(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
分析物質と特異的に反応する物質でかつ標識物質で標識された第一の物質を保持するコンジュゲートパッド、及びイムノクロマトグラフィー展開膜を含むイムノクロマトグラフィー測定装置であって、
（ａ）分析物質を含む展開液が前記コンジュゲートパッドに直接導入される構造、
（ｂ）前記コンジュゲートパッドと前記イムノクロマトグラフィー展開膜が離間された構造、
及び（ｃ）前記コンジュゲートパッドと前記イムノクロマトグラフィー展開膜の間に分析物質を含む展開液が保持されるポートが配置される構造、
を有し、分析物質を含む展開液が前記コンジュゲートパッドを重力下方向に通過することを特徴とするイムノクロマトグラフィー測定装置。
【請求項２】
前記コンジュゲートパッドが四方を囲まれた流路内に配置されることを特徴とする請求項１記載のイムノクロマトグラフィー測定装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分析物質を抽出液と混合した展開液を測定・検査・診断に用いるイムノクロマトグラフィー測定装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
イムノクロマトグラフィー測定装置は、吸水性材料からなるイムノクロマトグラフィー展開膜上の上流端部に分析物質および分析物質と特異的に反応する標識物質で標識された第一の物質を含む展開液を接触させた後、毛細管現象によるラテラルフローにより所定方向に展開し、イムノクロマトグラフィー展開膜の展開方向下流に設けた、分析物質や第一の物質を捕捉する物質が保持されている領域における変化を観察することで、展開液中の分析物質を検知する方法に用いられる装置である。
【０００３】
従来の一般的なイムノクロマトグラフィー測定装置のイムノクロマトグラフィー展開部の概略を、図１０、１１、１２に示す。滴下口２の直下にサンプルパッド２０と呼ばれるパッド部があり、サンプルパッド２０とイムノクロマトグラフィー展開膜５との間に、分析物質と特異的に結合する前述の第一の物質が保持されたコンジュゲートパッド１０と呼ばれるパッドが構成されている。滴下口から導入された分析物質を含む展開液はサンプルパッドを通じてコンジュゲートパッドに移動し、展開液中の分析物質と前述の第一の物質とともに、イムノクロマトグラフィー展開膜に移動する。更に毛細管現象によるラテラルフローにより所定方向に展開し、イムノクロマトグラフィー展開膜の展開方向下流に設けた分析物質と特異的に反応する抗体等が保持されている領域における変化を観察することで、分析物質および分析物質と特異的に反応する標識物質で標識された第一の物質を含む展開液中の分析物質を検知することができる。パッド部の主な役割は、供給された分析物質を含む展開液を一時的に吸収・保持した後、その表面積を生かしてコンジュゲートパッドに徐々に分析物質を含む展開液を供給することである。
【０００４】
ただし、このようなサンプルパッドとコンジュゲートパッドがイムノクロマトグラフィー展開膜に配置される構造では、サンプルパッドへの展開液の一部の残留や、コンジュゲートパッドを通過する際に分析物質と第一の物質が十分に反応できないことにより、検出感度低下が起こってしまう場合がある。また、残留した展開液のイムノクロマトグラフィー展開膜への再供給に伴うイムノクロマトグラフィー展開膜のバックグラウンド上昇や、パッド部とイムノクロマトグラフィー展開膜との接触部から発生する非特異染色等のような問題が起きることにより、結果判定の障害になってしまうことがある。特に分析物質を含む展開液供給後に基質液や洗浄液を追加供給する形式のイムノクロマトグラフィー法では、追加液がパッド部に流れ込むことによる展開の乱れが起り、上記問題がより一層悪化してしまう。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上述したように、サンプルパッドとコンジュゲートパッドがイムノクロマトグラフィー展開膜に配置される構造では、サンプルパッドへの展開液の一部の残留や、コンジュゲートパッドを通過する際に分析物質と第一の物質が十分に反応できないことにより、検出感度の低下起こってしまう問題点があった。
本発明の目的は、検出感度低下等の問題点のないイムノクロマトグラフィー測定装置を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下の通りである。
（１）分析物質と特異的に反応する物質でかつ標識物質で標識された第一の物質を保持するコンジュゲートパッド、及びイムノクロマトグラフィー展開膜を含むイムノクロマトグラフィー測定装置であって、
（ａ）分析物質を含む展開液が前記コンジュゲートパッドに直接導入される構造、
（ｂ）前記コンジュゲートパッドと前記イムノクロマトグラフィー展開膜が離間された構造、
及び（ｃ）前記コンジュゲートパッドと前記イムノクロマトグラフィー展開膜の間に分析物質を含む展開液が保持されるポートが配置される構造、
を有し、分析物質を含む展開液が前記コンジュゲートパッドを重力下方向に通過することを特徴とするイムノクロマトグラフィー測定装置。
（２）前記コンジュゲートパッドが四方を囲まれた流路内に配置されることを特徴とする（１）記載のイムノクロマトグラフィー測定装置。
【発明の効果】
【０００７】
本発明のイムノクロマトグラフィー測定装置を用いることにより、サンプルパッドへの展開液の残留がなく、コンジュゲートパッドを通過する際に分析物質と第一の物質が十分に反応するため、検出感度の向上が図れる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明を実施するための最良の形態を図を用いて説明する。
図１に本発明のイムノクロマトグラフィー測定装置の第１の例の概要平面図、図２に図1の上部ケーシングを取り除いた内部構造の概要平面図、図３に図１のI−II方向断面図を示す。
図１、図２、図３に示すイムノクロマトグラフィー測定装置は、上部ケーシング１には、分析物質を混合した展開液を滴下する滴下口２と、検出ライン６とコントロールライン７を観察できる判定窓３と空気穴４が配置される。下部ケーシング１６には、分析物質を混合した展開液を保持、通過させるサンプルポート８が隔壁１３に囲まれた形で配置されている。また、下部ケーシング１６には、サンプルポート８に導入された分析物質を含む展開液がコンジュゲートパッド１０を通って流れる経路９と、分析物質と分析物質と特異的に結合する第一の物質（標識物質で標識されている）とを含む展開液が保持される反応ポート１１が隔壁１４に囲まれた形で配置され、更に、イムノクロマトグラフィー展開膜５が展開膜保持隔壁１５に囲まれた形で配置される。上部ケーシング１と下部ケーシング１６の中に、分析物質と免疫学的に結合する第一の物質（標識物質で標識されている）を含むコンジュゲートパッド１０、分析物質および第一の物質および分析物質と第一の物質の結合物質がクロマト展開するためのイムノクロマトグラフィー展開膜５、展開液を吸収する吸収パッド１２、イムノクロマトグラフィー展開膜５を保持する保持板１７が収納されている。イムノクロマトグラフィー展開膜５上には分析物質を特異的に捕捉する第二の物質が保持された検出ライン６と第一の物質を捕捉する第三の物質が保持されているコントロールライン７が存在する。
【０００９】
図４に本発明のイムノクロマトグラフィー測定装置の第２の例の概要平面図、図５に図４の上部ケーシングを取り除いた内部構造の概要平面図、図６に図４のI−II方向断面図を示す。
図４、図５、図６に示すイムノクロマトグラフィー測定装置は、上部ケーシング１には、分析物質を混合した展開液を滴下する滴下口２が配置され、検出ライン６とコントロールライン７が観察できる判定窓３と空気穴４が配置される。下部ケーシング１６には、分析物質を混合した展開液を保持、通過させるサンプルポート８が隔壁１３に囲まれた形で配置されている。また、下部ケーシング１６には、サンプルポート８に導入された分析物質を含む展開液がコンジュゲートパッド１０を通って流れるコンジュゲートパッド１０の４方を囲む流路の形で形成された経路１８と、経路１８と分析物質と分析物質と特異的に結合する第一の物質（標識物質で標識されている）とを含む展開液が保持される反応ポート１１が隔壁１４に囲まれた形で配置され、更に、イムノクロマトグラフィー展開膜５が展開膜保持隔壁１５に囲まれた形で配置される。上部ケーシング１と下部ケーシング１６の中に、分析物質と免疫学的に結合する第一の物質を含むコンジュゲートパッド１０、分析物質および第一の物質および分析物質と第一の物質の結合物質がクロマト展開するためのイムノクロマトグラフィー展開膜５、展開液を吸収する吸収パッド１２、イムノクロマトグラフィー展開膜５を保持する保持板１７が収納されている。イムノクロマトグラフィー展開膜５上には分析物質を特異的に捕捉する第二の物質が保持された検出ライン６と第一の物質を捕捉する第三の物質が保持されているコントロールライン７が存在する。
【００１０】
図７に本発明のイムノクロマトグラフィー測定装置の第３の例の概要平面図、図８に図７の上部ケーシングを取り除いた内部構造の概要平面図、図９に図７のI−II方向断面図を示す。
図７、図８、図９に示すイムノクロマトグラフィー測定装置は、上部ケーシング１には、分析物質を混合した展開液を滴下する滴下口２が配置され、検出ライン６とコントロールライン７が観察できる判定窓３と空気穴４が配置される。下部ケーシング１６には、分析物質と特異的に結合する第一の物質（標識物質で標識されている）が保持されたコンジュゲートパッド１０を中空で保持し、分析物質を混合した展開液が重力方向にコンジュゲートパッド１０を通過するサンプルポート１９が隔壁１３に囲まれた形で配置されている。また、サンプルポート１９に導入された分析物質を含む展開液が流れる経路９、分析物質と第一物質とを含む展開液が保持される反応ポート１１が隔壁１４に囲まれた形で配置され、更に、イムノクロマトグラフィー展開膜を保持するための展開膜保持隔壁１５に囲まれた形で配置される。上部ケーシング１と下部ケーシング１６の中に、分析物質と免疫学的に結合する第一の物質を含むコンジュゲートパッド１０、分析物質および第一の物質および分析物質と第一の物質の結合物質がクロマト展開するためのイムノクロマトグラフィー展開膜５、展開液を吸収する吸収パッド１２、イムノクロマトグラフィー展開膜５を保持する保持板１７が収納されている。イムノクロマトグラフィー展開膜５上には分析物質を特異的に捕捉する第二の物質が保持された検出ライン６と第一の物質を捕捉する第三の物質が保持されているコントロールライン７が存在する。
【００１１】
本発明の実施形態は上記第１〜３の例に限定されないが、第１〜３の例に基づいて、さらに詳細な態様を述べる。
【００１２】
上部ケーシング１、下部ケーシング１５の母材はプラスチックであることが好ましい。プラスチックの材質としては、種々のプラスチック材料を選択することが可能であり、使用する用途、処理、使用する溶媒、生理活性物質、検出方法の特性に合わせて、成形性、耐熱性、耐薬品性、吸着性等を考慮し適宜に選択される。例えば、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリメチルメタクリレート、ポリビニルアセテート、ビニル−アセテート共重合体、スチレン−メチルメタアクリレート共重合体、アクリルニトリル−スチレン共重合体、アクリルニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体、ナイロン、ポリメチルペンテン、シリコン樹脂、アミノ樹脂、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、ポリエーテルイミド、フッ素樹脂、ポリイミド等が挙げられる。また、これらのプラスチック材料に、顔料、染料、酸化防止剤、難燃剤等の添加物を適宜混合してもよい。
【００１３】
上部ケーシング１、下部ケーシング１５を接合する方法として、勘合による接合、ヒートシールによる接合、接着剤による接合、両面テープによる接合、超音波接着法による接合、レーザー溶着法による接合等が挙げられるがこれに限定されるものではない。
【００１４】
分析物質を混合した展開液を滴下する滴下口２は、分析物質を含む展開液がサンプルポート８もしくはサンプルポート１９へ滴下された展開液の全量が導入される形状であれば支障はなく、その形は三角形、四角形、五角形、円形、楕円形、星型等が挙げられる。
【００１５】
検出ライン６とコントロールライン７が観察できる判定窓３としては、上部ケーシング１を貫通させた貫通穴から形成される窓、上部ケーシング１を貫通させた貫通穴にプラスチックフィルムを貼り合せた窓、上部ケーシング１を貫通させた貫通穴にプラスチック板を接合した窓が考えられ、イムノクロマトグラフィー測定のプロトコールにより適宜決定されるものである。プラスチックフィルムの貼り合せ方法およびプラスチック板の接合方法は、勘合による接合、ヒートシールによる接合、接着剤による接合、両面テープによる接合、超音波接着法による接合、レーザー溶着法による接合等が挙げられ、気密性、量産性等を考慮して選択される。
【００１６】
上部ケーシング１に加工された空気穴４は、上部ケーシング１を貫通させた貫通穴から形成される空気穴、上部ケーシング１を貫通させた貫通穴に多孔質体を貼り合せた空気穴、空気穴を設けない形も考えられ、イムノクロマトグラフィー測定のプロトコールにより適宜決定されるものである。多孔質体は、プラスチックや金属、セラミックに微細な穴を設けた板や一般的に用いられている多孔質メンブレンフィルター、セラミック焼結体等を使用することができる。展開液が水溶性の場合には、気密性を保つために撥水性の材料を用いることが望ましい。多孔質体と上部ケーシングの接合方法は、勘合による接合、ヒートシールによる接合、接着剤による接合、両面テープによる接合、超音波接着法による接合、レーザー溶着法による接合等が挙げられるがこれに限定されるものではない。
【００１７】
サンプルポート８およびサンプルポート１９は、イムノクロマトグラフィー測定装置の滴下口２から滴下された分析物質を含む展開液が経路９へ導入される形状であれば支障はなく、その形状は三角形、四角形、五角形、円形、楕円形、星型等が挙げられ、分析物質を含む展開液を経路へ導入することをより確実にするために傾斜を設けても良い。
【００１８】
経路９は、経路へ導入された分析物質を含む展開液もしくは分析物質および第一の物質が反応ポート１１へ導入される経路である。図１〜６に示されるコンジュゲートパッド１０が保持された経路の場合、分析物質を含む展開液がこの経路を通過する際にコンジュゲートパッド１０に保持されている分析物質と特異的に反応する第一の物質と混ざりながらこの経路を流れていくことが必要となり、コンジュゲートパッド１０の材質、目の粗さ、第一の物質の保持状態を考慮しながら経路の幅、長さ、傾斜等を適宜設計する。
【００１９】
図１〜３の場合は、上部に空間をもった状態で保持されたコンジュゲートパッド１０に展開液を導入するとコンジュゲートパッド１０の上に多く展開液が流れてしまうことによりコンジュゲートパッド１０から第一の物質が流れにくい傾向があり展開液の流速を遅くしたり展開液の量を多くしたりする必要がある。
【００２０】
図４〜６のように４方を囲んだ流路状態で保持されたコンジュゲートパッド１０に展開液を導入するとコンジュゲートパッド１０の周りに展開液が多くながれることからコンジュゲートパッド１０から第一の物質が多く流れるがコンジュゲートパッド１０の抵抗が大きいため経路の傾斜を多く取る必要がある。
【００２１】
図７〜９の場合は、滴下口２の直下にコンジュゲートパッド１０を配置させ展開液をコンジュゲートパッド１０に対して重力方向に流しサンプルポート１９に保持したのちに経路９を通じて反応ポート１１に展開液を流すため、図１〜６の場合と比べて構造が複雑になる。
これらの形状は一長一短があり適宜最適な形状を選択する必要がある。
【００２２】
反応ポート１１は、経路から導入された分析物質と第一の物質が展開液中で反応しイムノクロマトグラフィー展開膜５に吸収される部分であり、分析物質、第一の物質、イムノクロマトグラフィー展開膜等の選択により適宜形状は最適化される。その形状は三角形、四角形、五角形、円形、楕円形、星型等が挙げられ、分析物質と標識物質で標識された分析物質と特異的に反応する第一の物質が展開液中で反応しイムノクロマトグラフィー展開膜５に吸収されれば特に形状は限定しない。
【００２３】
隔壁１３はサンプルポートのための隔壁であり、滴下口２から滴下された分析物質がサンプルポート側面に漏れない形状・寸法であれば問題がない。
【００２４】
隔壁１４は反応ポート１１の隔壁であり経路より導入された分析物質と標識物質で標識された分析物質と特異的に反応する第一の物質を含む展開液が反応ポート側面から漏れない形状・寸法であれば問題がない。
【００２５】
隔壁１５は、保持板１７、イムノクロマトグラフィー展開膜、吸収パッド１２が保持されるための隔壁であり、反応ポートより吸収された分析物質と標識物質で標識された分析物質と特異的に反応する第一の物質を含む展開液がイムノクロマトグラフィー展開膜側面から漏れない形状・寸法であれば問題がない。
【００２６】
イムノクロマトグラフィー展開膜５は、０．１〜３μｍサイズの気孔を有するニトロセルロース、ガラスファイバー、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、セルロース、ナイロンなどが使用され、このうち、ニトロセルロースが一般的によく使用されているがこれに限定されない。
【００２７】
コンジュゲートパッド１０として、ガラス繊維、セルロース類布（濾紙、ニトロセルロース膜等）、ポリエチレン、ポリプロピレン等の多孔質プラスチック布類などが使用され、このうち、ガラス繊維が一般的によく使用されるがこれに限定されるものではない。
【００２８】
標識物質としては、金コロイド、白金コロイド等の金属コロイドの他、赤色および青色などのそれぞれの顔料で着色されたポリスチレンラテックスなどの合成ラテックスや、天然ゴムラテックスなどのラテックスが挙げられ、このうち、金コロイドなどの金属コロイドが一般的によく使用されているが特に限定されない。
【００２９】
コンジュゲートパッド１０に保持される第一の物質は、分析物質と特異的に反応する物質が選択され、抗原、抗体、アプタマー、ペプチド、レクチン等が挙げられるがこれに限定されるものではない。
検出ライン６に保持される第二の物質は分析物質と特異的に反応する物質が選択され、抗原、抗体、アプタマー、ペプチド、レクチン等が挙げられるがこれに限定されるものではない。
【００３０】
コントロールライン７に保持される第三の物質は、少なくとも第一の物質と反応する物質が選択され、抗原、抗体、アプタマー、ペプチド、レクチン等が挙げられるがこれに限定されるものではない。
【００３１】
検出ライン６、コントロールライン７を有するイムノクロマトグラフィー展開膜５と吸収パッド１２を組み合わせたストリップに関しては、測定する分析物質の種類、濃度や必要な測定感度、展開液の種類、コスト等により適宜設計される。
【００３２】
分析物質としては、腫瘍マーカー等のタンパク質やアレルゲン等、インフルエンザウィルス、アデノウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ａ型連鎖球菌、クラミジア等の病原体等が挙げられるがこれに限定されるものではない。
【実施例】
【００３３】
（実施例１）
図１、２、３に示すイムノクロマトグラフィー測定装置を作製した。上部ケーシング１および下部ケーシング１６を白色着色したアクリル（ＰＭＭＡ）材料を用いて射出成形で作製した。寸法は縦２０ｍｍ、横８０ｍｍ、高さ２０ｍｍとし、滴下口２の寸法は上部で直径１０ｍｍ、下部で直径５ｍｍ、判定窓３の寸法は縦４ｍｍ、横２０ｍｍ、空気穴４の寸法は縦４ｍｍ、横１ｍｍであり３個の穴をとした。サンプルポート８の寸法は直径１０ｍｍ、深さ４ｍｍ、反応ポート１１は縦５ｍｍ、横８ｍｍ、深さ４ｍｍ、サンプルポート８から反応ポート１１への経路は縦５ｍｍ、横１０ｍｍ、経路の長さ１５ｍｍとした。
【００３４】
ストリップの作製には、コンジュゲートパッド用パッドとしてグラスファイバーコンジュゲートパッド（ミリポア、Ｇ０４１タイプ）を、膜担体としてハイフロープラス（ミリポア、ＨＦ１８０）を、吸収パッドとしてセルロース吸収パッド（ミリポア、Ｃ０８３タイプ）を使用した。第一の物質として金コロイド標識したＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉ‐ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ（Ｈｙｔｅｓｔ製、４Ｔ２４、１Ａ９）を、第二の物質としてＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ-ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ（Ｈｙｔｅｓｔ製、４Ｔ２４、１５Ｃ７）を、第三の物質としてＲａｂｂｉｔ  Ａｎｔｉ‐Ｍｏｕｓｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ（ＤＡＫＯ製、Ｚ０１０９）を使用した。
第一の物質をコンジュゲートパッドに浸漬させ真空乾燥させることでコンジュゲートパッド１０を作成した。膜担体に、検出ライン６として第二の物質を固定し、コントロールライン７として第三の物質を固定して、吸収パッド１２を組み合わせ、カットし、長さ５０ｍｍ、幅５ｍｍのストリップを作製した。
コンジュゲートパッド１０とストリップを下部ケーシング１６に設置し上部ケーシング１を下部ケーシング１６との勘合により接合することでイムノクロマトグラフィー測定装置とした。
【００３５】
分析物質としてＰＵＲＩＦＩＥＤ  ＨＵＭＡＮ  ＡＬＢＵＭＩＮ（ＭＰ  ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬＳ製、５５９１２）を使用し、抽出液としてＰＢＳバッファーを使用した。  
前述の抽出液を用いて前述の分析物質を希釈して１０００、１００、１０、１ｎｇ／ｍｌの分析物質希釈液とした。なお、ブランクとして、抽出液のみを使用した。そして、イムノクロマトグラフィー測定装置に１５０mｌずつ導入し、１５分後、判定窓３から検出ライン６、及び、コントロールライン７における呈色を肉眼で評価し、結果を表１に示した。
【００３６】
（実施例２）
図４、５、６に示すイムノクロマトグラフィー測定装置を作製した。上部ケーシング１および下部ケーシング１６を白色着色したポリカーボネート（ＰＣ）材料を用いて射出成形で作製した。寸法は縦２０ｍｍ、横８０ｍｍ、高さ２０ｍｍとし、滴下口２の寸法は上部で直径１０ｍｍ、下部で直径５ｍｍ、判定窓３の寸法は縦４ｍｍ、横２０ｍｍ、空気穴４の寸法は縦４ｍｍ、横１ｍｍであり３個の穴をとした。サンプルポート８の寸法は直径１０ｍｍ、深さ４ｍｍ、反応ポート１１は縦５ｍｍ、横８ｍｍ、深さ４ｍｍ、サンプルポート８から反応ポート１１への経路は縦５ｍｍ、横１０ｍｍ、深さ１ｍｍ、経路の長さ１５ｍｍとした。
【００３７】
ストリップの作製には、コンジュゲートパッド用パッドとしてグラスファイバーコンジュゲートパッド（ミリポア、Ｇ０４１タイプ）を、膜担体としてハイフロープラス（ミリポア、ＨＦ１８０）を、吸収パッドとしてセルロース吸収パッド（ミリポア、Ｃ０８３タイプ）を使用した。第一の物質として金コロイド標識したＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉ‐ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ（Ｈｙｔｅｓｔ製、４Ｔ２４、１Ａ９）を、第二の物質としてＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ-ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ（Ｈｙｔｅｓｔ製、４Ｔ２４、１５Ｃ７）を、第三の物質としてＲａｂｂｉｔ  Ａｎｔｉ‐Ｍｏｕｓｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ（ＤＡＫＯ製、Ｚ０１０９）を使用した。
【００３８】
第一の物質をコンジュゲートパッドに浸漬させ真空乾燥させることでコンジュゲートパッド１０を作成した。膜担体に、検出ライン６として第二の物質を固定し、コントロールライン７として第三の物質を固定して、吸収パッド１２を組み合わせ、カットし、長さ５０ｍｍ、幅５ｍｍのストリップを作製した。
コンジュゲートパッド１０とストリップを下部ケーシング１６に設置し上部ケーシング１を下部ケーシング１６と勘合により接合することでイムノクロマトグラフィー測定装置とした。
【００３９】
分析物質としてＰＵＲＩＦＩＥＤ  ＨＵＭＡＮ  ＡＬＢＵＭＩＮ（ＭＰ  ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬＳ製、５５９１２）を使用し、抽出液としてＰＢＳバッファーを使用した。
前述の抽出液を用いて前述の分析物質を希釈して１０００、１００、１０、１ｎｇ／ｍｌの分析物質希釈液とした。なお、ブランクとして、抽出液のみを使用した。そして、イムノクロマトグラフィー測定装置に１５０mｌずつ導入し、１５分後、判定窓３から検出ライン６、及び、コントロールライン７における呈色を肉眼で評価し、結果を表１に示した。
【００４０】
（実施例３）
図７、８、９に示すイムノクロマトグラフィー測定装置を作製した。上部ケーシング１および下部ケーシング１６を白色着色したポリスチレン（ＰＳ）材料を用いて射出成形で作製した。寸法は縦２０ｍｍ、横８０ｍｍ、高さ２０ｍとし、滴下口２の寸法は上部で直径１０ｍｍ、下部で直径５ｍｍ、判定窓３の寸法は縦４ｍｍ、横２０ｍｍ、空気穴４の寸法は縦４ｍｍ、横１ｍｍであり３個の穴をとした。サンプルポート８の寸法は直径８ｍｍ、深さ４ｍｍとし、反応ポート１１は縦５ｍｍ、横８ｍｍ、深さ４ｍｍ、サンプルポート８から反応ポート１１への経路は縦５ｍｍ、横１０ｍｍ、経路の長さ１５ｍｍとした。
【００４１】
ストリップの作製には、コンジュゲートパッド用パッドとしてグラスファイバーコンジュゲートパッド（ミリポア、Ｇ０４１タイプ）を、膜担体としてハイフロープラス（ミリポア、ＨＦ１８０）を、吸収パッドとしてセルロース吸収パッド（ミリポア、Ｃ０８３タイプ）を使用した。第一の物質として金コロイド標識したＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉ‐ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ（Ｈｙｔｅｓｔ製、４Ｔ２４、１Ａ９）を、第二の物質としてＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ-ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ（Ｈｙｔｅｓｔ製、４Ｔ２４、１５Ｃ７）を、第三の物質としてＲａｂｂｉｔ  Ａｎｔｉ‐Ｍｏｕｓｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ（ＤＡＫＯ製、Ｚ０１０９）を使用した。
【００４２】
第一の物質をコンジュゲートパッドに浸漬させ真空乾燥させることでコンジュゲートパッド１０を作成した。膜担体に、検出ライン６として第二の物質を固定し、コントロールライン７として第三の物質を固定して、吸収パッド１２を組み合わせ、カットし、長さ５０ｍｍ、幅５ｍｍのストリップを作製した。
コンジュゲートパッド１０とストリップを下部ケーシング１６に設置し上部ケーシング１を下部ケーシング１６と勘合により接合することでイムノクロマトグラフィー測定装置とした。
【００４３】
分析物質としてＰＵＲＩＦＩＥＤ  ＨＵＭＡＮ  ＡＬＢＵＭＩＮ（ＭＰ  ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬＳ製、５５９１２）を使用し、抽出液としてＰＢＳバッファーを使用した。
前述の抽出液を用いて前述の分析物質を希釈して１０００、１００、１０、１ｎｇ／ｍｌの分析物質希釈液とした。なお、ブランクとして、抽出液のみを使用した。そして、イムノクロマトグラフィー測定装置に１５０mｌずつ導入し、１５分後、判定窓３から検出ライン６、及び、コントロールライン７における呈色を肉眼で評価し、結果を表１に示した。
【００４４】
（比較例１）
図１０、１１、１２に示す、従来のサンプルパッドを用いたイムノクロマトグラフィー測定装置を作製した。上部ケーシング１および下部ケーシング１６を白色着色したポリスチレン（ＰＳ）材料を用いて射出成形で作製した。寸法は縦２０ｍｍ、横８０ｍｍ、高さ５ｍｍとし、滴下口２の寸法は上部で直径１０ｍｍ、下部で直径５ｍｍ、判定窓３の寸法は縦４ｍｍ、横２０ｍｍ、空気穴４の寸法は縦４ｍｍ、横１ｍｍであり３個の穴をとした。
【００４５】
ストリップの作製には、サンプルパッドとしてセルロースサンプルパッド（ミリポア、Ｃ０８３タイプ）を、コンジュゲートパッド用パッドとしてグラスファイバーコンジュゲートパッド（ミリポア、Ｇ０４１タイプ）を、膜担体としてハイフロープラス（ミリポア、ＨＦ１８０）を、吸収パッドとしてセルロース吸収パッド（ミリポア、Ｃ０８３タイプ）を使用した。第一の物質として金コロイド標識したＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉ‐ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ（Ｈｙｔｅｓｔ製、４Ｔ２４、１Ａ９）を、第二の物質としてＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ-ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ（Ｈｙｔｅｓｔ製、４Ｔ２４、１５Ｃ７）を、第三の物質としてＲａｂｂｉｔ  Ａｎｔｉ‐Ｍｏｕｓｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ（ＤＡＫＯ製、Ｚ０１０９）を使用した。
【００４６】
第一の物質をコンジュゲートパッドに浸漬させ真空乾燥させることでコンジュゲートパッド１０を作成した。膜担体に、検出ライン６として第二の物質を固定し、コントロールライン７として第三の物質を固定して、サンプルパッド２０、コンジュゲートパッド１０、吸収パッド１２と組み合わせ、カットし、長さ６０ｍｍ、幅５ｍｍのストリップを作製した。
ストリップを下部ケーシング１６に設置し上部ケーシング１を下部ケーシング１６と勘合により接合することでイムノクロマトグラフィー測定装置とした。
【００４７】
分析物質としてＰＵＲＩＦＩＥＤ  ＨＵＭＡＮ  ＡＬＢＵＭＩＮ（ＭＰ  ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬＳ製、５５９１２）を使用し、抽出液として０．０５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００を含むＰＢＳバッファーを使用した。
前述の抽出液を用いて前述の分析物質を希釈して１０００、１００、１０、１ｎｇ／ｍｌの分析物質希釈液とした。なお、ブランクとして、抽出液のみを使用した。そして、イムノクロマトグラフィー測定装置に１５０mｌずつ導入し、１５分後、判定窓３から検出ライン６、及び、コントロールライン７における呈色を肉眼で評価し、結果を表１に示した。
【００４８】
（結果）
実施例１、２、３の評価結果を表１に示した。評価基準は以下のようにした。
＋：呈色が認められた。
±：わずかに呈色が認められた。
−：呈色が認められなかった。
表１より、実施例１，２，３のイムノクロマトグラフィー測定装置の方が比較例１の装置よりも検出感度がよいことがわかる。
【００４９】
【表１】
0005092836.tif 000002
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】本発明のイムノクロマトグラフィー測定装置の第１の例の概要平面図。
【図２】図1の上部ケーシングを取り除いた内部構造の概要平面図。
【図３】図１のI−II方向断面図。
【図４】本発明のイムノクロマトグラフィー測定装置の第２の例の概要平面図。
【図５】図４の上部ケーシングを取り除いた内部構造の概要平面図。
【図６】図４のI−II方向断面図。
【図７】本発明のイムノクロマトグラフィー測定装置の第３の例の概要平面図。
【図８】図７の上部ケーシングを取り除いた内部構造の概要平面図。
【図９】図７のI−II方向断面図。
【図１０】比較例１に用いたイムノクロマトグラフィー測定装置の概要平面図。
【図１１】図１０の上部ケーシングを取り除いた内部構造の概要平面図。
【図１２】図１０のI−II方向断面図。
【符号の説明】
【００５１】
１  ……  上部ケーシング
２  ……  滴下口
３  ……  判定窓
４  ……  空気穴
５  ……  イムノクロマトグラフィー展開膜
６  ……  検出ライン
７  ……  コントロールライン
８  ……  サンプルポート
９  ……  経路
１０  ……  コンジュゲートパッド
１１  ……  反応ポート
１２  ……  吸収パッド
１３  ……  サンプルポートの隔壁
１４  ……  反応ポートの隔壁
１５  ……  イムノクロマトグラフィー展開膜の隔壁
１６  ……  下部ケーシング
１７  ……  保持板
１８  ……  四方を囲まれた流路状経路
１９  ……  サンプルポート
２０  ……  サンプルパッド
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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