(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
キサンタンガムおよびアミノ酸を含有する眼科用組成物であって、アミノ酸がアスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸およびそれらの薬理学的に許容される塩から選択される少なくとも１つであり、眼科用組成物中のキサンタンガムの濃度が０．０５〜０．４ｗ／ｖ％である眼科用組成物。
【請求項２】
眼科用組成物中のアミノ酸の濃度が０．０５〜２ｗ／ｖ％である請求項１に記載の眼科用組成物。
【請求項３】
角膜上皮障害を治療するための請求項１または２に記載の眼科用組成物。
【請求項４】
角膜上皮障害が角膜上皮細胞の障害である請求項３に記載の眼科用組成物。
【請求項５】
角膜上皮細胞を保護するための請求項１または２に記載の眼科用組成物。
【請求項６】
点眼剤である請求項１〜５のいずれか１項に記載の眼科用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、角膜上皮障害を治療するためのキサンタンガム、またはキサンタンガムおよびアミノ酸を含有する眼科用組成物に関する。
【背景技術】  涙液は、角膜や結膜からなる眼球表面を覆って角結膜の湿潤性を保持し、乾燥を防いでいる。しかしながら、近年、涙液減少症に伴う角結膜表面の乾燥、コンタクトレンズ装用時の眼の乾燥、あるいはＯＡ機器の操作中に起きる眼の乾燥等により、疲労感、異物感を始めとした種々の症状、すなわち、ドライアイ症状を訴える人が増えている。ドライアイは、しばしば角膜上皮細胞の障害による角膜上皮障害や角膜上皮糜爛等を伴い、重篤な場合は角膜潰瘍や眼感染症を発症させることもある。これらの乾燥に伴うさまざまな症状を緩和するために、塩化ナトリウムなどの塩類を主剤とした人工涙液、ヒドロキシエチルセルロース、コンドロイチン硫酸またはヒアルロン酸を含む点眼剤等が使用されているが、未だ満足すべきものがないのが現状である。
涙液は擬塑性を示すと言われている。すなわち、涙液は、瞬きによる力が加わった時は粘度低下、加わらない時は粘度上昇を示す。したがって、涙液は、瞬き時には粘度が低くさらさらして瞬きをし易い状態であるが、瞬きの前後には粘度が高く眼表面を覆って保護するという特有の性質を有している。このような擬塑性を示す高分子化合物としてキサンタンガムが知られている。
キサンタンガムを含有する眼科用組成物としては、次のような報告がある。例えば、ヨウ化エコチオパートとキサンタンガムとを含有する眼科用組成物が開示され、キサンタンガムがヨウ化エコチオパートの治療効果を高めることが報告されている（米国特許第４１３６１７７号明細書）。またキサンタンガムと炭酸脱水酵素阻害剤とを含有する眼科用組成物が開示され、キサンタンガムは炭酸脱水酵素阻害剤の眼バイオアベイラビリティを改善させる目的で使用されている（特表２００１−５０８０３５号公報、特表２００２−５０１０１７号公報、特表２００２−５０６４６１号公報）。さらに、薬物の眼バイオアベイラビリティを改善させる目的でキサンタンガムが使用され、炭酸脱水酵素阻害剤、プロスタグランジン誘導体およびキサンタンガムを含有する眼科用組成物が開示されている（特表２００２−５０１５３３号公報、特表２００２−５２１３３２号公報、特表２００２−５２１３３３号公報）。ドライアイ処置のための第四級窒素含有エトキシ化グリコシドとキサンタンガムとを含有する眼科用組成物が開示されている（特表２００１−５１６７１３号公報）。また、キサンタンガムを含有する、眼に接触するとゲル化する眼科用組成物が開示されている（特表２００２−５１０６５４号公報）。
しかしながら、キサンタンガムとアミノ酸とを含有する眼科用組成物については報告されていない。また、キサンタンガムが角膜上皮細胞保護作用を有すること、またはキサンタンガムとアミノ酸とを組み合わせることにより角膜上皮細胞保護作用が改善されることは知られていない。
【発明の開示】
本発明の課題は、使用感の良い、優れた角膜上皮障害の治療効果を有する眼科用組成物を提供することである。具体的には優れた角膜上皮細胞保護効果を有する眼科用組成物を提供することである。
本発明者らは、前記目的を達成すべく鋭意検討を行った結果、角膜上皮細胞の培養試験系において、キサンタンガムが角膜上皮細胞保護作用を有することを見出し、またキサンタンガムとアミノ酸とを組み合わせることにより細胞保護作用が改善されることを見出し、この知見に基づいてさらに研究を進めて本発明を完成した。
すなわち本発明は、
（１）キサンタンガムを含有する眼科用組成物。
（２）さらにアミノ酸を含有する１に記載の眼科用組成物。
（３）アミノ酸がアスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸およびそれらの薬理学的に許容される塩から選択される少なくとも１つである２に記載の眼科用組成物。
（４）眼科用組成物中のキサンタンガムの濃度が０．０５〜０．４ｗ／ｖ％である１〜３のいずれかに記載の眼科用組成物。
（５）眼科用組成物中のアミノ酸の濃度が０．０５〜２ｗ／ｖ％である２〜４のいずれかに記載の眼科用組成物。
（６）角膜上皮障害を治療するための１〜５のいずれかに記載の眼科用組成物。
（７）角膜上皮障害が角膜上皮細胞の障害である６に記載の眼科用組成物。
（８）角膜上皮細胞を保護するための１〜５のいずれかに記載の眼科用組成物。
（９）点眼剤である１〜８のいずれかに記載の眼科用組成物。
（１０）角膜上皮障害を治療する医薬の製造のためのキサンタンガムの使用。
（１１）角膜上皮細胞を保護する医薬の製造のためのキサンタンガムの使用。
（１２）角膜上皮障害を治療する医薬の製造のためのキサンタンガムおよびアミノ酸の使用。
（１３）角膜上皮細胞を保護する医薬の製造のためのキサンタンガムおよびアミノ酸の使用。
（１４）アミノ酸がアスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸およびそれらの薬理学的に許容される塩から選択される少なくとも１つである１２または１３に記載の使用。
（１５）キサンタンガムの濃度が０．０５〜０．４ｗ／ｖ％である１０〜１４のいずれかに記載の使用。
（１６）アミノ酸の濃度が０．０５〜２ｗ／ｖ％である１２〜１５のいずれかに記載の使用。
（１７）角膜上皮障害を治療する方法であって、該治療を必要とする投与対象にキサンタンガムの有効量を投与する工程を含む、方法。
（１８）角膜上皮細胞を保護する方法であって、該保護を必要とする投与対象にキサンタンガムの有効量を投与する工程を含む、方法。
（１９）角膜上皮障害を治療する方法であって、該治療を必要とする投与対象にキサンタンガムおよびアミノ酸の有効量を投与する工程を含む、方法。
（２０）角膜上皮細胞を保護する方法であって、該保護を必要とする投与対象にキサンタンガムおよびアミノ酸の有効量を投与する工程を含む、方法。
（２１）アミノ酸がアスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸およびそれらの薬理学的に許容される塩から選択される少なくとも１つである１９または２０に記載の方法。
（２２）キサンタンガムの濃度が０．０５〜０．４ｗ／ｖ％である１７〜２１のいずれかに記載の方法。
（２３）アミノ酸の濃度が０．０５〜２ｗ／ｖ％である１９〜２２のいずれかに記載の方法。
本発明によれば、優れた角膜上皮障害の治療効果を有するキサンタンガム、またはキサンタンガムおよびアミノ酸を含有する眼科用組成物を提供することができる。さらに、点眼剤の態様をとった本発明の眼科用組成物は、擬塑性を示すキサンタンガムを含有することから優れた使用感を有するものである。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、本発明についてさらに詳細に説明する。
本発明は、キサンタンガムを含有する眼科用組成物を提供する。別の実施形態では、本発明のキサンタンガムを含有する眼科用組成物はさらに、アミノ酸を含有する。以下、これらの眼科用組成物をまとめて、本発明の眼科用組成物ともいう。
本発明の眼科用組成物は、眼の局所組織に投与することができる製剤であればよく、例えば、点眼剤、貼付剤、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤等が挙げられるが、好ましくは、点眼剤である。さらに、本発明の眼科用組成物は、コンタクトレンズ装着液としても用いることができる。
本発明の眼科用組成物に用いられるキサンタンガムの平均分子量は、通常１０００００〜５０００００００、好ましくは２０００００〜２０００００００、特に好ましくは１００００００〜１０００００００である。該キサンタンガムとしては、大日本製薬株式会社より市販されているエコーガムＴ、エコーガムＦ等のエコーガムシリーズ、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社より市販されているサンエースＮＸＧ−Ｓ等のサンエースシリーズ、三晶株式会社より市販されているケトロールＣＧ、ケトロールＣＧ−Ｔ等のケトロールシリーズ等が用いられるが、好ましくは、エコーガムＴ、ケトロールＣＧ−Ｔである。
本発明の眼科用組成物におけるキサンタンガムの含有量は、通常０．００５〜１ｗ／ｖ％、好ましくは０．０１〜０．６ｗ／ｖ％、さらに好ましくは０．０２〜０．５ｗ／ｖ％、特に好ましくは０．０５〜０．４ｗ／ｖ％である。
また、本発明の眼科用組成物に用いられるアミノ酸類としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、トリプトファン、ヒスチジン、システイン、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸またはそれらの薬理学的に許容される塩が挙げられる。塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩が挙げられる。これらは、１種または２種以上の組み合わせで用いられる。好ましく用いられるアミノ酸類は、アスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸、グルタミン酸、グリシン、リジンまたはそれらの薬理学的に許容される塩である。特に好ましくは、アスパラギン酸、コンドロイチン硫酸、アミノエチルスルホン酸またはそれらの薬理学的に許容される塩である。
本発明の眼科用組成物におけるアミノ酸の含有量は、通常０．０１〜１０ｗ／ｖ％、好ましくは０．０５〜２ｗ／ｖ％、さらに好ましくは０．１〜１ｗ／ｖ％、特に好ましくは０．２〜１ｗ／ｖ％である。
キサンタンガムとアミノ酸との組合せの割合は、重量比率として、通常５：１〜１：５０の範囲であり、２：１〜１：２０の範囲が好ましい。
本発明の眼科用組成物は、緩衝剤、等張化剤、保存剤、溶解補助剤、安定化剤、キレート剤、増粘剤、ｐＨ調整剤等の各種の添加剤を適宜配合することができる。
緩衝剤としては、例えば、ホウ酸またはその塩（ホウ砂等）、クエン酸またはその塩（クエン酸ナトリウム等）、酒石酸またはその塩（酒石酸ナトリウム等）、グルコン酸またはその塩（グルコン酸ナトリウム等）、酢酸またはその塩（酢酸ナトリウム等）、リン酸またはその塩（リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等）、グルタミン酸やイプシロンアミノカプロン酸等の各種アミノ酸およびトリス緩衝剤等、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
等張化剤としては、例えば、ソルビトール、マンニトール、グリセリン、プロピレングリコール、塩化ナトリウム、塩化カリウム等が挙げられる。
保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ソルビン酸またはその塩、グルコン酸クロルヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、塩化セチルピリジニウム、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、クロロブタノール等が挙げられる。
溶解補助剤としては、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリソルベート８０（商品名：Ｔｗｅｅｎ８０）等が挙げられる。
安定化剤としては、例えば、エデト酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、シクロデキストリン、縮合リン酸またはその塩、亜硫酸塩、クエン酸またはその塩、ジブチルヒドロキシトルエン等が挙げられる。
キレート剤としては、例えば、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、縮合リン酸またはその塩（縮合リン酸ナトリウム等）等が挙げられる。
増粘剤としては、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸等が挙げられる。
ｐＨ調整剤としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ホウ酸またはその塩（ホウ砂）、塩酸、クエン酸またはその塩（クエン酸ナトリウム、クエン酸二水素ナトリウム等）、リン酸またはその塩（リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム等）、酢酸またはその塩（酢酸ナトリウム、酢酸アンモニウム等）、酒石酸またはその塩（酒石酸ナトリウム等）等が挙げられる。
本発明の眼科用組成物のｐＨは、３〜１０、好ましくはｐＨ５〜８となるように調整される。
本発明の眼科用組成物は、角膜上皮細胞保護作用を有する。従って、本発明の眼科用組成物は、角膜上皮障害、特に角膜上皮障害に伴う角膜上皮細胞の障害の予防・治療剤として有用である。
とりわけ、本発明の眼科用組成物は、乾燥によって引き起こされる角膜上皮障害（例えば、涙液減少症、眼乾燥症、マイボーム腺機能不全、シェーグレン症候群、乾性角結膜炎、眼瞼炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、ＶＤＴ（Ｖｉｓｕａｌ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｔｅｒｍｉｎａｌ）作業に関連したドライアイ等のドライアイ症候群、または、ドライアイに伴う角結膜上皮障害、角膜上皮糜爛、角膜潰瘍、眼瞼縁炎、眼類天疱瘡、春季カタル、アレルギー性結膜炎等）の予防・治療剤、特に、乾燥によって引き起こされる角膜上皮障害に伴う角膜上皮細胞の障害の予防・治療剤に有用である。
また本発明の眼科用組成物は、紫外線によって引き起こされる角膜上皮障害（例えば、角膜炎、雪目等）の予防・治療剤、特に紫外線によって引き起こされる角膜上皮障害に伴う角膜上皮細胞の障害の予防・治療剤に有用である。
さらに、本発明の眼科用組成物は、保存剤が接触することによって引き起こされる角膜上皮障害（例えば、点状表層角膜炎、角膜潰瘍等）の予防・治療剤、特に、保存剤が接触することによって引き起こされる角膜上皮障害に伴う角膜上皮細胞の障害の予防・治療剤に有用である。
本発明の眼科用組成物はさらに、目の疲れ、目のかわき、目のかすみ、目のかゆみ、結膜充血、コンタクトレンズ着用時の不快感等の予防または改善するための点眼用組成物としても用いることができる。
本発明の眼科用組成物は、ヒト、ヒト以外の動物〔例えば、ヒト以外の哺乳類（ブタ、ウシ、ウマ、イヌ等の家畜および愛玩動物）等〕における上記疾患または状態を予防・治療するために用いることができる。
従って、本発明は、上記疾患または状態を予防・治療する方法を提供し、該方法は、該治療を必要とする投与対象（例えば、ヒトまたはヒト以外の動物）にキサンタンガムの有効量か、またはキサンタンガムおよびアミノ酸の有効量を投与する工程を含む。
本発明はまた、角膜上皮細胞を保護する方法を提供し、該方法は、該保護を必要とする投与対象（例えば、ヒトまたはヒト以外の動物）にキサンタンガムの有効量か、またはキサンタンガムおよびアミノ酸の有効量を投与する工程を含む。
キサンタンガムとアミノ酸とを投与する場合、投与時にキサンタンガムとアミノ酸とを組み合わすことができるものであれば、キサンタンガムとアミノ酸とを同時に製剤化して得られる単一の製剤として投与しても、キサンタンガムとアミノ酸とを別々に製剤化して得られる２種の製剤を組み合わせて同時に投与してもよい。
キサンタンガムの投与量は、剤形、対象疾患、被検体の年齢、性別、体重、症状などに依存して変化し得るが、例えば、成人（例えば、体重６０ｋｇ）の場合、１日あたり通常０．０１μｇ〜１０μｇの範囲であり、０．０２μｇ〜５μｇの範囲が好ましい。
また、キサンタンガムをアミノ酸と組み合わせて投与する場合、アミノ酸の投与量は、剤形、対象疾患、被検体の年齢、性別、体重、症状などに依存して変化し得るが、例えば、成人（例えば、体重６０ｋｇ）の場合、１日あたり通常０．０１μｇ〜１０μｇの範囲であり、０．０２μｇ〜５μｇの範囲が好ましい。
キサンタンガムとアミノ酸との組合せの割合は、両者が単一製剤として投与される場合、別個の製剤として投与される場合のいずれにおいても、重量比率として、通常５：１〜１：５０の範囲であり、２：１〜１：２０の範囲が好ましい。
各成分の１日あたりの用量は、一度にもしくは数回に分けて投与することができる。例えば、点眼剤として使用する場合には、本発明の眼科用組成物を、１日あたり数回、好ましくは１〜６回、１回数滴、好ましくは１〜３滴投与することができる。また投与期間は特に限定されない。
本発明はさらに、上記方法を実施するためのキット（商業パッケージ）を提供する。該キットは、本発明の眼科用組成物を含み、さらに、当該組成物を上記疾患または状態の予防・治療に使用することができる、または当該組成物を角膜上皮細胞の保護に使用することができることなどを記載した記載物（例えば、該キットを用いて上記方法を実施するための指示書）を含む。
以下に、実施例および試験例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【実施例】［試験例１］キサンタンガムとアスパラギン酸との組み合わせの乾燥による障害に対する角膜上皮細胞保護作用
１．試験方法
本試験は、文献（Ｂｒ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００１，８５，６１０）に準じて行った。凍結正常ウサギ角膜上皮細胞懸濁液（ＮＲＣＥ２、クラボウ社製）を培養液（ＲＣＧＭ２、クラボウ社製）に懸濁した。この懸濁液を遠心分離し（５分間、４００×ｇ）、上清を除去した。この細胞に２ｍＬの培養液を加えて懸濁し、その内２０μＬをトリパンブルー２０μＬで希釈し、生細胞数を血球計算盤でカウントした。その後、９６ウェルプレートの各ウェルに４×１０３個／ウェル／μＬになるように細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２、加湿下でコンフルエントまで培養を行った（ｎ＝５）。９６ウェルプレートの培養上清を除去した後、種々の濃度（ｗ／ｖ％）のＬ−アスパラギン酸カリウムおよび／またはキサンタンガム（エコーガムＴ：登録商標）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７、試験溶液）またはリン酸緩衝液（ｐＨ７、対照溶液）を１００μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２、加湿下で１５分間培養した。培養後、添加した試験溶液または対照溶液を除去し、室温で３０分間乾燥させた。各ウェルにＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８溶液（同仁化学研究所製）１００μＬを添加し、２時間後に９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ，登録商標）を用い、吸光度（波長４５０ｎｍ）を測定した。角膜上皮細胞の生存率（％）は下記式を用い、試験溶液または対照溶液の吸光度の平均値および無処置群の吸光度の平均値から求めた。
生存率（％）＝
試験溶液または対照溶液添加群の吸光度の平均値  ×１００
無処置群の吸光度の平均値
２．試験結果
表１に示すように、０．１％キサンタンガムを添加した０．２％、０．５％または１％Ｌ−アスパラギン酸カリウム溶液で処置した時の角膜上皮細胞の生存率は、キサンタンガム未添加のＬ−アスパラギン酸カリウム溶液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。また、０．１％キサンタンガムを添加したリン酸緩衝液（キサンタンガム単独溶液）で処置した時の生存率も、キサンタンガムを含まない単なるリン酸緩衝液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。しかしながら、キサンタンガムを添加することによる生存率改善効果（キサンタンガムを添加した時と添加しない時との生存率の差）は、Ｌ−アスパラギン酸カリウム溶液の方がリン酸緩衝液より高かった。
【表１】
0004948176.tif 000002
表２に示すように、１％Ｌ−アスパラギン酸カリウムを添加した０．０５％または０．１％キサンタンガム溶液で処置した時の角膜上皮細胞の生存率は、Ｌ−アスパラギン酸カリウム未添加のキサンタンガム溶液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。一方、１％Ｌ−アスパラギン酸カリウムを添加したリン酸緩衝液（Ｌ−アスパラギン酸カリウム単独溶液）で処置した時の生存率は、キサンタンガム未添加の単なるリン酸緩衝液で処置した時の生存率とほとんど変わらなかった。すなわち、Ｌ−アスパラギン酸カリウムを添加することによる生存率改善効果（Ｌ−アスパラギン酸カリウムを添加した時と添加しない時との生存率の差）は、キサンタンガム溶液の方がリン酸緩衝液より高かった。
これらの結果は、キサンタンガムとＬ−アスパラギン酸カリウムとを組み合わせることにより、角膜上皮細胞保護作用が改善されることを示す。
【表２】
0004948176.tif 000003
0004948176.tif 000004
［試験例２］キサンタンガムとアミノエチルスルホン酸との組み合わせの乾燥による障害に対する角膜上皮細胞保護作用
１．試験方法
Ｌ−アスパラギン酸カリウムの代わりにアミノエチルスルホン酸を用いて試験例１と同様に操作した。
２．試験結果
表３に示すように、０．５％アミノエチルスルホン酸を添加した０．１％キサンタンガム溶液で処置した時の角膜上皮細胞の生存率は、アミノエチルスルホン酸未添加のキサンタンガム溶液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。また、０．５％アミノエチルスルホン酸を添加したリン酸緩衝液（アミノエチルスルホン酸単独溶液）で処置した時の生存率も、アミノエチルスルホン酸未添加の単なるリン酸緩衝液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。しかしながら、アミノエチルスルホン酸を添加することによる生存率改善効果（アミノエチルスルホン酸を添加した時と添加しない時との生存率の差）は、キサンタンガム溶液の方がリン酸緩衝液より高かった。この結果は、キサンタンガムとアミノエチルスルホン酸とを組み合わせることにより、角膜上皮細胞保護作用が改善されることを示す。
【表３】
0004948176.tif 000005
［試験例３］キサンタンガムとコンドロイチン硫酸ナトリウムとの組み合わせの乾燥による障害に対する角膜上皮細胞保護作用
１．試験方法
Ｌ−アスパラギン酸カリウムの代わりにコンドロイチン硫酸ナトリウムを用いて試験例１と同様に操作した。
２．試験結果
表４に示すように、０．５％コンドロイチン硫酸ナトリウムを添加した０．１％キサンタンガム溶液で処置した時の角膜上皮細胞の生存率は、コンドロイチン硫酸ナトリウム未添加のキサンタンガム溶液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。また、０．５％コンドロイチン硫酸ナトリウムを添加したリン酸緩衝液（コンドロイチン硫酸ナトリウム単独溶液）で処置した時の生存率も、コンドロイチン硫酸ナトリウム未添加の単なるリン酸緩衝液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。しかしながら、コンドロイチン硫酸ナトリウムを添加することによる生存率改善効果（コンドロイチン硫酸ナトリウムを添加した時と添加しない時との生存率の差）は、キサンタンガム溶液の方がリン酸緩衝液より高かった。この結果は、キサンタンガムとコンドロイチン硫酸ナトリウムとを組み合わせることにより、角膜上皮細胞保護作用が改善されることを示す。
【表４】
0004948176.tif 000006
［試験例４］キサンタンガムとアスパラギン酸との組み合わせの乾燥による障害に対する角膜上皮細胞保護作用
１．試験方法
３７℃、５％ＣＯ２における培養時間を１５分間から５分間に変更および乾燥条件を室温３０分間から３７℃６０分間に変更することを除き、試験例１と同様に操作した。
２．試験結果
表５に示すように、０．４％キサンタンガムを添加した０．２％Ｌ−アスパラギン酸カリウム溶液で処置した時の角膜上皮細胞の生存率は、キサンタンガム未添加のＬ−アスパラギン酸カリウム溶液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。また、０．４％キサンタンガムを添加したリン酸緩衝液（キサンタンガム単独溶液）で処置した時の生存率も、キサンタンガムを含まない単なるリン酸緩衝液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。しかしながら、キサンタンガムを添加することによる生存率改善効果（キサンタンガムを添加した時と添加しない時との生存率の差）は、Ｌ−アスパラギン酸カリウム溶液の方がリン酸緩衝液より高かった。
【表５】
0004948176.tif 000007
［試験例５］保存剤による障害に対するキサンタンガムの角膜上皮細胞保護作用
１．試験方法
凍結正常ウサギ角膜上皮細胞懸濁液（ＮＲＣＥ２、クラボウ社製）を培養液（ＲＣＧＭ２、クラボウ社製）に懸濁した。この懸濁液を遠心分離し（５分間、４００×ｇ）、上清を除去した。この細胞に２ｍＬの培養液を加えて懸濁し、その内２０μＬをトリパンブルー２０μＬで希釈し、生細胞数を血球計算盤でカウントした。その後、９６ウェルプレートの各ウェルに４×１０３個／ウェル／μＬになるように細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２、加湿下でコンフルエントまで培養を行った（ｎ＝６）。９６ウェルプレートの培養上清を除去した後、塩化ベンザルコニウムを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７）、キサンタンガム（エコーガムＴ：登録商標）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７）またはリン酸緩衝液（ｐＨ７）を１００μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２、加湿下で３０分間培養した。培養後、添加したそれぞれの溶液を除去し、培養液１００μＬで２回洗浄した。各ウェルにＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８溶液（同仁化学研究所製）１００μＬを添加し、２時間後に９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ，登録商標）を用い、吸光度（波長４５０ｎｍ）を測定した。角膜上皮細胞の生存率（％）は下記式を用い、各溶液の吸光度の平均値および無処置群の吸光度の平均値から求めた。
生存率（％）＝
各試験溶液添加群の吸光度の平均値  ×１００
無処置群の吸光度の平均値
２．試験結果
表６に示すように、保存剤である塩化ベンザルコニウムを含む水溶液で培養した時の生存率は、リン酸緩衝液で培養した時よりも低かった。しかしながら、さらに０．１％または０．４％のキサンタンガムを加えた水溶液で培養することによって、生存率は改善した。この結果は、保存剤による障害に対して、キサンタンガムが角膜上皮細胞の保護効果を有することを示している。
【表６】
0004948176.tif 000008
［試験例６］紫外線による障害に対するキサンタンガムの角膜上皮細胞保護作用
１．試験方法
凍結正常ウサギ角膜上皮細胞懸濁液（ＮＲＣＥ２、クラボウ社製）を培養液（ＲＣＧＭ２、クラボウ社製）に懸濁した。この懸濁液を遠心分離し（５分間、４００×ｇ）、上清を除去した。この細胞に２ｍＬの培養液を加えて懸濁し、その内２０μＬをトリパンブルー２０μＬで希釈し、生細胞数を血球計算盤でカウントした。その後、９６ウェルプレートの各ウェルに４×１０３個／ウェル／μＬになるように細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２、加湿下でコンフルエントまで培養を行った（ｎ＝６）。９６ウェルプレートの培養上清を除去した後、キサンタンガム（エコーガムＴ：登録商標）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７）またはリン酸緩衝液（ｐＨ７）を１００μＬ添加した後、紫外線（約２０μＷ／ｃｍ２）を９０分間照射した。照射後、添加したそれぞれの溶液を除去し、培養液１００μＬで２回洗浄した。各ウェルにＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８溶液（同仁化学研究所製）１００μＬを添加し、２時間後に９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ，登録商標）を用い、吸光度（波長４５０ｎｍ）を測定した。角膜上皮細胞の生存率（％）は下記式を用い、各試験溶液の吸光度の平均値および無処置群の吸光度の平均値から求めた。
生存率（％）＝
各試験溶液添加群の吸光度の平均値  ×１００
無処置群の吸光度の平均値
２．試験結果
表７に示すように、角膜上皮細胞の生存率は、紫外線を照射することによって低下した。しかしながら、０．４％のキサンタンガムを加えた水溶液おいては、紫外線を照射しても生存率は高い値を示した。この結果は、紫外線による障害に対して、キサンタンガムが角膜上皮細胞の保護効果を有することを示している。
【表７】
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以下に、本発明によるキサンタンガムおよびアミノ酸を含有する点眼剤の製剤実施例を示す。
［実施例１］キサンタンガムおよびコンドロイチン硫酸ナトリウム含有人工涙液
常法により、次の処方の人工涙液を調製した。
コンドロイチン硫酸ナトリウム                    ０．５ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．５ｇ
ホウ酸                                          ０．３ｇ
ホウ砂                                          適量
クエン酸ナトリウム                              ０．２ｇ
キサンタンガム                                  ０．２ｇ
ソルビン酸                                      ０．２ｇ
精製水                                          適量      
全量                                          １００ｍｌ（ｐＨ７．０）
［実施例２］キサンタンガムおよびＬ−アスパラギン酸カリウム含有人工涙液
常法により、次の処方の人工涙液を調製した。
Ｌ−アスパラギン酸カリウム                      １ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．５ｇ
ホウ酸                                          ０．２ｇ
ホウ砂                                          適量
キサンタンガム                                  ０．２ｇ
塩化ベンザルコニウム液（１０ｗ／ｖ％）          ０．０５ｍｌ
（塩化ベンザルコニウムとして０．００５ｇ）
精製水                                          適量      
全量                                          １００ｍｌ（ｐＨ７．２）
［実施例３］キサンタンガムおよびアミノエチルスルホン酸含有人工涙液
常法により、次の処方の人工涙液を調製した。
アミノエチルスルホン酸                          １ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．５ｇ
ホウ酸                                          ０．４ｇ
ホウ砂                                          適量
キサンタンガム                                  ０．１ｇ
塩化ベンザルコニウム液（１０ｗ／ｖ％）          ０．０５ｍｌ
（塩化ベンザルコニウムとして０．００５ｇ）
精製水                                          適量      
全量                                          １００ｍｌ（ｐＨ７．２）
［実施例４］キサンタンガムおよびコンドロイチン硫酸ナトリウム含有コンタクトレンズ用点眼剤
常法により、次の処方のコンタクトレンズ用点眼剤を調製した。
コンドロイチン硫酸ナトリム                      ０．５ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．５５ｇ
塩化カリウム                                    ０．１５ｇ
ホウ酸                                          ０．５ｇ
ホウ砂                                          適量
エデト酸ナトリウム                              ０．０１ｇ
キサンタンガム                                  ０．１ｇ
ポリソルベート８０                              ０．１５ｍＬ
グルコン酸クロルヘキシジン液（２０ｗ／ｖ％）    ０．０２５ｍＬ
（グルコン酸クロルヘキシジンとして０．００５ｇ）
精製水                                          適量      
全量                                          １００ｍｌ（ｐＨ７．２）
［実施例５］キサンタンガムおよびアミノエチルスルホン酸含有コンタクトレンズ装着液
常法により、次の処方のコンタクトレンズ装着液を調製した。
アミノエチルスルホン酸                          １ｇ
ポリビニルアルコール（部分けん化物）            ２ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．６ｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース２９０６      ０．５ｇ
エデト酸ナトリウム                              ０．０２ｇ
酢酸ナトリウム                                  ０．１ｇ
水酸化ナトリウム                                適量
キサンタンガム                                  ０．１ｇ
塩化ベンザルコニウム液（１０ｗ／ｖ％）          ０．０５ｍＬ
（塩化ベンザルコニウムとして０．００５ｇ）
精製水                                          適量      
全量                                          １００ｍｌ（ｐＨ７．２）
［実施例６］キサンタンガムおよびコンドロイチン硫酸ナトリウム含有人工涙液
常法により、次の処方の人工涙液を調製した。
コンドロイチン硫酸ナトリウム                ０．５ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．５ｇ
ホウ酸                                          ０．３ｇ
ホウ砂                                          適量
クエン酸ナトリウム                              ０．２ｇ
キサンタンガム                                  ０．３ｇ
ソルビン酸                                      ０．２ｇ
精製水                                          適量      
全量                                        １００ｍｌ（ｐＨ７．０）
［実施例７］キサンタンガムおよびＬ−アスパラギン酸カリウム含有人工涙液
常法により、次の処方の人工涙液を調製した。
Ｌ−アスパラギン酸カリウム                      １ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．５ｇ
ホウ酸                                          ０．２ｇ
ホウ砂                                          適量
キサンタンガム                                  ０．４ｇ
塩化ベンザルコニウム液（１０ｗ／ｖ％）          ０．０５ｍｌ
（塩化ベンザルコニウムとして０．００５ｇ）
精製水                                          適量      
全量                                          １００ｍｌ（ｐＨ７．２）
［実施例８］キサンタンガムおよびアミノエチルスルホン酸含有人工涙液
常法により、次の処方の人工涙液を調製した。
アミノエチルスルホン酸                          １ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．５ｇ
ホウ酸                                          ０．４ｇ
ホウ砂                                          適量
キサンタンガム                                  ０．５ｇ
塩化ベンザルコニウム液（１０ｗ／ｖ％）          ０．０５ｍｌ
（塩化ベンザルコニウムとして０．００５ｇ）
精製水                                          適量      
全量                                          １００ｍｌ（ｐＨ７．２）
［実施例９］キサンタンガムおよびコンドロイチン硫酸ナトリウム含有コンタクトレンズ用点眼剤
常法により、次の処方のコンタクトレンズ用点眼剤を調製した。
コンドロイチン硫酸ナトリウム                      ０．５ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．５５ｇ
塩化カリウム                                    ０．１５ｇ
ホウ酸                                          ０．５ｇ
ホウ砂                                          適量
エデト酸ナトリウム                              ０．０１ｇ
キサンタンガム                                  ０．３ｇ
ポリソルベート８０                              ０．１５ｍＬ
グルコン酸クロルヘキシジン液（２０ｗ／ｖ％）    ０．０２５ｍＬ
（グルコン酸クロルヘキシジンとして０．００５ｇ）
精製水                                          適量      
全量                                          １００ｍｌ（ｐＨ７．２）
［実施例１０］キサンタンガムおよびＬ−アスパラギン酸カリウム含有コンタクトレンズ装着液
常法により、次の処方のコンタクトレンズ装着液を調製した。
Ｌ−アスパラギン酸カリウム                      １ｇ
ポリビニルアルコール（部分けん化物）            ２ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．４ｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース２９０６      ０．５ｇ
エデト酸ナトリウム                              ０．０２ｇ
酢酸ナトリウム                                  ０．１ｇ
水酸化ナトリウム                                適量
キサンタンガム                                  ０．４ｇ
塩化ベンザルコニウム液（１０ｗ／ｖ％）          ０．０５ｍＬ
（塩化ベンザルコニウムとして０．００５ｇ）
精製水                                          適量      
全量                                          １００ｍｌ（ｐＨ７．２）
［実施例１１］キサンタンガムおよびアミノエチルスルホン酸含有コンタクトレンズ装着液
常法により、次の処方のコンタクトレンズ装着液を調製した。
アミノエチルスルホン酸                          １ｇ
ポリビニルアルコール（部分けん化物）            ２ｇ
塩化ナトリウム                                  ０．６ｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース２９０６      ０．５ｇ
エデト酸ナトリウム                              ０．０２ｇ
酢酸ナトリウム                                  ０．１ｇ
水酸化ナトリウム                                適量
キサンタンガム                                  ０．５ｇ
塩化ベンザルコニウム液（１０ｗ／ｖ％）          ０．０５ｍＬ
（塩化ベンザルコニウムとして０．００５ｇ）
精製水                                          適量      
全量                                        １００ｍｌ（ｐＨ７．２）
【産業上の利用可能性】  本発明によれば、優れた角膜上皮障害の治療効果および角膜上皮細胞の保護効果を有するキサンタンガム、またはキサンタンガムおよびアミノ酸を含有する眼科用組成物を提供することができる。本発明の眼科用組成物は、涙液減少症、眼乾燥症、マイボーム腺機能不全、シェーグレン症候群、乾性角結膜炎、眼瞼炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、ＶＤＴ作業に関連したドライアイ等のドライアイ症候群またはドライアイに伴う角結膜上皮障害等の予防・治療剤としても有用である。また本発明の眼科用組成物は、紫外線によって引き起こされる角膜上皮障害または保存剤が接触することによって引き起こされる角膜上皮障害の予防・治療剤に有用である。
さらに、点眼剤の態様をとった本発明の眼科用組成物は、擬塑性を示すキサンタンガムを含有することから優れた使用感を有するものである。
以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で様々な修正と変更をなすことは可能である。従って、そのような修正および変更も、すべて後記の請求の範囲で請求される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。
本出願は、日本で出願された特願２００４−２８１５８８を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。