(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
膵臓腫瘍に苦しむ患者において化学療法剤を用いた治療の副作用を低減するための医薬の製造におけるパルボウイルスの使用であって、化学療法剤の用量を維持または上昇させる中で該副作用の低減が生じ、該副作用は、体重維持および／または血液学的パラメーターに関連するものであり、パルボウイルスが、化学療法剤を用いて実施される治療の前または該治療と同時に投与される、使用。
【請求項２】
用いるパルボウイルスがアデノ随伴ウイルスである請求項１記載の使用。
【請求項３】
アデノ随伴ウイルスがＡＡＶ−２ウイルスである請求項２記載の使用。
【請求項４】
パルボウイルスを、体重１ｋｇあたり１０9〜１０10粒子の用量で使用する請求項１〜３いずれか記載の使用。
【請求項５】
パルボウイルスを、静脈内、経皮、経口、腹腔内、動脈内または腫瘍内に投与する請求項１〜４いずれか記載の使用。
【請求項６】
化学療法剤が、化学療法に基づいて投与される請求項１〜５いずれか記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、腫瘍患者または慢性もしくは消耗性疾患を有する患者の一般状態を改善するためのパルボウイルスの使用に関する。
【０００２】
腫瘍患者および慢性もしくは消耗性疾患を有する患者は、自身の疾患に加え、不良な一般状態にもしばしば苦しむ。この不良な一般状態は、とりわけ、異常な血液検査値、疲労、エネルギー消耗および食欲減退として現れる。この不良な一般状態は、遺伝子毒性剤(genotoxischen Agentien)を用いて行なわれる必要な治療によってしばしば悪化する。これは、悪性疾患に苦しむ患者に特にあてはまる。外科的除去とともに、悪性疾患の治療は、現在、主として、化学療法剤もしくは放射線療法剤として腫瘍細胞を攻撃および破壊する遺伝子毒性剤の適用に基づいて行なう。通常、腫瘍細胞の死は、プログラムされた細胞死（アポトーシス）を誘起することにより引き起こされる。しかしながら、遺伝子毒性剤の使用は、吐気、悪阻、造血の低下、胃腸障害、出血などの副作用の発生により制限される。したがって、遺伝子毒性剤は、最大許容副作用(maximal tolerierbaren Nebenwirkungen)により許容される量より高用量で使用することができない。多くの場合、副作用は、患者にとって不快であったり、命にかかわることすらあるため、今のところ許容可能な用量の遺伝子毒性物質では、すべての腫瘍細胞を排除するには充分でない。同じことが、慢性炎症性疾患、あらゆる形態の自己免疫疾患または遺伝子毒性療法が、例えば化学療法剤、放射線療法剤もしくは免疫療法剤の形態で使用される他の適応症にもあてはまる。したがって、遺伝子毒性剤の有効性を増大するための治療の結果として生じる副作用を低減する可能性を提供することが特に望ましい。かかるアプローチはまた、腫瘍患者または慢性もしくは消耗性疾患に苦しむ患者の一般臨床状態を改善するはずである。
【０００３】
したがって、本発明の目的は、腫瘍患者または慢性もしくは消耗性疾患に苦しむ患者の一般的状態を著しく改善することである。遺伝子毒性療法により誘導される副作用により生じる問題もまた減少する。その結果、遺伝子毒性剤は、より多くの量で使用可能となり、また、高用量での患者の耐性が良好になる。このことは、治療の有効性を付加し、患者の生存率を向上させる。
【０００４】
本問題は、特許請求の範囲に規定された主題により解決される。
【０００５】
本発明では、パルボウイルス、特にアデノ随伴ウイルスを用い、これを用いなければ、遺伝子毒性処置を受けなければならない患者において生じる副作用を低減する。また、疾患をもつ個体の一般状態は著しく改善される。これは、新生物形成性疾患により引き起こされる腫瘍悪液質の形成および骨髄減少(Knochenmarksdepression)が著しく低減されるため、腫瘍患者に特にあてはまる。
【０００６】
本発明は、遺伝子毒性療法に基づくパルボウイルスの投与が、投与しない場合の一般的な副作用を著しく低減するという観察に基づく。これは、より高用量の遺伝子毒性剤に耐性となり、治療期間を延長しうるため、治療効果（特に、抗新生物形成効果）の増大を伴う。遺伝子毒性療法とパルボウイルス投与の併用適用により腫瘍処置の有効性を増大し得、同時に、遺伝子毒性処置の副作用を劇的に低減しうる。この作用は、遺伝子毒性剤でもパルボウイルス感染でも通常投与の反復適用では低減されない。化学療法または放射線療法の有効性、なかでも両立性(Vertraeglichkeit)はこのアプローチによりかなり増大しうる。
【０００７】
本発明者の知見によれば、遺伝子毒性療法、例えば化学療法的手段または放射線療法的手段と併用したパルボウイルス感染は、従来の治療の有効性を増大し、副作用の発生を低減するため、別の治療が以前よりも有望になる。本発明では、任意の非病原性パルボウイルスを使用しうる。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、特に有望であり、したがって好ましい。また、パルボウイルス、特にＡＡＶの断片も、それらが所望の効果を有するならば使用することが可能である。ＡＡＶ−２ウイルスまたはその断片を使用することが特に好ましい。
【０００８】
ＡＡＶウイルスは、増殖性(produktive)感染を生じさせるためのヘルパーウイルスとの同時感染を必要とするヒトパルボウイルスである。ＡＡＶは小児期初期にヒトに感染し、ＡＡＶ感染に関連するヒト疾患がないため非病原性であるとみなされている（Ａｄｖ．ｉｎ  Ｖｉｒ．Ｒｅｓ．１９８７，３２，４３−３０６）。ＡＡＶ感染は、免疫応答中和の形成ももたらさないため、任意の時点で再感染が起こり得る。血清疫学的データは、ＡＡＶに対する抗体を有する患者では、ＡＡＶに対する抗体をもたない患者よりも腫瘍性疾患が起こりにくいことを示す。
【０００９】
膵癌細胞を皮下移植した免疫適格ルイス（Ｌｅｗｉｓ）ラットを用いて行った動物実験では、化学療法と同時に行なったＡＡＶ感染が、化学療法のみで処置したラット群と比べて腫瘍進行の低下をもたらすことが示された。さらに、化学療法の間に同時に感染によってＡＡＶ−２を投与したラットは、化学療法単独で処置した動物に対して体重減少の著しい低下を示した。また、ＡＡＶ−２投与と化学療法の併用により動物の覚醒状態が著しく改善することができた。また、血液学的パラメータの欠陥は、化学療法単独で処置した動物よりもＡＡＶ−２感染動物において化学療法によって著しく低い程度になった。
【００１０】
パルボウイルス、特にＡＡＶウイルスは、本発明では、追加的な処置なしで使用することができ、あるいは遺伝子毒性療法の前、それと同時に、もしくはその後に使用することができる。しかしながら、それらは、好ましくは最初の遺伝子毒性処置の前に使用され、この使用は、遺伝子毒性剤を投与する各治療サイクルで反復される。このようにして、通常の使用可能用量の遺伝子毒性剤では通常治療可能でない腫瘍に関して少なくとも部分的な寛解を達成することが可能である。同時に、パルボウイルス感染は、血球算定および体重の維持を含む全体的な生理学的状況をかなり改善する。
【００１１】
遺伝子毒性療法は、好ましくは、癌を処置するために採用される任意の放射線療法もしくは化学療法でありうる。この治療に基づく遺伝子毒性剤は、当業者に周知の化学療法剤（以下を参照）、および種々の放射線源、例えば、α線、β線、γ線、中性子、陽子または他の種類の放射線である。かかる治療法は、これまでに知られており、腫瘍の外科的除去とともに、癌腫性疾患を治療したり、患者の余命をしばらく延長する確立された方法である。したがって、当業者は、放射線療法または化学療法の工程を熟知している。古典的な治療法、化学療法または放射線療法に加え、本発明はまた、パルボウイルス感染と任意の他の形態の抗新生物形成療法との併用を包含する。特に、遺伝子治療的アプローチとの併用を本明細書にて言及すべきである。本発明では、任意の形態の遺伝子治療もしくは免疫療法の腫瘍治療が、組換えウイルスおよびあらゆる非ウイルス性ベクターにより、ならびにパルボウイルスの同時投与による適用により支持される。このことは、特に、いわゆる腫瘍サプレッサー遺伝子、またはいわゆる自殺遺伝子の導入、抗体、サイトカイン、および任意の種類の他の薬物もしくは腫瘍細胞に指向される他の薬物の使用を含む。このことはまた、疾患に対する免疫応答を構築するのに役立つすべてのワクチン接種法を含むすべての免疫調節的(immunmodulatorischen)アプローチによる治療を包含する。
【００１２】
本発明では、パルボウイルス、特にＡＡＶウイルスを、任意の癌タイプに対して使用することができ、胃腸の腫瘍や気道、上部消化器系および下部尿路、神経系、生殖器系ならびにすべての間葉組織および造血系の腫瘍のすべてに関して最大の成功を期待しうる。大腸、肺、膵臓および脳の腫瘍（特に神経膠芽細胞腫）は、好ましいものとして挙げられる。しかしながら、本発明はまた、化学療法剤または放射線療法剤を使用する他の適応症のすべてを包含する。これは、特に、慢性炎症性疾患（例えば、慢性関節リウマチおよびリウマチ形態のさらなる疾患）、あらゆる形態の自己免疫疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎など）または化学療法剤、放射線療法剤もしくは免疫療法剤を使用する他の適応症にあてはまる。このことはまた、患者の一般状態がパルボウイルスの投与により改善されうるすべての慢性消耗性疾患（例えば、任意の種類の腫瘍性疾患、ＨＩＶ感染など）を包含する。
【００１３】
また、化学療法を伴わないパルボウイルス、特にＡＡＶの単独投与は、腫瘍の成長などの慢性消耗性疾患に苦しむ動物の状態を著しく改善しうることがわかった。したがって、本発明はまた、慢性の変性および／または消耗性状態の場合において、一般状態の改善を目的とするパルボウイルスの任意の形態の投与に関する。
【００１４】
本発明による使用は、静脈内、皮下的、動脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、経口的（吸入も）または経皮的である。パルボウイルスはまた、薬理学的局面下で特別な薬物投与システムにより疾患の部位に直接実在(freigesetzt) させうる。これに関連し、ウイルスを投与経路に適合させた適切な製剤に配合する。例えば、静脈内（注入液としてのものも）および腫瘍内の投与には、ウイルスを一般的な生理学的塩溶液、リンガー溶液またはＰＢＳ溶液（リン酸緩衝塩溶液）にて提供することが好ましく、経皮的投与には、軟膏、懸濁液またはゲルの形態で提供することが好ましく、経口投与には、錠剤または糖衣錠の形態で、吸入目的ではエーロゾルスプレーとして提供することが好ましい。
【００１５】
患者の体重に応じて、使用するウイルス用量は、１０9 〜１０10ウイルス粒子／ｋｇ体重である。しかしながら、用量は、医師により決定され、患者の体重、年齢および性別ならびに疾患の重篤度、投与の種類および投与期間に依存する。本発明の組成物はまた、従来の助剤を含み得る。使用する助剤は、担体、結合剤、崩壊(blasting)剤、滑剤、溶剤、可溶化剤、放出促進剤、放出遅延剤、乳化剤、安定剤、着色剤または味覚矯正剤などの通常のものでありうる。
【００１６】
本発明によれば、遺伝子毒性剤、特に化学療法剤（細胞増殖抑制剤）とともに、パルボウイルス、特にアデノ随伴ウイルス、例えばＡＡＶ−２を含んでなる医薬組成物もまた提供される。腫瘍治療においてこれまでの一般的なすべての化学療法剤（細胞増殖抑制剤）または他の治療法は、そのまま、または化学療法剤、例えばシスプラチン(Cis-Platin)およびその誘導体、エトポシド(Etoposid)、メトトレキセート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、イフォスファミド(Ifosphamid)、トロフォスファミド(Trofosfamid) 、ブスルファン、シタラビン、フルオロウラシル、メルカプトプリン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ブレオマイシン、タクソールまたはマイトマイシンとの組み合わせにより使用することができる。
【００１７】
以下の実施例により本発明をより詳細に説明する。
【００１８】
実施例１
免疫適格Ｌｅｗｉｓラットを用いて行なわれる動物実験において、動物にその股間への皮下接種により１×１０6 の腫瘍細胞数を有する同系ＤＳＬ６Ａ膵臓癌細胞を与えた。このように処置した動物の全てにおいてこれらの細胞は増殖し、腫瘍を与えた。４または６週間後、腫瘍はそれぞれ平均サイズ３０ｍｍ2 および６０ｍｍ2 に到達した。５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）に対して２つの異なる用量（動物１匹当たり毎週５ｍｇ／ｋｇ／体重（最小用量）または５０ｍｇ／ｋｇ／体重（最大用量））を使用した。腫瘍接種４週間後の平均腫瘍サイズ３０ｍｍ2 を有する動物を、５−ＦＵに対する最小用量（５ｍｇ／ｋｇ／体重）で治療した。それと対照的に、腫瘍接種６週間後の平均腫瘍サイズ６０ｍｍ2 を有する動物を、５−ＦＵに対する最大用量（５０ｍｇ／ｋｇ／体重）で治療した。同時ＡＡＶ−２感染の効果を調査するために、１×１０8 ウイルス粒子でＡＡＶ−２を各実験動物に１週間に１回腫瘍内に与えた。治療なしの腫瘍保持動物を対照群として供した。実験動物における腫瘍成長および生理的変化に対する単独ＡＡＶ感染の効果を制御できるようにするため、１×１０8 ＡＡＶ−２ウイルス粒子を有する腫瘍保持Ｌｅｗｉｓラットは腫瘍内感染させた（表１）。
【００１９】
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【００２０】
１週間に１回全ての動物について、腫瘍サイズ（長さ×幅）、転移の発生および体重を測定した。ＬＡＳＡ（実験動物科学協会（Laboratory Animal Science Association ））研究委員会の推奨に従って、１週間に１回実験動物についてスコア（ＳＣＯＲＥ）を明らかにし、評価した（実験動物（Laboratory animals) 、１９９０、（２４）、９７−１３０における実験動物科学協会研究委員会の報告）。
【００２１】
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【００２２】
治療の５〜６週間後、それぞれ異なる実験群由来の６匹ずつの動物の尾部静脈から血液１ｍｌを回収し、血液学的パラメーター、白血球数（総数）、ヘモグロビン、ヘマトクリット、血小板数、および白血球分画（好中球、リンパ球、単球）を調べた。
【００２３】
＞２０％体重が減少した時、治療を停止した。調査の終了点は、＞４００ｍｍ2 の腫瘍サイズの拡大または３を超える転移の発生であった。
【００２４】
結果
この実験過程で、腫瘍を保持し治療されていない動物（対照群）は、迅速な腫瘍成長を示すことがわかった。結果として、体重の減少、血球カウントにおける白血球減少および腫瘍のない健康な動物と比較して血球分画により示されるパーセンテージに関して高められた、多形核顆粒球および単球における減少があった。感染によりＡＡＶ−２を与えられた動物は、進行する腫瘍成長にもかかわらず体重において年齢相当の増加を示し、白血球減少を受けなかった。全体として、これらの動物はよりずっと活動的であり、それらの一般状態を評価するためのＬＡＳＡスコアが有意に良好であった。
【００２５】
表：腫瘍接種最大１０週間後の治療なしの腫瘍保持動物とＡＡＶ感染した腫瘍保持動物との間の比較（平均表示）
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【００２６】
腫瘍接種４週間後、平均腫瘍サイズが３０ｍｍ2 であった場合、５ｍｇ／ｋｇ／体重の用量で５−ＦＵを用いる単独化学療法は、腫瘍成長における抑制効果を示さなかった。それと対照的に、等しい用量の５−ＦＵ（５ｍｇ／ｋｇ／体重）と同時ＡＡＶ感染とを組み合わせた治療は、２〜３週間腫瘍成長を停止し得た。その後、腫瘍進行は、５−ＦＵ（５ｍｇ／ｋｇ／体重）でのみ治療した動物と比較して低減した。したがって、１３匹の動物全てが治療６週間後に生存していた一方で、化学療法のみによって治療した９匹の動物のうち５匹が死んだ。そのうえ、さらにＡＡＶで感染した動物は、化学療法の手段のみで治療した動物に比べてより良好なＬＡＳＡスコアおよびより多数の白血球を有した。
【００２７】
表：治療６週間後の５−ＦＵ単独療法（５ｍｇ／ｋｇ／体重、最小用量）と５−ＦＵ（５ｍｇ／ｋｇ／体重）の同時ＡＡＶ感染と組み合わせた治療との間の比較（平均表示）
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【００２８】
腫瘍接種６週間後、腫瘍は、６０ｍｍ2 の平均サイズに到達した。５０ｍｇ／ｋｇ／体重の最大用量を使用する５−ＦＵ化学療法をこれらの動物に単独療法としてまたはＡＡＶ感染と組み合わせてのどちらかで行なった。ここで、腫瘍成長の短期間の停止が、５−ＦＵでのみ治療した動物に対してなされた。治療のさらなる過程において、化学療法のかなりの副作用が現れた。例えば、動物の貧弱な一般状態および平均して２０％を超える体重の減少のために、治療２週目後に治療を中断しなければならなかった。さらにＡＡＶ感染を有する動物はこれらの副作用がなく、最初に腫瘍減少を示した。その後、腫瘍成長は約４週間停止し、対照動物または５−ＦＵでのみ治療された動物と比較してラットの生存期間は有意に延びた。治療６週間後、化学療法に基づいて与えられた最大用量でのみ治療された１２匹のラットのうち９匹が死んだ。それと対照的に、さらにＡＡＶで感染した動物群において全部で１２匹のラットのうち３匹のみが死んだ。経過を示すパラメーターを治療開始５〜６週間後に測定すると、同時ＡＡＶ−２感染なしで化学療法により治療した動物は、明らかな白血球減少、低減されたＬＡＳＡスコアおよび著しく減少した体重を受けたことが明らかになった。化学療法とＡＡＶ感染の両方が与えられた動物は、化学療法−誘導性または腫瘍−誘導性白血球減少を示さなかった。これらの動物はずっと活動的であり（ＬＡＳＡスコア）、体重が減少しなかった。
【００２９】
表：治療６週間後の５−ＦＵ単独療法（５０ｍｇ／ｋｇ／体重、最大用量）と５−ＦＵ（５０ｍｇ／ｋｇ／体重）の同時ＡＡＶ感染と組み合わせた治療との間の比較（平均表示）
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【００３０】
ＡＡＶでさらに感染し、したがって最大用量化学療法（５−ＦＵ、５０ｍｇ／ｋｇ／体重）の副作用が低減した動物の有意に良好な一般状態が、調べた血液学的パラメーターの全てにおいて現れた。例えば、５−ＦＵ（５０ｍｇ／ｋｇ／体重）でのみ治療した動物は、ヘモグロビン、血小板数の値ならびに血球分画で測定した好中球、リンパ球および顆粒球の値の有意な低下を示した。
【００３１】
表：治療６週間後の血液学的パラメーターにおける５−ＦＵ単独療法（５０ｍｇ／ｋｇ／体重、最大用量）と同時ＡＡＶ感染を伴う５−ＦＵ（５０ｍｇ／ｋｇ／体重）との間の比較（平均表示）
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【００３２】
これらの研究は、アデノ随伴ウイルス（例えば、ＡＡＶ−２）での腫瘍保持ラットの同時感染を付随させることが血球カウントならびに全体の生理学的状態をかなり改善し、動物の体重減少を低減することを示す。