(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式I：
【化１】
0004927306.tif 000020
［式中、Ar1は、C1-C6-アルコキシにおより置換されていてもよいフェニル基であり；
Ar2は、チエニル基であって、当該チエニル基は、カルボキシル基、カルボキシレート、カルボキサミド、OH、OHを担持するアルキル基及びヒドラジドカルボニル基から選択される少なくとも１つの基により置換されており；
Xは、O又はSであり；
R1は、水素又はC1-C6-アルキル基であり；
ｎは、0〜5の整数であり；
Yは、下記一般式：
【化２】
0004927306.tif 000021
（式中、L2はHであり、L1は-NHR3であり、ここでR3は、C1-C12-アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールC1-C6-アルキル、ヘテロアリール-C1-C6-アルキルから成る群から選択された置換基であり；前記アリール又はヘテロアリール基は、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、スルホニルにより任意に置換されていてもよい）で表される環状アミンである］
で表される親水性スルホンアミド誘導体、光学的活性形若しくはラセミ体の形での幾何学的異性体、又は医薬的に許容できるそれらの塩。
【請求項２】
前記光学活性形が鏡像異性体又はジアステレオマーである、請求項１に記載のスルホンアミド誘導体。
【請求項３】
下記群：
５−｛［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル｝−２−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−アニリノ｝ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボン酸；
５−｛［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル｝−２−｛［４−（オクチルアミノ）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝チオフェン−３−カルボン酸：
N−（２−ヒドロキシエチル）−５−｛［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル｝−２−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボキサミド；
N−（｛４−（ヒドラジノカルボニル）−５−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−ピペリジン−１−イル）スルホニル］チエン−２−イル｝メチル）−３−メトキシベンズアミド；
５−｛［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル｝−２−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−アニリノ｝ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボキサミド；
N−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−５−｛［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル｝−２−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボキサミド；
N−（｛４−（ヒドロキシメチル）−５−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝ピペリジン−１−イル）スルホニル］チエン−２−イル｝メチル）−３−メトキシベンズアミドから選択される請求項１又は２に記載のスルホンアミド誘導体。
【請求項４】
薬剤として使用される請求項１〜３のいずれか１項に記載のスルホンアミド誘導体。
【請求項５】
癲癇、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、網膜疾患、脊髄損傷、多発性硬化症、頭の外傷及び虚血から選択されたニュウロン疾患、炎症性腸疾患（IBD）、リウマチ様関節炎、ぜん息、敗血性ショック、移植性拒絶から選択された自己免疫疾患、乳−、結腸直腸−、膵臓、卵巣、前立腺、精巣、肝臓、腎臓、肺癌から選択された癌、発作、動脈硬化、心筋梗塞、心筋再灌流損傷を包含する心血管疾患、及び心臓、腎性、腎臓及び脳再灌流損傷、腎不全を包含する虚血性状態の処理のための薬剤の調製のためへの請求項１〜３のいずれか１項に記載のスルホンアミド誘導体の使用。
【請求項６】
JNK（Jun−キナーゼ）経路の調節のためへの請求項５に記載のスルホンアミド誘導体の使用。
【請求項７】
JNKの異常発現又は活性に関連する障害の処理の又は予防のためへの請求項６に記載の使用。
【請求項８】
JNK2及び/又はJNK3の異常発現又は活性に関連する障害の処理又は予防のためへの請求項７に記載の使用。
【請求項９】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の少なくとも１つのスルホンアミド誘導体、及び医薬的に許容できるそのキャリヤー、稀釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のスルホンアミド誘導体の製造方法であって、下記式V：
【化３】
0004927306.tif 000022
で表される塩化スルホニルを、下記式：
【化４】
0004927306.tif 000023
［式中、L1及びL2は上記で定義された通りである］で表されるアミンと反応せしめる方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野：
本発明は、実質的に親水性のスルホンアミド誘導体、又は実質的に親水性の成分を有するスルホンアミド誘導体に関する。前記スルホンアミド誘導体は、医薬的に活性の化合物としての使用のために注目に値する。また、本発明は、そのようなスルホンアミド誘導体を含む医薬製剤にも関する。特に、本発明は、免疫系及びニューロン系の疾病の処理及び/又は予防において有用であるスルホンアミド誘導体に関する。特に、本発明のスルホンアミド誘導体は、それぞれJNK（Jun−キナーゼ）機能又は経路の実質的な調節、特に阻害活性を示す。
【０００２】
発明の背景：
アポプトシスは、細胞がプログラムされた細胞死の工程を受ける場合、細胞の膜及びオルガネラの複雑なゆがみを示す。前記工程の間、細胞は固有の自殺プログラムを活性化し、そして組織的にそれ自体を破壊する。次の一連の現像が観察され得る：
・細胞表面はブレブを形成し始め、そして前食作用シグナルを発現する。次に、完全なアポプトシス細胞は、急速且つ巧妙に食作用により処理される膜結合された小胞に断片化し、その結果、周囲組織に対して最少の損傷が存在する。
・次に、細胞はその隣接部分から分離する。
【０００３】
核はまた、それが遺伝子自殺をする場合、形態学的変化の特徴的パターンを受け、クロマチンが濃縮し、そして特に、DNAフラグメントに切断される。
ニューロン細胞の死は、神経系が正常に成長することを確保することにおいて重要な役割を演じる。成長するニューロンの死は、それらが刺激する細胞のサイズに依存すると思われ、すなわち少数のシナプスパートナーを有する細胞は、多数のシナプスを形成したそれらの細胞よりもたぶん、より死亡する。これは、成長する神経系において前−又は後シナプスニューロンの相対的数を平衡化する工程に影響を与えることができる。ニューロン細胞死はアポプトシスであると思われるが、成長する囓歯動物の脳におけるニューロンは決定的には、形態学及びDNAフラグメント化により分類されるように、アポプトシスを受けることがつい最近、示されている。成長の間の細胞死は明らかに、病理学的工程ではないので、細胞は実際、存在するのを終えると思われる。
【０００４】
ニューロンの死は、外傷性神経損傷に続いて、又は神経変性疾病の間、アポプトシス又は壊死工程のいずれかにより生じる。複数の成分が、ニューロンのプログラムされた細胞死の駆動において役割を有するキープレイヤーとして出現する。中でも、ニューロンアポプトシスを導く成分は、MAPキナーゼ（MAPK）のサブファミリーであるSAPK/JNKのメンバーである。
【０００５】
哺乳類細胞は、種々のミトゲン−活性化されたタンパク質キナーゼ（MAPK）により介在されるシグナル化カスケードを活性化することによって、いくらかの細胞外刺激に対して応答する。上流の刺激に対するそれらの応答における差異にもかかわらず、MAPキナーゼキナーゼキナーゼ（MAPKKK又はMEKK）、MAPキナーゼキナーゼ（MAPKK又はMKK）及びMAPキナーゼ（MAPK）から成るMAPキナーゼカスケードが類似する態様で組織化される。MAPキナーゼは、“ストレス−活性化されたタンパク質キナーゼ”（SAPK）としても知られているc-Jun N −末端キナーゼ（JNK）、並びに細胞外シグナル調節されたキナーゼ（ERK）及びp38MAPキナーゼを包含する広いファミリーのキナーゼである。
【０００６】
それらの３種のMAPキナーゼサブファミリーの個々は、外部刺激により誘発される情報を運ぶ、少なくとも３種の異なっているが、しかし同目的の経路に包含される。JNKシグナル化経路は、環境ストレス、例えば化学的毒素、放射線、低酸素及び浸透圧ショックへの細胞の暴露により、及び成長因子又は前炎症性サイトカイン、例えば腫瘍壊死因子α（TNF−α）又はインターロイキンー１β（IL−１β）による細胞の処理により活性化される。
【０００７】
２種のMAPキナーゼキナーゼ（MKK又はMAPKKとして知られている）、すなわちMKK４（JNKK1としても知られている）及びMKK7（JNKK2としても知られている）は、サイトカイン及びストレスシグナルに応答して、酸素に対する活性化ループ上のThr−Pro−Tyrモチーフ内に位置する特定のトレオニン及びチロシン残基の二重リン酸化によりJNKを活性化する。シグナル化カスケードにおけるさらなる上流においてさえ、MKK4は、セリン及びトレオニン残基でのリン酸化を通して、MAPキナーゼキナーゼ（MEKK1）によりそれ自体活性化されることが知られている。活性化されると、JNKは転写因子標的物のN−末端に結合し、そして転写活性化ドメインをリン酸化し、アポプトシス、炎症応答又は腫瘍形成工程を導くことができる、種々の遺伝子活性物の発現のアップ−レギュレーションをもたらす（１−５）。
【０００８】
MAPK（ミトゲン−活性化されたタンパク質キナーゼ）は、トレオニン及びチロシン残基に対する二重リン酸化により活性化されるセリン/トレオニンキナーゼである。哺乳類細胞においては、MAPKに対して、細胞外刺激により生成される情報を運ぶ、少なくとも３種の異なっているが、しかし同目的の経路が存在する。前記経路は、ERK（細胞外調節されたキナーゼ）、JNK（c-Jun N−末端キナーゼ）及びp38/CSBPキナーゼの活性化を導くキナーゼカスケードから成る。JNK及びp38経路は、ストレス型分子外シグナルの供給に包含されるが、ERK経路は主に、細胞核へのミトゲン/分化シグナルの形質導入を担当する。
【０００９】
SAKカスケードは、異なった外部刺激、例えばUV照射、TNF−α、IL−１β、セラミド、細胞ストレス及び反応性酸素種によるDNA損傷により活性化され、そして明確な基質特性を有する、ミトゲンー活性化タンパク質キナーゼファミリーを示す。MKK4/JNK又はMKK3/p38によるシグナルトランスダクションは、下流のエフェクターの転写を開始するために、次にホモダイマー又はヘテロダイマーとして作用する、誘発性転写因子、c-Jun及びATF2のリン酸化をもたらす。
【００１０】
c-Junは、炎症応答に関与する多くの遺伝子（例えば、マトリックスメタロテイナーゼ）の活性化のために必要とされるトランス活性化複合体APを生成するために、JNKは、いくつかの異なった刺激、例えばUV光及びTNF−αが、タンパク質のN−末端における特定のセリン残基に対するc-Junのリン酸化を刺激することが見出された場合に発見された。
【００１１】
３種の異なったJNK酵素が、遺伝子JNK1、JNK2及びJNK3の生成物として同定されており、そしてJNKの10種の異なったイソフォームが同定されている（３，６，７）。  JNK1及び−２は、ヒト組織において偏在して発現され、ところがJNK3は脳、心臓及び精巣において選択的に発現される（７，８，９，10）。個々のイソフォームは、異なった親和性を有する基質に結合し、このことは、異なったJNKイソフォームによるシグナル化経路のインビボでの基質特異的調節を示す。
【００１２】
Xie. Xなど, (Structure 1998, 6(8); 983-991) の最近の公開においては、ストレス−活性化されたシグナルトランスダクション経路の活性化は、ラットPC-12及び上頸神経節（SCG）交感神経ニューロン細胞におけるNGF除去により誘発されるニューロンアポプトシスのために必要とされることが示唆されている。特定のキナーゼ、すなわちMAPキナーゼキナーゼ３（MKK3）及びMAPキナーゼキナーゼ4（MKK4）、又はc−Jun（MKK−４カスケードの一部）の阻害は、アポプトシスを阻害するために十分であり得る（また、Kumagae Yなど., Brain Res. Mol. Brain Res., 1999, 67(1), 10-17及びYang DD. など, Nature, 1997, 389 (6653); 865-870を参照のこと）。SCGニューロンにおけるNGF剥奪の数時間以内で、c−Junは非常にリン酸化するように成り、そしてタンパク質レベルが上昇する。
【００１３】
同様に、NGFを剥奪されたラットPC−12においては、JNK及びp38は、持効性活性化を受け、そしてERKは阻害される。このJNK3と一致するKOマウスは、海馬における毒性誘発されたアポプトシスに対して耐性であり、そしてより重要には、それらは、正常な動物に比較し、毒性促進性に応答して、非常に低められた癲癇性発作を示す（Nature 1997, 389, 865-870）。より最近には、JNKシグナル化経路は細胞増殖に包含され、そしてT−細胞活性化及び増殖により介在される自己免疫疾患において重要な役割を演じる（Immunity, 1998, 9, 575-585; Current Biology, 1999, 3, 116-125）ことが報告されている。
【００１４】
純粋な（前駆体）CD4+ヘルパーT（Th）細胞は、T−細胞受容体（TCR）複合体を通して、抗原提供細胞（APC）上の特定MHC−ペプチド複合体を認識する。TCT−介在性シグナルの他に、同時刺激シグナルは、APC上のB７タンパク質と共に、T−細胞上で発現されるCD28の連結により、少なくとも部分的に供給される。それらの２種のシグナルの組合せは、T−細胞のクローン発現を誘発する。
４〜５日の増殖の後、CD4+T細胞の前駆体は、免疫系の機能を介在する武装されたエフェクターTh細胞に分化する。この分化工程の間、遺伝子発現の実質的なプログラミングが生じる。
【００１５】
２種のサブセットのエフェクターT細胞は、それらの明確なサイトカイン分泌パターン及びそれらの免疫−調節効果に基づいて定義され：Th1細胞は、細胞−介在性炎症反応のために必要とされるTFNγ及びLT（TNF−β）を生成し；Th2細胞は、B細胞活性化及び分化を介在する、Il-4, IL-5, IL-6, IL-10及びIL-13を分泌する。それらの細胞は、免疫応答において中心的な役割を演じる。JNK MAPキナーゼ経路は、抗原刺激に基づいて、Th1エフェクター細胞において誘発されるが、しかしTh2においては誘発されない。さらに、前駆体CD4+細胞の、Th2細胞ではなく、エフェクターT細胞への分化は、JNK2−欠失マウスにおいては低められる。従って、最近、JNKキナーゼ経路が、JNK2を通してのTh1及びTh2免疫応答の釣り合いにおいて重要な役割を演じることが、実現されている。
【００１６】
JNK基質であることが知られているいくつかの転写因子は、Junタンパク質（c-Jun, Jun B及びJun D）、関連する転写因子ATF2及びATFa、Ets転写因子、例えばElk−１及びSap-1、腫瘍サプレッサーp53及び細胞死ドメインタンパク質（DENN）である。
JNK経路の活性化は、多くの疾病工程において提供されており、従って、薬剤発見のためにこの経路を標的化するための原理を提供する。さらに、分子遺伝子アプローチは、いくつかの疾病においてこの経路の病原性役割を確認している。
【００１７】
例えば、自己免疫及び炎症疾患は、免疫系の不適切な活性化に起因する。活性化された免疫細胞は、炎症分子、例えばサイトカイン、成長因子、細胞表面受容体、細胞付着分子、及び変性酵素をコードする多くの遺伝子を発現する。それらの遺伝子の多くは、転写因子c-Jun及びATF−2の転写の活性化を用いて、JNK経路により調節されることが知られている。
細菌リポ多糖−刺激されたマクロファージにおけるJNK活性化の阻害は、キー前炎症サイトカイン、すなわちTNFαの生成を効果的に調節する（11）。
【００１８】
JNK活性化の阻害は、リウマチ様関節炎における軟骨及び骨侵食、及び他の自己免疫疾患における組織化された組織破壊の増進を担当することが知られている、マトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）（12）の誘発性発現を担当する転写因子活性化を低める。
JNKカスケートはまた、抗原刺激及びCD28受容体同時刺激により、T細胞において活性化され（13）、そしてIL-2プロモーターの生成を調節する（14）。Tリンパ球の不適切な活性化は、多くの自己免疫疾患、例えば喘息、炎症性腸疾患及び多発性硬化症を開始し、そして永続せしめる。
【００１９】
アルツハイマー病から損傷を受けやすいニューロン、及び急性低酸素症を有する患者のCA１ニューロン（15）においては、JNK3タンパク質が高く発現される。JNK3遺伝子はまた、アルツハイマーの患者の脳の損傷された領域におい発現されることが見出された（16）。さらに、JNK3 KO１マウスからのニューロンは、野生型マウスからのニューロンに比較して、カイニン酸により誘発されたニューロン性アポプトシスに対して耐性になることが見出された（８）。
【００２０】
それらの発見に基づけば、JNKシグナル化経路及び特に、JNK2及びJNK3のその経路は、アポプトシス−駆動の神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、癲癇及び発作、ハンチントン病、外傷性脳損傷、虚血性及び出血性発作に包含されると思われる。
心血管疾患、例えばアテローム硬化症及び再狭窄は、血管壁の成長の欠陥性調節に起因する。JNK経路は、アテローム発生刺激により活性化され、そして前−アテローム硬化性遺伝子（19）を誘発する血管細胞（17, 18）における局部サイトカイン及び成長因子生成を調節する。
【００２１】
虚血のみ、又は心臓、肝臓、腎臓又は脳における再灌流と連結する虚血は、究極的には、うっ血性心不全、肝障害、腎不全又は大脳機能不全を導くことができる、細胞死及び瘢痕形成をもたらす。JNK経路は、JNK−応答遺伝子及び白血球−介在性組織損傷の活性を導く、心臓における虚血及び再灌流（20）により活性化される。JNK活性化はまた、虚血及び再灌流に続いて、腎臓（21）又は肝臓（22）においても観察される。JNKのダウンレギュレーションは、腎炎及び虚血性腎不全の間、腎機能及び長期結果を改良することがわかっている（23）。
【００２２】
癌は、細胞の制御できない成長、増殖及び移動により特徴づけられる。初期肺癌においては、c-Junの発現が変えられ、そして非−小細胞肺癌において成長因子シグナル化を介在することができる（24）。c-Jun生成及び活性の調節の他に、JNK活性化は、p53のリン酸化を調節し、そして従って、細胞周期進行を調節することができる（25）。さらに、HTLV−1（ヒトT細胞白血病ウィルスタイプ１）介在性腫瘍形成におけるJNK活性化の役割（26）は、癌処理におけるJNKインヒビターの可能性ある使用を示唆している（27）。JNK−相互作用−タンパク質−１（JIP1）呼ばれる、天然に介在するJNK阻害タンパク質によるJNK活性化の選択的阻害は、細胞形質転換を阻止する（28）。従って、JNKインヒビターは、形質転換及び腫瘍細胞増殖を阻止することができる。
【００２３】
JNKキナーゼ経路を阻害する目的に関しては、WO9849188号は、ヒトポリペプチド、すなわち生物学的生成物であり、そしてアポプトシス関連疾患を克服するためにまたアッセイされているJNK−相互作用タンパク質１（JIP−1）の使用を教授する。
そのようなヒトポリペプチドはJNKキナーゼ経路に対して阻害効果を有することが確かめられているが、次の広範囲の種々の欠点がそれらの使用に関連している：
【００２４】
・活性生−ペプチド又は生−タンパク質は、結果的に、時折り、得られる生成物をかなりの費用−強調的にするかなり包括的且つ高価な生合成によって、単に得られ、
・ペプチドは不良な膜侵入性を示すことが知られており、そして血液脳膜を通過することができず、
・ペプチドインヒビター又はアンタゴニストの使用に関する主要欠点は、腸分解に起因する低い経口生物利用能の問題である。従って、それらは非経口投与されるべきであり、そして最終的に、
【００２５】
・ペプチドインヒビター又はアンタゴニストが、排除されるべき物質を導入する場合、宿主本体により観察され、従って自己免疫応答を誘発する。
いくつかの広く拡散した疾病におけるJNK経路の高い関連性は、JNKのインヒビター、好ましくは選択的インヒビターを開発する必要性を強調する。
従って、種々の疾病、特にニューロン又は自己免疫系関連疾病、癌、虚血状態及び心血管疾患の処理のために適切である分子を供給することが、本発明の目的である。
【００２６】
JNK経路を包含する疾病の処理方法において有用であるよう、JNK（Junキナーゼ）経路を調節し、好ましくはダウンレギュレートし、又は阻害することができる化合物を供給することが特に本発明の目的である。
さらに、前記化合物を調製するための方法を提供することが本発明の目的である。疾病、特にJNK機能により介在されるそれらの疾病の処理のための新規カテゴリーの医薬製剤を供給することが、本発明のさらなる目的である。
最終的には、自己免疫及び/又はニューロン系の障害により引き起こされる疾病の処理及び/又は予防のための方法を提供することが、本発明の目的である。
【００２７】
発明の記載：
前記目的は、独立請求項に従って満たされている。好ましい態様は、そこに組み込まれる従属請求項内に記載されている。
次の文章は、本発明の化合物を構成し、そして本明細書及び請求項を通して均等に適用することを意図される種々の化学成分の定義を提供し、そして特にことわらない限り、広い定義を提供する。
【００２８】
“C1-C6−アルキル”とは、１〜６個の炭素原子を有する１価アルキル基を言及する。この用語は、基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ｎ−ヘキシル及び同様のものにより例示される。
“アリール”とは、単環（例えば、フェニル）又は複数の縮合された環（例えば、ナフチル）を有する、６〜14個の炭素原子の不飽和芳香族炭素環式基を言及する。好ましいアリールは、フェニル、ナフチル、フェナントレニル及び同様のものを包含する。
“C1-C6−アルキルアリール”とは、アリール置換基を有するC1-C6−アルキル基、例えばベンジル、フェネチル及び同様のものを言及する。
【００２９】
“ヘテロアリール”とは、単環式複素芳香族、又は二環式もしくは三環式の融合環複素芳香族基を言及する。複素芳香族基の特定の例は、任意に置換されていてもよいピリジル、ピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、１，２，３−チアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，３，４−トリアジニル、１，２，３−トリアジニル、ベンゾフリル、［２，３−ジヒドロ］ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イソベンゾチエニル、インドリル、イソインドリル、3H−インドリル、ベンズイミダゾリル、イミダゾ［１，２−a］ピリジル、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、キノリジニル、キナゾリニル、フタラジニル、キノキサリニル、シンノリニル、ナフチリジニル、ピリド［３，４−ｂ］ピリジル、ピリド［３，２−ｂ］ピリジル、ピリド［４，３−ｂ］ピリジル、キノリル、イソキノリル、テトラゾリル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリル、５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリル、プリニル、プテリジニル、カルバゾリル、キサンテニル、又はベンゾキノリルを包含する。
【００３０】
“C1-C6−アルキルへテロアリール”とは、ヘテロアリール置換基を有するC1-C6−アルキル基、例えば２−フリルメチル、２−チエニルメチル、２−（１H−インドール−３−イル）エチル及び同様のものを言及する。
“アルケニル”とは、好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、そしてアルケニル不飽和の少なくとも１又は２個の部位を有するアルケニル基を言及する。好ましいアルケニル基は、エテニル（-CH＝CH2）、ｎ−２−プロペニル（アリル、−CH2CH＝CH2）及び同様のものを包含する。
【００３１】
“アルキニル”とは、好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、そしてアルキル不飽和の少なくとも１〜２個の部位を有するアルキニル基を言及し、好ましいアルキニル基はエチニル（−C≡CH）、プロパルギル（-CH2C≡CH）及び同様のものを包含する。
“アシル”とは、基−C(O)Rを言及し、ここでRはC1-C6−アルキル、アリール、ヘテロアリール、C1-C6−アルキルアリール又はC1-C6−アルキルヘテロアリールを包含する。
【００３２】
“アシルオキシ”とは、基−OC（O）Rを言及し、ここでRはC1-C6−アルキル、アリール、ヘテロアリール、C1-C6−アルキルアリール又はC1-C6−アルキルヘテロアリールを包含する。
“アルコキシ”とは、基−O−Rを言及し、ここでRはC1-C6−アルキル、アリール、ヘテロアリール、C1-C6−アルキルアリール又はC1-C6−アルキルヘテロアリールを包含する。好ましいアルコキシ基は、例によれば、メトキシ、フェノキシ及び同様のものを包含する。
【００３３】
“アルコキシカルボニル”とは、基−C(O)ORを言及し、ここでRはC1-C6−アルキル、アリール、ヘテロアリール、C1-C6−アルキルアリール又はC1-C6−アルキルヘテロアリールを包含する。
“アミノカルボニル”とは、基−C(O)NRR’を言及し、ここで個々のR, R’は独立して、水素、C1-C6−アルキル、アリール、ヘテロアリール、C1-C6−アルキルアリール又はC1-C6−アルキルヘテロアリールを包含する。
【００３４】
“アシルアミノ”とは、基−NR(CO)R’を言及し、ここで個々のR, R’は独立して、水素、C1-C6−アルキル、アリール、ヘテロアリール、C1-C6−アルキルアリール又はC1-C6−アルキルヘテロアリールを包含する。
“ハロゲン”とは、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨード原子を言及する。
“スルホニル”とは、基−SO2−Rを言及し、ここでRは、H、アリール、ヘテロアリール、C1-C6−アルキル、ハロゲンにより置換されたC1-C6−アルキル−SO2−CF3基、C1-C6−アルキルアリール、又はC1-C6−アルキルヘテロアリールから選択される。
【００３５】
“スルホキシ”とは、基−S(O)-Rを言及し、ここでRは、H、C1-C6−アルキル、ハロゲンにより置換されたC1-C6−アルキル、例えば−SO-CF3基、アリール、ヘテロアリール、C1-C6−アルキルアリール、又はC1-C6−アルキルヘテロアリールから選択される。
“チオアルコキシ”とは、基−S-Rを言及し、ここでRは、C1-C6−アルキル、アリール、ヘテロアリール、C1-C6−アルキルアリール又はC1-C6−アルキルヘテロアリールを包含する。好ましいチオアルコキシ基は、チオメトキシ、チオエトキシ及び同様のものを包含する。
【００３６】
“置換された又は置換されていない”：特に個々の置換基の定義により制限されない限り、上記に示される基、例えばアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール及びヘテロアリール、等の基は任意には、C1-C6−アルキル、C1-C6−アルキルアリール、C1-C6−アルキルへテロアリール、C2-C6−アルケニル、C2-C6−アルキニル、第一、第二又は第三アミノ基又は第四アンモニウム成分、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アリール、ヘテロアリール、カルボキシル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、ニトロ、スルホキシ、スルホニル、アルコキシ、チオアルコキシ、トリハロメチル及び同様のものから成る群から選択された１〜５個の置換基により置換され得る。
【００３７】
他方では、前記置換基はまた、隣接する置換基が、特にビシナル官能置換基が包含される場合、環閉鎖を受ける情況を含んで成り、従って、例えばラクタム、ラクトン、環状無水物、またアセタール、チオアセタール、保護基を得るための努力において環閉鎖により形成されるアミナールを形成する。
【００３８】
“医薬的に許容できる塩又は複合体”とは、所望する生物学的活性を保持する、下記に定義される式Iの化合物の塩又は複合体を言及する。そのような塩の例は、無機酸（例えば、塩酸、臭酸、硫酸、リン酸、硝酸及び同様のもの）により形成される酸付加塩、及び有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、琥珀酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモール酸（pamoic acid）、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸及びポリガラクツロン酸により形成される塩を包含するが、但しそれらだけには限定されない。
【００３９】
前記化合物はまた、式−NR, R’, R’’+Z-（式中、R, R’, R’’は独立して、水素、アルキル又はベンジルであり、そしてZはカウンターイオン、例えばクロリド、ブロミド、ヨージド、−O−アルキル、トルエンスルホネート、メチルスルホネート、スルホネート、ホスフェート、又はカルボキシレート（例えば、ベンゾエート、スクシネート、アセテート、グリコレート、マレエート、マレート、フマレート、シトレート、タルトレート、アスコルベート、シンナモエート、マンデロエート及びジフェニルアセテート）である）で表される第四アンモニウム塩を特に包含する。
【００４０】
当業者に知られている医薬的に許容できる第四塩として投与され得る。塩基−付加塩の例は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム及び水酸化第四アンモニウム、例えば水酸化テトラメチルアンモニウムに由来するそれらの塩を包含する。
【００４１】
“医薬的活性誘導体”とは、受容体への投与に基づいて、本明細書に開示される活性を、直接的に又は間接的に提供することができるいずれかの化合物を言及する。
“イオン化できる成分”とは、官能基を言及し、ここでその特徴的な電子分布が、イオン性又はイオン化された基、例えば塩に転換されるその能力を前記成分に付与する。そのような基は、陽性化され得る塩基性成分、又は脱陽性化され得る酸性基であり得る。好ましいイオン化できる成分は、アミンのような塩基性基、又はカルボン酸のような酸性基である。
【００４２】
“実質的に溶解できる”とは、本発明の化合物が水性溶解において良好な溶解性を示すことを意味する。好ましい限界値は、約50μm/ml溶媒、より好まししくは、少なくとも100μg/ml溶媒である。
“親油性鎖”とは、疎水性基、置換基又は化合物、特に脂質又は脂肪化合物又は成分に対して明白な誘引性を有する基を言及する。それらは特に、任意に置換されたC4-C18−アルキル基又は置換されているか又は置換されていないアルキル−アリール基を包含する。
【００４３】
“親水性基”とは、親水性又は極性基、置換基又は化合物、又は脂肪化合物又は成分に対して明白な誘引性を有する官能基を言及する。それらは、カルボキシレート、ヒドロキシド、スルフェート、又はスルホネート、又はアミン又はアンモニウム塩を包含する。
“鏡像異性体過剰率”（ee）とは、実質的に鏡像異性体合成、又は鏡像選択段階を含んで成る合成により得られる生成物を言及し、それによれば、少なくとも52％のeeの程度での過剰の１つの鏡像異性体が得られる。鏡像異性体合成の不在下で、Junキナーゼインヒビターとしての活性を有するラセミ生成物が通常、得られる。
【００４４】
本発明の１つの観点は、下記式I：
【化１０】
0004927306.tif 000002
で表されるスルホンアミド誘導体である。
【００４５】
適切な医薬剤である本発明の式Iの化合物は、次のものであり、ここで
Ar1は置換されているか又は置換されていないアリール又はヘテロアリールであり、
Ar2は少なくとも１つの親水性置換基を担持するアリール又はヘテロアリール基であり、
XはO又はS、好ましくはOであり、
【００４６】
R1は水素、又はC1-C6−アルキル基であるか、あるいはR1は置換されているか又は置換されていない５〜６員の飽和又は不飽和環をAr1と共に形成し、
ｎは０〜５の整数、好ましくは１〜３及び最も好ましくは、１であり、
式I内のYは、少なくとも１つの窒素原子を含む、置換されていないか又は置換されている４〜12員の飽和環状又は二環式アルキルであり、それにより、前記環内の１つの窒素原子は式Iのスルホニル基と共に結合を形成し、従ってスルホンアミドを提供する。
【００４７】
本発明の好ましい態様においては、Yは、下記式：
【化１１】
0004927306.tif 000003
で表されるピペリジン又はピペリジン成分である。
【００４８】
前記ピペリジン又はピペリジン基においては、L1及びL2は、H、置換されているか又は置換されていないC1-C6−アルキル、置換されているか又は置換されていないC2-C6−アルケニル、置換されているか又は置換されていないC2-C6−アルキニル、任意に１〜３個のヘテロ原子を含み、そして任意には、アリール、又はヘテロアリールと融合している、置換されているか又は置換されていない環状C4-C8−アルキルを含んで成るか又はそれらから成る群からそれぞれ独立して選択されるか、又はL1及びL2は、置換されているか又は置換されていないアリール、置換されているか又は置換されていないヘテロアリール、アリール-C1-C6-アルキル、ヘテロアリール-C1-C6-アルキル、-C(O)-OR3, -C(O)-R3, -C(O)-NR3’R3, -NR3’R3, -NR3’C(O)R3、-NR3’C(O)NR3’R3, -(SO)R3, -(SO2)R3, -NSO2R3, -SO2NR3’R3を含んで成るか、又はそれらから成る群から独立して選択される。
【００４９】
それによれば、R3及びR3’は、H,  置換されているか又は置換されていないC1-C6-アルキル、置換されているか又は置換されていないC2-C2-アルケニル、置換されているか又は置換されていないアリール、置換されているか又は置換されていないヘテロアリール、置換されているか又は置換されていないアリール-C1-C6-アルキル、置換されているか又は置換されていないヘテロアリール-C1-C6-アルキルを含んで成るか、又はそれから成る群から独立して選択された置換基である。
【００５０】
R6は、水素、置換されているか又は置換されていないC1-C6-アルキル、置換されているか又は置換されていないC1-C6-アルコキシ、OH、ハロゲン、ニトロ、シアノ、スルホニル、オキソ（＝0）、スルホキシ、アシルオキシ、チオアルコキシを含んで成るか、又はそれらから成る群から選択され、そしてn’は０〜４の整数、好ましくは１又は２である。
【００５１】
上記に言及されたアリール又はヘテロアリール基のすべては、置換されているか又は置換されていないC1-C6−アルキル、同様のハロメチル、置換されているか又は置換されていないC1-C6−アルコキシ、アシルオキシ、置換されているか又は置換されていないC2-C6−アルケニル、置換されているか又は置換されていないC2-C6−アルキニル、アミノ、アシルアミノ、アシルカルボニル、C1-C6−アルコキシカルボニル、アリール、カルボキシル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、スルホニル、スルホキシ、C1-C6−チオアルコキシから選択された群から少なくとも１つにより任意に置換され得る。
【００５２】
また、L1及びL2は、一緒に取られる場合、４〜８員の飽和環状アルキル又はヘテロアルキル基、同様のトリアゾリン、テトラゾリン、オキサゾリン、イソキサゾリン、オキサゾール又はイソオキサゾールを形成することができる。好ましい態様においては、L1及びL2は、２〜３個の窒素原子を含む、５〜６員の飽和環状アルキル環を一緒に形成する。
L1はまた、親油性鎖が結合されるイオン化できる成分であり得る。そのようなイオン化できる成分は、親油性C4-C8−アルキル、好ましくはC6-C12−アルキル、又は置換されているか又は置換されていないアルキル−アリール基により置換されるアミノ基であり得る。
【００５３】
L1内の上記に言及されるイオン化できる成分は、式Iの分子に良好な溶解性を付与することを意味する。L1内のイオン化できる成分を通しての式Iの分子の溶解性の改良は、医薬化合物のために特に興味あるものである。
Junキナーゼの阻害に関しての式Iの特に有能な化合物は、L1が親油性成分を含んで成るそれらである。アミノ基のようなイオン化できる成分に結合されるC4-C18アルキル基が最も好ましい。そのような親油性基は、阻害されるべき酵素の孔中に侵入すると思われる。
本発明はまた、式Iの化合物の幾何学的異性体、光学的活性形、鏡像異性体、ジアステレオマー、並びに式Iのスルホンアミド誘導体のそれらのラセミ体及び医薬的に許容できる塩及び医薬的活性誘導体を包含する。
【００５４】
式Iにおける好ましいAr1は、置換されているか又は置換されていないC1-C6−アルキル、同様のトリハロメチル、置換されているか又は置換されていないC1-C6−アルコキシ、置換されているか又は置換されていないC2-C6−アルケニル、置換されているか又は置換されていないC2-C6−アルキニル、アミノ、アシルアミノ、アミノカルボニル、C1-C6−アルコキシカルボニル、アリール、カルボキシル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、スルホニル、スルホキシ、アシルオキシ、C1-C6−チオアルコキシにより任意に置換された、フェニル、チエニル、フリル、ピリジルを含んで成るか又はそれらから成る群から独立して選択されるそれらである。最も好ましいAr1は、置換されたフェニル、例えばクロロフェニル、ニトロフェニル、ヒドロキシフェニル、アルコキシフェニルである。
【００５５】
最も好ましいAr2は、少なくとも１つの、好ましくは１つの親水性置換基を有するチエニル、ピロロ又はフェニル基である。前記チエニル、ピロロ又はフェニル基に結合されるそのような親水性置換基は、式Iの分子に良好な溶解性を付与する残基である。それらは、特にカルボキシル基、カルボキシレート、カルボキサミド、OH又はOH担持のアルキル基、又はヒドラジドカルボニル基を包含する。Ar2上の親水性置換基を通しての式Iの化合物の溶解性の改良は、溶液にされる医薬化合物のために特に興味あるものである。
【００５６】
本発明の特に好ましい態様は、式Iのスルホンアミド誘導体に関し、ここでYは下記式：
【化１２】
0004927306.tif 000004
【００５７】
［式中、R6, n’, L1及びL2は上記で定義された通りである］で表される、置換されているか又は置換されていないピペリジン残基である。
より好ましい態様によれば、式Iのスルホンアミド誘導体は、Ar1が４−クロロフェニルであり、XがOであり、R1が水素であり、ｎが１であり、Ar2がチエニルであり、Yが下記式：
【００５８】
【化１３】
0004927306.tif 000005
【００５９】
［式中、L2はHであり、L1は−NHR3であり；ここでR3は、C1-C12−アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール−C1-C6−アルキル、ヘテロアリール−C1-C6−アルキルを含んで成るか又はそれらから成る群から選択された置換基である］で表されるそれらの誘導体である。
前記アリール又はヘテロアリール基は、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、スルホニルにより任意に置換され得る。
【００６０】
式Iの化合物の特定の例は、次のものを包含する：
５−{［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−２−［（４−{３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−アニリノ}ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボン酸；
５−{［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−２−{［４−（オクチルアミノ）ピペリジン−１−イル］スルホニル}チオフェン−３−カルボン酸：
N−（２−ヒドロキシエチル）−５−{［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−２−［（４−{３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ}ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボキサミド；
N−（{４−（ヒドラジノカルボニル）−５−［（４−{３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アミノ}−ピペリジン−１−イル）スルホニル］チエン−２−イル}メチル）−３−メトキシベンズアミド；
５−{［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−２−［（４−{３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−アニリノ}ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボキサミド；
【００６１】
N−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−５−{［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−２−［（４−{３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ}ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボキサミド；
N−（{４−（ヒドロキシメチル）−５−［（４−{３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ}ピペリジン−１−イル）スルホニル］チエン−２−イル}メチル）−３−メトキシベンズアミド；
２−{［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル}５−{［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−３−チオフェンカルボン酸；
５−{［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−２−［（４−{［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ}−１−ピペリジニル）スルホニル］−３−４オフェンカルボン酸。
【００６２】
式Iの化合物は、哺乳類、特にヒトの免疫系及びニューロン系の障害の処理への使用のために適切である。そのようなニューロン系障害は、例えばニューロン変性疾患、例えばアルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、網膜疾患、脊髄損傷、多発性硬化症、頭の外傷、癲癇及び発作、虚血及び出血性脳発作を包含する。免疫系疾患は、例えばぜん息、移植片拒絶、炎症工程、例えば炎症性腸疾患（IBD）、軟膏及び骨侵食障害、リウマチ様関節炎、敗血性ショックを包含する。
【００６３】
式Iの化合物はまた、癌、例えば乳、結腸直腸、膵臓、前立腺、精巣、卵巣、肺、肝臓、腎臓癌の処理への使用のためにも適切である。
もう1つの態様においては、式Iの化合物は、心血管疾患、例えばアテローム硬化症、再狭窄、発作、虚血症、例えば大脳虚血症、心筋梗塞の処理のために使用され得る。
もう１つの態様においては、式Iの化合物は、種々の虚血性状態、例えば心及び腎不全、肝障害及び脳再灌流損傷の処理のために使用され得る。
【００６４】
好ましくは、式Iの化合物は、単独で又は医薬組成物の形で、JNK経路の調節のために、より特定には、JNK、特にJNK2及び−３の発現又は活性に関連する疾病の処理又は予防のために有用である。前記調節は通常、好ましくはJNK経路、特にJNK2及び/又は−３の阻害を包含する。そのようなJNKの異常発現又は活性は、多くの刺激（例えば、ストレス、敗血性ショック、酸化ストレス、サイトカイン）により誘発され、そして例えば制御されていないアポプトシス、炎症応答又は腫瘍遺伝子工程を導く工程カスケードを引き起こすことができる。
【００６５】
それらの現象は時折、上記疾病及び疾病状態を包含する種々の疾病に包含される。従って、本発明の化合物は、JNK機能又はシグナル化経路を調節することによって、疾病の処理のために使用され得る。JNK機能又は経路の調節は、その活性化を包含するが、しかし好ましくは、それは、JNK経路、特にJNK１及び/又は−２及び/又はJNK3の阻害までのダウン−レギュレーションを包含する。本発明の化合物は、単独で、又は追加の医薬剤、例えば追加のJNKモジュレーターと組合して使用され得る。
【００６６】
さらに、本発明のさらなる目的は、上記に記載される式Iの新規スルホンアミド誘導体を調製するための方法である。本発明のスルホンアミド誘導体は、次の一般的方法を用いて、容易に入手できる出発材料から調製され得る。典型的な又は好ましい実験条件（すなわち、反応温度、時間、試薬のモル数、溶媒、等）が与えられる場合、他の実験条件もまた、特にことわらない限り、使用され得ることが理解されるであろう。最適な反応条件は、使用される特定の反応体又は溶媒により変化するが、しかしそのような条件は、通常の最適化方法を用いて、当業者により決定され得る。
【００６７】
好ましい合成方法においては、本発明のスルホンアミド誘導体は、まず、下記式II：
R1HN-(CH2)n-Ar2      II
［式中、Ar2及びR1は上記で決定された通りである］で表されるアミンを、下記式III：
【００６８】
【化１４】
0004927306.tif 000006
【００６９】
［式中、Ar1は上記で定義された通りである］で表される塩化アシルによりカップリングし、下記式IV：
【００７０】
【化１５】
0004927306.tif 000007
【００７１】
で表されるアミドを供給することによって調製される。式IIのアミンは、既知の化合物であるか、又は従来の方法により既知の化合物から調製され得る。出発材料としての好ましいアミンは、チエン−２−イル−メチルアミン、フラン−２−イル−メチルアミン、ピリジル−２−イルメチルアミン及び同様のものを包含する。式IIIの塩化アシルはまた、市販されており、又は前に記載された化合物である。好ましい塩化アシルは、４−クロロベンゾイルクロリド、３−メトキシ−ベンゾイルクロリド、２−ニトロベンゾイルクロリド及び同様のものを包含する。知られていない場合、酸ハロゲン化物は、その対応するカルボン酸と、無機酸ハロゲン化物、例えば塩化チオニル、三塩化リン又は塩化オキサリルとを、従来の条件下で反応せしめることによって調製され得る。
【００７２】
一般的に、この反応は、純粋な形で又は不活性溶媒、例えば四塩化炭素下で、約１〜５モル当量の無機酸ハロゲン化物又は塩化オキサリルを用いて、約0℃〜約80℃の温度で、約１〜約48時間、行われる。N, N−ジメチルホルムアミドのような触媒がまた、この反応において使用され得る。
ハロゲン化アシルがカップリング反応に使用される場合、それは典型的には、反応の間に生成される酸を除去するために、適切な塩基の存在下で第IIアミンと反応せしめられる。適切な塩基は、例によれば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、N−メチルモルホリン及び同様のものを包含する。他方では、過剰の第IIアミンが、反応の間に生成される酸を除去するために使用され得る。
【００７３】
他方では、化合物IIIのカルボン酸が、カップリング反応に使用され得る。IIIのカルボン酸は通常、市販されている試薬であるか、又は従来の方法により調製され得る。
III（すなわち、塩化アシル）のカルボン酸のカップリング反応は、いずれかの従来のカップリング試薬、例えばカルボジイミド、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド、N−（３−ジメチルアミノプロピル）−N’−エチルカルボジイミド及び他の促進剤、例えばN, N−カルボニル−ジイミダゾール又はPyBOPを用いて行われる。この反応は、カルボン酸及びアミンのカップリングを促進することが知れられている、良く知られている添加剤、例えばN−ヒドロキシスクシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを用いて、又はそれを用いないで行われ得る。
【００７４】
酸ハロゲン化合物III又はそのカルボン酸のいずれかを用いてのカップリング反応は好ましくは、約0℃〜約６℃の温度で、約１〜約24時間、行われる。典型的には、反応は、カルボン酸又はその酸ハロゲン化合物に基づいて約１〜約５モル当量のアミンを用いて、不活性非プロトン性溶媒、例えばN, N−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、テトラヒドロフラン及び同様のものにおいて行われる。反応の完結に基づいて、カルボキサミドIVは、従来の方法、例えば沈殿、クロマトグラフィー、濾過、蒸留及び同様の方法により回収される。
【００７５】
式Iのスルホニル−ピペリジン又はピペラジンの調製のために必要な下記式V：
【化１６】
0004927306.tif 000008
で表される塩化スルホニルは、従来のスルホン化方法を用いて調製される。
【００７６】
この反応への使用のための好ましいスルホン化試薬は、クロロスルホン酸である。典型的には、スルホン化反応は、式（IV）のカルボキサミドを、約５〜約10モル当量のスルホン化試薬により、不活性溶媒、例えばジクロロメタン下で、約−70℃〜約50℃の範囲の温度で処理することによって行われる。好ましくは、クロロスルホン酸の添加が−70℃で行われ、そして中間体スルホン酸の形成が誘導される。20℃への温度の上昇は、式Vの塩化スルホニルの形成を可能にする。
【００７７】
さらなる好ましい調製方法によれば、特に、式Vの塩化スルホニルの予備合成を導く、上記で指摘された方法が適用できない場合、本発明のスルホニルピペリジン及びピペリジンが次の段階により調製される：
・式IIの化合物のアミン官能基の保護；
・芳香族基のクロロスルホニル化；
・スルホンアミド官能基の形成；
・保護基の保護解除；
・上記で生成される遊離アミンのアシル化。
式IIのアミンは、下記式VI：
【００７８】
【化１７】
0004927306.tif 000009
【００７９】
［式中、Pは保護基を示す］で表される中間体を供給するために、アミン成分の適切な保護基により保護される。アミン官能基の多くの保護基P、及びそれらの導入及び除去は、T.W. Greene and G.M. Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York, 1998, 及びそこに引用される引例に良く記載されている。酸及び塩基安定性であり、そしてさらに、遷移金属錯体、例えばパラジウム錯体、例えばアリルカルバメート基（Alloc）又はN, N’−ビスアリル基を用いることによって除去され得る保護基が好ましい。もう１つの好ましい保護基は、すべての範囲の実験条件下で安定するマレイミド基である。
【００８０】
前記基の導入は、その対応するビスアリルカルボネート無水物又はアリルブロミド、又は無水マレイン酸を、塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、N−メチルモルホリン及び同様のものの存在下で、非プロトン性溶媒、例えばN, N−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、テトラヒドロフラン及び同様のものにおいて、約0℃〜約80℃の範囲の温度で反応することによって行われ得る。
【００８１】
次に、式VIの化合物は、下記式VII：
【化１８】
0004927306.tif 000010
【００８２】
で表される塩化スルホニルの獲得を可能にする従来の非常に温和なスルホン化方法を用いてスルホン化される。典型的には、保護されたアミンVIは、不活性雰囲気下で塩基、例えばｎ−ブチルリチウム又はtert−ブチルリチウムにより、極性溶媒、例えばテトラヒドロフラン、エーテル又はジオキサン下で、−70℃〜0℃の範囲の温度で、15分〜４時間、処理される。次に、そのようにして形成されたアニオンは、SO2Cl2又は最も好ましくはSO2により−70℃〜20℃の範囲の温度で、５分〜１時間、反応混合物中にガスを泡立てることによって処理される。次に、得られるスルホネートは、0℃〜70℃の範囲の温度でN−クロロスクシンイミドと接触せしめることによって、式VIIの塩化スルホニルに、現場転換される。
【００８３】
次に、式Iのスルホンアミド誘導体は、対応する環状アミン、例えば下記一般式VIII又はIX：
【化１９】
0004927306.tif 000011
【００８４】
［式中、L1及びL2は上記で定義された通りである］で表されるピペラジン又はピペリジンと反応することによって、その反応する上記で言及された塩化スルホニルV又はVIIから調製される。式VIII又はIXのアミンは、市販されている化合物、又は既知方法により調製され得る化合物である。典型的には、タイプVIIIのピペラジンは、当業者に知られてる従来の方法を用いて調製され得る。
【００８５】
L1及び/又はL2＝アリールに関しては、適切な調製方法は、Tetrahedron Lett. 1996, 37, 8487-8488及びそこに引用される引例に記載されている。L1及び/又はL2＝アリールC1-C6アルキルに関しては、さらなる好ましい方法は、その対応するピペラジン又はモノ−N−保護されたピペラジンと、下記式X：
アリール−(CH2)n−X          X
［式中、XはCl, Br, I, OTs, OMs である］で表される化合物との反応である。
【００８６】
反応は一般的に、溶媒、例えばN, N−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N−メチルピロリジドン、エタノール、アセトニトリルにおいて、塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、炭酸カリウム及び同様のものの存在下で、約0℃〜約100℃の温度で行われる。
L1及び/又はL2＝-C(S)−に関しては、さらなる好ましい方法は、Bull. Soc. Chim. Belgium, 1978, 87, 229に記載されるように、チオアミド基へのアミドの転換を可能にするLawesson’s 試薬を用いての下記式XI：
【００８７】
【化２０】
0004927306.tif 000012
【００８８】
で表される化合物の転換である。式Iのスルホンアミドは、塩化スルホニルと、式VIIIのアミンとを、反応の間に生成される酸を除去するのに適切な塩基の存在下で、接触せしめることによって容易に調製される。適切な塩基は、例によれば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、N−メチルモルホリン及び同様のものを包含する。反応は、溶媒、例えばN, N−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N−メチルピロリドン、エタノール、アセトニトリルにおいて、約0℃〜約100℃の温度で行われる。他方では、式Iのスルホンアミド誘導体は、一般式IXのピペリジンとの反応により、その対応する塩化スルホニルV又はVIIから容易に調製される。
【００８９】
式IXのピペリジンは、市販されている化合物は又は既知の方法により調製され得る化合物のいずれかである。
典型的には、タイプIXのピペリジンは、当業者により知られており、そしてJ. Pharm. Sci. 1972, 61, 1316: J. Heterocyclic. Chem., 1986, 23, 73; アメリカ特許第5106983号、WO/9113872号及びWO/9606609号に記載される従来の方法を用いて調製され得る。
【００９０】
式IXのピペリジンの獲得の好ましい方法は次の通りである：L1＝H及びL2＝(CH2)n−アリール（ｎ＝0, 1, 2）に関しては、モノ−保護された４−ピペリドン上への有機金属種、例えばAr3(CH2)nLi又はAr3(CH2)nMgBrの付加、続いて、タイプIXの化合物の形成を可能にする、そのようにして形成された二重結合の還元。
L2＝−NR−(CH2)n−アリール（ここでｎ＝0, 1, 2）に関しては、好ましい方法は、アリール−(CH2)n−NR−Hのアミンによる４−ピペリドンの還元性アミノ化である。ｎ＝0である場合のさらなる好ましい方法は、Tetrahedron Lett. 1995, 36, 6373−6374に記載されるように、モノ−N−保護された４−ピペリドールと、下記式XII：
【００９１】
【化２１】
0004927306.tif 000013
【００９２】
で表される活性化されたアニリンとの間での“Mitsunobu type”カップリングである。次に、スルファミノ基の保護解除が、炭酸カリウムの存在下で、チオフェノールを用いて行われる。
【００９３】
L2＝−NR3’C(O)R3、−NR3’C(O)NR3’R, NR3’SO2-R3に関しては、式IXの化合物の好ましい合成方法は、当業者に非常に良く知られている従来の条件下で、市販のN−BOC−４−アミノピペリジンと、それぞれ塩化アシル、イソシアネート及び塩化スルホニルとの反応である。
L2＝−CO−アリールに関しては、式IXの化合物は、極性非プロトン性溶媒、例えばジクロロメタンにおいて、ルイス酸、例えば三塩化アルミニウム又は四塩化チタンの存在下で、十分に選択された芳香族又はヘテロ芳香族環と、下記のタイプXIII：
【００９４】
【化２２】
0004927306.tif 000014
【００９５】
で表される中間体とを接触せしめることによって容易に調製される。中間体VIIIは、まず、ピペリド−４−イルカルボン酸のアセチル化、及び塩化チオニルによる処理による塩化アシルの形成により容易に得られる。
【００９６】
式Iのスルホンアミドは、反応の間に生成される酸を除去するために適切な塩基の存在下で、塩化スルホニルVと式IVのアミンとを接触することによって容易に調製される。適切な塩基は、例によれば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、N−メチルモルホリン及び同様のものを包含する。反応は好ましくは、溶媒、例えば、N, N−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N−メチルピロリドン、エタノール、アセトニトリル下で、約0℃〜約100℃の温度で行われる。
【００９７】
式XIVのスルホンアミドは、反応の間に生成される酸を除去するために適切な塩基の存在下で、塩化スルホニルVIIと式VIII又はIXのアミンとを接触することによって容易に調製される。適切な塩基は、例によれば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモリホリン及び同様のものを包含する。反応は好ましくは、溶媒、例えばN, N−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N−メチルピロリドン、エタノール、アセトニトリル下で、約0℃〜約100℃の温度で行われる。タイプVIIの塩化スルホニルの使用は、下記一般式XIV：
R1HN-(CH2)n-Ar2-SO2-Y          XIV
［式中、R1、Ar2、Y及びｎは、上記で定義された通りである］で表されるアミンを得るために、当業者に良く知られている方法を用いて保護解除されるべきであるアミンを誘導する。
【００９８】
次に、タイプXIVの誘導体が、一般式Iの化合物を誘導する上記の好ましい条件下での酸塩化物又はカルボン酸とアミンとの縮合によるアミドの調製のための記載される方法に従って、アシル化される。特に一般式I（ここでYはピペラジン誘導体を表す）の化合物の場合、本発明の一部としてまた見なされるべきである他の調製方法は、下記式XV：
【００９９】
【化２３】
0004927306.tif 000015
【０１００】
で表されるピペラジン誘導体と、L1（L1、L2の上記定義を参照のこと）の性質に依存して選択されるであろう求電子試薬との縮合から成る。それらのタイプの縮合を行うための方法は、良く知られており、そしてN−置換されたピペラジン誘導体の種々の合成に基づいて十分に記載されている。
【０１０１】
式I（式中、Ar2は置換基R6により置換されている）のスルホンアミドを調製するためのより好ましいアプローチは、下記段階を包含する：
・保護基Pを有する塩化スルホニル（VII）を供給し；
・塩化スルホニル（VII）とアミン（VIII）、例えば保護されたピペリジン−４−オンと反応せしめ、スルホンアミド（IX）を供給し：
【０１０２】
・前記スルホンアミド（IX）をAr2のメタレーション（例えば、BuLiを用いることにより）にゆだね、その対応する置換されたスルホンアミド（IXa）を生成し、ここでR6はカルボキシル基、カルボキシレート、カルボキサミド、OH、又はOH担持のアルキル基、ヒドラジドカルボニル基、スルフェート、スルホネート、アミン又はアンモニウム塩であり；
・前記スルホンアミド（IXa）の保護基Pを除去し、そしてスルホンアミドをアシル化し、式（IXb）の化合物を生成し；
・前記スルホンアミド（IXb）を保護解除し、そして式Iの化合物を得るために、その対応するケトンを還元的にアミノ化する。
前記アプローチは、下記スキーム１に例示される：
【０１０３】
【化２４】
0004927306.tif 000016
【０１０４】
上記に示される一般合成方法が式Iの化合物の獲得のために適用できない場合、当業者により知られている適切な調製方法が使用されるべきである。例えば、Ar2がフェニルである場合、市販の４−シアノフェニルスルホニルクロリドから出発し、そして当業者により知られている従来の方法を適用し、式Iのスルホンアミド誘導体に達すべきである。
【０１０５】
本発明の最終観点は、JNK機能又はシグナル化経路の調節のためへの式Iの化合物の使用、すなわちJNK経路の調節のための医薬組織物、及び式Iの活性化合物を含む精製の調製のためへの前記化合物の使用に関する。JNK経路の前記調節は、種々の障害のための適切な処理アプローチとして見られる。医薬として使用される場合、本発明のスルホンアミド誘導体は典型的には、医薬組成物の形で投与される。従って、式Iの化合物、及び医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤又は賦形剤を含んで成る医薬組成物はまた、本発明の範囲内である。当業者は、医薬組成物を配合するために適切な種々のそのようなキャリヤー、希釈剤又は賦形剤化合物を知っている。また、本発明は、薬剤として使用するための化合物を供給する。特に、本発明は、哺乳類、特にヒトの免疫及びニューロン系の疾患の処理のためのJNK、特にJNK3のインヒビターとして使用するための式Iの化合物を、単独で又は他の薬剤と組合して提供する。
【０１０６】
本発明の化合物は、従来使用されるアジュバント、キャリヤー、希釈剤又は賦形剤と共に、医薬組成物及びその単位用量の形に配置され、そしてそのような形においては、経口使用のためには、固体、例えば錠剤又は充填されたカプセル、又は液体、例えば前記物質により充填された溶液、懸濁液、エマルジョン、エリキシル又はカプセルとして、又は非経口（皮下使用を包含する）ための無菌注射用溶液の形で使用され得る。そのような医薬組成物及びその単位用量形は、追加の活性化合物又は成分を伴なって又はそれらを伴なわないで、従来の割合で成分を含んで成り、そしてそのような単位用量形は、使用される意図された毎日の用量範囲に比例し、いずれかの適切な有効量の活性成分を含むことができる。
【０１０７】
医薬として使用され得る場合、本発明のスルホンアミド誘導体は典型的には、医薬組成物の形で投与される。そのような組成物は、医薬業界において良く知られている態様で調製され得、そして少なくとも1つの活性化合物を含んで成る。一般的に、本発明の化合物は、医薬的に有効な量で投与される。実際に投与される化合物の量は、適切な環境、例えば処理される状態、投与の選択された経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重及び応答、患者の症状の重症度、及び同様のものを考慮して、医者により決定されるであろう。
【０１０８】
本発明の医薬組成物は、種々の経路、例えば経口、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内及び鼻腔内投与され得る。意図される供経路に依存して、化合物は好ましくは、注射用又は経口用組成物として配合される。経口投与のための組成物は、大量液体溶液又は懸濁液、又は大量粉末の形で取られ得る。しかしながら、より通常には、組成物は、正確な投与を促進するために単位用量形で提供される。用語“単位用量形”とは、ヒト対象及び他の哺乳類のために単位用量として適切な物理的に分離した単位を言及し、個々の単位は、適切な医薬賦形剤と共に、所望する治療効果を生成するために計算された、予定された量の活性材料を含む。
【０１０９】
典型的な単位用量形は、液体組成物の予備充填され、予備測定されたアンプル又は注射器、又は固体組成物の場合、ピル、錠剤、カプセル又は同様のものを包含する。そのような組成物においては、スルホンアミド化合物は通常、マイナーな成分であり（約0.1〜約50重量％、又は好ましくは約１〜約40重量％）、そして残りは所望する用量形の形成を助ける種々のビークル又はキャリヤー及び加工助剤である。
【０１１０】
経口投与のために適切な液体形は、緩衝液、懸濁及び分散剤、着色剤及び同様のものと共に、適切な水性又は非水性ビークルを含むことができる。固体形は、例えば、次の成分又は類似する性質の化合物のいずれかを含むことができる：結合剤、例えば微結晶性セルロース、トラガカントガム又はゼラチン；賦形剤、例えばスターチ又はラクトース、砕解剤、例えばアルギン酸、Primogel又はトウモロコシスターチ；滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム；グリダント（glidant）、例えばコロイド状二酸化珪素；甘味剤、例えばスクロース又はサッカリン；又は風味剤、例えばペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジフレーバー。
【０１１１】
注射用組成物は典型的には、注射用無菌塩溶液又はリン酸緩衝溶液、又は当業者において知られている他の注射用キャリヤーに基づかれている。上記で言及されたように、そのような組成物における式Inoスルホンアミド化合物は典型的には、時折、0.05〜10重量％の範囲のマイナーな成分であり、残りは注射用キャリヤー及び同様のものである。
【０１１２】
経口投与されるか又は注射用組成物のための上記に記載される成分は、単なる代表物である。さらなる材料、加工技法及び同様のものは、Part8 of Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, 1985, Marck Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 及びそこに引用される引例に示される。本発明の化合物はまた、持効性形で、又は持効性薬物供給システムから投与され得る。代表的な持効性材料の記載はまた、Remington’s Pharmaceutical Sciencesにおける組み込まれる材料に見出され得る。
【０１１３】
次に、本発明は、いくつかの例により例示されるが、それらは、本発明の範囲を制限するものではない。下記に記載される例に提供されるHPLC, NMR及びMSデータは、次の通りにして得られた。次の略語が、この後、付随する例に使用される：min（分）、hr（時）、g（グラム）、mmal（ミリモル）、m.p.（溶融点）、eq（当量）、mL（ミリリットル）、μL（マイクロリッター）、ACN（アセトニトリル）、Boc（ブトキシカルボニル）、CDCl3（重水素化されたクロロホルム）、cHex（シクロヘキサン）、DCM（ジクロロメタン）、DECP（ジエチルシアノホスフェート）、DIC（ジイソプロピルカルボジイミド）、DMAP（４−ジメチルアミノピリジン）、DMF（ジメチルホルムアミド）、DMSO（ジメチルホキシド）、DMSO−d6（重水素化されたジメチルスルホキシド）、DEC（１−（３−ジメチル−アミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド）、EtOAc（酢酸エチル）、
【０１１４】
Et2O（ジエチルエーテル）、Fmoc（９−フルオレニルメトキシカルボニル）、HOBt（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、K2CO3（炭酸カリウム）、NaH（水素化ナトリウム）、NaHCO3（炭酸水素ナトリウム）、nBuLi（ｎ−ブチルリチウム）、TBTU（O−ベンゾトリアゾリル−N, N, N’, N’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート）、TEA（トリエチルアミン）、TFA（トリフルオロ−酢酸）、THF（テトラヒドロフラン）、TMOF（トリメチルオルトホルメート）、MgSO4（硫酸マグネシウム）、PetEther（石油エーテル）、rt（室温）。
【０１１５】
実施例
例１：５−{［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−２−［（４−{３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−アニリノ}ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボン酸（１）
ジアリル−チオフェン−２−イルメチルアミン（1a）
CH2Cl2（IL）中、２−アミノメチルチオフェン（51.4g、956mモル）及びi−Pr2NEt（140g, 1081mモル）の溶液を、冷却器及び効果的磁気撹拌器を備えた３Lのフラスコ中に配置した。臭化アリル（115.7g, 454mモル）を添加し、その後、適度な発熱反応が、２時間後、環流温度に自発的に達した。
【０１１６】
前記混合物を一晩（16時間）、撹拌し、洗浄し（飽和炭酸水素ナトリウム塩；ブライン）、乾燥し（硫酸マグネシウム）、そして濃縮した。得られる油状物を、シリカゲル上で濾過した（EtOAc；ヘキサン１：４）。濾液を濃縮し、そして濾過を反復し、NMRにより純粋な褐色−黄色油状物として標記ジアリルアミン70.3g (80％)を得た：1H NMR (CDCl3) δ7.25 (br. d, J=5.9Hz, 1H), 6.98 (br. dd, J=5.1, 2.8Hz, 1H), 6.94-6.92 (m, 1H), 5.99-5.86 (m, 2H), 5.29-5.18 (m, 4H), 3.85 (s, 2H), 3.16 (dd, J=6.3, 0.9Hz, 4H)。
【０１１７】
５−ジアリルアミノメチル−チオフェン−２−スルホニルクロリド（1ｂ）
Et2O中、アリル−保護されたチオフェン（1a）（6.2g, 32.1mモル）の溶液を、アセトン/ドライアイス浴により−70℃に冷却した。ペンタン（21.38ml, 1.5M, 32.1mモル）中、t-BuLiの溶液を２分間にわたって添加し、その後、すぐに、内部温度を−50℃に上げ、そして混合物はオレンジ色に変わった。10分後、SO2を２分間、泡立て、濃厚な沈殿物のすぐの形成を導いた。反応を0℃にし、そしてTHF（20ml）中、NCS（4.63g, 32.1mモル）の懸濁液を添加し、その後、スラリーは紫色に変わった。室温での45分後、混合物をSiO2上で濾過し、EtOAcにより溶出した。蒸発、EtOAc：ヘキサン１：５による希釈及びSiO2上での濾過は、さらなる精製を伴なわないで使用される、淡褐色油状物として標記塩化スルホニル（1b）5.0g（53％）を得た。
【０１１８】
N, N−ジアリル−N−｛［５−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［4.5］デク−８−イルスルホニル）チエン−２−イル]メチル｝アミン（1c）
方法A（単離された塩化スルホニル（1b）からの）。CHCl3中、（1b）（5.84g, 20mモル）の溶液を、0℃に冷却し、そして１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［4．5］デカン（2.8ml、22mモル）及びEt3N (4.2ml, 30mモル) により処理し、そして23℃に10分間、暖めた。EtOAc（100ml）による希釈、標準の作業（飽和炭酸水素ナトリウム；ブライン；硫酸マグネシウム）、及びクロマトグラフィー処理（EtOAc：シクロヘキサン１：２）により、無色の油状物として標記スルホンアミド7.57g（95％）を得た。
【０１１９】
方法B（塩化スルホニル（1b）の単離を伴わないで、（1a）からの）。Et2O（440g、617ml）中、アリル−保護されたチオフェン（1a）(29.1g, 150mモル)の溶液を、１Lの三つ口フラスコ（温度計；アルゴン；隔壁又はSO2入口）に配置し、そしてアセトン/ドライアイス浴により−74℃に冷却した。ペンタン（100ml、1.5M、150mモル）中、ｔ−BuLiの溶液を５分間にわたって添加し、その後、内部温度をすぐに−64℃に上げ、そして混合物はピンク色に変化した。20分後、SO2（20g、312mモル）を15分間にわたって泡立てた。SO2消費を、反応の間、SO2ボトルをスケール上に配置することによって最良にモニターした。濃厚な白色のワックスに変化した反応混合物を、室温で２時間にわたって暖めた。
【０１２０】
NCS（30g、226mモル）の懸濁液を添加し、そして撹拌を一晩、続け、その後、スラリーは紫色に変化した。混合物を濾過し（ガラス）、そして沈殿物を注意して、CH2Cl2（２×300ml）により洗浄した。組み合わされた有機層を、Ar下で0℃に冷却し、そしてCH2Cl2（200ml）中、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［4．5］デカン（27.8g、194mモル）及びトリエチルアミン（19.7g、194mモル）の溶液により処理した。１時間後、混合物を洗浄し（飽和炭酸水素ナトリウム：ブライン）、乾燥し（硫酸マグネシウム）、そして濃縮し、黄色の油状物として標記スルホンアミド53g（83％）を得た：1H NMR (CDCl3) δ7.36 (d, J=3.8Hz, 1H), 6.90 (br. d, J=3.4Hz, 1H), 5.92-5.79 (m, 2H), 5.33-5.16 (m, 4H), 3.93 (s, 4H), 3.78 (S, 2H), 3.21 (t, 5.7Hz, 4H), 3.13 (d, 6.2Hz, 4H), 1.81 (t, 5.7Hz, 4H)。
【０１２１】
エチル５−［（ジアリルアミノ）メチル］−２−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［4.5］デク−８−イルスルホニル）チオフェン−３−カルボキシレート（1d）
THF（120ml）中、スルホンアミド（1c）(3,36g, 8.43mモル)の溶液を−78℃に冷却し、そしてｔ−BuLi（ヘキサン中、7.0ml、1.5M、10.5ml）により処理した。５分後、混合物を、THF（60ml）中、エチルクロロホルメート（6.45ml、67.5mモル）の冷却された（−100℃；アセトン/液体窒素）溶液中にカニューレ挿入した。
【０１２２】
反応混合物を−30℃に２時間にわたって暖め、そして次に、23℃に一晩、暖めた。混合物を回転蒸発機上で濃縮し、そしてEtOAc (250ml)により希釈した。標準作業（水；ブライン；硫酸マグネシウム）及び２回のクロマトグラフィー処理（EtOAc：シクロヘキサン１：４）は、標記エチルエステル1.48g（37％）を付与した：1H NMR (DMSO-d6) δ7.36 (d, 1H), 5.98-5.82 (m, 2H), 5.32-5.17 (m, 4H), 4.33 (q, J=7.1Hz, 2H), 3.92 (s, 4H), 3.85 (s, 2H), 3.32 (dd, J〜6.0, 5.0Hz, 4H), 3.17 (d, J=6.0Hz, 4H), 1.74dd, J〜6.0, 5.0Hz, 4H), 1.33 (t, J=7.2Hz, 3H)。
【０１２３】
エチル２−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［4.5］デク−８−イルスルホニル）−５−｛［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］−メチル｝チオフェン−３−カルボキシレート（1e）
CH2Cl2 (30ml) 中、エチルエステル（1d）(1.47g, 3.12mモル)及びNDMBA（1.07g、6.87mモル）の溶液を、アルゴンを泡立て、そして音波処理することによってガス抜きした。次に、Pd(PPh3)4 (216mg, 0.187mモル) を添加し、そして混合物を23℃で撹拌した。２時間後、混合物を−50℃に冷却し、Et3N（525μl、3.76mモル）及び３−（メトキシ）−ベンゾイルクロリド（300μl、2.13mモル）により処理し、そして室温に30分間にわたって暖めた。
【０１２４】
EtOAcによる希釈、標準作業（水；飽和炭酸水素ナトリウム；硫酸マグネシウム）及びクロマトグラフィー処理（EtOAc：シクロヘキサン１：１）は、標記３−メトキシベンズアミド1.0g（61％）を付与した：1H NMR (DMSO-d6) 9.29 (t, J=5.8Hz, 1H), 7.49-7.34 (m, 4H), 7.12 (ddd, J=7.9, 2.6, 1.0Hz, 1H), 4.66 (d, J=5.7Hz, 2H), 4.27 (q, J=7.2Hz, 2H), 3.84 (s, 4H), 3.80 (s, 3H), 3.24 (dd, J〜6.0, 5.0Hz, 4H), 1.67 (dd, J〜6.0, 5.0Hz, 4H), 1.26 (t, J=7.0Hz, 3H)。M/Z APCI：525 (M+1), 523 (M-1)。
【０１２５】
エチル５−{［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−２−［（４−オキソピペリジン−１−イル）スルホニル］−チオフェン−３−カルボキシレート（1f）
アセトン（5ml）中、スピロケタール（1e）（500mg、0.952mモル）の溶液を、48℃で18時間、1NのHCl (2.5ml) により処理した。EtOAcによる希釈及び標準作業（水；炭酸水素ナトリウム；ブライン；硫酸マグネシウム）は、所望する標記ケトン（83％）及び末反応の出発材料（９％）（TLCによる単一スポット）の９：１混合物425mgを付与した：1H NMR (CDCl3) 7.37-7.35 (m, 1H), 7.33-7.29 (m, 3H), 7.05 (ddd, J=7.7, 2.6, 1.7Hz, 1H), 6.81 (t, J=5.8Hz, 1H), 4.74 (d, J=6.1Hz, 2H), 4.31 (q, J=7.1Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.70 (t, J=6.1Hz, 4H), 2.52 (t, J=6.2Hz, 4H), 1.34 (t, J=7.1Hz, 3H). M/Z APCI: 481 (M+1), 479 (M-1)。
【０１２６】
エチル５−｛［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−２−［（４−{３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−アニリノ} ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボキシレート（1g）
無水テトラクロロエチレン（15ml）中、粗ケトン（1f）(425mg, 0.803mモル)、３−（トリフルオロメチルスルホニル）−アニリン（287mg、1.27mモル）及び３Åの粉末化されたMS（3g）の懸濁液を、厳格に無水条件下で17時間、加熱環流した。混合物を23℃に冷却し、そして微粉末化されたNaBH(OAc)3 (1.2g)を添加した。撹拌を2.5日間、続けた。
【０１２７】
EtOAcによる希釈、標準作業（飽和炭酸水素ナトリウム、；ブライン；硫酸マグネシウム）、及びクロマトグラフィー処理（EtOAc；シクロヘキサン１：1.5→２：１）は、出発ケトン（1f）及びスピロケタール（1e）、及び標記アニリノピペリジン216mg（39％）の混合物167mg（35％）を付与した：1H NMR (DMSO-d6) 9.16 (t, J=5.8Hz, 1H), 7.38-7.23 (m, 5H), 6.97-7.08 (m, 4H), 6.42 (d, J=7.9Hz, 1H), 4.53 (d, J=5.7Hz, 2H), 4.15 (q, J=7.0Hz, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.53 (dm, J=10.4Hz, 2H), 3.60-3.43 (m, 1H), 2.81 (br. t, J=10.6Hz, 2H), 1.84 (dm, J〜11.3Hz, 2H), 1.35-1.20 (m, 2H), 1.15 (t, J=7.0Hz, 3H). M/Z APCI: 690 (M+1), 688 (M-1)。
【０１２８】
５−{[(３−メトキシベンゾイル)アミノ]メチル}−２−[(４−{３−[(トリフルオロメチル)スルホニル]アニリノ}−ピペリジン−１−イル)スルホニル]チオフェン−３−カルボン酸（１）
MeOH（4ml）中、エチルエステル（1g）（40mg、0.058mモル）の溶液を、45℃で２時間、２MのNaOH（0.8ml）により処理した。混合物を、EtOAcにより希釈し、洗浄し（水性塩化アンモニウム；水；ブライン）、乾燥し（硫酸マグネシウム）、2mlに濃縮し、そしてセライト上で濾過し、EtOAcにより溶出した。蒸発により、標記酸40mg（96％）を得た。M/Z APCI:662 (M+1), 660 (M-1), 616 (M-CO2-1)。分析用HPLC：R.t=6.55分（方法a）。
【０１２９】
次の化合物（例番号として示される）を、還元性アミノ化段階における適切なアミンにより３−（トリフルオロメチルスルホニル）−アニリンを置換することによって、上記方法に従って調製した。次の表は、言及される例のHPLCデータ及び質量分光分析データを提供する（HPLC条件：C8対称a-MeCN、0.09％TFA、０〜100％（10分）；質量スペクトルAPCI）。
【０１３０】
【表１】
0004927306.tif 000017
【０１３１】
例５：N−（２−ヒドロキシエチル）−５−{［（３−メトキシベンゾイル）アミノ］メチル}−２−［（４−{３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ}ピペリジン−１−イル）スルホニル］チオフェン−３−カルボキサミド
MeOH（1ml）中、エチルエステル（1g）（10mg、0.015mモル）及びエタノールアミン（0.1ml）の溶液を、８時間、加熱還流し、そして蒸発乾燥し、標記アミド５を、ほぼ定量的収率で得た。M/Z APCI：705（M+1）、703（M-1）。分析用HPLC：R.t=6.14分（方法a）。
次の化合物（例番号として示される）を、ヒドラジン、水性アンモニウム又はN, N’−ジメチルアミノエチレンジアミンによりエタノールアミンを置換することによって、上記方法（例２）に従って調製した。次の表は、言及される例のHPLCデータ及び質量分光分析データを提供する。
【０１３２】
【表２】
0004927306.tif 000018
【０１３３】
例９：N−（{４−（ヒドロキシメチル）−５−［（４−{３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ}ピペリジン−１−イル）スルホニル］チエン−２−イル}メチル）−３−メトキシベンズアミド
カルボン酸（19mg、0.029mモル）の溶液を、ボラン−THF複合体（THF中、１M、1ml、1mモル）に溶解し、そしてその溶液を23℃で30分間、撹拌した。反応を水（1ml）により急冷し、乾燥し（硫酸マグネシウム）、濃縮し、そしてクロマトグラフィー処理し（EtOAc：シクロヘキサン１：２→２：１）、標記アルコール11.1mg（60％）を得た。APCI：648 (M+1), 646 (M-1)。分析用HPLC：R.t＝6.43分（方法a）。
【０１３４】
例10：医薬製剤の調製
次の製剤の例は、本発明の代表的な医薬組成物を例示するが、それらは本発明を制限するものではない。
製剤１−錠剤：
式Iのスルホンアミド化合物を、乾燥ゼラチン結合剤と共に約１：２の重量比で、乾燥粉末として混合する。少量のステアリン酸マグネシウムを、滑剤として添加する。その混合物を、錠剤プレスにより、240〜270mgの錠剤（錠剤当たり80〜90mgの活性スルホンアミド化合物）に形成する。
【０１３５】
製剤２−カプセル：
式Iのスルホンアミド化合物を、スターチ希釈剤と共に約１：１の重量比で、乾燥粉末として混合する。その混合物を250mgのカプセル中に満たす（カプセル当たり125mgの活性スルホンアミド化合物）。
製剤３−液体：
式Iのスルホンアミド化合物（1250mg）、スクロース（1.75g）及びキサンガム（4mg）をブレンドし、No.10メッシュのU.S. 篩を通し、そして次に、水中、微結晶セルロース及びナトリウムカルボキシルメチルセルロースの前もって調製された液体（11：89、50mg）と共に混合した。安息香酸ナトリウム（10mg）、風味剤及び着色剤を水により希釈し、そして撹拌しながら添加する。次に、十分な水を添加し、合計体積5mlを生成する。
【０１３６】
製剤４−錠剤：
式Iのスルホンアミド化合物を、乾燥ゼラチン結合剤と共に約１：２重量比で、乾燥粉末として混合する。少量のステアリン酸マグネシウムを、滑剤として添加する。その混合物を、錠剤プレスにより、450〜900mgの錠剤（150〜300mgの活性スルホンアミド化合物）に形成する。
製剤５−注射：
式Iのスルホンアミド化合物を、緩衝された無菌塩溶液の注射用水性媒体において、約5mg/mlの濃度に溶解する。
【０１３７】
例11：生物学的アッセイ
生物学的結果
式Iで表されるスルホンアミドの活性を、上記に記載されるインビトロ及びインビボ生物学的アッセイを用いて評価した。
JNK２及び−３インビトロアッセイ
JNK2又はJNK3によるc-junのリン酸化は、下記プロトコールに従ってc-jun中への33Pの組み込みをモニターすることによって追跡され得る。JNKを通してのc-junリン酸化に関しての式Iの化合物の阻害活性を、式Iの試験化合物の存在又は不在下でJNKのリン酸化活性を計算することによって決定する。
【０１３８】
JNK3及び/又は−２アッセイを、次の用に96ウェルMTTプレートにおいて行う：0.5μgの組換え、予備活性化されたGST−JNK3又はGST−JNK2と、1μgの組換え、ビオチニル化されたGST-c-Jun及び2μMの33γ−ATP（2rCi/μl）と共に、式Iの化合物の存在又は不在下で、及び50mMのトリス−HCl、pH8.0；10mMのMgCl2；1mMのジチオトレイトール及び100μMのNaVO4を含む反応体積50μlにおいてインキュベーションを行う。インキュベーションを、RTで120分間、行い、そしてリン酸緩衝液中、250μgのストレプタビジン被覆されたSPAビーズ (Amersham, Inc.)★、5mMのEDTA，0.1％Triton X-100及び50μMのATPを含む溶液200μlの添加に基づいて停止する。
【０１３９】
RTでの60分間インキュベーションの後、ビーズを、1500×gでの５分間の遠心分離により沈殿せしめ、5mMのEDTA、0.1％TritonX−100及び50μMのATPを含むPBS200μlに再懸濁し、そして放射能を、上記のようにしてビーズを沈殿した後、シンチレーションβカウンターにおいて測定する。ビオチニル化されたGST-1ATF2又はビオチニル化されたミエリン塩基性タンパク質によりビオチニル化されたGST−c Junを置換することによって、このアッセイはまた、それぞれ、予備活性化されたp38及びERK MAPキナーゼの阻害を測定するために使用され得る。
【０１４０】
【表３】
0004927306.tif 000019
【０１４１】
それぞれに示される値は、IC50(μM)、すなわち前記標的物の50％阻害を達成するために必要な量を言及する。前記値は、JNK3に関するスルホンアミド化合物の相当の効能を示す。
式Iの試験された化合物は、JNK3に関して、0.1μM以下、より好ましくは0.02μMに等しいか又はそれ以下の阻害性（IC50）を示す。
【０１４２】
交感神経ニューロン培養物及び生存性アッセイ
細胞死を誘発されているニューロン細胞の生存率を高める式Iの化合物の能力を、次のプロトコールを用いて評価した。
新生児ラット（p4）の上頸神経節（SCG）からの交感神経ニューロンを、ディスパーゼにより分離し、ラット尾コラーゲンにより被覆された48ウェルMTTプレートにおいて、104個の細胞/cm2の密度でプレートし、そして5%ラット血清、0.75μg/mlのNGF 7S (Boehringer Mannheim Corp., Indianapolis, IN)及び10-5Mのアラビノシンを含むLeibowitz培地において培養する。
【０１４３】
細胞死を、10μg/mlの抗NGF抗体(Boehringer Mannheim Corp., Indianapolis, IN) を含むが、しかしNGF又はアラビノシンを含まない、スルホンアミドインヒビターの存在又は不在下での培地に前記培養物を暴露することによって、プレートの４日後に誘発する。細胞死誘発の24時間後、細胞生存率の決定を、0.5mg/mlの３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（MTT）下での37℃で１時間の残基培養物のインキュベーションにより行う。MTTにおけるインキュベーションの後、細胞をDMSOに再懸濁し、96MTTプレートに移し、そして細胞生存率を、590nmでの光学密度を測定することによって評価する。
【０１４４】
IL-2放出アッセイ
IL-2の放出を阻害することによって炎症応答を調節する式Iの化合物の能力を、次のプロトコールを用いて評価した。JNK経路活性化は、炎症サイトカイン、例えばIL-2の生成を誘発する。JNKを、外部刺激、例えばPMA及びイノマイシンにより活性化することができ、そしてIL-2生成を、IL-2 ELISA試験により測定することができる。次のプロトコールに従って本発明の化合物を伴って及びそれを伴なわないでの比較測定は、ストレス−介在性IL-2放出を妨げる化合物の能力を測定する。
【０１４５】
Jurkat細胞、すなわちヒトT細胞白血病細胞系（American Type Culture Collection # TIB152）を、10%の熱活性化されたウシ胎児血清（FCS）、グルタミン及びPenstrepにより補充されたRPMI 1640培地（Gibco, BRL）において培養する。培地における細胞懸濁液を希釈し、２×106個の細胞/mlにする。細胞を、異なった濃度の式Iの化合物（化合物の最終濃度、10, 3, 1, 0.3, 0.1μM）を含む96−ウェルプレート上にプレートした（２×105個の細胞/ウェル）。この混合物を、湿潤されたCO2雰囲気下で37℃で30分間インキュベートする。
【０１４６】
次に、細胞を、負の対照を除くすべてのウェルにおいて、10μlのPMA（ホルボールミリステート−13 アセテート−12）＋イノマイシン（0.1μM及び１μMの最終濃度）により処理した。化合物を含まないウェルにおいては、10μlのRPMI 2％DMSO（＝最終0.1％）を添加する。細胞を37℃で24時間インキュベートし、そして次に、上清液を収穫し（同じ日に使用されなければ、−20℃で凍結する）、その後、上清液に対するIL-2 ELISA試験を行う。
【０１４７】
IL-2 ELISAアッセイ
試験化合物の存在又は不在下で、（PMA＋イノマイシン）−刺激されたJurkat細胞による培地中へのIL-2放出を、ELISAによりアッセイすることができる。
モノクローナル抗−ヒトIL-2抗体（MAB602）（保護）、ビオチニル化された抗−ヒトIL-2抗体（BAF202）（検出）及びFrom R&D Systemsからの組換えヒトIL-2  （202-IL-010）（標準）を使用する。
【０１４８】
プレートの調製
5μg/mlでPBS（PBS−Tween 0.05％）において希釈された100μlの保護抗体を、96ウェルELISAプレートに移し、そして室温で一晩インキュベートする。個々のウェルを、吸引し、そして洗浄緩衝液（PBS−Tween 0.05％）により３度、洗浄する。最後の洗浄の後、プレートをダンピングする。
【０１４９】
アッセイ方法
１．100μlのサンプル又は標準を、添加し（2000, 1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25 pg/ml）、そして室温で２時間インキュベートする。
２．３度の洗浄。
３．100μlの12.5ng/mlのビオチニル化された抗−ヒトIL-2を添加し、そして室温で２時間インキュベートする。
４．３度の洗浄。
【０１５０】
５．１：10,000での100μlのストレプタビジン−HRP（Zymed＃43−4323）を添加し、そして室温で30分間インキュベートする。
６．３度の洗浄。
７．100μlの基質溶液（クエン酸/Na2HPO4（１：１）＋H2O2 1:2000+OPD）を添加し、そして室温で20〜30分間インキュベートする。
８．50μlの停止溶液（20％硫酸）を、個々のウェルに添加する。
９．光学密度を、570nmでの補正を伴なって、450nmに設定されたマイクロタイタープレートリーダーを用いて測定する。
【０１５１】
C-Junレポーターアッセイ
MAPキナーゼシグナルトランスダクション経路における、JNKによる転写因子c-junのリン酸化を、トランス−報告システム、例えば市販のPathDetect(商標) (32) を通して追跡することができる。次に、式Iの化合物によるリン酸化の阻害を評価することができる。
トランス−報告システムは、ルシフェラーゼ活性を通して、融合トランス−活性化因子タンパク質の活性化状態の追跡を可能にする。トランス−活性化因子タンパク質は、酵母転写活性化因子により融合される興味ある（c-jun）転写因子の活性化ドメイン、すなわちGAL4 DNA結合ドメイン（abd）から成る。GAL4 dbdは、既知の哺乳類転写因子がそれに結合できず、そして従って、アッセイのバックグラウンドノイズが非常に低い利点を有する。
【０１５２】
現在の場合、GAL4−cJunを構成的に発現するHelaルシフェラーゼレポーターc-Jun (HLR-c-Jun) 細胞系を使用した。
MEKK−１遺伝子を挿入した。MEKK−１は、JNKの活性化を誘発するMAPKKKである。野生形MEKK−１の発現は、JNK活性化のために十分である（33）。JNKが活性化されると、それは、ダイマーを形成する融合トランス−活性化因子タンパク質（GAL4dbd-cJUN）のc-junドメインのリン酸化を誘発することができる。次に、ダイマーは、ルシフェラーゼ発現を活性化するレポーターのGAL4上流活性化配列（GAL4UAS）に結合することができる。
【０１５３】
ルシフェラーゼ発現は、単純なアッセイ、例えばアッセイ、例えばRenillaが“対照”レポーターとして使用されるDual-Luciferase(商標) Reporter Assay System (34) を用いて、発光により検出される。JNKの阻害は、ルシフェラーゼ発現の低下として観察され、そして発光の低下により検出される。
細胞培養
HLR-c-Jun細胞を、10%FCS（Sigma）、2mMのグルタミン（Gibco）、P/S、ヒグロマイシンb（100μg/ml）及びG418（250μg/ml）により補充されたDMEM High Gleにおいて培養する。
【０１５４】
細胞培養物の調製
細胞バンク
細胞を、10％ジメチルスルホキシドを含む培養培地における細胞懸濁液1.8ml体積として、液体窒素下で極低温管において凍結して貯蔵する。
細胞培養物融解
必要な場合、細胞の凍結されたバイアルを、水浴において37℃で、半−完全な融解まで、軽くかきまぜることによって、すばやく融解する。次に、細胞懸濁液を、培養培地10mlに添加し、そして次に、1200rpmで5分間、遠心分離する。上清液を除去し、そして細胞ペレットを培地において再構成する。フラスコを、5％CO2の雰囲気下で37℃でインキュベートする。
【０１５５】
細胞継代
細胞を、80％の集密性単層が得られる場合、連続的に継代培養する。個々のフラスコ中の培地を除去し、そして単層を、10〜15mlのリン酸緩衝溶液（PBS）により洗浄する。
トリプシン−EDTA溶液を、細胞単層に添加し、37℃でインキュベートし、そして細胞を取り除くために一定間隔で軽くたたく、細胞単層の完全な分離及び成分分離を、顕微鏡試験により確かめる。次に、細胞を、10mlの完全培地に再懸濁し、そして1200rpmで５分間、遠心分離する。上清液を捨て、細胞を培養培地において再懸濁し、そして175cm2のフラスコにおいて1/5に希釈する。
【０１５６】
０日目の朝
トランスフェクションのための細胞の調製
ほぼ集密性の培養物の細胞を分離し、そして上記のようにして、トリプシンによる処理により成分分離する。細胞を培養培地に再懸濁し、そして計数する。細胞懸濁液を、培地により希釈し、約3.5×106個の細胞/mlにし、そして細胞懸濁液1mlを、培養培地9mlを含む２個の10cm培養皿上に置く。プレートを、空気中、5％CO2の湿潤された雰囲気下で37℃でインキュベートする。
【０１５７】
０日目の夜
トランスフェクション：
対照：0.2μgのpTK Renilla, 5.8μgのpBluescript KS, 500μlのOPTIMEM（GIBCO）、18μlのFugene6。
誘発された：0.1μgのpMEKK1, 0.2μgのpTK Renilla, 5.7μgのpBluescript KS, 500μlのOPTIMEM（GIBCO）、18μlのFugene6、30’RT。
トランスフェクション混合物を、プレートされた細胞に添加する。プレートを、空気中、５％CO2の湿潤された雰囲気下で37℃で一晩、インキュベートする。
【０１５８】
１日目
96ウェルプレート（ウェル当たり100μlの培養培地）を調製する。
負の対照（ビークル）：２μlのDMSOを、前記100μlの培地に添加する（三重反復）。式Iの化合物の原液（100％DMSO中、３，１及び0.1mM）２μlを、前記100μlの培地に添加する（三重反復）。トランスフェクトされた細胞を、トリプシン処理し、そして12mlの培養培地に再懸濁する。プレートを、空気中、５％CO2の湿潤された雰囲気下で37℃で一晩、インキュベートする。
【０１５９】
２日目
試験方法：Dual−Luciferase(商標) Reporter Assay System(34)。
培地を、プレートから除去し、そして細胞を100μlのPBSにより２度洗浄する。溶菌試薬を適用する（Passive Lysis Buffer, PLB）。個々の培養ウェル中に、５μlの１×PLBを分配する。培養プレートを、揺動プラットフォーム又はオービタルシェーカー上に、軽く揺動かし又は振盪しながら配置し、１×PLBによる細胞単層の完全な適用範囲を確保する。
【０１６０】
培養物プレートを、室温で15分間、揺動かす。20μlの溶解物を、白色不透明の96ウェルプレートに移す。発光計読み取りを記録する。50μlのLuciferase Assay Reagent IIを注入し、そして読み取りを、５及び10分で記録する。50μlのStop & Glo(商標) Reagentを、注入し、そして読み取りを、５及び10分で記録する。次に、相対的発光を測定する：
RLUルシフェラーゼ/RLU Renilla。
【０１６１】
LPSはマウスにおいて内毒素ショックを誘発した
LPS攻撃により誘発される炎症サイトカインのレベルを有意に低める式Iで記載されるJNKインヒビターの能力を、次のプロトコールを用いて評価した：
内毒素は、グラム陰性細菌の外層膜のリポ多糖（LPS）成分である。LPSに対する応答は、異なった細胞集団の活性化を包含し、そして腫瘍壊死因子−α（TNFα）及びインターフェロンγ（IFN−γ）を包含する種々の炎症サイトカインの発現を導くことが示されている。LPSは、JNKを包含する種々のMAPキナーゼ経路の活性化を刺激することが知られているので（35）、JNKインヒビターの能力を、JNKシグナル化経路がLPS攻撃により切り替えられた後、試験することができる。
【０１６２】
式Iの化合物のJNKインヒビターとして野活性を、次のプロトコールを用いて、LPS攻撃の後、評価することができる。
LPS（S. アボルタス（S. abortus）−Galanos Lab.）を、雄C57BL/6マウスに注射し（200μg/kg, i.v.）、内毒素ショックを誘発する。式Iの化合物（0.1, 1, 10mg/kg）又はNaCl（200μM）を、LPS攻撃の15分前、静脈内注射する（10ml/kg）。ヘパリン添加された血液を、LPS攻撃の後、異なった時点で眼窩洞から得、そして血液を9,000rpmで4℃で10分間、遠心分離し、上清液を集める。マウスによるサイトカイン生成物、例えばTNFα及びγの測定を、ELISAキット、例えばTNFαについてのDuoset(商標) DY410及びTFNγについてのDY485により行う。（36）に記載されるような他のELISAアッセイを行うことができる。
【０１６３】
アレチネズミにおける全般的な虚血症
発作の間、細胞死を保護する、式Iで記載されるJNKインヒビターの能力を、次のプロトコールを用いて評価した：
アレチネズミの両側頸動脈閉塞は、急性虚血性発作の十分に記載されている動物モデルであり、そして比較的容易な手術技法を包含する。海馬におけるニューロン劣化は、数日間にわたって進行し、そしてしばしば、“遅延されたニューロン死”として言及される。
【０１６４】
さらに、組織学的に観察されるニューロン劣化は、明白であり、そして容易に安定化される（37）。さらに、アレチネズミに見られる組織病理学は、心停止に続いてヒト脳の海馬CA1領域に観察されるその病理学的に類似する。行動性の観察、例えば記憶試験は、アレチネズミの場合、行われ得る。回収の程度の評価のためのこの種の試験は、他のモデルにおいては、例えば学習能力がより不良であるラットにおいては、容易に管理できない（38）。
式Iのニューロン保護効果を、アレチネズミの全般的虚血症モデル及び下記のようなプロトコールを用いて評価することができる：
【０１６５】
(１) 方法
＊手術：
−イソフルラン（0.5〜4％）による麻酔。
−頸動脈（左及び右）を、組織から分離する。
−Bulldoyマイクロクランプを用いて、５分間の動脈の閉塞。
−クランプの除去（再灌流）。
−眼がさめるまで加熱ランプ下での動物の安定化。
−個々のおりにおける動物の安定化。
【０１６６】
＊殺動物：
−虚血の７日後（断頭又はペントバルビタールの過剰投与）。
−脳のサンプリング。
＊組織学的パラメーター：
−イソペンタンにおける脳の凍結（−20℃）。
−凍結−マイクロトームを用いての海馬のスライス（20μm）。
−クレシルバイオレット方法による染色。
−改良されたGerhard & Boast評点による外傷（海馬のCA1/CA2サブフィールドにおける）の評価。
【０１６７】
(２) 処理
−式Iの化合物又はビークルの投与：再灌流（麻酔の回復後５〜10分）の後、15分、24時間、及び48時間。
−標準プロトコール：50匹の動物：８匹の５種のグループ（グループA：対照、グループB−D：３回の用量での試験物質及びグループE：参照化合物（オロト酸、３×300mg/kg, ip））。
式（I）の化合物の溶解性：
前記化合物を、室温でpH7.4での水におけるそれらの溶解性に関して評価した。一般的に、式（I）の化合物の溶解性は、少なくとも50μg/ml溶媒、より好ましくは少なくとも100μg/ml溶媒の範囲にある。化合物１は、pH7.4で室温で、0.18mg/mlの溶解性を示す。
【０１６８】
参考文献：
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