(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）架橋された、生体安定性ポリマーマトリックスと
ｂ）核酸である製剤学的に活性な化合物を含む塗膜を
ステントの外側の上に有し、かつ、該ポリマーがペンダント両性イオン性基とペンダントカチオン性基を有することを特徴とするステント。
【請求項２】
ポリマーが２０モル％未満の架橋性モノマーを含むエチレン型不飽和モノマーから形成されている請求項１記載のステント。
【請求項３】
ポリマーがａ）式Ｉ
ＹＢＸ                                          Ｉ
（式中、Ｂは結合であるか、あるいは直鎖もしくは分岐のアルキレンまたはアルキレン−オキシアルキレン基であって、このいずれかは１つもしくはそれ以上のフッ素置換基を含んでいてもよく、
Ｘは両性イオン性部分を有する有機基であり、そして
Ｙはエチレン型不飽和重合性基である）
の両性イオン型モノマーと、
ｂ）式ＩＩ
Ｙ1Ｂ1Ｑ1                              ＩＩ
（式中、Ｂ1は結合であるか、あるいは直鎖もしくは分岐のアルキレンまたはアルキレン−オキシアルキレン基であって、このいずれかは１つもしくはそれ以上のフッ素置換基を含んでいてもよく、
Ｙ1はエチレン型不飽和重合性基であり、そして
Ｑはカチオン性もしくはカチオン化し得る部分を有する有機基である）
のカチオン性モノマーと、
ｃ）一般式ＩＶ
Ｙ3Ｂ3Ｑ3                               ＩＶ
（式中、Ｂ3は結合であるか、あるいは直鎖もしくは分岐のアルキレンまたはアルキレン−オキシアルキレン基であって、このいずれかは１つもしくはそれ以上のフッ素置換基を含んでいてもよく、
Ｙ3はエチレン型不飽和重合性基であり、そして
Ｑ3はこのポリマーを架橋することができる反応性基を有する有機基である）
を有する架橋性モノマー
を含むエチレン型不飽和モノマーから形成される請求項１または２記載のステント。
【請求項４】
Ｑ3が架橋性シンナミル、エポキシ、−ＣＨＯＨＣＨ2Ｈａｌ（式中、Ｈａｌはハロゲン原子である）、メチロール、または反応性シリル、アセチレン、ジアセチレン、ビニルまたはジビニル基などのエチレン型不飽和架橋性基、またはアセトアセトキシまたはクロロアルキルスルホン基を含有する請求項３記載のステント。
【請求項５】
Ｑ3が基ＳｉＲ43（ここで、各Ｒ4はＣ1-4アルコキシ基またはハロゲン原子である）である請求項４記載のステント。
【請求項６】
請求項５記載のステントであって、モノマーとして、式ＩＶ’
Ｙ3Ｂ3Ｑ4
（式中、Ｙ3Ｂ3は化合物ＩＶについて定義したとおりであり、Ｑ4はヒドロキシル基である）
で示される化合物を更に含む、上記ステント。
【請求項７】
Ｘが式Ｖ
【化１】
0005000826.tif 000009
（式中、部分Ｘ1及びＸ2は、同一もしくは異なり、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または原子価結合であり、そして
Ｗ+は、式−Ｗ1−Ｎ+Ｒ63、−Ｗ1−Ｐ+Ｒ73または−Ｗ1−Ｈｅｔ+であり、かつ、Ｗ1は１個もしくはそれ以上のエチレン型不飽和二重結合もしくは三重結合を含有していてもよい１個もしくはそれ以上の炭素原子のアルキレン、二置換アリール，アルキレンアリール，アリールアルキレン，アルキレンアリールアルキレン、ニ置換シクロアルキル，アルキレンシクロアルキル，シクロアルキルアルキレンまたはアルキレンシクロアルキルアルキレンであり、Ｗ1はさらに１つもしくはそれ以上のフッ素置換基及び／又は１つもしくはそれ以上の官能基を含有していてもよく、Ｒ6は同一もしくは異なり，そして各々は水素または１から４個の炭素原子のアルキル，またはフェニルであるか、あるいはＲ6の２つが結合する窒素原子と一緒になって５から７個の原子を含有するヘテロ環を形成するか、あるいはＲ6の３つはそれらが結合する窒素原子と一緒になって各環中に５から７個の原子を含有する縮合環構造を形成し、Ｒ6はさらに１つもしくはそれ以上の親水性官能基により置換されていてもよく、Ｒ7は同一もしくは異なり、各々はＲ6または基ＯＲ6(ここで、Ｒ6は上で定義されているとおりである)であり、Ｈｅｔは芳香族の窒素、リンもしくはイオウを含有する環である）
の基である請求項３ないし６のいずれかに記載のステント。
【請求項８】
Ｘ1及びＸ2が各々Ｏであり、そしてＷ1がＣ1-12アルキレン基である、請求項７記載のステント。
【請求項９】
Ｗ1が直鎖アルキレン基である請求項７または８記載のステント。
【請求項１０】
Ｘが式ＶＩ
【化２】
0005000826.tif 000010
（式中、基Ｒ8は同一もしくは異なり、各々は水素またはＣ1-4アルキルであり、そして
ｅは１から６である）
の基である請求項７ないし９のいずれかに記載のステント。
【請求項１１】
各Ｒ8がメチルであり、そしてｅが２または３である請求項１０記載のステント。
【請求項１２】
Ｑ1が基Ｎ+Ｒ53、Ｐ+Ｒ53またはＳ+Ｒ52
（ここで、基Ｒ5は同一もしくは異なり、そして各々は水素、Ｃ1-4アルキルもしくはアリールであるか、または基Ｒ5の２つは、それらが結合するヘテロ原子と一緒になって５から７個の原子を含有する飽和もしくは不飽和のヘテロ環を形成する）
である請求項３ないし１１のいずれかに記載のステント。
【請求項１３】
モノマーが式ＩＩＩ
Ｙ2Ｂ2Ｑ2                             ＩＩＩ
（式中、Ｂ2は結合であるか、あるいは直鎖もしくは分岐のアルキレンまたはアルキレン−オキシアルキレン基であって、このいずれかは１つもしくはそれ以上のフッ素置換基を含んでいてもよく、
Ｙ2はエチレン型不飽和の重合性基であり、そして
Ｑ2は少なくとも６個の炭素原子を有するアルキル基、フッ素置換アルキル基及び少なくとも一つのシロキサン置換基を有するアルキル基から選ばれる疎水性基を有する有機基である）
のモノマーを更に含む請求項３ないし１２のいずれかに記載のステント。
【請求項１４】
Ｙ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3及び／またはＹ3は、独立して、ＣＨ＝ＣＨ（Ｃ6Ｈ4）−Ｋ−、ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−Ａ−、ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）−ＣＨ2−Ｏ−、ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）−ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−、ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）ＯＣ（０）−、ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）Ｏ−、及びＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ1）−〔ここで、Ｒは水素またはＣ1−Ｃ4アルキル基であり、Ａは−Ｏ−または−ＮＲ1−であり、Ｒ1は水素またはＣ1−Ｃ4アルキル基であるか、もしくはＲ1は−Ｂ−Ｘ、Ｂ1Ｑ1、Ｂ2Ｑ2またはＢ3Ｑ3であり、Ｂ、Ｂ1、Ｂ2、Ｂ3、Ｑ1、Ｑ2とＱ3及びＸは上で式ＩないしＩＶのそれぞれ一つにおいて定義されている通りであることができ、そして
Ｋは基−（ＣＨ2）pＯＣ（Ｏ）−、−（ＣＨ2）pＣ（Ｏ）Ｏ−、−（ＣＨ2）pＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−（ＣＨ2）pＮＲ2−、−（ＣＨ2）pＮＲ2Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ2）pＣ（Ｏ）ＮＲ2−、−（ＣＨ2）pＮＲ2Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−（ＣＨ2）pＯＣ（Ｏ）ＮＲ2−、−（ＣＨ2）pＮＲ2Ｃ（Ｏ）ＮＲ2−（ここで、基Ｒ2は同一もしくは異なる）、−（ＣＨ2）pＯ−もしくは−（ＣＨ2）pＳＯ3−であり、またはＫはＢと組み合わさって原子価結合であってもよく、そしてｐは１から１２であり、そしてＲ2は水素またはＣ1−Ｃ4アルキル基である〕から選ぶことができる、請求項３ないし１３のいずれかに記載のステント。
【請求項１５】
一緒に共重合されたすべてのモノマーの該エチレン型不飽和基がアクリレートタイプであるか、またはスチレンタイプ（ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ａ−もしくはＣＨ＝ＣＨ−（Ｃ6Ｈ4）−Ｋ−）である請求項１４記載のステント。
【請求項１６】
エチレン型不飽和基が式ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ａであり、そしてＲがＨもしくはＣＨ3であり、そしてＡが−ＮＨ−もしくは−Ｏ−である請求項１５記載のステント。
【請求項１７】
各エチレン型不飽和基においてＡが−Ｏ−である請求項１６記載のステント。
【請求項１８】
ポリマーの形成に使用される両性イオン性モノマー対カチオン性モノマーの比が１：１０ないし１０：１の範囲にある請求項３ないし１７のいずれかに記載のステント。
【請求項１９】
塗膜が少なくとも０．５μｍの乾燥厚さを有する請求項１ないし１８のいずれかに記載のステント。
【請求項２０】
核酸がＤＮＡまたはＲＮＡであり、そして線状もしくは環状、一本鎖もしくは二本鎖である請求項１ないし１９のいずれかに記載のステント。
【請求項２１】
核酸が少なくとも１５塩基有する請求項１ないし２０のいずれかに記載のステント。
【請求項２２】
架橋された、水膨潤性ポリマーマトリックスであって、製剤学的活性体を含まない空ポリマーマトリックスの塗膜をステントの外側の上に有する空のステントを核酸である製剤学的活性体の水溶液と接触させて、それによって核酸をポリマーマトリックス中もしくはポリマーマトリックス上に吸着させる請求項１ないし２１のいずれかに記載のステントの作製方法。
【請求項２３】
請求項２２記載の方法であって、該ポリマーマトリックスが水膨潤性であり、かつ、水溶液が該方法においてポリマーマトリックスを膨潤させる、上記方法。
【請求項２４】
請求項２２または２３記載の方法であって、ポリマーマトリックスを水溶液と接触させる場合に、該ポリマーマトリックスが溶媒を含まない、上記方法。
【請求項２５】
請求項２２または２３記載の方法であって、ポリマーマトリックスを水溶液と接触させる場合に、該ポリマーマトリックスが膨潤性液体により予め膨潤されている、上記方法。
【請求項２６】
ステントを多量の水溶液中に浸漬すことにより、該ステントを上記溶液と接触させる請求項２２ないし２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
ステントを送達器具上に搭載する請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
水溶液とステントの接触時間が少なくとも３０秒である請求項２２ないし２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
水溶液が２０ないし４０°Ｃの範囲の温度にある請求項２２ないし２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
温度が３７℃である請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
ステントを架橋性ポリマーにより被覆し、このポリマーを架橋する予備的段階を含む請求項２２ないし３０のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、インプラント、特に主として血管の中に導入するためのステントであるが、他の体腔の中に導入するためにも有用であるステントであって、配置する血管壁に薬剤が直接に送達される貯留として使用される、生体適合性ヒドロゲルポリマーの塗膜を有するものに関する。
【０００２】
優先日には公表されなかった本発明者らの以前のＷＯ−Ａ−０１０１９５７において、本発明者らは、患者の中に送達する直前に薬剤含有溶液中で膨潤させる、生体適合性架橋ポリマーの塗膜を有するステントを記述した。薬剤は、膨潤したヒドロゲルの中に吸収され、そしてこの移植ステントから長時間にわたって放出される。これらの出願で述べられた系は、１２００Ｄまでの分子量を有する薬剤と共に使用するためにヨーロッパで販売することが承認された。このような薬剤の例は、ジピリダモル、ジクロキサシリン、ビタミンＢ１２及びアンジオペプチンを含む。
【０００３】
本発明者らの以前の出願ＷＯ−Ａ−９８／２２５１６において、本発明者らは、種々の基材上に生体適合性塗膜を設けるのに有用な、カチオン性モノマーと両性イオン性モノマーを含むエチレン型不飽和モノマーから形成されるポリマーを記述した。このカチオン性ポリマーはアニオン性ムコポリサッカライドを引き付ける。このポリマーにより被覆したステントを捕捉器具として使用して、患者の循環から全身的なヘパリンを除去してもよい。もしくは、この器具に例えばヘパリンを付着することによって、移植ステントから循環のなかへ薬剤を遅延放出することが可能になることが示唆されている。
【０００４】
ＥＰ−Ａ−０８０９９９９においては、カルメダ（Ｃａｒｍｅｄａ）ＣＨ５ヘパリン塗膜系を用いて、ヘパリンがステントに共有結合されている。
【０００５】
血管形成性化合物をステントから送達して、狭窄性障害が治療されている。ＷＯ−Ａ−９７／４７２５３においては、例えば、心臓の放射線治療に続いて血管形成性化合物が送達される。送達はポリマーにより被覆されたステントであってもよい。
【０００６】
ＵＳ−Ａ−５９５４７０６においては、アニオン性ヒドロゲルをステント上に被覆し、ベンザルコニウム化合物などの一価のカチオン性化合物をこのヒドロゲルの上に被覆し、そしてヘパリンを接触し、このカチオン性化合物に静電的に結合させている。
【０００７】
例えばＷＯ−Ａ−９８／１５５７５においては、センス及びアンチセンスＤＮＡをステントから送達した。このＤＮＡが血管形成性タンパク質をコードしていてもよい。
【０００８】
ＵＳ−Ａ−５６７４１９２においては、バルーンカテーテル上の膨潤したヒドロゲル塗膜から核酸とモノクローナル抗体を絞り出すことにより、これらを送達する。これらの核酸は、オリゴヌクレオチドまたはウイルス性ベクターであってもよい。このヒドロゲルは、ポリアクリル酸などのポリカルボン酸であってもよい。核酸は血管壁の細胞に送達される。
【０００９】
本発明による新しいインプラントは、
ａ）少なくとも０．１μｍの乾燥厚さを有する架橋された、水膨潤性ポリマーマトリックスと
ｂ）製剤学的に活性な化合物
を含んでなり、ここでこのポリマーがペンダント両性イオン性基とペンダントカチオン性基を有するものである、外部表面上に塗膜を有する。
【００１０】
このインプラントは好ましくはステントである。
【００１１】
本発明は、生理的な条件下でアニオン性である製剤学的に活性な化合物を送達するのに特に有用である。本発明は、また、特に１０００Ｄより大きい、更に好ましくは１２００Ｄより大きい、例えば５０００Ｄもしくはそれ以上の分子量を有する、高分子量の活性化合物に対して特に価値がある。
【００１２】
この製剤学的活性体は、タンパク質、例えば抗体またはこれらのフラグメントであってもよい。このような化合物は、一般的にはそして好ましくは、本発明では生理的環境においてアニオンに荷電している。本発明は、核酸からなる活性化合物に対して特に価値がある。この核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、そして線状もしくは環状、一本もしくは二本鎖であってもよい。この核酸は、医薬として有用なポリペプチドまたはタンパク質をコードしてもよく、もしくはこの核酸を送達する細胞中の対象とする遺伝子を調節するのに使用される、アンチセンスオリゴヌクレオチドであってもよい。有用なポリペプチドまたはタンパク質をコードする核酸は、制御領域、または他の配列を含んでいてもよく、この遺伝子の発現及び／またはその細胞の中への送達及び／またはこのタンパク質の標的への輸送を可能とせしめてもよい。ターゲティングの目的で他の活性体等にコンジュゲートされたオリゴヌクレオチドもまた本発明により有用に送達される。
【００１３】
本発明により送達される遺伝子の一つの特に興味ある類は、血管内皮成長因子または線維芽細胞成長因子などの血管形成性因子、または血小板由来の成長因子をコードする。少なくとも、調節配列は、特に平滑筋細胞における発現を方向付ける。例えば、調節配列は、ＷＯ−Ａ−９８／１５５７５に記述されている通りであってもよい。本発明で使用されるオリゴヌクレオチドは、例えば、少なくとも５塩基、好ましくは少なくとも１５塩基を有する。
【００１４】
本発明の第２の局面によれば、新しいインプラントは、
ａ）架橋された、生体安定性のポリマーマトリックスと
ｂ）製剤学的に有用な核酸
を含んでなり、ここでこのポリマーがペンダント両性イオン性基とペンダントカチオン性基を有する塗膜をその外部表面上に有する。
【００１５】
本発明の第３の局面によれば、新しいインプラントは、
ａ）架橋された、生体安定性のポリマーマトリックスと
ｂ）生理的なｐＨでアニオン性に荷電しているタンパク質である製剤学的に活性な化合物
を含んでなり、ここでこのポリマーがペンダント両性イオン性基とペンダントカチオン性基を有する、塗膜をその外部表面上に有する。
【００１６】
第２及び第３の局面においては、このポリマーマトリックスは少なくとも０．１μｍの乾燥厚さを有することが、必須ではないが好ましい。更には、このポリマーマトリックスは水膨潤性であることが必須ではないとしても好ましい。核酸及びタンパク質などのアニオン性活性体、特に、１ＫＤ以上の分子量を有するものは、主としてカチオン性基と両性イオン性基を有するポリマーの表面に吸着されて、ポリマー体の中には僅かしか吸収されないことを本発明者らは見出した。この理由のために、膨潤性と厚さは、第１の局面におけるよりは重要性が少ない。
【００１７】
このインプラントは好ましくはステントである。この明細書の以降の部分においては、この器具をステントの形で記述するが、他のインプラントをステントに置き換えてもよいことは理解されるであろう。
【００１８】
このポリマーマトリックスの架橋は、ステント上の塗膜を安定化し、塗膜を生体安定性とする。架橋密度の調節は、本来的に概ね水性の膨潤性溶媒中でのこのポリマーの膨潤する程度を若干コントロールする。更に、この架橋密度は、このポリマーマトリックスの孔のサイズに影響する。この孔のサイズは、次には本発明の第１の局面に特に関係するこのマトリックスの中に吸着される製剤学的に活性な化合物の最大分子サイズに影響すると考えられる。このポリマーは、２０モル％未満の架橋性モノマーを含むエチレン型不飽和モノマーから形成されるのが好ましい。
【００１９】
本発明で使用されるポリマーは、
ａ）式Ｉ
ＹＢＸ                                          Ｉ
（式中、Ｂは結合である、あるいは直鎖もしくは分岐のアルキレン、アルキレン−オキシアルキレンまたはアルキレン−オリゴ（オキシアルキレン）基であって、このいずれかは１つもしくはそれ以上のフッ素置換基を場合によっては含むものであり、
Ｘは両性イオン性部分を有する有機基であり、そして
Ｙはエチレン型不飽和重合性基である）
の両性イオン性モノマーと
ｂ）式ＩＩ
Ｙ1Ｂ1Ｑ1                                 ＩＩ
（式中、Ｂ1は結合であるか、あるいは直鎖もしくは分岐のアルキレン、アルキレン−オキシアルキレンまたはアルキレン−オリゴ（オキシアルキレン）基であって、このいずれかは１つもしくはそれ以上のフッ素置換基を場合によっては含むものであり、
Ｙ1はエチレン型不飽和重合性基であり、そして
Ｑはカチオン性もしくはカチオン化し得る部分を有する有機基である）のカチオン性のモノマーと、
ｃ）一般式ＩＶ
Ｙ3Ｂ3Ｑ3                                    ＩＶ
（式中、Ｂ3は結合であるか、あるいは直鎖もしくは分岐のアルキレン、アルキレン−オキシアルキレンまたはアルキレン−オリゴ（オキシアルキレン）基であって、このいずれかは１つもしくはそれ以上のフッ素置換基を場合によっては含むものであり、
Ｙ3はエチレン型不飽和の重合性基であり、そして
Ｑ3はこのポリマーを架橋することができる反応性基を有する有機基である）
を有する架橋性モノマー
ーを含むエチレン型不飽和モノマーから好ましくは形成される。
【００２０】
このコモノマーを架橋するのに使用される好ましい反応性コモノマーＩＶは、Ｑ3が架橋性シンナミル、エポキシ、−ＣＨＯＨＣＨ2ＨａＩ（式中、Ｈａｌはハロゲン原子である）、メチロール、反応性シリル、アセチレン、ジアセチレン、ビニルまたはジビニル基などのエチレン型不飽和の架橋性基、またはアセトアセトキシまたはクロロアルキルスルホン、好ましくはクロロエチルスルホン基を含有するものである。最適な架橋のためには、反応性シリル基（例えば、各Ｒ4がＣ1-4アルコキシ基またはハロゲン原子である基−ＳｉＲ43）を含むモノマーがヒドロキシル基を含むさらなるモノマー、例えば、式ＩＶ’
Ｙ3Ｂ3Ｑ４                                        ＩＶ’
（式中、Ｙ3及びＢ3は化合物ＩＶにおいて定義されている通りであり、Ｑ4はヒドロキシル基である）
を有するものと組み合わせて使用される。
【００２１】
このポリマーが形成されるエチレン型不飽和モノマーは、式ＩＩＩ
Ｙ2Ｂ2Ｑ2                                    ＩＩＩ
（式中、Ｂ2は結合であるか、あるいは直鎖もしくは分岐のアルキレン、アルキレン−オキシアルキレンまたはアルキレン−オリゴ（オキシアルキレン）基であって、このいずれかは１つもしくはそれ以上のフッ素置換基を場合によっては含むものであり、
Ｙ2はエチレン型不飽和重合性基であり、
そしてＱ2は少なくとも６個の炭素原子を有するアルキル基、フッ素置換アルキル基及び少なくとも一つのシロキサン置換基を有するアルキル基から選ばれる疎水性基を有する有機基である）
のターモノマーを更に含むことができる。
【００２２】
最適の膜形成性と疎水性表面の被覆能力のためには、これらのポリマーは、好ましくは１０モル％より多く、更に好ましくは２０モル％より多くこのようなターモノマーを含有する。
【００２３】
これらのポリマーは希釈剤コモノマーを含んでもよい。９０モル％までの、通常５０モル％未満の量でこのような希釈剤コモノマーを使用してもよい。Ｃ1-24アルキル（メタ）アクリレート、及び−（メタ）アクリルアミドとヒドロキシＣ1-24アルキル（メタ）アクリレート及び−（メタ）アクリルアミドなどの共重合性の非イオン性モノマーを使用してもよい。
【００２４】
モノマーＩからＩＶの各々においては、このエチレン型不飽和基は、好ましくはＣＨ＝ＣＨ−（Ｃ6Ｈ4）−Ｋ−、ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−Ａ−、ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）ＣＨ2−Ｏ−、ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）−ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−、ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）ＯＣ（Ｏ）−、ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）Ｏ−及びＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−から選ばれる。式中、
Ｒは水素またはＣ1−Ｃ4アルキル基であり、
Ａは−Ｏ−または−ＮＲ1［ここで、Ｒ1は水素またはＣ1−Ｃ4アルキル基であるか、もしくは場合によってＲ1は−Ｂ−Ｘ、Ｂ1Ｑ1、Ｂ2Ｑ2またはＢ3Ｑ3（ここで、Ｂ、Ｂ1、Ｂ2、Ｂ3、Ｑ1、Ｑ2及びＱ3及びＸは式ＩからＩＶのそれぞれ一つの中で上で定義されている通りである）である］であり、そしてＫは基−（ＣＨ2）pＯＣ（Ｏ）−、−（ＣＨ2）pＣ（Ｏ）Ｏ−、−（ＣＨ2）pＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−（ＣＨ2）pＮＲ2−、−（ＣＨ2）pＮＲ2Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ2）pＣ（Ｏ）ＮＲ2−、−（ＣＨ2）pＮＲ2Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−（ＣＨ2）pＯＣ（Ｏ）ＮＲ2−、−（ＣＨ2）pＮＲ2Ｃ（Ｏ）ＮＲ2−（ここで、基Ｒ2は同一もしくは異なる）、−（ＣＨ2）pＯ−、−（ＣＨ2）pＳＯ3−、または場合によってはＢと組み合わさって原子価結合であり、そしてｐは１から１２であり、そしてＲ2は水素またはＣ1−Ｃ4アルキル基である。
【００２５】
好ましくは、一緒に共重合されるすべてのモノマーのエチレン型不飽和基は、アクリレートタイプであるか、もしくはスチレンタイプ（ＣＨ2＝Ｃ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ａ−またはＣＨ＝ＣＨ−（Ｃ6Ｈ4）−Ｋ−）であり、最も好ましくは各々は同一の式を有する。好ましくは、両性イオン性、カチオン性及び架橋性モノマー及び任意のターモノマーのアクリレートタイプのエチレン型不飽和基の基Ａは、同一であり、最も好ましくはすべて−Ｏ−である。
【００２６】
両性イオン性基Ｘは、好ましくはアニオンとしてホスフェートエステル基またはチオエステル類似体またはアミド類似体またはホスホネートを有する。このカチオン性部分は、好ましくは４級アンモニウム基であるが、スルホニウムもしくはホスホニウム基であってもよい。好ましくは、このカチオン性基は、基Ｂから遠い基Ｘの末端にある。
【００２７】
好ましくは、Ｘは、式Ｖ
【００２８】
【化３】
0005000826.tif 000002
【００２９】
の基である。式中、部分Ｘ1及びＸ2は、同一もしくは異なり、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または原子価結合、好ましくは−Ｏ−であり、そしてＷ+はアンモニウム、ホスホニウムもしくはスルホニウムのカチオン性基とアニオン性及びカチオン性部分を連結する基であって、好ましくはＣ1-12アルキレン基である基を含んでなる基である。
【００３０】
好ましくは、Ｗは、カチオン性基としてアンモニウム基、更に好ましくは４級アンモニウム基を含有する。
【００３１】
基Ｗ+は、例えば式−Ｗ1−Ｎ+Ｒ63、−Ｗ1−Ｐ+Ｒ73、−Ｗ1−Ｓ+Ｒ72または−Ｗ1−Ｈｅｔの基であってもよい。
式中、Ｗ1は場合によっては１個もしくはそれ以上のエチレン型不飽和の二重もしくは三重結合を含有する、１個もしくはそれ以上の、好ましくは２−６個の炭素原子のアルキレン、二置換アリール、アルキレンアリール、アリールアルキレン、またはアルキレンアリールアルキレン、二置換シクロアルキル、アルキレンシクロアルキル、シクロアルキルアルキレンまたはアルキレンシクロアルキルアルキレンであり、基Ｗ1は１つもしくはそれ以上のフッ素置換基及び／または１つもしくはそれ以上の官能基を場合によっては含有し、そして
基Ｒ6は同一もしくは異なり、そして各々は水素または１から４個の炭素原子のアルキル、好ましくはメチル、またはフェニルなどのアリールであるか、もしくは基Ｒ6の２つが結合する窒素原子と一緒になって５から７個の原子を含有するヘテロ環を形成するか、もしくは基Ｒ6の３つはそれらが結合する窒素原子と一緒になって各環中に５から７個の原子を含有する縮合環構造を形成し、そして
１つもしくはそれ以上の基Ｒ6は親水性官能基により場合によっては置換され、そして
基Ｒ7は同一もしくは異なり、各々はＲ6または基ＯＲ6（ここで、Ｒ6は上で定義されている通りである）であり、もしくは
Ｈｅｔは芳香族の窒素、リンもしくはイオウ、好ましくは窒素を含有する環、例えばピリジンである。
【００３２】
好ましくは、Ｗ1は直鎖アルキレン基、最も好ましくは１，２−エチレンである。
【００３３】
式Ｖの好ましい基Ｘは式ＶＩの基である。
【００３４】
式（ＶＩ）の基は、
【００３５】
【化４】
0005000826.tif 000003
【００３６】
であり、式中、基Ｒ8は同一もしくは異なり、そして各々は水素またはＣ1-4アルキルであり、そしてｅは１から６である。
【００３７】
好ましくは、基Ｒ8は同一である。また、基Ｒ8の少なくとも一つは、メチルであることが好ましく、基Ｒ8はすべてメチルであることが更に好ましい。
【００３８】
好ましくは、ｅは２または３、更に好ましくは２である。
【００３９】
Ｘが式（ＶＩ）の基である場合には、好ましくは、Ｂは式−（ＣＲ92）−または−（ＣＲ92）2−、例えば−（ＣＨ2）−または−（ＣＨ2ＣＨ2）−の基である。
【００４０】
好ましくは、この両性イオン性モノマーは、一般式ＶＩＩ
【００４１】
【化５】
0005000826.tif 000004
【００４２】
を有する。
式中、Ｒ、Ａ及びＢは上で定義されており、
基Ｒ3は同一もしくは異なり、そして各々は水素、Ｃ1-1アルキル、アリール、アルクアリール、アラルキルであるか、もしくは基Ｒ3の２つまたは３つは、それらが結合する窒素原子と共に飽和もしくは不飽和のヘテロサイクル環を形成し、そしてｅは１から６まで、好ましくは２から４までである。
【００４３】
基Ｑ1中のカチオン化し得る部分は、概ね容易にプロトン化され、例えば水性の環境中ｐＨ７でプロトン化されて、カチオン性に変わることができる基である。
【００４４】
このカチオン性モノマーの基Ｑ1は、好ましくは基Ｐ+Ｒ53またはＳ+Ｒ52である。式中、基Ｒ5は同一もしくは異なり、そして各々は水素、Ｃ1-4アルキルまたはアリール（好ましくはフェニル）であるか、もしくは基Ｒ5の２つはそれらが結合するヘテロ原子と一緒になって５から７個の原子を含有する飽和もしくは不飽和のヘテロ環を形成する。好ましくは、基Ｑ1は永久にカチオン性である。すなわち、各Ｒ5は水素以外である。好ましくは、Ｑ1はＮ+Ｒ53であり、式中、各Ｒ5はＣ1-4アルキル、好ましくはメチルである。
【００４５】
両性イオン性モノマー対カチオン性モノマーの分子中における両性イオン性ペンダント基対カチオン性ペンダント基の相対比（当量）は、１：１００から１００：１（両性イオン性対イオン性）好ましくは１：１０から１０：１、更に好ましくは１：２から２：１の範囲にある。
【００４６】
一般的に、この架橋性基を含むポリマーは、ステント上に被覆され、塗膜の後、架橋される。架橋は、一般的に、湿気の存在下、例えば少なくとも４０°Ｃ、好ましくは少なくとも６０°Ｃ、例えば７０°Ｃ近傍で場合によっては加熱することによる。
【００４７】
この化合物と架橋性ポリマーの両方を含有する組成物から共被覆されることにより、このポリマーマトリックスの中にこの製剤学的に活性な化合物を装填させてもよい。もしくは、そして好ましくは、このポリマーをステント上に被覆し、架橋した後にこの薬剤をこのマトリックスの中にもしくは上に吸収させる。この装填段階は、場合によっては予備膨潤段階の後に、ポリマーマトリックスに浸透することができる製剤学的に活性な化合物の溶媒中の溶液または分散液とこの被覆されたステントを接触することにより行われる。普通、製薬学的活性体に対する溶媒は、このポリマーを膨潤させる溶媒である。好適な充填用組成物は水を含んでなり、加えてもしくは代わって、アルコールを含んでなる。製剤学的活性体を含有する膨潤したマトリックスからこの溶媒を除去してもよいが、もしくは例えば、貯蔵時には、もしくはこのステントを患者に直ちに送達することによりこのポリマーの中に溶媒を保持させてもよい。
【００４８】
活性体の適当な装填量を得るように、装填条件が決められる。この温度は、このポリマーに好適な性質をもたらすように選ばれる。この温度は、普通０と６０°Ｃの間、好ましくは室温から約４０°Ｃ、例えば２０から４０°Ｃまで、最も好ましくは３７°Ｃ近傍である。この溶液または分散液は、この付着温度で適当な流動性を得るように選ばれた溶媒を含有してもよい。
【００４９】
装填前後で例えばガンマ線照射により、このステントを殺菌してもよい。
【００５０】
薬剤の適切な装填量を提供するために、この塗膜ポリマーの塗膜は、少なくとも０．５μｍ、更に好ましくは少なくとも１μｍ厚（乾燥厚さ）であることが好ましい。場合によっては、この厚さは少なくとも２μｍ厚である。このステントをインプラントする血管壁の中に製剤学的活性体を直接に送達するステントの外側の上にのみ、このポリマー塗膜と製剤学的に活性な化合物を被覆してもよい。しかしながら、好ましくは、更に厚い塗膜を、もしくは好ましくは外部塗膜よりも薄い塗膜をこのステントの腔表面にも付けるように、ポリマーの全体の塗膜をこのステントに付ける。
【００５１】
このステントは、形状記憶金属ステント、自己膨張性ステントまたはバルーン膨張型ステントでもよい。例えば、自己膨張性ステントは、圧延シート器具または編網器具でもよい。最も好都合には、このステントは、エッチングされた管バルーン膨張型ステントである。送達器具上に搭載した時に本発明における薬剤をこのステントに付着させてもよい。決められた塗膜に上に両性イオン性ポリマーのオーバーコートを塗布して、使用時の放出を制御してもよい。
【００５２】
【実施例】
次の実施例は本発明を例示する。
略号
ＭＰＣ：２−メタクリロイルオキシエチル−２'−トリメチルアンモニウムエチルホスフェート
ＬＭ：ラウリルメタアクリレート
ＨＰＭ：ヒドロキシプロピルメタアクリレート−（７０％３−ヒドロキシプロピル：３０％２−ヒドロキシ−１−メチルエチル）
ＸＬ：３−（トリメトキシシリル）プロピルメタクリレート
ＣＭ：コリンメタアクリレート
ＤＭＡ：ジメチルアクリルアミド
これらのモノマー比は、重合で使用したモノマー量を基準とした重量ベースのものである。
（実施例１）
この目的は、各種ポリマー上への一本鎖のオリゴヌクレオチド（ＡＳＯＮ、ｃ−ｍｙｃ）の装填量を比較して、ポリマー膜へのＡＳＯＮ装填量に対する疎水性、親水性、架橋密度及びカチオン電荷のレベルの重要性を評価することである。
【００５３】
次の薬剤／化合物を評価し、比較した。
（ｉ）アンチセンス一本鎖オリゴヌクレオチド（ＡＳＯＮ）
（ｉｉ）ジピリダモル−抗血小板薬剤
（ｉｉｉ）ＦＩＴＣ標識したデキストラン
ポリマー系は２つのタイプをベースとした。
（１）参照
１．１  ＥＰ９９３０４１４０．９のポリマー  ＭＰＣ29ＬＭ51ＨＰＭ15ＸＬ5
１．２  疎水性のバリエーション品  ＭＰＣ15ＬＭ65ＨＰＭ15ＸＬ5
１．３  親水性のバリエーション品  ＭＰＣ45ＬＭ35ＨＰＭ15ＸＬ5
１．４  架橋剤の増加  ＭＰＣ30ＱＬＭ50ＨＰＭ10ＸＬ10
１．５  ＥＰ９９３０４０９２．２のポリマー  ＭＰＣ37ＬＭ63
（２）本発明
２．１  標準  ＭＰＣ29ＬＭ50ＣＭ5ＨＰＭ12ＸＬ4
２．２  電荷の増加  ＭＰＣ21．5ＬＭ42.5ＣＭ20ＨＰＭ12ＸＬ4
２．３  親水性のバリエーション品  ＭＰＣ48ＬＭ30ＣＭ6ＨＰＭ12ＸＬ4
２．４  架橋剤の低減  ＭＰＣ25ＬＭ50ＣＭ6ＨＰＭ14ＸＬ2
２．５  親水性ポリマー  ＭＰＣ28ＬＭ20ＣＭ6ＨＰＭ12ＸＬ4ＤＭＡ30
２．６  高カチオン性  ＭＰＣ18ＬＭ31ＣＭ35ＨＰＭ12ＸＬ4
ポリマー調製
ポリマー１．１を例外としてＷ０９８／２２５１６に述べられているようなポンプによる供給方法によりすべてのポリマーを調製した。開始剤としてＡＩＢＮを使用してイソプロパノールと酢酸イソプロピル（沸点８３°Ｃ）の還流するブレンドにイソプロパノール溶液中のモノマーを２時間にわたってポンプ供給した。
スチール片の塗膜
スチール片（１ｃｍ×１．５ｃｍ）をジクロロメタン中で１０分間超音波浴を用いてクリーニングした。５０ｍｇ／ｍｌのポリマー溶液２００μｌをこのスチール片上に均一に被覆した。各ポリマー試料に対して７個のスチール片を被覆した。次に、被覆したスチール片をオーブン中で７０°Ｃで一夜乾燥して、このポリマー膜を硬化させた。
ポリマーへの薬剤の装填
１ｍｇ／ｍｌの薬剤溶液を入れた穴の中で６個の被覆したスチール片を、ポリマー側を下にして入れた。一つのコントロール試料には薬剤を装填させなかった。このスチール片を１時間浸した。次に、このスチール片を穴から取り出し、表面をティシュで軽くたたくことにより過剰の薬剤を除去した。次に、このスチール片を室温で更に３０分間乾燥した。次に、各試料をきれいなＰＢＳ溶液中に迅速に浸漬し、この塗膜から過剰な薬剤を除去した（３秒浸漬）。次に、各スチール片をバイアルに入れた３ｍｌのＰＢＳ溶液中に入れた。次に、この薬剤をこのポリマー塗膜から抽出するために、各バイアルを３５°Ｃの浴温で２０分間超音波を照射した。次に、各溶液を蛍光分光法を用いて測定して、薬剤取り込み量を求めた。
【００５４】
注−ジピリダモルの場合、薬剤の溶解度のためにＰＢＳの代わりに５０：５０ＰＢＳ／エタノール溶液を使用した。ＡＳＯＮとＦＴＩＣ−デキストランの場合には、３ｍｌのＰＢＳでなく合計６０ｍｌのＰＢＳ／エタノール溶液の中に試料を抽出した。
実施例１：１  ポリマー膜へのＡＳＯＮの装填
【００５５】
【表１】
0005000826.tif 000005
【００５６】
ＡＳＯＮを装填した１．１及び１．２ポリマーバリエーション品に対する初期の結果は、ポリマー１．１がいかなるＡＳＯＮも取り込まず、その一方でポリマー２．１が少量のこの薬剤を取り込むことを示した。第１には、ポリマー２．１の中へのＡＳＯＮの付着は、このポリマー上の電荷の存在と関連するように思われる。また、この結果は、電荷レベルを増加する場合に、このポリマー塗膜が更なる量の薬剤を取り込まないように見えることを示す。電荷の増加の主なメリットは、活性化合物（ＡＳＯＮ）の放出速度をスローダウンさせることである。
【００５７】
ポリマー２．１におけるＡＳＯＮの取り込みは、ＡＳＯＮ分子に関連する負電荷とこのポリマー塗膜中のＣｍの存在に関連する正電荷の相互作用によるのかもしれない。
【００５８】
試料２．１及び２．２に更に１時間の超音波を照射して、それ以上のＡＳＯＮがいくらかでも放出されるかどうかを求めた。この結果は、２０分後に観測された結果と差異を示さず、恐らく１．６及び１．８μｇが全装填量であることを示した。
実施例１：２
ＡＳＯＮ分子が大きすぎてこのポリマー塗膜中に浸透することができるかどうかを調べるために、膜厚に対する薬剤取り込みを評価することにより更なる実験を行った。この実験の目的は、ポリマーへのＡＳＯＮの浸透が起こったかどうかを示すことであった。
【００５９】
５０ｍｇ／ｍｌのポリマーストック溶液２００、５００、及び８００μｌで種々の量の２．１及び１．１ポリマーによりスチール片を被覆した。次に、各スチール片を前述の方法によりＡＳＯＮを付着させた。得られた結果を表２に示す。
【００６０】
【表２】
0005000826.tif 000006
【００６１】
結果は、全体としての電荷を持たないポリマーはＡＳＯＮを吸収せず、カチオン性ポリマーは吸収することを示す。カチオン性ポリマーの場合の薬剤の取り込みは、表面積だけでなくポリマー容積に関係すると思われる。
実施例１：３
これまでの観察は、ＡＳＯＮはカチオン性タイプポリマーにより吸収されるのみであることを示した。次のアプローチは、このようなポリマーの疎水性、親水性及び架橋密度の影響を試験して、ポリマー網目の変化がＡＳＯＮの装填度を増加させるかどうかを決めることであった。２００μｌの塗膜に対して得た結果を表３に示す。
【００６２】
【表３】
0005000826.tif 000007
【００６３】
得られた結果は、このカチオン性ポリマーはＡＳＯＮを吸収するが、ポリマー組成の変化は低架橋ポリマー系を例外としてポリマー塗膜中の取り込みの度合いを増加させないようであるという点で以前の発見を確認した。この親水性コポリマーは、塗膜性の点で最適でなく、結果として、見かけ上薬剤を吸収できないのかもしれない。
実施例１：４  装填量に及ぼす薬剤分子量の影響
ポリマー塗膜中への薬剤分子量の装填量への影響を試験するために、蛍光により検出することができる種々の分子量の化合物を同定しなければならなかった。このような化合物の一つは、フルオレッセインイソチオシアネートデキストラン（ＦＩＴＣ−デキストラン）であった。これは中性の化合物である。ＦＩＴＣ−デキストランは単純なポリサッカライドであり、ある範囲の分子量、すなわち４４００Ｄ、９５００Ｄ、１９５００Ｄ、４２０００Ｄ、及び７７００００で入手できる。
【００６４】
これらの化合物のサイズは、５０００Ｄの分子量を有するＡＳＯＮに類似している。
【００６５】
この実験は、いずれのポリマー塗膜においてもこのＦＩＴＣ−デキストラン（分子量４４００）を検出することができなかったことを示した。ポリマー２．１はいかなるデキストランも吸収しないという観察は、ポリマー２．１塗膜への取り込みに対する分子上の負電荷の重要性と必要性を示す。前にも示したように、ポリマー１．１は、分子量＞４４００Ｄの化合物／薬剤を取り込まない。
実施例２  二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＳＯＮ）（分子量１００００Ｄ）
この溶液の中にこのステントを数回浸漬し、中間で乾燥し、取り出す自動化ステント塗膜器具の上にＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏステントを次の条件を使用して被覆した。
ポリマー：２５ｍｇ／ｍｌエタノール中
浸漬回数：×５
空気圧（真空）：６バール
浸漬速度：５ｍｍ／秒（電源パック上で２５Ｖ）
真空下の乾燥時間：浸漬サイクル当り２分
次に、ステントを７０°Ｃで一夜硬化させた。
装填試験
リン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）中１ｍｇ／ｍｌの濃度でＤＳＯＮを入れた穴の中に浸漬することにより、このステントにＤＳＯＮを装填させた。各ステントに１時間付着させた。装填が完了したら、このステントを穴から取り出し、ステントをティシューで軽くたたくことにより過剰のＤＳＯＮを除去した。
【００６６】
このステントをＰＢＳ（２ｍｌ）中に入れ、１時間超音波を照射して、ステントから吸収／吸着ＤＳＯＮを除去した。２つの方法を使用して、充填された材料の量を確認した。
（１）蛍光（吸収５００ｎｍ／発光５２５ｎｍ）
全薬剤装填量
２ｍｇ／ｍｌ溶液（ＤＳＯＮ、水中）：４μｇ
１ｍｇ／ｍｌ溶液（ＤＳＯＮ、水／ＰＢＳ５０：５０中）：５μｇ
繰り返し試験−１ｍｇ／ｍｌ溶液（ＤＳＯＮ、水／ＰＢＳ５０：５０中）：６μｇ
（２）ＵＶ（＠２５８ｎｍ）
全薬剤装填量
１ｍｇ／ｍｌ溶液（ＤＳＯＮ、ＰＢＳ中）：ｌ６μｇ（濾過前）
１ｍｇ／ｍｌ溶液（ＤＳＯＮ、ＰＢＳ中）：１２μｇ（濾過後）
装填させたステントを超音波照射浴に約１時間入れた後、全装填量に対する値を得た。結果は、超音波照射時にポリマー塗膜の一部がこのステントからはずれて、予想よりも大きな値を生じることを示す。それゆえ、分析の前にこの溶液を濾過することが必要であると感じられた。図１のグラフは、ＰＣ被覆のＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏステントからのオリゴヌクレオチドの放出を示す。
【００６７】
このＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏステントに１ｍｇ／ｍｌのＰＢＳ（５０：５０水：ＰＢＳ）中からＡＳＯＮとＤＳＯＮを付着させた。ほぼ１−２μｍでポリマー２．１により被覆された１５ｍｍＢｉｏｄｉｖＹｉｓｏステントへの取り込みは、ＡＳＯＮ５．３μｇ（１０ｍｇ／ｍｌ−５２μｇ）、ＤＳＯＮ５−１０μｇであった。
【００６８】
ＰＢＳ中への溶離を上で示した通りに求めた。
【００６９】
ガンマ線照射したポリマー２．１被覆の１５ｍｍＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏステントを用いて、ＡＳＯＮの付着と放出を調べるこの試験を繰り返した。この結果は、ガンマ線照射しないポリマー被覆のステントに対して同じであった。これは、照射後にこのポリマーの化合物の吸収／吸着能力に変化がないことを示す。
実施例３  プラスミドＤＮＡ
この試験計画の目的は、ポリマー被覆の円板からのプラスミドＤＮＡ（分子量約５０ｋＤａ）の装填と薬剤放出プロフィールを求めることであった。
【００７０】
１３ｍｍの直径でスチール円板を切断した。各円板を充分に洗浄した。次に、この円板を空気中で２時間乾燥した。ポリマー２．２もしくは１．１の塗膜溶液（１５ｍｇｍｌ-1）２０μｌの容積を各円板の片側に添加し、２時間乾燥させた。次に、各円板の逆側を同じ方法で被覆した。この被覆した円板を７０°Ｃで４時間加熱架橋した。加えて、塗膜無しのスチール円板を比較のために試験した。
【００７１】
ＤＮＡ−プラスミド溶液（２．３２５μｇ／μｌ）２０μｌの容積を各円板の片側に添加した。この円板を３時間乾燥した。この手順をもう一方の側で繰り返した。
【００７２】
この円板の一部をオーバーコートした。ポリマー被覆し、装填させた円板をエタノール中のポリマー１．５の２０ｍｇ／ｍｌ溶液で噴霧塗膜することにより、オーバーコートを行った。
【００７３】
この装填させた円板を２ｍｌのＰＢＳ中に入れた。一定時間後、１ｍｌの溶液を取り出し、プラスチックバイアルの中に入れた。この１ｍｌの溶液を１ｍｌの新しいＰＢＳで置き換えた。この手順を異なる時間間隔で繰り返した。ＤＮＡを紫外／可視分光光度計を用いて定量する。放出データをグラフで表す（図２０−２２を参照）。図２０は、オーバー塗膜の有り及び無しの２つの塗膜からのＤＮＡ−プラスミドの放出を示す。このデータは、経時的な損失パーセントの形で表される。ほぼ９０−１００μｇのＤＮＡプラスミドを各円板に装填させた。図２１は、オーバー塗膜有り及び無しの２つの塗膜からのＤＮＡ−プラスミドの放出を再度示す。このデータは、実際のＤＮＡ−プラスミドの経時的な損失量の形で表される。図２２は、類似の結果を示すが、ポリマー被覆の円板に比較した非被覆のスチール円板からの放出を示す。
【００７４】
このＤＮＡ−プラスミドは、カチオン性ポリマー塗膜２．２から中性塗膜（ポリマー１．１）よりもゆっくりと放出するように見える。６０分後には、ポリマー２．２塗膜上に著しい量のＤＮＡ−プラスミドが存在し、この時間の後は、極めて少量しかポリマー１．１塗膜上に残存しないように見える。
【００７５】
多分、ポリマー２．２被覆のスチール円板上には、正に荷電した表面と強く相互作用する材料である著しい量のＤＮＡ−プラスミドが数時間後に残存する。非被覆のスチール円板に比較して、ポリマー１．１塗膜からの速度と全溶離の間にさほどの差はない。このプラスミドのオーバー塗膜は、両方のポリマータイプに対する溶離の全速度を低減させる。
実施例４  被覆したＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏステントを用いるヘパリンの装填と放出
ａ）ポリマー２．１を装填させたステント
この試験は、ポリマー２．１被覆のステントがほぼ１００００Ｄの平均分子量の未分別ヘパリンが試料を取り込み、放出する能力を調べた。被覆ステントをＰＢＳ中のヘパリン溶液の中に浸漬することにより、付着を行った。ある範囲の条件を使用して、このステントの中への装填を調べた。
【００７６】
【表４】
0005000826.tif 000008
【００７７】
表６ヘパリンの装填と放出の条件と結果の要約
注−＊放出ヘパリンが最大に達する時間；＊＊放出実験の間に放出されたヘパリンの最大重量（放出プロフィールの最大点を参照、図２）
図２：ヘパリンの装填量に及ぼす装填時間の影響
図３：ヘパリン２ｍｇ／ｍｌを４時間装填させたステントのヘパリン放出プロフィール
ヘパリン試験の結果は、予期した通り、これがポリマー２．１被覆のステントにヘパリンを吸着／吸収することができ、このステントからヘパリンを長時間にわたって放出することを示す。
ｂ）ポリマー２．２を被覆したステント
２ｍｇ／ｍｌの水溶液からポリマー２．２により被覆されたステントに放射性標識した（35Ｓ）ヘパリン（分子量８−１０ｋＤａ）を装填させた。全装填量を求めるために、このステントを液体シンチレーション剤の中に入れ、放射能を測定するために被覆した。ヘパリンの平均取り込みはステント当り１１μｇであった。このステントを各々多量のＰＢＳの中に入れて、４時間にわたってヘパリンの溶離速度を求めた。このステントの中に残存するヘパリンのパーセントの形で示される、この結果を図１８に示す。この結果は、多分ゆるく結合したヘパリンが直ぐに洗い出されることにより、初期にはバーストとしてヘパリンが放出され、それに緩慢な放出相が続くことを示す。放出データの外挿は、恐らく１００％のヘパリンが約２４時間後に起こることを示す。
実施例５  装填レベルに及ぼす装填時の時間、温度及びオリゴマーサイズとポリマーのカチオン含量の影響
この試験の目的は、短いＤＮＡオリゴヌクレオチドをＰＣ被覆の１５ｍｍのＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏ薬剤送達ステントに付着させるフィージビリティを試験し、薬剤の装填に影響する種々のパラメーターを最適化することであった。種々の条件を用いて、１５マー及び３２マーの32Ｐ放射性標識した一本鎖のＤＮＡオリゴヌクレオチドを３００μｌ溶液からＰＣ被覆ステント（上述のポリマー２．１、２．２及び２．６を用いた）に装填させた。温度（２３、３７、４５、６５°Ｃ）、薬剤溶液への露光時間（５、１０、２０、３０分）、薬剤活性（濃度）（１１−５００μＣｉ／３００μｌ）及びポリマー中のカチオン性モノマー含量（５、２０及び３５重量％）の影響を試験した。全装填量をシンチレーションカウンター中で評価した。すべての装填実験は成功した。
【００７８】
ポリマー２．１により被覆されたステント上に３７°Ｃで装填させた１５マーに対する露光時間の装填レベルに及ぼす影響を図４に示す。
【００７９】
装填溶液中の１５マーの濃度を変える（ポリマー２．１、３０分の塗膜時間及び３７°Ｃの温度を用いて）ことの装填レベルに及ぼす影響を図５に示す。
【００８０】
薬剤溶液の温度を変える（ポリマー２．１、３０分の塗膜時間及び７５μＣｉの１５マーの濃度を用いて）ことの装填レベルに及ぼす影響を図６に示す。
【００８１】
このポリマー中のカチオン性モノマーのレベルを変え、この塗膜を脱イオン水により１時間前浸漬する（１５マーと３２マーのオリゴヌクレオチドの両方に対して３００μｌ中の２１１ｐＣｉの初期濃度の薬剤により３０分の塗膜時間と３７°Ｃの温度を用いて）ことの装填レベルに及ぼす影響を図７ないし９に示す。
【００８２】
この溶液にステントを１０分暴露した後に全薬剤装填量のプラトーが得られ、３７°Ｃ（ｐ，０．０５）で最大装填量を得た。これらのパラメーターを用いる装填効率は１０％であった。薬剤濃度の増加と共に最適な装填を実現し、４５８ｐＣｉ（３４μｇＤＮＡ）溶液を用いて、４５．８ｐＣｉ（３．２７μｇＤＮＡ）を装填させた。また、他の濃度（０及び６％に対してｐ＜０．０５）に比較して、このステント上のこのポリマーのＣＭ含量を２０％まで増加することは、最大装填量を改善した。
実施例６  ステントからのオリゴヌクレオチドのインビトロの溶離
ポリマー２．１、２．２及び２．６により被覆され、１５マーまたは３２マーの32Ｐ標識のオリゴマーを装填（３７°Ｃ、３０分、脱イオン水中の前浸漬の有りもしくは無しで、浸漬溶液中３００μｌの濃度で２１１μＣｉで）させたステントをヒトの血液またはＤＭＥＭ細胞培養媒体中３７°Ｃでインキュベーションした。このインキュベーション媒体の試料をある時間にわたって採取し、放射能を評価した。この結果を使用して、ある時間後このステント上に残存する％オリゴマーを計算した。
【００８３】
図１０は、血液と細胞培養媒体中でインキュベーションしたポリマー２．１により被覆されたステントからの１５マーに対する溶離プロフィールを示す。
【００８４】
図１１は、血液と共のインキュベーション時の、異なるポリマーにより被覆されたステントからの１５マーと３２マーの溶離プロフィール及び脱イオン水中で前含浸したポリマー２．１に対する溶離プロフィールを示す。
実施例７  インビボのオリゴマーの放出
ａ）ポリマー２．１により被覆されたステント（１５ｍｍ×３．５ｍｍ）にステント当り１２ｐＣｉの全標識装填量で32Ｐ標識した１５マーのＡＴＧＣＣＣＣＴＣＡＡＣＧＴＧ（配列ＩＤ  １）を装填させた。次に、装填させたステントをブタのＬＣ×動脈の中に配備した。このブタを３０分後に屠殺した。血液試料を採取し、このステントを回収し、１５マーのレベルをこの血液、ステント、動脈壁及びバルーンに対して求めた。この結果を図１２に示す。
【００８５】
ｂ）ポリマー２．２により被覆されたステント上の高装填量の３２マーを用いたことを除いて、類似の実験を行った。０時、配備後３０分、２４時及び屠殺時４８時で血液試料を採取した。この結果を図１３に示す。
【００８６】
ｃ）ポリマー２．１により被覆され、実験８ｃ）で使用のと同じ32Ｐ標識した３２マーを装填させたステントをバルーンカテーテル上に搭載し、インビボでブタの頚動脈の中に送達した。０、３．６及び７２時間と８及び１４日の各時点に対して２ないし３匹の動物を使用した。送達後の特定の時点で、このステント上に残存する32Ｐ標識のレベルとこのステントから動脈及び心筋の中へのオリゴヌクレオチドの組織取り込みをシンチレーション計数により測定した。
【００８７】
この結果を図１５及び１６に示す。
結論
実施例７ａ）−ｃ）の結果は、オリゴヌクレオチドがこのステントを取り囲む血管壁の中にインビボで放出され、このステントを移植した血管に隣接する組織では殆ど検出されないことを示す。このように、実施例７ｃ）においては、心筋の中で検出された放射能は殆どなかった。送達効率は、局所的な薬剤送達カテーテルの空気入れポンプ（ｉｎｆｉｌｔｒａｔｏｒ）（ＴＭ）を使用するよりずっと高い。比較の結果は、１６８０ｐＣｉの32Ｐ標識ＯＤＮの投与量を送達することは、結果として、３時間と６時間で組織中で同一レベルの標識が得られ、ステントからの投与として僅か１００μｇであったことを示す。これらの化合物の更に低い投与量を使用して、標的組織に送達してもよい。
実施例８  蛍光標識したオリゴヌクレオチド
ａ）ポリマー２．２被覆のステント上の取り込みと放出
生理食塩水中の５ｍｇ／ｍｌのＤＮＡ溶液中に３０分間浸漬することにより、ポリマー２．２により被覆されたステントに蛍光標識により標識した１５マーのｃ−ｍｙｃアンチセンスオリゴヌクレオチドＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＣＡＴ（配列ＩＤ  ２）を装填させた。
【００８８】
３個のステントを各々３ｍｌのＰＢＳの中に入れ、３０分間超音波照射することにより、全装填量を求めた。この蛍光標識を定量した。この装填量は、ステント当り約２０μｇであることが判明した。ＰＢＳの中への放出を図１９に示す。
ｂ）ブタ頚動脈中での放出と取り込み
ポリマー２．１被覆のステントに８ａで使用した同じオリゴヌクレオチドを装填させた。このステントをウイック（ｗｉｃｋ）乾燥した。バルーン上に搭載し、この切片中でバルーンを膨らませることにより、各ステントをブタ頚動脈の５０ｍｍの長さの切片中に配備した。次に、動脈のこの切片を培養媒体を充填した室中でカニューレ上に搭載した。更なる培養媒体をシリコーン管の回路と、それから動脈の切片から６０ｍｌ分-1の速度で流動させた。１、６、１２もしくは２４時間後、ステント移植した切片をこの回路から取り外し、このステントから近位及び遠位の血管の末端をＯＤＮを定量するために取り出した。血管のこのステント化セグメントをこのステントから静かに引き離した。３つの血管セグメントすべてを液体窒素中でスナップ（ｓｎａｐ）冷凍し、粉末化し、そして溶解緩衝液中で一夜インキュベーションした。超音波照射と遠心分離に続いて、この上澄みを蛍光について測定して、ＯＤＮと結合した状態と考えられる標識濃度を求めた。この結果を図１４に示す。この循環液体中の蛍光標識のレベルを各実験の終わりで検出し、これが読み取り器の検出レベル以下であることを見出した。血管の開始切片の一つを全蛍光標識の分析をする代わりに、切片し、そして臭化エチジウム染色の後共焦点顕微鏡下で観察した。この結果は、オリゴヌクレオチドが核の位置を示すと考えられる臭化エチジウムを含有することを示す。
実施例９  Ａｂｃｉｘｍａｂ装填とインビトロの溶離
Ａｂｃｉｘｍａｂは、血栓形成を最少化するためのステント術の前後に全身的に投与されるグリコタンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａに対する抗体（分子量、約５０ｋＤａ）である。Ａｂｃｉｘｍａｂは、潜在的に平滑筋細胞上に存在し、そして平滑筋細胞遊走を仲介する役割のαＶβ３と反応し、それにより再狭窄にプラスに影響する。これは全体としてアニオン電荷を有する。
【００８９】
この試験においては、このステントを０．００１％ポリソルベート８０を含有するリン酸塩緩衝液中の２ｍｇ／ｍｌの薬剤溶液の中に浸漬して、溶解を室温で３０分間を助けることにより、125Ｉ標識したａｂｃｉｘｉｍａｂを、ポリマー２．２により被覆されたステント上に、もしくは比較としてむきだしのステント（ポリマー無し）上に装填させる。このステントを除去し、ウイック乾燥した。次に、アルブミンを含有する再循環（２０ｍｌ／分）リン酸塩緩衝液の分離した回路の一部を形成するチャンネルの中に３７°Ｃでこのステントを入れる。循環するＰＢＳ中の標識のレベルを２４または４８時間にわたって測定することにより、このステント上に残存する125Ｉ標識のレベルを求め、パーセントの形で示した。この結果を図１７に示す。また、ステント上の薬剤の全装填量を求め、それがポリマー２．２により被覆されたステントに対してステント当り約５μｇであることも判明した。
【００９０】
この結果は、むきだしのステントからよりもこのカチオン性ポリマーからの方が更に長い時間にわたってこの活性剤を放出することを示す。
【図面の簡単な説明】
【図１】  実施例２の結果を示す。
【図２及び３】  実施例４ａの結果を示す。
【図４ないし９】  実施例５の結果を示す。
【図１０及び１１】  実施例６の結果を示す。
【図１２及び１３】  実施例７ａ及びｂの結果を示す。
【図１４】  実施例８ｂの結果を示す。
【図１５及び１６】  実施例７ｃの結果を示す。
【図１７】  実施例９の結果を示す。
【図１８】  実施例４ｂの結果を示す。
【図１９】  実施例８ａの結果を示す。
【図２０ないし２２】  実施例３の結果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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