(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパー鎖及び／又はラムダ鎖を測定し、カッパー鎖値、ラムダ鎖値又はカッパー／ラムダの比の、いずれか１つ以上の値と健常者の対応する値を比較することを特徴とする、心不全、心筋症、心筋炎及び急性心筋梗塞から選ばれる心疾患を検出する方法。
【請求項２】
検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパー鎖及び／又はラムダ鎖を測定し、カッパー鎖値、ラムダ鎖値又はカッパー／ラムダの比の、いずれか１つ以上の値と健常者の対応する値を比較することを特徴とする、心不全、心筋症、心筋炎及び急性心筋梗塞から選ばれる心疾患におけるウイルス感染の合併を検出する方法。
【請求項３】
検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパー鎖及び／又はラムダ鎖を測定し、カッパー鎖値、ラムダ鎖値又はカッパー／ラムダの比の、いずれか１つ以上の値と健常者もしくは心疾患の軽症者の対応する値を比較することを特徴とする、心不全、心筋症、心筋炎及び急性心筋梗塞から選ばれる心疾患の重症度を検出する方法。
【請求項４】
遊離イムノグロブリン軽鎖の測定がイムノアッセイ法である、請求項１、２又は３記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心疾患を診断するための新規なバイオマーカー及びその利用法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
心不全とは、一般に、心筋梗塞、狭心症などの虚血性心疾患、心筋症、高血圧症などの様々な原因により心機能が低下した病態を指す。現在、このような心不全を診断するためのバイオマーカーとしては、心房性利尿ペプチド（ＡＮＰ）、脳性利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰ（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）などが入手可能で、これらのマーカーを測定することで、患者が心不全であるか否か、あるいはその重症度はどの程度かを知ることができる。【０００３】
しかしながら、心不全に限らず、疾患の多くは原因が単一ではなく、現実の臨床の場においては、１つのバイオマーカーを測定するによって特定の疾患を確定的に診断することはできない。また、バイオマーカーといえども、種々病態が進行した結果、血中、尿中等に出現するものであり、病態の進行の過程が患者毎に変化した場合には、必ずしも特異的なマーカーとなり得ないこともあることから、多くの疾患において、種々のマーカーを組合せて総合的に判断することが、疾病診断の現状である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このように、心不全などの心疾患においても、ＡＮＰ、ＢＮＰ等の、公知マーカー以外の新規マーカーの開発が切望されていた。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、心疾患の新規なバイオマーカーを開発すべく、種々検討を行った結果、心疾患の診断に使用されたことのない、イムノグロブリン重鎖と解離した遊離のイムノグロブリン軽鎖（Ｆｒｅｅ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ：ＦＬＣ）に注目した。【０００６】
従来、ＦＬＣは、骨髄腫、アミロイドーシスなどの血液疾患の診断に使用されてきた。すなわち、骨髄腫では腫瘍化する細胞の種類により、カッパー（ｋａｐｐａ：κ）鎖を産生する腫瘍ではカッパー鎖が増加し、カッパー／ラムダ比が上昇するのに対し、ラムダ（ｌａｍｂｄａ：λ）鎖を産生する腫瘍ではラムダ鎖が増加し、カッパー／ラムダ比は低下する。このような性質を利用し、骨髄腫の診断が行われていた。【０００７】
このようなＦＬＣは、病態マーカーのひとつであり、Ｂリンパ球の活性化を示すマーカーでもあると考えられるため、心不全の診断に利用可能であれば、心不全でＢリンパ球が活性化することも検出できる可能性があり、このような検出が可能であれば、たとえば、Ｂリンパ球の活性化を調整することにより心不全の新しい治療薬のスクリーニングや開発に利用できるという点で、従来の公知のマーカーとは異なる有用なマーカーとなり得ると考えられる。【０００８】
本発明者は、ＦＬＣの心疾患診断への応用に関し、鋭意検討を重ねた結果、現在まで一度も心疾患の診断に利用されたことのないＦＬＣが心不全等の心疾患の診断に応用できることを見出し、本発明を完成させた。従って、本発明は以下の通りである。【０００９】
［１］検体中のＦＬＣのカッパー鎖及び／又はラムダ鎖を測定し、カッパー鎖値、ラムダ鎖値又はカッパー／ラムダの比のいずれか１つ以上の値と健常者の対応する値を比較することを特徴とする、心疾患を検出する方法。【００１０】
［２］検体中のＦＬＣのカッパー鎖及び／又はラムダ鎖を測定し、カッパー鎖値、ラムダ鎖値又はカッパー／ラムダの比のいずれか１つ以上の値と健常者の対応する値を比較することを特徴とする、心疾患におけるウイルス感染の合併を検出する方法。【００１１】
［３］検体中のＦＬＣのカッパー鎖及び／又はラムダ鎖を測定し、カッパー鎖値、ラムダ鎖値又はカッパー／ラムダの比のいずれか１つ以上の値と健常者もしくは心疾患の軽症者の対応する値を比較することを特徴とする、心疾患の重症度を検出する方法。【００１２】
［４］心疾患が、心不全、心筋症、心筋炎又は急性心筋梗塞である、上記［１］、［２］又は［３］記載の方法。【００１３】
［５］ＦＬＣの測定がイムノアッセイ法である、上記［１］、［２］又は［３］記載の方法。【００１４】
［６］以下のａ）〜ｄ）からなる群より選ばれる少なくとも１以上の試薬を含み、上記［１］、［２］又は［３］記載の方法を実施するための心疾患診断用キット。
ａ）固相化ＦＬＣ特異抗体
ｂ）標識化ＦＬＣ特異抗体
ｃ）ＦＬＣ特異抗体
ｄ）上記ｃ）記載の抗体に特異的に結合しうる二次抗体【００１５】
［７］心疾患が、心不全、心筋症、心筋炎又は急性心筋梗塞である、上記［６］記載のキット。【００１６】
［８］ＦＬＣの測定がイムノアッセイ法である、上記［６］記載のキット。
【発明の効果】
【００１７】
本発明により、ＦＬＣが、心不全、心筋症、心筋炎、急性心筋梗塞等の、心疾患の診断に有用であることが初めて明らかとなった。さらに、心筋症、心筋炎において、Ｃ型肝炎ウイルス等のウイルス感染症の合併の診断に有用であることも本発明により初めて見出されたことである。従って、本発明の心疾患を検出する方法及び心疾患診断用キットは、心疾患の診断はもとより、心疾患におけるウイルス感染の合併を診断するのに極めて有用なものである。【００１８】
また、カッパー値、ラムダ値は心不全等の心疾患の重症度、予後測定に有用とされるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値と相関することから、ＦＬＣの測定は心不全等の心疾患の重症度、予後判定に有用である。【００１９】
さらに、本発明方法により、心疾患の治療薬の効果の測定、抗ウイルス薬の効果の判定も可能であり、心疾患及びウイルス性感染症の治療薬の開発にも貢献をすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】心不全心筋組織内のカッパー、ラムダ鎖の検出結果を示す図である（ヘマトキシリン・エオジン染色、ＦＬＣｋａｐｐａ（カッパー鎖の検出）、ＦＬＣｌａｍｂｄａ（ラムダ鎖の検出）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
１．心疾患の診断方法
ＦＬＣのカッパー鎖値、ラムダ鎖値、カッパー／ラムダ比のいずれか１つ以上の値が、心疾患病態や予後を反映する。従って、検体中のＦＬＣのカッパー鎖とラムダ鎖を定量することにより、心疾患の診断に利用することができる。
使用する検体は、被験者や臨床献体等から単離された、血液、体液、組織又は排泄物等の試料を意味するが、特に血液、血清、血漿などの血液由来の検体および尿検体が好ましい。【００２２】
ＦＬＣの測定は、公知のイムノアッセイ法（ＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法など）を採用することにより実施できる。
たとえば、イムノアッセイ法を具体的に説明すれば、検体中に微量に存在するＦＬＣに対して十分な測定感度を有し、インタクトなイムノグロブリンに対する交差反応性をほとんど示さず（例えば１％以下）、検体中のＦＬＣ以外の成分の影響を受けない方法が好適であり、好ましくは中野らが開発した酵素免疫測定法を利用することができる（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００３，２７５，９−１７）。【００２３】
また、より高感度にＦＬＣを測定したい場合には、検体中のＦＬＣを捕獲（トラップ）するための抗体としてＦＬＣに特異的なポリクローナル抗体を使用し、トラップされたＦＬＣを検出するための抗体としてＦＬＣに特異的に反応するモノクローナル抗体を使用するイムノアッセイ法を採用するのが好ましい。【００２４】
使用する抗体は、ＦＬＣに特異的に反応するモノクローナル抗体及びＦＬＣに特異的に反応するポリクローナル抗体から選ばれる２種類の抗体である。このような抗体は、抗体自体あるいはそれらの活性フラグメント〔Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’など〕であってもかまわない。【００２５】
ここで、ＦＬＣに特異的に反応する抗体とは、インタクトイムノグロブリン中に存在する重鎖と結合した軽鎖に対する反応性が極めて弱いか又は全く認識せず、重鎖に結合していない軽鎖には強く反応する抗体を意味する。【００２６】
このようなＦＬＣに特異的に反応するモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体は、常法により作製することができる。たとえばＦＬＣのカッパー鎖又はラムダ鎖を抗原とし、モノクローナル抗体を調製し、得られた抗体の中からインタクトイムノグロブリンとは結合せず、ＦＬＣと特異的に結合する抗体を選出すればよい。【００２７】
また、ＦＬＣに特異的に反応するポリクローナル抗体は、常法により作製することができる。たとえばＦＬＣのカッパー鎖又はラムダ鎖を抗原とし、ポリクローナル抗体を調製し、得られた抗体成分のうちインタクトイムノグロブリンに結合する抗体を吸収、除去すればよい。さらに、このような抗体は既に市販されており、利用可能である。ただしＦＬＣに対する特異性を確認する必要がある。【００２８】
免疫測定法自体は、従来行われている方法、手順など何等変わるものではない。すなわち、検体中のＦＬＣを捕獲（トラップ）するための抗体としては、担体に結合した固相抗体を例示することができる。【００２９】
固相抗体を調製する際に使用する担体としては、通常使用されているもの、たとえば、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、スチレン−無水マレイン酸共重合体、ナイロン、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ポリアクリロニトリル、ポリプロピレン、ポリメチレンメタクリレートなどの合成有機高分子化合物、デキストラン誘導体（セファデックスなど）、アガロースゲル（セファロース、バイオゲルなど）、セルロース（ペーパーディスク、濾紙など）などの多糖類、ガラス、シリカゲル、シリコーンなどの無機高分子化合物を例示することができ、これらはアミノ基、カルボキシル基、カルボニル基、水酸基、スルヒドリル基などの官能基が導入されたものであってもよい。【００３０】
担体の形状は、平板状（マイクロタイタープレート、ディスクなど）、粒子状（ビーズなど）、管状（試験管など）、繊維状、膜状、微粒子状（ラテックス粒子など）、カプセル状、小胞体状などいずれの形状であってもよく、測定法に応じて好適な形状の担体を適宜選択すればよい。【００３１】
担体と抗体の結合は、物理的吸着法、イオン結合法、共有結合法、包括法など公知の方法〔たとえば、「固定化酵素」（千畑一郎編、昭和５０年３月２０日、（株）講談社発行）参照〕を採用することができ、とりわけ、物理的吸着法は簡便である点で好ましい。また、上記結合は直接行ってもよく、両物質の間に他の物質を介して行ってもよい。
このようにして得られた固相試薬は、非特異的結合を抑制するため、ゼラチン、ＢＳＡなどの通常のブロッキング剤を用いてブロッキング処理を施してもよい。【００３２】
また、トラップされたＦＬＣを検出するための抗体としては、標識剤で標識された抗体を例示することができる。標識剤としては、放射性同位体（たとえば３２Ｐ、３Ｈ、１４Ｃ、１２５Ｉなど）、酵素（たとえばβ−ガラクトシダーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼ、乳酸オキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、モノアミンオキシダーゼなど）、補酵素・補欠分子族（たとえば、ＦＡＤ、ＦＭＮ、ＡＴＰ、ビオチン、ヘムなど）、フルオレセイン誘導体（たとえば、フルオレセインイソチオシアネート、フルオレセインチオフルバミルなど）、ローダミン誘導体（たとえば、テトラメチルローダミンＢイソチオシアネートなど）、ウンベリフェロン及び１−アニリノ−８−ナフタレンスルホン酸などの蛍光色素、ルミノール誘導体〔たとえば、ルミノール、イソルミノール、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−Ｎ−エチルイソルミノールなど〕などを例示することができる。【００３３】
抗体と標識剤との結合は、成書〔たとえば、「続生化学実験講座５免疫生化学研究法」（株）東京化学同人、（１９８６年発行）第１０２〜１１２頁〕に記載されているような公知の方法から適宜選択して実施すればよい。【００３４】
このような固相抗体と標識抗体を用いての測定手順は、通常の免疫測定法の手順をそのまま採用すればよい。すなわち、固相抗体と被検試料を反応させ、必要によりＢＦ分離後、さらに標識抗体を反応させる（ツーステップ法）か、固相抗体、被検試料及び標識抗体を同時に反応させ（ワンステップ法）、以後のそれ自体公知の方法により試料中のＦＬＣを検出又は定量することができる。【００３５】
なお、免疫測定法の詳細については、たとえば以下の文献を参照すればよい。
（１）入江  寛編「続ラジオイムノアッセイ」（（株）講談社、昭和５４年５月１日発行）
（２）石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第２版）（（株）医学書院、１９８２年１２月１５日発行）
（３）臨床病理  臨時増刊  特集第５３号「臨床検査のためのイムノアッセイ−技術と応用−」（臨床病理刊行会、１９８３年発行）
（４）「バイオテクノロジー事典」（（株）シーエムシー、１９８６年１０月９日発行）【００３６】
（５）「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  Ｖｏｌ．７０」（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ  Ａ））
（６）「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  Ｖｏｌ．７３」（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ  Ｂ））
（７）「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  Ｖｏｌ．７４」（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ  Ｃ））
（８）「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  Ｖｏｌ．８４」（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ  Ｄ：Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ））
（９）「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  Ｖｏｌ．９２」（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ  Ｅ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ））
［（５）〜（９）はアカデミックプレス社発行］【００３７】
このようにして測定したＦＬＣのカッパー鎖値、ラムダ鎖値、カッパー／ラムダ比のいずれか１つ以上の値が、心疾患病態や予後を診断する。
対象とする心疾患としては、心不全、心筋症、心筋炎、急性心筋梗塞又はそれらのウイルス感染症が挙げられる。【００３８】
診断は、検体中のＦＬＣのカッパー鎖値、ラムダ鎖値又はカッパー／ラムダの比のいずれか１つ以上の値と健常者の対応する値を比較することにより、心疾患の存在の検出、心疾患におけるウイルス感染の合併の検出、あるいは心疾患の重症度の検出、急性心筋梗塞と心筋炎や心不全との鑑別等が可能である。【００３９】
検体中のカッパー鎖値、ラムダ鎖値、カッパー／ラムダ比は、後記実施例１に示すように、病態により変動し、かつ従来のマーカーや心機能を示す指標と相関する。
従って、これらの判定値にもとづき、心疾患の存在の検出、心疾患におけるウイルス感染の合併の検出、あるいは心疾患の重症度の検出が可能である。ここで心疾患の検出には、心不全、心筋症、心筋炎及び急性心筋梗塞のそれぞれの鑑別も含まれる。【００４０】
２．心疾患診断用キット
本発明のキットは、上述の心疾患の診断方法を実施するためのものであり、たとえば、下記の試薬から構成される。
１）固相化ＦＬＣ特異抗体
２）標識化ＦＬＣ特異抗体【００４１】
ここで固相化ＦＬＣ特異抗体及び標識化ＦＬＣ特異抗体に用いるＦＬＣ特異抗体は、ＦＬＣ特異モノクローナル抗体及びＦＬＣ特異ポリクローナル抗体のいずれでもよいが、２種のＦＬＣ特異モノクローナル抗体を組み合せて用いてもよく、ＦＬＣ特異ポリクローナル抗体とＦＬＣ特異モノクローナル抗体の組み合せでもよい。このうち、固相化ＦＬＣ特異ポリクローナル抗体と標識化ＦＬＣ特異モノクローナル抗体とを組み合せるのが、感度の点で好ましい。【００４２】
また、標識化ＦＬＣ特異抗体の代わりに標識化してないＦＬＣ特異抗体と二次抗体を使用してもよく、その場合には次の試薬から構成される。
１）固相化ＦＬＣ特異抗体
２）ＦＬＣ特異抗体
３）標識化抗イムノグロブリン抗体【００４３】
ここで用いる固相化ＦＬＣ特異抗体及びＦＬＣ特異抗体も、前記と同様にモノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよい。このうち、固相化ＦＬＣ特異ポリクローナル抗体とＦＬＣ特異モノクローナル抗体とを組み合せるのが、感度の点で好ましい。【００４４】
上記各試薬のほかに、必要により、発色試薬、反応停止用試薬、標準抗原試薬、試料前処理用試薬などの各試薬から測定法に応じた適当な試薬を適宜選択し、本発明のキットに添付すればよい。
【実施例】
【００４５】
以下、実施例に基づき、詳細に説明するが、本発明がこれに限定されないことは明らかである。【００４６】
（１）血清検体
本実験に使用した血清検体としては、健常ボランティア、心不全患者、心筋症患者及び心筋炎患者の血清を用いた。【００４７】
（２）ＦＬＣ特異モノクローナル抗体
ＦＬＣ特異モノクローナル抗体はＦＬＣ（Ｂｅｔｈｙｌ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  社，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＴＸ）をＢＡＬＢ／ｃマウスに免疫し、作製した（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２７５，９−１７．（２００３））。また、得られた抗体のＦ（ａｂ’）２フラグメントをホースラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識した（Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．，２２，１０８４−９１．（１９７４））。【００４８】
（３）ＦＬＣ測定法
ＦＬＣ測定法については文献（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００３，２７５，９−１７）に従って行った。すなわち、ＦＬＣ特異モノクローナル抗体をコートした９６穴マイクロプレート（Ｎｕｎｃ）に検体あるいは標準濃度溶液を１００μｌ毎加え、室温で２時間反応させた。洗浄した後、二次抗体として抗カッパー軽鎖型抗体ならびに抗ラムダ軽鎖型抗体の西洋ワサビペルオキシダーゼ標識体を各１００μｌ加え、３７℃、３０分反応させた。反応後、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで洗浄し、発色液（ＯＰＤ、Ｓｉｇｍａ）を１００μｌ毎分注し発色させた。１Ｎ硫酸にて発色を停止後、４９２ｎｍでの吸光度を測定した。なお、アッセイ用の緩衝液としては１％ウシ血清アルブミンを含む５０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ７．５）を使用した。【００４９】
実施例１
心不全患者６３例（２００２年１２月〜２００４年１１月）について、以下の検討を行った。上記の患者のうちＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、幹細胞因子（ＳＣＦ）を測定した１７例におけるＦＬＣとの相関を表１に示す。【００５０】
【表１】
0004950879.tif 000002
【００５１】
実施例２
心筋炎多施設臨床試験（Ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｔｒｉａｌ）の血清中のＦＬＣの測定結果を以下に示す。
（１）心筋炎全体の測定結果を表２に示す。【００５２】
【表２】
0004950879.tif 000003
【００５３】
（２）Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染の有無との関係を表３に示す。【００５４】
【表３】
0004950879.tif 000004
【００５５】
（３）Ｃ型肝炎ウイルス抗体陽性の心筋症患者におけるＦＬＣ値を表４に示す。【００５６】
【表４】
0004950879.tif 000005
【００５７】
（４）ＦＬＣと心不全重症度の関係
ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）の自覚症状に基づく心不全の心機能分類によって軽症（Ｉ度＋ＩＩ度）と重症（ＩＩＩ度＋ＩＶ度）に分けて、重症度との関連について検討した結果を表５に示す。【００５８】
【表５】
0004950879.tif 000006
【００５９】
（５）実施例１及び２の結果のまとめ
（５−１）心不全におけるカッパー、ラムダ値は、心不全の重症度や予後と関係するＮＴ−ｐｒｏＢＮＰと正の相関を有し、特にラムダ値との相関が強く、一方カッパー／ラムダ比とは負の相関を示した。【００６０】
（５−２）心不全におけるカッパー、ラムダ値は、ＳＣＦ値と正の相関を有する。
（５−３）心筋炎において、カッパー、ラムダ値は上昇するが、カッパー／ラムダ比に変化はない。
（５−４）心筋炎において、カッパー、ラムダ値は、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰと正の相関を示し、カッパー／ラムダ比はＮＴ−ｐｒｏＢＮＰと負の相関を示す。【００６１】
（５−５）心筋炎において、Ｃ型肝炎ウイルス感染者ではカッパー、ラムダ値は上昇するが、特にラムダ値の上昇が著明で、カッパー／ラムダ比は著明に低下する。
（５−６）Ｃ型肝炎ウイルス感染陽性の心筋症では、カッパー、ラムダ値とも増加し、カッパー／ラムダ比は低下傾向を示す。【００６２】
（５−７）重症心不全では、軽症に比べラムダ値が高く、カッパー／ラムダ比は低下した。従って、心不全におけるラムダ値、カッパー／ラムダ比は心不全の重症度と関連する。
（５−８）心不全にＣ型肝炎ウイルス感染が加わると、ラムダ値が一層上昇し、カッパー／ラムダ比は逆に低下する。【００６３】
実施例３
心不全患者４８例において以下の検討を行った。
（１）心不全患者４８例の正常者１７例のＦＬＣカッパー鎖、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比を比較した。
その結果、心不全ではＦＬＣラムダ鎖が増加し、カッパー／ラムダ比が低下することが明らかとなった。【００６４】
【表６】
0004950879.tif 000007
【００６５】
（２）心不全４８例において生存期間とＦＬＣとの関連を検討した。
その結果、生存期間とラムダ鎖には負の相関があることが明らかとなった。【００６６】
【表７】
0004950879.tif 000008
【００６７】
（３）ＦＬＣカッパー鎖、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比と心不全、心筋傷害の指標であるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）との関連を検討した。
その結果、カッパー鎖、ラムダ鎖はＮＴ−ｐｒｏＢＮＰと正の相関を示し、カッパー／ラムダ比とは、負の相関を示し、心不全、心筋傷害の指標となることが明らかとなった。【００６８】
【表８】
0004950879.tif 000009
【００６９】
（４）ＦＬＣカッパー、ラムダ、カッパー／ラムダ比と心臓カテーテル検査における肺動脈圧との関連を検討した。
その結果、カッパー鎖、ラムダ鎖は平均肺動脈圧と正の相関を示した。【００７０】
【表９】
0004950879.tif 000010
【００７１】
（５）ＦＬＣカッパー、ラムダ、カッパー／ラムダ比と心臓カテーテル検査における心拍出係数との関連を検討した。
その結果、カッパー鎖、ラムダ鎖は心拍出係数と有意な負の相関を示し、心機能と関連することが明らかとなった。【００７２】
【表１０】
0004950879.tif 000011
【００７３】
（６）ＦＬＣカッパー鎖、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比と心エコー図による左室収縮末期経（ＬＶＤｓ）、拡張末期経（ＬＶＤｄ）、及び心収縮能の指標である左室駆出分画（ＥＦ）との関係を検討した。
その結果、ラムダ鎖はＬＶＤｄ，ＬＶＤｓと有意な正の相関を有し、左室腔の拡大と関連し、カッパー／ラムダ比はＬＶＤｄ，ＬＶＤｓと負の相関、ＥＦとは正の相関を示し、左室腔の拡大、心臓の収縮能と関連することが明らかとなった。【００７４】
【表１１】
0004950879.tif 000012
【００７５】
（７）ＦＬＣカッパー鎖、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比と炎症反応の指標であるＣＲＰと相関を検討した。
その結果、カッパー鎖、ラムダ鎖はＣＲＰと有意な正の相関を示し、カッパー鎖、ラムダ鎖は炎症反応を反映することが示された。【００７６】
【表１２】
0004950879.tif 000013
【００７７】
（８）ＦＬＣカッパー鎖、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比と線維化の指標であるＩＶ型コラーゲンとの相関を検討した。
その結果、カッパー鎖、ラムダ鎖はＩＶ型コラーゲンと正の相関を示し、カッパー／ラムダ比はＩＶ型コラーゲンと負の相関を示し、ＦＬＣは線維化のマーカーと関連することが明らかとなった。【００７８】
【表１３】
0004950879.tif 000014
【００７９】
（９）心不全症例の心筋標本のパラフィン切片を用いてヘマトキシリン・エオジン染色を行い、心筋細胞径を測定し、ＦＬＣとの関連を検討した。
その結果、心筋細胞径はカッパー／ラムダ比と負の相関を示した。【００８０】
【表１４】
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【００８１】
（１０）ＦＬＣとマスト細胞との関連を検討するため、心不全の手術時に採取された凍結保存された心筋組織を用いＲＮＡを抽出し、リアルタイムＰＣＲ法により幹細胞因子（ＳＣＦ）、メタロプロテアーゼ（ＭＭＰ−９）、キマーゼ、トリプターゼのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の発現を検討した。各ｍＲＮＡはハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨで補正した。
その結果、カッパー／ラムダ比は、ＳＣＦ、ＭＭＰ−９、キマーゼ、トリプターゼの発現と正の相関を示し、マスト細胞の活性化との関連が考えられた。【００８２】
【表１５】
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【００８３】
（１１）心不全例の心臓組織におけるカッパー鎖、ラムダ鎖原の分布を検討した。
心不全の心臓のホルマリン固定標本のパラフィンブロックより５ミクロンの切片を作製した。切片はキシレンにより脱パラフィンを行った後、アルコールにより脱水し、過酸化水素により内因ペルオキシダーゼを不活化した。
一次抗体としてカッパー鎖、ラムダ鎖に対するマウスモノクローナル抗体（ヤマサ醤油、千葉）を用い４℃で一夜インキュベートし、マウスＩｇＧ用にペクスタインＡＢＣ  ｋｉｔ（バーリンゲーム、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）により免疫染色を行い、ＤＡＢ発色を行った。
その結果、図に示す如く心不全の心臓において、心筋組織内の白血球にカッパー鎖、ラムダ鎖が検出され、心不全の心筋内に浸潤した白血球がカッパー鎖、ラムダ鎖を産生することが明らかとなった。【００８４】
（１２）心不全患者２０例における尿中ＦＬＣを測定し、正常者の尿中ＦＬＣと比較検討した。
その結果、心不全では尿中カッパー鎖、ラムダ鎖は正常者に比し有意に高値を示した。【００８５】
【表１６】
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【００８６】
（１３）心不全患者２０例における尿中と血中のＦＬＣの相関を調べた。
その結果、尿中のカッパー鎖、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比と血中のカッパー鎖、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比には有意な正の相関がみられた。【００８７】
【表１７】
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【００８８】
（１４）実施例３の結果のまとめ
（１４−１）心不全ではラムダ鎖が増加し、カッパー／ラムダ比が低下する。
（１４−２）ラムダ鎖は心不全の生命予後と関連する。
（１４−３）カッパー、ラムダ鎖は心不全、心筋傷害のマーカーＮＴ−ｐｒｏＢＮＰと相関し、炎症マーカーであるＣＲＰとも相関する。
（１４−４）カッパー、ラムダ鎖は心機能と関連し、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比は心内腔の拡大と相関する。
（１４−５）カッパー鎖、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比は線維化のマーカーと相関する。
（１４−６）カッパー／ラムダ比は心筋細胞肥大と逆相関する。
（１４−７）カッパー／ラムダ比は、マスト細胞関連メディエータと相関する。
（１４−８）心不全の心筋内に浸潤した白血球細胞からカッパー、ラムダ鎖が産生される。
（１４−９）心不全患者尿中のカッパー、ラムダ鎖は増加する。
（１４−１０）心不全患者尿中のカッパー鎖、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比は血中のカッパー鎖、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比と相関する。【００８９】
実施例４
急性心筋梗塞発症当日、２４時間後、４週後のＦＬＣを測定し、正常者と比較検討した。
その結果、カッパー鎖は、心筋梗塞発症当日、２４時間後は有意に減少したが、ラムダ鎖、カッパー／ラムダ比には有意な差がみられなかった。
このことから、ＦＬＣカッパー鎖の測定は急性心筋梗塞の診断に有用であり、さらに急性心筋梗塞と心筋炎や心不全との鑑別にも有用であることがわかった。【００９０】
【表１８】
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【００９１】
以上の結果から、ＦＬＣの測定は、心不全、心筋症、心筋炎、急性心筋梗塞の診断に有用である。心筋症、心筋炎においてＣ型肝炎ウイルス感染者では、カッパー、ラムダ値が増加し、カッパー／ラムダ比は低下することから、Ｃ型肝炎ウイルス感染やその他のウイルス感染症の診断に有用である。【００９２】
ＨＣＶ感染のある心不全では、ＨＣＶ感染のない心不全に比し、ラムダ値が一層高値となり、カッパー／ラムダ比は逆に低下するため、感染症の合併を診断することができる。
従って、心不全の治療薬の効果、及び抗ウイルス薬の効果の判定ができ、心不全、心筋症、心筋炎、ウイルス性感染症の治療薬の開発に貢献できる。【００９３】
重症心不全では、軽症に比べラムダ値がさらに高く、カッパー／ラムダ比は低下し、心不全の重症度と関連した。また、カッパー、ラムダ値は心不全の重症度、予後測定に有用とされるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値と相関することから、ＦＬＣの測定は心不全の重症度、予後判定に有用である。
【図１】
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