(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの溶媒抽出物からなるプロテアソーム活性促進剤。
【請求項２】
溶媒抽出物が水、低級アルコール、液状多価アルコールから一種又は二種以上選ばれる溶媒による抽出物であることを特徴とする請求項１記載のプロテアソーム活性促進剤。
【請求項３】
抽出溶媒が水である請求項１記載のプロテアソーム活性促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの溶媒抽出物からなるプロテアソーム活性促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする問題】
従来の研究では、皮膚の老化の原因は、加齢による内的な要因と、乾燥、酸化、太陽光（紫外線）等による外的な要因が考えられている。これらが皮膚を構成する角化細胞や線維芽細胞等に影響を及ぼすことにより、皮膚におけるコラーゲンやエラスチンの減少、ヒアルロン酸をはじめとする酸性ムコ多糖類の減少といった皮膚老化の現象を引き起こす。これは様々な内的、外的要因等によって皮膚を構成する細胞の機能が低下したためと考えられている。従って、細胞の機能低下を抑え、細胞本来の機能を維持させることが皮膚等の組織の老化防止に重要である。
【０００３】
細胞の機能低下の原因としては、細胞内の蓄積タンパク質の増加が知られている。実際に老化し機能の低下した細胞内では不要になったタンパク質の蓄積が観察されている。細胞内には不要になったタンパク質を積極的に分解する経路があり、プロテアソームと呼ばれるタンパク分解酵素が重要な働きを担っている。先の老化した細胞ではプロテアソームの活性低下も同時に観察されている。従ってプロテアソーム活性を促進し蓄積タンパク質の増加を抑制することは、細胞の機能低下を防ぐこととなり、皮膚を始めとする細胞組織の老化を防ぐうえで重要である。ところが、従来の技術では、プロテアソーム活性の促進に着目したものは存在していない。
【０００４】
従って本発明は、細胞内のプロテアソーム活性を促進して蓄積タンパクによる機能低下を抑制し、本来の機能を維持させることで、皮膚を始めとする細胞組織の老化を予防し、身体を健やかで若々しい状態を維持又は改善する効果を奏する、プロテアソーム活性促進剤を提供することを目的とする。
【０００５】
【発明を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題の解決に向けて鋭意検討を行った結果、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの溶媒抽出物が優れたプロテアソーム活性促進効果を有していることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
即ち本発明は、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの溶媒抽出物からなるプロテアソーム活性促進剤である。
【０００７】
以下、本発明の構成について、詳細に説明する。本発明に用いられるＧａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍは、マンネンタケ科（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔａｃｅａｅ）、マンネンタケ属（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属する。その学名は、文献［Ａｃｔａ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ  １９（３），２６５−２７９，１９７９］によると、黒霊芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍ）に分類されている。本発明に用いられるＧａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍは、広く中国や日本市場等で流通しているものを用いることができる。
【０００８】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級１価アルコール及び液状多価アルコールが良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は１種でも２種以上を混合して用いても良い。
【０００９】
Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの溶媒抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過等の処理及び活性炭等による脱色、脱臭処理をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１０】
次に本発明を詳細に説明するため実施例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を示す。
【００１１】
製造例１  Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの熱水抽出物
Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの乾燥物  ２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してＧａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの熱水抽出物を１．４ｇ得た。
【００１２】
製造例２  Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍのエタノール抽出物
Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍのエタノール抽出物を１．５ｇ得た。
【００１３】
製造例３  Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの乾燥物１００ｇに１．０ｋｇの精製水及び１．０ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００１４】
比較製造例１  赤芝の熱水抽出物
赤芝の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して赤芝の熱水抽出物を２．０ｇ得た。
【００１５】
比較製造例２  赤芝のエタノール抽出物
赤芝の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、赤芝のエタノール抽出物を２．５ｇ得た。
【００１６】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００１７】
実験例１  プロテアソーム活性促進試験
（１）試料の調製
プロテアソーム活性促進試験には、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの熱水抽出物（製造例１）及び赤芝の熱水抽出物（比較製造例１）を促進剤試料として、それぞれ精製水で希釈して使用した。
【００１８】
（２）プロテアソーム活性促進に関する試験方法とその結果
プロテアソーム活性は（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ，１９２，１１０６−１１１４，１９９３）に従って、以下の通り行った。また、反応緩衝液として、０．０５ＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．６）を用いて行った。プロテアソーム基質として、Ｓｕｃｃｉｎｙｌ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−４−Ｍｅｔｈｙｌｃｏｕｍａｒｙｌ−７−ａｍｉｄｅ（ペプチド研究所）を１０ｍＭになるようにＤＭＳＯに溶解して冷凍保存（−２０℃）した。使用時には、反応緩衝液で、０．１ｍＭになるように希釈して使用した。プロテアソームは、ラット肝臓より調製したシトソール分画をプロテアソーム酵素液として用いた。シトソールは以下の方法で調節した。ラット肝臓にその重量の４倍容の０．２５Ｍショ糖、０．０２５ＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．４）緩衝液を加え、テフロン（登録商標）ペッスル付きガラス製ホモジェナイザーで均質化し、１００，０００ｇで２時間、４℃で遠心した。遠心後上清を分取し、シトソールとして冷凍保存（−２０℃）した。使用時には、反応緩衝液で５０μｇ／ｍｌになるように希釈して使用した。また、促進剤試料については、蒸留水の１０％溶液を反応緩衝液で１倍、１０倍及び１００倍に希釈したものを用いた。
【００１９】
試験管に、それぞれ、０．１ｍＭのプロテアソーム基質を６０μｌづつ分注し、続いて０．４％のＳＤＳを１０μｌ添加し、さらに１０μｌの促進剤試料を添加した。これを、３７℃で１０分間インキュベーションした後、５０μｇ／ｍｌのシトソールを２０μｌ加えて、直ちに３７℃で１０分間インキュベーションした。その後１０％トリクロロ酢酸を１ｍｌ加えて反応を停止させ、励起光３５０ｎｍ、蛍光４６０ｎｍで蛍光強度を測定した。ただし促進率は以下の関数による。
【００２０】
促進率（％）＝（促進物質存在下の蛍光強度／促進物質非存在下の蛍光強度）×１００
【００２１】
その結果を表１に記す。
【００２２】
【表１】
0004954382.tif 000002
【００２３】
表１より明らかなように、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの溶媒抽出物に明らかなプロテアソーム活性促進効果が認められた。
【００２４】
【発明の効果】
以上より、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍの溶媒抽出物は、プロテアソーム活性促進効果を示した。