭甲状腺癌、濾胞性甲状腺癌、甲状腺髄様癌、又は平滑筋腫から選択されることを特徴とする製剤であるのが好ましい。
【００２０】
また、血中への徐放が、経口投与、あるいは、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与からなる群より選択されることを特徴とする製剤であるのが好ましい。
【００２１】
また、前記インプラントが、ステント、ステントグラフト、人工血管、カテーテル、バルーンカテーテル、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸であることを特徴とする製剤であるのが好ましい。
【００２２】
本発明の別の態様として、前記リファマイシン誘導体含有組成物を球形晶析法によりマイクロ粒子またはナノ粒子に封入することを特徴とする、正常組織に比べ傷害組織に選択的にデリバリーする製剤の製造方法がある。
【００２３】
また、本発明の別の態様として、リファマイシン誘導体含有組成物を前記表面改質剤と混合粉砕することによりマイクロ粒子またはナノ粒子に封入することを特徴とする、正常組織に比べ傷害組織に選択的にデリバリーする製剤の製造方法がある。
【００２４】
上記方法においては、リファマイシン誘導体含有組成物を生分解性ポリマーから構成される粒子に封入するのが好ましい。
【００２５】
本発明のその他の態様およびこれらの効果は、以下に説明する実施形態および図面によって明らかにされる。
【発明の効果】
【００２６】
本発明にかかるリファマイシン誘導体をマイクロ粒子またはナノ粒子に封入した製剤は、正常組織に比べ傷害組織に蓄積しやすいことから、傷害組織でのリファマイシン誘導体の効果の増強、及び正常組織における副作用の軽減あるいは抑制が期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
以下に、本発明のリファマイシン誘導体含有組成物をマイクロ粒子またはナノ粒子に封入し、正常組織に比べ傷害組織に選択的にデリバリーする製剤について詳細に記載する。
【００２８】
１．リファマイシン誘導体
（１）本願発明で用いられるリファマイシン誘導体は、以下の式（Ｉ）：
【００２９】
【化１１】
2009137922.tif 000004
（式（Ｉ）中、Ｘ1は酸素原子または硫黄原子を示し、Ｒ1はアセチル基または水素原子を示し、Ｒ2はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ3、Ｒ4は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、下記（II）式で表される基、または、下記式（IV）で表される基を示す）で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であるのが好ましい。
【００３０】
【化１２】
2009137922.tif 000005
【００３１】
【化１３】
2009137922.tif 000006
上記式（II）中、Ｒ5、Ｒ6は同一または相異なり、炭素数１から３のアルキル基、または式（III）で表される基を示す。
【００３２】
【化１４】
2009137922.tif 000007
（式（III）中、ｊは１から３の整数を示す）
上記式（IV）中、Ｒ7、Ｒ8は同一または相異なり、水素原子または炭素数１から３のアルキル基を示し、Ｘ2は酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、下記式（V）で表される基、または、下記式（VI）で表される基を示す。
【００３３】
【化１５】
2009137922.tif 000008
【００３４】
【化１６】
2009137922.tif 000009
上記式（V）中、Ｒ9、Ｒ10は同一または相異なり、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、またはＲ9とＲ10が結合して下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ2）k−
（式中、ｋは１から４の整数を示す）
上記式（VI）中、ｍは０または１を示し、Ｒ11は水素原子、炭素数１から７のアルキル基、または下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ2）nＸ3
（式中、ｎは１から４の整数を示し、Ｘ3は炭素数１から３のアルコキシ基、ビニル基、エチニル基、または下記式（VII）で表される基を示す。）
【００３５】
【化１７】
2009137922.tif 000010
上記式（Ｉ）〜（VI）において、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9およびＲ10の炭素数１から３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基およびシクロプロピル基が挙げることができ、Ｒ11の炭素数１から６のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、ヘキシル基、４−メチルペンチル基、シクロヘキシル基、３−メチルシクロペンチル基、ヘプチル基、イソヘプチル基などの鎖状または環状アルキル基を挙げることができる。
【００３６】
Ｘ3の炭素数１から３のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基およびシクロプロポキシ基を挙げることができる。
（２）好ましくは、リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ1が酸素原子であり、Ｒ1がアセチル基または水素原子を示し、Ｒ2はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ3、Ｒ4は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、または式（VIII）：
【００３７】
【化１８】
2009137922.tif 000011
（式中、Ｒ12は水素原子、または炭素数１から７のアルキル基を示す）で表されるリファマイシン誘導体またはその生理学的に許容される塩である。
【００３８】
Ｒ12の炭素数１から７のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、１，２−ジメチルプロピル基、１−エチルプロピル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、ヘキシル基、４−メチルペンチル基、シクロヘキシキル基、３−メチルシクロペンチル基、ヘプチル基、イソヘプチル基などの鎖状または環状のアルキル基を挙げることができる。
（３）好ましくは、リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ1が酸素原子であり、Ｒ1がアセチル基であり、Ｒ2がメチル基であり、Ｒ3が水酸基であり、Ｒ4が式（IX）：
【００３９】
【化１９】
2009137922.tif 000012
で表されるリファラジル｛Ｒｉｆａｌａｚｉｌ、３'-Ｈｙｄｒｏｘｙ−５’−（４−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）ｂｅｎｚｏｘａｚｉｎｏｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＫＲＭ１６４８｝またはその生理学的に許容される塩である。ただし、本発明で用いられるリファマイシン誘導体は、これらの化合物に限定されるものではない。
【００４０】
また、リファマイシン誘導体含有組成物とは、リファマイシン誘導体を含有する組成物であればよく、例えば、抗凝固薬、抗血小板物質、抗痙薬、抗菌薬、抗腫瘍薬、抗微生物剤、抗炎症剤、抗物質代謝剤、免疫抑制剤等や、その他薬剤を含んでいてもよい。
【００４１】
２．リファマイシン誘導体含有組成物を、傷害組織に選択的にデリバリーする製剤の調製
薬剤を傷害組織に選択的にデリバリーするために、本発明で用いられるリファマイシン誘導体を含有する組成物は、マイクロ粒子またはナノ粒子に封入される。
【００４２】
粒子の大きさは、動的光散乱式法により測定した場合、平均粒子径として、その上限が、１０，０００ｎｍ以下であり、好ましくは２，０００ｎｍ以下であり、より好ましくは１，０００ｎｍ以下であり、さらに好ましくは８００ｎｍ以下であり、さらに好ましくは４００ｎｍ以下、特に好ましくは２５０ｎｍ以下である。また、その下限は、１ｎｍ以上であり、好ましくは１０ｎｍ以上であり、より好ましくは５０ｎｍ以上であるのが好ましい。このような粒子径とすることにより、薬剤が傷害組織に選択的にデリバリーされることとなる。
【００４３】
また、製剤中のリファマイシン誘導体の量は、通常は約１０〜２０％（ｗ／ｗ）が好ましい。
【００４４】
リファマイシン誘導体含有組成物を封入するマイクロ粒子またはナノ粒子は、生理活性を持たないポリマー等で構成され、表面改質剤を当該粒子表面に持つ構造をとる。
【００４５】
マイクロ粒子またはナノ粒子を構成するポリマーとしては、例えば、生分解性ポリマーが挙げられる。生分解性ポリマーとは、生体内で分解・消失する性質を有する高分子であり、生理活性を持たないポリマーであればどのようなものであってもよい。このようなポリマーとしては、例えば乳酸、グリコール酸、酪酸、ヒドロキシ酪酸またはシュウ酸、リンゴ酸、ヒドロキシ酢酸、グリコール酸などのホモポリマー（重合体）、並びにこれらのコポリマー（共重合体）があげられ、好ましくは、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸−グリコール酸共重合体であり、さらに好ましくは、乳酸・グリコール酸共重合体である。なお、光学活性体は、ｄ体、ｌ体またはそれらの混合物のいずれであってもよい。
【００４６】
乳酸−グリコール酸共重合体としては、乳酸とグリコール酸を約０．０１：１〜１：０．０１、好ましくは１：５〜１０：１、さらに好ましくは１：１〜６：１の比率で含む、分子量約２，０００〜２００，０００、好ましくは２，０００〜１００，０００、さらに好ましくは５，０００〜８５，０００のものがあげられる。
【００４７】
本発明に用いられる表面改質剤とは、粒子の表面を変化させる性質を有する生物活性剤となりうる化学的または生物学的化合物のことを示し、組織または細胞への粒子を結合させること、投与部位における保持を含む粒子の持続放出性を強化すること、粒子に封入したリファマイシン誘導体組成物を保護すること、抗血栓溶解効果を付与すること、懸濁性を改善すること、及び粒子の凝集を防ぐことのうち少なくとも１つ以上の目的を実施するために使用される。
【００４８】
表面改質剤としては、例えばカルボキシメチルセルロース、セルロース、酢酸セルロース、フタル酸セルロース、レシチン、キトサン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩又はカルシウム塩、非晶質セルロース、ポラキソマー、ポロキサミン、デキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリスチレン、ドデシル硫酸ナトリウム、及びケイ酸が挙げられ、好ましくは、ポリビニルアルコール、キトサン、ポリエチレングリコールである。
【００４９】
ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）としては重合度１００〜５，０００のものが挙げられ、好ましくは１００〜３，０００、さらに好ましくは２００〜２，０００のものが挙げられる。また、そのけん化度は、約７０〜１００のものが挙げられ、好ましくは７５〜９５、さらに好ましくは７５〜９０のものが挙げられる。このようなポリビニルアルコールは、ポリ酢酸ビニルの部分もしくは完全加水分解により製造することもできるが、適当な市販品も存在する。
【００５０】
リファマイシン誘導体含有組成物をマイクロ粒子またはナノ粒子に封入する方法としては、粉砕法（湿式粉砕法、及び乾式粉砕法）、球形晶析法が好ましく、より具体的には、前記表面改質剤との混合粉砕、水中エマルジョン分散法、エバポレーション溶媒留去法などが挙げられる。粒子径は、例えば、粉砕法においては遊星ボールミルの粉砕ボールの径を変えることにより、球形晶析法においては溶媒の攪拌速度を調節することによりコントロールすることが出来る。
【００５１】
上記のようにして得られた、リファマイシン誘導体含有組成物は、分級して用いるのが好ましい。分級する方法としては、例えば、遠心操作が挙げられる。遠心操作によれば、遠心速度を調節することにより、目的に応じて、所望の粒子径のナノ粒子を得ることができる。より具体的には、生成したナノ粒子を洗浄する際の遠心速度を数種類に分けることが挙げられ、好ましくは０〜３，０００Ｇ、３，０００〜２０，０００Ｇ、２０，０００〜６０，０００Ｇ、さらに好ましくは１，０００〜２，０００Ｇ、４，０００〜８，０００Ｇ、３０，０００〜５０，０００Ｇに分ける方法が挙げられる。
【００５２】
薬物を封入したナノ粒子は、治療部位への投与、封入した薬物の投与形態などに応じて種々の目的に使用され、１０〜１０００ｎｍの範囲、好ましくは５０〜６００ｎｍの範囲で自在に平均粒子径を調節することができる。なお、１，０００ｎｍ以上だと大きすぎて病変部位に入らないおそれがある。また、１０ｎｍ以下だと、小さすぎて病変部位以外に入るおそれがある。このうち、粒子の直径が５０〜４００ｎｍであることが、病変部位への取り込まれやすさの点から好適である。より好ましくは、２５０ｎｍ以下である。
【００５３】
３．傷害組織の例
本発明において使用される製剤は、炎症性疾患、感染症、悪性腫瘍といった病因により細胞間の構築性が悪化している傷害組織に対して使用されうる。
【００５４】
前記炎症性疾患としては血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症などがある。このうち、血管性疾患としては、動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、および経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞などがある。
【００５５】
また前記感染症としては、肺炎、上気道および下気道感染症、皮膚および軟部組織感染症、骨および関節感染症、院内肺感染症、急性細菌性中耳炎、細菌性肺炎、複雑性感染症、非複雑性感染症、腎盂腎炎、腹腔内感染症、深部膿瘍、細菌性敗血症、中枢神経系の感染症、菌血症、創傷感染、腹膜炎、髄膜炎、火傷の後の感染症、尿生殖路感染症、消化管感染症、骨盤炎症性疾病、心内膜炎または血管内感染症などがある。
【００５６】
また前記悪性腫瘍としては、脊髄腫瘍、褐色細胞腫、進行悪性疾患、アミロイド症、神経芽細胞腫、髄膜腫、血管外皮細胞腫、多発性脳転移、多形性膠芽細胞腫、膠芽細胞腫、脳幹神経膠腫、予後不良の悪性脳腫瘍、悪性神経膠腫、未分化星細胞腫、未分化乏突起神経膠腫、神経内分泌腫瘍、直腸腺癌、デュークスＣ＆Ｄ結腸直腸癌、切除不能な結腸直腸癌、転移性肝細胞癌、カポジ肉腫、カロタイプ急性骨髄芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度濾胞性リンパ腫、局在性もしくは転移性黒色腫、腹膜癌、漿液性乳頭癌、婦人科肉腫、軟組織肉腫、セルロデルマ、皮膚血管炎、ランゲルハンス細胞組織球症、平滑筋肉腫、進行性骨化性線維形成異常症、ホルモン抵抗性前立腺癌、切除したハイリスク軟組織肉腫、切除不能な肝細胞癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、くすぶり型骨髄腫、無痛無症候性骨髄腫、輸卵管癌、アンドロゲン非依存性前立腺癌、アンドロゲン依存性ＩＶ期非転移性前立腺癌、ホルモン非感受性前立腺癌、化学療法非感受性前立腺癌、乳頭甲状腺癌、濾胞性甲状腺癌、甲状腺髄様癌、または平滑筋腫などがある。
【００５７】
４．傷害組織への徐放
リファマイシン誘導体を含有する傷害組織に選択的にデリバリーされる製剤を血中に徐放する場合の経路は特に限定されず、経口投与、あるいは、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与のいずれでもよい。
【００５８】
上記インプラントは、ステント、ステントグラフト、人工血管、カテーテル、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸のいずれでもよい。
【実施例】
【００５９】
以下の実施例では、ＰＬＧＡを用いたリファマイシン誘導体を含むナノ粒子が傷害組織に蓄積しやすいことを説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００６０】
（実施例１）リファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子の作製
リファマイシン誘導体の一種であるリファラジル（１１２．５ｍｇ）、ＰＬＧＡ（和光純薬工業(株)製、７５０ｍｇ）をアセトン：エタノール（２：１）混合液（２２．５ｍｌ）に溶解し、撹拌中（４００ｒｐｍ）の４０度の０．２％ＰＶＡ水溶液（３７５ml）に１ｍｌ/ｍｉｎの速度で滴下した。そのまま撹拌を２時間続けた後、有機溶媒を留去した。留去後、得られた液を遠心分離し（４０，０００Ｇ、２０分）、上澄み液を廃棄して残渣（ナノ粒子）を得た。さらに、残渣を蒸留水に分散させ、再び遠心分離した。得られた残渣に少量の水を加えて再分散させ、２４時間真空乾燥してナノ粒子を得た。なお、ＰＬＧＡはＰＬＧＡ７５２０、ＰＬＧＡ７５０５、ＰＬＧＡ５００５（いずれも和光純薬工業(株)製）を用いた。
【００６１】
得られたナノ粒子を精製水に再懸濁させ、リファラジルの含有率と平均粒径を測定した。含有率は、粒子懸濁液にアセトニトリル、メタノールを加え、リファラジルの濃度を測定することにより導き出した。また、平均粒径は動的光散乱式粒径分布測定装置（ＬＢ−５５０、（株）堀場製作所製）により測定した。その結果、3種類とも含有率は１０〜２０％、平均粒径は２００〜４００ｎｍの間にあった。
【００６２】
（実施例２）ＰＬＧＡナノ粒子からのリファラジルの溶出性
前記実施例１にて作製した３種類の粒子に５％ウシ胎児血清含有の培地を加え、粒子濃度が５００μｇ/ｍｌとなるように再分散させ、一定時間（１、３、７、１４、２１、２８日）３７℃にて放置した。一定時間放置後、遠心分離し、上清中のリファラジル濃度を測定することにより粒子からの溶出率を求めた。
【００６３】
図１は、経過時間とリファラジル溶出率の関係を示すグラフである。
図１に示されるように、時間の経過と共にリファラジル含有粒子からリファラジルが溶出した。その溶出速度は分解の速いＰＬＧＡほど速かった。
【００６４】
（実施例３）動脈へのリファラジルの集積
血管はウサギ腹部大動脈を用いた。傷害動脈は、市販の動脈閉塞除去用バルーンカテーテルを用いてウサギの腹部大動脈を擦過し、１〜２週間後に腹部大動脈を摘出することにより得た。
【００６５】
摘出した腹部大動脈を約１〜１．５ｃｍの幅でカットし、長軸方向に沿って切開した。次に、下室をＤＭＥＭ（１０％牛胎児血清、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、０．１ｍｇ／ｍＬストレプトマイシンを含む）で満たしたブラインドウェル（ＢＷ２００Ｓ、家田貿易株式会社）に内腔側が上方になるよう血管を取り付けた。次に、上室に２００μＬのリファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液（ＰＬＧＡ７５２０を用いて前記実施例１に記載した方法で粒子を作製し、培地を用いてリファラジル濃度が1μＭとなるように再分散させ調整した）を加え、ＣＯ2インキュベーターにて所定時間（１０、１２０分）インキュベートした。培養終了後、上室の培地を除去し、ＰＢＳ（−）にて上室を洗浄した。ブラインドウェルから血管を取り出し、余分な水分を除去した後、透過面のみを切り取り、組織中のリファラジル含量を測定した。この結果を図２および図３に示す。図２及び３は、インキュベート時間と動脈中のリファラジル含有量との関係を示すグラフである。図２は正常動脈（バルーンカテーテルで擦過していない動脈）を、図３は傷害動脈を用いた場合である。
【００６６】
リファラジルの抽出法はＦｏｌｃｈの方法を参考にした。すなわち、６ｍＬのＣ−Ｍ液（クロロホルム：メタノール＝２：１）を加え、１昼夜放置した。遠心分離（３,０００ｒｐｍ（１,２００Ｇ）、１０分、４℃）し、別の５０ｍＬ遠沈管に溶媒を回収した。残渣に２ｍｌのＣ−Ｍ液を加えて攪拌し、溶液を回収した。回収した溶媒に２ｍＬの０．０４％塩化マグネシウム溶液を加え、攪拌した。遠心分離（３,０００ｒｐｍ（１,２００Ｇ）、１０分、４℃）し、上清を除去した。除去した上清と等量のＣ−Ｍ−Ｗ液（クロロホルム：メタノール：蒸留水＝３：４８：４７）を加え、攪拌した。遠心分離（３,０００ｒｐｍ（１,２００Ｇ）、１０分、４℃）し、上清を除去した。窒素にて溶媒を留去し、抽出物を乾固した。３５０μＬのメタノールを加えて抽出物を溶解し、リファラジルの濃度を測定した。
【００６７】
（比較例１）
比較例１では、リファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液に替えてリファラジル溶液（１μＭ、培地を用いて調製）を用いたほかは前記実施例１と同様の方法で実験した。実験結果を図２および図３に示す。
【００６８】
図２に示されるように、１２０分間インキュベート後の動脈中のリファラジル含量は、溶液では大きく増加するのに対し、粒子懸濁液では殆ど増加しなかった。このことから、粒子懸濁液の状態ではリファラジルは正常動脈に蓄積しにくいことが示された。
また、図３に示されるように、１２０分間インキュベート後の動脈中のリファラジル含量は、溶液と同様に粒子懸濁液でも大きく増加した。
【００６９】
（実施例４）遠心操作により分級したリファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子の作製
リファマイシン誘導体の一種であるリファラジル（１１２．５ｍｇ）、ＰＬＧＡ７５２０（和光、２２７．３ｍｇ）をアセトン：エタノール（２：１）混合液（２２．５ｍｌ）に溶解し、撹拌中（４００ｒｐｍ）の４０度の０．２％ＰＶＡ水溶液（３７５ｍｌ）に１ｍｌ/ｍｉｎの速度で滴下した。そのまま撹拌を２時間続け、有機溶媒を留去した。留去後、得られた液を遠心分離し（１，５００Ｇ、２０分）、上澄み液を回収し、残渣（ナノ粒子）を得た。回収した上澄み液を遠心分離（５，０００Ｇ、２０ｍｉｎ）し、上澄み液を回収し、残渣を得た。さらに、回収した上澄み液を遠心分離し（４０，０００Ｇ、２０ｍｉｎ）残渣を得た。得られた残渣を再度遠心分離した。得られた残渣に少量の水を加えて再分散させ、２４時間真空乾燥してナノ粒子を得た。
【００７０】
得られたナノ粒子を１０％ウシ胎児血清含有の培地に再懸濁させ、粒度分布計（ＨＯＲＩＢＡ  ＬＢ−５５０）を用いて算術平均粒径を測定した。その結果を表１に示す。
【００７１】
【表１】
2009137922.tif 000013
【００７２】
（実施例５）動脈へのリファラジルの集積
傷害血管は、ウサギの動脈をバルーンで擦過することにより得た。すなわち、市販の動脈閉塞除去用バルーンカテーテルを用いてウサギの腹部大動脈を傷害し、５日後に腹部大動脈を摘出した。
【００７３】
摘出した腹部大動脈を約１〜１．５ｃｍの幅でカットし、長軸方向に沿って切開した。次に、下室を培地で満たしたブラインドウェル（ＢＷ２００Ｓ、家田貿易株式会社）に内腔側が上方になるよう血管を取り付けた。次に、上室に２００μＬの上記実施例４で作製したリファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液（1μＭ、培地を用いて懸濁）を加え、ＣＯ2インキュベーターにて所定時間（１２０分）インキュベートした。培養終了後、上室の培地を除去し、ＰＢＳ（−）にて上室を洗浄した。ブラインドウェルから血管を取り出し、余分な水分を除去した後、透過面のみを切り取り、組織中のリファラジル含量を測定した。なお、培地はＤＭＥＭ（１０％牛胎児血清、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、０．１ｍｇ／ｍＬストレプトマイシンを含む）を用いた。この結果を図４に示す。図４は、使用した粒子の粒径と動脈中のリファラジル含有量との関係を示すグラフである。
なお、リファラジルの抽出は実施例３と同様の方法で行った。
【００７４】
（比較例２）
比較例２では、リファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液に替えてリファラジル溶液（１μＭ、培地を用いて調製）を用いたほかは前記実施例５と同様の方法で実験した。実験結果を図４に示す。
【００７５】
図４に示されるように、１２０分間インキュベート後の動脈中のリファラジル含量は、４０，０００Ｇで分級した粒子を使用した場合では他の遠心速度で分級した場合、及びリファラジル溶液を使用した場合よりも多いことが示された。このことから、リファラジル含有粒子懸濁液は、傷害動脈に蓄積し易く、さらに粒径によっても異なることが示された。
【００７６】
以上より、リファラジル含有粒子懸濁液は、正常動脈には蓄積し難く、傷害動脈に蓄積し易いことが示された。したがって、リファラジル含有粒子は、正常組織に比べ病変組織に選択的にデリバリーする製剤として有用であり、さらにその平均粒径を調整することにより（特に粒径が１９０ｎｍ程度の場合に）、さらに効果が上がることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】図１は経過時間とＰＬＧＡナノ粒子からのリファラジルの溶出率の関係を示したグラフである。
【図２】図２はインキュベート時間と正常動脈中のリファラジル含有量の関係を示したグラフである。
【図３】図３はインキュベート時間と傷害動脈中のリファラジル含有量の関係を示したグラフである。
【図４】図４はナノ粒子の粒子径と傷害動脈中のリファラジル含有量の関係を示したグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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