(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒノキチオールとポリアセチルグリコシルハライドをキレート剤、金属水酸化物及び相関移動触媒の存在下に反応させる工程を有する、ヒノキチオールアセチル配糖体の製造方法。
【請求項２】
ヒノキチオールの金属塩とポリアセチルグリコシルハライドをキレート剤及び相関移動触媒の存在下に反応させる工程を有する、ヒノキチオールアセチル配糖体の製造方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の製造方法により得られるヒノキチオールアセチル配糖体を脱アセチル化する工程を有するヒノキチオール配糖体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒノキチオールアセチル配糖体の製造方法及びヒノキチオール配糖体の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ヒノキチオールは、台湾ヒノキ、青森ヒバ等の樹木の精油成分中に含有されている天然トロポロンであり、抗菌、防カビ、防腐、育毛促進等の多くの効果が認められることから現在は、医薬品、農薬、頭髪用品、食品保存剤及び化粧品類等に利用されている（例えば、特開平２−４０３０４号公報、特開平４−１８２４０８号公報等参照）。
しかしヒノキチオールは水に難溶性であるため、ヒノキチオールを配合した製剤は、その剤型が限定され、結果ヒノキチオール自身の用途が限定されているのが現状である。
【０００３】
そこで、アーモンド由来のβ−グルコシダーゼにてヒノキチオールとグルコースを反応させる方法（特開平７−１７９９３号公報）や、ユーカリ属（Eucalyptus) の植物の組織片から誘導した培養細胞に鉄分を含まない培地で培養し、そこへヒノキチオールを添加しヒノキチオール配糖体を得る方法（特開平７−８２２８８号公報）等の方法が開示されているが、これらの方法はいずれも生産性が悪く、またコストがかかるため工業的とは言い難い。
【０００４】
一方、ヒノキチオール配糖体を化学合成して得る方法については、殆ど知られていないが、前記化学合成の手段としては、糖受容体と糖供与体とのグリコシル化反応を利用することが考えられる。かかるグリコシル化反応としては、従来銀塩や水銀塩等を化学量論量用いるKoenigs-Knorr 法が主流であった。例えば、シリカゲル担持炭酸銀を用いたテルペンアルコールと臭化糖誘導体の反応によるテルペン配糖体の合成（油化学  第４３巻  第１号）、炭酸銀を触媒に用いたトロポロン配糖体の合成 (Biosci. Biotech. Biochem., 60(12)2095-2096, 1996) 等が既存の事実として知られていた。しかしこれらの合成方法では低収率であり、しかも高価な銀を化学量論量用いるため、工業的とは言い難い。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、水溶性の高いヒノキチオール配糖体を工業的に安価かつ高収率に得ることができる製造方法及び該ヒノキチオール配糖体の製造に利用できるヒノキチオールアセチル配糖体の製造方法を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
即ち、本発明の要旨は、
〔１〕ヒノキチオールとポリアセチルグリコシルハライドをキレート剤、金属水酸化物及び相関移動触媒の存在下に反応させる工程を有する、ヒノキチオールアセチル配糖体の製造方法、
〔２〕ヒノキチオールの金属塩とポリアセチルグリコシルハライドをキレート剤及び相関移動触媒の存在下に反応させる工程を有する、ヒノキチオールアセチル配糖体の製造方法、並びに
〔３〕前記〔１〕又は〔２〕に記載の製造方法により得られるヒノキチオールアセチル配糖体を脱アセチル化する工程を有するヒノキチオール配糖体の製造方法に関する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明のヒノキチオールアセチル配糖体の製造方法は、前記のように、ヒノキチオールとポリアセチルグリコシルハライドをキレート剤、金属水酸化物及び相関移動触媒の存在下に反応させる工程を有する。
【０００８】
前記ヒノキチオールとしては、タイワンヒノキ、ヒバ、アスナロ等に由来する精油から抽出された天然物でもよく、化学合成品でもよい。また、市販品のヒノキチオールをそのまま用いてもよいし、ヒノキチオールの塩も使用することができる。前記ヒノキチオールの塩としては、特に限定されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、銅塩、亜鉛塩に代表される金属塩等の無機塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、プロパノールアミン塩、ピペラジン塩、ピペリジン塩、アルギニン塩、リジン塩、ヒスチジン塩等の有機塩類等が挙げられる。本発明においては、これらのヒノキチオール及びその塩を単独で又は２種以上を混合して用いてもよい。
【０００９】
前記ポリアセチルグリコシルハライドは、ハロゲン化されたＯ−アセチルグルコシド誘導体をいい、その例としては、式（Ｉ）：
【００１０】
【化１】
0004870296.tif 000002
【００１１】
で表されるテトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド（tetra-O-acetyl- α-D-gulucopyranosyl bromide) 等の単糖類、式（II）：
【００１２】
【化２】
0004870296.tif 000003
【００１３】
で表されるヘプタ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マルトシルブロマイド（hepta-O-acetyl- α-D-maltosyl bromide)等の二糖類等が挙げられる。
【００１４】
前記キレート剤としては、ペンタメチルジエチレントリアミン、エチレンジアミン４酢酸、ジエチレントリアミン５酢酸、テトラエチレングリコール等が好ましい。
【００１５】
前記金属水酸化物としては、アルカリ金属及びアルカリ土類金属等の水酸化物が挙げられる。また、金属水酸化物の態様としては、溶液又は水溶液が好ましい。中でも、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムの溶液又は水溶液がより好ましい。
かかる金属水酸化物を用いることにより、ヒノキチオールをヒノキチオールの金属塩として反応させるので、ヒノキチオールの金属塩を原料として用いる場合には、金属水酸化物を添加する必要はない。従って、本発明の他の態様として、ヒノキチオールの金属塩とポリアセチルグリコシルハライドをキレート剤及び相関移動触媒の存在下に反応させる工程を有する、ヒノキチオールアセチル配糖体の製造方法を提供する。本発明において、金属水酸化物を用いることによりアセチル配糖体を収率よく得ることができるという利点がある。
【００１６】
前記相関移動触媒としては、テトラノルマルブチルアンモニウムブロミド、テトラノルマルブチルアンモニウムクロリド、テトラノルマルブチルアンモニウムトリブロミド、テトラノルマルブチルアンモニウムヨーダイド、トリオクチルメチルアンモニウムクロリド（以降ＴＯＭＡＣ）、塩化ベンザルコニウム、テトラノルマルブチルアンモニウム硫酸水素塩、アセトアミド、Ｎ−セチルピリジウムクロリド、テトラエチルアンモニウムｐトルエンスルホネート、テトラフルオロホウ酸テトラエチルアンモニウム、テトラノルマルプロピルアンモニウムヒドロキシド、ベンゾニトリル、トリメチルセチルアンモニウムブロミド、トリメチルドデシルアンモニウムクロリド、トリメチルベンジルアンモニウムヒドロキシド、トリノルマルブチルベンジルアンモニウムクロリド、トリメチルベンジルアンモニウムクロリド水溶液、トリエチルベンジルアンモニウムクロリド水溶液、ベンゾイルトリブチルアンモニウムクロリド等が挙げられる。中でも、反応性及び収率の観点から、塩化ベンザルコニウム及びＴＯＭＡＣが好ましい。
【００１７】
本発明の製造方法において、ヒノキチオールとポリアセチルグリコシルハライドをキレート剤、金属水酸化物及び相関移動触媒の存在下に反応させる方法としては、例えば、金属水酸化物を溶解させた水溶液をヒノキチオール、ポリアセチルグリコシルハライド、キレート剤及び相関移動触媒を溶解させた溶媒に加えて反応させる方法、前記５成分を全て溶媒に溶解させて反応させる方法、ヒノキチオール金属塩を溶解させた水溶液をポリアセチルグリコシルハライド、キレート剤及び相関移動触媒を溶解させた溶媒に加えて反応させる方法等が挙げられる。溶媒としては、トルエン、キシレン、ヘキサン、ベンゼン、酢酸エチル、エーテル等の疎水性溶媒、アセトン、エタノール、メタノール、２−プロパノール、ＤＭＳＯ、ジオキサン、ＴＨＦ等の親水性溶媒等が挙げられる。中でも、反応性及び取り扱いの観点から、トルエン、酢酸エチル及びエーテルが好ましい。
【００１８】
前記の混合条件として、例えば、温度が好ましくは２０〜１２０℃、より好ましくは３０〜８０℃で、３０〜６０分程度混合することが好ましい。
【００１９】
前記のようにして得られる混合物中のヒノキチオールの含有量は溶解度及びコストの観点から、１〜１０重量％が好ましく、３〜５重量％がより好ましい。キレート剤の含有量は、ヒノキチオールとキレートを形成させるための必要量の観点から、ヒノキチオールに対して０．５〜２．０倍モルが好ましく、０．８〜１．５倍モルがより好ましい。金属水酸化物の含有量としては、ヒノキチオールが金属塩を形成するための必要量の観点から、ヒノキチオールに対して０．５〜２．０倍モルが好ましくは、０．８〜１．２倍モルがより好ましい。相関移動触媒の含有量は、反応性の観点から、ヒノキチオールに対して０．０１〜２．０倍モルが好ましく、０．０５〜０．２０倍モルがより好ましい。ポリアセチルグリコシルハライドの含有量は、反応性及びコストの観点から、ヒノキチオールに対して１．０〜２．０倍モルが好ましく、１．２〜１．５倍モルがより好ましい。また、ヒノキチオールの金属塩を用いる場合、該ヒノキチオールの金属塩の含有量は溶解度及びコストの観点から、１〜１０重量％が好ましく、３〜５重量％がより好ましい。
【００２０】
前記反応条件として、温度条件は０〜７０℃が好ましく、３０〜６０℃がより好ましい。反応時間は、３〜２０時間程度が好ましい。該反応の終了は、例えば、トルエン層等の溶媒層をＬＣ分析〔条件：カラム：ODS-HG-5 (φ4.6 ×250mm)、移動相：アセトニトリル／10mM KH2PO4 緩衝液＝40／60、オーブン：40℃、UV：210nm 、ポンプ：1.0mL ／min 〕し、その反応収率を確認することにより確認することができる。
【００２１】
前記反応によりヒノキチオールアセチル配糖体が得られる。ヒノキチオールアセチル配糖体としては、原料であるポリアセチルグリコシルハライドの種類により一概に限定はできないが、例えば、式（III)〜（VI）：
【００２２】
【化３】
0004870296.tif 000004
【００２３】
で表される化合物が挙げられる。式（III)で表される化合物は４−イソプロピルトロポロン−２−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルシド(4-isopropyltropolone-2-tetra-O-acetyl- β-D-gulucide)、式（IV）で表される化合物は６−イソプロピルトロポロン−２−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルシド(6-isopropyltropolone-2-tetra-O-acetyl- β-D-gulucide)である。式（Ｖ）で表される化合物は、４−イソプロピルトロポロン−２−ヘプタ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マルトシド（4-isopropyltropolone-2-hepta-O-acetyl-β-D-maltocide) 、式（VI）で表される化合物は、６−イソプロピルトロポロン−２−ヘプタ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マルトシド（6-isopropyltropolone-2-hepta-O-acetyl-β-D-maltocide) である。ここで、式（III)又は（IV) 、若しくは式（Ｖ）又は（VI）のように２種類のヒノキチオールアセチル配糖体が得られるのは、ヒノキチオールが、以下の式（VII)：
【００２４】
【化４】
0004870296.tif 000005
【００２５】
に示す互変異性体であるためである。
【００２６】
なお、前記ヒノキチオールアセチル配糖体の構造は、ＬＣＭＡＳＳにより確認することができる。
【００２７】
また、前記ヒノキチオールアセチル配糖体は、反応後の反応液を遠心分離、濾過等により回収することができるが、後述のヒノキチオール配糖体の製造方法に使用する場合には、前記反応液をそのまま使用してもよい。
【００２８】
次に、本発明のヒノキチオール配糖体の製造方法は、前記のようにして得られるヒノキチオールアセチル配糖体をさらに脱アセチル化する工程により得られる。図１及び２に本方法の概略説明図を示す。図１は、ポリアセチルグリコシルハライドとして、式（Ｉ）で表されるテトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイドを用いる場合を示す。また、図２は、ポリアセチルグリコシルハライドとして、式（II）で表されるヘプタ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マルトシルブロマイドを用いる場合を示す。
【００２９】
なお、該方法において、式（III)又は（IV）で表されるヒノキチオールアセチル配糖体を得る方法は、前記ヒノキチオールアセチル配糖体の製造方法と同様の方法である。
【００３０】
本発明において、ヒノキチオールアセチル配糖体を脱アセチル化する手段としては、公知のものであれば特に限定はないが、例えば、前記ヒノキチオールアセチル配糖体をメタノールに溶解し、炭酸カリウムを触媒に用いて反応させ常法にて精製する方法が好ましい。メタノールの量としては、反応性の観点から、ヒノキチオールアセチル配糖体１００重量部に対して２００〜１０００重量部が好ましく、３００〜５００重量部がより好ましい。また、炭酸カリウムの量としては、反応性の観点から、ヒノキチオールアセチル配糖体に対して０．０１〜１．０倍モルが好ましく、０．０５〜０．５倍モルがより好ましい。反応条件として、反応温度は０〜４０℃が好ましく、５〜２０℃がより好ましい。反応時間は２〜４０時間が好ましく、４〜１０時間がより好ましい。該反応の終了は、反応液をＬＣ分析〔条件：カラム：ODS-HG-5 (φ4.6 ×250mm)、オーブン：40℃、UV：210nm 、ポンプ：1.0mL ／min 、移動相：アセトニトリル／10mM KH2PO4 緩衝液＝40／60〕により確認することができる。
【００３１】
前記反応によりヒノキチオール配糖体が得られる。ヒノキチオール配糖体としては、ポリアセチルグリコシルハライドの種類により一概に限定できないが、例えば、式（VIII) 〜（XI）：
【００３２】
【化５】
0004870296.tif 000006
【００３３】
で表される化合物が挙げられる。式（VIII) で表されるヒノキチオール配糖体は４−イソプロピルトロポロン−２−Ｏ−β−Ｄ−グルシド(4-isopropyltropolone-2-O-β-D-gulucide)、式（IX）で表されるヒノキチオール配糖体は６−イソプロピルトロポロン−２−Ｏ−β−Ｄ−グルシド(6-isopropyltropolone-2-O-β-D-gulucide)である。式（Ｘ）で表されるヒノキチオール配糖体は４−イソプロピルトロポロン−２−Ｏ−β−Ｄ−マルトシド（4-isopropyltropolone-2-O- β-D-maltocide) 、式（XI）で表されるヒノキチオール配糖体は６−イソプロピルトロポロン−２−Ｏ−β−Ｄ−マルトシド（6-isopropyltropolone-2-O- β-D-maltocide) である。
【００３４】
なお、前記ヒノキチオール配糖体の構造は、ＬＣＭＡＳＳにより確認することができる。
【００３５】
また、得られるヒノキチオール配糖体の精製方法としては、常法であればよく特に限定はない。
【００３６】
以上のようにして得られるヒノキチオール配糖体は、高水溶性で、抗菌力を有するという特性を有する。
【００３７】
本発明により、前記ヒノキチオール配糖体を工業的に安価かつ高収率に得ることができるという効果が発現される。
【００３８】
【実施例】
実施例１
１００ｍＬリアクターにヒノキチオール３．５ｇ（２１ｍｍｏｌ）、テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド１０．５ｇ（２６ｍｍｏｌ）、ペンタメチルジエチレントリアミン３．７ｇ（２１ｍｍｏｌ）、ＴＯＭＡＣ１．０ｇ（２ｍｍｏｌ）をトルエン５２．５ｍＬに溶解させた。ここへ水酸化ナトリウム０．８４ｇ（２１ｍｍｏｌ）を純水３５．０ｍＬに溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を添加し４０℃にて５時間反応させ、常法にて処理を行うと白色結晶９．０ｇが得られた（収率８６％）。得られた白色結晶をＬＣＭＡＳＳにて分析を行った結果、ヒノキチオールアセチル配糖体〔式（III)及び(IV)〕であることを確認した（図３）。得られたヒノキチオールアセチル配糖体９．０ｇ（１８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム０．１ｇ（１ｍｍｏｌ）をメタノール７０．０ｍＬにて溶解し、１００ｍＬリアクターにて１０〜２０℃、３時間反応させ常法にて精製を行うと白色結晶４．３ｇが得られた（収率７３％）。得られた白色結晶をＬＣＭＡＳＳにて分析を行った結果、ヒノキチオール配糖体〔式（VIII) 及び(IX)〕であることを確認した（図４）。なお、ＬＣＭＡＳＳの実験データを以下に示す。
〔ＬＣＭＡＳＳ〕
フローインジェクト法による（分析機器：M-1200 AP 形  LC/MS システム（株式会社日立製作所製）、分析条件：ポンプ：1.0mL ／min 、移動相：メタノール100 ％、MASS設定：ポジティブモード) 。
m/z 495  [M+ ] （ヒノキチオールアセチル配糖体）
m/z 327  [M+ ] （ヒノキチオール配糖体）
【００３９】
実施例２
５００ｍＬリアクターにヒノキチオール８．１ｇ（４９ｍｍｏｌ）、ヘプタ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マルトシルブロマイド４１．３ｇ（５９ｍｍｏｌ）、ペンタメチルジエチレントリアミン８．５ｇ（４９ｍｍｏｌ）、ＴＯＭＡＣ２．０ｇ（４ｍｍｏｌ）をトルエン１９５Ｌに溶解させた。ここへ水酸化ナトリウム２．０ｇ（５０ｍｍｏｌ）を精製水８１ｍＬに溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を添加し４０℃にて８時間反応させると定量的に反応は進行し常法にて処理を行うと白色結晶３８ｇが得られた〔式（Ｖ）及び(VI)〕。該反応の終了はＬＣ分析（条件：カラム：Inertsil ODS-2、UV：210nm 、カラムオーブン：25℃、移動相：アセトニトリル／10mM KH2PO4 緩衝液＝50／50、ポンプ：1.0mL ／min ) にて行った。得られた白色結晶３８ｇ（４８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム２．３ｇ（１７ｍｍｏｌ）をメタノール１６６ｍＬにて溶解し、５００ｍＬリアクターにて６〜１２℃、６時間反応させた。該反応の終了はＬＣ分析（条件：カラム：Inertsil ODS-2、UV：210nm 、カラムオーブン：25℃、移動相：アセトニトリル／10mM KH2PO4 緩衝液＝40／60、ポンプ：1.0mL ／min ) にて行った。常法にて精製を行うと白色結晶１６．８ｇが得られた（収率７０％）。得られた白色結晶をＬＣＭＡＳＳにて分析を行った結果、ヒノキチオール配糖体〔式（Ｘ）及び（XI) 〕であることを確認した（図５）。なお、ＬＣＭＡＳＳの分析データを以下に示す。
〔ＬＣＭＡＳＳ〕
フローインジェクト法による（分析機器：M-1200 AP 形  LC/MS システム（株式会社日立製作所製）、分析条件：ポンプ：1.0mL ／min 、移動相：メタノール100 ％、MASS設定：ポジティブモード) 。
m/z 489  [M+ ]
【００４０】
実施例３
ヒノキチオール（２４．３ｍｍｏｌ）、テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド（２．４３ｍｍｏｌ）、ＴＯＭＡＣ（２．４ｍｍｏｌ）、ペンタメチルジエチレントリアミン（２４．３ｍｍｏｌ）をトルエン６０ｍＬに溶解させた。これに水酸化ナトリウム（２４．３ｍｍｏｌ）を４０ｍＬの精製水に溶解させた水酸化ナトリウム溶液を加え、４０〜４５℃で６時間反応させた。反応終了後トルエン層をＬＣで分析した結果〔条件：カラム：ODS-HG-5 (φ4.6 ×250mm)、オーブン：40℃、UV：210nm 、ポンプ：1.0mL ／min 、移動相：アセトニトリル／10mM KH2PO4 緩衝液＝40／60、以下同じ〕、ヒノキチオールアセチル配糖体〔式（III)及び（IV）〕の反応収率は８３．５％であった。
【００４１】
実施例４
ヒノキチオール（２．０ｍｍｏｌ）、テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド（２．４ｍｍｏｌ）、ＴＯＭＡＣ（０．２ｍｍｏｌ）、ペンタメチルジエチレントリアミン（２．０ｍｍｏｌ）をトルエン５ｍＬに溶解させた。これに水酸化カリウム（２．０ｍｍｏｌ）を５ｍＬの精製水に溶解させた水酸化カリウム溶液を加え、４０〜４５℃で６時間反応させた。反応終了後トルエン層をＬＣで分析した結果、ヒノキチオールアセチル配糖体〔式（III)及び（IV）〕の反応収率は８５．３％であった。
【００４２】
実施例５
ヒノキチオールナトリウム塩（１．６７ｍｍｏｌ）、塩化ベンザルコニウム（０．２４ｍｍｏｌ）、ペンタメチルジエチレントリアミン（２．０２ｍｍｏｌ）を精製水５ｍＬに溶解させた。これにテトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド（２．４３ｍｍｏｌ）をトルエン５ｍＬに溶かした溶液に加え、４０〜４５℃で４時間反応させた。反応終了後トルエン層をＬＣで分析した結果、ヒノキチオールアセチル配糖体〔式（III)及び（IV）〕の反応収率は８２．３％であった。
【００４３】
実施例６
ヒノキチオールナトリウム塩（１．６７ｍｍｏｌ）、ＴＯＭＡＣ（０．２４ｍｍｏｌ）、ペンタメチルジエチレントリアミン（２．０２ｍｍｏｌ）を精製水５ｍＬに溶解させた。これにテトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド（２．４３ｍｍｏｌ）をトルエン５ｍＬに溶かした溶液に加え、４０〜４５℃で４時間反応させた。反応終了後トルエン層をＬＣで分析した結果、ヒノキチオールアセチル配糖体〔式（III)及び（IV）〕の反応収率は９１．９％であった。
【００４４】
実施例７
ヒノキチオールナトリウム塩（１．６７ｍｍｏｌ）、ＴＯＭＡＣ（０．２４ｍｍｏｌ）、ジエチレントリアミン５酢酸（２．０２ｍｍｏｌ）を精製水５ｍＬに溶解させた。これにテトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド（２．４３ｍｍｏｌ）をトルエン５ｍＬに溶かした溶液に加え、４０〜４５℃で４時間反応させた。反応終了後トルエン層をＬＣで分析した結果、ヒノキチオールアセチル配糖体〔式（III)及び（IV）〕の反応収率は８４．３％であった。
【００４５】
比較例１
ヒノキチオールナトリウム塩（１．６７ｍｍｏｌ）、ＴＯＭＡＣ（０．２４ｍｍｏｌ）を精製水５ｍＬに溶解させた。これにテトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド（２．４３ｍｍｏｌ）をトルエン５ｍＬに溶かした溶液に加え、４０〜４５℃で４時間反応させた。反応終了後トルエン層をＬＣで分析した結果、ヒノキチオールアセチル配糖体〔式（III)及び（IV）〕の反応収率は４９．８％であった。
【００４６】
比較例２
ヒノキチオールナトリウム塩（１．６７ｍｍｏｌ）、ペンタメチルジエチレントリアミン（２．０２ｍｍｏｌ）を精製水５ｍＬに溶解させた。これにテトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド（２．４３ｍｍｏｌ）をトルエン５ｍＬに溶かした溶液に加え、４０〜４５℃で４時間反応させた。反応終了後トルエン層をＬＣで分析した結果、ヒノキチオールアセチル配糖体〔式（III)及び（IV）〕の反応収率は４６．５％であった。
【００４７】
比較例３
ヒノキチオールナトリウム塩０．３７ｇ（１．６７ｍｍｏｌ）を精製水５ｍＬに溶解させた。これにテトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド１．００ｇ（２．４３ｍｍｏｌ）をトルエン５ｍＬに溶かした溶液を加え、４０〜４５℃で４時間反応させた。反応終了後トルエン層をＬＣで分析した結果、ヒノキチオールアセチル配糖体〔式（III)及び（IV）〕の反応収率は２２．９％であった。
【００４８】
試験例１〔ヒノキチオール配糖体の水への溶解試験〕
ヒノキチオール配糖体〔式（VIIIおよびIX）〕30ｇ及びヒノキチオール30ｇをそれぞれ300 ｍＬ三角フラスコに精秤後、水70ｇを添加した。温度を25℃に保ち30分間攪拌後、水への溶解を目視で確認した。その結果、ヒノキチオール配糖体は全て溶けていった。なお、ヒノキチオールはとけ残りがあり不溶性であった。このことから、ヒノキチオール配糖体は、ヒノキチオールに比べて、水溶性に優れたものであることがわかる。
【００４９】
試験例２〔ヒノキチオール配糖体の抗菌力試験〕
日本化学療法学会のＭＩＣ測定法に準じ、ヒノキチオール配糖体〔式（VIII) 及び（IX）〕を混釈した寒天平板培地上での試験菌の発育の有無を観察した。なお寒天平板培地は以下のようにして作製した。試料（ヒノキチオール配糖体）をエチルアルコールを倍数希釈し、得られた希釈試料を５０℃に保温した寒天培地に培地の１／１００量加え、試料の最終濃度が６〜１６００ｐｐｍになるようにした。試験にはポテト・デキストロース寒天培地（ｐＨ６）を用い、培養は２４℃で１０日間行った。この結果を表１に示す。なお、使用した試験菌株を以下に示す。
【００５０】
試験菌株
Pythium aphanidermatum IFO 32440 （綿腐病）
Thanatephorus cucumeris IFO 30445（苗立枯病等）
Fusarium solani IFO 9955 （苗立枯病等）
Botryotinia fuckeliana IFO 30915 （灰色カビ病）
Phomopsis obscurans MAFFF 744018 （いちご炭疽病）
Colletotrichum orbiculare MAFF 306518（メロン炭疽病）
Colletotrichum lagenarium（スイカ炭疽病）
【００５１】
【表１】
0004870296.tif 000007
【００５２】
表１の結果より、ヒノキチオール配糖体は、前記のような低濃度でも各種の試験菌の発育を抑えていたことから、十分な抗菌力を有するものであることがわかる。
【００５３】
【発明の効果】
本発明の製造方法により、水溶性の高いヒノキチオール配糖体を工業的に安価かつ高収率に得ることができるという効果が奏される。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ポリアセチルグリコシルハライドとして、テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイドを用いる場合のヒノキチオール配糖体の製造方法の概略説明図である。
【図２】図２は、ポリアセチルグリコシルハライドとして、ヘプタ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マルトシルブロマイドを用いる場合のヒノキチオール配糖体の製造方法の概略説明図である。
【図３】図３は、式（III)及び(IV)で評されるヒノキチオールアセチル配糖体のＬＣＭＡＳＳ分析の結果を示す。図中「４９５」のピークがヒノキチオールアセチル配糖体に相当する。
【図４】図４は、式(VIII)及び(IX)で表されるヒノキチオール配糖体のＬＣＭＡＳＳ分析の結果を示す。図中「３２７」のピークがヒノキチオール配糖体に相当する。
【図５】図５は、式（Ｘ）及び(XI)で表されるヒノキチオール配糖体のＬＣＭＡＳＳ分析の結果を示す。図中「４８９」のピークがヒノキチオール配糖体に相当する。
【図１】
0004870296.tif 000008
【図２】
0004870296.tif 000009
【図３】
0004870296.tif 000010
【図４】
0004870296.tif 000011
【図５】
0004870296.tif 000012