(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
心機能の変性によって引き起こされる神経液失調症の治療に使用するための薬剤の製造における(Ｒ)−Ｎ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミドの使用。
【請求項２】
心筋の収縮性タンパク質のカルシウム感受性を増加させるための薬剤の製造における(Ｒ)−Ｎ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミドの使用。
【請求項３】
(Ｒ)−Ｎ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミドを含む、心機能の変性によって引き起こされる神経液失調症の治療剤。
【請求項４】
(Ｒ)−Ｎ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミドを含む、心筋の収縮性タンパク質のカルシウム感受性増加剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の背景］
本発明は、(Ｒ)−Ｎ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミドを有効量投与することからなる、心筋における収縮性タンパク質のカルシウム感受性を増加させる方法、および心不全の進展を防止するための心機能の変性（alterations）によって引き起こされる神経液失調症（neurohumoral imbalance）を治療するための方法に関する。
【０００２】
ラセミＮ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミド（Ｉ）は、初期には高血圧薬（ＵＳ３，７４６，７１２）として、また筋変力（inotropic）活性を有する強心薬（ＵＳ４，３９７，８５４）として記載されている。ラセミＮ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミドの筋変力作用はホスホジエステラーゼIII（ＰＤＥIII）酵素阻害にもとづいていると報告されている（Ishimori T. et al., Arzneim.-Forsch. (1994), 44(5), 583-8）。化合物（Ｉ）は不斉炭素原子を有し、したがって、２つの立体異性体が存在する。（Ｉ）の(Ｒ)−および(Ｓ)−エナンチオマーは、早い時期に特開平３−１６３０５０号公報に記載されている。しかしながら、エナンチオマーの生物学的活性データは記載されていない。
【０００３】
現在、たとえばミルリノンなどの、ＰＤＥIII阻害にもとづくメカニズムを有する一連の筋変力化合物が心不全の治療に対して臨床的に試されている。これらの化合物は、心筋へのカルシウムの流入（current）を増加させることによって心筋の収縮性を増加させ、血管拡張をもたらす。心筋の収縮は、収縮タンパク質の微細線維（thin filament）におけるトポロニンへのカルシウムの結合によって誘発される。しかしながら、ＰＤＥIII阻害剤の長期適用は、不整脈を誘発し得る心筋におけるカルシウム過負荷（calcium overload）を導く可能性がある。したがって、心収縮性を増加するための主要なメカニズムは、カルシウム過負荷をもたらさないメカニズムであるべきである。筋小胞体から放出される細胞内カルシウムの代謝（turnover）促進、および収縮タンパク質のカルシウム感受性の増加は、カルシウム過負荷を引き起こすことのない、そのようなメカニズムである。
【０００４】
患者が心機能において危険な変性を有する場合、心筋の収縮性は、心筋におけるカルシウムの取り込みを増加させる体内中の神経液活性化によって、まだ維持することができる。この状況において、カルシウム過負荷は不整脈を誘発することができ、延長された神経液活性化は心不全の進展を加速するであろう。神経液失調症は、たとえば患者の血漿中のレニンおよびノルアドレナリン濃度の変化によって表わされることができる。ＰＤＥIII阻害剤は、それらがさらに心筋へのカルシウムの取り込みを増加させるため、神経液失調症の治療に長期間使用できない。しかしながら、カルシウム感作物質の使用は、すでに正常および減少したカルシウム濃度（神経液活性化の必要を減じ、それにより心不全の進展を防止する）において収縮性を充分に増加させることができる。
【０００５】
Ｎ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミドの(Ｒ)−エナンチオマーが、収縮タンパク質の微細線維でのカルシウム感作効果を有すること、およびこれが心収縮性を増加する主要メカニズムであることを今回発見した。これは、ラセミ化合物（Ｉ）がＰＤＥIII阻害剤であるという報告がなされているので予期されなかった。したがって、カルシウム感作物質であるＮ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミドの(Ｒ)−エナンチオマーは、心不全の進展を防止するための心機能の変性によって引き起こされる神経液失調症の治療に有用である。
【０００６】
本発明は、心不全の進展を防止するための心機能の変性によって引き起こされる神経液失調症の治療方法であって、たとえば経口または非経口で、固体または液体の剤形で、そのような治療を必要とする患者に化合物（Ｉ）の(Ｒ)−エナンチオマーを有効量投与することによる方法に関する。
【０００７】
本発明はまた、収縮タンパク質のカルシウム感受性を増加させる方法であって、そのような治療が必要な患者に化合物（Ｉ）の(Ｒ)−エナンチオマーを有効量投与することからなる方法に関する。
【０００８】
本発明はさらに、心不全の進展を防止するための心機能の変性によって引き起こされる神経液失調症の治療に使用するための薬剤の製造における、化合物（Ｉ）の(Ｒ)−エナンチオマーの用途に関する。
【０００９】
本発明はさらに、収縮タンパク質のカルシウム感受性を増加させるための薬剤の製造における、化合物（Ｉ）の(Ｒ)−エナンチオマーの用途に関する。
【００１０】
本発明にもとづく医薬活性化合物は、当該技術分野で既知の原理を用いて剤形に処方される。それは、患者にそのまま、または適切な薬学的賦形剤との組み合わせで、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、座剤、乳剤、懸濁液、または溶液の剤形で与えられる。本発明にもとづく組成物は、本発明の医薬活性化合物を治療に効果的な量含有する。活性化合物の含有量は組成物中に重量比で約０．５〜１００％である。
【００１１】
請求項に記載した方法において、本発明の化合物は、ヒトに経口用量で１日に約０．１〜５００ｍｇ、好ましくは０．５〜１０ｍｇの範囲で投与されてもよい。組成物に対する適切な成分の選択は、通常の当業者にとって常法（routine）である。この技術分野で通常使用される適切な担体、溶媒、成分を形成するゲル、成分を形成する分散剤、酸化防止剤、着色剤、甘味料、湿潤化合物およびその他の成分も使用され得ることは明らかである。
【００１２】
以下の実施例によって本発明をさらに説明する。
【００１３】
実施例１．(Ｒ)−Ｎ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミドの製造。
(Ｒ)−６−（４−アミノフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−メチル−３（２Ｈ）−ピリダジノン（３０．０ｇ）およびアセトニトリル（６００ｍｌ）を混合し、その混合物を開始物質が溶解するまで還流した。無水酢酸（３０．０ｍｌ）を還流している混合物に添加した。１０分後、溶液を室温まで放冷した。生成物をろ過し、アセトニトリルで洗浄し、乾燥した。収率３０．８ｇ、融点２３０〜２３２℃。1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) 1.06(d, 3H, J=7.3Hz), 2.06(s, 3H), 2.22(d, 1H, J=16.6Hz), 2.67(dd, 1H, J=16.6Hz, 6.8Hz), 3.35(m, 1H), 7.63(d, 2H, J=8.8Hz), 7.72(d, 2H, J=8.8Hz), 10.09(s, 1H), 10.88(s, 1H). [α]D20=-466°(c=2 mg/ml, DMF).
【００１４】
本発明の化合物の有用性は以下の実験によって示す。化合物Ａが(Ｒ)−Ｎ−[４−(１，４，５，６−テトラヒドロ−４−メチル−６−オキソ−３−ピリダジニル)フェニル]アセトアミドである。
【００１５】
剥ぎ取られた心線維（skinned cardiac fiber）におけるカルシウム感作効果
モルモットの左心室乳頭筋を切断し、氷冷したタイロード液で洗浄した。そののち、乳頭筋を、（ｍＭで）：酢酸カリウム ７４．７、ＥＤＴＡ １０、ＭｇＳＯ4 ５．４、ＡＴＰ−Ｎａ2 ４、ＤＴＥ １、ＭＯＰＳ ２０を含有する溶液（１Ｍ ＫＯＨでｐＨ７．０）に浸した。ついで、乳頭筋を１０ワットで６０秒間この氷冷溶液中で超音波処理した。超音波プローブと乳頭筋とのあいだの距離は１０ｍｍであった。線維（直径＜２００μｍ）を超音波処理した乳頭筋の表面から切断した。さらに、超音波処理し、切断した線維を、ほかの構成要素に加えてサポニン（２５０μｇ／ｍｌ）を含んだ「スキニング（skinning）」溶液（氷冷）中で３０分間保持した。この処理の間、継続して磁気的に撹拌した。
【００１６】
つぎに、さらに切断された線維（直径＜１００μｍ）を、にかわ（アセトン中のセルロースアセテート）で、等尺性の力変換器のスチールロッド延長部分（a steel-rod extension of isometric force transducer）(ＡＭＥ−８０１ strain gauge, ホルテン  エレクトロニクス（Horten Electronics）社製, ノルウェイ（Norwa）)と、ミクロマニピュレーターに付着させたガラスロッドとのあいだに水平にのせた。力変換器を増幅器に接続した。繊維を、（ｍＭで）：イミダゾール ３０、ＡＴＰ−Ｎａ2 １０、ＮａＮ3 ５、ＥＧＴＡ ５、ＭｇＣｌ2 １２．５、および３５０Ｕのクレアチンキナーゼを含有する「弛緩（relaxing）」溶液中に保持した。溶液の温度は２２℃で、ｐＨは１Ｍ ＫＯＨで６．７に設定した。イオン強度を１Ｍ ＫＣｌで「活性（activating）」溶液のイオン強度に相当するように調整した。「活性」溶液の組成は、ＣａＣｌ2をも含有することを除いて「弛緩」溶液の組成と同じであった。「弛緩」および「活性」溶液の適切な混合によって得られる目的の（desired）自由ｐＣａｓ（−ｌｏｇ[Ｃａ2+]）中で繊維を引き締めるよう誘導した。ｐＣａ４．８で繊維によって生み出される張力を最大応答とした。実験開始時に、線維を前述のように張った。
【００１７】
化合物Ａおよびミルリノンのカルシウム感作効果を表１に示す。
【００１８】
【表１】
0004938928.tif 000002
【００１９】
一定の速度の心筋における正筋変力性効果
約３５０ｇの４週間齢のモルモットを使用した。実験において、心臓の左心室乳頭筋を等尺性張力を測定するため、９５％Ｏ2、５％ＣＯ2で通気した改変タイロード溶液（３７℃）を含む器官溶液（organ bath）に置いた。改変タイロード溶液の組成は、（ｍＭで）：ＮａＣｌ １３５； ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １； ＫＣｌ ５； ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ２； ＮａＨＣＯ3 １５； Ｎａ2ＨＰＯ4・２Ｈ2Ｏ １； グルコース １０； ｐＨ７．３〜７．４であった。開放水平チャンバーの容積は１ｍｌで、チャンバーを通って流れる過融解溶液（superfusion solution）の流速は５ｍｌ／minであった。乳頭筋（直径＜１ｍｍ）を、力変位変換器（force-displacement transducer）（ＦＴ ０．３ Ｃ）とチャンバーの底に固定された針とのあいだに水平に張った。３００ｍｇの初期伸張力を、１Ｈｚの直角パルス（持続時間４ｍｓ）で白金電界電極を経て電気的に刺激された筋組織（刺激モデルＳＥＣ ４８ Ｆ、グラス  インスツルメント（Grass Instruments）社製）にかけた。毛管筋組織のすべての筋細胞の同時活性化を達成するために、２倍の閾値電圧で刺激を行なった。力変位変換器をポリグラフＤ.Ｃ.駆動体増幅器（モデル７ ＤＡ、グラス  インスツルメント社製）とプログラム可能なスキャナー（ＳＩ ５０１０型、テトロニクス（Tetronix）社製）とに接続した。増幅シグナルは、周波数１ｋＨｚプログラム可能なデジタル化機器（３９０ Ａ型、ソニー  テトロニクス社製）によってデジタル化された。
【００２０】
化合物Ａおよびミルリノンの筋変力性効果を表２に示す。
【００２１】
【表２】
0004938928.tif 000003