(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性系中の水溶性または水分散性のポリマーの混合物であって、水性系中の水溶性または水分散性のポリマーが、少なくとも一部がキラルモノマーから形成されるオリゴマーまたはコオリゴマーで少なくとも部分的にグラフトされた水溶性または水分散性のポリマーの混合物（Ａ）、および水性系中の水溶性または水分散性のポリマーの混合物であって、水性系中の水溶性または水分散性のポリマーが、混合物（Ａ）のポリマーにおける前記キラルモノマーのキラリティと相対するキラリティをもつキラルモノマーから少なくとも部分的に形成されるオリゴマーまたはコオリゴマーで少なくとも部分的にグラフトされた水溶性または水分散性のポリマーの混合物（Ｂ）を含み、混合物（Ａ）からのポリマー上のグラフト部分が混合物（Ｂ）からのグラフト部分との物理的相互作用を生じさせることを特徴とするヒドロゲル組成物。
【請求項２】
混合物（Ａ）または（Ｂ）の前記オリゴマーまたはコオリゴマーが、Ｄ−乳酸のホモオリゴマー、Ｄ−ラクチド／εカプロラクトンのランダムコオリゴマー、Ｄ−リッチポリ（乳酸）のジブロックおよびトリブロック混合物、ポリ（Ｄ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（エチレングリコール）／ポリ（乳酸）のジブロックおよびトリブロックコオリゴマー、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（α−メチル−α−エチル−β−プロピオラクトン）、ポリ（第３級ブチルエチレンオキシド）、ポリ（第３級ブチルエチレンスルフィド）、ポリ［β−（１，１−ジクロロプロピル）−β−プロピオラクトン］、ポリ（α−ベンジルグルタメート）、ポリ（メチルベンジルメタクリレート）、ポリ（ビニル−Ｎ−ブチルピリジウムブロミド）、ポリ（スチレンスルホン酸ナトリウム）、ポリ（第３級ブチルチイレン）、ポリ（α−メチルベンジルメタクリレート）、ポリ［β−（１，１−ジクロロエチル）−β−プロピオラクトン］、およびそれらの混合物を含む群から選択され、混合物（Ｂ）のモノマーは、混合物（Ａ）のモノマーの光学異性体であることを特徴とする、請求項１に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項３】
混合物（Ａ）のポリマーにおけるグラフト部分とポリマーとが結合する結合部分が、混合物（Ｂ）のポリマーにおけるグラフト部分とポリマーとが結合する結合部分とは化学的に異なっていることを特徴とする、請求項１または２に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項４】
混合物（Ａ）または（Ｂ）における前記結合部分の１つがヒドロキシル基であり、別の基における結合部分がカルボキシル基であることを特徴とする、請求項３に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項５】
オリゴマー基が平行性ステレオコンプレックスを形成する二官能基オリゴマーに由来することを特徴とする、請求項３または４に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項６】
水溶性または水分散性ポリマーが、デキストラン、スターチ、セルロース誘導体、アルブミン、リゾチーム、ポリ（アミノ酸）、ポリ（リジン）ホモポリマーおよびポリ（リジン）コポリマー、ポリ（グルタミン酸）ホモポリマーおよびポリ（グルタミン酸）コポリマー、ポリ（（メタ）アクリレート）／（（メタ）アクリルアミド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（エチレングリコール）、水溶性ポリホスファゼンまたはそれらの混合物から成る群から選択されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項７】
水溶性または水分散性ポリマーとオリゴマーまたはコオリゴマーとの間に結合基があり、結合基が加水分解可能な基を含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項８】
オリゴマー基またはコオリゴマー基の平均鎖長が、水中においてポリマーを可溶性または分散性にするために２５以下であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項９】
オリゴマー基またはコオリゴマー基による水分散性ポリマーの置換の平均度合いが、水溶性または水分散性のポリマーの物理的相互作用によって架橋が形成されるネットワークを得るために２以上であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項１０】
オリゴマー基またはコオリゴマー基による水溶性または水分散性ポリマーの置換の平均度合いが、水中において前記ポリマー構造を可溶性または分散性にするために２５以下であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項１１】
オリゴマー基またはコオリゴマー基による水分散性ポリマーの置換の平均度合いが３〜２５であることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項１２】
一方の混合物のオリゴマー基またはコオリゴマー基がポリ（Ｄ−乳酸）を含み、他方の混合物のオリゴマー基またはコオリゴマー基がポリ（Ｌ−乳酸）を含み、共にその平均鎖長が７〜１５のモノマーであることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項１３】
オリゴマー基またはコオリゴマー基のすべてが同等の長さを有することを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項１４】
オリゴマー基またはコオリゴマー基がグラフトであることを特徴とする請求項１〜１３のいずれか１項に記載のヒドロゲル組成物。
【請求項１５】
グラフト化された水溶性または水分散性ポリマーの２つの混合物を調製する工程を含むヒドロゲル組成物の調製方法において、
ａ）適切な開始剤の存在下または非存在下においてモノマーを重合する工程であって、一方の混合物のモノマーが他方の混合物のモノマーの光学異性体であるモノマーを重合する工程と；
ｂ）前記ａ）工程の産物を適切なカップリング化合物と反応する工程と；
ｃ）前記ｂ）工程の産物を水溶性または水分散性ポリマーと反応する工程とを含む２つの混合物の調製；
およびｄ）前記混合物を混合することとを含むことを特徴とするヒドロゲル組成物の調製方法。
【請求項１６】
適切な開始剤が第１級または第２級ヒドロキシル基を含有することを特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
有効成分が、工程ｃ）の前またその中で添加されることを特徴とする、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
オリゴマーまたはコオリゴマーがポリマー鎖に接着し、このようなポリマー鎖に物理的に結合する、オリゴマーまたはコオリゴマーにおける、モノマーの２つの相対する光学異性体形態の、請求項１５におけるヒドロゲル組成物の調製方法における使用。
【請求項１９】
請求項１〜１４のいずれか１項で定義したヒドロゲル組成物の埋め込みにおける使用。
【請求項２０】
請求項１〜１４のいずれか１項で定義されたヒドロゲル組成物をｉｎ ｖｉｖｏで形成するための、請求項１〜１４のいずれかで定義された混合物（Ａ）および（Ｂ）のｅｘ ｖｉｖｏにおける使用。
【請求項２１】
前の請求項１〜１４のいずれか１項で定義されたヒドロゲル組成物をミクロスフェアの形態で調製する方法であって、放出可能な化合物の存在下または非存在下において、２つの前記水溶性または水分散性ポリマーをそれらが不適合であるように選択することによって、二相系を形成することを含み、該二相系から、前記ヒドロゲル組成物が形成されることを特徴とする、ヒドロゲル組成物を調製する方法。
【請求項２２】
請求項１〜１４のいずれか１項で定義されたヒドロゲル組成物をミクロスフェアの形態で調製する方法であって、放出可能な化合物の存在下または非存在下において、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の少なくとも１つの水溶性ポリマーをスプレー乾燥することを含むことを特徴とする、ヒドロゲル組成物を調製する方法。
【請求項２３】
注射可能である、請求項２１または２２に記載の方法で入手可能なミクロスフェア。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、少なくともポリマーの一部が少なくとも２つの基を含有し、基が相互作用することができる、水性系における水溶性ポリマーまたは水分散性ポリマーの混合物から構成されるヒドロゲル組成物に関する。さらに、本発明は、かかるヒドロゲルを調製するための方法、およびゲル形成に関するオリゴマー基またはコオリゴマー基の使用に関する。
【０００２】
分子生物学およびバイオテクノロジーの分野における急速な進歩によって、多数の薬学上興味深い生成物を大量に生産することが可能になってきている。たとえば、癌のような生命を脅かすような疾患、およびウイルス、細菌並びに寄生虫による疾患の一部の治療に；たとえば糖尿病の治療に；たとえば予防目的並びに避妊目的のためのワクチンに薬剤として、薬学上活性のあるペプチドおよびタンパク質を好適に使用することができる。特に、このようなタイプの薬剤の特殊化された生物活性は、他のタイプの調剤に対して途方もない利点を提供する。
【０００３】
急速な進歩についてはたとえば、米国では５００を超える産物が研究中である一方、バイオテクノロジーで得られた約２７５の産物がフェーズＩＶの試験中であることが報告されている（たとえばSoeteeboek and Verheggen, Pharm. Weekblad 130: 670-675(1995); R. P. Evans and R. D. Sindelar, 'Biotechnology products in the pipeline' In Pjarmaceutical Biotechnology [D.J.A Crommelin ans R. D. Sindelar, eds] , Harword Academic Publishers, 337-355(1997)を参照のこと）。
【０００４】
薬学の観点から極めて興味深いと見なされる（組換え）タンパク質の例は、インターロイキン、インターフェロン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）のようなサイトカイン、インスリン、ワクチンに使用するためのタンパク質、および増殖因子である。
【０００５】
タンパク質およびペプチドを含むタンパク質様産物は、本明細書では以下、産物の群をタンパク質薬剤というが、その性質のために、少なくとも効果的には経口で投与することができない。特に、消化管内の酸性環境およびタンパク質分解酵素の存在のために、このような産物は消化管内で急速に分解する傾向がある。
【０００６】
さらに、タンパク質薬剤は、その大きさ、および一般に極性特性のために、高い程度では内皮および上皮のバリアを通過することができない。
【０００７】
このような理由で、タンパク質薬剤は、たとえば注射によって、非経口的に全身にもたらさなければならない。しかしながら、このような産物の薬物動態の特徴は、産物の注射それ自体が頻繁な投与を必要とするようなものである。タンパク質様物質が数分以内に循環血中から除かれるのは既知の事実である。
【０００８】
言い換えれば、タンパク質薬剤は、化学的および／または物理的に不安定であり、かつヒトまたは動物の体内で一般に短い半減期を有するので、所望の治療効果を有するためには、タンパク質薬剤は１日に複数回の注射または連続的な注入が要求される。このようなタンパク質薬剤が必要な患者にとってこのことが不都合なのは明らかである。その上、このタイプの適用は入院を要求することが多く、論理的に不利益を有する。
【０００９】
さらに、たとえば癌の治療に現在使用されているサイトカインのような、少なくとも特定の部類の医薬用タンパク質については、治療効率は、たとえば、腫瘍内または腫瘍周辺のような有効な送達に強く依存していると思われる。かかる場合、延長された時間の間、その活性が必要である部位にタンパク質薬剤を向けるべきである。
【００１０】
したがって、制御された放出のための能力を有する送達系に対するニーズがある。当該技術では、生分解可能なポリマーのマトリックスから成る送達系（たとえば、ポリ［ＤＬ−ラクチド−コグリコリド］、たとえば、J. L. ClelandのProtein Delivery, Physical Systems, Pharmaceutical Biotechnology, vol 10 [L. M. Dabders and R. W. Hendren eds][Plenum Press, 1997]中の１〜３９ページ『生分解可能なミクロスフェアからのタンパク質の送達』またはその中にマトリックスタンパク質が存在し、それから徐々に放出される、L. Brannon-PeppasのInt. J. Pharm., 116中の１〜９ページ『制御された薬剤送達における生分解性ミクロ粒子およびナノ粒子の使用の最近の進歩』を参照のこと）が提案されている。
【００１１】
たとえば、ミクロスフェアにおいてかかる生分解性ポリマーを使用することによって送達系を得ることができる。しかしながら、ポリ（乳酸）またはポリ（乳酸コグリコール酸）に基づくかかる系のｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける適用は、いくつかの固有の欠点を有する。第１に、ミクロスフェアにタンパク質を封入するには有機溶媒を使用しなければならない。第２に、分解の間に酸性産物が形成され、それはｐＨの低下の結果生じる可能性がある。低いｐＨおよび有機溶媒の双方共、タンパク質の安定性に影響を及ぼしうる。その上、これらの系からのタンパク質の放出を制御するのは困難であると思われ、突発的放出を招く可能性がある。
【００１２】
生分解性ポリマーから成るヒドロゲル系はかかる難点を克服するかも知れない。親水性ポリマーの架橋はヒドロゲルを含有することができる。たとえば、グルタールアルデヒド、ジイソシアネートおよびエピクロロヒドリンのような二官能基剤のような、タンパク質と適合しない、強烈で毒性のある架橋剤を用いることによって架橋を達成することができる  （薬剤送達のための生分解性ヒドロゲル[K. Park, W. S. W. Shalaby and H. Park eds、Technomic Publishing Co. Inc (1993)]の７５ページを参照のこと）。それらは、このようなゲルが治療用に適用される前にゲルから抽出しなければならない毒性化合物である。さらに、これらの化合物は、ヒドロゲルマトリックスに存在する、たとえば、タンパク質のイプシロンアミン残基またはリジン側鎖と反応することもできる。このような反応はタンパク質の生物活性を結果的に失うまたは低減する可能性があるので、このことは極めて望ましくない。
【００１３】
ＰＣＴ／ＮＬ第９７／００３７４号は、分解特性を改善するというこの問題の１つの解決を提供する送達系を記載している。前記ＰＣＴ出願に記載されているヒドロゲルは、生分解性ポリマーに基づいている。さらに詳しくは、このような生分解性ポリマーの鎖は結合基を介して分子間で架橋されており、ヒドロゲルを共に保持するこのような結合基は生理的条件下で加水分解可能であり、それはヒドロゲルの分解に影響する。
【００１４】
このような加水分解可能なヒドロゲルは、増強された放出特性を持ったゲルを提供するが、欠点もいくつか残っている。たとえば、デキストラン（の誘導体）の重合には、ｉｎ  ｖｉｖｏでの適用に本質的に適合しないペルオキシジサルフェートおよびＴＥＭＥＤを開始剤／促進剤として必要とする。さらに、開始剤の使用によってタンパク質のスルホキシドへの酸化を生じる。したがって、このような化合物を慎重に除くことが必要である。
【００１５】
放出系としてｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで適用することができる生分解性ヒドロゲルからなる放出送達系であって、架橋が共有結合ではないと言う意味において架橋は化学的性質ではないものを提供することが、本発明の目的である。したがって、かかる架橋は、化学結合の切断を必要としない。
【００１６】
上記で設定した要求を満たすヒドロゲル組成物を得るために、ポリマー鎖を改変するいくつかの方法が調べられ、本発明者は今や、キラリティの異なる元素、特に光学異性体である元素を含有するグラフトで親水性ポリマーを置換した場合、たとえばタンパク質薬剤のための、放出系としての適用に、特に、制御された放出系としての適用に優れた特性を有するゲル、すなわち架橋された構造が得られることを見い出した。
【００１７】
特定の理論に束縛されることを望まずに、このゲル化された構造の形成は、いわゆるステレオコンプレックスの構成要素間の相互作用に類似すると考えられるグラフトの相互作用によって生じると考えられている。このようなステレオコンプレックスは、特定のポリマーのラセミ混合物から形成されることが知られているラセミ結晶子である。たとえば、ポリ（乳酸）のステレオコンプレックスの融点は、両者の光学異性体結晶子の融点よりもかなり高いことが判っている（たとえばDe Jong et al., Macromolecules 31: 6397-6402, 1998を参照のこと）。
【００１８】
本発明に基づいて、ゲル構造のステレオコンプレックスは、オリゴ化されたモノマーが両者共親水性ポリマーに存在する、一方のキラリティを持つオリゴ化されたモノマーの相互作用と他方のキラリティを持つオリゴ化されたモノマーの相互作用の結果である。オリゴ化されたモノマーの基は、ポリマー鎖のいかなるところ、すなわちポリマー鎖の頭部または尾部に存在することができる。しかしながら、好ましくは、オリゴ化されたモノマー基はゲル構造を構成する別々のポリマー鎖上で側鎖またはグラフトとして存在する。明瞭にするために、本記載およびクレームでは、用語『グラフト』は、ポリマー主鎖の頭部および尾部におけるオリゴ化されたコモノマーを包含せず、ポリマー主鎖に組み入れられたかかるオリゴ化されたコモノマーのブロックも包含しない。
【００１９】
ゲルは、少なくとも２つの別々の系（Ａ）および（Ｂ）を混合することによって形成され、各系は、ポリマーがオリゴ化されているグラフトを有する、水溶性または水分散性ポリマーの溶液または分散液である。好ましくは１つの種類のキラルモノマー（たとえば、ＤまたはＬ乳酸）の重合によってグラフトは得られる。
【００２０】
したがって、本発明に基づいたヒドロゲル組成物は、水性系中の水溶性または水分散性のポリマーの混合物であって、水性系中の水溶性または水分散性のポリマーが、少なくとも一部がキラルモノマーから形成されるオリゴマーまたはコオリゴマーで少なくとも部分的にグラフトされた水溶性または水分散性のポリマーの混合物（Ａ）、および水性系中の水溶性または水分散性のポリマーの混合物であって、水性系中の水溶性または水分散性のポリマーが、混合物（Ａ）のポリマーにおける前記キラルモノマーのキラリティと相対するキラリティをもつキラルモノマーから少なくとも部分的に形成されるオリゴマーまたはコオリゴマーで少なくとも部分的にグラフトされた水溶性または水分散性のポリマーの混合物（Ｂ）を含み、混合物（Ａ）からのポリマー上のグラフト部分が混合物（Ｂ）からのグラフト部分との物理的相互作用を生じさせる。
【００２１】
系（Ａ）は、特定のキラリティのモノマーから形成されるグラフトと共に水溶性または水分散性のポリマーを含む。系（Ｂ）は、相対するキラリティのモノマー、すなわち系Ａで使用されたモノマーの光学異性体から形成される基と共に水溶性または水分散性のポリマーを含む。
【００２２】
任意に、オリゴ化された基に無作為に置かれたもう１つのモノマー（たとえばグリコール酸）が少ないモルパーセントで存在する。このコモノマーの存在は、たとえば、相対するキラリティのグラフトのような基と会合した複合体を形成するための相互作用を与えるグラフトのような基の能力を妨げるべきではない。
【００２３】
別の方法では、グラフトは、Ｘが非キラルモノマー（たとえば、ポリエチレングリコールブロック）から形成され、Ｙがキラルモノマー（たとえばポリ（ＤまたはＬ乳酸）ブロック）から形成されるＸ−Ｙのようなブロック様構造を含むコオリゴマーである。
【００２４】
本発明に基づいて、発明の水溶性または水分散性ポリマーを２以上混合することによってヒドロゲルを得ることができ、その際、ヒドロゲルは優れた放出特性を有し、たとえばタンパク質物質を容易に負荷し、有機溶媒を使うことなく調製することができる。
【００２５】
好ましくは、本明細書で以下『グラフト』というオリゴ化されたモノマーは生分解性である。グラフトは好ましくは、生分解性の結合を介してポリマーに結合する。放出系は全体として生分解性または生物適合性であることができる。
【００２６】
一方のキラリティのモノマーで形成されたグラフトと相対するキラリティのモノマーで形成されたグラフトが同一のポリマー鎖に存在する場合、所望の効果、すなわち、ステレオコンプレックスの相互作用を得ることも可能である。かかるグラフト化ポリマーが混合物に存在する場合、それらは、ステレオコンプレックスの相互作用を示すことができる。しかしながら、好ましくは、同一のキラリティのモノマーから形成されたオリゴマーと共に各ポリマー鎖をグラフトする。さらに好ましくは、グラフトは鎖長の単一分散分布を有する、すなわち、グラフトはすべて本質的に同一の長さを有する。
【００２７】
形成されたゲルの特徴は大部分、適用されたグラフトの種類、数および長さによって決定されることは上記から理解されるであろう。本発明に基づいたヒドロゲルでは、オリゴマー基またはコオリゴマー基の平均鎖長は、好ましくは、ポリマーを水に溶解するまたは分散するために充分短い。
【００２８】
本発明に基づいたヒドロゲルは、水溶性ポリマーまたは水分散性ポリマーを含み、グラフト基の平均鎖長は好ましくは、相対するキラリティのモノマーから形成されたグラフト間で物理的相互作用が得られるように充分長く、物理的相互作用は、同一モノマーのラセミ混合物からグラフトが形成される場合に生じる物理的相互作用とは異なっている。
【００２９】
１つのグラフトに異なった量の光学異性体を適用することができる。グラフト間の相互作用は、１つの系におけるポリマー上のグラフトが一方のキラリティのモノマーにより形成され、グラフトの別の部分が相対するキラリティを有する場合、最も大きいことは理解されるであろう。別の方法では、他方の系におけるポリマーのグラフトが第１のキラリティに対して本質的に相補的であるような様式で濃縮されている限り、一方のキラリティのモノマーによって排他的に形成される代わりに、一方のキラリティを有するモノマーを濃縮したグラフトの使用も可能である。同一のキラリティを持ったモノマーのブロックの形式でのたとえばオリゴマーまたはコオリゴマーによってこれを実現することができる。
【００３０】
本発明のヒドロゲルを形成するために、ポリマー鎖については、ゲル構造の干渉性に寄与するために少なくとも２つのグラフトでグラフトすることが必要である。この方法では、ネットワークを形成することができる。
【００３１】
グラフトの数は、水溶性または水分散性のポリマーの置換の度合い（ＤＳ）で表される。ＤＳが１００は、ポリマーの各モノマー単位がグラフトで置換されているポリマーを言うが、ＤＳが０は、グラフトされていないポリマーを言う。形成されるべきゲルに対して最小限のＤＳが要求される。合成条件、特にポリマーに対してグラフトを結合する間の条件を変えることによってＤＳは変化しうる。たとえば、合成混合物におけるオリゴマーグラフト／ポリマーの比を変えることによってこれを行うことができる。ＤＳを制御するのに使用してもよいその他のパラメータは、反応温度および反応時間である。前の上文で説明したように、ゲル構造に寄与するポリマー鎖の部分について、最小限のＤＳは、ポリマー鎖当りの２つのグラフトに相当すべきである。
【００３２】
それに対して、構成成分を水溶性または水分散性とするためには、ＤＳが大きくなりすぎないことが必要である。所望の水溶性または水分散性に必要とされるＤＳの値は、方法それ自体が当業者にとって標準であるような実験的方法によって実験的に得ることができる。好ましくは、ポリマー鎖当りのグラフトの数は２より大きく、さらに好ましくは２および約２５のＤＳに相当する数の間である。ＤＳの相当する値はポリマーの分子量に依存する。
【００３３】
本発明に基づいたヒドロゲル組成物の好ましい実施態様では、オリゴマーまたはコオリゴマー基を伴った水分散性ポリマーの置換の平均度合いは、水溶性または水分散性ポリマーの物理的相互作用によって架橋が形成されるネットワークを得るために充分高い。
【００３４】
好ましくは、置換の平均度合いは、ポリマー構造を水溶性または水分散性にするために充分低い。
【００３５】
グラフトの長さは、グラフトに寄与するモノマーの量である重合の度合い（ＤＰ）によって表される。ＤＰは、たとえば、開始剤／グラフトモノマーの比を変えるような、合成条件を変えることによって変えることができる。
【００３６】
ゲルを形成することができるようにグラフトが相互作用するために、ＤＰは充分に高くすべきである。それに対して、グラフトが長すぎる場合、水溶性または水分散性が不充分となる。典型的には、ポリ（乳酸）グラフトについては、平均ＤＰは６より大きく、さらに好ましくは７と２５の間であり、しかしこの値は当然、ポリマーの種類と同様にグラフトとして使用されるオリゴマーの種類に依存する。
【００３７】
デキストランポリマーのような、その一部がポリ（Ｄ−乳酸）でグラフトされ、その他の部分がポリ（Ｌ−乳酸）でグラフトされている水溶性ポリマーを含みまたはそれで構成されるヒドロゲルについては、ＤＳの低い値は、好ましくは、ポリマー鎖あたり２グラフトに相当する値である。高い値は好ましくは約２５であり、平均ＤＰは６と２５の間である。好ましくは両者の前記部分は同等である。
【００３８】
使用されるポリマーの種類およびその他の条件も影響を与えうるが、ＤＳおよびＤＰに対する好ましい値は、グラフトの種類および得られるゲルの必要とされる特徴に本質的に依存する。たとえば、本発明に基づいたヒドロゲル組成物の一方の混合物のオリゴマーまたはコオリゴマー基がポリ（Ｄ−乳酸）を含み、他方の混合物のオリゴマーまたはコオリゴマー基がポリ（Ｌ−乳酸）を含む場合、双方のオリゴマーまたはコオリゴマー基は、７〜２５のモノマーの平均鎖長を有するのが好ましい。
【００３９】
実際、制御された放出に適用するとき、得られるゲルの放出特性およびその他の特性は、ＤＰおよびＤＳを変えることにより微調整され、具体的な適用に適応することができ、それは、本発明の途方もない利点である。
【００４０】
使用されるモノマーの少なくとも１つがもう一方の系のポリマーのグラフトで使用される少なくとも１つのモノマーとは相対するキラリティを有する限り、グラフトは別のモノマーのコオリゴマーであるというのも可能である。
【００４１】
本発明の１つの実施態様では、系（Ａ）におけるポリマーのグラフトは、モノマーのＬ型光学異性体から本質的に形成され、系（Ｂ）におけるポリマーのグラフトは同一モノマーのＤ型光学異性体から本質的に形成される。
【００４２】
本発明に基づくヒドロゲルの好ましい実施態様では、混合物（Ａ）または（Ｂ）の前記オリゴマーまたはコオリゴマーが、Ｄ−乳酸のホモオリゴマー、Ｄ−ラクチド／εカプロラクトンのランダムコオリゴマー、Ｄ−リッチポリ（乳酸）のジブロックおよびトリブロック混合物、ポリ（Ｄ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（エチレングリコール）／ポリ（乳酸）のジブロックおよびトリブロックコオリゴマー、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（α−メチル−α−エチル−β−プロピオラクトン）、ポリ（第３級ブチルエチレンオキシド）、ポリ（第３級ブチルエチレンスルフィド）、ポリ［β−（１，１−ジクロロプロピル）−β−プロピオラクトン］、ポリ（α−ベンジルグルタメート）、ポリ（メチルベンジルメタクリレート）、ポリ（ビニル−Ｎ−ブチルピリジウムブロミド）、ポリ（スチレンスルホン酸ナトリウム）、ポリ（第３級ブチルチイレン）、ポリ（α−メチルベンジルメタクリレート）、ポリ［β−（１，１−ジクロロエチル）−β−プロピオラクトン］、およびそれらの混合物を含む群から選択され、混合物（Ｂ）のモノマーは、混合物（Ａ）のモノマーの光学異性体である。
【００４３】
もう１つの好ましい実施態様では、本発明のヒドロゲルの水溶性または水分散性のポリマーは、デキストラン、スターチ、セルロース誘導体、アルブミン、リゾチーム、ポリ（アミノ酸）、ポリ（リジン）および関連するコポリマー、ポリ（グルタミン酸）および関連するコポリマー、ポリ（（メタ）アクリレート）／（（メタ）アクリルアミド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（エチレングリコール）、水溶性ポリホスファゼンまたはそれらの混合物から成る群から選択される。
【００４４】
制御された放出系として適用される場合、放出されるべき薬剤は、ゲルの形成後、すなわち、混合物（Ａ）および（Ｂ）の添加後に組み入れられる。
【００４５】
別の方法としては、本発明のゲルは有機溶媒の非存在下で調製されるので、ゲルの形成前、すなわち、系（Ａ）および系（Ｂ）の添加前に、放出されるべき薬剤を組成物に加えることができる。したがって、薬剤は、系（Ａ）および／または系（Ｂ）と混合され、続いてこれらの系を混合し、適切な反応条件下でゲルが形成される。
【００４６】
基とポリマーの反応性に依存して、グラフト基はポリマーに直接結合することができ、または結合基によってポリマーに結合することができる。かかる結合基の例は、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）である。グラフトがポリマーに結合される場合、かかる結合基はさらに変換される。産物の生分解性を高めるためにも結合基を適用することができる。本発明の好ましい実施態様に基づいて、水溶性または水分散性のポリマーとオリゴマー基またはコオリゴマー基との間に結合基があり、その結合基は加水分解可能な基を含む。
【００４７】
モノマーのオリゴマー形成によってグラフトを形成することができ、好ましくはそれは開始剤を用いて行われる。開始剤は通常、オリゴ化グラフトに組み入れられる。かかる開始剤は、たとえば、乳酸エチルまたはその他の脂肪族若しくは芳香族乳酸エステル、ベンジルアルコール、ラウリルアルコール、１，４−ブタンジオール、アジピン酸、（モノメトキシ）ＰＥＧ、２−（メトキシエトキシ）エタノール、またはそれらの混合物のような第１級または第２級のヒドロキシル基を伴う化合物である。このような開始剤の使用が、ｉｎ  ｖｉｖｏで適用される場合に得られたゲル中でこのような開始剤の（反応産物の）毒性濃度を生じないことに注意すべきである。この理由のために、内因性化合物または内因性化合物に由来する化合物の開始剤としての使用が好まれる。かかる化合物の開始剤としての使用は、このような化合物またはその反応産物の許容できない（すなわち毒性）濃度を防止する。適切な開始剤の例は、乳酸エチルであり、それは、たとえば哺乳類では、相対的に有害ではないエタノールと乳酸に容易に加水分解する。
【００４８】
開始剤が適用される場合、得られる産物におけるグラフトは、末端基として開始剤（の一部）を持つ可能性がある。ＤＰ値を誂えるために、グラフトモノマーの量に対する開始剤の量を利用することができる。
【００４９】
適切な触媒の存在下でオリゴマー形成は行われる。かかる触媒は、スズオクトエート、アルミニウムアルコキシド（たとえば、アルミニウム  トリス（２−プロパノレート）、亜鉛粉末、ＣａＨ2、Ｓｎ（ＩＶ）トリス−２−エチルヘキサノエート、テトラフェニルポルフナトアルミニウム、アルミニウム  トリイソプロポキシド、キラルシッフ塩基／アルミニウムアルコキシド、Ａｌ（Ａｃａｃ）、ＳＡＬＥＮ−Ａｌ−ＯＣＨ3、ｔ−ＢｕＯＬｉ、Ｂｕ3ＳｎＯＣＨ3、ＰｂＯ、酸化亜鉛、亜鉛ジエチル、塩化亜鉛、塩化スズ、マグネシウム塩、Ｚｎ（Ａｃａｃ）3、ＺｎＥｔ2−Ａｌ（ＯｉＰｒ）、（ＺｎＥｔ2＋ＡｌＥｔ3＋ｎＨ2Ｏ）、酸化イットリウムまたはその混合物から選択することができる。
【００５０】
適切な溶媒中で結合基の存在下または非存在下にてグラフトとポリマーを混合することによってポリマーのグラフト化を達成することができる。好ましくは、結合基と共にグラフトを混合する。かかる溶媒は、使用されるポリマーによって、たとえば、ポリデキストランに対してジメチルスルホキシドのような非プロトン性溶媒から選択することができ、その後、適切な条件下にてグラフト反応が行われ、その条件は、当業者により容易に決定することができる。この後溶媒を除去する。
【００５１】
（コ）オリゴマーグラフトと水溶性ポリマーの量、たとえば、ラクチドとデキストランの比を変えることによって置換の度合いを制御することができる。
【００５２】
本発明に基づいたヒドロゲルで使用することができるもう１つのパラメータは、ポリマーにグラフトされない、ヒドロゲルにおける（コ）オリゴマーの存在である。かかる非結合性のコ）オリゴマーは物理的相互作用を形成し、相互作用は、上記で記載したものに類似している。非結合性のコ）オリゴマーはポリマー上に存在するグラフトと相互作用し、したがってグラフトを『占有し』、その結果、グラフトを介した別のポリマー間相互作用を低減し、ゲルをさらに柔らかくし、および／またはさらに低い剪断モジュールを持つようにする。
【００５３】
たとえば、オリゴマー基のヒドロキシル基（炭酸結合）またはカルボキシル基（エステル結合）とポリマー上に存在するヒドロキシ部分間で炭酸結合またはエステル結合を形成するような、カップリング反応によってオリゴマー基をポリマーに結合することができる。
【００５４】
本発明で特定の用途が見い出されているオリゴマー基の中には、二官能基、すなわち２つの官能基を有するものがあり、それによってポリマーへのカップリングを行うことができる。たとえば、乳酸オリゴマーは鎖の一方の端にヒドロキシル基を持ち、他方の端にはカルボキシル基を持つ。このカルボン酸末端基は、遊離の形態でもよいし、たとえば開始剤に由来するような基とのエステルの形態であってもよい。
【００５５】
かかるオリゴマーの混合物（たとえば、非結合性オリゴマー基それ自体）、たとえば、Ｄ−モノマーに由来するオリゴマーとＬ−モノマーに由来するオリゴマーのラセミ混合物（それぞれ、『Ｄ−オリゴマー』および『Ｌ−オリゴマー』という）からステレオコンプレックスが形成されてもよい。ステレオコンプレックス形成は、キラリティの異なるオリゴマーのいわゆる平行配向または反平行配向のどちらにおいても生じることが見い出される。
【００５６】
平行配向でのステレオコンプレックスでは、各Ｄ−オリゴマーの開始点（α位）がＬ−オリゴマーのα位の隣にくるようにし、それによってステレオコンプレックスが形成されるように、各Ｄ−オリゴマーはＬ−オリゴマーと対をなす。同様に、キラリティの異なったオリゴマーの末端位（ω位）はω−ωの対をなす。
【００５７】
しかしながら、反平行性のステレオコンプレックスでは、Ｄ−オリゴマーのα位がＬ−オリゴマーのω位（末端位）の隣にくるように、Ｄ−オリゴマーは対合に優先性を示す。平行性のステレオコンプレックスが形成されるのか、反並行性のステレオコンプレックスが形成されるのかは、オリゴマーの種類、すなわち、このようなオリゴマーを作るのに使用されたモノマーに主として依存する。たとえば、ポリ（Ｄ−ラクチド）とポリ（Ｌ−ラクチド）の混合物では、ポリ（Ｌ−ラクチド）断片とポリ（Ｄ−ラクチド）断片は平行形式でまとめられる（Okihara, T; Tsuji, M; Kawaguchi, A; Katayama, K.I; Tsuji, H; Hyon, S.H; Ikada, Y. J. Macromol. Sci. Phys. 1991, B30(1&2), 119-140）。
【００５８】
オリゴマーの平行配向性または反平行配向性に対する優先性は、特定の好ましい流体力学的挙動を有するヒドロゲルを得るのに用いることができる。
【００５９】
たとえば、平行配向性に優先性を示す二官能基オリゴマーに由来する基でグラフトされたポリマーの上述のような混合物（Ａ）および（Ｂ）からヒドロゲルを調製することができる。混合物（Ａ）中のポリマーにおけるオリゴマー基の大半がある部分（たとえば、α位での部分）を介してポリマーに結合している場合、混合物（Ｂ）中のオリゴマーはポリマーに、ニ官能基オリゴマーの相対する位置での部分（すなわち、ω位での部分）を介して結合するが、混合物（Ａ）および（Ｂ）双方共に同一のＤＰおよびＤＳを有し同一官能基によってポリマーに結合するオリゴマー基でグラフトされたポリマーに比べて、増強されたゲル形成、すなわちさらに強いゲル（さらに高い値のＧ’）を示す混合物が得られる。
【００６０】
混合物（Ｂ）中のポリマーをグラフトするための合成条件とは異なって、混合物（Ａ）中のポリマーをグラフトする合成条件を選択することによって、オリゴマー基の平行配向性が促進されるゲルを得ることができる。対応するオリゴマーの平行配向性が好ましい場合、このことによって、同一のオリゴマー基が反平行配向にある場合（配向は、両混合物中でのグラフトに対して同一の合成条件を用いることによって促進される）よりも強いゲルが得られる。
【００６１】
逆に、反平行性のステレオコンプレックスを形成するオリゴマーに由来するグラフトを用いる場合、グラフトの合成条件が両混合物で同一であれば強いゲルが得られる。
【００６２】
したがって、発明のさらなる実施態様に基づいて、上述したようなヒドロゲル組成物であって、オリゴマー基が平行性ステレオコンプレックスを形成する二官能基オリゴマーに由来し、混合物（Ａ）のポリマーにおけるグラフト部分とポリマーとが結合する結合部分が、混合物（Ｂ）のポリマーにおけるグラフト部分とポリマーとが結合する結合部分とは化学的に異なっていることを特徴とするヒドロゲル組成物が提供される。
【００６３】
逆に、反平行性オリゴマー基（すなわち、反平行性のステレオコンプレックスを形成するオリゴマー基に由来する基）を用いる場合、同一の基を介して混合物（Ａ）および（Ｂ）中のポリマーに基が結合するとき、さらに強いゲルが得られる。異なった基を介したカップリングは、この場合、上述のように、得られるゲルの強度（Ｇ’値）を下げるために用いることができる。
【００６４】
適切な合成条件を選択することによって、オリゴマー基の平行配向性または反平行配向性を促進することは容易に得ることができる。たとえば、ヒドロキシル基を有するポリマーを混合物（Ａ）ならびに（Ｂ）で使用し、平行複合化するオリゴマーをオリゴマー基として用い、オリゴマーが一方の端にヒドロキシル基およびもう一方の端にカルボキシル基を有する二官能基性である場合、当業者は、炭酸結合を生じるような、混合物（Ａ）における合成条件を選択することができる。炭酸結合は、オリゴマー基のヒドロキシル基とポリマーのヒドロキシル基との間に形成される。混合物（Ｂ）における合成条件は、オリゴマー基のカルボン酸とポリマーのヒドロキシル基との間にエステル結合が形成されるように選択することができる。続いて２つの混合物（Ａ）および（Ｂ）が共に混合されると、オリゴマー基の反平行配向によってゲル形成が増強される。
【００６５】
（Ａ）と（Ｂ）を混合する前に、個々の混合物を、特定の時間、混合することを含む溶媒化の対象とすることができる。
【００６６】
発明の興味深い可能性のある用途は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるヒドロゲルの形成のために混合物（Ａ）および（Ｂ）を使用することである。混合物（Ａ）と（Ｂ）が混合されるとき、ヒドロゲルの形成には少し時間がかかるので、混合物は当初液状である。この混合物を、ヒドロゲルの形成が完了する前に注射すると、ｉｎ  ｖｉｖｏでヒドロゲルが形成される。これは、ｅｘ  ｖｉｖｏで混合物（Ａ）および）Ｂ）を混合し、液状形態でこの混合物を注射し、その後、ｉｎ  ｖｉｖｏでヒドロゲルを形成することによって実行される。
【００６７】
本発明に基づいたステレオコンプレックスヒドロゲルは微視的なゲルである。たとえば埋め込みに適用されるような顕微鏡的な形態でゲルを使用することができる。薬剤を負荷したゲルを皮膚に塗布することによって有効成分を投与するような、局所適用にステレオコンプレックスヒドロゲルを用いてもよい。たとえば、熱傷や火傷の治療にこれを使用することができる。
【００６８】
別の方法として、たとえば、スプレー乾燥することによってゲルをミクロスフェアに形成することができる。ミクロスフェアを形成するためのもう１つの可能性は、ＰＣＴ／ＮＬ第９７／００６２５号に記載されており、その中では、二相系が不適合な水溶性ポリマーと少なくとも１つの放出可能な化合物から形成される二相法が開示されている。本発明に基づいて、ミクロスフェアの形態でヒドロゲルを調製する工程は、放出可能な化合物の存在下または非存在下において、２つの前記水溶性または水分散性ポリマーをそれらが不適合であるように選択することによる二相系の形成を含み；その二相系からヒドロゲルが形成される。
【００６９】
したがって、ゲル形成が行われる前に好ましくは組み入れられる、有効成分の制御された放出に適した、注射可能なミクロスフェアを得ることができる。
【００７０】
本発明のゲルのもう１つの興味深い適用は、細胞素材、特に生細胞を封入することである。これは再生医療に関して特に興味深い。細胞および／または増殖因子のようなもう１つの有効成分を混合物（Ａ）または（Ｂ）の１つと混合し、その後、もう１つの混合物を加え、それによってゲルが形成されることにより、この封入を達成することができる。細胞の代わりに、その他の生体化合物または非生体化合物を有効成分として使用することができる。例には、プラスミドＤＮＡ、ウイルスベクター、およびリポソーム、イスコム、ポリプレキシーズ（すなわち、有機ポリホスファゼンまたはポリアクリレートのような（カチオン系）ポリマーおよびＤＮＡの組合せ）、リポプレキシーズ（すなわち、（カチオン系）脂質およびＤＮＡの組合せ）ナノ粒子（すなわち、ナノメータサイズの範囲にあるポリマーを基にした粒子）、コロイドサイズ範囲の固体脂質粒子のようなコロイド状キャリア、脂質内様系のようなエマルションおよびそれらの組合せがある。低分子量化合物を封入してもよい。
【００７１】
本発明はまた、グラフト化された水溶性または水分散性ポリマーの２つの混合物を調製する工程を含むヒドロゲルの調製方法において、
ａ）適切な開始剤の存在下または非存在下においてモノマーを重合する工程であって、一方の混合物のモノマーが他方の混合物のモノマーの光学異性体であるモノマーを重合する工程と；
ｂ）前記ａ）工程の産物を適切なカップリング化合物と反応する工程と；
ｃ）前記ｂ）工程の産物を前記水溶性または水分散性ポリマーと反応する工程とを含む２つの混合物の調製；
およびｄ）前記混合物を混合すること。
好ましくは、工程１）における適切な開始剤は第１級または第２級ヒドロキシル基である。
【００７２】
発明はさらに、オリゴマーまたはコオリゴマーがポリマー鎖に接着し、このようなポリマー鎖に物理的に結合する、オリゴマーまたはコオリゴマーにおけるモノマーの２つの相対する光学異性体形態の使用に関する。
【００７３】
グラフトされたポリマーの具体的な混合物がゲルの形成を生じるかどうかは、物理的相互作用（ステレオコンプレックス）の存在に関する流体力学的挙動を測定することによって評価することができ、物理的相互作用は、実験的に決定することができる、たとえば、貯蔵モジュール（Ｇ’）、喪失モジュール（Ｇ’’）、ｔａｎ  σ（＝Ｇ’’／Ｇ’）および／またはクリープにおいて反映されるような弾性を（さらに）生じる。
【００７４】
ここで、本発明を以下の実施例によって説明するが、これらの実施例は発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００７５】
実施例１
Ｄｅｘ−ラクタート（（ＤＰ）av＝１５、（ＤＳ）av＝１０））ヒドロゲルの合成
ラクチド（系（Ａ）の場合にはＬ−ラクチド、系Ｂの場合にはＤ−ラクチド、それぞれ５ｇ）の開環重合を、２−（２−メトキシエトキシ）エタノール（ＭＥＥ、０．５５６ｇ）を開始剤として、そしてオクタン酸第一スズ（０．０９３ｇ）を触媒として使用して行った。重合を１３０℃の溶融状態で４時間行い、ＭＥＥ−Ｌ−乳酸オリゴマー（Ａ）およびＭＥＥ−Ｄ−乳酸オリゴマー（Ｂ）を得た。図１には、ｄｅｘ−ラクチド（８）の合成に関する反応スキームが示されている。この場合、ＤＰは重合度であり、ＤＳは置換度（デキストランのグルコピラノースユニット１００個あたりの乳酸オリゴマーの数）である。
【００７６】
続いて、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ、１．１２２ｇ、２当量、６．９２ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下においてテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解した。前記工程から得られたＭＥＥ−ラクタート（Ａ）および（Ｂ）（それぞれ４ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）をＴＨＦに加え、それぞれのＣＤＩ混合物を得た。それぞれの反応混合物を窒素雰囲気下において室温で４時間攪拌した。生成物を、残留ＣＤＩを不活性化するための水において沈殿させることによって精製した。遠心分離後、生成物をアセトニトリルに溶解し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過後、有機溶媒を減圧下で除き、粘稠性オイルがそれぞれの混合物（Ａ）および（Ｂ）について得られた。生成物（Ａ）および（Ｂ）の両方を乾燥ＤＭＳＯに溶解した。
【００７７】
この後、デキストラン（５．６ｇ）を乾燥ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、その後、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ、１．０６ｇ、デキストランに対して０．２５当量、８．６５ｍｍｏｌ）を加えた２つの混合物を作製した。ＤＭＡＰの溶解後、前記工程のＭＥＥ−ラクタート−カルボニルイミダゾール混合物（Ａ）および（Ｂ）（それぞれ４．４８ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）のそれぞれをその１つに加え、２つの新しい混合物（Ａ）および（Ｂ）を得た。これらの混合物を窒素雰囲気下において室温で４日間攪拌した。その後、濃ＨＣｌを加え、ＤＭＡＰおよびイミダゾールを中和することによって反応を停止させた。反応混合物を４℃で脱塩水に対して透析した。粗製のｄｅｘ−ラクタート生成物を凍結乾燥し、未結合のラクタートオリゴマーをジクロロメタンでの抽出により除いた。ろ過および蒸発の後、純粋な生成物が得られた。
【００７８】
この生成物は、平均重合度（ＤＰ）avが１５であるグラフトを有し、かつポリマーの平均置換度（ＤＳ）avが１０であった。
【００７９】
８０％ヒドロゲルを、８００μｌの酢酸塩緩衝液（ｐＨ＝約４（加水分解を最小限にするため））における前記工程から得られた２００ｍｇの生成物（Ａ）の混合物を生成物（Ｂ）（同様に、２００ｍｇ／８００μｌ酢酸塩緩衝液（ｐＨ＝約４））と等量で混合することによって調製した、混合する前に、個々の生成物を室温で３日間分散させた。
【００８０】
実施例２
Ｄｅｘ−ラクタート（（ＤＰ）av＝９、（ＤＳ）av＝１０））ヒドロゲルの合成
実施例１の手順を繰り返したが、異なる量の反応物を使用した：Ｌ（またはＤ）−ラクチド（１０ｇ）、ＭＥＥ（１．８５ｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、オクタン酸第一スズ（０．３ｇ、０．７４ｍｍｏｌ、ＭＥＥに対して５ｍｏｌ％）。
【００８１】
この最初の工程の生成物から、４．２３ｇ（５．５ｍｍｏｌ）をＣＤＩ（１．７９ｇ、２当量、１１ｍｍｏｌ）とともに使用した。
【００８２】
ｄｅｘ−ラクタート−ＭＥＥが、前記工程の生成物（５．３２ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１．８８ｇ、０．２５当量、１５ｍｍｏｌ）を使用して得られた。
【００８３】
この生成物は、平均重合度（ＤＰ）avが９であるグラフトを有し、かつポリマーの平均置換度（ＤＳ）avが１０であった。
それ以外の手順は、実施例１の手順と同様であった。
【００８４】
実施例３
レオロジー挙動
前記実施例で調製されたサンプルのレオロジーを調べた。前記実施例から得られた混合物（Ａ）および（Ｂ）を、混合する前に所定の時間にわたって攪拌して溶媒和させたか、あるいは直接混合した。
【００８５】
（Ａ）および（Ｂ）を混合したとき、ゲル形成を、２ｃｍの１度のスチール製コーンプレートおよび１００ｍＰａ・ｓのシリコンオイルで満たされた溶媒トラップを使用するレオメーター（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＡＲ１０００−Ｎ）を用いて１Ｈｚの振動数で追跡した。測定は、１％の変形を得るための力が測定される制御されたひずみモードで行われた。結果は、サンプルにおけるエネルギーの弾性的貯蔵を表す貯蔵弾性率Ｇ’として示される。理想的なニュートン流体の場合、Ｇ’はゼロである。Ｇ’の値が大きい場合、ゲル化構造に対応する。定義上、ｔａｎδ＝１により、ゾル−ゲル転移が定義される。ｔａｎδの値が１よりも小さい場合、同様にゲルの形成が示される。一般に、本発明に従って得られるゲルは、０．３よりも小さいｔａｎδの値を有する。
【００８６】
水における２０％デキストラン−Ｌ−ラクタート（平均ＤＰ＝１５（図２）または９（図３））、ならびに水における１０ｗｔ％デキストラン−Ｌ−ラクタート（平均ＤＰ＝１５（図２）または９（図３））および１０ｗｔ％デキストラン−Ｄ−ラクタート（平均ＤＰ＝１５（図２）または９（図３））に対する典型的なレオロジーが示されている。
【００８７】
Ｌ型およびＤ型の混合物（混合物（Ａ）およびＢ）は、時間を関数とするＧ’の増大を示し、これに対して、ｄｅｘ−ラクタート生成物の一方のエナンチオマー形態はそのような増大を示さなかった。（Ａ）および（Ｂ）の混合物の場合におけるＧ’の増大は、生成物がさらにより弾性的になることを示している。この現象は、一方のエナンチオマー形態の場合には認められなかった。これは、ステレオコンプレックスが２つのエナンチオマー形態の間で形成されたことによって説明される。
【００８８】
【表１】
0004865947.tif 000002
【００８９】
【表２】
0004865947.tif 000003
【００９０】
【表３】
0004865947.tif 000004
【００９１】
表１〜表３ならびに図２および図３の実験データは、参考例（表１における「ＬまたはＤ」ならびに表２および表３における実験「ｂ」および「ｄ」）と比較した場合、本発明のヒドロゲルのレオロジー挙動が異なっていることを明らかに示している。
【００９２】
さらに、本発明による精製された例（表２および表３における「ｃ」）は、本発明による未精製のサンプル（表２および表３における「ａ」）と比較した場合、貯蔵弾性率がより大きいことを示している。
【００９３】
最後に、溶媒和時間が長くなると、弾性率のより大きな最終値を有するゲルの形成がもたらされる。
【００９４】
実施例４
ｄｅｘ−（Ｌ）ラクタート／ｄｅｘ−（Ｄ）ラクタートゲルの合成、特徴付けおよび性質
材料。Ｌ−ラクチド（（３Ｓ−ｃｉｓ）−３，６−ジメチル−１，４−ジオキサン−２，５−ジオン、＞９９．５％）およびＤ−ラクチド（（３Ｒ−ｃｉｓ）−３，６−ジメチル−１，４−ジオキサン−２，５−ジオン、＞９９．５％）をＰｕｒａｃ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ＢＶ（Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）から入手し、さらなる処理を行うことなく使用した。オクタン酸第一スズ（スズ（ＩＩ）ビス（２−エチルヘキサノアート）、ＳｎＯｃｔ2、９５％）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、米国）、ジクロロメタン、ペルオキシ二硫酸カリウム（ＫＰＳ）（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）および２（２−メトキシエトキシ）エタノール（Ａｌｄｒｃｈ−Ｃｈｅｍｉｅ、Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、ドイツ）を受領時のまま使用した。テトラヒドロフラ（ＴＨＦ）およびアセトニトリル（ＨＰＬＣ−Ｓ、グラジェント規格）をＢｉｏｓｏｌｖｅ  ＬＴＤ（Ｖａｌｋｅｎｓｗａａｒｄ、オランダ）から購入した。ＴＨＦは、使用直前にＬｉＡｌＨ4から蒸留した。デキストラン（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ起源、Ｍn＝１５，０００ＤａおよびＭw＝３２，５００Ｄａ、ＧＰＣ分析で測定された場合）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、＜０．０１％水）、メタクリル酸グリシジル（ＧＭＡ、メチルプロピオン酸（±）−２，３−エポキシプロピル、９５％（ＧＰＣ））、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）およびシリコンオイル（ＤＣ２００、１１０ｍＰａ・ｓ）をＦｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＡＧ（Ｂｕｃｈｓ、スイス）から入手した。４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ、９９％）およびＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ、９８％）をＡｃｒｏｓ  Ｃｈｉｍｉｃａ（Ｇｅｅｌ、ベルギー）から入手した。透析チューブ（セルロース、分子量カットオフ１２，０００〜１４，０００（タンパク質に基づく））をＭｅｄｉｃｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｔｄ．（Ｌｏｎｄｏｎ、英国）から購入した。置換度（ＤＳ、デキストランのグルコピラノシドユニット１００個あたりのメタクリル残基の数）が４であるメタクリル酸化デキストラン（ｄｅｘ−ＭＡ）を、Ｖａｎ  Ｄｉｊｋ−Ｗｏｌｔｈｕｉｓ，Ｗ．Ｎ．Ｅ．、Ｆｒａｎｓｓｅｎ，Ｏ．、Ｔａｌｓｍａ，Ｈ．、Ｖａｎ  Ｓｔｅｅｎｂｅｒｇｅｎ，Ｍ．Ｊ．、Ｋｅｔｔｅｎｅｓ−ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｓｃｈ，Ｊ．Ｊ．、Ｈｅｎｎｉｎｋ，Ｗ．Ｅ．、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、１９９５、２８、６３１７〜６３２２；Ｖａｎ  Ｄｉｊｋ−Ｗｏｌｔｈｕｉｓ，Ｗ．Ｎ．Ｅ．、Ｋｅｔｔｅｎｅｓ−ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｓｃｈ，Ｊ．Ｊ．、Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｅｒｋ−ｖａｎ  Ｈｏｏｆ，Ａ．、Ｈｅｎｎｉｎｋ，Ｗ．Ｅ．、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、１９９７、３０、３４１１〜３４１３に詳細が記載されている手順に従って合成した。
【００９５】
多分散乳酸オリゴマーの合成。様々なＤＰを有する乳酸オリゴマーを、Ｄｅ  Ｊｏｎｇ他（Ｄｅ  Ｊｏｎｇ，Ｓ．Ｊ．、Ｖａｎ  Ｄｉｊｋ−Ｗｏｌｔｈｕｉｓ，Ｗ．Ｎ．Ｅ．、Ｋｅｔｔｅｎｅｓ−ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｓｃｈ，Ｊ．Ｊ．、Ｓｃｈｕｙｌ，Ｐ．Ｊ．Ｗ．、Ｈｅｎｎｉｎｋ，Ｗ．Ｅ．、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、１９９８、３１、６３９７〜６４０２）に従って、２（２−メトキシエトキシ）エタノール（ＭＥＥ）およびオクタン酸第一スズをそれぞれ開始剤および触媒として用いるラクチドの開環重合反応によって合成した。生成するＭＥＥ−ラクタートの平均重合度（ＤＰav）は、ＭＥＥ／ラクチド比によって制御された。
【００９６】
単分散乳酸オリゴマーの調製。単分散乳酸オリゴマーを、ＡＫＴＡ精製装置（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＡＢ、スェーデン）を有する調製用ＨＰＬＣ（カラム：Ｅｃｏｎｏｓｐｈｅｒｅ  Ｃ８、１０ミクロン、２５０ｘ２２ｍｍ；Ａｌｌｔｅｃｈ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ、米国）で多分散ＭＥＥ−ラクチドを分画化することによって調製した。多分散オリゴマー（１ｇ）を１ｍｌの水／アセトニトリル（５０ｗ／ｗ％）に溶解し、この溶液の５００μｌをカラムに注入した。グラジェントを１００％Ａ（水／アセトニトリル、９５：５）から１００％Ｂ（アセトニトリル／水、９５：５）まで５０分かけて行った。流速は５．０ｍｌ／分であった；ＵＶによる検出（λ＝１９５ｎｍ）。クロマトグラムをＵｎｉｃｏｒｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓモジュール（バージョン２．３０）ソフトウエアで分析した。個々のオリゴマーを集め、対応するＤＰを有する画分をまとめた。溶媒を減圧下で除いた。オリゴマーの特徴付けを、ＨＰＬＣ、ＮＭＲおよびＭＳによって行った。
【００９７】
活性化乳酸オリゴマー合成。オリゴマーをデキストランに結合させるために、オリゴマーのヒドロキシル基を、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を使用して活性化した。本質的には、ヒドロキシエチルメタクリラート（ＨＥＭＡ）−ラクタート−ＣＩを合成する場合と同じ手順を使用した。簡単に記載すると、ＣＤＩ（３．６ｇ、２２ｍｍｏｌ、２当量）を窒素雰囲気下において乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、１００ｍｌ）に溶解した。ＭＥＥ−ラクタート（例えば、９のＤＰav；８．４６ｇ、１１ｍｍｏｌ、１当量）をＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶解して、ＣＤＩ溶液に加えた。この反応混合物を窒素雰囲気下において室温で４時間攪拌した。その後、ジクロロメタン（ＤＣＭ、２００ｍｌ）を加え、反応混合物を水（１００ｍｌ）で洗浄し、過剰なＣＤＩを分解し、イミダゾールを除いた。次いで、水層をＤＣＭ（５０ｍｌ）で２回抽出した。有機層を一緒にして、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後、有機溶媒を減圧下で除き、ＭＥＥ−ラクタート−ＣＩ（９のＤＰav）を得た。
【００９８】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ８．１６（ｍ、１Ｈ、Ｃ（Ｏ）−Ｎ−ＣＨ＝Ｎ）、７．４４（ｍ、１Ｈ、Ｃ（Ｏ）−Ｎ−ＣＨ＝ＣＨ）、７．０７（ｍ、１Ｈ、Ｃ（Ｏ）−Ｎ−ＣＨ＝ＣＨ）、５．３５（ｑ、１Ｈ、ＣＨ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ）、５．２３〜５．１２（重なったｑ、ＣＨ）、４．２８（ｍ、２Ｈ、ＣＨ2−Ｏ−Ｃ（Ｏ））、３．６６（ｍ、２Ｈ、ＣＨ3−Ｏ−ＣＨ2）、３．６０（ｍ、２Ｈ、ＣＨ2−Ｏ）、３．５１（ｍ、２Ｈ、ＣＨ2−Ｏ）、３．３７（ｓ、３Ｈ、ＣＨ3−Ｏ）、１．７２（ｄ、ＣＨ3−ＣＨ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｎ）、１．６３〜１．５０（重なったｄ、ＣＨ−ＣＨ3）。
【００９９】
13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１６９．５  Ｃ＝Ｏ、１６８．８  Ｃ（Ｏ）−Ｎ、１３７．１  Ｎ−ＣＨ−Ｎ、１２１．６＋１１７．１  Ｎ−Ｃ＝Ｃ−Ｎ、７１．７  ＣＨ2、７１．５  （ＣＨ3）ＣＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ、７０．３  ＣＨ2、６９．３〜６８．７  ＣＨ−ＣＨ3＋ＣＨ2−ＯＣＨ3、６４．３  ＣＨ2−Ｏ−Ｃ（Ｏ）、５８．９  ＣＨ3Ｏ、２５．５  ＣＨ3−ＣＨ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ、１６．６／１６．５  ＣＨ3。
【０１００】
Ｄｅｘ−ラクタートの合成。デキストラン−ラクタート（ｄｅｘ−ラクタート）を、ｄｅｘ−ラクタート−ＨＥＭＡを合成する場合と同じ手順を使用して合成した。簡単に記載すると、デキストラン４００００（１０ｇ）およびＤＭＡＰ（２ｇ、１６．３ｍｍｏｌ、デキストランのグリコピラノースユニットに対して０．２５当量）を乾燥ＤＭＳＯ（９０ｍｌ）に溶解した。次いで、乾燥ＤＭＳＯ（５ｍｌ）に溶解したＭＥＥ−ラクタート−ＣＩ（例えば、９のＤＶav、５．７ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を窒素雰囲気下において室温で４日間攪拌した。その後、濃ＨＣｌ（２ｍｌ、１当量）を加え、ＤＭＡＰおよびイミダゾールを中和することによって反応を停止させた。反応混合物を４℃で水に対して徹底的に透析した（逆浸透）。ｄｅｘ−ラクタート生成物を凍結乾燥によって集めた。微量の未結合の乳酸オリゴマーを除くために、ｄｅｘ−ラクタート生成物（１０ｇ）をジクロロメタン（４００ｍｌ）で抽出した。生成物を４０℃の真空乾燥器で乾燥して、ＤＰavが９であり、かつ置換度（ＤＳ、デキストランのグルコピラノースユニット１００個あたりのオリゴマーの数）が３であるｄｅｘ−ラクタートを得た。ＤＳは、（ｘ・１００）／ｙとして1Ｈ−ＮＭＲによって計算される。この場合、ｘは、（３・ＤＰ）によって除される１．４１ｐｐｍにおける乳酸オリゴマーのＣＨ3基の積分値であり、ＤＰは重合度であり、ｙは、５．１４ｐｐｍ〜４．９５ｐｐｍにおけるデキストランのアノマープロトンの積分値である。
【０１０１】
1Ｈ−ＮＭＲ（１２．５％2Ｈ2Ｏ／ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ５．１４〜４．９５（広いｍ、残留ＯＨ、ＣＨ、ＣＨ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ）、４．６５（広いｓ、デキストランのアノマープロトン）、４．１６（ｍ、２Ｈ、ＣＨ2−Ｏ−Ｃ（Ｏ））、３．８４〜３．１８（ｍ、（６Ｈ）デキストラン、（２Ｈ）ＣＨ3−Ｏ−ＣＨ2、（４Ｈ）ＣＨ2−Ｏ、（３Ｈ）ＣＨ3−Ｏ）、１．４１（重なったｄ、ＣＨ3−ＣＨ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｎ、ＣＨ−ＣＨ3）。
【０１０２】
13Ｃ−ＮＭＲ（１２．５％2Ｈ2Ｏ／ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１７０．４  Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ2、１６９．８  Ｃ＝Ｏ、９８．５  Ｃ芳香族、７３．７  Ｃ3、７２．１  Ｃ2、７１．６  ＣＨ2、７０．７  Ｃ5、７０．３  Ｃ4、６９．９  ＣＨ2、６９．８  （ＣＨ3）ＣＨ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ｄｅｘ、６９．３  ＣＨ、６８．５  ＣＨ2、６６．２  ＣＨ2（ｄｅｘ）、６４．８  ＣＨ2、５８．５  ＣＨ、２０．６  ＣＨ3−ＣＨ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ｄｅｘ、１６．９  ＣＨ3。
【０１０３】
レオロジー実験。レオロジー実験のために、２種類のポリマー溶液を調製した：１つはｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートを含有し、もう一方はｄｅｘ−（Ｄ）ラクタートを含有する。溶解時間は室温で少なくとも１日であった。ｄｅｘ−ラクタートの加水分解を防止するために、酢酸塩緩衝液（ｐＨ４）を溶媒として選択した。
【０１０４】
等量のｄｅｘ−（Ｌ）ラクタート溶液およびｄｅｘ−（Ｄ）ラクタート溶液を混合し、均一にして、素早くレオメーター（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｇｅｎｔ、ベルギー）のＡＲ１０００装置）に負荷した。測定の大部分については、フラットプレートによる測定装置（アクリル製、４ｃｍの直径、１ｍｍのすき間）を使用した。コーン−プレートによる測定装置（スチール製、１度の角度を有する２ｃｍの直径、３１μｍのすき間）を、少量のサンプルしか得られない場合には使用した。ｄｅｘ−ラクタート溶液のゲル化が測定装置のコーンとプレートとの間で生じた。溶媒トラップを使用して、溶媒の蒸発を防止した。さらに、シリコンオイル（１１０ｍＰａ・ｓ）の薄い層を適用して、ｄｅｘ−ラクタートサンプルの周りを囲み、それによって蒸発を防止した。
【０１０５】
ｄｅｘ−ラクタート溶液の混合物のゲル化を、剪断貯蔵弾性率（Ｇ’）ならびに損失弾性率（Ｇ”）を２０℃で６時間〜１８時間にわたって測定することによってモニターした。１Ｈｚの振動数および１％の制御されたひずみを与えた。これらの実験で使用されたひずみは、ｄｅｘ−ラクタートヒドロゲルの変形に対する変形の影響を最小限にするためにできる限り小さくした。ゲル化の最後に、２種類のレオロジー測定を行った。最初に、クリープ実験を行い、サンプルの粘弾性的な性質を明らかにした。したがって、一定の力（１％の変形を得るためにゲル化測定の最後に加えられた力に等しく、これは直線的な粘弾性範囲内にある）を６０秒間加え、その間のひずみをモニターした。次いで、温度を２０℃から８０℃に３０分で上昇させ、その間にいくつかのレオロジーパラメーターをモニターした（１Ｈｚの振動数、１％のひずみ）。８０℃において、クリープ実験を再び行った。１％の変形を得るために８０℃で加えられた力に等しい一定の力を加えた。その後、サンプルを２０℃に３０分で冷却し、その間のＧ’およびＧ”をモニターし（１Ｈｚの振動数、１％のひずみ）、その後、再びクリープ実験を行った。
【０１０６】
コントロールとして、同じレオロジー実験を、ｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートの溶液を用いて行った。物理的に架橋したｄｅｘ−ラクタートヒドロゲルのレオロジー挙動を化学的に架橋したゲルと比較するために、測定を、メタクリル酸化デキストラン（ｄｅｘ−ＭＡ）に基づくヒドロゲルで行った。ｄｅｘ−ＭＡヒドロゲルは、ｄｅｘ−ＭＡ水溶液（４のＤＳ、０．０１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）において１０ｗ／ｗ％のｄｅｘ−ＭＡ）のラジカル反応によって調製された。溶液Ａが、５０μｌのＴＥＭＥＤ（５００μｌ／ｍｌ、ｐＨを７に調節）を４５０μｌのｄｅｘ−ＭＡ溶液に加えることによって得られ、溶液Ｂは、４１０μｌのｄｅｘ−ＭＡ溶液と９０μｌのＫＰＳ溶液（０．０１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）において５０ｍｇ／ｍｌ）との混合物であった。１００μｌの溶液ＡおよびＢを混合して、レオメーターの測定装置に直接負荷した。
【０１０７】
レオロジー測定を、ｄｅｘ−ラクタート生成物の場合と同じ方法で行った。
ＮＭＲ分光測定。ＮＭＲスペクトルを、Ｇｅｍｉｎｉ３００ＭＨｚ分光装置（Ｖａｒｉａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｉｎｃ．、ＮＭＲ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ、米国）を用いて記録した。約３０ｍｇの乳酸オリゴマーを０．８ｍｌの重水素化クロロホルムに溶解し、３０ｍｇのｄｅｘ−ラクタートを０．８ｍｌのジメチルスルホキシド−ｄ6と０．１ｍｌの2Ｈ2Ｏとの混合物に溶解した（すべての溶媒はＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｎｄｏｖｅｒ、米国）から得られた）。1Ｈ−ＮＭＲの場合、クロロホルム（７．２６ｐｐｍ）を基準線として使用し、ＤＭＳＯ−ｄ6の場合にはＤＭＳＯの中心線を２．５０ｐｐｍに設定した。４．５μｓのパルス長（約１２μｓのＰＷ90）を使用し、緩和遅延は１５ｓであった。13Ｃ−ＮＭＲの場合、パルス長を４．５ｍｓに設定し（約１２μｓのＰＷ90）、緩和遅延は２ｓであった。７６．９ｐｐｍにおけるクロロホルム三重線の中心線を基準線として使用し、ＤＭＳＯ−ｄ6（９９．９％の3Ｈ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｎｄｏｖｅｒ、米国）の場合には、ＤＭＳＯの中心線を３９．５ｐｐｍに設定した。
【０１０８】
ＦＴＩＲ透過分光法および光音響分光法（ＰＡＳ）。乳酸オリゴマーのＩＲ透過スペクトルを、ＢｉｏＲａｄ  ＦＴＳ−２５干渉計／分光計を用いて記録した。Ｌ−乳酸オリゴマーの薄膜ならびにＬ型とＤ型との混合物の薄膜をジクロロメタン溶液からＫＢｒ錠上に注いだ。インターフェログラムを、重水素化トリグリシン硫酸塩（ＤＴＧＳ）を用いて２ｃｍ-1の分光分解能において高速走査モード（５ｋＨｚ）で記録した。３２回の走査を平均化して、良好な信号対雑音比が得られた。フーリエ変換により、純粋なＫＢｒ錠から同一のパラメーター設定で得られる背景スペクトルについて規格化されたＩＲ透過スペクトルが得られる。ｄｅｘ−ラクタートのＩＲ光音響（ＰＡ）スペクトルは、ＢｉｏＲａｄ  ＦＴＳ−６０００ステップ走査干渉計／分光計を用いて得られた。レオロジー実験の後、選択されたｄｅｘ−ラクタート生成物を室温で一晩乾燥させた。これらの生成物のＩＲスペクトルをＰＡ検出法で測定した。この方法の一般的な長所は、サンプル（すなわち、ｄｅｘ−ラクタート生成物）のさらなる調製が必要でないということである。したがって、固体物質のＩＲスペクトルを直接かつかなり迅速に得ることができる。インターフェログラムを、ＭＴＥＣ−２００光音響出器を使用して８ｃｍ-1の分光分解能で記録した。インターフェログラムは、干渉計のステップ走査モードにおいて、可動鏡の８００Ｈｚのステップ周波数で得られた。干渉計のステップ走査モードにおける走査により、はるかに良好な信号対雑音比が得られた。３２回の走査を平均化し、フーリエ変換により、ｄｅｘ−ラクタートのＩＲ−ＰＡスペクトルが得られた。すべてのＩＲ−ＰＡスペクトルは、ＰＡ基準サンプルのカーボンブラックを使用して正規化された。
【０１０９】
結果
ラクタートグラフト化デキストランの合成。ｄｅｘ−ラクタートの合成（図１）において、本質的には、ｄｅｘ−ラクタート−ＨＥＭＡを合成する場合と同じ方法が使用された。最初に、乳酸オリゴマー（３）がラクチドの開環重合によって合成された。ヒドロキシル末端基をＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ、４）で活性化した後、得られたラクタート−ＣＩ（５）をデキストラン（７）に結合させて、ｄｅｘ−ラクタート（８）を得た。室温で４日間の反応という標準的な反応環境のもとでの乳酸オリゴマーの取込みは約３０％であった。６０％までのより大きな取込み度が、より長い反応時間（１８日〜２４日）によって、あるいはより高い反応温度（８０℃）によって達成され得る。ＨＰＬＣ分析により、選択された反応条件のもとではエステル交換が生じていないことが明らかにされた。
【０１１０】
ｄｅｘ−ラクタート溶液のゲル化。図４には、ｄｅｘ−（Ｌ）ラクタート溶液、およびｄｅｘ−（Ｌ）ラクタート溶液とｄｅｘ−（Ｄ）ラクタート溶液との混合物の、時間を関数とするレオロジー特性が示されている。ｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートのＧ’およびｔａｎδは時間とともに変化しなかった。これに対して、ｄｅｘ−（Ｌ）ラクタート溶液とｄｅｘ−（Ｄ）ラクタート溶液との混合物は、Ｇ’の増大（１８時間後でさえ、実際には平坦な値に達しなかった）およびｔａｎδの劇的な低下（１．２から０．１）を時間とともに示した。網目構造の形成は、エナンチオマー乳酸鎖の会合（ステレオコンプレックスの形成）に起因し得る。Ｇ’が実際に平坦な値に達しないという事実は、ゼラチンなどの物理的に架橋した網目構造体において観測されることが多い。例えば、Ｂｏｔ，Ａ．、Ｖａｎ  Ａｍｅｒｏｎｇｅｎ，Ｉ．Ａ．、Ｇｒｏｏｔ，Ｒ．Ｄ．、Ｈｏｅｋｓｔｒａ，Ｎ．Ｌ．、Ａｇｔｅｒｏｆ，Ｗ．Ｇ．Ｍ．、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｇｅｌｓ  ａｎｄ  Ｎｅｔｗｏｒｋｓ、１９９６、４、１８９〜２２７を参照のこと。
【０１１１】
図５には、約１８時間後の図４のサンプルに対するクリープ実験の結果が示されている。遅延プロフィルは、ｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートに関する十分な粘性的挙動を示している（図５Ａ）。これは、観測されたｔａｎδの大きな値（図４）と一致している。ｄｅｘ−ラクタート混合物の場合、弾性的挙動がクリープ実験（図５Ｂ）において認められた。これは、ｔａｎδの低い値（図４）と一致している。
【０１１２】
熱可逆性。化学的に架橋したメタクリル酸化デキストランゲルのレオロジー特性を温度の関数としてモニターした。図６は、Ｇ’が温度に比例して増大したことを示しており、これはフローリーのゴム弾性理論と一致している。８０℃において、ｄｅｘ−ＭＡヒドロゲルは、クリープ実験から認められるように十分な弾性を依然として維持していた（結果は示されず）。冷却時に、逆のＧ’プロフィルが認められ、２０℃におけるＧ’は加熱前のＧ’と等しかった。
【０１１３】
これに対して、ｄｅｘ−ラクタートゲルは完全に異なる温度依存性を示した。ｄｅｘ−ラクタートゲルを加熱したとき、Ｇ’は低下した（図６）。混合物の８０℃における喪失弾性率（Ｇ”）は、ｄｅｘ−ラクタートの単一異性体のＧ”とほぼ等しかった（示さず）。このことは、架橋が混合物に残っていないことを示している。この温度における両方の系のクリープ実験は、図５Ａのような粘性的挙動を示した。図６は、冷却したとき、Ｇ’が増大し、最終的には２０℃におけるＧ’の元の値に達したことを示している。これは垂直の矢によって示されている。クリープ実験は、図５Ｂと同じパターンを示した。これにより、両異性体の混合物の完全な熱可逆的な性質、および架橋の物理的な特性が証明される。
【０１１４】
振動数を関数とする弾性的な性質。図７には、ｄｅｘ−ラクタートヒドロゲルおよび化学的に架橋したメタクリル酸化デキストランヒドロゲルのＧ’プロフィルが、それぞれ、振動数を関数として比較されている。ｄｅｘ−メタクリラートヒドロゲルのＧ’は、加えられた振動数とは無関係であった。このことは、再度ではあるが、永久的（化学的）な架橋を伴うヒドロゲルにおいて予想される理想的なゴム状の網目構造の存在を示している。（例えば、Ｄｅ  Ｓｍｅｄｔ，Ｓ．Ｃ．、Ｌａｕｗｅｒｓ，Ａ．、Ｄｅｍｅｅｓｔｅｒ，Ｊ．、Ｖａｎ  Ｓｔｅｅｎｂｅｒｇｅｎ，Ｍ．Ｊ．、Ｈｅｎｎｉｎｋ，Ｗ．Ｅ．、Ｒｏｅｆｓ，Ｓ．Ｐ．Ｆ．Ｍ．、Ｍｉｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、１９９５、２８、５０８２〜５０８８を参照のこと）。しかし、ｄｅｘ−ラクタートゲルのＧ’は、振動数の低下とともにかなり低下した。これにより、再度ではあるが、架橋の物理的な特性、すなわち、可逆的（一時的）な特性が明らかにされる（図７）。振動数が低い場合、長い時間スケールで、架橋が破壊され、そして再形成される（網目構造の緩和プロセス）。これに対して、振動数が高い場合、時間スケールは一層小さくなり、架橋は永久的であるかのように作用し、これによりＧ’の増大がもたらされる。
【０１１５】
ゲル形成に対するＤＰ、ＤＳおよび水分含有量の影響。図４に示されるＧ’プロフィルは、ＤＰavが９で、ＤＳが３であるｄｅｘ−ラクタートサンプルを使用して得られた。より大きなＤＰおよびより大きなＤＳを有するｄｅｘ−ラクタートを使用した場合、ｄｅｘ−（Ｌ）ラクタート（またはｄｅｘ−（Ｄ）ラクタート）溶液は粘弾性的な挙動を示した。これは、より長い乳酸鎖と、それと同じキラリティーのオリゴマーとの会合によって生じていると考えられる。このような会合はまた水溶性を一層悪くする。しかし、このサンプルにおいて、時間を関数とするゲル化は認められなかった。これに対して、ｄｅｘ−ラクタート混合物は、Ｇ’の増大から認められるように明らかにゲル化した（図８Ａ）。ゲルの形成はクリープ実験によって確認された：ｄｅｘ−ラクタート混合物は、ほとんど弾性的な挙動を示したが、ｄｅｘ−（Ｌ）ラクタート系は、典型的な粘弾性的な材料である（図８Ｂ）。
【０１１６】
図９には、ｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートをｄｅｘ−（Ｄ）ラクタート溶液と混合した１８時間後におけるＧ’に対する重合度（Ａ）、水分含有量および置換度（Ｂ）の影響が示されている。ＤＰavが５であるｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートをＤＰavが５であるｄｅｘ−（Ｄ）ラクタート溶液と混合することにより、対応するｄｅｘ−（Ｌ）ラクタート系のＧ’値と比較した場合、Ｇ’のわずかな増大がもたらされた。このことは、オリゴマーが相互に会合するために十分な長さを有していないという事実の結果として、弱いヒドロゲルが形成されたことを示している。より大きな重合度を有するｄｅｘ−ラクタートを混合することにより、異性体の一方に対するＧ’と比較した場合、混合物のＧ’に対する実質的により大きな値を反映するようなゲルの形成がもたらされる（図９Ａの白丸および黒丸を比較のこと）。図９Ｂに示されているように、より強いゲルが、置換度を大きくすることによって、そして系の水分含有量を低下させることによって得られた。
【０１１７】
デキストランにグラフト化された単分散乳酸オリゴマー。
レオロジー。重合度が８〜１２の範囲にある単分散乳酸オリゴマーを、ゲル形成に対する乳酸鎖長の影響を明らかにするためにデキストランに結合させた。乳酸オリゴマーの重合度が同じであるｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートとｄｅｘ−（Ｄ）ラクタートとの混合物をそのゲル形成能について調べた（表４）。これらのデータから、大きな置換度（１７のＤＳ）または低い水分含有量（７０％）が使用された場合でさえ、ＤＰが１１よりも低いｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートとｄｅｘ−（Ｄ）ラクタートとの混合物は主として粘性的であることが理解され得る。一方、ＤＰが１１または１２であるｄｅｘ−ラクタートの場合、Ｇ’の増大が、ｄｅｘ−（Ｌ）ラクタート生成物およびｄｅｘ−（Ｄ）ラクタート生成物を混合した後で認められ、ヒドロゲルが形成された。ゲルの形成は、混合物のほぼ弾性的な挙動を示したクリープ実験によって確認された。ゲルはまた、ＤＰが１２で、ＤＳが１７であるｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートを用いて得られた。
【０１１８】
【表４】
0004865947.tif 000005
【０１１９】
ＦＴＩＲ透過分光測定および光音響分光測定。赤外分光法を適用して、単分散ｄｅｘ−ラクタートゲルにおける可能なステレオコンプレックスの形成を調べた。ＩＲ分光法はポリ（ラクチド）（ＰＬＡ）結晶性ホモポリマーおよびＰＬＡステレオコンプレックスの１０3らせん配置と３1らせん配置とをそれぞれ区別できることが、Ｖｅｒｔ他（Ｋｉｓｔｅｒ，Ｇ．、Ｇａｓｓａｎａｓ，Ｇ．、Ｖｅｒｔ，Ｍ．、Ｐｏｌｙｍｅｒ、１９９５、３９、２６７〜２７３）によって明らかにされた。鋭いＩＲバンド形状が単分散の生成物について認められたので、それらを解釈のために使用した。遊離の単分散乳酸オリゴマー（８のＤＰ）、および混合したときにステレオコンプレックスを形成するその対応する混合物のＦＴＩＲ透過スペクトルを記録した（図１０）。ステレオコンプレックスにおいて、最も顕著な違いは、１２７０ｃｍ-1における吸収ピーク（δＣＨ3、νＣＯＣ、点線により示される）の消失であった。
【０１２０】
レオロジー測定の後、ｄｅｘ−（単分散）ラクタート生成物を周囲温度で乾燥させた。次いで、これらの乾燥させた生成物のＩＲスペクトルをＰＡ検出法で記録した。その結果、ＦＴＩＲ透過法と定量的に比較できることが判明した。図１１は、類似するＩＲスペクトルが、８のＤＰおよび１１のＤＰを有するｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートについて、そしてＤＰが８であるｄｅｘ−ラクタート混合物について得られたことを示している。この場合、ゲル化はほとんど生じなかった（表４）。興味深いことに、ＤＰが１１であるｄｅｘ−ラクタート混合物の場合（レオロジー実験によりゲルの形成が明らかにされた、表４）、いくつかの明瞭なＩＲ振動数の変化がＩＲスペクトルにおいて認められた。１２７０ｃｍ-1から１２６０ｃｍ-1への認められた変化（図１１Ｂ）は、ｄｅｘ−ラクタート混合物においてステレオコンプレックスが形成されたためであると考えることができる。表４には、種々のｄｅｘ−ラクタート混合物におけるＩＲ−ＰＡで検出されるようなステレオコンプレックスの存在が示されている。ＤＰが１１および１２である系の場合、ゲル化（レオロジーに基づく）は、ステレオコンプレックスの存在と明らかに関連していた。
【０１２１】
ＤＰが１０（６のＤＳおよび１５のＤＳ）であり、水分含有量が７０％であるｄｅｘ−ラクタート混合物は、同様に、（１２７０ｃｍ-1から１２６０ｃｍ-1への）同じＩＲ振動数変化を示したが、これらの混合物の場合、レオロジーデータは主として粘性的な挙動を示した。このことは、ステレオコンプレックスが、ＤＰが１０で、水分含有量が７０％であるｄｅｘ−ラクタート混合物において形成されたことを示している。しかし、ほんの少数の物理的相互作用（ステレオコンプレックス）が存在し得る。これは、完全な弾性的な網目構造を形成するのに十分ではない。遊離の乳酸オリゴマーの場合、７の最小ＤＰがステレオコンプレックスの形成には必要である。ｄｅｘ−ラクタートの場合、ステレオコンプレックスの形成のために必要とされる反対のキラリティーの少なくとも７個の乳酸ユニットの平行した配向を得るために、より長い乳酸鎖が必要とされる。
【０１２２】
実施例５
ステレオコンプレックスの形成により架橋されたデキストランゲルからのタンパク質の放出
初期水分含有量が８０％であるゲルを下記のように調製した。ｄｅｘ−Ｌ−ラクタート（９のＤＰav、１２のＤＳ）の約４００ｍｇ（正確に重量を測る）をリゾチームまたはＩｇＧの水溶液（１００ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．２）において３０ｍｇ／ｍｌ）の１．６ｍｌに加えた。リゾチームおよびＩｇＧをモデルの活性成分として使用した。別のバイアルにおいて、４００ｍｇのｄｅｘ−Ｄ−ラクタート（９のＤＰav、１４のＤＳ）をリゾチームまたはＩｇＧの水溶液（１００ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．２）において３０ｍｇ／ｍｌ）の１．６ｍｌに加えた。修飾デキストランは４℃で４８時間にわたって可溶化させた。その後、９００ｍｇの両溶液を十分に混合し、プラスチックチューブ（１．０ｃｍの直径、２．０ｃｍの長さ）において４℃で７２時間ゲル化させた。
【０１２３】
初期水分含有量が６０％であるゲルを、タンパク質溶液に加えられるｄｅｘ−ラクタートＭＥＥの量を調節することによって調製した。ゲルをプラスチックチューブから取り出し、重量測定し、リン酸塩緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ７．２）の水溶液の２０ｍｌに加え、３７℃でインキュベーションした。一定の時間で２ｍｌのサンプルを取り出し、新しい緩衝液により置換した。
【０１２４】
種々のサンプルにおけるタンパク質濃度をＢＣＡアッセイ（Ｋ．Ｓｍｉｔｈ、Ｒ．Ｉ．Ｋｒｏｈｎ、Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ａ．Ｋ．Ｍａｌｌｉａ、Ｆ．Ｈ．Ｐｒｏｖｅｎｚａ、Ｅ．Ｋ．Ｆｕｊｉｍｏｔｏ、Ｎ．Ｍ．Ｇｏｅｋｅ、Ｂ．Ｊ．Ｏｌｓｏｎ、Ｄ．Ｃ．Ｋｌｅｎｋ、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第１５０巻、７６頁〜８５頁、１９８５）で測定して、放出されたタンパク質の累積量を計算するために使用した。図１２Ａおよび図１２Ｂにはその結果が示されている。
【０１２５】
これらの結果から、放出はタンパク質の流体力学的サイズおよびゲルの初期水分含有量に依存していることが導かれる。
【０１２６】
実施例６
末端遊離カルボン酸基を有するラクタートオリゴマーの合成
ポリ（Ｌ−ラクチド）およびポリ（Ｄ−ラクチド）のステレオコンプレックスにおいて、ポリ（Ｌ−ラクチド）セグメントおよびポリ（Ｄ−ラクチド）セグメントは平行様式で詰め込まれる（Ｏｋｉｈａｒａ，Ｔ．、Ｔｓｕｊｉ，Ｍ．、Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，Ａ．、Ｋａｔａｙａｍａ，Ｋ．Ｉ．、Ｔｓｕｊｉ，Ｈ．、Ｈｙｏｎ，Ｓ．Ｈ．、Ｉｋｅｄａ，Ｙ．、Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｐｈｙｓ．、１９９１、Ｂ３０（１＆２）、１１９〜１４０）。オリゴマーの１つがその末端ヒドロキシル基を介してデキストランに結合され、それ以外のオリゴマーがカルボン酸を介して結合されたときに、デキストランにグラフト化されたオリゴマー間のステレオコンプレックスの形成が高められるかどうかを調べた。この目的のために、１つのオリゴマーをその末端ヒドロキシル基を介してデキストランに結合させ、キラリティーが反対のオリゴマーをそのカルボン酸基を介して結合させた。
【０１２７】
末端カルボン酸基を有する乳酸オリゴマーを下記のように合成した。Ｌ−ラクチド（５ｇ、３５ｍｍｏｌ）およびベンジルアルコール（０．８５ｇ、７．８ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃に加熱した。オクタン酸第一スズ（スズ（ＩＩ）ビス（２−エチルヘキサノアート）、ＳｎＯｃｔ2、７０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を１２０℃で２時間攪拌した。末端ヒドロキシル基を保護するために、無水酢酸（０．８７５ｇ、８．６ｍｍｏｌ）を加え、加熱を３時間続けた。生じた酢酸および過剰の無水酢酸を減圧にすることにより除き、その後、反応混合物を冷却した。粘稠性の透明なペーストが定量的に得られた。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）７．３４（ｍ、５Ｈ、ＡｒＨ）、５．０２〜５．２３（ｍ、１１Ｈ、ＣＨ−ＯＣ＝ＯおよびＡｒＣＨ2Ｏ）、２．１２（ｓ、３Ｈ、ＣＨ3＝Ｏ）、１．４７〜１．６２（ｍ、２７Ｈ、ＣＨ3、ラクタート）。
【０１２８】
得られたベンジル−ラクタート9アセタートを３０ｍｌの酢酸エチルに溶解した。窒素を溶液に吹き込み、３０ｍｇのＰｄ／Ｃを加えた。混合物を、水素を充填した風船に接続し、室温で２４時間攪拌した。混合物をセライトでろ過し、溶媒をロータリーエバポレーターで除いた。最後の微量の酢酸エチルを高真空下で除いた。粘稠性の透明な液体が定量的に得られた（α−カルボキシルラクタート9アセタート）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）７．３４（ｍ、５Ｈ、ＡｒＨ）、５．０２〜５．２３（ｍ、１１Ｈ、ＣＨ−ＯＣ＝ＯおよびＡｒＣＨ2Ｏ）、２．１２（ｓ、３Ｈ、ＣＨ3＝Ｏ）、１．４７〜１．６８（ｍ、２７Ｈ、ＣＨ3、ラクタート）。
【０１２９】
デキストラン−（ラクタート9）アセタートの合成。ガラス器具を乾燥器において１５０℃で少なくとも１時間乾燥させた。デキストランを真空乾燥器において４０℃で乾燥させた。熱い１０ｍｌフラスコに１００ｍｇのＬｉＣｌを入れ、排気して塩を乾燥させた。室温に冷却した後、５３５ｍｇの乾燥デキストラン４０，０００を加え、フラスコを３回排気して、窒素を充填した。その後、フラスコをセプタムで栓をし、５ｍｌの乾燥ＤＭＦを乾燥シリンジで加えた。混合物を１００℃に加熱して、デキストランを溶解させ、その後、室温に冷却した。
【０１３０】
別の１０ｍｌフラスコに、α−カルボキシルラクタート9アセタート（２３５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、４（ジメチルアミノ）ピリジン−４−トルエンスルホナート（１６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（１００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を入れた。フラスコを３回排気して、窒素を充填し、そしてフラスコをヘアドライヤーでわずかに加熱した。次いで、フラスコをセプタムで栓をし、デキストラン溶液をニードルの助けによりフラスコに移した。混合物を室温で２４時間攪拌した。
【０１３１】
反応混合物を２０ｍｌの水で希釈し、４℃で水（５Ｌ）に対して一夜透析した。生成物を凍結乾燥し、その後、５０ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2とともに１時間攪拌し、ろ過し、真空下で乾燥した。
【０１３２】
収率：８２％の白色粉末。ＤＳは９．７であった（ＮＭＲ分析）。他の置換度を有する生成物を、デキストラン／オリゴマーの比を調節することによって合成した。
【０１３３】
レオロジー評価。レオロジー実験のために、２種類のポリマー溶液を調製した：１つはｄｅｘ−（Ｌ）ラクタートを含有し、もう一方はｄｅｘ−（Ｄ）ラクタートを含有する。溶解時間は室温で少なくとも１日であった。ｄｅｘ−ラクタートの加水分解を防止するために、酢酸塩緩衝液（ｐＨ４）を溶媒として選択した。
【０１３４】
等量のｄｅｘ−（Ｌ）ラクタート溶液およびｄｅｘ−（Ｄ）ラクタート溶液を混合し、均一にして、素早くレオメーター（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｇｅｎｔ、ベルギー）のＡＲ１００装置）に負荷した。コーン−プレートによる測定装置（スチール製、１度の角度を有する２ｃｍの直径、３１μｍのすき間）を、少量の材料しか得られない場合には使用した。ｄｅｘ−ラクタート溶液のゲル化が測定装置のコーンとプレートとの間で生じた。溶媒トラップを使用して、溶媒の蒸発を防止した。さらに、シリコンオイル（１１０ｍＰａ・ｓ）の薄い層を適用して、ｄｅｘ−ラクタートサンプルの周りを囲み、それによって蒸発を防止した。
【０１３５】
ｄｅｘ−ラクタート溶液の混合物のゲル化を、剪断貯蔵弾性率（Ｇ’）ならびに損失弾性率（Ｇ”）を２０℃で１８時間にわたって測定することによってモニターした。１Ｈｚの振動数および１％の制御されたひずみを与えた。これらの実験で使用されたひずみは、ｄｅｘ−ラクタートヒドロゲルの変形に対する変形の影響を最小限するためにできる限り小さくした。２つの系のレオロジー特性を比較した。
【０１３６】
系Ｉにおいて、Ｌ−乳酸オリゴマーおよびＤ−乳酸オリゴマーはともに、本質的には実施例１〜４に記載されているように、その末端ヒドロキシル基を介してデキストランに結合している（ｄｅｘ−ラクタート−ＭＥＥ）。系ＩＩでは、Ｌ−乳酸オリゴマーは、上記の本実施例に記載されているように、その末端カルボン酸基を介して結合している（ｄｅｘ−ラクタート−アセタート）。Ｄ−オリゴマーは、本質的には実施例１〜４に記載されているように、その末端ヒドロキシル基を介して結合した（ｄｅｘ−ラクタート−ＭＥＥ）。表５にその結果をまとめる。
【０１３７】
【表５】
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【０１３８】
表５は、そのヒドロキシル基を介したオリゴマーと、そのカルボン酸基を介したキラリティーが反対のそれ以外のオリゴマーとを結合させることによって、２つのオリゴマーがそのヒドロキシル基を介して結合しているゲルと比較して、より強いゲルが得られたことを明瞭に示している（系ＩＩのＧ’値を、系Ｉの対応するゲルのＧ’値と比較すること）。
【０１３９】
したがって、１つのオリゴマーを、その末端ヒドロキシル基を介してデキストランに結合させ、そしてキラリティーが反対のオリゴマーを、そのカルボン酸基を介して結合させることは好都合である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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