(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
クラブラン酸のアミン塩とカリウム前駆体化合物との反応によるクラブラン酸カリウムの製造方法であって、洗浄媒体でクラブラン酸のアミン塩を洗浄するか、再結晶媒体からクラブラン酸のアミン塩を再結晶するか、または調製媒体中でクラブラン酸のアミン塩を調製し、ついで、クラブラン酸のアミン塩をカリウム前駆体化合物と反応させるか、あるいは調製媒体中でクラブラン酸アミン塩とカリウム前駆体化合物を反応させることを含み、該洗浄媒体、再結晶媒体、および調製媒体が、ｐＨ３．５〜５．０である方法。
【請求項２】
洗浄媒体がｐＨ３．５〜５．０の水および水混和性有機溶媒の混合液である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
クラブラン酸のアミン塩をｐＨ３．５〜５．０で水性媒体に溶解し、ついで、水溶液と沈殿化溶媒を混合することにより結晶化させて水溶液から単離することにより、クラブラン酸のアミン塩をｐＨ３．５〜５．０で水性再結晶媒体から再結晶する、請求項１記載の方法。
【請求項４】
沈殿化溶媒が、ジＣ１−７アルキルケトンである、請求項３記載の方法。
【請求項５】
クラブラン酸のアミン塩をｐＨ３．５〜５．０である液体媒体中で調製し、当該調製が、クラブラン酸を含有する有機溶媒相、およびアミン塩が抽出され、ｐＨ３．５〜５．０である水相からなる二相系で行われる、請求項１記載の方法。
【請求項６】
有機溶媒相が、水不混和性Ｃ１−７アルキル−Ｃ１−７アルカン酸エステルおよびジＣ１−７アルキルケトンから選択される、請求項５記載の方法。
【請求項７】
クラブラン酸カリウムを、クラブラン酸のアミン塩をカリウム前駆体化合物と、ｐＨ３．５〜５．０の調製媒体中で反応させ、該反応が、ｐＨ３．５〜５．０の水混和性有機溶媒と水の混合物中のアミン塩溶液にカリウム前駆体化合物を添加することにより行われる、請求項１記載の方法。
【請求項８】
水混和性有機溶媒が、Ｃ１−８アルキルアルコールである、請求項７記載の方法。
【請求項９】
カリウム前駆体化合物が、カリウムと、炭酸水素アニオン、炭酸アニオンおよびリン酸水素アニオン、ならびにＲ−ＣＯ２Ｈ（ここに、ＲはＣ１−２０アルキルである）で示される弱有機カルボン酸のアニオンから選択されるカウンターアニオンとの塩である、請求項１〜８いずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
カリウム前駆体化合物が、２−エチルヘキサン酸カリウムである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
クラブラン酸のアミン塩が、クラブラン酸のｔｅｒｔ−ブチルアミン塩である、請求項１〜１０いずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明はより純粋な状態でのクラブラン酸塩の新規精製方法に関する。
【０００２】
（従来技術）
クラブラン酸（Ｚ）−（２Ｒ，５Ｒ）−３−（２−ヒドロキシエチリデン）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸は、通常、医薬上許容される塩、特にクラブラン酸カリウムの形態で医薬処方の成分として商業的に用いられる、β−ラクタマーゼ阻害剤である。クラブラン酸は、例えばＧＢ１５０８９７７に記載のように微生物ストレプトマイセス・クラブリゲラス（Streptomyces clavuligerus）の培養により商業的に生産されている。
クラブラン酸は種々の方法により培養基から抽出できる。通常、最初にエス・クラブリゲラスの細胞を、濾過または遠心分離のような方法により培養基から除去し、ついで、抽出処理を行う。クラブラン酸は、酸性ｐＨに調節された冷浄化培養基からの溶媒抽出により、この浄化培養基から抽出できる。また、全ブロス抽出も可能である。溶媒抽出法において、クラブラン酸は有機溶媒中に抽出される。相を分離した後、クラブラン酸は有機相の溶液中に見られる。
【０００３】
クラブラン酸は、クラブラン酸の有機アミンとの塩の大きな水溶解性を利用することにより、有機相から新しい水相に逆抽出し、水相から該アミン塩を単離できる。該方法において、アミン塩は粗クラブラン酸を医薬上許容される塩に変換する方法における中間体として形成される。該方法は、例えばＥＰ−Ａ−００２６０４４に記載されており、有機溶媒中の純粋でないクラブラン酸の溶液を、ｔ−ブチルアミンと接触させ、クラブラン酸のｔ−ブチルアミン塩を形成し、ついでこれを単離する。他の有機アミン、例えばターシャリーオクチルアミン（ＥＰ−Ａ−０５９４０９９（Pharma Development）参照）、ジエチルアミン、トリ−（低級アルキル）アミン、ジメチルアニリンおよびＮＮ’−ジイソプロピル−エチレンジアミンを用いる、他の同様な方法が知られている。ＷＯ−Ａ−９３／２５５５７（SmithKline Beecham）は、この方法に使用できる非常に広範囲に及ぶアミンのリストを開示している。ＷＯ−Ａ−９４／２２８７３（Gist Brocades）は種々のターシャリー、ターシャリージアミン、例えばＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，２−ジアミノエタン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，６−ジアミノヘキサン、１，２−ジピペリジノエタンおよびジピペリジノメタンの使用を開示している。ＷＯ−Ａ−９６／２０１９９（Spurcourt）はジアミノエーテル、例えばビス（２−ジメチルアミノエチル）エーテルの使用を開示している。ＧＢ−Ａ−２２９８２０１（Spurcourt）は種々のベンズヒドリルアミンの使用を開示している。ＷＯ−Ａ−９６／３３１９７（ＬＥＫ）は、対称Ｎ，Ｎ’−アルキルエチレンジアミン、例えばＮ，Ｎ’−ジイソプロピル−エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジエチレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンおよびＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチレンジアミンを含むさらなるアミンの使用を開示している。ＷＯ−Ａ−９８／２１２１２（Gist-Brocades）は、例えばアミンＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン、１，３−ビス（ジ−メチルアミノ）−２−プロパノール、ベンズヒドリルアミンおよびビス（２−（ジメチルアミノ）エチル）エーテルを用いる方法を開示している。ＷＯ−Ａ−９８／２３６２２（Biochemis）はジイソプロピル−エチレン−ジアミンの使用を開示している。
【０００４】
単離の後、中間体アミン塩をクラブラン酸の医薬上有用な塩、特にアルカリ金属塩、詳細にはクラブラン酸カリウムに、一般的には、中間体アミン塩と、塩前駆体化合物、例えば２−エチルヘキサン酸カリウムとの反応により変換することができる。
クラブラン酸を調製することによる発酵過程は、副生成不純物も生成する。多くの不純物が、従来の方法により調製される粗クラブラン酸、クラブラン酸の中間体アミン塩および医薬上許容される塩のＨＰＬＣトレースにおけるピークとして同定されており、さらに、いくつかは化学的に同定されている。近年、１つの該不純物が本発明者らによりＮ−スクシニルチロシンとして同定された。
わずかな該不純物がクラブラン酸の最終生成物である医薬上許容される塩に存在しており、したがって、クラブラン酸の単離の間に、または最終生成物から該不純物を除去することが望まれている。例えば、該不純物は中間体アミン塩を医薬上許容される塩に変換する工程の間に上記中間体アミン塩から除去するか、または最終生成物から除去できる。
意外にも、この不純物をＮ−スクシニルチロシンとして同定することに成功したことにより、今まで可能であったよりもより少量のＮ−スクシニルチロシンにしか汚染されていないクラブラン酸塩を調製する方法が利用可能になった。
該方法は、Ｎ−スクシニルチロシンをこれにより汚染されているクラブラン酸塩から除去する精製方法でありうる。
【０００５】
（発明の開示）
したがって、本発明はＮ−スクシニルチロシンにより汚染されているか、または汚染されていると考えられるクラブラン酸塩をＮ−スクシニルチロシンを除去するために選択された条件に付す精製方法を提供する。該条件は化学的条件、例えば１つまたはそれ以上の適当な試薬で処理するものであってもよい。適当には、Ｎ−スクシニルチロシンにより汚染されているか、または汚染されていると考えられるクラブラン酸塩を、該試薬を含有する液体媒体、例えば有機溶媒または有機溶媒−水混合液に曝すことによってかかる条件に付すものであってもよい。かかる方法は、固体のクラブラン酸塩を該液体媒体により洗浄すること、または該液体媒体からクラブラン酸塩を結晶化することを含んでいてもよい。別法として、Ｎ−スクシニルチロシンにより汚染されているか、または汚染されていると考えられるクラブラン酸塩は固体の適当な試薬に曝してもよい。
【０００６】
別法として、精製方法はＮ−スクシニルチロシンにより汚染されているか、または汚染されていると考えられるクラブラン酸塩を、液体媒体、例えば有機溶媒または有機溶媒−水混合液中に懸濁するか、または溶解し、Ｎ−スクシニルチロシンを吸収するように選択された物質に曝し、それにより塩からＮ−スクシニルチロシンを除去する方法であってもよい。
別法として、クラブラン酸塩をＮ−スクシニルチロシンの形成および／またはクラブラン酸塩の生成物中での保持を最小限にするように選択された条件下で調製する調製工程であってもよい。例えば、クラブラン酸塩をＮ−スクシニルチロシンを除去する試薬を包含する液体媒体、例えば有機溶媒、水性媒体または有機溶媒の混合物中で調製するか、Ｎ−スクシニルチロシンを除去する化学的または物理的条件に付してもよい。
【０００７】
上記方法により精製されるか、または調製されたクラブラン酸塩はクラブラン酸のアミン塩、例えば上記のいずれかのアミン、特にターシャリーブチルアミンとの塩であってもよく、その後、このアミン塩をクラブラン酸の最終生成物である、アルカリ金属塩のような、医薬上許容される塩、例えばクラブラン酸カリウムに変換してもよい。別法として、塩はクラブラン酸の金属塩、例えばクラブラン酸のアルカリ金属塩、特にクラブラン酸カリウムであってもよい。
【０００８】
さらに意外にも、クラブラン酸の塩の中で、上記したＮ−スクシニルチロシンのような不純物の濃度は、その塩を選択された範囲のｐＨに曝すと、減少させることができることが見出された。かかる医薬上許容される塩の調製のための改良された方法の提供においてこの知見を使用することが本発明の目的である。
したがって、本発明により、クラブラン酸塩を、６．５よりも小さいｐＨ、好ましくは６．０以下、より好ましくはｐＨ５．５以下、より好ましくはｐＨ５．０以下、より好ましくはｐＨ３．５よりも大きい、例えばｐＨ３．５〜５．５、典型的にはｐＨ約４．５の液体媒体に曝すことを含む方法が提供される。本明細書に用いられる「ｐＨ」なる語は、水素イオン濃度の逆数の対数としてのｐＨなる語の従来の使用法を含む。また、本明細書で用いられるｐＨなる語は、観測されたｐＨ、すなわち、媒体を公知の型である従来のｐＨ計にさらすことにより測定され、公知の方法により適宜校正されたｐＨを含む。通常、本発明の方法において用いられる媒体は水をいくらか含むだろう。
【０００９】
本発明の方法のように、塩を処理することにより、クラブラン酸の塩またはクラブラン酸のさらなる塩、例えば、上記した塩から調製される医薬上許容される塩中の、１つまたはそれ以上の不純物、特にＮ−スクシニルチロシンの濃度を減少させることができる。
本発明の方法の第１の形態において、塩を６．５より小さいｐＨで、好ましくはｐＨ５．５またはそれより小さいｐＨの媒体、すなわち、洗浄媒体により洗浄できる。塩はクラブラン酸のアミン塩、例えば上記のいずれかのアミン、詳細にはターシャリーブチルアミンとの塩であってもよく、このアミン塩は洗浄媒体で洗浄することができ、ついで所望により、アミン塩を最終生成物である、アルカリ金属塩などの医薬上許容される塩、例えばクラブラン酸カリウムに変換してもよい。別法として、洗浄される塩は、クラブラン酸の金属塩、例えばクラブラン酸のアルカリ金属塩、特にクラブラン酸カリウムであってもよい。
洗浄媒体は、かかるｐＨの水性洗浄媒体、例えば酸性化された水であってもよく、または好ましくは、かかるｐＨの、例えばＣ１−７アルキルアルコール、典型的には０．５〜２０％ｖ／ｖの水を含む、水および水混和性有機溶媒の混合液であってもよい。適当には、水性洗浄媒体、例えば水または水および水混和性有機溶媒の該混合液は鉱酸、例えば硫酸、塩酸または硝酸、もしくは有機酸、例えばカルボン酸、例えば酢酸などのＣ１−７アルカン酸により酸性化することができる。
【００１０】
したがって、本発明の方法の第１の形態は、１つまたはそれ以上の不純物、例えばＮ−スクシニルチロシンを含む出発物質のクラブラン酸塩を準備し、この塩を洗浄媒体で洗浄し、それにより１つまたはそれ以上の不純物の濃度がより低いクラブラン酸塩の生成物を生成する方法であってもよい。
したがって、本発明の方法の第１の形態は、出発物質のクラブラン酸塩を洗浄媒体で洗浄することにより、１つまたはそれ以上の不純物、例えばＮ−スクシニルチロシンを出発物質のクラブラン酸塩から除去する方法である。
【００１１】
本発明の方法の第２の形態において、塩は６．５より小さいｐＨの媒体から再結晶することができる。例えばアミン塩はこのような再結晶媒体から再結晶することができ、ついでクラブラン酸の最終生成物である医薬上許容される塩、例えばアルカリ金属塩、例えばクラブラン酸カリウムに、公知の方法、例えば上記のように、例えば２−エチルヘキサン酸カリウムと反応させることにより変換できる。
適当には、この再結晶法において、塩、例えばアミン塩は水性媒体、例えば酸性化した水または水および水混和性有機溶媒、例えばＣ１−７アルキルアルコールの混合液中に溶解できる。好ましくは、溶液濃度は高く、例えば１０〜４０％またはそれ以上であるが、理論的な上限は無いことは明らかである。水性媒体は、最初から６．５よりも小さいｐＨであってもよく、または水溶液を調製した場合にそのｐＨを調節してもよく、例えば、水溶液を酸、適当には鉱酸、例えば硫酸、塩酸または硝酸、あるいは有機酸、例えばカルボン酸、例えばＣ１−７アルカン酸、例えば酢酸により酸性化してもよい。好ましいｐＨは約５．５であるか、またはそれより小さい。
【００１２】
ついで、塩、例えばアミン塩をその水溶液から単離できる。このことは、例えば溶液、例えば水溶液を沈殿化溶媒、例えば水混和性ケトンと混合することにより結晶化して達成できる。適当なケトンは脂肪族ケトン、例えばジ−Ｃ１−７アルキルケトンを含み、アセトンが好ましい。クラブラン酸アミン塩とこのようなケトンとの溶媒和物は公知のものであり、アミン塩はケトン溶媒和物として沈殿できる。例えば、溶液を過剰の、例えば５〜５０倍過剰の沈殿化溶媒、例えばケトンで希釈できる。希釈溶液を冷却することにより、例えば単離できる溶媒和物としての沈殿結晶のアミン塩の収率が改善されうる。
したがって、本発明の方法の第２の形態は、１つまたはそれ以上の不純物、例えばＮ−スクシニルチロシンを含む出発物質のクラブラン酸塩を準備し、その塩を再結晶媒体中で再結晶し、それにより１つまたはそれ以上の不純物の濃度がより低い生成物のクラブラン酸塩を生産する方法であってもよい。
したがって、本発明の方法の第２の形態は、出発物質のクラブラン酸塩を再結晶媒体から再結晶することにより、１つまたはそれ以上の不純物を出発物質のクラブラン酸塩から除去する方法とすることができる。
【００１３】
本発明の方法の第３の形態は、クラブラン酸塩を６．５より小さいｐＨの液体媒体中で調製する調製方法であってもよい。例えば、本発明の方法の第３の形態は、クラブラン酸のアミン塩を、クラブラン酸とアミンとを６．５よりも小さいｐＨので液体媒体中で反応させることにより調製する方法を含む。本発明の方法の第３の形態は、別法または従来の方法により調製されたクラブラン酸アミン塩において生じるよりも、より低い濃度の不純物、例えばＮ−スクシニルチロシンを含むクラブラン酸のアミン塩を調製するために使用できる。
本発明の方法の第３の形態の好ましい具体例において、反応はクラブラン酸を含む有機溶媒相、およびアミン塩を抽出し、６．５またはそれより小さいｐＨである水相の二相系で行う。したがって、適当には、水相はアミンの水溶液または懸濁液、詳細にはターシャリーブチアミンの水性溶液または懸濁液を含みうる。有機溶媒層は、好ましくは、溶媒と水とのいくらかの混合が起こりうるが、実質的に水と不混和性であり、相図の大部分にわたって２相が形成される。
【００１４】
例えば、二相系は溶解したクラブラン酸を含有する有機溶媒相、および分離した水相を含んで確立され、アミン塩が形成されると水相に抽出されるように、適当な混合条件をもって、例えば攪拌しながらまたは液体を乱しながら有機アミンをこの二相系に導入し、例えば水相に注入してもよい。典型的には、有機相は５〜１００ｇ／Ｌ、例えば１０〜４０ｇ／Ｌ、例えば約３０ｇ／Ｌのクラブラン酸の濃度を有してもよい。有機相に関する適当な溶媒は、実質的に水不混和性Ｃ１−７アルキル−Ｃ１−７アルカン酸エステル、例えば酢酸エチルおよび酢酸ターシャリーブチル、およびジ−Ｃ１−７アルキルケトン、例えばメチルイソブチルケトンを含む。約０〜５℃の温度がこの反応に好ましい。適当には、有機溶媒相は、所望により予備精製されていてもよく、例えば濾過および活性炭処理されていてもよいクラブラン酸が形成される発酵ブロスの有機溶媒により抽出された生成物であってもよい。
適当には、高濃度のアミン塩が水相に形成されるように、水相は循環抽出ループによる有機溶媒相からの逆抽出により得ることができる。水相は高濃度、例えば、適当な時間、水性抽出ループの循環により、例えば２５ｗｔ％またはそれ以上に濃縮できる。
【００１５】
一般には、クラブラン酸が水性ブロスから抽出され、かかる有機抽出相を形成する場合、ブロスはｐＨ２．０以下に酸性化される。有機アミンを上記の二相系に制御して添加することにより、水相のｐＨを調節でき、オンラインでモニター観察できる。好ましいｐＨは再び５．５より下である。
ついで、アミン塩を水相から単離してもよい。これは、例えば水溶液と沈殿化溶媒、例えば上記の水混和性ケトンとを混合することによる結晶化により達成でき、この結晶化は上記の再結晶法と類似の方法で行うことができる。
【００１６】
本発明の方法の第４の形態は、クラブラン酸の金属塩をクラブラン酸のアミン塩と金属塩前駆体化合物の間の６．５より小さいｐＨの液体媒体中での反応による生成物として形成する調製方法であってもよい。本発明の方法の第４の形態は、別法または従来の方法により調製されるクラブラン酸の金属塩よりも低濃度の不純物、例えばＮ−スクシニルチロシンを含むクラブラン酸の金属塩を調製するために利用できる。
本発明の方法の第４の形態により調製できる好ましい生成物のクラブラン酸金属塩はアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩、特にクラブラン酸カリウムである。
【００１７】
本発明の方法の第４の形態は、クラブラン酸のアミン塩との反応により医薬上許容されるクラブラン酸塩に変換できる、全ての金属塩前駆体化合物の使用に適していることは明らかである。一般的な群の適当な金属塩前駆体化合物はアルカリ金属カチオンおよびアルカリ土類金属カチオンと塩基性アニオンを含むカウンターアニオン、例えば炭酸水素アニオン、炭酸アニオンまたはリン酸水素アニオン、特に、弱有機カルボン酸、例えば式：Ｒ−ＣＯ２Ｈ（ＲはＣ１−２０アルキル、例えばＣ１−８アルキルである）で示されるアルカン酸のアニオンとの塩を含み、例えば酢酸塩、プロピオン酸塩およびエチルヘキサン酸塩、例えば２−ヘキサン酸塩を含む。これらの一般的群の前駆体化合物の例として、炭酸水素ナトリウムまたはカリウム、リン酸水素カリウムおよび炭酸カルシウムが含まれる。クラブラン酸カリウムに対する好ましい金属塩前駆体化合物は２−エチルヘキサン酸カリウムである。
【００１８】
本発明の方法の第４の形態の反応は、好ましくは水混和性有機溶媒および水の混合物、例えばＣ１−８アルキルアルコール、または該アルコールと水の混合物、例えばイソプロパノール／水混合物中のアミン塩の溶液または懸濁液で行う。特別な要求に適した該溶媒：水混合物の適当な比は実験的に決定してもよく、例えば１〜１０％ｖ：ｖの水、例えば約１〜５％ｖ：ｖの水を含む溶媒：水混合物である。アミン塩は６．０またはそれより小さいｐＨであってもよく、または適当な酸、例えば上記の鉱酸または有機酸によりｐＨを調節できる該溶媒に溶解できる。アミン塩は、適当には０．１〜１．０Ｍ、例えば約０．５Ｍのクラブラン酸基の溶液濃度で存在できる。好ましいｐＨは５．５またはそれ以下、例えば５．５〜５．０である。
アミン塩および前駆体化合物をどのような順序で混合することも本発明の範囲内であるが、好ましくは金属塩前駆体をアミン塩の溶液に加える。前駆体は溶液として、例えばアルコール、例えばイソプロパノール溶液として加えてもよい。この前駆体化合物溶液に対する適当な溶液濃度は０．５〜３．５Ｍ、例えば約２Ｍである。前駆体溶液を、好ましくは撹拌しながらゆっくりと添加することが好ましく、添加後、好ましくは周囲温度より下の温度、例えば０〜５℃に冷却する。
【００１９】
クラブラン酸生成物の金属塩は溶液からの沈殿物として形成できる。溶液からの生成物であるクラブラン酸金属塩の沈殿は、溶液と上記沈殿化剤、例えばイソプロパノールとを混合することにより促進できる。固体生成物を、例えば生成物の濾過および洗浄により反応媒体から単離できる。
各々の上記方法において、上記した媒体のｐＨは、より高いｐＨでの類似方法と比べて、生成物中の１つまたはそれ以上の不純物、例えばＮ−スクシニルチロシンの量を減少させうる。
本発明のこれらの方法は、例えば発酵ブロス中で形成されたような粗クラブラン酸、例えばアミン塩を中間体として用いる時の粗クラブラン酸からのクラブラン酸カリウムの全ての調製法の一部を構成することができる。
この全ての方法はクラブラン酸を含む水性ブロスを酸性する微生物の発酵（ｉ）、クラブラン酸の有機溶媒への抽出（ｉｉ）、クラブラン酸のクラブラン酸のアミン塩への変換（ｉｉｉ）、アミン塩の６．０またはそれより小さい、特に５．５またはそれより小さいｐＨへの曝露（ｉｖ）、アミン塩のクラブラン酸カリウムへの変換（ｖ）の工程を含んでいてもよい。本発明の洗浄および／または再結晶法は、例えば工程（ｉｉｉ）および／または（ｖ）のいずれかまたは両方の生成物として調製されたクラブラン酸塩に適用できる。本発明の調製方法は、例えば上記の予備工程（ｉｉｉ）および／または（ｖ）のいずれかまたは両方に適用できる。
【００２０】
クラブラン酸の医薬上許容される金属塩を含む本発明の方法において、好ましい塩はクラブラン酸カリウムである。
クラブラン酸のアミン塩を含む本発明の方法において、好ましいアミン塩はクラブラン酸のターシャリーブチルアミン塩である。これは、公知の反応（ＥＰ−Ａ−００２６０４４を参照、これは出典明示して本明細書に組み入れる）において、ターシャリーブチルアミンとクラブラン酸との反応により形成でき、容易にアセトン溶媒和物として単離できる。ターシャリーブチルアミン塩およびその溶媒和物の両方は、例えば、ＥＰ００２６０４４Ａに開示されているように、容易にクラブラン酸の医薬上許容される塩、例えばクラブラン酸カリウムに変換できる。しかしながら、本発明の方法は、原則的に、クラブラン酸の医薬上許容される塩、例えばクラブラン酸カリウムへの変換における中間体として利用できることが知られているこれら全てのアミン塩に適用できることは明らかである。したがって、本発明のこれらの方法は、原則的に、これら全てのアミンで有効であることは明らかである。
【００２１】
該アミンおよびこれらの対応するアミン塩の例は、例えば、上記の引用刊行物中に開示されており、例えばアミンが１つより多いアミノ基を有する場合、アミンポリ−例えばジ−クラブラン酸塩を含む。他の適当なアミン塩は上記の刊行物中に参照されているものを含み、例えばターシャリーオクチルアミン、ジエチルアミン、トリ−（低級アルキル）アミン、ジメチルアミン、ＮＮ’−ジイソプロピル−エチレンジアミン、ターシャリー、ターシャリージアミン、例えばＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，２−ジアミノエタン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，６−ジアミノヘキサン、１，２−ジピペリジノエタンおよびジピペリジノメタン、ジアミノエーテル、例えばビス（２−ジメチルアミノエチル）エーテル、ベンズヒドリルアミン、Ｎ，Ｎ’−アルキルエチレンジアミン、例えばＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジエチレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン、１，３−ビス（ジ−メチルアミノ）−２−プロパノール、ベンズヒドリルアミンおよびビス（２−（ジメチルアミノ）エチル）エーテルおよびジイソプロピルエチレンジアミンを含む。
【００２２】
さらに、本発明はいずれの上記方法の生成物、特にクラブラン酸ターシャリーブチルアミンであるクラブラン酸の生成アミン塩を提供する。
さらに、本発明はいずれの上記方法の生成物、特にクラブラン酸カリウムであるクラブラン酸の生成医薬上許容される金属塩を提供する。
これらの生成物は、公知の方法、特に上記のｐＨを有する媒体中で行われる対応する方法で得られる生成物よりも低い不純物、特にＮ−スクシニルチロシンの濃度により特徴付けられる。
【００２３】
次に、実施例を用いて本発明を説明する。
実施例１，２および３は、生成物であるクラブラン酸塩中の不純物の総量が減少することについて述べ、実施例４，５および６は、特定の不純物Ｎ−スクシニルチロシンの減少について述べる。
【００２４】
実施例１：アミン塩結晶化の間のアミン塩の酸性化
３０ｇのターシャリーブチルアミン（「ｔ−ＢＡ」）クラブラン酸塩を水に溶解し、３０％のｐｆａ（すなわち、「純粋な遊離酸（pure free acid）」すなわち、重量：容量によるクラブラン酸基として計算した）溶液を得た。溶液のｐＨを測定し、ｐＨ４．５に約１．１ｍｌの５０％硫酸または濃硝酸で酸性化した。５倍容量のアセトンを加え、混合物を１５分間撹拌した。さらにアセトンを２０分にわたって水性容量の３５倍まで加えた。前述の間、アミン塩溶液を周囲温度に維持した。生成物のｔ−ＢＡ塩を結晶化し、０〜５℃で６０分間冷却し、濾過して収集した。生成物を６００ｍｌのアセトンで洗浄し、減圧下で１２時間乾燥した。この方法を酸を添加することなしに「自然の」ｐＨ、すなわち約ｐＨ７．５で繰り返した。ついで、これらの方法を用いて得られたｔ−ＢＡ塩を公知の方法を用いてクラブラン酸カリウムの生成物に変換し、ｔ−ＢＡ塩の試料を用いて調製されたクラブラン酸カリウム中の総不純物の濃度を以下のように測定した。
【００２５】
【表１】
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【００２６】
実施例２：酸性条件下でのクラブラン酸およびアミンからのクラブラン酸アミン塩の調製
濾過した濃縮発酵ブロスからの１００Ｌのクラブラン酸水性濃縮液（約２０〜４０ｇ／Ｌ）をメチルイソブチルケトン（「ＭＩＢＫ」）中にｐＨ１．５で溶媒抽出した。クラブラン酸が豊富なＭＩＢＫを炭素（１７Ｌ）で処理し、水中に逆抽出し、ｔ−ＢＡの５０％ＭＩＢＫ溶液を制御して注入することによりｐＨ４．５に調節した。ｔ−ＢＡ添加速度を制御することにより、水相のｐＨを定め、ｐＨ４．５およびｐＨ５．４を分離実験において用いた。一旦、逆抽出水溶液を適当な結晶化濃度に近づけ、１００ｍｌのアリコートを３５倍容量のアセトンを添加することにより結晶化し、沈殿生成物を実施例１のように単離した。その後に結晶化したアミンをカリウム塩に変換し、不純物の総濃度を分析した。ついでこれをｐＨ５．４の水相で繰り返した。ｐＨ４．５を用いることにより、クラブラン酸カリウム中の総不純物の濃度はｐＨ５．４の濃度と比べて５０％減少した。
【００２７】
実施例３：アミン塩のクラブラン酸カリウムへの変換
２５ｇのｔ−ＢＡクラブラン酸塩をイソプロパノール（８１ｍｌ）および蒸留水（１０ｍｌ）の混合物中に溶解し、氷酢酸を用いてそのｐＨをｐＨ６．８にまで減少させた。撹拌する間、さらに１４５ｍｌのイソプロパノールを添加し、イソプロパノール中に溶解した５９．５ｍｌの２−エチルヘキサン酸カリウム（１．９２Ｎ）を２０分にわたって滴下した。このように形成したスラリーを１２０分間氷浴で０〜５℃で撹拌し、濾過した。クラブラン酸カリウムケークをアセトン（１２０ｍｌおよび２００ｍｌ）で洗浄し、減圧下、窒素ブリードで乾燥した。添加する氷酢酸の量を変えることにより、溶解溶液のｐＨを変化させた。クラブラン酸カリウム（Ｋｃｌａｖ）における不純物の総量およびクラブラン酸カリウムの総収率に対する効果を示す結果を以下の表に示す。
【００２８】
【表２】
0004954421.tif 000003
＊水の容量を用いる酢酸の添加容量を補うために減らした。
【００２９】
上記実施例３に記載の実験を、特定のｐＨを達成するために酢酸以外の他の酸を用いて繰り返し、例えば塩酸を用いた場合も同様の結果であった。
【００３０】
実施例４：アミン塩結晶化の間のアミン塩の酸性化
３０ｇのターシャリーブチルアミン（「ｔ−ＢＡ」）クラブラン酸塩を水に溶解し、３０％のｐｆａ（すなわち、「純粋な遊離酸」すなわち、重量：容量によるクラブラン酸基として計算した）溶液を得た。溶液のｐＨを測定し、ｐＨ４．５に約１．１ｍｌの５０％硫酸または濃硝酸で酸性化した。５倍容量のアセトンを加え、混合物を１５分間撹拌した。さらにアセトンを２０分にわたって水性容量の３５倍まで加えた。前述の間、アミン塩溶液を周囲温度に維持した。生成物のｔ−ＢＡ塩を結晶化し、０〜５℃で６０分間冷却し、濾過して収集した。生成物を６００ｍｌのアセトンで洗浄し、ついで、減圧下で１２時間乾燥した。この方法を酸を添加することなしに「自然の」ｐＨ、すなわち約ｐＨ８．５で繰り返した。ついで、これらの方法を用いて得られたｔ−ＢＡ塩中のＮ−スクシニルチロシンの濃度を以下のように測定した。
【００３１】
【表３】
0004954421.tif 000004
【００３２】
実施例５：酸性条件下でのクラブラン酸およびアミンからのクラブラン酸アミン塩の調製
濾過した濃縮発酵ブロスからの１００Ｌのクラブラン酸水性濃縮液（約２０〜４０ｇ／Ｌ）をメチルイソブチルケトン（「ＭＩＢＫ」）中にｐＨ１．５で溶媒抽出した。クラブラン酸が豊富なＭＩＢＫを炭素（１７Ｌ）で処理し、水中に逆抽出し、ｔ−ＢＡの５０％ＭＩＢＫ溶液を制御して注入することによりｐＨ４．５に調節した。ｔ−ＢＡ添加速度を制御することにより、水相のｐＨを定め、ｐＨ４．５およびｐＨ５．４を分離実験において用いた。一旦、逆抽出水溶液を適当な結晶化濃度に近づけ、１００ｍｌのアリコートを３５倍容量のアセトンを添加することにより結晶化し、沈殿生成物を実施例１のように単離した。その後に結晶化したアミンをカリウム塩に変換し、Ｎ−スクシニルチロシンの濃度を分析した。ついでこれをｐＨ５．４の水相で繰り返した。ｐＨ４．５を用いることにより、クラブラン酸カリウム中のＮ−スクシニルチロシン不純物の濃度はｐＨ５．４の濃度と比べて２６倍減少した。
【００３３】
実施例６：アミン塩のクラブラン酸カリウムへの変換
２５ｇのｔ−ＢＡクラブラン酸塩をイソプロパノール（８１ｍｌ）および蒸留水（１０ｍｌ）の混合物中に溶解し、氷酢酸を用いてそのｐＨをｐＨ６．８にまで減少させた。撹拌する間、さらに１４５ｍｌのイソプロパノールを添加し、イソプロパノール中に溶解した５９．５ｍｌの２−エチルヘキサン酸カリウム（１．９２Ｎ）を２０分にわたって滴下した。このように形成したスラリーを１２０分間氷浴で０〜５℃で撹拌し、濾過した。クラブラン酸カリウムケークをアセトン（１２０ｍｌおよび２００ｍｌ）で洗浄し、減圧下、窒素ブリードで乾燥した。添加する氷酢酸の量を変えることにより、溶解溶液のｐＨを変化させた。クラブラン酸カリウム（Ｋｃｌａｖ）におけるＮ−スクシニルチロシン不純物の量およびクラブラン酸カリウムの総収率に対する効果を示す結果を以下の表に示す。
【００３４】
【表４】
0004954421.tif 000005
＊水の容量を用いる酢酸の添加容量を補うために減らした。
【００３５】
上記実施例３に記載の実験を、特定のｐＨを達成するために酢酸以外の他の酸を用いて繰り返し、例えば塩酸を用いた場合も同様の結果であった。