(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
バラ、ブッソウゲ花弁から得られた赤色色素を有効成分として含有することを特徴とするP.acnesのヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、P.acnesのヒアルロニダーゼ活性阻害剤作用を持つ植物から抽出される天然物を主成分とするヒアルロニダーゼ阻害剤に関する。角質中のヒアルロン酸は、従来言われているNMF(天然保湿因子)、セラミドや皮脂に加えて新たに提案された保湿因子である。その分解の原因の一つにに皮膚上に多く存在しているP.acnesが産生するヒアルロニダーゼの関与が考えられる。そのヒアルロニダーゼ活性を阻害することによって角質中のヒアルロン酸の減少を防止し、角質の保湿能を保ち、さらには皮膚の透明感を向上する化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
肌の美しさにおいて、透き通るような肌は、最も理想とされる肌である。透き通るような肌は、角質層の水分量と密接な関係が有り、角質水分量の保持のために様々な方法が化粧品において試されている。保湿剤として、グリセリンやブチレングリコールなどの多価アルコール、糖やアミノ酸などのNMF類似成分、ヒアルロン酸やコラーゲンなどの保水性高分子、スクワランやグリセリン脂肪酸エステルなどの皮脂類似成分やセラミドなどが配合されているが、まだ十分ではないのが現状である。
【０００３】
【問題を解決するための手段】
本願発明者は、前記問題点を解決するために鋭意検討した結果、ばら科バラ属、ばら科サクラ属、あおい科フヨウ属、あおい科アオイ属、アオイ科ゼニアオイ属、ユリ科ユリ属、まめ科シャジクソウ属、きく科キク属、きく科ヒマワリ属、きく科タンポポ属、あかばね科マツヨイグサ属の植物の抽出物とバラやブッソウゲの赤色色素がP.acnesのヒアルロニダーゼの活性を低濃度で阻害することを見出すことによって、本発明を完成するに至った。
【０００４】
皮膚の透明感の減少は、角質の透明感の減少と深く関わっている。角質の透明感の減少に関わる因子は、メラニンの沈着、角質の水分量の低下などと言われている。角質の水分保持はアミノ酸類、糖類やピロリドンカルボン酸などの天然保湿因子、皮膚表面を覆い角質からの水分の蒸散を防ぐスクワレン、コレステロールやトリグリセライドなどの皮脂組成物やセラミドなどの細胞間脂質により保たれていることが知られている。近年、真皮中にしか存在していないと考えられていたヒアルロン酸が表皮や角質中にも存在することが報告された(Fragrance
Journal 臨時増刊 No.7 p48-55
(2000))。ヒアルロン酸はその水分保持能力の高さから角質に存在すると、角質水分量に重要な役割を果たしている可能性が高い。
【０００５】
また、皮膚上には多くの微生物が存在し、ほとんどの人に多数存在するものとしてはP.annes（アクネ菌）とS.epidermidis（表皮ブドウ球菌）をあげることができる。そのP.acnesはヒアルロニダーゼというヒアルロン酸を分解する酵素を持っている。そのヒアルロニダーゼは、角質中のヒアルロン酸を分解し、保湿機能を低下させていると考えられる。よってこの発明は、皮膚に存在するP.acnesのヒアルロニダーゼの活性を阻害することによって、角質中のヒアルロン酸の分解を防ぎ、角質水分量を保持することによって、皮膚の透明感を改善できる化粧料を提供するものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明にかかる植物の詳細の説明を行うと、ばら科バラ属の植物には、西洋バラ（rosa centifolia）、ハイブリッドティーローズ（Hybrid Tea rose）、ナニワイバラ（Rosa laevigate
Michaux）が好適に用いられる。
【０００７】
ばら科サクラ属の植物にはソメイヨシノ（Prunus yedoensis
Matsum）、サトザクラ（Prunus lannesiana
Wils.）、ウメ（Prunus mume Sied.）、モモ（Prunus persica
Batsch）が好適に用いられる。
【０００８】
あおい科フヨウ属の植物には、フヨウ（Hibiscus mutabilis L.）ブッソウゲ（Hibiscus rosa
sinensis L.）、ケナフ（Hibiscus
cannabiuus L.）、トロロアオイ（Hibiscus  manihot L.）、ムクゲ（Hibiscus syriacusL.）が好適に用いられる。
【０００９】
あおい科アオイ属の植物には、タチアオイ（Altheea rosa Car.）が好適に用いられる。
【００１０】
あおい科ゼニアオイ属の植物には、ウスベニアオイ（Malva sylvestris
L.）が好適に用いられる。
【００１１】
ゆり科ユリ属の植物には、テッポウユリ（Lilium
longiflorum Teumb.）、スカシユリ（Lilium elegans Teumb.）が好適に用いられる。
【００１２】
まめ科シャジクソウ属の植物には、シロツメクサ（Trifolium
pepengos L.）、ムラサキツメクサ（Trifolium
protense L.）が好適に用いられる。
【００１３】
つばき科ツバキ属の植物には、ツバキ（Camellia Japonica L.）、サザンカ（Camellia sasanqua Thumb.）が好適に用いられる。
【００１４】
きく科キク属の植物には、キク（Chrysathemum morifolium
Ramat ver.sinens）が好適に用いられる。
【００１５】
きく科ヒマワリ属の植物には、ヒマワリ（Helianthus
annuus L）が好適に用いられる。
【００１６】
きく科キンセンカ属の植物には、キンセンカ（Calendula
arvensis L）が好適に用いられる。
【００１７】
きく科タンポポ属の植物には、タンポポ（Taraxacum
platycarpum Dahlst.）が好適に用いられる。
【００１８】
あかばね科マツヨイグサ属の植物には、マツヨイグサ（Oenothera odorata
Jacq）が好適に用いられる。
【００１９】
本発明に使用される植物の抽出部位は、特に限定されない。花弁、葉、茎、根、種子、果実等或いは、全草を用いて抽出することも出来る。就中、花弁抽出物は他の葉や幹からの抽出物と比べてタンニン類などの含有率が低く、タンパクの変性などが少ないので好適である。
【００２０】
本発明で使用される抽出物は各種溶媒にて抽出することが可能である。水のみを用いる場合のほかに、水と混和する極性溶媒を単独で用いることもできる。極性溶媒としてエタノール、プロピレングリコール、エレエングリコール、1,3-ブチレングリコールなどを用いることが可能であるが極性溶媒であれば、その限りではない。更に、エタノール、プロピレングリコール、エチレングリコール、1,3-ブチレングリコールの1種又は2種以上の混合溶媒を用いることができる。
【００２１】
抽出時間・抽出温度は、特に限定されない。水による抽出であれば、通常60℃下において、３〜４時間抽出を行い、エタノールなどの低沸点溶媒を使用する場合は還流器付きの抽出装置を使用する。抽出した溶液は、冷却後、ろ過をすることによって抽出物を得ることができる。更に、活性炭やその他樹脂などを用いて脱臭・脱色などを行うこともできる。
【００２２】
この発明にかかるヒアルロニダーゼ阻害剤の配合量は、化粧料の実施態様、化粧料の使用形態などに応じて変動させることができるのでとくに限定されない。原則的には、有効量存在すれば良いことになるが、一般的には化粧料組成物中0.0000１〜100重量％が利用でき、好ましくは0.01〜5重量％、なかでも0.01〜1.0重量％が最適である。特に、用時調製のパウダー状の化粧料などは、この本願発明にかかるヒアルロニダーゼ活性阻害剤が100重量％を含めた高配合率で利用されることになる。
【００２３】
また、この発明にかかる化粧料の適用範囲は、特に限定されない。つまり、この発明の有効成分が有する作用効果に応じて各作用効果を利用できる全ての化粧料に適用できる。
【００２４】
たとえば、この発明にかかるヒアルロニダーゼ阻害剤を各種化粧料基剤などに配合して、クリーム、乳液、化粧水、パック剤、洗顔料などの各種基礎化粧料、洗髪料、育毛料、シャンプー、リンスなどの各種頭髪用化粧料、石けん、美爪料、オーデコロンなどその他の化粧料も含んで広範囲に適用できる。また、前記各種化粧料の実施態様は、溶液、エマルジョン、軟膏、ゾル、ゲル、パウダー、スプレーなどの各種態様で適用できる。
【００２５】
以下、本発明による試験実施例を示すとともに、本発明の素材を利用した化粧料の処方例を示すが、ここに記載された実施例に限定されるものではない。
【００２６】
【実施例１】
顔面からP.acnesの採取
PUK−DILUENT
【表１】
で湿らせた滅菌綿棒で皮膚約1cm2を強く擦過して、材料を取り、5mlのPUK−DILUENTに浮遊した。これを10倍段階希釈し、その10-1、10-2、10-3の0.1mlをPUK−MEDIUM改(滅菌条件：115℃,15min)
【表２】
平板上に塗布した。37℃、7日間、嫌気培養（AnaeroPack・ケンキ（三菱ガス化学(株)製）を用いて系内を嫌気にした）後、20〜100個の集落を生じた平板上でそれぞれ5〜20個を釣菌し、GAM寒天平板培地上に接種した。
【００２７】
【表１】
PUK−DILUENT
0005063842.tif 000002
【００２８】
【表２】
PUK−MEDIUM
0005063842.tif 000003
【００２９】
【実施例２】
P.acnesヒアルロニダーゼの精製
健常人男性より得たP.acnesをGAMブイヨン培地110ｍLで37℃、７日間静置培養した。培養液は遠心分離（9,000rpm、５min）を行い培養上清を集めた。氷冷下、培養上清に57ｍLのアセトンを加え30％アセトン溶液とし、生じた沈殿を遠心分離（6,000rpm，10min，4℃）を行い、沈殿を除いた。上清を集め、それに210ｍLのアセトンを追加し、70％アセトン溶液とし、遠心分離（6,000，10min，4℃）し、沈殿を集め少量の水に溶解し、凍結乾燥を行い、酵素粗精製物を得た。
【００３０】
【実施例３】
水抽出物の調製
各種植物乾燥物を、100gとり、1000mLの精製水を加え、60℃下において3時間抽出を行った。冷後、ろ過を行い、ろ液を得た。ろ液を減圧下濃縮し、水抽出物を得た。
【００３１】
【実施例４】
エタノール抽出物の調製
各種植物抽出物を10gとり、ソックスレー抽出器を用いて５時間抽出を行った。冷後、ろ過を行い、ろ液を得た。ろ液を減圧下濃縮し、エタノール抽出物を得た。
【００３２】
【実施例５】
ヒアルロニダーゼ活性阻害を持つ植物抽出物の検索
0.4mg/mLにヒアルロン酸Naを溶解した0.3Mリン酸緩衝液(pH5.31)溶液を0.2mLとり、1000、100ppm、10ppmの試料溶液0.2mLとP.acnesから得たヒアルロン酸分解酵素を予備試験で濃度の設定を行った酵素の20mMリン酸緩衝液(pH6.9)溶液0.2mLを、混和し、37℃で45分間放置後、アルブミン液（アルブミンを0.1%含む酢酸緩衝液(pH3.75)）を2.0mL加え、吸光度(濁度：600nm)を測定した。本試験において、アルブミンと試料溶液においても濁りを生じることがあるため、ヒアルロン酸を抜いたブランクを調製し、補正を行った。プレートリーダー使用の場合は、スケールを１／４で行った。同一試料は2個行った。抑制率を算出する計算式は下記に示した。
【００３３】
【数１】
0005063842.tif 000004
【００３４】
【結果】
【表３】
0005063842.tif 000005
【００３５】
【表４】
0005063842.tif 000006
【００３６】
【表３】
に示した結果のように、表記植物抽出物のP.acnesのヒアルロニダーゼ活性阻害作用が強いことを確認した。更に、バラやブッソウゲの赤色色素はきわめて低い濃度でヒアルロニダーゼの活性阻害作用を有することを確認した。
【００３７】
【実施例６】
化粧料の使用による
健常人女性10名に処方例３の化粧水と処方例３からバラ赤色色素を抜いた比較例を2週間塗布し、使用後の皮膚の変化をアンケートによって確認を行った。
【００３８】
【結果】
【表５】
0005063842.tif 000007
【００３９】
P.acnesのヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有するバラ赤色色素を含有した化粧料を使用することによって、瑞々しい肌への改善が見られた。
【００４０】
本発明に基づき、化粧品の処方例を示すが、本発明はかかる処方例のみに限定されるものではない。
【００４１】
【処方例１】
クリーム（重量％）
サクラエキス（花弁・50％エタノール抽出）・1.0
ステアリルアルコール・6.0
ステアリン酸・2.0
ワセリン・4.0
スクワラン・9.0
オクチルドデカノール・10.0
1,3−ブチレングリコール・6.0
グリセリン・4.0
ＰＯＥ（２０）セチルアルコールエーテル・3.0
モノステアリン酸グリセリン・2.0
防腐剤・適量
酸化防止剤・適量
精製水・残部
【００４２】
【処方例２】
ピールオフタイプパック（重量％）
ナニワイバラエキス(全草・水抽出)・2.0
ポリ酢酸ビニルエマルジョン・15.0
ポリビニルアルコール・10.0
ソルビトール・5.0
ポリエチレングリコール400・5.0
ホホバ油・3.0
スクワラン・1.0
ＰＯＥソルビタンモノステアリン酸エステル・1.0
酸化チタン・5.0
タルク・10.0
エタノール・8.0
防腐剤・適量
精製水・残部
【００４３】
【処方例３】
化粧水（重量％）
バラ赤色色素・0.01
ソルビット・2.0
１，３−ブチレングリコール・5.0
グリセリン・3.0
防腐剤・適量
精製水・残部
【００４４】
【発明の効果】
本発明の植物抽出液にP.acnesの産するヒアルロニダーゼ活性を阻害する効果を見出した。本発明の植物抽出液を化粧料に配合することによって、皮膚上でヒアルロニダーゼの働きを抑え、角質中のヒアルロン酸の分解を防ぐことによって、皮膚の保湿能を向上し、皮膚の透明感を向上することができる化粧料が可能となる。