(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式を有することを特徴とするテトラピロール化合物。
【化１】
0004885354.tif 000006
（式中、R1は
【化２】
0004885354.tif 000007
-CONHフェニレンCH2DTPAであり、ここで、R9は-OR10であり、R10は炭素原子1〜6個を有する低級アルキルであり; R2は-CH3であり、R5は-CH2CH3であり、R3とR4は共に共有結合を形成するか、又はR2とR3は共に＝Oを形成し、R4は-CH2CH3であり、R5は-CH3であり; R6は-NR11-又は共有結合であり; R6が-NR11-である場合、R7は＝Oであり、R6が共有結合である場合、R7は水素であり; R8は-(CH2)2CO2CH3又は-(CH2)2CONHフェニレンCH2DTPAであり;R11は炭素原子1〜6個を有する低級アルキル又は-CH2CONHフェニレンCH2DTPAである; 但し、R1、R8又はR11のうちの１つだけが、それぞれの基に対して規定される、-CONHフェニレンCH2DTPA、-(CH2)2CONHフェニレンCH2DTPA 又は-CH2CONHフェニレンCH2DTPAのいずれかであり、Raがメチル基であり、そして、(CH2)2-CONHフェニレンCH2DTPAが、
【化３】
0004885354.tif 000008
で示され、かつ、-CONHフェニレンCH2DTPAが、
【化４】
0004885354.tif 000009
で示される。）
【請求項２】
R1、R8又はR11が、それぞれの基に対して規定される、-CONHフェニレンCH2DTPA、-(CH2)2CONHフェニレンCH2DTPA 又は-CH2CONHフェニレンCH2DTPAのいずれかである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
R8が、-(CH2)2CONHフェニレンCH2DTPAである、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
R2が、-CH3であり、R5が-CH2CH3である、請求項３記載の化合物。
【請求項５】
R6が、-NR11-である、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
R6が、-NR11-であり、R11が、ヘキシルである請求項３記載の化合物。
【請求項７】
請求項３記載の化合物のインジウム111錯体。
【請求項８】
請求項３記載の化合物のガドリニウム(III)錯体。
【請求項９】
該化合物が、R1は、
【化５】
0004885354.tif 000010
であり、R6は、共有結合であり、そして、R8は、以下の式、
【化６】
0004885354.tif 000011
で示される111InアミノフェニルDTPAであり、Inが、111Iｎであり、そして、R9が、O-ヘキシルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
該化合物が、R1は、
【化７】
0004885354.tif 000012
であり、R6は、共有結合であり、そして、R8は、以下の式、
【化８】
0004885354.tif 000013
で示されるGd(III)アミノフェニルDTPAであり、Gdが、Gd(III)であり、そして、R9が、O-ヘキシルである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】
該化合物が、R1は、
【化９】
0004885354.tif 000014
であり、R2は-CH3であり、R5は-CH2CH3であり、R3とR4は共に共有結合を形成し、R6が-NR11-であり、R7は＝Oであり、そして、R8は、以下の式、
【化１０】
0004885354.tif 000015
で示され、R9が、O-ヘキシルであり、R11がヘキシルであり、Gdが、Gd(III）である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１２】
該化合物が、R1は、次式、
【化１１】
0004885354.tif 000016
で示され、R2は-CH3であり、R5は-CH2CH3であり、R3とR4は共に共有結合を形成し、R6が-NR11-であり、R7は＝Oであり、R8は、-(CH2)2CO2CH3 であり、R11がヘキシルであり、Gdは、Gd(III）である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１３】
該化合物が、R1は、-CH2CH3であり、R2とR3は共に＝Oを形成し、R4は-CH2CH3であり、R5は-CH3であり、R6は-NR11-であり、R7は＝Oであり、R8は、以下の式、
【化１２】
0004885354.tif 000017
で示され、R11がヘキシルであり、Gdは、Gd(III)である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１４】
請求項１０記載の化合物の調製方法であって、
メチル3-(ヘキシルオキシ)エチルフェオフォルビドaをLiOH、メタノール及びテトラヒドロフランの水溶液で加水分解して対応するカルボン酸を得る工程;
該カルボン酸と4-アミノフェニルDTPAペンタ-tert-ブチルエステルとを反応させてそのtert-ブチルアミノフェニルDTPA類縁体を得る工程;
該DTPA類縁体とトリフルオロ酢酸とを反応させてそのtert-ブチルエステル基をカルボン酸基に変換する工程;
ガドリウニウム６水和物の溶液と反応させる工程;
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１１記載の化合物の調製方法であって、
N-ヘキシルプルプリンイミドのヘキシルエーテル誘導体のｄ−環におけるCH2CH2COOCH3基のメチルエステル基を、対応するCH2CH2COOHカルボン酸に加水分解する工程;
得られたカルボキシプルプリンイミドとアミノフェニルDTPAペンタ-tert-ブチルエステルの溶液とを反応させる工程;
得られた結合体とトリフルオロ酢酸とを反応させてtert-ブチルエステル基を、カルボン酸に変換する工程; 及び
得られたカルボン酸と塩化ガドリニウムとを反応させて所望の化合物を得る工程;
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１３記載の化合物の調製方法であって、
3ビニルプルプリンイミド7を水素添加してメソ-N-ヘキシルプルプリン-18-イミドを得る工程;
該メソ-N-ヘキシルプルプリン-18-イミドとオスミウムテトロキシド、ピリジン及びH2Sとを反応させてvic-ジヒドロキシバクテリオクロリンを得る工程;
該vic-ジヒドロキシバクテリオクロリンと硫酸とを反応させて7-ケトバクテリオクロリンを得る工程;
該7-ケトバクテリオクロリンのメチルエステル基をカルボキシ基に加水分解する工程;
そのカルボキシ7-ケトバクテリオクロリンとアミノフェニルDTPAペンタ-tert-ブチルエステルとを反応させる工程;
得られた生成物とトリフルオロ酢酸とを反応させて対応するカルボン酸DTPA類縁体を得る工程; 及び
そのカルボキシDTPA類縁体と塩化ガドリニウムとを反応させて所望の化合物を得る工程;
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項９記載の化合物の調製方法であって、
次式、
【化１３】
0004885354.tif 000018
で示されるHPPH-アミノフェニルDTPAを、塩化111In(III)と反応させることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本出願は、1999年12月23日出願の暫定特許出願第60/171,961号の優先権を主張する。
【０００２】
【従来の技術】
がんは、米国において最も一般的な死亡原因の第２位であり、全死亡率の20％を占めている。これまでは、手術で切除する、放射線で攻撃する、又は化学療法で殺滅するという野蛮な力でがん細胞を制圧する医学が試みられてきた。しかしながら、あまりにもしばしば数個の細胞が猛攻撃を切り抜け、しばしば数年後に治療を受けつけない腫瘍へ成長する。腫瘍が初期の段階で診断され得る場合には、がん患者の生存率は確実に上昇する。従って、効率のよい腫瘍診断用イメージング剤を開発する努力が我々の及び他の様々な研究室で現在行われている。
長い間、ヒト解剖学の生体内イメージングは、放射性原子（核医学）又は非放射性ヨウ素化造影剤（様々なx線試験法やコンピュータ断層撮影法）の静脈内投与に依存していた。しかしながら、ここ10年間は磁気共鳴画像法（MRI）がイメージングの重要な役割を引き受けてきた。x線又はコンピュータ断層撮影法と異なり、MRは常磁性イオン、特にガドリニウム[Gd(III)]を含有する造影剤を用いるものである。常磁性イオンは、MRスキャナでそれ自体は『見られる』ことはない。むしろ、体内組織の水に影響を及ぼし、磁場に置かれる場合に組織によって出される『信号』を増強する。
【０００３】
一般的には、MR造影剤は疾患特異的でも臓器特異的でもない。静脈内に注入されると、たいていは糸球体ろ過によって腎臓から速やかに排泄される。数種の肝臓特異的造影剤がつくられたが、他の臓器を巧く標的にすることがなく、腫瘍結合活性MR造影剤は今日まで用いられていない。
診断用腫瘍イメージングにおいては不明の原発性腫瘍や転移疾患の検出が重要であることから、腫瘍結合活性造影剤が予後、治療の選択、及び患者の成果に大きく関係する。治療と好転の全課題に影響する。
最近、潜在的磁気共鳴画像法としてある種のGd系巨環状化合物（例えば、Z.D. Grossman & S.F. Rosebrough, Clinical Radioimmunoimaging, Grune & Stratton Inc., 1988, この文献の記載は本願明細書に含まれるものとする）及び放射性医薬品として99mTc又は111Inキレート化合物（例えば、H.D. Burns, R.F. Gibson, R.F. Dannals & P.K.S. Siegel(Eds.); Nuclear imaging in Drug Discovery, Development and Approval, Birkhauser, 1993, G.B. Saha, Fundamentals of Nuclear Pharmacy, Springer-Verlag, 1992, これらの文献の記載は本願明細書に含まれるものとする）に文献が集中してきた。
【０００４】
1988年に[Gd(DTPA)(H2O)]2-が承認されたので、30トンのガドリニウムが世界中の何百万人という患者に投与された。MRI例の約30％には造影剤が含まれ、この割合は新規な物質や適用が出てくるにつれて高くなると予想される。ガドリニウムは、医学研究にも余地が見出されている。基礎的科学文献には毎年600件を超えるガドリニウムに対する文献が出てくる。他のタイプのMRI造影剤、即ち、鉄粒子に基づく物質やマンガン(II)キレート化合物が承認されたが、Gd(III)は依然として支配的な物質である。この理由としては、MRI現出の問題やGdキレート化合物の種類が含まれる。MRIの信号強度は、主に、水のプロトンの縦緩和速度、1/T1、と横緩和速度、1/T2の局部的な値から生じる。信号は、1/T1が大きくなるにつれて大きくなり、1/T2が大きくなるにつれて小さくなる傾向がある。1/T1の変化を強調するパルスシーケンスは、1/T1周期と呼ばれ、逆はT2周期スキャンに言えることである。造影剤は、1/T1と1/T2双方をそれらの種類や印加磁場によっていろいろな程度まで高めるものである。1/T1と1/T2をほぼ同じ量だけ高めるガドリニウム(III)のような物質は、組織内の1/T1の変化％が1/T2より非常に大きいことからT1周期画像を用いて最も良く可視化する。縦緩和値及び横緩和値r1及びr2は1ミリオモルの物質につきそれぞれ1/T1及び1/T2の増加を意味する。T1作用物質のr1/r2比は通常１〜２であり、酸化鉄粒子のようなT2作用物質のその値は10以上ほどである。MRIの進展には、T1作用物質、つまり、ガドリニウム(III)が非常に好ましい。分解能の高い高速スキャンには急速高周波パルス標識が必要であり、各ボクセル内のMR信号が飽和されるので、一般的にはT1周期である。
T1作用物質は、パルス間の縦磁化の良好な部分を回復させることによりこの飽和を軽減する。同時に、良好なT1作用物質は局在している組織コンパートメントのバルク磁化率にほとんど影響しないので、イメージアーチファクト及び/又は信号強度の減少をまねき得る不均等をできるだけ少なくする。
【０００５】
ガドリニウム(III)キレート化合物の他の重要かつ興味深い特性は、その安定性である。体内でキレート化したままであり、そのまま排泄される。例えば、DTPAのような既製のリガンドは、安定な錯体を形成するので、物質が生体内にある間、検出可能に解離しない。サイズが大きいために、ランタニドは水性媒体中高配位数を容易にする傾向がある。現在、MRIでの使用に承認されたすべてのGd(III)系キレート化合物は、９配位錯体であり、リガンドが金属中央で８結合部位を占め、９番目の配位部位は溶媒の水分子によって占められている。
放射性医薬品は、放射性核種を含む薬剤であり、診断又は治療に核医学部門で通常用いられている。放射性医薬品は、主な２つ種類: 生体内分布が化学的性質と物理的性質によって独占的に決められるもの（ヨウ素-131のように）及び最後の分布が生物学的相互作用によって決められるもの（放射能標識抗体のように）に分類し得る。後者の種類としては、標的特異的放射性医薬品が含まれる。標的特異的放射性医薬品は、４つの部分: 標的分子、リンカー、キレートリガンド及び放射性核種からなる。標的分子は、媒体(vehicle)として疾患組織内の標的部位に放射性核種を運ぶ働きをする。放射性核種は、放射線源である。
【０００６】
金属放射性核種は、種々のキレート剤で金属のまわりの配位環境を変えることにより新規な放射性医薬品を設計する多くの機会を与える。慣用の核医学に用いられるほとんどの放射性医薬品は、半減期が短く（６時間）かつγ放射が理想的である（140 KeV）ことから99mTc標識されている。ミリキュリー量は、患者に過度に放射せずに送達し得る。単一エネルギー140 KeVプロトンは、平行にしやすく、優れた空間分解能の画像を与える。更に、99mTcは、99Mo-99mTcジェネレータから滅菌した発熱物質を含まない無担体状態で容易に得られる。その６時間半減期は、標識放射性医薬品の合成、純度分析、患者への注入、及び画像化に十分長いが、放射線量をできるだけ少なくするのには十分短い。巧く用いられる他の放射性核種は、111Inである。ソマトスタチン受容体ポジティブ腫瘍の診断に用いられる薬剤IN-DTPA-オクトレオチド（OCTREOSCAN）の成功は、新規な標的特異的放射性医薬品の探究を強化した。99mTcに比べて、111Inの半減期は、非常に長い（72時間）。
【０００７】
ある種のポルフィリンやテトラピロール関連化合物は、悪性腫瘍や他の過剰増殖組織、例えば、過剰増殖血管に正常組織より非常に高濃度で局在する傾向があるので、光力学治療（PDT）による様々なタイプのがんや他の過剰増殖組織の治療にツールとして有効である（T.J. Dougherty, C.J. Gomer, B.W. Henderson, G. Jori, D. Kessel, M. Kprbelik, J. Moan, Q. Peng, J. Natl. Cancer Inst., 1998, 90, 889, この文献の記載は本願明細書に含まれるものとする）。しかしながら、PHOTOFRIN(登録商標)（腫瘍の治療に世界的に承認されている）を含むほとんどのポルフィリン系光増感剤は、正常組織から徐々に除去されるので、患者は治療後かなりの時間日光にあたるのを避けなければならない。最近、多くのクロロフィル類縁体が合成され、PDTの光増感剤としての使用が評価された（例えば、R.K. Pandey, D. Herman, Chemistry & Industry, 1998, 739, この文献の記載は本願明細書に含まれるものとする）。これらの光増感剤の中でピロフェオフォルビド-aのヘキシルエーテル誘導体9（HPPH）（例えば、R.K. Pandey, A.B. Sumlin, S. Constantine, M. Aoudia, W. R. Potter, D.A. Bellnier, B.W. Henderson, M.A. Rodgers, K.M. Smith & T.J. Dougherty, Photochem, Photobiol., 1996, 64, 194; B.W. Henderson, D.A. Bellnier, W.R. Graco, A. Sharma, R.K. Pandey, L.A. Vaughan, W.R. Weishaupt & T. J. Dougherty, Cancer Res., 1997, 57, 4000; R. K. Pandey, T.J. Dougherty, 米国特許第5,198,460号, 1993; 同第5,314,905号, 1994; 同第5,459,159号, 1995, これらの文献及び明細書の記載は本願明細書に含まれるものとする）及びプルプリン-18-N-ヘキシルイミドのヘキシル-エーテル誘導体10（例えば、R.K. Pandey, W.R. Potter & T.J. Dougherty, 米国特許第5,952,366号, 1999, この明細書の記載は本願明細書に含まれるものとする）は、PHOTOFRIN(登録商標)と比べて腫瘍摂取率が高く、皮膚光毒性が低い。HPPHは、現在、ロズウェルパーク癌研究所、ニューヨーク州バッファローで光力学治療による様々なタイプのがんの治療にI/II相臨床試験中であり、結果は有望である。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ポルフィリン又はクロリン又はテトラピロール関連化合物とテクネチウム99、ガドリニウム、インジウム111や放射性ヨウ素のような放射性元素との化学的組合わせである組成物を含んでいる。元素がカチオンをつくり得る場合、化合物は、一般的には、ポルフィリン又はクロリン構造を有するキレート化合物である。元素がアニオンをつくる場合、化合物は、一般的には、放射性元素をポリフィリン又はクロリン構造に直接化学的に結合したものである。
本発明に従って変更される場合に、放射性元素を含む化合物を形成し得るポルフィリン又はクロリン構造の例は、例えば、米国特許第5,756,541号; 同第5,028,621号; 第4,866,168号; 第4,649,151号; 第5,438,071号; 第5,198,460号; 第5,002,962号; 第5,093,349号; 第5,171,741号; 第5,173,504号; 第4,968,715号; 第5,314,905号; 第5,459,159号; 第5,770,730号; 第5,864,035号; 第5,190,966号; 及び第5,952,366号に記載され、これらのすべての明細書の記載は本願明細書に含まれるものとする。
本発明は、更に、腫瘍や加齢関連黄斑変性症の湿潤形態と関連がある新生血管増殖のような過剰増殖組織の診断用イメージングのために本発明の化合物を用いる方法を含んでいる。
予想外に、上記のポルフィリン又はクロリンは、注入時に放射性元素を過剰増殖組織の細胞へ運び、MRイメージングにおいて腫瘍組織によって生じる信号を劇的に増強する。
ポルフィリン化合物又はクロリン化合物（バクテリオクロリンを含む）は、過剰増殖組織細胞（例えば、腫瘍）内に選択的に侵入及び保持させることができるテトラピロール基本構造が残っているならば、置換又は修飾によって他の形に化学的に変化させることができることは理解されるべきである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明の化合物は、一般的には、下記式を有する。
【００１０】
【化１４】
0004885354.tif 000002
（式中、Ｒ１は
【化１５】
0004885354.tif 000003
【００１１】
-CONHフェニレンCH2DTPAであり、ここで、Ｒ９は-OＲ１０であり、Ｒ１０は炭素原子1〜6個を有する低級アルキルであり; Ｒ２は-CH3であり、Ｒ５は-CH2CH3であり、Ｒ３とＲ４は共に共有結合を形成するか、又はＲ2とＲ3は共に＝Oであり、Ｒ4は-CH2CH3であり、Ｒ5は-CH3であり; Ｒ6は-NＲ11-又は共有結合であり; Ｒ6が-NＲ11-である場合、Ｒ7は＝Oであり、Ｒ6が共有結合である場合、Ｒ7は水素であり; Ｒ８は-(CH2)２CO2CH3又は-(CH2)2CONHフェニレンCH2DTPAであり; Ｒ11は炭素原子1〜6個を有する低級アルキル又は-CH2CONHフェニレンCH2DTPAである; 但し、Ｒ1、Ｒ8又はＲ11のうちの１つだけが、それぞれの基に対して規定される、-CONHフェニレンCH2DTPA、-(CH2)2CONHフェニレンCH2DTPA 又は-CH2CONHフェニレンCH2DTPAのいずれかであり、Raがメチル基であり、そして、(CH2)2-CONHフェニレンCH2DTPAが、
【００１２】
【化１６】
0004885354.tif 000004
【００１３】
で示され、かつ、-CONHフェニレンCH2DTPAが、
【００１４】
【化１７】
0004885354.tif 000005
【００１５】
で示される。）
【００２２】
【発明の実施の形態】
本発明の目的は、所望の結合体（Gd又は放射性核種とキレート化した）を腫瘍に送達する媒体としてこれらの光増感剤を用いることであった。キレート化合物は、一方にGdを結合し、もう一方に標的特異的媒体を結合することから『二官能性』である。キレート化合物は、金属に配位する適切な結合基をもつ多座配位リガンドである。好適実施態様においては、本発明は、
MRIによる腫瘍診断剤として親油性が変化しうるクロリン又はバクテリオクロリン系Gd(III)アミノフェニルDTPA結合体の創製、及び
クロリン又はバクテリオクロリン系111InアミノフェニルDTPAの創製、及び
腫瘍診断剤として親油性が変化しうる対照の99mTc N2S2結合体の創製、
を含んでいる。
目標は、（ｉ）はじめは光力学治療（PDT）用に設計された腫瘍結合活性ポルフィリンにガドリニウムを巧く結合させ、24時間の著しい腫瘍取込みが腫瘍によって生じた『信号』を増強し、よってMRイメージングに関する特徴を劇的に増強すること及び（ii）核医学用診断剤として111In標識関連放射性医薬品及び対照の99mTc N2S2結合体を調製することであった。
本発明は、MR造影剤及び原発性悪性腫瘍や転移疾患の診断用放射性医薬品としてある種の修飾したジテトラトリエチルアミンペンタカルボン酸（DTPA）結合体の合成と適用を含んでいる。
【００２３】
【実施例】
下記の実施例は、磁気共鳴イメージング剤の合成及び使用の例を記載するものである。
HPPH-Gd(III)アミノフェニルDTPA 14の合成:
標記化合物の調製として、文献の手順に従ってメチルフェオフォルビド-a 6a（スピルリナ・アルゲ(Spirulina Algae)から抽出したもの）からピロフェオフォルビド-a 6bを得た。次に、我々の実験室で開発した方法に従ってメチル3-(ヘキシルオキシ)エチル類縁体9aへ変換した。メチルエチル官能性をLiOH/メタノール/THFの水溶液で加水分解して対応するカルボン酸9bを定量的収量で得た。9bとカルボジイミド法（R.K. Pandey, F.Y. Shiau, A.B. Sumlin, T.J. Dougherty & K.M. Smith, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4, 1263, この文献の記載は本願明細書に含まれるものとする）による図４の方法に従って調製した4-アミノフェニルDTPAペンタ-tert-ブチルエステルとを反応させて対応する類縁体12を57％の収率で得た（図５及び図６）。構造をNMRと質量分析法の分析により確認した。  Gd(III)錯体を調製する前に、結合体のtert-ブチル基をトリフルオロ酢酸と反応させることにより対応するカルボン酸に変換した（収率100％）。Gd(III)錯体14の調製として、結合体をピリジンに溶解し、塩化ガドリニウム６水和物を脱イオン水に溶解した。混合液を室温で２時間撹拌した。反応の完了後（TLCでモニタした）、ピリジンを高真空中で除去した。残留物を水洗して過剰の塩化ガドリニウムを除去し、減圧下で乾燥し、標記化合物を92％の収率で単離した。最終生成物の構造を質量分析により確認した。
【００２４】
プルプリン-18-イミド-Gd(III)アミノフェニルDTPA 16の合成:
メチルフェオフォルビド-a 7aをN-ヘキシルプルプリンイミドのヘキシルエーテル誘導体に70％の収率で変換した。次に、9bの調製に記載された方法に従ってメチルエステル基を対応するカルボン酸10に加水分解した。次に、図7に示された反応順序に従ってプルプリンイミド10とアミノフェニルDTPAペンタtert-ブチルエステルとを反応させ、中間結合体を45％の収率で単離した。更に、トリフルオロ酢酸、次に、GdCl3・6H2Oと反応させてGd(III)錯体16を＞90％の収率で得た。結合体の構造をNMRと質量分析により確認した。
巨環状化合物におけるGd(III)結合体の位置の影響を調べる我々に試みにおいて、常法によりプルプリンイミド７を関連のカルボン酸類縁体11に変換した。10とアミノフェニルDTPA ５とを反応させてGd(III)アミノフェニルDTPA結合体15、プルプリン18-3-デビニル-3-[4'-アミドフェニルガドリニウム(III)DTPA]-N-ヘキシルイミドを得る。
この一連の化合物において、分子の全体の親油性は、アルキルエーテル置換基及び/又はN-置換アルキル鎖の炭素鎖の長さを変えることにより変化させ得る。従って、これらの化合物は、腫瘍取込みと親油性の相関を調べるユニークな機会を与える。
【００２５】
バクテリオクロリン系Gd(III)アミノフェニルDTPA 22の合成:
バクテリオクロリンは、相互に対角の２つのピロール単位が還元されている種類のテトラピロールである。N-ヘキシルプルプリンイミド７から出発して、我々は図９に示される反応順序に従ってケトバクテリオクロリン20を調製した。我々の方法においては、３位にビニル基を含むプルプリンイミド７を、触媒としてPd/Cを用いて水素と反応させることにより3-デビニル-3-エチル類縁体17（メソ-N-ヘキシルプルプリン-18-イミドとも名付けられている）に変換した。次に、オスミウムテトロキシド/ピリジン/H2Sと反応させ（A.N. Kozyrev, T.J. Dougherty & R.K. Pandey, Tetrahedron Lett., 1996, 37, 3781, この文献の記載は本願明細書に含まれるものとする）、対応するvic-ジヒドロキシバクテリオクロリン18をジアステレオマーの混合物として75％の収率で単離した（trans-還元環Dに対して上又は下のcis-ヒドロキシ基）。ジアステレオマー混合物としてのジヒドロキシ類縁体をピナコール-ピナコロン反応条件下に硫酸で処理し（R.K. Pandey, T. Tsuchida, S. Constantine, G. Zheng, C. Medforth, A Kozyrev, A. Mohammad, M.A.J. Rodgers, K.M. Smith & T.J. Dougherty, J. Med. Chem., 1997, 40, 2770, この文献の記載は本願明細書に含まれるものとする）、それぞれ７位（化合物20）か又は８位（化合物19）にケト基を含むケトバクテリオクロリンを70％の収率で単離した。これらのバクテリオクロリンの中で、7-ケト類縁体20がRIF腫瘍を移植したマウスモデルにおいて生体内反射分光法で求めた腫瘍取込みが大きかった（図３参照されたい）。バクテリオクロリン19及び20の構造をNMRと質量分析法の分析により確認した。
本発明の次の工程は、プルプリンイミド20のメチルエステル基をカルボン酸21に加水分解した後、上記の関連HPPH類縁体とプルプリンイミド類縁体の調製の方法に従って対応する4-アミノフェニルDTPA結合体22に変換することであった。
【００２６】
HPPH系ビスアミノエタンチオール結合体27の合成:
99mTc標識放射性医薬品の調製について、2種のアミノビスエタンチオール23と24を我々の実験室で開発した方法に従って調製した（G. Li, Q. Ma, B. Ma, Z.D. Grossman & R.K. Pandey, Heterocyclics, 1999, 印刷中; G. Li, B. Ma, J.R. Missert, Z.D. Grossman & R.K. Pandey, Heterocyclics, 印刷中, これらの文献の記載は本願明細書に含まれるものとする）。N2S2結合体26の合成について、HPPHとN2S2キレート化合物23とを反応させ、チオ保護HPPH結合体25を40％の収率で単離した。続いて、チオールをトリエチルシラン/TFAで脱保護して対応するビスアミノエタンチオール26を定量的収率で得た。新規に合成された化合物の構造をNMRと質量分析法の分析で確認した。
Kungと共同研究者の方法に従ってSn(II)グルコヘプトネートで還元した99mTcペルテクナテートとのリガンド交換反応によりTc-99m錯体27を調製した（S.K. Meegalla, K. Plossl, M-P. Kung, S. Chumpradit, D.A. Stevenson, S.A. Kushner, W.T. McElgin, P.D. Mozley & H.F. Kung. J. Med. Chem., 1997, 40, 9, この文献の記載は本願明細書に含まれるものとする）。放射能標識収率は＞80％であった。Tc-99m錯体の純度は、クロマトグラフィーにより＞95％であった。
【００２７】
HPPH系111InアミノフェニルDTPA結合体28の合成:
標記化合物の調製については、111InDTPA-葉酸塩の調製についてLowと共同研究者によって記載された方法（S. Wang J. Juo, D.A. Lantrip, D.A. Waters, C.J. Mathias, W.A. Green, P.L. Fuchs & P.S. Low, Bioconjugate Chem., 1997, 8, 673, この文献の記載は本願明細書に含まれるものとする）に従ってHPPH-アミノフェニルDTPA 13と塩化111In(III)とを反応させ、111In標識化合物を82％の収率で得た。
【００２８】
体内腫瘍MRイメージング:
HPPH-Gd(III)アミノフェニルDTPA結合体14:
GD標識HPPHの合成に従って、一組の３匹のラットに静脈内に注射し、注射の１時間後、及び２時間後に直ちに実験してGd-HPPHが現在標準的な造影剤（マグナビスト(Magnavist)又はGd-DTPA）より長い循環が保たれるかを確かめた。
マグナビストは16〜20分の循環の半減時間で糸球体ろ過によって哺乳動物の循環から速やかに除去されるが、新規に合成された造影剤Gd-HPPHは１時間の脳循環が明らかであった。続いて、Gd-HPPHが腫瘍結合活性であるかを確かめるために、皮下に移植したワード結腸がんをもつ１匹のラットを静脈内Gd-HPPHの24時間後に画像化した。２番目の腫瘍をもつラットをマグナビストの注射の24時間後に画像化した（図１及び図２を参照されたい）。Gd-HPPH注入後の腫瘍信号の増強から、Gd-HPPH 14がMR用造影剤として可能性があることが示されたことは明らかである。HPPH（クロロフィル-誘導物）は媒体であり、これによってGd錯体が腫瘍へ運ばれる。Gdキレート化合物をHPPHに付加すると、一重項酸素生成能を形成する能力を妨害しないので、この造影剤は二重の作用: MRイメージングに関する局在化の増強（診断）、続いて腫瘍損傷における光照射の特定（治療）に可能性がある。また、腫瘍選択性が優れかつ蛍光が強いことから、新規に合成された結合体はIRイメージングにも使用し得る。また、本発明で合成及び提唱したクロリン及びバクテリオクロリンに結合したインジウム又はTc-99mのような他の放射性核種（後者はN2S2リガンドによって結合する）は、核医学のイメージング剤としての可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【図１】市販の造影剤を用いたMR画像制御とコントラスト強調剤を用いていないMR画像を示す図である。市販の造影剤を用いた画像の腫瘍領域は、ほとんど又は全く強調されていない。
【図２】本発明のGd-HPPH造影剤を用いたMR画像と造影剤なしのMR画像を示す図である。本発明の造影剤を用いてつくられた画像は、腫瘍領域の劇的な画像強調を示している。
【図３】図３に示される化合物の反射分光法による腫瘍と筋肉の取込みの生体内測定のグラフである。
【図４】  4-アミノフェニルDTPAペンタ-tert-ブチルエステルの化学合成を示すスキームである。
【図５】メチルフェオフォルビド-aからカルボキシ3-(ヘキシルオキシ)エチルピロフェオフォルビド-aの化学合成を示すスキームである。
【図６】カルボキシ3-(ヘキシルオキシ)エチルピロフェオフォルビド-aと4-アミノフェニルDTPAペンタ-tert-ブチルエステルからHPPH-アミノフェニルDTPAを化学合成し、続いて三塩化ガドリニウム(III)と反応させてHPPH-アミノフェニルDTPAを形成する工程を示すスキームである。
【図７】プルプリン-18-イミドGd(III)アミノフェニルDTPA（16）の化学合成を示すスキームである。
【図８】プルプリン７からGd(III)アミノフェニルDTPA錯体の調製を示すスキームである。
【図９】バクテリオクロリン系Gd(III)アミノフェニルDTPAの調製を示すスキームである。
【図１０】ビスアミノエタンチオール化合物23の図式である。
【図１１】ビスアミノエタンチオール化合物24の図式である。
【図１２】  HPPH系ビスアミノエタンチオール結合体27の調製を示すスキームである。
【図１３】  HPPH系InアミノフェニルDTPA結合体28の調製を示すスキームである。
【図１４】本発明のDTPA又はN2S2ジヒドロテトラピロール化合物からN2S2リガンド99mTc錯体、アミノフェニルDTPA111In錯体及びアミノフェニルDTPA Gd(III)錯体、例えば、3-デビニル-3-(1'-アルコキシエチル)-17-[3'-(4''-アミドベンジルガドリニウム(III)DTPA)]エチルピロフェオフォルビド-aの調製を示すスキームである。
【図１５】本発明のDTPA又はN2S2ジヒドロテトラピロール化合物からN2S2リガンド99mTc錯体、アミノフェニルDTPA11In錯体、及びアミノフェニルDTPA111In錯体、及びアミノフェニルDTPA Gd(III)錯体、例えば、プルプリン-18-(3-デビニル-3-(4''-アルコキシエチル)-17-[3'-(4''-アミドベンジルガドリニウム(III)DTPA)]-N-置換イミドの調製を示すスキームである。
【図１６】本発明のDTPA又はN2S2ジヒドロテトラピロール化合物からN2S2リガンド99mTc錯体、アミノフェニルDTPA11In錯体、及びアミノフェニルDTPA111In錯体、及びアミノフェニルDTPA Gd(III)錯体、例えば、プルプリン-18-(3-デビニル-3-(1'-アルコキシエチル)-17-[3'-(4''-アミドベンジルガドリニウム(III)DTPA)]エチルピロフェオフォルビドの調製を示すスキームである。
【図１７】本発明のDTPA又はN2S2テトラヒドロテトラピロール化合物からN2S2リガンド99mTc錯体、アミノフェニルDTPA11In錯体、及びアミノフェニルDTPA111In錯体、及びアミノフェニルDTPA Gd(III)錯体、例えば、バクテリオプルプリン-18-3-(アルキル又はアルコキシアルキル)-7-ケト-17-[3'-(4''-アミドベンジルガドリニウム(III)DTPA)]-N-置換イミドの調製を示すスキームである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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