(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シャペロンタンパク質のレベルを、その増大が必要な対象者において増大させるための、以下の式II：
【化２】
0004965048.tif 000004
のメトキシクロルを含む、医薬組成物。
【請求項２】
シャペロンタンパク質が１又は複数のBiP、カルレティキュリン、カルネキシン、ERp72、ERP57、又はERp55である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
シャペロンタンパク質がERP57である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
患者に投与することにより、コントロールの個体群に見られるレベルの４０％以内にまでシャペロンタンパク質のレベルが増大される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
患者に投与することにより、コントロールの個体群に見られるレベルの２０％以内にまでシャペロンタンパク質のレベルが増大される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
患者に投与することにより、コントロールの個体群に見られるレベルの１０％以内にまでシャペロンタンパク質のレベルが増大される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
患者に投与することにより、27ng/mlの４０％以内にまでERP57のレベルが増大される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項８】
患者に投与することにより、27ng/mlの２０％以内にまでERP57のレベルが増大される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項９】
患者に投与することにより、27ng/mlの１０％以内にまでERP57のレベルが増大される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
メトキシクロルが約0.1mg/kg/日〜約3000mg/kg/日の範囲の用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
メトキシクロルが約0.1mg/kg/日〜約500mg/kg/日の範囲の用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
メトキシクロルが約10mg/kg/日〜約100mg/kg/日の範囲の用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
患者に投与することにより、コントロールの個体群に見られるレベルの４０％以内にまでERP57のレベルが増大される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
患者に投与することにより、コントロールの個体群に見られるレベルの２０％以内にまでERP57のレベルが増大される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
患者に投与することにより、コントロールの個体群に見られるレベルの１０％以内にまでERP57のレベルが増大される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
患者に投与することにより、27ng/mlの４０％以内にまでERP57のレベルが増大される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
患者に投与することにより、27ng/mlの２０％以内にまでERP57のレベルが増大される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
患者に投与することにより、27ng/mlの１０％以内にまでERP57のレベルが増大される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
メトキシクロルが約0.1mg/kg/日〜約3000mg/kg/日の範囲の用量で投与される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
メトキシクロルが約0.1mg/kg/日〜約500mg/kg/日の範囲の用量で投与される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
メトキシクロルが約10mg/kg/日〜約100mg/kg/日の範囲の用量で投与される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
シャペロンタンパク質のレベルを、その増大が必要な対象者において増大させるための医薬組成物であって、以下の式II：
【化８】
0004965048.tif 000005
のメトキシクロル及び医薬として許容される担体を含んで成る医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本出願は、PCT出願として、JORDAN LOYAL HOLTZMANにより、合衆国及び住居のある全ての指定国に出願されている。
【０００２】
本出願は、AGENTS AND METHODS FOR INCREASING BRAIN CHAPERONIN LEVELSと題された、２０００年５月２４日に出願された米国仮特許出願番号60/206,854号に対して優先権を主張するものであり、この開示は、引用によってその全体が本明細書に組み入れられる。
【０００３】
本発明の背景
幾つかのモデルが、年齢に関係する生理学的問題、例えば筋量の減少、免疫系の機能不全、及び認識力の低下を説明するために発展してきた。そのようなモデルとしては、例えばプログラムされた細胞死、すなわちアポトーシスの増加、オキシダント損傷の蓄積、細胞が染色体の末端にあるテロメアを維持することができなくなること、及び、ストレスに対する応答の欠如が挙げられる。観察される、年齢に関連したストレスへの応答の欠如は、シャペロンタンパク質が関与すると考えられる。
【０００４】
細胞レベルで、最も重要なストレスタンパク質はシャペロンである。シャペロンは、細胞機能において重要な役割を演じる。それらは、タンパク質をその天然の状態へと再配列するのを助け、それによって、損傷したタンパク質を復元し、かつ新たに合成されたタンパク質をその最終の最適構造へと向かわせることによってタンパク質の折り畳みの最終段階を助ける。シャペロンはまた、例えば分子内及び分子間ジスルフィド結合の形成によって、最終タンパク質生成物を安定化するのを助ける。シャペロンの１つのそのようなファミリーは、チオール：タンパク質ジスルフィドオキシドレダクターゼ(TPDO)として知られている。ストレスタンパク質及びシャペロンの研究は、年齢に関連した機能低下の多くが、シャペロン系の活性の低下に関連するという考えを支持する。シャペロンのレベル及び活性の低下は、不適当に折り畳まれ、かつタンパク質の不溶性の塊の形成の増加をもたらすことがある。
【０００５】
脳内のβ−アミロイドタンパク質の不溶性の塊、又はプラークは、アルツハイマー病の患者で見られる。β−アミロイド前駆体が原形質膜内に挿入されると、β−アミロイドタンパク質は当該前駆体タンパク質から開裂される。β−アミロイドは、生理学的溶液中で直ちに凝集してプラークを形成する。この凝集は、アルツハイマー病でない患者の脳脊髄液では観察されない。これは、正常な脳脊髄液がβ−アミロイドの凝集を防ぎ、そしてそれによってアルツハイマー病と関連するプラークの形成を防ぐ成分を含むことを示唆する。アルツハイマー病と関連する、この成分の同一性を決定するための努力において、β−アミロイドシャペロンタンパク質複合体が単離された。この複合体は、シャペロンの同一性を決定するために解析された。β−アミロイドと複合していたシャペロンタンパク質がERP57であることが発見された。ERP57のレベルは、アルツハイマー病及び他の関連疾患において役割を果たしている。これは、引用によって本明細書に組み入れられるPCT出願番号第99/25593号に記載されている。
【０００６】
従って、シャペロンタンパク質レベルを増大する方法についての必要性が残されている。
【０００７】
本発明の要約
本発明は概して、シャペロンタンパク質レベルを増大する方法に関する。本方法は、置換ビフェニルメタン化合物、又はこの化合物を含む医薬組成物を患者に投与することを含む。好ましくは、当該化合物は、メトキシクロル又はメトキシクロル類似体である。注目のシャペロンタンパク質は、ストレスタンパク質のうちの１つ、好ましくはチオール：タンパク質ジスルフィドオキシドレダクターゼ(TPDO)のファミリーのうちの１つ、更に好ましくはERP57である。
【０００８】
本発明はまた、アルツハイマー病の症状を処置し、又は緩和する方法を含む。当該方法は、ERP57レベルを増大する能力により選択される置換ビフェニルメタン化合物又は当該化合物の医薬組成物の投与を含む。本発明はまた、患者に存在するシャペロンタンパク質のレベルに関連する他の病気を処置するための方法を含む。これは、例えば、真性糖尿病、高血圧、心疾患、免疫機能の低下等を含む。
【０００９】
本発明はまた、医薬組成物を含む。本発明の医薬組成物は、置換ビフェニルメタン化合物及び医薬として許容される賦形剤を含む。好ましくは。当該医薬組成物は、メトキシクロル類似体及び医薬として許容される担体を含む。更に好ましくは、当該医薬組成物は、メトキシクロル及び医薬として許容される賦形剤を含む。これらの医薬組成物は、シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルを調節するために使用され得る。これらの医薬組成物はまた、アルツハイマー病の症状を処置し、又は緩和するために使用され得る。
【００１０】
好ましい態様の詳細な説明
本発明は、メトキシクロル又はメトキシクロル類似体の投与を介してシャペロンタンパク質であるERP57のレベルを増大する方法、メトキシクロル又はメトキシクロル類似体の投与を介して他のシャペロンタンパク質のレベルを増大する方法、アルツハイマー病の症状を処置し、又は緩和する方法、同様にシャペロンタンパク質のレベルに依存する疾患を予防する方法、アルツハイマー病を予防する方法、同様にシャペロンタンパク質のレベルに依存する疾患を予防する方法、シャペロンタンパク質、例えばERP57、のレベルを増大することが出来る医薬組成物、及び医薬組成物、に関する。特に、本発明は、メトキシクロルを投与することによって、シャペロンタンパク質のレベルを増大し、又は安定化する方法に関する。
【００１１】
アルツハイマー病及びβ−アミロイド
アルツハイマー病は、当該病気に苦しむ対象者者の脳におけるβ−アミロイドプラークの形成を含む。当該プラークは、β−アミロイドの凝集から生じ、これは、アミロイド前駆体タンパク質の開裂及び細胞間隙への分泌から形成する。β−アミロイドは、実験室系において溶液中で自由に凝集し、そしてアルツハイマー病において形成されるプラークと同様の凝集塊を形成する。
【００１２】
アミロイド前駆体タンパク質、β−アミロイド、及びβ−アミロイドの種々の断片が特徴づけられてきた。アミロイド前駆体タンパク質及びβ−アミロイドの既知の特徴は、それらをコードする哺乳類の遺伝子、これらのタンパク質のための組換え発現系（例えばベクター、プラスミド等）、これらのタンパク質の産生方法、タンパク質配列及び構造、ならびにアミロイド前駆体をβ−アミロイドへと開裂させるプロテアーゼ、を含む。
【００１３】
β−アミロイドを、種々の形態で生成し、そして／あるいは単離することができる。哺乳類の組織におけるβ−アミロイドの最も優勢な形態はβ−アミロイド1-42であり、ここでの番号付けは、完全なβ−アミロイドのアミノ末端で始まるアミノ酸の数を表し、これらは38〜43個のアミノ酸を有する。哺乳類の組織におけるβ−アミロイドの２番目に優勢な形態はβ−アミロイド1-38である。
【００１４】
β−アミロイドは、化学的及び／又は生物工学的方法によって産生され、特徴づけられ、そして完全なβ−アミロイドの特性の多くを有することが示されてきた。本明細書で使用する場合のβ−アミロイドは、β−アミロイドの種々の形態のすべてを言及し、グリコシル化された、グリコシル化されていない、種々の長さの形態等を含む。
【００１５】
シャペロン
シャペロン（シャペロンタンパク質としても知られ、シャペロニン及びある種の熱ショックタンパク質を含む）は、折り畳み、３次構造の形成、４次構造の形成及び／又は活性タンパク質を生成するのに必要な他の過程、を触媒する。本明細書に記載するように、幾つかのシャペロンは、加齢に伴ってレベルが低下し、かつ年齢に関連した疾病及び障害と相関し得る。特に、シャペロンBiP、カルレティキュリン、カルネキシン、ERp72、ERP57、及びERp55の１又は複数の組織レベルは、哺乳類、例えばげっ歯動物又はヒトの加齢に伴って低下し、且つ疾患と相関し得る。
【００１６】
シャペロンは、チオール：タンパク質ジスルフィドオキシドレダクターゼ(TPDO)として知られるファミリーを含む。TPDOは、本発明の好ましいシャペロンを表す。好ましいTPDOは、TPDO-ERP57である。TPDO-ERP57はまた、ERp57, ERp60, ERp61, 及びGRp58と呼ばれてきた。本明細書で使用する場合、ERP57は、このタンパク質についての任意な一般名を言及し、TPDO-ERP57、ERp57、ERp60、ERp61、及びGRp58、ならびにグリコシル化され、又はグリコシル化されていない型を含むすべての天然に生じるこのタンパク質の変異体型を含む。
【００１７】
シャペロン、例えばERP57は、一般によく研究され、そして／あるいは特徴づけられたタンパク質である。多くのシャペロン、例えばERp57のよく特徴づけられた特徴は、虫からヒトまでの範囲にわたる生物においてそれらをコードする遺伝子、これらのタンパク質のための組換え発現系（例えばベクター、プラスミド等）、これらのタンパク質を産生する方法、タンパク質配列及び構造、ある種のタンパク質基質、ならびにある種の生物学的機能を含む。シャペロン、例えばERP57は、哺乳類の年齢と共に減少することが既に観察されており、そしてアルツハイマー病又はβ−アミロイドプラークの形成に関係しているとみなされている。
【００１８】
シャペロンERP57とβ−アミロイドの複合体
脳脊髄液中には他のシャペロンが存在し得るが、ERP57だけが脳脊髄液中で同定されていた。ERP57レベルは、年齢と共に、哺乳類組織において正常なERP57レベルと比較して減少し得る。本明細書で使用される、用語「正常なERP57レベル」は、コントロールの個体群由来の脳脊髄液中で典型的に見られるERP57の平均濃度を含む。適当なコントロールの個体群としては、例えば若者、アルツハイマー病でない年配者等が挙げられる。３つのコントロールの個体群で測定したERP57のレベルは、約27±2ng/mlである。
【００１９】
ERP57はβ−アミロイドと複合体を形成することができる。この複合体は、脳脊髄液から単離される。ERP57及びβ−アミロイドは強く結合した複合体を形成すると考えられる。例えば、イムノブロットは、複合体の非常に少ない解離を証明する。ERP57とβ−アミロイドの複合体は、アルツハイマー病にかかっていない対象者においてアミロイド前駆体の正常なプロセシングの中間体であると考えられる。年老いた動物における、正常なERP57レベルと比較した場合のERP57レベルの低下は、複合体の量の減少及び遊離β−アミロイドの量の増加をもたらすことがある。遊離β−アミロイドの量の増加は、アルツハイマー病に関連するアミロイドプラークの沈積の増加を引き起こし得る。
【００２０】
ERP57とβ−アミロイドの複合体は、タンパク質化学の通常の方法によって、脳脊髄液から単離し、精製し、特徴づけることができる。例えば、当該複合体は、ERP57又はβ−アミロイドの１方又はどちらにも親和性を有する系を用いたアフィニティークロマトグラフィーによって単離し、そして／あるいは精製することができる。続いて、当該複合体は、他の形態のクロマトグラフィー、例えばセファクリルカラム及び／又はモノＱカラムでの分離によって、さらに精製することができる。単離及び／又は精製後、標準的な方法、例えばペプチドマッピング、配列決定、PAS反応（過ヨウ素酸−シッフ反応）及びマトリックス支援レーザーイオン化飛行時間形質量分析計(MALDI-TOF)を用いることによって、複合体を特徴づけることができる。
【００２１】
ERP57とβ−アミロイドの複合体は、天然の系においてグリコシル化され得る。当該複合体の周囲の多くの環境下では、ERP57もβ−アミロイドも、グリコシル化されないようである。典型的には、当該複合体はグリコシル化され、例えば複合オリゴ糖を用いてアスパラギン残基（例えば、アスパラギン２７）にてN-グリコシル化される。
【００２２】
ERP57レベルの検出
ERP57とβ−アミロイドの複合体ならびに未結合の成分ERP57及びβ−アミロイドは、タンパク質、糖及び／又はグリコシル化タンパク質の検出について知られている方法によって検出することができる。当該複合体は、穏やかに又は適度に変性しているゲルの電気泳動で、約62kDの分子量を有し、ERP57又はβ−アミロイドのいずれかに対する抗体によって認識される。ERP57又はβ−アミロイドを認識するポリクローナルもしくはモノクローナル抗体は当業界で公知であり、そして標準的な方法によって製造することができる。そのような抗体は標識されるか、さもなければ標準のイムノアッセイにおいて使用することができる。好ましい標準的なイムノアッセイとしては、ELISAアッセイ、イムノブロット、サンドウィッチアッセイ、増強された化学発光等を包含する。複合体又はその未結合成分を検出するさらなる方法としては、蛍光偏光アッセイ、カラム及びアフィニティクロマトグラフィーによる標準的なタンパク質精製、タンパク質分解性開裂後のエドマン分解アッセイ、飛行形質量分析計（例えば、MALDI-TOF）を包含する。
【００２３】
生物試料中のERP57濃度を検出する方法は、アルツハイマー病に対する患者又は対象者者の感受性を検出、決定、試験、診断、スクリーニング、又はさもなければ評価するための方法において使用することができる。本明細書で使用される「アルツハイマー病に対する感受性」という語は、対象者又は患者におけるアルツハイマー病の有無、この疾病の症状の有無、この疾病に至るもしくはこの疾病に関連する因子の有無、この疾病を発症する可能性の有無等を包含する。本明細書で使用する場合、この疾病に至るもしくはこの疾病に関連する因子としては、β−アミロイドプラークの形成、アミロイド前駆体タンパク質のプロセシングにおける障害等を包含する。
【００２４】
本明細書で使用する場合、生物試料としては、β−アミロイドプラークの沈積、アミロイド前駆体タンパク質のプロセシングにおける障害、アルツハイマー病、アルツハイマー病を発症する見込み等についてスクリーニングされる必要があるか又は、それらに罹りやすいかもしくは罹っていると疑われる動物又はヒトからの生物材料、例えば組織、細胞もしくは体液試料を包含する。生物試料はまた、β−アミロイドプラークもしくは凝集物を形成する傾向又はアミロイド前駆体タンパク質を不適当にプロセシングする傾向について検査される、実験動物、細胞又は培養物からの実験室試料を包含する。生物試料は更に、シャペロンタンパク質、例えばERP57を発現するために設計される系であって、シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベル、及び関連する効果を研究し、又はモニタリングするために使用され得るもの、を包含する。例えば、組織又は細胞を含む生物試料、例えば肝臓、血小板、血清又は皮膚は、生きている動物又は患者から、針生検、静脈穿刺又は皮膚をこすること(skin scraping)のような方法によって回収することができる。本発明の１つの観点においては、生物試料は、ヒト又は動物の中枢神経系からの生物材料を包含する。好ましい生物試料としては、生きている動物又は患者においてアルツハイマー病に対する感受性を評価するための、脳脊髄液由来の生物材料を包含する。脳脊髄液は、手術中の脊椎穿刺によって、又は当業者に公知の種々の方法のうちの任意の方法によって、回収することができる。
【００２５】
シャペロンのレベルの調節
ERP57レベルの低下
一般に、正常なERP57レベルに対するERP57レベルの低下は、アルツハイマー病に対する感受性と相関する。ERP57レベルは、生物試料中の遊離ERP57のレベル、β−アミロイドとの複合体において結合したERP57のレベル、遊離ERP57と、結合したERP57とを合わせたレベル、及び好ましくは全ERP57のレベルを包含する。ERP57レベルの低下は、アルツハイマー病に対する感受性の増大と相関する。本明細書で使用する場合、感受性の増大は、アルツハイマー病、この疾病の少なくとも１つの症状、この疾病に至るか又は関連する少なくとも１つの因子、この疾病を発症する可能性等が患者もしくは対象者に存在することがないというよりありそうなことをいう。ERP57の低下は、対象者における以前のレベルと比較して決定されうる。
【００２６】
アルツハイマー病に対する感受性の増大は更に、コントロールの個体群で見られるものより低いシャペロンタンパク質のレベルの観点から定義されうる。例えば、１つの実施態様においては、正常なERP57レベルに対して少なくとも35％のERP57レベルの低下は、アルツハイマー病を発症する100％の可能性と相関する。別の実施態様においては、動物又はヒトにおけるβ−アミロイドの凝集は、生物試料中のERP57レベルを測定することによって検出できる。正常なERP57レベルに対するERP57レベルの低下は、β−アミロイドの凝集の増加の可能性の増加と相関し、且つそのことを示す。β−アミロイドの凝集を検出することによって、β−アミロイドプラークの形成がまた検出される。
【００２７】
アルツハイマー病に対する感受性はまた、遊離ERP57レベル、β−アミロイドのレベル、及び複合体のERP57：β−アミロイドのレベルを相関させることによって決定することができる。正常なERP57レベルに対するERP57レベルの関連性のある低下は、約35％、好ましくは約50％、より好ましくは約65％の低下を含む。そのような関連性のある低下は、アルツハイマー病に対する感受性の増加、例えばアルツハイマー病を引き起こすか、又はこれと関連する因子、特にβ−アミロイドプラーク形成；アルツハイマー病；アルツハイマー病と関連する症状；アルツハイマー病の発症等と相関する。
【００２８】
正常なERP57レベルに対するERP57レベルの低下は、ERP57レベルを神経精神病学的機能測定又はMRIで比較することによって、アルツハイマー病に特有の症状と相関され得る。神経精神病学的機能測定は、例えば神経精神病学的評価、全病歴及び物理的試験を行うことによって、かつこの情報を、例えばDSMIII-R及びNinCDS-ADRDAにより定義される基準に基づいて評価することによって実施され得る。MRIは当業者に知られている方法によって実施され得る。この低下はまた、コントロールの個体群のもの未満のERP57レベルと相関されうる。
【００２９】
それ故に、ERP57レベルの増大は、アルツハイマー病及びその関連症状に対する有益な効果を有すると思われる。ERP57レベルの調節は、ERP57を直接投与することによって、又はERP57の天然の産生を増大する役割を果たす化合物を投与することによって達成されうる。ERP57レベルは、適当な化合物、又は適当な化合物を含む医薬組成物の投与によって増強されうる。本発明は、シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルを増大するために、置換ビフェニルメタン化合物を利用する。好ましくは、当該化合物は、メトキシクロル類似体でもある置換ビフェニルメタン化合物である。更に好ましくは、メトキシクロルは、ERP57のレベルを増大するために投与される。
【００３０】
シャペロンタンパク質のレベルの低下
シャペロンタンパク質の正常レベルに対するシャペロンタンパク質のレベルの低下はまた、アルツハイマー病に対する感受性と相関し得る。シャペロンタンパク質のレベルは、生物試料中の遊離シャペロンタンパク質のレベル、β−アミロイドとの複合体において結合したシャペロンタンパク質のレベル、遊離シャペロンタンパク質と、結合したシャペロンタンパク質とを合わせたレベル、及び好ましくは全シャペロンタンパク質のレベルを包含する。シャペロンタンパク質レベルの低下は、アルツハイマー病に対する感受性の増大と相関する。
【００３１】
アルツハイマー病に対する感受性の増大は、コントロールの個体群で見られるものより低いシャペロンタンパク質のレベルの観点から定義されうる。例えば、１つの実施態様においては、正常なシャペロンタンパク質レベルに対して少なくとも35％のシャペロンタンパク質レベルの低下は、アルツハイマー病を発症する100％の可能性と相関する。別の実施態様においては、動物又はヒトにおけるβ−アミロイドの凝集は、生物試料中のシャペロンタンパク質レベルを測定することによって検出できる。正常なシャペロンタンパク質レベルに対するシャペロンタンパク質レベルの低下は、β−アミロイドの凝集の増加の可能性の増加と相関し、且つそのことを示す。β−アミロイドの凝集を検出することによって、β−アミロイドプラークも検出される。
【００３２】
アルツハイマー病に対する感受性はまた、遊離シャペロンタンパク質レベル、β−アミロイドのレベル、及び複合体のシャペロンタンパク質：β−アミロイドのレベルを相関させることによって決定することができる。正常なシャペロンタンパク質レベルに対するシャペロンタンパク質レベルの関連性のある低下は、約35％、好ましくは約50％、より好ましくは約65％の低下を含む。そのような関連性のある低下は、アルツハイマー病に対する感受性の増加、例えばアルツハイマー病を引き起こすか、又はこれと関連する因子、特にβ−アミロイドプラーク形成；アルツハイマー病；アルツハイマー病と関連する症状；アルツハイマー病の発症等と相関する。
【００３３】
正常なシャペロンタンパク質レベルに対するシャペロンタンパク質レベルの低下は、シャペロンタンパク質レベルを神経精神病学的機能測定で比較することによって、アルツハイマー病に特有の症状と相関され得る。神経精神病学的機能測定は、例えば神経精神病学的評価、全病歴及び物理的試験を行うことによって、かつこの情報を、例えばDSMIII-R及びNinCDS-ADRDAにより定義される基準に基づいて評価することによって実施され得る。この低下はまた、コントロールの個体群のもの未満のシャペロンタンパク質レベルと相関されうる。
【００３４】
それ故に、シャペロンタンパク質レベルの増大は、アルツハイマー病及びその関連症状に対する有益な効果を有すると思われる。シャペロンタンパク質レベルの変化は、シャペロンタンパク質を直接投与することによって、又はシャペロンタンパク質の天然の産生を増大する役割を果たす化合物を投与することによって達成されうる。シャペロンタンパク質レベルは、適当な化合物、又は適当な化合物を含む医薬組成物の投与によって増強されうる。本発明は、シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルを増大するために、置換ビフェニルメタン化合物を利用する。好ましくは、当該化合物は、メトキシクロル類似体でもある置換ビフェニルメタン化合物である。更に好ましくは、メトキシクロルは、ERP57のレベルを増大するために投与される。
【００３５】
シャペロンタンパク質のレベルの増大
上文で言及したように、シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルの増大は、アルツハイマー病の症状の予防、処置、又は低下と相関する。シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルの増大は、生物試料中の遊離シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルの増大、β−アミロイドとの複合体において結合したシャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルの増大、遊離シャペロンタンパク質と、結合したシャペロンタンパク質とを合わせたレベル、及び好ましくは全シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルの増大を包含する。
【００３６】
アルツハイマー病の症状の予防、処置、又は低下は、本明細書で使用する場合、「有効量」の適当な化合物の投与によってもたらされる。「有効量」は、例えば、シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルを増大することによって、アルツハイマー病のいずれかの症状及び／又は根底にある原因を予防し、処置し、低下し、そして／あるいは緩和するのに十分な量である。幾つかの場合において、「有効量」は、これらの病気の症状を除去し、そしておそらくは当該疾患自体を克服するのに十分である。本発明の文章において、「処置」及び「治療」等の用語は、存在している疾病の軽減、進行を遅らせること、防御、弱化又は治癒をいう。本明細書で使用される「予防」は、そのような脳の疾病又は障害の開始を延期し、遅延し、遅くし、阻止し、又はさもなければ止め、減少させ又は改善することをいう。本発明の方法及び組成物は、任意な哺乳類に使用され得る。例示的な哺乳類として、限定しないが、ラット、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、及び更に好ましくはヒトがある。
【００３７】
１つの態様において、コントロールの個体群で見られるレベルの４０％以内となるような、シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルの増大は、アルツハイマー病の処置又は予防と相関する。好ましくは、コントロールの個体群に見られるレベルの２０％以内に達するシャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルの増大は、アルツハイマー病の処置又は予防と相関する。更に好ましくは、コントロールの個体群に見られるレベルの１０％以内に達するシャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルの増大は、アルツハイマー病の処置又は予防と相関する。
【００３８】
別の態様において、27ng/mlの４０％以内に達するERP57のレベルの上昇は、アルツハイマー病の処置又は予防と相関する。好ましくは、27ng/mlの２０％以内に達するERP57のレベルの上昇は、アルツハイマー病の処置又は予防と相関する。更に好ましくは、27ng/mlの１０％以内に達するERP57のレベルの上昇は、アルツハイマー病の処置又は予防と相関する。
【００３９】
更に別の態様において、動物又はヒトにおけるβ−アミロイドの凝集は、生物試料中のERP57レベルを測定することによって検出できる。アルツハイマー病に罹りやすいヒトのレベルと比較したシャペロンタンパク質、例えばERP57レベルの増大は、β−アミロイドの凝集に対する感受性の低下を示す。β−アミロイドの凝集を検出することによって、β−アミロイドプラークの形成がまた検出される。従って、このことはアルツハイマー病の処置又は予防と関連する。
【００４０】
アルツハイマー病の処置及び予防はまた、遊離シャペロンタンパク質、例えばERP57レベル、β−アミロイドのレベル、及び複合体におけるシャペロンタンパク質(ERP57)：β−アミロイドのレベルを相関することによってモニタリングされうる。アルツハイマー病に罹りやすい患者に見られる、シャペロンタンパク質、例えばERP57レベルと比較した、シャペロンタンパク質、例えばERP57レベルの関連する増大は、処置前のレベルと比較して、１０％、好ましくは約２０％、更に好ましくは約４０％の増大を含む。シャペロンタンパク質、例えばERP57の関連するレベルの別の測定は、それらがコントロールの個体群で見られるレベルの２０％以内であるということである。更に、ERP57の関連するレベルは、27ng/mlの２０％以内であるとして特徴づけられる。於曽能様な関連する増大は、アルツハイマー病の処置又は予防、例えばアルツハイマー病を引き起こすか、又はこれと関連する因子、特にβ−アミロイドプラーク形成；アルツハイマー病；アルツハイマー病と関連する症状；アルツハイマー病の発症等と相関する。
【００４１】
アルツハイマー病に罹りやすい患者における、シャペロンタンパク質、例えばERP57の増大は、シャペロンタンパク質、例えばERP57のレベルを、神経精神病学的機能測定又はMRIで比較することによって、アルツハイマー病に特有の症状と相関され得る。神経精神病学的機能測定は、例えば神経精神病学的評価、全病歴、物理的試験及びMRI等を行うことによって、且つこの情報を、例えばDSMIII-R及びNinCDS-ADRDAにより定義される基準に基づいて評価することによって実施され得る。アルツハイマー病に特有の症状の緩和はまた、コントロールの個体群のもの未満のERP57レベルと相関されうる。本発明の方法はまた、シャペロンタンパク質のレベルの低下と関連する他の病気の症状の緩和も意図する。
【００４２】
幾つかの例において、一定レベル又はほぼ正常のシャペロンタンパク質、例えばERP57を有する固体も、アルツハイマー病に罹ることがある。例えば、正常レベルのシャペロンタンパク、例えばERP57を有するが、アポE4の対立遺伝子を有する固体は、アルツハイマー病に罹りやすい。正常レベルのシャペロンタンパク質、例えばERP57の存在下でのアルツハイマー病に対する感受性の増大をもたらす、アルツハイマー病についての他の危険因子が存在することもある。
【００４３】
ERP57濃度を増大するための置換ビフェニルメタン化合物
本発明の方法に適した化合物は、以下の式の置換ビフェニルメタン化合物を含む。
【化１３】
0004965048.tif 000002
R1, R2, 及びR3についての適当な置換基の例は、水素、ヒドロキシ、アルキル、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、シクロアルコキシ、カルボキシアルキル、アシル、アシルオキシアルキル、-C(O)OH, -C(O)O-R4（ここで、R4はアルキル、シクロアルキル又はアリール基である）、アシルオキシ、アリール、-OSO2 R5（ここで、R5はアルキル、シクロアルキル又はアリール基である）、ハロゲン、又はハロアルキルである。R1及びR2の置換基は、それら自身が官能基、例えばヒドロキシ、ハロゲン、又はアミンで置換されることがある。
【００４４】
好ましくは、R1はヒドロキシ、ハロゲン、ヒドロキシアルキル、又はハロアルキルである。更に好ましくは、R1はフルオロアルキル、クロロアルキル、ブロモアルキル、又はヨードアルキルである。最も好ましくは、R1はトリクロロメチルである。
【００４５】
好ましくは、R2及びR3は独立して水素、アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、又はシクロアルコキシである。更に好ましくは、R2及びR3はアルコキシ置換基である。最も好ましくは、R2及びR3は共にメトキシ基である。
【００４６】
メトキシクロル
本発明の方法における使用にとって好ましい置換ビフェニルメタン化合物はメトキシクロル、１，１，１−トリクロロ−２，２−ビス−（４−メトキシフェニル）エタン（以下の式II）である。
【化１４】
0004965048.tif 000003
メトキシクロルは有機塩素系殺虫剤群の一員であり、これはメトキシクロル類似体を含む。その様なメトキシクロル類似体は、DDT［１，１，１−トリクロロ−２，２−ビス−（４−クロロフェニル）エタン］、ペルセン(perthan)［１，１−ジクロロ−２，２−ビス−（４−エチルフェニル）エタン］、及びDFDT［１，１，１−トリクロロ−２，２−ビス−（４−フルオロフェニル）エタン］を含む。当該有機塩素系殺虫剤は、１９３９年から使用されている。
【００４７】
メトキシクロルが一般的にDDTより安全であるとみなされているのは、生物学的蓄積(bioacumulation)のレベルが低いためである。メトキシクロルは、6000mg/kg超のラットの経口LD50により、全ての殺虫剤の中で最も安全なものの１つであると考えられる。これは、家庭菜園において、野菜及び果物の害虫の制御のために、そしてオランダニレ病の媒介動物であるキクイムシの制御にために幅広く使用される。
【００４８】
医薬組成物
治療的に有効なレベルに対しての、シャペロンタンパク質、例えばERP57の量の増大は、上述のような、治療的有効量の適当な置換ビフェニルメタン化合物を含む医薬組成物の投与を介して得られ得る。「治療的有効量」は、ERP57タンパク質の量を増大するという所望の目的を達成する化合物の量を意味することが意図される。ERP57の増大は、投与前の患者のレベルと比較して、又は所望のERP57レベルを達成を目的として、測定されうる。所望なERP57タンパク質のレベルは、脳内でのプラーク形成を低下させ、又は阻害するのに十分なレベルとして特徴づけることができる。当該レベルはまた、脳内でのプラーク形成と一般的に関連している症状の提示を減少させ、又は阻害するのに十分なものとして特徴づけることができる。当該レベルはまた、アルツハイマー病に対する患者の感受性を低下させるのに十分なものとして特徴づけることができる。
【００４９】
本発明は、シャペロンタンパク質、例えばERP57の濃度を増大するのに利用されうる組成物に関する。当該組成物は、例えば、哺乳類に対して物質を投与するのに適した、任意な医薬として許容される添加物、担体、又はアジュバント、を含んでもよい。好ましくは、当該医薬組成物は、患者のシャペロンレベルに関連する疾患、障害、又は損傷の診断、予防、又は処置において利用されることがある。好ましくは、当該組成物は、患者の内部での又は患者を通過する化合物の輸送を促進しうる医薬担体、添加物、及び／又はアジュバントと組み合わせた物質を含む。
【００５０】
当該組成物は典型的に、前記物質と混合される医薬として許容される担体及び医薬組成物中の他の成分を含む。「医薬として許容される担体」により、前記物質の保存、投与、及び／又は治療効果を容易にするために、当業界で常用される担体が意図される。担体はまた、前記物質の何らかの不所望な副作用を軽減することがある。適当な担体は、安定であるべきであり、すなわち、調剤において他の成分と反応することがない。それは、処置に利用される投与量及び濃度で、受容者において重大な局所的又は全身性の有害な作用を生むべきではない。本発明の医薬として許容される担体は、ヒトの投与に適し、且つ動物の毒物学的研究において利用される化合物を含まないものである。その様な担体は、当業界で一般的に知られている。
【００５１】
本発明に適した担体は、常用のもの、例えば、アルブミン、ゼラチン、コラーゲン、多糖、単糖、ポリビニルピロリドン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマー状のアミノ酸、不揮発性油、オレイン酸エチル、リポソーム、グルコース、スクロース、ラクトース、マンノース、デキストロース、デキストラン、セルロース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコール(PEG)等を含む。
【００５２】
水、生理食塩水、水性デキストロース、及びグリコールは、特に（等張性である場合）溶液にとって好ましい液体担体である。当該担体は、石油、動物性、植物性又は合成起源のもの、例えば落花生油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油等を含む種々の油から選択されうる。適当な医薬賦形剤は、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等を含む、当該組成物は、常用の医薬用の方法、例えば滅菌化にかけられることがあり、そして常用の医薬添加物、例えば保存剤、安定化剤、湿潤剤、又は乳化剤、浸透圧を調製するための塩、緩衝液等を含むことがある。
【００５３】
当該組成物中の他の許容される成分は、限定しないが、等張性を増強する緩衝液、例えば水、生理食塩水、リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酢酸、及び他の有機酸又はそれらの塩を含む。典型的に、医薬として許容される担体はまた、１又は複数の安定化剤、還元剤、酸化防止剤及び／又は抗酸化キレート剤を含む。タンパク質をもとにした組成物、特に医薬組成物の調製における緩衝液、安定化剤、還元剤、酸化防止剤及びキレート剤の使用は、当業界で周知である。
Wang et al.,“Review of Excipients and pHs for Parenteral Products Used in the United States.”J. Parent. Drug Assn., 34(6) : 452-462 (1980); Wang et al.,“Parenteral Formulations of Proteins and Peptides : Stability and Stabilizers,”J. Parent. Sci. and Tech., 42 : S4-S26 (Supplement 1988); Lachman, et al.,“Antioxidants and Chelating Agents as Stabilizers in Liquid Dosage Forms-Part 1,”Drug and Cosmetic Industry, 102(1) : 36-38, 40 and 146-148 (1968); Akers, M.J.,“Antioxidants in Pharmaceutical Products,”J. Parent. Sci. and Tech., 36(5) : 222-228 (1988); and Methods in Enzymology, Vol. XXV, Colowick and Kaplan eds.,“Reduction of Disulfide Bonds in Proteins with Dithiothreitol,”by Konigsberg, pages 185-188.
を参照のこと。
【００５４】
適当な緩衝液は、酢酸塩、アジピン酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、リン酸塩、酒石酸塩、ホウ酸塩、トリ（ヒドロキシメチルアミノメタン）、コハク酸塩、グリシン、ヒスチジン、種々のアミノ酸塩等、又はそれらの組み合わせを含む。Wang (1980)の455頁を参照のこと。適当な塩及び等張化剤は、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、スクロース、トレハロース等を含む。担体が液体である場合、それは担体が経口、結膜又は経皮用の液体に低浸透圧性又は等張性があり、そして４．５〜８．５の範囲内のｐＨを有することが好ましい。担体が粉末状である場合、担体が許容される非毒性のｐＨの範囲内であることも好ましい。
【００５５】
還元システインの還元を維持する適当な還元剤は、ジチオスレイトール（ＤＴＴはクリーランド試薬としても知られている）又は0.01%〜0.1%wt/wtのジチオエリスリトール；0.1%〜0.5%のアセチルシステイン又はシステイン；並びに0.1%〜0.5%のチオグリセロール(pH3.5〜7.0)及びグルタチオンを含む。Akers (1988)の225〜226頁を参照のこと。適当な酸化防止剤は、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホン酸ナトリウム、及びアスコルビン酸を含む。Akers (1988)の225頁を参照のこと。還元型システインの微量金属を触媒とする酸化を防ぐために、微量金属をキレートするのに適したキレート剤は、クエン酸塩、酒石酸塩、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)の二ナトリウム、四ナトリウム、及びカルシウム二ナトリウム塩、並びにジエチレントリアミン五酢酸を含む。Wang (1980)の457〜458及び460〜461頁、及びAkers (1988)の224〜227頁を参照のこと。
【００５６】
当該組成物は、１又は複数の保存剤、例えばフェノール、クレゾール、パラアミノ安息香酸、BDSA、ソルビトレート(sorbitrate)、クロルヘキシジン、塩化ベンズアルコニウム等を含む。適当な安定化剤は、炭水化物、例えばトレオース又はグリセロールを含む。当該組成物は、例えば、当該組成物の物理的形態を安定化するための安定化剤、例えば１又は複数のミクロクリスタリンセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、スクロース；及び、例えば当該組成物の化学構造を安定化するための１又は複数のグリシン、アルギニン、加水分解型コラーゲン、又はプロテアーゼ阻害剤を含むことがある。適当な懸濁剤として、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒアルロン酸、アルギン酸塩、コンドロイチン硫酸、デキストラン、マルトデキストリン、デキストラン硫酸、等がある。当該組成物は、乳化剤、例えばポリソルベート２０、ポリソルベート８０，プルロン酸、トリオレイン、ダイズ油、レシチン、スクアレン及びスクアラン、ソルビタントリオレイン酸塩等を含むことがある。当該組成物は、抗菌薬、例えばフェニルエチルアルコール、フェノール、クレゾール、塩化ベンズアルコニウム、フェノキシエタノール、クロルヘキシジン、チメロサール等を含むことがある。適当な増粘剤として、天然の多糖、例えばマンナン、アラビナン、アルギン酸塩、ヒアルロン酸、デキストロース等；及び合成多糖、例えば低分子量のPEGヒドロゲル及び前述した懸濁剤がある。
【００５７】
当該組成物は、アジュバント、例えば臭化セチルトリメチルアンモニウム、BDSA、コール酸塩、デオキシコール酸塩、ポリソルベート２０及び８０、フシジン酸等を含むことがあり；そしてDNA送達の場合、好ましくは陽イオン性の脂質を含むことがある。適当な糖は、グリセロール、トレオース、グルコース、ガラクトース及びマンニトール、ソルビトールを含む。適当なタンパク質はヒト血清アルブミンである。
【００５８】
好ましい組成物は、１又は複数の溶解度を増強する添加物、好ましくはシクロデキストリン；親水性の添加物、好ましくは単糖又はオリゴ糖；吸収促進添加物、好ましくはコール酸塩、デオキシコール酸塩、フシジン酸、又はキトサン；陽イオン性の界面活性剤、好ましくは臭化セチルトリメチルアンモニウム；粘度を増強する添加物、好ましくは投与部位での当該組成物の居留を促進するためのもの、好ましくは、カルボキシメチルセルロース、マルトデキストリン、アルギン酸、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸；又は徐放性のマトリックス、好ましくは、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ヒドロゲル、特定の徐放性のデポシステム、好ましくはポリ乳酸コグリコライド(PLG)、デポフォーム、デンプンのミクロスフェア、又はセルロース誘導型口腔系；脂質を基にした担体、好ましくはエマルジョン、リポソーム、ニオソーム(niosome)、又はミセルを含む。当該組成物は、二重層を不安定化する添加物、好ましくはホスファチジルエタノールアミン；融合誘導性の添加物、好ましくはヘミコハク酸コレステロールを含むことがある。
【００５９】
他の、舌下投与に好ましい組成物は、舌下腺に前記物質を維持するための生体接着剤；舌に適用されるスプレー、塗布剤又は綿棒を利用すること；徐々に溶解するピル又はロゼンジを舌下に保持すること、等を含む。皮膚を介する物質の投与は、経皮パッチ、軟膏、イオン注入パッチ又は装置等を含む経皮送達のための、当業界で既知の様々な方法によって達成されうる。経皮投与にとって好ましい他の方法は、皮膚の上又はその中に前記物質を保持するための生体接着剤；皮膚に適用されるスプレー、塗布剤、化粧剤、又は綿棒、等を含む。
【００６０】
これらの担体及び添加物のリストは決して完全ではなく、そして当業者は、医薬の調製において認められている化学物質のGRAS（一般に安全とみなされるもの）のリスト及び局所及び非経口製剤において現在認められているものから賦形剤を選択することができる。
【００６１】
本発明のための、適当な化合物を含む医薬組成物は、単位剤形及び、溶液、懸濁液、又は乳濁液の様な形態で調製されうる。前記物質は、粉末、顆粒、溶液、クリーム、スプレー（例えばエアゾール）、ゲル、軟膏、輸液、注射液、徐放組成物、例えばポリマーディスクとして鼻孔に投与されうる。頬側投与の場合、当該組成物は、常用の方法で調製された錠剤又はロゼンジの形態をとることがある。眼又は他の外部組織、例えば口及び皮膚に対する投与の場合、局所軟膏又はクリームとして患者の身体の感染部分に適用されうる。前記化合物は、軟膏で、例えば水溶性軟膏ベースで、又はクリームで、例えば水中油のクリームベースで提示されうる。結膜適用の場合、前記化合物は、生分解性又は非生分解性の眼の挿入物で投与されうる。前記薬物は、マトリックスの浸食によって、又はエチレン−ビニルアセテートポリマーの挿入物内にあるような孔を介して受動的に放出されうる。他の粘膜投与の場合、例えば舌下用の粉末ディスクは、舌の下に据えられることがあり、そして積極的な送達系は、乾燥した脂質混合物又はプロリポソームの製剤の場合に、ゆっくりとした水和によってそのまま留まることもある。
【００６２】
投与にとって好ましい他の形態は、粒子の懸濁液、例えば乳濁液、リポソーム、前記物質を徐々に放出する挿入物等を含む。当該医薬組成物の粉末又は顆粒形態は、溶液と、そして希釈剤、分散剤及び界面活性剤と組み合わされることがある。投与にとって好ましい他の組成物は、前記物質を投与部位に保持するための生体接着剤；粘膜又は上皮に適用されるスプレー、塗布剤、又は綿棒；徐々に溶解するピル又はロゼンジ、等を含む。当該組成物は、投与前に溶液、懸濁液、又は乳濁液に変換されうる、凍結乾燥粉末の形態であってもよい。前記物質を有する医薬組成物は、好ましくは膜による濾過によって滅菌され、そして単一の剤形又は多数の剤形の容器、例えば密封容器又はアンプルにおいて保存される。
【００６３】
医薬組成物を調製するための方法は、当業界で広く知られている。調剤及び医薬として許容される担体、安定剤、及びオスモル溶液の選択の徹底した考察は、引用によって本明細書に組み入れられるRemington's Pharmaceutical Sciences(18th ed.;Mack Publishing Company, Eaton, Pennsylvania, 1990)に見ることができる。
【００６４】
本発明の方法に適した化合物はまた、通常１日より長い間、処置される哺乳類における医薬として活性な物質の存在を延長するための徐放の形態で調製されることもある。徐放製剤の多くの調製方法が当業界で知られており、そして引用によって本明細書に組み入れられるRemington's Pharmaceutical Sciences(18th ed.;Mack Publishing Company, Eaton, Pennsylvania, 1990)において開示されている。
【００６５】
一般に、前記物質は、固体の疎水性ポリマーの半透過性マトリックスに包まれてもよい。当該マトリックスは、フィルム又はマイクロカプセルに成形されることがある。その様なマトリックスの例として、限定しないが、ポリエステル、L-グルタミン酸とガンマエチル-L-グルタミン酸塩のコポリマー(Sidman et al.(1983) Biopolymers 22: 547-556)、ポリラクチド（米国特許第3,773,919号及びEP 58,481)、ポリラクテートポリグリコレート(PLGA)、例えばポリラクチドコグリコリド（例えば米国特許第4,767,628号及び第5,654,008号を参照のこと）、ヒドロゲル（例えば、Langer et al.(1981)J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277; Langer (1982) Chem. Tech. 12: 98-105を参照のこと）、非分解性エチル−ビニルアセテート（例えば、エチレンビニルアセテートディスク及びポリ（エチレン−コビニルアセテート））、分解性の乳酸−グリコール酸のコポリマー、例えばLupron Depot、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸(EP 133,988)、ヒアルロン酸ゲル（例えば、米国特許第4,636,524号を参照のこと）、アルギン酸懸濁液等、がある。
【００６６】
適当なマイクロカプセルとして、更にコアセルベーション技術又は界面重合化(inerfacial polymerization)によって調製されるヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリメチルメタクリレートマイクロカプセルがある。引用によって本明細書に組み入れられる、"Method for Producing Sustained-release Formulations,"と題された同時継続出願であって、１９９８年１１月６日に出願された米国特許出願番号第09/187,780号（この中で、物質はPLGAマイクロスフェア内に包まれる）を参照のこと。更に、マイクロカプセル又はコロイド性の薬物送達系、例えばリポソーム及びアルブミンマイクロスフェアも使用され得る。Remington's Pharmaceutical Sciences(18th ed.;Mack Publishing Company, Eaton, Pennsylvania, 1990)を参照のこと。他の好ましい徐放性の組成物は、物質を投与部位に保持するための生体接着剤を利用する。
【００６７】
化合物の投与
本発明の方法の適当な化合物は、典型的に、治療的な有効量を提供するのに十分な用量で投与される。ERP57のレベルは、上文の「ERP57のレベルの検出」の項で示した方法を介して決定されうる。
【００６８】
当該化合物の用量は、投与される量を、上文で列記したような、所望とされるタンパク質、例えばERP57の結果的な増大、アルツハイマー病に対する感受性の低下、β−アミロイドプラークの形成の減少、遊離β−アミロイドの量の減少、と相関させることによって決定されうる。当該化合物の用量は、0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 250, 500, 1000, 2000, 又は3,000mg/kg/日であってもよい。
【００６９】
特定の組織に対して単位用量として投与される化合物の全量が、投与される医薬組成物の型、すなわち、当該組成物が、例えば溶液、懸濁液、乳濁液、又は徐放製剤の形態にあるか否か、に依存することが認識される。例えば、治療的な有効量の適当な化合物を含む医薬組成物が徐放製剤である場合、当該組成物はより高濃度で投与される。
【００７０】
当業者にとって、本発明のこの態様における適当な化合物の、治療的有効量及び頻度に関する変更が可能であることは自明なはずである。投与される適当な化合物の量は、投与の頻度に反比例するであろう。故に、一回で投与される用量における適当な化合物の濃度の増大、又は当該化合物の徐放型の場合における平均の居留時間の増大は、一般的に投与の頻度の減少と結びつけられる。
【００７１】
当業者には、適当な化合物の実際の用量が、投与される対象者にとって特異的であると思われる様々な要因に依存することは認識される。これらの要因は、当該化合物の治療的有効量及びその投与頻度を決定する場合に考慮されるべきである。例えば、当該有効量は、対象者の種、年齢、体重、身体全体の健康；疾患又は障害の重症度；化合物の有効量が達成されなければならない脳の部分のサイズ及び位置；投与の頻度及び期間；投与される製剤の型；化合物及び組成物の特徴、例えば親油性；もしあるならば、前記物質及びその受容体の性質等、に依存することがある。一般的に、疾患又は障害が更に重症である場合にはより大量の用量が好ましい。
【００７２】
いくつかの重要度の低い実験が、最も有効な量及び投与間隔を決定するために必要なことがあり、このことは、一旦本発明が開示されることにより、十分当業者の能力の範囲内である。
【００７３】
断続的な投与
本発明の別の態様において、治療的に有効な量の化合物を含む医薬組成物は、断続的に投与される。「断続的な投与」とは、治療的に有効な量の当該組成物の投与、その後の一定の中断期間、これらに続く治療的に有効な量の更なる投与、等を意図する。治療的に有効な量の投与は、連続的に、例えば徐放製剤を用いて達成されることがあり、あるいは所望の１日投与量の用法に従い、例えば１日当たり１，２，３又は４回で達成されることがある。「中断期間」とは、当該組成物の連続的な徐放又は毎日の投与の中断を意図する。中断期間は、連続的な徐放又は毎日の投与の期間よりも長いか、又は短いこともある。中断期間の間、関連組織における化合物のレベルは、処置の間に得られる最大レベルよりも実質的に低い。中断期間の好ましい長さは、有効量の濃度及び使用される組成物の形態に依存する。中断期間は、少なくとも二日間であることがあり、好ましくは少なくとも四日間であり、更に好ましくは少なくとも一週間であり、そして一般的に四週間を超えない。徐放製剤が使用される場合、中断期間は、損傷部位における組成物のより長い滞留時間を原因として延長されなければならない。あるいは、有効量の徐放製剤の投与間隔はそれに応じて減少されうる。当該組成物の断続的な投与スケジュールは、所望な治療効果、そして最終的には疾患又は障害の処置が達成されるまで続けられる。
【００７４】
更に別の態様において、治療的に有効な量の組成物の断続的な投与は周期的である。「周期的」とは、約１ヶ月〜約２，３，４，５，又は６ヶ月、更に好ましくは約３ヶ月〜約６ヶ月に及ぶ周期で、投与の休止を伴う断続的な投与が意図される。例えば、投与スケジュールは、単回の短期間の用量が、四週間、一週間に一回与えられ、これに３ヶ月間の断続的な投与の休止が続き、これに、四週間、一週間に一回与えられる単回の短期間の用量の投与、その後の３ヶ月間の断続的な投与の休止、等による断続的な投与が続く、有効量の組成物の断続的な投与であってもよい。別の例として、単回の短期間の用量は、二週間、一週間に一回与えられ、これに１ヶ月間の断続的な投与の休止が続き、これに、四週間、一週間に一回与えられる単回の短期間の用量の投与、その後の３ヶ月間の断続的な投与の休止、等による断続的な投与が続いてもよい。対象者に対する、製剤の周期的な断続的投与スケジュールは、所望な治療効果、そして最終的には障害又は疾患の処置が達成されるまで続けられてもよい。
【００７５】
本発明は、以下の例を参照して更によく理解されると思われる。これらの例は、本発明の具体的な態様の例示であることが意図され、そして本発明の範囲を限定するものとして意図されない。
【００７６】
例
例１−ラットの肝臓におけるERP57濃度に対するメトキシクロルの効果
この実験は、哺乳類の組織におけるミクロソームタンパク質ERP57のレベルに対する、メトキシクロルのレベルを変化させて１４日間投与する効果を決定するために行われた。
【００７７】
材料と方法
メトキシクロル、塩化カリウム、及びトリスはSigma Chemicals(St. Louis, MO)から購入した。BCA（ビシンコニン酸）アッセイキットは、Pierce Chemical Company(Rockford, IL)から購入した。アガロースは、Boehringer Mannheim(Indianapolis, IN)から購入した。ERP57に対するポリクローナル抗体は、既述されている通りに産卵鶏で発生された(Srivastava et al. 1991, J. Biol. Chem. 266: 20337-20344;Chen et al. 1996, Biochemistry 25:8299-8306)。
【００７８】
これらの研究で使用した動物は、Harlan Laboratoriesの150〜200gに育てられた、雄性のCDラットである。それらはメトキシクロル／コーン油又は担体単独(0.8ml)のいずれかを強制飼養によって受けた。当該動物はCO2で安楽死され、そしてそれらの肝臓が摘出され、秤量され、そして冷たいKCl-Tris(150mM-50mM;pH7.2)中で細かく切られた。それぞれの肝臓は、KCl-Tris中で別々にホモジェナイズされ（4ml/g肝臓)、そしてホモジェネートは10,000xgで２０分間遠心された。上清は100,000xgで１時間遠心された。ペレットを洗浄し、そしてKCl-Tris中で再懸濁され、そして100,000xgで１時間遠心された。最終的なミクロソームのペレットは、KCl-Tris中で懸濁された(0.5ml/g肝臓)。ミクロソームの懸濁液は分割され、そして解析するまで-80℃で保存された。
【００７９】
続いて、全ミクロソームタンパク質の濃度がBCAアッセイを介して決定された。統計的な有意性は、スチューデントのt検定によって推定された。0.05未満の両側検定のp値が有意であるとした。
【００８０】
試料中のERP57の濃度は、免疫電気泳動を用いて決定された。タンパク質のドデシル硫酸ナトリウム(SDS)−ポリアクリルアミドゲル電気泳動が3%のスタッキングゲル及び12%のランニングゲルを用いて、Laemliの方法(Laemmli 1970, Nature 227:680-685)によって実施された。当該タンパク質は、Towbin等によって説明された通りに(Towbin et al. 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. 76: 4350-4354)、CAPSバッファー中で前記ゲルからPVDF膜に移された。膜は、適当なアルカリホスファターゼと複合したヤギ抗ニワトリIgy又は抗ウサギIggのいずれかに従う抗体で処理された。
【００８１】
標識色素は、Bio Rad(Richmond, CA)のニトロブルーテトラゾリウムと5-ブロモ-4-クロロ-3-インドイルホスフェートを組み合わせた。膜はセルロースシートの間に挟んだ。染色されたバンドの濃さは、UMAX(Taiwan, China)のflat bed scanner上で決定された。スキャニングは、PowerPC(Apple Computer)上で、NIH Image(version 1.54)を用いて解析された。各バンドのためのブランクは、そのレーンの隣接した未反応領域から決定された。コントロールの研究において、当該イムノアッセイが各タンパク質の濃度に対して直線性を有し、そしてバンドの強度が、膜を挟んだ後に無期限に安定であったことが明らかとなった。
【００８２】
結果
図１は、ラットの肝臓におけるERP57のレベルに対する、メトキシクロル投与の効果を示す。ERP57の濃度は、肝臓の試料中の全ミクロソームのタンパク質濃度によって標準化された。そこで明らかにされるように、ERP57の相対濃度は、より大量の10, 50, 及び100mg/kg/日で有意な増大を示す。
【００８３】
考察
前記結果は、対象者に対するメトキシクロルの投与がERP57の濃度を増大させることを示す。アルツハイマー病とその関連により、ERP57濃度の増大はアルツハイマー病の処置、又は予防の方法に利用されうる。メトキシクロルに関連する化合物はまた、ERP57濃度における同一の応答を達成するためにも利用されうる。
【００８４】
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形("a", "an",及び"the")が、特に内容が明確に示していない限り、複数形の言及を含むことに注意しなければならない。従って、例えば、化合物("a compound")を含む組成物に対する言及は、２又はそれ以上の化合物の混合物を含む。また、用語「又は」が、特に内容が明確に示していない限り、通常「及び／又は」を含む意味で使用されることに注意しなければならない。
【００８５】
本明細書における全ての刊行物及び特許出願が、本発明が属する当業界の者のレベルを示す。
【００８６】
本発明は、種々の具体的且つ好ましい態様及び技術に関して説明されている。しかしながら、多くの変更及び修飾が、本発明の精神及び範囲を維持しつつ実施されうることを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、メトキシクロルの用量の関数としてERP57のレベルを例示する。
【図１】
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