(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化粧学上許容されるトリテルペン類の大豆サポニン若しくは大豆サポゲノール、又は、トリテルペン類の大豆サポニン若しくは大豆サポゲノールに富むグリシン・マックス抽出物から選択される化粧学上許容される一種以上と、
β−エクジソンを含有する真皮−表皮接合部中のコラーゲンＩＶ量を増加するための化粧剤。
【請求項２】
前記大豆サポニン若しくは大豆サポゲノールは、大豆の種から抽出されたものであることを特徴とする請求項１に記載の化粧剤。
【請求項３】
前記大豆サポニン若しくは大豆サポゲノールは、Ａ型若しくはＢ型トリテルペン類の大豆サポニン又は大豆サポゲノールであることを特徴とする請求項１又は２に記載の化粧剤。
【請求項４】
マデカシン酸、アジアチック酸、マデカシノシド、アジアチコシド、α−１−プロテナーゼ阻害剤、コラーゲナーゼ阻害剤、エラスターセ阻害剤、リシン、プロリン、２−オキソグルタミン酸、ギンセノシドＲ０、ビタミンＤ及びその誘導体、ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＥ、キサンチン、チロシン若しくはその誘導体、キニン若しくはその誘導体、発赤薬、ケラチンヒドリゼート、微量元素、５−α−リダクターゼ阻害剤、ミノキシジル、アゼライン酸及びその誘導体、１，４−メチル−４−アザステロイド、セレノア・レペンの抽出物からなる群より選択されるその他の活性成分の少なくとも１種と一緒に使用されることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の化粧剤。
【請求項５】
前記コラーゲナーゼ阻害剤がレチノール酸であって、前記チロシン誘導体がグルコースチロシネートまたはマリルチロシンであって、前記発赤薬がメチルニコチネートであって、前記微量元素が亜鉛、セレンまたは銅であって、前記５−α−リダクターゼ阻害剤がプロゲステロンまたはシプロテロン酢酸であって、前記１，４−メチル−４−アザステロイドが１７β−Ｎ，Ｎ−ジエチルカルバモイル−４−メチル−４−アザ−５−α−アンドロスタン−３−オンである請求項４に記載の化粧剤。
【請求項６】
前記大豆サポニン若しくは大豆サポゲノールと、前記β−エクジソンが、１：１０〜１０：１の重量割合で組み合わさっていることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の化粧剤。
【請求項７】
前記大豆サポニン若しくは大豆サポゲノールと、前記β−エクジソンが、１：１の重量割合で組み合わさっていることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の化粧剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載された化粧剤を含有し、前記大豆サポニン若しくは大豆サポゲノール、又は、前記大豆サポニン若しくは大豆サポゲノールに富むグリシン・マックス抽出物の比率が、最終化粧学的組成物の全重量に対し、０．００１〜５重量％であることを特徴とする真皮−表皮接合部中のコラーゲンＩＶ量を増加するための化粧学的組成物。
【請求項９】
前記大豆サポニン若しくは大豆サポゲノールと、前記β−エクジソンが、１：１０〜１０：１の重量割合で組み合わさっていることを特徴とする請求項８に記載の化粧学的組成物。
【請求項１０】
前記大豆サポニン若しくは大豆サポゲノール、又は、前記大豆サポニン若しくは大豆サポゲノールに富むグリシン・マックス抽出物の比率が、最終化粧学的組成物の全重量に対し、０．０１〜２重量％であることを特徴とする請求項８又は９に記載の化粧学的組成物。
【請求項１１】
加齢線に抗するため、または、日焼けを防止するためのクリームである請求項８〜１０のいずれか１項に記載の化粧学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、一般に、美容術及び真皮表皮接合部中のコラーゲンＩＶ量増加を目的とする皮膚処置用の医薬組成物の製造におけるサポニン又はサポゲノールの使用に関する。
さらに、本発明は、真皮表皮接合部中のコラーゲンＩＶ量増加を促進する新規化粧学的又は医薬組成物、及び、サポニン又はサポゲノールを用いた化粧学的処置の方法に関する。
【０００２】
真皮表皮接合部は、皮膚が適当に機能するのに必須な真皮及び表皮間の接着及び交換を確実にする複雑な構造であることが知られている。
コラーゲンＩＶとも称されるＩＶ型コラーゲンは、真皮表皮接合部の主要な構成物であり、真皮及び表皮間の機能的な界面を維持するのに特に関わっている。
真皮表皮接合部の最適な生理学的状態は、この真皮表皮接合部中にコラーゲンＩＶが充分量存在するかに依存する。
それゆえ、真皮表皮接合部の最適な生理学的状態を維持又は修復するために、そこにあるコラーゲンＩＶ量を増加する手段を持つことが望ましい。
トリテルペンサポニン及びサポゲノール、好ましくはＡ型又はＢ型のもの、特に化粧学上又は医薬上許容されるものが、真皮表皮接合部中のコラーゲンＩＶ量を増加する薬剤として特に好適であることが発見された；そのことが、本発明の基礎を構成する発見である。
【０００３】
すなわち、第一の特徴によれば、本特許出願は、真皮−表皮接合部中のコラーゲンＩＶ量を増加するための化粧剤としての、化粧学上許容されるトリテルペン類のサポニン又はサポゲノールの少なくとも１種、特に植物、好ましくは大豆若しくはメディカゴ種の植物から抽出されるサポニン若しくはサポゲノール、又は、そのような化合物に富む植物抽出物の使用を包含することを目的とする。
本発明は、化粧学的分野と同様、医薬的分野、特に皮膚科学分野にも適用される。
すなわち、第二の特徴によれば、本特許出願は、コラーゲンＩＶ量の不足から生じる真皮−表皮接合部欠損に伴う病状の治療用の医薬組成物、特に皮膚科学組成物製造の為の、医薬上許容されるトリテルペン類のサポニン若しくはサポゲノールの少なくとも１種、特に植物、好ましくは大豆若しくはメディカゴ種の植物から抽出されるサポニン若しくはサポゲノール、又は、そのような化合物に富む植物抽出物の使用を包含することを目的とする。
【０００４】
非常に多数のトリテルペン類のサポニン又はサポゲノールが、本発明の使用の範疇で、化粧学的又は医薬分野において適用できることが発見された。
これらの化合物は、化粧学的又は医薬的使用の範疇で化粧学上又は医薬上許容されなければならないが、好適には植物から抽出される。それらは、当業者が容易に理解し知っているように、化学合成によっても得ることができる。
特に、植物から抽出されるサポニン、好ましくはグリシン・マックス（大豆）、ファセオラス・ブルガリス、ファセオラス・オーレウス、ファセオラス・ルナタス、ビシア・ファーバ、レンス・クリナリス、シサー・アリータム、ビーナ・アングラリス、ビーナ・ムンゴ、オキシトロピス・オーロセファラ、オキシトロピス・グラバラ、ピサム・サティバム、ソフォラ・ファベッセンス、アスパラス・メンブラナセウス、クロタラリア・アルビダ、アラシス・ヒポゲア、ガレガ・オフィシナリス、ビスタリア・ブラチボリス及びトリフォリウム・レペンから抽出されるもの、又は、メディカゴ種の植物、特にメディカゴ・アルファルファ、及び、よく「アルファルファ」と称されるメディカゴ・サティバカルボニルから抽出されるものを使用することができよう。
【０００５】
第三の特徴として、本特許出願は、真皮表皮接合部中のコラーゲンＩＶ量を増加するための化粧剤としての、サポニン又はサポゲノールの少なくとも１種の使用であって、グリシン・マックス（大豆）、ファセオラス・ブルガリス、ファセオラス・オーレウス、ファセオラス・ルナタス、ビシア・ファーバ、レンス・クリナリス、シサー・アリータム、ビーナ・アングラリス、ビーナ・ムンゴ、オキシトロピス・オーロセファラ、オキシトロピス・グラバラ、ピサム・サティバム、ソフォラ・ファベッセンス、アスパラス・メンブラナセウス、クロタラリア・アルビダ、アラシス・ヒポゲア、ガレガ・オフィシナリス、ビスタリア・ブラチボリス及びトリフォリウム・レペンから選択され且つサポニン又はサポゲノールに富む植物、又は、メディカゴ種の植物、特にメディカゴ・アルファルファ及びメディカゴ・サティバ若しくは「アルファルファ」から抽出されるものである使用を包含することを目的とする。
【０００６】
第４の特徴として、本発明は、コラーゲンＩＶ量の不足から生じる真皮−表皮接合部欠損に伴う病状の治療用の医薬組成物、特に皮膚科学組成物製造の為の、サポニン又はサポゲノールの少なくとも１種の使用であって、グリシン・マックス（大豆）、ファセオラス・ブルガリス、ファセオラス・オーレウス、ファセオラス・ルナタス、ビシア・ファーバ、レンス・クリナリス、シサー・アリータム、ビーナ・アングラリス、ビーナ・ムンゴ、オキシトロピス・オーロセファラ、オキシトロピス・グラバラ、ピサム・サティバム、ソフォラ・ファベッセンス、アスパラス・メンブラナセウス、クロタラリア・アルビダ、アラシス・ヒポゲア、ガレガ・オフィシナリス、ビスタリア・ブラチボリス及びトリフォリウム・レペンから選択され且つサポニン又はサポゲノールに富む植物、又は、メディカゴ種の植物、特にメディカゴ・アルファルファ及びメディカゴ・サティバ若しくは「アルファルファ」から抽出されるものである使用を包含することを目的とする。好ましくは、トリテルペンサポニン又はサポゲノールに富む植物抽出物が使用されよう。
【０００７】
大豆、及び、メディカゴ・サティバ等のメディカゴ種の植物は、そのサポニン又はサポゲノールがトリテルペン型であり、また特にＡ型又はＢ型であることから、本発明の範疇内で使用できる上記化合物を供与するのに好適である。
このトリテルペン型のサポニン又はサポゲノールは、Ａ型若しくはＢ型のトリテルペン大豆サポニン又は大豆サポゲノールからなり、特にメディカゴ種の植物、特に、メディカゴ・アルファルファ、メディカゴ・サティバから抽出できる。
Ａ型若しくはＢ型のトリテルペン大豆サポニン又は大豆サポゲノールは、文献においてよく記載されている（例えば、記事、Ｇｅｏｒｇｅｓ  Ｍａｓｓｉｏｔ，  Ｃａｔｈｅｒｉｎｅ  Ｌａｖａｕｄ，  Ｄｏｍｉｎｉｑｕｅ  Ｇｕｉｌｌａｕｍｅ及びＬｏｕｉｓｅｔｔｅ  Ｌｅ  Ｍｅｎ−Ｏｌｉｖｉｅｒ、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．（１９８８），３６巻，９０２−９０９頁、及び、ケンブリッジ大学出版、Ｈｏｓｔｅｔｔｍａｎ  Ｋ．及びＭａｒｓｔｏｎ  Ａ．の「サポニン」と言うタイトルの本（１９９５）、特にＡｐｐｅｎｄｉｘ  ２、リファレンス４４６〜４６０及び５１７〜５１９参照。
それらは、以下の化学式：
−Ａ型大豆サポゲノール
【０００８】
【化１】
0005044071.tif 000002
【０００９】
−Ｂ型大豆サポゲノール
【００１０】
【化２】
0005044071.tif 000003
【００１１】
サポゲノールは糖置換基を含有せず、一般にアグリコンと称されている。一方で、それは糖又は糖鎖により置換されてもよく、そのとき、すなわちＡ型又はＢ型のものでありうる大豆サポニンと称される。
以下に例を挙げる：
【００１２】
【表１】
0005044071.tif 000004
【００１３】
【表２】
0005044071.tif 000005
【００１４】
【表３】
0005044071.tif 000006
【００１５】
上記トリテルペンサポニン又はサポゲノールは植物のいずれの部分からでも抽出することができるが、好ましくはメディカゴの場合は根から抽出したもの、大豆の場合は種から抽出することが好ましいであろう。
抽出条件は、例えば、本引用により本願に包括されるＷＯ９２／０９２６２の明細書を参照した当業者によく知られている。
本発明の使用の範疇において、サポニン、サポゲノール又はそれらを含有する植物抽出物の割合は、最終化粧学的又は医薬組成物の全体重量に対して、有利には０．００１〜５重量％、好ましくは０．０１〜２重量％である。
上記サポニン又は上記サポゲノールはトリテルペン類のサポニン又はサポゲノール、好ましくはＡ型又はＢ型のものを使用することが好ましいが、その性質に関わらず、例えばトリテルペン型のものでない場合でも、エクジステロイド又はアセチル化エクジステロイド誘導体、特にβ−エクジソン又はエクジステロンと一緒に使用した場合、サポニン及びサポゲノールの有益な作用が実質的に増加されうることも全く予想外に発見された。
【００１６】
エクジステロイド、特にエクジステロンは、特に昆虫中やポリポディウム・ブルガレ及びシアノティス・アラキノディア等の特定の植物に見受けられるよく知られた天然物質である。
エクジステロイドと一緒にしたサポニン又はサポゲノールの使用の範疇内において、それらの化合物は、好ましくは１：１０〜１０：１の間、特に好ましくは１：１の重量比で使用することができる。
サポニン又はサポゲノールは、マデカシン酸、アジアチック酸、マデカシノシド、アジアチコシド、α−１−プロテナーゼ阻害剤、レチノール酸等のコラーゲナーゼ阻害剤、エラスターセ阻害剤、リシン、プロリン、２−オキソグルタミン酸、ギンセノシドＲ０、ビタミンＤ及びそれらの誘導体、その他のビタミン、特にビタミンＡ、Ｂ及びＥ、キサンチン、チロシン若しくはその誘導体、例えばグルコースチロシネート、メチルチロシン、キニン若しくはその誘導体、メチルニコチネート、ケラチンヒドリゼート等の発赤薬、亜鉛、セレン又は銅等の微量元素、プロゲステロン若しくはシプロテロン酢酸等の５−α−リダクターゼ阻害剤、ミノキシジル、アゼライン酸及びその誘導体、１，４−メチル−４−アザステロイド、特に１７β−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル−４−メチル−４−アザ−５−α−アンドロスタン−３−オン、又は、セレノア・レペンの抽出物からなる群より選択される別の活性成分と一緒に使用することもできる。
【００１７】
この場合、この（これらの）その他の活性物質の濃度は、最終組成物の重量に対し、０．０００１〜５重量％の間である。
これらの物質は、サポニン又はサポゲノールを含有し、水和脂質層又はリポソーム型小包中に少なくとも部分的に任意に組み込まれることもできる。
第４の特徴によれば、本特許出願は、真皮表皮接合部中のコラーゲンＩＶ量の増加を促進する化粧学的又は医薬組成物を包含することを目的とする。
本組成物は、少なくとも１種のトリテルペン型のサポニン又はサポゲノールであることが好ましく、Ａ型若しくはＢ型であることが特に好ましいが、トリテルペン型でない場合でも、その種類を問わずサポニン又はサポゲノールの少なくとも１種を、有効量でエクジステロイド、特にβ−エクジソン又はエクジステロンと一緒に含有することを本質的な特徴とする。
この場合、上記サポニン又はサポゲノール及び上記エクジステロンは、１：１０〜１０：１の間、好ましくは１：１の重量割合で組み合わせる。
【００１８】
第５の特徴によれば、本特許出願は、上記定義した少なくとも１種のサポニン又は少なくとも１種のサポゲノールを有効量で、上述したもの等の１つ又は複数の他の活性物質と、及び／又は、エクジステロイド、特にエクジステロンと任意に一緒に、それを必要とするヒトへ局所的に投与される化粧学的処置方法を包含することを目的とする。
本発明のその他の目的、特徴及び利点は、いくつかの実施例で言及した以下の説明の記述で明確に明らかになるが、それらは詳述されているが、本発明の範囲を制限するものでない。
実施例において、他に断りのない限り、パーセンテージは重量単位で表され、温度は室温であり、圧力は大気圧である。抽出物の場合、その重量は乾燥重量で表される。
【００１９】
実施例１
大豆種から抽出されるサポニンによるコラーゲンＩＶ量の増加の証明
イタリアの会社ＩｎｄｅｎａよりＳＯＹ  ＳＥＬＥＣＴ  ＬＯＴ  ２６０４０／２と言う照合番号で市販されている大豆種抽出物を本実施例で使用した。
商品の情報によれば、本抽出物は、グループＢ大豆サポゲノールを主成分とする、乾燥重量で２９〜３０％の割合の「大豆サポニン」の部類のサポニンを含有する。
選択した実験のプロトコルの適正さを確認する為、一連の本試験は、ポジティブ・コントロール、すなわち、ヒトケラチン生成細胞の培養液中コラーゲンＩＶ量を増加することが知られているトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）と一緒に実施された。Ｋｏｎｉｇ  Ａ．及びＢｒｕｃｋｎｅｒ−Ｔｕｄｅｒｍａｎ  Ｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，１９９２年５月，１１７（３）巻，６９７−８５頁の記事を参照した。
【００２０】
１．試験のプロトコル
ａ．ケラチン生成細胞の由来：
普通ヒトケラチン生成細胞（ＮＨＫ）培養物は健康な皮膚から外科検体より成長させた。本試験では、４４歳のカフカス人女性に行ったフェイスリフトから得られた、ＨＫ４４と表した、細胞種で実施した。
ｂ．培養条件：
ケラチン生成細胞は、フランスのギブコ社で販売されている、ＥＧＦ（上皮増殖因子）及び下垂体抽出物を補足した完全特異ケラチン生成細胞培養培地（ＳＦＭ＝無血清培地）であるＫ−ＳＦＭ増殖培地中で培養した。細胞は、１継代した初代培養よりいったん植え継いだ、Ｐ１と称されるものである。
ｃ．処理条件：
細胞は、９６ウェルの培養プレート中に、Ｋ−ＳＦＭ中、ウェル当たり２５０００ＮＨＫの割合で接種した。細胞の良い接着に必要である接種２４時間後、接種培地を棄て、ＥＧＦ及び下垂体抽出物を除いた同じ基本培地で５０倍に希釈したＫ−ＳＦＭ培地に置換した。
それから、以下の表Ｉに示した様々な濃度でＤＭＳＯに溶解した本発明の試験すべき製品を添加して、混合液を７２時間培養した。
コントロールは、最終濃度０．１％で試験される製品に関し、同量のＤＭＳＯ溶媒を受けた。
培養液の上清を、以下で説明するＥＬＩＳＡを実行するために回収した。
【００２１】
ｄ．コラーゲンＩＶのＥＬＩＳＡ：
ＥＬＩＳＡ法によるコラーゲンＩＶを検定するプロトコルは、ＤＵＭＡＳ  Ｍ．らにより記載された、Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ａｇｅｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１９９４年、７３巻、１７９−１８７頁を採用した。
フランス、リヨンのパスツール研究所より提供された非ヒトコラーゲンＩＶ抗体を用いた。較正曲線は、シグマ社のヒト胎盤コラーゲンＩＶを用いて描いた。並行して、タンパク質検定全体を、細胞タンパク質の割合とコラーゲンＩＶ量とを関連づけるため、フランス、シグマ社で市販されているＢＣＡキットを用いてビシンコニニック酸法 （ｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）で行った。
３つの濃度各々及びコントロールテストに対して、６つの培養物を調製した。
ｅ．結果及び統計の説明の式：
ケラチン生成細胞培養物中のコラーゲンＩＶ量の増加の結果は、７２時間の培養後１００μｇタンパク質当たりのコラーゲンＩＶをナノグラム単位で表した。
製品の活性Ａはパーセンテージとして表され、以下の式に相当する：
【００２２】
【数１】
0005044071.tif 000007
【００２３】
式中、Ｑｓは、７２時間後の処理したＮＨＫ中のコラーゲンＩＶ量であり、１００μｇタンパク質当たり、ｎｇ量で表される。
Ｑｔは、７２時間後のＤＭＳＯコントロールＮＨＫ中のコラーゲンＩＶ量であり、１００μｇタンパク質当たり、ｎｇ量で表される。
処理した培養物（ｎ＝６）及びコントロール培養物（ｎ＝６）で得られた結果は、無対スチューデントｔ−検定により比較して、有意性水準は、ｐ＝０．０５とした。
２．結果及び結論
結果は、相違する培養物の測定値の平均を基にした以下の表Ｉで示した。
【００２４】
【表４】
0005044071.tif 000008
【００２５】
コラーゲンＩＶの割合は、７２時間細胞に接触させた後の１００μｇタンパク質当たりｎｇ単位で表したことを示しておく。試験したサポニンでヒトケラチン生成細胞培養物中、コラーゲンＩＶ量が有意に増加したことが明確に明らかである。
ポジィティブ・コントロール（ＴＧＦ−β）は、選択した実験プロトコルに有意に応答し、その実証及び実施した試験の適正さが確認できる。
このように、サポニンは、特に大豆より抽出したものは、コラーゲンＩＶ量の増加の為の化粧品又は医薬品若しくは皮膚科学薬品に使用できる。この場合、それにより、真皮及び表皮の交換区域でありケラチン生成細胞の分化過程に対し非常に重要な区域である真皮−表皮接合部の構造及び性質を強化することができる。
【００２６】
実施例２
メディカゴサポニンの存在下でのコラーゲンＩＶ量の増加の証明
本試験は以下のように実施した：
メディカゴ・サティバの根由来のサポニンからなる試験物は、Ｂｅｒｋｅｍ社より市販され販売されている粉状のものである。
本試験は、製品がメディカゴサポニンと称されているという予備知識無しで行った。
１．試験のプロトコル
ａ．ケラチン生成細胞の由来：
普通ヒトケラチン生成細胞（ＮＨＫ）培養物は、健康な皮膚から外科検体より成長させた。本試験では、４８歳のカフカス人女性に行ったフェイスリフトから得られた、ＨＫ５５５と表した細胞種で実施した。
ｂ．培養条件：
ケラチン生成細胞は、細胞を４回植え継ぎ、Ｐ４と称される、第４の植え継ぎ又は４継代した段階で回収したものである以外は、前の実施例で記載したのと同様の方法で培養した。
【００２７】
ｃ．処理条件：
細胞は、９６ウェルの培養プレート中に、Ｋ−ＳＦＭ中ウェル当たり３００００ＮＨＫの割合で接種した。
細胞の良い接着に必要である接種２４時間後、培地を２％に希釈したＫ−ＳＦＭで置換して、ケラチン生成細胞の増殖を制限した。
使用する直前に、本発明の製品を市販品より、それぞれ２．５、１０及び２５ｍｇ／ｍｌの割合でＤＭＳＯ溶媒中に調製した、そしてその貯蔵溶液を試験培地に添加して、最終濃度０．１％ｖ／ｖ、すなわち試験濃度２．５、１０及び２５μｇ／ｍｌとした。コントロールは、製品の賦形剤、すなわち０．１％ｖ／ｖのＤＭＳＯを受けた。
【００２８】
相違する試験濃度で本発明の製品に毒性がないことを、フランス、ＢＯＥＨＲＩＮＧＥＲ社のＸＴＴバイアビリティを用いて実証もした。
４８時間処理後、インキュベートした上清を存在するコラーゲンＩＶの検定のために回収した。細胞タンパク質の割合と存在するコラーゲンＩＶ量とを関連づけるため、ＳＩＧＭＡ社のＢＣＡ法をウェル中にとどまる細胞皮膜上のタンパク質検定の為に使用した。
ｄ．コラーゲンＩＶのＥＬＩＳＡ：
検定プロトコルは、検定の展開において以下の改良を行う以外は、実施例１と同様である。
−第１抗体：リヨンのパスツール研究所、照合番号２０４１１由来の非ヒトコラーゲンＩＶウサギモノクローナル抗体
−シグマ社、照合番号Ｃ５５３３のヒト胎盤由来のＩＶ型コラーゲンで調製した較正標準
ｅ．結果及び統計の説明の式：
実験の結果は、実施例１のｅ）で記載した方法で表し、以下の表ＩＩに示した。
２．結果及び結論：
結果は、相違する培養物の測定値の平均を基にして以下の表ＩＩで示した。
【００２９】
【表５】
0005044071.tif 000009
【００３０】
メディカゴ・サティバ又はアルファルファの根由来のサポニンの存在下で調製した普通ヒトケラチン生成細胞培養物中に存在するコラーゲンＩＶ量に有意な増加があったことが判った。サポニンの活性濃度は、１０及び２５μｇ／ｍｌであり、最大活性は１０μｇ／ｍｌであった。
このように本発明の製品は活性であり、実施例１と同様、化粧品製造のための化粧剤、真皮−表皮結合を強化する為の医薬的又は皮膚科学的組成物として使用することができる。
実施例３
大豆種から抽出されるサポニン及びβ−エクジソンの存在下でのコラーゲンＩＶ量の増加の証明
プロトコルは、大豆種（イタリアの会社Ｉｎｄｅｎａから市販されている、照合番号ＳＯＹ  ＳＥＬＥＣＴ  ＬＯＴ  ２６０４０／２）抽出物をβ−エクジソンと一緒に使用し、その２つの組成物を重量比１／１としたこと以外、並びに、試験品及び細胞間の接触時間を（７２時間の代わりに）４８時間としたこと以外は、実施例１での記載と同様である。
結果を、相違する培養物の測定値の平均を基にして以下の表ＩＩＩに示した。
【００３１】
【表６】
0005044071.tif 000010
【００３２】
表ＩＩＩから、β−エクジソンと一緒にした又は組み合わせた、一定濃度（２つの組成物が、各々２．５及び５μｇ／ｍｌ）の大豆サポニンの使用は、普通ヒトケラチン生成細胞を含有する培養物中でのコラーゲンＩＶ量の増加に関し、大豆サポニンのみの使用より、よりいっそう効果的であった。
同様の実験を、β−エクジソン単独使用でも行った。コラーゲンＩＶ量の増加は、見受けられなかった。
それゆえ、本発明者は、普通ヒトケラチン生成細胞を含有する培養物中でコラーゲンＩＶ量の増加を生じさせる大豆サポニン及びβ−エクジソンの能力に関し、それらの成分間に相乗的効果があると結論付けた。
それゆえ、大豆サポニンのβ−エクジソンとの組み合わせは、普通ヒトケラチン生成細胞を含有する培養物中でコラーゲンＩＶ量の増加する手段として非常に効果的であると思われる。
このように、本発明のサポニン及びエクジステロイドの組み合わせは、化粧学的、医薬的適用、特に皮膚科学的適用に非常に価値がある。
【００３３】
実施例４
加齢線を阻止するためのクリーム
レチノール                          ４０００ＩＵ
Ｂ型大豆サポニン                    ０．０１ｇ
グリセロール                        ３ｇ
コミッフォラ・ムックル（Ｃｏｍｍｉｐｈｏｒａ  ｍｕｋｋｕｌ）抽出物
０．１ｇ
流体乳化物賦形剤            合計して１００ｇ
この流体乳化物は、しわを処置するため晩に使用し、皮膚中に作用するべきものである。
【００３４】
実施例５
しわを阻止し、光加齢を防止するためのクリーム
レチノール                        ２０００ＩＵ
パルミチン酸レチノール            ０．０１ｇ
アスコビルパルミチン酸            ０．１ｇ
小麦タンパク質                    ３ｇ
大豆サポニン                      ０．０５ｇ
マデカッソシド                    ０．０５ｇ
パーソル（Ｐａｒｓｏｌ）ＭＣＸ    ７ｇ
ベンゾフェノン３                  １ｇ
シアバター                        １ｇ
香水を付けたクリーム賦形剤      合計して１００ｇ
このクリームは午後遅く以降に塗布して、内側からしわを修復して太陽光の最終光線から皮膚を保護するものである。