(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
主剤としてのセフェム系抗生物質と、炭素原子数８〜１２を持つ中鎖脂肪酸モノグリセライドと、油性基材とを含有することからなる乳房炎用注入剤。
【請求項２】
前記中鎖脂肪酸モノグリセライドの配合量が全体の０．５重量％以上である請求項１記載の乳房炎用注入剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、基剤から主剤の溶出性を高めることにより、主剤の薬理作用を高められるようにした乳房炎用注入剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、乳牛および山羊などの乳汁を得るために飼育される家畜においては屡々乳房炎を発症する。乳房炎は、家畜の乳房がブドウ球菌（たとえば、スタフィロコッカス オウレウス（Staphylococcus aureus））、大腸菌（エシェリキア コーリ（Escherichia coli））、その他の炎症を引き起こす病原菌に感染する疾患、あるいはこのような細菌が関与する疾患である。乳房炎は発生率が高く、その結果、乳量の減少、乳質の低下、乳動物群から罹病動物を取り除く間引き回数の増加が生じ、よって乳汁を産製する業者にとって乳房炎は死活問題につながる重大な疾患である。【０００３】
このため、乳汁を産製する業者は、乳房炎を発症しないよう予防するために、乳頭の拭き取り、乳頭の洗浄、乳頭を消毒液に浸漬する等の種々の方法により乳頭を衛生的に維持することを実施している。しかし、このように乳頭を衛生的に維持する方法を実施しても乳房炎の発症を防止することは困難である。【０００４】
このため、乳房炎が発症した際には、従来より、乳房炎に罹った家畜の乳房内へ乳房炎用注入剤を注入する治療法が多く用いられている。乳房炎用注入剤の多くは、抗生物質からなる主剤を、なたね油等の油性基剤に混濁させたものであり、この乳房炎用注入剤を直接乳房に注入することによって、多くの乳房炎は治癒、ないしは症状が軽減される。【０００５】
乳房炎用注入剤の主剤には、古くはペニシリン系抗生物質が用いられ、その後合成ペニシリン系抗生物質が用いられ、更にその後セフェム系抗生物質へと移り変わり、現在ではセフェム系抗生物質が最も多用されている。【０００６】
又、油性基剤には、コーン油、なたね油、ピーナッツ油、オリーブ油、綿実油等が用いられている。【０００７】
一方、注入容器としては、古くはアルミチューブ＋キャップ針が用いられ、その後アルミチューブ＋ワンタッチキャップが用いられ、近年ではシリンジが多用されるようになってきている。【０００８】
尚、乳房炎を治療するための乳房炎用注入剤を開示する先行技術情報としては、例えば特許文献１、特許文献２がある。
【特許文献１】特開２００１−２０６８４９号公報
【特許文献２】特表２００１−５１１４５１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従来から用いられている乳房炎用注入剤の多くは、前記した如く、主剤を単に油性基剤に混濁させたものが一般的であり、基剤については殆ど工夫がなされていないのが現状である。【００１０】
従って、前記した従来の乳房炎用注入剤においては、油性基剤からの主剤の溶出性（放出性）が低く、よって主剤の吸収性も低く、そのために主剤による十分な薬理作用を期待することができず、更に、溶出性、吸収性が低いために、主剤の実質的な使用量が増加し、動物体内の残留期間が長くなるという問題を有していた。【００１１】
本発明は、上記実情に鑑みてなしたもので、基剤の拡散・分散性を向上させて主剤の溶出性を高めることにより、主剤の薬理作用が高められるようにした乳房炎用注入剤を提供することを目的としてなしたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本願発明は、主剤としてのセフェム系抗生物質と、炭素原子数８〜１２を持つ中鎖脂肪酸モノグリセライドと、油性基材とを含有することからなる乳房炎用注入剤に係るものである。
【００１３】
上記手段において、前記中鎖脂肪酸モノグリセライドの配合量が全体の０．５重量％以上であることが好ましい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の乳房炎用注入剤によれば、主剤と、中鎖脂肪酸モノグリセライドと、油性基剤を含有しているので、中鎖脂肪酸モノグリセライドによって主剤の拡散・分散性が向上され、これにより主剤の溶出性が高められて吸収性が高められ、よって従来の乳房炎用注入剤に比して即効性を有し残留期間が短く、更に、主剤の無駄のない有効な活用が期待できることから主剤の使用量を低減できるという優れた効果を奏し得る。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】溶出試験法第２法（パドル法）によるＭＣＭの配合濃度を０〜１０重量％まで段階的に変化させたときのＣＥＺの溶出率を示す線図である。
【図２】乳房炎用注入剤の牛におけるＣＥＺの血中濃度推移を示す線図である。
【図３】乳房炎用注入剤の牛におけるＣＥＺの乳汁中濃度推移を示す線図である。
【図４】溶出試験法第２法（パドル法）によるＣＥＺの溶出量を示す線図である。
【図５】溶出試験法第２法（パドル法）によるＣＥＺの溶出率を示す線図である。
【図６】ＣＥＺ配合割合を変化し牛投与したときのＣＥＺの乳汁中濃度推移を示す線図である。
【図７】ＣＥＺの乳汁中濃度推移を示す線図である。
【図８】ＣＥＺ血中濃度推移を示す線図である。
【図９】投与毎のＣｍａｘ推移を示す線図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、油性基剤に中鎖脂肪酸モノグリセライドを配合したものに主剤を分散、または溶解し、必要に応じて添加剤を添加した乳房炎用注入剤に係るものであり、乳房炎用注入剤の主剤には、抗生物質、抗真菌剤、抗菌ペプチド、合成抗菌剤などの抗菌剤、及び非ステロイド性抗炎症剤、免疫賦活剤などが含まれる。抗生物質には、従来から用いられている、アミノグリコシド系、セフェム系、テトラサイクリン系、ペニシリン系、マクロライド系、その他の抗生物質、それらの複合製剤等を用いることができる。前記セフェム系の抗生物質としては、従来から用いられている、セファロニウム、セファピリンベンザチン、セファピリンナトリウム、セファゾリン、セフロキシムナトリウム等を用いることができる。また、非ステロイド性抗炎症剤（Non-steroidal anti-inflamatory drugs:NSAIDs）としては、グリチルリチン、アスピリン、サリチル酸ナトリウム、ピロキシカム、ケトプロフェン、フルニキシン等を用いることができる。なお、本発明に用いられる主剤は上記のものに限定されることなく、種々のものを用いることができる。【００１７】
前記油性基剤は、主剤を効果的に分散させ、かつ乳房炎用注入剤としての良好な流動性を持たせるためのものであり、油性基剤には、従来から用いられている、コーン油、なたね油、ピーナッツ油、オリーブ油、綿実油等を用い得る。【００１８】
又、前記添加剤としては、着色剤、分散剤等を用いることができる。【００１９】
前記中鎖脂肪酸モノグリセライド（以下ＭＣＭと略記する）は、グリセリン脂肪酸エステルの１種であり、ＭＣＭを油性基剤に配合することによって、主剤の溶出性（放出性）を高めることができる拡散剤としての作用が期待できる。即ち、前記ＭＣＭには、界面拡散剤、難吸収性薬物の吸収促進作用、抗菌活性等の作用が知られており、従って、ＭＣＭは従来より経皮吸収製剤、坐剤の基剤等として用いられている。しかし、本発明の如く前記ＭＣＭを配合してなる乳房炎用注入剤については製造或いは発表された例はない。【００２０】
前記ＭＣＭとしてはＣ8〜Ｃ12のものが存在しており、本発明ではＣ8〜Ｃ12のいずれのＭＣＭも用いることができる。市販品としては炭素数８のカプリル酸モノエステルであるサンソフト７０７（太陽化学株式会社製）や炭素数１２のラウリン酸モノエステルであるサンソフト７５７（太陽化学株式会社製）等が挙げられるが、これに限定されることなく、その他の各種モノグリセライドを用いることができる。ＭＣＭは、それ自体の乳化力は弱いものの、油相に少量配合することによって油相の表面張力を低下させる作用があり、且つＭＣＭを配合した油相は表面張力の低下により界面で拡散し易くなるという性質を有する。【００２１】
従って、本発明者らは、ＭＣＭを油性基剤に配合することによって、油性基剤の拡散性及び主剤の放出性が高められるのではないかと考え、各種試験を実施し、検証を行なった。【００２２】
その結果、驚くべきことに当初期待していた主剤の放出性の向上と併せて、主剤の吸収促進効果が向上するだけでなく、これによって、即効性のある、動物体内の残留時間の少ない、更に少量の主剤の使用で良好な薬理作用が得られる乳房炎用注入剤を提供できることが判明し、本発明を完成するに至った。【００２３】
以下に実施例を示して本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【００２４】
［実施例１］
ＭＣＭとして炭素数８のカプリル酸モノエステルであるサンソフト７０７（太陽化学株式会社製）、を用いて表１の組成を有する注入剤１（３ｇ）を製造した。【００２５】
［表１］
注入剤１
主剤        セファゾリン（ＣＥＺ）    １５０ｍｇ（力価）
Ｍ  Ｃ  Ｍ                              ７５ｍｇ（２．５重量％）
添加剤      食用青色１号                ２５ｍｇ
油性基剤    なたね油                    残量
合計                                    ３ｇ
上記注入剤１を出願人会社で通常使用している乳房炎軟膏用のプラスチックシリンジに充填し、乳房炎用注入剤を試作した。試作した上記注入剤１は乳房炎用注入剤として用いるのに適した物性を示した。【００２６】
１．ＭＣＭ配合割合の変化による溶出性試験
注入剤１について、日本薬局方一般試験法の溶出試験法第２法（パドル法）に基づき、試験液としてリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）（リン酸２水素カリウム（和光純薬株式会社製）４．８６ｇ、リン酸水素２ナトリウム・１２水（和光純薬株式会社製）５．１２ｇを１Ｌの蒸留水に混合しｐHを調整したもの）を用い回転数２５r.p.m.で試験を行い、経時的に試験液をサンプリングして試験液に溶出したＣＥＺの濃度、即ちＣＥＺの溶出率を動物用抗生物質医薬品基準、力価試験法の液体クロマトグラフ（以下、ＨＰＬＣ法という）に順じた測定を行った。この時、ＭＣＭの配合濃度を０〜１０重量％まで段階的に変化させて試験を行なった。その結果を図１に示す。【００２７】
図１では、最も高い溶出率を示したのはＭＣＭ２．５重量％配合の処方であった。この試験では、ＭＣＭの配合濃度が高い方が主剤の拡散能力が高いので、１０重量％配合が最も良好な溶出を示すものと予測していたのであるが、この予測に反して２．５重量％配合が最も良好な溶出性を示した。これはＭＣＭの特性の１つである難溶性薬物の溶解補助剤、可溶化剤としての性質がＣＥＺの溶出に影響を与えたことによるものと考えられる。【００２８】
２．ＭＣＭ配合の牛への投与によるＣＥＺの血中・乳汁中濃度推移試験
注入剤１について、血中・乳汁中濃度推移の試験を以下の方法によって行った。なお、試薬は特にことわりのない場合、和光純薬工業株式会社製のものを用いた。【００２９】
・血中濃度推移測定方法（ＨＰＬＣ法）
血中濃度の推移を調べるため、血清分析を行った。あらかじめ以下の溶液を調製した。【００３０】
１）試料溶液の調製
血清２ｍｌを正確に量り、リン酸二水素カリウム（ナカライテスク株式会社製）８７．１ｇ、クエン酸一水和物（ナカライテスク株式会社製）３９．９ｇを蒸留水で溶かし、全量１０００ｍｌとし、１ＮＫＯＨでｐＨ５．３±０．１に調製したｐＨ５．３リン酸緩衝液を２０ｍｌ加え、混和した後、予めメタノール５ｍｌ及び水１０ｍｌで処理した固相抽出カラム  Sep-pak plus C18 cartridge (Waters社製)に導入した。導入後、水２０ｍｌでカラムを洗浄した後、アセトニトリル５ｍｌでＣＥＺを溶出し、４０℃以下で溶媒を減圧留去した。残渣にリン酸二水素カリウム７．０ｇ、リン酸水素二ナトリウム１２水和物６．０ｇを蒸留水で溶かし、全量１０００ｍｌとし、リン酸でｐＨ６．０±０．１に調整したｐＨ６．０リン酸緩衝液１ｍｌを正確に加え、超音波処理（１ｍｉｎ）により再溶解した後、エキクロディスク１３ＣＲ（０．４５μｍメンブランフィルター）（日本ポール株式会社製）でろ過し試料溶液とした。【００３１】
２） 標準溶液の調製
常用標準セファゾリン２５ｍｇ（力価）に対応する量を精密に量り、リン酸二水素カリウム３．４ｇ、リン酸水素二ナトリウム（無水）１０．６５ｇを蒸留水で溶かし、全量１０００ｍｌとし、リン酸でｐＨ６．０±０．１に調整したｐＨ７．０リン酸緩衝液で溶解して５００μｇ（力価）／ｍｌの濃度の明らかな標準原液を調製した。標準原液適当量を正確に量り、ｐＨ６．０リン酸緩衝液で段階的に希釈して、５．０、１．０、０．５、０．２５、及び０．１０μｇ（力価）／ｍｌの標準溶液を調製した。【００３２】
調製した試料溶液及び標準溶液２００μｌにつき、以下の条件で液体クロマトグラフ法により試験を行い、ＣＥＺのピーク面積を求めた。標準溶液のクロマトグラムのピーク面積から作成した検量線の回帰式より、試料溶液中のＣＥＺの濃度を算出した。
[ＨＰＬＣ条件（イオンペアグラジエント）]
検出波長：ＵＶ２７０ｎｍ
カラム：Inertsil ＰＨ ５μｍ４．６ ×２５０ｎｍ（ＧＬサイエンス株式会社製）
カラム温度：２５℃
流速：１ｍｌ／１ｍｉｎ
移動相：Ａ液（ｐＨ３．０、リン酸）
ＴＢＡ液：アセトニトリル＝９：１
Ｂ液（ｐＨ３．０、リン酸）
ＴＢＡ液：アセトニトリル：メタノール＝５５：３０：１５
ＴＢＡ液は硫酸テトラブチルアンモニウム（ナカライテスク株式会社製）０．３４ｇ、リン酸水素二ナトリウム１２水和物１７．９ｇを蒸留水で溶かし、全量１０００ｍｌとした。【００３３】
経過時間とＢ液濃度の変化は表２の如くであった。【００３４】
［表２］
タイムプログラム（分析時間４５分）
経過時間（分）   Ｂ液濃度（％）
１２               ８
２５             ２０
３０             ２０
３５               ８
４４               ８【００３５】
・乳汁中濃度推移測定（バイオアッセイ法）
注入剤１において、乳汁中濃度推移を調べるため、乳汁分析を行った。あらかじめ以下の溶液を調製した。【００３６】
１）培地及び緩衝液
継代保存用培地：ミル・ピー斜面用寒天培地（ミル・ピーＮｏ.１培地）（極東製薬工業株式会社製、以下の培地も同様）
増殖用培地：ミル・ピー菌株用ブイヨン培地（ミル・ピーＮｏ.２培地）
試験用培地：ミル・ピーディスク用寒天培地（ミル・ピーＮｏ.３培地）
リン酸緩衝液（ｐＨ６．０）：リン酸二水素カリウム３．５ｇ、リン酸水素二ナトリウム１２水３．０ｇを蒸留水約７５０ｍｌで溶かし、リン酸でｐＨ６．０±０．１に調整した後、さらに蒸留水を加えて１０００ｍｌとした。【００３７】
２）試験菌
試験菌：Bacillus stearothermophilus var. calidolactis  C-953
試験菌液の調製：継代保存用培地に継代を繰り返した試験菌を、使用にあたって増殖用培地に増殖し、５５±１℃で１７±１時間培養したものを菌液とした。【００３８】
３） 試験用平板の調製
約５５℃に保温した試験用培地と試験菌液を５：１の割合で混合し、これを内径９０ｍｍの滅菌済プラスチック製シャーレに１０ｍｌずつ分注し、水平板上で冷却・固化させた。次いで穿孔器（東洋測定器株式会社製）を用い、平板の中心点より半径約２５ｍｍの円周に内接するほぼ正方形の各頂点の位置に直径８ｍｍの孔を４個ずつ穿孔して試験用平板とした。【００３９】
４） 試験溶液の調製
測定の直前まで−１５℃以下で凍結保存した試料を室温で融解した後、その１ｍｌを共栓付遠心沈澱管に正確に量った。これにメタノール２０ｍｌを加え、１０分間振とうした後、３０００r.p.m.で５分間遠心分離し、上清をナシ型フラスコに移した。これに、n−プロパノール（関東化学株式会社製）１ｍｌを加え、４５℃以下で減圧留去した。残渣にリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）５ｍｌを加えて溶かし、試料溶液とした。【００４０】
５） 標準溶液の調製
常用標準セファゾリン適当量を少量のアセトン（Fisher Scientific International社製）に溶解し、さらにリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で希釈して約１ｍｇ（力価）／ｍｌの濃度の明らかな標準原液を調製した。原液は５℃以下に保存し、１０日以内に使用した。用時、標準原液適当量を正確に量り、リン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で正確に希釈して、それぞれ０．１６、０．０８、０．０４、０．０２及び０．０１μｇ（力価）／ｍｌ濃度の希釈液を調製し、標準溶液とした。これとは別に標準原液の適当量を正確に測り、リン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で正確に希釈して、０．０４μｇ（力価）／ｍｌ濃度の希釈液を調製し、中心常用標準希釈液とした。【００４１】
調製した溶液を用いて、Microbioassay法により乳汁分析を行った。すなわち、試験用平板の穿孔内に試料溶液及び標準溶液をそれぞれ５０μｌ注入し、５５±１℃で５５時間以上培養した。出現した阻止円直径を測定し、標準溶液の阻止円直径から作成した検量線の回帰方程式を求め、それに試料溶液の阻止円直径を代入して試料溶液中のＣＥＺ濃度を算出した。算出したＣＥＺ濃度に再溶解時の希釈倍率を乗じて試料中のＣＥＺ濃度を求めた。なお測定の結果、明確な阻止円が得られなかった場合及び計算した結果、検出限界値以下であった場合、その成績は検出限界値以下（ＮＤ）と記録した。【００４２】
次の表３に示す条件で、注入剤１（ＭＣＭ２．５重量％、ＣＥＺ１５０ｍｇを配合）と、対照薬であるセファメジンＱＲ（ＭＣＭを含有せず、ＣＥＺ１５０ｍｇを含有するセファゾリン油性注入剤：日本全薬工業株式会社製）の夫々の供試薬剤を、ホルスタイン種搾乳牛５頭ずつの乳房に注入し、ＣＥＺの血中濃度推移及び乳汁中濃度推移を調べた。【００４３】
【表３】
0005037948.tif 000002
【００４４】
図２は乳房炎用注入剤１を投与した牛におけるＣＥＺの血中濃度推移の結果を示したものであり、検出限界値は０．０１５μｇ（力価）／ｍｌであり、それ以上の値をデータとして採取した。【００４５】
図２の結果から、ＭＣＭ配合処方は、セファメジンＱＲと比較して、血中濃度の立ち上がりが早く、しかも最高血中濃度（Ｃｍａｘ）も高くなっている。【００４６】
このことから、ＭＣＭ２．５重量％配合の注入剤１は、短時間でＣＥＺの血中濃度を迅速に高めることができ、よって主剤による即効的な薬理効果を期待することができる。【００４７】
図３は乳房炎用注入剤１及びセファメジンＱＲを投与した牛におけるＣＥＺの乳汁中濃度推移の結果を示したものである。【００４８】
図３では各投与群間での大きな差は認められなかった。又、ＭＣＭ配合処方は、セファメジンＱＲよりも乳汁中濃度が高くなっており、セファメジンＱＲよりも乳汁中への溶出が高いと考えられる。これは、溶出試験の結果と一致した。【００４９】
一方、ＭＣＭ２．５重量％配合の注入剤１では、現行のセファメジンＱＲに比してＣＥＺの急速な血中濃度の立ち上がりを示し、更に、最高血中濃度、乳汁中濃度でも有意な差が認められた。ＣＥＺは殺菌性抗菌剤であり、血中及び乳汁中に十分な濃度を短時間保持することができれば、薬理効果を発揮することができるので、前記したような急速な血中濃度の立ち上がり及び最高血中濃度の維持が可能な注入剤１は乳房炎の治療に非常に有効であることが判明した。又、ＭＣＭ２．５重量％配合の注入剤１は、拡散・分散性に優れ、主剤が乳汁中に溶出し易く、吸収性も高いことから、主剤の利用率を高く維持できることが判明した。【００５０】
このことから、注入剤に含有するＣＥＺの量を減らしても、現行のセファメジンＱＲと同等の効果が発揮できるのではないかと考え、以下の試験を実施した。【００５１】
製剤中のＣＥＺ含量を従来処方と同じ１５０ｍｇ／３ｇ処方(注入剤１)と、下記表４に示す如くその２分の１（ＣＥＺ７５ｍｇ／３ｇ）処方(注入剤２)と、下記表５に示す如くその３分の１（ＣＥＺ５０ｍｇ／３ｇ）処方(注入剤３)の各１ｇの注入剤と、対照薬としてセファメジンＱＲ１ｇを夫々別個に投入し、所定時間ごとに試験液に溶出したＣＥＺの溶出量と溶出率を測定した。【００５２】
［実施例２］
［表４］
注入剤２
主剤        セファゾリン（ＣＥＺ）      ７５ｍｇ（力価）
Ｍ  Ｃ  Ｍ                              ７５ｍｇ（２．５重量％）
添加剤      食用青色１号                ２５ｍｇ
油性基剤    なたね油                    残量
合計                                    ３ｇ
上記注入剤２を出願人会社で通常使用している乳房炎軟膏用のプラスチックシリンジに充填し、乳房炎用注入剤を試作した。試作した上記注入剤２は乳房炎用注入剤として用いるのに適した物性を示した。【００５３】
［実施例３］
［表５］
注入剤３
主剤        セファゾリン（ＣＥＺ）      ５０ｍｇ（力価）
Ｍ  Ｃ  Ｍ                              ７５ｍｇ（２．５重量％）
添加剤      食用青色１号                ２５ｍｇ
油性基剤    なたね油                    残量
合計                                    ３ｇ
上記注入剤３を出願人会社で通常使用している乳房炎軟膏用のプラスチックシリンジに充填し、乳房炎用注入剤を試作した。試作した上記注入剤３は乳房炎用注入剤として用いるのに適した物性を示した。【００５４】
１．ＭＣＭ配合割合の変化による溶出性試験
上記注入剤１と、注入剤２と、注入剤３と、対照薬であるセファメジンＱＲにおける溶出量を図４に、溶出率を図５に夫々示した。図５に示す如く、ＭＣＭ配合ＣＥＺ１／３処方である注入剤３は、直ちに溶出が開始して１０分で略１００％溶出した。ＭＣＭ配合ＣＥＺが従来同量処方及び１／２処方(注入剤２)においても４０分で略１００％溶出した。【００５５】
上記から、ＭＣＭ配合処方では、ＣＥＺ配合割合を変化させても夫々短い時間内に１００％溶出することが判明した。【００５６】
２．ＣＥＺ配合割合を変化し牛投与したＣＥＺの血中・乳汁中濃度推移試験
血中濃度、乳汁濃度は前記と同様の方法により夫々測定した。
次表６に示す注入剤２：ＣＥＺ７５ｍｇ／３ｇ（２分の１処方）、注入剤３：ＣＥＺ５０ｍｇ／３ｇ（３分の１処方）、及び対照薬として３ｇ中に１５０ｍｇのＣＥＺを含有するセファメジンＱＲの供試薬剤を、ホルスタイン種搾乳牛６頭ずつの乳房に朝の搾乳後注入し、これを３日間繰り返し、血中濃度推移及び乳汁中濃度を調べた。【００５７】
【表６】
0005037948.tif 000003
【００５８】
表７に血中濃度推移を示す。血液は投与前、及び１日目投与後０．５、１、３、４、６、８、２４時間後の各時点で採材した。血中濃度の検出限界値（ＮＤ）は０．０５μｇ（力価）／ｍｌ以下であった。【００５９】
【表７】
0005037948.tif 000004
【００６０】
前記表７によれば、ＭＣＭ配合の注入剤２、３は立ち上がりが早く、又消失も早く、セファメジンＱＲでは８時間後に検出されなくなったのに対し、注入剤２では４時間後、注入剤３では２時間後には検出されなくなった。ただし、注入剤２、３は主剤の量が少ないために血中濃度に大きくは反映されなかったが、主剤の濃度が２分の１、或いは３分の１と少ないことから見ると高い血中濃度を示した。【００６１】
従って、ＭＣＭ配合の注入剤によれば、主剤が無駄なく有効に活用されたことにより、主剤の使用量を低減できる可能性が得られた。【００６２】
前記血中濃度推移の測定と同様に搾乳時に採材した乳汁中濃度推移を測定し、その測定結果を表８、及び図６に示した。乳汁は３日間の投与期間中及び最終投与後７２時間目までの朝晩の搾乳時に採材した。最終投与後７２時間が最終投与後３日目の朝である。乳汁中濃度の検出限界値（ＮＤ）は０．０５μｇ（力価）／ｍｌ以下であった。【００６３】
【表８】
0005037948.tif 000005
【００６４】
図６、表８によれば、どの投与群においても、投与後初回の搾乳時での乳汁中濃度が一番高く、次の日の朝には低くなっている。しかし、投与後初回の搾乳時の濃度は、ＭＣＭ配合の注入剤２及び３では、１日目、２日目、３日目とも略同一の値を示しているのに対し、セファメジンＱＲは日ごとに増加する傾向を示した。投与後２４時間目のサンプルでも同様に増加する傾向が認められたことから、セファメジンＱＲは乳槽内に徐々に蓄積されていると考えられ、それに対して注入剤２及び３では蓄積性はあまりないと考えられる。【００６５】
又、乳汁中の濃度は、セファメジンＱＲが一番高く、次いで２分の１処方の注入剤２、一番低いのが３分の１処方の注入剤３であったが、注入剤２は製剤中の主剤の量がセファメジンＱＲ２分の１であるにも拘らず、実際の乳汁中の濃度は同程度であったことから、ＭＣＭ配合の処方はセファメジンＱＲに比べて高い溶出性を示すことが確認された。【００６６】
更に、休薬期間について見ると、表８の乳汁中濃度推移に示されるように、ＭＣＭ配合の注入剤２及び３では３０時間目が最終検出時点であるのに対し、セファメジンＱＲでは５４時間目まで検出されており、注入剤２及び３はセファメジンＱＲに対して２４時間短くなっている。従って、ＭＣＭ配合の注入剤によれば、休薬期間をセファメジンＱＲに比べて１日間（２４時間）短縮できる可能性が示唆された。【００６７】
３．主剤を現行製剤と同量にした場合のＣＥＺの残留性試験
前記試験で得られたように、ＭＣＭ配合の注入剤では繰り返し投与によって乳汁中のＣＥＺ濃度が低下する傾向を示したのに対し、セファメジンＱＲの投与ではこのような減少傾向が認められなかったことから、ＣＥＺの乳汁中濃度の低下はＭＣＭ配合処方による特有の現象と考えられた。ＭＣＭは吸収促進作用を有することから、連続投与によってＣＥＺの吸収性に影響を及ぼしていると考えられるため、主剤を現行製剤と同量にしても、通常の用法用量であれば休薬期間を短くできるのではないかと考え、以下の試験を実施した。
ＭＣＭとして炭素数８のカプリル酸モノエステルであるサンソフト７０７（太陽化学株式会社製）、を用いて表９の組成を有する注入剤４（３ｇ）を製造した。【００６８】
［実施例４］
実施例１と同じ注入剤１（ＭＣＭ２．５重量％、ＣＥＺ１５０ｍｇを配合）を用いて、該注入剤１と、対照薬であるセファメジンＱＲ（ＭＣＭを含有せず、ＣＥＺ１５０ｍｇを含有するセファゾリン油性注入剤：日本全薬工業株式会社製）の夫々の供試薬剤を、下記表９に示す条件で、ホルスタイン種搾乳牛４頭ずつの乳房に１日１回、３日間注入し、ＣＥＺの乳汁中濃度推移及び血中濃度推移を調べた。血液は１日目から３日目の各投与後０．５、１、２、４、８及び１２時間後に採取し、乳汁は１日目から３日目の朝夜と、最終投与後の１２、２４、３６、４８、６０、７２時間後に採取して夫々測定した。【００６９】
【表９】
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【００７０】
（１）供試薬剤投与後の乳汁中濃度推移
ＣＥＺの乳汁中濃度推移を表１０及び図７に示した。表１０の乳汁中濃度の検出限界値（ＮＤ）は０．０５μｇ（力価）／ｍｌ以下であった。【００７１】
【表１０】
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【００７２】
ａ）注入剤１
表１０において、１日目〜３日目の夫々の朝に供試薬剤を投与してから１２時間後である投与毎初回（夜）の搾乳時における夫々の乳汁中ＣＥＺ濃度（平均）は、１回目が21．89±7．09μg（力価）／mL、２回目が18．44±5．62μg（力価）／mL、３回目が12．28±4．21μg（力価）／mLであり、本試験においても投与毎にＣＥＺ濃度が低下する傾向が認められた。また、供試薬剤を投与してから２４時間後における次（朝）の搾乳時における乳汁中ＣＥＺ濃度は、１回目が2．03±1．35μg（力価）／mL、２回目が1．30±0．67μg（力価）／mL、３回目が1．28±0．44μg（力価）／mLと前記投与毎初回搾乳時と比較して大幅に低下していた。
乳汁中におけるＣＥＺの最終検出時点は、４頭中１頭が最終投与後３６時間であり、最終投与後４８時間には全頭とも検出限界値以下であった。【００７３】
ｂ）対照薬（セファメジンＱＲ）
表１０において、１日目〜３日目の朝に供試薬剤を投与してから１２時間後である投与毎初回（朝）の搾乳時における乳汁中ＣＥＺ濃度は、１回目が17．95±6．50μg（力価）／mL、２回目が18．21±8，93μg（力価）／mL、３回目が18．98±7．10μg（力価）／mLであった。また、供試薬剤を投与してから２４時間後における次（朝）の搾乳時における乳汁中ＣＥＺ濃度は、１回目が3．87±3．23μg（力価）／mL、２回目が4．74±3．85μg（力価）／mL、３回目が3．87±2．38μg（力価）／mLと前記投与毎初回搾乳時と比較して大幅に低下していた。
乳汁中におけるＣＥＺの最終検出時点は、４頭中１頭が最終投与後３６時間、２頭が４８時間、残りの１頭が６０時間であり、最終投与後７２時間には全頭とも検出限界値以下であった。【００７４】
（２）供試薬剤投与後の血中濃度推移
ＣＥＺの血中濃度推移を図８に示した。また、投与毎のＣｍａｘ推移を図９に示した。【００７５】
ａ）注入剤１
注入剤１の各投与後、０．５〜２時間で最高血中濃度に達し、投与毎２４時間後には、全頭とも検出限界値以下となった。投与毎のＣｍａｘは、１回目が0．04±0．03μg（力価）／mL、２回目が0．06±0．04μg（力価）／mL、３回目が0．08±0．04μg（力価）／mLであった。【００７６】
ｂ）対照薬（セファメジンＱＲ）
対照薬の各投与後、０．５〜８時間で最高血中濃度に達し、投与毎２４時間後には、全頭とも検出限界値以下となった。投与毎のＣｍａｘは、１回目が0．05±0．02μg（力価）／mL、２回目が0．04±0．01μg（力価）／mL、３回目が0．03±0．01μg（力価）／mLであった。【００７７】
上記試験により、表１０に示す如く乳汁中の最終検出時点は、注入剤１で３６時間、対照薬で６０時間であり、従って、主剤を現行製剤と同量にした注入剤１においても、前記試験結果と同様にＭＣＭ配合基剤を用いることによって、現行製剤と比べて休薬期間を２４時間短縮できる可能性が示唆された。【００７８】
また、ＭＣＭ配合処方のみで認められていた、複数回投与における乳汁中ＣＥＺ濃度の低下は上記試験によっても同様に発揮されることが認められた。一方、血中濃度をみると、注入剤１のＣｍａｘは投与毎に上昇する傾向を示しており、投与を重ねるごとに吸収性が増加するものと考えられた。血中濃度自体が低いため、乳汁中濃度の低下分すべてが血中に移行しているとは考え難いが、この吸収性の増加が乳汁中濃度の低下の一因になっていることが考えられる。【００７９】
次に、前記実施例１〜４の他に主剤を変えた場合及びＭＣＭの添加量を変えた場合の実施例５〜９を表１１に示した。中鎖脂肪酸モノグリセライド（ＭＣＭ）の添加量は実施例９のように０．５重量％という少量の添加でも乳房炎用注入剤の主剤の溶出性が有意に高まることが判明した。従って、乳房炎用注入剤に０．５重量％以上のＭＣＭを添加すると、主剤の溶出性が高められ、これにより吸収性が高まり、よって従来の乳房炎用注入剤に比して主剤が有効に活用されることから主剤の使用量を低減できることが判明した。【００８０】
【表１１】
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【００８１】
［実施例５］
チアムリン塩基３００ｍｇ（力価）、ＭＣＭ１５００ｍｇ(５０重量％)、食用青色１号２５ｍｇ、なたね油残量により本発明の注入剤３ｇを製造した。実施例４の注入剤は乳房炎用注入剤として用いるのに適した物性を示した。【００８２】
［実施例６］
フマル酸チアムリン２５０ｍｇ、ＭＣＭ３０ｍｇ(１．０重量％)、食用青色１号２５ｍｇ、なたね油残量により本発明の注入剤３ｇを製造した。実施例５の注入剤は乳房炎用注入剤として用いるのに適した物性を示した。【００８３】
［実施例７］
ベンジルペニシリンプロカイン３０万単位・硫酸カナマイシン３００ｍｇ力価、ＭＣＭ７５ｍｇ(２．５重量％)、食用青色１号２５ｍｇ、なたね油残量によって本発明の注入剤３ｇを製造した。実施例６の注入剤は乳房炎用注入剤として用いるのに適した物性を示した。【００８４】
［実施例８］
ベンジルペニシリンプロカイン３０万単位・硫酸ジヒドロストレプトマイシン３００ｍｇ力価、ＭＣＭ７５ｍｇ(２．５重量％)、食用青色１号２５ｍｇ、なたね油残量によって本発明の注入剤３ｇを製造した。実施例７の注入剤は乳房炎用注入剤として用いるのに適した物性を示した。【００８５】
［実施例９］
クロキサシリンナトリウム２００ｍｇ（力価）・アンピシリン７５ｍｇ（力価）、ＭＣＭ１５ｍｇ（０．５重量％）、食用青色１号２５ｍｇ、なたね油残量によって本発明の注入剤３ｇを製造した。実施例８の注入剤は乳房炎用注入剤として用いるのに適した物性を示した。【００８６】
なお、本発明の乳房炎用注入剤は上記実施例にのみ限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲内において種々変更を加え得ることは勿論である。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
本発明の乳房炎用注入剤は、主剤の拡散・分散性を向上でき、主剤の溶出性を高めて吸収性を高められ、従来の乳房炎用注入剤に比して即効性を有し残留期間を短くでき、主剤の使用量削減を図れる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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