(57)【要約】【課題】本発明は、新規なヒト分泌タンパク質およびそのようなタンパク質をコードする遺伝子のコード領域を含む単離された核酸に関する。【解決手段】上記課題は、本明細書に記載される、新規なヒト分泌タンパク質およびそのようなタンパク質をコードする遺伝子のコード領域を含む単離された核酸、ヒト分泌タンパク質を産生するためのベクター、宿主細胞、抗体、および組換え方法により解決される。本発明はさらに、これらの新規なヒト分泌タンパク質に関連する障害を診断および処置するために有用な、診断方法および治療方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
請求項１に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチドおよびこれらのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、このようなポリヌクレオチドおよびポリペプチドの使用、ならびにそれらの産生に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
膜によって取り囲まれる単一コンパートメントとして存在する細菌とは異なり、ヒト細胞および他の真核生物は、膜によって多くの機能的に異なるコンパートメントに細分される。それぞれの膜で区切られたコンパートメント、すなわちオルガネラは、そのオルガネラの機能に不可欠な種々のタンパク質を含む。細胞は、特定の細胞オルガネラにタンパク質を標的化するために、タンパク質内に位置するアミノ酸モチーフである「ソーティングシグナル」を使用する。
【０００３】
シグナル配列、シグナルペプチド、またはリーダー配列と呼ばれるソーティングシグナルの１つの型は、小胞体（ＥＲ）と呼ばれるオルガネラに１つのクラスのタンパク質を指向させる。ＥＲは、膜で区切られたタンパク質をすべての他の型のタンパク質から分離する。一旦ＥＲに局在すると、両方の群のタンパク質とも、ゴルジ装置と呼ばれる別のオルガネラにさらに指向され得る。ここで、ゴルジは、タンパク質を、分泌小胞を含む小胞、細胞膜、リソソーム、および他のオルガネラに分布させる。
【０００４】
シグナル配列によってＥＲに標的化されたタンパク質は、分泌タンパク質として細胞外空間に放出され得る。例えば、分泌タンパク質を含む小胞は、細胞膜と融合し、そして細胞外空間にその内容物を放出し得る（エキソサイトーシスと呼ばれるプロセスである）。エキソサイトーシスは、構成的に、またはトリガーシグナルの受け取りの後に生じ得る。後者の場合には、タンパク質は、エキソサイトーシスがトリガーされるまで、分泌小胞（または分泌顆粒）に貯蔵される。同様に、細胞膜上に存在するタンパク質はまた、タンパク質を膜に保持する「リンカー」のタンパク質分解切断によって、細胞外空間に分泌され得る。
【０００５】
近年大きく進歩したにもかかわらず、ヒトの分泌タンパク質をコードする遺伝子は少数しか同定されていない。これらの分泌タンパク質としては、商業的価値のあるヒトインスリン、インターフェロン、第ＶＩＩＩ因子、ヒト成長ホルモン、組織プラスミノーゲン活性化因子、およびエリスロポエチンが挙げられる。したがって、ヒト生理における分泌タンパク質の広範な役割を考慮すると、新規のヒトの分泌タンパク質およびそれらをコードする遺伝子を同定および特徴づけすることの必要がある。この知見は、分泌タンパク質またはそれらをコードする遺伝子を使用することによって、医学的障害を検出、処置、および予防することを可能にする。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、新規ポリヌクレオチドおよびコードされたポリペプチドに関する。さらに、本発明は、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを産生するためのベクター、宿主細胞、抗体、および組換え方法に関する。ポリペプチドに関連する障害を検出する診断方法、およびこのような障害を処置するための治療方法も提供される。本発明は、さらに、ポリペプチドの結合パートナーを同定するためのスクリーニング方法に関する。したがって、本発明は以下をも提供する。
（１）単離された核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号Ｘのポリヌクレオチドフラグメント、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列のポリヌクレオチドフラグメント；
（ｂ）配列番号Ｙのポリペプチドフラグメント、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチドフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号Ｙのポリペプチドドメイン、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチドドメインをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号Ｙのポリペプチドエピトープ、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチドエピトープをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｅ）生物学的活性を有する、配列番号Ｙのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列；
（ｆ）配列番号Ｘの改変体であるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号Ｘの対立遺伝子改変体であるポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号Ｙの種相同体をコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）（ａ）〜（ｈ）において特定されるポリヌクレオチドのいずれか１つにストリンジェント条件下でハイブリダイズし得るポリヌクレオチドであって、ここで、該ポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基のみのヌクレオチド配列を有する核酸分子に、ストリンジェント条件下でハイブリダイズしない、ポリヌクレオチド、
からなる群から選択される配列に少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。
（２）前記ポリヌクレオチドフラグメントが、分泌タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、項目１に記載の単離された核酸分子。
（３）前記ポリヌクレオチドフラグメントが、配列番号Ｙとして同定される配列、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、項目１に記載の単離された核酸分子。
（４）前記ポリヌクレオチドフラグメントが、配列番号Ｘの全体のヌクレオチド配列、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列を含む、項目１に記載の単離された核酸分子。
（５）前記ヌクレオチド配列が、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかからの連続するヌクレオチド欠失を含む、項目２に記載の単離された核酸分子。
（６）前記ヌクレオチド配列が、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかからの連続するヌクレオチド欠失を含む、項目３に記載の単離された核酸分子。
（７）項目１に記載の単離された核酸分子を含む、組換えベクター。
（８）項目１に記載の単離された核酸分子を含む、組換え宿主細胞を作製する方法。
（９）項目８に記載の方法によって産生される、組換え宿主細胞。
（１０）ベクター配列を含む、項目９に記載の組換え宿主細胞。
（１１）単離されたポリペプチドであって、以下：
（ａ）配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の、ポリペプチドフラグメント；
（ｂ）生物学的活性を有する、配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の、ポリペプチドフラグメント；
（ｃ）配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の、ポリペプチドドメイン；
（ｄ）配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の、ポリペプチドエピトープ；
（ｅ）配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の、分泌形態；
（ｆ）配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の、全長タンパク質；
（ｇ）配列番号Ｙの改変体；
（ｈ）配列番号Ｙの対立遺伝子改変体；または
（ｉ）配列番号Ｙの種相同体、
からなる群から選択される配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
（１２）前記分泌形態または前記全長タンパク質が、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかからの連続するアミノ酸欠失を含む、項目１１に記載の単離されたポリペプチド。
（１３）項目１１に記載の単離されたポリペプチドに特異的に結合する、単離された抗体。
（１４）項目１１の単離されたポリペプチドを発現する、組換え宿主細胞。
（１５）単離されたポリペプチドを作製する方法であって、
（ａ）該ポリペプチドが発現されるような条件下で、項目１４に記載の組換え宿主細胞を培養する工程；および
（ｂ）該ポリペプチドを回収する工程、
を包含する、方法。
（１６）項目１５に記載の方法によって産生される、ポリペプチド。
（１７）医学的状態を予防、処置、または緩和する方法であって、項目１１に記載のポリペプチドまたは項目１に記載のポリヌクレオチドの治療有効量を、哺乳動物被験体に投与する工程を包含する、方法。
（１８）被験体において病理学的状態、または病理学的状態に対する感受性を診断する方法であって、
（ａ）項目１に記載のポリヌクレオチドにおいて変異の存在または非存在を決定する工程；および
（ｂ）該変異の存在または非存在に基づいて、病理学的状態、または病理学的状態に対する感受性を診断する工程、
を包含する、方法。
（１９）被験体において病理学的状態、または病理学的状態に対する感受性を診断する方法であって、
（ａ）生物学的サンプルにおいて項目１１に記載のポリペプチドの発現の存在または量を決定する工程、および
（ｂ）該ポリペプチドの発現の存在または量に基づいて、病理学的状態、または病理学的状態に対する感受性を診断する工程、
を包含する、方法。
（２０）項目１１に記載のポリペプチドに対する結合パートナーを同定する方法であって、
（ａ）項目１１に記載のポリペプチドを結合パートナーと接触させる工程；および
（ｂ）該結合パートナーが該ポリペプチドの活性をもたらすかどうかを決定する工程、
を包含する、方法。
（２１）配列番号ＹのｃＤＮＡ配列に対応する、遺伝子。
（２２）生物学的アッセイにおいて活性を同定する方法であって、ここで該方法が、以下：
（ａ）細胞において配列番号Ｘを発現させる工程；
（ｂ）その上清を単離する工程；
（ｃ）生物学的アッセイにおいて活性を検出する工程；および
（ｄ）該活性を有する該上清においてタンパク質を同定する工程、
を包含する、方法。
（２３）項目２２に記載の方法によって産生される、産物。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
（詳細な説明）
（定義）
以下の定義は、本明細書全体を通して使用される特定の用語の理解を容易にするために提供される。
【０００８】
本発明において、「単離された」とは、その元の環境（例えば、それが天然に存在する場合は天然の環境）から取り出された物質をいい、したがって、天然の状態から「人間の手によって」変更されている。例えば、単離されたポリヌクレオチドは、ベクターまたは物質の組成物の一部であり得るか、あるいは細胞内に含まれ得、そしてなお「単離され」ている。なぜなら、ベクター、物質の組成物、または特定の細胞は、ポリヌクレオチドの元の環境ではないからである。
【０００９】
本発明において、「分泌」タンパク質とは、ＥＲ、分泌小胞、または細胞外空間にシグナル配列の結果として指向され得るタンパク質、ならびにシグナル配列を必ずしも含まないが細胞外空間に放出されるタンパク質をいう。分泌タンパク質が、細胞外空間に放出される場合、分泌タンパク質は、「成熟」タンパク質を産生するために細胞外プロセシングを受け得る。細胞外空間への放出は、エキソサイトーシスおよびタンパク質分解切断を含む多くの機構によって生じ得る。
【００１０】
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」とは、配列番号Ｘに含まれる核酸配列を有する分子、またはＡＴＣＣに寄託されたクローン内に含まれるｃＤＮＡをいう。例えば、ポリヌクレオチドは、５’および３’非翻訳配列、シグナル配列を含むかもしくは含まないコード領域、分泌タンパク質コード領域を含む全長ｃＤＮＡ配列のヌクレオチド配列、ならびにこの核酸配列のフラグメント、エピトープ、ドメイン、および改変体を含み得る。さらに、本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」とは、広く定義される場合、ポリヌクレオチドから生じた翻訳されたアミノ酸配列を有する分子をいう。
【００１１】
本発明では、配列番号Ｘとして同定された全長配列は、しばしば、複数のクローンに含まれる配列を重複させることによって生成された（コンティグ分析）。配列番号Ｘについての配列のすべてまたはほとんどを含む代表的クローンを、アメリカンタイプカルチャーコレクション（「ＡＴＣＣ」）に寄託した。表１に示すように、各クローンは、ｃＤＮＡクローンＩＤ  （Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ）およびＡＴＣＣ寄託番号によって同定される。ＡＴＣＣは、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，  Ｍａｎａｓｓａｓ，  Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９，  ＵＳＡに位置する。ＡＴＣＣ寄託は、特許手続の目的のための微生物の寄託の国際承認に係るブダペスト条約によって行われた。
【００１２】
本発明の「ポリヌクレオチド」はまた、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号Ｘに含まれる配列、その相補体、またはＡＴＣＣに寄託されたクローン内に含まれるｃＤＮＡにハイブリダイズし得るポリヌクレオチドを含む。「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ  ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫酸デキストラン、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での４２℃での一晩インキュベーション、次いで０．１×ＳＳＣ中で約６５℃にてフィルターを洗浄することをいう。
【００１３】
より低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件で本発明のポリヌクレオチドにハイブリダイズする核酸分子もまた意図される。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーおよびシグナル検出の変化は、主として、ホルムアミド濃度（より低い百分率のホルムアミドが、低下したストリンジェンシーを生じる）；塩濃度、または温度の操作によって行われる。例えば、より低いストリンジェンシー条件は、６×ＳＳＰＥ（２０×ＳＳＰＥ＝３Ｍ  ＮａＣｌ；０．２Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４；０．０２Ｍ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）、０．５％  ＳＤＳ、３０％ホルムアミド、１００μｇ／ｍｌサケ精子ブロッキングＤＮＡを含む溶液中での３７℃での一晩インキュベーション；次いで１×ＳＳＰＥ、０．１％  ＳＤＳを用いた５０℃での洗浄を含む。さらに、さらにより低いストリンジェンシーを達成するために、ストリンジェントなハイブリダイゼーション後に行われる洗浄は、より高い塩濃度（例えば、５×ＳＳＣ）で行われ得る。
【００１４】
上記の条件における変化が、ハイブリダイゼーション実験においてバックグラウンドを抑制するために使用される代替的なブロッキング試薬の包含および／または置換によって達成され得ることに留意すること。代表的なブロッキング試薬としては、デンハルト試薬、ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性サケ精子ＤＮＡ、および市販の製品処方物が挙げられる。特異的ブロッキング試薬の包含は、適合性の問題に起因して、上記のハイブリダイゼーション条件の改変を必要とし得る。
【００１５】
もちろん、ポリＡ＋配列（例えば、配列表に示されるｃＤＮＡの任意の３’末端ポリＡ＋領域（ｔｒａｃｔ））に、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的ストレッチにのみハイブリダイズするポリヌクレオチドは、このようなポリヌクレオチドが、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体（例えば、事実上任意の二本鎖ｃＤＮＡクローン）を含む任意の核酸分子にハイブリダイズするので、「ポリヌクレオチド」の定義に包含されない。
【００１６】
本発明のポリヌクレオチドは、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドから構成され得、これは、非改変ＲＮＡもしくは非改変ＤＮＡまたは改変ＲＮＡもしくは改変ＤＮＡであり得る。例えば、ポリヌクレオチドは、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖、またはより代表的には二本鎖もしくは一本鎖および二本鎖領域の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子から構成され得る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチドはまた、安定性のために、または他の理由のために改変された１つ以上の改変された塩基またはＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格を含み得る。「改変された」塩基としては、例えば、トリチル化された塩基およびイノシンのような普通でない塩基が挙げられる。種々の改変が、ＤＮＡおよびＲＮＡに対して行われ得；したがって、「ポリヌクレオチド」は、化学的、酵素的、または代謝的に改変された形態を含む。
【００１７】
本発明のポリペプチドは、ペプチド結合または改変されたペプチド結合、すなわち、ペプチドアイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）によって互いに連結したアミノ酸から構成され得、そして遺伝子がコードする２０個のアミノ酸以外のアミノ酸を含み得る。ポリペプチドは、翻訳後プロセシングのような天然のプロセスによって、または当該技術分野で周知の化学的改変技術によってのいずれかで、改変され得る。このような改変は、基本テキスト、およびより詳細な研究論文、ならびに多くの研究文献に十分記載される。改変は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、およびアミノ末端またはカルボキシル末端を含むポリペプチドのどこでも生じ得る。同じ型の改変が、所定のポリペプチド中のいくつかの部位で同じまたは種々の程度で存在し得ることが理解される。また、所定のポリペプチドは多くの型の改変を含み得る。ポリペプチドは、例えば、ユビキチン化の結果として分枝状であり得、そしてポリペプチドは、分枝を含むかまたは含まない、環状であり得る。環状、分枝状および分枝した環状ポリペプチドは、天然の翻訳後プロセスから生じ得るか、または合成方法によって作製され得る。改変としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介付加、およびユビキチン化が挙げられる。（例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ  ＡＮＤ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，  第２版，  Ｔ．Ｅ．  Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，  Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９３）；ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ  ＣＯＶＡＬＥＮＴ  ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ，  Ｂ．Ｃ．  Ｊｏｈｎｓｏｎ編，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １−１２頁  （１９８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら，  Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １８２：６２６−６４６  （１９９０）；Ｒａｔｔａｎら，  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ６６３：４８−６２  （１９９２）を参照のこと）。
【００１８】
「配列番号Ｘ」とは、ポリヌクレオチド配列をいうが、「配列番号Ｙ」とは、ポリペプチド配列をいい、両方の配列とも、表１に特定された整数によって同定される。
【００１９】
「生物学的活性を有するポリペプチド」とは、特定の生物学的アッセイで測定した場合、用量依存性を伴うかまたは伴わずに、本発明のポリペプチド（成熟形態を含む）の活性と類似であるが、必ずしも同一ではない活性を示すポリペプチドをいう。用量依存性が存在する場合、ポリペプチドの用量依存性と同一である必要はないが、むしろ本発明のポリペプチドと比較した場合に、所定の活性における用量依存性に実質的に類似する（すなわち、候補ポリペプチドは、本発明のポリペプチドと比較して、より大きな活性を示すか、または約１／２５以上、そして好ましくは約１／１０以上の活性、そして最も好ましくは約１／３以上の活性を示す）。
【００２０】
（本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド）
（遺伝子番号１によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主に好中球において発現する。
【００２１】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害、特に感染および炎症性障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織および造血組織、またはガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。
【００２２】
好中球における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、病原体の感染、免疫障害および組織または器官の移植における対宿主性移殖片応答の制御の診断および処置について有用であることを示す。さらに、この遺伝子産物は治療用標的のスクリーニングとして使用され得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号１１に関し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号１１の１〜１０９６の任意の整数であり、ｂは１５〜１１１０の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１１に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００２３】
（遺伝子番号２によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主に隆起性皮膚線維肉腫において発現し、そしてより低い程度では滑液線維芽細胞、骨巨細胞腫、樹状突起細胞、肺、単球およびヒト胚において発現される。
【００２４】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに外皮障害、増殖障害または筋肉障害、特に隆起性皮膚線維肉腫を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に結合組織の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、外皮組織、発達中の組織、筋組織、骨格組織、免疫組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、羊水、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。
【００２５】
組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、隆起性皮膚線維肉腫の診断および処置について有用であることを示す。同様に、外皮組織における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、種々の皮膚疾患（先天性障害（すなわち、母斑（ｎｅｖｉ）、色素性母斑（ｍｏｌｅ）、雀斑、蒙古斑、血管腫、ブドウ酒様症候群）、外皮腫瘍（すなわち、角化症、ボーエン病、基底細胞ガン、扁平上皮ガン、悪性黒色腫、パジェット病、菌状息肉腫およびカポージ肉腫を含む）、皮膚の傷害および炎症（すなわち、創傷、発疹、紅色汗疹障害、乾癬、皮膚炎）、粥状硬化症、蕁麻疹（ｕｔｉｃａｒｉａ）、湿疹、羞明、自己免疫障害（すなわち、狼瘡エリテマトーデス、白斑、皮膚筋炎、限局性強皮症、強皮症、類天疱瘡および天疱瘡）、ケロイド、線条、紅斑、点状出血、紫斑および眼瞼黄板症（ｘａｎｔｈｅｌａｓｍａ）の処置、診断および／または予防について有用であることを示す。さらに、このような障害は、皮膚のウイルス感染および細菌感染（すなわち、単純ヘルペス、疣贅、水痘、伝染性軟属腫、帯状疱疹、腫脹、蜂巣炎、丹毒、膿痂疹、輪癬、汗疱状白癬（ａｌｔｈｌｅｔｅｓ  ｆｏｏｔ）、および白癬）に対する感受性を増加させる素因であり得る。さらに、このタンパク質はまた、結合組織を罹患する障害（例えば、関節炎、外傷、腱炎、軟骨軟化症（ｃｈｒｏｎｄｏｍａｌａｃｉａ）、および炎症）の検出および処置、例えば、種々の自己免疫障害（例えば、慢性関節リウマチ、狼瘡、硬皮症および皮膚筋炎、ならびに小人症、脊椎変形および特定の関節異常、ならびに軟骨形成不全、すなわち先天性脊椎骨端形成異常、家族性変形性関節症、ＩＩ型骨形成不全（Ａｔｅｌｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｔｙｐｅ  ＩＩ）、シュミット型骨幹端軟骨形成不全）の診断または処置における有用性を示す。タンパク質、ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号１２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号１２の１〜９２２の任意の整数であり、ｂは１５〜９３６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１２に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００２６】
（遺伝子番号３によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子の翻訳産物は、ステロール異性化および神経保護因子の結合に重要であると考えられるフェニルアキルアミン結合タンパク質（エモパミル結合タンパク質（ＥＢＰ）としても公知である）と配列相同性を共有する。ＥＢＰは抗虚血剤についての主要なレセプターであることが公知であり、そして従ってこのファミリーの治療剤についての通常の標的として機能する（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号、ｇｉ｜７８０２６３を参照のこと）。相同性の比較により、この遺伝子はまた、同じまたは他の、組織または細胞型のいずれかにおいて同様な役割を果たす。特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは以下のアミノ酸配列を含む：ＭＮＱＩＦＬＦＧＱＮＶＩＨＳＳＬＨＦＶＦＶＬＬＬＬＮＮＬＦＱＩＧＦＫＡＴＳＦＲＣＩＶＶＱＬＮＧＤＩＧＫＲＥＱＩ（配列番号：１２２）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明により包含される。
【００２７】
この遺伝子は、シクロヘキサミド処理サプト（ｓｕｐｔ）細胞、アルツハイマーの海綿状形態、胎児上皮、平滑筋、ＣＤ３４枯渇バフィーコート臍帯血液で主に発現され、そしてより低い程度では活性化Ｔ細胞、内皮細胞、メラノサイト、Ｂ細胞リンパ球およびヒト小脳において発現される。
【００２８】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経障害、免疫障害または発達障害、特に神経変性障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に結合組織の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、外皮組織、発達中の組織、胎児組織、免疫組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、羊水、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープには、配列番号６８中で残基：Ｇｌｙ−３３からＡｌａ−３８、Ｇｌｕ−１２３からＨｉｓ−１２８、Ｔｒｐ−１５０からＡｓｎ−１６１、Ｈｉｓ−１９５からＳｅｒ−２０１として示される配列を含むエピトープが含まれる。
【００２９】
様々な神経組織における組織分布は、ＥＢＰタンパク質に対する相同性と合わせて、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、神経変性疾患状態、行動障害および炎症性障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄疾患、末梢神経障害、新生物、外傷、先天性奇形、脊髄損傷、虚血および梗塞形成、動脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および認知の障害を含む）の検出／処置のために有用であることを示す。さらに、その遺伝子または遺伝子産物はまた、発生中の胚に関連した発生障害、伴性障害、または心血管系の障害の処置および／または検出において役割を果たし得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号１３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは、配列番号１３の１〜９０７の間の任意の整数であり、ｂは、１５〜９２１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１３に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００３０】
（遺伝子番号４によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、血管周囲細胞腫で主に発現され、そしてより低い程度では視床下部、平滑筋、肝臓、脾臓、脳、骨、脂肪ならびに多くの他の組織および細胞で発現される。
【００３１】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経障害、特に血管周囲細胞腫を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に血管の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、肝組織、筋骨格組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、胆汁、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープには、配列番号６９中で残基：Ｌｙｓ−１４からＧｌｕ−１９、Ｇｌｕ−７４からＬｙｓ−８４、Ｐｒｏ−１００からＴｈｒ−１０５、Ｇｌｙ−１１９からＡｌａ−１２９、Ｇｌｎ−１３５からＡｓｎ−１４３、Ｐｒｏ−１４５からＧｌｎ−１５０、Ｇｌｕ−１６２からＧｌｕ−１６７、Ｇｌｕ−２０７からＰｒｏ−２１５として示される配列を含むエピトープが含まれる。
【００３２】
血管外皮細胞腫ならびに他の高度に血管が新生化された組織および器官における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、血管の障害、特に血管周囲細胞腫および新脈管形成の診断および処置について有用であることを示す。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号１４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは、配列番号１４の１〜２５２７の間の任意の整数であり、ｂは、１５〜２５４１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１４に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００３３】
（遺伝子番号５によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、正常な卵巣および卵巣癌でおもに発現され、そしてより低い程度にはメルケル細胞および滑膜の線維芽細胞で発現される。
【００３４】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに内分泌障害または生殖障害、特に卵巣癌を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に内分泌系および生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、生殖組織、内分泌組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。
【００３５】
組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、内分泌系または生殖系の障害の診断および処置について有用である。卵巣により分泌されるタンパク質産物は、生殖機能に関連する全身性効果または局所的効果のいずれかを有するホルモンを提示し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号１５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは、配列番号１５の１〜１０３２の間の任意の整数であり、ｂは、１５〜１０４６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１５に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００３６】
（遺伝子番号６によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、ホジキンリンパ腫および精巣で主に発現される。
【００３７】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫系または生殖系の障害、特にホジキンリンパ腫を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系、内分泌系および生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、生殖組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープには、配列番号７１中で残基：Ｐｒｏ−１６からＣｙｓ−３２、Ｔｈｒ−４６からＳｅｒ−５１、Ｇｌｙ−５９からＧｌｙ−６４として示される配列を含むエピトープが含まれる。
【００３８】
組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、免疫系の障害（免疫不全症、免疫機能不全、アレルギー、自己免疫疾患、器官／組織移殖または内分泌系の障害または不妊症のような生殖の問題を含む）の診断および処置について有用である。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号１６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは、配列番号１６の１〜９６８の間の任意の整数であり、ｂは、１５〜９８２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１６に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００３９】
（遺伝子番号７によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、脳組織、特に脳扁桃の抑制、線条の抑制およびアルツハイマー病の海綿状形態で主に発現され、そしてより少ない程度では膀胱およびメラノサイトで発現される。
【００４０】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経性障害および精神障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に中枢神経の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープには、配列番号７２中で残基：Ｐｒｏ−２９からＬｙｓ−３７として示される配列を含むエピトープが含まれる。
【００４１】
組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、神経変性障害および精神障害（鬱病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄疾患、末梢壊疽、新生物、外傷、先天性奇形、脊髄障害、虚血および梗塞形成、動脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および認知の障害を含む）の検出／処置のために有用であることを示す。さらに、その遺伝子または遺伝子産物はまた、発生中の胚に関連した発生障害、伴性障害、または心血管系の障害の処置および／または検出において役割を果たし得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号１７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは、配列番号１７の１〜３０７７の間の任意の整数であり、ｂは、１５〜３０９１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１７に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００４２】
（遺伝子番号８によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子の翻訳産物は、生理学的に重要なリガンドのシグナル伝達において重要であると考えられるＧタンパク質共役レセプターと配列相同性を共有する。
【００４３】
この遺伝子は、脳組織（例えば、線条の抑制）において主に発現され、そしてより低い程度では滑膜線維芽細胞、骨巨細胞腫、胎児腎臓、樹状細胞、視床下部および脂肪組織において発現される。
【００４４】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経系の障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に中枢神経系の障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、ガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープには、配列番号７３中で残基：Ａｓｎ−６７からＡｓｎ−７２として示される配列を含むエピトープが含まれる。
【００４５】
組織分布およびＧタンパク質共役レセプターに対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、治療化合物のスクリーニングについて有用であることを示す。これらの化合物は、多くの身体の系（中枢神経系、結合組織、骨、尿、代謝、免疫に関連する系を含む）における障害について使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、例えば、この疾患状態が同じ遺伝子の過剰発現から生じる場合におけるアンタゴニストとして、治療用タンパク質として全てまたは一部が発現され得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号１８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは、配列番号１８の１〜７８２の間の任意の整数であり、ｂは、１５〜７９６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１８に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００４６】
（遺伝子番号９によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、胎児肺のみで発現される。
【００４７】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに肺性障害または発生障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に肺系の障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、肺組織、発生中の組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、羊水、髄液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。
【００４８】
胎児肺のみにおけるこの遺伝子の組織分布は、肺系の発生において中心となるるような役割を果たすことを示唆する。これは、このタンパク質産物の成人における発現の誤調節が、リンパ腫または肉腫の形成（特に肺における）を誘導し得ることを示唆する。これはまた、特定の肺欠損症（例えば、肺浮腫および塞栓症、気管支炎ならびに嚢胞性線維症）に対する傾向に関与し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号１９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは、配列番号１９の１〜８０８の間の任意の整数であり、ｂは、１５〜８２２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１９に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００４９】
（遺伝子番号１０によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、骨で主に発現され、そしてより低い程度ではＴ細胞、好中球および内皮細胞において発現される。
【００５０】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに骨格障害、免疫障害または造血系障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、
骨格組織、免疫組織、造血組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープには、配列番号７５中で残基：Ｔｈｒ−３３からＧｌｕ−４４、Ｔｙｒ−６３からＡｒｇ−６８として示される配列を含むエピトープが含まれる。
【００５１】
造血細胞型におけるこの遺伝子の優性な組織分布は、この遺伝子が、関節炎、喘息および免疫不全疾患を含む免疫障害または造血性障害の処置または検出について重要であり得ることを示す。骨におけるこの遺伝子の発現は、骨発達の欠損、骨修復、骨障害および骨変形の処置および／または検出において潜在的な役割を示す。あるいは、様々な造血組織内部における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、貧血、汎血球減少症、白血球減少症、血小板減少症、または白血病のような造血関連障害の処置および診断に有用であることを示す。なぜなら、間質細胞は造血性系統の細胞の産生に重要であるからである。この用途には、骨髄細胞エキソビボ培養、骨髄移植、骨髄再構成、新形成の放射線治療または化学療法がある。この遺伝子産物はまた、リンパ球生成に関与し得る。従って、それは、感染、炎症、アレルギー、免疫不全などのような免疫障害に使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および方向付けられた前駆体の拡大において、および種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号２０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは、配列番号２０の１〜６４３の間の任意の整数であり、ｂは、１５〜６５７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号２０に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００５２】
（遺伝子番号１１によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、胎児の肝臓および脾臓で主に発現され、そしてより低い程度では平滑筋、滑膜肉腫および脳で発現される。
【００５３】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに発生の障害、肝臓障害および造血障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に肝系および造血系の障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープには、配列番号７６中で残基：Ｐｒｏ−６１からＡｌａ−６７として示される配列を含むエピトープが含まれる。
【００５４】
主に胎児肝臓におけるこの遺伝子の組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、肝障害（肝癌および肝炎を含む）、発達障害および造血系障害（関節炎、喘息、免疫欠損障害および白血病を含む）の処置／検出について有用であることを示す。タンパク質、ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号２１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは、配列番号２１の１〜６１８の間の任意の整数であり、ｂは、１５〜６３２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号２１に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００５５】
（遺伝子番号１２によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主に臍帯血で発現される。この配列中の任意のフレームシフトは、公知の分生物学技術を使用して容易に明らかにされる。
【００５６】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに造血障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に造血系の障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。  臍帯血におけるこの遺伝子の組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、種々の免疫系障害または造血性障害（関節炎、喘息、免疫機能不全疾患および白血病）の処置または検出のために有用であることを示す。臍帯血におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む潜在的にすべての造血細胞系統の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、またはガンの処置における有用性もまた示唆し得る他のプロセスの調節（例えば、免疫応答を高めることによって）に関与し得る。この遺伝子は、リンパ球起源の細胞において発現されるので、その天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それゆえ、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬および組織を含む免疫学的障害のための薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系統の方向付けられた前駆体の増殖において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的な有用性を有し得る。タンパク質およびこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、配列データベースを介して公に利用可能であり、そしてアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号２２に関連し、そして本発明の着想以前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特別に除かれる。関連する配列を全て列挙することは面倒である。従って、好ましくは本発明の範囲から除外されるのは、一般式ａ−ｂによって記載されるヌクレオチド配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドであり、ここで、ａは、配列番号２２の１〜８５１の任意の整数であり、ｂは、１５〜８６５の任意の整数であり、ここで、ａおよびｂの両方は、配列番号２２に示すヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてｂは、ａ＋１４以上である。
【００５７】
（遺伝子番号１３によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子のヌクレオチド配列は、活性化Ｔ細胞およびＮＫ細胞が疾患細胞を活動的に捕捉し、そして炎症の領域内部に移動させる場合において、免疫応答後期の間の活性化Ｔ細胞およびＮＫ細胞の接着性相互作用に関与すると考えられるＴ細胞表面タンパク質触覚前駆体との相同性を示す。
【００５８】
この遺伝子は、主に臍帯血で発現される。
【００５９】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに造血障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に造血系および免疫系の障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織ならびにガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。
【００６０】
臍帯血におけるこの遺伝子の組織分布およびＴ細胞表面タンパク質前駆体触覚とのその配列相同性は、この遺伝子が、種々の免疫系障害または造血性障害（関節炎、喘息、免疫機能不全疾患および白血病）の診断および処置のために重要であり得るを示す。タンパク質およびこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、配列データベースを介して公に利用可能であり、そしてアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号２３に関連し、そして本発明の着想以前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特別に除かれる。関連する配列を全て列挙することは面倒である。従って、好ましくは本発明の範囲から除外されるのは、一般式ａ−ｂによって記載されるヌクレオチド配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドであり、ここで、ａは、配列番号２３の１〜１２０８の任意の整数であり、ｂは、１５〜１２２２の任意の整数であり、ここで、ａおよびｂの両方は、配列番号２３に示すヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてｂは、ａ＋１４以上である。
【００６１】
（遺伝子番号１４によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主に脳で発現され、そしてより低い程度で胸腺および脾臓で発現される。
【００６２】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経障害および炎症障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に神経系および免疫系の障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、神経組織、ガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープには、配列番号７９中で残基：Ａｓｐ−４８からＳｅｒ−５４として示される配列を含むエピトープが含まれる。
【００６３】
脳において優性であるこの遺伝子産物の組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、神経変性疾患状態および行動障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、精神分裂病、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害および恐慌性障害）の検出／処置のために有用であることを示す。さらに、胸腺および脾臓におけるこの遺伝子の発現は、免疫障害（例えば、関節炎、喘息、免疫機能不全疾患および白血病）の検出および処置における実行可能な役割を示す。タンパク質およびこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、配列データベースを介して公に利用可能であり、そしてアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号２４に関連し、そして本発明の着想以前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特別に除かれる。関連する配列を全て列挙することは面倒である。従って、好ましくは本発明の範囲から除外されるのは、一般式ａ−ｂによって記載されるヌクレオチド配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドであり、ここで、ａは、配列番号２４の１〜１４０７の任意の整数であり、ｂは、１５〜１４２１の任意の整数であり、ここで、ａおよびｂの両方は、配列番号２４に示すヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてｂは、ａ＋１４以上である。
【００６４】
（遺伝子番号１５によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主として６週齢胚において発現される。
【００６５】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに発達障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に胎児の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、発達組織、分化組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、羊水、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号８０中で残基：Ｔｈｒ−３６からＭｅｔ−４３として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００６６】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、発達障害および変性障害、ならびにガンの処置および診断のために有用であることを示す。同様に、胚組織および増殖細胞によって特徴付けられる他の細胞供給源内における発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を演じ得ることを示唆し、そしてガンおよび他の増殖性障害の診断または処置における有用性を示し得る。同様に、胚発生はまた、パターン形成における細胞分化および／またはアポトーシスに関与する決定を含む。従ってこのタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、そしてガン治療においてもまた有用であり得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号２５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号２５の１〜６２４の任意の整数であり、ｂは１５〜６３８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２５に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００６７】
（遺伝子番号１６によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主として胎児脳において発現される。
【００６８】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに脳腫瘍、発達疾患および神経変性性疾患を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に脳の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、発達組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号８１中で残基：Ｈｉｓ−４１からＧｌｕ−４９として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００６９】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、脳および神経系の発達疾患および神経変性性疾患の処置および診断に有用であることを示す。例としては；行動および神経系の障害、例えば、抑鬱症、精神分裂病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、躁病、痴呆、偏執症、および習慣性行動、睡眠障害が挙げられる。あるいは、胎児組織内での発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を演じ得ることを示唆し、そしてガンおよび他の増殖障害の診断および処置において有用性を示し得る。同様に、胚発生はまた、パターン形成における細胞分化および／またはアポトーシスに関与する決定を含む。従ってこのタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、そしてガン治療においてもまた有用であり得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号２６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号２６の１〜７３５の任意の整数であり、ｂは１５〜７４９の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２６に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００７０】
（遺伝子番号１７によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主として胎児組織において発現される。
【００７１】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに発達障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に胎児の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、発達組織、分化組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、羊水、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。  その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、発達障害および変性障害、ならびにガンの処置および診断のために有用であることを示す。同様に、胎児組織内での発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を演じ得ること、ならびにガンおよび他の増殖障害の診断および処置において有用性を示し得ることを示唆する。同様に、胚発生はまた、パターン形成における細胞分化および／またはアポトーシスに関与する決定を含む。従ってこのタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、そしてガン治療においてもまた有用であり得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号２７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号２７の１〜７７４の任意の整数であり、ｂは１５〜７８８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２７に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００７２】
（遺伝子番号１８によってコードされるタンパク質の特徴）
Ｒｅｈ細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から除去した上清は、ＧＡＳ（ガンマ活性化部位）プロモーターエレメントを活性化した。従って、この遺伝子は、Ｂ細胞をＪａｋｓ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介して活性化するようである。ＧＡＳは、Ｊａｋｓ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流に見いだされるプロモーターエレメントである。Ｊａｋｓ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の分化および増殖に関与する広範なシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエレメントの結合によって反映されるＪａｋｓ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分化に関与するタンパク質を示すために使用され得る。
【００７３】
この遺伝子は、主として脳において発現される。
【００７４】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに脳腫瘍、脳の発達疾患および神経変性性疾患を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に脳の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号８３中で残基：Ｍｅｔ−１からＡｒｇ−８として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００７５】
脳におけるその組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、脳および神経系の発達疾患および神経変性性疾患の処置および診断に有用であることを示す。例としては；行動または神経系の障害、例えば、抑鬱症、精神分裂病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、躁病、痴呆、偏執症、および習慣性行動、睡眠障害が挙げられる。あるいは、Ｂ細胞内で検出されたＧＡＳの生物学的活性は、増殖；生存；分化；および／または血液幹細胞を含む潜在的にすべての造血細胞系列の活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、または例えば免疫応答をブーストすることによるガンの処置における有用性をまた示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。この遺伝子はリンパ起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それゆえ、この遺伝子は、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、慢性肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、好中球減少、好中球増加、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞傷害）、移植器官および組織に対する免疫反応（例えば、宿主対移植片および移植片体宿主疾患）または自己免疫障害（例えば、自己免疫性不妊症、レンズ組織損傷、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物誘導性溶血性貧血、慢性関節リウマチ、シェーグレン病、強皮症ならびに組織を含む免疫学的障害のための薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系列の方向付けられた前駆細胞の拡大、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号２８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号２８の１〜９２７の任意の整数であり、ｂは１５〜９４１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２８に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００７６】
（遺伝子番号１９によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主として胎児心臓において発現される。
【００７７】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに心臓障害、骨格障害、または発達障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に心血管系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、筋肉組織、心臓組織、発達組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、羊水、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号８４中で残基：Ｐｒｏ−４２からＡｓｎ−４９、Ａｒｇ−５４からＧｌｙ−５９、Ｉｌｅ−７３からＧｌｕ−８１として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００７８】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、心血管ならびに障害、特に、心臓およびその発達に関係する障害の処置および診断のために有用であることを示す。心臓病に関する状態（例えば、再狭窄、アテローム性動脈硬化、発作、狭心症、血栓症および創傷治癒）はすべて本遺伝子のタンパク質産物の適用性の潜在的な領域である。同様に、胎児組織および増殖細胞によって特徴付けられる他の細胞供給源は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を演じ得、そしてガンおよび他の増殖障害の診断および処置における有用性を示し得ることを示唆する。同様に、胚発生はまた、パターン形成における細胞分化および／またはアポトーシスに関与する決定を含む。従ってこのタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、そしてガン治療においてもまた有用であり得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号２９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号２９の１〜８２１の任意の整数であり、ｂは１５〜８３５の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２９に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００７９】
（遺伝子番号２０によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主として胎盤において発現される。
【００８０】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに胎児欠損および出生前障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、発達組織、増殖組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、羊水、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号８５中で残基：Ｖａｌ−５４からＡｓｐ−５９として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００８１】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、発達異常、胎児欠損、生殖機能不全、または出生前障害の処置および診断のために有用であることを示す。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号３０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３０の１〜５３９の任意の整数であり、ｂは１５〜５５３の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３０に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００８２】
（遺伝子番号２１によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子の産物は、細胞外マトリックス構造に重要であると考えられているショウジョウバエのペルオキシダシン（ｐｅｒｏｘｉｄａｓｉｎ）と配列相同性を共有する。ジャーカットＴ細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から除去した上清は、ＧＡＳ経路を活性化した。従って、この遺伝子は、Ｔ細胞をＪａｋｓ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介して活性化するようである。ＧＡＳは、Ｊａｋｓ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流に見いだされるプロモーターエレメントである。Ｊａｋｓ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の分化および増殖に関与する大きなシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエレメントの結合によって反映されるＪａｋｓ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分化に関与するタンパク質を示すために使用され得る。
【００８３】
この遺伝子は、主として臍静脈において発現され、より低い程度では、内皮細胞および脳細胞において発現される。
【００８４】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害、発達障害および成長障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に脳の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、神経組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号８６中で残基：Ａｌａ−５５からＴｈｒ−６２、Ｈｉｓ−１６４からＧｌｙ−１７５、Ａｌａ−１９７からＧｌｕ−２０２として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００８５】
その組織分布およびペルオキシダシンに対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、細胞外マトリックスの形成を含む種々の胎児の発達障害および成長障害の研究、処置および診断に有用であることを示す。あるいは、その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、種々の免疫系障害の診断および処置に有用であることを示す。この遺伝子の遺伝子産物によるＧＡＳ経路の活性化は、血液幹細胞を含む潜在的にすべての造血細胞系列の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、または例えば免疫応答をブーストすることによるガンの処置における有用性をまた示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。この遺伝子産物はＧＡＳ経路に関する活性を示すので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それゆえ、これは、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬、ならびに組織を含む、免疫障害のための薬剤として使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系列の方向付けられた前駆細胞の拡大、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号３１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３１の１〜１３３２の任意の整数であり、ｂは１５〜１３４６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３１に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００８６】
（遺伝子番号２２によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子の翻訳産物は、免疫調節に関与すると考えられるヒトＭ９７−２分泌タンパク質（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７４０１５１）に対して相同性を有することが示された。類似の構造に基づいて、これらのタンパク質は、類似の生物学的機能を共有すると考えられている。好ましいポリペプチドは，以下のアミノ酸配列を含む：
【００８７】
【化１】
2009131263.tif 000002
【００８８】
この遺伝子は、主として腎髄質において発現され、より低い程度では脳（扁桃抑制脳および幼児脳）において発現される。
【００８９】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに腎臓障害、内分泌系障害、およびＣＮＳ障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に腎臓系、内分泌系、および中枢神経系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、腎臓組織、脳組織、免疫組織、造血組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号８７中で残基：Ｐｒｏ−５からＧｌｎ−１１、Ｔｈｒ−２９からＡｌａ−３８として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００９０】
その組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、種々の内分泌系障害、腎臓障害、発達障害および中枢神経系障害の研究、処置、および診断のために有用であることを示す。その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが，肝臓障害およびガン（例えば、胚芽細胞腫、黄疸、肝炎、肝臓代謝疾患、および肝細胞前駆体細胞の分化に起因する状態）の検出および処置に有用であることを示す。さらに、胎児におけるその発現は、発達異常、胎児欠損、出生前障害、および種々の創傷治癒モデルならびに／または組織外傷におけるタンパク質産物の有用な役割を示唆する。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号３２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３２の１〜６１２の任意の整数であり、ｂは１５〜６２６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３２に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００９１】
（遺伝子番号２３によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主として髄膜腫において発現され、より低い程度では、乳児脳で発現される。
【００９２】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに脳およびＣＮＳの障害、特に神経変性性障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特にＣＮＳおよび発達系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、神経組織、発達組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。
【００９３】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、ＣＮＳおよび発達経路に関与する障害および疾患の処置および診断のために有用であることを示す。その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、神経変性状疾患状態および行動傷害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、精神分裂病、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉症、および行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および認知の障害を含む）の検出／処置のために有用であることを示す。さらに、遺伝子または遺伝子産物はまた、発生中の胚に関連した発生障害、伴性障害、または心血管系の障害の処置および／または検出において役割を果たし得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号３３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３３の１〜１００４の任意の整数であり、ｂは１５〜１０１８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３３に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００９４】
（遺伝子番号２４によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主として胸部リンパ節において発現される。
【００９５】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに代謝障害、造血障害、および免疫障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に代謝系および免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号８９中で残基：Ｌｙｓ−２７からＳｅｒ−３３として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００９６】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、代謝障害および免疫障害の研究、診断ならびに処置に有用であることを示す。その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、種々の免疫系障害の診断および処置に有用であることを示す。胸部リンパ節におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む潜在的にすべての造血細胞系列の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、または例えば免疫応答をブーストすることによりガンの処置における有用性をまた示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。この遺伝子はリンパ起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それゆえ、これはまた、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む、免疫学的障害のための試薬として使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系列の方向付けられた前駆細胞の拡大、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号３４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３４の１〜７５３の任意の整数であり、ｂは１５〜７６７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３４に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００９７】
（遺伝子番号２５によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主として胸部リンパ節において発現され、そしてより低い程度では骨髄で発現される。
【００９８】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに代謝障害および免疫障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に代謝系および免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。
【００９９】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、種々の代謝障害および免疫障害の研究、診断ならびに処置に有用であることを示す。その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、種々の免疫系障害の診断および処置に有用であることを示す。胸部リンパ節および骨髄におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む潜在的にすべての造血細胞系列の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、または例えば免疫応答をブーストすることによるガンの処置における有用性をまた示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。この遺伝子はリンパ起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それゆえ、これはまた、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬、ならびに組織を含む、免疫学的障害のための試薬として使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系列の方向付けられた前駆細胞の拡大、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号３５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３５の１〜８２６の任意の整数であり、ｂは１５〜８４０の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３５に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１００】
（遺伝子番号２６によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子配列は、ヒト第Ｘ染色体の配列と有意な相同性を示す。
【０１０１】
この遺伝子は、主として胎盤において発現され、そしてより低い程度では胎児肝臓および脾臓において発現される。
【０１０２】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫系、代謝系、および発達系の障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に代謝系および免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、腎臓組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号９１中で残基：Ｉｌｅ−９８からＰｒｏ−１０６、Ｐｒｏ−１１８からＬｅｕ−１２４、Ｓｅｒ−１３６からＡｒｇ−１４８として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１０３】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、免疫系、発達系、および代謝系を含む障害の研究、診断および処置に有用であることを示す。この遺伝子のヌクレオチド配列は、ヒト第１０染色体の領域と相同性を示し、そしてその組織分布が与えられる場合、この遺伝子は発達経路またはその調節において機能し得る。さらに、胎児におけるその発現は、発達異常、胎児欠損、および出生前障害におけるそのタンパク質産物の有用な役割を示唆する。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号３６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３６の１〜１１３４の任意の整数であり、ｂは１５〜１１４８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３６に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１０４】
（遺伝子番号２７によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子の翻訳産物は、エストロゲンレセプター改変体と配列相同性を有し、これは、生殖疾患、内分泌疾患および代謝疾患において重要であると考えられている。
【０１０５】
この遺伝子は主に癌性の髄膜腫組織において発現される。
【０１０６】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに癌および脳障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に脳および脳脊髄液の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、発生組織、癌組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。
【０１０７】
組織分布およびエストロゲンレセプター改変体に対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、脳障害、内分泌障害、生殖障害および代謝障害の研究、診断および処置のために有用であることを示す。あるいは、癌性の髄膜腫組織に対するこの組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドがこれらの腫瘍の診断および介入のために有用であることを示唆し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての組織特異的マーカーおよび/または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号３７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３７の１〜１３５３の任意の整数であり、ｂは１５〜１３６７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３７に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１０８】
（遺伝子番号２８によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主にヒト好中球において発現される。
【０１０９】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに炎症障害、および免疫障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に炎症系および免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号９３中で残基：Ａｓｎ−２０からＣｙｓ−２７までとして示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１１０】
組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、免疫および炎症障害の研究、診断および処置のために有用であることを示す。好中球におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む、潜在的に全ての造血細胞系列の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、または他のプロセスの調節に関与し得、このことは、（例えば、免疫応答を高めることによって）癌の処置における有用性もまた示唆し得る。この遺伝子は、リンパ起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それゆえ、これは、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡および乾癬を含む免疫障害のための薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系統の方向付けられた前駆細胞の拡大において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的な有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび/または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号３８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３８の１〜９０７の間の任意の整数であり、ｂは１５〜９２１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３８に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１１１】
（遺伝子番号２９によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主にＴ細胞において発現され、より低い程度には、下垂体組織において発現される。
【０１１２】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫および内分泌障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に内分泌系および免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号９４中で残基：Ｌｙｓ−２３からＳｅｒ−３０まで、Ａｌａ−５２からＬｅｕ−５７まで、Ｐｒｏ−９６からＳｅｒ−１０５として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１１３】
組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、種々の免疫障害および内分泌障害の研究、診断および処置に有用であることを示す。Ｔ細胞におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む、潜在的に全ての造血細胞系列の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、または他のプロセスの調節に関与し得、このことは（例えば、免疫応答を高めることにより）ガンの処置における有用性もまた示唆し得る。この遺伝子はリンパ起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それゆえ、これは、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡および乾癬を含む免疫障害のための薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系統の方向付けられた前駆細胞の拡大において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的な有用性を有し得る。タンパク質およびこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号３９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３９の１〜６１８の任意の整数であり、ｂは１５〜６３２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３９に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１１４】
（遺伝子番号３０によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子の翻訳産物は、Ｍｌｒｑマウスタンパク質と配列相同性を有し、これは、Ｔ細胞によるＭＨＣ認識において重要であると考えられる。この遺伝子の翻訳産物はまた、ヒト血小板因子と相同性を有し、これは、この遺伝子が免疫細胞（例えば、好中球など）の凝集において重要であることを示唆し得る。
【０１１５】
この遺伝子は主に滑膜線維芽細胞において発現され、そしてＴ細胞およびホジキンリンパ腫においてより少ない程度に発現される。
【０１１６】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫／自己免疫障害および癌を含む障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系および代謝系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号９５中で残基：Ａｓｐ−４３からＶａｌ−５４まで、Ａｓｎ−６６からＧｌｕ−７４として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１１７】
この組織分布およびＭｌｒｑマウスタンパク質は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが免疫疾患および自己免疫疾患ならびに癌の研究、診断および処置のために有用であることを示す。免疫細胞におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む、潜在的に全ての造血細胞系譜の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、またはその他のプロセスの調節に関与し得、このことはまた、（例えば免疫応答をブーストすることによる）癌の処置における有用性を示唆し得る。この遺伝子はリンパ起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それ故、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、アクネ、および乾癬を含む、免疫学的障害の薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系譜の方向付けられた前駆細胞の拡大、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび/または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号４０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４０の１〜５９４の任意の整数であり、ｂは１５〜６０８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４０に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１１８】
（遺伝子番号３１によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主に好中球において発現され、そしてより少ない程度には、腎臓髄質において発現される。
【０１１９】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫障害またはおよび炎症性障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系または腎臓系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、腎臓組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号９６中の残基：Ｇｌｕ−２１からＧｌｙ−３０、Ｇｌｕ−３３からＴｈｒ−４７として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１２０】
この組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが炎症性障害および免疫障害の研究、診断および処置のために有用であることを示す。好中球におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む、潜在的に全ての造血細胞系譜の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、またはその他のプロセスの調節に関与し得、このことはまた、（例えば免疫応答をブーストすることによる）癌の処置における有用性を示唆し得る。この遺伝子はリンパ起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それ故、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、アクネ、および乾癬を含む、免疫学的障害の薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系譜の方向付けられた前駆細胞の増大、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび/または免疫治療標的としての有用性を示し得る。あるいは、腎臓における組織分布は、この遺伝子または遺伝子産物が、以下を含む腎臓疾患の処置および検出において使用され得ることを示す：ウィルムス腫瘍疾患、ならびに馬蹄腎、多発性嚢胞腎、およびファンコーニ症候群のような先天性腎臓機能不全に加えて、腎不全、腎炎、腎性尿細管性アシドーシス、タンパク尿、膿尿、浮腫、腎盂腎炎、水腎症、ネフローゼ症候群、圧挫症候群、糸球体腎炎、血尿、腎仙痛、腎結石。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび/または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号４１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４１の１〜８６３の任意の整数であり、ｂは１５〜８７７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４１に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１２１】
（遺伝子番号３２によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主に子宮および精巣上体組織において発現される。
【０１２２】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに生殖障害およびホルモン障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。
【０１２３】
この組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが発生障害、生殖疾患および内分泌障害の研究および処置のために有用であることを示す。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号４２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４２の１〜９６４の任意の整数であり、ｂは１５〜９７８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４２に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１２４】
（遺伝子番号３３によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、ＬＰＳ誘導好中球において発現する。
【０１２５】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリぺプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに炎症および免疫欠損を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリぺプチドおよびこれらのポリぺプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供するにおいて有用である。上記の組織または細胞、特に免疫系の多くについて、標準的な遺伝子発現レベル（すなわち、その障害を有さない個体に由来する健常な組織または体液における発現レベル）と比較して、有意により高いかまたはより低いレベルでのこの遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取した特定の組織または細胞型（例えば、ガン組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料において、定常的に検出され得る。
【０１２６】
この組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが炎症性障害および一般的な免疫障害の研究および処置のために有用であることを示す。この遺伝子産物の誘導された好中球における発現は、血液幹細胞を含む、潜在的に全ての造血細胞系譜の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、またはその他のプロセスの調節に関与し得、このことはまた、（例えば免疫応答をブーストすることによる）癌の処置における有用性を示唆し得る。この遺伝子はリンパ起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それ故、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、アクネ、および乾癬を含む、免疫学的障害の薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系譜の方向付けられた前駆細胞の増大、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび/または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号４３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４３の１〜９８５の任意の整数であり、ｂは１５〜９９９の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４３に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１２７】
(遺伝子番号３４によりコードされるタンパク質の特徴)
この遺伝子は、ＬＰＳ誘導好中球において主に発現される。
【０１２８】
したがって、本発明のポリヌクレオチドおよびポリぺプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに炎症および免疫欠損を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供するにおいて有用である。上記の組織または細胞、特に免疫系の障害の多くについて、標準的な遺伝子発現レベル（すなわち、その障害を有さない個体に由来する健常な組織または体液における発現レベル）と比較して、有意により高いかまたはより低いレベルでのこの遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取した特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、ガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料において、定常的に検出され得る。好ましいエピトープは、配列番号９９において残基：Ｐｒｏ−９からＣｙｓ−１４として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１２９】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、炎症および一般的な免疫障害の研究および処置に有用であることを示す。この遺伝子産物の誘導された好中球における発現は、血液幹細胞を含む、潜在的に全ての造血細胞系譜の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、またはその他のプロセスの調節に関与し得、このことはまた、（例えば免疫応答をブーストすることによる）癌の処置における有用性を示唆し得る。この遺伝子はリンパ起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。それ故、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、アクネ、および乾癬を含む、免疫学的障害の薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系譜の方向付けられた前駆細胞の増大、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび/または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号４４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４４の１〜４９６の任意の整数であり、ｂは１５〜５１０の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４４に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１３０】
（遺伝子番号３５によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子は、主に乳児脳ならびにいくらか正常および形質転換細胞型において発現される。
【０１３１】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに神経系障害および癌を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に神経およびリンパ系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、この障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、脳組織、ガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。
【０１３２】
組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが癌および／または発生障害、神経系障害およびリンパ障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティングトン病、ツーレット症候群、および精神分裂病）の研究および処置のために有用であることを示す。さらに、遺伝子または遺伝子産物はまた、発生胚に関連する発生障害、伴性障害、または心血管系の障害の処置および／または検出において役割を果たし得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号４５に関し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４５の１〜９７２の任意の整数であり、ｂは１５〜９８６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４５に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１３３】
（遺伝子番号３６によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子の翻訳産物は、ＩＩ型コラーゲンと配列相同性を有し、これは、マトリクス統合性および組織ホメオスタシスにおいて重要であると考えられる。この遺伝子の１つの実施態様は、以下のアミノ酸配列：ＰＥＧＥＣＣＰＶＣＰ（配列番号１２８）のポリペプチドを含む。さらなる実施態様は、これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
【０１３４】
この遺伝子は、主として骨芽細胞おいて発現される。
【０１３５】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに骨格疾患および他の間葉性疾患を包含するがそれに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に筋骨格系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、ガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号１０１において残基Ａｓｐ−１８〜Ａｒｇ−３１、Ｌｅｕ−３８〜Ｌｅｕ−５３として示される配列を含むものが挙げられる。
【０１３６】
組織分布およびコラーゲンに対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが骨粗鬆症、関節炎障害および他の骨格障害の研究および処置のために有用であることを示す。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号４６に関し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４６の１〜６４６の任意の整数であり、ｂは１５〜６６０の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４６に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１３７】
（遺伝子番号３７によってコードされるタンパク質の特徴）
この配列は、ヒト第１７染色体にマッピングされている配列と相同性を有する。
【０１３８】
この遺伝子は主として、松果体および乳児脳において発現する。
【０１３９】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに神経内分泌疾患を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に神経系および内分泌系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織または細胞型（例えば、脳組織、ガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号１０２において残基Ａｌａ−３８からＬｙｓ−６２として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１４０】
この組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが神経系障害およびホルモン障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティングトン病、ツレット症候群、精神分裂病、躁病、痴呆、偏執症、強迫性障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害を含む）の研究および処置に有用であることを示す。さらに、遺伝子または遺伝子産物はまた、発生中の胚に関連した発生障害、伴性障害、または心血管系の障害の処置および／または検出において役割を果たし得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号４７に関し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４７の１〜３２６の間の任意の整数であり、ｂは１５〜３４０の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４７に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１４１】
（遺伝子番号３８によってコードされるタンパク質の特徴）
この配列は、ヒトウロプラキンタンパク質に対して有意な相同性を示し、これは、非対称ユニット膜の成分として有意な役割を果たすと考えられる。これは、最終的に分化した尿路上皮細胞から構成される生体膜を非常に特殊化している。このタンパク質は、非対称ユニット膜のアセンブリの調節において重要な役割を果たし得る。非対称ユニットタンパク質は、哺乳動物の尿路上皮の先端斑（ａｐｉｃａｌ  ｐｌａｑｕｅ）を形成し、そして尿路上皮先端表面を強化することにおいて役割を果たすと考えられているため、細胞が膀胱拡張の間に破裂するのを妨げる。この遺伝子の１つの実施態様は、以下のアミノ酸配列のポリペプチドを含む：
【０１４２】
【化２】
2009131263.tif 000003
【０１４３】
さらなる実施態様は、これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
【０１４４】
この遺伝子は、主に骨髄および滑膜肉腫において発現される。
【０１４５】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに造血および関節疾患を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系および骨格系、ならびに膜構造に関与する細胞の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、この障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、ガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号１０３において残基Ｇｌｎ−２９〜Ｓｅｒ−４９に示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１４６】
組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが,免疫障害および骨格障害ならびに癌の研究および処置について有用であることを示す。あるいは、組織分布および相同性によれば、この遺伝子およびその対応する翻訳産物は、非対称ユニット膜のアセンブリの調節において重要な役割を果たし得るようであり、非対称ユニット膜は、細胞尿路上皮細胞の先端斑を形成するため、これらの細胞を強化し、そして細胞が膀胱の拡張の間に破裂することを予防する。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号４８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４８の１〜５５３の任意の整数であり、ｂは１５〜５６７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４８に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１４７】
（遺伝子番号３９によってコードされるタンパク質の特徴）
このアミノ酸配列は、コラーゲンまたは膜発生および／もしくは構造において機能すると考えられるコラーゲン様タンパク質と弱く相同である。
【０１４８】
この遺伝子は、主に肺、脳、および脊髄において発現される。
【０１４９】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに神経系疾患および呼吸疾患を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特にＣＮＳおよび発生組織の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、ガン性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、定常的に検出され得る。好ましいエピトープとしては、配列番号１０４において残基Ｐｒｏ−３８〜Ｈｉｓ−４７、Ａｌａ−５９〜Ｔｈｒ−６６として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１５０】
組織分布およびコラーゲン様タンパク質に対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが神経系障害および呼吸障害の研究および処置のために有用であることを示す。この遺伝子の翻訳産物はまた、身体内のコラーゲンまたは膜の発生および／または構造の調節において機能し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号４９に関し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４９の１〜１３４３の任意の整数であり、ｂは１５〜１３５７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４９に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１５１】
(遺伝子番号４０によってコードされるタンパク質の特徴)
この遺伝子は、主に精巣組織、乳房組織、および発達する組織において発現され、そしてより少ない程度には、いくつかのほかの組織および器官において発現される。
【０１５２】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに内分泌器官の障害、生殖器官の障害、および発達する器官の障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に内分泌系および生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープは、配列番号１０５において残基Ｍｅｔ−１からＴｈｒ−６、Ｇｌｙ−４５からＡｓｎ−７４として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１５３】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、内分泌器官、生殖器官、および発達する器官の障害の処置および診断に有用であることを示す。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号５０に関連し、そして本発明の概念の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号５０の１〜１０２４の間の任意の整数であり、ｂは１５〜１０３８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５０に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１５４】
(遺伝子番号４１によってコードされるタンパク質の特徴)
この遺伝子の翻訳産物は、（相同な遺伝子産物の生理学的役割を挿入のこと）において重要であると考えられる（最も緊密なホモログの名前を挿入のこと）との配列相同性を共有する。
【０１５５】
この遺伝子は、主に（最も強力な発現が見られる組織または細胞株を挿入のこと）において発現され、そしてより少ない程度には、（遺伝子が発現されるほかの組織および細胞株を挿入のこと）において発現される。
【０１５６】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに（疾患状態を挿入のこと）を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に（関連する疾患状態がありそうな（例えば免疫）系を挿入のこと）の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープは、配列番号１０６において残基Ｖａｌ−１０からＬｙｓ−１７、Ｓｅｒ−２４からＬｙｓ−２９として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１５７】
その組織分布および（遺伝子または遺伝子ファミリー）に対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、（最良の推測を取り入れ、かつ理論的根拠を説明のこと）に有用であることを示す。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号５１に関連し、そして本発明の概念の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号５１の１〜９９５の間の任意の整数であり、ｂは１５〜１００９の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５１に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１５８】
(遺伝子番号４２によってコードされるタンパク質の特徴)
開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１１染色体に存在すると考えられる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１１染色体の連鎖解析におけるマーカーとして有用である。
【０１５９】
この遺伝子は、主にメラニン形成細胞および胎児肺において発現され、そしてより少ない程度には、他の組織および器官において発現される。
【０１６０】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに胎児、肺系、および皮膚の疾患を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に発達系、肺系、および皮膚系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。
【０１６１】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、表皮系、肺系、および発達系の疾患の処置または診断に有用であることを示す。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号５２に関連し、そして本発明の概念の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号５２の１〜８９４の間の任意の整数であり、ｂは１５〜９０８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５２に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１６２】
(遺伝子番号４３によってコードされるタンパク質の特徴)
この遺伝子は、主に気管腫瘍および網膜において発現される。
【０１６３】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびにガン、眼および肺系の疾患を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に眼系および肺系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。
【０１６４】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、眼、肺系、およびガンの障害の処置および診断に有用であることを示す。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙された組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号５３に関連し、そして本発明の概念の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号５３の１〜１２４１の間の任意の整数であり、ｂは１５〜１２５５の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５３に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１６５】
(遺伝子番号４４によってコードされるタンパク質の特徴)
この遺伝子の翻訳産物は、その変異体が、ガンの多くの症例に寄与する要因であると考えられる野生型ｐ５３遺伝子の制御下にある、細胞増殖調節タンパク質との相同性を共有する。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１１染色体に存在すると考えられる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１１染色体の連鎖解析におけるマーカーとして有用である。
【０１６６】
この遺伝子は、主に乳房および乳癌において発現され、そしてより少ない程度には、造血組織および免疫組織ならびにいくつかの他の組織および器官において発現される。
【０１６７】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに生殖系、内分泌系、および造血系の障害ならびにガンを包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に生殖系、内分泌系、および造血系ならびにガン組織の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープは、配列番号１０９において残基Ｃｙｓ−４２からＧｌｙ−４８、Ｇｌｙ−５２からＩｌｅ−６１として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１６８】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、生殖器官、内分泌器官、および造血器官の障害（ガンを含む）の処置および診断に有用であることを示す。組織分布および細胞増殖調節タンパク質に対する相同性が与えられると、この遺伝子の翻訳産物は癌性細胞の調節における役割を果たし得るか、または腫瘍性増殖を決定するための診断用ツールとして有用であり得ることもまたありそうである。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙された組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号５４に関連し、そして本発明の概念の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号５４の１〜１１２８の間の任意の整数であり、ｂは１５〜１１４２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５４に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１６９】
(遺伝子番号４５によってコードされるタンパク質の特徴)
この遺伝子の翻訳産物は、ガン、後天的免疫不全、糖尿病、心血管疾患、および神経系障害を含む種々の疾患において重要であると考えられるＧ共役型レセプターシグナリングに関与するタンパク質との配列相同性を共有する。
【０１７０】
この遺伝子は、主に副腎腫瘍、内皮細胞、および中枢神経系において発現され、そしてより少ない程度には、いくつかの他の組織および器官において発現される。
【０１７１】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに内皮、ＣＮＳ、およびガンの障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に内皮および中枢神経系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープは、配列番号１１０において残基Ｔｈｒ−４１からＡｌａ−５０として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１７２】
その組織分布およびＧ共役型レセプターシグナリングに関与するタンパク質に対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、ＣＮＳ、内皮、およびガンの障害の処置および診断に有用であることを示す。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙された組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号５５に関連し、そして本発明の概念の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号５５の１〜１９０９の間の任意の整数であり、ｂは１５〜１９２３の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５５に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１７３】
(遺伝子番号４６によってコードされるタンパク質の特徴)
この遺伝子は、主に活性化Ｔ細胞および副腎腫瘍において発現される。
【０１７４】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫系および内分泌系の障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系および内分泌系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープは、配列番号１１１において残基Ａｓｎ−５２からＡｓｎ−６０、Ｇｌｙ−７２からＰｒｏ−８８、Ｐｒｏ−９４からＩｌｅ−９９、Ｇｌｎ−１２７からＬｙｓ−１３２、Ｇｌｕ−１３８からＧｌｙ−１４４として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１７５】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、免疫系および内分泌系の障害の処置および診断に有用であることを示す。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号５６に関連し、そして本発明の概念の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号５６の１〜１２１４の間の任意の整数であり、ｂは１５〜１２２８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５６に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１７６】
(遺伝子番号４７によってコードされるタンパク質の特徴)
この遺伝子は、主に前立腺および脳において発現される。
【０１７７】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに生殖系および中枢神経系の疾患を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特にＣＮＳおよび生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープは、配列番号１１２において残基Ｓｅｒ−２２からＬｙｓ−２７として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１７８】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、ＣＮＳおよび生殖系の障害の処置および診断に有用であることを示す。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号５７に関連し、そして本発明の概念の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号５７の１〜１０２４の間の任意の整数であり、ｂは１５〜１０３８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５７に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１７９】
(遺伝子番号４８によってコードされるタンパク質の特徴)
この遺伝子は、主に骨髄において発現される。
【０１８０】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに骨髄の疾患を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系および造血系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。好ましいエピトープは、配列番号１１３において残基Ｓｅｒ−３９からＡｌａ−４７、Ｐｈｅ−５５からＬｅｕ−６４として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１８１】
その組織分布および相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、免疫系および造血系の疾患の処置および診断に有用であることを示す。骨髄細胞におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む潜在的に全ての造血性細胞系統の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、または癌の処置（例えば、免疫応答をブーストすることによって）における有用性をもまた示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。この遺伝子はリンパ起源の細胞において発現されるので、その天然の遺伝子産物は免疫機能に関与し得る。従って、それはまた、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血病、挫瘡（アクネ）、および乾癬を含む免疫学的障害のための薬剤としても使用し得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系統の方向付けられた前駆体の拡大において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的な有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号５８に関連し、そして本発明の概念の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号５８の１〜９７６の間の任意の整数であり、ｂは１５〜９９０の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５８に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１８２】
(遺伝子番号４９によってコードされるタンパク質の特徴)
開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第Ｘ染色体に存在すると考えられる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第Ｘ染色体の連鎖解析におけるマーカーとして有用である。
【０１８３】
この遺伝子は、主にメラニン形成細胞、胎児組織、および内皮細胞において発現され、そしてより少ない程度には、ガンを含む他の組織および器官において発現される。
【０１８４】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに皮膚および発達中の器官の疾患を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に内皮系および胎児系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。
【０１８５】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、表皮細胞および発達中の組織の疾患（ガンを含む）の処置または診断に有用であることを示す。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙された組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号５９に関連し、そして本発明の概念の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号５９の１〜１７５３の間の任意の整数であり、ｂは１５〜１７６７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５９に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１８６】
(遺伝子番号５０によってコードされるタンパク質の特徴)
この遺伝子は、主に扁桃において発現され、そしてより少ない程度には、樹状細胞、骨髄、脳、および肺細胞を含むいくつかの他の組織において発現される。
【０１８７】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫系障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織または細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。
【０１８８】
その組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、免疫系ならびに骨髄系および肺系を含むいくつかの他の系の障害の診断および処置のために有用であることを示す。免疫細胞におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む潜在的に全ての造血性細胞系統の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、または癌の処置（例えば、免疫応答をブーストすることによって）における有用性をもまた示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。その遺伝子が、リンパ起源の細胞において発現されるので、その天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。従って、それはまた、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血病、挫瘡（アクネ）、および乾癬を含む免疫学的障害のための薬剤としても使用し得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系統の方向付けられた前駆体の拡大において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的な有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつかは、配列番号６０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは、配列番号６０の１〜１６１１の間の任意の整数であり、ｂは、１５〜１６２５の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号６０に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１８９】
【表１Ａ】
2009131263.tif 000004
【０１９０】
【表１Ｂ】
2009131263.tif 000005
【０１９１】
【表１Ｃ】
2009131263.tif 000006
【０１９２】
【表１Ｄ】
2009131263.tif 000007
【０１９３】
【表１Ｅ】
2009131263.tif 000008
【０１９４】
【表１Ｆ】
2009131263.tif 000009
【０１９５】
【表１Ｇ】
2009131263.tif 000010
【０１９６】
表１は、上記の各「遺伝子番号」に対応する情報を要約する。「ヌクレオチド配列番号Ｘ」として同定されるヌクレオチド配列は、表１において同定される「ｃＤＮＡクローンＩＤ」から、およびいくつかの場合において、さらなる関連のＤＮＡクローンから得られる部分的に相同な（「重複する」）配列から構築された。重複する配列は、高い冗長性の単一の連続した配列に構築され（通常、各ヌクレオチド部位で３〜５個の重複する配列）、配列番号Ｘとして同定される最終的な配列を得た。
【０１９７】
ｃＤＮＡクローンＩＤは、その日付に寄託され、そして「ＡＴＣＣ寄託番号Ｚおよび日付」において列挙される対応する寄託番号が与えられた。寄託物のいくつかは、同じ遺伝子に対応する複数の異なるクローンを含む。「ベクター」は、ｃＤＮＡクローンＩＤにおいて含まれるベクターの型をいう。
【０１９８】
「総ヌクレオチド配列」は、「遺伝子番号」によって同定されるコンティグにおけるヌクレオチドの総数をいう。寄託されたクローンは、これらの配列の全てまたはほとんどを含み得、この配列は、配列番号Ｘの「クローン配列の５’ヌクレオチド」および「クローン配列の３’ヌクレオチド」として示されるヌクレオチドの位置によって反映される。推定開始コドン（メチオニン）の配列番号Ｘのヌクレオチドの位置は、「開始コドンの５’ヌクレオチド」として同定される。同様に、推定シグナル配列の配列番号Ｘのヌクレオチドの位置は、「シグナルペプチドの第一のアミノ酸の５’ヌクレオチド」として同定される。
【０１９９】
翻訳されたアミノ酸配列は、メチオニンで始まり、「アミノ酸配列番号Ｙ」として同定されるが、他のリーディングフレームもまた、公知の分子生物学技術を使用して容易に翻訳され得る。これらのオルタナティブオープンリーディングフレームによって生成されるポリペプチドは、本発明によって具体的に意図される。
【０２００】
推定シグナルペプチドの配列番号Ｙの第一および最後のアミノ酸の位置は、「シグナルペプチドの第一のアミノ酸」および「シグナルペプチドの最後のアミノ酸」として同定される。分泌部分の配列番号Ｙの推定される第一アミノ酸の位置は、「分泌部分の推定される第一のアミノ酸」として同定される。最後には、オープンリーディングフレームにおける最後のアミノ酸の配列番号Ｙのアミノ酸の位置は、「ＯＲＦの最後のアミノ酸」として同定される。
【０２０１】
配列番号Ｘおよび翻訳される配列番号Ｙは、十分に正確であり、そしてそうでなければ、当該分野において周知であるおよび以下でさらに記載される種々の使用に適切である。例えば、配列番号Ｘは、配列番号Ｘにおいて含まれる核酸配列または寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡを検出する核酸ハイブリダイゼーションプローブを設計するために有用である。これらのプローブはまた、生物学的サンプル中の核酸分子にハイブリダイズし、それによって本発明の種々の法医学（ｆｏｒｅｎｓｉｃ）の方法、および診断の方法を可能にする。同様に、配列番号Ｙから同定されるポリぺプチドは、表１において同定されるｃＤＮＡクローンによってコードされる分泌タンパク質に特異的に結合する抗体を作製するために使用され得る。
【０２０２】
それにもかかわらず、配列決定反応によって生成されるＤＮＡ配列は、配列決定のエラーを含み得る。エラーは、誤って同定されたヌクレオチドとして、または生成されたＤＮＡ配列におけるヌクレオチドの挿入または欠失として存在する。誤って挿入されたか、または欠失されたヌクレオチドは、推定アミノ酸配列のリーディングフレームにおいてフレームシフトを引き起こす。これらの場合において、作製されるＤＮＡ配列は、実際のＤＮＡ配列と９９．９％（例えば、１０００塩基を超えるオープンリーディングフレームにおける１塩基の挿入または欠失）を超えて同一であり得るにもかかわらず、推定アミノ酸配列は、実際のアミノ酸配列とは異なる。
【０２０３】
従って、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における正確さを必要とするこれらの適用のために、本発明は、配列番号Ｘとして同定され、作製されたヌクレオチド配列および配列番号Ｙとして同定され、推定の翻訳されたアミノ酸配列のみではなく、表１において記載されるような、ＡＴＣＣに寄託された本発明のヒトｃＤＮＡを含むプラスミドＤＮＡのサンプルもまた提供する。寄託されたクローンの各ヌクレオチド配列は、公知の方法に従って寄託されたクローンの配列決定によって容易に決定され得る。次いで、推定アミノ酸配列は、このような寄託物から証明され得る。さらに、特定のクローンによってコードされるタンパク質のアミノ酸配列はまた、ペプチド配列決定によって、または寄託されたヒトｃＤＮＡを含む適切な宿主細胞中でタンパク質を発現し、このタンパク質を収集し、そしてその配列を決定することによって、直接的に決定され得る。
【０２０４】
本発明はまた、配列番号Ｘ、配列番号Ｙ、または寄託されたクローンに対応する遺伝子に関する。対応する遺伝子は、本明細書中に開示される配列情報を使用して、公知の方法に従って単離され得る。このような方法は、開示された配列からプローブまたはプライマーを調製する工程、およびゲノム物質の適切な供給源から対応する遺伝子を同定または増幅する工程を包含する。
【０２０５】
本発明においてまた提供されるものは、種相同体である。種相同体は、本明細書中に提供される配列から適切なプローブまたはプライマーを作製し、そして所望の相同体について適切な核酸供給源をスクリーニングすることによって単離および同定され得る。
【０２０６】
本発明のポリぺプチドは、任意の適切な様式で調製され得る。このようなポリぺプチドとしては、単離された天然に存在するポリぺプチド、組換え的に生成されたポリぺプチド、合成的に生成されたポリぺプチド、またはこれらの方法の組合せによって生成されたポリぺプチドが挙げられる。このようなポリぺプチドを調製するための手段は、当該分野において十分に理解される。
【０２０７】
ポリぺプチドは、分泌タンパク質の形態（成熟形態を含む）であり得るか、またはより大きいタンパク質（例えば、融合タンパク質）の部分であり得る（以下を参照のこと）。分泌配列またはリーダー配列、プロ配列、精製を補助する配列（例えば、複数のヒスチジン残基）、または組換え生成の間の安定性のためのさらなる配列を含むさらなるアミノ酸配列を含むことは、しばしば有利である。
【０２０８】
本発明のポリぺプチドは、好ましくは、単離された形態で提供され、そして好ましくは実質的に精製される。ポリぺプチド（分泌されるポリぺプチドを含む）の組換え的に生成されたバージョン（ｖｅｒｓｉｏｎ）は、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ、Ｇｅｎｅ  ６７：３１−４０（１９８８）に記載される１工程の方法によって実質的に精製され得る。本発明のポリぺプチドはまた、当該分野において周知である方法における分泌タンパク質に対して惹起される本発明の抗体を使用して、天然のまたは組換えの供給源から精製され得る。
【０２０９】
（シグナル配列）
タンパク質が、シグナル配列、ならびにその配列についての切断点を有するか否かを予測するための方法が、利用可能である。例えば、ＭｃＧｅｏｃｈ，Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．  ３：２７１−２８６（１９８５）の方法は、短いＮ末端荷電領域およびそれに続く完全な（切断されていない）タンパク質の非荷電領域からの情報を使用する。ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０（１９８６）の方法は、切断部位の周辺の残基（代表的に−１３〜＋２残基）からの情報を使用し、ここで、＋１は、分泌タンパク質のアミノ末端を示す。これらの方法のそれぞれについての、公知の哺乳動物分泌タンパク質の切断点を予測することの正確さは、７５〜８０％の範囲にある（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ、前出）。しかし、２つの方法は、所定のタンパク質について、同じ推定切断点を必ずしも生成するとは限らない。
【０２１０】
本発明の場合において、分泌されるポリぺプチドの推定アミノ酸配列は、ＳｉｇｎａｌＰと呼ばれるコンピュータープログラム（Ｈｅｎｒｉｋ  Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １０：１−６（１９９７））によって分析される。このプログラムは、アミノ酸配列に基づいてタンパク質の細胞での位置を予測する。この局在化のコンピューター予測の一部として、ＭｃＧｅｏｃｈおよびｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅの方法が援用される。このプログラムによって、本明細書中に記載される分泌タンパク質のアミノ酸配列の分析は、表１において示される結果を提供した。
【０２１１】
しかし、当業者に理解されるように、切断部位は、時折、生物に応じて変化し、そして絶対的な確実性を伴っては予測され得ない。従って、本発明は、配列番号Ｙにおいて示される配列を有する分泌されるポリぺプチドを提供し、これは推定切断点の５残基（すなわち、＋または−５残基）内で始まるＮ末端を有する。同様に、ある場合において、分泌タンパク質からのシグナル配列の切断は、必ずしも均一ではなく、１つより多くの分泌される種を生じることもまた認識される。これらのポリぺプチド、およびこのようなポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドは、本発明によって意図される。
【０２１２】
さらに、上述の分析によって同定されるシグナル配列は、天然に存在するシグナル配列を必ずしも予測しないかもしれない。例えば、天然に存在するシグナル配列は、推定シグナル配列からさらに上流にあり得る。しかし、推定シグナル配列は、分泌タンパク質をＥＲに指向し得るようである。これらのポリぺプチド、およびこのようなポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドは、本発明によって意図される。
【０２１３】
（ポリヌクレオチドおよびポリぺプチド改変体）
「改変体」とは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリぺプチドとは異なるが、それらの本質的な特性を保持するポリヌクレオチドまたはポリぺプチドをいう。一般に、改変体は、全体的に密接に類似し、そして、多くの領域において、本発明のポリヌクレオチドまたはポリぺプチドに同一である。
【０２１４】
本発明の参照ヌクレオチド配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドによって、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、ポリヌクレオチド配列がポリぺプチドをコードする参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオチドあたり５つまでの点変異を含み得ることを除いて、参照配列に対して同一であることを意図する。換言すれば、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列のヌクレオチドの５％までが、別のヌクレオチドで欠失または置換され得るか、または参照配列中の総ヌクレオチドの５％までの多数のヌクレオチドで参照配列中に挿入され得る。問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配列は、表１に示される配列全体、ＯＲＦ（オープンリーディングフレーム）、または本明細書中で記載されるように特定される任意のフラグメントであり得る。
【０２１５】
実際問題として、任意の特定の核酸分子またはポリぺプチドが、本発明のヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、公知のコンピュータープログラムを使用して従来的に決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と本配列との間の最も良好な全体的な適合性（全体的な配列整列としてもまた参照される）を決定するための好ましい方法はまた、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．  Ｂｉｏｓｃｉ．（１９９０）６：２３７−２４５）のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合わせ配列および本配列は、両方ともにＤＮＡ配列である。ＲＮＡ配列は、ＵからＴに変換することによって比較され得る。この全体的な配列整列の結果は、同一性パーセント（％）で示される。同一性パーセントを算定するためにＤＮＡ配列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用される好ましいパラメーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝Ｕｎｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉｓｍａｔｃｈ  Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ  Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｅｎｇｔｈ＝０、およびＣｕｔｏｆｆ  Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ  Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ  Ｓｉｚｅ  Ｐｅｎａｌｔｙ  ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ  Ｓｉｚｅ＝５００または本ヌクレオチド配列の長さ（どちらかより短い方）である。
【０２１６】
本配列が、５’または３’欠失のために（内部欠失のためではなく）問い合わせ配列より短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない。これは、同一性パーセントを計算する場合に、ＦＡＳＴＤＢプログラムが本配列の５’および３’切断を考慮しないからである。５’末端または３’末端で切断される本配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パーセントは、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして一致／整列されない本配列の５’および３’である問い合わせ配列の塩基の数を計算することによって補正される。ヌクレオチドが一致／整列されるか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパーセントは、同一性パーセントから差し引かれ、特定のパラメーターを用いて上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定され、最終的な同一性パーセントのスコアに到達する。この補正されたスコアが、本発明の目的に使用されるものである。ＦＡＳＴＤＢ整列によって示されるように、問い合わせ配列と一致／整列されいていない、本配列の５’および３’塩基の外側の塩基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で算定される。
【０２１７】
例えば、９０塩基の本配列は、同一性パーセントを決定するために１００塩基の問い合わせ配列に整列される。本配列、および従って、ＦＡＳＴＤＢ整列の５’末端で生じる欠失は、５’末端で最初の１０塩基の一致／整列を示さない。１０個の不対合塩基は、配列の１０％（一致していない５’および３’末端での塩基の数／問い合わせ配列の塩基の総数）を表し、そのため１０％は、ＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定される同一性パーセントのスコアから差し引かれる。残りの９０塩基が完全に一致する場合は、最終的な同一性パーセントは９０％である。別の例では、９０塩基の本配列は、１００塩基の問い合わせ配列と比較される。この場合、欠失は、内部欠失であり、その結果、問い合わせ配列と一致／整列しない本配列の５’または３’に塩基がない。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセントは手動で補正される。再び、問い合わせ配列と一致／整列しない本配列の５’または３’の塩基のみが手動で補正される。他の手動の補正は、本発明の目的ではなされない。
【０２１８】
本発明の問い合わせアミノ酸配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」であるアミノ酸配列を有するポリぺプチドにより、本ポリペプチドのアミノ酸配列は、本ポリぺプチド配列が、問い合わせアミノ酸配列の各１００個のアミノ酸あたり５つまでのアミノ酸の変更を含み得ることを除いて、問い合わせ配列に同一であることが意図される。換言すれば、問い合わせアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリぺプチドを得るために、本配列におけるアミノ酸残基の５％までが、挿入、欠失、（消えない（ｉｎｄｅｌｓ））または別のアミノ酸で置換され得る。参照配列のこれらの変化は、参照アミノ酸配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端部位で生じ得るか、またはそれらの末端部位の間のどこにでも生じ得、参照配列中の残基間で個々に、または参照配列内の１つ以上のコンティグなグループにおいてのいずれかで、散在される。
【０２１９】
実際問題として、任意の特定のポリぺプチドが、例えば、表１に示されるアミノ酸配列に対して、または寄託されたＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、従来的に、公知のコンピュータープログラムを使用して決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と本配列との間での最良の全体的な一致（全体的配列整列としても参照される）を決定するための好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．  Ａｐｐ．  Ｂｉｏｓｃｉ．  （１９９０）  ６：２３７−２４５）のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合わせおよび本配列は、両方ともヌクレオチド配列であるかまたは両方ともアミノ酸配列であるかのいずれかである。上記の全体的配列整列の結果は、同一性パーセントで示される。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸整列に用いられる好ましいパラメーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝ＰＡＭ  ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ  Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ  Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ  Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｗｉｎｄｏｗ  Ｓｉｚｅ  ＝  配列の長さ、Ｇａｐ  Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ  Ｓｉｚｅ  Ｐｅｎａｌｔｙ  ＝  ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ  Ｓｉｚｅ＝５００または本アミノ酸配列の長さ（どちらかより短い方）である。
【０２２０】
本配列が、Ｎ末端またはＣ末端欠失により（内部の欠失のためではなく）問い合わせ配列よりも短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、全体的な同一性パーセントを算定する場合に、本配列のＮ末端切断およびＣ末端切断を考慮しないからである。Ｎ末端およびＣ末端で切断される本配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パーセントは、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして、対応する本残基と一致／整列しない本配列のＮ末端およびＣ末端側である問い合わせ配列の残基の数を計算することによって補正される。残基が一致／整列されているか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパーセントは、同一性パーセントから差し引かれ、上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって特定のパラメーターを使用して計算され、最終的な同一性パーセントのスコアに到達する。この最終的な同一性パーセントのスコアは、本発明の目的で使用されるものである。問い合わせ配列と一致／整列していない本配列のＮ末端およびＣ末端側の残基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で考慮される。すなわち、本配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基の外側の問い合わせ残基位置のみである。
【０２２１】
例えば、９０アミノ酸残基の本配列は、同一性パーセントを決定するために１００残基の問い合わせ配列と整列される。欠失が本配列のＮ末端で生じ、そしてそれゆえＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端での最初の１０残基の一致／整列を示さない。１０個の不対合残基は、配列の１０％（一致していないＮ末端およびＣ末端での残基の数／問い合わせ配列中の残基の総数）を表し、その結果ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算される同一性パーセントのスコアから１０％が差し引かれる。残りの９０残基が完全に一致した場合、最終的な同一性パーセントは９０％である。別の例において、９０残基の本配列が、１００残基の問い合わせ配列と比較される。この場合、欠失は、内部欠失であり、そのため問い合わせ配列と一致／整列しない本配列のＮ末端またはＣ末端の残基は存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセントは、手動で補正されない。再び、ＦＡＳＴＤＢ整列において示される、問い合わせ配列と一致／整列しない本配列のＮ末端およびＣ末端の外の残基位置のみが手動で補正される。他の手動の補正は、本発明の目的のためにはなされない。
【０２２２】
改変体は、コード領域、非コード領域、またはその両方における変化を含み得る。特に好ましいものは、サイレントな置換、付加、または欠失を生成するが、コードされるポリぺプチドの特性または活性を変化しない変化を含むポリヌクレオチド改変体である。遺伝コードの縮重に起因するサイレントな置換によって生成されるヌクレオチド改変体が、好ましい。さらに、任意の組合せにおいて５〜１０、１〜５、もしくは１〜２アミノ酸が置換、欠失、または付加される改変体もまた、好ましい。ポリヌクレオチド改変体は、多様な理由（例えば、特定の宿主についてのコドン発現を至適化する（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを、Ｅ．ｃｏｌｉのような細菌宿主によって好ましいコドンに変化する））ために、生成され得る。
【０２２３】
天然に存在する改変体は、「対立遺伝子改変体」と呼ばれ、そして生物の染色体上の所定の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替の形態のうちの１つをいう。（Ｇｅｎｅｓ  ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，編  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子改変体は、ポリヌクレオチドレベルおよび／またはポリぺプチドレベルのいずれかで変化し得る。あるいは、天然に存在しない改変体は、変異誘発技術によってまたは直接的な合成によって生成され得る。
【０２２４】
タンパク質工学および組換えＤＮＡ技術の公知の方法を使用して、改変体は、本発明のポリぺプチドの特性を改善または変化するために作製され得る。例えば、１つ以上のアミノ酸は、生物学的機能の実質的な欠損を伴わずに、分泌タンパク質のＮ末端またはＣ末端から欠失され得る。Ｒｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４−２９８８（１９９３）の著者らは、３、８、または２７個のアミノ末端のアミノ酸残基を欠失した後であってもヘパリン結合活性を有する改変体ＫＧＦタンパク質を報告している。同様に、インターフェロンγは、このタンパク質のカルボキシ末端から８〜１０個のアミノ酸残基を欠失した後、１０倍までのより高い活性を示している（Ｄｏｂｅｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７：１９９−２１６（１９８８））。
【０２２５】
さらに、豊富な証拠は、改変体が、天然に存在するタンパク質の生物学的活性に類似する活性をしばしば保持することを実証する。例えば、Ｇａｙｌｅおよび共同研究者ら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２６８：２２１０５−２２１１１（１９９３））は、ヒトサイトカインＩＬ−１ａの広範囲にわたる変異分析を行った。彼らは、ランダムな変異誘発を使用して、分子の全長にわたって改変体当たり平均２．５アミノ酸の変化になる、３，５００個を超える個々のＩＬ−１ａ変異体を作製した。複数の変異が、全ての潜在的なアミノ酸の位置で試験された。この研究者らは、「分子の大部分は、結合活性または生物学的活性のいずれかに対してほとんど影響を伴わないで変化され得る」ことを見出した。（要約を参照のこと）。実際、試験された３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうち、わずか２３個の独特なアミノ酸配列が、野生型と活性が有意に異なるタンパク質を生成した。
【０２２６】
さらに、ポリぺプチドのＮ末端またはＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、１つ以上の生物学的機能の改変または欠失を生じたとしても、他の生物学的活性はなお保持され得る。例えば、分泌される形態を認識する抗体を誘導および／または結合する、欠失改変体の能力は、分泌される形態の残基の過半数未満が、Ｎ末端またはＣ末端から除去される場合に保持されるようである。タンパク質のＮ末端またはＣ末端残基を欠損する特定のポリぺプチドが、このような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載される、およびそうでなければ当該分野において公知の慣用の方法によって容易に決定され得る。
【０２２７】
従って、本発明はさらに、実質的な生物学的活性を示すポリぺプチド改変体を含む。このような改変体としては、活性に対する影響をほとんど有さないように、当該分野において公知の一般的な法則に従って選択される、欠失、挿入、逆位、反復、および置換が挙げられる。例えば、表現型的にサイレントなアミノ酸置換を作製する方法に関する指針は、Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１３０６−１３１０（１９９０）において提供され、ここで、著者らは変化に対するアミノ酸配列の寛容性を研究するための２つの主要なストラテジーがあることを指摘する。
【０２２８】
第１のストラテジーは、進化の過程の間の天然の選別によるアミノ酸置換の寛容を利用する。異なる種におけるアミノ酸配列を比較して、保存されるアミノ酸が同定され得る。これらの保存されるアミノ酸は、タンパク質の機能について重要であるようである。対照的に、置換が天然の選別によって寛容されたアミノ酸の位置は、これらの位置がタンパク質の機能に重要ではないことを示す。従って、アミノ酸置換を寛容する位置は改変され得るが、タンパク質の生物学的活性をなおも維持する。
【０２２９】
第２のストラテジーは、タンパク質機能に重要な領域を同定するために、クローン化された遺伝子の特定の位置でアミノ酸変化を導入するための遺伝子工学を使用する。例えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発（分子中の各残基で一づつのアラニン変異の導入）が、使用され得る。（ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５（１９８９））。次いで、得られた変異分子は生物学的活性について試験され得る。
【０２３０】
著者らが言及するように、これらの２つのストラテジーは、タンパク質がアミノ酸置換に驚くほど寛容であることを明らかにした。著者らはさらに、どのアミノ酸変化が、タンパク質中の特定のアミノ酸位置で許容されるようであるかを示す。例えば、最も埋もれている（タンパク質の三次構造内の）アミノ酸残基は、非極性側鎖を必要とするが、表面側鎖の特徴は、一般にほとんど保存されない。さらに、寛容される保存的なアミノ酸置換は、脂肪族または疎水性アミノ酸のＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの置換；水酸基残基のＳｅｒおよびＴｈｒの置換；酸性残基のＡｓｐおよびＧｌｕの置換；アミド残基のＡｓｎおよびＧｌｎの置換、塩基性残基のＬｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓの置換；芳香族残基のＰｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐの置換、ならびに小さなサイズのアミノ酸のＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、およびＧｌｙの置換を含む。
【０２３１】
保存的なアミノ酸置換以外に、本発明の改変体は、（ｉ）１つ以上の非保存的なアミノ酸残基の置換、ここでは置換されるアミノ酸残基は、遺伝コードによってコードされるアミノ酸残基であってもよくもしくはそうでなくてもよい、または（ｉｉ）置換基を有する１つ以上のアミノ酸残基での置換、または（ｉｉｉ）別の化合物（例えば、ポリぺプチドの安定性および／もしくは可溶性を増加するための化合物（例えば、ポリエチレングリコール））との成熟ポリぺプチドの融合、または（ｉｖ）さらなるアミノ酸（例えば、ＩｇＧ  Ｆｃ融合領域ペプチド、またはリーダーもしくは分泌配列、または精製を容易にする配列）とのポリぺプチドへの融合を含む。このような改変体ポリぺプチドは、本明細書中の教示から、当業者の範囲内であることが考えられる。
【０２３２】
例えば、他の荷電されたアミノ酸または中性のアミノ酸を用いる荷電されたアミノ酸のアミノ酸置換を含むポリぺプチド改変体は、改善された特性（例えば、より少ない凝集性）を伴うタンパク質を生成し得る。薬学的処方物の凝集は、凝集体の免疫原活性に起因して、活性を減少し、かつクリアランスを増加する。（Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１−３４０（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ３６：８３８−８４５（１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  １０：３０７−３７７（１９９３））。
【０２３３】
（ポリヌクレオチドおよびポリぺプチドフラグメント）
本発明において、「ポリヌクレオチドフラグメント」とは、寄託されたクローンに含まれるか、または配列番号Ｘにおいて示される核酸配列を有する短いポリヌクレオチドをいう。短いヌクレオチドフラグメントは、好ましくは、少なくとも約１５ヌクレオチド、およびより好ましくは少なくとも約２０ヌクレオチド、なおより好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、およびさらにより好ましくは少なくとも約４０ヌクレオチドの長さである。「少なくとも２０ヌクレオチドの長さ」のフラグメントは、例えば、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡ配列または配列番号Ｘにおいて示されるヌクレオチド配列からの２０個以上の連続した塩基を含むことが意図される。これらのヌクレオチドフラグメントは、本明細書中で考察されるように、診断プローブおよびプライマーとして有用である。もちろん、より大きなフラグメント（およそ５０、１５０、５００、６００、２０００ヌクレオチド）が好ましい。
【０２３４】
さらに、本発明のポリヌクレオチドフラグメントの代表的な例は、例えば、配列番号Ｘまたは寄託されたクローンにおいて含まれるｃＤＮＡのヌクレオチド番号のおよそ１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４０１〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６５１〜７００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８００〜８５０、８５１〜９００、９０１〜９５０、９５１〜１０００、１００１〜１０５０、１０５１〜１１００、１１０１〜１１５０、１１５１〜１２００、１２０１〜１２５０、１２５１〜１３００、１３０１〜１３５０、１３５１〜１４００、１４０１〜１４５０、１４５１〜１５００、１５０１〜１５５０、１５５１〜１６００、１６０１〜１６５０、１６５１〜１７００、１７０１〜１７５０、１７５１〜１８００、１８０１〜１８５０、１８５１〜１９００、１９０１〜１９５０、１９５１〜２０００、および２００１〜最後からの配列を有するフラグメントを含む。この状況において、「およそ」は、具体的に列挙される範囲、いずれかの末端もしくは両方の末端で、いくつか（５、４、３、２、もしくは１個）のヌクレオチドだけより大きなまたはより小さな範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、生物学的活性を有するポリぺプチドをコードする。より好ましくは、これらのポリヌクレオチドは、本明細書において考察されるようにプローブまたはプライマーとして使用され得る。
【０２３５】
本発明において、「ポリぺプチドフラグメント」とは、配列番号Ｙにおいて含まれ、または寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡによってコードされる、短いアミノ酸配列をいう。タンパク質フラグメントは、「自立構造（ｆｒｅｅ−ｓｔａｎｄｉｎｇ）」であり得るか、またはフラグメントが部分または領域を形成するより大きなポリぺプチド内に、最も好ましくは単一の連続した領域として、含まれ得る。本発明のポリぺプチドフラグメントの代表的な例は、例えばコード領域のアミノ酸番号の約１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜１００、１０２〜１２０、１２１〜１４０、１４１〜１６０、または１６１〜最後のフラグメントを含む。さらに、ポリぺプチドフラグメントは、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、または１５０アミノ酸の長さであり得る。この状況において、「約」は、具体的に列挙される範囲、いずれかの末端または両方の末端で、いくつかの（５、４、３、２、または１個）アミノ酸長だけより大きなまたはより小さな範囲を含む。
【０２３６】
好ましいポリぺプチドフラグメントは、分泌タンパク質および成熟形態を含む。さらに好ましいポリぺプチドフラグメントは、アミノ末端もしくはカルボキシ末端、またはその両方から、連続した一連の欠失された残基を有する、分泌タンパク質または成熟形態を含む。例えば、１〜６０個の範囲の任意の数のアミノ酸は、分泌ポリペプチドまたは成熟形態のいずれかのアミノ末端から欠失され得る。同様に、１〜３０個の範囲の任意数のアミノ酸は、分泌タンパク質または成熟形態のカルボキシ末端から欠失され得る。さらに、上述のアミノ末端およびカルボキシ末端の欠失の任意の組み合わせが好ましい。同様に、これらのポリぺプチドフラグメントをコードするポリヌクレオチドフラグメントもまた、好ましい。
【０２３７】
構造ドメインまたは機能ドメイン（例えば、αヘリックスおよびαヘリックス形成領域、βシートおよびβシート形成領域、ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両親媒性領域、可変領域、表面形成領域、基質結合領域、および抗原性指標の高い領域を含むフラグメント）によって特徴付けられるポリぺプチドおよびポリヌクレオチドのフラグメントもまた、好ましい。保存されるドメイン内にある配列番号Ｙのポリぺプチドフラグメントは、本発明によって具体的に意図される。さらに、これらのドメインをコードするポリヌクレオチドフラグメントもまた、意図される。
【０２３８】
他の好ましいフラグメントは、生物学的に活性なフラグメントである。生物学的に活性なフラグメントは、本発明のポリぺプチドの活性に類似の活性を示すが、必ずしも同一である必要はないフラグメントである。フラグメントの生物学活性は、改善された所望の活性、または減少された所望されない活性を含み得る。
【０２３９】
（エピトープおよび抗体）
本発明において、「エピトープ」とは、動物において、特にヒトにおいて、抗原性または免疫原性活性を有するポリぺプチドフラグメントをいう。本発明の好ましい実施態様は、エピトープを含むポリぺプチドフラグメント、およびこのフラグメントをコードするポリヌクレオチドに関する。抗体が結合し得るタンパク質分子の領域は、「抗原性エピトープ」と定義される。対照的に、「免疫原性エピトープ」は、抗体応答を誘発するタンパク質の一部と定義される。（例えば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３９９８−４００２（１９８３）を参照のこと）。
【０２４０】
エピトープとして機能するフラグメントは任意の従来の手段によって産生され得る（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ．Ｒ．Ａ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８２：５１３１−５１３５  （１９８５）、米国特許第４，６３１，２１１号でさらに記載される、を参照のこと）。
【０２４１】
本発明において、抗原性エピトープは、好ましくは少なくとも７つ、より好ましくは少なくとも９つ、そして最も好ましくは約１５〜約３０アミノ酸の間の配列を含む。抗原性エピトープは、エピトープに特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）を惹起するために有用である（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ  ３７：７６７−７７８  （１９８４）；  Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ，  Ｊ．Ｇ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２１９：  ６６０−６６６  （１９８３）を参照のこと）。
【０２４２】
同様に、免疫原性エピトープは、当該分野で周知の方法に従って抗体を誘導するために使用され得る（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；  Ｗｉｌｓｏｎら、前出；  Ｃｈｏｗ，  Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８２：  ９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅ，  Ｆ．  Ｊ．ら、Ｊ．  ＧｅｎＶｉｒｏｌ．  ６６：２３４７−２３５４  （１９８５）を参照のこと）。好ましい免疫原性エピトープは分泌タンパク質を含む。免疫原性エピトープは、動物系（例えば、ウサギまたはマウス）にアルブミンのようなキャリアタンパク質とともに提示され得るか、または免疫原性エピトープが十分に長い場合（少なくとも、約２５アミノ酸）には、キャリアなしで提示され得る。しかし、わずか８〜１０アミノ酸を含む免疫原性エピトープは、変性ポリペプチドにおいて（例えば、ウエスタンブロッティングにおいて）、少なくとも線状エピトープに結合し得る抗体を惹起するのに十分であることが示されている。
【０２４３】
本明細書中で使用される用語「抗体」（Ａｂ）または「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）は、タンパク質に特異的に結合し得るインタクトな分子および抗体フラグメント（例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント）を含むことを意味する。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、インタクトな抗体のＦｃフラグメントを欠損し、循環からより迅速に排除され、そしてインタクトな抗体よりも少ない非特異的組織結合を有し得る。（Ｗａｈｌら、  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  ２４：  ３１６−３２５  （１９８３））。従って、これらのフラグメントは、ＦＡＢの産物または他の免疫グロブリン発現ライブラリーと同様に好ましい。さらに、本発明の抗体はキメラ抗体、単鎖抗体、およびヒト化抗体を含む。
【０２４４】
（融合タンパク質）
本発明の任意のポリペプチドは、融合タンパク質を産生するために使用され得る。例えば、本発明のポリペプチドは、第２のタンパク質と融合される場合、抗原性タグとして使用され得る。本発明のポリペプチドに対して惹起される抗体は、ポリペプチドに結合することによって、第２のタンパク質を間接的に検出するために使用され得る。さらに、分泌されるタンパク質は、細胞位置を輸送シグナルに基づいて標的化するので、本発明のポリペプチドは、他のタンパク質に一旦融合されると標的化分子として使用され得る。
【０２４５】
本発明のポリペプチドと融合され得るドメインの例は、異種シグナル配列のみならず、また他の異種機能性領域をも含む。融合は、必ずしも直接的である必要はないが、リンカー配列を介して起こり得る。
【０２４６】
さらに、融合タンパク質はまた、本発明のポリペプチドの特徴を改良するために操作され得る。例えば、さらなるアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域が、宿主細胞からの精製または続く取り扱いおよび貯蔵の間の安定性および持続性を改良するためにポリペプチドのＮ末端へ付加され得る。また、ペプチド部分は精製を容易にするためにポリペプチドへ付加され得る。このような領域は、ポリペプチドの最終調製の前に除去され得る。ポリペプチドの取り扱いを容易にするためのペプチド部分の付加は、当該分野でよく知られる慣用の技術である。
【０２４７】
さらに、本発明のポリペプチド（フラグメント、そして特にエピトープを含む）は、免疫グロブリン（ＩｇＧ）の定常ドメインの一部と組み合わせられ得、キメラポリぺプチドを生じる。これらの融合タンパク質は精製を容易にし、そしてインビボにおける増大した半減期を示す。１つの報告された例は、ヒトＣＤ４ポリペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質を記載している（ＥＰ  Ａ  ３９４，８２７；  Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：  ８４−８６（１９８８））。ジスルフィド連結二量体構造（ＩｇＧに起因する）を有する融合タンパク質もまた、単量体分泌タンパク質またはタンパク質フラグメント単独よりも、他の分子に結合しそして中和するのにさらに効率的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２７０：  ３９５８−３９６４  （１９９５））。
【０２４８】
同様に、ＥＰ−Ａ−Ｏ  ４６４  ５３３（カナダ国対応特許第２０４５８６９号）は、別のヒトタンパク質またはその部分とともに免疫グロブリン分子の定常領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパク質のＦｃ部分は、治療および診断において有益であり、従って、例えば、改良された薬物動態学的な特性を生じ得る（ＥＰ−Ａ  ０２３２  ２６２）。あるいは、融合タンパク質が発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分を欠失させることが望ましい。例えば、融合タンパク質が免疫化のための抗原として使用される場合、Ｆｃ部分は、治療および診断を妨害し得る。例えば、薬物の発見において、ｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するための高処理能力スクリーニングアッセイの目的のためにＦｃ部分と融合されてきた（Ｄ．  Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ８：５２−５８  （１９９５）；  Ｋ．  Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：  ９４５９−９４７１  （１９９５）を参照のこと）。
【０２４９】
さらに、本発明のポリペプチドはマーカー配列（例えば、融合されたポリペプチドの精製を容易にするペプチド）に融合され得る。好ましい実施態様において、マーカーアミノ酸配列は、とりわけヘキサ−ヒスチジンペプチド（例えば、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，  Ｉｎｃ．，  ９２５９  Ｅｔｏｎ  Ａｖｅｎｕｅ，  Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，  ＣＡ，  ９１３１１）において提供されるタグ）であり、これらの多くのマーカーアミノ酸配列が市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：  ８２１−８２４（１９８９）に記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の都合の良い精製を提供する。精製のために有用な別のペプチドタグである「ＨＡタグ」は、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する（Ｗｉｌｓｏｎら、  Ｃｅｌｌ  ３７：  ７６７  （１９８４））。
【０２５０】
従って、任意のこれら上記の融合物は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを使用して操作され得る。
【０２５１】
（ベクター、宿主細胞、およびタンパク質産生）
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、宿主細胞、および組換え技術によるポリペプチドの産生に関連する。例えば、ベクターは、ファージベクター、プラスミドベクター、ウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターであり得る。レトロウイルスベクターは、複製コンピテント、または複製欠損であり得る。後者の場合、一般的にウイルス増殖は、補完性（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｉｎｇ）宿主細胞にのみ生じる。
【０２５２】
ポリヌクレオチドは、宿主における増殖のために選択マーカーを含むベクターに連結され得る。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈澱のような沈澱物、または荷電脂質との複合体において導入される。ベクターがウイルスである場合、ウィルスベクターは、適切なパッケージング細胞株を使用してインビトロでパッケージングされ、次いで宿主細胞に形質導入され得る。
【０２５３】
ポリヌクレオチド挿入物は、適切なプロモーター（いくつか挙げれば、例えば、ファージλＰＬプロモーター、Ｅ．  ｃｏｌｉ  ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、ｐｈｏＡプロモーターおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーターおよびＳＶ４０後期プロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲのプロモーター）に作動可能に連結されるべきである。他の適切なプロモーターは当業者に公知である。発現構築物はさらに、転写開始、転写終結のための部位、および転写領域において、翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。構築物によって発現される転写物のコード部分は、好ましくは、始めに翻訳開始コドン、および翻訳されるためのポリペプチドの末端に適切に位置される終結コドン（ＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含む。
【０２５４】
示されるように、発現ベクターは、好ましくは少なくとも１つの選択マーカーを含む。このようなマーカーは、真核細胞培養のためのジヒドロ葉酸レダクターゼ、Ｇ４１８、またはネオマイシン耐性遺伝子、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他の細菌において培養するためのテトラサイクリン、カナマイシンまたはアンピシリン耐性遺伝子を含む。適切な宿主の代表的な例は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ細胞）；酵母細胞のような真菌細胞；Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌｉａ  Ｓ２およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  Ｓｆ９細胞のような昆虫細胞；ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、２９３細胞、およびＢｏｗｅｓメラノーマ細胞のような動物細胞；ならびに植物細胞を含むが、これらに限定されない。上記の宿主細胞のための適切な培養培地および条件は、当該分野で公知である。
【０２５５】
細菌における使用のために好ましいベクターの中には、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０およびｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮ，  Ｉｎｃ．から入手可能）；ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．から入手可能）；およびｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，  Ｉｎｃ．から入手可能）を含む。好ましい真核生物ベクターの中には、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）がある。他の適切なベクターは当業者に容易に明らかである。
【０２５６】
宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、または他の方法によってもたらされ得る。このような方法は、Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （１９８６）のような多くの標準的研究室マニュアルに記載される。本発明のポリペプチドは、実際、組換えベクターを欠損する宿主細胞によって発現され得ることが特に意図される。
【０２５７】
本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウム沈澱またはエタノール沈澱、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収され得、そして精製され得る。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）が精製のために使用される。
【０２５８】
本発明のポリペプチド、および好ましくは分泌形態はまた、以下から回収され得る：直接単離されるかまたは培養されるかにかかわらず、体液、組織および細胞を含む天然の供給源から精製された産物；化学的合成手順の産物；ならびに、例えば、細菌細胞、酵母細胞、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を含む、原核生物宿主または真核生物宿主から組換え技術によって産生された産物。組換え産生手順に使用される宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グリコシル化されてもまたはグリコシル化されていなくてもよい。さらに、本発明のポリペプチドもまた、宿主媒介プロセスの結果として、いくつかの場合において、最初の改変されたメチオニン残基を含み得る。従って、一般に、翻訳開始コドンによってコードされるＮ末端メチオニンが、すべての真核生物細胞における翻訳後の任意のタンパク質から高い効率で除去されることは当該分野において周知である。ほとんどのタンパク質においてＮ末端メチオニンもまた、ほとんどの原核生物において効果的に除去されるが、いくつかのタンパク質について、この原核生物除去プロセスは、Ｎ末端メチオニンが共有結合するアミノ酸の性質に依存しており、非効率的である。
【０２５９】
（ポリヌクレオチドの使用）
本明細書中で同定された各々のポリヌクレオチドは、試薬として多数の方法において使用され得る。以下の説明は例示的であるとみなされるべきであり、そして公知の技術を利用する。
【０２６０】
本発明のポリヌクレオチドは、染色体同定のために有用である。実際の配列データ（反復多型性）に基づく染色体マーキング試薬で、現在利用可能であるのはわずかであるため、新しい染色体マーカーを同定する必要性が存在するままである。本発明の各々のポリヌクレオチドは、染色体マーカーとして使用され得る。
【０２６１】
簡単に言うと、配列は、配列番号Ｘで示される配列からＰＣＲプライマー（好ましくは１５〜２５ｂｐ）を調製することによって染色体にマッピングされ得る。プライマーが、ゲノムＤＮＡ中の１つより多くの予測されたエキソンにまたがらないように、プライマーは、コンピューター分析を使用して選択され得る。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために使用される。配列番号Ｘに対応するヒト遺伝子を含むそれらのハイブリッドのみが、増幅したフラグメントを産生する。
【０２６２】
同様に、体細胞ハイブリッドは、特定の染色体に対してポリヌクレオチドをＰＣＲマッピングする迅速な方法を提供する。単一のサーマルサイクラーを使用して１日あたり３つ以上のクローンが割り当てられ得る。さらに、ポリヌクレオチドの準局在化（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、特定の染色体フラグメントのパネルで達成され得る。使用され得る他の遺伝子マッピング戦略は、インサイチュハイブリダイゼーション、標識フローソート（ｌａｂｅｌｅｄ  ｆｌｏｗ  ｓｏｒｔｅｄ）染色体でのプレスクリーニング、および染色体特異的ｃＤＮＡライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによる前選択を含む。
【０２６３】
ポリヌクレオチドの正確な染色体位置はまた、中期染色体スプレッド（ｓｐｒｅａｄ）の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して達成され得る。この技術は５００または６００塩基ほどの短さのポリヌクレオチドを使用する；しかし２，０００〜４，０００ｂｐのポリヌクレオチドが好ましい。この技術の総説に関しては、Ｖｅｒｍａら、「Ｈｕｍａｎ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：  ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８８）を参照のこと。
【０２６４】
染色体マッピングについては、ポリヌクレオチドは、個々に（単一染色体またはその染色体上の単一部位をマークするために）またはパネルで（複数部位および／または複数染色体をマークするために）使用され得る。好ましいポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡの非コード領域に対応する。なぜなら、コード配列は、遺伝子ファミリー内により保存される傾向があり、従って、染色体マッピングの間の交叉ハイブリダイゼーションの機会が増加するからである。
【０２６５】
一旦、ポリヌクレオチドが正確な染色体位置にマップされると、ポリヌクレオチドの物理的位置は、連鎖分析において使用され得る。連鎖分析は、染色体位置と特定の疾患の提示との間の同時遺伝（ｃｏｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ）を確立する。（疾患マッピングデータは、例えば、Ｖ．  ＭｃＫｕｓｉｃｋ，  Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ  Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｗｅｌｃｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙを通してオンラインで利用可能である）において見い出される）。１メガベースマッピング解像度および２０ｋｂあたり１遺伝子と仮定すると、疾患と関連する染色体領域に正確に配置されるｃＤＮＡは、５０〜５００の潜在的な原因遺伝子の１つであり得る。
【０２６６】
従って、一旦、同時遺伝が確立されると、罹患個体と非罹患個体との間でのポリヌクレオチドおよび対応する遺伝子における差異が試験され得る。まず、染色体中の可視的構造改変（例えば、欠損または転位）は染色体スプレッドにおいて、またはＰＣＲによって試験される。構造的改変が存在しない場合、点変異の存在が確認される。何人かのまたは全ての罹患された個体で観察されたが、正常な個体では観察されなかった変異は、変異が疾患を引き起こし得ることを示す。しかし、いくつかの正常な個体由来のポリペプチドおよび対応する遺伝子の完全な配列決定は、多型性を変異と区別するために要求される。新しい多型性が同定される場合、この多型ポリペプチドはさらなる連鎖分析のために使用され得る。
【０２６７】
さらに、非罹患個体と比較した罹患個体の遺伝子の増加または減少した発現が、本発明のポリヌクレオチドを使用して評価され得る。任意のこれらの改変（改変された発現、染色体再配置、または変異）は、診断マーカーまたは予後マーカーとして使用され得る。
【０２６８】
前記に加えて、ポリヌクレオチドは、三重らせん形成またはアンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡによって遺伝子発現を制御するために使用され得る。両方の方法は、ＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に依存する。これらの技術に関して、好ましいポリヌクレオチドは通常、２０〜４０塩基長であり、そして転写に関与する遺伝子領域（三重らせん−Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．６：３０７３  （１９７９）；  Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４１：  ４５６  （１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：  １３６０  （１９９１）を参照のこと）またはｍＲＮＡ自体（アンチセンス−Ｏｋａｎｏ，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  ５６：５６０  （１９９１）；  Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  ＦＬ  （１９８８））のいずれかに相補的である。三重らせん形成は、最適にはＤＮＡからのＲＮＡ転写を遮断するが、アンチセンスＲＮＡハイブリダイゼーションは、ポリペプチドへのｍＲＮＡ分子の翻訳を阻止する。両方の技術は、モデル系において効果的であり、そして本明細書に開示される情報は、疾患を処置するための試みにおいて、アンチセンスまたは三重らせんポリヌクレオチドを設計するために使用され得る。
【０２６９】
本発明のポリヌクレオチドはまた、遺伝子治療において有用である。遺伝子治療の１つの目標は、遺伝子欠損を修正する試みにおいて、欠損遺伝子を有する生物へ正常遺伝子を挿入することである。本発明に開示されるポリヌクレオチドは、高度に正確な様式でこのような遺伝子欠損を標的とする手段を提供する。別の目標は、宿主ゲノム中には存在しなかった新しい遺伝子を挿入することであり、それによって宿主細胞中に新しい形質を生成する。
【０２７０】
ポリヌクレオチドはまた、微小な生物学的サンプルから個体を同定するために有用である。例えば、米国軍は、その職員を同定するために制限フラグメント長の多型性（ＲＦＬＰ）の使用を考慮している。この技術において、個体のゲノムＤＮＡは１つ以上の制限酵素で消化され、そして職員を同定するため固有なバンドを生じるためのサザンブロットについてプローブされる。この方法は、「認識票（Ｄｏｇ  ｔａｇ）」（これは、失われたり、交換されたり、または盗まれたりすることにより、ポジティブな同定を困難にし得る）の現在の限界を受けない。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＦＬＰのためのさらなるＤＮＡマーカーとして使用され得る。
【０２７１】
本発明のポリヌクレオチドはまた、個体のゲノムの選択された部分の実際の塩基ごとのＤＮＡ配列を決定することによって、ＲＦＬＰのための代替として使用され得る。これらの配列は、このような選択されたＤＮＡ（これは、次いで配列決定され得る）を増幅しそして単離するためにＰＣＲプライマーを調製するために使用され得る。各個体が固有のセットのＤＮＡ配列を有するので、この技術を使用して、個体が同定され得る。一旦、固有のＩＤデータベースが個体について確立されると、個体が生存していようとまたは死亡していようとにかかわらず、個体のポジティブ同定が、極めて小さな組織サンプルから作製され得る。
【０２７２】
法医学生物学もまた、本明細書に開示されるようなＤＮＡに基づく同定技術を使用して利益を得る。組織（例えば、髪または皮膚）、または体液（例えば、血液、唾液、精液など）のような非常にわずかな生物学的サンプルから得られたＤＮＡ配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。ある先行技術において、ＤＱａクラスＩＩ  ＨＬＡ遺伝子のような多型性遺伝子座から増幅された遺伝子配列は、個体を同定するための法医学生物学において使用される。（Ｅｒｌｉｃｈ，  Ｈ．，  ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．  （１９９２））。一旦、これらの特異的多型性遺伝子座が増幅されると、これらは１つ以上の制限酵素で消化される。これは、ＤＱａクラスＩＩ  ＨＬＡ遺伝子に対応するＤＮＡでプローブされたサザンブロットについてのバンドの同定するセットを生じる。同様に、本発明のポリヌクレオチドは、法医学的目的のための多型性マーカーとして使用され得る。
【０２７３】
また、特定の組織の供給源を同定し得る試薬についての必要性が存在する。例えば、未知の起源の組織が提供される場合、法医学においてこのような必要性が生じる。適切な試薬は、例えば、本発明の配列から調製される特定の組織に特異的なＤＮＡプローブまたはプライマーを含み得る。このような試薬のパネルは、種および／または器官型によって組織を同定し得る。同様の様式で、これらの試薬は、夾雑物について組織培養物をスクリーニングするために使用され得る。
【０２７４】
少なくとも、本発明のポリヌクレオチドは、サザンゲルでの分子量マーカーとして、特定の細胞型における特定のｍＲＮＡの存在に関する診断プローブとして、新規なポリヌクレオチドを発見するプロセスでの公知の配列を「差し引き」するためのプローブとして、「遺伝子チップ」または他の支持体に付着させるためのオリゴマーを選択および作製するため、ＤＮＡ免疫技術を用いて抗ＤＮＡ抗体を惹起させるため、および免疫応答を誘発する抗原として、使用され得る。
【０２７５】
（ポリペプチドの使用）
本明細書中に同定される各ポリペプチドは、多くの方法に使用され得る。以下の説明は、例示としてみなされるべきであり、そして公知の技術を使用する。
【０２７６】
本発明のポリペプチドは、抗体に基づいた技術を使用して生物学的サンプル中のタンパク質レベルをアッセイするために使用され得る。例えば、組織におけるタンパク質発現は、古典的な免疫組織化学法を用いて研究され得る（Ｊａｌｋａｎｅｎ，  Ｍ．ら、  Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  １０１：９７６−９８５（１９８５）；  Ｊａｌｋａｎｅｎ，  Ｍ．ら、Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  １０５：３０８７−３０９６（１９８７））。タンパク質遺伝子発現を検出するのに有用である、抗体に基づいた他の方法には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）のような免疫アッセイが含まれる。適切な抗体アッセイの標識は、当該技術分野で公知であり、そして例えば、グルコースオキシダーゼのような酵素標識、ならびにヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１２Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９ｍＴｃ）のような放射性同位体、ならびにフルオレセインおよびローダミンのような蛍光標識、ならびにビオチンが挙げられる。
【０２７７】
生物学的サンプル中の分泌タンパク質レベルをアッセイすることに加えて、タンパク質はまた、画像化によりインビボで検出され得る。タンパク質をインビボで画像化するための抗体の標識またはマーカーとしては、Ｘ線ラジオグラフィー、ＮＭＲまたはＥＳＲにより検出可能なものが挙げられる。Ｘ線ラジオグラフィーについては、適切な標識は、検出可能な放射線を発するが、被験体に対して明白に有害ではないバリウムまたはセシウムのような放射性同位体を含む。ＮＭＲおよびＥＳＲに適切なマーカーには、例えば重水素のような検出可能な特徴的なスピンを有するものが含まれ、これは、関連したハイブリドーマのための栄養素を標識することにより抗体に取り込まれ得る。
【０２７８】
放射性同位体（例えば、１３１Ｉ、１１２Ｉｎ、９９ｍＴｃ）、放射線不透過性物質、または核磁気共鳴により検出可能な材料のような適切な検出可能な画像化部分で標識された、タンパク質特異的抗体または抗体フラグメントは、哺乳動物に（例えば、非経口的、皮下、または腹腔内に）導入される。被験体のサイズおよび用いられる画像化システムは、診断画像を生成するために必要な画像化部分の量を決定することが当該分野で理解される。放射性同位体部分の場合には、ヒト被験体について、注射される放射能の量は、通常、９９ｍＴｃの約５〜２０ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体または抗体フラグメントは、特定のタンパク質を含む細胞の位置に優先的に蓄積される。インビボ腫瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．  Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈｅ  Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒの第１３章、Ｓ．Ｗ．  ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．  Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｉｎｃ．（１９８２）に記載される。
【０２７９】
従って、本発明は、障害の診断方法を提供し、この方法は、（ａ）個体の細胞または体液中の本発明のポリペプチドの発現をアッセイする工程；（ｂ）この遺伝子発現レベルを標準の遺伝子発現レベルと比較する工程を包含し、これによって、標準的な発現レベルと比較して、アッセイされたポリペプチドの遺伝子発現レベルの増加または減少が、障害の指標になる。
【０２８０】
さらに、本発明のポリペプチドを用いて疾患を処置し得る。例えば、患者は、ポリペプチド（例えば、インスリン）の非存在またはレベルの減少を元に戻すこと、異なるポリペプチド（例えば、ヘモグロビンＢに対するヘモグロビンＳ）の非存在またはレベルの減少を補充すること、ポリペプチド（例えば、ガン遺伝子）の活性を阻害すること、ポリペプチドの活性を（例えば、レセプターに結合することによって）活性化すること、遊離リガンド（例えば、炎症を低減させる際に用いられる可溶性ＴＮＦレセプター）と膜結合レセプターと競合させることによって膜結合レセプターの活性を減少させること、または所望の応答（例えば、血管の増殖）をもたらすことに取り組む際に、本発明のポリペプチドが投与され得る。
【０２８１】
同様に、本発明のポリペプチドに指向される抗体もまた使用されて疾患を処置し得る。例えば、本発明のポリペプチドに指向される抗体の投与によって、ポリペプチドに結合して、そしてポリペプチドの過剰産生を低減し得る。同様に、抗体の投与によって、例えば、膜に結合したポリペプチド（レセプター）へ結合することにより、ポリペプチドを活性化し得る。
【０２８２】
少なくとも本発明のポリペプチドは、当業者に周知の方法を用いるＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルまたは分子ふるいゲル濾過カラムの分子量マーカーとして使用され得る。ポリペプチドを用いてもまた、抗体を惹起し得、次いで、この抗体を使用して、宿主細胞の形質転換を評価する方法として、組換え細胞からのタンパク質発現を測定する。さらに、本発明のポリペプチドを使用して、以下の生物学的活性を試験し得る。
【０２８３】
（生物学的活性）
本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドをアッセイに用いて、１つ以上の生物学的活性について試験し得る。これらのポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、特定のアッセイにおいて活性を示すならば、これらの分子は、生物学的活性に関連した疾患に関与し得る可能性が高い。従って、このポリヌクレオチドおよびポリペプチドを用いて、関連する疾患を処置し得る。
【０２８４】
（免疫活性）
本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、免疫細胞の増殖、分化、または移動（走化性）の活性化もしくは阻害によって、免疫系の不全または障害を処置するのに有用であり得る。免疫細胞は、造血と称されるプロセス、すなわち、多能性幹細胞から骨髄性細胞（血小板、赤血球、好中球、およびマクロファージ）およびリンパ系（ＢおよびＴリンパ球）細胞を産生するプロセスを介して発生する。これらの免疫不全または障害の病因は、遺伝性、体細胞性（例えば、ガンまたはいくつかの自己免疫障害）、後天性（例えば、化学治療または毒素による）、または感染性であり得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、特定の免疫系疾患または障害のマーカーまたは検出因子として使用され得る。
【０２８５】
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、造血細胞の不全または障害を処置または検出するに有用であり得る。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを使用して、特定の（または多くの）型の造血細胞の減少に関連する障害を処置するための取り組みにおいて、多能性幹細胞を含む造血細胞の分化および増殖を増加させ得る。免疫学的な不全症候群の例には、以下が挙げられるがそれらに限定されない：血液タンパク質障害（例えば、無ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症）、毛細血管拡張性運動失調、分類不能型免疫不全、ディ・ジョージ症候群、ＨＩＶ感染、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ感染、白血球接着不全症候群、リンパ球減少、食細胞殺菌機能不全、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）、ヴィスコット−オールドリッチ障害、貧血、血小板減少症、または血色素尿。
【０２８６】
さらに、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、止血活性（出血を停止する）または血栓崩壊活性（血餅の形成）を調節するために使用され得る。例えば、止血または血栓崩壊活性を増加させることによって、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、血液凝固障害（例えば、無フィブリノーゲン血症、因子欠乏）、血液血小板障害（例えば、血小板減少症）、または外傷、手術もしくは他の原因から生じる創傷を処置するために使用され得る。あるいは、止血活性または血栓崩壊活性を減少させ得る、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを用いて、凝固を阻害または溶解し得る。これらの分子は、心臓発作（梗塞）、発作、または瘢痕の処置に重要であり得る。
【０２８７】
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドはまた、自己免疫障害を処置または検出するのに有用であり得る。多くの自己免疫障害は、免疫細胞によって、自己を外来物質として不適切に認識することからもたらされる。この不適切な認識は、宿主組織の破壊を導く免疫応答を生じる。それゆえ、免疫応答、特にＴ細胞の増殖、分化、または走化性を阻害する本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドの投与は、自己免疫障害を予防するのに有効な治療であり得る。
【０２８８】
本発明によって処置または検出され得る自己免疫障害の例としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：アディソン病、溶血性貧血、抗リン脂質症候群、慢性関節リウマチ、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーヴズ病、多発性硬化症、重症筋無力症、神経炎、結膜炎、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、多発性内分泌腺症、紫斑、ライター病、スティッフマン症候群、自己免疫性甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫性肺炎症、ギヤンバレー症候群、インスリン依存性糖尿病、および自己免疫炎症性眼病。
【０２８９】
同様に、例えば、喘息（特にアレルギー性喘息）または他の呼吸問題のようなアレルギー性反応および状態はまた、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドにより処置され得る。さらに、これらの分子を用いてアナフィラキシー、抗原性分子に対する過敏症、または血液型不適合性を処置し得る。
【０２９０】
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドはまた、器官拒絶または対宿主性移植片拒絶（ＧＶＨＤ）を処置および／または予防するために用いられ得る。器官拒絶は、宿主免疫細胞が免疫応答を介して移植された組織を破壊することにより生じる。同様に、免疫応答はまた、ＧＶＨＤに関与しているが、この場合、外来の移植された免疫細胞は宿主組織を破壊する。免疫応答、特にＴ細胞の増殖、分化、または走化性を阻害する本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドの投与は、器官拒絶またはＧＶＨＤを予防するのに有効な治療であり得る。
【０２９１】
同様に、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、炎症を調節するために用いられ得る。例えば、このポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、炎症性応答に関与する細胞の増殖および分化を阻害し得る。これらの分子は、以下を含む炎症状態（急性および慢性の両方の状態）を処置するために使用され得る：感染に関連した炎症（例えば、敗血症性ショック、敗血症、または全身性炎症応答症候群（ＳＩＲＳ））、虚血性再灌流傷害、内毒素死亡、関節炎、補体媒介性超急性拒絶、腎炎、サイトカインまたはケモカイン誘導性肺傷害、炎症性腸疾患、クローン病、またはサイトカイン（例えば、ＴＮＦまたはＩＬ−１）の過剰産生からもたらされる状態。
【０２９２】
（過剰増殖性障害）
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、新生物を含む過剰増殖性障害を処置または検出するために使用され得る。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、直接的相互作用または間接的相互作用を介して障害の増殖を阻害し得る。あるいは、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、過剰増殖性障害を阻害し得る他の細胞を増殖させ得る。
【０２９３】
例えば、免疫応答を増加させることによって、特に過剰増殖性障害の抗原性の質を上げることによって、またはＴ細胞の増殖、分化、もしくは遊走によって、過剰増殖性障害は処置され得る。この免疫応答は、存在する免疫応答を増強させるかまたは新たな免疫応答を開始させるかのいずれかによって上昇され得る。あるいは、免疫応答の減少はまた、化学療法剤のような過剰増殖性障害を処置する方法であり得る。
【０２９４】
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドにより処置されるかまたは検出され得る過剰増殖性障害の例には、以下に見出される新生物が含まれるがこれらに限定されない：腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭部および頸部、神経（中枢および末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部、ならびに泌尿生殖器。
【０２９５】
同様に、他の過剰増殖性障害もまた、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドにより処置または検出され得る。このような過剰増殖性障害の例には、以下が挙げられるがこれらに限定されない：高ガンマグロブリン血症、リンパ球増殖性障害、パラプロテイン血症、紫斑病、サルコイドーシス、セザリー症候群、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ゴシェ病、組織球増殖症、および任意のその他の過剰増殖性疾患、加えて上記に列挙した器官系に見出される新生物。
【０２９６】
（感染性疾患）
本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、感染因子を処置または検出するために用いられ得る。例えば、免疫応答を上昇させることによって、特にＢ細胞および／またはＴ細胞の増殖および分化を増加させることによって、感染性疾患が処置され得る。免疫応答は、存在する免疫応答を上昇させるか、または新たな免疫応答を開始させるかのいずれかにより上昇され得る。あるいは、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、必ずしも免疫応答を誘発することなく、感染因子を直接阻害し得る。
【０２９７】
ウイルスは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドにより処置または検出され得る疾患または症状を引き起こし得る感染因子の一例である。ウイルスの例としては、以下のＤＮＡおよびＲＮＡウイルス科が挙げられるがこれらに限定されない：アルボウイルス、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アルテリウイルス、ビルナウイルス科、ブニヤウイルス科、カリチウイルス科、サルコウイルス科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科、フラビウイルス科、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例えば、サイトメガロウイルス、単純ヘルペス、ヘルペス帯状疱疹）、モノネガウイルス（Ｍｏｎｏｎｅｇａｖｉｒｕｓ）（例えば、パラミクソウイルス科、モルビリウイルス、ラブドウイルス科）、オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザ）、パポーバウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイルス科（例えば、痘瘡またはワクシニア）、レオウイルス科（例えば、ロタウイルス）、レトロウイルス科（ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウイルス）、およびトガウイルス科（例えば、ルビウイルス属）。これらの科内に入るウイルスは、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：関節炎、細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、脳炎、眼性感染症（例えば、結膜炎、角膜炎）、慢性疲労症候群、肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型、活動性慢性、デルタ）、髄膜炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ）、肺炎、バーキットリンパ腫、水痘、出血熱、麻疹、流行性耳下腺炎、パラインフルエンザ、狂犬病、感冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染症、皮膚病（例えば、カポージ、いぼ）、およびウイルス血症。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、任意のこれらの症状または疾患が処置または検出され得る。
【０２９８】
同様に、疾患または症状を引き起こし得、かつ本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドによって処置または検出され得る細菌性因子または真菌性因子は、以下のグラム陰性およびグラム陽性細菌科および真菌類を含むがこれらに限定されない：Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ（例えば、Ａｎｔｈｒａｘ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｂｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａｔｏｃｙｃｏｓｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏｓｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｔａｌｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａの感染症（例えば、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｃｅａｅ、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ、およびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ。これらの細菌または真菌の科は、以下を含むがこれらに限定されない疾患または症状を引き起こし得る：菌血症、心内膜炎、眼感染症（結膜炎、結核、ブドウ膜炎）、歯肉炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳに関連した感染症）、爪周囲炎、プロテーゼ関連感染症、ライター病、気道感染症（例えば、百日咳または蓄膿症）、敗血症、ライム病、ネコ引っ掻き病、赤痢、パラチフス熱、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄膜炎、クラミジア、梅毒、ジフテリア、ライ病、パラ結核、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマチ熱、猩紅熱、性感染病、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅｒｍａｔｏｃｙｃｏｓｅｓ））、毒血症、尿路感染症、創傷感染症。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、任意のこれらの症状または疾患を処置または検出し得る。
【０２９９】
さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドにより処置または検出され得る疾患または症状を引き起こす寄生生物性因子としては以下のファミリーが挙げられるがこれらに限定されない：アメーバ、バベシア、コクシジウム、クリプトスポリジウム、二核アメーバ、交疫、外部寄生生物、ジアルジア鞭毛虫、蠕虫、リーシュマニア、タイレリア、トキソプラスマ、トリパノソーマ、およびトリコモナス。これらの寄生生物は、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：疥癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（例えば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠合併症、およびトキソプラスマ。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、任意のこれらの症状または疾患を処置または検出し得る。
【０３００】
好ましくは、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いる処置は、患者に有効量のポリペプチドを投与するか、または患者から細胞を取り出して、本発明のポリヌクレオチドをこの細胞に供給し、そして患者に操作した細胞を戻す（エキソビボ治療）かのいずれかによるものであり得る。さらに、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはワクチン中の抗原として用いられて、感染性疾患に対する免疫応答を惹起し得る。
【０３０１】
（再生）
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを用いて、細胞を分化させ、増殖させ、そして誘引して、組織の再生を導き得る（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６：５９−８７（１９９７）を参照のこと）。組織の再生を用いて、先天性欠損、外傷（創傷、熱傷、切開、または潰瘍）、加齢、疾患（例えば、骨粗鬆症、変形性関節炎（ｏｓｔｅｏｃａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、歯周病、肝不全）、美容形成手術を含む手術、線維症、再灌流傷害、または全身性サイトカイン損傷により損傷を受けた組織を修復、置換、または保護し得る。
【０３０２】
本発明を用いて再生し得る組織としては、以下が挙げられる：器官（例えば、膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮）、筋肉（平滑筋、骨格筋、または心筋）、脈管（脈管内皮を含む）、神経、造血、および骨格（骨、軟骨、腱、および靭帯）の組織。好ましくは、再生は、瘢痕なく、または瘢痕が低減されて生じる。再生はまた、新脈管形成を含み得る。
【０３０３】
さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、治癒するのが困難な組織の再生を増加し得る。例えば、腱／靭帯再生を増大させることによって、損傷後の回復時間が早まる。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドはまた、損傷を回避する試みにおいて予防的に使用され得る。処置され得る特定の疾患は、腱炎、手根管症候群、および他の腱欠損または靭帯欠損を含む。非治癒創傷の組織再生のさらなる例は、褥瘡性潰瘍、脈管不全、外科的創傷、および外傷性創傷に関連する潰瘍を含む。
【０３０４】
同様に、神経および脳組織はまた、神経細胞を増殖および分化させるために本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを使用することによって再生され得る。本方法を用いて処置され得る疾患は、中枢神経系疾患および末梢神経系疾患、神経障害、または機械的および外傷性障害（例えば、脊髄障害、頭部外傷、脳血管疾患、および発作（ｓｔｏｋｅ））を含む。詳細には、末梢神経傷害と関連する疾患、末梢神経障害（例えば、化学療法または他の医学的療法から生じる）、局在神経障害、および中枢神経系疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、およびシャイ−ドレーガー症候群）はすべて、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを用いて処置され得る。
【０３０５】
（走化性）
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、走化性活性を有し得る。走化性分子は、細胞（例えば、単球、線維芽細胞、好中球、Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球、上皮細胞、および／または内皮細胞）を、身体中の特定の部位（例えば、炎症、感染、または過剰増殖の部位）に誘引または移動させる。次いで、移動した細胞は、特定の外傷または異常性を撃退および／または治癒し得る。
【０３０６】
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、特定の細胞の走化性活性を増大し得る。次いで、これらの走化性分子を使用して、身体中の特定の位置に標的化した細胞の数を増加させることによって、炎症、感染、過剰増殖性障害、または任意の免疫系障害を処置し得る。例えば、走化性分子を使用して、免疫細胞を傷害を受けた位置に誘引することによって、組織に対する創傷および他の外傷を処置し得る。本発明の走化性分子はまた、線維芽細胞を誘引し得、これは創傷を処置するために使用され得る。
【０３０７】
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが走化性活性を阻害し得ることもまた意図される。これらの分子はまた、障害を処置するために使用され得る。従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、走化性のインヒビターとして使用され得る。
【０３０８】
（結合活性）
本発明のポリペプチドは、ポリペプチドに結合する分子、またはポリペプチドが結合する分子をスクリーニングするために使用され得る。ポリペプチドと分子との結合は、結合したポリペプチドまたは分子の活性を活性化（アゴニスト）、増大、阻害（アンタゴニスト）、または減少させ得る。そのような分子の例は、抗体、オリゴヌクレオチド、タンパク質（例えば、レセプター）、または低分子を含む。
【０３０９】
好ましくは、分子は、ポリペプチドの天然のリガンド（例えば、リガンドのフラグメント）、または天然の基質、リガンド、構造的模倣物、もしくは機能的模倣物に密接に関連する（Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １（２）：  第５章（１９９１）を参照のこと）。同様に、分子は、ポリペプチドが結合する天然のレセプター、または少なくともポリペプチドによって結合され得るレセプターのフラグメント（例えば、活性部位）に密接に関連し得る。いずれの場合においても、分子は、公知の技術を用いて合理的に設計され得る。
【０３１０】
好ましくは、これらの分子についてのスクリーニングは、ポリペプチドを、分泌タンパク質としてまたは細胞膜上でのいずれかで発現する適切な細胞を産生する工程を包含する。好ましい細胞は、哺乳動物、酵母、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、またはＥ．  ｃｏｌｉ由来の細胞を含む。次いで、ポリペプチドを発現する細胞（または、発現されたポリペプチドを含む細胞膜）は、好ましくは、ポリペプチドまたは分子のいずれかの結合、刺激、または活性の阻害を観察するための分子を潜在的に含む試験化合物と接触される。
【０３１１】
アッセイは、ポリペプチドへの候補化合物の結合を簡単に試験し得、ここで結合は、標識によって、または標識された競合物との競合に関するアッセイにおいて検出される。さらに、アッセイは、候補化合物がポリペプチドへの結合によって生成されるシグナルを生じるか否かを試験し得る。
【０３１２】
あるいは、アッセイは、細胞を含まない調製物、固体支持体に固定されたポリペプチド／分子、化学ライブラリー、または天然産物の混合物を用いて実施され得る。アッセイはまた、ポリペプチドを含む溶液を候補化合物と混合する工程、ポリペプチド／分子の活性または結合を測定する工程、およびポリペプチド／分子の活性または結合を、標準と比較する工程を簡単に包含し得る。
【０３１３】
好ましくは、ＥＬＩＳＡアッセイは、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を用いて、サンプル（例えば、生物学的サンプル）におけるポリペプチドのレベルまたは活性を測定し得る。抗体は、ポリペプチドへの直接的もしくは間接的な結合のいずれか、またはポリペプチドとの基質についての競合によって、ポリペプチドのレベルまたは活性を測定し得る。
【０３１４】
これらの上記のアッセイのすべては、診断マーカーまたは予後マーカーとして使用され得る。これらのアッセイを用いて発見される分子は、ポリペプチド／分子を活性化または阻害することによって、疾患を処置するか、または患者における特定の結果（例えば、血管増殖）をもたらすために使用され得る。さらに、アッセイは、適切に操作された細胞または組織からのポリペプチドの産生を阻害または増強し得る因子を発見し得る。
【０３１５】
従って、本発明は、以下の工程を含む本発明のポリペプチドに結合する化合物を同定する方法を包含する：（ａ）候補結合化合物を本発明のポリペプチドとともにインキュベートする工程；および（ｂ）結合が生じたか否かを決定する工程。さらに、本発明は、以下の工程を含むアゴニスト／アンタゴニストを同定する方法を包含する：（ａ）候補化合物を本発明のポリペプチドとともにインキュベートする工程、（ｂ）生物学的活性をアッセイする工程、および（ｂ）ポリペプチドの生物学的活性が改変されているか否かを決定する工程。
【０３１６】
（他の活性）
本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、先に議論されるように造血系統に加えて、胚性幹細胞の分化または増殖を増加または減少し得る。
【０３１７】
本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、哺乳動物の特徴（例えば、身長、体重、毛の色、眼の色、皮膚、脂肪組織の割合、色素沈着、大きさ、および形（例えば、美容外科）、を調整するために使用され得る。同様に、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、異化作用、同化作用、プロセシング、利用、およびエネルギーの貯蔵に影響を及ぼす哺乳動物の代謝を調整するために使用され得る。
【０３１８】
本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、バイオリズム、カリカディック（ｃａｒｉｃａｄｉｃ）リズム、うつ病（抑うつ性障害を含む）、暴力の傾向、痛みへの耐性、生殖能力（好ましくは、アクチビンまたはインヒビン様活性によって）、ホルモンレベルもしくは内分泌レベル、食欲、性欲、記憶、ストレス、または他の認知の質に影響を及ぼすことによって、哺乳動物の精神状態または身体状態を変更するために使用され得る。
【０３１９】
本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、例えば、貯蔵能力、脂肪含有量、脂質、タンパク質、炭水化物、ビタミン、ミネラル、補因子、または他の栄養成分を増加または減少させるような食品添加物または保存剤として使用され得る。
【０３２０】
（他の好ましい実施態様）
本願発明の他の好ましい実施態様は、配列番号Ｘのヌクレオチド配列中の少なくとも約５０の連続したヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子を含み、ここで、Ｘは表１に規定されるような任意の整数である。
【０３２１】
上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて規定されるような、ほぼクローン配列の５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで始まり、そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで終わる位置の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子もまた好ましい。
【０３２２】
上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて規定されるような、ほぼ開始コドンの５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで始まり、そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで終わる位置の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子もまた好ましい。
【０３２３】
上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて規定されるような、ほぼシグナルペプチドの第１のアミノ酸の５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで始まり、そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで終わる位置の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子も同様に好ましい。
【０３２４】
配列番号Ｘのヌクレオチド配列中の少なくとも約１５０の連続したヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子もまた好ましい。
【０３２５】
配列番号Ｘのヌクレオチド配列中の少なくとも約５００の連続したヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子はさらに好ましい。
【０３２６】
さらに好ましい実施態様は、表１中の配列番号Ｘについて規定されるような、ほぼシグナルペプチドの第１のアミノ酸の５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで始まり、そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで終わる配列番号Ｘのヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸分子である。
【０３２７】
さらに好ましい実施態様は、配列番号Ｘの完全なヌクレオチド配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
【０３２８】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で核酸分子にハイブリダイズする単離された核酸分子もまた好ましく、ここで上記のハイブリダイズする核酸分子は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、Ａ残基のみまたはＴ残基のみからなるヌクレオチド配列を有する核酸分子にハイブリダイズしない。
【０３２９】
表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されるヒトｃＤＮＡクローンを含むＤＮＡ分子を含む物質の組成物もまた好ましく、このＤＮＡ分子は、アメリカンタイプカルチャーコレクションに寄託された物質中に含まれ、そして上記のｃＤＮＡクローンＩＤについて表１中に示される所定のＡＴＣＣ受託番号を与えられている。
【０３３０】
表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されるヒトｃＤＮＡクローンのヌクレオチド配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子もまた好ましく、このＤＮＡ分子は表１において示されるＡＴＣＣ受託番号を付与された寄託物中に含まれる。
【０３３１】
上記の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列が、上記ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる完全なオープンリーディングフレームの配列のヌクレオチド配列中に含まれる、単離された核酸分子もまた好ましい。
【０３３２】
上記ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列中の少なくとも１５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子もまた好ましい。
【０３３３】
さらに好ましい実施態様は、上記ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列中の少なくとも５００の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
【０３３４】
さらに好ましい実施態様は、上記ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる完全なヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
【０３３５】
さらに好ましい実施態様は、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸分子を、生物学的サンプルにおいて検出するための方法である：配列番号Ｘのヌクレオチド配列であって、ここでＸは表１において規定されるような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして表１において上記ｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物中に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列；上記の方法は、上記の群から選択される配列と、上記のサンプル中の少なくとも１つの核酸分子のヌクレオチド配列とを比較する工程、および上記サンプル中の上記核酸分子の配列が、上記の選択された配列に対して少なくとも９５％同一であるか否かを決定する工程を包含する。
【０３３６】
上記の配列を比較する工程が、上記サンプル中の核酸分子と、上記群から選択された配列を含む核酸分子との間の核酸ハイブリダイゼーションの程度を決定する工程を包含する、上記方法もまた好ましい。同様に、上記の配列を比較する工程が、上記サンプル中の核酸分子から決定されるヌクレオチド配列と、上記群から選択された配列とを比較する工程によって実施される、上記方法もまた好ましい。核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
【０３３７】
さらに好ましい実施態様は、生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同定するための方法であって、この方法は、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む上記サンプル中の核酸分子を（もしあれば）検出する工程を包含する：配列番号Ｘのヌクレオチド配列であって、ここでＸは表１において規定されるような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして表１において上記ｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物中に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列。
【０３３８】
生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同定するための方法は、少なくとも２つのヌクレオチド配列のパネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検出する工程を包含し得、ここで上記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である。
【０３３９】
表１において同定される分泌タンパク質をコードする遺伝子の異常な構造または発現と関連する病理学的状態を、被験体において診断するための方法もまた好ましく、この方法は、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、核酸分子を、（もしあれば）上記被験体から得られる生物学的サンプルにおいて検出する工程を包含する：配列番号Ｘのヌクレオチド配列、ここでＸは表１において規定されるような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１中の上記のｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列。
【０３４０】
病理学的状態を診断するための方法は、少なくとも２つのヌクレオチド配列のパネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検出する工程を包含し得、ここで、上記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である。
【０３４１】
上記の核酸分子のヌクレオチド配列が、少なくとも２つのヌクレオチド配列のパネルを含む、単離された核酸分子を含む物質の組成物もまた好ましく、ここで上記のパネル中の少なくとも１つの配列は、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である：配列番号Ｘのヌクレオチド配列、ここでＸは表１において規定されるような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１中の上記のｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列。核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
【０３４２】
配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約１０の連続したアミノ酸の配列に、少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた好ましく、ここでＹは、表１において規定されるような任意の整数である。
【０３４３】
上記連続したアミノ酸の配列が、表１中の配列番号Ｙについて示されるような、ほぼ分泌部分の第１のアミノ酸の位置の残基で始まり、そしてほぼオープンリーディングフレームの最後のアミノ酸の残基で終わる位置の範囲で、配列番号Ｙのアミノ酸配列中に含まれる、ポリペプチドもまた好ましい。
【０３４４】
配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約３０の連続したアミノ酸の配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた好ましい。
【０３４５】
配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約１００の連続したアミノ酸の配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
【０３４６】
配列番号Ｙの完全なアミノ酸配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
【０３４７】
表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１中の上記のｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる分泌タンパク質の完全なアミノ酸配列において、少なくとも約１０の連続したアミノ酸の配列に少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
【０３４８】
上記の連続したアミノ酸の配列が、表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１中の上記のｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる分泌タンパク質の分泌部分のアミノ酸配列に含まれる、ポリペプチドもまた好ましい。
【０３４９】
表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配列中の少なくとも約３０の連続的なアミノ酸の配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
【０３５０】
表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配列中の少なくとも約１００の連続的なアミノ酸の配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
【０３５１】
表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
【０３５２】
以下からなる群から選択される配列中の、少なくとも１０個の連続的なアミノ酸の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドに対して特異的に結合する単離された抗体は、さらに好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１で規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の完全アミノ酸配列。
【０３５３】
以下からなる群から選択された配列中の、少なくとも１０個の連続的なアミノ酸の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを、生物学的サンプルにおいて検出する方法はさらに好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１で規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の完全アミノ酸配列；この方法は、このサンプル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列をこの群から選択された配列と比較する工程およびこのサンプル中におけるこのポリペプチド分子の配列が、少なくとも１０個の連続的なアミノ酸のこの配列と少なくとも９０％同一であるかどうかを決定する工程を含む。
【０３５４】
このサンプル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列を、この群から選択された配列と比較するこの工程は、このサンプル中のポリペプチドの、以下からなる群から選択された配列中の少なくとも１０個の連続的なアミノ酸の配列に対して、少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと特異的に結合する抗体に対する特異的な結合の程度を決定する工程を含む、上記の方法もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の完全アミノ酸配列。
【０３５５】
配列を比較する工程が、このサンプル中のポリペプチド分子から決定されたアミノ酸配列を、この群から選択された配列と比較することによって行われる、上記の方法もまた好ましい。
【０３５６】
生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定する方法もまた好ましく、ここでこの方法は、このサンプル中のポリペプチド分子（このポリペプチドは、もし存在するならば、以下からなる群から選択される配列における少なくとも１０の連続的なアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む）を検出する工程を含む：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる、分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０３５７】
生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定する上記の方法もまた好ましく、ここでこの方法は、少なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸配列を含むポリペプチド分子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少なくとも１つの配列は、上記の群から選択された配列における少なくとも１０の連続的なアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一である。
【０３５８】
被験体において、表１において同定された分泌タンパク質をコードする遺伝子の異常な構造または発現に関連する病的状態を診断する方法もまた、好ましい。ここで、この方法は、この被験体から得られた生物学的サンプルにおいて、少なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸配列を含むポリペプチド分子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少なくとも１つの配列は、以下からなる群から選択される配列における少なくとも１０の連続的なアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一である：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０３５９】
これらの方法のいずれかにおいて、このポリペプチド分子を検出する工程は、抗体を使用することを包含する。
【０３６０】
以下からなる群から選択された配列中の、少なくとも１０の連続的なアミノ酸の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０３６１】
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、原核生物宿主でのこのポリペプチドの発現について最適化されている、単離された核酸分子もまた、好ましい。
【０３６２】
また、ポリペプチドが以下の群から選択されるアミノ酸配列を含む、単離された核酸分子もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０３６３】
上記の単離された核酸分子のいずれかをベクター中に挿入する工程を含む、組換えベクターの作製方法はさらに好ましい。この方法によって生成された組換えベクターも、好ましい。宿主細胞中にベクターを導入する工程を含む、組換え宿主細胞を作製する方法、ならびにこの方法によって生成された組換え宿主細胞もまた、好ましい。
【０３６４】
単離されたポリペプチドを作製する方法であって、このポリペプチドが発現されるような条件下でこの組換え宿主細胞を培養する工程、およびこのポリペプチドを回収する工程を包含する、方法もまた、好ましい。単離されたポリペプチドを作製するこの方法もまた好ましく、ここでこの組換え宿主細胞は真核細胞であり、そしてこのポリペプチドは、以下からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む、ヒト分泌タンパク質の分泌部分である：配列番号Ｙの分泌部分の第１のアミノ酸の位置の残基で始まる、配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に記載される整数であり、そして配列番号Ｙの分泌部分の第１のアミノ酸の位置は表１に規定される）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配列。この方法によって生成された単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
【０３６５】
増加したレベルの分泌タンパク質活性を必要とする個体を処置する方法もまた、好ましい。ここで、この方法は、このような個体に、この個体においてこのタンパク質の活性のレベルを増加させるのに有効な本願発明の単離されたポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体の量を含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【０３６６】
概して、本発明を記載してきたが、本発明は、例示の目的のために提供され、そして限定を意図しない、以下の実施例を参照することによってより容易に理解される。
【実施例】
【０３６７】
（実施例）
（実施例１：選択されたｃＤＮＡクローンの寄託されたサンプルからの単離）
引用されるＡＴＣＣ寄託物中の各ｃＤＮＡクローンは、プラスミドベクター中に含まれる。表１は、各クローンが単離されたｃＤＮＡライブラリーを構築するために用いられたベクターを示す。多くの場合において、ライブラリーを構築するために使用されたベクターは、プラスミドが切り出されたファージベクターである。直下の表は、ｃＤＮＡライブラリーを構築する際に使用される各ファージベクターについて関連するプラスミドを相関づける。例えば、特定のクローンがベクター「Ｌａｍｂｄａ  Ｚａｐ」中に単離されていると表１に示される場合、対応する寄託クローンは、「ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ」である。
【０３６８】
【表２】
2009131263.tif 000011
【０３６９】
ベクターＬａｍｂｄａ  Ｚａｐ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ  ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １６：７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ．およびＳｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １７：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ．ら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ５：５８−６１（１９９２））は、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１１０１１  Ｎ．Ｔｏｒｒｅｙ  Ｐｉｎｅｓ  Ｒｏａｄ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，９２０３７から市販されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてｐＢＫはネオマイシン耐性遺伝子を含む。両方とも、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１  Ｂｌｕｅ（これもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である）に形質転換され得る。ｐＢＳは、ＳＫ＋、ＳＫ−、ＫＳ＋およびＫＳの４つで入荷する。ＳおよびＫとは、ポリリンカー領域（「Ｓ」とはＳａｃＩであり、そして「Ｋ」とは、ＫｐｎＩのことであり、これらは、それぞれのリンカーの各末端での最初の部位である）に隣接するＴ７およびＴ３プライマー配列に対するポリリンカーの配向をいう。「＋」または「−」とは  、ある方向においてｆ１  ｏｒｉから開始される一本鎖レスキューがセンス鎖ＤＮＡを生成し、そして他方においてアンチセンスであるようなｆ１複製起点「ｏｒｉ」の配向をいう。
【０３７０】
ベクターｐＳｐｏｒｔ１、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ  ２．０およびｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０をＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ６００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ  ２０８９７から入手した。全てのＳｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である）に形質転換され得る。（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕｓ  １５：５９（１９９３）を参照のこと）。ベクターｌａｆｍｉｄ  ＢＡ（Ｂｅｎｔｏ  Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１  Ｂｌｕｅに形質転換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１６００  Ｆａｒａｄａｙ  Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ  ９２００８から入手可能である）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である）に形質転換され得る（例えば、Ｃｌａｒｋ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：９６７７−９６８６（１９８８）およびＭｅａｄ，Ｄ．ら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：（１９９１）を参照のこと）。好ましくは、本発明のポリヌクレオチドは、表１における特定のクローンについて同定されたファージベクター配列、ならびに上記に示された対応するプラスミドベクター配列を含まない。
【０３７１】
表１に引用される、任意の所定のｃＤＮＡクローンについてＡＴＣＣ受託番号を与えられたサンプルにおける寄託された物質はまた、１つ以上のさらなるプラスミド（これは各々、その所定のクローンとは異なるｃＤＮＡクローンを含む）を含み得る。従って、同じＡＴＣＣ受託番号を共有する寄託物は、表１に示される各ｃＤＮＡクローンのためのプラスミドを少なくとも含む。代表的には、表１に引用される各ＡＴＣＣ寄託物のサンプルは、ほぼ等量（重量で）の約５０個のプラスミドＤＮＡ（これは各々、異なるｃＤＮＡクローンを含む）の混合物を含む；しかし、このような寄託サンプルは、５０個よりも多いかまたは少ないｃＤＮＡクローン（約５００個までのｃＤＮＡクローン）のためのプラスミドを含み得る。
【０３７２】
表１における特定のクローンについて引用されるプラスミドＤＮＡの寄託サンプルからそのクローンを単離するために２つのアプローチが使用され得る。第一に、プラスミドを、配列番号Ｘに対応するポリヌクレオチドプローブを使用して、クローンをスクリーニングすることによって直接単離する。
【０３７３】
特に、３０〜４０ヌクレオチドを有する特定のポリヌクレオチドを、報告されている配列に従って、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  のＤＮＡ合成装置を使用して合成する。オリゴヌクレオチドを、例えば、３２Ｐ−γ−ＡＴＰで、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて標識し、そして慣用の方法に従って精製する。（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ、ＮＹ（１９８２））。プラスミド混合物を、当業者に公知の技術（例えば、ベクター供給者によって提供される技術または上記で引用された関連の刊行物もしくは特許において提供される技術）を用いて、上記のような適切な宿主（例えば、ＸＬ−１  Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ））に形質転換する。形質転換体を１．５％寒天プレート（適切な選択薬剤、例えば、アンピシリンを含む）に、１プレートあたり約１５０の形質転換体（コロニー）の密度で播種する。これらのプレートを、細菌コロニースクリーニングについての慣用の方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版、（１９８９）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１．９３〜１．１０４頁）または当業者に公知の他の技術に従って、ナイロンメンブレンを使用してスクリーニングする。
【０３７４】
あるいは、配列番号Ｘの両端（すなわち、表１に規定されるクローンの５’ＮＴおよび３’ＮＴによって囲まれる配列番号Ｘの領域内）に由来する、１７〜２０ヌクレオチドの２つのプライマーを合成し、そしてこれらを使用して、寄託されたｃＤＮＡプラスミドをテンプレートとして使用して、所望のｃＤＮＡを増幅する。ポリメラーゼ連鎖反応を、慣用の条件下で、例えば、０．５μｇの上記ｃＤＮＡテンプレートとの反応混合物の２５μｌ中で実施する。慣用の反応混合物は、１．５〜５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．０１％（ｗ／ｖ）ゼラチン、それぞれ２０μＭのｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、２５ｐｍｏｌの各プライマーおよび０．２５ユニットのＴａｑポリメラーゼである。３５サイクルのＰＣＲ（９４℃での変性を１分間；５５℃でのアニールを１分間；７２℃での伸長を１分間）を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｃｅｔｕｓ自動化サーマルサイクラーを用いて実施する。増幅産物をアガロースゲル電気泳動により分析し、そして予想される分子量のＤＮＡバンドを切り出し、そして精製する。ＰＣＲ産物を、ＤＮＡ産物をサブクローニングおよび配列決定することによって選択された配列であることを確認する。
【０３７５】
寄託されたクローンに存在しないかもしれない遺伝子の５’非コード部分または３’非コード部分の同定のために、いくつかの方法が利用可能である。これらの方法は、以下を含むがこれらに限定されない：フィルタープローブ探索、特異的プローブを使用するクローン富化、および当該分野で周知である５’および３’「ＲＡＣＥ」プロトコルと類似するかまたは同一のプロトコル。例えば、５’ＲＡＣＥに類似する方法は、所望の全長転写物の５’末端の欠失を生成するために利用可能である（Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３））。
【０３７６】
簡潔には、特定のＲＮＡオリゴヌクレオチドを、全長遺伝子ＲＮＡ転写物をおそらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結する。連結されたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の配列に特異的なプライマーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺伝子の５’部分をＰＣＲ増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、そしてこれを使用して全長遺伝子を生成し得る。
【０３７７】
この上記の方法は、所望の供給源から単離された総ＲＮＡを用いて開始するが、ポリＡ＋ＲＮＡをも使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスファターゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮＡの５’リン酸基を排除し得る。次いで、ホスファターゼを不活化するべきであり、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を除去するために、タバコ酸ピロホスファターゼを用いて処理するべきである。この反応は、次いでＴ４  ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに連結され得る、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。
【０３７８】
この改変型ＲＮＡ調製物を、遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドを用いる、第一鎖ｃＤＮＡ合成のためのテンプレートとして使用する。第一鎖合成反応物を連結されたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端のＰＣＲ増幅のためのテンプレートとして使用する。次いで、得られた生成物を配列決定し、そして分析して５’末端配列が所望の遺伝子に属するかを確認する。
【０３７９】
（実施例２：ポリヌクレオチドに対応するゲノムクローンの単離）
ヒトゲノムＰ１ライブラリー（Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．）を、実施例１に記載される方法に従って、配列番号Ｘに対応するｃＤＮＡ配列について選択されたプライマーを用いるＰＣＲによってスクリーニングする（Ｓａｍｂｒｏｏｋもまた参照のこと）。
【０３８０】
（実施例３：ポリペプチドの組織分布）
本発明のポリヌクレオチドのｍＲＮＡ発現の組織分布を、とりわけ、Ｓａｍｂｒｏｏｋらによって記載されるノーザンブロット分析についてのプロトコルを用いて決定する。例えば、実施例１に記載される方法によって生成されるｃＤＮＡプローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅＴＭ  ＤＮＡ  ｌａｂｅｌｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、製造者の指示に従って、Ｐ３２で標識する。標識後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ  ＳＰＩＮ−１００ＴＭカラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）を使用して、製造者のプロトコル番号ＰＴ１２００−１に従って精製する。次いで、精製した標識プローブを使用して、種々のヒト組織をｍＲＮＡ発現について試験する。
【０３８１】
種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含む多重組織ノーザン（ＭＴＮ）ブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂＴＭハイブリダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、製造者のプロトコル番号ＰＴ１１９０−１に従って、標識プローブで試験する。ハイブリダイゼーションおよび洗浄後、ブロットをマウントして、そして−７０℃で一晩フィルムに曝露し、そしてフィルムを標準的な手順に従って現像する。
【０３８２】
（実施例４：ポリヌクレオチドの染色体マッピング）
オリゴヌクレオチドプライマーのセットを、配列番号Ｘの５’末端の配列に従って設計する。このプライマーは、好ましくは約１００ヌクレオチドにわたる。次いで、このプライマーセットを、以下のセットの条件下でポリメラーゼ連鎖反応に使用する：９５℃で３０秒；５６℃で１分；７０℃で１分。このサイクルを３２回反復し、次いで１回、７０℃で５分間のサイクルを行う。個々の染色体または染色体フラグメントを含む体細胞ハイブリッドパネル（Ｂｉｏｓ，  Ｉｎｃ）に加えて、ヒト、マウス、およびハムスターのＤＮＡを鋳型として使用する。反応物を、８％ポリアクリルアミドゲルまたは３．５％アガロースゲルのいずれかで分析する。染色体マッピングを、特定の体細胞ハイブリッドにおける約１００ｂｐのＰＣＲフラグメントの存在によって決定する。
【０３８３】
（実施例５：ポリペプチドの細菌性発現）
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、実施例１に概説するように、ＤＮＡ配列の５’および３’末端に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを使用して増幅して挿入フラグメントを合成する。ｃＤＮＡ挿入物を増幅するために使用されるプライマーは、発現ベクターに増幅産物をクローニングするために、好ましくはプライマーの５’末端にＢａｍＨＩおよびＸｂａＩのような制限部位を含むべきである。例えば、ＢａｍＨＩおよびＸｂａＩは、細菌性発現ベクターｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｉｎｃ．，  Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，  ＣＡ）の制限酵素部位に対応する。このプラスミドベクターは、抗生物質耐性（Ａｍｐｒ）、細菌の複製起点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧで調節可能なプロモーター／オペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、６−ヒスチジンタグ（６−Ｈｉｓ）、および制限酵素クローニング部位をコードする。
【０３８４】
ｐＱＥ−９ベクターをＢａｍＨＩおよびＸｂａＩで消化し、そして、増幅されたフラグメントを細菌性ＲＢＳにおいて開始されるリーディングフレームを維持しながらｐＱＥ−９ベクターに連結する。次いで連結混合物を、ｌａｃＩリプレッサーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋａｎｒ）を与えるプラスミドｐＲＥＰ４の多重コピーを含む、Ｅ．  ｃｏｌｉ株Ｍ１５／ｒｅｐ４（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｉｎｃ．）を形質転換するために使用する。形質転換体を、それらのＬＢプレート上で生育できる能力によって同定し、そしてアンピシリン／カナマイシン耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、そして制限分析によって確認する。
【０３８５】
所望の構築物を含むクローンを、Ａｍｐ（１００μｇ／ｍｌ）およびＫａｎ（２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養で一晩（Ｏ／Ｎ）増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を、１：１００〜１：２５０の比で大量培養に接種するために使用する。細胞を、０．４〜０．６の間の吸光度６００（Ｏ．Ｄ．６００）まで増殖させる。次いで、ＩＰＴＧ（イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラクトピラノシド）を最終濃度１  ｍＭになるように加える。ＩＰＴＧは、ｌａｃＩリプレッサーの不活化によりＰ／Ｏの活性化を誘導し、遺伝子発現の増加を導く。
【０３８６】
細胞を、さらに３〜４時間増殖させる。次いで、細胞を遠心分離（６０００×ｇで２０分間）によって収集する。細胞ペレットを、カオトロピック剤である６ＭグアニジンＨＣｌ中に、４℃で３〜４時間攪拌することによって可溶化させる。細胞細片を遠心分離によって取り除き、そしてポリペプチドを含む上清を、ニッケル−ニトリロ−三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニティー樹脂カラムにロードする（ＱＩＡＧＥＮ，  Ｉｎｃ．  前出より入手可能）。６×Ｈｉｓタグを有するタンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂に高い親和性で結合し、そして単純な１工程手順で精製され得る（詳細には、ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｔ  （１９９５）  ＱＩＡＧＥＮ，  Ｉｎｃ．，  前出を参照のこと）。
【０３８７】
手短に言えば、上清を、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ  ８のカラムにロードし、カラムを、最初に１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ  ８で洗浄し、次いで１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ  ６で洗浄し、最後にポリペプチドを、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ  ５で溶出する。
【０３８８】
次いで、精製したタンパク質を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）または５０ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ  ６の緩衝液および２００ｍＭ  ＮａＣｌに対して透析することにより再生させる。あるいは、タンパク質はＮｉ−ＮＴＡカラムに固定化している間に、首尾よく再折畳みされ得る。推奨条件は以下の通りである：プロテアーゼインヒビターを含む、５００  ｍＭ  ＮａＣｌ、２０％  グリセロール、２０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ  ｐＨ  ７．４中の６Ｍ〜１Ｍ尿素の直線勾配を使用する再生。再生は１．５時間以上の時間をかけて行うべきである。再生後、タンパク質を２５０  ｍＭ  イミダゾールの添加によって溶出させる。イミダゾールを、ＰＢＳまたは５０  ｍＭ  酢酸ナトリウム  ｐＨ  ６の緩衝液および２００ｍＭ  ＮａＣｌに対する最終の透析工程によって除去する。精製したタンパク質を、４℃で保存するか、または−８０℃で冷凍する。
【０３８９】
上記の発現ベクターに加えて、本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチドに作動可能に連結されたファージオペレーターおよびプロモーターエレメントを含み、ｐＨＥ４ａと呼ばれる発現ベクターを含む（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４５、１９９８年２月２５日に寄託。）。このベクターは以下を含む：１）選択マーカーとしてのネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子、２）Ｅ．  ｃｏｌｉ複製起点、３）Ｔ５ファージプロモーター配列、４）２つのｌａｃオペレーター配列、５）シャイン−ダルガーノ配列、および６）ラクトースオペロンリプレッサー遺伝子（ｌａｑＩｑ）。複製起点（ｏｒｉＣ）は、ｐＵＣ１９（ＬＴＩ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）に由来する。プロモーター配列およびオペレーター配列を合成的に作製する。
【０３９０】
ＮｄｅＩおよびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ、またはＡｓｐ７１８によってベクターを制限処理し、制限生成物をゲルで泳動し、そしてより大きなフラグメント（スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）フラグメントは約３１０塩基対であるべきである）を単離することによって、ＤＮＡをｐＨＥａに挿入し得る。ＤＮＡ挿入物を、ＮｄｅＩ（５’プライマー）およびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ、またはＡｓｐ７１８（３’プライマー）に対する制限部位を有するＰＣＲプライマーを使用して、実施例１に記載のＰＣＲプロトコールに従って生成する。ＰＣＲ挿入物を、ゲル精製し、そして適合する酵素で制限処理する。挿入物およびベクターを標準的なプロトコールに従って連結する。
【０３９１】
操作されたベクターは、上記のプロトコールにおいて、細菌系でタンパク質を発現させるために容易に置換され得る。
【０３９２】
（実施例６：封入体由来のポリペプチドの精製）
以下の別の方法は、ポリペプチドが封入体の形態で存在する場合に、Ｅ．  ｃｏｌｉ中で発現されたポリペプチドを精製するために使用され得る。他に指定されない場合には、以下のすべての工程は４〜１０℃で行われる。
【０３９３】
Ｅ．  ｃｏｌｉ発酵の生産期の完了後、細胞培養物を４〜１０℃に冷却し、そして１５，０００  ｒｐｍの連続遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ  Ｓｅｐａｔｅｃｈ）によって細胞を採集する。細胞ペーストの単位重量あたりのタンパク質の予想される収量および必要とされる精製タンパク質の量に基づいて、細胞ペーストの適切な量（重量による）を、１００  ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５０  ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ  ７．４を含む緩衝溶液に懸濁させる。細胞を、高剪断ミキサーを使用して均質な懸濁液に分散させる。
【０３９４】
次いで、細胞をマイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，  Ｃｏｒｐ．  またはＡＰＶ  Ｇａｕｌｉｎ，  Ｉｎｃ．）に２回、４０００〜６０００  ｐｓｉで溶液を通すことによって溶解させる。次いでホモジネートを、最終濃度０．５  Ｍ  ＮａＣｌになるようにＮａＣｌ溶液と混合し、続いて７０００×ｇで１５分間遠心分離を行う。得られたペレットを、０．５  Ｍ  ＮａＣｌ、１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５０  ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ  ７．４を使用して再度洗浄する。
【０３９５】
得られた洗浄した封入体を、１．５  Ｍ  塩酸グアニジン（ＧｕＨＣｌ）で２〜４時間可溶化する。７０００×ｇで１５分間の遠心分離の後、ペレットを廃棄し、そしてポリペプチドを含む上清を４℃で一晩インキュベートしてさらなるＧｕＨＣｌ抽出を可能にする。
【０３９６】
不溶性粒子を除去するための高速遠心分離（３０，０００×ｇ）に続き、ＧｕＨＣｌ可溶化タンパク質を、ＧｕＨＣｌ抽出物と、５０  ｍＭ  ナトリウム、ｐＨ  ４．５、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌ、２  ｍＭ  ＥＤＴＡを含む２０容量の緩衝液とを、激しい攪拌で迅速に混合することによって、再折畳みさせる。再折畳みした希釈タンパク質溶液を、さらなる精製工程の前の１２時間、混合しないで４℃で保つ。
【０３９７】
再折畳みされたポリペプチド溶液を清澄にするために、あらかじめ準備した４０  ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ  ６．０で平衡化した、適切な表面積を有する０．１６μｍメンブレンフィルターを備える接触濾過ユニット（例えば、Ｆｉｌｔｒｏｎ）を使用する。濾過したサンプルを、カチオン交換樹脂（例えば、Ｐｏｒｏｓ  ＨＳ−５０，  Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上にロードする。カラムを４０  ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ  ６．０で洗浄し、そして同じ緩衝液中の２５０  ｍＭ  、５００  ｍＭ、１０００  ｍＭ、および１５００  ｍＭ  ＮａＣｌで、段階的な様式で溶出する。溶出液の２８０  ｎｍにおける吸光度を継続的にモニターする。画分を収集し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによってさらに分析する。
【０３９８】
次いでポリペプチドを含む画分をプールし、そして４容量の水と混合する。次いで希釈されたサンプルを、あらかじめ準備した強アニオン（Ｐｏｒｏｓ  ＨＱ−５０，  Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および弱アニオン（Ｐｏｒｏｓ  ＣＭ−２０，  Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）交換樹脂の直列カラムのセットにロードする。カラムを４０  ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ  ６．０で平衡化する。両方のカラムを、４０  ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ  ６．０、２００  ｍＭ  ＮａＣｌで洗浄する。次いでＣＭ−２０カラムを１０カラム容量の直線的勾配（０．２  Ｍ  ＮａＣｌ、５０  ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ  ６．０から１．０  Ｍ  ＮａＣｌ、５０  ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ  ６．５の範囲）を用いて溶出させる。画分を、溶出液の定常Ａ２８０モニタリング下で収集する。次いで、（例えば、１６％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって判明した）ポリペプチドを含む画分をプールする。
【０３９９】
得られたポリペプチドは、上記の再折畳みおよび精製工程の後で９５％より高い純度を示すべきである。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合、いかなる主たる混在バンドも、クマシーブルー染色した１６％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルから観察されないはずである。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ混在について試験され得、そして代表的には、ＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイに従って、０．１  ｎｇ／ｍｌ未満である。
【０４００】
（実施例７：バキュロウイルス発現系におけるポリペプチドのクローニングおよび発現）
この実施例では、ポリペプチドを発現するために、プラスミドシャトルベクターｐＡ２を使用してポリヌクレオチドをバキュロウイルスに挿入する。この発現ベクターは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多核体ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーター、続いてＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８のような便利な制限部位を含む。シミアンウイルス４０（「ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のために使用する。組換えウイルスの容易な選択のために、プラスミドは、同方向にある弱いＤｒｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下でＥ．  ｃｏｌｉ由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子、続いてポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを含む。挿入された遺伝子は両方の側で、クローン化したポリヌクレオチドを発現する生存可能なウイルスを生成する、野生型ウイルスＤＮＡとの細胞媒介性の相同組換えのためのウイルス配列と隣接する。
【０４０１】
他の多くのバキュロウイルスベクター（例えば、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１、およびｐＡｃＩＭ１）は、当業者が容易に理解するように、構築物が転写、翻訳、分泌など（必要とされる場合、シグナルペプチドおよびインフレームなＡＵＧを含む）のために適切に配置されたシグナルを提供する限りにおいて、上記のベクターの代わりに使用され得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃｋｏｗら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７０：３１−３９  （１９８９）  に記載される。
【０４０２】
具体的には、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡ配列（これは、表１に示されるＡＵＧ開始コドンおよび天然に付随するリーダー配列を含む）を、実施例１に記載されるＰＣＲプロトコルを使用して増幅させる。天然に存在するシグナル配列を使用して分泌タンパク質を産生する場合、ｐＡ２ベクターは第２のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、ベクターは、Ｓｕｍｍｅｒｓら（「Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｉｎｓｅｃｔ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ」、Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｅｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  Ｎｏ．  １５５５  （１９８７））に記載される標準的な方法を用いて改変して、バキュロウイルスリーダー配列を含ませ得る（ｐＡ２  ＧＰ）。
【０４０３】
増幅されたフラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ  １０１  Ｉｎｃ．，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  ＣＡ）を使用して、１％アガロースゲルから単離する。次いでフラグメントを適切な制限酵素で消化し、そして再び１％アガロースゲルで精製する。
【０４０４】
プラスミドを対応する制限酵素で消化し、そして必要に応じて、当該分野で公知の慣用の手順を用いて、仔ウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸化し得る。次いでＤＮＡを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ  １０１  Ｉｎｃ．，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  Ｃａ）を使用して、１％アガロースゲルから単離する。
【０４０５】
フラグメントおよび脱リン酸化したプラスミドを、Ｔ４  ＤＮＡリガーゼを用いて互いに連結する。Ｅ．  ｃｏｌｉ  ＨＢ１０１またはＸＬ−１  Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  Ｃａ）のような他の適切なＥ．  ｃｏｌｉ宿主細胞を、連結混合液で形質転換し、そして培養プレート上に拡げる。プラスミドを含む細菌を、個々のコロニー由来のＤＮＡを消化し、そして消化産物をゲル電気泳動によって分析することにより同定する。クローニングしたフラグメントの配列をＤＮＡ配列決定によって確認する。
【０４０６】
このポリヌクレオチドを含む５μｇのプラスミドを、  Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８４：７４１３−７４１７  （１９８７）  によって記載されたリポフェクション法を使用して、１．０μｇの市販の線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄＴＭ  ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  ＤＮＡ」，  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）とともに同時トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏｌｄＴＭウイルスＤＮＡおよび５μｇのプラスミドを、５０μｌの無血清グレース培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）を含む、マイクロタイタープレートの滅菌したウェル中で混合する。その後、１０  μｌのリポフェクチンおよび９０μｌグレース培地を加え、混合し、そして室温で１５分間インキュベートする。次いで、トランスフェクション混合液を、無血清グレース培地１  ｍｌを加えた３５  ｍｍ組織培養プレートに播種したＳｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １７１１）に滴下して加える。次いでプレートを２７℃で５時間インキュベートする。次いで、トランスフェクション溶液をプレートから除去し、そして１０％ウシ胎仔血清を補充した１  ｍｌのグレース昆虫培地を添加する。次いで培養を２７℃で４日間継続する。
【０４０７】
４日後上清を収集し、ＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ、前出によって記載されたようにプラークアッセイを行う。「Ｂｌｕｅ  Ｇａｌ」（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）を含むアガロースゲルを、ｇａｌが発現しているクローン（青色に着色したプラークを生ずる）の容易な同定および単離を可能にするために使用する。（この型の「プラークアッセイ」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ９−１０頁によって記載される、昆虫細胞培養およびバキュロウイルス学のための使用者ガイドの中に見出され得る。）適切なインキュベーションの後、青色に着色したプラークをマイクロピペッター（例えば、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）のチップで拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒天を、２００μｌのグレース培地を含む微小遠心分離チューブ中で再懸濁させ、そして組換えバキュロウイルスを含む懸濁液を、３５  ｍｍディッシュに播種したＳｆ９細胞に感染させるために使用する。４日後、これらの培養ディッシュの上清を採集し、次いで４℃に貯蔵する。
【０４０８】
ポリペプチドの発現を確認するために、１０％熱非働化ＦＢＳを補充したグレース培地中でＳｆ９細胞を増殖させる。細胞を、約２の感染多重度（「ＭＯＩ」）でポリヌクレオチドを含む組換えバキュロウイルスで感染させる。放射性標識したタンパク質を所望する場合には、６時間に後培地を除去し、そしてメチオニンおよびシステインを含まないＳＦ９００  ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，  ＭＤから入手可能）に置き換える。４２時間後、５μＣｉの３５Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの３５Ｓ−システイン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を添加する。細胞をさらに１６時間インキュベートし、次いで遠心分離によって採集する。上清中のタンパク質および細胞内タンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いで（放射性標識した場合）オートラジオグラフィーによって分析する。
【０４０９】
精製タンパク質のアミノ末端のアミノ酸配列の微量配列決定法を使用して、産生されたタンパク質のアミノ末端配列を決定し得る。
【０４１０】
（実施例８：哺乳動物細胞におけるポリペプチドの発現）
本発明のポリペプチドを、哺乳動物細胞中で発現させ得る。代表的な哺乳動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を仲介するプロモーターエレメント、タンパク質コード配列、および転写の終結および転写物のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。さらなるエレメントは、エンハンサー、コザック配列、および、ＲＮＡスプライシングのドナーおよびアクセプター部位に隣接する介在配列を含む。非常に効率的な転写は、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、レトロウイルス（例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩ）由来の長末端反復（ＬＴＲ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成される。しかし、細胞内エレメント（例えば、ヒトアクチンプロモーター）もまた、使用され得る。
【０４１１】
本発明を実施する際の使用に適切な発現ベクターは、例えば、ｐＳＶＬおよびｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，  Ｕｐｐｓａｌａ，  Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ  ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ  ３７１４６）、ｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ  ６７１０９）、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ２．０、ならびにｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０のようなベクターを含む。使用され得る哺乳動物宿主細胞は、ヒトＨｅｌａ細胞、２９３細胞、Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ  １細胞、Ｃｏｓ  ７細胞およびＣＶ１細胞、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞、ならびにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む。
【０４１２】
あるいは、ポリペプチドは、染色体に組み込まれたポリヌクレオチドを含む、安定な細胞株中で発現され得る。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、ハイグロマイシンのような選択可能なマーカーを用いる同時トランスフェクションは、トランスフェクトされた細胞の同定および単離を可能にする。
【０４１３】
トランスフェクトされた遺伝子はまた、大量のコードされたタンパク質を発現するために増幅され得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは、目的の遺伝子の数百または数千さえものコピーを有する細胞株の開発に有用である。（例えば、Ａｌｔ，  Ｆ．Ｗ．ら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２５３：１３５７−１３７０  （１９７８）；Ｈａｍｌｉｎ，  Ｊ．Ｌ．およびＭａ，  Ｃ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ、１０９７：１０７−１４３  （１９９０）：Ｐａｇｅ，  Ｍ．Ｊ．およびＳｙｎｄｅｎｈａｍ，  Ｍ．Ａ．、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：６４−６８  （１９９１）を参照のこと。）別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕｒｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．  ２２７：２７７−２７９  （１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６９−１７５  （１９９２））。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地中で増殖させ、そしてもっとも高い耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞株は、染色体に組み込まれた、増幅された遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は、タンパク質の産生のためにしばしば使用される。
【０４１４】
プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１４６）の誘導体である、発現ベクターｐＣ４（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４６）およびｐＣ６（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４７）は、ラウス肉腫ウイルス（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ４３８−４４７  （１９８５年３月））の強力なプロモーター（ＬＴＲ）、およびＣＭＶエンハンサー（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０  （１９８５））のフラグメントを含む。例えば、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８の制限酵素切断部位を有するマルチプルクローニングサイトは、目的の遺伝子のクローニングを容易にする。ベクターはまた、３’イントロン、ラットプレプロインシュリン遺伝子のポリアデニル化および終結シグナル、ならびに、ＳＶ４０初期プロモーターの制御下にあるマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。
【０４１５】
具体的には、例えば、プラスミドｐＣ６は、適切な制限酵素によって消化され、次いで当該分野で公知の手順に従って、仔ウシ腸ホスファターゼ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）を使用して脱リン酸化する。次いで、ベクターを１％アガロースゲルから単離する。
【０４１６】
本発明のポリヌクレオチドは、実施例１に概説するプロトコルに従って増幅される。天然に存在するシグナル配列が、分泌タンパク質を産生するために使用される場合、ベクターは、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天然に存在するシグナル配列が使用されない場合には、ベクターは異種シグナル配列を含むように改変され得る（例えば、ＷＯ９６／３４８９１を参照のこと）。
【０４１７】
増幅フラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」、ＢＩＯ  １０１  Ｉｎｃ．，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  Ｃａ．）を使用して１％アガロースゲルから単離する。次いで、フラグメントを、適切な制限酵素で消化し、そして再び１％アガロースゲル上で精製する。
【０４１８】
次いで、増幅フラグメントを同じ制限酵素で消化し、そして１％アガロースゲルで精製する。次いで、単離されたフラグメントおよび脱リン酸化したベクターを、Ｔ４  ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで、Ｅ．  ｃｏｌｉ  ＨＢ１０１またはＸＬ−１  Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そしてプラスミドｐＣ６に挿入されたフラグメントを含む細菌を、例えば、制限酵素分析を用いて同定する。
【０４１９】
活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠損するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、トランスフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ６を、リポフェクチンを用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎｅｏとともに同時トランスフェクトする（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優性選択マーカーであるＧ４１８を含む抗生物質の群に対する耐性を付与する酵素をコードするＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を補充したαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、細胞をトリプシン処理し、そして１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）中に播種する。約１０〜１４日後、単一のクローンをトリプシン処理し、次いでメトトレキサートの異なる濃度（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して、６ウェルのペトリ皿または１０ｍｌのフラスコに播種する。次いで、メトトレキサートの最高濃度で増殖するクローンを、さらに高い濃度（１μＭ、２μＭ、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ）のメトトレキサートを含む新たな６ウェルプレートに移す。同じ手順を、１００〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで繰り返す。所望の遺伝子産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロットによって、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。
【０４２０】
（実施例９：タンパク質融合物）
本発明のポリぺプチドは、好ましくは、他のタンパク質に融合される。これらの融合タンパク質は、種々の適用について使用され得る。例えば、本発明のポリぺプチドの、Ｈｉｓタグ、ＨＡタグ、プロテインＡ、ＩｇＧドメイン、およびマルトース結合タンパク質への融合は、精製を容易にする（実施例５を参照のこと；ＥＰ  Ａ  ３９４，８２７もまた参照のこと；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：８４−８６  （１９８８））  。同様に、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−３、およびアルブミンへの融合は、インビボでの半減期を増大させる。本発明のポリぺプチドに融合した核局在化シグナルは、タンパク質を特定の細胞下局在に標的化し得る。一方、共有結合ヘテロダイマーまたはホモダイマーは、融合タンパク質の活性を増大または減少させ得る。融合タンパク質はまた、１つより多い機能を有するキメラ分子を作製し得る。最後に、融合タンパク質は、非融合タンパク質と比較して、融合タンパク質の可溶性および／または安定性を増大させ得る。上記の融合タンパク質の全ての型は、ポリぺプチドのＩｇＧ分子への融合を概説する以下のプロトコル、または実施例５に記載されるプロトコルを改変することによって作製され得る。
【０４２１】
簡単には、ＩｇＧ分子のヒトＦｃ部分は、以下に記載の配列の５’および３’末端にわたるプライマーを使用してＰＣＲ増幅され得る。これらのプライマーはまた、発現ベクター（好ましくは、哺乳動物発現ベクター）へのクローニングを容易にする都合の良い制限酵素部位を有するべきである。
【０４２２】
例えば、ｐＣ４（受託番号第２０９６４６号）が使用される場合、ヒトＦｃ部分は、ＢａｍＨＩクローニング部位に連結され得る。３’ＢａｍＨＩ部位が破壊されるべきであることに注意のこと。次に、ヒトＦｃ部分を含有するベクターが、このＢａｍＨＩによって再び制限され、ベクターを線状化し、そして実施例１に記載するＰＣＲプロトコルによって単離された本発明のポリヌクレオチドが、ＢａｍＨＩ部位に連結される。ポリヌクレオチドは、終止コドンなしにクローン化され、そうでなければ、融合タンパク質は産生されないことに注意すること。
【０４２３】
天然に存在するシグナル配列が分泌タンパク質を産生するために使用される場合、ｐＣ４は、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天然に存在するシグナル配列が使用されない場合、ベクターは、異種シグナル配列を含むように改変され得る（例えば、ＷＯ  ９６／３４８９１を参照のこと）。
【０４２４】
【化３】
2009131263.tif 000012
【０４２５】
（実施例１０：ポリペプチドからの抗体の産生）
本発明の抗体は、種々の方法によって調製され得る。（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  第２章を参照のこと。）例えば、本発明のポリぺプチドを発現する細胞は、ポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導するために動物に投与される。好ましい方法において、分泌タンパク質の調製物が調製され、そして精製されて、実質的に天然の夾雑物を含まないようにする。次いで、このような調製物は、動物に導入されて、より大きな比活性のポリクローナル抗血清を生成する。
【０４２６】
最も好ましい方法において、本発明の抗体は、モノクローナル抗体（または、そのタンパク質結合フラグメント）である。このようなモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術を使用して調製され得る（Ｋoｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５  （１９７５）；  Ｋoｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ６：５１１  （１９７６）；  Ｋoｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ６：２９２（１９７６）；  Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  Ｎ．Ｙ．、５６３−６８１頁（１９８１）。）  一般に、このような手順は、動物（好ましくは、マウス）をポリぺプチドで免疫化すること、またはより好ましくは、分泌ポリぺプチド発現細胞での免疫化を含む。このような細胞は、任意の適切な組織培養培地において培養され得る；しかし、１０％ウシ胎仔血清（約５６℃で非働化した）を補充し、そして約１０ｇ／ｌの非必須アミノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変Ｅａｇｌｅ培地において細胞を培養することが好ましい。
【０４２７】
このようなマウスの脾細胞は抽出され、そして適切なミエローマ細胞株と融合される。任意の適切なミエローマ細胞株は、本発明に従って利用され得る；しかし、ＡＴＣＣから入手可能な親ミエローマ細胞株（ＳＰ２Ｏ）を利用することが好ましい。融合後、得られるハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に維持し、次いでＷａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ８０：２２５−２３２  （１９８１））に記載されるように限定希釈によってクローニングする。このような選択によって得られるハイブリドーマ細胞は、次いでポリぺプチドに結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するためにアッセイされる。
【０４２８】
あるいは、ポリぺプチドに結合し得るさらなる抗体を、抗イディオタイプ抗体を使用して２段階工程の手順において生成し得る。このような方法は、抗体それ自体が抗原であり、それゆえ二次抗体に結合する抗体を得ることが可能であるという事実を利用する。この方法に従って、タンパク質特異的抗体が使用されて、動物（好ましくは、マウス）を免疫する。次いで、このような動物の脾臓細胞を使用して、ハイブリドーマ細胞を産生する。そして、ハイブリドーマ細胞は、タンパク質特異的抗体に結合する能力がポリぺプチドによってブロックされ得る抗体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングされる。このような抗体は、タンパク質特異的抗体に対する抗イディオタイプ抗体を含み、そしてさらなるタンパク質特異的抗体の形成を誘導する動物を免疫するために使用され得る。
【０４２９】
ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２ならびに本発明の抗体の他のフラグメントは、本明細書中で開示される方法に従って使用され得ることが理解される。このようなフラグメントは、代表的には、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生するために）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生するために）のような酵素を使用して、タンパク質分解性切断によって産生される。あるいは、分泌タンパク質結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術の適用により、または合成化学により産生され得る。
【０４３０】
ヒトにおける抗体のインビボ使用のために、「ヒト化」キメラモノクローナル抗体を使用することが好ましくあり得る。このような抗体は、上記のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来する遺伝子構築物を使用することによって産生され得る。キメラ抗体を産生するための方法は当該分野で公知である。（総説については、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：  １２０２  （１９８５）；  Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４  （１９８６）；  Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、ＥＰ  １７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ  １７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ  ８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ  ８７０２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６４３  （１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：２６８（１９８５）を参照のこと。）
（実施例１１：高処理能力スクリーニングアッセイのための分泌タンパク質の産生）
以下のプロトコルは、試験されるべきポリぺプチドを含有する上清を産生する。次いで、この上清は、実施例１３〜２０に記載されるスクリーニングアッセイにおいて使用され得る。
【０４３１】
第一に、ポリ−Ｄ−リジン（６４４  ５８７  Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）ストック溶液（ＰＢＳ中に１ｍｇ／ｍｌ）を、ＰＢＳ（カルシウムもマグネシウムも含まない１７−５１６Ｆ  Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ）中で１：２０に希釈して、作業溶液５０μｇ／ｍｌにする。２００μｌのこの溶液を、各ウェル（２４ウェルプレート）に添加し、室温で２０分間インキュベートする。溶液を各ウェルにわたって分配させることを確実にする（注：チップをつけた１２チャンネルピペッターは、１つおきのチャンネルにおいて使用され得る）。ポリ−Ｄ−リジン溶液を吸引除去し、そして１ｍｌ  ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）でリンスする。ＰＢＳは、細胞をプレートする直前までウェル中に残るべきであり、そしてプレートは２週間まで予めポリリジンでコーティングされ得る。
【０４３２】
２９３Ｔ細胞（これは、Ｐ＋２０を過ぎて細胞を保有しない）を、２×１０５細胞／ウェルで、０．５ｍｌのＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地）（４．５Ｇ／ＬのグルコースおよびＬ−グルタミン（１２−６０４Ｆ  Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ）／１０％熱非働化ＦＢＳ（１４−５０３Ｆ  Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ）／１×Ｐｅｎｓｔｒｅｐ（１７−６０２Ｅ  Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ）を含む）中にプレートする。細胞を一晩増殖させる。
【０４３３】
翌日、滅菌溶液容器（ｂａｓｉｎ）中で、３００μｌリポフェクトアミン（１８３２４−０１２  Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）および５ｍｌ  Ｏｐｔｉｍｅｍ  Ｉ（３１９８５０７０  Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）／９６ウェルプレートを、一緒に混合する。小容量のマルチチャンネルピペッターを用いて、実施例８または９に記載する方法によって産生されたポリヌクレオチド挿入物を含有する約２μｇの発現ベクターを、適切に標識された９６ウェルの丸底プレート中にアリコートする。マルチチャンネルピペッターを用いて、５０μｌのリポフェクトアミン／Ｏｐｔｉｍｅｍ  Ｉ混合物を各ウェルに添加する。ピペットで緩やかに吸い上げたり下げたりして混合する。室温で１５〜４５分間インキュベートする。約２０分後、多チャンネルピペッターを使用して１５０μｌのＯｐｔｉｍｅｍ  Ｉを各ウェルに添加する。コントロールとして、インサートを欠失するベクターＤＮＡの１つのプレートは、トランスフェクションの各セットでトランスフェクトされるべきである。
【０４３４】
好ましくは、トランスフェクションは、以下の作業をタグ連結（ｔａｇ−ｔｅａｍｉｎｇ）することによって行うべきである。タグ連結によって、時間に関する労力は半減され、そして細胞をＰＢＳ上であまり多くの時間過ごさせない。まず、Ａさんは、培地を細胞の４つの２４ウェルプレートから吸引除去し、次いでＢさんが０．５〜１ｍｌのＰＢＳで各ウェルをリンスする。次いで、Ａさんは、ＰＢＳリンスを吸引除去し、そしてＢさんは、チップのついた１２チャンネルピペッターを使用して、チャンネル１つおきに、２００μｌのＤＮＡ／リポフェクトアミン／Ｏｐｔｉｍｅｍ  Ｉ複合体を、まず奇数のウェルに、次いで偶数のウェルにと、２４ウェルプレート上の各列に添加する。３７℃で６時間インキュベートする。
【０４３５】
細胞をインキュベートする間に、１×ペンストレップ（ｐｅｎｓｔｒｅｐ）を有するＤＭＥＭ中の１％ＢＳＡか、または２ｍＭグルタミンおよび１×ペンストレップを含むＣＨＯ−５培地（１１６．６ｍｇ／ＬのＣａＣｌ２（無水物）；０．００１３０ｍｇ／Ｌ  ＣｕＳＯ４−５Ｈ２Ｏ；０．０５０ｍｇ／ＬのＦｅ（ＮＯ３）３−９Ｈ２Ｏ；０．４１７ｍｇ／ＬのＦｅＳＯ４−７Ｈ２Ｏ；３１１．８０ｍｇ／ＬのＫＣｌ；２８．６４ｍｇ／ＬのＭｇＣｌ２；４８．８４ｍｇ／ＬのＭｇＳＯ４；６９９５．５０ｍｇ／ＬのＮａＣｌ；２４００．０ｍｇ／ＬのＮａＨＣＯ３；６２．５０ｍｇ／ＬのＮａＨ２ＰＯ４−Ｈ２Ｏ；７１．０２ｍｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４；０．４３２０ｍｇ／ＬのＺｎＳＯ４−７Ｈ２Ｏ；０．００２ｍｇ／Ｌのアラキドン酸；１．０２２ｍｇ／Ｌのコレステロール；０．０７０ｍｇ／ＬのＤＬ−α−酢酸トコフェロール；０．０５２０ｍｇ／Ｌのリノール酸；０．０１０ｍｇ／Ｌのリノレン酸；０．０１０ｍｇ／Ｌのミリスチン酸；０．０１０ｍｇ／Ｌのオレイン酸；０．０１０ｍｇ／Ｌのパルミトオレイン酸（ｐａｌｍｉｔｒｉｃ  ａｃｉｄ）；０．０１０ｍｇ／Ｌのパルミチン酸；１００ｍｇ／ＬのＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８；０．０１０ｍｇ／Ｌのステアリン酸；２．２０ｍｇ／ＬのＴｗｅｅｎ８０；４５５１ｍｇ／ＬのＤ−グルコース；１３０．８５ｍｇ／ｍｌのＬ−アラニン；１４７．５０ｍｇ／ｍｌのＬ−アルギニン−ＨＣＬ；７．５０ｍｇ／ｍｌのＬ−アスパラギン−Ｈ２Ｏ；６．６５ｍｇ／ｍｌのＬ−アスパラギン酸；２９．５６ｍｇ／ｍｌのＬ−シスチン２ＨＣｌ−Ｈ２Ｏ；３１．２９ｍｇ／ｍｌのＬ−シスチン−２ＨＣｌ；７．３５ｍｇ／ｍｌのＬ−グルタミン酸；３６５．０ｍｇ／ｍｌのＬ−グルタミン；１８．７５ｍｇ／ｍｌのグリシン；５２．４８ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン−ＨＣｌ−Ｈ２Ｏ；１０６．９７ｍｇ／ｍｌのＬ−イソロイシン；１１１．４５ｍｇ／ｍｌのＬ−ロイシン；１６３．７５ｍｇ／ｍｌのＬ−リジンＨＣｌ；３２．３４ｍｇ／ｍｌのＬ−メチオニン；６８．４８ｍｇ／ｍｌのＬ−フェニルアラニン；４０．０ｍｇ／ｍｌのＬ−プロリン；２６．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−セリン；１０１．０５ｍｇ／ｍｌのＬ−スレオニン；１９．２２ｍｇ／ｍｌのＬ−トリプトファン；９１．７９ｍｇ／ｍｌのＬ−チロシン−２Ｎａ−２Ｈ２Ｏ；９９．６５ｍｇ／ＬのＬ−バリン；０．００３５ｍｇ／Ｌのビオチン；３．２４ｍｇ／ＬのＤ−Ｃａパントテン酸；１１．７８ｍｇ／Ｌの塩化コリン；４．６５ｍｇ／Ｌの葉酸；１５．６０ｍｇ／Ｌのｉ−イノシトール；３．０２ｍｇ／Ｌのナイアシンアミド；３．００ｍｇ／ＬのピリドキサールＨＣｌ；０．０３１ｍｇ／ＬのピリドキシンＨＣｌ；０．３１９ｍｇ／Ｌのリボフラビン；３．１７ｍｇ／ＬのチアミンＨＣｌ；０．３６５ｍｇ／Ｌのチミジン；および０．６８０ｍｇ／ＬのビタミンＢ１２；２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝剤；２．３９ｍｇ／ＬのＮａヒポキサンチン；０．１０５ｍｇ／Ｌのリポ酸；０．０８１ｍｇ／Ｌのプトレシンナトリウム−２ＨＣｌ；５５．０ｍｇ／Ｌのピルビン酸；０．００６７ｍｇ／Ｌの亜セレン酸ナトリウム；２０μＭのエタノールアミン；０．１２２ｍｇ／Ｌのクエン酸第二鉄；４１．７０ｍｇ／���のリノール酸と複合体化したメチル−Ｂ−シクロデキストリン；３３．３３ｍｇ／Ｌのオレイン酸と複合体化したメチル−Ｂ−シクロデキストリン；ならびに１０ｍｇ／Ｌのレチナールと複合体化したメチル−Ｂ−シクロデキストリン）のいずれかの適切な培地を調製する。（１０％ＢＳＡストック溶液のために、１Ｌ  ＤＭＥＭ中にＢＳＡ（８１−０６８−３  Ｂａｙｅｒ）  １００ｇｍを溶解する）。培地を濾過し、そして５０μｌを内毒素アッセイのために１５ｍｌポリスチレンコニカル中に収集する。
【０４３６】
トランスフェクション反応を、好ましくはタグ結合（ｔａｇ−ｔｅａｍ）によってインキュベーション時間の終わりに終結させる。Ａさんは、トランスフェクション培地を吸引除去し、その間Ｂさんは、１．５ｍｌの適切な培地を各ウェルに添加する。使用された培地に依存して４５または７２時間、３７℃でインキュベートする：１％ＢＳＡは４５時間、またはＣＨＯ−５は７２時間。
【０４３７】
４日目に、３００μｌのマルチチャンネルピペッターを使用して、６００μｌを１ｍｌの深底ウェルプレートにアリコートし、そして残りの上清を２ｍｌの深底ウェルにアリコートする。次いで、各ウェルからの上清を実施例１３〜２０に記載するアッセイにおいて使用し得る。
【０４３８】
活性が、上清を使用して以下に記載する任意のアッセイにおいて得られる場合、活性は、ポリぺプチドから直接に（例えば、分泌タンパク質として）か、または他のタンパク質の発現を誘導するポリぺプチドによって（これは、次いで上清中に分泌される）のいずれかに由来することが特に理解される。従って、本発明はさらに、特定のアッセイにおける活性によって特徴づけられる上清中のタンパク質を同定する方法を提供する。
【０４３９】
（実施例１２：ＧＡＳレポーター構築物の構築）
細胞の分化および増殖に関与する１つのシグナル伝達経路は、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路と呼ばれる。Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化タンパク質は、多くの遺伝子のプロモーターに位置する、γ活性化部位「ＧＡＳ」エレメントまたはインターフェロン感受性応答エレメント（「ＩＳＲＥ」）に結合する。これらのエレメントに対するタンパク質の結合は、関連する遺伝子の発現を変化させる。
【０４４０】
ＧＡＳおよびＩＳＲＥエレメントは、転写のシグナルトランスデューサーおよびアクチベーターまたは「ＳＴＡＴ」と呼ばれる転写因子のクラスによって認識される。ＳＴＡＴファミリーには６つのメンバーが存在する。Ｓｔａｔ１およびＳｔａｔ３は、Ｓｔａｔ２と同様に（ＩＦＮαに対する応答が広範であるように）、多くの細胞型において存在する。Ｓｔａｔ４は、より限定されており、そして多くの細胞型において存在しないが、ＩＬ−１２での処理後のＴヘルパークラスＩ細胞に見出されている。Ｓｔａｔ５は、元々は哺乳動物成長因子と呼ばれたが、骨髄細胞を含む他の細胞においてより高い濃度で見出されている。それは、多くのサイトカインによって組織培養細胞において活性化され得る。
【０４４１】
ＳＴＡＴは活性化されて、Ｊａｎｕｓ  Ｋｉｎａｓｅ（「Ｊａｋｓ」）ファミリーとして知られるキナーゼのセットによってチロシンリン酸化に際して細胞質から核へ移動する。Ｊａｋｓは、可溶性のチロシンキナーゼの異なるファミリーを代表し、そしてＴｙｋ２、Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、およびＪａｋ３を含む。これらのキナーゼは、有意な配列類似性を示し、そして一般には休止細胞において触媒的に不活性である。
【０４４２】
Ｊａｋｓは、以下の表によって要約されるように広範なレセプターによって活性化される。（ＳｃｈｉｄｌｅｒおよびＤａｒｎｅｌｌ，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６４：６２１−５１（１９９５）による総説から改変。）Ｊａｋｓを活性化し得るサイトカインレセプターファミリーは、２つの群に分けられる：（ａ）クラスＩは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、Ｅｐｏ、ＰＲＬ、ＧＨ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、およびトロンボポエチンについてのレセプターを含み；そして、（ｂ）クラス２は、ＩＦＮ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、およびＩＬ−１０を含む。クラス１レセプターは、保存されたシステインモチーフ（４つの保存されたシステインおよび１つのトリプトファンのセット）、およびＷＳＸＷＳモチーフ（Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘｘｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（配列番号２）をコードする膜近接領域）を共有する。
【０４４３】
従って、リガンドのレセプターへの結合の際に、Ｊａｋｓは活性化され、これは次いでＳＴＡＴを活性化し、これは、次いで移動し、そしてＧＡＳエレメントに結合する。この全プロセスは、Ｊａｋｓ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に包含される。
【０４４４】
それゆえ、ＧＡＳまたはＩＳＲＥエレメントの結合によって反映されるＪａｋｓ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分化に関与するタンパク質を示すために使用され得る。例えば、成長因子およびサイトカインは、Ｊａｋｓ−ＳＴＡＴ経路を活性化することが知られている。（以下の表を参照のこと）。従って、レポーター分子に連結したＧＡＳエレメントを使用することにより、Ｊａｋｓ−ＳＴＡＴ経路のアクチベーターが同定され得る。
【０４４５】
【表３】
2009131263.tif 000013
【０４４６】
実施例１３〜１４に記載される生物学的アッセイにおいて使用されるプロモーターエレメントを含む合成ＧＡＳを構築するために、ＰＣＲに基づいたストラテジーをＧＡＳ−ＳＶ４０プロモーター配列を産生するために採用する。５’プライマーは、ＩＲＦ１プロモーターにおいて見出され、そして一定の範囲のサイトカインでの誘導の際にＳＴＡＴに結合することが以前に証明されたＧＡＳ結合部位の４つのタンデムなコピーを含むが（Ｒｏｔｈｍａｎら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １：  ４５７−４６８  （１９９４））、他のＧＡＳまたはＩＳＲＥエレメントを代わりに使用し得る。５’プライマーはまた、ＳＶ４０初期プロモーター配列に対して相補的な１８ｂｐの配列も含み、そしてＸｈｏＩ部位に隣接する。５’プライマーの配列は以下である：
【０４４７】
【化４】
2009131263.tif 000014
【０４４８】
下流プライマーはＳＶ４０プロモーターに対して相補的であり、Ｈｉｎｄ  ＩＩＩ部位に隣接する：５’：ＧＣＧＧＣＡＡＧＣＴＴＴＴＴＧＣＡＡＡＧＣＣＴＡＧＧＣ：３’（配列番号４）。
【０４４９】
ＰＣＲ増幅を、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手したＢ−ｇａｌ：プロモータープラスミド中に存在するＳＶ４０プロモーターのテンプレートを用いて実施する。得られたＰＣＲフラグメントをＸｈｏＩ／Ｈｉｎｄ  ＩＩＩを用いて消化し、そしてＢＬＳＫ２−（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にサブクローニングする。正方向および逆方向のプライマーを用いる配列決定により、挿入物が以下の配列を含むことを確認する：
【０４５０】
【化５】
2009131263.tif 000015
【０４５１】
次に、ＳＶ４０プロモーターに結合したこのＧＡＳプロモーターエレメントを用いて、ＧＡＳ：ＳＥＡＰ２レポーター構築物を操作する。ここで、レポーター分子は、分泌アルカリホスファターゼ、すなわち「ＳＥＡＰ」である。しかしながら、明らかに、この実施例または他の実施例のいずれにおいても、任意のレポーターの分子が、ＳＥＡＰの代わりとなり得る。ＳＥＡＰの代わりに使用され得る周知のレポーター分子には、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グリーン蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、または抗体により検出可能な任意のタンパク質が挙げられる。
【０４５２】
合成ＧＡＳ−ＳＶ４０プロモーターエレメントと確認された上記の配列を、ＧＡＳ−ＳＥＡＰベクターを作製するために、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｈｏＩを用いて、ＳＶ４０プロモーターを、増幅したＧＡＳ：ＳＶ４０プロモーターエレメントで効率的に置換し、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手したｐＳＥＡＰ−プロモーターベクターにサブクローニングする。しかしながらこのベクターはネオマイシン耐性遺伝子を含まず、それゆえ、哺乳動物の発現系には好ましくない。
【０４５３】
従って、ＧＡＳ−ＳＥＡＰレポーターを発現する哺乳動物の安定な細胞株を作製するために、ＧＡＳ−ＳＥＡＰカセットをＳａｌＩおよびＮｏｔＩを用いて、ＧＡＳ−ＳＥＡＰベクターから取り出し、そしてＧＡＳ−ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを作製するために、複数のクローニング部位におけるこれらの制限部位を用いて、ネオマイシン耐性遺伝子を含むバックボーンベクター（例えば、ｐＧＦＰ−１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ））に挿入する。一旦、このベクターを哺乳動物細胞にトランスフェクトすれば、このベクターは、実施例１３〜１４に記載されるようにＧＡＳ結合のためのレポーター分子として使用され得る。
【０４５４】
他の構築物を上記の記載を使用し、そしてＧＡＳを異なるプロモーター配列で置換して、作製し得る。例えば、ＮＦＫ−ＢおよびＥＧＲプロモーター配列を含むレポーター分子の構築を、実施例１５および１６に記載する。しかし、多くの他のプロモーターをこれらの実施例に記載のプロトコルを使用して置換し得る。例えば、ＳＲＥ、ＩＬ−２、ＮＦＡＴ、またはオステオカルシンのプロモーターを単独または組み合わせて（例えば、ＧＡＳ／ＮＦ−ＫＢ／ＥＧＲ、ＧＡＳ／ＮＦ−ＫＢ、Ｉｌ−２／ＮＦＡＴ、またはＮＦ−ＫＢ／ＧＡＳ）置換し得る。同様に、他の細胞株（例えば、ＨＥＬＡ（上皮細胞）、ＨＵＶＥＣ（内皮細胞）、Ｒｅｈ（Ｂ細胞）、Ｓａｏｓ−２（骨芽細胞）、ＨＵＶＡＣ（大動脈細胞）、または心筋細胞を、レポーター構築物の活性を試験するために使用し得る。
【０４５５】
（実施例１３：Ｔ細胞の活性についての高処理能力スクリーニングアッセイ）
以下のプロトコルを、例えば、Ｔ細胞を増殖または分化させ得る増殖因子およびサイトカインのような因子を同定することによりＴ細胞の活性を評価するために使用する。Ｔ細胞の活性を実施例１２で作製したＧＡＳ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構築物を用いて評価する。従って、ＳＥＡＰ活性を増加させる因子は、Ｊａｋｓ−ＳＴＡＴＳシグナル伝達経路を活性化する能力を示す。このアッセイに使用したＴ細胞は、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＴＩＢ−１５２）であるが、Ｍｏｌｔ−３細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５５２）およびＭｏｌｔ−４細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５８２）細胞もまた使用し得る。
【０４５６】
Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞は、リンパ芽球性ＣＤ４＋  Ｔｈ１ヘルパー細胞である。安定な細胞株を作製するために、およそ２００万のＪｕｒｋａｔ細胞をＤＭＲＩＥ−Ｃ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、ＧＡＳ−ＳＥＡＰ／ｎｅｏベクターでトランスフェクト（以下に記載のトランスフェクション手順）する。トランスフェクトした細胞を、およそ２０，０００細胞／ウェルの密度で播種し、そして１ｍｇ／ｍｌのゲンチシン（ｇｅｎｔｉｃｉｎ）に対して耐性であるトランスフェクト体を選択する。耐性コロニーを増殖させ、次いで、インターフェロンγの漸増する濃度に対するそれらの応答について試験する。選択したクローンの用量反応を示す。
【０４５７】
詳細には、以下のプロトコールにより、２００μｌの細胞を含む７５のウェルについて十分な細胞を得る。従って、複数の９６ウェルプレートについて十分な細胞を産生するために、スケールアップするか、または複数で実施するかのいずれかである。Ｊｕｒｋａｔ細胞を１％のＰｅｎ−ＳｔｒｅｐとともにＲＰＭＩ＋１０％  血清中で維持する。Ｔ２５フラスコ中で２．５ｍｌのＯＰＴＩ−ＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と１０μｇのプラスミドＤＮＡを組み合わせる。５０μｌのＤＭＲＩＥ−Ｃを含む２．５ｍｌのＯＰＴＩ−ＭＥＭを添加し、そして、室温で１５〜４５分間インキュベートする。
【０４５８】
インキュベート時間の間、細胞濃度をカウントし、必要な細胞数（トランスフェクションあたり１０７個）をスピンダウンし、そして最終濃度が１０７細胞／ｍｌとなるようにＯＰＴＩ−ＭＥＭ中で再懸濁する。次いで、１ｍｌのＯＰＴＩ−ＭＥＭ中の１×１０７個の細胞をＴ２５フラスコに加え、そして３７℃で６時間インキュベートする。インキュベーションの後、１０ｍｌのＲＰＭＩ＋１５％の血清を添加する。
【０４５９】
Ｊｕｒｋａｔ：ＧＡＳ−ＳＥＡＰ安定レポーター株をＲＰＭＩ＋１０％  血清、１ｍｇ／ｍｌ  ゲンチシン、および１％  Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐ中で維持する。これらの細胞を実施例１１に記載されるプロトコルにより産生されるようなポリペプチドを含む上清で処理する。
【０４６０】
上清の処理日に細胞を洗浄すべきであり、そして１ｍｌあたり５００，０００個の密度となるまで新鮮なＲＰＭＩ＋１０％血清中に再懸濁するべきである。必要な細胞の正確な数は、スクリーニングされる上清の数に依存する。１枚の９６ウェルプレートについて、およそ１０００万個の細胞（１０枚のプレートについて１億個の細胞）を必要とする。
【０４６１】
細胞を、１２チャンネルのピペットを用いて９６ウェルのディッシュに分与するために、三角のリザーバーボートに細胞を移す。２００μｌの細胞を、１２チャンネルのピペットを用いて、それぞれのウェルに移す（従って、ウェル当たり１００，０００個の細胞を添加する）。
【０４６２】
全てのプレートに播種した後、５０μｌの上清を、１２チャンネルピペットを用いて、上清を含む９６ウェルプレートから各ウェルに直接的に移す。さらに、外来性のインターフェロンγの用量（０．１、１．０、１０ｎｇ）を、ウェルＨ９、ウェルＨ１０、およびウェルＨ１１に添加し、アッセイについてのさらなる陽性コントロールとして供する。
【０４６３】
上清で処理したＪｕｒｋａｔ細胞を含む９６ウェルディッシュをインキュベーターに４８時間置く（注：この時間は４８〜７２時間の間で変更可能である）。次いで、各ウェルから３５μｌのサンプルを１２チャンネルのピペットを用いて、不透明な９６ウェルプレートに移す。不透明なプレートを（セロファンのカバーを用いて）覆うべきであり、そして実施例１７に従うＳＥＡＰアッセイを行うまで、２０℃で保存する。残存する処理した細胞を含むプレートを４℃に置き、そして、所望するならば、特定のウェル上でのアッセイを繰り返すための物質の供給源として供する。
【０４６４】
陽性コントロールとして、１００ユニット／ｍｌのインターフェロンγを使用し得、これは、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を活性化することが公知である。代表的には、３０倍を超える誘導が、陽性コントロールのウェルにおいて観察される。
【０４６５】
（実施例１４：骨髄性の活性を同定する高処理能力スクリーニングアッセイ）
以下のプロトコルを、骨髄性細胞を増殖または分化させ得る増殖因子およびサイトカインのような因子を同定することにより骨髄性の活性を評価するために使用する。骨髄性細胞活性を実施例１２において産生されたＧＡＳ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構築物を用いて評価する。従って、ＳＥＡＰ活性を増加させる因子は、Ｊａｋｓ−ＳＴＡＴＳシグナル伝達経路を活性化させる能力を示す。このアッセイに使用した骨髄性細胞は、Ｕ９３７、前単球（ｐｒｅ−ｍｏｎｏｃｙｔｅ）細胞株であるが、ＴＦ−１、ＨＬ６０、またはＫＧ１も使用し得る。
【０４６６】
Ｕ９３７細胞を、実施例１２において産生されたＧＡＳ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構築物で、一過性にトランスフェクトするために、ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ法（Ｋｈａｒｂａｎｄａら、１９９４，Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  ＆  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，  ５：  ２５９−２６５）を用いる。最初に、２×１０７個のＵ９３７細胞を回集し、そしてＰＢＳで洗浄する。Ｕ９３７細胞を、通常、１００単位／ｍｌのペニシリンおよび１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充した１０％  熱非働化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ  １６４０培地中で増殖させる。
【０４６７】
次に、０．５ｍｇ／ｍｌ  ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ、８μｇのＧＡＳ−ＳＥＡＰ２プラスミドＤＮＡ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、３７５μＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４．７Ｈ２Ｏ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、および６７５μＭ  ＣａＣｌ２を含む１ｍｌの２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ７．４）緩衝液に細胞を懸濁する。３７℃で４５分間インキュベートする。
【０４６８】
１０％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ  １６４０培地で細胞を洗浄し、次いで、１０ｍｌの完全培地に再懸濁し、そして３７℃で３６時間インキュベートする。
【０４６９】
ＧＡＳ−ＳＥＡＰ／Ｕ９３７安定細胞を、４００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で細胞を増殖させることにより得る。Ｇ４１８を含まない培地を使用して、慣用的に増殖させるが、１〜２ヶ月毎ではあるが、細胞を二継代の間、４００μｇ／ｍｌ  Ｇ４１８中で再増殖させるべきである。
【０４７０】
これらの細胞を１×１０８個の細胞を回集すること（これは１０枚の９６ウェルプレートアッセイのために十分である）により試験し、そしてＰＢＳで洗浄する。上記の２００ｍｌの増殖培地中で、５×１０５細胞／ｍｌの最終密度で細胞を懸濁する。９６ウェルプレートにおいてウェルあたり２００μｌの細胞をプレートする（すなわち、１×１０５細胞／ウェル）。
【０４７１】
実施例１１に記載されるプロトコルにより調製された上清を５０μｌ添加する。３７℃で４８〜７２時間インキュベートする。陽性コントロールとして、１００  単位／ｍｌのインターフェロンγを使用し得、これはＵ９３７細胞を活性化させることが公知である。代表的には、３０倍を超える誘導が、陽性コントロールウェルにおいて観察される。ＳＥＡＰは、実施例１７に記載のプロトコルに従って上清をアッセイする。
【０４７２】
（実施例１５：ニューロン活性を同定する高処理能力スクリーニングアッセイ）
細胞が分化および増殖をうける場合、遺伝子群は多くの異なるシグナル伝達経路を介して活性化される。これらの遺伝子の１つであるＥＧＲ１（初期増殖応答遺伝子１）を活性化時に種々の組織および細胞型において誘導する。ＥＧＲ１のプロモーターはこのような誘導を担う。レポーター分子に結合したＥＧＲ１プロモーターを使用して、細胞の活性化を評価し得る。
【０４７３】
詳細には、以下のプロトコルをＰＣ１２細胞株におけるニューロン活性を評価するために使用する。ＰＣ１２細胞（ラット褐色細胞腫（ｐｈｅｎｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａ  ｃｅｌｌ））は、多くのマイトジェン（例えば、ＴＰＡ（テトラデカノイルホルボールアセテート）、ＮＧＦ（神経成長因子）、およびＥＧＦ（上皮増殖因子））での活性化により増殖および／または分化することが公知である。この処理の間にＥＧＲ１遺伝子発現を活性化する。従って、ＳＥＡＰレポーターに結合したＥＧＲプロモーターを含む構築物でＰＣ１２細胞を安定にトランスフェクトすることにより、ＰＣ１２細胞の活性化を評価し得る。
【０４７４】
ＥＧＲ／ＳＥＡＰレポーター構築物を以下のプロトコルにより組み立て得る。ＥＧＲ−１プロモーター配列（−６３３〜＋１）（Ｓａｋａｍｏｔｏ  Ｋら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ６：  ８６７−８７１（１９９１））を以下のプライマーを用いて、ヒトゲノムＤＮＡからＰＣＲ増幅し得る：
【０４７５】
【化６】
2009131263.tif 000016
【０４７６】
次いで、実施例１２において作製したＧＡＳ：ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを使用して、ＥＧＲ１増幅産物をこのベクターに挿入し得る。制限酵素ＸｈｏＩ／ＨｉｎｄＩＩＩを使用してＧＡＳ：ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを線状化し、ＧＡＳ／ＳＶ４０スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）を取り除く。これらと同じ酵素を用いて、ＥＧＲ１増幅産物を制限する。ベクターとＥＧＲ１プロモーターとを連結する。
【０４７７】
細胞培養のための９６ウェルプレートを調製するために、コーティング溶液（コラーゲンＩ型（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．  カタログ番号０８−１１５）を含む３０％エタノール（滅菌濾過）での１：３０希釈）を１つの１０ｃｍプレートあたり２ｍｌ、または９６ウェルプレートのウェルあたり５０μｌ添加し、そして２時間風乾させる。
【０４７８】
ＰＣ１２細胞を、予めコートした１０ｃｍ組織培養ディッシュ上で、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を補充した、１０％  ウマ血清（ＪＲＨ  ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ  カタログ番号１２４４９−７８Ｐ）、５％  熱非働化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｂｉｏ  Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ）中で慣用的に増殖させる。１つから４つへの分割を３〜４日毎に行う。細胞を掻き取ることによりプレートから取り出し、そして１５回より多く上下にピペッティングして再懸濁する。
【０４７９】
ＥＧＲ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構築物を、実施例１１に記載のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅプロトコルを使用して、ＰＣ１２にトランスフェクトする。ＥＧＲ−ＳＥＡＰ／ＰＣ１２安定細胞を、３００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で細胞を増殖させることにより得る。１〜２ヶ月毎ではあるが、Ｇ４１８を含まない培地を慣用の増殖のために使用する。細胞を２継代の間、３００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で再増殖させるべきである。
【０４８０】
ニューロン活性をアッセイするために、およそ７０〜８０％コンフルエントである細胞を有する１０ｃｍプレートを、古い培地を除去することによりスクリーニングする。細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）を用いて１回洗浄する。次いで、細胞を低血清培地（抗生物質とともに１％  ウマ血清および０．５％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ−１６４０）中で一晩、飢餓させる。
【０４８１】
翌朝、培地を除去し、そしてＰＢＳで細胞を洗浄する。プレートから細胞を掻き取り、細胞を２ｍｌの低血清培地中でよく懸濁する。細胞数をカウントし、そしてより低血清の培地に添加し、５×１０５細胞／ｍｌの最終細胞密度に到達させる。
【０４８２】
２００μｌの細胞懸濁液を９６ウェルプレートの各ウェルに添加する（１×１０５細胞／ウェルに等しい）。実施例１１により産生された５０μｌの上清を、３７℃で４８〜７２時間加える。陽性コントロールとして、ＥＧＲを介してＰＣ１２細胞を活性化することが公知の成長因子（例えば、５０ｎｇ／μｌの神経成長因子（ＮＧＦ））を使用し得る。代表的には、５０倍を超えるＳＥＡＰ誘導が陽性コントロールウェルにおいて見られる。ＳＥＡＰは実施例１７に従って、上清をアッセイする。
【０４８３】
（実施例１６：Ｔ細胞の活性についての高処理能力スクリーニングアッセイ）
ＮＦ−κＢ（核因子κＢ）は、広範な種々の薬剤（炎症性サイトカインであるＩＬ−１およびＴＮＦ、ＣＤ３０およびＣＤ４０、リンホトキシン−αおよびリンホトキシン−βを含む）により、ＬＰＳまたはトロンビンへの曝露により、ならびに特定のウイルス遺伝子産物の発現により活性化される転写因子である。転写因子として、ＮＦ−κＢは免疫細胞の活性化に関与する遺伝子の発現、アポトーシスの制御（ＮＦ−κＢは、アポトーシスから細胞を保護すると思われる）、Ｂ細胞およびＴ細胞の発生、抗ウイルス応答および抗菌応答、ならびに複数のストレス応答を調節する。
【０４８４】
刺激されない条件において、ＮＦ−κＢは、Ｉ−κＢ（インヒビターκＢ）を有する細胞質に保持される。しかしながら、刺激の際に、Ｉ−κＢはリン酸化され、そして分解（ｄｅｇｒａｄｅｄ）され、ＮＦ−κＢの核への往復（ｓｈｕｔｔｌｅ）を引き起こす。これにより標的遺伝子の転写を活性化する。ＮＦ−κＢにより活性化される標的遺伝子には、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＣＡＭ−１およびＭＨＣクラスＩが挙げられる。
【０４８５】
その中心的な役割および一定の範囲の刺激に応答する能力に起因して、ＮＦ−κＢプロモーターエレメントを利用するレポーター構築物を、実施例１１において産生された上清をスクリーニングするために使用する。ＮＦ−κＢのアクチベーターまたはインヒビターは、疾患の処置に有用である。例えば、ＮＦ−κＢのインヒビターを、急性または慢性的なＮＦ−κＢの活性化に関連するこれらの疾患（例えば、慢性関節リウマチ）を処置するために使用し得る。
【０４８６】
ＮＦ−κＢプロモーターエレメントを含むベクターを構築するために、ＰＣＲに基づいたストラテジーを採用する。上流のプライマーは、ＮＦ−κＢ結合部位の４つの直列のコピー（ＧＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＣ）（配列番号８）、ＳＶ４０初期プロモーター配列の５’末端に対して相補的な１８ｂｐの配列を含み、そしてＸｈｏＩ部位に隣接する：
【０４８７】
【化７】
2009131263.tif 000017
【０４８８】
下流プライマーは、ＳＶ４０プロモーターの３’末端に対して相補的であり、そしてＨｉｎｄＩＩＩ部位に隣接する：
５’：ＧＣＧＧＣＡＡＧＣＴＴＴＴＴＧＣＡＡＡＧＣＣＴＡＧＧＣ：３’（配列番号４）。
【０４８９】
ＰＣＲ増幅を、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手したｐβ−ｇａｌ：プロモータープラスミドに存在するＳＶ４０プロモーターのテンプレートを使用して行う。得られたＰＣＲフラグメントをＸｈｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化し、そしてＢＬＳＫ２−（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にサブクローニングする。Ｔ７およびＴ３プライマーを用いる配列決定により、挿入物が以下の配列を含むことを確認する：
【０４９０】
【化８】
2009131263.tif 000018
【０４９１】
次に、ＸｈｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩを使用して、ｐＳＥＡＰ２−プロモータープラスミド（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に存在するＳＶ４０最小プロモーターエレメントをこのＮＦ−κＢ／ＳＶ４０フラグメントと置換する。しかしながら、このベクターはネオマイシン耐性遺伝子を含まず、そしてそれゆえ哺乳動物の発現系には好ましくない。
【０４９２】
安定な哺乳動物細胞株を作製するために、ＮＦ−κＢ／ＳＶ４０／ＳＥＡＰカセットを制限酵素ＳａｌＩおよびＮｏｔＩを使用して上記のＮＦ−κＢ／ＳＥＡＰベクターから取り出し、そしてネオマイシン耐性を含むベクターに挿入する。詳細には、ＳａｌＩおよびＮｏｔＩでｐＧＦＰ−Ｉを制限した後に、ＮＦ−κＢ／ＳＶ４０／ＳＥＡＰカセットをｐＧＦＰ−Ｉ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に挿入し、ＧＦＰ遺伝子を置換した。
【０４９３】
一旦、ＮＦ−κＢ／ＳＶ４０／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを作製した後は、実施例１３に記載のプロトコルに従って、安定なＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を作製し、そして維持する。同様に、これらの安定なＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を含む上清をアッセイするための方法がまた、実施例１３に記載される。陽性コントロールとして、外因性のＴＮＦα（０．１、１、１０ｎｇ）をウェルＨ９、Ｈ１０、およびＨ１１に添加し、代表的には、５〜１０倍の活性化を観察する。
【０４９４】
（実施例１７：ＳＥＡＰ活性についてのアッセイ）
実施例１３〜１６に記載されるアッセイのためのレポーター分子として、ＳＥＡＰ活性を、以下の一般的な手順に従ってＴｒｏｐｉｘ  Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｌｉｇｈｔ  Ｋｉｔ（カタログ番号ＢＰ−４００）を用いてアッセイする。Ｔｒｏｐｉｘ  Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｌｉｇｈｔ  Ｋｉｔは、以下で使用される希釈緩衝液、アッセイ緩衝液、および反応緩衝液を提供する。
【０４９５】
２．５×希釈緩衝液でディスペンサーをプライムし、そして１５μｌの２．５×希釈緩衝液を３５μｌの上清を含むオプティプレート（Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ）に分与する。プラスチックシーラーでプレートをシールし、そして６５℃で３０分間インキュベートする。一様でない加温を避けるためにオプティプレートを引き離す。
【０４９６】
サンプルを室温まで１５分間冷却する。ディスペンサーを空にし、そしてアッセイ緩衝液でプライムする。５０μｌのアッセイ緩衝液を添加し、そして室温で５分間インキュベートする。ディスペンサーを空にし、そして反応緩衝液でプライムする（以下の表を参照のこと）。５０μｌの反応緩衝液を添加し、そして室温で２０分間インキュベートする。化学発光シグナルの強度は時間依存的であり、そして照度計上で５つのプレートを読むために約１０分間を費やすので、５つのプレートをそれぞれの時間で処理し、１０分後に２つ目のセットを開始するべきである。
【０４９７】
照度計における相対的な光の単位（ｌｉｇｈｔ  ｕｎｉｔ）を読む。ブランクとしてＨ１２をセットし、そして結果を印字する。化学発光の増加は、レポーター活性を示す。
【０４９８】
【表４】
2009131263.tif 000019
【０４９９】
（実施例１８：低分子の濃度および膜透過性における変化を同定する高処理能力スクリーニングアッセイ）
レセプターへのリガンドの結合は、カルシウム、カリウム、ナトリウムのような低分子およびｐＨの細胞内レベルを変化させ、さらに膜電位を変化させることは公知である。これらの変化を特定細胞のレセプターに結合する上清の同定を行うアッセイで測定し得る。以下のプロトコルは、カルシウムのアッセイを記載するが、このプロトコルは、カリウム、ナトリウム、ｐＨ、膜電位、または蛍光プローブにより検出可能な任意の他の低分子における変化を検出するように容易に改変し得る。
【０５００】
以下のアッセイは、蛍光画像化プレートリーダー（「ＦＬＩＰＲ」）を使用して低分子と結合する蛍光分子（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）における変化を測定する。明らかに、低分子を検出する任意の蛍光分子を本明細書で用いるカルシウム蛍光分子、ｆｌｕｏ−３の代わりに使用し得る。
【０５０１】
接着細胞については、細胞を１０，０００〜２０，０００細胞／ウェルで、底が透明なＣｏ−ｓｔａｒ  ｂｌａｃｋ９６−ウェルプレートに播種する。プレートをＣＯ２インキュベーター内で２０時間インキュベートする。接着細胞をＢｉｏｔｅｋ洗浄器内で２００μｌのＨＢＳＳ（Ｈａｎｋ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）で二回洗浄し、最後の洗浄後、緩衝液１００μｌを残す。
【０５０２】
１ｍｇ／ｍｌ  ｆｌｕｏ−３の貯蔵溶液を１０％プルロン酸（ｐｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）ＤＭＳＯで作製する。細胞にｆｌｕｏ−３を負荷するため、１２μｇ／ｍｌ  ｆｌｕｏ−３  ５０μｌを各ウェルに添加する。このプレートをＣＯ２インキュベーター中、３７℃で６０分間インキュベートする。プレートをＢｉｏｔｅｋ洗浄器で、ＨＢＳＳにより４回洗浄し、緩衝液１００μｌを残す。
【０５０３】
非接着細胞については、細胞を遠心して培養培地から分離する。細胞を２〜５×１０６細胞／ｍｌに５０ｍｌのコニカルチューブ内でＨＢＳＳを用いて再懸濁する。１ｍｇ／ｍｌ  ｆｌｕｏ−３の１０％プルロン酸ＤＭＳＯ溶液  ４μｌを細胞懸濁液１ｍｌごとに加える。次に、チューブを３７℃の水浴中に３０〜６０分間放置する。細胞をＨＢＳＳで二回洗浄し、１×１０６細胞／ｍｌに再懸濁し、そしてマイクロプレートに１００μｌ／ウェルずつ分配する。プレートを１０００ｒｐｍで５分間遠心分離する。次に、プレートをＤｅｎｌｅｙ  ＣｅｌｌＷａｓｈ中で２００μｌで一回洗浄した後、吸引工程により最終容量を１００μｌにする。
【０５０４】
非細胞ベースのアッセイについては、各ウェルは、ｆｌｕｏ−３などの蛍光分子を含有する。上清をウェルに添加し、そして蛍光変化を検出する。
【０５０５】
細胞内カルシウムの蛍光を測定するため、ＦＬＩＰＲを以下のパラメーターについて設定する：（１）システムゲインは、３００〜８００ｍＷ；（２）曝露時間は、０．４秒間；（３）カメラＦ／ｓｔｏｐは、Ｆ／２；（４）励起波長は４８８ｎｍ；（５）発光波長は５３０ｎｍ；および（６）サンプル添加量は５０μｌ。５３０ｎｍにおける発光の増加は、細胞内Ｃａ＋＋濃度の増加を生じる、細胞外シグナリング事象を示す。
（実施例１９：チロシンキナーゼ活性を同定する高処理能力スクリーニングアッセイ）
プロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）は、膜貫通キナーゼおよび細胞質キナーゼの多様な群を表す。レセプタープロテインチロシンキナーゼ（ＲＰＴＫ）群内に、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＨＧＦおよびインスリンレセプターサブファミリーを含む一定の範囲の有糸分裂促進性（ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ）および代謝性成長因子のレセプターがある。さらに、対応するリガンドが未知である大きなＲＰＴＫファミリーがある。ＲＰＴＫのリガンドは、主として分泌小タンパク質を含むが、膜結合型および細胞外マトリックスタンパク質も含有する。
【０５０６】
リガンドによるＲＰＴＫの活性化は、リガンド媒介レセプター二量体化に関与し、レセプターサブユニットのトランスリン酸化および細胞質チロシンキナーゼの活性化が起こる。細胞質チロシンキナーゼには、ｓｒｃファミリー（例えば、ｓｒｃ、ｙｅｓ、ｌｃｋ、ｌｙｎ、ｆｙｎ）のレセプター関連チロシンキナーゼ、ならびにＪａｋファミリーのような非レセプター結合型および細胞質ゾルプロテインチロシンキナーゼが挙げられる。これらのメンバーは、サイトカインスーパーファミリーのレセプター（例えば、インターロイキン、インターフェロン、ＧＭ−ＣＳＦおよびレプチン）によって誘発されるシグナル伝達を介在する。
【０５０７】
チロシンキナーゼ活性を刺激し得る広範な公知の因子のため、チロシンキナーゼシグナル伝達経路を活性化し得る新規なヒト分泌タンパク質の同定は興味深い。従って、以下のプロトコルを設計して、チロシンキナーゼシグナル伝達経路を活性化し得るその新規なヒト分泌タンパク質を同定する。
【０５０８】
標的細胞（例えば、初代ケラチノサイト）を約２５，０００細胞／ウェルの密度で、Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ（Ｎａｐｅｒｖｉｌｌｅ，ＩＬ）から購入した９６ウェルＬｏｐｒｏｄｙｎｅ  Ｓｉｌｅｎｔ  Ｓｃｒｅｅｎ  Ｐｌａｔｅｓに播種する。プレートを１００％エタノールで３０分間、二回リンスして滅菌し、水でリンスした後、一晩乾燥させる。幾つかのプレートを、１００ｍｌの細胞培養グレードＩ型コラーゲン（５０ｍｇ／ｍｌ）、ゼラチン（２％）またはポリリジン（５０ｍｇ／ｍｌ）（これらは全て、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入し得る）で、またはＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）から購入した１０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ、あるいは仔ウシ血清で２時間コートし、ＰＢＳでリンスした後、４℃で貯蔵する。増殖培地に５，０００細胞／ウェルを播種し、４８時間後に製造業者のＡｌａｍａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，ＣＡ）が記載するように、ａｌａｍａｒＢｌｕｅを使用して細胞数を間接定量することにより、これらのプレート上の細胞増殖をアッセイする。Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）のＦａｌｃｏｎプレートカバー＃３０７１を使用し、Ｌｏｐｒｏｄｙｎｅ  Ｓｉｌｅｎｔ  Ｓｃｒｅｅｎ  Ｐｌａｔｅを覆う。Ｆａｌｃｏｎ  Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ  ＩＩＩ細胞培養プレートもまた、いくつかの増殖実験において使用し得る。
【０５０９】
抽出物を調製するため、Ａ４３１細胞をＬｏｐｒｏｄｙｎｅプレートのナイロン膜上に播種し（２０，０００／２００ｍｌ／ウェル）、そして完全培地内で一晩培養する。細胞を無血清基本培地中で２４時間インキュベートして静止させる。ＥＧＦ（６０ｎｇ／ｍｌ）または実施例１１で生成した上清５０μｌで５〜２０分間処理した後、培地を除去し、１００ｍｌの抽出緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５，０．１５Ｍ  ＮａＣｌ，１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，０．１％ＳＤＳ，２ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４，２ｍＭ  Ｎａ４Ｐ２Ｏ７およびＢｏｅｈｅｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）から入手したプロテアーゼインヒビターの混合物（＃１８３６１７０））を各ウェルに添加し、そしてプレートを回転振盪器上、４℃で５分間振盪する。次に、プレートを真空トランスファーマニホールド（ｖａｃｕｕｍ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｍａｎｉｆｏｌｄ）に設置し、そしてハウスバキュームを使用して抽出物を各ウェルの底の０．４５ｍｍ膜で濾過する。抽出物をバキュームマニホールドの底の９６−ウェル捕獲／アッセイプレートに集め、そして直ちに氷上に置く。遠心分離により明澄化した抽出物を得るため、界面活性剤で５分間可溶化した後、各ウェルの含有物を取り出し、４℃、１６，０００×ｇで１５分間遠心分離する。
【０５１０】
濾過抽出物をチロシンキナーゼ活性レベルについて試験する。チロシンキナーゼ活性を検出する多数の方法が公知であるが、本明細書においては方法の一つを記載する。
【０５１１】
一般的に、特異的な基質（ビオチン化ペプチド）上のチロシン残基をリン酸化する能力を測定することにより、上清のチロシンキナーゼ活性を評価する。この目的に使用し得るビオチン化ペプチドには、ＰＳＫ１（細胞分裂キナーゼｃｄｃ２−ｐ３４のアミノ酸６〜２０に対当）およびＰＳＫ２（ガストリンのアミノ酸１〜１７に対当）が含まれる。両ペプチドは、一連のチロシンキナーゼの基質であり、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ    Ｍａｎｎｈｅｉｍから入手される。
【０５１２】
以下の成分を順に添加することにより、チロシンキナーゼ反応をセットアップする。まず、５μＭビオチン化ペプチド１０μｌを添加した後、順に、ＡＴＰ／Ｍｇ２＋（５ｍＭ  ＡＴＰ／５０ｍＭ  ＭｇＣｌ２）  １０μｌ、５×アッセイ緩衝液（４０ｍＭ塩酸イミダゾール、ｐＨ７．３、４０ｍＭβ−グリセロリン酸塩、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１００ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．５ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ）  １０μｌ、バナジウム酸ナトリウム（１ｍＭ）  ５μｌ、最後に水５μｌを加える。成分を穏やかに混合し、反応混合物を３０℃で２分間プレインキュベートする。コントロール酵素または濾過上清１０μｌを加えて反応を開始させる。
【０５１３】
次に、１２０ｍＭ  ＥＤＴＡ１０μｌを添加して反応物を氷上に置くことにより、チロシンキナーゼアッセイ反応を停止させる。
【０５１４】
反応混合物の５０μｌのアリコートをマイクロタイタープレート（ＭＴＰ）モジュールに移し、３７℃で２０分間インキュベートすることにより、チロシンキナーゼ活性を測定する。これにより、ストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐｔａｖａｄｉｎ）被覆９６ウエルプレートをビオチン化ペプチドと結合させる。ＭＴＰモジュールを３００μｌ／ウエルのＰＢＳで４回洗浄する。次に、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合した抗ホスホチロシン（ｐｈｏｓｐｏｔｙｒｏｓｉｎｅ）抗体（抗Ｐ−Ｔｙｒ−ＰＯＤ（０．５ｕ／ｍｌ））７５μｌを、各ウエルに添加した後、３７℃で１時間インキュベートする。ウエルを上記のように洗浄する。
【０５１５】
次に、ペルオキシダーゼ基質溶液（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）１００μｌを加え、室温で少なくとも５分間（最長３０分間）インキュベートする。ＥＬＩＳＡリーダーを使用して、４０５ｎｍにおけるサンプルの吸光度を測定する。結合ペルオキシダーゼ活性レベルをＥＬＩＳＡリーダーを使用して定量し、これは、チロシンキナーゼ活性レベルを反映する。
【０５１６】
（実施例２０：リン酸化活性を同定する高処理量スクリーニングアッセイ）
実施例１９に記載のタンパク質チロシンキナーゼ活性アッセイの可能性のある代替および／または補完（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔ）として、主要な細胞内シグナル伝達中間体の活性化（リン酸化）を検出するアッセイもまた使用し得る。例えば、下記のように、一つの特定のアッセイは、Ｅｒｋ−１およびＥｒｋ−２キナーゼのチロシンリン酸化を検出し得る。しかし、Ｒａｆ、ＪＮＫ、ｐ３８ＭＡＰ、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）、ＭＥＫキナーゼ、Ｓｒｃ、筋肉特異的キナーゼ（ＭｕＳＫ）、ＩＲＡＫ、ＴｅｃおよびＪａｎｕｓなどの他の分子、ならびに他の任意のホスホセリン、ホスホチロシンまたはホスホスレオニン分子のリン酸化を、以下のアッセイでこれらの分子をＥｒｋ−１またはＥｒｋ−２と置き換えることにより検出し得る。
【０５１７】
特に、９６ウエルＥＬＩＳＡプレートのウエルをプロテインＧ（１μｇ／ｍｌ）０．１ｍｌにより室温（ＲＴ）で２時間被覆してアッセイプレートを作製する。次に、プレートをＰＢＳですすぎ、３％ＢＳＡ／ＰＢＳによりＲＴで１時間ブロックする。次に、プロテインＧプレートをＥｒｋ−１およびＥｒｋ−２に対する二つの市販のモノクローナル抗体（１００ｎｇ／ウエル）（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で処理（ＲＴで１時間）する。（他の分子を検出するために、この工程を、上記の任意の分子を検出するモノクローナル抗体と交換することにより、容易に変更し得る）。ＰＢＳで３〜５回すすいだ後、使用時まで、プレートを４℃で貯蔵する。
【０５１８】
Ａ４３１細胞を２０，０００／ウエルで９６ウエルＬｏｐｒｏｄｙｎｅフィルタープレートに播種し、増殖培地中で一晩培養する。次に、細胞を基本培地（ＤＭＥＭ）中で４８時間飢餓させた後、ＥＧＦ（６ｎｇ／ウエル）または実施例１１で得た上清５０μｌで５〜２０分間処理する。次に、細胞を可溶化し、抽出物を濾過して直接アッセイプレート内へ入れる。
【０５１９】
抽出物とＲＴで１時間インキュベートした後、ウエルを再度すすぐ。陽性コントロールとして、市販のＭＡＰキナーゼ調製物（１０ｎｇ／ウエル）をＡ４３１抽出物の代わりに使用する。次に、プレートを、Ｅｒｋ−１およびＥｒｋ−２キナーゼのリン酸化エピトープを特異的に認識する市販のポリクローナル（ウサギ）抗体（１μｇ／ｍｌ）で処理する（ＲＴで１時間）。この抗体を標準的な手順によりビオチン化する。次に、結合ポリクローナル抗体をユーロピウムストレプトアビジン（Ｅｕｒｏｐｉｕｍ−ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ）およびユーロピウム（Ｅｕｒｏｐｉｕｍ）蛍光増強剤とＷａｌｌａｃ  ＤＥＬＦＩＡ装置内で連続的にインキュベートする（時間分解性蛍光）ことによって定量する。バックグラウンドを超える蛍光シグナルの増加は、リン酸化を示す。
【０５２０】
（実施例２１：ポリヌクレオチドに対応する遺伝子における変化の測定方法）
目的の表現型（疾病などの）を提示する家族全員または個々の患者から単離されたＲＮＡを単離する。次に、ｃＤＮＡをこれらのＲＮＡサンプルから当該分野で公知のプロトコルを使用して生成する（Ｓａｍｂｒｏｏｋを参照）。次に、ｃＤＮＡを、配列番号Ｘにおける目的の領域を取り囲むプライマーを使用するＰＣＲの鋳型として使用する。提案されるＰＣＲ条件は、Ｓｉｄｒａｎｓｋｙ，Ｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２：７０６（１９９１）に記載の緩衝溶液を使用し、９５℃で３０秒間；５２〜５８℃で６０〜１２０秒間；および７０℃で６０〜１２０秒間の３５サイクルからなる。
【０５２１】
次に、ＰＣＲ産物を、ＳｅｑｕｉＴｈｅｒｍ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて５’末端に、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼで標識したプライマーを使用して配列決定する。選択したエクソンのイントロン−エクソン境界もまた決定し、ゲノムＰＣＲ産物を分析してその結果を確認する。次に、変異を有すると疑われるＰＣＲ産物のクローン化および配列決定を行い、直接配列決定の結果を確認する。
【０５２２】
ＰＣＲ産物を、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｔ．Ａ．およびＧｒａｈａｍ，Ｍ．Ｗ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９：１１５６（１９９１）に記載のようにＴテールベクターにクローン化し、Ｔ７ポリメラーゼ（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）で配列決定する。罹患個体を、非罹患個体には存在しない変異により同定する。
【０５２３】
ゲノム再配置もまた、ポリヌクレオチドに対応する遺伝子における改変を決定する方法として観察する。実施例２に従って単離したゲノムクローンを、ジゴキシゲニンデオキシ−ウリジン５’−三リン酸（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｈｅｉｍ）でニックトランスレーションし、そしてＪｏｈｎｓｏｎ，  Ｃｇ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ３５：  ７３−９９（１９９１）に記載のようにＦＩＳＨを行う。対応するゲノムの遺伝子座への特異的ハイブリダイゼーションのために、大過剰のヒトｃｏｔ−１  ＤＮＡを用いて標識プローブとのハイブリダイゼーションを行う。
【０５２４】
染色体を、４，６−ジアミノ−２−フェニリドールおよびヨウ化プロピジウムで対比染色し、ＣおよびＲバンドの組み合わせを生成する。正確なマッピングのための整列イメージを、三重バンドフィルターセット（Ｃｈｒｏｍａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ，ＶＴ）と冷却電荷結合素子カメラ（Ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）および可変励起波長フィルター（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｃｖ．ら、Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．，８：７５（１９９１））とを組み合わせて用いて得る。ＩＳｅｅ  Ｇｒａｐｈｉｃａｌ  Ｐｒｏｇｒａｍ  Ｓｙｓｔｅｍ  （Ｉｎｏｖｉｓｉｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  Ｄｕｒｈａｍ，  ＮＣ）を使用して、イメージ収集、分析および染色体部分長測定を行う。プローブがハイブリダイズしたゲノム領域の染色体改変を、挿入、欠失および転座として同定する。これらの改変を関連疾患の診断マーカーとして使用する。
【０５２５】
（実施例２２：生物学的サンプル中のポリペプチドの異常レベルを検出する方法）
本発明のポリペプチドは生物学的サンプル中で検出し得、そしてポリペプチドレベルの上昇および低下が検出されるなら、このポリペプチドは、特定表現型のマーカーである。検出方法は数多くあり、そしてそれ故、当業者は以下のアッセイをそれらの特定の必要性に適合するように改変し得ることが理解される。
【０５２６】
例えば、抗体サンドイッチＥＬＩＳＡを使用し、サンプル中、好ましくは、生物学的サンプル中のポリペプチドを検出する。マイクロタイタープレートのウエルを、特異的抗体を用いて最終濃度０．２〜１０μｇ／ｍｌで被覆する。この抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであって、実施例１０に記載の方法により産生される。ウエルに対するポリペプチドの非特異的結合が減少するように、このウエルをブロックする。
【０５２７】
次に、被覆ウエルを、ポリペプチド含有サンプルと室温で２時間を超えてインキュベートする。好ましくは、サンプルの系列希釈を使用して結果を確認すべきである。次に、プレートを脱イオン水または蒸留水で三回洗浄し、非結合ポリペプチドを除去する。
【０５２８】
次に、特異的抗体−アルカリホスファターゼ結合体５０μｌを２５〜４００ｎｇ濃度で加え、室温で２時間インキュベートする。プレートを再び脱イオン水または蒸留水で三回洗浄し、未結合の結合体を除去する。
【０５２９】
４−メチルウンベリフェリルリン酸（ＭＵＰ）またはｐ−ニトロフェニルリン酸（ＮＰＰ）基質溶液７５μｌを各ウエルに添加し、そして室温で１時間インキュベートする。反応物をマイクロタイタープレートリーダーにより測定する。対照サンプルの系列希釈を使用して標準曲線を作成し、そしてＸ軸（対数スケール）にポリペプチド濃度を、そしてＹ軸（直線スケール）に蛍光または吸光度をプロットする。標準曲線を用いてサンプル中のポリペプチド濃度を補間する。
【０５３０】
（実施例２３：ポリペプチドの処方）
分泌ポリペプチド組成物を、個々の患者の臨床状態（特に、分泌ポリペプチド単独処置の副作用）、送達部位、投与方法、投与計画および担当医に知られた他の因子を考慮に入れ、医療実施基準（ｇｏｏｄ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ）を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において目的とする「有効量」は、このような考慮を行って決定される。
【０５３１】
一般的提案として、用量当り、非経口的に投与される分泌ポリペプチドの合計薬学的有効量は、患者体重の、約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあるが、上記のようにこれは治療的判断に委ねられる。さらに好ましくは、このホルモンについて、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくはヒトに対して約０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ／日である。連続投与する場合、代表的には、分泌ポリペプチドを約１μｇ／ｋｇ／時間〜５０μｇ／ｋｇ／時間の投薬速度で日に１〜４回の注射かまたは連続皮下注入（例えばミニポンプを用いる）のいずれかにより投与する。静脈内用バッグ溶液もまた使用し得る。変化を観察するために必要な処置期間および応答が生じる処置後の間隔は、所望の効果に応じて変化するようである。
【０５３２】
本発明の分泌タンパク質を含む薬学的組成物を、経口的、直腸内、非経口的、槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｒｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（粉末、軟膏、ゲル、滴、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔スプレーとして投与する。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性固体、半固体または液体充填剤、希釈剤、被包材または任意の型の製剤補助剤をいう。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、膀胱内、皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。
【０５３３】
分泌ポリペプチドはまた、徐放性システムにより適切に投与される。徐放性組成物の適切な例は、例えば、フィルムまたは、マイクロカプセルの成形品の形態の半透過性ポリマーマトリックスを包含する。徐放性マトリックスには、ポリラクチド類（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ第５８，４８１号）、Ｌ−グルタミン酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ，  Ｕら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１）、およびＲ．Ｌａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５（１９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら）またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が含まれる。徐放性組成物はまた、リポソームに包括されたポリペプチドを包含する。分泌ポリペプチドを含有するリポソームは、それ自体が公知である方法により調製される：ＤＥ３，２１８，１２１；Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８−３６９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０−４０３４（１９８０）；ＥＰ５２，３２２；ＥＰ３６，６７６；ＥＰ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９；ＥＰ１４２，６４１；日本特許出願第８３−１１８００８号；米国特許第４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号ならびにＥＰ第１０２，３２４号。通常、リポソームは、小さな（約２００〜８００Å）ユニラメラ型であり、そこでは、脂質含有量は、約３０モル％コレステロールよりも多く、選択された割合が、最適分泌ポリペプチド治療のために調整される。
【０５３４】
非経口投与のために、１つの実施態様において、一般に、分泌ポリペプチドは、それを所望の程度の純度で、薬学的に受容可能なキャリア、すなわち用いる投薬量および濃度でレシピエントに対して毒性がなく、かつ製剤の他の成分と適合するものと、単位投薬量の注射可能な形態（溶液、懸濁液または乳化液）で混合することにより製剤化される。例えば、この製剤は、酸化剤、およびポリペプチドに対して有害であることが知られている他の化合物を含まないことが好ましい。
【０５３５】
一般に、ポリペプチドを液体キャリアまたは微細分割固体キャリアあるいはその両方と均一および緊密に接触させて製剤を調製する。次に、必要であれば、生成物を所望の製剤に成形する。好ましくは、キャリアは、非経口的キャリア、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。このようなキャリアビヒクルの例には、水、生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液が挙げられる。不揮発性オイルおよびオレイン酸エチルなどの非水溶性ビヒクルもまた、リポソームと同様に本明細書において有用である。
【０５３６】
キャリアは、等張性および化学安定性を高める物質など微量の添加剤を適切に含有する。このような物質は、用いる投薬量および濃度でレシピエントに対して毒性がなく、このような物質には、リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酢酸および他の有機酸またはその塩類などの緩衝液；アスコルビン酸などの抗酸化剤；低分子量（約１０残基より少ない）ポリペプチド、例えば、ポリアルギニンまたはトリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニンなどのアミノ酸；セルロースまたはその誘導体、ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの対イオン；および／またはポリソルベート、ポロキサマーまたはＰＥＧなどの非イオン性界面活性剤がある。
【０５３７】
代表的には、分泌ポリペプチドは、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約３〜８のｐＨで、このようなビヒクル中に製剤化される。前記の特定の賦形剤、キャリアまたは安定化剤を使用することにより、ポリペプチド塩が形成されることが理解される。
【０５３８】
治療的投与に用いられるべき任意のポリペプチドは滅菌され得る。滅菌濾過膜（例えば０．２ミクロンメンブレン）で濾過することにより滅菌は容易に達成される。一般に、治療用ポリペプチド組成物は、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下用注射針で穿刺可能なストッパー付の静脈内用溶液バッグまたはバイアルに配置される。
【０５３９】
ポリペプチドは、通常、単位投薬量または複数投薬量容器、例えば、密封アンプルまたはバイアルに、水溶液または再調製するための凍結乾燥製剤として貯蔵される。凍結乾燥製剤の例として、１０ｍｌのバイアルに、滅菌濾過した１％（ｗ／ｖ）ポリペプチド水溶液５ｍｌを充填し、そして得られる混合物を凍結乾燥する。凍結乾燥したポリペプチドを注射用静菌水を用いて再構成して注入溶液を調製する。
【０５４０】
本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１つ以上の成分を満たした一つ以上の容器を含む薬学的パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製剤の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような容器に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、使用または販売に関する政府機関による承認を表す。さらに、本発明のポリペプチドを他の治療用化合物と組み合わせて使用し得る。
【０５４１】
（実施例２４：ポリペプチドのレベル低下を処置する方法）
個体における分泌タンパク質の標準または正常発現レベルの低下により引き起こされる状態は、本発明のポリペプチドを、好ましくは分泌形態で投与することにより処置し得ることが理解される。従って、本発明はまた、ポリペプチドのレベルの増加が必要な個体の処置方法を提供する。この方法は、このような個体に、このような個体でポリペプチドの活性レベルを増加させる量のポリペプチドを含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【０５４２】
例えば、ポリペプチドのレベルが低下した患者は、ポリペプチドを、１日用量０．１〜１００μｇ／ｋｇで６日続けて服用する。好ましくは、ポリペプチドは分泌形態である。投与および製剤に基づく投薬計画の正確な詳細は、実施例２３に提供されている。
【０５４３】
（実施例２５：ポリペプチドのレベル上昇を処置する方法）
アンチセンス技術を使用して本発明のポリペプチドの産生を阻害する。この技術は、ガンなどの様々な病因に起因するポリペプチド、好ましくは分泌形態のポリペプチドのレべルを低下させる方法の１つの例である。
【０５４４】
例えば、ポリペプチドのレベルが異常に上昇したと診断された患者に、アンチセンスポリヌクレオチドを、０．５、１．０、１．５、２．０および３．０ｍｇ／ｋｇ／日で静脈内に２１日間投与する。この処置に対して十分な耐性があれば、７日間の休薬後に、この処置を繰り返す。アンチセンスポリヌクレオチド製剤は、実施例２３に提供されている。
【０５４５】
（実施例２６：遺伝子治療を使用する処置方法）
遺伝子治療の１つの方法は、ポリペプチドを発現し得る線維芽細胞を患者に移植する。一般に、線維芽細胞は、皮膚生検により被験者から得られる。得られた組織を組織培養培地中に配置し、小片に分割する。小塊の組織を組織培養フラスコの湿潤面に置き、ほぼ１０片を各フラスコに置く。このフラスコを倒置し、しっかりと閉めた後、室温で一晩放置する。室温で２４時間後、フラスコを反転させ、組織塊をフラスコの底に固定させたままにし、そして新鮮培地（例えば、１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するＨａｍ’ｓ  Ｆ１２培地）を添加する。次に、フラスコを３７℃で約１週間インキュベートする。
【０５４６】
この時点で、新鮮培地を添加し、次いで数日ごとに取り換える。さらに二週間培養した後に単層の線維芽細胞が出現する。単層をトリプシン処理し、さらに大きなフラスコにスケールアップする。
【０５４７】
Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルスの長末端反復が隣接するｐＭＶ−７（Ｋｉｒｓｃｈｍｅｉｅｒ，Ｐ．Ｔ．ら、ＤＮＡ，７：２１９−２５（１９８８））をＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、子ウシ腸ホスファターゼで処理する。線状ベクターをアガロースゲルで分画し、そしてガラスビーズを使用して精製する。
【０５４８】
本発明のポリペプチドをコードするｃＤＮＡを、実施例１に記載のそれぞれ５’および３’末端配列に対応するＰＣＲプライマーを使用して増幅し得る。好ましくは、５’プライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、そして３’プライマーはＨｉｎｄＩＩＩ部位を含む。等量の、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルス線状骨格および増幅したＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩフラグメントを、Ｔ４ＤＮＡリガーゼの存在下で一緒に加える。得られた混合物を二つのフラグメントを連結するのに適した条件下で維持する。次に、連結混合物を使用し、細菌ＨＢ１０１を形質転換する。次に、それを、カナマイシンを含む寒天上に塗沫し、ベクターが正確に挿入された目的の遺伝子を有することを確認する。
【０５４９】
アンフォトロピックｐＡ３１７またはＧＰ＋ａｍ１２パッケージング細胞を、１０％子ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含む  Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ改変Ｅａｇｌｅｓ培地（ＤＭＥＭ）中の組織培養で集密密度まで増殖させる。次に、遺伝子を含むＭＳＶベクターを培地に加え、パッケージング細胞をベクターで形質導入する。このとき、パッケージング細胞は遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（ここで、パッケージング細胞をプロデューサー細胞と呼ぶ）。
【０５５０】
形質導入されたプロデューサー細胞に新鮮培地を添加し、次いで培地を１０ｃｍプレートの集密のプロデューサー細胞から採取する。感染性ウイルス粒子を含む消費培地をミリポアーフィルターで濾過し、はがれたプロデューサー細胞を除去した後、この培地を使用して、線維芽細胞を感染させる。線維芽細胞の準集密プレートから培地を除去し、かつプロデューサー細胞から培地を速やかに置き換える。この培地を除去し、そして新鮮培地と置き換える。ウイルスの力価が高ければ、実質的にすべての線維芽細胞が感染され、選択は必要ではない。力価が非常に低ければ、ｎｅｏまたはｈｉｓなどの選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを使用することが必要である。線維芽細胞が効率的に感染したなら、線維芽細胞を分析し、タンパク質が産生されているか否かを測定する。
【０５５１】
次に、操作された線維芽細胞を、単独で、またはサイトデックス３マイクロキャリアビーズ上で集密に増殖させた後のいずれかで宿主に移植する。
【０５５２】
本発明は、前記の説明および実施例で詳細に記載した通り以外にも、実施し得ることは明らかである。本発明の数多くの改変および変更は、上記の教示を考慮すれば可能であり、そしてそれ故、添付の請求項の範囲内にある。
【０５５３】
発明の背景、詳細な説明および実施例において引用した各文書（特許、特許出願、雑誌論文、抄録、実験室マニュアル、本または他の開示）の全開示は、本明細書中に参考として援用される。さらに、同封して提出した配列表のハードコピーおよび対応するコンピューター読み込み可能な形態の両方は、本明細書中にそれらの全体が参考として援用される。
【０５５４】
【表５】
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【０５５５】
【表６】
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【０５５６】
【表７】
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【０５５７】
【表８】
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【０５５８】
【表９】
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【０５５９】
【表１０】
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【０５６０】
（配列表）
【０５６１】
【表１０１】
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【０５６２】
【表１０２】
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【０５６３】
【表１０３】
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【０５６４】
【表１０４】
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【０５６５】
【表１０５】
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【０５６６】
【表１０６】
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【０５６７】
【表１０７】
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【０５６８】
【表１０８】
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【０５６９】
【表１０９】
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【０５７０】
【表１１０】
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【０５７１】
【表１１１】
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【０５７２】
【表１１２】
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【０５７３】
【表１１３】
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【０５７４】
【表１１４】
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【０５７５】
【表１１５】
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【０５７６】
【表１１６】
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【０５７７】
【表１１７】
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【０５７８】
【表１１８】
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【０５７９】
【表１１９】
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【０５８０】
【表１２０】
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【０５８１】
【表１２１】
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【０５８２】
【表１２２】
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【０５８３】
【表１２３】
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【０５８４】
【表１２４】
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【０５８５】
【表１２５】
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【０５８６】
【表１２６】
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【０５８７】
【表１２７】
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【０５８８】
【表１２８】
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【０５８９】
【表１２９】
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【０５９０】
【表１３０】
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【０５９１】
【表１３１】
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【０５９２】
【表１３２】
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【０５９３】
【表１３３】
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【０５９４】
【表１３４】
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【０５９５】
【表１３５】
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【０５９６】
【表１３６】
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【０５９７】
【表１３７】
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【０５９８】
【表１３８】
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【０５９９】
【表１３９】
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【０６００】
【表１４０】
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【０６０１】
【表１４１】
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【０６０２】
【表１４２】
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【０６０３】
【表１４３】
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【０６０４】
【表１４４】
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【０６０５】
【表１４５】
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【０６０６】
【表１４６】
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【０６０７】
【表１４７】
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【０６０８】
【表１４８】
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【０６０９】
【表１４９】
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【０６１０】
【表１５０】
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【０６１１】
【表１５１】
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【０６１２】
【表１５２】
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【０６１３】
【表１５３】
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【０６１４】
【表１５４】
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【０６１５】
【表１５５】
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【０６１６】
【表１５６】
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