(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下からなる群：５−イソブチル−２−メチル−４−(２−フラニル)チアゾール、２−アミノ−５−イソブチル−４−(２−フラニル)チアゾール、２−アミノ−５−メチルチオ−４−[２−フラニル]チアゾール、９−（２−ヒドロキシエトキシメチル）グアニン（ＡＣＶ）、９−β−Ｄ−アラビノフラノシルアデニン（ａｒａＡ）、３’−アジド−２’,３’−ジデオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’,３’−ジデオキシアデノシン（ｄｄＡ）および５−フルオロ−２’−デオキシウリジン（５−ＦｄＵ）から選択される式Ｍ−Ｈで示される親ドラッグのプロドラッグである式ＶＩ：
【化２】
0005063837.tif 000051
[式中、Ｍは、以下からなる群：
【化５２】
0005063837.tif 000052
からなる群から選択される式で示され、
Ｖはフェニルおよび１〜４個のハロゲンで置換されたフェニルからなる群から選択され、Ｙはそれぞれ独立に−Ｏ−および−ＮＲ６−からなる群から選択され、
Ｒ６は−Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキルおよびＣ１−Ｃ４アシルからなる群から選択される］
で示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｖが、３,５−ジクロロフェニル、３−ブロモ−４−フルオロフェニル、３−クロロフェニル、３−ブロモフェニルおよび３,５−ジフルオロフェニルからなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項３】
Ｒ６が−Ｈ、メチルおよびアセチルからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項４】
両方のＹが−Ｏ−であるか、または一方のＹが−Ｏ−であり他方のＹが−ＮＲ６−である、請求項１に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項５】
ＶおよびＭが互いにシスである請求項１に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項６】
前記化合物が以下
【化５３】
0005063837.tif 000053
からなる群から選択される請求項１に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項７】
患者への投与後の親ドラッグＭ−Ｈの経口バイオアベイラビリティーを増大させるための医薬組成物であって、該Ｍ−Ｈが、５−イソブチル−２−メチル−４−(２−フラニル)チアゾール、２−アミノ−５−イソブチル−４−(２−フラニル)チアゾール、２−アミノ−５−メチルチオ−４−[２−フラニル]チアゾール、９−（２−ヒドロキシエトキシメチル）グアニン（ＡＣＶ）、９−β−Ｄ−アラビノフラノシルアデニン（ａｒａＡ）、３’−アジド−２’,３’−ジデオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’,３’−ジデオキシアデノシン（ｄｄＡ）および５−フルオロ−２’−デオキシウリジン（５−ＦｄＵ）からなる群から選択され、該組成物が請求項１〜６のいずれかに記載の化合物と製薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物。
【請求項８】
肝臓疾患または肝臓が生化学的最終産物の過剰生成の原因である代謝疾患を処置するための、請求項７記載の医薬組成物。
【請求項９】
肝臓疾患が、肝炎、癌、線維症、マラリア、胆石、および慢性の胆嚢結石からなる群から選択される請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１０】
代謝疾患が、糖尿病、アテローム性硬化症および肥満症からなる群から選択される請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１１】
生化学的最終産物がグルコース、コレステロール、脂肪酸およびトリグリセリドからなる群から選ばれる請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
経口バイオアベイラビリティーが、経口投与された親ドラッグに対して少なくとも１０％増大する、請求項７記載の医薬組成物。
【請求項１３】
経口バイオアベイラビリティーが、経口投与された親ドラッグに対して５０％増大する、請求項７記載の医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１〜６のいずれかに記載の化合物および製薬的に許容し得る担体を含有する、Ｐ４５０酵素を発現する癌を処置するための医薬組成物。
【請求項１５】
癌が肝細胞の癌である請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１〜６のいずれかに記載の化合物および製薬的に許容し得る担体を含有する、肝臓線維症を処置するための医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１〜６のいずれかに記載の化合物および製薬的に許容し得る担体を含有する、高脂血症を処置するための医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１〜６のいずれかに記載の化合物および製薬的に許容し得る担体を含有する、寄生虫感染を処置するための医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１〜６のいずれかに記載の化合物および製薬的に許容し得る担体を含有する、肝臓への診断用造影剤の送達のための医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１〜６のいずれかに記載の化合物および製薬的に許容し得る担体を含有する、ウイルス感染を処置するための医薬組成物。
【請求項２１】
ウイルス感染が肝炎である、請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２２】
肝炎がＢ型肝炎である、請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２３】
肝炎がＣ型肝炎である、請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２４】
ウイルスのキナーゼによってＭ−ＰＯ３２−を生じる、請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２５】
ウイルス感染が肝炎であり、ウイルスのキナーゼが肝炎ウイルス以外のウイルスに由来する、請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１記載の化合物の製造方法であって、
ａ）Ｍ−ＰＯ32-で示される化合物を、Ｍ−Ｐ（Ｏ）Ｌ”2（ここに、Ｌ”はハロゲンから選択される脱離基である）で示される化合物に変換し、これをＨＹ−ＣＨ（Ｖ）ＣＨ2ＣＨ2−ＹＨと反応させる；または
ｂ）Ｍ−ＰＯ32-で示される化合物またはＭ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲ６）Ｏ-で示される化合物を
【化５４】
0005063837.tif 000054
[式中、Ｌ’はＮＲ12、−Ｏ−アリールまたはハロゲンであり、Ｒ1はアルキル、アリールまたはアラルキルである]
との反応により環状ホスホルアミデートに変換し、該環状ホスホルアミデートを酸化剤と反応させることにより請求項１記載の化合物に変換することを含んでなり、
Ｍが、以下からなる群：
【化５５】
0005063837.tif 000055
から選択される式で示され、
Ｖがフェニルおよび１〜４個のハロゲンで置換されたフェニルからなる群から選択され、Ｙはそれぞれ独立に−Ｏ−および−ＮＲ６−からなる群から選択され、
Ｒ６は−Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキルおよびＣ１−Ｃ４アシルからなる群から選択される、製造方法。
【請求項２７】
【化５６】
0005063837.tif 000056
がキラルである請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
キラルなホスホルアミデートをキラルなアミノアルコールを用いて生成させる、請求項２６記載の方法。
【請求項２９】
酸化剤がリンについて単一の立体異性体を生成する請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
【化５７】
0005063837.tif 000057
が単一の立体異性体である請求項２６記載の方法。
【請求項３１】
前記立体異性体をキラルなアミノアルコールを用いて生成させる請求項３０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の属する技術分野
本発明は、生物学的に活性であるか、またはさらにリン酸化されて生物学的に活性な化合物を生成する、ホスフェート（ホスホネート）化合物を生じる新規なプロドラッグ、並びにその製造、合成中間体および使用に関する。より具体的には、本発明は、環部分が、リンに結合した少なくとも１つのアミノを含む、置換された環状１,３−プロパニルエステルの分野に関する。
【０００２】
発明の背景
以下の本発明の背景に関する記載は、本発明の理解を助けるために記載するものであり、本発明の先行技術であると認めるものでも、またはそれを記載するものでもない。引用した刊行物はすべて、参考のためにその全内容が本明細書の一部を構成する。
【０００３】
遊離のリンおよびホスホン酸並びにその塩は、生理学的ｐＨで高い電荷を有するため、低い経口バイオアベイラビリティー、低い細胞透過性および限られた組織分布を示すことが多い（例えばＣＮＳ）。さらに、これらの酸はまた、一般に、急速な腎クリアランスに起因する短い血漿半減期や毒性（例えば、腎臓、胃腸など）（例えば、Antimicrob Agents Chemother 1998 May;42(5):1146-50）を含め、薬物としての使用を妨げる他のいくつかの特性に関与している。ホスフェートは、ホスファターゼの作用により急速な加水分解を受けるので、血漿中や大部分の組織において安定でないという点でさらなる限定を受ける（例えば、アルカリホスファターゼ、ヌクレオチダーゼ）。
【０００４】
リン含有化合物のプロドラッグは、限られた経口吸収と低い細胞透過性を改善するために第一に模索されてきた。カルボン酸プロエステルとは対照的に、多くのホスホネートおよびホスフェートエステルは、単純アルキルのエステルを含めて、生体内で加水分解されない。最も一般的に使用されているプロドラッグのクラスはアシルオキシアルキルエステルであり、1983年のFarquhar et al., J. Pharm. Sci. 72(3):324 (1983)においてはじめてホスフェートおよびホスホネートエステル化合物に応用された。
【０００５】
環状ホスホネートおよびホスフェートエステルはまた、リン含有化合物に関して記載されている。いくつかの場合では、これらの化合物は、強力なホスフェートまたはホスホネートプロドラッグとして研究されてきた。Hunston et al., J. Med. Chem. 2~1: 440 444 (1984)。これら環状エステルの番号付けを以下に示す：
【化３４】
0005063837.tif 000002
環状２,２−ジフルオロ−１,３−プロパンエステルは加水分解に対し不安定であり、急速な開環モノエステルの生成を伴うと報告されている。Starrett et al. J. Med. Chem. 37: 1857-1864 (1994)。
【０００６】
ａｒａＡおよびａｒａＣおよびチオイノシンの環状３,５−ホスフェートエステルは合成されている。Meier er al., J. Med. Chem. 22: 811-815 (1979)。これらの化合物は、通常１つの負電荷を必要とするホスホジエステラーゼの作用により開環する。
【０００７】
環状１,３−プロパニルホスホネートおよびホスフェートエステルは、縮合アリール環を含んでいることが報告されている。即ち、シクロサリゲニルエステル。Meier et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 7: 99-104 (1997)。これらのプロドラッグは、「２つの組み合わされた工程における設計されたタンデム反応にしたがう生理学的 pＨでの制御された、非酵素的機構」によってホスフェートとを生じることが報告されている。この方法は、称するところによれば、ＣＥＭ細胞およびＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２に感染したチミジンキナーゼに欠陥のあるＣＥＭ細胞にｄ４−Ｔモノホスフェートを送達するために用いられた。
【０００８】
５−フルオロ−２−デオキシ−ウリジン（Farquhar et al., ]. Med. Chem. 26: 1153 (1983)）およびａｒａ−Ａ（Farquhar et al., J. Med. Chem. 28: 1358 (1985)）のモノホスフェートの置換されていない環状１,３−プロパニルエステルは、調製されたが生体内での活性は示されなかった。さらに、Ｃ−１'でピバロイルオキシメチルオキシ基で置換された環状１,３−プロパニルエステルは、５−フルオロ−２−デオキシ−ウリジンモノホスフェートについて調製され（Freed et al., Biochem. Pharmac. 38: 3193 (1989）；他の文献によってかなり有用なプロドラッグとして仮定された（Biller et al., US 5,157,027）。細胞内では、これらプロドラッグのアシル基は、エステラーゼによる開裂を受けて、β−脱離反応後、遊離のホスフェートおよびアクロレインならびにホルムアルデヒドおよびピバリン酸に急速に分解される不安定なヒドロキシル中間体を生じる。
【０００９】
置換されていない環状ホスホルアミデートエステルは、即ち環の酸素の１つがＮＲで置換されている環状ホスホネートおよびホスフェートエステルも知られている。例えば、シクロホスファミド（ＣＰＡ）は、このプロドラッグ部分を利用するマスタード腫瘍細胞崩壊剤のクラスの代表的なものである。ＣＰＡは肝臓においてシトクロームＰ４５０で触媒される参加によって最初に活性化されるが、その生物学的活性は肝臓の外に存在する。ＣＰＡは、Ｐ４５０活性化の後で産生した１またはそれ以上の中間体代謝物質が肝臓から循環内へ拡散するため、肝臓以外の癌の腫瘍細胞崩壊剤であると同時に、有効な免疫抑制剤である。時間とともに中間体が肝外の組織に入り、β−脱離反応を受けてアクロレインと活性なホスホルアミドマスタードを生じる。両生成物は、細胞に対して毒性であることが報告されている。マスタード細胞毒性は、ＤＮＡ（またはＲＮＡ）のアルキル化により生じるものである。アクロレインは、グルタチオン消費、Michael反応によるＤＮＡおよびタンパク質のアルキル化を含む、いくつかの機構によって毒性を示すことが報告されている。さらに、アクロレインは、シクロホスファミド治療に関して一般的に観察される、用量が制限される膀胱毒性のような他の毒性物質を産生する。これら物質の毒性はしばしば、化学療法剤としてのそれらの使用を妨げる。腫瘍中または腫瘍付近のＰ４５０活性を増強し、それにより腫瘍に対するこれら物質の活性化と抗増殖効果を局在化させるためように設計される数多くの方法が研究中である。１つの方法は、レトロウイルスまたは遺伝子を標的組織に導入するための他のよく知られた技術を用いる（e.g. Jounaidi et al., Cancer Research 58, 439 L (1998)）他の方法には、カプセルに封入された、Ｐ４５０を産生するように処理された細胞を配置することが含まれる（e.g. Lohr et al., Gene Therapy S. 1070 (1998)）。
【００１０】
置換されていない環状ホスホルアミドエステルはまた、ａｒａＡおよび５−フルオロ−２−デオキシウリジンの可能性のあるプロドラッグとして製造されている（Farquhar et al., J. Med. Chem. 28, 1358-1361 (1985); J. Med. Chem. 26, 11531158 (1983)）。化合物は、白血病のマウスモデルにおいて試験された。そのプロドラッグ変換がシクロホスファミドと同様であれば、これらの物質は、白血病ならびに大腸、乳房および子宮の癌腫を含む様々な癌の処置に有用であろう。さらに、腫瘍細胞薬物耐性の原因となる機構のいくつかがモノホスフェートを合成するために使用する酵素の減少を伴うので、この方法は、薬物耐性の腫瘍の処置に恐らく有益であろうと期待された。その化合物は、マウスモデルにおける寿命を延ばすのに「わずかに有効」であるに過ぎなかった。
【００１１】
様々な置換された１,３プロパニル環状ホスホルアミデート（１'は窒素に対しα位に存在する炭素を表する）をシクロホスファミドアナログとして製造した（Zon, Progress in Med. Chem. 19, 1205 (1982)）。例えば、数多くの２'−および３'−置換のプロエステルが、Michael反応を受けるα,β−置換されていないカルボニル副生成物の性質を減じるために製造された。フェニル、メチル、トリフルオロメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、およびシクロへキシルを含む様々な基が３−位で用いられるのに対して、２'−置換体には、メチル、ジメチル、ブロモ、トリフルオロメチル、クロロ、ヒドロキシ、およびメトキシが含まれる。３−アリール基を有するアナログ、例えばトランス−４−フェニルホスファミドは、Ｌ１２１０試験系において適度に効果的であり、生体内では活性が示されなかったG. Zu Pros. Med. Chem. 19: 205-246 (1982)。様々な１'−置換されたアナログもまた製造された。一般に、これらの化合物は、最終化合物を生成することが可能な１'−置換されたアナログとして既に存在させることにより酸化工程をバイパスする「プレ活性化された」シクロホスファミドアナログとなるように設計された。例えばヒドロペルオキシドおよび１−チオエーテル。一連の１'−アリールアナログも酸化の潜在性を高めるために製造した。１−ヒドロＰレルオキシアナログとは対照的に、１−アリール化合物は、標準的な抗癌生体内スクリーン検定、即ちマウス１２１０検定、において活性を示さないかまたは非常に弱かった。この活性の欠如は、フェニルの立体障害に起因すると仮定され、それゆえ、プロドラッグの酸化が制限される。この仮定の根拠は、シクロホスファミドと同様の活性を示す非環式フェニルケトアナログの強力な活性であった。Luderman et al. J. Med. Chem. 29: 716 (1986)。
【００１２】
リン含有化合物の環状エステルは、化学の文献に記載されているが、これらは生体系におけるプロドラッグとして試験はされていない。これらの環式エステルには：
［１］Nifantyev et al., Phosphorus, Sulfur Silicon and Related Elements, 1 13: 1 (1996); Wijnberg et al., EP-180276 A1に報告されているリン酸のジおよびトリエステル；
［２］リン酸（ＩＩＩ）エステル。Kryuchkov et al., Izv. Akad Nauk SSSR. Ser. Whim. 6: 1244 (1987)。この化合物のいくつかはＬ−Ｄｏｐａ前駆体の不斉合成に有用であるとして特許請求された。Sylvain et al., DE3512781 A1;。
［３］ホスホルアミデート。Shih et al., Bull. Inst. Chem. Acad Sin, 41: 9 (1994); Edmundson et al., J. Chem. Res. Synop. 5: 122 (1989)；および
［４］ホスホネート。Neidlein et al., Heterocycles 35: 1185 (1993)。
【００１３】
数多くのリン含有化合物が薬理学的活性を示すことが知られているが、上記の１またはそれ以上の制限のために、最適であるにははるかに及ばない。記載された活性のいくつかには、抗高血圧薬としておよびＮＥＰ２４.１１の阻害によって心不全の治療に有用なホスホン酸、興奮性アミノ酸受容体（例えばＮＭＤＡ受容体）への結合によって様々なＣＮＳ状態（発作、てんかん、脳および脊髄の外傷など）の処置に有用であるホスホン酸、骨粗鬆症の処置にゆうう様なビスホスホン酸、脂質低下剤として有用なホスホン酸（例えばスクアレンシンターゼ阻害物質）、糖尿病、癌並びに寄生虫およびウイルス感染の処置に有用であるホスホネートおよびホスフェートが含まれる。
【００１４】
グルコース低下活性に特に有用であると知られており、それゆえ糖尿病の処置に有用であると期待されるホスフェートおよびホスホネートは、米国特許第５,６５８,８８９号、ＷＯ９８／３９３４４、ＷＯ９８／３９３４３およびＷＯ９８／３９３４２に記載されているフルクトース１,６−ビスホスホネート（ＦＢＰａｓｅ）のＡＭＰ部位に結合する化合物である。リン含有薬物の他の例には、スクアレンシンターゼ阻害物質が含まれる（例えばＢＭＳ１８８４９４）。
【００１５】
肝炎に対して活性であることが知られている薬物の大きなクラスは、一般に、細胞の内側でリン酸化されて生物学的に活性な三リン酸塩を生じるヌクレオシドまたはヌクレオチドアナログである。例としては、ラミブジン（３ＴＣ）およびビダラジン（ａｒａＡ）が含まれる。それぞれの場合において、薬物は、ウイルスＤＮＡポリメラーゼまたはＤＮＡ鎖終止の阻害により三リン酸型を経由するウイルス複製を妨害する。ウイルス感染細胞に対しある程度の特異性は、ウイルスによってコードされるキナーゼ、並びにウイルスＤＮＡポリメラーゼの特異的な阻害によって薬物の両方の優先的なリン酸化によって増大する。それにもかかわらず、ヌクレオチドベースの薬物の多くが有意の非肝臓毒性と関連している。例えば、ａｒａＡは、筋または感覚ニューロパシーを示す疼痛と神経伝導における異常に苦しむ多くの患者および多少の震え、構語障害、混乱またはさらには昏睡を有する数少ない患者に関して神経学的毒性（４０％）をしばしば生じる。Lok et al., J. Antimicrob. Chemotherap. 14: 93-99 (1984)。他の場合では、ヌクレオシドの有効性および／または治療指数は、低いリン酸化効力によって損なわれ、それゆえ生物学的に活性な三リン酸塩のレベルは低い(e.g Yamanaka et al., Antimicrob. Agents and Chemother. 43, 190 (1999))。
【００１６】
ホスホン酸は抗ウイルス活性も示す。いくつかの場合では、化合物は、それ自身抗ウイルス性物質（例えば、ホスホノギ酸）であるのに対して、その他の場合ではジホスフェート、例えば９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン（ＰＭＥＡ、アデノビル）に対するリン酸化を必要とする。しばしば、これらの化合物は、ウイルスキナーゼに対する対応するヌクレオシドの低い基質活性のためにまたはヌクレオシドをモノホスフェートに変換する必要があるウイルスヌクレオシドキナーゼは下方調節されたウイルス耐性であるので、増大した活性を示すことが報告されている。モノホスフェートおよびリン酸は、しかし、血漿においてモノホスフェートが不安定である場合、それらの高い電荷のために経口投与後のウイルス感染細胞への送達が困難である。さらに、これらの化合物は、多くの場合高い腎クリアランスのために、しばしば半減期が短い（例えば、ＰＭＥＡ、アデノビル）。いくつかの場合では、高い腎臓クリアランスは腎毒性につながり得るかまたは腎機能がしばしば危険にさらされる糖尿病などの疾患において大きな制限を受ける。
【００１７】
肝癌は現在の治療では処置が不十分である。一般に、肝臓腫瘍は放射線療法に対して耐性がある。化学療法に対する応答は低く、細胞の不均質性の程度が高いことによって特徴づけられる。５−フルオロ−２−デオキシウリジン等の腫瘍細胞崩壊性のヌクレオシドもまた初期の肝癌に対する応答が低いことも示されている。
【００１８】
発明の要約
本発明は、ホスフェート（ホスホネート）化合物を生じる新規のプロドラッグ、その製造、その合成中間体、およびその使用に関する。1つの態様では、本発明は、経口での薬物送達を増大するためのプロドラッグの使用に関する。本発明の別の態様は、増大した薬物分散または肝臓および同様の組織や細胞に対する特異性から恩恵を受ける、肝炎、癌、肝線維症、マラリア、他のウイルスおよび寄生虫感染、および肝臓が生化学的な最終産物（例えばグルコース（糖尿病）；コレステロール、脂肪酸およびトリグリセリド（高脂血症）（アテローム性動脈硬化症）（肥満症）））を過剰産生する原因である代謝性疾患を含む、疾患を処置するためのプロドラッグの使用である。別の態様では、プロドラッグは薬物の薬動力学的半減期を長くするために使用される。さらに、本発明のプロドラッグ方法論は、親薬物の治療指数を増加させるために使用される。本発明の別の態様は、特定の組織におけるP450活性を高める技術と組み合わせたプロドラッグの使用である。さらなる態様は、それらプロドラッグの新規な中間体である。別の態様では、プロドラッグは肝臓への診断用造影剤の送達においても有用である。
【００１９】
本発明の１つの態様は、試験管内でまたは生体内でＭ−ＰＯ３２−、ＭＰ２Ｏ６３−、ＭＰ３Ｏ９４−、およびＭＰ（Ｏ）（ＮＨＲ６）Ｏ−に変換され、式Ｉ
【化３５】
0005063837.tif 000003
［式中、
Ｖ、Ｗ、およびＷ'は、−Ｈ、アルキル、アラルキル、脂環式、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、１−アルケニルおよび１−アルキニルからなる群から独立に選択されるか；
ＶとＺが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して結合して５〜７個の環の原子を含む環基を形成し、場合により１個のへテロ原子が、リンに結合した両方のＹ基から３つの原子である炭素原子に結合したヒドロキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、またはアリールオキシカルボニルオキシで置換されているか；
ＶとＺが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して結合して、場合により１個のヘテロ原子を含む環基を形成し、該環基がＶに隣接したＹに対してβおよびγ位でアリール基に縮合しているか；
ＶとＷが一緒になってさらなる３個の炭素原子を介して結合して、６個の炭素原子を含み、リンに結合したＹから３つの原子である該さらなる炭素原子の１つに結合した、ヒドロキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アルキルチオカルボニルオキシおよびアリールオキシカルボニルオキシからなる群から選ばれる１つの置換基で置換された、場合により置換された環基を形成するか；
ＺとＷが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して結合して、場合により１個のヘテロ原子を含む環基を形成し、Ｖがアリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、または置換されたヘテロアリール環基でなければならないか；
ＷとＷ'が一緒になってさらなる２〜５個の原子を介して結合して、場合により０〜２個のヘテロ原子を含む環基を形成し、Ｖがアリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、または置換されたヘテロアリールがでなければならず；
Ｚは、−ＣＨＲ２ＯH、−ＣＨＲ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、−ＣＨＲ２ＯＣ(Ｓ）Ｒ３、−ＣＨＲ２ＯＣ(Ｓ）ＯＲ３、−ＣＨＲ２ＯＣ（Ｏ）ＳＲ３、−ＣＨＲ２ＯＣＯ２Ｒ３、−ＯＲ２、−ＳＲ２、−ＣＨＲ２Ｎ３、−ＣＨ２アリール、−ＣＨ（アリール）ＯH、−ＣＨ(ＣＨ＝ＣＲ２２）ＯH、−ＣＨ(Ｃ≡ＣＲ２）ＯH、−Ｒ２、−ＮＲ２２、−ＯＣＯＲ３、−ＯＣＯ２Ｒ３、−ＳＣＯＲ３、−ＳＣＯ２Ｒ３、−ＮＨＣＯＲ２、−ＮＨＣＯ２Ｒ３、−ＣＨ２ＮＨアリール、−(ＣＨ２）ｐ−Ｏ１２および−(ＣＨ２）ｐ−ＳＲ１２からなる群から選ばれ；
ｐは２または３の整数である；
但し、
ａ）Ｖ、Ｚ、Ｗ、Ｗ'のすべてが−Ｈではなく；
ｂ）Ｚが−Ｒ２であるとき、Ｖ、Ｗ、およびＷ'の少なくとも１つが−Ｈ、アルキル、アラルキルまたは脂環式でない；
Ｒ２は、Ｒ３および−Ｈからなる群から選ばれ；
Ｒ３は、アルキル、アリール、脂環式およびアラルキルからなる群から選ばれ；
Ｒ６は、−Ｈ、および低級アルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシカルボニルオキシアルキルおよび低級アシルからなる群から選択され；
Ｒ１２は−Ｈおよび低級アシルからなる群から選ばれ；
各Ｙは、−Ｏ−、−ＮＲ６−からなる群から独立に選ばれるが、少なくとも１つのＹが−ＮＲ６−であり；
ＭはＰＯ３２−、Ｐ２Ｏ６３−、Ｐ３Ｏ９４−またはＰ(Ｏ）(ＮＨＲ６）Ｏ−に結合した基から選択され、生物学的に活性な物質であるがＦＢＰアーゼ阻害物質ではなく、炭素、酸素、硫黄または窒素原子を介して式Ｉのリンに結合し；
但し、
１）Ｍは、−ＮＨ(低級アルキル）、−Ｎ(低級アルキル）２、−ＮＨ(低級アルキルハライド）、−Ｎ(低級アルキルハライド）２、または−Ｎ(低級アルキル）（低級アルキルハライド）ではなく；
２）Ｒ６は低級アルキルハライドではない］
で示される化合物に関する。
【００２０】
本発明は、本発明のプロドラッグを製造するいくつかの新規な方法を提供する。１つの方法は、以下の新規なＰ（ＩＩＩ）試薬の反応による：
【化３６】
0005063837.tif 000004
Ｇ'＝Ｏ、ＮＲ    Ｌ＝−ＮＲ２、ハロゲンなどの脱離基
【００２１】
次いで、得られたホスファイトを環状のホスホルアミデートに酸化する。
【００２２】
第２の方法は、新規なＰ（Ｖ）試薬の反応による：
【化３７】
0005063837.tif 000005
Ｇ'＝Ｏ、ＮＨ    Ｌ'＝−ＮＲ２、−Ｏ−アリール、ハロゲンなどの脱離基
【００２３】
第３の方法は、別の新規なＰ（Ｖ）化合物とジアミンまたはアミノアルコールとの反応による：
【化３８】
0005063837.tif 000006
【００２４】
これらの化合物は不斉中心を有するため、本発明は、これらの化合物のラセミおよびジアステレオマー混合物だけでなく、個々の立体異性体にも関する。また本発明は、式Ｉで示される化合物（酸付加塩を含む）の製薬的に許容しうる塩および／または有用な塩を包含する。本発明はまた、式Ｉで示される化合物のプロドラッグも包含する。
【００２５】
定義
本発明を説明するにあたり、本明細書で用いる語句は、他に特記されない限り、下記のとおりである。
【００２６】
“アリール”とは、共役π電子系をもつ５〜１４の環原子を有する芳香族基を意味し、炭素環アリール、複素環アリール、およびビアリール基が含まれ、それらはすべて場合により置換されていてもよい。適当なアリール基には、フェニルおよびフラン−２，５−ジイルが含まれる。
【００２７】
炭素環アリール基は、芳香環上の環原子が炭素原子である基である。炭素環アリール基は、モノ環式炭素環アリール基および必要に応じて置換されたナフチル基などの多環式または縮合化合物を包含する。
【００２８】
複素環アリールまたはヘテロアリール基は、芳香環の環原子として１〜４個のヘテロ原子を有し、残りの環原子が炭素原子である基である。適当なヘテロ原子として、酸素、イオウおよび窒素原子、およびセレンが挙げられる。適当なヘテロアリール基として、フラニル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−低級アルキルピロリル、ピリジル−Ｎ−オキシド、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリルなどが挙げられ、これらは場合により置換されている。
【００２９】
“ビアリール”は、縮合環系および他のアリール基で置換されたアリール基などの１つ以上の芳香環を含む基を意味する。そのような基は、場合により置換されていてもよい。適当なビアリール基には、ナフチルおよびビフェニルが含まれる。
【００３０】
“脂環式”とは、脂肪族化合物と環式化合物の特性をあわせ持つ化合物を意味する。これらの環式化合物には、芳香族シクロアルキルおよび架橋シクロアルキル化合物が含まれるがこれらに限定されるものではない。環式化合物は、複素環化合物を包含する。シクロヘキセニルエチルおよびシクロヘキシルエチルは適当な脂環基である。これらの基は、場合により置換されていてもよい。
【００３１】
“場合により置換された”または“置換された”とは、低級アルキル、低級アリール、低級アラルキル、低級脂環基、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アリールオキシ、過ハロアルコキシ、アラルコキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアラルコキシ、アジド、アミノ、グアニジノ、ハロ、低級アルキルチオ、オキソ、アシルアルキル、カルボキシエステル、カルボキシル、−カルボキサミド、ニトロ、アシルオキシ、アミノアルキル、アルキルアミノアリール、アルキルアリール、アルキルアミノアルキル、アルコキシアリール、アリールアミノ、アラルキルアミノ、ホスホノ、スルホニル、−カルボキサミドアルキルアリール、−カルボキサミドアリール、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アルキルアミノアルキルカルボキシ−、アミノカルボキサミドアルキル−、シアノ、低級アルコキシアルキル、低級過ハロアルキルおよびアリールアルキルオキシアルキルから独立して選択される１〜４個の置換基で置換された基を包含する。“置換されたアリール”および“置換されたヘテロアリール”は、好ましくは、１〜３の置換基で置換されたアリールおよびヘテロアリール基を意味する。好ましくは、これらの置換基は、低級アルキル、低級アルコキシ、低級過ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシおよびアミノからなる群から選択される。Ｒ５基について記載するとき、“置換された”には、環形成は含まれない。
【００３２】
“アラルキル”とは、アリール基で置換されたアルキル基を意味する。適当なアラルキル基として、ベンジル、ピコリルなどが挙げられ、場合により置換される。“−アラルキル−”は、２価の基“−アリール−アルキレン−”を意味する。“ヘテロアリールアルキル”は、ヘテロアリール基で置換されたアルキレン基を意味する。
【００３３】
“−アルキルアリール−”は、“alk”がアルキレン基である−alk−アリール−基を意味する。“低級−アルキルアリール−”は、アルキレンが低級アルキレンであるそのような基を意味する。
【００３４】
“低級”とは、炭素原子数が１０個まで、好ましくは６個まで、さらに好ましくは４個までの有機の基または化合物を意味する。このような基は直鎖、分枝鎖または環式であってよい。
【００３５】
“アリールアミノ”（ａ）および“アラルキルアミノ”（ｂ）とはそれぞれ、−ＮＲＲ’基であって、（ａ）Ｒがアリールであり、Ｒ’が水素、アルキル、アラルキルまたはアリール、および（ｂ）Ｒがアラルキルであり、Ｒ’が水素、アラルキル、アリール、アルキルである基を意味する。
【００３６】
“アシル”は、Ｒがアルキルおよびアリールである−Ｃ（Ｏ）Ｒを意味する。
【００３７】
“カルボキシエステル”とは、Ｒがアルキル、アリール、アラルキルおよび脂環式である−Ｃ（Ｏ）ＯＲを意味し、これらは場合により置換されている。
【００３８】
“カルボキシル”は、−C（O）OHを意味する。
【００３９】
“オキソ”は、アルキル基における＝Oを意味する。
【００４０】
“アミノ”は、RおよびR’が、水素、アルキル、アリール、アラルキルおよび脂環式（Hを除き場合により置換されている）から独立に選択され、RおよびＲ１が環系を形成することもある−NRR’を意味する。
【００４１】
“−カルボキシルアミド”は、各Ｒが独立して水素またはアルキルである−ＣＯＮＲ２を意味する。
【００４２】
“ハロゲン”または“ハロ”は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒおよび−Ｉである。
【００４３】
“アルキルアミノアルキルカルボキシ”とは、ａｌｋがアルキレン基であり、Ｒが水素または低級アルキルである−ａｌｋ−ＮＲ−ａｌｋ−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−を意味する。
【００４４】
“アルキル”とは、直鎖、分枝鎖および環式の飽和脂肪族基を意味する。適当なアルキル基には、メチル、イソプロピル、およびシクロプロピルが含まれる。
【００４５】
“環式アルキル”または“シクロアルキル”とは、環式のアルキル基を意味する。適当な環状基には、ノルボルニルおよびシクロプロピルが含まれる。このような基は置換されていてもよい。
【００４６】
“複素環”および“複素環アルキル”とは、少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは１〜３個のへテロ原子を含んでいる、３〜１０個の原子、より好ましくは３〜６個の原子を含む環状基を意味する。適当なヘテロ原子には、酸素、硫黄、および窒素が含まれる。複素環基は、環の窒素原子を介してまたは炭素原子を介して結合していてもよい。適当な複素環基には、ピロリジニル、モルホリノ、モルホリノエチル、およびピリジルが含まれる。
【００４７】
“ホスホノ”は、Rが−H、アルキル、アリール、アラルキル、および脂環式からなる群から選択される−PO３R２を意味する。
【００４８】
“スルホニル（sulphonyl）”または“スルホニル（sulfonyl）”は、Rが、H、アルキル、アリール、アラルキル、および脂環式である、−SO３Rを意味する。
【００４９】
“アルケニル”とは、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む不飽和基を意味し、直鎖、分枝鎖および環基が含まれる。アルケニル基は場合により置換されていてもよい。適当なアルケニル基にはアリルが含まれる。“１−アルケニル”は、二重結合が１番目と２番目の炭素結合の間にあるアルケニル基を意味する。１−アルケニル基が別の基と結合しているとき、例えばそれが環状ホスホネート（ホスホルアミデート）に結合した置換基Wである場合、その置換基は１番目の炭素で結合している。
【００５０】
“アルキニル”とは、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む不飽和基を意味し、直鎖、分枝鎖および環基が含まれる。アルキン基は場合により置換されていてもよい。適当なアルキニル基には、エチニルが含まれる。“１−アルキニル”は、三重結合が１番目と２番目の炭素結合の間にあるアルキニル基を意味する。１−アルキニル基が別の基と結合するとき、例えばそれが環状ホスホネート（ホスホルアミデート）に結合した置換基Wである場合、それは１番目の炭素で結合している。
【００５１】
“アルキレン”とは、二価の直鎖、分枝鎖および環式の飽和脂肪族基を意味する。
【００５２】
“アシルオキシ”とは、Ｒが水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキルまたは脂環式であるエステル基−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｒを意味する。
【００５３】
“アミノアルキル−”は、“alk”がアルキレン基であり、RがH、アルキル、アリール、アラルキル、および脂環式から選択される、基NR２−alk−を意味する。
【００５４】
“−アルキル（ヒドロキシ）−”は、アルキル鎖から分岐した−OHを意味する。この用語がＸ基であるとき、−OHは少なくともリン原子に対してα位に存在する。
【００５５】
“アルキルアミノアルキル−”は、各alkが独立して選ばれたアルキレンであり、Ｒが水素または低級アルキルである、基−alk−ＮＲ−alk−を意味する。“低級アルキルアミノアルキル”とは、各アルキレンが低級アルキルである基を意味する。
【００５６】
“アリールアミノアルキル−”は、“alk”がアルキレン基であり、Rが、H、アルキル、アリール、アラルキル、および脂環式から選択される、基アリール−NR−alk−を意味する。“低級アリールアミノアルキル−”において、アルキレン基は低級アルキレンである。
【００５７】
“アルキルアミノアリール−”は、“aryl”が２価の基であり、Rが、H、アルキル、アラルキル、および脂環式である、基アルキル−ＮＲ−アリール−を意味する。“低級アルキルアミノアリール”において、アルキレン基は低級アルキルである。
【００５８】
“アルコキシアリール−”とは、アルキルオキシ基で置換されたアリール基を意味する。“低級アルコキシアリール−”において、アルキル基は低級アルキルである。
【００５９】
“アリールオキシアルキル−”は、アリールオキシ基で置換されたアルキル基を意味する。
【００６０】
“アラルキルオキシアルキル−”は、“alk”がアルキレン基であるアリール−alk−O−alk−を意味する。“低級アラルキルオキシアルキル−”は、アルキレン基が低級アルキレンであるこのような基を意味する。
【００６１】
“−アルコキシ−”または“−アルキルオキシ−”は、“alk”がアルキレン基である基−alk−O−を意味する。“アルコキシ−”は、基アルキル−O−を意味する。
【００６２】
“−アルコキシアルキル−”または“−アルキルオキシアルキル−”は、各“alk”が独立に選択されたアルキレン基である、基−alk−O−alk−を意味する。“低級−アルコキシアルキル−”において、各アルキレンは、低級アルキレンである。
【００６３】
“アルキルチオ−”および“−アルキルチオ−”は、基アルキル−S−、および−alk−S−をそれぞれ意味する。ここで、“alk”はアルキレン基である。
【００６４】
“−アルキルチオアルキル−”は、各“alk”が独立してアルキレン基から選択される、基−alk−S−alk−を意味する。“低級−アルキルチオアルキル−”において、各アルキレンは低級アルキレンである。
【００６５】
“アルコキシカルボニルオキシ−”は、アルキル−O−C（O）−O−を意味する。
【００６６】
“アリールオキシカルボニルオキシ−”は、アリール−O−C（O）−O−を意味する。
【００６７】
“アルキルチオカルボニルオキシ−”は、アルキル−S−C（O）−O−を意味する。
【００６８】
“アミド”または“カルボキサミド"”は、RおよびR１にH、アルキル、アリール、アラルキル、および脂環式が含まれる、NR２−C（O）−およびRC（O）−NR１−を意味する。この用語には、尿素、−NR−C（O）−NR−が含まれない。
【００６９】
“カルボキサミドアルキルアリール”および“カルボキサミドアリール”は、“ar”がアリールであり、“alk”がアルキレンであり、R１およびRにH、アルキル、アリール、アラルキル、および脂環式が含まれる、アリール−alk−NR１−C（O）−、および−NR１−C（O）−alk−をそれぞれ意味する。
【００７０】
“ヒドロキシアルキル”は、１つの−OHで置換されたアルキル基を意味する。
【００７１】
“ハロアルキル”は、I、Cl、Br、Fからなる群から選択される１つのハロで置換されたアルキル基を意味する。
【００７２】
“シアノ”は、−C≡Nを意味する。
【００７３】
“ニトロ”は、−NO２を意味する。
【００７４】
“アシルアルキル”は、“alk”がアルキレンである、アルキル−C（O）−alk−を意味する。
【００７５】
“アミノカルボキサミドアルキル−”は、Rがアルキル基またはHであり、“alk”がアルキレン基である、基NR２−C（O）−N（R）−alk−を意味する。“低級アミノカルボキサミドアルキル−”は、“alk”が低級アルキレンであるそのような基を意味する。
【００７６】
“ヘテロアリールアルキル”は、ヘテロアリール基で置換されたアルキル基をを意味する。
【００７７】
“過ハロ”は、脂肪族またはアリール基のすべてのC−H結合がC−ハロ結合に置き換わっている基を意味する。適当な過ハロアルキル基には、−CF３および−CFCl２.が含まれる。
【００７８】
“グアニジド”は、各R基が独立に−H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、および脂環式から選択され、−H以外は場合により置換されている、−NR−C（NR）−NR２並びに−N＝C（NR２）２の両方を意味する。
【００７９】
“アミジノ”は、各R基が−H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、および脂環式から独立に選択され、−H以外は場合により置換されている、−C（NR）−NR２を意味する。
【００８０】
“製薬的に許容し得る塩”とは、式Ｉで示される化合物の塩および本発明化合物と有機または無機の酸または塩基との組み合わせから誘導されたそのプロドラッグを意味する。
【００８１】
本明細書で用いる語句“プロドラッグ”とは、生体系に投与された時に、自然発生的な化学反応、酵素により触媒される化学反応、および／または代謝的化学反応の結果として、“ドラッグ”物質（生物学的に活性な化合物）を生じる化合物を意味する。標準的なプロドラッグは、インビボで開裂する、ＦＢＰアーゼインヒビターに関連する官能基、例えば、ＨＯ−、ＨＳ−、ＨＯＯＣ−、Ｒ２Ｎ−に結合する基を用いて形成される。標準的なプロドラッグには、その基がアルキル、アリール、アラルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシカルボニルオキシアルキルであるカルボン酸エステル、並びに結合している基がアシル基、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、リン酸または硫酸であるヒドロキシル、チオールおよびアミンのエステルが含まれるがこれに限られない。ホスホン酸の標準的なプロドラッグもまた包含され、式ＩおよびＸのＲ１で表される。以下に例示したグループは網羅したものではなく、当業者であれば、他にも公知の種々のプロドラッグを製造することができる。式ＩおよびＸで示される化合物のこのようなプロドラッグも本発明の範囲に含まれる。プロドラッグは、何らかの化学的変換を受けて、生物学的に活性であるかまたは生物学的に活性な化合物の前駆体となる化合物を生じなければならない。いくつかの場合においては、プロドラッグはドラッグそのものに比べて生物学的活性が低いが、改善された経口バイオアベイラビリティー、薬力学的半減期などを通じて、効力または安全性の改善に供する。生物学的に活性な化合物には、例えば、抗癌剤、抗ウイルス剤、および抗生物質が含まれる。
【００８２】
“２座”とは、その末端が同じ原子に結合して環状基を形成するアルキル基を意味する。例えば、プロピレンイミンは２座のプロピレン基を含む。
【００８３】
以下の構造
【化３９】
0005063837.tif 000007
は、R６＝R６、V＝W、W’＝Hで、VとWがいずれも上を向いているか、またはいずれも下を向いているかのどちらかである場合、リン−酸素間二重結合を通る対称面を有する。各−NR６が−O−に置き換わっている構造についても同じである。
【００８４】
“環状１’、３’−プロパンエステル”、“環状１，３−プロパンエステル”、“環状１’、３’−プロパニルエステル”、および“１，３−プロパニルエステル”は、次式
【化４０】
0005063837.tif 000008
を意味する。
【００８５】
“VとZが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して連結し、場合により１個のヘテロ原子を含み、リンに結合した両方のＹ基から３個の原子である炭素原子に結合したヒドロキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシまたはアリールオキシカルボニルオキシで置換された、５〜７個の原子を含む環基を形成する”には、以下のものが含まれる
【化４１】
0005063837.tif 000009
【００８６】
“VとZが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して連結し、場合により１個のヘテロ原子を含み、リンに結合したＹに対してβおよびγの位置で結合したアリール基と縮重した環基を形成する”には、以下のものが含まれる。
【化４２】
0005063837.tif 000010
が含まれる。
【００８７】
“VとＷが一緒になってさらなる３個の炭素原子を介して連結し、６個の炭素原子を含み、ヒドロキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アルキルチオカルボニルオキシ、およびアリールオキシカルボニルオキシからなる群から選択される、リンに結合したＹから連結した３個の原子である該さらなる炭素原子の１つに結合した１個の置換基で置換された、場合により置換された環基を形成する”には、次式：
【化４３】
0005063837.tif 000011
が含まれる。
【００８８】
上の構造は、Ｙに連結した３個の炭素原子にアシルオキシ置換基、および新たな６員環上に任意の置換基ＣＨ３、を有する。少なくとも１つの水素を以下の位置のそれぞれにおいて有する：Ｚに結合した炭素、“３”と表示した炭素に対してα位にある両炭素；および上記“OC（O）CH３”に結合した炭素。
【００８９】
“WとW’が一緒になってさらなる２〜５個の原子によって連結して、場合により０〜２個のヘテロ原子を含み、Vがアリール、置換されたアリール、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールでなければならない、環基を形成する”には、次式：
【化４４】
0005063837.tif 000012
が含まれる。
【００９０】
上の構造は、V＝アリールであり、WおよびW’がスピロ縮合したシクロプロピル基である。
【００９１】
“ホスホルアミダイト”とは、Ｃ、Ｏ、ＳまたはＮを介して、環状構造を含んでいる−Ｐ（ＹＲ）（ＹＲ）［式中、Ｙは独立して−Ｏ−またはＮＲ６−であるが、少なくとも１つのＹは−ＮＲ６−である］のリンに結合した化合物を意味する。
【００９２】
“ホスホルアミデート”とは、Ｃ、Ｏ、ＳまたはＮを介して、環状構造を含んでいる−Ｐ（Ｏ）（ＹＲ）（ＹＲ）［式中、Ｙは独立して−Ｏ−またはＮＲ６−であるが、少なくとも１つのＹは−ＮＲ６−である］のリンに結合した化合物を意味する。
【００９３】
“環状ホスホルアミデート”は、−Ｐ（Ｏ）（ＹＲ）（ＹＲ）が
【化４５】
0005063837.tif 000013
であるホスホルアミデートを意味する。
【００９４】
Ｖに結合した炭素はC−H結合を有していなければならない。Zに結合した炭素もまたC−H結合を有していなければならない。
【００９５】
“炭素環糖”とは、通常糖の環に存在する酸素の代わりに炭素を含んでいる糖アナログを意味する。これには、環の酸素が炭素によって置換されているリボフラノシルおよびアラビノフラノシル糖等の５員環が含まれる。
【００９６】
“非環式糖”とは、環、例えばリボフラノシル環、を有しない糖を意味する。１つの例は、リボフラノシル環に代わる２−ヒドロキシメチルである。
段落“Ｌ−ヌクレオシド”とは、天然のβ−Ｄ−ヌクレオシドアナログのエナンチオマーを意味する。
【００９７】
“アラビノフラノシルヌクレオシド”とは、アラビノフラノシル糖を含んでいるヌクレオシドアナログを意味する。即ち、リボフラノシル糖の２’−ヒドロキシルは糖の環の対面に存在している。
【００９８】
“ジオキソラン糖”は、リボフラノシル糖の３’炭素に代えて酸素原子を含んでいる糖を意味する。
【００９９】
“フッ素化糖”とは、１〜３個の炭素原子−フッ素原子を有する糖を意味する。
【０１００】
“Ｐ４５０酵素”とは、有機化合物を酸化するシトクローム酵素を意味し、、天然に存在するＰ４５０アイソザイム、突然変異体、先端が切り取られた酵素、ポストトランスクリプターゼ修飾酵素、およびその他の変異体が含まれる。
【０１０１】
“肝臓”は、本発明のホスホネート（ホスホルアミデート）エステルを酸化することがわかっているＣＹＰ３Ａ４アイソザイムまたは他のいずれかのＰ４５０アイソザイムを含む、肝臓並びに同様な組織および細胞を意味する。実施例Ｆに基づいて、我々は、式ＶＩおよびＶＩＩのプロドラッグが、シトクロムＰ４５０アイソザイムＣＹＰ３Ａ４によって選択的に酸化されることを見い出した。DeWaziersetal（J.Pharm.Exp.Ther.，253、387−394（1990））によれば、CYP3A4は、ヒトの以下の組織に存在する（イムノブロッティングおよび酵素測定により決定）。
0005063837.tif 000014
【０１０２】
このように、“肝臓”は、より好ましくは、肝臓、十二指腸、空腸、回腸、大腸、胃、食道を意味する。最も好ましくは、肝臓は、肝臓器官を意味する。
【０１０３】
“肝臓（hepatic）”とは、肝臓器官の細胞を意味し、例えば十二指腸由来の細胞ではない。
【０１０４】
“増強する”は、特定の性質を増大または改善することを意味する。
【０１０５】
“肝臓特異性”は、薬物またはプロドラッグで処置された動物組織において測定される次式：
【数１】
0005063837.tif 000015
【０１０６】
“増加したまたは増強した肝臓特異性”は、本発明のドラッグで処置された動物に対する、プロドラッグで処置された動物における肝臓特異性の割合の増加を意味する
【０１０７】
“増強された経口バイオアベイラビリティー”は、親ドラッグまたはプロドラッグ（本発明ではない）の用量の胃腸管からの吸収の少なくとも５０％の増加を意味する。より好ましくは、少なくとも１００％である。経口バイオアベイラビリティーの測定値は、通常、プロドラッグ、ドラッグ、またはドラッグ代謝物の、全身投与後の測定値に対する経口投与後の、血中、組織または尿中の測定値を意味する。
【０１０８】
“親ドラッグ”は、同じ生物物学的活性を有する化合物をもたらす化合物を意味する。親ドラッグ形態は、R５−Ｘ−P（O）（OH）２およびエステルなどの標準的なプロドラッグである。
【０１０９】
“ドラッグ代謝物”は、親ドラッグからインビボまたはインビトロで生じる化合物を意味し、生物学的に活性なドラッグを含みうる。
【０１１０】
“薬力学的半減期”は、ドラッグまたはプロドラッグの投与後、測定される薬学的応答の２分の１の減少が観察される時間を意味する。その半減期が、好ましくは少なくとも５０％増大したとき、薬力学的半減期が増大する。
【０１１１】
“薬物動態学的半減期”は、ドラッグまたはプロドラッグの投与後、血漿または組織中のドラッグ濃度の２分の１の減少が観察される時間を意味する。
【０１１２】
“治療指数”は、死亡、毒性の指標となるマーカーの上昇および／または薬学的副作用などの好ましくない応答を生じる用量に対する、治療上有益な応答をもたらすドラッグまたはプロドラッグの用量の割合を意味する。
【０１１３】
“生物学的に活性なドラッグのレベルを増強する”とは、プロドラッグと親ドラッグの両方に対し同じ投与方法を用いたとき、親ドラッグの投与後に達成されるレベルと比較して、生物学的に活性なドラッグの肝臓におけるレベルが増加することを意味する。
【０１１４】
“Ｐ４５０酵素を発現する癌”とは、腫瘍細胞におけるＰ４５０活性を誘導する物質を有するまたは有しない、少なくとも５％の肝臓に特異的な活性を有する腫瘍細胞を意味する。
【０１１５】
“低レベルの酵素”とは、生物学的に活性な物質の最大応答をもたらすに必要なレベルよりも低いレベルを意味する。
【０１１６】
“不適当な細胞産生”とは、生物学的に活性な物質の最大応答をもたらすのに必要なレベルよりも低いレベルを意味する。例えば、その応答はウイルス力価であり得る。
【０１１７】
“持続的送達”は、生物学的に活性なドラッグが適切な血中レベルで存在して治療効果を有する時間の増大を意味する。
【０１１８】
“バイパス薬物耐性”は、体内の目的とする部位での、ドラッグの生物学的に活性な形態を生じおよび維持するのに重要な生化学的経路および細胞活性における変化、並びに別の経路や細胞活性が用いることによりこの耐性をバイパスする因子の能力に起因する、ドラッグの治療効果の損失または部分的損失（薬物耐性）を意味する。
【０１１９】
“ＦＢＰアーゼ阻害物質”とは、ヒトのフルクトース１,６−ビスホスホファターゼ酵素を、１８時間絶食した正常なラットに１００ｍｇ／ｋｇでi.v.投与したのち、少なくとも１００μＭのＩＣ５０と低いグルコース濃度でもって阻害する化合物を意味する。生物学的に活性なＦＢＰアーゼ阻害物質は、Ｍ−ＰＯ３２−［式中、Ｍは炭素を介して結合するか、ＭＨがヌクレオシドアナログを含むイミダゾールであるとき酸素を介して結合する］である。
【０１２０】
“生物学的に活性なドラッグまたは物質”は、生物学的効果をもたらす化学物質を意味する。これに関連して、活性な物質とは、Ｍ−ＰＯ３２−、Ｍ−Ｐ（Ｏ−）ＮＨＲ６−、ＭＰ２Ｏ６３−、またはＭＰ３Ｏ９４−［式中、Ｍは親ドラッグまたは代謝物におけるＭと同じである］を意味する。
【０１２１】
“治療上有効な量”は、疾患または状態の処置において、いずれかの有益な効果を有する量を意味する。
【０１２２】
“リン酸化酵素の減少した活性”には、効率の減少（より低いＫｍまたはＶｍａｘ）または酵素の外来の阻害物質の産生の増大につながる、酵素、突然変異体の産生の減少が含まれる。
【０１２３】
“ホスフェート（ホスホネート）”とは、Ｃ、Ｏ、ＳまたはＮを介してＰＯ３２−またはＰ（Ｏ）（ＮＨＲ６）Ｏ−に結合した化合物を意味する。対イオンは、Ｈ＋または金属カチオンであり得る。
【０１２４】
“ヌクレオシド”とは、糖（その複素環および炭素環アナログを含む）にＫ都合したプリンまたはピリミジン塩基（そのアナログを含む）を意味する。
【０１２５】
以下のよく知られたドラッグを明細書および請求の範囲において引用する。
略語および一般名も記載する。
ａｒａＡ;９−ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルアデニン(ビダラビン)
Ａ７Ｔ;３'−アジド−２',３'−ジデオキシチミジン(ジドブジン)
ｄ４Ｔ;２',３'−ジデヒドロ−３'−デオキシチミジン(スタブジン)
ｄｄＩ;２',３'−ジデオキシイノシン(ジダノシン)
ｄｄＡ;２',３'−ジデオキシアデノシン
ｄｄＣ;２',３'−ジデオキシシチジン(ザルシタビン)
Ｌ−ｄｄＣ;Ｌ−２',３'−ジデオキシシチジン
Ｌ−ＦｄｄＣ;Ｌ−２',３'−ジデオキシ−５−フルオロシチジン
Ｌ−ｄＴ;ｂ−Ｌ−チミジン(ＮＶ−０２Ｂ)
Ｌ−ｄＣ;ｂ−Ｌ−２−デオキシシチジン(ＮＶ−０２Ｃ)
Ｌ−ｄ４Ｃ;Ｌ−３'−デオキシ−２',３'−ジデヒドロシチジン
Ｌ−Ｆｄ４Ｃ;Ｌ−３'−デオキシ−２',３'−ジデヒドロ−５−フルオロシチジン
３ＴＣ;(−)−２',３'−ジデオキシ−３'−チアシチジン;２'Ｒ,５'Ｓ(−)−１−[２−(ヒドロキシメチル)オキサチオラン−Ｓ−イル]シトシン(ラミブジン)
Ｉ−ｂ−Ｄ−リボフラノシル−１,２,４−トリアゾール−３−カルボキサミド(リバビリン)
ＦＩＡＵ;１−(２−デオキシ−２−フルオロ−ｂ−Ｄ−アラビノフラノシル)−５−ヨードウリジン
ＦＩＡＣ;１−(２−デオキシ−２−フルオロ−ｂ−Ｄ−アラビノフラノシル)−５−ヨードシトシン
ＢＨＣＧ;(±)−(１ａ,２ｂ,３ａ)−９−[２,３−ビス(ヒドロキシメチル)シクロブチル]グアニン
ＦＭＡＵ;２'−フルオロ−５−メチル−ｂ−Ｌ−アラビノ−フラノシルウラシル
ＢｖａｒａＵ;１−ｂ−Ｄ−アラビノフラノシル−Ｅ−５−(２−ブロモビニル)ウラシル(ソリブジン)
Ｅ−５−(２−ブロモビニル)−２'−デオキシウリジン
ＴＦＴ;トリフルオロチミジン(トリフルオロチミジン)
５−プロピニル−１−アラビノシルウラシル(ゾナビル)
ＣＤＧ;炭素環２'−デオキシグアノシン
ＤＡＰＤ;(−)−Ｂ−Ｄ−２,６−ジアミノプリンジオキソラン
ＦＤＯＣ;(−)−Ｂ−Ｄ−５−フルオロ−１−[２−（ヒドロキシメチル）−１,３−ジオキソラン]シトシン
ｄ４Ｃ;３'−デオキシ−２',３'−ジデヒドロシチジン
ＤＸＧ:ジオキソラングアノシン
ＦＥＡＵ;２'−デオキシ−２'−フルオロ−１−ｂ−Ｄ−アラビノフラノシル−５−エチルウラシル
ＦＬＧ;２',３'−ジデオキシ−３'−フルオログアノシン
ＦＬＴ; ３'−デオキシ−３'−フルオロチミジン
ＦＴＣ; (−)−cis−５−フルオロ−１−[２−(ヒドロキシメチル)−１ ,３−オキサチオラン−５−イル]シトシン
５−イル−炭素環 ２'−デオキシグアノシン (ＢＭＳ２００,４７５)
[１−(４'−ヒドロキシ−１',２'−ブタジエニル)シトシン](シタレン)
オキセタノシンＡ;９−(２−デオキシ−２−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−エリトロ−オキセタノシル)アデニン
オキセタノシンＧ; ９−(２−デオキシ−２−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−エリトロ−オキセタノシル)グアニン
ｄｄＡＰＲ: ２,６−ジアミノプリン−２',３'−ジデオキシリボサイド
３ＴＣ;(−)−２',３'−ジデオキシ−３'チアシチジン;(２Ｒ,５Ｓ)１−［２−(ヒドロキシメチル)−１,３−オキサチオラン−５−イル]シトシン (ラミブジン)
シクロブタＡ;(＋/−)−９−[(１β,２α,３β)−２,３−ビス(ヒドロキシメチル)−１−シクロブチル]アデニン
シクロブタＧ; (＋/−)−９−[(１β,２α,３β)−２,３−ビス(ヒドロキシメチル)−１−シクロブチル]グアニン(ロブカビル)
５−フルオロ−２'−デオキシウリジン (フロクスウリジン)
ｄＦｄＣ;２',２'−ジフルオロデオキシシチジン (ゲムシタビン)
ａｒａＣ;アラビノシルシトシン (シタラビン)
ブロモデオキシウリジン
ＩＤＵ;５−ヨード−２'−デオキシウリジン (ヨードクスウリジン)
ＣｄＡ;２−クロロデオキシアデノシン (クラドリビン)
Ｆ−ａｒａ−Ａ;フルオロアラビノシルアデノシン(フルダラビン)
ＡＣＶ;９−(２−ヒドロキシエトキシメチル)グアニン (アシルロビル)
ＧＣＶ; ９−(１,３−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル)グアニン (ガンシクロビル)
９−(４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルブタ−１−イル)グアニン (ペンシクロビル)
(Ｒ)−９−(３,４−ジヒドロキシブチル)グアニン (ブシクロビル)
ホスホノギ酸(ホスカルネット)
ＰＰＡ; ホスホノ酢酸
ＰＭＥＡ; ９−(２−ホスホニルメトキシエチル) アデニン (アデホビル)
ＰＭＥＤＡＰ; ９−(２−ホスホニルメトキシエチル)−２,６−ジアミノプリン
ＨＰＭＰＣ; (Ｓ)−９−(３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル) シトシン (シドホビル)
ＨＰＭＰＡ; (Ｓ)−９−(３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル) アデニン
ＦＰＭＰＡ; ９−(３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル) アデニン
ＰＭＰＡ; ９−[２−（Ｒ)−ホスホニルメトキシ)プロピル] アデニン (テノホビル)
ａｒａＴ; ９−ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルチミジン
ＦＭｄＣ; (Ｅ)−２'−デオキシ−２'(フルオロメチレン)シチジン
ＡＩＣＡＲ; ５−アミノイミダゾール４−カルボキサミド−１−リボフラノシル
【０１２６】
発明の詳細な記載
本発明は、化合物を、肝臓およびこれらの特異的な酵素を含んでいる他の組織において見られるＰ４５０酵素によってホスフェート（ホスホネート）含有化合物に効率的に変換することを可能にする、新規の環状ホスホルアミデート方法論の使用に関する。この方法論は、様々なドラッグおよび診断用造影剤に適用することができる。より具体的には、本発明は、非エステラーゼ介在性の加水分解を受けて、生物学的に活性であるかまたは生物学的に活性な物質Ｍ−ＰＯ３２−、Ｍ−Ｐ２Ｏ６３−またはＭ−Ｐ３Ｏ９２−変換されるＭＰ（Ｏ）（ＮＨＲ６）Ｏ−を生じるプロドラッグの使用に関する。高い電荷を有するホスフェート（ホスホネート）含有化合物は胃腸管には容易に吸収されないので、このプロドラッグ方法論は経口投与後の吸収を増大させるために使用することができる。
【０１２７】
本発明の環状ホスフェート（ホスホネート）は、親ドラッグを代謝する酵素による代謝を回避することができるので、本発明の別の態様では、このプロドラッグ方法論は、薬動力学的半減期を親ドラッグと比較して増大させるのにも使用することができる。同様に、プロドラッグは血流から負に荷電した化合物を取り除くのに用いられるクリアラン経路を回避するので、本発明のプロドラッグは、本発明のホスフェート（ホスホネート）含有化合物の薬動力学的半減期を増大させることができる。
【０１２８】
本発明の別の態様では、本プロドラッグ方法論はまた、肝臓において新規のプロドラッグの酸化が異なる速度で進行し、したがってゆっくりであるが治療上有効なレベルの維持に適当な速度で酸化するプロドラッグの選択が持続的な治療抗かをもたらすので、親ドラッグの持続的送達を達成するために使用することができる。
【０１２９】
本発明の新規の環状１,３−プロパノイルエステル方法論を用いて、本発明の環状１,３−プロパニルエステルの酸化を担う豊富な量のＰ４５０アイソザイムを含んでいる肝臓への特定のドラッグまたは造影剤の拡散を増加させ、最終的に遊離のホスフェート（ホスホネート）を生じるようにすることもできる。したがって、このプロドラッグ法は、肝臓の疾患または、肝臓が糖、コレステロール、脂肪酸およびトリグリセリド等の生化学的な最終産物の過剰産生の原因であるような疾患の処置における有用であることが明らかである。そのような疾患には、ウイルスおよび寄生虫感染、肝臓癌、肝線維症、糖尿病、高脂血症および肥満症が含まれる。１つの態様では、好ましくはこの疾患は、糖尿病ではない。さらに、肝臓への診断試薬の送達における、本プロドラッグの肝臓特異性の有用性が明らかにされる。生物学的に活性などラッグの高いレベルは、活性化されたプロドラッグ、その後のプロドラッグ開裂中間体並びに生物学的に活性なドラッグのこれらの細胞による有意の持続のために、プロドラッグを開裂することが可能なＰ４５０酵素を発現している組織において達成される。さらに、組織において親ドラッグのリン酸化が弱く、または代謝または他のクリアランス機構のために比較的短い薬動力学的半減期を有する場合、親ドラッグの投与後に達成されるレベルに対して、生物学的に活性なドラッグの高いレベルが達成される。
【０１３０】
ＧＩの癌（例えば、第１期および第２期の肝癌）、並びに例えばレトロウイルスや他のよく知られた遺伝子治療法によって並びにシトクロームＰ４５０を発現する様に処理を施された移植細胞を通じてシトクロームＰ４５０が人為的に誘導された癌の処置のための、シクロホスファミドのある種のプロドラッグアナログの使用もまた想到される。
【０１３１】
これらの特異的なＰ４５０酵素は他の具体的な組織や細胞にも存在し、この方法論は、これらの物質のそれらの組織への送達を増大させるために使用することもできる。
【０１３２】
本発明の別の態様において、本発明のホスホルアミデートの大部分が肝臓において代謝されホスフェート（ホスホネート）を生じる特徴は、ドラッグまたは肝臓外の組織において拡散したその代謝産物の量に関する副作用を有する様々なドラッグの治療計数を増大させるために本発明のプロドラッグ方法論の使用を可能にすることができる。治療計数の増大は、生物学的に活性な物質の増大した肝臓レベル、したがって同様の等よ量で投与した親ドラッグに対する効力の増大によってももたらされ得る。
【０１３３】
本発明の別の態様では、プロドラッグは、ホスフェート（ホスホネート）を、親化合物の基質活性が低いためにおよび／または親化合物をリン酸化するために用いられる酵素の発現が低いために、ホスフェート（ホスホネート）およびその関連するより高度にリン酸化された代謝物の次善のレベルをもたらす組織に送達するために使用することができる。
【０１３４】
本発明の別の態様では、新規のホスホルアミダイトおよびホスホルアミデート中間体を記載する。
【０１３５】
別の態様では、環状ホスホルアミデートプロドラッグの製造方法を記載する。
【０１３６】
これらの態様をより詳細に記載する。
【０１３７】
ホスホルアミダイトドラッグ
式Ｍ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲ６）Ｏ−で示される化合物は、ＡＭＰ結合部位等のヌクレオチド結合部位、および負に荷電した化合物、例えばカルボン酸およびリン酸、を認識することが分かっているある種の部位に対する結合に有用な化合物である。これらの酵素は、負に荷電した酸素を含んでいるテトラヘドラル基を有する化合物を認識するので、カルボニル化合物、具体的にはペプチドカルボニル、エステル、ケトン、またはアルデヒドへの水の付加を触媒する酵素は、特に興味深い。１つの例は、亜鉛が関与する触媒機構を用いてペプチドカルボニルに水を付加する、亜鉛金属プロテイナーゼクラスのクラスである。これらの酵素はホスホルアミデートによって阻害される。例えば、ＮＥＰ２４.１１は、天然物ホスホルアミドンによって阻害される。プロドラッグ方法論は、これら化合物を経口で送達する、またはより高い効力またはより高い治療濃度域を達成するためにある種の化合物を肝臓へ送達するための有用な手段を提供する。プロドラッグとして送達するために適当であろう酵素阻害物質には、慢性関節リウマチや骨粗鬆症においておよび急性の心筋梗塞後の心臓および癌の転移において起きるようなマトリックス改造に関与する、ＮＥＰ２４.１１、コラゲナーゼ、ストロメリシン、ゼラチナーゼ、ＡＣＥ、エンドセリン転換酵素、および金属プロテイナーゼを阻害するある種のホスホルアアミデートを含む。
【０１３８】
ホスホン酸およびリン酸
式Ｉで示されるプロドラッグの開裂により、いくつかの場合において化学的な加水分解または加水分解を触媒する酵素（ホスファターセ、アミダーゼ）によって対応するＭ−ＰＯ３２−にさらに変換される、ホスホルアミデートＭ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲ）Ｏ−が生じる。生成物のＭ−ＰＯ３２−がドラッグであるか、またはそれ自身が細胞のキナーゼによってさらに代謝されてより高いオーダーのホスフェート、例えば、Ｍ−Ｐ２Ｏ６３−またはＭ−Ｐ３Ｏ９４−を生じる。ある場合には、中間体のＭ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲ）Ｏ−がＭ−Ｈへの内部転換によって、より高いオーダーのホスフェートに変換されることもあろう。
【０１３９】
経口バイオアベイラビリティーの増大
本発明は、ある種の環状ホスホルアミデートおよび対応するホスフェート（ホスホネート）化合物の治療上有効な量を、好ましくはそれを必要とする動物に送達、最も好ましくは経口投与により送達するためのその使用に関する。本発明のプロドラッグは、プロドラッグ部分およびその置換基Ｖ、Ｚ、ＷおよびＷ’の結果としてドラッグの物理学的特性を変化させることによって経口バイオアベイラビリティーを増大させる。活性なドラッグは、Ｍ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲ６）Ｏ−またはＭ−ＰＯ３２−であろう。あるいは、その代わりに両者がさらに代謝、例えばＭ−Ｐ２Ｏ６３−および／またはＭ−Ｐ３Ｏ９４−を活性なドラッグ物質として形成するキナーゼによるリン酸化、を受けるであろう。
【０１４０】
これらの基は、生理学的 pＨで高い電荷を有するので、遊離のリン酸またはホスホン酸基を含む化合物は、一般に低い（＜２％）経口バイオアベイラビリティーを示す。２５０Ｄａ以上の分子量を有する化合物の荷電した基は、細胞膜を通過する受動拡散並びに内臓の上皮細胞層を通過する吸収を妨害する。これらの化合物は、より親油性であり、それゆえより改善された腸管透過性を示すため、これら化合物の天然のプロドラッグは研究されてきた。多くのプロドラッグのクラスが報告されているが、薬物の開発に適した特性を示すことが分かったものは少ない。
【０１４１】
最も一般的なプロドラッグのクラス、および臨床上の候補としてほとんど専ら用いられるクラスは、アシルオキシアルキルエステルである。しかし、これらのプロドラッグは、水相での安定性が低く、酸性／塩基性 pＨに対する安定性が低く、胃腸管におけるエステラーゼによる急速な分解（Straw & Cundy, Pharm. Res. IO, (Suppl), S294 (1993)）のため、わずかな経口バイオアベイラビリティーの改善しか示さない。プロドラッグの別のクラスは、少数の極端な場合において経口バイオアベイラビリティーのわずかな改善をもたらすことが示された、ビス−アリールプロドラッグである（e.g. DeLombert et al. J. Med. Chem. 37, 498 (1994)）。この化合物のクラスの主な制限は、このプロドラッグエステルがしばしば生体内で急速に一酸に分解されるが、変換される以上は、親ドラッグへの変換がゆっくりとしか起こらない（ときには数日）ということである。
【０１４２】
本発明のプロドラッグは、親ドラッグと比較して増大した経口バイオアベイラビリティーにつながる改善された特性を示す。本環状ホスホルアミデートプロドラッグのいくつかの特性は、経口バイオアベイラビリティーを増大するそれらの能力に寄与するであろう。第１に、プロドラッグは、水性溶液中、広い pＨ範囲で良好な安定性を示す（実施例Ａ）。この pＨ安定性は、吸収される前に口腔内および胃腸管での急速な加水分解を妨害する。 このpＨ安定性はまた、その生成物の製剤化において有益でもありうる。
【０１４３】
第２に、プロドラッグは、胃腸管内で豊富に存在するエステラーゼおよびホスファターゼに対して耐性である。投与した用量の多くは胃腸管において無傷のままであるので、化合物は、薬物のより多くが受動拡散および血流への移入によって吸収され得ることを意味する遊離のホスフェート（ホスホネート）よりも高い電荷を有する化合物が少ないままである（実施例Ｂ）。
【０１４４】
最後に、プロドラッグは、分子の別の側面で代謝を制限することができる。例えば、本発明のプロドラッグは、胃腸管にも豊富に存在しているアデノシンデアミナーゼによるａｒａＡのプロン塩基の代謝を排除する（実施例Ｂ）。この酵素によって通常脱アミノ化されるａｒａＡのアミンは、５’−リボフラノシルヒドロキシルに存在する環状のホスフェート部分によって保護される。その分子の他の部位での減少した代謝によって、より多くのドラッグを血流内を循環させることが可能である。これらの特性のすべてがすべてのドラッグのすべてのプロドラッグに適用可能であるとは言えないけれども、これら特性のそれぞれによって、胃腸管においてより多くのドラッグを維持し吸収可能ようにすることができる。
【０１４５】
本発明の新規のプロドラッグ法は、肝臓において作用するドラッグ並びに血管系または肝臓外組織の局在する標的において作用するある種のドラッグの経口送達に有用である。高濃度のＣＹＰ３Ａ４（新規のプロドラッグの活性化を担う酵素）は肝臓に存在するため、他の組織と比較して、生物学的に活性なドラッグは肝臓において高い濃度を有する。１つの態様では、肝臓内で作用する親ドラッグが好ましい。
【０１４６】
しかし、ホスフェート（ホスホネート）のいくつかは、肝臓において有機アニオン輸送物質によって輸送され、血流内に入る。血流内のホスフェート（ホスホネート）の多くは腎臓によって素早く取り除かれる。そのような化合物は、恐らく肝臓外の組織において治療的レベルには到達しないであろう。しかし、腎臓によって急速には取り除かれないために、循環内に残存することが可能なホスフェート（ホスホネート）およびホスフェートがいくつか存在する（例えば、ＮＥＰ阻害物質）。そのような化合物は、血液および肝臓外組織において治療上有効なレベルを達成することが可能である。したがって、別の態様では、腎臓によって取り除かれないホスフェート（ホスホネート）の肝臓外組織への経口送達が好ましい。即ち、腸管の空間において、血液または体液に暴露されている脈管構造内の標的または細胞膜上に存在する酵素もしくは受容体の標的のような遊離のリン酸（ホスホン酸）に接近可能な部位に作用するそのような親ドラッグが好ましい。本発明のこの態様に適当な標的は、非経口的（例えばi.v.注射）に投与されたホスホン酸によって病的状態の処置に有用であると期待される薬理学的または生化学的応答をもたらすような標的であろう。
【０１４７】
阻害物質は、低い経口バイオアベイラビリティー（＜２％）を示すので、本発明において記載されるタイプのプロドラッグは経口バイオアベイラビリティーを増大し、肝臓においてプロドラッグ開裂後にホスホン酸を生じることができるであろう。肝臓は循環内へホスホン酸を排出することが知られているので、肝臓におけるプロドラッグ開裂後に、循環するドラッグの適当なレベルが期待される。
【０１４８】
経口バイオアベイラビリティーは、血漿、肝臓または目的とする他の組織もしくは体液における、経口およびi.v.投与後のプロドラッグ、親ドラッグ、および／または代謝物濃度の、時間に対する曲線の下の領域を比較することによって計算することができる（実施例Ｐ）。
【０１４９】
例えば、腎臓で大量に排出されるドラッグについては、例えば、プロドラッグの経口およびi.v.投与後の親ドラッグまたは尿中に排出される代謝物の量を比較することによって経口バイオアベイラビィティーを測定することができる。経口バイオアベイラビリティーの下限は、プロドラッグ（p.o.）および親ドラッグ（i.v.）の投与後に尿中に排出される親ドラッグの量を比較することにより推定することができる。本発明のプロドラッグは、広いプロドラッグのスペクトルに渡って改善された経口バイオアベイラビリティーを示し、非常に好ましくは１.５〜１０倍の経口バイオアベイラビリティーの増加を示す。より好ましくは、経口バイオアベイラビリティーは親ドラッグと比較して少なくとも２倍増大する。
【０１５０】
物質は、胃腸管においてＣＹＰ３Ａ４を阻害することが知られている。例えば、グレープフルーツジュースは、恐らく、この酵素の不活性化および／または下方調節をもたらすグレープフルーツジュース中の成分によって活性が減少することが知られている（e.g. Bergamottin; Chem Res Toxicol 1998, 11, 252-259）。胃腸管のＣＹＰ３Ａ４のみが影響を受けるため、本発明のプロドラッグの経口吸収は増大するはずである。プロドラッグを代謝するＰ４５０を阻害する、不活性化するまたは下方調節する物質の組み合わせは、それらの吸収を増大する効果を有し、それによってより多くのプロドラッグの肝臓内における代謝が可能になる。したがって、この組み合わせの正味の効果は、より多くのドラッグを経口投与後に肝臓に送達することである。
【０１５１】
持続的送達
生体内で急速に取り除かれるドラッグは、しばしば、有意の期間にわたって治療上有効な血中レベルを達成するために複数回のドラッグ投与を必要とする場合が多い。他の方法は徐放性の製剤およびデバイスを含ませることも可能である。時間につれて分解されるプロドラッグは持続的なドラッグレベルを達成する方法を提供することも可能である。既知のホスフェート（ホスホネート）プロドラッグは、生体内で急速な加水分解を受ける（例えばアシルオキシアルキルエステル）または非常にゆっくりとした変換を受ける（例えばジ−アリールプロドラッグ）かのいずれかのために、一般に、この特性は、これらのプロドラッグについては不可能であった。
【０１５２】
本発明の環状ホスホルアミデートは、時間の経過とともに一定した放出をもたらすことによって持続したドラッグ放出が可能である。例えば、大部分のホスフェートは、血液中に存在するホスファターゼの作用により、全身投与後数分以内に生体内において脱リン酸化を受ける。同様に、これらホスフェートのアシルオキシアルキルエステルは、エステラーゼが介在する急速な加水分解を受けてホスフェートになり、その後急速に脱リン酸化される。本プロドラッグの多くが、時間の経過とともに肝臓においてホスフェート（ホスホネート）にゆっくりと酸化されるため、本発明のいくつかのプロドラッグは長時間のドラッグ送達を可能にし得る（実施例Ｓ）。適当に配置されたプロドラッグ部分は、親ドラッグか関わる全身の代謝を阻止するかまたは遅延させることができる。
【０１５３】
ドラッグの持続的送達は、生体内において、時間の経過とともに治療上有効なドラッグレベルを維持することが可能な速度で加水分解される式Ｉのプロドラッグを選択することにより達成可能である。ドラッグの分解速度は様々な要因に依存し、これにはＰ４５０の酸化速度が含まれ、これは、プロドラッグ部分の置換基、これら置換基の立体構造と親ドラッグの両者に依存する。さらに、持続的なドラッグ生成は、酸化後に生じた中間体の除去速度と、酸化の主な部位である肝臓に対するプロドラッグのアベイラビリティーに依存するであろう。望ましい特性を有するプロドラッグの同定は、肝臓ミクロソームの存在下または肝細胞の存在下、代謝に関わる主要なＰ４５０酵素の存在下でドラッグ生成の速度をモニターするアッセイにおいてプロドラッグをスクリーニングすることにより、容易に行なうことができる。これらのアッセイを、実施例Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｊにそれぞれ記載する。
【０１５４】
本発明のプロドラッグを組み合わせて、例えば、迅速に治療的レベルを達成する活性な物質を速やかに生じる１つのプロドラッグと、時間の経過とともにその活性な物質をよりゆっくりと放出する別のプロドラッグを含ませることが企図される。
【０１５５】
改善された薬動力学的半減期
継続した期間にわたって、そしていくつかの場合においてそのプロドラッグのより長い薬動力学的半減期を生じるそのドラッグの能力の結果として、新規のプロドラッグ方法論によってドラッグの薬動力学的半減期を延ばすことができる。両方の特性は、薬動力学的半減期を完全をもたらす延長された期間にわたって維持されるべき治療上のドラッグレベルを個々に可能にすることができる。いくつかのドラッグについては、本発明のプロドラッグは、親ドラッグに関連する代謝または除去経路を回避することができ、それによって動物内において延長された期間プロドラッグとして存在する。延長された期間にわたるプロドラッグの高いレベルは、ドラッグの薬動力学的半減期の改善をもたらすことができる親ドラッグの持続的な産生をもたらす。親ドラッグに関連する代謝経路を妨害するプロドラッグクラスの能力の例は、ａｒａＡＭＰプロドラッグによって示される。ａｒａＡＭＰと比較して、プロドラッグは、経口またはi.v.投与後に、例えば血漿および胃腸管において産生されるａｒａＡの既知の代謝副生成物であるａｒａ−ヒポキサンチン（“ａｒａＨ”）は示さない。一方、ａｒａＡＭＰは、急速且つほぼ完全にａｒａＨに変換される。ａｒａＨは、最初にａｒａＡへ脱リン酸化されたのちアデノシンデアミナーゼによる塩基の脱アミノ化によって生じる。プロドラッグ部分は、脱リン酸化および脱アミノ化の両方が起きることを阻止する。
【０１５６】
ホスフェート（ホスホネート）プロドラッグの一般的な除去経路は、腎臓を経由し、アニオン性化合物を認識する輸送である。循環に由来するホスホネートおよびホスフェート含有ドラッグは、ドラッグ投与からわずか数分後に起きることが多い。本発明のプロドラッグは、肝臓および同様の組織における酸化および加水分解の後まで負に荷電させることによってこれらドラッグの除去を遅らせることができる。
【０１５７】
肝臓および同様の組織への物質の増大された選択的送達
高い選択性でもってドラッグを肝臓へ送達することは、肝疾患または異常な肝臓の特性に関連する疾患（例えば、糖尿病、高脂血症）を最小限度の副作用で処置するためには望ましい。ＣＹＰ３Ａ４の組織分布の解析は、肝臓において大量に発現することを示している（DeWaziers et al., J. Pharm. Exp. Ther. 253: 387 (1990)）。さらに、プロドラッグの存在下での組織ホモジネートの解析は、上部胃腸管における組織由来のホモジネートのより低いレベルに対し、肝臓のホモジネートのみがプロドラッグを開裂する事を示している。腎臓、脳、心臓、胃、脾臓、筋肉、肺、および精巣はプロドラッグの開裂を大して示さなかった（実施例Ｄ）。
【０１５８】
肝臓特異性の証拠がさらに、プロドラッグの経口およびi.v.投与の両方の後で生体内において示された。ａｒａＡＭＰi.v.のプロドラッグ投与は、ａｒａＡまたはａｒａＡＭＰのいずれかの同等な投与量によって達成されるよりも高い、生体に作用するドラッグであるａｒａＡＴＰのレベルをもたらす。対照的に、プロドラッグは、文献において報告されているように、ａｒａＡまたはａｒａＡＭＰ投与のいずれかの後に容易に検出されるａｒａＡの副生成物であるａｒａＨの検出可能な量を産生することができない。同様に、プロドラッグは、経口投与後に代謝物であるａｒａＨを生じることなしに高い肝臓レベルを達成する。プロドラッグは肝臓に豊富に存在する酵素によって開裂するので、初回通過効果（first pass effect）によって一様な高い肝臓特異性が可能であろう。
【０１５９】
本発明において記載したプロドラッグは、除去過程が速く、それゆえ生成物が酸化される部位の近くで生じ、この部位はこれらのプロドラッグについては肝臓またはＰ４５０を発現している他の組織／細胞内の部位である。
【０１６０】
いくつかの場合においては肝臓特異性は、生成したのち肝臓からの拡散に比べて速い速度で局所的に作用する、高い反応性を有するドラッグのプロドラッグを用いて最も最適に達成される。
【０１６１】
Ｐ４５０活性、例えばＣＹＰ３Ａ４活性、を含む物質は知られている。例えば、リファンピシン、グルココルチコイド、フェノバルビタール、エリスロマイシンは、ラットおよびヒトの肝臓においてＣＹＰ３Ａ４活性を増大させることが知られている。Ｐ４５０活性は、非侵襲性の方法、例えば［１４Ｃ］エリスロマイシン呼気検査によってヒトにおいてモニターすることができる。これらの試験は、ヒトにおいてＣＹＰ３Ａ４を活性化する物質の同定において有用である。したがって、ドラッグ送達がプロドラッグの代謝速度によって制限される（例えば、プロドラッグのクリアランス速度がプロドラッグ開裂の速度と比較して速い）場合のプロドラッグに関しては、リファンピシン等の物質を組み合わせてまたは添加物または前処理剤として使用して、肝臓におけるＣＹＰ３Ａ４活性を増大させ、それによって肝臓のドラッグレベルを増加させることができる（実施例ＪおよびＯ）。
【０１６２】
プロドラッグ開裂機構
本発明のプロドラッグは、肝臓に豊富に存在する酵素に対するそれらの感受性に基づいた肝臓に選択的なドラッグ送達を可能にする単純な、低分子量のドラッグの修飾である。プロドラッグ開裂機構は、反応の必要条件と生成物を解析する試験に基づけば酸化とβ脱離を伴うことが必要である。いくつかの場合では、Ｍ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲ６）Ｏ−がさらにＭ−ＰＯ３２−およびＭ−Ｐ３Ｏ９４−に代謝される。プロドラッグは、広い pＨ範囲にわたって水溶液に対して安定であり、したがって化学的な開裂過程を受けず親ドラッグを生じる。さらに、プロドラッグはエステラーゼおよび血液のタンパク質に対して安定である。対照的に、プロドラッグは、ラット由来（実施例Ｃ）およびヒト由来（実施例ＤおよびＦ）の肝臓ミクロソームの存在下で急速に開裂する。ドラッグは、対応するホスフェート（ホスホネート）および／または生物学的に活性な物質（実施例ＧおよびＪ）として検出される場合、新たに単離されたラット肝細胞においても生じる。さらに、親ドラッグがＦＢＰアーゼ阻害物質である場合、ドラッグの生成は、強力な糖新生阻害をもたらすプロドラッグの能力によって支持される（実施例Ｉ）。
【０１６３】
開裂過程に関わる可能性のある特定の酵素は、既知のシトクロームＰ４５０阻害物質（実施例Ｅ）の使用によって評価した。この試験は、ドラッグのケトコノゾール阻害に基づいて、アイソザイムシトクロームＣＹＰ３Ａ４が原因となっていることを示している。
【０１６４】
生物学的に活性な物質は、以下の式ＶＩ〜ＶＩＩＩで示されるドラッグの投与後に肝臓において検出される。
【化４６】
0005063837.tif 000016
【０１６５】
以下の式で示されるプロドラッグは特に好ましい。
【０１６６】
式ＶＩで示されるプロドラッグは、開裂してアリールビニルケトンを生じ、式ＶＩＩＩで示されるプロドラッグは開裂してフェノールを生じる（実施例Ｌ）。開裂の機構は、以下の機構によって進行する。１つのＹがＮＲ６である化合物について示す。
【化４７】
0005063837.tif 000017
【０１６７】
本発明におけるエステルは上期の機構に限定されないけれども、一般に、エステルはそれぞれミクロソーム酸化を受けやすい基または原子を含んでおり（例えば、アルコール、ベンジル型メチンプロトン）、これが今度はＭ−Ｐ（Ｏ）（ＹＨ）２のβ脱離により水性溶液中で本発明の化合物に分解される中間体を生じる。この化学種は活性な化合物であるかまたは化学的もしくは酵素的な過程によりさらにＭ−ＰＯ３２−、Ｍ−Ｐ２Ｏ６３−、またはＭ−Ｐ３Ｏ９４−に変換される。さらに、これらのとくていのプロドラッグはＣＹＰ３Ａ４により開裂するが、このクラスの他のプロドラッグは他のＰ４５０の基質であってよい。構造におけるわずかな変化は基質活性とＰ４５０選択性に影響を及ぼすことが知られている。プロドラッグを活性化するアイソザイムの同定は、実施例Ｂに記載した手順にしたがって行なうことができる。
【０１６８】
別法として、環状ホスホルアミデートは、中間体のホスホルアミデートは、ＭＨまたはＭＰＯ３２を生成することができるホスファターゼ／アミダーゼの作用によってＭＰＯ３２−、ＭＰ２Ｏ６３−、ＭＰ３Ｏ９４−に変換することができ、これらが今後はキナーゼによって生物学的に活性な化合物にリン酸化され得る。
【化４８】
0005063837.tif 000018
【０１６９】
増加した治療指数
本発明のプロドラッグは、ある種のドラッグの治療指数（“ＴＩ”）を有意に増加させることができる。多くの場合、増加したＴＩは高い肝臓特異性の結果である。例えば、ａｒａＡおよびａｒａＡＭＰは、有意の全身的な副作用をもたらすことが知られており、これらの副作用は、ａｒａＡ副生成物であるａｒａＨの血中レベルに関連している。恐らく、この副作用は、例えばヒトにおいてドラッグに関連するニューロパシーをもたらす（ａｒａＡを服用した患者の４０％を越える）、ａｒａＨまたはａｒａＡの肝臓外組織（例えば神経）における毒性の結果である。ａｒａＡのプロドラッグは、ａｒａＡＭＰと比較して、肝臓（ａｒａＡＴＰ）／尿（ａｒａＨ）比の実質的な変化を示す。
【０１７０】
腎毒性は、リン酸に関連する一般的な毒性である。同等に効率的な内腔輸送機構による細胞からのドラッグの輸送（例えばアニオン交換または促進された拡散）が存在しないと、負に荷電した薬物の、ドラッグを高い濃度まで蓄積する例えば管状細胞内への輸送、例えば腎臓の近位尿細管の基底外側膜に局在する有機アニオン輸送物質による輸送によってこの毒性が生じる。多くの例が、腎毒性のリン酸、例えばＰＭＥＡおよびＨＰＭＰＡ、に関する文献に報告されている。ＰＭＥＡの新規のプロドラッグは、比較できる肝臓ドラッグレベルを達成する用量でＰＭＥＡまたはビスＰＯＭＰＭＥＡのいずれかと比較して、尿中にごく少量のＰＭＥＡしか示さない。
【０１７１】
リン酸ドラッグに関連する別の一般的な毒性は、いくつかの場合においてはＧＩ侵食による胃腸毒性である。本発明のプロドラッグはＧＩ毒性、特に経口投与後のＧＩ管に対するドラッグの直接の作用により生じる毒性、を減少させることができる。腎臓と同様に、内臓の上皮細胞は、細胞毒性である高い細胞内ドラッグレベルをもたらし得る有機アニオン輸送物質を有している。負に荷電したホスフェート（ホスホネート）は吸収されて肝臓内で開裂するまで現れないので、本発明のプロドラッグは内臓毒性を減少させる。
【０１７２】
深刻な毒性はほぼすべての抗癌剤にも関連している。第１期または第２期の肝臓癌の処置においてこれら毒性を減少させる努力において、ドラッグをときには肝臓ドラッグ暴露を増加させるために門動脈（portal artery）中へ直接投与することもある。腫瘍崩壊剤は有意の副作用に典型的に関連するので、局所的な投与はより高い肝臓の取り込みを可能にし、それにより肝臓外の毒性が減少する。化学動脈塞栓術は、さらなる肝臓取りこみの増加ために、肝動脈ドラッグ注入に関連してしばしば用いられる。本発明におけるプロドラッグの高い肝臓特異性は、全身的な副作用が新規のプロドラッグによる方法によって同様に最小限になることを示唆している。
【０１７３】
さらに、第１期および第２期の肝臓癌は特に化学療法と放射線療法の両方に対して耐性である。耐性の機構は完全に分かっていないが、急速な代謝および／または化学療法剤の排出につながる肝臓の遺伝子産物の増加によってもたらされるのであろう。さらに、一般に生体異物の代謝と細胞毒性の中間体の生成に関連する肝臓は、本来、これらの中間体による損傷が最小限になるよう多重の保護機構を備えている。例えば、肝臓におけるグルタチオンの細胞内濃度は、他の組織と比較して非常に高く、その結果恐らくタンパク質およびＤＮＡをアルキル化することが可能な中間体が急速な細胞内反応によって解毒化される。したがって、肝臓は、これらの機構のために化学療法剤に対しては耐性であり、成功させるためには通常の濃度よりも高い腫瘍崩壊剤の濃度を必要とするであろう。より高い肝臓濃度は、一般に肝臓外毒性をもたらすドラッグのより高い投与量を必要とする。
【０１７４】
本発明のプロドラッグは、様々な機構によって、生物学的に活性なドラッグのより高いレベルが可能であるため、これらの癌に有効である。例えば、高い肝臓特異性は、投与量が制限される肝臓外の副作用が減少しているため、より高い用量が可能である。第２に、プロドラッグの持続的な送達は、持続する期間にわたって維持される高いドラッグレベルが可能である。第３に、ある場合には、親ドラッグは標的細胞においてあまりリン酸化されない。本発明のプロドラッグは、この過程を回避し、ある場合においてさらに生物学的に活性な物質に代謝されるホスフェート（ホスホネート）を送達することができる。最後に、治療指数は、さらにＣＹＰ誘導物質（例えば、リファンピシン、グルココルチコイド、フェノバルビタール、エリスロマイシン）の同時投与によってさらに増大させることができることもある。肝臓における変換を増大させることができ、それによって投与量を増加させることなく高いレベルの生物学的に活性なドラッグが可能である（実施例ＪおよびＯ）。本プロドラッグのこれらの利点によって、第１期および第２期の肝臓癌並びに他の肝臓疾患等の肝臓疾患の治療が功を奏する。
【０１７５】
副生成物の毒性
本発明のプロドラッグは、非毒性であるかまたは急速に解毒される副生成物を生じるのでさらに有用である。本発明のプロドラッグによって生じる副生成物のいくつかは臨床で使用されると期待される用量、特に副生成物（例えばフェノール）が肝臓で生じる用量で毒性が高いと考えられる。本発明のプロドラッグによって生じる他の副生成物、例えばアリールビニルケトン、はアルキル化剤と考えられ、したがって細胞毒性もしくは遺伝毒性のいずれかまたはその両方を生じ得る。しかし、これらの毒性は、１）副生成物がプロドラッグ活性化の部位でまたはその近くで産生する、および２）天然の防御機構が副生成物産生の部位に存在し、その複製生物を完全に解毒することが可能であるため、肝臓において活性化されるプロドラッグが除去される。その副生成物の酸化、還元または変換（例えばスルホン化）につながる反応を含む他の機構はさらに、解毒において役立つ。
【０１７６】
プロドラッグ副生成物に由来する細胞を保護すると考えられる１次防御系は、天然のチオールグルタチオンおよび恐らくグルタチオンの求電子試薬への付加を触媒する酵素、即ちグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を含む。グルタチオンとＧＳＴは、有機化合物のＣＹｐ−介在の酸化の間に産生した反応性の高い酸素種から細胞を保護する天然の防御系の一部としてＣＹＰにより常に同時発現する。ＣＹＰはある種の細胞において発現して有機化合物を酸化する。ＣＹＰはある種の細胞において発現して（主として肝細胞）有機化合物を酸化し、それによりそれらの身体からの除去が補助される。組織分布試験は、ＣＹＰ３Ａ４並びに他の大部分のＰ４５０が肝臓において次いで小腸において高度に発現する。その他の組織はすべて肝臓ＣＹＰ３Ａ４活性の＜＜２％である。同様に、グルタチオンレベルの解析は、肝臓（１０ｍＭ）および胃腸管が、他の組織によりもほぼ１０００倍高いグルタチオンレベルを示している。グルタチオンのこれらのレベルは、病的な肝臓においてさえ依然として高い。
【０１７７】
グルタチオンはビニルケトン、およびいずれかのアルキル化剤と急速に反応して抱合体を生じ、その後胆汁または腎臓によって排泄される。グルタチオンは、核酸の塩基におけるヘテロ原子よりもずっと望ましい求電子試薬であり、タンパク質の表面に存在するチオール基よりもずっと高濃度で存在するので、他のタンパク質または核酸の細胞におけるアルキル化は、細胞内においてグルタチオンによるものではないと思われる。アクロレイン等の副生成物は、これらのプロドラッグが肝細胞内の副生成物を生じるそれらの能力によって阻止され得る膀胱毒性をもたらす。実施例ＭおよびＮは副生成物の毒性を処置するのに有用であり、この副生成物は肝臓内で肝臓グルタチオンレベル正常値の＞２０％をできるだけ長く維持するとは思われない。グルタチオンは肝細胞並びにインビボで容易に測定される（実施例ＭおよびＮ）。細胞毒性は、トリパンブルーを用い、肝臓酵素の上昇を解析することによって細胞の生存性を試験することにより肝細胞において検出される。インビトロでは、肝臓毒性を、血漿における肝臓酵素の上昇によって評価する。
【０１７８】
非変異原性プロドラッグ
本発明のプロドラッグは、最初の酸化、次いでβ脱離反応が関与する仮定される機構によって高められる。時として、例えば、式ＶＩおよび式ＶＩＩで示されるある種のプロドラッグは、反応の副生成物がα,β−不飽和カルボニル化合物、例えばＶ＝Ｐｈ、Ｚ，ＷでありＷ'＝Ｈである、そのプロドラッグに対するビニルフェニルケトンである。化合物はMichael受容体として作用し、Michael付加によって求電子試薬と反応する。突然変異誘発により、いくつかのα−β−不飽和ケトンが観察され、Michael付加体からある種の毒性が生じる（例えば、アクロレイン生成物膀胱毒性）。これらの活性が式ＶＩの化合物の使用を制限する程度は、毒性の重篤度と示された疾患に依存する。
【０１７９】
非毒性をもたらすプロドラッグおよび非変異原性の副生成物は、慢性疾患の処置に特に好ましい（例えば糖尿病）。化合物の変異原特性を予測することは困難な場合が多い。例えば、培養したＬ５１７９Ｙマウスリンパ腫細胞（Dearfield et al., Mutagenesis 4, 381-393 (1989)）における増加した染色体異常および小核頻度によって示されるように、数多くのアクリレートが陽性の変異原性応答を生じることが示されている。しかし、他のアクリレートは、この試験（J. Tox. Envir. Health, 34, 279-296 (1991)）並びにAmesテストおよびＣＨＯアッセイでは陰性である。ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｈｇｐｒｔ）の座において新たに誘導された突然変異を測定する（Mutagenesis 6, 77-85 (1991)）。フェニルビニルケトンは、培養したラット胚において催奇活性を欠いており、変異原性でなく高い毒性も有しないであろう（Teratology 39, 31-37 (1989)）。
【０１８０】
変異原性および毒性はあまり予想される特性でないため、式Ｉで示される非変異原性のプロドラッグおよびそれらの関連する副生成物は、よく知られたインビトロおよびインビボアッセイを行なうことによって容易に同定することができる。例えば、化合物は、Ａｍｅｓ試験、Kl.neumoniaeの変動試験、S.typhimuriumを用いる前進突然変異アッセイ、Saccharomyces cerevisiaeにおける染色体喪失アッセイ、またはSaccharomyces cerevisiaeにおけるＤ３組換え原性アッセイなどの非哺乳類細胞アッセイにおいて試験することができる。化合物は、マウスリンパ腫細胞アッセイ（Ｌ５１７８Ｙマウスリンパ腫細胞のＴＫ＋／−ヘテロ接合体）、チャイニーズハムスター卵巣細胞におけるアッセイ（例えば、ＣＨＯ／ＨＧＰＲＴアッセイ）、およびラット肝臓細胞系におけるアッセイ（例えば、ＲＬ１またはＲＬ４）等、哺乳類細胞においても試験することができる。これらアッセイのそれぞれは、これらプロドラッグに特に重要であろう活性化物質（例えば肝臓ミクロソーム）の存在下に行なうことができる。例えば、これらアッセイを肝臓ミクロソームの存在下で行なうことにより、プロドラッグは、フェノールまたはビニルケトンなどの生成物を生じる。副生成物の変異原性を直接またはプロドラッグとして結果を親ドラッグ単独と比較して測定する。肝細胞系におけるアッセイは、これら細胞が、Michael受容体によって引き起こされる損傷から細胞を保護する高いグルタチオンレベルと、化合物を解毒するために用いられる細胞内酵素のより高いレベルを有するため、本発明の好ましい態様である。例えば、肝臓には、いくつかの副生成物についてカルボニルの還元をもたらし得る還元酵素が含まれている。
【０１８１】
種々の終点は細胞増殖、コロニーサイズ、遺伝子突然変異、小核形成、有糸分裂染色体喪失、不定期ＤＮＡ合成、ＤＮＡ伸張、ＤＮＡ分解、形態変換および相対的有糸分裂活性(relative mitotic activity)を含めて観測する。
【０１８２】
化合物の変異原性および発癌性を評価するインビボアッセイも知られている。例えば、非哺乳類インビボアッセイには、ショウジョウバエ伴性劣性致死アッセイがある。哺乳類インビボアッセイの例としては、ラット骨髄細胞遺伝学アッセイ、ラット胚アッセイ並びに動物奇形学および発癌性アッセイがある。
【０１８３】
キナーゼバイパス
ヌクレオシドはしばしば細胞中においてモノ−、ジ−およびトリ−ホスフェートに変換され、後者は通常、生物学的に活性な種として作用する。時として、トリホスフェートは標的酵素の強力な阻害剤であるが、ヌクレオシド投与では十分に高い生物学的に活性なホスフェートレベルが達成されないため、インビボにおいて貧弱〜ささやかな効力しか達成されない。多くの場合、高いホスフェートレベルを達成できないのは、ヌクレオシドがリン酸化反応を触媒する酵素の基質として不十分だからである。他の理由としては、標的細胞中のリン酸化酵素の天然レベルが低いことが挙げられ、それは天然の発現レベルが低いことを意味する、または酵素の下方制御をもたらすその薬剤若しくは他の薬剤を用いる慢性的な治療の結果であり得る。場合によっては、薬剤耐性はヌクレオシドモノホスフェート合成に寄与する酵素(例えば、チミジル酸キナーゼのようなキナーゼ、または５−フルオロ−２'−デオキシＵＭＰの生合成経路中の酵素)活性が減少する結果として生じる。他の場合には、ヌクレオシド輸送体が下方制御されて低い細胞内ヌクレオシド薬剤濃度につながり、その結果、リン酸化に利用できるヌクレオシドが不足する。同様に、多剤耐性遺伝子産物の発現増加によって、癌細胞からのヌクレオシド輸出が増加すると考えられる。プロドラッグの投与は親ドラッグに対する耐性の原因となる経路を回避する異なる経路によってモノリン酸を生じる。このように、本発明のプロドラッグは親ドラッグに対して耐性である細胞において治療効果を達成する。モノまたはトリホスフェートアナログとしてのドラッグの幾つかは、標的酵素(例えば、ＨＢＶポリメラーゼ)の効力の高い阻害剤であるが、リン酸化が乏しいのために細胞中またはインビボにおける効果は低い。(実施例Ｈ)本プロドラッグによる方法によって、モノホスフェートが供給されるため、これらの薬剤はとりわけ好ましいドラッグである。しばしば、ヌクレオシドの最初のリン酸化は律速段階にも関わらず、哺乳類キナーゼによるモノホスフェートのトリホスフェートへのリン酸化は、急速かつ構造変化に対して比較的非感受性である。
【０１８４】
ある種の癌の処置のための環置換シクロホスファミドアナログ
シクロホスファミド(ＣＰＡ)およびイホスファミド(ＩＦ)は、一般に腫瘍細胞崩壊剤に使用され、肝臓におけるＰ４５０機構(ＣＹＰ２Ｂ６およびＣＹＰ３Ａ４)を介する、中間体７への初期活性化を受ける。この中間体は開環種(８)と平衡状態で存在し、それはアルキル化マスタード９およびアクロレインを生じるβ−脱離反応を包む様々な代謝経路のための、最後から２番目の中間体である。後の一連の反応は非酵素反応により起こり、中性ｐＨで、約３０〜４０分のｔ１/２で進行すると考えられる。
【化４９】
0005063837.tif 000019
【０１８５】
中間体８および９は相対的に親油性で、かつ寿命が長い。結果として、活性化されたＣＰＡのかなりの割合が肝臓をすり抜け、全身循環に入る。腫瘍細胞崩壊活性およびドラッグに関連する副作用は、肝臓外細胞の破壊による。腫瘍細胞による中間体の取り込みおよびマスタードの産生は、細胞増殖の阻害をもたらす。同様に、骨髄制御および白血球の減少は、肝臓外細胞の増殖の阻害から生じるＣＰＡ治療に関連する副作用である。
【０１８６】
ＣＰＡおよびＩＦは、例えばレトロウィルスおよび他の周知の遺伝子治療法、並びに癌の処置のためにシトクロムＰ４５０を発現するよう処理を施された移植細胞をによる、シトクロムＰ４５０の人為的な誘導のための有用な方法とともに研究されている。その期待は、腫瘍細胞付近で、ＣＹＰを発現する細胞を用いてより局所的でそれゆえ、潜在的により有益な治療が可能となることである。本発明のプロドラッグは、活性な腫瘍細胞崩壊作用物質をより局所的に生じる、即ちＰ４５０活性を含む組織からあまり出ないために、原発性および続発性肝臓癌並びにＰ４５０活性の増大を伴う腫瘍を処置するのに有利である。強力な局所効果は：(１)急速かつ不可逆な開環反応；および(２) 負に荷電(ＭＰ(Ｏ)(ＮＨＲ６)Ｏ−)され得る結果、受動拡散では細胞を出ることができない開環産物を包含するプロドラッグ分開中間体の相違によるものである。
【０１８７】
親ドラッグの種類
様々な親ドラッグは、本発明のプロドラッグ方法論の恩恵を受けることができる。リン酸化され生物学的に活性なドラッグになるＭＨ型の親ドラッグは、本発明のプロドラッグ方法論における使用によく適している。リン酸化を経て生物学的に活性になる周知のＭＨ型親ドラッグはたくさんある。例えば、抗腫瘍および抗ウィルスヌクレオシドは、リン酸化によって活性化されることがよく知られている。これらの化合物は、ＬｄＣ、ＬｄＴ、ａｒａＡ；ＡＺＴ；ｄ４Ｔ；ｄｄＩ；ｄｄＡ；ｄｄＣ；Ｌ−ｄｄＣ；Ｌ  ＦｄｄＣ；Ｌ−ｄ４Ｃ；Ｌ−Ｆｄ４Ｃ；３ＴＣ；リバビリン；５−フルオロ−２'−デオキシウリジン；ＦＩＡＵ；ＦＩＡＣ；ＢＨＣＧ；Ｌ  ＦＭＡＵ；ＢｖａｒａＵ；Ｅ−５−(２−ブロモビニル−２'デオキシウリジン；ＴＦＴ；５−プロピニル−１  アラビノシルウラシル；ＣＤＧ；ＤＡＰＤ；ＦＤＯＣ；ｄ４Ｃ；ＤＸＧ；ＦＥＡＵ；ＦＬＧ；ＦＬＴ；ＦＴＣ；５−イル−炭素環２'デオキシグアノシン；オキセタノシン(oxetanocin)Ａ；オキセタノシンＧ；シクロブタＡ,シクロブタＧ；ｄＦｄＣ；araＣ；ブロモデオキシウリジン；ＩＤＵ；ＣｄＡ；ＦａｒａＡ；コホルマイシン,２'−デオキシコホルマイシン；ａｒａＴ；チアゾフリン；ｄｄＡＰＲ；９−(アラビノフラノシル)−２,６ジアミノプリン；９−(２'−デオキシリボフラノシル)−２,６ジアミノプリン；９−(２'−デオキシ２'フルオロリボフラノシル)−２,６−ジアミノプリン；９(アラビノフラノシル)グアニン；９−(２'デオキシリボフラノシル)グアニン；９−(２'−デオキシ２'フルオロリボフラノシル)グアニン；ＦＭｄＣ；５,６ジヒドロ−５−アザシチジン；５−アザシチジン；５−アザ２'デオキシシチジン；ＡＩＣＡＲ；ＡＣＶ,ＧＣＶ；ペンシクロビル；(Ｒ)−９−(３,４ジヒドロキシブチル)グアニン；シタレン；ＰＭＥＡ,ＰＭＥＤＡＰ,ＨＰＭＰＣ,ＨＰＭＰＡ,ＦＰＭＰＡおよびＰＭＰＡを包含する。
【０１８８】
１つの好ましい態様において、式Ｉの化合物は、ＭＨがａｒａＡまたは５−フルオロ−２'−デオキシウリジンである化合物を含まない。
【０１８９】
好ましい抗ウィルス剤には：
ＬｄＣ,ＬｄＴ,ａｒａＡ；ＡＺＴ；ｄ４Ｔ；ｄｄＩ；ｄｄＡ；ｄｄＣ；Ｌ−ｄｄＣ；Ｌ  ＦｄｄＣ；Ｌ−ｄ４Ｃ；Ｌ−Ｆｄ４Ｃ；３ＴＣ；リバビリン；ＦＩＡＵ；ＦＩＡＣ；ＢＨＣＧ；Ｌ−ＦＭＡＵ；ＢｖａｒａＵ；Ｅ−５−(２ブロモビニル−２'−デオキシウリジン；ＴＦＴ；５−プロピニル  １−アラビノシルウラシル；ＣＤＧ；ＤＡＰＤ；ＦＤＯＣ；ｄ４Ｃ；ＤＸＧ；ＦＥＡＵ；ＦＬＧ；ＦＬＴ；ＦＴＣ；５−イル−炭素環２'デオキシグアノシン；シタレン；オキセタノシンＡ；オキセタノシンＧ；シクロブタＡ,シクロブタＧ；ブロモデオキシウリジン；ＩＤＵ；ａｒａＴ；チアゾフリン；ｄｄＡＰＲ；９−(アラビノフラノシル)−２,６ジアミノプリン；９−(２'−デオキシリボフラノシル
)−２,６ジアミノプリン；９−(２'−デオキシ２'フルオロリボフラノシル)−２,６−ジアミノプリン；９(アラビノフラノシル)グアニン；９−(２'デオキシリボフラノシル)グアニン；９−(２'−デオキシ２'フルオロリボフラノシル)グアニン；ＦＭｄＣ；５,６ジヒドロ−５−アザシチジン；５−アザシチジン；５−アザ２'デオキシシチジン；ＡＣＶ,ＧＣＶ；ペンシクロビル；(Ｒ)９−(３,４−ジヒドロキシブチル)グアニン；シタレン；ＰＭＥＡ；ＰＭＥＤＡＰ；ＨＰＭＰＣ；ＨＰＭＰＡ；ＦＰＭＰＡ；ＰＭＰＡ；ホスカルネット；およびホスホノギ酸が含まれる。
【０１９０】
１つの好ましい態様において、ＭＨはａｒａＡを含まない。
【０１９１】
さらに好ましい抗ウィルス薬は：
ａｒａＡ；ＡＺＴ；ｄ４Ｔ；ｄｄＩ；ｄｄＡ；ｄｄＣ；Ｌ−ｄｄＣ；Ｌ  ＦｄｄＣ；Ｌ−ｄ４Ｃ；Ｌ−Ｆｄ４Ｃ；３ＴＣ；リバビリン；ＦＩＡＵ；ＦＩＡＣ；Ｌ−ＦＭＡＵ；ＴＦＴ；ＣＤＧ；ＤＡＰＤ；ＦＤＯＣ；ｄ４Ｃ；ＤＸＧ；ＦＥＡＵ；ＦＬＧ；ＦＬＴ；ＦＴＣ；５−イル炭素環２'デオキシグアノシン；シタレン；オキセタノシンＡ；オキセタノシンＧ；シクロブタＡ,シクロブタＧ；ａｒａＴ；ＡＣＶ,ＧＣＶ；ペンシクロビル；ＰＭＥＡ；ＰＭＥＤＡＰ；ＨＰＭＰＣ；ＨＰＭＰＡ；ＰＭＰＡ；ホスカルネットを包含する。
【０１９２】
１つの好ましい態様において、ＭＨはａｒａＡを含まない。
【０１９３】
最も好ましい抗ウィルス剤には：
３ＴＣ；
ペンシクロビル；
ＦＭＡＵ；
ＤＡＰＤ；
ＦＴＣ；
シクロブタＧ；
ＡＣＶ；
ＧＣＶ；
ＰＭＥＡ；
ＨＰＭＰＡ；
５−イル炭素環２'デオキシグアノシン；
リバビリンが含まれる。
【０１９４】
好ましい抗癌剤には：
ｄＦｄＣ；２',２'−ジフルオロデオキシシチジン(ゲンシタビンgemcitabine)
ａｒａＣ；アラビノシルシトシン(シタラビン)
Ｆ−ａｒａ−Ａ；２−フルオロアラビノシルアデノシン(フルダラビン)；および
ＣｄＡ；２−クロロデオキシアデノシン(クラドリビン)
２'−デオキシ−５−ヨードウリジン
コホルマイシン
２'−デオキシコホルマイシン
チアゾフリン
リバビリン
５−フルオロ−２'デオキシウリジン
９−(アラビノフラノシル)−２,６−ジアミノプリン
９−(２'−デオキシリボフラノシル)−２,６−ジアミノプリン
９−(２'−デオキシ−２'−フルオロリボフラノシル)−２,６−ジアミノプリン
９−(アラビノフラノシル)−グアニン
９−(２'−デオキシリボフラノシル)−グアニン
９−(２'−デオキシ２'−フルオロリボフラノシル)−グアニン
が含まれる。
【０１９５】
１つの好ましい態様において、ＭＨは５−フルオロ−２'−デオキシウリジンを含まない。
【０１９６】
１つの態様において、式Ｉの化合物を糖尿病処置に用いないことは好ましい。
【０１９７】
より好ましい抗癌剤には：
ｄＦｄＣ；
ａｒａＣ；
ＦａｒａＡ；
ＣｄＡ；
５−フルオロ２'デオキシウリジン；
ＧＣＶ；
５,６−ジヒドロ−５−アザシチジン；
５−アザシチジン；および
５−アザ−２'−デオキシシチジンが含まれる。
【０１９８】
１つの好ましい態様において、ＭＨは５−フルオロ−２'−デオキシウリジンを含まない。
【０１９９】
ホスホン酸(Ｃ−ＰＯ３２−)部分を含むドラッグは、本発明において有利に使用される適当な親ドラッグでもある。これらのドラッグはＭＰＯ３２−,ＭＰ２Ｏ６３−またはＭＰ３Ｏ９４−型のいずれでも生物学的に活性である。このプロドラッグ伝達法にも適したホスホン酸には、例えば抗高血圧、抗癌または抗−炎症作用剤に有用なプロテアーゼ阻害剤が含まれる。本新規プロドラッグ方法論はＮＥＰ阻害剤(DeLambert et al., J. Med. Chem. 37: 498 (1994))、ＡＣＥ阻害剤、エンドセリン変換酵素阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、腫瘍転移をに関わる金属プロテアーゼの阻害剤およびコラゲナーゼの阻害剤(Bird et al., J. Med. Chem. 37: 158-169 (1994))に適用し得る。さらに、ホスホン酸はＮＭＤＡアンタゴニストとして有用であり、発作、頭部外傷、疼痛およびてんかんを含む様々な状態の処置に有用である。本プロドラッグストラテジーから恩恵を受け得る他のホスホン酸には、Squibbによって報告されたスクアレン合成を阻害するもの、Hoechstによって報告された免疫調節物質であるもの、Merckによって報告された抗うつ剤であるもの、Ciba-GeigyおよびMarion Merrel Dowによって報告されたプリンヌクレオシドホスホリラーゼの阻害による免疫抑制剤であるもの、およびBristol-Myers Squibb, Gileadによって報告された抗ウィルス剤であるものである。ある種の抗生物質、特にＤ−アラニンラセマーゼ阻害剤およびホスホマイシンおよび関連するアナログのような抗生物質が適当であろう。
【０２００】
以下の化合物およびそれらのアナログは本発明のプロドラッグ方法論に使用することができる：
ＮＥＰ阻害剤
J Med Chem. 1994 Feb 18; 37(4): 498-511中のDeLombaert et al.による(Ｓ)−３−[Ｎ−[２−[(ホスホノメチル)アミノ]−３−(４−ビフェニルイル)プロピオニル]アミノ]プロピオン酸
コラゲナーゼ阻害剤
J Med Chem 1994 Jan 7; 37(1): 158-69中のBird et al.によるＮ,[Ｎ−((Ｒ)−１−ホスホノプロピル(−(Ｓ)−ロイシル]−(Ｓ)−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
アンギオテンシン変換酵素阻害剤
Int J Pept Protein Res 1991 Jul; 38(1): 20-4中のHirayama et al.による(ＩＲ)−１−(Ｎ−(Ｎ−アセチル−Ｌ−イソロイシル)−Ｌ−チロシル)アミノ−２−(４−ヒドロキシフェニル)エチル−ホスホン酸
エンドセリン阻害剤
DeLombaert et al., Biochem Biophys Res Commun 1994 Oct 14; 204(1): 407-12によるＣＧＳ２６３０３
Wallace et al., J Med Chem 1998 Apr 23; 41(9): 1513-23による(Ｓ,Ｓ)−３−シクロへキシル−２−[[５−(２,４−ジフルオロフェニル)−２−[(ホスホノメチル)アミノ]ペンタ−４−イノイル]アミノ]プロピオン酸
(Ｓ,Ｓ)−２−[[５−(２−フルオロフェニル)−２−[(ホスホノメチル)アミノ]ペンタ−４−イノイル]アミノ]−４−メチルペンタン酸
(Ｓ,Ｓ)−２−[[５−(３−フルオロフェニル)−２−[(ホスホノメチル)アミノ]ペンタ−４−イノイル]＋＋＋アミノ]−４−メチルペンタン酸
ＮＭＤＡ/ＡＭＰＡアンタゴニスト
Bioorg Med Chem Lett. 1999 Jan 18; 9(2): 249-54に記載のＮ−ホスホノアルキル−５−アミノメチルキノキサリン−２,３−ジオン類
Eur J Pharmacol 1998 Jun 26; 351(3): 299-305中のBespalov et al.による３−(２−カルボキシピペラジン−４−イル)−１−プロペニル−１−ホスホン酸
[２−(８,９−ジオキソ−２,６−ジアザビシクロ[５.２.０]ノナ−１(７)−エン−２−イル)−エチル]ホスホン酸
Ｄ,Ｌ−(Ｅ)−２−アミノ−４−[３Ｈ]−プロピル−５−ホスホノ−３−ペンテン酸
J Med Chem. 1996 Jan 5; 39(1): 197-206中のDesos et al.による６,７−ジクロロ−２(１Ｈ)−オキソキノリン−３−ホスホン酸
シス−４−(ホスホノメチル)ピペリジン−２−カルボン酸(ＣＧＳ１９７５５)
プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤
[７−(２−アミノ−１,６−ジヒドロ−６−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル)−１,１−ジフルオロへプチル]ホスホン酸および[４−(５−アミノ−６,７−ジヒドロ−７−オキソ−３Ｈ−１,２,３,−トリアゾロ[４,５−ｄ]−ピリミジン−３−イル)ブチル]ホスホン酸
J Med Chem 1995 Mar 17; 38(6): 1005-14中のKelly et al.による[[[５−(２−アミノ−１,６−ジヒドロ−６−オキソ−９Ｈ−プリン−９−イル)ペンチル]ホスフィニコ(phosphinico)]メチル]ホスホン酸
Biochem Pharmacol. 1994 Jul 19; 48(2): 245-52中のWeibel et al.による(２−[２−[(２−アミノ−１,６−ジヒドロ−６−オキソ−９Ｈ−プリン−９−イル)メチル]−フェニル]エテニル)−ホスホン酸
J Med Chem 1994 Apr 15; 37(8): 1109-14中のGuida et al.による９−(３,３−ジメチル−５−ホスホノペンチル)グアニン
アラニンラセマーゼ阻害剤
J Med Chem 1986 Apr; 29(4): 579-81中のVo-Quang et al.によるＤＬ−(１−アミノ−２−プロペニル)ホスホン酸
スクアレン合成阻害剤
Arzneimittelforschung. 1996 Aug; 46(8): 759-62中のAmin et al.による１−ヒドロキシ−３−(メチルペンチルアミノ)−プロピリデン−１,１−ビスホスホン酸
J Med Chem. 1996 Feb 2; 39(3):661-4中のDickson et al.によるＢＭＳ１８８４９４はＢＭＳ１８７７４５のＰＯＭプロドラッグである。
【０２０１】
癌の処置
本発明におけるプロドラッグ法は、癌治療に有利に用いられるいくつかの特徴を含む。既知の抗癌剤の多くは、モノホスフェートへのリン酸化を受け、さらに高い頻度でトリホスフェートに変換されるヌクレオシドである。本プロドラッグストラテジーは、プロドラッグが肝臓の十分な酵素によって開裂される結果、肝外組織と比較して肝臓において活性な代謝物の高いレベルが達成されるため、これらのドラッグ効果を増大させる。その正味の効果はより高い効力および/または治療指数である。場合によって、本プロドラッグストラテジーは、摂取、活性な代謝物の細胞内生合成、モノホスフェートの搬出および代謝に関わる機構を包含する周知の耐性機構を回避することによっても、これらドラッグの効果が増大する。本法に特に従う好ましいドラッグ候補の例には、例えばｄＦｄＣ,ａｒａＣ,Ｆ−ａｒａおよびＣｄＡ並びに５−フルオロ−２'−デオキシウリジン(「５−ＦＵ」)が含まれる。１つの態様において、ＭＨは５−ＦＵではない。
【０２０２】
あるプロドラッグは、細胞にモノホスフェートをある程度蓄積することができる。ある種のモノホスフェート、例えばチミジルシンターゼ(ＴＳ)およびＩＭＰデヒドロゲナーゼの強力な阻害剤であるモノホスフェートは、癌の処置に有用である。ＴＳ阻害剤の幾つかは、肝臓癌の処置において適度に効果的であると報告されている。例えば、５−ＦＵおよび５−ＦｄＵＭＰが効果的である。しかし、これらの薬剤は薬剤耐性および重い副作用が厄介である。後者を避けるために、５−ＦＵアナログは可能な限り高い肝臓レベルを達成させるために、しばしば門動脈を経て送達する。従って、５−ＦｄＵＭＰおよび関連するアナログは、本プロドラッグストラテジーに適した標的である。他のヌクレオシド、例えばリバビリン、チアゾフリンおよびコホルマイシン並びにそれらのアナログも、本プロドラッグストラテジーに適した標的である。
【０２０３】
肝臓癌は、放射線治療に対しても大変耐性である。放射線治療を促進する方法の１つに、放射線感受性増強物質の投与がある。放射線感受性増強物質、例えば２'−デオキシ−５−ヨードウリジンは、本プロドラッグがＰ４５０を含む細胞によってのみ開裂され得るため、本プロドラッグ技術に適したヌクレオシドである。開裂後、そのモノホスフェートはトリホスフェートにさらにリン酸化され、細胞内にトラップされることで細胞を放射線治療に対しより感受性にし得る。
【０２０４】
ウィルス感染症の処置
肝臓に感染し、肝臓障害を引き起こすウィルス、例えば肝炎ウィルス株の処理に有用な薬剤は、効果、副作用および耐性の点において、抗癌ヌクレオシド薬に対して類似の性質を示す。その結果、これらのヌクレオシドのプロドラッグは肝炎の処置に有用であろう。場合によっては、本薬剤は肝炎を既に標的としている(例えば、ａｒａＡ、３ＴＣ、Ｌ−ＦＭＡＵ、ＦＴＣ、ＢＭＳ２００,４７５)。これらの化合物のプロドラッグは、効果を増大させ、治療指数を高め、薬理学的半減期を改善し、および/または薬剤耐性を回避することができる。肝炎以外のウィルス感染症を処置するために用いられる他の薬剤のプロドラッグは、それらの薬剤が好適な抗ウィルス剤(例えば、アシクロビル)であるために、本発明のプロドラッグ投与によっても有用とされ得るが、プロドラッグがウィルスキナーゼによってモノホスホノにリン酸化されるために、他のウィルス感染症に対しても有用とされ得る。そのモノホスフェートは、哺乳類キナーゼによって生物学的に活性なトリホスフェートに変換される。従って、本クランのプロドラッグを用いるモノホスフェート送達は、他のウィルス感染症を処置するのに一般に用いられる薬剤による肝炎の処置を可能にする。
【０２０５】
診断薬の送達のための使用
ヌクレオシド診断薬、例えばＴｃで置換された５Ｈを持つウリジンアナログは、肝臓診断薬として本発明のプロドラッグとして有用である。これらの化合物は最初モノホスフェートへ変換された後、Ｐ４５０活性、特にＣＹＰ３Ａ４活性を含む細胞においてトリホスフェートへ変換される。ほぼ全ての活性が肝臓内に存在するために、このタイプの診断薬は最初に肝臓において代謝され、プロドラッグを代謝する細胞中に蓄積される。従って、ＣＹＰ３Ａ４活性を持たない肝臓腫瘍、または正常な活性のおよそ５０％の活性を有する肝細胞癌のような腫瘍は、正常な肝臓組織から区別し得る。
【０２０６】
ＣＹＰ活性の調節に使用する薬剤
様々な方法を、式Ｉの化合物のインビボ活性を増大させるために使用し得る。例えば、シトクロムＰ４５０(ＣＹＰ)活性を増大させる種々の薬剤が、知られている。増大は遺伝子転写の増大の結果であることが多い。ＣＹＰの４つのファミリー、すなわちＣＹＰ１〜４が、特に誘導されやすい。その称するところによれば、誘導は様々な生体異物によって活性化される受容体を介するようである。例えば、ＣＹＰ１遺伝子の活性化は、多環式芳香族炭化水素によるＡｈ受容体の活性化が関与することが多い。ＣＹＰ２〜４はオーファン核受容体を経て活性化される。データは、核受容体ＣＡＲ(構成的に活性な受容体)がフェノバルビタールＣＹＰ特にＣＹＰ２遺伝子の活性化に寄与することを示唆している。プレグナン核受容体(ＰＸＲ若しくはＰＡＲまたはＳＸＲ)がＣＹＰ３Ａ遺伝子を活性化すると考えられるが、ＰＰＡＲ(ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体)がＣＹＰ４遺伝子活性化に関連する。これら３つの生体異物受容体の全てが肝臓において高度に発現され、それはＰ４５０遺伝子誘導の肝臓特異性の原因となっている。
【０２０７】
ＣＹＰ３遺伝子を誘導することで知られる生体異物には、フェノバルビタール、種々のステロイド剤、例えばデキサメタゾン、抗生物質、例えばリファンピシン、およびプレグネノロン−１６ａカルボニトリル、フェニトイン、カルバマゼピン、フェニルブタゾンなどの化合物を包含する。ＨｅｐＧ２細胞におけるレポーター遺伝子アッセイ(Ogg et al., Xenobiotica 29, 269-279 (1999))を含む、Ｐ４５０ｓを誘導する生体異物の同定が可能な種々の方法が知られている。転写後の段階で、ｍＲＮＡまたはタンパク質安定化のいずれかにより作用するＣＹＰ３Ａサブファミリーの他の誘導物質、例えばクロトリマゾール、ＴＡおよびエリスロマイシンが知られている。ＣＹＰを誘導することが知られ、またはインビトロアッセイにおいて同定された化合物は、インビボにおいて次にＣＹＰ活性を高めるために使用される。例えば、ＣＹＰ活性は、事前にＣＹＰモジュレーターで処置したラットにおいて、例えば最適な前処置期間、投与量および投与回数を決定するためある一定期間に渡って肝臓ミクロソームを評価することにより観察される。ＣＹＰ活性、とりわけプロドラッグ(例えば、ＣＹＰ３Ａ４)の活性化するに寄与するＣＹＰ活性が増大したラットを、次に式Ｉの化合物で処置する。増大したＣＹＰ活性は、その後増大したプロドラッグ変換と、肝臓特異性につながり得る。例えば、増大したシクロホスファミド代謝が、フェノバルビタールを用いた前処理によって見出された(Yu et al., J. Pharm. Exp. Ther. 288, 928-937 (1999))。
【０２０８】
場合によって、増大したＣＹＰ活性が望ましくない薬物代謝につながり得る。例えば、プロドラッグ活性化が関与しない増大したＣＹＰ活性は、薬物代謝の増大をもたらし、その結果効果が低下し得る。加えて、他組織における増大したＣＹＰ活性、例えば胃腸管におけるＣＹＰ３Ａ４は、プロドラッグ吸収および肝臓のドラッグレベルの低下をもたらし得る。ＣＹＰ活性の阻害剤は望ましくない薬物代謝を最小限にするのに有用であろうと知られている。例えば、グレープフルーツジュースが胃腸のＣＹＰ３Ａ４を不活性化し、ＣＹＰ３Ａ４によって代謝される多量の薬物の吸収の増大をもたらすことが知られている。また、プロドラッグ開裂にとって重要なＣＹＰ活性を維持しながら、望ましくない薬物代謝を減じさせるのに有用であろうＣＹＰ阻害剤が多くのＣＹＰサブファミリーについて知られている。例えば、ＣＹＰ３Ａ阻害剤ＴＡＯが、抗腫瘍活性に寄与しない毒性の代謝物の形成を低下させるように、インビボでのシクロホスファミド代謝の調節に使用された。
【０２０９】
患者Ｐ４５０活性を観測する方法
ＣＹＰ活性は、人によってかなりの相異を示すことが知られている。その幅は、５から２０倍であるが、たいていの人は３倍の範囲内にある。肝疾患を患っている人(３０−５０％)または高齢者(２５−５０％)ではある程度の減少がみられる。性別による差は、さらに少ない(＜２５％)。個人のＣＹＰ活性を表現型化(phenotyping)する方法は周知であり、ＣＹＰ活性を調節する薬物を投与すべき人を予測するのに有用とされる。回避的(evasive)な方法には肝臓生検がある。非回避的(nonevasive)な方法は、放射標識したエリスロマイシン(ｉｖ)のＣＹＰ３Ａ媒介Ｎ‐脱メチル化反応から生じる１４ＣＯ２の蒸散に基づく「エリスロマイシン呼吸テスト」を含め、報告されている(Watkins, Pharmacogenetics 4, 171-184 (1994))。
【０２１０】
遺伝子治療
正常に発現しなくなった酵素をコードする腫瘍細胞遺伝子への導入は、抗癌化学療法の治療効果を増大させる新たな治療方法を意味する。その一般的なストラテジーは、抗癌剤のプロドラッグの分解を触媒する酵素の発現の結果、腫瘍塊中またはその付近に位置させ、その他の場所への広がりを制限する。そのストラテジーは、ＨＳＶ−ＴＫ遺伝子を使用し、トランスフェクトした細胞において特に発現されるチミジレートキナーゼが、ガンシクロビルをモノホスフェートに活性化した後、他のキナーゼによって腫瘍細胞に対して致死的なトリホスフェートに変換されることで実証されている。同様のストラテジーでは、５−フルオロウラシルから５−フルオロシトシンに変換する細菌性シトシンデアミナーゼ遺伝子を使用する。他の遺伝子にはカルボキシペプチダーゼＧ２、ニトロ還元酵素、プリンヌクレオシドリン酸化などが包まれると考えられる。加えて、ＣＹＰ遺伝子輸送は、ＣＹＰによって活性化されることが知られている薬剤の２つであるシクロホスファミドおよびイホスファミドの化学療法効果を増大させる方法として研究されている。例えば、ヒト乳癌細胞をＣＹＰ２Ｂ１遺伝子でトランスフェクションすることによって感受性にした(Chem et al., Cancer Research, 56, 1331 1340 (1996))。ＨＳＶ−ＴＫ遺伝子ストラテジーに対する本ストラテジーの利点は、ＣＹＰが触媒する酸化の生成物が腫瘍細胞の外へ速やかに拡散して付近の細胞内へ入るということである。ＨＳ−ＶＴＫストラテジーのモノホスフェート産物とは対照的に、本生産物は細胞同士接触していない、細胞に入ることができるので、さらに広範囲な腫瘍致死効果をもたらす(Chen および Waxman, Cancer Research, 55, 581-589 (1995))。
【０２１１】
プロドラッグ開裂に特異的に関わるＣＹＰをコードする遺伝子を導入する遺伝子治療を用いることで、式Ｉの化合物をさらに効果的にすることができる。プロドラッグを分解する特異的なＣＹＰは、以下の工程：１)ヒトミクロソームを用いてプロドラッグ開裂を実証し；２)様々なサブファミリー特異的な誘導物質で誘導(例えば、ＣＹＰ３酵素は、種々のステロイド、例えばデキサメタゾン、抗生物質、例えばリファンピシン、およびプレグネノロン−１６ａカルボニトリル、フェニトイン、カルバマゼピン、フェニルブタゾンなどの化合物で誘導される)したミクロソームで活性を比較することでサブファミリーを分類し、；３) 既知のＣＹＰサブファミリー特異的阻害剤(例えば、トレアンドマイシン、エリスロマイシン、ケトコナゾールおよびゲストデン(gestodene))を使用すること、および/または中和抗体を使用することにより、プロドラッグ活性化に寄与するＣＹＰまたはＣＹＰｓを同定し、；４)組換え酵素による回転率を実証することによりＣＹＰサブファミリーを確認する：の幾つか、または全てを用いて容易に決定される。
【０２１２】
遺伝子は、適当なベクター(例えば、レトロウィルスベクター、アデノウィルスベクター)の使用、または直接ＤＮＡを注入することにより腫瘍に導入する。Ｐ４５０活性は、Ｐ４５０を発現するように処理を施した細胞を使用して、腫瘍塊中へ、またはその付近に導入することもできる。好ましいのは被包性の細胞である(例えば、Lohr et al., Gene Therapy 5: 1070 (1998))。その後、式Ｉの化合物は腫瘍においてＣＹＰ活性が有意に増大したのち導入する。
【０２１３】
とりわけ好ましいのは、細胞および組織、特に肝細胞および肝臓において、実施例ＧおよびＪに記載の手順を用いて、肝細胞において細胞内の薬物代謝物の測定によって示されるように、親ホスフェート(ホスホネート)に変換される本発明で開示されるプロドラッグである。
【０２１４】
好ましい化合物
本発明の化合物は、式Ｉ：
【化５０】
0005063837.tif 000020
によって表されるようなある種のホスフェート(ホスホネート)の置換された６員環１,３プロパンプロドラッグである。
［式中、
Ｖ、Ｗ、およびＷ'は、−Ｈ、アルキル、アラルキル、脂環式、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、１−アルケニルおよび１−アルキニルからなる群から独立に選択されるか；
ＶとＺが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して結合して５〜７個の環の原子を含む環基を形成し、場合により１個のへテロ原子が、リンに結合した両方のＹ基から３つの原子である炭素原子に結合したヒドロキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、またはアリールオキシカルボニルオキシで置換されているか；
ＶとＺが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して結合して、場合により１個のヘテロ原子を含む環基を形成し、該環基がＶに隣接したＹに対してβおよびγ位でアリール基に縮合しているか；
ＶとＷが一緒になってさらなる３個の炭素原子を介して結合して、６個の炭素原子を含み、リンに結合したＹにから３つの原子である該さらなる炭素原子の１つに結合した、ヒドロキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アルキルチオカルボニルオキシおよびアリールオキシカルボニルオキシからなる群から選ばれる１つの置換基で置換された、場合により置換された環基を形成するか；
ＺとＷが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して結合して、場合により１個のヘテロ原子を含む環基を形成し、Ｖがアリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、または置換されたヘテロアリール環基でなければならないか；
ＷとＷ'が一緒になってさらなる２〜５個の原子を介して結合して、場合により０〜２個のヘテロ原子を含む環基を形成し、Ｖがアリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、または置換されたヘテロアリールがでなければならず；
Ｚは、−ＣＨＲ２ＯH、−ＣＨＲ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、−ＣＨＲ２ＯＣ(Ｓ）Ｒ３、−ＣＨＲ２ＯＣ(Ｓ）ＯＲ３、−ＣＨＲ２ＯＣ（Ｏ）ＳＲ３、−ＣＨＲ２ＯＣＯ２Ｒ３、−ＯＲ２、−ＳＲ２、−ＣＨＲ２Ｎ３、−ＣＨ２アリール、−ＣＨ（アリール）ＯH、−ＣＨ(ＣＨ＝ＣＲ２２）ＯH、−ＣＨ(Ｃ≡ＣＲ２）ＯH、−Ｒ２、−ＮＲ２２、−ＯＣＯＲ３、−ＯＣＯ２Ｒ３、−ＳＣＯＲ３、−ＳＣＯ２Ｒ３、−ＮＨＣＯＲ２、−ＮＨＣＯ２Ｒ３、−ＣＨ２ＮＨアリール、−(ＣＨ２）ｐ−Ｏ１２および−(ＣＨ２）ｐ−ＳＲ１２からなる群から選ばれ；
ｐは２または３の整数である；
但し、
ａ）Ｖ、Ｚ、Ｗ、Ｗ'のすべてが−Ｈではなく；
ｂ）Ｚが−Ｒ２であるとき、Ｖ、Ｗ、およびＷ'の少なくとも１つが−Ｈ、アルキル、アラルキルまたは脂環式でない；
Ｒ２は、Ｒ３および−Ｈからなる群から選ばれ；
Ｒ３は、アルキル、アリール、脂環式およびアラルキルからなる群から選ばれ；
Ｒ６は、−Ｈ、および低級アルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシカルボニルオキシアルキルおよび低級アシルからなる群から選択され；
Ｒ１２は−Ｈおよび低級アシルからなる群から選ばれ；
各Ｙは、−Ｏ−、−ＮＲ６−からなる群から独立に選ばれるが、少なくとも１つのＹが−ＮＲ６−であり；
ＭはＰＯ３２−、Ｐ２Ｏ６３−、Ｐ３Ｏ９４−またはＰ(Ｏ）(ＮＨＲ６）Ｏ−に結合した基から選択され、生物学的に活性な物質であるがＦＢＰアーゼ阻害物質ではなく、炭素、酸素、硫黄または窒素原子を介して式Ｉのリンに結合し；
但し、
１）Ｍは、−ＮＨ(低級アルキル）、−Ｎ(低級アルキル）２、−ＮＨ(低級アルキルハライド）、−Ｎ(低級アルキルハライド）２、または−Ｎ(低級アルキル）（低級アルキルハライド）ではなく；
２）Ｒ６は低級アルキルハライドではない］
で示される化合物およびその製薬的に許容し得るプロドラッグおよび塩。
【０２１５】
一般に、式ＩおよびＸの好ましい置換基V、Z、W、およびW’は、以下の特性の１またはそれ以上を示すように選択する：
（１）酸化反応の増大、なぜならばこの反応は律速段階でありドラッグ除去過程に匹敵するであろうからである；
（２）水溶液中および他の非ｐ４５０酵素の存在下での安定性の増大；
（３）細胞浸透の増大、例えば、両特性とも経口バイオアベイラビリティー並びに細胞浸透を制限し得るので置換基は荷電していないまたは高分子量でない；
（4）１またはそれ以上の特性を有する開環生成物の生成による最初の酸化の後のβ脱離反応の促進：
ａ）再閉環しない；
ｂ）限定的な共有結合性水和を受ける；
ｃ）プロトン除去における補助によるβ脱離の促進；
ｄ）安定な付加体を形成する付加反応の妨害、例えばチオールの最初のヒドロキシル化された生成物または開環後のカルボニルへの求核付加；および
ｅ）反応中間体の代謝の制限（例えば開環したケトン）；
（５）１またはそれ以上の以下の特性を有する非毒性および非突然変異誘発性の副生成物の誘導。両特性は、Michael付加、反応を制限する置換基を用いることによって最小限にすることができる、例えば
ａ）二重結合の分極を減少させる電子供与性のＺ基
ｂ）β炭素への求核付加を立体的にブロックするＷ基
ｃ）再互変異性化（エノール→ケト）または加水分解（例えばエナミン）のいずれかを介して脱離反応後の二重結合を脱離するＺ基
ｄ）α、β−不飽和ケトンに付加して環を形成する基を含むＶ基；
ｅ）二重結合へのMichael付加により安定な環を形成するＺ基；および
ｆ）以下の特性の１またはそれ以上を生じることによる副生成物の解毒化を増強する基
（i）肝臓への限局；および
（ii）解毒反応に対して感受性にする（例えばケトン還元）；および
（６）薬学的に活性な生成物が製造可能である。
【０２１６】
適当なアルキル基は１〜約２０個の炭素原子を有する基を含む。適当なアリール基は１〜約２０個の炭素原子を有する基を含む。適当なアラルキル基は２〜約２１個の炭素原子を有する基を含む。適当なアシルオキシ基は１〜約２０個の炭素原子を有する基を含む。.適当なアルキレン基は１〜約２０個の炭素原子を有する基を含む。.適当な脂環式基は３〜約２０個の炭素原子を有する基を含む。適当なヘテロアリール基は１〜約２０個の炭素原子を有し、好ましくは窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１〜４個のへテロ原子を有する基を含む。適当なヘテロ脂環式基は２〜約２０個の炭素原子と好ましくは窒素、酸素、リン、および硫黄から独立して選択される１〜５個のヘテロ原子を有する基を含む。
【０２１７】
式Ｉの化合物において、１つのＹが−Ｏ−であり、かつ１つのＹが−ＮＲ６−であることが好ましい。１つのＹだけが−ＮＲ６−である場合に、ＷおよびＷ'に最も近いＹは−Ｏ−であることが好ましい。他の態様において、Ｖに最も近いＹが−Ｏ−であることが好ましい。
【０２１８】
他の態様において、両Ｙ基は−ＮＲ６−である。
【０２１９】
さらに好ましいのは、１つのＹは−Ｏ−であり、並びに
Ｖ,ＷおよびＷ'は、−Ｈ、アルキル、アラルキル、脂環式、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換へテロアリール、１−アルケニルおよび１−アルキニルからなる群から独立して選択されるか、または
ＶおよびＷはいっしょになり、さらなる３つの炭素原子を介して結合して、６つの炭素原子を含む置換されていてもよい環基を形成し、並びにリンと結合したＹからの３つの原子である該さらなる炭素原子の１つに結合する、ヒドロキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アルキルチオカルボニルオキシおよびアリールオキシカルボニルオキシからなる群から選択される１つの置換基で置換されている。
【０２２０】
さらに好ましいのは、Ｖがアリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換へテロアリールからなる群から選択される化合物である。
【０２２１】
式ＶＩのさらに好ましいＶ基は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換へテロアリールである。１つのＹが‐Ｏ‐であることが好ましい。特に好ましいアリールおよび置換アリール基にはフェニルおよび、１−３ハロゲンで置換されたフェニルが含まれる。３,５−ジクロロフェニル、３−ブロモ−フルオロフェニル、３−クロロフェニルおよび３−ブロモフェニルはとりわけ好ましい。
【０２２２】
Ｖが単環へテロアリールおよび単環置換へテロアリールであって、少なくとも１つの窒素を含むものからなる群から選択される場合もまた、とりわけ好ましい。そのようなヘテロアリールおよび置換へテロアリールがそれぞれ４−ピリジルおよび３−ブロモピリジルである場合が最も好ましい。
【０２２３】
特に好ましい他の態様では、１つのＹ基は−Ｏ−であり、Ｚ、ＷおよびＷ'はＨであり、かつＶは１〜３ハロゲンで置換されたフェニルである。３,５−ジクロロフェニル、３−ブロモ−４−フルオロフェニル、３−クロロフェニルおよび３−ブロモフェニルはとりわけ好ましい。
【０２２４】
Ｖがヘテロアリール、および置換へテロアリールからなる群から選択される場合もまた、とりわけ好ましい。
【０２２５】
そのようなヘテロアリールが４−ピリジルである場合が最も好ましい。
【０２２６】
他の態様では、ＶおよびＷがいっしょになり、さらなる３つの炭素原子を介して結合して、６つの炭素原子を含む置換されていてもよい環基を形成し、かつリンと結合するＹからの３つの原子である該さらなる炭素原子の１つと結合する、ヒドロキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アルキルチオカルボニルオキシおよびアリールオキシカルボニルオキシからなる群から選ばれる１つの置換基で一置換されている場合が好ましい。そのような化合物において、ＶおよびＷがいっしょになり、−ＣＨ２−ＣＨ(ＯＨ)−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ(ＯＣＯＲ３)−ＣＨ２−および−ＣＨ２ＣＨ(ＯＣＯ２)Ｒ３)−ＣＨ２−からなる群から選ばれる環基を形成する場合がさらに好ましい。
【０２２７】
別の好ましいＶ基は１−アルケンである。Ｐ４５０酵素による酸化は、ベンジルおよびアリル炭素において生じることが知られている。
【０２２８】
１つの態様において、Ｚが−ＣＨＲ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＯＲ３または−ＣＨ２ＯＣＯ２Ｒ３である場合、好ましいＶ基は−Ｈを含む。
【０２２９】
他の態様において、Ｖ基がアリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールの場合、好ましいＺ基は−ＯＲ２、−ＳＲ２、−Ｒ２、−ＮＲ２２、−ＯＣＯＲ３、−ＯＣＯ２Ｒ３、−ＳＣＯＲ３、−ＳＣＯ２Ｒ３、−ＮＨＣＯＲ２、−ＮＨＣＯ２Ｒ３、−(ＣＨ２)ｐ−ＯＲ１２および−(ＣＨ２)ｐＳＲ１２を含む。さらに好ましいＺ基は−ＯＲ２、−Ｒ２、−ＯＣＯＲ２、−ＯＣＯ２Ｒ３、−ＮＨＣＯＲ２、−ＮＨＣＯ２Ｒ３、‐(ＣＨ２)ｐ−ＳＲ１２を含む。最も好ましいＺ基は−ＯＲ２、−Ｈ、−ＯＣＯＲ３、−ＯＣＯ２Ｒ３および−ＮＨＣＯＲ２を含む。
【０２３０】
好ましいＷおよびＷ'基はＨ、Ｒ３、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換アリールを含む。ＷおよびＷ'が同じ基であることが好ましい。ＷおよびＷ'がＨの場合がさらに好ましい。
【０２３１】
１つの態様において、式ＩＶのプロドラッグは加えて好ましい：
【化５１】
0005063837.tif 000021
[式中
Ｖはアリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換へテロアリールからなる群から選ばれる]。そのような化合物中のＭがＯまたはＮ原子を介してリンに結合していることがさらに好ましい。３,５−ジクロロフェニル、３−ブロモ−４−フルオロフェニル、３−クロロフェニル、３−ブロモフェニルはとりわけ好ましい。Ｙは−Ｏ−であることが好ましい。特に好ましいアリールおよび置換アリール基は、フェニルおよび置換フェニル含む。特に好ましいヘテロアリール基は単環置換および非置換へテロアリール基を含む。４−ピリジルおよび３−ブロモピリジルであることがとりわけ好ましい。
【０２３２】
１つの態様において、式ＶＩの化合物は、好ましくはＨ、アルキル、脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、ＯＣ(Ｏ)Ｒ３、ＯＣ(Ｏ)ＯＲ３またはＮＨＣ(Ｏ)Ｒ２であるＺ基を持つ。そのような基中のＺがマイケル付加を受ける副産物、ビニルアリールケトンの配向を減少させることが好ましい。好ましいＺ基はビニル基に電子を供与する基であり、それはマイケル付加を受けるα,β−不飽和カルボニル化合物の配向を減少させる既知のストラテジーである。例えば、アクリルアミド上の類似位置におけるメチル基は非突然変異誘発活性となるが、非置換ビニルアナログは高突然変異誘発性となる。他の基、例えばＺ＝−ＯＲ１２、ＮＨＡｃなどは同様の機能を果たすことができる。また他の基、とりわけＺ＝−ＯＨ、−ＯＣ(Ｏ)Ｒ３、−ＯＣＯ２Ｒ３およびＮＨ２のような二重結合の完全除去を導く基であって、脱離反応後、迅速に再互変を受ける基はマイケル付加を防ぎ得る。特定のＷおよびＷ'基は、その基がβ−炭素への付加反応を妨げるか、または生産物の不安定化するので、この役割においても有利である。その他の好ましいＺ基は、脱離反応（elimination reaction）後にα,β−不飽和二重結合に付加し得る求核基を含む基であり、即ちｐが２または３である(ＣＨ２)ｐＳＨまたは(ＣＨ２)ｐＯＨである。さらなる他の好ましい基は、脱離反応後にα,β−不飽和二重結合に付加することができるＶと結合する基である：
【化５２】
0005063837.tif 000022
【０２３３】
他の態様において、式ＶＩＩ：
【化５３】
0005063837.tif 000023
のプロドラッグが好ましい。
[式中
Ｚは：
−ＣＨＲ２ＯＨ、−ＣＨＲ２ＯＣ(Ｏ)Ｒ３、‐ＣＨＲ２ＯＣ(Ｓ)Ｒ３、−ＣＨＲ２ＯＣＯ２Ｒ３、‐ＣＨＲ２ＯＣ(Ｏ)ＳＲ３、‐ＣＨＲ２ＯＣ(Ｓ)ＯＲ３および−ＣＨ２アリールからなる群から選ばれる]。Ｍは窒素を介してリンに結合することが好ましい。さらに好ましい基は、−ＣＨＲ２ＯＨ、−ＣＨＲ２ＯＣ(Ｏ)Ｒ３およびＣＨＲ２ＯＣＯ２Ｒ３を含む。Ｒ２がＨであることが好ましい。
【０２３４】
他の態様において、式ＶＩＩＩ：
【化５４】
0005063837.tif 000024
のプロドラッグが好ましい。
[式中
Ｚ'は−ＯＨ、‐ＯＣ(Ｏ)Ｒ３、‐ＯＣＯ２Ｒ３および−ＯＣ(Ｏ)ＳＲ３からなる群から選ばれる；
Ｄ４およびＤ３は−Ｈ、アルキル、−ＯＨおよび−ＯＣ(Ｏ)Ｒ３からなる群から独立して選ばれる；ただし、Ｄ４およびＤ３の少なくとも１つは−Ｈである。Ｙが−Ｏ‐であることが好ましい。とりわけ好ましいＺ基はＯＨである]。
【０２３５】
１つの好ましい態様において、Ｗ'およびＺは−Ｈであり、ＷおよびＶは、同じアリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換へテロアリールであり、かつ両Ｙ基は同じ−ＮＲ６−でもあり、そのようなホスホン酸プロドラッグ部分：
【化５５】
0005063837.tif 000025
は、リン−酸素二重結合を通る平面対称性を持つ。
【０２３６】
他の好ましい態様において、ＷおよびＷ'はＨであり、Ｖはアリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換へテロアリールからなる群から選ばれ、かつＺは−Ｈ、ＯＲ２および−ＮＨＣＯＲ２からなる群から選ばれる。そのような化合物中のＺは−Ｈであることがさらに好ましい。そのような化合物は酸素を経て結合するＭを持つことが好ましい。そのような化合物中の酸素は一級ヒドロキシル基内であることが最も好ましい。これらの化合物中のＶがフェニルまたは置換フェニルであることもさらに好ましい。
【０２３７】
１つの態様において、Ｐ４５０酵素を発現する腫瘍細胞は：
【化５６】
0005063837.tif 000026
［式中、
Ｖ、Ｗ、およびＷ'は、−Ｈ、アルキル、アラルキル、脂環式、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、１−アルケニルおよび１−アルキニルからなる群から独立に選ばれるか；
ＶとＺが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して結合して５〜７個の環の原子を含む環基を形成し、場合により１個のへテロ原子が、リンに結合した両方のＹ基から３つの原子である炭素原子に結合したヒドロキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、またはアリールオキシカルボニルオキシで置換されているか；
ＶとＺが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して結合して、場合により１個のヘテロ原子を含む環基を形成し、該環基がＶに隣接したＹに対してβおよびγ位でアリール基に縮合しているか；
ＶとＷが一緒になってさらなる３個の炭素原子を介して結合して、６個の炭素原子を含み、リンに結合したＹにから３つの原子である該さらなる炭素原子の１つに結合した、ヒドロキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アルキルチオカルボニルオキシおよびアリールオキシカルボニルオキシからなる群から選ばれる１つの置換基で置換された、場合により置換された環基を形成するか；
ＺとＷが一緒になってさらなる３〜５個の原子を介して結合して、場合により１個のヘテロ原子を含む環基を形成し、Ｖがアリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、または置換されたヘテロアリール環基でなければならないか；
ＷとＷ'が一緒になってさらなる２〜５個の原子を介して結合して、場合により０〜２個のヘテロ原子を含む環基を形成し、Ｖがアリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、または置換されたヘテロアリールがでなければならず；
Ｚは、−ＣＨＲ２ＯH、−ＣＨＲ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、−ＣＨＲ２ＯＣ(Ｓ）Ｒ３、−ＣＨＲ２ＯＣ(Ｓ）ＯＲ３、−ＣＨＲ２ＯＣ（Ｏ）ＳＲ３、−ＣＨＲ２ＯＣＯ２Ｒ３、−ＯＲ２、−ＳＲ２、−ＣＨＲ２Ｎ３、−ＣＨ２アリール、−ＣＨ（アリール）ＯH、−ＣＨ(ＣＨ＝ＣＲ２２）ＯH、−ＣＨ(Ｃ≡ＣＲ２）ＯH、−Ｒ２、−ＮＲ２２、−ＯＣＯＲ３、−ＯＣＯ２Ｒ３、−ＳＣＯＲ３、−ＳＣＯ２Ｒ３、−ＮＨＣＯＲ２、−ＮＨＣＯ２Ｒ３、−ＣＨ２ＮＨアリール、−(ＣＨ２）ｐ−Ｏ１２および−(ＣＨ２）ｐ−ＳＲ１２からなる群から選ばれ；
ｐは２または３の整数である；
但し、
ａ）Ｖ、Ｚ、Ｗ、Ｗ'のすべてが−Ｈではなく；
ｂ）Ｚが−Ｒ２であるとき、Ｖ、Ｗ、およびＷ'の少なくとも１つが−Ｈ、アルキル、アラルキルまたは脂環式でない；
Ｒ２はＲ３および−Ｈからなる群から選ばれる；
Ｒ３はアルキル、アリール、脂環式およびアラルキルからなる群から選ばれる；
Ｒ６６は−Ｈ、低級２−ハロアルキルおよび低級アルキルからなる群から選ばれる；
Ｒ１２は−Ｈおよび低級アシルからなる群から選ばれる；
Ｒ''は低級２−ハロアルキルである；
Ｒ'''はＨ、低級アルキルおよびＲ''からなる群から選ばれる；
それぞれのＹが−Ｏ−、−ＮＲ６６−からなる群から独立して選ばれ、ただし少なくとも１つのＹは−ＮＲ６６−である；
からなる群から選ばれるシクロホスファミドアナログ、並びに製薬的に許容されるプロドラッグ、およびそれらの塩を投与することによって処置することができる。
【０２３８】
腫瘍細胞が肝臓細胞性癌腫であることが好ましい。これらのシクロホスファミドアナログは、シクロホスファミドアナログを酸化させるＰ４５０酵素の活性を増大させ、かつシクロホスファミドアナログを投与することによって、腫瘍細胞を処置するために使用することもできる。
【０２３９】
他の態様において、Ｐ４５０活性は、内因性のＰ４５０酵素量を増加させる化合物を投与することによって高められる。内因性のＰ４５０酵素量を増加させる化合物は、フェノバルビトール(phenobarbitol)、デキサメタゾーン、リファンピシン、フェントイン(phentoin)およびプレガノロン(preganolon)１６α−カルボニトリルからなる群から選ばれることが好ましい。
【０２４０】
好ましいシクロホスファミドアナログは、その式中のＲ''が２−クロロエチル並びにＲ'''が−Ｈおよび２−クロロエチルからなる群から選ばれるものを含む。
【０２４１】
また、シクロホスファミドアナログ中のＲ６６は−Ｈ、メチルおよび２−クロロエチルからなる群から選ばれることが好ましい。
【０２４２】
１つの態様において、Ｐ４５０酵素活性は、内因性のＰ４５０酵素量を増加させる化合物の投与によって高められる。
【０２４３】
また好ましいシクロホスファミドアナログはこれらの式中Ｚ、Ｗ、Ｗ'およびＲ６６が−Ｈであり、かつＲ''およびＲ'''が２−クロロエチルであるものである。
【０２４４】
好ましいシクロホスファミドアナログは、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換へテロアリールからなる群から選ばれるＶを有するものである。より好ましいのは、Ｚ、Ｗ、Ｗ'およびＲ６６が−Ｈであり、Ｒ''およびＲ'''が２−クロロエチルである前記化合物である。また、より好ましいのは、Ｖがフェニル、３−クロロフェニルおよび３−ブロモフェニルからなる群から選ばれるものである。またＶが４−ピリジルである前記化合物が好ましい。
【０２４５】
また、より好ましいのは、Ｖが、少なくとも１個の窒素原子を含有する置換されていることもある一環式へテロアリールである化合物である。好ましくは、このような化合物は酸素を介して結合したＭを有する。最も好ましくは該酸素が第一級ヒドロキシル基中にある前記化合物である。特に好ましいのは、Ｖが４−ピリジルである該化合物である。
【０２４６】
好ましくは、経口バイオアベイラビリティーは少なくと５％である。より好ましくは、経口バイオアベイラビリティーは少なくとも１０％である。
【０２４７】
Ｐ４５０酸化は芳香族基を保持するリンまたは炭素位のいずれかであり得る立体化学に対して感受性であり得る。本発明のプロドラッグはリンまわりの２個の異性体型を有する。好ましくは、この立体化学は酸化および除去反応の両方を可能にする。好ましくはシス立体化学である。反対に、この反応は開裂が種々のホスホネート、ホスフェートおよびホスホルアミデートで生じるため、基Ｍに対して比較的非感受性である。リンと結合したＭにおける原子はＯ、ＳまたはＮであってよい。活性な薬物は、糖尿病、肝炎、肝臓ガン、肝臓線維症、マラリアおよび代謝疾患で、肝臓が生化学的末端産物、例えばグルコース（糖尿病）、コレステロール、脂肪酸およびトリグリセリド（動脈硬化）の過剰発現を担っている疾患を含む、肝臓が標的器官である疾患の処置に有用なＭ−ＰＯ３２−、ＭＰ２Ｏ６３−またはＭＰ３Ｏ９４−である。さらに、Ｍ−ＰＯ３２−、ＭＰ２Ｏ６３−またはＭＰ３Ｏ９４−は、標的がプロドラッグを酸化できる組織または細胞のうち肝臓以外である疾患の処置に有用であり得る。
【０２４８】
他の好ましいＭ基には、糖尿病、ガン、ウイルス感染、肝臓線維症、寄生虫感染、高血圧および高脂血症の処置に有用な薬物が含まれる。
【０２４９】
式ＶＩＩＩの好ましい化合物は、酸化反応を受けて不安定な中間体を生じさせ、これが除去反応を介して対応するＭ−Ｐ(Ｏ)(ＮＨＲ６)２またはＭ−Ｐ(Ｏ)(Ｏ−)(ＮＨＲ６) に分解し得るＺ'基を利用する。特に好ましいＺ'基はＯＨである。基Ｄ４およびＤ３は好ましくは水素、アルキル、−ＯＲ２、−ＯＣＯＲ３であるが、Ｄ４またはＤ３の少なくとも一方はＨでなければならない。
【０２５０】
以下の化合物およびそのアナログは本発明のプロドラッグ方法論において用いることができる。
【０２５１】
１つの好ましい側面では、Ｍは式Ｉ中のリンに酸素原子を介して結合する。好ましくは、Ｍはヌクレオシドである。好ましくは、Ｍは、リボフラノシルまたはアラビノフラノシル基上の第一級ヒドロキシル基中にある酸素原子を介して結合する。好ましくは、このような化合物には、ＬｄＴ、ＬｄＣ、ａｒａＡ；ＡＺＴ；ｄ４Ｔ；ｄｄＩ；ｄｄＡ；ｄｄＣ；Ｌ−ｄｄＣ；Ｌ ＦｄｄＣ；Ｌ−ｄ４Ｃ；Ｌ−Ｆｄ４Ｃ；３ＴＣ；リバビリン；５−フルオロ ２'デオキシウリジン；ＦＩＡＵ；ＦＩＡＣ；ＢＨＣＧ；Ｌ ＦＭＡＵ；ＢｖａｒａＵ；Ｅ−５−(２−ブロモビニル−２' デオキシウリジン；ＴＦＴ；５−プロピニル−１ アラビノシルウラシル；ＣＤＧ；ＤＡＰＤ；ＦＤＯＣ；ｄ４Ｃ；ＤＸＧ；ＦＥＡＵ；ＦＬＧ；ＦＬＴ；ＦＴＣ；５−イル−カルボサイクリック ２'デオキシグアノシン；オキセタノシンＡ（oxetanocin A）；オキセタノシンＧ；シクロブタＡ（Cyclobut A）；シクロブタＧ；ｄＦｄＣ；ａｒａＣ；ブロモデオキシウリジン；ＩＤＵ；ＣｄＡ；ＦａｒａＡ；コフォルマイシン（Coformycin）、２'−デオキシコフォルマイシン；ａｒａＴ；チアゾフリン；ｄｄＡＰＲ；９−(アラビノフラノシル)−２，６ ジアミノプリン；９−(２' デオキシリボフラノシル)−２，６ ジアミノプリン；９−(２'−デオキシ ２'フルオロリボフラノシル)−２，６−ジアミノプリン；９(アラビノフラノシル)グアニン；９−(２'−デオキシリボフラノシル)グアニン；９−(２'−デオキシ ２'フルオロリボフラノシル)グアニン；ＦＭｄＣ；５，６−ジヒドロ−５−アザシチジン；５−アザシチジン；５−アザ ２'デオキシシチジン；またはＡＩＣＡＲが含まれる。別の側面では、Ｍが非環式糖上のヒドロキシル基中の酸素を介して結合しているのが好ましく、このようなＭＨがＡＣＶ、ＧＣＶ；ペンシクロビル（penciclovir）；(Ｒ)−９−(３，４−ジヒドロキシブチル)グアニン；またはシタレン（cytallene）であるのが好ましい。
【０２５２】
１つの好ましい側面では、式Ｉの化合物はＭＨがａｒａＡまたは５−フルオロ−２'−デオキシウリジンである化合物を含まない。
【０２５３】
一般に、Ｍが酸素を介して結合している場合、該酸素は第一級ヒドロキシ基中にあるのが好ましい。ＭＨがａｒａＡ；ＡＺＴ；ｄ４Ｔ；ｄｄＩ；ｄｄＡ；ｄｄＣ；Ｌ−ｄｄＣ；Ｌ ＦｄｄＣ；Ｌ−ｄ４Ｃ；Ｌ−Ｆｄ４Ｃ；３ＴＣ；リバビリン；５−フルオロ ２'デオキシウリジン；ＦＩＡＵ；ＦＩＡＣ；ＢＨＣＧ；Ｌ ＦＭＡＵ；ＢｖａｒａＵ；Ｅ−５−(２−ブロモビニル−２' デオキシウリジン；ＴＦＴ；５−プロピニル−１ アラビノシルウラシル；ＣＤＧ；ＤＡＰＤ；ＦＤＯＣ；ｄ４Ｃ；ＤＸＧ；ＦＥＡＵ；ＦＬＧ；ＦＬＴ；ＦＴＣ；５−イル−カルボサイクリック ２'デオキシグアノシン；オキセタノシンＡ；オキセタノシンＧ；シクロブタＡ、シクロブタＧ；ｄＦｄＣ；ａｒａＣ；ブロモデオキシウリジン；ＩＤＵ；ＣｄＡ；ＦａｒａＡ；コフォルマイシン、２'−デオキシコフォルマイシン；ａｒａＴ；チアゾフリン；ｄｄＡＰＲ；９−(アラビノフラノシル)−２，６ ジアミノプリン；９−(２'−デオキシリボフラノシル)−２，６ ジアミノプリン；９−(２'−デオキシ ２'フルオロリボフラノシル)−２，６−ジアミノプリン；９(アラビノフラノシル)グアニン；９−(２' デオキシリボフラノシル)グアニン；９−(２'−デオキシ ２'フルオロリボフラノシル)グアニン；ＦＭｄＣ；５，６ ジヒドロ−５−アザシチジン；５−アザシチジン；５−アザ ２'デオキシシチジン；ＡＩＣＡＲ；ＡＣＶ、ＧＣＶ；ペンシクロビル；(Ｒ)−９−(３，４ ジヒドロキシブチル)グアニン；またはシタレンであるのが好ましい例もある。
【０２５４】
別の側面では、ＭＨはａｒａＡである。
別の側面では、ＭＨは５−フルオロ−２'−デオキシウリジンである。
【０２５５】
別の側面では、Ｍが式Ｉのリンに炭素原子を介して結合している式Ｉの化合物が好ましい。このような化合物中、Ｍ−ＰＯ３２−はホスホノギ酸（phosphonoformic acid）またはホスホノ酢酸（phosphonoacetic acid）であるのが好ましい。
【０２５６】
別の好ましい側面では、ＭＰＯ３２−、ＭＰ２Ｏ６３−またはＭＰ３Ｏ９４−は、肝臓が生化学的末端産物の過剰発現を担っている肝臓疾患または代謝疾患の処置に有用である。好ましくは、このような肝臓疾患は、糖尿病、肝炎、ガン、線維症、マラリア、胆石症および慢性コレシスタリチアシス（chronic cholecystalithiasis）からなる群から選ばれるものである。ＭＨ、ＭＰＯ３２−、ＭＰ２Ｏ６３−またはＭＰ３Ｏ９４−が抗ウイルス剤または抗ガン剤であるような疾患を処置する場合にはより好ましい。
【０２５７】
好ましくは、ＭＰＯ３２−、ＭＰ２Ｏ６３−またはＭＰ３Ｏ９４−が糖尿病、動脈硬化および肥満症に有用である代謝疾患。
【０２５８】
別の側面では、生化学的末端産物がグルコース、コレステロール、脂肪酸およびトリグリセリドからなる群から選択されるのが好ましい。より好ましいのは、ＭＰ(Ｏ)(ＮＨＲ６)Ｏ−またはＭＰＯ３２−がＡＭＰ活性化タンパク質キナーゼアクチベーターである場合である。
【０２５９】
１つの好ましい態様では、Ｗ'およびＺは−Ｈであり、ＷおよびＶの両者は同じアリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり、したがってそのホスホネートプロドラッグ部分：
【化５７】
0005063837.tif 000027
は対象面を有する。
【０２６０】
別の好ましい態様では、ＷおよびＷ'はＨであり、Ｖはアリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールからなる群から選ばれ、Ｚは−Ｈ、ＯＲ２および−ＮＨＣＯＲ２からなる群から選ばれる。より好ましいのは、Ｚが−Ｈである上記化合物である。好ましくは、この化合物は酸素を介して結合したＭを有する。最も好ましいのは、酸素が第一級ヒドロキシル基中にある上記化合物である。
【０２６１】
またＶがフェニルまたは置換フェニルである上記化合物がより好ましい。最も好ましいのは、該酸素が第一級ヒドロキシル基中にある上記化合物である。
【０２６２】
好ましくは、上記化合物は酸素を介して結合したＭを有する。
【０２６３】
またＶが、少なくとも１個の窒素原子を有する置換されていることもある一環式へテロアリールである上記化合物はより好ましい。好ましくは、上記化合物は酸素を介して結合しているＭを有する。最も好ましいのは、該酸素が第一級ヒドロキシル基中にある上記化合物である。
【０２６４】
特に好ましいのは、Ｖが１〜３個のハロゲンで置換されているフェニルおよび４−ピリジルからなる群から選ばれる上記化合物である。またこれらの化合物中、ＭＨがＬｄＴ、ＬｄＣ、ａｒａＡ；ＡＺＴ；ｄ４Ｔ；ｄｄＩ；ｄｄＡ；ｄｄＣ；Ｌ−ｄｄＣ；Ｌ ＦｄｄＣ；Ｌ−ｄ４Ｃ；Ｌ−Ｆｄ４Ｃ；３ＴＣ；リバビリン；５−フルオロ ２'デオキシウリジン；ＦＩＡＵ；ＦＩＡＣ；ＢＨＣＧ；Ｌ ＦＭＡＵ；ＢｖａｒａＵ；Ｅ−５−(２−ブロモビニル−２'デオキシウリジン；ＴＦＴ；５−プロピニル−１ アラビノシルウラシル；ＣＤＧ；ＤＡＰＤ；ＦＤＯＣ；ｄ４Ｃ；ＤＸＧ；ＦＥＡＵ；ＦＬＧ；ＦＬＴ；ＦＴＣ；５−イル−カルボサイクリック ２'デオキシグアノシン；オキセタノシンＡ；オキセタノシンＧ；シクロブタＡ；シクロブタＧ；ｄＦｄＣ；ａｒａＣ；ブロモデオキシウリジン；ＩＤＵ；ＣｄＡ；ＦａｒａＡ；コフォルマイシン、２'−デオキシコフォルマイシン；ａｒａＴ；チアゾフリン；ｄｄＡＰＲ；９−(アラビノフラノシル)−２，６ ジアミノプリン；９−(２'−デオキシリボフラノシル)−２，６ ジアミノプリン；９−(２'−デオキシ ２'フルオロリボフラノシル)−２，６−ジアミノプリン；９(アラビノフラノシル)グアニン；９−(２' デオキシリボフラノシル)グアニン；９−(２'−デオキシ ２'フルオロリボフラノシル)グアニン；ＦＭｄＣ；５，６−ジヒドロ−５−アザシチジン；５−アザシチジン；５−アザ ２'デオキシシチジン；ＡＩＣＡＲ；ＡＣＶ；ＧＣＶ；ペンシクロビル；(Ｒ)−９−(３，４ ジヒドロキシブチル)グアニン；またはシタレンからなる群から選択される場合が好ましい。特に好ましいのは、Ｖが１−３ ハロゲンで置換されているフェニルおよび４−ピリジルからなる群から選択され、ＭＨがａｒａＡ；ＡＺＴ；ｄ４Ｔ；３ＴＣ；リバビリン；５ フルオロ−２'デオキシウリジン；ＦＭＡＵ；ＤＡＰＤ；ＦＴＣ；５−イル−カルボサイクリック ２'デオキシグアノシン；シクロブタＧ；ｄＦｄＣ；ａｒａＣ；ＩＤＵ；ＦａｒａＡ；ＡＣＶ；ＧＣＶ；またはペンシクロビルからなる群から選択される上記化合物である。
【０２６５】
またＭＨがＡＣＶ；ＧＣＶ；ペンシクロビル；(Ｒ)−９−(３，４ ジヒドロキシブチル)グアニン；シタレンからなる群から選択される場合が好ましい。
またＷ’およびＷがＨであり、Ｖがアリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり、ＺがＨ、ＯＲ２または−ＮＨＣＯＲ２である場合、Ｍは炭素原子を介してリンと結合しているのが好ましい。ＭＰＯ３２−がホスホノギ酸およびホスホノ酢酸からなる群から選択される上記化合物が好ましい。また、ＭＨはＰＭＥＡ、ＰＭＥＤＡＰ、ＨＰＭＰＣ、ＨＰＭＰＡ、ＦＰＭＰＡおよびＰＭＰＡからなる群から選択されるのが好ましい。
【０２６６】
好ましくは経口バイオアベイラビリティーは少なくとも５％である。より好ましくは経口バイオアベイラビリティーは少なくとも１０％である。
【０２６７】
Ｐ４５０酸化は、芳香族基を保持するリンまたは炭素位のいずれかにおける立体化学に感受性であり得る。本発明のプロドラッグはリンまわりの２つの異性体型を有する。酸化および除去反応の両者を可能にする立体化学が好ましい。好ましいのはシス立体化学である。反対に、この反応は、開裂が種々のホスホネート、ホスフェートおよびホスホルアミデートで生じるため、基Ｍに対して比較的非感受性である。したがって、基Ｍは、式Ｉの化合物の部分として、対応するＭ−ＰＯ３２−への変換を介する生物学的に活性な化合物のインビボ生成を可能にする基である。リンと結合するＭ中の原子はＯ、Ｓ、ＣまたはＮであってよい。活性な薬物はＭ−ＰＯ３２−またはＭ−ＰＯ３２−の代謝産物、例えばトリホスフェートであって、糖尿病、肝炎、肝臓ガン、肝臓線維症、マラリアおよび代謝疾患で、肝臓が生化学的末端産物、例えばグルコース（糖尿病）、コレステロール、脂肪酸およびトリグリセリド（動脈硬化）の過剰生産を担っている疾患を含む、肝臓が標的器官である疾患の処置に有用なものであってよい。さらにＭ−ＰＯ３２−およびＭＰ(Ｏ)(ＮＨＲ６)Ｏ−は、標的が肝臓以外であるがホスフェートまたはホスホネートに接近可能である疾患の処置に有用であり得る。好ましいＭ基は、Ｍがヌクレオシドであり、ホスフェートがヒドロキシル、好ましくは、糖または糖アナログ上の第一級ヒドロキシルと結合している基である。より好ましいＭ基には、ＬｄＣ、ＬｄＴ、ａｒａＡ；ＡＺＴ；ｄ４Ｔ；ｄｄＩ；ｄｄＡ；ｄｄＣ；Ｌ−ｄｄＣ；Ｌ ＦｄｄＣ；Ｌ−ｄ４Ｃ；Ｌ−Ｆｄ４Ｃ；３ＴＣ；リバビリン；５−フルオロ ２'デオキシウリジン；ＦＩＡＵ；ＦＩＡＣ；ＢＨＣＧ；Ｌ ＦＭＡＵ；ＢｖａｒａＵ；Ｅ−５−(２−ブロモビニル−２' デオキシウリジン；ＴＦＴ；５−プロピニル−１ アラビノシルウラシル；ＣＤＧ；ＤＡＰＤ；ＦＤＯＣ；ｄ４Ｃ；ＤＸＧ；ＦＥＡＵ；ＦＬＧ；ＦＬＴ；ＦＴＣ；５−イル−カルボサイクリック ２'デオキシグアノシン；オキセタノシンＡ；オキセタノシンＧ；シクロブタＡ；シクロブタＧ；ｄＦｄＣ；ａｒａＣ；ブロモデオキシウリジン；ＩＤＵ；ＣｄＡ；ＦａｒａＡ；コフォルマイシン、２'−デオキシコフォルマイシン；ａｒａＴ；チアゾフリン；ｄｄＡＰＲ；９−(アラビノフラノシル)−２，６ ジアミノプリン；９−(２'−デオキシリボフラノシル)−２，６ ジアミノプリン；９−(２'−デオキシ ２'フルオロリボフラノシル)−２，６−ジアミノプリン；９(アラビノフラノシル)グアニン；９−(２'−デオキシリボフラノシル)グアニン；９−(２'−デオキシ ２'フルオロリボフラノシル)グアニン；ＦＭｄＣ；５，６ ジヒドロ−５−アザシチジン；５−アザシチジン；５−アザ ２'デオキシシチジン；ＡＩＣＡＲ；ＡＣＶ；ＧＣＶ；ペンシクロビル；(Ｒ)−９−(３，４ ジヒドロキシブチル)グアニン；またはシタレンが含まれる。特に好ましいのはロブカビル（lobucavir）、ＦＴＣ、３ＴＣ、ＢＭＳ ２００,４７５；ＤＡＰＤ；ＤＸＧ；Ｌ−ＦＭＡＵ、ＬｄＣ、ＬｄＴ、リバビリン、Ｆ−ａｒａ−Ａ、ａｒａＣ、ＣｄＡ、ｄＦｄＣ、５−フルオロ−２'−デオキシウリジン、ＡＣＶ、ＧＣＶ、およびペンシクロビルである。
【０２６８】
好ましいＭ基にはウイルス感染の処置に有用なリン酸が含まれる。このような好ましい抗ウイルス剤には、ＰＭＥＡ；ＰＭＥＤＡＰ；ＨＰＭＰＣ；ＨＰＭＰＡ；ＦＰＭＰＡ；ＰＭＰＡ；フォスカルネット；ホスホノギ酸が含まれる。より好ましいのはＰＭＥＡ、ＰＭＰＡ、ＨＰＭＰＣおよびＨＰＭＰＡである。特に好ましいのはＰＭＥＡおよびＰＭＰＡである。
【０２６９】
他の好ましいＭ基には、糖尿病、肝臓線維症、例えば Bird et al., J. Med. Chem. 37, 158-169 (1994) に報告されるコラゲナーゼ阻害剤、寄生虫感染、金属タンパク質に応答する疾患（例えば高血圧、肝臓、ガン）および高脂血症の処置に有用なホスホン酸が含まれる。
【０２７０】
もう１つの側面では、好ましいＭＨ基はＬ−ヌクレオシドを含むものである。好ましいＬ−ヌクレオシドにはＦＴＣ、３ＴＣ、Ｌ−ＦＭＡＵ、ＬｄＣおよびＬｄＴが含まれる。
１つの側面では、好ましいＭＨ基は非環式ヌクレオシドである。好ましい非環式ヌクレオシドには、ＡＣＶ、ＧＣＶ；ペンシクロビル；(Ｒ)−９−(３，４ ジヒドロキシブチル)グアニン；およびシタレンが含まれる。ＡＣＶ；ＧＣＶ；およびペンシクロビルがより好ましい。
【０２７１】
もう１つの側面では、好ましいＭＨ基はジデオキシヌクレオシドを含むものである。好ましいジデオキシヌクレオシドには、ＡＺＴ；ｄ４Ｔ；ｄｄＩ；ｄｄＡ；ｄｄＣ；Ｌ−ｄｄＣ；Ｌ−ＦｄｄＣ；Ｌ ｄ４Ｃ；Ｌ−Ｆｄ４Ｃ；ｄ４Ｃ；およびｄｄＡＰＲが含まれる。より好ましいのはＡＺＴ；ｄ４Ｔ；ｄｄＩ；およびｄｄＣである。
【０２７２】
もう１つの側面では、好ましいＭＨ基はアラビノフラノシルヌクレオシドを含むものである。好ましいのは、ａｒａＡ；ａｒａＴ；５−プロピニル−１−アラビノシルウラシル；ａｒａＣ；ＦａｒａＡ；９−(アラビノフラノシル)−２，６ ジアミノプリン；および９−(アラビノフラノシル)グアニンである。より好ましいのはａｒａＡ；ａｒａＣ；およびＦａｒａＡである。
【０２７３】
もう１つの側面では、好ましいＭＨ基はカルボサイクリックヌクレオシドを含むものである。５−イル−カルボサイクリック ２'デオキシグアノシン；ＣＤＧ；シクロブタＡ；シクロブタＧ；およびＢＨＣＧであるのが好ましい。より好ましいのは、５−イル−カルボサイクリック ２'デオキシグアノシン；およびシクロブタＧである。
【０２７４】
もう１つの側面では、好ましいＭＨ基はヌクレオシド上のフッ素化された糖を含むものである。好ましいフッ素化された糖には、ＦＬＴ；ＦＬＧ；ＦＩＡＣ；ＦＩＡＵ；ＦＭＡＵ；ＦＥＡＵ；ｄＦｄＣ；９−(２'−デオキシ−２'フルオロリボフラノシル) ２，６−ジアミノプリン；および９−(２'−デオキシ ２'フルオロリボフラノシル)グアニンが含まれる。より好ましくは、Ｌ−ＦＭＡＵ；およびｄＦｄＣである。
【０２７５】
もう１つの側面では、好ましいＭＨ基はデオキソランヌクレオシドを含むものである。好ましいデオキソランヌクレオシドには、ＤＡＰＤ；ＤＸＧ；およびＦＤＯＣが含まれる。より好ましいのは、ＤＡＰＤおよびＤＸＧである。
もう１つの側面では、ウイルス感染の処置用に好ましいＭＨおよびＭＰＯ３２−には、ロブカビル、ＦＴＣ、３ＴＣ、ＢＭＳ ２００,４７５；ＤＡＰＤ、ＤＸＧ、Ｌ−ＦＭＡＵ、ＬｄＣ、ＬｄＴ、リバビリン、ＡＣＶ、ＧＣＶ、ペンシクロビル、ＰＭＥＡおよびＰＭＰＡが含まれる。
【０２７６】
もう１つの側面では、ガンの処置用に好ましいＭＨ基には、Ｆ−ａｒａ−Ａ、ａｒａＣ、ＣｄＡ、ｄＦｄｃおよび５−フルオロ−２'−デオキシウリジンが含まれる。
【０２７７】
以下のプロドラッグは本発明の好ましい化合物である。この化合物はジアステレオマー混合物または単一の立体異性体として生物学的に活性であるため、立体化学の指定なしに記載されている。表１に列記される化合物は、以下の規定を用いて式ＶＩａ中の意義に割り当てられた数字によって記載する：Ｍ１．Ｖ．Ｌ１．Ｌ２（ここにＹはＮＨであり、Ｙ’は酸素である）；Ｍ１は、基Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')でリン酸化され、式ＶＩａで示される化合物を形成する特定のヒドロキシル基を有する式：Ｍ−Ｈで示される化合物を表す意義であるか、あるいはＭ１は式：Ｍ−ＰＯ３２−で示されるホスホン酸であり、ＰＯ３２−基中の２個の酸素がＹ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ'で置換されることによって式ＶＩａの化合物に変換されるものを表す意義である。Ｖはアリールまたはヘテロアリール基であり、これは指定の位置に２置換基、Ｌ１およびＬ２を有する。
【０２７８】
意義Ｍ１は構造に関して、以下の各群に割り当てられる３つの群に分けられる：
【化５８】
0005063837.tif 000028
意義Ｍ１：群Ｍ１１：
１)  ３ＴＣ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
２)  (−)ＦＴＣ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒド
ロキシルに結合
３)  Ｌ−ＦＭＡＵ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
４)  ペンシクロビル中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合（これは細胞中でリン酸化される）
５)  ＢＭＳ２００,４７５中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
６)  Ｌ(−)Ｆｄ４Ｃ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
７)  ロブカビル(Lobucavir)中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合（これは細胞中でリン酸化される）
８)  ＤＸＧ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
９)ＬｄＣ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
意義Ｍ１：群Ｍ１２：
１)  ｄｄＩ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
２)  ＬｄＴ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
３)  ｄｄＣ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
４)  ＡＺＴ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
５)  ｄ４Ｔ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
６)  ＤＡＰＤ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
７)  Ｌ−ＦｄｄＣ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
８)  リバビリン中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
９)  ＣｄＡ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
意義Ｍ１：群Ｍ１３：
１)  ガンシクロビル中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合（これは細胞中においてリン酸化される）
２)  アシクロビル中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
３)  シタラビン中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
４)  ゲンシタビン中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
５)  フルダラビン中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
６)  フロキシウリジン(Floxuridine) 中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')が一級ヒドロキシルに結合
７)  ＨＰＭＰＣ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')がＰＯ３＝基で置換
８)  ＰＭＥＡ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')がＰＯ３＝基と置き換わる
９)  ＰＭＰＡ中の−Ｐ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ')がＰＯ３＝基と置き換わる。
【０２７９】
意義Ｖ：群Ｖ１
１)  ２−(Ｌ１)−３(Ｌ２)フェニル
２)  ２−(Ｌ１)−４(Ｌ２)フェニル
３)  ２−(Ｌ１)−５(Ｌ２)フェニル
４)  ２−(Ｌ１)−６(Ｌ２)フェニル
５)  ３−(Ｌ１)−４(Ｌ２)フェニル
６)  ３−(Ｌ１)−５(Ｌ２)フェニル
７)  ３−(Ｌ１)−６(Ｌ２)フェニル
８)  ２−(Ｌ１)−６(Ｌ２)−４−クロロフェニル
９)  ３−(Ｌ１)−５(Ｌ２)４−クロロフェニル
【０２８０】
意義Ｖ：群Ｖ２
１)  ２−(Ｌ１)−３(Ｌ２)４−ピリジル
２)  ２−(Ｌ１)−５(Ｌ２)４−ピリジル
３)  ２−(Ｌ１)−６(Ｌ２)４−ピリジル
４)  ３−(Ｌ１)−５(Ｌ２)４−ピリジル
５)  ３−(Ｌ１)−６(Ｌ２)４−ピリジル
６)  ２−(Ｌ１)−４(Ｌ２)３−ピリジル
７)  ２−(Ｌ１)−５(Ｌ２)３−ピリジル
８)  ２−(Ｌ１)−６(Ｌ２)３−ピリジル
９)  ４−(Ｌ１)−５(Ｌ２)３−ピリジル
【０２８１】
意義Ｖ：群Ｖ３
１)  ４−(Ｌ１)−６(Ｌ２)３−ピリジル
２)  ５−(Ｌ１)−６(Ｌ２)３−ピリジル
３)  ３−(Ｌ１)−４(Ｌ２)２−ピリジル
４)  ３−(Ｌ１)−５(Ｌ２)２−ピリジル
５)  ３−(Ｌ１)−６(Ｌ２)２−ピリジル
６)  ４−(Ｌ１)−５(Ｌ２)２−ピリジル
７)  ４−(Ｌ１)−６(Ｌ２)２−ピリジル
８)  ３−(Ｌ１)−４(Ｌ２)−２−チエニル
９)  ２−(Ｌ１)−５(Ｌ２)３−フラニル
【０２８２】
意義Ｌ１
１)  水素
２)  クロロ
３)  ブロモ
４)  フルオロ
５)  メチル
６)  イソプロピル
７)  メトキシ
８)  ジメチルアミノ
９)  アシルオキシ
【０２８３】
意義Ｌ２
１)  水素
２)  クロロ
３)  ブロモ
４)  フルオロ
５)  メチル
６)  イソプロピル
７)  メトキシ
８)  ジメチルアミノ
９)  アシルオキシ
【０２８４】
好ましい化合物は群Ｍ１１およびＶ１を用いたテーブル１中に挙げる化合物である。例えば、化合物１.３.６.７は群Ｍ１１の構造１、即ち３ＴＣ；群Ｖ１の構造３、即ち２−(Ｌ１)−５−(Ｌ２)フェニル；意義Ｌ１の構造６、即ちイソプロピル；および意義Ｌ２の構造７、即ちメトキシを表す。その結果、化合物１.３.６.７は、{[１−(２−Ｉ−プロピル−５−メトキシフェニル)−１,３−プロピル]ホスホリルである、一級ヒドロキシル基に結合したＰ(Ｏ)(Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ２ＣＨ２Ｙ')を伴う３ＴＣである。
好ましい化合物は群Ｍ１１およびＶ２を用いるテーブル１中に挙げる化合物でもある。
好ましい化合物は群Ｍ１１およびＶ３を用いるテーブル１中に挙げる化合物でもある。
好ましい化合物は群Ｍ１２およびＶ１を用いるテーブル１中に挙げる化合物でもある。
好ましい化合物は群Ｍ１２およびＶ２を用いるテーブル１中に挙げる化合物でもある。
好ましい化合物は群Ｍ１２およびＶ３を用いるテーブル１中に挙げる化合物でもある。
好ましい化合物は群Ｍ１３およびＶ１を用いるテーブル１中に挙げる化合物でもある。
好ましい化合物は群Ｍ１３およびＶ２を用いるテーブル１中に挙げる化合物でもある。
好ましい化合物は群Ｍ１３およびＶ３を用いるテーブル１中に挙げる化合物でもある。
好ましい化合物はＹが酸素およびＹ'がＮＨであるものを除く全ての上記化合物によって表される。
好ましい化合物はＹおよびＹ'がＮＨであるものを除く全ての上記化合物によって表される。
好ましい化合物はＹがＮＣＨ３およびＹ'が酸素であるものを除く全ての上記化合物によって表される。
好ましい化合物はＹが酸素およびＹ'がＮＣＨ３であるものを除く全ての上記化合物によって表される。
【０２８５】
【表１】
0005063837.tif 000029
【０２８６】
【表２】
0005063837.tif 000030
【０２８７】
【表３】
0005063837.tif 000031
【０２８８】
【表４】
0005063837.tif 000032
【０２８９】
【表５】
0005063837.tif 000033
【０２９０】
【表６】
0005063837.tif 000034
【０２９１】
【表７】
0005063837.tif 000035
【０２９２】
【表８】
0005063837.tif 000036
【０２９３】
【表９】
0005063837.tif 000037
【０２９４】
【表１０】
0005063837.tif 000038
【０２９５】
【表１１】
0005063837.tif 000039
【０２９６】
【表１２】
0005063837.tif 000040
【０２９７】
【表１３】
0005063837.tif 000041
【０２９８】
別の群の好ましい化合物を表２に挙げ、以下の規定を用いて、式Ｉ中の意義に割り当てられた数字によって記載する：Ｍ１.Ｙ／Ｙ'.Ｖ／Ｚ／Ｗ。この化合物は、ジアステレオマー混合物としてか、あるいは単一の立体異性体として生物学的に活性であるため、立体化学の記載なしに示す。Ｍ１は式：Ｍ−Ｈで示される化合物を表す意義であって、特定のヒドロキシル基を有し、これが基：Ｐ(Ｏ)[Ｙ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ(Ｚ)ＣＨ(Ｗ)−Ｙ']でリン酸化され、式Ｉの化合物を構成するものであるか、あるいはＭ１は式：Ｍ−ＰＯ３＝で示されるホスホン酸を表す意義であり、これはＰＯ３＝基の２個の酸素をＹ−ＣＨ(Ｖ)ＣＨ(Ｚ)ＣＨ(Ｗ)―Ｙ'で置換することによって式Ｉの化合物に変換されるものである。
【０２９９】
意義Ｍ１に関する構造は上に記載されるものと同一である。
【化５９】
0005063837.tif 000042
【０３００】
意義Ｙ／Ｙ'
１）        Ｙ＝ＮＨ；Ｙ'＝酸素
２）        Ｙ＝酸素；Ｙ'＝ＮＨ
３）        Ｙ＝ＮＨ；Ｙ'＝ＮＨ
４）        Ｙ＝Ｎ−ＣＨ３；Ｙ'＝酸素
５）        Ｙ＝酸素；Ｙ'＝ＮＣＨ３
６）        Ｙ＝Ｎ−ＣＨ２ＣＨ３；Ｙ'＝酸素
７）        Ｙ＝Ｎ−フェニル；Ｙ'＝酸素
８）        Ｙ＝Ｎｉ−プロピル；Ｙ'＝酸素
９）        Ｙ＝酸素；Ｙ'＝Ｎ−ＣＨ２ＣＨ３
【０３０１】
意義Ｖ／Ｚ／Ｗ：群Ｖ／Ｚ／Ｗ１
１）        Ｖ＝フェニル；Ｚ＝メチル；Ｗ＝水素
２）        Ｖ＝３，５−ジクロロフェニル；Ｚ＝メチル；Ｗ＝水素
３）        Ｖ＝４−ピリジル；Ｚ＝メチル；Ｗ＝水素
４）        Ｖ＝フェニル；Ｚ＝メトキシ；Ｗ＝水素
５）        Ｖ＝３，５−ジクロロフェニル；Ｚ＝メトキシ；Ｗ＝水素
６）        Ｖ＝４−ピリジル；Ｚ＝メトキシ；Ｗ＝水素
７）        Ｖ＝フェニル；Ｚ＝水素；Ｗ＝フェニル
８）        Ｖ＝３，５−ジクロロフェニル；Ｚ＝水素；Ｗ＝３，５−ジクロロフェニル
９）        Ｖ＝４−ピリジル；Ｚ＝水素；Ｗ＝４−ピリジル
【０３０２】
意義Ｖ／Ｚ／Ｗ：群Ｖ／Ｚ／Ｗ２
１）        Ｖ＝フェニル；Ｚ＝ＮＨＡｃ；Ｗ＝水素
２）        Ｖ＝３，５−ジクロロフェニル；Ｚ＝ＮＨＡｃ；Ｗ＝水素
３）        Ｖ＝４−ピリジル；Ｚ＝ＮＨＡｃ；Ｗ＝水素
４）        Ｖ＝フェニル；Ｚ＝水素；Ｗ＝メチル
５）        Ｖ＝３，５−ジクロロフェニル；Ｚ＝水素；Ｗ＝メチル
６）        Ｖ＝４−ピリジル；Ｚ＝水素；Ｗ＝メチル
７）        Ｖ＝フェニル；Ｚ＝ヒドロキシ；Ｗ＝水素
８）        Ｖ＝３，５−ジクロロフェニル；Ｚ＝ヒドロキシ；Ｗ＝水素
９）        Ｖ＝４−ピリジル；Ｚ＝ヒドロキシ；Ｗ＝水素
【０３０３】
意義Ｖ／Ｚ／Ｗ：群Ｖ／Ｚ／Ｗ３
１）        Ｖ＝水素；Ｚ＝ＣＨ２ＯＨ；Ｗ＝水素
２）        Ｖ＝水素；Ｚ＝ＣＨ２ＯＣ(Ｏ)ＣＨ３；Ｗ＝水素
３）        Ｖ＝水素；Ｚ＝ＣＨ２ＯＣ(Ｏ)ＯＣＨ３；Ｗ＝水素
４）        Ｖ＝メチル；Ｚ＝ＣＨ２ＯＨ；Ｗ＝水素
５）        Ｖ＝メチル；Ｚ＝ＣＨ２ＯＣ(Ｏ)ＣＨ３；Ｗ＝水素
６）        Ｖ＝メチル；Ｚ＝ＣＨ２ＯＣ(Ｏ)ＯＣＨ３；Ｗ＝水素
７）        Ｚ＝水素；ＶおよびＷ＝−ＣＨ２−ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２−
８）        Ｚ＝水素；ＶおよびＷ＝−ＣＨ２−ＣＨ(ＯＡｃ)ＣＨ２−
９）        Ｚ＝水素；ＶおよびＷ＝−ＣＨ２−ＣＨ(ＯＣＯ２ＣＨ２ＣＨ３)ＣＨ２−
【０３０４】
好ましい化合物は、群Ｍ１１およびＶ／Ｚ／Ｗ１を用いる表２に列記される化合物である。例えば、化合物１.１.３は、群Ｍ１１の構造１、すなわち３ＴＣ；意義Ｙ／Ｙ'の構造１、すなわちＹ＝ＮＨおよびＹ'＝酸素；群Ｖ／Ｚ／Ｗ１の構造３、すなわちＶ＝４−ピリジル、Ｚ＝メチルおよびＷ＝水素を表す。したがって化合物１.１.３.は、第一級ヒドロキシルと結合したＰ(Ｏ)(Ｎ(Ｈ)−ＣＨ(４−ピリジル)ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２Ｏ)を有する３ＴＣである。
【０３０５】
また、好ましい化合物は群Ｍ１１およびＶ／Ｚ／Ｗ２を用いる表２に列記される化合物である。さらに、好ましい化合物は群Ｍ１１およびＶ／Ｚ／Ｗ３を用いる表２に列記される化合物である。さらにまた、好ましい化合物は群Ｍ１２およびＶ／Ｚ／Ｗ１を用いる表２に列記される化合物である。また、好ましい化合物は群Ｍ１２およびＶ／Ｚ／Ｗ２を用いる表２に列記される化合物である。また、好ましい化合物は群Ｍ１２およびＶ／Ｚ／Ｗ３を用いる表２に列記される化合物である。好ましい化合物は群Ｍ１３およびＶ／Ｚ／Ｗ１を用いる表２に列記される化合物である。好ましい化合物は群Ｍ１３およびＶ／Ｚ／Ｗ２を用いる表２にを列記される化合物である。好ましい化合物は群Ｍ１３およびＶ／Ｚ／Ｗ３を用いる表２に列記される化合物である。
【０３０６】
【表１４】
0005063837.tif 000043
【０３０７】
【表１５】
0005063837.tif 000044
【０３０８】
式Ｉの化合物の合成
本発明に包含される化合物の合成には、Ｉ）プロドラッグの合成；および II）置換１，３−ヒドロキシアミンおよび１，３−ジアミンの合成が含まれる。
【０３０９】
Ｉ）プロドラッグの合成
プロドラッグの製造に関する以下に記載の手法は、本発明のプロドラッグの製造に用いられる一般的手法を示し、これはすべてのホスフェート、ホスホナート−およびホスホルアミデート含有薬物に適用される。プロドラッグは薬物合成の種々の段階で導入できる。これらの基は種々の反応条件に対して一般に感受性であるため、これらは後期段階で製造されることが最も多い。場合により、カラムクロマトグラフィーおよび／または結晶化の組み合わせによりジアステレオマーを分離することによってか、あるいはキラル活性化ホスホルアミド中間体をエナンチオ選択的合成することによって、リン中心における単一の異性体を含む純粋なプロドラッグを合成できる。
【０３１０】
プロドラッグの製造はさらに、１）活性化Ｐ(Ｖ)中間体を介する合成：、２）活性化Ｐ(III)中間体を介する合成、３）ホスフェートまたはホスホナート二酸（diacid）を介する合成、および４）種々の方法によって構成される。ここに記載されている一般的合成方法のいくつかはホスフェートおよびホスホナートエステル合成に有用である。しかし、これらの方法は、プロドラッグ部分の窒素が適当に保護され、ならびに／あるいは置換されている場合、ホスホルアミデートの場合においても等しく適用可能である。
【０３１１】
Ｉ.１  活性化Ｐ(Ｖ)中間体を介する合成
【化６０】
0005063837.tif 000045
Ｉ.１.ａ.  活性化Ｐ(Ｖ)中間体の合成
ホスホルアミデートヌクレオチドプロドラッグの最も好ましい合成は、強塩基、例えば水素化ナトリウムまたは水素化リチウムの存在下でＭＨヒドロキシ基を４−ニトロフェニル ホスホルアミデート（ここにＬはニトロフェニルである）と反応させることである。この活性化前駆体は市販の４−ニトロフェニル ホスホロクロリデート（phosphorochloridate）を置換１，３−アミノアルコールまたは１，３−ジアミンと反応させることによって製造される。一般に、ホスホロアミデートプロドラッグ（phosphoroamidate prodrug）は、アルコールを対応する活性化ホスホロアミデート前駆体とカップリングすることによって合成される。例えば。クロロホスホロアミデート（Ｌ＝クロロ）をヌクレオシドの５'−ヒドロキシに付加する（addition）方法はホスホロアミデートの製造に関して周知である（Stepanov et al., Tetrahedron Lett., 1989, 30, 5125)。活性化前駆体はいくつかの周知の方法によって製造できる。プロドラッグの合成に有用なクロロホスホロアミデートは置換−１，３−プロパンジアミンまたは１，３−アミノアルコールから製造される（Kirsten, et al, J. Org. Chem., 1997, 62, 6882)。またクロロホスホロアミデートは対応するＰ(III)中間体を酸化することによって製造してもよく（Ozaki, et al, Bull. Chem Soc. Jpn., 1989, 62, 3869）、このＰ(III)中間体は適当な保護および／または置換１，３−アミノアルコールまたは１，３−ジアミンを三塩化リンと反応させることによって得られる。別法として、クロロホスホロアミデート物質は、置換１，３−アミノアルコールまたは１，３−ジアミンをオキシ塩化リンで処理することによって作成される（Welch, et al., J. Org. Chem., 1990, 55, 5991）。クロロホスホロアミデート種はまた、対応するホスファイトからインサイチュで製造できる（Jung, et al., Nucleosides and Nucleotides, 1994, 13, 1597）。ホスホロアミド酸（phosphoroamidic acid）から製造されたホスホロフロウリデート中間体（Phosphoroflouridate intermediate）はまた、環式プロドラッグの製造における前駆体として働き得る（Watanabe et al., Tetrahedron lett., 1988, 29, 5763）。
【０３１２】
ホスホルアミデート（Ｌ＝ＮＲＲ'）はまた、窒素が置換されているか、保護形態であるリン酸エステルの合成においてと同様に、ホスホルアミデートプロドラッグの場合でも中間体として用いることができる。モノアルキルまたはジアルキルホスホルアミデート（Watanabe, et al, Chem Pharm Bull., 1990, 38, 562）、トリアゾールホスホルアミデート（Yamakage, et al., Tetrahedron, 1989, 45, 5459）およびピロリジノホスホルアミデート（Nakayama, et al, J. Am. Chem. Soc., 1990, 112, 6936）はリン酸エステルの製造において用いられる既知の中間体のうちのいくつかである。別の有効なリン酸化手法は，２−オキサゾロンの環式クロロホスホロアミデート付加化合物を金属触媒反応によって付加すること（addition）である。このタイプの中間体は、第二級ヒドロキシ基の存在下での第一級ヒドロキシル基のリン酸化における高度な選択性を獲得する（Nagamatsu, et al, Tetrahedron Lett., 1987, 28, 2375）。これらの物質は、クロロホスホロアミデートをアミンと反応させることによってか、あるいは別法として、対応するホスホルアミダイトを形成させた後に酸化することによって得られる。
【０３１３】
Ｉ.１.ｂ.  キラル活性化ホスホルアミデートの合成
例えば市販のホスホロジクロリデート：Ｒ−ＯＰ(Ｏ)Ｃｌ２（式中、ＲＯは脱離基、好ましくは電子吸引基、例えばニトロまたはクロロで置換されているアリールである）を用いて、エナンチオマー的に純粋な置換１，３−アミノアルコールまたは１，３−ジアミンをリン酸化すると、２つのジアステレオマー中間体が得られ、これらはカラムクロマトグラフィーおよび／または結晶化の組み合わせによって分離できる。このような方法はまた、キラルクロロホスホロアミデートの製造に利用することができる。キラルホスホルアミデート中間体は光学的に純粋なアミンをキラル補助物として利用することにより獲得できる。このタイプの中間体は、ホスフェート形成において立体特異的置換を受けることが知られている（Nakayama, et al. J. Am. Chem. Soc., 1990, 112, 6936）。リン原子の相対的配置は３１Ｐ ＮＭＲスペクトルの比較によって決定できる。赤道結合のホスホリルオキシ部分（トランス異性体）の化学シフトは常に、軸結合の異性体（シス異性体）の化学シフトよりアップフィールド（upfield）である（Verkade, et al, J. Org. Chem., 1977, 42, 1549）。
【化６１】
0005063837.tif 000046
【０３１４】
Ｉ.１.ｃ.  活性化ホスホルアミデートを用いるプロドラッグの合成
活性化ホスホルアミデートとアルコール（ＭＨ）のカップリングは、有機塩基の存在下で行う。例えば、以前の段落に記載されているように合成されたクロロホスホルアミデートを、ピリジンまたはＮ−メチルイミダゾールのような塩基の存在下でアルコールと反応させる。クロロからヨードホスホルアミデートをインサイチュで製造することによりリン酸化が高められる場合もある（Stomberg, et al., Nucleosides & Nucleotides., 1987, 5: 815）。またＣｓＦまたはｎ−ＢｕＬｉのような塩基の存在下、リン酸化反応においてホスホロフロウリデート中間体を用い、環式プロドラッグを製造できた（Watanabe et al., Tetrahedron lett., 1988, 29, 5763）。ホスホルアミデート中間体は遷移金属触媒反応によってカップリングすることが示される（Nagamatsu, et al., Tetrahedron Lett., 1987, 28, 2375）。
【０３１５】
ホスホルアミデート中間体の光学的に純粋なジアステレオマーを、酸の存在下で薬物のヒドロキシルと反応させることにより、直接的ＳＮ２(Ｐ)反応によって光学的に純粋なホスフェートプロドラッグが製造される（Nakayama, et al., J. Am. Chem. Soc., 1990, 112, 6936）。別法として、光学的に純粋なホスホルアミデート前駆体をフルオライド源、好ましくはフッ化セシウムまたはテトラブチルアンモニウムフルオライドと反応させ、薬物のヒドロキシルと反応して、リン原子での光学的に純粋なプロドラッグ配置を与えるより反応性のホスホロフルオリデートを製造する（Ogilvie, et al., J. Am. Chem. Soc., 1977, 99, 1277）。
【０３１６】
Ｉ.２  ホスホルアミダイト中間体を介する合成
【化６２】
0005063837.tif 000047
Ｉ.２.ａ.  活性化Ｐ(III)中間体の合成：
ヒドロキシおよびアミノ基のリン酸化は、Ｐ(III)酸化状態である環式リン酸化剤を用いて行う。１つの好ましいリン酸化剤はクロロホスホルアミダイト（Ｌ'クロロ）である。環式クロロホスホルアミダイトは穏やかな条件下、三塩化リンを置換１，３−アミノアルコールまたは１，３−ジアミンと反応させることによって製造される（Wada, et al., Tetrahedron Lett., 1990, 31, 6363）。別法として、ホスホルアミダイトはリン酸化剤として用いることができる（Beaucage, et al., Tetrahedron, 1993, 49, 6123）。適当に置換されたホスホルアミダイトは環式クロロホスホルアミダイトをＮ，Ｎ−ジアルキルアミンと反応させることによって（Perich, et al., Aust. J. Chem., 1990, 43, 1623. Perich, et al., Synthesis, 1988, 2, 142）か、あるいは市販のジアルキルアミノホスホロクロリデートを置換プロピル-１，３−アミノアルコールまたは１，３−ジアミンと反応させることによって製造できる。
【０３１７】
Ｉ.２.ｂ.  キラル活性化Ｐ(III)中間体の合成：
非対称１，３−アミノアルコールまたは１，３−ジアミンを用いる場合、環式ホスホルアミダイトはキラル異性体の混合物を形成することが予想される。光学活性の純粋なアミノアルコールまたはジアミンを用いる場合、クロマトグラフィーによって分離できる、リン原子に対して軸結合または赤道結合の脱離基（ＮＲＲ'）を有する２つの安定なジアステレオマーの混合物が予想される（Brown et al., Tet., 1990, 46, 4877）。純粋なジアステレオマーは通常、クロマトグラフィーでの分離により得られる。これらの中間体はまた、光学活性アミンによるキラリティーの誘導を介して製造することができる。
【０３１８】
Ｉ.２.ｃ.  活性化ホスホルアミダイトを用いるプロドラッグの合成：
適当に置換されたクロロホスホルアミダイトを用い、有機塩基（例えばトリエチルアミン、ピリジン）の存在下でヌクレオシドにおけるアルコールをリン酸化する。別法として、ホスホルアミダイトは、カップリング促進剤、例えばテトラゾールまたはベンゾイミダゾリウム トリフラートの存在下、ヌクレオシドをホスホルアミデートとカップリングさせることによって得られる（Hayakawa et al., J. Org. Chem., 1996, 61, 7996）。アルコールとクロロ ホスホルアミダイトまたはホスホルアミダイトの縮合はＳＮ２(Ｐ)反応であるから、この生成物は転化された配置（an inverted configuration）を有することが予想される。これはプロドラッグの環式ホスホルアミダイトの立体選択的合成を考慮している。また、リン酸化反応物の異性体の混合物を平衡（例えば熱平衡）させ、より熱動力学的に安定な異性体にすることができる。
【０３１９】
次いで、得られたプロドラッグのホスホルアミダイトを酸化剤、例えば酸素分子またはｔ−ブチルヒドロペルオキシドを用いて酸化し、対応するホスホルアミデートプロドラッグにする（Ozaki et al., Tetrahedron. Lett., 1989, 30, 5899）。光学的に純粋なＰ(III)中間体の酸化は立体選択的に光学活性なプロドラッグを提供することが予想される（Mikolajczyk, et al., J. Org. Chem., 1978, 43, 2132. Cullis, P. M. J. Chem. Soc., Chem Commun. 1984, 1510, Verfurth, et al., Chem. Ber., 1991, 129, 1627）。
【０３２０】
Ｉ.３  二酸を介するホスホルアミデートプロドラッグの合成
【化６３】
0005063837.tif 000048
式Ｉで示されるプロドラッグは対応するホスホジクロリデート（phosphodichloridate）および１，３−アミノアルコールまたは１，３−ジアミンを反応させることによって合成される（Khamnei, et al., J. Med. Chem., 1996, 39:4109）。例えば、塩基（例えばピリジン、トリエチルアミンなど）の存在下、ホスホジクロリデートを置換１，３−アミノアルコールまたはジアミンと反応させると式Ｉの化合物が得られる。また、これらの条件はシクロホスファミドアナログの合成に適用でき、ここでは市販のビス（２−クロロエチル）アミドリン酸ジクロライドを対応する置換１，３−アミノアルコールまたは１，３−ジアミンとカップリングさせる。
【０３２１】
このような反応性ジクロリデート中間体は対応する酸および塩素化剤、例えばチオニルクロライド（Starrett, et al., J. Med. Chem., 1994, 1857）、オキサリルクロライド（Stowell, et al., Tetrahedron Lett., 1990, 31:3261）および五塩化リン（Quast, et al., Synthesis, 1974, 490）から製造できる。別法として、これらのジクロロホスホナートはまた、ジシリルエステル（Bhongle, et al., Synth. Commun., 1987, 17: 1071）およびジアルキルエステル（Still, et al., Tetrahedron Lett., 1983, 24: 4405; Patois, et al., Bull. Soc. Chim. Fr., 1993, 130: 485）から製造できる。
【０３２２】
別法では、ホスフェートまたはホスホナート二酸で出発する式Ｉの化合物の合成に、カルボジイミド（Alexander et al., Collect. Czech. Chem. Commun., 1994, 59: 1853; Casara, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1992, 2: 145; Ohashi, et al., Tetrahedron Lett., 1988, 29: 1189; Hoffman, M., Synthesis, 1988, 62）およびベンゾトリアゾリルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム塩（Campagne, et al., Tetrahedron Lett., 1993, 34: 6743）を含むがこれらに限定されない酸カップリング剤を用いる。
【０３２３】
キラルホスホノアミデートプロドラッグは分割（Pogatnic, et al., Tetrahedron Lett., 1997, 38, 3495）またはキラリティー誘導（Taapken, et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 6659; J. Org. Chem., 1998, 63, 8284）によって合成できる。
【０３２４】
Ｉ.４.  種々の方法
アルコールのリン酸化はまた、Mitsunobu 反応条件下、トリフェニルホスフィンおよびジエチルアゾジカルボキシラートの存在下で環式１'，３'−プロパニル アミドリン酸を用いて行う（Kimura et al., Bull. Chem. Soc. Jpn., 1979, 52, 1191）。さらに、ホスフェートプロドラッグは、トリエチルホスファイトの存在下、ホスホリルクロライドを用いてヌクレオシドをジクロリデート中間体に変換し、置換−１，３−アミノアルコールでクエンチすることによって製造できる（Farquhar et al., J. Org. Chem., 1983, 26, 1153）。
【０３２５】
またリン酸化は、アミドリン酸の環式ジエステルおよびスルホニルクロライド、好ましくは８−キノリンスルホニルクロライドの混合無水物を作成し、薬物のヒドロキシルを塩基、好ましくはメチルイミダゾールの存在下で反応させることによって行うことができる（Takaku, et al., J. Org. Chem., 1982, 47, 4937）。さらに、キラル分割によって得られたキラル環式アミドリン酸（Wynberg, et al., J. Org. Chem., 1985, 50, 4508）から出発することもまた、キラルホスホルアミデートプロドラッグの起源である。
【０３２６】
III.  置換１，３−ヒドロキシアミンおよび１，３−ジアミンの合成
置換１，３−ヒドロキシアミンおよび１，３−ジアミンの製造に関しては、天然に存在する化合物中にはこれらの官能基が遍在するため、多数の合成方法が利用可能である。これらの方法のいくつかは以下のようにまとめることができる：１．置換１，３−ヒドロキシアミンの合成；２．置換１，３−ジアミンの合成および３．キラル置換１，３−ヒドロキシアミンおよび１，３−ジアミンの合成。
【０３２７】
III.１.  置換１，３−ヒドロキシアミンの合成：
３−アリール−３−ヒドロキシ−プロパン−１−アミン型のプロドラッグ部分についての一般的合成手法は、アリールエステルをアルキルニトリルとアルドール型縮合させ、次いで得られた置換ベンゾイルアセトニトリルを還元することを含む（Shih et al., Heterocycles, 1986, 24, 1599）。この手法はまた、置換アルキルニトリルを用いる２−置換アミノプロパノールの形成に当てはめることができる。別のアプローチでは、酢酸アンモニウムの存在下でマロン酸を縮合させ、次いで得られた置換ｂ−アミノ酸を還元することによって、アリールアルデヒドから３−アリール−３−アミノ−プロパン−１−オール型のプロドラッグ群が合成される。これらの両方法はアリール基の幅広い種々の置換の導入を可能にする（Shih, et al., Heterocycles, 1978, 9, 1277）。別のアプローチでは、スチレン型の化合物から作成された１−アミノ−１−アリールエチルジアニオンの−置換有機リチウム化合物にカルボニル化合物を付加（addition）し、このカルボニル化合物のバリエーションにより種々のＷ、Ｗ'置換が得られる（Barluenga, et al., J. Org. Chem., 1979, 44, 4798）。
【０３２８】
ラセミまたはキラル１，３−ジオールの製造に関しては多数の合成方法が知られている。これらの方法は、ヒドロキシ官能基を脱離基に変換し、無水のアンモニアまたは必要とされる第一級または第二級アミンで処理することにより、対応する置換１，３−アミノアルコールまたは１，３ ジアミンの合成に利用することができる（Corey, et al., Tetrahedron Lett., 1989, 30, 5207: Gao, et al., J. Org. Chem., 1988, 53, 4081）。同様の変換は Mitsunobu 型反応条件においてアルコールから直接行うこともできる（Hughes, D. L., Org. React., 1992, 42）。
【０３２９】
以下の型の１，３−ジオールを製造する種々の合成方法が知られている：ａ）１−置換；ｂ）２−置換；およびｃ）１，２−または１，３−環状（そのラセミまたはキラル形態において）。式ＩのＶ、Ｗ、Ｚ基の置換はアミノアルコールの合成時か、あるいはプロドラッグの合成後に導入または修飾できる。
【０３３０】
III.１ａ）１−置換１，３−ジオール
１，３−ジヒドロキシ化合物は文献に記載されるいくつかの周知の方法によって合成できる。１−ヒドロキシ プロパン−３−アル（propan-3-al）に対するアリールグリニャール付加により、１−アリール−置換プロパン−１，３−ジオールが得られる。この方法は種々の置換アリールハライドを１−アリール置換−１，３−プロパンジオールに変換することを可能にする（Coppi, et al., J. Org. Chem., 1988, 53, 911）。アリールハライドはまた、１，３−ジオキサ−４−エンを Heck カップリングし、次いで還元および加水分解することによる１−置換プロパンジオールの合成に用いることができる（Sakamoto, et al., Tetrahedron Lett., 1992, 33, 6845）。置換１，３−ジオールはビニルケトンのエナンチオ選択的還元およびヒドホウ素化（hydoboration）によってか、あるいはアリルアルコールの動力学的分割によって製造できる。種々の芳香族アルデヒドは、ビニルグリニャール付加、その後のヒドロホウ素化（hydroboration）によって１−置換−１，３−ジオールに変換できる。置換芳香族アルデヒドはまた、リチウム−ｔ−ブチルアセテート付加、その後のエステル還元によって利用される（Turner., J. Org. Chem., 1990, 55 4744）。別法では、触媒的非対称エポキシ化条件下で市販の桂皮アルコールをエポキシアルコールに変換できる。これらのエポキシアルコールを Red-Al によって還元し、エナンチオマー的に純粋な１，３−ジオールを得る（Gao, et al., J. Org. Chem., 1980, 53, 4081）。別法では、ヒドロキシエチルアリールケトン誘導体のキラルボラン還元によってエナンチオマー的に純粋な１，３−ジオールを得ることができる（Ramachandran, et al., Tetrahedron Lett., 1997, 38 761）。ピリジル、キノリン、イソキノリン プロパン−３−オール誘導体を、Ｎ−オキシド形成、その後の無水酢酸条件における転位（rearrangement）によって酸素化して１−置換−１，３−ジオールにすることができる（Yamamoto, et al., Tetrahedron, 1981, 37, 1871）。アルドール縮合は、よく記載されている、１，３−酸素化官能基の別合成方法である（Mukaiyama, Org. React., 1982, 28, 203）。キラル置換ジオールはまた、カルボニル化合物のエナンチオ選択的還元、キラルアルドール縮合または酵素促進化動力学的分割によって製造できる。
【０３３１】
III.１ｂ）２−置換 １，３−ジオール：
種々の２−置換−１，３−ジオールは市販の２−(ヒドロキシメチル)−１，３−プロパンジオールから製造できる。ペンタエリトリトールは、二酸の脱カルボキシル化、その後の還元を介してトリオールに変換でき（Werle, et al., Liebigs, Ann. Chem., 1986, 944）、あるいはまたジオール−モノカルボン酸誘導体は既知の条件下での脱カルボキシル化によって得ることができる（Iwata, et al., Tetrahedron lett. 1987, 28, 3131）。また、ニトロトリオールは還元的除去によってトリオールを与えることが知られている（Latour, et al., Synthesis, 1987, 8, 742）。このトリオールは、アルカノイルクロライドまたはクロロギ酸アルキルで処理することによるモノアセチル化またはカルボナート形成によって誘導体化できる（Greene and Wuts, Protective groups in organic synthesis, John Wiley, New York, 1990）。アリール置換はアルデヒドへの酸化およびアリールグリニャール付加によって行うことができる。またアルデヒドは還元的アミノ化反応によって置換アミンに変換できる。
【０３３２】
III.１ｃ）環式−１，３−ジオール：
Ｖ−ＺまたはＶ−Ｗが４個の炭素によって縮合している式１の化合物はシクロヘキサン誘導体から製造できる。市販のシス，シス−１，３，５−シクロへキサントリオールを、そのまま用いるか、あるいは２−置換プロパン−１，３−ジオールの場合において記載されるように修飾して種々のアナログを得ることができる。これらの修飾はエステル形成の前または後に施すことができる。種々の１，３−シクロヘキサンジオールはピロンをジエンとして用い、Diels-Alder 方法論によって製造できる（Posner, et al., Tetrahedron Lett., 1991, 32, 5295）。またシクロヘキシルジオール誘導体はニトリルオキシド−オレフィン付加によって製造できる（Curran, et al., J. Am. Chem. Soc., 1985, 107, 6023）。別法では、またシクロヘキシル前駆体は市販のキナ酸から製造される（Rao, et al., Tetrahedron Lett., 1991, 32, 547）。
【０３３３】
III.２.  置換１，３−ジアミンの合成：
置換１，３−ジアミンは種々の基質から出発して合成される。アリールグルタロニトリルは、アミドへの加水分解および Hoffman 転位条件によって１−置換ジアミンに変換できる（Bertochio, et al., Bull. Soc. Chim. Fr, 1962, 1809）。一方、マロノニトリル置換は、親電子物質導入、その後の対応するジアミンへの水素化物還元による種々のＺ置換を可能にする。別のアプローチでは、桂皮アルデヒドはヒドラジンまたは置換ヒドラジンと反応し、対応するピラゾリンを与え、これを接触水素化すると置換１，３−ジアミンが得られる（Weinhardt, et al., J. Med. Chem., 1985, 28, 694）。１，３−置換の高いトランスジアステレオ選択性はまた、ピラゾリンへのアリールグリニャール付加、その後の還元によって達成可能である（Alexakis, et al., J. Org Chem., 1992, 576, 4563）。また、１−アリール−１，３−ジアミノプロパンは、ニトリル置換芳香族化合物から製造される３−アミノ−３−アリールアクリロニトリルのジボラン還元によって製造される（Dornow, et al., Chem Ber., 1949, 82, 254）。対応する１，３−カルボニル化合物から得られた１，３−ジイミンの還元は、１，３−ジアミンプロドラッグ部分の別の供給源であり、これは幅広い種々の活性化基Ｖおよび／またはＺを与える（Barluenga, et al., J. Org. Chem., 1983, 48, 2255）。
【０３３４】
III.３.  キラル置換１，３−ヒドロキシアミンおよび１，３−ジアミンの合成：
β−クロロプロピオフェノンをＣＢＳエナンチオ選択的接触反応させた後、ハロ基を置換して必要な第二級または第一級アミンを製造することにより、エナンチオマー的に純粋な３−アリール３−ヒドロキシプロパン−１−アミンが合成される（Corey, et al., Tetrahedron Lett., 1989, 30, 5207）。キラル ３−アリール−３−アミノプロパン−１−オール型のプロドラッグ部分は、キラル的に純粋なオレフィンおよびアリールアルデヒドの置換ニトロンの１，３−双極付加、その後の得られたイソオキサゾリジンの還元によって得ることができる（Koizumi, et al., J. Org. Chem., 1982, 47, 4005）。δ−アミノアルコールのエナンチオ選択的形成を生じさせるキラルホスフィンパラジウム複合体によって、１，３−極付加においてキラル誘導し、置換イソオキサゾリジンを形成させる（Hori, et al., J. Org. Chem., 1999, 64, 5017）。別法では、所望のアミンを有する対応するキラルエポキシアルコールの選択的開環によって、光学的に純粋な１−アリール置換アミノアルコールを得る（Canas et al., Tetrahedron Lett., 1991, 32, 6931）。
【０３３５】
１，３−二置換アミノアルコールのジアステレオ選択的合成に関していくつかの方法が知られている。例えば、(Ｅ)−Ｎ−シンナミルトリクロロアセトアミドを次亜塩素酸で処理すると、容易に加水分解されてエリトロ−β−クロロ−α−ヒドロキシ−δ−フェニルプロパンアミンになるトランス−ジヒドロオキサジンが高度にジアステレオ選択的に得られる（Commercon et al., Tetrahedron Lett., 1990, 31, 3871）。１，３−アミノアルコールのジアステレオ選択的形成はまた、光学的に純粋な３−ヒドロキシケトンの還元的アミノ化によって行われる（Haddad et al., Tetrahedron Lett., 1997, 38, 5981）。別のアプローチでは、選択的水素化物還元によって高度に立体選択的に、３−アミノケトンが１，３−二置換アミノアルコールに変換される（Barluenga et al., J. Org. Chem., 1992, 57, 1219）。
【０３３６】
すべての上記方法はまた、対応するＶ−ＺまたはＶ−Ｗ環化キラルアミノアルコールの製造に適用できる。さらにまた、このような光学的に純粋なアミノアルコールは、段落中以前に記載した手法によって光学的に純粋なジアミンを得るための供給源である。
【０３３７】
製剤化
１日当たり、約０．１ｍｇ／ｋｇ／用量〜約１００ｍｇ／ｋｇ／用量、好ましくは約０．３ｍｇ／ｋｇ／用量〜約３０ｍｇ／ｋｇ／用量の総投与量の本発明の化合物を経口投与する。最も好ましい投与量範囲は０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ（約１〜２０nmoles／ｋｇ／用量）である。徐放性製剤を使用して、活性成分の放出速度を制御するのが好ましいこともある。用量を、都合良くいくつかに分割して投与することができる。他の方法を用いる場合（例えば静脈内投与)、影響を受けた組織に対して、０．３〜３００nmol／ｋｇ／分、好ましくは３〜１００nmoles／ｋｇ／分の範囲の割合で化合物を投与する。これらの化合物を下記のように静脈内投与する場合は、このような割合を容易に維持できる。
【０３３８】
本発明の目的のため、経口、非経口、吸入スプレー、局所または経直腸を含む種々の方法で、製薬的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含む製剤として、本化合物を投与することができる。本明細書中で用いる用語「非経口」には、種々の注入技術での、皮下、静脈内、筋肉内および動脈内注射が含まれる。本明細書中で用いる動脈内注射および静脈内注射にはカテーテルを通した投与が含まれる。経口投与は一般に好ましい。
【０３３９】
活性成分を含む医薬組成物は、意図する投与方法に適当な任意の形態にすることできる。例えば、経口使用のために用いる場合、錠剤、口内錠、トローチ剤、水性懸濁剤または油状懸濁剤、分散粉末剤または顆粒剤、乳化（エマルジョン）剤、硬カプセル剤または軟カプセル剤、シロップ剤またはエリキシル剤を調製することができる。医薬組成物を製造するための当分野に既知のいずれかの方法にしたがい、経口使用のための組成物を調製することができ、このような組成物には、快い調製物を提供するため、甘味料、香料、着色料、および保存料を含む１つまたはそれ以上の物質を含ませることができる。錠剤の製造に適当な無毒の製薬的に許容される賦形剤との混合物中に活性成分を含む錠剤が許容される。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムのような不活性希釈剤；トウモロコシスターチまたはアルギン酸のような顆粒化剤および崩壊剤；デンプン、ゼラチンまたはアカシアのような結合剤；ならびにステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのような滑沢剤であり得る。錠剤はコーティングしなくてもよいし、あるいは胃腸管内での崩壊および吸収を遅らせ、それにより長期間にわたる持続した活性を提供するためにマイクロカプセル化することを含む既知の技術でコーティングしてもよい。例えば一ステアリン酸グリセリンまたは二ステアリン酸グリセリンのような時間遅延物質を単独で、あるいはワックスとともに用いることができる。
【０３４０】
また、経口使用のための製剤は、活性成分が不活性固形希釈剤、例えばリン酸カルシウムまたはカオリンと混合されているゼラチン硬カプセル剤、あるいは活性成分が水または油状媒体、例えばピーナッツ油、流動パラフィンまたはオリーブオイルと混合されているゼラチン軟カプセル剤とすることもできる。
【０３４１】
本発明の水性懸濁剤は、水性懸濁剤の製造に適当な賦形剤との混合物中に活性物質を含む。このような賦形剤には、懸濁化剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴム、ならびに分散剤または湿潤剤、例えば天然に存在するリン脂質（例えばレシチン)、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合産物（例えばステアリン酸ポリオキシエチレン)、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール)、エチレンオキシドと、脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導された部分的エステルとの縮合産物（例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）が含まれる。また、水性懸濁剤には、１つまたはそれ以上の保存剤、例えばエチル ｐ−ヒドロキシ−ベンゾエートまたは ｎ−プロピル ｐ−ヒドロキシ−ベンゾエート、１つまたはそれ以上の着色料、１つまたはそれ以上の香料および１つまたはそれ以上の甘味料、例えばスクロースまたはサッカリンを含ませることができる。
【０３４２】
活性成分を落花生油、オリーブオイル、ゴマ油またはココナッツ油のような植物性油状物中に、あるいは流動パラフィンのような鉱油中に懸濁することによって油状懸濁剤を製剤化することができる。経口懸濁剤には、増量剤、例えば蜜蝋、固型パラフィンまたはセチルアルコールを含ませることができる。上に記載のような甘味料、および香料を加えて、快い経口調製物を提供することができる。抗酸化剤、例えばアスコルビン酸を加えることによって、これらの組成物を保存することができる。
【０３４３】
水を加えて、水性懸濁剤を調製するのに適当な本発明の飛散性粉末製剤および顆粒剤は、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１つまたはそれ以上の保存剤との混合物中に活性成分を提供する。適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤は、上記物質によって代表される。また、さらなる賦形剤、例えば甘味料、香料および着色料を存在させることもできる。
【０３４４】
また、本発明の医薬組成物をｏ／ｗ型乳化剤（oil-in-water emulsions）の形態にすることもできる。油状相は植物性油、例えばオリーブオイルまたは落花生油、鉱油、例えば流動パラフィン、またはこれらの混合物とすることができる。適当な乳化剤には、天然に存在するゴム、例えばアカシアゴムおよびトラガカントゴム、天然に存在するリン脂質、例えば大豆レシチン、脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導されたエステルまたは部分的エステル、例えばモノオレイン酸ソルビタン、ならびにこれらの部分的エステルのエチレンオキシドとの縮合産物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（polyoxyethylene sorbitan monooleate）が含まれる。また、乳化剤には甘味料および香料を含ませることもできる。
【０３４５】
シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味料、例えばグリセロール、ソルビトールまたはスクロースとともに製剤化することができる。また、このような製剤には、粘滑剤、保存剤、香料または着色料を含ませることもできる。
【０３４６】
本発明の医薬組成物は滅菌注射可能調製物、例えば注射可能な滅菌水性懸濁剤または油性懸濁剤の剤型とすることができる。上述した適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用い、既知の技術にしたがって、この懸濁剤を製剤化することができる。また、注射可能な滅菌調製物は、無毒の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の注射可能な滅菌溶液または懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール溶液とするか、あるいは凍結乾燥粉末として調製することができる。用いることができる許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液および塩化ナトリウム等張溶液がある。加えて、滅菌固定油は、溶媒または懸濁化媒体として都合良く用いることができる。この目的のため、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む、刺激の少ない任意の口当たりのよい固定油を用いることができる。さらに、注射可能な物質の調製には、脂肪酸、例えばオレイン酸を同様に用いることができる。
【０３４７】
単一投与剤型を生産するために担体物質と混合されていてもよい活性成分の量は、処置される宿主および特定の投与様式に応じて変化する。例えば、ヒトへの経口投与を意図した徐放性製剤には、総組成物の約５から約９５％まで変動し得る適当かつ都合のよい量の担体物質と混合した２０〜２０００μmol（約１０〜１０００ｍｇ）の活性物質を含ませることができる。投与量を容易に測り得る医薬組成物を製造することが好ましい。例えば、約３０ｍＬ／時の割合で適当な容量を注入することができるように、静脈内注入用の水溶液には、溶液１ｍＬ当たり約０．０５〜約５０μmol（約０．０２５〜２５ｍｇ）の活性成分を含ませるべきである。
【０３４８】
上記のように、経口投与に適当な本発明の製剤は、それぞれあらかじめ決められた量の活性成分を含む個々の単位、例えばカプセル剤、カシェ剤または錠剤として；粉末剤または顆粒剤として；水性または非水性液体中の溶液剤または懸濁剤として；あるいはｏ／ｗ型液状乳化剤またはｗ／ｏ型液状乳化剤として存在し得る。また、活性成分は巨丸剤、舐剤またはペースト剤として投与することもできる。
【０３４９】
場合により１つまたはそれ以上の付属成分とともに圧縮または成形して、錠剤を製造することができる。場合により結合剤（例えばポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース)、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えばグリコール酸デンプンナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム)、界面活性剤または分散剤と混合した自由流動形態、例えば粉末または顆粒の活性成分を、適当な装置中で圧縮することによって、圧縮錠を製造することができる。不活性液状希釈剤で湿らせた粉末化された化合物の混合物を、適当な装置中で成形することによって、成形錠を製造することができる。場合により、錠剤をコーティングするか、あるいは錠剤に刻印をつけることができ、ならびに例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを種々の割合で用いて、活性成分をゆっくりと、あるいは制御されて放出するように製剤化し、所望の放出プロファイルを提供することができる。場合により、腸溶コーティングした錠剤を提供し、胃ではなく腸の部分で放出させることができる。式Ｉの化合物が酸加水分解を受けやすい場合に、このことは該化合物に特に有利である。
【０３５０】
口腔における局所投与に適当な製剤には、香料基剤（flavored base)、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含むトローチ剤；不活性基剤、例えばゼラチンおよびグリセリンあるいはスクロースおよびアカシア中に活性成分を含む香錠；ならびに適当な液状担体中に活性成分を含む口内洗浄剤が含まれる。
【０３５１】
経直腸投与用の製剤は、例えばココアバターまたはサリチラートを含む適当な基剤を有する坐剤として存在し得る。
【０３５２】
膣投与用の適当な製剤は、活性成分に加えて、適当であることが当分野に既知である担体を含む膣坐剤、タンポン剤、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡沫剤またはスプレー剤として存在し得る。
【０３５３】
非経口投与用に適当な製剤には、抗酸化剤、緩衝液（バッファー）、静菌剤、および製剤を目的の患者の血液と等張にする溶質を含んでいてもよい水性および非水性の等張滅菌注射用溶液剤；ならびに懸濁化剤および増量剤を含んでいてもよい水性および非水性の滅菌懸濁剤が含まれる。製剤は一回投与または複数投与密封容器、例えばアンプルおよびバイアル中に入れてもよく、使用直前、注射用に滅菌液状担体、例えば水を加えることのみを必要とする凍結乾燥条件下に保存することもできる。前記種類の滅菌粉末剤、顆粒剤および錠剤から注射用溶液および注射用懸濁液を製造することができる。
【０３５４】
好ましい単位投与製剤は、薬物の１日の投与量またはユニット、１日のサブ投与量（sub-dose)、またはその適当なフラクションを有する製剤である。
【０３５５】
しかし、当業者にはよく理解されているように、いかなる特定の患者に対する具体的な投与量も、用いる具体的な化合物の活性；処置される個人の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事；投与時間および経路；排泄の頻度；以前投与されていた他の薬物；ならびに治療される具体的な疾患の重篤度を含む種々の要因に依存することが理解されよう。
【０３５６】
実施例
本発明のプロドラッグ化合物、その中間体およびその製造は、これらの化合物を製造するいくつかのプロセスを例示する実施例によってさらに理解することができる。しかし、これらの実施例は本発明を具体的に限定するものと考えられるべきではなく、現在既知であるか、後に開発される化合物のバリエーションは本明細書中で特許請求されている本発明範囲内であるとものとする。
式Ｉの化合物は以下の実施例に詳細に記載される手法を用いて製造される。
【０３５７】
実施例１：
ホスホン酸含有ドラッグのホスホルアミデートプロドラッグに関する一般的手法：
チオニルクロライド２．５ｍＬ中の５−イソブチル−２−メチル−４−(２−(５−ホスホノ)フラニル)チアゾール（２００ｍｇ、０．６mmol）の懸濁液を還流温度で４時間加熱した。反応混合物を冷却し、蒸発乾固し、次いでトルエンと共沸（azeotroping）した。得られた残留物のメチレンクロライド溶液（４ｍＬ）に、メチレンクロライド１ｍＬ中のアミノアルコール（８２ｍｇ、０．５４mmol）およびピリジン（０．５ｍＬ、６mmol）の溶液を加えた。
２５℃で４時間攪拌した後、反応物を蒸発させ、トルエンとともに蒸発させた。粗製の生成物をクロマトグラフィー（１０％ メタノール−ジクロロメタンで溶出）に付し、極性小の異性体５２ｍｇ（２０．８％）および極性大の異性体４８ｍｇ（１９．２％）を得た。
【０３５８】
この方法により以下の化合物を製造した：
１.１：５−イソブチル−２−メチル−４−{２−[５−(１−フェニル−１，３−プロピル)ホスホルイミド]フラニル}チアゾール、極性小の異性体。
１０％ ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２中Ｒｆ＝０．７６。
元素分析（Ｃ２１Ｈ２５Ｎ２Ｏ３ＰＳ＋０．２５Ｈ２Ｏ＋０．１ＨＣｌとして）
計算値：Ｃ：５９．４０；Ｈ：６．０８；Ｎ：６．６０．
実測値：Ｃ：５９．４２；Ｈ：５．７２；Ｎ：６．４４．
１.２：５−イソブチル−２−メチル−４−{２−[５−(１−フェニル−１，３−プロピル)ホスホルイミド]フラニル}チアゾール、極性大の異性体。
ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２中Ｒｆ＝０．７
元素分析（Ｃ２１Ｈ２５Ｎ２Ｏ３ＰＳ＋０．２５Ｈ２Ｏとして）：
計算値：Ｃ：５９．９１；Ｈ：６．１；Ｎ：６．６５．
実測値：Ｃ：６０．１７；Ｈ：５．８１；Ｎ：６．５２．
１.３：２−アミノ−５−イソブチル−４−{２−[５−(１−フェニル−１，３−プロピル)ホスホルアミド]フラニル}チアゾール。
Ｒｆ＝０．５３（シリカ、９：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）。
元素分析（Ｃ２０Ｈ２４Ｎ３Ｏ３ＰＳ＋０．２ＣＨ２Ｃｌ２＋０．２５Ｈ２Ｏとして）：
計算値：Ｃ：５５．２７；Ｈ：５．７２；Ｎ：９．５７．
実測値：Ｃ：５５．０３；Ｈ：５．４２；Ｎ：９．３７．
【０３５９】
１.４：２−アミノ−５−イソブチル−４−{２−[５−(１−フェニル−１，３−プロピル)ホスホルアミド]フラニル}チアゾール、極性小の異性体。
Ｒｆ＝０．５７（シリカ、９：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）。
元素分析（Ｃ２０Ｈ２４Ｎ３Ｏ３ＰＳ＋０．１５ＣＨ２Ｃｌ２として）：
計算値：Ｃ：５６．２６；Ｈ：５．６９；Ｎ：９．７７．
実測値：Ｃ：５６．３６；Ｈ：５．４６；Ｎ：９．５９．
１.５：２−アミノ−５−メチルチオ−４−{２−[５−(１−フェニル−１，３−プロピル)ホスホルアミド]フラニル}チアゾール、極性小の異性体。
Ｒｆ＝０．５９（シリカ、９：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）。
元素分析（Ｃ１７Ｈ１８Ｎ３Ｏ３ＰＳ２＋０．４ＨＣｌとして）：
計算値：Ｃ：４８．３８；Ｈ：４．３９；Ｎ：９．９６．
実測値：Ｃ：４８．４７；Ｈ：４．２１；Ｎ：９．９６．
１.６：２−アミノ−５−メチルチオ−４−{２−[５−(１−フェニル−１，３−プロピル)ホスホルアミド]フラニル}チアゾール、極性大の異性体。
Ｒｆ＝０．５６（シリカ、９：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）。
元素分析（Ｃ１７Ｈ１８Ｎ３Ｏ３ＰＳ２として）：
計算値：Ｃ：５０．１１；Ｈ：４．４５；Ｎ：１０．３１．
実測値：Ｃ：４９．８４；Ｈ：４．１９；Ｎ：１０．１３．
【０３６０】
１.７：２−アミノ−５−メチルチオ−４−{２−[５−(Ｎ−メチル−１−フェニル−１，３−プロピル)ホスホルアミド]フラニル}チアゾール。
Ｒｆ＝０．５６（シリカ、９：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）。
元素分析（Ｃ１８Ｈ２０Ｎ３Ｏ３ＰＳ２＋．２５ＨＣｌとして）：
計算値：Ｃ：５０．２１；Ｈ：４．７４；Ｎ：９．７６．
実測値：Ｃ：５０．３１；Ｈ：４．４６；Ｎ：９．７９．
１.８：２−アミノ−５−イソブチル−４−{２−[５−(１−フェニル−１，３−プロピル)−Ｎ−アセチルホスホルアミド]フラニル}チアゾール。
Ｒｆ＝０．６２（シリカ、９：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）。
元素分析（Ｃ２２Ｈ２６Ｎ３Ｏ４ＰＳ＋１．２５Ｈ２Ｏとして）：
計算値：Ｃ：５４．８２；Ｈ：５．９６；Ｎ：８．７２．
実測値：Ｃ：５５．０９；Ｈ：５．９９；Ｎ：８．３９．
１.９：２−アミノ−５−イソブチル−４−{２−[５−(１−[２，４−ジクロロフェニル]−プロパン−１，３−イル)ホスホルアミド]フラニル}チアゾール。
ｍｐ ２３５〜２３７Ｃ（分解）。
Ｒｆ＝０．３５（シリカ、３：２ ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２)。
元素分析（Ｃ２０Ｈ２２Ｃｌ２Ｎ３Ｏ３ＰＳとして）：
計算値：Ｃ：４９．３９；Ｈ：４．５６；Ｎ：８．６４．
実測値：Ｃ：４９．０４；Ｈ：４．５１；Ｎ：８．３７．
【０３６１】
１.１０：１８８−１８９ ９−{２−[１−フェニル−１−アザ−３−オキサ−２−ホスホリナニル−２−メチルオキシ]エチル}アデニン。
ｍｐ １８８〜１８９Ｃ。
Ｒｆ＝０．２５（シリカ、９：１ ＣＨＣｌ２／ＭｅＯＨ）。
元素分析（Ｃ１７Ｈ２１Ｎ６Ｏ３Ｐ＋０．５Ｈ２Ｏとして）：
計算値：Ｃ：５１．３８；Ｈ：５．５８；Ｎ：２１．１５．
実測値：Ｃ：５１．０５；Ｈ：５．２８；Ｎ：２０．７７．
１.１１：２−アミノ−５−イソブチル−４−{２−[５−(１−(３−クロロフェニル)−プロパン−１，３−イル)ホスホラジアミド]フラニル}チアゾール。
淡黄色固形物；Ｒｆ＝０．４５（シリカ、５：９５ メタノール／ジクロロメタン）；１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯｄ６）ｄ７．３５（ｍ，４Ｈ）；７．１（ｍ，１Ｈ），６．６（ｍ，１Ｈ）；５．５５（ｍ，１Ｈ），２．８（ｄ，２Ｈ），０．９（ｄ，６Ｈ）。
【０３６２】
実施例２：
工程Ａ：
テトラヒドロフラン（６０ｍＬ）中の３−アミノ−３−フェニル−１−プロパノール（１ｇ、６．６mmol）およびトリエチルアミン（３ｍＬ、２１．８mmol）の溶液を、０℃のテトラヒドロフラン中の４−ニトロフェニル ホスホロジクロリデートの溶液に２０分かけて滴加した。すぐに白色沈殿が形成された。黄色の異成分からなる混合物を０℃で１時間攪拌した後、ゆっくり室温にあたためた。室温で６０時間攪拌した後、沈殿を水（４０ｍＬ）に溶解した。透明な黄色溶液をｃａ４０ｍＬに濃縮した。得られた混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で希釈し、酢酸エチルで２回抽出した。有機抽出物をまとめ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄した。水性洗浄物を抽出し戻し、その有機抽出物をまとめた。まとめた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）によって精製し、速く溶出するトランス異性体（９９５ｍｇ、４５％）および遅く溶出するシス異性体（１ｇ、４５％）を得た。および）；
【０３６３】
工程Ｂ：
tert−ブタノール中の２'，３'−ジデオキシ−アデノシン（５０ｍｇ、０．２１mmol）、セシウムフルオライド（３２３ｍｇ、２．１mmol）および速く溶出する (４−ニトロフェノキシ)−４−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリナン−２−オン（１４２ｍｇ、０．４mmol）の混合物を８０℃に加熱した。４８時間後、さらなる (４−ニトロフェノキシ)−４−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリナン−２−オン（７０ｍｇ）を加え、攪拌を８０℃で継続した。５日後、冷却した黄色の異成分からなる混合物を５０／５０ メタノール／ジクロロメタンで希釈し、シリカ床を通してろ過し、５０／５０ メタノール／ジクロロメタンですすいだ。ろ液をまとめ、濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、メタノール／ジクロロメタン）によって精製し、プロドラッグを得、これをジクロロメタンおよびヘキサンから再結晶した：４２ｍｇ（４７％収率）。
【０３６４】
この方法により以下の化合物を製造する：
２.１  ２'，３'−ジデオキシ−５'−Ｏ−(２−オキソ−４−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリン−２−イル)−アデノシン。
ｍｐ １１９〜１２２。
Ｒｆ＝０．２５（シリカゲル、１／９ メタノール／ジクロロメタン）。
元素分析（Ｃ１９Ｈ２３Ｎ６Ｏ４Ｐ＋０．９mol ジクロロメタンとして）：
計算値：Ｃ：４７．１６；Ｈ：４．９３；Ｎ：１６．５８．
実測値：Ｃ：４７．０３；Ｈ：４．９８；Ｎ：１６．６１．
２.２  ３'−アジド−３'−デオキシ−５'−Ｏ−(４−フェニル−２−オキソ−１，３，２−オキサアザホスホリン−２−イル)−チミジン。
ｍｐ ８５〜１０５。
Ｒｆ＝０．５（シリカゲル、１／９ メタノール／ジクロロメタン）。
元素分析（Ｃ１９Ｈ２３Ｎ６Ｏ６Ｐとして）：
計算値：Ｃ：４９．３５；Ｈ：５．０１；Ｎ：１８．１７．
実測値：Ｃ：４９．３２；Ｈ：５．１７；Ｎ：１７．８９．
【０３６５】
実施例３：
工程Ａ：
実施例２の工程Ａと同じである。
工程Ｂ：
水素化リチウム（１５ｍｇ、１．５２mmol）を、室温のジメチルホルムアミド中の９−β−Ｄ−アラビノフラノシル−アデニン（１００ｍｇ、０．３７mmol）および速く溶出する (４−ニトロフェノキシ)−４−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリナン−２−オン（２５０ｍｇ、０．７４mmol）の溶液に加えた。６時間後、黄色の異成分からなる混合物を酢酸で中和した。透明の黄色溶液を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、メタノール／ジクロロメタン）によって精製した。単離された生成物を、調製用ＴＬＣによってさらに精製し、エタノールから再結晶してプロドラッグを得た：１８ｍｇ（１１％収率）；
【０３６６】
この方法により以下の化合物を製造する：
３.１  ５'−Ｏ−(２−オキソ−４−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリン−２−イル)−９−β−Ｄ−アラビノフラノシル−アデニン。
ｍｐ＞２５０。
Ｒｆ＝０．２５（シリカゲル、２／８ メタノール／ジクロロメタン）。
元素分析（Ｃ１９Ｈ２３Ｎ６Ｏ６Ｐとして）：
計算値：Ｃ：４９．３５；Ｈ：５．０１；Ｎ：１８．１７．
実測値：Ｃ：４９．２２；Ｈ：４．８９；Ｎ：１８．０３．
【０３６７】
後処理時に反応物を塩酸１Ｎ溶液で中和することを以外は同様にして、以下の化合物を製造する。
３.２  ９−[(２−(４−フェニル−２−オキソ−１，３，２−オキサアザホスホリナン−２−オキシ)−エトキシ)メチル]−グアニン：
ｍｐ １５１〜１６５；
Ｒｆ＝０．２（シリカゲル、２／８ メタノール／ジクロロメタン）；
元素分析（Ｃ１７Ｈ２１Ｎ６Ｏ５Ｐ＋２Ｈ２Ｏとして）：
計算値：Ｃ：４４．７４；Ｈ：５．５２；Ｎ：１８．４１．
実測値：Ｃ：４４．４５；Ｈ：５．４０；Ｎ：１８．１４．
３.３  ２'−デオキシ−５−フルオロ−５'−Ｏ−(４−フェニル−２−オキソ１，３，２−オキサアザホスホリン−２−イル)−ウリジン。
ｍｐ １８８〜１９５ 分解。
Ｒｆ＝０．２５（シリカゲル、１／９ メタノール／ジクロロメタン）。
ＭＳ（Ｃ１８Ｈ２１ＦＮ３Ｏ７Ｐ＋Ｎａ＋として）：
計算値：４６４；実測値：４６４；
ＭＳ（Ｃ１８Ｈ２１ＦＮ３Ｏ７Ｐ−Ｈとして）：
計算値：４４０；実測値：４４０．
【０３６８】
実施例４：
Ｐ(III)中間体によるヌクレオチドプロドラッグの形成の一般的手法：
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の１(アリール)−１−(１−アルキルまたはアシルアミノ)プロパノール（１mmol）の溶液に、０℃で三塩化リンを加える。この反応物を室温にあたため、３時間攪拌する。反応混合物を濃縮し、トルエン（２×１０ｍＬ）とともに共沸し、乾燥する。粗製のクロロホスホルアミダイトをさらに精製することなく次の工程で用いる。
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のヌクレオシド（１mmol）の溶液に、−４０℃でジイソプロピルエチルアミン（２mmol）を加える。この混合物にＤＭＦ２ｍＬ中の粗製の環式クロロホスホルアミダイト（１mmole）を加える。この混合物を室温にあたため、２時間攪拌する。反応物を冷却して−４０℃に戻し、デカン中の５〜６Ｍ ｔ−ブチルヒドロペルオキシド（２mmol）を加え、室温で放置する。一晩攪拌した後、この反応物を濃縮し、粗製の混合物をクロマトグラフィーに付する。
【０３６９】
実施例５：
アリールアルデヒドから３−アリール−３−アミノプロパノールを製造する一般的手法：
（Shih, et al., Heterocycles, 1978, 9, 1277）
工程Ａ：
９５％エタノール５０ｍＬ中の適当なアリールアルデヒド（１０mmol）、マロン酸（１０mmol）および酢酸アンモニウム（１０mmol）の混合物を８０℃の水浴中で加熱する。二酸化炭素放出は５５℃で始まり、反応は５〜７時間で完了する。白色固形物を吸引によって集め、水性エタノールから再結晶し、３−アリール−３−アミノプロピオン酸を得る。
工程Ｂ：
冷却および攪拌しながら、無水のテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中の水素化アルミニウムリチウム（５０mmol）の懸濁液に３−アリール−３−アミノプロピオン酸（２０mmol）を加える。この混合物を３時間還流し、一晩静置し、湿性エーテル（moist ether）で処理した後、水で処理し、過剰の水素化アルミニウムリチウムを分解する。有機層をデカンテーションし、フラスコに残留した物質を高温のエチルアセテート（３×５０ｍＬ）で抽出する。有機溶液をまとめ、回転式蒸発させる。残留物を減圧蒸留するか、あるいは再結晶し、３−アリール−３−アミノプロパノールを得る。
【０３７０】
実施例６：
エポキシ桂皮アルコールから３−アリール−３−ヒドロキシプロピルアミンを製造する一般的手法：
（Gao, et al., J. Org. Chem., 1988, 53, 4084）
工程Ａ：
ジメトキシエタン（５０ｍＬ）中の市販の(−)−(２Ｓ，３Ｓ)−２，３−エポキシ桂皮アルコール（１０．０mmol）の溶液に、窒素下、０℃でトルエン（１０．５mmol）中のナトリウム ビス(２−メトキシエトキシ)アルミニウムヒドリド（Red-Al）の３．４Ｍ溶液を滴加する。室温で３時間攪拌した後、溶液をエーテルで希釈し、５％ ＨＣｌ溶液でクエンチする。さらに室温で３０分間攪拌した後、形成された白色沈殿をろ過によって取り出し、酢酸エチルとボイルし、再びろ過する。有機抽出物をまとめ、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して (Ｒ)−３−フェニル−１，３−ジヒドロキシプロパンを得る。
【０３７１】
工程Ｂ：
エーテル（９０ｍＬ）中の (Ｒ)−３−フェニル−１，３−ジヒドロキシプロパン（１７．８mmol）およびトリエチルアミン（２５．６mmol）の溶液に、窒素下、−１０℃でＭｓＣｌ（１８．７mmol）を滴加する。−１０〜０℃で３時間攪拌した後、この混合物を氷水（３０ｍＬ）に注ぎ、有機層を２０％ Ｈ２ＳＯ４、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥する。粗製の生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０３７２】
工程Ｃ：
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の (Ｒ)−３−フェニル−３−(ヒドロキシ)−プロピル メタンスルホナート（３mmol）およびメチルアミン（１０ｍＬ、水中４０％）の溶液を６５℃で３時間加熱する。冷却後、この溶液をエーテルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、無水の炭酸カリウムで乾燥する。抽出物を濃縮し、(Ｒ)−３−フェニル−３−(ヒドロキシ)−プロピルアミンを得る。
【０３７３】
実施例７：
桂皮アルデヒドから３−アリール−プロピレンジアミンを製造する一般的手法：
（Weinhardt, et al., J. Med. Chem., 1985, 28, 694）
工程Ａ：
ＥｔＯＨ １００ｍＬ中の桂皮アルデヒド（１０mmol）の溶液に、置換ヒドラジン（１０mmol）を加える。この反応物を室温で４５分間攪拌する。溶媒を回転式エバポレーターで除去し、飽和ＮａＨＣＯ３を残留物に加えた。粗製の生成物をエーテルに抽出する。有機層を洗浄し、乾燥し、蒸発させる。クロマトグラフィーからの粗製の生成物から純粋なピラゾリン付加化合物を得る。
【０３７４】
工程Ｂ：
ＡｃＯＨ ５０ｍＬおよび１０％ＨＣｌ １０ｍＬ中の３−フェニルピラゾリン（１０mmol）の溶液を、大気圧下、５％Ｐｔ／Ｃ ５００ｍｇと接触させて水素化する。この反応物を水素下で６時間攪拌する。ろ過によって触媒を除去し、ろ液を濃縮する。粗製の生成物をカラムによって精製し、純粋な３−アリール−プロピレンジアミン誘導体を得る。
【０３７５】
実施例８：
２−置換プロドラッグ（Ｖ，ＷおよびＷ'＝ＨおよびＺ＝−ＣＨＲ２ＯＨ）用の１，３−アミノアルコールに関する一般的手法：
工程Ａ：
ピリジン（５ｍＬ）中の市販の２−(ヒドロキシメチル)−１，３−プロパンジオール（１mmol）の溶液に、メタンスルホニルクロライド（１mmol）を加え、室温で攪拌し反応を完了させる。この混合物を濃縮し、抽出し、生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０３７６】
工程Ｂ：
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の２−(メチルスルホニルオキシメチレン)−１，３−プロパンジオール（１mmol）および水酸化アンモニウム（１０ｍＬ、水中３０％）の溶液を、密封反応容器中１００℃で加熱する。冷却後、混合物を濃縮し、抽出し、生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製し、２−置換−１，３−アミノアルコールを得る。適当なアミンを工程Ｂにおいて用いて−ＮＲ６置換を変更することができる。また工程ＡおよびＢを用い、試薬の適当な化学量論を利用して、２−(ヒドロキシメチル)−１，３−プロパンジオールから２−置換−１，３−ジアミンを合成することができる。
工程Ｃ：
親化合物に応じ、実施例１または２（工程ＡおよびＢ）または実施例３（工程Ｂ）または実施例４に記載のカップリング手法にしたがって、２−置換−１，３−アミノアルコールまたは２−置換−１，３−ジアミンのプロドラッグを合成する。
【０３７７】
実施例９：
環式１，３−アミノアルコール（ＶおよびＷは一緒になって連結されている）に関する一般的手法：
工程Ａ：
市販のシス，シス−１，３，５−シクロヘキサントリオールを、実施例８、工程Ａに記載されるように、モノメシラートに変換する。
【０３７８】
工程Ｂ：
実施例８、工程Ｂに記載されるように、シス，シス−１−(メチルスルホニルオキシ)シクロヘキサン−３，５−ジオールを対応するアミノアルコールに変換する。適当なアミンを工程Ｂにおいて用いて、−ＮＲ６置換を変更することができる。また、工程ＡおよびＢを用い、適当な試薬の化学量論を利用して、シス，シス−１，３，５−シクロヘキサントリオールから１−ヒドロキシ−３，５−ジアミノシクロヘキサンを合成することができる。
【０３７９】
工程Ｃ：
親化合物に応じ、実施例１または実施例２（工程ＡおよびＢ）または実施例３（工程Ｂ）または実施例４に記載されるように、シクロヘキシル−１，３−アミノアルコールをまたは１，３−ジアミンのプロドラッグを合成する。
【０３８０】
実施例１０
２−置換４−[２'−(５'−ホスホノ)フラニル]チアゾール
工程Ａ．
トルエン中のフラン（１．３mmole）の溶液を、５６℃で３．５時間、４−メチル吉草酸（１mmole）、トリフルオロ酢酸無水物（１．２mmole）およびボロン トリフルオライド エーテレート（０．１mmole）で処理した。冷却反応混合物を水性重炭酸ナトリウム（１．９mmole）でクエンチし、セライト床を通してろ過した。抽出、蒸発および蒸留により、２−[(４−メチル−１−オキソ)ペンチル]フランを茶色油状物として得た（ｂｐ ６５〜７７℃、０．１ｍｍＨｇ)。
【０３８１】
工程Ｂ．
Dean-Stark トラップを介して水を除去しながら、ベンゼン中の２−[(４−メチル−１−オキソ)ペンチル]フラン（１mmole）の溶液を、還流温度で６０時間、エチレングリコール（２．１mmole）およびｐ−トルエンスルホン酸（０．０５mmole）で処理した。オルトギ酸トリエチル（０．６mmole）を加え、得られた混合物をさらに１時間加熱還流した。抽出および蒸発により、２−(２−フラニル)−２−[(３−メチル)ブチル]−１，３−ジオキソランをオレンジ色液状物として得た。
【０３８２】
工程Ｃ．
ＴＨＦ中の２−(２−フラニル)−２−[(３−メチル)ブチル]−１，３−ジオキソラン（１mmole）の溶液を−４５℃においてＴＭＥＤＡ（１mmole）およびｎＢｕＬｉ（１．１mmole）で処理し、得られた反応混合物を−５〜０℃で１時間攪拌した。得られた反応混合物を−４５℃に冷却し、−４５℃のＴＨＦ中のジエチルクロロホスフェートの溶液にカニューレ挿入した。この反応混合物を１．２５時間かけて室温まで徐々にあたためた。抽出および蒸発により、２−[２−(５−ジエチルホスホノ)フラニル]−２−[(３−メチル)ブチル]−１，３−ジオキソランを暗色油状物として得た。
【０３８３】
工程Ｄ．
メタノール中の２−[２−(５−ジエチルホスホノ)フラニル]−２−[(３−メチル)ブチル]−１，３−ジオキソラン（１mmole）の溶液を、６０℃で１８時間、１Ｎ塩酸（０．２mmole）で処理した。抽出および蒸留によって５−ジエチルホスホノ−２−[(４−メチル−１−オキソ)ペンチル]フランを淡オレンジ色油状物として得た（ｂｐ １５２〜１５６℃、０．１ｍｍＨｇ）。
【０３８４】
工程Ｅ．
エタノール中の上記化合物、５−ジエチルホスホノ−２−[(４−メチル−１−オキソ)ペンチル]フラン（１mmole）の溶液を、還流温度で３時間、臭化銅（II）（２．２mmole）で処理した。冷却した反応混合物をろ過し、ろ液を蒸発乾固した。得られた暗色油状物をクロマトグラフィーによって精製し、５−ジエチルホスホノ−２−[(２−ブロモ−４−メチル−１−オキソ)ペンチル]フランをオレンジ色油状物として得た。
【０３８５】
工程Ｆ．
エタノール中の５−ジエチルホスホノ−２−[(２−ブロモ−４−メチル−１−オキソ)ペンチル]フラン（１mmole）およびチオ尿素（２mmole）の溶液を還流温度で２時間加熱した。冷却した反応混合物を蒸発乾固し、得られた黄色泡沫を飽和重炭酸ナトリウムおよび水（ｐＨ＝８）に懸濁した。得られた黄色固形物をろ過によって集め、２−アミノ−５−イソブチル−４−[２−(５−ジエチルホスホノ)フラニル]チアゾールを得た。
【０３８６】
工程Ｇ．
メチレンクロライド中の２−アミノ−５−イソブチル−４−[２−(５−ジエチルホスホノ)−フラニル]チアゾール（１mmole）の溶液を、２５℃で８時間、ブロモトリメチルシラン（１０mmole）で処理した。この反応混合物を蒸発乾固し、残留物を水に懸濁した。得られた固形物をろ過によって集め、２−アミノ−５−イソブチル−４−[２−(５−ホスホノ)フラニル]チアゾールをオフホワイト色固形物として得た。
１０.１  ２−アミノ−５−イソブチル−４−[２'−(５'−ホスホノ)フラニル]チアゾール
ｍｐ＞２５０℃。
元素分析（Ｃ１１Ｈ１５Ｎ２Ｏ４ＰＳ＋１．２５ＨＢｒとして）：
計算値：Ｃ：３２．７５；Ｈ：４．０６；Ｎ：６．９４．
実測値：Ｃ：３２．３９；Ｈ：４．３３；Ｎ：７．１８．
【０３８７】
同様の手法にしたがって以下の化合物を製造した：
１０.２  ２−メチル−５−イソブチル−４−[２'−(５'−ホスホノ)フラニル]チアゾール。
元素分析（Ｃ１２Ｈ１６ＮＯ４ＰＳ＋ＨＢｒ＋０．１ＣＨ２Ｃｌ２として）：
計算値：Ｃ：３７．２０；Ｈ：４．４４；Ｎ：３．５８．
実測値：Ｃ：３７．２４；Ｈ：４．５６；Ｎ：３．３０．
１０.３  ２−アミノ−５−メチルチオ−４−[２'−(５'−ホスホノ)フラニル]チアゾール。
ｍｐ １８１〜１８４℃。
元素分析（Ｃ８Ｈ９Ｎ２Ｏ４ＰＳ２＋０．４Ｈ２Ｏとして）：
計算値：Ｃ：３２．０８；Ｈ：３．３０；Ｎ：９．３５．
実測値：Ｃ：３２．０９；Ｈ：３．３１；Ｎ：９．１５．
【０３８８】
実測値１１：
シクロホスファミドアナログ合成の一般的手法：
（Boyd, etal., J. Med. Chem. 1980, 23, 372）
酢酸エチル（１００ｍＬ）中のビス(２−クロロエチル)アミドリン酸ジクロライド（１０mmol）の溶液を、室温の酢酸エチル（１００ｍＬ）中の市販の３ メチルアミノ−１−フェニル−１−プロパノール（１０mmol）およびトリエチルアミン（２０mmol）の溶液に滴加する。室温で３日間攪拌した後、この塩をろ別し、ろ液をまとめて減圧下で濃縮する。粗製の生成物をシリカ上でのカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０３８９】
実施例１２：
１−メチルアミノ−１−フェニル−３−プロパノールのホスホルアミドプロドラッグ
工程Ａ：
実施例２の工程Ａに記載の手法と同じ手法を用いて、試薬、Ｎ−メチル−２−(４−ニトロフェノキシ)−２−オキソ−６−フェニル−１，３，２−オキシアザホスホリナンを製造した：
速く溶出する異性体：白色固形物、ｍｐ １３５℃；Ｒｆ＝０．４（シリカ、酢酸エチル／ヘキサン １／１）。
遅く溶出する異性体：白色固形物、ｍｐ １２８〜１２９；Ｒｆ＝０．１５（シリカ、酢酸エチル／ヘキサン １／１）。
【０３９０】
工程Ｂ：
反応混合物を１００℃で５時間攪拌すること以外は、実施例３の工程Ｂに記載の方法と同様の方法により、ヌクレオシドとのカップリング工程を行った。
この方法によって以下の化合物を製造した：
１２.１：９−[(２−(Ｎ−メチル−２−オキソ−６−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリン−２−オキシ)−エトキシ)メチル]−グアニン：淡黄色非晶固形物；Ｒｆ＝０．４５（シリカ、メタノール／ジクロロメタン ２／８）；
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ ｄ６）δ７．８（ｂｓ，１Ｈ）；７．３（ｂｓ，５Ｈ），６．７５（ｂｓ，２Ｈ，Ｄ２Ｏで交換可能）；５．３５（ｂｓ，３Ｈ）。
【０３９１】
この方法によって以下の化合物を製造した：
１２.２：５−(Ｎ−メチル−２−オキソ−６−フェニル−１，３，２−オキシアザホスホリン−２−イル)−９−β−Ｄ−アラビノフラノシルアデニン：オフホワイト色非晶固形物；Ｒｆ＝０．２（シリカ、メタノール／ジクロロメタン １／９）；１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ ｄ６）δ７．４−７．１（ｍ，５ Ｈ）；５．７５（ｓ，１ Ｈ），５．２５（ｍ，１ Ｈ）；４．８（ｍ，１ Ｈ）。
【０３９２】
実施例１３：
３−アミノ−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパンのホスホルアミドプロドラッグ
工程Ａ：
３−フェニル−３−ヒドロキシプロピルメタンスルホナート（１．７１ｇ、Gao, et al., J. Org. Chem., 1988, 53, 4081）、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）および２８％水酸化アンモニウム（３０ｍＬ）の混合物を、ボンベ中、６５℃で１６時間加熱した。冷却後、揮発性物質を除去して水溶液を得、これをエーテルで抽出した。水層を減圧下で濃縮し、無水のアセトニトリルとともに２回共沸し、減圧下で乾燥し、３−アミノ−１−フェニル−１−プロパノール（１．０４ｇ）を白色固形物として得た：ｍｐ ９２−９４℃、Ｒｆ＝０．１（シリカ、メタノール／酢酸エチル １／１）。
【０３９３】
工程Ｂ：
実施例２の工程Ａに記載の手法と同じ手法を用いて、試薬、２−(４−ニトロフェノキシ)−２−オキソ−６−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリナン（１３.１）を製造した：
速く溶出する異性体：Ｒｆ＝０．６（シリカ：酢酸エチル）、１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ ｄ６）δ８．２２（ｍ，２ Ｈ）；７．４８（ｍ、２Ｈ），７．３５（ｍ，５ Ｈ）；５．５２（ｍ，１ Ｈ）。
【０３９４】
工程Ｃ：
実施例３の工程Ｂに記載の方法と同様の方法により、ヌクレオシドとのカップリング工程を行う。
この方法により以下の化合物を製造する：
９−[(２−(Ｎ−メチル−２−オキソ−６−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリン−２−オキシ)−エトキシ)メチル]−グアニン；
５−(Ｎ−メチル−２−オキソ−６−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリン−２−イル)−９−β−Ｄ−アラビノフラノシルアデニン。
【０３９５】
本発明方法の使用の例には、以下のものが含まれる。これらの実施例は例示的であり、本発明方法はこれらの実施例だけに限定されないことが理解されよう。
明瞭さおよび簡潔さのため、以下の生物学的実施例では、化学化合物を合成実施例番号によって表す。
【０３９６】
生物学的実施例
実施例Ａ：抗糖尿病ホスホルアミデートプロドラッグの化学的安定性
方法：リン酸カリウムバッファー（ｐＨ３および７(室温)）中の化合物１.３の１０μｇ／ｍＬ溶液の一定量を、１２時間かけて１時間ごとにサンプル化した。Beckman Ultrasphere C8 カラム（４．６Ｘ２５０ｍｍ）を用いる逆相ＨＰＬＣによってサンプルを分析した。このカラムを平衡化し、５０ｍＭ リン酸ナトリウムｐＨ５．５〜８０％アセトニトリルのグラジエントで流速１．０ｍＬ／分で溶出した。２５４ｎｍで検出した。これらの条件下、２−アミノ−５−イソブチル−４−[２−(５−ホスホノモノアミド)フラニル]チアゾールから、ならびに２−アミノ−５−イソブチル−４−(２−フラニル)チアゾールから化合物１.３を分離した（保持時間＝それぞれ１７、１５．８および１５．６分）。
結果：ｐＨ３．０での化合物１．３の半減期は３．８時間であった；このｐＨでプロドラッグは未知の代謝産物に分解した。ｐＨ７．０で化合物１.３は完全に安定であった；１２時間のインキュベーションを通じて分解の証拠は存在しなかった。
【０３９７】
実施例Ｂ：エステラーゼ、ホスファターゼ、アデノシンデアミナーゼおよび血漿に対するホスホルアミデートプロドラッグの安定性
方法：カルボキシルエステラーゼ（ブタ肝臓）およびアルカリホスファターゼ（子ウシ腸粘液）は Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO) から購入する。０．１Ｍ トリス−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８．０）中でカルボキシルエステラーゼ活性を測定する。この反応における、ｐ−ニトロフェニルアセテート、既知の基質および正のコントロールに対する活性を、例えば Matsushima M., et al., [FEBS Lett. (1991)293(1-2):37-41]に記載されるように測定する。０．５ｍＭ ＭｇＣｌ２を含む０．１Ｍ ジエタノールアミンバッファー（ｐＨ９．８）中でアルカリホスファターゼ活性を測定する。この反応における、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、既知の基質および正のコントロールに対する活性は、[例えば Brenna O., et al (1975) Biochem J. 151(2):291-6] に記載のように測定する。アデノシンデアミナーゼ活性は、例えば Gustin NC, et al. [Anal. Biochem. (1976) 71:527-532] に記載のように測定する。これらの反応においてアデノシンは正のコントロールとして用いる。血漿は新鮮な、ヘパリンで凝固防止されたラットまたはヒト血液から遠心によって調製する。一定濃度、例えば２５μＭのプロドラッグを、カルボキシルエステラーゼ、アルカリホスファターゼ、アデノシンデアミナーゼまたはラットもしくはヒト血漿を含む適当な反応混合物中でインキュベートする。エステラーゼ、ホスファターゼおよびアデノシンデアミナーゼの場合、記載のように酵素の既知の基質を用いて並行反応を行う。
【０３９８】
種々の時点で反応混合物から一定量を取り出し、メタノールを６０％まで加えて反応を停止させる。遠心およびろ過した後、標準的逆相、イオン対形成またはイオン交換ＨＰＬＣ法によって、メタノール性アリコートをＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) または他の代謝産物の生成に関して分析する。
結果：このプロドラッグをカルボキシルエステラーゼ、アルカリホスファターゼまたは血漿に対して暴露した後に、ＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) またはその代謝産物は検出されなかった。
【０３９９】
実施例Ｃ：ラット肝臓ミクロソームによるホスホルアミデートプロドラッグの活性化
方法：新鮮な、食塩水で潅流されたラット肝臓からミクロソームフラクションを調製する。２ｍＭ ＭｇＣｌ２および１ｍＭ ＥＧＴＡを含む０．２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４バッファー（ｐＨ７．５）３容量（ｗ／ｖ）中で肝臓組織をホモジナイズする。ホモジネートを１０，０００ｇで１時間遠心し、上清を回収する。上清フラクションを１００，０００ｇで再び遠心し、ミクロソームフラクションをペレット化する。このペレットをホモジナイズバッファーに再懸濁し、再遠心する。このプロセスを２回繰り返し、サイトゾルの酵素活性を完全に除去する。最後の遠心後、ミクロソームペレットをホモジナイズバッファーに、最終タンパク質濃度約１４ｍｇ／ｍＬで再懸濁する。反応混合物（０．５ｍＬ）は０．２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．５）、１３Ｍｍ グルコース−６−ホスフェート、２．２ｍＭ ＮＡＤＰ＋、１単位のグルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、、０〜２．５ｍｇ／ｍＬのミクロソームタンパク質および１００μＭ 化合物７.１からなる。反応は３７℃で行う。適当な時点で反応混合物から一定量を取り出し、６０％メタノールで抽出する。メタノール抽出物を１４，０００ｒｐｍで遠心し、ろ過（０．２μＭ）し、ＨＰＬＣで分析する。逆相、イオン対形成またはイオン交換クロマトグラフィーを含む標準的ＨＰＬＣ技術を用いる。溶出ピークは既知の濃度の標準物と比較して定量する。
【０４００】
別法では、この反応の必須の補因子であるＮＡＤＰＨの枯渇によってプロドラッグの活性化をモニターする。このアッセイは、０．２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４、０．２２ｍＭ ＮＡＤＰＨ、０〜２．５ｍｇ／ｍＬ ミクロソームタンパク質および１００μＭ 化合物２８.４または３０.１からなる反応混合物中で行う。反応は３４０ｎｍでの分光測定によってモニターする。吸光度の減少は補因子の枯渇を表し、したがってプロドラッグがＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) に酵素酸化されたことを示す。
【０４０１】
結果：ＮＡＤＰ＋（この補因子は反応混合物中に存在するデヒドロゲナーゼによってＮＡＤＰＨに酵素還元される）の存在下ではプロドラッグはＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) に変換され、不存在下ではそうならない。この結果は、プロドラッグの活性化に酸化工程が関与することを示す。プロドラッグがＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−)に活性化される割合は、ミクロソームタンパク質濃度に対してリニアに依存し、このことは活性化が酵素依存機構によって生じることを確実にする。
【０４０２】
実施例Ｄ：ヒトミクロソームによるホスホルアミデートプロドラッグの活性化および活性化に関与するミクロソーム酵素の同定および組織分布
方法：ヒト肝臓ミクロソームおよびすべての主要なイソ型を示すクローン化ヒトＰ４５０酵素をそれぞれ In Vitro Technologies および Gentest Inc., から得る。反応混合物は典型的に１００ｍＭ リン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．４）、２ｍＭ ＮＡＤＰＨ、０〜２ｍｇ／ｍＬ ミクロソームタンパク質またはクローン化ミクロソームイソ酵素および、例えば１００μＭ濃度のプロドラッグを含む。ＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) の形成は、標準的逆相、イオン対形成またはアニオン交換ＨＰＬＣ法によってモニターする。ＭＰＯ２(ＮＨＲ６−)をｕｖ吸収によって検出し、標準物と比較して定量する。活性化酵素の組織分布を測定するために、肝臓、肺、腸、腎臓、心臓および骨格筋を含む鍵となる組織からホモジネートを調製する。各ホモジネート中でプロドラッグがＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−)に変換される割合は、上のミクロソーム反応に関して記載されるように評価する。別法では、主要な触媒的イソ型（catalytic isoform）を同定した後、特定の酵素に対して作成した抗体を用いる免疫組織学的方法（Waziers et al 1989, J. Pharm. Exp. Ther. 254: 387）、またはＰＣＲ技術を用いる分子生物学的方法（Sumida et al 2000, BBRC 267: 756）を用いて、活性の組織分布を測定する。
【０４０３】
結果：ヒトミクロソームが触媒する反応において、プロドラッグは、容易に測定可能な割合でＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) に変換される。クローン化ミクロソームイソ酵素のスクリーニングでは、他のイソ酵素もプロドラッグへ向けたいくらかの活性を示すが、ＣＹＰ３Ａ４イソ酵素が最も高い割合でプロドラッグの活性化を触媒する。この組織分布研究では、他の組織と比べて肝臓における活性化酵素の高い活性または豊富さが示される。
【０４０４】
実施例Ｅ：特異的酵素阻害剤の使用による、ホスホルアミデートプロドラッグ活性化に関与するＰ４５０イソ酵素の同定
３つの主要なＰ４５０イソ酵素の特異的阻害剤：ケトコナゾール（ＣＹＰ３Ａ４）、フラフィリン（ＣＹＰ１Ａ２）およびスルファフェナゾール（ＣＹＰ２Ｃ９）の不存在および存在下において、ヒトミクロソームが触媒するＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) への変換に関してプロドラッグを評価する。
方法：反応物（０．５ｍＬ＠３７℃）は０．２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４、１３ｍＭ グルコース−６−ホスフェート、２．２ｍＭ ＮＡＤＰ＋、１単位のグルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、０〜２．５ｍｇ／ｍＬ ヒトミクロソームタンパク質（In Vitro Technologies, Inc.）、２５０μＭ プロドラッグおよび０〜１００μＭ Ｐ４５０イソ酵素阻害剤からなる。メタノールを濃度６０％にまで添加して反応を停止させ、ろ過（０．２μＭ フィルター）する。標準的逆相、イオン対形成またはイオン交換ＨＰＬＣ法によってＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) を定量する。溶出ピークを既知の濃度の標準物と比較して定量する。
【０４０５】
結果：ケトコナゾールは用量依存的にＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) の形成を阻害する。他の阻害剤、フラフィリンおよびスルファフェナゾールは有意な阻害を示さない。この結果は、ＣＹＰ３Ａ４がヒト肝臓におけるホスホルアミデートプロドラッグの活性化を担う主要なＰ４５０イソ型であることを示す。
【０４０６】
実施例Ｆ：組換えＣＹＰ３Ａ４による化合物１.３の活性化
ヒト組換えＣＹＰ３Ａ４およびシトクロームＰ４５０還元酵素を同時発現するバキュロウイルス感染昆虫細胞由来のミクロソームを含む反応において化合物１.３の活性化を評価した（Panvera Corp., Madison, WI）。
方法：反応混合物の組成は実施例Ｄに記載のものと同様であった。メタノールを最終濃度６０％まで添加して反応を停止させ、生成物を実施例Ａに記載のようにＨＰＬＣによって分析した。
結果：化合物１.３から、４．２nmoles／分／nmole ＣＹＰ３Ａ４の割合で２−アミノ−５−イソブチル−４−[２−(５−ホスホノモノアミド)フラニル]チアゾールを製造した。
【０４０７】
実施例Ｇ：単離されたラット肝細胞における抗ウイルスホスホルアミデートプロドラッグの活性化
ラット肝細胞における対応するヌクレオシドトリホスフェートの細胞内生産をモニターして、化合物３.１および３.２の活性化を評価した。
方法：飼育された、デキサメタゾーン誘導化 Sprague-Dawley ラット（３００ｇ）から、Groen (Groen, A.K. et al. Eur J. Biochem 122, 87-93 (1982)) によって修飾されるように Berry および Friend (Berry, M.N., Friend, D.S.J. Cell Biol. 43, 506-520 (1969)) の手法にしたがって肝細胞を調製した。肝細胞（６２ｍｇ湿重量／ｍＬ）を１０ｍＭ グルコースおよび１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡを含む Krebs 重炭酸バッファー２ｍＬ中でインキュベートした。インキュベーションは、高速振とう水浴（３７℃）中に沈めた密封５０ｍＬ Falcon チューブ中の９５％酸素、５％二酸化炭素雰囲気中で行った。化合物３.１および３.２をメタノールに溶解し、２５ｍＭ 保存溶液を得、次いでこれを細胞懸濁液に希釈し、最終濃度２５０μＭにした。投与２時間後、一定量の細胞懸濁液を取り出し、ケイ素／鉱油層を通して１０％過塩素酸中へ移す。０．３容量の３Ｍ ＫＯＨ／３Ｍ ＫＨＣＯ３を加えて酸層中の細胞抽出物を中和し、７０％ Ａ（１０ｍＭ リン酸アンモニウム ｐＨ３．５、６％ ＥＴＯＨ）および３０％ Ｂ（１Ｍ リン酸アンモニウム ｐＨ３．５、６％ ＥＴＯＨ）で平衡化したアニオン交換ＨＰＬＣカラムにロードした。それぞれ化合物３.１および３.２の予想される代謝産物であるＡｒａＡＴＰおよびアシクロビル−トリホスフェートを、２０分間、８０％ Ｂまでの直線状グラジエントでカラムから溶出した。２５４ｎｍでのｕｖ吸収によって検出した。天然肝細胞抽出物に注入された標準物に対するピーク領域を比較することによって、ピーク領域を定量した。
【０４０８】
結果：単離されたラット肝細胞において、両プロドラッグはそれぞれのトリホスフェートを生産した。インキュベート２時間後に形成された量を以下にまとめる：
0005063837.tif 000049
【０４０９】
実施例Ｈ：キナーゼバイパス
アシクロビルのホスホルアミデートプロドラッグ（化合物３.２）およびアシクロビルそのものからのアシクロビルトリホスフェートの生産をラット肝細胞内で比較した。
方法：実施例Ｇに記載されるように、単離されたラット肝細胞中、２５０μＭにおいて、化合物３.２およびアシクロビルを評価した。
結果：インキュベーション２時間後に形成されたアシクロビルトリホスフェート量を以下にまとめる：
0005063837.tif 000050
【０４１０】
この結果は、アシクロビルのような細胞内で不十分にしかリン酸化されない親ヌクレオシドのホスホルアミデートプロドラッグは、ヌクレオシドリン酸化工程をバイパスでき、したがって遊離のヌクレオシドよりも高い細胞内レベルのトリホスフェートを生産可能であることを示す。
【０４１１】
実施例Ｉ：化合物１.３によるラット肝細胞でのグルコース生産の阻害
単離されたラット肝細胞において、グルコース生産の阻害に関し、化合物１.３およびそのホスホン酸親化合物、２−アミノ−５−イソブチル−４−(２−フラニル)チアゾールを試験した。
方法：絶食させた Sprague Dawley ラット（２５０〜３００ｇ）から実施例Ｇに記載のように単離されたラット肝細胞を調製した。肝細胞（７５ｍｇ湿重量／ｍＬ）を１０ｍＭ グルコースおよび１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡを含む Krebs 重炭酸バッファー１ｍＬ中でインキュベートした。インキュベーションは、高速振とう水浴（３７℃）中に沈めた密封５０ｍＬ Falcon チューブ中９５％酸素、５％二酸化炭素雰囲気中で行った。１０分の平衡化後、ラクテートおよびピルベートをそれぞれ１０ｍＭおよび１ｍＭ濃度まで加えた。これらの糖新生基質の添加後、すぐに試験化合物を１〜１００μＭの範囲の濃度まで加えた。１時間後、一定量（０．２５ｍＬ）を取り出し、Eppendorf チューブに移し、遠心した。次いで、Glucose Oxidase キット（Sigma Chemical Co.）を製造元の指示にしたがって用いて得られた上清（５０μＬ）をグルコース含有量に関してアッセイした。
【０４１２】
結果：化合物１.３および２−アミノ−５−イソブチル−４−(２−フラニル)チアゾールは、用量依存的に、それぞれ８．５および２．５μＭのＩＣ５０'ｓでグルコース生産を阻害した。化合物１.３はインビトロにおけるＦＢＰアーゼの阻害剤ではないので、肝細胞における糖新生の阻害により、プロドラッグが細胞内で２−アミノ−５−イソブチル−４−(２−フラニル)チアゾールに変換されることが確実にする。化合物１.３の効力が２−アミノ−５−イソブチル−４−(２−フラニル)チアゾールと比べて約１／３であることは、細胞内においてプロドラッグが親化合物へ時間依存的に活性化されることと矛盾しない。
【０４１３】
実施例Ｊ：誘導化ラット肝臓細胞における抗糖尿病および抗ウイルス性ホスホルアミデートプロドラッグの活性化
デキサメタゾーン処理によってＣＹＰ３Ａ４発現が誘導されている、ラットから単離された肝細胞の活性化に関して、化合物１.７および１２.１を試験した。この処理はホスホルアミデートプロドラッグのより過度の細胞内活性化を生じさせる。
方法：（Brain EGC et al 1998, Br. J. Cancer 7: 1768）に記載されるようにラットをデキサメタゾーン（５０ｍｇ／ｋｇ、腹膜内）で４日間処理した。単離された肝細胞を調製し、実施例Ｇに記載されるように、プロドラッグを活性化に関して試験した。
結果：２時間のインキュベーション後、化合物１.７は活性化され、２０．５±３nmole／ｇ量の２−アミノ−５−メチルチオ−４−[２−(５ ホスホノ)フラニル]チアゾールを得た。化合物１２.１は１１０±０．２nmoles １ｇアシクロビル トリホスフェートを生じさせた。
【０４１４】
実施例Ｋ：ＣＹＰ３Ａ４を発現していないセルラインにおけるホスホルアミデートプロドラッグの細胞毒性試験
血漿安定プロドラッグ形態の薬物を投与すると、遊離のＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および代謝産物への暴露を制限することによって全身毒性を減少させることができる。このプロドラッグデリバリーの潜在的利点は、プロドラッグの活性化に必要とされるＣＹＰ３Ａ４酵素を発現していないセルラインにおけるこのプロドラッグの毒性プロファイルを対応する親化合物と比較することによって示される。
方法：セルラインの選択は親化合物の既知の毒性プロファイルによって決まる。親化合物の毒性プロファイルが未知である場合、種々の培養セルラインのパネルを試験することができる。細胞を一定範囲のプロドラッグおよび親化合物濃度に数時間〜数日暴露する。生存性は Trypan blue 排除、酵素マーカー漏出、ＤＮＡへのラベル化チミジンの包含または他の標準的方法によって測定される。
【０４１５】
結果：ホスホルアミデートプロドラッグは非細胞毒性であるか、あるいは対応する親化合物より相当高い濃度で細胞毒性である。後者のプロファイルはプロドラッグへの全身性暴露が高い場合でさえ、遊離の親化合物より低いインビボ末梢毒性を示す可能性があることを示す。試験プロドラッグはこのように、プロドラッグの本質的毒性の評価を可能にし、これを用いて好ましい細胞安全プロファイルを有するプロドラッグを選択することができる。
【０４１６】
実施例Ｌ：ホスホルアミデートプロドラッグ活性化を触媒する細胞系における細胞毒性試験
ホスホルアミデートプロドラッグが活性化される系における細胞毒性試験は、生成するＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) およびプロドラッグの他の代謝産物または親化合物の安全性評価を可能にする。いくつかの細胞系は試験に有用である：（ａ）適当な誘導物質、例えばリファンピシンによってＣＹＰ３Ａ４発現が維持されている、ヒトまたは他の起源の肝細胞の新鮮な初期培養、（ｂ）ＣＹＰ３Ａ４および必要な還元酵素が同時トランスフェクションされているセルライン、（ｃ）ＣＹＰ３Ａ４を発現する初期肝細胞とともにインキュベートされているセルライン、（ｄ）標準的ＮＡＤＰＨ再利用系に加えてＣＹＰ３Ａ４含有ミクロソームフラクションまたはクローン化ＣＹＰ３Ａ４調製物とともにインキュベートされているセルライン。プロドラッグをこれらの系において数時間または数日インキュベートする。細胞毒性は標準的方法、例えば Trypan blue 排除技術、酵素マーカーの漏出、細胞のＤＮＡ内へのラベル化前駆体の包含などによって評価する。
【０４１７】
実施例Ｍ：インビトロ副産物毒性試験
あるホスホルアミデートプロドラッグの活性化はまた、ＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) を生成することに加えて、細胞成分のアルキル化能を有する親電子性副産物を形成させる。問題のプロドラッグは主に肝臓で活性化されるので、形成された副産物の潜在的毒性を試験するための細胞タイプとして、プロドラッグの活性化に必要とされるミクロソーム酵素および重要な解毒機構の両者を含むことが知られている初期（primary）ラット肝細胞を選択する。
【０４１８】
方法：上記実施例Ｇに記載のように、単離されたラット肝細胞を調製し、試験化合物とインキュベートする。アセトアミノフェンは、これらの細胞においてミクロソーム代謝により親電子性代謝産物を生じさせる（Smolarek TA et al 1989, Metabolism and Disposition 18: 659）ことが知られているため、これらの試験においてアセトアミノフェン（０〜１０ｍＭ）を正のコントロールとして用いる。この代謝産物はグルタチオン、肝臓細胞内にｍＭ濃度で存在する保護チオールに加えることによって解毒される。アセトアミノフェンおよびホスホルアミデートプロドラッグとのインキュベーションは４時間である。細胞の生存性はラクテートデヒドロゲナーゼまたは他の肝臓酵素漏出ならびに／あるいは Trypan blue 排除によって評価する。また細胞内グルタチオン保存を、（Baker MA et al 1990, Anal. Biochem. 190: 360）に記載のように定量する。
【０４１９】
結果：アセトアミノフェンは、試験された最も高用量（１０ｍＭ）において９０％まで細胞内グルタチオン量を枯渇させたが、Trypan blue 排除によって測定される細胞の生存性を危険にさらさなかった。このデータは、アセトアミノフェン代謝の結果として生じる副産物は肝細胞において容易に解毒され、細胞の解毒能を超えなかったことを示す。この肝細胞系においてホスホルアミデートプロドラッグの活性化は副産物に関連する毒性を引き起こさない。
【０４２０】
実施例Ｎ：インビボ副産物毒性試験
特定のホスホルアミデートプロドラッグのミクロソーム活性化によって生じた親電子物質の毒性をマウスにおいて試験する。
方法：マウスに種々の用量のプロドラッグおよびアセトアミノフェン（正のコントロール、実施例Ｍ参照）を投与し、次いで薬物投与後種々の時点で犠牲にする。肝臓を取り出し、実施例Ｍに記載のようにグルタチオン分析に関して処理し、ならびに標準的逆相、イオン対形成またはイオン交換ＨＰＬＣ法により薬物分析に関して処理する。血漿サンプルは、肝臓機能のマーカーを評価する標準的化学パネルに付する。
【０４２１】
結果：アセトアミノフェン暴露（５０、２５０および５００ｍｇ／ｋｇ）は肝臓グルタチオンの用量依存的減少を生じさせる。肝臓の酵素増加および壊死障害の発症の形態の肝臓毒性は最も高い用量でのみ明らかであり、ここでは肝臓グルタチオンが＞８０％まで枯渇していた。このことは文献に記載されており；グルタチオンは、形成された親電子性アセトアミノフェン代謝産物との付加化合物を形成し、枯渇のしきいレベルが達成されるまで肝臓損傷に対して保護する（Mitchell JR et al 1973, J. Pharm. and Exp. Ther 187: 211）。ホスホルアミデートプロドラッグ投与はまた、グルタチオン枯渇を生じさせ、このことは形成された副産物が効率的に解毒されることを示す。肝臓損傷は、ヒトにおいて計画される治療用量をかなり超える非常に高い用量でのみ見られる。このデータはまた、ホスホルアミデートプロドラッグ投与後における用量依存のＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の蓄積を示す。
【０４２２】
実施例Ｏ：ＣＹＰ３Ａ誘導物質で前処理された動物の肝臓への、薬物の高められたデリバリー
ラットにおいて、デキサメタゾーンまたは他の適当な物質で処理することにより、肝臓ＣＹＰ３Ａ酵素を誘導する。ＣＹＰ３Ａ発現を高めると、高い割合のプロドラッグ活性化が生じ、したがってこの器官へのＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の分配が高められる。
【０４２３】
方法：（Brain EGC et al 1998, Br. J. Cnacer 7: 1768）に記載のようにラットをデキサメタゾーン（５０ｍｇ／ｋｇ、腹膜内）で４日間処理する。他のＣＹＰ誘導物質、例えばフェノバルビタールまたはリファンピシンを用いることもできる。次いで、誘導された動物にプロドラッグを経口投与または全身投与し、次いで種々の時点で犠牲にする。肝臓を取り出し、過塩素酸（１０％）でホモジナイズする。遠心および中和によって透明にした後、ホモジネート中のＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物を、標準的ＨＰＬＣ法によって定量する。同様の実験を誘導されていない動物において行う。
【０４２４】
結果：誘導されたマウスの肝臓におけるＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物のＡＵＣは誘導されていないマウスのものを超えるであろう。ＣＹＰ３Ａ誘導から得られたＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の高められた肝臓デリバリーは効力の増加を生じさせることが予測される。
【０４２５】
実施例Ｐ：ホスホルアミデートプロドラッグの経口バイオアベイラビリティー
ホスホルアミデートプロドラッグの経口バイオアベイラビリティー（ＯＢＡＶ）は、経口投与後に肝臓において生じるＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の曲線下領域（ＡＵＣ）を静脈内投与後に生じるものと比較することによって評価する。別法では、プロドラッグ投与後のＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の尿排出アッセイによってＯＢＡＶを測定する。
【０４２６】
方法：適当なビヒクル中のホスホルアミデートプロドラッグをラットに経口投与または全身投与し、次いで薬物投与後の適当な時点で犠牲にする。肝臓および血漿サンプルを得、処理し、ＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物に関して標準的逆相、イオン対形成またはイオン交換ＨＰＬＣ法によって分析する。別法では、薬物投与後に動物を代謝かごに入れ、尿を２４〜４８時間収集する。次いで、尿に排出されたＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の量をＨＰＬＣ分析によって測定する。経口投与後および全身投与後の、肝臓におけるＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物のＡＵＣまたは尿中の量を比較し、経口バイオアベイラビリティーを計算する。
【０４２７】
結果：データは、ホスホルアミデートプロドラッグがＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の経口デリバリーに適することを示す。
【０４２８】
実施例Ｑ：ホスホルアミデートプロドラッグ投与後のＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の、高められた肝臓デリバリーおよび減じられた全身暴露
方法：ラットにホスホルアミデートプロドラッグ、ＭＰＯ２(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物を経口投与または全身投与する。次いで、薬物投与後適当な時点で動物を犠牲にする。肝臓および血漿サンプルを得、処理し、標準的逆相、イオン対形成またはイオン交換ＨＰＬＣによってＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物に関して分析する。
結果：ホスホルアミデートプロドラッグを投与すると、遊離のＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) を投与した場合よりも、肝臓においてより高レベルのＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物が生じ、その血漿中の濃度は減少する。
【０４２９】
実施例Ｒ：ホスホルアミデートプロドラッグの投与後の、ＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の減少した腎臓排出
方法：ホスホルアミデートプロドラッグおよび各ＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) をラットに全身投与する。次いで、ラットを代謝かごに入れ、２４〜４８時間尿を収集する。尿中のＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物を、標準的逆相、イオン対形成またはイオン交換ＨＰＬＣ法によって定量する。尿中に排出された親化合物／代謝産物の量を投与量と比較することによって、％腎臓クリアランスを計算する。
【０４３０】
結果：ホスホルアミデートプロドラッグ投与後のＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の腎臓排出は親化合物を投与した場合より低下する。この結果は、特定の親化合物および／またはその代謝産物に関連する腎臓暴露およびそれゆえの腎臓毒性が、化合物をホスホルアミデートプロドラッグ形態で投与することにより回避できることを示す。
【０４３１】
実施例Ｓ：持続した肝臓薬物レベル
方法：ラットにホスホルアミデートプロドラッグまたは対応するＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) を経口投与および全身投与し、次いで、薬物投与後の適当な時点で犠牲にする。肝臓サンプルを得、処理し、標準的逆相、イオン対形成またはイオン交換ＨＰＬＣにより、ＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物に関して分析する。WinNonLin 1.1 software (Scientific Consulting, Inc.) を用いて肝臓の半減期を測定する。
【０４３２】
結果：ホスホルアミデートプロドラッグ形態で投与した場合、遊離のＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) を投与した場合より、肝臓におけるＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の半減期は長くなる。この結果は、このプロドラッグがＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) 蓄積物として働き、延長されたインビボ半減期のおかげで、ＭＰＯ２−(ＮＨＲ６−) および／またはその代謝産物の肝臓への持続した放出を提供することと矛盾しない。