(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式：
【化１】
0004879433.tif 000014
［式中、
R1は、-OHまたは-OCH3であり、
R2、R3、R4、およびR5は、水素原子、-OH、および-OCH3から独立して選択され；
mは、０〜４の整数であり；
R6は、オルト、メタ、またはパラ位が-O-R7-COOHで置換されているフェニルであり；
R6は、任意にハロゲン、-OH、-OCH3、C1-C4アルキル、-NH2、-NH(CH3)、-N(CH3)2、および-NO2から選択される１種または複数の基によって置換され；
R7は、C1-C12アルキルであるが、R1が-OCH3のとき、mは0である］
を有する化合物またはその塩を含む送達剤。
【請求項２】
R1が-OHである、請求項１に記載の送達剤。
【請求項３】
前記化合物が
【化２】
0004879433.tif 000015
および前記化合物の塩および溶媒和物からなる群から選択される、請求項１に記載の送達剤。
【請求項４】
前記化合物が
【化３】
0004879433.tif 000016
および前記化合物の塩および溶媒和物からなる群から選択される、請求項１に記載の送達剤。
【請求項５】
前記化合物が化合物１のジナトリウム塩である、請求項４に記載の送達剤。
【請求項６】
前記化合物が
【化４】
0004879433.tif 000017
および前記化合物の塩および溶媒和物からなる群から選択される、請求項１に記載の送達剤。
【請求項７】
（Ａ）生物学的活性剤；および
（Ｂ）請求項１に記載の送達剤
を含む薬剤組成物。
【請求項８】
（Ａ）生物学的活性剤；および
（Ｂ）請求項４に記載の送達剤
を含む薬剤組成物。
【請求項９】
（Ａ）生物学的活性剤；および
（Ｂ）請求項５に記載の送達剤
を含む薬剤組成物。
【請求項１０】
前記生物学的活性剤が、少なくとも１種のタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ホルモン、多糖、ムコ多糖、炭水化物、または脂質を含む、請求項７に記載の薬剤組成物。
【請求項１１】
前記生物学的活性剤が、ヒト成長ホルモン、組換えヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモンを含むがこれらには限定されない成長ホルモン；成長ホルモン放出ホルモン；成長ホルモン放出因子；α−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロンを含むがこれらに限定されないインターフェロン；インターロイキン−１、インターロイキン−２を含むがこれらに限定されないインターロイキン；ブタインシュリン、ウシインシュリン、ヒトインシュリン、ヒト組換えインシュリン、インシュリン様成長因子、インシュリン様成長因子−１を含むがこれらに限定されないインシュリン；未分画ヘパリン、ヘパリノイド、デルマタン、コンドロイチン、低分子量ヘパリン、超低分子量ヘパリン、極超低分子量ヘパリンを含むがこれらに限定されないヘパリン；サケカルシトシン、ウナギカルシトニン、ヒトカルシトニンを含むがこれらに限定されないカルシトニン；エリスロポエチン；心房性ナトリウム利尿因子；抗原；モノクローナル抗体；ソマトスタチン；プロテアーゼ阻害剤；アデノコルチコトロピン；ゴナドトロピン放出ホルモン；オキシトシン；黄体ホルモン（leutinizing-hormone）放出ホルモン；卵胞刺激ホルモン；グルコセレブロシダーゼ；トロンボポエチン；フィルグラスチム；プロスタグランジン；シクロスポリン；バソプレシン；クロモリンナトリウム；クロモグリク酸ナトリウム；クロモグリク酸ジナトリウム；バンコマイシン；デスフェリオキサミン；上皮小体ホルモン；上皮小体ホルモン断片；抗微生物剤；抗真菌剤；ビタミン；これらの化合物の類似体、断片、模倣剤およびポリエチレングリコール（PEG）修飾誘導体；およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１０に記載の薬剤組成物。
【請求項１２】
前記生物学的活性剤が、インシュリン、未分画ヘパリン、低分子量ヘパリン、超低分子量ヘパリン、極超低分子量ヘパリン、カルシトニン、PTH、EPO、hGHまたはこれらの組合せを含む、請求項１１に記載の薬剤組成物。
【請求項１３】
前記生物学的活性剤がインシュリンを含む、請求項１２に記載の薬剤組成物。
【請求項１４】
（Ａ）請求項７に記載の薬剤組成物；および、
（Ｂ）（ａ）賦形剤、
（ｂ）希釈剤、
（ｃ）崩壊剤、
（ｄ）滑沢剤、
（ｅ）可塑剤、
（ｆ）着色剤、
（ｇ）投与用担体、または、
（ｈ）これらの組合せ、
を含有する薬剤組成物。
【請求項１５】
前記生物学的活性剤が、少なくとも１種のタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ホルモン、多糖、ムコ多糖、炭水化物、または脂質を含む、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項１６】
前記生物学的活性剤が、ヒト成長ホルモン、組換えヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモンを含むがこれらには限定されない成長ホルモン；成長ホルモン放出ホルモン；成長ホルモン放出因子；α−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロンを含むがこれらに限定されないインターフェロン；インターロイキン−１、インターロイキン−２を含むがこれらに限定されないインターロイキン；ブタインシュリン、ウシインシュリン、ヒトインシュリン、ヒト組換えインシュリン、インシュリン様成長因子、インシュリン様成長因子−１を含むがこれらに限定されないインシュリン；未分画ヘパリン、ヘパリノイド、デルマタン、コンドロイチン、低分子量ヘパリン、超低分子量ヘパリン、極超低分子量ヘパリンを含むがこれらに限定されないヘパリン；サケカルシトニン、ウナギカルシトニン、ヒトカルシトニンを含むがこれらに限定されないカルシトニン；エリスロポエチン；心房性ナトリウム利尿因子；抗原；モノクローナル抗体；ソマトスタチン；プロテアーゼ阻害剤；アデノコルチコトロピン；ゴナドトロピン放出ホルモン；オキシトシン；黄体ホルモン（leutinizing-hormone）放出ホルモン；卵胞刺激ホルモン；グルコセレブロシダーゼ；トロンボポエチン；フィルグラスチム；プロスタグランジン；シクロスポリン；バソプレシン；クロモリンナトリウム；クロモグリク酸ナトリウム；クロモグリク酸ジナトリウム；バンコマイシン；デスフェリオキサミン；上皮小体ホルモン；上皮小体ホルモン断片；抗微生物剤；抗真菌剤；ビタミン；これらの化合物の類似体、断片、模倣剤およびポリエチレングリコール（PEG）修飾誘導体；およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１５に記載の薬剤組成物。
【請求項１７】
前記生物学的活性剤が、インシュリン、未分画ヘパリン、低分子量ヘパリン、超低分子量ヘパリン、極超低分子量ヘパリン、カルシトニン、PTH、EPO、hGH、またはこれらの組合せを含む、請求項１６に記載の薬剤組成物。
【請求項１８】
前記活性剤がインシュリンを含む、請求項１７に記載の薬剤組成物。
【請求項１９】
錠剤、カプセル、粉、または液体である、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項２０】
投与用担体を含み、前記投与用担体が水、２５％水性プロピレングリコール、リン酸緩衝液、１，２-プロパンジオール、エタノール、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項２１】
（Ａ）少なくとも１種の生物学的活性剤；
（Ｂ）請求項１に記載の送達剤；および、
（Ｃ）任意に、投与用担体
を混合することを含む、薬剤組成物の調製方法。
【請求項２２】
生物学的活性剤を必要としている動物に前記活性剤を投与するための、請求項７に記載の薬剤組成物。
【請求項２３】
生物学的活性剤を必要としている動物に肺経路を介して前記活性剤を投与するための、請求項９に記載の薬剤組成物。
【請求項２４】
請求項１７に記載の生物学的活性剤を必要としている動物を治療するための医薬の製造における、請求項７に記載の薬剤組成物の使用。
【請求項２５】
請求項１７に記載の生物学的活性剤を必要としている動物を治療するための医薬の製造における、請求項８に記載の薬剤組成物の使用。
【請求項２６】
請求項１７に記載の生物学的活性剤を必要としている動物を治療するための医薬の製造における、請求項９に記載の薬剤組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生物学的活性剤または化学的活性剤などの活性剤を標的に送達するための化合物に関する。これらの化合物は、経口、結腸内、肺、その他の経路を経由して動物に投与するための活性剤と非共有結合性混合物を形成するのに大変適している。こうした組成物の調製方法および投与方法も開示される。
【０００２】
【従来の技術】
活性剤の送達のための従来の方法は、生物学的、化学的、および物理的障壁によって制限されることが多い。典型的には、これらの障壁は、そこを通して送達が行われる環境、送達のための標的の環境、および／または標的そのものによるものである。生物学的または化学的活性剤は、特にこうした障壁を受けやすい。
【０００３】
生物学的または化学的活性製薬および治療薬の動物への送達において、障壁は身体によって与えられる。物理的障壁の例は、皮膚、脂質二重層、および循環系など、ある種の活性剤にとっては比較的非浸透性であるが標的に到達する前に通過しなければならない種々の器官膜である。化学的障壁は、消化（GI）管におけるpH変化および分解酵素を含むが、これらに限定されない。
【０００４】
これらの障壁は、経口送達系の設計において特に重要である。多くの生物学的または化学的活性剤の経口送達は、生物学的、化学的、および物理的障壁ではなく、動物への投与のためには選択される経路である。通常は経口投与しやすくない多くの薬剤中には、カルシトニンおよびインシュリンなどの生物学的または化学的に活性なペプチド；多糖類、特にムコ多糖（これに限られないがヘパリンが含まれる）；ヘパリノイド；抗生物質；および他の有機物質が含まれる。これらの薬剤は、消化管において、酸加水分解、酵素などによって速やかに不活性化または破壊される。また、高分子薬剤の大きさおよび構造が吸収を妨げる可能性がある。
【０００５】
攻撃を受けやすい薬理学的薬剤を経口投与する初期の方法は、補助薬（例えば、レゾルシノール、およびポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルなどの非イオン性界面活性剤）を同時投与して腸壁の透過性を人工的に増大させること、並びに、酵素阻害剤（例えば、膵臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスフェート（DFF）およびトラシロール（trasylol））を同時投与して酵素的分解を阻止することによるものであった。また、リポソームも、インシュリンおよびヘパリンのための薬物送達系として記載されている。しかしながら、これらの薬物送達系の広範な使用は、（１）系が毒性量の補助薬または阻害剤を必要とすること；（２）適当な低分子量の積荷、即ち活性剤が入手できないこと；（３）系の安定性が低く、有効期間が不十分であること；（４）系の製造が困難なこと；（５）系が活性剤（積荷）を保護できないこと；（６）系が活性剤（積荷）に有害な変化をもたらすこと；あるいは（７）系が活性剤の吸収を許容または促進しないことから、除外されていた。
最近では、プロテイノイド微小球（microsphere）が、医薬品の送達に用いられている。例えば、米国特許第5，401，516号および再発行特許第35，862号参照。さらに、ある種の修飾されたアミノ酸が医薬品の送達に用いられている。例えば、米国特許第5，629，020号、第5，643，957号、第5，766，633号、第5，776，888号、および第5，866，536号参照。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、依然として、調製が容易で広範な活性剤の送達が可能な、簡単かつ安価な送達系への要求が存在している。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、活性剤の送達を容易にするに化合物および組成物を提供する。本発明の送達剤は次式：
【化５】
0004879433.tif 000002
（式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、水素原子、ハロゲン、-OH、-OCH3、C1-C4アルキル、-NH2、-NH(CH3)、-N(CH3)2、または-NO2から独立して選択され；
mは０〜４の整数であり；
R6はオルト、メタ、またはパラ位が-O-R7-COOHで置換されているフェニルであり；
R6は、任意にハロゲン、-OH、-OCH3、C1-C4アルキル、-NH2、-NH(CH3)、-N(CH3)2、および-NO2から選択される１種または複数の基によって置換され；
R7はC1-C12アルキルである。）を有するか、またはその塩である。
【０００８】
１つの好適実施形態では、R1は-OHである。別の好適実施形態ではR1は-OCH3である。
【０００９】
１つの好適実施形態では、mは０である。さらに別の好適実施形態では、mは３である。
【００１０】
別の好適実施形態では、R6中のフェニルは、Cl（好ましくは-O-R7-COOHのパラ位）で置換されている。
【００１１】
別の好適実施形態では、R7はC3-C9アルキルである。
【００１２】
さらに別の好適実施形態では、R7はC3-C7アルキルである。
【００１３】
別の好適実施形態では、R1は-OH、R6はオルト位に-O-R7-COOHを有するフェニルである。より好ましくは、R6はO-R7-COOHのパラ位にCl置換基を有するフェニルである。より好ましくは、R7はC3-C7アルキルである。より好ましくはmは０である。
【００１４】
別の好適実施形態では、R1は-OCH3、mは１〜３の整数であり、R6はパラ位に-O-R7-COOHを有する置換フェニルである。より好ましくは、R7はC3-C7アルキルである。
【００１５】
好適な化合物の中には式Ｉの化合物のモノナトリウム塩およびジナトリウム塩が含まれるが、これらに限定されない。
【００１６】
特に言及されるのは、式：
【化６】
0004879433.tif 000003
（式中、nは１〜１２の整数であり；
Xは、ハロゲン、-OH、-OCH3、C1-C4アルキル、-NH2、-N(CH3)2、または-NO2から独立して選択される１種または複数の置換基であり；
Yは、ハロゲン、OH、OCH3、C1-C4アルキル、NH2、N(CH3)2、またはNO2から独立して選択される１種または複数の置換基である）を有する化合物またはその塩である。
【００１７】
好ましくは、nは３〜９の整数であり、より好ましくは３〜７である。
１つの好適実施形態では、Xはフェニル基の４位のClである。
【００１８】
別の好適実施形態では、Yはフェニル基の２位の-OHである。
【００１９】
より好ましい化合物は以下の１種または複数の化合物またはその塩を含む。
【００２０】
【化７】
0004879433.tif 000004
【００２１】
【化８】
0004879433.tif 000005
【００２２】
本発明は、上記の式ＩおよびＩＩ、１〜１０の送達剤化合物もしくはその塩の少なくとも１つ、またはそれらの混合物、および少なくとも１種の活性剤を含む組成物も提供する。こうした組成物は、送達剤を用いない活性剤の投与と比べ、生物学的系への活性剤の送達において、活性剤の生物学的利用性を高めすなわち改善する。
【００２３】
本発明はまた、この組成物を含む投薬単位形を提供する。投薬単位形は液体でも、錠剤、カプセルまたは粉剤や小分袋を含む粒などの固体でもよい。
【００２４】
本発明の別の実施形態は、活性剤を必要とする動物に、上記送達剤の少なくとも１種類および活性剤を含む組成物を動物に投与することにより、活性剤を投与する方法である。好ましい投薬経路には経口、結腸内および肺内経路が含まれる。
【００２５】
さらに別の実施形態は、本発明の組成物を投与することにより、動物中において疾患を処置し、または所望の生理学的効果を実現する方法である。
【００２６】
さらに別の実施形態は、上記式の送達剤化合物の少なくとも１種と少なくとも１種の活性剤とを混合することによる本発明組成物の調製方法である。
【００２７】
【発明の実施の形態】
送達剤化合物
送達剤化合物はカルボン酸またはその塩の形でよい。適当な塩は、有機および無機塩、例えば、ナトリウム、カルシウムおよびリチウムなどのアルカリ金属塩；マグネシウム、カルシウムまたはバリウムなどのアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩；リシンまたはアルギニンなどの塩基性アミノ酸；ジメチルアミンやピリジンなどの有機アミンが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００２８】
好ましくは、塩はナトリウム塩である。塩は、モノナトリウム塩およびジナトリウム塩など一価の塩でも多価の塩でもよい。塩はまた、溶媒和物（エタノール溶媒和物や水和物を含む。）でもよい。本明細書において「溶媒和物」という用語は、溶媒（エタノールなど）の分子またはイオンと、本発明化合物のイオンまたは分子との分子錯体またはイオン性錯体を含むが、これらに限定されない。
【００２９】
本発明の送達剤化合物の塩は、当技術分野で知られた方法で調製することができる。例えば、ナトリウム塩は、送達剤化合物をエタノールに溶解し、水性水酸化ナトリウムを添加することにより調製することができる。
【００３０】
一般に、本発明の化合物は、以下の方法を用いて調製することができる。
【００３１】
適当に置換されたアミノフェノール（２−アミノ−フェノールなど）と適当なアルキル化剤を水酸化カリウム（KOH）およびジメチルスルホキシド（DMSO）中、室温で２時間混合し、次いで蒸留水中に注いで酢酸エチル（EtOAc）で抽出する。有機層を合わせて水洗し、硫酸マグネシウム（MgSO4）で乾燥しろ過する。真空に引いて溶媒を蒸発させ、粗生成物を得る。これは、当技術分野で知られた方法、例えば、１０％EtOAcヘキサン溶液を溶離溶媒として用いる媒体加圧液体クロマトグラフィ（MPLC）で精製してもよい。
【００３２】
中間体エステルをテトラヒドロフラン（THF）に溶解し、窒素でフラッシュしてから約０℃に冷却する。中間体エステルを含む溶液に、トリエチルアミンおよび次いで適当に置換した塩化ベンゾイルTHF溶液（１００ｍＬ）をゆっくりと添加する。混合物を室温まで温め、薄層クロマトグラフィで反応の進行を監視しながら終夜撹拌する。３％HCl溶液を加えて反応を完了させる。各相を分離し、有機層を３％HCl、水、次いで飽和NaCl溶液で洗浄する。有機層をMgSO4で乾燥させ、ろ過し、真空に引いて溶媒を蒸発させる。
【００３３】
１０％水酸化ナトリウム（NaOH）水溶液をこの生成物に添加し、混合物を約９０℃で２時間撹拌し、次いで冷却し水で希釈する。この溶液を約pH６以下の酸性にする。生成物を溶液から分離しろ過によって回収し、水で穏やかに洗浄し、真空下、４０℃で終夜乾燥して、生成物を結晶性粉末として得る。
【００３４】
本明細書において、「ハロゲン」という用語は、特に断らない限り、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を指す。本明細書において、「アルキル」という用語は、特に断らない限り、飽和の一価炭化水素残基を含み、これは直鎖、分岐鎖または環状でもよい。こうしたアルキル基は単結合、二重結合または三重結合を含んでもよい。環状アルキルとしては環形成のために少なくとも３つの炭素原子が必要であると理解される。
【００３５】
溶媒和物は、本発明の化合物を、エタノールなどの溶媒に溶解することにより調製し、次いで混合物を、モル過剰量のナトリウム含有塩（例えば、水酸化ナトリウム）などの塩と反応させてもよい。例えば、本発明の化合物のジナトリウム塩のエタノール溶媒和物を調製するには、少なくとも約２モル当量のモノナトリウム含有塩を化合物とエタノールとの混合物に添加する。溶媒和物は当技術分野で知られた方法で回収することができる。
【００３６】
活性剤
本発明で用いるのに適した活性剤は、生物学的活性剤および化学的活性剤を含み、殺菌剤、殺虫剤、医薬剤、および治療剤を含むが、これらに限定されない。
【００３７】
例えば、本発明で用いるのに適した生物学的または化学的活性剤は、タンパク質；ポリペプチド；ペプチド；ホルモン；多糖類、特にムコ多糖の混合物；炭化化物；脂質；小さな極性有機分子（すなわち、分子量５００ダルトン以下の極性有機分子）；他の有機化合物；および、特に、それ自身では胃腸膜を通過しない（または投与量の一部しか通過しない）かつ／または消化管における酸および酵素で化学的開裂を受けやすい化合物；およびこれらの任意の組合せを含むが、これらに限定されない。
【００３８】
さらなる例は、以下のもの（合成、天然またはその組換え物を含む。）：ヒト成長ホルモン（hGH）、組換えヒト成長ホルモン（rhGH）、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモンを含む成長ホルモン；成長ホルモン放出ホルモン；成長ホルモン放出因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロンを含むインターフェロン；インターロイキン−１；インターロイキン−２；ブタインシュリン、ウシインシュリン、ヒトインシュリン、ヒト組換えインシュリン（任意に亜鉛、ナトリウム、カルシウムおよびアンモニウムを含む対イオンを有する。）；IGF-1を含むインシュリン様成長因子；未分画ヘパリン、ヘパリノイド、デルマタン、コンドロイチン、低分子量ヘパリン、超低分子量ヘパリン、極超低分子量ヘパリンを含むヘパリン；サケ、ウナギ、ブタおよびヒトを含むカルシトニン；エリスロポエチン；心房性ナトリウム利尿因子；抗原；モノクローナル抗体；ソマトスタチン；プロテアーゼ阻害剤；アデノコルチコトロピン；ゴナドトロピン放出ホルモン；オキシトシン；黄体ホルモン（leutinizing-hormone）放出ホルモン；卵胞刺激ホルモン；グルコセレブロシダーゼ；トロンボポエチン；フィルグラスチム；プロスタグランジン；シクロスポリン；バソプレシン；クロモリンナトリウム（例えば、クロモグリク酸ナトリウムまたはクロモグリク酸ジナトリウム）；バンコマイシン；デスフェリオキサミン（DFO）；アレンドロネート、チルドロネート、エチドロネート、クロドロネート、パミドロネート、オルパドロネート、およびインカドロネートを含むビスホスホナート；上皮小体ホルモン（その断片を含む。）；抗生物質、抗細菌剤（抗生物質の例は、ダプトマイシンおよびその類似体などのグラム陽性作用性殺細菌リポペプチドおよび環状ペプチド抗生物質を含むが、これらに限定されない。）および抗真菌剤などの抗微生物剤；ビタミン；これらの化合物の類似体、断片、模倣剤（mimetics）およびポリエチレングリコール（PEG）修飾誘導体；およびこれらの任意の組合せを含むが、これらに限定されない。
【００３９】
送達システム
本発明の組成物は、１種または複数の本発明の送達剤化合物、および１種または複数の活性剤を含む。１つの実施形態では、１種または複数の送達剤化合物、もしくはこれらの化合物の塩、またはこれらの化合物もしくは塩が１種または複数のその単位を形成するポリアミノ酸もしくはペプチドを送達剤として用い、投与に先立ち活性剤と混合して投与組成物を形成することができる。
【００４０】
投与組成物は、液体の形でもよい。溶液媒体は、水（例えば、サケカルシトニン、上皮小体ホルモン、およびエリスロポエチンに対して）、２５％水性プロピレングリコール（例えば、ヘパリンに対して）やリン酸緩衝液（例えば、rhGHに対して）を用いることができる。その他の投薬単体としてはポリエチレングリコールが含まれる。投薬溶液は、送達剤化合物溶液を活性剤溶液と投与直前に混合して調製することができる。あるいは、送達剤化合物（または活性剤）の溶液を固形の活性剤（または送達剤化合物）と混合してもよい。送達剤化合物と活性剤は乾燥粉末として混合してもよい。また、送達剤と活性剤は製造プロセスで混合することもできる。
【００４１】
投薬溶液は、任意に、リン酸緩衝塩、クエン酸、グリコール、その他の分散剤などの添加剤を含んでもよい。安定化用添加剤を、好ましくは約０．１から２０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で、溶液に組み入れてもよい。
【００４２】
あるいは、投与組成物は、錠剤、カプセルまたは粒子状（例えば、粉または小分袋）などの固形状でもよい。固形投与形は、固形送達剤化合物を固形活性剤と混合して調製することができる。あるいは、固体は、化合物と活性剤の溶液から、フリーズドライ（冷凍乾燥）、沈殿、結晶化および固形分散などの当技術分野で知られた方法で得ることもできる。
【００４３】
本発明の投与組成物は、1種または複数の酵素阻害剤を含有させることもできる。こうした酵素阻害剤は、アクチノニンもしくはエピアクチノニンまたはこれらの誘導体などの化合物を含むが、これらに限定されるものではない。他の酵素活性剤としては、これらに限定されるものではないが、アプロチニン（Trasylol）およびボウマン−バーク（Bowman-Birk）阻害剤が含まれる。
【００４４】
本発明の投与組成物中に用いられる活性剤の量は、特定の活性剤について標的適応症のための目的を達成するのに有効な量である。組成物中の活性の量は、典型的には薬学的、生物学的、治療剤的、または化学的に有効な量である。しかし、組成物が投与単位形で用いられる場合は、その量はそうした量より少なくすることもできる。投与単位形が複数の送達剤化合物／活性剤組成物を含んでもよく、あるいは、分割された薬学的、生物学的、治療剤的、または化学的有効量を含んでもよいからである。こうした場合、全有効量は、合計で活性剤有効量を含む累積的な単位として投与することができる。
【００４５】
用いるべき活性剤の合計量は、当業者には知られた方法で決定することができる。しかし、本発明の組成物は、活性剤単独を含む組成物よりも活性剤を効果的に送達できるので、従来の投薬単位形または送達システムで用いられている活性剤の生物学的または化学的量よりも少ない量で対象に投与しても、同一の血中濃度および／または治療効果を達成することができる。
【００４６】
ここに開示した送達剤組化合物は、生物学的および化学的な活性剤の、特に経口、鼻内、舌下、皮下、十二指腸内、頬、結腸内、直腸内、腟、経粘膜、肺経由、経皮、皮内、腸管外、静脈内、筋肉および眼系、並びに、血液／脳障壁を介する場合も、送達を容易にする。
【００４７】
投与単位形は、賦形剤、希釈剤、崩壊剤、滑沢剤（lubricant）、可塑剤、着色剤、香料、味覚マスク剤、糖、甘味料、塩、および投与用担体（水、１，２−プロパンジオール、エタノール、オリーブオイルまたはこれらの任意の組合せを含むがそれに限定されない。）の任意の１種または組合せを含むことができる。こうした成分の例（但し、これに限定されるものではない。）は、レミントン製薬科学（Remingtons Pharceutical Sciences）第１８版（Mak Publishing Co．（1990））に記載されており、参照により本願に組み込まれる。
【００４８】
本発明の化合物および組成物は、鶏などの鳥類；げっ歯類、牛、豚、犬、猫および霊長類（特にヒト）などの哺乳類；および昆虫類を含む（但し、これらに限定されるものではない。）任意の動物に、生物学的または化学的活性剤を投与するのに有用である。
【００４９】
この系は、活性剤がその標的域（すなわち、送達組成物中の活性剤が放出されるべき領域）に達する前に遭遇する条件により、投与された動物体内で、本発明の系でなければ破壊または有効性の低下を受けやすい生物学的または化学的活性剤の送達に特に有利である。特に本発明の化合物および組成物は、経口的に活性剤、特に通常は経口的には投与できないか、より送達改善が望まれているものを投与するのに有用である。
【００５０】
化合物および活性剤を含む組成物は、活性剤を生体系に送達させること、および、送達剤を用いない活性剤の投与と比較して活性剤の生物学的利用能（bioavailability）を増大ないし改善することに有用性を有する。送達は、時間をかけてより多くの活性剤を送達することにより、または、特定の時期に（より迅速なまたは遅延的な送達）あるいは時間をかけて（持続的送達）活性剤を送達することにおいて改善される。
【００５１】
本発明の別の実施形態は、動物において本発明の組成物を投与することによる、疾患の治療もしくは予防方法、または下表にリストとして示すような所望の生理学的効果の実現方法である。活性剤の具体的指示は、Physicians' Desk Reference（５４版、２０００年、Medical Economics Company，Inc．ニュージャージー州モントベール（Montvale、NJ））に記載されており、参照により本願に組み込まれる。下表の活性剤は、その類似体、断片、模倣剤、およびポリエチレングリコール修飾誘導体を含む。
【００５２】
【表１】
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【００５３】
例えば、本発明の１つの実施形態は、インシュリンおよび本発明の送達剤化合物の少なくとも１種を投与することによる、糖尿病に罹患しているあるいは罹患しやすい患者の治療方法である。
【００５４】
投与後、組成物中または投薬単位形中に存在する活性剤は循環系に取り込まれる。活性剤の生物学的利用能は、血中の知られた医薬品活性、例えば、ヘパリンによる血液凝固時間の増大や、カルシトニンにより引き起こされる循環カルシウム濃度の減少を測定することにより容易に評価される。あるいは、活性剤自身の循環系内濃度を直接に測定することもできる。
【００５５】
【実施例】
以下の例により本発明を説明するが本発明はこれらの例に限定されない。すべての部は特に断らない限り重量に基づく。
【００５６】
下記のリストに掲げた化合物のプロトン核磁気共鳴（1H NMR）分析は、特に断らない限り、ジメチルスルホキシド（DMSO-d6）を溶媒として用いて３００ＭＨｚのブルーカー（Bruker）スペクトロメータにより行った。
【００５７】
実施例１−化合物の調製
化合物１の調製
５００ｍｌの丸底フラスコにKOH（１６．１ｇ、２７０ｍｍｏｌ）およびDMSO（１６０ｍＬ）を入れた。この混合物に２−アミノ−４−クロロフェノール（１３．６ｇ、９４．７ｍｍｏｌ）、次いでエチル８−ブロモオクタノエート（２４．０ｇ、９５．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を２００ｍＬの蒸留水に注いだ。溶液をEtOAcで抽出した（２×２００ｍＬ）。有機層を合わせ、一度水で洗い、MgSO4で乾燥してからろ過した。真空に引いて溶媒を蒸発させ、粗生成物を濃厚な褐色液体として得た。１０％EtOAcのヘキサン溶液を溶離液として使用して、生成物を媒体圧力液体クロマトグラフィ（MPLC）で精製して中間体エステルを薄い褐色の液体として得た（１７．１ｇ、５４．５ｍｍｏｌ、収率３８％）。
【００５８】
中間体エステル（３．３７ｇ、１７ｍｍｏｌ）をTHF（１５０ｍｌ）に溶解し、さらに添加用ロートを備えた５００ｍＬの丸底フラスコに入れた。系を窒素でフラッシュし、氷浴で０℃まで冷やした。トリエチルアミン（３．０ｍＬ、２１．２ｍｍｏｌ）をシリンジ経由でゆっくりと加えた。Ｏ−アセチルサリチロイルクロリド（３．３７ｇ、１７ｍｍｏｌ）をTHF（１００ｍＬ）に加え、前記の添加用ロートに入れ、３０分をかけてゆっくりとエステル混合液に加えた。溶液はゆっくりと曇った。この混合物を室温まで温め、終夜撹拌した。反応の進行は薄層クロマトグラフィによって監視した。３％HCｌ（v/v）溶液（１００ｍＬ）を加えて反応を完了させる。各相を分離し、有機層を３％（v/v）HCｌ（１００ｍＬ）、H2O（１００ｍＬ）、次いで飽和NaCl溶液（１００ｍＬ）で洗浄する。有機層をMgSO4で乾燥させ、ろ過し、真空に引いて溶媒を蒸発させる。
【００５９】
１０％（w/w）水酸化ナトリウム（NaOH）水溶液（６８ｍＬ）を上で分離した粗生成物に添加し、混合物を油浴中９０℃で２時間撹拌した。溶液を冷却し水（１００ｍＬ）で希釈し、約pH６の酸性にした。白色沈殿物が形成され、ろ過によって回収し、水で穏やかに洗浄し、真空下、４０℃で終夜乾燥して、化合物１を微細な白色結晶性粉末として得た（４．６０ｇ、１１．３ｍｍｏｌ、収率６６％）；融点：１５２〜１５３℃；C21H24ClNO5として計算：％C、62.14（計算値）、62.20（実測値）；％H、5.96（計算値）、5.81（実測値）；％N、3.45（計算値）、3.26（実測値）。1H NMR分析（DMSO-d6）：δ1.27-1.53、1.77-1.91、2.15-2.20、（4.05-4.09、6.97-7.10、7.41-7.47、8.01-8.05、8.56-8.57、11.0、11.6、12.0。適当な出発物質を用い上記方法によって化合物２、３、４および５を調製した。化合物６も適当な出発物質を用い上記方法によって調製することができる。
【００６０】
化合物２：融点：１６６〜１６９℃；燃焼分析：％C：59.43（計算値）、59.37（実測値）；％H：4.99（計算値）、4.96（実測値）；％N：3.85（計算値）、3.59（実測値）；％Cl：9.75（計算値）、9.74（実測値）。1H NMR分析（d6-DMSO）：δ11.80-12.0、11.00、8.58、8.02-8.05、7.41-7.47、7.06-7.10、6.98-7.03、4.06-4.11、2.31-2.36、1.68-1.86。）
【００６１】
化合物３：融点：２３１〜２３４℃；燃焼分析：％C：58.38（計算値）、58.13（実測値）；％H：4.61（計算値）、4.67（実測値）；％N：4.00（計算値）、3.91（実測値）；％Cl：10.14（計算値）、10.10（実測値）。1H NMR分析：（d6-DMSO）：δ11.80-12.0、11.00、8.02-8.06、7.41-7.47、7.06-7.10、6.98-7.03、4.08-4.13、2.44-2.52、2.00-2.10。
【００６２】
化合物４：融点：１２２〜１２４℃；燃焼分析：％C：67.91（計算値）、67.77（実測値）；％H：6.78（計算値）、6.83（実測値）；％N：3.77（計算値）、3.78（実測値）。1H NMR分析：（d6-DMSO）：δ11.80-12.0（br. s，1H）、11.00（s，1H）、8.41-8.44（m，1H）、8.01-8.04（dd，1H）、7.38-7.44（m，1H）、7.04-7.08（m，3H）、6.91-7.00（m，2H）、4.03-4.08（t，2H）、2.15-2.19（t，2H）、1.78-1.83（m，2H）、1.26-1.50（m，8H）。
【００６３】
化合物５：融点：１４７〜１４９℃；燃焼分析：％C：54.22（計算値）、54.15（実測値）；％H：5.79（計算値）、5.74（実測値）；％N：5.75（計算値）、5.66（実測値）。1H NMR分析：（d6-DMSO）：δ11.80-12.0（br. s，1H）、11.00（s，1H）、8.44-8.47（m，1H）、8.02-8.05（dd，1H）、7.39-7.45（m，1H）、7.01-7.09（m，3H）、6.91-6.99（m，2H）、4.05-4.10（t，2H）、2.31-2.36（t，2H）、1.68-1.87（m，4H）。
【００６４】
化合物８の調製
工程Ａ：４−アミノフェノール（１０．００ｇ、０．０９１７）、ジオキサン（１７５ｍｌ）、および水（９０ｍｌ）を磁気回転棒、添加用ロートおよびアルゴンパージを口に嵌めて取り付けた１リットルの丸底フラスコに加えた。反応混合物を氷／水浴で冷却して、反応混合物に１Ｎ  NaOH溶液（９１．７ｍｌ）を１０分間かけて滴下した。カルボン酸ジ−ｔ−ブチル（１９．００ｇ、０．０９１７ｍｍｏｌ）をジオキサン（３０ｍｌ）に溶解し、この溶液を添加用ロートに入れた。この溶液を４５分間かけて滴下した。氷浴を除き反応混合物を終夜かけて室温まで戻るに任せた。終夜撹拌後、真空に引いてジオキサンを除き、酢酸エチルを反応混合物に加えた。水層のpHが２になるまで０．５Ｍ  H2SO4溶液を加えた。酢酸エチル層を分離し、水層についてさらに２回酢酸エチルによる抽出を行った。酢酸エチル層を合わせて活性炭で脱色し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空に引いて濃縮物を褐色の固体として得た。これを温ヘキサンで洗浄した。得られた４−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−ヒドロキシベンゼンを分離した（収量：１４．８２ｇ）。
【００６５】
４−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−ヒドロキシベンゼンの一部（７．０ｇ、０．０３３５ｍｏｌ）とアセトン（６０ｍｌ）をアルゴンパージ、磁気回転棒および冷水凝縮器を口に嵌めて取り付けた２５０ｍｌの丸底フラスコに装入した。３−ブロモベンジルプロピルエーテル（６．５０ｍｌ、０．０３６８ｍｏｌ）と炭酸カリウム（４．６２ｇ、０．０３３５ｍｏｌ）を加え、反応混合物の加熱を開始した。４日間還流した後、反応混合物の加熱を停止して、脱イオン水（１００ｍｌ）を加えた。この混合物を２分したジエチルエーテル（１００ｍｌ）で抽出した。エーテル層を合わせ２Ｎ  NaOH溶液（１００ｍｌ）で２回抽出した。エーテル層を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空に引いて濃縮すると黄褐色の固体が得られた。この黄褐色の固体をヘキサンから再結晶して３−（４−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）フェノキシ）−１−ベンゾオイルオキシプロパン  （８．２ｇ）を得た。
【００６６】
上記のようにして調製した３−（４−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）フェノキシ）−１−ベンゾオイルオキシプロパン（１２．７５ｇ、０．０３５７ｍｏｌ）をアルゴンパージおよび磁気回転棒を口に嵌めて取り付けた５００ｍｌの丸底フラスコに装入した。反応混合物をアルゴンを約３０分間散布し、活性炭担持１０％パラジウム（０．７５ｇ）を反応混合物に加えた。反応容器を脱気した後、水素を含む風船を反応容器上に取り付けた。２日間撹拌した後、さらに活性炭担持１０％パラジウム（０．２５ｇ）を加えた。フラスコを再び脱気し、水素を含む風船を再びフラスコ上に取り付けた。この混合物をさらに水素下で４日間撹拌した（必要に応じて風船に補充を行った。）。次いで反応混合物をろ過し、ろ液を真空に引いて３−（４−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）フェノキシ）プロパン−１−オールを白色固体として得た（収量：９．４７ｇ）。
【００６７】
上記のようにして調製した３−（４−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）フェノキシ）プロパン−１−オール（０．９５ｇ、０．０３４６ｍｏｌ）を、アルゴンパージおよび磁気回転棒を口に嵌めて取り付けた２５０ｍｌの丸底フラスコに装入した。ピリジニウムジクロメート（４５．５９ｇ、０．１２１３ｍｏｌ）を加え、終夜かけて反応混合物を室温で撹拌した。次いで、反応混合物を５００ｍｌの水に注ぎ、酢酸エチル２００ｍｌずつで３回抽出した。酢酸エチルを合わせ１００ｍｌの０．５Ｍ  H2SO4で洗い、次いで１００ｍｌの２Ｎ  NaOH溶液で抽出した。次いでNaOH層を２N  HClで酸性にしたところ、灰色の固体沈殿が生じた。３−（４−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）フェノキシ）プロピオン酸を分離した（収量：３．２６ｇ）。
【００６８】
上記のようにして調製した３−（４−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）フェノキシ）プロピオン酸（３．２５ｇ、０．０１１５７ｍｏｌ）とジオキサン（３０ｍｌ）を１００ｍｌの丸底フラスコに装入した。反応混合物をろ過し、このろ液をアルゴンパージおよび磁気回転棒を口に嵌めて取り付けた別の１００ｍｌの丸底フラスコに装入した。４Ｍ  HClのジオキサン溶液（２０ｍｌ）を加え混合物を室温で撹拌した。終夜撹拌した後、反応混合物をろ過し、白色固体を分離した。一方、ろ液を３日間保存したところ、さらに固体が沈殿しているのが認められた。この固体をろ過によって分離し先に分離した固体と合わせた。４Ｍ  HClのジオキサン溶液（１０ｍｌ）を固体に加えた。室温で終夜撹拌した後、さらに固体が沈殿しているのが認められた。これもろ過で分離して先の固体と合わせた。この合わせた固体を真空に引いて乾燥し３−（４−アミノフェノキシ）プロピオン酸を分離した（収量：２．０８ｇ）。
【００６９】
上記のようにして調製した３−（４−アミノフェノキシ）プロピオン酸（１．９５ｇ、０．０１０８ｍｏｌ）を凝縮器、アルゴンパージ、および磁気回転棒を口に嵌めて取り付けた２５０ｍｌの丸底フラスコに装入した。ジクロロメタンを加え黄褐色スラリーを形成した。トリメチルシリルクロリド（２．７４ｍｌ、０．０２１５ｍｏｌ）を反応混合物に加え加熱還流を開始した。１．５時間後、加熱を止め、次いで反応混合物を氷／水浴で冷却した。トリエチルアミン（２．２５ｍｌ、０．０１６２ｍｏｌ）を加えた。アセチルサリチロイルクロリド（２．０３ｇ、０．０１０２ｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶解した。この溶液を、凝縮器に代えて添加用ロートを頂上に付けたフラスコに装入した。次いで、アセチルサリチロイルクロリド溶液の滴下を１５分かけて行った。この混合物をさらに３０分間撹拌してから水浴を除き、終夜かけて反応混合物を室温に戻した。次いで真空に引いて塩化メチレンを除いた。次いで２Ｎ  NaOH（７０ｍｌ）を加え、この混合物を約３０分間撹拌した後、反応混合物を２Ｍ  H2SO4で酸性にした。黄褐色の固形沈殿をろ過により分離し、酢酸エチルに取って２Ｎ  HClで溶液で５０ｍｌずつ２回洗浄した。酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空に引いて濃縮した。得られた黄褐色の固体をエタノール／水溶液から再結晶し、水で洗って黄褐色の固体を得た。
【００７０】
工程Ｂ：この固体をエチルアルコールを入れた２５０ｍｌエーレンマイヤーフラスコに取った。固体が溶解するまで混合物を加熱した。次いで混合物を高温ろ過し１０Ｎ  NaOH溶液（０．６４ｍｌ、０．００６４ｍｏｌ）をろ液に加えてろ液を形成した。混合物を数分間撹拌した後、真空に引いて約半分のエタノールを除いた。得られたスラリーにヘプタン（７５ｍｌ）を加えた。混合物をろ過後、真空に引いてさらに乾燥し固体を分離した。この固体をNaOH/H2O混合物に取った。この溶液を２Ｍ  H2SO4で酸性にした。沈殿した白色固体をろ過によって分離し、エタノール：水混合物（１：１）から再結晶し真空下で乾燥した。
【００７１】
工程Ｃ：生成物３−（４−サリチロイルアミノ）フェノキシプロピオン酸を分離した（収量：１．４０ｇ）。
【００７２】
化合物８：融点：１６５〜１６７℃；燃焼分析：％C：63.79（計算値）、63.58（実測値）；％H：4.98（計算値）、4.92（実測値）；％N：4.65（計算値）、4.57（実測値）。1H NMR分析：（d6-DMSO）：δ12.4、（COOH）；δ12.00、（OH）；δ10.3，s，1H、（NH）；δ7.95、（芳香環、アミドに対しα位CH）；δ7.55、（芳香環、エーテルに対しα位CH）；δ7.40、（芳香環、アミドに対しパラ位CH）；δ6.91、（芳香環、エーテルに対しメタ位CHおよび水酸基に対しオルトおよびパラのCH'）；δ4.13、（エーテルに対しα位CH2）；δ2.65、（カルボン酸に対しα位CH2）。
【００７３】
化合物９の調製
化合物８の調製について説明した方法において、工程Ｂを省略しアセチルサリチロイルクロリドに代えてＯ−アニソールクロリドを用いることにより、化合物９を調製した。
【００７４】
化合物９：融点：１５４〜１５８℃；燃焼分析：％C：64.76（計算値）、64.70（実測値）；％H：5.40（計算値）、5.51（実測値）；％N：4.44（計算値）、4.24（実測値）。1H NMR分析：（d6-DMSO）：δ12.4、（COOH）；δ10.0，s，1H、（NH）；δ7.61、（芳香環、アミドに対しα位CHおよびエーテルに対しα位CH'）；δ7.45、（芳香環、メトキシに対しメタ位CH）；δ7.15，d、（芳香環、メトキシに対しα位CH）；δ7.03、（芳香環、エーテルに対しパラ位CH）；δ4.10、（エーテルに対しα位CH2）；δ3.85、（CH3）；δ2.65、（カルボン酸に対しα位CH2）。
【００７５】
化合物７の調製
化合物８の調製について説明した方法において、工程Ｂを省略しアセチルサリチロイルクロリドに代えて２，３−ジメトキシベンゾイルクロリドを用いることにより、化合物７を調製した。
【００７６】
化合物７：融点：１３５〜１３７℃；燃焼分析：％C：62.61（計算値）、62.31（実測値）；％H：5.51（計算値）、5.57（実測値）；％N：4.06（計算値）、3.95（実測値）。1H NMR分析：（d6-DMSO）：δ12.3、（COOH）；δ10.1、（NH）；δ7.60、（芳香環、エーテルに対しα位CH'）；δ7.09、（芳香環、３−メトキシ基に対しオルト、メタおよびパラ位CH'）；δ6.88，dd，2H、（芳香環、エーテルに対しメタ位CH）；δ4.13、（エーテルに対しα位CH2）；δ3.85、（２−メトキシ基CH3）；δ3.78，s，3H、（３−メトキシ基CH3）；δ2.66，t，2H、（カルボン酸に対しα位CH2）。
【００７７】
化合物１０の調製
３−（４−ヒドロキシフェニル）−１−プロマノール（２０．０ｇ、０．１３５ｍｏｌ）および炭酸カリウム（２２．２ｇ、０．１６２ｍｏｌ）を、凝縮器、油浴および磁気回転子を取り付けた５００ｍＬ丸底フラスコ中のアセトン／水（１５０ｍＬ／１５ｍＬ）中で撹拌した。エチルブロモアセテートを滴下し、フラスコを加熱して１８時間還流した。反応物を室温まで冷却し真空に引いて濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し水、１Ｎ塩酸および再び水で洗浄した。有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過してから真空に引いて濃縮した。中間体化合物Ｉの構造は、1H NMRで確認しさらに精製は行わなかった。３０．２９ｇ（収量：９４．３％）。
【００７８】
中間体化合物Ｉ（３０．２９ｇ、０．１２７ｍｏｌ）を、添加用ロートおよびアルゴン導入口／バブラを取り付けた５００ｍＬ丸底フラスコ中の塩化メチレン（１００ｍＬ）に溶解した。溶液を氷浴で冷却した。トリエチルアミン（１９．４７ｍＬ、０．１３９ｍｏｌ）を５分間かけて滴下した。トシルクロライド（２１．２６ｇ、０．１２７ｍｏｌ）を塩化メチレンに溶解し反応フラスコに２０分かけて滴下した。反応溶液が室温まで温まるに任せHPLCで監視した。トリエチルアミンとトシルクロリドを添加し、反応完了を監視した。混合物を真空に引いて濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。溶液を塩酸（２×１００ｍＬ、１Ｎ）および重炭酸ナトリウム（６×１０ｍＬ）で洗った。有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空に引いて濃縮した。中間体化合物ＩＩの構造は、1H NMRで確認しさらに精製は行わなかった。２９．１５ｇ（収量：６０％）。
【００７９】
２５０ｍＬの１口フラスコ中で、カルサラム（carsalam）（４．２２ｇ、０．０２６ｍｏｌ）、中間体化合物ＩＩ（１０．０ｇ、０．０２６ｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１００ｍＬ）、および炭酸ナトリウム（３．０３ｇ、０．０２８６ｍｏｌ）を窒素雰囲気下、２０時間、９０℃に加熱した。反応混合物を室温まで冷却後、ろ過し無機物を除いた。水（１００ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて真空に引いて濃縮した。残渣を水酸化ナトリウム（２Ｎ）および１，４−ジオキサン中、２．５時間撹拌し、次いで濃縮物を塩酸酸性にした。得られた固体をろ過で回収し、五酸化リン上で真空に引いて乾燥して化合物１０を得た。
【００８０】
化合物１０：融点：１２４〜１２６．５℃。C18H19O5Nについての燃焼分析：％C：65.64（計算値）、65.32（実測値）；％H 5.81（計算値）、5.89（実測値）；％N 4.25（計算値）、4.15（実測値）。1H NMR分析：（300ＭＨｚ、d6-DMSO）：δ..13.0；8.85；7.85；7.40；7.15；6.85；4.60；3.30；2.6；1.8。
【００８１】
化合物１のジナトリウム塩エタノール溶媒和物の調製
凝縮器、熱電対、記録器、バリアック（可変変圧器）、加熱マントル、モーター駆動撹拌器、および添加用ロートを備えた２Ｌの４口フラスコに、２−アミノ−４−クロロフェノール（２００ｇ、１．３０ｍｏｌ、ウィスコンシン州ミルウォーキー所在のAldrich Chemical Company，Inc．より入手可能）を入れ水（５００ｍｌ）中で撹拌した。無水酢酸（１７１ｇ、１．６８ｍｏｌ）を１０分間かけて反応フラスコに加えた。反応物を加熱して３０分間還流し、次いで室温まで冷却した。得られたスラリーを減圧ろ過し固体を水洗して褐色の固体を得た。これを５０℃で真空に引いて乾燥し２４９．２ｇのＮ−アセチル−２−アミノ−４−クロロフェノールを得た（収率９７％；ガスクロマトグラフィ（GC）による純度９５．４％）。
【００８２】
凝縮器、熱電対、記録器、窒素導入口／バブラ、モーター駆動撹拌器、および添加用ロートを備えた２Ｌの４口フラスコに、エタノール（２００ｍｌ）を入れた。ケロシンで洗浄後、ナトリウム（９．５ｇ、０．４１２ｍｏｌ）を、反応温度を６０℃以下に保ちつつ、３０分間かけて加えた。すべてのナトリウムが溶解するまで（約９０分間）反応物を混合し、一方、反応物は２５℃に冷却した。６１．２５ｇ（０．３３ｍｏｌ）のＮ−アセチル−２−アミノ−４−クロロフェノールを７０℃でエタノール（３５０ｍＬ）に溶解し、カニューレによりナトリウム溶液に添加した。次いで、エチル８−ブロモオクタノエート（１０３ｇ、０．４１２ｍｏｌ）（ドイツ国Seelze所在のRiedel-de Haenより入手可能）を添加用ロートから反応物に加えた。反応物を加熱して１８．５時間加熱還流した。室温まで冷却した後、反応物をろ過してろ液を真空に引いて濃縮した。得られた褐色の半固体をヘプタン（６００ｍＬ）と数時間撹拌し、ろ過し乾燥して１２０．８ｇの２−Ｎ−アセチルアミノ−４−（クロロフェノキシ）エチルオクタノエートを固形分として得た（収率１００％）。
【００８３】
モーター駆動撹拌器、温度計、THERM-O-WATCH（登録商標）熱コントローラ（ペンシルベニア州Cheltenham所在のI2Rより入手可能）、加熱マントル、および窒素導入口／バブラを取り付けた５Ｌの４口フラスコに中で、水酸化ナトリウム（２４０．０ｇ、６．０ｍｏｌ）をエタノール（１２０ｍＬ）に４６．５℃で溶解した。１２．０ｇ（０．３３７ｍｏｌ）の２−Ｎ−アセチルアミノ−４−（クロロフェノキシ）エチルオクタノエートを溶液に加え、フラスコを８０℃で約１３時間加熱した。加水分解後、HPLCを行った。エタノール（３４７．８ｍＬ）を留去し、反応物を２５℃まで冷却し固体を生成させた。氷浴を用いて温度を２５℃以下に保って濃塩酸（４６９．１ｍＬ）をフラスコに滴下してpH４．６５とした。褐色固体をろ別し、水洗して８２．９３ｇの８−（２−アミノ−４クロロフェノキシ）オクタン酸を得た（収率：８６％）。構造をNMRで確認した。同じ化合物の第２バッチ（８１．３３ｇ）を同じ方法で調製した。
【００８４】
モーター駆動撹拌器、氷浴、添加用ロート、凝縮器および温度計を備えた３リットルの４口フラスコ内で、乾燥メタノール（５００ｍＬ）を２℃まで冷却した。アセチルクロリド（５２．５６ｇ、０．６６９ｍｏｌ）をメタノールに滴下し、溶液をさらに１５分間撹拌した。１５９ｇ（０．５５８ｍｏｌ）の８−（２−アミノ−４−クロロフェノキシ）オクタン酸を乾燥メタノール（５００ｍＬ）に溶解し、反応フラスコにゆっくりと加えた。１５分間撹拌した後、氷浴を除き、フラスコを３時間加熱還流した。溶液を真空に引いて１８７ｇ（１００％）のメチル（８−（２−アミノ−４−クロロフェノキシ）オクタノエート・HCl）を薄い褐色固体として濃縮した。構造をNMRで確認した。
【００８５】
モーター駆動撹拌器、添加用ロートおよび温度計を備えた３リットルの４口フラスコ内で、１００ｇ（０．３２２ｍｏｌ）のメチル（８−（２−アミノ−４−クロロフェノキシ）オクタノエート・HCl）をTHF（５００ｍＬ）およびトリエチルアミン（７０．５５ｇ、０．６９７ｍｏｌ）に５℃で滴下した。次いで、THF（２５０ｍＬ）に溶解させたアセチルサリチロイルクロリド（６５．９８ｇ、０．３３２ｍｏｌ）を３０分かけて加えた。５℃でさらに１５分間経過後、反応物を室温まで温めHPLCで監視した。水酸化ナトリウム（２Ｎ、全量９５０ｍＬ）を反応フラスコに添加し加水分解後、HPLCを行った。反応物を氷浴を用いて５℃まで冷やし、温度を２０℃以下に保って濃塩酸（１７０ｍＬ）をフラスコに滴下して最終pHを４．０とした。THFを留去し、得られた黄褐色固体をろ別、風乾し、１１７．９１ｇ（収率：８７．５％）の８−［（Ｎ−サリチロイル−２−アミノ−４−クロロ）フェノキシル］オクタン酸（化合物ＩＩＩ）を得た。構造をNMRおよび元素分析で確認した（C21H24O5Clとしての計算値：C，62.14；H，5.96；N，3.45；実測値：C，61.92；H，5.91；N，3.26）。
【００８６】
モーター駆動撹拌器、加熱マントル、温度計、窒素導入部／バブラおよび添加用ロートを備えた２リットルの３口フラスコ内で、１１７．９１ｇの化合物ＩＩＩをエタノール（１Ｌ）中に撹拌し、７５℃で３時間加熱した。温度を７０℃に下げ、水酸化ナトリウムのエタノール溶液（１１．３ｗｔ％、１９９．７ｍＬ）を溶液に加えて３０分間撹拌した。エタノール（９７０ｍＬ）を留去し、反応物をわずかに冷却した。塊状の溶融物を結晶皿にあけ、８０℃で乾燥し、固体を形成後、真空下に引いて、１３０．３６ｇ（９７．４％）の８−［（Ｎ−サリチロイル−２−アミノ−４−クロロ）フェノキシ］オクタン酸ジナトリウム塩のエタノール溶媒和物（化合物Ｉエタノール溶媒和物）を生成した。エタノール溶媒和物の構造は元素分析で確認した。C23H28NO6Na2Cl・1．3664H2Oとしての計算値：C，55.31；H，5.19；H，2.80；Na，9.21；実測値：C，54.4；H，5.42；N，2.90；Na，7.98）。また、エタノール溶媒和物の構造は、1H NMR（３００ＭＨｚ、DMSO-d6）で確認した。δ：14.8，8.70，7.7，6.9，6.55，6.2，4.0，4.4，3.45，1.4，1.24.4、エタノール；4.4，3.45，1.05。融点＞２５０℃（使用した装置の測定限界）。
【００８７】
実施例２
肺投与インシュリン
送達剤化合物およびヒトインシュリンを含む投与用水溶液組成物を調製した。典型的には、脱イオン水を１．５ｍｇの送達剤化合物に加えて体積を１．０ｍｌとし、溶液をボルテックスで撹拌した。送達剤化合物のナトリウム塩を用いるか、得られた溶液を撹拌することにより遊離酸をナトリウム塩に変換し、水酸化ナトリウム（１０Ｎ）の１当量を加えて水で希釈した。溶液をボルテックスで撹拌し、次いで加熱し（約３７℃）、超音波処理した。NaOHとHClを用いてpHを約７．０と８．５の間に調整した。
【００８８】
この溶液に７５μｌのヒトインシュリンストック溶液（２ｍｇ／ｍｌ）を加えた。ヒトインシュリンストック溶液は、以下のように調製したものである。０．０２ｇのヒトインシュリンに３ｍｌのHCl脱イオン水溶液（pH＝３）を添加し、溶液のpHをHClで約２．６とし、溶液が清澄になるまでNaOHを加えた。次いで、NaOHとHCｌを用いてpHを７．６に上昇させた。pH７．５の脱イオン水で最終体積を１０ｍｌとしたところ、最終pHは７．５９となった。水を添加して全体積を２．０ｍｌとし、溶液を穏やかに数回転置した。最終送達剤化合物投薬量、インシュリン投薬量および投薬物体積を下表にまとめた。
【００８９】
典型的な投薬および試料採取プロトコールは以下のようにした。体重２００〜２５０ｇのオスのSprague-Dawleyラットを２４時間絶食させ、投薬の１５分前に、ケタミン（４４ｍｇ／ｋｇ）およびクロロプロマジン（１．５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。典型的には、５匹のラットからなる投薬群には投薬液の１種を投与した。５匹の動物からなる対照群にはインシュリンのみを投与した。ライトを取り付けたげっ歯類用の気管滴下具（ペンシルバニア州PittsburghのPenn Century，Inc．から入手可能）に投薬用溶液を充填し、針が気管に達するまで（目視確認）喉の中に挿入した。プランジャを押すことにより溶液を投与した。
【００９０】
血液試料を尾の動脈から連続的に（典型的には５、１５、３０、６０および１２０分の時点で）、回収した。血清インシュリン濃度は、インシュリンELISAテストキット（テキサス州WebsterのDiagnostic Systems Laboratories，Inc．から入手できるKit # DSL-10-1600）によって測定した。各投薬群における５匹のラットの結果を各時間毎に平均した。最大値を下表１に示す。
【００９１】
経口投与インシュリン
送達剤およびヒトインシュリン亜鉛（カリフォルニア州La JollaのCalbiochem-Novabiochem Corpから入手できる、最小２６ＩＵ／ｍｇ）を含む経口投薬（PO）組成物を脱イオン水中で調製した。典型的には、送達剤化合物５００ｍｇを水１．５ｍｌに加えた。送達剤化合物の遊離酸を、得られた溶液を撹拌することによりナトリウム塩に変換し、１当量の水酸化ナトリウムを加えた。溶液をボルテックスで撹拌し、次いで加熱し（約３７℃）、超音波処理した。NaOHとHClを用いてpHを約７と８．５の間に調整した。必要に応じ、さらにNaOHを加え、均一な溶解性を実現し、pHを再び約７と８．５の間に調整した。次いで水を加えて全量を約２．４ｍｌとし、ボルテックスで撹拌した。約１．２５ｍｇのインシュリンをインシュリンストック溶液（インシュリン０．５４０９ｇと１８ｍｌの脱イオン水から調製した１５ｍｇ／ｍｌで、４０ｍｌの濃HCl、２５ｍｌの１０Ｎ  NaOHおよび５０ｍｌの１Ｎ  NaOHを用いて、HClおよびNaOHで清澄な液体となるように調整した）から溶液に加え転置により混合した。溶液を直ちに投薬プロトコールに従って用いるか、あるいは、投薬前１時間、溶液を３７℃の水浴に漬けた。最終的な送達剤化合物の投薬量、インシュリン投薬量および投薬物体積を下表１にまとめた。
【００９２】
典型的な投薬および試料採取プロトコールは以下のようにした。体重２００〜２５０ｇのオスのSprague-Dawleyラットを２４時間絶食させ、投薬の１５分前に、および麻酔を維持する必要に応じて、ケタミン（４４ｍｇ／ｋｇ）およびクロロプロマジン（１．５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。５匹のラットからなる投薬群には投薬液の１種を投与した。経口投薬のために、１１ｃｍのRusch８Frenchカテーテルを１ｍｌのピペットチップ付きシリンジに嵌めた。溶液をカテーテル内に引き込むことでシリンジに投薬溶液を充填し、次いで液を拭き取った。次いでカテーテルを、門歯を抜けてチューブを１ｃｍ残すまで食道に入れた。シリンジのプランジャを押すことで投薬液を投与した。
【００９３】
血液試料は尾の動脈から連続的に（典型的には１５、３０、６０、１２０および１８０分の時点で）、回収した。血清インシュリン濃度は、インシュリンELISAテストキット（テキサス州WebsterのDiagnostic Systems Laboratories，Inc．から入手できるKit # DSL-10-1600）を用いたが、テストキットで使用する試料の体積および濃度に対して感度および標準曲線の直線範囲が最適となるように標準プロトコールを修正して測定した。各投薬群における５匹のラットそれぞれの血清ヒトインシュリン濃度（μＵ／ｍｌ）を各時間毎に平均した。各時間毎の５つの値を平均し結果を血清インシュリン濃度対時間としてプロットした。平均値のうちの最大の値を表１に示す。事前の実験では、ヒトインシュリンのみの経口投薬の後、ヒトインシュリンは測定可能な濃度に達しないことが示された。
【００９４】
【表２】
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【００９５】
サケカルシトニン（sCT）の経口送達
送達剤化合物とサケカルシトニン（sCT）を含む経口投薬（PO）水溶液組成物を調製した。典型的には、４５０ｍｇの送達剤化合物を２．０ｍｌの水に加えた。送達剤化合物のナトリウム塩を用いるか、得られた溶液を撹拌し、水酸化ナトリウム（１．０Ｎ）の１当量を加えて水で希釈することにより遊離酸をナトリウム塩に変換した。溶液をボルテックスで撹拌し、次いで加熱し（約３７℃）、超音波処理した。NaOHとHClを用いてpHを約７（６．５と８．５の間）に調整した。この溶液に、９０μｇのsCTをストック溶液から加えた。次いで、水を加えて全量を約３．０ｍｌ（送達剤化合物の溶解度により変わる。）とし、ボルテックスで撹拌した。最終送達剤化合物投薬量、sCT投薬量および投薬物体積を表２にまとめた。
【００９６】
典型的な投薬および試料採取プロトコールは以下のようにした。体重２００〜２５０ｇのオスのSprague-Dawleyラットを２４時間絶食させ、投薬の１５分前に、ケタミン（４４ｍｇ／ｋｇ）およびクロルプロマジン（１．５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。５匹のラットからなる投薬群には投薬液の１種を投与した。経口投薬のために、１１ｃｍのRusch８Frenchカテーテルを１ｍｌのピペットチップ付きシリンジに嵌めた。溶液をカテーテル内に引き込むことでシリンジに投薬溶液を充填し、次いで液を拭き取った。次いでカテーテルを、ラットの門歯を抜けてチューブを１ｃｍ残すまで食道に入れた。シリンジのプランジャを押すことで投薬液を投与した。
【００９７】
血液試料を尾の動脈から連続的に（典型的には０、１０、２０、３０、６０および９０分の時点で）、回収した。血清sCT濃度は、EIAキット（カリフォルニア州San CarlosのPeninsula Laboratories，Inc．から入手可能なKit # EIAS-6003）によって測定した。測定したsCT濃度は、時点＝０でのベースライン値に従って調整した。各投薬群における５匹のラットから得られた結果を各時間毎に平均した。最大値を以下の表２に示す。
【００９８】
【表３】
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【００９９】
化合物１のジナトリウム塩の調製
実施例１で調製した化合物のエタノール溶媒和物２５ｇをメタノール２５０ｍｌに溶解した。活性炭５ｇを添加し、混合物を５０〜６０℃で２０分間撹拌した。スラリーをろ過し、活性炭処理を繰り返した。真空に引いてメタノールを除いた。得られた固体を１００ｍｌのヘキサンで洗浄し、真空に引いて乾燥した。化合物１のジナトリウム塩１４．８ｇを灰色がかった白色固体として回収した。HNMRは、精製試料にエタノールが含まれていないことを示していた。
【０１００】
インシュリンの経口投与について上述した方法により、化合物１のジナトリウム塩をインシュリンとともに生体内で試験した。結果を以下の表３に示す。
【０１０１】
【表４】
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【０１０２】
ヘパリンの結腸内送達
送達剤化合物とヘパリンナトリウムUSPを含む２５％プロピレングリコール水溶液結腸内（IC）投薬組成物を調製した。送達剤化合物のナトリウム塩を用いるか、得られた溶液を撹拌することにより遊離酸をナトリウム塩に変換し、１当量の水酸化ナトリウムを加えて水で希釈した。典型系には、送達剤化合物とヘパリン（約１６６〜１８２ＩＵ／ｍｇ）を乾燥粉末としてボルテックスを用いて混合した。この乾燥混合物を２５％ｖ／ｖプロピレングリコール水溶液に溶解し、ボルテックスで撹拌し超音波処理した（約３７℃）。NaOH水溶液（２Ｎ）を用いてpHを約７（６．５と８．５の間）に調整した。投薬溶液を超音波処理して清澄な液体を作製した。最終的な液量を３．０ｍＬに調整した。最終送達剤化合物投薬量、ヘパリン投薬量および投薬物体積を下記の表４にまとめた。
【０１０３】
典型的な投薬および試料採取プロトコールは以下のようにした。体重２７５〜３５０ｇのオスのSprague-Dawleyラットを２４時間絶食させ、投薬直前に、塩酸ケタミン（８８ｍｇ／ｋｇ）で麻酔した。５匹のラットからなる投薬群には投薬液の１種を投与した。
【０１０４】
結腸内（±C）投薬のために、７．５ｃｍの８fr Ruschカテーテルを１ｍｌのピペットチップ付きシリンジに嵌めた。当薬用カテーテルをチューブが見えなくなるまで肛門から結腸内に挿入した。投薬用溶液は、ゆっくりと結腸内に送り込んだ。
【０１０５】
ケタミンを投与（８８ｍｇ／ｋｇ）した後、心臓穿刺により、典型的には０．２５、０．５、１．０および１．５時間の時点でにクエン酸化血液試料を採取した。Henry，J．B．著「実験室的方法による医療診断および管理」（Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Method）（ペンシルバニア州フィラデルフィア  W．B．Saunders（1979））に従い、活性化部分トロンボプラスチン時間（APTT：activated partial thromboplastin time）を用いてヘパリン活性を測定した。事前の検討でベースライン値は約２０秒であることが示されていた。各群における５匹のラットから得られた結果を各時間毎に平均した。最大値を以下の表４に示す。
【０１０６】
【表５】
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【０１０７】
上皮小体ホルモン送達（PTH 1-34）経口／結腸内送達
送達剤化合物およびヒト上皮小体ホルモン残基1-34（PTH）を含む経口強制投薬（PO）水溶液を調製した。送達剤化合物溶液は、送達剤化合物のナトリウム塩を用いるか、遊離酸をナトリウム塩に変換して作製した。典型的には、送達剤化合物溶液は、水中で撹拌し、１当量の水酸化ナトリウム（１．０Ｎ）を加えて調製した。最終的な投薬用溶液は、送達剤化合物溶液をPTHストック溶液（典型的には濃度５ｍｇPTH／ｍｌ）と混合して所望の体積（通常は３．０ｍｌ）に希釈した。送達剤化合物、PTHおよび投薬物体積を下記の表５にまとめた。
【０１０８】
典型的な投薬および試料採取プロトコールは以下のようにした。体重２００〜２５０ｇのオスのSprague-Dawleyラットを２４時間絶食させ、投薬の１５分前に、ケタミン（４４ｍｇ／ｋｇ）およびクロルプロマジン（１．５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。５匹のラットからなる投薬群には投薬液の１種を投与した。経口強制投薬（PO）のために、１１ｃｍのRusch８Frenchカテーテルを１ｍｌのピペットチップ付きシリンジに嵌めた。溶液をカテーテル内に引き込むことでシリンジに投薬溶液を充填し、次いで液を拭き取った。次いでカテーテルを、門歯を抜けてチューブを１ｃｍ残すまで食道に入れた。シリンジのプランジャを押すことで投薬液を投与した。
【０１０９】
血液試料は尾の動脈から連続的に（典型的には経口投与後０、１５、３０、４５、６０および９０分の時点で）、回収した。血清PTH濃度は、PTHラジオイムノアッセイキット（カリフォルニア州San CarlosのPeninsula Laboratories，Inc．から入手可能なKit # RIK6101）を用いて測定した。事前の検討でベースライン値は約０であることが示された。各群における５匹のラットからの結果を各時間毎に平均した。最大値を以下の表５に示す。
【０１１０】
【表６】
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【０１１１】
インターフェロン−経口送達
送達剤化合物およびヒトインターフェロン（IFN）を含む経口投薬用液を脱イオンで調製した。送達剤化合物は、１当量の水酸化ナトリウムを用いて遊離酸をナトリウム塩に変換した。典型的には、送達剤化合物溶液は、水中で撹拌し、ナトリウム塩を作製する場合は、１当量の水酸化ナトリウム（１．０Ｎ）を加えて調製した。混合物はボルテックスで撹拌し超音波処理した（約３７℃）。NaOH水溶液を用いてpHを約７．0と８．５の間に調整した。混合物をボルテックスにかけ、必要ならば超音波処理および加熱して、均一な懸濁液または溶液とした。さらに、必要に応じてNaOHを添加して均一な溶解性を達成し、pHを再び調整して約７．０〜８．５とした。送達剤化合物溶液をIFNストック溶液（約２２．０〜２７．５ｍｇ／ｍｌリン酸緩衝塩水）と混合して所望の体積（通常は３．０ｍｌ）に希釈した。最終送達剤化合物、IFNおよび投薬体積を下記の表６にまとめた。
【０１１２】
典型的な投薬および試料採取プロトコールは以下のようにした。体重２００〜２５０ｇのオスのSprague-Dawleyラットを２４時間絶食させ、投薬の１５分前に、および麻酔を維持する必要に応じて、ケタミン（４４ｍｇ／ｋｇ）およびクロルプロマジン（１．５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。５匹のラットからなる投薬群には投薬液の１種を投与した。経口強制投薬（PO）のために、１１ｃｍのRusch８Frenchカテーテルを１ｍｌのピペットチップ付きシリンジに嵌めた。溶液をカテーテル内に引き込むことでシリンジに投薬溶液を充填し、次いで液を拭き取った。次いでカテーテルを、門歯を抜けてチューブを１ｃｍ残すまで食道に入れた。シリンジのプランジャを押すことで投薬液を投与した。
【０１１３】
血液試料は尾の動脈から連続的に（典型的には０、１５、３０、４５、６０および９０分の時点で）、回収した。血清INF濃度は、ヒトIFN-α用Cytoscreen Immunoassay Kit（カリフォルニア州CamarilloのBiosource Internationalから入手可能なカタログ# KHC4012）を用いて測定した。事前の検討でベースライン値は約０であることが示された。各群における５匹のラットからの結果を各時間毎に平均した。これらの平均の最大値（すなわち、平均ピーク結成IFN濃度）を以下の表６に示す。
【０１１４】
【表７】
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【０１１５】
組換えヒト成長ホルモン（rhGH）経口送達
送達剤化合物およびrhGHを含む経口強制投薬（PO）溶液をリン酸緩衝液を用いて調製した。送達剤化合物溶液は、送達剤化合物のナトリウム塩を用いるか、遊離酸をナトリウム塩に変換してつくった。典型的には、送達剤化合物溶液は、リン酸緩衝液中で撹拌し、ナトリウム塩を作製する場合には、１当量の水酸化ナトリウム（１．０Ｎ）を加えて調製した。最終的な投薬用溶液は、送達剤化合物溶液をrhGHストック溶液（１５ｍｇ  rhGH／ｍｌ）と混合して所望の体積（通常は３．０ｍｌ）に希釈した。送達剤化合物およびrhGH投薬量を下記の表７にまとめた。
【０１１６】
典型的な投薬および試料採取プロトコールは以下のようにした。体重２００〜２５０ｇのオスのSprague-Dawleyラットを２４時間絶食させ、投薬の１５分前に、ケタミン（４４ｍｇ／ｋｇ）およびクロロプロマジン（１．５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。５匹のラットからなる投薬群には投薬液の１種を投与した。経口強制投薬（PO）のために、１１ｃｍのRusch８Frenchカテーテルを１ｍｌのピペットチップ付きシリンジに嵌めた。溶液をカテーテル内に引き込むことでシリンジに投薬溶液を充填し、次いで液を拭き取った。次いでカテーテルを、ラットの門歯を抜けてチューブを１ｃｍ残すまで食道に入れた。シリンジのプランジャを押すことで投薬液を投与した。
【０１１７】
血液試料は尾の動脈から連続的に（典型的には経口投与については０、１５、３０、４５、６０および９０分の時点で、IC投薬については０、１０、２０、３０、６０および９０分の時点で）回収した。各期間における５つの試料をそれぞれプールした。血清rHGH濃度は、rHGHイムノアッセイキット（マサチューセッツ州CambridgeのGenzyme Corporation，Inc．から入手可能なKit # K1F4015）を用いて測定した。事前の検討でベースライン値は約０であることが示された。
【０１１８】
各群における最大濃度を以下の表７に示す。
【０１１９】
【表８】
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【０１２０】
上記の特許、出願、試験方法および刊行物は、その全体が参照によって本願に組み込まれる。
【０１２１】
本発明の多くの変形態様は、上記の詳細な説明を参考にすれば当業者には自明なことである。こうした明らかな変形は、完全に、添付する請求の範囲の範囲内である。