(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドまたはその製薬上許容されうる酸付加塩を含有する角膜神経突起形成促進剤。
【請求項２】
（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドまたはその製薬上許容されうる酸付加塩を含有する角膜知覚回復剤。
【請求項３】
（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドまたはその製薬上許容されうる酸付加塩を含有するドライアイ治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、角膜神経突起形成促進剤、および角膜神経突起形成促進による角膜知覚回復剤、ならびにドライアイ治療剤に関する。
【背景技術】  レーザー屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）、レーザー角膜切削形成術（レーシック；ＬＡＳＩＫ）、角膜移植などの角膜手術後には、角膜神経が切断されるため、通常約３週間から１年間角膜知覚機能の低下症状が起きるといわれている。例えば、ＬＡＳＩＫ後には明らかに角膜神経が切断されていること（Ｔｕｕｌｉ  Ｕ．Ｌｉｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９８，６６，ｐ．７５５−７６３参照）、また、ＬＡＳＩＫ後に神経像が認められないか、あるいは神経線維束が短く連結していない角膜領域において、角膜の知覚が低下することが報告されている（Ｔｕｕｌｉ  Ｕ．Ｌｉｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，４１，ｐ．３９３−３９７参照）。
ＰＲＫおよびＬＡＳＩＫ後の角膜知覚の低下が涙腺応答低下、涙液減少の原因であることが示唆されている（Ｒｏｂｅｒｔ  Ｔ．Ａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２００１，１２，ｐ．３１８−３２２参照）。この角膜知覚機能低下のため、角膜手術後の患者では瞬目回数が減少しドライアイ症状が認められることが問題となっている。一方、ドライアイ患者では涙液機能の低下が角膜知覚の低下をもたらし、この角膜知覚の低下が涙液機能の低下をさらに悪化させ、角膜表面の症状を重篤化させることが問題となっている。
しかし、現在角膜手術後の低下した角膜知覚の回復は自然回復に委ねられ、またドライアイの治療においても角膜知覚を回復させるための積極的治療は施されていないのが現状である。また、神経麻痺性角膜症、角膜潰瘍、糖尿病性角膜症などの角膜神経変性を伴う疾患でも角膜知覚低下が引き起こされるが、現在のところ適切な治療法はない。
Ｒｈｏキナーゼは、低分子量ＧタンパクであるＲｈｏの活性化に伴い活性化されるセリン／スレオニンキナーゼであり、さまざまな基質をリン酸化することにより、平滑筋収縮、神経軸索の退縮など多彩な生理機能を制御することが知られている。このようなＲｈｏキナーゼに対して阻害活性を有する化合物は、さまざまな医薬用途が期待され、例えば、高血圧、狭心症、脳血管攣縮、喘息、末梢循環障害、動脈硬化、骨粗鬆症、網膜症などの治療薬として、また、抗がん剤、抗炎症薬、免疫抑制薬などの用途が示唆されている（例えば、ＷＯ９８／０６４３３参照）。また、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は網膜神経節細胞の軸索伸展作用を有することから、視覚機能障害の改善に有用であることが知られている（ＷＯ０２／０８３１７５参照）。本作用からＲｈｏキナーゼ阻害剤は視神経細胞の再生を促進し、網膜や視神経の損傷や欠損、変性等に起因する種々の眼疾患に伴う視覚機能障害の治療に有用であるとされているが、該文献には、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤の角膜知覚低下等の角膜疾患に及ぼす影響に関する記載は一切見当たらない。
角膜知覚は角膜に分布する知覚神経である三叉神経（角膜神経）に支配されている。Ｒｈｏと三叉神経の関係については、ラットの三叉神経組織培養（ｔｒｉｇｅｍｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ  ｉｎ  ｗｈｏｌｅｍｏｕｎｔ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ）系において、神経成長因子（ＮＧＦ）などによる神経栄養因子誘発神経軸索伸展がＲｈｏ活性化剤（リゾホスファチジン酸）で阻害され、ドミナントネガティブＲｈｏを細胞に導入することで促進されることが報告されている（Ｐ．Ｈａｎｄｅ  Ｏｚｄｉｎｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２００１，４３８，ｐ．３７７−３８７参照）。しかし、神経栄養因子非存在下では、Ｒｈｏが三叉神経軸索伸展に有効かどうかについては分からないとの記載があり（Ｐ．Ｈａｎｄｅ  Ｏｚｄｉｎｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２００１，４３８，ｐ．３７７−３８７参照）、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤の三叉神経に対する効果についても未だ判明していない。
ＬＡＳＩＫなどの手術後の角膜神経傷害の治療に関して、神経再生または神経突起伸長を促進する化合物が使えるとする文献があり、それら化合物の例として神経栄養性因子刺激物質であるネオトロフィンなどの化合物が例示されている（ＷＯ０３／０２０２８１参照）。しかしながら、ＷＯ０３／０２０２８１にはＲｈｏキナーゼあるいはその阻害剤についての記載は一切なく、またそれらを示唆する記載もない。
【発明の開示】
本発明は、レーザー屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）、レーザー角膜切削形成術（レーシック；ＬＡＳＩＫ）、ＬＡＳＥＫ（ラゼック；Ｌａｓｅｒ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｋｅｒａｔｏｍｉｌｅｕｓｉｓ；Ｊｕｔｔａ  Ｈｏｒｗａｔｈ−Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃａｔａｒａｃｔ  Ｒｅｆｒａｃｔ  Ｓｕｒｇ  ３０：２３１６−２３２１，２００４）、角膜移植などの角膜手術後などの角膜知覚機能低下、および糖尿病角膜症などの角膜神経変性疾患やドライアイに伴って低下した角膜知覚機能低下を有効に回復する医薬、さらに角膜知覚が低下した患者におけるドライアイを有効に回復する医薬を提供することを課題とした。
本発明者らは、角膜手術後の角膜知覚回復や角膜知覚低下に伴うドライアイを改善する新規な医薬を提供すべく検討を行ったところ、ある特定の構造を有するアミド化合物が三叉神経に作用し、この三叉神経細胞の神経突起形成を効果的に促進することを見出した。また、この知見に基づき該アミド化合物が角膜神経突起形成促進、角膜知覚回復、ドライアイ治療用の医薬として有用であることも見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、
（１）  一般式（Ｉ）：
0004932480.tif 000002
〔式中、Ｒａは式：
0004932480.tif 000003
［式（ａ）および（ｂ）中、Ｒは水素、アルキルまたは環上に置換基を有していてもよいシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、フェニルもしくはアラルキルを示すか、あるいは式：
0004932480.tif 000004
（式中、Ｒ６は水素、アルキルまたは式：−ＮＲ８Ｒ９（ここで、Ｒ８、Ｒ９は同一または異なって水素、アルキル、アラルキルまたはフェニルを示す。）を示し、Ｒ７は水素、アルキル、アラルキル、フェニル、ニトロまたはシアノを示す。または、Ｒ６とＲ７は結合して環中にさらに酸素原子、硫黄原子または置換基を有していてもよい窒素原子を含有していてもよい複素環を形成する基を示す。）を示す。
Ｒ１は水素、アルキルまたは環上に置換基を有していてもよいシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、フェニルもしくはアラルキルを示す。
または、ＲとＲ１は結合して隣接する窒素原子とともに環中にさらに酸素原子、硫黄原子または置換基を有していてもよい窒素原子を含んでいてもよい複素環を形成する基を示す。
Ｒ２は水素またはアルキルを示す。
Ｒ３、Ｒ４は同一または異なって水素、アルキル、アラルキル、ハロゲン、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アラルキルオキシ、シアノ、アシル、メルカプト、アルキルチオ、アラルキルチオ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、カルバモイル、モノ・ジアルキルカルバモイルまたはアジドを示す。
Ａは式：
0004932480.tif 000005
（式中、Ｒ１０、Ｒ１１は同一または異なって水素、アルキル、ハロアルキル、アラルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシまたはアルコキシカルボニルを示す。または、Ｒ１０とＲ１１は結合してシクロアルキルを形成する基を示す。ｌ、ｍ、ｎはそれぞれ０または１〜３の整数を示す。）を示す。
式（ｃ）中、Ｌは水素、アルキル、アミノアルキル、モノ・ジアルキルアミノアルキル、テトラヒドロフルフリル、カルバモイルアルキル、フタルイミドアルキル、アミジノを示すか、あるいは式：
0004932480.tif 000006
（式中、Ｂは水素、アルキル、アルコキシ、アラルキル、アラルキルオキシ、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、アルカノイルオキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、α−アミノベンジル、フリル、ピリジル、フェニル、フェニルアミノ、スチリルまたはイミダゾピリジルを示す。
Ｑ１は水素、ハロゲン、水酸基、アラルキルオキシまたはチエニルメチルを示す。
Ｗはアルキレンを示す。
Ｑ２は水素、ハロゲン、水酸基またはアラルキルオキシを示す。
Ｘはアルキレンを示す。
Ｑ３は水素、ハロゲン、水酸基、アルコキシ、ニトロ、アミノ、２，３−ジヒドロフリルまたは５−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロピリダジン−６−イルを示す。
Ｙは単結合、アルキレンまたはアルケニレンを示す。）を示す。
また、式（ｃ）中、破線と実線によって表される結合は一重結合または二重結合を示す。
Ｒ５は水素、水酸基、アルコキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アルカノイルオキシまたはアラルキルオキシカルボニルオキシを示す。］を示す。
Ｒｂは水素、アルキル、アラルキル、アミノアルキルまたはモノ・ジアルキルアミノアルキルを示す。
Ｒｃは置換基を有していてもよい含窒素複素環を示す。〕
で示されるアミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩、あるいはそのプロドラッグを含有する角膜神経突起形成促進剤；
（２）  Ｒａが式：
0004932480.tif 000007
〔式中の各記号は上記（１）に記載のとおり〕を示す、上記（１）に記載の角膜神経突起形成促進剤；
（３）  アミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩が、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドの塩酸塩である、上記（１）に記載の角膜神経突起形成促進剤；
（４）  上記一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩、あるいはそのプロドラッグを含有する角膜知覚回復剤；
（５）  Ｒａが式：
0004932480.tif 000008
〔式中の各記号は上記（１）に記載のとおり〕を示す、上記（４）に記載の角膜知覚回復剤；
（６）  アミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩が、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドの塩酸塩である、上記（４）に記載の角膜知覚回復剤；
（７）  上記一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩、あるいはそのプロドラッグを含有するドライアイ治療剤；
（８）  Ｒａが式：
0004932480.tif 000009
〔式中の各記号は上記（１）に記載のとおり〕を示す、上記（７）に記載のドライアイ治療剤；
（９）  アミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩が、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドの塩酸塩である、上記（７）に記載のドライアイ治療剤；
（１０）  角膜神経突起形成促進用の薬剤を製造するための、上記一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩、あるいはそのプロドラッグの使用；
（１１）  Ｒａが式：
0004932480.tif 000010
〔式中の各記号は上記（１）に記載のとおり〕を示す、上記（１０）に記載の使用；
（１２）  アミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩が、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドの塩酸塩である、上記（１０）に記載の使用；
（１３）  角膜知覚回復用の薬剤を製造するための、上記一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩、あるいはそのプロドラッグの使用；
（１４）  Ｒａが式：
0004932480.tif 000011
〔式中の各記号は上記（１）に記載のとおり〕を示す、上記（１３）に記載の使用；
（１５）  アミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩が、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドの塩酸塩である、上記（１３）に記載の使用；
（１６）  ドライアイ治療用の薬剤を製造するための、上記一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩、あるいはそのプロドラッグの使用；
（１７）  Ｒａが式：
0004932480.tif 000012
〔式中の各記号は上記（１）に記載のとおり〕を示す、上記（１６）に記載の使用；
（１８）  アミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩が、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドの塩酸塩である、上記（１６）に記載の使用；
（１９）  上記一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩、あるいはそのプロドラッグの有効量を、角膜神経突起形成促進を必要とする対象に投与することを特徴とする、角膜神経突起形成促進方法；
（２０）  Ｒａが式：
0004932480.tif 000013
〔式中の各記号は上記（１）に記載のとおり〕を示す、上記（１９）に記載の方法；
（２１）  アミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩が、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドの塩酸塩である、上記（１９）に記載の方法；
（２２）  上記一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩、あるいはそのプロドラッグの有効量を、角膜知覚回復を必要とする対象に投与することを特徴とする、角膜知覚回復方法；
（２３）  Ｒａが式：
0004932480.tif 000014
〔式中の各記号は上記（１）に記載のとおり〕を示す、上記（２２）に記載の方法；
（２４）  アミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩が、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドの塩酸塩である、上記（２２）に記載の方法；
（２５）  上記一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩、あるいはそのプロドラッグの有効量を、ドライアイ治療を必要とする対象に投与することを特徴とする、ドライアイ治療方法；
（２６）  Ｒａが式：
0004932480.tif 000015
〔式中の各記号は上記（１）に記載のとおり〕を示す、上記（２５）に記載の方法；
（２７）  アミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩が、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドの塩酸塩である、上記（２５）に記載の方法；
（２８）  上記一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物、その異性体および／またはその製薬上許容されうる酸付加塩、あるいはそのプロドラッグを含む薬剤と、該薬剤を角膜神経突起形成促進、角膜知覚回復、またはドライアイ治療に使用し得るかまたは使用すべきであることを記載した書類とを含む商業的パッケージ
に関するものである。なお、本明細書中、一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物を含有する角膜神経突起形成促進剤、角膜知覚回復剤、ドライアイ治療剤をまとめて「本発明の医薬」とも称する。
【図面の簡単な説明】  図１は、試験例１における培養ウサギ三叉神経細胞の蛍光顕微鏡像である。Ａは化合物１無添加の培養液で培養した細胞を、Ｂは化合物１添加の培養液で培養した細胞の蛍光顕微鏡像である。
図２は、試験例１における三叉神経突起形成細胞の割合をグラフで示す。縦軸は全細胞に対する神経突起形成細胞の割合（％）を示す。各値は３例の平均値±標準偏差を示す。図中＊は対照群に対する有意差（ｐ＜０．００１）を示す。
図３は、試験例２におけるウサギ角膜知覚の経時変化の試験結果である。図中、−〇−は対象群、−▲−は被験物質１週間投与群、−◆−は被験物質２週間投与群の結果を示し、＊は対照群に対する有意差（ｎ＝７〜８、平均値±標準誤差、＊：ｐ＜０．０５）を示す。
発明の詳細な説明
本明細書中、「角膜神経」とは、知覚神経である三叉神経の支配をうけ角膜周囲に形成される輪状神経叢、角膜実質に網目上に分布する実質内神経叢、ボーマン膜直下で形成される上皮下神経叢、ボーマン膜を貫通したところで形成される基底細胞神経叢および神経線維をいう。「神経突起」とは、ニューロン（神経細胞）の細胞体から出る突起（樹状突起および軸索）をいい、「形成」とは細胞体から前記神経突起が生成および／または伸展することをいう。どの程度の神経突起形成をもって促進されている状態というかは、当業者には明らかである。神経突起の形成状態は、例えば、神経細胞を蛍光染色し、蛍光顕微鏡を用いて細胞の形態を観察することにより確認することができる。また、蛍光顕微鏡での観察画像を画像解析ソフトを用いて解析してもよい。さらに、神経細胞体と神経突起を構成する、例えば、ニューロフィラメントを認識する抗体とこれを発色させる試薬を用いて、その吸光度をもってニューロフィラメント量を測定し、神経突起形成の指標とすることもできる。
本明細書中、一般式（Ｉ）の各記号の定義は次の通りである。
Ｒ、Ｒ１におけるアルキルとは炭素数１〜１０個の直鎖状または分枝鎖状のアルキルであって、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第２級ブチル、第３級ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル等が挙げられ、炭素数１〜４個のアルキルが好ましい。
Ｒ、Ｒ１におけるシクロアルキルとはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル等の炭素数３〜７個のシクロアルキルを示す。
Ｒ、Ｒ１におけるシクロアルキルアルキルとはシクロアルキル部が前記炭素数３〜７個のシクロアルキルであり、アルキル部が炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキル（メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル等）であるシクロアルキルアルキルであって、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチル、シクロヘプチルメチル、シクロプロピルエチル、シクロブチルエチル、シクロペンチルエチル、シクロヘキシルエチル、シクロヘプチルエチル、シクロプロピルプロピル、シクロブチルプロピル、シクロペンチルプロピル、シクロヘキシルプロピル、シクロヘプチルプロピル、シクロプロピルブチル、シクロブチルブチル、シクロペンチルブチル、シクロヘキシルブチル、シクロヘプチルブチル、シクロプロピルヘキシル、シクロブチルヘキシル、シクロペンチルヘキシル、シクロヘキシルヘキシル、シクロヘプチルヘキシル等が挙げられる。
Ｒ、Ｒ１におけるアラルキルとは、アルキル部として炭素数１〜４個のアルキルを有するものであって、ベンジル、１−フェニルエチル、２−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、４−フェニルブチル等のフェニルアルキルを示す。
Ｒ、Ｒ１における環上に置換基を有していてもよいシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、フェニル、アラルキルの置換基としては、ハロゲン（塩素、臭素、フッ素、ヨウ素）、アルキル（Ｒ、Ｒ１におけるアルキルと同義）、アルコキシ（炭素数１〜６個の直鎖状もしくは分枝鎖状のアルコキシであって、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、第２級ブトキシ、第３級ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ等を示す。）、アラルキル（Ｒ、Ｒ１におけるアラルキルと同義）、ハロアルキル（Ｒ、Ｒ１において示したアルキルに１〜５個のハロゲンが置換したものであり、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル等を示す。）、ニトロ、アミノ、シアノ、アジド等が挙げられる。
ＲとＲ１とが結合して隣接する窒素原子とともに環中にさらに酸素原子、硫黄原子または置換基を有していてもよい窒素原子を含んでいてもよい複素環形成する基としては、５〜６員環、これらの縮合環が好適であり、具体的には１−ピロリジニル、ピペリジノ、１−ピペラジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、１−イミダゾリル、２，３−ジヒドロチアゾール−３−イル等が例示される。また、置換基を有していてもよい窒素原子における置換基としてはアルキル、アラルキル、ハロアルキル等が挙げられる。ここで、アルキル、アラルキル、ハロアルキルはＲ、Ｒ１において示したものと同義である。
Ｒ２におけるアルキルとはＲ、Ｒ１におけるアルキルと同義である。
Ｒ３、Ｒ４におけるハロゲン、アルキル、アルコキシ、アラルキルはＲ、Ｒ１において示したものと同義である。
Ｒ３、Ｒ４におけるアシルとは炭素数２〜６個のアルカノイル（アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリル、ピバロイル等）、ベンゾイル、またはアルカノイル部が炭素数２〜４個のフェニルアルカノイル（フェニルアセチル、フェニルプロピオニル、フェニルブチリル等）を示す。
Ｒ３、Ｒ４におけるアルキルアミノとは、アルキル部に炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキルを有するアルキルアミノであって、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ブチルアミノ、イソブチルアミノ、第２級ブチルアミノ、第３級ブチルアミノ、ペンチルアミノ、ヘキシルアミノ等を示す。
Ｒ３、Ｒ４におけるアシルアミノとは、アシル部に炭素数２〜６個のアルカノイル、ベンゾイル、またはアルカノイル部が炭素数２〜４個のフェニルアルカノイル等を有するアシルアミノであって、アセチルアミノ、プロピオニルアミノ、ブチリルアミノ、バレリルアミノ、ピバロイルアミノ、ベンゾイルアミノ、フェニルアセチルアミノ、フェニルプロピオニルアミノ、フェニルブチリルアミノ等を示す。
Ｒ３、Ｒ４におけるアルキルチオとは、アルキル部に炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキルを有するアルキルチオであって、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、イソブチルチオ、第２級ブチルチオ、第３級ブチルチオ、ペンチルチオ、ヘキシルチオ等を示す。
Ｒ３、Ｒ４におけるアラルキルオキシとは、そのアルキル部に炭素数１〜４個のアルキルを有するアラルキルを有するものであって、ベンジルオキシ、１−フェニルエチルオキシ、２−フェニルエチルオキシ、３−フェニルプロピルオキシ、４−フェニルブチルオキシ等を示す。
Ｒ３、Ｒ４におけるアラルキルチオとは、そのアルキル部に炭素数１〜４個のアルキルを有するアラルキルを有するものであって、ベンジルチオ、１−フェニルエチルチオ、２−フェニルエチルチオ、３−フェニルプロピルチオ、４−フェニルブチルチオ等を示す。
Ｒ３、Ｒ４におけるアルコキシカルボニルとは、アルコキシ部に炭素数１〜６個の直鎖状もしくは分枝鎖状のアルコキシを有するものであって、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、第２級ブトキシカルボニル、第３級ブトキシカルボニル、ペンチルオキシカルボニル、ヘキシルオキシカルボニル等を示す。
Ｒ３、Ｒ４におけるモノ・ジアルキルカルバモイルとは、炭素数１〜４個のアルキルでモノまたはジ置換されたカルバモイルであって、メチルカルバモイル、ジメチルカルバモイル、エチルカルバモイル、ジエチルカルバモイル、プロピルカルバモイル、ジプロピルカルバモイル、ブチルカルバモイル、ジブチルカルバモイル等を示す。
Ｒ５におけるアルコキシとはＲ、Ｒ１におけるアルコキシと同義である。
Ｒ５におけるアルコキシカルボニルオキシとは、アルコキシ部に炭素数１〜６個の直鎖状もしくは分枝鎖状のアルコキシを有するものであって、メトキシカルボニルオキシ、エトキシカルボニルオキシ、プロポキシカルボニルオキシ、イソプロポキシカルボニルオキシ、ブトキシカルボニルオキシ、イソブトキシカルボニルオキシ、第２級ブトキシカルボニルオキシ、第３級ブトキシカルボニルオキシ、ペンチルオキシカルボニルオキシ、ヘキシルオキシカルボニルオキシ等を示す。
Ｒ５におけるアルカノイルオキシとは、アルカノイル部に炭素数２〜６個のアルカノイルを有するものであって、アセチルオキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、バレリルオキシ、ピバロイルオキシ等を示す。
Ｒ５におけるアラルキルオキシカルボニルオキシとは、そのアルキル部に炭素数１〜４個のアルキルを有するアラルキルを有するものであって、ベンジルオキシカルボニルオキシ、１−フェニルエチルオキシカルボニルオキシ、２−フェニルエチルオキシカルボニルオキシ、３−フェニルプロピルオキシカルボニルオキシ、４−フェニルブチルオキシカルボニルオキシ等を示す。
Ｒ６におけるアルキルはＲ、Ｒ１におけるアルキルと同義である。また、Ｒ８、Ｒ９におけるアルキルはＲ、Ｒ１におけるアルキルと同義であり、Ｒ８、Ｒ９におけるアラルキルはＲ、Ｒ１におけるアラルキルと同義である。
Ｒ７におけるアルキルはＲ、Ｒ１におけるアルキルと同義であり、Ｒ７におけるアラルキルはＲ、Ｒ１におけるアラルキルと同義である。
Ｒ６とＲ７が結合して環中にさらに酸素原子、硫黄原子または置換基を有していてもよい窒素原子を含有していてもよい複素環を形成する基としては、イミダゾール−２−イル、チアゾール−２−イル、オキサゾール−２−イル、イミダゾリン−２−イル、３，４，５，６−テトラヒドロピリジン−２−イル、３，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル、１，３−オキサゾリン−２−イル、１，３−チアゾリン−２−イルまたはハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、フェニル、アラルキル等の置換基を有していてもよいベンゾイミダゾール−２−イル、ベンゾチアゾール−２−イル、ベンゾオキサゾール−２−イル等が挙げられる。ここで、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アラルキルとはＲ、Ｒ１において示したものと同義である。
また、上記の置換基を有していてもよい窒素原子における置換基としては、アルキル、アラルキル、ハロアルキル等が挙げられる。ここで、アルキル、アラルキル、ハロアルキルとはＲ、Ｒ１において示したものと同義である。
Ｒ１０、Ｒ１１におけるヒドロキシアルキルとは、炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキルに１〜３個のヒドロキシが置換したものであり、例えばヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、１−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、４−ヒドロキシブチル等が挙げられる。
Ｒ１０、Ｒ１１におけるアルキルはＲ、Ｒ１におけるアルキルと同義であり、Ｒ１０、Ｒ１１におけるハロアルキル、アルコキシカルボニルはＲ、Ｒ１において示したものと同義であり、Ｒ１０、Ｒ１１におけるアラルキルはＲ、Ｒ１におけるアラルキルと同義である。
Ｒ１０、Ｒ１１が結合して形成するシクロアルキルもＲ、Ｒ１におけるシクロアルキルと同義である。
ＬにおけるアルキルはＲ、Ｒ１におけるアルキルと同義である。
Ｌにおけるアミノアルキルとは、炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキルにアミノが置換したものであり、例えばアミノメチル、２−アミノエチル、１−アミノエチル、３−アミノプロピル、４−アミノブチル、５−アミノペンチル、６−アミノヘキシル等が挙げられる。
Ｌにおけるモノ・ジアルキルアミノアルキルとは、炭素数１〜４個のアルキルでモノまたはジ置換されたアミノアルキルであって、メチルアミノメチル、ジメチルアミノメチル、エチルアミノメチル、ジエチルアミノメチル、プロピルアミノメチル、ジプロピルアミノメチル、ブチルアミノメチル、ジブチルアミノメチル、２−ジメチルアミノエチル、２−ジエチルアミノエチル等を示す。
Ｌにおけるカルバモイルアルキルとは、炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキルにカルバモイルが置換したものであり、例えばカルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、１−カルバモイルエチル、３−カルバモイルプロピル、４−カルバモイルブチル、５−カルバモイルペンチル、６−カルバモイルヘキシル等が挙げられる。
Ｌにおけるフタルイミドアルキルとは、炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキルにフタルイミドが置換したものであり、例えばフタルイミドメチル、２−フタルイミドエチル、１−フタルイミドエチル、３−フタルイミドプロピル、４−フタルイミドブチル、５−フタルイミドペンチル、６−フタルイミドヘキシル等が挙げられる。
ＢにおけるアルキルはＲ、Ｒ１におけるアルキルと同義である。
ＢにおけるアルコキシはＲ、Ｒ１におけるアルコキシと同義である。
ＢにおけるアラルキルはＲ、Ｒ１におけるアラルキルと同義である。
ＢにおけるアラルキルオキシはＲ３、Ｒ４におけるアラルキルオキシと同義である。
ＢにおけるアミノアルキルはＬにおけるアミノアルキルと同義である。
ＢにおけるヒドロキシアルキルはＲ１０、Ｒ１１におけるヒドロキシアルキルと同義である。
Ｂにおけるアルカノイルオキシアルキルとは、炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキルに炭素数２〜６個のアルカノイル部を有するアルカノイルオキシが置換したものであって、例えばアセチルオキシメチル、プロピオニルオキシメチル、ブチリルオキシメチル、バレリルオキシメチル、ピバロイルオキシメチル、アセチルオキシエチル、プロピオニルオキシエチル、ブチリルオキシエチル、バレリルオキシエチル、ピバロイルオキシエチル等が挙げられる。
Ｂにおけるアルコキシカルボニルアルキルとは、炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキルに炭素数１〜６個のアルコキシ部を有するアルコキシカルボニルが置換したものであって、例えばメトキシカルボニルメチル、エトキシカルボニルメチル、プロポキシカルボニルメチル、イソプロポキシカルボニルメチル、ブトキシカルボニルメチル、イソブトキシカルボニルメチル、第２級ブトキシカルボニルメチル、第３級ブトキシカルボニルメチル、ペンチルオキシカルボニルメチル、ヘキシルオキシカルボニルメチル、メトキシカルボニルエチル、エトキシカルボニルエチル、プロポキシカルボニルエチル、イソプロポキシカルボニルエチル、ブトキシカルボニルエチル、イソブトキシカルボニルエチル、第２級ブトキシカルボニルエチル、第３級ブトキシカルボニルエチル、ペンチルオキシカルボニルエチル、ヘキシルオキシカルボニルエチル等が挙げられる。
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３におけるハロゲンはＲ、Ｒ１におけるハロゲンと同義である。Ｑ１、Ｑ２におけるアラルキルオキシはＲ３、Ｒ４におけるアラルキルオキシと同義である。
Ｑ３におけるアルコキシはＲ、Ｒ１におけるアルコキシと同義である。
Ｗ、Ｘ、Ｙにおけるアルキレンとは炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキレンであって、メチレン、エチレン、トリメチレン、プロピレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン等を示す。
Ｙにおけるアルケニレンとは炭素数２〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルケニレンであって、ビニレン、プロペニレン、ブテニレン、ペンテニレン等を示す。
ＲｂにおけるアルキルとはＲ、Ｒ１におけるアルキルと同義である。
ＲｂにおけるアラルキルとはＲ、Ｒ１におけるアラルキルと同義である。
ＲｂにおけるアミノアルキルとはＬにおけるアミノアルキルと同義である。
Ｒｂにおけるモノ・ジアルキルアミノアルキルとはＬにおけるモノ・ジアルキルアミノアルキルと同義である。
Ｒｃにおける含窒素複素環とは、単環の場合、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、トリアジン、ピラゾール、トリアゾールを示し、縮合環の場合、ピロロピリジン（１Ｈ−ピロロ〔２，３−ｂ〕ピリジン、１Ｈ−ピロロ〔３，２−ｂ〕ピリジン、１Ｈ−ピロロ〔３，４−ｂ〕ピリジン等）、ピラゾロピリジン（１Ｈ−ピラゾロ〔３，４−ｂ〕ピリジン、１Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｂ〕ピリジン等）、イミダゾピリジン（１Ｈ−イミダゾ〔４，５−ｂ〕ピリジン等）、ピロロピリミジン（１Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、１Ｈ−ピロロ〔３，２−ｄ〕ピリミジン、１Ｈ−ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン等）、ピラゾロピリミジン（１Ｈ−ピラゾロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、ピラゾロ〔１，５−ａ〕ピリミジン、１Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン等）、イミダゾピリミジン（イミダゾ〔１，２−ａ〕ピリミジン、１Ｈ−イミダゾ〔４，５−ｄ〕ピリミジン等）、ピロロトリアジン（ピロロ〔１，２−ａ〕−１，３，５−トリアジン、ピロロ〔２，１−ｆ〕−１，２，４−トリアジン等）、ピラゾロトリアジン（ピラゾロ〔１，５−ａ〕−１，３，５−トリアジン等）、トリアゾロピリジン（１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ〔４，５−ｂ〕ピリジン等）、トリアゾロピリミジン（１，２，４−トリアゾロ〔１，５−ａ〕ピリミジン、１，２，４−トリアゾロ〔４，３−ａ〕ピリミジン、１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ〔４，５−ｄ〕ピリミジン等）、シンノリン、キナゾリン、キノリン、ピリドピリダジン（ピリド〔２，３−ｃ〕ピリダジン等）、ピリドピラジン（ピリド〔２，３−ｂ〕ピラジン等）、ピリドピリミジン（ピリド〔２，３−ｄ〕ピリミジン、ピリド〔３，２−ｄ〕ピリミジン等）、ピリミドピリミジン（ピリミド〔４，５−ｄ〕ピリミジン、ピリミド〔５，４−ｄ〕ピリミジン等）、ピラジノピリミジン（ピラジノ〔２，３−ｄ〕ピリミジン等）、ナフチリジン（１，８−ナフチリジン等）、テトラゾロピリミジン（テトラゾロ〔１，５−ａ〕ピリミジン等）、チエノピリジン（チエノ〔２，３−ｂ〕ピリジン等）、チエノピリミジン（チエノ〔２，３−ｄ〕ピリミジン等）、チアゾロピリジン（チアゾロ〔４，５−ｂ〕ピリジン、チアゾロ〔５，４−ｂ〕ピリジン等）、チアゾロピリミジン（チアゾロ〔４，５−ｄ〕ピリミジン、チアゾロ〔５，４−ｄ〕ピリミジン等）、オキサゾロピリジン（オキサゾロ〔４，５−ｂ〕ピリジン、オキサゾロ〔５，４−ｂ〕ピリジン等）、オキサゾロピリミジン（オキサゾロ〔４，５−ｄ〕ピリミジン、オキサゾロ〔５，４−ｄ〕ピリミジン等）、フロピリジン（フロ〔２，３−ｂ〕ピリジン、フロ〔３，２−ｂ〕ピリジン等）、フロピリミジン（フロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、フロ〔３，２−ｄ〕ピリミジン等）、２，３−ジヒドロピロロピリジン（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ〔２，３−ｂ〕ピリジン、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ〔３，２−ｂ〕ピリジン等）、２，３−ジヒドロピロロピリミジン（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ〔３，２−ｄ〕ピリミジン等）、５，６，７，８−テトラヒドロピリド〔２，３−ｄ〕ピリミジン、５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン等を示し、これらの環が水素添加されている芳香族環を形成する場合、環中の炭素原子がカルボニルでもよく、例えば２，３−ジヒドロ−２−オキソピロロピリジン、２，３−ジヒドロ−２，３−ジオキソピロロピリジン、７，８−ジヒドロ−７−オキソ−１，８−ナフチリジン、５，６，７，８−テトラヒドロ−７−オキソ−１，８−ナフチリジン等も含まれる。
また、これらの環はハロゲン、アルキル、アルコキシ、アラルキル、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、ホルミル、アシル、アミノアルキル、モノ・ジアルキルアミノアルキル、アジド、カルボキシ、アルコキシカルボニル、カルバモイル、モノ・ジアルキルカルバモイル、アルコキシアルキル（メトキシメチル、メトキシエチル、メトキシプロピル、エトキシチル、エトキシエチル、エトキシプロピル等）、置換基を有していてもよいヒドラジノ等の置換基によって置換されていてもよい。
ここで、置換基を有していてもよいヒドラジノの置換基としては、アルキル、アラルキル、ニトロ、シアノ等が挙げられるが、アルキル、アラルキルはＲ、Ｒ１におけるアルキル、アラルキルと同義であり、例えばメチルヒドラジノ、エチルヒドラジノ、ベンジルヒドラジノ等が例示される。
また、本発明の一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物として使用される化合物は製薬上許容される酸付加塩でもよく、その酸とは塩酸、臭化水素酸、硫酸等の無機酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、マンデル酸、クエン酸、酒石酸、サリチル酸等の有機酸が挙げられる。また、カルボキシル基を有する化合物は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の金属との塩、リジン等のアミノ酸との塩とすることもできる。さらに、それらの１水和物、２水和物、１／２水和物、１／３水和物、１／４水和物、２／３水和物、３／２水和物、６／５水和物等も本発明に含まれる。
本発明の一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物として使用される化合物は、プロドラッグとして提供されてもよい。ここでプロドラッグとは、生体内で上述の一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物に変換され得る化合物であって、例えば、一般式（Ｉ）で表される化合物の分子内のカルボキシル基（ＣＯＯＨ）、水酸基（ＯＨ）、アミノ基（ＮＨ２、アミドも含む）、メルカプト基（ＳＨ）等の部位が修飾されたものをいう（医薬品の開発７巻（分子設計）廣川書店）。
一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物に光学異性体、そのラセミ体またはシス−トランス異性体が存在する場合には、本発明においてこれらすべてを使用することができ、これらの異性体は常法により単離するか、各異性体原料を用いることによって製造することができる。
一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物は、ＷＯ９５／２８３８７等に記載されている方法により合成することができる。
酸付加塩、水和物ならびにプロドラッグについても常法により製造することができる。
本発明においては、一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物として使用される化合物のうちでも、Ｒａが式：
0004932480.tif 000016
〔式中の各記号は上述のとおり〕を示す一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物が好ましく、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミドの塩酸塩がさらに好ましく、（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミド・１塩酸塩が特に好ましい。
本発明の医薬は、哺乳動物（例えばヒト、サル、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）や鳥類（例えば、ニワトリ、ハト、七面鳥など）において、角膜神経が傷害、切断または欠損することによって低下した角膜知覚を回復し、また角膜知覚低下に伴うドライアイ症状を改善する治療薬として有用である。例えば、白内障手術やＰＲＫ、ＬＡＳＩＫ、ＬＡＳＥＫまたは角膜移植手術などの角膜手術に際して、あるいは神経麻痺性角膜症、角膜潰瘍、糖尿病角膜症などの角膜神経変性疾患に伴って、低下した角膜知覚機能を回復させ、また、角膜知覚低下に伴うドライアイの治療薬として有用である。さらに、ドライアイ患者のドライアイ症状とドライアイに伴う角膜知覚低下を回復する治療薬として有用である。
本発明の医薬は全身的または局所的に投与される。全身的には経口投与の他、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射など非経口的にも投与される。局所的には、眼に投与される。
本発明の医薬の製剤化形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、坐剤などの固形剤、およびシロップ剤、注射剤、点眼剤などの液剤などが挙げられる。顆粒および錠剤として製造する場合には、例えば賦形剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、結晶セルロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（デンプン、カルメロースナトリウム、炭酸カルシウムなど）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、カルメロース液、アラビアゴム液、ゼラチン液、アルギン酸ナトリウム液など）などを用いることにより任意の剤形を製造することができる。また、顆粒剤および錠剤には、適当なコーティング剤（ゼラチン、白糖、アラビアゴム、カルナバロウなど）、腸溶性コーティング剤（例えば酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマー、フタル酸ヒドロキシプロピル、カルボキシメチルエチルセルロースなど）などで剤皮を施してもよい。
カプセル剤として製造する場合には、適当な賦形剤、例えば流動性と滑沢性を向上させるためのステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、軽質無水ケイ酸など、また加圧流動性のための結晶セルロースや乳糖などの他、上記崩壊剤などを適宜添加したものを均等に混和または粒状もしくは粒状としたものに適当なコーティング剤で剤皮を施したものを充填するが、適当なカプセル基剤（ゼラチンなど）にグリセリン、マンニトールまたはソルビトールなどを加えて塑性を増したカプセル基剤で被包成形することもできる。これらカプセル剤には必要に応じて、着色剤、保存剤［二酸化イオウ、パラベン類（パラオキシ安息香酸メチル、エチル、プロピルエステル）］などを加えることができる。カプセル剤は通常のカプセルの他、腸溶性コーティングカプセル、胃内抵抗性カプセル、放出制御カプセルとすることもできる。腸溶性カプセルとする場合、腸溶性コーティング剤でコーティングした化合物または化合物に上記の適当な賦形剤を添加したものを通常のカプセルに充填または、カプセル自身を腸溶性コーティング剤でコーティング、もしくは腸溶性高分子を基剤として成形することができる。
坐剤として製造する場合には坐剤基剤（例えばカカオ脂、マクロゴールなど）を適宜選択して使用することができる。
シロップ剤として製造する場合、例えば安定剤（エデト酸ナトリウムなど）、懸濁化剤（アラビアゴム、カルメロースなど）、矯味剤（単シロップ、ブドウ糖など）、芳香剤などを適宜選択して使用することができる。
本発明の医薬を注射剤または点眼剤として製造する場合、医薬上許容される添加物、例えば等張化剤（塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂、ブドウ糖、プロピレングリコールなど）、緩衝剤（リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸緩衝液、イプシロンアミノカプロン酸緩衝液など）、保存剤（パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂など）、懸濁化剤（カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリソルベート８０、アルギン酸ナトリウムなど）、増粘剤（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールなど）、安定化剤（亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエンなど）、ｐＨ調整剤（塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸など）などを適宜添加した溶液に溶解または分散することによって製造することができる。
上記シロップ剤、注射剤および点眼剤における添加剤の添加量は、添加する添加剤の種類、用途などによって異なるが、添加剤の目的を達成し得る濃度を添加すればよく、等張化剤は、通常、浸透圧が約２２９〜約３４３ｍＯｓｍとなるよう、約０．５〜約５．０ｗ／ｖ％を添加する。また、緩衝剤は約０．０１〜約２．０ｗ／ｖ％程度、増粘剤は約０．０１〜約１．０ｗ／ｖ％程度、安定化剤は約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％程度になるように添加する。ｐＨ調整剤は、適宜添加し、通常ｐＨ約３〜約９．好ましくは約４〜約８になるように添加する。
特に点眼剤として使用する場合、一般式（Ｉ）で示されるアミド化合物の濃度は、通常下限は約０．００００１ｗ／ｖ％、好ましくは約０．００００５ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．０００１ｗ／ｖ％であり、上限は約１ｗ／ｖ％、好ましくは約０．１ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．０５ｗ／ｖ％、さらに好ましくは約０．０２ｗ／ｖ％に調製される。
本発明の医薬はＲｈｏキナーゼ阻害作用を有し、主として本作用により角膜神経の突起形成を促進すると考えられる。ＮＧＦ（神経成長因子）による神経突起伸長では、Ｒｈｏキナーゼ阻害によってＦ−アクチンが脱重合され神経突起形成が開始される。次いで、活性化されたＲａｃ１によって神経突起内にＦ−アクチンが再重合され、さらに神経突起を伸長させる（Ｎｅｇｉｓｈｉ  Ｍ．ａｎｄ  Ｋａｔｏｈ  Ｈ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１３２，１５７−１６６，２００２）。このような神経突起形成のメカニズムから、Ｒｈｏキナーゼ阻害作用が長期にわたり持続すると、Ｆ−アクチンの再重合に拮抗して、逆に神経突起形成が鈍化または障害される可能性も出てくる。
本発明の医薬の投与量および投与期間は対象となる疾患、症状、投与対象、投与方法などにより異なるが、以上のような本発明医薬の作用メカニズムを考慮すると、３日間以下、５日間以下、１週間以下、２週間以下などと投与期間を短期に限定して投与を行うことが好ましい。例えば、ＰＲＫ手術後の角膜知覚回復剤として成人の眼に局所的に短期投与する場合には、式（Ｉ）で示されるアミド化合物を約０．０１ｗ／ｖ％含有する点眼液を、１回約２０〜約５０μＬ、１日数回、２週間まで点眼投与するのがよい。また、例えば、ＬＡＳＩＫ手術後に角膜知覚回復剤として成人に短期経口投与する場合には、式（Ｉ）で示されるアミド化合物を約１０ｍｇ含有する錠剤を１日１回ないし２回服用させるのがよい。
しかしながら、本発明医薬は短期投与のみならず、１回投与量や１日投与回数を調整すれば、長期に亘り投与を行うことも可能である。さらには、日をおいて間歇的に投与することなども可能であり、場合に即して適切と考えられる様々な治療計画を立てることが可能である。
例えば、ＬＡＳＩＫ手術後に角膜知覚回復剤として成人に長期投与する場合、初めの１週間は式（Ｉ）で示されるアミド化合物を約０．０１ｗ／ｖ％含有する点眼液を、１回約２０〜約５０μＬ、１日２〜８回、その後は０．００３ｗ／ｖ％または０．００１ｗ／ｖ％の点眼液を１日２〜４回、３週間〜６週間継続投与するのがよい。また、間歇的治療法の例として、ＬＡＳＩＫ手術後に角膜知覚回復剤として成人に投与する場合、式（Ｉ）で示されるアミド化合物を約０．０１ｗ／ｖ％含有する点眼液を、１回約２０〜約５０μＬ、１日数回の条件で１週間連続して点眼投与し、その後１〜２週間休薬する。休薬後、同じ投与条件で投与を再開し、１週間投与を継続し、その後再び休薬する。このような間歇的な投与を角膜知覚が正常に回復するまで繰り返すのがよい。
なお、上記医薬を用いて角膜神経突起形成を促進する方法、角膜知覚を回復する方法、およびドライアイを治療する方法も本発明に包含され、式（Ｉ）で示されるアミド化合物を含む、角膜神経突起形成用、角膜知覚回復用またはドライアイ治療用の組成物も本発明の範疇に包含される。
【実施例】  本発明を実施例により、さらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。以下の実施例において、化合物１とは（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミド・１塩酸塩を示す。化合物１はＷＯ９５／２８３８７の実施例９に記載の方法に準じ調製できる。
試験例１
培養ウサギ三叉神経細胞における神経突起形成促進作用
１）使用動物
北山ラベスより購入した日本白色種ウサギ（生後２〜３日）を使用した。
２）被験物質
化合物１を用いた。
３）試験方法
（細胞培養）
三叉神経細胞の単離は、Ｃｈａｎらの報告（Ｋｗａｎ  Ｙ．Ｃｈａｎ  ａｎｄ  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｈ．Ｈａｓｃｈｋｅ．Ｅｘｐ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．４１：６８７−６９９，１９８５）を参考にして行った。すなわち、エーテル麻酔下、生理食塩水で心臓灌流後、三叉神経節を切り出し、神経分散液（住友ベークライト）を用いて、三叉神経節を分散し、細胞懸濁液を調製した。細胞培養にはニューロベーサル培養液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）にＢ２７  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．最終濃度２％ｖ／ｖ）およびＬ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．最終濃度１ｍＭ）を添加した培養液を用い、培養条件は５％  ＣＯ２、９５％空気下、３７℃とした。細胞は、２４ウェルプレート中に浸漬したポリリジン／ラミニンコーティング済みカバーグラス（住友ベークライト）上に約３×１０３細胞／ウェルとなるよう播種した。被験物質として化合物１（最終濃度１μＭ）を添加し、対照群は無添加とした。
（免疫染色）
培養４８時間後に、細胞を４％パラホルムアルデヒトを用い、室温で２時間固定した。神経細胞に特異的な中間径フィラメントであるニューロフィラメントを特異的に認識する抗ニューロフィラメント２００抗体（Ｓｉｇｍａ）および、これと反応する蛍光二次抗体を用いて、神経細胞体および神経突起を蛍光染色した。
（画像解析）
染色細胞は蛍光顕微鏡からコンピュータに画像として取り込み、取り込んだ細胞画像の細胞体直径および神経突起長を画像解析ソフト（Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ  ｖｅｒ．４．０，Ｐｌａｎｅｔｒｏｎ．Ｉｎｃ．）を用いて計測した。化合物１添加群および対照群につき、各３ウェルの細胞を計測した。細胞体直径の２倍以上の長さの神経突起を有する細胞を神経突起形成細胞として、神経突起形成細胞の全計測細胞数に占める比率（％）を算出した。
４）試験結果
図１は培養ウサギ三叉神経細胞の蛍光顕微鏡画像を示す。Ａは無添加対照群の細胞を、Ｂは化合物１添加群の細胞を示す。無添加群では神経突起を伸長した細胞が少ないのに対して、化合物１添加群では神経突起を長く伸長させた細胞が多く観察された。図２は各群の全測定細胞数に占める神経突起形成細胞数の比率を示すグラフである。対照群と化合物１添加群の比率は、各々、２４％および５４．６％であり、化合物１添加群は対照群に対して有意に高い神経突起形成細胞率を示した（＊：ｐ＜０．００１、ｔ−ｔｅｓｔ、Ｎ＝３、平均値±標準偏差）。
以上の結果より、化合物１は培養ウサギ三叉神経細胞の神経突起形成を促進することが明らかとなった。
試験例２
マイクロケラトームを用いたウサギ角膜知覚低下に対する改善効果
１）使用動物
日本ＳＬＣより購入した体重２．５〜３．０ｋｇの日本白色種ウサギを使用した。動物は、入荷後から試験終了日まで、室温２３±３℃、湿度５５±１０％、１２時間照明（８：００点灯、２０：００消灯）に設定された飼育室内で１ケージあたり１匹収容して飼育した。動物には固形飼料（ラボＲストック、日本農産工業）を１日１００ｇ制限給餌し、水道水を自由に摂取させた。
２）被験物質
被験物質として化合物１を使用した。化合物１を下記基剤溶液に０．０１％となるように溶解し、点眼投与した。また、対照群には基剤溶液を点眼投与した。
基剤溶液処方：
リン酸二水素ナトリウム二水和物              ０．１ｇ
塩化ナトリウム                              ０．９ｇ
水酸化ナトリウム                            適量（ｐＨ７）
精製水                        全量          １００ｍＬ
３）試験方法
（動物の選定および角膜知覚初期値の測定）
試験開始前に動物の前眼部肉眼観察とフルオレセインによる角膜染色斑の観察を行ない、それらに異常が認められないウサギを選定した。Ｃｏｃｈｅｔ−Ｂｏｎｎｅｔ角膜知覚計（ＬＵＮＥＡＵ社製）を用いて角膜知覚の初期値を測定した。
（角膜フラップの作製）
動物にセラクタール（２％キシラジン）：ケタラール（５％ケタミン）＝０．５：１混合液の筋肉内注射（０．９ｍＬ／ｋｇ）を行なって全身麻酔を施し、眼球を十分に露出させた。マイクロケラトーム（ＭＫ２０００、ニデック社）の吸引リング内側にウサギ眼用アダプターを装着し、１３０μｍ厚のブレードを使用して直径８．５ｍｍの角膜フラップを作製した（Ａｒｂｅｌａｅｚ  ＭＣ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｒｅｆｒａｃｔ  Ｓｕｒｇ．，２００２  Ｍａｙ−Ｊｕｎ  １８（３  Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ３５７−６０）。顕微鏡下で角膜フラップを確実に元の位置に戻し、フラップの位置が動かないように動物を観察しながら麻酔から覚醒させた。
（動物の群分け）
角膜フラップ作製の翌日に動物の状態を観察し、角膜フラップが正常に復位している個体を選定した。これらの動物について、角膜フラップ作製前の角膜知覚の初期値が均一になるようにＳＡＳ前臨床パッケージ（Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０，ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｊａｐａｎ）を用いて多変数によるブロック化割付け手法により群分けをおこなった。
（投与）
被験物質溶液および対照の基剤溶液は、角膜フラップ作製翌日から１週間あるいは２週間、点眼投与した。点眼投与は、手術眼に対して２時間間隔で１日４回、マイクロピペットを用いて１回あたり５０μＬずつ行った。なお、手術後一週間は１日４回の被験物質点眼の１回目および３回目に抗炎症剤として０．１％ブロムフェナクナトリウム点眼液（ブロナック点眼液，千寿製薬）を、また、２回目および４回目に抗菌剤として０．３％塩酸ロメフロキサシン点眼液（ロメフロン点眼液，千寿製薬）を併せて点眼投与した。
（角膜知覚測定）
Ｃｏｃｈｅｔ−Ｂｏｎｎｅｔ角膜知覚計を用いて、手術の１週間後から８週間後まで毎週一回、角膜知覚を測定した。なお、測定者には測定するウサギがいずれの投与群に属するか分からないように、測定はブラインドで実施した。
（統計解析）
統計解析にはパラメトリックＤｕｎｎｅｔｔ多重比較上側検定法（ＳＡＳ前臨床パッケージ；Ｖｅｒｓｉｏｎ  ５．０，ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｊａｐａｎ）を用い、危険率５％未満を有意であると判定した。
（試験結果）
図３は角膜知覚の経時変化を示している。角膜知覚は、Ｃｏｃｈｅｔ−Ｂｏｎｎｅｔ角膜知覚計のナイロンフィラメント（直径０．１２ｍｍ）の先を角膜中央部に接触させ時に瞬目反応を示すフィラメントの最長の長さで示されるが、その長さを図３の縦軸に表示した。手術１週間後に、基剤投与群（対照群）および被験物質溶液投与群のいずれの群でも角膜知覚の急激な低下が認められた。その後、対照群では緩やかな角膜知覚の回復が認められ、一方、被験物質投与群では対象群よりも良好な角膜知覚の回復が認められた。結果は、手術２週間後から８週間後まで、１週間投与群、２週間投与群、対照群の順に良好な結果を示した。統計学的解析を行った結果、術後５週に１週間投与群の角膜知覚が対照群のそれと比較して有意に高かった。
レーザー角膜切削形成術（ＬＡＳＩＫ）では、マイクロケラトームを用いて作製した角膜フラップを折り返して角膜実質を表出させ、エキシマレーザー照射により角膜実質を切削して屈折矯正をおこなった後、角膜フラップを元の位置に戻す。本試験はこのマイクロケラトームを用いたウサギ角膜知覚低下モデルを用いて化合物１の角膜知覚回復促進効果を検討したものである。以上の試験結果は、化合物１が角膜神経切断による角膜知覚低下の回復を促進させる作用を有すること示している。また、投与量が同じである場合には、その投与期間を短くする方が効果的な結果が得られうる可能性も示唆されている。
製剤実施例１  鋺剤
化合物１                    １０  ｍｇ
乳糖                        ８０  ｍｇ
デンプン                    １７  ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム      ３  ｍｇ
結晶セルロース              １０  ｍｇ
以上の成分を１錠分の材料として、常法により錠剤を成形する。錠剤は必要に応じて通常用いられる腸溶性コーティング剤（例えばフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、糖衣およびフィルム（例えばエチルセルロース）を適用してもよい。添加剤との配合比を変えることにより、化合物１の成分量が２０ｍｇ、５ｍｇ、１ｍｇ、０．５ｍｇ、０．１ｍｇ／錠の錠剤を調製することができる。
製剤実施例２  カプセル剤
化合物１                    ５０  ｍｇ
マンニトール                ７５  ｍｇ
デンプン                    １７  ｍｇ
ステアリン酸カルシウム        ３  ｍｇ
以上の成分を１カプセル剤の材料として均一に混合し、常法により顆粒状とし、硬カプセルに充填する。この充填前に必要に応じて、通常用いられる腸溶性コーティング剤（例えば、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、糖衣またはフィルム（例えば、エチルセルロース）を顆粒に適用してもよい。添加剤との配合比を変えることにより、化合物１の成分量が２０ｍｇ、１０ｍｇ、５ｍｇ、１ｍｇ、０．５ｍｇ、０．１ｍｇ／カプセルのカプセル剤を調製することができる。
製剤実施例３  注射剤
化合物１                                ７５０  ｍｇ
カルボキシメチルセルロースナトリウム    ５００  ｍｇ
注射用水                        全量    １００  ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して注射剤を調製する。添加剤との配合比を変えることにより、化合物１の成分量が１０００ｍｇ、５００ｍｇ、２００ｍｇ、１００ｍｇ／１００ｍＬである注射剤を調製することができる。
製剤実施例４  点眼剤
化合物１                              ０．００５  ｇ
ホウ酸                                ０．７  ｇ
ホウ砂                                適量（ｐＨ７）
塩化ナトリウム                        ０．５  ｇ
ヒドロキシメチルセルロース            ０．５  ｇ
エデト酸ナトリウム                    ０．０５  ｇ
塩化ベンザルコニウム                  ０．００５  ｇ
滅菌精製水                  全量      １００  ｍＬ
滅菌精製水８０ｍＬを約８０℃まで加温し、ヒドロキシメチルセルロースを加えて攪拌し、液温を室温まで戻す。この液に化合物１、塩化ナトリウム、ホウ酸、エデト酸ナトリウムおよび塩化ベンザルコニウムを加えて溶解する。ホウ砂を適量加えてｐＨを７に調整する。滅菌精製水を加えて１００ｍＬまでメスアップする。添加剤との配合比を変えることにより、化合物１の濃度が０．１ｗ／ｖ％、０．０５ｗ／ｖ％、０．０３ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．００３ｗ／ｖ％、０．００１ｗ／ｖ％、である点眼剤を調製することができる。
製剤実施例５  点眼剤
化合物１                                １０  ｍｇ
Ｄ−マンニトール                        ４．５  ｇ
リン酸二水素ナトリウム                  ０．１  ｇ
水酸化ナトリウム                        適量（ｐＨ７）
滅菌精製水                      全量    １００  ｍＬ
滅菌精製水８０ｍＬに化合物１、Ｄ−マンニトール、リン酸二水素ナトリウムを加えて溶解する。水酸化ナトリウムを適量加えてｐＨを７に調整する。滅菌精製水を加えて１００ｍＬまでメスアップする。調製した点眼剤をメンブランフィルターで滅菌ろ過後、ディスポーザブル（ユニットドーズ）容器に充填、密封する。添加剤との配合比を変えることにより、化合物１の濃度が０．１ｗ／ｖ％、０．０５ｗ／ｖ％、０．０３ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．００３ｗ／ｖ％、０．００１ｗ／ｖ％、である点眼剤を調製することができる。
【産業上の利用可能性】  本発明の医薬は、角膜神経突起形成促進作用を有することから、角膜神経の損傷などに伴う角膜知覚機能低下の改善および角膜知覚機能低下に伴うドライアイ症状の改善に有用である。具体的には、白内障手術後やＰＰＫ、ＬＡＳＩＫ、ＬＡＳＥＫまたは角膜移植手術後の角膜知覚の低下、神経麻痺性角膜症、角膜潰瘍、糖尿病性角膜症などの角膜神経変性に伴う角膜知覚低下やドライアイ症状の改善効果が期待できる。
本出願は、日本で出願された特願２００４−１６６４４５を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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