(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ソバのスプラウトからフラボン類を生産するに当たり、殻を取り除いたソバの種子からスプラウトを生育し、生育したスプラウトを採取して、有機溶媒で抽出処理した後、得られた抽出物を有機酸で処理してフラボン類を得ることを特徴とするフラボン類の生産方法。
【請求項２】
生育中のスプラウトに、紫外線照射を１〜６日間行うことを特徴とする請求項１記載のフラボン類の生産方法。
【請求項３】
紫外線照射を行う前に、生育中のスプラウトに過酸化水素又は次亜塩素酸塩の水溶液を付与することを特徴とする請求項１記載のフラボン類の生産方法。
【請求項４】
採取したソバのスプラウトを摺りつぶした状態で有機溶媒又はそれらの水溶液により処理してフラボン類含有成分を抽出することを特徴とする請求項１記載のフラボン類の生産方法。
【請求項５】
抽出に使用する有機溶媒が、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチルからなる群から選ばれた少なくとも１種の溶媒であることを特徴とする請求項４記載のフラボン類の生産方法。
【請求項６】
抽出物を処理する有機酸が、カルボン酸又はその水溶液であることを特徴とする請求項１記載のフラボン類の生産方法。
【請求項７】
抽出物を処理するカルボン酸が、マロン酸又は酢酸であることを特徴とする請求項６記載のフラボン類の生産方法。
【請求項８】
有機酸処理時に、６０〜１００℃で０．２〜３時間、加熱処理することを特徴とする請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載のフラボン類の生産方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、フラボン類の生産方法に関するものであり、具体的には、ソバ（蕎麦）のスプラウト（芽生え）からフラボン類を高い収率で取得する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  ソバ（蕎麦）にはルチン等の健康増進に寄与する成分が含まれていることはよく知られており、古くから健康に良い食品として多くの人々に食されている。近年に至り、ソバのスプラウト（芽生え）に関する研究が行われ、ソバのスプラウトには、イソオリエンチン（ルテオリン６−Ｃ−グルコシド）、オリエンチン（ルテオリン６−Ｃ−グルコシド）、ビテキシン、イソビテキシン等のフラボン類とルチン（フラボノール類）が含まれていることが報告されている。【０００３】  例えば、下記の非特許文献１〜３には、ソバのスプラウト（芽生え）には、ルチンのほかに、オリエンチン、イソオリエンチン等のフラボン類が含有されており、これらのフラボン類はメタノール還流でソバのスプラウトから抽出できること等が記載されている。【０００４】  しかしながら、これら従来公知の方法では、フラボン類の収率が低いという問題があり、これがソバ由来のフラボン類の生産が未だ実用化されていない一因となっている。【０００５】  本発明者らは、ソバのスプラウトから高収率でフラボン類を取得する方法として、先に、特願２００６−２９９５９３（平成１８年１０月６日出願）において、ソバのスプラウトからフラボン類を生産するに当たり、生育中のソバのスプラウトに紫外線照射を施し、スプラウトの葉を採取して、その葉を有機溶媒で抽出処理した後、得られた抽出物を有機酸で処理してフラボン類を従来より高い収率で得る方法を提案した。【０００６】  上記方法によれば、フラボン類を従来よりも高収率で得ることができるが、さらに高い収率で生産できれば、一段とコストを下げることが可能となり、ソバ由来のフラボン類がより広範囲に利用されるようになると期待される。【０００７】
【非特許文献１】  渡辺満ら「ソバ地上部の生育ステージによる抗酸化能とフラボノイド組成の変動」日本食品科学工学会誌、４９（２）、ｐ１１９−１２５、（２００２）
【非特許文献２】  渡辺満ら「ソバ幼植物のフラボノイド組成」東北農業研究、ｐ２５７−２５８、（２００２）
【非特許文献３】  渡辺満ら「ソバ芽生えのフェノール性化合物量に及ぼす光の影響」日本食品科学工学会誌、５０（１）、ｐ３２−３４、（２００３）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】  したがって、本発明は、ソバのスプラウトから、より高い収率で効率的にフラボン類を取得する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】  本発明者らは、先に特願２００６−２９９５９３で提案した方法を改良して、フラボン類の収率をさらに高めるべく、研究を重ねた結果、ソバの種子から殻を取り除き、これを蒔いて生育させたスプラウトを用いると、収率が飛躍的に向上することを見出し、本発明に到達した。【００１０】  本発明は、かかる知見に基づくものであり、以下のごとく、ソバのスプラウトからより高い収率でフラボン類を取得する方法である。
（１）ソバのスプラウトからフラボン類を生産するに当たり、殻を取り除いたソバの種子からスプラウトを生育し、生育したスプラウトを採取して、有機溶媒で抽出処理した後、得られた抽出物を有機酸で処理してフラボン類を得ることを特徴とするフラボン類の生産方法。
（２）生育中のスプラウトに、紫外線照射を１〜６日間行うことを特徴とする上記（１）のフラボン類の生産方法。
（３）紫外線照射を行う前に、生育中のスプラウトに過酸化水素又は次亜塩素酸塩の水溶液を付与することを特徴とする上記（１）のフラボン類の生産方法。
（４）採取したソバのスプラウトを摺りつぶした状態で有機溶媒又はそれらの水溶液により処理してフラボン類含有成分を抽出することを特徴とする上記（１）のフラボン類の生産方法。
（５）抽出に使用する有機溶媒が、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチルからなる群から選ばれた少なくとも１種の有機溶媒であることを特徴とする上記（４）のフラボン類の生産方法。
（６）抽出物を処理する有機酸が、カルボン酸又はその水溶液であることを特徴とする上記（１）のフラボン類の生産方法。
（７）抽出物を処理するカルボン酸が、マロン酸又は酢酸であることを特徴とする上記（６）のフラボン類の生産方法。
（８）有機酸処理時に、６０〜１００℃で０．２〜３時間、加熱処理することを特徴とする上記（１）〜（７）のフラボン類の生産方法。
【発明の効果】
【００１１】  本発明の方法によれば、ソバのスプラウトから従来よりも遥かに高収率でフラボン類を取得することが可能となる。具体的には、従来の方法にくらべて約２〜４倍と言う高い収率で、ルテオリン６−Ｃ−グルコシド（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ  ６−Ｃ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ），ルテオリン８−Ｃ−グルコシド（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ  ８−Ｃ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ），アピゲニン６−Ｃ−グルコシド（Ａｐｉｇｅｎｉｎ  ６−Ｃ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）及びアピゲニン８−Ｃ−グルコシド（Ａｐｉｇｅｎｉｎ  ８−Ｃ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）等のフラボン類を取得することができる。【００１２】  これらのフラボン類は、抗酸化活性、抗腫瘍活性等、種々の生理機能を有することが報告されている。したがって、本発明の方法で得られたソバ由来のフラボン類も、医薬品、健康食品、化粧品、食品添加剤等の用途において有効に利用できる。また、本発明によれば、試薬調製時の収率増大という利点もある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】  すでに渡辺満らによって既に報告されているとおり、ソバのスプラウトは４種類のフラボン類を含んでいる。すなわち、ソバのスプラウトに含まれるフラボン類は、フラボン骨格に結合する置換基の位置により、以下の化学式で表されるルテオリン６−Ｃ−グルコシド（以下、Ｌ６ＣＧと略称）、ルテオリン８−Ｃ−グルコシド（以下、Ｌ８ＣＧと略称）、アピゲニン６−Ｃ−グルコシド（以下、Ａ６ＣＧと略称）及びアピゲニン８−Ｃ−グルコシド（以下、Ａ８ＣＧと略称）の４種類に区分される。
本発明は、ソバのスプラウトから、これらのフラボン類を、従来知られている方法よりも高い収率で生産する方法に係るものである。【００１４】
【化１】
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【００１５】
【化２】
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【００１６】
【化３】
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0004983701.tif 000005
【００１７】
【化４】
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【００１８】  本発明は、ソバのスプラウトから、これらのフラボン類を、従来知られている方法よりも高い収率で生産する方法に係るものである。【００１９】＜ソバ・スプラウトの生育＞
本発明では、ソバのスプラウト（芽生え）を生育させるに当り、先ず、ソバの種子から殻を取り除いた脱皮種子を土壌又は培地に蒔く。ソバの種子は、一般に、殻つきの状態で蒔かれるが、本発明者らの研究によれば、殻を除去した脱皮種子から生育させた場合に、目的とするフラボン類の収率ならびに抽出作業効率が大幅に向上することが見出された。【００２０】  ここで、ソバのスプラウト（芽生え）とは、ソバの種子を培養液又は土壌に蒔き、発芽させ葉が出るまで生育させた幼植物体のことを言い、通常、３〜１０日間栽培されたものを指す。ソバは大きく生育するとフラボンの含有量が急激に減少し、ついには実質的に含まなくなるので、上記のごとく葉が出て間がない幼植物を使用する。【００２１】  本発明によれば、ソバ・スプラウトを生育するにあたり、まず、ソバの種子から殻を取り除き、殻なしの脱皮種子を土壌又は生育用の培地に蒔く。従来、ソバの種子は殻付きのままで蒔くのが普通であるが、本発明では、予め殻を取り除いた脱皮種子を土壌又は適当な培地に蒔き、暗所で育成して芽生えさせる。使用するソバの種類は限定されないが、ソバの中でもキタワセ等国産品種が好適である。【００２２】＜生育中のソバ・スプラウトの培養液に対するストレス付与剤の添加＞
本発明では、このように殻を取り除いたソバの種子からを芽生えさせたスプラウトの生育時に、過酸化水素又は次亜塩素酸塩の希薄水溶液を、直接スプラウトに散布するか、あるいは生育する土壌又は培地に添加することにより、スプラウトにストレスを与えるのが好ましい。これらの水溶液における過酸化水素、次亜塩素酸塩の濃度は、通常、０．０１〜５（重量）％が好ましい。該水溶液の好ましい付与量は、容器の大きさと蒔く種の量で変わるが、土壌又は培地が湿る程度でよい。【００２３】＜紫外線照射処理＞
上記のようにして約１日〜２日間生育した後、さらに生育中のスプラウトに、紫外線照射（ＵＶ照射）を行うと効果的である。照射強度は０．５〜１００ルクスの範囲が適当である。このような照射は１日当たり０．１〜２０時間ずつ１〜６日間程度行うのが良い。【００２４】＜スプラウトの採取＞
生育中に以上のような処理を施したソバ・スプラウトを採取し、採取したスプラウトを容器に入れて後述する抽出用有機溶媒を添加し、該溶媒中で擦りつぶして磨砕する。本発明では、ソバの殻が無いので、特願２００６−２９９５９３で提案した方法のような葉の採取は不要であり、スプラウト全体を擦りつぶして抽出を行う。【００２５】＜有機溶媒による抽出＞
その状態でしばらく静置し有機溶媒中に葉に含まれるフラボン類含有成分を抽出する。抽出に用いる有機溶媒としては、メタノール、エタノール、酢酸エチル又はアセトンが好適である。これらは水溶液として用いてもよい。通常の場合、抽出時の温度は室温でよい。また、抽出時間は３分〜５分程度でよい。続いて、フラッシュ程度の遠心分離の工程又は濾過の工程に送り、抽出物（抽出した成分）と有機溶媒とを分離する。【００２６】＜有機酸処理＞
次に、抽出物を有機酸で処理する。ここで使用する有機酸としてはカルボン酸が適当であり、例えば、ギ酸、酢酸、コハク酸、クエン酸、マレイン酸、マロン酸、グルクロン酸、ガラクロツロン酸、プロピオン酸、カフェ酸、アスコルビン酸、クマル酸、安息香酸、酒石酸、没食子酸、乳酸から選ばれた少なくとも１種のカルボン酸が好ましい。なかでもマロン酸又は酢酸が最適である。これらの有機酸は水溶液で用いることができ、通常、酸濃度１０〜３０重量％程度の水溶液として使用するのが好ましい。
有機酸による処理温度は、室温〜１００℃が採用されるが、一般に、処理温度が高い方が収率が高くなるので、例えば酢酸水溶液では、５０〜９０℃が好適である。処理時間は１５〜２００分が好ましい。【００２７】＜加熱処理＞
本発明方法では、上記有機酸処理の際、加熱処理してもよく、通常、その方が効果的である。この場合、好適な加熱温度は６０〜１００℃、加熱処理時間は０．２〜３時間である。【００２８】＜単離・精製＞
以上詳述した本発明の方法により、Ｌ６ＣＧ、Ｌ８ＣＧ、Ａ６ＣＧ、Ａ８ＣＧのフラボン類が混在した組成物が得られる。この組成物はフラボン類の混合物であるため、そのまま健康食品や化粧品等に原料として有効に使用することもできるが、それぞれの化合物ごとに単離・生成する必要があるときは、例えば、以下の方法によって目的化合物ごとに分離精製することができる。【００２９】＜Ｌ６ＣＧ、Ｌ８ＣＧ、Ａ６ＣＧ、Ａ８ＣＧの分取＞
有機酸処理後の組成物を、ロータリーエバポレータでそれぞれ濃縮し、必要に応じて、水に置換した抽出液１リットルをイオン交換樹脂（ＸＡＤ）がガラス管（内径１０ｃｍ、高さ２０ｃｍ）に充填されたカラムクロマトグラフィーにアプライし、水をカラム体積の２〜５倍程度流した後、溶離液に５０〜９０％メタノールを用いフラボンを回収し、回収フラクションを得たら濃縮する。
その後、フォトダイオードアレイ検出器を用いたＨＰＬＣによる分取を行って目的物質を得る。このときのＨＰＬＣの条件は下記のとおりである。
カラム：Ｃａｄｅｎｚａ  ＣＤ−５Ｃ１８（２０ｍｍＩ．Ｄ．×１５０ｍｍ）
移動相：水／メタノール＝７５／２５（ｖ／ｖ）
流速：８．０ｍｌ／ｍｉｎ
オーブン温度：４０℃
なお、上記分取ＨＰＬＣにより精製された画分のうち、Ａ６ＣＧ画分については、同画分にペクチン様のゲル化多糖類が含まれる場合がある。この場合は、該画分を糖の加水分解方法として一般的な強酸による加熱加水分解に供し、水解処理後中和し水で充填されたイオン交換樹脂（ＸＡＤ）カラム（内径１０ｃｍ、高さ２０ｃｍ）にアプライする。水をカラム体積の２〜５倍程度流した後、溶離液に５０〜９０％メタノールを用い回収フラクションを濃縮・乾固し、精製Ａ６ＣＧを得る。
【実施例】
【００３０】  以下に、本発明方法の実施例及び比較例を詳述する。ただし、これらの例によって本発明の範囲が限定されるものではない。なお、実施例及び比較例で使用したＨＰＬＣの条件は以下のとおりである。
また、以下の実施例及び比較例では、ソバとして国内種のキタワセを使用して実験を行った。【００３１】
【表１】
0004983701.tif 000007
【００３２】  実施例（試料Ｎｏ．１〜Ｎｏ．４）では、ソバ種子から殻を除去した脱皮種子を使用した。脱皮工程では、玄ソバ磨機、玄ソバ石抜機、玄ソバ選別機、玄ソバ脱皮機の順で処理した。玄ソバ選別機では種子の大きさを４種に選別し、それぞれ所定目開きの玄ソバ選別機脱皮網を通して脱皮した（試料Ｎｏ．１〜Ｎｏ．４）。これらの各試料における玄ソバ選別機の種子の大きさと玄ソバ脱皮網における脱皮網の目開きは、表１に示すとおりであった。
一方、比較例（試料Ｎｏ．０）では、殻付きの種子を用いて同様のテストを行った。
試料Ｎｏ．１〜Ｎｏ．４の脱皮種子及び試料Ｎｏ．０の殻付き種子を、それぞれ、シャーレに５個ずつ５検体、幡種し、水を与え５日間、暗所栽培を行った。この際、５０個の種子を無作為に選び、暗所栽培を４日間行い、根が生え芽が出たものを発芽とし、発芽したものをさらに１日生育させた。試料ごとの発芽率は、以下の表２に示す通りであった。【００３３】
【表２】
0004983701.tif 000008
【００３４】  上記のソバ・スプラウトの生育に当たり、最初の２日間は、水で栽培し次いで３日間は、ストレス付与剤として２％過酸化水素水、０．１（重量）％塩酸、０．１（重量）％次亜塩素酸の水溶液を培地に与え、次いで、３日間は、毎日４時間ずつＵＶ照射を行ってさらにストレスを付与し、トータルで５日間栽培を行う実験も行った。【００３５】  実施例及び比較例（試料Ｎｏ．１〜Ｎｏ．４及びＮｏ．０）において、それぞれ種蒔きから５日後に、スプラウトの葉を採取し、容器に入れて、抽出用の有機溶媒を添加し、磨砕して処理した。遠心分離後の上澄みをＸＡＤカラムにかけ、抽出物を得た。この際、同じ処理をしたスプラウトに、各種有機溶媒で抽出を実施したところ、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチルが好適なことがわかった。また、上記の渡辺満らの報告にあるように通風乾燥メタノール還流による抽出も試みたが、有機溶媒中に浸漬する場合よりも劣る結果となった。【００３６】  続いて、それぞれ同じ条件で抽出した抽出物に、有機酸処理を行った。有機酸処理では、酢酸、コハク酸、クエン酸、マレイン酸、マロン酸、グルクロン酸、ガラクロツロン酸、ギ酸、プロピオン酸、カフェ酸、アスコルビン酸、クマル酸、安息香酸、酒石酸、没食子酸、乳酸等の有機カルボン酸又はリン酸で処理を行った。有機酸処理時の加熱条件として、８０℃、２時間として検討を行った。その結果、有機カルボン酸は、フラボン含量を増やすことが判った。このうち、マロン酸処理での増加率が最も高い結果となった。また、この試験より、有機酸の濃度はおおむね最終濃度０．０５Ｍあれば、フラボン類が増加することが確認できた。また、酢酸を使用する実験では、温度及び時間を変えて処理を行った。
そして、各種処理後に、ＨＰＬＣでの分析を行った。【００３７】  以上の一連の工程において、有機酸処理としてマロン酸処理を行ったときについて、有機酸処理前の各処理との組み合わせを検討した。その結果、０．１（重量）％次亜塩素酸ナトリウムとＵＶ照射のストレスを与えた後、マロン酸処理を行ったときの増加量が一番高いことがわかった。【００３８】  また、実施例（試料Ｎｏ．１〜Ｎｏ．４）で、ＵＶ照射なしの場合のフラボン類の収量を、比較例（試料Ｎｏ．０、ＵＶ照射なし）の収量との比で示すと、以下の表３のとおり、殻を除去した脱皮種子を使用すると、収量は殻付きの場合に比べ１．５倍〜２．４倍に増加した。なかでも試料Ｎｏ．２の脱皮種子を使用した場合は、２．３〜２．４倍の高い収量となった。【００３９】
【表３】
0004983701.tif 000009
【００４０】  次に、ソバ種子の殻有無におけるＵＶ照射有無によるフラボン収量の影響を比較検討した。その結果を図１に示す。この図１から、ソバ種子から殻を除去した脱皮粒子を用い、かつＵＶ照射を行うことにより、それらを行わない場合に比べ、収量が２．６〜３．７倍も増大することがわかる。【００４１】  次に、本発明の方法で生産されるソバ由来のルテオリン６−Ｃ−グルコシド精製品の抗酸化活性等の特性を調べた。その結果を次の表４にまとめて示す。なお、各測定は、特願２００６−２９９５９３と同様、以下のように実施した。【００４２】Ａ）脂質過酸化抑制効果
４％リノール酸メチル・メタノール溶液１０ｍｌ、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）１０ｍｌを遠沈管に採取し、試料１ｍｌ加え、オーブンで５５℃、４８時間加熱処理し、過酸化脂質を生成させた。試料はササ葉１ｇ／１００ｍｌの濃度になるように調製した。ブランクとしてメタノール、対照として２０ｐｐｍトコフェロールを試料の代わりに加え、同様にオーブンで５５℃、４８時間加熱処理し、過酸化脂質を生成させた。
生じた過酸化脂質の過酸化物価（ＰＯＶ）を常法に従って測定し、抗酸化剤が無い状態のコントロールのＰＯＶを０％とし、試料の脂質過酸化抑制率を求めた。【００４３】Ｂ）ＤＰＰＨラジカル消去活性
安定なラジカルであるＤＰＰＨラジカルに対するラジカル消去活性について検討した。
０．５ｍＭのＤＰＰＨラジカル・エタノール溶液１００μｌ、試料１００μｌの順に小ワッセルマンに採取し混合した。すばやく攪拌し、偏平セルに吸い上げてキャビティに挿入し、一定時間後（４５秒）にＥＳＲ装置（ＪｅｏｌＪＥＳ−ＦＲ３０）に装填し測定を開始した。ブランクには超純水又はアセトニトリルを用いた。それぞれを下記条件のＥＳＲに供し、ラジカルの消去率を（１−試料値／ブランク値）×１００（％）として求めた。
Ｆｉｅｌｄ：３３５±５ｍＴ，  Ｐｏｗｅｒ：４ｍＷ，  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  Ｗｉｄｔｈ：４０μＴ
Ｓｗｅｅｐ  Ｔｉｍｅ：２ｍｉｎ，  Ｔｉｍｅ  ｃｏｎｓｔ：０．１ｓｅｃ，  Ａｍｐ：２００【００４４】Ｃ）スーパーオキシドアニオンラジカル消去活性（ＳＯＤ様活性）
ヒポキサンチンを基質とし、キサンチンオキシターゼ（ＸＯＤ）の反応によるスーパーオキシドアニオンラジカル発生系を用い、ＳＯＤ様活性を測定した。この測定では、原液ＤＭＰＯ（ラボテックＮＨ−６８７）１５μｌ、５ｍＭのＨｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ（ＳＩＧＭＡ  Ｈ−９３７７）５０μｌ、５．５ｍＭのＤＴＰＡ（同仁化学３４７−０１１４１）３５μｌ、試料５０μｌ、０．４Ｕ／ｍｌのＸＯＤ（ＳＩＧＭＡ  Ｘ−４３７６）５０μｌの順に小ワッセルマンに採取し混合した。すばやく攪拌し、偏平セルに吸い上げてキャビティに挿入し、一定時間後（４５秒）にＥＳＲ装置（ＪｅｏｌＪＥＳ−ＦＲ３０）に装填し測定を開始した。ブランクには超純水又はアセトニトリルを用いた。それぞれを下記条件のＥＳＲに供し、スーパーオキシドアニオンラジカルの消去率を（１−試料値／ブランク値）×１００（％）として求めた。
Ｆｉｅｌｄ：３３５±５ｍＴ，  Ｐｏｗｅｒ：４ｍＷ，  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  Ｗｉｄｔｈ：０．０７９ｍＴ
Ｓｗｅｅｐ  Ｔｉｍｅ：２ｍｉｎ，  Ｔｉｍｅ  ｃｏｎｓｔ：０．１ｓｅｃ，  Ａｍｐ：２００【００４５】
【表４】
0004983701.tif 000010
【００４６】  表４に示す結果から、ソバ・スプラウト由来のルテオリン６−Ｃ−グルコシドは、良好なＤＰＰＨラジカル消去活性、ＳＯＤ様活性を有するのに加えて、脂質過酸化物抑制活性に優れていることが確認された。【００４７】  さらに、ルテオリン６−Ｃ−グルコシドについて、褐変酵素ポリフェノールオキシダーゼ（ＰＰＯ）の阻害効果を調べる目的で、一般に知られているＰＰＯ活性阻害剤、他のフラボノイド類との比較測定を行った。その測定方法は以下のとおりであり、測定結果は下掲の表５に示すとおりであった。
＜ＰＰＯ（褐変酵素ポリフェノールオキシダーゼ）阻害活性の測定＞
０．０５Ｍクロロゲン酸を基質とし酵素液としてタマネギ鱗茎より抽出・部分精製を行った酵素液を用いた。すなわち、１．３ｍｌの１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に１ｍＭ濃度、２ｍＭ濃度、１０ｍＭ濃度に調製した阻害剤を０．１ｍｌ、酵素液を０．１ｍｌ添加し混合、３０℃に１０分間予備加温後、０．０５Ｍクロロゲン酸基質溶液を０．１ｍｌ加え混合し、３０℃、３０分間加温後の波長４２０ｎｍにおける褐変度を求めた。阻害剤添加の代わりに１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を加えたものをコントロールとし、活性を１００％として阻害効果を相対活性で示した。【００４８】  この結果、ソバ・スプラウト由来のルテオリン６−Ｃ−グルコシドは、一般のＰＰＯ活性阻害剤や他のフラボノイド類と比べて卓越したＰＰＯ阻害活性を有し、少量の使用でも褐変を防止できることがわかった。従って、本発明方法によるルテオリン６−Ｃ−グルコシドは、例えば、食品類の褐変防止剤として有効に利用することができる。【００４９】
【表５】
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【００５０】  さらに、ルテオリン６−Ｃ−グルコシド及び類似化合物について、ヒト胃ガン細胞及び白血病細胞の増殖抑制効果を測定した。その結果、ソバ・スプラウト由来のルテオリン６−Ｃ−グルコシドは、卓越した高い増殖抑制効果を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５１】  本発明によれば、ソバのスプラウトからフラボン類を採取するときの収率が増大できるので、フラボンの生産方法として有用である。そして、本発明の方法により得られるフラボン類は抗酸化作用があるため、医薬品、健康食品、化粧品等の材料として有効に利用される。特に、ルテオリン６−Ｃ−グルコシドは、卓越した褐変防止効果、増殖抑制効果も有するので、これらの特性を生かした各用途にも有効に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】  ソバ種子の殻有無によるＵＶ照射栽培のスプラウトからのフラボン収量の変化を示すグラフ
【図１】
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