(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化学構造、
【化１】
0004854850.tif 000007
を有する４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１）又は薬理学的に許容されうるその塩。
【請求項２】
以下の化学構造、
【化２】
0004854850.tif 000008
を有する４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ａ）又は薬理学的に許容されうるその塩。
【請求項３】
以下の化学構造、
【化３】
0004854850.tif 000009
を有する４−アミノ−４−デオキシ−１０−エチル−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｂ）又は薬理学的に許容されうるその塩。
【請求項４】
以下の化学構造、
【化４】
0004854850.tif 000010
を有する４−アミノ−４−デオキシ−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｃ）又は薬理学的に許容されうるその塩。
【請求項５】
以下の化学構造、
【化５】
0004854850.tif 000011
を有する４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｄ）又は薬理学的に許容されうるその塩。
【請求項６】
葉酸拮抗剤に応答する新生物の増殖を治療するための製薬的組成物であって、前記新生物の増殖を阻止するための、製薬的に許容されうる担体若しくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む製薬的組成物。
【請求項７】
葉酸拮抗剤に応答する新生物の増殖を治療するための製薬的組成物であって、前記新生物の増殖を阻止するための、製薬的に許容されうる担体若しくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８，１０−トリデアザ−プテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ａ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む製薬的組成物。
【請求項８】
葉酸拮抗剤に応答する新生物の増殖を治療するための製薬的組成物であって、前記新生物の増殖を阻止するための、製薬的に許容されうる担体若しくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−１０−エチル−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｂ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む製薬的組成物。
【請求項９】
葉酸拮抗剤に応答する新生物の増殖を治療するための製薬的組成物であって、前記新生物の増殖を阻止するための、製薬的に許容されうる担体若しくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｃ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む、葉酸拮抗剤に応答する新生物の増殖を治療するための製薬的組成物。
【請求項１０】
葉酸拮抗剤に応答する新生物の増殖を治療するための製薬的組成物であって、前記新生物の増殖を阻止するための、製薬的に許容されうる担体若しくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｄ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む製薬的組成物。
【請求項１１】
アレルゲンまたは自己免疫応答によって生ずる炎症を治療するための製薬的組成物であって、炎症を改善するための、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む製薬的組成物。
【請求項１２】
アレルゲンまたは自己免疫応答によって生ずる炎症を治療するための製薬的組成物であって、炎症を改善するための、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ａ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む製薬的組成物。
【請求項１３】
アレルゲンまたは自己免疫応答によって生ずる炎症を治療するための製薬的組成物であって、炎症を改善するための、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−１０−エチル−５，８，１０−トリデアザ−４’−メチレングルタミン酸（１ｂ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む製薬的組成物。
【請求項１４】
アレルゲンまたは自己免疫応答によって生ずる炎症を治療するための製薬的組成物であって、炎症を改善するための、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｃ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む製薬的組成物。
【請求項１５】
アレルゲンまたは自己免疫応答によって生ずる炎症を治療するための製薬的組成物であって、炎症を改善するための、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｄ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む製薬的組成物。
【請求項１６】
新生物増殖を治療するための薬剤の製造における、製薬的に許容されうる担体若しくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１）又は薬理学的に許容されうるその塩の使用。
【請求項１７】
新生物増殖を治療するための薬剤の製造における、製薬的に許容されうる担体若しくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ａ）又は薬理学的に許容されうるその塩の使用。
【請求項１８】
新生物増殖を治療するための薬剤の製造における、製薬的に許容されうる担体若しくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、４−アミノ−４−デオキシ−１０−エチル−５，８，１０−トリデアザ−４’−メチレングルタミン酸（１ｂ）又は薬理学的に許容されうるその塩の使用。
【請求項１９】
新生物増殖を治療するための薬剤の製造における、製薬的に許容されうる担体若しくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、４−アミノ−４−デオキシ−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｃ）又は薬理学的に許容されうるその塩の使用。
【請求項２０】
新生物増殖を治療するための薬剤の製造における、製薬的に許容されうる担体若しくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｄ）又は薬理学的に許容されうるその塩の使用。
【請求項２１】
アレルゲンまたは自己免疫応答によって生ずる炎症性疾患を治療するための薬剤の製造における、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１）又は薬理学的に許容されうるその塩の使用。
【請求項２２】
アレルゲンまたは自己免疫応答によって生ずる炎症性疾患を治療するための薬剤の製造における、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ａ）又は薬理学的に許容されうるその塩の使用。
【請求項２３】
アレルゲンまたは自己免疫応答によって生ずる炎症性疾患を治療するための薬剤の製造における、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、４−アミノ−４−デオキシ−１０−エチル−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｂ）又は薬理学的に許容されうるその塩の使用。
【請求項２４】
アレルゲンまたは自己免疫応答によって生ずる炎症性疾患を治療するための薬剤の製造における、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、４−アミノ−４−デオキシ−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｃ）又は薬理学的に許容されうるその塩の使用。
【請求項２５】
アレルゲンまたは自己免疫応答によって生ずる炎症性疾患を治療するための薬剤の製造における、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｄ）又は薬理学的に許容されうるその塩の使用。
【請求項２６】
喘息を改善するための、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む、喘息を治療するための製薬的組成物。
【請求項２７】
喘息を改善するための、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ａ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む、喘息を治療するための製薬的組成物。
【請求項２８】
喘息を改善するための、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−１０−エチル−５，８，１０−トリデアザ−４’−メチレングルタミン酸（１ｂ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む、喘息を治療するための製薬的組成物。
【請求項２９】
喘息を改善するための、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｃ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む、喘息を治療するための製薬的組成物。
【請求項３０】
喘息を改善するための、製薬的に許容されうる担体もしくは希釈剤を伴なう若しくは伴なわない、治療上有効な且つ無毒性量の４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１ｄ）又は薬理学的に許容されうるその塩を含む、喘息を治療するための製薬的組成物。
【請求項３１】
以下の化学構造
【化６】
0004854850.tif 000012
を有し、４−メチレングルタメート部分が「Ｌ」配置である４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１）又は薬理学的に許容されうるその塩。
【請求項３２】
以下の化学構造
【化７】
0004854850.tif 000013
を有し、４−メチレングルタメート部分が「Ｄ」配置である４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸（１）又は薬理学的に許容されうるその塩。
【請求項３３】
以下の化学構造
【化８】
0004854850.tif 000014
を有し、４−メチレングルタメート部分が「Ｌ」配置である４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸又は薬理学的に許容されうるその塩。
【請求項３４】
以下の化学構造
【化９】
0004854850.tif 000015
を有し、４−メチレングルタメート部分が「Ｌ」配置である４−アミノ−４−デオキシ−５，８−ジデアザプテロイル−４’−メチレングルタミン酸又は薬理学的に許容されうるその塩。
【請求項３５】
前記薬理学的に許容されうる塩が、ナトリウム塩若しくはカリウム塩である、請求項１〜５及び３１〜３４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３６】
前記薬理学的に許容されうる塩が、ナトリウム塩若しくはカリウム塩である、請求項６〜１５及び２６〜３０のいずれか１項に記載の製薬的組成物。
【請求項３７】
前記薬理学的に許容されうる塩が、ナトリウム塩若しくはカリウム塩である、請求項１６〜２５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３８】
効果を増強するために、抗腫瘍剤をさらに含む、請求項６〜１０のいずれか１項に記載の製薬的組成物。
【請求項３９】
効果を増強するために、抗腫瘍剤の使用をさらに含む、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４０】
自己免疫応答によって生ずる炎症性疾患が関節リウマチである、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、代謝的に不活性で、高いレベルの抗炎症作用および抗腫瘍作用を示す葉酸拮抗物質に関する。代謝的に不活性な古典的葉酸拮抗物質は新規であり、従って、それらは本発明に引用するものなどの予期しなかった生物的特性を示す。本発明の分野は、新規で新しい葉酸代謝拮抗物質の抗炎症作用と、抗悪性腫瘍作用と、抗リウマチ作用とに関する。
【０００２】
本発明の化合物の番号は、明細書全体においてその化合物番号が同じ化合物を識別する。
【０００３】
【従来の技術】
葉酸拮抗物質は、葉酸代謝の種々の段階において妨害する化合物である[ネイア（Ｍ．Ｇ．Ｎａｉｒ）、「抗腫瘍剤の化学（Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ａｇｅｎｔｓ）」、第７章；ブラッキー＆サンズ（Ｂｌａｃｋｉｅ＆Ｓｏｎｓ）、  ロンドン、１９９１年]。葉酸塩は、ＤＮＡのプリンおよびピリミジンヌクレオチド前駆体の生合成に必須であるビタミンである。従って、葉酸拮抗物質はＤＮＡ生合成、ひいては細胞分割を阻害することができる。実際、活性ビタミンのテトラヒドロ葉酸の生成を介するジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）の阻害という点で強力な葉酸拮抗物質であるメトトレキセート（ＭＴＸ）は、絨毛癌およびバーキットリンパ腫に治療効果を示す。ＭＴＸはまた、種々の形態のヒト癌を治療するために、単独薬剤として、または他の薬剤と併用して広範に使用される[ネイア（Ｍ．Ｇ．Ｎａｉｒ）、「癌の増殖と進行：ヒトにおける癌治療（Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：Ｃａｎｃｅｒ  Ｍａｂａｇｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｍａｎ）」第１０巻、カイザー（Ｈ．Ｅ．Ｋａｉｓｅｒ）（編）；クルーワー  アカデミック  パブリッシャー（Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、第７章、１９８９年]。ＭＴＸの抗リウマチ作用は十分に文献に示されており、現在、商品名リウマトレックス（Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ）で関節炎軽減剤として使用されている。ＭＴＸはまた喘息に対する作用も有するが、実験以外ではこの適応症にはまだ臨床では使用されていない。
【０００４】
１９７３年に、ネイア（Ｍ．Ｇ．Ｎａｉｒ）とボー（Ｂａｕｇｈ）[Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１２，３９２３，１９７３]は、ＭＴＸはヒトおよびヒト以外のほ乳類の組織においてポリグルタミル誘導体に代謝されることを発見した。ＭＴＸポリグルタメートは細胞内で一旦形成されると、容易に流出せず、長期間残存して、腫瘍細胞および正常細胞に細胞毒性作用を与える。ＭＴＸと比較してＭＴＸポリグルタメートはこのように長時間の残存することにより宿主に毒性を生じる可能性がある。１９９１年にネイア（Ｍ．Ｇ．Ｎａｉｒ）は、広く認められている考えとは異なり、古典的葉酸拮抗物質のポリグルタミル化は抗腫瘍作用に必須ではないことを発見した[米国特許第５，０７３，５５４号]。実際、この代謝的変換は薬剤の薬理的制御および標的特異性を損失させることがある。この新たな所見により、数多くのポリグルタミル化され得ない古典的葉酸拮抗物質が発見され、ヒト固形腫瘍を治療するための実験的抗癌剤としてメチレン−１０−デアサアミノプテリン[ＭＤＡＭ]が臨床開発された[Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２，７０７−７１２，１９９６]。１９９６年に、ネイア（Ｍ．Ｇ．Ｎａｉｒ）らは、ＭＤＡＭの活性なエナンチオマーを、Ｌ−配座を有するものとして[Ｌ−ＭＤＡＭ]同定した[米国特許第５，５５０，１２８号]。ある種のポリグルタミル化され得ない葉酸拮抗物質の代謝的性質を明らかにするための、ネイア（Ｍ．Ｇ．Ｎａｉｒ）らによるさらなる検討により、４−メチレングルタメート部分の存在が、このような化合物と、対応する７−ヒドロキシ誘導体への酸化的不活性化を仲介する肝臓酵素アルデヒドオキシダーゼとの結合を変化させるということが予期せず発見された[Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３，２９，１９９６]。
【０００５】
ＭＴＸのインビボにおける別の変換は、腸肝循環への流入の際に生じるＣ９−Ｎ１０結合の切断である。切断された生成物は不活性であるので、別の代謝的不活性化経路となる。腸管微生物叢はメトトレキセートおよびアミノプテリンのＬ−グルタメート部分を離脱して不活性な化合物を形成することができ、それが腸肝循環を介して全身循環に入り、さらにこれらの薬剤の生化学的薬理を悪いことに複雑にすることも文献に示されている。このような、薬剤の不活性化の多経路および７−ヒドロキシ誘導体の形成を共に考慮すると、ポリグルタミル化および標的細胞への輸送に関しての親薬剤との競合並びに上記の代謝的変換に二次的な標的特異性の損失により、ＭＴＸの薬理的制御が害されるだけでなく、効果が損失し、望ましくない毒性が発現する。
【０００６】
ヒト癌を治療するための低毒性で特異性の高い葉酸拮抗物質を開発する目的の継続プログラムの一部として、実験的抗癌剤メチレン−１０−デアザアミノプテリン[ＭＤＡＭ]のプテリジン環をキナゾリン環と交換した。この新規な化合物１は、数多くの生物試験系を使用して、抗腫瘍剤としての利用性の可能性を評価したとき、予期しなかった生物的特性を示した。例えば、１はウサギ肝アルデヒドオキシダーゼと共にインキュベーションしたとき、全く不活性で、それが対応する７−ヒドロキシ誘導体に変換しないことを確立した。化合物１および１ｄは、シュードモナス属菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄ  ｓｐ）由来のカルボキシペプチダーゼと共にインキュベーションした結果、４−メチレングルタメート部分が離脱されず、４−メチレングルタメート部分は腸管細菌叢による微生物不活性化を受けないことを確立した。さらに、おそらく１が代謝的変換に対して全く不活性であることにより、他の古典的な葉酸拮抗物質と異なって、１は治療関連濃度で数多くのヒト白血病およびヒト固形腫瘍培養細胞を死滅させることができた。化合物１はまた、ＭＴＸの１０位のメチルアミノ基とは違ってメチレン基を有するので、橋結合の切断による細菌不活性化を受けない。数多くの培養ヒト癌細胞の増殖に対する阻害作用について評価したとき、化合物１はＭＴＸおよびＭＤＡＭのどちらよりも活性が顕著に大きかった。酵素ホリポリグルタメート合成酵素を使用してさらに実施したインビトロ評価は、本明細書において報告する１およびその類似物は、４−メチレングルタメート部分が存在することにより、ポリグルタメートを生成しないことを明らかにした。従って、１の予期しなかった高い生物活性は、インビボにおける代謝が全く欠損している点に原因があるはずである[図−１]。トリメトレキサートと異なり、本発明に記載する化合物は、４−メチレングルタメート部分が存在することにより、還元型葉酸輸送体（ＲＦＴ）によって標的腫瘍細胞に輸送され得る。さらに驚くべきことには、平行して、ポリグルタミル化欠損という点においてＭＴＸに抵抗性である白血病細胞の増殖を阻害する際に、化合物１はＭＴＸ感受性の野生型親世代ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞系統と比較して、４〜５倍感受性が大きかった。従って、本発明は、ジヒドロ葉酸レダクターゼの代謝的に不活性な古典的葉酸類似物阻害剤は、メトトレキセートおよびアミノプテリンなどの代謝され得る古典的葉酸拮抗物質と比較して、また７−水酸化され得るが、ポリグルタミル化され得ない葉酸拮抗物質ＭＤＡＭおよびＭＥＤＡＭと比較して優れた抗腫瘍剤であることを示す。代謝的に無効なＤＨＦＲ阻害剤のモデルとして、化合物１をＭＴＸと比較して抗炎症剤としての可能性のある薬剤として評価し、驚くべきことに、喘息のこの動物モデルにおいて顕著な作用を示し、代謝的に不活性なＤＨＦＲ阻害剤の卓越性を確証した。実際、１は、アレルギーウサギを使用して評価したとき、ＭＴＸより優れているだけでなく、早期および後期喘息応答並びに気管支過剰応答（ＢＨＲ）において周知の抗喘息剤テオフィリンより優れていることが見いだされた。本発明において報告する抗癌作用および抗炎症作用を有する葉酸拮抗物質には、アルデヒドオキシダーゼが介する７−水酸化が不可能な修飾されたＣ９−Ｃ１０領域と、ポリグルタミル化およびアルデヒドオキシダーゼへの結合の調整を受けない４−メチレングルタメート部分とを有する１に近似した類似物が含まれる。これらのキナゾリン系化合物[１、１ａ、１ｂ、１ｃおよび１ｄ]はラセミ体のＤ，Ｌ−４−メチレングルタメート部分、純粋な鏡像体Ｄ−４−メチレングルタメート[「Ｄ」配置]部分または純粋な鏡像体Ｌ−４−メチレングルタメート[「Ｌ」配置]部分を有してもよい。それらは、また、酵素ジヒドロ葉酸レダクターゼを阻害することにより、関節リウマチを治療するのに有用である。
【０００７】
従って、本発明は、新生物疾患[白血病、腹水腫瘍および固形腫瘍]を治療するための方法と、喘息および関連する炎症性疾患を治療するための方法と、関節リウマチおよび他の自己免疫疾患を治療するための方法とであって、白血球の割合が異常であるかまたは悪性新生物、喘息もしくは関節リウマチの他の徴候を有する温血動物に、治療的に有効で、無毒性の量の５，８，１０−トリデアザ−４’−メチレンアミノプテリン（１）[本明細書において化合物１と呼ぶ]またはその近似した類似物１ａ〜１ｄをそれら自体で、または薬理学的に許容されうるそれらの塩の形態で投与することを含む方法を提供する。それらは、毒性を低下するために、ロイコボリン[フォリン酸；シトロボラム因子]などの他の化合物と併用してもよく、または効果を増強するために、トムデックス（ｔｏｍｕｄｅｘ）、５−ＦＵ；５−ＦｄＵＲ；カルボプラチン、オキサロプラチンもしくはシスプラチン；タキソール、カンポテシン（ｃａｍｐｏｔｈｅｃｉｎｓ）またはシクロホスファミドを含むが、これらに限定されない他の抗癌剤と併用してもよい。
【０００８】
１またはその近似した類似物[１ａ〜１ｄ]の塩は、キナゾリン環の１つ以上のアミノ基と、酢酸、塩酸、硫酸、スルホン酸、硝酸、臭化水素酸、リン酸、クエン酸、サリチル酸またはメタンスルホン酸などの酸とによって形成され得る。化合物１またはその近似の類似物およびそれらの塩は経口経路または非経口経路（腹腔内、静脈内、髄腔内、皮下、筋肉内等）によって温血動物に投与され得る。毒性をさらに低下するために、より高用量の１またはその近似の類似物[１ａ〜１ｄ]をラセミ体のロイコボリン[６−（Ｒ，Ｓ）５−ホルミルテトラヒドロ葉酸]および／または葉酸と併用して投与してもよい。
【０００９】
化合物１またはその近似の類似物[１ａ〜１ｄ]は、患者への投与を容易にするための複合形態で提供されても、単位用量形態で提供されてもよい。毒性がなく、滅菌済みの担体を１およびその近似の類似物に添加してもよい。この担体は、媒体、基剤または賦形剤として働くことができる固体、液体もしくは半固体とすることができる。メチルセルロース、ポリヒドロキシベンゾエート、タルク、ゼラチン、乳糖、デキストロース、デンプン、マンニトール、ソルビトール、鉱物油、アカシアゴム、カカオ油またはステアリン酸マグネシウムが担体として使用されてもよい。患者に投与するための、これらの物質の有用で好ましい別の製剤は、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウム溶液に溶解することによって、対応するナトリウム塩またはカリウム塩に変換したものである。得られた溶液は、そのまま使用しても、または固体のナトリウム塩もしくはカリウム塩に凍結乾燥されてもよく、便利に、水性もしくは非水性の基剤もしくは担体中で製剤化されてもよい。化合物１またはその近似の類似物（１ａ〜１ｄ）および担体または希釈剤は、投与単位での使用が意図される場合には、紙または他の容器、オブラート、ゼラチン、カプセルまたはサシェにカプセル化または封入してもよい。
【００１０】
化合物１を合成するための本発明の方法は、標準的な手順によって、商業的に入手可能な５−メチル−２−ニトロ安息香酸を対応するアミド２に変換し、その後５−メチル−２−ニトロベンゾニトリル（３）に変換することで始まる。ジアザビシクロオクタンなどの有機塩基の存在下において３を窒素雰囲気下でＤＭＦ中でｐ−ホルミルメチルベンゾエートと数時間反応させると、幾何的異性体の混合物としての作業後にオレフィン（４）が得られた。オレフィン４はまた、塩基としてナトリウムメトキシドを使用して、メタノール中で３をｐ−ホルミルメチルベンゾエートと反応させることによって生成することができる。一般に、この反応は、普通に使用される有機塩基または無機塩基を使用して、任意の適当な有機溶媒中で実施することができる。４を亜ジチオン酸ナトリウムで還元させると、アミノニトリル（５）が得られ、これをグアニジンで環化して対応するプテロエート類似物（６）を得、触媒的水素化および加水分解により、４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイン酸（７）が得られた。ネイア（Ｎａｉｒ）およびボー（Ｂａｕｇｈ）[Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１２，３９２３−３９２７，１９７３]によって以前に記載されたイソブチルクロロホルメート法によって、７をジエチル−４−メチレングルタメートとカップリングし、次に得られたジエステルを穏和に加水分解することによって、１の粗生成物を得、これを、溶出溶媒として１２％アセトニトリル水溶液を使用したＣ１８シリカゲルでの逆相クロマトグラフィーで精製した[スキーム−１]。
【００１１】
オレフィン４を生成する別の手順は、３をアリル臭素化して対応する臭化ベンジル（３ｂ）を形成し、その後、トリフェニルホスフィンと反応させて、ウィッティヒ塩を形成した。典型的なウィッティヒ反応において有機塩基を使用して有機溶媒（例えば、ＤＭＦ）中でこのウィッティヒ塩をｐ−ホルミルメチルベンゾエートで処理することにより、４を中程度の収率で得た。任意の簡便な有機溶媒および有機溶媒と相溶性である有機または無機塩基をこの反応に使用することができる。
【００１２】
上記３の反応においてｐ−ホルミル メチルベンゾエートをｐ−カルボメトキシアセトフェノンと交換すると、対応するメチル置換オレフィンが得られ、ジチオナイト還元、グアニジン環化、水素化、加水分解、ジエチル−４−メチレングルタメートカップリングとその後の穏和な加水分解により１０−メチル誘導体１ａが得られた。同様に、３の反応においてｐ−ホルミルメチルベンゾエートをｐ−カルボメトキシプロピオフェノンと交換し、上記の作業により１０−エチル誘導体１ｂが得られた。
【００１３】
３をベンジル臭素化することにより、対応するブロモメチル誘導体（３ｂ）が得られ、それは、ｐ−メチルアミノメチベンゾエートおよびメチル−ｐ−メチルアミノベンゾエートとの反応において、対応するアミノニトリルを与え、ジチオナイト還元、グアニジン環化および加水分解によってプテロエート類似物８および９が得られた。上記の４−メチレングルタメートカップリングおよび加水分解により１０−ノル−メチルアミノおよび１０−ノル−アミノ誘導体１ｃおよび１ｄがそれぞれ得られた。
【００１４】
１および１ｅの作用機序を解明するために、それらをヒトジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤として検討した。両化合物は、ＭＴＸと同様にこの酵素に対して阻害作用を示した。１、１ｅおよびＭＴＸによるヒト酵素のＩ50*値は、それぞれ、６６．０、６６．０および１１．０ｎＭであった。トリメトレキサート（ＴＭＴＸ）の対応する値は５４．０ｎＭであった。
【００１５】
実施例−１
喘息応答および気管支過剰応答の評価
実験モデル：ウサギにおける喘息の誘発。パスツレラを保有しないニュージーランド白ウサギの同腹の仔を育て、誕生から２４時間以内に３１２ＡＵダストダニアレルゲン抽出液[バーケリー  バイオロジカル（Ｂｅｒｋｅｌｅｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、カリフォルニア州バーケリー]を１０％カオリンに加えたものを、１ヶ月間は週１回、その後４ヶ月齢までは２週間ごとに腹腔内注射することによって免疫化した。ムスターファ（Ｍｕｓｔａｆａ）らはアメリカン  ジャーナル  オブ  フィジオロジー[２２６，２７１−２７７，１９９４]に記載するように、このウサギモデルを使用した。これらのアレルギー動物は、アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体を優先的に産生し、典型的に、早期および後期喘息応答を伴って空中アレルゲンの攻撃に応答し、気管支過剰応答（ＢＨＲ）の亢進を示す。
【００１６】
アレルゲン、テオフィリンおよび葉酸拮抗物質投与：これらの実験は、１９９２年のジャーナル、エージェンツ  アンド  アクションズ（Ｊｏｕｒｎａｌ，Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｃｔｉｏｎｓ ３７、１６８−１７０、１９９２）においてムスターファ（Ｍｕｓｔａｆａ）らが記載しているように実施した。簡単に説明すると、記載のように、動的コンプライアンス（Ｃｄｙｎ）が約５０％低下するまで、アレルギーウサギをブタクサアレルゲンエアゾール（１０，０００ＰＮＵ／ｍＬ）で攻撃した。肺機能は１５分間隔で６時間測定した。ウサギを、示した葉酸拮抗物質[５ｍｇ／ｍＬ、４分間噴霧]で攻撃し、直後に同じ総用量のアレルゲンを投与した。引用した参照文献にムスターファ（Ｍｕｓｔａｆａ）らが記載しているように肺機能測定を６時間実施した。２４時間後にヒスタミンの反復攻撃を実施して、アレルゲン誘発性気管支過剰応答に対するＭＴＸ、テオフィリンおよび１の影響を求めた。
【００１７】
気道におけるアレルゲン誘発性変化に対する葉酸拮抗物質の効果を評価するために、早期及び後期相の応答の曲線下領域を、コンピューター支援プレノメトリー（ｐｌｅｎｏｍｅｔｒｙ）によって６時間の間各ウサギについてデジタル化した。結果を表−１に要約する。
【００１８】
【表１】
0004854850.tif 000002
ＭＴＸおよび１はエアゾール（５ｍｇ／ｍｌ）として投与した。テオフィリンはエアゾール（５ｍｇ／ｍｌ）として投与した。
【００１９】
実施例２
商業的に入手可能な５−メチル−２−ニトロ安息香酸をイソブチルクロロホルメート次いでアンモニアと反応させることによって対応するアミドに変換した。得られたアミドをＤＭＦ中でＰＯＣｌ3によって５−メチル−２−ニトロベンゾニトリル（３）に変換した。
【００２０】
４の生成
丸底フラスコ中で、６．６ｇｒ（４０ｍｍｏｌ）の３と６．５ｇｒ（〜４０ｍｍｏｌ）の４−ホルミルメチルベンゾエートとの混合物を７５ｍＬのメタノールに溶解し、撹拌しながら、４０．８ｍｍｏｌのナトリウムメトキシド溶液を徐々に添加した。混合物を７２時間撹拌すると、鮮やかな黄色の沈殿が形成された。この段階で、反応混合物を酢酸で酸性化し、留去し、１００ｇｒの氷を混ぜた。得られた４の鮮やかな黄色の沈殿をろ過し、水、メタノールと続けて洗浄し、乾燥した。収量５．８ｇｒ；ｍｐ２６６〜２６９℃；ＭＳ（ＦＡＢ）、[Ｃ17Ｈ12Ｎ2Ｏ4]、計算値、３０８；観察値３０９[ＭＨ+]。
【００２１】
標準的な手順によって５−メチル−２−ニトロベンゾニトリルをＮＢＳでベンジル臭素化し、次に得られた生成物（３ｂ）をトリフェニルホスフィンで処理することによって３−シアノ−４−ニトロベンジルトリフェニルホスホニウム ブロマイドを十分な収率で得た。
【００２２】
３−シアノ−４−ニトロベンジルトリフェニルホスホニウム ブロマイドとｐ−ホルミルメチルベンゾエートとのウィッティヒ反応。４の別の合成。
８ｍｍｏｌ[４．０２５ｇｒ]の臭化ホスホニウム（３ｂ）と８ｍｍｏｌ[１．３１５ｇｒ]のｐ−ホルミルメチルベンゾエートを３０ｍＬのＤＭＦ中で窒素雰囲気下で撹拌中の溶液に１．２ｍＬのＤＢＮを１５分間かけて分けて添加し、赤色の溶液を４日間撹拌した。５０ｍＬの無水アルコールを添加すると４の黄色の沈殿が得られ、これをろ過し、水および無水アルコールで洗浄した。収量１．６ｇｒ。
【００２３】
実施例−３
実施例−２の生成物４のジチオナイト還元：６０〜７０度に維持したＤＭＦ４０ｍＬ中１．０ｇｒの４の撹拌溶液に、５．０ｇｒのナトリウムジチオナイト、次いで６０ｍＬの水を２０分かけて分けて添加した。添加終了後約１５分後に、混合物を減圧下で留去して乾燥し、２５ｇｒの氷を添加すると、桃色の固形物が形成された。氷が全て溶けた後に、沈殿をろ過し、水で洗浄し、乾燥して７００ｍｇの生成物を得た。還元生成物はＴＬＣプレート上でスポットが１つであり、出発化合物より極性が強かった。ｍｐ、１９５〜１９７℃；ＭＳ[Ｃ17Ｈ14Ｎ2Ｏ2]、計算値，２７８；観察値、２７９[ＭＨ＋]。
【００２４】
実施例−３のジチオナイト還元生成物のグアニジン環化：金属ナトリウム[７０．０ｍｇ]を１５ｍＬのエトキシエタノールに溶解し、得られた溶液を２８７ｍｇの塩酸グアニジンの同溶媒１５ｍＬ溶液と混合し、ろ過し、溶媒アダプターを取り付けた１００ｍＬの丸底フラスコ中の５５６ｍｇの上記ジチオナイト還元生成物に添加した。混合物を撹拌しながら徐々に加熱し、シリコーン油浴を使用して２時間還流し、溶媒が全てフラスコから蒸散するまで還流を継続した。残渣を１９０〜２００℃の油浴中で３０分間維持し、次いで浴から取り出した。５０ｍＬのエーテルを添加し、混合すると固形物が得られ、これをろ過し、水で洗浄し、乾燥した。生成物を８％メタノールを塩化メチレンに加えたもので繰り返し洗浄すると粗結晶生成物６が得られた。収量１５０ｍｇ。ｍｐ．＞３００℃；ＭＳ[Ｃ18Ｈ16Ｏ2Ｎ4]計算値，３２０；観察値３２１[ＭＨ＋]。
【００２５】
実施例−５
４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイン酸（７）の調製。環化生成物[２００ｍｇ]を３５ｍＬのＤＭＦに溶解し、触媒として５０ｍｇの炭素上１０％パラジウムを用いて水素圧２０ｐｓｉで４８時間水素化した。触媒をろ別し、ろ液を留去して乾燥し、固形物を得、これを５０ｍＬの０．１Ｎ  ＮａＯＨと２０ｍＬのアセトニトリルの混合物と共に１８時間撹拌した。アセトニトリルを回転式留去によって除去し、得られた透明な溶液を氷酢酸でｐＨ４．０に酸性化し、冷蔵庫で終夜冷却し、ろ過し、水で洗浄して乾燥した。収量６５ｍｇ、ＭＳ[Ｃ17Ｈ16Ｎ4Ｏ2]計算値、３０８；観察値３０９[ＭＨ＋]。または、環化生成物を先ず加水分解して、次いで水素化し、７を生成してもよい。
【００２６】
実施例−６
４’−メチレン−５，８，１０−トリデアザアミノプテリン（１）の生成：１ｍｍｏｌ（３０８ｍｇ）の４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザプテロイン酸のＤＭＦ５０ｍＬ溶液を氷浴中で冷却し、１．２５ｍｍｏｌトリエチルアミン、次いで１．０ｍｍｏｌのイソブチルクロロホルメートを添加した。１５分後、この溶液を入れた丸底フラスコを氷浴から取り出し、１時間かけて室温まで暖めた。この混合無水物に、１５ｍＬのＤＭＦに溶解し、２．０ｍｍｏｌのトリエチルアミンで中和した２．０ｍｍｏｌのジエチル−４−メチレングルタメート ハイドロクロライドの溶液を添加し、反応混合物を１８時間撹拌し、減圧下で留去した。７５ｇｒの氷と混ぜると、茶色がかった黄色の沈殿が形成され、これをろ過し、水で洗浄し、１００ｍＬの０．１Ｎ  ＮａＯＨと３５ｍＬのアセトニトリルの混合物に懸濁させ、終夜撹拌した。反応混合物を減圧下、４０℃において〜６０ｍＬまで留去し、氷浴で冷却し、氷酢酸でｐＨ４．０に酸性化すると、鮮やかな黄色の沈殿が形成された。この沈殿をろ過によって回収し、水で洗浄し、最小量の５％炭酸水素ナトリウムに溶解し、１２％アセトニトリル水溶液で調製したＣ−１８シリカゲルカラムを使用し、同じ溶媒で溶出してクロマトグラフィーを実施した。生成物に相当する全ての分画を貯留し、氷酢酸でｐＨ４．０に酸性化して、１を沈殿として得、これをろ過し、水で洗浄し、乾燥した。収量１２５ｍｇ。ｍｐ＞２５０℃；ＭＳ[Ｃ23Ｈ23Ｎ5Ｏ5]；計算値、４４９；観察値，４５０[ＭＨ＋]
【００２７】
４−アミノ−４−デオキシ−５，８，１０−トリデアザフォレート（１）の抗腫瘍活性
国立癌研究所のヒト疾患指向性インビトロ抗腫瘍スクリーン（Ｈｕｍａｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｏｒｉｅｎｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｓｃｒｅｅｎ）を使用して、化合物１を抗腫瘍作用について評価した。驚くべきことに、他の葉酸拮抗物質とは異なって、１は顕著な効力で癌細胞を死滅させることができた。この予期しなかった所見は、１が代謝的変換を受けないことによる可能性がある。選択したヒト腫瘍細胞の１による総増殖阻害[ＴＧＩ]をメトトレキセート（ＭＴＸ）と比較したものを表−２に示す。−４．０より小さいｌｏｇ１０ ＴＧＩ値はＭＴＸでは治療に関連がない。表−２のデータは、１はこのパネルではＭＴＸと比較して少なくとも１，０００〜１０，０００倍効果が大きいことを示し、値は治療に関連する濃度を示す。
【００２８】
【表２】
0004854850.tif 000003
【００２９】
実施例−７
５，８−ジデアザメトトレキセート（１ｄ）の調製
ａ）５−ブロモメチル−２−ニトロベンゾニトリルとメチル−４−メチルアミノベンゾエートの反応
実施例−１のブロモ化合物３２５ｍｇと、３３０ｍｇのメチル−４−メチルアミノベンゾエートと、６５ｍｇの酸化マグネシウムを５．０ｍＬのジメチルアセタミドに加えた懸濁液を８０℃において６時間撹拌しながら加熱した。この混合物に３０．０ｍＬのＥｔＯＡｃを添加し、ろ過した。ろ液を３回繰り返して水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、留去して、固形物を得、これに２０．０ｍＬのエーテルを混ぜて、ろ過した。生成物はＴＬＣ上では均質であり、融点は１５６〜１６０℃であった。収量、２３０ｍｇ。ＭＳ、[Ｃ17Ｈ15Ｎ3Ｏ4]、計算値、３２５；観察値３２６[ＭＨ＋]。
【００３０】
ｂ）ジチオナイト還元：実施例７−ａで得られた生成物[２．３ｇｒ]を、磁気撹拌子を入れた三角フラスコ中で６５℃において３００ｍＬのＤＭＦに溶解し、６５〜７０℃に維持した水浴に入れた。撹拌しながら、この溶液に１０．０グラムの亜ジチオン酸ナトリウムおよび３００ｍＬの水を２５分かけて添加した。次いで、さらに３００ｍＬの水を添加し、混合物を氷浴に入れ、撹拌した。１時間後、分離した黄色の固形物をろ過して回収し、水で洗浄して、乾燥した。ｍｐ；１４０〜４１℃；収量、１．５ｇｒ、ＭＳ、[Ｃ17Ｈ17Ｏ2Ｎ2]、計算値、２９５；観察値２９６。
【００３１】
ｃ）ジチオナイト還元生成物の環化および加水分解：実施例７−ｂのジチオナイト還元生成物を１．２５当量のグアニジン塩基[エトキシエタノール（２００ｍＬ）中で１．５当量の塩酸グアニジンと等モル量のナトリウムから生成]で処理し、１８０〜２００℃に維持した油浴に入れた。エトキシエタノールを蒸散させ、残渣を２００℃において２０分間維持し、次いで油浴から出した。周囲温度まで冷却した後、２５０ｍＬのエーテルを添加し、混ぜて、暗褐色の固形物を得、これをろ過し、エーテルで洗浄し、２５０ｍＬの０．１Ｎ  ＮａＯＨと８０ｍＬのアセトニトリルの混合物と共に１８時間撹拌した。このようにして得られた透明な溶液を〜２００ｍｌまで留去し、１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ８．０までｐＨを低下し、減圧下で〜７５ｍＬまで再度留去し、氷酢酸で酸性化すると、８の暗黄色の固形物が分離し、これをろ過し、水で洗浄し、真空下で乾燥した。収量、７５０．００ｍｇ；ＭＳ[Ｃ17Ｈ17Ｎ5Ｏ2]、計算値、３２３；観察値３２４[ＭＨ＋]。
【００３２】
ｄ）ジエチル−４−メチレングルタメートカップリング：上記のように実施例−７ｃで得られた３２３ｍｇ[１．０ｍｍｏｌ]の４−アミノ−４−デオキシ−５，８−ジデアザ−１０−メチルプテロイン酸（８）を４５ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解した。この溶液を氷浴で冷却し、撹拌しながら、１．２５ｍｍｏｌのトリエチルアミン、次いで１．０ｍｍｏｌのイソブチルクロロホルメートを添加した。室温まで加温した後、２．０ｍｍｏｌの４−メチレングルタメート塩酸塩および２．０ｍｍｏｌのトリエチルアミンの溶液を添加し、反応混合物を１８時間撹拌し、減圧下で留去した。このようにして得られた粘性の生成物を２５ｍＬの５％炭酸水素ナトリウムと共に撹拌し、ろ過した。水で洗浄後、固形物を５０ｍＬの０．１Ｎ  ＮａＯＨと２０ｍＬのアセトニトリルの混合物で１６時間加水分解し、〜３０ｍＬまで留去し、氷浴で冷却し、氷酢酸でｐＨ４．０に酸性化して１ｄの褐色の沈殿を得、これを洗浄し、１０．０ｍＬの５％炭酸ナトリウムに再度溶解し、溶出溶媒として１２％アセトニトリル水溶液を使用してＣ１８シリカゲルでクロマトグラフィーを実施した。所望の生成物に相当する主要な分画を貯留し、酢酸で酸性化して、黄色の沈殿を得、これをろ過し、水で洗浄し、真空下で乾燥した。収量１２０ｍｇ；ＭＳ、[Ｃ23Ｈ24Ｎ6Ｏ5]、計算値、４６４；観察値、４６５[ＭＨ＋]
【００３３】
【化１０】
0004854850.tif 000004
【化１１】
0004854850.tif 000005
【化１２】
0004854850.tif 000006
【図１】
0004854850.tif 000016