(57)【要約】【課題】  紅麹抽出物は、血圧降下作用を有することが知られまた、紅麹抽出物に含まれるモナコリンＫが、コレステロール低下作用を有することも知られている。一方、プロアントシアニジンは植物中に含有されるポリフェノールの一種であり、抗酸化作用、抗肥満作用などの種々の活性を有することが知られている。本発明の課題は、これら以外の種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である、紅麹抽出物、または、該抽出物とプロアントシアニジンを有効成分として用いる治療剤の提供にある。【解決手段】  紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とする、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、コレステロール低下剤、血圧降下剤、抗糖尿病剤、リウマチ治療剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項２】
紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とする高尿酸血症の予防または改善剤。
【請求項３】
紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗骨粗鬆症剤。
【請求項４】
紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗鬱・抗ストレス剤。
【請求項５】
紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とするアディポネクチン産生促進剤。
【請求項６】
紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とするリウマチ治療剤。
【請求項７】
紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項８】
紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする高尿酸血症の予防または改善剤。
【請求項９】
紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗骨粗鬆症剤。
【請求項１０】
紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗鬱・抗ストレス剤。
【請求項１１】
紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするアディポネクチン産生促進剤。
【請求項１２】
紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするコレステロール低下剤。
【請求項１３】
紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とする血圧降下剤。
【請求項１４】
紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とする抗糖尿病剤。
【請求項１５】
紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするリウマチ治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紅麹抽出物、または、該抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とする各種疾病に有用な治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
紅麹抽出物は、血圧降下作用を有することが知られている（特許文献１）。また、紅麹抽出物に含まれるモナコリンＫが、コレステロール低下作用を有することも知られている（特許文献２）。
一方、プロアントシアニジンは植物中に含有されるポリフェノールの一種であり、抗酸化作用（特許文献３）、抗肥満作用（特許文献４）などの種々の活性を有することが知られている。
しかしながら、紅麹抽出物や、該抽出物とプロアントシアニジンとの組み合わせが、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効であるとの見地はない。
【特許文献１】特開２００６−１０４１５６号公報
【特許文献２】特公昭６４−５５７０号公報
【特許文献３】特公平３−７２３２号公報
【特許文献４】特開２００６−１６３３０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
請求項１に記載の発明は、紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤である。
請求項２に記載の発明は、紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とする高尿酸血症の予防または改善剤である。
請求項３に記載の発明は、紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗骨粗鬆症剤である。
請求項４に記載の発明は、紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗鬱・抗ストレス剤である。
請求項５に記載の発明は、紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とするアディポネクチン産生促進剤である。
請求項６に記載の発明は、紅麹抽出物を有効成分とすることを特徴とするリウマチ治療剤である。
請求項７に記載の発明は、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤である。
請求項８に記載の発明は、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする高尿酸血症の予防または改善剤である。
請求項９に記載の発明は、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗骨粗鬆症剤である。
請求項１０に記載の発明は、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗鬱・抗ストレス剤である。
請求項１１に記載の発明は、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするアディポネクチン産生促進剤である。
請求項１２に記載の発明は、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするコレステロール低下剤である。
請求項１３に記載の発明は、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とする血圧降下剤である。
請求項１４に記載の発明は、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とする抗糖尿病剤である。
請求項１５に記載の発明は、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするリウマチ治療剤である。
【発明の効果】
【０００５】
本発明によれば、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
【０００７】
本発明で用いられる紅麹は、モナスカス（Monascus）属に属するものであればいずれの菌であってもよく、例えば、モナスカス・プルプレウス（Monascus purpureus）ATCC16385、モナスカス・アンカ（Monascus anka）、モナスカス・ピローサス（Monascus pilosus）IFO4520、IFO4480、モナスカス・プビゲレス（Monascus pubigerus）IFO4521、モナスカス・エスピー（Monascus sp.）ATCC16370これらの変種、変異株などが例示できる。
紅麹抽出物は、例えば特許４０４９９７５号公報に記載の方法に従い調製することができる。特許４０４９９７５号公報に記載の方法は、モナコリンＫの抽出効率を高める方法であって、例えば、紅麹菌を、米、ダイズ等とともに培養し、培養物と４０〜８０％（ｖ／ｖ）の含水エタノールとを接触させる方法が挙げられる。接触時間は、１分以上、望ましくは１５分以上である。培養物が液体培養物の場合は、含水エタノールを加えた後の液全体が４０〜８０％（ｖ／ｖ）のエタノール濃度となるようにすればよい。抽出は室温または４０〜８０℃に加熱下で行なうことができる。含水エタノール量は、例えば培養物に対し、５倍量以上であればよい。抽出物は、必要に応じて当業者に公知の各種クロマトグラフ法を単独で、または組み合わせて採用することができる。
【０００８】
上記とは別に、紅麹抽出物を得る方法として、超臨界流体抽出法が挙げられる。
超臨界流体抽出法は、物質の気液の臨界点（臨界温度、臨界圧力）を超えた状態の流体である超臨界流体を用いて抽出を行う方法である。超臨界流体としては、二酸化炭素、エチレン、プロパン、亜酸化窒素（笑気ガス）などが用いられ、二酸化炭素が好適である。
【０００９】
超臨界流体抽出法は、目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程および目的成分と超臨界流体とを分離する分離工程からなる。分離工程は、圧力変化による抽出分離、温度変化による抽出分離、または吸着剤、吸収剤を用いた抽出分離のいずれを行ってもよい。
【００１０】
紅麹抽出物は、必要に応じて濃縮して濃縮物としたり、凍結乾燥を行なって粉末化することもできる。
【００１１】
紅麹抽出物の投与量は、患者の年令、体重、適応症状などによって異なるが、例えば、凍結乾燥粉末として、成人１日１〜数回、１回量約１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは３ｍｇ〜３００ｍｇ程度投与するのがよい。
【００１２】
一方、本発明で使用されるプロアントシアニジンとは、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上、好ましくは２〜１０量体、さらに好ましくは２〜４量体の縮重合体からなる化合物群、誘導体およびそれらの立体異性体を指称する。プロアントシアニジンのうち、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２〜４の縮重合体をＯＰＣ（オリゴメリックプロアントシアニジン；ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）という。ＯＰＣは強力な抗酸化物質であり、植物の葉、樹皮、果物の皮もしくは種子の部分に豊富に含有されている。具体的には、ブドウ、松の樹皮、ピーナッツの薄皮、イチョウ、ニセアカシアの果実、コケモモ、ブルーベリー、イチゴ、アボガド、大麦、小麦、大豆、黒大豆、カカオなどに含まれている。また、西アフリカのコーラナッツ、ペルーのラタニアの根にもＯＰＣが含まれていることが知られている。ＯＰＣはヒトの体内では生成することができない物質である。
【００１３】
本発明の有効成分として用いられるプロアントシアニジンについては、原料の由来あるいは原料の利用部分、製造法、精製法は何ら制限されないが、上記の樹皮、果実もしくは種子の粉砕物、またはこれらの抽出物のような食品原料を使用することができる。特に松樹皮、さらに好ましくはＯＰＣが豊富に含まれているフランス海岸松樹皮の抽出物を用いることが好ましい。フランス海岸松樹皮はプロアントシアニジンの原料として好ましく用いられる。
【００１４】
プロアントシアニジンは、公知の方法［例えば、松の樹皮からの抽出法；アール・ダブル・ヘミングウェイ（Ｒ．Ｗ．Ｈｅｍｉｎｇｗａｙ）ら、フィトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），１９８３年，第２２巻、ｐ．２７５−２８１］あるいはそれに準じた方法を採用することによって上記各種植物体から容易に得ることができる。
【００１５】
以下、ＯＰＣを豊富に含む松樹皮の抽出物を例に挙げて、プロアントシアニジンの調製方法を説明する。
【００１６】
松樹皮抽出物は、松樹皮を水または有機溶媒で抽出して得られる。水を用いる場合には、温水または熱水が用いられる。抽出に用いる有機溶媒としては、食品あるいは薬剤製造に許容される有機溶媒が用いられ、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ブタン、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，２−トリクロロエテンなどが挙げられる。これらの水および有機溶媒は単独で用いてもよいし、組み合わせて用いてもよい。特に、熱水、含水エタノール、含水プロピレングリコールが好適に用いられる。
【００１７】
松樹皮からプロアントシアニジンを抽出する方法は、特に限定されないが、例えば、加温抽出法、超臨界流体抽出法などが用いられる。
【００１８】
超臨界流体抽出法は、物質の気液の臨界点（臨界温度、臨界圧力）を超えた状態の流体である超臨界流体を用いて抽出を行う方法である。超臨界流体としては、二酸化炭素、エチレン、プロパン、亜酸化窒素（笑気ガス）などが用いられ、とりわけ二酸化炭素が好適に用いられる。
【００１９】
超臨界流体抽出法は、目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程および目的成分と超臨界流体とを分離する分離工程からなる。分離工程は、圧力変化による抽出分離、温度変化による抽出分離、または吸着剤、吸収剤を用いた抽出分離のいずれを行ってもよい。
【００２０】
また、エントレーナー添加法による超臨界流体抽出を行ってもよい。この方法は、超臨界流体に、例えば、エタノール、プロパノール、ｎ−ヘキサン、アセトン、トルエンなどを２〜２０％程度添加し、得られた抽出流体で超臨界流体抽出を行うことによって、ＯＰＣなどの被抽出物の抽出流体に対する溶解度を飛躍的に上昇させる、あるいは分離の選択性を増強させる方法であり、効率的に松樹皮抽出物を得る方法である。
【００２１】
松樹皮からの抽出は、上記の方法以外に、液体二酸化炭素回分法、液体二酸化炭素還流法、超臨界二酸化炭素還流法などにより行ってもよい。
【００２２】
以上のようにして得られたプロアントシアニジンは、液状もしくは半固形状の形態で得られるが、このものから抽出溶媒を減圧留去、スプレードライ、凍結乾燥等の公知の方法によって除去すれば、そのままプロアントシアニジン含有濃縮物や乾燥物として使用することができる。さらに精製するには、カラムクロマトグラフィー、向流分配法等の公知の精製手段を採用して、目的を達成することができる。
【００２３】
プロアントシアニジンは、水によく溶解し、生体への吸収性が高い。酸性、中性、アルカリ性のいずれの条件においても安定性が高い。
【００２４】
プロアントシアニジンの投与量は、その種類、その剤型、また患者の年令、体重、適応症状などによって異なるが、例えば、成人１日１〜数回、１回量約１〜５００ｍｇ、好ましくは３〜３００ｍｇ程度投与するのがよい。
【００２５】
本発明の治療剤は、錠剤、ピル、カプセル、顆粒、粉末、散剤、液剤等の固形または溶液の形態（以下、製剤ともいう）に公知の方法により適宜調製することができる。即ち、本発明に有用な固形製剤または液状製剤は、従来充分に確立された公知の製剤製法を用いることにより製造される。添加剤としては、例えば賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、希釈剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤または香料などが挙げられる。
【００２６】
また本発明の治療剤は、各種健康食品および機能性食品として摂取可能である。これらの例としては、各種のものをあげることができるが、健康食品および機能性食品の製造に関しては、通常用いられる、食品素材、食品添加物に加え、賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、分散剤、保存剤、湿潤化剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化材、カプセル基剤等の補助剤を用いた飲食品製剤形態で利用することができる。該補助剤の具体的な例示をすれば、乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、またはその塩、アラビアガム、ポリエチレングルコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウム、プルラン、カラギーナン、デキストリン、還元パラチノース、ソルビトール、キシリトール、ステビア、合成甘味料、クエン酸、アスコルビン酸、酸味料、重曹、ショ糖エステル、植物硬化油脂、塩化カリウム、サフラワー油、ミツロウ、大豆レシチン、香料等が配合できる。このような健康食品、機能性食品の製造に関しては、医薬品製剤の参考書、例えば「日本薬局方解説書（製剤総則）」（廣川書店）等を参考にすることができる。
【００２７】
上記以外にも本発明の治療剤は飲食品として摂取することができる。具体的には、プリン、クッキー、クラッカー、ポテトチップス、ビスケット、パン、ケーキ、チョコレート、ドーナツ、ゼリーなどの洋菓子、煎餅、羊羹、大福、おはぎ、その他の饅頭、カステラなどの和菓子、冷菓（飴等）、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば、きしめん等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、ハム、ソーセージ、ハンバーグ、コーンビーフ等の畜肉製品や、塩、胡椒、みそ、しょう油、ソース、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、甘味料、辛味料等の調味類や、明石焼き、たこ焼き、もんじゃ焼き、お好み焼き、焼きそば、焼きうどん等の鉄板焼き食品や、チーズ、ハードタイプのヨーグルト等の乳製品や、納豆、厚揚げ、豆腐、こんにゃく、団子、漬物、佃煮、餃子、シューマイ、コロッケ、サンドイッチ、ピザ、ハンバーガー、サラダ等の各種総菜や、各種粉末（ビーフ、ポーク、チキン等畜産物、海老、帆立、蜆、昆布等水産物、野菜・果実類、植物、酵母、藻類等）や、油脂類・香料類（バニラ、柑橘類、かつお等）を粉末固形化したものや、粉末飲食品（インスタントコーヒー、インスタント紅茶、インスタントミルク、インスタントスープ、味噌汁等）等の各種食品が挙げることができるが、これらに特に制限されない。
【００２８】
さらに本発明においては、例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、葉酸、パントテン酸、ビオチン、これらの誘導体等）、ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛等）、セレン、レシチン、カロテノイド（リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン等）、サポニン（ギムネマ酸、大豆サポニン、人参サポニン等）、脂肪酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチン等）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖等）、リン脂質及びその誘導体（フォスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、セラミド等）、含硫化合物（アリイン、セパエン、タウリン、グルタチオン、メチルスルホニルメタン等）、糖アルコール、リグナン類（セサミン等）、これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ウコン、ショウガ等）、麦若葉末等のイネ科植物の緑葉、ケール等のアブラナ科植物の緑葉、サボテンの乾燥葉、ターミナリアベリリカ抽出物、サツマイモの茎葉をまるごと粉砕した素材、大豆から抽出したセラミド様成分含有物、チャンカピエドラのようなハーブ類、などを使用することもできる。中でも、麦若葉末等のイネ科植物の緑葉、ケール等のアブラナ科植物の緑葉、サボテンの乾燥葉、ターミナリアベリリカ抽出物、サツマイモの茎葉をまるごと粉砕した素材、大豆から抽出したセラミド様成分含有物、チャンカピエドラのようなハーブ類を併用した場合は、上記の紅麹抽出物とプロアントシアニジンとを併用した形態と同等の治療効果を奏する。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本発明の治療剤は、紅麹抽出物のみを有効成分とする場合は、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、リウマチ治療剤に有用であり、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを併用する場合は、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、コレステロール低下剤、血圧降下剤、抗糖尿病剤、リウマチ治療剤としてきわめて有用である。すなわち、紅麹抽出物およびプロアントシアニジンを併用する場合は、両有効成分が互いに相乗的な効果を発揮するものと推測される。以下、上記各種薬効について実施例でもって説明する。
【００３０】
実施例１（抗アレルギー剤としての効果）
特許４０４９９７５号公報の実施例１と同様にして、紅麹粉末を得た。
精白米を１２時間水に浸漬した後、３０分間水切りし、それに浸漬米に対し７重量％の割合で米胚芽粉末を添加し、１２１℃、１時間蒸煮滅菌し、蒸し米を得た。これにモナスカス・ピローサスＩＦＯ４５２０を無菌的に植菌し、水分率を３５〜４２％に維持しつつ、３０℃で４日間、続いて２５℃で３日間、計７日間静置培養した。こうして得られた紅麹を１１０℃、２０分間の熱処理により菌および酵素を失活させた後、６０℃で送風乾燥し、粉砕機にて粉末化した。
該紅麹粉末５ｇに対しエタノール濃度６０％（ｖ／ｖ）の含水エタノールを５０ｍｌ添加し、室温にてマグネットスターラーで撹拌しながら３０分間抽出した。抽出後、さらに凍結乾燥し、紅麹抽出物の凍結乾燥の粉末１を得た。
【００３１】
ＲＡＳＴ法による食物アレルゲン陽性の慢性じんま疹の患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に前記粉末１を３００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表１に示す。
【００３２】
【表１】
2009249341.tif 000002
【００３３】
実施例２
ＲＡＳＴ法によるアトピー性皮膚炎患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に実施例１の粉末１を３００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表２に示す。
【００３４】
【表２】
2009249341.tif 000003
【００３５】
実施例３
松樹皮９００ｇに精製水７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１０分間加熱抽出した。次いで、直ちに濾過して濾液を得た。濾過後の残渣を精製水１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて９Ｌの松樹皮の熱水粗抽出液を得た。この抽出液１ｍＬを凍結乾燥したところ、乾燥重量は８ｍｇであった。
【００３６】
上記粗抽出液１Ｌ（粉末乾燥重量８ｇ）を２５℃まで放冷し、塩化ナトリウムを１００％飽和濃度となるまで添加してよく攪拌した後、４℃で２４時間静置した。静置後、この溶液を濾過し、９１０ｍＬの濾液を得た。この濾液を以下に示す工程によりさらに精製した。まず、水で膨潤させた芳香族系合成樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０：三菱化学株式会社製）を１００ｍＬ充填した３０×３００ｍｍのカラムに上記濾液を通液し、さらに１Ｌの精製水で洗浄した。次いで、カラムから１５％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒で溶出し、２００ｍＬの松樹皮の熱水抽出精製物を得た（以下、松樹皮の熱水抽出物とする）。得られた精製物を凍結乾燥して粉末化した。本操作を繰り返して、９Ｌの松樹皮の熱水抽出液から松樹皮の熱水抽出物の乾燥粉末２を７．５１ｇを得た。
【００３７】
上記粉末２中のプロアントシアニジンおよびＯＰＣの含有量を、特開２００５−２３０３２号公報に記載の方法により測定した結果、プロアントシアニジンは、上記乾燥粉末中に４０重量％含有されていた。また、ＯＰＣは、２〜４量体として、上記乾燥粉末中に２０重量％含有されていた。
【００３８】
実施例２において、実施例１の粉末１を３００ｍｇ、および、実施例３の粉末２を３００ｍｇ、１カ月投与した。それ以外は実施例２と同様である。その結果を以下の表３に示す。
【００３９】
【表３】
2009249341.tif 000004
【００４０】
実施例４（高尿酸血症の改善効果）
実験方法
供試動物はWistar系ラット雌（８週令、体重約180g）を１群６匹で用いた。
試験飼料に0.75％の濃度でアデニンを加えてラットに給与し、腎臓からの尿中への尿酸排泄阻害を起こさせて高尿酸血症のモデル動物とした。
対照群は、上記の0.75％アデニン飼料のみ、薬剤投与群は、０．７５％アデニンと実施例１の粉末１含有飼料とした。飼料は自由摂取としたが、薬剤投与群の試験飼料中の上記粉末１の濃度を、摂取量が１ｍｇ／ｋｇ体重となるように調整した。試験開始日及び24日目に血中の尿酸値を測定した。
その結果、対照群の試験開始日の血中尿酸濃度は、０．５７ｍｇ／ｍｌであり、２４日目が２．３３ｍｇ／ｍｌであったのに対し、薬剤投与群の２４日目の血中尿酸濃度は０．８１ｍｇ／ｍｌであった。
この結果から明らかなように、対照群では血中尿酸濃度が大幅に増加するのに対し、薬剤投与群ではいずれもその濃度は増加しなかった。したがって、茶の花部の抽出物は、高尿酸血症の予防または改善剤として有用であることが示された。
【００４１】
実施例５
実施例４において、薬剤投与群の試験飼料中に、さらに実施例３の粉末２を添加し、該粉末２の濃度を、摂取量が１ｍｇ／ｋｇ体重となるように調整したこと以外は、実施例４を繰り返した。その結果、薬剤投与群の２４日目の血中尿酸濃度は０．６０ｍｇ／ｍｌであった。
【００４２】
実施例６（抗骨粗鬆症効果）
骨粗鬆症改善効果試験
ＳＤ系ラット（２２週齢）メスの卵巣を外科的に取り除き、骨粗鬆症のモデルラットを作成した。卵巣摘出ラットを７匹ずつ６群に分け、３５日間の試験期間中、１日置きに（計１７回）、実施例１の粉末１の摂取量が１ｍｇ／ｋｇとなるように、生理食塩水溶解した液体を２ｍｌ経口投与した。飼料はオリエンタル酵母株式会社のマウス・ラット・ハムスター用固形飼料ＣＲＦ−１を用い、給餌および給水方法は自由摂取とした。試験期間中、各群間で、餌の摂取量に差は認められなかった。試験開始後３５日目にラットの体重を測定した後、大腿骨を取り出した。大腿骨は、接着組織および筋肉を取り除いて分析に使用した。大腿骨の体積を測定した後、エタノールで３回洗浄し、次にアセトンで３回洗浄したのち、一晩乾燥し、その後、重量を測定して大腿骨の乾燥重量を求めた。体積および乾燥重量から、骨密度（乾燥重量ｇ／体積ｍｍ3 ）を測定した。なお対照実験として、前記熱水抽出物１の粉末を含まない生理食塩水をラットに投与したこと以外は、上記実験を繰り返した例（比較例）も併せて、その結果を表４に示す。
【００４３】
【表４】
2009249341.tif 000005
【００４４】
実施例６と比較例とを対比したところ、実施例１はp＜0.05の危険率で有意差が認められた。
【００４５】
実施例７
実施例６において、前記粉末１に加え、実施例３の粉末２の摂取量が１ｍｇ／ｋｇとなるように、生理食塩水溶解した液体を２ｍｌ経口投与した。それ以外は、実施例６を繰り返した。その結果、骨密度は１．０７８（ｍｇ／ｍｍ3 ）であった。
【００４６】
実施例８（抗リウマチ効果）
ヒト慢性リウマチ患者の滑膜から樹立された繊維芽細胞株であるＤＳＥＫ細胞を１０％ＦＢＳ（バイオウイタッカー社製）を含むＩｓｃｏｖ−ＭＥＭ培地（ＩＭＤＭ：ギブコＢＲＬ社製）にて、５％ＣＯ２存在下、３７℃で細胞が培養器に飽和になるまで培養し、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（バイオウイタッカー社製）で細胞を３×１０４細胞／ｍｌとなるように上記培地に懸濁し、９６ウェルマイクロタイタープレート（ＦＡＬＣＯＮ社製）の各ウェルに２００μｌずつ分注した。培養５〜７日後、ほぼ細胞が８０％飽和になった時で培地を交換し、実施例１の粉末１濃度が５００μｇ／ｍｌの濃度である２００μｌの上記培地を加えた。
２４時間、７２時間経過時に１０μｌのプレミックスＷＳＴ−１（宝酒造社製、ＭＫ４００）を加えて３７℃で３．５時間反応させ、４５０ｎｍにおける吸光度（Ａ４５０）から６５０ｎｍにおける吸光度（Ａ６５０）を差し引いた値を細胞増殖度とした。その結果、２４時間後の細胞増殖度は０．８２、７２時間後は０．３７であり、抗リウマチ活性が認められた。なお、前記粉末１を加えない対照区では、２４時間、７２時間経過時の細胞増殖度が３．９０であった。
【００４７】
実施例９
実施例８において、培地を交換する際に、前記粉末１の濃度が５００μｇ／ｍｌの濃度である１００μｌの上記培地と、実施例３の粉末２の濃度が５００μｇ／ｍｌの濃度である１００μｌの上記培地とを混合し、合計２００μｌの交換培地としたこと以外は、実施例８を繰り返した。その結果、２４時間後の細胞増殖度は０．６９、７２時間後は０．２９であり、抗リウマチ活性が認められた。
【００４８】
実施例１０（抗鬱・抗ストレス効果）
実施例１の粉末１の治療効果を調べた。
マウス強制水泳試験による精神安定作用の評価
本発明の治療剤の評価は、１９７７年にPorsoltにより開発されたマウス強制水泳試験を採用した。本試験は鬱病の動物モデル実験として最も多用される方法のひとつである。本試験では、マウスをある限られたスペースの中で強制的に泳がせて「無動状態」を惹起させる。この無動状態は、ストレスを負荷された動物が水からの逃避を放棄した一種の「絶望状態」を反映するものと考えられ、ヒトにおける鬱状態、ストレス状態と関連づけられている。事実、抗鬱薬は特異的にこの状況下における無動状態の持続時間を短縮させることがわかっており、この短縮作用は臨床力価との間に有意な相関を有することが認められている。
【００４９】
本試験方法は次のとおりである。
２５℃の水を深さ１５ｃｍまで入れたプラスチック円筒中でマウスを強制水泳させる。５分間の強制水泳後、３０℃の乾燥機中で１５分間乾燥し、ホームケージに戻す。翌日マウスに試験試料を腹腔内投与して、その１時間後に再び５分間の強制水泳を課し、現れた無動状態の持続時間をストップウォッチを用いて測定する。マウスが水に浮かんで静止している状態を無動状態と判定する。無動状態持続時間については有意差検定を行い、統計学的に有意差を検定する。実験には雄のｄｄYマウスを使用し、１群６匹とする。なお、試験は全て午後１時から午後６時の間に行う。また、ポジティブコントロールとして抗鬱薬であるイミプラミンを用いた試験も行う。
【００５０】
その結果、粉末１を３０ｍｇ／ｋｇ投与したマウスの無動状態持続時間は、１７５．０±４．４秒であった。コントロール（生理食塩水のみ）は２２０．０±２．２秒であった。ポジティブコントロール（３０ｍｇ／ｋｇ投与）のマウスの無動状態持続時間は、１７６．５±４．０秒であった。本実施例およびポジティブコントロールの無動状態持続時間は、危険率１％で有意差を有する。なお、粉末１を２〜３倍量使用しても、同様の結果を得た。
【００５１】
実施例１１
実施例１０において、粉末１を３０ｍｇ／ｋｇ投与したのに加え、実施例３の粉末２を３０ｍｇ／ｋｇさらに投与したこと以外は、実施例１０を繰り返した。その結果、マウスの無動状態持続時間は、１５９．１±４．７秒であった。
【００５２】
実施例１２
アディポネクチン産生上昇確認試験
正常ヒト前駆脂肪細胞を使用し、１．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはヒト前駆脂肪細胞基礎培地を用いた。２４時間後に分化誘導添加剤と実施例１の粉末１を加えた増殖培地に交換し、さらに１週間培養した。その後、培養上清中に産生されたアディポネクチン量をＥＬＩＳＡ法により定量した。各試料の評価結果を、ブランク（試料未添加）のアディポネクチン量を１００とした場合の相対値にて下記に示す。なお、添加した粉末１濃度は、１０μｇ／ｍｌであった。
【００５３】
上記試験結果：相対値＝３６９。この数値は、危険率１％で有意差を有する。
【００５４】
実施例１３
実施例１２において、粉末１を１０μｇ／ｍｌ添加したのに加え、実施例３の粉末２を１０μｇ／ｍｌさらに添加したこと以外は、実施例１２を繰り返した。その結果、相対値は３９０であった。
【００５５】
実施例１４（コレステロール低下作用）
体重２０ｇ前後のＩＣＲ系雄性マウス（１群５匹）に、高コレステロール−コール酸食餌（７１．９％標準餌、１５％ショ糖、２％食塩、１０％ココナッツオイル、０．６％コレステロール、０．２％コール酸、０．３％塩化コリン）を試験第１日目から第７日目まで給餌（自由摂取）した。試験第６日目と第７日目に、実施例１の粉末１の５ｍｇを蒸留水に溶解し、経口投与した。その後、２４時間の絶食を行い、試験第８日目にマウスから血液を採取し、血清を分離した。
【００５６】
また、採取した血清の一部にヘパリンを添加し沈降させ、低比重リポタンパク（ＬＤＬ）としてヘパリン沈降リポタンパクを得た。血清中の総コレステロール値及びＬＤＬ中のコレステロール値を、シー・シー・アライン（Ｃ．Ｃ．Ａｌｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．）らの報告（クリニカル ケミストリイ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１９７４年、２０巻、４７０−４７５頁）に従って、測定した。
【００５７】
血清中の総コレステロール値からＬＤＬコレステロール値を引いた値を、高比重リポタンパク（ＨＤＬ）コレステロール値として算出した。なお対照群は、上記粉末１を投与していない群である。
これとは別に、上記粉末１の５ｍｇに加え、実施例３の粉末２の５ｍｇをさらに投与したこと以外は、上記試験を繰り返した。その結果を表５に示した。
【００５８】
【表５】
2009249341.tif 000006
【００５９】
表５から、紅麹抽出物とプロアントシアニジンの血清中総コレステロール低下の相乗効果が認められた。
【００６０】
実施例１５（血圧降下効果）
実施例１の粉末１を一般市販飼料（船橋農場製、船橋SP）に添加し、脳卒中易発症性高血圧自然発症ラット（SHR−SP）を用いて最高血圧値、体重の変化を比較した（粉末１区）。対照区は、粉末１を添加しない一般試料を用いた。また、実施例１の粉末１および実施例３の粉末２を上記一般市販飼料に添加し、上記ラットを用いて最高血圧値、体重の変化を比較する実験も行なった（粉末１および２区）。
それぞれの飼料で５週齢の雄性SHR−SPを各区６匹ずつ７週間飼育し、12週齢に達した時の血圧値と体重の変化について調べた。表６に示すように血圧の変化においては、粉末１および２区に相乗的効果でもって血圧上昇の抑制が認められた。なお、粉末１区においては、粉末１の１日あたりの粉末１の摂取量が、５０ｍｇ／ｋｇ体重となるように、粉末１および２区においては、粉末１および粉末２の１日あたりの粉末１の摂取量が、それぞれ５０ｍｇ／ｋｇ体重となるように、飼料中の各粉末の濃度を調整した。
【００６１】
【表６】
2009249341.tif 000007
【００６２】
実施例１６
６週齢の雄性ＳＤ系ラット（１群６匹）の尾静脈にストレプトゾトシンを１回投与することにより糖尿病を惹起した。
実施例１の粉末１の投与量を５００μｇ／ｋｇとし、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）投与の１時間前に経口投与し、その翌日より１日１回１３日間連続経口投与した。最終投与の翌日に５０％グルコース水溶液（１０ｍｌ／ｋｇ）を経口投与し、経時的に血糖値（ｍｇ／ｄｌ）を測定（ｏ−トルイジン・ホウ酸）した。
【００６３】
なお、正常対照群としてＳＴＺを投与せずに滅菌水のみを投与した群、病態対照群としてＳＴＺを投与して滅菌水を投与した群、および陽性対照群としてＳＴＺを投与してニコチン酸アミド（５０ｍｇ／ｋｇ）を投与した群を設けた。ニコチン酸アミドはＳＴＺ糖尿病モデルに対して有効であることが報告されている（新薬開発のための動物利用集成，４１９−４２２頁，Ｒ＆Ｄプランニング，１９８５年）。
【００６４】
糖尿病は糖代謝能力が低下し高血糖を呈する疾患である。本実施例においてはグルコース投与１時間後に血糖値のピークを認めるが、病態対照群では最高血糖値が３６０ｍｇ／ｄｌであり、正常対照群では最高血糖値は１６４ｍｇ／ｄｌであった。病態対照群の最高血糖値は正常対照群のそれと比較して約２倍を示し、病態対照群では糖代謝能力の低下が認められた。
【００６５】
粉末１の活性は、式１により病態対照群の血糖値に対する抑制率（％）を算出した。
【００６６】
（式１）
抑制率（％）＝〔１−（粉末１投与群または陽性対照群の最高血糖値−正常対照群の最高血糖値）／（病態対照群の最高血糖値−正常対照群の最高血糖値）〕×１００
【００６７】
その結果、粉末１投与群の抑制率は４０．９％であった。陽性対照群の抑制率は４３．０％であった。
【００６８】
上記試験において、ラットに対する実施例１の粉末１の投与量を５００μｇ／ｋｇ、実施例３の粉末２の投与量を５００μｇ／ｋｇとしたこと以外は、上記試験を繰り返した。
【００６９】
その結果、粉末１および２投与群の抑制率は６０．５％であった。
【００７０】
参考例１
〔動物実験〕
４週令のフィッシャー３４４系雄ラット（日本クレア（株））を標準飼料で６日間予備飼育した後、１群２５匹ずつ２群に分け、表７に示したごとくの実験飼料を給与して６カ月間飼育した。なお、飼料は自由に摂取させた。発癌物質（１，２−ジメチルヒドラジン）は試験開始後１週目より２０週目まで計２０回、２０ｍｇ／ｋｇ体重となるようにラットの腹腔内に投与した。大腸癌の有無は、ラットを解剖して大腸を摘出して数を調べた。動物実験に用いた飼料の成分組成を表７に、大腸癌の発生頻度を表８にそれぞれ示す。なお、本発明区においては、実施例１の粉末１のラットの１日あたりの摂取量が、５０ｍｇ／ｋｇ体重となるように飼料中の粉末１の濃度を調整した。
【００７１】
【表７】
2009249341.tif 000008
【００７２】
【表８】
2009249341.tif 000009
【００７３】
参考例２（二日酔い予防又は改善効果）
ウィスター（Ｗｉｓｔｅｒ）系雄性ラット（７〜８週齢）一群６匹を一夜絶食後、翌朝、実施例１の粉末１（１０ｍｌ／ｋｇ）を経口投与し、２０分後に１５％（Ｗ／Ｖ）エタノール水溶液２０ｍｌ／ｋｇを経口投与した。エタノール水溶液投与後、１、３、５の各時間後に尾の先端から採血し、血中アルコール測定キット（シグマ社製）を用いて血中アルコール濃度を測定した。
【００７４】
その結果、ラットの血中アルコール濃度は、エタノール水溶液投与直後が１５０ｍｇ／ｄｌであったのに対し、１時間後は１１９ｍｇ／ｄｌ、３時間後は９８ｍｇ／ｄｌ、５時間後は４２ｍｇ／ｄｌであった（平均）。これに対し、粉末１を投与しない対照群は、エタノール水溶液投与直後が１５０ｍｇ／ｄｌであったのに対し、１時間後は１４０ｍｇ／ｄｌ、３時間後は１０７ｍｇ／ｄｌ、５時間後は８８ｍｇ／ｄｌであった。
【００７５】
参考例３
以下の処方にてジュースを調製した。
冷凍濃縮オレンジ果汁  ５．０質量部
果糖ブドウ糖液糖  １．０質量部
クエン酸  ０．１０質量部
Ｌ−アスコルビン酸  ０．０９質量部
実施例１の粉末１  ０．０５質量部
【００７６】
エタノールパッチテストでアルデヒド脱水素酵素欠損型と判定された健常人５名（年齢２５〜３２才、男性３名、女性２名）をパネルとし、上記ジュースおよび上記ジュースから粉末１を除いた対照ジュースを用いた。なお、上記ジュースにおける粉末１の量は、下記の試験において摂取量が１５０ｍｇとなるようにした。
【００７７】
ジュースおよび対照ジュース服用後２０分にビール（アルコール濃度約 ５．５％）１３５ml を飲酒させて、飲酒後２０分での自覚症状を質問票で回答させた。
パネルテストは順序効果を考慮し、ブラインドで行い、同一時間帯に日を変えて実施した。
自覚症状の評価は１〜５（１：症状なし、２：やや症状あり、３：症状あり、４：ややひどい、５：ひどい）の５段階で行い、Paired-t 検定により有意差を検定した。
【００７８】
結果を以下に示す。参考例３のジュースは、危険率 ５％で酔いの程度および顔のほてりを改善し、悪酔いを予防することが明らかになった。
【００７９】
ジュースおよび対照ジュースの悪酔い予防効果（平均値）
参考例３のジュース：
酔いの程度２．２＊
顔のほてり２．１＊
心臓の鼓動２．６
眠気の程度３．２
対照ジュース：
酔いの程度３．６
顔のほてり３．７
心臓の鼓動３．１
眠気の程度３．４
＊：対照ジュースに比べて有意差あり（P<0.05）
【００８０】
なお、上記各例において、実施例１の粉末１の調製の際に、エタノール水溶液を用いずに、熱水を用いて抽出物を調製した場合においても、上記と同様の結果を得た。
【産業上の利用可能性】
【００８１】
本発明の治療剤は、医薬、食品、飼料の形態として有用である。