(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
造礁珊瑚の微粉末の平均粒径が１．５μｍ以下であることを特徴とするウイルス除去剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルスを効果的に除去するウイルス除去剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザウイルスを始めとし、コロナウイルス、ヘルペスウイルス、肝炎ウイルスその他多くのウイルスが病原ウイルスとして存在している。これらのウイルスから人体への感染を防ぐため、ウイルスを捕獲し除去するウイルス除去剤やウイルスの感染力を消失させる抗ウイルス剤といったものの開発が要望されている。しかし、ウイルスの平均粒子直径は、短径が１〜１０００ｎｍ、長径が５〜１００００ｎｍと非常に小さく、これを捕獲し除去することは非常に困難とされていた。
【０００３】
従来、ウイルスを捕獲し除去する抗ウイルス剤として、ドロマイト（苦灰石）を焼成し、その一部を水和して得た粉末が知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【特許文献１】特開２０００−１８９７６５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上記、特許文献１で開示されている抗ウイルス剤によれば、ウイルスを捕獲し除去する効果は認められるものの、その除去効果が十分とはいえないものであった。
【０００５】
本発明者は、ウイルスをより効果的に捕獲し除去するために試験研究を重ねた結果、多孔質物質である珊瑚に着目し、珊瑚を微粉末にしたとき、微粉末の粒径が特定の粒径で非常に効果的にウイルスを捕獲し除去できることを見出し、本発明を開発するに至った。
【０００６】
本発明の目的とするところは、ウイルスをより効果的に捕獲し除去できるウイルス除去剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記の目的を達成するために、本願発明のウイルス除去剤は、造礁珊瑚の微粉末の平均粒径が１．５μｍ以下であることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係るウイルス除去剤によれば、ウイルスを吸着し効果的に除去することができる。そして、吸着したウイルスの感染性は失活させるものではないが、安定化もせず、吸着したウイルスを、通常の培養液中とほぼ同じ速度で感染性を失わせることができる。
【００１０】
このような構成からなるウイルス除去剤は、繊維に添着して、例えばフィルターとして使用することができ、また、洗浄剤やうがい薬等にも添加して使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明を実施するための最良の形態を説明する。本発明に係るウイルス除去剤は、造礁珊瑚の微粉末からなる。造礁珊瑚を微粉末にするにあたり、先ず、珊瑚骨格を水で洗い乾燥殺菌してから粉砕する。
【００１２】
粉砕した造礁珊瑚の微粉末の粒径としては、特に制限はないが、０．１〜５０μｍが好ましい。また、造礁珊瑚の微粉末の平均粒径は１．５μｍ以下である。
【００１３】
このようにして得られたウイルス除去剤は、その表面にウイルスを結合吸着して除去し、そして、吸着したウイルスの感染性は失活させるものではないが、安定化もせず、吸着したウイルスを、通常の培養液中とほぼ同じ速度で感染性を失わせる。このようにして得られたウイルス除去剤は極めて高いウイルス除去作用があり、従来のドロマイト（苦灰石）を焼成し粉末にして得た抗ウイルス剤に比べ遙かに高いウイルス除去作用を有する。
【００１４】
この発明で除去の対象となるウイルスとしては、アデノウイルス，ヘルペスウイルス，ポックスウイルス，ポリオーマウイルス，パピローマウイルス，パルボウイルス，肝炎ウイルス，ピコルナウイルス，カリシウイルス，トガウイルス，フラビウイルス，インフルエンザウイルス，パラミキソウイルス，ラブドウイルス，フィロウイルス，コロナウイルス，アレナウイルス，ボルナウイルス，レオウイルス，レトロウイルス，昆虫ウイルス，植物ウイルス，バクテリオファージなどが挙げられる。
【００１５】
以下、造礁珊瑚の微粉末のウイルス除去性の実施例及び比較例をあげて、造礁珊瑚の微粉末に極めて高いウイルス除去作用があることを例証する。ただし、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００１６】
本実施例にて用いたウイルス液の調製法およびウイルス感染力価の測定法は、以下の通りである。
【００１７】
＜ウイルス液の調製法＞
インフルエンザウイルスであるＡ／Ｈｙｏｇｏ／７３／２００２（Ｈ１Ｎ１）およびＡ／Ｈｙｏｇｏ／１３／２００４（Ｈ３Ｎ２）について、組織培養細胞を用いてウイルス液を調製した。ＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎｅ−Ｄａｒｂｙ  Ｃａｎｉｎｅ  Ｋｉｎｄｎｅｙ）細胞の単層培養にウイルスをＭｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（Ｍ．Ｏ．Ｉ．）が０．０１（計算上１％の細胞が感染する）になるように接種し、５μｇ／ｍｌトリプシン（例えばＳｉｇｍａ製）添加、血清非添加Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ、例えば日水製薬製）で３４℃、３〜５日培養した。培養上清を２，５００ｇで１０分間遠心し、上清をウイルス液として−８０℃で保存した。
【００１８】
インフルエンザウイルスであるＡ／Ｒ／Ｈｏｋ／１／０４（Ｈ５Ｎ１）について、発育鶏卵を用いてウイルス液を調製した。種ウイルスを１０４倍希釈して（感染価にして１０３ＣＩＵ／ｍｌ）発育鶏卵１０日卵の漿尿膜腔へ２００μｌ接種し、３４℃で転卵しながら３日間培養した。採取した漿尿液を２，５００ｇで１０分間遠心し、上清をウイルス液として−８０℃で保存した。
【００１９】
ＣＩＵ（Ｃｅｌｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｎｇ  Ｕｎｉｔ）は、感染性ウイルス粒子の数の単位で、１ＣＩＵは、理論上１感染性粒子に等しい。
【００２０】
調製したウイルス液の力価を以下に示す方法で測定した。
【００２１】
結果は、
Ａ／Ｈｙｏｇｏ／７３／２００２（Ｈ１Ｎ１）：３．０Ｘ１０６ＣＩＵ／ｍｌ
Ａ／Ｈｙｏｇｏ／１３／２００４（Ｈ３Ｎ２）：１．６Ｘ１０６ＣＩＵ／ｍｌ
Ａ／Ｒ／Ｈｏｋ／１／０４（Ｈ５Ｎ１）：８．４Ｘ１０７ＣＩＵ／ｍｌ
であった。
【００２２】
＜ウイルス感染力価の測定法＞
ＭＤＣＫ細胞に４倍段階希釈したウイルス液を接種した。３４℃で１４時間培養した後、感染細胞を１％パラホルムアルデヒドで１時間、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で１５分間処理して固定した。一次抗体として抗インフルエンザウイルスＡ型ＮＰ蛋白モノクロナル抗体（例えばＵＫ−Ｓｅｒｏｔｅｃ製）、続いて二次抗体としてＦＩＴＣ結合抗マウスＩｇＧウサギ血清（例えば医学生物学研究所製）を用いた間接蛍光抗体法で感染細胞を標識した後、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ製）で観察し、画像解析により計数して感染力価を算出し、ウイルス液からのウイルスの除去と、ウイルスの感染性の変化、ウイルスの除去への造礁珊瑚の微粉末の粒子径の影響を評価した。
【００２３】
［実施例１］
平均粒径１．５μｍの造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）をリン酸緩衝食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ，ＰＢＳ）に１０、５、２．５、１．２５および０．６２５ｍｇ／ｍｌの濃度になるように懸濁し、その４０μｌと２０倍に希釈したインフルエンザウイルス（Ａ／Ｈｙｏｇｏ／７３／２００２（Ｈ１Ｎ１））３６０μｌを混合した。５分おきに攪拌しながら室温に３０分間置いた後、２，５００ｇで５分間遠心して造礁珊瑚の微粉末（沈殿ＳＭＰ）と上清とに分けた。沈殿の造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）には新しいＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ）を４００μｌ添加して懸濁液とし、上清とともに、それぞれの液中のウイルス力価（感染力価）を測定し、インフルエンザウイルスの造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）への吸着とウイルス液からの除去性を評価した。
【００２４】
結果を図１に示す。図１から明らかなように、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）の濃度が増すにつれ試料中（上清中）のインフルエンザウイルス力価が減少し、１０ｍｇ／ｍｌの濃度では、残存ウイルス力価はほとんど検出できなくなった。反対に、沈殿ＳＭＰ画分のウイルス力価は上昇し、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）がインフルエンザウイルスを吸着し、試料液中から除去したことを確認でき、インフルエンザウイルスの造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）への吸着とウイルス液からの除去性はきわて良好であった。
【００２５】
なお、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）が１０ｍｇ／ｍｌの濃度の場合では、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）の量が多すぎ、吸着したウイルスの感染価を正確に測定できなかった。
【００２６】
［実施例２］
造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）のウイルスへの作用として、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）にウイルスが吸着することで感染性に影響を与えるかどうか検討するために、インフルエンザウイルス（Ａ／Ｈｙｏｇｏ／７３／２００２（Ｈ１Ｎ１）を実施例１と同じ平均粒径１．５μｍの造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）に吸着させた後４℃に保存し、３日および１０日後に感染性を測定し、４℃に保存した通常の培養液中のウイルスの感染性の変化と比較し、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）に吸着したインフルエンザウイルスの感染性の変化を評価した。
【００２７】
結果を図２に示す。図２から明らかなように、培養液中および造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）に吸着したインフルエンザウイルスの感染力価は、３日後に、元の力価の約６０％、１０日後に数％にまで減少し、ほぼ同じ経過で失活した。したがって、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）はウイルスを失活させることも安定化することもなく、吸着により試料中のウイルス感染力価を減少させることができる。
【００２８】
［実施例３］
造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）の粒子の大きさによるウイルス吸着効果の違いを検討するため、平均粒径１．５μｍと４μｍの造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）のＰＢＳ懸濁液（５ｍｇ／ｍｌ）４０μｌに、インフルエンザウイルス（Ａ／Ｈｙｏｇｏ／７３／２００２（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／Ｈｙｏｇｏ／１３／２００４（Ｈ３Ｎ２）またはＡ／Ｒ／Ｈｏｋ／１／０４（Ｈ５Ｎ１）を１．５Ｘ１０５ＣＩＵ／ｍｌに希釈した液３６０μｌを加え、５分おきに攪拌しながら室温に３０分間置いた後、２，５００ｇで５分間遠心して造礁珊瑚の微粉末（沈殿ＳＭＰ）と上清とに分けた。沈殿の造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）には新しいＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ）を４００μｌ添加して懸濁液とし、上清とともに、それぞれの液中のウイルス力価（感染力価）を測定し、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）のインフルエンザウイルス除去性への粒子径の影響を評価した。
【００２９】
結果は図３に示す。図３から明らかなように、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）はＨ１Ｎ１以外のインフルエンザウイルスも良く吸着し、試料液中から除去したことを確認できた。そして、また、粒子径１．５μｍと４μｍの造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）を比較すると、ウイルス除去能力は平均粒径１．５μｍの粒子の方が１．６〜４．３倍程度優れていることが確認できた。これは造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）によるウイルス除去作用が吸着によるものなので、粒径の小さいものの方が、単位重量あたりの表面積が大きいためであると考えられる。
【００３０】
［比較例１］
平均粒径１．５μｍと４μｍのドロマイト（ＤＭ）を実施例３と同じ条件でサンプルを作り、実施例３と同じ条件でウイルス試料からのウイルス力価（感染力価）を測定し、実施例３による造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）のインフルエンザウイルス除去性と比較して評価した。
【００３１】
実施例３の結果と比較した比較例１の結果を図４（平均粒径１．５μｍ粒子）と図５（平均粒径４μｍ粒子）に示す。ドロマイト（ＤＭ）処理後の残存ウイルス力価は、平均粒径１．５μｍで比較した場合、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）の１．１〜４．３倍程度高く（図４）、平均粒径４μｍで比較した場合、１．６〜４．２倍程度高い（図５）ことが示された。これにより、造礁珊瑚の微粉末（ＳＭＰ）はドロマイト（ＤＭ）よりも試料中のウイルス除去能力が優れていることが確認できた。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】本発明に係るウイルス除去剤によるウイルスの除去性を示すグラフ。
【図２】本発明に係るウイルス除去剤に吸着したウイルスの感染性の変化を示すグラフ。
【図３】本発明に係るウイルス除去剤のウイルス除去性への粒子径の影響を示すグラフ。
【図４】本発明に係るウイルス除去剤とドロマイトとのウイルス除去性の比較（平均粒径１．５μｍ粒子）を示すグラフ。
【図５】参考例のウイルス除去剤とドロマイトとのウイルス除去性の比較（平均粒径４μｍ粒子）を示すグラフ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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