(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
烏薬及び何首烏よりなる群から選択される少なくとも１種の生薬の抽出物を有効成分とする、歯周病原性細菌ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）生育阻害剤。
【請求項２】
生薬の抽出物が、烏薬の場合は流エキス剤として、また何首烏の場合はチンキ剤として用いられる、請求項１記載の生育阻害剤。
【請求項３】
烏薬及び何首烏よりなる群から選択される少なくとも１種の生薬の抽出物を有効成分とする、歯周病原性細菌ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）産生コラゲナーゼ阻害剤。
【請求項４】
生薬の抽出物が、烏薬の場合は流エキス剤として、また何首烏の場合はチンキ剤として用いられる、請求項３記載のコラゲナーゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、歯周病の予防および治療に有効な抗歯周病剤に関する。より詳細には、本発明は歯周病原性細菌として知られるポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）の生育を阻害し、更にこの菌が産生するコラゲナーゼを阻害する作用を有する、天然植物に由来する抗歯周病剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
歯周病は細菌性由来の炎症性疾患であり、歯周病原性細菌の増加、細菌の組織内侵入及び感染に対する宿主応答がその要因となっている。ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）は、歯周病の中でも最も多いとされる成人性歯周炎の病原菌として有力視されている細菌であり、歯周病患者の歯周ポケット深部から高い頻度で分離される。また、この菌は血液平板培地上で黒色のコロニーを形成する非運動性のグラム陰性の桿菌であり、コラゲナーゼ、フォスフォリパーゼＡ、アルカリフォスファターゼ、酸フォスファターゼ等の酵素を産生することが知られている。なかでもコラゲナーゼは歯周組織のコラーゲンを分解する作用を有するため、歯肉の組織破壊を導く直接的な因子といわれている。このため、歯周病を有効に予防しまた治療するためには、歯周ポケット内のポルフィロモナス・ジンジバリスの生育を抑え、また該菌が産生する酵素の働きを阻害することが重要である。
【０００３】
従来より、上記歯周病原性細菌の生育を阻害することによって歯周炎の症状を改善する薬剤としてテトラサイクリン、ミノサイクリン等の抗生物質が用いられている。しかしながら、かかる抗生物質は作用が強力で効果が優れる反面、薬剤耐性菌の出現や副作用等の問題があり、その使用は制限されているのが実情である。
【０００４】
そこで、副作用が無くて人体への安全性が高く、しかも上記抗生物質に匹敵するか、またはそれ以上の効果を有する薬剤の開発が早急に求められている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記従来の課題を解決することを目的とするものである。すなわち、本発明は、歯周病の病原菌として知られるポルフィロモナス・ジンジバリスに対して生育阻害作用を有しながらも人体に安全な抗歯周病剤を提供することを目的とする。特に本発明は、上記歯周病原性細菌に対する生育阻害作用と該菌が産生するコラゲナーゼを阻害する作用とを併せもつことにより歯周病の予防および治療に有効な抗歯周病剤であって、副作用等の心配のない抗歯周病剤を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題に鑑みて、人体に対して安全でしかも歯周病の原因菌として有力視されているポルフィロモナス・ジンジバリスに対して生育阻害作用を示す物質を求めて日夜研究を重ねたところ、従来から生薬として広く用いられている松葉、丁子、ローズマリー、烏薬、櫻皮、厚朴、辛夷、及び何首烏といった各種の植物に上記生育阻害作用があることを見出した。そしてかかる知見に基づいてさらに検討を重ねたところ、この生薬は、更にポルフィロモナス・ジンジバリスが産生するコラゲナーゼを阻害する作用をも有していることを見出し、歯周病の治療並びに予防に極めて有効な抗歯周病剤として調製できることを確認した。本発明はかかる知見に基づいて完成したものである。すなわち、本発明は下記に掲げる抗歯周病剤である：
項１．松葉、丁子、ローズマリー、烏薬、櫻皮、厚朴、辛夷、及び何首烏よりなる群から選択される少なくとも１種の生薬の抽出物を有効成分とする、歯周病原性細菌ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）の生育阻害作用、並びに該ポルフィロモナス・ジンジバリス産生コラゲナーゼの阻害作用を有することを特徴とする、抗歯周病剤。
項２．生薬の抽出物が、烏薬、櫻皮、厚朴または辛夷の場合は流エキス剤として、また何首烏の場合はチンキ剤として用いられる、項１記載の抗歯周病剤。
項３．項１または２に記載の抗歯周病剤を含有する口腔用組成物。
【０００７】
【実施の形態】
本発明の抗歯周病剤の有効成分としては、松葉、丁子、ローズマリー、烏薬、櫻皮、厚朴、辛夷、及び何首烏よりなる群から選択される少なくとも１種の生薬の抽出物を挙げることができる。これらの生薬は、古来より使用され安全性の確認されている植物系生薬である。
【０００８】
松葉はアカマツ（Pinus densiflora Sieb. et Zuee.[Japanese red pine]）の葉であって、日本薬局方掲載外の生薬として従来からリウマチ、脚気、凍傷の予防治療薬として用いられているものであり；丁子は、Syzygium aromaticum Merrill et Perry (Eugenia caryophyllata Thunberg)(Myrtaceae)の蕾または葉であり、日本薬局方掲載生薬として従来から健胃薬等の各種処方の漢方処方用薬に用いられているものであり；ローズマリー（Rosemarinus officinalis L.）は日本薬局方の掲載外の生薬として従来から抗炎症、鎮痛、消化機能改善薬として用いられているものであり；烏薬は、テンダイウヤク（Lindera strychnifolia F.Villars (Lauraceae)）の根であり、日本薬局方外生薬規格に掲載の生薬として従来から胃腸薬等の各種処方の漢方処方用薬に用いられているものであり；櫻皮は、ヤマザクラ（Prunus jamasakura Siebold）またはその他近縁植物（Rosaceae）（例えば、ソメイヨシノ）の、通例、周皮を除いた樹皮であり、日本薬局方掲載外の生薬として従来からかぜ薬や鎮咳去痰薬等の各種処方の漢方処方用薬に用いられているものであり；厚朴は、ホウノキ Magnolia obovata Thunberg, Magnolia officinalis Rehder et Wilson 又は、Magnolia officinalis Rehder et Wilson var. biloba Rehder et Wilson (Magnoliaceae)の樹皮であり、日本薬局方掲載生薬として従来から健胃薬や鎮痛鎮けい薬等の各種処方の漢方処方用薬に用いられているものであり；辛夷は、タムシバ(Magnolia salicifolia Maximowicz)、コブシ（Magnolia kobus De Candolle）、Magnolia biondii Pampaniniまたはその他近縁植物（Magnoliaceae)の蕾であり、従来から日本薬局方外生薬規格掲載の生薬として葛根湯加川・辛夷や辛夷清肺湯といった漢方処方用薬に用いられているものであり；何首烏は、ツルドクダミ（Polygonum multiforum Thunberg (Polygonaceae))の塊根であり、従来から日本薬局方外生薬規格掲載の生薬として当帰飲子といった漢方処方用薬に用いられているものである。
【０００９】
これらの生薬は、各植物の部位をそのまま（生）若しくは破砕物として抽出操作に付してもいいし、また乾燥後、必要に応じて粉砕粉体状として抽出操作に付してもよい。
【００１０】
抽出溶媒としては、例えば、水、有機溶媒またはこれらの混合物を挙げることができる。有機溶媒としては特に制限されるものではないが、メタノール，エタノール，プロパノール及びブタノール等の炭素数１〜４の低級アルコール；酢酸エチルエステル等の低級アルキルエステル；エチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどのグリコール類；その他エチルエーテル、アセトン、酢酸等の極性溶媒；ベンゼンやヘキサン等の炭化水素；エーテルや石油エーテルなどのエーテル類等の非極性溶媒の公知の有機溶媒を挙げることができる。好ましくは水並びにアルコールである。これら溶媒は、単独で用いてもよく、二種以上を組み合わせて使用することもできる。例えば必要に応じて上記有機溶媒に適量の水を加えて含水有機溶媒として用いることもでき、かかるものとしては好適に水とアルコールの混合溶媒を挙げることができる。本発明において、より好ましくは水、アルコール（例えばエタノール等）、または水とアルコールの混合液であり、混合液の場合２０〜４０重量％程度のエタノール含有水溶液を例示することができる。
【００１１】
抽出方法としては、一般に用いられる方法が採用でき、例えばエキス剤、エリキシル剤、浸剤・煎剤、流エキス剤及びチンキ剤等の各種生薬製剤の調製に用いられる抽出方法を広く挙げることができる。制限はされないが、例えば溶媒中に上記生薬（そのまま（生）若しくは粗末、細切物）、又はそれらの乾燥破砕物（粉末など）を冷浸（通常〜25℃）や温浸（通常35〜45℃）等によって浸漬する方法、加温し攪拌しながら抽出を行い、濾過して抽出液を得る方法、またはパーコレーション法（通常１〜３０℃）等を挙げることができる。
【００１２】
得られた抽出液は、必要に応じてろ過または遠心分離によって固形物を除去した後、使用の態様により、そのまま用いるか、または溶媒を留去して一部濃縮若しくは乾燥して用いてもよい。また濃縮ないしは乾燥後、得られる濃縮物乃至は乾燥物を非溶解性溶媒で洗浄して精製して用いても、またこれを更に適当な溶剤に溶解もしくは懸濁して用いることもできる。また、抽出液を、慣用されている精製法、例えば向流分配法や液体クロマトグラフィー等を用いて、ポルフィロモナス・ジンジバリスに対する生育阻害活性及び／又は該菌が産生するコラゲナーゼを阻害する活性を有する画分を取得、精製して使用することも可能である。更に、本発明においては、例えば上記のようにして得られた溶媒抽出液を、減圧濃縮によって軟エキスとして、または減圧乾燥や凍結乾燥等の通常の手段によりエキス乾燥物として使用することもできる。
【００１３】
本発明の原料として用いる生薬が、例えばそれが含有する精油に起因して強い香気を有する場合において、その香気が食品等への適用に支障をきたす場合には、予め該生薬から精油成分を除去した後に上記抽出処理を施すことが好ましい。精油成分の除去は、特に制限されないが、対象の生薬をそのまま若しくは乾燥、粉砕した後、水蒸気蒸留するかまたはヘキサンなどの無〜低極性溶媒で抽出処理することによって実施できる。
【００１４】
なお、本発明で用いられる上記各種の生薬のうち、松葉、丁子及びローズマリーは抽出物に調製して用いることができる。これらの抽出物は上記方法に従って調製してもよいし、簡便には商業的に松葉抽出物、丁子抽出物及びローズマリー抽出物として販売されているものを使用することもできる。
【００１５】
また、上記生薬のうち、烏薬、櫻皮、厚朴及び辛夷はエキス剤または流エキス剤として調製して使用することが好ましい。これらのエキス剤または流エキス剤は日本薬局方に規定される慣用方法に従って調製してもよいが、簡便にはエキス剤または流エキス剤（烏薬流エキス、櫻皮流エキス、厚朴流エキス及び辛夷流エキス）として商業的に販売されているものを使用することもできる。さらに、何首烏はチンキ剤として調製して使用することが好ましい。これらのチンキ剤は日本薬局方に規定される慣用方法に従って調製してもよいが、簡便には商業的に販売されている何首烏チンキ剤を使用することもできる。
【００１６】
なお、エキス剤を調製する場合には、賦形剤を用いて生薬の濃度を調製することもできる。かかる賦形剤としては、軟エキスの場合は液状ブドウ糖、マルツエキス、グリセリン；乾燥エキスの場合は澱粉、白糖、乳糖、カンゾウ末、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸カルシウム、等を例示することができる。
【００１７】
本発明の抗歯周病剤は、上記の生薬の抽出物からなるものであっても、またそれを有効成分として含有するものであってもよい。有効成分として含有する場合、抗歯周病活性を示すための各生薬抽出物の配合割合は０．００１〜２５％の範囲から適宜選択することができる。
【００１８】
また、本発明の抗歯周病剤は、食品、医薬部外品又は医薬品などの各種口腔用組成物の成分として配合されることにより、口腔内の歯周病の予防及び治療に有効に利用することができる。
【００１９】
よって本発明は上記の生薬抽出物を抗歯周病剤として含有する口腔用組成物を提供するものである。
【００２０】
ここで口腔用組成物とは、例えば飲食物のように経口的に摂取されるもの並びに歯磨きやマウスウォッシュのように口腔内で用いられるものの双方を含む。
【００２１】
口腔用組成物として具体的には、例えばトローチ、チューインガム、キャンディ、グミキャンディ、チョコレート、ジュース等の各種食品；歯磨剤（練り状、液体状、粉末固形状），マウススプレーなどの口中清涼剤、咀嚼剤、トローチ剤、口腔用パスタ剤、うがい剤、シロップ剤等の医薬品又は医薬部外品；歯磨剤、マウスウォッシュ、マウスリンスなどの口腔内化粧品を挙げることができる。好ましくは、トローチ、チューインガム及びキャンディ等の食品、並びに歯磨剤，マウスウォッシュ及びマウスリンスなどの洗口剤を挙げることができる。
【００２２】
これらの形態並びに剤形は、特に制限されず、種類に応じて任意に定めることができる。
【００２３】
口腔用組成物中の抗歯周病剤の配合割合は、抗歯周病剤に含まれる生薬の種類やその生薬抽出物の有効濃度、口腔用組成物の種類、口中における希釈などの因子を考慮して適宜選択決定することができる。口腔用組成物100重量％あたりの抗歯周病剤の配合割合として、各生薬抽出物の濃度に換算して、通常０．００１〜２５重量％、好ましくは０.０１〜１０重量％の範囲から適宜選択調整することができる。
【００２４】
本発明の抗歯周病剤は、本発明の効果を妨げない限り、他の成分として、公知若しくは将来公知となり得る、歯周病原性細菌に対する抗菌剤（生育阻害剤）、歯周病原性細菌が産生するコラゲナーゼの阻害剤、若しくは消炎剤などの成分と組み合わせて配合することもできる。
【００２５】
また、本発明の抗歯周病剤は、適用する口腔用組成物の種類に応じて、該口腔用組成物に通常配合される成分と併用することができる。
【００２６】
例えば練歯磨の場合、第２リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、非晶質シリカ、酸化アルミニウム等の研磨剤；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸塩、カラゲナン、アラビアゴム、ポリビニルアルコール等の粘結剤；ポリエチレングリコール、ソルビトール、グリセリン、プロピレングリコール等の粘稠剤；ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、水素添加ココナッツ脂肪酸モノグイセリドモノ硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、Ｎ−ラウロイルザルコシン酸ナトリウム、Ｎ−アシルグルタミン酸塩、ショ糖脂肪酸エステル等の発泡剤等を挙げることができ、更にこれに通常用いられるメントール等の香料並びに矯味剤又は甘味剤、防腐剤等を配合することができる。マウスウオッシュ等の洗口剤並びにチューイングガム等の食品の場合についても、常法の成分を併用することができる。なお、併用配合される甘味剤としては、う蝕性が低いか又はないものが好ましく、例えばＤ−キシロース、キシリトール、サッカリンナトリウム、アスパルテーム、トレハロースなどを好適に挙げることができる。
【００２７】
さらに、本発明の抗歯周病剤は、塩化リゾチーム、溶菌酵素、デキストラナーゼ、ムタナーゼ、クロルヘキシジン、ソルビン酸、アレキシジン、ヒノキチオール、セチルピリジニウム、アルキルグリシン、アルキルジアミノエチルグリシン塩、モノフルオロリン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、フッ化第１スズ、水溶性第一若しくは第二リン酸塩、第四級アンモニウム化合物、塩化ナトリウム等の成分と併用して用いることもできる。
【００２８】
【実施例】
以下に試験例及び実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例等に何ら限定されるものではない。
参考例１   松葉抽出物の調製
容器にアカマツ（Pinus densiflora Sieb. et Zuee.）の葉の粗切物を入れ、これに、エタノール３容量に水を加えて１０容量に調整した含水エタノール（以下、これを「30％エタノール」という。）を加えてよく混和して潤した後、密閉して室温で２日間放置し、その後自然ろ過してこれを第１浸出液とする。また残留物に再度30％エタノールを加え、同様にして２日間放置した後、自然ろ過して、これを第２浸出液とする。第２浸出液は６０℃以下で減圧濃縮し、第１浸出液と合わせ、これに再び30％エタノールを加えて、液量を１ｍｌ中に原生薬１ｇが含まれるように調整し、２日間放置した後、珪藻土を用いてろ過した。得られた濾液を松葉抽出物とした。
【００２９】
参考例２  丁子抽出物の調製
容器に丁子（Syzygium aromaticum Merrill et Perry [Eugenia caryophyllata Thunber]）（Myrtaceae）をとり、これに30％エタノールを２倍量添加し、よく混和して潤した後、密閉して室温で２日間放置し、その後自然ろ過してこれを第１浸出液とする。また残留物に再度30％エタノールを２倍量加え、同様にして２日間放置した後、自然ろ過して、これを第２浸出液とする。第２浸出液は６０℃以下で減圧濃縮し、第１浸出液と合わせ、これに再び30％エタノールを加えて、液量を１ｍｌ中に原生薬１ｇが含まれるように調整し、２日間放置した後、珪藻土を用いてろ過した。得られた濾液を丁子抽出物とした。
【００３０】
参考例３  ローズマリー抽出物の調製
容器にローズマリー（Rosmarinus officinalis L.の葉）の乾燥物１０ｋｇを量りとり、これに30％エタノール４０Ｌを添加してよく混和し、密閉して室温で３日間放置した後、自然ろ過してこれを第１浸出液とする。また残留物に再度30％エタノールを３０Ｌ加え、同様にして２日間放置した後、自然ろ過して、これを第２浸出液とする。第１浸出液と第２浸出液を合わせて６０℃以下で減圧濃縮し、次いでこれにエタノールを加えて全量を１０Ｌとし、２日間放置した後、珪藻土を用いてろ過した。得られた濾液をローズマリー抽出物とした。
【００３１】
参考例４  烏薬流エキスの調製
テンダイウヤク（Lindera strychnifolia F.Villars (Lauraceae)）の根の乾燥破砕物１０ｋｇを原料とし、第１浸出剤及び第２浸出剤として30％エタノールを用いて、日本薬局方製剤総則「流エキス剤」に記載される製法に従って、浸出処理して、約１０ｋｇの浸出液を得た。得られた浸出液を烏薬流エキスとした。
【００３２】
参考例５  櫻皮流エキスの調製
ソメイヨシノ（Prunus yedonsis Matsum.）の周皮を除いた樹皮の乾燥破砕物１０ｋｇを原料とし、第１浸出剤及び第２浸出剤として30％エタノール水溶液を用いて、日本薬局方製剤総則「流エキス剤」に記載される製法に従って、浸出処理して、約１０ｋｇの浸出液を得た。得られた浸出液を櫻皮流エキスとした。
【００３３】
参考例６  厚朴流エキスの調製
日本薬局方厚朴の乾燥破砕物１０ｋｇを原料とし、第１浸出剤及び第２浸出剤として３０％エタノールを用いて、日本薬局方製剤総則「流エキス剤」に記載される製法に従って、浸出処理して、約１０ｋｇの浸出液を得た。得られた浸出液を厚朴流エキスとした。
【００３４】
参考例７  辛夷流エキスの調製
タムシバ(Magnolia salicifolia Maximowicz)の蕾の乾燥細切り物１０ｋｇを原料とし、第１浸出剤及び第２浸出剤として30％エタノール水溶液を用いて、日本薬局方製剤総則「流エキス剤」に記載される製法に従って、浸出処理して、約１０ｋｇの浸出液を得た。得られた浸出液を辛夷流エキスとした。
【００３５】
参考例８  何首烏チンキの調製
ツルドクダミ（Polygonum multiforum Thunberg (Polygonaceae))の塊根の乾燥破砕物（何首烏）１０ｋｇを、50％エタノールを浸出液として、日本薬局方製剤総則「チンキ剤」の冷浸法に記載される製法に従って３０Ｌの浸漬液を得た。
得られた浸出液を辛夷流エキスとした。
【００３６】
試験例１   生育阻害作用
参考例１〜８で調製した各種の生薬抽出物を用いて歯周病原性ポルフィロモナス・ジンジバリスに対する生育阻害作用を測定した。
【００３７】
具体的には、まずＧＡＭブイヨン培地（ＧＡＭブイヨン59g、精製水1000ml）に等量の生薬抽出物を添加し（２倍希釈物：50％溶液）、これを被験サンプル溶液とした。該被験サンプル溶液を同様にＧＡＭブイヨン培地で希釈することにより２４穴マイクロプレートに２、４、８、16、32及び64倍の希釈系列（生薬濃度：50％、25％、12.5％、6.25％、3.125％及び1.56％）を作成した。これらそれぞれにポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）菌 ATCC 33277株を10％の割合で添加し、３７℃で３日間、嫌気条件で静置培養して、菌の生育の有無を調べた。培養から３日目の菌の生育の有無から、各生薬抽出物の最小阻害濃度を求めた結果を表１に示す。なお、表中、−は菌の生育なし、＋は菌の生育ありを意味する。
【００３８】
【表１】
0004873805.tif 000002
【００３９】
この結果から、松葉、丁子、ローズマリー、烏薬、櫻皮、厚朴、辛夷、及び何首烏はいずれも歯周病原性ポルフィロモナス・ジンジバリスに対して有意に生育阻害作用を有することが判明した。特に丁子、ローズマリー、何首烏、松葉、厚朴、辛夷、烏薬、櫻皮に強い抗菌作用が認められた。
【００４０】
試験例２    コラゲナーゼ阻害作用
参考例１〜８で調製した各種の生薬抽出物を被験体として用いて、歯周病原性ポルフィロモナス・ジンジバリス産生コラゲナーゼに対する阻害作用を求めた。
【００４１】
コラゲナーゼ阻害作用は、コラゲノキットCLN-100（コラーゲン技術研修会）を用いて評価した。具体的には、蛍光標識コラーゲンを基質とし被験体存在下でコラゲナーゼと反応して生じる分解物を、35℃で選択的に変性させた後、エタノールで抽出し、抽出された分解物の蛍光強度を測定することにより被験体のコラゲナーゼ阻害活性を算出した。すなわち、被検体が分解した時のコラゲナーゼ活性の減少率を阻害率としてコラゲナーゼ活性阻害率を求めた。
【００４２】
(1) コラゲナーゼ溶液の調製
ポルフィロモナス・ジンジバリス産生コラゲナーゼ溶液は、以下の方法により調製した。
【００４３】
血液平板培地（トリプチケイス・ソイ・アガー(Tripticase soy Agar）40ｇ、ヘミン(hemin）5mg、メナジオン(menadione）0.5mg、馬脱繊維血液 50ml、精製水 950ml）により４日間嫌気的に培養を行ったポルフィロモナス・ジンジバリスATCC 33277株を酵素抽出用液体培地（GAMブイヨン59g、精製水1000ml）1000mlに接種し、37℃で３日間嫌気的に培養した。培養液を遠心分離（12000×g、20分間）し、上清を80％硫酸アンモニウム飽和し、再度遠心分離（12000×g、20分間）した。得られた沈殿を５mＭ 塩化カルシウムを含む0.05Ｍトリス−塩酸緩衝液（pH 7.5）250 mlに溶解し、同緩衝液を用いて十分に透析を行った。透析内液をろ過（0.22μｍ、MILLIPORE）したものをポルフィロモナス・ジンジバリス産生コラゲナーゼ溶液とした。
【００４４】
(2) コラゲナーゼ阻害作用の測定
参考例１〜８で調製した各種の生薬抽出物についてコラゲナーゼ阻害作用を測定した。具体的にまずポルフィロモナス・ジンジバリス産生コラゲナーゼ溶液（3.684U/ml）100μｌ、蛍光標識コラーゲン溶液200μｌ及び各生薬抽出物の希釈液（希釈倍率：10倍希釈液(10％)、100倍希釈液(１％)、1000倍希釈液(0.1％)、10000倍希釈液(0.01％)）100μｌを混合して計400μｌとし、これを35℃で２時間反応させて、反応後に分解物の蛍光強度を測定して、コラゲナーゼ活性を算出した。生薬抽出物のコラゲナーゼ活性阻害率は、以下の式から求めた（１Ｕ＝１μgのコラーゲン分解／分）。
【００４５】
【数１】
0004873805.tif 000003
【００４６】
試験結果を表２に示す。なお、コントロールのコラゲナーゼ活性は3.684U/mlだった。
【００４７】
【表２】
0004873805.tif 000004
【００４８】
この結果から、松葉、丁子、ローズマリー、烏薬、櫻皮、厚朴、辛夷、及び何首烏の各生薬の抽出物がポルフィロモナス・ジンジバリスが産生するコラゲナーゼに対して阻害作用を有することがわかる。
【００４９】
＜実施例＞
以下、本発明の抗歯周病剤の適用例を実施例として記載する。なお、各実施例において、生薬抽出物として上記参考例１〜８で調製した松葉抽出物（松葉乾燥物換算：8.8g/100ml）、丁子抽出物（丁子乾燥物換算：6.6g/100ml）、ローズマリー抽出物（ローズマリー乾燥物換算：7.4g/100ml）、烏薬流エキス（烏薬乾燥物換算：1.89g/100ml）、櫻皮流エキス（櫻皮乾燥物換算：1.7g/100ml）、厚朴流エキス（厚朴乾燥物換算：5.0g/100ml）、辛夷流エキス（辛夷乾燥物換算：6.0g/100ml）、または何首烏チンキ（何首烏乾燥物換算：4.6g/100mlを用いた。また、各処方の単位は特に言及しない限り、重量部を意味するものである。
【００５０】
0004873805.tif 000005
【００５１】
0004873805.tif 000006
【００５２】
実施例３  糖衣タブレット
錠剤部分200重量部を、糖衣部130重量部で糖衣した口中清涼剤を作成した
0004873805.tif 000007
【００５３】
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【００５４】
0004873805.tif 000009
【００５５】
0004873805.tif 000010
【００５６】
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【００５７】
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【００５８】
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【００５９】
0004873805.tif 000014
【００６０】
【発明の効果】
本発明によれば、古来より漢方薬の成分として広く用いられている生薬の抽出物を原料とする安全性の高い抗歯周病剤を提供することができる。当該抗歯周病剤は歯周病原性細菌として知られるポルフィロモナス・ジンジバリスの生育を阻害し、且つこの菌の産生するコラゲナーゼを阻害する作用を有するため、優れた歯周病の予防効果および治療効果を発揮することができる。本発明で用いられる生薬抽出物は異味異臭が比較的少なく、また唾液との親和性（相溶性）に優れるため、経口組成物の形態の抗歯周病剤として広く応用可能である。