(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
黒霊芝と霊芝（赤芝）の抽出物を、固形物の重量比として１：１の割合で含有することを特徴とする高血圧抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、黒霊芝の抽出物を主成分とした高血圧抑制剤に係り、さらに詳しくは、黒霊芝抽出物がアンジオテンシン変換酵素（以下、ＡＣＥと称する）の活性を阻害する抽出物であり、これを含有する高血圧抑制剤に関するものである。更に、マンネンタケ抽出物を吸着剤で精製した画分の製造方法と、その画分を含有する高血圧抑制剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
高血圧の重要な要因の一つとして、血圧の上昇系を担うレニン−アンジオテンシン系があげられる。このレニン−アンジオテンシン系において、中心的な役割を果しているのがＡＣＥである。ＡＣＥは、不活性型のアンジオテンシンＩを血圧上昇作用が高い、活性型のアンジオテンシンＩＩに変換する酵素である。そこで、ＡＣＥの活性を阻害することにより、血圧の上昇を抑制することが可能になる。最近では、ＡＣＥの活性を阻害することによって、レニン−アンジオテンシン系を調節して高血圧を抑制する試みが行われている。
【０００３】
そのようなＡＣＥ活性阻害を有する物質としては、合成化合物ではカプトプリル等のＬ−プロリン誘導体、天然物由来では蛇毒由来のブラディキニン増強因子、牛カゼインやイワシ等のトリプシン消化物由来のペプチド等が知られている。
【０００４】
担子菌では、シイタケ（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ、特開昭５８−２６８２０公報）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒｅａｔｕｓ、特開平２−７２１２１公報）、マイタケ（Ｇｒｉｆｏｒａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ、特開平８−２９１０７８公報）、エノキタケ（Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ  ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ、特開平８−２９１０７８公報）、ブナシメジ（Ｌｙｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｕｌｍａｒｉｕｍ、特開平８−９９８９５公報）等が報告されている。
【０００５】
また、マンネンタケ（霊芝）関連では、マンネンタケ（霊芝）の抽出物を配合した高血圧抑制剤（特開昭６１−２６７５２７）、マンネンタケ（霊芝）のアルコール抽出物中のガノデリン酸を配合した高血圧抑制剤（特開昭６０−２０８１６１）等が知られている。特開昭６１−２６７５２７の公報で用いられるマンネンタケとは、サルノコシカケ科に属するキノコで、赤芝、白芝、黄芝、紫芝等を含むと記載されている。しかし、この公報では、霊芝として用いているのみであり、赤芝、白芝、黄芝、紫芝等について詳細に比較検討されているわけではなかった。
【０００６】
一般にマンネンタケは、上記公報に示される赤芝、白芝、黄芝、紫芝の他、黒霊芝（黒芝）があげられ、これらは子実体の色が赤、白、黄、紫、黒であることから単純に命名されたものであるが、最近では、黒霊芝を霊芝や紫芝等と区別して研究されている。例えば、文献［日本醸造協会誌，８５（６），３８５−３９２，１９９０］によると、黒霊芝には赤芝や紫芝に含有する代表的なトリテルペン成分（ガノデリン酸）は含有されず、味も全く異なると報告されている。以上のことから、黒霊芝の高血圧抑制効果について更に深く研究する余地があった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
以上のことから、安全性が高く、ＡＣＥ阻害作用に優れた高血圧抑制剤が望まれている。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
この様な事情により、本発明者らは鋭意研究検討した結果、マンネンタケの中でも、黒霊芝の抽出物が特に優れたＡＣＥ阻害作用を有することを見出した。さらに、黒霊芝を単独で用いるよりも黒霊芝及び霊芝（赤芝）を併用することにより、更に相乗的に効果が上がることを見出した。また、マンネンタケ抽出物を吸着剤で精製した画分が特に優れたＡＣＥ阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
本発明に用いる黒霊芝（黒芝）及び霊芝（赤芝）は、生薬「霊芝」に用いられる担子菌であり、マンネンタケ科、マンネンタケ属に属し、マンネンタケの一種である。その学名は、文献［Ａｃｔａ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ，１９（３），２６５−２７９，１９７９］によると、黒霊芝（黒芝、学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍ）、霊芝（赤芝、学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ）に分類されるが、分類法はこの文献のみに限定されるものではない。本発明に用いられる黒霊芝及び霊芝（赤芝）は、広く中国や日本市場等で流通しているものを用いることができる。
【００１０】
本発明に用いる黒霊芝や霊芝（赤芝）の抽出物とは、子実体、菌糸体、菌糸体の培養物等から抽出することができる。好ましくは、子実体からの抽出物が良い。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。なお、菌糸体又は菌糸体の培養物については、定法により製造することができる。
【００１１】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水及びエタノールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。
【００１２】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭、エタノール沈殿等の処理をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１３】
更に、マンネンタケ抽出物を吸着剤に吸着させ、溶媒により溶出させることにより、高血圧抑制効果に優れた画分を得ることができる。
【００１４】
吸着剤としては、例えば、スチレン−ジビニルベンゼン系の合成吸着樹脂、陰イオン交換樹脂、オクタデシル基化学結合型シリカゲル（ＯＤＳ）、セルロース、デキストラン、修飾デキストラン等の吸着剤が挙げられる。中でも、スチレン−ジビニルベンゼン系の合成吸着樹脂が回収率の面から好ましい。
【００１５】
吸着方法としては、吸着剤をカラムに充填し、これに抽出物の溶液を通す方法や、抽出物の溶液に吸着剤をそのまま混合する方法などがあるが、特に限定されない。
【００１６】
吸着剤の溶出溶媒としては、各吸着剤の特性により選択できるが、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水やエタノールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。更に、上記溶出溶媒に酸やアルカリを添加してｐＨ調整して用いても良い。
【００１７】
上記の精製物は、溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭等の処理をして用いても良い。更には、濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１８】
特に好ましい例を挙げると、マンネンタケの抽出物（抽出物が固体であれば溶液にする）をスチレン−ジビニルベンゼン系の合成吸着樹脂を充填したカラムに通液して吸着させる。次いで、精製水を通液して洗浄した後、含水アルコール（例えば、アルコールとしてはエタノール）又はアルコールをカラムに通液することにより画分が溶出、回収できる。得られた画分を減圧濃縮し、噴霧乾燥又は凍結乾燥を行ない、本発明の高血圧抑制剤を得ることができる。
【００１９】
本発明の高血圧抑制剤には、上記抽出物や吸着剤による精製物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、希釈剤を用いることができ、希釈剤としては固体、液体、半固体でもよく、たとえば次のものがあげられる。すなわち、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、香料、保存料、溶解補助剤、溶剤等である。具体的には、乳糖、ショ糖、ソルビット、マンニット、澱粉、沈降性炭酸カルシウム、重質酸化マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、セルロースまたはその誘導体、アミロペクチン、ポリビニルアルコール、ゼラチン、界面活性剤、水、生理食塩水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、カカオ脂、ラウリン脂、ワセリン、パラフィン、高級アルコール等である。
【００２０】
本発明の高血圧抑制剤は、食品、医薬部外品又は医薬品のいずれにも用いることができ、その剤形としては、例えば、経口用として散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤などである。非経口用として注射液にすることが出来る。また、座薬とすることも出来る。
【００２１】
本発明に用いる上記抽出物の配合量は、本発明の高血圧抑制剤全量に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上、好ましくは０．００１〜９０重量％の配合が良い。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。９０重量％を越えて配合した場合、効果の増強はみられにくく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【００２２】
本発明に用いる上記抽出物のうち、黒霊芝と霊芝（赤芝）の抽出物を併用することにより、相乗的な高血圧抑制作用を示す。また、黒霊芝と霊芝（赤芝）の抽出物の配合比は、固形物の重量比で５：９５〜９５：５、好ましくは１０：９０〜９０：１０である。
【００２３】
【実施例】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、本発明の処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部をし、％は重量％を示す。
【００２４】
製造例１  黒霊芝の熱水抽出物
黒霊芝子実体の乾燥物２０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して黒霊芝の熱水抽出物を１．４ｇ得た。
【００２５】
製造例２  黒霊芝の５０％エタノール抽出物
黒霊芝子実体の乾燥物１００ｇに精製水１Ｌ及びエタノール１Ｌを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して黒霊芝の５０％エタノール抽出物を１．３ｇ得た。
【００２６】
製造例３  黒霊芝のエタノール抽出物
黒霊芝子実体の乾燥物１００ｇにエタノール２Ｌを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、黒霊芝のエタノール抽出物を０．９ｇ得た。
【００２７】
製造例４  霊芝（赤芝）の熱水抽出物
霊芝（赤芝）子実体の乾燥物２０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝（赤芝）の熱水抽出物を２．０ｇ得た。
【００２８】
製造例５  霊芝（赤芝）の５０％エタノール抽出物
霊芝（赤芝）子実体の乾燥物１００ｇに精製水１Ｌ及びエタノール１Ｌを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝（赤芝）の５０％エタノール抽出物を１．８ｇ得た。
【００２９】
製造例６  霊芝（赤芝）のエタノール抽出物
霊芝（赤芝）子実体の乾燥物１００ｇに２Ｌのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、霊芝（赤芝）のエタノール抽出物を１．０ｇ得た。
【００３０】
製造例７  黒霊芝の菌子体培養物の抽出物
ジャーファーメンターを用いて培養した。すなわち、麦芽エキス５０ｇ、酵母エキス２０ｇ、グルコース２０ｇを精製水５Ｌと混合し、ジャーに入れた後、１２１℃で３０分間滅菌した。これをジャーファーメンターに取り付け、同じ培地で２５℃１４日間振とう培養した黒霊芝の種菌糸体培養物１５０ｍＬを接種した。３００ｒ．ｐ．ｍの撹はん下、３Ｌ／分で空気を通気しながら、２５℃で１４日間培養した。得られた培養物をろ過し、菌子体を２．０ｋｇ（湿重量）得た。
分離した菌子体に精製水２Ｌを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して黒霊芝の菌子体培養物の抽出物を２２ｇ得た。
【００３１】
製造例８  黒霊芝のカラム精製物
製造例１の黒霊芝子実体の熱水抽出物２．０ｇを精製水５０ｍＬに溶解し、スチレン−ジビニルベンゼン系の合成吸着樹脂３５０ｍＬを充填したカラムに通液した。次いで、精製水を７５０ｍＬ通液して洗浄した後、２５％、５０％、１００％エタノール各７５０ｍＬで溶出させた。得られた画分を濃縮し、凍結乾燥して２５％エタノール画分０．４ｇ、５０％エタノール画分０．２ｇ、１００％エタノール画分０．２ｇを得た。これらは、実験例１に用いた。
同様に、２５％、５０％、１００％エタノール各７５０ｍＬで溶出させた画分を混合して濃縮し、凍結乾燥して黒霊芝のカラム精製物を０.８ｇ得た。
【００３２】
実施例１  散剤１
処方                                                    配合量
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例１）                      １０部
２．霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例４）                １０
３．乾燥コーンスターチ                                  ３０
４．微結晶セルロース                                    ５０
［製法］成分１〜４を混合し、散剤１とする。
【００３３】
実施例２  散剤２
実施例１において、霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例４）を黒霊芝の熱水抽出物（製造例１）に置き換えたものを散剤２とする。
【００３４】
比較例１  散剤３
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物（製造例１）を霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例４）に置き換えたものを散剤３とする。
【００３５】
実施例３  錠剤
処方                                                    配合量
１．黒霊芝のエタノール抽出物（製造例３）                  ４部
２．霊芝（赤芝）のエタノール抽出物（製造例６）            １
３．乾燥コーンスターチ                                  ２５
４．カルボキシメチルセルロースカルシウム                ２０
５．微結晶セルロース                                    ４０
６．ポリビニルピロリドン                                  ７
７．タルク                                                ３
［製法］成分１〜５を混合し、次いで成分６の水溶液を結合剤として加えて顆粒成形する。成形した顆粒に成分７を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【００３６】
実施例４  錠菓
処方                                                    配合量
１．黒霊芝の５０％エタノール抽出物（製造例２）            １部
２．乾燥コーンスターチ                                  ５０
３．エリスリトール                                      ４０
４．クエン酸                                              ５
５．ショ糖脂肪酸エステル                                  ３
６．香料                                                適量
７．水                                                  適量
［製法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【００３７】
実施例５  飲料
処方                                                    配合量
１．黒霊芝のカラム精製物（製造例８）                      ２部
２．霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例４）                  ２
３．ステビア                                              ０．０５
４．リンゴ酸                                              ５
５．香料                                                  ０．１
６．水にて全量を１００とする
［製法］成分３及び４を少量の水に溶解する。次いで、成分１、２、５及び６を加えて混合する。
【００３８】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００３９】
実験例１  ＡＣＥ阻害活性作用
高血圧抑制効果は、ＡＣＥ阻害活性を指標に測定した。ＡＣＥ阻害活性が強いもの程、血圧降下作用が強いとされている。ＡＣＥ阻害活性の測定方法は、ツツミらの改良Ｃｕｓｈｍａｎ法（Ｊ．Ｗｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，４４，４６３，１９９８）に準じた。
すなわち、各製造例の抽出物を４００μｇ／ｍＬ（各製造例の抽出物を混合して用いる場合は全量で４００μｇ／ｍＬ）となるように水／ジメチルスルホキシド混合液（９：１）に溶解し、試料溶液とする。試料溶液０．５ｍＬに３．０ｍＵ／ｍＬのＡＣＥ溶液０．２５ｍＬを加え、３７℃、３分間保持した後、５ｍＭのヒプリルヒスチジルロイシンを含む１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．３）溶液０．２５ｍＬを加えた。これを３７℃、３０分間反応を行った後、０．１Ｍ水酸化ナトリウム２．０ｍＬを加えて反応を停止した。次に０．２％オルトフタルアルデヒドメタノール溶液０．１ｍＬを加え、０℃で１５分間遮光放置した。これに、１．５Ｍリン酸溶液０．４ｍＬを加えて被験液とし、蛍光強度（励起波長３６０ｎｍ、蛍光波長４８０ｎｍ）を測定した。ＡＣＥ阻害活性（％）は、被験液の蛍光強度を（Ｃ）、試料の代わりに水を加えたときの値を（Ａ）、（Ｃ）の酵素ブランク（酵素の代わりに水を加えたもの）の値を（Ｄ）、（Ａ）の酵素ブランクの値を（Ｂ）とし、て、次式から算出した。
ＡＣＥ阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
【００４０】
これらの実験結果を表１に示した。その結果、黒霊芝の熱水抽出物は、霊芝（赤芝）の熱水抽出物と比較して優れたＡＣＥ阻害活性作用を示した。更に、黒霊芝の熱水抽出物と霊芝（赤芝）の熱水抽出物を併用した場合、顕著なＡＣＥ阻害活性作用を示した。また、マンネンタケ抽出物を吸着剤で精製した画分が特に優れたＡＣＥ阻害作用を示した。その他の製造例の抽出物についても同様に優れたＡＣＥ阻害活性作用を示した。
【００４１】
【表１】
0004949579.tif 000002
【００４２】
実験例２  高血圧抑制作用
試料は、製造例１、３、４、８、製造例１と４の等量混合物、実施例１、２、及び比較例１を用いた。
雄性高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）を生後１０週齢から１２週齢まで市販の固形飼料と水道水で飼育し、上記試料を１群８匹、体重１ｋｇ当たり、上記の試料を水に分散させて経口投与し、投与前と投与２時間後の血圧を測定した。なお、投与量は、固形分に換算して、製造例１、３、４、８の場合１００ｍｇ、製造例１と４の等量混合物の場合は全量で１００ｍｇ、実施例１、２、及び比較例１で示される散剤１〜３については２５０ｍｇになるように投与した。血圧は、非観血式尾動脈血圧測定装置により、尾動脈で測定した。その最高血圧の平均値を血圧の値とした。対照群には水を投与した。
【００４３】
これらの実験結果を、表２に示した。その結果、黒霊芝の抽出物を含有する製剤は、優れた高血圧抑制作用を示した。更に、黒霊芝の熱水抽出物と霊芝（赤芝）の熱水抽出物を併用した場合、顕著な高血圧抑制作用を示した。また、マンネンタケ抽出物を吸着剤で精製した画分が特に優れた高血圧抑制作用を示した。その他の製造例の抽出物や実施例についても同様に優れた高血圧抑制作用を示した。
【００４４】
【表２】
0004949579.tif 000003
【００４５】
【発明の効果】
以上のことから、本発明の黒霊芝の抽出物は、霊芝（赤芝）の抽出物と比較してＡＣＥ阻害活性作用に優れていた。さらに、黒霊芝及び霊芝（赤芝）抽出物を併用することにより、相乗効果を示した。また、マンネンタケ抽出物を吸着剤で精製した画分が特に優れたＡＣＥ阻害作用を有することも見出した。これらを含有する食品、医薬部外品又は医薬品は、安全で優れた高血圧抑制作用を示した。