(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターを含有する、動物の加齢黄斑変性を予防的にまたは治療的に処置するための組成物であって、当該組成物は、当該動物の局所に、結膜下に、眼球後方に、網膜下に、脈絡膜上に、眼内にまたは眼周囲に投与されるように用いられ、当該プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターは、ゲニステインである組成物。
【請求項２】
上記加齢黄斑変性が加齢、遠視、全身性疾患、喫煙、光曝露または栄養失調に起因する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
上記全身性疾患が心臓血管性疾患または高血圧である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
上記加齢黄斑変性が滲出性合併症を伴っている、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
上記滲出性合併症が脈絡膜の血管新生である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
上記滲出性合併症が網膜色素上皮剥離、網膜色素上皮断裂、円板状瘢痕、硝子体出血または網膜下出血である、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
上記加齢黄斑変性が萎縮性合併症を伴っている、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
上記萎縮性合併症がドルーゼン、基底板沈着物、ブルッフ膜の肥厚または網膜色素上皮萎縮症である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
全量で０．１ｍｇから全量で５ｍｇまでの量のゲニステインが眼内に投与されるように用いられる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
全量で０．５ｍｇから全量で１ｍｇまでの量のゲニステインが眼内に投与されるように用いられる、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターを含有する、動物の加齢黄斑変性の滲出性合併症を予防的にまたは治療的に処置するための組成物であって、当該組成物は、当該動物の局所に、結膜下に、眼球後方に、網膜下に、脈絡膜上に、眼内にまたは眼周囲に投与されるように用いられ、当該プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターは、ゲニステインである組成物。
【請求項１２】
上記滲出性合併症が網膜色素上皮剥離、網膜色素上皮断裂、円板状瘢痕、硝子体出血または網膜下出血である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
全量で０．１ｍｇから全量で５ｍｇまでの量のゲニステインが眼内に投与されるように用いられる、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
全量で０．５ｍｇから全量で１ｍｇまでの量のゲニステインが眼内に投与されるように用いられる、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターを含有する、動物の網膜の変性を予防的にまたは治療的に処置するための組成物であって、当該組成物は、当該動物の局所に、結膜下に、眼球後方に、網膜下に、脈絡膜上に、眼内にまたは眼周囲に投与されるように用いられ、当該プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターは、ゲニステインである組成物。
【請求項１６】
プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターを含有する、動物の脈絡膜の変性を予防的にまたは治療的に処置するための組成物であって、当該組成物は、当該動物の局所に、結膜下に、眼球後方に、網膜下に、脈絡膜上に、眼内にまたは眼周囲に投与されるように用いられ、当該プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターは、ゲニステインである組成物。
【請求項１７】
全量で０．１ｍｇから全量で５ｍｇまでの量のゲニステインが眼内に投与されるように用いられる、請求項１５または１６に記載の組成物。
【請求項１８】
全量で０．５ｍｇから全量で１ｍｇまでの量のゲニステインが眼内に投与されるように用いられる、請求項１７に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の技術分野）
本発明は加齢黄斑変性(age-related macular degeneration)を予防的におよび治療的に処置する方法、ならびに網膜の変性、脈絡膜の変性およびブルッフ膜の肥厚を予防的におよび治療的に処置する方法に関する。
【０００２】
（発明の背景）
ヒトの平均寿命が医療技術の発展により絶えず延長されるにつれて、老化に関連する医療問題に取り組む必要性が増大している。老化過程は眼において物理的変化および化学的変化をもたらし、それは視力の喪失、対比感度の減退、ついには完全な視力喪失に至る。失明はおそらく老年人口を苦しめている一番の衰弱疾患である。加齢黄斑変性は６５歳以上の患者の失明の一番の原因である。事実、加齢黄斑変性による視力喪失はアメリカ合衆国６５歳以上の人口のおよそ１０％で見られる(Gerster et al. Age Ageing 20: 60-69 (1991))。世界の老年人口が増加するにつれて、加齢黄斑変性の罹病率は劇的に増加すると予測され、２０３０年までにはアメリカ合衆国だけで７５０万例に到達すると予測されている(Hyman et al. Am J Epidemiol 118: 213-227 (1983))。
【０００３】
加齢黄斑変性は視力の喪失をもたらす眼の進行性、変性性疾患である。加齢黄斑変性の症状としては、視力障害、特に薄明かりでの、読む能力の減退、暗順応に伴う障害そして比較的まれなケースでは急性視力喪失が挙げられる。進行した加齢黄斑変性に関連する合併症は２つのカテゴリー、萎縮性および滲出性に分けられる。萎縮性合併症は網膜色素上皮(RPE)の萎縮症をもたらす網膜色素上皮細胞喪失に関連する。加齢黄斑変性症例のおよそ１０％で見られる滲出性合併症としては円板状瘢痕(disciform scars) (すなわち、繊維状要素(fibrous elements)を含有する瘢痕)および血管新生が挙げられる。最終的には、加齢黄斑変性による失明はRPEの変性およびそれに続く光受容体の死から生じる。
【０００４】
加齢黄斑変性に関連する危険因子としては、加齢、遺伝、全身性疾患、環境因子(例えば、喫煙および光曝露(例えば、Chesapeake Bay Waterman Study, Taylor et al., Arch. Ophthalmol. 110: 99-104 (1992)参照))ならびに栄養失調が挙げられる。遠視および虹彩の色もまたこの疾患に関連している。加齢黄斑変性は、明るい色の虹彩と相関性が見られ、これはおそらく暗い色の虹彩では正常に吸収される損傷を与える光に慢性的に曝露されることによる。この疾患はまた、男性より女性でより多く見られる。
【０００５】
加齢黄斑変性の進行の最もよく証明されたメカニズムとしては、RPEにおける分子の分解が挙げられる。異常分子（おそらく合成後に変化したもの）の不完全な消化がRPE細胞中に廃棄物のポケットを形成し、最終的にこの細胞の正常な代謝を妨害する。その結果、RPE細胞からの異常排泄物はブルッフ膜内で基底板沈着物、ドルーゼンおよび組織片(debris)として凝集する。そのような沈着物は血管新生および／またはRPE細胞の死を引き起こすと考えられている(Young, Survey of Ophthalmology 31(5): 291-306 (1987))。
【０００６】
現在、加齢黄斑変性(AMD)の公知の予防的処置または治療的処置はない。AMDの治療ではないが、レーザー光凝固術は加齢黄斑変性に関連する脈絡膜の血管新生を処置するために使用される。そのような処置は重度の視力喪失の危険を減らすことが証明されてきた。レーザー光凝固術はまた、ドルーゼンを処置するためにも使用されてきた。しかし、レーザー処置は、処置された領域に対応する永久的な盲斑を引き起こし、視力の減退に至る可能性がある。レーザー処置はまた、持続的出血または再発性出血を引き起こし、知覚性網膜剥離の危険性を増加させる可能性がある。多くの患者は、結局は処置したにも関わらず重度の視力喪失を経験する。同様に、一般に老化過程に関連する眼の物理的変化および化学的変化の予防的処置または治療的処置に利用できる方法は現在ない。
【０００７】
加齢黄斑変性の罹患率を考えると、加齢黄斑変性の有効な予防的処置および治療的処置が依然として必要とされている。従って、加齢黄斑変性に関連する萎縮性合併症および滲出性合併症の処置を含む、加齢黄斑変性を予防的におよび治療的に処置する方法を提供することが本発明の主要な目的である。眼の悪化（例えば、網膜の変性、脈絡膜の変性およびブルッフ膜の肥厚）の有効な予防的処置および治療的処置もまた当分野において必要とされている。本発明はそのような処置方法を提供する。本発明のこれらのおよび他の目的ならびに本発明のさらなる特徴は、本明細書に記載する詳細な説明から明らかとなるだろう。
【０００８】
（発明の要旨）
本発明は、加齢黄斑変性に関連する萎縮性合併症および滲出性合併症の処置を含む、加齢黄斑変性を予防的におよび治療的に処置する方法に関する。本発明はまた、動物の網膜の変性を予防的におよび治療的に処置する方法に関する。動物の脈絡膜の変性を予防的にまたは治療的に処置する方法も提供され、動物のブルッフ膜の肥厚を予防的にまたは治療的に処置する方法も同様に提供される。これらの方法はプロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターを投与することを含む。好ましくは、当該プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターが式:
【０００９】
【化９】
0004920134.tif 000002
【００１０】
（式中、V、WおよびXは水素、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロ、エステル、エーテル、カルボン酸基、カルボン酸基の医薬的に許容し得る塩および-SR（式中、Rは水素またはアルキル基である）からなる群から選択され、Yは酸素、硫黄、C(OH)およびC=Oからなる群から選択され、Zは水素およびC(O)OR1（式中、R1はアルキルである）からなる群から選択される）の化合物である。好ましくは、当該アルコキシはC1-C6アルコキシである。好ましくは、当該ハロはフッ素、塩素または臭素である。好ましくは、当該エステルはC1-C6エステルである。好ましくは、当該エーテルはC1-C6エーテルである。好ましいカルボン酸基の医薬的に許容し得る塩としては、ナトリウム塩およびカリウム塩が挙げられる。好ましくは、当該アルキル基はC1-C6アルキル基である。望ましくは、プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターはゲニステインである。
【００１１】
（発明の詳細な説明）
本発明は、プロテインチロシンキナーゼ経路インヒビター、特にゲニステインが、加齢黄斑変性に関連する滲出性合併症および萎縮性合併症を含む加齢黄斑変性ならびに眼障害（例えば、網膜の変性、脈絡膜の変性およびブルッフ膜の肥厚）の予防的処置および治療的処置に有効であるという知見を基礎とする。従って、本発明は加齢黄斑変性を予防的におよび治療的に処置する方法を提供する。「予防的」とは、加齢黄斑変性、特に脈絡膜の血管新生および網膜色素上皮萎縮症に対する全体的または部分的な防護を意味する。「治療的」とは、加齢黄斑変性それ自体の改善、およびさらなる加齢黄斑変性、特に脈絡膜の血管新生および網膜色素上皮萎縮症に対する全体的または部分的な防護を意味する。好ましくは、加齢黄斑変性は加齢、遠視、全身性疾患（例えば、心臓血管性疾患または高血圧）、喫煙、光曝露または栄養失調に起因するものである。
【００１２】
本方法は、加齢黄斑変性の黄斑を予防的にまたは治療的に処置するのに十分な量のプロテインチロシンキナーゼ経路インヒビターを投与することを含む。プロテインチロシンキナーゼ(PTK)経路の任意のインヒビターは、それが安全でかつ有効である限り、本発明の方法で使用し得る。
【００１３】
本発明はさらに加齢黄斑変性に関連する萎縮性合併症と滲出性合併症の両方を予防的におよび治療的に処置する方法を提供する。萎縮性合併症としては、網膜色素上皮の色素障害(pigmentary disturbance)、硬性、軟性および／または融合性ドルーゼン、基底板沈着物、ブルッフ膜の肥厚ならびにRPE萎縮症が挙げられる。ドルーゼンは、しばしば血管新生の前駆体である、RPEの基底膜とブルッフ膜との間の黄色または白色の異常生成物である。滲出性合併症としては脈絡膜の血管新生、RPE剥離、RPE断裂、円板状瘢痕、硝子体出血および網膜下出血が挙げられる。滲出性合併症の予防的処置および治療的処置は基底膜の完全な状態の破壊の防止または阻害により達成される。
【００１４】
本方法は、加齢黄斑変性の滲出性合併症または萎縮性合併症を予防的にまたは治療的に処置するのに十分な量のPTK経路インヒビターを投与することを含む。任意の安全かつ有効なPTKインヒビターを使用することができる。
【００１５】
本発明はさらに、動物の網膜の変性、特に加齢による網膜の変性を予防的におよび治療的に処置する方法を提供する。本明細書中で使用されるように、網膜の変性、特に加齢による網膜の変性は、例えば、色素上皮異常およびガングリオン細胞喪失を含む。網膜の変性はまた、対比感度の減退および視力喪失をもたらす光受容体細胞の喪失を含む。「予防的」とはさらなる網膜の変性に対する全体的または部分的な防護を意味する。「治療的」とは網膜の変性それ自体の改善、およびさらなる網膜の変性に対する全体的または部分的な防護を意味する。
【００１６】
本方法は、網膜の変性、特に加齢による網膜の変性を予防的にまたは治療的に処置するのに十分な量のPTK経路インヒビターの投与を含む。前記したように、安全かつ有効である限り、任意のPTK経路インヒビターを本方法において使用することができる。
【００１７】
さらに、本発明は動物の脈絡膜の変性、特に加齢による脈絡膜の変性を予防的におよび治療的に処置する方法を提供する。脈絡膜の変性、特に加齢による脈絡膜の変性としては、例えば、脈絡膜の平坦化が挙げられる。加齢による脈絡膜の変性としては脈絡毛細管板の萎縮症も挙げられる。「予防的」とは脈絡膜の変性に対する全体的または部分的な防護を意味する。「治療的」とは脈絡膜の変性それ自体の改善、およびさらなる脈絡膜の変性に対する全体的または部分的な防護を意味する。
【００１８】
本方法は、脈絡膜の変性、特に加齢による脈絡膜の変性を予防的にまたは治療的に処置するのに十分な量のPTK経路インヒビターを投与することを含む。任意の安全かつ有効なPTK経路インヒビターを使用することができる。
【００１９】
眼障害としては、さらに、網膜と脈絡膜の間に位置するブルッフ膜の肥厚、特に加齢の結果としてのブルッフ膜の肥厚が挙げられる。ブルッフ膜の肥厚は、血管の多い脈絡膜から光受容体細胞を分離し、網膜において異常を引き起こすことによって視覚を妨害し得る。従って、本発明は、動物のブルッフ膜の肥厚を予防的におよび治療的に処置する方法を提供する。「予防的」とはブルッフ膜の肥厚に対する全体的または部分的な防護を意味する。「治療的」とはブルッフ膜の肥厚それ自体の改善、およびさらなるブルッフ膜の肥厚に対する全体的または部分的な防護を意味する。
【００２０】
本方法は、ブルッフ膜の肥厚を予防的にまたは治療的に処置するのに十分な量のPTK経路インヒビターを投与することを含む。任意の安全かつ有効なPTK経路インヒビターを使用することができる。
【００２１】
本明細書において、「PTKインヒビター」はそのような化合物を言及するために使用されるだろうし、化合物が阻害効果を発揮するのが経路のどの点であるかに関わらず、PTK経路を阻害する任意のおよび全ての化合物を包含することを意図している。PTKインヒビターは当分野で知られており、他のものは当分野で知られているアッセイに従って識別することができる。当業者は、PTKインヒビターによるPTK経路の完全な阻害が好ましいが、PTK経路の部分的な阻害は本発明における予防的効果または治療的効果を達成するのに十分であり得ることをよく理解するだろう。
【００２２】
好ましくは、PTKインヒビターはゲニステイン(5,7-ジヒドロキシ-3-(4-ヒドロキシフェニル)-4H-1-ベンゾピラン-4-オン)もしくはその医薬的に許容し得る、PTK経路阻害類似体またはそのプロドラッグあるいは前記の任意のものの医薬的に許容し得る塩である。従って、PTKインヒビターは下記式:
【００２３】
【化１０】
0004920134.tif 000003
【００２４】
（式中、V、WおよびXは水素、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロ、エステル、エーテル、カルボン酸基、カルボン酸基の医薬的に許容し得る塩および-SR（式中、Rは水素またはアルキル基である）からなる群から選択され、Yは酸素、硫黄、C(OH)およびC=Oからなる群から選択され、Zは水素およびC(O)OR1（式中、R1はアルキルである）からなる群から選択される）の化合物であり得る。好ましくは、当該アルコキシはC1-C6アルコキシである。好ましくは、当該ハロはフッ素、塩素または臭素である。好ましくは、当該エステルはC1-C6エステルである。好ましくは、当該エーテルはC1-C6エーテルである。好ましいカルボン酸基の医薬的に許容し得る塩としては、ナトリウム塩およびカリウム塩が挙げられる。好ましくは、当該アルキル基はC1-C6アルキル基である。望ましくは、PTK経路インヒビターはゲニステインである。
【００２５】
該プロドラッグはゲニステイン、ゲニステインのPTK経路阻害類似体、前記のもののいずれかの医薬的に許容し得る塩の医薬的に許容し得る任意のプロドラッグであり得る。しかしながら、当業者は、使用されるプロドラッグは黄斑、網膜、脈絡膜またはブルッフ膜の周辺で活性なPTKインヒビターに変換しうるものでなければならないことを理解するだろう。好ましいプロドラッグはゲニステイン、ゲニステインのPTK経路阻害類似体、前記のもののいずれかの医薬的に許容し得る塩の脂溶性を増大させるプロドラッグである。好ましいプロドラッグはV、WおよびXのうちの１以上が独立してエステル（例えば、ピバル酸）に誘導されたものである。
【００２６】
上記式の化合物は商業的に広く入手可能である。例えば、ゲニステインはLC Laboratories (Woburn, MA)から入手可能である。商業的に入手できない化合物は当分野で公知の有機合成法を使用して容易に調製することができる。
【００２７】
本発明に従う化合物の特定の類似体、プロドラッグまたは医薬的に許容し得る塩が、黄斑変性、網膜の変性、脈絡膜の変性またはブルッフ膜の肥厚、それらのうち加齢による任意のものを予防的にまたは治療的に処置することができるか否かは実施例２および４〜６で使用されるマウスモデルにおけるその効果により決定することができる。あるいは、PTK経路インヒビターの類似体、プロドラッグおよび医薬的に許容し得る塩は、例えば実施例１に記載した方法のようなインビトロのアッセイで試験することができる。
【００２８】
さらに、カラードップラーイメージング(color Doppler imaging)は眼の病理における薬物の作用を評価するために使用することができる(Valli et al., Ophthalmologica 209(13): 115-121 (1995))。カラードップラーイメージングは超音波検査において近年、発展した技術であり、血流の構造の同時二次元イメージング(simultaneous two-dimensional imaging) および評価を可能にする。従って、萎縮性合併症（例えば、網膜色素上皮萎縮症）および滲出性合併症（例えば、脈絡膜の血管新生）をそのような技術を使用して分析することができる。同様に、網膜の変性に関連する合併症（例えば、光受容体喪失およびガングリオン細胞喪失）ならびに脈絡膜の変性に関連する合併症（例えば、脈絡毛細管板萎縮症および脈絡膜の平坦化）はカラードップラーイメージングを用いて分析することができる。
【００２９】
PTKインヒビターは、所望により、本発明の方法での使用のために適当なマトリックス（例えば、ポリマー性マトリックス）に結合することができる。ポリマー結合化合物がインビボで使用される場合に、該ポリマーが生物学的に許容し得るものであれば(例えば、米国特許5,384,333号および5,164,188号参照)、広範囲のポリマーのうちで任意のものを本発明において使用することができる。
【００３０】
ゲニステインの利点は、ゲニステインが非常に安全かつ有効であることである。例えば、ゲニステインをZucker diabetic fattyラットに経口投与した場合、ゲニステインは、網膜電図記録によって測定すると、６カ月間の期間にわたる75mg/kg/日〜300mg/kg/日の範囲の投薬において、網膜に対して非毒性であることが分かった。さらに、ゲニステインの経口投与は、雄および雌のラットの食物摂取および体重に影響しないことが分かった。また、経口投与したゲニステインは雌ラットの卵巣および子宮の重量に対して影響がないことが分かった。
【００３１】
PTKインヒビター（これは、好ましくはゲニステイン、ゲニステインのPTK経路阻害類似体、ゲニステインのPTK経路阻害プロドラッグ、または前記の任意のものの医薬的に許容し得る塩である）は任意の適切な経路で本発明の方法に従って投与され得る。投与の適切な経路としては、全身的（例えば、経口的または注入によって）、局所的、眼内、眼周囲(例えば、テノン鞘下（subTenon's）)、結膜下、網膜下、脈絡膜上および眼球後方が挙げられる。PTKインヒビターを投与する様式は、加齢黄斑変性、網膜の変性、脈絡膜の変性またはブルッフ膜の肥厚の処置が予防的であるか治療的であるのかどうかにある程度依存する。例えば、加齢黄斑変性の治療的処置のためにPTKインヒビターを投与する様式は、疾患の原因にある程度依存する。
【００３２】
例えば、ドルーゼンおよびRPE過色素沈着症の出現がよくある加齢黄斑変性の最初の兆候であると仮定すれば、ドルーゼンおよびRPE過色素沈着症を検出後すぐにPTKインヒビターを予防として投与することができる。加齢黄斑変性の予防的処置のために、PTKインヒビターを好ましくは全身に（例えば、経口でまたは注入によって）投与する。加齢黄斑変性の治療的処置（すなわち、萎縮性および／または滲出性の合併症の処置）のために、例えば、全身に（例えば、経口でまたは注入によって）、眼内に、局所的に、結膜下に、または眼周囲(例えば、テノン鞘下)にPTKインヒビターを投与することができる。
【００３３】
PTKインヒビターは好ましくは、動物（例えば、哺乳動物、具体的にはヒト）が加齢黄斑変性の危険性にあるか(予防的処置)、または加齢黄斑変性を発症し始めた(治療的処置)ことを決定後すぐに投与する。処置は、使用する特定のPTKインヒビター、投与するPTKインヒビターの量、投与経路、ならびに、もしわかるならば黄斑変性の原因および程度にある程度依存するだろう。同様に、PTKインヒビターは好ましくは、動物（具体的にはヒト）が網膜もしくは脈絡膜の変性またはブルッフ膜の肥厚の危険にあるか(予防的処置)、あるいは、網膜もしくは脈絡膜の変性またはブルッフ膜の肥厚を発症し始めている(治療的処置)ことを決定後すぐに投与する。
【００３４】
当業者は、本発明の方法において有用なPTKインヒビターを投与する適切な方法が利用可能であることを理解するだろう。特定のPTKインヒビターを投与するために１つ以上の経路を使用できるが、特定の経路は他の経路よりも迅速かつ有効な反応を提供できる。従って、記載の投与経路は単なる例示であり、限定するものではない。
【００３５】
本発明に従って、動物（特に、ヒト）に投与する用量は、適切な時間枠にわたって動物における所望の応答を引き起こすのに十分な量にすべきである。当業者は投薬が様々な因子（この因子としては、利用する特定のPTKインヒビターの強さ、動物の年齢、種、状態もしくは疾患状況および体重、ならびに、変性によって影響を受ける、もしくは実際に影響を受けた黄斑、網膜もしくは脈絡膜の量、または肥厚によって影響を受ける、もしくは実際に影響を受けたブルッフ膜の量が挙げられる）に依存することを認識している。また、用量のサイズは、投与の経路、タイミングおよび頻度、ならびに、特定のPTKインヒビターの投与に伴うであろう任意の有害な副作用と所望の生理学的効果の存在、種類および程度によって決定されるだろう。当業者は、様々な状態もしくは疾患状況（特に、慢性の状態もしくは疾患状況）が多重投与を含む持続的な処置を必要とし得ることを理解するだろう。
【００３６】
適切な用量および投薬計画は当業者に公知の従来の範囲決定技術によって決定され得る。概して、化合物の最適用量より少ない、より少量の投薬で処置を開始する。その後、この状況下での最適効果が達成されるまで、投薬を小さな増分で増加する。本発明の方法は、代表的には、全身投与の場合、約1 mg/kg/日〜約100 mg/kg/日、好ましくは約 15 mg/kg/日〜約 50 mg/kg/日の投与を含む。眼内投与は、代表的には、全量で約 0.1 mgから全量で約 5 mgまで、好ましくは全量で約 0.5 mgから全量で約 1 mgまでの投与を含む。好ましい局所投与の濃度は100μＭである。
【００３７】
本発明の方法で使用する組成物は、好ましくは、医薬的に許容し得る担体と、加齢黄斑変性および／またはその萎縮性もしくは滲出性の合併症を予防的にまたは治療的に処置するのに十分な量のPTKインヒビターとを含有する。あるいは、網膜の変性（例えば、加齢に起因するもの）、脈絡膜の変性（例えば、加齢に起因するもの）またはブルッフ膜の肥厚（例えば、加齢に起因するもの）を処置する本発明の方法で使用するための組成物は、好ましくは、医薬的に許容し得る担体と、網膜の変性、脈絡膜の変性またはブルッフ膜の肥厚をそれぞれ予防的にまたは治療的に処置するに十分な量のPTKインヒビターとを含有する。担体は、任意の従来から使用されているものであればよく、化学−物理学的な考察（例えば、溶解度、および化合物との反応性のないこと）によって、および投与の経路によってのみ限定される。当業者は、以下に記載の医薬組成物に加えて、PTKインヒビターがポリマー組成物、包接複合体（例えば、シクロデキストリン包接複合体）、リポソーム、ミクロスフェア、マイクロカプセルなどとして処方され得ることを理解するだろう（例えば、米国特許第4,997,652号、同第5,185,152号および同第5,718,922号参照）。
【００３８】
PTKインヒビターは医薬的に許容し得る酸付加塩として処方され得る。当該医薬組成物に使用する医薬的に許容し得る酸付加塩の例としては、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸および硫酸）および有機酸（例えば、酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息好酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸およびアリールスルホン酸（例えば、p-トルエンスルホン酸）から誘導したものが挙げられる。
【００３９】
本明細書中に記載の医薬的に許容し得る賦形剤（例えば、ビヒクル、アジュバント、担体または希釈剤）は、当業者に周知のものであり、一般に容易に入手可能である。医薬的に許容し得る担体が、PTKインヒビターに対して化学的に不活性なもの、および使用状態での有害な副作用または毒性を有さないものであることが好ましい。
【００４０】
賦形剤の選択は、特定のPTKインヒビターによって、および組成物を投与するために使用する特定の方法によって、ある程度決定されるだろう。従って、本発明の医薬組成物の広範な適切な製剤が存在する。以下の製剤は単なる例示であり、限定するものではない。
【００４１】
注入可能な製剤が本発明の方法に従う好ましいものうちの一つである。注入可能な組成物用の医薬的に有効な担体の要件は当業者に周知である(Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J.B. Lippincott Co., Philadelphia, PA, BankerおよびChalmers編、238-250頁 (1982年)、ならびに ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel、第４版、622-630頁 (1986年)参照)。このような注入可能な組成物を筋肉内、静脈内または腹腔内に投与することが好ましい。
【００４２】
局所製剤は当業者に周知である。このような製剤は、本発明に関して、皮膚への適用に適している。パッチ、角膜シールド（例えば、米国特許第5,185,152号参照）、ならびに眼科用液剤(例えば、米国特許第5,710,182号参照)および軟膏（例えば、点眼剤）の使用もまた当該分野の技術内である。
【００４３】
経口投与に適した製剤は以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）からなり得る：(ａ)液体溶液、例えば、希釈剤（例えば、水、生理食塩水またはオレンジジュース）中に溶解した有効量の化合物;（ｂ）カプセル、サシェ剤（sachet）、錠剤、ロゼンジおよびトローチであって、各々は、予め決定した量の活性成分を固体もしくは顆粒として含む;（ｃ）粉剤;（ｄ）適切な液体中での懸濁液;ならびに（ｅ）適切な乳剤。液体製剤は、医薬的に許容し得る界面活性剤、懸濁化剤または乳化剤の添加あり、または添加なしのいずれかで、希釈剤（例えば、水およびアルコール類（例えば、エタノール、ベンジルアルコール、およびポリエチレンアルコール類）を含み得る。カプセル形態は、例えば、界面活性剤、滑沢剤および不活性充填剤（例えば、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウムおよびトウモロコシデンプン）を含む、通常のハードシェルもしくはソフトシェルのゼラチン型の形態であってもよい。錠剤形態は、１つ以上のラクトース、スクロース、マンニトール、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、アルギン酸、微結晶性セルロース、アカシア、ゼラチン、グアルゴム、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、ならびに他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存剤、着香剤および薬理学的に併用可能な賦形剤を含み得る。ロゼンジ形態は、矯味矯臭薬中の活性成分、（通常は、スクロースおよびアカシアまたはトラガカント）、ならびに不活性基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア）中に活性成分を含む香錠、乳剤、ゲル、活性成分に加えて、当該分野で公知の賦形剤などを含有するものなどを含み得る。
【００４４】
非経口投与に適した製剤は、水性および非水性の等張性滅菌注入溶液と、水性および非水性の滅菌懸濁液とを含み、この等張性滅菌注入溶液は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、および投与対象者の血液と等張性の製剤を与える溶質を含むことができ、該水性および非水性の滅菌懸濁液は、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤および保存剤を含むことができる。インヒビターは、医薬的に許容し得る界面活性剤（例えば、セッケンまたはデタージェント）、懸濁化剤（例えば、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはカルボキシメチルセルロース）もしくは乳化剤および他の医薬的なアジュバントを添加して、または添加しないで、医薬的な担体中の生理学的に許容し得る希釈剤（例えば、以下に挙げる滅菌液体または液体の混合物）中で投与され得る：水、生理食塩水、デキストロースおよび関連の糖の水溶液、アルコール（例えば、エタノール、イソプロパノールまたはヘキサデシルアルコール）、グリコール（例えば、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）、ジメチルスルホキシド、グリセロールケタール（例えば、2,2-ジメチル-1,3-ジオキソラン-4-メタノール）、エーテル（例えば、ポリ(エチレングリコール) 400）、オイル、脂肪酸、脂肪酸エステルもしくはグリセリド、またはアセチル化した脂肪酸グリセリド。
【００４５】
非経口製剤で使用できるオイルとしては、石油、動物性、植物性もしくは合成オイルが挙げられる。オイルの具体的な例としては、落花生油、大豆油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ油、オリーブ油、ワセリンおよび鉱油が挙げられる。
【００４６】
非経口製剤での使用に適した脂肪酸としては、オレイン酸、ステアリン酸およびイソステアリン酸が挙げられる。オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルが適切な脂肪酸エステルの例である。
【００４７】
非経口製剤での使用に適したセッケンとしては脂肪族のアルカリ金属、アンモニウムおよびトリエタノールアミンの塩が挙げられ、適切なデタージェントとしては以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）が挙げられる：（ａ）カチオン性デタージェント（例えば、ジメチルジアルキルアンモニウムハライドおよびアルキルピリジニウムハライドなど）、（ｂ）アニオン性デタージェント（例えば、アルキル、アリールおよびオレフィンのスルホネート、アルキル、オレフィン、エーテルおよびモノグリセリドのサルフェート、ならびにスルホスクシネートなど）、（ｃ）非イオン性デタージェント（例えば、脂肪族アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミドおよびポリオキシエチレンポリプロピレンコポリマーなど）、（ｄ）両性のデタージェント（例えば、アルキル-p-アミノプロピオネートおよび2-アルキル-イミダゾリン四級アンモニウム塩など）、および（ｅ）その混合物。
【００４８】
非経口製剤は、代表的には、約 0.5〜約 25重量％の活性成分を溶液中に含む。保存剤および緩衝剤を使用してもよい。注入の部位における刺激を最小限にするかまたは除去するために、このような組成物は、約 12〜約 17の親水性−親油性バランス(HLB)を有する１つ以上の非イオン性界面活性剤を含んでもよい。
【００４９】
このような製剤中の界面活性剤の量は、代表的には、約 5〜約 15重量％の範囲である。適切な界面活性剤としては、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ソルビタンモノオレイン酸エステル）、およびプロピレングリコールとプロピレンオキシドとの縮合によって形成される疎水性ベースにエチレンオキシドが付加した高分子量の付加体が挙げられる。非経口製剤は、単位用量もしくは多回用量の密封容器（例えば、アンプルおよびバイアル）中に存在してもよく、そして、使用する直前に、注入用の滅菌液体賦形剤（例えば、水）の添加のみを必要とする、フリーズドライ(凍結乾燥)条件下で保存することができる。即時注入溶液および懸濁液は、上述した種類の滅菌粉剤、顆粒および錠剤から調製され得る。
【００５０】
このような組成物は、眼内製剤、持続放出性製剤または装置として処方され得る(例えば、米国特許第5,378,475号参照)。例えば、ゼラチン、コンドロイチン硫酸、ポリホスホエステル（例えば、ビス-2-ヒドロキシエチル-テレフタレート(BHET)、または(様々な割合の)ポリ乳酸-グリコール酸が持続放出性製剤を処方するために使用され得る。インプラント(例えば、米国特許第5,443,505号、同第4,853,224号および同第4,997,652号参照)、装置(例えば、米国特許第5,554,187号、同第4,863,457号、同第5,098,443号および同第5,725,493号参照)、例えば、インプラント可能な装置（例えば、メカニカルレザバ）、眼内導管(例えば、100μ〜1 mm（直径）)を備えた眼内装置または眼球外装置など、あるいは上述のポリマー組成物を包含したインプラントまたは装置が使用され得る。
【００５１】
本発明の方法はまた、他の医薬的に活性な化合物の併用投与を含み得る。「併用投与」とは、上述のようなPTKインヒビターの投与の前、それと同時（例えば、同一の製剤もしくは別個の製剤中でPTKインヒビターと組み合わせて）、またはその後に投与することを意味する。例えば、コルチコステロイド類（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾンまたはトリアムシノロンアセトニド（triamcinalone acetinide））または非コルチコステロイド抗炎症化合物（例えば、イブプロフェンまたはフルビプロベン（flubiproben））が併用投与され得る。同様に、ビタミンおよびミネラル（例えば、亜鉛）、抗酸化剤（例えば、カロチノイド類(例えば、ゼアキサチンまたはルテインなどのキサントフィルカロチノイド)および微量養分が併用投与され得る。さらに、プロテインチロシンキナーゼ経路の他のタイプのインヒビター（これには、天然のプロテインチロシンキナーゼインヒビター〔ケルセチン、ラベンダスチン（lavendustin） A、エルブスタチン（erbstatin）およびへルビマイシン（herbimycin） Aなど〕、ならびに合成のプロテインチロシンキナーゼインヒビター〔チルホスチン（tyrphostin） (例えば、AG490、AG17、AG213 (RG50864)、AG18、AG82、AG494、AG825、AG879、AG1112、AG1296、AG1478、AG126、RG13022、RG14620およびAG555)、ジヒドロキシおよびジメトキシベンジリデンマロノニトリル、ラベンダスチン Aの類似体(例えば、AG814およびAG957)、キナゾリン(例えば、AG1478)、4,5-ジアニリノフタリミドおよびチアゾリジンジオンなど〕が挙げられる）は、ゲニステインまたはその類似体、プロドラッグもしくは医薬的に許容し得る塩と併用投与され得る(Levitzki et al., Science 267: 1782-1788 (1995);ならびにCunningham et al., Anti-Cancer Drug Design 7: 365-384 (1992)参照)。この点について、ゲニステインの潜在的に有用な誘導体として、Mazurekら、米国特許第5,637,703号に記載のものが挙げられる。増殖因子に対する中和タンパク質（例えば、VEGFなどの所定の増殖因子に特異的なモノクローナル抗体）(例えば、Aiello et al., PNAS USA 92: 10457-10461 (1995)参照)、あるいはホスホチロシン(Dhar et al., Mol. Pharmacol. 37: 519-525 (1990))が共に投与され得る。併用投与され得る他の様々な化合物としては以下のものが挙げられる：プロテインキナーゼＣのインヒビター(例えば、米国特許第5,719,175号および同第5,710,145号参照)、サイトカイン調節剤、内皮細胞に特異的な増殖のインヒビター（例えば、トロンボスポンジン（thrombospondin））、内皮細胞に特異的な阻害増殖因子（例えば、TNFα）、抗増殖ぺプチド（例えば、SPARCおよびポルフィリン様ペプチド）、グルタミン酸レセプターアンタゴニスト、アミノグアニジン、アンジオテンシン変換酵素インヒビター（例えば、アンジオテンシン II）、カルシウムチャンネルブロッカー、Ψ-テクトリゲニン（tectorigenin）、ST638、ソマトスタチン類似体（例えば、SMS 201-995）、モノシアロガングリオシド GM1、チクロピジン、神経向性増殖因子、メチル-2,5-ジヒドロキシシンナメート、脈管形成インヒビター（例えば、組換え EPO）、スルホニルウレア経口低血糖剤（例えば、グリクラジド(非インスリン依存性糖尿病)、ST638）(Asahi et al., FEBS Letter 309: 10-14 (1992))、サリドマイド、ニカルジピン塩酸塩、アスピリン、ピセアタノール（piceatannol）、スタウロスポリン（staurosporine）、アドリアマイシン、エピデルスタチン（epiderstatin）、(+)-エアロプリシニン（aeroplysinin）-1、フェナゾシン、ハロメチルケトン、抗脂肪血症剤（例えば、エトフィブレート（etofibrate）、クロルプロマジンおよびスフィンゴシン（spinghosine））、アルドースリダクターゼインヒビター（例えば、トルレスタット（tolrestat）、SPR-210、ソルビニル（sorbinil）または酸素、ならびにレチノイン酸およびその類似体）(Burke et al., Drugs of the Future 17(2): 119-131 (1992);およびTomlinson et al., Pharmac. Ther. 54: 151-194 (1992))。セレノインドール(2-チオインドール)および関連ジスルフィドセレニド（例えば、Dobrusin et al., 米国特許第5,464,961号に記載のもの）は有用なPTKインヒビターである。全身体液貯留（例えば、心臓血管または腎臓の疾患に起因するもの）および重症の全身性高血圧を示す患者は、利尿薬、透析、強心薬および抗高血圧剤でさらに処置され得る。
【００５２】
（実施例）
以下の実施例は、本発明をさらに例示するが、当然、本発明の範囲を限定するものとして考慮すべきではない。
【００５３】
（実施例１）
この実施例は、基底膜の完全な状態の破壊、およびそれに続く網膜内皮細胞の基底膜への浸潤を阻害する際にゲニステインが有効であることを実証する。
【００５４】
bFGF (1-10 ng/ml)の存在下およびゲニステイン (0.2 mg/100 ml)の存在下または非存在下で網膜の毛細血管の内皮細胞をMatrigel (Collaborative Research, Bedford, MA)上で培養した。Matrigelは、基底膜産生腫瘍組織に由来し、網膜の基底膜と同様にＩＶ型コラーゲンおよびラミニンからなり、成分の相対的な割合のみが異なる。
【００５５】
bFGF単独の存在下で培養した網膜毛細血管内皮細胞はMatrigelを浸潤した。ゲニステインの存在はMatrigelへの網膜毛細血管内皮細胞の浸潤を.8 mm減少させた。すなわち、ゲニステインは浸潤を約32%阻害した。
【００５６】
この実施例は、基底膜の完全な状態の破壊、およびそれに続く基底膜への網膜毛細血管内皮細胞の浸潤を阻害するゲニステインの能力を実証する。
【００５７】
（実施例２）
この実施例は、加齢黄斑変性に関連した光受容体の損失および加齢に関連した網膜の変性を阻害するゲニステインの能力を実証する。
【００５８】
黄斑の光誘導損傷へのゲニステインの効果を決定するために、２系統のマウス、老化促進マウス系 9 (senile accelerated mice strain 9) (SAM9)および耐性マウス系 4 (R4) (両系は京都大学、日本からの寄贈品であり、現在、Johns Hopkins Universityで維持されている)を光源に曝露した。SAM9 マウスは、皮膚と眼における加速性の加齢変化の傾向を有する。R4 マウスは、R4 マウスが加速性の老化に関連した身体的な変化に耐性であることを除いて、SAM9と同一である。
【００５９】
全体で約 20-25 匹の各系のマウスを対照群および処置群に分けた。処置群は、約 4 週間までに１日に１回の経口洗浄によってゲニステイン(150 mg/kg 食物)を受容した。光に曝露した後、１、２および３週間でマウスを屠殺した。組織学的研究のために眼を摘出し、連続的に切断した。詳細には、光受容体の核を計数して、後部および末梢の網膜の特定領域にわたる光受容体の損失の程度を決定した。
【００６０】
1週間では、６つの層の光受容体の核の平均を両系のマウスの処置群および対照群の両方で観察した。対照群と処置群との間で、光誘導損傷の量における有意差は存在しなかった。２週間では、ゲニステインは両系の処置群の光誘導損傷の量を有意に減少させた。２〜３層の光受容体の核の平均をゲニステインで処置したSAM9 マウスおよびR4 マウスで観察した。約０〜１層の光受容体の核を対照群で観察した。３週間では、0-1層の光受容体の核の平均を両系の処置および未処置の動物の両方で観察した。
【００６１】
光誘導光受容体細胞の損失へのゲニステインの効果を決定するために、老化促進マウスの追加の系（系 8 (SAM8)）を耐性系 1 (R1)と共に光源に曝露した。２４時間、暗順応の後に全ての被検体を一定の８００ルクスの白色蛍光に曝露した。マウスのそれぞれのSAM8およびR1 系を次の２つの群に分けた:洗浄法によって経口的にゲニステイン (50 mg/kg 体重/日)を受容した処置群、および処置を受けなかった対照群。光曝露の一週間後、外側の核の層（outer nuclear layer）(ONL)の厚さおよび細胞数は、SAM8およびR1の両方のゲニステイン処置群において対照群よりも大きかった。光曝露の二週間後、ONLの厚さは、ゲニステイン処置したR1において、対応する対照群のものよりも大きかった。光曝露の三週間後、ONLの厚さはゲニステイン処置したR1において、対応する対照群のものよりも大きかった。光曝露の二週間および三週間後、SAM8 群において処置による差異はなかった。
【００６２】
この実施例は、光受容体損失（網膜の変性に関連するものなど、加齢および加齢黄斑変性に起因するものなど）を阻害するゲニステインの能力を実証する。
【００６３】
（実施例３）
この実施例は、ブルッフ膜の破壊後に加齢黄斑変性の進行を阻害するゲニステインの能力を例証する。
【００６４】
レーザービームを使用して３匹のカニクイザルのブルッフ膜を破壊し、続いて、脈絡膜の新生血管形成を評価した。レーザーで誘発するブルッフ膜の破壊の前に、100 mgの単回眼内注入によってゲニステインを二匹のサルに投与した。１７の損傷のうち１３が新生血管形成を生じた。１匹のサルには、単回眼内注入(100 mg)に加えて、レーザー処置の２日前から始めて隔日に全体で３回、ゲニステインを経口で投与した(300 mg/kg 体重)。レーザー処置で生じた１８の損傷のうち、わずか２つの損傷のみが脈絡膜の新生血管形成を生じた。
【００６５】
これらの結果は、ゲニステインが、ブルッフ膜の破壊の前に与えられると、第二の新生血管形成の発生を阻害または予防することができ、それによって加齢黄斑変性の進行を阻害することを示す。
【００６６】
（実施例４）
この実施例は、網膜の変性（例えば、加齢に起因するもの）を阻害または改善するための、本明細書中に記載するようなPTK経路インヒビターの有用性を決定する方法を記載する。
【００６７】
２系統のマウス（老化促進傾向系 (SAMP)および耐性系 (SAMR)）は、武田薬品工業株式会社、大阪、日本から得られる。上述のように、SAMPマウスは、眼に加速性加齢変化の傾向を有し、他方、SAMRマウスは、加速性の老化に関連した身体的な変化に対して耐性である。
【００６８】
各系の被検体を対照群と処置群とに分ける。温度および光が制御され(68-72 oF および 7:00 a.m.〜9:00 p.m.で照射する明/暗 サイクル)、随意に食物(PMI Nutrition International, Inc, 1401, St. Louis, MO) および自動ろ過システムからの水を自由摂取できる、高効率の飼育装置を用いて、SPF(specific pathogen-free)条件下で全てのマウスを飼育する。処置群はゲニステイン(50 mg/kg/日)を経口洗浄で一日一回受容するか、あるいはゲニステインは食物(150 mg/kg 食物)中に含められる。
【００６９】
分析に関しては、眼を摘出し、必要に応じて、組織学的研究のために連続的に切断する。光学顕微鏡または電子顕微鏡の場合、アイカップ(eye cup)をリン酸緩衝液中の２％四酸化オスミウムで２時間固定し、アルコール脱水し、エポキシ樹脂中に包埋する。２ミクロン厚の切片をトルイジンブルーで染色し、光学顕微鏡用に使用する。電子顕微鏡の場合、薄切片をクエン酸鉛および酢酸ウラニルで染色し、JOEL JEM-100 CX2 電子顕微鏡(日立、東京、日本)で試験する。次いで、対照および処置した被検体におけるガングリオン細胞の損失および網膜の色素上皮の変化を試験する。詳細には、所望により、ガングリオン細胞の核を計数してガングリオン細胞の損失の程度を決定する。
【００７０】
（実施例５）
この実施例は、脈絡膜の変性（例えば、加齢に起因するもの）を阻害または改善するために、本明細書中に記載するようなPTK経路インヒビターの有用性を決定する方法を記載する。
【００７１】
２系統のマウス（老化促進傾向系 (SAMP)および耐性系(SAMR)）（武田薬品工業株式会社、大阪、日本から入手）を利用して脈絡膜の変性へのゲニステインの効果を分析する。動物を実施例４に記載のように維持する。脈絡毛細管板の萎縮を含む、脈絡毛細管板における変化を実施例４に記載のように光学顕微鏡および電子顕微鏡によって試験する。
【００７２】
また、脈絡膜血管キャスト(choroidal vascular cast)は脈絡毛細管板の萎縮の程度を分析する際に有用である。被検体をケタミンおよびキシラジンの筋内注入（50 mg/kg 体重）によって麻酔する。左心室を５０ｍｌのヘパリン化乳酸加リンガー液で灌流する。次いで、左心室を通してメルコックス（mercox）溶液(Ladd Research Industries, Burlington, VT)を注入する前にマウスを屠殺する。眼を摘出し、前区を微切開（micro-dissection）によって分離する。後区の腐食キャスト（corrosion cast）を0.1 mol KOH中で作製する。組織の完全な漂白の後、水中での慎重な微切開によって、網膜の血管を脈絡膜血管から分離する。走査電子顕微鏡検査(JOEL JSM-84OA 走査電子顕微鏡、日立、東京、日本）の前に、脈絡膜血管のキャストをアルミニウムタブ上に置き、金パラジウムでスパッタコートする。４００Ｘの倍率で各眼球の後極のランダムな領域を記録することによって、脈絡膜血管床の定量分析を行う。脈絡毛細管板の領域をトレースすることによって各４００ｘの写真で脈絡膜血管床の領域を測定するために、Microplan II 画像解析プログラム(Laboratory Computer Systems Inc., MA)使用する。得られる値をまとめ、対のスチューデントｔ検定によって分析する。典型的には、0.05未満のＰ値を有意なものとみなす。
【００７３】
（実施例６）
この実施例は、加齢にしばしば関連するブルッフ膜の肥厚を阻害または改善するために、本明細書中に記載するようなPTK経路インヒビターの有用性を決定する方法を記載する。
【００７４】
２系統のマウス（老化促進傾向系 (SAMP)および耐性系(SAMR)）は、武田薬品工業株式会社、大阪、日本から得られ、これを利用して、ブルッフ膜の肥厚に対するゲニステインの効果を分析する。動物を実施例４に記載するように維持する。ブルッフ膜の肥厚を含む、ブルッフ膜における変化を実施例４に記載するように光学顕微鏡および電子顕微鏡によって試験する。
【００７５】
本明細書中に記載の全ての文献（特許、特許出願、文献の刊行物などを含む）は、その全体が言及により本明細書に組み込まれるものである。
【００７６】
本発明を好ましい実施態様で強調して記載しているが、好ましい化合物および方法のバリエーションが使用されてもよいこと、本発明が本明細書中に詳細に記載した以外の方法で実施してもよいことを意図していることが当業者に明らかであろう。従って、本発明は、上記の特許請求の範囲に規定する本発明の趣旨および範囲内に包含される全ての改変を含む。