(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
五斂子（Averrhoa carambola L.）の葉部から極性溶媒を使用した抽出処理により得られる抽出物を有効成分として含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤。
【請求項２】
五斂子（Averrhoa carambola L.）の葉部から極性溶媒を使用した抽出処理により得られる抽出物を有効成分として含有することを特徴とするサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤。
【請求項３】
五斂子（Averrhoa carambola L.）の葉部から極性溶媒を使用した抽出処理により得られる抽出物を有効成分として含有することを特徴とする活性酸素消去剤。
【請求項４】
五斂子（Averrhoa carambola L.）の葉部から極性溶媒を使用した抽出処理により得られる抽出物を有効成分として含有することを特徴とするラジカル消去剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒスタミン遊離抑制作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、活性酸素消去作用またはラジカル消去作用を有し、アレルギー性疾患や炎症性疾患等の予防・治療、皮膚の老化（例えば、皮膚のしわ形成や弾力性低下等）の予防・治療などに有用な植物抽出物を含有する各種薬剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、花粉症、アレルギー性鼻炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎など、アレルギー反応を通じて発症するアレルギー性疾患は、子供から成人にまで及ぶ広い年代層において見られる現代病の一つとなっている。その原因となるアレルギー反応はＩ型からＩＶ型に分けられる。例えば、アレルギー性鼻炎や気管支喘息に代表されるＩ型アレルギー（即時型アレルギー）においては、肥満細胞や好塩基球からヒスタミン、ロイコトリエン、プロスタグランジン等のケミカルメディエーターが放出され、これらケミカルメディエーターが鼻炎や喘息などの症状を伴う炎症反応を引き起こす。また、アレルギー性接触性皮膚炎に代表されるＩＶ型アレルギー（遅延型アレルギー）においては、Ｔ細胞が放出するサイトカインが好酸球やマクロファージを活性化し集積させ、炎症反応を引き起こす。
【０００３】
このようなアレルギー反応やそれに伴う炎症反応は、体内におけるヒスタミン遊離、血小板凝集、活性酸素やラジカルの発生などが原因となって生じる。
【０００４】
ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象で、遊離されたヒスタミンが炎症反応を引き起こす。このため、ヒスタミン遊離を阻害・抑制する物質によりアレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療する試みがなされており、そのようなヒスタミン遊離抑制剤として、トラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメタジン等が用いられてきた。しかしながら、これらの物質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題となっていた。
【０００５】
血小板凝集は、アラキドン酸カスケードのホスホリパーゼＡ２の活性化を招き、それにより放出されたロイコトリエンＢ４やプロスタグランジンＥ２等が炎症反応を引き起こす。このため、血小板の凝集を阻害・抑制する物質によりアレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療する試みがなされており、そのような血小板凝集阻害物質として、アスピリン、チクロピジン、スルフィピラゾン等が用いられてきた。しかしながら、これらの物質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題となっていた。
一方、血小板の凝集は血小板中のサイクリックＡＭＰの濃度と関係があり、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼによってサイクリックＡＭＰが分解されてサイクリックＡＭＰの濃度が低下すると、血小板は凝集しやすくなる。従って、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑制してサイクリックＡＭＰ濃度の低下を防止すれば、血小板凝集を防止できるものと考えられる。
【０００６】
活性酸素やラジカルは、体内で過剰に産生されたり、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）による消去が不十分であったりして、体内における濃度が高くなると、アレルギー性炎症を生じさせるだけでなく、様々な組織障害の原因となる。特に、皮膚は紫外線など環境因子の刺激を直接受けるため活性酸素やラジカルが発生しやすい器官であり、活性酸素やラジカルは、コラーゲン等の生体組織を分解、変性あるいは架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりして、皮膚のしわ形成や弾力性低下等の皮膚の老化を引き起こす。このため、活性酸素消去物質やラジカル消去物質を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、ウワミズザクラのプルヌソールＡ、ユーカリ等のエラグ酸、大麦、黒米、黒インゲン等の穀類のフラボノイド類、茶のカテキン、ゴマのセサミン類、セージ、ローズマリー等のハーブ類に含まれるカルノソールやロズマノール等の有効性が確認されている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
アレルギー反応やそれに伴う炎症反応を阻害・抑制し、アレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療するには、その原因となるヒスタミン遊離、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼによるサイクリックＡＭＰの分解、活性酸素や生体内ラジカルの発生等を阻害・抑制することが有用であると考えられる。また、活性酸素や生体内ラジカルの発生の阻害・抑制により、過酸化脂質の生成の抑制等を通じて皮膚のしわ形成や弾力性低下等の皮膚の老化を予防・治療できるものと考えられる。
【０００８】
そこで、本発明は、第一に、天然物の中からヒスタミン遊離抑制作用を有するものを見出し、それを有効成分としたヒスタミン遊離抑制剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第二に、天然物の中からサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有するものを見出し、それを有効成分としたサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤を提供することを目的とする。
さらに、本発明は、第三に、天然物の中から活性酸素消去作用を有するものを見出し、それを有効成分とした活性酸素消去剤を提供することを目的とする。
さらに、本発明は、第四に、天然物の中からラジカル消去作用を有するものを見出し、それを有効成分としたラジカル消去剤を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、本発明により提供されるヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消去剤は、五斂子（Averrhoa carambola L.）の葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１０】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明のヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消去剤の有効成分である「五斂子の葉部からの抽出物」には、抽出処理によって五斂子の葉部から得られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、またはこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１１】
抽出処理の際に抽出原料として使用するものは、五斂子（学名：Averrhoa carambola L.；生薬名：陽桃）の葉部である。葉部には、完全葉の他、葉の一部（例えば葉身、葉柄、托葉など）が含まれる。また、五斂子の茎部も抽出原料として使用することができるので、茎部を葉部とともに抽出原料とすることや、茎部のみを抽出原料とすることも可能である。
【００１２】
五斂子はカタバミ科に属し、新鮮な果実は食用される。五斂子は、中国では紀元前から文献に記載され、その果実は断面が星形のことからスターフルーツとも呼ばれている。五斂子は沖縄、中国東南部や雲南その他熱帯各地で栽培されており、これらの地域から容易に入手することができる。
【００１３】
抽出原料として使用する五斂子の葉部は、採取後ただちに乾燥し、中切または細切したもの、あるいは粉砕したものが適当である。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥器を用いて行ってもよい。五斂子の葉部は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行なうことにより、五斂子の葉部の極性溶媒による抽出処理を効率よく行なうことができる。
【００１４】
抽出処理の際には、抽出溶媒として極性溶媒を使用するのが好ましい。五斂子の葉部に含まれるヒスタミン遊離抑制作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、活性酸素消去作用またはラジカル消去作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。
【００１５】
好適な抽出溶媒の具体例としては、水、低級脂肪族アルコール、含水の低級脂肪族アルコール等を例示でき、これらを単独で、またはこれら２種以上の混合物として使用することができる。好適な低級脂肪族アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、1,3−ブチレングリコール、エチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、イソプレングリコール等を例示することができる。これらの抽出溶媒は取り扱いが容易であり、抽出作業を比較的容易に行なうことができる。
【００１６】
抽出溶媒として使用し得る水には、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１７】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比を７：３〜２：８（重量比）とすることができる。
【００１８】
抽出処理は、五斂子の葉部に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されず、常法に従って行なうことができる。抽出処理の際には、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。
【００１９】
例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、ときどき攪拌しながら可溶性成分を溶出させる。この際、抽出条件は抽出原料等に応じて適宜調整し得るが、抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（重量比）あり、抽出時間は通常１〜３時間であり、抽出温度は通常、常温〜９５℃である。
【００２０】
抽出処理により可溶性成分を溶出させた後、ろ過して抽出残渣を除くことによって、抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、またはこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。例えば、抽出液を遠心分離などにより固液分離して目的となる抽出物を得ることができる。
【００２１】
得られた抽出液はそのままでもヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消去剤として使用することができるが、活性が低い場合もあるため、濃縮液またはその乾燥物としたものの方が利用しやすい。例えば、適当に濃縮したエキス状物や、スプレードライ等の方法を用いてさらに乾固させた乾燥エキスとして使用することができる。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。
【００２２】
また、五斂子の葉部は特有の匂いと味を有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行なうことも可能であるが、化粧料や飲食品に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行なうことができる。
【００２３】
以上のようにして得られる五斂子の葉部からの抽出物は、ヒスタミン遊離抑制作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、活性酸素消去作用またはラジカル消去作用を有する。
【００２４】
五斂子の葉部からの抽出物は、そのままでもヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消去剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して使用することもできる。製剤化する場合、保存や取り扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができる。五斂子の葉部からの抽出物は、製剤化により錠剤、カプセル剤、散剤、液剤等、任意の剤形とすることができ、外皮用剤、内服液剤、内服固形剤注射剤、座剤等として使用することができる。また、五斂子の葉部からの抽出物は、飲食品、皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品、医薬品等の構成成分として広く利用することができる。
【００２５】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消去剤の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度等により適宜決定することができる。
【００２６】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤は、ヒスタミンの遊離を抑制することができる。本発明のヒスタミン遊離抑制剤によれば、Ｉ型アレルギー反応に伴う肥満細胞からのヒスタミンの遊離を抑制することができ、これによりヒスタミンによって引き起こされる炎症反応を抑制することができる。したがって、本発明のヒスタミン遊離抑制剤によれば、ヒスタミン遊離が関与するアレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療することができる。
【００２７】
本発明のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの活性を阻害することができる。血小板の凝集は血小板中のサイクリックＡＭＰの濃度と関係があり、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼによってサイクリックＡＭＰが分解されてサイクリックＡＭＰの濃度が低下すると、血小板は凝集しやすくなる。そして、血小板凝集は、アラキドン酸カスケードのホスホリパーゼＡ２の活性化を招き、それにより放出されたロイコトリエンＢ４やプロスタグランジンＥ２等が炎症反応を引き起こす。したがって、本発明のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤によれば、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑制して血小板凝集を防止でき、これにより血小板凝集が関与する炎症反応を抑制することができる。また、本発明のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤によれば、血小板凝集が関与するアレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療することができる。
【００２８】
本発明の活性酸素消去剤は、活性酸素を消去することができる。ここで、「活性酸素」には、スーパーオキサイド、過酸化水素、ヒドロキシラジカル、一重項酸素等が含まれる。本発明の活性酸素消去剤は、これらの活性酸素種のうち特に過酸化水素を消去するために好適に使用することができる。活性酸素は、アレルギー性炎症を生じさせるだけでなく、生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、種々の炎症性疾患を誘発する。したがって、本発明の活性酸素消去剤によれば、活性酸素が関与するアレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療することができる。また、活性酸素は、コラーゲン等の生体組織を分解、変性あるいは架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりして、皮膚のしわ形成や弾力性低下等の皮膚の老化を引き起こす。したがって、本発明の活性酸素消去剤によれば、過酸化脂質の生成の抑制等を通じて、皮膚のしわ形成や弾力性低下等の皮膚の老化を防止することができる。
【００２９】
本発明のラジカル消去剤は、ラジカルを消去することができる。ここで、「ラジカル」とは、不対電子を１つまたはそれ以上有する分子または原子を意味する。本発明のラジカル消去剤が消去し得るラジカルは特に限定されないが、本発明のラジカル消去剤は、スーパーオキサイド、ヒドロキシラジカル、ＤＰＰＨ等のラジカルを消去するために好適に使用することができる。スーパーオキサイド、ヒドロキシラジカル等の生体内ラジカルは、アレルギー性炎症を生じさせるだけでなく、生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、種々の炎症性疾患を誘発する。したがって、本発明のラジカル消去剤によれば、生体内ラジカルが関与するアレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療することができる。また、生体内ラジカルは、皮膚の老化に関与する過酸化脂質を生成する根源であり、特に、ヒドロキシラジカルは、生体内に存在する脂質、蛋白質、核酸または糖質等と直ちに化学反応し、細胞膜の脂質の過酸化を引き起こす。したがって、本発明のラジカル消去剤によれば、生体内ラジカルによる過酸化脂質の生成の抑制等を通じて、皮膚のしわ形成や弾力性低下等の皮膚の老化を防止することができる。
【００３０】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消去剤は、患者に直接投与（例えば経口投与）してもよいが、皮膚外用剤、飲食品等に配合して使用することが好ましい。
【００３１】
ここで、「皮膚外用剤」とは、皮膚に適用される各種薬剤を意味し、例えば、化粧料、医薬部外品、医薬品、浴用剤等が含まれる。皮膚外用剤の具体例としては、肌に対するものとして、軟膏、パップ、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー等を例示でき、頭皮に対するものとして、トニック、リンス、シャンプー、アストリンゼント等を例示することができる。
【００３２】
また、飲食品の具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これら飲料の濃縮液および調製用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の氷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、シュウマイの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、天ぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂および油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；錠剤状、顆粒状等の種々の形態の健康・栄養補助食品類；その他スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物、等を例示することができる。
【００３３】
皮膚外用剤への配合量は、五斂子の葉部からの抽出物の活性の強さや、当該抽出物を配合する皮膚外用剤の種類によって適宜調整し得るが、通常０．００１〜１．０重量％である。また、飲食物への配合量は、五斂子の葉部からの抽出物の摂取量が１日あたり１〜１０００ｍｇとなるように調整することが好ましい。
【００３４】
以上に説明したヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消去剤は、ヒトに対して好適に適用するものであるが、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００３５】
【実施例】
以下、本発明に係る実施例を示し、本発明について更に詳細に説明する。
【００３６】
〔製造例１〕
五斂子（学名：Averrhoa carambola L.）の葉部の粗粉砕物300gを抽出溶媒2000mlに投入し、穏やかに攪拌しながら３時間、70℃に保った。その後ろ過し、ろ液を40℃で減圧下にて濃縮し、さらに減圧乾燥機で乾燥して五斂子の葉部からの抽出物を得た。４種類の抽出溶媒を用いて上記抽出処理を行ったところ、抽出物の収率は表１のとおりであった。なお、抽出溶媒が混合物の場合、以下に示す混合比は重量基準によるものである。
【００３７】
0004889068.tif 000002
【００３８】
〔試験例１〕過酸化水素消去作用（ＳＯＤ様活性）の試験
製造例１で得られた水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノール抽出物（試料４）について、以下の方法で過酸化水素消去作用を試験した。
【００３９】
（１）過酸化水素の標準溶液（濃度1.5mM）10μLに、試料１〜４をそれぞれ含有する試料溶液10μLを加え、37℃で20分間インキュベートした後、発色試薬［DA-64（和光純薬）を10mMおよびトライトンX-100を0.5％含む0.1M PIPES緩衝液（pH 7.0）に、ペルオキシダーゼ溶液（100unit/mL，和光純薬）1mLを加え、全量を100mLに調整したもの］2.98mLを添加し、37℃で５分間インキュベートした後、波長727nmにおける吸光度を測定した。以下、この吸光度を「過酸化水素標準溶液添加、試料溶液添加時の吸光度」という。
【００４０】
（２）上記（１）において、過酸化水素の標準溶液を添加しない場合についても同様にして吸光度を測定した。以下、この吸光度を「過酸化水素標準溶液無添加、試料溶液添加時の吸光度」という。
【００４１】
（３）上記（１）および（２）において、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様にして吸光度を測定した。以下、これらの吸光度をそれぞれ「過酸化水素標準溶液添加、試料溶液無添加時の吸光度」および「過酸化水素標準溶液無添加、試料溶液無添加時の吸光度」という。
【００４２】
（４）次式に基づいて、試料１〜４の過酸化水素消去率（％）を求めた。
【００４３】
【式１】
過酸化水素消去率（％）＝〔１−(C−D)/(A−B)〕×100
【００４４】
なお、式中、「Ａ」は過酸化水素標準溶液添加、試料溶液無添加時の吸光度を、「Ｂ」は過酸化水素標準溶液無添加、試料溶液無添加時の吸光度を、「Ｃ」は過酸化水素標準溶液添加、試料溶液添加時の吸光度を、「Ｄ」は過酸化水素標準溶液無添加、試料溶液添加時の吸光度を表す。
【００４５】
試料溶液の終濃度を段階的に変化させて過酸化水素消去率（％）の測定を行ない、過酸化水素消去率が50％になる試料濃度(ppm；μg/mL)を内挿法により求めた。
試料１〜３の過酸化水素50％消去濃度は以下の表２に示すとおりであった。
【００４６】
0004889068.tif 000003
【００４７】
表２に示す結果から、五斂子の葉部からの水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノール抽出物（試料４）はいずれも過酸化水素消去作用（ＳＯＤ様活性）を有することが示された。また、これらの抽出物の中でも特に50％エタノール抽出物（試料２）が優れた過酸化水素消去作用（ＳＯＤ様活性）を有することが示された。また、抽出物の濃度を変化させることにより、過酸化水素消去作用（ＳＯＤ様活性）の強さを変化させることができることが示された。
【００４８】
〔試験例２〕ラジカル消去作用
製造例１で得られた水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノール抽出物（試料４）について、非常に安定なラジカルであるDPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl）を使用して以下の方法によりラジカル消去作用を試験した。
【００４９】
（１）1.5×10-4M DPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl）エタノール溶液３mLに、試料１〜４をそれぞれ含有する試料溶液３mLを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜた後、30分間静置した。その後、520nmにおける吸光度を測定した。以下、この吸光度を「試料溶液添加時の吸光度」という。
【００５０】
（２）コントロールとして、試料溶液の代わりに試料を溶解した溶媒を用いた場合についても同様にして520nmにおける吸光度を測定した。以下、この吸光度を「コントロールの吸光度」という。
【００５１】
（３）ブランクとして、エタノール３mLに試料溶液３mLを加えた後、直ちに520nmにおける吸光度を測定した。以下、この吸光度を「ブランクの吸光度」という。
【００５２】
（４）次式に基づいて、試料１〜４のラジカル消去率（％）を求めた。
【００５３】
【式２】
ラジカル消去率（％）＝〔１−(B−C)/A〕×100
【００５４】
なお、式中、「Ａ」はコントロールの吸光度を、「Ｂ」は試料溶液添加時の吸光度を、「Ｃ」はブランクの吸光度を表す。
【００５５】
試料濃度の試料濃度を段階的に変化させてラジカル消去率（％）を測定し、ラジカル消去率が50％になる試料濃度（ppm；μg/mL）を内挿法により求めた。
試料１〜４のラジカル50％消去濃度は以下の表３に示すとおりであった。
【００５６】
0004889068.tif 000004
【００５７】
表３に示す結果から、五斂子の葉部からの水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノール抽出物（試料４）はいずれもラジカル消去作用を有することが示された。また、これらの抽出物の中でも特に50％エタノール抽出物（試料２）が優れたラジカル消去作用を有することが示された。また、抽出物の濃度を変化させることにより、ラジカル消去作用の強さを変化させることができることが示された。
【００５８】
〔試験例３〕ヒスタミン遊離抑制作用の試験
製造例１で得られた水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノール抽出物（試料４）について、以下の方法でヒスタミン遊離抑制作用を試験した。なお、以下の方法は、細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価する方法である。
【００５９】
（１）25mLの培養フラスコに入れた培地（15％FBS添加S-MEM培地；以下同じ）にRBL-2H3細胞 1.0×106個を播種し、37℃、5％CO2-95％airの下で４日間培養した。次いで、トリプシン処理し、遠心分離（800rpmで４分間）して細胞を集めた。得られた細胞を4.0×105cell/mLで培地に懸濁し、そこにマウスモノクローナル抗ジニトロフェニル基IgE（DNP-Specific IgE）を0.5μg/mLの濃度で添加した。この細胞浮遊液を96ウェルプレートの各ウェルに100μLずつ播種し、37℃、5％CO2-95％airの下で24時間培養した。培養終了後、各ウェル中の培地を除去し、シラガニアン緩衝液で２回洗浄した。次いで、上記緩衝液30μLと試料１〜４をそれぞれ含有する試料溶液10μLとを加え、37℃で10分間インキュベートした後、ジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（DNP-BSA）10μLを加え、さらに37℃で15分間インキュベートした。その後、氷冷下で上清10μLを新たな96ウェルプレートに移し替え、これに１mmol/L p-ニトロフェニル-N-アセチル-β-D-グルコサミド溶液10μLを加え、37℃で１時間インキュベートした。反応終了後、0.1mol/L Na2CO3−NaHCO3溶液250μLを加え、マイクロプレートリーダーにて650nmを対照に415nmにおける吸光度を測定した（以下、この吸光度を「吸光度Ａ」という）。
【００６０】
（２）試料溶液の代わりにシラガニアン緩衝液を添加した細胞上清についても同様の処理と吸光度の測定を行なった（以下、この吸光度を「吸光度Ｂ」という）。
【００６１】
（３）細胞上清と0.1mol/L Na2CO3−NaHCO3溶液を同様の処理で反応させたものについても吸光度の測定を行なった（以下、この吸光度を「吸光度Ｃ」という）。
【００６２】
（４）DNP-BSAの代わりにシラガニアン緩衝液を加えたものについても同様の処理と吸光度の測定を行なった（以下、この吸光度を「吸光度Ｄ」という）。
【００６３】
（５）次式に基づいて、試料１〜４のヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を求めた。
【００６４】
【式３】
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１−〔(A−C−D)/(B−D)〕｝×100
【００６５】
なお、式中、「Ａ」は吸光度Ａを、「Ｂ」は吸光度Ｂを、「Ｃ」は吸光度Ｃを、「Ｄ」は吸光度Ｄを表す。
【００６６】
試料溶液の試料濃度を段階的に変化させてヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を測定し、ヘキソサミニダーゼの遊離を50％阻害する試料濃度ＩＣ５０(ppm；μg/mL)を内挿法により求めた。
試料１〜４のＩＣ５０は以下の表４に示すとおりであった。
【００６７】
0004889068.tif 000005
【００６８】
表４に示す結果から、五斂子の葉部からの水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノール抽出物（試料４）はいずれもヒスタミン遊離抑制作用を有することが示された。また、これらの抽出物の中でも特に50％エタノール抽出物（試料２）が優れたヒスタミン遊離抑制作用を有することが示された。また、抽出物の濃度を変化させることにより、ヒスタミン遊離抑制作用の強さを変化させることができることが示された。
【００６９】
〔試験例４〕サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用の試験
製造例１で得られた水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノール抽出物（試料４）について、以下の方法でサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を試験した。
【００７０】
（１）５mM塩化マグネシウムを含有する50mMトリス塩酸緩衝液（pH7.5）0.2mLにウシ胎児血清アルブミン溶液（2.5mg/mL）0.1mLおよびサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ溶液（0.1mg/mL）0.1mLを加え、さらに試料１〜４をそれぞれ含有する試料溶液0.05mLを加え、37℃で５分間インキュベートした。次いで、サイクリックＡＭＰ溶液（0.5mg/mL）0.05mLを加え、37℃で60分間反応させた。反応後、沸騰水上で３分間煮沸して反応を停止させ、４℃で遠心分離し、上清中の反応基質（サイクリックＡＭＰ）を高速液体クロマトグラフィーにより定量した。
【００７１】
（２）試料溶液を加えずに同様の酵素反応と反応基質の定量を行ない、試料無添加時の反応基質量に対する試料添加時の反応基質量の比率より、試料１〜４のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害率（％）を求めた。
【００７２】
（３）試料溶液の試料濃度を段階的に変化させてサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率（％）を測定し、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの活性を50％阻害する試料濃度ＩＣ５０（ppm；μg/mL）を内挿法により求めた。
試料１〜４のＩＣ５０（ppm）は以下の表５に示すとおりであった。
【００７３】
0004889068.tif 000006
【００７４】
表５に示す結果から、五斂子の葉部からの水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノール抽出物（試料４）はいずれもサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有することが示された。また、これらの抽出物の中でも特に50％エタノール抽出物（試料２）が優れたサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有することが示された。また、抽出物の濃度を変化させることにより、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用の強さを変化させることができることが示された。
【００７５】
〔試験例５〕肌荒れ改善作用（皮膚の老化防止・改善作用）の試験
製造例１で得られた五斂子の葉部からの５０％エタノール抽出物（試料２）を配合した乳液（以下「実施例乳液」という。）を常法に従って調製した。実施例乳液の組成を以下に示す。
【００７６】
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料２）                  ０．１ｇ
セチルアルコール                                      ０．５ｇ
ミツロウ                                              ２．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（10E.0）       １．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル                            １．０ｇ
ヒアルロン酸                                          ０．１ｇ
プロピレングリコール                                  ５．０ｇ
エタノール                                            ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                              ０．３ｇ
香料                                                  ０．０３ｇ
精製水                              残部（全量を１００mlとする）
【００７７】
実施例乳液と、五斂子の葉部からの抽出物を含まないほかは実施例乳液と同じ組成からなる比較例乳液とについて、下記の評価試験を行った。
被験者：２２〜４３歳の女性多数の中から、皮溝・皮丘が消え、広範囲の角質がめくれている（表６に示す評価が１）、または皮溝・皮丘が不鮮明で、角質が部分的にめくれている（表６に示す評価が２）、肌荒れと判定された２０名を選抜して被験者とした。
塗布試験：各被験者に、顔の右半分には実施例乳液を、左半分には比較例乳液を、朝夕各１回、３０日間塗布させた。
【００７８】
0004889068.tif 000007
【００７９】
[判定１：肌荒れ改善効果]
塗布試験終了後、シルフロ（FLEXICL DEVELOPMENTS LTD製）によるレプリカ法を用いて顔のレプリカをとり、５０倍の顕微鏡で皮紋の状態および角質剥離の状態を観察し、表６に示す評価基準で肌の状態を判定した。判定結果を表７に示す。
【００８０】
0004889068.tif 000008
【００８１】
表７に示されるように、実施例乳液を塗布した領域は、比較例乳液を塗布した領域に比べて顕著に肌荒れ（皮膚の老化）が改善された。
【００８２】
[判定２・官能評価]
使用感と肌への効果について、実施例乳液と比較例乳液とを比較した場合の優劣を被験者全員に質問した。回答の集計結果を表８に示す。
【００８３】
0004889068.tif 000009
【００８４】
表８に示される結果より、官能評価によっても、上記判定１と同様の効果と、優れた使用感とが確認された。
【００８５】
判定１および２の結果より五斂子の葉部からの抽出物を配合した皮膚化粧料が皮膚の老化防止・改善作用（肌荒れ改善作用）を有するとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れていることが確認された。
【００８６】
〔配合例〕
製造例１で得られた五斂子の葉部からの抽出物を用いて以下の化粧料、食品および薬剤を製造したところ、いずれの場合においても、良好な化粧料、食品および薬剤を得ることができた。
【００８７】
（配合例１  乳液）
下記の組成の乳液を常法により製造した。
ホホバオイル                                          ４ｇ
オリーブオイル                                        ２ｇ
スクワラン                                            ２ｇ
セタノール                                            ２ｇ
モノステアリン酸グリセリル                            ２ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.0）             ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.0)         ２ｇ
１，３−ブチレングリコール                            ３ｇ
アスコルビン酸リン酸マグネシウム                      ０．１ｇ
カミツレ抽出物                                        ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                            ０．１ｇ
黄杞抽出物                                            ０．１ｇ
シャクヤク抽出物                                      ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                              ０．１５ｇ
香料                                                  ０．０５ｇ
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料１）                  １ｇ
精製水                              残部（全量を１００ｇとする）
【００８８】
（配合例２  化粧水）
下記の組成の化粧水を常法により製造した。
グリセリン                                            ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                            ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.0)         ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                              ０．１５ｇ
クエン酸                                              ０．１ｇ
クエン酸ソーダ                                        ０．１ｇ
油溶性甘草抽出物                                      ０．０５g
酢酸トコフェロール                                    ０．０５ｇ
アロエ抽出物                                          ０．１ｇ
マロニエエキス                                        ０．１ｇ
クジン抽出物                                          ０．１ｇ
シラカバ抽出物                                        ０．１ｇ
香料                                                  ０．０５ｇ
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料２）                  ０．５ｇ
精製水                              残部（全量を１００ｇとする）
【００８９】
（配合例３  クリーム）
下記の組成のクリームを常法により製造した。
流動パラフィン                                        ５ｇ
サラシミツロウ                                        ４ｇ
セタノール                                            ３ｇ
スクワラン                                          １０ｇ
ラノリン                                              ２ｇ
ステアリン酸                                          １ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.0)         １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル                            ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                            ６ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                              １．５ｇ
コンキオリン加水分解物                                ０．１ｇ
ニンジンエキス                                        ０．１ｇ
香料                                                  ０．１ｇ
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料３）                  ２ｇ
精製水                              残部（全量を１００ｇとする）
【００９０】
（配合例４  パック）
下記の組成のパックを常法により製造した。
ポリビニルアルコール                                １５ｇ
ポリエチレングリコール                                ３ｇ
プロピレングリコール                                  ７ｇ
エタノール                                          １０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル                              ０．０５ｇ
チンピ抽出液                                          ０．１ｇ
ローヤルゼリー抽出液                                  ０．１ｇ
ソウハクヒエキス                                      ０．１ｇ
コメヌカ抽出液                                        ０．１ｇ
香料                                                  ０．０５ｇ
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料４）                  ５ｇ
精製水                              残部（全量を１００ｇとする）
【００９１】
（配合例５  健康・栄養補助食品）
下記の混合物を打錠して、錠剤状健康・栄養補助食品を製造した。
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料１）              １００重量部
コラーゲン                                          ３０重量部
ムコ多糖・タンパク(コンドロイチン)                  １０重量部
ヒアルロン酸                                          １重量部
ハス胚芽抽出物                                      ２０重量部
月桃葉茎抽出物                                      ２０重量部
黒米抽出物                                          ２０重量部
甘草抽出物(グリチルリチンを含む)                    １０重量部
ミルク蛋白加水分解物(アミノ酸、低分子ペプチドを含む)１０重量部
ビタミンＢ群混合粉末(全ビタミンＢ群を含む)            ４重量部
ビタミンＣ                                          １０重量部
粉糖（ショ糖）                                      ５３重量部
グリセリン脂肪酸エステル                            １２重量部
【００９２】
（配合例６  健康・栄養補助食品）
下記の混合物を顆粒状に形成して健康・栄養補助食品を製造した。
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料２）              ２００重量部
ハス胚芽抽出物                                      ５０重量部
真珠蛋白加水分解(各種アミノ酸、ペプチドを含む)      １５重量部
シルク蛋白加水分解物（各種アミノ酸、ペプチドを含む）１５重量部
大豆イソフラボン                                    １０重量部
紫米抽出物                                          ５０重量部
赤ワインエキスパウダー(プロシアニジンを含む)        ３０重量部
酵母エキス                                          １０重量部
(グルタチオン、核酸、アミノ酸、ビタミンを含む)
ザクロ種子抽出物                                    １０重量部
小麦胚芽抽出物                                      １０重量部
(ビタミン、クロム、セレン、モリブデンを含む)
ＤＮＡ                                              ３０重量部
ビートオリゴ糖                                  １０６０重量部
ステビア抽出物                                      １０重量部
【００９３】
（配合例７  健康・栄養補助食品）
下記の混合物をゼラチンカプセル化して、錠剤状健康・栄養補助食品を製造した。
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料１）                ５０重量部
ハス胚芽抽出物                                      １５重量部
セラミド                                            ３０重量部
リン脂質(レシチン)                                  １０重量部
ビタミンＥ(トコフェロール)                          １７重量部
マルチカロチン(αおよびβカロチン、ルテイン、リコペン)１０重量部
赤米抽出物（シクロアルテノールエステルを含む）      １５重量部
オクタコサノール                                      １重量部
植物ステロール                                        ５重量部
シソの実油(αリノレン酸を含む)                      ２０重量部
精製魚油(ＤＨＡ、ＥＰＡを含む)                      ２０重量部
ごま油(リグナン化合物を含む)                        ２０重量部
オリーブ油                                          １０重量部
大豆、菜種混合油                                    ６５重量部
グリセリン脂肪酸エステル                            １２重量部
【００９４】
（配合例８  清涼飲料水）
下記の混合物を常法に従い混合し清涼飲料水を製造した。
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料１）                  １重量部
ハス胚芽抽出物                                        １重量部
ローヤルゼリー                                        ３重量部
水溶性コラーゲン                                      ８重量部
ハトムギエキス                                        １重量部
高麗ニンジンエキス                                    １重量部
プラセンタ(胎盤)エキス                                １重量部
プエラリアエキス                                      １重量部
パープルヤムエキス                                    １重量部
オリゴ糖                                              ５重量部
ショ糖                                              １０重量部
プルーン果汁                                          ２重量部
ザクロ果汁                                            ５重量部
グレープフルーツ果汁                                １０重量部
ビタミンＣ                                            １重量部
グレープフルーツフレーバー                        ０．７重量部
水                              残部（全量を１００重量部とする）
【００９５】
（配合例９  キャンディー）
下記の混合物を常法に従い混合しキャンディーを製造した。
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料２）                  ２重量部
ハス胚芽抽出物                                        １重量部
水あめ                                              ３０重量部
甘草エキス                                            ３重量部
甜茶エキス                                            １重量部
ブルーベリーエキス                                    １重量部
ストロベリー１／５濃縮果汁                            １重量部
赤キャベツ色素                                  ０．０５重量部
レモン果汁                                        ０．５重量部
水                                                    ５重量部
【００９６】
(配合例１０  錠剤)
下記成分分量に基づき、錠剤製造の常法により処理して錠剤を製造した。
【００９７】
五斂子葉部抽出物（製造例１の試料２）            ０．２重量部
乳糖                                          ９５．０重量部
ステアリン酸マグネシウム                        ０．０１重量部
着色料                                          微量
香料                                            適量
【００９８】
【発明の効果】
本発明によれば、ヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消去剤が提供される。本発明のヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消去剤は、アレルギー性疾患や炎症性疾患等の予防・治療、皮膚の老化（例えば、皮膚のしわ形成や弾力性低下等）の予防・治療などに有用である。