(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ型肝炎ウイルスｓ抗原（ＨＢｓＡｇ）と、Ｂ型肝炎ウイルスｃ抗原（ＨＢｃＡｇ）をプロテアーゼ処理して得られたＢ型肝炎ウイルスｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）との両方を含むことを特徴とする、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）抗原検出用の精度管理用試薬。
【請求項２】
ｐＨを６．５〜７．５に維持するための緩衝剤をさらに含有する請求項１に記載の精度管理用試薬。
【請求項３】
タンパク質保護剤をさらに含有する請求項１又は２に記載の精度管理用試薬。
【請求項４】
前記プロテアーゼが、トリプシンである請求項１〜３のいずれか１項に記載の精度管理用試薬。
【請求項５】
前記ＨＢｓＡｇが、遺伝子組み換えＨＢｓＡｇである請求項１〜４のいずれか１項に記載の精度管理用試薬。
【請求項６】
前記ＨＢｃＡｇが、遺伝子組み換えＨＢｃＡｇである請求項１〜５のいずれか１項に記載の精度管理用試薬。
【請求項７】
ＨＢｓＡｇと、ＨＢｃＡｇをプロテアーゼ処理して得られたＨＢｅＡｇとを混合する工程を含むＨＢＶ抗原検出用の精度管理用試薬の製造方法。
【請求項８】
前記混合する工程において、ｐＨを６．５〜７．５に維持するための緩衝剤をさらに混合する請求項７に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）抗原を検出する方法において用いることができる精度管理用試薬及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に対する感染の有無及び感染の種類（一過性感染又は持続性感染）の診断、治療経過の観察、感染の病歴の調査などは、一般に、患者の血液中のＢ型肝炎ウイルスｓ抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ｂ型肝炎ウイルスｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）、ＨＢｓＡｇに対する抗体（ＨＢｓ抗体）、Ｂ型肝炎ウイルス核抗原に対する抗体（ＨＢｃ抗体）、ＨＢｅＡｇに対する抗体（ＨＢｅ抗体）などのＨＢＶマーカーを調べることにより行うことができる。
例えば、ＨＢｓ抗体やＨＢｃ抗体が陽性であることは過去にＨＢＶに感染していたことを示すが、現在の感染の有無を調べるには、まずＨＢｓＡｇを調べる。また、ＨＢｅＡｇの量を調べることにより、患者の体内でのウイルスの感染性の程度を知ることができる。
【０００３】
これらのＨＢＶマーカーは、一般的に、これらの抗原又は抗体に対する抗体又は抗原を用いるラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）やエンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）のような免疫測定法により検出及び定量できることが知られている。
このようなＨＢＶマーカーの測定が正確に行われていることを確認するために、測定対象となるＨＢＶ抗原又は抗体を含む精度管理用試薬（いわゆる陽性コントロール）が利用されている。
【０００４】
従来、ＨＢｓＡｇやＨＢｅＡｇを測定する際の精度管理用試薬に含まれるＨＢＶ抗原としては、ＨＢＶに感染したヒトの血液から得られたものが用いられていた。しかし、この場合、原料としてのヒトの血液を安定して入手することが困難であること、抗原の精製の際に感染の危険性があることなどの問題があった。
【０００５】
そこで、これらのＨＢＶ抗原を、遺伝子組換え技術により作製する研究が進められている。
例えば特開昭５８−５２２２８号（特許文献１）には、遺伝子組換え技術により大腸菌で発現させたＢ型肝炎ウイルスｃ抗原（ＨＢｃＡｇ）を、プロテアーゼで処理することにより、ＨＢｅＡｇを得る方法が開示されている。また、特開平７−２０３９７１号（特許文献２）には、酵母で発現させる組換えＨＢｅＡｇが開示されている。
また、特開２００１−２９４５９９号（特許文献３）には、遺伝子組み換え技術によりＨＢｓＡｇを得ることが開示されている。
【０００６】
現在、ＨＢｓＡｇ測定用の精度管理用試薬としては上述したようなＨＢｓＡｇを含む精度管理用試薬が、ＨＢｅＡｇ測定用の精度管理用試薬としては上述したようなＨＢｅＡｇを含む精度管理用試薬が、それぞれ製造、販売されている。しかしながら、これらの２種の抗原測定に共通して使用できる精度管理用試薬は知られていない。
【０００７】
ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの２種の抗原の測定に共通して使用できる精度管理用試薬を得ることができれば、１種類の精度管理用試薬を２種の測定に用いることができるので、試薬の数を少なくして検査における煩雑さを低減することができる。このことから、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの測定に共通して使用できる精度管理用試薬の開発が望まれている。
【特許文献１】特開昭５８−５２２２８号公報
【特許文献２】特開平７−２０３９７１号公報
【特許文献３】特開２００１−２９４５９９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの測定に共通して使用できる精度管理用試薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、ＨＢｓＡｇと、ＨＢｃＡｇをプロテアーゼ処理して得られたＨＢｅＡｇとの両方を含む、ＨＢＶ抗原検出用の精度管理用試薬を提供する。
また、本発明は、ＨＢｓＡｇと、ＨＢｃＡｇをプロテアーゼ処理して得られたＨＢｅＡｇとを混合する工程を含むＨＢＶ抗原検出用の精度管理用試薬の製造方法をも提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のＨＢＶ抗原検出用の精度管理用試薬は、ＨＢｓＡｇとＨＢｅＡｇとを含むので、ＨＢｓＡｇの測定及びＨＢｅＡｇの測定の両方において用いることができる。これにより、例えば両方の抗原について測定を行う場合に、試薬の数が多くなり測定が煩雑になることを回避できる。
また、この精度管理用試薬に含まれるＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇは、安定性が良好である。これにより、安定性に優れた精度管理用試薬を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明者らは、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの２つの抗原を試薬に含有させることにより、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの測定に共通して使用できる精度管理用試薬を得ることができると考えた。しかしながら、ＨＢｓＡｇとＨＢｅＡｇの安定性が良い条件は必ずしも同じではない。例えば、ＨＢｓＡｇの安定性はｐＨ７．０付近で良好であるのに対して、ＨＢｅＡｇの安定性は悪くなる。一方、ＨＢｅＡｇの安定性はｐＨ８．５付近で比較的良いのに対して、ＨＢｓＡｇの安定性は悪くなる。このため、単にこれらの２種の抗原を含む精度管理用試薬を作製しても、いずれか一方の抗原の安定性が悪い条件の試薬しか作製することができず、精度管理用試薬としての品質を充分に保障できない。
【００１２】
そこで、本発明者らは、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの２種の抗原を共に安定な条件で含む精度管理用試薬を得るために鋭意研究を重ねた結果、ＨＢｃＡｇをプロテアーゼ処理して得られるＨＢｅＡｇを用いることにより、同じ精度管理用試薬中にこれらの２種の抗原を安定に含有させることができることを見出して、本発明を完成した。
【００１３】
本明細書において、「ＨＢＶ抗原検出用の精度管理用試薬」とは、ＨＢＶ抗原を検出するための測定の精度を保証するために用いられる精度管理用物質、いわゆる陽性コントロールを意味する。
【００１４】
本発明の精度管理用試薬は、ＨＢｓＡｇと、ＨＢｃＡｇをプロテアーゼ処理して得られたＨＢｅＡｇとを含む。
ＨＢｓＡｇは、ＨＢＶの外殻を構成するタンパク質であり、ＨＢＶ表面抗原とよばれる。本発明の精度管理用試薬に用いるＨＢｓＡｇは、ＨＢＶに感染した人の血液から精製して得られるものであってもよいが、一定の品質のものが得られるという点で、遺伝子組換え技術により得られる組換えＨＢｓＡｇが好ましい。
ＨＢｓＡｇは、ｓ抗原としての抗原性を有する部分を切り出した抗原フラグメントであってもよい。
ＨＢｓＡｇとしては、市販品を用いることができる。
【００１５】
上記の精度管理用試薬に用いられるＨＢｅＡｇは、ＨＢｃＡｇをプロテアーゼ処理することにより得られる。ＨＢｅＡｇは、ＨＢＶのコア粒子を構成するタンパク質であり、ＨＢＶが増殖する際にＨＢＶに感染したヒトの血液中に放出されるので、この抗原を検出することにより、感染の状態を調べることができる。
通常、ＨＢｃＡｇはＨＢＶの外殻に包まれた内部に存在するので、ＨＢＶに感染したヒトの血液中にＨＢｃＡｇを検出することはほとんどできない。
よって、上記のＨＢｅＡｇを得るために用いられるＨＢｃＡｇは、遺伝子組換え技術により得られる組換えＨＢｃＡｇが好ましい。
組換えＨＢｃＡｇは、市販品を用いることができる。
【００１６】
ＨＢｃＡｇをプロテアーゼ処理してＨＢｅＡｇを得る方法としては、公知の方法を利用した（特許文献１に記載の方法）。
【００１７】
ＨＢｅＡｇを得るために用いられるプロテアーゼは、ＨＢｃＡｇからＨＢｅＡｇを得るために通常用いられるプロテアーゼであれば特に限定されず、トリプシン、プロナーゼ、ズブチリシン、カルボキシペプチダーゼＡ、カルボキシペプチダーゼＢ、パパイン、キモパイン、プロメリン、プロテアーゼＫ及びテルモリシンからなる群より選択されるものを好適に用いることができる。より好ましくは、トリプシンである。
【００１８】
上記の精度管理用試薬中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇのそれぞれの濃度は、該精度管理用試薬を用いる測定方法の種類、測定に用いる試薬及び装置の種類などに応じて適宜設定することができる。
【００１９】
ＨＢｓＡｇは、一般にｐＨ６．５〜７．５といった中性付近のｐＨで安定であると考えられている。一方、ＨＢｅＡｇは、一般にｐＨ８．０〜９．０といった弱アルカリ性付近のｐＨで安定であると考えられている。しかしながら、上記のようなプロテアーゼ処理により得られたＨＢｅＡｇについて本発明者らが安定性を調べたところ、プロテアーゼ処理により得られたＨＢｅＡｇは中性付近のｐＨで安定でもあるとがわかった。
これらのことから、上記の精度管理用試薬は、中性付近のｐＨとすることが好ましい。具体的なｐＨとしては、６．５〜７．５が好ましく、６．８〜７．２がより好ましい。
上記の精度管理用試薬は、上記のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの他に、ｐＨを上述したような範囲に維持するための緩衝剤を、さらに含有するものが好ましい。該緩衝剤としては、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、リン酸ナトリウム、及びＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＢＥＳなどのグッド緩衝剤などが挙げられる。緩衝剤の濃度は、上記のｐＨが維持できる濃度であれば特に限定されない。
【００２０】
上記の精度管理用試薬は、精度管理用試薬中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇが、保存する容器などに吸着してしまうことを防止するためのタンパク質保護剤をさらに含有するものが好ましい。このようなタンパク質保護剤は、従来公知のものを用いることができ、ＢＳＡ、カゼイン、コラーゲン、ゼラチン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）などが挙げられる。精度管理用試薬にタンパク質保護剤を含有させることにより、精度管理用試薬中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇが、保存する容器などに吸着してしまうことを防ぐことができる。
上記のタンパク質保護剤は、精度管理用試薬中に０．００１〜５重量％、より好ましくは０．０５〜１重量％含まれることが好ましい。
【００２１】
上記の精度管理用試薬は、上記の成分以外に、従来の精度管理用試薬に含まれることが知られている添加成分を含むことができる。このような添加成分としては、防腐剤（例えばアジ化ナトリウム）、賦形剤（例えばシュークロース）、キレート剤（例えばＥＤＴＡ）などが挙げられる。
【００２２】
上記の精度管理用試薬は、液状でもよく、液体を凍結させた凍結状態でもよく、液体から凍結乾燥により得られる固体状でもよい。例えば液状である場合、精度管理用試薬は、その状態で測定に用いることができる。凍結状態である場合、精度管理用試薬は、使用前に融解することにより液状にしてから測定に用いることができる。固体の形状である場合、使用前に適切な溶媒、例えば水、緩衝液などに溶解することにより液状にしてから測定に用いることができる。
【００２３】
上記の精度管理用試薬は、ＨＢｓＡｇとＨＢｅＡｇとを安定に保持するものである。ここで安定とは、精度管理用試薬を液状で冷蔵（２〜８℃）の条件下でおよそ６ヶ月間、好ましくはおよそ１年間保存した場合、試薬中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの抗原性の変化が保存前のものと比べて±１０％範囲内、好ましくは±５％範囲内であることをいう。なお、このような安定性は、精度管理用試薬を液状で４５℃で３日間保存した場合の、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの抗原性を調べることにより簡便に予測することができる。この簡便な方法において、精度管理用試薬中のこれらの抗原性が、対照に対して９０％以上、好ましくは９５％以上保持されていれば、試薬中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇが安定に保持されると予測できる。該抗原性は、抗原を測定する方法により測定でき、例えば抗原に対する抗体を用いる免疫測定法を用いて測定できる。上記の対照とは、精度管理用試薬を冷蔵（２〜８℃）又は冷凍（−３０℃未満）の条件下で同じ期間保存したものを用いることができる。
【００２４】
上記の精度管理試薬が液状の場合、試薬溶液中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの保存安定性が優れた試薬となる。上述したように試薬の形態としては液状以外に、凍結又は固体の状態であり得る。しかし測定を行う際には通常、凍結又は固体の状態の精度管理用試薬を融解又は水溶液で溶解し、液状にしてから測定に使用される。そして、凍結や固体の状態の精度管理用試薬は、液状にしたときのＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの保存安定性に優れた試薬となる。
【００２５】
上記の精度管理用試薬は、ＨＢｃＡｇからプロテアーゼ処理により得られるＨＢｅＡｇとＨＢｓＡｇとを混合することにより製造することができる。製造で使用されるＨＢｓＡｇは、上記のＨＢｓＡｇを使用することができる。
該混合工程においては、これらの抗原を、液体の状態で混合することができるか、又は固体の状態で混合することができる。或いは、固体の状態であるいずれか一方の抗原と、液体の状態である他方の抗原とを混合することもできる。液体の状態で得られた混合液は、凍結又は凍結乾燥させることもできる。
【００２６】
上記の精度管理用試薬を製造する方法において、上記の混合工程においては、上記の任意の成分、すなわち緩衝剤、タンパク質保護剤、添加成分などを共に混合することができる。
【実施例】
【００２７】
以下に、本発明を、実施例を用いてより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【００２８】
参考例１  ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇのｐＨによる安定性（４５℃加速試験）
ＨＢｓ抗原（ＨＢｓＡｇ）及びＨＢｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）のｐＨに対する安定性を確かめるために、次の実験を行った。
市販の組換えＨＢｓＡｇ（ａｄｒタイプ、ＣＯＲＴＥＸ  ＢＩＯＣＨＥＭ社）と、市販の組換えＨＢｅＡｇ（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ社）を、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）含有のｐＨ７．０若しくは７．５のトリエタノールアミン（ＴＥＡ）緩衝液又はｐＨ８．０若しくは８．５のＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液にそれぞれ溶解した。
得られたＨＢｓＡｇ・ＨＢｅＡｇ含有溶液を４５℃にて１〜３日間保存した後の溶液中の各抗原を、組換えＨＢｓＡｇ（以降、ｒＨＢｓＡｇともいう）についてはエルジア・ＦＳ−ＨＢｓ抗原（ＨＢｓＡｇ測定用試薬、シスメックス社）、組換えＨＢｅＡｇ（以降、ｒＨＢｅＡｇともいう）についてはエルジア・ＦＳ−ＨＢｅ抗原（ＨＢｅＡｇ測定用試薬、シスメックス社）を用いてそれぞれ測定した。測定装置は、ＥＬＩＳＡ−ＦＳ１２００（シスメックス社）を用いた。
【００２９】
さらに、ＨＢｓＡｇ・ＨＢｅＡｇ含有溶液を測定して得られた測定値を、第０日目に測定された値に対する相対値として求めた。
結果を、表１及び図１に示す。
【００３０】
【表１】
0004890399.tif 000002
【００３１】
表１は、ｒＨＢｓＡｇ及びｒＨＢeＡｇの相対値を示す。図１は、（Ａ）ｒＨＢｓＡｇの相対値の変化、及び（Ｂ）ｒＨＢｅＡｇの相対値の変化を示す。
表１及び図１の結果から、４５℃の条件下で保存した場合、ｐＨ７．０〜８．０の溶液中のｒＨＢｓＡｇは保存３日後でも８０％以上の相対値を示したが、ｐＨ８．５の溶液中のｒＨＢｓＡｇは保存３日後で６０％程度の相対値であった。以上のことから、ｒＨＢｓＡｇは、ｐＨ７．０付近では比較的安定であるが、ｐＨ８．５付近では安定性が良好でないことがわかる。一方、４５℃の条件下で保存した場合、ｒＨＢｅＡｇは、いずれの場合も保存１日後で相対値が低下していた。これは、この相対値の低下は、４５℃という特殊な条件によるものかもしれない。なお、各ｐＨの結果を比較したところ、ｒＨＢｅＡｇはｐＨ７．０よりもｐＨ７．５〜８．５のアルカリ側で比較的安定であることが予想される。以上のことから、これらの２種の組換え抗原を同じ溶液中で保存しても、安定な精度管理用試薬として用いることはできないことが予想される。
【００３２】
参考例２  ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇのｐＨによる安定性（長期安定性）
上記の参考例１で用いたものと同じ市販の組換えＨＢｓＡｇ及び市販の組換えＨＢｅＡｇを、ｐＨ８．０のトリエタノールアミン（ＴＥＡ）緩衝液（０．１％ＢＳＡ含有）にそれぞれ溶解して、ＨＢｓＡｇ・ＨＢｅＡｇ含有溶液を得た。この溶液を９℃にて３、６及び９ヶ月間保存したときの溶液中の各抗原を、参考例１と同様にして測定した。
対照として、冷凍保存（−８０℃）したＨＢｓＡｇ・ＨＢｅＡｇ含有溶液を用いた。
なお、測定は３回行い、その平均値を測定値の結果として示す。
【００３３】
対照の測定値を１００％として、測定された各抗原の測定値から相対値を算出した。
結果を、表２及び図２に示す。
【００３４】
【表２】
0004890399.tif 000003
【００３５】
表２は、（Ａ）ｒＨＢｓＡｇの相対値、（Ｂ）ｒＨＢｅＡｇの相対値を示す。図２は、ｒＨＢｓＡｇ及びｒＨＢｅＡｇの相対値の変化を示す。表２及び図２の結果から、期間が経過するにつれｒＨＢｓＡｇの相対値は低下し、一方ｒＨＢｅＡｇの相対値は上昇したことがわかる。すなわち、本比較例のＨＢｓＡｇ・ＨＢｅＡｇ含有溶液中では、ｒＨＢｓＡｇ及びｒＨＢｅＡｇのいずれの保存安定性も良好でないことがわかる。以上のことから、単に２つの抗原を組み合わせて用いても、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇが安定な精度管理用試薬を得ることは困難であることがわかった。
【００３６】
実施例１
ＨＢｃＡｇをプロテアーゼ処理（トリプシン処理）してＨＢｅＡｇを得る方法としては、公知の方法を利用した（特許文献１に記載の方法）。以降、このようにして得られたＨＢｅＡｇをトリプシン処理ＨＢｅＡｇともいう。
【００３７】
ｐＨ７．０の０．１Ｍ  ＴＥＡ緩衝液（０．１％ＢＳＡ含有）中に、トリプシン処理ＨＢｅＡｇと、市販の組換えＨＢｓＡｇ（ａｄｒタイプ、ＣＯＲＴＥＸ  ＢＩＯＣＨＥＭ社）を混合して、精度管理用試薬を得た。この精度管理用試薬を、３７、４５及び５０℃にてそれぞれ表３に示す日数保存したときの試薬中の抗原を測定した。
対照として、冷蔵保存（２〜８℃）した上記の精度管理用試薬を用いた。
【００３８】
なお、ＨＢｅＡｇの量は、参考例１と同様にして測定した。一方、ＨＢｓＡｇの量は、次に記載するＨＢｓＡｇの免疫測定法に従って測定した。
＜ＨＢｓＡｇの免疫測定法＞
（１）試薬の調製
国際受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０５８２の抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体を市販のキットを用いてビオチン化し、ビオチン化抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体溶液（２μｇ／ｍＬ、０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．５））を得た。さらに、国際受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０５８３の抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体にアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）を結合させ、アルカリＡＬＰ結合抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体溶液（２００ｍＵ／ｍＬ、０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．５））を得た。市販のストレプトアビジン磁性粒子を０．５％となるように２０ｍＭ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．５、０．１％ＢＳＡ）懸濁し、ストレプトアビジン磁性粒子懸濁液を調製した。        
【００３９】
（２）免疫測定法
ビオチン化抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体溶液５０μＬと、精度管理用試薬２０μＬとを混合し、４２℃にて約２分間インキュベートした。次いで、０．５％ストレプトアビジン磁性粒子懸濁液３０μＬを加えて、４２℃にて約１分間インキュベートした。この磁性粒子を洗浄液（２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５））で洗浄した後、ＡＬＰ結合抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体溶液１００μＬを加えて、４２℃にて約１分間インキュベートした。磁性粒子を上記の洗浄液で洗浄した後に、ＡＬＰの基質であるＣＤＰ−Ｓｔａｒ（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社）１００μＬを加えて発光させた。ＬＵＭＩ−ＣＯＵＮＴＥＲ  ７００（（株）マイクロテック・ニチオン）を用いて発光強度を測定した。
【００４０】
対照の測定値を１００％として、測定された各抗原の測定値から相対値を算出した。
結果を表３及び図３に示す。
【００４１】
【表３】
0004890399.tif 000004
【００４２】
表３は、（Ａ）ｒＨＢｓＡｇの相対値、（Ｂ）トリプシン処理ＨＢeＡｇの相対値を示す。図３は、（Ａ）ｒＨＢｓＡｇの相対値の変化、（Ｂ）トリプシン処理ＨＢｅＡｇの相対値の変化を示す。
さらに、各温度条件での測定値からアレニウスプロットを作成し、作製した精度管理用試薬中の各抗原の劣化予測をしたところ、９℃にて３９５日保存した場合にｒＨＢｓＡｇは９７．９％、トリプシン処理ＨＢｅＡｇは９９％以上、それぞれの抗原の活性が残存すると予測された。以上のことから、ｒＨＢｓＡｇ及びトリプシン処理ＨＢeＡｇを含む精度管理用試薬は、保存安定性に優れていると予測できる。
【００４３】
実施例２
実施例１で作製した精度管理用試薬を、９℃にて３、５又は６ヶ月保存したときの試薬中の各抗原を、実施例１と同様にして測定した。対照として、−８０℃で保存した精度管理用試薬を用いた。
なお、測定は３回行い、その平均値を測定値の結果として示す。
対照の測定値を１００％として、測定された各抗原の測定値から相対値を算出した。
結果を、表４及び図４に示す。
【００４４】
【表４】
0004890399.tif 000005
【００４５】
表４は、（Ａ）ｒＨＢｓＡｇの相対値、（Ｂ）トリプシン処理ＨＢeＡｇの相対値を示す。図４は、（Ａ）ＨＢｓＡｇの相対値の変化、（Ｂ）トリプシン処理ＨＢｅＡｇの相対値の変化を示す。表４及び図４の結果から、期間が経過しても、ｒＨＢｓＡｇ及びトリプシン処理ＨＢｅＡｇの測定値の変化ほとんど見られないことがわかる。すなわち、精度管理用試薬中では、ｒＨＢｓＡｇ及びトリプシン処理ＨＢｅＡｇの保存安定性が良好であることがわかる。
実施例１及び２の結果から、ＨＢｓＡｇとプロテアーゼ処理により得られたＨＢｅＡｇとを組み合わせて調製された精度管理用試薬中では、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇが共に長期間安定に存在できることがわかる。
【００４６】
参考例３及び４
市販の組換えＨＢｓＡｇ（ａｄｒタイプ、ＣＯＲＴＥＸ  ＢＩＯＣＨＥＭ社）、又は実施例１に記載のようにしてＨＢｃＡｇからトリプシン処理により作製したＨＢｅＡｇを、それぞれ別々に、ｐＨ６．５、６．８、６．９、７．０．７．１及び７．２の０．１Ｍ  ＴＥＡ緩衝液（０．１％ＢＳＡ含有）に溶解して、ＨＢｓＡｇ含有溶液及びＨＢｅＡｇ含有溶液を作製した。
これらの溶液を、４５℃にて２及び７日間保存したときの溶液中の抗原を、参考例１と同様にして測定した。
対照として、冷蔵保存（２〜８℃）したＨＢｓＡｇ含有溶液又はＨＢｅＡｇ含有溶液を用いた。
対照の測定値を１００％として、測定された各抗原の測定値から相対値を算出した。
結果を、表５及び図５に示す。
【００４７】
【表５】
0004890399.tif 000006
【００４８】
表５は、（Ａ）ＨＢｓＡｇ含有溶液中のｒＨＢｓＡｇの相対値、（Ｂ）ＨＢｅＡｇ含有溶液中のトリプシン処理ＨＢｅＡｇの相対値を示す。図５は、（Ａ）ＨＢｓＡｇ含有溶液中のＨＢｓＡｇの相対値の変化、（Ｂ）ＨＢｅＡｇ含有溶液中のトリプシン処理ＨＢｅＡｇの相対値の変化を示す。表５（Ａ）及び図５（Ａ）から、ｐＨ６．５〜７．２の条件下では、ＨＢｓＡｇ含有溶液中のｒＨＢｓＡｇの安定性が良好であることがわかる。また、表５（Ｂ）及び図５（Ｂ）から、ｐＨ６．５〜７．２の条件下では、ＨＢｅＡｇ含有溶液中のトリプシン処理ＨＢｅＡｇの安定性が良好であることがわかる。
以上のことから、実施例１及び２の精度管理用試薬中の各抗原は、上記のｐＨであっても安定性が良好であることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】参考例１のＨＢｓＡｇ・ＨＢｅＡｇ含有溶液中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの各ｐＨにおける４５℃での安定性を示すグラフである。
【図２】参考例２のＨＢｓＡｇ・ＨＢｅＡｇ含有溶液中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの長期保存安定性を示すグラフである。
【図３】実施例１の精度管理用試薬中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの加速試験における保存安定性を示すグラフである。
【図４】実施例２の精度管理用試薬中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの長期保存安定性を示すグラフである。
【図５】ＨＢｓＡｇ含有溶液と、トリプシン処理して得られたＨＢｅＡｇ含有溶液中の各抗原の加速試験における保存安定性を示すグラフである。
【図１】
0004890399.tif 000007
【図２】
0004890399.tif 000008
【図３】
0004890399.tif 000009
【図４】
0004890399.tif 000010
【図５】
0004890399.tif 000011