(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
凍結乾燥されたヒト成長ホルモン放出因子（ｈＧＲＦ）及び１〜２００ｍｇ／バイアルのサッカロースを、単独で、又は他の賦形剤と共に含む、薬剤組成物。
【請求項２】
安定化剤がサッカロースのみである、請求項１記載の薬剤組成物。
【請求項３】
３又は１０ｍｇ／バイアルのｈＧＲＦを含む、請求項１又は２記載の薬剤組成物。
【請求項４】
３又は１０ｍｇ／バイアルのｈＧＲＦ及び２０．５又は６８．４ｍｇ／バイアルのサッカロースを含む、請求項１ないし３のいずれか１項記載の薬剤組成物。
【請求項５】
緩衝剤をさらに含む、請求項１ないし４のいずれか１項記載の薬剤組成物。
【請求項６】
成分の水溶液の調製、コンテナ内での分散及びコンテナ中の凍結乾燥を含む、請求項１ないし５のいずれか１項記載の薬剤組成物の製造方法。
【請求項７】
使用前の保存に適し、そして溶剤中あるいは溶液中に混合物を戻して注射液とするのに適した、コンテナ中に無菌条件において密封された、請求項１ないし５のいずれか１項記載の薬剤組成物。
【請求項８】
溶剤又は溶液中で戻されて注射液とされた請求項１ないし５のいずれか１項記載の凍結乾燥されたｈＧＲＦを含む溶液。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）含有薬剤組成物に関する。より正確には、本発明は、サッカロース安定化ＧＲＦに関する。
発明の背景
１９８０年代の初期に、いくつかのグループが成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）を単離して、特性決定した。
【０００２】
ＧＲＦ（ソマトレリンとも呼ぶ）は視床下部から分泌されるペプチドであって、その受容体に作用して、下垂体前葉からの成長ホルモン（ＧＨ）の放出を促進することができる。それは、４４−、４０−又は３７−アミノ酸のペプチドとして存在する；４４アミノ酸の形態が短い形態へ生理学上変換されるのかもしれない。３つの形態全てが活性であることが報告されており、活性は主に最初の２９アミノ酸残基に存在する。ヒトＧＲＦ［ｈＧＲＦ（１−２９）］の１−２９のアミノ酸に対応する合成ペプチドは、セルモレリンとも呼ばれ、欧州特許１０５  ７５９に記載されるとおり、組換えＤＮＡ技術により製造された。
【０００３】
セルモレリンは酢酸塩の形態で成長ホルモン欠損の診断及び治療において使用されてきた。
ＧＲＦは、特定の成長ホルモン関連異常の治療に関して、事実、治療価値を有する。ＧＨ放出を刺激するためのＧＲＦの使用は、長い骨の成長又は蛋白質の同化作用の促進における生理学上の方法である。
【０００４】
自然界の形態のＧＲＦが、主に８位のＡｓｎにおいて、水溶液中で化学分解を受け、生物学上の能力の低下をもたらすことはよく知られている（Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ａ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．，３７，１４−２０，１９９１；Ｂｏｎｇｅｒｓ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３９，３６４−３７４，１９９２）。
【０００５】
ＧＲＦにおいて生じる主な加水分解反応はｐＨに感受性であり、報告されたことは：ｐＨ４−６．５におけるＡｓｐ3の転位、ｐＨ２．５−４．５におけるＡｓｐ3−Ａｌａ4の分断、７以上のｐＨにおけるＡｓｎ8の転位（Ｆｅｌｉｘ  Ａ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，編纂者：Ｇｉｒａｌｔ  Ｅ．ａｎｄ  Ａｎｄｒｅｕ  Ｄ．，ｐｐ  ７３２−７３３，Ｅｓｃｏｍ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  １９９１）である。組み合わされた分解経路のために、安定化されていない水溶液のＧＲＦはｐＨ範囲４−５においてもっとも安定である。Ｂｏｎｇｅｒｓら（Ｂｏｎｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）は、Ａｓｎ8における脱水アミド化反応が、ｐＨのｐＨ３より上への上昇に伴い、迅速に増加することを示した。
【０００６】
ＷＯ９８／５３８４４はニコチンアミド及びプロピレングリコールを含むｈＧＲＦの安定な液体薬剤組成物を記載する。
様々な研究者が、化学安定性を改良するために天然ＧＲＦ配列に対するアミノ酸の置換によりＧＲＦの類似体を作成した（Ｓｅｒｏｎｏ  Ｓｙｍｐｏｓｉａ  ＵＳＡ，１９９６；Ｆｒｉｅｄｍａｎ，１９９１）。修飾は安定性を改良して生物活性を保持するためには有効な手段であり得るが、免疫原性を変更するために望まれないかもしれず、成長ホルモン欠損のような長期にわたる治療には問題であり得る。
【０００７】
ＥＰ  １８９  ６７３及びＵＳ  ４，９６３，５２９（Ｓｕｍｉｔｏｍｏ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．）によると、ＧＲＦ製剤はヒト血清アルブミン又はグリシンにより凍結乾燥と安定化により製造できる。ＪＰ３０８３９３１とＥＰ  ４１７  ９３０はＧＲＦ含有経鼻製剤を記載しており、塩化ナトリウム及び／又は糖アルコール、例えばそれに対するマンニトール又はソルビトールを添加することにより鼻粘膜に対して低刺激性にした。
【０００８】
ｈＧＲＦのような物質をヘルスケアの部局及び患者に提供するために、これらの物質は薬剤組成物として製造されなければならない。そのような組成物は、適切な期間活性を保持せねばならず、ヒトに対しての容易且つ迅速な投与に対してそれ自身が受容可能でなければならず、そして容易に製造可能でなければならない。多くの場合、薬剤製剤は凍結か又は凍結乾燥した形態にて提供される。この場合、使用に先立ち、組成物を解凍して戻さねばならない。凍結したか又は凍結乾燥した形態は、生化学上の完全性と、広く様々な貯蔵条件下で組成物中に含まれた医学作用物質の活性を保持するためにしばしば使用され、当業者には凍結乾燥製剤がそれらの液体対応物よりもしばしば良好に活性を保持することが認識されているとおりである。
【０００９】
そのような凍結乾燥製剤は適切な薬学上受容可能な希釈剤、例えば注射用の無菌水又は生理食塩水等の添加により、使用前に元に戻される。
ヒトＧＲＦはマンニトールＧＥＲＥＦ（登録商標），Ｓｅｒｏｎｏにより安定化された凍結乾燥製剤にて市場において見いだされる。
【００１０】
発明の説明
本発明の主な目的は、ヒトＧＲＦと安定化量のサッカロースの固形の完全な混合物を含む薬剤組成物を提供することである。
【００１１】
さらなる側面は、上記薬剤組成物の製造のための方法を提供することであり、上記組成物の水溶液をコンテナ中で凍結乾燥する工程を含む。別の目的は、使用前の保存に適し、且つ注射可能な物質のための混合物を戻すのに適した、コンテナ中の無菌条件においてきっちりと密封された上記固形混合物を含む、提示形態の上記薬剤組成物を提供することである。そのようなコンテナは、単一用量の投与又は複数回用量の投与のために適していてよい。そのような凍結乾燥組成物は、好ましくは静菌剤も含む。静菌剤は好ましくはｍ−クレゾールである。
【００１２】
本発明の凍結乾燥組成物は、さらに緩衝剤を含んでよい。薬剤製剤に適した如何なる緩衝剤も使用してよく、例えば、酢酸塩、リン酸塩又はクエン酸塩である。製剤に添加される緩衝剤の量は、凍結乾燥組成物のｐＨが戻したあとに所望の範囲内に保持されるようにする。この発明に従う所望のｐＨ範囲は、２から７、好ましくは４から６の間である。
【００１３】
別の目的は、注射可能な溶液、例えば注射可能な水又は生理学上の塩溶液中で戻された上記混合物の溶液を提供することである。便宜上、そのような戻しは、注射のための使用の直前に実施する。
【００１４】
活性成分に添加されるサッカロースの量に臨界的な制限はないが、１から２００ｍｇ／バイアル、好ましくは２０から１００ｍｇ／バイアルのサッカロースを添加することが適切となる。
【００１５】
この発明によれば、用語「ｈＧＲＦ」は、あらゆるヒトＧＲＦペプチドを含むことを意図し、特に１−４４、１−４０、１−２９ペプチド及びその対応するアミド（それらの末端に−ＮＨ2を含む）又はそれらの混合物にも関する。それらは全て市販の化合物である。好ましいｈＧＲＦはｈＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ2である。各バイアル中に存在する活性成分の量に対して臨界的な制限はない。そのような量は好ましくは０．１から１００ｍｇ／バイアルの間に含まれる。
【００１６】
本発明は以下の実施例により今記載されることになり、あらゆる意味において本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
実施例
活性成分の安定性に対しての賦形剤の効果を評価するために、組換えｈＧＲＦの３つの製剤を様々な賦形剤：サッカロース、マンニトール／リン酸緩衝液を用いて製造した。充填容量は２ｍｌであった。製造された様々な製剤の組成を表１に報告する。
【００１７】
【表１】
0004880845.tif 000002
【００１８】
安定化剤を含む溶液にｈＧＲＦの大量の粉末を溶解することにより、凍結乾燥の調製を実施した。得られた溶液を濾過してガラス製のバイアルに充填して、凍結乾燥した。４０℃及び５０℃において４週間保存したそのような製剤の安定性の研究を、ｐＨ及びペプチドの精製度の測定により実施した。
【００１９】
ｈＧＲＦの精製度を評価するためのクロマトグラフィーアッセイ方法論（逆相ＨＰＬＣ）はＣ−１８カラムを通した直線溶出であり、１ｍｌ／分の移動相（ＴＦＡ／水／アセトニトリル）及び２１４ｎｍのＵＶ検出を用いた。
【００２０】
注射のための水５ｍｌで戻したバイアル中で、ｐＨをｐＨメーターにより測定した。
結果を表２及び３に要約する。
【００２１】
【表２】
0004880845.tif 000003
【００２２】
【表３】
0004880845.tif 000004
【００２３】
結果は、サッカロースを含む製剤が、マンニトール及び／又はマンニトール／リン酸緩衝剤を含む製剤に比して、より安定したプロフィールを呈したことを示した。
【００２４】
表１に記載した製剤３の組成を有する追加の製剤を別のコンテナ（バイアル）で製造した；上記組成物を表４に報告する。
【００２５】
【表４】
0004880845.tif 000005
【００２６】
上記製剤は５℃、２５℃及び４０℃で保存し、そして前に記載した分析方法を用いて安定性に関して試験した（ｐＨ，精製度及びＲＰによる力価）。
安定性のデータは２４週まで起こした；結果を表５から７に報告する。
【００２７】
【表５】
0004880845.tif 000006
【００２８】
【表６】
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【００２９】
【表７】
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【００３０】
０．３％ｍ−クレゾールを１．５及び５ｍｌ伴う溶液の５±３℃及び２５±２℃における１カ月までの安定性も研究した。
戻した溶液の安定性のデータを表８から１０に報告する。
【００３１】
【表８】
0004880845.tif 000009
【００３２】
【表９】
0004880845.tif 000010
【００３３】
【表１０】
0004880845.tif 000011
【００３４】
薬剤製造の実施例
材料：超純粋サッカロースＤＡＢ，Ｐｈ  Ｅｕｒ，ＢＰ，ＮＦ（Ｍｅｒｃｋ）；注射可能な水。
【００３５】
コンテナはＤＩＮ  ２Ｒ及びＤＩＮ  ６Ｒ（ホウ珪酸塩ガラスタイプＩ）を用いたように、ガラスのクロージャー（Ｐｈａｒｍａｇｕｍｍｉ  Ｗ１８１６  Ｖ５０）及びアルミニウムリング及びフリップオフキャップ（Ｐｈａｒｍａ−Ｍｅｔａｌ  ＧｍｂＨ）。
サッカロースを含むｈＧＲＦ溶液の調製：（各３又は１０ｍｇのｈＧＲＦを含む２００バイアルに関して）。
【００３６】
サッカロース（１７．１ｇ）を注射可能な水（５００ｍｌ）に溶解して、出発サッカロース溶液を得る。
大量のｈＧＲＦ（２ｇ）をサッカロースの溶液に加えることにより、最終重量４００ｇを得て、溶液を０．２２μｍのＤｕｒａｐｏｒｅ滅菌フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を通した。
充填及び凍結乾燥
バイアルを０．６及び２ｍｌのｈＧＲＦ滅菌溶液で充填し、フリーズドライヤーに移し、そして以下のサイクルで凍結乾燥した：
凍結：−２５℃で３時間
−１５℃で１時間
−４５℃で３時間
第１乾燥：―１０℃で１３時間
第２乾燥：―１０℃から＋４０℃で８時間；＋４０℃でサイクルの最後まで。