(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２核性菌糸体であるシイタケの細胞を、倍数体形成能を有する使用濃度０．０１〜０．１％のコルヒチン含有培地によって４℃〜１０℃の温度で、且つ少なくとも７日以上培養処理し、同質の高次倍数体を形成することを特徴とする食用担子菌の高増殖菌株の製法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、食用担子菌の高増殖菌株の製法に関し、とくに２核性菌糸体であるシイタケの高増殖菌株及びその製法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  シイタケは、担子菌類のキシメジ科シイタケ族に属し、古くから現在にいたるまで、食用菌として用いられ、日本において古来より栽培されている。シイタケ菌の育種のほとんどは交配育種に頼っており、変異原処理等による育種は行なわれておらず、また交配による育種は胞子形成を伴うことから非常に時間がかかり、形質が変化した株を選抜するために多大の労力を必要とするという問題点があった。【０００３】  そこで、ＤＮＡの交差によって新たな形質を発現させて遺伝的組換体を得る細胞融合法による同質の核を含む融合株を得て、これによって倍数体を得る方法が提案されている（非特許文献１参照。）。また本発明者は、先に発明・出願した菌類の同質多倍数体の形成方法を提案している（特許文献１参照。）。そして、２核性菌体であるシイタケ菌体の多核体化も提案している（非特許文献２１参照。）。【０００４】
【特許文献１】特開平１−５００９１号公報
【非特許文献１】Ｔｏｙａｍａ，Ｈ．，Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｋ．，Ｓｈｉｎｍｙｏ，Ａ．Ｏｋａｄａ，Ｈ．：Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，４７，３６３（１９８４）
【非特許文献２】Ｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｈｙｐｅｒｐｏｌｙｐｌｏｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｉｎｕｃｌｅａｔｅ  ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｒｅｔｅ，Ｌｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ  ｗｉｔｈ  ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｈｉｄｅｏ  Ｔｏｙａｍａ  ａｎｄ  Ｎｏｂｕｏ  Ｔｏｙａｍａ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｓ，１８４，２２１−２３０，（１９９５）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  しかしながら、上記非特許文献１に示された技術では、シイタケ菌体からプロトプラストを生成して融合させて融合細胞を再生培地上で再生して菌体を形成するが、この菌体中の核は融合しておらずホモカリオン（同種核共存物）の状態にあり、これをさらに核融合作用が知られる樟脳を含む培地で長時間培養させる必要がある。しかしこの方法は人手と長時間を要し、しかも低次の倍数体しか得られないものであった。また上記特許文献１において、本発明者はイヌサフランのアルカロイドであるコルヒチンを用いて菌類の同質多核体を形成させる方法を開示したが、シイタケ等の２核性菌子体から高増殖菌株を作成する技術に関しては何らの開示もされていないものであった。そして、上記非特許文献２において提案した技術はコルヒチン培地を使用して２核性菌子体であるシイタケ菌体から多核体を形成するものであり、一時的に低次の同質倍数核体を形成するが、元菌の核と比較して微小な核が多数形成されるものであった。【０００６】  上記の問題点に鑑み本発明者は、上記特許文献１及び非特許文献１、２を元にさらに鋭意研究の結果、コルヒチンを使用した培地によって低温で、且つ長時間培養を行なうことによって、２核性菌子体であるシイタケ菌から同質で高次倍数体を単一の処理によって一気に形成できることを見出した。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
このため本発明の食用担子菌の高増殖菌株の製法は、２核性菌糸体であるシイタケの細胞を、倍数体形成能を有する使用濃度０．０１〜０．１％のコルヒチン含有培地によって４℃〜１０℃の温度で、且つ少なくとも７日以上培養処理し、同質の高次倍数体を形成することを第１の特徴とする  
【００１１】  尚、上記倍数体形成能を有するものとしては、コルヒチンに限らずコルセミドなどのコルヒチン誘導体であってもよく、またその使用濃度は０．０１〜０．１％が望ましい。
【発明の効果】
【００１２】  本発明に係る食用担子菌の高増殖菌株の製法によれば、２核性菌体であるシイタケ菌等の食用担子菌から同質の高次倍数体を形成できるという優れた効果を有する。【００１３】  そして、得られた同質の高次倍数体は、高増殖性であるという優れた効果を有する。【００１４】  また、この高次倍数体は、元菌と比較して微小な核に多核化することなく、安定に維持できるという優れた効果を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】  本発明の高増殖菌株の製法について説明する。本発明はシイタケ菌株を、コルヒチンを含有する培地を用いて培養し、低温でしかも長時間培養することによって、高増殖性を有する同質の高次倍数体を形成する製法である。以下これを実施例に従いさらに詳述する。
【実施例１】
【００１６】（元株）
まず、元株菌としてＬｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ（ＩＦＯ３０７２４）を所定の方法にて準備した。【００１７】（コルヒチン培地による培養）
シイタケ菌体（１ｃｍ×１．５ｃｍ）を後述するコルヒチン培地２５ｍｌを入れた５０ｍｌの三角フラスコに加え、８℃で３ヶ月間静置培養を行なった。【００１８】（コルヒチン培地の構成）
ツァペック培地
グルコース                １．０％（ｗ／ｖ）
ペプトン                  ０．５％（ｗ／ｖ）
コルヒチン                ０．１％又は０．０１％（ｗ／ｖ）（ｐＨ６．０）
（注）ツァペック培地の組成（使用時の濃度）
ＮａＮＯ３：２．０ｇ／ｌ、Ｋ２ＨＰＯ４：１．０ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．５ｇ／ｌ、ＫＣｌ：０．５ｇ／ｌ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．０１ｇ／ｌ【００１９】（寒天培地による培養）
上記の培養によって得られた菌体を蒸留水で洗浄後、２ｍｍ四方の切片に切り出して、ポテトデキストロース（ＰＤＡ）寒天培地上のおいて２８℃、１０日間培養を行なった。また、比較とし元株菌も同様に培養を行った。培養後、寒天培地上のコロニー直径をデジタルノギスによって測定し、この測定値から一時間当たりの菌糸伸長率を算出した。結果を表１、図１乃至図３に示す。【００２０】
【表１】
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【００２１】（結果）
表１において、数値は平均値を示しており、１菌株当たり寒天培地２枚使用したものである。
表に示すように、本発明の製法による菌株は元株と比べ菌体の面積が大きく、高増殖性であることが確認された。また、図１は表１の元株菌（写真右）とＮｏ．４株菌（写真左）を示しており、図２及び図３は夫々図１の顕微鏡写真である。図から明らかなように元株と比べ菌体の面積が大きく、高次の同質多倍数体であることが確認される。しかも、遺伝的不安定の兆候を示す扇状セクターも形成されないことから安定であることが判る。尚、本実施例において、コルヒチン培地による培養に３ヶ月間かけて処理を行なったが、カビであるトリコデルマ菌では７日間で倍数核が形成されており、このカビと増殖特性が近い担子菌であるシイタケ菌も同様に７日間の処理で高次倍数核が形成される可能性がある。【００２２】（比較例）
次に、本発明に使用したシイタケ菌株を、コルヒチンを含有する培地を用いた従来の培養方法による同質倍数化処理について説明する。【００２３】（元株）
まず、元株菌としてＬｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ（ＩＦＯ３０７２４）を所定の方法にて準備した。【００２４】（コルヒチン培地による培養）
シイタケ菌体（５ｍｍ四方）をコルヒチン培地５ｍｌを入れた１０ｍｌのガラス遠心管に加え、２６℃で１０日間静置培養を行なった。尚、コルヒチン培地の構成は上記実施例１と同等であり省略する。【００２５】（寒天培地による培養）
上記の培養によって得られた菌体を蒸留水で洗浄後、２ｍｍ四方の切片に切り出して、ポテトデキストロース（ＰＤＡ）寒天培地上のおいて２８℃、７日間培養を行なった。結果を図４及び図５に示す。【００２６】（結果）
図４に示すように、従来のコルヒチン処理によると、菌株は元株と比べ菌体の直径が増大（倍数化）するが、その後倍数化した核から微小な核が形成され、多核体となった。また、図５は扇状のセクターを示しており遺伝的に不安定であることが判る。【００２７】  以上、本発明の食用担子菌の高増殖菌株の製法によれば、コルヒチンを使用した培地によって低温でしかも長時間培養を行なうことによって、２核性菌子体であるシイタケ菌の核から同質で高次倍数核を単一の処理によって一気に形成できる。
【産業上の利用可能性】
【００２８】  本発明によれば、高増殖性菌株を安定して形成することができる。また、早期に子実体を形成すると共に、巨大な子実体の形成も可能となり、旨味成分が豊富な食用担子菌として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】本発明の高増殖菌株の製法により菌株を培養した結果を示す写真である。
【図２】図１の元株の顕微鏡写真である。
【図３】図１のＮｏ．４株菌の顕微鏡写真である。
【図４】従来のコルヒチンを含有する培地を用いて菌株を培養した結果を示す写真である。
【図５】従来のコルヒチンを含有する培地を用いて菌株を培養した結果を示す写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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