(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）下記式（１）：
【化１】
0004981442.tif 000009
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑ、および
（ｂ）カルニチン、アセチルカルニチン、アシルカルニチン、プロプリオニルカルニチンまたはその薬学的に許容される塩、
を含む、哺乳動物の抗疲労用医薬組成物。
【請求項２】
補酵素Ｑが補酵素Ｑ１０である、請求項１の組成物。
【請求項３】
さらに抗酸化剤を含む請求項１または２の組成物。
【請求項４】
抗酸化剤が、ビタミンＣ、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、セレン、チオ硫酸ナトリウム、ビタミンＥ、ピクノジェノール、プラバンジェノール、ピロロキノリンキノン、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、およびアスコルビン酸ペルオキシダーゼからなる群より選択される、請求項３の組成物。
【請求項５】
抗疲労用医薬組成物の製造方法であって、
（ａ）下記式（１）：
【化２】
0004981442.tif 000010
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑ、および
（ｂ）カルニチン、アセチルカルニチン、アシルカルニチン、プロプリオニルカルニチンまたはその薬学的に許容される塩、
を混合すること、
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、下記式（１）【０００２】
【化１】
0004981442.tif 000002
【０００３】
で表される還元型補酵素Ｑおよびカルニチンまたはその誘導体、並びに所望により下記式（２）：【０００４】
【化２】
0004981442.tif 000003
【０００５】
で表される酸化型補酵素Ｑを含む、抗疲労組成物に関する(式中ｎは１〜１２の整数を表す)。ここでいう抗疲労組成物とは、運動による肉体疲労の回復および予防、病中病後の肉体疲労、加齢による疲れ易さなどを改善できる組成物である。
【背景技術】
【０００６】
従来、数多くの疲労改善効果を示す物質が報告されてきた。カルニチン誘導体もそのひとつであり、酸化型補酵素Ｑもそうである。【０００７】
補酵素Ｑは、細菌から哺乳動物まで広く生体に分布する必須成分である。ヒトでは、補酵素Ｑの側鎖が繰り返し構造を１０個持つ、補酵素Ｑ10が主成分であることが知られている。補酵素Ｑは、生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分として存在する生理学的成分であり、生体内において酸化と還元を繰り返すことで電子伝達系における伝達成分としての機能を担っている。【０００８】
補酵素Ｑは生体において、エネルギー生産、膜安定化および抗酸化活性を示すことが知られており、その有用性は広い。補酵素Ｑのうち、酸化型補酵素Ｑ（ユビキノンまたはユビデカレノン）は、鬱血性心不全薬として医薬用途に用いられているように、心臓に対して効果的に働くことが知られている。【０００９】
その効果としては、心筋での酸素利用効率の改善、心筋でのＡＴＰの産生賦活、心機能の改善などが報告されている。医薬用途以外では、ビタミン類と同様に、栄養剤、栄養補助剤としての効果が報告されている。【００１０】
また、特開昭６２−５９２０８号公報（特許文献１）には、ユビキノンと乾燥酵母粉末の混合物による組織代謝活性化組成物が、特開昭５２−９９２２０号公報（特許文献２）には、重症筋無力症の症状の改善が、また特開昭５２−９９２２２号公報（特許文献３）では赤血球増加なども報告されている。更には、疲労に対する回復効果についても報告がある（特開平７−３３０５８４（特許文献４）、特開平７−３３０５９３（特許文献５）、および特開平１０−２８７５６０号公報（特許文献６））。【００１１】
カルニチン誘導体は、一般に胃液分泌促進作用、胃蠕動運動促進作用など胃腸症状の改善に用いられているが、ミトコンドリアに作用してＡＴＰの合成を促進する作用があることから、抗疲労物質としても注目されてきた。特開平７−３３０５８４（特許文献４）には、酸化型補酵素Ｑ10とカルニチン誘導体を併用することにより、相乗的に抗疲労効果が現れることが開示されている。しかし、カルニチン誘導体と還元型補酵素Ｑの組み合わせが、疲労予防または回復に対して相乗的に有効であるとの報告はない。
【特許文献１】特開昭６２−５９２０８号公報
【特許文献２】特開昭５２−９９２２０号公報
【特許文献３】特開昭５２−９９２２２号公報
【特許文献４】特開平７−３３０５８４号公報
【特許文献５】特開平７−３３０５９３号公報
【特許文献６】特開平１０−２８７５６０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、低用量でも効果的で安全な抗疲労組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
発明者らは、鋭意検討の結果、還元型補酵素Ｑとカルニチン誘導体を組み合わせることにより、酸化型補酵素Ｑとカルニチン誘導体の組み合わせにもまして相乗的な抗疲労効果が発現することを見出した。特開平１０−１０９９３３号公報には、酸化型補酵素Ｑ単独に比較して、還元型補酵素Ｑが共に存在することで補酵素Ｑの経口吸収性が高まることが開示されている。しかしながら、酸化型補酵素Ｑの投与によっても生体内で還元を受けて還元型補酵素Ｑが増加する事が知られており、酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの生体への効果は同等であるというのが一般的な理解である。従って、カルニチン誘導体と還元型補酵素Ｑの組み合わせが、カルニチン誘導体と酸化型補酵素Ｑの組み合せにもまして、疲労予防または回復に対して極めて有効であることは、当業者でも容易に予測しえない驚くべきことである。【００１４】
この知見基づき、本発明者らは本発明を完成するに至った。即ち、本発明は以下の通りである：
[１]  （ａ）下記式（１）;【００１５】
【化３】
0004981442.tif 000004
【００１６】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑ、および
（ｂ）カルニチンまたはその誘導体、
を含む、哺乳動物の抗疲労組成物。
[２]  補酵素Ｑが補酵素Ｑ10である、[１]の哺乳動物の抗疲労組成物。
[３]  [１]の抗疲労組成物、および医薬または食品として許容される担体を含む、医薬または食品用の組成物。
[４]  さらに抗酸化剤を含む[３]の組成物。
[５]  抗酸化剤が、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、セレン、チオ硫酸ナトリウム、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、ピクノジェノール、プラバンジェノール、ピロロキノリンキノン、ピロロキノリンキノン誘導体、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、およびアスコルビン酸ペルオキシダーゼからなる群より選択される、[４]の組成物。
[６]  哺乳動物対象の疲労を予防または処置する方法であって、[１]ないし[５]いずれか抗疲労組成物の有効量を、該哺乳動物対象に投与することを含む方法。
[７]  抗疲労組成物の製造方法であって、
（ａ）下記式（１）;【００１７】
【化４】
0004981442.tif 000005
【００１８】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑ、および
（ｂ）カルニチンまたはその誘導体、
を混合すること、を含む方法。
[８]  （ａ）下記式（１）;【００１９】
【化５】
0004981442.tif 000006
【００２０】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑ、および
（ｂ）カルニチンまたはその誘導体、
を混合して製造され得る、哺乳動物の抗疲労組成物。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、還元型補酵素Ｑおよびカルニチン誘導体を組み合わせて用いることにより、予想外に強い抗疲労効果が得られる。特に、それぞれ単独では効果を示さない低用量の還元型補酵素Ｑおよびカルニチン誘導体を組み合わせて用いる場合の本発明によれば、効果の確実かつ安全な、抗疲労用医薬または食品が提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
補酵素Ｑは、生体内においては通常約４０〜９０％程度が還元型で存在することが知られている。還元型補酵素Ｑを得る方法としては特に限定されず、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により補酵素Ｑを得た後、クロマトグラフィーにより流出液中の還元型補酵素Ｑ区分を濃縮する方法などを採用することが出来る。この場合においては、必要に応じて上記補酵素Ｑに対し、水素化ほう素ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム(ハイドロサルファイトナトリウム)等の一般的な還元剤を添加し、常法により上記補酵素Ｑ中に含まれる酸化型補酵素Ｑを還元して還元型補酵素Ｑとした後にクロマトグラフィーによる濃縮を行っても良い。また、既存の高純度補酵素Ｑ（酸化型補酵素Ｑ）に上記還元剤を作用させる方法によっても得ることが出来る。あるいは、還元型補酵素Ｑを含有する菌体等を使用することも可能である。【００２３】
補酵素Ｑ中の還元型の割合は、通常、ＵＶ検出器を用いたＨＰＬＣシステムにより、試料中の酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑを定量し、その量比をもって算出する方法、または、ＨＰＬＣに電気化学的検出器を組み込んだシステムにより、酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの割合をピーク面積から算出する方法により求めることができる。電気化学的検出器を組み込んだシステムでは、酸化還元物質を特異的に測れることおよび感度が高いことから、生体あるいは試料に微量に存在する還元型の割合を測定する場合は、有用性が高い。具体的には、島津社製のＨＰＬＣ分析装置に資生堂社製の電気化学的検出器を組み込み、以下のＨＰＬＣの条件で測定した。即ち、カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ（ＯＤＳ−Ａ３０３）、検出波長：２７５ｎｍ、移動相：メタノール（８８％）、ヘキサン（１２％）、流速：１ｍｌ／ｍｉｎである。【００２４】
カルニチンは、４−トリメチルアミノ−３−ヒドロキシ酪酸（４−トリメチル−３−ヒドロキシブチロベタイン）である。カルニチン誘導体は、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により製造できる。カルニチン誘導体は、市販されている製品をそのまま用いることが可能である。あるいはカルニチン誘導体を高度に含有した酵母、菌乾燥物、食品を用いることも出来る。【００２５】
本明細書における誘導体は、ある化合物に小部分の構造上の変化があってできる化合物である。化合物中の水素原子あるいは特定の原子団が、他の原子あるいは原子団によって置換された化合物は、該化合物の誘導体であると理解される。本明細書では、該化合物それ自体をまた、その誘導体として言及することもある。【００２６】
カルニチン誘導体としては、例えば、カルニチン、アセチルカルニチン、ブチリルカルニチン、バレリルカルニチン、イソバレリルカルニチン、プロピルカルニチン、アシルカルニチン、プロプリオニルカルニチンおよびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される化合物が挙げられる。これらの１種のみを用いてもよいし、または２種以上を併用してもよい。好ましくは、アセチルカルニチン、アシルカルニチン、およびまたはプロプリオニルカルニチンからなる群より選ばれる化合物である。それぞれの場合、カルニチン誘導体は、Ｌ体でもＤ体でもよいが、天然型であるＬ体が好ましい。【００２７】
薬学的に許容される塩としては、カルニチン誘導体が塩基性部分を有する場合、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、またはリン酸との塩を含むが挙げられる。カルニチン誘導体が酸性部分を有する場合、アルカリ金属塩、例えばナトリウムまたはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムまたはマグネシウム塩；および好適な有機配位子、例えば第四級アンモニウム塩とで形成される塩が挙げられる。【００２８】
本発明の抗疲労組成物においては、還元型補酵素Ｑおよびカルニチン誘導体の含有量は特に制限されず、その製品コンセプトなどにより適宜決定できる。【００２９】
本発明の還元型補酵素Ｑとカルニチン誘導体の重量比は、限定されないが、十分な相乗効果が得られる観点から約１００：１ないし約１：１００、好ましくは約１０：１ないし約１：１０、より好ましくは約５：１ないし約１：５、もっとも好ましくは約１：１であってもよい。【００３０】
なお、本明細書に記載されるカルニチン誘導体の重量の分析は、一般的なアミノ酸の分析に用いられる蛍光検出器などを用いたＨＰＬＣ法によって実施される。【００３１】
本発明の抗疲労組成物においては、還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑの混合物を有効成分としても良い。還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑの割合は特に制限はないが、十分な相乗効果が得られる観点から補酵素Ｑ全体に対して還元型補酵素Ｑの割合が、約６０重量％以上であるのが好ましく、約８０重量％以上であるのがより好ましい。上限は最大１００重量％（還元型補酵素Ｑのみ）であり、補酵素Ｑ中の還元型補酵素Ｑの割合が高いほど、カルニチン誘導体とのより高い相乗効果が期待できる。ただし、必ずしも、補酵素Ｑ中の還元型補酵素Ｑの割合を極端に高める必要はなく、安定化対策にかかるコスト等を考慮して適時決定しうる。通常は、９９重量％以下である。【００３２】
本発明で使用出来る還元型補酵素Ｑは前記式（１）で表されるように側鎖の繰り返し単位（式中ｎ）が１〜１２のものを使用することが出来る。ヒトをはじめイヌなどの多くの愛玩動物で十分な効果が得られる観点から、中でも側鎖繰り返し単位が１０のもの、すなわち還元型補酵素Ｑ10が特に好適に使用出来る。【００３３】
本発明の抗疲労組成物の剤形としては特に限定されず、経口剤であってもよく、あるいは皮膚に直接塗布するものであってもよい。経口剤としては、例えば粉末剤であってもよく、結合剤を加えて顆粒剤としてもよく、粉末剤あるいは顆粒剤をカプセルに充填してカプセル剤としてもよい。【００３４】
また、天然油、油状の高級脂肪酸、高級脂肪酸モノグリセライド、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）、界面活性剤またはこれらの混合物などを加え、油状のまま充填してソフトカプセル剤とすることもできる。この場合においては、ゼラチンを主体としたカプセルまたはその他の水溶性高分子物質を主体としたカプセル等を使用することもできる。また、このようなカプセルにはマイクロカプセルも含まれる。あるいは、液状にしてドリンク剤としてもよい。【００３５】
本発明の抗疲労組成物には、更に、上記還元型補酵素Ｑおよびカルニチン誘導体の他に薬剤学的に許容される他の製剤素材を、常法により適宜添加混合してもよい。このようなものとしては特に限定されず、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などが挙げられる。【００３６】
上記賦形剤としては特に限定されず、例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ（トウモロコシ澱粉）、マンニト−ル、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、などが挙げられる。上記崩壊剤としては特に限定されず、例えば、澱粉、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガント等が挙げられる。【００３７】
上記滑沢剤としては特に限定されず、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等が挙げられる。上記結合剤としては特に限定されず、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トラガント、シェラック、ゼラチン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ソルビトール等が挙げられる。【００３８】
上記酸化防止剤としては特に限定されず、例えば、アスコルビン酸、トコフェロール、ビタミンＡ、β−カロチン、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸などが挙げられる。【００３９】
上記着色剤としては特に限定されず、例えば、医薬品に添加することが許可されているものなどを使用することができる。【００４０】
上記凝集防止剤としては特に限定されず、例えばステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸などが挙げられる。【００４１】
上記吸収促進剤としては特に限定されず、例えば高級アルコール類、高級脂肪酸類、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステルなどの界面活性剤などが挙げられる。【００４２】
上記溶解補助剤としては特に限定されず、例えばフマル酸、コハク酸、りんご酸などの有機酸などが挙げられる。上記安定化剤としては特に限定されず、例えば安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチルなどが挙げられる。【００４３】
皮膚に直接塗布する場合は、剤型は、特に限定されるものではなく、例えば、適当な基剤中に上記薬物を溶解または混合分散させてクリーム状、ペースト状、ジェリー状、ゲル状、乳液状、液状の形状になされたもの(軟膏剤、リニメント剤、ローション剤、クリーム剤、スプレー剤など）、基剤中に上記薬物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（パップ剤など）、粘着剤中に上記薬物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（プラスター剤、テープ剤など）などが挙げられる。基材、粘着剤としては必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲で、医薬品、化粧品などに通常用いられている基材が使用出来る。【００４４】
本発明の抗疲労組成物には、抗酸化剤を含有する事ができる。抗酸化剤としては特に限定はされないが、例えば、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、ピロロキノリンキノン、ピクノジェノール、フラバンジェノール、又はセレンなどが適している。また、抗酸化剤として抗酸化酵素を用いても良い。抗酸化酵素としては、特に限定はされないが、例えば、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、又はアスコルビン酸ペルオキシダーゼなどが適している。上記抗酸化剤（抗酸化酵素も含む）は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。【００４５】
本発明の抗疲労組成物は、他の滋養強壮成分を共に含む事ができる。滋養強壮成分としては、特に限定はされないが、例えば、クレアチン、タウリン、ビタミンＢ1、ビタミンＢ誘導体、又はアミノ酸などが適している。上記は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。本発明の補酵素Ｑおよびカルニチン誘導体とこれらの成分を混合する事により、相加的あるいは相乗的な効果が更に期待できる。【００４６】
本発明の抗疲労組成物は、栄養補助成分を共に含む事が出きる。栄養補助成分としては、特に限定はされないが、アミノ酸、金属イオン、糖類、蛋白質類、脂肪酸類、ビタミンなどが挙げられる。【００４７】
本発明の抗疲労組成物を一般食品とする場合の形態は、特には限定されないが、食用油脂組成物、調理油類、スプレー油類、バター類、マーガリン類、ショートニング類、ホイップクリーム類、濃縮乳類、ホワイトナー類、ドレッシング類、ピックル液類、パン類、ケーキ類、パイ類、クッキー類、和菓子類、スナック菓子類、油菓子類、チョコレート及びチョコレート菓子類、米菓類、ルウ類、ソース類、たれ類、トッピング類、氷菓類、麺類、ベーカリーミックス類、フライ食品類、加工肉製品類、水産練り製品類、冷凍アントレ類、畜産冷凍食品、農産冷凍食品などの冷凍食品類、米飯類、ジャム類、チーズ、チーズフード、チーズ様食品、ガム類、キャンデイー類、発酵乳類、缶詰類、飲料類などが挙げられる。【００４８】
本発明の抗疲労組成物は、皮膚に直接塗布することにより、筋肉疲労を改善することができる。この場合、抗炎症作用を示す物質を共に含有する事ができる。抗炎症作用を示す物質とは、特に限定はされないが、ステロイド、サリチル酸およびその誘導体、アリール酢酸およびその誘導体、プロピオン酸およびその誘導体、フェナム酸およびその誘導体、ピラゾロンおよびその誘導体、オキシカムおよびその誘導体、および非酸性抗炎症剤からなる群より選択される少なくとも一種である。【００４９】
ステロイドとしては、例えば、吉草酸酢酸プレドニソロン、アムシノニド、吉草酸ジフルコルトロン、吉草酸デキサメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、酢酸ジフロラゾン、プロピオン酸デキサメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、ジフルプロドナート、フルオシノニド、ハルシノニド、プデソニド、酪酸プロピオン酸ヒドロコルチゾン、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸ベクロメタゾン、フルオシノロナセトニド、トリアムシノロナセトニド、ピバル酸フルメタゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、酪酸クロベタゾン、プロピオン酸アルクロメタゾン、デキサメタゾン、酢酸メチルプレドニソロン、プレドニソロン、酢酸ヒドロコルチゾンが挙げられる。【００５０】
サリチル酸誘導体としては、例えば、アスピリンおよびその誘導体、ジフルサニルが挙げられる。アリール酢酸誘導体としては、例えば、インドメタシン、ジクロフェナク、スリンダク、ナプメトン、プログルメタシン、インドメタシンファルネシル、エトドラクが挙げられる。プロピオン酸誘導体としては、例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、チアプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、アルミノプロフェンなどが挙げられる。【００５１】
フェナム酸誘導体としては、例えば、メフェナム酸、トルフェナム酸などが挙げられる。ピラゾロン誘導体としては、例えば、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾンなどが挙げられる。オキシカム誘導体としては、例えば、ピロキシカム、テノキシカム、アンピロキシカムなどが挙げられる。【００５２】
非酸性抗炎症剤としては、例えば、エピリゾール、チアラミド、エモルファゾンなどが挙げられる。本発明の還元型補酵素Ｑを含有する抗疲労組成物とこれらの成分を混合する事により、相加的あるいは相乗的な抗疲労効果が期待できる。【００５３】
抗疲労効果は、疲労を予防、処置、回復、改善、治療効果を含む。本発明の抗疲労組成物の有効量を、哺乳動物対象に投与することによって、該哺乳動物対象の疲労を予防、処置、回復、改善、治療し得る。【００５４】
「有効量」は、処置される対象への抗疲労効果を付与する化合物分の量を意味する。抗疲労効果は、客観的（すなわち、何らかの試験またはマーカーによって測定可能）または主観的（すなわち対象が効果を指摘または感じる）であり得る。前記の化合物の用量レベルおよび、特異的組み合わせの投与の頻度は、それぞれの使用される化合物の能力、その化合物の代謝的安定性および作用の長さ、患者の年齢、体重、一般健康、性別、食餌、投与の様式および時間、排出の割合、薬物組み合わせ、処置すべき状態の重度、および患者が経験する治療に依存して変化する。【００５５】
本発明の組成物は、還元型補酵素Ｑおよびカルニチン誘導体、並びに存在する場合の酸化型補酵素Ｑを、約０．１ないし１００重量％、好ましくは約１ないし９９重量％、より好ましくは約２ないし９８重量％含み得る。有効量の決定は当業者の通常の技術の範囲内であり、当業者は実験的または経験的に決定し得る。有効量の例としては、約０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日のカルニチン誘導体、好ましくは約０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日のカルニチン誘導体、特に約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日のカルニチン誘導体が挙げられる。なお、前記有効量は、単回または多回投与で投与し得、通常は、経口的に与えられるが、例えば非経腸または経腸投与もまた選択しうる。【００５６】
本発明の組成物は、相乗性組成物であると考えることもまた可能である。ここにいう「相乗性組成物」の語は、還元型補酵素Ｑおよびカルニチン誘導体の相互作用によって、それらを別々に適用した場合に観察される作用を基にして予想される活性、すなわち相加的活性よりも大きな活性が示される組成物を意味する。相乗性組成物の相乗性有効量の例としては、前記の有効量よりも少ない、還元型補酵素Ｑおよびカルニチン誘導体が挙げられるが、また前記の有効量と同様な、約０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日のカルニチン誘導体、好ましくは約０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日のカルニチン誘導体、特に約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日のカルニチン誘導体も挙げられる。【００５７】
本発明は、相乗性有効量の第一の作用成分と第二の作用成分を、別個の単位、例えばカプセル、錠剤または丸薬に製剤化し、そして組み合わせた、組み合わせ剤を提供する。本発明はまた、該組み合わせ剤を、必要により同時的または逐次的に適用すべき旨の指示書とともに含む、またはその旨の表示を付した包装とともに含む、商業的製品を提供する。【００５８】
本発明の抗疲労組成物は、既存の薬学的手法にしたがって、還元型補酵素Ｑを入手し、カルニチン誘導体と混合することを含む製造方法によって製造し得る。あるいは酸化型補酵素Ｑを、カルニチン誘導体を混合する。製造工程のいずれかの時点、例えば混合の前、時または後において、該酸化型補酵素Ｑを酸化型補酵素Ｑに変換してもよい。【００５９】
本発明の還元型補酵素Ｑおよびカルニチン誘導体を含有する抗疲労組成物を作製する際の、還元型補酵素Ｑの含有量、製品形態、製品の保存方法および保存形態は、その抗疲労組成物の商品設計および用途などに応じて適宜決定される。
【実施例】
【００６０】
以下に実施例及び製剤例を揚げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例および製剤例のみに限定されるものではない。【００６１】
（製造例１）還元型補酵素Ｑ10の製造
１０００ｇのエタノール中に、１００ｇの酸化型補酵素Ｑ10（純度９９．４％）、６０ｇのＬ−アスコルビン酸を加え、７８℃にて攪拌し、還元反応を行った。３０時間後、５０℃まで冷却し、同温を保持しながらエタノール３３０ｇと水７０ｇ添加した。このエタノール溶液（還元型補酵素Ｑ10を１００ｇを含む）を攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却し、白色のスラリーを得た。得られたスラリーを減圧濾過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノールで順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶９７ｇを得た。減圧乾燥を除く全ての操作は窒素雰囲気下で実施した。【００６２】
（製造例２）
１００ｇの酸化型補酵素Ｑ10を２５℃で１０００ｇのヘプタン溶液に溶解させた。攪拌しながら、還元剤として次亜硫酸ナトリウム（純度７５％以上）１００ｇに１０００ｍｌの水を加えて溶解させた水溶液を徐々に添加し、２５℃、ｐＨ４〜６で還元反応を行った。２時間後、反応液から水相を除去し、脱気した飽和食塩水１０００ｇでヘプタン相を６回水洗した。以上、すべての操作は窒素雰囲気下で実施した。このヘプタン相を減圧下にて溶媒置換し、５０℃の還元型補酵素Ｑ10の７％（ｗ／ｗ）エタノール溶液を調製した（還元型補酵素Ｑ10を１００ｇ含む）。このエタノール溶液に水５０ｇを添加し、攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却して結晶を析出させた。全ての操作は窒素雰囲気下で実施した。得られたスラリーを減圧濾過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノールで順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに、湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶９７ｇを得た。【００６３】
（実施例１）  若年ラットによるトレッドミル試験（１）
ＳＤ系雄性ラット（７〜１０週齢、ｎ＝２０）を用いて還元型補酵素Ｑ10（約２％の酸化型補酵素Ｑ10を含有する）単独、カルニチン単独および還元型補酵素Ｑ10とカルニチンの併用による抗疲労効果をトレッドミルにより評価した。即ち、トレッドミル装置（型式ＮＫ−７３−４、夏目製作所）を用いて、ラットを１０ｍ／ｍｉｎの速度で走行させ、３分毎に５ｍ／ｍｉｎずつ段階的に速度を上げていき、ラットが走行不能となるまでの時間（最大走行時間）を測定した。
被験物質として、還元型補酵素Ｑ10（但し、約２％の酸化型補酵素Ｑ10を含む）またはカルニチンの０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）水溶液（還元型補酵素Ｑ10またはカルニチン／ＣＭＣ−Ｎａ＝１０ｍｇ／ｍｌ）を作製し、１００ｍｇ／ｋｇの投与量で、ラットに経口投与した。ラットは４群に分け、溶媒投与群、還元型補酵素Ｑ10単独投与群、カルニチン単独投与群、および還元型補酵素Ｑ10とカルニチンの併用群とした。最大走行時間は、投与前および投与３時間後に測定し、最大走行時間の延長時間を算出した。対照群には、０．５％ＣＭＣ−Ｎａ水溶液を投与した。【００６４】
【表１】
0004981442.tif 000007
【００６５】
最大走行時間の値を表１に示す。対照群は被験物質投与前後の最大走行時間の差は、−２５±９２秒で最大走行時間がやや低下する傾向が認められた。還元型補酵素Ｑ10またはカルニチンの単独投与群では、ラットの最大走行時間に投与前後での延長は認められなかったが、還元型補酵素Ｑ10及びカルニチンを投与した群では、ラットの最大走行時間は対照群に比較して有意に増加した。即ち、還元型補酵素Ｑ10とカルニチンを組み合わせることにより、単独では明らかでなかった抗疲労効果が明確に表れ、これらの物質の組み合わせが相乗的な抗疲労作用を生み出すことが判った。【００６６】
（実施例２）若年ラットによるトレッドミル試験（２）
ＳＤ系雄性ラット（７〜１０週齢、ｎ＝１５）を用いて酸化型補酵素Ｑ10とカルニチンの併用および還元型補酵素Ｑ10とカルニチンの併用による抗疲労効果を、実施例１と同様に評価した。【００６７】
【表２】
0004981442.tif 000008
【００６８】
最大走行時間の値を表２に示す。酸化型補酵素Ｑ10とカルニチンの併用では有意な走行時間の延長は認められなかったが、還元型補酵素Ｑ10とカルニチンの併用では有意な走行時間の延長が認められた。即ち、酸化型補酵素Ｑ10とカルニチンの併用では抗疲労効果が明らかではなかったが、還元型補酵素Ｑ10とカルニチンの併用では大変強い抗疲労効果が得られることが判った。【００６９】
（製剤例１）
オリーブオイルを６０℃に加温し、同様に６０℃で溶融した補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）及びＬ−カルニチンを加えた。これにビタミンＥを少しずつ加えて均質とし、常法によりソフトカプセル化した。１カプセル中に補酵素Ｑ10として２０ｍｇ、Ｌ−カルニチンとして２０ｍｇを含有するソフトカプセル製剤を得た。【００７０】
補酵素Ｑ10        ２０重量部
Ｌ−カルニチン    ２０重量部
ビタミンＥ        １５重量部
オリーブ油      ３５０重量部【００７１】
（製剤例２）
補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）及びＬ−カルニチンをアセトンに加え、次いでこれを結晶セルロース（微粉末）に吸着させた後、乾燥した。これをコーンスターチと混合し、常法により散剤とした。【００７２】
補酵素Ｑ10                      １０重量部
Ｌ−カルニチン                  １０重量部
結晶セルロース                  ４０重量部
コーンスターチ                  ５５重量部【００７３】
（製剤例３）
補酵素Ｑ10（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）及びＬ−カルニチンをアセトンに加え、次いでこれを結晶セルロース（微粉末）に吸着させた後、乾燥した。これにコーンスターチ、乳糖、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウムを混合し、次いでポリビニルピロリドンの水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤としてタルクを加えて混合した後、１錠に補酵素Ｑ10を２０ｍｇ、Ｌ−カルニチンを２０ｍｇ含有する錠剤に打錠した。【００７４】
補酵素Ｑ10                                ２０重量部
Ｌ−カルニチン                            ２０重量部
コーンスターチ                            ２５重量部
乳糖                                      １５重量部
カルボキシメチルセルロースカルシウム      １０重量部
結晶セルロース                            ４０重量部
ポリビニルピロリドン                        ５重量部
ステアリン酸マグネシウム                    ３重量部
タルク                                    １０重量部【００７５】
（製剤例４）
下記成分を常法により顆粒化した後、ゼラチン硬カプセルに充填した。１カプセル中に補酵素Ｑ10を２０ｍｇ、Ｌ−カルニチンを２０ｍｇ含有するカプセル剤を得た。【００７６】
補酵素Ｑ10                                    ２０重量部
（還元型補酵素Ｑ10：酸化型補酵素Ｑ10＝８５：１５）
Ｌ−カルニチン                                  ２０重量部
結晶セルロース                                  ４０重量部
コーンスターチ                                  ２０重量部
乳糖                                            ６２重量部
ステアリン酸マグネシウム                          ２重量部
ポリビニルピロリドン                              ３重量部