(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
担体の骨格に結合した薬剤部分からなるプロドラッグであって、該プロドラッグが、薬剤部分を遊離させるために、担体の骨格の芳香族酸化によって活性化され、かつ、下記式（Ｚ）を有するプロドラッグ。
【化１】
0004885356.tif 000018
式中、Ｄｒｕｇは薬剤部分を示す。
Ｘ＝ＯＨ、ＯＭｅ又はＮ（ＣＨ３）２；及び、
ｎ＝０〜６
及び：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ステロイド炭素担体骨格又は置換されたベンジル担体骨格を形成する。
かつ、
薬剤部分が、遊離アミノ基、ヒドロキシル基又はチオール基を有する薬剤から誘導されるときは、ＡがＮＨ、ＮＲ（Ｒ＝Ｃ１〜４低級アルキル）、Ｏ又はＳを表わし、あるいは、
薬剤部分が、カルボキシレート基を有する薬剤から誘導されるときは、Ａが存在せず、エステル結合によりプロドラッグの残部に結合されるもののいずれかである。
薬剤部分が、コルヒチン、エスペリマイシン、タキソール、ダウノマイシン、スタウロスポリン、ナイトロジェンマスタード、及び、５−フルオロウラシルからなる群のいずれか１つから選択されるものである。
【請求項２】
エストラジオールから誘導されるステロイド炭素担体骨格を有する請求項１に記載のプロドラッグ。
【請求項３】
下記式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）および（ＩＸ）のいずれか１つの式を有する請求項１又は２に記載のプロドラッグ。
【化５】
0004885356.tif 000019
【化７】
0004885356.tif 000020
（式中、−ＯＲ＝−ＯＭｅ又は−ＯＨ）。
【請求項４】
下記式（Ｘ）〜（ＸＩＩＩ）のいずれか１つの式を有する請求項１〜３のいずれか１項に記載のプロドラッグ。
【化８】
0004885356.tif 000021
【化９】
0004885356.tif 000022
（式中、Ｒ＝Ｈ（式ＸＩＩａ）又はＲ＝Ｍｅ（式ＸＩＩｂ））。
【請求項５】
置換されたベンジル担体骨格を有する請求項１に記載のプロドラッグ。
【請求項６】
下記式（Ｙ）を有する請求項５に記載のプロドラッグ。
【化１２】
0004885356.tif 000023
（式中、Ｒ２、Ｒ３及びＸは、下記からなる群のいずれか１つから選択される。
ａ）Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝Ｈ、Ｘ＝ＯＭｅ（式ＸＶＩＩＩ）
ｂ）Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝ＯＭｅ、Ｘ＝ＯＭｅ（式ＸＩＸ）
ｃ）Ｒ２＝ＯＭｅ、Ｒ３＝Ｈ、Ｘ＝ＯＭｅ（式ＸＸＩＩ）
【請求項７】
下記式（ＸＸＩＩＩ）〜（ＸＸＶＩＩＩ）のいずれか１つの式を有する請求項５に記載のプロドラッグ。
【化１３】
0004885356.tif 000024
【化１４】
0004885356.tif 000025
【化１５】
0004885356.tif 000026
【請求項８】
芳香族ヒドロキシル化により活性化される請求項１〜７のいずれか１項に記載のプロドラッグ。
【請求項９】
酵素による芳香族ヒドロキシル化により活性化される請求項１〜８のいずれか１項に記載のプロドラッグ。
【請求項１０】
ＣＹＰ１Ｂ１によるヒドロキシル化により活性化される請求項１〜９のいずれか１項に記載のプロドラッグ。
【請求項１１】
担体骨格の薬剤部分への結合が、カルバメート、カーボネート又はチオカーボネート結合基による、プロドラッグ中のヒドロキシアルキル基から、薬剤部分のアミノ、ヒドロキシ又はチオール基へのものである請求項１に記載のプロドラッグ。
【請求項１２】
芳香族酸化がヒドロキシル化によるものであり、薬剤部分及び二酸化炭素の遊離を引き起こす請求項１〜１１のいずれか１項に記載のプロドラッグ。
【請求項１３】
人体又は動物の体の治療方法又は診断方法に使用するための請求項１〜１２のいずれか１項に記載のプロドラッグ。
【請求項１４】
腫瘍の治療用の薬剤の製造における請求項１〜１２のいずれか１項に記載のプロドラックの使用。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のプロドラックを使用することからなる腫瘍の治療用の薬剤の製造方法。
【請求項１６】
腫瘍の治療に使用するための請求項１〜１２のいずれか１項に記載のプロドラック。
【請求項１７】
（ｉ）請求項１〜１２のいずれか１項に記載のプロドラッグと試料を生体外で接触させる工程と、
（ｉｉ）プロドラッグの芳香族酸化の生成物を検出する工程と、
（ｉｉｉ）プロドラッグの芳香族酸化の生成物の検出を芳香族酸化活性と相互に関連させる工程とからなる芳香族酸化の検出方法。
【請求項１８】
芳香族酸化活性が酵素による請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
芳香族酸化活性がＣＹＰ１Ｂ１芳香族酸化活性である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
腫瘍細胞の検出方法である請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、芳香族酸化、特には酵素による芳香族酸化によって薬剤部分の遊離によるそれらの活性化が生じるプロドラッグに関する。特には、抗腫瘍プロドラッグ、及び、Ｐ−４５０酵素ＣＹＰ１Ｂ１のヒドロキシル化活性によって特に活性化されるプロドラッグに関する。
【０００２】
化学療法の目的で使用され得る多くの従来の細胞毒性薬が知られている（例えば、コルヒチン、エスペリマイシン、タキソール、ダウノマイシン、及び、スタウロスポリン）。しかしながら、それらは、典型的に、一般的に細胞毒性であるという問題を欠点として有しており、それ故に破壊することが望まれている細胞以外の細胞にも影響を与え得る。これは、例えば腫瘍組織の部位に直接注入する、標的とされる薬剤送達系を使用することによって、又は、例えばガン細胞によって示される抗原を特異的に認識する抗体に細胞毒性剤を結合させることによって、幾分多少解決され得る。あるいは、薬剤が細胞毒性になるように、体内の所望の部位で薬剤に化学的変化を生じさせるために、電磁放射を使用してもよい。しかしながら、これらの技術の全ては、多かれ少なかれ、或る制限及び欠点を有している。
【０００３】
酵素ＣＹＰ１Ｂ１、即ち生体異物を新陳代謝させる酵素のシトクロムＰ４５０ファミリーのメンバーが、乳房、大腸、肺、食道、皮膚、リンパ節、脳、及び精巣のガン等の人間のガンの範囲で、常に頻繁に発現され、かつ、正常な組織では検出され得ないことが報告されている（Ｍｕｒｒａｙ，Ｇ．Ｉ．等著、１９９７年７月１５日、「ガンの研究（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」、第５７巻：３０２６〜３０３１頁）。「腫瘍細胞中のＣＹＰ１Ｂ１の発現…により、腫瘍細胞中のＣＹＰ１Ｂ１の存在によって選択的に活性化され得る、新規な抗ガン剤の開発のために、分子の目標が与えられる」という結果が、これにより導かれた。また、ＣＹＰ１Ｂ１は、エストラジオールの４−ヒドロキシル化が可能であることも報告された（３０３０頁、カラム１第１５〜１７行目）。特定の抗ガン剤は提案されていなかった。
【０００４】
本発明者等は今回、それらが正常な状態の際には細胞毒性効果を殆ど持たないか又は無視できるほどしか持たないが、例えばヒドロキシル化（例えばＣＹＰ１Ｂ１によって）などの芳香族酸化により、薬剤部分の遊離が生じる物質（薬剤部分が「プロドラッグの残部」と下記で呼ばれる以外のプロドラッグ）に結合した薬剤部分を有する、「担体」骨格を有するプロドラッグの範囲を生じさせるのに成功した。ヒドロキシル化酵素としてＣＹＰ１Ｂ１を用いると、これは、細胞毒性のない（又は少なくとも無視できるほどの細胞毒性の）化合物を、例えば全身系の方法で患者に投与し、次いでその化合物が腫瘍細胞の部位でヒドロキシル化されて（腫瘍内のヒドロキシル化）、腫瘍細胞を殺すように作用するか、さもなければ、腫瘍細胞に影響を与える薬剤を遊離させ得る、自己−標的薬剤送達系のために提供される。ＣＹＰ１Ｂ１が正常な細胞によっては発現されないという事実は、プロドラッグのヒドロキシル化は腫瘍細胞の部位でのみ生じ、それ故に腫瘍細胞のみ影響を受け、従って自己標的薬剤送達系を提供することを意味する。
【０００５】
本発明のプロドラッグは、体内のいかなる部位の腫瘍の治療にも有用であるという、顕著な利点を有するものであり、それは転位した腫瘍さえも（部位−特異的治療を通常は受け難い）、勿論一次腫瘍及び二次腫瘍も治療され得ることを意味する。
【０００６】
プロドラッグは、他の酸化剤、例えばプロドラッグのヒドロキシル化を生じさせる他の酵素（例えばシトクロムＰ−４５０ファミリーの酵素の他のメンバー）によって、達成されるように設計され得る。例えば、人間のＣＹＰ１Ａ１アイソフォームによるヒドロキシル化によって活性化されるプロドラッグは、胃がんの治療に有用であろう。これはこのアイソフォームは、ガンのこのタイプで発現されるからである（Ｍｕｒｒａｙ等著、１９９８年、「Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ」、第７７巻：１０４０頁）。更には、プロドラッグが、真菌Ｐ−４５０酵素アイソフォームによって特に活性化される場合、次いでそれは、選択的な抗菌剤としての有用性を有し、同様に、細菌性Ｐ−４５０酵素アイソフォームによって特に活性化されるプロドラッグは、選択的な抗生物質剤としての有用性を有するであろう。
【０００７】
ＣＹＰ１Ｂ１は、まだ完全には特徴付けされておらず、それ故に同じ触媒的特性を有する、その腫瘍に特異的なアイソフォームが存在し得る可能性がある。本発明のプロドラッグは、もちろんこのような酵素と共に使用されてもよい。
【０００８】
シトクロムＰ−４５０で活性化されたプロドラッグの場合は、それらを使用して達成された治療戦略は、ＳＰＥＡＲと呼ばれる（特異的なＰ−４５０酵素で活性化された薬剤の遊離（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｐ−４５０  Ｅｎｚｙｍｅ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｄｒｕｇ  Ｒｅｌｅａｓｅ））。
【０００９】
本発明によると、担体の骨格に結合した薬剤部分からなるプロドラッグであって、そのプロドラッグが、薬剤部分を遊離させるために、担体の骨格の芳香族酸化によって活性化されるプロドラッグが提供される。
【００１０】
プロドラッグは芳香族ヒドロキシル化によって活性化され得る。それは、酵素による芳香族ヒドロキシル化によって活性化されてもよい。
【００１１】
他の酵素によって活性化されるプロドラッグは、例えばペプチダーゼによる分裂の結果として薬剤部分を遊離する物質が、知られている。しかしながら、プロドラッグが酵素によるヒドロキシル化によって薬剤部分を遊離させるために活性化され得ることをこれまでに提案したものはない。
【００１２】
本発明によるプロドラッグは、下記式（Ｚ）を有し得る。
【００１３】
【化１７】
0004885356.tif 000002
【００１４】
（式中、Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ又はＮ（ＣＨ３）２  、
ｎ＝０〜６、
Ｒ１＝Ｈ、Ｃ１〜４低級アルキル、又は、Ｒ２と共に多環シクロアルキル基の部分を形成するために更に置換されていてもよい、シクロアルキル基の部分を形成するか、又は、Ｒ２と共にステロイド炭素骨格の部分を形成する。
Ｒ２＝Ｈ、ＯＭｅ、Ｃ１〜４低級アルキル、又は、Ｒ１及び／又はＲ３と共に、シクロアルキル、多環シクロアルキル、又は、ステロイド炭素骨格の部分を形成するか、又は、Ｒ４への結合によって多環芳香族基の部分を形成する。
Ｒ３＝Ｈ、ＯＭｅ、Ｃ１〜４低級アルキル、又は、Ｒ２と共に、シクロアルキル、多環シクロアルキル、又は、ステロイド炭素骨格の部分を形成する。
Ｒ４＝Ｈ、又は、Ｒ２で示される芳香族の位置に直接結合する、
あるいは、
薬剤部分が、遊離アミノ、ヒドロキシル又はチオール基を有し、それをＡがＮＨ、ＮＲ（Ｒ＝Ｃ１〜４低級アルキル）、Ｏ又はＳを表わす、プロドラッグの残部に結合させる、薬剤から誘導されるか、若しくは、
薬剤部分が、カルボキシレート基を有し、エステル結合がプロドラッグの残部にそれを結合させており、かつ、Ａが存在しない薬剤から誘導される。
【００１５】
式（Ｚ）のプロドラッグの酵素によるヒドロキシル化により、ヒドロキシル化の部位（例えば、芳香族の４位−図１参照）から、薬剤部分へ、電子の移動が生じ、その結果それが遊離することとなる。
【００１６】
プロドラッグは、例えば、抗腫瘍プロドラッグであり得る。薬剤部分は、細胞毒性剤又は細胞増殖抑制剤であり得るが、もちろんいかなる他の望まれる効果を有している部位であってもよい。薬剤部分のクラスの例としては、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、抗葉酸剤、抗代謝剤、ＤＮＡ損傷化剤、又は、酵素抑制剤等が挙げられる。可能な細胞毒性剤部分の特定の例としては、５−フルオロウラシル、コルヒチン、エスペリマイシン、タキソール、ダウノマイシン、スタウロスポリン、及び、ナイトロジェンマスタード等が挙げられる。あるいは、薬剤部分が、例えば腫瘍内法で遊離されるであろう蛍光有機分子であってもよく、それは薬剤部分及び従ってその遊離を生じさせた酸化剤の存在（たとえば、ＣＹＰ１Ｂ１）、特定の細胞蛍光を相互に関連させることによって、腫瘍を検出するのを助け得る。
【００１７】
このように、用語「薬剤」は、診断の目的で使用され得る部位にも拡大する。
【００１８】
可能なナイトロジェンマスタードは、例えば、パラ−ヒドロキシ基によってプロドラッグの残部に結合している、パラ−ヒドロキシアニリンマスタードである。ナイトロジェンマスタードプロドラッグの場合、マスタードの機能は、薬剤部分がプロドラッグから遊離される場合にのみそれ自身活性化される。ＳＰＥＡＲプロドラッグに混合され得る、ナイトロジェンマスタードの他の例は、ノル−マスチン（Ｎｏｒ−ｍｕｓｔｉｎｅ）であり、それはマスタードの窒素原子によって直接に結合させられ得る。カルバメートが結合したノル−マスチンの場合、プロドラッグは非常に毒性が低いが、プロドラッグの酵素によるヒドロキシル化により、よく効く細胞毒性剤であるノル−マスチンが遊離される。
【００１９】
下記オレフィン結合は、シス−又はトランス−ジオメトリーを有し得る。それは、アクリルであってもよいし、環状であってもよい。それは、芳香族系又は多環芳香族系の部分を形成し得る。
【００２０】
【化１８】
0004885356.tif 000003
【００２１】
プロドラッグは、ＣＹＰ１Ｂ１によって活性化され得る。従って、細胞毒性の薬剤部分をＣＹＰ１Ｂ１によるヒドロキシル化で遊離させるプロドラッグは、自己目標抗ガン剤として使用され得、ＣＹＰ１Ｂ１によって腫瘍の部位で活性化させられて、体の残りの部分では細胞毒性を持たない（又は無視できるほどの細胞毒性しか持たない）。
【００２２】
担体骨格の薬剤部分への結合は、カルバメート、カーボネート又はチオカーボネート結合基による、プロドラッグ中のヒドロキシアルキル基から、薬剤部分のアミノ、ヒドロキシ又はチオール基へのものであり得る。
【００２３】
本発明の戦略及びプロドラッグを使用すると、遊離アミノ、ヒドロキシ又はチオール基によって、いかなる所望の薬剤部分へも結合可能である。薬剤部分をプロドラッグの残部に結合させる、カルバメート、カーボネート又はチオカーボネート結合基からなる結合基を供給することにより、薬剤部分の遊離によって二酸化炭素の遊離が生じ、それによって反応が不可逆性になる。従って、プロドラッグのヒドロキシル化（又は他の芳香族酸化）により、薬剤部分及び二酸化炭素の遊離が生じ得る。
【００２４】
プロドラッグは、ステロイド炭素担体骨格を有し得る。例えば、それはエストラジオールから誘導され得る。
【００２５】
本発明によるプロドラッグの例は、図１に示される、式Iを有するプロドラッグである。それは、エストラジオール誘導体であり、ステロイドの６位で薬剤部分と結合している。この位置では、エストラジオールの３−ヒドロキシ基は、必要な電子を遊離させないが、４−ヒドロキシル化によって、４−ヒドロキシ基からの電子の遊離が、プロドラッグ内で電子の移動を誘発して、その結果薬剤部分の遊離が生じる。
【００２６】
本発明によるプロドラッグは、例えば、下記式（I）〜（IＸ）のいずれか１つの式を有し得る。
【００２７】
【化１９】
0004885356.tif 000004
【００２８】
【化２０】
0004885356.tif 000005
【００２９】
【化２１】
0004885356.tif 000006
【００３０】
（式中、−ＯＲ＝−ＯＭｅ又は−ＯＨ）。
【００３１】
プロドラッグは、下記式（Ｘ）〜（ＸIII）のいずれか１つの式を有していてもよい。
【００３２】
【化２２】
0004885356.tif 000007
【００３３】
【化２３】
0004885356.tif 000008
【００３４】
（式中、Ｒ＝Ｈ（式ＸIIａ）又はＲ＝Ｍｅ（式ＸIIｂ））。
【００３５】
式（Ｘ）は、コルヒチン−エストラジオールプロドラッグである。（ＸI）は、コンブレタスタチン−エストラジオールプロドラッグである。（ＸII）は、マスタード−エストラジオールプロドラッグである。（ＸIII）は、フルオロホル−エストラジオール共役である。プロドラッグは、多環芳香族担体骨格を有していてもよい。例えば、プロドラッグは、ナフチル又はフェナントリル構造をベースとしていてもよい。ナフチルをベースとするプロドラッグ及びフェナントリルをベースとするプロドラッグの例は、下記式（ＸIＶ）〜（ＸＶII）によって与えられる。化合物（ＸIＶ）は、ナフチル／コルヒチンプロドラッグであり、（ＸＶ）は、ナフチル／マスタードプロドラッグであり、（ＸＶI）は、ナフチル／５−フルオロウラシルプロドラッグであり、（ＸＶII）は、フェナントリル／マスタードプロドラッグである。ナフチルをベースとするプロドラッグの合成に使用される合成経路は、図３に示される図式に略述されている。
【００３６】
【化２４】
0004885356.tif 000009
【００３７】
【化２５】
0004885356.tif 000010
【００３８】
プロドラッグは置換されたベンジル担体骨格をベースとしていてもよい。例えば、プロドラッグは、様々なメトキシで置換されたベンジル基をベースとしていてもよく、これらは、式（ＸＶIII）〜（ＸＸII）を有するベンジル／マスタード化合物によって例示される。化合物（ＸＶIII）は、３−メトキシベンジル／マスタードプロドラッグであり、（ＸIＸ）は、３，５−ジメトキシベンジル／マスタードプロドラッグであり、（ＸＸ）は、ベンジル／マスタードプロドラッグであり、（ＸＸI）は、２−メトキシベンジル／マスタードプロドラッグであり、（ＸＸII）は、２，５−ジメトキシベンジル／マスタードプロドラッグである。これらの化合物は下記式（Ｙ）を有する。
【００３９】
【化２６】
0004885356.tif 000011
【００４０】
式（ＸＶIII）〜（ＸＸII）を有する特定の分子は下記に詳述される通りの基Ｒ２、Ｒ３及びＸを有する。
【００４１】
【表１】
0004885356.tif 000012
【００４２】
ベンジル担体骨格に結合し得る様々な薬剤及びフルオロホルは、式（ＸＸIII）〜（ＸＸＶIII）に与えられるベンジルをベースとするプロドラッグによって更に例示される。化合物（ＸＸIII）は、３−メトキシベンジル／５−フルオロウラシルプロドラッグであり、（ＸＸIＶ）は、３−メトキシベンジル／コルヒチンプロドラッグであり、（ＸＸＶ）は、細胞毒性のカルコン（Ｅ）−１−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロプ−１−エン−３−オンから誘導される、３−メトキシベンジル／カルコンプロドラッグであり、（ＸＸＶI）は、３−メトキシベンジル／コンブレタスタチンプロドラッグであり、（ＸＸＶII）は、３−メトキシベンジル／レゾルフィンフルオロホル共役であり、（ＸＸＶIII）は、３−メトキシベンジル／７−アミノ−４−メチルクマリンフルオロホル共役である。
【００４３】
【化２７】
0004885356.tif 000013
【００４４】
【化２８】
0004885356.tif 000014
【００４５】
【化２９】
0004885356.tif 000015
【００４６】
プロドラッグは、シンナミル担体骨格をベースとしていてもよく、これは式（ＸＸＸ）〜（ＸＸＸII）によって与えられる、シンナミルをベースとするプロドラッグによって例示される。化合物（ＸＸＸ）は、３−メトキシシンナミル／マスタードプロドラッグであり、（ＸＸＸI）は、シンナミル／レゾルフィンフルオロホル共役であり、（ＸＸＸII）は、シンナミル／７−アミノ−４−メチルクマリンフルオロホル共役である。
【００４７】
【化３０】
0004885356.tif 000016
【００４８】
また、本発明によると、人体又は動物の体の治療方法又は診断方法、特に腫瘍の治療方法又は診断方法に使用するための本発明によるプロドラッグが提供される。
【００４９】
また、本発明によると、薬剤、例えば腫瘍の治療用の薬剤の製造における本発明によるプロドラックの使用が提供される。
【００５０】
また、本発明によると、本発明によるプロドラックを使用することからなる薬剤の製造方法が提供される。
【００５１】
また、本発明によると、本発明によるプロドラックを患者に投与することからなる患者の治療方法が提供される。プロドラッグは、医療状態、例えば病気を治療するために投与され得る。
【００５２】
薬剤の製造方法は、よく知られている。例えば薬剤は、製薬的に許容可能な担体、希釈剤、または、賦形剤から更になり得る（レミントンの製薬科学及び米国薬局方（Ｒｅｍｉｎｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  ＵＳ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）、１９８４年、Ｍａｃｋ出版社、米国ペンシルニア州イーストン）。
【００５３】
患者に投与されるべきプロドラッグの正確な投与量（すなわち、製薬的に許容可能な投与量）は、例えば単純な用量−反応実験を使用することによって当業者には容易に決定され得る。
【００５４】
本発明のプロドラッグは、例えば腫瘍細胞に特異的であるので、それらは腫瘍を治療をするために使用されるだけでなく、患者（又は患者から採取された試料）が腫瘍細胞を有するか否かを決定するためにも使用され得る。例えば、腫瘍細胞は、酵素によるヒドロキシル化によって蛍光化合物を遊離する、フルオロホル共役であるＳＰＥＡＲプロドラッグを使用することによって検出され得る。このタイプのフルオロホル共役の例は化合物（ＸIII）によって与えられる。酸化された、例えばヒドロキシル化されたプロドラッグの存在及び量を評価し得るのと同様に、試料中の細胞数を評価し得、従って腫瘍細胞の存在を診断するために提供する。ＳＰＥＡＲプロドラッグが、診断のために使用され得る他の方法は、炭素−１３の同位元素で標識されたカルボニル結合を使用することによる。ここで、プロドラッグの続く芳香族ヒドロキシル化で遊離させられた二酸化炭素は炭素−１３の同位元素を含有するであろうので、従ってマススペクトル等の炭素−１３の検出技術によって測定され得る。炭素−１３で標識された二酸化炭素は、プロドラッグを用いて投与された患者の吐き出された息の中で検出可能であるであろう。それ故にこの技術によって、ガンのための診断の呼吸試験のための手段が提供される。従って、いかなる診断試験においても、薬剤部分は、プロドラッグの芳香族酸化によって検出可能な生成物の遊離が生じるものであればいかなる物であってもよい。従って、診断試験において、検出工程は、プロドラッグの芳香族酸化の生成物のため、例えば薬剤部分、担体骨格又は芳香族酸化の他の生成物のためのものであり得る。
【００５５】
従って、本発明はまた、下記（ｉ）〜（ｉｉｉ）の工程からなる芳香族酸化の検出方法を提供する。
【００５６】
（ｉ）請求項１〜２６のいずれか１項に記載のプロドラッグと試料を接触させる工程
（ｉｉ）プロドラッグの芳香族酸化の生成物を検出する工程
（ｉｉｉ）プロドラッグの芳香族酸化の生成物の検出を芳香族酸化活性と相互に関連させる工程
芳香族酸化活性は、酵素による、例えばＣＹＰ１Ｂ１芳香族酸化活性であり得る。
【００５７】
この方法は腫瘍細胞の検出方法であってもよい。
【００５８】
この方法は人体又は動物の体の診断方法であってもよい。
【００５９】
本発明は、幾つかの添付の図面の図を参照して、下記の説明から更に明らかになるであろう。なお、説明は例によってのみプロドラッグの形体を示すものである。
【００６０】
エストラジオール−コルヒチンプロドラッグIの合成は図２に示される。合成経路は出発物質としてエスとラジオールを使用する。６−オキソ基が、ピリジニウムクロロクロメートとエストラジオールの酸化によって導入されて、６−オキソエストラジオールが得られる。次いで、これはホウ化水素還元を受けて６−ヒドロキシエストラジオールを生成する。次いで、所望の細胞毒性剤を、カップリング剤としてトリホスゲンを使用して、６−ヒドロキシエストラジオールに結合させて（Ｅｃｋｅｒｔ及びＦｏｓｔｅｒ、１９８７年、Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．、第２６巻：８９４〜８９５頁）、カルバメートが結合したエストラジオールプロドラッグが得られる。プロドラッグの合成において、Ｒ基は初めは保護基である（例えばアセテート基）。一旦最終工程（上記）が始まると、保護基は水素で置換されて最終のプロドラッグ生成物を与える。保護基及びそれらの置換の化学はよく知られており、当業者には容易に明らかであろう。化合物（ＸIIｂ）で例示される通り、Ｒがメチル基である場合、次いでこの基は最終生成物中に残るので、従って脱保護工程はこの場合には必要ない。
【００６１】
プロドラッグの４−ヒドロキシル化（図１）によって、４−ヒドロキシ基から電子の移動が生じ、その結果薬剤部分と二酸化炭素の遊離が生じる。二酸化炭素の遊離により反応は不可逆性になる。
【００６２】
本発明は式（Ｘ）〜（ＸＶ）で与えられる特定のＳＰＥＡＲプロドラッグによって例示される。化合物（Ｘ）は、カルバメートが結合したコルヒチン−エストラジオールプロドラッグであり、それはＣＹＰ１Ｂ１によって酵素によるヒドロキシル化で、細胞毒性剤であるデス−アセチルコルヒチンを遊離させる。化合物（ＸI）は、カーボネートが結合したコンブレタスタチン−エストラジオールプロドラッグである。化合物（ＸII）は、ナイトロジェンマスタードのＳＰＥＡＲプロドラッグであり、非常に細胞毒性のアルキル化剤である、ビス（クロロエチル）アミンマスタードを、酵素によるヒドロキシル化によって生成させる。化合物（ＸIII）は、酵素によるヒドロキシル化によって、蛍光化合物である７−アミノ−４−メチルクマリンを遊離させる、ＳＰＥＡＲフルオロホル共役である。化合物（ＸIＶ）は、６−メトキシ−１−ナフタレンメタノールに結合したコルヒチンの、非ステロイド系ＳＰＥＡＲプロドラッグの例である。化合物（ＸＶ）は、３−メトキシベンジルアルコールから誘導される、非ステロイド系ＳＰＥＡＲプロドラッグの例である。
【００６３】
プロドラッグ代謝の研究
シトクロムＰ−４５０ＣＹＰ１Ｂ１酵素を発現する取り出された人間の腫瘍組織からなるミクロソーム調製液を、Ｂａｒｒｉｅ等の方法によって記載される通り（１９８９年、Ｊ．  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第６巻：１１９１〜１１９５頁）本質的に調製した。プロドラッグ代謝実験を黄色灯の下で３７℃で行なった。
【００６４】
１．５ｍｌの遠心機の管のアレーを有気性条件下で水浴シェーカー中に置いた。次いで、それぞれの管にｐＨ７．６の緩衝液（０．１ＭのＮａＫ２ＰＯ４）５００μｌを添加し、続いてＮＡＤＰＨ（２５ｍＭの原液５μｌ）からなる水溶液を添加した。次いで、ミクロソームの調製液（８０μｌ）を添加し、管を３７℃で５分間予備培養した。次いで、プロドラッグ基質を添加し（５ｍＭの原液１０μｌ）、３７℃で１時間培養した。１時間後管を氷／水冷却浴（０℃）に移した。次いで、管を３０分間１５０００ｒｐｍで遠心分離した。次いで、上清の試料（１００μｌ）を取り出し、次のＨＰＬＣ条件を使用してＨＰＬＣで分析した。すなわちガードカラムを用いずに使用された、Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ  Ｃ１８（２５ｃｍ×４．６ｍｍ  ｉｄ）、流速１ｍｌ／分、溶離剤０．１ＭのＫＨ２ＰＯ４７５％及びアセトニトリル２５％。このようにして、プロドラッグの代謝が遊離の薬剤部分の遊離を生じさせることを見出した。例えば、コルヒチン−エストラジオール化合物（Ｘ）の腫瘍ミクロソーム代謝は、遊離のＮ−デスアセチルコルヒチンを遊離させ、それはＨＰＬＣ分析によって検出された。
【００６５】
生体外での細胞毒性の研究
使用した細胞毒性アッセイ法は、ＭＴＴ細胞毒性アッセイを修正したものであった（Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ等著、１９８７年、「ガンの研究（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」、第４７巻：９３６頁）。化合物の活性は、酵素ＣＹＰ１Ｂ１（Ｖ７９ｍｚｈｕｌＢ１）を発現する細胞系、及び、ＣＹＰ１Ｂ１（Ｖ７９ｍｚ）を発現しない対応する親の細胞系で評価した（Ｌｕｃｈ等著、１９８８年、「Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．」、第１１巻：６８６頁）。１０３の細胞を、付着及び代謝回復を可能にするために、２４時間、９６のウエルの（Ｎｕｎｃ）マイクロ滴定濃度板の１つのウエル当り、１００ｍｌのＤＭＥＭ（高グルコース）（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅｓ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製）と、１０％の熱で不活性化されたＦＢＳ（胎児の牛の血清、Ｈｙｂｉｍａｘ、Ｓｉｇｍａ社製）との中で培養し、続いて１００ｍｌの同じ媒体中に２倍の濃度で４倍の化合物を添加し、０．２％のＤＭＳＯの最終の最高の濃度にした。化合物原料は、ＤＭＳＯ中１００ｍＭとして造られ、４℃で１ヶ月未満貯蔵した。次いで、板を、３７℃、５％のＣＯ２、１００％の湿度で、更に４８時間培養し、続いてＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳ  Ａ中に３回浸漬させることによって洗浄した。次いで、２ｍｇ／ｍｌのＭＴＴを有する、ＲＰＭＩ  １６４０ｗ／ｏフェノールレッド（Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｍｅｄｉｕｍ  １６４０、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製）５０ｍｌを、上記の通りに４時間添加して、過剰のＭＴＴを吸引によって除去し、ＤＭＳＯ１２５ｍｌを３０分間で渦上に添加して、生成物を溶解させた。Ａ４５０での吸収度を、記録して、その結果を担体のみで処理された対照の生存％として表わした。このデータから、ＩＣ５０値が計算されたが、これは５０％の細胞毒性が観察された濃度である。ＣＹＰ１Ｂの発現の確認は、化合物が添加された時点でのアッセイで使用された細胞の免疫細胞学、ウエスタンブロット及びＥＲＯＤ（エトキシレゾルフィン−Ｏ−デアルキラーゼアッセイ；Ｂｕｒｋｅ，Ｍ．Ｄ．等著、１９８５年、「Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．」、第３４巻：３３３７頁）アッセイによって、決定され、−２０℃でメタノール中で固定されるか、又は、複製板から取り入れられ、アッセイまで−８０℃で貯蔵された。
【００６６】
上記アッセイ系を使用して、プロドラッグを評価し、その結果を表１に示す。これらの結果は、本発明の化合物が細胞系を表わすＣＹＰ１Ｂ１に対して特異な毒性を示すことを、示している。
【００６７】
表１から、化合物ＸＶIII（ＤＭＵ−３１３）及び化合物ＸIＸ（ＤＭＵ−３１５）は、ＣＹＰ１Ｂ１を発現する細胞系に対して、３倍以上細胞毒性であることが判り、本発明の化合物はＣＹＰ１Ｂ１酵素を発現する腫瘍に対して、腫瘍に選択的な抗ガン剤として有用であることを示している。
【００６８】
プロドラッグの合成
セクション１：エストラジオールをベースとするプロドラッグ
エストラジオール３，１７−ジピバロエート
塩化ピバロイル（６６４ｍｇ；５．５ｍｍｏｌ）を、１：１のピリジン／ジクロロメタン（３ｍｌ）中のエストラジオール（２５０ｍｇ；０．９ｍｍｏｌ）からなる溶液に０℃で滴下添加した。１５時間後、反応を水（１０ｍｌ）を用いて急冷し、生成物をエーテル（３×１０ｍｌ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、１０％のＨＣｌ（１５ｍｌ）、飽和した水性硫酸銅（１５ｍｌ）及び生理食塩水（１５ｍｌ）を用いて連続して洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、最後に真空下で濃縮させた。残さを熱いエタノールから再結晶させ、白色の結晶性の固形物で単離された（２４７ｍｇ；６１％）。ＩＲ（ｃｍ−１．ＫＢｒ）：（３０００，ＣＨ）（１７００，ＣＯＯ）（１５００，ＡｒＣ＝Ｃ）（１３００，ＣＨ３）；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：（Ｈ（０．９，ｓ；３Ｈ）（１．２，ｓ；９Ｈ）（１．３，ｓ；９Ｈ）（１．４，ｍ；６Ｈ）（１．８，ｍ；３Ｈ）（２．３，ｍ；３Ｈ）（２．９，ｔ；２Ｈ）（４．７，ｔ；１Ｈ）（６．８，ｍ；２Ｈ）（７．１，ｄ；１Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：（ｃ  １２．０、２３．３、２６．１、２７．０、２７．１、２７．２、２７．６、２９．５、３６．９、３８．２、３８．８、３９．９、４３．１、４３．９、４９．８、８２．２、１１８．４、１２１．３、１２６．３、１３７．５、１３８．０、１４８．９、１５７．８、１７７．３、１７８．５；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝４４１
【００６９】
６−オキソエストラジオール３，１７−ジピバロエート
（ＤＭＵ−３０９）
３，５−ジメチルピラゾール（５４５ｍｇ；５．７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２ｍｌ）中の−２０℃の三酸化クロム（５７６ｍｇ；５．７ｍｍｏｌ）からなる懸濁液に添加した。１５分攪拌後、ジクロロメタン（１ｍｌ）中のエストラジオール３，１７−ジピバロエート（２５０ｍｇ；０．５７ｍｍｏｌ）を、滴下添加して、反応混合物を、４時間、−１５℃で攪拌した。反応を水（１５ｍｌ）を用いて急冷し、水層をエーテル（３×１５ｍｌ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、水（１５ｍｌ）及び生理食塩水（１５ｍｌ）を用いて洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させた。残さをシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけところ、生成物が白色固形物で単離された（５５ｍｇ；２１％）。ＩＲ（ｃｍ−１．ＫＢｒ）：（３０００，ＣＨ）（１７００，ＣＯＯ）（１６５０，ＡｒＣＯ）（１５００，ＡｒＣ＝Ｃ）（１３００，ＣＨ３）；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：（Ｈ（０．９，ｓ；３Ｈ）（１．２，ｓ；９Ｈ）（１．３９，ｄ；９Ｈ）（１．４１，ｍ；６Ｈ）（１．９，ｍ；２Ｈ）（２．２，ｍ；２Ｈ）（２．３，ｍ；１Ｈ）（２．４，ｍ；１Ｈ）（２．７，ｄ；１Ｈ）（４．７，ｔ；１Ｈ）（７．２，ｄ；１Ｈ）（７．４，ｄ；１Ｈ）（７．６，ｄ；１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：（ｃ  １１．９、２２．９、２５．３、２７．１、２７．２、２７．４、３６．５、３８．９、３９．１、３９．５、４２．９、４３．０、４３．８、４９．８、８１．７、１１９．９、１２６．６、１２６．９、１３３．６、１４４．０、１４９．８、１７８．４、１９６．９；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝４５５
【００７０】
６−ヒドロキシエストラジオール３，１７−ジピバロエート
（ＤＭＵ−３１０）
水素化ホウ素ナトリウム（１０４ｍｇ；２．８ｍｍｏｌ）を、エタノール（２０ｍｌ）中の６−オキソエストラジオール−３，１７−ピバロエート（５００ｍｇ；１．１ｍｍｏｌ）に窒素下２５℃で添加した。４８時間後、反応を水（１００ｍｌ）を用いて急冷し、水層をジエチルエーテル（３×５０ｍｌ）を用いて抽出した。有機相を混合し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させた。生成物をシリカゲル上で精製し、オフホワイトの固形物で単離した（１５０ｍｇ；３０％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（３５００；ＯＨ）（２９００；ＣＨ）；１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（０．８，ｓ；３Ｈ）（１．１，ｓ；９Ｈ）（１．３，ｍ；１０Ｈ）（１．４，ｍ；９Ｈ）（２．２，ｍ；３Ｈ）（４．７，ｔ；１Ｈ）（４．８，ｔ；１Ｈ）（６．９，ｄｄ；１Ｈ）（７．２，ｍ；１Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：１２．１、２３．３、２７．３、３６．９、３７．８、４３．１、４４．５、４９．３、６９．８、８２．１、１２０．０、１２０．５、１２６．４、１３７．３、１４０．９；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝４５７
【００７１】
化合物（Ｘ）：エストラジオール−コルヒチンプロドラッグ
（ＤＭＵ−３２７）
ジクロロメタン（１ｍｌ）中のトリホスゲン（０．２５ｍｍｏｌ、７４ｍｇ）からなる溶液に、ジクロロメタン（１．５ｍｌ）中の６−ヒドロキシエストラジオール３，１７−ジピバロエート（０．３ｍｍｏｌ、１３７ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）からなる溶液を添加した。混合物を３０分間攪拌し、次いでジクロロメタン（１．５ｍｌ）中のＮ−デスアセチルコルヒチン（０．３ｍｍｏｌ、１０７ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）からなる溶液を添加し、混合物を１時間攪拌した。次いで、反応混合物を乾燥するまで蒸発させて、残さを酢酸エチルに再溶解させ、０．５ＭのＮａＣＯ３（水性）を用いて洗浄した。次いで、酢酸エチル溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させたところ、３，１７−ジピバロエートエステルとして、表題のプロドラッグが得られた。
【００７２】
次いで、プロドラッグジピバロエートエステルを、メタノール（３ｍｌ）中に溶解させ、メチルアミン（４０％ｗ／ｗ、０．５ｍｌ）からなる水溶液を添加し、溶液を１時間攪拌した。次いで、希ＨＣｌ（０．１Ｍ）を添加して、混合物をｐＨ７まで中和させ、次いで生成物をジクロロメタン（３×１０ｍｌ）を用いて抽出した。次いで溶媒を真空下で蒸発させたところ、表題のエストラジオール−コルヒチンプロドラッグを与えた。ＩＲ（ＫＢｒ）１６９５ｃｍ−１；ＭＳ（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝６７２
【００７３】
化合物（ＸI）：エストラジオールコンブレタスタチンプロドラッグ
（ＤＭＵ−３２８）
手順は、Ｎ−デスアセチルコルヒチンに代えてコンブレタスタチン（０．３ｍｍｏｌ、９５ｍｇ）を使用した以外は、上記化合物（Ｘ）に記載されるのに従ったところ、表題のエストラジオールコンブレタスタチンプロドラッグが得られた。ＩＲ（ＫＢｒ）１７５０ｃｍ−１；ＭＳ（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝６３１
【００７４】
化合物（ＸIIａ）：エストラジオールマスタードプロドラッグ
（ＤＭＵ−３２９）
手順は、Ｎ−デスアセチルコルヒチンに代えて、コンブレタスタチン（０．３ｍｍｏｌ、９５ｍｇ）並びに過剰当量のジイソプロピルエチルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）を使用した以外は、化合物（Ｘ）に記載されるのに従った。これにより、白色の結晶性化合物状の表題のエストラジオールマスタードプロドラッグが得られた。ＩＲ（ＫＢｒ）１７００ｃｍ−１；ＭＳ（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝４５６
【００７５】
化合物（ＸIII）：エストラジオールフルオロホル共役
（ＤＭＵ−３３０）
手順は、Ｎ−デスアセチルコルヒチンに代えて７−アミノ−４−メチルクマリン（０．３ｍｍｏｌ、５３ｍｇ）を使用した以外は、化合物（Ｘ）に記載されるのに従ったところ、表題のエストラジオール−フルオロホル共役が得られた。ＩＲ（ＫＢｒ）１６９０ｃｍ−１；ＭＳ（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝４９０
【００７６】
エストラジオール３，１７−ジメチルエーテル
水素化ナトリウム（１．７６ｇ；４４ｍｍｏｌ）を、室温で、無水ＴＨＦ（１５ｍｌ）中のエストラジオール（１ｇ；３．６ｍｍｏｌ）からなる溶液に少しずつ添加した。５分間攪拌した後、ヨウ化メチル（２．７ｍｌ；４４ｍｍｏｌ）を滴下添加し、反応を３時間攪拌したままにした。反応を水（１５ｍｌ）を用いて急冷し、水層をエーテル（３×１５ｍｌ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空下で濃縮させたところ、白色固形物が得られた。粗生成物をヘキサンを用いて粉砕し、熱いエタノールから再結晶させて、白色の結晶性固形物の表題の化合物を得た（６７０ｍｇ；６０％）。ＩＲｃｍ−１（ＫＢｒ）２９００（ＣＨ）、１５００（ＡｒＣ＝Ｃ）、１２５０（ＯＭｅ）；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）０．８（ｓ，３Ｈ）、１．１（ｍ，９Ｈ）、１．８（ｍ，４Ｈ）、２．８５（ｍ，３Ｈ）、３．３（ｔ，１Ｈ）、３．４（ｓ，３Ｈ）、３．８（ｓ，３Ｈ）、６．６（ｄ，１Ｈ）、６．７（ｄｄ，１Ｈ）、７．２（ｄ，１Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１１．６、２３．１、２６．５、２７．３、２７．８、２９．８、３８．１、３８．６、４３．３、４３．９、５０．３、５５．３、５７．９、９０．８、１１１．５、１１３．８、１２６．４、１３２．７、１３８．０、１５７．４；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝３０１
【００７７】
６−オキソエストラジオール３，１７−ジメチルエーテル
（ＤＭＵ−３０３）
３，５−ジメチルピラゾール（３．２ｇ；３２ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン（１５ｍｌ）中の−２０℃の三酸化クロム（３．３２ｇ；３２ｍｍｏｌ）からなる懸濁液に添加した。１５分攪拌後、無水ジクロロメタン（５ｍｌ）中のエストラジオール３，１７−ジメチルエーテル（５００ｍｇ；１．６ｍｍｏｌ）を滴下添加して、反応混合物を４時間、−１５℃で攪拌した。反応を水（２０ｍｌ）を用いて急冷し、水層をエーテル（３×２０ｍｌ）を用いて抽出した。混合された水層を水（３×２０ｍｌ）及び生理食塩水（３×２０ｍｌ）を用いて洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空下で濃縮させた。残さをシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけところ、生成物が白色固形物で単離された（６０ｍｇ；１１．４％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（３０００；ＣＨ）（１６８０；ＣＯ）（１２５０；ＯＣＨ３）；１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（０．８，ｓ；３Ｈ）（１．２，ｍ；１２Ｈ）（２．７，ｄｄ；１Ｈ）（３．３，ｔ；１Ｈ）（３．４，ｓ；３Ｈ）（３．９，ｓ；３Ｈ）（７．１，ｄ；１Ｈ）（６．７，ｄｄ；１Ｈ）（７．３，ｄ；１Ｈ）（７．６，ｄ；１Ｈ）；１３ＣＮＭＲＣＤＣｌ３：１１．４、１９．５、２２．８、２５．６、３７．５、３９．９、４２．９、４４．１，５０．２、５５．５、５７．９、９０．４、１０９．７、１２１．５、１２６．６、１３３．４、１３９．７、１５０．０、１５８．２１、１８０．３４、１９８．２；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ：３１５
【００７８】
６−ヒドロキシエストラジオール３，１７−ジメチルエーテル
（ＤＭＵ−３０４）
水素化ホウ素ナトリウム（３．３ｍｇ；０．０８５ｍｍｏｌ）を、エタノール（１．５ｍｌ）中の６−オキソエストラジオール３，１７−ジメチルエーテル（５５ｍｇ；１７ｍｍｏｌ）に窒素下室温で添加した。６２時間後、反応を水（５ｍｌ）を用いて急冷し、水層をエーテル（３×５ｍｌ）を用いて抽出した。有機相を混合し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空下で濃縮させた。生成物をシリカゲル上で精製し、白色固形物で単離した（２２ｍｇ；３９％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（３４５０；ＯＨ）（２９００；ＣＨ）（１５００；ＡｒＣＨ）；１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（０．８，ｓ；３Ｈ）（１．１，ｍ；９Ｈ）（１．８，ｍ；４Ｈ）（２．８５，ｍ；３Ｈ）（３．３，ｔ；１Ｈ）（３．４，ｓ；３Ｈ）（３．８，ｓ；３Ｈ）（６．６，ｄ；１Ｈ）（６．７，ｄｄ；１Ｈ）（７．２，ｄ；１Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：１１．５、２５．０、２６．４、２７．７、３７．９、３８．２、４３．４、４４．０、４９．７、５５．３、５７．９、７０．１、９０．７、１１１．８、１１３．８、１２６．４、１３２．４、１４０．８、１５８．１；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ：３１６
【００７９】
化合物（ＸIIｂ）：エストラジオールジメチルエーテル／マスタードプロドラッグ
（ＤＭＵ−３３３）
ジクロロメタン（１ｍｌ）中のトリホスゲン（０．２５ｍｍｏｌ、７４ｍｇ）からなる溶液に、ジクロロメタン（１．５ｍｌ）中の６−ヒドロキシエストラジオール３，１７−ジメチルエーテル（０．３ｍｍｏｌ、９５ｍｇ）及びジイソプロピルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）からなる溶液を添加した。混合物を３０分間攪拌し、次いでジクロロメタン（１．５ｍｌ）中のビス（クロロエチル）アミン塩酸塩（０．３ｍｍｏｌ、５３ｍｇ）及びジイソプロピルアミン（１．２ｍｍｏｌ、０．２ｍｌ）からなる溶液を添加し、混合物を１時間攪拌した。次いで、反応混合物を乾燥するまで蒸発させて、残さを酢酸エチルに再溶解させ、０．５ＭのＮａＣＯ３（水性）を用いて洗浄した。次いで、酢酸エチル溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させたところ、表題のエストラジオールジメチルエーテル／マスタードプロドラッグが得られた。ＩＲ（ＫＢｒ）１７００ｃｍ−１；ＭＳ（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝４８４
【００８０】
セクション２：ナフチルをベースとするプロドラッグ
６−メトキシ−１−メチル−１，２−ジヒドロナフタレン
メチルリチウム（ＴＨＦ中の１Ｍの溶液；２７ｍｌ、２７ｍｍｏｌ）を、ゆっくりと窒素下で、ＴＨＦ（１５ｍｌ）中の６−メトキシ−１−テトラロン（３．１６ｇ、１８ｍｍｏｌ）からなる溶液に添加した。反応混合物を、Ｎ２下、ＲＴで一晩（１２時間）反応させた。次いで、酢酸エチルを用いて希釈し、氷冷されたＨＣｌ（２Ｍ）を用いて急冷した。水層を更に酢酸エチルを用いて抽出し、乾燥させ、真空下で濃縮した。溶離剤として石油エーテル中の５％エーテルを使用して、シリカゲル上で粗物質をクロマトグラフィーによる精製をしたところ、ゴム状の表題の化合物が得られた（１．６ｇ、５２％）。１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：２．１（ｔ，３Ｈ，Ｍｅ）、２．２（ｍ，２Ｈ）、２．８（ｔ，２Ｈ）、３．８（ｓ，３Ｈ，ＯＭｅ）、５．８（ｔ，１Ｈ）、６．８〜７．２（ｍ，３Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）１９．３、２３．２、２８．９、５５．２、１１０．８、１１３．７、１２２．９、１２３．９、１２９．１、１３１．８、１３８．１、１５８．４；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝１７５
【００８１】
６−メトキシ−１−メチルナフタレン
テトラクロロ−１，２−ベンゾキノン（３．６ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を、ジエチルエーテル（２０ｍｌ）中の６−メトキシ−１−メチル−１，２−ジヒドロナフタレン（２．３ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）からなる攪拌された溶液に、一部づつ添加した。反応物を２４時間後に濃縮させ、溶離剤として石油エーテルを使用してカラムクロマトグラフィーによって精製したところ、白色固形物の表題の化合物が得られた（１．２ｇ、５３％）。１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）２．５（ｓ，３Ｈ）、３．８（ｓ，３Ｈ）、７．０〜７．８（ｍ，６Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）１９．３、５５．２、１０６．５、１１８．１、１２４．４、１２５．２、１２５．７、１２６．２、１２８．０、１３４．２、１３４．７、１５７．３；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝１７３
【００８２】
６−メトキシ−１−ナフタレンメチルブロマイド
四塩化炭素（８ｍｌ）中の６−メトキシ−１−メチルナフタレン（１００ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）からなる溶液に、Ｎ−ブロモこはく酸イミド（１１０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を添加し、続いて過酸化ベンゾイル（１０ｍｇ）を添加した。反応混合物を５時間還流させ、次いで周囲温度まで冷却させた。次いで、混合物を濾過し、形成された白色固形物を除去し、濾過物を濃縮させた。溶離剤として石油エーテル中の２％酢酸エチルを使用して、シリカゲル上でカラムクロマトグラフィーによって精製したところ、白色固形物の表題の化合物が得られた（１１５ｍｇ、７９％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）４．０（ｓ，３Ｈ、ＯＭｅ）、４．９（ｓ，２Ｈ、ＣＨ２ＢＲ）、７．１〜８．１（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）３１．８、５５．２、１０６．９、１１９．２、１２５．３、１２５．６、１２６．０、１２６．５、１３３．３、１３５．４、１５７．８；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝２５１
【００８３】
６−メトキシ−１−ナフタレンメタノール
（ＤＭＵ−３２１）
細かく粉砕されたＮａＯＨ（４４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５ｍｌ、１％のＨ２Ｏを含有する）中の６−メトキシ−１−ナフタレンメチルブロマイド（２５１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）からなる攪拌された溶液に添加した。反応を、一晩（１０時間）放置し、次いで酢酸エチルを用いて希釈し、続いて水洗した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させた。溶離剤としてＣＨ２Ｃｌ２を使用してカラムクロマトグラフィーによって精製したところ、白色固形物の表題の化合物が得られた（７６ｍｇ、４１％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）３．８（ｓ，３Ｈ、ＯＭｅ）、４．９（ｓ，２Ｈ、ＣＨＯＨ）、７．０〜７．８（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）５５．３、６３．７（Ｃ−ＯＨ）、１０６．７、１１８．９、１２３．２、１２５．５、１２６．０、１２６．７、１２７．５、１３５．２、１３６．４、１５７．５）；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝１８９
【００８４】
化合物（ＸIＶ）：ナフチル−コルヒチンプロドラッグ
（ＤＭＵ−３３１）
ジクロロメタン（１ｍｌ）中のトリホスゲン（０．２５ｍｍｏｌ、７４ｍｇ）からなる溶液に、ジクロロメタン（１．５ｍｌ）中の６−メトキシ−１−ナフタレンメタノール（０．３ｍｍｏｌ、５６ｍｇ）及びジイソプロピルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）からなる溶液を添加した。混合物を３０分間攪拌し、次いでジクロロメタン（１．５ｍｌ）中のＮ−デスアセチルコルヒチン（０．３ｍｍｏｌ、１０７ｍｇ）及びジイソプロピルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）からなる溶液を添加し、混合物を更に１時間攪拌した。次いで、反応混合物を乾燥するまで蒸発させて、残さを酢酸エチルに再溶解させ、０．５ＭのＮａＣＯ３（水性）を用いて洗浄した。次いで、酢酸エチル溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させたところ、表題のナフチル−コルヒチンプロドラッグが得られた。
【００８５】
ＩＲ（ＫＢｒ）１６９５ｃｍ−１；ＭＳ（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝５７２
化合物（ＸＶ）：ナフチル−マスタードプロドラッグ
（ＤＭＵ−３２２）
ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中の６−メトキシ−１−ナフタレンメタノール（６７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１０２ｍｇ、１３８μｌ、０．７９ｍｍｏｌ）からなる溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍｌ）中のトリホスゲン（１０７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）からなる攪拌された溶液に、窒素雰囲気下でゆっくりと添加した。１０分後、ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中のビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（６３ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）からなる溶液を上記反応混合物に添加した。反応を４時間進行させ、次いで希水性ＨＣｌ（１Ｍ）を用いて急冷した。次いで反応混合物を酢酸エチルを用いて抽出し、有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させたところ、粗生成物が得られた。溶離剤としてＣＨ２Ｃｌ２を使用してクロマトグラフィーにかけたところ、表題のナフチル−マスタードプロドラッグ（８０ｍｇ、６３％）が得られた。ＩＲ（ＫＢｒ）１７０１ｃｍ−１；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）３．４（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、３．６（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、３．７（ｂｓ，４Ｈ）、３．９（ｓ，３Ｈ）、５．６（ｓ，２Ｈ）、７．２〜７．９（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）４１．９、５０．７、５１．３、５５．３、６６．２、１０６．８、１１９．２、１２５．１、１２５．３、１２５．９、１２７．１、１２８．３、１３１．６、１３５．２、１５７．６、１８９．５；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝３５６
【００８６】
化合物（ＸＶI）：ナフチル／５−フルオロウラシルプロドラッグ
（ＤＭＵ−３３９）
ジクロロメタン（１ｍｌ）中のトリホスゲン（０．２５ｍｍｏｌ、７４ｍｇ）からなる溶液に、ジクロロメタン（１．５ｍｌ）中の６−メトキシ−１−ナフタレンメタノール（０．３ｍｍｏｌ、５６ｍｇ）及びジイソプロピルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）からなる溶液を添加した。混合物を３０分間攪拌し、次いでジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（１：１、１．５ｍｌ）中のジイソプロピルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）を含有する溶液中の、５−フルオロウラシル（０．３ｍｍｏｌ、４０ｍｇ）からなる懸濁液を添加し、混合物を更に１時間攪拌した。次いで、反応混合物を乾燥するまで蒸発させて、残さを酢酸エチルに再溶解させ、０．５ＭのＮａＣＯ３（水性）を用いて洗浄した。次いで、酢酸エチル溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させたところ、表題のナフチル／５−フルオロウラシルプロドラッグが得られた。ＩＲ（ＫＢｒ）１６９５ｃｍ−１；ＭＳ（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝３４５
【００８７】
セクション３：フェナントリルをベースとするプロドラッグ
化合物（ＸＶII）：フェナントリル−マスタードプロドラッグ
（ＤＭＵ−３３４）
ＣＨ２Ｃｌ２（１．５ｍｌ）中の７−メトキシ−１−ナフタレンメタノール（１１９ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１９４ｍｇ、２６０μｌ、１．５０ｍｍｏｌ）からなる溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍｌ）中のトリホスゲン（１４８ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）からなる攪拌された溶液に、窒素雰囲気下でゆっくりと添加した。１０分後、ＣＨ２Ｃｌ２（１．５ｍｌ）中のビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（８９ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）からなる溶液を、上記反応混合物に添加した。反応を、４時間進行させ、次いで希水性ＨＣｌ（１Ｍ）を用いて急冷した。次いで反応混合物を、酢酸エチルを用いて抽出し、有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させたところ、粗生成物が得られた。溶離剤としてＣＨ２Ｃｌ２を使用してクロマトグラフィーにかけたところ、表題のフェナントリルマスタードプロドラッグ（２４０ｍｇ、５９％）が得られた。ＩＲ（ＫＢｒ）１７００ｃｍ−１；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝４０６
【００８８】
セクション４：ベンジルをベースとするプロドラッグ
化合物（ＸＶIII）：３−メトキシベンジル／マスタードプロドラッグ
（ＤＭＵ−３１３）
ジクロロメタン（１ｍｌ）中のトリホスゲン（１６６ｍｇ；５６ｍｍｏｌ）からなる溶液に、無水ジクロロメタン（１ｍｌ）中の３−メトキシベンジルアルコール（７７ｍｇ；５６ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．２１４ｍｌ；１．２３ｍｍｏｌ）からなる溶液を滴下添加した。室温で２０分間攪拌後、無水ジクロロメタン（１ｍｌ）中のビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（１００ｍｇ；５６ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３１２ｍｌ；１．７９ｍｍｏｌ）からなる溶液を滴下添加し、混合物を１８時間攪拌した。反応を、水（１０ｍｌ）で急冷し、水層をエーテル（３×１０ｍｌ）を用いて抽出した。合わせた有機層を２Ｍの水性塩酸（３×１０ｍｌ）及び生理食塩水（３×１０ｍｌ）を用いて洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空下で濃縮させた。残さをシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけ、生成物を油状で単離した（６０ｍｇ；３５％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（１７００；ＣＯ）（１５００；ＡｒＣ＝Ｃ）（１２５０，ＯＣＨ３）；１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（３．６，ｓ；８Ｈ）（３．８，ｓ；３Ｈ）（５．１，ｓ；２Ｈ）（６．９，ｑ；３Ｈ）（７．３，ｔ；３Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：４１．９、５０．７、５１．３、５５．３，６７．５，１１３．３，１１３．８，１２０．１，１２９．７、１３７．７、１５５．８、１５９．８；マススペクトル（Ｍ＋）ｍ／ｅ：３０５
【００８９】
化合物（ＸIＸ）：３，５−ジメトキシベンジル／マスタードプロドラッグ
（ＤＭＵ−３１５）
手順は、３−メトキシベンジルアルコールに代えて３，５−ジメトキシベンジルアルコール（５００ｍｇ、２．９７ｍｍｏｌ）を使用した以外は、化合物（ＸＶIII）に記載されるのに従った。これによって、蝋質固形物の表題の３，５−ジメトキシベンジル／マスタードプロドラッグが得られた（３８２ｍｇ；３８％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（１７００；ＣＯ）（１５００；ＡｒＣ＝Ｃ）；１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（３．７，ｓ；８Ｈ）（３．８，ｓ；６Ｈ）（５．１，ｓ；２Ｈ）（６．４，ｔ；１Ｈ）（６．５，ｄ；２Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：４１．９、５０．７、５１．２、５５．３、６７．４、１００．２、１０５．５、１３８．４、１５５．６、１６０．９；マススペクトル（Ｍ−）ｍ／ｅ：３３５
【００９０】
化合物（ＸＸ）：ベンジル／マスタードプロドラッグ
（ＤＭＵ−３１１）
手順は、３−メトキシベンジルアルコールに代えてベンジルアルコール（５００ｍｇ、４．６２ｍｍｏｌ）を使用した以外は、化合物（ＸＶIII）に記載されるのに従った。これによって、油状の表題のベンジル／マスタードプロドラッグが得られた（２４７ｍｇ；３９％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（１７００；ＣＯ）（１５００；ＡｒＣ＝Ｃ）。１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（３．６，ｍ；８Ｈ）（３．８，ｓ；３Ｈ）（５．１，ｓ；２Ｈ）（７．４，ｓ；５Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：４１．９、５０．６、５１．１、６７．６、１２７．９、１２８．２、１２８．４、１２８．６、１３６．２、１５５．６；マススペクトル（Ｍ−）ｍ／ｅ：２７５
【００９１】
化合物（ＸＸI）：２−メトキシベンジル／マスタードプロドラッグ
（ＤＭＵ−３１２）
手順は、３−メトキシベンジルアルコールに代えて２−メトキシベンジルアルコール（５００ｍｇ；３．６２ｍｍｏｌ）を使用した以外は、化合物（ＸＶIII）に記載されるのに従った。これによって、蝋質固形物の表題の２−メトキシベンジル／マスタードプロドラッグが得られた（１６６ｍｇ；１５％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（１７００；ＣＯ）（１５００；ＡｒＣ＝Ｃ）。１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（３．６，ｄ；８Ｈ）（３．８，ｓ；３Ｈ）（５．２，ｓ；２Ｈ）（６．９，ｍ；２Ｈ）（７．３，ｄ；２Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：４２．０、５０．８、５１．８、５５．４、６１．８、６３．５、１１０．５、１２０．４、１２４．４、１２９．６、１２９．７、１５５．９、１５７．６；マススペクトル（Ｍ＋）ｍ／ｅ：３０５
【００９２】
化合物（ＸＸII）：２，５−ジメトキシベンジル／マスタードプロドラッグ
（ＤＭＵ−３３８）
手順は、３−メトキシベンジルアルコールに代えて２，５−ジメトキシベンジルアルコール（５００ｍｇ；２．９７ｍｍｏｌ）を使用した以外は、化合物（ＸＶIII）に記載されるのに従った。これによって、油状の表題の２，５−ジメトキシベンジル／マスタードプロドラッグが得られた（３５４ｍｇ；３５％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（１７００；ＣＯ）（１５００；ＡｒＣ＝Ｃ）；１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（３．５，ｍ；８Ｈ）（３．８，ｄ；６Ｈ）（５．１，ｓ；２Ｈ）（６．８，ｍ；２Ｈ）（７．０，ｔ；１Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：３４．２、４２．８、４３．３、４７．９、５３．１、５５．１、１０４．９、１１３．４、１１６．３、１２２．１、１３９．６、１４４．９、１４７．９、１５７．９；マススペクトル（Ｍ＋）ｍ／ｅ：３３５
【００９３】
化合物（ＸＸIII）：３−メトキシベンジル／５−フルオロウラシルプロドラッグ
（ＤＭＵ−３３５）
ジクロロメタン（５ｍｌ）中のトリホスゲン（１．６ｍｍｏｌ、４７４ｍｇ）からなる溶液に、ジクロロメタン（１０ｍｌ）中の３−メトキシベンジルアルコール（１．９２ｍｍｏｌ、２６５ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（３．８ｍｍｏｌ、０．６ｍｌ）からなる溶液を添加した。混合物を３０分間攪拌し、次いでジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（１：１、３ｍｌ）中のジイソプロピルアミン（３．８ｍｍｏｌ、０．６ｍｌ）を含有する溶液中の、５−フルオロウラシル（１．９２ｍｍｏｌ、２５０ｍｇ）からなる懸濁液を添加し、混合物を１時間攪拌した。次いで、反応混合物を乾燥するまで蒸発させて、残さを酢酸エチルに再溶解させ、０．５ＭのＮａＣＯ３（水性）を用いて洗浄した。次いで、酢酸エチル溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させたところ、表題の３−メトキシベンジル／５−フルオロウラシルプロドラッグが得られた。ＩＲ（ＫＢｒ）１６９５ｃｍ−１；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）（３．８（ｓ，３Ｈ）、５．４（ｓ，２Ｈ）、６．９（ｄｄ，１Ｈ）、７．０（ｔ，２Ｈ）、７．３（ｔ，１Ｈ）、８．２（ｄ，１Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝２９５
【００９４】
化合物（ＸＸIＶ）：３−メトキシベンジル／コルヒチンプロドラッグ
（ＤＭＵ−３３２）
ジクロロメタン（１ｍｌ）中のトリホスゲン（０．２５ｍｍｏｌ、７４ｍｇ）からなる溶液に、ジクロロメタン（１．５ｍｌ）中の３−メトキシベンジルアルコール（０．３ｍｍｏｌ、４１ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）からなる溶液を添加した。混合物を３０分間攪拌し、次いでジクロロメタン（１．５ｍｌ）中のＮ−デスアセチルコルヒチン（０．３ｍｍｏｌ、１０７ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）からなる溶液を添加し、混合物を１時間攪拌した。次いで、反応混合物を乾燥するまで蒸発させて、残さを酢酸エチルに再溶解させ、０．５ＭのＮａＣＯ３（水性）を用いて洗浄した。次いで、酢酸エチル溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させたところ、表題の３−メトキシベンジル／コルヒチンプロドラッグが得られた。ＩＲ（ＫＢｒ）１６９５ｃｍ−１；ＭＳ（Ｍ＋１）ｍ／ｅ＝５２２
【００９５】
化合物（ＸＸＶ）：３−メトキシベンジル／カルコンプロドラッグ
（ＤＭＵ−３３７）
ジクロロメタン（１ｍｌ）中のトリホスゲン（０．２５ｍｍｏｌ、７４ｍｇ）からなる溶液に、ジクロロメタン（１．５ｍｌ）中の３−メトキシベンジルアルコール（０．３ｍｍｏｌ、４１ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）からなる溶液を添加した。混合物を３０分間攪拌し、次いでジクロロメタン（１．５ｍｌ）中の、カルコン（Ｅ）−１−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロプ−１−エン−３−オン（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．６ｍｍｏｌ、０．１ｍｌ）からなる溶液を添加し、混合物を１時間攪拌した。次いで、反応混合物を乾燥するまで蒸発させて、残さを酢酸エチルに再溶解させ、０．５ＭのＮａＣＯ３（水性）を用いて洗浄した。次いで、酢酸エチル溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させたところ、表題の３−メトキシベンジル／カルコンプロドラッグが得られた。ＩＲ（ＫＢｒ）１７５０ｃｍ−１；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）３．８（ｓ，３Ｈ）、３．９（ｓ，３Ｈ）、４．０（ｄ，９Ｈ）、５．３（ｓ，２Ｈ）、６．９（ｍ，６Ｈ）、７．２（ｍ，６Ｈ）、７．８（ｄ，２Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）５５．３、５６．１、５６．５、６１．０、７０．５、１０５．９、１１２．６、１１３．８、１１４．３、１２０．５、１２１．３、１２８．０、１２８．９、１２９．１、１２９．８、１３０．９、１３３．６、１３６．３、１４０．５、１４２．４、１４３．６、１５３．２、１５９．８、１８９．０
【００９６】
化合物（ＸＸＶI）：３−メトキシベンジル／コンブレタスタチンプロドラッグ
（ＤＭＵ−３３６）
手順は、カルコンに代えて、コンブレタスタチン（９５ｍｇ、０３ｍｍｏｌ）を使用した以外は、化合物（ＸＸＶ）に記載されるのに従ったところ、表題の３−メトキシベンジル／コンブレタスタチンプロドラッグが得られた。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（１７５０；ＣＯ）（１５００；ＡｒＣ＝Ｃ）；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ：４３７
【００９７】
化合物（ＸＸＶII）：３−メトキシベンジル／レゾルフィンフルオロホル共役
（ＤＭＵ−３２０）
ジクロロメタン（１ｍｌ）中のトリホスゲン（１３９ｍｇ；４６．９ｍｍｏｌ）からなる溶液に、無水ジクロロメタン（１ｍｌ）中の３−メトキシベンジルアルコール（６５ｍｇ；４６．９ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．１８ｍｌ；１．０３ｍｍｏｌ）からなる溶液を、滴下添加した。室温で２０分間攪拌した後、無水ジクロロメタン／１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（１：１、１ｍｌ）中のレゾルフィン（１１０ｍｇ；４６．９ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．１８ｍｌ；１．０３ｍｍｏｌ）からなる懸濁液を滴下添加し、混合物を１８時間攪拌した。反応を水（１０ｍｌ）を用いて急冷し、褐色の沈殿物を単離した。残り／水層をエーテル（３×１０ｍｌ）を用いて抽出した。合わせた有機層を生理食塩水（３×１０ｍｌ）を用いて洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空下で濃縮させた。沈殿物及び単離された残さを混合し、予備薄層クロマトグラフィーを使用して精製したところ、橙色の固形物が得られた（４０ｍｇ；２１％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（１７５０；ＣＯ）（１２５０；ＯＣＨ３）；１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（３．８，ｓ；３Ｈ）（５．３，ｓ；２Ｈ）、（６．４，ｓ；１Ｈ）、（６．８，ｍ；４Ｈ）、（７．２，ｍ；４Ｈ）、（７．８，ｍ；１Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：５５．４、７０．９、１０７．４、１０９．１、１１４．１、１１４．６、１１８．５、１２０．８、１２９．９、１３１．３、１３４．８、１３５．３、１３５．７、１４４．４、１５３．６、１５７．８、１８６．３；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ：３７９
【００９８】
化合物（ＸＸＶIII）：３−メトキシベンジル／７−アミノ−４−メチルクマリン共役
（ＤＭＵ−３１９）
ジクロロメタン（１ｍｌ）中のトリホスゲン（４２３ｍｇ；１．４２ｍｍｏｌ）からなる溶液に、無水ジクロロメタン（１ｍｌ）中の３−メトキシベンジルアルコール（１７７ｍｇ；１．４２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．５４５ｍｌ；３．１２ｍｍｏｌ）からなる溶液を、滴下添加した。室温で２０分間攪拌した後、無水ＤＭＦ中の７−アミノ−４−メチルクマリン（２５０ｍｇ；１．４２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．５４５ｍｌ；３．１２ｍｍｏｌ）からなる溶液を滴下添加して、混合物を１８時間攪拌した。反応混合物を水（１０ｍｌ）及びエーテル（１０ｍｌ）を用いて希釈して白色の沈殿物を単離した。粗沈殿物を、予備薄層クロマトグラフィーを使用してクロマトグラフィーにかけたところ、白色固形物の生成物が得られた（５０ｍｇ；１０％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（１５２０；ＡｒＣＨ）（１２１０；ＯＣＨ３）；１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（２．４，ｓ；３Ｈ）（３．８，ｓ；３Ｈ）、（５．２，ｓ；２Ｈ）、（６．２，ｓ；１Ｈ）、（６．８，ｍ；３Ｈ）、（７．１，ｓ；１Ｈ）、（７．３，ｍ；４Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：１８．６、２９．７、５５．３、６７．３、１０５．９、１１３．９、１４．０、１４．４、１５．６、１２０．５、１２５．４、１２９．８、１４１．４、１５２．３、１５４．５、１５９．９、１６１．２；マススペクトル（Ｍ＋１）ｍ／ｅ：３５５
【００９９】
セクション５：シンナミルをベースとするプロドラッグ
３−メトキシシンナミルアルコール
リチウムアルミニウムハイドライド（２１３ｍｇ；５．５ｍｍｏｌ）を０℃で無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）に少しずつ添加した。これに、ＴＨＦ（５ｍｌ）中の３−メトキシシンナム酸（２ｇ；１１ｍｍｏｌ）からなる溶液を添加した。反応を０℃で１０分間攪拌させたままにし、次いで周囲温度まで到達させた。反応混合物を２Ｍの水性水酸化ナトリウム（１５ｍｌ）を用いて急冷し、水層をエーテル（３×１５ｍｌ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、２Ｍの塩酸（３×１５ｍｌ）、生理食塩水（３×１５ｍｌ）を用いて洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空下で濃縮させた。残さをシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけ、油状の生成物を単離した（２２２ｍｇ；１２％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（３４００，ＯＨ）（１４００；Ｃ＝Ｃ）（１２５０；ＯＣＨ３）；１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（３．８，ｓ；３Ｈ）（４．３，ｄｄ；２Ｈ）（６．３，ｍ；１Ｈ）（６．６，ｄ；１Ｈ）（６．８，ｄｄ；１Ｈ）（６．９，ｔ；１Ｈ）（７．０，ｄ；１Ｈ）（７．２，ｔ；１Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：５５．３、６３．６、１１１．９、１１３．４、１１９．２、１２８．９、１２９．６、１３１．０、１３８．２、１５８．２、１５９．９；マススペクトル（Ｍ＋）ｍ／ｅ：１６４
【０１００】
化合物（ＸＸＸ）：３−メトキシシンナミル／マスタードプロドラッグ
（ＤＭＵ−３２３）
手順は、３−メトキシベンジルアルコールに代えて３−メトキシシンナミルアルコール（２２２ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を使用した以外は、化合物（ＸＶIII）に記載されるのに従った。これによって油状の表題の３−メトキシシンナミル／マスタードプロドラッグが得られた（１１５ｍｇ；２６％）。ＩＲ（ｃｍ−１；ＫＢｒ）：（１７００；ＣＯ）（１５００；ＡｒＣ＝Ｃ）。１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（３．６，ｓ；８Ｈ）（３．８，ｓ；３Ｈ）（４．７，ｄｄ；２Ｈ）（６．３，ｍ；１Ｈ）（６．６，ｄ；１Ｈ）（６．８，ｄｄ；１Ｈ）（６．９，ｑ；２Ｈ）（７．２，ｍ；１Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：４１．９、５０．６、５１．２、５５．２、６６．３、１１１．９、１１４．２、１１９．３、１２３．７、１２９．６、１３３．９、１３７．６、１５５．６、１５９．８；マススペクトル（Ｍ＋）ｍ／ｅ：３３１
【０１０１】
化合物（ＸＸＸI）：シンナミル／レゾルフィンフルオロホル共役
（ＤＭＵ−３２５）
手順は、３−メトキシシンナミルアルコールに代えてシンナミルアルコール（２５０ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）を使用した以外は、化合物（ＸＸＶII）に記載されるのに従ったところ、橙色固形物の表題のシンナミル／レゾルフィン共役が得られた（４０ｍｇ；６％）。１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（４．９，ｄｄ；２Ｈ）（６．３，ｍ；２Ｈ）（６．９，ｄｄ；１Ｈ）（７．２，ｍ；９Ｈ）（７．８，ｍ；１Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：６３．７、６９．９、１０７．３、１０９．２、１１８．６、１２１．３、１２７．７、１２８．８、１３１．３、１３４．８、１３５．３、１３６．３、１４４．４、１４８．５、１４９．３、１５２．５、１５３．６、１８６．３
【０１０２】
化合物（ＸＸＸII）：シンナミル／７−アミノ−４−メチルクマリンフルオロホル共役
（ＤＭＵ−３２４）
手順は、３−メトキシベンジルアルコールに代えてシンナミルアルコール（７６ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を使用した以外は、化合物（ＸＸＶIII）に記載されるのに従ったところ、油状の表題の化合物が得られた（３ｍｇ；２％）。１Ｈ−ＮＭＲＣＤＣｌ３：（２．４，ｓ；３Ｈ）（４．９，ｓ；２Ｈ）（６．１，ｓ；１Ｈ）（６．２，ｍ；１Ｈ）（６．９，ｍ；１Ｈ）；（７．２，ｍ；８Ｈ）
【０１０３】
【表２】
表１：ＣＹＰ１Ｂを示さない及び示す細胞の成長抑制（ＩＣ５０／ｕＭ±２％）
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【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は式（I）を有するエストラジオールで誘導されたプロドラッグ、並びに、その４−ヒドロキシル化を示す。
【図２】  図２はエストラジオール−コルヒチンプロドラッグの合成を示すものである。Ｒは、Ｈ又は保護基、例えばアセテート基（ＣＯＣＨ３）又はベンジル基（ＣＨ２Ｃ６Ｈ５）を表わすものを意味する。
【図３】  図３は６−メトキシ−１−テトラロンから出発するナフチル／マスタードプロドラッグの合成を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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