(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
脱塩したもずくの熱水抽出物を含有してなり、酢のない条件において３７℃で抗菌性を示すこと、を特徴とする病原性大腸菌Ｏ−１５７に対する抗菌医薬剤。
【請求項２】
もずくの熱水抽出物が、もずくと水の混合物を加熱した後、これを濾過し、得られた濾液を電気透析して脱塩した液体であること、を特徴とする請求項１に記載の抗菌医薬剤。
【請求項３】
もずくが、糸もずく、太もずく、沖縄もずくの少なくともひとつであること、を特徴とする請求項１〜２のいずれか１項に記載の抗菌医薬剤。
【請求項４】
該熱水抽出物が、濃縮物、ペースト化物、乾燥物、乳化物、希釈物の少なくともひとつであること、を特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗菌医薬剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗菌組成物に関するものであり、更に詳細には、病原性大腸菌に対する天然系抗菌組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
大腸菌（Escherichia coli）の中で、病原性大腸菌Ｏ−１５７（以下Ｏ−１５７と略す）は、腸管出血性大腸菌（ベロ毒素産生性大腸菌）に属し、Ｏ−１５７感染はＯ−１５７に汚染された飲食物を摂取するか、患者の糞便を何らかの理由で直接口にすることで起こる。Ｏ−１５７に感染した場合、無症状から死亡するケースまで様々であるが、多くの場合、Ｏ−１５７の産生するベロ毒素により、出血性大腸炎を起こす。中には溶血性尿毒症（ＨＵＳ）や脳症などの重症合併症になる患者もおり、最悪の場合死亡する。Ｏ−１５７は細胞表面の血清型により、多くの種類に分類されているが、食中毒件数が多く、毒性の強いものはＯ−１５７：Ｈ７である。１９８２年（昭和５７年）にアメリカのオレゴン州で発生した集団食中毒の際に初めて報告されて以来、現在までにアメリカおよびカナダで２０件以上の集団発生を起こしている。
【０００３】
わが国においても、１９９６年には各所においてＯ−１５７による集団食中毒の大発生がみられ、死亡例も認められるという大きな被害をこうむっている。
【０００４】
原因食材の追及も行われているが、Ｏ−１５７は、潜伏期間が長いだけでなく、ごく少数の菌でも感染、発病するためにその特定には至っておらず、Ｏ−１５７に対する抗菌システムの開発が緊急テーマとして当業界において強く要望されている。
【０００５】
このような中、Ｏ−１５７等を保有するハエ類が確認されたことからハエ類によるＯ−１５７の感染・伝播の可能性も考えられた。これらのことからさらにＯ−１５７による食中毒の予防や治療に対し関心が高まり、食品などにも使用できるＯ−１５７に対して有効かつ安全な抗菌性物質の開発が望まれている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記した業界の要望に応えるためになされたものであって、毒性が非常に強いＯ−１５７：Ｈ７にも有効で強力な抗菌力を有し、食品にも使用できる抗菌組成物を開発する目的でなされたものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記した目的、すなわちＯ−１５７その他の病原性大腸菌及び非病原性大腸菌を含む各種大腸菌に対して有効な抗菌組成物を開発する目的でなされたものである。
【０００８】
本発明者らは、そのために各方面から検討の結果、Ｏ−１５７の感染者は児童等比較的若年層に多いところから、抗菌性のみでなく安全性も重要である点に着目し、食用としても使用しうる物質について広くスクリーニングを行い、もずくに着目してその熱水抽出物を調製し、Ｏ−１５７に対する抗菌性を検討したところ、Ｏ−１５７に対してすぐれた抗菌性を有するというきわめて有用な新知見を得た。
【０００９】
更にまた、このもずくの熱水抽出物は、液状を呈しているうえ、必要あればペースト、乾燥粉末等の処理物にすることも可能であって、各種剤型の医薬品や飲食品にも使用できることも併せて確認し、これらの新知見に基づき、更に研究の結果、本発明の完成に至ったものである。
以下、本発明について詳述する。
【００１０】
本発明においては、もずくを使用するが、本発明に用いられるもずくとしては、糸もずく（細もずく）（モズク科モズク：Nemacystus decipieus）、沖縄もずく（ナガマツモ科オキナワモズク：Cladosiphon okamuranus）、太もずく（Tinocladia crassa）等が例示されるが、以下、糸もずくを代表例にとり、これを単にもずくと称して、本発明を詳述する。
【００１１】
もずくから本発明の抽出物を抽出するには、６０℃以上、好ましくは８０℃以上の熱水を用いて、３０分〜３時間もずく（切断、ペースト化、乾燥、冷凍したものでもよい）を抽出した後（例えば、オートクレーブで１００℃、４５分〜１時間３０分程度処理した後）、得られた抽出液を電気透析により脱塩する。本発明の熱水抽出物には、上記のようにもずくを単に熱水で抽出して得た抽出液、その濾液、これ（ら）を更に脱塩してなる抽出液が包含される。
【００１２】
また、本発明においては、もずくの熱水抽出物の処理物も使用可能である。該処理物としては、濃縮物、ペースト化物、乾燥物（噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物等）、乳化物、液状物、希釈物等が挙げられる。
【００１３】
本発明に係る抗菌組成物は、もずくの熱水抽出物及び／又はその処理物を有効成分として含有するものであって、後記するところからも明らかなように、Ｏ−１５７等の病原性大腸菌その他各種の大腸菌に対してすぐれた抗菌性を示すだけでなく、各種の剤型、形態に製剤、加工することが可能であって、飲食品タイプ及び医薬品タイプのいずれのタイプの組成物としても自由に使用できるものである。
【００１４】
有効成分の配合量は、任意でよいが、使用目的（予防、保健、又は治療）、患者の年齢、投与方法、剤形等に応じて適宜定めればよく、通常、もずくの熱水抽出物に換算して、１mg〜５ｇ(乾物)／日を経口投与するようにするのが適当である。しかしながら、長期間に亘って保健上ないし健康維持の目的で摂取する場合には、上記範囲よりも少量であってもよいし、また本有効成分は、安全性について問題がないので、上記範囲よりも多量に使用しても一向にさしつかえない。現にマウスを用いた１０日間の急性毒性試験の結果、１００ｍｇ／ｋｇの経口投与でも死亡例は認められなかった。
【００１５】
飲食品タイプの組成物として使用する場合には、本有効成分をそのまま、使用したり、他の食品ないし食品成分と併用したりして適宜常法にしたがって使用できる。本有効成分を用いる本発明に係る組成物は、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよいが、甘味料、酸味料、ビタミン剤その他ドリンク剤製造に常用される各種成分を用いて、健康ドリンクに製剤化すると好適である。
【００１６】
すなわち、本発明に係る飲食品としての抗菌組成物には、そのまま直ちに喫食できるもの、調理等を行って喫食するもの、食品製造用のプレミックスされた材料などのいずれもが含まれる。固体状のものとしては、粉末状、顆粒状、固形状のいずれのものでもよく、例えばビスケット、クッキー、ケーキ、スナック、せんべいなどの各種菓子類、パン、粉末飲料（粉末コーヒー、ココアなど）が含まれる。また液状、乳化状、ペースト状物の例としては、ジュース、炭酸飲料、乳酸菌飲料などの各種飲料が含まれる。これらのうち、本発明においては、上記したように、特に飲料が好ましい。
【００１７】
医薬品タイプの組成物として使用する場合、本有効成分は、種々の形態で投与される。その投与形態としては例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与をあげることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。
【００１８】
本発明に係る抗菌組成物は、後記する実施例からも明らかなように、Ｏ−１５７及びその他の大腸菌に対する抗菌活性が非常に高く、しかもその効果は長期間に亘って持続するので、医薬品として使用できるほか、食品自体又は他の食品と併用することによって、他の食品に由来するＯ−１５７及びその他の大腸菌に対しても抗菌作用を示し、すぐれた抗菌効果が奏され、病原性大腸菌及びその他の大腸菌に対して広く抗菌作用を示す。
そのうえ、本発明に係る抗菌組成物は、それ自体が食品であるため、安全性についても全く問題はなく、安全にしてきわめて有効な天然系抗菌組成物である。
以下、本発明の実施例について述べる。
【００１９】
【実施例１】
（１）もずく熱水抽出物の製造方法
表面に付着した異物を除去した湿潤状態のもずく（モズク科モズク；Nemacystus decipieus）１００ｇを蒸留水１００ｍｌとよく攪拌した。これをオートクレーブを使用し、１００℃で１時間加熱した。その後ろ過により残さを除き、この抽出液を電気透析により脱塩を行った。得られた熱水抽出液をそのまま使用することも可能だが、必要に応じて凍結乾燥法により粉末にした。得られた熱水抽出液を容器側面に広がるよう凍結させ、室温（約２０℃）で減圧し一日間水分を除去し、もずく熱水抽出物を１．５ｇ得た。つまり、この方法で、もずく１００ｇ当たり約１．５ｇのもずく熱水抽出物（茶色粉末）を得ることができた。
【００２０】
（２）もずく熱水抽出物のＯ−１５７に対する抗菌性試験
本試験を行うに当り、Ｏ−１５７は指定伝染病であるため、各種の実験を行うには特定の設備が必要であり、そこで島根大学生物資源科学部（松田研究室）との共同研究により、島根大学遺伝子実験施設のＰ３レベル実験室を使用した。
【００２１】
もずく熱水抽出物のＯ−１５７に対する抗菌性を確認するため、以下の試験を行って、もずく熱水抽出物水溶液ともずくとの菌体数の変化を比較した。なお、もずく熱水抽出物水溶液は、上記によって得たもずく熱水抽出物をそれぞれの濃度となるよう加水して調製した水溶液である。
【００２２】
まず、もずくともずく熱水抽出物水溶液を培地として使用し、もずく熱水抽出物水溶液の濃度は実験▲１▼、▲２▼でそれぞれ調製し、もずくは、もずくと蒸留水を２：１の割合で混合した。各培地のｐＨを測定したところ、もずくがｐＨ６．５、もずく熱水抽出物水溶液（１．５％）がｐＨ６．６、もずく熱水抽出物水溶液（３．０％）がｐＨ６．７であった。その後、Ｏ−１５７を実験的に大量に混入させ（約１．０×１０6個／ｇになるよう混入）、３７℃で保存した。ＬＢ培地（Luria-Bertani's Broth、大腸菌の培養に使用する培地、１リットルの組成：ポリペプトン  １０ｇ、イーストエクストラクト５ｇ、ＮａＣｌ  １０ｇ；ｐＨ７．０）で一晩培養したＯ−１５７を各培地９９ｇに対し１ｍｌ加え、各試料培地とした。本実験で用いたＯ−１５７は島根県衛生公害研究所よりＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｏ−１５７；Ｈ７を頂いた。菌体数の測定は植菌後０、３、６、８、１０、１２、１４、１６、２４時間後に、実験▲１▼では２２時間後にも食品衛生検査で一般的に行われている方法（食品衛生検査指針  微生物編（１９９０）厚生省生活衛生局監修（社）日本食品衛生協会）に準ずる方法（平板培養法）で行った。
【００２３】
時間ごとに各試料培地から１ｍｌ抜き取り、滅菌した生理食塩水９ｍｌに加え、希釈した。希釈した液より１ｍｌ取り、さらに生理食塩水９ｍｌに加えて希釈する方法で適当な倍率（寒天培地で培養したとき、コロニーが３０〜３００個出る倍率）まで希釈し、ＬＢ寒天培地（組成は液体のＬＢ培地と同じで、Ａｇａｒを１５ｇ添加）で培養後、コロニー数を計測した。
【００２４】
実験▲１▼（図１）では、もずく１００ｇ当たり約１．５ｇのもずく熱水抽出物を得たことから、もずく熱水抽出物水溶液の濃度を１．５％、実験▲２▼（図２）では実験▲１▼の２倍の濃度の３．０％に調製し実験を行った。得られた結果を図１及び下記表１、そして図２及び下記表２にそれぞれ示す。なお、各培地のｐＨは次のとおりである。もずく：ｐＨ６．５、もずく熱水抽出物水溶液（１．５％）：ｐＨ６．６、同（３．０％）：ｐＨ６．７。
【００２５】
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【００２６】
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【００２７】
上記結果から明らかなように、実験▲１▼（図１）（表１）では、もずくでは植菌後、時間の経過ごとに菌が増殖し、２４時間後には７．２×１０7個／ｇまで増殖した。もずく熱水抽出物水溶液（１．５％）では徐々に菌が減少し２４時間後に菌が死滅した。実験▲２▼（図２）（表２）でも、もずくでは植菌後、時間の経過ごとに菌が増殖し、２４時間後には６．７×１０7個／ｇまで増殖した。そしてもずく熱水抽出物水溶液（３．０％）では菌が減少していき１４時間後には菌が死滅した。
【００２８】
以上の結果より、もずくのみではＯ−１５７に対する抗菌性が見られなかったが、もずく熱水抽出物で処理することによりＯ−１５７に対する抗菌性が現れることが分かった。また、もずく熱水抽出物の濃度が上がるにしたがって抗菌性が高まることが分かった。
これらのことより、もずく中に含まれる多糖類などの成分が加熱されることにより物理的な変化もしくは化学的な変化などの何らかの変化をしたものがＯ−１５７に対して抗菌性を示すようになったと考えられる。
【００２９】
【実施例２】
上記によって得たもずくの熱水抽出物が大腸菌に対して抗菌性を示すことを以下により確認した。
【００３０】
実験方法としてはＭ９最少培地、調味液、味付糸もずく、糸もずく熱水抽出物水溶液の４種類の培地に前培養をした大腸菌Ｗ３１１０を各培地１００ｍｌに対し１ｍｌ加え、３７℃で培養した。その後、各時間ごとに平板培養法で１ｍｌ（１ｇ）当たりの菌数を測定した。
調味液は味付糸もずくと同濃度になるよう希釈し、糸もずく熱水抽出物水溶液は糸もずくと同濃度（１．５％）になるよう蒸留水で希釈し、培地として使用した。
【００３１】
なお、Ｍ９最少培地は、その１Ｌの組成が、Ｎａ2ＨＰＯ4  ６ｇ、ＫＨ2ＰＯ4３ｇ、ＮａＣｌ  ０．５ｇ、ＮＨ4Ｃｌ  １ｇ、０．４％  グルコース、０．１ｍＭ  ＣａＣｌ2、２ｍＭ  ＭｇＳＯ4、１ｍＭ  チアミン、ｐＨ７．４である培地である。また、味付糸もずくは、醸造酢、醤油、砂糖、カツオエキス、みりん、昆布エキス、水からなる調味液を用いて調製したもずく製品（株式会社海産物のきむらや製品）である。
【００３２】
得られた結果を図３に示す。その結果から明らかなように、これまでの調味液、味付糸もずくの抗菌性は酢に依存していたが、糸もずく熱水抽出物は、酢のない条件で抗菌性を示した。また、糸もずくのみでは抗菌性を示さなかったが、糸もずく熱水抽出物は抗菌性を示した。
【００３３】
【実施例３】
もずく熱水抽出物（実施例１：乾燥粉末）７０重量部、ラクトース２０重量部、コーンスターチ１０重量部を混合し、得られた混合物をヒドロキシプロピルメチルセルロースの５％水溶液で流動層造粒し、細粒剤を得た。
【００３４】
（参考例１）もずく熱水抽出物（実施例１）１００ｇ、糖類１５０ｇ、蜂蜜１５ｇ、アスコルビン酸１ｇ、クエン酸０．５ｇ、香料適量に水を加えて１ｋｇとし、これを９５℃で２０分間殺菌し、１００ｍｌずつ無菌的にビンに充填して、飲食品タイプの健康ドリンクを製造した。
【００３５】
（参考例２）もずく熱水抽出物（フリーズドライ粉末）の２０％水溶液２００ｇ、酢酸トコフェロール５ｇ、硝酸チアミン１０ｇ、ニコチン酸アミド２０ｇ、無水カフェイン５０ｇ、安息香酸塩及び香料適量に脱イオン水を加えて３０Ｌとし、殺菌した後３０ｍｌずつ無菌的にビンに充填して、医薬品としての健康ドリンクを製造した。
【００３６】
（参考例３）ショートニング８部と砂糖１８部を混合し、次に薄力小麦粉４２部、もずく熱水抽出物（実施例１）７．５部、ベーキングパウダー０．８部、卵１６部、ブドウ糖１部及び水２５部を加えて攪拌し生地を作った。この生地を５ｍｍ厚に圧延して１枚が１６〜１７ｇになるよう型抜きして９０℃のオーブンで３２〜３６分焼成する。その結果、１枚約１２ｇのビスケットを得た。１２ｇのビスケット中に１ｇのモズク熱水抽出物を含有する計算となる。
【００３７】
【発明の効果】
本発明によって、もずくの熱水抽出物によるＯ−１５７、Ｗ３１１０等の、各種病原性大腸菌及び非病原性大腸菌を包含する各種大腸菌に対する抗菌効果が確認され、本組成物は、これら各種大腸菌に対して、飲食品や医薬品の形で、保健、予防及び／又は治療に使用することができる。
【００３８】
また、本発明において有効成分として使用するもずく熱水抽出物はＯ−１５７その他の大腸菌に対する抗菌性を有した食品や飼料への利用が可能であり、具体的にはジュース、清涼飲料水などの各種飲料、クッキーやケーキなどの菓子類など機能性食品への利用が可能である。この水溶液には粘性があるため増粘、安定、保存などの効果を有する食品への利用なども期待できる。またＯ−１５７その他の大腸菌に対する抗菌性を有した牛などの家畜の飼料として用いることも可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】大腸菌Ｏ−１５７に対するもずく熱水抽出物等の増殖抑制効果（３７℃）（その１）を示す。
【図２】図（その２）を示す。
【図３】大腸菌Ｗ３１１０に対するもずく熱水抽出物水溶液等の増殖抑制効果（３７℃）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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