(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の細菌に対して抗菌性を有する抗菌ペプチドを主成分とする抗菌剤であって、以下のアミノ酸配列：
ＴＬＫＥＲＣＬＱＶＶＲＳＬＶＫ（配列番号１）；
ＳＬＱＹＬＣＲＦＶＩＲＱＹＴＲ（配列番号２）；
ＳＬＱＨＩＣＲＭＳＩＲＲＶＭＳ（配列番号３）；
ＴＬＬＳＬＣＲＶＡＶＲＲＡＬＧ（配列番号４）；
ＴＬＫＫＲＣＬＱＶＶＲＫＬＶＫ（配列番号５）；
ＴＬＱＨＬＣＲＫＴＶＮＧＨＬＤ（配列番号７）；
ＳＬＱＨＩＣＲＴＶＩＣＮＣＴＴ（配列番号８）；
ＳＬＱＹＩＣＲＡＶＩＣＲＣＴＴ（配列番号９）；
ＳＬＱＨＬＣＲＦＲＩＲＱＬＶＲ（配列番号１０）；
ＳＬＫＨＬＣＲＫＡＬＲＳＦＬＴ（配列番号１１）；
ＰＬＡＨＬＣＲＬＲＶＲＫＡＩＧ（配列番号１２）；および
ＳＬＴＨＬＣＲＬＥＩＲＳＳＩＫ（配列番号１３）；
のうちのいずれかのアミノ酸配列又は該アミノ酸配列について１個、２個又は３個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されて形成されたアミノ酸配列から成る人為的に合成された抗菌ペプチド；
を含有する抗菌剤。
【請求項２】
前記抗菌ペプチドは、少なくとも一つのアミノ酸残基がアミド化されている、請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項３】
前記抗菌ペプチドを含有する液剤、軟膏、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、又はカプセルの形態に調製されている、請求項１又は２に記載の抗菌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然には存在しない形態の独立したペプチド鎖から成る抗菌性を有するオリゴペプチド又はポリペプチド（以下これらを総称して「抗菌ペプチド」という。）及びその利用、特にそのような抗菌ペプチドを主成分とする抗菌剤（組成物）に関する。
本願は２００５年２月１５日に出願された日本国特許出願第２００５−０３７９７３号に基づく優先権を主張しており、この出願の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
【背景技術】
【０００２】
抗菌ペプチドは一般に幅広い抗菌スペクトルを有し、薬剤耐性菌が出現し難いと考えられていることから、ヒト及び動物の細菌感染性疾患の予防や治療、或いは、食材等の物品に抗菌性を付与する目的での利用が期待されている。これまでに多くの抗菌ペプチドが種々の動植物から単離されている。例えば、特開２０００−６３４００号公報、特開２００１−１８６８８７号公報、国際公開第ＷＯ９８／５１７９４号、第ＷＯ９９／２６９７１号、第ＷＯ００／０９５５３号、第ＷＯ００／５９５２７号及び第ＷＯ０１／０９１７５号には、種々の天然由来の抗菌ペプチドが記載されている。
また、国際公開第ＷＯ０３／９１４２９号には、抗菌性との関連性が全く論じられなかった既知のアミノ酸配列を利用して設計、合成された抗菌ペプチドが報告されている。
【発明の開示】
【０００３】
本発明は、上記特許文献に記載されるような従前の抗菌ペプチド含有抗菌剤の開発アプローチによらず、自然界において抗菌ペプチドとして存在し機能しているペプチドとは異なる新たな抗菌ペプチドを設計することを目的とする。また、本発明により設計された抗菌ペプチドを製造し、該ペプチドを主成分とする抗菌剤（薬学的組成物）の提供を他の目的とする。また、ここで開示される抗菌ペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供することを他の目的とする。
【０００４】
本発明によって提供される抗菌ペプチドは、自然界において抗菌ペプチドとして存在するポリペプチドとは異なるポリペプチドに含まれるアミノ酸配列を利用して設計された人為的な抗菌ペプチドである。
本発明者は、von Hippel Lindau病に関与する遺伝子であって癌抑制遺伝子として知られるＶＨＬ遺伝子の産物であるＶＨＬタンパク質の一領域であって、ＥｌｏｎｇｉｎＡと複合体を形成して転写調節因子として働くことが知られているＥｌｏｎｇｉｎＢＣコンプレックス（具体的にはＥｌｏｎｇｉｎＣの一部）に結合し得る領域（即ちαドメイン）に着目した。例えば以下の文献：
Ｃ．Ｅ．ステビンス、Ｗ．Ｇ．ケランジュニア、Ｎ．Ｐ．パブレチコ(C. E.
Stebbins, W. G. Kaelin Jr. and N. P. Pavletich)、サイエンス(SCIENCE)、２８４巻、１９９９年、ｐｐ．４５５−４６１；および
Ｍ．オウ、Ｙ．タカギ、Ｔ．アソウ、Ｃ．Ｅ．ステビンス、Ｎ．Ｐ．パブレチコ、Ｂ．ズバル、Ｒ．Ｃ．コナウェイ、Ｊ．Ｗ．コナウェイ、Ｗ．Ｇ．ケランジュニア(M. Ohh, Y. Takagi, T.Aso, C. E. Stebbins, N. P. Pavletich, B. Zbar,
R. C. Conaway, J. W. Conaway and W. G. Kaelin Jr.)、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション(The Journal of Clinical Investigation)、１０４巻、１９９９年、ｐｐ．１５８３−１５９１；
を参照されたい。
また、本発明者は、該領域と類似した構造モチーフ（即ちＳＯＣＳ−ボックス）を有するＳＯＣＳタンパク質（サイトカイン情報伝達のサプレッサー）及びそのファミリータンパク質のＥｌｏｎｇｉｎＢＣコンプレックスに結合すると考えられている領域（ＳＯＣＳ−ボックス）に着目した。例えば上記Stebbinsらの文献ならびに以下の文献：
Ｔ．カムラ、Ｓ．サトウ、Ｄ．ハク、Ｌ．リュー、Ｗ．Ｇ．ケランジュニア、Ｒ．Ｃ．コナウェイ、Ｊ．Ｗ．コナウェイ(T. Kamura, S. Sato, D. Haque, L. Liu, W. G. Kaelin Jr., R. C.
Conaway and J. W. Conaway)、ジーン・アンド・ディベロップメント(GENES
& DEVELOPMENT)、１２巻、１９９８年、ｐｐ．３８７２−３８８１；および
Ｄ．Ｊ．ヒルトン、Ｒ．Ｔ．リチャードソン、Ｗ．Ｓ．アレクサンダー、Ｅ．Ｍ．ビネイ、Ｔ．Ａ．ウィルソン、Ｎ．Ｓ．スプリッグ、Ｒ．スター、Ｓ．Ｅ．ニコルソン、Ｄ．メトカーフ、Ｎ．Ａ．ニコラ(D. J. Hilton, R. T. Richardson, W. S. Alexander, E. M. Viney, T. A.
Willson, N. S. Sprigg, R. Starr, S. E. Nicholson, D. Metcalf and N. A. Nicola)、ＰＮＡＳ、９５巻、１９９８年、ｐｐ．１１４−１１９；
を参照されたい。
そして、これら領域（ドメイン若しくはモチーフ）のアミノ酸配列の一部配列を含むペプチドが細菌等の微生物に対して高い抗菌性を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
ここで開示される抗菌ペプチドは、少なくとも１種の細菌に対して抗菌性を有する天然に存在しない人為的に合成された抗菌ペプチドである。
ここで開示される幾つかの抗菌ペプチドは、抗菌性発現に関与するアミノ酸配列として、ヒト由来のＶＨＬタンパク質（以下、単に「ＶＨＬ」という。）のαドメインを構成するアミノ酸配列であって、ＶＨＬとＥｌｏｎｇｉｎＣとの結合に関与する領域に含まれる部分アミノ酸配列または該配列に部分的な改変が施された配列（例えば、該配列について１〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加された配列）を有するペプチドである。
また、ここで開示される幾つかの抗菌ペプチドは、抗菌性発現に関与するアミノ酸配列として、ＳＯＣＳ−ボックスと呼ばれる領域（ＢＣ−ｂｏｘモチーフを含む）を有するタンパク質（以下、「ＳＯＣＳ−ボックスタンパク質」と総称する。）群に属するもののうちの幾つかのタンパク質が有するＳＯＣＳ−ボックス（概ね４０〜５０程度のアミノ酸残基によって構成される）を構成するアミノ酸配列に含まれる部分アミノ酸配列または該配列に部分的な改変が施された配列（例えば、該配列について１〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加された配列）を有するペプチドである。
【０００６】
ここで開示される好適ないくつかの抗菌ペプチドは、少なくとも１種の細菌に対して抗菌性を有する人為的に合成された抗菌ペプチドであり、以下のアミノ酸配列：
（ａ）ＴＬＫＥＲＣＬＱＶＶＲＳＬＶＫ（配列番号１）；
（ｂ）ＳＬＱＹＬＣＲＦＶＩＲＱＹＴＲ（配列番号２）；
（ｃ）ＳＬＱＨＩＣＲＭＳＩＲＲＶＭＳ（配列番号３）；
（ｄ）ＴＬＬＳＬＣＲＶＡＶＲＲＡＬＧ（配列番号４）；
（ｅ）ＴＬＫＫＲＣＬＱＶＶＲＫＬＶＫ（配列番号５）；
（ｆ）ＴＬＱＨＬＣＲＫＴＶＮＧＨＬＤ（配列番号７）；
（ｇ）ＳＬＱＨＩＣＲＴＶＩＣＮＣＴＴ（配列番号８）；
（ｈ）ＳＬＱＹＩＣＲＡＶＩＣＲＣＴＴ（配列番号９）；
（ｉ）ＳＬＱＨＬＣＲＦＲＩＲＱＬＶＲ（配列番号１０）；
（ｊ）ＳＬＫＨＬＣＲＫＡＬＲＳＦＬＴ（配列番号１１）；
（ｋ）ＰＬＡＨＬＣＲＬＲＶＲＫＡＩＧ（配列番号１２）；
（ｌ）ＳＬＴＨＬＣＲＬＥＩＲＳＳＩＫ（配列番号１３）；
のうちのいずれかのアミノ酸配列又は該アミノ酸配列に部分的な改変が施された配列を有する。好ましくは、ここで開示される抗菌ペプチドは、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が３０以下（特に２０以下）であることを特徴とする。
【０００７】
本明細書において「天然に存在しない人為的に合成された抗菌ペプチド」とは、そのペプチド鎖がそれのみで独立して自然界に安定的に存在するものではなく、人為的な化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって製造され、所定の系（例えば抗菌剤を構成する組成物）の中で安定して存在し得るペプチド断片をいう。
本明細書において「抗菌ペプチド」とは、少なくとも一種の細菌に対して抗菌活性を示す複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、ペプチド鎖に含まれるアミノ酸残基の数によって限定されない。アミノ酸残基数が１０程度までのオリゴペプチド或いはそれ以上のアミノ酸残基から成るポリペプチドも本明細書における抗菌ペプチドに包含される。
本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のＮ末端アミノ酸及びＣ末端アミノ酸を包含する用語である。
本明細書において所定のアミノ酸配列に対して「部分的な改変が施された配列（改変アミノ酸配列）」とは、当該所定のアミノ酸配列が有する抗菌性を損なうことなく、１個または数個（例えば９個以下、好ましくは５個以下、特に好ましくは２，３個）のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加（挿入）されて形成されたアミノ酸配列をいう。例えば、１個又は数個（典型的には２個又は３個）のアミノ酸残基が保守的に置換したいわゆる同類置換（conservative amino acid replacement）によって生じた配列（例えば塩基性アミノ酸残基が別の塩基性アミノ酸残基に置換した配列）、或いは、所定のアミノ酸配列について１個又は数個（典型的には２個又は３個）のアミノ酸残基が付加（挿入）した若しくは欠失した配列、或いは、非塩基性アミノ酸残基（例えばセリン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸）を塩基性アミノ酸残基（リジン、アルギニン）に置換した配列等は、本明細書でいう「部分的な改変が施された配列（改変アミノ酸配列）」に包含される典型例である。
【０００８】
本発明者は、ＥｌｏｎｇｉｎＢＣコンプレックス（具体的にはＥｌｏｎｇｉｎＣのアミノ酸配列部分の一部）に結合すると考えられる領域（モチーフ）に存在するアミノ酸配列であって、人為的に合成可能な比較的短いペプチド鎖において抗菌性を発揮し得るアミノ酸配列となり得るアミノ酸配列を特定した。上記（ａ）〜（ｄ）或いは（ｆ）〜（ｌ）に示すアミノ酸配列はその典型例である。即ち、（ａ）に示すアミノ酸配列（１５アミノ酸残基）は、ヒトＶＨＬ（ｈｕｍａｎＶＨＬ）のαドメインに含まれる配列である。他方、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）及び（ｌ）に示す配列は、それぞれ、ＳＯＣＳ−ボックスタンパク質として同定されたｈＳＯＣＳ−６（ｂ）、ｍＷＳＢ−１（ｃ）、ｍＡＳＢ−１（ｄ）、ｍＳＯＣＳ−３（ｆ）、ｍＳＯＣＳ−４（ｇ）、ｍＳＯＣＳ−５（ｈ）、ｍＳＯＣＳ−７（ｉ）、ｍＷＳＢ−２（ｊ）、ｍＡＳＢ−２（ｋ）及びｈＡＳＢ−３（ｌ）のＳＯＣＳ−ボックスに含まれる配列である（上記３，４参照）。また、上記（ｅ）に示すアミノ酸配列は、上記（ａ）に示すアミノ酸配列に基づく改変配列（即ち（ａ）に示すアミノ酸配列のＮ末端から４番目のグルタミン酸残基及び１２番目のセリン残基をそれぞれリジン残基に置換した改変配列）である。
【０００９】
また、抗菌ペプチドは、少なくとも一つのアミノ酸残基がアミド化されているものが好ましい。アミノ酸残基（典型的にはペプチド鎖のＣ末端アミノ酸残基）のカルボキシル基のアミド化により、抗菌ペプチドの構造安定性（例えばプロテアーゼ耐性）を向上させ得る。
また、抗菌ペプチドは、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下（好適には５０以下、好ましくは３０以下、特に好ましくは２０以下）であるものが望ましい。このような鎖長の短いペプチドは、化学合成が容易であり、容易に抗菌ペプチドを提供することができる。
【００１０】
本発明は他の側面として、少なくとも１種の細菌に対して抗菌性を有する抗菌ペプチドを主成分とする抗菌剤であって、ここで開示される抗菌ペプチドを１種又は２種以上含有する抗菌剤（典型的には医療分野又は衛生分野において使用し得る組成物）を提供する。好ましくは、上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）及び（ｌ）に示すアミノ酸配列のうちのいずれかのアミノ酸配列又は該アミノ酸配列に部分的な改変が施された配列（例えば上記（ｅ）に示すアミノ酸配列）を有する人為的に合成された抗菌ペプチド（好ましくはペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が３０以下のもの）を含有する。
本発明により提供される抗菌剤は、ここで開示されるいずれかの抗菌ペプチドを含有することによって、少なくとも一種の細菌（グラム陰性細菌及び／又はグラム陽性細菌）或いは真菌に対して高い抗菌活性を発揮し得る。
ここで開示される抗菌剤は、典型的には、１種又は２種以上の抗菌ペプチドと薬学的に許容され得る担体とを含む。
【００１１】
ここで開示される抗菌ペプチドの特に好適なものとして、配列番号１，２，３，４，５，７，８，９，１０，１１，１２及び１３（即ち上記（ａ）〜（ｌ）に示すアミノ酸配列）のいずれかに示されるアミノ酸配列、或いは該配列について１〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されて形成されたアミノ酸配列を有する抗菌ペプチド（特に好ましくはペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が３０以下のもの）が挙げられる。例えば、配列番号５（（ｅ）に示すアミノ酸配列）に示されるアミノ酸配列又は該配列について１〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されて形成されたアミノ酸配列（但し配列番号１に示すアミノ酸配列と等しい配列を除く）を有し、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が３０以下（好ましくは２０以下）のペプチドが挙げられる。これら配列を含む抗菌ペプチド（典型的にはこれら配列から成る抗菌ペプチド）は、細菌、特に黄色ブドウ球菌のようなグラム陽性細菌に対して高い抗菌活性を発揮し得る。従って、このようなペプチドを含有する抗菌剤が好適である。
【００１２】
また、本発明は、ここで開示される抗菌ペプチドの製造方法を提供する。すなわち、本発明によって提供される抗菌ペプチド製造方法は、上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）及び（ｌ）に示すアミノ酸配列のうちのいずれかのアミノ酸配列又は該アミノ酸配列に部分的な改変が施された配列（例えば上記（ｅ）に示すアミノ酸配列或いは該配列について１〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されて形成されたアミノ酸配列）を有し、且つ、少なくとも１種の細菌に対して抗菌性を有するペプチド鎖を設計すること、および、上記設計したペプチド鎖を合成すること、を包含する。
かかるペプチド鎖の設計において、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が３０以下（特に２０以下）となるように該ペプチド鎖を設計することが好ましい。
【００１３】
また、本発明は、ここで開示されるいずれかの抗菌ペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、天然に存在しない人為的に設計されたポリヌクレオチド（例えばそれら配列により実質的に構成されるポリヌクレオチド）を提供する。
本明細書において「ポリヌクレオチド」とは、複数のヌクレオチドがリン酸ジエステル結合で結ばれたポリマー（核酸）を指す用語であり、ヌクレオチドの数によって限定されない。種々の長さのＤＮＡフラグメント及びＲＮＡフラグメントが本明細書におけるポリヌクレオチドに包含される。また、「天然に存在しない人為的に設計されたポリヌクレオチド」とは、そのヌクレオチド鎖（全長）がそれ単独で自然界に存在するものではなく、化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって人為的に合成されたポリヌクレオチドをいう。
【００１４】
好ましいポリヌクレオチドとして、配列番号１〜５のいずれかに示されるアミノ酸配列（または該配列において部分的な改変が施されて成る改変配列）をコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド（例えばそれら配列により実質的に構成されるポリヌクレオチド）が挙げられる。各アミノ酸を規定するコドンの選択には特に制限はなく、利用可能な宿主細胞における使用頻度を考慮しつつ適宜選択すればよい。
【００１５】
＜配列表フリーテキスト＞
配列番号１  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号２  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号３  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号４  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号５  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号６  末端にアミド基を含む、設計されたペプチド。
配列番号７  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号８  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号９  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号１０  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号１１  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号１２  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
配列番号１３  末端にアミド基を含む、設計された抗菌ペプチド。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明の好適な実施形態を説明する。なお、本明細書において特に言及している事項（例えば抗菌ペプチドの一次構造や鎖長）以外の事柄であって本発明の実施に必要な事柄（例えばペプチド合成、ポリヌクレオチド合成、ペプチドを成分とする抗菌剤（薬剤組成物）の調製に関するような一般的事項）は、有機化学、生化学、遺伝子工学、タンパク質工学、分子生物学、薬学、医学、衛生学等の分野における従来技術に基づく当業者の設計事項として把握され得る。本発明は、本明細書に開示されている内容と当該分野における技術常識とに基づいて実施することができる。なお、以下の説明では、場合に応じてアミノ酸をIUPAC-IUBガイドラインで示されたアミノ酸に関する命名法に準拠した１文字表記（但し配列表では３文字表記）で表す。【００１７】
本明細書において開示される抗菌ペプチドは、天然に存在しない人為的に設計されたペプチドであり、抗菌性発現に関与するアミノ酸配列として上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）及び（ｌ）に示すアミノ酸配列のうちのいずれかのアミノ酸配列又は上記（ｅ）に示すアミノ酸配列のように該アミノ酸配列に部分的な改変が施された配列（以下これら本発明に係るアミノ酸配列を「抗菌関連配列」と総称する。）を有する比較的短いポリペプチドまたはオリゴペプチドである。好ましくは、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数の５０％以上が１単位又は２単位以上の抗菌関連配列で構成されるペプチドである。ここで抗菌関連配列について１単位（unit）とは、抗菌関連配列を構成する一つの配列部分（領域若しくはモチーフ）を指す。従って、あるペプチド鎖に抗菌関連配列が２単位含まれるというときは、それらが同種であるか異種であるかを問わず相互に独立して抗菌関連配列と認められる配列が当該ペプチド鎖中に二つ存在することを意味する。１単位の抗菌関連配列から構成される短いペプチド鎖から成るペプチドはここで開示される抗菌ペプチドの典型例であり、抗菌剤の主成分たる抗菌ペプチドとして好適である（後述する実施例参照）。【００１８】
全体のアミノ酸配列に対する抗菌関連配列の占める割合（即ちペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数に占める抗菌関連配列部分を構成するアミノ酸残基数の個数％）は、５０％以上であれば特に限定はないが、７０％以上が更に好ましく、９０％以上が特に好ましい。なお、本発明の抗菌ペプチドとしては、全てのアミノ酸残基がＬ型アミノ酸であるものが好ましいが、抗菌活性を失わない限りにおいて、アミノ酸残基の一部又は全部がＤ型アミノ酸に置換されているものであってもよい。【００１９】
ここで開示される抗菌ペプチドの鎖長（即ち総アミノ酸残基数）は、抗菌関連配列の長さに応じて異なり得るので特に限定されないが、全アミノ酸残基数が１００以下（典型的には５０以下）であることが適当であり、３０以下（特に２０以下）であることが好ましい。例えば、１０〜２０個程度のアミノ酸残基で構成されるものは高い抗菌活性を奏し得ると共に合成が容易であり利用し易い。
なお、ペプチドのコンホメーション（立体構造）については、使用する環境下で抗菌性を発揮する限りにおいて、特に限定されるものではないが、免疫原（抗原）になり難いという観点から直鎖状又はへリックス状のものが好ましい。このような形状のペプチドはエピトープを構成し難い。かかる観点から、抗菌剤に適用する抗菌ペプチドとしては、直鎖状であり比較的低分子量（典型的には３０以下（特に２０以下、例えば１４又は１５又は１６又は１７）のアミノ酸残基数）のものが好適である。【００２０】
本発明の抗菌ペプチドを設計するための抗菌関連配列としては、上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）及び（ｌ）のうちのいずれかのアミノ酸配列をそのまま採用してもよいし、或いはいずれかのアミノ酸配列の改変配列、例えば１若しくは複数（典型的には９個以下、好ましくは２〜５個程度）のアミノ酸残基を置換、欠失及び／又は付加して成る配列を採用して抗菌ペプチド（ペプチド鎖）を容易に設計することができる。例えば上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）及び（ｌ）のうちのいずれかのアミノ酸配列を改変配列作成のためのベースとし、そこから抗菌性（例えば細菌を対象とするＭＩＣ試験）を指標として該配列を改変していくことができる。具体的な改変の手段としては、アミノ酸残基の置換、欠失又は付加（挿入）が挙げられる。即ち、上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）及び（ｌ）のうちのいずれかのアミノ酸配列（又は（ｅ）のアミノ酸配列）を基にして１〜数個のアミノ酸残基の置換、欠失又は付加（挿入）を任意に行い、それら改変配列から成るペプチドを製造し、所定の抗菌活性試験（後述する実施例参照）を行う。例えば、１５アミノ酸残基から成る上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）及び（ｌ）のうちのいずれかのアミノ酸配列を先ず選択し（例えば（ａ）の配列を選択）、その選択したアミノ酸配列のうちの幾つかのアミノ酸残基（例えば選択した（ａ）配列のＮ末端のアミノ酸残基であるスレオニン）を、他の配列の対応する位置に存在するアミノ酸残基（例えば（ｂ）配列のＮ末端のアミノ酸残基であるセリン）に置換することによって改変配列を多数設計することができる。そして、得られた改変配列から成るペプチドを製造し、それらについて所定の抗菌活性試験を行う。このことによって当該改変配列ペプチドが抗菌活性を有するものであるか否かを判別することができる。
或いは、製造コストを下げる或いは化学合成を容易にするという観点からはアミノ酸残基の欠失が好ましい。構造安定性を向上させるという観点からはアミノ酸残基の付加が好ましい。或いはまた、抗菌活性を向上させるという観点からはアミノ酸残基の置換が好ましい。特に好適な改変配列としては、例えば１若しくは複数の非塩基性アミノ酸残基を塩基性アミノ酸残基に置換した配列（例えば上記（ｅ）のアミノ酸配列）が挙げられる。【００２１】
本発明の抗菌ペプチドは、抗菌性を失わない限りにおいて、抗菌関連配列に含まれ得ない配列を部分的に含み得る。特に限定するものではないが、かかる部分配列としてはペプチド鎖における抗菌関連配列部分の３次元形状（典型的には直鎖形状）を維持し得る配列が好ましい。【００２２】
ここで開示される抗菌ペプチドのうちペプチド鎖の比較的短いものは、一般的な化学合成法に準じて容易に製造することができる。例えば、従来公知の固相合成法又は液相合成法のいずれを採用してもよい。アミノ基の保護基としてＢｏｃ（t-butyloxycarbonyl）或いはＦｍｏｃ（9-fluorenylmethoxycarbonyl）を適用した固相合成法が好適である。
ここで開示される抗菌ペプチドは、市販のペプチド合成機（例えば、PerSeptive
Biosystems社、Applied Biosystems社等から入手可能である。）を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列、修飾（Ｃ末端アミド化等）部分を有するペプチド鎖を合成することができる。【００２３】
或いは、遺伝子工学的手法に基づいて抗菌ペプチドを生合成してもよい。このアプローチは、ペプチド鎖の比較的長いポリペプチドを製造する場合に好適である。すなわち、所望する抗菌ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列（ＡＴＧ開始コドンを含む。）のＤＮＡを合成する。そして、このＤＮＡと該アミノ酸配列を宿主細胞内で発現させるための種々の調節エレメント（プロモーター、リボゾーム結合部位、ターミネーター、エンハンサー、発現レベルを制御する種々のシスエレメントを包含する。）とから成る発現用遺伝子構築物を有する組換えベクターを、宿主細胞に応じて構築する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、動物（哺乳類）細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的の抗菌ペプチドを得ることができる。一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、哺乳類細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的の抗菌ペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。【００２４】
例えば、宿主細胞内で効率よく大量に生産させるために融合タンパク質発現システムを利用することができる。すなわち、目的の抗菌ペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子（ＤＮＡ）を化学合成し、該合成遺伝子を適当な融合タンパク質発現用ベクター（例えばノバジェン社から提供されているｐＥＴシリーズおよびアマシャムバイオサイエンス社から提供されているｐＧＥＸシリーズのようなＧＳＴ(Glutathione S-transferase)融合タンパク質発現用ベクター）の好適なサイトに導入する。そして該ベクターにより宿主細胞（典型的には大腸菌）を形質転換する。得られた形質転換体を培養して目的の融合タンパク質を調製する。次いで、該タンパク質を抽出及び精製する。次いで、得られた精製融合タンパク質を所定の酵素（プロテアーゼ）で切断し、遊離した目的のペプチド断片（設計した抗菌ペプチド）をアフィニティクロマトグラフィー等の方法によって回収する。このような従来公知の融合タンパク質発現システム（例えばアマシャムバイオサイエンス社により提供されるＧＳＴ／Ｈｉｓシステムを利用し得る。）を用いることによって、本発明の抗菌ペプチドを製造することができる。
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型ＤＮＡ（即ち抗菌ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片）を構築し、ペプチド合成に必要な種々の化合物（ＡＴＰ、ＲＮＡポリメラーゼ、アミノ酸類等）を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology,
19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット（例えば、日本の東洋紡績（株）から入手可能なPROTEIOS（商標）Wheat germ cell-free protein
synthesis kit）が市販されている。
従って、上述のようにして、利用するアミノ酸配列をひとたび決定し、ペプチド鎖を設計しさえすれば、そのアミノ酸配列に従って無細胞タンパク質合成システムによって目的の抗菌ペプチドを容易に合成・生産することができる。例えば、日本の（株）ポストゲノム研究所のピュアシステム（登録商標）に基づいて本発明の抗菌ペプチドを容易に生産することができる。【００２５】
ここで開示される抗菌ペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む一本鎖又は二本鎖のポリヌクレオチドは、従来公知の方法によって容易に製造（合成）することができる。すなわち、設計したアミノ酸配列を構成する各アミノ酸残基に対応するコドンを選択することによって、抗菌ペプチドのアミノ酸配列に対応するヌクレオチド配列が容易に決定され、提供される。そして、ひとたびヌクレオチド配列が決定されれば、ＤＮＡ合成機等を利用して、所望するヌクレオチド配列に対応するポリヌクレオチド（一本鎖）を容易に得ることができる。さらに得られた一本鎖ＤＮＡを鋳型として用い、種々の酵素的合成手段（典型的にはＰＣＲ）を採用して目的の二本鎖ＤＮＡを得ることができる。
本発明によって提供されるポリヌクレオチドは、ＤＮＡの形態であってもよく、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ等）の形態であってもよい。ＤＮＡは、二本鎖又は一本鎖で提供され得る。一本鎖で提供される場合は、コード鎖（センス鎖）であってもよく、それと相補的な配列の非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。
本発明によって提供されるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、抗菌ペプチド生産のための組換え遺伝子（発現カセット）を構築するための材料として使用することができる。
本発明によると、新規なアミノ酸配列の抗菌ペプチド（例えば上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）及び（ｌ）に示す各アミノ酸配列の改変配列、例えば（ｅ）に示すアミノ酸配列から成る抗菌ペプチド）をコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが提供される。例えば、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が５０以下（好ましくは３０以下、特に好ましくは２０以下）であって、配列番号１，２，３，４，５，７，８，９，１０，１１，１２及び１３で示されるいずれかのアミノ酸配列或いは該配列の改変配列（抗菌関連配列）を含むアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む（又はそれら配列から実質的に構成された）天然に存在しない人為的に設計されたポリヌクレオチドが提供される。【００２６】
本発明の抗菌ペプチドは少なくとも一種の細菌に対して高い抗菌活性を有し、好ましいものでは更に比較的広い抗菌スペクトルを有しており、抗菌剤の主成分として好適に用いられる。例えば、細菌感染症の治療、創傷面の消毒、眼病予防、口腔内洗浄（うがい）、食品の防腐や鮮度保持、脱臭、家具や衛生機器表面の殺菌又は静菌等の目的に用いられ得る。
なお、抗菌剤に含有される抗菌ペプチドは、抗菌活性を損なわない限りにおいて、塩の形態であってもよい。例えば、常法に従って通常使用されている無機酸又は有機酸を付加反応させることにより得られ得る該ペプチドの酸付加塩を使用することができる。或いは、抗菌活性を有する限り、他の塩（例えば金属塩）であってもよい。【００２７】
このような目的に使用される抗菌剤は、主成分たる抗菌ペプチドの他、医薬（薬学）上許容され得る種々の担体を含み得る。希釈剤、賦形剤等としてペプチド医薬において一般的に使用される担体が好ましい。抗菌剤の用途や形態に応じて適宜異なり得るが、典型的には、水、生理学的緩衝液、種々の有機溶媒が挙げられる。例えば、適当な濃度のアルコール（エタノール等）水溶液、グリセロール、オリーブ油のような不乾性油であり得る。或いはリポソームであってもよい。また、抗菌剤に含有させ得る副次的成分としては、種々の充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、表面活性剤、色素、香料等が挙げられる。
抗菌剤の形態に関して特に限定はない。例えば、内用剤若しくは外用剤の典型的な形態として、軟膏、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセルが挙げられる。また、注射等に用いるため、使用直前に生理食塩水又は適当な緩衝液（例えばＰＢＳ）等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。抗菌剤に含まれる担体は、抗菌剤の形態に応じて異なり得る。
なお、抗菌ペプチド（主成分）及び種々の担体（副成分）を材料にして種々の形態の薬剤（組成物）を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製剤方法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修，Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。【００２８】
本発明によって提供される抗菌剤は、その形態及び目的に応じた方法や用量で使用することができる。
ここで開示される抗菌関連配列を含む抗菌ペプチドは、比較的高い濃度のカチオン、塩類（例えば塩化ナトリウム）或いは血清のような有機物が存在する系においても高い抗菌活性を維持し得る。従って、ここで開示される抗菌剤は、カチオン、塩類や血清等が存在する系（場）での使用に好適である。例えば、本発明によって提供される抗菌剤は、液剤として、静脈内、筋肉内、皮下、皮内若しくは腹腔内への注射或いは灌腸によって患者に投与することができる。
或いは、錠剤等の固体形態のものは経口投与することができる。また、衛生陶器表面の消毒（殺菌）や食品の防腐目的に使用する場合は、比較的多量（例えば1〜100mg/ml）の抗菌ペプチドを含有する液剤を対象物の表面に直接スプレーするか、或いは、当該液剤で濡れた布や紙で対象物の表面を拭くとよい。これらは例示にすぎず、従来のペプチド系抗生物質やペプチドを構成成分とする農薬、医薬部外品等と同じ形態、使用方法を適用することができる。
例えば、放射線治療を受けているガン患者やエイズ患者にとって、細菌感染症の予防及び治療は重大な関心事である。ここで開示される抗菌ペプチドは、感染症の原因たる細菌（例えば黄色ブドウ球菌のようなグラム陽性細菌）に対して高い抗菌作用を示し得る。このため、本発明の抗菌ペプチドは、抗菌剤の主成分として有用である。【００２９】
また、本発明の抗菌ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、いわゆる遺伝子治療に使用する素材として用い得る。例えば、抗菌ペプチドをコードする遺伝子（典型的にはＤＮＡセグメント、或いはＲＮＡセグメント）を適当なベクターに組み込み、目的とする部位に導入することにより、常時、生体（細胞）内で本発明に係る抗菌ペプチドを発現させることが可能である。従って、本発明の抗菌ペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡセグメント、ＲＮＡセグメント等）は、上述した患者等に対し、細菌感染を予防し又は治療する薬剤として有用である。【００３０】
再生医療の分野において、皮膚、骨、各種の臓器の培養時の細菌感染を防止することは重要である。ここで開示される抗菌ペプチドは、哺乳動物細胞及び組織に対する毒性が極めて低く、細菌に選択的に抗菌作用を示し得る。このため、培養臓器等の細菌感染を防止する薬剤として極めて有用である。例えば、後述する実施例に示すように、適当な濃度で本発明の抗菌ペプチド単独又は当該ペプチドを主成分の一つとする抗菌剤を培養液中に添加することにより、培養中の臓器等の細菌感染を防止することができる。
また、培養細胞や培養組織に対して、本発明の抗菌ペプチドをコードするポリヌクレオチドを遺伝子治療に使用する素材として用いることができる。例えば、本発明の抗菌ペプチドをコードする遺伝子（典型的にはＤＮＡセグメント又はＲＮＡセグメント）を適当なベクターに組み込み、目的とする培養組織に導入することにより、常時或いは所望する時期に培養組織（細胞）内で本発明に係る抗菌ペプチドを発現させることが可能である。従って、本発明によって提供される本発明の抗菌ペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡセグメント、ＲＮＡセグメント等）は、培養組織の細菌感染を防止する薬剤として有用である。【００３１】
以下、本発明に関するいくつかの実施例を説明するが、本発明をかかる実施例に示すものに限定することを意図したものではない。【００３２】
＜実施例１：ペプチド合成＞
計１３種類のペプチド（サンプル１〜１２、比較サンプル１）を後述するペプチド合成機を用いて製造した。表１には、これら合成ペプチドのアミノ酸配列を列挙している。
【００３３】
【表１】
0005041231.tif 000002
【００３４】
表１に示すように、サンプル１〜１２は、いずれも抗菌関連配列を有している。すなわち、サンプル１のペプチド（配列番号１）は、上記（ａ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。サンプル２のペプチド（配列番号２）は、上記（ｂ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。サンプル３のペプチド（配列番号３）は、上記（ｃ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。サンプル４のペプチド（配列番号４）は、上記（ｄ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。サンプル５のペプチド（配列番号５）は、上記（ｅ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。サンプル６のペプチド（配列番号７）は、上記（ｆ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。サンプル７のペプチド（配列番号８）は、上記（ｇ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。サンプル８のペプチド（配列番号９）は、上記（ｈ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。サンプル９のペプチド（配列番号１０）は、上記（ｉ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。サンプル１０のペプチド（配列番号１１）は、上記（ｊ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。サンプル１１のペプチド（配列番号１２）は、上記（ｋ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。そして、サンプル１２のペプチド（配列番号１３）は、上記（ｌ）のアミノ酸配列から構成された１５アミノ酸残基から成るペプチドである。
他方、比較サンプル１のペプチド（ＴＬＨＱＱＣＩＲＶＬＫＮＮＩＤ：配列番号６）は、ｈｕｍａｎＥｌｏｎｇｉｎＡの部分配列（上記Kamuraらの文献参照）から構成された合成ペプチドである。なお、いずれのサンプルも、Ｃ末端アミノ酸のカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）はアミド化（−ＣＯＮＨ２）されている。【００３５】
上述した各ペプチドは、市販のペプチド合成機（PEPTIDE SYNTHESIZER
9050、PerSeptive Biosystems社製品）を用いて固相合成法（Ｆｍｏｃ法）により合成した。なお、縮合剤としてＨＡＴＵ（Applied Biosystems社製品）を使用し、固相合成法に用いた樹脂及びアミノ酸はNOVA biochem社から購入した。アミノ酸配列のＣ末端をアミド化する場合には、固相担体として「Rink Amide resin (100〜200 mesh)」 を使用した。
而して、上記ペプチド合成機の合成プログラムに準じて脱保護基反応及び縮合反応を反復して樹脂に結合するFmoc−アミノ酸からペプチド鎖を伸長していき、目的の鎖長の合成ペプチドを得た。具体的には、２０％ピペリジン／ジメチルホルムアミド(DMF)（ペプチド合成用グレード、関東化学（株）製品）によって、アミノ酸のアミノ保護基であるFmocを切断除去し、ＤＭＦで洗浄し、Fmoc−アミノ酸(-OH)各４ｅｑを反応させ、ＤＭＦで洗浄する操作を反復した。そして、ペプチド鎖の伸長反応が全て終了した後、２０％ピペリジン／ＤＭＦによりFmoc基を切断し、ＤＭＦ、メタノールの順で上記反応物を洗浄した。【００３６】
固相合成後、合成したペプチド鎖を樹脂と共に遠沈管に移し、エタンジオール１．８ｍＬ、m-クレゾール０．６ｍＬ、チオアニソール３．６ｍＬ及びトリフルオロ酢酸２４ｍＬを加え、室温で２時間撹拌した。その後、ペプチド鎖に結合していた樹脂を濾過して除去した。
次いで、濾液に冷却エタノールを加え、氷冷水で冷却してペプチド沈澱物を得た。その後、遠心分離（2500rpmで５分間）によって上澄みを廃棄した。沈殿物に冷ジエチルエーテルを新たに加えて十分に撹拌した後、上記と同じ条件で遠心分離を行った。この撹拌と遠心分離の処理を計３回反復して行った。【００３７】
得られたペプチド沈殿物を真空乾燥し、高速液体クロマトグラフ（Waters 600：Waters社製品）を用いて精製を行った。
具体的には、プレカラム（日本ウォーターズ（株）製品、Guard-Pak
Delta-pak C18 A300）及びＣ１８逆相カラム（日本ウォーターズ（株）製品、XTerra（登録商標）カラム、MS C18、5μm、4.6×150mm）を使用し、０．１％トリフルオロ酢酸水溶液と０．１％トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液との混合液を溶離液に用いた。即ち、溶離液に含まれる上記トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液の分量を経時的に増大させつつ（容積比で１０％から８０％への濃度勾配を設ける）、１．５ｍＬ／分の流速で上記カラムを用いて３０〜４０分間の分離精製を行った。なお、逆相カラムから溶離したペプチドは紫外線検出器（490E Detector：Waters社製品）を用いて波長：２２０ｎｍで検出され、記録チャート上にピークとして示される。
また、溶離した各ペプチドの分子量をPerSeptive Biosystems社製のVoyager DE RP（商標）を用いてMALDI-TOF/MS（Matrix-Assisted Laser Desorption Time of Flight Mass Spectrometry：マトリックス支援レーザーイオン化−飛行時間型−質量分析)に基づいて決定した。その結果、目的のペプチドが合成・精製されていることが確認された。【００３８】
＜実施例２：合成ペプチドの抗菌活性＞
本発明に係る抗菌ペプチド（サンプル１〜１２）及び比較サンプル１のペプチドについて、グラム陰性細菌（大腸菌：E. coli）及びグラム陽性細菌（黄色ブドウ球菌：S. aureus）に対する抗菌活性（最小阻止濃度：ＭＩＣ）を９６穴(well)マイクロプレートを用いた液体培地希釈法により求めた。
即ち、先ず、滅菌蒸留水で最高試験濃度の４０倍の濃度の薬剤（合成ペプチド）溶液を調製し、次いでペプチド濃度が２００、１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、及び１．５６μＭとなる液体肉汁培地（DIFCO社製品「NUTRIENT BROTH Dehydrated」）をそれぞれ作製した。そして、作製した上記各濃度のペプチド含有液体肉汁培地を９６穴マイクロプレートに１００μＬずつ充填した。
一方、３７℃で１８時間培養した寒天平板（DIFCO社製品「ミューラーヒントン寒天(Mueller Hinton Agar)」）上の被験菌体をループで掻き取り、滅菌生理食塩水に懸濁した。２×１０7cells／ｍＬ相当に調整した菌液５μＬを上記マイクロプレートの各ウェルに充填されている上記各濃度のペプチド含有液体肉汁培地にそれぞれ接種した（試験菌数：約１×１０6cells／ｍＬ）。接種後、３７℃の恒温器内で培養を開始し、２４時間後の濁度により菌発生の有無を調べた。その計測時における菌による濁度の増加が認められない最小薬剤濃度（ポリペプチド濃度）を本実施例におけるＭＩＣ（単位：μＭ）と定めた。結果を表２に示す。【００３９】
【表２】
0005041231.tif 000003
【００４０】
表２に示す結果から明らかなように、抗菌関連配列を有する抗菌ペプチド（サンプル１〜１２）は、いずれも良好な抗菌活性を示した。サンプル１〜５は特にグラム陽性細菌（ここでは黄色ブドウ球菌）に対して高い抗菌活性を示した。
一方、比較対照の合成ペプチド（比較サンプル１）については抗菌活性は認められなかった。【００４１】
＜実施例３：顆粒剤の調製＞
サンプル１のペプチド５０ｍｇと結晶化セルロース５０ｍｇ及び乳糖４００ｍｇとを混合した後、エタノールと水の混合液１ｍＬを加え混練した。この混練物を常法に従って造粒し、抗菌ペプチドを主成分とする顆粒剤（顆粒状抗菌剤）を得た。【００４２】
以上、本発明の具体例を詳細に説明したが、これらは例示にすぎず、特許請求の範囲を限定するものではない。特許請求の範囲に記載の技術には、以上に例示した具体例を様々に変形、変更したものが含まれる。
【産業上の利用可能性】
【００４３】
上述のように本発明の抗菌ペプチドは高い抗菌活性を有しているため、例えば医薬や衛生材料として利用することができる。
【配列表】
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