(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体を収容すべきガラス製測定セルを耐熱性の蓋体によって密封して形成されたエンドトキシン測定用の容器であって、
前記ガラス製測定セル及び前記蓋体は、乾熱滅菌されているとともに、
前記容器内部に、乾熱滅菌された磁性攪拌子を有することを特徴とするエンドトキシン測定用の容器。
【請求項２】
前記容器の外表面における、少なくとも前記ガラス製測定セルと前記蓋体との境界部分を覆うことにより、該容器の密閉性を強化する密閉強化部材をさらに有することを特徴とする請求項１に記載のエンドトキシン測定用の容器。
【請求項３】
前記容器内部に、凍結乾燥されたＬＡＬ試薬をさらに有することを特徴とする請求項１または２に記載のエンドトキシン測定用の容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エンドトキシンの検出または濃度測定を行うためのエンドトキシン測定用の容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
グラム陰性菌の細胞外膜に存在するエンドトキシンが、注射薬剤や外科手術器具、液剤など、さらには、人工透析における透析液、透析装置・器具などに付着、混入すると、患者に対して重篤な発熱反応や種々の免疫反応を惹起するおそれがある。従って、エンドトキシンは、上記薬剤、器具などへの混入が無いように管理することが義務付けられている。
【０００３】
エンドトキシンの濃度を測定する一般的な方法にはゲル化法、比濁法などがある。これらの方法においては、乾熱滅菌処理などにより予めエンドトキシンを不活性化させたガラス製測定セルに、エンドトキシン測定試薬と検体とを入れて混和するか、あるいは、別容器においてエンドトキシン測定試薬と検体とを混和した後にガラス製測定セルに移動させる。これによって、ゲル化法においては一定時間内に混和液がゲル化するかどうかによりエンドトキシンの検出を行う。また、比濁法では、混和液の経時的な濁度の変化を測定することにより、検体中のエンドトキシン濃度を測定する。
【０００４】
上記のようにゲル化法では、一定時間後における混和液のゲル化の有無を確認することで、検体中に基準以上のエンドトキシンが存在するか否かの判定を行うことができる。一方、比濁法では、経時的な濁度の変化からゲル化を検出するが、ゲル化に要した時間は検体におけるエンドトキシンの濃度が高いほど短くなるので、ゲル化に要した時間からエンドトキシンの濃度を測定できる。
【特許文献１】特開２００４−０６１３１４号公報
【特許文献２】特開平１０−２９３１２９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ここで、比濁法によってエンドトキシンの濃度測定を行う場合には、前述のように、乾熱滅菌処理されたガラス製測定セルにエンドトキシン測定試薬と検体との混和液を生成させる。そして、乾熱滅菌処理されたキャップによってガラス製測定セルを密封した上で静置し、混和液のゲル化を外部から光学的に測定することが行われている。
【０００６】
このように、エンドトキシン測定試薬と検体との混和液を静置しつつ混和液のゲル化が測定されるのは、エンドトキシンの検出が、従来よりゲル化法によって行われることが多く、これから、より詳細な濃度測定のために比濁法が発展してきたという歴史的背景に基づいている。すなわち、ゲル化法においては、エンドトキシン測定試薬と検体との混和液を静置して、一定時間後に混和液を含んだガラス製測定セルの上下を反転させ、セル内における混和液の垂れを観察することで混和液のゲル化を判定していたからである。
【０００７】
このように、エンドトキシン測定試薬と検体との混和液を静置してエンドトキシンの濃度測定を行うと、測定自体に長時間を要することとなり、特に低濃度のエンドトキシンの測定は実用的でなくなるおそれがあった。
【０００８】
これに対し、エンドトキシン測定試薬と検体とを混和した後、乾熱処理済みのガラス製測定セル内で、磁性攪拌子を用いて混和液を継続的に攪拌することでゲル化の時間を短縮
することが考えられる。しかしこの場合は、エンドトキシン測定開始時に、磁性攪拌子をさらに乾熱滅菌処理することが必要となるなど、測定の準備や手順が複雑化するおそれがあった。
【０００９】
本発明は上述の問題点に鑑みて案出されたものであり、その目的とするところは、エンドトキシンの検出または濃度測定において、エンドトキシン測定試薬と検体との混和液のゲル化に要する時間を短縮することができるとともに、より簡便な手順で高精度な検出または測定を可能にする技術を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記目的を達成するための本発明は、乾熱滅菌したガラス製測定セル及びキャップのセットの内部に、やはり乾熱滅菌した磁性攪拌子を予め収納することで、エンドトキシン測定用の容器を形成することを最大の特徴とする。
【００１１】
より詳しくは、検体を収容すべきガラス製測定セルを耐熱性の蓋体によって密封して形成されたエンドトキシン測定用の容器であって、
前記ガラス製測定セル及び前記蓋体は、乾熱滅菌されているとともに、
前記容器内部に、乾熱滅菌された磁性攪拌子を有することを特徴とする。
【００１２】
これによれば、予め乾熱滅菌されたガラス製測定セルが乾熱滅菌された蓋体で密封されるとともに、その内部に、予め乾熱滅菌された磁気攪拌子が収納されたエンドトキシン測定用の容器を提供できる。このエンドトキシン測定用の容器においては、エンドトキシンの検出または濃度測定時には、当該容器の蓋体を外してセル内にエンドトキシン測定試薬と検体とを導入し、再度蓋体によって密封するという簡便な手順で、エンドトキシンの検出ならびに濃度測定のための試料を作製することができる。また、エンドトキシンによる初期の汚染をより確実に防止できるとともに、エンドトキシン測定試薬と検体とを継続的に攪拌しながらゲル化による濁度の測定を行うことができる。従って、エンドトキシンの検出ならびに濃度測定に要する時間を短縮できるとともに、より簡便な手順で高精度な検出または濃度測定を行うことが可能となる。
【００１３】
また、本発明のエンドトキシン測定用の容器においては、前記容器の外表面における、少なくとも前記ガラス製測定セルと前記蓋体との境界部分を覆うことにより、該容器の密閉性を強化する密閉強化部材をさらに有するようにしてもよい。
【００１４】
そうすれば、ガラス製測定セルと耐熱性の蓋体との間の境界部分から容器内部に、細菌などが事後的に侵入することをより確実に防止できる。
【００１５】
また、本発明のエンドトキシン測定用の容器においては、前記容器内部に、凍結乾燥されたＬＡＬ試薬をさらに有するようにしてもよい。
【００１６】
すなわち、乾熱滅菌したガラス製測定セル及び耐熱性の蓋体のセットの内部に、乾熱滅菌した磁性攪拌子と、エンドトキシン測定試薬としての凍結乾燥したＬＡＬ試薬とを予め収納することで、エンドトキシン測定用の容器を作製する。そうすれば、検体を容器内に導入するという極めて簡便な手順によって、エンドトキシンの検出ならびに濃度測定が可能となる。
【００１７】
また、この場合に、前記容器の外表面における、少なくともガラス製測定セルと耐熱性の蓋体との境界部分を覆うことにより、該容器の密閉性を強化する密閉強化部材をさらに有するようにすれば、容器内への湿気の侵入をより確実に防止できる。そうすると、容器内における凍結乾燥されたＬＡＬ試薬の保存状態をより良好に維持することが可能となる
。
【００１８】
なお、上記した本発明の課題を解決する手段については、可能なかぎり組み合わせて用いることができる。
【発明の効果】
【００１９】
本発明にあっては、エンドトキシンの検出または濃度測定において、エンドトキシン測定試薬と検体との混和液のゲル化に要する時間を短縮することができるとともに、より簡便な手順でより高精度な検出または濃度測定を行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下に図面を参照して、この発明を実施するための最良の形態を例示的に詳しく説明する。
【実施例１】
【００２１】
カブトガニの血液の抽出物(ＬＡＬ : Limulus amoebocyte lysate）は、グラム陰性菌の細胞外膜の主要構成要素であるエンドトキシン(リボ多糖)と反応するとゲル化することが知られている。
【００２２】
このＬＡＬは、エンドトキシンと非常に高感度に反応してゲル化するので、極めて微量のエンドトキシンを検出することができる。従って、このＬＡＬを測定試薬として用いたＬＡＬ法は、エンドトキシン検出の手段として広く用いられている。
【００２３】
このＬＡＬ法においては具体的には、ＬＡＬ試薬とエンドトキシンを含む検体とを混和させる。そうすると、ＬＡＬ試薬とエンドトキシンとの反応により、混和液中に微小なゲル粒子が生成されるなどして、混和液がゲル化する。このゲル粒子の存在を光散乱を用いて光学的に測定する方法を光散乱粒子計測法という。また、ゲル粒子の生成または混和液のゲル化による混和液の濁りを光透過率によって光学的に測定する方法を比濁法という。
【００２４】
次に、ＬＡＬ法によりエンドトキシンの検出または濃度測定を行う場合の具体的な操作につき図４を用いて説明する。従来より、ＬＡＬ法によってエンドトキシンの検出または濃度測定を行う場合には、図４（ａ）に示すような、乾熱滅菌されたガラス製キュベット３とアルミキャップ５とが用いられる。そして、図４（ｂ）に示すように、ガラス製キュベット３に別容器で混和したＬＡＬ試薬と検体との混和液を入れ、さらに前述の乾熱滅菌したアルミキャップ５で密封する。その後図４（ｃ）に示すように静置することで混和液のゲル化を待ち、混和液のゲル化の発生を光学的に検知することで、エンドトキシンを検出または濃度測定を行っていた。
【００２５】
ここで、ガラス製キュベット３、アルミキャップ５を予め乾熱滅菌しておくのは、上述のようにＬＡＬは極めて微量のエンドトキシンと反応するので、ガラス製キュベット３やアルミキャップ５が少しでもエンドトキシンで初期的に汚染されている場合には、検体に対するエンドトキシンの検出または濃度測定が正確に行なえないからである。
【００２６】
しかし、上記のような従来の検出法ならびに測定法においては、ＬＡＬ試薬と検体の混和液を静置して反応を進行させるので、反応に要する時間が長期化し、測定時間が長引くという不都合があった。
【００２７】
また、マグネチックスターラーバー（磁性攪拌子）を用いて混和液を外部から継続的に攪拌し、反応速度を早めることが考えられるが、この場合、マグネチックスターラーバーを別途乾熱滅菌する必要があるなどの手間がかかり、エンドトキシンの検出または濃度測
定を短時間で効率的に行うことは困難であった。
【００２８】
そこで、本実施例においては、予め乾熱滅菌されたガラス製キュベット、アルミキャップ及びマグネチックスターラーバーを組み合わせてエンドトキシン測定用のキットをして準備しておき、より効率的にエンドトキシン測定を行うことができるようにした。
【００２９】
図１には、本実施例におけるエンドトキシン測定用キット１及び、その作製方法を示している。
【００３０】
図１（ａ）に示すように、本実施例におけるエンドトキシン測定用キット１は、ガラス製キュベット３に、マグネチックスターラーバー７を収納し、さらにアルミキャップ５で密封する。そしてその後２５０℃２時間の条件で乾熱滅菌処理を行う。従って図１（ｂ）の状態では、エンドトキシン測定用キット１内部の滅菌処理は完了しており、エンドトキシンで汚染されていることは有り得ない。
【００３１】
本実施例では、図１（ｂ）の状態において、さらに、ガラス製キュベット３とアルミキャップ５の境界部分１０を覆うように、熱収縮フィルム９を被せ、その後、熱収縮フィルム９が充分に収縮する温度までエンドトキシン測定用キット１を加熱する。これにより、図１（ｃ）に示すように、熱収縮フィルム９がアルミキャップ５及び境界部分１０を密閉する。この状態で最終的なエンドトキシン測定用キット１が完成する。こうすれば、完成後に、エンドトキシン測定用キット１の内部に細菌等が侵入することをより確実に抑制することができる。
【００３２】
このエンドトキシン測定用キット１を使用してエンドトキシンの測定を行う場合には、まず、熱収縮フィルム９を剥がし、アルミキャップ５を外して、そこにＬＡＬ試薬及び検体を導入する。その後、アルミキャップ５で密封し、この状態で、マグネチックスターラーバー７を外部から駆動させて混和液の攪拌を継続しながら、混和液におけるゲル粒子の発生または混和液のゲル化を光学的に測定する。そうすれば、簡単な操作で、混和液におけるゲル粒子の発生または混和液のゲル化を促進することができ、検出または濃度測定に要する時間を短縮することができる。
【００３３】
以上、説明したように、本実施例におけるエンドトキシン測定用キット１を用いてエンドトキシンの測定を行えば、エンドトキシン測定用キット１の熱収縮フィルム９及びアルミキャップ５を外して、ガラス製キュベット３にＬＡＬ試薬と検体の混和液を導入して、アルミキャップ５を再度閉めるという作業だけで、エンドトキシン検出または濃度測定の準備が完了する。また、外部からマグネチックスターラーバー７を駆動することにより、混和液の攪拌を継続しながら、ＬＡＬ試薬と検体とを反応させることができ、より短期間且つ効率的に、エンドトキシン測定を行うことが可能となる。また、エンドトキシン測定用キット１は確実に乾熱滅菌処理されているために、エンドトキシンによる初期的な汚染をより確実に防止できる。
【００３４】
なお、上記においては、図１（ａ）において、ガラス製キュベット３、アルミキャップ５及び、マグネチックスターラーバー７を組み合わせた後に、乾熱滅菌処理を行うこととしたが、ガラス製キュベット３、アルミキャップ５及び、マグネチックスターラーバー７に対して各々別に乾熱滅菌処理を行い、その後にそれぞれを組み合わせることとしても構わない。
【００３５】
また、上記の実施例においては、エンドトキシン測定用キット１の長期の保存を見込んで、熱収縮フィルム９でアルミキャップ５及び境界部分１０を密閉することとしたが、これはあくまで、エンドトキシン測定用キット１の信頼性をより向上させるためのものであ
る。エンドトキシン測定用キット１の保存期間が短期であるような場合には、必ずしも必要ではない。
【００３６】
ここで、ガラス製キュベット３は本実施例においてガラス製測定セルに相当する。アルミキャップ５は耐熱性の蓋体に相当する。熱収縮フィルム９は密閉強化部材に相当する。さらに、エンドトキシン測定用キット１はエンドトキシン測定用の容器に相当する。また、耐熱性の蓋体の材質は、アルミである必要はなく、鉄、チタンなど他の金属でもよく、セラミックを用いてもよい。さらに、アルミホイルなどでガラス製キュベット３の開口部を密閉するような構成としてもよい。また、密閉強化部材としては、熱収縮フィルム以外の素材を用いてもよく、例えばパラフィンフィルムを用いてもよい。
【実施例２】
【００３７】
次に、本発明における実施例２について説明する。本実施例においては、実施例１におけるエンドトキシン測定用キットの内部に、予め凍結乾燥したＬＡＬ試薬を封入する例について説明する。
【００３８】
図２には、本実施例におけるエンドトキシン測定用キット１１及び、その作製方法について示す。本実施例においてはまず、図２（ａ）に示すように、ガラス製キュベット３、アルミキャップ５及びマグネチックスターラーバー７の各々に対して乾熱滅菌処理を行う。そして、ガラス製キュベット３にマグネチックスターラーバー７を収納する。
【００３９】
次に、その状態で、図２（ｂ）においては、ＬＡＬ試薬をさらにガラス製キュベット３に必要量導入し、凍結乾燥させる。そして、その後、図２（ｃ）においてアルミキャップ５で密封する。その後の図２（ｄ）及び、図２（ｅ）については、図１（ｂ）及び図１（ｃ）と同等の説明となるのでここでは省略する。
【００４０】
本実施例におけるエンドトキシン測定用キット１１においては、エンドトキシンの検出または濃度測定時の手順を大幅に簡略化できる。すなわち、エンドトキシン測定用キット１１の熱収縮フィルム９を剥がすとともにアルミキャップ５を外して、ガラス製キュベット３に検体のみを導入し、アルミキャップ５を再度閉めるという作業だけで、ＬＡＬ試薬と検体の混和液をガラス製キュベット３内で生成できる。そして、外部からマグネチックスターラーバー７を駆動すれば、混和液の攪拌を継続しながら、ＬＡＬ試薬と検体を反応させることができる。従って本実施例によれば、さらに効率的に、エンドトキシンの検出または濃度測定を行うことが可能となる。また、測定用キット１１自体のエントドキシンによる初期の汚染をより確実に防止できるので、測定精度の向上を達成することができる。
【実施例３】
【００４１】
次に、本発明における実施例３について説明する。本実施例においては、実施例２において熱収縮フィルムによってアルミキャップ及び境界部分を密閉することの代りに、アルミキャップでガラス製キュベット３を密封する前に、耐熱性のゴム栓で密閉性を強化する例について説明する。
【００４２】
図３には、本実施例におけるエンドトキシン測定用キット２１及び、その作製方法について示す。本実施例においてはまず、図３（ａ）に示すように、ガラス製キュベット３、アルミキャップ５及びマグネチックスターラーバー７の他に、ゴム栓８に対しても乾熱滅菌処理を行う。そして、ガラス製キュベット３にマグネチックスターラーバー７を収納する。
【００４３】
次に、その状態で、図３（ｂ）においては、図２（ｂ）と同様にＬＡＬ試薬をさらにガ
ラス製キュベット３に必要量導入し、凍結乾燥させる。そして、その後、図３（ｃ）においてガラス製キュベット３から空気を除去するとともに、ゴム栓８をする。その後の図３（ｄ）においては、アルミキャップ５でゴム栓８の上からさらに密封する。これにより、図３（ｅ）のように、エンドトキシン測定用キット２１が完成する。
【００４４】
本実施例におけるエンドトキシン測定用キット２１においても、エンドトキシンの検出または濃度測定時の手順を大幅に簡略化できる。すなわち、エンドトキシン測定用キット２１のアルミキャップ５及びゴム栓８を外して、ガラス製キュベット３に検体のみを必要量導入し、アルミキャップ５を再度閉めるという作業だけで、ＬＡＬ試薬と検体の混和液をガラス製キュベット３内で生成できる。そして、外部からマグネチックスターラーバー７を駆動すれば、混和液の攪拌を継続しながら、ＬＡＬ試薬と検体とを反応させることができる。
【００４５】
また、本実施例においては、ＬＡＬ試薬を凍結乾燥させた後に、空気を除去してゴム栓８をすることによりエンドトキシン測定用キット２１内を完成後も陰圧状態で維持するようにしている。よって、より確実に、ＬＡＬ試薬の吸湿を防止できるとともに細菌などの侵入を防止できる。その結果、本実施例によれば、ＬＡＬ試薬の吸湿による劣化と測定用キット２１自体のエントドキシンによる初期の汚染とを、より確実に防止できるので、測定精度のさらなる向上を達成することができる。
【００４６】
なお、本実施例においてゴム栓は密閉強化部材に相当する。また、本発明においては、エンドトキシン測定用キット２１の完成後、さらに熱収縮フィルム等で密閉性を高めるようにしても構わない。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】本発明の実施例１におけるエンドトキシン測定用キットを説明するための図である。
【図２】本発明の実施例２におけるエンドトキシン測定用キットを説明するための図である。
【図３】本発明の実施例３におけるエンドトキシン測定用キットを説明するための図である。
【図４】従来のエンドトキシン測定の方法について説明するための図である。
【符号の説明】
【００４８】
１、１１、２１・・・エンドトキシン測定用キット
３・・・ガラス製キュベット
５・・・アルミキャップ
７・・・マグネチックスターラーバー
８・・・ゴム栓
９・・・熱収縮性フィルム
１０・・・境界部分
【図１】
0004940085.tif 000002
【図２】
0004940085.tif 000003
【図３】
0004940085.tif 000004
【図４】
0004940085.tif 000005