(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Iまたは一般式IIのギムネマ酸誘導体、またはその医薬的塩基付加塩：
【化１】
0004903309.tif 000035
【化２】
0004903309.tif 000036
但し、R１はHまたは以下の式で示される遊離基であり、
【化３】
0004903309.tif 000037
R３はH、かつR２は以下の遊離基を表すか、または
【化４】
0004903309.tif 000038
R３は以下の遊離基を表し、
【化５】
0004903309.tif 000039
R２はHまたは以下の遊離基を表す。
【化６】
0004903309.tif 000040
【請求項２】
式IのR1が水素である、請求項１に記載のギムネマ酸誘導体。
【請求項３】
式IのR1が以下の式の基である、請求項１に記載のギムネマ酸誘導体。
【化７】
0004903309.tif 000041
【請求項４】
式IIのR3が水素であり、かつR2が以下の式の基である、請求項１に記載のギムネマ酸誘導体。
【化８】
0004903309.tif 000042
【請求項５】
式IIのR3が水素であり、かつR2が以下の式の基である、請求項１に記載のギムネマ酸誘導体。
【化９】
0004903309.tif 000043
【請求項６】
式IIのR2が水素であり、かつR3が以下の式の基である、請求項１に記載のギムネマ酸誘導体。
【化１０】
0004903309.tif 000044
【請求項７】
式IIのR3が以下の式の基であり、
【化１１】
0004903309.tif 000045
R2が以下の式の基である請求項１に記載のギムネマ酸誘導体。
【化１２】
0004903309.tif 000046
【請求項８】
活性成分としての請求項１〜７記載の式Ｉおよび／もしくはIIの少なくとも一種のギムネマ酸誘導体またはその医薬的塩基付加塩、薬学的キャリア、および賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項９】
活性成分としての請求項１〜７記載の式IまたはIIの少なくとも一種のギムネマ酸誘導体またはその医薬的塩基付加塩、薬学的キャリア、および賦形剤を含む、高血糖、高脂血症、および血小板の凝集に関する疾患の予防または治療のための医薬組成物。
【請求項１０】
請求項８または９に記載の組成物において、請求項１〜７記載の式Iおよび／またはIIのギムネマ酸誘導体を含み、前記組成物の重量に基づいて、化合物A、B、D、E、およびFの含量は、1.25-2.10wt％の化合物A、0.89-1.50wt％の化合物Ｂ、2.40-3.80wt％の化合物Ｃ、2.10-3.40wt％の化合物Ｄ、2.74-4.60wt％の化合物E、および3.24-5.40wt％の化合物Ｆである組成物であって、
Ａは、Ｒ１がＨである、式Iのギムネマ酸誘導体であり、
化合物Ｂは、Ｒ１が以下の基である、式Iのギムネマ酸誘導体であり、
【式１２−１】
0004903309.tif 000047
化合物Ｃは、Ｒ3がＨで、かつＲ2が以下の基である式IIのギムネマ酸誘導体であり、
【式１２−２】
0004903309.tif 000048
化合物Ｄは、Ｒ3が以下の基で、かつＲ2がＨである式IIのギムネマ酸誘導体であり、
【式１２−３】
0004903309.tif 000049
化合物Eは、Ｒ3が以下である式IIのギムネマ酸誘導体であり、
【式１２−４】
0004903309.tif 000050
化合物Ｆは、Ｒ3がＨで、かつＲ2が以下である式IIのギムネマ酸誘導体である組成物。
【式１２−５】
0004903309.tif 000051
【請求項１１】
請求項１〜７記載の式Iおよび式IIのギムネマ酸誘導体を１２．５〜４０重量％含むGymnema sylvestre. R. Brの抽出物。
【請求項１２】
高血糖、高脂血症、および血小板の凝集に関する疾患および症状の予防または治療するための薬物を製造するための、請求項１〜７記載の式Iおよび／またはIIのギムネマ酸誘導体、または請求項11に記載の式Iおよび／またはIIのギムネマ酸誘導体を含む抽出物の使用。
【請求項１３】
請求項１〜７記載の式IおよびIIのギムネマ酸誘導体またはその医薬的塩基付加塩を調製する方法であって、以下の工程を含む方法：
ａ）エタノール還流下においてギムネマ・カーン植物から抽出して、次に濃縮することと、
ｂ）工程ａ）で濃縮された脂質をシクロヘキサンで抽出し、次にn−ブタノールで抽出し、減圧下で乾燥して濃縮し、次に軟膏を得ることと、
ｃ）工程ｂ）の軟膏を、クロロホルム：エタノール＝90：10-50：5、または90：10-60：40で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーにかけて、式Iのギムネマ酸誘導体および残渣を得ることと、
ｄ）工程ｃ）の残渣を、メタノール／水（20/80-40/60）で溶出するC18カラムクロマトグラフィーにかけて、式IIのギムネマ酸誘導体を得ることと、
ｅ）所望であれば、得られた式IまたはIIのギムネマ酸誘導体を、無機または有機塩基で医薬的塩基付加塩に変えること。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の分野】
本発明は新規ギムネマ酸誘導体、その製造、それらを含む医薬組成物または抽出物、およびそれらの医薬としての使用、特に高血糖、高脂血症、および血小板の凝集に関する疾患の予防または治療における使用に関する。
【０００２】
【技術背景】
ギムネマ酸誘導体について多くの研究がなされ、これらのギムネマ酸誘導体のすべてが、Gymnema Sulvestre.Ｒ.Ｂｒ.として分類されるギムネマ・カーン (Gymnema cane)とよばれる植物に由来する。インドでは、これらは腫脹、蛇毒毒素およびマラリアを治療するために使用されており、また利尿剤として、または血糖レベルを下げるために使用されていた。本発明で述べるギムネマ酸誘導体およびその生化学的活性は、今までに報告されていない。
【０００３】
【本発明の目的】
本発明の目的は、新規ギムネマ酸誘導体を見いだすこと、およびそれらの医薬的使用を開発することである。
【０００４】
【本発明の詳細】
本発明者は、式IまたはIIの新規ギムネマ酸誘導体、およびそれらの医薬的使用、特に高血糖、高脂血症、および血小板の凝集の治療における使用を発見した。本発明は、今回、上述の発見を基にして行われた。
【０００５】
第一の部分において、本発明は、式IまたはIIのギムネマ酸誘導体、またはその医薬的塩基付加塩に関する。
【０００６】
【式１３】
0004903309.tif 000002
【０００７】
【式１４】
0004903309.tif 000003
但し、R１はHまたは以下の式で示される遊離基であり、
【０００８】
【式１５】
0004903309.tif 000004
R３はH、かつR２は以下の遊離基を表すか、または
【０００９】
【式１６】
0004903309.tif 000005
R３は以下の遊離基を表し、
【００１０】
【式１７】
0004903309.tif 000006
R２はHまたは以下の遊離基である。
【００１１】
【式１８】
0004903309.tif 000007
本発明の第二の部分は、活性成分として式１および／またはIIの少なくとも一種のギムネマ酸誘導体またはその医薬的塩基付加塩、薬学的キャリアおよび賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【００１２】
本発明の第三の部分は、ギムネマ酸抽出物（12.5-40wt％の式Iおよび／またはIIのギムネマ酸誘導体）に関する。
【００１３】
本発明のもう一つも部分は、活性成分として少なくとも一種の式Iおよび／またはIIのギムネマ酸誘導体またはその医薬的塩基付加塩、薬学的キャリアおよび賦形剤を含む、高血糖、高脂血症、および血小板の凝集に関する疾患の予防または治療のための医薬組成物に関する。
【００１４】
本発明のもう一つの部分は、活性成分として、式Iおよび／またはIIの少なくとも一種のギムネマ酸誘導体または医薬的塩基付加塩、公定のキャリアおよび賦形剤を含む、糖尿病の予防または治療のための医薬組成物に関する。
【００１５】
本発明のもう一つも部分は、活性成分として、式IまたはIIの少なくとも一種のギムネマ酸誘導体またはその医薬的塩基付加塩、薬学的キャリア、および賦形剤を含む、高血液脂質レベルの予防または治療のための医薬組成物に関する。
【００１６】
本発明のもう一つも部分は、活性成分として、式Iおよび／またはIIの少なくとも一種のギムネマ酸誘導体またはその医薬的塩基付加塩、薬学的キャリアおよび賦形剤を含む、血小板の凝集を予防または治療のための医薬組成物に関する。
【００１７】
本発明のもう一つも部分は、活性成分として、式IおよびIIの少なくとも一種のギムネマ酸誘導体またはその医薬的塩基付加塩の製造であって、以下の工程を含む製造方法に関する：
ａ）エタノール還流下においてギムネマ・カーン植物から抽出して、次に濃縮することと、
ｂ）工程ａ）で濃縮された脂質をシクロヘキサンで抽出し、次にn−ブタノールで抽出し、減圧下で乾燥して濃縮し、次に軟膏を得ることと、
ｃ）工程ｂ）の軟膏を、クロロホルム：エタノール＝90：10-50：5、または90：10-60：40で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーにかけて、式Iのギムネマ酸誘導体および残渣を得ることと、
ｄ）工程ｃ）の残渣を、メタノール／水（20/80-40/60）の溶出でC18カラムクロマトグラフィーにかけて、式IIのギムネマ酸誘導体を得ることと、
ｅ）所望であれば、得られた式IまたはIIのギムネマ酸誘導体を、無機または有機塩基で医薬的塩基付加塩に変えること。
【００１８】
本発明の他の部分は、12.5-40wt％の範囲の式IおよびIIのギムネマ酸誘導体を含む抽出物の調製方法であって、以下の工程を含む方法に関する。
【００１９】
ａ）60-95％エタノールでギムネマ・カーンの葉から抽出すること、および濃縮することと、
ｂ）工程ａ）で濃縮された脂質をシクロヘキサンで抽出し、次にn−ブタノールで抽出し、減圧下で乾燥して濃縮すること。
【００２０】
本発明のもう一つの側面は、高血糖、高脂血症、および血小板の凝集に関する疾患の予防または治療のための薬物を製造するための、式IおよびIIのギムネマ酸誘導体、式IおよびIIのギムネマ酸誘導体を含む抽出物の使用に関する。
【００２１】
最後に、本発明は、高血糖、高脂血症、および血小板の凝集に関する疾患の予防または治療のための方法であって、予防または治療に有効な量の式IおよびIIのギムネマ酸誘導体を、高血糖、高脂血症、および血小板の凝集に関する疾患もしくは症状に罹患する患者に投与することを含む方法に関する。
【００２２】
本発明において「患者」の用語は、ヒトを含むほ乳類、特にヒトをいう。
【００２３】
【発明の詳細な記載】
本発明は、式Iおよび／またはIIのギムネマ酸誘導体、またはその医薬的塩基付加塩に関する：
【００２４】
【式１９】
0004903309.tif 000008
【００２５】
【式２０】
0004903309.tif 000009
但し、R１はHまたは以下の式で示される遊離基であり、
【００２６】
【式２１】
0004903309.tif 000010
R3はH、かつR２は以下の遊離基を表すか、または
【００２７】
【式２２】
0004903309.tif 000011
R3は以下の遊離基を表し、
【００２８】
【式２３】
0004903309.tif 000012
R２はHまたは以下の遊離基を表す。
【００２９】
【式２４】
0004903309.tif 000013
本発明に従えば、式IまたはIIのギムネマ酸の医薬的塩基付加塩は、薬学的無機塩基または有機塩基、無機塩基を用いて形成された塩を含み、これら塩基には、たとえばアルカリもしくはアルカリ土類金属の水酸化物、アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の炭酸塩もしくは炭酸水素塩が含まれる。アルカリ金属はLi、Na、Kから選択されてもよく、アルカリ土類金属はBa、Mg、Caなどから選択されてもよい。有機塩基は、たとえばトリエチルアミンなどでもよい。
【００３０】
本発明に従えば、ギムネマ酸化合物は、R1がＨである式Iのギムネマ酸化合物が好ましい。
【００３１】
本発明に従えば、ギムネマ酸化合物は、R1が以下の遊離基である式Iのギムネマ酸化合物が好ましい。
【００３２】
【式２５】
0004903309.tif 000014
本発明に従えば、ギムネマ酸化合物は、R3がHであり、かつR2が以下の遊離基である式IIのギムネマ酸化合物が好ましい。
【００３３】
【式２６】
0004903309.tif 000015
本発明に従えば、ギムネマ酸化合物は、R3がHであり、かつR2が以下の遊離基である式IIのギムネマ酸化合物が好ましい。
【００３４】
【式２７】
0004903309.tif 000016
本発明に従えば、ギムネマ酸化合物は、R3が以下の遊離基であり、かつR2がHである式IIのギムネマ酸化合物が好ましい。
【００３５】
【式２８】
0004903309.tif 000017
本発明に従えば、ギムネマ酸化合物は、R3およびR2がどちらも以下の遊離基である式IIのギムネマ酸化合物が好ましい。
【００３６】
【式２９】
0004903309.tif 000018
本発明に従えば、ここで述べられた医薬組成物は、式Iおよび／またはIIの少なくとも一種のギムネマ酸誘導体、並びに薬学的キャリアおよび賦形剤を含む。たとえば、医薬組成物は、たとえば1.25-2.10wt％の化合物A、0.89-1.50wt％の化合物Ｂ、2.40-3.80wt％の化合物Ｃ、2.10-3.40wt％の化合物Ｄ、2.74-4.60wt％の化合物E、および3.24-5.40wt％の化合物Ｆ（化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦは以下の実施例において定義される）を含んでいてよい。この医薬組成物は、胃腸内、非経口、または経口、筋肉内、皮下、腹膜、静脈などの局所的投与によって投与することができる。腸管投与に適した薬剤の形態は、たとえばタブレット、カプセル、溶液、懸濁液、粉末、顆粒などである。非経口に適した薬剤の形態は、溶液の注射、注射のための凍結乾燥粉末などである。局所用に適した薬剤形態は、たとえば、軟膏、クリーム、ペースト、パッチ、およびスプレーである。これら全ての形態のなかで経口投与が好ましく、経口形態にはカプセルが好ましい。医薬組成物における医薬キャリアまたは賦形剤は、結合剤、充填物、湿潤剤、防腐剤、潤滑剤、崩壊剤、界面活性剤、希釈剤などを含む。所望であれば、着色剤、矯味矯臭剤、可溶化剤、緩衝剤なども使用される。本発明において、希釈剤は、でんぷん、デキストリン、ラクトース、マイクロセルロース、シリカゲルなどを含む。およびシリカゲルが好ましい。湿潤剤は、水、およびエタノールを含み、潤滑剤は、滑石粉末、ステアリン酸マグネシウムを含む。
【００３７】
本発明の医薬組成物は、当該技術において既知の方法によって製造することができる。たとえば薬学的キャリア、および賦形剤と、式Iおよび／またはIIのギムネマ酸誘導体、または医薬的塩基付加塩を混合する。
【００３８】
式IおよびIIのギムネマ酸誘導体の投与量は、予防されるまたは治療される疾患の特徴および重篤度、性別、年齢、体重、個人の応答、特定の化合物、投与経路、および投与時間などの多くの因子に依存する。一般に、特定の投与量は、医師の判断に依存する。一般に言うと、式IおよびIIのギムネマ酸誘導体の医薬組成物の投与量は、単一投与および一日に1-4回服用する形態で行うことができる。
【００３９】
本発明に従えば、前記式Iのギムネマ酸誘導体またはその医薬的塩基は、以下のように調製することができる：
ａ）ギムネマ・カーンの葉を粉砕乾燥し、次に60-95％のエタノール還流下において3回、それぞれ2時間抽出し、抽出した脂質を混合し、使用するために、減圧下においてエタノールがなくなるまで濃縮すること；
ｂ）工程ａ）で濃縮された混合液をシクロヘキサンで3〜6回抽出し、次にn−ブタノールで抽出し、減圧下で乾燥して濃縮し、すぐに使用するために乾燥抽出物を得ること；
ｃ）工程ｂ）の乾燥抽出物を、90：10〜60：40の割合のクロロホルムとメタノールの混合物で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーにかけて、式Iのギムネマ酸誘導体を得ること；および
ｄ）所望であれば、工程ｃ）の式Iの誘導体をその医薬的塩基塩に転換すること。
【００４０】
本発明に従えば、前記式IIのギムネマ酸誘導体は、以下のように調製することができる：
ａ）ギムネマ・カーンの葉を粉砕乾燥し、次に60-95％のエタノール還流下において3回、それぞれ2時間抽出し、抽出した脂質を混合し、使用するために、減圧下においてエタノールがなくなるまで濃縮すること；
ｂ）濃縮された混合液をシクロヘキサンで3〜6回抽出し、次にn−ブタノールで抽出し、すぐに使用するために、減圧下で乾燥して濃縮すること；
ｃ）工程ｂ）の乾燥抽出物を生のシリカゲルと混合し、90：10〜50：50の割合のクロロホルムとメタノールの混合物を溶出液に用いるシリカゲルＨの薄層クロマトグラフィーで分離し、、溶出後の残渣をメタノール／水（20：80-40：60）溶出液でC18カラムクロマトグラフィーにかけて、式IIのギムネマ酸誘導体を得ることと、
ｄ）所望であれば、工程ｃ）の式IIの誘導体をその医薬的塩基塩に転換すること。
【００４１】
本発明に従えば、式Iおよび式IIのギムネマ酸誘導体の12.5-40wt％の溶出生成物は、以下のように調製することができる：
ギムネマ・カーンの葉の生の粉末を60-95％エタノールで1-4回還流した（それぞれの溶液量を6ｍｇ／ｍｌとして、溶出時間は1-3時間である）。前記抽出混合液を共に混合して、エタノールがなくなるまで減圧下で蒸留した。濃縮された混合液は、シクロヘキサンで1-3時間（500ｍｌの溶液をそれぞれの回に使用して）抽出した。次に、前記混合液を500ｍｌのn−ブタノールで1-3回抽出した。すべての抽出混合液を混合して、減圧下で蒸留して所望の産物を得た。
【００４２】
本発明はさらに製造例、および生物学的活性実験によって例示を与えるが、これは本発明の如何なる限定も意味しない。
【００４３】
実施例１
化合物Ａ（Ｒ１がＨである、式Iのギムネマ酸誘導体である）および化合物Ｂ（Ｒ１が以下の基である、式Iのギムネマ酸誘導体である）
【００４４】
【式３０】
0004903309.tif 000019
1000ｇのギムネマ・カーンの生粉末を60％エタノールで3回還流した（それぞれ6Ｌの溶媒を使用して、かつそれぞれの回で2時間）。前記抽出混合液を共に混合して、かつエタノールがなくなるまで減圧下において蒸留した。前記濃縮された混合液を0.5Ｌのシクロヘキサンおよびブタンで3回抽出した。N−ブタンの抽出混合液を合わせて、かつ減圧下で蒸留して、64.0ｇの乾燥抽出産物を得た。32.0ｇの乾燥抽出物質を60ｇの60-100メッシュのシリカゲルに添加して、前記混合物を蒸発させて水皿上で乾燥した。450ｇの200-300メッシュ（ｍ）シリカゲルを湿潤法によってカラムに充填して、次に90：10-60：40の混合液のクロロホルムとメタノール混合液で溶出して、カラムで分離が行われるように、処置したサンプルを添加した。80ｍｇの化合物Ａおよび60ｇの化合物Ｂが得られた。
【００４５】
化合物Ａおよび化合物Ｂの物理的、および化学的データを以下に示す：
化合物Ａ：
アモルファス粉末：mp198-202℃；[α]２０D+16.0°(c0.10,MeOH)；IRvmax3414(OH)、1724(COOH)、1636(C=C)、1458、1380、1054cm-１；１HNMR(500MHZ、pyridin-d5)δ0.86(3H、s、Me)、0.95(3H、s、Me)、1.01(9H、s、3ｘMe)、1.32(3H、s、Me)、1.39(3H、s、Me)、3.39(1H、dd、J=4.3and11.8Hz、H-3α)、3.68(1H、d、J=10.5Hz、H-28a)、4.43(1H、d、J=10.5Hz、H-28b)、4.68(1H、m、H-16α)、5.04(1H、d、J=7.8Hz、H-1のグルコン酸)、5.26(1H、brs、H-12)；13CNMR(125MHz、ピリジン-d5)、表１および２参照；FAB MSm/z 657[M+Na]
化合物Ｂ：
アモルファス；mp192-195℃；[α]20D+27.2°(c0.15、MeOH)；IRvmax3444(OH)、1724、1700、1635(C=C)、1457、1388、1280、1074、720cm-１；１HNMR (500MHZ、ピリジン)δ0.86(3H、s、Me)、1.01(3H、s、Me)、1.02(9H、s、3ｘMe)、1.07(3H、s、Me)、1.30(3H、s、Me)、1.34(3H、s、Me)、1.36(3H、s、Me)、3.40(1H、dd、J=4.5 and 12.0Hz、H-3α)、3.70(1H、d、J=10.2Hz、H-28a)、4.42(1H、d、J=10.2Hz、H-28b)、4.70(1H、m、H-16α)、5.10(1H、d、J=7.8Hz、H-1 のグルコン酸、5.70(1H、d、J=4.7および12.3Hz、H-21α)、7.47(3H、overlap、II-3',-4'および-5')、8.25(2H、dd、J=1.4および4.8Hz、H-2'、および-6')；13CNMR(125MHz、ピリジン-d5)、表１および２参照；FAB MSm/z 777[M+Na]
【００４６】
【表１】
0004903309.tif 000020
【００４７】
【表２】
0004903309.tif 000021
実施例２
化合物Ｃ（Ｒ3がＨで、かつＲ2が以下の基である式IIのギムネマ酸誘導体）、
【００４８】
【式３１】
0004903309.tif 000022
化合物Ｄ（Ｒ3が以下の基で、かつＲ2がＨである式IIのギムネマ酸誘導体）、
【００４９】
【式３２】
0004903309.tif 000023
化合物E（Ｒ3が以下である式IIのギムネマ酸誘導体）、
【００５０】
【式３３】
0004903309.tif 000024
化合物Ｆ（Ｒ3がＨで、かつＲ2が以下である式IIのギムネマ酸誘導体）、
【００５１】
【式３４】
0004903309.tif 000025
1000ｇのギムネマ・カーンの生粉末を75％エタノールで3回還流した（それぞれ6.0Ｌの溶媒を使用して、かつそれぞれの回で2時間）。前記抽出混合液を共に混合して、かつエタノールがなくなるまで減圧下において蒸留した。前記濃縮された混合液を0.5Ｌのシクロヘキサンおよびブタンで3回抽出した。すべてのN−ブタンの抽出混合液を合わせて、かつ減圧下で蒸留して、72.0ｇの乾燥抽出産物を得た。36.0ｇの乾燥抽出物質を60ｇの60-100メッシュのシリカゲルに添加して、前記混合物を蒸発させて水皿上で乾燥した。400ｇの200-400ｍuシリカゲルＨを使用して、湿潤法によってカラムに充填して、次に、処置したサンプルを添加して、90：10-50：50の混合液のクロロホルムとメタノール混合液で溶出してカラムによる分離を行った。130ｍｇの化合物Ｃ、115ｍｇの化合物Ｄ、160ｇの化合物E、および195ｍｇの化合物Ｆがそれぞれ得られた。
【００５２】
化合物Ｃの物理的、および化学的データを以下に示す：
化合物Ｃ：
アモルファス粉末：mp206-209℃；[α]２０D-16.0°(c0.11、MeOH)；IRvmax3424(OH)、1735(COOH)、1636(C=C)、1457、1034cm-１；１HNMR (400MHZ、ピリジン-d5)δ0.82(3H、s、Me)、0.87(3H、s、Me)、0.91(3H、s、Me)、0.97(3H、s、Me)、1.03(3H、s、Me)、1.20(3H、s、Me)、1.23(3H、s、Me)、3.17(1H、dd、J=3.5および10.2Hz、H-18)、3.30(1H、d、J=3.9および11.7Hz、H-3α)、5.37(1H、brs、H-12)；13CNMR(100MHz、ピリジン-d5)、表3および4参照；FAB MSm/z 943[M+Na]  化合物Ｄの物理的、および化学的データを以下に示す：
化合物Ｄ：
アモルファス粉末：mp202-204℃；[α]２０D-3.2°(c0.15、MeOH)；IRvmax3410(OH)、1710(COOR)、1638(C=C)、1458、1036cm-１；１HNMR (400MHZ、ピリジン-d5)δ0.87(3H、s、Me)、0.91(3H、s、Me)、0.96(3H、s、Me)、1.02(3H、s、Me)、1.10(3H、s、Me)、1.24(3H、s、Me)、1.29(3H、s、Me)、3.30(1H、dd、J=4.5および11.5Hz、H-3α)、5.38(1H、brs、H-12)、13CNMR(100MHz、ピリジン-d5)、表3および4参照；FAB MSm/z 935[M+Na]
化合物Eの物理的、および化学的データを以下に示す：
化合物E：
アモルファス粉末：mp212-215℃；[α]２０D-9.6°(c0.20、MeOH)；IRvmax3414(OH)、1740(COOR)、1636(C=C)、1460、1364、1044、896cm-１；１HNMR (500MHZ、ピリジン-d5)δ0.85(3H、s、Me)、0.90(3H、s、Me)、0.94(3H、s、Me)、1.300(3H、s、Me)、3.19(1H、dd、J=4.0および13.7Hz、H-18)、3.32(1H、d、J=4.4および11.7Hz、H-3α)、5.40(1H、brs、H-12)；13CNMR(100MHz、ピリジン-d5)、表3および4参照；FAB MSm/z 943[M+Na]
化合物Ｆの物理的、および化学的データを以下に示す：
化合物Ｆ：
アモルファス粉末：mp209-211℃；[α]２０D-12.0°(c0.12、MeOH)；IRvmax3424(OH)、1734(COOR)、1636(C=C)、1458、1047cm-１；１HNMR (400MHZ、ピリジン-d5) δ0.87(3H、s、Me)、0.90(3H、s、Me)、0.92(3H、s、Me)、1.26(3H、s、Me)、3.20(1H、dd、J=3.5および13.6Hz、H-18)、3.33(1H、d、J=4.4および11.5Hz、H-3α)、5.39(1H、brs、H-12)、13CNMR(100MHz、ピリジン-d5)、表3および4参照；FAB MSm/z 1127[M+Na]
【００５３】
【表３】
0004903309.tif 000026
【００５４】
【表４】
0004903309.tif 000027
生物学的活性の実験
実施例１
ラットにおいて、ショ糖によって引き起こされる血糖量増加に対する化合物Ｂの効果
24時間絶食させた雌のSDラットをいくつかのグループにランダムに分けた。テストグループには、50、100、200ｍｇ/ｋｇの化合物Ｂを与え、ポジティブコントロールグループには、100ｍｇ/ｋｇのフェンホルミンを与えた。正常グループ、コントロールグループ、およびブランクグループには、同じ量の水を与えた。与えた医薬の量は、10ｍｇ/ｋｇである。30分後、正常グループをのぞくそれぞれのグループにはショ糖1/ｋｇ（5ｍｌ/ｋｇ）、を与えた。そして30、60、および120分後にそれぞれラットの目から血液を抽出し、血清中のグルコース含量を測定した。
【００５５】
ラットにショ糖が与えられてから30、60分後、血糖値が明らかに増加される結果となった。200ｍｇ/kgの化合物Ｂ、および100ｍｇ/ｋｇのフェノホルミンは、どちらも30分以内に、著しく血糖値の増加を減少することができ、二つの化合物の強度は同様であった。表５を参照。
【００５６】
【表５】
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実施例２
高脂血症ラットの血清中のTG、コレステロール含量に対する化合物Ｂの効果
体重が130-170ｇの雄SDラットの正常グループには普通の餌を与え、その他のグループには高脂肪含量である餌（1％コレステロール、10％ラード、0.3％コール酸、0.2％メチルチオイミダゾール、および88.5％普通の飼料、を固形にした）を与えた。14日経過後において、12時間絶食させたラットを試薬箱の方法によって測定して、血清中のTGおよびコレステロール含量を得た。次に、血液グリース値によって異なったグループに分けた。実験グループには、50、100、200ｍｇ/ｋｇの化合物Ｂを与え、ポジティブコントロールグループには、コフィブレート（cofibrate）を与えた。コントロールグループには水を与えた。与えた医薬量は10ｍｌ/ｋｇを10日間であり、それぞれのグループには医薬が与えられる前に5日間、高脂肪飼料を与えた。その後少なくとも5日間、普通の飼料を与えた。最終投与が与えられる前の11時間は、ラットを絶食させ、医薬が与えられてから1時間後のラットの血液を抽出して、血清中TGおよびコレステロール含量を得た。
【００５７】
高グリースを有する飼料がラットに与えられてから10日後、TGおよびコレステロール含量は明らかに増加し、50、100、200ｍｇ/ｋｇの化合物Ｂ、および100ｍｇ/ｋｇのコフィブレートは、どちらも高脂血症ラットの血清中のTGおよびコレステロール含量を減少し、200ｍｇ/ｍｌの化合物Ｂは、高脂血症の減少に対して、100ｍｇ/ｋｇのコフィブレートと同等の効果を有することを、前記結果が示している。表６を参照。
【００５８】
【表６】
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実施例３
インビトロにおける、ウサギ血小板の凝集に対する化合物Ｂの効果
穿刺によりウサギ心臓から血液を得て、抗凝集のための3.8％クエン酸ナトリウム（1：9）、1000rpmで15分間遠心して、血小板プラズマがリッチな層（ｐｒｐ）として上層をとった。次に、4000rpmで10分間遠心して、血小板プラズマの乏しいもの（ｐｐｐ）として上清をとった。200μｌのpppを比濁チューブに移して、化合物Ｂの生理食塩水10μｌを様々な濃度で添加して、最終濃度をそれぞれ250、500、1000μｇ/ｍｌとし、かつアスピリンの生理食塩溶液10μｌをコントロールチューブに添加して、37℃で2分間暖めた後に細胞を測定し、かつADPナトリウム塩の生理食塩水10μｌを攪拌しながら添加して、最終濃度を1.0×105Ｍとした。最大凝集率をPAM−１タイプの血小板機器で3分以内に観察する。
【００５９】
500、1000μｇ/ｍｌの化合物Ｂ、および250μｇ/ｍｌのアスピリンが、血小板の凝集を明らかに阻害することを、前記結果が示している。
【００６０】
【表７】
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実施例４
ラットにおける血糖上昇に対する化合物Ｆの効果
雄のKun Ming系マウスをランダムに実験グループに分ける。それらにはそれぞれ、50、100、200ｍｇ/ｋｇの化合物Ｆを経口によって摂取させ、ポジティブコントロールグループにはそれぞれ、50ｍｇ/ｋｇのグリベンクラミド（glubenclamide）を経口によって摂取させ、ブランクコントロールグループ、および正常コントロールグループには、経口によって同量の滅菌水を摂取させる。与えた医薬の量は、7日間続けて20ｍｌ/ｋｇである。それらには、最終投与の前10時間は飼料を与えることを禁止させる。正常コントロールグループを除くそれぞれのグループには、2.5ｇ/ｋｇ（10ｍｌ/ｋｇ）のデキストロース溶液を与えた。デキストロース投与の30分前および後に、目から100の血液を採集し、デキストロース酸素化酵素法に従って血清中のデキストロース含量を測定する。
【００６１】
結果
経口によりデキストロースを摂取してから30分後、血糖は明らかに上昇し、100、200ｍｇ/ｋｇ、および50ｍｇ/ｋｇの化合物Ｆは、いずれもマウスの血糖の上昇を阻害する。200ｍｇ/ｋｇの化合物Ｂおよび500ｍｇ/ｋｇのグリベンクラミド（glybenclamide）による血糖の低下は同等であり、これは表８で参照できるであろう。
【００６２】
【表８】
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実施例５
高脂血症ラットの血清中のトリグリセリドおよびコレステロールに対する化合物Ｆの効果
体重が130-170ｇの雄SDラットの正常グループには普通の餌を与え、その他のグループには高脂肪含量である餌（1％コレステロール、10％ラード、0.3％コール酸、0.2％メチルチオイミダゾール、および88.5％no普通の飼料を、自身によって飼料を作製する）を与えた。飼料を与えてから14日経過後において、12時間絶食したラットの血清中のTGおよびコレステロール含量を測定した。次に、血液脂質値によってランダムにグループに分けた。実験グループには、50、100、200ｍｇ/ｋｇの本化合物Ｆを与えた。ポジティブコントロールグループには、経口により100ｍｇ/ｋｇのコフィブレート（cofibrate）を与え、コントロールグループには水を与えた。投与量は、10日間続けて10ｍｌ/ｋｇで与えられる。それぞれのグループには、医薬を与える5日以前に高脂肪飼料が与えられ、次に普通の飼料が、次の5日間で与えられた。最終投与を与える前の11時間は、ラットを絶食させる。医薬を与えてから1時間後、血液を採取して、血清中のエステルおよびコレステロール含量を測定する。
【００６３】
結果
高脂質飼料が10日間与えられた後、ラット血清中のTGおよびコレステロール含量は明らかに増加する。50ｍｇ/ｋｇ、100ｍｇ/ｋｇ、200ｍｇ/ｋｇの化合物Ｆ、および200ｍｇ/ｋｇのコフィブレートは、どちらも高脂血症ラットの血清中のTGおよびコレステロール含量を減少させる。200ｍｇ/ｍｌの化合物Ｆが血液脂質を減少する機能は、100ｍｇ/ｋｇのコフィブレートと同等である（表9）。
【００６４】
【表９】
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実施例６
ウサギ血小板の凝集に影響を及ぼす化合物Ｂの効果
穿刺によりウサギ心臓から血液を得て、抗凝集のための3.8％クエン酸ナトリウム（1：9）、1000rpmで15分間の遠心して、血小板プラズマがリッチな層（ｐｒｐ）として上層をとった。そして次に、4000rpmで10分間遠心して、血小板プラズマの乏しいもの（ｐｐｐ）として上清をとった。200μｌのpppを比濁チューブに移して、化合物Ｂの生理食塩溶液10μｌを様々な濃度で添加して、化合物Ｂの最終濃度をそれぞれ250、500、1000μｇ/ｍｌとし、最終濃度をそれぞれ250、500、1000μｇ/ｍｌとし、かつアスピリンの生理食塩溶液10μｌをポジティブコントロールチューブに最終濃度250μｇ/ｍｌで添加して、生理食塩溶液10μｌをコントロールチューブに最終濃度250μｇ/ｍｌで添加する。PAM−１タイプの血小板凝集機器で3分以内に最大凝集率を観察する。
【００６５】
500、1000μｇ/ｍｌの化合物Ｆ、および250μｇ/ｍｌのアスピリンが、血小板の凝集を明らかに阻害することを、前記結果が示している。
【００６６】
【表１０】
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正常マウスの血糖に対する化合物Ｂの効果
雄のKun Ming系マウスをランダムに実験グループに分ける。それらにはそれぞれ、50、100、200ｍｇ/ｋｇの化合物Ｂを経口によって摂取させ、ポジティブコントロールグループにはそれぞれ、100ｍｇ/ｋｇのトルブトール（tolbutol）を経口によって摂取させ、ブランクコントロールグループには、経口によって同量の滅菌水を摂取させる。与えた医薬の量は、14日間続けて20ｍｌ/ｋｇである。
それらには、投与の1、3、7、14日後、テスト薬を投与する（投与の5時前間に、餌を与えることを事前に禁止されたものが提供される。）。投与してから3時間後に、目から10μｌの血液を採集し、試薬箱の方法に従って血清中のデキストロース含量を測定する。
【００６７】
結果
50、100、200ｍｇ/ｋｇ、の化合物Ｂを14日間投与し続けたが、正常マウスの血糖に対して明らかな効果はないという結果を示す。しかし、トルブトールの投与開始して三日目から、正常マウスの血糖の低下に対して、明らかな効果があることを示す。結果は表１１においても参照される。
【００６８】
【表１１】
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