(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
固体基材表面に担持された核酸をインビトロで細胞に押しつけることにより該核酸を該細胞内に入れることを特徴とする核酸デリバリー方法。
【請求項２】
前記核酸が、カチオン性脂質またはポリアミンと複合体を形成している請求項１に記載の核酸デリバリー方法。
【請求項３】
前記核酸が、プロタミンまたはデンドリティックポリリジンと複合体を形成している請求項２に記載の核酸デリバリー方法。
【請求項４】
前記核酸が遺伝子治療に有用な核酸である請求項１に記載の核酸デリバリー方法。
【請求項５】
固体基材の表面に複数の既知遺伝子もしくは未知遺伝子をスポットし、スポットされた該既知遺伝子もしくは未知遺伝子を、インビトロで培養細胞もしくは動物臓器に押しつけ、その遺伝子発現をスクリーニングすることを特徴とする遺伝子のスクリーニング法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞内へ核酸をデリバリー（導入）する方法に関するものであり、さらに詳しくは、治療、診断、分子生物学操作等の目的で核酸をインビトロで細胞内に導入する核酸デリバリー方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、細胞内の遺伝子あるいは細胞内への遺伝子発現を制御するために、低分子機能性核酸を細胞内に導入する方法として、エレクトロポレーション法（electroporation）などの物理的な方法や、塩基性脂質、塩基性ポリマーなどを利用した化学的手法が知られている。しかし、これらの物理的あるいは化学的手法は、細胞に与えるダメージが大きく、さらに、特殊な装置や試薬が必要であり、コストがかかる。このため、安価で簡便、そして、細胞に対して付加の少ない細胞内への核酸デリバリー技術が求められている。
【０００３】
このような核酸デリバリー技術として、文献１及び２には、ガラス基板上にゼラチンとＤＮＡの混合物をスポットし、それに細胞を播種して培養し、ガラス基板上においてＤＮＡを自発的に培養細胞内へ取り込ませる手法が開示されており、文献３及び４には、このような原理を利用した遺伝子導入装置が開示されている。
また、文献５には、文献１及び２の手法を発展させ、親水処理を施したガラス基板上にＤＮＡと塩基性脂質−ＤＮＡ複合体を交互積層させたものを作製し、この積層体上に培養細胞を播種して、ＤＮＡを細胞内へ取り込ませる手法が提案されている。
文献１    米国特許第６，５４４，７９０号
文献２    Junaid  Ziauddin,  David  M.  Sabatini,  Nature  vol.
411,  107-110(2001)
文献３    米国特許第６，６７０，１２９号
文献４    米国特許第６，６５２，８７８号
文献５    Fumio  Yamauchi,  Koichi  Kato,  Hiroo
Iwata,Biochimica  et  Byophysica  Acta  vol.1672,138-
147(2004)
【０００４】
上記の文献に開示されているいずれの手法も、多種遺伝子をスポットし、その培養細胞内での機能解析へ発展できると期待される。しかし、機能解析のためのデバイスであり、動物臓器への適用はできない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
前述のような問題点を抱える物理的あるいは化学的手法をベースとする核酸デリバリー技術は、その成功が強く期待されているにもかかわらず、大きなブレークスルーは未だ成し遂げられてはいないのが現状である。核酸デリバリー技術には、安価で簡便であること、細胞への負担が少ないこと、及び高い核酸デリバリー効率の３つの要素が要求される。３つの要素を同時に高いレベルで実現する核酸デリバリー技術の構築は、遺伝子治療及び分子生物学的に一般に広く用いられる基礎技術の開発につながる。
【０００６】
従って、本発明の目的は、安価で簡便であること、細胞への負担が少ないこと、及び高い核酸デリバリー効率の３つの要素を備えた核酸デリバリー方法及び核酸デリバリーデバイス（たとえば、遺伝子治療用核酸を担持させた遺伝治療用デバイス）を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意研究した結果、固体基材表面に核酸を担持させたものを、培養細胞上部から押し付けることで、単に細胞と接触させるだけでは細胞内への取り込みが困難であるとされてきた種類の核酸も細胞内へ取り込まれることを見出した。また、核酸とカチオン性脂質またはポリアミンとの複合体を同様に固体基材表面に担持させて細胞に押しつけるときには、核酸を単独で担持して押し付けた場合或いは該複合体を単に細胞と接触させた場合に比較して、より効率的に核酸が細胞内に取り込まれることを見出した。本発明は、このような新規知見に基づいてなされたものである。
【０００８】
本発明によれば、固体基材表面に担持された核酸をインビトロで細胞に押しつけることにより該核酸を該細胞内に入れることを特徴とする核酸デリバリー方法が提供される。
【０００９】
かかる核酸デリバリー方法においては、
（１）前記核酸が、カチオン性脂質またはポリアミンと複合体を形成していること、
（２）前記核酸が、プロタミンまたはデンドリティックポリリジンと複合体を形成していること、
（３）前記核酸が遺伝子治療に有用な核酸であること、
が好ましい。
【００１０】
このような本発明の核酸デリバリー方法は、細胞内へ効率よく核酸をデリバリーするのみならず、再現性もよく、操作も簡単である。さらに、核酸担持固体基材を細胞に押し付けたときに一時的なストレスは細胞にかかるが、押しつけた後の固体基材を取り除けば、基本的に処置後には何も化学物質は残らないため、細胞への負担は従来の化学的手法に比べれば低い。したがって、本発明の核酸デリバリー方法は、細菌などの原核細胞、その他、植物あるいは動物個体から分離した真核細胞に対してのみならず、植物あるいは動物個体の組織に存在する状態のままの細胞に対しても好ましく適用することができる。
【００１３】
このような本発明の方法に使用する核酸デリバリーデバイスとしては、安価かつ簡便に製作することができ、かつ、その核酸担持表面を細胞に押しつけることにより該核酸を細胞内へ効率よくデリバリーすることができる。この場合、核酸をカチオン性脂質またはポリアミンと複合体（以下、「核酸複合体」と略記することがある）を形成させて固体基材表面に吸着担持させると、カチオン性脂質またはポリアミンが、エンドサイト―シスの取り込み機構により細胞内への核酸デリバリー効率をより高くする。また、固体基材表面をカチオン性官能基またはアニオン性官能基で修飾することにより、固体基材表面への核酸または核酸複合体の結合力が増し、この結果、核酸デリバリー性能を安定化することができる。
【００１４】
本発明の方法に使用する核酸デリバリーデバイスは、例えば、遺伝子治療に有用な核酸を担持させて遺伝子治療のためのデバイスとして、及び、複数の既知遺伝子または未知遺伝子をスポット（点在配置）して遺伝子発現のスクリーニングまたは遺伝子機能の解析のための遺伝子導入デバイスなどとして、実用に供することができる。
【００１５】
より具体的には、本発明の方法に使用する核酸デリバリーデバイスとしては、
（ａ）遺伝子治療用核酸を担持させ、体内臓器に押しつけることによる遺伝子を細胞内に入れるために使用するデバイス、
（ｂ）遺伝子治療用核酸を担持させ、体外に取り出した細胞に押し付けて該核酸（遺伝子）を細胞内に入れ、それを体内に戻すことにより遺伝子治療を行うために使用するデバイス、
（ｃ）固体基板上に複数の既知遺伝子もしくは未知遺伝子をスポットし、それを培養細胞もしくは動物臓器に押しつけ、その遺伝子発現をスクリーニングするために使用するデバイス、または、その遺伝子機能を解析するために使用する遺伝子導入デバイス、
などとして実用することができる。
【００１６】
例えば、上記（ａ）の遺伝子を細胞内に入れるデバイスの具体例の一つとして、ステント表面に遺伝子治療用核酸を担持させ、このステントを血管等の体腔内に搬入し狭窄部位の拡張治療と同時に同部位の細胞への遺伝子導入を達成するために使用するデバイス（すなわち表面に遺伝子治療用核酸を担持させたステント）が挙げられる。
【００１７】
従って、本発明によれば、上記の核酸デリバリー方法或いは固体基材の表面に複数の既知遺伝子もしくは未知遺伝子をスポットし、スポットされた該既知遺伝子もしくは未知遺伝子を、インビトロで培養細胞もしくは動物臓器に押しつけ、その遺伝子発現をスクリーニングすることを特徴とする遺伝子のスクリーニング法が提供される。
【００１９】
（固体基材）
本発明において、核酸を担持する固体基材としては、核酸を担持しうるものである限り、格別の制限はなく、核酸デリバリーデバイスの使用目的、使用環境などに応じて適当な材質、形状を有する固体基材を選択使用することができる。例えば、ガラス、各種セラミック、金属、天然または合成高分子等からなる固体基材を用いることができる。また、固体基材の形状は、板状体（プレート）、シート、フィルム、棒状体、中空筒状体、ひも状物、線状物、網目構造物、織布、不織布などであってよく、所要量の核酸を表面に担持させ易く、かつ、細胞へ押しつける操作を行い易い形状を有する固体基材を、使用目的、使用形態に応じて選択すればよい。
【００２０】
上記の固体基材は、必要に応じて、各種のポリマーでコーティングされていてもよく、特にガラス製の固体基材を用いる場合には、その表面が、ポリマーでコーティングされていることが好ましい。このようなポリマーとしては、例えば、ヒドロキシエチルメタクリレート／スチレンブロック共重合体、ポリエーテル／ナイロン６−１０ブロック共重合体、ポリエーテルポリウレタン等のミクロドメイン構造を有する生体適合性ポリマー；ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリウレタン、ポリスルホン、ナイロン等の医用材料として汎用されているポリマー；これらのポリマーにアニオン性官能基が導入されたポリマー；などを例示することができる。
【００２１】
また、上記の生体適合性ポリマーの中では、特にＳＥＡＭ−Ｆと呼ばれているものが好適である。このＳＥＡＭ−Ｆは、トリメトキシシリルプロピルメタクリレート（ＴＭＳＰＭＡ）／メチルメタクリレート（ＭＭＡ）／ブチルメタクリレート（ＢＭＡ）／２−ヒドロキシメチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）／スチレン（Ｓｔ）五元共重合体と、両末端にトリメトキシシリル基を有するポリウレタンと、ＴＭＳＰＭＡ／ＭＭＡ／パーフルオロデシルエチルメタクリレート（ＰＦＤＥＭＡ）／Ｓｔ四元共重合体とをブレンドすることにより製造されるものであり、親水性と疎水性のミクロドメイン構造を有する共重合体材料である。このようなＳＥＡＭ−Ｆは、例えば、K.  Kawahito  et  al.,Artificial  Organs,19(8); 857-863にＦＡＳＵＳコポリマーとして記載されている。
【００２２】
また、上記の固体基材は、本発明の目的、作用効果を阻害しない範囲内で、核酸を担持すべき表面を化学修飾したものであってもよい。即ち、固体基材表面を化学修飾することにより、固体基材表面と核酸や核酸とポリアミンとの複合体との結合力を高めることができる。特に、核酸に対する結合力を高めるためには、カチオン性官能基による修飾が有効であり、核酸とポリアミンとの複合体に対する結合力を高めるためにはアニオン性官能基による修飾が有効である。カチオン性官能基による修飾は、固体基材表面に、アミノ基やグアニジウム基などのカチオン性官能基を有する物質をコーティングすることにより達成することができる。一方、アニオン性官能基による修飾は、固体基材表面に、カルボキシル基やリン酸基、硫酸基などのアニオン性官能基を導入し、またはこれらのアニオン性官能基を有する物質をコーティングすることにより達成される。
【００２３】
（核酸）
本発明の方法に使用する核酸デリバリーデバイスにおいて、上述した固体基材表面に担持させる核酸の量は、該デバイスの使用目的に応じて任意に選択することができるが、一般に、固体基材がその使用時に細胞と接触する表面を基準にし、１ｃｍ２当り２０ナノグラム乃至１０マイクログラム、好ましくは１００ナノグラム乃至５マイクログラム、より好ましくは３００ナノグラム乃至２．５マイクログラムの範囲がよい。
【００２４】
また、本発明において使用する核酸は、一般に、次に記載するような大きさを有するものであることができる。
（ｉ）２本鎖ＤＮＡに関して、直鎖状、環状を問わず、長さ１０塩基対から
２００，０００塩基対、好ましくは、長さ１０塩基対から５０，０００塩基
対、とくに好ましくは、長さ１，０００塩基対から１０，０００塩基対のも
の。
（ｉｉ）１本鎖ＤＮＡ（フォスホロチオエート型も含めて）に関して、長さ１
０塩基から１，０００塩基、好ましくは、長さ１０塩基から５０塩基対のも
の。
（iii）２本鎖ＲＮＡに関して、長さ１０塩基対から５，０００塩基対、好ま
しくは、長さ１０塩基対から５０塩基対のもの。
（ｉｖ）１本鎖ＲＮＡに関して、長さ１０塩基から５０，０００塩基、好まし
くは長さ１０塩基から５，０００塩基、とくに好ましくは、長さ２０塩基か
ら１，０００塩基のもの。
【００２５】
本発明においては、細胞内への核酸をデリバリーする目的に応じ、上記のごとき大きさを有する任意の核酸を用いることができる。たとえば、ヒトまたはその他の動物の疾病の治療を目的とする場合、用いる核酸としては、遺伝子治療に用いられる機能性核酸であればとくに制限はないが、その適当な例としては、プラスミドＤＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アプタマー、リボザイム、ｓｉＲＮＡ等を例示することができる。これらの中でも、たとえばｓｉＲＮＡのごとき低分子機能性核酸が人工的に合成しうる点、ゲノムに直接作用しない点で特に好ましい。
また、本発明においては、上述した核酸は、ポリアミンまたはカチオン性脂質との複合体の形で固体基材表面に担持させることができる。
【００２６】
このようなポリアミンとしては、プロタミン、ポリリジン、ポリエチレンイミン、デンドリティックポリリジン、ポリアミドアミンデンドリマーを例示することができる。これらの中でも、プロタミンが、容易に入手しうる点、細胞毒性が低い点で特に好ましい。カチオン性脂質としては、ジオレオイルオキシプロピル−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）、ジオレオイル−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）、ジメチルアミノエタンカルバモイルコレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）などを用いることができる。
【００２７】
上記のような複合体において、核酸とポリアミン或いはカチオン性脂質との量比は、その種類に応じて、適切な核酸デリバリー効率が得られるように選択すればよい。本発明においては、特に核酸とポリアミンとの複合体を担持させることが好適であり、特に良好な核酸デリバリー効率を確保できるという点で、カチオン／アニオン比（Ｃ／Ａ比）が４以上となるような量比でポリアミンと核酸とが混合された複合体が最も好適である。Ｃ／Ａ比が上記範囲よりも低い場合には、核酸デリバリー効率が低下する場合がある。
【００２８】
（核酸の担持）
本発明の方法に使用する核酸デリバリーデバイスにおいて、核酸或いは核酸とポリアミンもしくはカチオン性脂質との複合体（核酸複合体）を固体基材表面に担持する方法としては、核酸或いは核酸複合体を固体基材表面に固定することができる方法であれば特に制限はなく、任意の方法を適用することができる。一般的には、核酸または核酸複合体を含む溶液または分散液に固体基材を浸漬し、引き上げて乾燥するか、固体基材に前記溶液または分散液を噴霧し、乾燥すればよい。また、前記溶液もしくは分散液を固体基材上に滴下し、その後、吸着保持されなかった過剰の溶液もしくは分散液を除去する方法を採用することもできる。ここで用いる溶媒や溶液濃度等に関しては特別の制限はなく、上記操作を行うことができる範囲内で適宜選択すればよい。例えば、前記溶液または分散液における核酸の濃度は、用いる核酸および希釈用媒体の種類にもよるが、１００ナノグラム／ｍｌ乃至５０μｇ／ｍｌ、好ましくは５００ナノグラム／ｍｌ乃至２５μｇ／ｍｌ、さらに好ましくは１．５μｇ／ｍｌ乃至１２．５μｇ／ｍｌが用いられる。また、前記溶液または分散液には、必要に応じ、固体基材への核酸または核酸複合体の担持固定化を助けるためのポリマーまたはミセル化剤等の補助的成分を含有させることができる。
【００２９】
（核酸のデリバリー）
上記のようにして作製された核酸デリバリーデバイスを使用して核酸を細胞内へデリバリーするためには、該デバイスの核酸担持表面を細胞に接触させて押し付けるだけでよい。押し付け力は、細胞を破壊しない範囲内で所定のデリバリー効率が確保できるようなものであればよく、一般には、５乃至５００ｇ／ｃｍ２、好ましくは１０乃至１００ｇ／ｃｍ２、より好ましくは１５乃至５０ｇ／ｃｍ２である。また、押しつけておく時間は、一般に、約１０分乃至３時間、好ましくは２０乃至４０分である。ただし、核酸デリバリーデバイスをその使用目的さらに長時間生体内等に留置することを妨げない。
【００３０】
本発明の方法に使用する核酸デリバリーデバイスは、安価、且つ簡便に作製できる。また、このようなデバイスを利用した本発明の核酸デリバリー方法は、再現性に優れ、操作も簡単であり、このデバイスの核酸担持表面を細胞に押し付けることで、細胞に対しての負荷を少なくして効率よく、核酸を細胞内にデリバリーすることができる。例えばプラスミドＤＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＤＮＡなどを固体基板に担持させたものは、このような核酸の細胞内へのデリバリーを再現性よく、簡便に実現することができる。さらに、固体基板にはガラス板をそのまま利用することもでき、これまでの遺伝子デリバリー技術のように特殊な装置や試薬を必要としない上に、一時的なストレスが細胞にかかるものの、細胞に押し当てられた固体基板を取り除けば、何の化学物質も残らないため、細胞への負荷が低く、高い核酸デリバリー効率を得ることができる。
本発明の核酸デリバリーデバイスは、細胞内への核酸デリバリーの基礎的技術となるものであり、従来に無い高機能性核酸デリバリーデバイスの実用化につながるものである。
【００３１】
【実施例】
以下、実施例により本発明を拠り具体的に説明するが、本発明はこれらの例示に限定されるものではない。
【００３２】
（実施例１）
［ＳＥＡＭ−Ｆコーティング基板に担持された核酸の細胞内取り込み］
スライドガラスを１０×１０ｍｍの大きさに切り、メタノールで洗浄した。このガラス基板上に、１０％ＳＥＡＭ−Ｆ／トルエン溶液を１００μＬ塗布し、ヒートブロック上で５０℃、５時間加熱することでＳＥＡＭ−Ｆコーティングを行った。
【００３３】
尚、用いたＳＥＡＭ−Ｆは、ＴＭＳＰＭＡ（１０．６ｗｔ％）／ＭＭＡ（５２．８％）／ＢＭＡ（１５．５ｗｔ％）／ＨＥＭＡ（５．３ｗｔ％）／Ｓｔ（１５．８ｗｔ％）五元共重合体と、両末端にトリメトキシシリル基を有するポリウレタン（ウレタン８８．６ｗｔ％とアミノプロピルトリメトキシシラン１１．４ｗｔ％からなる）と、ＴＭＳＰＭＡ（３８．９ｗｔ％）／ＭＭＡ（２．５ｗｔ％）／ＰＦＤＥＭＡ（３０．３ｗｔ％）／Ｓｔ（２８．３ｗｔ％）四元共重合体とを、重量比５４：４３：３でブレンドすることにより製造されたものである。
【００３４】
２．５μｇのプラスミドＤＮＡに対して、プロタミンをＣ／Ａ比＝０，１，２，４，８，１６となるように、２００μＬの滅菌水中で混合し、軽く撹拌後、１５分間静置することでプロタミン―プラスミドＤＮＡ複合体を形成させた。
【００３５】
尚、プラスミドＤＮＡは、次のように作製したものを用いた。
ＰＧＬ３−コントロールベクター（Promega,  Madison,  W1,  USA）のシルフェラーゼｃＤＮＡを、制限酵素HindIII/XbaIで切り出し、その断片をｐｃＤＮＡ３ベクター（Invitrogen,  Carlsbad,  CA,  USA）のマルチクローニングサイトに組み込んだ。このプラスミド（pCMV-Luc）を大腸菌DH5alphaにより増殖させ、キアゲン・プラスミド・ギガ・キット（QIAGEN  GmbH,  Hilden,  Germany）にて精製した。
【００３６】
プロタミン−ＤＮＡ複合体溶液２００μＬを、ＳＥＡＭ−Ｆコーティングガラス上にのせ、１時間吸着させた後、滅菌水ですすいだ。得られた核酸担持ＳＥＡＭ−Ｆコーティング基板を、培養細胞（チャイニーズハムスター卵巣由来細胞；ＣＨＯ）上部から３０分間押し当てた後（押し付け力：４０ｇ／ｃｍ２）、基板を除去した。２４時間後の細胞内に取り込まれたプラスミドＤＮＡからの遺伝子（ルシフェラーゼ）発現を評価した。結果を図１に示す。
【００３７】
図１において、横軸はルシフェラーゼ遺伝子の発現量で、遺伝子が細胞内に入り機能した量を示し、縦軸は混合したプロタミンのカチオンとＤＮＡのリン酸基（アニオン）との比（Ｃ／Ａ比）を表す。Ｃ／Ａ比＝４以上において高い遺伝子発現が認められ、Ｃ／Ａ比が大きいほど安定した発現が認められた。
【００３８】
（実施例２）
［ガラス基板に担持された核酸の細胞内取り込み］
２．５μｇのプラスミドＤＮＡに対して、Ｃ／Ａ比＝０，１，２，４，８，１６となるように、プロタミンを２００μＬの滅菌水中で混合し、軽く撹拌後、１５分間静置した。得られたプロタミン−プラスミドＤＮＡ複合体２００μＬを、１０×１０ｍｍガラス上にのせ、１時間吸着させた後、滅菌水ですすいで核酸担持ガラス基板を作製した。
【００３９】
この核酸担持ガラス基板をＣＨＯ細胞上部から３０分間押し当てた後（押し付け力：３０ｇ／ｃｍ２）、基板を除去した。２４時間後の細胞内に取り込まれたプラスミドＤＮＡからの遺伝子発現を評価した。結果を図２に示す。
【００４０】
図２の結果から、ガラス基板にＤＮＡのみを吸着させても（Ｃ／Ａ比＝０の場合）、遺伝子発現が認められ、またＤＮＡとプロタミンとの複合体を吸着させると安定して高い発現効率を示すことが判る。
また、５μｇ，２．５μｇ，１．２５μｇ，０．６２５μｇ、及び０．３１３μｇのプラスミドＤＮＡに対して、それぞれＣ／Ａ比＝４となるように、プロタミンを、２００μＬの滅菌水中で混合し、軽く撹拌した後、１５分間静置した。
１０×１０ｍｍガラス上に、上記で得られたプロタミン−ＤＮＡ複合体溶液２００μＬをのせ、１時間吸着させた後、滅菌水ですすいで核酸担持ガラス基板作製した。
【００４１】
この核酸担持ガラス基板をＣＨＯ細胞上部から、上記と同様にして３０分間押し当てた後、基板を除去した。２４時間後の細胞内に取り込まれたプラスミドＤＮＡからの遺伝子発現を評価した。結果を図３に示す。
【００４２】
図３において、横軸はルシフェラーゼ遺伝子の発現量を示し、縦軸は培養シャーレ、１ウェルあたりの添加したＤＮＡ量を表す。図３の結果から、０．３１３μｇで既に高い遺伝子発現が認められ、少なくとも０．３１３μｇのＤＮＡを利用すれば十分な遺伝子デリバリーが実現することがわかった。
さらに、５μｇ，２．５μｇ，１．２５μｇ，０．６２５μｇ及び０．３１３μｇのプラスミドＤＮＡを、２００μＬの滅菌水中に混合しプロタミン−ＤＮＡ複合体溶液を得た。１０×１０ｍｍガラス上に、得られたプロタミン−ＤＮＡ複合体溶液２００μＬをのせ、１時間吸着させた後、滅菌水ですすいで核酸担持ガラス基板を作製した。
【００４３】
得られた核酸担持ガラス基板をＣＨＯ細胞上部から上記と同様にして３０分間押し当てた後、基板を除去した。２４時間後の細胞内に取り込まれたプラスミドＤＮＡからの遺伝子発現を評価した。結果を図４に示す。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】  本発明の核酸担持ＳＥＡＭ−Ｆコーティング基板からＣＨＯ細胞内へのトランスフェクション効率を示すグラフである。
【図２】  混合比の異なるプロタミン−プラスミドＤＮＡ複合体を担持したガラス基板からＣＨＯ細胞内へのトランスフェクション効率を示すグラフである。
【図３】  ＤＮＡ量の異なるプロタミン−プラスミドＤＮＡ複合体（Ｃ／Ａ比＝４）溶液を吸着させたガラス基板からＣＨＯ細胞内へのトランスフェクション効率を示すグラフである。
【図４】  濃度の異なるプラスミドＤＮＡ溶液を吸着させたガラス基板からＣＨＯ細胞内へのトランスフェクション効率を示すグラフである。
【図１】
0005105600.tif 000002
【図２】
0005105600.tif 000003
【図３】
0005105600.tif 000004
【図４】
0005105600.tif 000005