(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１日あたり２０ｍｇの総用量を上限として、以下の構造式：
【化１】
0004975214.tif 000011
を有する化合物を単位製剤あたり１乃至２０ｍｇ含み、ヒトにおける勃起不全の処置に使用される内服用単位製剤。
【請求項２】
１乃至５ｍｇの上記化合物を含む請求項１記載の内服用単位製剤。
【請求項３】
２.５ｍｇの上記化合物を含む請求項１または２記載の内服用単位製剤。
【請求項４】
５ｍｇの上記化合物を含む請求項１または２記載の内服用単位製剤。
【請求項５】
２０ｍｇの上記化合物を含む請求項１記載の内服用単位製剤。
【請求項６】
液剤、錠剤、カプセル剤、およびゲルカップ剤からなる群より選択される形態にある請求項１乃至５のいずれかに記載の内服用単位製剤。
【請求項７】
錠剤の形態にある請求項１乃至６のいずれかに記載の内服用単位製剤。
【請求項８】
処置を必要としているヒトにおける勃起不全の処置用の医薬の製造のための、以下の構造式：
【化２】
0004975214.tif 000012
を有する化合物を単位製剤あたり１乃至２０ｍｇ含有し、１日あたり２０ｍｇの総用量を上限とする内服用単位製剤の使用。
【請求項９】
１乃至５ｍｇの上記化合物を含有する１以上の単位製剤が投与されるものである、請求項８記載の内服用単位製剤の使用。
【請求項１０】
前記単位製剤が、２.５ｍｇの上記化合物を含有する請求項８または９記載の内服用単位製剤の使用。
【請求項１１】
前記単位製剤が、５ｍｇの上記化合物を含有する請求項８または９記載の内服用単位製剤の使用。
【請求項１２】
前記単位製剤が、液剤、錠剤、カプセル剤、およびゲルカップ剤からなる群より選択される形態にある請求項８乃至１１記載の内服用単位製剤の使用。
【請求項１３】
前記単位製剤が、錠剤の形態にある請求項８乃至１２記載の内服用単位製剤の使用。
【発明の詳細な説明】
本発明は、１９９９年４月３０日に出願せる仮特許出願Ｎｏ．６０／１３２，０３６の優先権を主張するものである。
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、選択性の高いホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）酵素阻害剤と、医薬単位製剤におけるその使用に関する。詳細には、本発明は環状グアノシン３’，５’−モノホスフェート特異的ホスホジエステラーゼ・タイプ５（ＰＤＥ５）の強力な阻害剤に関し、これは、医薬製品に配合すると性的機能不全の処置のために有用である。本明細書に記載の単位製剤は選択的ＰＤＥ５阻害によって特徴付けられ、したがって他のホスホジエステラーゼ酵素の阻害に原因する有害な副作用の最小化または回避を成し遂げつつ、ＰＤＥ５の阻害が望まれる治療分野に利をもたらすものである。
【０００２】
【従来の技術】
環状グアノシン３’，５’−モノホスフェート特異的ホスホジエステラーゼ（ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ）阻害剤の生化学的、生理学的、および臨床的効果によって、平滑筋、腎性、止血性、炎症性および／または内分泌機能の改変が望まれる疾患状態における様々な有用性が示唆されている。タイプ５のｃＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ５）は、脈管の平滑筋における主要なｃＧＭＰ加水分解酵素であり、陰茎の海綿体で発現していることが報告されている（Taherら、J.Urol.、149巻、285A頁(1993)）。しかしてＰＤＥ５は、性的機能不全の処置において興味深い標的である（Murray、DN&P、6巻3号、150〜156頁(1993)）。
【０００３】
現在、ＰＤＥ阻害剤を提供する医薬製品が、バイアグラ（登録商標、VIAGRA）という商標名で市販されており、入手することができる。バイアグラの有効成分はシルデナフィル（sildenafil）である。製品は、２５、５０、および１００ｍｇのシルデナフィル錠剤と添付文書を含む製造品として販売されている。添付文書には、シルデナフィルが他の既知ホスホジエステラーゼよりも強力なＰＤＥの阻害剤であることが記載されている（ＰＤＥ１阻害については８０倍以上の阻害、ＰＤＥ２、ＰＤＥ３およびＰＤＥ４に対しては１，０００倍以上の阻害）。ＰＤＥ５に対するシルデナフィルのＩＣ50は、３ｎＭ（Drugs of the Future、22巻、2号、128〜143頁(1997)）および３．９ｎＭ（Boolellら、Int. J. of Impotence、8巻、47〜52頁(1996)）との報告がある。シルデナフィルはＰＤＥ３よりもＰＤＥ５に対して４，０００倍の選択性を有しており、ＰＤＥ６に対するＰＤＥ５に対する選択性はわずか１０倍であることが記載されている。ＰＤＥ６に対する選択性を比較的欠如していることが、色覚に関連する異常の理由になっているという説がある。
【０００４】
シルデナフィルは多大な商業的成功を修めたものの、顔面紅潮（１０％の発生率）を含めた重大な副作用のためにこれは短期間で凋落した。視覚異常、高血圧に罹患している患者における、そして最も重要なものとして、有機硝酸塩を使用している個体（Weldsら、Amer.J. of Cardiology、83巻、5A号、21(C)〜28(C)頁(1999)）における有害な副作用により、シルデナフィルの使用が限定されてしまっている。
【０００５】
有機硝酸塩を摂取している患者におけるシルデナフィルの使用は、患者に危険をもたらしうる、臨床的に重大な血圧の低下を引き起こす。したがって、シルデナフィルが硝酸塩の血圧降下作用を増強するので、シルデナフィル用の添付文書では、有機硝酸塩（たとえばニトログリセリン、イソソルビド一硝酸塩、イソソルビド硝酸塩、エリスリトール三硝酸塩）や、常用、断続使用を問わず、またいかなる製剤であっても他の硝酸酸化物との併用に対して、厳密な配合禁忌が提示されている。C.R.Contiら、Amer.J. of Cardiology、83巻(5A)、29C〜34C頁(1999)を参照されたい。このように、シルデナフィルに効能があるものの、性的機能不全の処置において有用な、改善された医薬製品を同定する必要性が依然として残されている。
【０００６】
Dauganの米国特許第５，８５９，００６号は、ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ、つまりＰＤＥ５の強力な阻害剤である特定の四環系誘導体を開示している。米国特許第５，８５９，００６号に開示された化合物のＩＣ50は、１ｎＭ乃至１０μＭの範囲にあると報告されている。かくして、単位製剤（錠剤またはカプセル剤）は、０．２乃至４００ｍｇの有効成分化合物として報告されている。米国特許第５，８５９，００６号に開示された化合物が原因となる重大な副作用は開示されていない。
【０００７】
出願人らは、かかる四環系誘導体の一つである (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-ヘキサヒドロ-2-メチル-6-(3,4-メチレンジオキシフェニル)ピラジノ[2',1':6,1]ピリド[3,4-b]インドール-1,4-ジオン、あるいは別名、(6R-トランス)-6-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2,3,6,7,12,12a-ヘキサヒドロ-2-メチルピラジノ-[1',2':1,6]ピリド[3,4-b]インドール-1,4-ジオンで、本明細書において化合物（Ｉ）として言及されているものが、現在市場に出されているＰＤＥ５阻害剤であるシルデナフィルに伴う副作用なしに、有効な処置をもたらすような単位用量にて投与されうることを発見した。本発明よりも前には、このような副作用はＰＤＥ５の阻害に本来備わっているものと考えられていた。
【０００８】
重要なことには、本出願人らの臨床試験によってさらに、感受性のある個体において顔面紅潮を惹起する傾向が低い有効な製品を提供できることも明らかになっている。最も意外なことには、この製品は、ＰＤＥ５阻害剤と有機硝酸塩とを組み合わせた効果に伴う副作用が臨床的に問題にならない程度にて、投与することができる。このように、ＰＤＥ５阻害剤を含有する製品に対してはかつて不可欠と信じられていた配合禁忌が、本明細書に開示されるとおりに約１ｍｇ乃至約２０ｍｇの単位製剤として化合物（Ｉ）を投与する場合には不要である。しかして本発明は、硝酸塩療法を必要としている個体、性的機能不全治療の開始よりも３ヶ月以上前に心筋梗塞に罹患している個体、およびクラス１うっ血性心不全に罹患している個体などの、心血管性疾患を有する個体、または視覚障害に見舞われている個体を含めた、これまでは処置不可能であったか、または容認しえない副作用に見舞われていた個体における、性的機能不全に対する効果的な治療法を提供するものである。
【０００９】
本発明は、単位製剤にて化合物（Ｉ）を提供する。すなわち、本発明によって約１乃至約２０ｍｇの化合物（Ｉ）を含む経口投与のために好適な医薬単位製剤が提供される。
【００１０】
【発明の要約】
本発明は、１ｍｇ乃至２０ｍｇの(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-ヘキサヒドロ-2-メチル-6-(3,4-メチレンジオキシフェニル)ピラジノ[2',1':6,1]ピリド[3,4-b]インドール-1,4-ジオンを、経口投与用に好適な単位製剤に含む、医薬用途の医薬製剤を提供する。
【００１１】
本発明はさらに、ＰＤＥ５の阻害が望まれる状態を処置する方法を提供するもので、この方法は、それを必要としている患者に、１乃至２０ｍｇの選択的ＰＤＥ５阻害剤を含有する経口製剤を、１日あたり２０ｍｇの最高総用量を上限として、必要に応じて投与する工程を含むものである。本発明はさらに、性的機能不全の処置のための、１乃至２０ｍｇの用量での選択的ＰＤＥ５阻害剤を含有する経口製剤の使用を提供する。
【００１２】
本発明によって処置することができる特定の状態には、雄性の勃起不全および雌性の性的機能不全、特に雌性性的覚醒障害としても知られている雌性覚醒障害が包含されるが、これらに限定されることはない。
【００１３】
詳細には、本発明は医薬単位用量組成物であって、以下の構造式：
【００１４】
【化４】
0004975214.tif 000002
【００１５】
を有する化合物を１乃至２０ｍｇ含み、当該単位製剤は経口投与に好適である単位製剤、およびかかる医薬単位用量組成物を用いて性的機能不全を処置する方法に関するものである。
【００１６】
【詳細な説明】
本明細書に開示および記載されたごとき本発明の目的のために、以下の用語および略語を下記のとおりに定義する。
【００１７】
「容器」なる用語は、医薬製品の保存、輸送、販売、および／または取扱に好適な器および閉止具（クロージャ）のあらゆるものを意味する。
【００１８】
「ＩＣ50」なる用語は、特定のＰＤＥ酵素（たとえばＰＤＥ１ｃ、ＰＤＥ５、またはＰＤＥ６）を阻害する化合物の作用強度の基準である。ＩＣ50は、単一投与量応答実験において５０％の酵素阻害をもたらす化合物の濃度である。ある化合物に対するＩＣ50値の定量は、Y.Chengら、Biochem.Pharmacol.、22巻、3099〜3108頁(1973)に概説されている既知のイン・ビトロにおける方法によって容易に実施される。
【００１９】
「添付文書」なる用語は、製品の使用に関して医師、薬剤師、および患者に詳細な情報を得た上での決断をさせることを許容するのに必要とされる、安全性および有効性データと、製品の投与の仕方についての説明を提供する、製品に添付される情報を意味する。添付文書は一般的に医薬製品の「ラベル」とみなされる。
【００２０】
「経口製剤」なる用語は、一般的な意味では経口投与される医薬品を言及するのに使用される。経口製剤は、液体製剤、錠剤、カプセル剤、およびゲルカプセル剤（gelcaps）として当業者に認識されるものである。
【００２１】
「視覚障害」なる用語は、ＰＤＥ６阻害によって惹起されると考えられている青色−緑色視覚により特徴付けられる異常な視覚を意味するものとする。
【００２２】
「顔面紅潮」なる用語は、薬物の摂取に伴って引き起こされる血管拡張に起因しうる顔および首の偶発性の紅潮を意味し、通常は顔および首全体が熱くなるように感じ、発汗を伴うことがあるものである。
【００２３】
「遊離薬物」なる用語は、ポリマー性の共沈物中に密に埋設されていない薬物の固体粒子を意味する。
【００２４】
特許請求の範囲で今回請求された単位製剤は好ましくは、添付文書、容器、および約１乃至約２０ｍｇの化合物（Ｉ）を含む製剤を含んでいる、ヒトの医療用途の製造品として包装される。
【００２５】
添付文書は、製品の使用に関して医師、薬剤師、および患者に詳細な情報を得た上での決断をさせることを許容するのに必要とされる、安全性および有効性データと、製品の投与の仕方についての説明を提供する。本発明の製造品に組み入れられる添付文書は、化合物（Ｉ）が、ＰＤＥ５の阻害が所望される状態の処置において有用であることを示すものである。添付文書はさらに、必要に応じて１乃至２０ｍｇの単位用量を１回以上、１日当たり２０ｍｇの総用量を上限として投与する旨の指示も与えるものである。好ましくは、投与される用量は１日当たり１乃至２０ｍｇ、より好ましくは、１日当たり約５乃至１５ｍｇである。最も好ましくは、１日１回、約１０ｍｇの製剤が投与される。
【００２６】
処置されるのに好ましい状態には、性的機能不全（雄性の勃起不全、および雌性の性的機能不全、そしてより好ましくは雌性覚醒障害（ＦＡＤ）を含む）が包含される。好ましい被処置状態は、雄性の勃起不全である。
【００２７】
重要なこととして、添付文書には、網膜疾患、たとえば糖尿病性の網膜症または色素性網膜炎に罹患している患者、あるいは有機硝酸塩を使用している患者などにおける性的機能不全を処置するうえでの、製品の使用をサポートする。かように、添付文書には、好ましくはこれらの状態に伴う配合禁忌（特に有機硝酸塩との併用時の投与での配合禁忌）がない。より好ましくは、添付文書には、網膜疾患、特に色素性網膜炎に関わる警告も、また視覚障害易発性の個体に関わる警告も一切ない。好ましくは、添付文書には、本発明の製剤を投与した患者の顔面紅潮の発症率が２％を下回る、好ましくは１％を下回る、最も好ましくは０．５％を下回ることも報告されている。顔面紅潮の発症率の割合は、ＰＤＥ５阻害剤を含有する従来の医薬製品よりもはるかに改善がみられることが立証されている。
【００２８】
製造品において使用される容器は、医療品の技術における従来型のものでよい。一般に、容器としてはブリスターパック、ホイル包装、ガラスもしくはプラスチック瓶とキャップもしくは閉止具、または他の、患者もしくは薬剤師が使用するのに好適な品などを挙げることができる。好ましくは、容器は１乃至１０００の固形製剤、好ましくは１乃至５００の固形製剤、そして最も好ましくは５乃至３０の固形製剤を収納するような大きさとされるとよい。
【００２９】
経口投与用製剤は当業者の技術常識となっており、たとえば液体製剤、錠剤、カプセル剤、およびゲルカプセル剤などが包含される。好ましくは、製剤としては固形製剤がよく、特に、１乃至２０ｍｇの化合物（Ｉ）を含む錠剤であるとよい。経口用に用いられる医薬上容認されうる賦形剤はすべて、上記製剤に好適に使用可能である。好適な医薬製剤には、たとえばButlerの米国特許第５，９８５，３２６号（引用することにより本明細書の一部とする）に記載されている共沈物（coprecipitate form）が包含される。好ましい実施態様において、本発明の単位製剤は、化合物（Ｉ）の共沈物を含まず、遊離薬物として固形の化合物（Ｉ）を含有するものである。
【００３０】
好ましくは、錠剤にはラクトース、微結晶性セルロース、デンプン、炭酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、およびコロイド状二酸化ケイ素などの、一般に安全であると考えられている賦形剤を含むものであり、またRemington's Phamaceutical Sciences、18版、Mack Publishing Co.、Easton ペンシルバニア(1990)などに収載されている標準的な医薬製造技術によって調製される。かような技術には、たとえば湿式造粒を行い、その後乾燥、粉砕、および圧縮を行って錠剤とする（フィルム・コーティングをしてもしなくてもよい）技術；乾式造粒を行い、その後、粉砕、および圧縮を行って錠剤とする（フィルム・コーティングをしてもしなくてもよい）技術；乾燥混和して、その後圧縮し錠剤とする（フィルム・コーティングをしてもしなくてもよい）技術；成形打錠（molded tablet）；湿式造粒（乾燥およびゼラチンカプセル剤に充填）；乾燥混和（ゼラチンカプセル剤に充填）；あるいはゼラチンカプセル剤に懸濁液または溶液として充填する技術などが挙げられる。一般的に固形の製剤には、その表面に刻印または彫刻した識別記号が付される。
【００３１】
本発明は、詳細な実験および臨床試験、ならびにこれまでＰＤＥ５阻害の指標であると考えられてきた副作用を、化合物および単位用量の選択によって臨床的に問題にならないレベルにまで減じることができるという、予期せざる観察に基づくものである。この予期せざる観察によって、経口投与した場合にこれまでは不可避であると考えられていた望ましからざる副作用を最小限に抑える、単位製剤当たり１乃至２０ｍｇで化合物（Ｉ）を配合している単位製剤の開発が可能となった。これらの副作用には、化合物（Ｉ）を単独または有機硝酸塩と組み合わせて投与した場合の顔面紅潮、視覚障害、および血圧の有意な低下が包含される。１乃至２０ｍｇの単位製剤にて投与された、ＰＤＥ６に対する化合物（Ｉ）の最小限の効果はまた、糖尿病性の網膜症または色素性網膜炎などのような網膜疾患に罹患している患者への選択的ＰＤＥ５阻害剤の投与も供与するものである。
【００３２】
化合物（Ｉ）は以下の構造式を有する。
【００３３】
【化５】
0004975214.tif 000003
【００３４】
構造式（Ｉ）の化合物を有機硝酸塩と組み合わせて投与した場合に、収縮期血圧に対して最低限の影響しか与えないことをヒト臨床試験において立証した。これに対し、シルデナフィルは偽薬の場合に比して収縮期血圧の低下が４倍であることが示され、これがバイアグラ（登録商標）の添付文書における、そして特定の患者への警告における、配合禁忌をもたらす一因となっている。
【００３５】
以下に、本明細書に記載の方法によって定量される、構造式（Ｉ）の化合物についてのＰＤＥ５およびＰＤＥ６のＩＣ50値を示す。
【００３６】
【表１】
0004975214.tif 000004
【００３７】
構造式（Ｉ）の化合物はさらに、１０，０００のＰＤＥ１ｃに対するＩＣ50、および４，０００のＰＤＥ１ｃ／ＰＤＥ５の比を示す。
【００３８】
調製例
ヒトＰＤＥ５調製
ヒトＰＤＥ５の組み換え製造は、V. Priceら、Methods in Enzymology, 1985,308〜318頁 (1990) に記載された基本的なＡＤＨ２プラスミドベクターに由来し、ＡＤＨ１プロモーターおよびターミネーター配列でなく酵母ＡＤＨ２プロモーターおよびターミネーター配列が組み込まれた酵母形質転換ベクターを用い、そして酵母（Saccharomyces cerevisiae）宿主が、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、マナッサス、バージニア州に、ＡＴＣＣ ７４４６５の受託番号にて１９９８年８月３１日に寄託されたプロテアーゼ欠損菌株ＢＪ２−５４であったことを除けば、実質的に米国特許第５，７０２，９３６号（引用することにより本明細書に組み入れることとする）の実施例７に記載のとおりに行った。形質転換された宿主細胞は、微量の金属およびビタミン類を含む２Ｘ ＳＣ−ｌｅｕ培地、ｐＨ６．２の中で生育した。２４時間後に、グリセロールを含有するＹＥＰ培地を、２Ｘ ＹＥＰ／３％グリセロールの最終濃度となるように添加した。およそ２４ 時間後に、細胞を収集して洗浄し、そして−７０℃にて保存した。細胞ペレット（２９ｇ）を氷上で等用量の溶解用緩衝液（２５ ｍＭ トリス−Ｃｌ、ｐＨ ８、５ｍＭ ＭｇＣ１2、０．２５ｍＭ ジチオスレイトール、１ｍＭ ベンズアミジン、および１０μＭ ＺｎＳＯ4）と共に解凍した。細胞は、２０，０００ｐｓｉで、Ｎ2を用いミクロフルイダイザーにおいて溶解した。溶解液を遠心分離し、そして０．４５μｍの使い捨てフィルターを通して濾過した。濾液をＱ Sepharose Fast Flow（Pharmacia）の１５０ｍｌカラムに付した。カラムを１．５倍容量の緩衝液Ａ（２０ｍＭ ビス−トリス プロパン、ｐＨ６．８、１ｍＭ ＭｇＣ１2、０．２５ｍＭ ジチオスレイトール、１０μＭ ＺｎＳＯ4）で洗浄して、１２５ｍＭのＮａＣ１を含む緩衝液Ａでの段階的勾配と、その後の１２５〜１０００ ｍＭ ＮａＣｌを含む緩衝液Ａでの直線勾配にて溶出させた。
【００３９】
直線勾配からの活性画分は、緩衝液Ｂ（２０ ｍＭ ビス−トリス プロパン（ｐＨ ６．８）、１ｍＭ ＭｇＣ１2、０．２５ｍＭ ジチオスレイトール、１０μＭ ＺｎＳＯ4、および２５０ｍＭ ＫＣ１）中の１８０ｍｌのセラミック・ヒドロキシアパタイトカラムに付した。負荷後にカラムを２倍容量の緩衝液Ｂで洗浄し、そして０〜１２５ ｍＭ リン酸カリウムを含む緩衝液Ｂの直線勾配を用いて溶出させた。活性画分をプールし、６０％硫酸アンモニウムを用いて沈殿させて、緩衝液Ｃ（２０ ｍＭ ビス−トリス プロパン、ｐＨ ６．８、１２５ ｍＭ ＮａＣｌ、０．５ ｍＭ ジチオスレイトール、および１０μＭ ＺｎＳＯ4）中に懸濁させた。プールを、Sephacryl Ｓ−３００ ＨＲの１４０ｍｌカラムに付して、緩衝液Ｃで溶出させた。活性画分は５０％グリセロールとなるように希釈し、そして−２０℃に保存した。得られた調製物は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによれば８５％の純度であった。
【００４０】
ＰＤＥ活性に対するアッセイ
ＰＤＥ５の活性は当該技術分野における標準的なアッセイによって測定することができる。たとえば、いかなるＰＤＥの特異的な活性も以下のようにして定量できる。木炭分離技術を用いたＰＤＥアッセイは、実質的にLoughneyら、(1996)、The Journal of Biological Chemistry、271巻、796〜806頁に記載されたとおりに行った。このアッセイにおいてＰＤＥ５活性は、存在するＰＤＥ５活性の量に比例して［32Ｐ］ｃＧＭＰを［32Ｐ］５’ＧＭＰに変換する。次いで［32Ｐ］５’ＧＭＰを定量的にヘビ毒５’−ヌクレオチダーゼの活性によってフリーの［32Ｐ］リン酸塩とラベルされてないアデノシンに変換する。したがって、遊離の［32Ｐ］リン酸塩の量は酵素活性に比例する。アッセイは３０℃で（最終濃度）４０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ（ｐＨ８．０）、１μＭ ＺｎＳＯ4、５ｍＭ ＭｇＣｌ2、および０．１ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン含有の１００μＬ反応混合液中で行う。ＰＤＥ５は、基質の全加水分解の３０％未満を生じる量で存在する（直線的アッセイ条件）。アッセイは、基質（１ｍＭ ［32Ｐ］ｃＧＭＰ）の添加により開始し、混合液は１２分間インキュべートする。次に７５μｇのCrotalus atrox毒を加え、インキュベーションをさらに３分間続ける（計１５分間）。２００ｍＬの活性炭（０．１Ｍ ＮａＨ2ＰＯ4、ｐＨ４中の２５ｍｇ／ｍＬ懸濁液）を添加して反応を停止する。木炭を沈殿させるために遠心分離した後（７５０×ｇ、３分間）、シンチレーションカウンターにおける放射活性定量のために上清の試料をとり、ＰＤＥ５活性を算出する。調製物は、１ミリグラムタンパク質あたりで１分あたり約３μモルのｃＧＭＰを加水分解する比活性を有していた。
【００４１】
ウシＰＤＥ６の調製
ウシＰＤＥ６は、N. Virmaux博士、INSERM U338、Strasbourgによって提供された。ウシ網膜はVirmauxら、FEBS Letters、12巻、(6)号、325〜328頁(1971)に記載されたように調製したが、A. Sitaramayya ら、Exp. Eye Res.、25巻、163〜169頁(1977)も参照されたい。簡潔には、他に言及しない限り、すべての操作は冷却下で薄暗い赤色灯の下で行った。眼は屠殺後４時間まで冷却下に暗がりの中で保持した。
【００４２】
ウシ網膜外側の切片（ＲＯＳ）の調製は、基本的にSchichi.ら、J. Biol. Chem. 、224巻、529頁(1969)に記載された手順にしたがった。典型的な実施例において、３５のウシ網膜を、ショ糖濃度を４０％とした、３５ｍＬの０．０６６Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．０の入った乳鉢中ですりつぶし、次いでポッターホモジナイザー中でホモジナイズした（２０回の上下動）。懸濁液を２５，０００×ｇで２０分間遠心分離した。ペレットを７．５ｍＬの０．００６Ｍリン酸緩衝液（ショ糖中４０％）中でホモジナイズし、注意深く７．５ｍＬのリン酸緩衝液（ショ糖不含）下に加層した。遠心分離はスイングローターにおいて４５，０００×ｇで２０分間行い、ペレット（底部の黒色のもの）と、赤色のバンド（０．０６６Ｍリン酸緩衝液--４０％ショ糖／０．０６６Ｍリン酸緩衝液の界面、（粗製ＲＯＳ））とを得た。前記界面での赤色物質を取り出し、リン酸緩衝液で希釈し、回転させてぺレットにし、さらに前記のように緩衝化した４０％ショ糖中に再分配した。この手順をペレットが形成されなくなるまで２または３回繰り返した。精製されたＲＯＳをリン酸緩衝液中で洗浄し、最終的に２５，０００×ｇで２０分間回転させてペレットにした。その後すべての物質は、使用するまで凍結して保持しておいた。
【００４３】
単離したＲＯＳを１０ｍＬ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭ ＥＤＴＡ、および１ｍＭジチオスレイトール中に懸濁し、続いて１００，０００×ｇで３０分間遠心分離することによって、低張抽出物を調製した。
【００４４】
調製物はミリグラムタンパク質あたりで１分あたり約３５ナノモルのｃＧＭＰを加水分解する比活性を有していると報告された。
【００４５】
Spodotera fugiperda細胞（Ｓｆ９）からのＰＤＥ１ｃの調製
細胞ペレット（５ｇ）を、２０ｍＬの溶解用緩衝液（５０ｍＭ ＭＯＰＳ ｐＨ７．４、１０μＭ ＺｎＳＯ4、０．１ｍＭ ＣａＣｌ2 、１ｍＭ ＤＴＴ、２ｍＭ塩酸ベンズアミジン、各々５μｇ／ｍｌのペプスタチン、ロイペプチン、およびアプロチニン）を用いて氷上で解凍した。温度を１０℃未満に維持しながら細胞をフレンチ・プレシャー・セル（French pressure cell）（ＳＬＭ−Ａｍｉｎｃｏ製）に通すことによって溶解した。この結果得られた細胞ホモジネートを、タイプＴＩ４５ローターを用いベックマン超遠心機において３６，０００ｒｐｍで４℃にて４５分間遠心分離した。上清を捨て、得られたペレットを４０ｍＬの可溶化用緩衝液（１Ｍ ＮａＣｌ、０．１Ｍ ＭｇＣｌ2 、１ｍＭ ＣａＣｌ2 、２０μｇ／ｍＬのカルモジュリン、および１％のスルフォべタインＳＢ１２（Ｚ３−１２）を含有する溶解用緩衝液に、３０秒間、３回、マイクロチップを付けたビブラーセル・チューナーを用いて超音波処理することによって再懸濁した。これは、冷却用の破砕した氷／塩の混合物中で行った。超音波処理に続き、混合物を３０分間４℃でゆっくり混合し、膜結合タンパク質の可溶化を終了した。この混合物をタイプＴＩ４５ローターを用いたベックマン超遠心分離機において３６，０００ｒｐｍで４５分間遠心分離した。上清を１０μｇ／ｍｌのカルパイン（calpain）阻害剤ＩおよびIIを含有する溶解用緩衝液で希釈した。沈殿したタンパク質を２０分間、９，０００ｒｐｍでベックマンＪＡ−１０ローターにて遠心分離した。回収した上清を次いで、ミメテックブルーＡＰアガロースクロマトグラフィー（Mimetic Blue AP Agarose Chromatografy）に供した。
【００４６】
ミメテックブルーＡＰアガロースカラムを実行するために、非特異的結合部位をブロックするべく１％のポリビニルピロリジン（すなわち分子量４０，０００）の１０倍ベッド容量を適用することによって前記樹脂を最初に保護した。ゆるやかに結合したＰＶＰ−４０を、１０倍ベッド容量の２Ｍ ＮａＣｌ、および１０ｍＭクエン酸ナトリウムｐＨ３．４で洗浄することによって除いた。可溶化したＰＤＥ１ｃ３試料を添加する直前に、カラムは５倍ベッド容量のカラム用緩衝液Ａ（５０ｍＭ ＭＯＰＳ ｐＨ７．４、１０μＭ ＺｎＳＯ4、５ｍＭ ＭｇＣｌ2 、０．１ｍＭ ＣａＣｌ2 、１ｍＭ ＤＴＴ、２ｍＭ塩酸ベンズアミジン）で平衡化した。
【００４７】
可溶化した試料を２ｍｌ／分の流速で全試料が１２時間の内に４乃至５回付されるように再循環させながらカラムに付した。負荷が完了した後、カラムを１０倍のカラム容量のカラム用緩衝液Ａで洗浄し、続いて５倍のカラム容量のカラム用緩衝液Ｂ（２０ｍＭ ５’−ＡＭＰを含有するカラム用緩衝液Ａ）で洗浄し、さらに続いて５倍のカラム容量のカラム用緩衝液Ｃ（５０ｍＭ ＭＯＰＳ ｐＨ７．４、１０μＭ ＺｎＳＯ4、０．１ｍＭ ＣａＣｌ2 、１ｍＭ  ジチオスレイトール、および２ｍＭ塩酸ベンズアミジン）で洗浄した。前記酵素を３つの連続的プールに溶出させた。第１のプールは、１ｍＭ ｃＡＭＰを含有するカラム用緩衝液Ｃを用いた５倍ベッド容量洗浄液由来の酵素からなっていた。第２のプールは、１Ｍ ＮａＣｌを含有するカラム用緩衝液Ｃを用いた１０倍ベッド容量洗浄液由来の酵素からなっていた。最後の酵素のプールは、１Ｍ ＮａＣｌと２０ｍＭ ｃＡＭＰを含有するカラム用緩衝液Ｃを用いた５倍ベッド容量洗浄液からなっていた。
【００４８】
酵素活性があるプールを集めて、通常のゲル濾過クロマトグラフィーまたはヒドロキシ−アパタイト樹脂におけるクロマトグラフィーによって環状ヌクレオチドを除去した。環状ヌクレオチドを除去した後、２５ｍＭ ＭＯＰＳ ｐＨ７．４、１０μＭ ＺｎＳＯ4、５００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＣａＣｌ2 、１ｍＭ ジチオスレイトール、および１ｍＭ塩酸ベンズアミジンを含有する透析用緩衝液に対して酵素プールを透析し、続いて５０％グリセロールを含有する透析用緩衝液に対して透析した。酵素を迅速にドライアイスを用いて凍結し、そして−７０℃にて保存した。
【００４９】
この結果得られた調製物は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによると純度が約９０％を超えていた。これらの調製物はミリグラムタンパク質あたりで１分あたり約０．１から１．０μモルのｃＡＭＰを加水分解する比活性を有していた。
【００５０】
ＩＣ50値の定量
ＰＤＥ５および／またはＰＤＥ１ｃならびにＰＤＥ６の競合酵素阻害剤の能力を評価するに際して関心の対象となるパラメーターは、阻害定数、すなわち、Ｋiである。このパラメーターは、以下の条件下で単一の用量−応答実験における、５０％酵素阻害を生じさせる阻害剤濃度であるＩＣ50を定量することによって概算することができる。
【００５１】
フリーの阻害剤濃度（未知である）が全阻害剤濃度（既知である）によって概算されるように、阻害剤の濃度は常に酵素の濃度よりもより高くなるようにする。
【００５２】
阻害剤濃度の好適な範囲（すなわち、Ｋiより少なくとも数倍高い阻害剤濃度と、数倍低い阻害剤濃度が実験において存在するようにする）を選択する。典型的には、阻害剤濃度を１０ｎＭ乃至１０μＭの範囲とした。
【００５３】
酵素活性がおおよそアッセイ中一定となるように、酵素と基質の濃度を、基質の２０％未満が阻害剤の不存在下で消費されるように選択する（たとえば、１０から１５％の、最大基質加水分解の場合）。
【００５４】
基質の濃度は、ミカエルス定数（Ｋm）の１／１０未満である。これらの条件下では、ＩＣ50はＫiに近似する値として概算されるであろう。これは、これら２つのパラメータに関係するチェン−プロソフ（Cheng-Prusoff）反応式：ＩＣ50＝Ｋ1（１＋Ｓ／Ｋm）（Ｓ／Ｋmが低い値であると（１＋Ｓ／Ｋm）はおおよそ１である）によるためである。
【００５５】
ＩＣ50値は、酵素阻害剤相互作用の好適なモデルにデータを適合させることによって、データーのポイントから評価される。この相互作用が基質との阻害剤の単純な競合に関わることが知られている場合、２パラメータのモデルを使用することができる：
Ｙ＝Ａ／（１＋ｘ／Ｂ）
式中、ｙはｘの阻害剤濃度で測定された酵素活性であり、Ａは阻害剤が存在しない場合の活性であり、ＢはＩＣ50である。Y. Chengら、Biochem. Pharmacol.、22巻、3099〜3108頁(1973)を参照されたい。
【００５６】
前記したようなＰＤＥ５およびＰＤＥ６調製物の酵素活性における本発明の阻害剤の効果を、主にスケールに基づき互いに相異するがＩＣ50値については実質的に同じ結果が得られる２つのアッセイのうちのいずれかにおいて評価した。双方のアッセイには、Wellsら、Biochim. Acta、384巻、430頁(1975)の方法を変更することが含まれていた。第一のアッセイは、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．５、３ｍＭ 酢酸マグネシウム、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５０μｇ／ｍＬヘビ毒ヌクレオチダーゼおよび５０ｎＭ ［3Ｈ］−ｃＧＭＰ（Amersham製）を含有する全量２００μｌにおいて行った。本発明の化合物がアッセイにおいて最終的に２％で存在するように、ＤＭＳＯに溶解した。アッセイ物を３０分間３０℃でインキュべートし、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭテオフィリン、０．１ｍＭアデノシン、および０．１ｍＭグアノシンの８００μｌを添加することによってアッセイを停止した。混合物は、０．５ｍＬ ＱＡＥセファデックスカラムに付し、そして２ｍＬの０．１Ｍギ酸塩（ｐＨ７．４）で溶出した。溶出された放射活性を、オプティフェーズ・ハイセーフ（Optiphase Hisafe）３におけるシンチレーション計数にて測定した。
【００５７】
第二の、マイクロプレート、ＰＤＥアッセイは、マルチスクリーンプレートおよび真空多岐管を用いて行った。アッセイ物（１００μｌ）は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、５ｍＭ酢酸マグネシウム、１ｍＭ ＥＤＴＡおよび２５０μｇ／ｍＬヘビ毒ヌクレオチダーゼを含有していた。反応混合物の他の構成要素は、前記したと同様である。インキュベーションの終わりに、アッセイ物の全量を、ＱＡＥセファデックスミクロカラムプレートに濾過して付した。フリーの放射活性を２００μｌの水を用いて溶出させ、そこから５０μｌのアリコートを前記したと同様のシンチレーション計数によって分析した。
【００５８】
以下の実施例は、特許請求の範囲にかかる本発明をさらに例証するために例示するものである。本発明の範囲は、単に以下の実施例からなるものとして解釈されるべきものではない。
【００５９】
【実施例】
［実施例１］
化合物（Ｉ）は、米国特許第５，８５９，００６号に記載されたとおりに調製し、湿式造粒法を用いて錠剤に製剤化した。ポビドンを水に溶解して１０％溶液とした。有効成分化合物、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、およびラウリル硫酸ナトリウムを高剪断力ミキサに加え、そして２分間混合した。ポビドン溶液および造粒を完遂するのに必要とされるに応じた付加的な水にて、粉体を湿式造粒した。こうして得られる混合物を、乾燥に伴う失量が２．５％を下回るまで、７０℃±５℃で吸気しながら流動層乾燥器にて乾燥させた。顆粒は、好適なスクリーン（または篩）を用いてコミル（Comil）を通し、そして好適なミキサに加えた。顆粒外のクロスカルメロースナトリウムおよびラウリル硫酸ナトリウム、ならびにコロイド状無水シリカを好適な篩（たとえば５００ミクロン）に通して、ミキサに加え、そして５分間混和した。ステアリン酸マグネシウムを加えて２分間混和した。混和物を９ｍｍの円形通常凹形金型を用いて２５０ｍｇの標的加圧／重量となるように圧縮した。
【００６０】
核錠は、オパドライ（Opadry）ＯＹ−Ｓ−７３２２の水性懸濁液で、アセラコタ（Accelacota）（または類似のコーティング・パン）を使用し、錠剤の重量がおよそ８ｍｇ分まで増加するようになるまで５０℃乃至７０℃にて吸気を用いながら被覆した。オパドライＯＹ−Ｓ−７３２２は、メチルヒドロキシプロピルセルロース（ヨーロッパ薬局方）、二酸化チタン（ヨーロッパ薬局方）、トリアセチン（米国薬局方）を含有している。オパドライは、各錠剤の重量を約２５８ｍｇに増加させる。錠剤ごとに適用されるフィルム・コートの量は、プロセスの効率に依存して上記のものより低くすることができる。
【００６１】
錠剤はブリスター包装に入れて、化合物の安全性および有効性を記載している添付文書を添える。
【００６２】
【表２】
0004975214.tif 000005
【００６３】
［実施例２］
以下の処方を、化合物（Ｉ）を１０ｍｇ含有する製剤の完成品を調製するのに用いる。
【００６４】
【表３】
0004975214.tif 000006
【００６５】
錠剤の製造には、精製水（米国薬局方）を使用する。水は加工の間に除去して、最少レベルしか完成品に残存しないようにする。
【００６６】
錠剤は、湿式造粒プロセスを使用して製造する。プロセスを段階を追って以下に説明する。造粒すべき薬物および賦形剤は、安全に篩過させる（security sieved）。選択的ＰＤＥ５阻害剤は、ラクトース一水和物（噴霧乾燥体）、ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、およびラクトース一水和物と共に乾式混合する。得られる粉末混和物を、ヒドロキシプロピルセルロースおよびラウリル硫酸ナトリウムの水溶液にて、パワレックス（Powerex）またはその他の好適な高剪断力造粒機を用いて造粒する。さらなる水を所望の終末点に到達するまで添加してもよい。湿潤顆粒を脱塊し、乾燥させるのにミルを使用してもよい。湿潤顆粒は、流動層乾燥器または乾燥オーブンのいずれかを用いて乾燥される。材料を一旦乾燥すれば、大きな集塊をいずれも排除するためにサイズ調整をすることができる。微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、およびステアリン酸マグネシウムは安全に篩過させて乾燥サイズ調整済み顆粒に添加する。これらの賦形剤および乾燥顆粒を、転動容器（tumble bin）、リボンミキサ、または他の好適な混合機器を用いて均一になるまで混合する。混合プロセスは２つの相に分けることもできる。すなわち、第一相において、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウムおよび乾燥顆粒をミキサに加えて混和する、その後、この顆粒にステアリン酸マグネシウムを加えて第二相の混合を行う。
【００６７】
混合された顆粒は次いで、回転圧縮機を用いて錠剤へと圧縮される。核錠は、コーティング・パン（たとえば、Accela Cota）の中で適切な混色の水性懸濁液を用いてフィルム・コートされる。コートされた錠剤は、錠剤の取扱適性を向上するためにタルクを軽くまぶしてもよい。
【００６８】
錠剤をプラスチック容器に充填し（３０錠／容器）、化合物の安全性と効能を記載した添付文書を添える。
【００６９】
［実施例３］
以下の処方を、５ｍｇの化合物（Ｉ）を含有する製剤の完成品を調製するのに用いる。
【００７０】
【表４】
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【００７１】
実施例３の製剤は、実施例２の製剤と同様の方法で調製した。
【００７２】
［実施例４］
【００７３】
【表５】
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【００７４】
ゼラチンカプセルを、予め溶解しておいた薬物製剤の精密な充填量を、カプセルの部分的に密封された空洞に注ぎ込むことによって正確に充填する。薬剤溶液製剤の注入充填後直ちに、カプセルを完全に加熱密封する。
【００７５】
カプセルをプラスチック容器に充填して、添付文書を添える。
【００７６】
［実施例５］
本試験は無作為に、二重盲検にて、偽薬でコントロールをとった二方向交差デザインの臨床薬理学の薬物相互作用試験であって、健常な雄性ボランティアに対する短時間作用性の硝酸塩と選択的ＰＤＥ５阻害剤（すなわち、化合物（Ｉ））との併用投与の血行力学的効果を評価するものであった。本試験において、被験者は７日間毎日、１０ｍｇの用量の化合物（Ｉ）か偽薬のいずれかを服用した。第６日目または第７日目に、被験者は傾いた机の上に仰向けになって舌下ニトログリセリン（０．４ｍｇ）を服用した。ニトログリセリンを化合物（Ｉ）服用から３時間後に投与し、すべての被験者はニトログリセリン錠が完全に溶けるまで舌下に当該錠剤を維持した。被験者は合計３０分の間５分毎に、７０゜頭部を上げて傾けて、血圧と心拍数を測定した。本試験に参加した２２人の健常な雄性被験者（年齢１９から６０才）の中で中断する人はいなかった。
【００７７】
本試験の予備的分析において、化合物（Ｉ）はうまく許容され副作用は起こらなかった。１２−鉛ＥＣＧまたは研究室安全評価における、化合物（Ｉ）に付随する変化はなかった。最も一般的な副作用は頭痛、消化不良、および背部痛であった。化合物（Ｉ）は、平均収縮期血圧と、ニトログリセリンにより誘導される平均収縮期血圧低下の平均最大幅に対して、あったとしても最小の効果を示した。
【００７８】
［実施例６］
無作為に、二重盲検にて、偽薬でコントロールをとった２種の試験において、毎日投薬と、家庭環境における（home setting）性的結び付きおよび性交に対する要求即応治療用との用量の範囲で、化合物（Ｉ）を必要に応じて患者に投与した。５〜２０ｍｇの用量の化合物（Ｉ）が有効であって、顔面紅潮は１％未満であり、視覚障害も報告されないことが示された。１０ｍｇの用量の化合物（Ｉ）が充分に有効であることが見出され、副作用はほとんどないことが立証された。
【００７９】
勃起機能の促進は、国際勃起機能指標（ＩＩＥＦ、Rosenら、Urology、49巻、822〜830頁(1997)）、性的試行ダイアリー、および全体的な満足度についての設問によって評価した。化合物（Ｉ）は、「要求即応」および毎日投薬の双方の処方計画で、勃起に到達しこれを維持する能力を含めた、性交の試みの成功の百分率を有意に改善させた。
【００８０】
［実施例７］
第三の臨床試験は、雄性の勃起不全患者に「必要時に」投与する化合物（Ｉ）の、無作為に、二重盲検で、偽薬でコントロールをとった試験であった。化合物（Ｉ）を、雄性の勃起不全（ＥＤ）の処置において、８週間の期間にわたって投与した。勃起不全（ＥＤ）は、満足な性行為を許容するに至当な勃起に到達し、且つ／またはそれを維持することが永続的にできないこととして定義される。「要求即応」服用は、性的活動性が期待されるに先駆けて化合物（Ｉ）を間欠的に投与することとして定義される。
【００８１】
被験者集団は、軽度から重度の勃起不全である、少なくとも１８歳の男性２１２名であった。化合物（Ｉ）は、Butlerの米国特許第５，９８５，３２６号の方法にしたがって製造した共沈物の錠剤として経口投与した。化合物（Ｉ）は、「要求即応」で、但し２４時間に１回を越えない頻度にて、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、および２５ｍｇの用量にて投与した。試験期間中のいかなるときにも、あらゆる硝酸塩、アゾール系抗真菌剤（たとえばケトコナゾールまたはイトラコナゾール）、ワーファリン、エリスロマイシン、または抗アンドロゲン物質を用いた処置は禁止された。他の認可もしくは治験医薬、処置、または勃起不全を処置するために使用される器具なども禁止された。４１名の被験者には、偽薬を投与した。
【００８２】
２つの第一次有効性変数（primary efficacy variable）は、国際勃起機能指数（ＩＩＥＦ）によって測定された、被験者がパートナーに貫入できる能力、ならびに性交のあいだ勃起を維持できる能力であった。ＩＩＥＦの設問には１５の質問が含まれており、それは勃起機能の簡潔で信頼できる尺度である。R.C. Rosenら、Urology、49巻、822〜830頁(1997)を参照されたい。
【００８３】
第二次有効性変数は、勃起機能、オルガスム機能、性的欲望、性交満足度、および全体的な満足度に対するＩＩＥＦドメインスコア；患者が勃起を成し遂げる能力、患者の陰茎をパートナーの膣に挿入する能力、射精を伴う性交の完遂、勃起の硬さについての満足度、そして全体的な満足度（すべて性的遭遇プロファイル（ＳＥＰ）ダイアリーにより測定）；ならびに処置期間終了時になされた一般的評価についての設問であった。ＳＥＰは、試験期間中に各々の性的遭遇を文書化した患者のダイアリー書面である。
【００８４】
試験の安全性面は参加被験者全員について調べられ、報告された副作用のすべて、ならびに臨床試験測定値、生命徴候、身体検査の結果、および心電図の結果の変化を評価することによって評定した。
【００８５】
終了時に、患者の貫入能力（ＩＩＥＦ質問第３）を「ほとんどまたはまったく、普段と同様」と格付けした者は以下のとおりであった。偽薬群で１７．５％、２ｍｇ投与群で３８．１％、５ｍｇ投与群で４８．８％、１０ｍｇ投与群で５１．２％、そして２５ｍｇ投与群で８３．７％。比較の結果、偽薬群と化合物（Ｉ）の全用量レベルの投与群との間の貫入能力の変化に有意差があることが明らかになった。
【００８６】
終了時に、性交の際の勃起維持能力（ＩＩＥＦ質問第４）を「ほとんどまたはまったく、普段と同様」と格付けした者は以下のとおりであった。偽薬群で１０．０％、２ｍｇ投与群で１９．５％、５ｍｇ投与群で３２．６％、１０ｍｇ投与群で３９．０％、そして２５ｍｇ投与群で６９．０％。比較の結果、偽薬群と化合物（Ｉ）の３種の高用量レベルの投与群との間の勃起維持能力の変化に有意差があることが明らかになった。
【００８７】
この試験は、安全性評価も含むものであった。処置により発生する副作用は、ベースラインで存在せずベースライン後（postbaseline）に出現した状態、またはベースラインで存在しベースライン後に重篤度が増大した状態として定義される。最も一般的に報告される、処置によって発生する副作用は、頭痛、消化不良、および背部痛であった。処置により発生する副作用の出現頻度は、用量に関連するようであった。
【００８８】
全体として、本試験によって「要求即応」にて摂取された化合物（Ｉ）の４種の用量すべて（すなわち２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、および２５ｍｇ）に関し、ＩＩＥＦによって、性交の成功および満足の頻度を評価した患者のダイアリーによって、ならびに全体的評価によって評定された勃起不全男性の性行動を、偽薬に対して有意に改善させることが立証された。
【００８９】
臨床試験の結果を総合すると、以下の表に示すように、化合物（Ｉ）の投与によって、男性の勃起不全が有効に処置されることが示された。
【００９０】
【表６】
0004975214.tif 000009
【００９１】
しかしながら臨床試験の結果を総合すると、以下の表に示すように、化合物（Ｉ）の単位用量を増加させるに伴い、処置により発生する副作用の率が増大することも観察された。
【００９２】
【表７】
0004975214.tif 000010
【００９３】
上掲の表には、２５ｍｇ乃至１００ｍｇの単位用量にて、副作用が増大することが示されている。したがって、勃起不全の処置の有効性は２５ｍｇ乃至１００ｍｇの用量でも観察されたものの、２５ｍｇ乃至１００ｍｇの用量で観察される副作用を考慮に入れる必要があることが判った。
【００９４】
本発明によれば、２４時間ごとに２０ｍｇを上限として投与される、約１乃至約２０ｍｇ、好ましくは約２乃至約２０ｍｇ、より好ましくは約５乃至約２０ｍｇ、そして最も好ましくは約５乃至約１５ｍｇの単位用量の化合物（Ｉ）によって、有効に勃起不全を処置し、且つ有害な副作用の発生を抑制または回避することができる。重要なことには、視覚障害の報告がなく、顔面紅潮も実質的に回避された。意外にも、化合物（Ｉ）を約１乃至約２０ｍｇの単位用量用いて有害な副作用を抑制しつつも勃起不全が処置されることに加えて、硝酸塩での治療を受けている個体をも、本発明の方法および組成物によって勃起不全を処置することが可能となるのである。
【００９５】
本発明の原理、好ましい実施態様、および操作の態様は、以上の詳細な説明に記載したとおりである。しかしながら、開示された特定の形態は限定でなく例示として考えられるべきであるので、ここで保護される発明がそれらに限定するものとして解釈されるべきではない。本発明の精神から逸脱することなく、当業者によって修正および変更がなされうるものである。