(57)【要約】【課題】建物を解体する現場において建材から石綿を簡便かつ迅速に検出できる石綿検出方法および石綿検出キットを提供する。【解決手段】建材の表面をブロックするブロッキング液を塗ることにより建材の表面を前処理し、処理された建材の表面に、石綿に結合する石綿結合タンパク質と石綿の検出指標として機能するレポータータンパク質との融合タンパク質を含有する液を塗ることにより、この融合タンパク質を建材の表面の石綿に結合させ、建材の表面を洗浄した後、建材の表面から石綿を検出する。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
建材の表面をブロックするブロッキング液を塗ることにより、前記建材の表面を前処理するブロッキング工程と、
前記前処理された建材の表面に、石綿に結合する石綿結合タンパク質と石綿の検出指標として機能するレポータータンパク質との融合タンパク質を含有する液を塗ることにより、前記融合タンパク質を前記建材の表面の石綿に結合させる結合工程と、
前記建材の表面を洗浄する洗浄工程と、
前記建材の表面から石綿を検出する検出工程と、
を備えることを特徴とする石綿検出方法。
【請求項２】
前記検出工程が前記レポータータンパク質と反応して発色する発色基質液を塗ることを特徴とする請求項１に記載の石綿検出方法。
【請求項３】
前記レポータータンパク質が、アルカリホスファターゼであることを特徴とする請求項１または請求項２に記載の石綿検出方法。
【請求項４】
前記石綿結合タンパク質が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であることを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の石綿検出方法。
【請求項５】
前記レポータータンパク質が、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であることを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の石綿検出方法。
【請求項６】
前記レポータータンパク質が蛍光物質であり、
前記検出工程が紫外線を照射することを特徴とする請求項１に記載の石綿検出方法。
【請求項７】
前記融合タンパク質を含有する液を収納する収納容器と、
前記融合タンパク質を含有する液を前記建材の表面に塗る塗布器具と、
を有することを特徴とする請求項１から請求項６のいずれか一項に記載の石綿検出方法を実施するための石綿検出キット。
【請求項８】
前記融合タンパク質を含有する液を収納しかつ開口が形成された容器部と、前記開口に設けられかつ前記融合タンパク質を含有する液を前記建材の表面に塗る塗布部とを有する塗布容器を備えたことを特徴とする請求項１から請求項６のいずれか一項に記載の石綿検出方法を実施するための石綿検出キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、建材に含まれる石綿の検出に用いられる石綿検出方法および石綿検出キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
現況において建材中のアスベスト（石綿）の分析は、厚生労働省労働基準局長通達「建材中の石綿含有率の分析方法について」に基づき、ＪＩＳ Ａ １４８１「建材製品中のアスベスト含有率測定方法」に則して行われる（非特許文献１、２参照）。上記分析方法においては、まず建築物等から採取された建材試料を、その構成成分に応じて、一定以下の粒子にまで粉砕する、あるいは低温灰化装置を用いて有機成分を灰化するなどの処理を行って第一次試料を作製し、位相差顕微鏡による分散染色法または偏向顕微鏡による消光角法により、定性分析を行う。これに併せて、Ｘ線回折分析法による定性分析を行う。上記定性分析法により石綿含有と判定された当該試料については、標準添加法又は内標準法によるＸ線回折分析、あるいは、第一次試料をギ酸で処理し、第二次試料を作製し基底標準吸収補正法によるＸ線回折分析により、定量分析を行い、石綿含有量を求め、石綿含有率を算出する、という方法が用いられる。
【非特許文献１】基発第０８２１００２号、平成１８年８月２１日
【非特許文献２】ＪＩＳ Ａ １４８１、財団法人日本規格協会、平成１８年３月２５日
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、上記の分析方法においては試料の調製や、特殊な機器を用いた分析操作が煩雑なため、検査に相当な時間と熟練した技能が必要となり、検査機関の数や試料の処理能力を高めることは困難である。また分析に際し試料の粉砕処理を行うため、検査時の石綿の飛散や混入が懸念される。
【０００４】
また、現在において、石綿含有製品はその製造が禁止されているが、これまで大量に建材等に使用されてきており、それら石綿含有建材を使用した建築物の解体・建て替え時期はこれからピークを迎える。そのような中で大量に生じる建築廃材中の石綿の有無を迅速かつ簡便に検査できる方法は、社会的に強く求められている。現在においても上記ＪＩＳ法による委託分析は、検出結果を得るまでに通常、１０日から２週間程度かかり、また費用も高額なものとなっている。上述の通り今後、石綿含有の可能性がある廃材の増加が見込まれることから、検査機関の不足により、さらに検査に要する時間の長期化が予想される。検査に要する時間の長期化は石綿飛散の危険性を増大させる。
【０００５】
一方、環境への負荷を軽減し資源を有効に利用するという観点から、増大する廃材の再利用は促進されるべきであるが、リサイクル事業において資源の回収・集積を行う上で、安全性と採算性の点から従来法による石綿の分析は現実的であるとは言えない。特に石膏ボードにおいては製品により石綿の所在と含有率とが知られているが、多くが再利用されることなく処分されてきた。
【０００６】
本発明は、以上のような問題に鑑み、迅速な検査により作業環境を確保すること、また、検査にかかる時間と経費を低減することを目的としてなされたものである。すなわち、建物を解体する現場において建材から石綿を、安価で簡便かつ迅速に検出できる石綿検出方法および石綿検出キットを提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、石綿に選択的に結合するタンパク質を用いて、当該タンパク質とレポータータンパク質との融合タンパク質を作製し、それを建材表面に塗布することにより、建材を微細に粉砕することなく、迅速かつ簡便に前記建材中の石綿の有無を判定することが可能であることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００８】
すなわち、本発明の石綿検出方法は、前記石綿に選択的に結合するタンパク質が、建材中の石綿以外の共存物質に非特異的に結合することを抑制するために、建材の表面をブロックするブロッキング液を塗ることにより、前記建材の表面を前処理するブロッキング工程と、前記前処理された建材の表面に、石綿に結合する石綿結合タンパク質と石綿の検出指標として機能するレポータータンパク質との融合タンパク質を含有する液を塗ることにより、前記融合タンパク質を建材の表面の石綿と結合させる結合工程と、前記建材の表面を洗浄する洗浄工程と、前記建材の表面から石綿に結合した上記融合タンパク質を検出する検出工程と、を備えることを特徴とする。
【０００９】
また、本発明の石綿検出方法は、前記ブロッキング液がBSA、ゼラチン、カゼイン、スキムミルク等のタンパク質を成分として含有するものであってもよく、またEDTA、EGTA等の金属キレート剤であってもよく、またPEG、PVP等有機高分子を含有するものであってもよい。
【００１０】
また、本発明の石綿検出方法は、検査中の石綿以外の構成物質に対し上記融合タンパク質の非特異的吸着が見られないことが既知である場合、ブロッキング工程を省略してもよい。
【００１１】
また、本発明の石綿検出方法は、前記石綿結合タンパク質が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質、またその部分断片であってもよく、また上記アミノ酸配列において１または数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたものであってもよい。
【００１２】
また、本発明の石綿検出方法は、前記レポータータンパク質が、アルカリホスファターゼ（配列番号２）であってもよく、また上記アミノ酸配列において１または数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたものであってもよい。
【００１３】
また、本発明の石綿検出方法は、前記検出工程が前記レポータータンパク質と反応して発色する発色基質液を塗ることにより行われてもよい。
【００１４】
また、本発明の石綿検出方法は、前記レポータータンパク質が蛍光物質であり、前記検出工程が紫外線を照射することにより行われてもよい。
【００１５】
また、本発明の石綿検出キットは、前記融合タンパク質を含有する液を収納する収納容器と、前記融合タンパク質を含有する液を前記建材の表面に塗る塗布器具とを有することを特徴とする。
【００１６】
また、本発明の石綿検出キットは、前記融合タンパク質を含有する液を収納しかつ開口が形成された容器部と、前記開口に設けられかつ前記融合タンパク質を含有する液を前記建材の表面に塗る塗布部とを有する塗布容器を備えることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１７】
本発明による石綿検出方法および石綿検出キットを用いれば、建材の表面をブロックするブロッキング液を塗り建材の表面を前処理し、前処理された建材の表面に石綿に結合する石綿結合タンパク質と石綿の検出指標として機能するレポータータンパク質との融合タンパク質を含有する液を塗り融合タンパク質を建材表面の石綿と結合させた後、建材の表面から石綿に結合した上記融合タンパク質を検出することにより、建材のサンプルを搬出することなく、建物を解体する現場において簡便かつ迅速に石綿を検出できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
（第１実施形態）
本発明の第１実施形態を図に基づき説明する。図１は本発明に係る第１実施形態の石綿検出キットを示す構成図である。
【００１９】
石綿検出キット１は、建材の表面をブロックするブロッキング液を収納するブロッキング液収納容器１０と、ブロッキング液を建材の表面に塗る塗布器具１１と、石綿に結合する融合タンパク質を含有する液を収納する融合タンパク質液収納容器１２と、融合タンパク質を含有する液を建材の表面に塗る塗布器具１３と、建材の表面を洗浄するための洗浄液が収納された噴霧器１４と、融合タンパク質と反応して発色する発色基質液を収納する発色基質液収納容器１５と、発色基質液を建材の表面に塗る塗布器具１６と、を備える。
【００２０】
まず、本発明を適用する建材として、石膏ボード、スレートボード、スレート波板、スラグせっこう板、パルプセメント板、窯業系サイディング、パネル、耐火被膜板、断熱材、保温材、耐火パイプ、吸音天井板、石綿自体や石綿を含有した物質を吹き付けた建材等が挙げられる。特に、建材の表面に石綿が集中して存在する建材が好ましい。たとえば、石膏ボード（石綿を抄き込んだ紙を石膏ボードの表面に使用して耐火性や断熱性を向上させたタイプのもの）や、石綿自体や石綿を含有した物質を吹き付けた建材等である。
【００２１】
ブロッキング液収納容器１０は、ポリエチレン製の容器部１０ａと、ポリエチレン製のキャップ部１０ｂを有している。ブロッキング液収納容器１０の中には、ブロッキング液が入っている。このブロッキング液により建材の表面をブロックして前処理をする。ブロッキング液として、０．３Ｍ塩化ナトリウムおよび０．５％ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（商品名：Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標））を含有する２５ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）に、０．５％カゼイン（ミルクパウダー由来）を添加した液を用いた。なお、カゼインの代わりに牛や魚由来のゼラチンでもよく、安価なタンパク質が好ましい。
【００２２】
塗布器具１１は綿棒であり、柄等の手で持ちやすい部位があり、液を吸着できる物質が柄等の先端近傍にあればよく、本実施形態の形状に限定されない。塗布器具１１は、液を汚染しないよう使い捨てである。
【００２３】
次に、融合タンパク質液収納容器１２において、その形状や材質は、ブロッキング液収納容器１０と同じであるが、ラベルや容器の色が異なっており、石綿に結合する石綿結合タンパク質と石綿の検出指標として機能するレポータータンパク質との融合タンパク質を含有する液が入っている。
【００２４】
この融合タンパク質の石綿結合タンパク質の一例は、微生物の中から発見されたタンパク質で、特にシリカの化合物である石綿に特異的に結合するタンパク質が広島大学の黒田らにより見出されている。
【００２５】
たとえば配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質が一例である。これは石綿のうち特に白石綿（クリソタイル）に特異的に結合する。
【００２６】
融合タンパク質は、石綿に結合する機能を有する石綿結合タンパク質と石綿の検出指標として機能するレポータータンパク質とから構成され、レポータータンパク質としてアルカリホスファターゼを用いた。たとえば配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質がアルカリホスファターゼ一例である。アルカリホスファターゼは基質との反応により、発色、蛍光、発光などの作用を行う。この融合タンパク質はこれら２つの機能を持つタンパク質を遺伝子操作等によって融合させたもので、両者の機能を併せ持っている。この融合タンパク質が石綿検出酵素として機能する。すなわち石綿検出酵素は、石綿を認識して結合し、発色、蛍光、発光などの作用を行う酵素である。
【００２７】
なお、本明細書において、「タンパク質」は、「ポリペプチド」または「ペプチド」と交換可能に使用される。「タンパク質」には、タンパク質の部分断片（フラグメント）が含まれるものとする。また、「タンパク質」には、融合タンパク質が含まれるものとする。「融合タンパク質」は、２つ以上の異種タンパク質の一部（フラグメント）または全部が結合したタンパク質である。
【００２８】
融合タンパク質を含有する液を建材の表面に塗る塗布器具１３は、綿棒であり、塗布器具１１と同様の構成である。
【００２９】
次に、噴霧器１４は、洗浄液を収納した容器部と、レバーと、ノズルとを有し、手動により洗浄液を建材の表面に吹きかける構成である。
【００３０】
洗浄液は、０．３Ｍ塩化ナトリウムおよび０．５％ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（商品名：Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標））を含有する２５ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）である。洗浄液は、０．１Ｍ以上の塩化ナトリウムを含むものであれば特に限定されないが、ｐＨが中性付近の緩衝液が好ましい。
【００３１】
次に、発色基質液収納容器１５において、その形状や材質は、ブロッキング液収納容器１０や融合タンパク質液収納容器１２と同じであるが、ラベルや容器の色が異なっており、レポータータンパク質と反応して発色する発色基質液が入っている。
【００３２】
この発色基質液は、発色基質（ＢＣＩＰ（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate） ／ ＮＢＴ（nitro blue tetrazolium）ＰＬＵＳ（Ｍｏｓｓ, INC．））を含有した液である。この発色基質液が、石綿に結合した石綿検出酵素のアルカリホスファターゼの働きにより紫〜青色に発色し、発色の程度を目視、または分光光度計により吸光度を測定することにより石綿を検出することができる。
【００３３】
発色基質液を建材の表面に塗る塗布器具１６は、綿棒であり、塗布器具１１、１３と同様の構成である。ただし同じものを用いない。
【００３４】
次に、図２および図３に基づきタンパク質を検出する工程を説明する。
【００３５】
図２は、第１実施形態の石綿検出工程を示すフローチャートである。図３は、石綿検出の原理を示す模式図である。
【００３６】
まず、検査対象である建材、たとえば石膏ボード上の石膏紙上に約１cm径の円を鉛筆で描き、これから塗っていく液を塗布する位置を特定する（ステップＳ１）。
【００３７】
次に、ブロッキング液収納容器１０の中に塗布器具１１を入れ、塗布器具１１にブロッキング液を付ける。そして、建材に描いた円の中央にブロッキング液１５０μlほどを塗布器具１１により直接塗り、およそ５分間放置し、使い捨ての乾燥した布等を軽く押し当てブロッキング液を除去する（ステップＳ２）。これにより建材の表面を前処理し、石綿検出酵素と非特異的に結合する部位を塞ぐことにより、偽陽性反応を減らし、石綿検出の特異性を高める。
【００３８】
次に、融合タンパク質液収納容器１２の中に塗布器具１３を入れ、融合タンパク質液（石綿検出酵素液）を塗布器具１３に付ける。そして、建材に描いた円の中央に石綿検出酵素液を５０μｌほど塗布器具１３により直接塗る（ステップＳ３）。図３（Ａ）に模式的に示すように、石綿５に融合タンパク質（石綿結合タンパク質６およびレポータータンパク質７）を加えた状態である。そしておよそ５分間放置し、石綿に融合タンパク質を十分に結合させる。これにより、図３（Ｂ）に示すように、石綿５に融合タンパク質の石綿結合タンパク質６の部分が結合する。
【００３９】
次に、噴霧器１４により、建材に描いた円に洗浄液１ｍｌほどを吹きかけて洗い流し、建材の表面を洗浄する（ステップＳ５）。この洗浄操作を計３回繰り返す（ステップＳ６）。これにより、石綿に結合しなかった融合タンパク質を洗い流す。このとき融合タンパク質（６，７）は図３（Ｂ）に示すように石綿に強く結合しているため、流れ落ちない。
【００４０】
洗浄が終わったならば、使い捨ての乾燥した布等を軽く押し当て洗浄液を除去する（ステップＳ６）。
【００４１】
次に、発色基質液収納容器１５の中に塗布器具１６を入れ、発色基質液を塗布器具１６に付け、建材に描いた円の中央に発色基質液を５０μｌほど塗布器具１６により直接塗る（ステップＳ７）。
【００４２】
そして１０分間以上放置して発色を観察し、石綿の有無を判定し、建材の表面から石綿を検出する（ステップＳ８）。ここで図３（Ｃ）に模式的に示すように、建材に石綿５が存在するならば、発色基質８が融合タンパク質のレポータータンパク質と反応して発色する。
【００４３】
以上、本実施形態の石綿検出キットを使用し、石膏ボード等の建材の表面にブロッキング液を塗り、石綿検出酵素液を塗り、洗浄液を吹きかけて建材の表面を洗浄し、発色基質液を塗るだけで、建材の表面から石綿を検出することができる。このように石綿検出キットを使用して液を塗ったり、建材の表面を洗浄したりするだけなので、非常に簡便である。また、直接建材に液を塗ったり、建材の表面を洗浄したりするだけなので、建物を解体する現場などオンサイトで石綿を建材から検出でき、しかも粉砕などの前処理を必要としないで、石膏ボードに直接、一連の「塗る」作業で検査を行うことができ、利便性が大幅に向上する。
【００４４】
さらに、天井面の石膏ボードや壁材の垂直面の石膏ボード等を検査する際、石膏ボードの一部を石膏ボード片として運び出す手間を省くことができる。
【００４５】
また、現場において約２０分で作業が終わるため、従来検査機関にサンプルを持ち込み、測定結果を得るまでに通常１０日から２週間程度かかっていたのに比べ、非常に迅速である。なお、検出時間は石綿の含有量により異なってくる。
【００４６】
また、建材を解体することがなく、解体する前に、石綿の有無が判定できるので、作業環境あるいは周囲の環境への石綿の飛散を防ぐことができる。
【００４７】
また、石膏ボード等の建材を運び出すことなく、建物に組み込まれた状態で石綿の有無の検査を実施できるので、コストや時間がかからない。
【００４８】
また、大型で特殊な機器が不要で、技術的にも高度な技能や熟練が不要なため、コストがかからない。
【００４９】
また、解体に伴う廃石膏ボード等の建材は、石綿が存在する可能性があると廃棄されていたが、現場でオンサイトに検査できるので、石綿がない場合、建材をリサイクルできるため、リサイクル事業が促進できる。すなわち廃棄処分されざるをえなかった廃材の再利用が可能になる。
【００５０】
また解体時に求められる多数検体の検査処理も容易になるため、建物の解体現場などで増大する要望に応えることができる。
（第２実施形態）
次に本発明にかかる第２実施形態について説明する。
【００５１】
図４は、第２実施形態の石綿検出工程を示すフローチャートである。第１実施形態と異なり、現場の建材から一部小片を取り出し、石綿の有無を検出する方法である。なお使用するブロッキング液や、石綿検出酵素液や洗浄液や発色基質液は、第１実施形態と同じである。
【００５２】
まず、現場の建材から５〜７ｍｍ幅ほどの短冊状の試料を切り出す（ステップＳ１０）。
【００５３】
次に、この試料先端部にスポイト等によりブロッキング液（１５０μl）を添加し、５分間ほど放置する（ステップＳ１１）。なお塗布器具１１で塗ってもよい。
【００５４】
次に、石綿検出酵素液（５０μl）を試料先端部にスポイト等により添加し、５分放置する（ステップＳ１２）。なお塗布器具１３で塗ってもよい。
【００５５】
次に、マイクロチューブに洗浄液を１ｍｌ入れ、その中へ試料を挿入し、軽く振とうする（ステップＳ１３）。マイクロチューブを変え、同様の操作を計３回繰り返す（ステップＳ１４）。
【００５６】
マイクロチューブから試料を取り出した後、試料の水分を除去する（ステップＳ１５）。
【００５７】
次に、マイクロチューブに発色基質液を２００μl入れ、試料を挿入する（ステップＳ１６）。
【００５８】
１０分間以上放置し、発色を観察して石綿の有無を判定する（ステップＳ１７）。
【００５９】
図５は、第２実施形態の石綿検出方法を用いて、本発明による石綿の検出感度を測定するために行った実験結果を示す図である。横軸が白石綿（クリソタイル）の含有量である。試験片として白石綿を練り込んだ石膏紙を用いている。縦軸が反応時間で、室温で実験を行った。クリソタイルの含有量が重量比で５％の場合、３０分ほどで、紫色になりクリソタイルを検出できた。またクリソタイルの含有量が重量比で１０％の場合、１０分ほどで、紫色になりクリソタイルを検出できた。なお、石膏ボードの表面に石綿を多く含んだ石膏紙が使われているため、このような検出感度で十分である。なお一般に石膏紙は重量比で約３５％の石綿を含有している。
【００６０】
このように第２実施形態によれば、第１実施形態の効果に加えて、検査する建材がたとえば建物の奥にあるので、塗ったり、洗浄液を吹きかけたりするのが難しいところに有効である。
（比較例）
次に比較のため、検出キット・アスベスターの標準的使用法（以下、標準法と略す）に従った石綿検出工程を説明する。仮に第１実施形態および第２実施形態で使用した融合タンパク質を石綿検出酵素液として用いた場合の検出方法である。
【００６１】
図６は、標準法に従った石綿検出工程を示すフローチャートである。なお使用するブロッキング液や、石綿検出酵素液や洗浄液や発色基質液は、第１実施形態と同じである。
【００６２】
まず、各試料建材を乳鉢で粉末状になるまで粉砕し、１０ｍｇを秤量して１チューブ（マイクロチューブ）あたりの試料とする（ステップＳ２０）。
【００６３】
次に、試料の前洗浄を行う。上記（ステップＳ２０）で調製した試料が入ったマイクロチューブに洗浄液１ｍｌを加えて混和する（ステップＳ２１）。続いて、遠心操作（１０，０００×ｇ、３分間）により試料を沈殿させ、上清を除去する（ステップＳ２２）。以上ステップＳ２１からＳ２２が試料の前洗浄である。
【００６４】
次にブロッキングを行う。ブロッキング液１ｍｌを加え、ミキサー（ＲＶＩＩＩ−２０００，ＩＷＡＫＩ社製）を用いて５分間混和する（ステップＳ２３）。続いて、遠心操作（１０，０００×ｇ、３分間）により試料を沈殿させ、上清を除去する（ステップＳ２４）。以上ステップＳ２３からＳ２４がブロッキングである。
【００６５】
次に、石綿検出酵素の結合を行う。タンパク質濃度が０．０５ｍｇ／ｍｌの石綿検出酵素液を５０μl加え、ミキサー（Ｔ３６０，ＴＯＭＹ社製）を用いて５分間混和する（ステップＳ２５）。続いて、遠心操作（１０，０００×ｇ、３分間）により試料を沈殿させ、余分な上清を完全に除去する（ステップＳ２６）。
【００６６】
次に、洗浄を行う。洗浄液１ｍｌを加えて混和し（ステップＳ２７）、遠心操作（１０，０００×ｇ、３分間）により試料を沈殿させ、上清を除去する（ステップＳ２８）。この操作を計３回行う（ステップＳ２９）。以上ステップＳ２７からＳ２９が洗浄である。
【００６７】
次に、溶出を行う。溶出液（１Ｍ 塩化マグネシウムを含有する０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．０））５０μl加え、ミキサー（Ｔ３６０、ＴＯＭＹ社製）を用いて５分間混和する（ステップＳ３０）。続いて、遠心操作（１０，０００×ｇ、３分間）により試料を沈殿させ、上清５０μlを新しいマイクロチューブに移す（ステップＳ３１）。以上ステップＳ３０からＳ３１が溶出である。
【００６８】
次に、発色基質液添加を行う。発色基質液（ＢＣＩＰ／ＮＢＴ ＰＬＵＳ：Ｍｏｓｓ，ＩＮＣ．）５０μlを加え、混和する（ステップＳ３２）。
【００６９】
次に、色調判定を行う。発色基質液添加から室温で１０分間反応後、色の変化を目視観察して、石綿の有無を判定する（ステップＳ３３）。
【００７０】
次に、標準法による検出感度と第２実施形態で示した検出感度とを比較する。
【００７１】
図７は、標準法の検出感度を測定するために行った実験結果を示す図である。横軸が、白石綿（クリソタイル）の含有量である。試験片として石膏ボード（クリソタイルを含有しないもの）を粉砕したものにクリソタイル標準試料をそれぞれの割合で添加したものを用いている。縦軸が反応時間である。
【００７２】
クリソタイルの含有量が重量比で５％の場合、反応時間が１０分ほどで液が紫色に変わり、石綿を検出できた。このように標準法は検出感度が、第２実施形態で示した検出感度より高いが、標準法に比べ第２実施形態は、工程が激減していることが判る。また少なくとも検査対象とする特定の建材に関しては建材の表面に高濃度の石綿が存在（重量比で約３５％）する場合が多いので、第２実施形態で示した検出感度により、解体現場等で十分使用できる。
【００７３】
さらに標準法は、試料を切り出し、粉砕するため、乳鉢や粉砕器が必要である。また遠心操作が必要なため遠心分離器が別途必要となり、かつ遠心分離に時間がかかる。遠心分離器を現場に持ち込むことは現実的でない。
【００７４】
このように第１実施形態や第２実施形態は、建物を解体する現場において簡便かつ迅速に建材から石綿を検出できるので、新たな簡易標準法になりうる。
【００７５】
なお、図８に示すように、第１実施形態の変形例として収納容器と塗布器具とが一体となっていてもよい。すなわち、石綿検出キット２は、ブロッキング液用塗布容器２０と、融合タンパク質液用塗布容器２１と、噴霧器１４と、発色基質液用塗布容器２２とを備えている。
【００７６】
たとえば、融合タンパク質液用塗布容器２１は、融合タンパク質液を収納しかつ開口が形成された容器部２１ａと、その開口に設けられかつ融合タンパク質液を建材の表面に塗る塗布部２１ｂとを有する。塗布部２１ｂはスポンジの膜面である。
【００７７】
ブロッキング液用塗布容器２０や発色基質液用塗布容器２２も同様の構成で、ラベルや容器の色が異なる。
【００７８】
このような構成でも、第１実施形態のように建物を解体する現場において簡便かつ迅速に石綿を検出できる。
【００７９】
なお、レポータータンパク質として、アルカリホスファターゼ以外に、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、ベータガラクトシダーゼ、ジアホラーゼおよびパーオキシダーゼなどが挙げられ、本実施形態に限定されない。たとえば融合タンパク質のレポータータンパク質部分に緑色蛍光タンパク質（green fluorescent protein）を用いた場合は、検出工程で紫外線を照射して蛍光顕微鏡を用いて緑色蛍光を発光している粒子の有無を観察すれば検出できる。また、ルシフェラーゼを用いた場合は、検出工程で基質であるルシフェリンとＡＴＰを添加して、化学発光量をルミノメーター等を用いて測定すればよい。また、レポータータンパク質にアルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、ジアホラーゼ、パーオキシダーゼ等の酵素を用いた場合は、蛍光基質や発色基質を用いて、蛍光や発色の有無を目視で観測したり、蛍光量または発色量を蛍光光度計や分光光度計を用いて測定したりすればよい。
【００８０】
また石綿の検出指標として機能する物質としてレポータータンパク質に限られず、タンパク質でなく蛍光を発する物質を石綿結合タンパク質に接続させた複合タンパク質でもよい。
【００８１】
配列番号１または２に示されるアミノ酸配列において１または数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質でもよく、アスベストに特異的に結合するタンパク質ならばよい。
【００８２】
また、青石綿（クロシドライト）や茶石綿（アモサイト）等に特異的に結合する石綿結合タンパク質を用いてもよい。この場合、これら用の石綿結合タンパク質を使い分けることにより、石綿の種類も判定できる。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】本発明に係る第１実施形態の石綿検出キットを示す構成図である。
【図２】第１実施形態の石綿検出工程を示すフローチャートである。
【図３】石綿検出の原理を示す模式図である。
【図４】本発明に係る第２実施形態の石綿検出工程を示すフローチャートである。
【図５】第２実施形態の石綿検出方法を用いた検出結果を示す図である。
【図６】標準法に従った石綿検出工程を示すフローチャートである。
【図７】標準法による検出結果を示す図である。
【図８】第１実施形態の変形例の石綿検出キットを示す構成図である。
【符号の説明】
【００８４】
１…石綿検出キット
１０…ブロッキング液収納容器
１１、１３、１６…塗布器具
１２…融合タンパク質液収納容器（収納容器）
１４…噴霧器
１５…発色基質液収納容器
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図６】
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【図８】
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【図５】
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【図７】
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【配列表】
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