(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
固形腫瘍の増殖を減少または抑制するのに使用するための医薬の製造における、ホモハリングトニンおよび抗増殖性剤の使用であって、
該抗増殖性剤がシスプラチン、シタラビン、カンプトテシン、ビンブラスチン、エトポシド、５−フルオロウラシル、アモナフィド、コルチシン、またはゲニステインである使用。
【請求項２】
医薬はホモハリングトニン薬物および抗増殖性薬物を含み、該ホモハリングトニン薬物は抗増殖性薬物の投与前に投与する、請求項１記載の使用。
【請求項３】
医薬はホモハリングトニン薬物および抗増殖性薬物を含み、該ホモハリングトニン薬物は抗増殖性薬物の投与の間に投与する、請求項１記載の使用。
【請求項４】
医薬はホモハリングトニン薬物および抗増殖性薬物を含み、該ホモハリングトニン薬物は抗増殖性薬物の投与後に投与する、請求項１記載の使用。
【請求項５】
該医薬を用いた該固形腫瘍についてのモジュレートは、該抗増殖性剤を単独で用いた場合よりも大きい、請求項１記載の使用。
【請求項６】
ホモハリングトニンおよび抗増殖性剤を含有する、固形腫瘍の増殖を減少または抑制するのに使用するための医薬組成物であって、
該抗増殖性剤がシスプラチン、シタラビン、カンプトテシン、ビンブラスチン、エトポシド、５−フルオロウラシル、アモナフィド、コルチシン、またはゲニステインである医薬組成物。
【請求項７】
該固形腫瘍の増殖の減少または抑制は腫瘍の大きさが４倍になる時間の増加を含む、請求項１記載の使用。
【請求項８】
増殖の減少または抑制が相乗的である、請求項１記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、細胞増殖性疾患を有する宿主を処置するために、セファロタキシンアルカロイドを抗増殖性剤と一緒に使用することに関する。
【０００２】
（背景技術）
通常の抗新生生物剤に関係する抗腫瘍効果の速度および持続時間を増大させるために、現在使用されている抗増殖性剤の効能をモジュレートすることにかなりの関心が存在する。
【０００３】
癌の処置に使用される通常の抗増殖性剤は、（１）結合し、アルキル化し、鎖の開裂を誘発し、塩基対間でインターカレートし、またはＤＮＡおよびＲＮＡの無傷の状態（integrity）および機能性を維持する酵素に影響を及ぼすことによって、核酸高分子の無傷の状態に影響を及ぼす化学的な化合物；（２）タンパク質と結合して酵素的な作用を阻害し（例えば、抗代謝性剤）、または細胞の無傷の状態に必要な構造タンパク質の機能を阻害する（例えば、抗チューブリン剤）化学的な剤として広く分類されている。いくつかの癌の処置において有用であると同定されている他の化学的な化合物としては、例えば乳癌および精巣癌の処置のためにステロイド性ホルモンを遮断する薬剤、光化学的に活性な剤、放射線増感剤および保護剤を含む。
【０００４】
本発明の最も関心のあるものは、癌細胞の遺伝的な構造の無傷の状態に直接に影響を及ぼす化合物である。核酸高分子（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ）は、抗癌薬剤の主要な標的である。アルキル化剤（例えば、窒素マスタード、ニトロソウレア、アジリジン含有化合物）はＤＮＡを直接に攻撃する。金属配位化合物（例えば、シスプラチンおよびカルボプラスチン）は同様に、核酸構造を直接に攻撃し、細胞が修復するのが困難な病変となり、その後に細胞死を生じ得る。他の核酸に影響を及ぼす化合物としては、アントラサイクリン分子（例えば、ＤＮＡ高分子の核酸塩基対の間にインターカレートするドキソルビシン、核酸鎖の開裂を生じるブレオマイシン）、および偽塩基ヌクレオシドを含む。偽塩基ヌクレオシドとしては、核酸高分子構造に不適当に取り込まれ、最終的に未熟なＤＮＡ鎖の終結を生じる、ピリミジンおよびプリンのヌクレオシドアナログを含む。ゲノムの無傷の状態および機能性に影響を及ぼすある酵素はまた、特定の化学的な剤によって癌細胞中で抑制され、そして癌細胞の死を生じ得る。これらのものとしては、例えばリボヌクレオチドレダクターゼに影響を及ぼす酵素（例えば、ヒドロキシウレアおよびゲムシタビン）、トポイソメラーゼＩ（例えば、カンプトテシン）およびトポイソメラーゼＩＩ（例えば、エトポシド）を含む。
【０００５】
これらのＤＮＡを標的とする抗癌剤の中で最も広く使用されている剤の１つは、シスプラチン（これは、シス−ジアミンジクロロ白金ＩＩ、ＣＤＤＰ）である。この化合物は、いくつかのヒトの癌（例えば、精巣癌、小細胞肺癌、膀胱癌、頚部癌および頭頚部（head and neck）癌を含む）に対して活性である。
【０００６】
現在承認されている抗増殖性剤の多数の形態の癌に対する臨床的な活性が知られ得るが、腫瘍応答速度の改善、応答の持続期間の改善、究極的には患者の生存率の改善についてなお求められている。本明細書に記載の発明は、セファロタキシンアルカロイドおよびそのアナログ（例えば、ホモハリントニン（ＨＨＴ）を含み、このものは化学療法剤、特に核酸ポリマー（例えば、ＤＮＡ）の無傷の状態に影響を及ぼす剤の抗腫瘍効果を増強することができる）の新規な使用を示す。
【０００７】
（発明の概要）
本発明は、細胞増殖性疾患、特に異常増殖を有する宿主の処置を提供する。本発明の方法において、医薬的に許容し得るセファロタキシンおよび抗増殖性剤を、該細胞増殖性疾患をモジュレートするのに十分な量で投与する。
【０００８】
（発明の詳細な記載）
本発明は、細胞増殖性疾患（特に、異常増殖）を有する宿主の処置する方法およびその組成物を提供する。本発明の方法において、医薬的に許容し得るセファロタキシンを、抗増殖性剤と一緒に投与（全身投与が好ましい）して、抗癌効果を改善する。好ましい態様において、セファロタキシンは化学増強効果を示す。
【０００９】
該剤は、細胞増殖性疾患をモジュレートするのに十分な量で与える。ある態様において、細胞増殖性疾患のモジュレートは腫瘍の増殖の減少を含む。別の態様において、疾患のモジュレートは腫瘍の増殖の抑制を含む。別の態様において、細胞増殖性疾患のモジュレートは腫瘍の大きさを４倍にする時間の増加（以下に記載する）を含む。別の態様において、細胞増殖性疾患のモジュレートは化学増強効果を含む。別の態様において、疾患のモジュレートは化学増感効果を含む。他の態様において、疾患のモジュレートは細胞分裂停止を含む。更に他の態様において、疾患のモジュレートは細胞毒性効果を含む。
【００１０】
化学増強剤または抗増殖性剤を単独で使用する場合の活性と比べて加成よりも大きい様式で公知の抗増殖性剤の効果を増大させる場合に、化学的な剤は「化学増強剤」である。ある場合に、化学増感効果を観察することができる。これは、単独で使用する場合に有意な抗腫瘍効果を示さないが、抗増殖性剤を単独で使用する場合と比較して、抗増殖性剤の抗腫瘍効果を改善するであろう剤の使用による効果と定義される。
【００１１】
本明細書で使用する用語「セファロタキシン」とは、中国常緑樹のアルカロイド誘導体、セファロタキス  フルテリ（Cepharotaxus fortueni）およびそのアナログを含む化学群の全ての構成要素を含む。セファロタキシン群は、化学構造が図１の環構造であるものとして定義される。
【００１２】
セファロタキシンアナログは、Ｒ１およびＲ２に置換基を有する図１に示す構造によって更に定義されるが、このものに限定されない。Ｒ１および／またはＲ２としては、例えばエステル（例えば、ハリントニン、イソハリントニン、ホモハリントニン、デオキシハリントニン、アセチルセファロタキシンなどを含む）を含む。表１は、これらのアナログについてのいくつかのＲ１およびＲ２の構造を示す。Ｒ１およびＲ２置換基は典型的に、生物学的な活性および医薬的な属性（例えば、生物学的な適合性または安定性）を増大するか、または毒性を減少するのに使用する。ある態様において、Ｒ１および／またはＲ２としては、例えばアルキル置換基（例えば、メチル、エチル、プロピルなど）を含む。別の態様において、Ｒ１および／またはＲ２としては、例えばエステル（例えば、メトキシ、エトキシ、ブトキシなど）を含む。しかしながら、Ｒ１およびＲ２は本発明の範囲内で上記の例に限定されるものではない。
【表１】
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【００１３】
セファロタキシンアナログは更に化学的な改良物である。セファロタキシンアアナログの具体的な例は、ホモハリントニン（これは、セファロタキシンの４−メチル−２−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−４−メチルペンチル）ブタン二酸エステルである）を挙げられる（図２）。
【００１４】
本明細書で使用する、抗増殖性剤は細胞分裂停止または細胞毒性を誘発する化合物である。「細胞分裂停止」とは細胞の増殖の抑制であり、一方で「細胞毒性」とは細胞を殺すことと定義される。抗増殖性剤の具体的な例としては、抗代謝性剤（例えば、メトトレキセート、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン（gemcitabine）、シタラビン（ｃytarabine）、ペントスタチン（pentostatin）、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、Ｌ−アスパラギナーゼ、ヒドロキシウレア、Ｎ−ホスホノアセチル−Ｌ−アスパラギン酸（ＰＡＬＡ）、フルダラビン（fludarabine）、２−クロロデオキシアデノシンおよびフロキシウリジン（floxuridine））；構造タンパク質剤（例えば、ビンカアルカロイドであって、これはビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン（vinorelbine）、パクリタキセルおよびコルチシンを含む）；抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（dactinomycin）、ダウノルビシン（daunorubisin）、ドキソルビシン（doxorubicin）、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（（paclimycin）およびミトマイシン（mitomycin））；ホルモン拮抗薬（例えば、タモキシフェンおよび黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アナログ）；核酸損傷剤（例えば、アルキル化剤であるメクロレタミン（mechlorethamine）、シクロホスファミド、イフォスファミド（ifosfamide）、クロラムブシル（chlorambucil）、デカルバジン（decarbazine）、メチルニトロソウレア、セムスチン（semustine）（メチル−ＣＣＮＵ）、クロロゾトシン、ブスルファン（busulfan）、プロカルバジン、メルファラン、カルムスチン（carmustine）（ＢＣＮＵ）、ロモムスチン（lomustine）（ＣＣＮＵ）およびチオテパ（tiotepa））；インターカレート剤（例えば、ドキソルビシン（doxorubicin）、ダクチノマイシン（dactinomycin）、ダウノルビシン（daunorubicin）およびメトキサントロン（mitoxantrone））；トポイソメラーゼインヒビター（例えば、エトポシド、カンプトテシンおよびテニポシド）および金属配位錯体（例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン）を含む。
【００１５】
以下の実施例を例示するが、これらは限定するものではない。
【００１６】
実施例
実施例１
ホモハリントニン（ＨＨＴ）によるシスプラチン（ＣＤＤＰ）の化学増強作用
移植可能な実験用マウスの繊維肉腫（２×１０５  ＲＩＦ−１細胞）を、３ヶ月齢の雌性Ｃ３Ｈマウス（チャールズリバー（Charles River）、ホリスター（Holister）、ＣＡ）の側腹部で皮内増殖させた。腫瘍の大きさが約１００ｍｍ３の大きさに達した後に、該マウスをランダムに各々の群（群毎に４匹）に割り当てた。
【００１７】
実験用の組成物を表２に記載の通り製造した。
【表２】
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【００１８】
化学増強剤であるホモハリントニンをＮＣＩから入手し、このものをＤＭＳＯ中で適当な濃度とした。シスプラチン（このものは、ダビッド・ブルラボ社製、ムルグレーブ、豪州、製品番号5201844X）を、注射用の水中で適当な濃度とした。該組成物を１００ミリリットルの容量で全身（すなわち、腹膜腔内的、i.p.）注射した。群３の処置の場合には、該化学増強剤であるホモハリントニンを、シスプラチンの注射３０分前に注射した。処置後に、腫瘍の３垂直方向をノギス測定することによって該腫瘍の増殖を週に３回追跡して、式：
【数１】
Ｖ＝π／６×Ｄ１×Ｄ２×Ｄ３
（式中、Ｄ１〜３はｍｍ単位である）
から腫瘍の大きさを算出した。
【００１９】
０日目の処置の大きさの４倍のサイズ（ＴＶＱＴ）に達するか、または処置の３０日後のいずれかが最初に来るまで、該腫瘍を追跡した。該データを、「腫瘍の大きさを４倍にする時間（ＴＶＱＴ）」の平均値または「遅延」として表わす。平均ＴＶＱＴは、個々の腫瘍を初期の処置日での大きさの４倍にまで増殖するのに必要な平均日数である。該「遅延」とは、処置群の平均的な大きさを４倍にまで増殖するのに必要な日数の中央値から、コントロール群の平均的な大きさを４倍にまで増殖するのに必要な日数の中央値を引いたものである。該データを、未処置のコントロール群の場合に対して処理腫瘍の腫瘍の大きさを４倍とする時間の比率（ＴＶＱＴ／ＴＶＱＴ）としても表わす。
【００２０】
該データを、以下の表３および図３に示す。
【表３】
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【００２１】
表３の結果は、シスプラチン単独（群４）またはホモハリントニン単独（群２）を使用する場合と比較して、両方の化合物を腫瘍を有するマウスに使用した場合に（群３）、加成性よりも大きい効果が観察されたことで、化学増強剤であるホモハリントニンの使用によって、シスプラチンの抗増殖性効果が増大されることを示している。
【００２２】
実施例２
Ｃ３ＨマウスでのＲＩＦ−１腫瘍の増殖における、ホモハリントニン単独および他の化学療法剤との組み合わせの効果
ＲＩＦマウス繊維肉腫モデルを、ホモハリントニン単独および様々な抗増殖性剤との組み合わせによる抗腫瘍活性を評価するのに使用した。使用した該抗増殖性剤としては、例えば核酸（例えば、ＤＮＡ）の無傷の状態に影響を及ぼす剤（例えば、シスプラチン、シタラビン、カンプトテシン、エトポシド、５−フルオロウラシルまたはアモナフィド）、構造タンパク質に影響を及ぼす剤（例えば、パクリタキセル、ビンブラスチンまたはコルチシン）または細胞質内酵素（例えば、ゲニステイン）を含む。
【００２３】
ホモハリントニン（ＨＨＴ−ＮＣＩ）を粉末としてＮＣＩから入手した。ホモハリントニン（ＨＨＴ−ＣＬｉｎ）はハングホウ・ミンシェング医薬グループ (Hangzhou Minsheng Pharmaceutical Group）（ハングホウ（Hangzhou），中国）（このものは、水を用いて予め１ｍｇ／ｍＬまで希釈している）から１ｍＬバイアルで入手した。注射用のシスプラチン、ＵＳＰは、凍結乾燥した粉末としてデビッド・ブルラボ社（David Bull Labs）（ムルグレーブ（Mulgrave）、豪州）（製品番号5201844X）から入手した。パクリタキセルは、ブリストルマイヤーズスクイブ社（Bristol Myers Squibb Co.）（プリンストン、ＮＪ）（このものは、クレマホールCremaphor）中で予め６ｍｇ／ｍＬまで希釈している）（製品番号は9J16241, 2001年9月輸出（exp.））から入手した。シタラビンは、ベッドフォード（Bedford, OH）社（製品番号は86968A）（2002年6月輸出）から凍結乾燥した粉末として入手した。カンプトテシンは、ベーリンガーインゲルハイム社（Boehringer-Ingelheim）（製品番号は142088）から粉末として入手した。ビンブラスチンは、ベッドフォード社（ベドフォード、ＯＨ）（製品番号112647）から凍結乾燥した粉末として入手した。エトポシドは、ファルマシア（Pharmacia）（カラマゾ（Kalamazoo, MI）（製品番号ETA013）（1999年5月輸出）（このものは、予め２０ｍｇ／ｍＬに希釈した液体である）から入手した。５−フルオロウラシルはファルマシア（Pharmacia）（カラマゾ（Kalamazoo, MI）（製品番号FFA191）（2000年7月輸出）（このものは、予め５０ｍｇ／ｍＬに希釈した液体である）から入手した。アモナフィドは、ペンタ  ビオテック社（Penta Biotech）（ユニオンシティー（Union City）、ＣＡ）（製品番号039-01）から粉末として入手した。コルチシンは、シグマ社（Sigma）（セントルイス、ＭＯ）(製品番号55H0685）から粉末として入手した。ゲシステインは、ケムコン（ChemCon）ＧｍｂＨ社（フレブルグ（Freburg）i, Br.）（製品番号CC-6700-26）から粉末として入手した。ＤＭＳＯは、シグマ社（セントルイス、ＭＯ）（製品番号80K3695）から入手した。注射用の０．９％塩化ナトリウム、ＵＳＰ（サリン）は、アボットラボ社（Abbott Laboratories）（製品番号55-199-DK）から入手した。注射用の減菌した水、ＵＳＰ（ＷＦＩ）は、リフォメド社（Lyphomed）（製品番号390849）から入手した。
【００２４】
製剤：試験調製物（処置群）を表４にまとめる。
製剤１〜４の調製については、ＨＨＴ−ＮＣＩをバイアル中で秤量し、このものを表示濃度でＤＭＳＯ中に溶解した。
【００２５】
製剤５については、含有量が１０ｍｇバイアルの凍結乾燥させたＣＤＤＰ（注射用のシスプラチン）をＷＦＩ（１０ｍＬ）と一緒に再懸濁して、１ｍｇ／ｍＬのＣＤＤＰ懸濁液を得た。
【００２６】
製剤６については、パクリタキセル（このものは、クレマホール／ＥＬおよび脱水アルコール中に予め６ｍｇ／ｍＬまで希釈している）を更にＷＦＩを用いて希釈して３．３ｍｇ／ｍＬとした。
【００２７】
製剤７および８は、ＨＨＴ−Ｃｌｉｎを更にＷＦＩを用いて表示濃度にまで希釈することによって調製した。製剤９は未希釈のＨＨＴ−Ｃｌｉｎであり、入手したままで使用した。
【００２８】
製剤１０は、ＷＦＩ（１ｍＬ）を凍結乾燥させた粉末であるシタラビン（１００ｍｇ）に加えることによって調製した。
【００２９】
製剤１１は、濃度が１ｍｇ／ｍＬであるカンプトテシンにＤＭＳＯを加えることによって調製した。
【００３０】
製剤１２は、注射用の０．９％塩化ナトリウムを凍結乾燥させたビンブラスチン粉末（１０ｍｇバイアル）に加えることによって調製した。
【００３１】
製剤１３〜１７は、適当な量の各々の試験剤をサリンに希釈させることによって調製した（１３〜２．５ｍｇ／ｍＬのエトポシド、１４〜７．５ｍｇ／ｍＬの５−フルオロウラシル、１５〜７．５ｍｇ／ｍＬのアモナフィド、１６〜２．５ｍｇ／ｍＬのコルチシン、１７〜３．７５ｍｇ／ｍＬの５−フルオロウラシル）。
【００３２】
製剤１８は、ゲニステイン（１５ｍｇ）をＤＭＳＯ（１ｍＬ）に希釈させることによって調製した。
【００３３】
動物：雌性Ｃ３Ｈマウス（チャールズ・リバー・ラボ社、ホリスター、ＣＡ）（これは、約３ヶ月齢）を研究に使用した。平均体重は約２５ｇであった。動物をアイソレーターゲージ中、１２時間の明−暗周期で保った。食糧および水は自由に与えた。
【００３４】
腫瘍：ＲＩＦ−１マウス繊維肉腫セルラインを、加湿した５％ＣＯ２インキュベート中、３７℃でインビトロ培地（このものは、２０％胎児ウシ血清を用いて補足したウェイモウス（Waymouth）培地）中で保った。ログ期のＲＩＦ−１細胞をトリプシン処理し、細胞培養フラスコから収集して濃度を４×１０６細胞／ｍＬとした。次いで、このものを各々のマウスの両方の側腹部に容量が５０μＬ（これは、注射１回当たり２×１０５細胞に相当する）で皮内注射した。９日後に、腫瘍は大きさが約１００ｍｍ３に達し、該動物を異なる処置群にランダム化した。
【００３５】
処置群：処置群を表４にまとめる。４〜５匹の動物を各々の処置群に割り当てた。腹膜腔内注射の容量は１００μＬとした。対側性の腫瘍（このものは未処置のコントールとして機能する）を有する各々の動物の２つの腫瘍のうちの１つに、腫瘍内注射（５０μＬ）を行った。経口投与の容量は１００μＬとした。該２つの試験剤を用いる組み合わせ処置を、２つの別々の注射として投与した。この場合に、２番目は１番目の直後または３０分後のいずれかとした。
【００３６】
腫瘍の大きさを４倍にする時間の評価：
腫瘍をベルニエル（Vernier）ノギスを用いて、２２日まで週に３回測定した。腫瘍の大きさ（立方ミリメートル、ｍｍ３）を、式：
【数２】
Ｖ＝π／６×Ｄ１×Ｄ２×Ｄ３
（式中、Ｄ１〜３は、測定された垂直方向の直径（単位はｍｍである）である）に従って算出した。
【００３７】
腫瘍の大きさを４倍にする時間（ＴＶＱＴ）（これは、腫瘍の大きさを最初の大きさ（処置時）の４倍にまで増殖するのに必要とされる時間と定義する）を、研究の終わりとして使用した。該ＴＶＱＴを各々の処置群について測定し、平均値±標準誤差（ＳＥ）として表わした（単位は日数）。
【００３８】
ホモハリントニンを単独剤としてまたは他の化学療法剤と組み合わせて投与することによる、抗腫瘍活性または腫瘍増殖のモジュレート（これは、遅延した腫瘍の増殖、すなわちＴＶＱＴ値の増加によって測定される）を、表５に示す。
【００３９】
８個の別々の実験からの結果を本研究に含める。実験Ｅ０１０において、未処置のコントロール動物における腫瘍は、平均して７．２日で大きさが４倍となった。ＮＣＩ製のホモハリントニンの５ｍｇ／ｋｇを腹膜腔内投与する場合は、ＴＶＱＴが１４．５日であった。該用量でのホモハリントニンの腫瘍内投与する場合は、ＴＶＱＴが１５．６日であった。
【００４０】
実験Ｅ０１１において、未処置のコントロール動物の場合は大きさが平均８．３日で４倍となった。一方で、ＮＣＩ製のホモハリントニンを２ｍｇ／ｋｇで腹膜腔内投与する場合には、平均ＴＶＱＴが１０．１日まで延びた。また、ＣＤＤＰを更に腹膜腔内投与する場合には、平均ＴＶＱＴが１４．９日まで延びた。一方で、パクリタキセル（１０ｍｇ／Ｋｇ）を単独で用いる場合には、ＴＶＱＴが８．８日であった。ホモハリントニン（２ｍｇ／Ｋｇ）を加えることにより、ＴＶＱＴは変わらなかった。このことにより、ホモハリントニン単独の場合よりも低いコンビナトリアル活性を有する唯一の剤はパクリタキセルであった。
【００４１】
ホモハリントニン（ハングホウ・ミンシェング医薬グループ（ハングホウ, 中国）製）（このものは、減菌した水中で２ｍｇ／Ｋｇまたは４ｍｇ／Ｋｇのいずれかで製剤化する）を、組み合わせ研究の残りとして使用した。
【００４２】
２ｍｇ／Ｋｇの場合に、Ｅ０２６ではホモハリントニンは平均ＴＶＱＴが１０．４日であり、一方で未処置のコントロールでは７．２日で４倍となった。シスプラチン（４ｍｇ／Ｋｇ）をホモハリントニン（２ｍｇ／Ｋｇ）と組み合わせ投与する場合には、ＴＶＱＴが１１．１日であり、このことはホモハリントニン単独（ＴＶＱＴ＝１０．４日）またはシスプラチン単独（ＴＶＱＴ＝９．４日）の場合よりも長かった。
【００４３】
実験０４３０の場合に、未処置のコントロールでは６．７日で４倍となった。ホモハリントニン処置（２ｍｇ／Ｋｇ）では、ＴＶＱＴが７．９日であり、カンプトテシンまたはシタラビンを使用する場合には、ＴＶＱＴがそれぞれ９．４日または７．６日であった。ホモハリントニン（２ｍｇ／Ｋｇ）をカンプトテシン（６ｍｇ／Ｋｇ）またはシタラビン（４００ｍｇ／Ｋｇ）と組み合わせ投与する場合には、ＴＶＱＴがそれぞれ１０．１日および８．６日まで増大した。
【００４４】
Ｅ０３２の場合に、未処置のコントロールでは６．５日で４倍となった。ホモハリントニン（４ｍｇ／Ｋｇ）では平均ＴＶＱＴは８．５日であった。ホモハリントニン（４ｍｇ／Ｋｇ）を５−フルオロウラシル（３０ｍｇ／Ｋｇ）と組み合わせ投与する場合には、ＴＶＱＴが１７．９日であり、それに対して５−フルオロウラシル単独では、１３．６日であった。ホモハリントニン（４ｍｇ／Ｋｇ）をビンブラスチン（２ｍｇ／Ｋｇ）と組み合わせ投与する場合には、ＴＶＱＴが１０．９日であり、それに対してビンブラスチン単独では８．６日であった。ホモハリントニン（４ｍｇ／Ｋｇ）およびシスプラチン（４ｍｇ／Ｋｇ）またはアモナフィド（３０ｍｇ／Ｋｇ）を組み合わせ投与する場合には、ＴＶＱＴがそれぞれ１０．４日または１０．２日であり、それに対してそれら剤の単独の場合ではそれぞれ９．９日および７．６日であった。ホモハリントニンをエトポシド（１０ｍｇ／Ｋｇ）と組み合わせ投与する場合には、ＴＶＱＴが８．７日であり、一方でエトポシド単独の場合では８．５日であった。
【００４５】
Ｅ０３３の場合に、コルチシン（１０ｍｇ／Ｋｇ）を経口投与する場合では、ＴＶＱＴが６．３日であった。一方で、未処置のコントールおよびホモハリントニン（４ｍｇ／Ｋｇ）の場合には、ＴＶＱＴがそれぞれ７．８日および８．３日であった。ホモハリントニンをこれらの用量でのコルチシンと組み合わせる場合には、ＴＶＱＴが９．４日まで増大した。
【００４６】
Ｅ０３６の場合に、ゲニステイン（６０ｍｇ／Ｋｇ）をホモハリントニン（４ｍｇ／Ｋｇ）と組み合わせる場合には、ＴＶＱＴが９．２日であった。これは、ゲニステイン単独の場合（７．１日）よりも大きかった。
【００４７】
以下に記載する通り、いくつかの群で動物の死が観察された。ＮＣＩから入手してＤＭＳＯ中で１．２５ｍｇ／ｍＬに製剤化したホモハリントニンの処置後では、４匹のマウス中、３匹が死亡した。この製剤を腫瘍内で与えた後では、５匹のマウス中、２匹が死亡した。ＤＭＳＯ中で２．５ｍｇ／ｍＬに製剤化した同様なホモハリントニンの処置後では、４匹のマウス中、４匹が死亡した。ホモハリントニンのＤＭＳＯ（０．５ｍｇ／ｍＬ）をパクリタキセル（２．５ｍｇ／ｍＬ）と組み合わせる場合には、４匹のマウス中、２匹が死に至った。また、ホモハリントニンのＤＭＳＯ（０．５ｍｇ／ｍＬ）をシスプラチン（１ｍｇ／ｍＬ）と組み合わせる場合には、４匹のマウス中、１匹が死に至った。ホモハリントニン（１ｍｇ／ｍＬ）をビンブラスチン（０．５ｍｇ／ｍＬ）と組み合わせる場合には、該処置を与えた４匹のマウス中、１匹が死に至った。また、ホモハリントニン（１ｍｇ／ｍＬ）およびゲニステイン（１５ｍｇ／ｍＬ）の組み合わせの場合には、５匹のマウス中、２匹が死に至った。
【００４８】
まとめると、ＲＩＦ−１マウスの繊維肉腫モデルにおいて、ホモハリントニンの腹膜腔内投与は抗腫瘍活性を有し、すなわち腫瘍の増殖のモジュレートを有していた。ホモハリントニンをシスプラチン、シタラビン、カンプトテシン、ビンブラスチン、エトポシド、５−フルオロウラシル、アモナフィド、コルチシンおよびゲニステインと組み合わせて腹膜腔内投与した場合には、ホモハリントニン単独または個々の試験剤よりも大きい抗腫瘍活性レベルを有していた。最善のコンビナトリアル活性は、５−フルオロウラシル、アモナフィドおよびビンブラスチンを使用する場合であった。ホモハリントニンをパクリタキセルと組み合わせて投与した場合には、ホモハリントニン単独の場合よりも小さい抗腫瘍活性を有していた。ＮＣＩから入手してＤＭＳＯ中で製剤化したホモハリントニンは、ある程度の致死毒性を示し、一方でハングホウ・ミンシェング医薬グループ (ハングホウ, 中国）から入手し、ヒト使用のための減菌した水中で製剤化したホモハリントニンは、使用した用量では致死毒性を示さなかった。
【表４】
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【表５】
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【表６】
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【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、セファロタキシンアナログの一般式である。Ｒ１およびＲ２は、置換基を表わす。Ｒ１およびＲ２についての構造は、セファロタキシンアナログであるホモハリントニンの場合について示す。
【図２】  図２は、セファロタキシンアナログである、ホモハリントニンの構造式である。
【図３】  図３は、ＨＴＴ、ＨＴＴおよび続くＣＤＤＤＰ、またはＣＤＤＰのみを用いて処置後の日数における腫瘍の大きさについての、腫瘍の増殖の遅延を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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