(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物と、オキサリプラチン（Oxaliplatin）、シスプラチン（Cisplatin）、塩酸イリノテカン（CPT-11）、エス・エヌ３８（SN38）、ゲムシタビン（Gemcitabine）、メトトレキサート（Methotrexate）、パクリタキセル（Paclitaxel）およびドキソルビシン（Doxorubicin）からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物とを組み合わせてなる癌治療用医薬組成物。
【請求項２】
Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含んでなる製剤と、オキサリプラチン（Oxaliplatin）、シスプラチン（Cisplatin）、塩酸イリノテカン（CPT-11）、エス・エヌ３８（SN38）、ゲムシタビン（Gemcitabine）、メトトレキサート（Methotrexate）、パクリタキセル（Paclitaxel）およびドキソルビシン（Doxorubicin）からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含んでなる製剤とをセットにしたことを特徴とする癌治療用キット。
【請求項３】
オキサリプラチン（Oxaliplatin）、シスプラチン（Cisplatin）、塩酸イリノテカン（CPT-11）、エス・エヌ３８（SN38）、ゲムシタビン（Gemcitabine）、メトトレキサート（Methotrexate）、パクリタキセル（Paclitaxel）およびドキソルビシン（Doxorubicin）からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物と組み合わせてなる癌治療用医薬組成物の製造のためのＮ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物の使用。
【請求項４】
オキサリプラチン（Oxaliplatin）、シスプラチン（Cisplatin）、塩酸イリノテカン（CPT-11）、エス・エヌ３８（SN38）、ゲムシタビン（Gemcitabine）、メトトレキサート（Methotrexate）、パクリタキセル（Paclitaxel）およびドキソルビシン（Doxorubicin）からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物とともに患者に併用投与するための、Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含む癌治療用医薬組成物。
【請求項５】
Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物と組み合わせてなる癌治療用医薬組成物の製造のためのオキサリプラチン（Oxaliplatin）、シスプラチン（Cisplatin）、塩酸イリノテカン（CPT-11）、エス・エヌ３８（SN38）、ゲムシタビン（Gemcitabine）、メトトレキサート（Methotrexate）、パクリタキセル（Paclitaxel）およびドキソルビシン（Doxorubicin）からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物の使用。
【請求項６】
Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物とともに患者に併用投与するための、オキサリプラチン（Oxaliplatin）、シスプラチン（Cisplatin）、塩酸イリノテカン（CPT-11）、エス・エヌ３８（SN38）、ゲムシタビン（Gemcitabine）、メトトレキサート（Methotrexate）、パクリタキセル（Paclitaxel）およびドキソルビシン（Doxorubicin）からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含む癌治療用医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スルホンアミド化合物と、ＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎまたはＣｉｓｐｌａｔｉｎなどの白金錯体物質、ＣＰＴ−１１などのＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＭｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅなどの代謝拮抗物質、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌなどの微小管阻害物質、およびＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎなどの抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質とを組み合わせてなる新規な医薬組成物およびキット、ならびに癌の治療方法および／または血管新生阻害方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
癌の化学療法剤として従来用いられているものには、アルキル化剤のサイクロフォスファミド、代謝拮抗剤のメトトレキセート、フルオロウラシル、抗生物質のアドリアマイシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、植物由来のタキソール、ビンクリスチン、エトポシド、金属錯体のシスプラチンなどがあるが、いずれもその抗腫瘍効果は十分であるとは言えず、新しい抗腫瘍剤の開発が切望されていた。
近年、有用な抗腫瘍剤として、スルホンアミド化合物が報告されている（１−４）。特に、Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド（以下、「Ｅ７８２０」と称する場合がある）、Ｎ−［［（４−クロロフェニル）アミノ］カルボニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−５−スルホンアミド（以下、「ＬＹ１８６６４１」と称する場合がある）、Ｎ−［［（３，４−ジクロロフェニル）アミノ］カルボニル］−２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−スルホンアミド（以下、「ＬＹ２９５５０１」と称する場合がある）、Ｎ−（２，４−ジクロロベンゾイル）−４−クロロフェニルスルホンアミド（以下、「ＬＹ−ＡＳＡＰ」と称する場合がある）、Ｎ−（２，４−ジクロロベンゾイル）−５−ブロモチオフェン−２−スルホンアミド（以下、「ＬＹ５７３６３６」と称する場合がある）、２−スルファニルアミド−５−クロロキノキサリン（以下、「ＣＱＳ」と称する場合がある）などは、種々のタイプの腫瘍に活性を示し非常に有用である。
しかしながら、これらの化合物の組み合わせにより、いかなる効果を示すか否かについては、これまで報告されていない。
近年、種々のＤＮＡマイクロアレイを用い、多数の遺伝子の発現量を同時に検出する方法が確立され、ＤＮＡマイクロアレイは、幅広い目的に応用されている（５および６）。また、ＤＮＡマイクロアレイ（一部メンブランフィルターを用いたマクロアレイ）を用いて、腫瘍細胞に抗癌剤を作用させた際に起こる遺伝子発現変化を検討した報告もいくつか成されている（７−９）。これらの報告は、遺伝子発現の変動解析が、複数の細胞集団の特性比較や、薬剤の処理等により細胞に引き起こされる生物学的な変化を、分子レベルで包括的に研究するために極めて有用であることを示している。
また、米国Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの６０種類の癌細胞株パネルについて遺伝子発現プロファイルを解析することにより、これら細胞株を再分類し、その特性を検討した報告（１０）、さらに、この６０種類の癌細胞株パネルの遺伝子発現プロファイルと、各細胞株の各種抗癌剤に対する感受性との間の関連について考察した報告（１１）等がなされている。
参考文献
（１）国際公開第００／５０３９５号パンフレット
（２）欧州特許出願公開第０２２２４７５号明細書
（３）国際公開第０２／０９８８４８号パンフレット
（４）国際公開第０３／０３５６２９号パンフレット
（５）Ｓｃｈｅｎａ  Ｍ，Ｓｈａｌｏｎ  Ｄ，Ｄａｖｉｓ  ＲＷ，Ｂｒｏｗｎ  ＰＯ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９５，２７０，４６７−７０．
（６）Ｌｏｃｋｈａｒｔ，Ｄ．Ｊ．，Ｄｏｎｇ，Ｈ．，Ｂｙｒｎｅ，Ｍ．Ｃ．，Ｆｏｌｌｅｔｔｉｅ，Ｍ．Ｔ．，Ｇａｌｌｏ，Ｍ．Ｖ．，Ｃｈｅｅ，Ｍ，Ｓ．，Ｍｉｔｔｍａｎｎ，Ｍ．，Ｗａｎｇ  Ｃ．，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｍ．，Ｈｏｒｔｏｎ，Ｈ．Ｂｒｏｗｎ，Ｅ．Ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９６，１４，１６７５−１６８０．
（７）Ｒｈｅｅ  ＣＨ，Ｒｕａｎ  Ｓ，Ｃｈｅｎ  Ｓ，Ｃｈｅｎｃｈｉｋ  Ａ，Ｌｅｖｉｎ  ＶＡ，Ｙｕｎｇ  ＡＷ，Ｆｕｌｌｅｒ  ＧＮ，Ｚｈａｎｇ  Ｗ，Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ，１９９９，６，３９３−４０１．
（８）Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ  Ｊ，Ｅｒｄｍａｎｎ  Ｄ，Ｌａｌａｎｄｅ  Ｉ，Ｇｒｏｓｓｅｎｂａｃｈｅｒ  Ｒ，Ｎｏｏｒａｎｉ  Ｍ，Ｆｕｒｓｔ  Ｐ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０００，１９，２９１３−２０．
（９）Ｋｕｄｏｈ  Ｋ，Ｒａｍａｎｎａ  Ｍ，Ｒａｖａｔｎ  Ｒ，Ｅｌｋａｈｌｏｕｎ  ＡＧ，Ｂｉｔｔｎｅｒ  ＭＬ，Ｍｅｌｔｚｅｒ  ＰＳ，Ｔｒｅｎｔ  ＪＭ，Ｄａｌｔｏｎ  ＷＳ，Ｃｈｉｎ  ＫＶ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２０００，４１６１−６．
（１０）  Ｒｏｓｓ  ＤＴ，Ｓｃｈｅｒｆ  Ｕ，Ｅｉｓｅｎ  ＭＢ，Ｐｅｒｏｕ  ＣＭ，Ｒｅｅｓ  Ｃ，Ｓｐｅｌｌｍａｎ  Ｐ，Ｉｙｅｒ  Ｖ，Ｊｅｆｆｒｅｙ  ＳＳ，Ｖａｎ  ｄｅ  Ｒｉｊｎ  Ｍ，Ｗａｌｔｈａｍ  Ｍ，Ｐｅｒｇａｍｅｎｓｃｈｉｋｏｖ  Ａ，Ｌｅｅ  ＪＣ，Ｌａｓｈｋａｒｉ  Ｄ，Ｓｈａｌｏｎ  Ｄ，Ｍｙｅｒｓ  ＴＧ，Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ  ＪＮ，Ｂｏｔｓｔｅｉｎ  Ｄ，Ｂｒｏｗｎ  ＰＯ，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ，２０００，２４，２２７−３５．
（１１）  Ｓｃｈｅｒｆ  Ｕ，Ｒｏｓｓ  ＤＴ，Ｗａｌｔｈａｍ  Ｍ，Ｓｍｉｔｈ  ＬＨ，Ｌｅｅ  ＪＫ，Ｔａｎａｂｅ  Ｌ，Ｋｏｈｎ  ＫＷ，Ｒｅｉｎｈｏｌｄ  ＷＣ，Ｍｙｅｒｓ  ＴＧ，Ａｎｄｒｅｗｓ  ＤＴ，Ｓｃｕｄｉｅｒｏ  ＤＡ，Ｅｉｓｅｎ  ＭＢ，Ｓａｕｓｖｉｌｌｅ  ＥＡ，Ｐｏｍｍｉｅｒ  Ｙ，Ｂｏｔｓｔｅｉｎ  Ｄ，Ｂｒｏｗｎ  ＰＯ，Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ  ＪＮ，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ，２０００，２４，２３６−４４．
【発明の開示】
【０００３】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その解決しようとする課題は、優れた抗腫瘍活性および／または血管新生阻害活性を有する医薬組成物およびキット、ならびに癌の治療方法および／または血管新生阻害方法を見出すことにある。
本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意検討を重ねた結果、血管内皮細胞増殖アッセイ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）において、Ｅ７８２０は、Ｔａｘｏｌ（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎと併用することにより、細胞増殖抑制に対する統計的（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）に有意な相乗効果を示すことが明らかになった。また、血管内皮細胞管腔形成アッセイ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）において、Ｅ７８２０は、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎと併用することにより、管腔形成抑制に対する統計的（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）に有意な相乗効果を示すことが明らかになった。さらには、ヒト大腸癌細胞株皮下移植モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）において、Ｅ７８２０は、ＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎまたはＣＰＴ−１１と併用することにより、抗腫瘍効果に対する統計的（ｔｗｏ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）に有意な相乗効果を示すことが明らかになった。また、ヒト膵癌細胞株皮下移植モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）において、Ｅ７８２０は、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅと併用することにより、抗腫瘍効果に対する統計的（ｔｗｏ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）に有意な相乗効果を示すことが明らかになった。さらに、Ｅ７８２０は、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ、ＣＰＴ−１１およびＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅからなる群から選択される少なくとも一つの化合物と併用することにより、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ、ＣＰＴ−１１およびＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅからなる群から選択される少なくとも一つの化合物単独では示すことができないような優れた抗腫瘍効果が認められた。
また、ＤＮＡマイクロアレイおよび癌細胞株パネルの実験において、Ｅ７０７０（本明細書において、「Ｎ−（３−クロロ−１Ｈ−インドール−７−イル）−４−スルファモイルベンゼンスルホンアミド」を意味する）、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ５７３６３６もしくはＣＱＳまたはこれらの組み合わせによる遺伝子変動パターンおよび細胞増殖抑制活性が、高い相関を示すことを見出した。また、細胞増殖抑制活性を測定するアッセイにおいて、Ｅ７０７０に耐性を示す癌細胞株が、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ−ＡＳＡＰ、ＬＹ５７３６３６もしくはＣＱＳに交叉耐性を示すことを見出した。本発明者は、これらの結果から、Ｅ７０７０、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ−ＡＳＡＰ、ＬＹ５７３６３６もしくはＣＱＳまたはこれらの組み合わせは、同一または類似の作用機序を有し、同一または類似の遺伝子変化および効果をもたらすという知見を得た。
よって、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ−ＡＳＡＰ、ＬＹ５７３６３６もしくはＣＱＳまたはこれらの組み合わせは、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＣＰＴ−１１、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、ＰａｃｌｉｔａｘｅｌおよびＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎからなる群から選択される少なくとも一つの化合物と併用することにより、すぐれた抗腫瘍活性および／または血管新生阻害活性を示すと考えられ、スルホンアミド化合物、好ましくはＥ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ−ＡＳＡＰ、ＬＹ５７３６３６もしくはＣＱＳまたはこれらの組み合わせと、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＣＰＴ−１１、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、ＰａｃｌｉｔａｘｅｌおよびＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎからなる群から選択される少なくとも一つの物質との組み合わせは、有用な医薬組成物およびキットとして使用し得ること、ならびに癌の治療および／または血管新生の阻害に使用し得ることを見出した。
すなわち本発明は、以下に関する。
（１）スルホンアミド化合物と、白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物とを組み合わせてなる医薬組成物。
（２）（ａ）スルホンアミド化合物と、白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物とを併用することを記載した、包装容器、取扱説明書および添付文書からなる群から選択される少なくとも一つと、
（ｂ）スルホンアミド化合物を含む医薬組成物と、
を含有するキット。
（３）スルホンアミド化合物を含んでなる製剤と、白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含んでなる製剤とをセットにしたことを特徴とするキット。
（４）白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物と組み合わせてなる医薬組成物の製造のためのスルホンアミド化合物の使用。
（５）スルホンアミド化合物と、白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物とを患者に投与することを特徴とする癌の治療方法および／または血管新生の阻害方法。
（６）白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質とともに患者に併用投与するための、スルホンアミド化合物を含む医薬組成物。
上記（１）〜（６）において、前記スルホンアミド化合物は、Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミドもしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を挙げることができる。
また、上記（１）〜（６）において、前記スルホンアミド化合物は、
一般式（Ｉ）
0005106098.tif 000002
［式中、Ｅは、−Ｏ−、−Ｎ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２Ｏ−を、Ｄは、−ＣＨ２−または−Ｏ−を、Ｒ１ａは、水素原子またはハロゲン原子を、Ｒ２ａは、ハロゲン原子またはトリフルオロメチル基をそれぞれ意味する。］
で表わされる化合物、
一般式（ＩＩ）
0005106098.tif 000003
［式中、Ｊは、−Ｏ−または−ＮＨ−を、Ｒ１ｂは、水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ基、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルキルチオ基、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＳＣＦ３、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシカルボニル基、ニトロ基、アジド基、−Ｏ（ＳＯ２）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、水酸基、フェニル基、置換基を有するフェニル基、ピリジニル基、チエニル基、フリル基、キノリニル基またはトリアゾール基を、Ｒ２ｂは、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、−ＣＦ３、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ基、置換基を有していてもよいフェニル基または置換基を有していてもよいキノリニル基を、Ｒ３ｂは、水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ基を、Ｒ４ｂは、水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基（但し、Ｒ３ｂおよびＲ４ｂの少なくとも一つは、水素原子である）を、Ｒ５ｂは、水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、−ＣＦ３またはニトロ基を、Ｒ６ｂは、水素原子、ハロゲン原子または置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基（但し、Ｒ６ｂが置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基のとき、Ｒ５ｂは水素原子であり、Ｒ７ｂはハロゲン原子である）を、Ｒ７ｂは、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基または−ＣＦ３（但し、Ｒ５ｂまたはＲ７ｂのいずれか一方が、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基であるか、あるいはＲ７ｂが、ハロゲン原子または置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基である場合には、Ｒ５ｂまたはＲ６ｂのいずれか一方が、水素原子である）をそれぞれ意味する。］
で表わされる化合物、
式（ＩＩＩ）
0005106098.tif 000004
で表わされる化合物および
式（ＩＶ）
0005106098.tif 000005
で表される化合物からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を挙げることができる。
また、上記（１）〜（６）において、白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質からなる群としては、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＣＰＴ−１１、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、ＰａｃｌｉｔａｘｅｌおよびＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎからなる群を挙げることができる。
本発明により、すぐれた抗腫瘍活性および／または血管新生阻害活性を示す医薬組成物およびキット、ならびに癌の治療方法および／または血管新生阻害方法が提供される。
より具体的には、スルホンアミド化合物、すなわち、（Ａ）Ｅ７８２０、（Ｂ）一般式（Ｉ）で表される化合物、好ましくはＬＹ１８６６４１またはＬＹ２９５５０１、（Ｃ）一般式（ＩＩ）で表される化合物、好ましくはＬＹ−ＡＳＡＰ、（Ｄ）ＬＹ５７３６３６および（Ｅ）ＣＱＳから選択される少なくとも一つの化合物と、（ｉ）白金錯体物質、好ましくはＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎまたはＣｉｓｐｌａｔｉｎ、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、好ましくはＣＰＴ−１１、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、好ましくはＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＭｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、（ｉｖ）微小管阻害物質、好ましくはＰａｃｌｉｔａｘｅｌ、および（ｖ）抗生物質、好ましくはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎから選択される少なくとも一つの物質とを組み合わせることにより、すぐれた抗腫瘍活性および／または血管新生阻害活性を示す医薬組成物およびキット、ならびに癌の治療方法および／または血管新生阻害方法が提供され、癌の治療または血管新生の阻害に用いることが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、ヒト大腸癌細胞株（Ｃｏｌｏ３２０ＤＭ）皮下移植モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）における腫瘍増殖抑制に対するＥ７８２０とｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎとの併用効果を示す。図１中、＊は、危険率０．０５未満で統計的に有意な相乗効果があったことを示す。図１中、日数＃は、投与開始日をｄａｙ１とした日数を示す。
図２は、ヒト大腸癌細胞株（Ｃｏｌｏ３２０ＤＭ）皮下移植モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）における腫瘍増殖抑制に対するＥ７８２０とＣＰＴ−１１との併用効果を示す。図２中、＊は、危険率０．０１未満で統計的に有意な相乗効果があったことを示す。図２中、日数＃は、投与開始日をｄａｙ１とした日数を示す。
図３は、ヒト膵癌細胞株（ＫＰ−１）皮下移植モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）における腫瘍増殖抑制に対するＥ７８２０とＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅとの併用効果を示す。図３中、＊は、危険率０．０１未満で統計的に有意な相乗効果があったことを示す。図３中、日数＃は、投与開始日をｄａｙ１とした日数を示す。
図４は、実施例７におけるＤＮＡマイクロアレイにおける階層的クラスターリング解析の結果を示す。
図５は、実施例８におけるＤＮＡマイクロアレイにおける相関係数を示す。
図６は、実施例８におけるＤＮＡマイクロアレイにおける階層的クラスターリング解析の結果を示す。
図７は、実施例８におけるＤＮＡマイクロアレイにおける相関係数を示す。
図８は、実施例８におけるＤＮＡマイクロアレイにおける階層的クラスターリング解析の結果を示す。
図９は、細胞増殖抑制活性を測定するアッセイにおける、ＨＣＴ１１６−Ｃ９、ＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ１およびＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ４に対するＥ７０７０、Ｅ７８２０、ＣＱＳ、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１およびＬＹ−ＡＳＡＰの増殖抑制作用を示したものである。
図１０は、細胞増殖抑制活性を測定するアッセイにおける、ＨＣＴ１１６−Ｃ９、ＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ１およびＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ４に対するＥ７０７０およびＬＹ５７３６３６の増殖抑制作用を示したものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
以下に本発明の実施の形態について説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態にのみ限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、さまざまな形態で実施をすることができる。
なお、本明細書において引用した文献、および公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。
１．スルホンアミド化合物
本発明の医薬組成物および／またはキット、ならびに癌の治療方法および／または血管新生阻害方法は、スルホンアミド化合物を含むものである。
本発明において、スルホンアミド化合物は、下記の式（Ｖ）で表される化合物を含む。
0005106098.tif 000006
式（Ｖ）で表される化合物は、Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミドであり、Ｅ７８２０と称する場合がある。
Ｅ７８２０は、公知の方法で製造でき、例えば、国際公開第００／５０３９５号パンフレット（ＷＯ００／５０３９５）に記載された方法によって製造することができる。
本発明において、スルホンアミド化合物は、下記の一般式（Ｉ）で表される化合物を含む。
0005106098.tif 000007
上記一般式（Ｉ）において、式中、Ｅは、−Ｏ−、−Ｎ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２Ｏ−を、Ｄは、−ＣＨ２−または−Ｏ−を、Ｒ１ａは、水素原子またはハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子）を、Ｒ２ａは、ハロゲン原子またはトリフルオロメチル基をそれぞれ意味する。
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、公知の方法により製造でき、例えば、欧州特許出願公開第０２２２４７５Ａ１号明細書（ＥＰ０２２２４７５Ａ１）に記載の方法によって製造することができる。
一般式（Ｉ）において、好ましい化合物は、ＬＹ１８６６４１またはＬＹ２９５５０１である。
ＬＹ１８６６４１とは、Ｎ−［［（４−クロロフェニル）アミノ］カルボニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−５−スルホンアミドをいい、その構造式を以下の式（ＶＩ）に示す。
0005106098.tif 000008
ＬＹ１８６６４１は、公知の方法で製造でき、例えば、欧州特許出願公開第０２２２４７５Ａ１号明細書（ＥＰ０２２２４７５Ａ１）に記載の方法で製造することができる。
本発明において、ＬＹ２９５５０１とは、Ｎ−［［（３，４−ジクロロフェニル）アミノ］カルボニル］−２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−スルホンアミドをいい、その構造式を以下の式（ＶＩＩ）に示す。
0005106098.tif 000009
ＬＹ２９５５０１は、公知の方法で製造でき、例えば、欧州特許出願公開第０２２２４７５Ａ１号明細書（ＥＰ０２２２４７５Ａ１）および／または欧州特許出願公開第０５５５０３６Ａ２号明細書（ＥＰ０５５５０３６Ａ２）に記載の方法で製造することができる。
また、本発明において、スルホンアミド化合物は、下記の一般式（ＩＩ）で表される化合物を含む。
0005106098.tif 000010
一般式（ＩＩ）において、式中、Ｊは、−Ｏ−または−ＮＨ−を、Ｒ１ｂは、水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ基、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルキルチオ基、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＳＣＦ３、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシカルボニル基、ニトロ基、アジド基、−Ｏ（ＳＯ２）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、水酸基、フェニル基、置換基を有するフェニル基、ピリジニル基、チエニル基、フリル基、キノリニル基またはトリアゾール基を、Ｒ２ｂは、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、−ＣＦ３、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ基、置換基を有していてもよいフェニル基または置換基を有していてもよいキノリニル基を、Ｒ３ｂは、水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ基を、Ｒ４ｂは、水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基（但し、Ｒ３ｂおよびＲ４ｂの少なくとも一つは、水素原子である）を、Ｒ５ｂは、水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、−ＣＦ３またはニトロ基を、Ｒ６ｂは、水素原子、ハロゲン原子または置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基（但し、Ｒ６ｂが置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基のとき、Ｒ５ｂは水素原子であり、Ｒ７ｂはハロゲン原子である）を、Ｒ７ｂは、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基または−ＣＦ３（但し、Ｒ５ｂまたはＲ７ｂのいずれか一方が、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基であるか、あるいはＲ７ｂが、ハロゲン原子または置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基である場合には、Ｒ５ｂまたはＲ６ｂのいずれか一方が、水素原子である）をそれぞれ意味する。
一般式（ＩＩ）において、「ハロゲン原子」は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子であることが好ましい。
一般式（ＩＩ）において、「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」は、炭素数が１〜６の直鎖若しくは分枝状のアルキル基を意味し、例えば、特に限定されるわけではないが、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基（アミル基）、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、１−エチルプロピル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１，２，２−トリメチルプロピル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基などを意味する。これらのうち好ましい基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等を挙げることができる。
一般式（ＩＩ）において、「Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基」は、炭素数が１〜４のアルコキシ基を意味し、特に限定されるわけではないが、好ましくは、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基等が挙げられる。
一般式（ＩＩ）において、「Ｃ１−Ｃ４アルキルチオ基」において、アルキル基は特に限定されるわけではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等を挙げることができる。
一般式（ＩＩ）において、「Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル基」の例としては、特に限定されるわけではないが、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｎ−プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ｎ−ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、ｓｅｃ−ブトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基等を挙げることができる。
一般式（ＩＩ）において、導入される置換基としては、特に限定されるわけではないが、例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等）、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基（例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基等）、アミノ基、水酸基、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子）またはシリル基などの置換基を挙げることができる。
本発明の一般式（ＩＩ）で表される化合物は、公知の方法により製造でき、例えば、国際公開第０２／０９８８４８号パンフレット（ＷＯ０２／０９８８４８）に記載の方法によって製造することができる。
一般式（ＩＩ）において、好ましい化合物はＬＹ−ＡＳＡＰである。
ＬＹ−ＡＳＡＰとは、Ｎ−（２，４−ジクロロベンゾイル）−４−クロロフェニルスルホンアミドをいい、その構造式を以下の式（ＶＩＩＩ）に示す。
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ＬＹ−ＡＳＡＰは、公知の方法で製造でき、例えば、国際公開第０２／０９８８４８号パンフレット（ＷＯ０２／０９８８４８）に記載の方法で製造することができる。
本発明において、スルホンアミド化合物には、ＬＹ５７３６３６を挙げることができる。本発明において、ＬＹ５７３６３６とは、Ｎ−（２，４−ジクロロベンゾイル）−５−ブロモチオフェン−２−スルホンアミドをいい、その構造式を以下の式（ＩＩＩ）に示す。
0005106098.tif 000012
ＬＹ５７３６３６は、ナトリウム塩であることが好ましい。
ＬＹ５７３６３６は、公知の方法で製造でき、例えば、国際公開第０２／０９８８４８号パンフレット（ＷＯ０２／０９８８４８）に記載の方法と同様にして、市販の５−ブロモチオフェン−２−スルフォニルクロライドと２，４−ジクロロ安息香酸より製造することができる。
また、ＬＹ５７３６３６は、国際公開第０３／０３５６２９号パンフレット（ＷＯ０３／０３５６２９）における実施例６３に記載の方法で製造することができる。
本発明において、スルホンアミド化合物には、ＣＱＳを挙げることができる。本発明において、ＣＱＳとは、２−スルファニルアミド−５−クロロキノキサリンをいい、その構造式を以下の式（ＩＶ）に示す。
0005106098.tif 000013
ＣＱＳは、公知の方法で製造でき、例えば、（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９４７，７１，６−１０）の方法で製造することができる。
スルホンアミド化合物は、酸または塩基と薬理学的に許容される塩を形成する場合もある。本発明におけるスルホンアミド化合物は、これらの薬理学的に許容される塩をも包含する。酸との塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、燐酸塩等の無機酸塩や蟻酸、酢酸、乳酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸との塩を挙げることができる。また、塩基との塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、アルギニン、リジン等の有機塩基との塩（有機アミン塩）、アンモニウム塩を挙げることができる。
また、スルホンアミド化合物は、無水物であってもよく、水和物などの溶媒和物を形成していてもよい。溶媒和物は水和物または非水和物のいずれであってもよいが、水和物が好ましい。溶媒は水、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール）、ジメチルホルムアミドなどを使用することができる。
また、これら化合物の溶媒和物および／または光学異性体が存在する場合には、本発明におけるスルホンアミド化合物は、それらの溶媒和物および／または光学異性体が含まれる。また、本発明におけるスルホンアミド化合物は、生体内で酸化、還元、加水分解、抱合などの代謝を受けるスルホンアミド化合物をも包含する。またさらに、本発明におけるスルホンアミド化合物は、生体内で酸化、還元、加水分解などの代謝を受けてスルホンアミド化合物を生成する化合物をも包含する。
２．白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質
本発明の医薬組成物および／またはキット、ならびに癌の治療方法および／または血管新生阻害方法は、白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質を含むものである。
（１）白金錯体物質
本発明において、白金錯体物質は中心金属を白金とする錯体（白金錯体）であればよく、中心金属と配位子間との結合の程度、錯体の荷電、配位子のブリッジド構造による中心金属の数の増加などに限定されるものではない。また、本発明において、白金錯体物質は白金錯体を製剤化した白金製剤であってもよい。本発明において、白金錯体物質を白金製剤と称する場合もある。
本発明において、白金錯体物質には、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ、Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ（ＣＤＤＰ）、Ｌｏｂａｐｌａｔｉｎ、ＡＲ−７２６、Ｍｉｒｉｐｌａｔｉｎ、Ｐｉｃｏｐｌａｔｉｎ、ＰＬＤ−１４７、Ｓａｔｒａｐｌａｔｉｎ、Ｔｈｉｏｐｌａｔｉｎ、Ｔｒｉｐｌａｔｉｎなどが挙げられ、好ましくは、ＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎまたはＣｉｓｐｌａｔｉｎであり、より好ましくはＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎである。白金錯体物質は、公知の方法で製造でき、また、購入することができる。
本発明において、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎとは、ｏｘａｌａｔｏ（１Ｒ，２Ｒ−ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅｄｉａｍｉｎｅ）ｐｌａｔｉｎｕｍをいい、式（ＩＸ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000014
Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎは、公知の方法で製造できる。また、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎは、Ｓａｎｏｆｉ  Ａｖｅｎｔｉｓ社からＥｌｏｘａｔｉｎ（登録商標）を購入することによって、入手することができる。
本発明において、Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎとは、ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅ（１，１−ｃｙｃｌｏｂｕｔａｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）ｐｌａｔｉｎｕｍをいう。
本発明において、Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎは、パラプラチン（ブリストル製薬株式会社）を購入することによって、入手することができる。
本発明において、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ（ＣＤＤＰ）は、ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ  ＩＩをいい、式（ＸＸ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000015
本発明において、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ（ＣＤＤＰ）は、ランダ（日本化薬）またはブリプラチン（ブリストル製薬株式会社）を購入することによって入手することができる。
本発明において、Ｌｏｂａｐｌａｔｉｎとは、［ＳＰ−４−３−（Ｓ），（ｔｒａｎｓ）］−（１，２−ｃｙｃｌｏｂｕｔａｎｅｄｉｍｅｔｈａｎａｍｉｎｅ−Ｎ，Ｎ’−）［２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｏａｔｅ（２−）−Ｏ１，Ｏ２］−ｐｌａｔｉｎｕｍをいう。
Ｌｏｂａｐｌａｔｉｎは、公知の方法で製造できる（ＤＥ４１１５５５９）。
本発明において、ＡＲ−７２６とは、ｃｉｄ−ｂｉｓ−ｎｅｏｄｅｃａｎｏａｔｅ−ｔｒａｎｓ−Ｒ，Ｒ−１，２−ｄｉａｍｉｎｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−Ｐｔ（ＩＩ）をいう。
ＡＲ−７２６は、公知の方法で製造できる。
本発明において、Ｍｉｒｉｐｌａｔｉｎとは、（ＳＰ−４−２）−［（ＩＲ，２Ｒ）−ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−１，２−ｄｉａｍｉｎｅ−Ｎ，Ｎ’］ｂｉｓ（ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏａｔｏ−Ｏ）ｐｌａｔｉｎｕｍをいう。
Ｍｉｒｉｐｌａｔｉｎは、公知の方法で製造できる（ＥＰ１９３９３６）。
本発明において、Ｐｉｃｏｐｌａｔｉｎとは、（ＳＰ−４−３）−ａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏ（２−ｍｅｔｈｙｌｐｙｒｉｄｉｎｅ）ｐｌａｔｉｎｕｍをいう。
Ｐｉｃｏｐｌａｔｉｎは、公知の方法で製造できる。
本発明において、ＰＬＤ−１４７とは、（ＯＣ−６−４３）−ｂｉｓ（ａｃｅｔａｔｏ）（１−ａｄａｍａｎｔｙｌａｍｉｎｅ）ａｍｍｉｎｅ−ｄｉｃｈｌｏｒｏ−ｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＶ）をいう。
ＰＬＤ−１４７は、公知の方法で製造できる（ＵＳ６５０３９４３）。
本発明において、Ｓａｔｒａｐｌａｔｉｎとは、（ＯＣ−６−４３）−ｂｉｓ（ａｃｅｔａｔｏ）ａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏ（ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｅ）ｐｌａｔｉｎｕｍをいう。
Ｓａｔｒａｐｌａｔｉｎは、公知の方法で製造できる（ＥＰ３２８２７４）。
本発明において、Ｔｈｉｏｐｌａｔｉｎとは、ｂｉｓ−（Ｏ−ｅｔｈｙｌｄｉｔｈｉｏｃａｒｂａｍａｔｏ）ｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ）をいう。
Ｔｈｉｏｐｌａｔｉｎは、公知の方法で製造できる（ＷＯ００／１０５４３）。
本発明において、Ｔｒｉｐｌａｔｉｎとは、ｔｒａｎｓ−［ｂｉｓ［ｔｒａｎｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ（μ−ｈｅｘａｎｅ−１，６−ｄｉａｍｉｎｅ）］］ｄｉａｍｍｉｎｅｐｌａｔｉｎｕｍをいう。
Ｔｒｉｐｌａｔｉｎは、公知の方法で製造できる（ＵＳ５７４４４９７）。
（２）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質
本発明において、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質とは、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉを阻害する作用を有する物質を意味する。
本発明において、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質には、ＣＰＴ−１１、Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、Ｅｘａｔｅｃａｎ、Ｒｕｂｉｔｅｃａｎ、９−ａｍｉｎｏ−ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ、Ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、Ｇｉｍａｔｅｃａｎ、Ｅｄｏｔｅｃａｒｉｎなどが挙げられ、好ましくは、ＣＰＴ−１１である。
ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質は、公知の方法で製造でき、また、購入することができる。
本発明において、ＣＰＴ−１１とは、塩酸イリノテカン三水和物（［１，４’−Ｂｉｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ］−１’−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ（Ｓ）−４，１１−ｄｉｅｔｈｙｌ−３，４，１２，１４−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，１４−ｄｉｏｘｏ−１Ｈ−ｐｙｒａｎｏ−［３’，４’：６，７］−ｉｎｄｏｌｉｚｉｎｏ［１，２−ｂ］ｑｕｉｎｏｌｉｎ−９−ｙｌｅｓｔｅｒ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ  ｔｒｉｈｙｄｒａｔｅ）をいい、式（Ｘ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000016
ＣＰＴ−１１は、公知の方法で製造できる。また、ＣＰＴ−１１は、第一製薬株式会社からトポテシン（登録商標）を購入することによって、入手することができる。
本発明において、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質にはＣＰＴ−１１活性体であるＳＮ３８を用いることもできる。ＳＮ３８とは、７−ｅｔｈｙｌ−１０−ｈｙｄｒｏ−（２０）Ｓ−Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎをいう。ＳＮ３８はＡＢＡＴＲＡ社から購入して入手することができる。
本発明において、Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅとは、（４Ｓ）−１０−［（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｍｅｔｈｙｌ］−４−ｅｔｈｙｌ−４，９−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１Ｈ−ｐｙｒａｎｏ［３’，４’：６，７］ｉｎｄｏｌｉｚｉｎｏ［１，２−ｂ］ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ｄｉｏｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅをいい、式（ＸＩ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000017
Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅは、公知の方法で製造することができる（米国特許第５００４７５８号明細書（ＵＳ５００４７５８））。また、Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅは、日本化薬からハイカムチン（登録商標）を購入することによって、入手することができる。
本発明において、Ｅｘａｔｅｃａｎとは、（１Ｓ，９Ｓ）−１−ａｍｉｎｏ−９−ｅｔｈｙｌ−５−ｆｌｕｏｒｏ−１，２，３，９，１２，１５−ｈｅｘａｈｙｄｒｏ−９−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−ｍｅｔｈｙｌ−１０Ｈ，１３Ｈ−ｂｅｎｚｏ［ｄｅ］ｐｙｒａｎｏ［３’，４’：６，７］ｉｎｄｏｌｉｚｉｎｏ［１，２−ｂ］ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−１０，１３−ｄｉｏｎｅをいい、式（ＸＩＩ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000018
Ｅｘａｔｅｃａｎは、公知の方法で製造することができる（特開平０５−５９０６１号公報（ＪＰ９３−５９０６１））。
本発明において、Ｒｕｂｉｔｅｃａｎとは、（４Ｓ）−ｅｔｈｙｌ−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−１０−ｎｉｔｒｏ−１，１２−ｄｉｈｙｄｒｏ−１４Ｈ−ｐｙｒａｎｏ［３’，４’：６，７］−ｉｎｄｏｌｉｚｉｎｏ［１，２−ｂ］ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ｄｉｏｎｅをいい、式（ＸＩＩＩ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000019
Ｒｕｂｉｔｅｃａｎは、公知の方法で製造することができる（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９８６），２９（１１），２３５８−６３、特開昭５９−０５１２８８）。
本発明において、９−ａｍｉｎｏ−ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎとは、（４Ｓ）−ｅｔｈｙｌ−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−１０−ａｍｉｎｏ−１，１２−ｄｉｈｙｄｒｏ−１４Ｈ−ｐｙｒａｎｏ［３’，４’：６，７］−ｉｎｄｏｌｉｚｉｎｏ［１，２−ｂ］ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ｄｉｏｎｅをいい、式（ＸＩＶ）で表される化合物である。
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９−ａｍｉｎｏ−ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎは、公知の方法で製造することができる（特開昭５９−０５１２８９）。
本発明において、Ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ  ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅとは、７−（４−ｍｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚｉｎｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅ）−１０，１１−ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉｏｘｙ−２０（ｓ）−ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅをいい、式（ＸＶ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000021
Ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ  ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅは、公知の方法で製造することができる（ＷＯ９５／２９９１９）。
本発明において、Ｇｉｍａｔｅｃａｎとは、（４Ｓ）−１１−［（Ｅ）−［［１，１−ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｏｘｙ］ｉｍｉｎｏ］ｍｅｔｈｙｌ］−４−ｅｔｈｙｌ−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，１２−ｄｉｈｙｄｒｏ−１４Ｈ−ｐｙｒａｎｏ［３’，４’：６，７］−ｉｎｄｏｌｉｚｉｎｏ［１，２−ｂ］ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−３，１４（４Ｈ）−ｄｉｏｎｅをいい、式（ＸＶＩ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000022
Ｇｉｍａｔｅｃａｎは、公知の方法で製造することができる（ＷＯ００／０５３６０７）。
本発明において、Ｅｄｏｔｅｃａｒｉｎとは、１２−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−２，１０−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−［［２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｅｔｈｙｌ］ａｍｉｎｏ］−１２，１３−ｄｉｈｙｄｒｏ−６Ｈ−ｉｎｄｏｌｏ［２，３−ａ］ｐｙｒｒｏｌｏ［３，４−ｃ］ｃａｒｂａｚｏｌｅ−５，７−ｄｉｏｎｅをいい、式（ＸＶＩＩ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000023
Ｅｄｏｔｅｃａｒｉｎは、公知の方法で製造することができる（ＷＯ９５／３０６８２）。
（３）代謝拮抗物質
本発明において、代謝拮抗物質は、核酸合成やタンパク質合成などの細胞の代謝において必要な物質と類似の構造をもつ化合物であり、その構造類似性により、細胞の代謝を阻害するものである。
本発明において、代謝拮抗物質には、Ｃｙｔｉｄｉｎｅ誘導体が挙げられ、具体的には、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ（ａｒａＣ）、Ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｃｉｔａｒａｂｉｎｅ  ｏｃｆｏｓｆａｔｅ、５−ａｚａｃｙｔｉｄｉｎｅ、ＣＮＤＡＣなどが挙げられ、好ましくは、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅである。
また、本発明において、代謝拮抗物質には、葉酸拮抗剤が挙げられ、具体的には、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅが挙げられる。葉酸拮抗剤は、ジヒドロ葉酸レダクターゼを阻害することにより、核酸合成を阻害するものである。
代謝拮抗剤は、公知の方法で製造でき、また、購入することができる。
本発明において、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅとは、塩酸ゲムシタビン（２’−ｄｅｏｘｙ−２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−ｃｙｔｉｄｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）をいい、式（ＸＶＩＩＩ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000024
Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅは、公知の方法で製造できる。また、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅは、日本イーライリリー社からＧＥＭＺＡＲ（登録商標）を購入することによって、入手することができる。
Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ（ａｒａＣ）は、キロサイド（日本新薬）またはキロサイドＮ（日本新薬）を購入することによって、入手することができる。
Ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ（ＢＨ−ＡＣ）は、サンラビン（旭化成）を購入することによって、入手することができる。
Ｃｉｔａｒａｂｉｎｅ  ｏｃｆｏｓｆａｔｅ（ＳＰＡＣ）は、スタラシド（日本化薬）を購入することによって、入手することができる。
５−ａｚａｃｙｔｉｄｉｎｅは、公知の方法で製造することができ、また、ナカライテスク株式会社から購入することによって、入手することができる。
本発明において、ＣＮＤＡＣとは、１−（２−Ｃ−ｃｙａｎｏ−２−ｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ａｒａｂｉｎｏ−ｐｅｎｔｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−Ｎ−ｐａｌｍｉｔｏｙｌｃｙｔｏｓｉｎｅをいい、式（ＸＩＸ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000025
ＣＮＤＡＣは、公知の方法で製造することができる（ＥＰ５３６９３６）。
本発明において、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅとは、Ｎ−｛４−［Ｎ−（２，４−ｄｉａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｄｉｎ−６−ｙｌｍｅｔｈｙｌ）−Ｎ−ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ］ｂｅｎｚｏｙｌ｝−Ｌ−ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄをいい、式（ＸＸＩ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000026
本発明において、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅは、ワイス−武田からメソトレキセート（登録商標）またはリウマトレックス（登録商標）を購入することによって、入手することができる。
（４）微小管阻害物質
本発明において、微小管阻害物質は、細胞分裂における紡錘体形成機能または物質輸送機能などの微小管の機能を阻害する作用を有する物質を意味する。例えば、微小管阻害物質は、細胞分裂が盛んな細胞または神経細胞などの微小管に作用して抗腫瘍効果を示す。
本発明において、微小管阻害物質には、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、Ｄｏｃｅｔａｘｅｌなどが挙げられ、好ましくはＰａｃｌｉｔａｘｅｌである。
微小管阻害物質は、公知の方法で製造でき、また、購入することができる。
本発明において、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌとは、（−）−（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４，１０−ｄｉａｃｅｔｏｘｙ−２−ｂｅｎｚｏｙｌｏｘｙ−５，２０−ｅｐｏｘｙ−１，７−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−９−ｏｘｏｔａｘ−１１−ｅｎ−１３−ｙｌ（２Ｓ，３Ｓ）−３−ｂｅｎｚｏｙｌａｍｉｎｏ−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐｉｏｎａｔｅをいい、式（ＸＸＩＩ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000027
Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌは、ブリストル製薬株式会社からタキソール（Ｔａｘｏｌ）を購入することによって、入手することができる。
Ｄｏｃｅｔａｘｅｌは、タキソテール（登録商標）（サノフィ・アベンティス）を購入することによって、入手することができる。
（５）抗生物質
本発明において、抗生物質は、好ましくは抗腫瘍性抗生物質である。抗腫瘍性抗生物質は、腫瘍細胞中のＤＮＡ合成抑制またはＤＮＡ鎖切断などの作用を有し、抗腫瘍作用を示すものである。
本発明において、抗生物質には、Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ（アドリアマイシン）、Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ、Ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ、Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ、Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ、Ａｃｌａｒｕｂｉｃｉｎ、Ａｍｒｕｂｉｃｉｎ、Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅなどが挙げられ、好ましくはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎである。
抗生物質は、公知の方法で製造でき、また、購入することができる。
本発明において、Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎとは、１０−［（３−ａｍｉｎｏ−２，３，６−ｔｒｉｄｅｏｘｙ−α−Ｌ−ｌｙｘｏ−ｈｅｘｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）ｏｘｙ］−７，８，９，１０−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−６，８，１１−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ−８−（ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｙｌ）−１−ｍｅｔｈｏｘｙ−（８Ｓ−ｃｉｓ）−５，１２−ｎａｐｈｔｈａｃｅｎｅｄｉｏｎｅをいい、式（ＸＸＩＩＩ）で表される化合物である。
0005106098.tif 000028
Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎは、アドリアシン（登録商標）（協和発酵）を購入することによって、入手することができる。
Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎは、ダウノマイシン（登録商標）（明治製菓）を購入することによって、入手することができる。
Ｐｉｐａｒｕｂｉｃｉｎは、テラルビシン（登録商標）（明治製菓）またはピノルビン（登録商標）（メルシャン−日本化薬）を購入することによって、入手することができる。
Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎは、ファルモルビシン（登録商標）（ファイザー−協和発酵）を購入することによって、入手することができる。
Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎは、イダマイシン（登録商標）（ファイザー）を購入することによって、入手することができる。
Ａｃｌａｒｕｂｉｃｉｎは、アクラシノン（登録商標）（メルシャン−山之内）を購入することによって、入手することができる。
Ａｍｕｒｕｂｉｃｉｎは、カルセド（登録商標）（住友製薬）を購入することによって、入手することができる。
Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅは、ノバントロン（登録商標）（ワイス−武田）を購入することによって、入手することができる。
（６）塩、溶媒和物
白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質は、酸または塩基と薬理学的に許容される塩を形成する場合もある。また、上記（１）〜（５）にあげた化合物は、（１）〜（５）で例示した塩とは異なる薬理学的に許容される塩を形成する場合もある。本発明における前記の物質は、これらの薬理学的に許容される塩をも包含する。酸との塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、燐酸塩等の無機酸塩や蟻酸、酢酸、乳酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸との塩を挙げることができる。また、塩基との塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、アルギニン、リジン等の有機塩基との塩（有機アミン塩）、アンモニウム塩を挙げることができる。
また、白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質は、無水物であってもよく、水和物などの溶媒和物を形成していてもよい。溶媒和物は水和物または非水和物のいずれであってもよいが、水和物が好ましい。溶媒は水、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール）、ジメチルホルムアミドなどを使用することができる。
また、これら物質の溶媒和物および／または光学異性体が存在する場合には、本発明における前記物質には、それらの溶媒和物および／または光学異性体が含まれる。また、本発明における前記物質は、生体内で酸化、還元、加水分解、抱合などの代謝を受ける白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質から選択される少なくとも一つをも包含する。またさらに、本発明における前記物質は、生体内で酸化、還元、加水分解などの代謝を受けて白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質から選択される少なくとも一つを生成する物質をも包含する。
３．医薬組成物、キット、癌の治療方法、血管新生阻害方法
本発明は、スルホンアミド化合物と、（ｉ）白金錯体物質、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、（ｉｖ）微小管阻害物質、および（ｖ）抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質とを組み合わせる点に特徴を有する医薬組成物、キット、癌の治療方法および血管新生阻害方法に関するものである。
本発明において、スルホンアミド化合物は、「１．スルホンアミド化合物」で記載したとおりであるが、例えば、（Ａ）Ｅ７８２０（式（Ｖ））、（Ｂ）一般式（Ｉ）で表される化合物、好ましくはＬＹ１８６６４１またはＬＹ２９５５０１、（Ｃ）一般式（ＩＩ）で表される化合物、好ましくはＬＹ−ＡＳＡＰ、（Ｄ）ＬＹ５７３６３６（式（ＩＩＩ））および（Ｅ）ＣＱＳ（式（ＩＶ））から選択される少なくとも一つの化合物であり、より好ましくはＬＹ２９５５０１およびＬＹ５７３６３６から選択される少なくとも一つの化合物であり、特に好ましくはＬＹ５７３６３６のナトリウム塩である。
他方、本発明において、スルホンアミド化合物は、好ましくはＥ７８２０である。
本発明において、白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質は、「２．白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質」で記載したとおりであるが、（ｉ）白金錯体物質は好ましくはＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎ、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質は好ましくはＣＰＴ−１１および（ｉｉｉ）代謝拮抗物質は好ましくはＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅである。他方、本発明において、（ｉ）白金錯体物質は好ましくはＣｉｓｐｌａｔｉｎ、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質は好ましくはＭｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、（ｉｖ）微小管阻害物質は好ましくはＰａｃｌｉｔａｘｅｌ、および（ｖ）抗生物質は好ましくはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎである。
本発明において、上記スルホンアミド化合物および上記（ｉ）〜（ｖ）の物質には、その薬理学的に許容される塩、またはそれらの水和物などの溶媒和物も包含される。
本発明の医薬組成物は、スルホンアミド化合物と、（ｉ）白金錯体物質、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、（ｉｖ）微小管阻害物質、および（ｖ）抗生物質から選ばれる少なくとも一つの物質とを組み合わせてなる医薬組成物である。本発明の医薬組成物は、癌治療用医薬組成物および／または血管新生阻害用医薬組成物として有用である。
本発明において、「組み合わせてなる」とは、化合物を併用して用いるための組み合わせを意味し、別々の物質を投与時に併用する形態、および混合物としての形態の両方を含む。
また、本発明の医薬組成物は、（ｉ）白金錯体物質、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、（ｉｖ）微小管阻害物質、および（ｖ）抗生物質から選ばれる少なくとも一つの物質とともに患者に併用投与するためのスルホンアミド化合物を含む医薬組成物の態様でも提供される。スルホンアミド化合物、および（ｉ）白金錯体物質、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、（ｉｖ）微小管阻害物質、および（ｖ）抗生物質から選ばれる少なくとも一つの物質は、同時または別々に投与され得る。「同時」とは、一つの投与スケジュールにおいて同一のタイミングで投与されることを意味し、投与の時分が完全に同一である必要はない。「別々」とは、一つの投与スケジュールにおいて異なるタイミングで投与されることを意味する。
また、本発明のキットは、スルホンアミド化合物を含んでなる製剤と、（ｉ）白金錯体物質、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、（ｉｖ）微小管阻害物質、および（ｖ）抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質を含んでなる製剤とをセットにしたことを特徴とするキットである。本発明のキットに含まれる製剤は、スルホンアミド化合物または上記（ｉ）〜（ｖ）の少なくとも一つの物質を含む限り、その剤形は特に限定されない。本発明のキットは、癌治療用キットおよび／または血管新生阻害用キットとして有用である。
本発明のキットにおいて、スルホンアミド化合物を含んでなる製剤と、上記（ｉ）〜（ｖ）の少なくとも一つの物質を含む製剤とは、混合されていてもよいし、あるいは、別個に収納されて一体に包装されていてもよく、また、同時に投与されてもよいし、いずれか一方を先に投与してもよい。
本発明の医薬組成物および／またはキットならびに癌の治療方法および／または血管新生阻害方法は、さらに一または複数の他の抗癌剤を組み合わせてもよい。他の抗癌剤は、抗癌作用を有する製剤であれば、特に限定されない。他の抗癌剤としては、例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ホリナートカルシウム（ロイコボリン）、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））などが挙げられる。また、前記他の抗癌剤としては、癌治療剤の対象となる癌種が、大腸癌である場合には、５−フルオロウラシル、ホリナートカルシウム、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、ベバシズマブが特に好ましく、膵癌である場合には、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、ベバシズマブが特に好ましい。
さらに、本発明において、化合物の特に好ましい組み合わせとしては、癌治療剤の対象となる癌種が、大腸癌である場合には、例えば、表１に示した組み合わせであり、膵癌である場合には、例えば、表２に示した組み合わせである。
【表１】
0005106098.tif 000029
表１は、本発明において、癌治療剤の対象となる癌種が、大腸癌である場合における好ましい組み合わせを示す。表中、ＬＶは、ホリナートカルシウムを示す。
【表２】
0005106098.tif 000030
表２は、本発明において、癌治療剤の対象となる癌種が、膵癌である場合における好ましい組み合わせを示す。
本発明の医薬組成物および／またはキットは、癌治療剤または血管新生阻害剤として使用することができる。
本発明において、治療は、疾患の症状を軽減すること、疾患の症状の進行を抑制すること、疾患の症状を除去すること、疾患の予後を改善すること、疾患の再発を予防することも包含する。
本発明において、癌治療剤とは、抗腫瘍剤、癌予後改善剤、癌再発予防剤、癌転移抑制剤などを含むものをいう。
癌治療の効果は、レントゲン写真、ＣＴ等の所見や生検の病理組織診断により、あるいは腫瘍マーカーの値により確認することができる。
本発明の医薬組成物および／またはキットは、哺乳動物（例、ヒト、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して、投与することができる。
癌治療剤の対象となる癌種は、特に限定されず、例えば、脳腫瘍、頚癌、食道癌、舌癌、肺癌、乳癌、膵癌、冐癌、小腸や十二指腸の癌、大腸癌（結腸癌、直腸癌）、膀胱癌、腎癌、肝癌、前立腺癌、子宮癌、卵巣癌、甲状腺癌、胆嚢癌、咽頭癌、肉腫（例えば、骨肉腫、軟骨肉腫、カポジ肉腫、筋肉腫、血管肉腫、線維肉腫など）、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、リンパ腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）など）およびメラノーマからなる群から選択される少なくとも一つなどがあげられる。また、癌治療剤の対象となる癌種は、好ましくは大腸癌および膵癌からなる群から選択される少なくとも一つである。
本発明の医薬組成物および／またはキットを使用する場合には、経口もしくは非経口的に投与することができる。
本発明の医薬組成物および／またはキットを使用する場合、スルホンアミド化合物の投与量は、症状の程度、患者の年齢、性別、体重、感受性差、投与方法、投与時期、投与間隔、医薬製剤の性質、調剤、種類、有効成分の種類等によって異なり、特に限定されないが、通常成人（体重６０Ｋｇ）１日あたり１０〜６０００ｍｇ、好ましくは５０〜４０００ｍｇ、さらに好ましくは５０〜２０００ｍｇであり、これを通常１日１〜３回に分けて投与することができる。
本発明の医薬組成物および／またはキットを使用する場合、（ｉ）白金錯体物質、好ましくはＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎまたはＣｉｓｐｌａｔｉｎ、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、好ましくはＣＰＴ−１１、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、好ましくはＧｅｍｃｌｔａｂｉｎｅまたはＭｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、（ｉｖ）微小管阻害物質、好ましくはＰａｃｌｉｔａｘｅｌ、および（ｖ）抗生物質、好ましくはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎからなる群から選択される少なくとも一つの物質の投与量は、特に限定されないが、通常成人１日あたり１０〜６０００ｍｇ、好ましくは５０〜４０００ｍｇ、さらに好ましくは５０〜２０００ｍｇであり、これを通常１日１〜３回に分けて投与することができる。
使用するスルホンアミド化合物の量は、特に限定されず、（ｉ）白金錯体物質、好ましくはＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎまたはＣｉｓｐｌａｔｉｎ、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、好ましくはＣＰＴ−１１、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、好ましくはＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＭｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、（ｉｖ）微小管阻害物質、好ましくはＰａｃｌｉｔａｘｅｌ、および（ｖ）抗生物質、好ましくはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎからなる群から選択される少なくとも一つの物質との個々の組み合わせによって異なるが、例えば、（ｉ）〜（ｖ）から選択される少なくとも一つの物質の約０．０１〜１００倍（重量比）である。さらに好ましくは約０．１〜１０倍（重量比）である。
本発明の医薬組成物は、種々の剤形、例えば、経口用固形製剤、または注射剤、坐剤、軟膏剤、パップ剤などの非経口用製剤などにすることができる。
また、本発明のキットに含まれるスルホンアミド化合物と、（ｉ）白金錯体物質、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、（ｉｖ）微小管阻害物質、および（ｖ）抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質とは、それぞれ種々の剤形、例えば、経口用固形製剤、または注射剤、坐剤、軟膏剤、パップ剤などの非経口用製剤などの製剤にすることができる。
経口用固形製剤を調製する場合には、主薬に賦形剤、さらに必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤等とすることができる。また、シロップ剤等の経口用非固形製剤も適宜調製することができる。
賦形剤としては、例えば、乳糖、コーンスターチ、白糖、ぶどう糖、ソルビット、結晶セルロース、二酸化ケイ素などが、結合剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、エチルセルロース、メチルセルロース、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等が、滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ等が、着色剤としては医薬品に添加することが許可されているものが、矯味矯臭剤としては、例えば、ココア末、ハッカ脳、芳香酸、ハッカ油、龍脳、桂皮末等が用いられる。これらの錠剤、顆粒剤には糖衣、ゼラチン衣、その他必要により適宜コーティングすることは勿論差し支えない。
注射剤を調製する場合には、必要により主薬にｐＨ調整剤、緩衝剤、懸濁化剤、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、保存剤などを添加し、常法により静脈、皮下、筋肉内注射剤、点滴静注剤とすることができる。その際必要により、常法により凍結乾燥物とすることもできる。
懸濁化剤としては、例えば、メチルセルロース、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートなどを挙げることができる。
溶解補助剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マクロゴール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステルなどを挙げることができる。
また安定化剤としては、例えば、亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウム等を、保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロクレゾールなどを挙げることができる。
本発明の医薬組成物および／またはキットは、上記のスルホンアミド化合物、および（ｉ）白金錯体物質、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、（ｉｖ）微小管阻害物質、および（ｖ）抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質の他に、包装容器、取扱説明書、添付文書等を含んでいてもよい。包装容器、取扱説明書、添付文書等には、化合物を併用して用いるための組み合わせを記載することができ、また、別々の物質を投与時に併用する形態または混合物としての形態について、用法、用量などを記載することができる。用法、用量は、上記を参照して記載することができる。
また、本発明のキットは、（ａ）スルホンアミド化合物と、（ｉ）白金錯体物質、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、（ｉｖ）微小管阻害物質、および（ｖ）抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質とを併用して用いることを記載した、包装容器、取扱説明書および添付文書からなる群から選択される少なくとも一つと、（ｂ）スルホンアミド化合物を含む医薬組成物とを含有する態様であってもよい。当該キットは、癌治療用キットおよび／または血管新生阻害用キットとして有用である。前記スルホンアミド化合物を含む医薬組成物は、癌治療用医薬組成物および／または血管新生阻害用医薬組成物として有用である。包装容器、取扱説明書、添付文書等には、スルホンアミド化合物と上記（ｉ）〜（ｖ）から選択される少なくとも１つの物質とを併用して用いることを記載することができ、また、別々の物質を投与時に併用する形態または混合物としての形態について、用法、用量などを記載することができる。用法、用量は、上記医薬組成物／キットの記載を参照して設定することができる。
さらに、本発明には、（ｉ）白金錯体物質、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、（ｉｖ）微小管阻害物質、および（ｖ）抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質と組み合わせてなる医薬組成物の製造のためのスルホンアミド化合物の使用も含まれる。本発明の使用において、上記医薬組成物は、癌治療用医薬組成物および／または血管新生阻害用医薬組成物として有用である。
また、本発明には、スルホンアミド化合物と、（ｉ）白金錯体物質、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、（ｉｖ）微小管阻害物質、および（ｖ）抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質とを、同時または別々に患者に投与する癌の治療方法および／または血管新生阻害方法をも含むものである。本発明の癌の治療方法および／または血管新生阻害方法において、スルホンアミド化合物および上記（ｉ）〜（ｖ）から選択される少なくとも一つの物質の投与経路および投与方法は特に限定されないが、上記本発明の医薬組成物の記載を参照することができる。
以下に、具体的な例をもって本発明を示すが、本発明はこれに限られるものではない。
【実施例１】
【０００６】
血管内皮細胞増殖アッセイ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）における細胞増殖に対するＥ７８２０と抗癌剤Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎとの併用効果
ヒト臍帯静脈内皮細胞を、培養培地としてブレットキットＥＧＭ−２（Ｃａｍｂｒｅｘ）に懸濁し、１ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製して、１００μｌの本溶液を９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに加え、３７℃下、５％炭酸ガスインキュベーターにて培養した。翌日、Ｅ７８２０を含む溶液、併用抗癌剤を含む溶液並びにＥ７８２０および併用抗癌剤の両化合物を含む溶液を、培養培地にてそれぞれ希釈した。そして、当該希釈液を前記培養中の各ｗｅｌｌに１００μｌ／ｗｅｌｌ加えて培養を続けた。
３日後、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８溶液（Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８、和光純薬）１０μｌを添加し、３７℃下で２〜３時間培養後、プレートリーダー（コロナ電気株式会社）によって４５０ｎｍの吸光度を測定した。併用効果は、Ｃｈｏｕら（Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．，２２，２７−５５，１９８４）の計算式に従い算出した。
その結果、Ｅ７８２０とＰａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎとの組み合わせは、Ｅ７８２０、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ単独に比べて、より強い細胞増殖抑制作用を示した。また、Ｅ７８２０とＰａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎとを併用した場合のｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ（ＣＩ）が１以下となったことから、Ｅ７８２０は、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎと併用することにより細胞増殖抑制に対する相乗効果（Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ）を示すことが明らかになった（表３）。当該効果は、併用により一般的に認められる効果に比べて、顕著な効果であり、当業者にとってまったく予想し得ないものであった。
【表３】
0005106098.tif 000031
表３は、血管内皮細胞増殖アッセイ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）における細胞増殖抑制に対するＥ７８２０と抗癌剤との相乗効果を示す。
【実施例２】
【０００７】
血管内皮細胞管腔形成アッセイ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）における管腔形成に対するＥ７８２０と抗癌剤Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎとの併用効果
２４ウェルプレート（ＦＡＬＣＯＮ社製）にｔｙｐｅ  Ｉ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｇｅｌ（新田ゼラチン）４００μｌを分注し、３７℃、ＣＯ２インキュベーターに４０ｍｉｎおいてゲル化した。２０ｎｇ／ｍｌ  ＥＧＦ（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ社製）を含む無血清培地（Ｈｕｍａｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ−ＳＦＭ  Ｂａｓａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｍｅｄｉｕｍ、インビトロジェン社製）を調製し、この溶液２００μｌをｔｙｐｅ  Ｉ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｇｅｌの入った各ｗｅｌｌに分注した。ヒト臍帯静脈内皮細胞株（ＨＵＶＥＣ）を、無血清培地（Ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ−ＳＦＭ  Ｂａｓａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｍｅｄｉｕｍ、ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ社製）に懸濁し、５ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ細胞懸濁液を調製した。この懸濁液２００μｌをｔｙｐｅ  Ｉ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｇｅｌおよび無血清培地の入った各ｗｅｌｌにまきこみ一晩培養した。
翌日、ｔｙｐｅ  Ｉ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｇｅｌ  ４００μｌを重層して３７℃、ＣＯ２インキュベーターに３時間置いてゲル化させた後、Ｅ７８２０、併用抗癌剤並びにＥ７８２０と併用抗癌剤の両方を含む無血清培地（１０ｎｇ／ｍｌ  ＥＧＦおよび２０ｎｇ／ｍｌ  ＶＥＧＦ（Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｔｅｃｈｎｅ  Ｃｏｒｐ．）を含む）を１．５ｍｌを加え、更に３７℃、ＣＯ２インキュベーターにて３日間培養した。
培養後、ＭＴＴ（ＳＩＧＭＡ社製）３．３ｍｇ／ｍｌ溶液４００μｌを各ｗｅｌｌに分注し、３７℃、ＣＯ２インキュベーターにて３時間反応させて細胞を発色させた。ＨＵＶＥＣが形成する管腔の画像を顕微鏡下（ＳＺＸ１２、ＯＬＹＭＰＵＳ社製）で取り込んだ（Ｍ−３２０４Ｃ、ＯＬＹＭＰＵＳ社製）。取り込んだ画像を画像解析ソフトＭａｃ  ＳＣＯＰＥ  ２．５６（ＭＩＴＡＮＩ社製）を用いて管腔の長さを測定することによりＨＵＶＥＣの管腔形成を定量した。併用効果はＣｈｏｕら（Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．，２２，２７−５５，１９８４）の計算式に従い算出した。
その結果、Ｅ７８２０とＰａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎとの組み合わせは、Ｅ７８２０、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ単独に比べて、より強い管腔形成抑制作用を示した。また、Ｅ７８２０とＰａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎとを併用した場合のｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ（ＣＩ）が１以下となったことから、Ｅ７８２０は、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、ＳＮ３８（ＣＰＴ−１１活性体）、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎと併用することにより管腔形成抑制に対する相乗効果（Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ）を示すことが明らかになった（表４）。当該効果は、併用により一般的に認められる効果に比べて、顕著な効果であり、当業者にとってまったく予想し得ないものであった。
【表４】
0005106098.tif 000032
表４は、血管内皮細胞管腔形成抑制に対するＥ７８２０と抗癌剤との相乗効果を示す。
以上の結果から、Ｅ７８２０と白金錯体物質、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、代謝拮抗物質、微小管阻害物質および抗生物質からなる群から選択される少なくとも一つの物質とを組み合わせることにより、優れた血管新生阻害活性を示す医薬組成物およびキット、ならびに血管新生の阻害方法が提供され、本発明の医薬組成物、キットおよび方法は、癌の治療および血管新生の阻害に用いることが可能となった。
【実施例３】
【０００８】
ヒト大腸癌細胞株（Ｃｏｌｏ３２０ＤＭ）皮下移植モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）におけるＥ７８２０とＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎとの併用
ヒト大腸癌細胞株Ｃｏｌｏ３２０ＤＭ（大日本製薬より購入）を３７℃下、５％炭酸ガスインキュベーター内においてＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ含）で約８０％コンフルエントとなるまで培養し、トリプシン−ＥＤＴＡにより、細胞を回収した。５０％マトリゲル含有リン酸緩衝液で、７．５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ懸濁液を調製し、得られた細胞懸濁液を０．１ｍＬずつヌードマウス体側皮下に移植した。移植後６日目より、Ｅ７８２０（５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回・２週間・経口投与）、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ  Ａｖｅｎｔｉｓ社）（１０ｍｇ／ｋｇ、４日に１回、計３回、静脈内投与）の単独投与あるいは併用投与を開始した。腫瘍長径・短径をデジマチックキャリパ（Ｍｉｔｓｕｔｏｙｏ）で測定し、以下の式で腫瘍体積、比腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積ＴＶ＝腫瘍長径（ｍｍ）×腫瘍短径２（ｍｍ２）／２
比腫瘍体積ＲＴＶ＝測定日の腫瘍体積／投与開始日の腫瘍体積
併用群において、ｔｗｏ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡで統計的有意な相互作用が認められた場合、Ｅ７８２０とＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎとの間に相乗効果を有すると判定した。
その結果、Ｅ７８２０は、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎと併用することにより、相乗効果が認められ、Ｅ７８２０またはＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎ単独の効果に比べ、すぐれた抗腫瘍効果を示した（表５および図１）。また、Ｅ７８２０は、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎと併用することにより、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ単独では示すことができないような優れた抗腫瘍効果が認められた（表５および図１）。
【表５】
0005106098.tif 000033
表５は、Ｃｏｌｏ３２０ＤＭヌードマウス皮下移植モデルにおける、Ｅ７８２０、ＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎおよびＥ７８２０とＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎとの組み合わせによる抗腫瘍効果を示す。投与開始日をＤａｙ１とした。
以上の結果から、Ｅ７８２０とＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎとを組み合わせることにより、すぐれた抗腫瘍活性を示す医薬組成物およびキット、ならびに癌の治療方法が提供され、本発明の医薬組成物、キットおよび方法は癌の治療に用いることが可能となった。
【実施例４】
【０００９】
ヒト大腸癌細胞株（Ｃｏｌｏ３２０ＤＭ）皮下移植モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）におけるＥ７８２０とＣＰＴ−１１との併用
ヒト大腸癌細胞株Ｃｏｌｏ３２０ＤＭ（大日本製薬より購入）を３７℃下、５％炭酸ガスインキュベーター内においてＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ含）で約８０％コンフルエントとなるまで培養し、トリプシン−ＥＤＴＡにより、細胞を回収した。５０％マトリゲル含有リン酸緩衝液で、７．５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ懸濁液を調製し、得られた細胞懸濁液を０．１ｍＬずつヌードマウス体側皮下に移植した。移植後６日目より、Ｅ７８２０（５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回、２週間、経口投与）、ＣＰＴ−１１（トポテシン（登録商標）、第一製薬）（１００ｍｇ／ｋｇ、４日に１回、計３回、静脈内投与）の単独投与あるいは併用投与を開始した。腫瘍長径・短径をデジマチックキャリパ（Ｍｉｓｔｓｕｔｏｙｏ）で測定し、以下の式で腫瘍体積、比腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積ＴＶ＝腫瘍長径（ｍｍ）×腫瘍短径２（ｍｍ２）／２
比腫瘍体積ＲＴＶ＝測定日の腫瘍体積／投与開始日の腫瘍体積
併用群において、ｔｗｏ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡで統計的有意な相互作用が認められた場合、Ｅ７８２０とＣＰＴ−１１との間に相乗効果を有すると判定した。
その結果、Ｅ７８２０は、ＣＰＴ−１１と併用することにより、相乗効果が認められ、Ｅ７８２０またはＣＰＴ−１１単独の効果に比べ、すぐれた抗腫瘍効果を示した（表６および図２）。また、Ｅ７８２０は、ＣＰＴ−１１と併用することにより、ＣＰＴ−１１単独では示すことができないような優れた抗腫瘍効果が認められた（表６および図２）。
【表６】
0005106098.tif 000034
表６は、Ｃｏｌｏ３２０ＤＭヌードマウス皮下移植モデルにおける、Ｅ７８２０、ＣＰＴ−１１およびＥ７８２０とＣＰＴ−１１との組み合わせによる抗腫瘍効果を示す。投与開始日をＤａｙ１とした。
以上の結果から、Ｅ７８２０とＣＰＴ−１１とを組み合わせることにより、すぐれた抗腫瘍活性を示す医薬組成物およびキット、ならびに癌の治療方法が提供され、本発明の医薬組成物、キットおよび方法は癌の治療に用いることが可能となった。
【実施例５】
【００１０】
ヒト膵癌細胞株（ＫＰ−１）皮下移植モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）におけるＥ７８２０とＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅとの併用
ヒト膵癌細胞株ＫＰ−１（九州がんセンターより入手）を３７℃下、５％炭酸ガスインキュベーター内においてＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ含）で約８０％コンフルエントとなるまで培養し、トリプシン−ＥＤＴＡにより、細胞を回収した。リン酸緩衝液で、１×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ懸濁液を調製し、得られた細胞懸濁液を０．１ｍＬずつヌードマウス体側皮下に移植した。移植後１１日目より、Ｅ７８２０（５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回、３週間、経口投与）、およびＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）、日本イーライリリー社）（２００ｍｇ／ｋｇ、３日に１回、計４回、静脈内投与）の単独投与あるいは併用投与を開始した。腫瘍長径・短径をデジマチックキャリパ（Ｍｉｔｓｕｔｏｙｏ）で測定し、以下の式で腫瘍体積、比腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積ＴＶ＝腫瘍長径（ｍｍ）×腫瘍短径２（ｍｍ２）／２
比腫瘍体積ＲＴＶ＝測定日の腫瘍体積／投与開始日の腫瘍体積
併用群において、ｔｗｏ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡで統計的有意な相互作用が認められた場合、Ｅ７８２０とＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅとの間に相乗効果を有すると判定した。
その結果、Ｅ７８２０は、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅと併用することにより、相乗効果が認められ、Ｅ７８２０またはＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ単独の効果に比べ、すぐれた抗腫瘍効果を示した（表７および図３）。また、Ｅ７８２０は、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅと併用することにより、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ単独では示すことができないような優れた抗腫瘍効果が認められた（表７および図３）。
【表７】
0005106098.tif 000035
表７は、ＫＰ−１ヌードマウス皮下移植モデルにおける、Ｅ７８２０、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅおよびＥ７８２０とＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅとの組み合わせによる抗腫瘍効果を示す。投与開始日をＤａｙ１とした。
以上の結果から、Ｅ７８２０とＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅとを組み合わせることにより、すぐれた抗腫瘍活性を示す医薬組成物およびキット、ならびに癌の治療方法が提供され、本発明の医薬組成物、キットおよび方法は癌の治療に用いることが可能となった。
【実施例６】
【００１１】
ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ｍＲＮＡの定量
ヒト臍帯静脈内皮細胞２ｘ１０６個を２５ｃｍ２細胞培養用ボトルに蒔き込んだ後、ＥＧＭ−２培地（三光純薬）を用いて３７℃下、ＣＯ２インキュベーターにて一晩培養した。翌日、Ｅ７８２０を１μＭになるように添加し、６時間後に細胞からＲＮＡを調製した。すなわち、培地を除去した細胞にＩＳＯＧＥＮ（和光純薬）３ｍｌを加えて溶解し、等量のＣＨＣｌ３を加えて攪拌後、水相を抽出した。次に、半量のｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌを加えて５分間静置後、遠心によって沈殿を回収した。沈殿を７０％エタノールで洗浄後、滅菌水を加えて溶解し、分光光度計により２６０ｎｍの吸光度を測定することによりＲＮＡ量を定量した。
次に、ＴａｑＭａｎ  Ｇｏｌｄ  ＲＴ−ＰＣＲ  ｋｉｔ（アプライド  バイオシステムズ社製）を用いてＲＴ−ＰＣＲ反応を行った。すなわち、ＲＮＡ  ０．１μｇを反応液５０μｌへ加え、２５℃１０分間、４８℃３０分間、９５℃５分間の反応を行い、ｃＤＮＡを調製した。次に、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ｍＲＮＡ測定用プライマー（ＡＢＩ  Ｔａｑｍａｎ  ｐｒｏｂｅ  Ｈｓ００１７２２１４ｍｌ）によりＰＣＲ反応を行い、ＡＢＩ７７００（アプライド  バイオシステムズ社製）によってＲＮＡ量を定量した。
その結果、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ｍＲＮＡ量は、未処理群では４．４μｇ／ｍｌであったのに対し、Ｅ７８２０処理群では１．６μｇ／ｍｌであった。
ところで、抗癌剤によるＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害により、腫瘍におけるＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩが上昇することが報告されている（Ｋｉｍ  Ｒ，Ｈｉｒａｂａｙａｓｈｉ  Ｎ，Ｎｉｓｈｉｙａｍａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  ｎｕｄｅ  ｍｉｃｅ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．１９９２；５０：７６０−６．，Ｗｈｉｔａｃｒｅ  ＣＭ，Ｚｂｏｒｏｗｓｋａ  Ｅ，Ｇｏｒｄｏｎ  ＮＨ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩａｌｐｈａ  ｌｅｖｅｌｓ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ  ｉｎ  ｓｃｈｅｄｕｌｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９７；５７：１４２５−８．）。このため、Ｅ７８２０は、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩの発現阻害作用に基づき、ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害剤との組み合わせにより相乗的な抗腫瘍効果を示すと考える。
したがって、スルホンアミド化合物は、ＣＰＴ−１１のみならず、その他のＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害剤との組み合わせにより相乗的な抗腫瘍効果を示すことが強く示唆された。
【実施例７】
【００１２】
ＤＮＡマイクロアレイ解析
（１）細胞培養、化合物処理、およびＲＮＡの抽出
化合物により誘導される遺伝子発現変化をＤＮＡマイクロアレイ解析によって調べる目的で、ヒト大腸癌由来細胞株ＨＣＴ１１６（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）およびヒト白血病由来細胞株ＭＯＬＴ−４（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）を、１０％の胎児牛血清、１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。以下、培養および化合物処理は５％ＣＯ２、３７℃に調整されたインキュベーター内で行った。１０ｃｍ径の細胞培養ディッシュに２．０×１０６細胞／ディッシュの割合でＨＣＴ１１６細胞およびＭＯＬＴ−４細胞を蒔き、２４時間培養後に以下の化合物処理を行った。
ＨＣＴ１１６細胞に関しては、Ｅ７８２０（０．８μＭ）、Ｅ７０７０（０．８μＭ）、ＬＹ２９５５０１（３０μＭ）、ＣＱＳ（８μＭ）、ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（０．２μＭ）、ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ（０．２μＭ）、ＩＣＲＦ１５４（８０μＭ）、ＩＣＲＦ１５９（８０μＭ）、ｋｅｎｐａｕｌｌｏｎｅ（１０μＭ）、ａｌｓｔｅｒｐｕｌｌｏｎｅ（１０μＭ）、ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ（０．１μＭ）、ｒａｐａｍｙｃｉｎ（８０μＭ）の１２化合物を評価した。一方、ＭＯＬＴ−４細胞に関しては、Ｅ７０７０（０．８μＭ）を評価した。ここで、ａｄｒｉａｍｙｃｉｎおよびｄａｕｎｏｍｙｃｉｎは、ＤＮＡにインターカレーションする型のＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ阻害剤、ＩＣＲＦ１５４およびＩＣＲＦ１５９は、ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｔｙｐｅのＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ阻害剤、ｋｅｎｐａｕｌｌｏｎｅおよびａｌｓｔｅｒｐｕｌｌｏｎｅは、ｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｋｉｎａｓｅｓ（ＣＤＫｓ）阻害剤、ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａは、ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ阻害剤、ｒａｐａｍｙｃｉｎは、ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ阻害剤として、それぞれ公知の化合物である。化合物処理濃度は、各々の化合物のＨＣＴ１１６細胞に対する５０％増殖阻害濃度（ＷＳＴ−８を用いた３日間の細胞増殖抑制活性に基づく）を基準にその３〜５倍の濃度として設定し、上記化合物名に続く括弧内に示した設定濃度で２４時間処理後に細胞を回収した。また、化合物を加えずに２４時間培養した細胞も同様に回収した。
回収した細胞からの全ＲＮＡの抽出は、ＴＲＩＺＯＬ試薬（インビトロジェン社製）を用いて添付の操作法に従って行った。
（２）ＤＮＡマイクロアレイによる遺伝子発現解析
得られたＲＮＡを１００μｌのｄｉｅｔｈｙｌｐｙｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ（ＤＥＰＣ）処理をした滅菌水に溶解し、さらにＲＮｅａｓｙカラム（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて精製し、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｃｈｏｉｃｅ  Ｓｙｓｔｅｍ（インビトロジェン社製）およびＴ７−ｄ（Ｔ）２４プライマーを用いて２本鎖のｃＤＮＡを合成した。
まず１０μｇのＲＮＡに５μＭのＴ７−ｄ（Ｔ）２４プライマー、１ｘ  Ｆｉｒｓｔ  ｓｔｒａｎｄ  ｂｕｆｆｅｒ、１０ｍＭ  ＤＴＴ、５００μＭのｄＮＴＰ  ｍｉｘ、および２０ｕｎｉｔｓ／μｌのＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅを加え、４２℃にて１時間反応させ、１本鎖ＤＮＡを合成した。続いて、１ｘ  Ｓｅｃｏｎｄ  ｓｔｒａｎｄ  ｂｕｆｆｅｒ、２００μＭのｄＮＴＰｍｉｘ、６７Ｕ／ｍｌ  ＤＮＡ  ｌｉｇａｓｅ、２７０Ｕ／ｍｌ  ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｉ、および１３Ｕ／ｍｌ  ＲＮａｓｅ  Ｈを添加して、１６℃にて２時間反応させ２本鎖ｃＤＮＡを合成した。さらに、６７Ｕ／ｍｌ  Ｔ４  ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｉを添加して、１６℃にて５分間反応させた後、１０μｌの０．５Ｍ  ＥＤＴＡを加え反応を停止した。
得られたｃＤＮＡをフェノール／クロロホルムにて精製し、ＲＮＡ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｅｎｚｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用い、添付の操作法に従って、ビオチン化ＵＴＰならびにＣＴＰによるラベル化反応を行った。反応生成物をＲＮｅａｓｙ  カラムにて精製後、２００ｍＭ  トリス酢酸ｐＨ８．１、１５０ｍＭ酢酸マグネシウム、５０ｍＭ酢酸カリウム中で９４℃にて３５分間加熱してｃＲＮＡを断片化した。
断片化したｃＲＮＡを、１００ｍＭ  ＭＥＳ、１  Ｍ  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０中、４５℃にて１６時間、ＧｅｎｅＣｈｉｐ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）Ｈｕｍａｎ  Ｆｏｃｕｓ  ａｒｒａｙにハイブリダイズさせた。ハイブリダイズ後、ＧｅｎｅＣｈｉｐはＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ｆｌｕｉｄｉｃｓ  ｓｔａｔｉｏｎに添付のプロトコールＭｉｄｉ＿ｅｕｋ２に従い洗浄および染色した。染色にはストレプトアビジン・フィコエリトリンとビオチン化抗ストレプトアビジンヤギ抗体を用いた。染色後のＧｅｎｅＣｈｉｐをＨＰアルゴンイオンレーザー共焦点顕微鏡（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ）を用いてスキャンし、蛍光強度を測定した。測定は、４８８ｎｍの波長でｅｘｃｉｔａｔｉｏｎを行い、５７０ｎｍの波長のｅｍｉｓｓｉｏｎで行った。
定量的データ解析は全てＧｅｎｅＣｈｉｐ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）ならびにＧｅｎｅ  Ｓｐｒｉｎｇ（Ｓｉｌｉｃｏｎｇｅｎｅｔｉｃｓ）を用いて行った。ＧｅｎｅＣｈｉｐ  ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて化合物による遺伝子発現変化を評価する際には、化合物処理群と未処理群の２つの条件間でＲＮＡの定量値が２倍以上解離している場合につき、その遺伝子の発現が有意に「増加」あるいは「減少」したと判断した。Ｇｅｎｅ  Ｓｐｒｉｎｇを用いて、各化合物が誘導する遺伝子発現変化の類似性を評価する際には、Ｈｕｍａｎ  Ｆｏｃｕｓ  Ａｒｒａｙに載っている全遺伝子の発現変化をもとに階層的クラスターリング解析を行った。
ＨＣＴ１１６細胞の階層的クラスターリング解析の結果を図４に示した。
解析の結果、同一の作用機序を有するａｄｒｉａｍｙｃｉｎおよびｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ、ＩＣＲＦ１５４およびＩＣＲＦ１５９、Ｋｅｎｐａｕｌｌｏｎｅおよびａｌｓｔｅｒｐｕｌｌｏｎｅは、それぞれ類似の遺伝子変化を引き起こした（図４）。よって、同一の作用機序を有する化合物が、互いに類似の遺伝子変化を引き起こすことが確認された。
Ｅ７０７０、Ｅ７８２０、ＬＹ２９５５０１およびＣＱＳは、類似の遺伝子変化を引き起こした（図４）。よって、本解析により、Ｅ７０７０、Ｅ７８２０、ＬＹ２９５５０１およびＣＱＳは、同一または類似の作用機序を有すると考えられ、同一または類似の遺伝子変化および効果をもたらすことが強く示唆された。
【実施例８】
【００１３】
ＤＮＡマイクロアレイ解析
ＨＣＴ１１６細胞を、１０％の胎児牛血清、１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。以下、培養および化合物処理は、５％ＣＯ２、３７℃に調整されたインキュベーター内で行った。１０ｃｍ径の細胞培養ディッシュに２．０×１０６細胞／ディッシュの割合でＨＣＴ１１６細胞を蒔き、２４時間培養後に以下の化合物処理を行った。
本実施例ではＨＣＴ１１６細胞を用いて、Ｅ７８２０（０．１６μＭ）、Ｅ７０７０（０．２６μＭ）、ＬＹ１８６６４１（５９μＭ）、ＬＹ２９５５０１（２４μＭ）、ＬＹ−５７３６３６（９．６μＭ）、ＣＱＳ（４．０μＭ）、ＭＳＴ１６（１００μＭ）、ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ（３．６μＭ）、ｅｔｈｏｘｚｏｌａｍｉｄｅ（４１０μＭ）、ｃａｐｓａｉｃｉｎ（２８０μＭ）、ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ（０．１６μＭ）、ｋｅｎｐａｕｌｌｏｎｅ（７．１μＭ）の１２化合物で処理したときの遺伝子発現変化を調べた。
ここで、ＭＳＴ１６は、ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｔｙｐｅのＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ阻害剤、ｅｔｏｐｏｓｉｄｅはｃｌｅａｖａｂｌｅ  ｃｏｍｐｌｅｘの形成を誘導するＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ阻害剤、ｅｔｈｏｘｚｏｌａｍｉｄｅはｃａｒｂｏｎｉｃ  ａｎｈｙｄｒａｓｅ阻害剤、ｃａｐｓａｉｃｉｎはｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｌａｓｍａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ＮＡＤＨ  ｏｘｉｄａｓｅ阻害剤、ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａはｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ阻害剤、ｋｅｎｐａｕｌｌｏｎｅはｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｋｉｎａｓｅｓ（ＣＤＫｓ）阻害剤として、それぞれ公知の化合物である。
化合物処理濃度は、各々の化合物のＨＣＴ１１６細胞に対する５０％増殖阻害濃度（ＭＴＴを用いた３日間の細胞増殖抑制活性に基づく）を基準に、その２倍の濃度として設定した。上記化合物名に続く括弧内に示した設定濃度で２４時間処理後に細胞を回収した。また、化合物を加えずに２４時間培養した細胞も同様に回収した。
回収した細胞からの全ＲＮＡの抽出は、ＴＲＩＺＯＬ試薬（インビトロジェン社製）を用いて添付の操作法に従って行った。
ＤＮＡマイクロアレイによる遺伝子発現解析は、実施例７中の「（２）ＤＮＡマイクロアレイによる遺伝子発現解析」と同様に行った。
また、本実施例は、各サンプルについてｄｕｐｌｉｃａｔｅで行った（実験の便宜上、それぞれのサンプルは区別できるようにｃｏｎｔｒｏｌ−１、ｃｏｎｔｒｏｌ−２、Ｅ７０７０−１、Ｅ７０７０−２の要領で枝番号を付した）。そして、ＧｅｎｅＣｈｉｐ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）ｓｙｓｔｅｍ（Ｈｕｍａｎ  Ｆｏｃｕｓ  ａｒｒａｙ）を用いて各化合物の誘導する遺伝子発現変化を解析した。
本実施例で得られた２６個（ｃｏｎｔｒｏｌ＋１２化合物の１３サンプル×２）の「．ｃｅｌ」ファイルに対しＲＭＡ法（ｒｏｂｕｓｔ  ｍｕｌｔｉ−ａｒｒａｙ  ａｖｅｒａｇｅ法（Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ（２００３），４，２４９−２６４））を適用し、プローブレベルでの正規分布化を行った後、遺伝子レベルでのシグナル強度のログ値を算出した。続いて、各遺伝子の化合物処理群におけるシグナル強度のログ値から化合物未処理群（ｃｏｎｔｒｏｌ−１）におけるシグナル強度のログ値を引き、ｃｏｎｔｒｏｌ−１に対する化合物処理群のシグナル比のログ値を得た。そして、コサイン相関係数を計算し、実験間の相関係数とした（図５）。この相関係数をもとに、ＵＰＧＭＡ法（Ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ  Ｐａｉｒ  Ｇｒｏｕｐ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｗｉｔｈ  Ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ  ｍｅａｎ法）により階層的クラスターリング解析した（図６）。ｃｏｎｔｒｏｌ−２についても、同様の計算を行った（図７および図８）。使用したソフトウェアはＲ  ２．０．１（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／）、ａｆｆｙ  ｐａｃｋａｇｅ  １．５．８（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ．ｏｒｇ）である。
図５〜８において、「ＬＹ１」はＬＹ１８６６４１を、「ＬＹ２」はＬＹ２９５５０１を、「ＬＹ５」はＬＹ５７３６３６を、「ＣＡＩ」はｅｔｈｏｘｚｏｌａｍｉｄｅを、「Ｃａｐ」はｃａｐｓａｉｃｉｎを、「ＭＳＴ」はＭＳＴ１６を、「Ｅｔｏｐ」はｅｔｏｐｏｓｉｄｅを、「ＴＳＡ」はｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａを、「Ｋｅｎｐ」はｋｅｎｐａｕｌｌｏｎｅを示す。図６および図８において、「ｄｅ  ｈｃｌｕｓｔ（＊，”ａｖｅｒａｇｅ”）」は、統計解析を行う時のコマンドであり、ｄｕｐｕｌｉｃａｔｅの実験データの平均値を用いてＲによるクラスターリング分析を行ったことを示す。
解析の結果、Ｅ７０７０、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ５７３６３６およびＣＱＳは、ＨＣＴ１１６細胞に対して引き起こす遺伝子変化は非常に高い類似性を示し、他のどの化合物（ＭＳＴ１６、ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ、ｅｔｈｏｘｚｏｌａｍｉｄｅ、ｃａｐｓａｉｃｉｎ、ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ、ｋｅｎｐａｕｌｌｏｎｅ）のプロファイルとも異なることが明らかとなった（図５〜図８）。よって、本解析により、Ｅ７０７０、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ５７３６３６およびＣＱＳは、同一または類似の作用機序を有すると考えられ、同一または類似の遺伝子変化および効果をもたらすことが強く示唆された。
【実施例９】
【００１４】
癌細胞株パネル実験
３６株のヒト癌細胞パネルを用いて、Ｅ７８２０、Ｅ７０７０、ＣＱＳ、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１の細胞増殖抑制活性の相関を調べた。用いた癌細胞株は、ＤＬＤ−１，ＨＣＴ１５，ＨＣＴ１１６，ＨＴ２９，ＳＷ４８０，ＳＷ６２０，ＷｉＤｒ（以上、ヒト大腸癌細胞株）Ａ４２７，Ａ５４９，ＬＸ−１，ＮＣＩ−Ｈ４６０，ＮＣＩ−Ｈ５２２，ＰＣ−９，ＰＣ−１０（以上、ヒト肺癌細胞株）、ＧＴ３ＴＫＢ，ＨＧＣ２７，ＭＫＮ１，ＭＫＮ７，ＭＫＮ２８，ＭＫＮ７４（以上、ヒト胃癌細胞株）、ＡｓＰＣ−１，ＫＰ−１，ＫＰ−４，ＭｉａＰａＣａＩＩ，ＰＡＮＣ−１，ＳＵＩＴ−２（以上、ヒト膵臓癌細胞株）、ＢＳＹ−１，ＨＢＣ５，ＭＣＦ−７，ＭＤＡ−ＭＢ−２３１，ＭＤＡ−ＭＢ−４３５，ＭＤＡ−ＭＢ−４６８（以上、ヒト乳癌細胞株）、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ，ＨＬ６０，Ｋ５６２，ＭＯＬＴ−４（以上、ヒト白血病細胞株）の３６種類であり、全ての細胞は１０％の胎児牛血清、１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地を用いて５％ＣＯ２条件下３７℃にて培養した（表８）。
【表８】
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表８は、ヒト癌細胞株パネルにおけるヒト癌細胞株の種類、蒔きこみ細胞数および倍化時間を示す。
表８に記載の細胞数で９６ウェルマイクロプレート（平底）に蒔き（５０μｌ／ｗｅｌｌ）、２４時間後に３倍希釈系列の化合物を添加した（５０μｌ／ｗｅｌｌ）。さらに７２時間後にＷＳＴ−８（１０μｌ／ｗｅｌｌ）を添加し、４５０ｎｍの吸光度を測定した。最小二乗法により全３６株の癌細胞に対する５０％増殖抑制阻害濃度を求め、そのパターンを各化合物間で比較した。相関の指標としては、Ｐｅａｒｓｏｎ’ｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓを用いた（Ｐａｕｌｌ，Ｋ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｓｐｌａｙ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｅａｎ  ｇｒａｐｈ  ａｎｄ  ＣＯＭＰＡＲＥ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．１９８９，８１，１０８８−１０９２；Ｍｏｎｋｓ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｈｉｇｈ−ｆｌｕｘ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇ  ｓｃｒｅｅｎ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｐａｎｅｌ  ｏｆ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．１９９１，８３，７５７−７６６．）。
その結果、Ｅ７０７０、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１およびＣＱＳは、各癌細胞株に対する増殖抑制活性において、高い相関係数を示した（表９）。よって、本解析により、Ｅ７０７０、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１およびＣＱＳは、同一または類似の作用機序を有すると考えられ、同一または類似の遺伝子変化および効果をもたらすことが強く示唆された。
【表９】
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表９は、ヒト癌細胞株パネルにおける化合物間（Ｅ７０７０、Ｅ７８２０、ＣＱＳ、ＬＹ１８６６４１およびＬＹ２９５５０１）の相関係数を示す。
【実施例１０】
【００１５】
Ｅ７０７０耐性株における交差耐性
Ｅ７０７０耐性株を用いて、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ−ＡＳＡＰおよびＣＱＳの細胞増殖抑制活性を評価した。ＨＣＴ１１６−Ｃ９は、ヒト大腸癌由来ＨＣＴ１１６（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）から分離した亜株であり、このＨＣＴ１１６−Ｃ９をＥ７０７０存在下で培養し、Ｅ７０７０濃度を漸次的に上昇させることにより得たＥ７０７０耐性亜株がＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ１およびＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ４である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２００２，１，２７５−２８６）。
ＨＣＴ１１６−Ｃ９、ＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ１、ＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ４の３細胞株を各々３０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで９６ウェルマイクロプレート（平底）に蒔き（５０μｌ／ｗｅｌｌ）、２４時間後に３倍希釈系列の化合物を添加した（５０μｌ／ｗｅｌｌ）。さらに、７２時間後にＭＴＴ法（Ｍｏｓｓｍａｎｎ  Ｔ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９８３，６５，５５−６３）により細胞増殖抑制活性を評価した。最小二乗法により各癌細胞に対する５０％増殖抑制阻害濃度を求めた。
その結果、Ｅ７０７０の細胞増殖抑制活性は、ＨＣＴ１１６−Ｃ９（Ｃ９）に対してＩＣ５０は０．１２７μＭであった。これに対し、ＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ１（Ｃ９Ｃ１）およびＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ４（Ｃ９Ｃ４）に対する活性はそれぞれＩＣ５０＝３１．９μＭおよび２６．９μＭであり、Ｅ７０７０のＣ９Ｃ１およびＣ９Ｃ４に対する細胞増殖抑制活性が顕著に低下することが確認された（図９）。また、Ｅ７８２０、ＣＱＳ、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ−ＡＳＡＰの細胞増殖抑制活性については、ＨＣＴ１１６−Ｃ９に対する活性がそれぞれＩＣ５０＝０．０８０μＭ、１．７３μＭ、３３．６μＭ、１０．９μＭ、１．６３μＭであったのに対し、ＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ１およびＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ４に対する活性は、ＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ１について、それぞれＩＣ５０＝５１．２μＭ、６３４μＭ、１３４μＭ、１１１μＭ、１１３μＭであり、ＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ４について、それぞれＩＣ５０＝５２．８μＭ、５１７μＭ、１３８μＭ、１１０μＭ、９０．３μＭであった。したがって、Ｅ７８２０、ＣＱＳ、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ−ＡＳＡＰの細胞増殖抑制活性については、Ｃ９に対する活性に比べ、Ｃ９Ｃ１およびＣ９Ｃ４に対する活性が顕著に低下していた（図９）。よって、Ｅ７０７０、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ−ＡＳＡＰおよびＣＱＳは、同一または類似の作用機序を有すると考えられ、同一または類似の遺伝子変化および効果をもたらすことが強く示唆された。
【実施例１１】
【００１６】
Ｅ７０７０耐性株における交差耐性
実施例１０と全く同様にして、Ｅ７０７０耐性株を用いてＬＹ５７３６３６の細胞増殖抑制活性をＥ７０７０と同時に評価した。
その結果、Ｅ７０７０の細胞増殖抑制活性は、ＨＣＴ１１６−Ｃ９に対する活性に比べ（ＩＣ５０＝０．１２７μＭ）、ＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ１およびＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ４に対する活性（それぞれＩＣ５０＝３２．７μＭ、２８．０μＭ）が顕著に低下することが再度確認された（図１０）。また、ＬＹ５７３６３６の細胞増殖抑制活性も、ＨＣＴ１１６−Ｃ９に対する活性に比べ（ＩＣ５０＝５．１１μＭ）、ＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ１およびＨＣＴ１１６−Ｃ９−Ｃ４に対する活性（それぞれＩＣ５０＝２６４μＭ、２４０μＭ）が顕著に低下していた（図１０）。よって、ＬＹ５７３６３６は、Ｅ７０７０と同一または類似の作用機序を有すると考えられ、同一または類似の遺伝子変化および効果をもたらすことが強く示唆された。
これらの結果（実施例７−１１）から、Ｅ７０７０、Ｅ７８２０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ−ＡＳＡＰ、ＬＹ５７３６３６もしくはＣＱＳまたはこれらの組み合わせが、同一または類似の遺伝子変化ならびに同一または類似の作用および効果をもたらすことが明らかとなった。
よって、Ｅ７８２０と同様に（実施例１−６）、スルホンアミド化合物、好ましくはＥ７０７０、ＬＹ１８６６４１、ＬＹ２９５５０１、ＬＹ−ＡＳＡＰ、ＬＹ５７３６３６もしくはＣＱＳまたはこれらの組み合わせが、（ｉ）白金錯体物質、好ましくはＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎまたはＣｉｓｐｌａｔｉｎ、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、好ましくはＣＰＴ−１１、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、好ましくはＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＭｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、（ｉｖ）微小管阻害物質、好ましくはＰａｃｌｉｔａｘｅｌ、および（ｖ）抗生物質、好ましくはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎからなる群から選択される少なくとも一つの化合物と併用することにより、すぐれた抗腫瘍活性および血管新生阻害活性を示すことが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００１７】
本発明により、すぐれた抗腫瘍活性および／または血管新生阻害活性を示す医薬組成物およびキット、ならびに癌の治療方法および／または血管新生阻害方法が提供される。
より具体的には、スルホンアミド化合物、すなわち（Ａ）Ｅ７８２０、（Ｂ）一般式（Ｉ）で表される化合物、好ましくはＬＹ１８６６４１またはＬＹ２９５５０１、（Ｃ）一般式（ＩＩ）で表される化合物、好ましくはＬＹ−ＡＳＡＰ、（Ｄ）ＬＹ５７３６３６および（Ｅ）ＣＱＳから選択される少なくとも一つの化合物と、（ｉ）白金錯体物質、好ましくはＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎまたはＣｉｓｐｌａｔｉｎ、（ｉｉ）ＤＮＡ−ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ阻害物質、好ましくはＣＰＴ−１１、（ｉｉｉ）代謝拮抗物質、好ましくはＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅまたはＭｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、（ｉｖ）微小管阻害物質、好ましくはＰａｃｌｉｔａｘｅｌ、および（ｖ）抗生物質、好ましくはＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎからなる群から選択される少なくとも一つの物質とを組み合わせることにより、すぐれた抗腫瘍活性および／または血管新生阻害活性を示す医薬組成物およびキット、ならびに癌の治療方法および／または血管新生阻害方法が提供される。本発明の医薬組成物、キットおよび方法は、癌の治療または血管新生の阻害に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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