(57)【要約】【課題】  簡便かつ安価な方法で、Ｓ−アデノシルメチオニンおよびグルタチオンを高含有する酵母、ならびに、その製造方法を提供すること。【解決手段】  メチオニン、および、グルタミン酸またはその塩を含む培地で酵母菌株を培養することによって、乾燥菌体重量あたり２重量％以上のＳ−アデノシルメチオニンおよび２重量％以上のグルタチオンを含有するＳ−アデノシルメチオニンとグルタチオン高含有酵母が得られる。酵母菌株としてはグルタチオン高生産菌を使用するのが好ましい。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乾燥菌体重量あたりＳ−アデノシルメチオニンを２重量％以上、かつグルタチオンを２重量％以上含有することを特徴とする酵母。
【請求項２】
酵母菌株がサッカロマイセス・セレビシエであることを特徴とする、請求項１記載の酵母。
【請求項３】
酵母菌株がグルタチオン高生産菌であることを特徴とする、請求項１記載の酵母。
【請求項４】
酵母菌株がＦＥＲＭ  Ｐ−１９０７２、Ｐ−１９０７３又はＰ−１９０７４であることを特徴とする、請求項３記載の酵母。
【請求項５】
メチオニン、および、グルタミン酸またはその塩を含む培地で酵母菌株を培養することを特徴とする、乾燥菌体重量あたりＳ−アデノシルメチオニンを２重量％以上、かつグルタチオンを２重量％以上含有する酵母の製造方法。
【請求項６】
０．２重量％以上のメチオニン、および、０．０５重量％〜５重量％のグルタミン酸またはその塩を含む培地で培養することを特徴とする、請求項５記載の製造方法。
【請求項７】
酵母菌株としてグルタチオン高生産菌を培養することを特徴とする、請求項５記載の培養方法。
【請求項８】
酵母菌株としてＦＥＲＭ  Ｐ−１９０７２、Ｐ−１９０７３又はＰ−１９０７４を培養することを特徴とする、請求項７記載の培養方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ−アデノシルメチオニンおよびグルタチオンを高含有する酵母、ならびに、その製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｓ−アデノシルメチオニン（Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ、以下ＳＡＭという）は、生体組織に広く存在し、核酸、神経伝達物質、リン脂質、ホルモン、タンパク質などの合成・代謝におけるメチル基供与体、または、酵素活性化因子として数多くの生物反応に関与する物質である。また、ＳＡＭは肝臓障害（非特許文献１）、鬱病（非特許文献２）、骨関節症（非特許文献３）に対して有効であることが知られている。
【０００３】
酵母を用いたＳＡＭの製造方法として、例えば、酵母をメチオニン含有培地で培養することにより菌体内ＳＡＭ含量を高める製造方法が開示されている（特許文献１、２）。
【０００４】
一方、グルタチオンは、グルタミン酸、システイン、グリシンの３つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、酵母や動物の肝臓などに広く存在し、生体内の酸化還元に関与する物質である。また、グルタチオンは肝機能回復作用や解毒作用などの作用を有していることが知られている。
【０００５】
グルタチオンの製造方法として、酵母から抽出する方法が知られており、グルタチオン高含有酵母の製造としては、培地に亜鉛を添加する方法（特許文献３）、アミノ酸を添加する方法（特許文献４）が開示されている。
【０００６】
上述したとおり、ＳＡＭおよびグルタチオンは単独で上記の様な有益な効果を示すことから、ＳＡＭおよびグルタチオンを共生産した酵母を摂取することによって、相加的または相乗的な効果が発揮されることが期待される。また、工業的な生産に際して一度の培養において、同時に２種以上の有用物質を生産することは、製造コストの削減等に関して極めて有効であると考えられる。
【０００７】
ＳＡＭおよびグルタチオンを共に含有する酵母を取得する方法としては、酵母をメチオニン添加培地中で培養する方法が開示されている（特許文献５）。しかしながら、該文献に記載の方法では、酵母中のグルタチオン含量を十分に高めることはできなかった。
【特許文献１】特開昭５８−１４６２９１号
【特許文献２】特開昭５８−１３８３９３号
【特許文献３】特開２０００−２７９１６４号
【特許文献４】特開昭５３−９４０８９号
【特許文献５】特開昭４８−４４４９１号
【非特許文献１】Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９０，１１１，６５−７２
【非特許文献２】Ｊ  Ｆａｍ  Ｐｒａｃｔ，２００２，５１，４２５−４３０
【非特許文献３】Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃａｎｄ  Ｓｕｐｐｌ，１９９４，１５４，７−１４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記を鑑み、ＳＡＭおよびグルタチオンを高含有する酵母、ならびに、その製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記実情に鑑み鋭意検討を行った結果、酵母の培養においてメチオニンとグルタミン酸を培地に添加することにより、酵母中のＳＡＭ含量およびグルタチオン含量共に高めることができることを見出し、本発明の完成に至った。
【００１０】
すなわち本発明は、以下の酵母およびその製造方法を提供するものである。
（１）  乾燥菌体重量あたりＳ−アデノシルメチオニンを２重量％以上、かつグルタチオンを２重量％以上含有することを特徴とする、酵母。
（２）  酵母菌株がサッカロマイセス・セレビシエであることを特徴とする、（１）記載の酵母。
（３）  酵母菌株がグルタチオン高生産菌であることを特徴とする、（１）記載の酵母。
（４）  酵母菌株がＦＥＲＭ  Ｐ−１９０７２、Ｐ−１９０７３又はＰ−１９０７４であることを特徴とする、（３）記載の酵母。
（５）  メチオニン、および、グルタミン酸またはその塩を含む培地で酵母菌株を培養することを特徴とする、乾燥菌体重量あたりＳ−アデノシルメチオニンを２重量％以上、かつグルタチオンを２重量％以上含有する酵母の製造方法。
（６）  ０．２重量％以上のメチオニン、および、０．０５重量％〜５重量％のグルタミン酸またはその塩を含む培地で培養することを特徴とする、（５）記載の製造方法。
（７）  酵母菌株としてグルタチオン高生産菌を培養することを特徴とする、（５）記載の培養方法。
（８）  酵母菌株としてＦＥＲＭ  Ｐ−１９０７２、Ｐ−１９０７３又はＰ−１９０７４を培養することを特徴とする、（７）記載の培養方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明より、ＳＡＭおよびグルタチオンを高含有する酵母、ならびに、その製造方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１３】
本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母は、ＳＡＭを乾燥菌体重量あたり２重量％以上、かつ、グルタチオンを乾燥菌体重量あたり２重量％以上含有する酵母である。そのなかでも、ＳＡＭを乾燥菌体重量あたり２．５重量％以上含有する酵母であることが好ましく、ＳＡＭを乾燥菌体重量あたり３重量％以上含有する酵母であることがさらに好ましく、ＳＡＭを乾燥菌体重量あたり３．５重量％以上含有する酵母であるのがもっとも好ましい。また、グルタチオン含量が乾燥菌体重量あたり２．５重量％以上である酵母が好ましく、グルタチオン含量が乾燥菌体重量あたり３重量％以上である酵母がさらに好ましく、グルタチオン含量が乾燥菌体重量あたり３．５重量％以上である酵母がもっとも好ましい。本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母の、ＳＡＭおよびグルタチオン含有量の上限は特に限定されず、高ければ高いほど好ましいが、通常、乾燥菌体重量あたりのＳＡＭ含有量は１２重量％以下、場合によっては１０重量％以下、乾燥菌体重量あたりのグルタチオン含有量は通常８重量％以下、場合によっては５重量％以下である。
【００１４】
本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母を生産するための酵母菌株としては、ＳＡＭおよびグルタチオンを共に生産する能力のある菌株であれば特に限定されず、例えばパン酵母、ビール酵母、ワイン酵母、清酒酵母、焼酎酵母などサッカロマイセス属やトルラスポラ属に属する酵母、トルラ酵母などキャンディダ属に属する酵母、ラクティック酵母などクルイメロマイセス属に属する酵母などが挙げられるが、サッカロマイセス・セレビシエ属の酵母菌株であるものが好ましい。また、酵母菌株としてグルタチオン高生産菌を使用するのが好ましい。ここでいうグルタチオン高生産菌とは、一般的な酵母と比較してグルタチオンを高生産する能力を有している菌株であり、例えば一般的な培地（例えば糖蜜培地やグルコース培地）で培養した際のグルタチオン含有率が、乾燥菌体重量あたり２．５重量％以上である菌株のことである。なかでも遺伝子操作技術を用いずに得たグルタチオン高生産菌が好ましく、このような菌株としては例えば特開２００４−１８０５０９に記載された、ＦＥＲＭ  Ｐ−１９０７２、Ｐ−１９０７３またはＰ−１９０７４（これら３つの菌株は、２００２年１０月１８日に独立行政法人産業技術総合技術研究所特許生物寄託センターに寄託されている）が好ましい例として挙げられる。
【００１５】
本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母を得る方法としては特に限定されないが、例えば、メチオニンと、グルタミン酸またはその塩（例えばグルタミン酸ナトリウム）を含有する培地を用いて酵母菌株を培養する方法が挙げられる。この場合の、メチオニンと、グルタミン酸またはその塩を含有する培地調製方法や培地への添加時期は特に限定されず、メチオニンと、グルタミン酸またはその塩を共添加した培地を調製しそれを用いて培養を開始することもでき、また、メチオニンとグルタミン酸またはその塩を含まない培地を用いて培養を開始した後に、培養途中からメチオニンとグルタミン酸またはその塩をそれぞれ適宜添加し培養を実施することもできる。
【００１６】
上記の場合の培地へのメチオニンの添加量は、酵母菌体中にＳＡＭを乾燥菌体重量あたり２重量％以上含有させ得る添加量であれば特に限定されないが、十分にＳＡＭを菌体内に含有させるために培地に対して０．０５重量％以上であることが好ましく、０．２重量％以上であることがさらに好ましい。
【００１７】
上記の場合の培地へのグルタミン酸またはその塩の添加量は、酵母菌体中にＳＡＭおよびグルタチオンを乾燥菌体重量あたりそれぞれ２重量％以上含有させ得る添加量であれば特に限定されないが、培地に対して０．０５重量％〜５重量％の範囲で添加することが好ましく、０．１重量％〜１重量％の範囲で添加することがより好ましい。培地に対するグルタミン酸またはその塩の添加量が０．０５重量％より少ないと、酵母中にＳＡＭおよびグルタチオンを高含有させることができないことがある。一方、培地に対するグルタミン酸またはその塩の添加量が５重量％より多いと培地コストが大きくなり製造上好ましくない。
【００１８】
また、本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母の製造に使用される培地のその他の成分としては、酵母が資化できる炭素源を原料とすることが好ましい。例えば、グルコース、フルクトース、マルトース等の糖類、エタノール、酢酸などが挙げられる。副原料として、一般的には窒素源、リン源、ビタミン類が使用可能である。窒素源として、尿素、硫酸アンモニウム、アンモニア水などが挙げられる。リン源としては、リン酸やリン酸アンモニウムが挙げられる。ビタミン類としては、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、パンテトン酸、ナイアシン等が挙げられる。
【００１９】
本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母の培養は、嫌気条件、好気条件のいずれでも実施可能であるが、酵母菌体を効率良く増殖させるために好気条件が好ましい。
【００２０】
本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母の培養温度は、酵母が増殖できる範囲内であれば良いが、１５〜４０℃の範囲での培養が好ましく、２５〜３５℃の範囲がさらに好ましい。
【００２１】
本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母の培養時のｐＨも、酵母が増殖できる範囲内であれば良いが、ｐＨ３．５〜８．０の範囲での培養が好ましく、ｐＨ４．０〜６．５の範囲がさらに好ましい。
【００２２】
その他、本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母の培養方法、培養条件としては、一般的な酵母の培養方法、培養条件に準じて適宜決定することが出来る。
【００２３】
本発明において、酵母菌体内のＳＡＭの含有量は、培養後の菌体を遠心分離にて集菌し、例えば、生理食塩水で洗浄した後、菌体を１．５Ｎ過塩素酸に懸濁することでＳＡＭを抽出し、該抽出液中のＳＡＭ濃度を高速液体クロマトグラフ法により分析し、乾燥菌体重量あたりの含有量に換算することで求めることができる。
【００２４】
本発明において、酵母菌体内のグルタチオンの含有量は、培養後の菌体を遠心分離にて集菌し、例えば、生理食塩水で洗浄した後、菌体を水に懸濁し加熱することでグルタチオンを抽出し、該抽出液中のグルタチオン濃度を高速液体クロマトグラフ法により分析し、乾燥菌体重量あたりの含有量に換算することで求めることができる。
【００２５】
本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母の使用形態は特に限定されず、酵母懸濁液、乾燥菌体またはその粉砕物、あるいは酵母抽出物として用いることができる。
【００２６】
ＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母の懸濁液を得るための方法は、特に限定されないが、例えば、培養終了後、遠心分離して水洗することにより得られる。
【００２７】
ＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母の乾燥菌体を得るための乾燥方法は特に限定されないが、例えば、噴霧乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥等があげられ、更には必要に応じてそれを粉砕処理しても良い。
【００２８】
ＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母の抽出物を得るための方法は、特に限定されないが、例えば、培養後、分離、洗浄された酵母菌体を、熱処理等で抽出する方法、タンパク質分解酵素、細胞壁溶解酵素等を用いて抽出する方法、酵母中の酵素を利用して自己消化により抽出する方法、高圧分散処理等の高圧粉砕により抽出する方法等により得られる。この抽出物は、溶液の状態でも良いし、上述の乾燥方法により乾燥させることもできる。
【００２９】
本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母や、その懸濁液、乾燥菌体、抽出物は、そのまま直接摂取することもできるし、また、公知の担体や助剤などの添加剤を使用して、カプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態に成型して摂取することもできる。また、栄養強化を目的として、ビタミンＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅなどの各種ビタミン類を添加、併用して用いることもできる。これらの成型剤における本発明のＳＡＭおよびグルタチオン高含有酵母や、その懸濁液、乾燥菌体、抽出物の含有量は、好ましくは０．１〜１００重量％、より好ましくは１０〜９０重量％の範囲である。さらに、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、はんぺんなどの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類；パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、あらゆるの飲食物に使用することができる。
【実施例】
【００３０】
以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３１】
（実施例１）
ＹＰＤ培地（培地１Ｌあたり、グルコース２０ｇ、トリプトン２０ｇ、酵母エキス１０ｇ含有）６ｍＬ入りの大型試験管に、新鮮なスラントからサッカロマイセス・セレビシエ  ＦＥＲＭ  Ｐ−１９０７２株（２００２年１０月１８日に独立行政法人産業技術総合技術研究所特許生物寄託センターに寄託）を１白金耳植菌し、３０℃で４８時間振とう培養した。その後、培養液を生理食塩水で洗浄し、３ｍＬの生理食塩水に再懸濁し懸濁液を得た（前培養懸濁液）。
【００３２】
糖蜜培地にメチオニンを１重量％およびグルタミン酸を０．５重量％添加した糖蜜培地（培地１Ｌあたり、糖蜜を糖として重量換算で４０ｇ、尿素３ｇ、硫酸アンモニウム０．８ｇ、リン酸水素２アンモニウム０．４ｇ、メチオニン１０ｇ、グルタミン酸５ｇ含有）６ｍＬ入りの大型試験管に、上記の懸濁液を０．２ｍＬ植菌し、３０℃でさらに４８時間振とう培養を実施した（本培養）。
【００３３】
得られた培養液を遠心分離し菌体を回収し、生理食塩水で洗浄した後、菌体を１．５Ｎ過塩素酸に懸濁してＳＡＭを抽出し高速液体クロマトグラフでＳＡＭ含有量を分析した。また、得られた菌体を生理食塩水で洗浄した後、菌体を水に懸濁し加熱しグルタチオンを抽出し高速液体クロマトグラフ法でグルタチオン含有量を分析した。さらに、別途凍結乾燥法により菌体濃度を測定し、乾燥菌体あたりのＳＡＭ含有量およびグルタチオン含有量を求めた。その結果（ＳＡＭ含有量、グルタチオン含有量）について表１に示す。
【００３４】
（比較例１）
メチオニン１重量％を添加した糖蜜培地（培地１Ｌあたり、糖蜜を糖として重量換算で４０ｇ、尿素３ｇ、硫酸アンモニウム０．８ｇ、リン酸水素２アンモニウム０．４ｇ、メチオニン１０ｇ含有）６ｍＬ入りの大型試験管に、実施例１で得られた懸濁液（前培養懸濁液）を０．２ｍＬ植菌し、３０℃でさらに４８時間振とう培養を実施した。
【００３５】
得られた培養液を遠心分離し菌体を回収し、実施例１と同様の方法でＳＡＭ含有量、グルタチオン含有量を求めた。その結果を表１に示す。
【００３６】
（比較例２）
メチオニンもグルタミン酸も添加しない糖蜜培地（培地１Ｌあたり、糖蜜を糖として重量換算で４０ｇ、尿素３ｇ、硫酸アンモニウム０．８ｇ、リン酸水素２アンモニウム０．４ｇ含有）６ｍＬ入りの大型試験管に、実施例１で得られた懸濁液（前培養懸濁液）を０．２ｍＬ植菌し、３０℃でさらに４８時間振とう培養を実施した。
【００３７】
得られた培養液を遠心分離し菌体を回収し、実施例１と同様の方法でＳＡＭ含有量、グルタチオン含有量を求めた。その結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】
2009017849.tif 000002
表１から明らかなように、メチオニンおよびグルタミン酸を含む培地で培養することによって、酵母中のＳＡＭ含有量およびグルタチオン含有量が共に高められ、乾燥菌体重量当たり２重量％以上のＳＡＭおよび２重量％以上のグルタチオンを含有する酵母が得られた。また、使用した菌株は、グルタミン酸を添加しない培地でもグルタチオンを乾燥菌体重量あたり２．５重量％以上生産しうる菌株であるにもかかわらず、単にメチオニンを培地に添加しただけではグルタチオン生産性が低下し、本菌株においては、メチオニンおよびグルタチオン高含有菌体を得るには、培地中にメチオニンと共にグルタミン酸の添加が必要であることが分かる。