(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉの化合物。
Ｖ−Ｌ−Ｒ      （Ｉ）
（式中、Ｖはベクター部分であり、
Ｌはリンカー部分または結合であり、
Ｖ−Ｌは、
Ｎ2−［３Ｓ−ヒドロキシ−４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）２Ｒ−イソブチルスクシニル］−Ｌ−（４−オキシメチルカルボキシ）フェニルアラニン−Ｎ1−メチルアミド、
Ｎ−（４−オクチルフェニル）−３−（２−カルボキシエチル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−チアゾロ［３，２−ａ］ピリミジン−２−カルボキサミド、
Ｎ2−［３Ｓ−ヒドロキシ−４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２Ｒ−イソブチルスクシニル］−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ1−メチルアミド、
塩酸Ｎ−［６−アミノヘキシル］−［４−（６，７−ジメトキシ−キナゾリン−４−イルアミノ）フェニル］アセトアミド、
３−オキソ−２−［２−（ピリジン−２−イルアミノ）−エチル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸［２−（２−アミノ−エチルカルバモイル）−エチル］−アミド、および
Ｎ−（６−アミノ−ヘキシル）−２−｛３−［２−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−２−（２，４−ジクロロ−フェニル）−エチル］−３Ｈ−イミダゾール−１−イル｝−アセトアミドからなる非ペプチド性有機基から選択され、そして
Ｒは１〜１０個の検出可能な標識である。）。
【請求項２】
ＲがＤＴＰＡのＧｄ（ＩＩＩ）、99mＴｃまたは111Ｉｎキレートである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒが放射性核種である、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒがヨウ素または金属放射性核種である、請求項３記載の化合物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項記載の式Ｉの化合物を少なくとも１種の製薬上許容しうる担体または賦形剤とともに含有する医薬組成物。
【請求項６】
造影剤を被検者に投与し、その被検者のすくなくとも身体の一部の像を形成させることからなる、診断法に使用するための造影剤の製造への請求項１〜４のいずれか一項記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項記載の式Ｉを有する化合物の製造法であって、前記ベクター部分Ｖを前記リンカー部分または結合Ｌを介して前記検出可能な標識Ｒにコンジュゲートすることからなる、方法。
【発明の詳細な説明】
本発明は、標的造影剤を用いて病気の状態をイメージさせ得る診断造影技術およびそのような技術に適する標的造影剤に関する。より特定的には、本発明は、標的ベクターが新脈管形成に関連する受容体に結合する、そのような造影剤の使用に関する。従って、そのような造影剤は、例えば悪性疾患、心臓病、炎症関連疾患、リュウマチ性関節炎およびカポジ肉腫の診断に使用することができる。さらにそのような薬剤は、これらの疾病の治療上の処置に使用することができる。
新しい血管は、二つの異なる機構：脈管形成または新脈管形成により形成され得る。新脈管形成は、既存の血管からの枝分かれによる新しい血管の形成である。この過程に対する主な刺激は、組織中の細胞への栄養および酸素の不十分な供給（低酸素症）でありうる。細胞は、１例としては度々引用する血管内皮増殖因子（VEGF）であるが、多数存在する脈管形成因子の分泌に応答しうる。これらの因子は、基底膜のタンパク質を崩壊させるタンパク質分解酵素と同時にこれらの潜在的に有害な酵素の作用を制限する阻害剤の分泌を開始させる。脈管形成因子の他の顕著な作用は、内皮細胞の移動および分裂を引き起こすことである。基底膜に結合し、反対側において血管の廻りに連続シートを形成する内皮細胞は細胞分裂しない。結合の喪失および脈管形成因子の受容体からのシグナルを組み合わせた効果は、内皮細胞を移動させ、増殖させ、そして転移させ、最終的に新たな血管の周りに基底膜を合成させる。
新脈管形成は、傷の回復および炎症過程を包含する組織の成長および再形成において顕著である。腫瘍は、ミリメートルの大きさに達したとき、その成長速度を維持するために新脈管形成を開始させる。新脈管形成が内皮細胞およびその周辺における特有の変化に付随して起こるために、その過程は治療的介入にとって有望な標的である。新脈管形成の阻害は、抗腫瘍治療に対する有望な戦略とも考えられる。新脈管形成を伴う形質転換はまた、診断において非常に有望であり、明らかな例が悪性疾患であるが、しかしその概念は炎症、およびアテローム性動脈硬化症、脈管形成因子の潜在的源であるマクロファージの初期のアテローム硬化による損傷を包含する多くの炎症に関連する疾患に対して大きな期待を示す。これらの因子はまた、狭窄が短時間内に開放される場合に起こる心筋の梗塞部分の再−脈管形成にも関与する。
新脈管形成は、内皮細胞に特有の受容体を包含する。これらの細胞の表面は移動の準備のために再形成され、タンパク質分解の達成および制御に関連する多くのタンパク質に加えて、隠された構造は基底膜が減少するときに曝される。新脈管形成に関連する多くの公知の受容体／標的を下記の表１に列記する。腫瘍の場合、生じる血管の網状組織は、著しいよれの形成、さらに動静脈シャントを伴い、通常は組織を破壊する。本明細書において記載する標的方法を使用すると、医学において使用される大部分の造影法によって新脈管形成を検出することができる。
0004993419.tif 000002
0004993419.tif 000003
0004993419.tif 000004
0004993419.tif 000005
上記のように、多くの望ましくない状態は、新たな血管の発達および増殖である新たな脈管形成または新脈管形成に関連する。そのような状態の例を下記の表２に列記する。
0004993419.tif 000006
0004993419.tif 000007
このような新たな血管の表面細胞、つまり内皮細胞では、例えば受容体チロシンキナーゼ（RTK）のような種々の表面または膜貫通受容体が通常の濃度より遥かに大きく、新脈管形成の中心を検出する手段として、そのような受容体に対して放射線標識もしくは発色標識した抗体、または同様に標識したそのような受容体に対する天然タンパク質リガンドの類似体の使用が提案されている（例えばWO 95／26364（Orion）、WO 96／30046（Genetech）およびWO 95／12414（Repligen）参照）。
しかしながら、ペプチド性リガンドは、検出可能な標識（レポーター）に対する結合部位が相対的に少なく、そのようなペプチド性リガンドにおける多くの部位でのレポーターの結合は、リガンドがとりうるコンホメーションに影響する。ペプチドに伴うさらなる問題は、それらがインビボで不安定なことである。
従って、新脈管形成に関連する受容体に親和性を有する有効な標的造影剤が必要とされる。
本発明は、二つの方法 − 第一に非ペプチド性リガンド（ベクター）に基づく標的造影剤を提供する、そして第二に非常に多数の検出可能な標識を供給する高分子または粒状レポーター（複数レポーター）に基づく標的造影剤を提供することによって、この必要性に取り組むものである。
従って、一つの態様として、本発明は、式Ｉ
Ｖ−Ｌ−Ｒ        （Ｉ）
（式中、Ｖは新脈管形成に関連する内皮細胞の受容体に親和性を有するベクター部分であり、Ｌはリンカー部分または結合であり、そしてＲは、例えばヒトまたは血管新生したヒト以外の動物（例えば、哺乳類、鳥類または虫類）の身体のインビボ造影のような造影法において検出可能である、検出可能なレポーター部分、好ましくは気体を含まない検出可能なレポーター部分である）
を有する化合物を提供するものであり、Ｖが非ペプチド性有機基であるか、またはＶがペプチド性であり、且つＲがインビボ造影において検出可能な多数の標識を供給する高分子もしくは粒状物質であることを特徴とする。
Ｒが多数の標識を供給する高分子物質である場合、これらは別個に検出可能な標識（例えば常磁性または放射性物質）であるかまたは相互作用、例えば協同磁気現象の作用により検出可能な物質を生成しうるものである。この様な複数−レポーターの例には、ポリキレート並びにポリイオン物質、および強磁性体、フェリ磁性体並びに超常磁性体粒子が包含される。
多くの例において、式Ｉの化合物は特定化可能な化合物である。他方、結合、さもなくば互いに会合、例えば接合した化合物の組み合わせとすることができる。便宜上、化合物を以下、薬剤と称する。
「気体」とは、37℃において気体である物質または物質の混合物を意味する。「気体を含まない」とは、インビボにおける超音波診断において検出可能であるような十分な気体を含まないレポーターを意味する。気体含有レポーターを含む造影剤は、1997年10月28日出願の本出願人の同時係属の国際特許出願第PCT／GB 97／02958に記載されている。
別の態様により、本発明は、式Ｉの薬剤の有効量（例えば、インビボ造影において、造影を強化するのに有効な量）を少なくとも１種の製薬上有効な担体または賦形剤と共に含む医薬組成物を提供する。
さらに別の態様によると、本発明は、造影剤を被検者に投与し、前記被検者の少なくとも身体の一部分の画像を形成させることからなる診断方法において使用する前記造影剤の製造における式Ｉの薬剤の使用に関する。
さらにまた別の態様によると、本発明は、造影剤を被検者の、例えば血管系または胃腸管に投与し、前記造影剤が分配した前記被検者の少なくとも身体の一部の画像を、例えばＸ−線、ＭＲ、超音波、シンチグラフィ、PET、SPECT、電気インピーダンス、光学または磁気測定画像法で形成させることからなる、前記造影剤として式Ｉの薬剤を使用することを特徴とする、ヒトまたはヒト以外の動物（好ましくは哺乳類または鳥類）の画像の形成法を提供する。
さらに別の態様によると、本発明は、新脈管形成に伴う状態を克服するための薬物、例えば細胞毒剤を用いたヒトまたはヒト以外の動物の治療の効果をモニターする方法を提供し、前記方法は、式Ｉの薬剤を前記被検者に投与し、内皮細胞受容体、特に新脈管形成の領域の受容体による前記薬剤の取り込みを検出することからなり、前記投与および検出は、任意にしかし繰り返し、例えば前記薬剤を用いる治療の前、その間およびその後達成されることが好ましい。
さらにまた別の態様によると、本発明は、式Ｉの薬剤の調製方法を提供し、前記方法は、新脈管形成に関連する内皮細胞受容体に対する結合親和性を有する化合物（ｉ）を、診断造影法において検出可能な化合物またはキレート化合物（ii）にコンジュゲートさせ、必要により、得られたコンジュゲート中のキラント基を診断造影法において検出可能な金属イオンを用いて金属化する。
式Ｉの薬剤は、三つの特徴的な成分：ベクター（Ｖ）、リンカー（Ｌ）およびレポーター（Ｒ）を有する。ベクターは新脈管形成の領域に対する化合物を標的とする能力を有していなければならず、レポーターはインビボ診断造影法において検出可能でなければならず、そしてリンカーはベクターとレポーターとを、少なくともレポーターが新脈管形成の領域に到達するまで、好ましくは造影法が完了するまで、連結させなければならない。
ベクター
ベクターとしては、新脈管形成に関連する受容体に対して親和性を有する、任意のペプチド性、より好ましくは非ペプチド性化合物を用いることができる。
ペプチド性ベクターが一般的に生物学的安定性に乏しく、身体による望ましくない応答を引き起こすために、非ペプチド性化合物を用いるのが好ましい。
ベクターは、何れの許容し得ない生物学的応答を引き起こさない化合物、特に実質的に新脈管形成を促進しないものが好ましい。
ベクターは、新脈管形成の阻害剤であるのが特に好ましく、特に非ペプチド性新脈管形成阻害剤であるのが好ましい。
非ペプチド性新脈管形成阻害剤の例は、WO 94／17084（British Biotech）、EP-A-618208（Daiichi）、WO 94／13277（ICRT）、WO 95／06473（Nippon Kayaku）、WO 94／21612（Otsuka）、WO 97／37655（Merck）、WO 97／30035（Zeneca）、EP-A-678296（Tsumura）、WO 94／18967（Harvard）、WO 95／08327（Dept. of Health and Human Services）（US-A-4590201（Merck）をも参照）およびEP-A-652000（Eli Lilly）に記載されている。
ペプチド性新脈管形成阻害剤の例は、WO 94／02446（British Biotech）、WO 94／02447（British Biotech）、WO 94／21625（British Biotech）、WO 94／24140（British Biotech）、WO 95／04033（Celltech）、EP-A-589719（Eli Lilly）、US-A-5399667（Frazier）、EP-A-241830（The General Hospital Corporation）およびWO 97／38009（Merck）に記載されている。
開発中の特定の新脈管形成阻害剤には下記の表３に挙げたものがある：
0004993419.tif 000008
0004993419.tif 000009
並びに下記のペプチド系および非ペプチド系医薬化合物：
0004993419.tif 000010
0004993419.tif 000011
新脈管形成領域を標的とし得る他の既知の化合物は下記の表４に挙げる：
0004993419.tif 000012
0004993419.tif 000013
0004993419.tif 000014
同様に、WO 95／08327に記載されている化合物をベクターとして使用することができる（Kohn等、Proc. Nat. Acad Sci. USA 92:1307-1311（1995）およびJ. Clin. Oncol. 15:1985-1993（1997）も参照）。
上記の特許刊行物のいくつかに記載されているベクター化合物の特定の例は以下の通りである。
WO 95／08327（Dept. of Health and Human Services）は式Ｉ
Y-（CH2）p-Ar1-X-Ar2           （Ｉ）
式中、
Ar1およびAr2は芳香族基であり、そしてこれらは相異なるかまたは同一であってもよく；そしてＸは連結基、例えば、Ｏ、Ｓ、SO2、CO、CHCN、アルキル、アルコキシまたはアルコキシアルキルである、
および式II
0004993419.tif 000015
式中、
ＡはＮまたはCH；R1はＨ、-CONH、-CONHR5、COOH、-COOR5、SO2NH2；R2はＨ、NH2、NHCOPh、-NHCOR5、-NHCHO、-NHR5、-N（R5）2；およびR5は１〜６個の炭素を有するアルキル、例えば、
0004993419.tif 000016
を有する新脈管形成阻害剤化合物を記載している。
WO 95／06473（Nippon Kayaku Kabushiki Kasai）は式１
0004993419.tif 000017
式中、
ＸはＯ、COOであり；そしてＭは遷移金属である、
および式２
0004993419.tif 000018
式中、
X1およびX2は置換もしくは未置換のフェニルまたはナフチル基であり；Y1およびY2はハロゲン原子、アミノ基またはモノ−もしくはジ−置換のアミノ基であり；そしてＺはNHC2H4NHまたは置換もしくは未置換の芳香族ジアミン残基、例えば、
0004993419.tif 000019
を有する抗腫瘍および新脈管形成阻害剤化合物を開示している。
WO 95／04033（Celltech Limited）は下記の新脈管形成阻害剤を開示している：
0004993419.tif 000020
式中、R1は
0004993419.tif 000021
であり、ここでR3はＨ、ハロゲンまたはCH3、CF3もしくはOCH3であり；R2はＨまたはCH3である。例えば、
N4−ヒドロキシ−N1−（１−（Ｓ）−カルバモイル−2,2−ジメチルプロピル）−２−（Ｒ）−４−（クロロフェニル−プロピル）スクシンアミド；
N4−ヒドロキシ−N1−（１−（Ｓ）−カルバモイル−2,2−ジメチルプロピル）−２−（Ｒ）−４−（メチルフェニル−プロピル）スクシンアミド；
N4−ヒドロキシ−N1−（１−（Ｓ）−カルバモイル−2,2−ジメチルプロピル）−２−（Ｒ）−４−（メトキシフェニル−プロピル）スクシンアミド；および
N4−ヒドロキシ−N1−（１−（Ｓ）−カルバモイル−2,2−ジメチルプロピル）−２−（Ｒ）−４−（トリフルオロメチルフェニル−プロピル）スクシンアミド。
EP 241830（The General Hospital Corporation）は内皮マイトジェンおよび強力な新脈管形成因子である肝臓癌由来成長因子（HDGF）の精製を開示している。免疫診断アッセイを用いる新脈管形成の制御および癌性肝臓腫瘍の検出におけるHDGFの使用も開示されている。HDGFペプチド断片はＮ−末端アミノ酸配列を有しており、その中で最初の16個のアミノ酸は
0004993419.tif 000022
（xx＝未同定のアミノ酸部分）
である。
Ｎ−末端アミノ酸エクステンション配列が
0004993419.tif 000023
から成るＨＤＧＦペプチド断片も開示されている。
EP 652000（Eli Lilly and Company）は式
0004993419.tif 000024
式中、
R1およびR3はＨ、Me、-C（O）（C1〜C6アルキル）、-C（O）Arであり；Arは場合により置換されたフェニルであり；そしてR2はピロリジノまたはピペリジノ、例えば、
0004993419.tif 000025
である。
EP 652000［589719?］（Eli Lilly and Company）は下記のアミノ酸配列を有する修飾血小板因子４を開示している。
MPF−４
0004993419.tif 000026
CPF−４
0004993419.tif 000027
これは、
NH2-Glu-Ala-Glu-Glu-Asp-Gly-Asp-Leu-Gln-Cys-Leu-Cys-Val-Lys-Thr-Thr-COOHのアミノ酸配列を有する第二タンパク質とジスルフィド結合している。MPF−４のCys−20と第二タンパク質のCys−10との間およびMPF−４のCys−36と第二タンパク質のCys−12との間にはジスルフィド橋がある。
WO 94／13277（Imperical Cancer Research Technology Limited）は式Ｉ
0004993419.tif 000028
式中、
R1からR4は各々独立して-X、N3、-NO2、ハロ、トリフルオロメチル、R5、OR5、-CH2OR6、-OCOR5、-CH2OCOR5、-NHCOR5、-CH2OCOR5、-NHCOR5、-CH2NHCOR5、-NR5R6、-CH2NR5R6、-CH2NO2、CONR5R6、CH2CONR5R6、-COOR5、-CH2COOR5、-CHOおよびCH2CHOの一個またはそれ以上であり；そして-Xは独立して-SO3R5、-CH2PO3R5R6、-CH2SO3R5、-OSO3R5、-CH2OSO3R5、-NHSO3R5、-CH2NHSO3R5、-OPO3R5R6、-CH2OPO3R5R6および-PO3R5R6（ここで、R5およびR6は独立して-Hおよび低級アルキルから選択される）であり、Ａはナフチル基に直接結合する少なくとも５個で30個以下の結合を含む化学基である（但し、（ｉ）この化合物はスラミンではなく、（ii）Ａが
0004993419.tif 000029
（式中、ｍおよびｎは独立して０、または２である）ではない場合、R1からR4の少なくとも一個は-OHまたは酸性基である）の化合物、およびその製薬上許容し得る塩、エステル、そのようなエステルの塩またはそのような化合物のアミドの使用を開示している。
また、Ａのナフチル環への結合がアミドまたはスルホンアミド基を介する化合物も記載されている。さらに、Ａが式ＩＩの基であり得る場合もある。Ａはまた直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、アリール基、アルキルアリール基、脂肪族ジカルボン酸、ポリエンおよびそれらの誘導体ならびにポリオールおよびその誘導体から選択し得る。さらにいくつかの化合物は下記の式
0004993419.tif 000030
0004993419.tif 000031
を有する。
EP 678296（Tsumura & Co.）は一般式
0004993419.tif 000032
例えば、
0004993419.tif 000033
を有する新脈管形成阻害剤を開示している。
WO94／18967（President and Fellows of Harvard College）は新脈管形成を阻害するイミダゾールの種類を開示している。
0004993419.tif 000034
EP-A-618208（Daiichi Pharmaceutical）は式
0004993419.tif 000035
例えば、
0004993419.tif 000036
0004993419.tif 000037
の化合物を開示している。
WO 94／02446（British Biotechnology Limited）は式
0004993419.tif 000038
例えば、
0004993419.tif 000039
の化合物を開示している。
WO 94／02447（British Biotechnology Limited）は式
0004993419.tif 000040
例えば、
0004993419.tif 000041
の化合物を開示している。
WO 94／21625（British Biotechnology Limited）は式
0004993419.tif 000042
例えば、
0004993419.tif 000043
の化合物を開示している。
WO 94／24149（British Biotechnology Limited）は式（Ｉ）
0004993419.tif 000044
式中、
Ｘは-CONHOHまたはCOOHであり、式（II）
0004993419.tif 000045
例えば、
0004993419.tif 000046
を有する基の置換基R3および／またはR4の存在を主に特徴とする、
の化合物を開示している。
ここで言及されたすべての刊行物の内容は参照により本明細書中に組み込まれる。
特に好ましいベクターは、WO 94／02446に記載されているようなアミノ酸誘導体、WO 94／02447に記載されているようなヒドロキサム酸誘導体、EP-A-618208に記載されているようなチアゾロピリミジン、WO 95／08327に記載されているようなトリアゾール、WO97/30035に記載されているようなキナゾリン、WO 97／37655に記載されているようなイソインドロン、インテグリン阻害剤、VEGFアンタゴニスト、bFGFアンタゴニスト、トロンボスポンジン並びにトロンボスポンジン断片、CD 36および増殖因子（例えばVEGF、bFGFなど）を包含する。
CAM-Dおよび上述した他の候補の特定並びに評価技術もまた、候補のペプチド性および非ペプチド性ベクターを特定および評価するのに使用することができる。
従って、分子ライブラリーを直接スクリーニングすることによって、新脈管形成に関連する受容体に特異的に結合する分子を得ることも可能である。ペプチドライブラリーのスクリーニングもまた、慣用または組合わせの化学により生成され得る非ペプチド性アナログの一般的に有効なペプチド構造を特定するために使用することができる。この方法において特定された結合部分は、任意のベクター分子のレポーターへの結合に対する一般的手段を構成する、リンカー分子と連結させることができる。
ベクター分子は、正確な分子標的を知ることを必ずしも必要とせずに、造影すべき領域／構造に結合する分子の機能的選択（インビトロ、生体外またはインビボ）によって、組み合わせライブラリーから生成させることができる。
上述のように、式Ｉの薬剤は、ベクター、リンカーおよびレポーター部分からなる。一つのリンカー部分は、一つのベクターを一つのレポーターと連結させることができ；また、一つ以上のベクターおよび／または一つ以上のレポーターを一緒に連結させることができる。同様に、レポーターまたはベクターを、一つ以上のリンカーと連結させることができる。この方法における複数のレポーター（例えば、一つのベクターに結合した幾つかのリンカー−レポーター部分またはそれ自身一つのベクターと結合した一つのリンカーと結合した幾つかのレポーター）の使用は、造影剤の検出能の向上を可能にし得るか（例えば、その放射線不透過性、エコー発生または緩和性を増加させることにより）、または一つ以上の造影法において検出を可能にすることができる。この方法における複数のベクターの使用は、造影剤の標的効率を増加させ得るかまたは造影剤を一つ以上の部位、例えば受容体異質性を有する薬剤に対する異なる受容体を標的とすることができるように得る。故に、例えば式Ｉの薬剤は、新脈管形成に関連する受容体以外の親和性部位を有する、例えば身体の管路の壁面における細胞表面に親和性を有するベクター部分を包含することができる。従って、薬剤は、抗体断片およびオリゴペプチドような、例えばRGDもしくは類似の細胞表面結合ペプチドモチーフであるベクター（例えば、EP-A-422937およびEP-A-422938（Merck）に記載されている）またはGB 9700699.3に記載されているような他のベクターを包含することができる。そのような特別なベクターもまた、選択された標的器官、組織、細胞もしくは細胞群、または哺乳類の身体の他の位置においてインビボで自然に濃縮される全ての分子から選択することができる。これらは、アミノ酸、オリゴペプチド（例えばヘキサペプチド）、分子認識単位（MRU’s）、単一鎖抗体（SCA’s）、タンパク質、非ペプチド性有機分子、Fab断片および抗体を包含し得る。部位特定分子の例には、多糖類（例えば、CCKおよびヘキサペプチド）、タンパク質（レクチン、アシアロフェチュイン、ポリクローナルIgG、血液凝固タンパク質（例えばヒルジン）、リポタンパク質および糖タンパク質など）、ホルモン、増殖因子、凝固因子（PF4など）、重合フィブリン断片（例えば、E1）、血清アミロイド前躯体（SAP）タンパク質、低密度リポタンパク質（LDL）前駆体、血清アルブミン、無傷の赤血球の表面タンパク質、エストロゲンなどの受容体結合分子、ガラクトシル−ネオグリコアルブミン（NGA）（Vera等、Radiology 151: 191（1984）を参照）、結合したガラクトサミンの変化する部材とのＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（HMPA）コポリマー（Duncan等, Biochim. Biophys. Acta 880: 62（1986）を参照）、アリル並びに６−アミノヘキシルグリコシド（Wong等, Carbo.Res. 170:27（1987）を参照）などの肝臓特異的タンパク質／ポリマー、およびフィブリノーゲンが包含される。部位特定タンパク質はまた、抗体とすることができる。抗体、特に抗体の抗原特異性の選択は、薬剤に対する特別に意図される標的部位によって決まる。モノクローナル抗体は、ポリクローナル抗体に対して好ましい。所望の抗原と反応する抗体の調製は公知である。抗体製剤は、種々の起源から商業的に入手できる。フィブリ��断片E1は、Olexa等, J. Biol. Chem. 254:4925（1979）に記載されるように調製することができる。LDL前駆体およびSAPタンパク質の調製は、de Beer等、J. Immunol. Methods 50:17（1982）によって記載されている。上記の論文は、その全てにおいてここで引用することにより組み入れる。
そのような付加的なベクターを結合させ、血流中の薬剤の動きを遅くするが、これを止めないようにし、そして新脈管形成に関連する受容体部位に結合したときにその場所に留めるようにするのが特に好ましい。
ベクターを、例えば慣用の化学的連結技術を用いてリンカー部分または直接的にレポーター部分に結合させるために、ベクター化合物における官能基（例えばアミノ基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、チオール基など）を用いることができる。
ベクターがペプチド化合物である場合、レポーターは多重レポーター、例えば金属化ポリキラント（好ましくは樹状ポリキラント）、磁性（好ましくは超常磁性）粒子、造影有効粒子または造影有効分子の溶液を含有する小胞、ポリイオン物質（例えば多数のイオン基、好ましくはアニオン基、例えばカルボン酸塩、リン酸塩またはスルフォン酸塩のポリマー）である。
ベクターが非ペプチド性である場合、レポーターは多重レポーターとすることができるか、または一つもしくは少数（例えば10個まで）の検出可能な標識、例えばキレート化常磁性金属イオン、共有結合もしくはキレート化ラジオアイソトープ、および発色団（例えば蛍光団）を含むことができる。レポーターが共有結合した放射性核種であるかまたはこれを含む場合、トリチウムまたは13C原子よりヨウ素放射性核種であるのが好ましい。
リンカー
生分解性リンカーおよび生体高分子物質を包含する種々のリンカーを使用することができる。
造影剤のリンカー成分は、最も単純なものでベクターとレポーターの間の結合である。しかし、より一般的にはリンカーは、一つまたはそれ以上のベクターを一つもしくはそれ以上のレポーターに共有結合的または非共有結合的に連結させ、共有結合的もしくは非共有結合的、例えば配位的にベクターおよびレポーター部分と結合する、またはそのような部分を封入、エントラップもしくは連結する組み込みもしくは付加基を有する、単一または複数の分子骨格、例えば線状、環状、枝分かれもしくは網状分子骨格、または分子状凝集物を与える。
レポーター単位の所望のベクターへの結合は、通常、レポーターおよび／またはベクター上に位置する官能基一つ以上との相互作用が関与している共有結合または非共有結合により達成される。このために使用することができる化学的反応性を有する官能基の例には、アミノ、ヒロドキシル、スルフィドリル、カルボキシルおよびカルボニル基、並びに炭水化物基、ビシナルジオール、チオエーテル、２−アミノアルコール、２−アミノチオール、グアニジニル、イミダゾリルおよびフェノール性の基が包含される。
従って、レポーターとベクターの共有結合カップリングはこのような官能基と反応できる反応性の部分を有する連結剤を用いて行なってよい。スルフィドリル基と反応できる反応性部分の例にはX-CH2CO-型（式中Ｘ＝Br、ClまたはＩ）のα−ハロアセチル化合物が包含され、これはスルフィドリル基に対して特別の反応性を示すが、Grud, F.R.N., Methods Enzymol.（1967）11, 532に記載のとおりイミダゾリル、チオエーテル、フェノールおよびアミノ基を修飾するために使用することもできる。Ｎ−マレイミド誘導体もまたスルフィドリル基に対して選択性を有すると考えられているが、特定の条件下ではアミノ基へのカップリングにおいても有用である。結合がジスルフィド架橋の形成をとおして起こる場合は、アミノ基の変換によってチオール基を導入する、例えばTraut, R.等, Biochemistry（1973）12, 3266に記載の２−アミノチオランのような試薬がスルフィドリル試薬と考えられる。即ち、レポーターまたはベクターの何れかに反応性のジスルフィド結合を導入する試薬が有用であるのは、結合がベクターとレポーターの間のジスルフィド交換によりもたらされるためであり；このような試薬の例にはEllman試薬（DTNB）、4,4′−ジチオジピリジン、メチル−３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィドおよびメチル−２−ピリジルジスルフィド（Kimura, T.等, Analyt. Biochem.（1982）122,271）が包含される。
アミノ基との反応が可能な反応性の部分の例にはアルキル化およびアシル化剤が包含される。代表的なアルキル化剤を以下に示す。
ｉ）反応性チオール基の不存在下でアミノ基に対して特異性を示し、X-CH2CO-（式中Ｘ＝Cl、BrまたはＩ）の型のα−ハロアセチル化合物、例えば、Wong, Y-H. H., Biochemistry（1979）24, 5337に記載のもの；
ii）マイケル型反応を介して、または、Smyth, D.G.等、J. Am. Chem. Soc.（1960）82, 4600およびBiochem. J.（1964）91, 589に記載の環状カルボニル基への付加によるアシル化を介して、アミノ基と反応するＮ−マレイミド誘導体；
iii）反応性のニトロハロ芳香族化合物のようなアリールハライド；
iv）McKenzie, J.A.等、J. Protein Chem.（1988）7, 581に記載のアルキルハライド；
ｖ）アミノ基とのシッフ塩基形成が可能なアルデヒドおよびケトンであり、形成した付加物は通常還元により安定化されて安定なアミンとなるもの；
vi）アミノ、スルフィドリルまたはフェノール性ヒドロキシル基と反応するエピクロロヒドリンおよびビスオキシランのようなエポキシド誘導体；
vii）アミノ、スルフィドリルまたはヒドロキシル基のような親核物質に対して高い反応性を有するs-トリアジンの塩素含有誘導体；
viii）開環によりアミノ基のような親核物質と反応する、例えばRoss, W.C.J., Adv. Cancer Res.（1954）2, 1に記載されているもののような、上記したｓ−トリアジン化合物系のアジリジン；
ix）Tietze, L.F., Chem. Ber.（1991）124, 1215に記載のスクワリック（squaric）酸ジエチルエステル；および
ｘ）例えばBenneche, T.等、Eur. J. Med. Chem（1993）28, 463に記載したもののような、エーテル酸素原子により誘発された活性化のためにノルマルアルキルハライドよりも反応性の高いアルキル化剤であるα−ハロアルキルエーテル。
代表的なアミノ反応性アシル化剤の例には以下のものが包含される。
ｉ）Schick, A.F.等、J. Biol. Chem.（1961）236, 2477に記載したもののような、安定な尿素およびチオ尿素誘導体をそれぞれ形成し、蛋白交叉結合のために使用されているイソシアネートおよびイソチオシアネート、特に芳香族誘導体；
ii）Herzig. D.J.等、Biopolymers（1964）2, 349に記載した、そして、リンカーへの蛍光レポーター基の導入のために有用であるスルホニルクロリド；
iii）酸ハロゲン化物；
iv）ニトロフェニルエステルまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルのような活性エステル；
ｖ）混合無水物、対象無水物またはＮ−カルボキシ無水物のような酸無水物；
vi）Bodansky, M.等、Principles of Peptide Synthesis（1984）Springer-Verlagに記載したようなアミド結合形成のための他の有用な試薬；
vii）例えばWetz, K.等、Anal. Biochem.（1974）58, 347に記載したような、アジド基が亜硝酸ナトリウムを用いて予め形成されたヒドラジド誘導体から形成されるアシルアジド；
viii）例えばRasmussen, J.K.等、Reactive Polymers（1991）16, 199に記載したような、ビスアクリルアミドのような重合体に結合したアズラクトン；および、
ix）例えばHunter, M.J. およびLudwig, M.L., J. Am. Chem. Soc.（1962）84, 3491に記載したようなアミノ基との反応により安定なアミジンを形成するイミドエステル。
アルデヒド官能基のようなカルボニル基は親核蛋白側鎖官能基がプロトン化されるようなpHで弱蛋白塩基と反応させてよい。弱塩基には、例えばRatner, S.等、J. Am. Chem. Soc.（1937）59, 200に記載のようなアルデヒド基を有する安定な５員チアゾリジン環を選択的に形成するＮ−末端システイン残基中に認められるような1,2−アミノチオールが包含される。フェニルヒドラゾンのような他の弱塩基も、例えばHeitzman, H.等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA（1974）71, 3537に記載のとおり、使用することができる。
アルデヒドおよびケトンはまたアミンと反応させてシッフ塩基を形成してよく、これは還元的アミノ化により好都合に安定化してよい。アルコキシルアミノ部分は例えばWebb, R.等、Bioconjugate Chem.（1990）1, 96に記載のとおり、ケトンおよびアルデヒドと容易に反応して安定なアルコキシアミンを生成する。
カルボキシル基との反応が可能な反応性の部分の例には、ジアゾアセテートエステルおよびジアゾアセトアミドのようなジアゾ化合物が包含され、これらは、例えばHerriot R.M., Adv. Protein Chem.（1947）3, 169に記載のとおり、高い選択性で反応してエステル基を生成する。Ｏ−アシル尿素形成、次いでアミド結合形成を介して反応するカルボジイミドのようなカルボン酸修飾試薬もまた有用に使用され；連結はアミンの添加を通じて促進してよく、あるいは、直接ベクター−受容体カップリングを行なってよい。有用な水溶性カルボジイミドには例えばZot, H.G.およびPuett, D.がJ. Biol. Chem.（1989）264, 15552に記載のとおり、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）カルボジイミド（CMC）および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（EDC）が包含される。他の有用なカルボン酸修飾試薬にはイソキサゾリウム誘導体、例えばWoodwards試薬Ｋ;クロロホルメート、例えばｐ−ニトロフェニルクロロホルメート；カルボニルジイミダゾール、例えば1,1′−カルボニルジイミダゾール；およびＮ−カルボアルコキシジヒドロキノリン、例えばＮ−（エトキシカルボニル）−２−エトキシ−1,2−ジヒドロキノリンが包含される。
他の潜在的に有用な反応性の部分には、例えばWagner等がNucleic acid Res.（1978）5, 4065に記載のとおりグアニジニル基と反応させるために用いてよいｐ−フェニレンジグリオキサルのようなビシナルジオン；および、例えばIshizaka, K.およびIshizaka T.がJ. Immunol.（1960）85, 163に記載のとおり、親電子置換反応を起こすジアゾニウム塩が包含される。ビスジアゾニウム化合物は酸性溶液中亜硝酸ナトリウムでアリールジアミンを処理することにより容易に調製される。レポーターおよび／またはベクター中の官能基は、当然ながら、例えば別の反応性または選択性を与えるために、所望により他の官能基に変換した後に反応させることができる。このために有用な方法の例には、ジカルボン酸無水物のような試薬を用いたアミンからカルボン酸への変換；Ｎ−アセチルホモシステインチオラクトン、無水Ｓ−アセチルメルカプトコハク酸、２−イミノチオランまたはチオール含有スクシンイミジル誘導体のような試薬を用いたアミンからチオールへの変換；α−ハロアセテートのような試薬を用いたチオールからカルボン酸への変換；エチレンイミンまたは２−ブロモエチルアミンのような試薬を用いたチオールからアミンへの変換；カルボジイミド次いでジアミンのような試薬を用いたカルボン酸からアミンへの変換；およびトシルクロリドのような試薬を用い、次いでチオアセテートとのエステル交換および酢酸ナトリウムを用いたチオールへの加水分解によるアルコールからチオールへの変換が包含される。
ベクター−レポーターカップリングはまた長さゼロ−レングスの連結剤として酵素を用いて行ってもよく；即ち、例えば、トランスグルタミナーゼ、ペルオキシダーゼおよびキサンチンオキシダーゼを用いて架橋生成物を得ることができる。逆蛋白分解もまたアミド架橋の形成を介した架橋のために用ることができる。
非共有結合ベクター−レポーターカップリングは例えば安定な金属複合体の形態のキレート形成を介して、または、高親和性結合相互作用を介して、静電電荷相互作用により行うことができる。
膜挿入を媒介することのできる要素を含むペプチド、リポ−オリゴ糖またはリポペプチドリンカーと結合するベクターもまた有用である。一つの例は、Leenhouts, J.M.等のFebs Letters（1995）370（3）, 189-192に記載されている。
カップリングはまたアビジンまたはストレプトアビジンを用いて行なってよく、これらはビオチンに対する高親和性結合部位４個を有している。従ってアビジンは、ベクターとレポーターが共にビオチニル化されている場合にベクターをレポーターにコンジュゲートするために使用される。その例はBayer, E.A.およびWilchek, M.のMethods Biochem. Anal.（1980）26, 1に記載されている。この方法は、薬剤の結合を促進し、結果として効果を潜在的に増大させ得る過程である、レポーターとレポーターとの連結を包含することを意図してもよい。また、アビジンまたはストレプトアビジンをレポーター粒子の表面に直接結合させることもできる。
非共有結合カップリングもまた二重特異性免疫グロブリンの二官能性の性質を利用してよい。これらの分子は２個の抗原に特異的に結合できるため、これらを連結できる。例えば、二重特異性のIgGまたは化学的に構築された二特異性のF（ab）′2フラグメントのいずれかを連結剤として用いることができる。ヘテロ二官能性二重特異性抗体もまた、例えばBode, C.等, J. Biol. Chem.（1989）264, 944およびStaerz, U.D.等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA（1986）83, 1453に記載のとおり、二種の異なる抗原に連結することが報告されている。同様に、二種以上の抗原決定基を有するレポーターおよび／またはベクター（Chen, Aa等, Am. J. Pathol.（1988）130, 216等）を抗体分子と交叉結合させ、潜在的に効果が向上した式Ｉの薬剤の交叉結合構造体を形成させることができる。
（例えばカルボジイミドを用いるか、または酵素により誘導されたアミド結合の形成の場合のように）別の連結物質を導入することなく二つの反応性の化学性基を直接共有結合するいわゆるゼロ−レングスの連結剤は、所望により、非共有結合レポーター−ベクターの結合を誘導するビオチン／アビジン系のような剤および静電相互作用を誘導する剤の場合のように本発明により使用することができる。
しかしながら、最も一般的には、連結剤はスペーサー要素により連結された、例えば上記したような二種以上の反応性の部分を有する。このようなスペーサーの存在により、二官能性のリンカーは分子内または二種の異なる分子間の特定の官能基と反応することができ、これにより、これら二成分間の結合が起こり、レポーター−ベクターコンジュゲート内に外来性のリンカー由来物質が導入される。連結剤中の反応性の部分は同じ（ホモ二官能性物質）かまたは異なって（ヘテロ二官能性物質または数種の異なる反応性の部分が存在する場合はヘテロ多官能性物質）いてよく、これにより分子内または分子間の何れの化学種の間も共有結合できる多様な試薬が得られる。
連結剤により導入される外来性物質の性質は、標的設定能力および最終生成物の全般的安定性に対し、重要な関連性を有している。従って、例えば生物分解性または化学的に感受性が高いか、または、酵素切断部位を有するスペーサーアームを含む不安定な連結を導入することが望ましい。あるいは、スペーサーは、例えば界面活性剤として機能し、剤の安定性を向上させるために重合体成分を含んでもよい。スペーサーはまた、表面の交叉結合を増強させるために例えば上記したような反応性の部分を含んでいてもよい。
スペーサー要素は典型的には、距離５〜30Åでリンカーの反応部分を効果的に分離する脂肪族鎖よりなる。これらはポリ（エチレングリコール）のような巨大分子構造を有する。このような重合体構造は以後PEGと称するが、これは生物工学および生物医学の用途において大きく注目されている（例えばMilton Harris, J.（ed）,“Poly（ethylene glycol）chemistry, biotechnical and biomedical applications”, Plenum Press, New York, 1992参照）単純な天然のポリエーテルである。PEGは水などのほとんどの溶媒中に可溶であり、２または３個の水分子が各エチレングリコールセグメントに結合しながら水性条件で高度に水和しており；これは他の重合体または蛋白のPEG修飾表面への吸着を阻止する作用を有する。PEGは非毒性であり活性蛋白または細胞に対して無害であることが判っており、また共有結合PEGは非免疫原性および非抗原性であることが判っている。PEGは更に、その化学特性に殆ど影響することなく容易に修飾し他分子に結合することができる。その好都合な溶解性と生物学特性はPEGおよびPEG−ポリウレタンおよびPED−ポリプロピレンのようなブロック共重合体を含むその共重合体の用途が広いことから明らかである。
本発明で使用するPEGスペーサーの適切な分子量は例えば120ダルトン〜20ｋダルトンである。
網内系（RES）細胞による粒子の取り込みの主要な機序は血中の血漿蛋白によるオプソニン作用であり；これらがマークした外来性粒子が次いでRESに取り込まれる。本発明で使用するPEGスペーサー要素の生物学的性質はPEG化されたリポソームで観察されるものと同様の造影剤循環時間を延長させることである（例えばKlibanov, A.L.等、FEBS Leters（1990）268, 235-237およびBlume, G. およびCevc, G. Biocim. Biophys. Acta（1990）1029, 91-97参照）。
対象となる領域へのカップリング効率の増強はまたPEGスペーサーの末端に結合した抗体を用いて行ってよい（例えばMaruyama. K.等、Biochim. Biophys. Acta（1995）1234, 74-80およびHansen, C.B.等、Biochim. Biophys. Acta（1995）1239, 133-144参照）。
他の代表的なスペーサー要素には、構造型多糖類、例えばポリガラクツロン酸、グリコサミノグリカン、ヘパリノイド、セルロースおよび水産多糖類、例えばアルギネート、キトサンおよびカラギーナン；保存型多糖類、例えば澱粉、グリコーゲン、デキストランおよびアミノデキストラン；リジン、グルタミン酸およびアスパラギン酸のホモおよびコポリマーの場合のように、ポリアミノ酸およびそのメチルおよびエチルエステル；および酵素切断部位を有するかまたは有しないポリペプチド、オリゴ糖およびオリゴヌクレオチドが包含される。
一般的にスペーサー要素はビシナルグリコール、アゾ、スルホン、エステル、チオエステルまたはジスルフィド基のような切断可能な基を有する。下記式：
-（Z）m.Y.X.C（R1R2）X.Y.（Z）n-
［式中、ＸおよびＺは-O-、-S-および-NR-（Ｒは水素または有機性の基）から選択され；Ｙは各々カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、スルホリルまたは同様の酸形成基であり：ｍおよびｎは各々０または１であり；そしてR1およびR2は各々、水素、有機性の基または基-X.Y.（Z）m-であるか一緒になって２価の有機性の基を形成する］の生物分解性メチレンジエステルまたはジアミド基含有のスペーサーも有用であり；例えばWO-A-9217436に記載のとおり、このような基は例えばin vivoでエステラーゼの存在下容易に生物分解されるが、このような酵素の非存在下では安定である。従ってこれらは、好都合に治療薬と結合させてその放出を遅延させることができる。
ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）メタクリルアミド］は細胞および組織との相互作用の程度が低いため潜在的に有用なスペーサー物質である（例えばVolfova, I., Rihova, B. およびV. R. およびVetvicka, P., J. Bioact. Comp. Polymers（1992）7, 175-190参照）。主として密接に関連する２３−ヒドロキシプロピル誘導体よりなる類似の重合体に関する研究によれば、更に低い程度までのみ単核食細胞系によりエンドサイト−シスは低い程度にしか起こらないことが判っている（Goddard, P., Williamson, I., Bron. J., Hutchkinson. L. E., Nicholls, J. およびPetrak, K., J. Bioct. Compat. Polym.（1991）6, 4-24参照）。
他の潜在的に有用な重合体スペーサー物質には以下のものが包含される。
ｉ）メチルメタクリレートとメタクリル酸の共重合体、即ち浸潤崩壊可能であり（Lee, P.I., Pharm. Res.（1993）10, 980参照）、カルボキシレート置換基は中性の重合体と比較してより高い水準の膨潤を起こすもの；
ii）ポリメタクリレートと生物分解性ポリエステルのブロック共重合体（例えばSan Roman, J. およびGuillen-Garcia, P., Biomaterials（1991）12, 236, 241参照）;
iii）シアノアサクリレート、即ち、２−シアノアクリル酸のエステルの重合体で、生物分解性であり、選択的薬物デリバリーのためにナノ粒子の形態で使用されているもの（Forestier, F., Gerrier, P., Chaumard, C., Quero, A.M., Couvreur, P. およびLabarre, C., J. Antimicrob. Chemoter.（1992）30, 173-179参照）；
iv）水溶性で一般的に生体適合性であると考えられているポリビニルアルコール（例えばLanger, R., J. Control. Release（1991）16, 53-60参照）;
ｖ）生物浸潤崩壊性であるとされているビニルメチルエーテルと無水マレイン酸との共重合体（Finne, U., Hannus, M. およびUrtti, A., Int. J. Pharma.（1992）78, 237-241参照）;
vi）腎臓で急速に濾過される例えば分子量約25,000未満のポリビニルピロリドン（Hespe, W., Meier, A.M. およびBlankwater, Y.M., Arzeim.-Forsch.／Drug Res.（1977）27, 1158-1162参照）；
vii）グリコール酸、乳酸、酪酸、吉草酸およびカプロン酸のような短鎖脂肪族ヒドロキシ酸の重合体および共重合体（例えばCarli, F., Chim. Ind.（Milan）（1993）75, 494-9参照）（分解速度を高めるために芳香族ヒドロキシ酸を配合した共重合体を包含する）（Imasaki, K., Yoshida, M., Fukuzaki, H., Asano, M., Kumakura, M., Mashimo, T., Yamanaka, HおよびNagai, T. のInt. J. Pharm.（1992）81, 31-38参照）；
viii）非分解性であるが生体適合性の高いDacron（登録商標）のようなエチレングリコールとテレフタル酸の交互単位よりなるポリエステル；
ix）脂肪族ヒドロキシ酸重合体の生物分解性セグメントを有するブロック共重合体（例えばYounes, H., Nataf, P.R., Cohn, D., Appelbaum, Y.J., Pizov, G. およびUretzky, G., Biomater. Artif. Cells Artif. Organs（1988）16, 705-719参照）、例えばポリウレタンと組み合わせたもの（Kobayashi, H., Hyon, S.H. およびIkada, Y.,“Water-curable and biodegradable prepolymers”-J. Biomed. Mater. Res.（1991）25, 1481-1494参照）；
ｘ）移植片中で許容性の高いことが判っており、例えばポリ（テトラメチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）またはポリ（エチレングリコール）を含有する可撓性の「ソフト」セグメントおよび例えば4,4′−メチレンビス（フェニレンイソシアネート）を含有する芳香族「ハード」セグメントと組み合わせてよいポリウレタン（例えばRatner, B.D., Johnston, A.B. およびLenk, T.J., J. Biomed. Mater. Res: Applied Biomaterials（1987）21, 59-90; Sa Da Costa, V.等, J. Coll. Inter-face Sci.（1981）80, 445-452およびAffrossman, S. 等, Clinical Materials（1991）8, 25-31参照）;
xi）加水分解性エステル結合のために生物分解性エステルであると考えられており（例えばSong, C. X., Cui, X. M. およびSchindler, A., Med. Biol. Eng. Comput.（1993）31, S147-150参照）、吸収性を向上させるためにグリコリド単位を含んでよい（Bezwada, R,S., Shalaby, S.W. およびNewman, H.D.J., Agricultural and synthetic polymers：Biodegradability and utilization（1990）（ed Glass, J.E. およびSwift, G.）, 167-174-ACS symposium Series, #433, Washington D.C., USA-American Chemical Society）ポリ（1,4−ジオキサン−２−オン）；
xii）ウサギ（Brem, H., Kader, A., Epstein, J.I., Tamargo, R.J., Domb, A., Langer, R. およびLeong, K.W., Sel. Cancer Ther,（1989）5, 55-65参照）およびラット（Tamargo, R.J., Epstein, J.I., Reinhard, C.S., Chasin, M. およびBrem, H., J. Biomed. Mater. Res.（1989）23, 253-266）における試験で明らかな毒性作用を伴うことなく薬物の脳内制御放出に有用であることが判っているセバシン酸（オクタンジ酸）とビス（４−カルボキシ−フェノキシ）プロパンの共重合体のようなポリ無水物；
ｘiii）in vivoの制御放出のために用いられているオルトエステル基を有する生物分解性重合体（Maa, Y.F. およびHeller, J., J. Control. Release（1990）14, 21-28）;および、
ｘiv）交互に存在するリンおよび窒素原子よりなる無機重合体であるポリホスファゼン（Crommen, J.H., Vandorpe, J. およびSchacht, E.H., J. Control. Release（1993）24, 167-180参照）。
以下の表は本発明の標的設定造影剤を調製する際に有用な連結剤を列挙したものである。
ヘテロ二官能性連結剤
0004993419.tif 000047
0004993419.tif 000048
ホモ二官能性連結剤
0004993419.tif 000049
0004993419.tif 000050
ビオチニル化剤
0004993419.tif 000051
蛋白修飾のための薬剤
0004993419.tif 000052
すでに企図されている直鎖および分枝鎖PEG様リンカー（例えばエチレンオキシド反覆単位２〜100個を含有するポリエチレングリコール等）に加えて、VLR系でのリンカーは独立して化学的結合または連結基の残基であってよい。本文で使用される「連結基の残基」なる用語は、ベクター反応性基とベクター上の反応性部位との反応から残存しているか、結果として生じるかまたは誘導される部分を言うものとする。本文で使用される「ベクター反応性基」なる用語は、一般的にベクター上に存在している官能基と反応し得るいずれの基を言うものとし、この基の誘導体化は最小限度でベクターの受容体への結合能力に影響するものである。しかしながら、このようなベクター反応性基は関連するタンパク質分子に典型的に存在している官能基とも反応し得ることが具体的に意図されている。すなわち、一つの特徴によれば、本発明の実施化に有用なリンカーは、反応性基を含有する上述したベクターからなるいずれの関連分子（このような関連分子がタンパク質であってもなくても）と反応して連結基を形成し得る基から誘導される。
好ましい連結基は、限定するものではないが、次のものから選択されるベクター反応性基から誘導される：
ベクター上で直接カルボキシ、アルデヒド、アミン（NHR）、アルコール、スルフヒドリル基、活性化メチレン等と反応する基、例えば、活性ハロゲン含有基、例えば、クロロメチルフェニル基およびクロロアセチル〔ClCH2C（=O）-〕基、活性化２−（脱離基で置換された）−エチルスルホニルおよびエチルカルボニル基例えば２−クロロエチルカルボニル；ビニルスルホニル；ビニルカルボニル；エポキシ；イソシアナト；イソチオシアナト；アルデヒド；アジリジン；スクシンイミドキシカルボニル；活性化アシル基例えばカルボン酸ハロゲン化物；混合無水物等。
ベクター反応性基を含有する修飾ベクター分子と容易に反応し得る基、すなわち、例えばベクターをアルデヒドまたはカルボン酸に酸化することにより、上掲の表に記述した反応性基のような反応性基を含有するように修飾された反応性基を含有するベクターと容易に反応し得る基、この場合「連結基」はアミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、アリールヒドラジノ、カルバジド、セミカルバジド、チオカルバジド、チオセミカルバジド、スルフヒドリル、スルフヒドリルアルキル、スルフヒドリルアリール、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキシアルキルおよびカルボキシアリールから選択される反応性基から誘導することができる。前記連結基のアルキル部分は１乃至約20個の炭素原子を含有している。前記連結基のアリール部分は約６乃至約20個の炭素原子を含有している；および
反応性基を含有するベクターまたは上述した修飾ベクターに架橋剤を用いて連結し得る基。ある種の有用な架橋剤、例えばホモ二官能性およびヘテロ二官能性ゼラチン硬化剤、ビスエポキシドおよびビスイソシアネートの残基は架橋反応の過程で連結基の一部となっている。しかし、その他の有用な架橋剤は例えば消費性の触媒として架橋を容易に行うことができ、最終のコンジュゲートには存在していない。このような架橋剤の例には、米国特許第4,421,847号に開示されているカルボジイミドおよびカルバモイロニウム架橋剤および米国特許第4,877,724号のエーテルがあげられる。これらの架橋剤の場合、反応剤の一種例えばベクターはカルボキシ基を有していなければならず、またその他の反応剤例えば長鎖スペーサーは反応性アミン、アルコールまたはスルフヒドリル基を有していなければならない。アミド結合形成に当り、架橋剤はまず選択的にカルボキシ基と反応し、次にこのようにして「活性化された」カルボキシ基とアミン基との反応の過程で分割されてこのように共有結合している二つの部分の間にアミド結合を形成する。このアプローチの利点は、同様な部分の架橋例えばベクターとベクターとの架橋が回避されることにあり、これに対して例えばホモ二官能性架橋剤の反応は非選択的であり、所望しない架橋分子が得られる。
好適で有用な連結基は、例えばPierce Chemical Company Immunotechnology Catalog-Protein Modification Section,（1995および1996）に列挙されているような様々なヘテロ二官能性架橋試薬から誘導される。このような試薬の有用であって非限定的な例として次のものがあげられる：
Sulfo-SMCC    スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート
Sulfo-SIAB    スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート
Sulfo-SMPB    スルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート
2-IT          ２−イミノチオラン
SATA          Ｎ−スクシンイミジル Ｓ−アセチルチオアセテート
前掲の記述に加えて、連結基は全体または部分的にヌクレオチドおよびヌクレオチドの残基の相補的配列（天然および修飾両方）からなっていてもよいし、またそれらから誘導されてもよく、好ましくは非自己会合性オリゴヌクレオチド配列である。例えばアミンおよびスルフヒドリル基のような反応性官能基を含有する修飾ヌクレオチド部分をオリゴヌクレオチド配列に組み入れるための特に有用であって、非限定的な試薬は例えばClontech Laboratories Inc.（Palo Alto California）から商業上入手可能であり、これらの試薬にはUni-Link AminoModifier（カタログ＃5190）、Biotin-ON phosphoramidite（カタログ＃5191）、N-MNT-C6-AminoModifier（カタログ＃5202）、AminoModifier II（カタログ＃5203）、DMT-C6-3′Amine-ON（カタログ＃5222）、C6-ThiolModifier（カタログ＃5211）等があげられる。一つの特徴によれば、本発明の連結基は、例えば上述のClontech試薬（その一種または二種以上はオリゴヌクレオチド配列に組み入れられている）で入手可能であるアミンまたはスルフヒドリル基のような反応性官能基と例えば前述したベクター反応性基例えばヘテロ二官能性基とのベクター上での反応から誘導される。
二種の相補的オリゴヌクレオチド配列の一方をベクターにまた他方をレポーターに付着させることにより、得られた二本鎖ハイブリッドオリゴヌクレオチドはベクターとレポーターとの間に連結基を含むことになる。
リンカーとして役立つその他の重合体系には次のものがある：
ポリ（ＬまたはＤまたはDL−アミノ酸）＝タンパク質およびペプチド；天然または合成
プソイドポリ（アミノ酸）＝（非アミド結合により連結されたアミノ酸）
ポリ（ＬまたはＤまたはDL−ラクチド）およびコポリマー例えばポリ（Ｌ−ラクチド／DL−ラクチド）ポリ（グリコリド）
Ｌ−ラクチド／グリコリドコポリマー
ポリカプロラクトンおよびそのコポリマー
ポリ無水物
ポリ（オルトエステル）
ポリホスファゲン
長鎖の直鎖または分枝鎖脂質（およびりん脂質）
糖および炭水化物
オリゴヌクレオチド（前文参照）
ならびに上述したものの混合物。
本発明で使用される連結剤は一般にはある程度の特異性をもってベクター対レポーターまたはレポーター対レポーターの連結を生じ、そして治療上有効な薬剤の一種または二種以上を付着させるのに使用することもできる。
従って、本発明によれば、製品のベクター媒介使用説明と組み合わされた所望の部位への治療的薬物デリバリーのための手段が提供される。「治療的」または「薬物」とは、ヒト生体またはヒト以外の動物での特定の疾患に対する有益な効果を有する薬剤を意味する。
本発明に従って使用される治療的化合物は分子凝集体または微粒リンカーの内部にカプセル化されているか、または小胞リンカーのカプセル化された壁に付着されているか、または組み入れられていてよい。すなわち、治療的化合物は例えば共有またはイオン結合により表面の一部に連結されていてもよいし、または、特に薬物がカプセル化材料と同じ極性または溶解性を有しているときは、生体で作用を示す前に、製品から漏出しないようにカプセル化材料中に物理的に混和されていてもよい。薬物の放出は、単なる投与後血液と湿潤接触により、またはその他の内的または外的影響、例えば酵素により触媒されるか、またはレポーターが磁性粒子である場合磁力加熱の使用により触媒される解離プロセスの結果として、開始される。
治療的物質は、例えば上述のような適当な連結剤を用いて小胞リンカーのカプセル化膜表面に共有結合によって連結されていてよい。すなわち、例えば生分解性結合またはリンカーによって薬物が結合されているリン脂質誘導体をまず製造し、次にこの誘導体を上述のように小胞膜を製造するのに使用する材料に組み入れてもよい。あるいはまた、造影剤を最初に治療薬なしで製造し、次にこれを使用前に微粒（例えば小胞）剤にカップリングまたはコーティングしてよい。すなわち、例えば、治療薬を水性媒質中のリポソームの懸濁液に加え、そして治療薬をリポソームに付着または接着させるために振とうすることができる。
治療薬は例えば血管新生または腫瘍抑制に使用することが知られている薬物またはプロドラッグであってよい。
プロドラッグ活性化酵素を含有する本発明による剤を病理学的領域に標的設定をすることによって、酵素の標的設定を造影することができ、剤が適切に標的設定されている場合および剤が非標的領域から消失した場合に可視化させることができる。このようにして、プロドラッグを個々の患者に注射するための最適時間を定めることができる。
別の代替法は、同一微粒リンカーレポーターにプロドラッグ、プロドラッグ活性化酵素およびベクターをプロドラッグが何らかの外部刺激後に初めて活性化されるような方法で組み入れることである。このような刺激は所望の標的設定が達成された後の発色団レポーターの光による刺激または超常磁性レポーターの磁力加熱である。
所渭プロドラッグも本発明による剤で使用することができる。すなわち、薬物を誘導体としてそれらの物理化学的性質を変更し、そして本発明の造影剤に適合させることができる。このような誘導体とした薬物はプロドラッグとみなされ、誘導体としている基が開裂して活性形態の薬物を再生するまでは通常活性を示さない。
治療薬は本発明によって血管新生の部位に容易に送達される。
例示として、レポーターがキレート化金属種（例えば、常磁性金属イオンまたは金属放射性核種）である場合、リンカーは金属キレート化基に結合した鎖、分子主鎖の側鎖であるか、または分子主鎖に組み入れられている多数の金属キレート化基を有する重合体鎖、分枝末端に金属キレート化基を有する分枝ポリマー（例えばデンドリメリックポリキラント）等を包含していてよい。リンカーにとって必要なことは、適切な期間ベクター部分とレポーター部分とを一緒に結合させることにつきる。適切な期間とは、造影剤がその所望の効果を発揮するのに十分な期間例えば診断造影操作の過程でin vivoでのコントラストを増強するのに十分な期間を意味する。
すなわち、ある種の状況下では、リンカーが投与後に生分解するのが望ましいこともある。適切に生分解し得るリンカーを選定することにより、ベクターおよび（または）レポーターに対する生体分布（biodistribution）および生体除去（bioelimination）を変更させることができる。ベクターおよび（または）レポーターが生物活性を有しているか、または造影操作終了後も残存していると望ましくない効果を奏する可能性がある場合、ベクターおよび（または）レポーター部分の適切な生体除去または代謝性損傷を確実にする生分解性をリンカーでデザインするのが望ましい。すなわち、リンカーは、分解するとベクターからのレポーターの放出または巨大分子構造の破砕で生じる変更された生体分布パターンを有する分解産物を生成する生分解機能を含有していてよい。例として、キレート化金属イオンレポーターを担持するリンカーにとって、レポーターを含有する排出可能なキレート化合物を分解で放出する生分解機能をリンカーに組み入れることができる。従って、生分解機能を所望によりリンカー構造内に組み入れることができ、好ましくは、（ａ）分枝部位である部位で、（ｂ）ベクターまたはレポーターのための結合部位またはその近辺で、または（ｃ）生分解が生理学的に許容し得るか、または迅速に排出可能なフラグメントを生じるように組み入れることができる。
適当な生分解性官能基の例には、エステル、アミド、ジエステル（double ester）、リン酸エステル、エーテル、チオエーテル、グアニジル、アセタールおよびケタール官能基がある。
上述の如く、リンカー基は所望により、例えば水がキレート化常磁性金属イオンレポーターに到達するように造影剤の生体分布に影響を及ぼすか、または造影剤の適切な立体配座を確実にするその分子主鎖基に組み入れられていてよい。例示として、リンカー主鎖は部分的にまたは本質的に全体としてポリアルキレンオキシド鎖の一つまたは二つ以上からなっていてよい。
すなわち、リンカーは、リンカー主鎖（Lb）基を介して結合された場合によっては生分解性（Vb）およびレポーター結合（Rb）基の複合体とみなすことができ、ここでリンカー主鎖は生体分布を変更するためのリンカー側鎖（Lsc）基を担持することができ、またそれ自体で生分解性官能基を組み入れることができる。RbおよびVb結合基はリンカー主鎖からの側基であってもよいし、またリンカー主鎖の末端基であってもよく、例えば一つのLb末端基に一つのRbまたはVb基、RbまたはVb基は一緒に二つのLb末端基に連結し、または一つのLb末端基は二つまたはそれ以上のRbまたはVb基を担持している。LbおよびLsc基は好都合にはオリゴマー性または重合体性構造（例えば、ポリエステル、ポリアミド、ポリエーテル、ポリアミン、オリゴペプチド、ポリペプチド、オリゴ糖および多糖、オリゴヌクレオチド等）であり、好ましくは少なくとも一部が親水性または親油性の性状を有する構造、例えば親水性、両親媒性または親油性構造を有している。
リンカーは例えば2MDまでの低い、中程度のまたは高い分子量であってよい。一般に、多数のベクターまたはレポーターを組み入れなければならない場合、またはベクターとレポーターとの間に間隔をあけることが必要な場合、またはリンカー自体が生体分布の変更に当って役割を果たすべき場合、分子量のより高いリンカーが好ましい。しかし、一般には、リンカーは分子量100〜100 000Ｄ、殊に120Ｄ〜20kDである。
リンカーのベクターへのコンジュゲーションおよびリンカーのベクターへのコンジュゲーションは、上述の如く、いずれの適切な化学的接合技術、例えば共有結合（例えば、エステルまたはアミド形成）、金属キレート化またはその他の金属配位結合もしくはイオン結合であってよい。
適当なリンカーシステムの例には、US-A-5364613およびPCT／EP 90／00565のマグニファイア・ポリキラント構造、ポリアミノ酸（例えばポリリジン）、機能性PEG、多糖類、グリコサミノグリカン、例えばWO 93／06868およびAngew. Chem. Int. Ed. Engl. 29：138-175（1990）にTomalia等が記載のデンドリテイック（dendritic）ポリマー、例えばWO 94／08629、WO 94／09056およびWO 96／26754に記載のPEG−キラントポリマー等がある。
レポーターがキレート化金属イオンである場合、リンカー基は一般にはキラント部分を組み入れている。あるいはまた、キレート化金属は微粒レポーター上またはその中に担持されていてよい。いずれの場合にせよ、例えば放射性薬品およびMRI造影剤の分野で周知である通常の金属キレート基を使用することができる。例えば、線状、環状および分枝鎖状ポリアミノ−ポリカルボン酸およびリンオキシ酸同等物および当該分野で知られているその他の硫黄および（または）窒素リガンド、例えばDTPA、DTPA-BMA、EDTA、DO3A、TMT（例えばUS-A-5367080参照）、BATおよび類縁体（例えば、Ohmono等, J. Med. Chem. 35：157-162（1992）およびKung等, J. Nucl. Med. 25：326-332（1984））、NeuroliteのM2S2キラントECD、MAG（Jurisson等, Chem. Rev. 93：1137-1156（1993）参照）、HIDA、DOXA（１−オキサ−4,7,10−トリアザシクロドデカン三酢酸）、NOTA（1,4,7−トリアザシクロノナン三酢酸）、TETA（1,4,8,11−テトラアザシクロテトラデカン四酢酸）、THT4′−（３−アミノ−４−メトキシ−フェニル）−6,6″−ビス（N,N′−ジカルボキシメチル−Ｎ−メチルヒドラジノ）−2,2′：6′,2″−テルピリジン）等である。これに関して、例えばMR、Ｘ線および放射線診断剤での診断用金属のためのキレート化剤に関するSterling Winthrop, Nycomed（Nycomed ImagingおよびNycomed Salutarを含む）の特許文献を参照されたい。例えば、US-A-4647447、EP-A-71564、US-A-4687659、WO 89／00557、US-A-4885363およびEP-A-232751を参照。
レポーター
本発明の造影剤のレポーター部分はin vivo診断造影手法で直接または間接に検出し得るいずれの部分であってもよく、例えば検出可能な放射線を発するか、または発するようにされている部分（例えば放射性崩壊、蛍光励起、スピン共鳴励起等により）、局所電磁場に影響を及ぼす部分（例えば、常磁性、超常磁性、フェリ磁性または強磁性種）、放射エネルギーを吸収または拡散する部分（例えば、発色団および発蛍光団）、粒子（小胞含有液体を包含する）、重元素およびその化合物、および検出可能な物質を発生する部分等がある。
診断造影法で検出可能な非常に広い範囲の物質が当該分野で知られていて、そしてレポーターは使用される造影法に従って選択される。すなわち、例えば超音波造影については、エコー源物質またはエコー源物質を発生し得る物質が普通選択され、Ｘ線造影については、レポーターは一般には重原子（例えば、原子量38以上のもの）であるか、または重原子を含有し、MR造影については、レポーターは零でない核スピン同位元素（例えば19F）または不対電子スピンを有する物質であり、それ故常磁性、超常磁性、フェリ磁性または強磁性特性を有する物質であり、光造影については、レポーターは光散乱体（例えば、着色または非着色粒子）、光吸収体または光発生体であり、磁気造影については、レポーターは検出可能な磁気特性を有し、電気インピーダンス造影については、レポーターは電気インピーダンスに影響を及ぼし、またシンチグラフィー、SPECT、PET等については、レポーターは放射性核種である。
適当なレポーターの例は診断造影文献で広く知られている。例えば磁気酸化鉄粒子、キレート化常磁性金属（例えば、Gd、Dy、Mn、Fe等）である。例えば、US-A-4647447、PCT／GB 97／00067、US-A-4863715、US-A-4770183、WO 96／09840、WO 85／02772、WO 92／17212、PCT／GB 97／00459、EP-A-554213、US-A-5228446、WO 91／15243、WO 93／05818、WO 96／23524、WO 96／17628、US-A-5387080、WO 95／26205、GB 9624918.0等を参照。
レポーターとして特に好ましいのは次のようなものである：キレート化常磁性金属イオン例えばGd、Dy、FeおよびMn、特に大環状キラント基（例えば、テトラアザシクロドデカンキラント例えばDOTA、DO3A、HP-DO3Aおよびその類縁体）またはリンカーキラント基例えばDPTA、DTPA-BMA、EDTA、DPDP等でキレート化されている場合；金属放射性核種例えば90Y、99mTc、111In、47Sc、67/Ga、51Cr、177mSn、67Cu、157Tm、97Ru、188Re、177Lu、199Au、203Pbおよび141Ce；300〜1400nm、特に600nm〜1200nm、殊に650〜1000nmの吸収および（または）発光極大を有する発色団および発蛍光団；キレート化重金属クラスターイオン（例えば、ＷまたはMoポリオキソアニオンまたは硫黄または混合硫黄／酸素類縁体）；高原子番号（ヨウ素）または放射性原子例えば123I、131I等である共有結合非金属イオン；小胞を含有するヨウ素化化合物等である。
一般的に言うと、レポーターは（１）金属が高原子番号金属（例えば37よりも大きい原子番号）、常磁性種（例えば、遷移金属またはランタニド）または放射性同位元素である場合、キレート化可能な金属または多原子金属含有イオン、（２）不対電子サイト（例えば、永存遊離ラジカル中の酸素または炭素）、高原子番号非金属または放射性同位元素である共有結合非金属種、（３）高原子番号原子を含有するか、協同磁気挙動（例えば超常磁性、フェリ常磁性または強磁性）を示すか、または放射性核種を含有する多原子クラスターまたは結晶、（４）発色団（この用語には蛍光性またはリン光性である種が含まれる）、例えば無機または有機構造、特に錯体形成金属イオンまたは広い非局在化電子システムを有する有機基、または（５）例えば広い非局在化電子システムによって電気インピーダンス変動特性を有する構造または基であってよい。
特に好ましいレポーター群の例を以下にさらに詳しく記載する。
キレート化金属レポーター：金属放射性核種、常磁性金属イオン、蛍光性金属イオン、重金属イオンおよびクラスターイオン
好ましい金属放射性核種には、次のものがあげられる。90Y、99mTc、111In、47Sc、67Ga、51Cr、177mSn、67Cu、157Tm、97Ru、188Re、177Lu、199Au、203Pbおよび141Ce。
好ましい常磁性金属イオンには遷移およびランタニド金属（例えば、原子番号６〜９、21〜29、42、43、44または57〜71を有する金属）のイオンがあげられ、特にCr、Ｖ、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、YbおよびLu、殊にMn、Cr、Fe、GdおよびDy、さらに殊にGdのイオンがあげられる。
好ましい蛍光性金属イオンにはランタニド、特にLa、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、YbおよびLuがあげられる。Euが殊に好ましい。
好ましい重金属含有レポーターには、Mo、Bi、SiおよびＷの原子があげられ、特にWO 91／14460、WO 92／17215、WO 96／40287およびWO 96／22914に記載の多原子クラスターイオン（例えば、Bi化合物およびＷおよびMo酸化物）であってよい。
金属イオンは望ましくはリンカー部分上のまたは粒子中もしくは粒子上のキラント基でキレート化されていてよく（例えば、小胞または多孔性もしくは非多孔性無機または有機固体）、特に、線状、大環状、テルピリジンおよびN2S2キラント例えばDTPA、DTPA-BMA、EDTA、DO3A、TMTである。適当なキラント基のその他の例はUS-A-4647447、WO 89／00557、US-A-5367080、US-A-5364613等に記載されている。
リンカー部分または粒子はこのようなキラント基の一種または二種以上を含有し、また所望により二種以上の金属種で金属化されていてよい（例えば、異なった造影法で検出可能なレポーターを提供するように）。
金属が非放射性である場合は特に、ポリキラントリンカーまたは粒子状レポーターを使用するのが好ましい。
本文に記載のキラントまたはキレート基は、金属イオンまたは多原子イオン（例えばTcO）を錯体化し得る種々のキレート化剤の一種または二種以上の残基を包含していてよい。
周知の如く、キレート化剤は、金属原子との配位結合により結合してキレート錯体またはキレートと称する環状構造を形成し得る供与体原子を含有する化合物である。この組の化合物はKirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology, Vol.5, 339-368に記載されている。
適当なキレート化剤の残基は次のものから選択することができる。ポリホスフェート、例えばトリポリリン酸ナトリウムおよびヘキサメタリン酸；アミノカルボン酸例えばエチレンジアミン四酢酸、Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチレンジアミン三酢酸、ニトリロ三酢酸、N,N−ジ（２−ヒドロキシエチル）グリシン、エチレンビス（ヒドロキシフェニルグリシン）およびジエチレントリアミン五酢酸；1,3−ジケトン例えばアセチルアセトン、トリフルオロアセチルアセトン、およびテノイルトリフルオロアセトン；ヒドロキシカルボン酸例えば酒石酸、クエン酸、グルコン酸、および５−スルホサリチル酸；ポリアミン、例えばエチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、およびトリアミノトリエチルアミン；アミノアルコール例えばトリエタノールアミンおよびＮ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン；芳香族複素環式塩基、例えば2,2′−ジイミダゾール、ピロリンアミン、ジピロリンアミンおよび1,10−フェントロリン；フェノール、例えばサリチルアルデヒド、ジスルホピロカテコールおよびクロモトロプ酸；アミノフェノール例えば８−ヒドロキシキノリンおよびオキシムスルホン酸；オキシム、例えばジメチルグリオキシムおよびサリチルアルドキシム；近接キレート化官能基を含有するペプチド例えばポリシステイン、ポリヒスチジン、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、またはこれらのアミノ酸の組み合わせ；シッフ塩基例えばジサリチルアルデヒド、1,2−プロピレンジイミン；テトラピロール例えばテトラフェニルポルフィンおよびフタロシアニン；硫黄化合物、例えば、トルエンジチオール、メソ−2,3−ジメルカプトコハク酸、ジメルカプトプロパノール、チオグリコール酸、エチルキサント酸カリウム、ジエチルジチオカルバミン酸ナトリウム、ジチゾン、ジエチルジチオリン酸およびチオ尿素；合成大環状化合物、例えばジベンゾ〔18〕クラウン−６、（CH3）6-〔14〕-4,11〕−ジエン−N4、および（2.2.2−クリプテート）；ホスホン酸例えばニトリロトリメチレンホスホン酸、エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）およびヒドロキシエチリデンジホスホン酸、または上述した薬剤の２種以上の組み合わせ。適当なキレート化剤の残基は好ましくはポリカルボン酸基を包含し、そして好ましい例には、次のものが包含される：エチレンジアミン−N,N,N′,N′−四酢酸（EDTA）；N,N,N′,N″,N″−ジエチレン−トリアミン五酢酸（DTPA）；1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−N,N′,N″,N″′−四酢酸（DOTA）；1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−N,N′,N″−三酢酸（DO3A）；１−オキサ−4,7,10−トリアザシクロドデカン−N,N′,N″−三酢酸（OTTA）；トランス（1,2）−シクロヘキサノジエチレン−トリアミン五酢酸（CDTPA）。
キレート化剤のその他の適当な残基は米国特許第5078985号に記載の如く例えばテクネチウムおよびレニウムのような金属のキレート化のために変性されたタンパク質を包含している。この米国特許の記載を参照により本文に組み入れる。
キレート化剤の適当な残基は、例えば、次の米国特許に記載されているようなN3SおよびN2S2含有化合物からも誘導される：米国特許第4444690；4670545；4673562；4897255；4965392；4980147；4988496；5021556および5075099号。
キレート化剤のその他の適当な残基はPCT／US 91／08253に記載され、この記載を参照により本文に組み入れる。
好ましいキレート化基は、２−アミノメチルピリジン、イミノ酢酸、イミノ二酢酸、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）、ジエチレントリアミン五酢酸（DTPA）、1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸（DOTA）、カルボニルイミノ二酢酸、メチレンイミノ酢酸、メチレンイミノ二酢酸、エチレンチオエチレン−イミノ酢酸、エチレンチオエチレンイミノ二酢酸、TMT、テルピリジニル基、テルピリジル基およびカルボキシメチルアミノ基からなるキレート化剤、または上述した酸のいずれかの塩からなる群から選択される。殊に好ましいキレート化基はDTPA、DTPA-BMA、DPDP、TMT、DOTAおよびHPDO3Aである。
代表的なキレート化基はUS 5559214 A、WO 9526754、WO 9408624、WO 9409056、WO 9429333、WO 9408624、WO 9408629 A1、WO 9413327 A1およびWO 9412216 A1にも記載されている。
存在しているいずれのキレート化剤を金属化する方法は当業者の技術水準内にある。金属は三種の一般的方法：すなわち、直接組み込み、鋳型合成および（または）金属交換反応のいずれか一つによりキラント部分に組み込むことができる。直接組み込みが好ましい。
すなわち、金属イオンが、例えばキレート剤含有部分の水溶液を好ましくは約４〜約11のpH領域を有する水溶液中の金属塩に単に曝すか、またはそれと混合することによって、キレート化剤と容易に錯体形成するのが望ましい。塩はいずれの塩であってもよいが、好ましくは塩は金属の水溶性塩例えばハロゲン塩であり、そしてさらに好ましくはこのような塩は金属イオンとキレート化剤との結合を妨害しないように選択する。キレート化剤含有部分は好ましくは約５〜約９、さらに好ましくは約６〜約８のpHの水溶性中にある。キレート化剤含有部分は緩衝剤塩例えばクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩およびホウ酸塩と混和して最適pHを生じることができる。好ましくは、緩衝剤塩はその次の金属イオンがキレート化剤に結合するのを妨害しないように選択される。
診断造影では、ベクター・リンカー・レポーター（VLR）構成体は好ましくはこのような診断造影適用に当り有効な金属放射性核種イオン対キレート化剤の比を含有している。好ましい態様では、キレート化剤当りの金属イオンのモル比は約１：1,000乃至約１：１である。
放射線治療の適用においては、VLRは好ましくはこのような治療の適用で有効な金属放射性核種イオン対キレート化剤の比を含有している。好ましい態様において、キレート剤当りの金属イオンのモル比は約１：100乃至約１：１である。放射性核種は例えばSc、Fe、Pb、Ga、Ｙ、Bi、Mn、Cu、Cr、Zn、Ge、Mo、Ru、Sn、Sr、Sm、Lu、Sb、Ｗ、Re、Po、TaおよびTlの放射性同位元素から選択することができる。好ましい放射性核種には44Sc、64Cu、67Cu、212Pb、68Ga、90Y、153Sm、212Bi、186Reおよび188Reが包含される。これらのうち、90Yが殊に好ましい。これらの放射性同位元素は原子形態であり、好ましくはイオン性である。
以下の同位元素または同位元素対は、放射性同位元素標識法またはキレート化剤を変更することなく、造影および療法の双方に使用することができる：47Sc21; 141Ce58; 188Re75; 177Lu71; 199Au79; 47Sc21; 131I53；67Cu29; 131I53および123I53; 188Re75および99mTc43; 90Y39および87Y39；47Sc21および44Sc21; 90Y39および123I53; 146Sm62および153Sm62；および90Y39および111In49。
リンカー部分が単一のキラントを含有している場合、このキラントは例えばベクターでアミン基、チオール基またはヒドロキシ基とエステル、アミド、チオエステルまたはチオアミド結合を形成し得るキラントの金属配位基の一つを介して、ベクター部分に直接連結されていてよい。あるいはまた、ベクターとキラントとはキラント主鎖に連結している官能基、例えば、Meares等がJACS 110：6266-6267（1988）に提案しているようなDOTAの環炭素に連結しているCH2−フェニル−NCS基を介して直接連結されていてもよいし、またはホモまたはヘテロ二官能性リンカー例えばビスアミン、ビスエポキシド、ジオール、二酸、二官能基化PEG等を介して間接的に連結されていてもよい。この場合、二官能基性リンカーは好都合にはベクターとキラント残基との間に１〜200個、好ましくは３〜30個の原子の鎖を提供する。
リンカー部分は多数のキラント基を含有する場合、リンカーは好ましくは次の式の部分であるか、またはこれらの部分を含有している。
0004993419.tif 000053
ここで、Chはキラント部分であり、そしてLiはリンカー主鎖成分であり、すなわちリンカーは好ましくは側鎖キラント、主鎖内キラントもしくは末端キラントまたはこれらの組み合わせを有している。側鎖および主鎖内重合体性構造は分枝鎖であってもよいが、さらに好ましくは線状であり、そして重合体中の反覆単位（LiCh）またはその他の反覆単位は主鎖内または側鎖生物分布修飾基例えばWO 94／08629、WO 94／09056およびWO 96／20754におけるようなポリアルキレン基を有していてよい。WO 93／06868におけるようなデンドリティック重合体であってよい末端キラント構造Li（Ch）nはキラントか占めていない末端に連結された生物分布を有していてよく、またWO 95／28966におけるようなリンカー構造内に生分解促進部位を有していてもよい。
ポリキラントリンカー内のキラント部分はキラントの主鎖官能化を介して、またはキラントの金属配位基の一種または二種以上を利用することにより、または例えばPCT／EP 96／00565のポリリジン−ポリDTPA、ポリリジン−ポリDOTAおよび所渭マグニファイアー（magnifier）ポリキラントにおけるように、酸キラントとアミンまたはヒドロキシ担持リンカー主鎖との間のアミドまたはエーテル結合形成により連絡されていてよい。このようなポリキラントリンカーは直接（例えば、ポリキラントリンカー中のアミン、酸またはヒドロキシ基を利用して）またはモノキラントリンカーについて前述したように二官能性リンカー化合物を介してベクター基の一つまたは二つ以上に共役されていてよい。
キレート化された種が微粒（または分子凝集体例えば小胞体）リンカーで担持されている場合、キレートは例えば粒子内に封入されている非連結モノまたはポリキレート（例えばGd DTPA-BMAまたはGd HP-DO3A）であってよいか、またはキレートは共有結合により、または小胞の膜とモノ／ポリキレート上の定着基（例えば、親油性基）の相互作用により粒子に共役されたモノまたはポリキレートであってよい（例えば、PCT／GB 95／02378を参照）。
非金属原子レポーター
好ましい非金属原子レポーターには、例えば123Iおよび131Iのような放射性同位元素、および例えば19Fのような零でない核スピン原子およびＩのような重金属原子が包含される。
このようなレポーター、好ましくは例えば２〜200のような多数のレポーターは通常の化学合成技術を用いて、またはトリヨードフェニル基のような支持基を介してリンカー主鎖に共有結合されている。
本発明の態様では、ヨウ素の放射性同位元素の使用が具体的に企図されている。例えば、ベクターまたはリンカーが共有結合形成反応においてヨウ素で化学的に置換されている置換分例えばヒドロキシフェニル官能基を含有する置換分からなる場合、このような置換分はヨウ素の放射性同位元素で当該分野で周知の方法によって標識されている。ヨウ素体（species）は治療的および診断造影適用で使用することができる。同時に、同じベクター・リンカーでのキレート化剤中の金属は治療的または診断造影適用で使用することもできる。
上述した金属キレートによる如く、このような金属原子レポーターはリンカーに連結してもよいし、また例えば小胞のような微粒リンカー中または上に担持されていてもよい（WO 95／26205およびGB 9624918.0を参照）。
金属レポーターに関連して上述したタイプのリンカーは非金属原子レポーターに使用することもでき、かかるレポーターを担持する非金属原子レポーターまたは基はキラント基の若干または全体の場を占めている。
有機の発色団又は発蛍光団レポーター
好適な有機の発色団又は発蛍光団レポーターには、広範な非局在電子系を有するグループ、例えば、シアニン、メロシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、及び分子内又は分子間電荷移動色素及び色素錯体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）錯体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）錯体、ヨードアニリン色素、ビス（S,O−ジチオレン）錯体、等が含まれる。好適な有機又は金属化有機発色団の例が、“Topics in Applied Chemistry: Infrared absorbing dyes”（Ed. M. Matsuoka, Plenum, NY 1990）、“Topics in Applied Chemistry: The Chemistry and Application of Dyes”（Waring等, Plenum, NY, 1990）、“Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals”（Haugland, Molecular Probes Inc, 1996）、DE-A-4445065、DE-A-4326466、JP-A-3/228046、NarayananらのJ. Org. Chem. 60: 2391-2395（1995）、LipowskaらのHeterocyclic Comm. 1: 427-430（1995）、FabianらのChem. Rev. 92: 1197（1992）、WO96/23525、StrekowskaらのJ. Org. Chem. 57: 4578-4580（1992）、WO（Axis）及びWO 96／17628の文献に見出される。使用できる発色団の特定の例として、キシレンシアノール、フルオレセイン、ダンシル、NBD、インドシアニングリーン、DODCI、DTDCI、DOTCI及びDDTCIが含まれる。
特に好ましくは、ヘモグロビン吸収との干渉を避けるため、吸収極大が600〜1000nmの範囲を有するグループである（例えば、キシレンシアノール）。
さらに、そのような例として以下のものが含まれる。
シアニン色素：ヘプタメチンシアニン色素のような、例えば前掲文献Matsuokaの第26頁の表IIに記載された下記4a〜4gの化合物
0004993419.tif 000054
〔４ａ：ＹはＳ、ＸはＩ、ＲはEt
４ｂ：ＹはＳ、ＸはClO4、ＲはEt
４ｃ：ＹはCMe2、ＸはＩ、ＲはMe
４ｄ：ＹはCMe2、ＸはClO4、ＲはMe
４ｅ：ＹはCH＝CH、ＸはＩ、ＲはEt
４ｆ：ＹはCH＝CH、ＸはBr、ＲはEt
４ｇ：ＹはCH＝CH、ＸはClO4、ＲはEtである〕
並びに、前掲文献Matsuokaの第28頁の表IIIに記載された化合物、すなわち、
0004993419.tif 000055
〔ここで、ＹがＯのとき、ＸはＩ、ＲはMe、ＹがCMe2のとき、ＸはＩ、ＲはMe、ＹがＳのとき、ＸはBr、ＲはEｔである〕。
カルコゲノピリロメチン色素としては、例えば前掲文献Matsuokaの第31頁の化合物12、すなわち、
0004993419.tif 000056
〔ここで、ＹはTe、Se、Ｏ又はNRである〕である。
モノカルコゲノピリロメチン色素としては、例えば前掲文献Matsuokaの第31頁の化合物13、すなわち、
0004993419.tif 000057
〔ここで、ｎは１又は２である〕である。
ピリリウム色素としては、例えば前掲文献Matsuokaの第32頁の化合物14（Ｘ＝Ｏ）、すなわち、
0004993419.tif 000058
〔ここで、ＸはＯ、Ｓ、又はSeである〕である。
チアピリリウム色素としては、例えば前掲文献Matsuokaの第32頁の化合物15及び第167頁の化合物I、すなわち、
0004993419.tif 000059
〔ここで、ｎは１又は２である〕である。
スクアリリウム色素としては、例えば前掲文献Matsuokaの第30頁の化合物10および表IV、すなわち、
0004993419.tif 000060
〔ここで、ＸがCH=CHのとき、ＹはＨ及びＲはEt、ＸがＳのとき、ＹはＨ及びＲはEt、及びＸがCMe2のとき、ＹはＨ及びＲはMeである〕
並びに前掲文献Matsuokaの第26頁の化合物６であり、すなわち、
0004993419.tif 000061
〔ここで、ＸはCH=CH、ＹはＨ、及びＲはEtである〕である。
クロコニウム色素としては、例えば前掲文献Matsuokaの第30頁の化合物９および表IV、すなわち、
0004993419.tif 000062
〔ここで、ＸがCH=CHのとき、ＹはＨ及びＲはEt、ＸがＳのとき、ＹはＨ及びＲはEt、ＸがＳのとき、ＹはＨ及びＲはEt、ＸがCMe2のとき、ＹはＨ及びＲはMeである〕
並びに前掲文献Matsuokaの第26頁の化合物７、すなわち、
0004993419.tif 000063
〔ここでＸはCH=CH、ＹはＨ、及びＲはEtである〕である。
アズレニウム色素としては、例えば前掲文献Matsuokaの第27頁の化合物８、すなわち、
0004993419.tif 000064
である。
メロシアニン色素としては、例えば前掲文献Matsuokaの第32頁の化合物16（Ｒ＝Me）、すなわち、
0004993419.tif 000065
である。
インドアニリン色素は、インドアニリン色素の銅やニッケルとの錯体のようなもので、例えば前掲文献Matsuokaの第63頁の化合物６、すなわち、
0004993419.tif 000066
〔ここでＲがEtのとき、R′はMe、ＭはCu、ＲがEtのとき、R′はMe、ＭはNi、ＲがMeのとき、R′はＨ、ＭはCu又はＲがMeのとき、R′はＨ、ＭはNiである〕である。
ベンゾ〔ａ〕フェノキサジニウム色素及びベンゾ〔ａ〕フェノチアジニウム色素としては、例えば前掲文献Matsuokaの第201頁に示されるようなもの、すなわち、
0004993419.tif 000067
〔ここでＸはＯ又はＳである〕である。
1,4−ジアミノアントラキノン（Ｎ−アルキル）−3′−チオキソ−2,3−ジカルボキシイミドとしては、例えば前掲文献Matsuokaの第41頁の化合物20、すなわち、
0004993419.tif 000068
である。
インダンスレン顔料は、例えば、
0004993419.tif 000069
である（前掲Matsuokaの第41頁の化合物21参照）。
２−アリールアミノ−3,4−フタロイルアクリドン色素は、例えば、前掲Matsuokaの第41頁の化合物22、
0004993419.tif 000070
である。
トリスフェノキノン色素は、例えば前掲Matsuokaの第41頁の化合物23、
0004993419.tif 000071
である。
アゾ色素、例えばモノアゾ色素は、前掲Matsuokaの第90頁の化合物２、すなわち、
0004993419.tif 000072
〔ここでＸがCH=C（CN）2のとき、R1とR2はEｔ、R3とR4はＨ、ＸがC（CN）=C（CN）2のとき、R1とR2はEt、R3とR4はＨ、又はＸが
0004993419.tif 000073
である場合は、ＹがC=Oのとき、R1とR2はEt、R3とR4はＨであり、またはＹがSO2のとき、R1はＨ、R2はCH（Me）nBu、R3はOMe、R4はNHAcである〕である。
アゾ色素、例えばポリアゾ色素としては、前掲Matsuokaの第91頁の化合物５、すなわち、
0004993419.tif 000074
である。
分子内電荷移動供与体−アクセプター赤外色素は、例えば前掲Matsuokaの第91頁の化合物６と７、すなわち、
0004993419.tif 000075
である。
非ベンゼン系芳香族色素は、例えば前掲Matsuokaの第92頁の化合物８、トロポンであり、すなわち、
0004993419.tif 000076
である。
テトラジンラジカル色素は、例えば前掲Matsuokaの第92頁の化合物９、すなわち、
0004993419.tif 000077
〔ここで、Ｘはｐ−フェニレン又はＸはｐ−テルフェニレンである〕
または前掲Matsuokaの第92頁の化合物10、すなわち、
0004993419.tif 000078
〔ここで、Ｘはｐ−ビフェニルである〕である。
テトラジンラジカル色素のカチオン塩は、例えば前掲Matsuokaの第92頁の化合物11、すなわち、
0004993419.tif 000079
〔ここで、Ｘはｐ−フェニレンである〕である。
供与体−アクセプター分子間電荷移動色素は、例えば前掲Matsuokaの第93頁の化合物13ｂ及び14ａから14ｃのCT錯体、すなわち、
0004993419.tif 000080
〔ここで、供与体中のＸがCH=N-N（Ph）2である場合、アクセプター中でａ）ＹはCN、ＺはNO2、ｂ）ＹはCN、ＺはＨ、又はｃ）ＹはCl、ＺはNO2である〕である。
アントラキノン色素は、例えば前掲Matsuokaの第38頁の化合物12（ＸはＳ又はSe）、すなわち、
0004993419.tif 000081
〔ここで、ＸはＳ又はSeであり、Ｙはテトラクロロ、テトラブロモ、2,3−ジカルボン酸、2,3−ジカルボン酸無水物又は2,3−ジカルボン酸Ｎ−フェニルイミドである〕である。
ナフトキノン色素は、例えば前掲Matsuokaの第37頁の化合物２、３及び４、すなわち、
0004993419.tif 000082
である。
金属化アゾ色素は、ニッケル、コバルト、銅、鉄及びマンガンを含むようなアゾ色素である。
フタロシアニン色素は、例えば前掲Matsuokaの第51頁の表IIの化合物１、すなわち、
0004993419.tif 000083
である。
ナフタロシアニン色素は、例えば前掲Matsuokaの第51頁の表IIの化合物３、すなわち、
0004993419.tif 000084
である。
金属フタロシアニンは、例えばアルミニウム、シリコン、ニッケル、亜鉛、鉛、カドミウム、マグネシウム、バナジウム、コバルト、銅、及び鉄を含有するフタロシアニンであり、例えば前掲Matsuokaの第52頁の表IIIの化合物１、例えば、
0004993419.tif 000085
〔ここで、例えばＭはMgである〕である。
金属ナフタロシアニンは、例えばアルミニウム、亜鉛、コバルト、マグネシウム、カドミウム、シリコン、ニッケル、バナジウム、鉛、銅、及び鉄を含有するナフタロシアニンであり、前掲Matsuokaの第52頁の表IIIの化合物３に見出される、例えば、
0004993419.tif 000086
〔ここで、例えばＭはMgである〕である。
ビス（ジチオレン）金属錯体は、ニッケル、コバルト、銅及び鉄のような金属イオンがビス（S,S′−２座）配位子錯体中の4個の硫黄原子に配位されてなるものであり、例えば、前掲Matsuokaの第59頁の表Iに見出される
0004993419.tif 000087
〔ここで、
R1とR2はCF3、ＭはNi、
R1とR2はフェニル、ＭはPd、
R1とR2はフェニル、ＭはPt、
R1は炭素数が４〜10のアルキル、R2はＨ、ＭはNi、
R1は炭素数が４〜10のアルキル、R2はＨ、ＭはPd、
R1は炭素数が４〜10のアルキル、R2はＨ、ＭはPt、
R1とR2はフェニル、ＭはＮｉ、
R1とR2はｐ−CH3−フェニル、ＭはNi、
R1とR2はｐ−CH3O−フェニル、ＭはNi、
R1とR2はｐ−Cl−フェニル、ＭはNi、
R1とR2はｐ−CF3−フェニル、ＭはNi、
R1とR2は3,4,−ジCl−フェニル、ＭはNi、
R1とR2はｏ−Cl−フェニル、ＭはNi、
R1とR2はｏ−Br−フェニル、ＭはNi、
R1とR2は3,4,−ジCl−フェニル、ＭはNi、
R1とR2はｐ−CH3、ＭはNi、
R1とR2は２−チエニル、ＭはNi、
R1はｐ−（CH3）2N−フェニル、R2はフェニル、ＭはNi、及び
R1はｐ−（CH3）2N−フェニル、R2はｐ−H2N−フェニル、ＭはNiである〕である。
ビス（ベンゼンジチオレート）金属錯体は、ニッケル、コバルト、銅、及び鉄などの金属イオンが配位子錯体中の4個の硫黄原子に配位されてなり、例えば、前掲Matsuokaの第62頁の表IIIに見出される、すなわち、
0004993419.tif 000088
〔ここで、
Ｘはテトラメチル、ＭはNi、
Ｘは4,5−ジメチル、ＭはNi、
Ｘは４−メチル、ＭはNi、
Ｘはテトラクロロ、ＭはNi、
ＸはＨ、ＭはNi、
Ｘは４−メチル、ＭはCo、
Ｘは４−メチル、ＭはCu、及び
Ｘは４−メチル、ＭはFe〕
である。
N,O−２座インドアニリン色素は、ニッケル、コバルト、銅及び鉄などの金属イオンが二つのN,O−２座インドアニリン配位子中の２個の窒素原子と２個の酸素原子に配位されてなり、例えば前掲Matsuokaの第63頁の表IVの化合物６、例えば
0004993419.tif 000089
〔ここで、
ＲはEt、R′はMe、ＭはCu、
ＲはEt、R′はMe、ＭはNi、
ＲはMe、R′はＨ、ＭはCu、及び
ＲはMe、R′はＨ、ＭはNiである〕
である。
ビス（S,O−ジチオレン）金属錯体は、ニッケル、コバルト、銅及び鉄などの金属イオンがビス（S,O−２座）配位子錯体中の２個の硫黄原子と２個の酸素原子に配位されてなり、例えば米国特許第3,806,462号に見出される、
0004993419.tif 000090
である。
ａ−ジイミン−ジチオレン錯体は、ニッケル、コバルト、銅及び鉄などの金属イオンが混合S,S−及びN,N−２座ジリガンド錯体中の２個の硫黄原子と２個のイミノ窒素原子に配位されてなり、例えば、前掲Matsuokaの第180頁の表IIの下から２番目に見出され（同様に、日本国特許62／39,682、63／126,889及び63／139,303参照）、例えば、
0004993419.tif 000091
である。
そして、トリス（ａ−ジイミン）錯体は、金属イオンがトリリガンド錯体中の６個の窒素原子に配位されてなり、例えば、前掲Matsuokaの第180頁の表IIの最後の化合物に見出され（同様に、日本国特許61／20,002及び61／73,902参照）、例えば、
0004993419.tif 000092
である。
可視色素の代表的な例としては、フルオレセイン誘導体、ローダミン誘導体、クマリン、アゾ色素、金属化可能な色素、アントラキノン色素、ベンゾジフラノン色素、多環式芳香族カルボニル色素、インジゴイド系色素、ポリメチン色素、アザカルボシアニン色素、ヘミシアニン色素、バルビツエート、ジアザヘミシアニン色素、ストリル色素、ジアリールカルボニウム色素、トリアリールカルボニウム色素、フタロシアニン色素、キノフタロン色素、トリフェノジオキサジン色素、ホルマザン色素、メチレンブルー、アズレＡ、アズレＢ及びアズレＣのようなフェノチアジン色素、オキサジン色素、チアジン色素、ナフトラクタム色素、ジアザヘミシアニン色素、アゾピリドン色素、アゾベンゼン色素、媒染染料、酸性色素、塩基性色素、金属化及びプレ金属化色素、キサンテン色素、直接染料、前駆体ロイコ色素の色調が変換されて深い色調の色素を製造するため酸化が可能であるロイコ色素、及びWaring, D. R.とHallas, G.らの“Topics in Applied Chemistry: The Chemistry and Application of Dyes”（Plenum Press, New York, NY, 1990）に挙げられた他の色素である。補足すべき色素は、Haugland, R. P. の“Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals”（Sixth Edition, Molecular Probes Inc, Eugene OR, 1996）に見出される。
かかる発色団又は発蛍光団は、ベクターに直接共有結合的に連結していても、或いは、リンカー構造に連結するか組み込まれていてもよい。金属レポーターに関連して上記したタイプのリンカーは、再度、発色団又は発蛍光団がキラントグループのいくつか又は全部の代わりをするように有機の発色団又は発蛍光団のために使用される。
既述した金属キラントに伴って、発色団又は発蛍光団は、粒状のリンカー部分に取り込まれて又は付着して、例えば小胞に取り込まれ若しくは小胞中に付着して、又は光散乱レポーターとしても機能しうる不活性のマトリックス粒子に共有結合的に連結されて担持される。
粒子状レポーターまたはリンカーレポーター
粒子状レポーターおよびリンカーレポーターは一般に２つのカテゴリーすなわちレポーターを担持または含むマトリックスまたはシェルからなるものおよび粒子マトリックスそれ自体がレポーターであるものに分類される。第１のカテゴリーの例は、コントラストに有効なレポーター例えばキレート化常磁性金属または放射性核種または水溶性ヨウ素化Ｘ線造影剤を含む液相または固相を含有する小胞（例えば、ミセルおよびリボソーム）；レポーターの入った多孔性粒子、例えば常磁性金属の入ったモレキュラーシーブ粒子；および例えばレポーターが結合または被覆された不活性な生体許容可能なポリマーの固体粒子例えば染料入りポリマー粒子である。
第２カテゴリーの例は、有機または無機光散乱粒子、磁性粒子（すなわち、超常磁性（super paramagnetic）、強磁性またはフェリ磁性粒子）および染料粒子である。
好適な粒子状レポーターまたはレポーターリンカーには、超常磁性粒子（US-A-4770183、PCT／GB 97／00067、WO 96／09840などを参照）、エコー発生性小胞（WO 92／17212、PCT／GB 97／00459などを参照）、ヨウ素含有小胞（WO 95／26205およびGB 9624918.0参照）および染料の入ったポリマー粒子（WO 96／23524参照）がある。
粒子状レポーターはその表面に直接または間接的に結合した１種またはそれ以上のベクターを有していてもよい。一般に、粒子当たり複数（例えば、２〜50）のベクター部位が結合していることが好ましい。所望の標的ベクターの他に、流れ減速ベクターが粒子に結合していることが特に好都合である。すなわち、造影剤の毛細血管または標的器官への通過を遅延させるのに十分であるがそれ自体では造影剤を不動にするのに不十分な、毛細管ルーメンまたはその他の器官の表面に対する親和性を有するベクターが好都合である。さらに、そのような流れ減速ベクター（例えば、GB 9700699.3に記載）は、その標的サイトにいったん結合されると造影剤を固定する役目をする。
ベクターと粒子の結合が達成される手段は、粒子表面の性質に依存する。無機粒子の場合、粒子への結合は例えばベクター上またはベクターに結合したリンカー上の金属結合基（例えば、ホスフェート、ホスホネートまたはオリゴまたはポリホスフェート基）間の相互作用によるかもしれない。有機粒子（例えば、ポリマー粒子）の場合、ベクターの結合は粒子表面上の基とベクター中の反応性基例えばアミドまたはエステル結合との間の直接共有結合によるか、あるいはベクターおよび粒子のリンカーへの共有結合によるかもしれない。キレート化金属レポーターに関して上述したタイプのリンカーを用いてもよいが、一般にそれらのリンカーは粒子同士を結合するために用いられないであろう。
非固体粒子例えば小滴（例えば、US-A-5318767、US-A-5451393、US-A-5352459およびUS-A-5569448に記載されているような水不溶性ヨウ素化液体の小滴）および小胞の場合、リンカーは疎水性「アンカー」基例えば粒子表面を浸透しかつベクターを粒子に結合する飽和または不飽和C12-30鎖を含有するのが好都合である。したがって、リン脂質小胞の場合、リンカーはベクターを小胞膜と適合し得るリン脂質と共有結合により結合させるのに役立つかもしれない。小胞および無機粒子に結合するリンカーの例は、GB 9622368.0およびPCT／GB 97／00067に記載されている。
ベクターの他に、その他のもの、例えば安定剤（凝集防止）およびPEGのような生体内分布モディファイアを粒子表面に結合させてもよい。そのようなものは例えばPCT／GB 97／00067、WO 96／09840、EP-A-284549およびUS-A-4904479に論述されている。
本発明のＶ−Ｌ−Ｒ剤は、レポーターに直接または間接的に結合された受容体標的ベクターを有していることが好ましく、例えば上記ベクターは共有結合されたヨウ素ラジオアイソトープによって、粒子状レポーターまたはリンカーレポーター例えば超常磁性結晶（場合により、例えばPCT／GB 97／00067のように被覆されている）または小胞例えばヨウ素化造影剤含有ミセルまたはリボソームに直接または有機リンカー基を介して結合した金属キレートによって結合されている。
簡単に云えば、MRI、Ｘ線、光画像形成、核画像形成、磁気断層撮影および電気インピーダンス断層撮影の画像様式の場合、好ましいレポーターは下記の通りである。
MRIの場合：超常磁性酸化鉄粒子、通常約80nmより小さい粒子サイズを有するもの。特に、高分子電解質、PEG、澱粉および加水分解殿粉のような種々の被覆材で被覆された酸化鉄が好ましい。キレートと粒子状物質の両方を含有する常磁性金属物質も有用である。
光画像形成の場合：任意の光画像形成用レポーター基。近赤外域で吸収する物質に集中すべきである。
核医学の場合：99Tcまたは111Inならびに123I、125I、131I、75Brまたは77Brのような放射線標識ハロゲン置換基を有する直接放射線標識ベクターからなる放射性キレート。
磁気断層撮影の場合：上述した超常磁性酸化鉄粒子。
電気インピーダンス断層撮影の場合：多イオン性種例えば繰返し単位にイオン性基を有するポリマー。
本発明の剤は特定の画像形成技術を用いて所望のコントラストを得るのに十分な量で画像用として患者に投与してもよい。レポーターが金属の場合、通常患者の体重１kg当り0.001〜5.0mmolの画像形成用キレート化金属イオンの投与量が十分なコントラスト強化を得るのに有効である。大抵のMRI適用に好適な画像形成用金属イオンの投与量は体重１kg当り0.02〜1.2mmolの範囲であるが、Ｘ線適用の場合は体重１kg当り0.05〜2.0mmolの投与量が通常Ｘ線減衰を達成するのに有効である。大抵のＸ線適用に好適な投与量は体重１kg当り0.1〜1.2mmolのランタナイドまたは重金属化合物である。レポーターが放射性核種の場合、通常70kgの体重当り0.01〜100mCi好ましくは0.1〜50mCiの投与量で十分である。レポーターが超常磁性粒子の場合、投与量は通常体重１kg当り0.5〜30mgのFeである。
本発明の化合物の治療用の投与量は処置される条件に依存するが、通常体重１kg当り１pmol〜1mmolのオーダーである。
本発明の化合物は慣用の医薬または獣医薬助剤、例えば乳化剤、脂肪酸エステル、ゲル化剤、安定剤、酸化防止剤、浸透圧調整剤、緩衝剤、pH調整剤などを用いて調剤にすることができ、そして非経口投与例えば注射または注入あるいは血管系への直接投与に適した形態にしてもよい。すなわち、本発明の化合物は生理学上許容し得るキャリア媒体例えば注射用の水中の溶液、懸濁液および分散液のような慣用の医薬投与形態にしてもよい。
それ故、本発明の化合物は生理学上許容し得るキャリアまたは賦形剤を用いて当業者に知られた方法で投与用に調剤することができる。例えば、場合により本発明の化合物に医薬上許容し得る賦形薬を加えて水性媒体中に懸濁または溶解させてもよく、それにより得られた溶液または懸濁液は安定化される。
非経口的に投与可能な形態例えば静脈注射用の溶液は滅菌されかつ生理学上許容し得ない剤を含有しないものであって、投与時の刺激またはその他の悪影響を最小限にする低い浸透圧を有すべきであり、したがって造影剤は等張性またはわずかに浸透圧の高いものでなければならない。適当なビヒクルには、非経口用溶液を投与するために慣用的に用いられる水性ビヒクル例えば塩化ナトリウム注射液、リンガー（Ringer）の注射液およびRemington’s Pharmaceutical Sciences, 15th ed., Easton：Mack Publishing Co., pp. 1405-1412および1461-1487（1975）およびThe National Formulary XIV, 14th ed. Washington: American Pharmaceutical Association（1975）に記載されているようなその他の溶液が包含される。これらの溶液は非経口用溶液のために慣用的に用いられる防腐剤、抗菌剤、緩衝剤および酸化防止剤、賦形剤およびキレートと相容しかつ製品の製造、保存または使用に影響を与えないその他の添加剤を含有することができる。
式Iの剤は疾病状況の治療ならびにインビボ造影で検出できる治療において治療上有効である。したがって、例えばレポーター部位のベクターは例えば放射性核種レポーターの放射線治療効果、発色団（または発蛍光団）レポーターの光力学治療における効力あるいは、ベクター部位の化学療法効果によって、治療効力を有することができる。
したがって、治療組成物の製造および人または動物の治療または予防法における式Iの剤の使用は、本発明の別の局面を表すものと考えられる。
本発明を以下の非限定的実施例によって説明する。特に断らない限り、％はすべて重量による。
実施例  １
脈管形成のMR画像形成用造影剤
化合物１
リシン（0.1ｇ、0.7mmol）を、乾燥DMF（N,N−ジメチルホルムアミド）中のN2−〔3S−ヒドロキシ−４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）2R−イソブチルスクシニル〕−Ｌ−（４−オキシメチルカルボキシ）フェニルアラニン−N1−メチルアミド（0.3ｇ、0.7mmol、WO 94／02447に従って製造された）およびDCC（N,N−ジシクロヘキシルカルボジイミド）の溶液に加える。反応混合物を周囲温度で撹拌し次いでTLCに付する。分散液を＋４℃で一晩放置する。分散液を濾過しそして溶媒を回転蒸発させた後、物質をクロマトグラフィーで精製する。
化合物２
ジエチレントリアミンペンタ酢酸二無水物（17.9ｇ、50mmol）を乾燥DMFに溶解しそして乾燥DMFに溶解した化合物１（0.3ｇ、0.5mmol）を加える。反応混合物を窒素雰囲気下高められた温度で撹拌する。次いでTLCに付する。溶媒を回転蒸発させそして物質をクロマトグラフィーで精製する。
化合物２のGd（III）キレート
化合物２（0.4ｇ、0.4mmol）の水中の溶液に、酸化ガドリニウムGd2O3（0.1ｇ、0.2mmol）を加えそして混合物を95℃で加熱する。濾過後、溶液を蒸発させ、50℃で減圧乾燥させる。
実施例  ２
脈管形成のMR画像形成用造影剤
化合物３
リシン（0.1ｇ、0.7mmol）を、乾燥DMF（N,N−ジメチルホルムアミド）中のＮ−（４−オクチルフェニル）−３−（２−カルボキシエチル）−6,7−ジヒドロ−5H−チアゾロ〔3,2-a〕ピリミジン−２−カルボキサミド（0.3ｇ、0.7mmol、EP-A-618208に従って製造された）およびDCC（N,N′−ジシクロヘキシルカルボジイミド）の溶液に加える。反応混合物を周囲温度で撹拌し次いでTLCに付する。分散液を＋４℃で一晩放置する。分散液を濾過しそして溶媒を回転蒸発させた後、物質をクロマトグラフィーで精製する。
化合物４
ジエチレントリアミンペンタ酢酸二無水物（17.9ｇ、50mmol）を乾燥DMFに溶解し、そして乾燥DMFに溶解した化合物３（0.3ｇ、0.5mmol）を加える。反応混合物を窒素雰囲気下高められた温度で撹拌する。次いでTLCに付する。溶媒を回転蒸発させそして物質をクロマトグラフィーで精製する。
化合物４のGd（III）キレート
化合物４（0.4ｇ、0.4mmol）の水中の溶液に、酸化ガドリニウムGd2O3（0.1ｇ、0.2mmol）を加えそして混合物を95℃で加熱する。濾過後、溶液を蒸発させ、50℃で減圧乾燥させる。
実施例  ３
脈管形成検出用核医学用造影剤
化合物２の99mTcキレート
実施例１からの化合物２（１mg）を、0.05Ｎ HClに溶解した0.1Ｎ NaOH・SnCl2・2H2O（100μg）に溶解し、そして生理食塩水中のナトリウムパーテクネテート形態の10〜100mCi 99mTcの溶液を加える。１分未満で0.5Ｍのリン酸塩緩衝液（pH５）を加えて溶液のpHをpH７〜８に調整する。次いで、TLCに付しそして物質をクロマトグラフィーで精製する。
実施例  ４
脈管形成検出用核医学用造影剤
化合物４の99mTcキレート
実施例２からの化合物４（１mg）を、0.05Ｎ HClに溶解した0.1Ｎ NaOH・SnCl2・2H2O（100μg）に溶解し、そして生理食塩水中のナトリウムパーテクネテート形態の10〜100mCi 99mTcの溶液を加える。１分未満で0.5Ｍのリン酸塩緩衝液（pH５）を加えて溶液のpHをpH７〜８に調整する。次いで、TLCに付しそして物質をクロマトグラフィーで精製する。
実施例  ５
脈管形成検出用核医学用造影剤
131I2（２当量）および過塩素酸ナトリウム（１当量）の水溶液を、Ｎ2−［３Ｓ−ヒドロキシ−４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２Ｒ−イソブチルスクシニル］−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ1−メチルアミド（１当量、WO 94／02446に従って製造した）の水溶液に加える。溶媒を回転蒸発させそして物質をクロマトグラフィーで精製する。
実施例  ６
脈管形成MR検出用VEGF受容体を標的にするベクターを含むDTPAモノアミドガドリニウム錯体の製造
0004993419.tif 000093
a） 6,7−ジメトキシ−3H−キナゾリン−４−オンの合成
２−アミノ−4,5−ジメトキシ安息香酸（9.9mg、0.050mmol）およびホルムアミド（５ml）の混合物を190℃で６時間加熱した。混合物を80℃まで冷却しそして水（25ml）に注いだ。沈殿物を濾去し、水で洗浄しそして減圧乾燥させた。収量1.54ｇ（15％）、褐色の粉末。その構造は1H（500MHz）および13C NMR（125MHz）分析により確認された。
b） ４−クロロ−6,7−ジメトキシキナゾリンの合成
オキシ塩化リン（20ml）中の、ａ）からの化合物（1.03ｇ、5.00mmol）の懸濁液を３時間還流した。暗色の溶液を濃縮しそして残渣を酢酸エチルに溶解させた。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄した後乾燥（MgSO4）させた。溶液を短いシリカカラムを通して濾過し、濃縮して392mg（35％）の純白でない物質を得た。1H NMR（300MHz）および13C NMR（75MHz）のスペクトルは構造に従っていた。
c） 〔４−（6,7−ジメトキシ−キナゾリン−４−イルアミノ）−フェニル〕酢酸の合成
２−プロパノール（８ml）中の、ｂ）からの化合物（112mg、0.500mmol）および４−アミノフェニル酢酸（76mg、0.50mmol）の混合物を３時間還流させた。反応混合物を冷却しそして沈殿物を単離し、２−プロパノールで洗浄し、減圧乾燥させた。収量183mg（97％）、淡黄色固体物質。構造を1H NMR（500MHz）および13C NMR（125MHz）により確認した。MALDI質量分析（α−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸マトリックス）を用いてさらに特性化を行ったところ、〔MH〕+に対するｍ／ｚは341、期待値340であった。
d） ｔ−ブチル（６−｛２−〔４−（6,7−ジメトキシキナゾリン−４−イルアミノ）フェニル〕アセチルアミノ｝ヘキシル）カルバメートの合成
DMF（2.0ml）中の、ｃ）からの化合物（38mg、0.10mmol）およびＮ−Boc−1,6−ジアミノヘキサン塩酸塩（25mg、0.10mmol）の懸濁液に、N,N−ジイソプロピルエチルアミン（34ml、0.20mmol）を加えた。澄明な溶液に、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−N′−エチルカルボジイミド塩酸塩（19mg、0.10mmol）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（15mg、0.10mmol）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し次に炭酸ナトリウム（2.5ｇ）および塩化ナトリウム（4.0ｇ）を含む25mlの水に注いだ。有機物質をクロロホルム中へ抽出しそして有機相を水洗した後乾燥（Na2SO4）させた。溶液を濾過した後濃縮した。生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、クロロホルム／メタノール／酢酸85：10：５）で精製し、最後に酢酸から凍結乾燥した。収量54mg（90％）、黄白色の固体物質（アセテート）。生成物をMALDI質量分析（α−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸マトリックス）で特性化したところ、〔MH〕+に対するｍ／ｚは期待した通り539であった。1H（500MHz）および13C（125MHz）NMR分光法を用いてさらに特性化を行った。
e） Ｎ−（６−アミノヘキシル）−〔４−（6,7−ジメトキシキナゾリン−４−イルアミノ）フェニル〕アセトアミド塩酸塩の合成
ｄ）からの化合物（27mg、0.050mmol）をゆっくり加熱してジオキサン（３ml）に溶解させた。溶液に、ジオキサン（0.5ml）中の４Ｎ HClを加えた。反応混合物を一晩撹拌し、減圧乾燥して定量収率の標記化合物を得た。MALDI質量分析（α−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸マトリックス）を用いて特性化を行ったところ、〔MH〕+に対するｍ／ｚは期待した通り439であった。分析用HPLC（カラムVydac 218TP54、勾配12〜24％Ｂ20分間、Ａ＝水／0.1％TFA、Ｂ＝アセトニトリル／0.1％TFA、流速1.0ml／分）を用いてさらに特性化を行ったところ、340nmで検出された保持時間13.0分で一つの生成物ピークが得られた。また、NMR分光法によって特性化を行ったところ、構造に一致する1H（500MHz）および13C（125MHz）スペクトルが得られた。
f） ガドリニウムキレート化用DTPAモノアミド誘導体（上記の構造）の合成
DMF（５ml）中の、ｅ）からの化合物（0.05mmol）およびDTPA−無水物（179mg、0.500mmol）の懸濁液に、N,N−ジイソプロピルエチルアミン（17μl、0.10mmol）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、減圧濃縮した。HPLC分析（カラムVydac 218TP54、勾配16〜28％Ｂ20分、Ａ＝水／0.1％TFA、Ｂ＝アセトニトリル／0.1％TFA、流速1.0ml／分）により、LC-MS（ESI）によって示される7.9分で生成物のピークが得られ、これは標記の化合物（〔MH〕+に対するｍ／ｚ 813、期待値814）に相当する。生成物を調製用HPLC（カラムVydac 218TP1022、勾配16〜28％Ｂ60分、Ａ＝水／0.1％TFA、Ｂ＝アセトニトリル／0.1％TFA、流速10.0ml／分、254nmで検出）で精製したところ、6.7mgの精製物が得られた。精製物のHPLC分析により、保持時間のシフトは5.6分（上記の分析条件）であることが判明し、鉄錯体に対応するMALDI質量分析を行ったところ、錯体についてはｍ／ｚは870、遊離配位子については816が得られた。
g） ｆ）からの化合物のガドリニウム錯体の製造
ｆ）からの化合物（0.1mg）を三塩化ガドリニウムの水溶液（濃度２mg／ml、0.1ml）に溶解した。混合物を一晩撹拌した。ガドリニウム錯体への定量的転換は、MALDI質量分析（α−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸マトリックス）により証明され、ガドリニウム錯体（それぞれ、ガドリニウム、ガドリニウム／ナトリウムおよびガドリニウム／二ナトリウム）についてはｍ／ｚピークは970、992および1014であり、そして遊離配位子／ナトリウム錯体に相当するｍ／ｚピークは816／838であった。鉄錯体の痕跡は検出できなかった。
実施例  ７
脈管形成MR検出用VEGF受容体を標的にするベクターを含むDTPAビスアミドガドリニウム錯体の製造
0004993419.tif 000094
a） ガドリニウムキレート化用DTPAビスアミド誘導体（上記の構造）の合成
実施例６ｆ）における反応混合物の分析用HPLCは、上記のDTPAビスアミドに相当するLC-MS（EIS）によって示された16.8minでピークを与え、ｍ／ｚは期待した通り〔MH〕+では1233が得られ、そして〔MH2〕2+では期待した通り616.6が得られた。生成物を調製用HPLC（実施例６ｆ）に記載した条件）で精製して凍結乾燥後に14mgの純粋な物質を得た。精製された物質を分析用HPLCで分析したところ、精製中の鉄錯体の生成に起因して保持時間のシフトが16.8分（粗混合物中）から11.1minになり、これはMALDI質量分析（α−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸マトリックス）によって証明され、ｍ／ｚが鉄錯体では1291、遊離配位子では1237が得られた。
b） ａ）からの化合物のガドリニウム錯体の製造
ａ）からの化合物を実施例６ｇ）に記載したように三塩化ガドリニウムの水溶液で処理した。２時間の反応時間後、MALDI質量分析によりガドリニウム錯体への転換が示され、ｍ／ｚはガドリニウム錯体では1391、遊離配位子では1235であった。
実施例  ８
カルボキシメチル−〔２−（カルボキシメチル−｛２−〔カルボキシメチル−（｛２−〔３−（｛３−オキソ−２−〔２−（ピリジン−２−イルアミノ）−エチル〕−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−５−カルボニル｝−アミノ）−プロピオニルアミノ〕−エチルカルバモイル｝−メチル）−アミノ〕−エチル｝−アミノ）−エチル〕−アミノ｝−酢酸（12）
0004993419.tif 000095
a） ４−メチル−イソフタル酸（２）
窒素下、−78℃（ドライアイス／メタノール）まで冷却した３−ブロモ−４−メチル−安息香酸（5.0ｇ、23.25mmol）のTHF溶液（130ml）に、エーテル中のMeMgBr（3.0Ｍ、8.5ml、25.57mmol）を、温度が−75℃を越えないような速度で加えた。次に、温度を−60℃まで上昇させ、ガスの放出が止まった後、溶液を再び−78℃まで冷却した。次に、温度が−75℃を越えないようにヘキサン中のBuLi（1.6Ｍ、29.06ml、46.50mmol）を滴加した。次に、混合物をこの温度で15分間撹拌した後粉砕ドライアイス（4.4ｇ、100mmol）を加えた。温度が周囲温度まで自由に上昇するように、沈殿物を激しく撹拌した。混合物を６Ｎ HClを用いて酸性にし、固体物質を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した後乾燥させた。水から再結晶させて純白でない純粋な化合物（81％）、融点296〜298℃（昇華後）を得た。NMRは予想した構造と一致した。
b） ４−メチル−イソフタル酸メチルエステル（４）
化合物（２）（2.83ｇ、15.71mmol）、塩化チオニル（50ml）およびDMF（３滴）の混合物を２時間還流加熱させた。室温まで冷却した後、過剰の塩化チオニルを減圧下（回転蒸発器）で除去した。得られた暗色の油状物を四塩化炭素（30ml）に溶解し、ピリジン（１ml、12.43mmol）とメタノール（20ml）で処理した後周囲温度で２時間撹拌した。溶剤を蒸発させた後残渣をフラッシュクロマトグラフィー：シリカ、ヘキサン／EtOAc（９：１）で精製した。
c） ４−ブロモエチル−イソフタル酸ジメチルエステル（５）
四塩化炭素（20ml）中の（４）（0.96ｇ、4.61mmol）、過酸化ジベンゾイル（56mg、0.23mmol）およびＮ−ブロモコハク酸イミド（NBS）（0.82ｇ、4.61mmol）の混合物を20時間還流加熱させた。室温まで冷却し、濾過した後、溶剤を蒸発させて黄色の油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー：シリカ、ヘキサン／EtOAc（７：３）により純粋な化合物が得られた。
d） ３−オキソ−２−〔２−（ピリジン−２−イルアミノ）−エチル〕2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−５−カルボン酸メチルエステル（６）
トルエン（10ml）中の（５）（511mg、1.78mmol）の溶液を、Et3N（744μl、5.33mmol）およびN1−ピリジン−２−イルーエタン−1,2−ジアミン（244mg、1.78mmol）（２−ブロモピリジンを過剰のエチレンジアミンとピリジンで処理して製造）で処理し、混合物を６時間還流させた。室温まで冷却しそして溶剤を蒸発させた後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー：シリカ、CH2Cl2／アセトン（３：２）で精製した。
e） ３−オキソ−２−〔２−ピリジン−２−イルアミノ）−エチル〕2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−５−カルボン酸（７）
（６）（301mg、0.97mmol）および１Ｎ NaOH（３ml）のメタノール溶液（６ml）を周囲温度で24時間撹拌させた。１Ｍ NaHSO4溶液を用いて溶液を酸性にし、沈殿物を濾取し、水で十分に洗浄しそしてP2O5／ブルーゲルで24時間乾燥させた。
f） ３−（｛３−オキソ−２−〔２−（ピリジン−２−イルアミノ）−エチル〕2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−５−カルボニル｝−アミノ）−プロピオン酸第３ブチルエステル（８）
（７）（166mg、0.56mmol）、Ｎ−メチルモルホリン（185μl、1.68mmol）、BOP（322mg、0.73mmol）およびＨ−β−アラ−OtBu（152mg、0.84mmol）の、DMF（５ml）中の溶液を周囲温度で20時間撹拌した。混合物を酢酸エチル（10ml）で希釈し、次にH2O、NaHCO3、10％KHSO4および食塩水（５ml）でそれぞれ一回洗浄した後乾燥（MgSO4）、濃縮させた。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、EtOAc）によりエステル（８）が白色固体として得られた。
g） ３−（｛３−オキソ−２−〔２−（ピリジン−２−イルアミノ）−エチル〕2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−５−カルボニル｝−アミノ）−プロピオン酸（９）
エステル（８）（252mg、0.60mmol）、TFA（４ml）およびCH2Cl2（８ml）の溶液を周囲温度で３時間撹拌した。混合物を蒸発乾固させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、EtOH／NH4OH 19：１）で精製して（９）を純白でない泡状物（フォーム）として得た。NMRは下記の構造に一致した。
0004993419.tif 000096
h） ｛２−〔３−（｛３−オキソ−２−〔２−（ピリジン−２−イルアミノ）−エチル〕−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−５−カルボニル−アミノ）−プロピオニルアミノ〕−エチル｝−カルバミン酸第３ブチルエステル（10）
DMF（２ml）中の、酸（９）（20mg、0.054mmol）の溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（NMM）（16.40mg、0.162mmol）、BOP（カストロ試薬）（31.05mg、0.078mmol）およびBOCで保護されたジアミン（13mg、0.081mmol）を加え、混合物を周囲温度で20時間撹拌した。EtOAc（５ml）で希釈した後、溶液をH2O、飽和NaHCO3、10％KHSO4および食塩水でそれぞれ一回洗浄した。有機相を乾燥（MgSO4）させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、１：１ CH2Cl2／アセトン）。MALDI-MS；510.59。
i） ３−オキソ−２−〔２−（ピリジン−２−イルアミノ）−エチル〕−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−５−カルボン酸〔２−（２−アミノエチルカルバモイル）−エチル〕−アミド（11）
（10）（20mg、0.039mmol）およびTFA（２ml）のCH2Cl2溶液を周囲条件下で４時間乾燥した。反応混合物を濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、19：１ CH2Cl2／アセトン）で精製して（４）を白色の固体として得た。MALDI-MS；410.48。
j） カルボキシメチル−〔２−（カルボキシメチル−｛２−〔カルボキシメチル−（｛２−〔３−（｛３−オキソ−２−〔２−（ピリジン−２−イルアミノ）−エチル〕−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−５−カルボニル｝−アミノ）−プロピオニルアミノ〕−エチルカルバモイル｝−メチル）−アミノ〕−エチル｝−アミノ）−エチル〕−アミノ｝−酢酸（12）
（11）（15mg、0.36mmol）、N,N−ジイソプロピルアミン（17μl、0.10mmol）およびDTPA−無水物（129mg、0.36mmol）のDMF（12ml）中の溶液を周囲温度で３時間撹拌し、減圧濃縮させた。残渣を調製用HPLC（アセトニトリル／水中の0.1％TFA）で精製した。
実施例  ９
脈管形成のMR検出用bFGF受容体を標的にするベクターを含むDTPAモノアミドガドリニウム錯体の製造
0004993419.tif 000097
a） ｛３−〔２−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−２−（2,4−ジクロロ−フェニル）−エチル〕−3H−イミダゾール−１−イル｝−酢酸第３ブチルエステルの合成
１−〔２−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−２−（2,4−ジクロロ−フェニル）−エチル〕−1H−イミダゾール（１ｇ、2.25mmol）およびブロモ酢酸第３ブチル（１ml、6.8mmol）を15mlのアセトニトリルに溶解し、一晩還流加熱した。TLCにより出発物質が完全に転換したことが判明した。溶剤を冷却し、減圧蒸発させた後残留する油状物をクロロホルムに溶解し、エーテルで摩砕した。生成物をMALDI質量分析によって同定し、さらに精製しないで次の行程で用いた。
b） ｛３−〔２−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−２−（2,4−ジクロロ−フェニル）−エチル〕−3H−イミダゾール−１−イル｝−酢酸の合成
ａ）からの化合物（500mg、１mmol）を２mlのジクロロメタンに溶解し、氷浴で冷却した。２mlのトリフルオロ酢酸を加え、氷浴を除きそして反応混合物を１時間撹拌した。TLCにより出発物質が完全に転換していることが判明した。溶剤を減圧除去し、生成物をさらに精製しないで次のステップで用いた。
c） 〔６−（２−｛３−〔２−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−２−（2,4−ジクロロフェニル）−エチル〕−3H−イミダゾール−１−イル｝−アセチルアミノ）−ヘキシル〕−カルバミン酸第３ブチルエステルの合成
ｂ）からの生成物を実施例６ｄ）について述べた手順でｃ）に転換し、生成物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。
d） Ｎ−（６−アミノ−ヘキシル）−２−｛３−〔２−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−２−（2,4−ジクロロ−フェニル）−エチル〕−3H−イミダゾール−１−イル｝−アセトアミドの合成
ｃ）からの生成物を実施例６ｅ）について述べた手順でｄ）に転換した。生成物をさらに精製しないで用いた。
e） （（２−｛〔２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−エチル〕−カルボキシメチル−アミノ｝−エチル）−｛〔６−（２−｛３−〔２−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−２−（2,4−ジクロロ−フェニル）−エチル〕−3H−イミダゾール−１−イル｝−アセチルアミノ）−ヘキシルカルバモイル〕−メチル｝−アミノ）−酢酸の合成
ｄ）からの生成物を実施例６ｆ）について述べた手順でｅ）に転換した。実施例６ｆ）で述べたようにして調製用HPLCによって精製を行った。
f） 化合物ｅ）のガドリニウム錯体の製造は実施例６ｇ）で述べた手順で行った。