(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２２５から４５０ＩＵの範囲の１日の用量にてＷＨＯグループＩＩの無排卵の女性において、少数の卵胞の発生又は単一卵胞の発生を誘発するための医薬の製造における、ＬＨの使用であって、
ここにおいて、医薬は、８から１３ｍｍの範囲の平均直径を有する３つより多い卵胞が存在し、それより大きな卵胞は存在しない、中期又は後期の卵胞相中に開始して投与されるものであり、そして、
卵胞発生は、ＦＳＨの投与によって誘発される、
前記使用。
【請求項２】
ＬＨがｒ−ｈＬＨである、請求項１記載の使用。
【請求項３】
ＦＳＨに対するＬＨのＩＵ比が１．５：１から２０：１の範囲である、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
比が１．５：１から１０：１である、請求項３記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、無排卵の女性の治療におけるゴナドトロピンの使用に関する。特定すれば、本発明は、無排卵の女性において排卵を誘発する際に、卵胞の発生、特に乏卵胞（ｐａｕｃｉｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ）および単卵胞（ｍｏｎｏｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ）の発生を促進するための黄体形成ホルモン（ＬＨ）の使用に関する。
【０００２】
ゴナドトロピンはＷＨＯグループＩＩおよびＷＨＯグループＩ無排卵により女性を治療するための臨床実務において広く使用されている（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  ５１４，（１９７３））。伝統的には、卵胞発生（ｆｏｌｌｉｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）は、ｈＭＧ（ヒト閉経ゴナドトロピン）またはｕ−ｈＦＳＨ（尿内ヒト卵胞刺激ホルモン）の７５−１５０ＩＵ／日の用量の投与により誘発される。この用量は７５ＩＵのステップにより数日後に（通常は５日）増加させる。４５０ＩＵ／日を超えるのは稀である。平均直径少なくとも１８ｍｍを有する少なくとも１つの卵胞および平均直径少なくとも１６ｍｍの２つを超えない卵胞が存在する場合、高い用量（例えば５０００ＩＵ）のｈＣＧ（ヒト絨毛性ゴナドトロピン）を投与して排卵を誘発する。この「慣用のプロトコル」は２０年以上成功して使用されてきた。それは、しかしながらいくつかの危険を有し、主に、多嚢胞性卵巣疾患（ＰＣＯＤ）の患者においてである。これらの危険は、卵巣高刺激症候群（ＯＨＳＳ）の発症、および多胎妊娠の相対的に高い発生率を含む（Ｓｃｈｅｎｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．３５：１０５−１２３（１９８１））。大多数の多胎妊娠は双子であるが、排卵の誘発は英国において高いランクの多生児の１／３の一因となる（Ｌｅｖｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎａｃｏｌ．９９：６０７−６１３（１９９２））。
【０００３】
超音波（ＵＳ）による治療およびエストラジオール（Ｅ2）の評価の間の注意深い監視は、これらの危険を低下させてきたが、全ての患者でそれらを予防することはできていない。これらの問題は、非生理学上の複数の卵胞の発生を導く単一の支配的な卵胞の成長を得ることの困難に直接関係する。
【０００４】
最近１０年の間、新しいプロトコルがデザインされ（「緩性（ｃｈｒｏｎｉｃ）低用量プロトコル」）、そして試験されたことにより、ゴナドトロピン治療の合併症の発生をさらに減じた（Ｓｅｉｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｆｅｒｔｉｌ．，２９：３３８−３３９（１９８４）；Ｂｕｖａｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．，５２：５５３−５５９（１９８９）；Ｈａｍｉｌｔｏｎ−Ｆａｉｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄ．６：１０９５−１０９９（１９９１）；Ｓａｇｌｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｆｅｒｔｉｌ  Ｓｔｅｒｉｌ．，５５：５６−６０（１９９１）；Ｓｈｏｈａｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｆｅｒｔｉｌ  Ｓｔｅｒｉｌ．，５５：１０５１−１０５６（１９９１）；Ｍｅｌｄｒｕｍ，Ｆｅｒｔｉｌ  Ｓｔｅｒｉｌ．，５５：１０３９−１０４０（１９９１））。このプロトコルは、低用量のＦＳＨまたはｈＭＧ（７５ＩＵ／日）から開始して、処置の７日前、好ましくは１４日前に用量修正をしない。用量修正が必要ならば、ほんの３７．５ＩＵの増量ステップによりこれがなされる。さらに、のちの増加の各々を所定の用量において７日後に作用させるだけでよい。この緩性低用量プロトコルの概念は、単一卵胞発生（ｕｎｉｆｏｌｌｉｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）を促進するのに必要なＦＳＨの閾値を見つけることである。勇気付けられる結果がある程度公表されて、このアプローチが前排卵卵胞の平均数、平均前排卵Ｅ2レベルおよび中期黄体相の卵巣のサイズを低下させることを示す。
【０００５】
しかしながら、緩性低用量プロトコルの使用にも拘わらず、いくつかの処置サイクルは、過剰応答のためにいまだに中止（ｃａｎｃｅｌｌｅｄ）されなければならない（例えば、平均直径１６ｍｍまたはそれ以上の３つより多い卵胞がある場合）。さらに、多胎妊娠率は、慣用のプロトコルに比して明らかに改良されたが、自然妊娠サイクルよりも依然として高く、即ち自然サイクルの１．５％に対して誘発サイクルの５−１０％である。これは、誘発されたサイクルの約２／３から３／４においてしか単一の前排卵卵胞の発生が得られず、そしてｈＣＧ投与の日に前排卵卵胞の数を査定するときに、平均直径１５ｍｍまたはそれ以下を有する卵胞が通常は考えられないという事実による（Ｂｕｖａｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．，５２：５５３−５５９（１９８９）；Ｈａｍｉｌｔｏｎ−Ｆａｉｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄ．６：１０９５−１０９９（１９９１））。しかしながら、ｈＣＧ投与の日に平均直径１４から１５ｍｍまたはそれ未満の卵胞が排卵して健康な受精可能な卵母細胞を導くか否かは明らかでない。即ち、多胎妊娠およびサイクルの中止の率が低下するようなＦＨＳ−誘発性卵胞発生治療において、改良を有することが望まれる。
【０００６】
腔性（ａｎｔｒａｌ）卵胞成長がＦＳＨにより誘発される。生涯を通じて連続的に、そして閉経まで、いくつかの卵胞は成長期に入り、前排卵状態の完全成熟段階に到達する前に、退行および閉鎖により中断される（Ｈｉｌｌｅｒ，Ｈｕｍ．Ｒｅｐｒｏｄ．，９：１８１−１９１（１９９４））。成長期の間、十分な濃度のＦＳＨに露出されている限り、全ての卵胞が閉鎖から救済され得る。閉鎖を妨害して卵胞のさらなる成長を促進するのに必要なＦＳＨのレベルは「ＦＳＨ閾値」レベルと呼ばれる（Ｂｒｏｗｎ，Ａｕｓ．ＮＺＪ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．，１８：４７−５５（１９８７））。ＦＳＨ閾値レベルは時間と共に変わり、そして所定の時間点において、現在成長期の卵胞は異なるＦＳＨ閾値レベルを有する。これは、「緩性低用量」プロトコルが基礎とする原理である。ＦＳＨの用量の進行中の慎重な増加は、最小数の卵胞の閾値レベルを見いだして、望ましくは単排卵を達成するために使用される。
【０００７】
黄体形成ホルモン（ＬＨ）も卵胞の優占度（ｄｏｍｉｎａｎｃｅ）および単一排卵の現象に寄与する。事実、いくらかのＬＨは卵胞発生の間のエストロゲン合成に必須であるが、ＬＨへの過剰な暴露が卵胞閉鎖を誘引して、顆粒膜細胞の増殖を抑圧するとの証拠がある。発生する卵胞が、即ち、正常な卵胞発生が停止するのを越えて、ＬＨによる刺激に関する有限の要求を有するらしい。これは、「ＬＨ限界（ｃｅｉｌｉｎｇ）」の概念である（Ｈｉｌｌｅｒ，Ｈｕｍ．ｒｅｐｒｏｄ．，９：１８１−１９１（１９９４））。所定の時間点においては、現在成長期の卵胞は、異なるＬＨ限界レベルを有すると信じられている。より成熟した卵胞は、より未成熟な卵胞よりも、ＬＨの閉鎖作用に対して、より耐性であることが示唆される。
【０００８】
ＦＳＨ単独またはｈＭＧの何れかによりステップアッププロトコルを用いて処置したＷＨＯグループＩの無排卵の２つのケースが報告された（Ｇｌａｓｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１１９  Ａ−１５９（１９８８））。「ＦＳＨのみ」のサイクルはｈＭＧサイクルよりもはるかに多い数の成熟卵胞を有し、おそらくは、二次卵胞の閉鎖におけるＬＨの役割を支持する。後日、２つの比較研究が公表された。１０人の低ゴナドトロピン性の性機能低下の女性における第１のクロスオーバー研究において、著しい違いが前排卵Ｅ2レベルに関して記録されたが、卵胞のカウントは報告されなかった（Ｃｏｕｚｉｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．６６：５５２−５５６（１９８８））。９人の低ゴナドトロピン性の性機能低下の女性における第２のクロスオーバー研究は、２．０のｈＣＧ投与の日に１６ｍｍより大きい平均直径を有する卵胞の平均数を報告した（ｈＭＧ処置サイクルにおいて０．７、そしてＦＳＨ処置サイクルにおいて１．２（Ｓｈｏｈａｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｆｅｒｔｉｌ  Ｓｔｅｒｉｌ．，５５：１０５１−１０５６（１９９１）））。小さな卵胞の数についての利用可能な情報はない。
【０００９】
より最近、測定不可能なほどの低い血清ＦＳＨ、ＬＨおよびエストラジオール濃度の１人の患者に対する１５０ＩＵのｈＦＳＨ（ヒトＦＳＨ）および７５ＩＵのｒ−ｈＬＨ（組換えヒトＬＨ）投与の結果が公表された（Ｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，３４４（８９１８）：３３４−３３５（１９９４））。ｒ−ｈＬＨおよびｈＦＳＨの投与はＥ2レベルの上昇を引き起こし、そして直径１０ｍｍまたはそれ以上の直径の卵胞の全体数が低下し、ｈＦＳＨのみの投与に匹敵する。しかしながら、大きな卵胞の数は十分高いままであったため、受容不可能なほど高い多胎妊娠率を示唆する。
【００１０】
子宮内移植の前に複数の卵胞の発生を刺激するために、ＦＳＨで処置した後の正常な卵巣の女性に対して、ｒ−ｈＬＨ（３００ＩＵ／日または７５０ＩＵ／日の何れかの用量にて）およびｒ−ｈＦＳＨを投与する効果を、さらなる研究が比較した（Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８４，２２８−２３２，１９９９）。結果は、血清のＥ2レベルがＬＨを投与されたそれらの女性において上昇したことを示すが、卵胞の数と大きさの測定はなされず、そして多胎妊娠が７５０ＩＵ／日のＬＨを投与されたグループにおいて起こった。
【００１１】
本発明の第１の側面によれば、１００から１５００ＩＵの範囲の毎日の投与にて無排卵の女性に卵胞発生を誘発するための医薬の製造におけるＬＨおよび／または生物学上活性なその類似体の使用が提供される。
【００１２】
本明細書にて使用されるとおり、「ＩＵ比」は一つの成分のＩＵの値の別の成分のＩＵの値に対する比率である。ゴナドトロピンが生物学上のＩＵに代えて（質量／μｇ）にて現在は表現されてよいことに、注目すべきである。この場合、変換因子を使用することにより新しい値をＩＵに翻訳しなければならない。便宜上、ＬＨ，ＦＳＨおよびｈＣＧに対するこれ以降の言及は、生物学上活性なその類似体を含むことを意図する。
【００１３】
本発明者らは、１００から１５００ＩＵ／日の用量におけるＬＨの投与が乏卵胞の発生を促進し、即ち、１００から１５００ＩＵ／日にてＬＨを投与されないサイクルに比して、卵胞誘発を経た患者の処置サイクルあたりの前排卵卵胞の数を低下させ得ることを発見した。本発明に従い投与されたＬＨは単卵胞発生、即ち単一の前排卵卵胞の発生を誘発することができる。２００から８００ＩＵ／日、より好ましくは２２５から４５０ＩＵ／日の範囲の用量が特に有効であることがわかった。複数卵胞の発生の減少は過剰な卵胞発生のために取り消されたサイクルの数を低下させ、即ち、過剰な数の卵胞が存在する場合のそれらのサイクルを救済することができ、排卵誘発のプロセスをより効率よくさせる。さらに、多胎妊娠およびＯＨＳＳの発生を減少させることができる。
【００１４】
必要な毎日の用量は毎日単一の用量として投与してよい。即ち、医薬をパッケージにすることで、毎日の用量のＬＨを提供してよく、例えばバイアルのようなユニット用量コンテナーにおいてである。しかしながら、もちろんその日に投与される全ＬＨが毎日の用量に等しい限り、ＬＨは１日に２回またはそれ以上投与してよく、従って医薬を即ち複数ユニットコンテナー中にパッケージしてよい。ＬＨは隔日または長期間においてさえ投与することもできる。そのような決定は、上記医薬を投与する医師により行われることになり、そして患者の体重インデックス（ＢＭＩ）、病歴、ＬＨを投与された場合の卵胞の発生の段階、治療に対する応答、医薬の半減期等のパラメーターに依存することになる。
【００１５】
卵胞発生は、上記の慣用のプロトコルまたは緩性低用量プロトコルまたは別のプロトコルを使用して、ＦＳＨ投与により無排卵の女性において日常的に誘発されることになる。ＬＨは卵胞発生の適切な段階において、例えば中期または後期卵胞相において投与するべきである。この段階は、医薬を投与する医師により決定してよく、そして排卵が誘発される療法に依存してよい。例示のために、卵胞発生の適切な段階は、少なくとも一つの卵胞が平均直径８ｍｍに到達するか、または少なくとも一つの卵胞が１０−１５ｍｍ（好ましくは１１−１４ｍｍ）の範囲の平均直径を有するか、または８から１３ｍｍの範囲の平均直径を有する３つより多い卵胞が存在してそれ以上の卵胞が存在しない場合に、到達したと判定してよい。
【００１６】
ＬＨの投与は、排卵が高用量のｈＣＧの投与により誘発される場合に通常は停止することになる。再び、排卵を誘発するためのｈＣＧ投与のタイミングは、医師により決定してよい。例えば、直径１８ｍｍまたはそれ以上を有する少なくとも一つの卵胞および３つを超えない、好ましくは２つを超えない直径１１ｍｍまたはそれ以上を有する卵胞が存在する場合であってよい。
【００１７】
ＬＨは、卵胞の発生の必要な段階に到達した時にのみ投与することができる。この場合、ＦＳＨの投与は全く不連続であることができ、あるいは以前と同じ用量または低用量または高用量にて継続することができる。ＦＳＨの投与は続けるが、以前よりは低用量にするならば、用量はＬＨよりも低いのが好ましい。
【００１８】
あるいは、慣用プロトコルまたは緩性低用量プロトコルを用いて、即ち卵胞の発生が適切な段階に到達する前に、ＬＨを同時投与することができる。卵胞発生の必要な段階に到達したら、ＬＨが適切な用量にて投与されている限り、ＦＳＨの投与を不連続にするかまたは前のように連続させるか、または低用量か高用量にすることができる。さらなる代替においては、慣用プロトコルまたは緩性低用量プロトコルを置き換える手法において使用できるように、医薬を製剤化してよい。
【００１９】
即ち、ＦＳＨおよび／または生物学上活性なその類似体を、上記医薬の製造において使用してよい。この態様において、ＦＳＨに対するＬＨのＩＵ比は好ましくは１．５：１から２０：１の範囲である。より好ましくは、上記の比は１．５：１から１０：１である。
【００２０】
上記医薬が、卵胞発生の適切な段階の後の投与のためである場合、ＬＨ：ＦＳＨのＩＵ比は約１０：１であってよい。そのような医薬のための特に好ましい毎日の用量は、３７５ＩＵのｒ−ｈＬＨと３７．５ＩＵのｒ−ｈＦＳＨである。
【００２１】
本発明の第２の側面によれば、１．５：１から２０：１の範囲のＦＳＨに対してのＬＨの比において女性の卵胞発生を誘発する医薬の製造におけるＬＨおよびＦＳＨおよび／または生物学上活性なその類似体の使用が提供される。
【００２２】
本発明の第１および第２の側面の使用は、ＬＨを均等用量のｈＣＧおよび／または生物学上活性なその類似体で置換するように修飾してよい。
本明細書にて使用されるとおり、「均等用量」のヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）は、薬局方Ｖａｎ  Ｈｅｌｌバイオアッセイにおいて１ＵのｈＣＧが５−７ＩＵのＬＨに均等であるとの基準に基づいて計算される（Ｖａｎ  Ｈｅｌｌ，Ｈ，ｅｔ  ａｌ，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｎ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｂｉｏａｓｓａｙ  ｍｅｔｈｏｄｓ，Ａｃｔａ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．，４７：４０９−４１８，１９６４）。便宜上、黄体形成ホルモン（ＬＨ）に対しての言及はｈＣＧを含むことを意図し、ＬＨの用量は均等用量のｈＣＧを含むことを意図する。
【００２３】
本発明の第３の側面によれば、女性において卵胞発生を誘発することにおいて同時、連続または別々の使用のための化合された調製物として、ＬＨ（または均等用量のｈＣＧ）およびＦＳＨおよび／または生物学上活性なそれらの類似体を含む生成物が提供され、上記調製物はＬＨ（または均等用量のｈＣＧ）およびＦＳＨおよび／または生物学上活性なそれらの類似体を１．５：１から２０：１の範囲のＦＳＨに対するＬＨのＩＵ比で含む。
【００２４】
本発明の第２および第３の側面によれば、ＬＨまたはｈＣＧおよびＦＳＨを無排卵の女性に対して、好ましくは高用量のｈＣＧの投与による排卵の誘発までずっとサイクルを通して投与してよい。あるいは、卵胞の発生が適切な段階に達した後でそれらを投与してよい。
【００２５】
本発明は無排卵の女性において卵胞発生を誘発するための方法も提供し、黄体形成ホルモンおよび／または生物学上活性なその類似体の１００から１５００ＩＵ／日における投与または均等用量のヒト絨毛性ゴナドトロピンおよび／または生物学上活性なその類似体の投与を含む。
【００２６】
ＬＨ，ＦＳＨおよびｈＣＧは天然源から得てよく、例えば尿、下垂体または胎盤から単離してよく、あるいは組換えＤＮＡ技術を使用して得てよい（ＷＯ８５／０１９５９およびＬｏｕｍａｙｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄ．，１１：９５−１０７，１９９６を参照）。生物学上活性なその類似体は、ペプチド類似体、非ペプチド類似体およびキメラを含む。ヒトＬＨとＦＳＨを本発明において使用することが好ましい。
【００２７】
本発明に有用な化合物はあらゆる慣用の経路により投与のために製剤化してよく、しばしば薬学上および／または獣医学上受容可能な担体と共同させる。上記化合物は非経口投与のために製剤化されるのが好ましい。ＬＨとＦＳＨ（存在する場合）は皮下、好ましくは前方の（ａｎｔｅｒｉｏｒ）腹部壁内に投与するのが好ましい。
【００２８】
非経口投与のための製剤化は通常は無菌になる。非経口投与のために適合される薬学上の製剤化は水性および非水性の無菌注射を含み、抗酸化剤、バッファー、静菌剤および上記製剤を意図されたレシピエントの血液と等張にさせる容質を含んでよい；懸濁剤および濃化剤を含んでよい水性および非水性の無菌懸濁液も本発明の範囲内である。上記製剤はユニット用量または複数用量コンテナー、例えばシールされたアンプルまたはバイアル中に存在させてよく、そして無菌の液体担体、例えば注射用の水の添加のみを必要とする凍結乾燥状態にて使用直前まで保存してよい。即席の注射溶液および懸濁液を無菌粉末、顆粒およびタブレットから製造してよい。上記製剤は予め充填されたシリンジ、自動注射器または複数用量自動注射器を通して投与してよい。
【００２９】
経口および他の腸内製剤は無菌である必要がなく、そしてユニットまたは複数用量の形態にて存在させてよい。経口製剤は固形、例えば粉末、顆粒、タブレット、カプセル（例えば、硬質または軟質ゼラチンカプセル）またはトローチ剤、または液体例えばシロップまたはエリキシルの形態であってよい。充填剤および／または担体を適宜存在させてよく、そして薬学の製剤に関する当業者は必要または所望に応じてそのような追加または別の賦形剤を適用することができる；風味剤は一例である。経口投与のために意図されるあらゆる製剤を腸溶耐性のために製剤化してよく、それにより胃または小腸の近位において生じるかもしれないような上記化合物のあらゆる消化を回避するかまたは緩和することにより、小腸への送達を助ける。タブレットまたはカプセルは、例えば慣用の手法により腸溶性コートされてよい。液体製剤化は、中鎖トリグリセリドのような安定剤を含むかまたは同時投与されるかにより、有効に腸溶耐性にしてよい。
【００３０】
経口組成物以外の腸溶性組成物は直腸組成物を含み、坐薬の形態であってよい。坐薬は通常坐薬基材、例えばココアバッファーを含むことになる。再び、活性成分を含む特定の製剤は薬学の製剤に関する当業者により日常的に製造されてよい。
【００３１】
本発明のそのような側面の好ましい特徴は、他の側面各々のために必要な変更が加えられる。
この明細書を通して引用された全ての特許および論文の書類は、法律により許容されている完全な範囲に対して引用により本明細書に編入される。
【００３２】
本発明は、以下の非制限実施例においてさらに記載されることになる。
実施例１
ＦＳＨ刺激の後に投与された場合のＬＨの効果を、ＩＣＨ  ＧＣＰ（国際調和会議−良好な医療実務）のガイドラインに従って実施された臨床研究の間に、ＷＨＯグループＩＩ無排卵女性において試験した。患者らは以下の特徴を有した：
閉経前；年齢１８から３９の間；卵巣機能不全のために不妊；自発性の月経を経験してきた；クエン酸クロミフェン治療により誘発された月経または前年内の陽性のプロゲスチン誘発性退薬性出血（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｐｒｏｇｅｓｔｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  ｂｌｅｅｄ）；３５またはそれ未満の体重インデックス（ｍ2で表された（伸長ｘ体重）で割られた、ｋｇで表された体重として計算された）；甲状腺機能不全；ＬＨの吸着、分配、代謝または排泄を干渉するかもしれない医学症状がない；臨床上の全身性疾患がない；ゴナドトロピン調製物に対して公知のアレルギーがない；１１ｍｍまたはそれ以上の永続性の卵巣の嚢胞または卵巣子宮内膜症がない（超音波により測定された）；以前または現在のホルモン依存性腫瘍がない；臨床上関連のある再生性管疾患がない；そして現在物質の濫用がない。
【００３３】
患者らは直径８−１３ｍｍの範囲の卵胞が４つまたはそれ以上、大きくない卵胞および８ｍｍまたはそれ以上の厚さの子宮内膜が存在するまで、ＦＳＨによる日常の排卵誘発を受けた。彼らは次に無作為に３つのブラインドグループに分けられ、一つのグループは偽薬を投与され、一つのグループは２２５ＩＵのｒ−ｈＬＨ／日を投与され、そして一つのグループは４５０ＩＵのｒ−ｈＬＨ／日を投与された。
【００３４】
以下の表１は患者の各グループを要約する。
【００３５】
【表１】
0004975215.tif 000002
【００３６】
ｒ−ＬＨ（ＬＨａｄｉ（登録商標），Ｓｅｒｏｎｏ）を、７５ＩＵのｒ−ｈＬＨおよび４７．７５ｍｇの蔗糖、リン酸バッファーおよびＴｗｅｅｎ２０を凍結乾燥形態にて含むバイアル中で使用した。ＬＨａｄｉは、ヒトＬＨのアルファおよびベータ鎖をコードする遺伝子を組換え技術により導入された、遺伝子操作されたチャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞中で生産される。ＬＨａｄｉの比活性は約１５０００ＩＵ  ＬＨ／ｍｇである。
【００３７】
２２５ＩＵの用量に関して３つのバイアルを使用した。一つのバイアルを１ｍｌの水で元に戻して、緩やかに撹拌し、ゴム製のストッパーに接触するのを避けるように注意した。その結果の溶液全体を吸引して、第２のバイアルを元に戻すために使用した。緩やかな撹拌の後に、その結果の溶液全体を吸引して、第３のバイアルを元に戻すために使用した。さらに緩やかに撹拌した後に、その結果の溶液全体を吸引して、すぐに新しい注射針を用いて前方の腹部壁に皮下注射した。４５０ＩＵの用量に関しては、２２４ＩＵの２回の注射を行った。
【００３８】
偽薬はｒ−ｈＬＨバイアルに適合するが蔗糖、リン酸バッファーおよびＴｗｅｅｎ２０を含むバイアル中であった。
ｒ−ｈＬＨ／偽薬処置は、少なくとも一つの卵胞が平均直径少なくとも１８ｍｍに到達して１１ｍｍまたはそれ以上の平均直径を有する３つまたはそれより少ない卵胞が存在するまで、７日間続けた。このケースにおいては、５０００ＩＵのｕ−ｈＣＧ（Ｐｒｏｆａｓｉ（登録商標），Ｓｅｒｏｎｏ）の単一用量を皮下投与した。
【００３９】
ｒ−ｈＬＨ／偽薬処置の前と間に、超音波（ＵＳ）を１−２日の間隔で使用することにより、卵胞の平均直径（２つのもっとも長い垂直の直径として測定した）および子宮内膜の厚さ（子宮内膜と子宮筋層の高音波発生中間面から強い中線の音波を含む反対の中間面（子宮内膜中間面）として査定された）を測定した。平均直径１１ｍｍまたはそれ以上の全ての卵胞を記録した。
【００４０】
ｒ−ｈＬＨ／偽薬処置の間に超音波スキャンを実施した前と各時間において、採血して、その結果の血清をＥ2（エストラジオール），Ｐ4（プロゲステロン），ＬＨ，ＦＳＨおよびアンドロステンジオンに関して分析した。
【００４１】
Ｅ2とＰ4はＲＩＡ固相コートされたチューブ分離である、ＤＰＣ  Ｃｏａｔ−ａ−ｃｏｕｎｔを使用して分析し、ＬＨ（血清および尿）とＦＳＨはＭＡＩＡＣＬＯＮＥ  ＩＲＭＡを用いて分析し、そしてアンドロステンジオンはＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ法、ＲＩＡを用いて分析した。
【００４２】
結果を、表２−４および各々の患者についてｈＣＧ投与の日（またはｈＣＧを投与しなかった最後の処置日）の卵胞のサイズと数を示すグラフである図面をもつ図１に要約する。
【００４３】
ＦＳＨ処置に続く２２５または４５０ＩＵ／日のＬＨの投与が、偽薬の場合に比して、より顕著な卵胞の退行をもたらしたことが観察でき、完全な卵胞退行、ｈＣＧ投与の日の少ない数の卵胞および偽薬グループの１５ｍｍから２２５ＩＵのｒ−ｈＬＨのグループの１４ｍｍおよび４５０ＩＵのｒ−ｈＬＨのグループの１３ｍｍまでの卵胞の中央値のサイズの低下を伴う患者により示唆されるとおりである。
【００４４】
単排卵を促進することにおけるｒｈＬＨの効率は、優占的な卵胞の出現（中央値サイズにより明らかなとおり）、卵胞相の黄体形成の不在および中期黄体相における比較的低いＰ4レベルにより説明される。
実施例２
後期卵胞相の間に投与されたＬＨとＦＳＨの効果を、ＩＣＨ  ＧＣＰのガイドラインに従って実施された臨床試験の間に、ＷＨＯグループＩ無排卵女性において試験した。患者らは以下の特徴を有した：
閉経前；年齢１８から３９の間；ゴナドトロピン過剰性の性機能亢進の病歴；スクリーニング法の少なくとも１カ月前に拍動性ＧｎＲＨ、ゴナドトロピンまたはエストロゲンプロゲステロン処置治療による治療を（たとえあるとしても）停止した；スクリーニング期間に実施された陰性プロゲステロンチャレンジ試験を受けた；処置期間の６カ月以内に採血された断食血液サンプル（午前７時から９時３０分の間）中に以下のホルモン値を有する：
ＦＳＨ：                        ＜５ｍＩＵ／ｍｌ
ＬＨ：                          ＜１．２ｍＩＵ／ｍｌ
甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）：  ＜６．５μＩＵ／ｍｌ
遊離Ｔ4：                       ＞１１および２４＜ｐｍｏｌ／ｌ
テストステロン：                ＜３．５ｎｍｏｌ／ｌ
プロラクチン（ＰＲＬ）：        ＜５２０ｍＩＵ／ｌ；
研究を開始する前の６カ月以内に、前処置血液学、臨床化学および尿分析パラメーターにおいて臨床上顕著な異常な発見がないかまたは正常な限界の外側の病理上重大な結果がない；ファイル上に、臨床上示されるならば、視床下部下垂体領域のＣＴスキャンまたはＭＲＩを有し、上記領域の現在の仮想上の腫瘍状態を記録する；１８．４（１８歳では百分の１０）から３１．４（３８歳では百分の９０）の間の体重インデックス；ＬＨまたはＦＳＨの吸着、分配、代謝または排泄を干渉するかもしれない医学症状がない；臨床上の全身性疾患がない；ゴナドトロピン調製物に対して公知のアレルギーがない；１１ｍｍまたはそれ以上の永続性の卵巣の嚢胞または卵巣子宮内膜症がない（超音波により測定された）；以前または現在のホルモン依存性腫瘍がない；臨床上関連のある再生性管疾患がない；そして現在物質の濫用がない。
【００４５】
上記研究を、最大２８日のオープン相と最大７日のブラインド相に分けた。
オープン相においては、全ての患者が２２５ＩＵ／日のｒ−ｈＬＨおよび１１２．５ＩＵ／日のｒ−ｈＦＳＨを投与された。７日後にＥ2レベルの上昇または卵胞の成長の兆候がなかったならば、ｒ−ｈＦＳＨの用量を１５０ＩＵ／日に上昇させた。さらに７日後、７日後にＥ2レベルの上昇または卵胞の成長の兆候がなかったならば、ｒ−ｈＦＳＨの用量を１８７．５ＩＵ／日に上昇させ、そしてＥ2レベルの上昇または卵胞の成長の兆候がなかったならば、ｒ−ｈＦＳＨの用量を２６２．５ＩＵ／日に上昇させた。ｒ−ｈＬＨの用量はオープン相を通して一定のままであった。
【００４６】
１０−１３ｍｍの範囲の平均直径を有する少なくとも一つの卵胞を患者が有したなら、彼女はブラインド相に入った。この相においては、患者を無作為に３つのブラインドグループに分け、一つがＬＨ偽薬を投与されて、オープン相の最後の日に投与された用量のｒ−ｈＦＳＨを続け、一つは２２５ＩＵ／日のｒ−ｈＬＨを投与されて、オープン相の最後の日に投与された用量のｒ−ｈＦＳＨを続け、そして一つは２２５ＩＵ／日のｒ−ｈＬＨおよびＦＳＨ偽薬を投与された。
【００４７】
以下の表５は患者の各グループを要約する。
【００４８】
【表２】
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【００４９】
ｒ−ＦＳＨ（Ｇｏｎａｌ−Ｆ（登録商標），Ｓｅｒｏｎｏ）を、７５ＩＵのｒ−ｈＦＳＨおよび３０ｍｇの蔗糖およびリン酸バッファーを凍結乾燥形態にて含むバイアル中で使用し、その３つまでを注射用の水１ｍｌに溶解した。蔗糖とリン酸バッファーのみを含む適合アンプルをＦＳＨ偽薬のために用意した。
【００５０】
ＬＨａｄｉは実施例１におけるように用意して投与した。ＬＨ偽薬はｒ−ｈＬＨバイアルに適合するが蔗糖、リン酸バッファーおよびＴｗｅｅｎ２０を含むバイアル中であった。
【００５１】
全ての注射は前方の腹部壁に皮下にて行った。
ブラインド相は、少なくとも一つの卵胞が平均直径少なくとも１８ｍｍに到達して、１１ｍｍまたはそれ以上の平均直径を有する２つまたはそれより少ない卵胞が存在するまで、７日間続けた。このケースにおいては、１００００ＩＵのｕ−ｈＣＧ（Ｐｒｏｆａｓｉ（登録商標），Ｓｅｒｏｎｏ）の単一用量を皮下投与した。
【００５２】
オープン相の初日、５日目および８日目において、そしてブラインド相の通常の間隔で（即ち、１から２日）、音波処理を使用して、卵胞の平均直径と子宮内膜の厚さを測定した。平均直径１１ｍｍまたはそれより大きな全ての卵胞を記録した。
【００５３】
オープン相の初日に、そしてブラインド相の通常の間隔で（即ち、１から２日）、血液サンプルを採取して、その結果の血清を実施例１におけるとおりに、Ｅ2，Ｐ4，ＬＨ，ＦＳＨおよびアンドロステンジオンに関して分析した。
【００５４】
結果を、表６−９および各々の患者についてｈＣＧ投与の日（またはｈＣＧを投与しなかった処置の最後の日）の卵胞のサイズと数を示すグラフである図面をもつ図２に要約する。
【００５５】
ＦＳＨを停止して、２２５ＩＵ／日のｒ−ｈＬＨの投与が、顕著で過剰な卵胞の退行をもたらしたことが観察できる。
ＦＳＨ存在下で単排卵を促進することにおけるｒ−ｈＬＨの効率は、１４ｍｍまたはそれ以上の直径を有する卵胞の平均数の低下、１４ｍｍまたはそれ以上の直径を有するたった１つまたは２つの卵胞を有する患者の比率の増加、優占的な卵胞の出現（ＦＳＨ／偽薬グループの１５ｍｍに比較して１２ｍｍの中央値卵胞サイズにより明らかなとおり）、および卵胞相の黄体形成の不在により示唆される。
【００５６】
【表３】
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【００５７】
【表４】
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【００５８】
【表５】
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【００５９】
【表６】
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【００６０】
【表７】
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【００６１】
【表８】
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【００６２】
【表９】
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【図面の簡単な説明】
【図１】  各々の患者についてｈＣＧ投与の日（またはｈＣＧを投与しなかった最後の処置日）の卵胞のサイズと数を示すグラフである。
【図２】  各々の患者についてｈＣＧ投与の日（またはｈＣＧを投与しなかった最後の処置日）の卵胞のサイズと数を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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