(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
0004851018.tif 000005
〔式中、Ｒ1 、Ｒ2 はいずれもカフェオイルであり、
【化２】
0004851018.tif 000006
は５位の水酸基の配位がアキシアル又はエクァトリアルであることを表す〕で示される3，4-ジカフェオイルキナ酸又は3，4-ジカフェオイル-epi-キナ酸を有効成分とするマルターゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、一般式（Ｉ）
【化３】
0004851018.tif 000002
〔式中、Ｒ1 、Ｒ2 はいずれもカフェオイルであり、
【化４】
0004851018.tif 000003
は５位の水酸基の配位がアキシアル又はエクァトリアルであることを表す〕で示される3，4-ジカフェオイルキナ酸又は3，4-ジカフェオイル-epi-キナ酸を有効成分とするマルターゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖尿病は糖代謝の異常によって引き起こされる疾患であり、現在国内には６００万人の患者がいると言われ、又そのほぼ二倍の予備軍がいると推定されている。
【０００３】
糖尿病はインスリン依存型（IDDM）とインスリン非依存型（NIDDM)に大別され、インスリン依存型はウイルス等が原因とされる自己免疫機序によって膵臓のβ細胞が壊死あるいは機能停止することによりインスリンを合成・分泌できないタイプであり、患者の１割弱を占めている。又、インスリン非依存型はインスリン分泌異常とインスリン作用低下を引き起こす遺伝的素因とライフスタイルの変化に伴う肥満、過食、運動不足等の環境因子とが重なって発症するタイプであり、患者の９割以上がこのタイプに含まれる。このタイプの軽症又は中等症の患者における治療には食事療法と運動療法が主に採用されており、食事のカロリー制限及び運動による糖の代謝促進で血糖値の安定が図られている。
【０００４】
しかしながら、食後の血糖値の急な上昇とその持続（食後過血糖）が長年に亘って続くと、いずれは耐糖能異常につながり、糖尿病の悪化に伴って血管障害を促進し、神経症、腎症、網膜症、更には心筋梗塞、脳卒中等の合併症の発症につながる危険性を有している。食後過血糖の抑制はインスリン非依存型糖尿病の発症や悪化予防に効果があるとされ、アカルボースやボグリボース等のα−グルコシダーゼ阻害剤が最近医療用医薬品として利用されている。しかし、このα−グルコシダーゼ阻害剤においても、従来の糖尿病治療薬、例えばスルホニルウレア系薬剤、スルホンアミド系薬剤、ビグアナイド系薬剤又はインスリン抵抗性改善剤等との併用で低血糖症状が発現する等、必ずしも満足できるものではない。
【０００５】
その他、糖尿病以外で高血糖状態を引き起こす要因としてストレスがある。現代はストレス社会ともいわれ、子供から大人に至るまでストレスを感じている人は多い。又、このストレスがもとで暴飲・暴食をする人も少なくない。ストレスは交感神経を興奮させてアドレナリンやノルアドレナリンの分泌を促し、これにより血糖値が上昇するといわれている。したがって、日常生活においてストレスの状態、更に暴飲・暴食等が続くと高血糖状態になる危険性があり、糖尿病と同様の合併症の発症につながるため、日頃から食後過血糖の抑制等による血糖値コントロールが必要である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
以上のように、糖代謝異常は生活習慣病の多くの疾患と関連があることから、生活習慣病の予防又は悪化防止を目的とした新たな薬剤や食品が望まれている。
【０００７】
これまでに、本発明者らは南米アンデス原産のキク科植物ヤーコン〔Yacon：学名 Smallanthus sonchifolia (旧学名Polymnia sonchifolia)〕が糖尿病患者の血糖値を低下させたとの報告〔農業および園芸、第６４巻  第４号  ５３８（１９８９）〕に注目して、この植物の有効利用を検討した。そして、まずウーロン茶葉を混合することで味が改善されること並びにその配合茶が、それぞれを単独で用いた場合に比べて有意に食後過血糖を抑制し、血中の中性脂肪やコレステロールを低下させ更には体重増加を抑制する作用を有することを見出し〔ＰＣＴ出願公開WO98/08527〕、又、桑葉を混合することでヤーコン自体が持つ耐糖能異常の改善作用が増強されることを見出し〔特開2000-342228〕、新たな提案を行った。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
かかる経緯から、本発明者らはヤーコン茎葉部に含まれる血糖上昇抑制作用物質の探索研究を重ねた結果、前記一般式（Ｉ）で示されるジアシルキナ酸が、α−グルコシダーゼのうち特にマルターゼに阻害活性を有し、更に糖負荷試験で有意な血糖上昇抑制作用を有することを見出して本発明を完成するに至った。
【０００９】
本発明の有効成分である化合物は前記一般式（Ｉ）で示されるが、この式中で使用される記号の意味と例を以下に説明する。
【００１０】
【化５】
0004851018.tif 000004
は、キナ酸５位の炭素に結合する水酸基の配位を示す記号であり、アキシアルとエクァトリアルの両方の配位を取り得ることを意味する。
【００１１】
本発明の有効成分であるジアシルキナ酸としては、例えば、以下の化合物を挙げることができるが、本発明はこれらの化合物に限定されるものではない。なお、下記化合物名末尾の括弧内表示は慣用名を示す。
【００１２】
・3,4-O-ジカフェオイル-(1R,3R,4S,5S)-1,3,4,5-テトラヒドロキシシクロヘキサン-1-カルボン酸 ［3,4-ジカフェオイルキナ酸］
【００１３】
・3,4-O-ジカフェオイル-(1α,3α,4α,5α)-1,3,4,5-テトラヒドロキシシクロヘキサン-1-カルボン酸 ［3,4-ジカフェオイル-epi-キナ酸］
【００１４】
一般式（Ｉ）の構造式から明らかなように、化合物（Ｉ）には立体異性体又は光学異性体が存在するが、それらはいずれも本発明の有効成分として利用可能である。
【００１５】
本発明の有効成分である化合物（Ｉ）は、公知物質であり下記文献に記載の方法で分離精製されている。Biosci. Biotech. Biochem. 59(10), 1887-1890(1995)、Biol. Pharm. Bull. 19(7), 966-970(1996)、Chem. Pharm. Bull. 48(11), 1796-1798(2000)。
【００１６】
上記文献からも明らかなように、化合物（Ｉ）に免疫増強作用、抗アレルギー作用、抗酸化作用があることは知られているが、これらのジアシルキナ酸にα−グルコシダーゼ阻害作用や血糖上昇抑制作用があることを開示する文献は存在しない。又、上記文献の方法に準じてヤーコン茎葉部、コーヒー豆から化合物（Ｉ）を分離・精製できる。
【００１７】
【実施例】
次に、前記ジアシルキナ酸のマルターゼに対する阻害活性と血糖値に及ぼす効果を下記試験例１及び２を用いて説明する。なお、これらの試験用検体番号は検体の製造例番号に対応する。
【００１８】
又、各試験では以下の検体を比較化合物として用いた。
検体Ａ：4,5-O-ジカフェオイル-(1R,3R,4S,5R)-1,3,4,5-テトラヒドロキシシクロヘキサン-1-カルボン酸 ［4,5-ジカフェオイルキナ酸］
検体Ｂ：3,5-O-ジカフェオイル-(1R,3R,4S,5R)-1,3,4,5-テトラヒドロキシシクロヘキサン-1-カルボン酸 ［3,5-ジカフェオイルキナ酸］
検体Ｃ：O-4,6-ジデオキシ-4-[[(1S,4R,5S,6S)-4,5,6-トリヒドロキシ-3-(ヒドロキシメチル)-2-シクロヘキセン-1-イル]アミノ]-α-D-グルコピラノシル-(1→4)-O-α-D-グルコピラノシル-(1→4)-D-グルコピラノース ［アカルボース］
【００１９】
［試験例１］マルターゼ阻害活性試験
文献［Analytical Biochemistry 7, 18-25(1964)］記載のグルコースオキシダーゼ比色法に従って、マルターゼ阻害活性（IC50）を測定し、その結果を下記表１に示す。
【００２０】
【表１】
───────────────
検体    IC50(μg/ml)
───────────────
検体１        ２５
検体２        ２５
検体Ａ    ＞３００
検体Ｂ    ＞３００
検体Ｃ          ３
───────────────
【００２１】
上記結果から3,4-ジアシルキナ酸のマルターゼ阻害活性が構造類似の検体Ａ、Ｂに比べて特に強いことが示された。
【００２２】
［試験例２］糖負荷試験（経口投与）
ウィスター系雄性ラット（７週齢、228.5±2.0g、一群５匹）を約１７時間絶食させた後、ポリエチレングリコール（マクロゴール400）３％含有蒸留水に溶解もしくは懸濁させた検体（100mg／kg）をラット経口用ゾンデを用いて経口投与し、３０分後に蒸留水に溶解した可溶性デンプンを同じく経口投与した。可溶性デンプン投与後、１５分毎に１２０分まで尾静脈より採血し、血漿を調製して、血漿中のグルコース濃度をグルコースＢ−テストワコー（和光純薬製）を用いて測定した。
【００２３】
対照群には、検体を含まない以外、上記被験群と同様にして経口投与することで、投与後約３０分に血漿中のグルコース濃度がピークを示し、その後徐々に減衰した。一方、被験群では特に一般式（Ｉ）のジアシルキナ酸の投与によって、投与３０分後の血糖値と投与後０〜１２０分の血糖曲線下面積であるＡＵＣ値が下記表２のごとくいずれも有意に低値を示し、血糖上昇抑制作用が明らかに認められた。
【００２４】
【表２】
───────────────────────
検体    血糖値(mg/dl)    ＡＵＣ(mg/dl・min)
───────────────────────
検体１    163.7±12.1**   15,753±1,192*
検体Ｂ    215.6±7.9      19,605±844
対照群    224.7±4.3      20,163±541
───────────────────────
対照群との有意差［*：Ｐ＜0.01、 **：Ｐ＜0.005］
【００２５】
以上の結果より、一般式（Ｉ）のジアシルキナ酸は、有意に血糖値をコントロールして食後過血糖のような急激な血糖値の上昇を抑制し、血糖値を安定させる作用を示すことから、単独で又は従来の糖尿病薬と組み合わせて糖尿病の悪化防止及び改善効果が期待される。
【００２６】
又、本発明の薬剤は食事による急激な血糖値の上昇を抑制するため、中高年の糖尿病予備軍における過剰カロリー摂取の抑制に有用であり、糖尿病の発症予防効果が期待される。
【００２７】
化合物（Ｉ）を人又は哺乳類に適用する場合、経口的に投与可能であり、剤型としては錠剤、コーティング錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、マイクロカプセル剤、シロップ剤等が使用できる。これらの剤型の調製は薬学的に許容される賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、懸濁化剤、乳化剤、防腐剤、等張化剤、安定剤及び分散剤、例えば乳糖、白糖、でんぷん、デキストリン、結晶セルロース、カオリン、炭酸カルシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム又は蒸留水を用いて行われる。
【００２８】
人に適用する場合の投与量は患者の症状、年齢、体重等に応じて異なるが、成人に対する一日量として１００〜５００mgを１〜４回に分けて投与することができる。
【００２９】
次に、処方例、製造例を挙げて本発明について詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３０】
［処方例］
［処方例１］
製造例１）のジアシルキナ酸を用いた錠剤の処方例（１０錠中）
3,4-ジカフェオイルキナ酸    ４００mg
結晶セルロース              ５００mg
部分α化デンプン            １３０mg
乳糖                        ５００mg
ショ糖脂肪酸エステル          ５０mg
硬化油                        ２０mg
【００３１】
［処方例２］
製造例１）のジアシルキナ酸を用いた細粒剤の処方例（２包中）
3,4-ジカフェオイルキナ酸    ４００mg
結晶セルロース              ５４０mg
乳糖                      １０００mg
ショ糖脂肪酸エステル          ６０mg
【００３２】
［処方例３］
製造例１）のジアシルキナ酸を用いたカプセル剤の処方（６カプセル中）
3,4-ジカフェオイルキナ酸    ４００mg
無水リン酸水素カルシウム    １７０mg
乳糖                        ６００mg
ショ糖脂肪酸エステル          １５mg
硬化油                        １５mg
【００３３】
［製造例］
製造例１）  3,4-ジカフェオイルキナ酸の分離・精製
ヤーコン葉粉末２kgを四分割してそれぞれ500gを沸騰水（5L）で１０分間抽出した。各抽出液をガーゼで濾過し、濾液を合わせて減圧下１Lに濃縮した。これを水飽和n-ブタノール１Lで４回抽出し、n-ブタノール相を合わせて減圧下濃縮して、黄色残渣50.3gを得た。これをスチレンジビニルベンゼン系多孔性樹脂カラム（ダイアイオンHP20、80φ×200mm）にかけて、まず水７Ｌで溶出し、次に9.5Ｌの50％メタノール[メタノール−水(1:1)]で溶出することで835mgのマルターゼ阻害活性画分を得た。この画分を更に修飾デキストラン型ゲル濾過カラム（セファデックスLH20、45φ×410mm）にかけ、30％メタノール[メタノール−水(3:7)]で溶出した後、50％メタノールで10mLずつ分画しながらマルターゼ阻害活性を指標に197mgの画分を得た。次いで、この画分を親水性ビニルポリマー型ゲル濾過カラム（トヨパールHW-40）にかけ、50％メタノールで溶出し、10mLずつ分画しマルターゼ阻害活性を指標として最初の阻害活性画分（250mL溶出後の540mL溶出分）を分取し、溶媒を減圧下除去して淡黄色粉末状の標記化合物61mgを得た。
FAB-MS m/z: 515.1200[M-H]+
NMR(CD3OD)δ：2.0-2.4(4H, m), 4.37(1H, dt, J=4.0Hz, 9.0Hz), 4.99(1H, dd, J=2.5Hz, 7.8Hz), 5.64(1H, dd, J=3.4Hz, 7.5Hz), 6.25(1H, d, J=16Hz), 6.28(1H, d, J=16Hz), 6.72(1H, d, J=7.8Hz), 6.77(1H, d, J=8.3Hz), 6.86(1H, dd, J=1.4Hz, 7.8Hz), 6.92(1H, dd, J=1.6Hz, 7.9Hz), 7.01(1H, d, J=1.9Hz), 7.03(1H, d, J=2.0Hz), 7.54(1H, d, J=16Hz), 7.57(1H, d, J=16Hz)
【００３４】
製造例２）  3,4-ジカフェオイル-epi-キナ酸の分離・精製
製造例１）と同様にしてヤーコン葉粉末より抽出・分離し、親水性ビニルポリマー型ゲル濾過カラムにおける二番目のマルターゼ阻害活性画分［製造例１）の3,4-ジカフェオイルキナ酸溶出後、50％メタノールを更に40mL溶出させた後の70mL溶出分］を分取し、溶媒を減圧下除去することで、淡黄色粉末状の標記化合物５mgを得た。
FAB-MS m/z: 515.1217[M-H]+
NMR(CD3OD)δ：2.0-2.3(4H, m), 4.18(1H, q, J=5.4Hz), 5.14(1H, dd, J=2.5Hz, 7.8Hz), 5.62(1H, t, J=3.5Hz), 6.25(1H, d, J=16Hz), 6.28(1H, d, J=16Hz), 6.73(1H, d, J=7.8Hz), 6.75(1H, d, J=8.3Hz), 6.87(1H, dd, J=1.4Hz, 7.8Hz), 6.92(1H, dd, J=1.6Hz, 7.9Hz), 7.01(1H, d, J=1.9Hz), 7.04(1H, d, J=2.0Hz), 7.50(1H, d, J=16Hz), 7.58(1H, d, J=16Hz)
【００３５】
【発明の効果】
上述したように本発明によれば、ヤーコンに含まれる一般式（Ｉ）のジアシルキナ酸が糖質分解酵素マルターゼに対して阻害作用を示すと共に、糖尿病の発症や悪化に関係する食後過血糖に対して抑制効果を示した。
【００３６】
よって一般式（Ｉ）のジアシルキナ酸は血糖値コントロールに有用な物質であり、糖尿病の予防・改善用薬剤として応用可能である。