(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
0004880847.tif 000012
[式中、
Rは、水素、および1〜18個の炭素原子を有するアルキルよりなる群から選択され、
R1およびR2は、水素、および1〜18個の炭素原子を有するアシルよりなる群から独立して選択される。]
で表される化合物。
【請求項２】
3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンエポキシドである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
以下の式IまたはII：
【化２】
0004880847.tif 000013
[式中、
Rは、水素（式IIの場合のみ）、および1〜18個の炭素原子を有するアルキルよりなる群から選択され、
R1およびR2は、水素、および1〜18個の炭素原子を有するアシルよりなる群から独立して選択される。]
で表される化合物またはその薬学的に許容できる塩を含む、炎症疾患の治療に使用するための医薬組成物。
【請求項４】
式Iにおいて、R1およびR2が水素であり、Rが1〜18個の炭素原子を有するアルキルである、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンを含む、請求項３または４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
3,5-ジアセトキシ-4-イソプロピルスチルベンを含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項７】
3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピル-トランス-スチルベンエポキシドを含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項８】
炎症疾患が乾癬である、請求項３〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
炎症疾患がアトピー性皮膚炎である、請求項３〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
発光細菌種(Photorhabdus)の菌から単離されたスチルベン類は、抗生物活性を有することが知られている。V. J. Paul, S. Frautschv, W. Fenical, およびK. H. Nealson, Journal of Chemical Ecology, 7: 589-597 (1981)、ならびにK. Hu, J. Li, W. Wang, H. Wu, H. LinおよびJ. M. Webster, Canadian Journal of Microbiology. 44:1072-1077( 1998)参照のこと。しかし、かかる化合物は、その他の生物学的活性を有していることは示されていない。類似化合物であるレスベラトロールは、癌予防活性(Jangら、1997)、およびプロテインキナーゼC阻害活性(Garcia-Garciaら、1999)を有していると開示されている。
【０００２】
抗生物質による治療が上手くいかない一般的症状が多数存在する。これらの中には、炎症性疾患が含まれる。本発明の化合物は特異的な抗炎症特性を有している。
【０００３】
炎症性疾患は、慢性または急性のいずれかの特性を有するが、これは保健産業において実質的な問題を提示する。慢性的炎症は、持続的な期間(数週間または数ヶ月)に渡って炎症が認められ、激しい炎症、組織破壊および回復の兆しが同時に進行する(Robbins Pathological Basis of Disease R. S. Cotran, v. Kumar, およびS. L. Robbins著、 W. B, Saunders Co., p. 75, 1989)。慢性的炎症は急性炎症エピソードに続いて起こる場合があるが、例えば持続性の感染(例えば、結核、梅毒、真菌感染)により、時間経過と共に進行する潜伏性プロセスとして起こることもある。これは、遅延性の過敏反応、内因性の毒素(増大した血漿脂質など)または外因性の毒素(シリカ、アスベスト、タバコタール、外科的処置用縫合糸など)への持続的な曝露、または身体内の組織に対する自己免疫反応(例えば、慢性関節リュウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬など)をもたらすこととなる。したがって、慢性炎症性疾患は、慢性関節リュウマチ、再狭窄、乾癬、多発性硬化症、外科的な癒着、結核および慢性炎症性肺疾患および気道疾患(喘息、塵肺症、慢性閉塞性肺疾患、鼻ポリープおよび肺繊維症など)の多くの一般的な医学的症状に関与する。
【０００４】
乾癬は、一般的な慢性炎症性皮膚疾患であり、その特徴としては急速な増進および表皮の肥厚化をもたらす上皮細胞の代謝回転、ならびに、銀白色の鱗状斑で覆われた皮膚損傷部の炎症性の腫れ、および膨らんだ肥厚化した炎症性の鱗状の損傷部が挙げられ、かゆみ、ひりひりした痛み、刺痛を伴い、かつ出血しやすい。したがって、該疾患は、炎症だけではなく細胞の増殖によっても特徴を示す。増殖に関しては癌と類似しており、乾癬と癌は双方とも増殖性疾患として記述され得る。患者の約10％において、乾癬は、慢性関節リュウマチに認められる病変に類似した明らかな関節症を伴っている。米国の人口の約２〜３％が乾癬に罹っており、毎年250,000人の症例が新規に診断されている。本発明の化合物は乾癬に対する特異的活性を有する。
【０００５】
抗生物活性はまた、プロテインキナーゼ阻害剤としての利用性を予測させるものではない。プロテインキナーゼは、糖尿病における因子であると共に、癌、じゅく状斑および上皮増殖（乾癬を含む）などの多くの疾患に関連している。本発明の化合物は、特定のプロテインキナーゼ阻害活性を有する。
【０００６】
プロテインキナーゼ阻害剤は、無秩序な細胞再生の制御において、即ち、細胞再生障害において、大変重要であると考えられている。例えば、DNA-PKは、極めて大型の触媒性ポリペプチドとDNA結合/標的化制御サブユニット（Ku 自己抗原）からなるセリン/スレオニンプロテインキナーゼである。Kuは、最初、自己免疫疾患であるエリテマトーデスおよび強皮症を患っている患者由来の血清と反応する、ヘテロダイマー（p70/p80）のリン酸化核タンパク質として見出された。カゼインキナーゼII（Ck2）は、カゼインなどの酸性タンパク質をリン酸化するセリン/スレオニンキナーゼである。Ck2は、細胞内で種々の役割を担っており、多数の増殖因子、ホルモンおよびサイトカインにより活性化され得ることが示されている。Ck2は、複数の細胞内基質標的を有しており、それらは最終的には、DNA、RNAおよびタンパク質の合成の制御に関与するものである。Ck2は、細胞分裂シグナル、神経突起形成の制御に関与している。Ck2は、数々の疾患症状に関与していることが示されている。Ck2レベルの上昇が、ヒトの固形腫瘍および大腸粘膜などの非腫瘍性組織の迅速な増殖において示されている。転移性黒色腫およびヒトサイトメガロウイルスによって形質転換された細胞においては、Ck2の活性が極めて増大している。動物の寄生原虫感染は、Ck2の過剰発現に関連する致死的なリンパ球増殖症候群をもたらす。Ck2活性はまたは、アルツハイマー病においても増大していることが示されている。
【０００７】
Amsonら(1989)は、33kDのPIM遺伝子産物が、胎生期造血の際に、肝臓および腎臓で高発現していることを示した。一方、該遺伝子産物は、成体の循環顆粒球ではわずかしか発現していない。該遺伝子産物は、造血系悪性腫瘍、特に骨髄性およびリンパ球性急性白血病では過剰発現していた。この結果は、造血系の発達および種々の白血病における遺伝子の調節解除におけるPim1癌遺伝子の生理学的役割を暗示するものである。Sarisら(1991)は、マウスおよびヒトのPim1遺伝子産物が両方ともプロテインセリン/スレオニンキナーゼであるという証明を提示した。少なくとも、マウスにおいて、該遺伝子が44kDおよび34kDの２つのタンパク質をコードし、44kDのタンパク質は34kDのタンパク質のアミノ末端側が伸長したものであり、それは上流にあるCUGコドンでの選択的翻訳開始により合成される。Arkら(1991)は、マウスにおけるPim-1遺伝子座の正確な位置決定を示している。Pim-1遺伝子は、マウス第17染色体のt-ハプロタイプのさらなる遺伝子解析のためのマーカーとして用いられた。造血系の発達におけるPim-1の機能およびその役割を理解するために、Lairdら(1993)は、Pim-1機能欠損マウスを作製した。Pim-1欠損マウスは、一見正常かつ健康であり、生殖能も有しているが、詳細な分析により、Pim-1の欠損と小赤血球症との関連が示され、一方、トランスジェニックマウスにおけるPim-1の過剰発現が大赤血球症をもたらした。
【０００８】
分子に基づいた最近の研究または腫瘍性形質転換に関する最近の研究により、癌遺伝子と呼ばれる遺伝子ファミリーが特定された。該遺伝子の異常発現は腫瘍形成をもたらす。例えば、RNA腫瘍ウイルスは、発現すると感染した細胞の腫瘍性への転換を決定する癌遺伝子配列を有している。チロシンキナーゼであるLckは、主に、種々のタイプの造血細胞で発現している。該Lckタンパク質は、胸腺細胞および成熟T細胞で発見され、マウス脾臓成熟B細胞で発現していることが報告されている(Campbellら(1992))。Lckの阻害はT細胞活性化を阻止し得るので、Lck阻害剤は、多数の上記障害の治療に有効である(例えば、自己免疫疾患の治療など)。T細胞介在性疾患の治療(T細胞の活性化および増殖の抑制を含む)は、本発明の特に好ましい実施形態である。T細胞の活性化および増殖を選択的に阻止する化合物が好ましい。
【０００９】
したがって、これらのキナーゼの特異的阻害剤は、発癌、細胞の増殖、分化および自己免疫の機序の解明に有用であり得、癌および他の病的増殖状態の予防および化学療法に効果的であり得る。したがって、本発明の化合物は、ヒトを含む哺乳動物で病的増殖および自己免疫障害の治療に有用であり得る。以上のことより、ヒトまたは動物(例えば哺乳動物)は、本発明の化合物のうちの１種を治療に有効な量で投与することを含む方法により治療可能である。ヒトまたは動物が患っている疾患の症状または障害の回復が達成され得る。このような障害の典型的な例としては、骨髄芽球性白血病などの白血病、リンパ腫、肉腫、神経芽腫、ウィルムス腫、膀胱、乳房、肺または甲状腺の悪性腫瘍、上皮由来の腫瘍(乳癌など)を含む、良性および悪性腫瘍が挙げられる。さらに、乾癬などの上皮過剰増殖の治療に有用であり得る。本発明の化合物はまた、抗転移剤として、じゅく状斑および再狭窄の発達の抑制、血管新生の制御にも有用であり得、かつ、糖尿病の合併症の治療にも有用で有り得る。かかる化合物はまた、プロテインチロシンキナーゼが関与する疾患であれば、免疫系疾患の制御に、例えば免疫抑制剤として利用性がある。
【００１０】
移植拒絶応答(移植片対宿主疾患)および外科的な癒着もまた、プロテインキナーゼにより影響を受ける。本発明の化合物のプロテインキナーゼの阻害および抗炎症特性は、移植拒絶応答および外科的な癒着を低減するために外科的手法においても有用性をもたらす。
【００１１】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、その病因とは無関係に上記に例示した障害の治療に有用である。例を挙げるならば、移植拒絶応答、慢性関節リュウマチ、多発性硬化症、慢性閉塞性肺疾患、炎症性腸疾患、狼瘡、移植片対宿主疾患、T細胞介在性過敏性疾患、乾癬、橋本甲状腺炎、ギヤン-バレー症候群、癌、接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎などのアレルギー疾患、喘息、虚血性もしくは再灌流障害、またはアトピー性皮膚炎に対する治療が挙げられる。
【００１２】
発明の概要
本発明は、炎症性疾患の治療、乾癬の治療およびプロテインキナーゼの阻害に有用なヒドロキシル化スチルベンならびにその誘導体および類似体を含有する組成物に関する。
【００１３】
本発明はまた上記化合物の製造に用いられる新規の合成方法を含む。この方法は商業生産を可能にし、昆虫からの回収は不要である。
【００１４】
本発明はまた下記の式IIの新規化合物を含む。
【００１５】
詳細な説明
ある実施形態においては、炎症に対抗できる量の次式（式I）：
【化６】
0004880847.tif 000002
[式中、
Rは、置換および無置換のアルキル、置換および無置換のアルケニル、置換および無置換の環状アルキル、置換および無置換のアリール、ハライド、アルコキシル、アシル、アルキルスルホキシル、アルキルスルホニル、アルキルチオール、ヒドロキシル、チオール、置換および無置換のアミノ基、よりなる群から選択され、
Xは、置換および無置換のアルキル、置換および無置換のアルケニル、置換および無置換の環状アルキル、置換および無置換のアリール、置換および無置換のアミノ基、ニトロ、カルボキシル、アセトキシルなどのアシルオキシル、ヒドロキシル、アルコキシル、ハライド、アシル、アルキルスルホキシル、アルキルスルホニル、アルキルチオール、アリールならびにヘテロ環、よりなる群から選択され、
nは、0〜5であり、そして、
R1およびR2は、アシル、水素およびアルキル基よりなる群から選択される。]で表される化合物およびその薬学的に許容できる塩を含有する組成物に関する。
【００１６】
本発明の化合物は乾癬に対して特に有用であり、好ましい実施形態においては該化合物は抗乾癬量で存在する。
【００１７】
本発明の化合物はまたプロテインキナーゼ阻害剤としても有用であり、好ましい実施形態においては該化合物はプロテインキナーゼ活性を抑制する量で存在する。
【００１８】
本発明はまた、薬学的に有効な量の本発明の化合物を投与することによって、炎症もしくは乾癬を治療する方法またはプロテインキナーゼの阻害により治療し得る症状を治療する方法を含む。
【００１９】
本発明の組成物中での使用に好ましい化合物は、Rがアルキル基、R1およびR2が水素である化合物である。特に好ましくは、Rが分枝状の短鎖アルキル基であり、R1およびR2が水素である化合物である。最も好ましくは3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンである。
【００２０】
他の好ましい実施形態においては、Rが、1〜18個の炭素原子を有する置換および無置換のアルキル、1〜18個の炭素原子を有する置換および無置換のアルケニル、1〜18個の炭素原子を有する置換および無置換の環状アルキル、ハライド、1〜18個の炭素原子を有するアルコキシル、CO基および更に1〜17個の炭素原子を有するアシル基、1〜18個の炭素原子を有するアルキルスルホキシル、1〜18個の炭素原子を有するアルキルスルホニル、1〜18個の炭素原子を有するアルキルチオール、ヒドロキシル、チオール、よりなる群から選択され、Xが、水素、1〜18個の炭素原子を有する置換および無置換のアルキル、1〜18個の炭素原子を有する置換および無置換のアルケニル、1〜18個の炭素原子を有する置換および無置換の環状アルキル、置換および無置換のアミノ基、ニトロ、カルボキシル、アセトキシルなどのアシルオキシル、ヒドロキシル、アルコキシル、ハライド、C1-C17CO-などのアシル基、1〜18個の炭素原子を有するアルキルスルホキシル、1〜18個の炭素原子を有するアルキルスルホニル、1〜18個の炭素原子を有するアルキルチオール、ならびに置換および無置換のフェニル、よりなる群から選択され、
nが、0〜5であり、
R1およびR2が、1〜18個の炭素原子を有するアシル、水素、および1〜18個の炭素原子を有するアルキル基よりなる群から選択される、
化合物およびその薬学的に許容できる塩である。
【００２１】
より好ましい実施形態においては、Rが、1〜18個の炭素原子を有する置換および無置換のアルキル、1〜18個の炭素原子を有する置換および無置換のアルケニル、1〜18個の炭素原子を有する置換および無置換の環状アルキル、ならびにハライド、よりなる群から選択され、
Xが、メチル、アセトキシル、ヒドロキシル、メトキシル、ハライド、アセチル、よりなる群から選択され、
nが、0〜5であり、そして、
R1およびR2が、1〜18個の炭素原子を有するアシル、水素、およびメチル基よりなる群から選択される、
化合物およびその薬学的に許容できる塩である。
【００２２】
特に好ましい実施形態においては、組成物は3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンを含む。
【００２３】
本発明はまた、式II：
【化７】
0004880847.tif 000003
[式中、
Rは、水素、置換および無置換のアルキル、置換および無置換のアルケニル、置換および無置換の環状アルキル、置換および無置換のアリール、ハライド、アルコキシル、アシル、アルキルスルホキシル、アルキルスルホニル、アルキルチオール、ヒドロキシル、チオール、置換および無置換のアミノ基、よりなる群から選択され、
Xは、置換および無置換のアルキル、置換および無置換のアルケニル、置換および無置換の環状アルキル、置換および無置換のアリール、置換および無置換のアミノ基、ニトロ、カルボキシル、アセトキシルなどのアシルオキシル、ヒドロキシル、アルコキシル、ハライド、アシル、アルキルスルホキシル、アルキルスルホニル、アルキルチオール、アリールならびにヘテロ環、よりなる群から選択され、
nは、0〜5であり、そして、
R1およびR2は、アシル、水素およびアルキル基よりなる群から選択される。]で表される新規化合物および該化合物の抗炎症量を含有する組成物に関する。
【００２４】
式ＩおよびIIの遊離塩基に加えて、薬学的に許容できる塩などが本発明の範囲内に含まれる。
【００２５】
本発明の化合物および本発明の組成物は、化合物のトランス型およびシス型の立体化学形態と、トランス型およびシス型の混合物との双方を包含する。
【００２６】
図面の簡単な説明
（図面の簡単な説明については下記参照）
実施例１− 本発明の化合物の合成
本発明の組成物中で有用な化合物は、式：
【化８】
0004880847.tif 000004
で表される3,4-ジヒドロキシ安息香酸および4-ブロモ-3,4-ジヒドロキシ安息香酸から調製できる。
【００２７】
合成工程は、ヒドロキシルメチル化、エステル還元、アルコール酸化、Wittig反応（またはHorner反応もしくはHorner-Emmons-Wadsworth反応）および脱メチル化を含む。合成経路はよく確立されており、当業者ならば実行可能である。
【００２８】
他のスチルベン誘導体は、ヒドロキシル化スチルベン誘導体と酸またはその誘導体（例えば対応する塩、塩化物および無水物など）との反応による標準的なエステル化により得ることができる。この反応は当技術分野で公知である。例えば、アルコールを無水物とピリジンとの混合物中に低温にて添加し、該混合物を室温で十分な時間静置して反応を完結させた。反応後、当技術分野で公知の一般的な後処理工程によって対応する誘導体を得た。
【００２９】
式IIで表される本発明の化合物は、m-クロロ過安息香酸などの好適な酸化剤を用い、対応する式Iの化合物の加水分解により製造してもよい。例えば、3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピル-トランス-スチルベンエポキシドは、3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピル-トランス-スチルベン化合物（次頁のスキームIの化合物(９)）からCH2Cl2中で０℃にてm-クロロ過安息香酸（1.2当量）と反応させることにより合成することができる。反応後、一般的な後処理工程は当技術分野で公知である。あるいは、本発明の化合物は文献に記載の別の経路で調製してもよく、それらは参照により本明細書に組み入れられる。（Eicher, T.; Tiefensee, K.; Doing, R. および Pick, R. Synthesis 1991, 98-102; Krow, G. R.; Miles, W. H.; Smiley, P. M.; Lester, W. S. および Kim, Y.J. J. Org. Chem. 1992, 57, 4040-4043; Seguineru, P. および Villieras Tetrahedron Letters 1988, 29, 477-480; Thakkar, K.; Geahlen, R. L. および Cushman, M. J. Med. Chem. 1993, 36, 2950-2955; Bezou, P.; Hilberer, A. および Hadziioannou, G. Synthesis 1996, 449-451）。これらの方法は錯体触媒を用いるか（Krow, G. R.; Miles, W. H.; Smiley, P. M.; Lester, W. S. およびKim, Y. J. J. Org. Chem. 1992, 57, 4040-4043）、多くの段階を含むか(Eicher, T.; Tiefensee, K.; Doing, R. および Pick, R. Synthesis 1991, 98-102)のどちらかである。
【００３０】
(a) 合成スキーム
本発明の化合物を市販の3,4-ジヒドロキシ安息香酸(1)および4-ブロモ-3,4-ジヒドロキシ安息香酸(10)から、スキーム１または２に概略を示す経路に従って合成した。
【００３１】
【化９】
0004880847.tif 000005
スキーム１． i. (CH3)2SO4, CH3COCH3, K2CO3, 還流24時間; ii. BrCH(CH3)2, AlCl3, CS2, 還流7日間; iii. LiAlH4, Et2O, 0℃, 2時間, ; iv. Py+Cl-CrO3, 1.5時間; v. PO(OEt)3, (But)4N+I-, 110-130℃, 10時間; vi. NaH, cpd5, THF, 60℃, 3時間; vii. BBr3, CH2Cl2, -78℃その後0℃, 24時間
【００３２】
【化１０】
0004880847.tif 000006
スキーム２. i. (CH3)2SO4, CH3COCH3, K2CO3, 還流24時間; ii. LiAlH4, Et2O, 0℃, 2時間, ; iii. Py+Cl-CrO3, 1.5時間; iv. NaH, 7, THF, 60℃, 3時間; v. a. t-ブチル Li, THF, -78℃その後室温, 2時間, b. THF中RBr, vi. BBr3, CH2Cl2,  -78℃その後0℃, 24時間.  R-第一級アルキル基, ( -CH2CH3, -(CH2)13CH3 )
【００３３】
手順A（メチル化）
アルコールまたは酸（1g、1当量）を、硫酸ジメチル（各ヒドロキシル基またはカルボキシル基に対して２当量）およびK2CO3（各ヒドロキシル基またはカルボキシル基に対して５当量）を含有するよく攪拌したアセトン溶液(100ml)に添加した。この溶液を１２時間還流した。濾過後、溶媒であるアセトンを減圧下で蒸発させて、残留物をEtOAc（50ml）中に溶解した。EtOAc溶液を水（50ml x 2）、飽和NaCl水溶液（50ml）で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させてシロップ状物を得、シリカカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／EtOAc = 4 : 1）により精製した。PO(OEt)3がリン酸トリフェニルで置換されるとき、シス-誘導体が合成される。
【００３４】
手順B（メチルエステルからアルコールへの還元）
LiAlH4（1.5当量）を、無水ジエチルエーテル（100ml）中のメチルエステル（1g、1当量）に攪拌しながらゆっくりと0℃で添加した。30分後、水（5ml）を混合物中にゆっくりと添加して過剰量のLiAlH4を消失させ、混合物を10％ HCl(水溶液)で酸性化した。有機層を水（50ml x 2）、飽和NaHCO3（50ml）で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させてシロップ状物を得、EtOH／ヘキサンから結晶化させた。
【００３５】
手順C（第一級アルコールからアルデヒドへの酸化）
ジクロロメタン（10ml）に溶かしたアルコール（1g、1当量）の溶液を、塩化クロム酸ピリジニウム（各ヒドロキシル基に対して1.5当量）を懸濁した状態で含有する無水ジクロロメタン（50ml）に十分に攪拌しながら添加した。90分後、ジエチルエーテル（100ml）を添加し、上清をデカンテーションで除き、黒色の粘着性のシロップ状物を乾燥エーテル（20ml x 3）で洗浄し、黒色固体を得た。併せた有機溶液をFlorisolの短いパッド（a short pad）を通過させ、溶媒を回転式蒸発により除去してシロップ状物を得、その後EtOH／ヘキサンから結晶化させた。
【００３６】
手順D（Wittig反応）
NaH（2当量）を、乾燥THF（25ml）中のジエチルベンジルホスホナートエステル（7）（1.5当量）に十分に攪拌しながら60分間かけて0℃にて添加した。THF（2ml）中のアルデヒド（1g、1当量）を該混合物中にゆっくりと添加し、反応混合物を50℃にて3時間反応させた。室温に冷却後、混合物を氷上に注ぎ、その後2M HCl（5ml）を添加した。該混合物をEtOAc（20ml x 3）で抽出し、その後併せた有機層を水（25ml x 2）、飽和NaCl（25ml）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、溶媒を減圧下で蒸発させ、得られたシロップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル/エーテル = 8:1）により精製した。
【００３７】
手順E（脱メチル化）
10mlの乾燥CH2Cl2中のBBr3（4ml、CH2Cl2中1M）を乾燥CH2Cl2（5ml）中のメチル化スチルベン（1g、1当量）に-78℃にて滴下により添加し、室温で終夜静置した。その後、混合物を氷上に注ぎ、有機層を分離し、水層をCH2Cl2 (20ml x 2)で抽出した。併せた有機層を飽和NaClで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発乾固した。
【００３８】
手順F（アセチル化）
アルコール（1g、1当量）を、氷冷した無水酢酸／ピリジン＝1：1（v／v）の混合物（5ml）に添加し、この混合物を終夜室温で静置した。反応後、EtOAc（25ml）を該混合物に添加し、このEtOAcを氷冷水（25ml）、氷冷10% HCl（25ml x 2）、水（25ml x 2）、飽和NaHCO3水溶液（25ml）で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させた。溶媒の除去後、生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン/EtOAc = 8:1）により精製した。
【００３９】
(c) 3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピル-トランス-スチルベンおよびその誘導体の製造のための合成スキーム１の使用
【００４０】
(i) 3.5-ジメトキシ-安息香酸メチル（スキーム１中の化合物2）（手順Ａ）
粗生成物（シロップ）をEtOH/ヘキサンから結晶化させ、純粋な化合物2（スキーム1）を得た（〜90％）。融点：110-113℃。NMR (100 MHz, CDCl3)、δ4.20 (s, 6H, OCH3)、4.60 (s, 3H, COOCH3)、6.30 (t, 1H, J4,2=2.2 Hz, H-4)、7.20 (d, 2H, H-2,6)。
【００４１】
(ii) 3.5-ジメトキシ-4-イソプロピル-安息香酸メチル（スキーム１中の化合物3）
無水AlCl3（0.85g）を3.5-ジメトキシ-安息香酸メチル（スキーム１中の化合物2）(0.86g)および2-ブロモプロパン(0.61ml、1.1当量)を含有する乾燥CS2(100ml)中に添加した。この溶液を加熱し7日間還流させた。混合物を、濾過し、水（100ml x 2）、飽和NaHCO3（100ml）および飽和NcCl（100ml）で洗浄し、Na2SO4で乾燥させた。濾過し、溶媒を除去した後、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（EtOAc/ヘキサン = 4:1）で精製して3.5-ジメトキシ-4-イソプロピル安息香酸メチル（化合物3）(0.69g、66％)を得、EtOH/ヘキサンから結晶化させた。NMR (100 MHz, CDCl3) δ1.61 (d, 6H, J1’,2’=7.1 Hz, H-2’)、3.66 (hept, 1H, H-1’)、3.88 (s, 6H, OCH3)、3.94 (s, 3H, COOCH3)、7.25 (s, 2H, H-2,6)。
【００４２】
(iii) 3,5-ジメトキシ-4-イソプロピル-ベンジルアルコール（スキーム１中の化合物4）（手順B）
粗生成物（シロップ）をEtOAc/ヘキサンから結晶化させて化合物4（収率85%）を得た。NMR (100 MHz, CDCl3) δ 1.31 (d, 6H, J1’,2’=7.1 Hz, H-2’)、3.61 (hept, 1H, H-1’)、3.84 (s, 6H, OCH3)、4.68 (s, 1H, H-OH)、6.60 (s, 2H, H-2,6)。
【００４３】
(iv) 3,5-ジメトキシ-4-イソプロピル-ベンズアルデヒド（スキーム１中の化合物5）（手順C）
得られた残留物をEtOHから結晶化させ、化合物5を得た（収率80%）。NMR (100 MHz, CDCl3) δ 1.31 (d, 6H, J1’,2’=7.1 Hz, H-2’)、3.61 (hept, 1H, H-1’)、3.84 (s, 6H, OCH3)、4.68 (s, 1H, H-OH)、6.60 (s, 2H, H-2,6)。
【００４４】
(v) ベンジルホスン酸ジエチルエステル（スキーム1中の化合物7）
亜リン酸トリエチル (3.2ml、1.5当量)を、触媒量のヨウ化テトラブチルアンモニウムを含有する臭化ベンジル(2.11g)に添加し、該混合物を終夜110-130℃に加熱した。過剰の亜リン酸トリエチルを減圧下（15mmHg）で1時間100℃に溶液を加熱することにより除去し、定量的に化合物7を得た。NMR (100 MHz, CDCl3) δ 1.21 (t, 6H, J2’,1’=7.1 Hz, H-2’)、3.02 (s, 1H, H-α)、3.24 (s, 1H, H-β)、3.98 (quint, 2H, H-1’)、7.27 (s, 5H, H-ArH)。
【００４５】
(vi) 3,5-ジメトキシ-4-イソプロピル-トランス-スチルベン（スキーム１中の化合物8）（手順D）
生成物をカラムクロマトグラフィー（Et2O/ヘキサン=1:8）により精製し、エーテル／ヘキサンから結晶化させて純粋な化合物8（収率70%）を得た。融点:64-66℃。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.28 (d, 6H, JMe,CH=7.0 Hz, CH3)、3.58 (hept, 1H, -CH-)、3.85 (s, 6H, H-OCH3)、6.69 (s, 2H, H-2,6)、7.05 (s, 2H, =CH)、7.25 (m, 1H, H-4’)、7.35 (m, 2H, H-3’,5’)、7.25 (m, H-2’,6’)。
【００４６】
(vii) 3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピル-トランス-スチルベン（スキーム１中の化合物9）（手順E）
生成物をカラムクロマトグラフィー（EtOAc/ヘキサン）により精製し、所望の化合物9を得た（収率95%）。融点:140-142℃。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.38 (d, 6H, Jα,β=7.3 Hz, CH3)、3.46 (hept, 1H, -CH-)、4.80 (s, 2H, H-OH)、6.50 (s, 2H, H-2,6)、6.92 (d, 1H, JA,B=16.2 Hz, H- =CHA)、6.97 (d, 1H, H- =CHB)、7.25 (m, 1H, H-4’)、7.34 (m, 2H, H-3’,5’)、7.52 (m, 2H, H-2’,6’)。
【００４７】
(d) 4-置換3,5-ジヒドロキシ-トランス-スチルベンおよびその誘導体生成のためのスキーム2の使用
【００４８】
(viii) 3,5-ジメトキシ-4-ブロモ-安息香酸メチル（スキーム2中の化合物11）（手順A）
粗生成物(95%)をEtOH/ヘキサンから結晶化させた。融点: 119-124℃。NMR (100 MHz, CDCl3) δ 3.96 (s, 3H, COOCH3), 3.99 (s, 6H, OCH3)、7.28 (s, 2H, H-2,6)。
【００４９】
(ix) 3,5-ジメトキシ-4-ブロモ-ベンジルアルコール（スキーム2中の化合物12）（手順B）
粗生成物（収率85%）をEtOH/ヘキサンから結晶化させた。融点:84-95℃。NMR (100 MHz, CDCl3) δ 1.95 (s, 1H, OH)、3.93 (s, 6H, OCH3)、4.69 (s, 1H, CH2)、6.61 (s, 2H, H-2,6)。
【００５０】
(x) 3,5-ジメトキシ-4-ブロモ-ベンズアルデヒド（スキーム2中の化合物13）（手順C）
粗生成物（75%）をEtOH/ヘキサンから結晶化させた。融点:110-113℃。NMR (100 MHz, CDCl3) δ 4.02 (s, 6H, OCH3)、7.11 (s, 2H, H-2,6)、9.97 (s, 1H, CHO)。
【００５１】
(xi) 3,5-ジメトキシ-4-ブロモ-トランス-スチルベン（スキーム2中の化合物14）（手順D）
粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／エーテル=8:1）により70%に精製し、エーテル／ヘキサンから結晶化させた。融点: 149-152℃。NMR (400 MHz, CDCl3) δ3.96 (s, 6H, 2 x OCH3)、6.72 (s, 2H, H-2,6)、7.06 (d, 1H, JA,B=16.2 Hz, H- =CHA)、7.11 (d, 1H, H- =CHB)、7.28 (m, 1H, H-4’)、7.37 (m, 2H, H-3’,5’)、7.55 (m, 2H, H-2’,6’)。
【００５２】
(xii) 4-ブロモ-3,5-ヒドロキシ-トランス-スチルベン（スキーム2中の化合物16）（手順E）
粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／エーテル=4:1）により90%に精製し、エーテル／ヘキサンから結晶化させた。融点:150-152℃。NMR (100 MHz, CDCl3) δ5.39 (s, 2H, 2 x OH)、6.81 (s, 2H, ArH-2,6)、7.06 (d, 1H, JA,B=16.2 Hz, H- =CHA)、7.11 (d, 1H, H- =CHB)、7.28 (m, 1H, H-4’)、7.37 (m, 2H, H-3’,5’)、7.55 (m, 2H, H-2’,6’)。
【００５３】
(xiii) 3,5-ジメトキシ-4-エチル-トランス-スチルベン（スキーム2中の化合物15a）
t-ブチルLi (1.1 ml、THF中に1M)を、-78℃にて3,5-ジメトキシ-4-ブロモ-トランス-スチルベン(0.53g)を含有するTHF溶液（10ml）中に添加した。添加後、溶液をゆっくりと加温して30分間還流させ、その後-78℃まで冷却した。ヨウ化エチル（1.2当量、0.265ml）を-78℃にて溶液に添加した。反応終了後、水（10ml）を混合物中に滴下により添加し、THFを減圧下で蒸発させた。混合物をCH2Cl2（5ml x 3）で抽出し、併せた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で除去した。生成物混合物をカラムクロマトグラフィー（エーテル／石油エーテル=1:8）で精製し、3,5-ジメトキシ-4-エチル-トランス-スチルベン (14a)（70%）と、水分が原因で3,5-ジメトキシ-トランス-スチルベン（30%）とを得た。融点:70-73℃。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.12 (t, 6H, JMe,HCll=7.2 Hz, CH3)、2.70 (q, 2H, -CH2-)、3.91 (s, 6H, OCH3)、6.74 (s, 2H, H-2,6)、7.07 (s, 2H, 2 x =CH-)、7.26 (m, 1H, H-4’)、7.36 (m, 2H, H-3’,5’)、7.52 (m, 2H, H-2’,6’)。
【００５４】
(xiv) 3,5-ジヒドロキシ-4-エチル-トランス-スチルベン（スキーム2中の化合物16a）(手順E)
カラムクロマトグラフィー（エーテル／石油エーテル=8:1）の後、生成物を91%の収率で得、エーテル／ヘキサンから結晶化させた。融点:143-146℃。NMR (100 MHz, CDCl3) δ 1.22 (t, 6H, Jα,β=7.5 Hz, 2 x CH3)、2.70 (q, 2H, CH2)、4.81 (s, 2H, 2 x OH)、6.60 (s, 2H, H-2,6)、7.00 (s, 2H, 2 x =CH-)、7.26 (m, 1H, H-4’)、7.36 (m, 2H, H-3’,5’)、7.52 (m, 2H, H-2’,6’)。
【００５５】
(xv) 3,5-ジメトキシ-4-ミリスチル-トランス-スチルベン（スキーム2中の化合物15b）
手順と後処理は化合物14と同じ[上記(xi)参照]。融点: 68-70℃。NMR (100 MHz, CDCl3) δ 0.91 (m, 6H, 2 x CH3)、1.29 (m, 22H, 10 x CH2)、2.65 (m, 2H, CH2)、3.90 (s, 6H, 2 x OCH3)、6.73 (s, 2H, H-2,6)、7.10 (s, 2H, H- =CH)、7.26 (m, 1H, H-4’)、7.36 (m, 2H, H-3’,5’)、7.52 (m, 2H, H-2’,6’)。
【００５６】
(xvi) 3,5-ジヒドロキシ-4-ミリスチル-トランス-スチルベン（スキーム2中の化合物16b）（手順E）
カラムクロマトグラフィー（エーテル／石油エーテル=8:1）の後、生成物を91%の収率で得、エーテル／ヘキサンから結晶化させた。融点:125-128℃。NMR (100 MHz, CDCl3) δ 0.95 (m, 6H, 2 x CH3)、1.30 (m, 22H, 10 x CH2)、2.65 (m, 2H, CH2)、4.80 (s, 2H, 2 x OH)、6.60 (s, 2H, H-2,6)、7.00 (s, 2H, 2 x =CH-)、7.26 (m, 1H, H-4’)、7.36 (m, 2H, H-3’,5’)、7.52 (m, 2H, H-2’,6’)。
【００５７】
(e) 追加的なヒドロキシ-トランス-スチルベン誘導体の例
【００５８】
(xvii) 3,5-ジ-アセトキシ-4-イソプロピル-トランス-スチルベン（手順E）
所望の生成物を、手順Fに従って3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピル-トランス-スチルベンから定量的な収率で得、エーテル／ヘキサンから結晶化させた。融点:125-128℃。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.25, 1.27 (s, 6H, 2 x CH3)、2.35 (s, 6H, 2 x COCH3)、3.08 (heptet, 1H, CH)、6.99, 7.02 (s, 2H, H-2,6)、7.06 (s, 2H, CH=CH)、7.26 (m, 1H, H-4’)、7.36 (m, 2H, H-3’,5’)、7.52 (m, 2H, H-2’,6’)。
【００５９】
(xviii) 3,5-ジ-クロロアセトキシ-4-イソプロピル-トランス-スチルベン
トリエチルアミン（各OH基に対して2当量）を、エーテル(5ml)中の3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピル-トランス-スチルベン(143mg)とクロロ酢酸無水物（4当量）との混合物に室温で添加し、終夜静置した。溶媒の蒸発後に生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（EtOAc／ヘキサン=1:8）により精製して純粋な生成物を得、エーテル／ヘキサンから結晶化させた（167mg、72%）。融点:83-85℃。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.26, 1.33 (s, 6H, 2 x CH3)、3.08 (hept, 1H, CH)、4.39 (s, 4H, ClCH2CO)、6.99, 7.02 (s, 2H, H-2,6)、7.06 (s, 2H, CH=CH)、7.26 (m, 1H, H-4’)、7.36 (m, 2H, H-3’,5’)、7.52 (m, 2H, H-2’,6’)。
【００６０】
(xix) 3,4’,5-トリ-アセトキシ-トランス-スチルベン（手順E）
手順Fに従って、所望の生成物を3,4’,5-トリヒドロキシ-トランス-スチルベンから定量的に得た（収率100%）。融点:113-116℃。NMR (400 MHz, CDCl3) δ2.30-2.35 (s, 9H, 3 x COCH3)、6.82 (t, 1H, J4,2=J4,6=2.5 Hz, H-4)、6.99 (d, 1H, JA,B=16.2 Hz, =CHA)、7.04 (d, 1H, =CHB)、7.09 (m, 1H, HAA’-3’,5’)、7.12 (d, 1H, H-2,6)、7.49 (m, 1H, HBB’-2’.6’)。
【００６１】
(xx) 3,4’,5-トリ-アセトキシ-トランス-スチルベンエポキシド
m-クロロ過安息香酸（1.2当量）を、0℃にて3,4’,5-トリ-アセトキシ-トランス-スチルベン(24mg)を含有するCH2Cl2中に、TLC上で出発物質が消失するまで（〜3時間）添加した。その後、この溶液を水（1ml x 2）、飽和NaHCO3(1ml)、飽和NaCl（ml）で洗浄し、MgSO4で乾燥させた。濾過し、溶媒を除去した後、シロップ状物をシリカカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／エーテル＝8:1）により精製して純粋な化合物を得、エーテル／ヘキサンから結晶化させた(16mg、64％)。融点:133-137℃。NMR (400 MHz, CDCl3) δ2.29-2.31 (s, 9H, 3 x COCH3)、3.82 (q, 2H, JA,B=1.8 Hz, CHA-CHB)、6.89 (t, 1H, J4,2=J4,6=2.1 Hz, H-4)、6.97 (dd, 2H, H-2,6)、7.10 (AA’BB’のAA’, 1H, HAA’-3’,5’)、7.34 (AA’BB’のBB’, 1H, HBB’-2’.6’)。
【００６２】
(xxi) 3,4’,5-トリメトキシ-トランス-スチルベン（手順A）
生成物をシリカカラムクロマトグラフィー（EtOAc／ヘキサン=1:8）により精製して純粋な生成物を得て（収率〜100％）、エーテル／ヘキサンから結晶化させた。融点:51-54℃。NMR (400 MHz, CDCl3) δ3.83 (s, 9H, 3 x OCH3)、6.38 (t, 1H, J4,3=J4,5=4.6 Hz, H-4)、6.65 (d, 2H, H-3,5)、6.88-6.91 (AA’BB’のAA’, 2H, H-2’,6’)、6.91 (d, 1H, JA,B=16.1 Hz, =CHA)、7.04 (d, 1H, H- =CHB)、7.43-7.46 (AA’BB’のBB’, 2H, H-3’,5’)。
【００６３】
(xxii) 3,4-メチレンオキシ-トランス-スチルベン（手順D）
手順Dを用いて、3,4-メチレンオキシベンズアルデヒドから設計化合物を合成した。得られたシロップ状物をシリカカラムクロマトグラフィー（エーテル／ヘキサン＝1:8）により精製して純粋な生成物を得て、エーテル／ヘキサンから結晶化した（75％）。融点:89-91℃。NMR (400 MHz, CDCl3) δ5.99 (s, 2H, -CH2-)、6.80 (d, 1H, J5,6=8.1 Hz, H-5)、6.94 (d, 1H, JAB=16.3 Hz, =CHA)、6.95 (dd, 1H, J6,2=0.4 Hz, H-6)、7.03 (d, 1H, =CHB)、7.08 (d, 1H, H-2)、7.24 (m, 1H, H-4’)、7.34 (m, 2H, H-3’,5’)、7.48 (m, 2H, H-2’,6’)。
【００６４】
実施例２  本発明の化合物の製剤
ａ．軟膏製剤
0004880847.tif 000007
【００６５】
手順
白色ワセリンと鉱油を秤量して65℃に加熱し、均一に混合する。混合物を攪拌しながら50〜55℃に冷却する。指定の活性成分をエタノールに溶解して混練し、攪拌しながら上記混合物に加える。軟膏を室温まで冷却する。
【００６６】
ｂ．ローション製剤
0004880847.tif 000008
【００６７】
手順
ミリスチン酸イソプロピルの要求量の約90％を60℃まで加熱する。攪拌しながらモノステアリン酸アルミニウムを加え、加熱を維持することでモノステアリン酸アルミニウムを溶解させる。エタノールに溶解した指定の活性成分を残りのミリスチン酸イソプロピルに加える。指定の活性成分溶液を、予め45℃に冷却したモノステアリン酸アルミニウムのミリスチン酸イソプロピル濃厚溶液に攪拌しながら加える。ローションを攪拌しながら室温に冷却する。
【００６８】
ｃ．ゲル製剤
0004880847.tif 000009
【００６９】
手順
鉱油の一部(約90％)を適当な容器に加える。約80℃に加熱する。ポリエチレン(A-C8)に鉱油を加える。混合物をゆっくり攪拌しながらポリエチレンがすべて溶解するまで加温する。容器を10〜15℃の冷却浴に入れることで上記混合物をすばやく冷却し、再び通常の速度で攪拌する。容器の内容物が約45℃に達したら、指定の活性成分をエタノールに溶解した混合物を、上記のポリマー溶液に加える。混合物をゆっくり攪拌しながら空冷する。こうしてゲル形態になる。
【００７０】
ｄ．クリーム
0004880847.tif 000010
【００７１】
手順
指定の活性成分を秤量し、100μlのエタノールに溶解して、Glaxalベースクリームと室温で十分混合する。
【００７２】
実施例３  抗乾癬剤としての使用
本発明の化合物の抗乾癬活性の測定は、in vivoでの試験化合物の効果の測定によって行うことができる。なぜなら、その病気に適した動物モデルが存在しないからである。化合物をボランティアで試験した。これらの試験において、本発明の代表的な化合物、すなわち3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンが乾癬症状の軽減または排除に有効である。
【００７３】
本発明の組成物は、抗乾癬量の式Ｉまたは式IIで表される化合物を、適当な製薬上の担体とともに含有する。抗乾癬量は、乾癬症状、すなわち乾癬病巣の緩解をもたらすのに必要な化合物の量として定義される。治療の通常の経過では、活性成分を許容されるビヒクルに混合することにより、幹部への局所投与用の組成物を形成するか、あるいは経口投与に適した形態(例えば錠剤、カプセル剤、丸剤など)にする。局所適用のための組成物は、例えば、軟膏、クリーム、ローション、液剤、懸濁液、エーロゾル剤、ゲル、シャンプー、石鹸または散布剤でありうる。そのような組成物は、通常、標準的な担体、例えば製薬上許容される植物油および寒天、ガムならびにワセリンをベースとする。本発明の組成物のその他の成分は、特定の製剤に必要とされる、保存剤、着色剤、着香剤、甘味剤、増粘剤、懸濁剤、分散剤、乳化剤、膨張剤、安定剤および緩衝剤でありうる。そのような組成物は、活性成分を0.01〜10重量％含有するように処方される。
【００７４】
経口投与用の組成物としては、上記の投薬単位の他に、例えば、ロゼンジ、粉剤、顆粒剤、液剤、懸濁液またはエリキシル剤が挙げられうる。
【００７５】
必要とされる日用量は、１回で投与しても分割して投与してもよい。もちろん、投与すべき正確な用量は、使用される特定の化合物、被験者の年齢および体重、ならびに患者の個々の応答に依存する。動物試験および公知の活性成分との比較に基づいて、式Ｉで表される化合物の、乾癬、菌状息肉腫および白斑を治療するための局所投与にとって典型的な用量は、１日当たり0.01〜５mg/kgの範囲であると考えられる。この日用量は、１回で投与しても分割して投与してもよい。
【００７６】
下記の実施例は、本発明の例証となる化合物および組成物、およびその調製のために案出された方法を詳細に記述するものである。本開示の目的および意図から逸脱することなく、材料および方法の双方について多くの変更修正を行いうることは当業者には明白であろう。
【００７７】
3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンの１％クリームを、ボランティアにおける試験のために調製した。長期にわたる乾癬歴をもつボランティア２人を、試験のために採用した。両方とも試験開始前１ヶ月間は何ら投薬治療を受けていなかった。
【００７８】
ボランティア１は、15年以上頭皮乾癬に罹患している48歳の男性である。ボランティア１は、病気の過程で、様々な従来の薬物および治療法(例えばステロイド、光線療法その他の薬物)を使用していた。これらの治療はすべて、この乾癬に効果がないか、または非常に限られた効果しかなかった。
【００７９】
ボランティア２は、背中に斑がある24歳の女性である。ボランティア２はヒドロコルチゾンを以前使用していたが、副作用のためにその使用を停止した。
【００８０】
ボランティアを、患部の上面に１日に１回クリームを塗布することによって１日に１回処置した。対照としてベースクリームを用いた。比較可能な身体領域を2箇所選択し、一方を対照で処置し、他方を本発明の化合物を含むクリームで処置した。本発明のクリームには、１％の3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンと、実施例2(d)に記載したクリームにおけるその他の成分とが含まれていた。対照クリームは、3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンを含まないこと以外は同一であった。
【００８１】
各クリームを治療すべき領域の皮膚に、これ以上擦り込むことができなくなるまで擦り込んだ。
【００８２】
結果：本発明の化合物は、ボランティアにおいて、非処置領域と比較した場合、ならびに処置の前後で比較した場合、顕著な効能を示した。
【００８３】
ボランティア１の場合、本発明の化合物を塗布した領域は、治療の３日後に炎症の改善と増殖細胞の減少を示し始め、7日間で完全に排除された。対照クリームで処置した領域の症状には何ら変化は生じなかった。
【００８４】
ボランティア２の場合、処置の３日後に目に見える炎症の改善と、増殖細胞の排除が観察され、乾癬の有意な改善が処置後７日以内に観察された。
【００８５】
実施例４  プロテインキナーゼ阻害剤としての使用
本発明の化合物の特異的なプロテインキナーゼ活性は、下記のin vitro試験で活性であるという事実によって示される。
【００８６】
プロテインキナーゼ阻害試験
DNA-PKを、Chanら(1996)にしたがってヒト胎盤から精製し、阻害活性のin vitroアッセイを下記の概要にしたがって行った。
【００８７】
標準プロトコルとして、それぞれを100％DMSO中で調製し、アッセイを下記の条件で行った。
【００８８】
５μlのプロテインキナーゼ溶液と、５μlの化合物試験溶液と、５μlの基質溶液と、５μlのアッセイ希釈バッファー(20mMのMOPS、pH7.2、25mMのβグリセロリン酸塩、20mMのMgCl2、5mMのEGTA、2mMのEDTA、1mMのDTT、1mMのバナジン酸ナトリウム)との混合物を96ウェルマイクロタイタープレートに入れた。５μlの放射能標識ATP溶液(１μCiの[γ32P]ATPを含む250μlのATP)を、反応混合物に加えることによって反応を開始させ、プレートを室温で15分間インキュベートした。10μlの反応混合物を、ろ紙ディスクを含む96ウェルプレート上にスポットすることによって反応を停止させた。ろ紙プレートを１％リン酸で６回洗浄した後、プレートを送風乾燥し、シンチレーション液を各ウェルに加えた。次いでプレートをシンチレーションカウンターでカウントした。IC50値を３個１組のサンプルから計算した。表１に３つの代表的な化合物：3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピル-trans-スチルベンエポキシド(EP)、3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピル-trans-スチルベン(CST)および3,4',5-トリアセトキシ-trans-スチルベン(STA)の阻害活性を示す。
【００８９】
【表１】
0004880847.tif 000011
＊Ｎｄ＝測定されなかった。
【００９０】
表１に示した活性データから分かるように、本発明の化合物は、有益なタンパク質キナーゼ阻害特性を有する。
【００９１】
実施例５  抗炎症剤としての使用
3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンを、結晶および化学誘引物質による好中球活性化の阻害活性について試験した。好中球活性化は炎症において主要な役割を果たす。
【００９２】
試験は、既に確立されたプロトコルを用いて行った(Tudan.C. 1999, Bichem Pharmacol 58:1869-1880)。結果を図１および２に示す。
【００９３】
図１は、化合物が結晶によって引き起こされる好中球活性化の有意な阻害を示すことを示すものである。
【００９４】
図２は、化合物がfMLPによって引き起こされる好中球活性化の有意な阻害を示すことを示すものである。
【００９５】
参考文献
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【００９６】
本発明を好ましい実施形態に関連して開示したが、当業者には、示された特定の実施形態を本発明の範囲内に含めたままで変更修正し得ること、およびかかる実施形態の詳細が本発明を限定するものと解釈されないことが理解されるだろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は結晶により引き起こされる好中球活性化に対する3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンの効果を示すグラフである。
【図２】  図２はfMLPにより引き起こされる好中球活性化に対する3,5-ジヒドロキシ-4-イソプロピルスチルベンの効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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