(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
エストロゲン非依存性の腫瘍を処置するための薬物の製造における化合物または薬学的に活性なその塩の使用であって、ここで、該化合物は、以下の式：
【化１】
0005042411.tif 000024
であり、
ここで、基Ｉが、Ｃ１−６アルキル基またはＣ１−６アルコキシ基であり；そして
ここで、基ＩＩが、以下の式：
【化２】
0005042411.tif 000025
であり、
ここで、Ｒ１およびＲ２の各々が、独立して、Ｈまたはアルキル、シクロアルキル、アルケニル、およびアリールから選択されるか、あるいは一緒にアルキレンを表し、そのまたはそれぞれのアルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含む、
使用。
【請求項２】
前記基Ｉが、メトキシ基である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記化合物が、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメートである、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記基Ｉがエチル基である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記化合物が、２−エチルエストロン−３−Ｏ−サルファメートである、請求項４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、方法および使用に関する。詳細には、本発明は、医薬の製造のための方法に関する。
【０００２】
「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」第３版Ｌｏｄｉｓｈら、１７７−１８１頁において議論されるように、異なる真核生物細胞は、全く異なる速度で増殖および分裂し得る。例えば、酵母細胞は、１２０分毎に分裂し得、そしてウニおよび昆虫の胎児性細胞における受精卵の最初の分裂には１５３０分しかかからない。なぜならば１つの大きな予め存在する細胞が細別され（ｓｕｂｄｉｖｉｄｅｄ）ているからである。しかし、大部分の増殖する植物および動物細胞は、数が倍増するのに１０〜２０時間かかり、そしてより遅い速度で二倍になるものもある。成体における多くの細胞（例えば、神経細胞および横紋筋細胞）は、全く分裂せず；線維芽細胞のような創傷を治癒する際に補助する他の細胞は、要求に応じて増殖するが、そうでなければ休止している。
【０００３】
それにもかかわらず、分裂する全ての真核生物細胞は、２つの娘細胞に等しい遺伝物質を寄与する準備ができていなければならない。真核生物細胞におけるＤＮＡ合成は、細胞分裂周期の全体を通して起こらないが、細胞分裂の前の一部に限られる。
【０００４】
真核生物細胞ＤＮＡ合成と細胞分裂との間の関係は、全て増殖および分裂し得る哺乳動物細胞の培養において分析されている。細菌と対照的に、真核生物細胞はＤＮＡ合成にはほんの一部の時間しか費やさず、細胞分裂（有糸分裂）が完了するまで数時間であることが見出されている。従って、時間の間隔が、ＤＮＡ合成後と細胞分裂との間に存在し；別の間隔が分裂後とＤＮＡ合成の次の回の前の間に存在することが見出された。この分析により、真核生物細胞周期は、Ｍ（有糸分裂）段階、Ｇ1段階（第１の間隔）、Ｓ（ＤＮＡ合成）段階、Ｇ2段階（第２の間隔）、そしてＭに戻る段階からなるという結論が導かれた。有糸分裂の間の段階（Ｇ1、ＳおよびＧ2）は、まとめて分裂間期として公知である。
【０００５】
組織における多くの非分裂細胞（例えば、全ての休止繊維芽細胞）は、有糸分裂後かつＤＮＡ合成の直前に周期を阻止し；このような「休止」細胞は、細胞周期から外れてＧ0段階にあるといわれる。
【０００６】
蛍光活性化細胞ソーター（ＦＡＣＳ）を使用してその細胞の相対的ＤＮＡ含有量を測定することにより、細胞周期の３つの分裂間期段階のうちの１つにある細胞を同定することが可能であり；Ｇ1（ＤＮＡ合成前）にある細胞は、規定量ｘのＤＮＡを有し；Ｓ（ＤＮＡ複製）の間は、ｘと２ｘとの間であり、そしてＧ2（またはＭ）のときは２ｘのＤＮＡである。
【０００７】
動物細胞における有糸分裂および細胞質分裂の段階は、以下の通りである。
【０００８】
（ａ）分裂間期。分裂間期のＧ2段階は、有糸分裂の開始の直前である。染色体ＤＮＡは複製され、そしてＳ段階の間にタンパク質に結合されるが、染色体はまだ明確な構造としては見られない。核は、光学顕微鏡の下で見ることができる核基礎構造である。ＤＮＡ複製前の二倍体細胞において、各型の２つの形態学的染色体が存在し、そしてこの細胞は、２ｎであるといわれる。Ｇ2において、ＤＮＡ複製後、この細胞は４ｎである。各染色体ＤＮＡの４つのコピーが存在する。姉妹染色体は、まだ互いに分離していないので、これらは姉妹染色分体と呼ばれる。
【０００９】
ｂ）初期前期。中心小体（各々が新しく形成された娘中心小体を有する）は、細胞の反対の極に向かって移動し始め；染色体は、長い糸として見られ得る。核膜は、小さいベシクルに分解し始める。
【００１０】
（ｃ）中前期および後前期。染色体圧縮が完了し；各可視染色体構造は、セントロメアで共に保持された２つの染色分体からなる。各染色分体は、新しく複製された２つの娘ＤＮＡ分子のうちの１つを含む。微小管紡錘は、中心小体の直ぐ隣の領域から広がり始め、これらが極の近くに移動する。いくつかの紡錘糸は、極から極に達し；大部分は染色分体に延びてそして動原体で結合する。
【００１１】
（ｄ）中期。染色体は、細胞の赤道に向かって移動し、ここで赤道面に整列する。姉妹染色分体は、まだ分裂していない。
【００１２】
（ｅ）後期。２つの姉妹染色分体は、独立した染色体に分離する。各々紡錘糸により１つの極に連結されるセントロメアを含み、その極に移動する。従って、各染色体の１つのコピーは、各娘細胞に寄与される。同時に、細胞は細長くなり、同様に極から極へ紡錘も細長くなる。細胞質分裂は、分割溝が形成し始めるときに始まる。
【００１３】
（ｆ）終期。新しい膜が娘核の周りに形成し；染色体がほどけて、そしてより明瞭でなくなり、核は、再び見えるようになり、そして核膜は、各娘核の周りに形成する。細胞質分裂は、ほとんど完了し、そして紡錘は微小管および他の繊維が解重合する（ｄｅｐｏｌｙｍｅｒｉｓｅ）ときに消える。有糸分裂の全体を通して、各極において「娘」染色分体は、全長になるまで生長する。終期において、元々の中心小体の各々の複製が完了し、そして新しい娘染色分体が、次の分裂間期の間に生成される。
【００１４】
（ｇ）分裂間期。細胞質分裂の完了の際に、細胞は、細胞周期のＧ1段階に入り、そして再び周期を続行する。
【００１５】
細胞周期は、非常に重要な細胞過程であると理解される。正常細胞周期からの逸脱は、多くの医学的疾患を生じる。増加した細胞周期および／または無制限の細胞周期は、癌を生じ得る。減少した細胞周期は、変性状態を生じ得る。
【００１６】
癌は、大部分の西洋諸国において主要な死因のままである。これまでに開発された癌治療は、ホルモン依存性腫瘍の増殖を阻害するために、ホルモンの作用または合成をブロックする工程を包含している。しかし、より攻撃性の化学療法が、現在ではホルモン非依存性腫瘍の処置のために使用される。
【００１７】
従って、ホルモン依存性および／またはホルモン非依存性腫瘍の抗癌処置のための、化学療法に伴う副作用のいくつかまたは全てのない薬品の開発は、大部分の治療の進歩を表す。
【００１８】
本発明は、癌、特に乳癌の処置における処置における使用に適切な組成物を提供しようと努める。
【００１９】
本明細書中で使用される以下の略語は、所定の意味を有する：
ＥｌＳ、エストロン硫酸；
２−ＭｅＯＥ２、２−メトキシエストラジオール；
２−ＯＨＥ２、２−ヒドロキシエストラジオール；
ＥＭＡＴＥ、エストロン−３−Ｏ−サルファメート；
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート；
２−ＭｅＯＥ１、２−メトキシエストロン；
ＧｅｎＭＡＴＥ、ゲニスタイン−ビス−サルファメート（ｇｅｎｉｓｔａｉｎ−ｂｉｓ−ｓｕｌｐｈａｍａｔｅ）；
２−ＭｅＯＥ１Ｓ、２−メトキシエストロン硫酸；
ＥＲ、エストロゲンレセプター；
Ｔｄｔ、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ；
ＴＵＮＥＬ、Ｔｂｔ−媒介ｄＵＴＰ−ニック末端標識。
【００２０】
エストロゲンは、その合成の後に多数のヒドロキシル化および結合体化反応を受ける。最近まで、このような反応は最終的にエストロゲンを水溶性にし、そしてその身体からの除去を増強する代謝プロセスの一部であると考えられていた。いくつかのヒドロキシ代謝産物（例えば、２−ヒドロキシおよび１６α−ヒドロキシ）および結合体（例えば、エストロン硫酸、Ｅ１Ｓ）は、エストロゲンが体内で有するいくつかの複雑な作用を決定する際に重要であるということが、今では明らかである（１，２）。
【００２１】
Ｂｒａｄｌｏｗおよびその共同研究者らは、乳癌の危険性を変更する状態に関連する、２−ヒドロキシル化エストロゲンおよび１６α−ヒドロキシル化エストロゲンの形成を調べた。２−ヒドロキシラーゼ活性を増大する因子が、減少した癌の危険性と関連し、一方で１６α−ヒドロキシル化の増大は、乳癌の危険性を増大し得るという証拠が現在では存在する（３〜６）。エストロゲン代謝産物の生物学的役割におけるさらなる興味は、２−メトキシエストラジオール（図１、１、２−ＭｅＯＥ２）が、抗有糸分裂特性を有する内因性代謝産物であるという増大する一連の証拠により刺激されてきた（７）。２−ＭｅＯＥ２は、２−ヒドロキシエストラジオール（２−ＯＨＥ２）から、カテコールエストロゲンメチルトランスフェラーゼ（身体中全体に広く分布する酵素）により形成される。
【００２２】
Ｓｅｅｇｅｒおよびその共同研究者らは、比較的高い濃度の２−ＭｅＯＥ２（１μｍ以上）が、ＭＣＦ−７乳癌細胞に対して細胞傷害性であることを元々報告した（８）。彼らはまた、２−ＭｅＯＥ２が、混乱した微小管構造をまた有する細胞における均一でない染色体分配を引き起こすということも観察した。その後の研究により、２−ＭｅＯＥ２が、正常ヒト皮膚繊維芽細胞の形態学に効果を有さないが、形質転換された繊維芽細胞において顕著な効果を有することが明らかにされた（９）。
【００２３】
インビボで２−ＭｅＯＥ２は、Ｍｅｔｈ  Ａ肉腫細胞、Ｂ１６黒色腫細胞またはＭＤＡ−ＭＢ−４３５エストロゲンレセプター陰性（ＥＲ−）乳癌細胞の皮下注射から生じる腫瘍の増殖を阻害する（１０、１１）。これはまた、内皮細胞の増殖および移動、ならびにインビトロでの新脈管形成を阻害する。インビボで腫瘍増殖を阻害する２−ＭｅＯＥ２の能力は、腫瘍細胞の増殖の直接的な阻害よりも腫瘍に誘導される新脈管形成を阻害する能力に起因し得る（１０）。
【００２４】
２−ＭｅＯＥ２がその潜在的な抗マイトジェン効果および抗新脈管形成効果を行使する機構は、なお解明されつつある。高濃度では、２−ＭｅＯＥ２が微小管の重合を阻害し得、そしてチューブリンに対するコルヒチンの結合の弱いインヒビターとして作用するという証拠が存在する（１２）。しかし、最近、有糸分裂をブロックする濃度で、細胞中のチューブリンフィラメントは、解重合されないが、タキソール処置後に見られる形態学と同一の形態学を有することが見出された（１３）。従って、タキソール（乳癌および卵巣乳癌治療に使用される薬物）の様に、２−ＭｅＯＥ２は、微小管動特性を安定化する（ｓｔａｂｉｌｉｓｉｎｇ）ことにより作用する。
【００２５】
癌の新しい治療としての２−ＭｅＯＥ２の同定は、重要な進歩を示したが、経口投与されたエストロゲンのバイオアベイラビリティーは、不十分である。さらに、これらは、最初に肝臓を通過する間にさらなる代謝を受け得る。乳癌治療のためのステロイドスルファターゼインヒビターを開発するように計画された研究の一部として、エストロン−３−Ｏ−サルファメート（図１、２、ＥＭＡＴＥ）は、有効な活性部位指向インヒビターとして同定された（１４、１５）。予期しないことに、ＥＭＡＴＥは、ラットにおいて経口の子宮に効果のある活性が、エストラジオールの活性より１００倍高く、潜在的なエストロゲン様特性を有することが明らかとなった（１６）。その増強されたエストロゲン性は、赤血球（ｒｂｃ）による吸収から生じると考えられ、これによりＥＭＡＴＥが肝臓を通過する間の不活性化から保護し、そして長期間の間ＥＭＡＴＥをゆっくり放出するためのリザーバーとして作用する（１７）。多くのＡ環改変アナログ（２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（３、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ）を含む）が合成および試験された（１８、１９）。この化合物は、ステロイドスルファターゼインヒビターとしてＥＭＡＴＥと等しい効力であるが、エストロゲン性が欠けている。
【００２６】
本発明は、細胞周期傷害の処置の方法を提供しようと努める。詳細には、本発明は、癌の処置方法を提供する。
【００２７】
本発明の局面は、添付の特許請求の範囲において規定される。
【００２８】
本発明は、癌（ホルモン依存性癌およびホルモン非依存性癌を含む）のような細胞周期傷害の処置において使用するために適した化合物を提供することにおいて有利である。
【００２９】
さらに、本発明は、癌（例えば、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、肉腫、黒色腫、前立腺癌、膵臓癌など）および他の固形腫瘍の処置において使用するために滴した化合物を提供するという点において有利である。
【００３０】
本出願人らは、本発明の化合物（例えば、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ）が、乳癌細胞および繊維芽細胞の増殖に対して有する効果、ならびに細胞周期に対して有する効果を同定した。予備的なインビボでの研究において、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥは、インタクトなラットにおいて、ニトロソメチル尿素（ＮＭＵ）誘導乳腺癌の急速な後退を引き起こすということが見出された。
【００３１】
本発明に従って、細胞周期は、阻害および／または予防および／または阻止される。好ましくは細胞周期は、予防および／または阻止される。
【００３２】
好ましい局面において、細胞周期は、Ｇ2／Ｍ段階において阻害および／または予防および／または阻止される。
【００３３】
好ましい局面において、細胞周期は、不可逆的に予防および／または阻害および／または阻止される。好ましくは、細胞周期は、不可逆的に予防および／または阻止される。好ましくは細胞周期は、不可逆的に予防および／または阻止される。
【００３４】
用語「不可逆的に予防および／または阻害および／または阻止される」は、本発明の化合物の適用後に、化合物の除去の際に、この化合物の効果、すなわち細胞周期の予防および／または阻害および／または阻止が、なお観測可能であるということを意味する。より詳細には、用語「不可逆的に予防および／または阻害および／または阻止される」は、プロトコルＩに従ってアッセイされる場合に、目的の化合物で処理された細胞が、プロトコルＩの段階２の後にコントロール細胞よりも少ない増殖を示すことを意味する。プロトコルＩＩは、実施例の後に記載される。
【００３５】
本発明の化合物は、少なくとも１つの環を含む環状化合物であって、ここで基Ｉおよび基ＩＩは、互いに独立して、この環状化合物の環に連結され；ここで基Ｉが、ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基であり；そしてここで基ＩＩが、以下の式
【００３６】
【化４】
0005042411.tif 000002
の基であり、Ｘは、ＰまたはＳであり；ＸがＰである場合、Ｙが、＝ＯまたはＳであり、Ｚが、−ＯＨであり、そしてＲがヒドロカルビルまたはＨであり；ＸがＳである場合、Ｙが、＝Ｏであり、Ｚが、＝Ｏであり、そしてＲがヒドロカルビルまたはＮ（Ｒ1）（Ｒ2）であり、ここでＲ1およびＲ2の各々が、Ｈまたはヒドロカルビル基から独立して選択される。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒドロカルビル基」は、少なくともＣおよびＨを含む基を意味し、そして必要に応じて１つ以上の他の適切な置換基を含み得る。このような置換基の例としては、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、炭化水素基、Ｎ−アシル基、環式基などが挙げられ得る。置換基が環式基である可能性に加えて、置換基の組合せは、環式基を形成し得る。ヒドロカルビル基が１つより多くのＣを含む場合、これらの炭素は、必ずしも互いに連結している必要はない。例えば、少なくとも２つの炭素は、適切な元素または基を介して連結され得る。従って、ヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含み得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、そして例えば、イオウ、窒素および酸素が挙げられる。
【００３８】
本発明の１つの好ましい実施形態において、ヒドロカルビル基は、炭化水素基である。
【００３９】
本明細書において、用語「炭化水素」は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基のうちのいずれか１つであり、これらの基は、直鎖、分岐鎖もしくは環状またはアリール基であり得る。用語炭化水素はまた、必要に応じて置換された基も含む。炭化水素が、置換基を有する分岐した構造である場合、置換は、炭化水素骨格または分岐鎖のいずれか上にあり得；あるいは、置換は、炭化水素骨格上かつ分岐鎖上にあり得る。
【００４０】
化合物は、環状化合物である。この点において、この化合物は、単環化合物または多環式化合物であり得る。本明細書において、用語「多環式」は、縮合環および非縮合環構造（これらの組合せを含む）を含む。
【００４１】
環式基は、単環であり得るか、または多環式環構造である。
【００４２】
１つの局面において、環式基は、Ｃ、Ｈ、Ｏ、Ｎ、Ｐ，ハロゲン（Ｃｌ、ＢｒおよびＩを含む）、ＳおよびＰのうちの任意の１つ以上を含み得る。
【００４３】
少なくとも１つの環式基は、複素環式基（複素環）または非複素環式基であり得る。
【００４４】
少なくとも１つの環式基は、飽和環構造または不飽和環構造（例えば、アリール基）であり得る。
【００４５】
好ましくは、少なくとも１つの環式基は、アリール基である。
【００４６】
好ましくは、基Ｉおよび／または基ＩＩは、アリール環に連結されるかまたは結合される。
【００４７】
環式基が、多環式である場合、化合物の環成分のうちのいくつかまたは全ては、共に縮合しているかまたは１つ以上の適切なスペーサー基を介して連結され得る。
【００４８】
多環式化合物は、多数の縮合環を含み得る。この局面において、この縮合環は、異なる大きさの環の任意の組合せ（例えば、３つの６員環（６，６，６）、６員環、７員環および６員環（６，７，６）、６員環および２つの８員環（６，８，８）など）を含み得る。
【００４９】
１つの局面において、本発明は、多環式化合物が（６，６，７）環以外である化合物に関する。さらなる局面において、本発明は、多環式化合物が、７員環以外の環のみを含む。
【００５０】
１つの局面において、環式基が多環式である場合、基Ｉおよび基ＩＩは、各々この多環式化合物の同じ環に結合される。
【００５１】
従って、本発明の１つの局面に従って、好ましくは化合物は、多環式化合物である。
【００５２】
好ましくは、多環式化合物は、全ての置換基を含めて、約５０個以下の炭素原子、より通常には約３０〜４０個以下の炭素原子を含む。
【００５３】
多環式化合物は、少なくとも２つの環成分を含み得るか、または少なくとも３つの環成分を含み得るか、または少なくとも４つの環成分を含み得る。
【００５４】
好ましくは、多環式化合物は、４つの環成分を含む。
【００５５】
好ましい多環式化合物は、ステロイド環成分（すなわちシクロペンタノフェナンスレン骨格）、またはその生体同配体（ｂｉｏ−ｉｓｏｓｔｅｒｅ）を有する。
【００５６】
当該分野で周知のように、古典的ステロイド性構造は、一般式：
【００５７】
【化５】
0005042411.tif 000003
を有す。
【００５８】
上記の式において、環は、従来の様式で標識されてきた。
【００５９】
生物同配体の例は、任意の１以上の環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤが、複素環式環である場合、ならびに／または任意の１以上の環Ａ，Ｂ、ＣおよびＤが、置換される場合、ならびに／または任意の１以上の環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤが、修飾される場合であるが、ここで、サルファメート基が存在しない際の生物同配体は、ステロイド性特性を有する。
【００６０】
この点で、好ましい多環式化合物の構造は、以下：
【００６１】
【化６】
0005042411.tif 000004
のように示され得、ここで、各環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’は、独立して複素環式環または非複素環式環を表し、この環は、独立して置換されても置換されなくてもよく、飽和であっても飽和でなくてもよい。
【００６２】
例として、任意の１以上の環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’は、適切な基（例えば、アルキル基、アリール基、ヒドロキシ基、ハロ基、ヒドロカルビル基、オキシヒドロカルビル基など）で独立して置換され得る。
【００６３】
Ｄ’の例は、少なくとも１つの置換基を有する、５または６員環の非複素環式環である。
【００６４】
１つの好ましい実施形態において、環Ｄ’は、エチニル基で置換される。
【００６５】
環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’のいずれか１つが、複素環式環である場合、好ましくは、複素環式環は、Ｃ原子の組み合わせならびに少なくとも１つのＮ原子および／または少なくとも１つのＯ原子を含む。他の複素環式原子は、環中に示され得る。
【００６６】
本発明の化合物の適切な、好ましいステロイド性核環Ａ’〜Ｄ’の例としては、デヒドロエピアンドロステロンおよびエストロンを含むエストロゲンの環Ａ〜Ｄが挙げられる。
【００６７】
本発明の好ましい化合物の好ましいステロイド性核環Ａ’〜Ｄ’としては、以下の環Ａ〜Ｄが挙げられる：
（エストロンおよび置換エストロン、すなわち：）
エストロン
４−ＯＨ−エストロン
６α−ＯＨ−エストロン
７α−ＯＨ−エストロン
１６α−ＯＨ−エストロン
１６β−ＯＨ−エストロン
１７−デオキシエストロン
エストロン
（エストラジオールおよび置換エストラジオール、すなわち：）
４−ＯＨ−１７β−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
４−ＯＨ−１７α−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１７α−エストラジオール
１７β−エストラジオール
１７α−エチニル−１７β−エストラジオール
１７β−エチニル−１７α−エストラジオール
１７−デオキシエストラジオール
（エストリオールおよび置換エストリオール、すなわち：）
エストリオール
４−ＯＨ−エストリオール
６α−ＯＨ−エストリオール
７α−ストリオール
１７−デオキシエストリオール
（デヒドロエピアンドロステロンおよび置換デヒドロエピアンドロステロン、すなわち：）
デヒドロエピアンドロステロン
６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
７α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６β−ＯＨ−デヒドロエピランドロステロン。
【００６８】
一般的な用語において、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、種々の非干渉性置換基を含み得る。特に、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、１以上のヒドロキシ、アルキル、特に低級（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、および他のペンチル異性体、ならびにｎ−ヘキシルおよび他のヘキシル異性体）、アルコキシ、特に低級（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど）、アルキニル（例えば、エチニル）、またはハロゲン（例えば、フッ素置換基）を含み得る。
【００６９】
代替の実施形態において、多環式化合物は、ステロイド性核を含むかまたはこれに基づき得る。この点で、多環式化合物は、非ステロイド環系（例えば、ジエチルスチルボエストロール、スチルボエストロール（ｓｔｉｌｂｏｅｓｔｒｏｌ）、クマリン、フラボノイド、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎ）および他の環系）を含むかまたはこれに基づき得る。本発明の組成物における使用または本発明の組成物としての使用のための他の適切な非ステロイド性化合物は、ＵＳ−Ａ−５５６７８３１に見出され得る。
【００７０】
好ましくは、基Ｉおよび基ＩＩは、互いにオルト位で、本発明の環式化合物の同一の環に各々結合される。
【００７１】
好ましくは、多環式化合物は、ステロイド性構造を有し、そして基Ｉは、Ａ環に結合される。
【００７２】
好ましくは、基Ｉは、ステロイド構造のＡ環の２位に結合される。
【００７３】
好ましくは、多環式化合物は、ステロイド性構造を有し、そして基ＩＩは、Ａ環に結合される。
【００７４】
好ましくは、基ＩＩは、ステロイド性構造のＡ環の３位に結合される。
【００７５】
基Ｉは、ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基である。
【００７６】
本明細書中に示される場合、用語「ヒドロカルビル基」は、上記で規定される。
【００７７】
本発明の１つの好ましい実施形態において、ヒドロカルビル基は、炭化水素基である。
【００７８】
本明細書中で使用される場合、用語「炭化水素基」は、上記で規定される。
【００７９】
好ましくは、炭化水素基は、式Ｃ1〜Ｃ6（例えば、Ｃ1〜Ｃ3）である。
【００８０】
化合物が、ステロイド性核を含む場合、好ましくは、Ａ環は、２位でヒドロカルビル基を有する。
【００８１】
より好ましくは、基Ｃ1〜6は、ステロイド性核のＡ環の２位に結合される。
【００８２】
好ましくは、ヒドロカルビル基は、アルキルである。
【００８３】
アルキルは、好ましくは、１〜５炭素原子を含む低級アルキル基であり、すなわち、メチル、エチル、プロピルなどである。好ましくは、アルキル基は、メチルまたはエチルである。
【００８４】
従って、好ましい実施形態において、化合物が、ステロイド性核を含む場合、Ａ環は、２位でメチルまたはエチル置換基を有する。
【００８５】
本明細書中で使用される場合、用語「オキシヒドロカルビル基」は、少なくともＣ、Ｈ、およびＯを含む基を意味し、そして必要に応じて１以上の他の適切な置換基を含み得る。このような置換基の例としては、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、アルキル基−、環式基などが挙げられ得る。環式基である置換基の可能性に加えて、置換基の組み合わせは、環式基を形成し得る。オキシヒドロカルビル基が、１つのＣより多くのＣを含む場合、これらの炭素は、必ずしも互いに結合される必要はない。例えば、少なくとも２つの炭素は、適切な元素または基を介して結合され得る。従って、オキシヒドロカルビル基は、へテロ原子を含み得る。適切なへテロ原子は、当業者に明らかであり、例えば、硫黄および窒素が挙げられる。
【００８６】
本発明の１つの好ましい実施形態において、オキシヒドロカルボニル基は、オキシヒドロ炭素基である。
【００８７】
本明細書中で、用語「オキシヒドロ炭素」とは、アルコキシ基、オキシアルケニル基、オキシアルキニル基のいずれか１つを意味し、この基は、直線状、分岐状または環式、あるいはオキシアリール基であり得る。用語オキシヒドロ炭素とはまた、これらの基を含み得るが、それらは、必要に応じて置換される。オキシヒドロ炭素が、その上に置換基を有する分岐状構造である場合、置換基は、炭化水素バックボーンのいずれかの上または分岐状の上にあり得るか；あるいは、置換基は、炭化水素バックボーンおよび分岐状の上にあり得る。
【００８８】
好ましいオキシヒドロカルビル基は、式Ｃ1〜6Ｏ（例えば、Ｃ1〜3Ｏ）である。
【００８９】
化合物が、ステロイド性核を含む場合、好ましくは、Ａ環は、２位でオキシヒドロカルビル基を有する。
【００９０】
より好ましくは、基Ｃ1〜6Ｏ基は、ステロイド性核のＡ環の２位に結合される。
【００９１】
好ましくは、オキシヒドロカルビル基は、アルコキシである。
【００９２】
アルコキシ置換基のアルキル基は、好ましくは、１〜５炭素原子を含む低級アルキル基であり、すなわち、メチル、エチル、プロピルなどである。好ましくは、アルキル基は、メチルである。
【００９３】
従って、好ましい実施形態において、化合物がステロイド性核を含む場合、Ａ環は、２位にメトキシ置換基を有する。
【００９４】
本発明の１つの好ましい実施形態において、好ましくは、化合物は、非エストロゲンである。用語「非エストロゲン」とは、エストロゲン活性を全く示さないかまたは実質的にエストロゲン活性を示さないことを意味する。本発明の１つの好ましい実施形態において、好ましくは、化合物は、ホルモン活性を表示または誘導する化合物に対して新陳代謝され得ない。
【００９５】
本発明の１つの好ましい実施形態において、好ましくは、本発明の化合物は、経口的に活性である。
【００９６】
本発明は、本発明の化合物が、細胞周期を予防および／または阻害および／または阻止するための有効な手段を提供するという、非常に驚くべき発見に基づく。
【００９７】
本発明者らは、Ａ環上にヒドロカルビル置換基またはオキシヒドロカルビル置換基を有し、かつ／またはＡ環上に基ＩＩの式の基を有する化合物が、細胞周期を予防および／または阻害および／または阻止において、強力（そして幾らかの場合において、非常に強力）であることを、見出した。
【００９８】
本発明の好ましい化合物は、式：
【００９９】
【化７】
0005042411.tif 000005
を有し、ここで、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、独立して必要に応じて置換される。
【０１００】
好ましくは、基Ｉは、２位にある。
【０１０１】
好ましくは、基ＩＩは、３位にある。
【０１０２】
１つの好ましい局面において、Ｘは、Ｓであり、そしてＲは、Ｎ（Ｒ1）（Ｒ2）である。言いかえると、好ましくは、基ＩＩは、式：
【０１０３】
【化８】
0005042411.tif 000006
の基であり、ここで、Ｒ1およびＲ2の各々は、Ｈまたはヒドロカルビル基から独立して選択される。
【０１０４】
従って、好ましい局面において、本発明は、細胞周期を防ぐ、そして／または阻害する、そして／または阻止するための医薬の製造における、環式化合物またはその薬学的に活性な塩の使用を提供し、ここで、この環式化合物は、少なくとも一つの環を含み、ここで、基Ｉおよび基ＩＩが、互いに独立して、環式化合物の環に結合し；ここで、基Ｉが、ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基であり；そしてここで、基ＩＩが式
【０１０５】
【化９】
0005042411.tif 000007
の基であり、ここで、Ｒ1およびＲ2のそれぞれは、独立してＨまたはヒドロカルビル基から選択される。
【０１０６】
これらの好ましい化合物の基ＩＩは、「サルファメート基」と呼ばれる。これらの好ましい化合物は、「サルファメート化合物」と呼ばれる。
【０１０７】
好ましくは、Ｒ1およびＲ2は、独立して、Ｈまたはアルキル、シクロアルキル、アルケニル、およびアリールから選択されるか、あるいは一緒にアルキレンを表し、ここで、そのまたはそれぞれのアルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含む。
【０１０８】
置換される場合、Ｎ−置換サルファメート化合物は、１つまたは２つのＮ−アルキル、Ｎ−アルケニル、Ｎ−シクロアルキル、Ｎ−アシル、またはＮ−アリール置換基（好ましくは、それまたはそれぞれが最大１０個の炭素原子を含む）を含み得る。Ｒ1および／またはＲ2がアルキルである場合、好ましい値は、Ｒ1およびＲ2がそれぞれ独立して１〜５個の炭素原子を含む低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）から選択されるものである。好ましくは、Ｒ1およびＲ2は、ともにメチルである。Ｒ1および／またはＲ2がアリールである場合、典型的な値は、フェニルおよびトリル（−ＰｈＣＨ3；ｏ−、ｍ−またはｐ−）である。Ｒ1およびＲ2がシクロアルキルを表す場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。一緒に結合される場合、Ｒ1およびＲ2が、典型的には、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を表し、必要に応じて、一つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基（例えば、−Ｏ−または−ＮＨ−）によって割り込まれ、５、６または７員の複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノ、またはピペリジノ）を提供する。
【０１０９】
アルキル基（ｖａｌｕｅ）、シクロアルキル基、アルケニル基、アシル基、およびアリール基内で、本発明者らは、その中に置換基として、問題の化合物の細胞周期を阻止するそして／または阻害するそして／または妨げる活性を干渉しない一つ以上の基を含む、置換された基を含む。例示的な非干渉性置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキル、およびアリールが挙げられる。ヒドロカルビル基の非制限的な例は、アシル基である。
【０１１０】
いくつかの好ましい実施形態において、Ｒ1およびＲ2の少なくとも１つがＨである。
【０１１１】
本発明における使用に適切なサルファメート化合物の例、または本発明における使用に適切なサルファメート化合物に変換し得る適切な化合物の例は、当該分野で見出され得る（例えば、ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７，ＰＣＴ／ＧＢ９７／０３３５２，ＰＣＴ／ＧＢ９７／００４４４，ＧＢ  ９７２５７４９．７，ＧＢ  ９７２５７５０．５，ＵＳ−Ａ−５５６７８３１，ＵＳ−Ａ−５６７７２９２，ＵＳ−Ａ−５５６７８３１，ＷＯ−Ａ−９６／０５２１６，およびＷＯ−Ａ−９６／０５２１７）。
【０１１２】
例として、ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７は、エストロン依存性腫瘍（特に、乳癌）の処置における使用のためにそれらを含む新規なサルファメート化合物および薬学的組成物を教示する。これらのサルファメート化合物は、サルファメートエステルである。このようなインヒビターの例は、ステロイドのサルファメートエステル誘導体である。
【０１１３】
本発明のおける使用に適した別の化合物は、少なくとも以下
【０１１４】
【化１０】
0005042411.tif 000008
の構造的構造を有し、ここで、基ＩＩが、上記のようなサルファメート基を示し；そして
環Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤが、独立して必要に応じて置換される。
【０１１５】
好ましくは、基ＩＩが、サルファメート基に対する上記の好ましい式である。これに関して、Ｒ1およびＲ2の少なくとも１つがＨであることが好ましい。
【０１１６】
本発明における使用に適切な別の化合物は、少なくとも以下
【０１１７】
【化１１】
0005042411.tif 000009
の構造的構造を有し、ここで、基ＩＩが、上記のようなサルファメート基を示し；そして
環Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤが、独立して必要に応じて置換される。
【０１１８】
好ましくは、Ｒは、サルファメート基に対する上記の好ましい式である。これに関して、Ｒ1およびＲ2の少なくとも１つがＨであることが好ましい。
【０１１９】
本発明者は、Ａ環上のサルファメート基およびＡ環のヒドロカルビル置換基またはオキシヒドロカルビル置換基を有する化合物が、細胞周期を妨げるそして／または阻害するそして／または阻止する際に特に強力（ある場合には、非常に強力）である。
【０１２０】
本発明の好ましい化合物は、式
【０１２１】
【化１２】
0005042411.tif 000010
を有し、
基ＩＩが、サルファメート基であり；そして
環Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤが、独立して必要に応じて置換される。
【０１２２】
好ましくは、基Ｉが、２位である。
【０１２３】
好ましくは、基ＩＩが３位である。
【０１２４】
本発明について、好ましくは、サルファメート化合物は、オキシヒドロカルビルステロイド性サルファメート化合物（特に、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート）またはその薬学的に活性な塩（それらのアナログを含む）である。
【０１２５】
２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメートは、エストロン−３−Ｏ−サルファメート（他に、「ＥＭＡＴＥ」として公知）のアナログであり、これは、以下の構造：
【０１２６】
【化１３】
0005042411.tif 000011
を有し、２−メトキシＥＭＡＴＥと呼ばれ得る。
【０１２７】
２−メトキシＥＭＡＴＥは、天然のエストロゲン代謝物、２−メトキシエストロゲンのサルファモイル化誘導体である。この化合物は、２−ヒドロキシラーゼによるエストロンのヒドロキシル化、引き続くカテコールエストロゲンメチルトランスフェラーゼによるメトキシ誘導体への代謝によって、肝臓中で形成される。
【０１２８】
２−メトキシＥＭＡＴＥが、以下の式：
【０１２９】
【化１４】
0005042411.tif 000012
として示される式を有する。
【０１３０】
２−メトキシＥＭＡＴＥは、少なくとも部分的に、細胞周期を妨げるそして／または阻害するそして／または阻止することによってインビボで作用すると考えられる。
【０１３１】
従って、非常に好ましい実施形態において、サルファメート化合物は、オキシヒドロカルビルステロイド性サルファメート化合物（特に、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−メトキシＥＭＡＴＥ））である。
【０１３２】
これに関して、本発明者らは、Ｃ1-6（例えば、Ｃ1-3）アルコキシ置換基をＡ環の２位に有するサルファメート化合物（特に、２−メトキシＥＭＡＴＥ）が、腫瘍の増殖を妨げるそして／または阻害するのに非常に強力であることを見出した。
【０１３３】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、オキシヒドロカルビルステロイド性サルファメート化合物であり、ここで、このサルファメート基が、ステロイド成分の３位であるそして／またはオキシヒドロカルビル基が、ステロイド成分の２位である。
【０１３４】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、エストロンサルファメートのオキシヒドロカルビル誘導体である。
【０１３５】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−サルファメートのオキシヒドロカルビル誘導体である。
【０１３６】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−サルファメートのＣ1-6（例えば、Ｃ1-3）アルコキシ誘導体である。
【０１３７】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−サルファメートの２−Ｃ1-6（例えば、Ｃ1-3）アルコキシ誘導体である。
【０１３８】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメートである。
【０１３９】
本発明について、サルファメート化合物は、好ましくは、ヒドロカルビルステロイド性サルファメート化合物（特に、２−エチルエストロン−３−Ｏ−サルファメート）またはその薬学的に活性な塩（そのアナログを含む）であり得る。
【０１４０】
２−エチルエストロン−３−Ｏ−サルファメートは、エストロン−３−Ｏ−サルファメートのアナログであり、２−エチルＥＭＡＴＥと呼ばれ得る。
【０１４１】
２−エチルＥＭＡＴＥは、以下の式：
【０１４２】
【化１５】
0005042411.tif 000013
として表される式を有する。
【０１４３】
２−エチルＥＭＡＴＥは、少なくとも部分的に、細胞周期を妨げるそして／または阻害するそして／または阻止することによってインビボで作用すると考えられる。
【０１４４】
従って、非常に好ましい実施形態において、サルファメート化合物は、ヒドロカルビルステロイド性サルファメート化合物（特に、２−エチルエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−エチルＥＭＡＴＥ））である。
【０１４５】
これに関して、本発明者らは、Ｃ1-6（例えば、Ｃ1-3）アルキル置換基をＡ環の２位に有するサルファメート化合物（特に、２−エチルＥＭＡＴＥ）が、腫瘍の増殖を妨げるそして／または阻害するのに非常に強力であることを見出した。
【０１４６】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、ヒドロカルビルステロイド性サルファメート化合物であり、ここで、このサルファメート基が、ステロイド成分の３位であるそして／またはヒドロカルビル基が、ステロイド成分の２位である。
【０１４７】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、エストロンサルファメートのヒドロカルビル誘導体である。
【０１４８】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−サルファメートのヒドロカルビル誘導体である。
【０１４９】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−サルファメートのＣ1-6（例えば、Ｃ1-3）アルキル誘導体である。
【０１５０】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−サルファメートの２−Ｃ1-6（例えば、Ｃ1-3）アルキル誘導体である。
【０１５１】
１つの実施形態において、好ましくは、サルファメート化合物は、２−エチルエストロン−３−Ｏ−サルファメートである。
【０１５２】
本発明のサルファメート化合物は、適切なアルコールを適切な塩化サルファモイル（Ｒ1Ｒ2ＮＳＯ2Ｃｌ）と反応させることによって調製され得る。反応を実行するための好ましい条件は以下の通りである。水素化ナトリウムおよび塩化サルファモイルを、０℃で、無水ジメチルホルムアミド中のアルコールの攪拌溶液に加える。続いて、この反応物を室温まで温めさせ、ここで、攪拌をさらに２４時間続ける。反応混合物を重炭酸ナトリウムの冷飽和溶液に注ぎ、そして得られた水相をジクロロメタンで抽出する。合わせた有機抽出物を、無水ＭｇＳＯ4で乾燥させる。濾過に続き、減圧での溶媒エバポレーションおよびトルエンとの共エバポレーションによって、粗製の残渣を得、これをフラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製する。好ましくは、アルコールは、塩化サルファモイルとの反応の前に適切に誘導体化される。必要な場合は、アルコールの官能基は、公知の方法で保護され得、そして保護基は、反応の終わりに除去され得る。
【０１５３】
本発明の１つの局面において、ＸがＰであり、Ｙが＝Ｏであり、そしてＺが−ＯＨであるか；またはＸがＳであり、Ｙが＝Ｏであり、Ｚが＝Ｏであり、そしてＲがヒドロカルビルである。代替的に述べると、本発明の化合物は、スルホネート化合物またはホスホネート化合物であり、ここで、基Ｉが、式
【０１５４】
【化１６】
0005042411.tif 000014
の基であり、ここで、ＸがＰまたはＳであり；ＸがＰである場合、Ｚが−ＯＨであり；ＸがＳである場合、Ｚが＝Ｏであり；そしてＲがヒドロカルビルである。
【０１５５】
好ましくは、スルホネート化合物またはホスホネート化合物は、多環式化合物である。より好ましくは、スルホネート化合物またはホスホネート化合物がステロイド性構造を有する。
【０１５６】
スルホネート化合物またはホスホネート化合物がステロイド性構造である場合、スルホネート化合物またはホスホネート化合物は、ステロイド性核のＡ環の３位に結合する少なくとも１つのスルホネート基またはホスホネート基を有し得る。
【０１５７】
さらに好ましい局面において、スルホネート化合物またはホスホネート化合物は、ステロイド核のＡ環の２位に結合した、少なくとも１つの炭化水素基、好ましくはＣ1-6アルキルを含む。
【０１５８】
従って、さらなる局面において、本発明は、ステロイド環および以下の式：
【０１５９】
【化１７】
0005042411.tif 000015
のスルホネート基またはホスホネート基を含む、スルホネート化合物またはホスホネート化合物を提供し、
ここで、
Ｘは、ＰまたはＳであり；
ＸがＰである場合には、Ｚは−ＯＨであり、そしてＲはヒドロカルビルまたはＨであり；
ＸがＳである場合には、Ｚは＝Ｏであり、そしてＲはヒドロカルビルであり；そして
ここで、スルホネート基またはホスホネート基は、ステロイド核のＡ環の３位に結合し；そして少なくとも１つの炭化水素基、好ましくはＣ1-6アルキルが、ステロイド核のＡ環の２位に結合する。
【０１６０】
これらの新規なスルホネート化合物またはホスホネート化合物は、医薬品において使用され得、好ましくは本発明に従って使用され得る。
【０１６１】
本発明において使用するために適したスルホネート化合物またはホスホネート化合物の例、あるいは本発明において使用するために適したスルホネート化合物またはホスホネート化合物に転換され得る適切な化合物の例は、当該分野において見出され得る（例えば、ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８６）。
【０１６２】
さらなる局面において、本発明は、細胞周期を予防および／または阻害および／または阻止させるための医薬品の製造における、組成物の使用を提供し、ここで、この組成物は、以下を含有する：
（ｉ）本明細書中に規定のような化合物；ならびに
（ｉｉ）本明細書中に規定のようなさらなる化合物；および／または
（ｉｉｉ）薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、もしくは賦形剤；および／または
（ｉｖ）生物学的応答改変剤；および／または
（ｖ）純粋な抗エストロゲン；および／または
（ｖｉ）選択的エストロゲン応答改変剤（ＳＥＲＭ）；および／または
（ｖｉｉ）タキソール。
【０１６３】
用語生物学的応答改変剤（「ＢＲＭ」）としては、サイトカイン、免疫調節因子、増殖因子、造血調節因子、コロニー刺激因子、走化性、溶血性因子および血栓崩壊性因子、細胞表面レセプター、リガンド、白血球付着分子、モノクローナル抗体、予防的および治療的ワクチン、ホルモン、細胞外マトリックス成分、フィブロネクチンなどが挙げられる。
【０１６４】
好ましくは、生物学的応答改変剤は、サイトカインである。サイトカインの例としては、インターロイキン（ＩＬ）（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１９）；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）（例えば、ＴＮＦ−α）；インターフェロンα、βおよびγ；ＴＧＦ−βが挙げられる。
【０１６５】
好ましくは、サイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）である。
【０１６６】
本発明の好ましい局面に関して、ＴＮＦは、任意の型のＴＮＦ（例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β）であり得、これらの誘導体または混合物を含む。より好ましくは、サイトカインは、ＴＮＦ−αである。
【０１６７】
ＴＮＦに関する教示は、当該分野において見出され得る（例えば、ＷＯ−Ａ−９８／０８８７０およびＷＯ−Ａ−９８／１３３４８）。
【０１６８】
薬学的投与のために、本発明の組成物は、任意の適切な様式で、従来の薬学的処方技術および薬学的キャリア、アジュバント、賦形剤、希釈剤など（例えば、非経口投与のためのもの）を利用して、処方され得る。おおよその有効用量割合は、問題の化合物の個々の活性に依存し、そして平均体重（７０Ｋｇ）の患者に対して、１００〜８００ｍｇ／日の範囲内である。好ましいより活性な組成物についての、より通常の投薬量割合は、２００〜８００ｍｇ／日、より好ましくは、２００〜５００ｍｇ／日、最も好ましくは、２００〜２５０ｍｇ／日の範囲内である。これらは、単回用量レジメン、分離した用量レジメン、および／または数日間にわたって続く多回用量レジメンで、提供され得る。経口投与のためには、これらは、単位用量あたり１００〜５００ｍｇの処方物を含む、錠剤、カプセル剤、液剤または坐剤として処方され得る。あるいは、そして好ましくは、この処方物は、適切な非経口的に投与可能なキャリア中の、非経口投与のために処方され、そして２００〜８００ｍｇ、好ましくは２００〜５００ｍｇ、より好ましくは２００〜２５０ｍｇの範囲の単回の毎日の投薬量割合を提供する。しかし、このような有効な毎日の用量は、活性成分の固有の活性および患者の体重に依存して変動し、このような変動は、医師の技術および判断の範囲内である。
【０１６９】
本発明の化合物または処方物は、任意の適切な様式（例えば、経口投与、局所投与（例えば、パッチにより）、非経口投与、直腸投与または吸入スプレーによりのうちのいずれか１つ以上）で投与され得る。
【０１７０】
処置の方法において、被験体は、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。いくつかの適用については、好ましくは、ヒトは、女性である。
【０１７１】
特定の適用について、本発明の化合物または組成物は、組合せ治療（スルファターゼインヒビターとともにか、または例えば、アロマターゼインヒビター（例えば、４−ヒドロキシアンドロステンジオン（４−ＯＨＡ）など）と組合せてかのいずれか）において使用され得ることが、予測される。
【０１７２】
本発明に従って、組成物の成分は、混合物としてか、同時にかまたは連続的に、添加され得る。さらに、本発明に従って、成分の１つの発現を誘導する（か、または発現を増加させる）ことにより、組成物の少なくとも一部を、インサイチュで（例えば、インビボで）形成することが、可能であり得る。例えば、ＴＮＦのような生物学的応答改変剤の発現を誘導する（か、または発現を増加させる）ことが、可能であり得る。例として、細菌性リポ多糖類（ＬＰＳ）およびムラミルジペプチド（ＭＤＰ）を添加することにより、ＴＮＦの発現を誘導する（か、または発現を増加させる）ことが、可能であり得る。これに関して、組合せでの細菌性ＬＰＳおよびＭＤＰは、成熟脾細胞からのインビトロでのＴＮＦ産生およびインビボでの腫瘍後退を、刺激し得る（Ｆｕｋｓら  Ｂｉｕｌｌ  Ｅｋｓｐ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  １９８７  １０４：４９７−４９９）。
【０１７３】
本発明はまた、以下の組成物／化合物を提供する：
・細胞周期を予防および／または阻害および／または阻止させることにより、エストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）およびＥＲ陰性（ＥＲ−）の乳癌細胞の、インビトロでの増殖の阻害を引き起こすもの。
・インタクトな（すなわち、卵巣摘出されていない）動物における、ニトロソメチルウレア（ＵＭＵ）誘導乳房腫瘍の後退を引き起こすもの。
・癌細胞における細胞周期を予防および／または阻害および／または阻止させるもの。
・細胞周期を予防および／または阻害および／または阻止させることにより、インビボで作用するもの。
・細胞周期アゴニストとして作用するもの。
【０１７４】
さらなる局面において、本発明は、環式化合物またはその薬学的に活性な塩の、細胞周期アゴニストの製造における使用を提供し、ここで、この環式化合物は、少なくとも１つの環を含み、ここで、基Ｉおよび基ＩＩは、互いに独立して、この環式化合物の環に結合し；ここで基Ｉは、ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基であり；そしてここで、基ＩＩは、以下の式：
【０１７５】
【化１８】
0005042411.tif 000016
の基であり、Ｘは、ＰまたはＳであり；ＸがＰである場合には、Ｙは＝ＯまたはＳであり、Ｚは−ＯＨであり、そしてＲはヒドロカルビルまたはＨであり；ＸがＳである場合には、Ｙは＝Ｏであり、Ｚは＝Ｏであり、そしてＲはヒドロカルビルまたはＮ（Ｒ1）（Ｒ2）であり、ここで、Ｒ1およびＲ2の各々は、独立して、Ｈまたはヒドロカルビル基から選択される。
【０１７６】
２−メトキシエストロゲンのような本発明の化合物は、腫瘍増殖を阻害し得、そして新脈管形成を阻害し得る、新たなクラスの薬物として、明らかである。エストロゲンのスルファモイル化は、これらの効力およびバイオアベイラビリティを増強するので、本発明者らは、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ）の合成およびそれが乳癌細胞の増殖を阻害する能力の、２−メトキシエストロン（２−ＭｅＯＥ１）の能力との比較を、以下に記載する。２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ（１μＭ）は、エストロゲンレセプター陽性ＭＣＦ−７乳癌細胞の増殖を５２％阻害したのに対し、２−ＭｅＯＥ１は、この濃度ではほとんど効果を有さなかった。２−ＭｅＯＥＭＡＴＥはまた、エストロゲンレセプター陽性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞の増殖を阻害した。２−ＭｅＯＥＭＡＴＥへの細胞の曝露は、これらの細胞の円形化（ｒｏｕｎｄ  ｕｐ）および放出を引き起こし、このことは、この化合物が細胞のアポトーシスを誘導し得ることを提唱する。細胞周期分析は、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥがＧ2／Ｍ期において細胞の阻止を引き起こし、１２時間で検出可能なＧ2／Ｍで阻止した細胞が増加することを、明らかにした。ＭＣＦ−７細胞を２−ＭｅＯＥＭＡＴＥに２４時間曝露し、続いて薬物のない培地中で２４時間培養することは、細胞のＧ2／Ｍ期での阻止を逆転させなかった。ＴＵＮＥＬ分析は、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥが、アポトーシスを、処置したＭＣＦ−７細胞の有意な割合において誘導したことを確認した。インタクトなラットにおけるニトロソメチルウレア誘導乳房腫瘍を使用する、予備的なインビボ研究において、２−ＭｅＯＥ１（２０ｍｇ／ｋｇ／日、経口、１１日間）は、腫瘍増殖にほとんど効果を有さなかった。対照的に、同じ用量の２−ＭｅＯＥＭＡＴＥは、１１日の期間にわたって、２／３の腫瘍のほぼ完全な後退を生じた。２−ＭｅＯＥＭＡＴＥは、ホルモン依存性およびホルモン非依存性の乳房腫瘍の処置のための、かなりの治療能力を有するはずであることが、結論付けられる。
【０１７７】
まとめると、本発明は、腫瘍の処置において使用するための組成物、およびこれらを含む薬学的組成物を提供する。
【０１７８】
本発明を、例のみによってここに記載する。ここで、以下の図面に対して参照がなされるべきである。
【０１７９】
構造を示す図１；
グラフである図２；
写真板である図３；
写真板である図４；
写真板である図５；
グラフである図６；
グラフである図７；
グラフである図８；
グラフである図９；
グラフである図１０；
グラフである図１１；
構造を示す図１２；
グラフである図１３；
グラフである図１４；
写真板である図１５；および
グラフである図１６。
【０１８０】
（一般的方法）
使用されるすべての試薬および溶媒は、他に記載されない限り、凡用性であるかまたは分析グレードであり、ＡｌｄｒｉｃｈまたはＳｉｇｍａ  ＣｈｅｍｉｃａｌｓまたはＬａｎｃａｓｔｅｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓから購入した。
【０１８１】
シリカゲルは、シリカゲル（Ｍｅｒｃｋ、グレード６０）をいい、そして出発物質を、ＵＶ光のもとで観測するかまたはリンモリブデン酸のメタン酸溶液で処理し、続いて加熱するかのいずれかで検出した。ＮＭＲスペクトルを、他に記載されない限り、溶媒としてアセトン−ｄ6、ＣＤＣｌ3またはＤＭＳＯ4−ｄ6を用い、かつ内標としてＴＭＳを用いて検出した。1Ｈ  ＮＭＲおよび13Ｃ  ＮＭＲスペクトルを、Ｊｅｏｌ  ＧＸ  ２７０（２７０ＭＨｚにおいて）およびＪｅｏｌ  ＥＸ  ４００（４００ＭＨｚにおいて）ＮＭＲ分光計上に記録した。以下の略語を使用して、1Ｈ  ＮＭＲおよび13Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおける共鳴を記載する：ｓ、シングレット；ｄ、ダブレット；ｂｒ、ブロード；ｔ、トリプレット；ｑ、カルテット；ｍ、マルチプレット；および組み合わせ（例えば、ｄｄ、ダブレットのダブレット）。ＩＲスペクトルを、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ７８２  Ｉｎｆｒａ−Ｒｅｄ分光計を用いてＫＢｒディスクとして決定した。融点をＲｅｉｃｈｅｒｔ−Ｊｕｎｇ  Ｋｏｆｌｅｒ  Ｂｌｏｃｋ上で決定し、そして補正しなかった。マススペクトルを、ＶＧ  ７０７０およびＶＧ  Ａｕｔｏｓｐｅｃ装置（Ｂａｔｈ大学におけるＭａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅにおいて）に記録した。ＦＡＢマススペクトルを、ｍ−ニトロベンゾイルアルコール（ｍ−ＮＢＡ）をマトリックスとして用いて実施した。ＨＰＬＣ安定性研究を、ＬＤＣ  Ｃｏｎｓｔａｍｅｔｒｉｃ  ３０００ＨＰＬＣＰｕｍｐおよびＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ  ３０００可変波長検出器を用いて決定した。ＣＨＮ分析を、ガスクロマトグラフィー（Ｂａｔｈ大学のＭｉｃｏａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅにおいて）を用いて決定した。
【０１８２】
使用したすべての試薬および溶媒を、水分および光から離して保存し、使用する前に、乾燥した。低温度の実験を、０℃についてＮａＣｌを有する氷／水またはアセトンを有する炭素ジオキシドペレットのいずれかを含む十分に遮蔽された外部浴を用いるかあるいは冷プレートを用いて実施した。無水条件を必要とする実験を、自表（ｓｅｌｆ−ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ）シリカを含む乾燥チューブの手段によって保護した。溶媒のエバポレーションを、減圧（水ポンプ）下でかつ一定時においてロータリーエバポレーターを用い、続いて、高真空ポンプを使用して実行した。サンプルを、高真空下かつ低温度にて乾燥チューブ中で乾燥した。
【０１８３】
すべてのアッセイを、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｔ．Ｍａｒｙ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｌｏｎｄｏｎにて実行した。
【０１８４】
（塩化スルファモイルの調製）
塩化スルファモイルを、ＡｐｐｅｌおよびＢｅｒｇｅｒ44の方法に従って、ギ酸とクロロスルホニルイソシアネートとの反応によって調製した。硫黄がない無水トルエン（１５０ｍｌ）に、クロロスルホニルイソシアネート（２５ｇ、１７７ｍｍｏｌ）を、Ｎ2雰囲気下０℃にて添加した。撹拌後、ギ酸（６．０ｍｌ、１５６ｍｍｏｌ）を、Ｎ2下で０℃にて滴下した。生じた白色光エマルジョンを、一晩撹拌し続け、そしてトルエンを、水真空ポンプを用いて除去し、白色光の粗塩化スルファモイル（１６．２４％、７９％）を得た。次いで、塩化スルファモイルの標準溶液（計算値、０．７０Ｍ）を、無水無硫黄不純物トルエン中に粗結晶生成物を溶解させることにより調製し、そしてＮ2下にて冷蔵庫に保存した。粉砕をこの塩化スルファモイル溶液に試みず、このモル濃度を、後処理後に得たもとの粗塩化スルファモイルの重量に従って見積もった。塩化スルファモイル溶液の調製のために使用したトルエンを、記載される方法45に従って精製した。冷トルエン（１〜３リットル）を、分液ロート中に入れ、冷濃Ｈ2ＳＯ4（１００ｍｌ／ｌ、３〜４回）を用いて洗浄し、水で１回洗浄し、５％  ＮａＯＨ水溶液で１回洗浄し、そして再び中性になるまで水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4続いて、金属ナトリウムで一晩乾燥し、次いで、金属ナトリウムからＮ2下で画分的に希釈し、そしてＮ2下暗所に保存した。
【０１８５】
塩化スルファモイルを調製するために使用される無水ギ酸を、記載される方法45に従って精製した。ギ酸（９８％）を、無水ホウ酸を用いて一晩乾燥し、次いで、Ｎ2下で希釈して、Ｎ2下にて暗所に保存した。
【０１８６】
（スルファモイル化のための一般方法）
親化合物を用いて出発して、サルファメート誘導体を、他に示されない限り、Ｈｏｗａｒｔｈら14に記載される通りに原則的に調製した。この点で、無水ＤＭＦ中の適切な親化合物の溶液を、水素化ナトリウム［６０％分散；モノヒドロキシおよびジヒドロキシ化合物に対してそれぞれ１．２および２．５当量］を用いてＮ２雰囲気下０℃にて処理した。水素の放出が止まった後、トルエン中の塩化スルファモイル（過剰、計算値５〜６当量）を、添加し、そして反応混合物を室温まで一晩温めた後ブラインに注ぎ、そして酢酸エチルを添加した。有機画分を、ブラインで徹底的に洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、そして減圧下でエバポレートした。得た粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーまたは調製用ＴＬＣによって生成し、続いて再結晶して対応するサルファメートを得た。すべての化合物を、分光分析および燃焼分析によって特徴づけした。
【０１８７】
（２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−メトキシＥＭＡＴＥ）の合成）
２−メトキシＥＭＡＴＥ（図１、３、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ）を、０℃にて水素化ナトリウムを用いて無水ジメチルホルムアミド中で２−メトキシエストロン（図１、４、２−ＭｅＯＥ１）の溶液を処理することによって合成した。水素の放出が、止まった後、塩化スルファモイル（２当量）を、添加し、そして反応混合物を、室温まで一晩暖めた。この化合物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、そしてこの化合物は、ＴＬＣにより単一の純粋なスポットであり、満足な分光学的データおよび微量分析データを示した。
【０１８８】
この点で、２−メトキシエストロン（７５ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）は、粗生成物（１０３ｍｇ）を与え、これを、クロロホルム／アセトン（８：１）を用いてシリカ（５０ｇ）上で分取し、そしてエバポレーションの際に、第２の画分は、青白残渣（８３ｍｇ、８１％）を与え、これを、酢酸エチル／ヘキサン（１：２）中で再結晶し、１（６９ｍｇ）を白色結晶として得た。ｍ．ｐ．＝１７７〜１８０℃、クロロホルム／アセトン（８：１および４：１）に対してそれぞれＲfS＝０．２９および０．５４、かつ酢酸エチル／ヘキサン（２：１および１：１）に対してそれぞれＲfＳ＝０．４６および０．３１、
【０１８９】
【数１】
0005042411.tif 000017
ゲニステイン  ビス−サルファメート（図１、５、ＧｅｎＭＡＴＥ）を、２．５当量水素化ナトリウムが使用されることを除いて同一の手順によってゲニステイン（図１、６）から調製した。
【０１９０】
２−メトキシエストロンおよび他のステロイド、サイトカラシンＢを、Ｓｉｇｍａ（Ｐｏｏｌｅ、Ｄｏｒｓｅｔ、ＵＫ）から得た。スルファモイル反応のためのゲニステインを、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ（Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ  ＵＫ）から得た。
【０１９１】
（２−エチルエストロン（２−ＥｔＥ１）および２−エチルエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−ＥｔＥＭＡＴＥ）の合成）
２−エチルエストロン（２−ＥｔＥｌ）および２−エチルエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−ＥｔＥＭＡＴＥ）を、以下のように調製した：手短には、エストロン−３−Ｏ−メチルエーテルのＦｒｉｅｄｅｌ−Ｃｒａｆｔｓアセチル化および触媒的水素化、続いて、脱メチル化反応により、２−エチルエストロン（２−ＥｔＥｌ）を得、これを、塩化スルファモイルと反応して、対応する３−Ｏ−サルファメート（２−ＥｔＥＭＡＴＥ）を得た。２−エチルエストラジオールを、異なる経路（２１）によって以前に合成した。化合物を、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の１０ｍＭストックとして調製した。
【０１９２】
（２−アセチルエストロン  ３−メチルエーテル（８））
無水塩化アルミニウム（３．７６ｇ、２８．２０ｍｍｏｌ）およびアセチルクロリド（２．０ｍｌ、２８．１３ｍｍｏｌ）および無水ニトロメタン／ジクロロメタン（５０ｍｌ）の０℃の懸濁液に、エストロンメチルエーテル（４．０ｇ、１４．０７ｍｍｏｌ）を添加した。室温にて５時間撹拌した後、この反応混合物を、１０％  ＨＣｌ（１００ｍｌ）に注ぎ、そして生じた混合物を、酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、中性になるまでブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、そしてエバポレートした。得た黄色／茶色残渣を、メタノールを用いて粉砕し、そして生じた白色沈殿物を、濾過によって収集し、そして空気乾燥して白色個体（４．３ｇ）を得、これを、メタノールから再結晶して、８を白色結晶（４．０ｇ、８７％）として得た；ｍｐ  １８１〜１８４℃（ｌｉｔ．１８９〜１９０℃）224；ＴＬＣ（クロロホルム／アセトン、８：１）：Ｒｆ  ０．８２；
【０１９３】
【数２】
0005042411.tif 000018
（２−エチルエストロン  ３−メチルエーテル（９））
ＴＨＦ／エタノール（１：２）（３０ｍｌ）中の８（１．０ｇ、３．０６３ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｐｄ−Ｃ（１．０ｇ、１０％）の存在下で室温にて５０ｐｓｉにて２４時間水素添加した。補助触媒を濾過により除去した後、濾液をエバポレートして白色固体（９５０ｍｇ）を得、これを、フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／アセトン勾配）によって分取した。極性の少ない画分は、白色個体（８０５ｍｇ）を与え、これを、メタノールからさらに再結晶によって精製して、９（７７５ｍｇ、７８％）を白色結晶として得た；ｍｐ  １１２〜１１５℃；ＴＬＣ（クロロホルム、およびクロロホルム／アセトン、８：１）：Ｒｆｓそれぞれ０．５６および０．７８；
【０１９４】
【数３】
0005042411.tif 000019
（２−エチルエストロン（１０））
塩化アルミニウム（１．２８ｇ、９．６１５ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（１．４４ｇ、９．６１５ｍｍｏｌ）および９（３００ｍｇ、９６１．５μｍｏｌ）を、このオーダーでアセトニトリル（２５ｍｌ）およびジクロロメタン（１２．５ｍｌ）の混合物にＮ2下０℃にて添加した。生じた懸濁液を、還流下で８時間加熱し、室温まで冷却し、次いで、水に注ぎ、続いて、ジクロロメタン（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせたＤＣＭ抽出液を、１０％のチオ硫酸ナトリウム（１００ｍｌ）、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、そしてエバポレートして黄色の固体（２９０ｍｇ）を得、これを、フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／アセトン勾配）によって分取した。単離した黄色の個体（２５４ｍｇ）を、アセトンから再結晶によってさらに精製し、１０（２４０ｍｇ、８３％）を黄色の結晶として得た：ｍｐ２０１−２０４℃；ＴＬＣ（クロロホルムおよびクロロホルム／アセトン（８：１））：Ｒｆそれぞれ０．３および０．６５；
【０１９５】
【数４】
0005042411.tif 000020
（２−エチルエストロン  ３−Ｏ−サルファメート（１１））
１０（１５０ｍｇ、５０２．６μｍｏｌ）および２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルピリジン（ＤＢＭＰ）（３１０ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍｌ）の撹拌溶液に塩化スルファモイルのトルエン溶液（３．０１６ｍｍｏｌ）を滴下した。２時間の撹拌後、反応混合物を、ジクロロメタン（１００ｍｌ）で希釈し、そして生じた混合物を、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、そしてエバポレートした。得た残渣（１７０ｍｇ）を、フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／アセトン勾配）によって分取し、そして単離した白色固体（１５５ｍｇ）を、酢酸エチル／ヘキサン（１：２）からの再結晶によってさらに精製し、１１を白色結晶（１４６ｍｇ、７７％）として得た；ｍｐ  １６５−１６７℃；ＴＬＣ（クロロホルム／アセトン（８：１）：Ｒｆ０．４１；
【０１９６】
【数５】
0005042411.tif 000021
（実施例１−細胞培養）
ＭＣＦ−７（Ｅｒ＋）およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ＥＲ−）乳癌細胞を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から得た。細胞を、Ｅａｇｌｅの最小基本倍地（ＥＭＥＭ）中でＨｅｐｅｓ緩衝液（２０ｍＭ）を用いて２５ｃｍ2培養フラスコ中に慣用的に培養した。この培地を、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、炭酸水素ナトリウム（１０ｍＭ）、１％の非必須アミノ酸および５％（ｖ／ｖ）仔ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を用いて補充した。試験化合物を添加する前に、細胞を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて洗浄し、そして処置物質を、フェノールレッドがない培地（２％の裸のＦＣＳおよび補充物を含む）中に添加した。ＭＣＦ−７細胞の増殖における２−ＭｅＯＥ１または２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの効果を、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  ９６細胞増殖アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ、Ｈａｎｔｓ、ＵＫ）を用いて製造者の使用説明書に従って評価した。これについて、細胞（ウェルあたり５０００）を、フェノールレッドおよび１０％  ＦＣＳを含有する培地中に培養し、そしてアッセイを実施する前に薬物に４日曝した。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞について、細胞数を、Ｃｏｕｌｔｅｒ計算器を用いて決定した。
【０１９７】
繊維芽細胞の培養物ついて、反応した腫瘍組織を、刻み、そしてＥＭＥＭ中で３７℃にてコラゲナーゼ（２００μｇ／ｍｌ）を用いて１８〜２４時間インキュベートした。この分散細胞を、遠心分離によって収集し、培地を用いて２回洗浄し、コラゲナーゼを除去した。分散した細胞を、毎週を基本に継代させる前に、培養フラスコに播種し、コンフルーエンスに増殖した。実験の目的のために、１２ウェルマルチプレートまたは２５ｃｍ2フラスコを、繊維芽細胞を用いて播種し、そして７０〜８０％コンフルーエンシーまで増殖させた。細胞を、ＰＢＳを用いて洗浄し、そしてＣｏｕｎｔｅｒ計算器を用いて細胞数を決定する前に、薬物に２４時間曝した。
【０１９８】
コントロール細胞および処理した細胞の顕微鏡写真を、光の通常の条件下およびＯｌｙｍｐｕｓ  ＣＫ２顕微鏡下でＯｌｙｍｐｕｓ  ＳＬ３５  Ｔｙｐｅ１２カメラを用いて（×１００倍）曝露下で取った。
【０１９９】
（結果）
ＭＣＦ−７細胞の増殖における２−ＭｅＯＥ１または２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの４日にわたる効果を、マイクロウェルプレート増殖アッセイ（図２）を用いて決定した。０．１μＭまたは１．０μＭにおける２−ＭｅＯＥ１は、ＭＣＦ−７細胞の増殖においてほとんど効果を有さなかったが、１０μＭにおいて１９％まで増殖を減少させた。反対に、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥは、細胞増殖を２９％および５２％（それぞれ、０．１μＭおよび１．０μＭ）まで阻害した。しかし、細胞増殖におけるさらなる効果を、細胞がより高い（１０μＭ）濃度の２−ＭｅＯＥＭＡＴＥに曝される場合、検出した。
【０２００】
ＭＣＦ−７細胞の２−ＭｅＯＥＭＡへの曝露は、細胞形態学（図３）のおける注目すべき効果を有した。未処理の細胞（図３ａ）において、ほんの少しの成熟細胞を、視野あたり可視化し、一方で、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ（１μＭ）で２４時間処置した細胞について、成熟細胞および孤立細胞の数は、有意に増加した（図３ｂ）。反対に、２−ＭｅＯＥ１（１μＭ）は、細胞形態学においてほとんど効果を有しなかった（図３ｃ）。１０μＭにおいて試験された場合、エストロンまたはＥＭＡＴＥは、細胞形態学に影響を及ぼさなかった（データは示されない）。２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ（１μＭ）は、ＥＲネガティブＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞形態学おぼび数において同様の効果を有した（図４ａおよび４ｂ）。１μＭにおいて、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の数は、未処理細胞と比べて２１％まで減少された。間質コンパートメントが胸部腫瘍の容量の主要部分を構成する場合、胸部腫瘍誘導繊維芽細胞の形態学における２−ＭｅＯＥＭＡＴＥをまた、実験した（図５）。１μＭにおいて、細胞形態学における効果は、ほとんど検出されたかった（図５ｂ）が、一方で、５μＭにおいて、繊維芽細胞の有意な部分の丸みが、生じた（図５ｃ）。上皮細胞数における２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの効果と反対に、それは、繊維芽細胞の数を減少しなかった。
【０２０１】
（実施例２−フローサイトメトリー分析）
細胞を２−ＭｅＯＥ１、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたはビヒクルの存在下で４８時間までの間培養した。細胞周期に対する２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの効果の可逆性を調べるために、細胞を薬剤で２４時間処理し、その後細胞を洗浄し、新しい培地で薬剤なしでさらに２４時間培養した。
【０２０２】
ＤＮＡ含有量の分析のために細胞を準備するために、細胞をトリプシン処理（０．２５％  トリプシン、０．０２％  ＥＤＴＡ）し、ＰＢＳで洗浄し、７０％エタノールで固定した。細胞を遠心分離によって採取し、ＰＢＳ（１〜２×１０6細胞／ｍｌ）で再び懸濁し、ＲＮａｓｅ  Ａ（０．１ｍｇ／ｍｌ）で処理し、ヨウ化プロピジウム（０．０５ｍｇ／ｍｌ）で３０分間室温で染色した。細胞をフローサイトメーター（ＦＡＣｓｃａｎ，Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｂｅｄｆｏｒｄ  ＭＡ）で分析した。
【０２０３】
（結果）
ＭＣＦ−７細胞を２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ（１０μＭ）で処理し、細胞周期分布をフローサイトメトリーで分析した。タイムコースの研究によって、Ｇ2／Ｍ期における細胞の連続的な増加を示し、処理後１２時間で効果が明らかとなった（図６）。
【０２０４】
細胞周期のＧ1期における細胞の割合は、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥに１２時間または２４時間さらした後、未処理細胞の６６％から、それぞれ５０％および２３％に減少した。Ｇ2／Ｍ期の細胞の割合にも相当する増加があり、Ｓ期には細胞において検出できる変化がほとんどなかった。
【０２０５】
可逆性の研究では、再びＭＣＦ−７細胞を２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ（１０μＭ）に２４時間または４８時間さらしたところ、細胞周期のＧ2／Ｍ期の細胞の割合の著しい増加を示した（図７ａ−ｄ）。２４時間薬剤にさらした細胞について、その後薬剤を取り除き、細胞を無薬剤培地でさらに２４時間培養したところ、かなりの割合の細胞がＧ2／Ｍ期に引き止められたままであった（図７ｅ）。細胞周期の前Ｇ1、Ｇ1、ＳまたはＧ2／Ｍ期の細胞の定量（表１）によって、相互の、Ｇ1期の細胞の割合の減少およびＧ2／Ｍ期の増加が確かめられた。しかし、前Ｇ1期画分の細胞の割合のかなりの増加がまた検出された。前Ｇ1期画分の細胞がアポトーシスを起こしている細胞を示し得る。
【０２０６】
0005042411.tif 000022
（実施例３−ＴＵＮＥＬ分析）
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥのＭＣＦ−７細胞でアポトーシスを誘導する能力を、インサイチュ細胞死検出キット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｈｅｉｍ  ＵＫ  Ｌｔｄ．，Ｌｅｗｅｓ，Ｅａｓｔ  Ｓｕｓｓｅｘ，ＵＫ）を用いて、ＴＵＮＥＬ分析によって調査した。細胞を製造者の指示に従って固定し浸透化した。染色されたアポトーシスの細胞をフローサイトメトリーで定量した。
【０２０７】
（結果）
前Ｇ1期の画分の細胞はアポトーシスを起こす細胞を表し得るという可能性を、ＴＵＮＥＬ分析によるさらなる実験で確かめた（図８）。染色した後において、未処理細胞では蛍光標識した細胞の割合の増加を検出しなかった。対照的に、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ（１０μＭ）に４８時間さらした後、蛍光標識した細胞の割合のかなりの増加があった。蛍光標識した細胞は、細胞集団の約１０％を表した。この結果は２−ＭｅＯＥＭＡＴＥが、アポトーシスを起こす細胞を誘導し得ることを示している。
【０２０８】
（実施例４−インタクトなラットのＮＭＵによって誘導される哺乳動物の腫瘍の増殖に対する２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの効果）
哺乳動物の腫瘍の増殖に対する２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの効果をルードウィグラット（Ｈａｒｌａｎ  Ｏｌａｃ，Ｂｉｃｅｓｔｅｒ，ＵＫ）を用いた予備研究で調査し、腫瘍はＮＭＵの接種によって誘導した。腫瘍の発生を定期的に観察し、体積が０．５〜１．０ｃｍ3になった場合、動物にビヒクル（プロピレングリコール、２００μｌ／日、経口）、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ（２０ｍｇ／ｋｇ／日、経口）、あるいは２−ＭｅＯＥ１（２０ｍｇ／ｋｇ／日、経口）を１１日間毎日受容させた。腫瘍の長さおよび幅をカリパスで計測し、腫瘍の体積を記載されたように計算した（２１）。
【０２０９】
（結果）
インビボでの腫瘍の増殖を阻害する２−ＭｅＯＥ１および２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの能力を比較するために予備研究を行った。この研究のために哺乳動物の腫瘍の増殖をＮＭＵの接種によって開始させた。腫瘍の体積が０．５〜１．０ｃｍ3に達したとき、薬剤を経口投与した。ビヒクルを受容した動物のうちの２匹は、腫瘍体積が増加し続け（平均８２％）、これに対して３匹目の動物には腫瘍体積にほとんど変化は検出しなかった（図９）。２−ＭｅＯＥ１を受容した２匹の動物は、１１日間の研究にわたって、一匹目の動物は腫瘍体積に変化はなく、もう一匹に中程度（２５％）の減少が検出された。
【０２１０】
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥを受容した３匹の動物は、一匹目の動物は腫瘍体積が６日目まで増加し続けたが、その後少し（８％）減少した。対照的に２−ＭｅＯＥＭＡＴＥを受容した他の２匹の動物は、腫瘍は急激に後退し、１１日の最後には、かろうじて分かるぐらいであった。２−ＭｅＯＥＭＡＴＥを受容した２匹の動物の後退する腫瘍体積を、さらに３３日間観察し、この間、腫瘍の再増殖は検出されなかった。
【０２１１】
（実施例５−  ２−メトキシサルファメートまたは２−エチルエストロンサルファメートのＭＣＦ−７乳癌細胞の増殖に対する非可逆効果）
手順
（段階１）
ＭＣＦ−７乳癌細胞を多ウェル培養プレートに１ウェル当り１０5細胞の密度で播種した。次のように処理する際、細胞が付着して約３０％のコンフルエントになるまで増殖させた。
【０２１２】
コントロール−無処理
２−ＭｅＯＥｌ  ５μｍ
２−ＭｅＯＥｌ  １μｍ
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ  ５μｍ
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ  １μｍ
２−ＥｔＥｌ  ５μｍ
２−ＥｔＥｌ  １μｍ
２−ＥｔＥＭＡＴＥ  ５μｍ
２−ＥｔＥＭＡＴＥ  １μｍ
細胞を６日間、上記の薬剤を含んだ増殖培地で、３日ごとに培地／薬剤を変化させ、増殖させた。この期間の終わりには細胞の数をクールターセルカウンターを用いてカウントした。
【０２１３】
実験のこの最初の段階の結果を図１０に示す。コントロールと比較すると、２−メトキシエストロンまたは２−エチルエストロンは細胞の増殖にほとんど効果がなかった。対照的に、５μｍまたは１ｍの２−メトキシエストロンサルファメートで細胞を処理すると、細胞の数がそれぞれコントロールの細胞の数の４３％および５２％に減少した。２−エチルエストロンサルファメートを用いた細胞の処理後の対応する数値はそれぞれ３６％および５０％であった。
【０２１４】
（段階２）
上述の薬剤で６日間細胞を処理したのち、細胞を１ウェル当り１０4細胞の密度で再播種した。それ以上の処理は加えなかった。細胞は増殖培地の存在下でさらに６日間増殖させておいた。この期間の最後に細胞の数を再びカウントした。
【０２１５】
実験のこの部分の結果を図１１に示す。コントロールと比較して２−メトキシエストロンまたは２−エチルエストロンは細胞の数にほとんど効果が無く、これらの化合物はこれらの細胞に対する不可逆の増殖阻害の効果が無いことを示した。
【０２１６】
対照的に、２−メトキシエストロンサルファメートまたは２−エチルエストロンサルファメートのどちらで処理した細胞も、激しく細胞の増殖を制限された。これらの結果は、一旦細胞が２−メトキシエストロンサルファメートまたは２−エチルエストロンサルファメートにさらされると、それらの増殖が非可逆的に損なわれることを示している。
【０２１７】
（実施例６−非ヒドロカルビル基／オキシヒドロカルビル基で置換したサルファメートのＭＣＦ−７乳癌細胞の増殖に与える効果）
手順
上に記載した段階１および段階２をコントロール−無処理、ＥＭＡＴＥ２０μＭおよびＥＭＡＴＥ５μＭを用いて繰り返した。
【０２１８】
段階１および段階２の結果は：
段階１    ＥＭＡＴＥ２０μＭ＝コントロールの１１９％
ＥＭＡＴＥ５μＭ＝コントロールの１３９％
段階２    ＥＭＡＴＥ２０μＭ＝コントロールの１０３％
ＥＭＡＴＥ５μＭ＝コントロールの９８％
これらのデータは、細胞周期の抑制および／または防止および／または阻止を達成する本発明の化合物のヒドロカルビル基／オキシヒドロカルビル基での置換の重要性を示している。
【０２１９】
（実施例７−細胞周期およびアポトーシス分析）
ＭＣＦ７、ＣＡＬ５１、ＣＡＭＡ１およびＺＲ−７５−１の乳癌由来の細胞株をＡＴＣＣ（ＭＣＦ７、ＣＡＭＡ１、ＺＲ−７５−１）またはＤｕｔｒｉｌｌａｕｘ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣＡＬ５１）（２２）から入手し、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清および抗生物質を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で維持した。
【０２２０】
ＤＮＡ含有量を、ヨウ化プロピジウムで染色した細胞のフローサイトメトリー分析およびＴｄＴ媒介のｄＵＴＰニックエンドラベリング（ＴＵＮＥＬ）によって、それぞれ記載（２０）されたように決定した。細胞周期のＧ２／Ｍ期の細胞の割合を、２Ｎ  ＤＮＡ含有量を有する細胞の４Ｎ  ＤＮＡ含有量を有する細胞に対する割合として計算した。前Ｇ１期のＤＮＡ含有量の細胞の割合を総細胞のパーセンテージとして計算した。
【０２２１】
有糸分裂の細胞の割合を決定するために、薬剤処理の細胞をトリプシン処理で回収し、サイトスピンで調製した。細胞を氷冷したメタノールで５分間固定し、空気乾燥し、ＤＮＡをヨウ化プロピジウム（ＰＩ）（１０％（ｖ／ｖ）新生仔ウシ血清および０．０５％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の０．１  ｍｇ／ｍｌ）で染色した。細胞をＬＳＭ５１０共焦点システム（Ｚｅｉｓｓ，Ｊｅｎａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を装備したＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ  １００Ｍ顕微鏡を使用し、共焦点顕微鏡法で分析した。
【０２２２】
本発明者らは、乳癌細胞株のサルファモイル化したエストロンの増殖抑制効果に対する異なった感受性が、細胞周期の阻止および／または細胞死の程度／時期の差異に関係しているのかどうかを調べた。これらの研究は２−ＥｔＥＭＡＴＥに焦点を絞っている。なぜなら本発明者らは、たやすく比較的大量の本化合物を合成できるからである。本発明者らはまずヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色した細胞のフローサイトメトリー分析を用いて、ＭＣＦ７、ＺＲ−７５−１、ＣＡＬ５１およびＣＡＭＡ１の細胞のＤＮＡ含有量に対する２−ＥｔＥＭＡＴＥの効果を調査した（図１３および表２）。細胞を５００ｎＭの２−ＥｔＥＭＡＴＥで処理した。なぜならこれはそれぞれの細胞株でかなりの増殖抑制を与える最も低い用量だからである（図１４）。ＭＣＦ７細胞は２４時間以内に細胞周期のＧ２／Ｍ期に蓄積し、細胞は４８時間後に最大数が阻止する（約６０％の細胞）。７２時間および９６時間で細胞死を示す前Ｇ１期のＤＮＡ含有量の細胞におけるわずかな増加があったが、この阻止を実験の期間中維持した。Ｇ２／Ｍ期の阻止がこれらの細胞で遅れたけれども（７２時間後のＧ２／Ｍ期の６０％の細胞）、同様の結果がＺＲ−７５−１細胞で得られた。対照的に、マイクロタイタープレートアッセイ（図１４）で、ＭＣＦ７細胞あるいはＺＲ−７５−１細胞よりもっと感受性の高いＣＡＬ５１およびＣＡＭＡ１細胞はもっと迅速なＧ２／Ｍ期の阻止を経験した（約６０％の細胞が２４時間以内にＧ２／Ｍ期に存在した）。さらに２−ＥｔＥＭＡＴＥは４８時間以内にかなりの細胞死を誘導し、約半数の細胞が９６時間後に死んだ（表２）。
【０２２３】
（表２．乳癌細胞株のＤＮＡ内容に対する２−ＥｔＥＭＡＴＥの効果。）２−ＥｔＥＭＡＴＥ（５００ｎＭ）に９６時間までさらしたＭＣＦ７、ＺＲ−７５−１、ＣＡＬ５１およびＣＡＭＡ１細胞の細胞周期パラメーター。Ｇ１／ＳあるいはＧ２／Ｍ期の細胞の割合を２ＮのＤＮＡ含有量を有する細胞の合計の４ＮのＤＮＡ含有量を有する細胞の合計のパーセンテージとして表す。前Ｇ１期のＤＮＡ含有量の細胞の割合を細胞の合計のパーセントとして表す。未処理細胞は９６時間である。
【０２２４】
【表２】
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フローサイトメトリー分析は、サルファモイル化エストロン誘導体で処理した細胞が、細胞周期のＧ２／Ｍ期に阻止することを示した。２−ＥｔＥＭＡＴＥまたは２−ＭｅＯＥＭＡＴＥで処理した細胞はしばしば特徴的な「丸い」形態を持ち（参考文献２０およびデータは示さない）、細胞が実際に有糸分裂で阻止することを示している。細胞が間期つまり有糸分裂期であるのか否かを決定するために、本発明者らは薬剤処理したＭＣＦ７細胞をＰＩで染色し染色体を視覚化した。予備実験で本発明者らは、「丸い」細胞は蛍光染色実験に使用したコラーゲン処理したガラススライドに固定しないことを発見し、そのため本発明者らは、トリプシン処理によって全ての細胞を回収し、染色の前にサイトスピンで調製した。コントロールＭＣＦ７細胞の大多数は濃縮されていない染色体を持つ間期の細胞に特徴的な、均一に染色された核を持った（図１５および表３）。対照的に、２−ＥｔＥＭＡＴＥまたは２−ＭｅＯＥＭＡＴＥで処理した、かなりの割合の細胞が有糸分裂に特徴づけられた濃縮された染色体を示した。そのため、サルファモイル化エストロン誘導体は有糸分裂の阻止を誘導する。ＦＡＣｓアッセイの効果の欠如と一致して（図１３）、非サルファモイル化エストロン誘導体は有糸分裂細胞の数を増加させなかった。これらの実験でサイトスピンを使うことが必要であることから、サルファモイル化エストロン誘導体で処理した細胞の染色体の構造を決定するのは難しい。しかし、染色体は十分に濃縮されているようであり、細胞が前中期／中期に達していることが示唆された。
【０２２５】
（表３．エストロン誘導体のＭＣＦ７細胞の有糸分裂に対する効果。）ＭＣＦ７細胞を指示された化合物で２４時間処理した。細胞はトリプシン処理で回収し、サイトスピンで調製した。ＤＮＡをＰＩで染色し、有糸分裂の細胞（すなわち、濃縮した染色体を有する）を総細胞のパーセンテージとして決定した。
【０２２６】
薬剤                              有糸分裂細胞
コントロール                      ４％
２−ＥｔＥＭＡＴＥ、５μＭ        ４９％
２−ＥｔＥＭＡＴＥ、５００ｎＭ    ２９％
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ、５μＭ      ３８％
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ、５００ｎＭ  ２６％
２−ＥｔＥｌ、５μＭ              ６％
２−ＥｔＥｌ、５００ｎＭ          ４％
本発明者らは、ＴＵＮＥＬアッセイを用いて、ＰＩ染色した細胞のフローサイトメトリーによって検出された細胞死がアポトーシスに起因したことを確かめた。２−ＥｔＥＭＡＴＥにさらした後（５００ｎＭ、７２時間）、アポトーシスを起こすＣＡＬ５１およびＣＡＭＡ１細胞の割合のかなりの増加があった（それぞれ６０％および３７％のＴＵＮＥＬ陽性細胞）（図１６）。対照的に、２−ＥｔＥＭＡＴＥをこの濃度で処理したＭＣＦ７あるいはＺＲ−７５−１細胞（それぞれ７％および１０％）のＴＵＮＥＬ陽性のわずかな増加のみがあった。
【０２２７】
まとめると、これらの分析は、サルファモイル化エストロンで短期間の増殖を抑制されることに対する乳癌細胞株の感受性の変化は細胞周期およびアポトーシスに対する効果の差異を反映していることを示している。２−ＥｔＥＭＡＴＥは全ての細胞株においてＧ２／Ｍの阻止を誘導するが、これは、ＥＲ陽性のＭＣＦ７およびＺＲ−７５−１細胞よりも比較的感受性のＥＲ陰性のＣＡＬ５１およびＣＡＭＡ１細胞で、より迅速に起こった。さらに、２−ＥｔＥＭＡＴＥは、ＭＣＦ７およびＺＲ−７５−１細胞よりも、ＣＡＬ５１およびＣＡＭＡ１細胞で、より能力のあるアポトーシスの誘導剤であった。
【０２２８】
（考察）
本発明者らの結果は、２−メトキシエストロゲンあるいはそれらの合成アナログが癌治療の薬物の新しい種類であると示している証明（２３、２４）にさらに重みを加える。本化合物、例えば２−ＭｅＯＥＭＡＴＥは、以前に２−ＭｅＯＥ２に関して発見されたように、ＭＣＦ−７およびＭＤＡ−ＭＤ−２３１の乳癌細胞の形態および成長に目立った効果を有した。胸の腫瘍に由来する線維芽細胞はまた、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥに応答して同様の丸みを示したが、これらの細胞で形態的な変化を誘導するには、より高い濃度が必要であった。
【０２２９】
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥがＥＲ＋およびＥＲ−の乳癌細胞の成長に与える目立った効果が、例えば２−メトキシエストロゲンサルファメートなどの本化合物が、ホルモン依存およびホルモン独立の胸腫瘍の両方に対して活性があるべきと確認している。１μＭでは２−ＭｅＯＥ１はＭＣＦ−７細胞の増殖に対してほとんど効果を持たなかった。これに対し、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥは、この濃度では増殖を５２％抑制した。インビトロアッセイでのサルファメート基の２−ＭｅＯＥ１への付加によって与えられる増加した能力の理由は、たやすく明らかにはならない。エストロゲンサルファメートを用いるインビボでの研究から、これらの化合物がゆっくりとｒｂｃより放出され、ステロイドの血中濃度が延長して増加することが公知である（１７）。他のインビボの研究は、ＥＭＡＴＥが単一量あるいは複数量の後、長い期間、ステロイドスルファターゼを不活性化することができることを示した（２５）。このようにＥＭＡＴＥは細胞性タンパク質に結合し、そこからゆっくりと放出されるようである。このことは、細胞の増殖を減少できる２−ＭｅＯＥ１の能力と比較して、インビトロのサルファメートの増強された能力の説明となり得る。
【０２３０】
ＤＮＡ分析から、本化合物は、例えば２−ＭｅＯＥ２およびタキソールのように２−ＭｅＯＥＭＡＴＥは、細胞周期の阻止、特に細胞周期のＧ2／Ｍ期の細胞の阻止を誘導することが明らかである（９，２６，２７）。しかし、２−ＭｅＯＥ２については、洗浄実験はかなりの割合の細胞が薬剤の除去後２４時間までに細胞周期のＧ1／Ｓ期に再び入ったことを明らかにし（１３）、その実験で細胞は最初の期間薬物にさらした後、無薬物培地で培養し続けた。対照的に本発明の化合物（２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ）では、細胞は薬物の除去後少なくとも２４時間の間Ｇ2／Ｍ期に阻止したままであった。この発見は、本化合物は細胞タンパク質に結合し得るというさらなる証拠を提供する。
【０２３１】
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥは、全く新しい抗増殖効果を持っているが、有力なステロイドスルファターゼ抑制剤のままである（１８）。
【０２３２】
ＭＣＦ−７細胞をＥＭＡＴＥにさらし、次いで薬物を除くために過度に洗浄するという同様の実験は、ステロイドスルファターゼがほとんど完全に不活性の状態であることを示した（２８）。
【０２３３】
ＭＣＦ−７細胞の成長を抑制するおよび、細胞が丸くなり放出されるのを誘導する２−ＭｅＯＥ２の能力は以前にこれらの細胞でのアポトーシスを誘導する能力の結果生じることが示されている（８，９）。本調査では前Ｇ1期の画分の細胞のかなりの増加が、本化合物、すなわち２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ、にさらされた後に検出された。この画分中の細胞はアポトーシスを起こした細胞を示していると考えられる。ＴＵＮＥＬ分析は２−ＭｅＯＥＭＡＴＥが細胞の集団がアポトーシスを起こすことを誘導することを確かめた。２−ＭｅＯＥ２および、タキソールのような微小管の安定性を変化させる他の薬剤と同様に、本化合物（２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ）は腫瘍タンパク質のＢｃｌ−２のリン酸化を増加させることによって、おそらくアポトーシスを誘導する（２７−２９）。Ｂｃｌ−２は抗アポトーシスであるタンパク質のファミリーに属しており、それらの能力は、アポトーシスがこれらのタンパク質をＢａｘのようなアポトーシス推進タンパク質と二量体化させること、およびアポトーシス推進タンパク質の不活性化を行なうことを抑制する（３０，３１）。Ｂｃｌ−２のリン酸化はＢａｘとの二量体になる能力を阻害し、アポトーシスの誘導を可能にする。Ｂｃｌ−２のリン酸化は細胞周期のＧ2／Ｍ期の細胞の阻止期間に起こることが明示されている（３０）。予備研究では、２−ＭｅＯＥ２は白血病細胞でのＢｃｌ−２のリン酸化を誘導することが分かっている（２９）。このことは、２−メトキシエストロゲンが、微小管の損害を起こすタキソールおよび他の薬剤の作用と同様の作用メカニズムを有することを示している。
【０２３４】
本化合物、特に２−ＭｅＯＥＭＡＴＥがインビトロ細胞増殖に与える目立った効果が、予備的なインビボ研究へと導いた。インビボでは、２−ＭｅＯＥ１を投与したある動物のＮＭＵ誘導性の哺乳動物の腫瘍は、穏やかな（２５％）後退を示した。対照的に、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥを投与した動物の２／３の腫瘍は研究１１日後の終わりまでにほぼ完全に後退した。２−ＭｅＯＥ１と比較した２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの増幅された効力は、スルファモイル化エストロゲンが親化合物より効力があるというインビトロの研究からの発見を支持する。
【０２３５】
本化合物（２−メトキシエストロゲン）を用いた、ほかのインビボ腫瘍の研究もまた、奨励となる結果を生じたが、本研究で使用された量よりもはるかに高い量においてである。ＣＨ３マウスに１日おきに２−ＭｅＯＥ２（１００ｍｇ／ｋｇ、経口）を投与したとき、皮下に接種したＭｅｔｈＡサルコーマおよびＢ１６黒色腫の腫瘍の成長をそれぞれ５７％および８３％とかなり減少させた（１０）。本研究におけるように、この反応は比較的短い時間、１２日という期間で達成された。これらの腫瘍の成長を抑制することに加えて、腫瘍の新生血管形成が目立って減少した。このことは、腫瘍増殖の阻害における２−メトキシエストロゲンの重要な作用を提唱する。２−ＭｅＯＥ２（７５ｍｇ／ｋｇ／日  ２９日間）の経口投与もまた、ＳＣＩＤマウスへのＥＲ−ＭＤＡ−ＭＢ−４３５乳癌細胞の接種によって生じる腫瘍の成長を抑制した（１１）。未処理のコントロールの腫瘍と比較して、腫瘍の体積は６０％減少した。この比較的高い薬物使用量で毒性の副作用は検出されなかった。これらの動物研究に加えて、２−ＭｅＯＥ２は現在Ｉ／ＩＩ期の試行を行なっているが、この試行の結果の詳細はまだ利用可能ではない（４２、４３）。
【０２３６】
インビボでの本研究では、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥを使用したが、インビトロ調査では２−ＭｅＯＥ２が２−ＭｅＯＥ１よりも能力があると分かった（１０）。しかしエストラジオールサルファメートでの実験から、胃の移行期に１７−ヒドロキシル基が酸化され、ステロイドの還元形態がｒｂｃから放出されることが公知である（１７）。そのため、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの還元形態の経口投与から得られる利点は何も無いように思われる。
【０２３７】
ほとんどの癌は最終的にホルモンか化学療法のいずれに対して抵抗性となるため、異なった細胞の標的に作用する薬物の開発は新しい癌療法の開発へのかなりの希望をもたらす。このタキソールの療法的用法は重要な発達であるが、その溶解度および毒性が長期使用を制限してしまうという問題がある。増強された効果、バイオアベイラビリティ、作用期間をもつ２−メトキシエストロゲンの形態としての２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの同定が、この薬剤が癌療法にとってのかなりの能力を持っていることを示唆している。
【０２３８】
従って、要約すると、本発明は癌および、特に、乳癌の治療の際の使用に適した組成物および化合物を提供する。
【０２３９】
特に、ある局面では、本発明は白血病および例えば胸、子宮内膜、前立腺、卵巣および膵臓の腫瘍などの固形腫瘍を含む癌の成長の阻害の問題に取り組む。
【０２４０】
本発明は、エストロゲンに関連した条件に加え、ホルモンの条件を処置することに関することもまた考えられる。よって本発明はまたホルモン活性に影響を与え得、そして免疫応答に影響を与え得る組成物を提供しており、ここでは、この組成物は本発明の組成物である。
【０２４１】
本発明の化合物／組成物は他の重要な医療とかかわりを有し得ることもまた理解される。
【０２４２】
例えば、本発明の組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０５６３５に列挙されている障害の処置に有用であり得る。参照を容易にするために、列挙の一部をここに提示する：癌、炎症あるいは炎症性疾患、皮膚病学的疾患、発熱、心臓血管作用、出血、血液凝固および急性相反応、悪液質、食欲不振、急性感染、ＨＩＶ感染、ショック状態、対宿主性移植片反応、自己免疫疾患、再灌流障害、髄膜炎、片頭痛およびアスピリン依存の抗血栓症；腫瘍の増殖、侵襲および拡散、新脈管形成、転移、悪性の、腹水、および悪性の胸膜の滲出；大脳の虚血、虚血性心臓疾患、変形性関節症、慢性関節リウマチ、骨粗しょう症、喘息、多発硬化症、神経変性、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、発作、脈管炎、クローン病および潰瘍性大腸炎；歯周炎、歯肉炎、乾癬、アトピー性皮膚炎、慢性潰瘍、水疱、角膜潰瘍化、網膜症、ならびに手術傷治療；鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、アナフィラキシー；再狭窄、うっ血性心臓不全、子宮内膜症、アテローム性動脈硬化症または内部硬化。
【０２４３】
さらに、あるいは代替として、本発明の組成物はＷＯ−Ａ−９８／０７８５９に列挙されている障害の処置に有用であり得る。参照を容易にするためにここで列挙の一部を提示する：サイトカインおよび細胞の増加／分化活性；免疫抑制薬あるいは免疫刺激剤活性（例えば、ヒト免疫欠損ウイルスの感染を含む免疫欠損の処置；リンパ球増殖の調節；癌および多くの自己免疫疾患の処置、および移植の拒絶の予防あるいは腫瘍の免疫の誘導のため）；造血の調節、例えば、脊髄あるいはリンパ球の疾患の処置；骨、軟骨、腱、靭帯および神経組織、例えば、創傷の治癒、やけど、潰瘍、歯周病および神経変性の処置のため；小胞刺激ホルモンの抑制および活性化（受精能の調節）；化学走性活性／ケモキネシス活性（例えば、特定の細胞型を傷害や感染の部位に動員するため）；うっ血および血栓崩壊の活性（例えば、血友病および発作の処置のため）；抗炎症性活性（例えば、敗血症性ショックあるいはクローン病の処置のため）；抗菌剤として；例えば、代謝または動作のモジュレーターとして；鎮痛薬として；特定の欠損疾患の処置；例えば、ヒトあるいは獣医学における乾癬の治療のとき。
【０２４４】
さらに、あるいは代替として、本発明の組成物はＷＯ−Ａ−９８／０９９８５に列挙されている障害の処置に有用であり得る。参照を容易にするためにここでリストの一部を提示する：マクロファージ抑制活性および／またはＴ細胞抑制活性、従って、抗炎症活性；抗免疫活性、すなわち、炎症に関連しない反応を含む、細胞性および／または体液性の免疫反応に対する抑制効果；マクロファージおよびＴ細胞が、細胞外マトリックス成分およびフィブロネクチンに接着する能力、ならびにＴ細胞でのアップレギュレートされたｆａｓレセプターの発現の抑制；以下を含む不必要な免疫反応および炎症の阻害：関節炎（慢性関節リウマチを含む）、過敏症、アレルギー反応、喘息、全身的紅斑性狼瘡、コラーゲン病および他の自己免疫疾患に関連する炎症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化、アテローム硬化性心臓病、再灌流障害、心停止、心筋梗塞形成、血管炎症不全、呼吸困難症候群または他の心肺性疾患に関連する炎症、ペプシン潰瘍、ペプシン性大腸炎および他の胃腸道の疾患、ペプシン線維症、肝硬変もしくは他の肝臓疾患、甲状腺炎もしくは他の腺病、糸球体腎炎もしくは他の腎臓のおよび泌尿器科学の疾患、耳炎もしくは他の耳鼻咽頭科学の疾患、皮膚炎もしくは他の皮膚の疾患、歯周病もしくは他の歯の疾患、精巣炎もしくは精巣精巣上体炎、不妊症、精巣の外傷もしくは他の免疫関連の精巣病、胎盤機能不全、胎盤不全、習慣的中絶、子かん、子かん前および他の免疫および／もしくは免疫関連の婦人科学の病気、後部ブドウ膜炎、中間部ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、結膜炎、脈絡網膜炎、ブドウ膜網膜炎、視覚神経炎、眼内炎症（例えば、網膜炎もしくは形斑状水腫、交感神経の眼炎、強膜炎、色素網膜炎、変性底病の免疫および炎症の構成物、眼性外傷の炎症構成物、感染によって起こされる眼性炎症、増殖性硝子体網膜症、急性虚血性眼神経障害、過度の瘢痕（例えば、緑内障濾過操作後、目の移植片に対する免疫反応および／または炎症反応）ならびに他の免疫および炎症に関連する眼病）に関連する炎症、中枢神経系（ＣＮＳ）または任意の他の器官の両方で、免疫および／または炎症の抑制が有益である、自己免疫疾患あるいは状態あるいは障害に関連した炎症、パーキンソン病、パーキンソン病の治療の合併症および／または副作用、ＡＩＤＳ関連痴呆複合症、ＨＩＶ−関連脳症、デービック病、シデンハム舞踏病、アルツハイマー病および他の変性疾患、ＣＮＳの状態または障害、ストークスの炎症構成物、ポリオ後症候群、精神的医学的障害の免疫および炎症の構成物、脊髄炎、脳炎、亜急性硬化性全脳炎、脳脊髄炎、急性神経障害、亜急性神経障害、慢性神経障害、ギヤン−バレー症候群、シデンハム舞踏病、重症筋無力症、偽腫瘍大脳、ダウン症候群、ハンティングトン病、筋萎縮外側硬化、ＣＮＳ圧縮またはＣＮＳ外傷もしくはＣＮＳ感染の炎症要素、筋萎縮およびジストロフィーの炎症構成物、ならびに免疫および炎症の関連の疾患、中枢神経系および末梢神経系の状態または障害、外傷後の炎症、敗血性ショック、感染性疾患、手術の炎症性合併症または副作用、骨髄移植または他の移植の合併症および／または副作用、遺伝子治療の炎症ならびに／または免疫の合併症および副作用、例えば、ウイルスキャリアーでの感染による、あるいはエイズに関連した炎症、体液性および／または細胞性の免疫応答の抑圧もしくは抑制、単核細胞またはリンパ球の量を減らすことによる、単核細胞または白血球の増殖性疾患、例えば、白血病の治療または改善、天然または人工の細胞、組織および器官（例えば、角膜、骨髄、器官、レンズ、ペースメーカー、天然または人工の皮膚組織）の移植の際の、移植片拒絶の予防および／または処置のためのもの。
【０２４５】
（プロトコルＩ）
（非可逆の抑制）
（手順）
（段階１）
ＭＣＦ−７乳癌細胞を、多ウェル培養プレートに１ウェル当り１０5細胞の密度で播種した。以下のように処理する際、細胞を付着して約３０％のコンフルエントになるまで増殖した。
【０２４６】
コントロール−未処理
目的の化合物（ＣＯＩ）  ２０μＭ
３日ごとに培地／ＣＯＩを換え、細胞をＣＯＩを含む増殖培地で６日間増殖した。この期間の最後には細胞の数をコールタル細胞カウンターを用いて計数した。
【０２４７】
（段階２）
ＣＯＩで６日間細胞を処理した後、細胞を１ウェル当り１０4細胞の密度で再播種した。それ以上の処理は加えなかった。細胞は増殖培地の存在下でさらに６日間増殖させ続けた。この期間の最後に細胞の数を再び計数した。
【０２４８】
上記明細書に記載した、すべての出版物および特許は本明細書中に参考として援用される。
【０２４９】
本発明の様々な改変および変化は、発明の範囲および意図から逸脱することなく、当業者にとって明らかである。本発明を特定の好ましい実施形態に関して、記載したが、特許請求された本発明は過度にそのような特定の実施形態に制限されるべきではないと理解されるべきである。実際に、化学、生物学または関連分野の当業者にとって明らかな、本発明を実施するために記載した様式の様々な改変は、上記特許請求の範囲以内であることが意図される。
【０２５０】
（参考文献）
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４．Ｂｒａｄｌｏｗ，Ｈ．Ｌ．，Ｓｅｐｋｏｖｉｃ，Ｄ．Ｗ．，Ｔｅｌａｎｇ，Ｎ．Ｔ．，およびＯｓｂｏｒｎｅ，Ｍ．Ｐ．Ｉｎｄｏｌｅ−３−ｃａｒｂｉｎｏｌ：ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７２８：１８０−２００，１９９５．
５．Ｂｒａｄｌｏｗ，Ｈ．Ｌ．，Ｄａｖｉｓ，Ｄ．Ｌ．，Ｌｉｎ，Ｇ．，Ｓｅｐｋｏｖｉｃ，Ｄ．Ｗ．，およびＴｉｗａｒｉ，Ｒ．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒａｔｉｏ  ｏｆ  １６ａ／２−ｈｙｄｒｏｘｙｏｅｓｔｒｏｎｅ：  ａ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｉｓｋ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．，１０３（Ｓｕｐｐｌ．）：１４７−１５０，１９９５．
６．Ｂｒａｄｌｏｗ，Ｈ．Ｌ．，Ｔｅｌａｎｇ，Ｎ．Ｔ．，Ｓｅｐｋｏｖｉｃ，Ｄ．Ｗ．，およびＯｓｂｏｒｎｅ，Ｍ．Ｐ．２−Ｈｙｄｒｏｘｙｏｅｓｔｒｏｎｅ：ｔｈｅ’ｇｏｏｄ’ｅｓｔｒｏｇｅｎ．Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，１５０：Ｓ２５９−Ｓ２６５，１９９６．
７．Ｚｈｕ，Ｂ．Ｔ．，およびＣｏｎｎｅｙ，Ａ．Ｈ．Ｉｓ  ２−ｍｅｔｈｏｘｙｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍａｍｍａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５８：２２６９−２２７７，１９９８．
８．Ｓｅｅｇｅｒｓ，Ｊ．Ｃ．，Ａｖｅｌｉｎｇ，Ｍ．−Ｌ．，Ｖａｎ  Ａｓｗｅｇｅｎ，Ｃ．Ｈ．，Ｃｒｏｓｓ，Ｍ．，Ｋｏｃｈ，Ｆ．，およびＪｏｕｂｅｒｔ．Ｗ．Ｓ．Ｔｈｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ−１７β，ｃａｔｅｃｈｏｌｏｅｓｔｒａｄｉｏｌｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｘｙｏｅｓｔｒａｄｉｏｌｓ  ｏｎ  ｄｉｖｉｄｉｎｇ  ＭＣＦ−７  ａｎｄ  ＨｅＬａ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３２：７９７−８０９，１９８９．
９．Ｓｅｅｇｅｒｓ，Ｊ．Ｃ．，Ｌｏｔｔｅｒｉｎｇ，Ｍ．Ｌ．，Ｇｒｏｂｌｅｒ，Ｃ．Ｊ．，Ｖａｎ  Ｐａｐｅｎｄｏｒｐ，Ｄ．Ｈ．，Ｈａｂｂｅｒｓｅｔｔ，Ｒ．Ｃ．，Ｓｈｏｕ，Ｙ．，およびＬｅｈｎｅｒｔ，Ｂ．Ｅ．Ｔｈｅ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ，２−ｍｅｔｈｏｘｙｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｐ５３  ｌｅｖｅｌｓ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．，６２：２５３−２６７，１９９７．
１０．Ｆｏｔｓｉｓ，Ｔ．，Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｐｅｐｐｅｒ，Ｍ．Ｓ．，Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ，Ｈ．，Ｍｏｎｔｅｓａｎｏ，Ｒ．，Ｎａｗｒｏｔｈ，Ｐ．Ｐ．，およびＳｃｈｗｅｉｇｅｒｅｒ，Ｌ．Ｔｈｅ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｏｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ２−ｍｅｔｈｏｘｙｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｕｍｏｕｒ  ｇｒｏｗｔｈ．Ｎａｔｕｒｅ，３６８：２３７−２３９，１９９４．
１１．Ｋｌａｕｂｅｒ，Ｎ．，Ｐａｒａｎｇｉ，Ｓ．，Ｆｌｙｎｎ，Ｅ．，Ｈａｍｅｌ，Ｅ．，およびＤ’Ａｍａｔｏ，Ｒ．Ｊ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ２−ｍｅｔｈｏｘｙｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ａｎｄ  ｔａｘｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５７：８１−８６，１９９７．
１２．Ｄ’Ａｍａｔｏ，Ｒ．Ｊ．，Ｌｉｎ，Ｃ．Ｍ．，Ｆｌｙｎｎ，Ｅ．，Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｊ．，およびＨａｍｅｌ，Ｅ．２−Ｍｅｔｈｏｘｙｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ，ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ，ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ａｔ  ｔｈｅ  ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ  ｓｉｔｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：３９６４−３９６８，１９９４．ＡＮＤ  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．５，５０４，０７４．
１３．Ａｔｔａｌｌａ，Ｈ．，Ｍａｋｅｌａ，Ｔ．Ｐ．，Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ，Ｈ．，およびＡｎｄｅｒｓｓｏｎ，Ｌ．Ｃ．２−Ｍｅｔｈｏｘｙｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ａｒｒｅｓｔｓ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｍｉｔｏｓｉｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｄｅｐｏｌｙｍｅｒｉｓｉｎｇ  ｔｕｂｕｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，２２８：４６７−４７３，１９９６．
１４．Ｈｏｗａｒｔｈ，Ｎ．Ｍ．，Ｐｕｒｏｈｉｔ，Ａ．，Ｒｅｅｄ，Ｍ．Ｊ．，およびＰｏｔｔｅｒ，Ｂ．Ｖ．Ｌ．Ｅｓｔｒｏｎｅ  ｓｕｌｐｈａｍａｔｅｓ：ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｏｅｓｔｒｏｎｅ  ｓｕｌｐｈａｔａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３７：２１９−２２１，１９９４．
１５．Ｐｕｒｏｈｉｔ，Ａ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｇ．Ｊ．，Ｈｏｗａｒｔｈ，Ｎ．Ｍ．，Ｐｏｔｔｅｒ，Ｂ．Ｖ．Ｌ．，およびＲｅｅｄ，Ｍ．Ｊ．Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｓｕｌｐｈａｔａｓｅ  ｂｙ  ａｎ  ａｃｔｉｖｅ  ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｏｅｓｔｒｏｎｅ−３−Ｏ−ｓｕｌｐｈａｍａｔｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３４：１１５０８−１１５１４，１９９５．
１６．Ｅｌｇｅｒ，Ｗ．，Ｓｃｈｗａｒｚ，Ｓ．，Ｈｅｄｄｅｎ，Ａ．，Ｒｅｄｄｅｒｓｅｎ，Ｇ．，およびＳｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｂ．Ｓｕｌｐｈａｍａｔｅｓ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ  ａｓ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ａｔ  ｏｒａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ，Ｂｉｏｌ．，５５：３９５−４０３，１９９５．
１７．Ｅｌｇｅｒ，Ｗ．，Ｐａｌｍｅ，Ｈ．−Ｊ．，およびＳｃｈｗａｒｚ，Ｓ．  Ｎｏｖｅｌ  ｏｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｐｈａｍａｔｅｓ：ａ  ｎｅｗ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｏｒａｌ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，７：５７５−５８９，１９９８．
１８．Ｐｕｒｏｈｉｔ，Ａ．，Ｖｅｒｎｏｎ，Ｋ．Ａ．，Ｗａｇｅｎａａｒ−Ｈｕｍｅｌｉｎｃｋ，Ａ．Ｅ．，Ｗｏｏ，Ｌ．Ｗ．Ｌ．，Ｈｅｊａｚ，Ｈ．Ａ．Ｍ．，Ｐｏｔｔｅｒ，Ｂ．Ｖ．Ｌ．，およびＲｅｅｄ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａ−ｒｉｎｇ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｏｆ  ｏｅｓｔｒｏｎｅ−３−Ｏ−ｓｕｌｐｈａｍａｔｅ  ａｓ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｓｕｌｐｈａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．，６４：２６９−２７５，１９９８．
１９．Ｐｕｒｏｈｉｔ，Ａ．，Ｈｅｊａｚ．，Ｈ．Ａ．Ｍ．，Ｗｏｏ，Ｌ．Ｗ．Ｌ．，ＶａｎＳｔｒｉｅｎ，Ａ．Ｅ．，Ｐｏｔｔｅｒ，Ｂ．Ｖ．Ｌ．，およびＲｅｅｄ，Ｍ．Ｊ．Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｓｕｌｐｈａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．（Ｉｎ  Ｐｒｅｓｓ）．
２０．Ｗｏｏ，Ｌ．Ｗ．Ｌ．，Ｐｕｒｏｈｉｔ，Ａ．，Ｒｅｅｄ，Ｍ．Ｊ．，およびＰｏｔｔｅｒ，Ｂ．Ｖ．Ｌ．Ａｃｔｉｖｅ  ｓｉｔｅ  ｄｉｒｅｃｔｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｅｓｔｒｏｎｅ  ｓｕｌｐｈａｔａｓｅ  ｂｙ  ｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ｃｏｕｍａｒｉｎ  ｓｕｌｐｈａｍａｔｅｓ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３９：１３４９−１３５１，１９９６．
２１．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ，Ｊ．Ｒ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．Ｃ．，Ｓｉｎｇｈ，Ｄ．，Ｇｏｓｓ，Ｐ．Ｅ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｄ．，およびＣｏｏｍｂｅｓ，Ｒ．Ｃ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ｎｉｔｒｏｓｏｍｅｔｈｙｌｕｒｅａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｒａｔ  ｍａｍｍａｒｙ  ｔｕｍｏｒ  ｔｏ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｗｉｔｈ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４６：４８６２−４８６５，１９８６．
２２．Ｖｅｒａ，Ｊ．Ｃ．，Ｒｅｙｅｓ，Ａ．Ｍ．，Ｃａｒｃａｍｏ，Ｊ．Ｇ．，Ｖｅｌａｓｑｕｅｚ，Ｆ．Ｖ．，Ｒｉｖａｓ，Ｃ．Ｉ．，Ｚｈａｎｇ，Ｒ．Ｈ．，Ｓｔｒｏｂｅｌ，Ｐ．，Ｉｒｉｂａｒｒｅｎ，Ｒ．，Ｓｃｈｅｒ，Ｈ．Ｉ．，Ｓｌｅｂｅ，Ｊ．Ｃ．，およびＧｏｌｄｅ，Ｄ．Ｗ．Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ  ｉｓ  ａ  ｎａｔｕｒａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｈｅｘｏｓｅ  ａｎｄ  ｄｅｈｙｄｒｏａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ，ＧＬＵＴ１．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１：８７１９−８７２４，１９９６．
２３．Ｃｕｓｈｍａｎ，Ｍ．，Ｈｅ，Ｈ．−Ｍ．，Ｋａｔｚｅｎｅｌｌｅｎｂｏｇｅｎ，Ｊ．Ａ．，Ｌｉｎ，Ｃ．Ｍ．，およびＨａｍｅｌ，Ｅ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｔｉｔｕｂｕｌｉｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｏｆ２−ｍｅｔｈｏｘｙｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ，ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ｏｆ  ｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｓａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３８：２０４１−２０４９，１９９５．
２４．Ｃｕｓｈｍａｎ，Ｍ．，Ｈｅ，Ｈ．−Ｍ．，Ｋａｔｚｅｎｅｌｌｅｎｂｏｇｅｎ，Ｊ．Ａ．，Ｖａｒｍａ，Ｒ．Ｋ．，Ｈａｍｅｌ，Ｅ．，Ｌｉｎ，Ｃ．Ｍ．，Ｒａｍ，Ｓ．，およびＳａｃｈｄｅｖａ，Ｙ．Ｐ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｏｆ  ２−ｍｅｔｈｏｘｙｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ｗｉｔｈ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｓａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４０：２３２３−２３３４，１９９７．
２５．Ｐｕｒｏｈｉｔ，Ａ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｇ．Ｊ．，Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｃ．Ｊ．，Ｐｏｔｔｅｒ，Ｂ．Ｖ．Ｌ．，およびＲｅｅｄ，Ｍ．Ｊ．Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｅｓｔｒｏｎｅ  ｓｕｌｐｈａｔａｓｅ  ａｎｄ  ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｓｕｌｐｈａｔａｓｅ  ｂｙ  ｏｅｓｔｒｏｎｅ−３−Ｏｓｕｌｐｈａｍａｔｅ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６３：１０６−１１１，１９９５．
２６．Ｈａｌｄａｒ，Ｓ．，Ｊｅｎａ，Ｎ．，およびＣｒｏｃｅ，Ｃ．Ｍ．Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｃｌ−２  ｂｙ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：４５０７−４５１１，１９９５．
２７．Ｈａｌｄａｒ，Ｓ．，Ｃｈｉｎｔａｐａｌｌｉ，Ｊ．，およびＣｒｏｃｅ，Ｃ．Ｍ．Ｔａｘｏｌ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｂｃｌ−２  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅａｔｈ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６：１２５３−１２５５，１９９６．
２８．Ｐｕｒｏｈｉｔ，Ａ．，Ｒｅｅｄ，Ｍ．Ｊ．，Ｍｏｒｒｉｓ，Ｎ．Ｃ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｇ．Ｊ．，およびＰｏｔｔｅｒ，Ｂ．Ｖ．Ｌ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｓｕｌｐｈａｔａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７８４：４０−４９，１９９６．
２９．Ａｔｔａｌｌａ，Ｈ．，Ｗｅｓｔｂｅｒｇ，Ｊ．Ａ．，Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ，Ｌ．Ｃ．，Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ，Ｈ．，およびＭａｋｅｌａ，Ｔ．Ｐ．２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｃｌ−２：ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｆｒｏｍ  ＪＮＫ／ＳＡＰＫ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，２４７：６１６−６１９，１９９８．
３０．Ｈａｌｄａｒ，Ｓ．，Ｂａｓｕ，Ａ．，およびＣｒｏｃｅ，Ｃ．Ｍ．Ｂｃｌ−２  ｉｓ  ｔｈｅ  ｇｕａｒｄｉａｎ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５７：２２９−２３３，１９９７．
３１．Ｂｌａｇｏｓｋｌｏｎｎｙ，Ｍ．Ｖ．，Ｇｉａｎｎａｋａｋｏｕ，Ｐ．，Ｅｌ−Ｄｅｉｒｙ，Ｗ．Ｓ．，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｄ．Ｇ．Ｔ．，Ｈｉｇｇｓ，Ｐ．Ｉ．，Ｎｅｃｋｅｒｓ，Ｌ．，およびＦｏｊｏ，Ｔ．Ｒａｆ−１／ｂｃｌ−２  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ：ａ  ｓｔｅｐ  ｆｒｏｍ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｄａｍａｇｅ  ｔｏ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５７：１３０−１３５，１９９７．
３２．Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｏｕ，Ａ．Ｉ．，Ｋａｍａｔｈ，Ｎ．，およびＭｕｒｌｅｙ，Ｊ．Ｓ．Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｂｃｌ−２，  ｄｅｌａｙｓ  ｔｈｅ  Ｇ2／Ｍ  ｐｈａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ＭＣＦ−７  ｃｅｌｌｓ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，３４：１９２７−１９３４，１９９８．
３３．Ａｋｉｙａｍａ，Ｔ．，Ｉｓｈｉｄａ，Ｊ．，Ｎａｋａｇａｗａ，Ｓ．，Ｏｇａｗａｒａ，Ｈ．，Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｓ．−Ｉ．，Ｉｔｏｈ，Ｎ．，Ｓｈｉｂｕｙａ，Ｍ．，およびＦｕｋａｍｉ，Ｙ．Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ，ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２：５５９２−５５９５，１９８７．
３４．Ｆｌｉｅｒ，Ｊ．Ｓ．．，Ｍｕｅｃｋｌｅｒ，Ｍ．Ｍ．，Ｕｓｈｅｒ，Ｐ．，およびＬｏｄｉｓｈ，Ｈ．Ｆ．Ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ＲＮＡ  ａｒｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｒａｓ  ｏｒ  ｓｒｃ  ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：１４９２−１４９５，１９８７．
３５．Ｓｈｉｍ，Ｈ．，Ｃｈｕｎ，Ｙ．−Ｓ．，Ｌｅｗｉｓ，Ｂ．Ｃ．，およびＤａｎｇ，Ｃ．Ｖ．  Ａ  ｕｎｉｑｕｅ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｃ−ｍｙｃ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：１５１１−１５１６，１９９８．
３６．Ｇｏｕｌｄ，Ｇ．Ｗ．，およびＨｏｌｍａｎ，Ｇ．Ｄ．Ｔｈｅ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｆａｍｉｌｙ：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２９５：３２９−３４１，１９９３．
３７．Ｂｒｏｗｎ，Ｒ．Ｓ．，およびＷａｈｌ，Ｒ．Ｌ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＧＬＵＴ−１  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ，７２：２９７９−２９８５，１９９３．
３８．Ｙｏｕｎｅｓ，Ｍ．，Ｌｅｃｈａｇｏ，Ｌ．Ｖ．，Ｓｏｍｏａｎｏ，Ｊ．Ｒ．，Ｍｏｓｈａｒａｆ，Ｍ．，およびＬｅｃｈａｇｏ，Ｊ．Ｗｉｄｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ＧＬＵＴ−１  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６：１１６４−１１６７，１９９６．
３９．Ｚａｍｏｒａ−Ｌｅｏｎ，Ｐ．，Ｇｏｌｄｅ，Ｄ．Ｗ．，Ｃｏｎｃｈａ，Ｉ．Ｉ．，Ｒｉｖａｓ，Ｃ．Ｉ．，Ｄｅｌｇａｄｏ−Ｌｏｐｅｚ，Ｆ．，Ｂａｓｅｌｇａ，Ｊ．，Ｎｕａｌａｒｔ，Ｆ．，およびＶｅｒａ，Ｊ．Ｃ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｒｕｃｔｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ＧＬＵＴ−５  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９３：１８４７−１８５２，１９９６．
４０．Ｔｓａｋｉｒｉｄｉｓ，Ｔ．，Ｖｒａｎｉｃ，Ｍ．，およびＫｌｉｐ，Ａ．Ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｎ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：２９９３４−２９９４２，１９９４．
４１．Ｈａｍｉｌｔｏｎ−Ｗｅｓｓｌｅｒ，Ｍ．，Ａｄｅｒ，Ｍ．，Ｇｅｔｔｙ，Ｌ．Ｄｅａ，Ｍ．，Ｈａｍｍ−Ａｌｖａｒｅｚ，Ｓ．，およびＢｅｒｇｍａｎ，Ｒ．Ｎ．Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ  ｔａｘｏｌ  ｒｅｄｅｃｅｓ  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４５（Ｓｕｐｐｌ．２）：Ａｂｓｔｒ．６１５，１９９６．
４２．Ｂｒｅｍ，Ｓ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，２：９−２０，１９９８．
４３．Ｈａｒｒｉｓ，Ａ．Ｌ．Ａｒｅ  ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ  ａｎｄ  ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ｃｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ？  Ｌａｎｃｅｔ，３５１：１５９８−１５９９，１９９８．
４４．ＡｐｐｅｌおよびＢｅｒｇｅｒ  Ｇ．Ｕｂｅｒ  ｄａｓ  Ｈｙｄｒａｚｉｄｏｓｕｌｐｈａｍｉｄｅ（ｏｎ  ｈｙｄｒａｚｉｄｏｓｕｌｐｈａｍｉｄｅ）Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ  Ｂｅｒｉｃｈｔｅ  １９５８；９１；１３３９．
４５．Ｐｅｒｒｉｎ  ＤＤおよびＡｍａｒｅｇｏ  ＷＬＦ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌａｂｏｔａｔｏｒｙ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ．Ｐｅｒｇａｍｏｎ  ｐｒｅｓｓ；Ｏｘｆｏｒｄ  １９８８；２９０．
【図面の簡単な説明】
【図１】  構造：化合物１、２−メトキシエストラジオール（２−ＭｅＯＥ２）；２、エストロン−３−Ｏ−サルファメート（ＳＭＡＴＥ）；３、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ）；４、２−メトキシエストロン（２−ＭｅＯＥ１）；５、ゲニスチン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）ビス−サルファメート（ＧｅｎＭＡＴＥ）；６、ゲニスチン、７、２−メトキシエストロン−３−スルフェート（２−ＭｅＯＥ１Ｓ）。
【図２】  ＭＣＦ−７乳癌細胞の増殖に対する、２−メトキシエストロン（２−ＭｅＯＥ１）または２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ）の効果を示す、用量応答。細胞（１ウェルあたり５０００個）を、薬物に４日間曝露した（平均±標準偏差、ｎ＝３）。
【図３】  ２４時間後のＭＣＦ−７乳癌細胞に対する、ａ）ビヒクル、ｂ）２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ、１μＭ）、または２−メトキシエストロン（２−ＭｅＯＥ１、１μＭ）の効果。
【図４】  ２４時間後のＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞に対する、ａ）ビヒクル、またはｂ）２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ、１μＭ）の効果。
【図５】  ２４時間における乳房腫瘍誘導線維芽細胞に対する、ａ）ビヒクル、ｂ）２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ、１μＭ）またはｃ）２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ（５μＭ）の効果。
【図６】  ビヒクル（Ａ）または２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（１０μＭ）で４時間（Ｂ）、１２時間（Ｃ）または２４時間（Ｄ）処理したＭＣＦ−７乳癌細胞のＤＮＡヒストグラム。処理後１２時間まで、Ｇ2／Ｍ期での細胞の阻止の証拠が存在した。
【図７】  ２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（１０μＭ）で処理したＭＣＦ−７乳癌細胞のＤＮＡヒストグラム。２４時間（Ａ）または４８時間（Ｃ）におけるコントロールと比較すると、薬物で処理した細胞は、２４時間（Ｂ）および４８時間（Ｄ）におけるＧ2／Ｍ期の細胞の割合の有意な増加を示し、さらにサブＧ1画分の増加を示した。２４時間の細胞の曝露の後に、薬物のない培地中でさらに２４時間培養することによる薬物の除去は、Ｇ2／Ｍ期での細胞の阻止を逆転させなかった（Ｅ）。
【図８】  コントロールＭＣＦ−７細胞（Ａ）または２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（１０μＭ）に４８時間曝露した細胞（Ｂ）の、ＴＵＮＥＬ分析。ヒストグラムを、ＴｄＴの非存在下で染色した細胞（塗りつぶし）またはＴＵＮＥＬ反応混合物で染色した細胞（白抜き）について、重ね合わせる。下の図の棒は、ＴＵＮＥＬ陽性細胞を表し、そして処理した細胞の約１０％を表す。
【図９】  インタクトなラットにおけるニトロソメチルウレア誘導乳房腫瘍の増殖に対する、ビヒクル（プロピレングリコール、コントロール動物１〜３）、２−メトキシエストロン（２−ＭｅＯＥ１、２０ｍｇ／ｋｇ／日、経口、１１日間、２頭の動物において）、または２−メトキシエストロン−３−Ｏ−サルファメート（２０ｍｇ／ｋｇ／日、経口、１１日間、３頭の動物において）の効果。結果を、薬物投与の開始時の腫瘍体積と比較した、６日目または１１日目の腫瘍体積（Ｖｄｎ）（百分率で表現する）として表す。
【図１０】  ＭＣＦ−７乳癌細胞の増殖に対する、２−メトキシエストロンもしくは２−エチルエストロン、またはこれらのサルファメート誘導体の効果。
【図１１】  先行する曝露の後のＭＣＦ−７乳癌細胞の増殖に対する、２−メトキシエストロンサルファメートまたは２−エチルエストロンサルファメートの不可逆的な効果。
【図１２】  構造：化合物８、２−アセチルエストロン３−メチルエーテル；９、２−エチルエストロン３−メチルエーテル；１０、２−エチルエストロン；１１、２−エチルエストロン３−Ｏ−サルファメート。
【図１３】  プロピジウムヨージド（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ  ｉｏｄｉｄｅ）（ＰＩ）で染色した細胞のフローサイトメトリーを用いる、２−ＥｔＥＭＡＴＥの、ＭＣＦ７、ＺＲ−７５−１、ＣＡＬ５１およびＣＡＭＡ１細胞のＤＮＡ含有量に対する効果。
【図１４】  ＭＣＦ７、ＺＲ−７５−１、ＣＡＬ５１およびＣＡＭＡ１に対する、２−ＭｅＯＥ２、２−ＭｅＯＥ１、２−ＥｔＥ１、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ、および２−ＥｔＥＭＡＴＥの効果。
【図１５】  ２ＥｔＥＭＡＴＥ曝露の後の染色した核の写真板。
【図１６】  ＭＣＦ７、ＺＲ−７５−１、ＣＡＬ５１およびＣＡＭＡ１に対する、２−ＥｔＥＭＡＴＥの効果。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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